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PERSPECTIVAS DA PESQUISA EM BIOLOGIA MOLECULAR APLICADA NUTRIO

CARLOS KUSANO BUCALEN FERRARI e ELIZABETH APARECIDA FERRAZ SILVA TORRES

om o advento do genoma humano, um marco na pesquisa biolgica que permitir uma compreenso da expresso de nossas caractersticas hereditrias, cada vez mais nossa espcie avana no sentido de conhecer melhor as bases celulares e biomoleculares da preveno, do tratamento e da cura das doenas. Paralelamente, as Cincias da Alimentao e da Nutrio tm-se desenvolvido, em geral, no sentido de conhecer a interao alimento/nutriente? organismo e os efeitos da carncia ou do excesso de nutrientes sobre os tecidos e/ ou clulas animais ou humanas. Em muitos casos, os mecanismos de ao dos nutrientes (essenciais ou no) nem sempre foram claramente desvendados, embora j tenham sido definidas, para cada nutriente essencial, suas doses dirias recomendadas (DDR). No tendo como pretenso realizar uma reviso ou discusso exaustiva sobre o assunto, apenas foram discutidas algumas possibilidades de pesquisa ainda pouco exploradas, especialmente na Amrica Latina, na rea denominada Nutrio Biomolecular. Com a enorme riqueza florstica e faunstica encontrada no Bra-

sil e em diversos pases Latino-americanos, muitas so as possibilidades de pesquisa de fatores da dieta benficos sade, tanto do ponto de vista de nutrir o organismo, quanto de prevenir ou mesmo tratar enfermidades. Atualmente, tem sido dada muita nfase pesquisa de possveis propriedades funcionais ou medicinais dos alimentos (Machado e Santiago, 2001; Neumann et al., 2000), possuindo a Amrica Latina um grande potencial devido enorme variedade de espcies, como, por exemplo, vegetais fontes de diversos tipos de carotenides (Chvez e Chvez, 1999). As civilizaes dos Astecas e dos Maias j utilizavam o cacau no preparo de chocolate, servido principalmente como bebida quente, que seduziu os conquistadores espanhis, sendo considerado como ouro lquido. Alm disso, aquelas civilizaes j utilizavam o cacau como alimento medicinal. Duke (2000) descreve que o cacao (Theobroma cacao L.) pode ser indicado para o tratamento paliativo do mal de Parkinson, de mastites, de hepatopatias, de impotncia sexual, febre, cistites, resfriados, queimaduras, asma e bronquites, diabetes e obesidade. Este autor descreve cada uma das substncias encontradas no cacau e a respectiva indicao teraputica.

Na maioria dos casos, trata-se de substncias como a quercetina, a rutina, os cidos ferlico, cafeico e cumrico (dentre outros), as catequinas (tambm presentes nos chs verde e preto do Oriente), as metilxantinas (teofilina, teobromina, cafena, etc), vrios polifenlicos e flavonides. Como o cacau nativo das Amricas, tendo o Brasil como um dos principais produtores, deveramos trabalhar para o isolamento de seus compostos com atividade biolgica e testar os efeitos destas substncias mediante experimentos com cultura de clulas (in vitro) ou em animais de experimentao (in vivo). Seria desejvel, por exemplo, estudar se extratos de cacau ou de chocolate poderiam diminuir a formao da substncia -amilide nos neurnios cerebrais, uma vez que a produo desta substncia determina a formao de radicais livres, a morte neuronal e, conseqentemente, a progresso do Mal de Alzheimer (Ferrari, 2000a, b). Tambm seria interessante se fossem estudados os efeitos dos compostos do cacau e chocolate sobre a sobrevivncia celular. Isto significa testar se tais compostos (polifenlicos, como as procianidinas e catequinas) podem inibir a morte celular acidental (necrose) ou a morte celular programada (apoptose).

PALAVRAS CHAVE / Antioxidante / Apoptose / Aterosclerose / Cncer / Expresso Gnica / Obesidade /


Recebido: 15/04/2002. Modificado: 09/08/2002. Aceito: 03/09/2002

Carlos Kusano Bucalen Ferrari. Biomdico, Universidade Estadual Paulista (UNESP/ Botucatu). Mestre e Doutorando em Sade Pblica, Departamento de Nutrio da Faculdade de Sade Pblica da Universidade de So Paulo (USP). Endereo: Av. Dr. Arnaldo, 715 2 andar, 01246-904, Cerqueira Csar, So Paulo (SP), Brasil email: carlokferrari@bol.com.br. Elizabeth Aparecida Ferraz Silva Torres. Engenheira Agrnoma, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ). Mestre em Cincia e Tecnologia de Alimentos, UFRRJ. Doutora em Cincia dos Alimentos, USP. Professora Asociada Livre Docente, Departamento de Nutrio, Faculdade de Sade Pblica, USP. e-mail: eatorres@usp.br.

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Os principais mecanismos desempenhados pelas diversas biomolculas presentes em alimentos e seus conseqentes efeitos benficos sade podem ser, dentre outros (Duke, 2000; Lampe, 1999): 1) Atividades antioxidantes; 2) Atividades antimicrobianas; 3) Propriedades anti-inflamatrias; 4) Propriedades hipocolesterolmicas e anti-aterosclerticas; 5) Atividades anti-trombticas; 6) Propriedades imunoestimulantes; 7) Atividades de detoxificao de drogas e xenobiticos; 8) Efeitos redutores da presso arterial; e 9) Efeitos sobre a sobrevivncia celular, atravs da inibio ou ativao da morte celular programada. Mecanismos Antioxidantes Diversos grupos de pesquisa (Ziouzenkova et al., 1996; Ferrari, 1998; 1999; Vinson et al., 1998; Khknen et al., 1999) tm procurado desvendar se determinada fruta ou hortalia apresenta substncias com atividades antioxidantes, neutralizando ou removendo espcies reativas derivadas do oxignio (superxido, hidroxila, oxignio singlete, perhidroxila,), do nitrognio (peroxinitrito) ou de metais (do ferro, cobre e outros). Antioxidantes, LDL e aterosclerose Neste sentido, o grupo liderado por Kanner foi o primeiro a descobrir que os fenlicos do vinho (e das uvas) inibem a oxidao do colesterol ruim, o LDL (low density lipoprotein), prevenindo o desenvolvimento da aterosclerose e doenas correlatas (Kinsella et al., 1993). Os franceses no ficaram atrs e tambm tm pesquisado sobre o assunto, bem como os chilenos, importantes produtores de vinho. Entretanto, difcil encontrar pesquisas Latino-americanas sobre o assunto, pelo menos nos sistemas de indexao mais utilizados nas Amricas, como o MEDLINE e o LILACS, talvez porque muitas vezes os resultados so publicados em peridicos regionais no indexados e/ou pouco difundidos ou a divulgao se faz no exterior sem que seja possvel que o conhecimento seja divulgado no pas. Daquilo acima exposto, fica claro que muito se conhece das aes e/ou efeitos fisiolgicos das substncias naturais. Todavia, ainda no foram total ou mesmo parcialmente estabelecidos os verdadeiros mecanismos celulares e moleculares de substncias anticancergenas, cardioprotetoras e neuroprotetoras, dentre outras. Sem dvida, um os principais mecanismos que explicam os efei-

Figura 1. Mecanismo antioxidante na preveno da aterosclerose. ERO: espcie reativa de oxignio; Ox-LDL: LDL oxidada

tos benficos desempenhados pelos fitoqumicos presentes em frutas e verduras representado pela ao antioxidante. Os antioxidantes como o cido ascrbico (vitamina C) o tocoferol (vitamina E) e flavonides (especialmente os carotenides, incluindo aqueles com atividade pr-vitamnica A) apresentam fundamental importncia na estabilidade de membranas e molculas lipdicas, impedindo que as lipoprotenas sanguneas, principalmente a LDL e a VLDL (very low density lipoprotein), sejam oxidadas por espcies reativas do oxignio ou do nitrognio (Halliwell e Chirico, 1993), tendo como conseqncias a formao da placa aterosclertica e, a posteriori, a aterosclerose (Steinberg et al., 1989). Os clssicos trabalhos de Goldstein e Brown, no final da dcada de setenta (Basu et al., 1979), sobre estes mecanismos bioqumico-patognicos lhes resultaram no prmio Nobel de Medicina. Assim, para impedir a aterosclerose e outros processos patognicos, a terapia nutricional antioxidante apresenta, na prtica, fundamentos slidos quanto questo dos mecanismos antioxidantes e dos efeitos positivos sade, na diminuio tanto do risco de cncer, quanto de doenas cardiovasculares (Duthie e Bellizzi, 1999; Yang, 2000; Ferrari, 2001). Abbey et al (1995) evidenciaram que a suplementao da alimentao de fumantes com suco de laranja e cenoura diminuiu a oxidao de LDL, in vitro, induzida pelo cobre. Hoje, j esto bem estabelecidos os protocolos de pesquisa para testar as possveis atividades inibitrias sobre a oxidao das lipoprotenas LDL. Uma descrio completa dos mtodos pode ser obtida em trabalhos do grupo do H. Esterbauer (Ziouzenkova et al., 1996) e em Vinson et al. (1998) e Leonhardt et al. (1999). Por que no se testa o poder antioxidante do aa, da manga, da goiaba, da banana ou da jaca, dentre muitos outros alimentos? Do mesmo modo, atravs de ensaios qumicos, sabe-se que a capacidade antioxidante de uma taa de vinho tinto (150ml, DDR para a preveno de cardiopatias) equivalente a doze

taas de vinho branco, dois copos de ch, quatro mas, cinco cebolas, trs copos e meio de cerveja, sete taas de suco de laranja e vinte taas de suco de ma (Paganga et al., 1999). Novamente a questo se repete: quais so as pores de aa, de laranja, de ma, de ch mate, de cenoura, de alface, de mel, de prpolis, de cupua, de abacaxi, de milho, de feijo que apresentam a mesma atividade antioxidante de uma taa de vinho tinto? Ser que os nossos vinhos apresentam maior ou menor contedo de polifenlicos antioxidantes que os vinhos europeus? De modo geral, a proteo antioxidante das LDL ou de lipdios de biomembranas ocorre da forma exposta na Figura 1. H poucos anos, Fruebis et al. (1999) demonstraram que os tratamentos com vitamina E e probucol diminuram a expresso da molcula de adeso vascular-1 (VCAM-1) em 49,0% e 74.9%, respectivamente, decrescendo o risco de aterosclerose. A VCAM-1, juntamente com as integrinas, responsvel pela adeso de moncitos ao endotlio, contribuindo para o desenvolvimento da aterosclerose. Antioxidantes e DNA Outro mecanismo antioxidante, relevante para a preveno de mutaes e da carcinognese, a proteo do DNA. Diversos antioxidantes, como o ascorbato, o tocoferol e certos fenlicos, podem proteger o material gentico dos efeitos deletrios provocados pelas espcies reativas do oxignio, nitrognio e de metais (Ferrari, 2001). O isolamento de compostos de alimentos consumidos no pas e o teste de suas possveis atividades antimutagnicas podem ser realizados atravs da tcnica single-cell gel eletrophoresis assay ou ensaio cometa (Noroozi et al., 1998). O ensaio cometa consiste na exposio das clulas a baixas concentraes de perxido de hidrognio (H2O2) que em meio alcalino provoca lise nuclear de modo que o material nuclear liberado do ncleo, formando uma cauda de cometa, revelada em slides de gel de agaro-

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Figura 2. Mecanismos antioxidantes mediados pela ativao do Elemento de Resposta Antioxidante (ERA).

se. A inibio da formao da cauda do cometa pelo composto em estudo sugere uma atividade anti-mutagnica do mesmo. Do mesmo modo, podese induzir mutaes por meio de oxidantes e realizar o seqenciamento de um determinado conjunto de pares de bases do DNA. Caso a prvia adio do composto em estudo promova inibio do nmero de bases nucleotdicas mutadas, tal substncia tambm apresenta capacidade anti-mutagnica. Este teste, originalmente criado por Bruce Ames (Teste de Ames), utiliza linhagens de Salmonella typhimurium suscetveis mutao (Ames et al., 1975). Agentes mutagnicos tambm podem se ligar quimicamente ao DNA, alterando a expresso gnica. Neste sentido, o malonaldedo (MDA), um dos principais produtos secundrios da oxidao de lipdios, capaz de se ligar ao DNA, formando principalmente os adutos Guanina-MDA (Hadley e Draper, 1990). Fang et al. (1996) observaram nveis de adutos MDA-DNA 3,6 vezes maiores em leuccitos de indivduos alimentados com dieta rica em cidos graxos poliinsaturados em relao aos indivduos que receberam dieta rica em cidos graxos monoinsaturados (7,4 8,7 adutos/107 nucleotdeos versus 1,6 1,9 adutos/107 nucleotdeos). Embora ainda haja muitas dificuldades tcnicas na preparao, interpretao e anlise dos produtos da oxidao do DNA (adutos e outros), conforme discutiu Halliwell (2000), os estudos dietticos podem incorporar mais este arsenal para avaliar o potencial anti-mutagnico de compostos da dieta. Expresso gnica mediada por nutrientes Desde 1990, com a descoberta do gene elemento de resposta an-

tioxidante (antioxidant-responsiveelement; ARE) por Rushmore e Pickett (1990), hoje um dos maiores desafios da biologia molecular testar se um composto diettico (ou sinttico) poderia ativar o ARE provocando uma resposta defensiva antioxidante na clula para remover espcies reativas oxidantes. Para estudar tais questes, sugere-se a leitura do trabalho de Chesters (1998) para compreenso das diversas tcnicas de Biologia Molecular. Destas, destacam-se a hibridizao do genoma, o northern blotting (para estimao do RNA mensageiro, que codifica a mensagem para a sntese de uma protena), a clonagem do genoma, a reao de polimerase em cadeia (polymerase chain reaction; PCR) para a multiplicao da quantidade de DNA da amostra, o seqenciamento do DNA (para que sejam conhecidas, na seqncia correta, as composies de nucleotdios e bases nitrogenadas do DNA) e as protenas produzidas pelo RNA mensageiro. A tecnologia dos microchips de oligonucleotdeos (biochips) propiciou um grande avano no estudo da expresso gnica e identificao de protenas (Askari et al., 2001; Moreno-Aliaga et al., 2001). A Figura 2 esquematiza a ativao do ARE ou ERA (elemento de resposta antioxidante) como importante ao antioxidante de um fitoqumico. A avaliao do potencial antioxidante de substncias presentes em alimentos tambm pode ser realizada mediante testes de produo de antioxidantes celulares, como superxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPx), em clulas sanguneas (Kinscherf et al. 1998; Mats et al., 1999), no figado (Yamamasu et al., 1997), no crebro (Chan, 1996), no corao (Yen et al., 1996) e em outros rgos e tecidos importantes.

Tambm pode se estudar se compostos presentes em alimentos so capazes de ativar a produo de outros fatores antioxidantes citoprotetores, como o fator-1 induzido pela hipxia (hypoxiainducible factor-1; HIF-1) e as chaperonas ou protenas do choque trmico (heat-shock proteins; HSPs), que protegem tanto o miocrdio (Williams e Benjamin, 2000) quanto o sistema nervoso central (Sharp et al., 1999) da ao deletria de espcies oxidantes. O Selnio, reconhecido antioxidante, anticancergeno e inibidor da morte celular (Schrauzer, 2000), apresenta-se principalmente na forma de selenocistena, que incorporada s sete formas conhecidas de selenoprotenas (Lescure et al., 2000). Estudar o potencial de alimentos ricos em Selnio em ativar a produo de selenoprotenas tambm constitui uma linha de pesquisa relevante. Expresso gnica e obesidade A regulao gentico-bioqumica do acmulo de gordura nos tecidos adiposos outra questo crucial para a compreenso da obesidade e seus determinantes. A sntese de gordura atravs da glicose requer que esta sofra uma fosforilao mediada pela glicoquinase (EC 2.7.1.2) para formar a glicose-6fosfato (G-6-P). A G-6-P sensibiliza genes do elemento de resposta glicose (glucose response element; GRE) que, atravs de fatores de transduo, ativam a sntese da enzima cido graxo sintase (EC 2.3.1.85), convertendo intermedirios da glicose em cidos graxos no interior de adipcitos (Ferr, 1999). Um dos principais fatores de transcrio do GRE o ADD1, que pertence ao grupo dos elementos reguladores de esteris (sterol regulatory element binding protein-1; SREBP1), cuja superexpresso em camundongos transgnicos provoca uma elevadssima produo de cido graxo sintase e a formao da esteatose heptica. Por outro lado, a ativao de GRE e da cido graxo sintase inibida por uma enzima quinase dependente de AMP (AMP-activated protein quinase; AMPK) (Ferr, 1999). O controle da adipognese e lipognese depende tambm de outros genes. Em camundongos, mutaes em cinco genes [obeso (ob), diabetes (db), agouti yellow (Ay), fat e tubby] so responsveis pelo desenvolvimento da obesidade (Leibel et al., 1997; MorenoAliaga et al., 2001). A Leptina, produto do gene ob, controla o apetite e o balano energtico. Mutaes no gene ob diminuem a produo de Leptina, tendo como conseqncia o desenvolvimento da

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obesidade; e a administrao de Leptina provoca diminuio do peso naqueles animais (Leibel et al., 1997). Middleton et al. (2001) demonstraram que h uma relao inversa entre os nveis intracelulares de colesterol e a ativao gnica mediada pela adenosina-monofosfato cclica (AMPc). O metabolismo de lipdios tambm dependente da atividade dos receptores nucleares para a proliferao de peroxisomos (PPAR). Estes receptores, promovem a proliferao de peroxisomos, que estimulam a adipognese, e encontram-se em nveis elevados em pacientes com obesidade e diabetes. Dietas ricas em cidos graxos saturados estimulam o sistema PPAR, tendo como conseqncias hiperplasia e hipertrofia de adipcitos; ao passo que aquelas ricas em cidos graxos poli-insaturados (n-3), inibem a adipognese. Outros detalhes encontram-se em Uauy et al. (2000). O estudo de fatores nutricionais que possam controlar a expresso gnica crucial para a descoberta de novas formas de controle e terapias da obesidade. Estudos para compreender melhor os papis desempenhados pelos nutrientes e fitoqumicos sobre a expresso gnica so recomendados pelo Instituto de Tecnologia de Alimentos dos EUA (IFT, 2001), sendo fundamentais para a caracterizao de alimentos modificados geneticamente (AMG). A Unio Europia e a FAO classificaram os AMG em trs categorias: a) Aqueles que apresentam a mesma composio do parental, ou seja, no diferem geneticamente daquele que lhe originou. b) Aqueles que apresentam a mesma composio, excetuando-se uma caracterstica bem-definida. c) Aqueles que diferem do parental. Para o grupo a, a avaliao de seguridade obriga apenas a caracterizao da insero gnica realizada; enquanto que para o grupo b necessrio avaliar a seguridade das protenas expressas. Alm das avaliaes supracitadas, estudos toxicolgicos completos devem ser realizados para o ltimo grupo (Martens, 2000). Inibio ou Ativao da Apoptose atravs de Fitoqumicos: Chave para a Preveno das Doenas Neurolgicas ou para o Combate s Clulas Cancergenas. Introduzida definitivamente em 1972 por Kerr e colaboradores (Kerr et al., 1972), a apoptose ou morte celular programada (MCP) um tipo especial de morte celular que ocorre desde organismos unicelulares (protozorios, bactrias, fungos, etc) at a espcie humana (Evan e Littlewood, 1998; Ferrari, 2000a,b). Ainda no perodo embrionrio, ocorre MCP das clulas interdigitais para

TABELA I FATORES REGULADORES DA APOPTOSE E SITUAES CORRELATAS Agentes indutores da apoptose Etanol Metais e outros Agentes qumicos Peptdio b-amilide (Alzheimer) Drogas Quimioteraputicas Radiao (UV e gama) Frio e calor Material particulado (asbesto e slica) Protena gp120 do VIH Toxinas bacterianas Oncogenes (myc, rel, E1A, E2F, Ras) Supressores tumorais (p53) Deprivao de nutrientes Clulas T citotxicas (granzima B) Fator de Necrose Tumoral TNF Fator de Crecimento TumoralTGF-b Neurotransmissores excitotxicos em diversas doenas neurodegenerativas (dopamina, glutamato e NMDA) - Glicocorticides (estresse) - Elevao do Clcio intracelular (doenas neurodegenerativas, estresse oxidativo, cardiopatias isqumica e aterosclertica) - Oxidantes/radicais livres (vrios)
Fonte: Ferrari (2000a).

Agentes supressores da apoptose - Promotores tumorais (fenobarbital e hexaclorociclohexano) - Inibidores de protease que clivam a cistena - Inibidores de calpana - Genes virais [Herpesvrus (g1345), Vrus Epstein-Barr (BHRF-1,LMP-1), Cowpox (acrmA), Baculovirus (IAP, p35), Vrus da febre suna africana (LMW5-HL) e Adenovrus (E1B)] - Andrognios e Estrognios - Zinco - Aminocidos neutros - Matrix extracelular - Fatores de crescimento - Ligador do receptor CD40 - Antioxidantes celulares (Zinco, cobre, Superxido Dismutase, Catalase, Glutationa peroxidase) - Antioxidantes dietticos (Selnioebselem, compostos com grupos tiis, cido ascrbico, a-tocoferol, N-acetilcistena, trolox, L-cistena)

que sejam formados os dedos das mos e dos ps do novo ser humano. A apoptose ocorre em diversos processos fisiolgicos normais do organismo e tambm em diversas disfunes ou doenas, como na morte de linfcitos e de neurnios durante a infeco pelo HIV, na morte de neurnios na demncia e at mesmo na morte de clulas do miocrdio aps a isquemia ou o infarto do miocrdio (Thompson, 1995; Peter et al, 1997; Ferrari, 2000a). Um dos principais grupos de substncias txicas capazes de induzir tanto a morte celular acidental e grave, a necrose, quanto a subletal MCP, a apoptose, representado pelos radicais livres do oxignio e nitrognio (Ferrari, 2000b). Todavia, a vitamina C, o tocoferol, carotenides e diversos antioxidantes sintticos (N-acetil-cistetna, trolox, ebselen) so capazes de remover as substncias oxidantes e inibir a morte celular tanto in vitro quanto in vivo (Ferrari, 2000a,b). Por outro lado, a ativao da apoptose tem sido um dos artifcios estudados pelo homem para a eliminao de clulas envelhecidas ou cancergenas. Assim, diversos produtos naturais tem sido estudados no sentido de proteger o corao ou os tecidos nervosos da

apoptose ou de induz-la para eliminar clulas neoplsicas. Na Tabela I, esto agrupados fatores capazes de induzir e outros de suprimir a apoptose, podendo estar os primeiros associados patogenia e os ltimos preveno de doenas. Dentre as doenas associadas diminuio da apoptose temos algumas infeces virais, doenas linfoproliferativas e tumores. Ao contrrio, na AIDS, na colite ulcerativa, no diabetes mellitus, na falncia heptica, no infarto do miocrdio, na intoxicao etlica, na osteoporose, na tireoidite de Hashimoto e nas diversas doenas neurodegenerativas (Mal de Parkinson, degenerao cerebelar, Mal de Alzheimer, esclerose lateral amiotrfica, retinite pigmentosa, etc), ocorre apoptose em expressivo nmero de clulas (Ferrari, 2000a,b; Peter et al., 1997; Thompson, 1995). A Ativao da Apoptose como Mecanismo Anti-Tumoral Muitas pesquisas esto sendo realizadas no sentido de se determinar os efeitos pr-apoptticos de substncias naturais com potencial para a quimiopreveno ou tratamento do cncer. Sabe-se que o consumo de alho est relacionado a menor risco de cncer. O alho contm alicina, substncia capaz de

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ram revisadas (Ferrari, 2000b). Detalhes sobre os protocolos para estudar os possveis efeitos pr-apoptticos de nutrientes e substncias funcionais de alimentos na ativao de p53, das caspases e da fragmentao nuclear podem ser encontrados em Anjum e Khar (1997), Chau et al. (1998), Kinscherf et al. (1998), Stridh et al. (1998). Para diferenciao de necrose e apoptose veja Chau et al. (1998) e Ferrari (2000a). A Inibio da Apoptose Resguarda as Clulas, Protegendo rgos Vitais Todavia, os efeitos antiapoptticos so importantes para evitar a perda celular em rgos essenciais, como o fgado, o crebro, o pncreas, o corao, os rins, etc. Neste caso, diversos antioxidantes de origem natural podem ser candidatos a compostos capazes de inibir a morte celular e proteger tecidos e/ou rgos essenciais ao adequado funcionamento do organismo, uma vez que diversos tecidos so formados por clulas especializadas com baixa capacidade proliferativa, o que dificulta ou simplesmente impede a regenerao de um rgo. O papel dos antioxidantes e as principais vias celulares e moleculares que podem ser alvo para o estudo de nutrientes anti-apoptticos comeam a ser esclarecidas (Ferrari, 2000b). Para estudar a inibio da apoptose, podem ser avaliados os mesmos parmetros acima descritos e tambm a ativao do gene antiapopttico bcl-2 e a conseqente produo da protena antiapopttica Bcl-2 (Anjum e Khar, 1997; Chan, 1996), alm de outras vias encontradas na Figura 3. Discusso e Concluso Uma das maiores polmicas dos estudos nutricionais tm sido o paradoxal efeito da suplementao com vitaminas antioxidantes para a preveno do cncer. Alguns estudos demonstraram que a suplementao com -caroteno aumentou o risco de cncer pulmonar em fumantes inveterados, enquanto que diminuiu o risco de cncer gastroesofgico em desnutridos (Yang, 2000; Silva e Naves, 2001). Estudos sobre expresso de genes mediada por nutrientes podero ser fundamentais para comear a compreender em que situaes os antioxidantes realmente diminuem o risco de cncer e em quais eles no so eficazes. Ademais, diversas anlises de estudos epidemiolgicos com seres humanos tm evidenciado que h uma associao inversa entre a ingesto de frutas e hortalias e o risco de doenas car-

Figura 3. Mecanismos gerais de ativao ou supresso da Apoptose. EM: esfingomielinases; FL: fosfolipases; bcl-2: protena de linfoma de clulas B; AIF: fator indutor de apoptose; NFkB: fator nuclear ?; DISC: complexo indutor de apoptose; rb: gene do retinoblastoma; myc: gene de controle da proliferao; rpr: gene reaper de Drosophila sp; bax: gene ativador da apoptose via mitocndria; bad: gene inibidor da apoptose via inibio de bax; Setas: induo da apoptose; Linhas vermelhas: inibio da apoptose.

provocar apoptose de clulas tumorais in vitro (Wagner, 1999). Pesquisadores do Japo observaram que os polifenlicos do caqui (Diospyros kaki L.) foram capazes de induzir, in vitro, a apoptose de clulas de leucemia linfoctica humana (Achiwa et al., 1997). H muitos anos j se sabia tambm que o consumo de ch (verde ou preto) diminua o risco de cncer (digestrio, especialmente) nas populaes do Oriente. Yang et al. (1998) demonstraram que os polifenlicos do ch foram capazes de induzir a apoptose em diversas clulas tumorais humanas em cultura. Um caso intrigante o da -lapachona (3,4-dihidro-2,2-dimetil2H-nafto-[1,2,-b]piran-5,6,-diona), sintetizada a partir da adio de cido sulfrico ao composto lapachol, isolado da planta Tabecuia avellanedae, encontrada no Brasil. A -lapachona capaz de induzir a formao de radicais livres e conseqentemente de promover a apoptose de clulas de leucemia humana in vitro (Chau et al., 1998). Ao contrrio, o ster de fenitila do cido cafeico, encontrado no prpolis, induz a apoptose de clulas leucmicas HL-60, in vitro, atravs da diminuio do potencial transmembrana mitocondrial, da diminuio do GSH e da remoo do H2O2, mas no do O2? (Chen et al., 2001). Sabe-se que o resveratrole, polifenlico da casca das uvas, pre-

sente em sucos de uva e vinhos, capaz de diminuir a formao de tumores em animais, efeito este mediado, ao menos em parte, pela inibio da proliferao celular e da induo da MCP (Huang et al., 1999). sabido que o aparecimento de mutaes no DNA celular, promovidas por agentes patognicos (radicais livres, toxinas, metais, fontes energticas, etc), pode desencadear a perda do controle na proliferao celular, tendo como conseqncia um fentipo celular oncognico. Neste sentido, fatores da dieta podem induzir a apoptose de clulas neoplsicas desde os estgios iniciais da carcinognese, impedindo a expanso proliferativa das clulas transformadas e a formao dos tumores (Ferrari, 2000a). Certamente, fatores da dieta tambm diminuem o risco de cnceres atravs de outros mecanismos, como a remoo de radicais livres do oxignio e a detoxificao de xenobiticos (Lampe, 1999). Como principais indicadores da apoptose temos as caractersticas morfolgicas da clula, a ativao do gene p53 (e a produo de sua protena P53) e das enzimas caspases, que executam a morte celular apopttica, e a fragmentao nuclear (Figura 3). As principais vias celulares e moleculares da apoptose induzida por radicais livres e produtos da peroxidao de lipdeos fo-

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diovasculares (Ferrari, 1998, 2001). Em particular, tm sido demonstradas associaes inversas entre a ingesto de carotenides, vitamina C, vitamina E, fenlicos (diversos, incluindo o licopeno) e o risco de doenas cardiovasculares (Kinsella et al., 1993; Ferrari, 1998, 2001; Duthie e Bellizzi, 1999; Lampe, 1999). Os ensaios laboratoriais so fundamentais para elucidar quais os mecanismos de ao dos nutrientes e no nutrientes da dieta que so responsveis por tais efeitos benficos observados em estudos epidemiolgicos. Com esta grande biodiversidade, at quando vamos continuar investindo pouco em Educao, Pesquisa e Divulgao Cientfica, perdendo a oportunidade de isolar e descobrir novos compostos da dieta capazes de proporcionar uma alimentao mais saudvel para diminuir os riscos ou mesmo tratar doenas crnicas do crebro ou o cncer? Uma das sadas o trabalho em conjunto de diversos laboratrios de pesquisa da mesma Universidade, entre diferentes Universidades, ou mesmo de outros pases, possibilidade que vem sendo exercida atravs do programa INFOODS da FAO (Chvez e Chvez, 1999) e que pode ser ampliada atravs de outras iniciativas. Ademais, urgente a necessidade da formao de grupos de pesquisa multidisciplinares com bilogos moleculares, farmacutico-bioqumicos, qumicos, biomdicos, mdicos, nutricionistas e outros profissionais da rea de Alimentao e Nutrio.
AGRADECIMENTOS

Ao CNPQ (Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico) e FAPESP (Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo) pelo financiamento de nossas pesquisas.
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PERSPECTIVAS DA PESQUISA EM BIOLOGIA MOLECULAR APLICADA NUTRIO


Carlos Kusano Bucalen Ferrari e Elizabeth Aparecida Ferraz Silva Torres Com a enorme biodiversidade florstica e faunstica nas Amricas, diversas biomolculas dietticas podem apresentar potenciais efeitos benficos sade do ser humano. Descrevem-se e discutem-se alguns aspectos da biologia molecular aplicados pesquisa de substncias antioxidantes com propriedades cardioprotetores e neuroprotetoras, e de substncias com atividades pro-apoptticas, capazes a morte programada de clulas cancergenas. Para que ocorram avanos na descoberta de novos fatores da dieta saudveis ao homem necessria a consolidao de grupos de pesquisa multiprofissionais na rea de Alimentao e Nutrio.

PERSPECTIVES OF MOLECULAR BIOLOGY RESEARCH APPLIED TO NUTRITION


Carlos Kusano Bucalen Ferrari and Elizabeth Aparecida Ferraz Silva Torres American countries have an enormous biodiversity of plants and animals, which offers many dietetic biomolecules with potential benefits to human health. This paper describes and discusses some aspects of molecular biology applied to the research of antioxidant substances with cardioprotective and neuroprotective properties, and proapoptotic molecules able to induce the programmed killing of tumor cells. For advances on the discovery of new diet factors, healthy to human, it is necessary the consolidation of multidisciplinary research groups in food and nutrition.

PERSPECTIVAS DE LA INVESTIGACIN EN BIOLOGA MOLECULAR APLICADA A LA NUTRICIN


Carlos Kusano Bucalen Ferrari y Elizabeth Aparecida Ferraz Silva Torres Con la gran biodiversidad de la fauna y flora en las Amricas, diversas biomoleculas de la dieta pueden presentar efectos potencialmente beneficiosos para la salud humana. En este trabajo se describen y discuten algunos aspectos de la biologa molecular aplicados a las investigaciones sobre molculas antioxidantes con efectos cardioprotectores y neuroprotectores, asi como sobre la actividad pro-apopttica que seria capaz de programar la muerte celular de las clulas cancergenas. Para que tengan lugar avances en el descubrimiento de nuevos factores saludables en la dieta, es necesaria la consolidacin de grupos de investigacin multidisciplinarios en el rea de alimentacin y nutricin.

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