UDESC PLANALTO NORTE CENTRO DE TECNOLOGIA MOVELEIRA LABORATRIO DE BOTNICA

APOSTILA DE AULAS PRTICAS ANATOMIA VEGETAL

Prof. ARLINDO COSTA

SO BENTO DO SUL 2006

2 ______________________________________________________________________________ Caros alunos

Roteiro de aulas prticas Prof Arlindo Costa UDESC - 2006

Aqui esto algumas sugestes para que vocs possam ter um melhor aproveitamento do curso prtico de Anatomia Vegetal Leia cuidadosamente os procedimentos antes de iniciar as atividades prticas. Estude a teoria e observe bem as figuras nas aulas tericas antes de ter as aulas prticas. Se possvel, sempre tenha um livro com figuras dos assuntos a serem estudados. Anotar todos os detalhes pertinentes atividade prtica, desde a explicao do professor at as observaes peculiares de cada corte. Esclarecer com o professor todos os pontos duvidosos. Utilize o material necessrio, evitando desperdcios e danos. Deixar a bancada do laboratrio perfeitamente limpa. Deixar os microscpios limpos, cobertos, desligados. Devolver o material didtico a seu devido lugar. Colocar lminas e lamnulas sujas em local apropriado Elas devero estar limpas para serem utilizadas nas prximas aulas. Deixar todos os vidros com reagentes e corantes devidamente tampados Participe ativamente de todas os procedimentos prticos, para que ao final, voc adquira habilidade prtica em anatomia vegetal.

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1-INTRODUO AO ESTUDO PRTICO DE ANATOMIA VEGETAL O estudo interno das estruturas dos vegetais feito observando-se os cortes finos de tecido vegetal em microscpio ptico. Portanto, lembre-se que so necessrios cuidados redobrados com este equipamento para sua conservao. Quanto ao material vegetal, normalmente utiliza-se o material vegetal coletado a fresco, com a possibilidade de utilizao de material herborizado aps sua hidratao. Para a conservao do material vegetal so utilizadas solues fixadoras, que promovem a morte das clulas e sua preservao estrutural em estado prximo do material fresco. As principais substncias fixadoras so formol, o lcool, iodo, bicromato de potssio e os cidos: actico, pcrico crmico e smico. A escolha do uso de solues depende dos objetivos do trabalho a ser realizado. Ateno para evitar o contato das solues fixadoras com a pele, pois a maioria das substncias citadas txica. Para que a luz possa atravessar o tecido a ser estudado, os cortes feitos devem ser suficientemente finos e transparentes. Utiliza-se regularmente o micrtomo para obteno de cortes finos, mas para realizao dos cortes neste equipamento, o material vegetal deve estar devidamente desidratado e includo em um suporte (mais comum: parafina). Podemos tambm realizar cortes mo livre, com auxilio de uma lmina de barbear e um suporte (isopor, pecolo de embaba, medula do caule de sabugueiro). O corte deve ser imediatamente transferido para um recipiente contendo gua destilada. Os cortes realizados devem ser mais finos o possvel, possibilitando a observao das estruturas vegetais. Tipos de corte Para visualizarmos as estruturas anatmicas, devermos fazer e manipular os cortes com cuidado, observando sempre o plano de corte pode ser: a. Transversal: Perpendicular ao maior eixo do rgo. b. Longitudinal: Paralelo ao maior eixo do rgo. Quando o rgo cilndrico, o corte longitudinal pode ser tangencial, tangente ao raio cilindro, ou radial, passando pelo dimetro ou raio. www.profarlindo.bio.br

4 ______________________________________________________________________________ c. Paradrmico: Paralelo superfcie do rgo. Utilizado principalmente em estudos

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dos tecidos de revestimento.

Longitudinal radial

Longitudinal tangencial

Transversal

Figura 1. Planos de corte em rgo cilndrico. Durabilidade dos cortes Quanto durao os cortes podem ser provisrios, ou permanentes. Nos provisrios, o liquido de incluso utilizado a gua, glicerina ou corante. Nas montagens permanentes utiliza-se o Blsamo do Canad ou resinas sintticas. Em nossas aulas utilizaremos lminas com cortes provisrios confeccionados pelos alunos durante o perodo da aula prtica, portanto os procedimentos descritos so os adequados obteno desse tipo de material. Clareamento dos cortes A clula vegetal contm inmeras substncias que possuem cor, dentre elas os pigmentos. Para facilitar a observao das estruturas, vrios mtodos de colorao

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5 ______________________________________________________________________________ podem ser empregados, entretanto para que sejam eficientes, necessrio que os
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tecidos estejam livres de outras cores. O clareamento dos cortes feio utilizando soluo de hipoclorito de sdio comercial ou cloral hidratado. O transporte dos cortes para a soluo de hipoclorito deve ser feito com o auxlio de estilete e no com pincel, para no danificar suas cerdas. Transferir os cortes em seguida para outro recipiente com gua destilada e enxaguar abundantemente. Com o objetivo de corrigir o pH para que no haja interferncia na eficcia do corante, passar os cortes em soluo de cido actico diludo, enxaguando em gua em seguida. Colorao dos cortes O uso de corantes necessrio para evidenciar as estruturas celulares, resultando em maior facilidade para observao. Alguns reagentes so empregados para a definio do tipo de substncia encontrada em alguns tipos de clulas. O corante que ser mais utilizado em nossas aulas o safrablau. Trata-se de uma soluo composta por dois tipos de corantes: o azul de astra, que cora paredes celulsicas em azul, e a safranina, que cora paredes lignificadas, suberificadas e cutinizadas em vermelho. Devido disponibilidade escassa de recursos para as aulas, utilizaremos um substituto do azul de astra, o azul de alcio. Roteiro para preparo das lminas 1. Coloque os cortes em vidro de relgio contendo a soluo de hipoclorito de sdio at perderem completamente sua colorao; 2. Enxge os cortes em gua durante 1 minuto e repita este procedimento 2 vezes, trocando a gua de enxge; 3. Transfira os cortes para um vidro de relgio contendo cido actico diludo; 4. Enxge novamente durante 1 minuto; 5. Transfira os corte para um vidro de relgio contendo algumas gotas de safrablau durante 20-30 segundos; 6. Enxge abundantemente em gua; 7. Transfira os cortes com o pincel para uma lmina contendo uma gota de glicerina ou gua; 8. Cubra com lamnula, evitando a formao de bolhas. www.profarlindo.bio.br

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Desenhos As prticas de Anatomia Vegetal so realizadas mediante a observao de vrias estruturas vegetais em diversos grupos, portanto necessria a documentao das observaes atravs da confeco de desenhos. Os esquemas feitos durante a aula refletem se o aluno compreendeu a organizao das estruturas de maneira consistente. Os desenhos devem ser simples e levar em considerao a forma do objeto e as propores dos componentes dos cortes. Outro aspecto importante a incluso de legendas, para que se possa reconhecer as estruturas desenhadas. Dois tipos de desenho podem ser empregados nas aulas prticas: a. Desenho detalhado: Tem o objetivo de representar a estrutura da maneira mais prxima ao material observado. Deve ser includo o maior nmero possvel de detalhes. b. Desenho simplificada do esquemtico: Fornece uma idia global de forma material em estudo. Leva em considerao a forma e a

proporo dos diferentes componentes. Para este tipo de desenho, empregase usualmente a conveno de Metcalfe & Chalk para a representao de tecidos da seguinte maneira: Parnquima Colnquima Esclernquima Felema ou sber Xilema Floema Epiderme

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O curso ser ministrado com introduo gradual da observao de estruturas e da confeco de cortes, com o objetivo que o aluno desenvolva gradualmente habilidade na tcnica de preparo de lminas e observao de tecidos vegetais. Sempre anote qual material vegetal e o tipo de corte que esto sendo observados. Anote outras informaes que forem importantes no estudo que estiver sendo realizado. Os nomes cientficos devem ser anotados de acordo com o Cdigo Internacional de Nomenclatura Botnica. II- Roteiros 1- Cortes mo livre Objetivo: Treinamento na obteno de cortes mo livre, preparaes histolgicas e esquematizao das estruturas observadas no microscpio. Material: Folha e pecolo de diferentes espcies vegetais. Procedimento: I. Faa cortes transversais, longitudinais e paradrmicos, utilizando o suporte, de acordo com o esquema fornecido anteriormente. Questes: 1. Quantos tipos de clula voc capaz de distinguir nesta folha? 2. Qual o melhor aumento para observar: a. a estrutura interna geral do pecolo? b. Detalhes dos diferentes tipos de clulas? 3. Observe os diferentes tipos de clulas. Em que podemos nos basear para diferenci-los? 4. Faa os esquemas segundo as orientaes fornecidas previamente.

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2- Substncias ergsticas Etapa A - Amido Material vegetal: Tubrculo de Solanum tuberosum L. Procedimento: I. Faa cortes finos dos tubrculos; II. Adicione uma gota de lugol e cubra com lamnula. III. Observe ao microscpio e desenhe.

Material: Aumento:

Etapa B - Oxalato de clcio Material vegetal: Folhas de Nerium oleander e de Diefembachia sp. Procedimento: I. Faa cortes transversais nos diferentes materiais fornecidos. II. Coloque os cortes em uma gota de gua em diferentes lminas e cubra com lamnula. www.profarlindo.bio.br

9 ______________________________________________________________________________ III. Observe ao microscpio, identifique e desenhe as diferentes substncias ergsticas.

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Material: Aumento: Etapa C - Carbonato de clcio Material vegetal: Folhas de Ficus retusa. Procedimento: I.

Material: Aumento:

Fazer cortes transversais finos das folhas;

II. Coloque em uma lmina com uma gota de gua e cubra com lamnula; III. Observe ao microscpio o contedo das clulas perifricas mais volumosas que as demais, esquematize; IV. Observando ao microscpio, retire a gua com auxlio de papel de filtro e pingue uma gota de cido clordrico junto a uma das bordas da lamnula, de maneira que o cido entre em contato com o corte.

Material: Aumento: Questes: www.profarlindo.bio.br

10 ______________________________________________________________________________ 1. O que aconteceu quando o cido entrou em contato com o corte?

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3 - Meristemas Etapa A Meristemas apicais Material: Lminas permanentes de pice caulinar de Plecthranthus barbatus e de raiz de aguap. Procedimento: I. Observe ao microscpio a lmina de raiz de aguap;

II. Identifique a coifa e o meristema apical da raiz; III. Localize os meristemas primrios: Protoderme, procmbio e meristema fundamental. Esquematize. IV. Observe ao microscpio a lmina de pice de P. barbatus; V. Observe o meristema apical dos caule, os meristemas primrios e os primrdios foliares. Esquematize.

Material: Aumento:

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Material: Aumento: Questes: 1. Caracterize as clulas da coifa e da regio meristemtica com relao forma das clulas, relao ncleo citoplasma, ocorrncia de diviso celular. 2. Quais os tecidos originados pela protoderme, procmbio e meristema fundamental? 3. Qual a funo da coifa? 4. Compare o pice caulinar e o radicular. Cite as diferenas bsicas quanto posio do meristema e a produo de estruturas. Etapa B Meristemas laterais Material vegetal: Caule primrio e secundrio de P. barbatus. Procedimento: I. II. III. IV. Faa cortes transversais finos da regio prxima ao pice e de uma regio mais basal; Execute o procedimento para descolorao e colorao com safrablau; Prepare a lmina e cubra com lamnula; Observe ao microscpio, identifique os meristemas laterais e desenhe.

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Estrutura primria Aumento: Questes:

Estrutura secundria Aumento:

1. Diferencie os meristemas apicais dos laterais. 2. O que acontecer com a organizao dos tecidos vasculares primrios em decorrncia da atividade dos meristemas laterais? 3. A partir de suas observaes sobre o crescimento deste rgo, esquematize um estgio mais avanado do crescimento secundrio. 4- Epiderme e suas formaes Etapa A Tricomas Material vegetal: rgos tricomatosos. Sugestes: folhas de Tillandsia sp (barba de velho), caule de P. barbatus, folha de Melastomataceae. Procedimento: I. Faa cortes transversais finos e raspe a epiderme dos materiais fornecidos; II. Execute o procedimento de descolorao e colorao dos cortes; III. Prepare o material em lmina, cubra com lamnula, observe e desenhe.

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Material: Aumento: Questes: 1. Caracterize as clulas epidrmicas. 2. Quais as diferenas anatmicas e funcionais que existem entre tricomas tectores e secretores? 3. Caracterize os tipos de tricomas tectores encontrados quanto forma e a nmero de clulas. Etapa B - Estmatos. Material vegetal: Folhas de diferentes espcies (sugestes: uma espcie de Poaceae goiabeira, Coffea arabica, fortuna e cravnea). Procedimento:

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14 ______________________________________________________________________________ I. Faa cortes paradrmicos das faces adaxial e abaxial das espcies
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selecionadas; II. Execute o procedimento de descolorao e colorao; III. Observe ao microscpio, identifique os tipos de estmatos e esquematize.

Material: Aumento: Questes: 1. Indique, para as diferentes espcies, em qual das faces foram encontrados os estmatos. 5 - Parnquima Material vegetal: Folhas de Kalanchoe, ou outra espcie suculenta, caule de P. barbatus, folhas ou caules de uma espcie aqutica, tubrculo de Solanum tuberosus. Procedimento: www.profarlindo.bio.br

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I.

Faa cortes transversais finos dos tecidos a serem analisados;

II. Execute o procedimento de descolorao e de colorao; III. Prepare os cortes sobre lmina com gua. Cubra com lamnula e observe; IV. Alm dos cortes transversais, faa cortes longitudinais radiais finos dos caules. Monte em lmina com gua e cubra com lamnula; V. Observe as clulas de parnquima, a parede celular, os espaos intercelulares e o contedo celular; VI. Esquematize.

Material: Aumento: Questes: 1. Compare os diferentes tipos de parnquima observados. 2. Qual o tipo de parnquima que predomina nas folhas? 3. Caracterize o parnquima quanto sua localizao nos cortes. 4. Descreva a parede celular das clulas parenquimticas.

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6 - Colnquima Material vegetal: Pecolos de Datura suaueolens (trombeteira), Ricinus communis L. (mamona) e Sambucus australis Cham et Schelechtendal (sabugueiro). Procedimento: I. Faa cortes transversais finos dos trs tipos de tecidos fornecidos;

II. Descobrir os tecidos e corar com safrablau; III. Prepare os cortes em lmina com gua e cubra com lamnula; IV. Observe ao microscpio, esquematize e identifique encontrados. os tipos colnquima

Material: Aumento:

Material: Aumento:

Material: Aumento:

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Questes: 1. Qual o critrio utilizado para a classificao do colnquima? 2. Qual a localizao do tecido nos cortes observados? 3. Caracterize o espessamento da parede celular nos tipos de colnquima encontrados. 4. Compare uma clula parenquimtica com uma colenquimtica com relao formada clula e composio da parede celular. 7 - Esclernquima Material vegetal: Fruto de Pyrus malus, semente de Phaseolus vulgaris, caule de P. barbatus em desenvolvimento secundrio, folha de Nymphaea sp. * A colorao ser feita com floroglucina acidificada (reagente especfico para lignina) Procedimento I. Raspe a polpa do fruto de Pyrus malus e coloque sobre uma lmina; casca da semente e coloque sobre uma lmina; III. Faa cortes transversais e longitudinais do caule e coloque sobre uma lmina; IV. Faa cortes transversais da folha de Nymphaea e coloque sobre uma lmina; V. Em todos os cortes pingue uma gota de cido clordrico (Sol A) e outra de floroglucina (Sol. B). Aguarde 1-2 minutos; VI. Cubra com lamnula e observe ao microscpio; VII. Esquematize os diferentes tipos de clulas esclerenquimticas.

II. Faa cortes transversais da semente de leguminosa, procurando abranger a

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Material: Aumento: Questes: 1. Quais foram os tipos de clulas esclerenquimticas observadas? 2. Caracterize a parede celular das clulas esclerenquimticas. 3. Qual a localizao das clulas esclerenquimticas encontradas? 4. Diferencie as clulas colenquimticas das clulas esclerenquimticas. 8 - Xilema Material vegetal:Macerado do caule de Pinus sp e de Impatiens sp.; caule de Impatiens; Lmina semipermanente de Cupressus sp.

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Procedimento: I. Faa cortes transversais e longitudinais do caule;

II. Execute o procedimento de descolorao e colorao com safrablau; III. Prepare o corte em lmina e cubra com lamnula; IV. Observe as clulas do xilema e esquematize. V. Observe as lminas do material macerado e compare as clulas dos elementos de conduo.

Material: Aumento:

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20 ______________________________________________________________________________ Questes:
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1. Quais foram os componentes do xilema observados? 2. Quais foram os padres de espessamento da parede celular encontrados nas diferentes lminas? 3. Compare o xilema das gimnospermas com o de Impatiens. 8- Floema Material vegetal: Caule de Sechium sp ou de Curcubita pepo, caule de Panicum maximum. Procedimento: I. Faa cortes transversais e longitudinais dos caules;

II. Core os cortes com safrablau aps procedimento de descolorao; III. Prepare os cortes em lminas com gua, cubra com lamnula e observe; IV. Identifique os elementos do floema e esquematize.

Material: Aumento:

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21 ______________________________________________________________________________ Questes:
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1. Diferencie o xilema e o floema, anatomicamente. 2. Quais as disposies dos elementos do floema em relao aos elementos do xilema nas lminas observadas? 9 - Razes Material vegetal: Lminas semipermanentes de Phaseolus vulgaris e de raiz de Orqudea. Procedimento: I. Observe ao microscpio as lminas permanentes;

II. Identifique os tecidos que ocorrem nos dois tipos de razes; III. Esquematize.

Material: Aumento:

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22 ______________________________________________________________________________ Questes:
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Caracterize as razes observadas. Quais as diferenas entre a epiderme das duas espcies? Diferencie as razes de mono e dicotiledneas 9 - Caule Material vegetal: Caule de Panicum maximum e de Dicotilednea Procedimento: I. Faa cortes transversais do matria fornecido;

II. Execute a descolorao e colorao dos cortes; III. Prepare os cortes na lmina e cubra com lamnula; IV. Observe os cortes ao microscpio, identifique os tecidos e esquematize.

Material: Aumento: Questo: 1. Diferencie os caules de monocotilednea e dicotilednea em estrutura primria.

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23 ______________________________________________________________________________ 10- Folhas

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Material vegetal: Lmina foliar e pecolo de Tibouchina sp, lmina de Eucalyptus s Lmina foliar de Panicum maximum. Procedimento: I. II. III. IV. Observe as lminas permanentes ao microscpio esquematize compare. Faa cortes transversais do peciolo e das lminas das espcies citada monte em lminas com gua, cubra com lamnula e observe. Observe a disposio dos tecidos, dos feixes vasculares e das estruturas presentes nos cortes. Esquematize.

Material: Aumento:

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Questes: 1. Descreva o mesofilo das espcies observadas. 2. Diferencie as folhas de monocotiledneas das folhas de dicotiledneas. 3. Qual tecidos de sustentao ocorre na nervura central? 4. Em quais espcies ocorre anatomia foliar Kranz?

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