Diagramao: Regina de Siqueira Bueno DIFERENCIAO DO PROTOZORIO NAEGLERIA GRUBERI Atividade interativa 2 Introduo Existe um caso muito interessante de diferenciao que ocorre em um ser unicelular: trata-se do protozorio Naegleria gruberi. Esse protozorio de vida livre mais comumente encontrado em solo mido, apresentando forma amebide. Com essa morfologia, os indivduos capturam bactrias, seu principal alimento, utilizando pseudpodes e se reproduzem por cissiparidade. Em algumas situaes, como estar em um ambiente lquido, N. gruberi se transforma em uma clula alongada e portadora de dois longos fagelos. Com essa morfologia, passa a se alimentar de nutrientes que absorve do meio e no se divide. O processo de diferenciao pode ser reproduzido em laboratrio pela transferncia de indivduos amebides cultivados em um meio com nutrientes e bactrias para um meio nutritivo lquido sem bactrias e leva cerca de 100 minutos. Para que se formem os fagelos, a clula sintetiza cerca de 200 protenas, como as tubulinas, que compem o corpsculo basal e os microtbulos. Essa protena no foi encontrada nos indivduos amebides, o que signifca que os genes envolvidos nessa sntese esto desligados e na diferenciao so ligados. Os fatores que desencadeiam a diferenciao em N. gruberi ainda no so totalmente conhecidos. Nesta atividade vamos considerar apenas alguns processos celulares que ocorrem durante a diferenciao e as principais transformaes morfolgicas decorrentes desses processos. Objetivo Esta atividade interativa tem por objetivo facilitar a compreenso do processo de diferenciao celular, pois relaciona de modo concreto eventos de estimulao ambiental, ativao gnica e alterao de forma do organismo unicelular. Metodologia Construo de modelos seqenciais das etapas de diferenciao do protozorio. Materiais Massa de modelar (6 cores diferentes), miangas, vidrilhos, pedaos de barbante, etc; (Anexo 1) 28 Cartas de Sinais, organizadas em 4 conjuntos. Cada conjunto de oito cartas esto em envelopes denominados Etapa A, Etapa B, Etapa C e Etapa D. (Anexo 2) Nmero de participantes O ideal realizar a atividade em grupo para que possa haver discusso dos processos entre os participantes. Sugesto: grupos de 6 pessoas Tarefa inicial 1. Representar com massa de modelar e demais materiais fornecidos um modelo de indivduo amebide de Naegleria gruberi de acordo com as seguintes caractersticas: o ncleo esfrico; o citoplasma apresenta as organelas caractersticas de uma clula eucaritica animal por simplifcao, representar apenas os ribossomos, as mitocndrias e as algumas vesculas; no estgio amebide o ncleo e as organelas citoplasmticas no apresentam posies fxas na clula. 2. Compreender a situao problema apresentada na pgina 3 para estar em condies de dar continuidade ao restante da atividade DIFERENCIAO DO PROTOZORIO NAEGLERIA GRUBERI Atividade interativa 3 Situao problema 1. Supor que o indivduo amebide representado no modelo foi transferido para um meio de cultura lquido sem bactrias (tempo zero). A mudana do meio externo atua como um sinal que desencadeia na clula o processo de diferenciao. Nesse processo alguns genes so ativados, entre eles os envolvidos na formao dos fagelos e na mudana de forma (citoesqueleto). Analisar a fgura 1 e verifcar as alteraes morfolgicas que o protozorio sofrer. A B C D Tempo: 0 100 Figura 1. Fotografas de N. gruberi observado em microscopia ptica aps ser colocado em meio lquido. Figura 2. Diferenciao em indivduos de Naegleria gruberi. Indivduos com clula amebide foram cultivados em meio contendo bactrias; no tempo 0, foi adicionada gua no meio, simulando o que ocorre aps uma chuva. Aps 100 minutos, quase 100% da populao apresenta a forma fagelada. A B C D 100 60 20 20 40 60 80 Tempo (minutos) 0 A = incio da sntese de tubulina B = sntese de tubulina intensa C = organizam-se os corpsculos basais e em seguida fagelos tornam- se visveis; clula se torna arredondada D = clula se torna alongada 2. As transformaes sofridas durante o processo de diferenciao se completam em cerca de 100 minutos. Esse perodo foi subdividido em 4 etapas, indicadas pelas letras A, B, C e D e est esquematizado na fgura 2. 4 Incio da Diferenciao Acmulo de RNAm para tubulina e incio da sntese no citoplasma Sntese de tubulinas no citoplasma Clula comea a ficar arredondada Formao dos corpsculos basais, seguido do aparecimento dos flagelos O RNAm para tubulina se move e degradado. A clula se apresenta alongada e com 2 flagelos 0 min 20 min 40 min 60 min 80 min 100 min Tempo Entendendo os sinais para a diferenciao 1. Selecionar o envelope referente a Etapa A da diferenciao. Ele contm cartas de sinais celulares. Discutir em grupo quais sinais so necessrios para o protozorio cumprir essa etapa. Para isso, consultar a fgura 3 que resume os principais eventos celulares que ocorrem durante a diferenciao. Observar tambm o grfco que indica a sntese de tubulina durante os 100 minutos do processo de diferenciao (Figura 4). Figura 4. Grfco representando a concentrao de tubulina na clula durante a diferenciao. 2. Escolher trs cartas sinais a serem aplicadas na clula. 3. Representar, sempre que possvel, em massa de modelar e demais materiais, o efeito de cada um dos sinais. 4. Devolver para o envelope correspondente as cartas no selecionadas. 5. Repetir esse procedimento para os envelopes Etapa B, Etapa C e Etapa D. Figura 3. Principais eventos que ocorrem durante a diferenciao da clula Concentrao de tubulina na clula 0 100 min