Proposta para a estimativa da incerteza de medio e garantia

da qualidade do teste de germinao

1
Glaucia Bortoluzzi Maag
2
*, Filipe de Medeiros Albano
3
, Rosinha Maria Peroni Mesquita
2
RESUMO A norma NBR ISO/IEC 17025 exige que laboratrios implementem procedimentos para
validao ou conrmao de mtodos e clculos de estimativa de incerteza. Dentro deste contexto,
este trabalho objetivou apresentar uma sistemtica para estimar a incerteza de medio do teste de
germinao, bem como aplicar a lgica do Controle Estatstico de Processos (CEP), utilizando cartas
de controle para avaliao da garantia da qualidade. O clculo da estimativa da incerteza foi baseado
no Guia para a Estimativa da Incerteza em Ensaios Microbiolgicos do Instituto Portugus de
Acreditao (IPAC), sendo que o mtodo foi modicado para melhor adaptao na rea de anlise
de sementes. Os clculos foram aplicados aos dados de 20 amostras de rotina de sementes de soja do
LASO/LANAGRO/RS. Comparando-se a incerteza calculada com os valores de tolerncias admitidas
nas Regras para Anlise de sementes (RAS), vericou-se que o nvel de incerteza do laboratrio foi
inferior s tolerncias estabelecidas, demonstrando desempenho satisfatrio do laboratrio. Concluiu-
se que o CEP pode ser utilizado como ferramenta de monitoramento da garantia da qualidade dos
resultados e que a sistemtica de clculos apresentada para estimar a incerteza se mostrou adequada
e facilmente aplicvel, constituindo-se em um instrumento til para a avaliao e interpretao dos
resultados do teste de germinao gerados pelo laboratrio.
Termos para indexao: credenciamento, laboratrio, qualidade, NBR ISO/IEC 17025.
1
Submetido em 07/11/2013. Aceito para publicao em 20/11/2013.
2
Laboratrio Ocial de Anlise de Sementes do Laboratrio Nacional
Agropecurio/RS, Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
(LASO/LANAGRO/RS/MAPA), Av. Farrapos, 285, 90220-004 - Porto
Alegre, RS, Brasil.
3
Rede Metrolgica RS (RMRS), Av. Assis Brasil, 8787, 91140-001 - Porto
Alegre, RS, Brasil.
*Autor para correspondncia <glaucia.maag@agricultura.gov.br>
Introduo
O Laboratrio Ocial de Anlise de Sementes do Laboratrio
Nacional Agropecurio (LASO/LANAGRO/RS), pertencente
ao Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
(MAPA), localizado em Porto Alegre, supervisiona e audita
cerca de 40 laboratrios credenciados no Rio Grande do Sul e
foi o primeiro laboratrio de anlise de sementes no Brasil a
obter a acreditao junto ao Instituto Nacional de Metrologia,
Qualidade e Tecnologia (INMETRO). Muitos laboratrios de
sementes credenciados que buscam acreditao e melhoria
contnua dos seus processos do sistema de gesto da qualidade
tm procurado informaes junto ao LASO/LANAGRO/RS
sobre o atendimento ao requisito 5.6.2 da norma NBR ISO/IEC
17025:2005, que prev a estimativa da incerteza de medio dos
ensaios. Diante disto, elaborou-se para publicao um artigo
para estimativa da incerteza em anlise de pureza (Maag et
al., 2013), bem como o presente trabalho, a m de divulgar os
procedimentos utilizados no teste de germinao.
Segundo o Vocabulrio Internacional de Metrologia (VIM)
(Inmetro, 2012) a incerteza de medio denida como o
parmetro no negativo que caracteriza a disperso dos valores
atribudos a um mensurando, com base nas informaes
utilizadas. Em outras palavras, a incerteza a expresso
quantitativa da qualidade da medida e uma informao
numrica que complementa o resultado de uma medio.
A norma NBR ISO/IEC 17025 descreve os requisitos a
serem atendidos pelos laboratrios de ensaio, inclusive de anlise
de sementes, a m de demonstrarem que so tecnicamente
competentes. Os requisitos dessa norma exigem que esses
laboratrios implementem procedimentos para validao ou
conrmao de mtodos e clculos de estimativa de incerteza.
Enquanto que a abordagem desenvolvida para anlises qumicas
bem determinada em relao estimativa da incerteza, a mesma
metodologia no diretamente aplicvel aos ensaios biolgicos
(Castro, 2009). Segundo Morel et al. (2006) reconhecidamente
difcil estimar a incerteza de ensaios que utilizam organismos,
como espcies animais e vegetais. Devido a este fato, os
laboratrios que desenvolvem ensaios biolgicos, esto se
preocupando cada vez mais com a estimativa da incerteza de
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medida dos resultados produzidos (Castro, 2009).
Segundo Bich e Pennecchi (2012), a estimativa da
incerteza tem recebido pouca ateno na literatura que envolve
ensaios microbiolgicos, onde so realizadas medies por
contagem, no sendo nem mesmo aplicada a estas medies.
Estes ensaios estariam na categoria daqueles que dispensam
o clculo rigoroso, metrolgico e estatisticamente vlido da
incerteza de medio (ANVISA, 2004).
Em 2006, o Instituto Portugus de Acreditao (IPAC)
publicou o Guia para a Estimativa de Incerteza em Ensaios
Microbiolgicos (Ipac, 2006), que se baseia na ISO TS 19036:
Microbiology of Foods and Animal Feeding Stuffs Guide
on Estimation of Measurement Uncertainty for Quantitative
Determinations, com a nalidade de apoiar os laboratrios a
quanticarem a incerteza de medio atravs do clculo do desvio
padro da reprodutibilidade dos resultados dos ensaios efetuados.
A garantia da qualidade dos resultados tambm uma
das exigncias no processo de acreditao e credenciamento.
Os laboratrios devem monitorar as tendncias dos seus
resultados com o objetivo de garantir que os mesmos so
conveis (Abnt, 2005). Muitas vezes esta ao realizada
por meio do uso de Controle Estatstico de Processos (CEP),
utilizando cartas de controle, entre outras ferramentas da
qualidade (Albano e Raya-Rodriguez, 2009).
Dentro deste contexto, o objetivo principal do presente
trabalho foi apresentar uma sistemtica para estimar a
incerteza de medio do teste de germinao e propor o seu
uso aos laboratrios de anlises de sementes, em atendimento
aos requisitos tcnicos da NBR ISO/IEC 17025. Como
objetivo secundrio, aplicou-se a lgica do CEP nos dados
oriundos dos ensaios do laboratrio para analisar sua preciso
intermediria avaliar a garantia da qualidade dos resultados.
Material e Mtodos
O clculo da estimativa da incerteza de medio do
teste de germinao foi baseado no Guia para a Estimativa
da Incerteza em Ensaios Microbiolgicos do Instituto
Portugus de Acreditao (Ipac, 2006), sendo que o mtodo
foi modicado pelos autores para melhor adaptao na rea
de anlise de sementes. O trabalho foi conduzido no LASO/
LANAGRO/RS com o apoio da Rede Metrolgica RS,
durante os anos de 2012 e 2013, seguindo as seguintes etapas:
Etapa 1: Seleo aleatria dos resultados de germinao de 20
amostras de sementes de soja, de diversas cultivares, analisadas na
rotina do laboratrio durante o ano de 2012, por quatro diferentes
analistas. O mtodo de germinao utilizado foi em substrato rolo
de papel e temperatura de 25 C, conforme prescrito nas Regras
para Anlise de Sementes (RAS) (Brasil, 2009).
Etapa 2: Elaborao de uma planilha de Excel para os
clculos da incerteza referente aos dados de plntulas normais
do teste de germinao;
Etapa 3: Clculo da amplitude mxima entre os resultados
de 4 repeties de 100 sementes (8 repeties de 50 sementes
reunidas duas a duas) de cada amostra e da amplitude mdia
geral dos dados;
Etapa 4: Clculo do desvio padro da reprodutibilidade S
R
;
Etapa 5: Clculo da incerteza expandida U.
Aos dados de germinao foi aplicada a ferramenta do
CEP com o clculo do Limite de Controle Superior (LCS) e
elaborao da carta de controle, seguindo o roteiro de clculos
apresentados em (Montgomery, 2004).
Resultados e Discusso
Os resultados do parmetro plntulas normais do teste de
germinao de soja e os clculos utilizados para quanticao
da incerteza de medio so apresentados na Tabela 1 e
descritos nas seguintes etapas:
Resultados das Etapas 1 e 2: No modelo matemtico
utilizado pelo Ipac (2006) para o clculo da incerteza de
medio para ensaios microbiolgicos so necessrios,
para um mesmo mtodo e para uma mesma matriz, no
mnimo, 10 amostras analisadas em duplicata. Atendendo
a este preceito, os dados utilizados para a estimativa da
incerteza, constantes da Tabela 1 foram obtidos a partir dos
resultados de 20 amostras de sementes de soja, analisadas
na rotina do laboratrio, seguindo os procedimentos
prescritos nas Regras para Anlise de Sementes (RAS)
(Brasil, 2009).
Resultado da Etapa 3: Foram calculadas as amplitudes
mximas entre as 4 repeties do teste de germinao de cada
amostra e a mdia destas amplitudes (Tabela 1).
Resultado da Etapa 4: Na sequncia, calculou-se o
desvio padro da reprodutibilidade S
R
por meio da diviso
da amplitude mdia dos resultados por um coeciente d
2

tabelado:
S
R
=
2
d
R



Para as quatro analistas e as 20 amostras realizadas foi
considerado um d
2
de 2,07 (Aiag, 2002; Albano e Raya-
Rodriguez, 2009).
Resultado da Etapa 5: O resultado do desvio da
reprodutibilidade S
R
, obtido na frmula anterior, foi utilizado
para a obteno da incerteza expandida como segue:
U = k. S
R

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Multiplicou-se o valor de S
R
por um fator de abrangncia
k = 2 (a um nvel de conana de 95%, de acordo com a
tabela de t de Student), a m de obter-se um valor de incerteza
expandida, que fornece um intervalo de conana onde existe
a maior probabilidade de se encontrarem valores que podero
ser atribudos ao valor verdadeiro (Castro, 2009).
Neste caso, a incerteza expandida calculada foi U = 4,3%.
Como o Guia do Ipac (2006) recomenda que o nmero de
algarismos signicativos da incerteza deva ser arredondado e as
RAS (Brasil, 2009) preveem que a germinao seja informada
com nmero inteiro, a incerteza calculada foi arredonda para
cima e apresentada com nmero inteiro U = 5% (Tabela 1).
Desta maneira, o resultado para amostra 1 poderia ser reportado
como sendo 87% 5%.
Tabela 1. Resultado de plntulas normais e clculos utilizados para a estimativa da incerteza de medio no teste de germinao
de 20 amostras de sementes de soja.
Amostras
Repeties
Mdia Amplitude
Tolerncia
mxima* R1 R2 R3 R4
----------------------------------------------------------%--------------------------------------------------------
1 87 88 83 88 87 5 13
2 96 95 95 97 96 2 8
3 88 85 87 86 87 3 13
4 92 91 91 93 92 2 11
5 91 88 97 93 92 9 11
6 85 88 89 84 87 5 13
7 90 90 95 95 93 5 10
8 90 92 92 92 92 2 11
9 99 98 97 97 98 2 6
10 90 91 92 91 91 2 11
11 90 97 93 85 91 12 11
12 95 86 86 89 89 9 12
13 88 86 88 89 88 3 13
14 92 90 96 89 92 7 11
15 96 97 96 97 97 1 7
16 88 88 90 90 89 2 12
17 89 88 90 87 89 3 12
18 94 95 98 94 95 4 9
19 91 90 88 89 90 3 12
20 94 92 92 87 91 7 11
Amplitude Mdia 4,4
d
2
2,07
Desvio padro (S
R
) 2,13
U calculada 4,3
U arredondada 5
*Tolerncias extradas da Tabela 18.9 das Regras para Anlise de Sementes (RAS) (Brasil, 2009).
Em documento publicado em 2007, a ISTA salienta que
as tabelas de tolerncias ilustram a dependncia da incerteza
com o nvel de resultado do teste de germinao (Ista, 2007).
Comparando-se o resultado de incerteza do laboratrio (U =
5%) com os valores de tolerncias mximas admitidas na Tabela
18.9 das RAS (Brasil, 2009), transcritos na Tabela 1, vericou-se
que o nvel de incerteza foi inferior s tolerncias estabelecidas,
demonstrando desempenho satisfatrio do laboratrio.
Embora a legislao brasileira (Brasil, 2009; Brasil, 2010)
e a prpria Ista (2007) no exijam o relato da incerteza na
informao do resultado de anlise de sementes, cabe salientar
que o conhecimento da incerteza serve como uma ferramenta
de avaliao do controle de qualidade do laboratrio. Segundo
Castro (2009), para minimizar a incerteza dos ensaios de rotina
do laboratrio, o controle das fontes de erro imprescindvel e
para tanto alguns aspectos devem ser considerados, tais como:
capacitao da equipe de analistas nas tcnicas utilizadas
no laboratrio; manuteno e calibrao de equipamentos;
controle e registro das condies ambientais. Acrescentam-
se tambm: cuidados na aquisio e manuseio de materiais,
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reagentes e substratos, bem como com a qualidade da gua
utilizada na germinao.
Alm do clculo da incerteza, aos dados do teste de
germinao foi aplicada a lgica do CEP, por meio do uso
de cartas controle (Figura 1), para analisar sua preciso
intermediria, ou seja, a variao da repetibilidade e
reprodutibilidade interna do laboratrio ao longo do tempo.
Com as cartas de controle grcas, pode-se acompanhar
o processo de anlise no laboratrio ao longo do tempo,
vericando sua estabilidade e as causas especiais de variao
do processo (pontos fora dos limites de controle). Albano e
Raya-Rodriguez (2009) salientam que sempre que forem
identicadas causas especiais, os laboratrios devem fazer
uma anlise crtica vericando o que ocasionou a variao e
sanar o problema. Pela anlise da Figura 1, observou-se que,
excetuando-se a amostra 11, todas as demais permaneceram
com a variao dentro do limite superior de controle (LCS).
Para a amostra 11, como a amplitude entre as repeties foi
superior tolerncia mxima permitida, a menor repetio
foi eliminada para o clculo da germinao, conforme
determinam as RAS (Brasil, 2009). Em uma anlise de causas,
o laboratrio pode concluir que a maior variao pode ser
atribuda pouca experincia do analista e determinar uma
ao corretiva de retreinamento.
Figura 1. Carta de controle da preciso intermediria para o teste de germinao de 20 amostras de sementes de soja.
Concluses
Considerando os resultados obtidos e a facilidade
de aplicao dos clculos, sugere-se o uso da metodologia
proposta para a estimativa da incerteza de medio neste tipo
de teste por outros laboratrios de sementes. Cabe ressaltar que
o procedimento de estimativa da incerteza est relacionado s
exigncias do processo de acreditao de laboratrios.
Os resultados da aplicao do mtodo proposto neste
artigo tambm possibilitam fazer um diagnstico sobre o
desempenho do laboratrio na execuo dos testes, permitindo
identicar quando so necessrias melhorias no processo de
anlise. Uma incerteza alta ou uma causa especial na carta de
controle (CEP) indicam que existe uma necessidade de anlise
crtica dos resultados, identicando quais so as causas de
variao e propondo aes corretivas.
Por m, pode-se concluir que o CEP pode ser utilizado
como ferramenta de monitoramento da garantia da qualidade
dos resultados e que a sistemtica de clculos apresentada
para estimar a incerteza se mostrou adequada e facilmente
aplicvel, constituindo-se em um instrumento til para a
avaliao e interpretao dos resultados do teste de germinao
gerados pelo laboratrio.
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