Modelos experimentais in vitro:

CULTURA DE CÉLULAS
MARIA CLAUDIA ROSA GARCIA, MSc.
claugarciabio@hotmail.com
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DEFINIÇÃO

 Conjunto de complexos processos que envolve o isolamento de células do ambiente natural (in vivo)

e o crescimento subsequente em uma condição ambiental artificial controlada (in vitro).

 Objetivo de estudar processos fisiológicos e bioquímicos das células.

É possível realizar cultura celular a partir de tecidos

HUMANOS, ANIMAIS e VEGETAIS
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HISTÓRICO

 1907 - Harrison: marco para o cultivo celular – dissecou tubo medular de um embrião de sapo

 1912 - Carrel: descobriu-se a necessidade da troca de fonte de nutrientes contidos nos frascos

 1952 - George Gey: utilizou células de carcinoma cervical (HeLa)

 Primeiro estudo com cultura de células de origem humana
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TIPOS

PODEM SER DIVIDIDAS EM:

 Cultura primária

 Cultura secundária

 Linhagem celular contínua

 Células transformadas
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CULTURA PRIMÁRIA

Números de replicações finitas

Obtidas direto do tecido Senescência

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Obtidas direto do tecido

CULTURA PRIMÁRIA
CULTURA
SECUNDÁRIA
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LINHAGEM CELULAR CONTÍNUA

• Alta proliferação

• Não perdem características

Obtidas direto do tecido Senescência
• +/- 80 passagens

MRC-5: pulmão de feto humano – utilizada na vacina da rubéola

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CÉLULAS TRANSFORMADAS

Números de replicações finitas

Oriundas de tumores primários ou de células primárias que
passaram por transformação/IMORTALIZAÇÃO:

Oncogenes virais ou tratamento químicos

Aptas a crescer indefinidamente

Obtidas direto do tecido Senescência

Cultivos por longos períodos (pesquisa cientifica)

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CÉLULAS TRANSFORMADAS

Podem
Números ser
de replicações finitas
repetidamente
subcultivadas

Obtidas direto do tecido

Linhagem celular Ishikawa

> 3.400 linhagens celulares
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Obtidas direto do tecido

Células aderentes x células não aderentes

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CULTURA 3D

Obtidas direto do tecido

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CULTURA 3D

Obtidas direto do tecido

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INSERTO TRANSWELL®

Obtidas direto do tecido

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CONDIÇÕES DE CULTURA
AS CONDIÇÕES DE CULTURA VARIAM AMPLAMENTE PARA CADA TIPO CELULAR

 O ambiente artificial em que as células são cultivadas consiste:

 Frasco adequado;
 Meio de cultivo (nutrientes essenciais);
 Gases (CO2);
 Controle físico-químico (pH, temperatura).
Obtidas direto do tecido
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POR QUE USAR CULTURA CELULAR?

• É o principal modelo alternativo para a SUBSTITUIÇÃO DOS ANIMAIS em

experimentos de pesquisa (toxicidade)

• Uma maneira de estudar mais diretamente as doenças em humanos

Obtidas direto do tecido
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VANTAGENS

 Controle do ambiente;
 Homogeneidade da amostra;
 Resposta mais sensível
 Investigação de uma única variável de
forma precisa;
• Atividades intracelulares
• Fluxo intracelular
• Interações com o ambiente
• Interação célula-célula
• Produtos celulares
Obtidas direto do tecido
• Aspectos genéticos
• Estudo da Imunologia
• Compreensão de fenômenos de neoplasia
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LIMITAÇÕES

 A proliferação in vitro difere daquela in vivo

 A adesão célula-célula é reduzida
 Em geral não possui heterogeneidade e arquitetura TRIDIMENSIONAL de um

tecido in vivo
 Dificuldade de mimetizar o microambiente do organismo
 Líquido extracelular: hormônios, fatores de crescimento
 Perda de características conforme
Obtidas o tempo
direto de cultivo
do tecido
 Certa dificuldade de extrapolação para o modelo in vivo
 Linhagens derivam de uma única “fonte”
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APLICAÇÕES

 MECANISMOS ENVOLVIDOS em diversas doenças

 Alterações fenotípicas,
 Alterações na sinalização e expressão de genes e proteínas,
 Etc.

Obtidas direto do tecido

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APLICAÇÕES

 Pesquisa com CÂNCER

Mecanismos celulares e moleculares envolvidos no:

 Desenvolvimento/Sinalizações tumoral,
 Progressão tumoral,
 Mecanismos envolvidos nas metástases,
 Resistência terapêutica, Obtidas direto do tecido

 Interação das células tumorais com outros tipos

celulares,
 Etc.
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APLICAÇÕES

 Teste de NOVAS TERAPIAS

 Novas moléculas,
 Extrato de plantas,
 Nanopartículas (nanocarreadores),
 Redirecionamento de fármacos, etc.

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 Teste de TOXICIDADE CELULAR
Novas moléculas em estudo - selecionando melhor desenho experimental in vivo
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APLICAÇÕES

 ENGENHARIA DE TECIDOS

 Pode ser aplicada à produção de pele artificial, cartilagens e tecidos ósseos.

 Teste de cosméticos

Pele artificial no Laboratório de

Biologia da Pele da USP:
 TERAPIA CELULAR reconstruída a partir de células humanas

Obtidas direto do tecido

 Tem como princípio a restauração da função de um órgão ou tecido lesionado,

introduzindo células novas para substituir as células mortas ou danificadas, por doenças
ou problemas genéticos, por exemplo.
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APLICAÇÕES

 PRODUÇÃO DE IMUNOLÓGICOS

Para crescimento viral é necessário o seu cultivo em células, pois os

vírus se replicam em hospedeiros.

 A vacina de SARAMPO é produzida em culturas de fibroblastos de

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embrião de galinha;
 A vacina de POLIOMIELITE é produzida em células de rim de macaco-
verde africano (Cercopithecus aethiops).
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LABORATÓRIO DE BIOFÍSICA CELULAR E INFLAMAÇÃO - PUCRS

 Cultura primária

 Linhagens imortalizadas:

 HepG2 (carcinoma hepatocelular)

 GRX (fibrose hepática)
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 Hishikawa (câncer de endométrio)
 Raw 264.7
 MRC-5 (fibroblasto pulmonar)
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LABORATÓRIO DE BIOFÍSICA CELULAR E INFLAMAÇÃO - PUCRS

 Meio DMEM
 Soro Fetal Bovino – 5 ou 10%

 Estufa 37°C – 5% de CO2

 Mantidas em nitrogênio líquido

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LABORATÓRIO DE BIOFÍSICA CELULAR E INFLAMAÇÃO - PUCRS

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LABORATÓRIO DE BIOFÍSICA CELULAR E INFLAMAÇÃO - PUCRS

Obtidas direto do tecido

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REFERÊNCIAS

Barbosa, B. et al. Histórico do desenvolvimento do cultivo de células animais. Uma Revisão. Brazilian Journal of
Hygiene and Animal Sanity. V. 9, n. 2, 2015.

http://www.epsjv.fiocruz.br/sites/default/files/capitulo_5_vol2.pdf

http://cursobioquimica.iq.usp.br/paginas_view.php?idPagina=939&idTopico=1450#.X7JsdWVKjIU

Obtidas direto do tecido

Adesões celulares e a MEC
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Muito obrigada!
Obtidas direto do tecido
Adesões celulares e a MEC