captulo

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j possvel empregar essa

Doping Gentico A
doping gentico at ento. Por outro lado, discusso sobre o doping gentico teve considerando que ainda no existem meios de controle e deteco do doping gentico, e que, teoricamente, incio em junho de 2001, em um encontro da Gene Therapy Working Group promovido pelo COI. Nesse encontro, cujo tema foi Terapia Gnica e seu futuro impacto no esporte, o comit declarou que a terapia gnica, alm da sua importncia no tratamento e preveno de doenas, tem um grande potencial para mau uso nos esportes, e que formas de deteco do doping gentico devem ser desenvolvidas e aplicadas. Em 2004, a editora chefe da revista Molecular Therapy publicou em editorial que, se nas olimpadas de Atenas (2004) histrias de doping gentico possam ter sido apenas fico cientfica, em Pequim (2008) Terapia gnica A terapia gnica uma nova modalidade teraputica da medicina. Trata-se de um conjunto de tcnicas ainda incipiente e em fase apenas inicial de experimentao, mas que nos permite vislumbrar a possibilidade de cura para doenas consideradas incurveis, como as de origem predominantemente gentica e/ou hereditria (como exemplo podem ser citadas: distrofias musculares, fibrose cstica, fenilcetonria, tecnologia em seres humanos e outros animais, ningum pode afirmar com segurana que nenhum atleta tenha j o tenha experimentado.

possivelmente no mais sero. No incio de 2003 o doping gentico entrou na lista de mtodos proibidos do COI, e em 2004 a WADA definiu doping gentico como o uso no teraputico de clulas, genes, elementos genticos ou a modulao da expresso gnica, que tenham a capacidade de melhorar o desempenho

cnceres, disfuno endotelial, entre outras). Uma boa definio de terapia gnica a transferncia de material gentico para clulas humanas, com o objetivo de prevenir ou tratar doenas. Esse tipo de abordagem teraputica baseia-se no envio de material gentico, via vetores, para dentro de clulas-alvo (geralmente o material enviado DNA, embora RNA tambm possa ser utilizado), mais especificamente para o ncleo das clulas, lugar no qual esse DNA pode ser transcrito e posteriormente traduzido sua protena correspondente que, em ltima anlise,

esportivo. At o presente momento no h registro de nenhum caso de atleta que tenha feito uso desse tipo de manipulao. De fato, a terapia gnica uma modalidade teraputica mdica ainda

extremamente imatura, incipiente e basicamente experimental. Isso pode ter sido um importante motivo para que nenhum atleta fizesse uso do

produto

funcional

do

material

gentico

cuidados que devem ser tomados com esses procedimentos, bem como os testes de certificao da segurana das preparaes so muitos, e muito rigorosos. Apesar disso, restam ainda muitas dvidas a respeito dos efeitos colaterais da terapia gnica. De certo que a introduo de organismos

introduzido. Dessa forma possvel compensar a falta de uma protena (nos casos em que o paciente apresenta deleo completa do gene) ou a falta de uma protena funcional (nos casos em que o paciente apresenta mutaes ou delees parciais que resultam em uma protena truncada nofuncional). Para que o material gentico de funo teraputica chegue ao ncleo das clulas-alvo, necessria a utilizao de um vetor. Os mais utilizados so os vrus (geralmente adenovrus ou retrovrus), e m b o ra lipossoma, clulas

geneticamente modificados gera uma grande incerteza, especialmente se for levado em conta o potencial mutagnico dos vrus. Ainda assim, os efeitos menos conhecidos dizem respeito

expresso em longo prazo dos genes introduzidos e falta de controle da expresso de tais genes. Outro ponto muito importante a possibilidade (ainda que pequena) de modificao no apenas das clulas somticas, mas tambm das

geneticamente modificadas e injeo direta no tecido tambm sejam meios possveis de se introduzir o material gentico. evidente que os vrus usados como vetor so modificados em l a b o ra t r i o, rigorosamente e todo o procedimento Os seus

germinativas. Isso poderia ser catastrfico, uma vez que a mutao seria repassada s futuras geraes, de modo que seriam introduzidas pessoas com modificaes genticas no ambiente, e facilmente o controle da freqncia desse gene na populao seria perdido. exatamente por esse motivo que no permitida a terapia gnica em clulas da linhagem germinativa. Embora esses questionamentos estejam todos no campo da especulao, nenhum deles pode ser ainda

controlado.

genes

patognicos so retirados ou modificados e o(s) gene(s) teraputico(s) (so) inserido(s) em seu genoma. Assim o vrus mantm sua capacidade de reconhecimento, adeso e invaso da clula, bem como de utilizar a maquinaria molecular da clula do hospedeiro para expressar seus genes e produzir suas protenas. O resultado de tal procedimento a produo das protenas

completamente descartado, e discusses do ponto de vista da tica e moral so pertinentes a essa problemtica.

teraputicas sem que haja produo das protenas que conferem virulncia ao vrus. Uma reviso de 2006 afirma que cerca de 3000 pacientes j receberam algum tipo de terapia gnica. Diversas doenas foram tratadas, incluindo disfunes coronariana, endoteliais hemofilia, ligadas doena e

Terapia gnica e doping gentico Ainda que esteja sendo desenvolvida com o propsito de tratar doenas graves, a terapia gnica tem um imenso potencial de abuso entre atletas saudveis que queiram melhorar o

imunodeficincia

cnceres. De um modo geral a terapia gnica tem trazido bons resultados, e seus efeitos colaterais parecem ser reduzidos a um nmero pequeno de pacientes, o que um indicativo animador da segurana do tratamento. De qualquer forma, os

desempenho. A despeito dos potenciais riscos e das incertezas quanto a sua segurana, relatos indicam que certa parcela dos atletas de elite gostariam de se sujeitar a pesquisas com terapia

gnica. O interesse que esse tipo de abordagem desperta no meio esportivo no se reduz apenas melhora da performance, mas inclui tambm aplicaes teraputicas para o tratamento de leses em tecidos de difcil regenerao, como tendes, cartilagens e ligamentos. Vale lembrar que leses dessa natureza so muito comuns entre atletas, e que so importantes causas de

Pe s q u i s a s

com

ratos

macacos

conseguiram com sucesso transferir uma cpia adicional do gene da eritropoietina. Como

conseqncia, o hematcrito dos animais subiu para valores prximos de 80%! (lembre-se que o normal gira em torno de 40%). Isso obviamente pode representar da um risco srio de

comprometimento

funo

cardiovascular,

encerramento precoce da carreira esportiva e de afastamento prolongado de treinos e competies. Nesses casos, a terapia com genes que codificam fatores de crescimento poderia resultar em melhor regenerao tecidual. Atualmente isso est sendo testado em animais, e talvez dentro de alguns anos comece a ser testado em humanos. Os mais importantes genes candidatos a serem utilizados de forma abusiva e ilcita por atletas so:

incluindo dificuldade de manuteno do dbito cardaco e da perfuso tecidual, devido ao substancial aumento da viscosidade sangnea. Alm disso, foi relatada anemia severa em alguns animais por causa de uma resposta auto-imune transferncia levantam do gene extra. Esses relatos real

srias

dvidas

quanto

possibilidade de uso da transferncia do gene da eritropoietina em pessoas saudveis, como os atletas.

eritropoietina; GH e IGF-1 (e outras somatomedinas); VEGF; inibidores outros); da miostatina (folistatina e IGF-1 e GH Em animais de experimentao, a

introduo por vetor de adenovrus do gene que codifica a protena IGF-1 l e va a sua

endorfinas e encefalinas; leptina; PPAR delta (Peroxisome Proliferator Actived Receptor delta).

superexpresso, o que, por sua vez, leva ao aumento da sntese protica na musculatura esqueltica. Isso foi observado tanto nos animais que foram submetidos ao treinamento de fora quanto naqueles que no foram. Quando a

Eritropoietina Conforme discutido em detalhes na seo 124 do captulo 788, a eritropoietina uma protena produzida nos rins cujo principal efeito o estmulo da hematopoiese. Logo, uma cpia adicional do gene que codifica a eritropoietina aumenta a produo de hemcias, de modo que a capacidade de transporte de O2 para os tecidos fica aumentada. Portanto, esse tipo de doping seria especialmente endurance. ergognico para atletas de

introduo do gene extra IGF-1 foi combinada com o treinamento de fora, o ganho na massa muscular (hipertrofia) e o desenvolvimento da fora foram maiores do que os observados nos animais que apenas treinavam fora (e no superexpressavam IGF-1) e nos que apenas superexpressavam IGF-1 (e no treinavam fora). Veja detalhes dos resultados desse estudo na figura 132.

40 50 massa muscular % fora tetnica % 30 40 30 20 10 0

20

10

CON

IGF

TF

IGF+TF

CON

IGF

TF

IGF+TF

Figura 132. Comparao entre os grupos CON (controle), IGF (superexpresso de IGF-1), TF (treinamento de fora) e IGF+TF (superexpresso de IGF-1 combinada com treinamento de fora) em relao ao ganho de massa muscular (acima) e capacidade mxima de produo de fora (abaixo). Note que a superexpresso de IGF-1 resultou em ganhos de fora e massa muscular semelhantes ao grupo que treinou fora, e que a superexpresso de IGF-1 potencializou os efeitos do treinamento de fora. (Adaptado de Lee et al. Journal of Applied Physiology, 96:1097-1104, 2004.)

Pode-se dizer, ento, que a superexpresso de IGF-1 pode potencializar em grande magnitude as respostas musculares ao treinamento fsico, em especial ao treinamento das de fora. pode Essa ser

com a insero do gene do GH e do IGF-1 estejam relacionados com o desequilbrio do eixo

hipotlamo-hipofisrio e principalmente com o aumento da chance de ocorrncia de cnceres diversos.

exacerbao

adaptaes

especialmente interessante para aqueles atletas cujas modalidades esportivas requerem fora e hipertrofia muscular. Em vista do sucesso obtido em estudos com animais e da aparente segurana da terapia gnica com IGF-1, possvel que dentro de poucos anos ela j seja factvel em humanos. Isso, obviamente, poder ser utilizado por atletas que buscam melhorar sua performance, mas poder ser tambm utilizado por pessoas VEGF O VEGF (do ingls Vascular Endotelial Growth Factor, ou Fator de Crescimento do Endotlio Vascular) uma protena que, como o prprio nome sugere, desempenha um importante papel no crescimento do endotlio vascular, na angiognese e vasculognese. A terapia gnica com VEGF uma das poucas j utilizadas em seres humanos. A introduo do gene que codifica a VEGF em pacientes com disfuno endotelial responsvel por quadros de doena arterial coronariana e doena arterial perifrica (tambm conhecida como claudicao intermitente) tem produzido bons resultados, com boa formao de novos ramos vasculares e at formao de bypass (ramos vasculares alternativos que permitem o desvio do fluxo sangneo de uma regio vascular obstruda,

portadoras de doenas musculares graves, como a distrofia muscular de Duchme e outras. Teoricamente o doping gentico com GH levaria a efeitos bastante semelhantes aos

produzidos por IGF-1, haja vista que a ao do GH mediada pelo prprio IGF-1. Portanto, pode-se esperar que o doping gentico com GH produza ganhos de fora e hipertrofia muscular. Ainda no possvel precisar em que magnitude ocorreria tais aumentos, mas provvel que os riscos envolvidos

o que evita isquemia e at mesmo morte tecidual). Em atletas, a insero vetorial do VEGF poderia produzir vasculognese. Dessa maneira, o fluxo sangneo para todos os tecidos seria aumentado, assim como sua oxigenao e

Estudos que bloquearam a miostatina com protenas como a folistatina encontraram um grande efeito positivo sobre o crescimento da musculatura esqueltica, resultado do aumento no tamanho das fibras (hipertrofia) e no nmero das fibras (hiperplasia), alm de diminuio do

nutrio. Considerando que isso ocorra em tecidos como a musculatura esqueltica e a cardaca, pode-se esperar aumento da produo energtica, diminuio da produo de metablitos e o retardo da fadiga. Atletas de endurance seriam,

contedo de gordura intramuscular e de tecido conectivo. demonstraram Outros a trabalhos da tambm regulao

importncia

negativa que a miostatina desempenha sobre o crescimento muscular. Tanto ratos que

teoricamente, os mais interessados na terapia gnica com insero do VEGF. Uma vez que esse tipo de terapia j est sendo utilizado em seres humanos com fins teraputicos, o doping gentico envolvendo o VEGF j poderia ser empregado atualmente de maneira ilcita para melhorar o desempenho esportivo.

superexpressavam um inibidor da miostatina (folistatina) como bovinos nocaute para o gene da miostatina (ou seja, que no apresentavam e tampouco expressavam o gene) apresentaram crescimento enorme da musculatura esqueltica, conforme pode ser observado nas figura 123.

Inibidores da miostatina (folistatina) O gene da miostatina codifica uma protena que exerce um efeito regulador muito importante no crescimento da fibra muscular, tanto a cardaca quanto a esqueltica. Na verdade, a miostatina um regulador negativo da hipertrofia muscular.

B A A

Figura 123. Exemplos da importncia da regulao negativa que a miostatina cumpre sobre o crescimento da musculatura esqueltica. Figura A: fotos de bovinos nocaute para o gene da miostatina. Figura B: fotos de um rato em que o gene da folistatina, um inibidor da miostatina, foi inserido e superexpresso ( direita) em comparao com um rato controle ( esquerda). Em ambos os casos, observe a quantidade enorme de massa muscular desenvolvida.

Em humanos a miostatina desempenha a mesma funo. H um relato na literatura de um garoto que apresentou uma deleo espontnea do gene da miostatina e, a exemplo do que foi mostrado em outros animais, desenvolveu

possvel controlar a expresso do gene transferido artificialmente e, por conseqncia, talvez no seja possvel controlar o crescimento de massa muscular. Os efeitos que isso teria o msculo cardaco, incluindo seu impacto sobre todo o sistema cardiovascular, so bastante obscuros e preocupantes. Por outro lado, muito provvel que o crescimento muscular exagerado no

quantidade muito grande de massa muscular (veja a figura 124).

acompanhado pelo crescimento sseo e tendneo represente uma sobrecarga muito grande a esses tecidos, o que, por sua vez, pode aumentar o nmero de leses e a gravidade das mesmas.

Endorfinas e encefalinas O uso da terapia gnica com os genes da endorfina e encefalina esportivo poderia pela melhora o da

desempenho

diminuio

sensao de dor, a qual poderia estar associada tanto a algum tipo de leso que possa impedir um

recm-nascido

7 meses de idade

atleta de treinar e competir, como fadiga e ao excesso de treinamento. De fato, as drogas analgsicas esto entre as mais consumidas por atletas, o que indica o possvel interesse pela insero desses genes. Tanto a endorfina quanto a encefalina so peptdeos endgenos de atividade analgsica. Estudos em animais demonstraram que esse tipo de terapia gnica foi capaz de

Figura 124. Fotos de uma criana do sexo masculino com deleo do gene que codifica a miostatina. esquerda, o garoto pouco tempo depois do nascimento, e direita aos 7 meses de idade. Repare o grande quantidade de massa muscular, o que demonstra a importncia da miostatina na regulao negativa da sntese protica na musculatura. (Adaptado de: Schuelke et al. Brief Report: Myostatin Mutation Associated with Gross Muscle Hypertrophy in a Child, New England Journal of Medicine, 350:2682-2688, 2004).

Do ponto de vista teraputico, a introduo de genes cujos produtos so capazes de bloquear a miostatina tem sido considerada como uma boa esperana para o futuro tratamento de distrofias musculares graves. Contudo, evidente que esse tipo de terapia seja uma das mais promissoras para uso ilcito no esporte, j que o grande ganho de massa muscular pode ser decisivo para o

diminuir

percepo devido

de

dor

inflamatria. carncia de

Entretanto,

grande

informaes na literatura, provvel que o doping gentico envolvendo endorfinas e encefalinas ainda esteja longe de realmente acontecer.

Leptina A leptina, hormnio peptdico produzido principalmente no tecido adiposo cuja principal ao est relacionada ao controle da sensao de fome e saciedade, reduo do consumo alimentar e conseqente perda de peso, tambm um

desempenho em inmeras modalidades. Alm dos riscos inerentes a qualquer tipo de terapia gnica, o uso do doping gentico que tem como alvo a miostatina pode ser potencialmente danoso ao atleta. Isso porque talvez no seja

candidato para abuso em terapia gnica e doping gentico. Veja discusso mais detalhada sobre leptina no captulo 0,52/0,12. Em 1997 um estudo demonstrou que a introduo do gene leptina por vetor viral produzia significativa perda de peso em ratos. Em

da mitocndria, diminuindo a produo de ATP na cadeia respiratria), de modo que sua ao leva diminuio da produo de energia. Como

resultado, a PPAR-delta diminui a quantidade de tecido adiposo, reduz o peso corporal e aumenta a termognese. Essa , portanto, uma das

contrapartida, talvez o mesmo fenmeno no seja observado em humanos, j que indivduos obesos, os quais apresentam elevada concentrao

justificativas para o possvel interesse de atletas em usar doping gentico com PPAR- delta. Outro motivo para o possvel interesse em utilizar o PPAR- delta como doping gentico o seu provvel papel na converso de fibras musculares do tipo II em fibras do tipo I. Portanto, atletas cujas modalidades no dependem da fora, mas exigem que o atleta se mantenha com baixo peso e baixo percentual ginastas, de gordura (como e maratonistas, seriam na

plasmtica de leptina, no tm apetite reduzido. Essa resistncia ao da leptina pode representar um importante obstculo para a terapia gnica com esse hormnio. Alm disso, diferentemente dos modelos animais, o comportamento alimentar humano depende de um sem nmero de variveis, incluindo outros peptdeos e fatores de ordem psicolgica, social e cultural.

patinadores os mais

etc.)

potencialmente

interessados

transferncia do gene PPAR- delta. PPAR-delta As protenas da famlia dos PPARs atuam como fatores de transcrio de genes envolvidos no metabolismo de carboidratos f o ra m na e lipdeos. Referncias bibliogrficas
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P r i m e i ra m e n t e

elas

descobertas sntese motivo de

desempenhando peroximssomos, batizadas de e

papel por

esse

foram

Diamanti-Kandaraskis E, Konstantinopoulus P, Papailiou J, Kandaraskis AS, Andreopoulus A, Sykiotis G. Erytropoietin abuse and erytropoietin gene doping. Sports Md, 35(10):831-840, 2005.

peroxissome

proliferator-actived

receptors. Existem diversas protenas PPAR, mas a que apresenta, pelo menos do ponto de vista terico, maior potencial para abuso em doping gentico a PPAR-delta. A PPAR-delta uma reguladora chave do processo de oxidao de lipdeos (denominado de -oxidao). Atuando no fgado e no msculo esqueltico, ela estimula a transcrio de inmeros genes cujos produtos participam da -oxidao. A PPAR-delta tambm est relacionada com a dissipao de energia na mitocndria que ocorre por meio da UCPs (uncoupled proteins, ou protenas desacopladoras, que reduzem o

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gradiente de prtons no espao intermembranar

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