Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia

Estudo Dirigido III - Imunologia Geral

1) Descreva a interao antgeno-anticorpo. Que foras esto envolvidas?
- A associao especfica de antgenos e anticorpos dependente de ligaes
de hidrognio, interaes hidrofbicas, ligaes inicas, foras eletrostticas e
foras de van der waals. So reversveis, de natureza fraca e no-covalente,
ainda que algumas associaes entre antgeno e anticorpo possam ser
bastante fortes.
- Os antgenos, assim como os anticorpos, podem ser polivalentes, atravs de
mltiplas cpias do mesmo eptopo ou pela presena de vrios eptopos, que
so reconhecidos pelos vrios anticorpos. Interaes envolvendo polivalncia
podem produzir complexos mais estveis.

2) Diferencie afinidade de avidez.

Afinidade: Descreve a intensidade da interao antgeno-anticorpo em stios
antignicos individuais. Diz respeito a fora de ligao entre anticorpo e
antgeno. Esta fora normalmente representada pela constante de
dissociao, Kd, que descreve a concentrao dos antgenos necessria para
ocupar os locais de ligao e uma soluo com anticorpos.
Avidez: J a avidez consiste na fora total de ligao entre anticorpo e
antgeno, ou seja, leva em considerao que a dobradia da regio dos
anticorpos fornece a eles flexibilidade, permitindo que um nico anticorpo seja
capaz de se ligar a antgenos multivalentes por meio de mais de um eptopo.
controlada por trs fatores: Afinidade entre anticorpo e eptopo, valncia de
antgeno e anticorpo e arranjo estrutural da interao. Esses fatores definem a
especificidade do anticorpo, isto , a probabilidade de que o anticorpo seja
especfico para um eptopo
Afinidade se refere fora de ligao entre um nico determinante
antignico e um stio de combinao de um anticorpo particular,
enquanto que avidez se refere a fora total de ligao entre antgenos
e anticorpos.
3) O que reatividade cruzada? D exemplos.
Reatividade cruzada se refere habilidade de um stio de combinao de
anticorpo em particular de reagir com mais de um determinante antignico, ou
a habilidade de um populao de molculas de anticorpos de reagir com mais
de um antgeno. Reaes cruzadas aparecem porque o antgeno envolvido na
reao compartilha o
mesmo eptopo com o antgeno imunizador.
- Anticorpo ou populao de anticorpos que se ligam aos eptopos de outros
antgenos. Pode ser causada po baixa avidez ou especificidade do ac, ou pela
semelhana
de
eptopos
de
antgenos
distintos.
Ex: Brucella abortus x Yersinia eterocolitica

4) Diga a aplicao e como so realizados os imunoensaois relacionados

abaixo:
a) Aglutinao
Baseia-se na capacidade da ligao do anticorpo de alterar o estado fsico do
antgeno ao qual se liga.
Quando um antgeno exposto na superfcie de uma bactria, por exemplo, os
anticorpos podem fazer as bactrias aglutinarem. O mesmo se aplica s
reaes de tipagem sangunea, onde antgenos visados so os da superfcie
das hemcias.
Quando um antgeno particulado incubado com anticorpos especficos,
ocorrer uma reao de aglutinao de partculas antignicas.
A aglutinao usada para determinar o grupo ABO. A aglutinao induzida
por anticorpos ou aglutininas (anti-A e anti-B) que se ligam ao grupo A ou B
respectivamente. Estes antgenos esto arranjados em mltiplas cpias na
superfcie da hemcia, permitindo que as clulas se aglutinem durante uma
reao cruzada.
Adiciona-se em um tubo o soro teste e o antgenos particulado. Incuba-se at
a formao de aglutinao. Quando ocorrer aglutinao as partculas
sedimentam formando um tapete no fundo do tubo A aglutinao indica a
presena de anticorpos especficos para o antgeno.
b) Radioimunoensaio
Ensaio de ligao direto para anticorpos, normalmente usado para medir os
nveis de hormnio no sangue em fluidos teciduais.
No RIA para um antgeno, um anticorpo puro contra o antgeno marcado
radioativamente, em geral com I 125. O antgeno no marcado ligado a um
suporte slido, como um poo de uma microplaca, que adsorver certa
quantidade de qlq protena. O anticorpo marcado pode se ligar ao antgeno
no marcado ( a adsoro no especfica bloqueada). Todos os anticorpos no
ligados so retirados por lavagens. A ligao do anticorpo medida
diretamente pela quantidade de radioatividade retida nos poos. Pode ser
desenvolvido com anticorpos no marcados ligados a placa, e o antgeno
marcado sendo adicionado.
No permite que a quantidade de um antgeno ou anticorpo em uma amostra
de composio desconhecida seja medida diretamente, pois depende da

ligao de um antgeno ou anticorpo puro e marcado.

c) ELISA
Ensaio de ligao direta semelhante ao RIA, os dois usam o mesmo princpio. O
ELISA frequentemente usado no diagnstico viral, para detectar, por
exemplo, cados de infeco por HIV.
Para o ELISA, uma enzima quimicamente ligada ao anticorpo conhecido e
puro, enquanto o antgeno ligado a um suporte slido que adsorver certa
quantidade da protena. O anticorpo marcado com a enzima pode se ligar ao
antgeno no marcado. A adsoro inespecfica bloqueada e todos os
anticorpos no ligados e outras protenas so lavados. A ligao do anticorpo
medida por uma reao que torna um substrato incolor em um produto
colorido.
ELISA DE CAPTURA em vez de ligar o antgeno diretamente a placa, so
ligados anticorpos especficos para o antgenos que ligam o o antgeno com
alta afinidade, concentrando-os na superfcie da placa, mesmo com antgenos
em baixas concentraes. Um anticorpo diferente que reconhece outro etopo
usado para detectar o antgenos ligado
d) Western Blotting
Usado para a identificao de uma determinada protena em um lisado celular.
As clulas no marcadas so postas em detergente para solubilizar as
protenas e o lisado submetido a SDS PAGE para separar as protenas. As
protenas separadas por tamanho so transferidas para um suporte estvel
como uma membrana de nitrocelulose. Protenas especficas podem ser
detectadas por anticorpos especficos a protenas solubilizadas por SDS (ac de
sequencias desnaturadas), os anticorpos ligados so revelados com anticorpos
anti-IgG marcados com radioistopos ou enzimas.
e) Imunoprecipitao
O anticorpo fixado a um suporte slido. Todas as protenas de uma clula
podem ser marcadas metabolicamente com aminocidos radioativos ou,
apenas as protenasda superfcie podem ser marcadas por radioiodinao, ou
ainda por uma reaao com biotina. Uma vez que as protenas marcadas
tenham sido isoladas pelo anticorpo, elas podem ser caracterizadas, por
eletroforese, por exemplo.
A imunoprecipitao til ara determinar o peso molecular e o ponto
isoeltrico de uma protena.
Vrias quantidades de antgenos so adicionadas a uma quantidade fixa de
soro contendo anticorpo. Conforme a quantidade de antgeno aumenta, a
quantidade de precipitado produzida tambm aumenta at um mximo, para
depois diminuir.
f) Citometria de fluxo
Contar e definir linfcitos. O CITMETRO DE FLUXO DETECTA E CONTA CLULAS
INDIVIDUAIS PASSANDO EM UMA CORRENTE ATRAVS DE UM FEIXE DE LASER.

Usado para estudar propriedades de subgrupos de clulas identificados por ac

monoclonais contra protenas de superfcie.
5) Diferencie ELISA direto, indireto, sanduche e competitivo
Para o ELISA direto, uma enzima quimicamente ligada ao anticorpo
conhecido e puro, enquanto o antgeno ligado a um suporte slido. O
anticorpo marcado com a enzima se liga ao antgeno no marcado. A
adsoro inespecfica bloqueada e todos os anticorpos no ligados e
outras protenas so lavados. A ligao do anticorpo medida por uma
reao que torna um substrato incolor em um produto colorido.
ELISA DE CAPTURA em vez de ligar o antgeno diretamente a placa, so
ligados anticorpos especficos para o antgenos que ligam o o antgeno com
alta afinidade, concentrando-os na superfcie da placa, mesmo com antgenos
em baixas concentraes. Um anticorpo diferente que reconhece outro eptopo
usado para detectar o antgenos ligado.
NO MTODO INDIRETO o antgeno fica aderido ao suporte slido e em seguida
um anticorpo marcado com uma enzima adicionado, a enzima reage com o
substrato fazendo com que o cromforo mude de cor. A presen de cor nos
poos indica a presena de anticorpo e os poos que no mudam de corpo
indicam a ausncia do mesmo.
INDIRETO> Anticorpo aderido ao suporte slido
DIRETO> antgeno aderido ao suporte slido
6) Como funcionam as vacinas?
As vacinas induzem nosso sistema imunolgico a produzir anticorpos
especficos contra um determinado patgeno.
So introduzidas na forma de microrganismos mortos ou atenuados ou toxinas
inativas produzidas por eles. Uma vez aplicada, so capazes de estiumular o
sistema imunitrio a produzir acs sem provocar a doena. (IMUNDADE ATIVA)
7) Diferencie Imunizao passiva de ativa. D exemplos.
Na imunizao ATIVA ocorre quando o prprio sistema imune do indivduo, ao
entrar em contato com uma substancia estranha, responde produzindo
anticorpos e clulas imunes. Essa imunidade tem uma memria e prevalece
por vrios anos. Pode-se adquirir a imunidade ativa por meio da vacinao ou
contraindo uma doena infecciosa.
Na imunizao PASSIVA, obtida pela transferncia de anticorpos produzido por
outro indivduo (me ou outro animal), produzida uma rpida e eficiente
proteo temporria. caracterizada pela passagem de anticorpos da me
para o feto, atravs da placenta e leite.
8) Diferencie vacinas de organismos vivo atenuados de vacinas de organismos
inativados.
VACINAS ATENUADAS: Perda da patognicidade; capacidade de crescimento
transitrio no hospedeiro; seleo de mutantes em cultura anormal; exposio
prolongada a eptopos (aumenta imunogenicidade e acarreta em clulas de
memria); possibilidade de reverso. >> Sabin e Plio

VACINAS INATIVAS: Inativao feita quimicamente ou por calor; Necessitam de

reforos; irreversveis >> Vacina Salk e Pertussis
9) Como podem ser as vacinas de subunidades?
VACINAS
(toxinas,
contendo
partes do

DE SUBUNIDADES: usam apenas partes dos microrganismos

polissacardeos bacterianos capsulares) para estimular o SI,
apenas o necessrio para uma resposta e no todas as outras
MO. Tendem a causar menos reaes adversas

10) O que so vacinas conjugadas? Como funcionam? Quais suas vantagens?

Produzidas para combater doenas causadas por bactrias encapsuladas.
Utiliza componentes especficos do agente patognico, como um carboidrato,
que so capazes de produzir uma resposta imune. Um carboidrato, por
exemplo, precisa estar acoplado (conjugado) a uma protena transportadora
que reconhecida por macrfagos e clulas T. Proteo de longa durao.
11) Diferencie os quatro tipos de doenas de hipersensibilidade com base no
mecanismo imune patolgico.
12)
Reao de hipersensibilidade do tipo I = alergia. Reao do tipo imediata
mediada por anticorpos IgE
Antgenos incuos podem causar reaes de hipersensibilidade tipo II em
indivduos suscetveis, ligando-se a superfcie das clulas sanguneas
circulantes. (anemia hemoltica, trombocitopenia). Destruio de hemcias ou
plaquetas mediada por anticorpos um efeito colateral associado a igesto de
certos frmacos, como penicilina. O frmaco se liga superfcie celular e serve
como algo de IgG, causa destruio das clulas
Doena sistmica causada pela formao de complexos imunes ocorre aps a
administrao de grandes quantidades de antgenos pouco catabolizados..
Hipersensibilidade tipo III, pode surgir quando o antgenos solvel.
Patologia causada pelo depsito de agregados ac:ag ou complexos imunes.
(reao de arthus pele tem IgG = complexo imune)
Reaes de hipersensibilidade tardia so mediadas por clulas Th e T CD8
citotxicas. Tipo IV. Mediadas por t efetoras antigeno especificas. Tardia,
contato, glten.
Mutaes nos reguladores moleculares da inflamao podem cusar respostas
inflamatrias de hipersensibilidade, resultando na doena inflamatria.
Doenas autoinflamatrias. Sndrome de blau
As doenas de hipersensibilidade refletem mecanismos imunes normais que
so inapropriadamente dirigi dos contra antgenos incuos ou estmulos
inflamatrios. Elas podem ser media das por anticorpos IgG ligados a
superfcies celulares modificadas ou por com plexos de anticorpos ligados a
antgenos pouco catabolizados, como ocorre na doena do soro. As reaes de
hipersensibilidade mediadas pelas clulas T podem ser ativadas por protenas
prprias modificadas ou por protenas injetadas, como aquelas do extrato
micobacteriano tuberculina. Essas respostas mediadas pelas clulas T
requerem a sntese induzida de molculas efetoras e se desenvolvem mais
lentamente, sendo, por isso, denominadas hipersensibilidade tardia. Uma falha
gentica na regulao da inflamao causa raras sndromes auto-

inflamatrias, considerando-se que a doena de Crohn est associada a uma

falha para controlar bactrias comensais do intestino e impedir que causem
inflamao crnica.

13) O que alergia? Como classificada e como se manifesta?

Alergia: Reao sintomtica face a um antgeno ambiental normalmente
incuo. Resulta da interao do antgeno com o anticorpo ou com clulas T
intrudas produzidas pela exposio prvia ao mesmo antgeno.
Alergia ocupacional: quando o trabalho exercido por uma pessoa induz
alergia.
Alergia tipo inata: produo ou exacerbao de uma resposta semelhante
hipersensibilidade a um antgeno em que a resposta imune inata leva
ativao dos receptores semelhantes ao Toll.

14) Indique para cada uma das seguintes afirmativas se verdadeira ou

falsa. Justifique sua resposta.
a) O passo inicial no processo de de granulao de mastcitos durante a
reao de hipersensibilidade do tipo III a ligao cruzada de receptores
de Fc. E
A ligao do antgeno IgE pro-duz ligaes cruzadas entre esses
receptores, causando a liberao de mediadores qumicos pelos
mastcitos, o que pode levar ao desenvolvimento de uma reao de
hipersensibilidade tipo I.
b) IgE encontrada ligada a mastcitos mesmo se o antgeno no est
presente. C
A IgE difere de outros isotipos de anticorpos por estar localizada
predominantemente nos tecidos, onde est ligada aos mastcitos por
receptores de superfcie de alta afinidade denominados FcRI.
c) Nas reaes de hipersensibilidade do tipo I ocorre deposio de
complexos antgeno-anticorpo nas membranas basais dos capilares
causando dano tecidual. E >> Tipo III
d) A quimiotaxia de eosinfilos observada na resposta tardia da
hipersensibilidade do tipo IV.
Tipo I: A histamina se liga aos receptores H1 das clulas endoteliais e
tem os seguintes efeitos: dilatao das arterolas de menos calibre;
constrio das artrias de maior calibre; aumento da permeabilidade das
vnulas; formao de fendas venulares; contrao do msculo liso e
quimiotaxia para eosinfilos.

15) Descreva o mecanismo imunolgico desencadeados na reao de

transfuso. Esse mecanismo semelhante a que tipo de hipersensibilidade?
A transfuso de sangue incompatvel causa uma reao na qual as
hemcias so destrudas, causando a liberao de hemoglobina e levando
toxicidade. Semelhante a hipersensibilidade do tipo II
16) Como os anticorpos podem causar leso tecidual e doena?
O inicio de sndromes transitrias como a doena do soro, coincide com o
desenvolvimento de anticorpos contra as protenas solveis abundantes no
soro estranho. Esses anticorpos formam complexos imunes com os
antgenos por todo o corpo. Esses complexos imunes fixam o complemento
e podem se ligar e ativar leuccitos portadores de receptores de Fc e
complemento, os quais, por sua vez, causam leso tecidual. A formao de
complexos imunes elimina o antgenos estranho e essa sndrome auto
limitada.
17) D alguns exemplos de doenas causadas por anticorpos ou
imunocomplexos, sua patognese e suas principais manifestaes clnicas e
patolgicas.
1 Doena do soro, 2 reao de arthus
2 Quando o antgeno sensibilizante injetado na pele o ac IgG forma
complexos imunes locais que se ligam aos receptores Fc em leuccitos,
criando uma resposta inflamatria local.
1 Pode resultar da injeo de grandes quantidades de u antgeno estranho e
pouco catabolizado. (1 injeo local de antgenos em indivduo imune com o
anticorpo IgG 2 formao local do complexo 3 ativao a poro Fc nos
mastcitos induz a degranulao 3 inflamao local, aumento da liberao
de fluidos e protenas, fagocitose e ocluso dos vasos sang)
Os tipos I-III so mediados por anticorpos e se distinguem pelos diferentes tipos de antgenos
reconhecidos e pelas diferentes classes de anticorpos envolvidas. As respostas tipo I so
mediadas por IgE, que induz a ativao de mastcitos, ao passo que os tipos II e III so
mediados por IgG, que pode engajar mecanismos efetores mediados pelo complemento e
mecanismos fagocticos em vrios graus, dependendo da subclasse de IgG e da natureza do
antgeno envolvido. As respostas tipo II so dirigidas contra os antgenos da superfcie da clula
ou da matriz, e as respostas tipo III so dirigidas contra os antgenos solveis, e a leso tecidual
envolvida causada pelas respostas desencadeadas pelos complexos imunes. Uma categoria
especial de resposta do tipo II envolve anticorpos IgG contra receptores de superfcie celular
que interrompem as funes normais do receptor, causando ativao descontrolada ou
bloqueando a funo do receptor. As reaes de hipersensibilidade tipo IV so mediadas por
clulas T, podendo ser subdivididas em trs grupos. No primeiro grupo, a leso tecidual
causada pela ativao dos macrfagos pelas clulas T H 1, o que resulta em uma resposta
inflamatria. No segundo, a leso causada pela ativao das respostas inflamatrias
eosinoflicas pelas clulas T H 2; no terceiro, a leso causada diretamente pelas clulas T
citotxicas (CTL).