BMC I - Morte Celular (3+4 Aulas 10 Jan 2011) VF PDF

Mestrado Integrado de Medicina
2010 2011
Disciplina de Biologia Celular e Molecular I
1 ano - 1 semestre
Matria extra
extracurricular:
curricular: Pubmed + como comunicar com
os autores dos artigos
Matria curricular: Morte celular e clulas estaminais
Apoptose
Necrose
Luisa Mota Vieira, PhD (lmotavieira@hdes.pt, 296 203 531)

Unidade de Gentica e Patologia Moleculares
Hospital do Divino Esprito Santo de Ponta Delgada, EPE
Autofagia
10 Janeiro 2011
10 Jan. 2011 - BMCI Mestrado Integrado de Medicina
Luisa Mota Vieira
Luisa Mota Vieira
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez
Pedido de artigos por ee-mail ao

autor correspondente: exemplo
Dear Doctor , Professor .
I am a medical student at the University of Azores (Portugal), and I
read with great interest the abstract of your (last) paper "Cell death
pathways-potential therapeutic targets", published on Xenobiotica,
2009 Aug;39(8):616-24.
I would be very grateful if you could send me the pdf file.
Sincerely
Nome e e-mail
Morada (para envio do reprint)
Luisa Mota Vieira
Morte celular (tipos)

Apoptose
Necrose
Autofagia
Luisa Mota Vieira
Morte celular
Objectivos
Definir o papel da morte celular em biologia, quer

fisiolgica quer patologicamente;
Esclarecer a morte celular fisiolgica como uma parte

importante dos processos biolgicos normais (ex.:)
desenvolvimento embrionrio e fetal morfognese
adulto homeostase celular, tecidos e rgos

renovao das clulas
mecanismos imunolgicos de defesa,
Descrever a morte celular patolgica de que so

exemplos algumas doenas que afectam a sociedade
moderna.
Luisa Mota Vieira
Homeostase
de um organismo multicelular
Controlada
biolgicos:
pelo
equilbrio
de
trs
processos
proliferao diferenciao morte celular
Depende da remoo activa de clulas indesejveis a

uma comunidade social
Controlo social das clulas
Sobrevivncia do organismo
Luisa Mota Vieira
Longevidade das clulas

alguns nmeros
O corpo humano tem 220 tipos de clulas diferentes
Cerca de 5x1011 clulas do sangue morrem por dia
Os neutrfilos vivem 6-7 horas na circulao
Luisa Mota Vieira
Morte celular: apoptose

Objectivos
Descrever a apoptose ou morte celular programada como um

tipo de morte celular que envolve a autodestruio celular".
Esclarecer as diferentes vias apoptticas (via intrnseca e

extrnseca).
Explicar o envolvimento da apoptose na regulao fisiolgica do

tamanho dos tecidos, exercendo um papel oposto ao da mitose.
Exemplificar a funo da apoptose nos seguintes processos:

desenvolvimento embrionrio,
morfognese e organognese,
renovao (turnover) de clulas,
regresso de tumores,
processos degenerativos.
Luisa Mota Vieira
O que a apoptose
definio
Apoptose ou morte celular programada1
"autodestruio celular
energia e protenas
papel oposto ao da mitose
que
requer
Apoptosis ou programmed cell death
Fonte: Wikipedia
Luisa Mota Vieira
Apoptose
poptose:: morte celular programada
Significado biolgico
Apoptose o destino normal de uma clula num organismo multicelular
(a no ser que a clula receba sinais trficos ou de sobrevivncia e, neste
caso, sobrevive)
. ou seja
todas as clulas necessitam de sinais trficos para sobreviver;
na ausncia desses factores, as clulas cometem suicdio.
Luisa Mota Vieira
Apoptose
processo
altamente
regulado
e
conservado
ao longo da
evoluo
Evoluo x elevada presso selectiva promoveu a conservao de vrios genes

envolvidos na apotose, homlogos em organismos to distintos quanto os nematdes e os
mamferos
Luisa Mota Vieira
A apoptose um processo natural

natural::
exemplos de situaes fisiolgicas (1)
Desenvolvimento embrionrio
Organognese
Morfognese
Sinaptognese
Luisa Mota Vieira

natural::
Morfognese (anmala) fuso dos dedos dos ps ou das mos

(sindactilia)
Luisa Mota Vieira

natural::
Adulto
Renovao (turnover) normal das

clulas
Seleco tmica negativa
Citotoxicidade mediada pelas clulas T

(infeco viral)

Aps reconhecerem as clulas infectadas por vrus,
os linfcitos T citotxicos, libertam protenas que
conduzem morte das clulas infectadas.
Luisa Mota Vieira
A apoptose igualmente um processo patolgico

patolgico::
A regulao da morte celular est alterada
Apoptose insuficiente
cancro
doenas autoimunes
algumas infeces virais
Apoptose excessiva ou aumentada

SIDA
doenas neurodegenerativas
osteoporose
envelhecimento
Doente de Parkinson - evoluo da perda neuronal,
medida pela actividade dopaminrgica
Luisa Mota Vieira
Apoptose
Quando?
Clulas incapazes de
receber sinais de
sobrevivncia e/ou
capazes de receber
sinais de morte
Clulas que no
podem reparar
adequadamente uma
leso
Clulas que perdem

contacto com a
matriz extracelular
(ANOIKIA, loss of
home) ou com
certas clulas
Sinais que podem desencadear apoptose:

hormonas (ex: glucocorticoides)
citocinas (ex: TNF, tumor necrosis factor)
radiao (UV, X)
citostticos
Activao de um programa gentico de suicdio
Luisa Mota Vieira
Apoptose: morte celular programada e

fisiolgica caractersticas principais
Activao de um programa gentico de suicdio, que envolve a

activao e represso de genes especficos
Possui duas vias distintas de activao
Processo activo
No est associada a uma

resposta inflamatria
As clulas em apoptose
adquirem um aspecto
morfolgico caracterstico
Luisa Mota Vieira
Alteraes morfolgicas da clula em apoptose

Condensao da cromatina
Destruio de protenas
estruturais do ncleo
(controlo das interaces
entre a cromatina e
a membrana nuclear)
Fragmentao do DNA
entre os nucleossomas
APOPTOSE
Os corpos apoptticos formados so posteriormente fagocitados
por clulas vizinhas ou por macrofagos reciclagem do material celular
Alteraes na assimetria da membrana plasmtica - A translocao de fosfatidilserina

para o folheto externo da membrana serve de sinalizao para desencadear apoptose
e fagocitose pelas clulas vizinhas ou macrfagos.
PI
Anexina V
PI
Anexina V
Clulas em
apoptose
Iodeto de propdeo (propidium iodide, PI) liga-se ao DNA
Anexina V - protenas que se ligam aos fosfolpidos na presena de clcio;
As alteraes celulares que ocorrem durante o processo apopttico incluem a

perda da assimetria dos fosfolpidos numa fase inicial;
Os conjugados de Anexina V com FITC (fluorescein isothiocyanate) so

utilizados para detectar clulas apoptticas, sendo a sua deteco realizada por
citometria de fluxo, microscopia de fluorescncia ou microscopia confocal.
Luisa Mota Vieira
DNA laddering
Degradao do DNA genmico em fragmentos de, ou multiplos de,

180-200 pb
A fragmentao cria locais 3-OH, que podem ser marcados com

Br-dUTP (trifosfato de bromodeoxiuridina), pela aco da TdT (terminal
deoxynucleotidyl transferase)
Luisa Mota Vieira
Alteraes funcionais da clula em apoptose:

Inactivao de enzimas envolvidas na
reparao do DNA, em
particular, a PARP (poli-ADPribose polimerase) enzima
envolvida na reparao de DNA
danificado
replicao do DNA, exemplo, a

DNA topoisomerase II
enzima nuclear essencial para a
replicao e reparao do DNA
Luisa Mota Vieira
Microarrays
Dados classificados aleatoriamente
Anlise de clustering
Anlise diferencial da expresso gnica
Genes agrupados em famlias de genes
N total de genes envolvidos na apoptose: 198
Luisa Mota Vieira
Apoptose
Que mecanismos?
Principais protenas implicadas

na apoptose
Caspases
Protenas da famlia BCL-2: pre anti-apoptticas
Protenas adaptadoras
Luisa Mota Vieira
Caspases Cysteine aspartic acid proteases

Caspases:
efectoras (executoras) da apoptose
caspases 3, 6 e 7
iniciadoras (activadoras) da apoptose
caspases 2, 8, 9 e 10
3 domnios das caspases:
1 pro-domnio (N-terminal da protina), e
2 subunidades catalticas longa (p20-Cys) + curta (p10)
activao das caspases:
clivagem proteoltica, remoo do pro-domnio + separao das p20 e p10, ou
alterao da conformao (efeito alostrico)
DED (death effector domain) e CARD (caspase recruitment domain) so domnios de
interaco protena protena.
Luisa Mota Vieira
Protenas da famlia BCL-2 B-cell lymphoma protein-2
TM domnio transmembranar
BH1/BH2/BH3 domnios BCL2 homology-1/2/3
3 classes
anti-apoptticas (BCL2, BCL-XL e MCL1),
pr-apoptticas, vrios domnios (BAX e BAK) e
pr-apoptticas, um nico domnio BH3 (BID, BIM, BAD, NOXA e PUMA).
O domnio BH4 das protenas anti-apoptticas da famlia BCL-2 pode ser
removido (pela aco de caspases), resultando na produo de protenas com
actividade pr-apoptticas.
Luisa Mota Vieira
A apoptose desencadeada por interaces directas

entre protenas pr-apoptticas e anti-apoptticas
Luisa Mota Vieira
A apoptose processa-se por duas vias principais:

Via extrnseca (receptores pertencentes famlia do receptor TNF)
Via intrnseca (mitocondria)
Luisa Mota Vieira
Apoptose - Via extrnseca

Ligando de morte.
Ex. Fas-L (linfcitos T
citotxicos) e TNF-
Receptores de morte
transmembranares,
pertencentes famlia dos
receptores TNF (tumor
necrosis factor).
Ex. Fas e TNF-R1
morte da
clula
Luisa Mota Vieira
Via membranar
ou extrnseca
1FAS
protena da membrana plasmtica,

pertencente famlia do receptor
TNF.
2FADD
adaptor FAS associated death domain
Luisa Mota Vieira
Apoptose - Via intrnseca
Sinais extracelulares
radiao
choque trmico
Sinais intracelulares
compostos citotxicos
privao de factores de crescimento
stress do RE e o oxidativo da mitocondria
morte da
clula
Luisa Mota Vieira
Via mitocondrial ou intrnseca
Inibio das
caspases
Mecanismo de
sobrevivncia
da clula
Apaf-1, apoptosis activacting factor 1

IAPs, inhibitor of apoptosis proteins
Luisa Mota Vieira
Via mitocondrial ou intrnseca:

trs fases inicial, efectora e de degradao
A mitocondria controla a deciso para a morte celular

Luisa Mota Vieira
Luisa Mota Vieira
Regulao da apoptose, atravs de

protenas que promovem ou suprimem a apoptose
pr-apoptticas
Funo
Caspases
Clivagem de enzimas, citosqueleto e canais inicos
Bax, Bad
Formao de poros, libertao de Cit c
Receptores do glutamato
Influxo de Ca2+, activao de cinases e proteases
Fas
Inicia cascata da morte/caspase-8
Par-4
Disfuno mitocondrial, inibio NF-kB
p53
Transcrio de genes de morte, aumento de aco da Bax
anti-apoptticas
Bcl-2, Bcl-XL
Estabiliza funo mitocondrial, antioxidante
IAPs
Inibio das caspases
Factores trficos/ citocinas
Expresso de enzimas antioxidantes, protenas
Bcl-2
reguladoras de Ca2+, IAPs,
Telomerase
Previne o encurtamento dos telmeros
Enzimas antioxidantes
Reduz o stress oxidativo
Protena cinase C
Estimula a expresso de NF-kB
Protenas que ligam Ca2+
Homeostase de Ca2+
Luisa Mota Vieira
Regulao da
apoptose
A famlia de
protinas BclBcl-2
Protena
pro--apopttica
pro
(Bax)
Protenas
anti--apoptticas
anti
(Bcl--2, Bcl
(Bcl
Bcl--XL)
Luisa Mota Vieira
Presena de factores trficos

(NGF, nerve growth factor):
factor):
inibio da activao das caspases
Mecanismo de
sobrevivncia da clula
Luisa Mota Vieira
Apoptose:
do laboratrio clnica
Os seres humanos tm aproximadamente 1014

clulas capazes de entrarem em apoptose
Se ficar comprometido, o processo apopttico

pode originar situao de doena:
Apoptose insuficiente
Apoptose excessiva ou aumentada
Potencial uso teraputico

Modulao da apoptose no tratamento de doenas
Luisa Mota Vieira
Doena de Alzheimer (DA, AD

AD))
Doena neurodegenerativa que ocorre tardiamente:

Apoptose excessiva, por morte precoce dos neurnios demncia

progressiva e irreversvel
clinicamente decrscimo progressivo da capacidade cognitiva
primeiro sintoma da DA declnio da memria recente
Estadio inicial da DA:

Alterao do citosqueleto dos neurnios piramidais do crtex

cerebral, por hiperfosforilao anormal da protena tau (a tau
fosforilada dissocia-se dos microtbulos filamentos insolveis)
Crtex cerebral de doentes de DA

Depsitos extracelulares de -amilide (4 kDa), produto

minoritrio do metabolismo da APP (amyloid precursor protein,
protena transmembranar muito presente nas sinapses dos neurnios)
Luisa Mota Vieira
Evidncias de morte celular por apoptose na DA:

decrscimo Bcl-2 (anti

anti--apopttica) nos neurnios contendo tranas
neurofibrilhares
aumento dos nveis de Bax (observados antes da clivagem do DNA)
abertura PTPC; libertao citocromo c; activao de caspases
Mapping Memory. National Geographic

Nov 2007, pp 42-55.
Morte celular: necrose

Objectivos e bibliografia
Objectivos
Definir necrose como um processo celular irreversvel = leso

irreversvel
Identificar os diferentes tipos de necrose e a sua caracterizao

ao nvel de alteraes nucleares e citoplasmticas
Exemplificar alguns tipos de necrose (hemorrgica e isqumia),

caracterizando
as
alteraes
celulares:
nucleares
e
citoplasmticas
Bibliografia

Wikipedia (ingls)
Paper: Hotchkiss RS et al. Cell death. N Engl J Med. 361: 1570-1583
(2009)
Luisa Mota Vieira
Necrose
definio
Alteraes das clulas, aps a morte animal
Morte acidental no programada das clulas ou de um tecido, por

causas:
fisiolgicas (isqumia grave, isto , obstruo arterial)
traumatismos graves
agentes infecciosos (fungos, bactrias e vrus)
alteraes climticas bruscas (temperaturas extremas)
Processo passivo (independente de ATP)
Desorganizao estrutural progressiva da clula

destruio da membrana plasmtica, com consequente, dilatao dos

organelos (mitocndria e outros)
libertao dos componentes intracelulares
geralmente, os restos celulares so difceis de serem fagocitados, por falta

de emisso de sinais inflamao
Luisa Mota Vieira
Necrose
Alteraes nucleares 1 (MO)
Picnose
condensao da cromatina forma
uma massa escura, retrada, ao redor
do nuclolo
ncleo picntico ncleo muito
condensado (pequeno) e
basfilo (hipercromtico)
Cariorrxis
ncleo picntico e fragmentado
Carilise
dissoluo da cromatina
perda da nitidez do ncleo das clulas
colorao nuclear plida e fraca
Luisa Mota Vieira
Necrose
Alteraes nucleares 2 (MO)
Luisa Mota Vieira
Necrose
Alteraes citoplasmticas (MO)
Aumento da acidofilia eosinofilia capacidade
Hipfise normal
para corar com corantes cidos, eosina, pH

Lise do citoplasma
desnaturao das protenas
citoplasma com aparncia plida e vacuolizado
Principais sinais visveis ao MO

a clula perde o seu contorno
ocorre a diminuio da colorao diferencial entre

ncleo e citoplasma
destruio completa das clulas
Hipfise em
necrose
Luisa Mota Vieira
Necrose
Tipos
O tecido necrosado pode apresentar vrias alteraes morfolgicas

macro e microscpicas , resultantes de vrios factores:
agente etiolgico,
composio do tecido e
enzimas que permanecem activas
Diferenciao muito til,

uma vez que oferece um indcio quanto etiologia da necrose
Ex: a necrose caseosa provocada geralmente pelo bacilo de Koch
Luisa Mota Vieira
Tipos de necrose
. de coagulao
de liquefao
caseosa ou de caseificao
gorda
gangrenosa (gangrena)
Luisa Mota Vieira
Necrose de coagulao ou
isqumica: o tipo mais comum
Necrose de coagulao: rim
As clulas mortas
apresentam citoplasma opaco, acidfilo, devido

desnaturao das protenas e digesto do RNA
do citoplasma (ex. RNA dos ribossomas)
retm os
celulares
contornos
celulares
fantasmas
Necrose de coagulao:
corao enfarte agudo
Muitas vezes, o tecido preserva a sua estrutura

durante algum tempo no ocorre a liquefao
dos tecidos
desnaturao (coagulao) das protenas

enzimas lticas encontram-se desnaturadas
Luisa Mota Vieira
Necrose gangrenosa
Gangrena: a necrose de um tecido por isqumia, na

sequncia de obstruo arterial por embolia, choque,
infeco, ou exposio a frio intenso
Geralmente, o tecido necrtico sofre modificaes por

agentes externos, como o ar ou bactrias
1. perda do fornecimento de
oxignio e outros nutrientes
2. invaso bacteriana
3. putrefaco do tecido
Luisa Mota Vieira
Evoluo das necroses

O tecido necrosado, de modo geral, comporta-se

como elemento estranho que o organismo
procura eliminar
O modo de eliminao depende da extenso da

massa necrosada, do local onde se localiza, e
da causa da necrose
O tecido necrosado pode sofer:

absoro
drenagem
cicatrizao e calcificao
enquistamento
gangrena
Luisa Mota Vieira
Exemplos de doenas onde a necrose est

envolvida: Acidente Vascular Cerebral (AVC)
interrupo da irrigao sangunea (oxignio e glicose) numa

determinada regio do crebro perda da funo neuronal
Existem dois tipos:
Isqumico: falta de irrigao (formao de um cogulo de sangue)
Hemorrgico: ruptura de um vaso

sanguneo intracraniano
Factores de risco para AVC:

Hipertenso
Aterosclerose
Diabetes
Colesterol elevado
Tabagismo
lcool
Problemas cardacos
Luisa Mota Vieira
Necrose vs apoptose:
caractersticas morfolgicas, bioqumicas e fisiolgicas
que as distinguem
Luisa Mota Vieira
Morte celular: autofagia

Objectivos
Descrever o processo autofgico

papel na eliminao de organelos envelhecidos com a formao de

vesculas onde o organelo danificado envolto no chamado autofagossoma
que posteriormente se liga ao lisossoma
Relacionar a autogafia com a doena
Exemplificar o envolvimento da autofagia durante o jejum

prolongado, com o objectivo de converter os componentes da clula
em alimento para prolongar a sobrevivncia do organismo
Descrever autofagia celular como a chave para o desenvolvimento de

novos tratamentos para doenas, tais como, cancro, doenas
degenerativas e infeces
Luisa Mota Vieira
Autofagia eat onself

definio
Processo catablico, que envolve a degradao de componentes

celulares atravs do lisossoma
Altamente conservado nos eucariotas
Permite manter a homeostase celular, entre a sntese e a degradao

dos produtos celulares
Sem resposta inflamatria
A autofagia tem um papel essencial na:

adaptao ao jejum - privao de nutrientes
adaptao a alteraes ambientais e do desenvolvimento - privao
mediada por factores de crescimento
Luisa Mota Vieira
Luisa Mota Vieira
Autofagia ocorre em vrias doenas (cancro, neurodegenerativas,

infecciosas), homeostase dos rgos, e durante o desenvolvimento
Luisa Mota Vieira
Autofagia eat onself

3 tipos
Macroautofagia
Microautofagia
Autofagia mediada
por chaperones
Ciechanover, A. From the lysosome to ubiquitin and the

proteasome. Nature Rev. Mol. Cell Biol, 6: 7986 (2005).
Luisa Mota Vieira
Tipos de autofagia
microautofagia
micro
autofagia ou especfica
Ocorre quando os lisossomas engolem directamente partes do

citoplasma
H+
H+
Luisa Mota Vieira
Tipos de autofagia
macroautofagia
macro
autofagia ou no especfica (1)
Caracteriza-se pela sequestrao de organelos ou de protenas numa vescula

membranar autofagossoma que posteriormente se funde com o lisossoma
autofagolisossoma , sendo o contedo degradado pelas hidrolases cidas
lisossomais.
Luisa Mota Vieira
Lysosome containing
two damaged organelles
Tipos de autofagia
macroautofagia ou
macroautofagia
no especfica (2)
1m
Mitochondrion
fragment
Peroxisome
fragment
Luisa Mota Vieira
Macroautofagia autofagia 3 fases

Iniciao
adaptao ao jejum - privao de nutrientes
adaptao a alteraes ambientais e do desenvolvimento
- privao mediada por factores de crescimento
Execuo/ elongao
Maturao
ATG protenas: autophagy-related proteins
Nature Reviews Immunology 7, 767-777 (October 2007)

Luisa Mota Vieira
Actualmente, 31 genes esto envolvidos na macroautofagia

ATG 11-31
Luisa Mota Vieira
Regulao
da
autofagia
Luisa Mota Vieira
Como que a autofagia mata uma clula?
Autofagia massiva (morte celular tipo II)

Caracteriza-se pela destruio de grandes pores do

citoplasma e dos organelos atrofia celular irreversvel, o
que, por sua vez, conduz ao colapso da funo celular e
morte.
Autofagia activa a apoptose (morte celular tipo I)

A autofagia a primeira resposta ao estmulo (stress),

para, posteriormente, activar a apoptose que vai ser
responsvel pela morte celular.
Luisa Mota Vieira
A relao entre autofagia e apoptose
Luisa Mota Vieira
Funes da autofagia
Privao de nutrientes
Infeco defesa
microorganismos
Durante o jejum prolongado, os nveis de

autofagia
aumentam:
degradao
de
componentes
celulares
no
vitais
e,
consequentemente, libertao de nutrientes
para
a
prpria
clula

processo
de
sobrevivncia, adaptativo, da clula e do
organismo.
do
hospedeiro
contra
Quando
as
clulas
so
infectadas
por
determinadas bactrias, o processo autofgico
activado como forma de as eliminar.
Morte celular autofgica (autophagic cell death)

Morte celular tipo II autogafia massiva
Luisa Mota Vieira
Micrbios e autofagia
autofagia:: diversas estratgias
Defesa do hospedeiro contra o agente infeccioso
Bactrias e vrus podem utilizar a autofagia para sobreviver na clula
Luisa Mota Vieira
Neurodegenerao e autofagia
Doena de Parkinson
Doena de Alzheimer
Doena de Huntington
caracterizadas pela
acumulao de
protenas txicas
Ausncia de autofagia a toxicidade dos agregados
Luisa Mota Vieira
Cancro e autofagia
Luisa Mota Vieira
Mestrado Integrado de Medicina

2010 2011
Disciplina de Biologia Celular e Molecular I
1 ano - 1 semestre
Clulas
estaminais
Luisa Mota Vieira, PhD (lmotavieira@hdes.pt, 296 203 531)

Unidade de Gentica e Patologia Moleculares
Hospital do Divino Esprito Santo de Ponta Delgada, EPE
10 Janeiro 2011
Clulas estaminais
Objectivos
Definir clulas estaminais
Identificar os diferentes tipos de clulas

estaminais
Explicar o cancro como uma doena das clulas

estaminais
Descrever os problemas ticos relacionados com a

utilizao das clulas estaminais em medicina
Potencialidades e aplicaes das clulas

estaminais em medicina
Luisa Mota Vieira
O que so clulas estaminais (CE)

(CE)?
?
As CE distinguem-se das restantes clulas do organismo por
apresentarem 3 caractersticas bsicas:
so indiferenciadas e no especializadas,
tm capacidade de se auto-renovar e dividir indefinidamente,
so capazes de se diferenciar num ou mais tipos de clulas

especializadas linhagens celulares , sob a aco de um estmulo.
Diviso assimtrica
s 1 das clulas-filhas
= igual clula-me
Luisa Mota Vieira
Luisa Mota Vieira
Clulas estaminais:
classificao
Em funo da sua origem

CE embrionrias diferenciam-se em clulas que criam

os tecidos e os rgos
CE adultas participam na renovao e na reparao dos

tecidos adultos (diferenciados)
CE cancerigenas
CE pluripotentes induzidas terapias celulares
Em funo da sua capacidade de diferenciao

Totipotentes (- diferenciadas)
Pluripotentes
Multipotentes
Unipotentes (+ diferenciadas)
Luisa Mota Vieira
Tipos de
clulas estaminais
Clulas estaminais embrionrias

(Embryonic Stem cells, clulas ES)
Clulas estaminais adultas
Clulas estaminais pluripotentes induzidas

(iPSC, induced pluripotent stem cells)
Clulas estaminais cancergenas
Luisa Mota Vieira
Clulas totipotentes:
Clulas
estaminais:
capacidade de
diferenciao
zigoto ou ovo fertilizado, mrula com duas clulas

(origem a qualquer tipo de clula, incluindo a parte
fetal da placenta, o cordo umbilical e as
membranas extra-embrionrias)
Clulas pluripotentes:
do origem s clulas das camadas embrionrias
mesoderme, endoderme e ectoderme que, por
sua vez, se podem diferenciar em todos (220) os
tipos de clulas que constituem o organismo adulto
(exceptuando as clulas da placenta e tecidos
extra-embrionrios)
Clulas multipotentes:
so clulas mais especializadas, mais
diferenciadas, que do origem s linhagens de
clulas especficas dos tecidos ou rgos
Clulas unipotentes:
do origem a um tipo especfico de clulas
Luisa Mota Vieira
Onde se localizam as CE embrionrias?

Origem e fontes
Clulas estaminais embrionrias (Embryonic Stem cells, clulas ES)

Derivam da massa interna boto embrionrio do blastocisto
(embrio de 4-5 dias) destruio do embrio

Existem transitoriamente no embrio
Blastocisto (4-5 dias)

Luisa Mota Vieira
CE embrionrias
Podem ser isoladas e cultivadas numa
placa de Petri

linhagens de clulas embrionrias
pluripotentes (auto-renovao)
Blastocisto pr-implantao
massa interna ( destruio do embrio)
Blastocisto logo aps implantao no tero

clulas estaminais do epiblasto
(Epiblast stem cells, EpiSC)
Derivation of human embryonic stem cells from single blastomeres

Klimanskaya I et al. Nature. 444: 481-5 (2006).
Erratum in: Nature, 444: 512 (2006) and Nature, 446: 342 (2007).
Klimanskaya I et al. Nat Protoc, 2: 1963-72 (2007).
Terapia celular
Diferenciao
de clulas
estaminais
embrionrias
clulas
neuronais

produtoras de
dopamina
clulas
pancreticas

produtoras de
insulina
Luisa Mota Vieira
Luisa Mota Vieira
Onde se localizam as CE adultas?

Origem e fontes
Clulas estaminais adultas - nos tecidos e rgos adultos
fetais
sangue do cordo umbilical e placenta
liquido amnitico
individuo adulto
De Coppi, P. et al. Isolation of

amniotic stem cell lines with
potential
for
therapy.
Nat
Biotechnol, 25: 100-106 (2007)
Luisa Mota Vieira
CE adultas (1)
Como qualquer clula estaminal, as clulas

estaminais adultas dividem-se durante
longos perodos dando origem:
a cpias idnticas capacidade de se
auto-renovar , e
a vrios tipos de clulas que sofrem diferenciao.
So tipicamente multipotentes
Encontram-se nos tecidos diferenciados e especializados capacidade

de diferenciao restrita a linhagens de clulas especificas dos tecidos
ou rgos onde esto localizadas (so as clulas precursoras ou
progenitoras das clulas diferenciadas, incluindo as clulas
unipotentes)
Luisa Mota Vieira
CE adultas (2)
Nos organismos adultos, provvel que

a maior parte das CE estejam num
estado quiescente
No entanto, as CE adultas podem ser activadas

por factores exgenos diviso e diferenciao celular
Envolvidas na renovao turnover celular ou na reparao de

leses nos tecidos (ex. feridas, leso cerebral)
Por serem no diferenciadas e multipotentes, as CE adultas apresentam

uma grande plasticidade e tm a capacidade de se auto-renovar e
diferenciar durante toda a vida do organismo.
Luisa Mota Vieira
Clulas estaminais:
CE embrionrias versus CE adultas
Originam os 220 tipos de clulas que

constituem um organismo adulto
Originam as clulas do tecido de origem

(do seu prprio tecido, rgo)
Luisa Mota Vieira
Clulas
estaminais:
origem versus
capacidade de
diferenciao
canalBQ_6. n. 7, DEZEMBRO_2010
Tipos de CE adultas
Clulas estaminais neuronais

zona subventricular
zona ventricular
hipocampo
crebro fetal
crista neural
Clulas estaminais da medula ssea e sangue

na
na
no
no
na
medula ssea
hematopoiticas
Clulas estaminais adultas de diferentes tecidos

clulas progenitoras endoteliais

clulas do msculo esqueltico
clulas progenitoras do epitlio da mucosa do intestino
clulas do pncreas e fgado
Luisa Mota Vieira
Alguns tecidos tm naturalmente mais CE adultas

que outros, e renovamrenovam-nas continuamente.
continuamente.
CE pele epiderme e
folculos pilosos.
CE hematopiticas
sangue (glbulos vermelhos,
glbulos brancos, plaquetas,
etc.).
Luisa Mota Vieira
As clulas sanguneas eritrcitos, linfcitos e plaquetas so renovadas a partir das

clulas estaminais hematopoiticas existentes principalmente na medula ssea (1%)
Luisa Mota Vieira
Clulas estaminais de
sangue do cordo umbilical
Sangue do cordo umbilical fonte de clulas
estaminais no embrionrias de vrios tipos:
grande quantidade clulas estaminais hematopoiticas
menor quantidade clulas estaminais mesenquimais e

clulas estaminais endoteliais.
Actualmente, a aplicabilidade teraputica destas clulas

bastante discutvel, mas constitui matria de grande
investigao com considervel potencial econmico.
Luisa Mota Vieira
O sangue deve ser colhido logo aps o nascimento;

um processo totalmente seguro e indolor para a
me e para o recm-nascido.
1
Luisa Mota Vieira
Outros tecidos tm (muito) poucas CE adultas

CE neurais (CEN)
originam s trs principais
linhagens de clulas neurnios,
oligodendrcitos e astrcitos do
sistema nervoso central dos
mamferos
existem tambm na polpa dentria,

no periodonto (tecidos que rodeiam
e suportam os dentes) e na
mucosa olfactiva
Luisa Mota Vieira
http://www.youtube.com/watch?v=Fpw7xXF8XiE
http://www.youtube.com/watch?v=LF7JNx-Kt9M
Luisa Mota Vieira
Consideraes bioticas:
Porqu tanta controvrsia? (1)
Prs
Os blastcitos e as CE embrionrias
humanas podem ser criados por
fertilizao in vitro
tecnologia normalmente utilizada nos
18 Julho 1978
laboratrios de medicina reprodutiva
Contras
As CE embrionrias humanas so obtidas

a partir de um zigoto (vulo fertilizado)
em cultura
destruio de um feto
Luisa Mota Vieira
Porqu tanta controvrsia? (2)
Prs
Os embries excedentrios podiam ser

doados investigao (medicina
regenerativa)
na maior parte dos casos no existe
qualquer projecto parental (os embries
so rejeitados ou permanecem
congelados)
Contras
Os embries excedentrios humanos, fruto

da fertilizao in vitro, podiam ser uma
soluo para algumas mulheres infrteis
transferncia heterloga
11 Jan. 2010 - Biologia Celular e Molecular I (1 semestre - 1 ano, 2009 - 2010) Mestrado Integrado de Medicina
Luisa Mota Vieira
Como ultrapassar esta dificuldade?
R: Obtendo CE por outras maneiras (1)
Prs
Remover uma clula ao

embrio de 8 clulas
(morula, ~ diagnstico
pr-implantatrio)
nenhuma vida humana
seria perdida
Contras
Alguns riscos para o

embrio
eticamente
no aceitvel
Luisa Mota Vieira
Como ultrapassar esta dificuldade? R: Obtendo CE por outras maneiras (2)
Tcnica transferncia do ncleo somtico

para um ocito enuncleado
CE autlogas
Luisa Mota Vieira
Tcnica de transferncia do ncleo somtico
Luisa Mota Vieira
Clonagem reproductiva
http://www.cnn.com/2001/TECH/
science/11/25/cloning.act/
http://news.bbc.co.uk/1/hi/sci/tech/142426
7.stm
Dolly
Rosalind 1996
George and Charlie

Adv. Cell Tech 1999
http://cats.about.com/od/advoc
acy/a/clonedcat.htm
CC
Texas A&M 2001
http://news.bbc.co.uk/2/hi/asia-pacific/2153490.stm
http://www.bbc.co.uk/czech/scitech/story/20
05/08/050804_korea_cloning_0600.shtml
Millie, Christa, Alexis, Carrel and Dotcom
PPL Therapeutics 2000

Snuppy
S. Korea 2005
Luisa Mota Vieira
CLONAGEM
REPRODUTIVA
CLONAGEM
TERAPUTICA
(homem)
(obteno de
clulas estaminais)
Sim, mas
Luisa Mota Vieira
Tcnica Clulas estaminais pluripotentes

induzidas (iPS cells)
2006 induzir a reprogramao de

fibroblastos de ratinho em clulas
pluripotentes (iPSC) com
propriedades semelhantes s das
clulas ES.
A reprogramao obteve-se por

expresso forada de quatro
factores de transcrio:
Oct4, Sox2, Klf4 e c-Myc
Takahashi K & Yamanaka S (2006) Induction of Pluripotent

Stem Cells from Mouse Embryonic and Adult Fibroblast
Cultures by Defined Factors. Cell 126, 663-676.
Luisa Mota Vieira
Biol. Chem., 390: 845849 (2009)
Luisa Mota Vieira
Tcnica Clulas estaminais pluripotentes

induzidas (iPS cells) cont.
Clulas iPS so idnticas em muitos

aspectos s CE embrionrias (naturais):
expresso de certos genes e protenas
padro de metilao do DNA
tempo de crescimento celular e

de agregao celular
capacidade de diferenciao
Luisa Mota Vieira
Clulas estaminais pluripotentes induzidas

(iPS cells)
possvel diferenciar iPSC in vitro numa variedade de tipos celulares
Grande potencial para aplicaes clnicas

Medicina regenerativa
Patologias humanas corrigir in vitro

defeitos de clulas estaminais
hematopoiticas de doentes
com anemia de Fanconi
Ensaios clnicos testar

novos frmacos
necessrio melhorar ainda os processos de reprogramao e de

diferenciao das clulas iPS.
Luisa Mota Vieira
Em 2010
2010::
Reprogramao directa transdiferenciao
de clulas adultas diferenciadas
Fevereiro 2010 Reprogramao directa de

fibroblastos de ratinho em neurnios funcionais,
por expresso de 3 genes (Ascl1, Brn2 e Myt1l)
Vierbuchen et al. Nature, 463: 1035 (2010)
Agosto 2010 Reprogramao directa de

fibroblastos de ratinho em cardiomiocitos
funcionais, por expresso de 3 genes (Gata4,
Mef2c e Tbx5).
Ieda et al. Cell, 142: 375 (2010)
Novembro 2010 Converso directa de

fibroblastos humanos em clulas hematopoiticas,
capazes de originar in vitro glbulos vermelhos,
por expresso de um nico gene, OCT4.
Szabo et al. Nature, 468: 521 (2010)
Luisa Mota Vieira
Clulas estaminais e doena:

Cancro uma doena de clulas estaminais cancergenas
Devido capacidade de se
auto-renovar e de permanecer
no organismo durante um perodo
de tempo alargado, as clulas
estaminais adultas podem:
acumular mutaes oncognicas e
outros defeitos genticos e
epigenticos
facilmente adquirir um
fentipo tumorognico
As clulas estaminais cancergenas

so (mais) resistentes aos
tratamentos por quimoterapia e
radioterapia
Nature 442: 754-755 (2006)

Luisa Mota Vieira
Potencialidades e aplicaes
das clulas estaminais
em medicina (1)
Na investigao bsica e aplicada
no estudo dos factores e mecanismos genticos que determinam a
diferenciao celular e especializao dos tecidos;
na identificao da origem bioqumica de algumas doenas,
resultantes da diviso celular anormal ou da deficincia nos
mecanismos de diferenciao.
Na indstria farmacutica, para o desenvolvimento de

novas drogas
as CE podem ser usadas como modelos celulares, para testar o
efeito ou a toxicidade de frmacos, em substituio ou como mtodo
complementar dos sistemas in vitro ou dos modelos animais.
Luisa Mota Vieira
Potencialidades e aplicaes
das clulas estaminais
em medicina (2)
Na terapia celular de doenas
as CE j so utilizadas na terapia de diversas doenas causadas pela
disfuno de tecidos ou rgos, ou pela degenerao e morte celular
No futuro, prev-se que as CE sejam utilizadas no tratamento de
doenas, tais como Parkinson (terapia por substituio celular),
Alzeimher, diabetes, doenas cardacas ou diferentes tipos de cancro.
Na terapia gnica associada terapia celular

as CE podem ainda ser usadas como vectores na terapia gnica
possvel, por tcnicas de engenharia gentica e biologia
molecular, introduzir novos genes nas clulas estaminais.
Estas clulas corrigidas, quando introduzidas no indivduo, podem
diferenciar-se nas clulas do tecido alvo, repondo a funcionalidade
dos correspondentes genes mutados.
Luisa Mota Vieira
(somatic cell nuclear transfer )
Diabetes Mellitus tipo I

Caracterizada por nveis elevados de
glicose no sangue hiperglicemia.
Os sintomas mais comuns so:
secreo excessiva de urina
(poliuria), bem como sede (polidpsia)
e fome (polifagia) intensas.
O diabetes tipo 1 uma doena
autoimune, caracterizada por uma
destruio de clulas pancreticas
pelas clulas do sistema imune; os
doentes necessitam de injeces de
insulina exgena para sobreviver.
11 Jan. 2010 - Biologia Celular e Molecular I (1 semestre - 1 ano, 2009 - 2010) Mestrado Integrado de Medicina
Luisa Mota Vieira
No futuro
Nature Reviews Molecular Cell Biology 9: 725-729 (2008)

Luisa Mota Vieira
10 Jan. 2010
9 Jan. 2011
Luisa Mota Vieira

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