Compartimentao do Ncleo

Alves, Margarida; Duarte, Ana; Ferreira, Carina; Figueiredo, Catarina; Pereira, Mafalda Servio de Biologia Celular e Molecular da Faculdade de Medicina da Universidade do Porto
Introduo
O ncleo celular um organelo presente nas clulas eucariticas que funciona como centro de controlo celular. Contm a informao gentica sendo o local onde ocorre a duplicao do DNA e a sua transcrio. Apresenta invlucro nuclear, nucleoplasma, e nuclolo. geralmente nico e aproximadamente esfrico. O invlucro nuclear composto por duas membranas lipoproteicas, que se fundem nos complexos de poro nuclear os quais controlam o trfego nuclear, ncleo citosol. A informao gentica encontra-se nas molculas de DNA, sendo este organizado com a ajuda de protenas bsicas histonas, formando a cromatina. A cromatina pode ser classificada em heterocromatina e eucromatina. Os nuclolos so especficos e compostos por cromatina, grande quantidade de RNA ribossmico e protenas a sua funo est relacionada com a formao de ribossomas. O nucleoplasma o componente mais fluido do ncleo, sendo responsvel pela difuso molecular no interior do organelo.

Nuclolo
O nuclolo a subestrutura mais evidente dentro do ncleo celular. Nele ocorre a transcrio dos RNAs ribossmicos (rRNAs) e o seu processamento, ocorrendo a sntese de ribossomas, necessrios em quantidades variveis, para sntese proteica. Para satisfazer as necessidades de transcrio de grande nmero de molculas de rRNA, todas as clulas contm inmeras cpias dos seus genes. (no ser humano 250 cpias) O tamanho do nuclolo directamente proporcional taxa de sntese de ribossomas e de protenas da clula.

Morfologicamente os nuclolos possuem 3 regies distintas: -componente fibrilar denso onde ocorre a transcria pela RNA polimerase I e se inicia o processamento do pr-rRNA;

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Matriz nuclear
A matriz nuclear definida como estrutura residual do ncleo, que se obtm aps o processo de extraco e, responsvel pela forma e tamanho do ncleo. Subjacente membrana nuclear interna, est a lmina nuclear, uma rede fibrosa, que fornece suporte estrutural para o ncleo e tambm faz parte da matriz nuclear. A lmina nuclear composta por cerca de cinco protenas, estruturalmente relacionadas da famlia dos filamentos intermedirios, designadas por lminas A, B, C, D e E. Uma das propostas para a estrutura do nucleosqueleto, considera que este constitudo no por filamentos, mas por canais utilizados para o transporte de RNA, em cuja superfcie externa ( as lminas) se ancoraria ao DNA. (1)

-centro fibrilar que contem cpias dos genes do rRNA no transcritos activamente; - componente granular onde o processamento do pr-rRNA continua e se d a unio das protenas ribossomais ao pr-rRNA.

Molecular Biology of the cell, 4th ed., Alberts; 2002; Figure 6.63

Os ribossomas eucariticos (80S), contm 4 tipos de rRNA: 5S; 5.8S e 28S que fazem parte da subunidade grande (60S) e o rRNA 18S que constitui a subunidade pequena (40S).

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Cromatina As molculas de DNA encontram-se no ncleo, sendo organizado com a ajuda de protenas designadas histonas, formando a cromatina. Existem dois tipos de cromatina: Heterocromatina encontra-se preferencialmente periferia do ncleo e, constituda por sequncias de DNA que no codificam protenas (genes transcricionalmente inactivos), permanece altamente condensada, sendo esta poro bem visvel em microscopia. Eucromatina distribui-se por todo o ncleo de forma descondensada, sendo constituda por genes que codificam protenas, ou seja, genes transcricionalmente activos.
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THE CELL A Molecular Approach, 2nd ed.; Cooper, 2000; Figure 8.1 c

O nuclolo no circundado por membrana, organiza-se em torno dos cromossomas que contm os genes para os rRNAs 5.8S; 18S e 28S. Forma-se e desagrega-se variando em nmero e em tamanho ao longo do ciclo celular.

O invlucro nuclear
A sua estrutura: O invlucro nuclear uma estrutura complexa onde se identificam: - duas membranas concntricas: a membrana nuclear externa e a membrana nuclear interna; - a lmina nuclear fibrosa; - complexos de poros nucleares.
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Durante a interfase, embora a cromatina parea uniformemente distribuda, ela organiza-se em domnios funcionais distintos, que tm um papel muito importante na regulao da expresso gentica. Esses domnios perecem ser em forma de ansa, contendo aproximadamente 50 a 100 Kb do DNA, e funcionam independentemente. A separao dos domnios cromossomais feita por domnios intercromossomais; estes evitam que haja contacto entre cromatina de domnios diferenciais e interfiram na actividade uns dos outros. A cromatina torna-se muito condensada, durante a mitose, para formar os cromossomas, que vo ser distribudos pelas clulas-filhas.

THE CELL A Molecular Approach, 2nd ed.; Cooper, 2000; Figure 8.22 THE CELL A Molecular Approach, 2nd ed.; Cooper, 2000; Figure 8.18 b

Os RNAs ribossomais 5.8S; 18S e 28S, so transcritos dentro do nuclolo pela RNA polimerase I a partir de uma nica unidade de transcrio, produzindo um RNA precursor 45S. A transcrio do rRNA 5S ocorre fora do nuclolo e catalisada pela RNA polimerase III. Os genes para este rRNA esto presentes no cromossoma 1. O gene dos rRNAs 5.8S; 18S e 28S esto organizados em srie nos cromossomas 13, 14, 15, 21 e 22, sendo separados uns dos outros por uma sequncia de DNA espaador no transcrito. O transcrito primrio o rRNA45S alm dos RNAs ribossomais 5.8S; 18S e 28S, contm as regies espaadoras transcritas localizadas entre eles e nas extremidades do gene.

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THE CELL A Molecular Approach, 2nd ed.; Cooper, 2000; Figure 8.26

Outros domnios funcionais do ncleo

Domnios OPT (Oct1/ PTF/ Transcrio) Os domnios OPT so sobretudo locais onde se concentram factores de transcrio necessrios aco das RNA polimerases. Corpos Espiralados, Coiled bodies ou Corpos de Cajal So pequenos bastonetes curvos de natureza ribonucleoproteica e contm a protena fibrilharina. So locais de reserva de componentes do splicing do RNA. Podem organizar e regular a expresso dos genes dos SnRNAs U1 e U2, acumulando os SnRNAs U1 e U2. Intervm no processamento do RNAm e no amadurecimento do RNAr. GEMS (Gemini of Coiled bodies) Encontram-se associados aos corpos espiralados. Possuem SMN- uma protena importante como factor de transcrio. Esta associa-se protena SIP-1 formando complexos com a protena Sm que intervm na formao, activao e regenerao do spliceossoma. Tambm contm componentes do splicing. Os GEMS e os corpos espiralados esto juntos por uma protena de ligao que pode ser a fibrilharina do corpo espiralado que tem capacidade de se ligar SMN. Corpos de Clivagem Associam-se aos corpos espiralados em algumas fases do ciclo celular. So enriquecidos em factores de clivagem da extremidade 3 dos RNAs. Grnulos intercromatnicos Surgem periferia das regies de cromatina condensada em associaes de 30 a 50 grnulos ligados por fibrilas pericromatnicas; tm marcao autorradiogrfica muito intensa. Focos de transcrio So locais de associao de enzimas (RNA polimerase II) em actividade e dos seus transcritos; localizam-se na rea extranucleolar. Focos de replicao Esto distribudos uniformemente pelo ncleo agrupando componentes da replicao do DNA (Factores de replicao, DNA polimerase , DNA primase, Topoisomerase II, RNA polimerase II).

O espao entre a membrana nuclear externa e interna designa-se por cisterna perinuclear, o qual est em continuidade com as cisternas do retculo endoplasmtico. Deste modo, a membrana nuclear externa apresenta na sua face citoplasmtica ribossomas sendo funcionalmente similar s membranas do retculo endoplasmtico. As membranas nucleares funcionam como barreira de separao dos componentes nucleares do citoplasmticos. Subjacente membrana nuclear interna encontra-se a lmina nuclear fibrosa, rede fibrosa que fornece suporte estrutural ao ncleo e actua como local de ligao de cromatina. Esta lmina constituda por diferentes protenas, sendo as lminas A, B e C que se encontram em maior quantidade. A lmina B responsvel pela ligao da lmina nuclear fibrosa s membranas do invlucro nuclear, enquanto que as lminas A e C so DNA-binding proteins sendo responsveis pela estabilizao da cromatina perifrica no ncleo.

No processamento do pr-rRNA intervm protenas ribossomais e snoRNAs pequenos RNAs nucleolares. Inicialmente ocorre a clivagem dentro do espaador transcrito externo (ETS) prximo da extremidade 5 do pr-rRNA 45S. Esta clivagem feita pelo snoRNA U3, o snoRNA mais abundante do nuclolo. Segue-se a remoo do ETS da extremidae 3. Depois, ocorre a clivagem na extremidade 5 da regio 5.8S que separa 2precursores, 1 para o rRNA 18S e outro para o rRNA 5.8S + 28S. O snoRNA U8 responsvel pela clivagem do pr-rRNA que forma os rRNAs 5.8S e 28S; o snoRNA responsvel pela clivagem do pr-rRNA que forma o rRNA 18S.

Em determinados pontos, as membranas nucleares interna e externa fundem-se formando canais de natureza proteica que atravessam o invlucro nuclear que se designam por complexos de poros nucleares. Estes so os nicos canais por onde pequenas molculas polares, ies e macromolculas so capazes de se deslocar entre o ncleo e o citoplasma. Assim, o complexo de poro nuclear responsvel pelo trnsito selectivo de protenas e RNAs entre ncleo e citoplasma. As pequenas molculas so capazes de passar atravs de canais abertos no complexo de poros nucleares por difuso passiva, j as macromolculas so transportadas por um mecanismo selectivo dependente de energia que actua para importar ou exportar protenas e RNAs.

As protenas ribossomais so sintetizadas no citoplasma sendo os seus genes transcritos pela RNA polimerase II. Estas protenas so transportadas do citoplasma para o ncleolo onde so unidas com os pr-rRNAs para formar partculas pr-ribossomais. A associao da maioria das protenas comea enquanto o pr.rRNA ainda est a ser sintetizado mas algumas, assim como o rRNA 5S, so incorporadas j durante a clivagem do mesmo. As partculas pr-ribossomais depois amadurecem, sendo transportadas para o citoplasma como subunidade grande (rRNAs 5S, 5.8S e 28S) e pequena do ribossoma ( rRNA 18S), sendo que a segunda amadurece mais rapidamente. A sua exportao a partir do ncleo, parece ser devida a sinais de exportao presentes nas protenas ribossomais.

THE CELL A Molecular Approach, 2nd ed.; Cooper, 2000; Figure 85

O complexo de poro nuclear constitudo por oito complexos proteicos de sustentao ligados a anis nas faces citoplasmtica e nuclear do invlucro nuclear. O conjunto rodeia um canal central onde se situa o transportador central, atravs do qual ocorre o transporte molecular. O anel citoplasmtico possui prolongamentos filamentosos os quais desempenham uma funo no reconhecimento das molculas a transportar. Tambm o anel nuclear estende filamentos que formam uma estrutura com forma de cesto nuclear.
THE CELL A Molecular Approach, 2nd ed.; Cooper, 2000; Figure 8.7

THE CELL A Molecular Approach, 2nd ed.; Cooper, 2000; Figure 8.28

Bibliografia:
- Tese de doutoramento de Prof.a Dra. Delminda Neves apresentada Universidade do Porto em 2001; - "The Cell. A Molecular approach."- 3rd ed. G.M. Cooper, AMS Press, U.S.A. 2004; - "Molecular Biology of the Cell." 4th ed., Alberts, Bray, Lewis, Raff, Roberts and Watson, Garland Publishing, Inc. New York, 2002.
(1) Razin e Gromova (1995) The channels model of nuclear matrix structure. Bio Essays 17, 443 - 450 (2)http://images.google.com/imgres?imgurl=http://cellbio.utmb.edu/cellbio/nucleus2.jpg&imgrefurl=http://cellbio.utmb.edu/cellbio/nucleus.htm&h=604&w=437&sz=62&tbnid=AwVlMdOIvrMJ:&tbnh=133&tbnw=96&hl=en&start=7&prev=/images%3Fq%3DNucleus%26hl %3Den%26lr%3D (3)http://images.google.com/imgres?imgurl=http://www.cbs.dtu.dk/staff/dave/roanoke/fg16_05a.jpg&imgrefurl=http://www.cbs.dtu.dk/staff/dave/roanoke/genetics980218.html&h=480&w=560&sz=36&tbnid=1_B6l61iIcgJ:&tbnh=112&tbnw=131&hl=en&start=12&prev=/im ages%3Fq%3DDNA%2Bcompaction%26hl%3Den%26lr%3D%26sa%3DG

Agradecimentos:
- Prof Dra. Delminda Neves pelo apoio prestado na elaborao deste trabalho.