Universidade Presbiteriana Mackenzie

Curso de Ciências Biológicas e da Saúde

Disciplina de Citogenética
Profa Dra. Leda Navajas Haim

DIAGNÓSTICO PRÉ-NATAL DAS

ABERRAÇÕES CROMOSSÔMICAS

Bruna Baranski, Camila Ramos, Daniele Seo, Luiz Fernando

Maksemovicz, Tatiana Venancio
 INTRODUÇÃO

• O diagnóstico pré-natal permite a detecção de doenças

genéticas durante a gravidez

• É principal foco do diagnóstico genético

• A maioria dos resultados levam à um diagnóstico normal

• Tem como objetivo o fornecimento de informações para

que a família possa fazer escolhas
 HISTÓRICO DO DIAGNÓSTICO PRÉ-NATAL

1966 – Steele e Breg mostram que a constituição

cromossômica de um feto podia ser determinada pela
análise da cultura das células do líquido amniótico.

Conseguiram cultivar células de líquido amniótico de

gestantes de 20-37 semanas com risco de gerarem prole
com eritroblastose fetal.
 HISTÓRICO DO DIAGNÓSTICO PRÉ-NATAL

Estudos colaborativos realizados na América do Norte e

Europa constataram que a amniocentese realizada no
segundo trimestre (entre as 16ª e 20ª semanas de
gestação) é um procedimento seguro.
Assim, isso justificou o emprego do diagnóstico pré-
natal de anormalidades citogenéticas, como um
procedimento de rotina em países do hemisfério norte.

1979 - Introdução das técnicas de diagnóstico pré-natal

no Brasil.
FERRAMENTAS MOLECULARES PARA DIAGNÓSTICO PELA
ANÁLISE DE DNA

DIAGNÓSTICO INDIRETO
Análise de ligação

DIAGNÓSTICO DIRETO
Análise de RFLP
Oligonucleotídeos Alelo-Específicos
 DIAGNÓSTICO INDIRETO

ANÁLISE DE LIGAÇÃO
• Utilizada para diagnosticar qualquer doença genética mapeada

• Utiliza marcadores ligados, porém não envolve o exame direto das

mutações causadoras da doença

• A precisão do diagnóstico depende da proximidade dos marcadores

aos genes das doenças

VANTAGENS
• Único teste pode levar a descoberta de
múltiplas mutações
• Não há necessidade de conhecimento
da mutação causadora da doença
• O gene da doença e seus produtos não
precisam ser conhecidos
DESVANTAGENS
• Necessidade de tipagem de inúmeros
membros da família
• Possibilidade de recombinação e
cruzamentos não-informativos
• Os marcadores nem sempre são
informativos
 DIAGNÓSTICO DIRETO

ANÁLISE DE RFLP

• Alteração na sequência de reconhecimento de uma enzima de restrição em

consequência da mutação causadora da doença
•A própria mutação cria um polimorfismo de sítio de restrição
•O RFLP resultante reflete a mutação causadora da doença diretamente

VANTAGENS DESVANTAGENS
• Não é necessária informação genética • Mutação causadora da doença precisa
familiar ser reconhecida
• Marcadores são sempre informativos • Um único teste não é capaz de descobrir
• Não há erros resultantes de múltiplas mutações
recombinações •Apenas 5% das mutações causadoras de
doença afetam sítios de restrição
conhecidos
 DIAGNÓSTICO DIRETO

OLIGONUCLEOTÍDEOS ALELO-ESPECÍFICOS

• Utilização de sonda de oligonucleotídeo sintetizada para hibridização

na sequência mutada
• Um erro de pareamento de uma base evita a hibridização

VANTAGENS DESVANTAGENS
• Não é necessária informação genética • Mutação causadora da doença precisa
familiar ser reconhecida
• Marcadores são sempre informativos • Um único teste não é capaz de descobrir
• Não limita-se a mutações que causam múltiplas mutações
alterações de sítios de restrição
 MÉTODOS DE DIAGNÓSTICOS PRÉ-NATAIS DAS
ABERRAÇÕES CROMOSSÔMICAS

TESTES INVASIVOS
Amniocentese
Punção de vilosidades coriônicas
Cordocentese
Diagnóstico pré-implantação

TESTES NÃO - INVASIVOS

Ultra-sonografia
Triagem de soro materno
Isolamento de células fetais da circulação materna
 INDICAÇÕES PARA DIAGNÓSTICO PRÉ-NATAL
POR TESTES INVASIVOS

• Idade materna avançada

• Filho anterior com anomalia cromossômica de novo
• Presença de anomalias cromossômicas estruturais em um dos
pais
• História familiar de defeito genético que pode ser
diagnosticado ou excluído por análise bioquímica ou de DNA
• História familiar de distúrbio ligado ao X para o qual não há
teste diagnóstico pré-natal específico.
• Risco de defeito no tubo neural
• Triagem do soro materno e ultra-som
 TESTES INVASIVOS
AMNIOCENTESE

PROCEDIMENTO:

PIERCE (2004)
 TESTES INVASIVOS
AMNIOCENTESE
•Período: 15a e 17a semanas depois do último período menstrual
•Risco de complicações < 0,5%
•Importante a monitoração aplicada à punção
DESVANTAGENS
VANTAGENS • Processo doloroso
• Segurança e baixo índice de • Possibilidade de adquirir infecções
complicações (exame rotineiro) • Possibilidade de ferir o feto, a
• Avaliar problemas genéticos placenta ou o cordão umbilical com
a agulha
• Não há necessidade da paciente • Possibilidade de ocorrer
ficar internada
rompimento da cavidade amniótica
• Células do líquido amniótico • Possibilidade de ocorrência de dores
retiradas podem ser cultivadas para de parto e contrações precoces
testes bioquímicos (FISH) ou • Possibilidade de risco de aborto
iagnóstico de DNA • Mosaicismo cromos~sômico pode
• Teste fornece resultados altamente levar a erro de diagnóstico
precisos
 TESTES INVASIVOS
PUNÇÃO DE VILOSIDADES CORIÔNICAS - CVS

PROCEDIMENTO:

PIERCE (2004)
 TESTES INVASIVOS
PUNÇÃO DE VILOSIDADES CORIÔNICAS - CVS

•Período: 10a e 12a semana de gestação

•Risco de complicações < 1,0%
•Importante a monitoração aplicada à punção
Ultra-som usado antes da CVS para determinar o melhor enfoque para a coleta

VANTAGENS DESVANTAGENS
•Risco de aborto de 1% a 1,5%, acima
•É um método rápido e seguro
da taxa normal comparado ao 0,5% da
•Fornece diagnóstico mais amniocentese
precocemente na gravidez (10 e 11 •Exame doloroso para a mãe
semanas pós-LMP), sendo importante
para casais que cogitam a interrupção •Mosaicismo confinado à placenta
da gravidez (cerca de 1% a 2%) confunde
diagnóstico, pois o mosaicismo
•Para a análise são necessárias
observado da placenta não está
mínimas quantidades de tecido realmente presente no feto
•Detecção de alterações •AFP do líquido amniótico não pode
cromossômicas ser medida
 TESTES INVASIVOS
CORDOCENTESE

PROCEDIMENTO:

Fonte: Disponível em <http://www.cpdt.com.br/_site/servicos_sub

.asp?sub=16&uid=37>, acessado em 13 de setembro de 2009.
 TESTES INVASIVOS

CORDOCENTESE

•Período: 19a e 21a semanas depois do último período menstrual

•Risco de complicações: 2% a 3%

•Importante a monitoração aplicada à punção

VANTAGENS
•Análise citogenética dos fetos com
anomalias estruturais detectadas por ultra- DESVANTAGENS
som quando diagnóstico rápido é
necessário •Processo doloroso para mãe
•Diagnóstico de doenças hematológicas •Risco de aborto baixa, porém maior que
o da amniocentese e da CVS
•Confirmação de mosaicismo: distinção
rápida entre mosaicismo fetal verdadeiro e
mosaicismo falso causado pela
contaminação materna de amostra de
líquido amniótico
 TESTES INVASIVOS
DIAGNÓSTICO PRÉ-IMPLANTAÇÃO

PROCEDIMENTO:
•É realizado antes de se transferir os embriões para o útero
•O casal realiza a IVF e são retirados uma célula de cada embrião
produzido (fase de 6 a 8 células)
•Esta célula é examinada para saber se aquele determinado embrião
apresenta algum problema
-PCR → diagnosticar doenças monogênicas
-FISH → diagnosticar aneuploidias
•Somente os embriões sem problemas são implantados no útero da mãe

•Questionamentos éticos → embriões afetados são descartados

 TESTES INVASIVOS

DIAGNÓSTICO PRÉ-IMPLANTAÇÃO

•Período: 3 dias após a fertilização → embrião com 6 ou 8 células

VANTAGENS
•Método rápido e seguro
•Permite implantação somente de embriões
não-afetados
•Evita a questão da interrupção da gravidez
•Diagnóstico também pode ser realizado no
estágio de blastocisto de 100 células,
utilizando células do trofoectoderma do
blastocisto
•Comumente usado para casais que tenham
recorrido ao diagnóstico in vitro e desejam
testar condições genéticas
DESVANTAGENS
•Dropout alélico: problema ocasional, um
dos dois alelos pode ser detectável, o que
faria o heterozigoto parecer homozigoto
devido à falha na amplificação parcial pela
PCR quando utilizando DNA de uma
única célula
•Tecido extra – embrionário (também
chamado de trofoectoderma do blastocisto)
é diagnosticado, ao invés do próprio
embrião
•Disponibilidade da técnica ainda é
limitada
 TESTES NÃO-INVASIVOS
ULTRA-SONOGRAFIA
PROCEDIMENTO:

Fonte:Disponível em <http://www.alvesbaby.com.br/imgdic/
ultrasonografia_1.jpg>, acessado em 16 de setembro de 2009.

Fonte:Disponível em <http://www.msdbrazil.com/msd43/
m_manual/images/img_ultrasonografia.gif>, acessado em 16 de
setembro de 2009.
 TESTES NÃO - INVASIVOS
ULTRA-SONOGRAFIA
•Técnica mais comum utilizada para visualização fetal
•Contribui na eficiência da amniocentese, CVS e da cordocentese
•Crescimento fetal
•Malformações

VANTAGENS

•Não agressiva nem para a mãe nem para

o feto (SEGURA - não há contato com o
feto) DESVANTAGENS
•Grande nível de aceitação pelas
pacientes •Depende muito da habilidade do
•Resultado é imediato operador do aparelho
•Produz imagens em tempo real •Resolução espacial muito abaixo
•Permite um diagnóstico muito claro daquela obtida com TC ou RMN
quanto à formação do feto, detecção de •Não se dispõe, até o momento, de bons
alterações anatômicas contrastes.
•Baixo custo
•Investigação do efeito de agentes
teratogênicos
 TESTES NÃO-INVASIVOS
TRIAGEM DE SORO MATERNO
• α -Fetoproteína (AFP): no líquido amniótico até ± 14ª semana de gestação
drasticamente após 14ª semana
• Nivel de AFP no líquido amniótico é elevado
- Feto com NTD
- Fornece teste pré-natal confiável para esta condição
•Dosagem de AFP Ultra-sonografia Diagnóstico de NTDs abertos (espinha bífida
aberta e anencefalia)

VANTAGENS DESVANTAGENS
• Procedimento de triagem •Esta técnica não é considerada
populacional não-invasivo e diagnóstico confirmatório, mas um
seguro para os NTD marcador de risco
• Alta sensibilidade do teste •Necessidade de ultra-sonografia para
confirmação de diagnóstico de NTDs
 TESTES NÃO-INVASIVOS
TRIAGEM DE SORO MATERNO
•MSAFP: AFP difunde através das membranas fetais até soro materno
•Período: 15a e 17a semanas depois do último período menstrual
•Risco < 6% (1/15)
•Mulher com MSAFP → Escolher se submeter a amniocentese para determinar
realmente presença de feto com NTD
•MSAFP baixa Síndrome de Down
VANTAGENS
• Procedimento de triagem populacional
não-invasivo e seguro para os NTD
DESVANTAGENS
• Alta sensibilidade do teste (< para
detecção de NTD que para diagnóstico •Pode indicar a necessidade de teste
da AFP amniótica) diagnóstico
•Triagem falso-positiva pode ser
• Não impõe nenhum risco de perda fetal
provocada por subestimação da idade
• Serve como medida efetiva de triagem gestacional, gestação múltipla inesperada
que aumenta a detecção pré-natal de ou hemorragia de placenta
fetos com várias anormalidades, como
NTD, trissomia do 18 e síndrome de
Down
 TESTES NÃO-INVASIVOS
ISOLAMENTO DE CÉLULAS FETAIS DA CIRCULAÇÃO MATERNA
•Gravidez → Pequeno número de células fetais (hemácea nucleada por exemplo) entra
na corrente sanguínea materna
•Período: 6a a 8a semanas depois do último período menstrual
•PROCEDIMENTO:
- Separação de grande variedade de células fetais no sangue materno por diversas técnicas
-Seleção de células fetais no sangue materno com o uso de anticorpos monoclonais
• FISH: Análise cromossômica, como trissomias do 13, 18 e 21
• PCR: Testar no limitado de doenças monogênicas

VANTAGENS
• Requer pequena amostra de sangue
materno
• Não impõe risco ao feto
• Diagnóstico pré-natal de alguns
distúrbios monogênicos e análise
cromossômica
DESVANTAGENS
•Persistência dos linfócitos fetais na
circulação materna pode confundir o
uso de amostragem de células fetais nas
gestações subsequentes
•Técnica está em estágio inicial de
desenvolvimento
 Frequência das aberrações comossômicas
encontradas nesses testes

Aberrações estruturais

•Translocações reciprocas ou robertsonianas são as mais encontradas (RYU,

2001);
•A maior parte dessas translocações são herdadas de um dos pais. Podem
também ser novos rearranjos cromossômicos;

•As aberrações estruturais também podem ser inversões, deleções, aumento do

material genético ou presença de cromossomos marcadores.
 Importância

•O diagnóstico pré-natal é importante para dar informações sobre a gravidez às

mulheres que pertencem ao grupo de risco da população.

•A indicação de testes mais invasivos como amniocentese é para mulheres em idade

materna avançada, com parentes com anormalidades cromossômicas, mulheres que já
tiveram bebês com aberrações comossômicas entre outros.

•Na população a taxa de nascidos com aberrações cromossômicas é de 0.5%.

 ANÁLISE DE CASO

(C. Colmant et al. - França - Prenatal Diagnosis Journal /

Wiley InterScience - Junho 2009)
Casal não-consangüíneo; mulher de 37 anos, no 26º mês de
gestação indicada ao hospital para realização de exames,
após resultados de um ultrassom realizado na semana
anterior: feto (sexo masculino) apresentava micrognatia,
orelhas e nariz pequenos, ventriculomegalia, hipoplasia
cerebelar, rim policístico e diversas anomalias cardíacas
graves;
Amniocentese realizada. Cariotipagem convencional de 15
células revelou que o feto possuía um cromossomo 6
anormal, com o braço p mais curto do que o usual (Fig. 1);
Cariótipo dos pais normal, indicando uma origem “de
novo” do rearranjo estrutural cromossômico;
 ANÁLISE DE CASO

Deleção do braço curto do cromossomo 6 é de ocorrência

rara, e é normalmente diagnosticada após o nascimento.
Neste caso o diagnóstico é obtido por procedimento pré-
natal;

Após aconselhamento multidisciplinar, baseado no

prognóstico pobre em relação aos achados do ultrassom, e
no rearranjo estrutural cromossômico, o casal decidiu optar
pelo aborto, possível neste caso (legislação francesa);
Autópsia confirmou os problemas propostos pelo ultrassom,
como graves anomalias cerebrais, renais e cardíacas.
 ANÁLISE DE CASO

Após gestação terminada, feita cultura de linfócitos de

sangue do cordão umbilical. Realizado FISH (cromossomo
6 “whole cromossome painting”), indicando que o
cromossomo 6 anormal era composto apenas por material de
cromossomo 6;
A partir de uma cultura de fibroblastos do feto, foi retirada
uma amostra de DNA total para se realizar um CGH array,
que confirmou uma deleção intersticial em 6p (Fig. 2);

Perda cobria 15.2 Mb, de 6p24.3 a 6p22.3. Nenhum outro

desbalanço foi identificado, e o cariótipo foi estabelecido:
46,XY,del(6)(p24.3p22.3)dn;
 ANÁLISE DE CASO

ssddss
(Fig. 1 - Cariotipagem
convencional RHG, revelando
um cromossomo 6 anormal,
der(6), com o braço p mais
curto do que o normal)

(Fig. 2 – CGH array, mostrando a deleção

intersticial 6p22.3-p24.3)
 ANÁLISE DE CASO

Reportado uma rara deleção intersticial “de novo” do 6p,

cobrindo 15.2 Mb, caracterizada por: cariotipagem, FISH e
CGH array. Até a data de publicação (junho/2009) apenas 2
casos de deleção no 6p haviam sido diagnosticados por
exames pré-natais;
Muitos genes referentes ao 6p desempenham um papel
importante no desenvolvimento, e monossomias do 6p
humano resultam em uma variedade de anormalidades
relacionadas à organogênese, como nos rins, coração e
sistema nervoso (apresentado pelo feto);
Este relato pode ser útil para a pesquisa de genes envolvidos
no desenvolvimento humano e para aconselhamento
genético.
 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

JORDE, L. B.; CAREY, J. C.; BAMSHAD, M. J.; WHITE, R. L. Genética Médica. 3a

edição, Rio de Janeiro: Elsevier, p.326 - 339, 2004.

NAZARETH, H. R. S.; JUNIOR, W. P.; ANDRADE, J. A. D. Diagnóstico Pré-Natal de

Aberrações Cromossômicas. Primeira Experiência Brasileira. Rev. Brasil. Genet. IV, 3, p.
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NUSSBAUM, R. L.; McINNES, R. R.; WILLARD, H. F. THOMPSON & THOMPSON

Genética Médica. 6a edição, Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, p. 316 – 329, 2002.

PIERCE, B. A. Genética um enfoque conceitual. 1a edição, Rio de Janeiro: Guanabara

Koogan, p. 129 – 154, 2004.

PINTO, W. J. Diagnóstico pré-natal, p. 549 – 569, 2004. In: MIR, L. et. al. Genômica. 1 a
edição, São Paulo: Atheneu, 1191p., 2004.

COLMANT, C; BRISSET, S; TACHDJIAN, G; GAUTIER, V; FTOUKI, M; LAROUDIE,

M; DRUART, L; FRYDMAN, R; PICONE, O. Interstitial deletion 6p22.3-p24.3
characterized by CGH array in a foetus with multiple malformations. Prenatal Diagnosis
29: 908–910, 2009.