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GLICOSE MONOREAGENTE
K082
INSTRUES DE USO
FINALIDADE Mtodo para a determinao da Glicose. Teste enzimtico colorimtrico, somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO DE AO Metodologia: Enzimtica Colorimtrica - GOD - PAP. A Glicose oxidada enzimaticamente pela Glicose-oxidase (GOD) de acordo com a seguinte reao: AMOSTRAS Plasmas (fluoretado), soro, lquor; lquido (asctico, pleural e sinovial). O uso do anticoagulante Fluoreto - Bioclin recomendado por ser inibidor da gliclise. Usar 1 gota para cada 3 mL de sangue. O soro s poder ser usado se for centrifugado e dosado imediatamente aps a colheita. Em outros lquidos biolgicos adicionar um inibidor da gliclise na mesma proporo descrita para o sangue, centrifugando a amostra antes de iniciar a dosagem.

Glicose + O 2 + H 2O

GOD

cido Glucnico + H 2O 2

O Perxido de hidrognio, em presena da Peroxidase (POD) reage com a 4 Aminoantipirina e Fenol, formando um cromgeno vermelho cereja cuja intensidade de cor proporcional concentrao de Glicose. REAGENTES Reagente N 1 - Reagente Enzimtico - conservar entre 2 e 8 C. Contm: Tampo (pH 7,0) 100 mmol/L, Fenol 2 mmol/L, 4- Aminoantipirina 0,3 mmol/L, Azida sdica 8 mmol/L, Glicose Oxidase > 10.000 U/L, Peroxidase > 700 U/L. Reagente N 2 - Padro - conservar entre 2 e 8 C, bem vedado. Contm: Glicose 100,0 mg/dL (5,56 mmol/L) cido benzico 20,47 mmol/ L. Em baixas temperaturas o cido benzico pode precipitar, fato que no interfere na qualidade do Padro. APRESENTAO K082-1 Reagentes Reagente N 1 Reagente N 2 250 mL 3 mL K082-2 Vo l u m e 2 x 250 mL 3 mL 4 x 250 mL 3 mL K082-3

DESCRIO DO PROCESSO Tcnica Ponto Final Marcar 3 tubos de ensaio: B (Branco), A (Amostra), P (Padro) e proceder como a seguir: Amostra Reagente N 2 Reagente N 1 Branco --1,0 mL Padro -10 !L 1,0 mL Amostra 10 !L -1,0 mL

Homogeneizar bem e colocar em banho-maria 37 C por 10 minutos. Ler a absorbncia da Amostra e do Padro em 505 nm (490-550 nm), acertando o zero com o Branco. A cor estvel por 30 minutos. INTERFERENTES Amostras com concentrao at 20 mg/dL de Bilirrubina, 750 mg/dL de Triglicrides e 160 mg/dL de Hemoglobina no produzem interferncia significativa. Nos casos de interferncias produzidas pela amostra, realizar tambm um Branco da Amostra, a fim de minimizar a ao dos interferentes. Proceder como a seguir: Marcar 1 tubo como Branco da Amostra e colocar 1,0 mL de Cloreto de sdio 0,85% com 10 !L da Amostra. Determinar a sua absorbncia em 490-550 nm, acertando o zero com gua destilada ou deionizada. Subtrair a absorbncia assim obtida, da absorbncia do tubo da Amostra. Calcular a concentrao multiplicando o resultado pelo Fator de calibrao. O uso de medicamentos altamente redutores como o cido ascrbico (Vitamina C) interferem na reao, pois competem com o consumo de H2O2, fornecendo valores falsamente diminudos. Por esta razo, devese suspender o seu uso pelos menos 12 horas antes da coleta da amostra. DESCRIO DOS CLCULOS Mtodo Ponto Final Glicose (mg/dL) = Absorbncia da amostra x 100 Absorbncia do padro Exemplo: Absorbncia da amostra = 0,347 Absorbncia do padro = 0,350 Glicose (mg/dL) = 0,347 x 100 = 99 0,350 Como a reao segue a Lei de Lambert-Beer, o Fator de calibrao pode ser usado. Fator de calibrao = Concentrao do padro (100 mg/dL) Absorbncia do padro mg/dL = Absorbncia da amostra x Fator de calibrao Exemplo: Fator de calibrao = 100 = 286 0,350

EQUIPAMENTOS E INSUMOS OPERACIONAIS Espectrofotmetro ou colormetro, banho-maria (37 C), relgio ou cronmetro, pipetas, tubos de ensaio. Encontram-se no mercado especializado de artigos para Laboratrios de Anlises Clnicas. CONDIES DE ARMAZENAMENTO E TRANSPORTE A temperatura de armazenamento dever ser de 2 a 8 C. O transporte, em temperaturas entre 15 e 30 C, no dever exceder 72 (setenta e duas) horas. Manter ao abrigo da luz e evitar umidade. CUIDADOS ESPECIAIS 1 - Somente para uso diagnstico in vitro; 2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos; 3 - A gua utilizada na limpeza do material e na preparao dos reagentes deve ser recente e isenta de agentes contaminantes; 4 - Colunas deionizadoras saturadas liberam gua alcalina, ions diversos e agentes oxidantes e redutores, que podem alterar de forma significativa os resultados; 5 - O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio; 6 - Manusear com cuidado os reagentes. O Reagente N 1 contm Azida sdica, irritante para pele e mucosas; O Reagente N 2 contm cido benzico, causador de irritaes alrgicas cutneas em pessoas sensveis; 7 - O desenvolvimento de colorao rsea no reagente N 1 no interfere na qualidade e estabilidade do reagente, desde que seja utilizado o Branco correspondente e dosagens peridicas do padro. 8 - Determinar o fator periodicamente e a cada lote do produto; 9 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo os critrios de biossegurana de acordo com a legislao vigente.

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Os resultados sero expressos em mg/dL. Glicose (mg/dL) = 0,347 x 286 = 99 A reao linear at 500 mg/dL. Para amostras com valores acima de 500 mg/dL ou densidade ptica acima de 0,8, diluir a amostra com Cloreto de sdio 0,85%, repetir a dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. LIMITAES DO PROCESSO O mtodo proposto no indicado para dosagem de Glicose na urina. CONTROLE INTERNO DE QUALIDADE Deve ser prtica rotineira do Laboratrio Clnico o uso de soro controle para checar a preciso e exatido das dosagens. Deve ser de 5% o erro mximo permitido em relao aos valores pr-estabelecidos para os controles. VALORES DE REFERNCIA Os valores de referncia em mg/dL, para o presente mtodo, foram obtidos atravs da determinao de Glicose em populaes sadias do sexo masculino e feminino. Plasma ....................................................... 60 a 99 mg/dL Lquor ......................................................... 50 a 70 mg/dL Recm-nascidos a termo .......................... 30 a 80 mg/dL Prematuros ................................................ 20 a 50 mg/dL Para converter os valores de mg/dL em mmol/L ( SI ) multiplicar por 0,0556. Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada laboratrio dever criar sua faixa de valores de referncia, de acordo com a populao atendida. DESEMPENHO DO PRODUTO Exatido RECUPERAO A anlise de recuperao foi feita com 05 determinaes de amostras. As exatides foram calculadas e se encontraram em boa concordncia com os valores de referncia, obtendo uma recuperao entre 94% e 104%. COMPARAO DE MTODOS E ESPECIFICIDADE METODOLGICA O Kit Glicose Monoreagente Bioclin foi comparado com outro mtodo para dosagem de glicose comercialmente disponvel. Foram realizadas 07 anlises e os resultados foram avaliados. A equao linear obtida foi Y = 0,9755X + 0,9991 e o coeficiente de correlao = 0,999053. Com estes resultados pode-se concluir que o kit apresenta boa especificidade metodolgica. Preciso REPETITIVIDADE A repetitividade refere-se a 20 determinaes sucessivas de Glicose, utilizando-se 3 amostras com concentraes diferentes, encontrandose os seguintes resultados: Amostra Amostra Amostra 2 3 1 Concentrao Mdia (mg/dL) Desvio Padro (mg/dL) Coeficiente de Variao (%) 66,85 0,8127 1,2157 103,50 3,9000 3,7682 91,75 1,6182 1,7637

Sensibilidade A sensibilidade foi calculada a partir de 20 determinaes de uma amostra isenta de glicose. A mdia de 0,4 mg/dL com desvio padro de 0,503 mg/dL. A sensibilidade, que indica o limite de deteco do Mtodo, corresponde a 3 vezes o Desvio Padro = 1,508 mg/dL. Significado Diagnstico A homeostase glicmica controlada pela ao de diversos hormnios, especialmente a insulina, que mantm o equilbrio da concentrao de glicose. Alteraes hormonais e outros fatores levam a variaes nesta homeostase, desencadeando hiper e hipoglicemia. A hiperglicemia ocorre em vrios tipos de diabetes mellitus, onde so freqentes retinopatias, leses renais, neuropatias e aterosclerose. O diabetes mellitus classificado em: diabetes mellitus insulino dependente (Tipo I), diabetes mellitus insulino no dependente (Tipo II), diabetes mellitus associado a certas condies e sndromes (classificado anteriormente como diabetes secundrio) e diabetes gestacional. Nas Hipoglicemias (HG) os nveis glicmicos que levam s suas manifestaes so extremamente variveis. As manifestaes podem ocorrer no jejum ou ps prandial. Ocorre HG de jejum no insulinoma, tumores no pancreticos, doenas hepticas, hipoadrenalinismo (doena de Addison), hipopituitarismo (doena de Simmond), enfermidade do armazenamento retardado do glicognio (doena de von Gierke). A hipoglicemia ps-prandial ocorre devido a causa reativa (sintomas de HG 1 a 3 horas aps a refeio); podendo ainda ser de origem alimentar ou em conseqncia do diabetes mellitus Tipo II e de intolerncia Glicose. NMERO DE TESTES K082-1 - 250 Testes / 10 !L de amostra/1 mL de Reagente K082-2 - 500 Testes / 10 !L de amostra/1 mL de Reagente K082-3 - 1000 Testes / 10 !L de amostra/1 mL de Reagente REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1 - TRINDER, P., Ann. Clin. Biochem., 6-24, 1969. 2 - TONKS, D. B., Quality Control in Clinical Laboratories, 1983. 3 - LOTT, J. A.; TURNER, K., Clin. Chem., 1987, 21:1754, 1970. 4 - CARL, A. B. and EDWARD R. A., Tietz Textbook of Clinical Chem. 2nd ed., 928-997, 5 - Quibasa: Dados do Departamento de Pesquisa e Desenvolvimento. GARANTIA DE QUALIDADE Antes de serem liberados para o consumo, todos os reagentes !"#$%"& so testados pelo Departamento de Controle de Qualidade. A qualidade dos reagentes assegurada at a data de validade mencionada na embalagem de apresentao, desde que armazenados e transportados nas condies adequadas. DADOS DO FABRICANTE QUIBASA QUMICA BSICA Ltda Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil Tel.: (31) 3439.5454 - Fax (31) 3439.5455 e-mail - bioclin@bioclin.com.br www.bioclin.com.br CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indstria Brasileira ATENDIMENTO AO CONSUMIDOR Servio de Assessoria ao Cliente Tel.: 0800 031 5454. e-mail: sac@bioclin.com.br ANVISA: 10269360136.

REPRODUTIBILIDADE: A reprodutividade refere-se a 20 determinaes de Glicose, em 3 dias diferentes, com 3 amostras de concentraes diferentes, encontrandose os seguintes resultados: Amostra Amostra Amostra 1 2 3 Conc. Mdia / dia (mg/dL) Desvio Padro (mg/dL) Coeficiente de Variao (%) 68,77 1,6601 2,4141 103,32 0,6449 0,6242 91,92 2,8037 3,0502

Reviso: Fevereiro/09