CENTRO DE AQUICULTURA DA UNESP

CAMPUS DE JABOTICABAL

Aplicação da embriologia de peixes

na ecotoxicologia aquática

Dra. Maria do Carmo Faria Paes

Disciplina de Biologia do desenvolvimento de peixes

Janeiro 2019
Jaboticabal - SP
• Conceitos gerais

• Conhecimentos sobre o
desenvolvimento
embrionário/larval de
teleósteos aplicados nos
testes ecotoxicológicos

• Tipos de análises mais

comuns

• Meu projeto de
postdoc na Alemanha
Conceito:
Ecologia Toxicologia

Ciência que estuda a Ciência que estuda o

relação dos seres vivos efeito de um agente
entre si e com o ambiente químico em uma dada
que os cerca. espécie

Ecotoxicologia

Ciência que estuda os efeitos de um ou mais agentes

químicos sobre uma população ou comunidade de
organismos e seus reflexos sobre um ecossistema.
 Breve
histórico:
1962: Silent Spring – Rachel Carson
Alertou sobre os efeitos catastróficos do uso
indiscriminado de pesticidas (1940/50). - DDT
 O termo ECOTOXICOLOGIA foi sugerido pela primeira vez em
1969 por René Truhaut, reunindo a designação eco (do grego
oikos: casa, habitat) e a palavra toxicologia (ciência dos
agentes tóxicos).

NO MUNDO...

- A partir dos anos 70: aplicação de testes ecotoxicológicos.

- Na década de 80: testes comecaram a ser padronizados.

NO BRASIL...

- A partir da década de 70: primeiros trabalhos.

- 1975 CETESB: elaboração de normas técnicas.
- 2000: Sociedade Brasileira de Ecotoxicologia - SETAC Brasil.
 APLICAÇÕES
• Avaliação de áreas contaminadas;
• Avaliação da eficiência do tratamento de esgoto;
• Ecotoxicidade de novos químicos;
• Monitoramento de efluentes;
• Acidentes ambientais.
 Principais fontes de contaminacao
Chuvas contaminadas Agrotóxicos, fertilizantes,
Esgoto doméstico e pesticidas
industrial

2,1 bilhões de pessoas no Despejos industriais, Fossas e aterros

mundo não têm acesso a metais pesados, petróleo
água potável em casa!
4,5 bilhões nao tem acesso a
um saneamento seguro
Cenário brasileiro
Apenas 50,3% da população tem acesso à coleta de esgoto mais de 100
milhões de pessoas utilizando medidas alternativas para lidar com os dejetos
(fossas ou diretamente nos rios) (SNIS, 2016).

Tratamento de esgoto convencional é deficiente em remover inúmeras

substâncias químicas potencialmente tóxicas da água (Koerich, 2015;
Tousova et al., 2017).

• Sabe-se que existem milhares de substâncias

presentes nos ecossistemas aquáticos, cujos efeitos
tóxicos ainda são completamente desconhecidos.
• SUBSTÂNCIAS EMERGENTES: agrotóxicos,
medicamentos, plastizantes, produtos de limpeza e
higiene, químicos em geral (conservantes, corantes), etc.
 Como podemos avaliar a toxicidade de uma substância no
ambiente aquático?
• Escolha da substância;

• Avaliação da presença e concentração desta no ambiente aquático;

• Organismo teste;
• Concentrações letal (CL50) e subletal.

*Europa: ética e embriões

Organismo teste
Embriologia de teleósteos
nos testes ecotoxicológicos
Análises de Toxicidade Aguda
Quando a substância causa danos
ou morte em curto
espaço de tempo.
 Fish Experimental tests
(FET)
1. Preparo da água artificial (3 dias);
2. Preparo das substâncias – solução estoque e solução para uso;
3. Preparo de solução de solvente, quando for o caso;
4. Preparo da solução de controle positivo (3,4-dichloroaniline).
Fish Experimental tests (FET)

> 90%
Fish Experimental tests (FET)

nC: Negative control (artificial water), pC: positive control (4.0 mg/L of
3,4-dichloroaniline, recommended for zebrafish), iC: internal plate
control; sC: solvent control and 5 concentrations of test substance.
Endpoints
 Endpoints

From 24 hours From 48 hours From 72, 96 and 120 hrs

Coagulation of embryos No pigmentation Hatched/ no hatched

No somites No eye pigments Fin deformed
No detachment of the tail Spine deformation Swimming behavior
bud unnormal
No spontaneous Slow/no heartbeats Apoptosis
movements
Malformed embryo No blood circulation  
Underdevelopment Edemas  
Tipos de análises
complementares
mais comuns
• Microscopia de fluorescencia

Corantes vitais – acridine orange

(apoptoses)

(zebrafish sob efeito de etanol 0.3%/96h)

• Histologia

Medicamento para epilepsia afetando formacao dos olhos em zebrafish

Propylgallate no sistema nervoso de zebrafish (pesticida)

Comportamento (neurotoxicidade)

• Parâmetros de locomoção: velocidade,

distancia;
• Frequência cardiovascular;
• Respostas à estímulos de luz/escuridão.
Minha pesquisa na Alemanha
 Effects of propylparaben and
diethyl-phthalate in the
embryological development of
zebrafish (Danio rerio) with focus
on neurotoxicity and structural
damages
 Parabenos

• O que são parabenos?

• Onde são encontrados?
• O Brasil é o quarto maior
consumidor de PCP,
perfumaria e cosméticos
no mundo (Spadoto, 2017).
• Conservantes > clima > custo
• Absorção e
Metabolismo
Propilparabeno
Mamíferos:
• Alterações no Sistema
reprodutor
• Diversos tipos de câncer

Peixes:
• Alterações no Sistema
reprodutor
• Alterações histopatológicas
(fígado e vesícula)
• Bioacumulação no fígado e
músculo
• Letalidade.
 Ftalatos
O que são ftalatos?
• 2 tipos: baixo peso molecular
(solventes e fixadores) e alto
peso molecular (plastificantes)

• Onde são encontrados?

 Ftalatos
Mamíferos:
• hipertensão
• diabetes
• endometriose
• câncer de mama
• baixa qualidade de sêmen
• distúrbios do sistema respiratório e
cardiovascular
• autismo
• alterações no neurodesenvolvimento e no
desenvolvimento do sistema reprodutor
• aumento da mortalidade pré-natal, redução
do crescimento e peso no nascimento e má
formações externas.
 Dietil-Ftalato
Organismos aquáticos:
• Peixes: alterações no sistema
reprodutor;
• bioacumulação e alterações no
fígado, testículos, cérebro,
brânquias, rins e músculo.
• Alta mortalidade em camarões;
• Ecdise tardia e alterações no
hepatopâncreas de caranguejos;
• Anfíbios, moluscos e crustáceos:
afeta a reprodução, o
desenvolvimento e induz
aberrações genéticas.
 Avaliar a
embriotoxicidade, o
comportamento e
danos estruturais e
ultraestrurais de
embriões de Danio
rerio sob diferentes
concentrações de
Propilparabeno e
Dietilftalato.

Objetivo
Metodologia e análises
Testes preliminares (96h/CL50)
• FET
Doses subletais (CE50)

Análises: 24, 48, 72, 96 e 120h

• Histologia e estereomicroscopia
 
• Morte celular

• Comportamento
Obrigada!

mariacfpaes@yahoo.com.br