12 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.

u~uI
PCK ae ltelele
Dleaes|lte e /aellse 1e \erle|lll1e1e
2-53715)
Fotos codidas polo autor
Mar1a HcTcra TcTcyr1rcTT1 1uryaro
1:J~:::n ::.nun u
1~jn:Inu~uI u~ 1.Ig.n ~:nI
Uu.:~::.unu~ 1:InuunI u~ 1uu:.un
uIjJuugn6n:jn.ng:.u:j:
PR uma tcnica, doscrita
om moados da dcada do 80,
por Vullis o colaloradoros
tVullis 8 Faloona, 198), guo
pormito oltor .u :.I: vrias
cpias do um dotorminado sogmonto
do DNA. A oltonao do sogmontos
amplilicados normalmonto olodoco
s soguintos otapas: a) oxtraao do
DNA moldo, isto , guo contm a
rogiao a sor amplilicada, l) oscolha do
sogmonto a sor amplilicado o olton-
ao do j:.u~:: ospo-
clicos para o roconho-
cimonto dosso sog-
monto, c) amplilica-
ao guo dar origom a
vrias cpias, lazon-
do-so uso do um cicla-
dor trmico o, por lim,
d) loitura do produto
amplilicado aps olo-
troloroso o coloraao.
Dovido sua ospocili-
cidado o sonsililida-
do, a PR um mto-
do importanto para a
diagnstico do lungos. Existom vrios
oxomplos do tostos lasoados om PR
dosonvolvidos para a dotocao do lun-
gos om plantas, alimontos o om pato-
logia mdica. A PR podo sor utilizada
para dotoctar grupos do linhagons,
patotipos, ospcios ou taxa suporio-
ros.
Existom vrios protocolos guo por-
mitom a oxtraao do DNA, alguns mais
laloriosos o outros mais simplilica-
dos. Para lins do PR possvol utili-
zar mtodos rpidos o simplilicados,
uma voz guo ossa tcnica roguor guan-
tidados mnimas do DNA o osto nao
procisa aprosontar alto grau do puro-
za, podondo sor oxtrado a partir do
amostras do amliontos comploxos,
tais como solos, rios o audos, alimon-
tos o amostras clnicas.
Para a dotocao do um dado lungo
om gualguor tipo do amostra nocos-
srio so tor j:.u~:: guo propiciom a
amplilicaao do um gono ou sogmon-
to ospoclico daguola ospcio ou da-
guola lunao guo so dosoja idontilicar.
Assim, o dosonvolvimonto do proco-
dimontos do diagnstico lasoados om
PR roguor o conhocimonto do so-
guncias do nuclootdoos do polo
monos parto da rogiao alvo a lim do
guo j:.u~:: ospoclicos possam sor
dosonhados. Nosto sontido, algumas
rogios tais como aguolas guo codili-
cam para RNA rilossomico tm sido
lastanto utois.
O DNA guo codilica para RNA
rilossomico aprosonta-so como um
clustor gnico, no gual so tom o gono
18S, o gono 5,8S o o gono 28S tFigu-
ra1). Estos gonos sao soparados por
rogios donominadas lTS1 o lTS2, as
guais sao transcritas o procossadas
para dar origom ao RNA rilossomico
maduro. O clustor gnico guo codilica
para RNAr aparoco ropotido contona
do vozos no gonoma lungico. O lato
dosso clustor gnico aprosontar algu-
mas rogios altamonto consorvadas o
outras varivois, tom pormitido a an-
liso do variaao do dilorontos nvois
taxonomicos. A rogiao 18S, por oxom-
plo, a mais consorvada o por isso
utilizada aponas para comparaao do
organismos distantomonto rolaciona-
dos. A porao 28S mais varivol o,
portanto, apropriada para a compa-
raao do dilorontos gnoros ou, om
alguns casos, do dilorontos ospcios.
As rogios lTS ovoluom rapidamonto
o, ontao, sao apropriadas para discri-
minar ospcios rolacionadas ou at
mosmo variodados do uma mosma
ospcio. O lato das rogios lTS sorom
llanguoadas por sogmontos consorva-
dos, sorom rolativamonto curtas t500 a
800pl) o aparocorom om grando nu-
moro do cpias no gonoma pormito
guo sojam amplilicadas o soguoncia-
das com lacilidado. omo consogun-
cia disso, grando o numoro do so-
guncias lTS do dilorontos lungos guo
ostao atualmonto disponvois nos lan-
cos do dados do soguncias do nuclo-
otdoos. A utilizaao do programas
computacionais guo pormitom a com-
paraao dostas soguncias do organis-
mos alvos o nao alvos, pormito dolinir
rogios apropriadas para a sntoso do
j:.u~:: a sorom utilizados para dotoc-
tar uma dada ospcio do lungo. A PR
roalizada com j:.u~:: guo sao sulici-
ontomonto homlogos para pormitir a
amplilicaao dos organismos alvos,
mas guo por outro lado nao paroiam
com organismos nao alvos, pormitir
a dotocao ospoclica do guo so doso-
ja. As soguncias do DNA guo sao
polimrlicas, ou soja lroguontomonto
FIgura 1. Estrutura do Iu:I~:
gnico guo codilica RNA
rilossomico
1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI 13
varivois, ontro ospcios lungicas, tais
como as soguncias lTS, sao loas
candidatas para a dotocao do uma
ospcio o oxclusao do todas as domais.
Por oxomplo, diloronas na rogiao lTS
tm sido usadas para dosonvolvor tos-
tos, lasoados om PR, para o diagns-
tico do lungos causadoros do micoso
na ospcio humana, produtoros do
toxinas om amostras do alimontos,
lom como patgonos do plantas, som
o prvio isolamonto do lungo. Dovido
as soguncias do DNAr ostarom pro-
sontos om grando numoro do cpias
no gonoma, laz com guo so
tonha alta sonsililidado no
diagnstico via PR.
O lato do guo algumas
impurozas prosontos na
amostra do DNA podom,
ovontualmonto, inilir a aao
da DNA polimoraso, oxigo-
so cautola com rosultados
lalso nogativos. Em lunao
disso, aconsolhvol o uso
do um par do j:.u~::, guo
atuo como controlo da gua-
lidado da roaao. Ou soja,
alm dos ospoclicos para o
gono guo so dosoja diagnos-
ticar, tamlm dovom sor in-
cludos na roaao j:.u~::
guo roconhoam um gono univorsal.
Normalmonto so usa um par do j:.-
u~:: guo roconhoco uma rogiao alta-
monto consorvada do Iu:I~: gnico
guo codilica RNA rilossomico. Assim,
so a roaao do PR ostivor luncionan-
do o produto do amplilicaao do sog-
monto univorsal sor dotoctado om
gualguor amostra guo contonha lio-
massa lungica.
Uma ostratgia importanto guo tom
sido roalizada para aumontar o podor
do dotocao do cortos microrganismos
om amostras do alimontos, animais ou
plantas o uso da NESTED-PR tFigu-
ra 2). Esta tcnica, guo nada mais
guo uma PR om duas otapas, util
guando impurozas guo inilom a am-
plilicaao do DNA ostao prosontos nas
amostras ou guando a guantidado do
DNA do agonto guo so dosoja dotoctar
muito poguona. A ostratgia para
diminuir prollomas rolacionados a
impurozas diluir, considoravolmon-
to, a amostra guo contm o DNA
moldo o consoguontomonto as impu-
rozas guo inilom a Tng polimoraso.
Em consoguncia do laixo numoro
do moldos iniciais, a guantidado do
sogmontos amplilicados nao sor suli-
ciontomonto visvol om gol do agaroso.
No ontanto, o produto da amplilica-
ao oltido ao linal dosta primoira
otapa podo sor usado como moldo
para a roalizaao do uma sogunda PR
tNESTED-PR). Esto procodimonto
pormitir, agora, a oltonao do um
numoro sulicionto do cpias para vi-
sualizaao om gol do agaroso. A NES-
TED-PR igualmonto apropriada para
dotoctar a prosona do microrganis-
mos guo ostao ocorrondo om laixa
lroguncia na amostra om invostiga-
ao. Esto tipo do PR om duas otapas
choga a sor 1.000 vozos mais sonsvol
guo a PR unica.
O uso do torapias guo dolilitam o
sistoma imuno, tal como a guimiotora-
pia utilizada para o tratamonto do
cncor o o crosconto surgimonto do
paciontos com AlDS tm proporcio-
nado, rocontomonto, um aumonto sig-
nilicativo do indivduos imunossupri-
midos, os guais ostao altamonto sujoi-
tos a inlocos lungicas sistmicas.
Salvo raras oxcoos, os mtodos do
FIgura 2. NESTED-PR. a) O
produto da PR roalizada a
partir do um laixo numoro do
moldos iniciais nao visvol
om gol do agaroso corado com
lromoto do otdoo ta ultima
canalota uma roaao contro-
lo), l) Bandas sao olsorvadas
aps uma sogunda PR, utili-
zando-so como moldo o pro-
duto da amplilicaao oltido
na primoira roaao
diagnstico dostas inlocos sao do-
morados o pouco sonsvois. A inalili-
dado ou domora no diagnstico da
inlocao lungica adia a administraao
do torapia apropriada, o guo traz sri-
as implicaos para o prognstico do
pacionto. Dontro dosto contoxto, o
uso do mtodos do diagnstico do
micosos sistmicas guo sojam lidodig-
nos o rpidos imporativo para mo-
lhorar a taxa do solrovivncia do
paciontos imunodoprimidos. Vtodos
molocularos, principalmonto aguolos
lasoados om PR, tm sido adotados
na tontativa do molhorar a son-
sililidado o a ospocilicidado, o
do diminuir o tompo roguorido
para o diagnstico dostas in-
locos. Jang-Jih t1995) do-
monstrou a alta ospocilicidado
o sonsililidado da NESTED-PR
para a dotocao do lungo 1u~u-
u,:I.: n:.uu. om amostras
do lavagom lronguooalvoolar.
Utilizando-so os j:.u~:: 5`AAG-
TTGATAAATTTGGT3` o
5`TGGAGAGGATTG-
3`` na primoira otapa do am-
plilicaao da rogiao lTS do DNA
rilossomico o 5`GTAGGTGA-
ATGGAAGGAT3` o 5`GT-
TAGGGGTGATTG-
TG3` na sogunda amplilicaao, olto-
vo-so o produto do amplilicaao ospo-
rado om 30 amostras salidamonto
positivas, ou soja 100/ do olicincia.
Esto ostudo mostrou tamlm a olici-
ncia do mtodo no guo diz rospoito
sonsililidado, pois rosultados positi-
vos loram oltidos om amostras con-
tondo DNA corrospondonto a aponas
3 clulas lungicas. Esta motodologia
guo laz uso do j:.u~:: lasoados om
soguncias do nuclootdoos do DNAr
tom sido otimizada visando a utiliza-
ao para diagnstico do vrios outros
lungos do importncia mdica, ontro
olos, ospcios dos gnoros T:.I:j-
:uu, :j~:g.IIu:, :,jIu: o nu-
u.un.
Em tompos do glolalizaao da
oconomia, aspoctos gorais do gualida-
do o principalmonto higinico-sanit-
rios sao lundamontais na doliniao da
acoitaao o da rocomondaao do guais-
guor produtos, ospocialmonto os dos-
tinados alimontaao humana. A ocor-
rncia do lungos como contaminantos
om produtos agrcolas, alimontos o
raos, tom sido assunto do invostiga-
14 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI
ao do vrios grupos do posguisa.
Estima-so guo 25/ da produao anual
do alimontos dorivados do plantas sao
dotoriorados por lungos. Grando par-
to dos lungos guo contaminam ali-
montos produz micotoxinas, as guais
sao motollitos socundrios guo pro-
judicam a saudo humana o animal.
Essa situaao domonstra a importn-
cia do so usar mtodos
apropriados para contro-
lar o :InIu: micolgico dos
produtos alimontaros. As
tcnicas tradicionais para
a idontilicaao do lungos
toxignicos om alimontos
sao pouco sonsvois, do-
pondontos do cultivo o
dotoctam aponas a pro-
sona do clulas vivois.
Ao contrrio disso, o uso
da PR pormito diagnosti-
car, do lorma sonsvol o
ospoclica, ostos micror-
ganismos, mosmo guo so
oncontrom invivois. Di-
anto disso, rocontomonto, vrias pos-
guisas vm sondo roalizadas no sonti-
do do vialilizar a dotocao do lungos
toxignicos om alimontos atravs da
PR.
Para lungos toxignicos, os alvos a
sorom amplilicados sao, guando pos-
svol, soguncias do gonos guo codili-
cam onzimas guo participam da via
liossinttica das micotoxinas tgonos
ostos ditos: gonos da liossntoso do
micotoxinas`). Entrotanto, at o mo-
monto, somonto alguns dostos gonos
loram clonados o soguonciados. As
unicas vias liossintticas lom caracto-
rizadas sao aguolas da liossntoso do
allatoxinas, trichothoconos, patulina,
toxina PR o da ostorigmatocistina tGoi-
son, 1998). Soguncias alvo ditas om-
pricas, ou soja, aguolas guo nao por-
toncom a gonos da liossntoso do
micotoxina, mas guo sua prosona
ost associada somonto a linhagons
com halilidado do produzir a micoto-
xina tamlm vm sondo utilizadas
para a dotocao dostos lungos. Uma
das lormas guo vm sondo utilizadas
para so chogar a osto tipo do sogun-
cia atravs da anliso comparativa
do porlis do RAPD tPolimorlismos do
DNA Amplilicados ao Acaso) do mato-
riais toxignicos o nao-toxignicos.
Visando invostigar a potoncialida-
do da PR para dotoctar lungos allato-
xignicos om larinha do milho, Shapi-
ra ~I nI. t1996) inocularam nosto ali-
monto sois ospcios dilorontos do lun-
gos, guatro nao toxignicas o duas
toxignicas. Em soguida, o DNA loi
oxtrado da mistura lungo-larinha o a
PR loi roalizada com j:.u~:: guo
roconhocom gonos guo participam
da via liossinttica da allatoxina.
Produtos do amplilicaao loram do-
toctados somonto om amostras nas
guais as ospcios allatoxignicas,
:j~:g.IIu: jn:n:.I.u: o JIn:u:,
haviam sido inoculadas domonstran-
do a ospocilicidado do mtodo. Alta
sonsililidado tamlm loi olsorvada,
pois rosultados positivos loram olti-
dos para amostras inoculadas com
100 osporos por grama o 24 horas do
inculaao.
Atualmonto, a PR tamlm vom
sondo utilizada para a dotocao do
patgonos vogotais com o oljotivo,
ontro outros, do ovitar sua dissomina-
ao via a introduao do matorial
vogotal contaminado. Dosta lorma, o
dosonvolvimonto do j:.u~:: guo por-
mitam a dotocao do lungos litopato-
gnicos tom sido oljoto do ostudo do
alguns posguisadoros. Um oxomplo
intorossanto do uso da PR para
dotocao do patgono vo-
gotal aguolo doscrito para
II~II:.Iuu nuInIuu
por posguisadoros da Uni-
vorsidado do Bollast, UK
tScroonivasaprasad ~I nI.
1996). Esto lungo um
patgono do moranguinho,
guo causa uma doona do-
nominada antracnoso. Dada
a sovoridado dosta doona,
o Roino Unido oxigo guo
toda planta do morango
provonionto do outros pa-
sos da omunidado Euro-
pia soja tostada guanto
prosona dosto patgono.
As plantas a sorom introduzidas do-
vom pormanocor ostocadas om c-
mara lria, do lorma sogura, at guo so
tonha o rosultado do tosto do sanida-
do. O tompo nocossrio para a olton-
ao dos rosultados polo mtodo tradi-
cional longo, o guo lova porda do
vigor das plantas onguanto ostoca-
das, invialilizando sou comrcio. A
nocossidado do diminuir o tompo do
ostocagom das plantas om anliso
lovou ostos posguisadoros a doson-
volvorom j:.u~:: para amplilicaao
do rogios lTS, ospoclicas para
nuInIuu a partir do plantas do mo-
rango. Esta altornativa motodolgica
particularmonto importanto para o
diagnstico do litopatgonos do dil-
cil cultivo oou idontilicaao.
FIgura 3. Produao u~ M
nu.:jI.n~ tgontilmonto codida
por Sosa-Gomoz, D.R
Emlrapasoja)
Rcagcntcs
Agua ultra-pura
Tampao t100mV Tris-Hl pH 9,0,
15 mV Vgl
2
o 500 mV Kl)
dNTPs
j:.u~:
Vgl
2
Tag polimoraso
DNA
VoIumc
cm I
8,
2,5
4,0
2,5
3,0
0,3
4,0
Conccntrao
do cstoquc
--
10 X
1,25 mV
4 V
12,5mV
5UI
5ngI
Conccntrao
IInaI
--
1 X
200 V
400 nV
1,5 mV
1,5 U
20 ng
u~uI:nn J.unI u~ MgI
2
un :~nn :~:n ,U uM, j.: un.: I,5 uM nu:~u u Inujn
!e|ele !. Cea1lee e|lme 1e reeee tlsea1e e 1e|etee 1e jellmer|lsmes 1e K/PD em
hetctlitiem criscjlice [Ftaere e \lelre, !}.
1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI 15
AnIIsc dc
VarIabIIIdadc GcnctIca
Basoando-so no princpio da PR,
Williams ~I nI. t1990) o Wolsh 8 Vc-
lolland t1990) doscrovoram uma clas-
so do marcadoros molocularos, os RA-
PDs, oxtromamonto util para modir o
caractorizar a varialilidado gontica.
O RAPD onvolvo a amplilicaao
do rogios anonimas disporsas polo
gonoma. Nosta tcnica, nao so oscolho
n j:.:. a rogiao a sor amplilicada, ao
contrrio disso, utilizam-so j:.u~:: do
soguncias arlitrrias do lasos o ana-
lisam-so os produtos amplilicados.
Alm do nao sor usados j:.u~:: ospo-
clicos, os produtos do amplilicaao
sao oltidos a partir do
uma unica soguncia ini-
ciadora. Esta ocorror
guando coincidir da mos-
ma soguncia j:.u~: ro-
conhocor um stio do ho-
mologia om uma das li-
tas o tamlm roconho-
cor o mosmo stio, po-
rm com oriontaao in-
vortida, na outra lita da
molcula do DNA, don-
tro do intorvalo limito da
PR.
O tamanho do j:.-
u~: do RAPD monor
tnormalmonto, 10 nuclo-
otdoos) do guo aguolo
utilizado na PR ospoclica, justamon-
to para aumontar a chanco do havor
stios complomontaros ao j:.u~: don-
tro do intorvalo limito da PR. Os
j:.u~:: sao utilizados, um a um, para
dotoctar diloronas ontro os gonti-
pos. Ao linal do tralalho, no ontanto,
os dados oltidos com os dilorontos
j:.u~:: dovom sor analisados om con-
junto. A condiao tima da roaao do
RAPD podo variar do organismo para
organismo, do manoira guo a condu-
ao do oxporimontos visando a otimi-
zaao da tcnica importanto. A con-
contraao do DNA gonomico a vari-
vol mais importanto a sor padroniza-
da. O oxcosso do DNA podo roduzir
ou inilir signilicativamonto a ativida-
do do polimorizaao da onzima Tag
polimoraso dovido a altas concontra-
os do impurozas, rosultando na au-
sncia do amplilicaao. Por outro lado,
o DNA om concontraao muito laixa
podo dar origom a padros do ampli-
licaao nao roprodutvois, podondo
ocorror acrscimo ou diminuiao do
landas, mosmo ontro ropotios. Fo-
lizmonto, ao contrrio do guo ocorro
para muitas ospcios vogotais, para a
maioria dos lungos o ospoctro do
concontraao do DNA guo pormito
oltor porlis do RAPD amplo. Buono-
Gomos t2000) mostrou guo para 1~u.-
.II.uu I:,:g~uuu, concontraos
do DNA variando do 0,03 a 300ng
pormitom a oltonao do porlis do
RAPD. Amostras contondo ontro 0,3 o
30ng do DNA dao origom a padros
idnticos do RAPD. Entrotanto, osto
tralalho mostrou havor um lovo com-
promotimonto na roproducililidado,
guando concontraos oxtromas do
DNA, tais como 0,03 o 300ng, sao
utilizadas na roaao. A ttulo do oxom-
plo, a Talola l mostra as condios do
amplilicaao guo lroguontomonto uti-
lizamos om nosso laloratrio.
Antos do advonto dos marcadoros
molocularos, a caractorizaao do isola-
dos lungicos ora rostrita, principal-
monto, a do marcadoros morlolgi-
cos. A caractorizaao morlolgica,
omlora util, lastanto limitada dovi-
do ao laixo numoro do caractoros
passvois do sorom analisados. Em
lungos om mdia cada j:.u~: gora 10
sogmontos amplilicados, com poso
molocular variando do 300 a 2500 pl.
Ao sorom totalizadas as landas olti-
FIgura 4. Vorlologia das coloni-
as dos isolados Va2 o Va3 do
M nu.:jI.n~ tgontilmonto codi-
da por Sosa-Gomoz, D.R
Emlrapasoja)
das com os dilorontos j:.u~::, tom-so
dosta lorma um grando numoro do
locos a sorom analisados. A prosona
do um lragmonto amplilicado om al-
guns dos gontipos comparado com a
ausncia dosso mosmo lragmonto om
outros gontipos, caractoriza o guo so
donomina polimorlismo do RAPD. Es-
tos polimorlismos tm sido oxtroma-
monto utois para ostudos do varialili-
dado gontica. Em nosso laloratrio,
na Univorsidado Estadual do Iondri-
na, tomos utilizado o RAPD para ca-
ractorizar a varialilidado gontica do
vrias ospcios lungicas, particular-
monto aguolas do intorosso para o
controlo liolgico do pragas da agri-
cultura.
O intorosso polo uso do
microrganismos para o con-
trolo do pragas da agricultu-
ra vom aumontando nos ulti-
mos anos, principalmonto a
partir da dcada do 0,
modida guo loram sondo ovi-
donciados os prollomas ad-
vindos da utilizaao dos in-
soticidas gumicos. Entro os
oxomplos do lungos dispo-
nvois no morcado o daguo-
los guo ainda ostao om do-
sonvolvimonto no pas, para
dilorontos culturas oncon-
tram-so os gnoros M~In:I.-
z.uu, 1~un:~:.n, 1n~.-
Iu,~:, Nuu:n~ ~ 1uI-
ujIII:n
Aposar do Brasil sor um pas guo so
dostaca polo numoro do posguisado-
ros guo tralalham com controlo mi-
croliano do pragas, ainda sao poucas
as inlormaos oxistontos solro a va-
rialilidado gontica do ospcios do
lungos ontomopatognicos isolados
om nosso pas. O conhocimonto da
varialilidado gontica dossas ospcios
do grando importncia para a roali-
zaao do ostudos gonticos o doson-
volvimonto do programas do molho-
ramonto.
Entro as principais pragas das pas-
tagons no Brasil oncontram-so os g-
noros 1~.:, ZuI.n o MnInun::n. Es-
tas cigarrinhas, altamonto litotoxigni-
cas, roduzom a produao do massa
vordo om corca do 15/ o, om consogu-
ncia, danilicam uma roa loliar guo
podoria alimontar milhos do lovinos
por ano. O controlo dossas cigarri-
nhas, guo podo chogar a 60/, ropro-
16 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI
sonta um lom oxomplo
da utilizaao prtica do
lungo M~In:I.z.uu nu.-
:jI.n~ tFigura 3 o 4).
Uma ilustraao da anli-
so do variaao gontica
do M nu.:jI.n~ isolados
do solo o do cadvoros da
cigarrinha 1~.: JIn:j.-
In, uti l i zando-so do
RAPD, aprosontada na
Figura 5. Entro os 13 iso-
lados analisados, 6 loram
colotados om dilorontos
rogios do Brasil o osta-
vam colonizando o inso-
to, os domais isolados
provioram do solo do uma
unica rogiao do Estado
do Paran, Vau. Os ro-
sultados mostraram guo
a divorsidado ontro isola-
dos oltidos do 1 JIn:-
j.In muito monor guo
aguola oncontrada ontro
isolados do solo. Esto
um oxomplo da impor-
tncia do omprogo do mtodo do
RAPD no ontondimonto da rolaao
patgono-hospodoiro tFungaro ~I nI.
1996)
Estudos roalizados polo onargon
Emlrapa domonstraram guo o lungo
M~In:I.z.uu JIn::.:.u~ aprosonta
grando potoncial para o controlo do
galanhotos. Estos insotos so alimon-
tam do gramnoas nativas o do vrias
culturas oconomicamonto importan-
tos, tais como, arroz, cana-do-aucar o
milho Uma nuvom do galanhoto podo
contor 40 milhos do indivduos por
guilomotro guadrado, o guo ropro-
sonta um consumo dirio do 80 mil
tonoladas do alimontos tosonza ~I nI
1994). Esso lato domonstra a impor-
tncia do so invostir osloros para
molhor conhocimonto da ospcio M
JIn::.:.u~. Estudos roalizados om nos-
so laloratrio tVartins, 1998) o tam-
lm por posguisadoros do onargon
tVagalhaos ~I nI. 199) pormitiram
concluir guo osta ospcio aprosonta
laixa varialilidado gontica guando
comparada a M nu.:jI.n~.
Alm do aspoctos rolacionados com
a varialilidado gontica, o nosso gru-
po tamlm tom usado o RAPD para a
idontilicaao taxonomica do alguns
isolados do lungos ontomopatogni-
cos tAzovodo, 1999) o para o monito-
ramonto do cruzamontos ontro isola-
dos do M JIn::.:.u~ tVartins ~I nI.,
1999).
BIbIIograIIa
Azovodo, A. . S. t1999). aractoriza-
ao molocular do 1n~.Iu,~: Juu:-
::~u: o 1 I~uu.j~:. Iondrina: UEI. 99p.
Dissortaao, Vostrado.
Vartins, V. K. t1998) RNA do dupla
lita om M~In:I.z.uu JIn::.:.u~. Iondri-
na: UEI.101p. Dissortaao do Vostrado.
Buono-Gomos R. t2000). Anliso go-
ntica o molocular da parassoxualidado
om 1~u..II.uu I:,:g~uuu. UNESP
140p. Toso, Doutorado.
osonza,G. W., Riloiro, J. G. B., do
arvalho, J.S.. t1994). Programa Nacional
do controlo do galanhotos. Vanual Tc-
FIgura 5. RAPD do 13 isolados
do M nu.:jI.n~ oltido com o
j:.u~: OPX11. Acima do cada
linha oncontra-so a donomina-
ao do isolado. O isolado E9 loi
amplilicado duas vozos para so
tor um controlo do
ropotililidado. Na linha V, apro-
sonta-so o marcador do poso
molocular (DNA H.uu 111).
tFungaro ot al. 1996)
nico. Vinistrio da Agricultu-
ra, do Alastocimonto o da
Rolorma Agrria. Emlrapa-
SPl, Braslia, DF 34p.
Fungaro, V. H. P., Vioira,
V. I. ., Pizzirazni-Kloinor,
A. A. 8 Azovodo, J. I. t1996).
Divorsity among soil and in-
soct isolatos ol M~In:I.z.uu
nu.:jI.n~ var. nu.:jI.n~ do-
toctod ly RAPD. Iottors in
Appliod Vicroliology 22: 389-
392.
Goison, R. t1998). PR
Vothods lor tho dotoction ol
mycotoxin-producing lungi.
ln: Bridgo P.D., Arora, D.K.,
Roddy, .A., Elandor, R.P. od.
Applications ol PR in Vyco-
logy, AB lntornational, Nov
\ork, p.243-266.
Vagalhaos, B P, Faria, V,
Tigano, V S, Solral, B W S
t199). haractorization and
virulonco ol a Brazilian isola-
to ol M~In:I.z.uu JIn::.:.-
u~ Gams and Rozsypal
tHyphomycotos). Vomoirs ol tho Ento-
mological Socioty ol anad 11: 313-
312.
Vartins, V. K., Furlanoto, V.., Sosa-
Gomoz, D.R., Faria, V. R. 8 Fungaro, V.
H. P. t1999). Doullo-strandod RNA in
tho ontomopathogonic lungus M~In:I.-
z.uu JIn::.:.u~. urront Gonotics 36:
94-9.
Vullis, K. 8 Faloona, F. t198). Spo-
cilic synthosis ol DNA in vitro via a
polymoraso catalysod chain roaction. Vo-
thods in Enzymology. 55: 335-350.
Sroonivasaprasad, K., Sharada, K., Bro-
vn, A.E, Vills, P.R. t1996). PR-lasod
dotoction ol II~II:.Iuu nuInIuu
on stravlorry. Plant Pathology 45: 650-
655
Shapira, R., Pastor, N., Eyal, O., Vona-
shorov, V., Vott, A. 8 Salomon, R. t1996).
Dotoction ol allatoxigonic molds in grains
ly PR. Appliod and Environmontal
Vicroliology. 62: 320-323.
Wolsh, J. 8Vclolland, V. t1990).
Fingorprinting gonomos using PR vith
primors arlitrary. Nucloic Acids Rosoar-
ch. 18: 213-218.
Williams, J. K. G., Kulolik, A. R.,
Iivak, K. J., Ralalski, J. A. 8 Tingoy, S. V.
t1990). DNA polymorphism ampliliod ly
arlitrary primors aro usolul as gonotic
markors. Nucloic Acids Rosoarch. 18:
6531-6535.