Biotecnologia

Professora: Rafaela Correia

Biotecnologia
Qualquer aplicação tecnológica que usa sistemas
biológicos, seres vivos ou seus derivados para fazer
ou modificar produtos ou processos.
Seleção Artificial
Era realizado de forma intuitiva
Melhor sabor
Maior número de grãos
Animais robustos
Maior quantidade de leite
Carne mais macia
Heterose e vigor híbrido
Heterose: cruzamento entre linhagens homozigóticas distintas.
Vigor híbrido: organismo resultante de heterose que apresenta algumas
características superiores aos indivíduos parentais.
Exemplo: raça bovina Girolando
Gir (rusticidade) x Holandês (boa produção de leite)

Girolando
Endogamia
Visa preservar a homogeneidade genética em uma
linhagem por meio da manutenção de genes em
homozigose.
Autofecundação
Cruzamento entre poucos indivíduos selecionados
ao longo de várias gerações.
Enxertia
Parte de uma planta viva é enxertada em outra.

Visa propagar assexuadamente as plantas de

interesse.
Engenharia Genética
Técnicas que permitem manipular diretamente o
genoma dos organismos e também construir
sequências de DNA em laboratório.
Enzimas de restrição
São enzimas capazes de cortar moléculas de DNA em
pontos específicos.
Tecnologia do DNA recombinante
 Produção de etanol e xilitol por novas
espécies de leveduras do gênero
Spathaspora isoladas de ecossistemas
brasileiros

Dissertação de Mestrado

Rafaela Correia do Carmo Soares

Orientador: Prof. Carlos Augusto Rosa
Co-orientadora: Dra. Mariana Rocha Lopes

Laboratório de Taxonomia, Biodiversidade e Biotecnologia de Fungos

 Leveduras selecionadas
Leveduras selecionadas para o presente trabalho.
Levedura Ano de
Local de Coleta Ecossistema
(UFMG-CM-) coleta
Reserva Ambiental do Taquaruçu,
Y425 Cerrado 2011
Tocantins
Floresta
Y6059 Floresta Nacional de Caxiuanã, Pará 2015
Amazônica
Floresta
Y6060 Floresta Nacional de Caxiuanã, Pará 2015
Amazônica
Reserva Florestal da Fazenda Bela Floresta
Y6078 2009
Vista, Roraima Amazônica
Extração de DNA – Protocolo de extração
com clorofórmio: álcool isoamílico

YM, 24h, 25°C Tampão de lise 65°C clorofórmio:álcool isoamílico 14.000 rpm

Isopropanol, repouso 15’ etanol 70% gelado estocado a – 20ºC

Amplificação de regiões do gene rRNA
 Amplificação de regiões do gene rRNA utilizando os
iniciadores ITS1 e NL4
• ITS1 (5’-TAG GTG AAC CTG CGG AAG GAT CAT-3’) e
NL4 (5’ GGT CCG TGT TTC AAG ACG G-3’) (Marinoni
e Lachance 2004).
 Eletroforese em gel de agarose 1%
PCR – Reação em Cadeia da
Polimerase
Eletroforese
Técnica que consiste em colocar uma amostra de
alguma substância – DNA, por exemplo - em uma
placa de gel e aplicar uma corrente elétrica.

No caso do DNA, todos os fragmentos percorrem o

gel em direção ao polo elétrico positivo, mas os
menores se movimentam mais rapidamente que os
maiores.
Purificação dos produtos de PCR e
sequenciamento
Purificação dos produtos de PCR

Quantificação por espectrometria, utilizando

NanoDrop

Sequenciamento por eletroforese capilar em

aparelho ABI3130
Análise das sequências

As sequências de DNA foram analisadas utilizando o

programa BLASTn , disponível no portal NCBI.

Comparadas às sequências já depositadas no GenBank.

Determinação da influência do inóculo inicial
de células na fermentação de D-xilose
YP + Xilose a 5% (50 gL-1)
Triplicata
Variação das concentrações de inóculo inicial: 1 ; 2; 5 e 10 gL-1
Concentração de Células - Densidade Óptica DO
 CONCLUSÕES
- As quatro leveduras isoladas de madeira em decomposição de
ecossistemas brasileiros representam novas espécies do clado
Spathaspora, pois apresentam diferenças nas sequências gênicas
das regiões D1/D2 e ITS em relação às espécies filogeneticamente
mais próximas.
- As leveduras testadas apresentam potencial biotecnológico para a
produção de etanol e xilitol, assim como também podem ser fonte
genes para serem introduzidos em linhagens industriais.
- Os maiores títulos de etanol foram alcançados com as leveduras
Spathaspora sp.1 e Spathaspora sp.4, enquanto que os maiores
títulos de xilitol foram alcançados com as leveduras Spathaspora
sp.2 e Spathaspora sp.3.
- Os melhores parâmetros fermentativos foram alcançados com o
inóculo inicial de células de 2g/L, pois nessa condição houve maior
equilíbrio entre o crescimento celular e a formação de produto,
além da disponibilidade de oxigênio ter sido a mais adequada.
OGMs
Organismos Geneticamente Modificados

São aqueles cujo genoma foi alterado por meio de

técnicas de engenharia genética.

É possível desenvolver cultivares mais resistentes a

doenças, a herbicidas, a geadas, a secas, com menos
necessidade de adubo, com frutos maiores, mais
doces, mais nutritivos...
Transgênicos
OGM que recebeu DNA proveniente de outra
espécie.

Ex.: Escherichia coli que recebeu o gene humano da

insulina.
Clonagem
Terapia Gênica
HANKS!