Centro Universitrio Franciscano - UNIFRA

rea da Sade
Curso de Farmcia
Manual de Aulas Prticas de Microbiologia
Elaborado por: a!se "isca#lia $ieira
%ilson &unior 'a()ell Ro*uete
Supervis+o: ,ro-. Roberto C/rist $ianna Santos
Santa 'aria0 a#osto de 1223
P r e f c i o
A rela4+o ensino-aprendi5a#em envolve #randes e comple(as decis6es0 devendo
contar sempre com o envolvimento de pro-essores e alunos7
Com a iniciativa de um pe*ueno0 mas muito interessado #rupos de alunos do se(to
semestre do curso de Farmcia do Centro Universitrio Franciscano 8 UNIFRA0 elaboramos
este simples pro9eto7 Como resultado de al#uns *uestionamentos0 concordamos em revisar e
ampliar o pro#rama de ensino de aulas prticas0 aper-ei4oando-o e colocando uma maior
interatividade e conse*uentemente um maior envolvimento do acad:mico7
Este manual representa um primeiro passo de nossos ob9etivos0 constituindo um a#ente
-acilitador e uma importante -erramenta na aprendi5a#em em 'icrobiolo#ia7 Aos acad:micos
a!se "isca#lia $ieira e %ilson &nior 'a()ell Ro*uete0 apresento meus cumprimentos e
a#radecimentos7
Santa 'aria0 a#osto de 1223
Professor Roberto Christ Vianna Santos
,ro-essor de 'icrobiolo#ia
Centro Universitrio Franciscano
1
P R T I C A 1 " i o s e # u r a n 4 a
; O estudante deer estar na sala de aula !rtica" obrigatoria#ente$
usando avental<
cabelos presos<
sapato bai(o e -ec/ado<
cal4a comprida<
n+o usar brinco e assemel/ados<
sempre com luvas<
; Cuidados %ue se dee# to#ar !ara eitar a conta#ina&'o nas aulas !rticas$
A bancada de trabal/o deve estar a mais desimpedida poss!vel0 evitar cadernos0 bolsas
e apontamentos *ue n+o ser+o utili5ados durante a -ase e(perimental0 evitando
acidentes e dei(ando o local livre para o manuseio do material em estudo7
; (# todos os trabalhos !rticos" obserar os seguintes crit)rios$
Fa5er limpe5a da bancada com lcool =2>7
"ico de "unsen com c/ama a5ulada0 a utili5a4+o deste0 visa -lambar a al4a ou a#ul/a
bacteriol?#ica e propiciar um ambiente ass@ptico ao redor do material *ue voc:
manuseia7 Aeve-se trabal/ar com a c/ama a sua -rente para evitar acidentes com -o#o0
e esse -ato indese9ado s? depende de seu BcuidadoC7
Al4a ou a#ul/a bacteriol?#ica deve ser -lambada at@ o rubor0 antes e ap?s cada
e(perimento0 elas s+o -lambadas para evitar resultados indese9veis ao seu estudo0 pois
micror#anismos podem estar assentados sobre o material7 A -lamba#em @ obri#at?ria0
pois0 esse material posteriormente poder contaminar outras pessoas como cole#as0
pro-essores e o material de limpe5a7
Sempre *ue utili5ar pipetas0 lDminas e outros materiais *ue n+o podem ser
esterili5ados por calor seco E-lamba#emF0 solicitem ao pro-essor ou monitor presente0 a
orienta4+o *uanto ao local ade*uado onde voc: dever despre5-los7 Nunca abandone
esse material sobre a bancada0 li(o etc0 para evitar contamina4+o de pessoas
desavisadas *ue n+o devem pa#ar pelo seu descuido7
G
Sempre *ue /ouver al#um acidente como *uebra de tubos ou placas com
micror#anismos0 contato com material contaminado etc0 n+o se desespere0 pois saiba
*ue o ob9etivo de seu pro-essor ou monitor @ prepar-los ade*uadamente para seus
-uturos compromissos pro-issionais0 e n+o de submet:-los a riscos de in-ec4+o7 Esses
micror#anismos t:m bai(o poder pato#:nico0 e voc: deve sempre avisar seu pro-essor
ou monitor para *ue ele tome provid:ncias ade*uadas e imediatas7
Ao -inal de todo trabal/o prtico0 retirar as luvas de -orma ade*uada0 lavar as m+os
com #ua e sab+o e posteriormente lcool =2> ou iodado7
odas as ve5es *ue voc: utili5ar o microsc?pio0 voc: deve ao -inal do trabal/o0 limpar
as ob9etivas e mant:-los livre do alcance de p?7 Foi atrav@s da manuten4+o ade*uada
destes instrumentos caros0 por cole#as *ue l/e antecederam0 *ue permitiu *ue voc:
/o9e as utili5asse7 N+o *uebre esta cadeia7
P r o c e d i # e n t o s$ t @ c n i c a s # e r a i s
A* +la#bage# da al&a ou agulha bacteriol,gica$ colocar o instrumento sobre a c/ama0
numa inclina4+o apro(imada de H3. e nunca em posi4+o /ori5ontal para n+o esterili5ar
s? a por4+o -inal e sim toda a al4a7
-* Abrir o tubo de cultura$ para os destros: su#ere o tubo com a m+o es*uerda e retire o
tamp+o com os dedos m!nimo e anelar da m+o direita0 dei(ando livres os dedos
m@dios0 indicador e pole#ar para manuseio da al4a bacteriol?#ica e da pipeta0 evitando
assim dei(ar o lampi+o sobre a bancada o *ue livraria a sua contamina4+o7
C* Abrir a !laca de !etri$ colo*ue a placa -ec/ada sobre a bancada0 com a tampa para
bai(o7 Retire o -undo da placa com a m+o es*uerda e assim voc: ter a m+o direita
livre para semear microor#anismos na super-!cie do meio de cultura7
.* Se#eadura !or esgota#ento$ semeie o material contido numa al4a ou BS)abC num
dos *uadrantes da placa com movimentos de vai e vem7 Iire a placa J2. e repita esses
movimentos atin#indo apenas um dos *uadrantes7 Iire novamente a placa0 e repita o
procedimento anterior7 No H. *uadrante da placa -a4a um 5i#ue-5a#ue lar#o7 Com isso
voc: obter colKnias isoladas7
H
(* Se#eadura e# !rofundidade" e# tubos$ semeie o material contido em uma a#ul/a
-a5endo picadas at@ o -undo do tubo0 com isso /aver o crescimento de
microor#anismos anaerobiose7
+* Confec&'o de u# bo# esfrega&o$ Aesen#ordure a lDmina passando-a livremente pela
c/ama e limpando-a com um papel absorvente7 Colo*ue no centro da lDmina o
material a ser corado evitando a concentra4+o e(cessiva num nico local0 mas
proporcionando a obten4+o de um es-re#a4o denso7 Em se#uida passe pela c/ama a
parte oposta da lDmina0 para -i(ar o es-re#a4o *ue estar pronto *uando todo o
material estiver seco7 N+o es*ue4a de identi-icar o lado da lDmina onde -e5 o
es-re#a4o7 Em se#uida reali5e a colora4+o dese9ada7
3
P R T I C A / 0 C o l o r a 4 6 e s
/11* Colora&'o de 2ra#
AF 'aterial necessrio:
- LDmina para microscopia<
- lpis para vidro<
- al4a de platina<
- tubo contendo solu4+o salina esterili5ada<
- cultura de bact@rias #ram positiva e ne#ativa<
- bateria de colora4+o de Iram Ecristal violeta0 lu#ol0 lcool acetona0
-ucsina -enicadaF<
- microsc?pio0 ?leo de imers+o0 papel absorvente<
- suporte para lDminas<
- secador de cabelo7
"F ,rocedimento:
b7MF Es-re#a4o:
- -lambar rapidamente uma lDmina de microscopia limpa0 nos dois
lados0 BcortandoC lentamente a c/ama do bico de "unsen<
- identi-icar o lado da lDmina onde ser -eito o es-re#a4o<
- -lambar a al4a de platina at@ o rubor0 e a se#uir0 dei(-la es-riar0
conservando-a toda via perto da c/ama<
- tomar o tubo de cultura com a m+o es*uerda e com os dedos m!nimo e
anelar da m+o direita remover o lampi+o da boca do tubo<
- -lambar a boca do tubo de cultura<
- introdu5ir a al4a de platina0 apreendida entre o pole#ar e o indicador
da m+o direita0 no interior do tubo at@ tocar o meio de cultura 8 retirar a al4a<
- -lambar novamente a boca do tubo de cultura<
- -ec/ar o tubo com o tamp+o e coloc-lo na estante<
- tomar uma lDmina Eanteriormente preparadaF com a m+o es*uerda e
depositar no centro da mesma a #ot!cula de suspens+o bacteriana<
N
- espal/ar o material com movimentos de rota4+o da al4a de platina0
para se obter um es-re#a4o de -orma oval0 bem -ino e uni-orme0 secar naturalmente<
- es-re#a4o nas pro(imidades da c/ama ou utili5ar o secador de cabelo
para au(iliar na seca#em7
b71F Fi(a4+o:
- -i(ar o es-re#a4o0 BcortandoC lentamente a c/ama por G ve5es0 a -im
de *ue o material -i*ue bem aderente O lDmina7 A -i(a4+o @ sempre -eita do lado contrrio ao
es-re#a4o bacteriano7
b7GF @cnica:
- -a5er um es-re#a4o /omo#:neo e -i(ar pelo calor e esperar es-riar<
- cobrir com cristal violeta e dei(ar a#ir por M minuto<
- cobrir com solu4+o de lu#ol por M minuto<
- lavar com #ua<
- descorar rapidamente com lcool acetona<
- lavar com #ua<
- corar com -ucsina -enicada por G2 se#undos<
- lavar com #ua0 secar e observar em ob9etiva de imers+o7
b7HF Resultado:
- c@lulas Iram positiva 8 ro(o escuro
- c@lulas Iram ne#ativa 8 avermel/adas ErosadaF
/1/* Colora&'o !or a3ul de #etileno
AF 'aterial necessrio:
- LDmina para microscopia<
=

- lpis para vidro<
- al4a de platina<
- tubo contendo solu4+o salina esterili5ada<
- cultura de bact@rias Iram positiva e ne#ativa<
- microsc?pio0 ?leo de imers+o0 papel absorvente<
- suporte para lDminas<
- secador de cabelo7
"F ,rocedimento:
b MF Es-re#a4o:
- -lambar rapidamente uma lDmina de microscopia limpa0 nos dois
lados0 BcortandoC lentamente a c/ama do bico de "unsen<
- identi-icar o lado da lDmina onde ser -eito o es-re#a4o<
--lambar a al4a de platina at@ o rubro e0 a se#uir0 dei(-la es-riar0
conservando-a toda via perto da c/ama<
- tomar o tubo de cultura com a m+o es*uerda e com os dedos m!nimo e
anelar da m+o direita remover o lampi+o da boca do tubo<
- -lambar a boca do tubo de cultura<
- introdu5ir a al4a de platina0 apreendida entre o pole#ar e o indicador
da m+o direita0 no interior do tubo at@ tocar o meio de cultura 8 retirar a al4a<
- -lambar novamente a boca do tubo de cultura<
- -ec/ar o tubo com o tamp+o e coloc-lo na estante<
- tomar uma lDmina Eanteriormente preparadaF com a m+o es*uerda e
depositar no centro da mesma a #ot!cula de suspens+o bacteriana<
- espal/ar o material com movimentos de rota4+o da al4a de platina0
para se obter um es-re#a4o de -orma oval0 bem -ino e uni-orme0 secar naturalmente<
- es-re#a4o nas pro(imidades da c/ama ou utili5ar o secador de cabelo
para au(iliar na seca#em7
b71F Fi(a4+o:
- -i(ar o es-re#a4o0 BcortandoC lentamente a c/ama por tr:s ve5es0 a -im
de *ue o material -i*ue bem aderente O lDmina7 A -i(a4+o @ sempre -eita do lado contrrio ao
es-re#a4o bacteriano7
P
b7GF @cnica:
- -a5er um es-re#a4o bem /omo#:neo0 -i(ar pelo calor e esperar es-riar<
- cobrir com o corante Ea5ul de metilenoF e dei(ar por M minuto<
- lavar rapidamente em #ua0 secar e observar em ob9etiva de imers+o7
b7HF Resultado:
/14* Colora&'o de es!oros$ 5irt30Con6lin
AF 'aterial necessrio:
- duas lDminas para microscopia<
- suporte para lDmina<
- corante verde mala*uita<
- corante sa-ranina ou -ucsina -enicada<
- cultura de bact@ria esporuladas E"7 subtilisF<
- lpis para vidro<
- microsc?pio0 ?leo de imers+o0 papel absorvente7

"F procedimento:
b7MF @cnica: - -a5er es-re#a4o da cultura bacteriana0 -i(ar e corar pelo %irt5-
ConQlin0 con-orme se#ue:
R corar por H minutos com solu4+o de verde mala*uita a *uente<
R dei(ar es-riar e lavar em #ua<
R corar por M minuto com sa-ranina a -rio<
R lavar com #ua0 dei(ar secar e observar em imers+o7
J
b71F Resultado:
- esporos coram-se em verde0 -ormar ve#etativas em vermel/o7
/17* Colora&'o de bact)rias lcool0cido resistentes$ 8iehl 0 9eelsen
AF 'aterial necessrio:
- es-re#a4o preparado de material de escarro de paciente
tuberculoso 9 -i(ado0 dentro de placa de petri<
bateria para colora4+o de Sie/l E-ucsina de Sie/l0 lcool-cido0
a5ul de metilenoF<
- suporte para lDmpada<
- #rampo para lDminas<
- microsc?pio e ?leo de imers+o0 papel absorvente7
"F ,rocedimento:
b7MF As micobact@rias di-icilmente ad*uirem colora46es convencionais EIRA'F0
necessitando0 portanto0 de colora46es especiais7 A parede celular destas bact@rias permite
colora4+o pela -ucsina apenas *uando a temperatura @ elevada Ecolora4+o a *uenteF7
b71F @cnica:
- corar com -ucsina de Sie/l concentrada0 a*uecendo a lDmina
at@ a emiss+o de vapores0 durante 3 minutos7 N+o dei(ar -erver nem secar<
- escorrer o corante e di-erenciar com lcool-cido Elcool a J3>
e cido clor!drico a M>F7 empo delicado0 apro(imadamente M3 se#undos<
- lavar em #ua corrente<
M2
- corar o -undo durante G2 se#undos com solu4+o a*uosa dilu!da
de a5ul de metileno<
- lavar e secar<
- observar em imers+o7
b7GF Resultado:
- encontrar bacilos corados em vermel/o0 contrastando com
outros microor#anismos e ncleos celulares em a5ul7
MM
P R T I C A 4 8 ' e i o d e c u l t u r a 8 # a r 8 n u t r i e n t e
'eios de cultura destinam-se ao cultivo arti-icial das bact@rias7 Esses meios s+o
substratos ade*uados ao crescimento0 multiplica4+o e desenvolvimento de microor#anismos
-ora de seu /bito natural7
AF 'aterial necessrio:
- placa de petri<
- erlenmeTer<
- balan4a<
- substDncias como: e(trato de carne0 peptona0 e(trato de levedura0
a#ar-O#ar e #ua destilada<

"F ,rocedimento:
- ,esa#em das substDncias:
RM2# de e(trato de carne<
RM3# de peptona<
RM# de e(trato de levedura<
RMG# de a#ar 8 a#ar<
RM222ml de #ua destilada<
- adicionar essas substDncias em um erlenmeTer0 /omo#enei5ar e
completar com #ua<
- -ec/ar o erlenmeTer com uma Bbuc/aC<
0 colocar na autoclave a M1M.C por 12 minutos para sua esterili5a4+o<
0 esterili5ar as placas de petri a M=2.C por 1 /oras na estu-a de
esterili5a4+o<
0 limpar a bancada para obter um ambiente livre de
bact@riasEcontamina4+oF
0 distribuir o meio em placas de petri<
0 arma5enar as placas contendo o meio0 embrul/ados em plsticos e
#uardados na #eladeira7
M1
P R T I C A 7 E s t e r i l i 5 a 4 + o 8 C o n t r o l e m i c r o b i a n o
U o ato ou processo de destruir ou eliminar todas as -ormas vivas de um material ou
ambiente7
AF Esterili5a4+o por calor mido - autoclave
a7MF ,rocedimento:
- veri-icar se a resist:ncia da autoclave E*ue -ica no -undo do aparel/oF
est coberta com #ua<
- Colocar o material devidamente acondicionado<
- -ec/ar a tampa e li#ar o aparel/o0 dei(ando a vlvula de escape aberta<
- *uando o vapor sair de -orma cont!nua0 -ec/ar a vlvula<
- *uando a temperatura atin#ir M1M.C0 inicia a conta#em de tempo de
esterili5a4+o0 #eralmente M3 a G2 minutos<
- desli#ar o aparel/o e esperar o ponteiro do monKmetro c/e#ar a 5ero0
para ent+o abrir a vlvula de escape0 pois em caso contrrio a #ua entra em ebuli4+o<
- abrir a autoclave somente *uando a press+o interna -or i#ual O e(terna7
"F Esterili5a4+o por calor seco 8 Estu-a
b7MF,rocedimento:
- colocar o material devidamente acondicionado Eembrul/ado em
papelF0 sem sobrecarre#ar o -orno<
- li#ar o aparel/o0 re#ulando a temperatura de MN2 ou M=2.C0 por meio
do termostato<
- esperar *ue o aparel/o atin9a a temperatura dese9ada0 controlando
sempre por um termostato colocado no ori-!cio *ue se encontra na parte superior do aparel/o<
- a partir desse momento0 iniciar a conta#em do tempo de esterili5a4+o
por duas /oras<
- abrir a estu-a somente *uando a temperatura interna atin#ir valores
pr?(imos O do ambiente7
MG
P R T I C A : - A t i v i d a d e a n t i m i c r o b i a n a d o s s a n e a n t e s
Saniantes s+o substDncias ou produtos capa5es se destruir0 indiscriminadamente0 os
micror#anismos de um super-!cie ou instrumento0 sem0 entretanto eliminar as -ormas
esporuladas7
AF 'aterial necessrio:
-ubo contendo cultura em meio li*uido E3mlF dos se#uintes
microor#anismos:
R Escherichia coli
* Candida albicans
* Bacillus stearothermophilu
* Staphylococcus aureus
- Um tubo contendo 3ml de solu4+o salina esterili5ada<
0 Ai-erentes tipos de desin-etantes em tubos de ensaio<
- Uma placa de petri contendo #ar 8 nutriente E'ueller VintonF<
- Al4a de platina<
- Uma pipeta7
"F ,rocedimentos:
- de acordo com as instru46es no r?tulo do produto0 reali5e as dilui46es
de cada produto<
- ,ipetar 203 ml do micror#anismo a ser utili5ado Ecada aluno dever
reali5ar o e(perimento com um microor#anismoF e trans-erir para um tubo contendo solu4+o
salina e para os tubos dos di-erentes desin-etantes<
- A#uardar M3 minutos<
- dividir o -undo da placa contendo #ar 8 nutriente com lpis para
vidro0 marcar os desin-etantes correspondentes<
- Semear com al4a de platina a partir dos tubos com desin-etantes W
microor#anismos0 para os X correspondentes da placa<
- Incubar a G= .C durante HP /oras7
MH
b7MFResultados:
- Ybservar o crescimento nas partes correspondentes O a4+o de cada
desin-etantes0 nas placas semeadas7 Contar o numero de colKnias E*uando poss!velF
P R T I C A ; 0 E - e i t o s d o c a l o r s o b r e o c r e s c i m e n t o
d e m i c r o r # a n i s m o s7
AF 'aterial necessrio:
- Um tubo contendo cultura de micror#anismos EBacillus
stearothermophilus, Staphylococcus aureus, Candida albicans, Escherichia coli);
- Uma placa de petri contendo #ar 8 nutriente E'ueller VintonF<
- al4a de platina<
- pin4a de madeira<
- ban/o maria<
- lpis para vidro7
"F,rocedimento:
- Aividir o -undo da placa de petri contendo #ar-nutriente em *uatro
partes0 identi-icar Enome e nmeroF e marcar E20 30 M20 e 12 minutosF<
- Semear com al4a de platina o microor#anismo no tubo X
correspondente ao tempo Z 2 na placa<
- Colocar o tubo em ban/o-maria -ervente durante 3 minutos7 Retirar e
semear com al4a de platina no M[H correspondente<
- Colocar novamente o tubo no ban/o-maria0 a#uardar 3 minutos EtZM2F0
retirar e semear com al4a de platina no X correspondente<
- Repetir a opera4+o dei(ando o tubo no ban/o-maria -ervente por mais
M2 minutos Et Z 12F0 retirar e semear com a al4a de platina no X correspondente7

( S < = ( M A . O P R O C ( . I M ( 9 T O A S ( R S ( 2 = I . O
M3
Cultura de
micror#anismo
Z3 Z2
ZM2 Z12
b7MF Interpreta4+o: Ybservar onde ocorreu o crescimento nas partes correspondentes da
placa de petri semeada

'icror#anismo 2\ 3\ M2\ 12\
MN
P R T I C A > 0 S e n s i b i l i d a d e a o s a n t i b i ? t i c o s i n $ I R Y :
A N I " I Y I R A ' A
AF 'aterial necessrio:
- cultura de microor#anismos a serem testada EIram W: stap/Tlococcus
sp0 Iram - : E7 Coli F<
- lDminas de microscopia<
- al4a de platina<
- bateria de colora4+o de Iram<
- dois s)abs esterili5ados<
- duas placas de petri contendo meio para antibio#rama E'ueller 8
Vinton ou "VIF<
- duas pin4as esterili5adas<
- discos de antibi?ticos Es@rie Iram positiva e #ram ne#ativaF7
"F ,rocedimento:
- -a5er um es-re#a4o da cultura a ser utili5ada0 corar pelo m@todo da
Iram Ecultura pura do microor#anismo em caldo0 com 1H /oras de incuba4+oF7 A -inalidade
da lDmina @ observar mor-olo#ia e caracter!sticas de colora4+o0 para orientar a escol/a de
antibi?ticos a serem testados<
- mol/ar o s)ab esterili5ado na cultura de micror#anismos0 retirar o
e(cesso nas paredes do tubo e espal/ar de -orma /omo#:nea as bact@rias sobre a super-!cie do
meio da cultura<
- colocar assepticamente0 com au(!lio de pin4a esterili5ada0 discos de
papel contendo antibi?ticos com concentra46es con/ecidas Eencontrada pronto no com@rcioF0
sobre a super-!cie do meio *ue -oi previamente semeado0 procurando distribuir os discos
simetricamente7 Ys discos devem distar um do outro G a H cm e da borda da placa cerca de 103
cm7 As placas ser+o incubados a G=.C e os tubos de inibi4+o medidos ap?s crescimento
bacteriano7
M=
b7MF Escol/a dos antibi?ticos:
- embora em muitos casos uma in-ec4+o possa ser tratada com sucesso
sem reali5ar culturas0 deve-se SE',RE -a5er provas de sensibilidade para as bact@rias
isoladas nas culturas em cada um dos casos0 dado *ue di-erentes amostras de bact@rias podem
apresentar di-erentes sensibilidades aos antibi?ticos7 Ys produtos para culturas devem ser
coletados antes de se iniciar a administra4+o dos antibi?ticos7 Se n+o ocorrer resposta cl!nica0
devem-se -a5er culturas repetidas7
b71F Resultados:
- A interpreta4+o dos resultados @ -eita medindo-se os /alos de inibi4+o
do crescimento bacteriano0 nas placas semeadas na aula passada0 ao redor dos discos com
antibi?ticos7 A medida @ -eito em mm e comparada com tabelas -ornecidas pelos -abricantes
do disco indicando resist:ncia ERF0 #rau intermedirio EIF ou sensibilidade ESF
b7GF CI' E Concentra4+o inibit?ria m!nimaF e C"' EConcentra4+o bacteriana
m!nimaF
- CI'0 @ a concentra4+o de antibi?tico no s!tio da in-ec4+o0 necessria
para inibir o crescimento da bact@ria in-ectante7
- C"'0 @ a concentra4+o de antibi?tico no s!tio da in-ec4+o necessria
para matar a bact@ria in-ectante7
CF Ai-us+o:
- ,reparar o inoculo do microor#anismo a ser testado e trans-erir H a N
colKnias para caldo 'ueller 8 Vinton7 Incubar por 1 a P /oras a G3-G =.C de modo a se obter
uma turbide5 moderadaEdensidade de 203ml na escala de 'acFarland 8 apro(imadamente M2
P
UFC[mL do inoculoF7 Semear 20MmL dessa cultura para a placa de #ar 'ueller 8 Vinton
atrav@s de swab ou pipeta7
- Colocar os discos impre#nados com antibi?ticos sobre a super-!cie do
#ar inoculado com uma pin4a est@ril0 pressionando levemente e mantendo um espa4amento
de modo *ue -i*uem su-icientemente separados uns dos outros para evitar a superposi4+o dos
/alos de inibi4+o7 Incubar as placas por HP /oras a G3-G =.C1
MP
c7MF Resultados:
- A leitura das placas dever ser -eita0 medindo-se o diDmetro dos /alos
de inibi4+o Eincluindo o diDmetro do discoF0 e comparando com os dados da tabela7 Classi-icar
os microor#anismos como resistentes0 sens!vel e intermedirio7
( ? ( M P @ O de resist:ncia intermediria e sens!vel





MJ
132
M32
M22
32
13
12
M2
3
1
M2 12 G2 diDmetro mm
CI'
resistente
R
S
intermediria
sens!vel
P R T I C A A E ( p e r i m e n t o d e a n a e r o b i o s e
AF 'aterial necessrio: micror#anismos com crescimento positivo em anaerobiose7
- Uma 9arra /ermeticamente -ec/ada ElacradaF<
- produto anaero IEN<
- placa de petri com meio de cultura<
- al4a de platina<

"F ,rocedimento: ]uando o anaero IEN @ colocado em uma 9arra /ermeticamente
-ec/ada0 o o(i#:nio atmos-@rico da 9arra e rapidamente absorvido0 com trans-orma4+o em
di?(ido de carbono7 Este m@todo di-ere dos m@todos comuns0 pois a rea4+o continua sem
produ4+o de /idro#:nio0 assim0 portanto0 n+o re*uer um catalisador e n+o @ necessria a
adi4+o de #ua para ativar a rea4+o7
b7MF @cnica:
- Colocar na 9arra /ermeticamente -ec/ada placas de petri com meio de
cultura semeado al#uns micror#anismos de caracter!sticas anaerobi?tica7
- Aplicar o anaero IEN0 abrindo-o de sua embala#em0 colocar na 9arra
e -ec/ar ElacrarF /ermeticamente a 9arra<
- Incubar em 1H/oras a G= .C7
b71F Resultados: Aepois do per!odo de incuba4+o determinado pelo pro-essor ou
monitor0 retirar a placa da 9arra e veri-icar se ocorrer crescimento de microor#anismo7
12

P R T I C A B 0 r a n s m i s s + o e c o n t r o l e d e E p i d e m i a
a r t i - i c i a l d e m i c r o r # a n i s m o
AF 'aterial necessrio:
- 2M par de luvas 8 est@ril<
- 21 BS)absC<
- 2M tubo com salina est@ril<
- 2M al4a bacteriol?#ica<
- 2M -rasco com polvidine<
- 2M placa de petri com uma bala7
"F procedimentos:
b7MF As principais ra56es para o empre#o de m@todos de controle dos
microor#anismos s+o:
- prevenir a transmiss+o de doen4as in-ecto-conta#iosas<
- prevenir a detereori5a4+o de alimentos<
- prevenir ou controlar contamina46es indese9veis7
b71F @cnica:
- cada #rupo de 21 estudantes receber uma bala contida numa placa de petri7
Al#umas dessas balas estar+o contaminadas com um micror#anismo de bai(a pato#enicidade7
Um dos membros do #rupo colocar o par de luvas e passar a es-re#ar a bala *ue receber0 na
m+o enluvada7 A se#uir a bala deve ser #uardada na placa0 para posterior esterili5a4+o7
Cuidado para n+o contaminar a bancada0 pois seus cole#as podem se contaminar0 ou mesmo o
pessoal da limpe5a7 Esse indiv!duo dever apertar a m+o de um outro cole#a0 tamb@m
enluvado7 Essa -ase do e(erc!cio dever ser reali5ada com ordem e dissipada0 a -im de *ue o
pro-essor ou monitor possa anotar a se*^:ncia do aperto das m+os7 Y outro cole#a do #rupo
col/er com um Bs)abC est@ril0 umedecido e salina est@ril0 material da luva da m+o do cole#a
*ue -oi usada nos apertos de m+os0 e a se#uir -ar a semeadura desse material em um dos
/emis-@rios da metade da placa7 Numa se#unda -ase0 o estudante enluvado dever lavar as
m+os0 de -orma ade*uada0 com o uso de #ua e polvidine7 Ap?s secar as m+os enluvadas com
papel toal/a0 o cole#a do #rupo -ar nova col/eita com o outro Bs)abC est@ril umedecido em
1M
salina est@ril0 *ue dever ser semeado0 como anteriormente0 na outra metade da placa de #ar -
san#ue7
Y aluno enluvado dever retirar a luva e coloc-la em lu#ar apropriado
desi#nado pelo pro-essor ou monitor0 para posterior descarte7 Y estudante *ue semeou a
amostra dever identi-icar a placa desi#nando corretamente os /emis-@rios da placa de #ar-
san#ue correspondente a M_ e 1_ -ase de estudo0 al@m de anotar o nmero de bala recebida e
nmero de componentes do #rupo7 A se#uir colocar em estu-a de G=.C por 1H /oras7 Ambos
os membros do #rupo0 antes de -inali5ar os trabal/os0 dever+o lavar as m+os com #ua0 sab+o
e lcool =2>
b7GF resultado:
- No dia se#uinte cada #rupo pe#ar sua placa e dever e(amin-la
*uanto a presen4a de microor#anismos em ambas as -ases do estudo e discutir os resultados
*uanto O transmiss+o e controle de epidemia arti-icial7
OBS: Esta prtica tem por ob9etivo0 tamb@m treinar o aluno nas t@cnicas de
col/eita0 semeadura e a anlise das caracter!sticas da colKnia obtida7
11
P R T I C A 1C 0 @ c n i c a d e s e m e a d u r a
AF 'aterial necessrio:
- 2M tubo com meio l!*uido semeado com stap/Tlococcus sp<
- 2M tubo com suspens+o contendo esta-ilococos e E7 coli<
- uma placa contendo a#ar-san#ue para semeadura em super-!cie<
- uma placa esterili5ada e 2M tubo contendo 12 ml de #ar simples
a*uecido a temperatura de 32.C Epara semeadura em pro-undidadeF<
- 2M pipeta de Mml esterili5ada<
- 2M lpis para vidro<
- 2M tubo com #ar inclinado<
- 2M tubo com meio l!*uido<
- al4a de platina<
"F ,rocedimento:
- os procedimentos devem ser reali5ados na rea de imunidade da
c/ama do bico de "unsen
b7MF Repi*ue em meio l!*uido
- se#urar a al4a de platina com a m+o direita0 -lambar at@ o rubor0 dei(ar
a al4a es-riar perto da c/ama0 pe#ar o tubo contendo a cultura bacteriana com a m+o es*uerda0
retirar o tamp+o do tubo com o dedo m!nimo e anelar da m+o direita0 -lambar a boca do tubo0
introdu5ir a al4a de platina at@ tocar o meio0 retir-la com uma #ota do meio0 -lambar
novamente a boca do tubo0 recolocar o tamp+o0 colocar o tubo na estante Eeste procedimento
deve ser repetido para semeadura em "10 "G0 "HF
- pe#ar o tubo com meio l!*uido est@ril com a m+o es*uerda0 retirar o
tamp+o com o dedo m!nimo da m+o direita0 -lambar a boca do tubo0 colocar a al4a carre#ada
com microor#anismo no interior do tubo at@ atin#ir o meio e a#itar delicadamente7 Retirar a
al4a0 -lambar novamente a boca do tubo0 recolocar o tamp+o0 colocar o tubo na estante0
-lambar a al4a de platina7
OBS: - Nunca colocar o tamp+o do tubo sobre a bancada
1G
- Cada aluno deve reali5ar a semeadura sem a9uda do compan/eiro0 pois
o aprendi5ado de semeadura tamb@m -a5 parte das aulas7
- Antes de iniciar o repi*ue0 certi-i*ue-se *ue o material necessrio
encontra-se pr?(imo7
- Identi-icar os tubos de cultura e as placas semeadas7
b71F @cnicas em meio s?lido por picada
- carre#ar a a#ul/a de platina0 procedendo como a primeira parte de
B"MC<
- o repi*ue dever ser -eito introdu5indo-se a a#ul/a de platina dentro
do #ar7 Repetir0 per-urando o #ar por tr:s ve5es7
b7GF Semeadura por es#otamento em #ar-inclinado:
- carre#ar a la4a de platina como a descrita em B"MC<
- o repi*ue @ -eito colocando-se a al4a carre#ada o mais pro-undo
poss!vel dentro do tubo0 sem tocar o meio7 Em se#uida encostar delicadamente a ponta da al4a
na super-!cie do #ar e proceder a semeadura com movimentos de vai-v@m7
b7HF Semeadura por es#otamento em placa de petri:
- Aividir o -undo da placa de petri contendo #ar-san#ue em G partes0
com lpis para vidro<
- carre#ar a al4a como em B"MC<
- abrir a placa com a m+o es*uerda0 encostar a al4a contendo
microor#anismo na borda do M[G delimitado na placa7 A se#uir iniciar a semeadura em estrias0
mais pr?(imas inicialmente e0 a se#uir0 distanciar as estrias7 A se#uir semear as outras 1[G0
sem carre#ar a al4a7 Evitar passar a al4a duas ve5es no mesmo local e procurar aproveitar toda
a super-!cie do meio sem Bmac/ucarC o mesmo7
b73F Semeadura em placa de em ,our ,late
- Semear com pipeta esterili5ada 20M ml de suspens+o contendo
bact@rias0 no -undo de placa de petri esterili5ada<
- verter o meio de cultura E#ar simplesF dissolvida a H2 8 H3.C<
- submeter a placa a movimentos rotat?rios suaves0 com a -inalidade de
misturar o inoculo0 com o #ar<
1H
- esperar solidi-icar o meio<
- o ob9etivo da t@cnica de semeadura em ,our ,late @ obter colKnias
isoladas E*ualitativoF ou para reali5ar conta#em de colKnias em placas E*uantitativoF7 Nesta
t@cnica deve-se tomar cuidado para n+o adicionar o meio em temperatura elevada sobre o
in?culo o *ue poder matar as bact@rias7
13
P R T I C A 110 ' o r - o l o # i a d a s c o l K n i a s
As caracter!sticas *ue os micror#anismos apresentam ao crescer em meios de culturas
s+o e(press6es -enot!picas do material #en@tico e0 portanto0 s+o muito teis na sua
identi-ica4+o7 Embora muitas ve5es elas se9am consideradas de importDncia secundria e
utili5adas apenas na identi-ica4+o preliminar0 em muitos casos elas s+o essenciais e0 Os ve5es0
representam a nica caracter!stica *ue permite a distin4+o e a identi-ica4+o dos esp@cimes7
Nas placas podemos observar as caracter!sticas das colKnias:
- taman/o EmmF<
- mor-olo#ia E-orma0 bordo ou mar#em e eleva4+oF<
- pi#menta4+o Ecor0 solubilidade0 -luoresc:ncia0 ru#osidadeF<
- aspecto Ebril/o0 transpar:ncia0 opacidade0 ru#osidadeF<
- consist:ncia Ebutirosa ou amantei#ado0 viscosa0 membranosa0 seca0
*uebradi4aF7
1N
Yb9etivo:
- Ybservar e descrever as caracter!sticas culturais de cultura7
,rocedimentos:
- inocular as culturas em placas0 #ar nutriente7 -
Incubar a temperatura ade*uada por 1H-HP /oras7
- Reali5ar as leituras e preenc/er a -ic/a de avalia4+o com os resultados7
Avalia4+o: ,reenc/er na -ic/a de avalia4+o os resultados
A a l i a & ' o
C u l t u r a s
M 1 G H
ColKnias taman/o EmmF
Forma
Eleva4+o
"ordo
,i#menta4+o cor
Aspecto
Consist:ncia
1=
Morfologia das colnias
-ibliografia
SIL$A FILVY0 Iermano Nunes [ $entria Lopes de Yliveira7 Microbiologia$ #anual de
aulas !rticas1 Florian?polis: ed7 da UFSC0 122H
'ARSVALL0 &ac*uelTn R7 Manual de @aborat,rio ClDnico$ Microbiologia1 M7ed7 S+o
,aulo: Livraria Santos0 MJJ37
&YRIE0 Antonio Y7 Cardoso7 Microbiologia$ Atiidades !rticas1 17ed7 S+o ,aulo: Livraria
Santos0 122M7
1P