(Português) Biologia Do Desenvolvimento, 5 Edição, Gilbert PDF

Biologia do
Desenvolvimento
QUINTA EDIO
Biologia do
Desenvolvimento
QUINTA EDIO
Scott F. Gilbert
Swarthmore College
Traduo e Reviso
Adolfo Max Rothschild

Zuleika Rothschild
Francisco A. de Moura Duarte
Maria Helena Corra Marques
A capa
FOTOGRAFIA DA CAPA: O mRNA para o Fator 8 de Crescimento
Fibroblstico pode ser detectado pela hibridizao in situ da montagem
total usando RNA marcado quimicamente que complementar a
essa mensagem. No embrio de pinto de 3 dias, a mensagem do Fgf8
encontrada no ectoderma mais distal dos brotos dos membros, no
limite entre o crebro posterior e o crebro intermedirio, nos somitos,
nos arcos branquiais do pescoo e na cauda em desenvolvimento. O
FGF8 importante para diversos processos desenvolvimentais e
desempenha papis crticos no crescimento dos membros e na
padronizao do desenvolvimento do crebro. Captulos 3, 7 e 18.
(Fotografia cortesia de E. Laufer, C.-Y. Yeo e C. Tabin.)
FOTOGRAFIA DA CONTRACAPA: Fotografia de um embrio de pinto

de 20-21 dias nos estgios de pipping (bicando a casca internamente)
Do original: Developmental biology, e pr-ecloso. Note o revestimento peridrmico proeminente na
Fifth Edition extremidade do bico (dente do ovo), usado pelo pinto para fazer
Copyrigth 1997 by Sinauer Associates,
Inc. buracos na casca do ovo, a qual se tornou mais fina e mais quebradia,
como uma conseqncia da utilizao de minerais pelo embrio para
Dados Internacionais de Catalogao na seu crescimento esqueltico. Esse estgio desenvolvimental marca a
Publicao (CIP)
(Cmara Brasileira do livro, SP, Brasil) transio do embrio em um pinto que respira ar. Captulos 1 e 5.
_____________________________________ (Fotografia do International Poultry Journal, cortesia de R. Tuan.)
Gilbert, Scott F., 1949-
Biologia do desenvolvimento /
Scott F. Gilbert. -- As pginas de ttulo
5. ed. -- Ribeiro Preto, SP :
FUNPEC Editora, 2003. PGINA ESQUERDA: A expresso gnica gera limites nos discos imagi-
Ttulo original : Developmental biology nais da Drosophila. Os discos grandes e pequenos dentro da larva da
Vrios tradutores e revisores. mosca formam as asas e os halteres, respectivamente, no adulto. Nes-
Bibliografia. se estgio, a protena Apterous (vermelho) expressa somente nos
ISBN 85-87528-61-0 compartimentos dorsais; a protena Cubitus interruptus (azul) mar-
ca os compartimentos anteriores (mas no os posteriores) (uma linha
1. Biologia do desenvolvimento I. Ttulo.
formando esse limite pode ser observada). A colorao verde (origi-
03-4459 CDD-571.8 nria da protena Vestigial) no interior demarca o limite entre o mem-
_____________________________________ bro livre e a articulao ligando-o parede torcica. Captulo 19. (Fo-
ndices para catlogo sitemtico: tografia cortesia de J. Williams, S. Paddock e S. Carroll.)
1. Bilogia do Desenvolvimento: Cincias
da vida 571.8 PGINA DIREITA: Expresso do gene paraxis no embrio de pinto no
estgio de 6 somitos. Hibridizao in situ da montagem total usando
Direitos para a lngua portuguesa cedidos
pela Sinauer Associates, Inc. para a RNA marcado com digoxygenin complementar a uma poro da
Fundao de Pesquisas Cientficas de mensagem paraxis do pinto mostra a expresso desse gene durante a
Ribeiro Preto que se reserva a formao do somito. A protena Paraxis importante no estabeleci-
propriedade desta traduo.
mento da estrutura desses grupos mesodrmicos. Captulos 2 e 9.
Proibida a reproduo dos textos (Montagem fotogrfica cortesia de R. Tuan.)
originais, mesmo parcial e por
qualquer processo, sem autorizao
da editora.
Para Daniel, Sarah, e David
Tabela de Contedos
PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento

Introduo ao desenvolvimento Genes e desenvolvimento:
animal 1 1 Introduo e tcnicas 35 2
O objetivo da biologia do desenvolvimento 1 As origens embriolgicas da teoria dos genes 35
Os problemas da biologia do desenvolvimento 2 Ncleo ou Citoplasma: Qual Controla a
Os estgios do desenvolvimento animal 3 Hereditariedade? 35
Nossa herana eucaritica 5 O Cromossomo X como uma Ponte Entre Genes e
Desenvolvimento entre eucariotos unicelulares 6 Desenvolvimento 37
Controle da Morfognese no Desenvolvimento em A ciso entre a embriologia e a gentica 38
Acetabulria 6 Primeiras tentativas da gentica do desenvolvimento 39
Diferenciao em Ameboflagelados Naegleria 10 Evidncia para a equivalncia genmica 40
As Origens da Reproduo Sexual 12 Metaplasia 40
Eucariotos coloniais: A evoluo da diferenciao 16 Clonagem de Anfibios: A Restrio da Potncia
As Volvocaceanas 16 Nuclear 42
Q Informaes adicionais & Especulaes Clonagem de Anfbios: A Pluripotncia de Clulas
Sexo e Individualidade em Volvox 18 Somticas 43
Diferenciao e Morfognese em Dictyostelium 21 Q Informaes adicionais & Especulaes
Q Informaes adicionais & Especulaes Clonando Mamferos por Prazer e Lucro 45
Evidncia e Anticorpos 25 Sobre E.coli e elefantes: O modelo operon 47
Q Informaes adicionais & Especulaes Sntese diferencial de RNA 49
Como o Grex Sabe Qual Lado Est Para Cima 27 Hibridizao de cido nuclico 54
Padres desenvolvimentais entre metazorios 28 Clonagem de DNA genmico 55
Os Porferos 29 Hibridizao de DNA: entre e intra espcies 58
Protostomatas e Deuterostomatas 30 Seqenciamento de DNA 59
Anlise de mRNA atravs de bibliotecas de cDNA 61
Tcnicas de localizao de RNA 63
Hibridizao In Situ 63
Transferncias Northern 64
Tabela dos Contedos vii
Encontrando mensagens raras pela reao da polimerase Identificando molculas de adeso celular e seu
em cadeia 66 papel no desenvolvimento 92
Determinando a funo do gene: clulas e organismos Caderinas 92
transgnicos 69 CAMs da superfamlia de imunoglobulinas 95
Tcnicas de insero de DNA novo em uma clula 69 Molculas da juno celular: protenas da juno em
Camundongos quimricos 70 fenda 97
Experimentos com genes com endereamento A base molecular da afinidade clula-substrato 99
(Gene targeting ou Knockout) 70 Afinidade diferencial a substrato 99
Determinando a funo de uma mensagem: RNA antisense 73 A matriz extracelular 99
Reinvestigao de velhos problemas com novos mtodos 73 Receptores celulares para molculas da matriz
Uma concluso e um alerta 75 extracelular 104
Adeso diferencial resultante de sistemas de
Base celular da morfognese: adeso mltipla 106
Afinidade celular diferencial 79 3 Molculas de receptores e vias de transduo

de sinais 107
A via JAK-STAT 107
Afinidade celular diferencial 80 A via RTK-Ras 108
O modelo termodinmico de interaes celulares 84 Q Informaes adicionais & Especulaes
Q Informaes adicionais & Especulaes Mutaes negativas dominantes em receptores 110
Evidncia para o modelo termodinmico 87
A via do inositol fosfato 111
A base molecular das adeses clula-clula 88 Cruzamentos entre vias 112
As classes de molculas de adeso celular 88 A matriz extracelular e a superfcie da clula como
Q Informaes adicionais & Especulaes fontes de sinais crticos para o
Anticorpos monoclonais e gentica reversa 89 desenvolvimento 112
Molculas de adeso celular 92 Interaes recprocas na superfcie celular 113
PARTE II Padres de Desenvolvimento

Fertilizao: Iniciando um Preveno da Polispermia 140
novo organismo 121 4 Q Informaes adicionais & Especulaes

A Ativao do Metabolismo dos Gametas
Ativao do metabolismo do vulo 149
147
Estrutura dos gametas 121 Respostas precoces 149

Espermatozide 121 Respostas tardias 151
O vulo 125 Fuso do material gentico 152
Reconhecimento do vulo e do espermatozide: Ao Q Informaes adicionais & Especulaes
distncia 128 A No-Equivalncia dos Proncleos de
Atrao do Espermatozide 128 Mamferos 154
Ativao Espermtica: A Reao Acrossmica no Rearranjo do citoplasma do vulo 156
Ourio-do-Mar 129 Preparao para a Clivagem 158
Q Informaes adicionais & Especulaes
Ao Distncia: Gametas de Mamferos 131
Clivagem: Criando
Reconhecimento do vulo e espermatozide:
Contato de gametas 132
Reconhecimento Espcie-Especfico em Ourios-
multicelularidade 167 5
do-Mar 132 PADRES DE CLIVAGEM EMBRIONRIA 168
Ligao de Gametas e Reconhecimento em Clivagem holoblstica radial 169
Mamferos 135 A holotria, Synapta 169
Fuso de gametas e a preveno da polispermia 139 Ourio-do-Mar 170
Fuso entre as membranas do vulo e do Anfbios 173
espermatozide 139 Clivagem holoblstica espiral 175
viii Tabela dos Contedos
Q Informaes adicionais & Especulaes Mecanismos de gastrulao em aves 238

Adaptao pela modificao da clivagem Gastrulao em mamferos 242
embrionria 178 Modificaes para desenvolvimento dentro de
Clivagem Holoblstica Bilateral 179 outro organismo 242
Clivagem holoblstica rotacional 180 Formao de membranas extra-embrionrias 245
Compactao 181
Incio do desenvolvimento vertebrado:
A Superfcie da Clula e o Mecanismo de
Compactao 184
Formao da massa celular interna 185
Neurulao e ectoderma 253
FORMAO DO SISTEMA NERVOSO CENTRAL 254
7
Fuga da Zona Pelcida 185 Neurulao: aspectos gerais 254
Q Informaes adicionais & Especulaes Neurulao primria 255
Gmeos e clulas embrionrias precursoras 186 A mecnica da neurulao primria 257
Clivagem Meroblstica 188 A formao da placa neural 257
Clivagem discoidal 189 Formao do assoalho da placa neural 258
Clivagem Superficial 192 A modelagem e dobramento da placa neural 259
Q Informaes adicionais & Especulaes Fechamento do tubo neural 260
Excees, Generalizaes, e Clivagem Q Informaes adicionais & Especulaes
Parastica da Vespa 195 A modelagem dorsoventral do sistema nervoso 264
MECANISMO DE CLIVAGEM 196 Neurulao secundria 264
Regulando o ciclo da clivagem 196 Diferenciao do tubo neural 265
Fator promotor de maturao 197 Formao das regies do crebro 265
Q Informaes adicionais & Especulaes Q Informaes adicionais & Especulaes
MPF e Seus Reguladores 198 Determinando as regies do crebro anterior e
O mecanismo citoesqueltico da mitose 201 crebro mdio 268
A formao de novas membranas 203 Arquitetura de Tecido no Sistema Nervoso Central 270
Organizao do cerebelo 272
Gastrulao: Reorganizando as Organizao cerebral 274
clulas embrionrias 209 6 Tipos de neurnios 276

Desenvolvimento do olho em vertebrados 279
Dinmica do desenvolvimento tico 279
Gastrulao em ourio-do-mar 210
Diferenciao da retina neural 280
Ingresso do Mesnquima Primrio 210
Primeiro estgio da invaginao do arquntero 215
Porque os bebs no enxergam bem 282
Segundo e terceiro estgios da invaginao do
Diferenciao do cristalino e da crnea 283
arquntero 217
A CRISTA NEURAL 284
Gastrulao em peixes 218
A crista neural e seus derivados 284
A transio da blstula intermediria e a aquisio
A crista neural do tronco 285
de motilidade celular 218
Vias de migrao das clulas da crista neural do
Formao das camadas germinais 220
tronco 285
Gastrulao de anfbios 221
A matriz extracelular e a migrao da crista neural
Movimentos celulares durante a gastrulao de
do tronco 287
anfbios 221
Posicionando o blastporo 224
Anlise das mutaes que afetam o desenvolvi-
Movimentos celulares e a construo do arquntero 226
mento das clulas da crista neural 290
Migrao do mesoderma involutivo 229
A potncia do desenvolvimento das clulas da crista
neural do tronco 291
Reguladores moleculares do desenvolvimento:
Diferenciao final das clulas da crista neural 292
Fibronectinas e as vias da migrao
A crista neural ceflica 293
mesodrmica 230
Vias migratrias das clulas da crista neural
Epibolia do ectoderma 232
ceflica 293
Gastrulao em aves 233
Potncia de desenvolvimento das clulas da crista
Generalidades sobre gastrulao em aves 233
neural ceflica 295
Tabela dos Contedos ix
A crista neural cardaca 296 Incio do desenvolvimento

A EPIDERME E A ORIGEM DAS ESTRUTURAS CUTNEAS 297
A origem das clulas epidrmicas 297 vertebrado: Mesoderma e
Apndices cutneos 299
Concluses 300
endoderma 341 9
Especificidade axnica 307 8 MESODERMA 341
Mesoderma dorsal: A notocorda e a diferenciao dos
somitos 341
A gerao da diversidade neuronial 307 Mesoderma Paraxial 341
Especificao do Neurnio Motor de Vertebrado 308 Somitmeros e a Iniciao da Formao do
Especificao dos Neurnios Motores em Somito 343
Drosophila 310 Gerao de Tipos de Clulas Somticas 344
Formao de padres no sistema nervoso 312 Miognese: Diferenciao do Msculo
Seleo de trajetrias: Orientao pela matriz Esqueltico 347
extracelular 313 Q Informaes adicionais & Especulaes
Orientao pelo Terreno Fsico: Orientao por Construo Muscular e a Famlia MyoD de
Contato 313 Reguladores Transcricionais 349
Orientao para Gradientes de Adeso: Osteognese: O Desenvolvimento
Haptotaxia 314 dos Ossos 351
Conduo por Sinais Migratrios especficos Q Informaes adicionais & Especulaes
do Axnio: A Hiptese das Trajetrias Controle da Condrognese na Placa de
Marcadas 315 Crescimento 357
Orientao pela Repulso Especfica de Cones de Mesoderma da Placa Lateral 358
Crescimento 317 Formao das Membranas
Q Informaes adicionais & Especulaes Extra-Embrionrias 359
Sexo,Odor e Adeso Especfica 319 O Corao 361
Seleo de trajetria: Orientao por molculas Formao dos vasos sangneos 366
difusveis 320 Q Informaes adicionais & Especulaes
Sinais para conduo mltipla 323 Redirecionando o Fluxo Sangneo no
Neurnios Motores Vertebrados 323 Mamfero Recm-nascido 372
Axnios da Retina 325 O Desenvolvimento de clulas sangneas 373
Selees de alvos 326 O Conceito de Clula-tronco 373
Especificidades Adesivas em Diferentes Regies Clulas-tronco Pluripotenciais e Microambientes
do Tectum 328 Hematopoticos 374
Seleo de endereo: Desenvolvimento dependente de Desenvolvimento Osteoclstico 377
atividade 331 Locais de Hematopoiese 378
Sobrevivncia diferencial aps a inervao: Fatores ENDODERMA 380
neurotrficos 331 Faringe 380
Q Informaes adicionais & Especulaes O tubo digestivo e seus derivados 382
Neurnios Fetais em Hospedeiros Adultos 334 Fgado, Pncreas e Vescula Biliar 382
O desenvolvimento de comportamentos: constncia e O Tubo Respiratrio 383
plasticidade 334
x Tabela dos Contedos
PARTE III Mecanismo da Diferenciao Celular

Regulao transcricional da expresso Ruptura e reorganizao de nucleossomos: o papel
dos complexos de ruptura 436
gnica: Fatores de transcrio Ruptura e reorganizao de nucleossomos: o papel
e a ativao de promotores da competio de histonas 437
especficos 391 10 Regies de controle de loco: transcrio do gene da

globina 437
xons e ntrons 392 Trocas no gene de globina 440
Estrutura e funo do promotor 394 Metilao de DNA e atividade gnica 442
Estrutura do promotor 396 Correlaes entre metilao do promotor e
Funo do promotor 397 inatividade gnica 442
Q Informaes adicionais & Especulaes Metilao e a manuteno dos padres de
RNA polimerase e os fatores trans-reguladores transcrio 443
no promotor 399 Q Informaes adicionais & Especulaes
Estrutura e funo dos intensificadores 402 Metilao e impresso gnica 444
Necessidade de intensificadores 402 Compensao de dosagem do cromossomo X de
Funo do intensificador: Modelos temporais e mamferos 446
espaciais de transcrio 403 Q Informaes adicionais & Especulaes
Fatores de transcrio: Os trans-reguladores dos O mecanismo de inativao do cromossomo X 449
promotores e dos intensificadores 404 Associao do DNA ativo com a matriz nuclear 451
Protenas de homeodomnio 405 Ligao da cromatina ativa a uma matriz nuclear 451
Os fatores de transcrio POU 406 Topoisomerases e a transcrio gnica 453
Q Informaes adicionais & Especulaes Isoladores e domnios 454
Regulao da transcrio dos genes de cadeia Resumo 455
leve das imunoglobulinas 409
Fatores de transcrio bsicos do tipo hlice-ala-
hlice 415 Controle do desenvolvimento pelo
Q Informaes adicionais & Especulaes processamento e traduo
Regulando as protenas bHLH miognicas:
Governando a troca entre proliferao e
diferenciao de clulas musculares 416
diferencial do RNA 461 12
Fatores de transcrio do zper bsico da leucina 416 CONTROLE DO DESENVOLVIMENTO PELO PROCESSAMENTO
Q Informaes adicionais & Especulaes DIFERENCIAL DE RNA 461
Armadilhas do intensificador: natural e Controle do desenvolvimento precoce pela seleo de
experimental 418 RNA nuclear 462
Fatores de Transcrio Dedo de Zinco 420 Os mecanismos de emenda de RNA: Spliceosomes 465
Receptores Nucleares de Hormnios e Seus Emenda alternativa do RNA: Criando protenas
Elementos Responsivos a Hormnios 420 alternativas a partir do mesmo gene 466
Protenas que dobram o DNA 423 Um gene, Muitas Protenas Relacionadas 466
Ativao dependente de contexto ou silenciamento 423 Processamento Alternativo de RNA e
Regulao da atividade do fator de transcrio 425 Determinao Sexual em Drosophila 468
Uso Disseminado do Processamento de RNA para
o Controle da Expresso Gnica 471
Regulao transcricional da REGULAO DA TRADUO DOS PROCESSOS
expresso gnica: A ativao da DESENVOLVIMENTAIS 471
cromatina 431 11 Mecanismos da traduo eucaritica 472

Controle da sntese protica pela longevidade diferencial
do mRNA 474
Nucleossomos e a ativao da cromatina reprimida 431 Degradao Seletiva de mRNAs 475
Acessibilidade a fatores trans-reguladores 432 Controle da traduo de mensagens do ocito 476
Stios hipersensveis DNAase I 434
Tabela dos Contedos xi
Caracterizao de RNAs Mensageiros Q Informaes adicionais & Especulaes

Armazenados em Ocitos 477 A Ativao do Genoma Embrionrio 488
Q Informaes adicionais & Especulaes Regulao dos genes da traduo em larvas e
Determinando o Destino Celular por Meio do adultos 490
mRNA Localizado do Ocito 480 Determinao de Gametas em C. elegans 490
Mecanismos para a regulao da traduo das RNA Antisenso Natural 491
mensagens dos ocitos 481 Disjuntores do Controle da Traduo 492
A Hiptese da Mensagem Materna Mascarada 482 Editorao do RNA 493
A Hiptese da Cauda Poli(A) 483 Controle da traduo e sntese protica coordenada:
A Hiptese da Eficincia da Traduo 486 Produo de Hemoglobina 494
Outros sistemas de ativao do mRNA: Mensagens Eplogo: Regulao Ps-traduo 497
sem Cap e Mensagens Seqestradas 486
PARTE IV Especificao do Destino Celular e os

Eixos Embrionrios
Especificao celular autnoma A gentica da
por determinantes especificao axial em
citoplasmticos 505 13 Drosophila 543 14
Comprometimento celular e diferenciao 505 Resumo do desenvolvimento de Drosophila 543
Pr-formao e epignese 507 AS ORIGENS DA POLARIDADE NTERO-POSTERIOR 545
Os Teratologistas Franceses 509 Viso Panormica 545
Especificaes autnomas em embries de tunicados 510 Os genes de efeito materno 546
O determinante formador de msculos do Evidncia Embriolgica da Regulao da
crescente amarelo 511 Polaridade pelo Citoplasma do Ocito 546
Especificao citoplasmtica das linhagens O Modelo Molecular: Gradientes Proticos no
endodrmicas e epidrmicas e o eixo ntero- Embrio Precoce 547
posterior 514 Q Informaes adicionais & Especulaes
Localizao citoplasmtica em embries de moluscos 515 Modelos de Gradientes da Informao
O lbulo polar 517 Posicional 551
Especificao celular no nematdeo Caenorhabditis Evidncia que o Gradiente da Protena Bicoid
elegans 521 Constitui o Centro de Organizao Anterior 552
Controle maternal da identidade do blastmero: O O Centro de Organizao Posterior: Localizando e
controle gentico das clulas progenitoras Ativando o Produto de nanos 556
farngeas de C. elegans 524 O Grupo Gene Terminal 557
Regulao em C. elegans 527 Os genes da segmentao 559
Q Informaes adicionais & Especulaes Uma Viso Panormica 559
Ser ou No Ser: Esse o Fentipo 529 Os Genes de gap 561
Divises celulares assimtricas no desenvolvimento Os Genes pair-rule 563
tardio 530 Os Genes de Polaridade Segmentar 565
Localizao citoplasmtica de determinantes de clulas Os genes de Seleo hometica 569
germinativas 531 Padres de Expresso dos Genes Hometicos 569
Determinao de clulas germinativas em Iniciando os Padres da Expresso dos genes
nematdeos 531 Hometicos 572
Determinao da clula germinativa em insetos 532 Mantendo os Padres de Expresso dos genes
Componentes do plasma polar da Drosophila 534 Hometicos 572
Determinao de clulas germinativas em Os Elementos Cis-Reguladores e o Complexo
anfbios 536 Bithorax 574
Resumo 538
xii Tabela dos Contedos
Q Informaes adicionais & Especulaes Induo de especificidade mesodrmica ventral e

Regulao Molecular do Desenvolvimento: As lateral 612
Protenas do Homeodomnio 576 A criao da atividade do organizador 613
A GERAO DA POLARIDADE DORSOVENTRAL EM Protenas secretadas do organizador 613
DROSOPHILA 577 Q Informaes adicionais & Especulaes
A protena Dorsal: Morfgeno para a polaridade BMP4 e a lagosta de Geoffroy 616
dorsoventral 577 Fatores de transcrio induzidos no
Translocao da Protena Dorsal 577 organizador 619
Provendo o sinal assimtrico para a translocao da Q Informaes adicionais & Especulaes
protena Dorsal 578 Como o Organizador Neuraliza o
Sinal do Ncleo do Ocito para as Clulas Ectoderma? 621
Foliculares 578 A especificidade regional de induo 621
Sinalizao das Clulas Foliculares para o A determinao das diferenas regionais 621
Citoplasma do Ocito 580 O modelo do duplo gradiente 623
O Estabelecimento do Gradiente da Protena Correlatos moleculares da caudalizao
Dorsal 581 neural 624
PRIMRDIOS DE RGOS E EIXOS 585 Q Informaes adicionais & Especulaes
O modelo de coordenadas cartesianas e a especificao Sinais verticais e horizontais do
dos primrdios dos rgos 585 organizador 626
Resumo: Alguns princpios do desenvolvimento da Genes homeobox na especificao neural 628
Drosophila 586 Competncia e cascatas indutivas 628
Especificao do destino celular Estabelecimento dos eixos

por interaes clula-clula corporais em mamferos
progressivas 591 15 e aves 635 16
Desenvolvimento regulativo 591 Iniciando o eixo ntero-posterior 635
Testando a teoria do plasma germinativo 592 Estabelecendo um Centro de Nieuwkoop 635
August Weismann: A teoria do plasma Expresso Gnica em Tecidos Organizadores 636
germinativo 592 Especificando o eixo ntero-posterior de mamfero: A
Wilhelm Roux: Desenvolvimento em mosaico 593 hiptese do cdigo Hox 637
Hans Driesch: Desenvolvimento Regulativo 594 Homologia dos Complexos de Genes Hometicos
Sven Hrstadius: Potncia e gradientes em ocitos 597 entre Drosophila e Mamferos 637
Formao de um organismo integrado: Restringindo Expresso de Genes Hox no Sistema Nervoso
a potncia das clulas vizinhas 598 Central e seus Derivados 638
Regulao durante o desenvolvimento de anfbios 600 Anlise Experimental de um Cdigo Hox: Gene
Hans Spemann: Determinao progressiva das Alvo 640
clulas embrionrias 600 Transformao Parcial de Segmentos por
Hans Spemann e Hilde Mangold: Induo Eliminao de Genes Hox Expressos no
embrionria primria 603 Tronco 642
O centro de Nieuwkoop 606 Anlise Experimental do Cdigo Hox: Teratognese
A formao do centro de Nieuwkoop e a polaridade do cido Retinico 643
mesodrmica 606 Evidncia para um Cdigo Hox da Anatomia
A especificao da polaridade dorsoventral na Comparada 645
fertilizao 607 Q Informaes adicionais & Especulaes
A base molecular da induo mesodrmica 609 Animais como Variaes sobre o Mesmo Tema
Estabelecendo a regionalizao dorsal: o possvel Desenvolvimental 646
papel da -catenina 609 Eixos dorsoventral e esquerdo-direito em mamferos e
O funcionamento do centro de Nieuwkoop: funes aves 647
para Vg1 e Noggin 610
Tabela dos Contedos xiii
PARTE V Interaes Celulares Durante a

Formao do rgo
Interaes proximais de tecidos: de crescimento dos fibroblastos como
Induo secundria 655 17 indutores do broto do membro 704

Induo da crista ectodrmica apical 704
Produo do eixo prximo-distal dos membros 706
Interaes instrutivas e permissivas 655 A crista ectodrmica apical: O componente
Competncia e receptores 656 ectodrmico 706
Fatores parcrinos 657 A zona progressiva: O componente mesodrmico 708
Os Fatores de Crescimento Fibroblstico 658 Genes Hox e a especificao do eixo prximo-
A famlia hedgehog 659 distal do membro 709
A famlia Wnt 660 Interaes entre a AER e a zona progressiva 711
A superfamlia TGF- 661 Mutaes nas interaes entre a zona progressiva
Sinalizao Justcrina 662 e a AER 711
Interaes epitlio-mesnquima 663 Q Informaes adicionais & Especulaes
Especificidade Regional da Induo 663 A regenerao dos membros da salamandra e a
Especificidade Gentica da Induo 666 reteno do eixo prximo-distal 714
Cascatas de induo embrionria: Induo do cristalino 667 Especificao do eixo ntero-posterior dos membros 716
Os Fenmenos da Induo do Cristalino 667 A zona de atividade polarizante 716
A Base Celular da Induo do Cristalino 668 Sonic hedgehog como definidor da ZPA 717
Formao da Crnea 672 Interaes entre a AER e a ZPA para integrar
Formao de rgos parenquimatosos 672 crescimento e padro 718
Morfognese do Rim de Mamfero 673 Especificando a ZPA 721
Os Mecanismos da Organognese Renal 676 A produo do eixo dorsoventral 721
Q Informaes adicionais & Especulaes Distinguindo o membro anterior do membro posterior 722
Diferenciao Coordenada e Morfognese no Q Informaes adicionais & Especulaes
Dente 682 Lies de limbless 724
Mecanismos de ramificao na formao de rgos Morte celular e a formao de dgitos 724
parenquimatosos 683 Q Informaes adicionais & Especulaes
A Matriz Extracelular como um Elemento Crtico Evoluo do membro tetrpode 726
na Ramificao 684
Fatores Parcrinos Efetuando Padres de
Ramificao 686 Interaes celulares distncia:
Induo ao nvel de uma nica clula 687 Hormnios como mediadores do
Q
Induo Vulvar no Nematide Caenorhabditis
elegans 690
Informaes adicionais & Especulaes
desenvolvimento 733 19
Interaes Clula-Clula e Possibilidade na Metamorfose: o direcionamento hormonal do
Determinao de Tipos Celulares 692 desenvolvimento 733
Metamorfose anfbia 734
Controle hormonal da metamorfose de anfbios 735
Desenvolvimento do membro
de tetrpode 701 18 Q
Respostas Moleculares aos Hormnios da Tireide
Durante a Metamorfose 740
Informaes adicionais & Especulaes
Padronizao no membro 701 Heterocronia 743
Formao do broto do membro 702 Metamorfose em insetos 746
O campo do membro 702 Everso e Diferenciao dos Discos Imaginais 746
Especificao dos campos do membro: Genes Q Informaes adicionais & Especulaes
Hox e cido retinico 703 A determinao dos discos imaginais da perna
Crescimento do broto de membro precoce: fatores e da asa 750
Remodelao do sistema nervoso 753
xiv Tabela dos Contedos
Controle Hormonal da Metamorfose de Insetos 754 Hermafroditismo 795

A biologia Molecular da Atividade da Hermafroditismo no Nematide C. elegans 795
Hidroxiecdisona 757 Hermafroditismo em Peixes 797
Q Informaes adicionais & Especulaes Determinao ambiental do sexo 798
Controle ambiental sobre a forma e a funo da Determinao Sexual Dependente de Temperatura
larva 761 em Reptis 798
Interaes hormonais mltiplas no desenvolvimento da Determinao Sexual Dependente da Localizao
glndula mamria 762 em Bonellia viridis e Crepidula fornicata 799
Estgio embrionrio 762 Resumo 800
Adolescncia 765
Gravidez e lactao 765 Regulao ambiental do
Determinao do sexo 773 20 desenvolvimento animal 805 21
REGULAO AMBIENTAL DO DESENVOLVIMENTO NORMAL 806
Determinao cromossmica do sexo em mamferos 774
Sugestes ambientais usadas pelos organismos para
Determinao Sexual Primria 774
completar seus desenvolvimentos 806
Determinao Secundria do Sexo 774
A colonizao larval 806
As Gnadas em Desenvolvimento 775
Refeies de sangue 808
Determinao sexual primria dos mamferos: Genes
Simbiose no desenvolvimento 808
cromossmicos Y para a determinao dos
Diferenas ambientais previsveis como sugestes para o
testculos 777
desenvolvimento 810
SRY: O Determinante Sexual do Cromossomo Y 778
Sazonalidade e sexo: Afdios e Volvox 810
Determinao sexual primria em mamferos: Genes
Diapausa 812
autossmicos na determinao de testculos 780
Plasticidade fenotpica: Polifenismo e regras de
SOX9: Reverso Autossmica na Displasia
reao 813
Campomlica 780
Polifenismo sazonal em borboletas 814
SF1: A Ligao Entre SRY e as Trajetrias
Polifenismo nutricional 816
Desenvolvimentais Masculinas 780
Determinao sexual dependente do ambiente 817
Determinao sexual primria em mamferos:
Fatores ambientais imprevisveis controlando o
Desenvolvimento ovariano 781
desenvolvimento animal 818
DAX1: Um Potencial Gene Determinante de Ovrio
Defesas induzveis contra a predao 819
no Cromossomo X 781
Plasticidade fenotpica e mudanas no ambiente 820
Wnt4a: Um Potencial Gene Determinante de
Ovrio em um Autossomo 781
Assimilao Gentica 821
Determinao sexual secundria em mamferos 782
A contnua plasticidade do desenvolvimento 822
Regulao Hormonal do Fentipo Sexual 782
O sistema imune: Desenvolvimento no adulto 822
Testosterona e Diidrotestosterona 783
Aprendizado: Um sistema nervoso adaptvel ao
Hormnio Anti-Mlleriano 784
ambiente 823
O Sistema Nervoso Central 785
DISTRBIOS AMBIENTAIS DO DESENVOLVIMENTO NORMAL 827
Malformaes e distrbios 827
O Desenvolvimento de Comportamentos
Agentes teratognicos 828
Sexuais 787
cido retinico como um teratognico 829
Determinao sexual cromossmica em Drosophila 788
Talidomida como um teratognico 830
A Via do Desenvolvimento Sexual 788
lcool como um teratognico 833
O Gene Sex-lethal como o Piv para a
Outros agentes teratognicos 835
Determinao do Sexo 790
Os Genes transformer 793
Estrgenos Ambientais 836
doublesex: O Gene Comutador da Determinao
Interaes gentica-ambiental 837
Sexual 793
Resumo 837
Genes-alvo para a Cascata de Determinao
Sexual 794
Tabela dos Contedos xv
A saga da linhagem Mecanismos desenvolvimentais

germinativa 843 22 da mudana evolucionria 883 23
Migrao das clulas germinativas 843 Unidade de Tipo e Condies de Existncia 883
Migrao das Clulas Germinativas em A Sntese de Charles Darwin 883
Anfbios 843 E. B.Wilson e F. R. Lillie 885
Migrao das Clulas Germinativas em A evoluo do desenvolvimento precoce: E. Pluribis
Mamferos 844 Unum 885
Q Informaes adicionais & Especulaes A emergncia dos embries 885
Teratocarcinomas e Clulas-Tronco Formao de um Novo Filo: Modificando os
Embrionrias 847 Caminhos do Desenvolvimento 887
Migrao de Clulas Germinativas em Aves e Modularidade: O pr-requisito para mudana evolutiva
Rpteis 848 atravs do desenvolvimento 891
Migrao de Clulas Germinativas Primordiais em Modularidade 891
Drosophila 849 Dissociao: Heterocronia e Alometria 891
Meiose 850 Duplicao e Divergncia 893
Q Informaes adicionais & Especulaes Co-opo 894
Grandes Decises: Mitose ou Meiose? Progresso correlacionada 896
Espermatozide ou vulo? 853 Restries ao desenvolvimento 898
Espermatognese 855 Restries Fsicas 898
Espermiognese 857 Restries Morfogenticas 898
Q Informaes adicionais & Especulaes Restries Filticas 899
Expresso Gnica Durante o Desenvolvimento Evoluo Conjunta do Ligante e Receptor:
do Espermatozide 858 Isolamento Reprodutivo 901
Oognese 860 O mecanismo gentico do desenvolvimento da
Meiose oognica 860 mudana evolucionria: Genes reguladores
Maturao do Ocito em Anfibios 861 homlogos 902
Concluso da meiose: Progesterona e Pax6 e o desenvolvimento do olho 902
Fecundao 864 BMP4 e a Morfognese dos Membros 904
Transcrio Gnica em Ocitos 865 Genes Hox e a Evoluo dos Vertebrados 905
Oognese Merostica em Insetos 867 Genes Hox e a Evoluo dos Artrpodes 907
Q Informaes adicionais & Especulaes Caminhos homlogos do desenvolvimento 909
A Origem dos Eixos Embrionrios de Criando novos tipos de clulas: O mistrio evolucionrio
Drosophila Durante a Oognese 869 bsico 911
Oognese em Mamferos 870 Uma nova sntese evolucionria 912
O Reincio da Meiose nos Ocitos de Fontes Para as Citaes das Aberturas
Mamferos 875
dos Captulos C-1
ndice de Autores IA-1
ndice de Assuntos IA-2
ndice de Abreviaturas IA-3
Prefcio
O s ltimos anos do sculo 20 encontram a biologia do desenvolvi-

mento retornando posio que ela ocupou no incio do sculo: a
disciplina que unifica os estudos da hereditariedade, evoluo e
fisiologia. Em 1896, a primeira edio de B. Wilson do The Cell in Development
and Inheritance anunciou a verdade maravilhosa que uma nica clula pode
conter em seu interior sua extenso microscpica da soma-total da herana
das espcies. Hoje, a biologia do desenvolvimento est na vanguarda desse
estudo de nossa herana natural. Nos seus aspectos moleculares, ela toca a
qumica fsica na sua investigao dos mecanismos bioqumicos pelos quais
protenas diferentes so produzidas em clulas diferentes do mesmo geno-
ma. Ela tambm est na liderana dos estudos evolucionrios que procuram
entender como mudanas macroevolucionrias ocorreram. Ela abriu recen-
temente uma rea nova da biologia do desenvolvimento ecolgico, onde mu-
danas ambientais so vistas criando alteraes no desenvolvimento do
organismo. Durante os ltimos 3 anos, a biologia do desenvolvimento tam-
bm expandiu para a medicina, fundindo-se com a gentica clnica para criar
uma cincia revitalizada da embriologia humana, uma cincia que j se
tornou importante na explanao das malformaes congnitas.
A quinta edio do Biologia do Desenvolvimento foi revisada e reescrita
para refletir essas revolues que esto acontecendo. Aconteceram quatro
mudanas importantes na estrutura do livro desde sua ltima edio. Pri-
meiro, tornou-se impossvel discutir os princpios fundamentais da em-
briologia sem o conhecimento da atividade gnica ou vias da transduo de sinais.
Portanto, essa informao foi trazida dentro da seo introdutria do livro
de modo que interaes celulares, tais como fertilizao e induo, podem
ser apreciadas tanto no mbito molecular quanto no morfolgico.
Segundo, novo interesse nos efeitos do ambiente no desenvolvimento
normal e anormal conduziu a um novo captulo. O Captulo 21, Regulao
Ambiental do Desenvolvimento Animal, diz respeito s vias pelas quais o
meio ambiente afeta o fentipo do organismo. Interesse na proteo ambiental
e em controvrsias envolvendo a possibilidade de poluentes teratognicos
foraram uma nova percepo das influncias que o meio ambiente repre-
senta no desenvolvimento normal e anormal. Na verdade, os biologistas do
desenvolvimento podem rapidamente encontrar-se frente dos movimen-
tos da conservao ecolgica. As primeiras quatro edies deste livro bus-
caram integrar abordagens molecular, celular e orgnica biologia do de-
senvolvimento; esta edio adiciona a dimenso ecolgica.
Terceiro, esta edio introduz novas nfases nos papis dos fatores
parcrinos no desenvolvimento. No somente os estudos da transduo
de sinais esto colocados na seo introdutria deste livro, como a Parte V
Prefcio xvii
da Quinta Edio inicia com uma viso geral das famlias do fator de cres-
cimento fibroblstico, TGF-, Wnt e Hedgehog dos fatores de crescimento
e diferenciao.
Quarto, este livro est conectado a um website onde estudantes e pro-
fessores podem encontrar mais material em muitos tpicos selecionados.
Tal material inclui (1) detalhes de experimentos que so extremamente
especializados para serem colocados no texto, (2) informao histrica so-
bre reas particulares da biologia do desenvolvimento e personalidades
envolvidas, (3) implicaes mdicas de fenmenos particulares do desen-
volvimento, (4) debates ou comentrios em questes relevantes para o cam-
po, e (5) atualizaes do material do texto nessa rea da biologia de cresci-
mento cada vez mais rpido. Filmes e entrevistas gravadas esto includas
e esses artigos de destaque podero ser expandidos medida que a tecnologia
os tornar mais fceis para serem usados. Esse website est conectado tam-
bm a outros websites e podem ser usados para enriquecer a perspectiva de
algum sobre o que est acontecendo no desenvolvimento animal. A presen-
a de um website nos permite manter o direcionamento deste livro s pesso-
as para as quais isso foi originalmente pretendido: estudantes dos ltimos
anos da graduao e do incio da ps-graduao. Ele tambm me ajudou a
no deixar o livro tornar-se um substituto para peso de papel.
A viso de Roux foi que a biologia do desenvolvimento algum dia cons-
tituiria a base de todas as outras disciplinas biolgicas e, em continuada
simbiose com essas disciplinas, desempenharia uma parte proeminente nas
solues dos problemas da vida. Essas foram palavras audaciosas, at mes-
mo arrogantes h cem anos atrs; hoje, elas expressam uma aceitao ampla-
mente sustentada. O desenvolvimento integra todas as reas da biologia e
desempenha um papel crucial em relacionar o gentipo ao fentipo. O desen-
volvimento pode ser estudado usando qualquer organismo e em qualquer
nvel de organizao, de molculas a filos.
medida que o campo continuar a se expandir e se aprofundar , uma
palavra de advertncia requerida: a biologia do desenvolvimento no pode
ser aprendida ou ensinada em um nico semestre. Este texto uma tentati-
va para prover cada pessoa com material suficiente para seu curso, mas um
instrutor no necessita se sentir culpado por no determinar todos os cap-
tulos, e os estudantes no necessitam se sentir privados se eles no lerem
todos os captulos. Isto o comeo do caminho, no sua concluso.
Como usar o website

Qualquer pessoa pode entrar no website atravs de sua homepage
[http://zygote.swarthmore.edu/index.html] ou atravs da sua lista de ar-
quivos de captulos localizada no [http://zygote.swarthmore.edu/info.html].
Alternativamente, ns colocamos acessos especficos endereados em todo
o livro onde quer que exista uma entrada relevante no momento da publica-
o. Todos esses endereos comeam com [http://zygote.swarthmore.edu/]
e so seguidos por um cdigo dado no livro texto. Assim, a localizao
especificada na pgina 20 do livro :
http://zygote.swarthmore.edu/intro2.html
Mais localizaes esto sendo adicionadas no website, e essas podem

ser acessadas entrando nos arquivos do captulo. Em adio, clicando no
boto Outros Arquivos abaixo de cada captulo, as conexes para outros
websites sero facilitadas. Divirta-se.
xviii Prefcio
Agradecimentos
Esta edio, como suas precursoras, deve muito s sugestes e crticas dos
estudantes em minhas classes de biologia do desenvolvimento e gentica
do desenvolvimento. O grupo de funcionrios e docentes extremamente
corporativo da Universidade Swarthmore tambm desempenharam pa-
pis importantes na produo deste livro, e os bibliotecrios da rea de
cincia E. Horikawa e M. Spencer merecem agradecimentos especiais por
terem segurado volumes recentes na biblioteca enquanto eu estava escre-
vendo o livro. Os cientistas que revisaram estes captulos forneceram enor-
me ajuda tanto na preciso tcnica dos captulos quanto nas sugestes
para trabalho futuro. Esses investigadores incluem: S. Carroll, J. Cebra-
Thomas, E. M. De Robertis, S. DiNardo, E. Eicher, C. Emerson, G. Grunwald,
D. J. Grunwald, M. Hollyday, L. A. Jaffe, W. Katz, R. Keller, K. Kemphues, D.
Kirk, G. Martin, H. F. Nijhout, D. Page, R. Raff, R. Schultz, C. Stern, S.
Tilghman, R. Tuan e M. Wickens. Eu tambm quero agradecer aos muitos
cientistas que desviaram do seu caminho para ajudar a tornar esta edio
melhor lendo pores especficas dos captulos. Eles incluem: M. Bronner-
Fraser, J. Fallon, N. M. Le Douarin, E. McCloud, J. Opitz, K. Sainio, H. Sariola,
I. Thesleff e T. Valente. Se eu deixei algum fora, por favor me desculpem.
desnecessrio dizer que os julgamentos editoriais finais foram de minha
responsabilidade. Meus agradecimentos especiais a Judy Cebra-Thomas
que no somente me aconselhou em certos captulos mas quem deu exce-
lente ajuda durante meu perodo sabtico permitindo-me terminar este
livro. Agradecimentos tambm aos cientistas e filsofos, especialmente: C.
van der Weele, R. Amundson, L. Nyhart, R. Burian, H. F. Nijhout, A. F.
Sterling, K. Smith e A. I. Tauber, que participaram nos workshops de biolo-
gia do desenvolvimento da Sociedade Internacional para a Histria, Filo-
sofia e Estudos Sociais da Biologia. Algumas das melhores crticas cons-
trutivas deste livro-texto vieram dessas pessoas.
Andy Sinauer uma vez mais conseguiu reunir as mesmas e extraor-
dinrias pessoas neste projeto, e foi um privilgio trabalhar com eles. Meus
agradecimentos a ele e aos editores Nan Sinauer e Carol Wigg, coordenador
de produo Chris Small, artistas John Woolsey e Gary Welch, designer
Susan Schmidler, editor de texto Janet Greenblatt, e artista de layout Janice
Holabird. As habilidades editoriais de Tinsley Davis so extremamente re-
conhecidas. Devido ao fato de que os prazos finais devem ser cumpridos e
outro trabalho posto de lado, eu tenho que agradecer minha famlia por
mais uma vez me permitir prosseguir com isso. Em particular, este livro
nunca poderia ter sido completado se no fosse pelo encorajamento de mi-
nha esposa, Anne Raunio, que, como uma obstetra, gosta do lado mais pr-
tico da biologia do desenvolvimento. Meus agradecimentos a todos vocs.
SCOTT F. GILBERT
1 DE MARO DE 1997
Introduo Biologia
do Desenvolvimento
1 Introduo ao desenvolvimento animal 1
2 Genes e desenvolvimento: Introduo e tcnicas 35
3 Base celular da morfognese: Afinidade celular diferencial 79
I
CAPTULO 1 Introduo ao Desenvolvimento Animal 1
Introduo ao desenvolvimento animal

1
O
A natureza parece nunca mudar, ainda que CONCEITO DE EMBRIO assombroso, e a formao de um embrio a
sua aparncia esteja sempre mudando. tarefa mais rdua que algum haver de realizar. Para se tornar um embrio,
nosso dever como artistas transmitir junta- voc teve que construir a si mesmo a partir de uma nica clula. Teve que
mente com todos os seus elementos a emo- respirar antes que tivesse pulmes, digerir alimentos antes que seus rgos estives-
o dessa permanente transformao.
sem formados, construir ossos a partir de uma massa e ordenar os neurnios antes
Paul Cezanne (ca. 1900)
mesmo de adquirir a capacidade de pensar. Uma diferena marcante entre voc e a
mquina que a mquina nunca requisitada para uma funo antes que esteja
Feliz a pessoa que consegue discernir as
causas das coisas. terminada. Todo animal tem que estar em funcionamento enquanto se auto-constri.
Virglio (37 A.C.)
O objetivo da biologia do desenvolvimento
Para plantas e animais, o nico caminho para o desenvolvimento a partir de uma clula,
desenvolvendo um embrio. O embrio o intermedirio entre o gentipo e o fentipo,
ou seja, entre os genes herdados e o organismo adulto. Enquanto a maior parte da
biologia estuda a estrutura adulta e funo, a biologia do desenvolvimento encontra
maior interesse nos estgios mais transitrios. Biologia do desenvolvimento a cin-
cia do vir a ser, a cincia do processo. Dizer que um inseto efmero vive apenas um dia
no significa nada para um biologista do desenvolvimento, porque o inseto pode ser
adulto apenas por um dia, mas passou outros 364 dias como um embrio e larva.
As questes levantadas por um biologista do desenvolvimento so freqente-
mente questes mais ligadas ao vir a ser do que ao ser propriamente dito. Dizer que
mamferos XX so geralmente fmeas e mamferos XY so geralmente machos, no
explica a determinao sexual para um biologista do desenvolvimento. Esse quer sa-
ber como o gentipo XX produz um ser feminino e como o gentipo XY produz um ser
masculino. Da mesma maneira, um geneticista gostaria de saber como os genes globina
so transmitidos de uma gerao outra, e um fisiologista pode fazer perguntas sobre
a funo da globina no corpo. Porm, o biologista do desenvolvimento pergunta
porque os genes globina se expressam somente nas hemcias e como essas se tornam
ativas apenas em certas fases do desenvolvimento (ainda no sabemos as respostas).
Biologia do desenvolvimento uma cincia excelente para pessoas que querem
integrar diferentes nveis da biologia. Diante de um problema, podemos estud-lo a
1
2 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
nveis molecular e qumico (p. ex., Como os genes globina so transcritos, e como os
fatores que ativam sua transcrio interagem uns com os outros e com o DNA?), a nveis
celular e tissular (p. ex., Quais so as clulas capazes de produzir globina, e como o
mRNA da globina deixa o ncleo?), a nvel de rgos ou sistema de rgos (p. ex., Como
vasos capilares so formados em cada tecido, e como so instrudos a se conectarem e
ramificarem?) e, at mesmo, a nveis ecolgicos e evolucionrios (p. ex., Como diferenas
na ativao do gene globina permitem o fluxo de oxignio da me para o feto, e como
fatores ambientais acionam a diferenciao de mais hemcias?). Biologistas do desen-
volvimento podem estudar qualquer organismo e todo tipo de clula.
Biologia do desenvolvimento um dos campos que mais tem crescido e tambm
um dos mais emocionantes da biologia. Parte dessa emoo vem dos assuntos estu-
dados, porque estamos apenas comeando a entender o mecanismo molecular do
desenvolvimento animal. Outra parte da emoo vem do papel unificador que a biolo-
gia do desenvolvimento assume nas cincias biolgicas. A biologia do desenvolvi-
mento est criando uma estrutura que integra a biologia molecular, fisiologia, biologia
celular, anatomia, pesquisa do cncer, neurobiologia, imunologia, ecologia, e biologia
evolucionria. O estudo do desenvolvimento tornou-se essencial para a compreenso
de qualquer rea da biologia.
Os problemas da biologia do desenvolvimento

O desenvolvimento realizado por duas funes principais: gera diversidade e ordem
celular dentro de cada gerao, o que assegura a continuidade da vida que passa de
uma gerao outra. Assim, existem duas questes fundamentais para a biologia do
desenvolvimento: Como um ovo fertilizado origina um ser adulto, e como esse ser
adulto produz um outro ser? Cada espcie tem suas prprias respostas, mas algumas
generalizaes podem ser feitas. Tradicionalmente, essas questes tm sido subdivi-
didas em quatro problemas gerais da biologia do desenvolvimento:
O problema da diferenciao. Uma nica clula, o ovo fertilizado, se desen-
volve e gera centenas de clulas de diferentes tipos - clulas musculares,
clulas epidrmicas, neurnios, linfcitos, clulas do sangue, clulas gorduro-
sas, e assim por diante. Essa gerao de diversidade celular chamada diferen-
ciao. Desde que cada clula do corpo contm o mesmo conjunto de genes,
precisamos entender como esse mesmo conjunto de instrues genticas pode
produzir diferentes tipos de clulas.
O problema da morfognese. Nossas clulas diferenciadas no so distribu-
das aleatoriamente; pelo contrrio, so organizadas em intrincados tecidos e
rgos. Esses rgos esto dispostos de tal maneira que: dedos esto nas
pontas e no no meio de nossas mos, os olhos esto na nossa cabea e no
nos ps ou intestinos. Essa criao de forma ordenada, chamada morfogne-
se. Como as clulas se auto-organizam e formam um arranjo correto?
O problema do crescimento. Somos maiores do que um ovo, mas como as
clulas sabem quando devem parar de se dividir? Se cada clula de nossa face
realizasse mais uma diviso celular, seramos considerados horrivelmente mal
formados. Se cada clula de nossos braos tivesse realizado apenas mais uma
srie de divises, poderamos amarrar nossos sapatos sem nos abaixar.
O problema da reproduo. O espermatozide e o vulo so clulas muito
especializadas. Somente eles podem transmitir instrues para produzir um
organismo de uma gerao para outra. Como essas clulas so separadas para
formar a prxima gerao, e quais as informaes no ncleo e no citoplasma
que permitem tal funcionamento?
Recentemente, tem-se dado grande nfase a um quinto problema:
O problema da evoluo. A evoluo envolve mudanas herdadas durante o
desenvolvimento. Quando dizemos que o cavalo de um dedo s de hoje, teve
um ancestral de cinco dedos, estamos dizendo que mudanas no desenvolvi-
mento da cartilagem e dos msculos ocorreram ao longo de muitas geraes de

embries nos ancestrais do cavalo. Como mudanas no desenvolvimento cri-
am novas formas de corpo? Quais modificaes hereditrias so possveis,
dadas as restries impostas pela necessidade do organismo sobreviver en-
quanto se desenvolve?
Os estgios do desenvolvimento animal

De acordo com Aristteles, o primeiro grande embriologista da histria, a cincia
comea com a curiosidade: graas a curiosidade que as pessoas comearam a
filosofar, e a curiosidade permanece desde o incio do conhecimento. O desenvolvi-
mento de um ser a partir do ovo tem sido motivo de admirao atravs da histria da
humanidade. O simples procedimento de se abrir um ovo de galinha a cada dia do seu
perodo de incubao de trs semanas proporciona uma notvel experincia quando
se observa desde uma fina camada de clulas at o total desenvolvimento da ave.
Aristteles realizou esse procedimento e observou a formao dos principais rgos.
Qualquer um pode se admirar com esse fenmeno, ainda que ordinrio, mas cientistas
so os que procuram descobrir como o desenvolvimento realmente ocorre. E ainda
mais do que dissipar essa admirao, novo conhecimento s faz aument-la.
Organismos pluricelulares no se formam de imediato, ao contrrio, so formados
por um processo relativamente lento de mudana progressiva, o qual chamamos de
desenvolvimento. Em quase todos os casos, o desenvolvimento de um organismo
pluricelular comea com uma nica clula - ovo fertilizado ou zigoto, que dividido
atravs da mitose, produz todas as clulas do corpo. O estudo do desenvolvimento
animal tem sido tradicionalmente chamado de embriologia, se referindo ao fato de que
entre a fertilizao e o nascimento, o organismo em desenvolvimento conhecido
como embrio. Mas o desenvolvimento no cessa no nascimento, ou mesmo na vida
adulta, porque a maioria dos organismos nunca pra de se desenvolver. A cada dia ns
repomos mais de um grama de clulas de pele (fazendo com que as clulas mais velhas
se desprendam assim que nos movemos), e nossa medula ssea sustenta o desenvol-
vimento de milhes de novos eritrcitos a cada minuto de nossas vidas. Portanto, nos
ltimos anos tem sido comum se falar em biologia do desenvolvimento, como a discipli-
na que estuda processos embrionrios e outros do desenvolvimento.
As principais caractersticas do desenvolvimento animal esto ilustrados na Figu-
ra 1.1. A vida de um novo indivduo iniciada pela fuso do material gentico de dois
gametas, o espermatozide e o vulo. Essa fuso, chamada fertilizao, estimula o
ovo a iniciar o desenvolvimento. Os estgios subseqentes do desenvolvimento so
coletivamente chamados de embriognese. Por todo reino animal existe uma incrvel
variedade de tipos embrionrios, mas a maioria dos padres de embriognese compre-
ende variaes em quatro temas:
1. Ocorrncia de clivagem imediatamente aps a fertilizao. Clivagem uma

srie de divises mitticas extremamente rpidas, onde o enorme volume cito-
plasmtico do zigoto dividido em numerosas clulas menores. Essas clulas
so chamadas blastmeros e, ao fim da clivagem, eles geralmente formam uma
esfera conhecida como blstula.
2. Aps a reduo na taxa de diviso mittica, os blastmeros passam por
mudanas dramticas quanto s suas posies, um em relao ao outro. Essa
srie de redistribuio de clulas chamada de gastrulao. Como resultado
da gastrulao, o embrio tpico contm trs regies celulares chamadas
camadas germinativas*. O ectoderma, a camada exterior, produz as clulas
da epiderme e do sistema nervoso; o endoderma, camada interior, produz o
*Do Latim germen, significa broto ou rebento (a mesma raiz da palavra germinao). Os
nomes das trs camadas germinativas so do Grego: ectoderma de ektos (fora) mais derma
(pele); mesoderma de mesos (meio) e endoderma de endon (dentro).
Esperma-
tozide
Mrula
Blstula
Ocito Local das clulas
embrionrias
Clula germinativa
(Germ plasm)
Esperma- Blastocele
tozide
(gameta Ocito
masculino) (gameta
feminino)
GAMETOGNESE
Adulto
sexualmente maduro
Blastporo
Ectoderma
Gnada
Mesoderma
Estgios
Endoderma
larvais
imaturos
INCUBAO (NASCIMENTO)
Figura 1.1
Histrico do desenvolvimento de um repre-
sentante animal, um sapo. Estgios que vo
da fertilizao at o nascimento so coletiva-
mente conhecidos como embriognese. As
regies responsveis por produzir clulas em-
brionrias so mostradas em cores. Gameto-
gnese, que completa no adulto sexualmen-
te maduro, comea em pocas diferentes, de-
pendendo da espcie. revestimento do tubo digestivo e rgos associados (pncreas, fgado, pul-
mes, etc.); e o mesoderma, camada do meio, d origem a diversos rgos
(corao, rins, gnadas), tecidos conjuntivos (ossos, msculos, tendes, va-
sos sangneos) e clulas sangneas.
3. Uma vez que as trs camadas embrionrias esto estabelecidas, as clulas
interagem umas com as outras e se reorganizam para produzir tecidos e rgos.
Esse processo chamado organognese. (Nos vertebrados, a organognese
iniciada quando uma srie de interaes celulares induzem as clulas ectodr-
micas da poro mediana do dorso a formar o tubo neural. Esse tubo originar
o crebro e a coluna vertebral). Muitos rgos contm clulas de mais de uma
camada embrionria, e no incomum o exterior de um rgo ser derivado de
uma determinada camada e o interior de outra. Tambm durante a organognese,
algumas clulas sofrem longas migraes do seu lugar de origem at sua loca-
lizao final. Essas clulas migrantes incluem os precursores das clulas san-
gneas, clulas linfticas, clulas pigmentadas e gametas. A maior parte dos
ossos de nossa face so provenientes de clulas que migraram ventralmente
da regio dorsal da nossa cabea.
4. Como observado na Figura 1.1, em muitas espcies, uma parte especializada
do citoplasma do ovo d origem s clulas que so precursoras dos gametas.
Essas clulas so chamadas de clulas germinativas, sendo destinadas
funo reprodutiva. Todas as outras clulas do corpo so chamadas clulas
somticas. Essa separao entre clulas somticas (que do origem a um
corpo individual) e clulas germinativas (que contribuem para a formao de
uma nova gerao) freqentemente uma das primeiras diferenciaes que
ocorrem durante o desenvolvimento animal. As clulas germinativas final-
mente migram para as gnadas, onde se diferenciam em gametas. O desen-
volvimento de gametas, chamado de gametognese, normalmente no com-
pletado at que o organismo tenha se tornado fisicamente maduro. Na matu-
ridade, os gametas podem ser liberados e participar de uma fertilizao dando
incio a um novo embrio. O organismo adulto finalmente sofre envelheci-
mento e morre.
Nossa herana eucaritica

Os organismos esto divididos em dois grupos principais, dependendo apenas se
as clulas possuem um envoltrio nuclear ou no. Os procariotos (do grego karion,
significa ncleo), onde esto includas as arqueobactrias e as eubactrias, no
possuem um ncleo verdadeiro. Os eucariotos que incluem os protistas, animais,
plantas e fungos, possuem um tegumento nuclear bem formado circundando os
seus cromossomos. Essa diferena fundamental entre os eucariotos e procariotos
influencia a maneira como esses grupos organizam e utilizam seu material gentico.
Em ambos os grupos, a informao herdada necessria para o seu desenvolvimento
e metabolismo se encontra codificada nas sequncias de cido desoxirribonuclico
(DNA) dos cromossomos. Os cromossomos procariticos normalmente so hlices
duplas de DNA, pequenas e circulares consistindo de aproximadamente 1 milho de
pares de bases. As clulas eucariticas geralmente possuem diversos cromosso-
mos, e um simples protista eucaritico possui 10 vezes, ou mais, a quantidade de
DNA encontrada na maioria dos procariotos complexos. Alm disso, a estrutura de
um gene eucaritico mais complexa do que a de um gene procaritico. A seqncia
de aminocidos de uma protena procaritica a reflexo direta da seqncia de
DNA do cromossomo. O DNA de um gene eucaritico que codifica uma protena,
geralmente, dividido de tal forma que a seqncia completa de aminocidos da
protena derivada de segmentos descontnuos de DNA (Figura 1.2). O DNA entre
os segmentos freqentemente contm seqncias que esto envolvidas na regulao
do momento e lugar em que o gene ativado.
Cromossomos eucariticos tambm so muito diferentes dos cromossomos
procariticos. O DNA eucaritico reveste complexos proticos especficos, chamados
nucleossomos, compostos por protenas histonas. Os nucleossomos organizam o
DNA em estruturas compactas e so importantes na designao de qual gene ir se
expressar em qual clula. Nas bactrias no existem histonas. Mais ainda, clulas
eucariticas sofrem mitose, na qual o tegumento nuclear se parte e os cromossomos
replicados so igualmente divididos entre as clulas filhas (Figura 1.3). Nos procariotos,
a diviso celular no mittica; no se desenvolve o fuso mittico e, tambm, no
existe tegumento celular para se partir. Ao invs disso, os cromossomos filhos perma-
necem ligados a pontos adjacentes na membrana celular. Esses pontos de ligao so
separados entre si pelo crescimento da membrana celular, e finalmente colocam os
cromossomos em diferentes clulas filhas.
Figura 1.2 (A) CLULA PROCARITICA (B) CLULA EUCARITICA

Resumo dos passos pelos quais as protenas
so sintetizadas a partir do DNA. (A) Ex- Envoltrio nuclear
presso procaritica (bacteriana) do gene.
Regies codificadoras do DNA so colineares
ntron ntron
com o produto protico. (B) Expresso de
Gene 1 2
genes eucariticos. Os genes so descontnuos DNA
e um envoltrio nuclear separa o DNA do xon xon xon
citoplasma. 1 2 3
Ncleo
Transcrio
RNA nuclear
Transcrio
Processamento de RNA
mRNA mRNA
Traduo
Citoplasma Traduo
mRNA mRNA
Protena Protena
Procariotos e eucariotos tm mecanismos diferentes de regulao do gene. Em

ambos, o DNA transcrito por enzimas chamadas RNA polimerases para produzir
RNA. Quando o RNA mensageiro (mRNA) produzido nos procariotos, ele imedia-
tamente traduzido em uma protena enquanto o seu outro terminal est sendo transcri-
to do DNA (Figura 1.4). Sendo assim, nos procariotos, transcrio e traduo so
eventos simultneos e coordenados. Mas a existncia de envoltrio nuclear em
eucariotos proporciona a oportunidade de se obter um tipo de regulao celular total-
mente novo. Os ribossomos, que so responsveis pela traduo, esto de um lado do
envoltrio nuclear, e o DNA e a RNA polimerase necessria para a transcrio esto do
outro. Entre a transcrio e a traduo, o RNA transcrito deve ser processado para que
possa passar atravs do envoltrio nuclear. A regulao pela qual o mRNA pode
passar para o citoplasma, torna a clula capaz de selecionar quais das mensagens
recm-sintetizadas sero traduzidas. Assim, um novo nvel de complexidade foi adici-
onado, que extremamente importante para o organismo em desenvolvimento.
Desenvolvimento entre eucariotos unicelulares

Todos os organismos eucariticos pluricelulares se desenvolveram de protistas uni-
celulares. nesses protistas que as caractersticas bsicas do desenvolvimento apa-
receram primeiro. Eucariotos simples nos deram os primeiros exemplos da morfognese
direcionada pelo ncleo, o uso da superfcie da clula para mediar cooperao entre
clulas individuais e as primeiras ocorrncias de reproduo sexual.
Controle da Morfognese no Desenvolvimento em Acetabulria

H um sculo, ainda no havia sido provado se o ncleo continha alguma informao
hereditria ou de desenvolvimento. Algumas das melhores evidncias para essa teoria
vieram de estudos onde organismos unicelulares foram fragmentados em pedaos
Prfase:
O envoltrio nuclear
quebra e um fuso se forma
entre dois centrolos.
Prometfase:
Interfase: DNA duplicado em Os cromossomos se
preparao para a diviso celular. ligam s fibras dos fusos.
Cromatdeos do
cromossomo
Ncleo Cromatina Nuclolo
Regio do centrmero
Fuso em
desenvolvimento
Centrolos
ster
Envoltrio Envoltrio
nuclear nuclear
Nuclolo rompe
Cromossomos filhos
Metfase:
Os cromossomos se
alinham no equador da clula.
Telfase:
Os cromossomos atingem
os plos mitticos e a clula
comea a invaginar.
Figura 1.3
Diagrama de mitose em clulas animais. Du-
Anfase:
Os cromossomos duplicados
rante a interfase o DNA duplicado em pre-
(chamados cromatdeos) so parao para a diviso celular. Durante a
separados. prfase, o envoltrio nuclear quebra e for-
ma-se um fuso entre os dois centrolos. Na
nucleados e anucleados (reviso por Wilson, 1986). Quando vrios protistas foram metfase, os cromosssomos se alinham no
equador da clula e se inicia a anfase, os
fragmentados, quase todas as partes morreram. No entanto, os fragmentos que conti-
cromossomos duplicados (cada duplicata de
nham ncleo foram capazes de sobreviver, regenerando todo a complexa estrutura cromossomo um cromatdeo) so separa-
celular (Figura 1.5) dos. Na telfase os cromossomos atingem
O controle nuclear da morfognese celular e a interao do ncleo e citoplasma os plos mitticos e a clula comea a
esto muito bem demonstrados nos estudos da Acetabulria. Essa enorme clula invaginar. Cada plo contm o mesmo nme-
individual (2 a 4 cm de comprimento) consiste de trs partes: o disco reprodutivo, o ro e tipos de cromossomos que continha a
pednculo e o rizide (Figura 1.6A). O rizide est localizado na base da clula onde clula antes da diviso.
essa presa ao substrato. O ncleo individual da clula se localiza dentro do rizide. O
tamanho da Acetabulria e a localizao do seu ncleo permitiram que pesquisadores
DNA Ribossomos RNA
Figura 1.4
Transcrio e traduo simultnea em procariotos. Uma poro de DNA de Escherichia coli se
estende horizontalmente por essa microfotografia eletrnica. Transcries de RNA mensageiro
podem ser vistas dos dois lados. Ribossomos se juntaram ao mRNA e esto sintetizando
protenas (que no podem ser vistas). O mRNA pode ser visto aumentando de tamanho, da
esquerda para a direita, indicando a direo da transcrio. (Cortesia de O. L. Miller, Jr.)
removessem o ncleo de uma clula e o substitusse por outro, de outra clula. Nos
anos 30, J. Hmmerling tirou proveito dessa singular caracterstica e trocou ncleos
entre duas espcies morfologicamente distintas, A. mediterranea e A. crenulata. Como
mostrado na fotografia, essas duas espcies tm discos reprodutivos muito diferen-
tes. Hmmerling descobriu que quando um ncleo de uma determinada espcie era
transplantado para o pednculo de outra, o novo disco em formao finalmente assu-
mia a forma associada com o ncleo do doador (Figura 1.6B). Assim, foi considerado
que o ncleo era o controlador do desenvolvimento da Acetabulria.
A formao de um disco reprodutivo um evento morfognico complexo, envol-
vendo a sntese de um grande nmero de protenas, que devem ser acumuladas em
certa poro da clula e ento organizadas em estruturas complexas especficas da
espcie. O ncleo transplantado da clula realmente direciona a sntese de seu disco
reprodutivo espcie-especfico, mas uma tarefa que pode levar semanas para ser
realizada. Alm disso, se o ncleo for removido da clula de Acetabulria em estgio
inicial do desenvolvimento, antes de formar o disco reprodutivo, um disco normal se
formar semanas depois, ainda que o organismo ir morrer. Esses estudos sugerem
que (1) o ncleo contm informao especfica sobre o tipo de disco reprodutivo
produzido (isto , contm informao gentica que especifica as protenas necessri-
as para a produo de um certo tipo de disco reprodutivo), e (2) o material contendo
essa informao entra no citoplasma muito antes dessa produo ocorrer. A informa-
o no citoplasma no ser usada por vrias semanas.
Fragmento
anucleado morre
Corte
Fragmento
Ncleo nucleado
se regenera
Corte
Figura 1.5
Regenerao do fragmento nucleado do protista unicelular
Stylonychia. Os fragmentos anucleados sobrevivem por al- Fragmento
gum tempo, mas finalmente morrem. anucleado morre
(B)
Disco
reprodutivo
(A)
Disco
reprodutivo
Pednculo
A. crenulata A. mediterranea
Pednculo Ncleos transplantados
Ncleo Ncleo
Rizide
Rizide Rizide
1 cm 1 cm A estrutura do disco
reprodutivo a do
ncleo doador
Figura 1.6
(A) Acetabulria mediterranea (esquerda) e A.
crenulata (direita). Cada unidade uma clula singu-
lar. O rizide contm o ncleo. (B) Efeitos da troca de
ncleos entre duas espcies de Acetabulria. Ncleos
foram transplantados para fragmentos de rizides
anucleados. Estruturas de A. crenulata esto sombre-
adas; estruturas de A. mediterranea no esto som-
breadas. (Fotografias cortesia de H. Harris.)
Uma hiptese atual, proposta para explicar essas observaes, que o ncleo sintetiza
um mRNA estvel, posicionado em estado dormente no citoplasma at a formao do
disco reprodutivo. Essa hiptese amparada por uma observao publicada por Hmmerling
em 1934. Hmmerling fracionou uma Acetabulria jovem em diversas partes (Figura 1.7). A
poro com o ncleo finalmente formou um novo disco, conforme esperado; da mesma
forma o fez a extremidade apical do pednculo. No entanto, a parte intermediria do pedn-
culo no formou o disco reprodutivo. Por isso, Hmmerling postulou (aproximadamente 30
anos antes de sabermos da existncia do mRNA), que as instrues para a formao do
disco reprodutivo se originavam no ncleo, sendo de alguma forma guardadas dormen-
tes prximo extremidade do pednculo. Muitos anos mais tarde, Kloppstech e
Schweiger (1975) estabeleceram que o mRNA derivado do ncleo se acumula nessa
regio. Ribonuclease, uma enzima que cliva RNA, inibe completamente a formao do
disco reprodutivo quando adicionada gua marinha na qual cresce a Acetabulria. Em
clulas anucleadas, esse efeito permanente; uma vez que o RNA destrudo, no pode
mais haver a formao do disco reprodutivo. Em clulas nucleadas, no entanto, um novo
disco pode ser formado aps a eliminao da ribonuclease, presumivelmente porque um
novo mRNA ento produzido pelo ncleo. Garcia e Dazy (1986) tambm demonstraram
que a sntese da protena especialmente ativa no pice da Acetabulria.
Fica claro pela discusso anterior, que a transcrio nuclear tem um papel impor-
tante na formao do disco reprodutivo da Acetabulria. Mas deve ser notado que o
Disco reprodutivo e
pednculo regenerados
Extremidade
apical do
pednculo
Poro central
do pednculo Sem regenerao
Rizide
e ncleo
Regenerao total
Figura 1.7
Habilidade regenerativa de diferentes fragmentos da A. mediterranea
citoplasma tambm cumpre uma parte essencial na formao desse disco. O mRNA
no traduzido durante semanas, mesmo estando no citoplasma. Algo no citoplasma
controla quando as mensagens devem ou no ser utilizadas. Portanto, a expresso do
disco reprodutivo controlada no somente pela transcrio nuclear como tambm
pelo controle de traduo do RNA citoplasmtico. Nesse organismo unicelular, o
desenvolvimento controlado em ambos estgios de transcrio e de traduo.
Diferenciao em Ameboflagelados Naegleria

Um dos casos mais marcantes de diferenciao em protistas, aquele de Naegleria
gruberi. Esse organismo ocupa um lugar especial na taxonomia protista porque pode
mudar sua forma, de uma ameba para a de um flagelado (Figura 1.8). Durante a maior
parte do seu ciclo de vida, a N. gruberi uma ameba tpica, alimentando-se de bact-
rias do solo e dividindo-se por ciso. No entanto, quando as bactrias so diludas
(tanto pela gua da chuva quanto pela gua nos experimentos), cada N. gruberi
desenvolve rapidamente uma forma aerodinmica e dois longos flagelos anteriores,
que so usados para encontrar regies mais abundantes em bactrias. Nessas condi-
es, ao invs de existirem diversos tipos de clulas diferenciadas em um nico orga-
nismo, essa clula nica tem estruturas celular e bioqumica diferentes nos diferentes
estgios de sua vida.
Diferenciao para a forma de flagelado ocorre aproximadamente em uma hora
(Figura 1.9). Durante esse perodo, a ameba tem que criar centrolos para servir como
corpos basais do flagelo (centros organizadores de microtbulos), assim como criar o
prprio flagelo. Os corpos basais e os flagelos so compostos de diversas protenas,
das quais a mais abundante a tubulina. As molculas de tubulina so organizadas em
microtbulos; esses so posteriormente arranjados para permitir o movimento flagelar.
Fulton e Walsh (1980) mostraram que a tubulina dos flagelos de Naegleria no existe
(A) (B) (C) (D)
Figura 1.8
Transformao de Naegleria gruberi da forma
em seu estgio de ameba. produzida de novo (desde o comeo), comeando com amebide ao estado flagelado. Linha superior
uma nova transcrio no ncleo. Para mostrar isso, os pesquisadores manipularam corada com Iodo/Lugol; linha inferior corada
com um anticorpo fluorescente protena tu-
transcries em vrios estgios com actinomicina D, uma droga antibitica que seleti-
bulina dos microtbulos. A transformao
vamente inibe a sntese do RNA. Quando adicionada anteriormente diluio do iniciada pela eliminao do alimento (bactri-
alimento, esse antibitico previne a sntese da tubulina. No entanto, se a actinomicina as) da colnia de Naegleria. (A) 0 minutos;
D adicionada 20 minutos aps a diluio, a tubulina ainda produzida em tempo (B) 25 minutos, mostrando sntese de nova
normal (aproximadamente 30 minutos mais tarde). Portanto, parece que o mRNA para tubulina; (C) 70 minutos, emergncia de
a tubulina foi produzido durante os primeiros vinte minutos aps a diluio e usado flagelos visveis (D) 120 minutos, mostrando
logo em seguida. Essa interpretao foi confirmada quando foi demonstrado que o flagelos maduros e forma aerodinmica do cor-
mRNA extrado da ameba no continha mensagem alguma, detectvel para tubulina po (de Walsh, 1984, cortesia de C. Walsh.)
flagelar, ao passo que mRNA extrado de clulas diferenciadas continha muitas mensa-
gens desse tipo (Walsh, 1984).
Ento, temos aqui um excelente exemplo de controle transcricional de um proces-
so de desenvolvimento: O ncleo da Naegleria responde a mudanas ambientais
sintetizando o mRNA para tubulina flagelar. Notamos tambm um outro processo que
permanece extremamente importante no desenvolvimento de todos os outros animais
e plantas, que o agrupamento de molculas de tubulina para a produo do flagelo.
Esse arranjo, pelo qual a tubulina polimerizada em microtbulos, e esses por sua vez
agrupados de forma ordenada, visto em toda a natureza. Em mamferos, est evidente
no flagelo do espermatozide e nos clios da medula espinhal e do trato respiratrio.
Mais ainda, no somente a tubulina que produz o flagelo. Existem em torno de 300
outras protenas em cada flagelo, e o movimento flagelar depende da orientao ade-
quada dessas protenas uma em relao a outra. At mesmo processos celulares tm a
sua prpria morfognese baseada em interaes moleculares entre os fragmentos
de protena. Tal controle ps-traduo, onde uma protena no funcional at que
esteja ligada a outras molculas, ser discutido melhor mais tarde. Vimos ento, que o
desenvolvimento em eucariotos unicelulares pode ser controlado nos estgios de
transcrio, traduo e ps-traduo.
Figura 1.9 os
Diferenciao do fentipo flagelado em rp
co m
Naegleria. Amebas que vinham crescendo a de po a
in o or lar an
em um meio enriquecido com bactria so ul t
en las
c c
b
tu e a ei
s
de ag
e al n t o
lavadas afim de se eliminar as bactrias no da o m p am lu dam s v o a fl l os m e
u c n v i e i
e c
es r gr s, o a rm ag r
tempo 0. Aos 80 minutos, praticamente toda
nt e l a A asai rred e lo
s
rm fo Fl o m p l
o
a populao desenvolveu flagelo. (Segundo S ag b a ag F m c ta
fl se Fl co to
Fulton, 1977.)
100
Porcentagem da populao com flagelo

80
Clulas de corpo com

60 forma flagelar
40
20
0
0 20 40 60 80 100
Tempo aps suspenso (minutos)
As Origens da Reproduo Sexual

A reproduo sexual outra inveno dos protistas que teve um profundo efeito em
organismos mais complexos. Deve-se notar que sexo e reproduo so dois proces-
sos separveis e distintos. A reproduo envolve a criao de novos indivduos.
Sexo envolve a combinao de genes de dois indivduos distintos em um novo
arranjo. Reproduo na ausncia de sexo uma caracterstica de organismos que se
reproduzem por ciso; no h discriminao nos genes quando uma ameba se divide
ou quando uma hidra brota clulas para formar uma nova colnia. Sexo sem reprodu-
o tambm comum entre os organismos unicelulares. As bactrias so capazes de
transmitir genes de um indivduo para o outro por meio dos pilos sexuais (Figura
1.10). Essa transmisso independente da reproduo. Protistas so tambm capa-
zes de reorganizar genes sem reproduo. Os paramcios, por exemplo, se reprodu-
zem por ciso, mas o sexo realizado atravs de conjugao. Quando dois paramcios
se juntam, eles se unem atravs de seus aparelhos orais formando uma conexo
citoplasmtica atravs da qual podem trocar material gentico (Figura 1.11). Cada
macroncleo (que controla o metabolismo do organismo) degenera enquanto o
Figura 1.10 microncleo passa por meiose para produzir oito microncleos haplides, dos quais
Sexo em bactrias. Algumas clulas de bactri- todos, exceto um, degeneram. O microncleo remanescente divide-se mais uma vez
as esto cobertas de numerosos apndices
para formar um microncleo estacionrio e um microncleo migratrio. Cada
(pilos) sendo capazes de transmitir genes para
uma clula recipiente (sem pilos) atravs de
microncleo migratrio atravessa a ponte citoplasmtica e se funde com o microncleo
um pilus sexual. Nessa figura, o pilus sexual estacionrio (fertilizante), criando um novo ncleo diplide em cada clula. Esse
est realado por partculas virais que se ligam ncleo diplide se divide mitoticamente fazendo surgir um novo microncleo e um
especificamente quele estrutura. (Cortesia de novo macroncleo quando os dois parceiros se separam. Ainda que no tenha
C. C. Brinton, Jr. e J. Carnahan.) ocorrido reproduo, houve sexo.
Microncleo Fuso
meitico
Macroncleo
Ponte
citoplasmtica
Dois paramcios Microncleos passam Todos menos um
formam por meiose, formando 8 dos microncleos de
ponte citoplasmtica ncleos haplides por clula; cada parceiro degeneram
macroncleos degeneram
Microncleo
estacionrio
Microncleo
migratrio
Microncleo restante se Microncleos migratrios Ncleo diplide se forma e

divide para formar um microncleo atravessam a ponte citoplasmtica sofre divises mitticas para
estacionrio e um migratrio e fertilizam os microncleos gerar um novo macroncleo e
estacionrios do parceiro dois microncleos quando os
paramcios se separam
Figura 1.11
Unio de paramcios atravs da ponte citoplasmtica, onde dois paramcios podem trocar
material gentico, deixando cada um com genes que diferem daqueles com os quais iniciaram o
processo. (Strickberger, 1985.)
A unio desses dois processos distintos, sexo e reproduo, em reproduo

sexual, visto em eucariotos unicelulares. A Figura 1.12 mostra o ciclo de vida da
Chlamydomonas. Esse organismo geralmente haplide, portando apenas uma
cpia de cada cromossomo (como os gametas dos mamferos). Os indivduos de
cada espcie, no entanto, esto divididos em dois grupos de parceiros: mais e
menos. Quando se encontram, juntam-se os citoplasmas e seus ncleos se fundem
para formar um zigoto diplide. Esse zigoto a nica clula diplide do ciclo de vida
e passar por meiose para formar quatro novas clulas de Chlamydomonas. Aqui
est uma reproduo sexual, pois cromossomos so realinhados durante as divi-
ses meiticas onde mais indivduos so formados. Note que nesse tipo de reprodu-
o sexual protista, os gametas so morfologicamente idnticos e a distino entre
espermatozide e vulo ainda no aconteceu.
Com a evoluo da reproduo sexual, dois importantes avanos foram alcana-
dos. O primeiro o mecanismo da meiose (Figura 1.13), pelo qual o complemento
diplide dos cromossomos reduzido ao estado haplide (discutido em detalhe no
Captulo 22). O outro avano o mecanismo pelo qual os parceiros reprodutivos
diferentes se reconhecem um ao outro. Em Chlamydomonas, o reconhecimento ocorre
primeiro nas membranas flagelares (Figura 1.14; Bergman et al., 1975; Goodenough e
Weiss, 1975). A aglutinao dos flagelos permite que regies especficas das membra-
nas celulares se juntem. Esses setores especializados contm componentes
reprodutivos especficos que permitem a fuso dos citoplasmas. Seguindo-se
aglutinao, os indivduos mais iniciam a fuso estendendo um tubo de fertilizao.
Figura 1.12 Reproduo assexual (mittica)

Reproduo sexual em Chlamydomonas. Duas Parceiro tipo mais Parceiro tipo menos
linhagens, ambas haplides, podem se repro- (haplide) (haplide)
duzir assexuadamente quando separadas. Res-
peitando certas condies, os dois cordes
podem se unir para produzir uma clula
diplide que pode sofrer meiose para formar
quatro novos organismos haplides. (Segundo
Strickberger, 1985.) Reproduo
sexual
Acasalamento
Fuso citoplasmtica
Zigoto (diplide)
Maturao (meiose)
Germinao
Dois parceiros tipo mais e tipo menos
Figura 1.13
Sumrio da meiose. O DNA e as protenas associadas replicam durante a interfase. Durante a
prfase, o envoltrio nuclear se rompe e os cromossomos homlogos (cada cromossomo
duplicado, com os cromatdeos juntos no centrmero) se alinham em pares. Reagrupamentos
cromossmicos podem ocorrer entre quatro cromatdeos homlogos nesse estgio. Aps a
primeira metfase, os dois cromossomos homlogos originais so segregados em clulas dife-
rentes. Durante a segunda diviso, o centrmero se divide, deixando cada nova clula com uma
cpia de cada cromossomo.
MEIOSE I
Envoltrio Cromossomos Cromatdeos

nuclear Cromatina homlogos homlogos
Ncleo
Interfase Prfase I precoce Meia prfase I Prfase I tardia Metfase I
O envoltrio nuclear se rompe e cromossomos homlogos (cada cromossomo

sendo duplo, com os cromatdeos ligados no centrmero) se alinham aos pares.
Rearranjos cromossmicos podem ocorrer entre os quatro cromatdeos homlo-
gos neste momento.
(A) (B) Figura 1.14

Duas etapas do reconhecimento no acasala-
mento de Chlamydomonas. (A) Varredura por
micrografia eletrnica (7000x) de par em aca-
salamento. Os flagelos que interagem, torcem-
se um em torno do outro, aderindo nas pontas
(flexas). (B) Microfotografia eletrnica de
transmisso (20.000x) de uma ponte citoplas-
mtica conectando os dois organismos. Os
microfilamentos se estendem da clula doado-
ra (abaixo) para a clula recipiente (acima). (de
Goodenough e Weiss, 1975 e Bergman et al.,
1975; com permisso de U. Goodenough.)
Microfilamentos
Esse tubo conecta e se funde com um local especfico no indivduo menos. interes-
sante que o mecanismo usado para estender esse tubo - polimerizao da protena
actina - tambm usado para estender processos do espermatozide e vulo do
ourio-do-mar. No Captulo 4, veremos que o reconhecimento e fuso de espermato-
zide e vulo ocorrem de uma maneira espantosamente semelhante a desses protistas.
Eucariotos unicelulares parecem ter os elementos bsicos do processo de desen-
volvimento que caracterizam os organismos mais complexos: a sntese celular con-
trolada pela regulao transcricional, por traduo e ps-traduo; existe um mecanis-
mo para processar o RNA atravs da membrana nuclear; as estruturas de genes indi-
viduais e cromossomos so como sero atravs da evoluo eucaritica; mitose e
meiose so aperfeioadas; e a reproduo sexual existe, envolvendo a cooperao
entre clulas individuais.Tal cooperao intercelular se torna ainda mais importante
com a evoluo de organismos multicelulares.
MEIOSE II
Anfase I Telfase I Metfase II Anfase II Telfase II
Os dois cromossomos O centrmero se divide Cada nova clula tem

homlogos originais so uma cpia de cada
segregados em clulas cromossomo
diferentes
Eucariotos coloniais: A evoluo da diferenciao

Um dos mais importantes experimentos da evoluo foi a criao de organismos
pluricelulares. Parece ter havido diversos caminhos pelo qual uma nica clula evo-
luiu para uma disposio pluricelular; discutiremos apenas dois deles (veja o Captulo
23 para uma discusso mais completa). O primeiro caminho envolve a diviso ordena-
da da clula reprodutiva e a subseqente diferenciao da sua prognie em diferentes
tipos de clulas. Esse caminho para a multicelularidade pode ser visto em uma notvel
srie de organismos pluricelulares, coletivamente referidos como a famlia das
Volvocaceas ou volvocaceanas.
As Volvocaceanas
Os organismos mais simples entre as volvocaceanas so reunies ordenadas de nu-
merosas clulas, cada uma parecida ao protista unicelular Chlamydomonas. Um nico
organismo de volvocacea do gnero Gonium (Figura 1.15), por exemplo, consiste de
uma placa plana contendo de 4 a 16 clulas, cada uma com seu prprio flagelo. Em um
gnero relacionado, Pandorina, 16 clulas formam uma esfera; e no Eudorina, a esfe-
ra contm 32 ou 64 clulas organizadas em um padro regular. Nesses organismos, um
princpio muito importante tem-se desenvolvido: a diviso ordenada de uma clula
para gerar um nmero de clulas que so organizadas de uma maneira previsvel.
Como ocorre na maioria dos embries animais, as divises celulares pelo qual uma
nica clula de volvocacea produz um organismo de 4 a 64 clulas ocorrem em uma
seqncia muito rpida e com ausncia de crescimento celular.
Os dois prximos gneros da srie volvocacea exibem um outro princpio impor-
tante do desenvolvimento: a diferenciao de tipos celulares em organismo indivi-
dual. As clulas reprodutivas se diferenciam das clulas somticas. Em todos os
gneros j mencionados, toda a clula pode, e normalmente o faz, produzir um organis-
mo novo completo por mitose (Figura 1.16 A,B). Nos gneros Pleodorina e Volvox,
porm, relativamente poucas clulas podem se reproduzir. Na Pleodorina californica,
as clulas da regio anterior so restritas uma funo somtica; somente aquelas
Figura 1.15
Representante da ordem dos Volvocales. (A)
o protista unicelular Chlamydomonas rei-
nhardtii. (B) Gonium pectorale com oito c-
lulas Chlamydomonas-smiles em um disco
convexo. (C) Pandorina morum. (D) Eudo-
rina elegans. (E) Pleodorina californica. Aqui
todas as 64 clulas so originalmente simila-
res, mas as posteriores desdiferenciam e redi- (A) (B) (C)
ferenciam como clulas assexuadas reprodu-
tivas chamadas gondios, enquanto as clulas
anteriores permanecem pequenas e biflagela-
das, como o Chlamydomonas. (F) Volvox
carteri. Aqui, clulas destinadas a se torna-
rem gondios so separadas no comeo do
desenvolvimento e nunca desenvolvem carac-
tersticas somticas. As clulas menores,
somticas, lembram Chlamydomonas. Todas,
menos o Chlamydomonas, so membros da
famlia das Volvocaceas. A complexidade au-
menta do Chlamydomonas unicelular ao
Volvox pluricelular. Barra em A de 5m; B-
D, 25m; E, F, 50m (Cortesia de D. Kirk.) (D) (E) (F)
Figura 1.16
Reproduo assexuada nas volvocaceanas. (A)
Colnia madura de Eudorina elegans. (B) Cada
uma das clulas de E. elegans se divide e pro-
duz uma nova colnia. (C) Volvox carteri ma-
duro. A maioria das clulas so incapazes de se
reproduzir. Clulas germinativas (gondia) co-
mearam a se dividir em novos organismos. (A
e B segundo Hartmann,1921; C de Kirk et al.,
(A) (B) (C)
1982, cortesia de D. Kirk.)
clulas do lado posterior podem se reproduzir. Em P. californica, a colnia normalmen-

te tem 128 ou 64 clulas, e a relao do nmero de clulas somticas para o nmero de
clulas reprodutivas normalmente 3:5. Dessa maneira, uma tpica colnia de 128
clulas tem 48 clulas somticas e uma colnia de 64 clulas tem 24 clulas somticas.
Nos Volvox, quase todas clulas so somticas, e muito poucas clulas so capa-
zes de produzir novos indivduos. Em algumas espcies de Volvox, clulas reproduti-
vas como as da Pleodorina, so derivadas de clulas que originalmente parecem e
funcionam como clulas somticas antes de crescer e se dividir para formarem uma
nova prognie. No entanto, em outros membros do gnero, como o V. carteri, existe
uma diviso do trabalho completa: as clulas reprodutivas que vo criar a nova gera-
o so colocadas de lado durante a diviso das clulas reprodutivas que esto
formando um novo indivduo. As clulas reprodutivas nunca desenvolvem um flagelo
funcional e nunca contribuem para motilidade e outras funes somticas do indiv-
duo; so inteiramente especializadas para reproduo. Ainda que as volvocaceas
mais simples sejam consideradas organismos coloniais (porque cada clula capaz de
existncia independente e perpetuao da espcie), no V. carteri temos um organismo
verdadeiramente celular com dois tipos de clulas independentes e distintos (somtico
e reprodutivo), ambos requeridos para a perpetuao da espcie (Figura 1.16C). Embo-
ra nem todos os animais separem suas clulas reprodutivas das clulas somticas (e
as plantas raramente o fazem), essa separao de clulas germinativas das clulas
somticas no incio do desenvolvimento caracterstica de muitos filos animais e ser
discutida em maior detalhe no Captulo 13.
Embora todas as volvocaceas, incluindo seu parente unicelular Chlamydomo-
nas, se reproduzam predominantemente por meios assexuados, tambm so capazes
de reproduo sexual. Isso envolve a produo e fuso de gametas haplides. Em
muitas espcies de Chlamydomonas, incluindo a ilustrada na Figura 1.12, a reprodu-
o sexual isogmica, j que os gametas haplides que se encontram so similares
em tamanho, estrutura e motilidade. No entanto, em outras espcies de Chlamydo-
monas - assim como as vrias espcies de volvocaceas coloniais - gametas nadado-
res de diversos tamanhos so produzidos por parceiros de acasalamentos diferen-
tes. Isso chamado heterogamia. Mas as volvocaceas maiores desenvolveram uma
forma especializada de heterogamia, chamada oogamia, que envolve a produo de
vulos grandes e relativamente imveis por um parceiro do acasalamento e esper-
matozides pequenos e mveis pelo outro parceiro (veja Vises Colaterais & Espe-
culaes). Aqui vemos um gameta especializado para reteno de recursos nutricionais
e de desenvolvimento e outro gameta especializado para transporte de ncleos.
Assim, as volvocaceas incluem os organismos mais simples que tm macho e fmea
distinguveis, e possuem caminhos diferentes para desenvolver o vulo ou o es-
permatozide. Em todas as volvocaceas, a reao da fertilizao se assemelha do
Chlamydomonas porque resulta na produo de um zigoto diplide dormente, ina-
tivo, capaz de sobreviver a condies ambientais severas. Quando as condies
permitem aos zigotos germinar, eles primeiro sofrem meiose para produzir herdeiros
haplides dos dois parceiros em nmeros iguais. [other.html#intro1]
Informaes adicionais
& Especulaes
Sexo e Individulidade em Volvox

S imples como , o Volvox comparti-
lha muitos traos que caracterizam o
ciclo de vida e histrico de desen-
volvimento de organismos muito mais com-
so parentes. A morte chega para uma
ameba apenas se ela ingerida ou sofre
um acidente fatal; quando isso acontece,
a clula morta no deixa prole.
conjunto de gondios. No fim da clivagem,
todas as clulas que estaro presentes no
adulto, foram produzidas de cada um dos
gondios. Mas o embrio est virado de
plexos, incluindo ns mesmos. Como j foi Porm, a morte se torna uma parte es- dentro para fora: seus gondios esto do
mencionado, o Volvox est entre os orga- sencial da vida para qualquer organismo lado de fora e os flagelos de suas clulas
nismos mais simples a exibir a diviso de pluricelular que estabelece diviso de tra- somticas esto apontando para o interi-
trabalho entre dois tipos de clulas dife- balho entre clulas somticas e clulas or da esfera oca de clulas. Essa condio
rentes. Como conseqncia disso, est en- germinativas (reprodutivas). Considere o adversa corrigida por um processo cha-
tre os organismos mais simples a incluir a histrico de vida do Volvox carteri quan- mado inverso, pelo qual o embrio se vira
morte como uma parte regular, geneticamen- do se reproduz assexuadamente (Figura com o lado certo para fora atravs de
te programada, da sua histria de vida. 1.17). Cada adulto assexuado um movimentos celulares que fazem lembrar
esferide contendo aproximadamente movimentos de gastrulao no embrio
Morte e Diferenciao 2000 pequenas clulas somticas biflage- animal (Figura 1.18). Um agrupamento de
Organismos unicelulares que se reprodu- ladas ao longo de sua periferia e por volta
zem atravs de uma simples diviso celu- de 16 grandes clulas reprodutivas Figura 1.17
lar, tais como as amebas, so potencial- assexuadas, chamadas gondios, dispos- Reproduo assexual em V. carteri. Quando as
mente imortais. A ameba que vemos sob tas em umas das extremidades do interior. clulas reprodutivas (gondios) esto maduras,
um microscpio no tem ancestrais mor- Quando maduro, cada gondio divide-se entram em um estado semelhante clivagem do
tos! Quando uma ameba se divide, nenhu- rapidamente 11 ou 12 vezes. Parte dessa desenvolvimento embrionrio para produzir se-
ma das duas clulas resultantes pode ser diviso assimtrica e produz as 16 clu- res juvenis dentro do adulto. Atravs de uma
considerada ancestral ou prognie; elas las grandes que iro se tornar um novo srie de movimentos celulares semelhantes
gastrulao, o volvox embrionrio se inverte e
finalmente liberado do progenitor. As clulas
somticas do progenitor, sem gondios, passam
por senescncia e morrem, enquanto a colnia
juvenil amadurece. O ciclo sexual total dura dois
Expanso
dias. (Segundo Kirk, 1988.)
de adultos
Embriognese e juvenis
Adulto com
juvenis
Adulto com
gondios maduros
Maturao
dos gondios Expanso continuada
da matriz extracelular
Expanso Morte de clulas

continuada somticas - progenitores
de juvenis
Liberao
de juvenis
(A) (F) Figura 1.18

Inverso dos embries V. carteri produzidos
assexuadamente. A-E so micrografias eletr-
nicas de varredura de embries completos. F-
J so cortes sagitais atravs do centro do em-
brio, visualizado por microscopia diferencial
de interferncia. Antes da inverso, o embrio
uma esfera cncava de clulas conectadas.
Quando as clulas mudam a sua forma, um
buraco (o fialoporo) abre-se no topo do em-
brio (A,B,F,G). As clulas se curvam e se
renem em um dos plos (C-E, H-J). (Kirk et
(B) (G) al., 1982, cortesia de D. Kirk.)
das clulas que as produzem (Pommerville

e Kochert, 1982). Alm do mais, nessa mor-
te, as clulas liberam para o uso de ou-
tras, incluindo sua prpria cria, todo o nu-
triente acumulado durante toda a vida.
Dessa maneira emerge, como assinala
David Kirk, um dos grandes temas da
vida no planeta Terra: Alguns morrem para
(C) (H)
que outros possam viver.
Em V. carteri, foi identificado um gene*
especfico que tem um papel importante re-
gulando a morte das clulas (Kirk, 1988).
Em linhagens laboratoriais possuindo mu-
taes desse gene, as clulas somticas
abandonam suas tendncias suicidas,
ganham a habilidade de se reproduzirem
(D) (I) * Esse gene (regA) foi clonado e mostrou

codificar uma protena que age para reprimir
(direta ou indiretamente) todos os genes cujos
produtos so requeridos pela clula para se de-
senvolver como gondio. Mutaes de perda da
funo impediro a protena de agir, e as clulas
sero capazes de se tornarem gondios (D. Kirk,
comunicao pessoal).
(E) (J)
clulas em forma de garrafa abre um bura- O que acontece s clulas somticas

co em um dos lados do embrio produzindo progenitor Volvox agora que as jo- Figura 1.19 Clulas garrafas prxi-
do tenso sobre a camada de clulas in- vens deixaram o lar? Tendo produzido mas abertura do fialoporo. Essas clulas
terconectadas (Figura 1.19). O embrio se uma cria e sendo incapazes de uma nova permanecem estreitamente conectadas atra-
utiliza desse buraco para fazer a inverso reproduo, essas clulas somticas mor- vs de pontes citoplasmticas prximas a
seus pices alongados, desse modo criando
e depois o fecha. Posteriormente, as col- rem. Para ser mais exato, elas cometem a tenso que causa a curvatura da lmina ce-
nias juvenis so enzimaticamente soltas suicdio, sintetizando um conjunto de pro- lular interconectada. ( Kirk et al., 1982, cor-
do progenitor e nadam livres. tenas que causam a morte e a dissoluo tesia de D. Kirk.)
(A) assexuadamente e se tornam potencialmen- advento da inevitvel morte natural

te imortais (Figura 1.20). O fato desses mu- no reino animal, e tudo em nome do
tantes nunca terem sido encontrados na sexo. E pergunta: Vale a pena?
natureza, indica que a morte das clulas
tem um papel importante na sobrevivncia Para Volvox carteri, certamente que sim.
do V. carteri sob condies naturais. V. carteri vive em pequenas poas rasas
[intro2.html] que temporariamente se enchem com as
guas das chuvas da primavera e secam no
Entra o sexo calor do vero. Durante a maior parte desse
Mesmo o V. carteri se reproduzindo as- tempo, V. carteri nada livremente, reprodu-
sexuadamente a maior parte do tempo, na zindo-se assexuadamente. Esses volvox
(B)
natureza se reproduzem sexualmente uma morreriam em minutos se a poa secasse,
vez por ano. Quando o faz, uma gerao mas o V. carteri capaz de sobreviver se
de indivduos morre, e uma nova gerao tornando sexual pouco antes da secagem
geneticamente diferente produzida. O das poas, produzindo zigotos inativos que
naturalista Joseph Wood Krutch (1956) sobrevivem ao calor e seca do alto vero e
colocou isso de uma forma mais potica: ao frio do inverno. Quando a chuva enche
esses pequenos reservatrios na primave-
A ameba e o paramcio so potencial- ra, os zigotos interrompem a sua dormncia
mente imortais...Mas para o Volvox a e criam uma nova gerao para reproduzi-
morte parece inevitvel, assim como o rem-se assexuadamente at que as guas
para um camundongo ou o homem. ameacem secar novamente. Como esses or-
Volvox deve morrer, como Leeuwenko- ganismos to simples prevem a chegada
ek observou, porque teve filhos e no de condies adversas com acuidade sufi-
Figura 1.20 mais necessrio. Quando sua hora ciente para produzir uma gerao sexual no
Mutao de um nico gene (chamado regene- chegar, tomba em silncio, vai para tempo certo, ano aps ano?
rador somtico A) elimina a programao de o fundo juntar-se a seus ancestrais. O estmulo para mudana do modo
morte em clulas V. carteri. Volvox recm- Como Hegner, o zoologista de Johns assexual para o modo sexual de reprodu-
eclodido carregando essa mutao (A) Hopkins, escreveu, Esse o primeiro o em V. carteri devido a uma protena
indistinguvel do esferide tipo-selvagem. No
entanto, momentos antes das clulas somti- Figura 1.21
cas do esferide tipo-selvagem comearem a Reproduo sexual em V. carteri. Machos e fmeas so indistiguveis na sua fase assexuada.
morrer, as clulas somticas desse mutante se Quando a protena indutora sexual est presente, os gondios de ambos parceiros passam por
rediferenciam como gondios (B). Finalmente, uma embriognese modificada que leva formao de vulos nas fmeas e espermatozides nos
cada clula do mutante ir se dividir para for- machos. Quando os gametas esto maduros, pacotes de espermatozide (contendo 64 ou 128
mar ( regenerar) um novo esferide que ir re- espermatozides cada), so liberados e nadam para as fmeas. Ao alcanar a fmea o pacote se
petir esse ciclo do desenvolvimento potenci- rompe em espermatozides individuais, que podem fertilizar os vulos. O zigoto resultante tem
almente imortal. paredes duras que podem resistir seca, calor e frio. Quando as chuvas da primavera fazem o
zigoto germinar, sofrendo meiose para produzir machos e fmeas haplides que se reproduzem
assexuadamente at o calor induzir novamente o ciclo sexual.
Pacotes de esperma-
Desenvolvimento tozide
sexual de gondios
Indutor
sexual
Espermatozide
Macho assexuado Desenvolvimento embrionrio Macho sexuado

Gondio modificado dos gondios resultando
em produo de gametas
vulos
Indutor
Zigotos
sexual
vulo
Fmea assexuada Fmea sexuada

Meiose e germinao
sexual indutiva de 30-kDa. Essa protena tando placas com V. carteri temperaturas de aparecer, multiplicar-se, realizando uma
to poderosa que concentraes meno- que poderiam ser encontradas em um reser- orgia sexual reprodutiva em poas de gua
res que 6x10-17 fazem com que os gondios vatrio raso durante o fim do vero. Quan- da chuva de apenas duas semanas
sofram um padro modificado de desen- do isso era feito, as clulas somticas dos (Powers, 1908). Ainda que reservatrios tem-
volvimento embrionrio que resulta na volvox assexuados produziam a protena porrios formados pela gua das chuvas se-
produo de vulos ou espermatozides, sexual indutora. Sendo a quantidade da pro- quem sob o calor do vero, Volvox encon-
dependendo do sexo gentico do indiv- tena secretada por um indivduo suficiente trou um meio de sobrevivncia: usa o calor
duo (Sumper et al.,1993). Os espermato- para iniciar o desenvolvimento sexual em para induzir a formao de indivduos sexu-
zides so liberados para nadar para a f- mais de 500 milhes de volvox assexuados, ados cujo acasalamento produz zigotos ca-
mea onde fertilizam os vulos para pro- um nico volvox indutor pode converter um pazes de sobreviver sob condies que ma-
duzir zigotos dormentes (Figura 1.21). reservatrio inteiro para a sexualidade. Essa tam o organismo adulto. Observamos, tam-
Qual a fonte dessa protena indutora descoberta explica uma observao feita h bm, que o desenvolvimento est critica-
sexual? Kirk e Kirk (1986), descobriram que quase 90 anos, de que na intensa radiao mente ligado ao ecossistema ao qual o or-
o ciclo sexual poderia ser iniciado esquen- solar do vero de Nebraska, Volvox capaz ganismo se adaptou para sobreviver.
Diferenciao e Morfognese em Dictyostelium
O CICLO DE VIDA DO DICTYOSTELIUM. Um outro tipo de organizao multicelular

derivada de organismos unicelulares encontrada no Dictyostelium discoideum.* O
ciclo de vida desse organismo fascinante ilustrado na Figura 1.22. Em seu ciclo
vegetativo, uma solitria ameba haplide (chamada myxamoebae ou ameba social
para distingui-las de espcies de amebas que sempre permanecem solitrias) vive em
troncos cados, se alimentando de bactrias e se reproduz por ciso binria. Quando
tiver esgotado seu suprimento de comida, dezenas de milhares dessas amebas se juntam
para formar um fluxo corrente de clulas que convergem em um ponto central. Aqui se
amontoam uma sobre a outra sob forma de um cone chamado de agregado apertado ou
justo. Subseqentemente, uma ponta surge no topo desse monte, que se dobra forman-
do uma lesma migratria (com a ponta na frente). A lesma (geralmente lhe dado um
ttulo mais dignificado de pseudoplasmdio ou grex) mede normalmente de 2 a 4 mm de
comprimento e envolvida por uma bainha viscosa. O grex comea a migrar (se o
ambiente est escuro e mido) com sua ponta anterior um pouco levantada; quando
atinge uma rea iluminada, a migrao cessa, e o grex se diferencia em um corpo de
frutificao composto de clulas esporos e pednculo. As clulas anteriores, represen-
tando 15 a 20 porcento de toda populao celular, formam o pednculo tubular. O
pednculo comea na parte centro-anterior da clula, enquanto as clulas pr-
pedunculares comeam a secretar um revestimento extracelular estendendo um tubo
atravs do grex. medida que as clulas pr-pedunculares se diferenciam, formam
vacolos e aumentam de tamanho levando a massa de clulas pr-pednculo que
havia ficado nos quatro-quintos posteriores do grex (Jermyn e Williams, 1991). As
clulas do pednculo morrem, mas as clulas posteriores, elevadas acima do pedn-
culo, transformam-se em clulas-esporo. Essas se dispersam, cada uma tornando-se
uma nova mixameba.
Em adio a esse ciclo sexual, existe a possibilidade para sexo em Dictyostelium.
Duas amebas podem fundir-se para criar uma clula gigante, que digere todas as
outra clulas do agregado. Quando tiver ingerido todos seus vizinhos, se enquista
em uma parede grossa e sofre divises meitica e mittica; e por fim, novas mixamebas
so liberadas.
Dictyostelium tem sido um maravilhoso organismo experimental para biologis-
tas do desenvolvimento, porque clulas inicialmente iguais so diferenciadas em
dois tipos alternativos de clulas, esporo e pednculo. tambm um organismo
onde clulas individuais se juntam para formar uma estrutura coesa composta por
tipos de clulas diferenciadas, parecido com a formao de tecidos em organismos
* Embora chamado coloquialmente um fungo celular pegajoso, Dictyostelium no um fungo
(como Neurospora), nem consistentemente pegajoso. melhor consider-lo como uma ameba social.
Lesma
(Pseudoplasmdio; grex)
15 h
16 h
14 h
17 h
CULMINAO 20 h
MIGRAO
12 h
Esporos
23 h
10 h
AGREGAO
Mixamebas Fluxos
9 h celulares
Corpo de frutificao maduro
6 h
24h
Figura 1.22
Ciclo vital de Dictyostelium discoideum. Esporos haplides originam mixamebas, que podem
reproduzir-se assexualmente para formar mais mixamebas haplides. A medida que diminui o
suprimento alimentar, ocorre agregao em pontos centrais, e forma-se um agregado de
pseudoplasmdio. Finalmente, esse pra de se movimentar e forma um corpo de frutificao
que libera mais esporos. Os nmeros referem-se s horas decorridas desde que a diluio
nutricional iniciou a seqncia desenvolvimental.
mais complexos. A agregao de milhares de amebas em um nico organismo um

feito incrvel de organizao e convida experimentao para resolver perguntas
sobre os mecanismos envolvidos.
AGREGAO DE CLULAS DE DICTYOSTELIUM. A primeira pergunta : O que

induz a ameba a se agregar? Microcinematografia de espaamento temporal mostrou
que no ocorre movimento direcionado durante as primeiras 4-5 horas aps carncia
nutricional. Durante as 5 horas seguintes, porm, as clulas so vistas mover-se por
aproximadamente 20m / min durante 100 segundos. Esse movimento cessa aps
aproximadamente 4 minutos, e em seguida recomea. Embora o movimento seja
direcionado para um ponto central, no um simples movimento radial. Antes, as
clulas se juntam umas s outras para formar correntes; essas convergem em corren-
tes maiores, e finalmente todas se juntam no centro. Bonner (1947) e Shaffer (1953)
mostraram que esse movimento devido quimiotaxia: as clulas so guiadas para os
centros de agregao por uma substncia solvel. Essa substncia foi posteriormente
identificada como adenosina 3,5 monofosfato cclico (cAMP) (Konijn et al., 1967;
Bonner et al., 1969), cuja estrutura qumica est mostrada na Figura 1.23A.
A agregao iniciada medida que cada clula comea a sintetizar o cAMP. No
h clulas dominantes que comeam a secreo ou controlam as outras. Antes, os
locais de agregao so determinados pela distribuio das amebas (Keller e Segal,
1970; Tyson e Murray, 1989). Clulas vizinhas respondem ao cAMP de duas maneiras:
ou iniciando sua movimentao de acordo com as pulsaes de cAMP, ou acompa-
nhando a liberao de seu cAMP prprio (Robertson et al., 1972; Shaffer, 1975). Em
seguida, a clulas no respondem mais aos pulsos de cAMP por vrios minutos. O
(A) Adenina (B)
(C)
(D)
Figura 1.23
Quimiotaxia de amebas de Dictyostelium de-
vida ondas espirais de cAMP. (A) estrutura
resultado uma onda giratria em espiral de cAMP, que se propaga atravs da qumica do cAMP. (B) Visualizao de vrias
populao de clulas (Figura 1.23B-D). medida que chega cada onda, as clulas do ondas de cAMP no meio. Clulas centrais
secretam cAMP em intervalos regulares, e
mais um passo para o centro.*
cada secreo difunde para fora como um onda
A diferenciao de amebas individuais em clulas pedunculares (somticas) ou concntrica. As ondas so mapeadas saturan-
esporos (reprodutivas) uma questo complexa. Raper (1940) e Bonner (1957) dedo-se papel de filtro com cAMP radioativo e
monstraram que as clulas anteriores normalmente formam pednculo, enquanto as colocando-o sobre uma colnia em agregao.
clulas remanescentes, posteriores, em geral esto destinadas a formar esporos. No O cAMP das clulas secretoras dilui o cAMP
entanto, a remoo cirrgica da parte anterior da lesma no elimina a capacidade do radiativo. Quando a radioatividade no papel
grex formar um pednculo. Em vez disso, as clulas que agora se encontram no final registada (colocando-o sobre filme de raios-
anterior aps a cirurgia (e que originalmente estavam destinadas a formar esporos), X), as regies de alta concentrao de cAMP
agora formam o pednculo (Raper, 1940). De alguma maneira, tomada uma deciso de na cultura aparecem mais claras que aquelas
de baixa concentrao de cAMP. (C,D) On-
modo tal, que clulas anteriores virem clulas pedunculares e clulas posteriores
das espirais de amebas movendo-se em dire-
virem esporos. Essa habilidade de clulas mudarem seus destinos desenvolvimentais, o fonte inicial de cAMP. (C) Essa
microfotografia em campo escuro processa-
da digitalmente mostra cerca de 107 clulas.
* A bioqumica dessa reao envolve um receptor que liga o cAMP. Quando essa ligao Como clulas mveis e imveis dispersam a
ocorre, realiza-se transcrio especfica de genes, iniciada movimentao em direo fonte de luz diferentemente, a fotografia reflete movi-
cAMP, e enzimas adenilciclases (que sintetizam cAMP a partir de ATP) so ativadas. O cAMP mento celular. As bandas claras so compos-
recm-formado ativa seus receptores prprios, assim como aqueles de seus vizinhos. As clulas tas de clulas migratrias alongadas; as ban-
na rea permanecem insensveis s novas ondas de cAMP at que o cAMP ligado seja removido das escuras so clulas que pararam de se
dos receptores por outra enzima da superfcie celular, a fosfodiesterase (Johnson et al., 1989). mover e se arredondaram. (D) As clulas for-
A matemtica de tais reaes de oscilao prev que a difuso de cAMP seria inicialmente mam correntes, a espiral de movimento ainda
circular. Porm, medida que o cAMP interage com as clulas que recebem e propagam o sinal, pode ser vista movendo-se em direo ao cen-
as clulas que recebem a parte frontal da onda comeam a migrar com uma velocidade diferente
daquela das clulas atrs delas. O resultado a espiral rotatria de cAMP e a migrao vistas na tro. (B de Tomchick e Devreotes, 1981, cor-
Figura 1.23. interessante que as mesmas frmulas matemticas predizem o comportamento de tesia de P. Devreotes; C e D de Siegert e Weijer,
certas reaes qumicas e a formao de novas estrelas em galxias espirais rotatrias (Tyson e 1989, cortesia de F. Siegert.)
Murray, 1989).
Figura 1.24
Clulas de Dictyostelium sintetizam um adesivo, glicoprotena 24-kDa, pouco aps a inanio
nutricional. Clulas de Dictyostelium foram coradas com um anticorpo fluorescente que se liga
glicoprotena 24-kDa e foram em seguida observada sob luz ultravioleta. Essa protena no foi
vista em amebas que tinham apenas parado de se dividir. No entanto, como mostrado aqui 10
horas aps o fim da diviso celular amebas individuais so vistas apresentando essa protena
em suas membranas celulares e so capazes de aderir umas s outras.
de acordo com sua localizao dentro do organismo inteiro, e assim compensar por
partes faltantes, chamada regulao. Veremos esse fenmeno em muitos embries,
inclusive naqueles dos mamiferos.
MOLCULAS DE ADESO CELULAR EM DICTYOSTELIUM. Como essas clulas

individuais aderem entre si para formar um organismo coeso? Este o mesmo proble-
ma que enfrentam as clulas embrionrias, e a soluo que evoluiu para os protistas
a mesma que aquela usada pelos embries: molculas de adeso celular reguladas
pelo desenvolvimento.
Enquanto esto crescendo mitoticamente em bactrias, clulas de Dictyostelium
no aderem umas s outras. Porm, uma vez que a diviso celular cessa, as clulas se
tornam progressivamente mais adesivas, alcanando um patamar de coesividade m-
xima aproximadamente aps 8 horas de inanio. A adeso clula-clula mediada por
uma glicoprotena de 24.0000 Da (24-kDa) que est ausente em clulas em crescimento
mas pode ser vista pouco depois dessa fase (Figura 1.24; Knecht et al., 1987; Loomis,
1988). Essa protena sintetizada a partir de mRNA recm-transcrito e fica localizada
nas membranas celulares das mixamebas. Se essas clulas so tratadas com anticor-
pos que se ligam a essa protena e a mascaram, as clulas no iro aderir umas s
outras e todo desenvolvimento subseqente cessa.
Uma vez que essa agregao inicial tiver ocorrido, estabilizada por uma segunda
molcula de adeso celular. Essa glicoprotena de 80-kDa tambm sintetizada duran-
te a fase de agregao. Se apresentar defeitos ou estiver ausente nas clulas, lesmas
pequenas se formaro, e seus corpos de frutificao s atingiro aproximadamente um
tero de seu tamanho normal. Assim, o segundo sistema de adeso celular, parece ser
necessrio para a reteno de um nmero de clulas suficientemente grande para a
formao de grandes corpos de frutificao (Mller e Gerisch, 1978; Loomis, 1988). Um
terceiro sistema de adeso ativado tardiamente no desenvolvimento, quando a les-
ma estiver migrando. A protena ou grupo de protenas que intervem no terceiro siste-
ma pode existir somente em clulas pr-esporo e pode ser responsvel pela separao
de clulas pr-esporo de clulas pr-pednculo (Loomis, comunicao pessoal). As-
sim, Dictyostelium evoluiu para trs sistemas de adeso clula-clula regulados pelo
desenvolvimento, e que so necessrios para a morfognese de clulas individuais
para formar um organismo coerente. Como veremos em captulos subseqentes, clu-
las de metazorios tambm usam molculas de adeso celular para formar os tecidos e
rgos do embrio.
Dictyostelium um organismo multicelular em tempo parcial que no forma
muitos tipos de clulas (Kay et al., 1989), e os organismos multicelulares mais comple-
xos no se formam pela agregao de clulas anteriormente independentes. No entan-
to, muitos dos princpios do desenvolvimento demonstrados por esse simples or-
ganismo tambm aparecem em embries de filos mais complexos. A habilidade de

clulas individuais sentir um gradiente qumico (como a resposta da ameba ao cAMP)
muito importante para a migrao celular e morfognese durante o desenvolvimento
animal. Ainda mais, o papel das protenas da superfcie celular para a coesividade
celular pode ser visto atravs do reino animal, e molculas indutoras da diferenciao
esto agora comeando a ser isoladas de organismos metazorios.
& Especulaes
Evidncia e Anticorpos
A Biologia, tal como qualquer outra Como ento ir para alm da mera cor- tenas de membrana em geral). Nesse
cincia, no trata de fatos; antes, relao? No estudo da adeso celular em caso, bloquear a glicoprotena tambm
trata de evidncias. Vrios tipos Dictyostelium, o prximo passo foi usar causaria a inibio da agregao celu-
de evidncia sero apresentados neste li- aqueles mesmos anticorpos para bloque- lar. Assim, a evidncia perda-defuno
vro; no so todos de equivalente vigor. ar a adeso de mixamebas. Usando uma precisa ser amparada por muitos con-
Como exemplo, vamos usar a anlise da tcnica introduzida pelo laboratrio de troles demonstrando que agentes cau-
adeso celular em Dictyostelium. O primei- Gerisch (Beug et al., 1970), Knecht e cola- sadores de perda de funo derrubam
ro e mais fraco tipo de evidncia a evi- boradores (1987) tomaram os anticorpos especificamente aquela funo em par-
dncia correlativa. Aqui, so feitas corre- que ligam essa glicoprotena 24-kDa e iso- ticular, e nada mais.
laes entre dois ou mais eventos, e infe- laram seus stios ligantes de antgeno (as O tipo mais forte de evidncia evi-
re-se que um evento estimule o outro. partes da molcula do anticorpo que re- dncia-de-ganho-de-funo. Aqui, o in-
Como vimos, anticorpos marcados com flu- conhecem o antgeno). Isso foi necess- cio do primeiro evento estimula um segun-
orescncia para uma certa glicoprotena de rio porque o todo da molcula de anticor- do e mesmo em situaes onde nenhum
24 kDa, no marcam clulas vegetativas em po contm dois stios ligantes de antgeno desses eventos ocorre usualmente. Recen-
diviso; porm, esses mesmos anticorpos que iriam ligar-se artificialmente de manei- temente, da Silva e Klein (1990) e Faix e
acham a protena em membranas celulares ra cruzada e aglutinar as mixamebas. Quan- colaboradores (1990) obtiveram tal evidn-
de mixameba logo que as clulas param de do esses fragmentos ligantes de antgeno cia para mostrar que a glicoprotena 80-kDa
se dividir e tornam-se competentes para (chamados Fragmentos Fab) foram adici- uma molcula adesiva. Isolaram o gene
agregar (veja Figura 1.24). Assim, existe uma onados s clulas competentes para agre- para essa protena e o modificaram de uma
correlao entre a presena dessa glico- gao, as clulas no puderam se agre- maneira a motiv-lo ser expresso continu-
protena da membrana celular e a capaci- gar. Os fragmentos de anticorpo impedi- amente. Em seguida, recolocaram-no em
dade de agregao. ram as clulas de aderir entre si, presu mixameba bem-alimentada, crescendo ve-
Evidncia correlativa d um ponto de mivelmente por ligarse a glicoprotena getativamente, que usualmente no expres-
partida para investigaes, mas no se 24-kDa, bloqueando sua funo. Esse tipo sa essa protena e no tem capacidade de
pode afirmar com certeza que um evento de evidncia chamado evidncia-de- adeso. A presena dessa protena na mem-
estimula outro somente baseado em cor- perda-de-funo. Se bem que mais forte brana celular dessas clulas em diviso foi
relaes. Embora se possa inferir que a que a evidncia correlativa, ela ainda no confirmada por marcao com anticorpos.
sntese dessa protena causa a adeso das exclui outras inferncias. Por exemplo, Tais clulas agora aderiram umas s outras
clulas, tambm possvel que adeso ce- possvel que os anticorpos tenham mata- mesmo nos estados vegetativos, o que nor-
lular leve as clulas a sintetizar essa nova do a clula (o que poderia acontecer se a malmente no fazem. Assim, elas tinham
glicoprotena, ou que a adeso celular e a glicoprotena 24-kDa for um crtico canal ganho uma funo adesiva somente por
sntese da glicoprotena 24-kDa sejam de transporte). Isso tambm impediria a expressar essa glicoprotena em particular
eventos separados, iniciados pela mesma adeso celular. Ou talvez, a glicoprotena nas suas superfcies celulares. Essa evi-
causa subjacente. A ocorrncia simult- 24-kDa nada tinha a ver com a adeso pro- dncia de ganho-de-funo mais convin-
nea dos dois eventos pode mesmo ser co- priamente, mas necessria para o funci- cente que outros tipos de anlise. Experi-
incidncia e os eventos no terem relao onamento da verdadeira molcula adesi- mentos semelhantes foram recentemente
um com o outro.* va (como atravs da estabilizao de pro- realizados em clulas de mamferos (veja
captulo 3), para demonstrar a presena de
* Em uma carta irnica, caoando de tais inferncias correlativas, Sies (1988) demonstrou uma determinadas molculas adesivas celula-
notvel boa correlao entre o nmero de cegonhas vistas na Alemanha Ocidental de 1965 at 1980 res no embrio em desenvolvimento.
e o nmero de bebs nascidos durante esses mesmos anos.
DIFERENCIAO EM DICTYOSTELIUM. A diferenciao em uma clula-pedncu-

lo ou em uma clula-esporo reflete um dos principais fenmenos da embriognese: a
seleo pela clula de uma trajetria desenvolvimental. As clulas freqentemente
selecionam um determinado destino desenvolvimental quando alternativas esto dis-
ponveis. Uma determinada clula num embrio de vertebrado por exemplo, pode tor-
nar-se uma clula da epiderme ou um neurnio. Em Dictyostelium, vemos uma deciso
dicotmica simples, porque somente dois tipos celulares so possveis. Como uma
clula torna-se uma clula de pednculo ou uma clula de esporo? Embora os detalhes
no sejam totalmente conhecidos o destino de uma clula parece ser regulado por
certas molculas difusivas. Os dois principais candidatos so o fator indutor de dife-
renciao (DIF) e o cAMP. DIF parece ser necessrio para a diferenciao da clula
peduncular. Esse fator, tal como o fator indutor de sexo em Volvox, eficaz em concen-
traes muito baixas (10-10M); e, como a protena de Volvox, parece induzir a diferen-
ciao de um determinado tipo de clula. Quando adicionado s amebas isoladas ou
mesmo s clulas pr-esporo (posteriores), induz a formao de clulas pedunculares.
A sntese desse lipdeo de baixo peso molecular regulada geneticamente, pois h
cepas mutantes de Dictyostelium que formam somente o precursor de clulas-esporo
e no de clulas pedunculares. Quando DIF adicionado a essas culturas de mutantes,
clulas penduculares conseguem se diferenciar (Kay e Jermyn, 1983; Morris et al.,
1987), e novos mRNAs especficos pr-pednculo so encontrados no citoplasma
celular (Williams et al., 1987). O mecanismo pelo qual DIF induz 20 porcento das
clulas do plasmdio (grex) a tornar-se tecido peduncular ainda controverso (veja
Early et al., 1995). DIF pode agir atravs da liberao de ons de clcio de compartimen-
tos intracelulares no interior da clula (Schaulsky e Loomis, 1995). [other.html#intro3]
Embora DIF estimule amebas a tornarem-se clulas pr-pednculo, a diferencia-
o de clulas pr-esporo mais provavelmente controlada por pulsos contnuos
de cAMP. Altas concentraes de cAMP iniciam a expresso de mRNA pr-esporo
especfico, em amebas agregadas. Alm disso, quando lesmas so colocadas em um
meio contendo uma enzima que destri cAMP extracelular, as clulas pr-esporo
perdem suas caractersticas de diferenciao (Figura 1.25; Schaap e van Driel, 1985;
Wang et al., 1988a,b).
(A)
(B)
Figura 1.25
Substncias qumicas que controlam a diferenciao em Dictyostelium. (A) e (C)
(B) mostram os efeitos de se colocar lesmas Dictyostelium em um meio
contendo enzimas que destroem cAMP extracelular. (A) Grex (pseudoplas-
mdio) corado para presena de uma protena pr-esporo especfica (regies
claras). (B) Grex semelhante corado aps tratamento com enzimas que de-
gradam cAMP. No visto produto pr-esporo especfico. (C) Amplifica-
o maior de uma lesma tratada com DIF (na ausncia de amnia). O corante
usado liga-se parede de celulose das clulas pedunculares. Todas as clulas
do grex tornaram-se clulas pedunculares. (A e B de Wang et al., 1988a; C de
Wang e Schaap, 1989; cortesia dos autores.)
& Especulaes
Como o Grex Sabe Qual Lado Est Para Cima

S E TODAS AS AMEBAS do grex
comearem no mesmo nvel, como
podem clulas nos quatro-quintos
posteriores da lesma se diferenciar em c-
da esto emanando da ponta apical do
agregado. Esses pulsos so quimiotcti-
cos para clulas pr-pednculo, mas no
para clulas pr-esporo, de modo que atra-
luz solar, cessa de migrar e sofre a diferen-
ciao final em esporos e pednculo. Du-
rante esse processo (chamado culmina-
o), o grex se apia em um dos terminais
lulas-esporo, enquanto clulas equivalen- em as clulas pr-pednculo para a ponta fazendo com que as clulas traseiras se
tes do quinto anterior se tornam clulas da agregado (Matsukuma e Durston, 1979; tornem sua base. Algumas clulas pstA
pedunculares? A resposta pode estar na Mee et al., 1986; Siegert e Weijer, 1991; migram para o tubo central de clulas pstB,
observao de que as clulas originais no Takeuchi, 1991).Portanto, o AMP cclico e quando entram em contato com o tubo
so todas iguais. Amebas sujeitas ina- parece ter vrias funes no desenvolvi- central, diferenciam-se em clulas pstB, sin-
nio durante a parte precoce de seu cimento de Dictyostelium. Agrega as clu- tetizando componentes de uma nova matriz
clo celular tendem a se mover para a por- las umas s outras, induz diferenciao de extracelular. As clulas novas so adiciona-
o anterior do pseudoplasmdio, en- clulas pr-esporo e dirige a migrao de das regio anterior do tubo, forando-o
quanto amebas expostas inanio du- clulas pr-pednculo para a parte anteri- mais para dentro da estrutura culminativa.
rante o fim do ciclo, tendem a permanecer or do agregado. Esse tubo se diferencia para tornar-se o pe-
na poro posterior (McDonald e Durs- Uma vez completo, o agregado tomba dnculo. Ao mesmo tempo, as clulas pstA
ton, 1984; Weijer et al., 1984). Esse traba- sobre um dos lados e forma o grex migra- que tinham ficado na regio posterior do
lho foi confirmado e ampliado por Ohmori trio. A maioria das clulas pr-pedncu-
e Maeda (1987), que mostraram que clu- lo esto nos 20 porcento anteriores do
Figura 1.26
las no-alimentadas durante a parte tar- grex, porm, h tambm algumas clulas
Regulao da diferenciao de clulas pedun-
dia do ciclo celular, respondem de manei- pr-pednculo espalhadas atravs da par-
culares durante a fase de culminao do cresci-
ra diferente ao cAMP e mostram adesivi- te posterior. Clulas pr-pednculo podem mento de Dictyostelium. Representao
dade muito mais alta que clulas jejuadas ser distinguidas pela sua secreo de pro- esquemtica mostrando que clulas pr-esporo
imediatamente aps a mitose. Williams e tena A da matriz extracelular para espa- e pr-pednculo esto em geral misturadas no
colaboradores (1989) acharam que clu- os intercelulares. No centro da poro estgio precoce da agregao, mas se separam
las pr-esporo e pr-pednculo podem ser anterior do grex, um outro grupo de clu- de modo que a maioria das clulas pr-
diferenciadas em agregados precoces e las pr-pednculo comea a secretar uma pednculo se encontrem na parte anterior do
que esto distribudas de modo aleatrio segunda nova protena (protena B), para grex. As clulas pr-pednculo A constituem
atravs desses montes hemisfricos. As- sua matriz extracelular. Essas clulas so a maior parte do anterior do grex, com alguma
sim, as tendncias para certos destinos chamadas clulas pr-pednculo B (pstB), clulas similares no posterior. Clulas pr-
foram estabelecidas at mesmo antes do enquanto a maioria das clulas pr-pedn- pednculo B so vistas na parte central da
grex comear a migrar. Dentro de cada agre- culo so conhecidas como clulas pr- poro anterior do grex. Nos estgios preco-
gado, a maioria das clulas pr-pedncu- pednculo A (pstA) (Figura 1.26). Outro ces da culminao, as clulas pr-pednculo
lo, migram ativamente para o anterior, en- grupo de clulas pr-pednculo, as clu- do posterior migram para formar o disco basal
quanto clulas pr-esporo permanecem las pstO, esto espalhadas de maneira e os clices do saco de esporos; as clulas pr-
no que se tornar a regio posterior do esparsa atravs das clulas pr-esporo, e pednculo A do anterior migram para o centro
e se tornam clulas pr-pednculo B. Isso es-
grex. Essa migrao provavelmente de- migram mais lentamente em direo ao
tende o pednculo at que esse eleve a caixa de
vida a repetidos pulsos de cAMP que ain- anterior. Quando o grex se encontra na
esporos acima da superfcie. (Segundo
Harwood et al., 1992).
Clulas pr-pednculo A Clice superior

Clulas pr-pednculo B
Clulas pr-pednculo AB Clulas
Direo do movimento celular pr-esporo
Clulas pr-esporo Clice
Pr-pednculo AB
Pr-pednculo AB Inferior Pr-pednculo AB
Pr-pednculo B
Guarda da Pr-pednculo A
retaguarda Disco basal interior
Disco basal exterior
Pr-pednculo B Pr-pednculo B
Agregado Grex Culminante precoce Culminante mdio Culminante tardio

grex migram para as bordas da regio pr- (Gross et al., 1983; Wang et al., 1990). passa a fosforilar um repressor que esta-
esporo e diferenciam-se no invlucro dos Bonner e colaboradores (1985), sugeriram va inibindo a expresso dos genes de di-
esporos e disco basal (Williams e Jermyn, que como a luz causa difuso mais rpida ferenciao do pednculo. No estado fos-
1991; Harwood et al., 1992). Finalmente, da amnia, remove o inibidor permitindo forilado, o inibidor inativo. Portanto, uma
os esporos so levantados 2 mm acima assim, o progresso da culminao. vez que os nveis de cAMP se elevam (pela
do solo, de onde podem ser dispersos A amnia parece inibir a produo do remoo da amnia), a PKA pode inativar
pelo vento ou um animal que passa. pednculo pelos menos de duas manei- o inibidor dos genes formadores do pe-
O gatilho para a culminao parece ser ras. Inibe a ao de DIF (Wang e Schaap, dnculo (Figura 1.27). [intro.4html]
a luz solar ou a baixa umidade. Experimen- 1989), e inibe a produo de cAMP nas
tos recentes sugerem que esses dois fa- clulas pr-pednculo (Schindler e Sus- Figura 1.27
tores causam a difuso de amnia da les- sman, 1977; Harwood et al., 1992). Esse Uma hiptese para a iniciao coordenada da
ma. A amnia produzida copiosamente cAMP necessrio para ativar a protena culminao e diferenciao de clulas
por lesmas migratrias e reprime a culmi- quinase cAMP-dependente (PKA). Clu- pedunculares em Dictyostelium. A luz solar
dissipa a amnia na parte anterior do grex,
nao. Sempre que a amnia estiver exau- las pr-pednculo contendo PKA no- permitindo maior produo de cAMP nas c-
rida (quer naturalmente ou experimental- funcional, no fosforilam certas protenas. lulas pr-pednculo. A concentrao mais alta
mente), a culminao comea (Schindler e Essas clulas no migram para a regio de cAMP ativa a PKA, que fosforila um
Sussman, 1977; Newell e Ross, 1982; central anterior, nem se diferenciam em inibidor da expresso gnica do pednculo. O
Bonner et al., 1985). A amnia inibe a con- clulas do pednculo (Firtel e Chapman, inibidor fosforilado no pode mais inibir os
verso de clulas pstA em pstB e probe a 1990; Harwood et al., 1992). Os dados genes pednculo-especficos. A seqncia pela
qual a formao de esporos inibida, no est
continuao da formao do pednculo sugerem que quando PKA ativada, clara. (Baseado em modelos de Bonner et al.,
1985, e Harwood et al., 1992)
cAMP
Amnia
Repressor ativo da
diferenciao e de Migrao
genes de migrao continuada
peduncular do grex
Luz solar PKA

inativa
cAMP
PKA
ativa
Transcrio
do gene da protena B
da matriz extracelular;
Repressor inativo
migrao de clulas
(fosforilado)
pr-pednculo;
diferenciao e
culminao peduncular
Padres desenvolvimentais entre metazorios

Como o restante deste livro se ocupa do desenvolvimento de metazorios - animais
multicelulares que atravessam estgios embrionrios de desenvolvimento - apre-
sentaremos um viso panormica dos seus padres desenvolvimentais.* A Figura
1.28 ilustra os principais rumos evolutivos do desenvolvimento metazorio. A ob-
servao mais impressionante que a vida no evoluiu segundo uma linha reta;
apresenta diversos caminhos evolutivos ramificados. Podemos ver que a maioria
das espcies de metazorios pertence a um de dois principais ramos de animais:
protostomatas e deuterostomatas.
*Plantas passam por padres igualmente complexos e fascinantes de desenvolvimento embri-

onrio e ps-embrionrio. No entanto, o desenvolvimento das plantas difere significativamente
daquele dos animais; a incluso de um tratamento abrangente do seu desenvolvimento teria dobrado
a extenso deste livro. Por isso, foi tomada a deciso de enfocar neste texto, o desenvolvimento dos
animais. Para uma reviso, veja Singer, 1997.
BILATERIA RADIATA PARAZOA
DEUTEROSTOMATAS PROTOSTOMATAS
Ascdios Moluscos Artrpodos Platel- Cnidrios Porferos

Nematelmintos
Vertebrados (Tunicados) Equinodermos Aneldeos mintos (Celenterados) (Esponjas)
Segmentados No-segmentados
Larva
trocfora
Clivagem em
a
ad
espiral gastrulao
m
lo
protostosomal da
ce
ma
do
lo
eu
ce
Larva dipleura
ps
a
izo
ad
em
(tornria)
m
qu
elo
ag
es
ac
nh
em
Li
em
ag
ag
nh
Clivagem radial
nh
Li
gastrulao Li
deuterostomal
L
DIA
RA
SIMETRIA Platelmintos primitivos RIA
ET
BILATERAL (acelomados) SIM
Larvas planulides
Protozorios coloniais
primitivos
Protistas flagelados
Figura 1.28
Principiais divergncias evolucionrias em animais existentes. (Outros modelos so possveis,
porm, os esquemas em geral so todos semelhantes ao mostrado aqui.)
Os Porferos
Considera-se que os protistas coloniais deram origem, ao menos, a dois grupos de
metazorios, ambos passando por estgios embrionrios. Um desses grupos o Porfero
(esponjas). Esses animais desenvolvem-se de um modo to diferente daquele de qual-
quer outro grupo de animais, que alguns taxonomistas sequer consideram-nos
metazorios (chamando-os, parazorios). Uma esponja tem trs tipos principais de
clulas somticas, mas um deles, o arquecito, pode se diferenciar em todos os outros
tipos. As clulas de uma esponja quando passadas por uma peneira, podem regenerar
novas esponjas a partir de clulas individuais. Ainda mais, em alguns casos, tal re-
agregao espcie-especfica: se clulas individuais de esponja de duas espcies
diferentes forem misturadas, cada uma que se re-forma contm somente clulas de
uma espcie (Wilson, 1907). Nesses casos, admite-se que os arquecitos mveis cole-
cionam clulas de sua espcie, mas no das outras (Turner, 1978). Esponjas no con-
tm mesoderma, no havendo portanto verdadeiros sistemas de rgos em Porfero;
esses seres no tm tubo digestivo, sistema circulatrio, nervos ou msculos. Assim,
apesar de passarem por estgios embrionrios e larvais, esponjas so muito pouco
parecidos com a maioria dos metazorios (veja Fell, 1997).
Protostomatas e Deuterostomatas
O outro grupo de metazorios emergindo dos protistas coloniais caracterizado pela
presena de trs camadas germinativas durante o desenvolvimento. Alguns membros
do grupo constituem os Radiatas, assim chamados porque tm simetria radial tal como
um tubo ou uma roda. Os Radiatas incluem os cnidrios (medusas, corais e hidras) e
ctenforos (medusas de crista). Nesses animais, o mesoderma rudimentar, consistin-
do de clulas escassamente disseminadas em uma matriz gelatinosa. Porm, a maioria
dos metazorios tem simetria bilateral, constituindo assim, os Bilaterias. Esses filos
bilaterais so classificados como platelmintos, protostomatas ou deuterostomatas.
Pensa-se que todos os Bilateria descendam de um tipo primitivo de platelminto. Esses
platelmintos foram os primeiros a ter mesoderma verdadeiro (embora no tivessem
ficado ocos para formar uma cavidade corprea), e foram considerados parecidos com
as larvas de certos celenterados contemporneos. Enquanto os platelmintos so des-
providos de celoma (cavidade corprea), os nematelmintos (e rotiferas) tm uma cavi-
dade corprea diferente daquela de todos os outros animais, por ser desprovida de
revestimento mesodrmico. A maioria dos filos so celomados, isto , possuem uma
cavidade corporal revestida por mesoderma.
As diferenas entre as duas divises de Bilateria esto ilustradas na Figura 1.29.
Protostomatas (do Grego, boca primeiro), incluem os filos dos moluscos, artrpodos
e vermes; so assim chamados porque a boca formada em primeiro lugar, junto ou
prximo da abertura intestinal, produzida durante a gastrulao. O nus se forma mais
tarde em outro local.
A cavidade corprea desses animais se forma a partir de uma previamente slida
corda de clulas mesodrmicas, tornadas ocas. A outra grande diviso dos Bilateria
a linhagem dos deuterostomatas. Os filos nessa diviso incluem os chordatas e os
equinodermos. Embora possa parecer estranho classificar seres humanos e cavalos
no mesmo grupo que estrelas-do-mar e ourios-do-mar, alguns traos embriolgicos
acentuam esse parentesco. Em primeiro lugar, nos deuterostomatas (do Grego signifi-
cando boca depois), a abertura bucal formada depois da abertura anal. Tambm,
enquanto prostostomatas em geral formam suas cavidades corpreas tornando oco
um bloco slido de mesoderma (formao esquizelide), a maioria dos deuterostomatas
formam suas cavidades corpreas a partir de bolsas mesodrmicas estendendo-se do
intestino (formao enteroclica). Porm, deve-se mencionar que h muitas excees
a essas generalizaes.
Protostomatas e deuterostomatas diferem na maneira pela qual so clivados. Na
maioria dos deuterostomatas, os blastmeros so perpendiculares ou paralelos uns aos
outros. Isso chamado clivagem radial. Protostomatas ao contrrio, tm uma extensa
variedade de tipos de clivagem. Muitas espcies formam blstulas compostas por clu-
las que esto em ngulos agudos relativamente ao eixo polar do embrio. So por isso
considerados sofrer clivagem espiral. Alm disso, os blastmeros em estgio de clivagem,
na maioria dos deuterostomatas, tm maior capacidade de regular seu desenvolvimento
do que os prostostomatas. Se um nico blastmero removido de um embrio
quadricelular de ourio-do-mar ou camundongo, tal blastmero ir desenvolver-se em
um organismo inteiro, e os trs-quartos restantes do embrio tambm iro se desenvolver
(A) PROTOSTOMATAS (B) DEUTEROSTOMATAS
1. Clivagem espiral 1. Clivagem radial
2. Desenvolvimento esquizoclico 2. Desenvolvimento enteroclico
Celoma Celoma
Bolsa
Blastocele Blastocele
Intestinal
Mesoderma Bolsas se
se divide destacam
Mesoderma Mesoderma
Intestino Intestino Intestino Intestino
3. Tendncia a no regulao 3. Tendncia regulao
Embrio de Um blastmero Desenvolvimento

de 4 clulas excludo interrompido Embrio de Um blastmero Duas larvas normais
de 4 clulas excludo se desenvolvem
Figura 1.29
Tendncias principais dos prostostomatas e
normalmente. Porm, se a mesma operao fosse realizada em um embrio de lesma ou de deuterostomatas. Excees todas essas ten-
verme, tanto o blastmero isolado como os restantes se desenvolveriam em embries dncias gerais evoluram secundariamente em
certos membros de cada grupo. (A maioria dos
parciais cada um carente daquilo que foi formado a partir dos outros.
vertebrados por exemplo, no tem uma forma-
A evoluo dos organismos depende de alteraes herdadas em seu desenvolvi- o estritamente enteroclica da cavidade cor-
mento. Um dos maiores avanos evolucionrios o ovo amnitico ocorreu entre os poral; e os embries de certos deuterostomatas,
deuterostomatas. Esse tipo de ovo, exemplificado pelo da galinha (Figura 1.30), como os tunicados, no sofrem regulao se os
considerado ter-se originado dos ancestrais anfbios dos rpteis, h cerca de 255 blastmeros so deles removidos.)
milhes de anos. O ovo amnitico permitiu aos vertebrados vagar pela terra longe de
suprimentos de gua existentes. Ao passo que a maioria dos anfbios obrigada a
voltar para a gua para procriar e permitir o desenvolvimento de seus ovos, o ovo
amnitico carrega seu prprio suprimento de gua e nutrientes. O ovo fertilizado
internamente e contm a gema para nutrir o embrio em desenvolvimento. Ainda,
contm quatro bolsas: o saco vitelnico, que armazena protenas nutrientes, o mnio,
que contm fluido banhando o embrio, a alantide, na qual restos do metabolismo
embrionrio so coletados, e o crio, que interage com o ambiente externo, seletiva-
mente permitindo materiais chegar ao embrio. O todo dessa estrutura est contido em
uma casca que permite a difuso de oxignio, ao mesmo tempo sendo suficientemente
dura para proteger o embrio de agresses ambientais. Desenvolvimento semelhante
de protees do ovo permitiram aos artrpodes serem os primeiros invertebrados
sobre a terra. Assim, a travessia final dos limites entre gua e terra ocorreu com a
modificao do estgio mais precoce do desenvolvimento o ovo.
Figura 1.30 Embrio

Diagrama do ovo amnitico do pinto, mos- Intestino
trando o desenvolvimento das membranas en-
mnio
volvendo o embrio. (A) Incubao de trs dias.
O mesoderma extra-embrionrio se estende do Cavidade
embrio para prover vasos sangneos para e amnitica
de vrias regies fora do embrio. (B) Incuba-
Alantide
o de sete dias. A origem das membranas ser
detalhada no captulo 9. A gema ser finalmen- Crio
te rodeada pelo saco vitelnico que permite a
entrada de nutrientes nos vasos sangneos. O Gema
crio derivado em parte do ectoderma e es-
tende-se do embrio at a casca (onde ir tro- Saco vitelino
car oxignio e gs carbnico e obter clcio da Alantide
casca). O mnio prove o meio fluido no qual
(A) (B)
cresce o embrio, e a alantide coleta resduos
nitrogenados que seriam perigosos para o em-
brio. Finalmente, o endoderma se transforma
no intestino e envolve a gema. A evoluo do
mnio e das outras membranas extra-embrio- A biologia do desenvolvimento proporciona um sortimento infinito de fascinantes
nrias constituiu uma grande linha divisria problemas e animais. No presente livro, encontraremos apenas uma pequenssima
entre aqueles vertebrados cuja reproduo est amostra deles, servindo para ilustrar os princpios mais importantes do desenvolvi-
ligada gua (anamniotas) e aqueles que po- mento animal (para uma cobertura mais completa da diversidade do desenvolvimento
dem se reproduzir em reas secas (amniotas).
animal atravs dos filos, veja Gilbert e Raunio,1997). Estamos apenas observando o
conjunto das mars ao nosso alcance, enquanto todo o oceano do desenvolvimento
se estende nossa frente. Aps uma breve viso dos princpios genticos e celulares
relevantes para a biologia do desenvolvimento, investigaremos os estgios precoces
da embriognese animal: fertilizao, clivagem, gastrulao e construo do plano do
corpo vertebrado. Captulos posteriores se concentraro nos mecanismos genticos e
celulares pelos quais ele elaborado. Embora uma tentativa de cobrir as variaes
importantes que ocorreram no reino animal tivesse sido feita, um certo chauvinismo
deuterostossmico pode ter ficado aparente.
LITERATURA CITADA
Bergman, K., Goodenough, U. W., Coodenough, Bonner, J., Hay, A. and John, D. 1985. pH Firtel, R. A. and Chapman, A. L. 1990. A role
D. A., Jawitz, J. and Martin, H. 1975. Gametic affects fruiting and slug orientation in Dictyos- for cAMP-dependent protein kinase A in early
differentiation in ChIamydomonas reinhardtii. telium discoideum. J. Embryol. Exp. Morphol. Dictyostelium development. Genes Dev. 4:18-28.
II. Flagellar membranes and the agglutination 87: 207-213.
Fulton, C. 1977. Cell differentiation in Naegleria
reaction. J. Cell Biol. 67: 606-622.
da Silva, A. M. and Klein, C. 1990. Cell adhesion gruberi. Annu. Rev. Microbiol. 31: 597-629.
Beug, H., Gerisch, G., Kempff, S., Riedel, V. and transformed D. discoideum cells: Expression of
Fulton, C. and Walsh, C. 1980. Cell differentia-
Cremer, G. 1970. Specific inhibition of cell gp80 and its biochemical characterization. Dev.
tion and flagellar elongation in Naegleria
contact formation in Dictyostelium by univalent Biol. 140: 139-148.
gruberi: Dependence on transcription and
antibodies. Exp. Cell Res. 63: 147-158.
Early, A., Abe, T. and Williams, J. 1995. Evidence translation. J. Cell Biol. 85: 346-360.
Bonner, J. T. 1947. Evidence for the formation for positional differentiation of prestalk celIs
Garcia, E. and Dazy, A.-C. 1986. Spatial
of cell aggregates by chemotaxis in the develop- and for a morphogenetic gradient in Dictyoste-
distribution of poly(A) + RNA and protein
ment of the slime mold Dictyostelium discoi- lium. Cell 83: 91-99.
synthesis in Acetabularia mediterranea. Biol.
deum. J. Exp. Zool. 106: 1-26.
Faix, J., Gerisch, G. and Noegel, A. A. 1990. Cell 58: 23-29.
Bonner, J. T. 1957. A theory of the control of Constitutive overexpression of the contact A
Gilbert, S. F. aned Raunio, A. M. 1997. Embryo-
differentiation in the cellular slime molds. Q. glycoprotein enables growth-phase celIs of Dic-
logy: Constructing the Organism. Sinauer
Rev. Biol. 32: 232-246. tyostelium discoideum to aggregate. EMBO J. 9:
Associates, Sunderland, MA.
2709-2716.
Bonner, J. T., Berkley, D. S., Hall, E. M., Konijn,
Goodenough, U. W. and Weiss, R. L. 1975,
T. M., Mason, J. W., OKeefe, G. and Fell, P. 1997. Porifera, the sponges. In S. F.
Gametic differentiation in ChIamydomonas rei-
Gilbert and A. M. Raunio (eds.), Embryology:
Wolfe, P. B. 1969. Acrasin, acrasinase and the nhardtii. III. Cell wall lysis and microfilament
Constructing the Organism. Sinauer Associates,
sensitivity to acrasin in Dictyostelium discoi- associated mating structure activation in wild-type
Sunderland, MA.
deum. Dev. Biol. 20: 72-87. and mutant strains. I. Cell Biol. 67: 623-637.
Cross, J., Bradbury, J, Kay, R. and Peacey, M. Krutch, J. W. 1956. The Great Chain of Life. Shaffer, B. M. 1975. Secretion of cyclic AMP
1983. Intracellular pH and the control of cell Houghton Mifflin, Boston. [pp. 28-29] induced by cyclic AMP in the cellular slime mold
differentiation in Dictyostelium discoideum. Dictyostelium discoideum. Nature 255: 549-552.
Loormis, W. F. 1988. Cell-cell adhesion in Dic-
Nature 303: 244-245.
tyostelium discoideum. Dev. Genet. 9: 549-559. Shaulsky, G. and Loomis, W. F. 1995. Mitochon-
Hmmerling, J. 1934. ber formbildended drial DNA replication but no nuclear DNA
Matsukuma, S. and Durston, A. J. 1979. replication during development. Proc. Natl.
Substanzen bei Acetabularia mediterranea, ihre
Chemotactic cell sorting in Dictyostelium dis- Acad. Sci. USA 92: 5660-5663.
rumliche und zeitfiche Verteilung und ihre
coideum. J. Embryo1. Exp. Morphol, 5O:
Herkunft. Wlhelm Roux Arch. Entwicklungs- Siegert, F. and Weijer, C. J. 1989. Digital image
243-251.
mech. Org. 131: 1-81. processing of optical density wave propagation
McDonald, S. A. and Durston, A. J. 1984. The in Dictyostelium discoideum and analysis of the
Hartmann, M. 1921. Die dauernd agame Zucht
cell cycle and sorting out behaviour in Dictyos- effects of caffeine and ammonia. J. Cell Sci. 93:
von Eudorina elegans, experimentelle Beitrge
telium discoideum. J. Cell Sci. 66: 196-204. 325-335.
zum Befruchtungs-und Todproblem. Arch.
Protistk. 43: 223-286. Mee, J. D., Tortolo, D. M. and CoukelI, M. B. Siegert, F. and Weijer, C. J. 1991. Analysis of
1986. Chemotaxis -associated properties of optical density wave propagation anel cell
Harwood, A. J., Hopper, N. A., Simon, M.-N.,
separated prestalk and prespore celIs of Dic- movement in the cellular slime mould Disctyos-
Driscoll, D. M., Veron, M. and Williams, J. G.
tyostelium discoideum. Biochem. Cell Biol. telium discoideum. Physica D 49: 224-232.
1992. Culmination in Dictyostelium is regulated
64:722-732.
by the cAMP-dependent protein kinase. Cell Sies, H. 1988. A new parameter for sex education.
69: 615-624. Morris, H. R., Taylor, G. W., Masento, M. S., Nature 332: 495.
Jermyn, K. A. and Kay, R. R. 1987. Chemical Singer, S. 1997. Plant development. In S. F.
Jermyn, K. A. and Williams, J. 1991. An analysis
structure of the morphogen differentiation-in- Gilbert and A. M. Raunio (eds.), Embryology:
of culmination in Dictyostelium using prestalk
ducing factor from Dictyostelium discoideum. Constructing the Organism. Sinauer Associates,
and stalk-specific cell autonomous markers. De-
Nature 328: 811-814. Sunderland, MA.
velopment 111: 779-787.
Mllier, K. and Gerisch, G. 1978. A specific gly- Strickberger, M. W. 1985. Genetics, 3rd Ed.
Johnson, R. L., Gundersen, R., Lilly, P., Pitt, G.
coprotein as the target of adhesion blocking Fab Macmillan, New York.
S., Pupillo, M., Sun, T. J, Vaughan, R. A. and
in aggregating Dictyostelium cells. Nature 274:
Devreotes, P. N. 1989. G-protein-linked signal Sumper, M., Berg, E., WenzI, S. and Gocil, K.
445-447.
transduction systems control development in 1993. How a sex pheromone might act at a
Dictyostelium. Development [Supp1.1: 75-80. NewelI, P. and Ross, F 1982. Genetic analysis of concentration below 10-16 M. EMBO J. 12:
the slug stage of Dictyostelium discoideurn. J. 831-836.
Kay, R. R. and Jermyn, K. A. 1983. A possible
Genet. Microbiol. 128: 1639-1652.
morphogen controlling differentiation in Dic- Takeuchi, 1. 1991. Cell sorting and pattern for-
tyostelium. Nature 303: 242-244. Ohmori, T. and Maeda, Y. 1987. The develop- mation in Dictyostelium discoideum. In J.
mental fate of Dictyostelium discoideum cells Gerhart (ed.), Ce11-Cell Interactions in Early
Kay, R. R., Berks, M. and Traynor, D. 1989.
depends greatly on the cell-cycle position at the Development. Wiley-Liss, New York, pp.
Morphogen hunting in Dictyostelium. Develop-
onset of starvation. Cell Differ. 22:11-18. 249-259.
ment [Supp1.1: 81-90.
Pommerville, J. and Kochert, G. 1982. Effects Tomchick, K. J. and Devreotes, P. N. 1981.
Keller, E. F. and Segal, L. A. 1970. Initiation of Adenosine 3',5' monophosphate waves in Dictyos-
of senescence on somatic cell physiology in the
slime mold aggregation viewed as an instability. telium discoideum: A demonstration by isotope
green alga Volvox carteri. Exp. Cell Res. 14:
J. Theoret. Biol. 26: 399-415. dilution -fluorography. Science 212: 443-446.
39-45.
Kirk, D. L. 1988. The ontogeny and phylogeny Turner, R. S. Jr. 1978. Sponge cell adhesions. In
Powers, J. H. 1908. Further studies on Volvox,
of cellular differentiation in Volvox. Trends D. R. Garrod (ed.), Specificity of Embryological
with description of three new species. Trans.
Genet. 4: 32-36. Interactions. Chapman and HalI, London, pp.
Am. Micros. Soc. 28: 141-175.
Kirk, D. L. and Kirk, M. M. 1986. Heat shock 199-232.
elicits production of sexual inducer in Volvox. Raper, K. B. 1940. Pseudoplasmodium formati-
Tyson, J. J. and Murray, J. D. 1989. Cyclic AMP
Science 231: 51-54. on and organization in Dietyostelium discoi-
waves during aggregation of Dictyostelium
deum. J. Elisha Mitchell Sci. Soc. 56: 241-282.
Kirk, D. L., Viamontes, G. I., Green, K. J. and amoebae. Development 106: 421-426.
Bryant, J. L. Jr. 1982. Integrated morphogene- Robertson, A., Drage, D. J. and Cohen, M. H. 1972. Walsh, C. 1984. Synthesis and assembly of the
tic behavior of cell sheets: Volvox as a model. In Control of aggregation in Dictyostelium discoi- cytoskeleton of Naegleria gruberi flagellates.
S. Subtelny and P. B. Green (eds.), Developmen- deum by an external periodic pulse of cyclic J. Cell Biol. 98: 449-456.
tal Order: Its Origin and Regulation. Alan R. adenosine monophosphate. Science 175: 333-335.
Liss, New York, pp. 247-274. Wang, M. and Schaap, P. 1989. Ammonia
Schaap, P. and van Driel, R. 1985. The induction depletion and DIF trigger stalk cell differentia-
Kloppstech, K. and Schweiger, H. G. 1975. of post-aggregative differentiation in Dictyos- tion in intact Dictyostelium discoideum slugs.
Polyadenylated RNA from Acetabularia. Diffe- teium discoideum by cAMP. Evidence for in- Development 105: 569-574
rentiation 4:115-123. volvement of the cell surface cAMP receptor.
Exp. Cell Res. 159: 388-398. Wang, M., van Driel, R. and Schaap, P. 1988a.
Knecht, D. A., Fuller, D. and Loomis, W. F. Cyclic AMP-phosphodiesterase induces dediffe-
1987. Surface glycoprotein gp24 involved in Schindier, J. and Sussman, M. 1977. Ammonia rentiation of prespore celIs in Dictyostelium
early adhesion of Dictyostelium discoideum. Dev. determines the choice of morphogenetic discoideum slugs: Evidence that cyclic AMP is
Biol. 121: 277-283. pathways in Dictyostelium discoideum. J. Mol. the morphogenetic signal for prespore differen-
Biol. 116:161-169. tiation. Development 103: 611-618.
Konijn, T. M., van der Meene, J. G. C., Bonner,
J. T. and Barkley, D. S. 1967. The acrasin activity Shaffer, B. M. 1953. Aggregation in cellular
Wang, M., Aerts, R. J., Spek, W. and Schaap,
of adenosine -3,5'-cyclic phosphate. Proc. Natl. slime molds: In vitro isolation of acrasin.
P. 1988b. Cell cycle phase in. Dictyostelium
Acad. Sei. USA 58: 1152-1154. Nature 171: 975.
discoideum is correlated with the expression of Williams, J. G. and Jermyn, K. A. 1991. Cell Williams, J. G., Duffy, K. T., Lane, D. P.,
cyclic AMP production, detection and degrada- sorting and positional differentiation during Dic- McRobbie, S. J., Harwood, A. J., Traynor, D.,
tion. Involvement of cAMP signalling in cell tyostelium morphogenesis. In J. Gerhart (ed.), Kay, R. R. and Jermyn, K. A. 1989. Origins of
sorting. Dev. Biol. 125:410-416. Ce11-Cell Interactions in Early Development. the prestalk-prespore pattern in Dictyostelium
Wiley-Liss, New York, pp. 261-272. development. Cell 59: 1157-1163.
Wang, M., Roelfsema, J. H., Williams, J. G. and
Schaap, P. 1990. Cytoplasmic acidification Williams, J. C., Ceccarelli, A., McRobbie, S., Wilson, E. B. 1896. The Cell in Development
facilitates but does not mediate DIF-induced Mahbubani, H., Kay, R. R., Early, A., Berks, M. and Inheritance. Macmillian, New York.
prestalk gene expression in Dictyostelium dis- and Jermyn, K. A. 1987. Direct induction of
Wilson, H. V. 1907. On some phenomena of
coideum. Dev. Biol. 140: 182-188. Dictyostelium pre-staIk gene expression. of DIF
coalescence and regeneration. in sponges. J. Exp.
provides evidence that DIF is a morphogen. Cell
Weijer, C. J., DuschI, G. and David, C. N. 1984. Zool. 5: 245-258.
49: 185-192.
Dependence of cell-type proportioning and
sorting on cell cycle phase in Dictyostelium dis-
coideum. Exp. Cell Res. 70: 133-145.
Genes e desenvolvimento:
Introduo e tcnicas 2
O que gostaramos de saber se a estrutura
determinada diretamente pela informao
codificada no DNA, gravada no ovo... na
extenso em que estrutura pode ser ex-
pressa por informao. JONATHAN
E NTRE OS CARACTERES que fornecem os dados para a teoria, e os
genes postulados, aos quais os caracteres se referem, est todo o cam-
po do desenvolvimento embrionrio. Aqui Thomas Hunt Morgan (1926)
estava verificando que o nico caminho de gentipo para fentipo, passava atravs
de processos desenvolvimentais. No comeo do sculo vinte, embriologia e gentica
BARD (1990) no eram consideradas cincias separadas. Divergiram na dcada de 1920, quando
Morgan redefiniu a gentica como a cincia que estuda a transmisso dos traos em
Os segredos que me enlaam e cativam so oposio embriologia, a cincia que estuda a expresso desses traos. Durante a
em geral segredos da hereditariedade: como ltima dcada, porm, as tcnicas da biologia molecular realizaram uma reaproximao
uma semente de pra vira uma pereira em entre embriologia e gentica. Na realidade, os dois campos se ligaram novamente a tal
vez de um urso polar. CYNTHIA
ponto que se torna necessrio uma discusso prvia da gentica molecular neste
OZICK (1989)
texto. Questes do desenvolvimento animal que no poderiam ser consideradas h
uma dcada, esto sendo agora resolvidas por um conjunto de tcnicas envolvendo
sntese de cidos nuclico e hibridizao. Este captulo procura situar essas novas
tcnicas dentro do contexto do dilogo, ora em curso, entre gentica e embriologia.
As origens embriolgicas da teoria dos genes

Ncleo ou Citoplasma: Qual Controla a Hereditariedade?
Mendel chamou-os Formbildungelementen, elementos construtores de formas; ns os
chamamos de genes. Porm, na terminologia de Mendel que vemos como no sculo
dezenove os conceitos de herana e desenvolvimento estavam intimamente entrelaa-
dos. Entretanto, as observaes de Mendel no indicaram onde na clula ficavam esses
elementos hereditrios, nem como eram levados a se expressarem. A teoria dos genes,
que viria a ser a pedra angular da gentica moderna, teve origem em uma controvrsia no
campo da embriologia. Em fins sculo XIX, um grupo de cientistas comeou a estudar,
por seu valor intrnseco, como ovos fertilizados davam origem a organismos adultos.
Dois jovens embriologistas americanos, Edmund Beecher Wilson e Thomas Hunt Morgan
(Figura 2.1), tornaram-se parte desse grupo de embriologistas fisiolgicos, cada um
tornando-se partidrio na controvrsia sobre qual dos dois compartimentos do ovo
fertilizado - o ncleo ou o citoplasma - controla a herana.
35
(B)
Figura 2.1
(A) E. B. Wilson (1856-1939; mostrado aqui em
aproximadamente 1899), um embriologista cujo
trabalho, na fase precoce da embriologia e da de-
terminao sexual, muito avanou as hipteses
cromossmicas do desenvolvimento. (Wilson era
tambm reconhecido como um dos melhores vio-
loncelistas amadores do pas.) (B) Thomas Hunt
Morgan (1866-1945), que desenvolveu a teoria
dos genes a partir da embriologia. Essa fotografia
- tomada em 1915, quando os elementos bsicos
da teoria dos genes estavam se encontrando
mostra Morgan usando uma lente manual para
identificar moscas. (A) cortesia de W. N. Timmins;
(B) cortesia de G. Allen.)
(A)
Quando Morgan e Wilson entraram nesse debate, a disputa j estava bem ativa.
Uma escola associada a Oskar Hertwig, Wilhelm Roux e Theodor Boveri, propunha
que os cromossomos do ncleo continham os elementos construtores de formas.
Esse grupo era desafiado por Eduard Pflger, T. L. W. Bischoff, Wilhelm His e seus
colegas, que acreditavam que estruturas pr-formadas no poderiam causar to enor-
mes mudanas durante o desenvolvimento; ao contrrio, eles acreditavam que os
padres herdados de desenvolvimento eram causados pela criao de novas molcu-
las do gameta interativo, citoplasmas. Morgan aliou-se a esse ltimo grupo e obteve
dados que interpretou com sendo consistentes com o modelo citoplasmtico da he-
rana. Em seu experimento mais crucial, ele removeu citoplasma do rcem-fertilizado
ovo ctenforo (gelia de crista). Em 1897 Morgan relatou:
Aqui, embora todo o ncleo de segmentao esteja presente, devido perda de

parte do citoplasma, produz-se embries com defeito... Parece no haver escape
da concluso que no citoplasma, e no no ncleo, est o poder de diferenciao
dos estgios precoces do desenvolvimento.
CAPTULO 2 Genes e Desenvolvimento 37
Wilson, nesse nterim, tornou-se o maior proponente do ponto de vista de que os

elementos formadores se encontravam nos cromossomos nucleares. Defendeu
vigorosamente essa idia em seu livro A Clula no Desenvolvimento e na Herana
(1896), salientando a necessidade da presena do ncleo para regenerao dos
protozorios (veja captulo 1):
Esse fato presume que o ncleo , se no o local da formao de energia, ao menos,

o fator controlador dessa energia e, por isso, o fator controlador da herana. Essa
conjectura transforma-se em certeza quando nos voltamos para os fatos da matu-
rao (meiose), fertilizao e diviso celular. Todos convergem em direo da
concluso de que a cromatina o elemento essencial para o desenvolvimento.
Wilson (1895) no se esquivou das conseqncias dessa concluso*
Agora, a cromatina sabida ser intimamente semelhante, se no idntica,

substncia conhecida como nuclena...que a anlise demonstra ser um compos- (A)
to qumico toleravelmente bem definido, composto de cido nuclico (um com-
plexo cido orgnico rico em fsforo) e albumina. E assim, chegamos notvel
concluso que a herana pode, talvez, ser efetuada pela transmisso fsica de um
dado composto qumico do progenitor para a descendncia.
Wilson pensou que o material formador de rgos que Morgan havia removido do
citoplasma de ovos de ctenforo, j havia sido para ali secretado pelos cromossomos
nucleares (Wilson, 1894, 1904). Para Wilson (1905) Os materiais citoplasmticos pare-
cem ser apenas o meio imediato ou a causa eficiente da diferenciao, e ainda procu-
ramos sua determinao primria nas causas que residem mais profundamente.
Parte do maior apoio para a hiptese cromossmica da herana estava vindo dos
estudos embriolgicos de Theodor Boveri (Figura 2.2 A), um pesquisador na Estao
Biolgica de Npoles. Boveri fertilizou vulos de ourio-do-mar com altas concentra-
es de seu espermatozide e obteve ovos que haviam sido fertilizados por dois
espermatozides. Na primeira clivagem, esses ovos formaram quatro plos mitticos e
dividiram o ovo em quatro, em vez de duas clulas (veja captulo 4). Boveri ento
separou os blastmeros e demonstrou que cada clula se desenvolvia anormalmente
e de maneiras diferentes por ter cada clula diferentes tipos de cromossomos. Assim,
Boveri declarou que cada cromossomo tinha uma natureza individual e o controle de (B)
diferentes processos vitais.
Figura 2.2
O Cromossomo X como uma Ponte Entre Genes e Desenvolvimento O carter singular do cromossomo foi mostra-
do por Boveri e Stevens. (A) Theodor Boveri
Em adio evidncia de Boveri, E. B. Wilson (1905) e Nettie Stevens (1905a,b) de- (1862-1915) cujo trabalho Wilson (1918) co-
monstraram uma correlao crtica entre cromossomos nucleares e o desenvolvimento mentou: conseguiu a verdadeira fuso de
organizacional. Stevens (Figura 2.2B), uma ex- estudante de Morgan, mostrou que em citologia, embriologia e gentica um feito bi-
92 espcies de insetos (e um cordato primitivo), as fmeas tinham dois cromossomos olgico que... no fica atrs de qualquer outro
sexo-especficos em cada ncleo (XX), enquanto machos tinham somente um cromos- de nosso tempo. Fotografia tirada em 1908,
somo X (XY ou XO). Parecia que uma estrutura nuclear, o cromossomo X, estava quando os estudos cromossmicos e embrio-
controlando o desenvolvimento sexual** . Morgan discordou da interpretao de que lgicos de Boveri estavam no seu apogeu. (B)
Nettie M. Stevens (1861-1912), que treinou
tanto com Boveri como com Morgan, vista
*Note-se que Wilson est escrevendo sobre unidades construtoras de forma na cromatina aqui em 1904 quando era estudante de ps-
em 1896 antes da redescoberta do trabalhos de Mendel ou do estabelecimento da teoria dos doutorado, realizando a pesquisa que correla-
genes. Para uma anlise mais detalhada das interaes entre Morgan e Wilson que levaram cionou o nmero de cromossomos X com o
teoria dos genes, veja Gilbert (1978, 1987) e Allen (1986). desenvolvimento sexual. [(A) cortesia de
**
Baltzer, 1967; (B) cortesia do Instituto
Wilson era um dos amigos mais ntimos de Morgan, que considerava Stevens sua melhor
estudante de ps-graduao. Ambos estavam contra Morgan nessa questo. Mesmo assim,
Carnegie de Washington.]
Morgan apoiou inteiramente o pedido de Stevens para fundos de pesquisa, confirmando suas
qualidades como as melhores possveis. Wilson escreveu uma elogiosa carta de recomendao,
apesar de saber que ela seria uma rival na pesquisa (veja Brush, 1978).
os cromossomos determinavam o sexo. Ao contrrio, ele considerou o conjunto de

cromossomos como uma caracterstica sexual secundria, controlada por alguma subs-
tncia citoplasmtica determinadora do sexo.
A converso de Morgan para a hiptese cromossmica ocorreu depois de
obter dados contrrios s suas teorias (veja Allen, 1978; Gilbert, 1978; Lederman,
1989). Enquanto criava Drosophila para uma srie de experimentos sobre evolu-
o, Morgan comeou a obter vrias mutaes correlacionadas com o sexo. (Como
ele logo iria mostrar, mutaes ligadas ao X apareciam antes de mutaes em
outros cromossomos, porque defeitos no cromossomo X no so mascarados
pelo cromossomo homlogo no macho.) Em 1910, Morgan mostrou que os traos
para ambos sexos e cor branca dos olhos esto correlacionados de alguma manei-
ra com a presena de um dado cromossomo X; entretanto, evitou consider-los
ligados fisicamente. Porm, em 1911mostrou que fatores reguladores da cor dos
olhos, cor do corpo, forma das asas e sexo segregavam-se juntos com o cro-
mossomo X, o que o levou a comear a visualizar os genes como fisicamente
ligados um ao outro no cromossomo. O embriologista Morgan tinha demonstra-
do que cromossomos nucleares eram responsveis pelo desenvolvimento de
caracteres herdados. [gene1.html]
A ciso entre a embriologia e a gentica

A evidncia de Morgan proporcionou uma base material para o conceito do gene. A
gentica havia sido, em geral, uma cincia emprica sobre procriao de animais e
plantas; Morgan deu-lhe um fundamento cientfico. Movida pelo desejo de progre-
dir no conhecimento da reproduo de animais e plantas (e seres humanos), e na
capacidade dos geneticistas de obter rapidamente resultados concretos e matemati-
camente verificveis, a gentica logo se tornou a cincia biolgica predominante
nos Estados Unidos (veja Allen, 1986; Sapp, 1987; Paul e Kimmelman, 1988). Na
dcada de 1930, tornou-se disciplina autnoma, desenvolvendo seu vocabulrio
prprio, revistas, sociedades, organismos favorecidos, professorados e regras de
evidncia. Hostilidade entre embriologia e gentica tambm emergiu. Os geneticis-
tas acreditavam que os embriologistas eram antiquados e que o desenvolvimento
viria a ser inteiramente explicado como o resultado da expresso gnica. Conforme
proclamado por Richard Goldschmidt (1938), O desenvolvimento, obviamente, a
produo ordenada de um padro e assim, em ltima anlise, os genes controlam o
padro. Se os embriologistas no olharem para a embriognese em termos da ativi-
dade dos genes, os geneticistas o faro.
Reciprocamente, os embriologistas consideraram os geneticistas como irrelevantes
e mal-informados. Embriologistas como Frank Lillie (1927), Ross Granville Harrison
(1937), Hans Spemann (1938) e Ernest E. Just (1939) (Figura 2.3), argumentaram que
no poderia haver uma teoria gentica do desenvolvimento at que ao menos trs
principais desafios fossem resolvidos:
1. Os geneticistas teriam que explicar como cromossomos que eram considera-

dos idnticos em cada clula do organismo direcionam tipos diferentes e
variveis de citoplasmas celulares.
2. Quase todos genes conhecidos na poca afetavam a modelagem das etapas
finais (cor dos olhos, forma das cerdas, vascularizao alar). Os geneticistas
teriam que produzir evidncia que os genes controlam os estgios precoces da
embriognese. Conforme enunciado por Just (citado por Harrison, 1937), os
embriologistas estavam interessados em saber como uma mosca forma o seu
dorso e no no nmero de cerdas no seu dorso.
3. Os geneticistas teriam que explicar fenmenos como a determinao do sexo
em certos invertebrados (e vertebrados, como rpteis), nos quais o ambiente
determina o fentipo sexual.
(A) (B)
Figura 2.3 (C)

Embriologistas tentaram impedir a gentica de conquistar seu territrio na dcada de 1930.
(A) Frank Lillie encabeou o Laboratrio de Biologia Marinha em Woods Hole e foi um lder na
pesquisa sobre fertilizao e endocrinologia reprodutiva. (B) Hans Spemann ( esquerda) e
Ross Harrison ( direita) aperfeioaram operaes de transplante para descobrir quando eram
determinados os eixos do corpo e dos membros. Argumentaram que os geneticistas no possu-
am um mecanismo para explicar como os mesmos genes nucleares podiam criar tipos celulares
diferentes durante o desenvolvimento. (C) Ernest E. Just fez descobertas cruciais sobre fertili-
zao. Rejeitou a gentica e enfatizou o papel da membrana celular na determinao dos destinos
das clulas. (A cortesia de V. Hamburger; B cortesia de T. Horder; C cortesia do Laboratrio de
Biologia Marinha, Woods Hole.)
O debate tornou-se deveras veemente. Numa retrica, refletindo as ansiedades

polticas do fim da dcada de 1930, Harrison (1937) alertou:
Agora que a necessidade de relacionar os dados da gentica com a embriologia
est sendo usualmente reconhecida e a sede de conhecimento dos geneticistas
comea a impeli-los em nossa direo, no pareceria imprprio apontar para
um perigo dessa ameaada invaso. O prestgio do sucesso desfrutado pela
teoria dos genes poderia facilmente tornar-se um obstculo para a compreenso
do desenvolvimento, por dirigir nossa ateno exclusivamente para o genoma,
enquanto movimentos celulares, diferenciao e todos os processos desenvolvi-
mentais so de fato realizados pelo citoplasma. J temos teorias que referem os
processos do desenvolvimento ao dos genes e consideram toda performance
como nada mais que a consecuo dos potenciais dos genes. Tais teorias so
totais e demasiadamente unilaterais.
At que os geneticistas puderam demonstrar a existncia de variantes herdadas du-

rante a fase precoce do desenvolvimento e at que os geneticistas tiveram uma bem-
documentada teoria sobre como os mesmos cromossomos podiam produzir diferentes
tipos de clulas, os embriologistas em geral no sentiram a necessidade de basear sua
embriologia na ao dos genes. [gene2.html]
Primeiras tentativas da gentica do desenvolvimento

Porm, alguns cientistas acharam que nem a embriologia nem a gentica estavam
completas uma sem a outra. Vrias tentativas foram feitas para sintetizar as duas
disciplinas, mas sua primeira integrao bem-sucedida veio no fim da dcada de
1930, por parte de dois embriologistas, Salome Gluecksohn-Schoenheimer (agora

S. Gluecksohn Waelsch) e Conrad Hal Waddington. Ambos haviam sido treinados
em embriologia na Europa e tinham aprendido gentica nos Estados Unidos com
estudantes de Morgan. Gluecksohn-Schoenheimer e Waddington, tentaram achar
mutaes que afetassem o desenvolvimento precoce e processos afetados por es-
ses genes. Gluecksohn-Schoenheimer (1938, 1940) mostrou que mutaes nos genes
de Brachyury do camundongo, causavam desenvolvimento aberrante da poro
posterior do embrio, e atribuiu os efeitos desses genes mutantes a defeitos no
mesoderma axial que normalmente teriam ajudado a induzir o eixo dorsal.* Alm
disso, Gluecksohn-Schoenheimer (1938) considerou que no trabalho com camun-
dongos no era possvel fazer o que os embriologistas experimentais deveriam estar
fazendo - alterando a estrutura durante seu desenvolvimento e observando quais
eram as conseqncias dessa operao. Em vez disso, um novo tipo de cientista era
necessrio, o geneticista do desenvolvimento:
Enquanto o embriologista experimental desenvolve um dado experimento e em
seguida estuda seus resultados, o geneticista do desenvolvimento tem que estu-
dar primeiro o desenrolar do desenvolvimento (isto , os resultados da pertur-
bao do desenvolvimento) para depois, s vezes, chegar a concluses sobre a
natureza do experimento realizado pelo gene.
Ao mesmo tempo, Waddington (1939) isolava diversos genes que causavam mal-
formaes alares na mosca das frutas, Drosophila. Tambm analisava como esses
genes podiam afetar os primrdios que do origem a essas estruturas. A asa da Droso-
phila, conforme proclamou corretamente, parecia favorvel para pesquisas sobre a
ao desenvolvimental dos genes. Assim, uma das principais objees ao modelo
gentico do desenvolvimento levantadas pelos embriologistas - que os genes atuam
somente sobre a modelagem final do embrio e no sobre seus principais esquemas de
construo foi contrariada. [gene3.html]
Evidncia para a equivalncia genmica

Ainda permanecia uma outra grande objeo para uma embriologia baseada na genti-
ca: Como poderiam genes nucleares dirigir o desenvolvimento se os genes eram os
mesmos em cada tipo celular? Essa equivalncia genmica no estava provada mas
era assumida (porque cada clula o descendente mittico do ovo fertilizado) e um
dos primeiros problemas da gentica do desenvolvimento era o de determinar se cada
clula de um organismo tinha o mesmo genoma que outra.
Metaplasia
A primeira evidncia para equivalncia genmica veio aps a 2a Guerra Mundial, por
parte de embriologistas que estavam estudando a regenerao de tecidos excisados.
O estudo da regenerao do olho da salamandra demonstrou que mesmo clulas
adultas diferenciadas podem reter o seu potencial de produzir outros tipos celulares.
Portanto, os genes para os produtos desses outros tipos de clulas devem ainda estar
presentes, embora normalmente no expressos. Na salamandra, a remoo da retina
*As observaes de Gluecksohn-Schoenheimer levaram 60 anos para ser confirmadas atravs

da hibridizao do DNA. No entanto, quando o gene do T-locus foi clonado e sua expresso
detectada pela tcnica da hibridizao in situ (discutida mais adiante neste captulo), Wilkinson e
colaboradores (1990) acharam que a expresso do gene T tem um papel direto nos eventos
precoces da formao do mesoderma e na morfognese da notocorda. Embora uma histria
completa do desenvolvimento precoce da gentica do desenvolvimento ainda permanea por ser
escrita, mais informaes sobre suas turbulentas origens podem ser encontradas em Oppenheimer,
1981; Sander, 1986; Gilbert, 1988, 1991, 1996; Burian et al., 1991; Harwood, 1993; Keller, 1995;
e Morange, 1996.
neural promove sua regenerao a partir da retina pigmentada, e uma nova lente pode
ser formada a partir das clulas da ris dorsal. A regenerao do tecido lenticular da ris
(a assim chamada regenerao Wolffiana a partir da pessoa que primeiro a observou
em 1894) foi intensamente estudada. Yamada e seus colegas (Yamada, 1966, Dumont e
Yamada, 1972) acharam que aps a remoo de uma lente, uma srie de acontecimentos
leva produo de uma nova lente a partir da ris (Figura 2.4). Os ncleos do lado
dorsal da ris comeam a sintetizar quantidades enormes de ribossomos, seu DNA se
replica, e divises mitticas se sucedem. As clulas da ris pigmentada comeam, em
seguida, a se desdiferenciar expelindo seus melanossomos (os grnulos pigmentados
que do ao olho a sua cor; esses melanossomos so ingeridos por macrfagos que
entram no local da ferida). A ris dorsal continua a se dividir, formando um globo de
tecido desdiferenciado na regio da lente removida. Essas clulas comeam ento a
sintetizar os produtos diferenciados de clulas lenticulares, as protenas do cristali-
no. Essas protenas so fabricadas na mesma ordem que no desenvolvimento normal
da lente. Uma vez formada uma nova lente, as clulas do lado dorsal da ris cessam sua
atividade mittica.
Esses eventos no so a via normal pela qual a lente dos vertebrados formada.
Como ser visto em detalhe mais tarde, a lente normalmente se desenvolve a partir de
uma camada de clulas epiteliais da cabea, induzida pelas clulas retinais precursoras
subjacentes. A formao da lente por clulas diferenciadas da ris representa metaplasia
(ou transdiferenciao), a transformao de um tipo celular diferenciado em outro
(Okada, 1991). A ris da salamandra, portanto, no havia perdido gene algum daqueles
usados na diferenciao das clulas da lente.
Retina Retina
pigmentada neural
ris dorsal
Figura 2.4
Lente Regenerao Wolffiana da lente da salamandra
a partir da margem dorsal da ris. (A) Olho
normal, no-operado no estgio larval da sala-
ris mandra Notophtalmus viridiscens. (B-G) Re-
ventral generao da lente, vista respectivamente nos
dias 5, 7, 9, 16, 18 e 30. A nova lente estar
completa no dia 30. (de Reyer, 1954, cortesia
de R. W. Reyer.)
(A) (B) (C)
(D) (E) (F) (G)

Clonagem de Anfbios: A Restrio da Potncia Nuclear

O teste definitivo sobre se, ou no, o ncleo de uma clula diferenciada sofreu qual-
quer restrio funcional irreversvel, seria o de conseguir que esse ncleo gerasse
todo outro tipo de clula diferenciada no organismo. Se cada ncleo fosse idntico ao
ncleo do zigoto, o ncleo de cada clula deveria ser capaz de direcionar todo o
desenvolvimento do organismo, quando transplantado para um ovo ativado enucleado.
Porm, antes que tal experimento pudesse ser feito, trs tcnicas tiveram que ser
aperfeioadas: (1) um mtodo para enuclear ovos do hospedeiro sem destru-los; (2)
um mtodo para isolar ncleos doadores intactos; (3) um mtodo para transferir tais
ncleos para dentro do ovo sem danificar o ncleo ou o ocito.
Essas tcnicas foram desenvolvidas na dcada de 1950, em primeiro lugar por
Robert Briggs e Thomas King que combinaram a enucleao com a ativao do ovo.
Quando um ocito de r-leopardo (Rana pipiens) perfurado com uma agulha limpa
de vidro, o ovo sofre todas as mudanas citolgicas e bioqumicas associadas
fertilizao. Ocorre rearranjo citoplasmtico interno e a finalizao da meiose perto
do plo animal da clula. Esse fuso meitico pode ser facilmente localizado quando
empurra os grnulos pigmentados do plo animal; a puno do ocito nesse local
induz o fuso e seus cromossomos a fluir para fora do ovo (Figura 2.5). O ovo hospe-
deiro agora considerado estar ativado (as reaes de fertilizao necessrias para
iniciar o desenvolvimento foram completadas) e enucleado. A passagem de um n-
cleo para o ovo conseguida pela ruptura de uma clula doadora e transferncia do
ncleo liberado para o ocito por meio de uma micropipeta. Algum citoplasma acom-
panha o ncleo para seu novo lar, mas a razo do citoplasma doador para o receptor
somente de 1:105, e o citoplasma do doador no parece afetar o resultado dos
experimentos. Em 1952, Briggs e King demonstraram que ncleos da clula da bls-
tula podiam direcionar o desenvolvimento de girinos completos quando transferi-
dos para o citoplasma do ocito.
O que acontece quando ncleos de estgios mais avanados so transferidos
para ocitos ativados e enucleados? Os resultados de King e Briggs (1956) esto
delineados na Figura 2.6. Enquanto a maioria dos ncleos da blstula podiam produzir
girinos completos, houve um dramtico decrscimo da capacidade dos ncleos deri-
vados de estgios mais tardios direcionar o desenvolvimento direto at o estgio de
Plo animal Fuso

Agulha de vidro meitico isolado
Micropipeta
Fuso Grnulos Remoo dos cromossomos Ovo ativado Extrao e lise da Ncleo doador
meitico pigmentados e do fuso da clula enucleado clula doadora inserido na clula
enucleada
Figura 2.5
Procedimento para o transplante de ncleos da Membrana
blstula para ovos ativados enucleados de Rana cicatriza
pipiens. As dimenses relativas do fuso meitico
foram exageradas para demonstrar a tcnica. A
bela R. pipiens na fotografia foi derivada dessa
maneira. (Segundo King, 1966; fotografia corte-
sia de M. DiBerardino e N. Hoffner.)
Estgio desenvolvimental dos embries e girinos Figura 2.6

dos quais foram retirados os ncleos Grfico de transplantes nucleares bem sucedidos, em fun-
a l
ud
o da idade do desenvolvimento nuclear. A abscissa repre-
ca co senta o estgio no qual o ncleo doador (de R. pipiens) foi
e o to a
a oc a br m ard isolado e inserido no ocito ativado e enucleado. A ordena-
nucleares que se desenvolvem normalmente
r di ec r di m co o c
pr
Porcentagem de embries de transplantes
ta ta c o s t da mostra a porcentagem desses transplantes capazes de

ul
a
ul
a
ul
a la os no e n
st tr tr ru n iri t i m produzir blstulas que podiam em seguida direcionar o de-
s s u ir i G
ba
Bl G G N G senvolvimento para o estgio do girino nadador (Segundo
McKinnell, 1978.)
Girinos (Rana pipiens)

nadando normalmente
Horas a 18oC
girino. Quando ncleos de clulas somticas de girinos no estgio de broto caudal

foram usados como doadores, no ocorreu desenvolvimento normal. Porm, ncle-
os de clulas germinativas de girinos do estgio de broto caudal (que iro finalmen-
te dar origem a um organismo completo aps a fertilizao), foram capazes de
direcionar desenvolvimento completo em 40 porcento das blstulas que se desen-
volveram (Smith, 1956). Assim, clulas somticas parecem perder sua capacidade de
direcionar desenvolvimento completo medida que se tornam definidas e diferenci-
adas, e a progressiva restrio da potncia nuclear durante o desenvolvimento
parece ser uma regra geral. Porm, possvel que alguns ncleos celulares diferen-
ciados sejam diferentes de outros.
Clonagem de Anfbios: A Pluripotncia de Clulas Somticas

John Gurdon e seus colegas, usando mtodos ligeiramente diferentes de transplante
nuclear na r Xenopus, obtiveram resultados sugerindo que os ncleos de algumas
clulas diferenciadas podem permanecer totipotentes. Gurdon tambm achou uma
progressiva perda de potncia no decorrer do desenvolvimento, embora clulas de
Xenopus tenham retido suas potncias por um perodo de desenvolvimento mais
longo (Prancha 1). As excees a essa regra mostraram ser muito interessantes. Gurdon
havia transferido ncleos do endoderma intestinal de girinos Xenopus que se alimen-
tavam, para ovos ativados enucleados. Esses ncleos doadores continham um
marcador gentico (um nuclolo por clula, em lugar dos dois usuais), que os distin-
guia dos ncleos do hospedeiro. Entre 276 ncleos transferidos, somente 10 (1.4
porcento) promoveram o desenvolvimento at o estgio do girino que se alimentava.
Transplantes seriados (que requeriam colocar um ncleo intestinal em um ovo e quan-
do o ovo tinha se transformado em blstula, transferia-se o ncleo da blstula para
vrios outros ovos), aumentavam o rendimento para 7 porcento (Gurdon, 1962). Em
alguns casos, ncleos das clulas intestinais dos girinos foram capazes de gerar todas
linhagens de clulas neurnios, clulas do sangue, nervos e assim por diante de
um girino vivente. Alm disso, sete desses girinos (de dois ncleos originais) se
metamorfosearam em rs adultas frteis (Gurdon e Uehlinger, 1966); esses ncleos
eram totipotentes (Figura 2.7).
King e seus colegas criticaram esses experimentos assinalando que: (1) no havi-
am sido tomadas suficientes precaues para ter certeza que clulas germinativas
primordiais, que podem migrar at o intestino, no foram usadas como fontes de
ncleos, e (2) as clulas intestinais de um girino to jovem poderiam no se qualificarem
Figura 2.7 EXPERIMENTO

Procedimento empregado para obter rs ma- Ovo no-fertilizado Girino
duras de ncleos intestinais de girinos de Xe- (cepa 2 nu) (cepa 1 nu)
nopus. O ovo de tipo selvagem (2 nuclolos
por ncleo; 2-nu) irradiado para destruir os
cromossomos maternos, e um ncleo intesti-
nal de um girino marcado (1-nu) inserido. Em
alguns casos no ocorre diviso; em alguns ca- Ncleo intestinal
Irradiao UV destri epitelial inserido
sos o desenvolvimento do embrio sustado;
comossomos do ovo no ovo irradiado
porm, em outros casos, uma r inteiramente
nova formada tendo um gentipo 1-nu. (Se-
gundo Gurdon, 1968, 1977.) Micropipeta
Ovo receptor Ncleo intestinal

irradiado
RESULTADOS
Blstula Blstula Blstula Sem diviso
Girino Girino
(morre)
Embrio
anormal
R adulta
(Cepa 1 nu)
como um tipo de clula verdadeiramente diferenciada porque clulas de girinos que se

alimentam ainda contm plaquetas de gema (DiBerardino e King, 1967; McKinnell,
1978; Briggs, 1979). Para responder a essas crticas, Gurdon e seus colegas cultivaram
clulas epiteliais da membrana natatria de rs adultas. Essas clulas mostraram estar
diferenciadas; cada uma continha queratina, a protena caracterstica de clulas adul-
tas da pele. Quando ncleos dessas clulas foram transferidos para ocitos ativados
e enucleados de Xenopus, nenhum dos transferidos de primeira gerao progrediu
alm da formao do tubo neural, pouco aps a gastrulao. Por transplantes seria-
dos, porm, numerosos girinos foram gerados (Gurdon et al., 1975). Embora esses
girinos tivessem morrido antes de atingir o estado alimentar, um nico ncleo celular
diferenciado ainda retinha potncias incrveis. Um nico ncleo derivado de uma
hemcia de uma r adulta (que nem se replica e nem sintetiza RNA) pode sofrer mais de
100 divises aps ser transplantado para um ocito ativado e, ainda, reter a habilidade
de gerar girinos natatrios (Orr et al., 1986; DiBerardino, 1989). Embora DiBerardino
(1987) tenha observado que at o presente, ncleo algum de uma clula
documentadamente especializada, nem de uma clula adulta tenha mostrado ser
totipotente, tal ncleo pode no entanto instruir a formao de todos os rgos do
girino natatrio.
Algumas das diferenas entre os resultados dos laboratrios de Briggs e de Gurdon,
podem envolver diferenas na fisiologia do desenvolvimento das rs Rana e Xenopus.
Quando se transfere um ncleo de uma clula diferenciada para o citoplasma do ocito,
se est pedindo ao ncleo para reverter para condies fisiolgicas s quais ele no
est acostumado. Os ncleos da clivagem das rs dividem-se rapidamente, enquanto
alguns ncleos de clulas diferenciadas dividem-se raramente, se tanto. Falhas em
replicar DNA rapidamente podem levar a quebras cromossmicas: tais anormalidades
foram vistas em muitas clulas de girinos clonados. Sally Hennen (1970) mostrou que
o sucesso desenvolvimental de ncleos doadores pode ser ampliado tratando-se
esses ncleos com espermina e resfriando os ovos para dar tempo ao ncleo de se
adaptar ao citoplasma do ovo. Acredita-se que a espermina remova histonas da
cromatina podendo re-acertar a atividade dos ncleos. Quando ncleos do endoderma
de girinos de Rana pipiens, no estgio de broto caudal, foram tratados dessa maneira,
62 porcento daqueles ncleos que iniciaram desenvolvimento normal, prosseguiram
at a gerao de girinos normais. Em animais controle, nenhum dos ncleos conse-
guiu gerar tais girinos. Assim, os genes para o desenvolvimento do girino completo
no pareceram ter sido perdidos pelas clulas do endoderma.
Podemos olhar para esses experimentos de clonagem de anfbios de duas manei-
ras. Primeiro, reconhecer uma restrio geral de potncia concomitante ao desenvolvi-
mento. Segundo, facilmente ver que o genoma da clula diferenciada notavelmente
potente em sua habilidade de produzir todos os tipos celulares do girino anfbio. Em
outras palavras, mesmo existindo um debate sobre a totipotncia de tais ncleos,
existe pouca dvida de que eles so extremamente pluripotentes. Certamente, muitos
genes no usados na pele ou em clulas sangneas, podem ser reativados para
produzir os nervos, o estmago, ou o corao de um girino natatrio. Assim, cada
ncleo no corpo contm a maioria (se no todos) dos mesmos genes.
& Especulaes
Clonando Mamferos por Prazer e Lucro
C LONAR SERES HUMANOS a

partir de clulas previamente di-
ferenciadas parece ser o objeti-
vo de editores de jornais e novelistas.
dessem ser geradas de ncleos diferencia-
dos, essa habilidade no poderia ser
extrapolada para clulas humanas. Alm
das dificuldades ticas e tcnicas do tra-
1983). Esses zigotos reconstrudos come-
am a se dividir e so ento implantados
no tero. Os camundongos resultantes exi-
bem o fentipo do ncleo doador. Enquan-
Deve ter ficado bvio da discusso pre- balho com o organismo humano, o cito- to mais de 90 porcento dos zigotos enucle-
cedente que clonar um indivduo total- plasma do ocito humano pode no res- ados do camundongo, recebendo pron-
mente desenvolvido, a partir de clulas ponder a sinais emitidos por um ncleo de cleos de outros zigotos, se desenvolvem
diferenciadas, uma formidvel tarefa. uma clula em estgio avanado. Trans- at o blastcito (blstula), nem um nico
Mesmo em anfbios, os ncleos das clu- plante nuclear foi conseguido em camun- embrio (de 81), desenvolveu-se at esse
las diferenciadas no foram capazes de dongos, pela remoo de proncleos estgio quando ncleos de embries de 4
gerar animais adultos quando colocados (haplides) de espermatozide e vulo de clulas foram transferidos para zigotos
em clulas ativadas e enucleadas. um zigoto, e substituio por proncleos enucleados (McGrath e Solter, 1984). Simi-
Alm disso, mesmo se rs adultas pu- de outro (Figura 2.8; McGrath e Solter, larmente, ncleos de embries de 8 clulas
(A) (C) po de ativao e implantao uterina. Usan-

do modificaes tcnicas, Willadsen (1986)
produziu carneiros de termo completo a
partir de ncleos transplantados de blas-
tmeros do estgio de 8 clulas; ncleos
de embries pr-implantados de gado, por-
cos e coelhos foram capazes de direcionar
o desenvolvimento completo quando
(B) (D) transplantados para ocitos ativados e
enucleados (Prather et al., 1987; Stice e
Robl, 1988; Prather et al., 1989; Willadsen,
1989). Porm, em todos esses casos, os n-
cleos vieram de embries pr-implantados.
Recentemente, Wilmut e colaboradores
(1997) mostraram que possvel clonar um
carneiro a partir de um ncleo de clula de
glndula mamria adulta. Esse resultado
Figura 2.8 Procedimento para transferir ncleos para o ovo ativado enucleado de mamifero.
Um embrio de clula nica, incubado em colcemida e citocalasina para relaxar o citoesquele- poder ter importantes conseqncias agr-
to, seguro com uma pipeta de suco. Os ncleos haplides derivados do espermatozide e colas e legais (Prather, 1991). [gene4.html]
do vulo, no se juntaram ainda. A pipeta de enucleao perfura a zona pelcida (a protena
que envolve o ovo) e aspira a membrana celular adjacente e a rea da clula contendo os Clonagem de Plantas
proncleos. (A) A pipeta de enucleao retirada e o citoplasma contendo os proncleos Somente nas plantas os ncleos de clu-
removido do ovo. A membrana celular no est rompida; a continuidade do citoplasma limita- las diferenciadas de organismos adultos
do pela membrana est indicada pela flexa. (B) A membrana celular forma uma vescula ao podem ser facilmente vistos como capa-
redor dos proncleos no interior da pipeta de enucleao. (C) Essa vescula misturada com zes de direcionar o desenvolvimento de
vrus Sendai (que induz a fuso de membranas nucleares) e inserida no espao entre a zona outro organismo adulto. Essa habilidade
pelcida e o outro ovo enucleado. (D) O vrus Sendai proporciona a fuso do ovo enucleado foi dramaticamente demonstrada em clu-
e os proncleos envoltos pela membrana, permitindo que os proncleos (flexa) penetrem na las de cenouras ou tabaco. Em 1958, F. C.
clula. (Segundo McGrath e Solter, 1983; cortesia dos autores.) Steward e seus colegas estabeleceram um
processo pelo qual os tecidos diferencia-
e massa celular interna (os blastmeros que (cujas clulas so totipotentes) no do dos de razes de cenouras podiam dar ori-
formam o embrio, mas no a placenta*) suporte para o desenvolvimento total. Tais gem a toda uma nova planta (Figura 2.9).
tambm no puderam apoiar o desenvolvi- experimentos provavelmente fracassam Pequenos pedaos de floema so isola-
mento. Em contraste com ncleos de ouri- porque ncleos de blastmeros no funci- dos da cenoura e rodados em grandes
os-do-mar ou anfbios, os ncleos dos onam de maneira normal no citoplasma frascos contendo leite de coco. Esse flui-
blastmeros precoces do camundongo zigtico. Por isso, a clonagem de Elvis do ( realmente o endosperma da semen-
Presley a partir de clulas diferenciadas no te do coco) contm os fatores e nutrien-
*Cada blastmero da massa celular interna
algo com que possamos contar. tes necessrios para o crescimento da
totipotente no sentido de reter sua capacida-
de de formar clulas de qualquer tipo no orga- Nem todos blastmeros mamferos planta e os hormnios exigidos para a
nismo. Essa capacidade permite o aparecimen- so os mesmos, todavia, as espcies diferenciao. Sob essas condies, os
to de gmeos. mamferas diferem muito em termos de tem- tecidos proliferam e formam uma massa
Figura 2.9
Experimento de Steward demonstrando a
totipotncia de clulas do floema da cenoura.
Clulas livre do calo

continuam a se desenvolver
em suspenso
Floema
de raiz
Corte Planta
Planta de Proliferao de
transversal jovem
cenoura massa celular
da raiz
madura (calo) em meio Planta embrionria
de cultura de transferida para meio Planta de cenoura
leite de coco de cultura de agar madura no agar
desorganizada chamada calo. A continu- de cenoura completa e frtil (Steward et so destacadas como uma linhagem dis-
ao da rotao leva ao desbastamento al., 1964; Steward, 1970). tinta de clulas no incio do desenvol-
de clulas individuais do calo para o meio Porm, plantas e animais se desen- vimento), as plantas normalmente deri-
de suspenso. Essas clulas do origem volvem de maneira diferente; a propa- vam seus gametas de clulas somticas.
a ndulos celulares semelhantes a razes gao vegetativa de plantas por corte Portanto, no to surpreendente que
que continuam a crescer enquanto per- (i.e, pores de plantas que quando nu- uma nica clula de uma planta possa
manecem em suspenso. A partir desses tridas, regeneram as partes faltantes) se diferenciar em outros tipos de clu-
ndulos, colocados em um meio solidifi- uma prtica agrcola comum. Alm dis- las e formar um clone geneticamente
cado com agar, o resto da planta capaz so, em contraste com anfbios e mamfe- idntico (clone, do grego klon, signifi-
de se desenvolver, formando uma planta ros (nos quais as clulas germinativas cando ramo).
Sobre E. coli e elefantes: O modelo operon

Na maioria dos casos estudados, o genoma o mesmo de clula para clula no orga-
nismo. Os genes para a protena globina podem ser encontrados em clulas da pele, e
os genes para as queratinas da pele podem ser encontrados em neurnios cerebrais.
Porm, isso ainda deixa sem resposta outra grande questo levantada pelos
embriologistas: Se o ncleo de cada clula no organismo tem os mesmos genes, como
podem esses genes fazer com que essas clulas se tornem diferentes? *Pouco tempo
aps a 2a Guerra Mundial, muitos biologistas concordaram que:
a maior lacuna, ainda para ser preenchida, entre dois campos da pesquisa em
biologia provavelmente aquela entre a gentica e a embriologia. o problema
repetidas vezes declarado, porm, at agora no resolvido, de como clulas com
genomas idnticos podem se tornar diferenciadas, adquirir a propriedade de
confeccionar molculas com novos, ou no mnimo, diferentes padres ou confi-
guraes especficos.
Curiosamente, essa citao vem de Jacques Monod (1947), um geneticista

microbiano trabalhando na sntese de enzimas adaptativas, que so protenas que
embora no sejam usualmente sintetizadas por bactrias ou levedos, sero sinte-
tizadas se os microorganismos encontrarem um novo substrato. Por exemplo, a
bactria Escherichia coli s sintetiza -galactosidase e outras enzimas digestoras
de lactose, quando encontram a lactose. Se a lactose est ausente do citoplasma,
essas enzimas no so sintetizadas. Mas, com a introduo de lactose no citoplasma,
esse grupo de novas enzimas aparecem. Em micrbios, ao menos, o mesmo genoma
pode produzir dois estados citoplasmticos funcionalmente diferentes, depen-
dendo da presena ou no de determinado composto (no caso, a lactose). Monod
lanou a hiptese que o fenmeno da adaptao enzimtica podia oferecer a solu-
o para o problema de como genomas idnticos podem sintetizar diferentes mo-
lculas especficas.
*A grande exceo a essa regra da constncia dos genes os genes das imunoglobulinas
discutida no Captulo 10. Cada clula tem todas as subunidades gnicas das imunoglobulinas, mas em
linfcitos, algumas dessas subunidades esto rearranjadas ou mesmo suprimidas do genoma. O
terceiro desafio - a explicao de como o ambiente pode direcionar o desenvolvimento foi
prontamente compreendida, uma vez que a explicao geral para a expresso diferencial da expres-
so gnica foi estabelecida. Conforme veremos, o modelo do operon demonstrou como uma
substncia do ambiente podia efetuar a expreso gnica diferenciada.
Monod no foi o nico cientista a achar que micrbios unicelulares poderiam

explicar a diferenciao multicelular. O microbiologista Sol Spiegelman (1947) declarou
que a embriologia estava sendo prejudicada por sua prpria terminologia. O problema
da diferenciao no podia mais ser visto como uma propriedade estrutural dos teci-
dos, mas passar a ser considerado uma propriedade bioqumica de clulas individuais.
A diferenciao deveria ser vista no em termos anatmicos, mas como produo
controlada de padres enzimticos nicos. Essa redefinio focaliza a ateno para a
relao entre os genes do ncleo e as propriedades do citoplasma. Alm disso, a
sntese de uma enzima adaptativa em presena do seu substrato deveria ser discutida
como uma induo. Esse o termo tcnico usado em embriologia para descrever a
habilidade de uma clula produzir uma substncia capaz de influenciar a diferenciao
de outra. O agente molecular responsvel deveria ser chamado o indutor. Spiegelman
via uma semelhana fundamental entre a induo de novos tipos celulares no embrio
e a induo de novas enzimas em microorganismos. [gene5.html]
No fim da dcada de 1950, um grupo de pesquisadores acreditava que micrbios
eram um excelente (e facilmente estudado) modelo para diferenciao embrionria.
Muitos geneticistas microbianos explicitamente ligaram enzimas indutivas a concei-
tos embriolgicos. Julgavam ser vlida a extrapolao, e apelaram para a unidade da
natureza e, em ltima anlise, as regras simples que esperavam encontrar. Como suge-
rido por Monod (veja Judson, 1979), se algum entender a bactria, entender o ele-
fante. Muitos embriologistas, porm, permaneceram cpticos a respeito da extrapolao
de bactrias a embries, enfatizando a complexidade do desenvolvimento e a diversi-
dade da performance embriolgica.
Em 1961, Jacob e Monod sintetizaram dados sobre a induo da -galactosidase
levando construo do modelo do operon. Esse modelo postula que a pequena
molcula do indutor causava a transcrio de diferentes genes em E. coli (Figura 2.10).
Em sistemas indutivos, uma protena repressora codificada por genes liga-se ao stio
operador adjacente aos genes estruturais, impedindo a ligao da RNA polimerase ao
stio promotor que inciaria a transcrio. Estando presente, o indutor liga-se protena
repressora alterando sua conformao de forma a impedir a ligao ao operador. Com
isso, o gene torna-se capaz de transcrever mRNA, que pode ser traduzido formando
protena. Dessa maneira, o mesmo genoma pode sintetizar diferentes enzimas, depen-
dendo da presena ou no do respectivo indutor. Em um importante trabalho de 1961,
Jacob e Monod enfatizaram que o mecanismo de controle do operon-smile pode ser
parte da regulao gnica universal. Eles conectaram seus resultados ao problema
fundamental da embriologia qumica que a compreenso do porqu clulas dos
tecidos no expressam constantemente todos os potenciais contidos em seu genoma.
O modelo do operon foi imediatamente introduzido nos textos de embriologia por
cientistas que procuravam a sntese da gentica com a embriologia. O livro de
Waddington (1962), Novos Padres na Gentica e no Desenvolvimento, comea com
um captulo relacionando o modelo do operon de Jacob e Monod com o controle da
expresso gnica no desenvovimento dos anfbios. Waddington aprovou especial-
mente esse modelo porque significava que os genes no so apenas ativos, mas
reativos, respondendo s mudanas no citoplasma. Waddington considerou genes e
citoplasma como mutuamente interativos. Essa perspectiva foi tambm salientada em
Hereditariedade e Desenvolvimento (1963), sntese de embriologia com gentica por
John Moore, que conclui:
Na gerao anterior, poucos embriologistas ou geneticistas teriam previsto

que a sntese dos seus campos de trabalho teria se tornado possvel por estu-
dos com a bactria Escherichia coli. No entanto, essa criatura microscpica,
sem embrio prprio, mostrou um caminho. Na prxima dcada, poder ser
difcil perceber a diferena entre um geneticista e um embriologista, medida
que eles avanam em sua cincia para alm daquilo que cada um poderia ter
conseguido isoladamente.
(A) O operon lac Figura 2.10

Regulao diferencial de genes em E. coli. (A-C) No estado induzvel de
tipo-selvagem, no h transcrio de RNA de -galactosidase a no ser
que a lactose esteja presente. (B) Quando a lactose no est disponvel,
uma protena repressora produzida pelo gene i liga-se ao stio repressor
Gene indutor Promotor Genes estruturais
para utilizao
(o), inibindo a transcrio pela RNA polimerase do promotor (p). (C)
Operador
da lactose Quando o indutor lactose est presente, combina com a protena repres-
sora, alterando sua forma, o que faz com que a protena no possa mais
(B) Quando no h lactose disponvel se ligar ao DNA operador , fazendo comear a transcrio. (D) A solubi-
Genes estruturais lidade dessa protena demonstrada em estudos com o mutante de E.
coli. Quando clulas bacterianas haplides com um gene indutor no-
funcional (i-) so tornadas parcialmente diplides com o gene tipo-
selvagem (i+), forma-se repressor tipo-selvagem capaz de tornar indutvel
No h transcrio o gene original da -galactosidase.
Protena repressora de genes estruturais
produzidas por
i liga-se a o
(C ) Quando a lactose est disponvel

Genes estruturais
Lactose
RNA
mRNA polimerase
-galactosidase
mRNA transcrito
Lactose combinando
com o repressor,
previne ligao a o
(D) O repressor da lactose solvel
Genes estruturais
O gene i do tipo selvagem pode produzir

repressor para ambos cromossomos que se
ligam a o na ausncia de lactose
Genes estruturais
Sntese diferencial de RNA

A desejada unificao no ocorreu to rapidamente como esperado por Moore. Po-
rm, baseado na evidncia embriolgica a favor da equivalncia genmica e do mode-
lo do operon de E. coli, emergiu na dcada de 1960 um consenso de que as clulas
regulam seu desenvolvimento atravs da expresso gnica diferencial. Como bactri-
as eram os modelos para tal atividade, expresso em geral significava transcrio de
mRNA. Os trs postulados da expresso gnica diferencial eram os seguintes:
1. Cada ncleo celular contm o genoma completo estabelecido no ovo fertiliza-

do. Em termos moleculares, os DNAs de todas as clulas diferenciadas so
idnticos.
2. Os genes no-usados das clulas diferenciadas no so destrudos ou mutados,
retendo o potencial de serem expressos.
3. S uma pequena porcentagem do genoma est sendo expressa em cada clula,
e uma poro do RNA sintetizado especfica para aquele tipo de clula.
Os dois primeiros postulados j foram discutidos. O terceiro que s uma pequena

parte do genoma est ativo produzindo produtos especficos dos tecidos foi primei-
ro testado em larvas de insetos. Aps a ecloso, uma larva de inseto tem duas popu-
laes celulares diferentes, formadas por cerca de 10.000 clulas. A maior parte tem
cromossomos politnicos. Tais cromossomos sofrem replicao de DNA na ausncia
de mitose, contendo portanto 512 (29), 1024 (210), ou mesmo mais hlices duplas para-
lelas de DNA em lugar de somente uma (Figura 2.11; Prancha 31). Essas clulas no
sofrem mitose, e crescem expandindo seu volume at 150 vezes. Durante a metamorfo-
se, tais clulas morrem sendo substitudas por clulas diplides no politnicas agru-
padas em certas regies da larva (veja Captulo 19). Beermann (1952) mostrou que o
padro de distribuio das bandas de cromossomos politnicos era idntico ao longo
da larva e que no se notavam perdas ou adies de qualquer regio cromossmica
quando diferentes tipos de clulas eram comparados (Figura 2.12). Porm, Beermann
estudando o mosquito Chironomus e Becker (1959) estudando Drosophila, acharam
regies cromossmicas que estavam estufadas. Esses tufos apareciam em lugares
diferentes nos cromossomos em cada tecido; seu aparecimento mudava com o de-
senvolvimento dessas clulas (Figura 2.13). Ainda mais, alguns tufos podiam ser
Figura 2.11
Cromossomos politnicos. (A) Cromossomos politnicos de clulas da glndula salivar de
Drosophila melanogaster. Os quatro cromossomos esto conectados em seus centrmeros,
formando um denso cromocentro. Os genes estruturais para a lcool desidrogenase (ADH),
aldedo oxidase (Aldox) e octanol desidrogenase (ODH) foram mapeados nas posies designa-
das nesses cromossomos. (B) Fotografia ao microscpio eletrnico de uma pequena regio de
um cromossomo politnico de Drosophila. As bandas escuras esto altamente condensadas
comparadas com as regies interbandas. (A de Ursprung et al., 1968, cortesia de H. Ursprung;
B de Burkholder, 1976, cortesia de G. D. Burkholder.)
Aldox
estimulados ou inibidos por certas mudanas fisiolgicas causadas pelo calor ou por
hormnios (Clever, 1966; Ashburner, 1972; Ashburner e Berondes, 1978).
Beermann (1961) apresentou evidncias que esses tufos representam um afrouxa-
mento localizado de cromossomos politnicos (Figura 2.14) e que so stios de sntese
ativa de RNA. Duas espcies intercruzadas diferentes de Chiromonus foram encon-
tradas: uma produzindo grande quantidade de protena salivar e a outra no (Figura
2.15). Os produtores tinham uma tufo grande (anel de Balbiani) em determinada banda;
esse tufo no existia nos no-produtores. O cruzamento de produtor com no-produ-
tor resultou em larvas produzindo quantias intermedirias de protena salivar. Cruzan-
do duas moscas hbridas, a capacidade de produzir protena salivar segregou-se de
forma Mendeliana: 1 alto produtor: 2 intermedirios:1 no-produtor. Altos produtores
tinham dois tufos (um em cada cromossomo homlogo), produtores intermedirios
tinham apenas um, e no-produtores nenhum tufo. Beermann concluiu que a informa-
o gentica necessria para a sntese dessa protena salivar est presente nessa
banda distal do cromossomo e que sua produo dependia de transformao em uma
regio estufada.
(A)
Glndula Tbulos de Tecido Intestino

salivar Malpighi retal
(B)
Figura 2.12
Identidade genmica em cromossomos politnicos. (A) Uma regio do
conjunto cromossmico da mosca Chiromonus tentans. Notar a constn-
cia do nmero de bandas nos diferentes tecidos. (B) Hibridizao do RNA
de uma protena da gema com um cromossomo da glndula salivar larval
de Drosophila. Os gros escuros (flexa) mostram onde a mensagem da
protena radioativa da gema se ligou aos cromossomos. Notar que o gene
para a protena est presente no cromossomo da glndula salivar, apesar
da protena no ser a sintetizada. (A) Segundo Beermann, 1952; (B) De
Barnett et al., 1980; fotografia cortesia de P. C. Wensink.
Figura 2.13
Seqncia de estufamentos de uma poro do cro-
mossomo 3 da glndula salivar de Drosophila mela-
nogaster. (A,B) larva de 110 horas; (C) larva de 115
horas; (D,E) estgio pr-pupa (aps 4 horas). Notar
o estufamento e a regresso das bandas 74EF e 75B.
Outras bandas (71DE, 78D) estufam mais tarde, po-
rm, a maioria no estufa de modo algum durante o
perodo. (Cortesia de M. Ashburner.)
(A) (B) (C) (D) (E)
Prova adicional de que tufos cromossmicos produzem mRNA vem de estudos

sobre tufos do anel de Balbiani (BR2) em Chironomus tentans. O BR2 pode ser
isolado por microdisseco devido seu tamanho excepcional, e seus produtos po-
dem ser analisados por autoradiografia (Lambert e Daneholt, 1975). A Figura 2.16 A,
B mostra o isolamento de BR2 do cromossomo 4 de C. tentans. Transcrio de BR2
foi demonstrada incubando glndulas salivares isoladas com precursores de RNA
(A)
(B)
Figura 2.14
Terminao proximal do cromossomo 4 da glndula sali-
var de Chiromonus pallidivitatus, mostrando o enorme
tufo BR2. (A) Fotomicrografia em contraste de fase, de
preparaes coradas, mostrando o extenso tufo no cro-
mossomo politnico. (B) Diagrama da regio passando
por estufamento. (A de Grossbach, 1973, cortesia de U.
Grossbach; B segundo Beermann, 1963)
BR4(SZ)
Alto No-produtor
produtor
BR2
Todos produtos
intermedirios
BR1
BR3
Alto produtor No-produtor

Produtores
(A) (B) (C) Intermedirios
Figura 2.15
Correlao de padres de estufamento com fun-
es especializadas nas clulas das glndulas
salivares de Chironomus pallidivitatus. (A)
radioativos. O RNA radioativo pde, em seguida, ser extrado da poro BR2 do Cromossomo de uma clula produzindo uma
cromossomo dissecado (Lambert, 1972). Esse RNA era excepcionalmente grande secreo granular e mostrando um anel de
cerca de 50.000 bases. O grande segmento de RNA radioativo, especificamente Balbiani adicional [BR4(SZ)]. (B) Cromosso-
hibridizado para a regio BR2 do cromossomo, mostrou que o DNA estufado (Puff mo 4 de uma clula salivar, mostrando somen-
de DNA) - e nenhum outro local - tinha-o transcrito ativamente (Figura 2.16C). Esse te anis de Balbiani 1, 2 e 3 (BR1, BR2, BR3).
mesmo RNA pde ser isolado de polissomos sintetizadores de protenas, indicando (C) Evidncia gentica que a sntese de uma
importante protena salivar depende da for-
que ativo na sntese protica (Wieslander e Daneholt, 1977). Assim, um RNA
mao de tufos BR4(SZ). Larvas com altos
transcrito de uma banda especfica de DNA, que estufa na glndula salivar larval, nveis de secrees granulares tm clulas sali-
pode posteriormente ser visto produzindo protenas em ribossomos citoplasmticos. vares glandulares com tufos BR4(SZ) em am-
bos cromossomos 4 (coloridos), enquanto lar-
vas sem essas secrees no tm tais tufos.
Produtores intermedirios tm somente um
cromossomo 4 com uma regio estufada
BR4(SZ) em cada clula salivar realizando a
secreo. (A e B segundo Beermann, 1961, cor-
tesia de W. Beermann.)
(A)
(B) Figura 2.16

BR 2 (A,B) Isolamento da regio BR2 de Chirono-
mus tentans por micromanipulao. O cromos-
somo intacto 4 pode ser dividido em trs regi-
es, uma contendo BR2. (C) Transcrio da
regio BR2 mostrado por uma auto-radiogra-
fia in situ aps hibridizao do BR2 RNA com
a preparao cromossmica. (A e B de Lambert
e Daneholt, 1975; C de Lambert, 1972; foto-
(C) grafias cortesia de B. Lambert.)
Portanto, os tufos nos cromossomos salivares esto produzindo mRNA ativamen-

te. Em clulas que sintetizam essa protena, o gene est ativado; em clulas que no
usam essa protena, o gene permanece reprimido.
Hibridizao de cido nuclico

Poucos genes puderam ser analisados como aqueles nos tufos politnicos de
Chiromonus. E embora esses genes dos tufos eram ativos em clulas que j se
haviam diferenciado (como aquelas da glndula salivar), no eram os genes cau-
sadores da diferenciao celular. Para encontrar e analisar os genes que so res-
ponsveis pelo desenvolvimento embrionrio, novas tcnicas tiveram que ser
aperfeioadas.
A maioria das tcnicas para anlise de genes eucariotos baseia-se na hibridizao
de cidos nuclicos. Essa tcnica envolve fortalecimento de pedaos de fitas simples
de RNA e DNA, para permitir a formao de hbridos de fitas duplas. Por exemplo, se
o DNA cortado em pequenos pedaos e cada pedao dissociado em duas fitas
simples desnaturado cada fita na soluo dever achar e reunir-se com seu parcei-
ro complementar, quando lhe dado tempo suficiente para isso. As condies de
renaturao devem ser tais que ligao especfica entre fitas complementares seja
mantida e combinaes no especficas sejam dissociadas. Isso , em geral, consegui-
do variando a temperatura ou as condies inicas da soluo em que ocorre a
renaturao (Wetmur e Davidson, 1968). De maneira semelhante, RNA sintetizado a
partir de uma regio particular do DNA poderia ser esperado ligar-se fita do qual foi
transcrito (Figura 2.17). Assim, RNA pode ser esperado hibridizar especificamente
com o gene que o codifica. Para medir essa hibridizao, uma das fitas de cido nuclico
(a sonda) em geral marcada pela incorporao de nucleotdeos radioativos. Um
problema tcnico que inicialmente atormentou os estudos de hibridizao de cidos
nuclicos foi a dificuldade em conseguir colocar quantidades suficientes de radioati-
vidade na molcula de RNA. Esse problema foi superado isolando o RNA e fazendo
uma cpia complementar de DNA (cDNA) na presena de precursores radiativos. Isso
pode ser feito em tubo de ensaio contendo o RNA, uma extenso curta de DNA
(chamado de iniciador ou primer), precursores radioativos de DNA e a enzima viral
transcriptase reversa. Essa enzima pode produzir DNA de um molde de RNA (Figura
2.18). O DNA sintetizado in vitro, no sendo necessrio preocupar-se com a diluio
(A)
Condies de Condies de
desnaturao re-anelamento
(calor, lcali)
Figura 2.17
Hibridizao de cidos nuclicos. (A) Se a h- RNA
(B)
lice de DNA for separada em duas fitas, essas
devem se re-anelar sob condies adequadas
de fora inica e tempo. De maneira semelhan-
te, se o DNA for separado em suas duas fitas,
o RNA deve ficar capacitado a se ligar a genes
que o codificam. Se presente em quantidades Desnaturar; adicionar RNA hibridiza
RNA (em grande com uma
suficientemente grandes em comparao com
quantidade em fita de DNA
o DNA, o RNA ir substituir uma das fitas de comparao com DNA)
DNA nessa regio.
dos precursores radiativos. Alm disso, o DNA pode hibridizar tanto com o gene que
produziu o RNA (embora a outra fita) e com o prprio RNA, tornando-o extremamente
mRNA
til para a deteco de pequenas quantidades de RNAs especficos.[other.html#gene6]
Anelar iniciador
Clonagem de DNA genmico
mRNA
J em 1904 Theodor Boveri desesperava-se, considerando que as tcnicas de sua
poca nunca seriam suficientes para permitir-lhe estudar como os genes criam embri- Transcriptase
es. Havia necessidade de uma tcnica especial de amplificao gnica: reversa
Porque no somente o ncleo, nem mesmo cromossomos individuais, mas cer- mRNA
tas partes de certos cromossomos de certas clulas que precisam ser isolados e
coletados em quantidades enormes para anlise; essa seria uma pr-condio cDNA
para colocar o qumico em uma posio a qual lhe permitiria analisar (o mate- lcali
rial hereditrio) com mais mincias que o morfologista.
cDNA
Entretanto, desde a dcada de 1970 a hibridizao de cido nuclico permitiu aos
biologistas do desenvolvimento realizar o que Boveri aspirava: isolar e amplificar Figura 2.18
regies especficas do cromossomo. A tcnica principal para isolar e amplificar genes Mtodo para preparar DNA complementar
individuais chamada clonagem de genes. A primeira fase desse processo consiste no (cDNA). A maioria dos mRNA possui uma
corte de DNA nuclear em pedaos distintos, por incubao de DNA com uma longa cadeia de resduos de adenosina (AAAn)
endonuclease de restrio (geralmente chamada de enzima de restrio). De modo no terminal 3 da mensagem (a ser discutida no
geral, essas endonucleases so enzimas bacterianas que reconhecem seqncias es- Captulo 12); por isso, o pesquisador anela
pecficas do DNA e o clivam nesses stios (Tabela 2.1; Nathans e Smith, 1975). Por um iniciador consistindo de 15 resduos de de-
soxitimidina (dT15) ao final 3' da mensagem.
exemplo, quando DNA humano incubado com a enzima BamHI (de Bacillus
Transcriptase reversa em seguida, transcreve
amyloliquifaciens, cepa H), o DNA clivado em cada stio onde aparece a seqncia uma fita de DNA complementar, comeando
GGATCC. Os produtos so fragmentos de DNA de vrios tamanhos, todos terminan- no iniciador dT15. O cDNA pode ser separado
do com G em um dos lados e GATCC no outro (Figura 2.19). Esses pedaos so aumentando o pH da soluo, dessa maneira,
freqentemente chamados de fragmentos de restrio. desnaturando o hbrido de dupla fita e clivan-
do o RNA.
Tabela 2.1 Enzimas de restrio comumente usadas
Stio Derivao Reconhecimento e clivagem

enzimtico*
EcoRI Escherichia coli G AA T T C

C T TAA G
BamHi Bacillus amyloliquifaciens G G AT C C
C C TAG G
HindIII Haemophilus influenzae A AG CTT
TTC GA A
SalI Streptomyces albus G TC GAC
CAG C T G
SmaI Serratia marcescens CCC GGG
GGG CCC
HhaI Haemophilus haemolyticus GCG C
C GCG
HaeIII Haemophilus aegyptius GG CC
CC GG
AluI Arthrobacter luteus AGCT
T C GA
* Todos os stios de reconhecimento de enzimas de restrio tm um centro de simetria. A seqncia

de dupla fita lida em uma direo idntica seqncia lida da frente para trs na outra direo.
O prximo procedimento na clonagem do gene incorporar esses fragmentos de

restrio em vetores de clonagem. Usualmente esses vetores so molculas circulares
de DNA, replicadas em clulas bacterianas, independentemente do cromossomo
bacteriano. So usados plasmdeos resistentes a drogas ou vrus especialmente modi-
ficados (que so muito teis na clonagem de grandes fragmentos de DNA). Por exem-
plo, um vetor pode ser construdo contendo apenas um stio sensvel BamHI. Esse
vetor pode ser aberto por incubao com essa enzima de restrio. Aps a abertura,
ele pode ser misturado com os fragmentos de DNA humano, produzidos tambm por
BamHI. Em muitos casos, os pedaos do DNA cortado sero incorporados a esses
vetores (porque seus terminais so complementares aos terminais abertos do vetor) e
ligados covalentemente, colocando-os em uma soluo contendo a enzima DNA ligase.
O processo total fornece plasmdeos bacterianos, cada um contendo um nico pedao
de DNA humano. Esses so chamados plasmdeos recombinantes ou, geralmente,
DNA recombinante (Cohen et al.,1973; Blattner et al., 1978).
O plasmdeo ilustrado na Figura 2.19 pUC18, um vetor freqentemente usado por
biologistas moleculares (Vierra e Messing,1982). Ele contm (1) um gene resistente a
drogas, AmpR, que torna a bactria imune ampicilina e permite ao pesquisador sele-
cionar aquelas bactrias que incorporaram um plasmdeo; (2) uma origem para a
replicao de DNA, permitindo ao plasmdeo replicar centenas de vezes em cada
bactria; e (3) um poli-ligante, um pedao curto de DNA artificial que contm os stios
enzimticos de restrio para vrias dessas endonucleases. O poli-ligante se situa
dentro de um gene lacZ que codifica a -galactosidase de E. coli. O poli-ligante
suficientemente curto (e tem o nmero correto de pares de bases) de modo a no
interferir com a atividade enzimtica da -galactosidase. O processo de clonagem
comea quando os fragmentos de restrio do DNA nuclear so misturados aos
plasmdeos abertos pUC18 e a eles so ligados, ocasionando o fechamento do
plasmdeo. Os plasmdeos recombinantes putativos assim formados so ento incu-
bados com clulas de E. coli sensveis ampicilina e sem o gene da -galactosidase.
Mesmo que as bactrias e os plasmdeos sejam misturados em condies que encora-
jam as bactrias a incorporar os plasmdeos, nem todas as bactrias incorporam um
plasmdeo. Para evidenciar aquelas bactrias que incorporaram plasmdeos, as clulas
tratadas de E. coli so cultivadas em gar contendo ampicilina. Somente aquelas
bactrias que incorporaram um plasmdeo (com seu gene dominante, ampicilina-resis-
tente) sobrevivem.
Mas nem todos plasmdeos incorporaram um gene estranho, porque possvel
que os terminais adesivos do stio da enzima de restrio sofram uma renaturao
entre si mesmos. Para distinguir entre colnias bacterianas que incorporaram DNA
estranho e aquelas que no o fizeram, o gar tambm contm um corante chamado X-
gal. Esse composto incolor, mas quando transformado pela -galactosidase forma
um precipitado azul *.Assim, se um plasmdeo no incorporou um fragmento de restri-
o ao stio de enzima de restrio no poli-ligante, o gene da -galactosidase (lacZ)
est funcional e a -galactosidase resultante torna o corante azul. O resultado o
aparecimento de colnias azuis. Entretanto, se o plasmdeo incorporou um fragmen-
to de DNA, o gene da -galactosidase destrudo pela insero. Essas bactrias no
vo produzir a cor azul do corante; produzem colnias incolores no gar.
Colnias incolores so ento selecionadas quanto a presena de um gene espec-
fico. Clulas de cada uma dessas colnias so colocadas em um finssimo filtro de
nitrocelulose ou nylon. Quando essas clulas so lisadas, seu DNA adere aos filtros.
Em seguida, as fitas de DNA so separadas por aquecimento, e os filtros incubados
em uma soluo contendo o RNA radioativo (ou sua cpia de cDNA) do gene que se
*O corante 5-bromo-4-cloroindol, e azul a no ser quando est complexado com uma

molcula como galactose. A -galactosidase codificada pelo gene do plasmdeo cliva a galactose do
corante permitindo que adquira a conformao azul.
Stio Stio BamHI Stio Eco RI

Hind III
Poli-ligante
Plasmdeo cortado
no gene lacZ
Quebra
endonucleoltica
por BamHI
Fragmentos
de gene Plasmdeo
humano recombinante
incubados e com gene lacZ
ligados em um interrompido
plasmdeo
DNA humano
Quebra endonucleoltica Mistura com bactrias

por BamHI (lacZ, sensvel amp.)
Figura 2.19
Um protocolo geral para clonar DNA, usando como exemplo a insero de uma se-
Colnias
qncia de DNA humano em um plasmdeo com um stio sensvel BamHI.
incolores
quer clonar. Em alguns casos, a seqncia do mRNA ou gene no conhecida, Meio contendo
ampicilina
devendo-se ento estimar a seqncia a partir da seqncia de aminocidos da
protena). Se o plasmdeo contm aquele gene, seu DNA deve estar no filtro, e
Colnias azuis
somente aquele DNA dever ser capaz de ligar o RNA radioativo ou a sonda de
cDNA. Portanto, somente aquelas reas sero radioativas. A radioatividade nessas
regies determinada por auto-radiografia. Filme sensvel a raios-X colocado Aplicao das colnias
incolores nos crculos do
sobre o papel tratado. Os eltrons de alta energia, emitidos pelo RNA radioativo, papel de filtro; lisar para
sensibilizam os gros de prata no filme, tornando-os escuros quando o filme reve- expor o DNA
lado. Finalmente, uma mancha escura produzida sobre cada colnia contendo o
plasmdeo recombinante que carrega o gene especfico (veja Figura 2.19). Essa col-
nia ento isolada e cultivada, produzindo bilhes de bactrias, cada uma contendo
centenas de plasmdeos recombinantes idnticos.
Os plasmdeos recombinantes podem ser separados do cromossomo da E. coli por
centrifugao, e incubando o DNA do plasmdeo com BamHI libera-se o fragmento de
DNA extranho que contm o gene. Esse fragmento pode ser separado do DNA
plasmdico, permitindo ao pesquisador possuir microgramas de seqncias de DNA mRNA
radioativo
purificado contendo o gene especfico. Apesar desse procedimento parecer muito
lgico e fcil, freqentemente o nmero de colnias a serem selecionadas astronmi- Papel de filtro incubado com mRNA
co. O nmero de fragmentos aleatrios que devem ser clonados para a obteno do radioativo do gene a ser clonado
gene desejado, aumenta com a crescente complexidade do genoma do organismo*.
Para detectar um gene especfico de um genoma de mamfero, milhes de clones indi-
viduais devem ser selecionados.
*Complexidade se refere ao nmero de diferentes tipos de genes no ncleo. Apesar que

milhes de clones precisam ser selecionados, aproximadamente 100.000 colnias podem, agora,
ser selecionadas em uma nica placa. Outra maneira comum de selecionar os clones usar um
plasmdeo que tem seu stio da enzima de restrio prximo a um vigoroso promotor bacteriano
(tal como aquele para -galactosidase). As bactrias transcrevero o cDNA e o traduziro em
protena. Aps a lise das colnias bacterianas no papel de filtro, as protenas aderem ao papel e Preparao de auto-radiografia para indicar os
podem ser identificadas por anticorpos dirigidos contra quela protena. Isso chamado clonagem clones bacterianos com fragmento de DNA
de expresso, e os plasmdeos referidos como vetores de expresso. que formou um hbrido com o DNA radioativo
Hibridizao de DNA: entre e intra espcies

Clones podem ser selecionados por qualquer segmento de nucleotdeos radioativos.
Portanto, os genes clonados de um organismo podem ser sondados com cDNAs
radioativos derivados do mRNA de outras espcies. Uma das descobertas mais exci-
tantes da moderna biologia do desenvolvimento foi verificar que genes usados para
processos especficos de desenvolvimento em um organismo, podem ser usados para
processos similares em outro organismo. Drosophila teve uma importncia crtica na
descoberta desses genes. Iniciando com Morgan, esses genes foram mapeados e, nos
anos 60, E. B. Lewis confirmou que alguns desses genes so responsveis pela forma-
o de partes bsicas do corpo (veja Captulo 14). Um deles, Antennapedia, um gene
cujo produto protico essencial para inibir a formao de estruturas da cabea no
trax. Se o gene no est presente, antenas crescem onde deveriam estar as pernas. Se
o gene expresso na cabea (como sucede em um mutante especfico), a mosca
desenvolve um conjunto extra de pernas saindo das cavidades orbitais (veja Figura
14.28). Poderia tal gene existir em vertebrados?
Evidncias desses genes em vertebrados apareceram em transferncias de DNA,
algumas vezes chamadas de transferncias Southern devido a seu inventor, E. M.
Southern (1975). DNA de numerosos organismos vertebrados e invertebrados, foram
tratados com uma enzima de restrio, e os fragmentos de DNA resultantes foram
separados em uma eletroforese em gel. As misturas de fragmentos foram colocadas em
fendas em um dos lados do gel, que foi em seguida submetido uma corrente eltrica.
Os fragmentos de DNA carregados negativamente migraram em direo ao plo posi-
tivo, os fragmentos menores movendo-se mais rapidamente do que os maiores. *
Como a hibridizao no pode ser feita dentro do gel; o DNA deve ser colocado em
uma superfcie plana, e isso feito por transferncia. Aps a desnaturao das fitas de
DNA em lcali, os pesquisadores retornaram o gel a um pH neutro e em seguida o
Figura 2.20 colocaram sobre um papel de filtro mido suportado por uma estrutura de plstico
Transferncia Southern. DNA tratado com (Figura 2.20; Mc Ginnis et al., 1984; Holland e Hogan, 1986). Papel de nitrocelulose
enzimas de restrio e os fragmentos resul-
(capaz de ligar DNA de fita nica) foi colocado diretamente sobre o gel e coberto com
tantes so colocados em um gel e separados
por eletroforese. Aps a separao, o DNA mltiplas camadas de papel-toalha secas. O papel de filtro abaixo do gel estava em
desnaturado em fitas nicas. O gel , em se- comunicao com o interior de uma cuba contendo tampo de alta fora inica. O
guida, colocado sobre um papel de filtro tampo caminhou para cima atravs do gel e do filtro de nitrocelulose para as toalhas
saturado com tampo de alta fora inica. Pa- de papel. O DNA tambm foi levado por esse fluxo de tampo, mas foi detido pelo filtro
pel de nitrocelulose ou um filtro de nylon de nitrocelulose; assim, o DNA foi transferido do gel ao papel de nitrocelulose. Aps
colocado sobre o gel e o conjunto coberto fixar pelo calor os fragmentos de DNA no papel de nitrocelulose (de outra forma eles
com toalhas de papel. O tampo de transfe-
rncia atravessa o gel, o papel de nitrocelulo-
se e as toalhas por ao capilar, levando jun- *Considerando a mesma relao carga/massa, fragmentos menores adquirem uma maior veloci-
to o DNA. O DNA de fita nica retido pelo dade que os maiores quando impulsionados pela mesma energia. Isso uma funo da equao de
energia cintica, E=1/2 mv2. Resolvendo para velocidade, encontramos que ela inversamente
papel de nitrocelulose. As posies do DNA
proporcional raiz quadrada da massa.
no papel diretamente refletem a posio dos Filtro de
fragmentos de DNA no gel. nitrocelulose
ou nylon
Espaadores Papel-toalha Peso
Contatos de
Desnaturar fragmentos de papel de filtro
DNA fitas simples em lcali
Suporte
Cuba com
Gel
Digesto com restrio soluo tampo Colocar filtro de nitrocelulose
e eletroforese Colocar gel no papel de filtro ou membrana de nylon sobre gel:
em gel de agarose mido entre 2 espaadores colocar papel-toalha e peso
Figura 2.21 Drosophila Besouro Galinha Camundongo

Transferncia Southern do DNA de vrios organismos usando uma sonda radioativa do melanogaster
gene Antennapedia de Drosophila melanogaster. No se espera que as seqncias de
espcies to diversas sejam perfeitamente idnticas e por essa razo o rigor da hibridizao 10 10 10 10
Ubx
diminudo trocando as solues salinas. (Coloquialmente esse baixo rigor das transfern-
cias ao longo dos filos chamado transferncias de zoolgico, por razes bvias). Auto- ftz
radiografia mostra que os genes de Drosophila contm vrias pores que so como as do 3 3 3
gene Antennapedia em termos de estrutura; tambm, muitos organismos contm vrios
3
genes que formaro hbridos com esse fragmento gnico radioativo, sugerindo que genes
Antp
similares a Antennapedia existem nesses organismos. Os nmeros ao lado das transfernci-
as indicam os tamanhos das bandas, em quilobases. (de McGinnis et al.,1984, cortesia de 1
W. McGinnis.) 1 1
1
se desprenderiam), o conjunto foi incubado com cDNA radioativo de uma poro do

gene Antennapedia de Drosophila. Um autoradiograma do papel de nitrocelulose
mostrou onde o DNA radioativo encontrou seu semelhante. Os resultados desses
experimentos (Figura 2.21) mostraram que mesmo vertebrados (camundongos, huma-
nos e pintos) tm genes que hibridizam com essas seqncias. Essa seco radioativa
do gene Antennapedia foi usada para selecionar uma biblioteca genmica de clones
de DNA derivados do genoma dessas diferentes espcies. Como veremos no Captulo
16, pesquisadores encontraram clones contendo genes que se parecem com o
Antennapedia; esses genes se mostraram extremamente importantes na formao do
eixo do corpo dos vertebrados.
Seqenciamento de DNA
Dados de seqncia podem dar informaes sobre a estrutura da protena codifi-
cada e podem identificar seqncias regulatrias de DNA que certos genes tm em
comum. A simplicidade da tcnica de seqenciamento didesoxi de Sanger (Sanger
et al.,1977) tornou-a um procedimento padro em muitos laboratrios de biologia
molecular. No incio, usa-se um vetor contendo o gene clonado e se isola uma fita
nica do DNA circular (Figura 2.22). Funde-se (anela-se) ento um iniciador (primer)
radioativo de DNA (aproximadamente 20 pares de bases) complementar ao DNA
do vetor imediatamente 3' ao gene clonado. (Porque essas seqncias dos vetores
so conhecidas, iniciadores oligonucleotdicos podem ser facilmente sintetizados
ou adquiridos comercialmente). O iniciador tem uma ponta 3' livre qual mais
nucleotdeos podem ser adicionados. Coloca-se o DNA alvo e o iniciador junta-
mente com todos os quatro desoxirribonucleosdeos trifosfatos em quatro tubos
de ensaio. Cada um dos tubos contm a subunidade polimerizante da DNA polime-
rase e um diferente didesoxinucleosdeo trifosfato: um tubo contm didesoxi-G,
outro didesoxi-A e assim por diante. As estruturas dos desoxinucleotdeos e dos
didesoxinucleotdeos esto representadas na Figura 2.23. Enquanto o
desoxirribonucleotdeo no tem um grupo hidroxila (OH) no carbono 2' do seu
acar, o didesoxirribonucleotdeo no tem grupos hidroxila em ambos os carbo-
nos, 2' e 3'. Assim, mesmo que um didesoxirribonucleotdeo possa ser ligado a uma
crescente cadeia de DNA pela DNA polimerase, ele interrompe o crescimento da
cadeia por no ter um grupamento 3' ao qual se ligaria um novo nucleotdeo.
Assim, quando a DNA polimerase est sintetizando DNA do iniciador, o novo
DNA ser complementar ao gene clonado. No tubo com didesoxi-A, entretanto,
sempre que a polimerase coloca um A na cadeia crescente, existe a possibilidade
de que um didesoxi-A seja colocado em lugar do desoxi-A. Se isso acontecer, a
cadeia pra. Similarmente, no tubo com didesoxi-G, a cadeia tem o potencial de
parar toda vez que um G inserido. (O processo foi comparado uma dana
folclrica grega na qual uma pequena porcentagem dos danarinos em potencial
tem um brao em uma tipia).
Fita nica desnaturada de DNA de plasmdeo recombinante
Iniciador
Subunidade polimerizante de DNA polimerase I

de E. coli + dATP, dGTP, dCTP e dTTP
Seqncia da fita
do iniciador
Seqncia
complementar
Fragmentos
maiores
Fragmentos
menores
Figura 2.22
O mtodo didesoxi de seqenciar DNA. A fotografia contm a regio da auto-radiografia que
mostra essa seqncia (Cortesia de G. Guild).
Base 1
Adenina Adenina
Base 2
Adenina Desoxiadenosina Didesoxiadenosina
trifosfato (acar desoxirribose) trifosfato (acar
(A) didesoxirribose) (B)
Figura 2.23
Comparao entre desoxinucleotdeos e didesoxinucleotdeos. (A) Estruturas dos dois tipos de
nucleotdeos. A diferena evidenciada em cores. (B) O terminal 3' de uma cadeia que terminou
pela incorporao de um didesoxinucleotdeo no tem um grupo hidroxila 3' terminal para
continuar a polimerizao do DNA.
Em cada tubo esto sendo feitas milhes de cadeias e por essa razo eles contero
uma populao de cadeias, algumas interrompidas no primeiro stio possvel, outras
no ltimo e algumas em stios intermedirios. O tubo com didesoxi-A, por exemplo,
conter cadeias com diferentes e distintos comprimentos, cada uma terminando com o
resduo A. Os fragmentos de DNA radioativo resultantes sero separados por eletro-
forese. O resultado uma escada de fragmentos onde cada degrau uma seqn-
cia de nucleotdeos de comprimento diferente. Lendo escada acima, obtem-se a se-
qncia do DNA complementar quela do gene clonado.
Anlise de mRNA atravs de bibliotecas de cDNA

Agora podemos retornar especificidade da transcrio de mRNA: possvel
isolar populaes de mRNA que caracterizam certos tipos de clulas e esto au-
sentes em todas as outras? Para encontrar esses RNAs, podemos clonar os
mRNA de diferentes tipos de clulas e compar-los. Como mostra a Figura 2.24A,
isso feito tomando os RNAs mensageiros de uma clula ou tecido e converten-
do-os em fitas de DNA complementar. Levando esse procedimento um passo
frente (com o auxlio de DNA polimerase e S1 nuclease), podemos transformar
essa populao de cDNA de fita nica em outra contendo pedaos de cDNA com
fitas duplas. Essas fitas de DNA podem ser inseridas em plasmdeos, adicionan-
do-lhes finais apropriados com DNA ligase. Acoplando um fragmento GATCC/
G aos terminais rombudos desse pedao de DNA cria-se um corte artificial de
restrio BamHI, o que permite a insero em um vrus ou plasmdeo clivado por
essa enzima (Figura 2.24B).
Tais colees de clones derivados de mRNAs so freqentemente chamadas de
bibliotecas. Assim, podemos ter uma biblioteca de fgado de embrio de camundongo
de 16 dias, representando todos os genes ativos produzindo protenas hepticas
embrionrias. Podemos ter tambm uma biblioteca de ocitos vegetais de Xenopus,
representando mensagens presentes somente em uma parte especfica daquela clula.
Genes clonados dessa maneira so muito importantes porque eles no tm ntrons.
Quando adicionados s clulas bacterianas, esses genes podem ser transcritos e em
seguida traduzidos nas protenas que codificam.
Bibliotecas tm sido extremamente teis no estudo de desenvolvimento como
demonstram os esforos de Wessel e colaboradores (1989) em verificar diferenas nos
RNAs de diferentes partes do embrio, em gastrulao, do ourio-do-mar. Para encon-
trar mRNAs especficos do endoderma em ourio-do-mar, Wessel e colaboradores
prepararam uma biblioteca de cDNA de embries gastrulantes. O mRNA dessas amos-
tras (a maior parte do RNA de clulas eucariticas ribossmico) foi isolado por
passagem em esferas com oligo-dT, as quais capturam as caudas de poli(A) das men-
sagens (veja legenda da Figura 2.19). A populao de mRNA foi, ento, convertida em
uma de cDNA pelo uso da transcriptase reversa (veja Figura 2.24A). Usando polimerase
I de E. coli o cDNA de fita nica foi transformado em fita dupla. No prximo passo, os
cDNAs de fita dupla foram ligados a finais de EcoRI que esto disponveis no comr-
cio. Isso os tornou clonveis em vetores que foram abertos com a enzima de restrio
EcoRI. O DNA foi misturado com os braos de um fago geneticamente modificado
(veja Figura 2.24B). Esse fago construdo de tal maneira que ao ser cultivado em uma
placa de Petri, os fagos que incorporaram o DNA (e assim destruram o gene da -
galactosidase) produzem placas incolores (Figura 2.24C). Dessa forma, foram gerados
aproximadamente 4 milhes de fagos recombinantes, cada um contendo um cDNA re-
presentando uma molcula de mRNA.
O prximo passo envolvia selecionar os fagos recombinantes. Quais deles repre-
sentariam mRNAs encontrados no endoderma e no em outras camadas celulares?
Wessel e seus colegas isolaram populaes de mRNAs do mesoderma, ectoderma e
endoderma. Depois prepararam cDNAs marcados de cada uma das populaes de
mRNA, usando precursores radioativos. Agora, possuam trs colees de molculas
(A)Preparao de cDNA (B) Insero de cDNA de dupla fita no vetor viral (bacterifago )
clonvel
Regio codificadora
mRNA DNA de fago
Anela iniciador oligo (dT)
BamHI
Regio codificadora
mRNA
Transcriptase reversa Brao esquerdo Brao direito
cDNA
No necessrio para
mRNA a replicao do fago
Hidrlise alcalina Braos contm todos os

cDNA de dupla fita genes necessrios para a
preparado como replicao, mas muito
cDNA descrito em (A) pequeno para o
empacotamento
Inserir cDNA nos
terminais do DNA do
DNA polimerase I fago ; ligar
Regio codificadora
cDNA
S1 nuclease
Regio codificadora
Fita cDNA do
dupla mRNA, agora
cDNA clonado em
vetores virais
Adicionar finais Bam HI
de cDNA radioativos, cada uma representando a populao de mRNA de uma das

trs camadas germinativas.
Os fagos recombinantes representando os mRNAs do embrio, em gastrulao,
do ourio-do-mar foram cultivados e amostras de numerosas colnias cada uma
contendo milhares de fagos colocadas em dois filtros de nitrocelulose (Figura 2.24D).
O conjunto foi colocado em soluo de lcali para a lise dos fagos e obteno de DNA
de fita nica. Um desses papis de filtro foi incubado com cDNA radioativo feito a
partir do mRNA total do endoderma; o outro papel incubado com sondas radioativas
para ambos, mesoderma e ectoderma. Os filtros foram lavados para a remoo de
cDNA radioativo no hibridizado, secos e expostos em filmes para raios-X. Se um
mRNA estivesse presente no endoderma, mas no no ectoderma ou mesoderma, o
DNA recombinante produzido daquela mensagem deveria ligar cDNA radioativo do
endoderma e no deveria encontrar um mRNA em qualquer outro lugar. Como resulta-
do, aquela mancha de DNA recombinante do endoderma deveria ser radioativa (pois
foi ligado ao cDNA radioativo do endoderma), mas o mesmo clone no deveria ser
radioativo quando exposto a mRNA ectodrmico ou mesodrmico; isso foi confirma-
do. Um fago recombinante, em particular, ligou somente cDNA radioativo produzido
(C) Preparao da biblioteca de clones do fago (D) Seleo da biblioteca de fagos clonados
Transferir alguns
Fago fagos para filtros
hbrido de nitrocelulose
Adicionar camada de
clulas de E. coli Filtros de nitrocelulose
Infeco de E. coli pelo fago

Lise
Placa Tratar filtros com
soluo alcalina para
lisar os fagos e
Zona de lise desnaturar o DNA
indicando clones liberado
Camada de do fago
bactrias
E. coli Incubar com sonda radioativa Incubar com sonda radioativa
para endoderma para mesoderma e ectoderma
Figura 2.24 Sonda

radioativa
Protocolo usado para organizar bibliotecas de cDNA. (A)
RNA mensageiro isolado e feito seu cDNA, que em segui-
da transformado em dupla fita e adicionado de fragmentos DNA de
finais de restrio. (B) Os genes cDNA so inseridos em fago de fita
vetores especialmente modificados, nesse caso, bacterifagos. nica ligado
(C) Os fagos contendo o DNA recombinante lisaro E. coli ao filtro
formando placas. Tcnicas bioqumicas podem distinguir pla-
cas de fagos recombinantes daquelas que no tm o gene inse- Preparao dos
rido. (D) As placas so transferidas para papel de nitrocelu- autoradiogramas
lose e tratadas com lcali para lisar os fagos e desnaturar
DNA localmente. Esses filtros so ento incubados com son-
das radioativas (usualmente cDNA) de um tecido. Para a
seleo da biblioteca diferencial de cDNA, discutida no texto,
a mesma biblioteca de fagos foi selecionada com sondas radi-
oativas de dois tecidos diferentes, permitindo ao pesquisador Clone de DNA representando o mRNA
procurar por um mRNA encontrado em um tipo de tecido encontrado no endoderma mas no no
mas no em outro. mesoderma ou ectoderma
de mRNA do endoderma; portanto, representava um mRNA encontrado no endoderma

e no no mesoderma ou ectoderma. O fago contendo esse gene pode agora ser culti-
vado em grandes quantidades e caracterizado.
Tcnicas de localizao de RNA

Hibridizao In Situ
O processo de hibridizao in situ, desenvolvido por Mary Lou Pardue e Joseph

Gall (1970), permite ao pesquisador visualizar as posies de cidos nuclicos espe-
cficos dentro de clulas e tecidos. Se um clone especfico considerado interessan-
te (por exemplo, o clone endoderma-especfico que foi mencionado) ele cultivado em
grandes quantidades, e o gene clonado isolado tratando o vetor recombinante com

enzimas de restrio. Esse transformado em fita nica e tornado radioativo. Quan-
do o cDNA radioativo adicionado s clulas fixadas apropriadamente em lminas
de microscpio, o cDNA radioativo se liga unicamente onde est presente o mRNA
complementar. Aps eliminao do cDNA no fixado, a lmina coberta com uma
emulso fotogrfica transparente para auto-radiografia. As manchas resultantes,
diretamente acima de onde o cDNA radioativo foi ligado, parecem escuras quando
visualizadas diretamente, ou brancas quando vistas com iluminao em campo
escuro. Assim, pode-se visualizar aquelas clulas (ou mesmo regies dentro das
clulas) que acumularam um tipo especfico de mRNA. A Figura 2.25A,B mostra
hibridizao in situ usando o cDNA especfico para clulas endodrmicas. O cDNA
encontra mRNAs somente no endoderma da gstrula precoce do ourio-do-mar.
Continuando a gastrulao, o cDNA (e portanto o mRNA) se localiza de forma
ainda mais precisa entre a regio do intestino posterior e o intestino mdio no
tubo endodrmico.
Trabalhando com sondas radioativas e emulses, torna-se necessrio o uso de
seces microscpicas extremamente finas. Uma tcnica mais recente para hibridiza-
o in situ utiliza sondas que ligam reagentes coloridos. Dessa maneira, cientistas
podem observar rgos inteiros (e organismos) sem seccion-los, e com uma viso de
amplas regies de expresso gnica. A Figura 2.25C mostra uma hibridizao in situ,
realizada em montagem integral, em um embrio de camundongo com 10.5 dias. A
sonda reconhece o mRNA codificado pelo gene Brachyury (discutido na pgina 40),
que sintetiza uma protena necessria para a produo de clulas mesodrmicas na
parte posterior do embrio de camundongo.
Transferncias Northern
Podemos tambm determinar a expresso temporal e espacial de RNAs executando
uma transferncia de RNA (freqentemente chamada transferncia Northern). En-
quanto transferncias Southern transferem fragmentos de DNA do gel para o papel,
transferncias Northern (nome no se relaciona com o inventor) transferem RNA
entre os mesmos suportes e da mesma maneira. O pesquisador pode extrair RNAs
mensageiros do embrio em vrios estgios de desenvolvimento e submet-los
eletroforese lado a lado, em um gel. Aps transferncia dos RNAs separados para o
papel de nitrocelulose ou membrana de nylon, o conjunto incubado em uma solu-
o contendo um fragmento radioativo, mono-fita, de DNA de um determinado gene.
Esse DNA adere somente s regies onde est localizado o RNA complementar.
Assim, se o mRNA para aquele gene est presente em um determinado estgio
embrionrio, o DNA radioativo se liga a ele e pode ser detectado por auto-radiogra-
fia. Autoradiogramas desse tipo, onde vrios estgios so comparados simultanea-
mente, so denominados transferncias Northern de desenvolvimento. A Figura
2.26A mostra uma transferncia Northern de desenvolvimento para a expresso de
um gene endoderma-especfico durante o desenvolvimento do ourio-do-mar. Po-
demos ver que o mRNA para essa protena endodrmica inicialmente sintetizado
durante o estgio de blstula mesenquimatosa e continuamente durante todo o
resto do desenvolvimento. A transferncia Northern na Figura 2.26B mostra que a
acumulao desse mRNA no estgio de prisma restrita ao endoderma (Wessel et
al.,1989). Hibridizao in situ e transferncias Northern fornecem as melhores evi-
dncias em favor da transcrio diferencial de RNA, no espao e no tempo. A trans-
crio de certos genes pode ser especfica para tecidos ou tempo.
A distribuio temporal na transcrio de vrios genes pode ser visualizada por
transferncia de mancha. Por exemplo, Sargent e Dawid (1983) isolaram da gstrula de
Xenopus um mRNA que no estava presente no ovo. Para isso eles extraram o mRNA
da gstrula e fizeram cpias cDNA dessas mensagens. Os cDNAs da gstrula foram
misturados com grandes quantidades de mRNA de ocitos. Se houvesse hibridizao
entre o mRNA dos ocitos e o cDNA da gstrula, significaria que o cDNA era derivado
(B)
(A)
(C)
Figura 2.25
Hibridao in situ. (A,B) Fotomicrografias,
em fundo escuro, de hibridao in situ, mos-
trando a localizao de mRNA endoderma-
especfico em embrio de ourio-do-mar. O
cDNA radioativo usado como sonda foi pre-
parado do gene clonado, feito a partir de
mRNA endoderma-especfico (veja Figura
2.24). Esse cDNA radioativo se liga ao mRNA
do endoderma da gstrula precoce do ourio-
do-mar (A) e ao endoderma do intestino m-
dio e posterior da gstrula tardia do ourio-
do-mar (B). (C) Hibridizao in situ, em mon-
tagem integral, de um embrio de camundon-
go de 9.5-10.5 dias corado para mRNA de
Brachyury. Essa mensagem transcrita em
clulas formando novo mesoderma, e nesse
estgio encontrada na poro posterior do
embrio. Embries fixados foram incubados
Enzima em uma sonda para mRNA de Brachyury (a
fosfatase Corante fita antisense complementar ao mRNA) que
alcalina (precipitado azul escuro) foi sintetizada usando uridina biotinilada.
Ncleo Aps eliminar a parte da sonda que no se
Corante ligou ao mRNA de Brachyury (e inativar qual-
Anticorpo (incolor) quer atividade endgena de fosfatase alcalina
para biotina do embrio), o embrio foi tratado com anti-
Sonda complementar a mRNA de Brachyury corpos para biotina. Esses anticorpos foram
Biotina ligados s enzimas do tipo fosfatase alcalina.
tendo resduos de biotina em suas uridinas
Colorir para a presena de fosfatase alcalina
permite que se determine a localizao de um
mRNA especfico. Fotografias coloridas da
mRNA de Brachyury hibridizao in situ, em montagem integral,
esto nas Pranchas 22, 23 e 25. (A e B de
Wessel et al.,1989, cortesia de G. Wessel; C
do laboratrio do autor.)
(A) Ovo de um mRNA presente em ambos os estgios, ocito e gstrula. Essas molculas
Clivagem hbridas com dupla fita foram removidas por filtrao, deixando uma populao de
cDNAs gstrula-especfico. Os cDNAs foram transformados na forma de dupla fita
Blstula
(pela DNA polimerase) e inseridos em veculos de clonagem. Essa tcnica denomina-
Blstula da de clonagem de subtrao. Como a seleo dupla de bibliotecas de cDNA, a
Mesenquimatosa clonagem de subtrao gera um conjunto de clones estgio-especficos cujo mRNA
Blstula precoce
encontrado em alguns estgios, mas no em outros, ou em alguns tecidos mas no em
Blstula tardia outros (Figura 2.27).
Sargent e Dawid usaram embries, dos estgios de zigoto a broto caudal do
Prisma
girino e, separadamente, isolaram seus RNAs. Os RNAs foram aplicados direta-
Plteo mente (sem prvia eletroforese em gel) a filtros de nitrocelulose de modo que cada
filtro tinha RNAs de todos os estgios. Aps a fixao (calor) dos RNAs no filtro,
(B) Ectoderma / mesoderma
DNA de fita nica derivado de um especfico clone gastrular, foi marcado radi-
oativamente e incubado com os filtros. Se um gene estava sendo transcrito em um
Endoderma determinado estgio, o cDNA radioativo daquele gene encontraria seu comple-
mento nos mRNAs daquele estgio, no filtro. Aps eliminaco do cDNA no liga-
Figura 2.26 do, a ligao do cDNA radioativo foi observado por auto-radiografia. A transfe-
Transferncia Northern para um gene espec- rncia de manchas na Figura 2.28 mostra o esquema temporal de expresso para 17
fico no endoderma do ourio-do-mar, Lytechi-
genes que so ativos em vrios estgios da gastrulao. Nenhum deles expresso
nus variegatus. (A) Transferncia Northern
de desenvolvimento, mostrando acumulao antes da transio da blstula mediana em 7 horas. Alguns genes (DG64, DG39)
de mRNA de acordo com o estgio especfico so expressos imediatamente depois, enquanto outros (DG72, DG81) comeam a
desse gene. mRNA total (10 g por estgio) ser transcritos na gstrula mediana, aps aproximadamente 7 horas. Alguns genes
foi submetido eletroforese em gel de agarose. (DG76, DG81) so mantidos aps a ativao, enquanto a atividade de outros (DG56,
O gel foi transferido para papel tratado e os DG21) muito mais transitria.
mRNAs aderidos ao papel, que foi em seguida
incubado com cDNA radioativo de um clone
endoderma-especfico. Mostrou-se que esse
Encontrando mensagens raras pela
mRNA sintetizado durante o estgio de bls-
reao da polimerase em cadeia
tula do mesnquima e aumentado ao longo do
desenvolvimento. (B) Transferncia Northern A reao da polimerase em cadeia (PCR) um mtodo de clonagem in vitro que pode
no estgio de prisma, mostrando que o mRNA produzir enormes quantidades de um fragmento especfico de DNA a partir de uma
est presente no endoderma (com algum me- pequena quantidade de material de partida (Saiki et al.,1985). Esse mtodo pode ser
soderma aderido) mas no no ectoderma. RNA usado para clonar um gene especfico ou para determinar se um gene especfico est
total do endoderma foi eletroforisado (pista 2) ativamente transcrevendo RNA em um determinado rgo ou tipo de clula. O mtodo
prximo ao mRNA do resto do ourio-do-mar padro de clonagem usa microorganismos vivos para amplificar o DNA recombinante.
(pista1). Ligao com cDNA radioativo detec-
PCR, no entanto, pode amplificar uma nica molcula de DNA por um fator de vrios
tou mRNA somente no endoderma. (de Wessel
et al., 1989, cortesia de G. Wessel.) milhes em poucas horas e o faz em um tubo de ensaio. Essa tcnica tem sido extrema-
mente til em casos onde a quantidade de cido nuclico para estudo muito peque-
na. Embries de camundongos, por exemplo, na fase de pr-implantao tm muito
pouco mRNA e no se pode obter milhes desses embries para estudo. Se fosse
necessrio saber se o embrio de camundongo na fase de pr-implantao contm o
mRNA para uma protena determinada, seria muito difcil descobrir usando os mto-
dos padro de clonagem. Entretanto, a tcnica do PCR permite encontrar essa mensa-
gem com poucos embries, por amplificar especificamente somente aquela mensagem,
um milho de vezes (Rappolee et al., 1988).
O uso de PCR para encontrar mRNAs raros est ilustrado na Figura 2.29. Os
mRNAs de um grupo de clulas so purificados e convertidos a cDNA por transcriptase
reversa. Usando DNA polimerase e S1 nuclease, a populao de DNAs de fita nica
transformada em uma populao de fita dupla. Em seguida, escolhe-se um DNA para
ser amplificado. Para isso, separam-se as duplas hlices do DNA, s quais so adici-
onados dois pequenos oligonucleotdeos iniciadores que so complementares a
uma poro da mensagem procurada. Se os oligonucleotdeos reconhecem seqn-
cias no DNA, ento o mRNA estava presente originalmente. Os oligonucleotdeos
foram preparados de forma a permitir uma hibridizao com fitas opostas e lados
opostos da seqncia alvo. (Se a tentativa isolar o gene ou mRNA para uma protena
especfica de seqncia conhecida, essas regies laterais podem ser preparadas,
cDNA de gstrula que cDNA de gstrula sem

encontra mensagem seqncia complementar
Extrair complementar em a mRNA de ocitos
mRNA mRNA de ocito
Ocito mRNA total

de ocito Hibridizar
Extrair Fazer cDNA DNA polimerase

mRNA de mRNA S1 nuclease
Gstrula mRNA total cDNA de

de gstrula gstrula
cDNA de dupla
Figura 2.27 fita especfico de gstrula
Clonagem de subtrao de genes de gstrula expressos diferencialmente em Xenopus laevis.
cDNA foi produzido para mensagens isoladas de gstrula e hibridizado com mRNA de ocitos. Adicionar ligantes
Os cDNA de gstrula que no encontraram seqncias complementares nos mRNAs de
ocitos, eram produtos de genes ativos na gstrula mas no nos ocitos. Esses genes foram
clonados fazendo o cDNA de fita dupla e adicionando ligantes para permitir sua insero em
veculos de clonagem.
Colocar em veculo
de clonagem
Figura 2.28
Transferncias de mancha no desenvolvimento mostram os tempos em que 17 genes de Xenopus
esto transcrevendo ativamente. Acumulao especfica de mRNA no citoplasma registrada
embebendo mRNA total, de genes em estgios embrionrios, em papel de nitrocelulose e incu- Plasmdeo recombi-
nante contendo DNA
bando a tira de papel com DNA radioativo derivado de um clone de cDNA especfico de
para mRNA especfico
gstrula. Justapondo essas tiras, obtem-se um esquema temporal para a atividade de genes para gstrula
especficos. A linha r5 representa um controle de RNA ribossmico que deve estar sempre
presente. (de Jamrich et al., 1985, cortesia de I. Dawid e M. Sargent.)
Blstula Gstrula Nurula Broto de cauda
Estgio
Clone
Horas aps a fertilizao

Finais da seqncia do polipeptdeo
RNAs que codificam RNAs que codificam

o amino terminal o carboxi terminal
(iniciador 1) (iniciador 2)
RNA
1 cpia iniciador 1 DNA alvo
Aquecer a 95oC para
desnaturar DNA.
Esfriar a 37oC para RNA
permitir hibridizao iniciador 2
dos iniciadores a DNA
Primeiro ciclo
Quando aquecido a 72o C, taq

polimerase estende fitas
complementares a partir dos
iniciadores
2 cpias
Primeiro ciclo de snteses
resulta em duas cpias da seqncia
alvo de DNA
Desnatura DNA
Hibridiza
Segundo ciclo
iniciadores
Estende novas
fitas de DNA
Segundo ciclo de
snteses resulta em
4 cpias quatro cpias da
seqncia alvo de DNA
Figura 2.29
Protocolo para a reao de polimerase em cadeia (PCR). Para determinar se um tipo particular
de mRNA est presente, todo mRNA convertido a DNA de dupla fita pela transcriptase
reversa e DNA polimerase. Esse DNA desnaturado e dois conjuntos de iniciadores so
adicionados. Se a seqncia especfica estiver presente, os iniciadores se hibridizaro aos seus
terminais opostos. (Iniciadores especficos so produzidos com base na seqncia que se pro-
cura. Se conhecida apenas a seqncia da protena codificada pela mensagem, prepara-se um
conjunto de diferentes iniciadores, cada um possivelmente complementar ao DNA.) Usando
DNA polimerase termoestvel de T. aquaticus, cada fita de DNA sintetiza seu complemento.
Essas fitas so, por sua vez, desnaturadas e os iniciadores so hibridizados a elas, iniciando o
ciclo novamente. Dessa maneira, o nmero de fitas novas com a sequncia entre os dois
iniciadores aumenta exponencialmente.
sintetizando oligonucleotdeos que codificam o amino terminal da protena e

oligonucleotdeos complementares aqueles que codificam o carboxi terminal da prote-
na). Os finais 3' desses iniciadores esto face a face de modo que a replicao
atravs do DNA alvo. Uma vez hibridizado o primeiro iniciador, a DNA polimerase
pode sintetizar uma nova fita.
Essa enzima no a DNA polimerase normal de E. coli; uma polimerase de

bactrias como Thermus aquaticus ou Thermococcus litoralis. Essas bactrias vivem Ovrio de rato
Adulto
em fontes de gua quente (como aquelas do Yellowstone National Park) ou nos respi- Ovrio de camundongo
radouros trmicos de submarinos, onde a temperatura atinge valores prximos de
900C. Essas DNA polimerases podem suportar temperaturas prximas ebulio e o Rim de camundongo
PCR se utiliza dessa adaptao evolucionria. Uma vez sintetizada a segunda fita, ela
Rim de camundongo
Embrio de 14 dias
separada de seu complemento por desnaturao em alta temperatura. O segundo
iniciador adicionado e agora ambas as fitas podem sintetizar novo DNA. Sucessivos Salivares de camundongo
ciclos de desnaturao e sntese amplificaro essa regio do DNA de forma geomtri-
ca. Aps vinte turnos, aquela regio especfica estar amplificada 220 vezes (um pouco Pncreas de camundongo
mais de um milho). Quando submetido eletroforese esse fragmento amplificado Pulmo de camundongo
facilmente detectado. Isso mostra que o mRNA original com essa seqncia estava
presente na amostra. (A confirmao poderia ser feita por transferncia Southern,
como na Figura 2.30). Alm disso, pode-se usar essas cpias amplificadas para clona- Sem adio de DNA
gem, colocando-as em vetores de clonagem.
Figura 2.30
Determinando a funo do gene: Evidncia fornecida por PCR, para a sntese
de um fator de crescimento, activina, de r-
clulas e organismos transgnicos gos embrionrios de camundongo. O mRNA
desses rgos foi convertido em DNA e am-
Tcnicas de insero de DNA novo em uma clula plificado atravs de 20 ciclos de replicao.
Apesar de ser importante conhecer a seqncia de um gene e seu esquema temporo- O DNA foi submetido sucessivamente ele-
espacial de expresso, o que realmente crucial conhecer a funo daquele gene troforese e transferncia Southern usando uma
no desenvolvimento. Tcnicas recentes permitem estudar a funo do gene, tirando sonda radioativa para uma parte do gene de
e repondo certos genes de clulas embrionrias. Pedaos de DNA clonados podem activina. mRNA de activina foi encontrado
ser modificados (se desejado), e colocados em clulas por vrios meios. Uma tcni- no ovrio do camundongo adulto (como es-
ca muito direta a microinjeo, na qual uma soluo contendo o gene clonado perado) e tambm em vrios rgos embrio-
nrios. A possvel funo de activina nesses
cuidadosamente injetada no ncleo da clula (Capecchi, 1980). Essa uma tcnica
orgos ser discutida no Captulo 17. (Corte-
especialmente til para injetar genes em ovos recentemente fertilizados, pois os sia de O. Ritvos.)
ncleo haplides do espermatozide e do vulo so relativamente grandes (Figura
2.31). Em transfeco, o DNA incorporado diretamente na clula por incubao em
uma soluo determinada onde a clula o incorpora. A probabilidade de incorpora-
o de tal fragmento de DNA no cromossomo relativamente pequena, sendo ne-
cessrio misturar o DNA com outro gene que permite a sobrevivncia das raras
clulas que o incorporaram, em condies de cultura onde as outras clulas so
destrudas (Perucho et al.,1980; Robins et al.,1981).
Outra tcnica a eletroporao, onde pulsos de alta voltagem empurram o DNA
para dentro da clula. Um mtodo mais natural para introduzir genes na clula
colocar o gene clonado em um elemento transponvel ou vetor retroviral. Esses so
regies mveis de DNA, de ocorrncia natural, que podem ser integrados no genoma.
Retrovrus so vrus contendo RNA. Dentro da clula hospedeira eles produzem uma
cpia de seu DNA (usando sua prpria transcriptase reversa); a cpia se transforma
em dupla fita e se integra em um cromossomo do hospedeiro. A integrao consuma-
da devido s duas seqncias idnticas (longas repeties terminais) nos terminais
do DNA retroviral. Vetores retrovirais so produzidos removendo os genes do
empacotamento viral (necessrios para a sada dos vrus da clula) do centro de um
retrovrus de camundongo. Essa extrao cria um stio vazio onde outros genes po-
dem ser colocados. Usando enzimas de restrio apropriadas, o pesquisador pode
remover genes de um fago ou plasmdeo clonado e reinserir o gene em vetores retrovirais.
Retrovetores virais infectam clulas de camundongo com eficincia prxima de 100%.
Em Drosophila, novos genes podem ser introduzidos na mosca, via elementos P.
Essas seqncias de DNA, so elementos transponveis de ocorrncia natural que
podem ser integrados como vrus em qualquer regio do genoma da Drosophila.
Ainda mais, eles podem ser isolados, e genes clonados inseridos no centro do elemen-
to P. Quando o elemento P recombinado injetado em um ocito de Drosophila, ele
pode se integrar ao DNA e prover o embrio de um novo gene (Spradling e Rubin, 1982).
Camundongos quimricos
As tcnicas descritas tm sido usadas recentemente para transferir genes para to-
das as clulas do embrio de camundongo (Figura 2.32). Durante o desenvolvimen-
to do camundongo existe um estgio onde somente esto presentes dois tipos de
clulas: as clulas externas, que formaro a poro fetal da placenta, e as clulas
internas, que daro origem ao prprio embrio. Essas clulas internas so chamadas
clulas embrionrias precursoras (clulas tronco), porque cada uma delas pode,
se isolada, gerar todas as clulas do embrio (Gardner, 1968; Moustafa e Brinster,
1972). Essas clulas podem ser isoladas do embrio de um camundongo e cultiva-
das. Uma vez em cultura, elas podem ser tratadas como descrito, de modo a incorpo-
rar novo DNA. A nova clula embrionria precursora (no somente o DNA, mas a
clula inteira) pode ser injetada em outro embrio de camundongo em fase precoce.
Assim, a clula precursora tratada estar integrada no embrio do hospedeiro. O
resultado um camundongo quimrico*. Algumas de suas clulas so derivadas
das clulas embrionrias precursoras do hospedeiro, mas outra poro de clulas
derivada tambm das clulas precursoras tratadas. Se as clulas tratadas se torna-
ram parte da linha germinal do camundongo, alguns dos seus gametas sero deriva-
dos da clula doadora. Quando cruzado com um camundongo do tipo selvagem,
alguns de seus descendentes levaro, portanto, uma cpia do gene inserido. Os
descendentes heterozigotos, no acasalamento produziro 25% de embries carre-
Figura 2.31 gando duas cpias do gene inserido em cada clula de seu corpo (Gossler et al.,1986).
Injeo de DNA (de genes clonados) em um
Assim, em trs geraes o camundongo quimrico, o camundongo heterozigoto
ncleo (neste caso, um proncleo de um ovo
de camundongo). (de Wagner et al.,1981, cor- e o camundongo homozigoto um gene que foi clonado de um outro indivduo,
tesia de T. E. Wagner.) est agora presente em ambas as cpias dos cromossomos dentro do genoma do
camundongo. Camundongos com genes estveis de outros indivduos so chama-
dos camundongos transgnicos. Essas linhagens tm sido particularmente teis na
determinao das funes de regies reguladoras que ladeiam os genes.
Experimentos com genes com endereamento

(Gene targeting ou Knockout)
A anlise de embries precoces de mamferos foi durante muito tempo prejudicada
pela dificuldade em criar e selecionar mutaes que afetam a fase inicial do desen-
volvimento embrionrio. Esse problema foi superado pela tcnica chamada de
endereamento de genes (s vezes, chamada de Knockout). As tcnicas so simi-
lares quelas que produzem camundongos transgnicos, mas em lugar de adicionar
genes, enderear genes significa trocar alelos do tipo selvagem por outros mutados.
Chisaka e Capecchi (1991) usaram essa tcnica para estudar a funo do gene Hoxa-
3 no desenvolvimento do camundongo. Hoxa-3 semelhante a vrios genes de
Drosophila que so conhecidos como controladores da expresso gnica de seg-
mentos especficos no embrio precoce; a protena codificada por Hoxa-3 liga-se ao
DNA, exatamente como sua correspondente na Drosophila. Seria possvel que Hoxa-
3 de maneira similar estaria regulando a expresso gnica espao-especfica nos
mamferos? Chisaka e Capecchi isolaram o gene Hoxa-3, cortaram-no com uma enzima
de restrio e inseriram nesse stio um gene para resistncia neomicina (Figura
2.33). Em outras palavras, eles mutaram o gene Hoxa-3 pela insero de um grande
pedao de DNA que continha um gene resistente neomicina, destruindo a habili-
dade da protena Hoxa-3 em se ligar a DNA. Esses genes mutantes Hoxa-3 foram
eletroporados em clulas embrionrias precursoras que eram sensveis neomicina.
* crtico notar a diferena entre uma quimera e um hbrido. Um hbrido resulta da unio de dois
genomas diferentes dentro da mesma clula: o descendente de um genitor de gentipo AA e outro de
gentipo aa um hbrido Aa. Uma quimera resulta quando clulas de constituio gentica diferente
aparecem no mesmo organismo. O termo apto: refere-se a um monstro mitolgico com cabea de
leo, corpo de bode e cauda de serpente.
Clulas embrionrias
precursoras
Gene clonado
no vetor
Cultura de clulas
Trofoblasto embrionrias precursoras
Mistura de clulas Seleo de clulas
embrionrias precursoras embrionrias precursoras
com o gene clonado que incorporaram o transgene
Microinjetar Integrao das clulas Injetar no

clulas precursoras no hospedeiro tero
transgnicas no Camundongos
embrio hospedeiro quimricos
Figura 2.32
Produo de camundongos transgnicos. C-
lulas embrionrias precursoras de um camun-
dongo so cultivadas e o genoma alterado pela
adio de um gene clonado. As clulas
transgnicas so selecionadas e injetadas em
um embrio hospedeiro de camundongo na sua
fase precoce. Aqui, as clulas embrionrias
Camundongos precursoras transgnicas se integram s celulas
transgnicos precursoras do hospedeiro. Esse embrio
homozigotos colocado no tero de um camundongo fmea
Camundongos
grvida e se desenvolve em um camundongo
transgnicos
heterozigotos quimrico. Se as clulas precursoras doadoras
contriburam para a linha germinativa, e o ca-
mundongo quimrico cruzado com um do
tipo selvagem, parte dos descendentes sero
Uma vez dentro do ncleo dessas clulas, o gene Hoxa-3 mutado substituiu um heterozigotos ao alelo adicionado. Cruzando
alelo normal desse gene por um processo chamado recombinao homloga. Aqui, heterozigotos, pode ser gerada uma linhagem
de camundongos que homozigota ao alelo
as enzimas envolvidas no reparo de DNA e replicao incorporam o gene mutante
adicionado. Essa seria uma linhagem transg-
em lugar da cpia normal. Esse um evento raro, mas tais clulas podem ser nica. O gene adicionado (o transgene) pode
selecionadas cultivando as clulas precursoras em neomicina. A maioria das clulas ser de qualquer fonte eucaritica.
morre com a droga, mas aquelas que adquiriram resistncia pelo gene incorporado
sobrevivem. As clulas resultantes tm um gene Hoxa-3 normal e um Hoxa-3 mutado.
As clulas precursoras heterozigotas so microinjetadas em um blastcito de ca-
mundongo e se integram nas clulas do embrio. O camundongo resultante uma
quimera composta de clulas do tipo selvagem do embrio hospedeiro e de clulas
heterozigotas Hoxa-3, das clulas precursoras. As quimeras so acasaladas com
camundongos do tipo selvagem e se algumas das clulas doadoras se integraram
linhagem das clulas germinativas, alguns dos descendentes sero heterozigotos
(A)
Massa
celular neo r
interna
Cultura de clulas
Blastcito embrionrias
precursoras (ES) Recombinao
Eletroporao homloga
(B) Clula
gene Hoxa-3 precursora
embrionria
Hoxa-3
Endonucleases gene Hoxa-3 mutado
de restrio com o gene neor inserido
gene neor
Figura 2.33
Seleo de clulas ES
Tcnica de endereamento de genes (gene targeting). Nesse caso o gene alvo o heterozigotas por sua
Hoxa-3. (A) Clulas embrionrias precursoras (ES) so cultivadas a partir de uma resistncia neomicna
massa celular interna. (B) Os genes Hoxa-3 clonados so cortados com uma enzima
de restrio, e um gene neomicina-resistente inserido na regio que codifica o stio
de ligao da protena ao DNA. Esses genes Hoxa-3 mutantes so eletroporados em
clulas ES, onde recombinao homloga troca o gene do tipo selvagem pela cpia Injeo de clulas ES
mutada. As clulas so selecionadas pela sua resistncia neomicina. (C) As clulas heterozigotas no
(C)
blastcito
ES heterozigotas selecionadas so inseridas na massa interna de clulas de um em-
brio do tipo selvagem, e o blastcito retornado ao tero. O camundongo resultante
uma quimera composta de tecidos Hoxa-3 heterozigotos e tecidos Hoxa-3 do tipo
selvagem. Cruzando os animais quimricos com camundongos do tipo selvagem
produz-se descendentes Hoxa-3 heterozigotos se as clulas ES contriburam na
linhagem germinativa. Os animais heterozigotos podem ser cruzados entre si, e Injeo dos
aproximadamente 25% de sua cria deve ser de homozigotos mutantes de Hoxa-3. blastcitos no tero
Produo de
camundongos quimricos
Cruzamento de
quimricos com
tipo selvagem
Cruzamento de
camundongos
heterozigotos
Hoxa-3/ Hoxa-3+
Heterozigotos Heterozigotos
Hoxa-3/ Hoxa-3
Homozigoto
para o gene Hoxa-3. Os animais heterozigotos podem ser cruzados entre si, e apro-
ximadamente 25% de seus descendentes devem levar duas cpias do gene mutado
Hoxa-3. Esses camundongos mutantes homozigotos no possuem as glndulas
tireide, paratireide e timo! Dessa maneira, endereando genes pode-se analisar as
funes de determinados genes durante o desenvolvimento de mamferos.
[gene7.html]
Determinando a funo de uma mensagem:

RNA antisense
Outro mtodo para determinar a funo de um gene fazer cpias antisense de sua
mensagem. Mensagens antisense podem ser produzidas usando cDNA clonado e
fazendo sua reclonagem em reverso, prximo a um vigoroso promotor bacteriano, em
outro vetor. O promotor bacteriano iniciar a transcrio da mensagem na direo
errada quando for incubado com RNA polimerase e nucleosdeos trifosfato. Dessa
maneira, sintetizado um transcrito que complementar aquele natural (Figura 2.34A).
O transcrito complementar chamado RNA antisense porque o reverso da mensa-
gem original. Quando grandes quantidades de RNA antisense so injetadas ou
transfectadas em clulas contendo o mRNA normal desse gene, o RNA antisense se
liga mensagem normal; o cido nuclico dupla-fita resultante degradado (enzimas Figura 2.34
do citoplasma das clulas digerem cidos nuclicos de fita dupla). Isso causa uma Produco de RNA antisense para examinar a
depleo funcional da mensagem, como se houvesse uma mutao eliminatria para funo dos genes no desenvolvimento. (A)
aquele gene. Produo da mensagem antisense (neste caso,
Esses resultados foram confirmados quando RNA antisense foi produzido a partir ao gene Krppel da Drosophila) colocando o
fragmento de cDNA clonado para a mensagem
do gene Krppel de Drosophila. Krppel crtico para a formao do trax e do
Krppel entre dois vigorosos promotores. Os
abdmen da mosca. Se esse gene est ausente, as larvas da mosca morrem pela falta promotores esto em orientao oposta com
dos segmentos torcico e abdominal anterior (Figura 2.34B); uma situao semelhante respeito ao cDNA do Krppel. Nesse caso, o
criada quando grandes quantidades de RNA antisense contra a mensagem Krppel promotor T3 est em orientao normal e o
so injetados em embries precoces da mosca (Rosenberg et al.,1985). RNA antisense promotor T7 est revertido. Os promotores
permite ao biologista do desenvolvimento determinar a funo dos genes durante o reconhecem RNA polimerases diferentes (dos
desenvolvimento e analisar a ao dos genes em animais; de outra forma isso seria bacterifagos T3 e T7, respectivamente). T3
inacessvel anlise gentica. polimerase permite a transcrio de mRNA de
consenso, ao passo que T7 polimerase pro-
duz transcritos antisense. (B) Resultado da
Reinvestigao de velhos problemas com novos mtodos injeo da mensagem Krppel antisense em um
embrio precoce (estgio blastodrmico
A unio da embriologia com a biologia molecular est permitindo ao biologista do sincicial) de Drosophila antes que a mensa-
desenvolvimento uma nova apreciao de como trabalham os genes na construo de gem Krppel seja produzida. A figura central
um organismo. Estamos em meio uma revoluo nos nossos conhecimentos sobre um embrio do tipo selvagem pouco antes de
desenvolvimento, e um dos maiores sucessos resultantes de clonagens e eclodir. Acima est o mutante causado pela
seqenciamentos a nova anatomia do gene eucarioto. Descreveremos a estrutura falta do genes Krppel. Abaixo est o embrio
do gene com mais detalhe no Captulo 10, mas importante ressaltar que os genes do tipo selvagem, injetado com a mensagem
Krppel antisense no estgio embrionrio pre-
eucariotos que codificam protenas tm vrios stios regulatrios (Figura 2.35). Um
coce. Ambos os embries, mutante e o tratado
stio, o promotor, est localizado diretamente a montante do gene (antes do incio) e com antisense, no possuem os segmentos
torcico e abdominal anterior. (B, de acordo
(A) com Rosenberg et al., 1985.)
mRNA de consenso (B) Embrio mutante Krppel

(sense) Krppel
promotor
T7
mRNA
antisense Embrio normal
Krppel
T3 RNA
T3 polimerase polimerase
promotor T7 RNA Embrio normal
infectado com RNA
antisense Krppel
o stio onde se liga a RNA polimerase. Localizada em algum lugar dentro do gene (a
jusante ou a montante, ou ainda em um ntron dentro do gene), est uma segunda
regio chamada intensificadora. Fatores proticos que se ligam ao intensificador per-
mitem sua interao com o promotor e, conseqentemente, com a transcrio do gene
pela RNA polimerase. Alguns promotores (como aqueles usados por produtos relaci-
onados ao metabolismo geral da clula) no precisam ser ativados por intensificado-
res, mas a maioria dos genes ligados ao desenvolvimento so ativados em tempos e
clulas especficos. Esses genes precisam ser ativados por fatores que se ligam ao
intensificador e ao promotor. Como veremos no Captulo 10, a ligao de diferentes
fatores de transcrio aos promotores e intensificadores de genes especficos um
dos mecanismos que controlam a produo de protenas diferentes a partir de genomas
idnticos. Um exemplo a ativao do gene para ZP3.
Como detalharemos no Captulo 4, ZP3 a principal protena ligante de espermato-
zide na superfcie do vulo de camundongo. uma glicoprotena sintetisada pelo
ocito durante sua maturao em vulo (Roller et al.,1989). Uma transferncia Northern
mostra que o mRNA para essa protena sintetizado somente em ocitos em cresci-
mento e no pode ser detectado em nenhum outro tipo de clula (Figura 2.36). O que
permite a esse gene ser ativado somente nos ocitos? Lira e colaboradores (1990)
isolaram o gene para ZP3, determinaram sua seqncia e encontraram um stio promo-
tor, 28 pares de bases a montante do stio onde a transcrio do gene iniciada. Como
hiptese, consideraram que seqncias responsveis por ativao ocito-especfica
podem existir at mais longe, a montante do gene. Eles usaram enzimas de restrio
para isolar o DNA da regio 5', a montante, (com 150 pares de bases) e o fundiram ao
gene para a luciferinase de vaga-lume. (No necessrio dizer que essa enzima produ-
tora de luz no encontrada em camundongos. Est sendo usada aqui como um gene
reprter para monitorar onde o DNA a montante pode causar sua expresso.) O gene
recm-construdo, contendo a regio a montante do gene ZP3 ligada ao gene estrutu-
ral para luciferinase, foi injetado em zigotos de camundongo para criar animais
transgnicos, levando em cada ncleo o gene luciferinase com a regio regulatria
ZP3. Em camundongos transgnicos fmeas, a hibridizao in situ localizou mRNA de
luciferinase em um nico tipo de clula, o ocito (Figura 2.37). Assim, a seqncia de
DNA com 150 pares de bases foi necessria e suficiente para ativar o gene (qualquer
gene!) no ocito. Dentro dessa regio de 150 pares de bases (de 99 a 86 pares de bases
a montante do gene estrutural ZP3) existe a seqncia 5-GATAA-3' que liga uma
protena chamada OSP-1. OSP-1 encontrada somente em ocitos em maturao; ela
ativa o gene ZP3 ligando-se a essa sequncia de DNA no promotor. Parece, ento, que
ZP3 sintetizado em ocitos porque eles tm a protena OSP-1 que se liga a certas
seqncias de DNA que so parte de seu promotor (Schickler et al.,1992). No momen-
to, est sendo investigado como regulado o gene codificador de OSP-1.
Figura 2.35
Estrutura bsica de um gene regulado pelo de-
senvolvimento. O promotor da maioria dos
genes codificadores de protenas encontrado
no terminal 5' (a montante) do gene. O intensi-
ficador freqentemente est mais acima, a mon-
tante, mas pode ser encontrado dentro de um Intensificador
ntron ou no terminal 3'. Protenas que se li- Promotor xon ntron xon ntron xon
gam ao promotor e aos intensificadores
interagem para regular a transcrio do gene.
(No exemplo ZP3, o stio OSP-1, GATAA,
est localizado no promotor, aproximadamen-
te 95 pares de bases a montante do stio de Intensificador Intensificador
incio da transcrio. Um stio intensificador
sensvel a estrognios encontrado no primei- a montante a jusante
ro ntron do gene ZP3.) do gene do gene
Figura 2.36 Ocito

Transferncia Northern de RNA de ZP3 acumulado no camundongo. RNA de vrios tecidos
Ovrio
(10g por pista) e ocitos (125ng) foram submetidos eletroforese e transferidos para papel de
nitrocelulose. Um fragmento radioativamente marcado do gene ZP3 foi usado como sonda do Crebro
mRNA. A mensagem ZP3 foi encontrada somente no ovrio, especialmente dentro dos ocitos. Embrio de 13 dias
(de Roller et al.,1989, cortesia de P. Wassarman).
Corao
Intestino
Rim
Uma concluso e um alerta
Fgado
Depois de quase um sculo, estamos comeando a entender como as clulas regulam Msculo
a expresso diferenciada de seus genes, permitindo que genes diferentes possam se Testculos
tornar ativos em diferentes clulas. Esse conhecimento est ajudando a explicar como tero
a informao herdada utilizada para construir os planos bsicos do corpo e os tipos
especficos de clulas do organismo em desenvolvimento.
Entretanto, uma palavra de alerta. Caso o tom celebratrio deste captulo deixou a
impresso de que desenvolvimento somente uma funo da atividade gnica
necessrio relembrar do Captulo 1, que a distino entre talo e esporo (Dictyoste-
lium), estado amebide e flagelado (Naegleria) e gondios sexual e assexual (Volvox)
determinada pelo ambiente. Em captulos posteriores (especialmente Captulo 21),
veremos outros exemplos do controle ambiental do desenvolvimento: determinao
de sexo temperatura-dependente em rpteis, desenvolvimento em insetos dependente
da dieta, e a diferenciao, dependente de experincia, dos neurnios e linfcitos em
mamferos. Nesses casos o organismo herda a habilidade para responder aos sinais
do ambiente, mas no possvel predizer o fentipo a partir do gentipo.
(A) (B)
Figura 2.37
Hibridizao in situ da expresso do gene reprter luciferinase, quando luciferinase foi
ligado ao promotor do gene ZP3. A sonda radioativa era dirigida mensagem luciferinase,
a qual apareceu onde foi expressa sob a direo do promotor de ZP3. (A) Viso do
ovrio inteiro (60x). (B) Magnificao (160x) de dois folculos ovarianos contendo
ocitos em maturao. (de Lira et al., 1990, cortesia de P. Wassarman.)
LITERATURA CITADA
Allen, G. E. 1978. Thomas Hunt Morgan: The Brush, S. 1978. Nettie Stevens and the discovery Gilbert, S. F. 1991. Induction and the origins
Man and His Science. Princeton University of sex determination. Isis 69: 132-172. of developmental genetics. In S. Gilbert
Press, Princeton, NJ. (ed.), A Conceptual History of Modern
Burian, R., Gayon, J. and Zallen, D. T. 1991.
E m b r y o l o g y. P l e n u m , N e w Yo r k , p p .
Allen, G. E. 1986. T. H. Morgan and the split Boris Ephrussi and the synthesis of genetics and
181-206.
between embryology and genetics, 1910-1935. embryology. In S. Gilbert (ed.), A Conceptual
In T. J. Horder, J. A. Witkowski and C. C. Wylie History of Modern Embryology. Plenum, New Gilbert, S.F. 1996. Enzyme adaptation and the
(eds.), A History of Embryology. Cambridge York, pp. 207-227. entrance of molecular biology into embryology.
University Press, New York, pp. 113-146. In S. Sarkar (ed.), The Molecular Philosophy
Burkholder, G. D. 1976. Whole mount electron
and History of Molecular Biology: New
Ashburner, M. 1972. Patterns of puffing activity microscopy of polytene chromosome from Dro-
Perspectives, Kluwer Academic Publishers,
in the salivary glands of Drosophila. VI. sophila melanogaster. Can. J. Genet. Cytol. 18:
Dordrecht, pp. 101-123.
Induction by ecdysone in salivary glands of D. 67-77.
melanogaster cultured in vitro. Chromosoma Gluecksohn-Schoenheimer, S. 1938. The deve-
Capecchi, M. R. 1980. High efficiency trans-
38: 255-281. lopment of two tailless mutants in the house
formation by direct microinjection of DNA into
mouse. Genetics 23: 573-584.
Ashburner, M. and Berondes, H. D. 1978. Puffing cultured mammalian cells. Cell 22: 479-488.
of polytene chromosomes. In The Genetics and Gluecksohn-Schoenheimer, S. 1940. The effect
Chisaka, 0. and Capecchi, M. R. 1991. Regionally
Biology of Drosophila, Vol. 2B. Academic Press, of an early lethal (to) in the house mouse. Gene-
restricted developmental defects resulting from
New York, pp. 316-395. tics 25: 391-400.
targeted disruption of the homeobox gene box
Baltzer, F. 1967. Theodor Boveri: Life and Work 1.5. Nature 350: 473-479. Goldschmidt, R. B. 1938. Physiological Gene-
of a Great Biologist. (Trans. D. Rudnick.) tics. McGraw-Hill, New York. [p. 1]
Clever, U. 1966. Induction and repression of
University of California Press, Berkeley.
a puff in Chironomus tentans. Dev. Biol. Gossler, A., Doetschman, T., Korn, R., Serfling,
Barnett, T., Pachl, C., Gergen, J. P. and Wensink, 14:421-438. E. and Kemler, R. 1986. Transgenesis by means
P. C. 1980. The isolation and characterization of blastocyst -derived stem cell lines. Proc. NatI.
Cohen, S. N., Chang, A. C. Y., Boyer, H. W. and
of Drosophila yolk protein genes. Cell 21: Acad. Sci. USA 83: 9065-9069.
Helling, R. B. 1973. Construction of biologically
729-738.
functional bacterial plasmids in vitro. Proc. Natl. Grossbach, U. 1973. Chromosome puffs and gene
Becker, H. J. 1959. Die Puffs der Speicheldr- Acad. Sci. USA 70: 3240-3244. expressions in polytene cells. Cold Spring
senchromosomen von Drosophila melanogas- Harbor Symp. Quant. Biol. 38: 619-627.
DiBerardino, M. A. 1987. Genomic potential of
ter. I. Beobachtungen zum Verhalten des Puff-
differentiated cells analyzed by nuclear trans- Gurdon, J. B. 1962. The developmental capacity
musters im Normalstamm und bei zwei
plantation. Am. Zool. 27: 623-644. of nuclei taken from intestinal epithelial cells
Mutanten, giant- und lethal-giant Larvae. Chro-
of feeding tadpoles. J. Embryol. Exp. Morphol.
mosoma 10: 654-678. DiBerardino, M. A. 1989. Genomic activation
10: 622-640.
in differentiated somatic cells. In M. A.
Beermann, W. 1952. Chromomerenkonstanz
DiBerardino and L. D. Etkin (eds.), Develop- Gurdon, J. B. 1968. Transplanted nuclei and cell
und spezifische Modifikationen der Chromo-
mental Biology: A Comprehensive Synthesis. differentiation. Sci. Am. 219(6): 24-35.
somenstruktur in der Entwicklung und Organ-
Plenum, New York, pp. 175-198.
differenzierung von Chironomus tentans. Chro- Gurdon, J. B. 1977. Egg cytoplasm and gene
mosoma 5: 139-198. DiBerardino, M. A. and King, T. J. 1967. Deve- control in development. Proc. R. Soc. Lond.
lopment and cellular differentiation of neural [B] 198: 211-247.
Beermann, W. 1961. Ein Balbiani -ring als
nuclear transplants of known karyotypes. Dev.
Locus einer Speicheldrsen -Mutation. Chro- Gurdon, J. B. and Uehlinger, V. 1966. Fertile
Biol. 15:102-128.
mosoma 12: 1-25. intestinal nuclei. Nature 210: 1240-1241.
Dumont, J. N. and Yamada, T. 1972. Dediffe-
Beermann, W. 1963. Cytological aspects of Gurdon, J. B., Laskey, R. A. and Reeves, 0. R.
rentiation of iris epithelial cells. Dev. Biol.
information transfer in cellular differentiation. 1975. The developmental capacity of nuclei
29:385-401.
Am. Zool. 3: 23-28. transplanted from keratinized cells of adult frogs.
Gardner, R. L. 1968. Mouse chimeras obtained J. Embryol. Exp. Morphol. 34: 93-112.
Blattner, F. R. and eight others. 1978. Cloning
by the injection of cells into the blastocyst.
human fetal g-globin and mouse a-type globin Harrison, R. G. 1937. Embryology and its
Nature 220: 596-597.
DNA: Preparation and screening of shotgun relations. Science 85: 369-374.
collections. Science 202:1279-1283. Gilbert, S. F. 1978. The embryological origins
Harwood, J. 1993. Styles of Scientific Thought:
of the gene theory. J. Hist. Biol. 11: 307-351.
Boveri, T. 1904. Ergebmisse ber die Konstitu- The German Genetics Community 1900-1933.
tion der chromatischen Substanz des Zelkerns. Gilbert, S. F. 1987. In friendly disagreement: The University of Chicago Press, Chicago.
Gustav Fisher, Jena. [p. 123] Wilson, Morgan, and the embryological origins
Hennen, S. 1970. Influence of spermine and reduced
of the gene theory. Am. Zool. 27: 797-806.
Briggs, R. 1979. Genetics of cell type deter- temperature on the ability of transplanted nuclei to
mination. Int. Rev. Cytol. [Suppl.] 9: Gilbert, S. E 1988. Cellular politics: Ernest Everett promote normal development in eggs of Rana
107-127. just, Richard B. Goldschmidt, and the attempts to pipiens. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 66: 630-637.
reconcile embryology and genetics. In R. Rainger,
Briggs, R. and King, T. J. 1952. Transplan- Holland, P. W. H. and Hogan, B. L. M. 1986.
K. R. Benson and J. Maienschein (eds.), The
tation of living nuclei from blastula cells Phylogenetic distribution of Antennapedia-like
American Development of Biology. University of
into enucleated frogs eggs. Proc. Natl. Acad. homeoboxes. Nature 321: 251-253.
Pennsylvania Press, Philadelphia, pp. 311-346.
Sci. USA 38:455-463.
Jacob, F. and Monod, J. 1961. Genetic regulatory Morange, M. 1996. Construction of the develo- Roller, R. J., Kinloch, R. A., Hiraoka, B. Y.,
mechanisms in the synthesis of proteins. J. Mol. pmental gene concept. The crucial years: Li, S. S.-L. and Wassarman, P. M. 1989. Gene
Biol. 3: 318-356. 1960-1980. Biol. Zent. bl. 115:132-138. expression during mammalian oogenesis and
early embryogenesis: Quantification of three
Jamrich, J., Sargent, T. D. and Dawid, I. 1985. Morgan, I H. 1897. The Frogs Egg. Macmi- messenger RNAs abundant in fully grown
Altered morphogenesis and its effects on gene llan, New York. [p. 135]. mouse oocytes. Development 106:251-261.
activity in Xenopus laevis embryos. Cold Spring
Morgan, T. H. 1926. The Theory of the Gene. Rosenberg, U. B., Preiss, A., Seifert, E., Jckle,
Harbor Symp. Quant. Biol. 50: 31-35.
Yale University Press, New Haven. H. and Knpple, D. C. 1985. Production of
Judson, H. F. 1979. The Eighth Day of Creation. phenocopies by Kriippel antisense RNA
Moustafa, L. A. and Brinster, R. L. 1972. Induced
Simon & Schuster, New York. injection into Drosophila embryos. Nature 313:
chimaerism by transplanting embryonic cells into
Just, E. E. 1939. The Biology of the Cell Surface. mouse blastocysts. J. Exp. Zool. 181: 193-202. 703-706.
Blakiston, Philadelphia. Saiki, R. K., Scharf, S., Faloona, F., Mullis, K.
Nathans, D. and Smith, H. 0. 1975. Restriction
Keller, E. F. 1995. Refiguring Life: Metaphors endonucleases in the analysis and restructuring B., Horn, G. T., Erlich, H. A. and Arnheim, N.
of Twentieth-Century Biology. Colorado of DNA molecules. Annu. Rev. Biochem. 44: 1985. Enzymatic amplification of -globin
University Press. 273-293. genomic sequences and restriction site analysis
for diagnosis of sickle cell anemia. Science 230:
King, T. J. 1966. Nuclear transplantation in Okada, T. S. 1991. Transdifferentiation. Oxford 1350-1354.
amphibia. Methods Cell Physiol. 2: 1-36. University Press, New York.
Sander, K. 1986. The role of genes in ontogene-
King, T. J. and Briggs, R. 1956. Serial transplan- Oppenheimer, J. M. 1981. Walter Landauer and sisevolving concepts from 1883 to 1983 as
tation of embryonic nuclei. Cold Spring Harbor developmental genetics. In S. Subtelny and U. perceived by an insect embryologist. In T. J.
Symp. Quant. Biol. 21: 271-289. K. Abbott (eds.), Levels of Genetic Control in Horder, J. A. Witkowski and C. C. Wylie (eds.),
Development. Alan R. Liss, New York, pp. 1-13. A History of Embryology. Cambridge University
Lambert, B. 1972. Repeated DNA sequences in
Press, New York, pp. 363-395.
a Balbiani ring. J. Mol. Biol. 72: 65-75. Orr, N. H., DiBerardino, M. A. and McKinnell,
R. G. 1986. The genome of frog erythrocytes Sanger, F., Nicklen, S. and Coulson, A. R.
Lambert, B. and Daneholt, B. 1975. Microa-
displays centuplicate replications. Proc. Natl. 1977. DNA sequencing with chain-termina-
nalysis of RNA from defined cellular compo-
Acad. Sci. USA 83: 1369-1373. ting inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
nents. Methods Cell Biol. 10: 17-47.
74:5463-5467.
Pardue, M. L. and Gall, J. G. 1970. Chromoso-
Lederman, M. 1989. Research note: Genes on
mal localization of mouse satellite DNA. Science Sapp, J. 1987. Beyond the Gene: Cytoplasm
chromosomes: The conversion of Thomas Hunt
168: 1356-1358. Inheritance and the Struggle for Authority in
Morgan. J. Hist. Biol. 22: 163-176.
Genetics. Oxford Universtiy Press.
Paul, D. B. and Kimmelman, B. A. 1988. Mendel
Lillie, F. R. 1927. The gene and the ontogenetic
in America: Theory and practice, 1900-1919. Sargent, T. D. and Dawid, I. 1983. Differential
process. Science 64: 361-368.
In R. Rainger, K. R. Benson and J. Maienschein gene expression in the gastrula of Xenopus laevis.
Lira, A. A., Kinloch, R. A., Mortillo, S. and Was- (eds.), The American Development of Biology. Science 222: 135-139.
sarman, P. A. 1990. An upstream region of the University of Pennsylvania Press, Philadelphia,
pp. 281-310. Schickler, M., Lira, S., Kinloch, R. A. and
mouse ZP3 gene directs expression of firefly
Wassarman, P. A. 1992. A mouse oocytes-
luciferinase specifically to growing oocytes in
Perucho, M., Hanahan, D. and Wigler, M. 1980. pecific protein that binds to a region of
transgenic mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:
Genetic and physical linkage of exogenous mZP3 promoter responsible for oocyte
7215-7219.
sequences in transformed cells. Cell 22: 309-317. -specific mZP3 gene expression. Mol. Cell
McGinnis, W., Garber, R. L., Wirz, J. Kurioiwa, Biol. 122:120-127.
Prather, R. S. 1991. Nuclear transplantation and
A. and Gehring, W. J. 1984. A homologous
embryo cloning in mammals. Int. Lab. Animal Smith, L. D. 1956. Transplantation of the nuclei
protein-coding sequence in Drosophila homeotic
Res. News 33: 62-68. of primordial germ cells into enucleated eggs of
genes and its conservation in other metazoans.
Rana pipiens. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 54:
Cell 37: 403-408. Prather, R. S., Barnes, F. L., Sims, M. M., Robl,
101-107.
J. M., Eyestone, W. H. and First, N L. 1987.
McGrath, J. and Solter, D. 1983. Nuclear trans-
Nuclear transplantation in the bovine embryo: Southern, E. M. 1975. Detection of specific
plantation in the mouse embryo by microsur-
Assessment of donor nuclei and recipient oocyte. sequences among DNA fragments separated by
gery and cell fusion. Science 220: 1300-1302.
Biol. Reprod. 37: 859-866. gel electrophoresis. J. Mol. Biol. 98: 503-517.
McGrath, J. and Solter, D. 1984. Inability of
Prather, R. S., Sims, M. M. and First, N. L. 1989. Spemann, H. 1938. Embryonic Development
mouse blastomere nuclei transferred to enuclea-
Nuclear transplantation in early porcine and Induction. Yale University Press, New
ted zygotes to support development in vitro.
embryos. Biol. Reprod. 41: 414-418. Haven.
Science 226: 1317-1319.
Rappolee, D. A., Brenner, C. A., Schultz, R., Spiegelman, S. 1947. Differentiation as the
McKinnell, R. G. 1978. Cloning: Nuclear Trans-
Mark, D. and Werb, Z. 1988. Developmental controlled production of unique enzymatic
plantation in Amphibia. University of Minne-
expression of PDGF, TGF- and TGF- genes patterns. In J. F. Danielli and R. Brown
sota Press, Minneapolis.
in preimplantation mouse embryos. Science 241: (eds.), Growth in Relation to Differentiati-
Monod, J. 1947. The phenomenon of enzymatic 1823-1825. on and Morphogenesis. Cambridge Univer-
adaptation and its bearing on problems of genetics sity Press, Cambridge, p. 287.
Reyer, R. W. 1954. Regeneration in the lens in
and cellular differentiation. Growth Symp. 11:
the amphibian eye. Q. Rev. Biol. 29: 1-46. Spradling, A. C. and Rubin, G. M. 1982.
223-289.
Transposition of cloned P elements into
Robins, D. M., Ripley, S., Henderson, A. S. and
Moore, J. A. 1963. Heredity and Development. Drosophila germ line chromosomes. Science
Axel, R. 1981. Transforming DNA integrates
Oxford University Press, Oxford. [p. 236] 218:341-347.
into the host chromosome. Cell 23: 29-39.
Stevens N. M. 1905a. A study of the germ cells Waddington, C. H. 1939. Preliminary notes on Willadsen, S. M. 1986. Nuclear transplantation
of Aphis rosae and Aphis oenotherae. J. Exp. the development of wings in normal and mutant in sheep embryos. Nature 320: 63-65.
Zool. 2: 371-405; 507-545. strains of Drosophila. Proc. NatI. Acad. Sci.
Willadsen, S. M. 1989. Cloning of sheep and
USA 25:299-307.
Stevens, N. M. 1905b. Studies in Spermato- cow embryos. Genome 31: 956-962.
genesis with Especial Reference to the Waddington, C. H. 1962. New Patterns in Gene-
Accessory Chromosome. Carnegie Institute Wilmut, I., Schnieke, A. E., McWhir, J., Kind,
tics and Development. Columbia University
of Washington, Washington, D.C. A. J. and Campbell, K. H. S. 1997. Viable
offspring from fetal and adult mammalian cells.
Steward,F. C. 1970. From cultured cells to whole Wagner, T. E., Hoppe, P., Jollick, J. D., Scholl, Nature 385: 810-813.
plants: The induction and control of their growth D. R., Hodinka, R. L. and Gault, J. B. 1981.
Wilson, E. B. 1894. The mosaic theory of de-
and morphogenesis. Proc. R. Soc. Lond. [B] Microinjection of rabbit -globin gene into
175:1-30. velopment. Biol. Lect. Marine Biol. Lab. Woods
zygotes and its subsequent expression in adult
Hole 2:1-14.
mice and offspring. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Steward, F. C., Mapes, M. 0. and Smith, J. 1958.
78: 6376-6380. Wilson, E. B. 1895. An Atlas of the Fertilization
Growth and organized development of cultured
cells. I. Growth and division of freely suspended and Karyogenesis of the Ovum. Macmillan, New
Wieslander, L. and Daneholt, B. 1977. Demons-
cells. Am. J. Bot. 45: 693-703. York. [p. 4]
tration of Balbiani ring RNA sequence in
polysomes. J. Cell Biol. 73: 260-264. Wilson, E. B. 1896. The Cell in Development
Steward, F. C., Mapes, M. 0., Kent, A. E. and
Holsten, R. D. 1964. Growth and development and Inheritance. Macmillan, New York. [p. 262]
Wessel, G. M., Goldberg, L., Lennarz, W. J.
of cultured plant cells. Science 143: 20-27. and Klein, W. H. 1989. Gastrulation in the sea Wilson, E. B. 1904. Experimental studies on
urchin is accompanied by the accumulation of germinal localization. I. The germ regions in
Stice, S. J. and Robl, J. M. 1988. Nuclear re-
an endoderm-specific mRNA. Dev. Biol. 136: the egg of Dentalium. J. Exp. Zool. 1: 1-72.
programming in nuclear transplant rabbit
526-538.
embryos. Biol. Reprod. 39: 657-664. Wilson, E. B. 1905. The chromosomes in re-
Wetmur, J. G. and Davidson, N. 1968 . Kinetics lation to the determination of sex in insects.
Ursprung, H., Smith, K. D., Sofer, W. H. and
of renaturation of DNA. J. Mol. Biol. 31:349-370. Science 22: 500-502.
Sullivan, D. T 1968. Assay systems for the study
of gene function. Science 160: 1075-1081. Wilkinson, D. G., Bhatt, S. and Herrmann, B. Yamada, T. 1966. Control of tissue specificity:
G. 1990. Expression pattern of the mouse T The pattern of cellular synthetic activities in
Vierra, J. and Messing, J. 1982. The pUC
gene and its role in mesoderm formation. tissue transformation. Am. Zool. 6:21-31.
plasmids, an M13mp7-derived system for
Nature 343: 657-659.
insertion mutagenesis and sequencing with
synthetic universal primers. Gene 19: 259-268.
A base celular da morfognese:
Afinidade celular diferencial
3
Mas a natureza no atomizada. Sua pa-
dronizao inerente e primria, e a ordem
subjacente beleza nela demonstrada; mais
ainda, a natureza s pode ser percebida pela
mente humana, porque ela mesmo parte
U m corpo no meramente uma coleo de tipos de clulas distribudas ao
acaso. Desenvolvimento envolve no s a diferenciao celular, mas tam-
bm sua morfognese em arranjos multicelulares tais como tecidos e rgos.
Quando observamos a anatomia detalhada de um tecido como a retina neural, vemos
um arranjo preciso e intrincado de muitos tipos diferentes de clulas. Neste Captulo,
integrante e majoritria daquela ordem. introduziremos as vias de mudana pelas quais as clulas do embrio em desenvolvi-
Paul Weiss (1960) mento criam rgos funcionais do corpo. Existem quatro questes majoritrias partici-
pando do arcabouo de discusses sobre morfognese:
Eu fui criado terrivelmente e maravilhosa-
Como se formam tecidos a partir de clulas? De que modo clulas da retina
mente. Salmo 139 (ca. 500 a.c).
neural aderem a outras clulas da retina neural e no se associam s celulas da
retina pigmentada ou da ris que esto prximas a elas? De que modo, os vrios
tipos de clulas presentes na retina neural (as trs camadas distintas de fotore-
ceptores, neurnios bipolares e clulas ganglionares) esto organizados para
permitir que a retina seja funcional?
Como so os rgos construdos a partir de tecidos? As clulas retinais do
olho esto situadas atrs da crnea e da lente a uma distncia exata. A retina
seria intil se estivesse situada atrs de um osso ou outro lugar qualquer, onde
a lente no pudesse nela focalizar os raios de luz. Alm disso, os neurnios da
retina devem penetrar no crebro para inervar as regies do crtex cerebral que
analisam a informao visual. Todas essas conexes devem estar precisamente
ordenadas.
Como clulas migrantes atingem seu destino, e como se formam rgos em
determinados locais? Olhos se desenvolvem na cabea, mas em nenhum ou-
tro lugar. O que impede a formao de um olho em outras partes do corpo, se
todas as clulas tm o mesmo potencial gentico? Em alguns casos, como o de
precursores de nossas clulas pigmentadas, clulas germinativas e glndula
supra-renal, as clulas devem percorrer longas distncias para alcanar seu
destino final. Como as clulas so instrudas para percorrer certas rotas e parar
quando atingem uma regio especfica do corpo?
Como crescem rgos e suas clulas, e como esse crescimento coordenado
ao longo do desenvolvimento? As clulas do olho devem crescer juntas, e as
clulas da retina raramente dividem-se aps o nascimento. Nosso intestino,
entretanto, est constantemente descartando clulas e regenerando outras, e
79
ainda assim, sua velocidade mittica cuidadosamente controlada. Se mais

clulas fossem regeneradas do que aquelas descartadas, seriam produzidos
crescimentos cancerosos. Se o nmero de clulas regeneradas fosse menor, o
intestino no poderia digerir o alimento. O que controla essas diferenas na
velocidade de crescimento?
Todas essas perguntas se referem a aspectos do comportamento celular. Existem

dois grupos principais de clulas no embrio: clulas epiteliais, fortemente ligadas
umas s outras em camadas ou tubos, e as clulas mesenquimatosas, isoladas e
funcionando como unidades individuais. A morfognese nessas duas classes de clu-
las se d atravs de um limitado repertrio de processos celulares: (1) direo e nme-
ro de divises celulares; (2) mudanas na forma das clulas; (3) movimento celular; (4)
crescimento celular; (5) morte celular; e (6) mudanas na composio da membrana
celular e da matriz extracelular. A maneira pela qual esses processos se completam
pode diferenciar entre clulas epiteliais e mesenquimatosas (Figura 3.1).
Parecem existir duas vias principais pelas quais clulas se comunicam umas com as
outras para que se efetue a morfognese. A primeira atravs de substncias difusveis
que so sintetizadas por um tipo de clula e que mudam o comportamento de outros
tipos celulares. Essas substncias incluem hormnios, fatores de crescimento e
morfgenos; cada um ser detalhado em captulos subseqentes. O segundo mtodo
involve contato entre superfcies de clulas adjacentes. Clulas podem seletivamente
reconhecer outras, aderindo a algumas clulas ou migrando sobre outras. Os eventos
moleculares que intermediam o reconhecimento seletivo de clulas e sua transforma-
o em tecidos e rgos, ocorrem na superfcie celular. Enquanto o paradigma domi-
nante na gentica do desenvolvimento a expresso diferencial do gene, o paradigma
dominante na morfognese envolve afinidade celular diferencial. Essas afinidades
podem ser para superfcies de outras clulas ou para molculas da matriz extracelular
secretadas pelas clulas. Neste captulo veremos como superfcies de clulas adjacen-
tes interagem durante o desenvolvimento, visando localizar as clulas em stios apro-
priados dentro de tecidos e rgos.
Afinidade celular diferencial

Assim como a demonstrao da importncia dos genes no desenvolvimento gerou
desentendimentos entre pesquisadores, tambm se desenvolveu um debate sobre o
papel da superfcie celular na formao do embrio. A superfcie celular parece a mes-
ma em todos tipos de clulas, e muitos pesquisadores mais antigos pensavam at que
a superfcie celular no era uma parte vital da clula. Observaes sobre fecundao e
desenvolvimento embrionrio precoce feitas por E. E. Just (1939) sugeriam que a
superfcie celular diferia em tipos diferentes de clulas, mas a anlise moderna da
morfognese se inicia com os experimentos de Townes e Holtfreter em 1955. Conside-
rando a descoberta de que tecidos de anfbios se dissociavam em clulas isoladas
quando colocados em solues alcalinas, eles prepararam suspenses de clulas
isoladas provenientes de cada uma das trs camadas germinativas dos anfbios, logo
aps a formao do tubo neural. Duas ou mais dessas suspenses de clulas isoladas
poderiam ser combinadas de vrias maneiras, e quando o pH era normalizado, as
clulas aderiam umas s outras, formando agregados em placas de Petri cobertas com
agr. Usando embries de espcies que tinham clulas de diferentes tamanhos e co-
res, Townes e Holtfreter conseguiram observar o comportamento das clulas
recombinadas (Figura 3.2).
Figura 3.1
Sumrio dos principais processos morfogenticos em clulas mesenquimatosas e epiteliais
PROCESSO AO MORFOLOGIA EXEMPLO
CLULAS MESENQUIMATOSAS
Condensao Mesnquima se Mesquina da

cartilagem torna epitlio cartilagem
Diviso Mitose para produzir Mesnquima

celular mais clulas (hiperplasia) dos membros
Morte Clula morre Mesnquima

celular interdigital
Migrao Clula se move em tempos Mesnquima

e lugares determinados do corao
Secreo de Sntese ou remoo da Mesnquima

matriz e degradao camada extracelular da cartilagem
Crescimento Clulas ficam Clulas

maiores (hipertrofia) gordurosas
CLULAS EPITELIAIS
Disperso Epitlio mesnquima Degenerao do

(estrutura inteira) ducto Mlleriano
Delaminao Epitlio mesnquima Hipoblastos de

(parte da estrutura) de galinha
Mudana de Clulas permanecem ligadas Neurulao

forma ou crescimento com alterao da morfologia
Migrao celular Linhas do epitlio se fundem Gastrulao

(intercalao) para formar menos linhas de vertebrados
Diviso celular Mitose dentro da linha ou Gastrulao de

outra direo vertebrados
Secreo de matriz Sntese ou remoo da Formao de

e degradao camada extracelular rgos vertebrados
Migrao Formao de bordas Ectoderma de

livres galinha
Clulas epidrmicas
presuntivas
Segregao de
tipos de clulas
Reagregao
espontnea
Dissociao
de clulas
Clulas da placa neural

Seo atravs da bola de
clulas segregadas
Figura 3.2
Reagregao de clulas da nurula de anfbi-
os. Clulas epidrmicas presuntivas de em- Os resultados de seus experimentos foram surpreendentes. Em primeiro lugar,
bries pigmentados e clulas da placa neural verificaram que clulas reagregadas se tornavam espacialmente segregadas. Ou seja,
de embries no pigmentados so dissociadas em lugar de permanecerem misturadas, cada tipo de clula se posicionava em sua
e misturadas entre si. As clulas reagrupam- prpria regio. Assim, quando clulas epidrmicas (ectodrmicas) e mesodrmicas
se de tal forma que um tipo (aqui, a epiderme foram ajuntadas para formar um agregado misto, as clulas epidrmicas foram encon-
presuntiva) cobre o outro. (Modificado de tradas na periferia do agregado e as clulas mesodrmicas no seu interior. Em nenhum
Townes e Holtfreter, 1955.) caso as clulas permaneceram misturadas ao acaso, e na maioria dos casos, um tipo de
tecido envolvia o outro completamente.
Em segundo lugar, os pesquisadores observaram que as posies finais das clu-
las reagregadas refletiam suas posies embrinicas. O mesoderma migra centralmen-
te epiderme, aderindo sua superfcie interna (Figura 3.3A). O mesoderma tambm
migra centralmente em relao ao intestino ou endoderma (Figura 3.3B). Entretanto,
quando as trs camadas germinativas so misturadas entre si, o endoderma se separa
do ectoderma e mesoderma e ento envolvido por eles (Figura 3.3C). Na sua configu-
rao final, o ectoderma est na periferia, o endoderma interno e o mesoderma se
situa na regio entre eles. Holtfreter interpretou esse fato em termos de afinidade
seletiva. A superfcie interna do ectoderma tem uma afinidade positiva pelas clulas
mesodrmicas e uma afinidade negativa para o endoderma, enquanto o mesoderma
tem afinidades positivas para ambas as clulas, ectodrmicas e endodrmicas. A
mimetizao da estrutura embrionria normal por agregados celulares tambm pode
ser vista na recombinao de clulas da epiderme e da placa neural (Figura 3.3D). As
clulas epidrmicas presuntivas migram para a periferia, como antes; as clulas da
placa neural migram para o centro, formando uma estrutura reminescente do tubo
neural. Quando clulas axiais mesodrmicas (notocorda) so adicionadas suspen-
so de clulas presuntivas, epidrmicas e neurais, a segregao celular resulta em uma
camada epidrmica externa, um tecido neural localizado centralmente, e uma camada
de tecido mesodrmico entre eles (Figura 3.3E). De alguma maneira, as clulas tm a
capacidade de distribuirem-se em suas prprias posies embriolgicas.
Tais afinidades preferenciais foram tambm observadas por Boucaut (1974),
que injetou clulas individuais de especficas camadas germinativas de volta na
cavidade gastrular de anfbio. Ele verificou que essas clulas migram para sua
camada germinativa apropriada. Clulas endodrmicas encontram posies no
endoderma do hospedeiro, enquanto que clulas ectodrmicas se localizam em seu
CAPTULO 3 A base celular da morfognese 83
Epiderme Placa neural

+ +
Epiderme Mesoderma Mesoderma Placa neural Mesoderma axial
+ + + + +
mesoderma endoderma endoderma epiderme epiderme
Epiderme Endoderma Mesoderma Epiderme Epiderme Mesoderma
Mesoderma Mesoderma Endoderma Placa Epiderme Placa

neural neural
(A) (B) (C) (D) (E)
Figura 3.3
ectoderma. Assim, afinidade seletiva parece ser importante para fornecer informao Distribuio e reorganizao de relacionamen-
posicional s clulas embrionrias. tos embrionrios espaciais em agregados de
A terceira concluso de Holtfreter e seus colegas foi que afinidades seletivas clulas embrionrias de anfbios. (Modificado
mudam durante o desenvolvimento. Isso deveria ser esperado, pois clulas embrion- de Townes e Holtfreter, 1955.)
rias no mantm uma nica relao estvel com outras clulas. Para que ocorra o
desenvolvimento, clulas precisam interagir de forma diferente com outras popula-
es celulares em tempos especficos. Essas mudanas na afinidade celular foram
dramaticamente confirmadas por Trinkaus (1963), que mostrou uma clara correlao
entre mudanas de adeso in vitro e o comportamento da clula embrionria. Mais
recentemente, os experimentos de Fink e McClay (1985) demonstraram esse comporta-
mento no ourio-do-mar, durante seu desenvolvimento. Na blstula, todas as clulas
parecem ter a mesma afinidade umas pelas outras. Cada clula tem tambm uma alta
afinidade para a matriz extracelular (camada hialina) que cobre o embrio, e uma baixa
afinidade para as protenas dentro da cavidade embrionria (blastocele). Entretanto,
ao iniciar-se a gastrulao, um grupo especfico de clulas, no plo vegetal da blstu-
la, perde sua afinidade pelas clulas vizinhas e pela matriz extracelular externa, en-
quanto adquire simultaneamente afinidade pelas fibrilas proticas que forram a blasto-
cele (Figura 3.4). Essas mudanas de afinidade causam a perda de contato das clulas
Figura 3.4 (A) (B)

Sumrio das modificaes na adeso celular de clulas precursoras Camada hialina
do esqueleto (encaixadas). (A) Na blstula do ourio-do-mar, cada
Clulas da
clula tem alta afinidade por suas vizinhas e por seu substrato, a
blstula
camada hialina. (B) Enquanto progride o desenvolvimento, mu-
danas na superfcie celular produzem um enfraquecimento das
afinidades pelas clulas vizinhas e camada hialina e um aumento de
afinidade pelas protenas da cavidade interna da blastocele. O
resultado que essas clulas migram para a blastocele (flechas) e
formaro o esqueleto.
Fibrilas
da
blastocele
Alta afinidade por clulas Decrscimo de afinidade por

vizinhas e camada hialina clulas vizinhas e camada
hialina. Aumento de afinidade
por fibrilas da bastocele.
com suas vizinhas e a migrao para dentro da blastocele, onde elas formaro o
esqueleto da larva. Quando elas comeam a formar esse esqueleto, suas proprieda-
des adesivas tero que mudar novamente. Essas clulas, que tinham sido anti-
sociais entre si desde seu ingresso na blastocele, devem agora aderir para formar
os rudimentos do anel esqueltico. Essas mudanas na adeso so especficas
temporalmente e tambm especficas para as clulas precursoras esquelticas
(McClay e Ettensohn, 1987). Tais mudanas na afinidade celular so extremamente
importantes nos processos da morfognese.
A reconstruo de agregados de embries tardios de aves e mamferos foi
obtida pelo uso da protease tripsina para dissociar as clulas entre si (Moscona,
1952). Quando as clulas isoladas resultantes foram misturadas em um frasco e
agitadas de modo que a fora de cisalhamento destrusse adeses no especfi-
cas, as clulas se distriburam de acordo com seu tipo celular. Dessa maneira, elas
reconstruram a organizao do tecido original (Moscona, 1961; Giudice, 1962). A
Figura 3.5 mostra a reconstruo do tecido da pele de um embrio de camundon-
go de 15 dias. As clulas da pele so separadas por enzimas proteolticas e depois
agregadas em uma cultura rotatria. As clulas epidrmicas migram para a perife-
ria, e as drmicas migram para o centro. Em 72 horas, a epiderme foi reconstituda,
formou-se uma camada de queratina e folculos de plo so vistos na regio dermal.
Essa reconstruo de tecidos complexos a partir de clulas nicas chamada de
agregao histotpica.
O modelo termodinmico de interaes celulares

A clulas, ento, no se distribuem ao acaso, mas se movem ativamente para criar
organizao tissular. Quais foras dirigem o movimento celular durante a morfogne-
se? Em 1964, Malcolm Steinberg props um modelo que explicava o direcionamento da
Figura 3.5 Epiderme Derme Folculo piloso

Reconstruo da pele a partir de uma suspenso de clulas de pele de um embrio de camundon- primrio
go de 15 dias. (A) Seo atravs da pele embrionria, mostrando a epiderme, derme e folculos
pilosos primrios. (B) Suspenso de clulas isoladas de pele tanto da derme como da epiderme.
(C) Agregados aps 24 horas. (D) Seo atravs de um agregado mostrando migrao de clulas
epidrmicas para a periferia. (E) Nova diferenciao dos agregados (72 horas), mostrando
epiderme e derme reconstitudas, completa com folculos de plo e camada queratinizada. (de
Monroy e Moscona, 1979, cortesia de A. Moscona.)
distribuio celular baseado em princpios termodinmicos. Usando clulas derivadas

de tecidos embrionrios tripsinisados, Steinberg mostrou que certos tipos de clulas
sempre migram para o centro quando combinadas com determinados tipos de clulas, (A)
mas migram perifericamente quando combinadas com outras. A Figura 3.6 ilustra as
interaes entre culturas de clulas pigmentadas e clulas neurais da retina. Quando
suspenses de clulas isoladas desses dois tipos so misturadas, elas formam agre-
gados de clulas organizadas ao acaso. Entretanto, aps algumas horas, j no se
observa clulas pigmentadas da retina na periferia dos agregados; em dois dias, duas
distintas camadas so vistas, com as clulas pigmentadas localizadas internamente s
clulas neurais da retina. Os mesmos tipos de interaes podem ser observados quan-
do agregados esfricos de tecidos so colocados em contato, uns com os outros. Um (B)
dos tecidos finalmente envolve o outro, e a topografia final independente das posi-
es de partida (Figura 3.7).
Alm disso, tais interaes obedecem a uma hierarquia (Steinberg, 1970). Se a
posio final de um tipo de clula, A, interna em relao a um segundo tipo, B, e a
posio final de B interna a um terceiro tipo, C, ento a posio final de A ser sempre
interna a C. Por exemplo, clulas pigmentadas da retina migram internamente s clulas
neurais da retina, e clulas do corao migram centralmente em relao retina
pigmentada. Portanto, clulas do corao migram internamente s clulas neurais da (C)
retina. Essa observao levou Steinberg a propor que as clulas misturadas, interagem
para formar um agregado com a menor energia livre interfacial (Figura 3.8). Em outras
(D) Derme
Derme Epiderme Camada queratinizada
(A) (B) (C)
Figura 3.6
Agregados formados pela mistura de clulas da retina neural (no pigmentada) de um embrio de (E)
galinha de 7 dias com clulas pigmentadas da retina (escuras). (A) Cinco horas aps a mistura Folculos de plo
das suspenses de clulas isoladas, so vistos agregados de clulas distribudas ao acaso. (B) Em
19 horas, as clulas pigmentadas da retina no so mais vistas na periferia. (C) Aps dois dias,
a maioria das clulas pigmentadas da retina esto localizadas em uma massa central interna
rodeadas pelas clulas da retina neural. (As clulas pigmentadas espalhadas so provavelmente
clulas mortas). (de Armstrong, 1989, cortesia de P. B. Armstrong.)
Figura 3.7
Espalhamento de um tipo de clula sobre outro tipo. A posio final de agregados compostos de
dois tipos de tecidos independente de sua posio inicial. Uma condio final idntica
Tecido Tecido obtida, se os tecidos so transformados em suspenses de clulas isoladas e, ento, reagregadas
A B ou os tecidos so mantidos intactos e colocados em contato. (De acordo com Armstrong, 1989.)
Colocar tecidos Dissociar os

juntos, bem tecidos palavras, as clulas se rearranjam na forma termodinamicamente mais estvel. Se as
encaixados e reagregar clulas dos tipos A e B tm diferentes foras de adeso, e se a fora da conexo A-A
maior do que aquela entre A-B ou B-B, vai haver distribuio com centralizao das
clulas do tipo A. Se a fora da conexo A-A menor ou igual a da conexo A-B, o
agregado permanecer com uma mistura de clulas ao acaso. Finalmente, se a conexo
A-A tiver uma fora muito maior do que a conexo A-B em outras palavras, as clulas
A e B no mostram basicamente nenhuma adesividade entre si ento as clulas A e B
formaro agregados separados.
Para que as clulas sejam distribudas, o essencial que tenham diferenas em
suas foras de adeso. Na forma mais simples desse modelo, todas as clulas
poderiam ter o mesmo tipo de cola distribuda na sua superfcie. A quantidade
desse produto da superfcie celular, ou a arquitetura celular que permite subs-
Movimento do Movimento das tncia ser concentrada diferencialmente, originar diferentes nmeros de conta-
tecido B para clulas A para dentro,
envolver o tecido A distante da periferia
tos estveis entre tipos de clulas. Alternativamente, as diferenas termodinmicas
poderiam ser causadas por vrios tipos de molculas de adeso. Esse modelo
termodinmico chamado hiptese da adeso diferencial. Nessa hiptese, o em-
brio precoce pode ser considerado como existindo em um estado de equilbrio at
que alguma mudana na atividade gnica altere as molculas na superfcie celular.
Os movimentos que ocorrem visam restaurar uma nova configurao de equilbrio
para as clulas.
Clulas A localizadas
centralmente s clulas B
(A) DISTRIBUIO
(B) AO ACASO
(C) SEPARAO
Figura 3.8
Distribuio como um processo tendendo estabilidade termodinmica mxima. (A) Distribui-
o ocorre quando a fora adesiva mdia entre diferentes tipos de clulas (ab) menor que a
fora adesiva mdia homotpica (A-A ou B-B) (aa, bb). As clulas mais adesivas se localizam
centralmente. (B) Se a fora das adeses A-B maior ou igual mdia das adeses homotpicas,
no vai haver distribuio, porque o sistema j atingiu o equilbrio termodinmico, e a mistura
dos tipos de clulas ser ao acaso. (C) Se as ligaes A-B so muito mais fracas que a mdia das
adeses homotpicas, haver uma completa separao, como caracterstico para leo e gua.
& Especulaes
Evidncia para o modelo termodinmico
E vidncias recentes para a hipte-

se da adeso diferencial surgiram
em pesquisa com o objetivo de
responder duas questes: (1) pode o fe-
nmeno da distribuio ser explicado pela
Membros de salamandra tm alguns
atributos surpreendentes. Quando um
membro anterior amputado no antebra-
o, o toco remanescente forma na sua
ponta, uma massa de clulas desdiferen-
sas clulas formam um gradiente ao lon-
go do eixo proximodistal; essas proprie-
dades so maiores no pulso e menores no
antebrao.
Crawford e Stocum (1988) conseguiram
tenso superficial gerada pela adeso ce- ciadas (blastema regenerativo), que se relacionar essa distribuio de clulas in
lular?, e (2) essa distribuio realmente divide e diferencia formando um novo vitro ao processo de regenerao de mem-
ocorre durante o desenvolvimento? membro. O novo tecido do membro se ini- bro ao vivo. Blastemas do pulso, cotovelo
Foty e colegas no laboratrio de cia no local da amputao, nesse caso, ou antebrao foram enxertados na juno
Steinberg (1994) analisaram a tenso su- formando o resto do membro, do antebra- blastema-toco de um membro posterior re-
perficial interfacial em vrios tecidos em- o para baixo. Quando o membro ampu- generando a partir da meia coxa. Os
brionrios. Eles comprimiram amostras de tado no pulso, forma-se um blastema re- blastemas de membro anterior migraram
tecido entre as placas de vidro de um generativo parecido. Entretanto, no re- distalmente at o nivel correspondente do
tensimetro, e mediram a tenso superfi- formado o tecido do antebrao, cotovelo membro posterior do hospedeiro e regene-
cial dos tecidos em termos da habilidade e cbito; em lugar disso, o local sendo raram uma nova estrutura (Figura 3.10). O
desses em retornar forma esferide ori- conhecido regenera somente o pulso e blastema do antebrao imediatamente re-
ginal. Dessa maneira, a tenso superficial os dgitos. generou um membro completo a partir do
de cada tecido poderia ser calculada em Como armazenada essa memria nvel da meia coxa; o blastema do cotovelo
dines por centmetro. Foty e seus colabo- posicional? Nardi e Stocum (1983) dese moveu ao nvel do joelho e formou o
radores encontraram uma completa corre- monstraram que colocando junto dois resto do brao a partir desse ponto; o
lao entre a tenso superficial do tecido blastemas de membros de salamandra com blastema do pulso foi deslocado at o fim
e sua tendncia de distribuir-se no centro o mesmo nvel de origem eles se fundem, do membro posterior em regenerao, onde
ou na periferia de um agregado misto. Te- mas nenhum envolve o outro (Figura 3.9). formou um pulso ao nvel do tarso do p.
cidos com uma maior tenso superficial Entretanto, quando os blastemas so de Esses dados sugerem que as hierarquias
sempre se localizavam internamente quan- nveis diferentes, o mais proximal (perto da distribuio celular, vistas in vitro, re-
do misturados com outros de menor tendo corpo) envolve o mais distal. Parece, fletem diferenas que so usadas pelo cor-
so superficial. Parece que a distribuio ento, que as propriedades adesivas des- po, in vivo, na construo de novos rgos.
pode ser explicada unicamente pelas ten-
ses superficiais das clulas justapostas. Blastema marcado
[cell1.html]
Pulso Cotovelo Antebrao
At recentemente, era muito difcil pla-
nejar experimentos para testar, in vivo, esse
modelo de distribuio celular; entretanto,
Pulso
esto surgindo evidncias para essa hip-

tese em estudos de regenerao de mem-
bros na salamandra. Aqui, o tecido mais
proximal (perto do corpo) envolver o mais
Blastema no marcado
distal (Nardi e Stocum, 1983).

Cotovelo
Figura 3.9
Distribuio quando blastemas de nveis iguais
ou diferentes, de membros anteriores, so co-
locados juntos em cultura. (Um membro de
cada par foi marcado com tritio para distingu-
lo do outro). Depois de trs dias em cultura,
os agregados foram fixados e secionados.
Antebrao
Blastemas do mesmo nvel fundiram em uma

linha reta. Quando os blastemas eram de dife-
rentes nveis, o blastema proximal parecia ten-
tar envolver as clulas mais distais. (de Nardi e
Stocum, 1983, cortesia de D. Stocum.)
Figura 3.10 Blastema Blastema Blastema

Distribuio in vivo, onde blastemas de mem- de pulso de cotovelo de antebrao
bros anteriores em regenerao (em cores) en-
xertados em blastemas da coxa mediana (cin-
za) so deslocados para a regio correspon-
dente do membro posterior em regenerao
(pulso ao tarso; cotovelo ao joelho; antebrao
coxa mediana) onde iniciam a formao do
membro anterior, distalmente daquele ponto.
(de Crawford e Stocum, 1988.) Enxertar blastema no
blastema em regenerao
da coxa mediana
Blastema de
coxa mediana
Permitir crescimento
externo dos enxertos
A base molecular das adeses clula-clula

As classes de molculas de adeso celular
A formao de tecidos e rgos mediada por eventos que ocorrem na superfcie de
clulas adjacentes. A superfcie celular inclui a membrana plasmtica, as molculas
diretamente abaixo dela e a ela associadas, e as molculas encontradas no espaos
extracelulares. Clulas eucariticas so envolvidas por uma complexa borda molecular
chamada membrana plasmtica (ou celular). A membrana plasmtica uma bicamada
fluida lipdica que contm protenas capazes de interagir com o ambiente externo.
Certas protenas tm seus stios ativos apontando para fora, em direo a outras
clulas; existem trs classes de molculas da membrana celular (principalmente prote-
nas) que esto particularmente envolvidas no controle de interaes especficas com
outras clulas (Edelman e Thiery, 1985):
Molculas de adeso celular. Essas protenas participam da adeso clula-
clula. Elas podem unir clulas em lminas epiteliais e condensar clulas me-
senquimatosas em agregados coesos. Elas tm um papel crtico na separao
de diferentes tecidos entre si.
Molculas da juno celular. Essas molculas fornecem vias de comunicao
entre o citoplasma de clulas adjacentes e fornecem barreiras de permeabilidade
e fora mecnica s lminas epiteliais.
Molculas de adeso a substrato. Essas molculas permitem ligao das clu-
las s suas matrizes extracelulares. Elas incluem componentes da matriz extra-
celular e seus receptores situados na superfcie da clula. Molculas de ade-
so a substrato permitem o movimento de clulas do mesnquima e neurnios,
e permitem a separao espacial das lminas epiteliais.
Os padres locais de expresso dessas molculas da superfcie celular, propiciam uma
conexo importante entre o cdigo gentico unidimensional e o organismo tri-
dimensional. Modulando o aparecimento dessas molculas, o potencial gentico pode
se manifestar no processo mecnico da morfognese.
& Especulaes
Anticorpos monoclonais e gentica reversa

Monitoramento de modificaes da mem-
brana celular atravs de anticorpos mo- Imunizao Clulas mutantes de mieloma,
noclonais. sem enzima HPRT
A expresso de componentes da membra-
na muda no espao e no tempo. Diferen-
tes tipos de clulas possuem componen-
tes da superfcie celular que so diver-
sos, e que mudam enquanto a clula se
desenvolve. Esses componentes da mem-
brana, tecido-especficos, so freqente- Clulas de bao Clulas de mieloma
mente reconhecidos por antisoros e, por de camundongo
essa razo, denominados antgenos de
diferenciao (Boyse e Old, 1969).
Antgenos de diferenciao especficos
podem atualmente ser identificados por
anticorpos monoclonais (Figura 3.11). Ge-
Fuso
ralmente, esses anticorpos so produzi-
dos injetando celulas estranhas em ca-
mundongos (ou clulas de camundongos
de uma linhagem em animais de outra li-
nhagem). Os linfcitos B do camundon- Seleo em meio HAT;
go comearo a produzir anticorpos con- selecionar anticorpos
tra cada um dos componentes estranhos
dessas clulas, sendo que cada linfcito
B produz um nico tipo de anticorpo. Es-
ses linfcitos so tornados imortais pela Cultivar clones de hibridomas
fuso com clulas cultivadas de linfcito individuais de poos positivos
B de tumores (mielomas), que foram
mutados de modo a: (1) no sintetizar seus
prprios anticorpos e (2) no ter a enzima
de recuperao de purinas, hipoxantina
fosforribosiltransferase (HPRT). Devido a
essa ltima alterao, as clulas do
mieloma s podem produzir nucleotdeos
de purina de novo, no podendo usar as Secionar e cultivar clones
purinas do meio de cultura. Aps a fuso, cujos sobrenadantes testam
as clulas so cultivadas em um meio con- positivo
tendo aminopterina, uma droga que inibe
a via de sntese de novo da purina. Assim,
clulas do mieloma no fundidas morrem
por fome de purinas. Elas no podem pro-
duzir nucleotdeos de purina usando a via Figura 3.11
de recuperao mediada por HPRT e a Protocolo para preparar anticorpos monoclonais. Clulas do bao de um camundongo imuniza-
do so fundidas com clulas mutadas de mieloma, sem a enzima HPRT. Clulas so cultivadas
aminopterina bloqueia tambm a via de
em um meio contendo hipoxantina, aminopterina e timidina (HAT). Clulas de mieloma no
novo. Linfcitos B normais tambm no
fundidas no podem crescer nesse meio porque a aminopterina bloqueia a nica via para sinte-
dividem-se em cultura, de modo que eles
tizar nucleotdeos purnicos. Clulas B morrem nesse meio, mesmo contendo a enzima (HPRT)
morrem igualmente. O produto da fuso que lhes permitiria utilizar a hipoxantina do meio. As clulas fundidas (hibridomas) crescem e se
do linfcito B e da clula do mieloma o dividem. Os poos nos quais crescem os hibridomas so selecionados quanto presena do
hibridoma prolifera, porque possui a anticorpo efetivo, e as clulas de poos positivos so semeadas em densidade suficientemente
enzima de recuperao de purina do baixa para permitir que clulas individuais originem clones discretos. Esses clones so isolados
linfcito B e as propriedades de cresci- e selecionados para o anticorpo efetivo. Tal anticorpo monoclonal. Os hibridomas produzindo
mento do tumor. Mais ainda, cada um esse anticorpo podem ser cultivados e congelados. (de Yelton e Scharff, 1980.)
Segmentos externos de Mas logo em seguida, a clula comea a

fotorreceptores expressar outra molcula da membrana, o
Somas de fotorreceptores
antgeno 24B10. Essa molcula encon-
(camada nuclear externa)
trada somente nos neurnios que se trans-
Camada sinptica externa formaro em fotorreceptores. Nos estgi-
Camada nuclear interna os seguintes (aproximadamente 80 horas
(soma interneuronal) mais tarde), o antgeno 21A6 expresso
em certas regies de fotorreceptores em
Camada sinptica interna maturao, e outro antgeno, 28H9, ca-
racterstico de fotorreceptores retinais ter-
minalmente diferenciados (Zipursky et
Soma das clulas al.,1984). Assim, membranas celulares de
ganglionrias diferentes tipos de clulas contm mol-
culas diferentes, e essas podem mudar du-
Axnios das clulas
ganglionrias
rante a maturao da clula.
(A) (B) (C) (D) Da protena ao gene

Figura 3.12 Como antgenos de diferenciao so pro-
Especificidade da superficie celular da retina neural de galinha. (A) Fotografia de contraste de tenas cuja expresso regulada no tem-
fase de uma seo da retina neural de um pinto recm-eclodido. (B) Seo de retina marcada com po e no espao, e como essas mudanas
um anticorpo monoclonal fluorescente que reconhece clulas retinais (mas no outras neuronais). so freqentemente correlacionadas com
(C) Seo retinal marcada com anticorpo monoclonal fluorescente que reconhece processos mudanas morfolgicas especficas (como
neuronais mas no corpos celulares na retina. (D) Seo retinal marcada com anticorpo mono- mostra a Figura 3.13), seria interessante
clonal fluorescente que reconhece antgeno em um subconjunto de processos em clulas nervo- saber como seus genes so regulados. Por
sas nas camadas sinpticas externas e internas. (Cortesia de G. Grunwald.)
exemplo, o conhecimento de como a pro-
tena 24B10 se expressa poderia dar
desses hibridomas secreta o anticorpo es- celular de uma nica clula epitelial de indicaces sobre os mecanismos genti-
pecfico do linfcito B. O meio no qual Drosophila enquanto ela se desenvolve cos da diversidade neuronal. Como po-
esto crescendo os hibridomas testado em um fotorreceptor retinal. Anticorpos demos realizar essa gentica reversa
quanto presena de anticorpos que se monoclonais foram obtidos aps injetar indo da protena para o gene?
ligam populao original das clulas es- camundongos com homogenatos de teci- Em primeiro lugar, ligamos anticorpos
tranhas. Tais anticorpos, tendo um nico do da cabea de Drosophila, e um painel monoclonais s particulas de resinas e
linfcito B como sua fonte original, de- de anticorpos foi testado em clulas do passamos homogenatos de retina em
nominado anticorpo monoclonal. Anticor- disco imaginal do olho larval que se dife- colunas contendo esse material (Figura
pos monoclonais podem ser produzidos renciavam em estruturas do olho. Assim 3.14). (Essa uma coluna de imunoafini-
em grandes quantidades e podem reco- que as clulas epiteliais, no diferencia- dade.) O anticorpo se liga somente ao
nhecer antgenos (protenas, lipdeos e das, do disco mostram propriedades antgeno reconhecido originalmente, e a
carboidratos) que so fracamente expres- neuronais, elas expressam o antgeno protena ligada resina eluda (por so-
sos (Khler e Milstein, 1975). 22C10. Esse antgeno tambm encontra- lues salinas) e submetida eletrofore-
Anticorpos monoclonais dirigidos do em outros tipos de clulas neuronais. se em gel para separ-la de um possvel
contra tipos especficos de clulas, de-
monstraram numerosos antgenos de di-
Clula epitelial Fotorreceptor
ferenciao aparecendo em diferentes no diferenciada Fotorreceptor maduro
tempos e lugares durante o desenvolvi-
mento. A Figura 3.12 mostra diferentes Neurnio sensorial
molculas da superfcie celular, em dife- Neurnio fotorreceptor
rentes camadas espaciais da retina neural
de um pinto recm-eclodido. Cada um dos
anticorpos monoclonais reconhece uma
molcula diferente na membrana celular.
Vrios antgenos
Como est evidente nesta fotografia com- no especficos 22C10
posta, as membranas de todas as clulas antgeno
da retina neural no so iguais. Na verda-
24B10 21A6 28H9
de, regies da mesma membrana celular antgeno antgeno antgeno
podem ser diferentes; as membranas dos Figura 3.13
axnios e da soma do nervo, por exemplo, Mudanas temporais na membrana celular correlacionadas com a morfognese de uma clula
contm molculas diferentes. A Figura 3.13 retinal fotorreceptora da Drosophila. Enquanto se procede a diferenciao, diferentes antgenos
mostra mudanas temporais na membrana se expressam na membrana celular. (de Venkatesh et al., 1885.)
Anticorpo Juntar anticorpo marcado

monoclonal ao ao antgeno 24B10, na
antgeno 24B10 seo retinal
1 Cobrir partculas de resina

com anticorpo monoclonal
Localizao de 24B10 por

anticorpo monoclonal
marcado com fluorescena
2 Preparar coluna de
imunoafinidade com
partculas cobertas
Figura 3.14
Protocolo para encontrar o gene que codifi-
3 Adicionar homogenato
de retina contendo ca a protena identificada por um anticorpo
antgeno 24B10 ( ) e monoclonal. O oligonucleotdeo decodificado
outros antgenos ( ) pela estrutura da protena no precisa ser
um par perfeito com a verdadeira seqncia.
Homogenato (de Venkatesh et al., 1985; fotografia corte-
retinal
sia de S. Benzer.)
4 Depois que outros antgenos contaminante. A regio do gel contendo

( ) passam atravs da coluna, a protena separada, a protena eluda

eluir material ( ) remanescen- da matriz do gel parcialmente seqen-
te nas partculas, separar por ciada. necessrio sintetizar oligonucle-
eletroforese em gel e corar gel otdeos radioativos que se ligariam a uma
para protena
Protena purificada,
seqncia de DNA capaz de codificar tal
antgeno 24B10 protena. No caso da 24B10, essas son-
das radioativas foram usadas para sele-
cionar uma biblioteca de clones de DNA
recombinante contendo regies do ge-
5 Eluir protena purificada
noma de Drosophila. O DNA de Droso-
24B10 do gel e seqenciar
o amino terminal phila de cada clone positivo foi seqen-
ciado para verificar se esse complemen-
tava a seqncia da protena original iso-
Met-Glu-Glu-Thr-His-Tyr-Pro lada pelo anticorpo monoclonal. Por essa
via, podemos ir de uma rara protena
6 Gerar uma seqncia AUG - GAA - GAA - AGG - CAG - AAC - CC identificada por um anticorpo monoclo-
mensageira possvel e TAC - C T T - C T T - TCC - GTC - T T G - GG nal a um pedao especfico do DNA
sintetizar uma seqncia genmico. (Zipursky et al.,1984; Venka-
complementar radioativa tesh et al., 1985.)
7 Usar essa sonda para selecionar a

biblioteca de fago do genoma da Droso-
phila; seqenciar o clone positivo
TCC ATG T T C GAT CGC GAG ATG GAG GAG ACG CAT TAC CCG CCC TGC ACC TAC AAC GTG ATG TGC
Ser Met Phe Asp Arg Glu Met Glu Glu T h r His Ty r P r o P r o Cys T h r Ty r Asn Val Met Cys
Seqncia esperada
8 Isolar e caracterizar gene

Molculas de adeso celular

Identificando molculas de adeso celular e seu papel no
desenvolvimento
Os estudos de distribuio de Holtfreter e Steinberg no identificaram as molculas
envolvidas na adeso celular diferenciada. Roth (1968; Roth et al., 1971) demonstrou
que diferentes tipos de clulas mostram uma adeso celular seletiva independente da
distribuio das clulas. Ele modificou o ensaio de agregao rotatrio, incubando
clulas de cartilagem marcadas com 3H e hepatcitos marcados com 14C em uma solu-
o em rotao, contendo pequenos agregados de clulas de cartilagem no marcadas.
Medindo as clulas marcadas com 14C e 3H nesses agregados, ele demonstrou que os
agregados de cartilagem escolheram especificamente clulas de cartilagem. Experi-
mentos similares estenderam essas concluses s clulas do msculo e do fgado
(Figura 3.15). Esses estudos indicaram que tipos diferentes de clulas podiam usar
diferentes molculas de adeso.
A tarefa seguinte identificar as molculas mediadoras da adeso celular e desco-
brir como conseguem realizar esse feito. Vrias molculas de adeso celular (CAMs),
foram identificadas e agrupadas em duas categorias gerais: as caderinas, cujas propri-
edades de adeso celular dependem de ons clcio e as CAMs da superfamlia de
imunoglobulinas, cujos domnios de ligao s clulas se parecem aqueles de molcu-
las de anticorpos. A Tabela 3.1 lista algumas CAMs recentemente descobertas.
Caderinas
ons de clcio so freqentemente necessrios para a adeso celular. Os ons esta-
bilizam as conformaes adesivas de certas protenas da superfcie celular chama-
das caderinas. Caderinas tm um papel crtico no estabelecimento e manuteno de
conexes intercelulares, e parecem ser cruciais para a segregao espacial de clu-
las e para a organizao da forma animal (Takeichi, 1987). Caderinas interagem com
outras caderinas de clulas adjacentes e so ancoradas na clula por complexos de
protenas chamados cateninas (Figura 3.16). O complexo caderina-catenina forma a
clssica juno aderente que liga as clulas epiteliais entre si. Mais ainda, como as
cateninas se ligam ao citoesqueleto de actina, elas integram as clulas epiteliais em
uma unidade mecnica. Em embries de vertebrados, quatro classes principais de
caderinas foram identificadas:
Figura 3.15 Clula isotpica

Especificidade da associao clula-clula. Agregados coletores, cada um consistindo de um tipo marcada com
3
de clula, so colocados em um frasco de cultura giratrio contendo clulas isoladas do mesmo H (cartilagem)
tipo (isotpico) e de tipos diferentes (heterotpico). As clulas isoladas, isotpicas e heterotpicas,
foram previamente marcadas com diferentes radioistopos. Aps seis horas, os agregados Clula
heterotpica
foram colhidos, lavados e determinados os nmeros de clulas isotpicas e heterotpicas que
marcada com
aderiram ao agregado, como mostra a tabela abaixo. (Dados de Roth, 1968.) 14
C (fgado)
Contagem das clulas radioativas que aderiram ao agregado Agregado

(cartilagem)
Clulas isoladas marcadas em suspenso*
Tipo de agregado Cartilagem Fgado Msculo peitoral Rotao por seis horas
Cartilagem 100 6 48
Fgado 10 100 0
Msculo peitoral 38 49 100 Contar clulas
radioativas que
* Porcentagem do nmero mdio de clulas coletadas pelos agregados isotpicos. aderiram ao agregado
Tabela 3.1 Classificao geral das principais molculas de adeso celular (CAMs)
Classe CAM Tipo celular
Caderinas N-caderina (a.k.a. A-CAM) Nervos, rins, lentes, corao

(clcio-dependente) P-caderina Placenta, epitlio
E-caderina (a.k.a. L-CAM, Epitlio, blstula de camundongo
uvomorulina)
CAMs da super N-CAM Msculos, nervos, rins

famlia de imuno- Ng-CAM (a.k.a. L1, NILE) Glia, neurnios
globulinas Neurofascina Neurnios de Drosophila
(clcio-independente) CAM-celular Hepatcitos
LFA-1 Linfcitos
CD4 glicoprotena (HIV receptor) Indutor de clulas T
E-caderina (caderina epitelial, tambm chamada uvomorulina e L-CAM) ex-

pressa em todas as clulas embrionrias precoces de mamferos, mesmo no
estgio de uma clula. Mais tarde, essa molcula restrita a tecidos epiteliais
de embries e adultos.
P-caderina (caderina de placenta) parece ser expressa primariamente em clu-
las placentrias do embrio de mamfero, que fazem contato com a parede
uterina (as clulas trofoblsticas) e o prprio epitlio da parede uterina (Nose
e Takeichi, 1986). possvel que a P-caderina facilita a conexo do trofoblasto
com o tero, pois a P-caderina nas clulas uterinas visualizada em contato
com a P-caderina das clulas trofoblsticas de embries de camundongos
(Kadokawa et al., 1989).
Stios de fosforilao Figura 3.16

Reconhecimento Representao esquemtica da adeso celular
do stio de adeso mediada por caderina. Caderinas esto associ-
adas com trs tipos de cateninas. As cateninas
podem se associar com o sistema de microfila-
mentos de actina. A importncia dessas intera-
Membrana
Stio de celular es para o desenvolvimento normal vista na
ligao Cateninas Figura 3.18; caderinas que no tm o domnio
de clcio Actina extracelular podem interferir com o desenvol-
vimento. Presumivelmente, elas competem
com as caderinas normais, ligando as cateninas
disponveis com seus domnios citoplasmti-
cos. (de Takeichi, 1991).
Caderina
Ligao
caderina-caderina
Caderina
N-caderina (caderina neural) vista inicialmente nas clulas mesodrmicas no

embrio em gastrulao enquanto elas perdem sua expresso de E-caderina.
intensamente expressa nas clulas do sistema nervoso central em desenvolvi-
mento (Figura 3.17; Hatta e Takeichi, 1986).
EP-caderina (C-caderina) crtica na manuteno da adeso celular entre
os blastmeros da blstula de Xenopus e necessria para os movimen-
tos normais de gastrulao (Figura 3.18; Heasman et al., 1994; Lee e
Gumbiner, 1995).
(A)
Caderinas promovem a aderncia celular, ligando-se ao mesmo tipo de caderina em
outra clula. Assim, clulas com E-caderina grudam em outras clulas que tm E-
caderina, e se separaro de outras clulas contendo N-caderinas em suas membranas.
Essa ligao chamada ligao homoflica. Clulas expressando N-caderinas rapida-
mente se isolam de clulas N-caderina-negativas in vitro, e anticorpos univalentes
contra caderinas convertero um agregado de clulas tridimensional histotpico, em
uma camada nica (Takeichi et al., 1979). Mais ainda, quando genes ativados de E-
caderina so transfectados em fibroblastos de camundongo cultivados e neles ex-
pressos (usualmente eles no expressam essa protena), E-caderina vista em suas
(B) superfcies celulares, e os fibroblastos tratados passam a se ligar fortemente uns aos
Ectoderma Crista Neural outros (Nagafuchi et al.,1987). Na verdade essas clulas comeam a se portar como
clulas epiteliais.
Expresso de caderinas freqentemente correlacionada com agregao e disper-
so. Clulas da crista neural (que esto na poro mais dorsal do tubo neural), inicial-
mente expressam N-caderina. Em seguida, enquanto deixam o tubo neural, migrando
como clulas individuais (para formar clulas pigmentadas, neurnios sensoriais e
outros tipos de clulas), elas perdem a expresso de N-caderina (veja Figura 3.17; veja
tambm Captulo 7). Entretanto, quando as clulas migrantes chegam ao seu destino e
Clulas comeam a se agregar entre si para formar gnglios nervosos, elas tornam a expressar
migratrias N-caderina (Hatta et al.,1987).
Tubo neural Expresso diferencial de caderina pode tambm explicar os dados de distribuio
homotpica discutida anteriormente. Como foi discutido, Roth e colaboradores de-
E-caderina monstraram que clulas de fgado tendem a coletar clulas de fgado e que clulas
(C) N-caderina
retinais coletam outras clulas retinais. Takeichi (1987) demonstrou que clulas retinais
Figura 3.17
expressam N-caderina e clulas hepticas expressam E-caderina, e que a distribuio
Localizao de duas diferentes caderinas du- seria a esperada devido a essa diferena na expresso de caderinas. Ele tambm suge-
rante a formao do tubo neural no camun- riu que as observaes de Townes e Holtfreter poderiam ser, da mesma forma, explicadas
dongo. Foi usada marcao imunofluorescen- por expresso diferencial de caderinas. Suporte para essa idia veio de estudos nos
te dupla para localizar E-caderina (A) e N- quais diferentes genes de caderina foram transfectados em fibroblastos de camun-
caderina (B) na mesma seo transversal do dongo, que no expressam habitualmente qualquer tipo de caderina. Fibroblastos
crebro posterior de um embrio de camun- expressando E-caderina aderiram a outros contendo E-caderina, enquanto fibroblastos
dongo de 8.5 dias. Anticorpos para E-caderi- de P-caderina se ligavam a outros que expressavam P-caderina. Tambm, quando
na foram marcados com um tipo de corante
tecido pulmonar embrionrio foi dissociado e sua recombinao permitida na presen-
fluorescente (o qual fluoresce em um interva-
lo de comprimento de onda), enquanto anti-
a de fibroblastos levando E-caderina ou de fibroblastos sem tratamento, os
corpos para N-caderina foram marcados com fibroblastos expressando E-caderina foram integrados nos tbulos epiteliais pulmo-
um segundo tipo de corante (que emite sua nares (que expressam E-caderina), enquanto que os fibroblastos no tratados se asso-
cor em outros comprimentos de onda). Foto- ciaram s clulas mesenquimatosas (que no expressam caderinas) (Nose et al.,1988).
grafias obtidas em diferentes comprimentos Todos esses experimentos foram realizados com clulas cultivadas. Recentemen-
de onda. mostram que o ectoderma externo te, estudos in vivo mostraram que caderinas podem ter um papel crtico nos fenme-
expressa E-caderina predominantemente, ao nos de distribuio ocorrendo dentro do embrio. Quando o mRNA para N-caderina
passo que a invaginante placa neural cessa a de galinha injetado em um dos dois blastmeros da primeira clivagem em embrio da
expresso de E-caderina, mas passa a expres-
r Xenopus, N-caderina freqentemente expressa em clulas que normalmente no a
sar N-caderina. (C) quando se forma o tubo
neural, ele expressa N-caderina, a epiderme
possuem. Os embries que expressam N-caderina extra so muitas vezes caracteriza-
expressa E-caderina e as clulas da crista dos por amontoados de clulas e camadas tissulares engrossadas. Normalmente, o
neural nenhuma das duas. (Fotografias de K. tubo neural (que expressa N-caderina) se separa das clulas que se transformaro em
Shimamura e H. Matsunami, cortesia de M. epiderme (a qual expressa E-caderina). Em embries nos quais a epiderme e o tubo
Takeichi; C de Rutishauser, 1988.) neural expressam a N-caderina extra, o tubo neural no se separa da epiderme (Detrick
(A)
(B)
Figura 3.18
Importncia de caderinas em manter a coeso entre clulas em desenvolvimento. (A) Quando
ocitos so injetados com oligonucleotdeos antisense contra uma mensagem de caderina herda-
da maternalmente, as clulas centrais dispersam quando o hemisfrio animal removido. Em
embries controle (direita), as clulas internas permanecem juntas. (B) No estgio de quatro
clulas, os blastmeros que formam o lado esquerdo do sapo so injetados com um mRNA para
N-caderina que no tem a regio extracelular da caderina. Durante a neurulao as clulas com a
protena mutante no formam uma camada coerente. (de Heasman et al., 1994; B de acordo com
Kintner et al, 1992; fotografias cortesia de J. Heasman e C. Kintner.)
et al., 1990; Fujimori et al., 1990). Assim, as caderinas esto, provavelmente, tendo um
papel principal na organizao das clulas em tecidos. [cell2.html]
CAMs da superfamlia de imunoglobulinas

Como discutimos no Captulo 1, anticorpos foram usados inicialmente para identificar
molculas de adeso celular em Dictyostelium. Gerisch e colegas (Beug et al.,1970),
prepararam anticorpos contra Dictyostelium e os quebraram quimicamente de modo
que somente suas regies monovalentes ligantes de antgeno permanecessem os
fragmentos Fab. (Os anticorpos bivalentes tiveram que ser quebrados, porque de
outra maneira eles poderiam artificialmente agrupar clulas e o efeito no poderia ser
medido). Isso levou descoberta de uma glicoprotena de 80-kDa que mediadora da
adeso clula-clula durante a agregao no fungo pegajoso. A mesma estratgia foi
usada por Edelman e seus colaboradores (Brackenbury et al., 1977) que levou ao
isolamento de uma molcula de adeso de clulas neurais (N-CAM). [cell3.html]
N-CAM um membro de uma classe de CAMs que no necessitam ons de clcio
e que tm uma estrutura semelhante (Figura 3.19). Essa estrutura extracelular com seus
domnios globulares imobilizados por pontes dissulfeto, se assemelha molcula de
imunoglobulina, e mesmo possvel que as imunoglobulinas sejam derivadas desse
grupo de CAMs (Williams e Barclay, 1988; Lander, 1989). Assim, essas glicoprotenas
so chamadas CAMs da superfamlia de imunoglobulinas*.
As CAMs da superfamlia de imunoglobulinas podem ter um papel importante
no desenvolvimento do sistema nervoso. N-CAM necessria para uma ligao
adequada de axnios s clulas musculares alvos (Covault e Sanes, 1986; Tosney et
al.,1986). Alm disso, N-CAM parece ser crtica para o empacotamento (fasciculao)
de axnios para que se movimentem como uma unidade. Anticorpos N-CAM po-
dem quebrar essas ligaes, permitindo que os axnios se dispersem (Fraser et al.,
1988; Landmesser et al.,1988). Uma situao similar parece ocorrer em insetos, onde
* A designao superfamlia freqentemente usada porque as diferentes classes de mo-

lculas de imunoglobulinas tambm constituem, elas mesmas, uma famlia. Esses outros
membros da superfamlia tm estruturas semelhantes s imunoglobulinas, mas no so exata-
mente famlia prxima.
Figura 3.19 (B)

Molculas de adeso da superfamlia de imunoglobulinas. (A) Trs membros da superfamlia de
imunoglobulinas. A forma da molcula de IgM ligada membrana tem duas cadeias pesadas,
cada uma com cinco domnios, e duas cadeias leves, cada uma com dois domnios. N-CAM um
polipeptdeo com cinco domnios. Sua ncora na membrana pode ser a seqncia de aminoci-
dos de uma protena transmembrana ou um lipdeo. L1 uma protena transmembrana com seis ou
domnios globulares. Fasciclina II, a molcula de adeso celular de insetos, e neurogliana se
assemelham a N-CAM e L1, respectivamente. (B) Modelo para a adeso das CAMs da super-
famlia de imunoglobulinas.
(A) N N
N N N
N N
Domnios semelhantes
imunoglobulina
Domnios semelhantes N
fibronectina
Extracelular
ou ou
Citoplasma CC
C C C
IgM N-CAM ou fasciclina II L1 ou neurogliana Interaes de N-CAM clula-clula
as CAMs da superfamlia de imunoglobulinas, chamadas fasciclinas (Figura 3.20)

ajudam a migrao de axnios (Harrelson e Goodman, 1988). L1 necessria para
a produo de certos axnios (Lemmon et al., 1989), e mutaes de L1 no homem
causam um espectro de anomalias caracterizada por hidrocefalia, retardamento
mental e inabilidade em controlar movimentos dos membros (Vits et al., 1994).
Expresso diferencial de CAM crtica nos limites entre dois grupos de clulas.
Nesses lugares, o corpo segrega diferentes clulas em diferentes regies. Clulas da
Figura 3.20 notocorda no entram no tubo neural e nem clulas dermais trespassam para a epiderme.
Expresso de fasciclina no sistema nervoso do
gafanhoto em desenvolvimento. (A) Estrutura
em andaime dos axnios fasciculados em um
embrio de gafanhoto como visto em um
microscpio de Nomarski. A com e P com so
as comissuras anterior e posterior cujos axnios
atravessam o segmento; ISN um neurnio
intersegmental e con um neurnio conectivo.
(B,C) Sistema nervoso embrinico como em
(A), mas marcado com anticorpos monoclonais
feitos para as glicoprotenas fasciclinas da
superfcie celular. O anticorpo em (B)
reconhece um subconjunto de axnios nas
comissuras anterior e posterior, enquanto o
anticorpo em (C) se liga a uma glicoprotena
de membrana dos mais longitudinais fascculos
de axnios. As flechas mostram os mesmos
locais em (B) e (C). Note que o anticorpo marca
somente uma poro de cada axnio. (de
Bastiani et al., 1987, cortesia de C. Goodman.) (A) (B) (C)
Figura 3.21
Distribuio de diferentes CAMs em bordas tissulares. Enquanto as clulas mesodrmicas se
renem para induzir o broto das penas no ectoderma, as clulas mesenquimatosas recm-
agregadas expressam N-CAM (A) e as clulas ectodrmicas expressam E-caderinas (B) nas
suas respectivas membranas celulares. (de Chuong e Edelman, 1985a, cortesia de G. Edelman).
Essa segregagao pode ser conseqncia da diferena de CAMs nas populaes

adjacentes. Por exemplo, penas so induzidas quando clulas mesenquimatosas deri-
vadas do mesoderma se agrupam para formar uma bola de clulas imediatamente
abaixo da epiderme da pele da galinha. As clulas ectodrmicas esto ligadas entre si
por E-caderina, enquanto as clulas mesenquimatosas, CAM-negativas anteriormen- (A)
te, comeam a expressar N-CAM e se juntam para formar um agregado (Figura 3.21).
Atravs do desenvolvimento da pena, diferentes grupos de clulas se separam umas
das outras, como resultado de sua habilidade para expressar N-CAM, E-caderina, ou
ambas as protenas (Chuong e Edelman, 1985a,b).
Molculas da juno celular:

protenas da juno em fenda
Junes em fenda so regies intercelulares especializadas onde clulas adjacentes
se encontram entre 15-40 nm de distncia. Finas conexes servem como canais de
comunicao entre clulas adjacentes (Figura 3.22A,B). Clulas assim ligadas so (B)
chamadas acopladas, e pequenas molculas (MW<1500) e ons podem passar
livremente de uma clula para outra. Na maioria dos embries, pelo menos alguns
(B) (D)
Figura 3.22
Protenas das junes em fenda. (A) Micro-
grafia eletrnica de uma fileira de junes em
Espao intracelular
(15-40 nm) fenda ligando duas clulas justapostas. (B) Mi-
crografia fluorescente de junes em fenda em
tbulo renal de embrio de camundongo de 17
dias. (C) Compartimento formado por prote-
Canais de nas da juno de fenda entre clulas que se
comunicao comunicam umas com as outras. Esse com-
partimento na gstrula de camundongo pode
ser visto injetando o corante Lucifer Yellow
em um clula e observando sua transferncia a
um pequeno grupo de clulas. (D) Estrutura
da subunidade da juno em fenda. (A de
Membranas Peracchia e Dulhunty, 1976, cortesia de C.
celulares
Peracchia; B de Sainio et al., 1992, cortesia de
Conexes K. Sainio; C de Kalimi e Lo, 1988, cortesia de
(A) (D) C. Lo; D conforme Darnell et al., 1986.)
dos blastmeros precoces esto ligados por junes em fenda, dessa forma permi-
tindo que ons e pequenas molculas solveis passem livremente entre eles. A habi-
lidade de clulas em formar junes em fenda com algumas clulas, e no com
outras, cria compartimentos fisiolgicos dentro do embrio em desenvolvimento
(Figura 3.22 C).
A importncia de junes em fenda no desenvolvimento foi demonstrada em
embries de anfbios e mamferos (Warner et al., 1984). Quando anticorpos contra
protenas da juno em fenda foram microinjetados em uma clula especfica de uma
blstula de Xenopus de oito clulas, a prognie daquela clula que usualmente est
ligada por junes de fenda, agora no podia permitir a passagem de ons ou mol-
culas pequenas de uma clula outra. Ainda mais, os girinos que resultaram das
blstulas tratadas mostraram defeitos especificamente relacionados ao destino de-
senvolvimental da clula injetada (Figura 3.23). A prognie de tal clula no morreu,
mas foi incapaz de se desenvolver de maneira normal (Warner et al., 1984). No em-
brio de camundongo, os oito primeiros blastmeros so conectados entre si por
junes em fenda. Apesar de frouxamente associadas entre si, essas oito clulas se
movem juntas para formar um embrio compacto. Se a compactao for inibida por
anticorpos contra protenas da juno em fenda, o desenvolvimento posterior ces-
sa. Os blastmeros tratados continuam a dividir-se, mas a compactao no ocorre
(Lo e Gilula, 1979; Lee et al., 1987). Se RNA antisense contra as mensagens da juno
em fenda injetado em um dos blastmeros de um embrio normal de camundongo,
aquela clula no formar junes em fenda e no ser includa no embrio (Bevilacqua
et al., 1989).
Os canais da juno em fenda so feitos de protenas chamadas conexinas. Em
cada clula, seis conexinas idnticas da membrana se agrupam para formar um canal
transmembrana contendo um poro central. O complexo de juno em fenda de uma
clula se conecta ao complexo de juno em fenda de outra clula, permitindo que se
juntem os citoplasmas de ambas as clulas (Figura 3.22D). Existem aproximadamente
doze tipos de conexinas, e algumas podem ser reguladas por caderinas. Jongen e
colaboradores (1991) observaram que em clulas acopladas por E-caderina, a comu-
nicao entre clulas, mediada por junes em fenda, depende da funo de caderinas.
Evidncias sugerem que caderinas permitem no s o contato entre as clulas como
tambm modificam as protenas tipo conexina. Os diferentes tipos de protena
conexina tm papis separados, mas parcialmente sobrepostos, no desenvolvimen-
to normal. Por exemplo, a protena de juno em fenda conexina-43 encontrada em
quase todos os tecidos do embrio do camundongo em desenvolvimento. Entretan-
to, se os genes da conexina-43 forem derrubados por endereamento de genes, o
embrio ainda se desenvolver. Parece que a funo da protena conexina-43 pode
ser assumida por outras conexinas. Mas, logo aps o nascimento, esses camundon-
gos tm respirao convulsiva, se tornam cianticos e morrem. Autpsia desses
animais mostra que o ventrculo direito a cmara que bombeia sangue aos pulmes
atravs da artria pulmonar est cheio de tecido que fecha a cmara e impede o
fluxo de sangue (Reaume et al.,1995). Mesmo que a perda da protena conexina-43
(A) possa ser compensada em muitos tecidos, parece que ela crtica para o desenvol-
vimento normal do corao. [cell4.html]
A membrana celular tem, ento, vrios mecanismos pelos quais pode fazer liga-
es com membranas de outras clulas. Podem ser usadas CAMs da superfamlia de
Figura 3.23
Efeitos da juno em fenda no desenvolvimento. Seo de um girino de Xenopus no qual um dos
blastmeros, no estgio de oito clulas, foi injetado com (A) um anticorpo controle ou (B) um
anticorpo contra a protena da juno em fenda. O lado formado pelo blastmero injetado no tem
(B) o olho e tem uma morfologia cerebral anormal. (de Warner et al., 1984, cortesia de A. E. Warner.)
imunoglobulinas, CAMs dependentes de clcio e protenas de juno. Mas isso

no esgota seu repertrio. Como j mencionado, a clula tambm pode se ligar a
componentes especficos da matriz extracelular. Agora voltamos nossa ateno para
esses componentes.
A base molecular da afinidade clula-substrato

Afinidade diferencial a substrato
A migrao de clulas, como a migrao de pssaros e borboletas monarca, depende
da percepo de quando comear a migrao, quando cessar a migrao e qual rota
tomar. Existem muitos sinais que o ambiente pode dar s clulas, mas os principais
parecem envolver substncias na matriz extracelular. A hiptese da afinidade diferen-
cial a substrato postula que diferentes clulas reconhecem diferentes molculas em
vrias matrizes extracelulares. Cada tipo de clula migratria prefere certas combina-
es de molculas da matriz a outras combinaes, e essas molculas orientam a clula
para quando e onde migrar. Weiss (1945) e Tyler (1946) sugeriram que a clula, por
vezes, pode interagir com seus substratos atravs do sistema chave-fechadura, ou
seja, entre a membrana celular e a matriz extracelular. O relacionamento entre a protena
da membrana celular e a molcula da matriz seria semelhante aquele entre enzima e
substrato ou anticorpo e antgeno. Durante a ltima dcada foi demonstrado que esse
tipo de interao muito importante para a migrao celular. [cell5.html]
A matriz extracelular
A matriz extracelular consiste de macromolculas secretadas pelas clulas no seu
ambiente imediato. Essas molculas interagem de modo a formar uma estrutura insol-
vel que pode ter vrias funes no desenvolvimento. Em algumas situaes, ela pode
separar dois grupos adjacentes de clulas e prevenir qualquer interao. Em outros
casos, a matriz extracelular pode servir como o substrato no qual as clulas migram, ou
pode at induzir diferenciao em certos tipos celulares. Um tipo de matriz mostrado
na Figura 3.24. Aqui, uma lmina de clulas epiteliais est adjacente a uma camada de
tecido mesenquimatoso frouxo. As clulas epiteliais formaram uma apertada camada
extracelular chamada lmina basal; as clulas mesenquimatosas secretam uma frouxa
lmina reticular. Juntas, essas camadas constituem a membrana basal da lmina de
clulas epiteliais. Existem trs componentes principais na maioria de matrizes
extracelulares: colgeno, proteoglicanos e glicoprotenas grandes que so chamadas
molculas de adeso a substrato (Tabela 3.2).
Epitlio Figura 3.24

Localizao e formao da ma-
triz extracelular no embrio de
galinha. A micrografia eletrnica
de varredura mostra a matriz ex-
tracelular na juno das clulas
Lmina basal epiteliais (acima) e mesenquima-
tosas (abaixo). As clulas epite-
liais sintetizam uma lmina den-
sa com base de glicoprotena,
enquanto as clulas mesenquima-
tosas secretam a lmina reticular
Colgeno
feita primariamente de colgeno.
(Cortesia de R. L. Trelsted.)
Tabela 3.2 Principais constituintes da matriz extracelular

Matriz extracelular mesenquimatosa Lmina basal das clulas epiteliais
COLGENOS COLGENO IV
Molculas longas e delgadas (Tipo I o mais comum; Tipos II, Os componentes estruturais majoritrios da lmina basal. Ao contr-
III, e V-XIII so tambm encontradas) que se organizam para rio de outros colgenos, suas fibrilas so como um fino arame de
formar fibrilas, usualmente com 60-70 nm de dimetro. galinheiro e se organizam em um substrato semelhante a feltro.
Colgenos proporcionam fora e estabilidade aos tecidos.
PROTEOGLICANOS DA MATRIZ
PROTEOGLICANOS DA MATRIZ
cido hialurnico e proteoglicanos sulfatados so freqentes na lmi-
Compostos de protenas e dissacardeos repetitivos (glicosaminogli- na basal. Sua presena pode facilitar a passagem de produtos
canos). Glicosaminoglicanos incluem cido hialurnico, uma enorme secretados pela lmina.
molcula (108 Da) que liga grandes quantidades de gua. Proteoglica-
nos sulfatados compreendem uma protena linear interna qual esto MOLCULAS DE ADESO DE SUBSTRATO
ligadas cadeias de um ou mais glicosaminoglicanos sulfatados
(condroitina, heparan, queratan e dermatan sulfato). Laminina, o componente funcional majoritrio da lmina basal. Um
Proteoglicanos estimulam e modulam movimentos celulares; sua trmero de glicoprotena com stios de adeso para a membrana celu-
disponibilidade sugere que podem ter outras propriedades no lar, colgeno IV e glicosaminoglicanos.
conhecidas. Lmina basal pode conter fibronectina, tenascina, nidogen e outras
glicoprotenas adesivas.
MOLCULAS DE ADESO DE SUBSTRATO
Molculas s quais clulas aderem permitindo-lhes que se movam.

Elas incluem fibronectina, condronectina e tenascina.
Fonte: Adaptado de Bard, 1990.
COLGENO. Colgeno uma famlia de glicoprotenas contendo altas porcenta-

gens de resduos de glicina e prolina. Quase metade das protenas do corpo so
constitudas de colgeno, que o principal suporte estrutural de quase todos os
rgos dos animais. Existem numerosos tipos de colgeno servindo funes espe-
ciais. Colgeno Tipo I, encontrado nas matrizes extracelulares da pele, tendes e
ossos, perfaz quase 90 porcento do colgeno do corpo. Colgeno Tipo II mais
evidente como secreo das clulas cartilaginosas, mas tambm encontrado na
notocorda e no corpo vtreo do olho. Vasos sangneos apresentam colgeno Tipo
III, e o Tipo IV encontrado na lmina basal produzida por clulas epiteliais (Vuorio,
1986). Outros tipos de colgeno so encontrados ao longo do corpo, especialmente
em cartilagem. Colgeno importante para a formao da lmina basal, e tambm
est implicado na ramificao dos tbulos epiteliais nas glndulas salivares, pul-
mes e outros rgos. [cell6.html]
PROTEOGLICANOS. So tipos especficos de glicoprotenas nas quais: (1) o peso

dos resduos de carboidratos muito maior do que o da protena; (2) os carboidratos
so cadeias lineares compostas de dissacardeos repetitivos. Usualmente, um dos
acares do dissacardeo tem um grupo amino e a unidade repetitiva chamada glico-
saminoglicano (GAG). A Tabela 3.3 lista os glicosaminoglicanos mais comuns; a es-
trutura bsica dos proteoglicanos mostrada na Figura 3.25. A interconexo de prote-
na e carboidrato forma uma matriz semelhante a uma rede, e em muitos tipos de clulas
mveis, o proteoglicano envolve as clulas impedindo que elas se juntem (Figura
3.26). A consistncia da matriz extracelular depende da relao entre colgeno e prote-
oglicanos. Cartilagem, que tem uma alta porcentagem de proteoglicanos, macia,
enquanto tendes, que contm predominantemente fibras de colgeno, so rgidos.
Na lmina basal predominam os proteoglicanos que formam uma peneira molecular
alm de propiciar suporte estrutural.
Monmeros de proteoglicanos
Pequenos glicosaminoglicanos
(tal como condroitina sulfato)
Protena
esqueleto
cido D-glucurnico N-acetil-D-glucosamina
cido
hialurnico
cido hialurnico
Glicosaminoglicano Figura 3.25

A estrutura da subunidade e a montagem de
um proteoglicano complexo. O dissacardeo
repetitivo do glicosaminoglicano (tal como
condroitina sulfato; veja Tabela 3.3) se liga a
um esqueleto protico relativamente peque-
Glicoprotenas no (colorido), para produzir as cadeias de pro-
ligantes teoglicanos. Essas cadeias podem ser conec-
tadas por glicosamino-glicanos mais longos
Agregados de (mostrado aqui como cido hialurnico) para
proteoglicanos produzir redes complexas. Glicoprotenas
ligantes estabilizam essas ltimas associaes.
(Modificado de Cheney e Lash, 1981.)
Tabela 3.3 Unidades dissacardicas repetitivas de glicosaminoglicanos mais comuns

encontradas em proteoglicanos da matriz
Glicosaminoglicano Unidade dissacardica repetitivaa Distribuio
cido hialurnico cido glucurnico-N- Tecidos conjuntivos, osso,

acetilglucosamina corpo vtreo
Condroitina sulfato cido glucurnico-N- Cartilagem, crnea, artrias
acetigalactosamina sulfato
Dermatan sulfato [cido glucurnico ou idurnico] Pele, corao, vasos sangneos
N-acetilgalactosamina sulfato
Queratan sulfato Galactose-N-acetilglucosamina Cartilagem, crnea
sulfato
Heparan sulfato [cido glucurnico ou idurnico] Pulmo, artrias, superfcie celular
N-acetilglucosamina sulfato
a
Essas so unidades repetitivas tpicas desses glicosaminoglicanos. Entretanto, algumas regies de cada GAG podem ter
sacardeos ligeiramente modificados.
(A)
(B)
(D)
(C)
Proteoglicanos tambm so importantes como mediadores de conexes entre
Figura 3.26 tecidos adjacentes em um rgo. No rgo, eles renem clulas soltas para formar
Capa de proteoglicanos envolvendo clulas m-
uma lmina epitelial* (San Antonio et al.,1987; Thesleff et al., 1989; Vainio et al.,
veis. (A) Capa de hialuronidato envolve
mioblastos de galinha. Mioblastos em cultura
1989; Bernfield e Sanderson, 1990). Em alguns casos, proteoglicanos secretados por
excluem pequenas partculas (nesse caso, um tipo de clula so essenciais para o crescimento de clulas vizinhas. Axnios
hemcias fixadas) em distncia significante da dos gnglios da raiz dorsal tm proteoglicanos de heparan sulfato entre suas prote-
borda celular. (B) quando os mioblastos so nas da superfcie celular; a remoo desses proteoglicanos impede a proliferao
tratados com hialuronidase (a qual dissolve ciao seu redor, das clulas de Schwann associadas (Ratner et al.,1985). Uma maneira
do hialurnico), essa capa extracelular desapa- pela qual cadeias de glicosaminoglicanos, de proteoglicanos, podem funcionar
rece. (C) A capa tambm desaparece quando reter e apresentar fatores de crescimento para receptores celulares. Fatores de cres-
os mioblastos cessam a diviso e se juntam cimento so protenas semelhantes a hormnios que regulam mitose ou diferencia-
enquanto se diferenciam. (D) Micrografia ele-
o quando se ligam a determinadas clulas. Entretanto, o receptor celular para o
trnica de hialuronidato em soluo aquosa
mostra uma rede fibrilar ramificada. (A-C de
fator de crescimento freqentemente no liga o fator com grande afinidade. Na
Orkin et al., 1985, cortesia de B. Toole; D de verdade, o fator inicialmente ligado pelos carboidratos do proteoglicano, e isso
Hadler et al., 1982, cortesia de N. M. Hadler.) concentra o fator de crescimento localmente, de modo a ser possvel a ligao com
o receptor (Massagu, 1991; Yayon et al.,1991).
GLICOPROTENAS EXTRACELULARES. Matrizes extracelulares contm uma va-

riedade de outras molculas especializadas, tais como: fibronectina, laminina e te-
nascina. Essas glicoprotenas grandes provavelmente so responsveis pela orga-
nizao de colgeno, proteoglicanos e clulas em uma estrutura ordenada. Fibro-
nectina um dmero de glicoprotena, muito grande (460-kDa), sintetizada por
fibroblastos, condrcitos, clulas endoteliais, macrfagos e certas clulas epiteliais
(como hepatcitos e amnicitos). Uma funo da fibronectina servir como adesivo
*Proteoglicanos de heparan sulfato so considerados como agregadores de condrcitos, as

clulas produtoras de cartilagem. Nveis excessivos de glicose inibem a sntese do esqueleto de
protena do proteoglicano, inibindo a formao da cartilagem. Leonard e colaboradores (1989)
propuseram esse como um possvel mecanismo para explicar problemas esquelticos em crianas
nascidas de mes severamente diabticas.
molecular em geral, ligando clulas a substratos, tais como: colgeno e proteoglica-

nos. Fibronectina tambm organiza a matriz extracelular por ter vrios pontos de
ligao distintos, que interagindo com as molculas apropriadas produz um alinha-
mento adequado de clulas e sua matriz extracelular (Figura 3.27).
Como ser visto em captulos posteriores, fibronectina tem tambm um papel im-
portante na migrao celular. As rodovias pelas quais se movem certas clulas
migratrias so pavimentadas com essa protena. A migrao de clulas mesodrmicas
na gastrulao vista na superfcie de fibronectina em muitas espcies, e o movimento
dessas clulas cessa quando a fibronectina localmente removida. Em embries de
galinha, os precursores do corao, as clulas precardacas, migram na fibronectina
para se mover das laterais do embrio para a linha mediana. Se embries de galinhas
so injetados com anticorpos fibronectina, as clulas precardacas no migram para
a linha mediana e desenvolvem dois coraes separados. Anticorpos fluorescentes
fibronectina demonstraram um gradiente da protena no caminho de migrao entre o
endoderma e o mesoderma. Se essa regio for cortada e sofrer uma rotao, as clulas
do corao seguem o gradiente para novas posies se afastando da linha mediana
(Linask e Lash, 1988a,b). Assim, a fibronectina parece ter um papel principal na migra-
o das clulas precardacas para a linha mediana do embrio. Outros tipos de clulas,
como as clulas germinativas, precursoras de embries do sapo, tambm migram so-
bre clulas que secretam fibronectina em suas superfcies (Heasman et al.,1981).
Laminina um componente principal da lmina basal. composta de trs cadeias
peptdicas, e, como fibronectina, pode se ligar ao colgeno, glicosaminoglicanos e clu-
las. O colgeno ligado por laminina do Tipo IV (especfico para lmina basal), e a regio
ligante de clulas da laminina reconhece principalmente clulas epiteliais e neurnios. A
adeso de clulas epiteliais laminina (na qual elas se assentam e usam) muito maior do
que a afinidade de clulas mesenquimatosas pela fibronectina ( qual elas devem se ligar
e liberar se dever haver migrao). Como a fibronectina, a laminina tem um papel na
montagem da matriz extracelular, promovendo adeso celular e crescimento, mudando a
forma da clula e permitindo a migrao celular (Hakomori et al.,1984).
Nem todas grandes glicoprotenas celulares promovem adeso celular. Tenascina
(tambm chamada citotactina) se assemelha a fibronectina em mais ou menos metade
Figura 3.27
Fibronectina no embrio de galinha em desen-
volvimento. (A) Anticorpos fluorescentes para
(A) fibronectina mostram que a deposio de pro-
tena no embrio de 24 horas se situa ao longo
da lmina basal de muitos rgos. (B) Estrutu-
ra e domnios de ligao na fibronectina. Os
retngulos representam domnios resistentes
a proteases. O domnio para a ligao de fibro-
blastos compreende duas unidades, o stio
RGD e o stio de alta afinidade; ambos so
essenciais para ligao da clula. Clulas da
crista neural de aves tm outro stio necessrio
para sua mobilidade em um substrato de fibro-
nectina. Outras regies na fibronectina permi-
tem ligaes com colgeno, heparina* e outras
molculas da matriz extracelular. (A cortesia
Domnios para ligao
de J. Lash; B conforme Dufour et al., 1988.)
de clulas da crista
neural de aves
Stio de alta *Heparina uma poro de um proteogli-
(B)
afinidade cano de heparina secretada por mastcitos e
RGDS CS1
basfilos. Heparan e heparan sulfato so nomes
H 2N COOH dados a glicosaminoglicanos similares encontra-
Domnio dos na matriz extracelular ou na superfcie da
ligante Domnio Domnios ligantes Stio II Stio II clula. Presume-se que os stios de ligao para
de fibrina e ligante de clulas para ligante de ligante de heparina sejam os mesmos que os para heparan
heparina de colgeno fibroblastos heparina fibrina sulfato (Bernfield e Sanderson, 1990).
do comprimento da molcula, e encontrada transitoriamente em vrias matrizes

extracelulares durante o desenvolvimento embrionrio. Entretanto, diferentes clulas
reagem de maneira diferente tenascina. Algumas clulas aderem a ela, outras so
arrebanhadas e se desligam da tenascina (Figura 3.28; Spring et al., 1989). Diferentes
quantidades relativas de fibronectina e tenascina podem gerar substratos de vrios
graus de adesividade. Alm disso, tenascinas parecem aumentar a sntese e secreo
de proteases das clulas que nela se localizam (Werb et al., 1990). Ambas as caracters-
ticas podem ser importantes na gerao de vias para a migrao celular, e na remode-
lao da matriz extracelular durante o desenvolvimento (Tan et al., 1987; Bronner-
Fraser, 1988; Wehrle e Chiquet, 1990).
Receptores celulares para molculas da matriz extracelular

INTEGRINAS. A habilidade de uma clula em ligar essas glicoprotenas adesivas
depende da sua capacidade em expressar um receptor da membrana, que se torna o
lugar de ligao na clula para essas grandes molculas. Os principais receptores de
Figura 3.28
fibronectina foram purificados usando anticorpos monoclonais que bloqueiam a
Inibio de adeso celular por tenascina.
ligao das clulas fibronectina (Chen et al.,1985; Knudsen et al., 1985). Foi obser-
Fibronectina e tenascina foram colocadas em
placas de cultura de tecidos, dispostas em forma vado que o complexo receptor de fibronectina capaz no s de ligar fibronectina
de letras. Fibroblastos foram adicionados s no exterior da clula, como tambm protenas do citoesqueleto dentro da clula.
placas podendo aderir e migrar. O resultado Ento, parece que o complexo receptor de fibronectina atravessa a membrana celular
mostra que fibronectina foi o substrato preferido e une dois tipos de matrizes. Dentro da clula, serve como um stio de ancoragem
no plstico da cultura de tecidos, enquanto que para os microfilamentos de actina que movimentam a clula; fora da clula, se liga
as clulas no aderiram ou migraram bem sobre fibronectina da matriz extracelular (Figura 3.29). Horwitz e colaboradores (1986;
a tenascina. (Cortesia de M. Chiquet.) Tamkun et al., 1986) denominaram essa famlia de receptores proticos como
integrinas porque elas integram as plataformas intra e extracelulares permitindo que
funcionem conjuntamente. Protenas integrinas foram encontradas atravessando a
membrana de numerosos tipos de clulas. No lado extracelular, integrina se liga
seqncia arginina-glicina-aspartato (RGD) de vrias protenas adesivas em matri-
zes extracelulares, inclundo vitronectina (encontrada na lmina basal do olho), fi-
bronectina e laminina (Ruoslahti e Pierschbacher, 1987). No lado citoplasmtico, a
integrina se liga talina e -actinina, duas protenas que se ligam aos microfilamen-
tos de actina. Essa ligao dupla permite o movimento da clula pela contrao dos
microfilamentos de actina contra a matriz extracelular fixa (veja Wang et al., 1993).
Tipos diferentes de clulas podem ter diferentes molculas de integrinas com dife-
rentes afinidades por molculas da matriz extracelular (Hemler et al., 1987; Hemler,1990).
Cada molcula de integrina tem duas subunidades distintas, e , e diferentes
combinaes binrias das subunidades e permitem que a integrina se ligue a
determinadas molculas extracelulares. Por exemplo, 21 se liga ao colgeno e
laminina, enquanto 41 se liga somente fibronectina.
Ambas as unidades e so necessrias para a ligao com fibronectina ou
laminina, mas somente a unidade conecta com o citoesqueleto interno. Durante a
migrao, as ligaes unindo a unidade da integrina ao citoesqueleto, podem ser
continuamente quebradas e refeitas por uma protease que cliva talina e est especifi-
camente localizada em stios da membrana celular onde a integrina se liga ao substrato.
possvel que essa protease quebre a ponte entre o receptor de fibronectina e o
citoesqueleto (Beckerle et al., 1987).
A importncia de integrinas dramaticamente ilustrada durante a embriognese
de Drosophila. Como as integrinas de vertebrados, as integrinas de Drosophila so
compostas de subunidades e que atravessam a membrana celular. Nas duas
integrinas de Drosophila que so conhecidas, as subunidades so idnticas, mas
as subunidades so diferentes. Essas duas integrinas freqentemente funcionam
em conjunto efetuando adeso tissular e celular durante o desenvolvimento. No
desenvolvimento da asa da Drosophila, duas lminas epiteliais so aproximadas. A
integrina PS1 est situada na superfcie basal do epitlio na asa presuntiva dorsal,
enquanto a integrina PS2 est na superfcie superior do epitlio na asa presuntiva
(A) RGD
Fibronectina
Stios de
ligao
Stio de ligao de RGD de clcio
Subunidade
Subunidade Subunidade
de integrina
de integrina de
integrina
Extracelular
Citoplasma
Actinina Vinculina
Talina
ventral. Durante a metamorfose, esses dois epitlios se encontram e aderem para

formar a lmina de duas camadas da asa. Mutaes nas integrinas produzem asas
com regies onde os dois epitlios se separam, como evidenciado por bolhas Actinina Microfilamento de actina
entre as duas lminas (Brower e Jaffe, 1989; Wilcox et al.,1989). Algumas mutaes
de integrinas em Drosophila so letais, porque integrina necessria para anexar
msculos epiderme e parede do intestino. Na mutao letal (1) myospheroid,
Figura 3.29
existe uma deficincia nos genes codificando a subunidade das integrinas de Dupla funo de integrinas ao se ligar com
Drosophila. Na ausncia dessa subunidade, nenhuma integrina se forma, e os matrizes extracelulares e com o citoesqueleto
msculos somticos se contraem em esferas sem ligantes para a parede do corpo interno. (A) Imunofluorescncia indireta co-
e do intestino (Leptin et al.,1989). rando os microfilamentos de actina de uma
Integrinas no so as nicas molculas capazes de se ligar laminina e fibronec- clula extendendo um lamelapdio. As fibras
tina. Enquanto o receptor integrina se liga a uma seqncia RGD na cadeia A de de actina irradiam da grade ordenada do cito-
laminina, outro receptor protico de laminina na membrana celular se liga a uma se- esqueleto para o lamelapdio. (B) Diagrama
qncia diferente (Y1GSR) na cadeia B1 (Graf et al.,1987; Yow et al., 1988). Os recepto- especulativo relacionando a ligao do cito-
esqueleto matriz extracelular atravs da mo-
res tm afinidade diferente por laminina, e essas podem ser importantes para sua
lcula de integrina. (A de Lazarides, 1976,
funo (Horwitz et al., 1985). A integrina a31 de fibroblastos, por exemplo, tem uma cortesia de E. Lazarides; B conforme Luna e
afinidade relativamente baixa por laminina (Kd = 10-6 M), enquanto a afinidade por Hitt, 1992.)
laminina de seu receptor epitelial muito mais alta (Kd=2 x10-9 M). O receptor usado
pode ser importante em permitir que as clulas usem laminina ou como membrana
basal (nesse caso a afinidade do receptor seria alta) ou como um substrato para a
migrao (na qual receptores de afinidade menor seriam usados).
GLICOSILTRANSFERASES. Outro grupo de protenas que pode aderir clulas a

protenas da matriz extracelular so as glicosiltransferases da superfcie celular.
Essas enzimas ligadas membrana so rotineiramente encontradas no retculo en-
doplasmtico e nas vesculas de Golgi, onde elas so responsveis por adicionar
resduos de acar a peptdeos para produzir glicoprotenas. Existem numerosas
glicosiltransferases, cada uma especfica para um dado acar e algumas mostrando
tambm especificidade de substrato. Assim, galactosiltransferase uma enzima
capaz de transferir galactose de um molcula doadora ativada (UDP-galactose) a
uma unidade aceptora. Devem existir muitas galactosiltransferases com afinidades
para diferentes molculas aceptoras.
Galactosiltransferases so enzimas funcionais da membrana celular, e sua adeso
matriz extracelular representa uma catlise frustrada (Figura 3.30). A enzima neces-
sita de dois substratos para completar a catlise, o carboidrato aceptor e o acar
ativado. As glicosiltransferases de membrana reconhecem o carboidrato receptor nas
Glicosil transferase
(A) NDP-acar + aceptor NDP + acar-aceptor
Doador de acar
(B) ativado (NDP-acar)
(C)
Enzima
glicosil- Aceptor
transferase insolvel
Ligao Ligao de Catlise cliva

NDP-acar acar de NDP e
glicosiltransferase o adiciona ao
Figura 3.30 aceptor
Interaes da superfcie celular atravs de gli-
cosiltransferases. (A) A reao padro de gli-
cosiltransferase, na qual um acar transferi-
do de um carregador nucleosdeo difosfato a
um receptor. (B) Interao entre glicosiltrans-
ferases e o grupo carboidrato (aceptor) na gli- protenas da matriz extracelular tal como a laminina. Isso causa adeso. Quando o
coprotena da matriz extracelular. Se o acar segundo substrato aparece, essas adeses podem ser quebradas pela catlise. Em
ativado est ausente, ocorre a adeso (consi- algumas instncias (como fertilizao no camundongo, onde a galactosiltransferase
dera-se que isso ocorra durante a fertilizao).
na membrana celular do espermatozide interage com componentes carboidrato da
Se o acar ativado est presente em pequenas
quantidades, a migrao permitida. (C) Mar-
matriz extracelular secretada pelo vulo), a adeso crtica e a catlise no ocorre. Em
cao da glicosiltransferase da superfcie celu- clulas migratrias, tanto adeso como catlise so observadas (Toole, 1976; Shur,
lar, incubando sees microscpicas de um em- 1977a,b; Turley e Roth, 1979; Eckstein e Shur, 1989).
brio de galinha de 10-somitos, com UDP-[3H]
galactose. Radioatividade insolvel vista por Adeso diferencial resultante de sistemas de adeso mltipla
radioautografia mostra que esse acar radioa- Apesar de estarmos discutindo sistemas de adeso como unidades separadas, os
tivo foi transferido s superfcies celulares, es- processos morfogenticos de interao clula-clula so provavelmente realizados
pecialmente das clulas mesodrmicas migra- por combinaes de molculas de adeso celular. Por exemplo, a fixao inicial do
trias. (A e B modificado de Pierce et al., 1980;
embrio de camundongo parede uterina parece ser mediada por vrios sistemas de
C de Shur, 1977a, cortesia de B. Shur.)
adeso. Primeiro, as clulas de fora do embrio (as clulas trofoblsticas) tm recepto-
res para o colgeno e os proteoglicanos de heparan sulfato do endomtrio uterino, e
interferncia com essa ligao pode impedir a implantao (Farach et al.,1987; Carson
et al., 1988, 1993). Segundo, Dutt e colaboradores (1987) mostraram que as clulas
trofoblsticas podem tambm aderir s clulas uterinas atravs das glicosiltransfera-
ses da superfcie celular. Terceiro, Kadokawa e colaboradores (1989) mostraram que P-
e E-caderinas esto presentes tanto no tecido uterino como no trofoblstico no local
da implantao. Assim, clulas podem ter muitos sistemas adesivos que lhes permitem
ligar e/ou migrar em substratos especficos.
As clulas tambm usam sistemas mltiplos para remodelar tecidos por digesto. Por
exemplo, quando embries de mamferos se embebem no tero, eles digerem seu cami-
nho atravs do epitlio do tero e atravs de sua membrana basal de laminina, fibronectina
e colgeno Tipo IV (Behrendtsen et al., 1992). Crescimento do osso, regresso da cauda do
girino e formao de rgos ramificados (tais como: glndulas salivares, rins e pulmes)
tambm requerem quebra da membrana basal. Essa degradao controlada de molculas
da matriz extracelular completada por um conjunto de enzimas coletivamente chamadas
de Metaloproteinases degradativas de matrizes (Matrisian, 1992; Sato et al., 1994). Algu-
mas dessas enzimas esto ligadas membrana celular, enquanto outras so secretadas
diretamente pelas clulas para dentro da matriz que ser dissolvida. Essas metaloproteinases
incluem: (1) colagenases que digerem colgenos dos Tipo I, II e III; (2) gelatinases que
digerem elastina e colgenos IV e V; e (3) estromelisinas que digerem proteoglicanos,
fibronectina e laminina. A ativao dos genes das metaloproteinases realizada
coordenativamente, e vrias dessas enzimas interagem para amplificar a intensidade das
enzimas digestivas (Figura 3.31). Logo aps a ativao das metaloproteinases, as clulas
ativam os genes para os inibidores dessas protenas. A produo e degradao controlada
da matriz extracelular parte essencial do desenvolvimento normal.
Procolagenase Colagenase
Plasminognio
Ativao Colagenase
Uroquinase Plasmina Ativa
transcricional muito ativa
Prostromelisina Estromelisina
Figura 3.31
Cascata de ativao de metaloproteinases de membrana. Uroquinase um ativador de
plasminognio, que cliva o plasminognio dando plasmina. Plasmina ativa as formas precurso-
ras de estromelisinas e colagenases produzindo uma mistura de enzimas muito ativa capaz de
digerir matrizes extracelulares. (Conforme Matrisian, 1992.)
Molculas de receptores e vias de transduo de sinais

Os destinos das clulas so freqentemente determinados pelas interaes em suas
superfcies, onde uma molcula de receptor encontra seu ligante complementar. Mas
como que certas interaes na superfcie da clula causam a transcrio de genes
especficos dentro do ncleo? As vias entre a membrana celular e o genoma so
chamadas vias de transduo de sinais. Vrias vias foram descobertas, aqui sero
mencionadas as principais. Como veremos, elas parecem ser variaes de um mesmo
tema. O tema deveras elegante: cada receptor se estende atravs da membrana
tendo uma regio extracelular, uma regio transmembrana e uma regio citoplasmti-
ca. Quando um ligante acoplado na regio extracelular, sua forma muda e a poro
citoplasmtica passa a ter atividade enzimtica. Essa atividade usualmente a de
uma quinase, que pode usar ATP para fosforilar protenas, inclusive a si mesmo. O
receptor ativo pode agora catalizar reaes que fosforilam outras protenas, e final-
mente, a fosforilao ativa um fator de transcrio, antes dormente. Esse fator de
transcrio pode agora ativar (ou reprimir) um novo conjunto de genes. O ligante
iniciador da reao pode estar ligado a uma clula ou matriz extracelular ou, ainda,
ser uma molcula difusvel. Quando a molcula difusvel vem do sangue conside-
rada um sinal endcrino. Se o sinal vem de clulas vizinhas difundindo-se de uma
para outra chamado parcrino.
JAK--ST
A via JAK STAAT
No Captulo 2 discutimos um conjunto de fatores de transcrio inativos at que
um sinal de outra clula produz sua fosforilao. Esses fatores de transcrio so
as protenas STAT (transdutores de sinais e ativadores de transcrio) (Ihle,1995,
1996). As STATs so fosforiladas pela forma ativa da uma famlia de quinases, a
JAK. A via JAK-STAT muito importante na diferenciao de clulas sangneas
e na ativao do gene de casena na produo de leite (Briscoe et al., 1994; Groner
e Gouilleux, 1995). Nesses casos, um certo fator de diferenciao se liga a seus
receptores membrana-abrangente, fazendo com que esse se dimerize (que forme
dmeros) (Figura 3.32). Protenas JAK esto ligadas a cada um dos receptores (em
suas respectivas regies citoplasmticas), e agora ao serem aproximadas fosforilam
o receptor em vrios stios. Os receptores ativados tm agora sua prpria ativida-
de quinsica e podem fosforilar certos STATs inativos, induzindo sua dimerizao.
Os dmeros so a forma ativa dos STAT que so translocados para o ncleo onde
se ligam s regies especficas do DNA.
Figura 3.32 Receptores de prolactina Prolactina Receptores

A via JAK-STAT nesse caso, a via de ativa- dimerizados
o do gene de casena por prolactina. O gene ativos
de casena ativado durante a ltima fase do Extracelular
desenvolvimento da glndula mamria (lacto-
gnica) e seu sinal a secreo de prolactina,
um peptdeo de 9 aminocidos da glndula
Citoplasma
pituitria anterior. Prolactina causa a dimeri-
zao dos receptores de prolactina nas clulas
epiteliais do ducto mamrio. Uma protena
JAK especfica (Jak2) est atrelada nesses
receptores. Quando os receptores so dimeri-
zados, as protenas JAK fosforilam umas as
outras e os receptores vizinhos, ativando a
quinase dormente desses receptores. Esses
adicionam um grupo fosfato a um resduo de Envoltrio nuclear
tirosina (Y) de uma protena STAT especfica
(nesse caso Stat5). Isso permite que a prote-
na se dimerize e seja translocada para o ncleo Ncleo
onde se liga a regies especficas de DNA. Em
combinaes com outros fatores de transcri-
o (que presumivelmente esperavam sua che-
gada), a protena STAT ativa a transcrio do Inicio da
gene de casena. GR o glucocorticide recep- transcrio
tor, OCT1 um fator de transcrio geral, e TBP
o conjunto de protenas responsvel pela liga-
o de RNA polimerase. (Para detalhes, veja
Groner e Gouilleux, 1995.) Promotor do
gene de casena
A via RTK
RTK-R-R as
-Ras
A via de transduo de sinais RTK-Ras foi uma das primeiras vias a unir as vrias reas
da biologia do desenvolvimento. Pesquisadores estudando olhos de Drosophila,
vulvas de nematdeos e cnceres humanos chegaram concluso que estudavam o
mesmo gene. A via RTK-Ras comea na superfcie celular, onde o receptor tirosina
quinase liga seu ligante especfico. Ligantes que se ligam a RTKs incluem fatores de
crescimento fibroblsticos, fatores de crescimento epidrmico e fatores de crescimen-
to derivados de plaquetas. O receptor tirosina quinase abrange a membrana e, quando
conectado com seu ligante, sofre uma mudana conformacional que permite sua
dimerizao. Esses dmeros tm uma atividade quinsica latente, ativada por mudana
conformacional fazendo com que os receptores se fosforilem um ao outro em resduos
particulares de tirosina. Assim, a introduo de um ligante no receptor causa uma
autofosforilao no domnio citoplasmtico do receptor.
A tirosina fosforilada no receptor reconhecida por uma protena adaptiva (Figura
3.33)especificamente, as tirosinas fosforiladas so reconhecidas por uma poro da
protena adaptativa chamada domnio SH2. As protenas adptativas servem como uma
ponte que liga a quinase fosforilada do receptor a um poderoso sistema intracelular de
sinalizao. Enquanto ligada ao receptor fosforilado pelo seu domnio SH2, a protena
adaptativa usa seu domnio SH3 para regular o ativador de uma protena Ras G. Normal-
mente, a protena de tipo selvagem Ras est na sua forma inativa e ligante de GDP.
Quando ativada pelo receptor ligante-acoplado, ela troca um fosfato de outro GTP
para transformar o GDP ligado em GTP. Essa catlise ajudada pelo fator de troca
guanina nucleotdeo. A Ras ligada a GTP a forma ativa da protena que transmite o
sinal. Aps a transmisso, o GTP hidrolizado a GDP. Essa catlise muito estimulada
Ligante Receptor Figura 3.33

A via RTK-Ras amplamente usada. O recep-
tor tirosina quinase dimerizado pelo ligante.
Extracelular
Isso causa a autofosforilao do receptor. A
protena SH3 reconhece as fosfotirosinas e
Citoplasma ativa as protenas intermedirias (GRB2 e
SOS), as quais ativam a protena Ras G por
permitir a fosforilao da poro GDP da Ras.
Ao mesmo tempo, as protenas GAP estimu-
lam a hidrlise dessa ligao fosfato. A Ras
ativa capaz de ativar a protena quinase C
(PKC), que ao seu turno fosforila uma srie de
quinases. Por fim, a MAP quinase altera a ex-
Ativao de presso gnica, fosforilando certos fatores de
eventos transcrio (que podem penetrar no ncleo
dependentes de
para mudar os tipos de genes transcritos) e
clcio e PKC
certos fatores de traduo (que alteram o nvel
Fator de de sntese de protenas). Em muitos casos, essa
Fator de transcrio ativo via reforada pela liberao de ons clcio.
transcrio inativo
Ncleo Modulao da
transcrio
pela complexao normal da protena Ras protena ativadora de GTP-ase (GAP).

Essa protena de 120-kDa aumenta a atividade hidrolizante de GTP mais de 100 vezes,
e retorna a Ras sua forma inativa (Trahey e McCormick, 1987; Gibbs et al., 1988).
Realmente, mutaes no gene RAS esto relacionadas com uma grande proporo de
tumores humanos (Shih e Weinberg, 1982), e as mutaes que tornam o gene
oncognico inibem a ligao da protena GAP. Sem a protena GAP, a protena Ras no
catalisa eficientemente a hidrlise de GTP permanecendo em sua configurao ativa
(Cales et al., 1988; McCormick,1989).
A protena Ras ativa associa-se com uma quinase chamada Raf. A protena Ras
coloca a protena inativa Raf na membrana celular onde ela se torna ativa (Leevers et
al.,1994; Stokoe et al., 1994). A protena Raf chamada MAP-quinase-quinase-quinase
(MAPKKK). (MAP quer dizer protena associada mitose, mas atualmente conside-
rada como um conjunto maior de fatores de transcrio). A MAPKKK fosforila a
MAPKK que, por sua vez, pode fosforilar a MAP quinase. Essa ltima quinase fosforila
os fatores de transcrio que especificam o destino da clula ou a proliferao. Em
olhos de Drosophila, por exemplo, considera-se que a cascata ativa o fator de trans-
crio Sina (Sevenless-in-Absentia), cuja presena necessria para a diferenciao
do fotorreceptor 7 (Carthew e Rubin, 1990; Dickson et al., 1992).
Como veremos mais tarde neste livro, essa via crtica em numerosos processos
desenvolvimentais. Em humanos, mutaes nessa via do origem s formas mais
comuns de nanismo, incluindo acondroplasia, que ocorre em 1 entre 50.000 nascimen-
tos. Aqui, o trax e a cabea crescem normalmente, mas os braos e as pernas so
encurtados proximalmente. A deficincia reside na proliferao mnima da cartilagem
da placa de crescimento dos ossos longos. A leso gentica parece estar no gene que
codifica o receptor 3 do fator de crescimento de fibroblastos (FGFR3) (Figura 9.19;

Rousseau et al., 1994; Shiang et al., 1994). Esse gene expresso nas clulas da cartila-
gem em desenvolvimento na placa de crescimento dos ossos longos. Quando ativado
por um FGF, o FGFR3 sinaliza o condrcito para parar de dividir e comear a diferenci-
ao. As mutaes nesse gene causam um fentipo de ganho de funo onde o
mutante FGFR3 ativo constitutivamente (isto , sem a necessidade de ser ativado
por um FGF)* (Deng et al., 1996; Webster e Donoghue, 1996). [cell7.html]
* Nomes podem ser perigosamente ilusivos. Muitos compostos tm mais de uma funo na
clula, e o que fazem depende do contexto da clula. Certos fatores de crescimento podem inibir
o crescimento, e alguns fatores de transcrio podem ser utilizados para inibir a transcrio.
Realmente, alguns fatores de transcrio podem ser usados para regular a traduo. Aqui vemos que
molculas de adeso celular podem ser usadas para transduo de sinais. Protenas celulares no
respeitam nossas fronteiras disciplinares.
& Especulaes
Mutaes negativas dominantes em receptores
O significado funcional de uma

molcula ligante pode ser veri-
ficado eliminando seu receptor.
Uma maneira de fazer isso criando mu-
(A)
FGF
FGFR normal:
FGF se liga causando dimerizao
do receptor de FGF
(B) FGFR dominante negativo
FGFR FGFR
taes dominantes negativas de recep- Receptor de FGF normal mutante
tores. Esse tipo de experimento ser bem
sucedido se a dimerizao for crtica para
a funo do receptor. Os receptores FGF
ativos, em um caso, so dmeros de duas
molculas idnticas embebidas na mem-
brana celular. O mutante dominante ne-
gativo no formar um dmero ativo, mes-
mo com um parceiro do tipo selvagem.
Portanto, quando presente em concen- Receptores
traes suficientemente altas, o receptor sem domnios Excesso do receptor
Domnio
intracelulares mutante pode
mutante compete com receptores FGF da tirosina Sinal
so inativos seqestrar o receptor
normais impedindo que suas protenas quinase
normal do fator de
sejam ativadas. Isso pode ocorrer em Sem sinal
crescimento. Esse
mutaes naturais ou provocadas. heterodmero inativo.
Amaya e colaboradores (1991) injetaram
Sem sinal
mRNA de uma forma mutante de um re-
Figura 3.34
ceptor FGF em embries de duas clulas
Ensaio para receptor dominante negativo para a importncia de um determinado receptor. O
de Xenopus. Essas blstulas no conse-
receptor de FGF (FGFR) uma RTK transmembrana. (A) Quando dmeros de FGF se ligam
guem responder ao FGF (Figura 3.34).
poro extracelular desses receptores, esses se dimerizam e seus dois domnios de protena
Nesse experimento, embries que no ti- quinase se fosforilam mutuamente. Quando fosforilados, acionam um sinal atravs do citoplas-
nham receptores FGF funcionais tinham ma. (B) O receptor dominante negativo no tem o domnio da protena quinase. Quando liga
mesoderma posterior e lateral dramatica- FGF, produz um dmero inativo, mesmo se o outro parceiro do tipo selvagem. Assim, o efeito
mente reduzido (Prancha 3). de FGF no transmitido clula.
A via do inositol fosfato

Algumas vezes, a transduo de um sinal da superfcie celular causa tantas mudanas,
que alteraes na expresso do gene constituem somente um pequeno subconjunto
do que faz o sinal. A ativao da via do inositol fosfato promove mudanas drsticas na
fisiologia da clula pela liberao de ons clcio do retculo endoplasmtico. Essa via
extremamente importante na ativao do espermatozide e do vulo, ambos neces-
sitando de um aumento na concentrao intracelular de ons clcio.
Figura 3.35
A via do inositol fosfato. (A) A reao de
(A) fosfolipase C, transformando PIP2 em DAG e
IP3. (B) Essa reao pode ser iniciada em dois
Extracelular pontos principais na membrana celular. Pri-
meiro, a via iniciada quando o receptor trans-
Fosfolipase C membrana ligado protena G ativado pela
introduo do ligante. Essa ativao resulta na
ligao de GTP protena heteromrica G e
Citoplasma sua dissociao em subunidades ativas. Essas
subunidades ativam enzimas fosfolipase C
(PLC) que podem catalizar a formao de DAG
e IP3. Em segundo lugar, a via pode ser ativada
pela via RTK. IP3 pode se ligar a um receptor
para liberar ons clcio do retculo endoplas-
mtico. Neste nterim, DAG (em presena dos
ons clcio liberados) ativa a protena quinase
C. A protena quinase estimula o transporta-
dor sdio/hidrognio a trocar ons hidrognio
celulares por ons sdio extracelulares, assim
levando a um aumento do pH.
(B)
RECEPTORES LIGADOS PROTENA G RECEPTORES LIGADOS TIROSINA QUINASE (PDGF, EGF, etc).
Ligante
Ligante
Extracelular
Citoplasma
Protena G
Via IP 3 PATHWAY
PKC MAP quinase
Atividade
Receptor celular e
IP 3 mitognese
Retculo
endoplasmtico
A via pode ter dois pontos iniciais (Figura 3.35; Berridge, 1993; Shilling et al.,
1994). Um ponto de iniciao o receptor tirosina quinase, mencionado anterior-
mente. Alm de ativar a protena Ras G, as tirosina quinases ativadas podem
interagir com um tipo de enzima, fosfolipase C (PLC1-y1, que tambm tem um
domnio SH2 que reconhece as tirosinas autofosforiladas). Fosfolipase C pode
catalisar a hidrlise de fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PIP2) em dois segundos
mensageiros: inositol 1,4,5-trifosfato (IP3) e diacilglicerol (DAG). IP3 capaz de
abrir canais de clcio do retculo endoplasmtico, liberando uma grande quantida-
de de ons clcio no citoplasma. DAG ativa a protena quinase C, que por sua vez
ativa a bomba de protena que troca ons sdio por ons hidrognio (Swann e
Whitaker, 1986; Nishizuka, 1986). O resultado a elevao de ons intracelulares
de clcio e um aumento no pH intracelular.
Um segundo ponto de iniciao outra classe de receptores, algumas vezes cha-
mado de receptores serpentina, porque tm sete domnios transmembrana e serpen-
teiam atravs da membrana. Esses receptores esto relacionados com outro tipo de
protena G, a protena G heteromrica. Quando o ligante liga-se ao seu receptor, esse
ativa a protena G. Essa ativao dissocia a protena G em suas subunidades, as quais
ativam outro conjunto de fosfolipase C, ou seja, PLC-1 e PLC-2. Esses dois tipos de
fosfolipase C podem clivar PIP2 em inositol 1,4,5-trifosfato e diacilglicerol. Como vere-
mos em captulos posteriores, as mudanas nos ons hidrognio e clcio, efetuadas
por essa via, alteram no somente a transcrio de genes, mas tambm a traduo de
mRNA e a replicao de DNA.
Cruzamentos entre vias

Representamos as vias principais como se fossem cadeias lineares, onde a informa-
o flui em condutes nicos. Na verdade, essas vias so apenas as principais
estradas pelas quais se escoa a informao, pois entre elas existem ruas e avenidas
que fazem as conexes entre elas. (Essa pode ser a razo da existncia de tantos
passos entre a superfcie da clula e o ncleo. Cada passo um ponto de regulao
em potencial e um potencial ponto de interseo). Essa comunicao cruzada pode
ser vista na Figura 3.35, onde duas vias reforam uma a outra. Deve-se lembrar
tambm que a clula tem numerosos receptores e est constantemente recebendo
muitos sinais simultaneamente. Em alguns casos, a transcrio de genes requer dois
sinais. Isso visto durante o desenvolvimento de linfcitos, onde dois sinais so
necessrios, cada um produzindo um dos dois peptdeos de um fator de transcrio
envolvido na produo de interleucina 2 (IL-2, tambm conhecida como fator de
crescimento da clula T). Um fator, c-Fos, produzido pela ligao do receptor da
clula T ao antgeno (Figura 3.36). Isso ativa a cascata Ras, criando um fator de
transcrio, Elk-1, ativador do gene c-fos que sintetiza c-Fos. O segundo sinal vem
da glicoprotena B7 na superfcie da clula que apresenta o antgeno. Esse sinal
ativa uma segunda cascata de quinases, finalmente produzindo c-Jun. Os dois
peptdeos, c-Fos e c-Jun, podem produzir a protena AP-1, um fator de transcrio
que se liga ao intensificador de IL-2 e ativa sua expresso (Liet al., 1996).
A matriz extracelular e a superfcie da clula como

fontes de sinais crticos para o desenvolvimento
Bissell e colegas (1982; Martins-Green e Bissell, 1995) propuseram que a matriz
extracelular capaz de induzir expresso gnica especfica em tecidos em desenvol-
vimento, especialmente aqueles do fgado e da glndula mamria, onde a induo de
fatores de transcrio especficos dependem da ligao clula-substrato (Liu et al.,
1991; Streuli et al., 1991; Notenboom et al.1996). Muitas vezes, a presena de integri-
na ligada previne a ativao de genes que especificam a morte celular (Brooks et al.,
1994; Montgomery et al., 1994). Portanto, a matriz extracelular uma fonte importante
de sinais que podem ser transduzidos para o ncleo para dar expresso gnica espe-
cfica. Estudos recentes mostraram que a ligao de integrinas matriz extracelular
CLULA APRESENTADORA DO ANTGENO
SINAL 1 SINAL 2
Citoplasma
MHC II
Antgeno Receptor B7
da clula T CD28
Extracelular
Citoplasma
RAF
T-LINFCITO
ELK-1 ativa
transcrio de c-fos
Intensificador de Fator de transcrio AP-1

interleucina 2
Ncleo
Transcrio de IL-2
Figura 3.36
Dois sinais so necessrios para efetuar a diferenciao de linfcitos T. O primeiro sinal vem de
receptores que ligam o antgeno apresentado na superfcie das clulas B ou macrfagos. O
segundo sinal vem da ligao da protena CD28 protena B7 que est na superfcie da clula
apresentante do antgeno. O primeiro sinal dirige a sntese de uma subunidade do fator de
transcrio AP-1. A outra subunidade sintetizada sob direo do segundo sinal. As duas
subunidades, c-fos e c-jun, formam o fator de transcrio AP-1 que pode ativar intensificadores
especficos para a clula T como os que regulam a produo de interleucina 2.
pode estimular a via RTK-Ras, como tambm pode estimular a interao da clula
com o L1, N-CAM e caderinas de uma clula vizinha (Bixby et al., 1994; Williams et
al., 1994a; Clark e Brugge, 1995). Caderinas (mesmo as solveis) podem dimerizar
receptores FGF exatamente como os ligantes normais de FGF, causando a liberao
de ons clcio, ativao transcricional e fenmenos de desenvolvimento caracters-
ticos das respostas do FGF celular (Figura 3.37; Williams et al., 1994b; Doherty et al.,
1995). Comunicao cruzada quase certa acontecer quando as molculas de ade-
so celular so tambm transdutores de sinais.
Interaes recprocas na superfcie celular

Quando duas clulas interagem durante o desenvolvimento, ambas so modificadas
na maioria das vezes. Essa induo recproca mediada por interaes na membrana
Citoplasma
Molcula de
adeso celular Receptor FGF
Extracelular
Citoplasma
Sinal
Figura 3.37
Possveis interaes de molculas de adeso celular com receptores de FGF. Os receptores FGF
podem ser seqestrados pelas molculas de adeso e colocados juntos. Isso pode ser feito
pela interao de molculas de adeso opostas, ou ligaes cruzadas de receptores de FGF das
membranas celulares opostas podem ativar seus domnios quinase.
celular. Uma via intensamente usada o sistema Wingless-Hedgehog. Nessa via,

duas clulas (ou grupo de clulas) so adjacentes; uma delas produz a protena
Hedgehog e a secreta. O peptdeo age na clula vizinha ocasionando a produo da
protena Wingless (Wnt). A protena Wingless, por sua vez, tambm secretada e se
liga clula vizinha, estimulando-a a continuar a sntese de Hedgehog. O resultado
a estabilizao de uma borda onde o tecido em um lado secreta protena Hedge-
hog, enquanto o tecido no outro lado produz Wingless. Essa borda crtica na
produo de segmentos e apndices em Drosophila, como tambm, subdivises
cerebrais e membros em mamferos (Figura 3.38; Ingham, 1994; Niswander et al.,
1994; Wilder e Perrimon, 1995). [cell8.html]
A superfcie celular um lugar extremamente importante para interaes desenvol-
vimentais. Essas incluem adeso diferencial de uma clula a outras, a adeso diferen-
cial de um tipo de clula a uma matriz extracelular e a comunicao de sinais para a
diferenciao e diviso celulares. Em 1782, o ensaista francs Denis Diderot ps a
questo da morfognese no sonho febril de um fsico. Esse elemento podia imaginar
que o corpo era formado por uma mirade de pequenos corpos sensveis que se
juntavam para formar um agregado, mas ele no podia imaginar como esse agregado
poderia se tornar um animal. Estudos recentes mostraram que essa ordenao devi-
da s molculas na superfcie dessas clulas. Em captulos subseqentes, veremos
com mais detalhes essas interaes morfogenticas. Estamos agora no estgio onde
podemos iniciar o estudo da embriognese precoce e ver a integrao entre os proces-
sos orgnicos, genticos e celulares no desenvolvimento animal.
Receptor Frizzled Wingless / protena Wnt Protena Figura 3.38

DPP Interaes recprocas entre clulas na via
wingless-hedgehog em Drosophila. A pro-
tena Wingless secretada por uma clula e
se difunde a uma curta distncia. A clula
Prot. Dishevelled vizinha liga a protena Wingless originando
wingless
patched a ativao da protena, que bloqueia a ao
Quinase Zw3 decapentaplegic inibidora da quinase Zeste-white-3 sobre a
protena Armadillo (uma catenina). A pro-
Prot. Armadillo (-catenina) tena Armadillo ativada induz a clula a
transcrever o gene hedgehog (hh). Essa pro-
tena secretada e ligada pela clula vizi-
Protena nha. Ligando a protena Hedgehog faz com
Smoothened Ci ativo que a clula transcreva o gene wingless e
engrailed
secrete a protena.
Ci inativo
hedgehog
Protena G
Protena
engrailed
Receptor
Patched
Protena
Hedgehog
LITERATURA CITADA
Ayama, E., Musci. T. J. and Kirschner, M. W. contact formation in Dictyostelium by univalent Bronner-Fraser, M. 1988. Distribution of
1991. Expression of a dominant negative mutant antibodies. Exp. Cell Res. 63: 147-158. tenascin during cranial neural crest development
of the FGF receptor disrupts mesoderm forma- in the chick. J. Neurosci. Res. 21: 135-147.
tion in Xenopus embryos. Cell 66: 257-270. Bevilacqua, A., Loch-Caruso, R. and Erick-
son, R. P. 1989. Abnormal development and Brooks, P. C. Montgomery, A. M. P., Rosenfeld,
Armstrong, P. B. 1989. Cell sorting out: The dye coupling produced by antisense RNA to M., Reisfeld, R. A., Hu, T., Klier, G. and Cheresh,
self-assembly of tissues in vitro. CRC Crit. Rev. gap junction protein in mouse preimplanta- D. A. 1994. Integrin v 3 antagonists promote
Biochem. Mol. Biol. 24: 119-149. tion embryos. Proc. Natl. Acad. Sci. USA tumor regression by inducing apoptosis of
86: 5444-5448. angiogenic blood vessels. Cell 79: 1157-1164.
Bastiani, M. J., Harrelson, A. L., Snow, P. M.
and Goodman, C. S. 1987. Expression of fasciclin Bissell, M. J., Hall, H. G. and Parry, G. 1982. Brower, D. L. and Jaffe, S. M. 1989. Require-
I and II glycoproteins on subsets of axon How does the extracellular matrix direct gene ment for integrins during Drosophila wing de-
pathways during neuronal development in the expression? J. Theoret. Biol. 99: 31-68. velopment. Nature 342: 285-287.
grasshopper. Cell 48: 745-755.
Bixby, J. L., Grunwald, G. B. and Bookman, R. J. Cales, C., Hancock, J. F., Marshall, C. J. and
Beckerle, M. C., Burridge, K., DeMartino, 1994. Ca++ influx and neurite growthin response Hall, A. 1988. The cytoplasmic protein GAP is
G. N. and Croall, D. E. 1987. Colocalization to purified N-cadherin and laminin. J. Cell Biol. implicated as a target for regulation by the ras
of calcium-dependent protease II and one 127: 1461-1475. gene product. Nature 332: 548-551.
of its substrates and sites of adhesion. Cell
Boucaut, J. C. 1974. tude autoradiographique Carson, D. D., Tang, J.-P. and Gay, S. 1988.
51: 569-577.
de la distribution de cellules embryonnaires Collagens support embryo attachment and
Behrendsten, 0., Alexander, C. M. and Werb, isoles, transplantes dans le blastocle chez Pleu- outgrowth in vitro: Effects of the Arg-GlyAsp
Z. 1992. Metalloproteinases mediate extra- rodeles waltii Michah (Amphibien, Urodele). sequence. Dev. Biol. 127: 368-375.
cellular matrix degradation by cells from Ann. Embryol. Morphol. 7: 7-50.
Carson, D. D., Tang, J.-P. and Julian, J. 1993.
mouse blastocyst outgrowths. Development
Boyse, E. A. and Old, L. J. 1969. Some aspects Heparan sulfate proteoglycan (perlecan) expres-
114: 447-456.
of normal and abnormal cell surface genetics. sion by mouse embryos during acquisition of at-
Bernfield, M. and Sanderson, D. 1990. Syndecan, Annu. Rev. Genet. 3: 269-289. tachment competence. Dev. Biol. 155: 97-106.
a morphogenetically regulated cell surface pro-
Brackenbury, R., Thiery, J.-P., Rutishauser, U. Carthew, R.W. and Rubin, G.M. 1990. Seven
teoglycan that binds extracellular matrix and
and Edelman, G. M. 1977. Adhesion among -in-absentia, a gene required for the speci-
growth factors. Philos. Trans. R. Soc. Lond. [A]
neural cells of the chick embryo. I. Immunolo- fication of R7 cell fate in the Drosophila
327: 171-186.
gical assay for molecules involved in cell-cell eye. Cell 63: 561-577
Berridge, M. J. 1993. Inositol triphosphate and binding. J. Biol. Chem. 252: 6835-6840.
Chen, W. T., Hasegawa, E., Hasegawa, T.,
calcium signalling. Nature 361: 315-325.
Briscoe, J., Guschin, D., and Mller, M. 1994. Weinstock, C. and Yamada, K. M. 1985. Deve-
Beug, H., Gerisch, G., Kempff, S., Riedel, V. and Just another signalling pathway. Curr. Biol. 4: lopment of cell-surface linkage complexes in
Cremer, G. 1970. Specific inhibition of cell 1033-1035. cultured fibroblasts. J. Cell Biol. 100: 1103-1114.
C h e n e y, C . M . a n d L a s h , J . W. 1 9 8 1 . Edelman, G. M. and Thiery, J.-P. 1985. The Cell early morphogenetic events in chick develop-
Diversification within embryonic chick in Contact: Adhesions and Junctions as Mor- ment. Nature 320: 447-449.
somites: Differential response to notochord. phogenic Determinants. Wiley, New York.
Hatta, K. Takagi, S., Fujisawa, H. and Takeichi,
Dev. Biol. 81: 288-298.
Farach, M. C., Tang, J. P., Decker, G. L. and M. 1987. Spatial and temporal expression
Chuong, C.-M. and Edelman, G. M. 1985a. Ex- Carson, D. D. 1987. Heparin/heparan sulfate is pattern of N-cadherin cell adhesion molecules
pression of cell adhesion molecules in embryo- involved in attachment and spreading of mouse correlated with morphogenetic processes of
nic induction. I. Morphogenesis of nestling embryos in vitro. Dev. Biol. 123: 401-410, chicken embryos. Dev. Biol. 120: 215-227.
feathers. J. Cell Biol. 101: 1009-1026.
Fink, R. and McClay, D. R. 1985. Three cell Heasman, J., Hines, R. D., Swan, A. P., Thomas,
Chuong, C.-M. and Edelman, G. M. 1985b. Ex- recognition changes accompany the ingression V. and Wylie, C. C. 1981. Primordial germ cells
pression of cell adhesion molecules in embryo- of sea urchin primary mesenchyme cells. Dev. of Xenopus embryos: The role of fibronectin in
nic induction. II. Morphogenesis of adult Biol. 107: 66-74. their adhesion during migration. Cell 27: 437-447.
feathers. J. Cell Biol. 101: 1027-1043.
Fraser, S., E., Carhart, M. S., Murray, B. A., Heasman, J., Ginsberg, D., Goldstone, K., Pratt,
Clark, E. A. and Brugge, J. S. 1995. Integrin and Chuong, C.-M. and Edelman, G. E. 1988. T., Yoshidanaro, C., and Wylie, C. 1994. A
signal transduction pathways: The road taken. Alterations in the Xenopus retinotectal functional test for maternally inherited cadherin
Science 268: 233-239. projection by antibodies to Xenopus N-CAM. in Xenopus shows its importance in cell adhesion
Dev. Biol. 129: 217-230. at the blastula stage. Development 120: 49-57.
Covault, J. and Sanes, J. R. 1986. Distribution of
N-CAM in synaptic and extrasynaptic portions Foty, R. A., Forgacs, G., Pfleger, C. M. and Hemler, M. E. 1990. VLA proteins in the integrin
of developing and adult skeletal muscle. J. Cell Steinberg, M. S. 1994. Liquid properties of em- family: Structures, functions, and their role on
Biol. 102: 716-730. bryonic tissues: Measurements of interfacial leukocytes. Annu. Rev. Immunol. 8: 365-400.
tensions. Physic. Rev. Lett. 72: 2298-2301. Hemler, M. E., Huang, C. and Schwartz, L. 1987.
Crawford, K. and Stocum, D. L. 1988. Retinoic
acid coordinately proximalizes regenerate pattern Foty, R. A., Pfleger, C. M., Forgacs, G. and The VLA protein family. Characterization of
and blastema differential affinity in axolotl limbs. Steinberg, M. S. 1996. Surface tensions of em- five distinct cell surface heterodimers each with
Development 102: 687-698. bryonic tissues predict their mutual envelopment a common 130,000 molecular weight subunit.
behavior. Development 122: 1611-1620. J. Biol. Chem. 262: 3300-3309.
Darnell, J., Lodish, H. and Baltimore, D. 1986.
Molecular Cell Biology. Scientific American Fujimori, T., Miyatani, S. and Takeichi, M. Horwitz, A., Duggan, K., Greggs, R., Decker,
Books, New York. 1990. Ectopic expression of N-cadherin perturbs C. and Buck, C. 1985. The cell substrate
histogenesis in Xenopus embryos. Development attachment (CSAT) antigen has properties
Deng, C., Wynshaw-Boris, A., Zhou, F., Kuo, A. of a receptor for laminin and fibronectin J.
110: 97-104.
and Leder, P. 1996. Fibroblast growth factor Cell Biol. 101: 2134-2144.
receptor-3 is a negative regulator of bone growth. Gibbs, J. B., Scaber, M. D., Allard, W.J., Sigal, I.
Cell 84: 911-921. S. and Scolnick, E. M. 1988. Purification of ras Horwitz, A., Duggan, K., Buck, C., Beckerle,
GTPase activating protein from bovine brain. M. C. and Burridge, K. 1986. Interaction of
Detrick, R. J., Dickey, D. and Kintner, C. R. plasma membrane fibronectin receptor with
Proc. Natt. Acad. Sci. USA 85: 5026-5030.
1990. The effects of N-cadherin misexpres- talin-a actinin transmembrane linkage. Nature
sion on morphogenesis in Xenopus embryos. Giudice, G. 1962. Restitution of whole larvae 320: 531-533.
Neuron 4: 493-506. from disaggregated cells of sea urchin embryos.
Dev. Biol. 5: 402-411. Ingham, P. W. 1994. Hedgehog points the way.
Dickson, B., Sprenger, F, Morrison, D. and Curr. Biol. 4:1-4.
Hafen, E. 1992. Ras1 functions downstream of Graf, J., Ogle, R. C., Robey, F A., Sasaki, M.,
Rasl in the Sevenless signal transduction pathway Martin, G. R., Yamada, Y. and Kleinman, H. K. Jongen, W, M. F. and seven others. 1991.
Nature 360: 600-603. 1987. A pentapeptide from the laminin B1 chain Regulation of connexin 43-mediated gap junction
mediates cell adhesion and binds to the 67000 intercellular communication by Ca2+ in mouse
Diderot, D. 1782. DAlemberts Dream. Reprin- epidermal cells is controlled by E-cadherin. J.
laminin receptor. Biochemistry 26: 6896-6900.
ted in J. Barzun and R. H. Bowen (eds.), Cell Biol. 114: 545-555.
Rameaus Nephew and Other Works (1956). Groner, B. and Gouilleux, F. 1995. Prolactin-
Doubleday, Garden City, NY [p. 114] mediated gene activation in mammary epithelial lhle, J. N. 1995. Cytokine receptor signalling.
cells. Curr. Opin. Genet. Dev. 5: 587-594. Nature 377: 591-594.
Doherty, P., Williams, E. and Walsh, F. S. 1995.
lhle, J. N. 1996. STATs: Signal transducers and
A soluble chimeric form of the Ll glycoprotein Hadler, N. M., Dourmash, R. R., Nermut, M. V.
activators of transcription. Cell 84: 331-334.
stimulates neurite outgrowth. Neuron 14: 57-66. and Williams, L. D. 1982. Ultrastructure of a
hyaluronic acid matrix. Proc. Natl. Acad. Sci. Just, E. E. 1939. The Biology of the Cell Surface.
Dufour, S., Duband, J.-L., Humphries, M. J.,
USA 79: 307-309. Blackiston, Philadelphia.
Obara, M., Yamada, K. M. and Thiery, J. P. 1988.
Attachment, spreading and locomotion of avian Hakomori, S., Fukuda, M., Sekiguchi, K. and Kadokawa, Y., Fuketa, I., Nose, A., Takeichi,
neural crest cells are mediated by multiple Carter, W. G. 1984. Fibronectin, laminin, and M. and Nakatsuji, N. 1989. Expression of E-
adhesion sites on fibronectin molecules. EMBO other extracellular glycoproteins. In K. A. Picz and P-cadherin in mouse embryos and uteri du-
J. 7: 2661-2671. and A. H. Reddi (eds.), Extracellular Matrix Bio- ring the periimplantation period. Dev. Growth
chemistry. Elsevier, New York, pp. 229-275. Diff. 31: 23-30.
Dutt, A., Tang, T.-P. and Carson, D. D. 1987. Lacto-
saminoglycans are involved in uterine epithelial cell Harrelson, A. L. and Goodman, C. S. 1988. Kalimi, G. H. and Lo, C. 1988. Communication
adhesion in vitro. Dev, Biol. 119: 27-37. Growth cone guidance in insects: FasciclinII is a compartments in the gastrulating mouse embryo.
member of the immunoglobulin superfamily. J. Cell Biol. 107: 241-255.
Eckstein, D. J. and Shur, B. D. 1989. Laminin
Science 242: 700-708.
induces the stable expression of surface glycosyl- Kintner, C. 1992. Regulation of embryonic cell
transferases on lamellipodia of migrating cells. Hatta, K. and Takeichi, M. 1986. Expression of adhesion by the cadherin cytoplasm domain. Cell
J. Cell Biol. 108: 2507-2517. N-cadherin adhesion molecules associated with 69: 225-236.
Knudsen, K., Horwitz, A. F. and Buck, C. 1985. Liu, J-K., Di Persio, M. C., and Zaret, K. S. Nose, A., Nagafuchi, A. and Takeichi, M.
A monoclonal antibody identifies a glycopro- 1991. Extracellular signals that regulate liver 1988. Expressed recombinant cadherins
tein complex involved in cell-substratum transcription factors during hepatic differentia- mediate cell sorting in model systems. Cell
adhesion. Exp. Cell Res. 157: 218-226. tion in vitro. Mol. Cell Biol. 11: 773-784. 54: 993-1001.
Khler, G. and Milstein, C. 1975. Continuous Lo, C. and Gilula, N. B. 1979. Gap junctional Notenboom, R. G. E., de Poer, P. A. J.,
cultures of fused cells secreting antibody of communication in the preimplantation mouse Moorman, A. F. M. and Lamers, W. H. 1996.
predefined specificity. Nature 256: 495-497. embryo. Cell 18: 399-409. The establishment of the hepatic architecture
is a prerequisite for the development of a
Lander, A. D. 1989. Understanding the Luna, E. J. and Hitt, A. L. 1992. Cytoskele-
lobular pattern of gene expression. Develop-
molecules of neural cell contacts: Emerging ton-plasma membrane interactions. Science
ment 122: 321-332.
patterns of structure and function. Trends 258: 955-964.
Neurosci. 12: 189-195. Orkin, R. W., Knudson, W. and Toole, P. T. 1985.
Martins-Green, M. and Bissell, M. J. 1995. Cell-
Loss of hyaluronidate-clependent coat during
Landmesser, L., Dahm, L., Schultz, K. and Ru- ECM interactions in development. Semin. Dev.
myoblast fusion. Dev. Biol. 107: 527-530.
tishauser, U. 1988. Distinct roles for adhesion Biol. 6: 149-159.
molecules during innervation of embryonic Peracchia, C. and Dulhunty, A. F. 1976. Low
chick muscle. Dev. Biol, 130: 645-670. Massagu, J. 1991. A helping hand from
resistance junctions in crayfish: Structural
proteoglycans. Curr. Biol. 1: 117-119.
changes with functional uncoupling. J. Cell Biol.
Lazarides, E. 1976. Actin, a actinin, and
Matrisian, L. M. 1992. The matrix-degrading 70: 419-439.
tropomyosin interaction in the structural
organization of actin filaments in nonmuscle metalloproteinases. BioEssays 14: 455-463.
Pierce, M., Turley, E. A. and Roth, S. 1980. Cell
cells. J. Cell Biol. 68: 202-219. McClay, D. R. and Ettensohn, C. A. 1987. Cell surface glycosyltransferase activities. Int. Rev.
recognition during sea urchin gastrulation. In W. Cytol. 65: 1-47.
Lee, C.-H. and Gumbiner, B. M. 1995. Disruption
of gastrulation movements in Xenopus by a F. Loomis (ed.), Genetic Regulation of Deve-
Ratner, N., Bunge, R. P. and Glaser, L. 1985. A
dominant-negative mutant for C-cadherin. Dev. lopment. Alan R. Liss, New York, pp. 111-128.
neuronal cell surface heparan sulfate proteogly-
Biol. 171: 363-373. McCormick, F. 1989. ras GTPase activating can is required for dorsal root ganglion neuron
Lee, S., Gilula, N. B. and Warner, A. E. 1987. protein: Signal transmitter and signal terminator. stimulation of Schwann cell proliferation. J. Cell
Gap junctional communication and compaction Cell 56: 5-8. Biol. 101: 744-754.
during preimplantation stages of mouse deve- Monroy, A. and Moscona, A. A. 1979. Intro- Reaurne, A. G. and eight others. 1995. Cardiac
lopment. Cell 51: 851-860. ductory Concepts in Developmental Biology. malformation in neonatal mice lacking connexin
Leevers, S. J., Paterson, H. F., and Marshall, C. University of Chicago Press, Chicago. 43. Science 267: 1831-1834.
J. 1994. Requirement for Ras in Raf activation Montgomery, A. M. P., Reisfeld, R. A., and Roth, S. 1968. Studies on intracellular adhesive
is overcome by targeting Raf to the plasma Cheresh, D. A. 1994. Integrin v 3 rescues selectivity. Dev. Biol. 18: 602-631.
membrane. Nature 369: 411-414. melanoma cells from apoptosis in a threedimen-
Roth, S., McGuire, E. J. and Roseman, S. 1971.
Lemmon, V., Farr, K. L., and Lagenauer, C. sional dermal collagen. Proc. NatI. Acad. Sci.
An assay for intercellular adhesive specificity. J.
1989). Ll-mediated axon growth occurs via USA 91: 8856-8860.
Cell Biol. 51: 525-535.
homophilic binding mechanism. Neuron 2: Moscona, A. A. 1952. Cell suspension from
1597-1603. Rousseau, F. and seven others. 1994. Muta-
organ rudiments of chick embryos. Exp. Cell
tions in the gene encoding fibroblast growth
Leonard, C. M., Bergman, M., Frenz, D. A., Res. 3: 535-539.
factor receptor-3 in achondroplasia. Nature
Macreery, L. A. and Newman, S. A. 1989. Moscona, A. A. 1961. Rotation-mediated 371: 252-254.
Abnormal ambient glucose levels inhibit pro- histogenetic aggregation of dissociated cells: A
teoglycan core protein gene expression and Ruoslahti, E. and Pierschbacher, M. D. 1987.
quantifiable approach to cell interaction in vitro.
reduce proteoglycan accumulation during chon- New perspectives in cell adhesion: RGD and
Exp. Cell Res. 22: 455-475.
drogenesis: Possible mechanism for teratogenic integrins. Science 238: 491-497.
effects of maternal diabetes. Proc. Natl. Acad. Nagafuchi, A., Shirayoshi, Y., Okazaki, K.,
Rutishauser, U., Acheson, A., Hall, A., Mann, D.
Sci. USA 86: 10113-10117. Yasuda, K. and Takeichi, M. 1987. Transforma-
M. and Sunshine, J. 1988. The neural cell
tion of cell adhesion properties of exogenously
Leptin, M., Bogaert, T., Lehmann, R. and Wilcox, adhesion molecule (N-CAM) as a regulator of
introduced E-cadherin cDNA. Nature 329: 341-343.
M. 1989. The function of PS integrins during cell-cell interactions. Science 240: 53-57.
Drosophila embryogenesis. Cell 56: 401-408. Nardi, J. B. and Stocum, D. L. 1983. Surface
Sainio, K., Gilbert, S. F., Lehtonen, E., Nishi,
properties of regenerating limb cells: Evidence
Li, W., Whaley, C. D., Mondino, A. and Mueller, M., Kumar, N. M., Gilula, N. B. and Saxn, L.
for gradation along the proximodistal axis. Dif-
D. L. 1996. Blocked signal transduction to the 1992. Differential expression of gap junction
ferentiation 25: 27-31.
ERK and JNK protein kinases in anergic CD4+ mRNAs and proteins in the developing murine
T cells. Science 271: 1272-1274. Nishizuka, Y. 1986. Studies and perspectives of kidney and in experimentally induced nephric
protein kinase C. Science 233: 305-312. mesenchymes. Development 115: 827-837.
Linask, K. L. and Lash, J. W. 1988a. A role for
fibronectin in the migration of avian precardiac Niswander, L., Jeffrey, S., Martin, G. R. and San Antonio, J. D., Winston, B. M. and Tuan, R.
cells. I. Dose-dependent effects of fibronectin Tickle, C. 1994. A positive feedback loop S. 1987. Regulation of chondrogenesis by
antibody. Dev. Biol. 129: 315-323. coordinates growth and patterning in the verte- heparan sulfate and structurally related glycosa-
brate limb. Nature 371, 609-612. minoglycans. Dev. Biol. 123: 17-24.
Linask, K. L. and Lash, J. W. 1988b. A role for
fibronectin in the migration of avian precardiac Nose, A. and Takeichi, M. 1986. A novel cadherin Sato H., Takino, T, Okada, Y., Cao, J., Shinagawa,
cells. II. Rotation of the heartforming region adhesion molecule: Its expression patterns A., Yamamoto, E. and Seiki, M. 1994. A matric
during different stages and its effects. Dev. Biol. associated with implantation and organogenesis metalloproteinase expressed on the surface of
129: 324-329. of mouse embryos. J. Cell Biol. 103: 2649-2658. invasive tuomour cells. Nature 370: 61-65.
Shiang, R. and seven others. 1994. Mutations in nipulation of cell surface to affect cellular re- Warner, A. E., Guthrie, S. C. and Gilula, N. B.
the transmembrane domain of FGFR3 cause the cognition mechanisms. Dev. Biol. 70: 195-205. 1984. Antibodies to gap junctional protein selectively
most common genetic form of dwarfism, achon- disrupt junctional communication in the early
Tamkun, J. W., DeSimone, D. W., Fonda, D.,
droplasia. Cell 78: 335-342. amphibian embryo. Nature 311: 127-131.
Patel, R. S., Buck, C, Horwitz, A. F. and Hynes,
Shih, C. and Weinberg, R. A. 1982. Isolation of R. 0. 1986. Structure of integrin, a glycoprotein Webster, M. K. and Donoghue, D. J. 1996.
a transforming sequence from a human bladder involved in transmembrane linkage between fi- Constitutive activation of fibroblast growth
carcinoma cell line. Cell 29: 161-169. bronectin and actin. Cell 46: 271-282. factor receptor 3 by the transmembrane
domain point mutation found in achondro-
Shilling, F. M., Carroll, D. J., Muslin, A. J., Tan, S.-S., Crossin, K. L., Hoffman, S. and Edelman,
plasia. EMBO J. 15: 520-527.
Escobodo, J. A., Williams, L. T. and Jaffe, G. M. 1987. Asymmetric expression of somites of
L. A. 1994. Evidence for both tyrosine kinase cytotactin and its proteoglycan ligand is correlated Wehrle, B. and Chiquet, M. 1990. Tenascin is
and G-protein-coupled pathways leading to with neural crest cell migration. Proc. Natl. Acad. accumulated along developing peripheral nerves
starfish egg activation. Dev. Biol. 162: 590-599. Sci. USA 84: 7977-7981. and allows neurite outgrowth in vitro. Develop-
ment 110: 401-415.
Shur, B. D. 1977a. Cell surface glycosyl- Thesleff, I., Vainio, S. and Jalkanen, M. 1989.
transferases in gastrulating chick embryos. Cell-matrix interactions in tooth development. Weiss, P. 1945. Experiments on cell and
I. Temporally and spatially specific patterns Int. J. Dev. Biol. 33: 91-95. axon orientation in vitro: The role of
of four endogenous glycosyltransferase colloidal exudates in tissue organization. J.
Toole, B. P. 1976. Morphogenetic role of glycosa-
activities. Dev. Biol. 58: 23-29. Exp. Zool. 100: 353-386.
minoglycans (acid mucopolysaccharides) in brain and
Shur, B. D. 1977b. Cell surface glycosyltransfe- other tissues. In S. H. Barondes (ed.), Neuronal Re- Werb, Z., Tremble, P. and Damsky, C. H. 1990.
rases in gastrulating chick embryos. II. Bioche- cognition. Plenum, New York, pp. 276-329. Regulation of extracellular matrix degradation
mical evidence for a surface localization of by cell-extracellular matrix interaction. Cell
Tosney, K. W., Watanabe, M., Landmesser, L. and
endogenous glycosyltransferase activities. Dev. Differ. Dev. 32: 299-306.
Rutishauser, U. 1986. The distribution of N-CAM in
Biol. 58: 40-55.
the chick hindlimb during axon outgrowth and Wilcox, M., DiAntonio, A. and Leptin, M.
Spring, J., Beck, K. and Chiquet-Ehrismann, R. synaptogenesis. Dev. Biol. 114: 468-481. 1989. The functions of the PS integrins in
1989. Two contrary functions of tenascin: Drosophila wing morphogenesis. Develop-
Townes, P. L. and HoItfreter, J. 1955. Directed
Dissection of the active sites by recombinant ment 107: 891-897.
movements and selective adhesion of embryo-
tenascin fragments. Cell 59: 325-334.
nic amphibian cells. J. Exp. Zool. 128: 53-120. Wilder, E. L. and Perrimon, N. 1995. Dual
Steinberg, M. S. 1964. The problem of functions of wingless in the Drosophila leg
Trahey, M. and McCormick, F. 1987. A cyto-
adhesive selectivity in cellular interactions. imaginal disc. Development 121: 477-488.
plasmic protein stimulates normal N-ras p2l.
In M. Locke (ed.), Cellular Membranes in
GTPase, but does not affect oncogenic mutants. Williams, A. F. and Barclay, A. N. 1988. The
Development. Academic Press, New York,
Science 238: 542-544. immunoglobulin superfamily: Domains for
pp. 321-434.
cell surface recognition. Annu. Rev. Immu-
Trinkaus, J. P. 1963. The cellular basis of
Steinberg, M. S. 1970. Does differential adhesion nol. 6: 381-405.
Fundulus epiboly. Adhesivity of blastula and
govern self-assembly processes in histogenesis?
gastrula cells in culture. Dev. Biol. 7: 513-532. Williams, E. J., WaIsch, F. S. and Doherty, P.
Equilibrium configurations and the emergence
1994a. Tyrosine kinase inhibitors can differen-
of a hierarchy among populations of embryonic Turley, E. A. and Roth, S. 1979. Spontaneous
tially inhibit integrin-dependent and CAM-
cells. J. Exp. Zool. 173: 395-434. glycosylation of glycosaminoglycan substrates
dependent neurite outgrowth. J. Cell Biol. 124:
by adherent fibroblasts. Cell 17: 109-115.
Stokoe, D., Macdonald, S. G., Cadwallader, K., 1029-1037.
Symons, M. and Hancock, J. F. 1994. Activation Tyler, A. 1946. An auto-antibody concept of
Williams, E. J., Furness, J., Walsh, F. S. and
of raf as well as recruitment to the plasma cell structure, growth, and differentiation. Growth
Doherty, P. 1994b. Activation of the FGF
membrane. Science 264: 1463-1467. 10 (Symposium 6):7-19.
receptor underlies neuriote outgrowth stimu
Streuli, C. H., Bailey, N. and Bissell, M. J. 1991. Vainio, S., Jalkanen, M., Lehtonen, E. and lated by L1, N-CAM, and N-cadherin.
Control of mammary epithelial differentiation: Bernfield, M. 1989. Epithelial-mesenchymal in- Neuron 13: 583-594.
Basement membrane induces tissue specific gene teractions regulate stage-specific expression of
Yayon, A., Klagsbrun, M., Esko, J. D., Leder, P.
expression in the absence of cell-cell interacti- a cell surface proteoglycan, syndecan, in the
and Ornitz, D. M. 1991. Cell surface heparin-
ons and morphological polarity J. Cell Biol. 115: development kidney. Dev. Biol. 134: 382-391.
like molecules are required for binding of basic
1383-1395.
Venkatesh, T. R., Zipursky, S. L. and Benzer, S. fibroblast growth factor to its high affinity re-
Swann, K. and Whitaker, M. 1986. The part 1985. Molecular analysis of the development ceptor. Cell 64: 841-849.
played by inositol trisphosphate and calcium in of the compound eye in Drosophila. Trends
Yelton, D. E. and Scharff, M. D. 1980. Mono-
the propagation of the fertilization wave in sea Neurosci. 8: 251-257.
clonal antibodies. Am. Sci. 68: 510-516.
urchin eggs. J. Cell Biol. 103: 2333-2342.
Vits, L., Van Camp, G., Couke, P., Wilson, G.,
Yow H., Wong, J. M., Chen, H. S., Lee, C., Steei,
Takeichi, M. 1987. Cadherins: A molecular Schrander-Stumpel;C., Schwarz, C. and Willems,
G. D. Jr. and Chen, L. B. 1988. Increased mRNA
family essential for selective cell-cell P. J. 1994. MASA syndrome is due to mutations
expression of a lamininbinding protein in human
adhesion and animal morphogenesis. Trends in the LlCAM gene. Nature Genet. 7: 408-413.
colon carcinoma: Complete sequence of a full-
Genet. 3: 213-217.
Vuorio, E. 1986. Connective tissue diseases: length cDNA encoding the protein. Proc. Natl.
Takeichi, M. 1991. Cadherin cell adhesion Mutations of collagen genes. Ann. Clin. Res. Acad. Sci.. USA 85: 6394-6398.
receptors as a morphogenetic regulator. Science 18: 234-241.
Zipursky, S. L., Venkatesh, T. R., Teplow, D. B.
251: 1451-1455.
Wang, N., Butler, J. P. and Ingber, D. E. 1993. and Benzer, S. 1984. Neuronal development in
Takeichi, M., Ozaki, H. S., Tokunaga, K. Mechanotransduction across the cell surface and the Drosophila retina: Monoclonal antibodies
and Okada, T. S. 1979. Experimental ma- through the cytoskeleton. Science 260: 1124-1127. as molecular probes. Cell 36: 15-26.
Padres de Desenvolvimento
4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo
5 Clivagem: Criando multicelularidade

121
167
6 Gastrulao: Reorganizando as clulas embrionrias 209

II
7 Incio do desenvolvimento vertebrado: Neurulao e ectoderma 253
8 Especificidade axnica 307
9 Incio do desenvolvimento vertebrado: Mesoderma e endoderma 341

CAPTULO 4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo 121
Fertilizao:
Iniciando um novo organismo
4
Desejo e desejo e desejo
Sempre o desejo procriativo do mundo.
Saindo da obscuridade iguais opostos
avanam,
Sempre substncia e aumento, sempre sexo,
F ERTILIZAO (FECUNDAO) o processo pelo qual duas clulas sexuais
(gametas) se fundem para criar um novo indivduo com potenciais genticos
derivados dos dois genitores. A fecundao, portanto, realiza duas atividades
separadas: sexo (a combinao de genes derivados dos dois pais) e a reproduo
(criao de novos organismos). Assim, a primeira funo da fecundao a de trans-
Sempre uma tessitura de identidade, sempre mitir genes dos pais para a prole, e a segunda a de iniciar no citoplasma do ovo
distino, aquelas reaes que permitem o desenvolvimento.
Sempre uma criao de vida.
WALT WHITMAN (1855)
Embora os detalhes da fecundao variem de espcie para espcie, os eventos da
concepo consistem, em geral, de quatro atividades principais:
O objetivo final de todas as intrigas amoro- Contato e reconhecimento entre espermatozide e vulo. Na maioria dos
sas, sejam elas cmicas ou trgicas, na casos, isso assegura que o espermatozide e o vulo sejam da mesma espcie.
realidade mais importante que todas as ou- Regulao da entrada do espermatozide para o interior do vulo. Somente
tras finalidades na vida humana. um espermatozide pode, em ltima anlise, fecundar um vulo. Isso geral-
Ele se volta para nada menos que a compo- mente conseguido com a permisso de somente um espermatozide entrar no
sio da prxima gerao. vulo e a inibio da entrada de qualquer outro.
A SCHOPENHAUER Fuso do material gentico do espermatozide e do vulo.
(CITADO POR C. DARWIN, 1871)
Ativao do metabolismo do ovo para comear o desenvolvimento.
Estrutura dos gametas

Existe um dilogo complexo entre vulo e espermatozide. O vulo ativa o metabolis-
mo do espermatozide que essencial para a fecundao, e o espermatozide retorna
a mensagem ativando o metabolismo do vulo necessrio para o incio do desenvol-
vimento. Porm, antes de investigar esses aspectos da fecundao, temos que consi-
derar as estruturas do espermatozide e do vulo dois tipos de clulas especializadas
para a fertilizao.
Espermatozide
Foi somente no sculo XIX que o papel do espermatozide na fertilizao tornou-se
conhecido. Anton van Leeuwenhoek, o microbiologista holands que co-descobriu o
espermatozide em 1678, acreditou inicialmente que ele continha animais parasitas vi-
vendo em seu interior (da o termo espermatozides, significando animais do esper-
ma). Assumiu originalmente que esses nada tinham a haver com a reproduo do
organismo onde se encontravam, porm, posteriormente chegou a acreditar que cada
espermatozide continha um embrio pr-formado. Leeuwenhoek (1685) escreveu que
121
122 PARTE II Padres de Desenvolvimento
espermatozides eram sementes (tanto sperma como smen significam semente), e

que a fmea meramente proporcionava o solo nutriente no qual as sementes eram
plantadas. Sob esse aspecto, ele estava voltando a uma noo da procriao enunci-
ada por Aristteles 2000 anos antes. Por mais que tentasse, Leeuwenhoek era continu-
amente desapontado em suas tentativas de achar um embrio pr-formado nos esper-
matozides. Nicolas Hartsoeker, o outro co-descobridor do espermatozide, dese-
nhou uma figura do que pretendia encontrar: um ser humano pr-formado
(homnculo) dentro do espermatozide (Figura 4.1). Essa crena de que o esperma-
tozide continha um organismo embrionrio inteiro, nunca recebeu muita aceitao,
porque implicava num enorme desperdcio de vida em potencial. A maioria dos inves-
tigadores consideravam o espermatozide como sem importncia (Veja Pinto-Correia,
1997, para detalhes sobre essa extraordinria histria). [fert1.html]
A primeira evidncia sugerindo a importncia do espermatozide na reproduo
veio de uma srie de experimentos realizados por Lazzaro Spallannzani em fins de 1700.
Spallanzani demonstrou que smen filtrado de r, livre de espermatozide, no fecun-
dava vulos. Concluiu, porm, que o fluido viscoso retido pelo papel de filtro, e no o
espermatozide, era o agente da fertilizao. Ele acreditava, tambm, que os animais
espermticos eram parasitas.
A combinao das melhores lentes de microscpio e da teoria celular, levaram a
uma reapreciao da funo espermtica. Em 1924, J. L. Prevost e J. B. Dumas afirma-
ram que os espermatozides no eram parasitas, mas sim os agentes ativos da fertili-
zao. Notaram a existncia universal de espermatozides em machos sexualmente
maduros e sua ausncia em indivduos imaturos ou idosos. Essas observaes,
acopladas conhecida ausncia de espermatozides na mula estril, os convenceram
que existe uma ntima relao entre sua presena nos rgos e a capacidade
fecundadora do animal. Eles propuseram que o espermatozide penetra o vulo e
contribui materialmente para a gerao seguinte.
Essas assertivas no foram em geral levadas em considerao at a dcada de 1840,
quando A. von Kolliker descreveu a formao do espermatozide a partir de clulas
contidas em testculos adultos. Kolliker ridicularizou a idia que o smen poderia ser
Figura 4.1 normal e ainda assim tolerar a presena de um nmero enorme de parasitas. Mas ainda
A criana humana pr-formada no espermato- assim, negou que haveria qualquer contato fsico entre espermatozide e vulo. Acredi-
zide, conforme representada por Nicolas tava que o espermatozide excitava o desenvolvimento do vulo de maneira semelhante
Hartsoeker (1964). aquela pela qual o m comunica sua presena ao ferro. Somente em 1876, Oscar Hertwig
e Hermann Fol, independentemente, demonstraram a entrada do espermatozide no
vulo e a unio de seus ncleos. Hertwig procurou um organismo adequado para obser-
vaes microscpicas detalhadas e descobriu que o ourio-do-mar Mediterrneo,
Toxopneustes lividus, era perfeito para isso. No somente era freqente na regio e
sexualmente maduro a maior parte do ano, como seus vulos eram abundantes e trans-
parentes, mesmo sob alto aumento. Aps misturar espermatozide e vulo em suspen-
ses, Hertwig repetidas vezes observou o espermatozide entrando no vulo e viu a
unio dos ncleos dessas clulas. Notou tambm que apenas um espermatozide era
visto penetrar em cada vulo e que todos os ncleos do embrio derivavam dos ncleos
fundidos por ocasio da fertilizao. Fol fez observaes semelhantes e detalhou o
mecanismo de penetrao do espermatozide. A fertilizao estava finalmente reconhe-
cida como a unio de espermatozide e vulo, e a unio dos gametas do ourio-do-mar
permanece como um dos exemplos de fertilizao melhor estudado. [fert2.html]
Cada espermatozide consiste de um ncleo haplide, um sistema de propulso
para movimentar o ncleo, e um saco de enzimas que permitem a entrada do ncleo no
vulo. A maior parte do citoplasma do espermatozide eliminada durante o amadure-
cimento, deixando somente certas organelas modificadas para exercer a funo esper-
mtica (Figura 4.2). Durante o transcorrer do amadurecimento, o ncleo haplide se
torna muito aerodinmico e seu DNA altamente comprimido. Na parte frontal desse
ncleo haplide comprimido est a vescula acrossmica, derivada do aparelho de
Golgi, contendo enzimas que digerem protenas e acares complexos; por isso, pode
ser considerado como uma vescula secretria modificada. Essas enzimas armazena-
das so usadas para lisar os invlucros externos do vulo. Em muitas espcies, tais
como os ourios-do-mar, existe uma regio de molculas globulares de actina entre o
ncleo e a vescula acrossmica. Essas protenas so usadas para estender um pro-
cesso de forma semelhante a um dedo durante os estgios precoces da fertilizao. Em
ourios-do-mar e vrias outras espcies, o reconhecimento mtuo entre espermatozi-
de e vulo envolve molculas desse processo acrossmico. Juntos, o acrossomo e o
ncleo constituem a cabea do espermatozide.
Os meios pelos quais o espermatozide impulsionado variam de acordo com o
modo pelo qual a espcie se adaptou s condies ambientais. Em algumas espcies
(como o nematelminto parasitrio Ascaris), o espermatozide viaja por movimentao
amebide de extenses lamelipodiais da membrana celular. Na maioria das espcies,
porm, um espermatozide capaz de viajar por longas distncias agitando o seu
flagelo. Os flagelos so estruturas complexas. A sua principal poro motora chama-
da axonema. Um axonema formado pelos microtbulos que emanam do centrolo na
base do ncleo do espermatozide (Figuras 4.2 e 4.3). O centro do axonema consiste
de dois tbulos centrais rodeados por uma fileira de nove duplas de microtbulos.
Realmente, s um microtbulo est completo, contendo 13 protofilamentos; o outro
tem forma de C e tem apenas 11 protofilamentos (Figura 4.3B). Um modelo tridimensi-
onal de um microtbulo completo est apresentado na Figura 4.3C. Aqui vemos os 13
protofilamentos interligados; os quais consistem exclusivamente da protena dimrica,
a tubulina.
Embora a tubulina seja a base da estrutura do flagelo, outras protenas tambm
so crticas para a funo do flagelo. A fora para a propulso do espermatozide
proporcionada pela dinena, uma protena apensa aos microtbulos (Figura 4.3B). A
dinena hidrolisa molculas de ATP e pode converter a energia qumica liberada em
Golgi
remanescente
Centrolo
Flagelo
Microtbulos
Centrolo
Flagelo
Vescula Poro
acrossmica final
e grnulo
Ncleo
Aparelho Mitocndrias
de Golgi Cauda
Mitocndrias
Figura 4.2
Axonema A modificao de uma clula germinativa para formar um espermatozide de ma-
Mitocndrias mfero. O centrolo produz um longo flagelo na parte que vir a ser a extremidade
Poro mediana
Centrolo posterior do espermatozide, e o aparelho de Golgi forma a vescula acrossmica
Pescoo na futura extremidade anterior. As mitocndrias (pontos abertos) agrupam-se ao
Ncleo Cabea do redor do flagelo perto da base do ncleo haplide e so incorporadas na parte
espermatozide mediana do espermatozide. O citoplasma remanescente descartado e o ncleo
Membrana plasmtica
se condensa. O tamanho do espermatozide maduro foi aumentado em relao s
Vescula acrossmica outras figuras. (Segundo Clermont e Leblond, 1955.)
Figura 4.3 (A) (C)

O aparelho de movimentao do espermato-
zide. (A) Seo transversal do flagelo de um
espermatozide mamfero, mostrando o
axonema central e as fibras externas. (B) Dia-
grama interpretativo do axonema, mostrando o
arranjo 9 + 2 dos microtbulos e outros com-
ponentes flagelares. O diagrama esquemtico
mostra a associao de protofilamentos de
tubulina em um microtbulo duplo. A primeira
(A) poro do par duplo um microtbulo
normal compreendendo 13 protofilamentos. A
segunda (B) poro da dupla contm somen-
te 11 (ocasionalmente 10) protofilamentos. (C)
Um modelo tridimensional do microtbulo A.
As subunidades -tubulina e -tubulina so
semelhantes, porm, no idnticas, e o
microtbulo pode mudar de tamanho polimeri-
zando e despolimerizando subunidades de tu-
bulina em qualquer um dos lados. (A cortesia de (B)
D. M. Phillips; B segundo De Robertis et al., Membrana plasmtica
1975, e Tilney et al., 1973; C de Amos e Klug, Trave radial
1974, cortesia dos autores.)
Cabea da trave
Nexina
Subfibra A
Subfibra B
Microtbulo central
Brao interno de dinena MICROTBULO DUPLO
Brao externo de dinena

AXONEMA
energia mecnica que propulsiona o espermatozide. Essa energia pemite o

deslizamento ativo das duplas externas de microtbulos, levando o flagelo a se
curvar (Ogawa et al., 1977; Asai, 1996). A importncia da dinena pode ser avaliada
em indivduos com a sndrome gentica chamada de trade de Kartagener. Esses
indivduos no tm dinena em suas clulas ciliadas e flageladas, o que as torna
estruturas imveis. Machos com essa doena so estreis (espermatozide imvel),
susceptveis infees brnquicas (clios respiratrios imveis), e tm 50 porcento
de probabilidade de ter o corao do lado direito de seu corpo (Afzelius, 1976).
Outra importante protena flagelar parece ser a histona H1. Essa protena geral-
mente vista dentro do ncleo, onde dobra e aperta a cromatina em agregados. No
entanto, Multigner e colaboradores (1992), mostraram que essa mesma protena
estabiliza os microtbulos flagelados impedindo seu espalhamento.
O arranjo 9 + 2 dos microtbulos com os braos de dinena foi conservado nos
axonemas em todo o reino eucarioto, sugerindo que extremamente adequado na
transmisso de energia para a movimentao. A energia para mover o flagelo e assim
impulsionar o espermatozide vem dos anis de mitocndrias localizadas na regio
do pescoo do espermatozide (veja Figura 4.2). Em muitas espcies (notavelmente
mamferos) uma densa camada de fibras se interps entre a bainha mitocondrial e o
axonema. Essa camada fibrosa enrijece a cauda do espermatozide. Como sua es-
pessura diminui na direo apical, as fibras provavelmente previnem que a cabea
do espermatozide balance abruptamente. Assim, o espermatozide sofreu extensa

modificao para assegurar a passagem de seu ncleo para o vulo.
Entretanto, a diferenciao do espermatozide no se completa nos testculos.
Aps sua expulso para a luz dos tbulos seminferos, os espermatozides so arma-
zenados no epiddimo, onde adquirem a capacidade de se mover. Essa mobilidade
conseguida atravs de mudanas no sistema gerador de ATP (possivelmente atravs
da modificao da dinena), assim como de alteraes da membrana plasmtica que
permitem que ela se torne mais fluida (Yanagimachi, 1994). Os espermatozides libera-
dos durante a ejaculao podem se mover, mas ainda no tm a capacidade de se ligar
ao vulo e fertiliz-lo. Esses estgios finais do amadurecimento espermtico (chama-
do capacitao) no ocorrem antes do espermatozide ter permanecido no interior do
trato reprodutivo feminino durante um certo tempo.
O vulo
Todo o material necessrio para o comeo do crescimento e desenvolvimento tem
que estar armazenado no vulo maduro. Enquanto o espermatozide eliminou a
maior parte do seu citoplasma, o vulo em desenvolvimento (chamado de ocito
antes de tornar-se haplide) no somente conserva seu material, mas continua a
acumul-lo ativamente. Sintetiza ou absorve protenas, como a gema, que atuam
como reservatrios de alimento para o embrio em desenvolvimento. Assim, game-
tas femininos das aves so enormes clulas singulares que se tornaram entumecidas
pela acumulao de gema. Mesmo vulos com gema relativamente esparsa so com-
parativamente grandes. O volume do vulo do ourio-do-mar de aproximadamente
2 x 10-4 m3, mais de 10.000 vezes aquele do espermatozide. A representao do
vulo do ourio-do-mar e do espermatozide na Figura 4.4 mostra seus tamanhos
relativos, assim como os vrios componentes do vulo maduro. Assim, enquanto o
espermatozide e o vulo tm componentes nucleares haplides iguais, o vulo tem
ainda um notvel reservatrio citoplasmtico acumulado durante seu amadureci-
mento. Esse armazm citoplasmtico inclui protenas, RNAs, substncias qumicas
protetoras e fatores morfogenticos:*
Protenas. Ser longo o perodo a transcorrer antes do embrio ser capaz de se
alimentar ou obter alimento de sua me. As clulas embrionrias precoces
precisam de um certo suprimento armazenvel de energia e aminocidos. Em
muitas espcies isso conseguido pelo acmulo de protenas na gema do ovo.
Muitas protenas da gema so sintetizadas em outros rgos (fgado, corpo
gorduroso) e viajam atravs do sangue materno para o ovo.
Ribossomos e tRNA. O embrio precoce precisa produzir muitas de suas prpri-
as protenas; em algumas espcies, ocorre um surto de sntese protica pouco
aps a fecundao. A sntese protica conseguida pelos ribossomos e tRNA,
preexistentes no vulo. O vulo em desenvolvimento tem mecanismos especi-
ais para sintetizar ribossomos, e certos ocitos de anfbios produzem at 1012
ribossomos durante a prfase meitica.
RNA mensageiro. Na maioria dos organismos, as mensagens para protenas
sintetizadas durante o desenvolvimento inicial j esto acondicionadas no
ocito. Estima-se que os vulos do ourio-do-mar contm de 25.000 a 50.000
tipos diferentes de mRNA. Porm, esse mRNA permanece dormente at aps a
fertilizao (veja Captulo 12).
Fatores morfogenticos. Essas molculas dirigem a diferenciao celular
em certos tipos de clulas. Parecem estar localizadas em diferentes regies
do vulo e se segregam em clulas diferentes durante a clivagem (veja
Captulo 13).
* Os contedos do vulo variam muito de espcie para espcie. A sntese e a colocao desses
materiais ser tratada no Captulo 22, quando discutirmos a diferenciao das clulas germinativas.
Figura 4.4 Membrana

Estrutura do vulo do ourio-do-mar durante Envoltrio vitelnico plasmtica
a fertilizao. (Segundo Epel, 1977.)
Camada gelatinosa Grnulo de gema
Grnulo cortical
Espermatozide
Mitocndria
Ncleo
Substncias qumicas protetoras. O embrio no pode fugir de predadores ou

movimentar-se para um ambiente mais seguro, necessitando, por isso, estar
equipado para enfrentar esses fatores. Muitos vulos contm filtros ultravioleta
e enzimas de reparos de DNA que os protegem da luz solar; alguns vulos
contm molculas que predadores potenciais acham desagradveis; a gema de
vulos de aves contm at mesmo anticorpos. [fert3.html]
Dentro desse enorme volume de citoplasma reside um grande ncleo. Em algumas
espcies (por exemplo, ourios-do-mar), o ncleo j haplide no momento da fertili-
zao. Em outras espcies (incluindo muitos vermes e a maioria dos mamferos), o
ncleo do vulo ainda diplide, e o espermatozide penetra antes das divises
meiticas estarem completas. O estgio do ncleo do vulo no momento da entrada
do espermatozide est ilustrado na Figura 4.5.
Envolvendo o citoplasma est a membrana plasmtica do vulo. Essa mem-
brana deve regular o fluxo de certos ons durante a fertilizao e deve ser capaz de
se fundir com a membrana plasmtica do espermatozide. Acima da membrana
plasmtica est o envoltrio vitelnico (Figura 4.6). O componente principal desse
envoltrio forma uma esteira fibrosa sobre o vulo. Essa esteira suplementada
por extenses de glicoprotenas da membrana plasmtica e pontes proteinceas
vitelnicas que aderem a esteira membrana (Mozingo e Chandler, 1991). O
envoltrio vitelnico essencial para a ligao espcie-especfica do espermato-
zide. Nos mamferos, o envoltrio vitelnico uma matriz extracelular separada e
grossa chamada zona pelcida. O vulo do mamfero tambm rodeado por uma
camada de clulas, as clulas do cumulus (Figura 4.7). A camada cumular repre-
senta clulas foliculares ovarianas que estavam alimentando o vulo quando da
sua liberao do ovrio. O espermatozide dos mamferos tem que passar por
essas clulas para fertilizar o vulo*.
Imediatamente abaixo da membrana plasmtica do vulo est uma fina casca (de
aproximadamente 5m) de um citoplasma gel-smile chamado de crtex. O citoplasma
nessa regio mais duro que o citoplasma interno e contm altas concentraes de
molculas globulares de actina. Durante a fertilizao, essas molculas polimerizam-se
*Em mamferos, as coberturas extracelulares do vulo esto divididas em duas regies: A zona
pelcida e o cumulus. O termo corona radiata refere-se quelas clulas foliculares imediatamente
adjacentes zona pelcida; so as clulas mais internas do cumulus.
Corpos
polares Proncleo
Vescula
germinal feminino
Ocito Ocito primrio Primeira metfase Segunda metfase Meiose completa

primrio totalmente
jovem crescido
Os vermes aneldeos O nematelminto O verme nemerteano O anfioxo Cnidrios

Dinophilus e Ascaris Cerebratulus Branchiostoma (e.g., anmonas)
Sacocirrrus O mesozorio Dicyema O verme poliqueta Anfbios Ourios-do-mar
O verme poliqueta A esponja Grantia Chaetopterus Mamferos (maioria)
Histriobdella O verme poliqueta O molusco Peixes
O platelminto Myzostoma Dentalium
Otomesostoma O verme concha O verme central
O onicforo Nereis Pectinaria
Peripatopsis O molusco Spisula Muitos insetos
O verme equiuride Urechis Estrela-do-mar
Ces e raposas
Figura 4.5
para formar longos fios de actina conhecidos como microfilamentos. Microfilamentos Estgios de maturao do vulo no momento
so necessrios para a diviso celular, e so tambm usados para estender a superfcie da entrada do espermatozide em diferentes
do vulo para o interior das microvilosidades, que ajudam a entrada do espermatozi- animais. (Segundo Austin, 1965.)
de para dentro da clula (veja Figura 4.6; veja tambm a Figura 4.19). Ainda, dentro
desse crtex esto os grnulos corticais (veja Figuras 4.4 e 4.6). Essas estruturas
Microvilosidades Envoltrio vitelnico
(A) (B) Grnulo cortical

Figura 4.6
A superfcie do vulo do ourio-do-mar. (A) Micrografia eletrnica de varredura de um vulo
antes da fertilizao. A membrana plasmtica est exposta onde o envoltrio vitelnico foi
retirado. (B) Microfotografia eletrnica de transmisso de um ovo no-fertilizado, mostrando
microvilosidades e a membrana plasmtica, que esto estreitamente cobertas pelo envoltrio
vitelnico. Um grnulo cortical aparece diretamente abaixo da membrana plasmtica do vulo.
(de Schroeder, 1979, cortesisa de T. E. Schroeder.)
Cumulus
vulo
Zona
pelcida
(A) (B)
Figura 4.7
vulos de hamster imediatamente antes da fecundao. (A) O ovo do hamster, ou vulo, est
encaixado na zona pelcida. Essa, por sua vez, est envolvida por clulas do cumulus. Uma clula
do corpo polar, produzida durante a meiose, tambm est dentro da zona pelcida. (B) Em menor
aumento, um ocito de camundongo mostrado em relao ao cumulus. Partculas de carbono
coloidal (tinta Nanquim) so excludas pela matriz de hialuronidase. (Cortesia de R. Yanagimachi.)
ligadas membrana so homlogas vescula acrossmica do espermatozide, sendo

organelas derivadas do Golgi contendo enzimas proteolticas. No entanto, enquanto
cada espermatozide contm uma vescula acrossmica, cada vulo do ourio-do-mar
contm aproximadamente 15.000 grnulos corticais. Alm das enzimas digestivas, os
grnulos corticais tambm contm mucopolissacardeos, glicoprotenas adesivas e
protena hialina. As enzimas e os mucopolissacardeos atuam na preveno da entra-
da de outros espermatozides no vulo aps a entrada do primeiro, e as protenas
hialinas e adesivas envolvem o embrio precoce providenciando apoio aos blastme-
ros do estgio de clivagem.
Muitos tipos de vulos tm uma gelia no exterior do seu envoltrio vitelnico
(Figura 4.4). Essa rede de glicoprotenas pode ter numerosas funes, mas principal-
mente usada para atrair ou ativar o espermatozide. O vulo, portanto, uma clula
especializada para receber o espermatozide iniciando o desenvolvimento.
Reconhecimento do vulo e do espermatozide: Ao distncia

Muitos organismos marinhos liberam seus gametas para o ambiente. Esse ambien-
te pode ser to pequeno quanto uma poa de mar ou to grande como o oceano.
Alm disso, esse ambiente compartilhado com outras espcies que podem libe-
rar suas clulas sexuais no mesmo perodo. Esses organismos enfrentam dois
problemas: 1) Como podem espermatozides e vulos se encontrarem quando em
concentraes to diludas, e 2) que mecanismo inibe o espermatozide da estrela-
do-mar tentar fertilizar os vulos do ourio-do-mar? Dois mecanismos principais
evoluram para resolver essas dificuldades: atrao e ativao espcie-especfica
do espermatozide.
Atrao do Espermatozide
A atrao espcie-especfica do espermatozide (um tipo de quimiotaxia) foi docu-
mentada em numerosas espcies, incluindo cnidrios, moluscos, equinodermos e
urocordados (Miller, 1985; Yoshida et al., 1993). Em 1978, Miller demonstrou que os
vulos do cnidrio Orthopyxis caliculata no somente secretam um fator quimiotti-
co mas tambm regulam o perodo de sua liberao. Ocitos em desenvolvimento, em
(A) (B) (C) (D)
Figura 4.8
vrios estgios de amadurecimento, foram fixados sobre lminas microscpicas, e Quimiotaxia do espermatozide em Arbacia.
espermatozides foram adicionados a uma certa distncia dos vulos. Miller encon- Um nanolitro de uma soluo 10-nM de
trou que quando o espermatozide era adicionado a ocitos que ainda no haviam resact injetado em uma gota de 20ml de
suspenso de espermatozide. A posio da
completado sua segunda diviso meitica, no havia atrao de espermatozide pelos
micropipeta est indicada em (A). (A) Uma
vulos. Porm, aps o trmino da segunda diviso meitica e os vulos estarem fotografia de 1 segundo, mostrando esper-
prontos para ser fertilizados, o espermatozide migrava em sua direo. Assim, esses matozide nadando em crculos estreitos an-
ocitos no controlam somente o tipo de espermatozide que atraem, mas tambm o tes da adio de resact. (B-D) Exposies
momento em que o atraem. semelhantes de 1 segundo mostrando a mi-
Os mecanismos de quimiotaxia so diferentes em outras espcies (veja Metz, 1978; grao do espermatozide para o centro do
Ward e Kopf, 1993). Uma dessas molculas quimiotticas, um peptdio de 14 aminocidos gradiente de resact 20, 40 e 90 segundos aps
chamado resact foi isolado da gelia do vulo do ourio-do-mar Arbacia punctulata a injeo. (de Ward et al., 1985, cortesia de
(Ward et al., 1985). Resact difunde facilmente na gua do mar e tem um profundo efeito V. D. Vacquier.)
quando adicionado a uma suspenso de espermatozide de Arbacia, mesmo em con-
centrao muito baixa (Figura 4.8). Quando uma gota de gua do mar, contendo esper-
matozide de Arbacia, colocada em uma lmina de microscpio, o espermatozide
geralmente nada em crculos de aproximadamente 50 m de dimetro. Se uma quantida-
de mnima de resact for introduzida na gota, em segundos o esperma migra para a
regio da injeo e ali se congrega. medida que o resact continua a difundir-se, mais
espermatozide recrutado para dentro do crescente agrupamento. Resact especfi-
co para A. punctulata e no atrai espermatozide de outras espcies. Espermatozide
de A. punctulata liga resact a receptores na sua membrana celular (Ramarao e Garbers,
1985; Bentley et al., 1986) e pode nadar atravs de um gradiente crescente de concen-
trao desse composto at alcanar o vulo.
Resact tambm age como um peptdio ativador de espermatozide. Esses peptdios
(mais de 70 foram isolados de diferentes espcies de ourios-do-mar) causam au-
mentos dramticos e imediatos da motilidade espermtica e do consumo de oxignio
(Hardy et al., 1994). O receptor para resact uma protena transmembrana. Quando
ela liga o resact ao lado externo da clula, resact causa uma mudana conformacional
que ativa a atividade de guanidil ciclase no lado citoplasmtico. Isso aumenta a
concentrao de GMP cclico do vulo (Shimomura et al., 1986), que parece ativar a
ATPase da dinena estimulando a agitao da cauda no espermatozide (Cook e
Babcock, 1993).
Ativao Espermtica: A Reao Acrossmica no Ourio-do-Mar

Uma segunda interao entre espermatozide e vulo envolve a ativao do esperma-
tozide pela gelia do vulo. Na maioria dos invertebrados marinhos, essa reao
acrossmica tem dois componentes: a fuso da vescula acrossmica com a membrana
plasmtica do espermatozide (uma exocitose que resulta na liberao dos componen-
tes da vescula acrossmica) e a extenso do processo acrossmico (Figura 4.9; Colwin
e Colwin, 1963). A reao acrossmica pode ser iniciada pela gelia do vulo
solubilizada, pela gelia que envolve o vulo, ou mesmo em certas espcies, pelo
contato com o prprio vulo. Tambm pode ser ativada artificialmente pelo aumento
da concentrao de clcio na gua do mar.
Membrana
acrossmica
Enzimas
acrossmicas
Bindina
Membrana do
espermatozide
Actina
globular Microfilamentos
de actina
Ncleos
Figura 4.9
Reao acrossmica em espermatozide de Em ourios-do-mar, o contato com a gelia do vulo causa a exocitose da vescula
equinoderma. (A-C) A poro da membrana acrossmica e a liberao de enzimas digestoras de protenas que podem digerir um
acrossmica diretamente abaixo da membra- caminho atravs da gelia de revestimento at a superfcie do vulo (Dan, 1967; Franklin,
na do espermatozide funde-se com essa li- 1970; Levine et al., 1978). A seqncia desses eventos est esquematizada na Figura
berando o contedo da vescula acrossmica. 4.9. A reao acrossmica considerada ser iniciada por um oligossacardeo ligado a
(D) Enquanto as molculas de actina se agre-
uma protena na gelia do vulo que permite a entrada de clcio na cabea do esperma-
gam para produzir microfilamentos, o pro-
cesso acrossmico se estende para fora. Fo-
tozide (SeGall e Lennarz, 1979; Schackmann e Shapiro, 1981; Keller e Vacquier, 1994
tografias reais da reao acrossmica no es- a,b). A exocitose da vescula acrossmica causada por uma fuso, mediada pelo
permatozide do ourio-do-mar so mostra- clcio, da membrana acrossmica com a membrana plasmtica adjacente do esperma-
das em seguida. (Segundo Summers e Hylan- tozide (Figuras 4.9 e 4.10). Essa exocitose permite que a vescula acrossmica libere
der, 1974; fotografias por cortesia de G. L. seu contedo na cabea do espermatozide*.
Decker e W. J. Lennarz.) A segunda parte da reao acrossmica envolve a extenso do processo
acrossmico (veja Figura 4.9). Essa protruso se origina da polimerizao de molcu-
las globulares de actina em filamentos de actina (Tilney et al., 1978). A exposio do
espermatozide do ourio-do-mar gelia do vulo tambm ocasiona a rpida utiliza-
o de ATP e um aumento de 50% da respirao mitocondrial. A energia gerada
usada primordialmente para motilidade flagelar (Tombes e Shapiro, 1985).
Os fatores da gelia do vulo que iniciam a reao acrossmica em ourios-do-mar
so muitas vezes muito especficos. Os espermatozides dos ourios-do-mar Arbacia
punctulata e Strongylocentrotus drobachiensis reagem somente com a gelia de
seus prprios vulos. No entanto, o espermatozide de S. purpuratus tambm pode
ser ativado pela gelia de Lytechinus variegatus (mas no de A. punctulata) (Summers
e Hylander, 1975). Portanto, a gelia do vulo pode prover reconhecimento espcie-
especfico em algumas espcies, mas no em outras.
* Tais reaes exocitticas podem ser vistas na liberao de insulina das clulas pancreticas e
na liberao de neurotransmissores de terminais sinpticos. Em todos os casos, h uma fuso
mediada pelo clcio entre a vescula secretria e a membrana celular. Realmente, a semelhana entre
a exocitose da vescula acrossmica e a exocitose da vescula sinptica pode ser bastante profunda.
Estudos recentes de reaes acrossmicas em ourios-do-mar e mamferos (Florman et al., 1992;
Gonzlez-Martnez et al., 1992) sugerem que quando os receptores para os ligantes ativadores do
espermatozide ligam essas molculas, causam a despolarizao da membrana que poderia abrir
canais de clcio voltagem-dependentes de maneira reminescente transmisso sinptica. As prote-
nas que atracam os grnulos corticais membrana celular tambm parecem ser homlogas quelas
usadas na ponta do axnio (Bi et al., 1995).
Membrana celular do
espermatozide
Fuso entre a
membrana celular
Membrana
do espermatozide
acrossmica
e a membrana
acrossmica adjacente
Ncleo
Centrolo
Figura 4.10
Reao acrossmica em espermatozide de hamster. (A) Micrografia de transmisso eletrnica
de um espermatozide de hamster passando pela reao acrossmica. A membrana acrossmica
pode ser vista formando vesculas. (B) Diagrama interpretativo de micrografias eletrnicas
mostrando a fuso de membranas acrossmica e celular na cabea do espermatozide. (A de
Meizel, 1948, cortesia de S. Meizel; B, segundo Yanagimachi e Noda, 1970.)
& Especulaes
Ao Distncia: Gametas de Mamferos
MUITO DIFCIL estudar as inte-

raes que podem estar ocorren-
do entre gametas de mamferos
antes do contato espermatozide-vulo.
Um motivo bvio para isso que a fertili-
culas que permitem aos espermatozides
nadar em direo ao vulo e serem
ativados. H muita controvrsia em rela-
o ao deslocamento do espermatozide
pico, se confiar somente no poder de seus
flagelos (Storey, 1995). mais provvel
que o espermatozide seja transportado
para o oviduto por meio da atividade mus-
mamfero at o oviduto, a capacitao e cular do tero.
zao ocorre dentro dos ovidutos femini- as reaes de hiperativao que parecem Espermatozide mamfero recm-eja-
nos. Embora seja relativamente fcil ser necessrias em algumas espcies para culado incapaz de sofrer a reao acros-
mimetizar as condies rodeando a fertili- lig-lo ao vulo, e a possibilidade que o smica sem ter residido por algum tempo
zao do ourio-do-mar (usando gua do vulo possa estar atraindo o espermato- no trato reprodutivo feminino (Chang,
mar natural ou artificial), ainda no conhe- zide por quimiotaxia. 1951; Austin, 1952). Esse requisito para
cemos os componentes dos vrios ambi- capacitao varia de espcie para espcie
entes naturais encontrados pelo esperma- Translocao e Capacitao (Gwatkin, 1976) e pode ser mimetizado in
tozide dos mamferos em sua viajem ao O trato reprodutivo de mamferos femini- vitro pela incubao de espermatozide
encontro do vulo. Um segundo motivo nos exerce um papel muito ativo no pro- em meios de cultura de tecidos (contendo
para essa dificuldade que a populao cesso de fertilizao. Enquanto a motili- ons de clcio, bicarbonato e soroalbumi-
de espermatozide ejaculada para o inte- dade espermtica necessria para que o na) ou em fluido dos ovidutos. Os esper-
rior da fmea provavelmente muito he- espermatozide do camundongo, uma vez matozides que no foram capacitados
terognea, contendo espermatozides em no oviduto encontre o ovo, a motilidade so segurados na matriz cumular, no
diferentes estgios de amadurecimento. espermtica provavelmente um fator de atingindo assim o vulo (Austin, 1960;
Dos 280 x 106 espermatozides humanos menor importncia para entrar no ovidu- Corselli e Talbot, 1987).
normalmente ejaculados para o interior da to. O espermatozide encontrado no As alteraes moleculares que expli-
vagina, somente 200 atingem a regio oviduto de camundongos, hamsters, co- cam a capacitao ainda so desconheci-
ampolar do oviduto, onde ocorre a fecun- baia, vacas e seres humanos dentro de 30 das (veja Yanigamachi, 1994), mas exis-
dao (Ralt et al., 1991). Como menos de 1 minutos aps a deposio, um perodo tem quatro conjuntos de alteraess mo-
em 10.000 espermatozides chegam perto demasiadamente curto para ser atingido leculares que podem ser importantes. Pri-
do vulo, difcil analisar aquelas mol- at mesmo pelo espermatozide mais olm- meiro, a membrana da clula espermtica
pode se alterar, mudando sua composi- Hiperativao e Quimiotaxia possibilidade de que o efeito fosse devido
o de lipdios. A concentrao de As diferentes regies do trato reproduti- a uma estimulao geral do movimento ou
colesterol no espermatozide diminuda vo feminino podem secretar fatores dife- do metabolismo do espermatozide. No en-
durante a capacitao do espermatozide rentes, regionalmente especficos. Esses tanto, essas investigaes revelaram uma
em vrias espcies (Davis, 1981), e duas fatores podem influenciar a motilidade correlao fascinante: o fluido de somente
protenas encontradas tanto no soro como espermtica assim como a capacitao. Por a metade dos folculos testados mostrou
no trato reprodutivo feminino (albumina exemplo, quando os espermatozides de um efeito quimiottico, e em quase todos
e protena 1 de transferncia lipdica), fo- certos mamferos (especialmente hams- os casos, o vulo s era fertilizvel se, e
ram verificadas remover colesterol do es- ters, cobaias e algumas variedades de ca- somente se, o fluido demonstrasse habili-
permatozide humano (Langlais et al., mundongos) passam do tero para os dade quimiottica (P < 0,0001). possvel,
1988; Ravnik et al., 1992). Em segundo lu- ovidutos, ficam hiperativados, passan- portanto, que tal como certos vulos de
gar, certas protenas ou carboidratos na do a nadar com maior velocidade e geran- invertebrados, o vulo humano secrete um
superfcie do espermaozide so perdidos do maior fora. Suarez e colaboradores fator quimiottico somente quando estiver
durante a capacitao (Poirier e Jackson, (1991) mostraram que enquanto essas re- capacitado para a fertilizao.
1981; Lopez et al., 1985; Wilson e Oliphant, aes no so conducentes a viagens em Deve-se notar que o prmio da corri-
1987). possvel que essas entidades per- fluidos de baixa viscosidade, parecem ser da no vai sempre para o mais rpido. Em-
didas durante a capacitao estivessem muito adequadas para o movimento line- bora algum espermatozide possa alcan-
bloqueando locais de reconhecimento ar do espermatozide no fluido viscoso ar a regio ampolar do oviduto (onde ocor-
para as protenas que se ligam zona que poder encontrar no oviduto. re a fertilizao) dentro de meia hora aps a
pelcida. Em terceiro lugar, certas prote- Alm de aumentar a atividade do es- relao sexual, aquele espermatozide pode
nas so fosforiladas por um caminho permatozide, fatores solveis no oviduto ter poucas chances de fertilizar o vulo.
cAMP-dependente. O AMP cclico pode tambm podem prover o componente dire- Wilcox e colaboradores (1995) acharam que
induzir artificialmente a competncia atra- cional do movimento do espermatozide. quase todas os engravidamentos humanos
vs da protena quinase cAMP-depen- Especulou-se que o vulo (ou, mais pro- resultam de relacionamento sexual duran-
dente (PKA), que necessria tanto para vavelmente, o folculo ovariano no qual o te um perodo de seis dias, terminando no
a aquisio de competncia como para a vulo se desenvolve) pode estar secretan- dia da ovulao. Isso significa que o es-
fosforilao de tirosino-quinases. pos- do substncias quimiotticas que poderi- permatozide fertilizador poderia demorar
svel que o trato reprodutivo feminino es- am atrair o espermatozide em direo ao at seis dias para fazer a jornada. Eisenbach
timule a adenilciclase do espermatozide vulo durante os ltimos estgios da mi- (1995) props a hiptese pela qual a
a produzir mais cAMP e que esse ative a grao (veja Hunter, 1989). Ralt e colabora- capacitao um acontecimento transit-
protena quinase que inicia a cascata de dores (1991) testaram essa hiptese usan- rio, e que dada ao espermatozide uma
fosforilao, terminando na fosforilao do fluido de folculos humanos cujos vu- janela de competncia relativamente bre-
e ativao das protenas envolvidas na los estavam sendo usados para fertiliza- ve, durante a qual pode ter sucesso na fer-
ligao do espermatozide zona pelcida o in vitro. Realizando um experimento tilizao do vulo. Quando os espermato-
e mediando a exocitose da vescula acros- semelhante aquele descrito anteriormente zides atingem a ampola, adquirem com-
smica (Leyton e Saling, 1989a; Visconti com ourios-do-mar, os autores microinje- petncia, mas se a ficam por um perodo
et al., 1995a,b). Em quarto lugar, o poten- taram uma gota do fluido folicular em uma demasiadamente longo, perdem-na. O es-
cial da membrana do espermatozide gota maior da suspenso de espermato- permatozide pode tambm ter diferentes
dramaticamente reduzido (de cerca de zides. Feito isso, observaram que parte prazos de sobrevivncia, dependendo da
30 para 50 mV; Zeng et al., 1995). Porm, do espermatozide mudou sua direo de sua localizao dentro do trato reproduti-
ainda incerto se esses eventos so in- movimentao, passando a migrar ao en- vo; isso pode permitir que algum esperma-
dependentes um do outro e at que pon- contro da fonte de fluido folicular. A tozide chegue mais tarde, porm com uma
to cada um deles produz capacitao do microinjeo de outras solues no teve melhor probabilidade de sucesso do que
espermatozide. esse efeito. Esses estudos no eliminam a aquele que chegou dias antes.
Reconhecimento do vulo e espermatozide:

Contato de gametas
Reconhecimento Espcie-Especfico em Ourios-do-Mar
Uma vez que o espermatozide do ourio-do-mar tiver penetrado na gelia do vulo,
o processo acrossmico do espermatozide faz contato com o envoltrio vitelnico do
vulo (Figura 4.11). Um importante passo do reconhecimento espcie-especfico ocorre
nesse ponto. A protena acrossmica mediando esse reconhecimento chamada bin-
dina. Em 1977, Vacquier e colaboradores isolaram essa protena insolvel, de 30.500-
Da, do acrossomo de Strongylocentrotus purpuratus. Essa protena capaz de se
Figura 4.11
Contato do processo acrossmico do espermatozide do ourio-do-mar com uma Figura 4.12
microvilosidade do vulo. (de Epel, 1977, cortesia de F. D. Collins e D. Epel.) Aglutinao espcie-especfica por bindi-
na de vulos desgeleificados . (A) aglutina-
o promovida pela adio de 212 g de
bindina em um recipiente plstico conten-
ligar a vulos desgeleificados de S. purpuratus (Figura 4.12; Vacquier e Moy, 1977).
do 0.25 ml de suspenso a 2% (volume/
Ainda mais, sua interao com vulos relativamente espcie-especfica (Glabe e volume) de vulos. Aps 2-5 min de agita-
Vacquier, 1977; Glabe e Lennarz, 1979); a bindina isolada dos acrossomos de S. o branda, os recipientes foram fotografa-
Purpurata aglutina seus prprios vulos desgeleificados, mas no aqueles de Arbacia dos. Cada bindina somente se ligou a seus
puctulata. Usando tcnicas imunolgicas, Moy e Vacquier (1979) demonstraram que prprios vulos. (B) Fotomicrografia de
a bindina est especificamente localizada no processo acrossmico, exatamente onde fluorescncia de vulos de S. purpuratus
deve estar para o reconhecimento espermatozide-vulo (Figura 4.13). ligados entre si por partculas de bindina
Estudos bioqumicos mostraram que as bindinas de espcies proximamente relaci- de S. purpuratus marcadas por fluorescn-
onadas de ourio-do-mar so mesmo diferentes. Esse achado implica na existncia de cia. As partculas de bindina estavam inva-
riavelmente nos lugares onde dois vulos
se encontravam. (A baseado em fotografias
de Glabe e Vacquier, 1977; B de Glabe e
(A) BINDINA DO ESPERMATOZIDE (B) Lennarz, 1979, cortesia dos autores.)
S. purpuratus S. fransciscanus
S. purpuratus
Partculas
de bindina
OVOS DESGELEIFICADOS
Aglutinao Sem aglutinao

vulos
S. fransciscanus
Sem aglutinao Aglutinao

(A) DAB + H2O2 (B) (C)

Imunoglobulina Membrana
Precipitado Precipitado DAB vitelnica do vulo Acrossomo
porcina anti-coelho
denso
conjugada com a
enzima peroxidase Anti-bindina
de coelho
Ncleo
Processo acrossmico
Bindina
Espermatozide
Figura 4.13
Localizao de bindina no processo acrossmico. (A) a tcnica de localizao
imunoqumica coloca um anticorpo de coelho nos lugares onde a bindina est exposta.
Os anticorpos do coelho foram produzidos contra a protena bindina, e esses anticorpos
foram incubados com espermatozide que tinha sofrido a reao acrossmica. Quando a
bindina estava presente, os anticorpos do coelho permaneciam ligados ao espermato-
zide. Depois de todo anticorpo no-ligado ser removido por lavagem, o espermatozi-
de foi tratado com anticorpos de porco capazes de ligar-se a anticorpos de coelho.
Esses anticorpos de porco haviam sido ligados covalentemente enzima peroxidase.
Dessa maneira, molculas de peroxidase foram colocadas em todos os lugares onde havia
bindina. Peroxidase catalisa a formao de um precipitado escuro de diaminobenzidina
(DAB) e gua oxigenada. O precipitado s se forma onde h bindina. (B) Localizao de
bindina no processo acrossmico aps a reao acrossmica (33.200x). (C) Localizao
de bindina no processo acrossmico na juno do espermatozide com o vulo. (B e C de
Moy e Vacquier, 1979, cortesia de V. D. Vacquier.)
receptores espcie-especficos de bindina no envoltrio vitelnico. Tais receptores

tambm foram sugeridos pelos experimentos de Vacquier e Payne (1973), que satura-
ram vulos de ourio-do-mar com espermatozide. Como pode ser visto na Figura 4.14
A, a ligao do espermatozide no se d sobre a superfcie inteira do vulo. Mesmo
(A)
Figur
Figuraa 4.14
Receptores de bindina no vulo. (A) Mi-
crografia eletrnica de varredura do esper-
matozide do ourio-do-mar ligado ao
envoltrio vitelnico de um vulo. (B) liga-
o do espermatozide de S. purpuratus a
partculas de polistireno que foram cober-
tas com a protena purificada do receptor de
bindina. (A cortesia de C. Glabe, L. Perez e
W. J. Lennarz; B de Foltz et al., 1993.)
(B)
a nveis saturantes de espermatozide (aproximadamente 1500), parece haver espao

no vulo para mais cabeas de espermatozide, indicando haver um nmero limitante
de locais ligantes de espermatozide. Um grande complexo de glicoprotenas dos
envoltrios vitelnicos de vulos de ourio-do-mar foi isolado e mostrou ligar bindina
radioativa de maneira espcie-especfica (Glabe e Vacquier, 1978; Rossignol et al.,
1984). Essa glicoprotena tambm capaz de competir com vulos pelo espermatozi-
de da mesma espcie. Isto , se espermatozide de S. purpuratus misturado com o
receptor de bindina de envoltrios vitelnicos de S. purpuratus, o espermatozide se
liga a ele e no ir fertilizar os vulos. O receptor isolado de S. purpuratus, porm, no
ir interferir com a fertilizao de outros ourios-do-mar relacionados. Esse receptor
de bindina uma glicoprotena transmembrana com quase 1300 aminocidos (Foltz et
al., 1993). A regio ligante de bindina se estende para o espao extracelular e provavel-
mente se torna um componente do envoltrio vitelnico. Esses receptores de bindina
se agregam em complexos, e centenas deles so provavelmente necessrios para
amarrar o espermatozide no vulo (Figura 4.14B). Assim, reconhecimento espcie-
especfico dos gametas do ourio-do-mar ocorrem ao nvel da atrao, ativao e
adeso do espermatozide superficie do vulo. [fert4.html]
Ligao de Gametas e Reconhecimento em Mamferos

ZP3: A PROTENA LIGANTE DA ZONA PELCIDA DO CAMUNDONGO. A zona
pelcida tem nos mamferos um papel anlogo aquele do envoltrio vitelnico nos
invertebrados. Essa matriz de glicoprotenas sintetizada e secretada pelo ocito em
crescimento, e tem dois papis importantes durante a fertilizao: liga o espermatozide, e
inicia a reao acrossmica aps essa ligao (Saling et al., 1979; Florman e Storey, 1982;
Cherr et al., 1986). A ligao de espermatozide zona relativamente, porm no absolu-
tamente, espcie-especfica (especificidade por espcie no deveria ser um grande proble- Figura 4.15
ma quando a fertilizao ocorre internamente), e a ligao do espermatozide do camun- Ligao do espermatozide zona pelcida.
dongo zona dessa espcie pode ser inibida pela incubao prvia de espermatozide (A) ensaio de inibio mostrando a dimi-
nuio especfica da ligao do esperma-
com glicoprotenas da zona. Bleil e Wassarman (1980, 1986, 1988) isolaram da zona pelcida
tozide do camundongo s zonas pelcidas
do camundongo uma glicoprotena ZP3, de 83-kDa, que o competidor ativo nesse ensaio
quando espermatozide e zonas so incu-
de inibio. As outras duas protenas da zona, ZP1 e ZP2, no puderam competir pela bados com aumentos crescentes da poro
ligao do espermatozide (Figura 4.15). Ainda mais, ZP3 radiativamente marcada ligou-se carboidrato da glicoprotena ZP3. A im-
s cabeas do espermatozide do camundongo que tinha acrossomos intactos. Assim, portncia da poro carboidrato de ZP3
ZP3 a protena especfica na zona pelcida qual se liga o espermatozide do camundon- tambm, indicada por essa figura. (B) Li-
go. ZP3 tambm inicia a reao acrossmica aps os espermatozides terem se ligado a ela. gao de ZP3 marcada radioativamente a
O espermatozide do camundongo pode, dessa forma, concentrar suas enzimas espermatozide capacitado do camundon-
proteolticas diretamente no ponto de fixao zona pelcida. go. (A segundo Bleil e Wassarman, 1980, e
Florman e Wassarman, 1985; B de Bleil e
Wassarman, 1986, cortesia dos autores.)
Ligao do espermatozide (%)
ZP3 sem
carboidratos
(A) Equivalentes da zona pelcida por l (B)

O mecanismo molecular pelo qual a zona pelcida e o espermatozide do mam-

fero se reconhecem mutuamente est sendo estudado. A hiptese corrente sobre
a ligao dos gametas de mamferos postula um conjunto de protenas do esper-
matozide capazes de reconhecer regies especficas de carboidratos na zona ZP3
do vulo (Florman et al., 1984; Florman e Wassarman, 1985; Wassarman, 1987;
Saling, 1989). A remoo desses grupos de carboidratos ligados por treonina ou
serina suprime a habilidade de ligar o espermatozide.
PROTENAS DE ADESO ESPERMATOZIDE-ZONA. O espermatozide do camun-

dongo no fura para chegar ao interior da zona. Na realidade, os espermatozides se
aproximam paralelamente ao plano da superfcie da zona e a so ativamente fixados
(Baltz et al., 1988). Como a zona capaz de ligar e conservar esses espermatozides
contorcedores? Parece que ZP3 pode ligar-se a pelo menos trs protenas adesivas na
membrana do espermatozide, e milhares desses stios podem ser necessrios para
prevenir que essas duas clulas se separem. H uma controvrsia significativa sobre a
questo de se todas as trs protenas no espermatozide so necessrias para ligao
zona, e quais as suas respectivas funes (veja Figura 4.16: Snell e White, 1996). Parece
que cada uma delas tem papis especficos, mas um tanto sobrepostos na adeso do
espermatozide e na reao acrossmica. Essas trs protenas so: a protena ligante de
galactose, a galactosil-transferase e a quinase do receptor da zona.
A PROTENA LIGANTE DE GALACTOSE 56-KDA (SP56). Uma protena crtica

ligante da zona do espermatozide parece ser a protena que especificamente se liga
aos resduos de galactose de ZP3. Bleil e Wassarman (1980) mostraram que um dos
carboidratos crticos da glicoprotena ZP3 o grupo galactose terminal. Se essa galactose
terminal for removida ou modificada quimicamente, a atividade ligante de espermatozi-
de perdida. Esses pesquisadores posteriormente isolaram essa protena, ligando
Zona pelcida
vulo
ZP3 (protena ligante de

Espermatozide espermatozide) na Zona
ZP3
Protenas candidatas N-acetil Galactose

a ligao zona no glicosamina Membrana
acrossomo celular do
espermatozide
GALACTOSILTRANSFERASE SP 56 P95
(protena
Ligao perifrica da Ativao
cruzada ativa membrana) de
protenas G tirosinoquinase Figura 4.16
Ligao de espermatozide zona pelcida do
Ativao de sntese Regulao de camundongo: alguns possveis participantes.
de IP3 na canais inicos A protena ZP3 da zona pelcida liga esper-
membrana ou sntese matozide. H evidncia da ligao de trs pro-
acrossmica de IP3 tenas espermticas a galactosiltransferase
da superfcie, sp56 e P95 ZP3. Essa liga-
Liberao de Ca++ o induz a reao acrossmica atravs da ati-
vao do fluxo de clcio. Os detalhes ainda
tero que ser elucidados. (Segundo Snell e
Reao acrossmica White, 1996.)
Figura 4.17
Sp56 purificada liga-se zona pelcida e ini-
be a ligao de espermatozide a vulos de
camundongo. (A) Ligao de sp56 zona
pelcida de ovos no-fertilizados. A pista 1
o resultado da lise de ovos no-fertilizados,
fazendo migrar as protenas extradas em um
gel, transferindo o gel, e sondando para a pre-
sena de sp56 com anticorpo marcado. No
se v sp56. A pista 2 mostra o resultado po-
sitivo obtido quando o ovo no-fertilizado
pr-incubado com sp56, indicando que sp56
se liga aos vulos. A pista 3 mostra os resul-
tados negativos obtidos quando sp56 foi adi-
cionada a embries bicelulares. A pista 4 mos-
tra o controle quando sp56 purificada feita
migrar no gel. (O anticorpo reconhece a for-
ma no-reduzida de sp56, que migra em 40
ZP3 uma coluna de afinidade, passando em seguida, por essa coluna, as protenas kDa). (B) Espermatozide ligando-se normal-
isoladas da membrana de espermatozides de camundongo (Bleil e Wassarman, mente a ovos no-fertilizados de camundon-
1990). A maioria das protenas passou pela coluna; porm um peptdio de 56- go (aproximadamente 76 espermatozides
kDa, ligou-se s partculas recobertas com ZP3, mas no se ligou a partculas por vulo). Os embries bicelulares (aqui
recobertas com ZP2 em experimento semelhante. Essa protena foi encontrada marcados por asteriscos) so controles inter-
nos mostrando no ocorrer ligao. (C ) Na
exposta na membrana espermtica; ligava-se a resduos de galactose, sugerin-
presena de sp56, o espermatozide foi im-
do fortemente ser um receptor de espermatozide ligante entidade terminal de pedido de se ligar zona. (de Bookbinder et
galactose na glicoprotena ZP3. A protena sp56 liga-se zona pelcida de al., 1995; cortesia de J.D. Bleil.)
ovos no-fertilizados (porm no dos fertilizados), bloqueando a ligao es-
permatozide-vulo (Figura 4.17; Bookbinder et al., 1995).
GALCTOSILTRANSFERASE. A Segunda protena do espermatozide que parece

ser importante para ligao espermatozides-zona a enzima da membrana celular do
espermatozide, glicosiltransferase. No laboratrio de Shur foi demonstrado que esse
receptor para a zona uma enzima que reconhece o acar N-acetilglicosamina na ZP3
(Shur e Hall, 1982a,b; Lopez et al., 1985; Miller et al., 1992). Essa enzima, N-
acetilglicosamina:galactosiltransferase, est embebida na membrana plasmtica do
espermatozide, diretamentre acima do acrossomo, com seu stio ativo apontando
para fora. A funo enzimtica dessa enzima de 60-kDa seria a de catalisar a adio de
um acar galactose (de UDP-galactose) para uma cadeia de carboidrato terminando
em um acar N-acetilglicosamina (veja Captulo 3). No entanto, no h resduos de
UDP-galactose no trato reprodutivo feminino. Embora a enzima possa se ligar aos
resduos de protenas da zona, exatamente como qualquer enzima se ligaria a um
substrato, ela no pode catalisar a reao porque o segundo reagente est faltando.
Portanto, as enzimas (no espermatozide) ficam ligadas a seus substratos (na zona).
Se essa hiptese estiver correta, poderamos esperar que a ligao vulo-es-
permatozide seria inibida ou pela inibio da enzima, ou pela adio do segundo
reagente, UDP-galactose. Isso exatamente o que Shur e colaboradores acharam
ser o caso. A ligao espermatozide-zona foi bloqueada por: (1) adio de UDP-
galactose, (2) remoo de resduos de N-acetilglicosamina de ZP3, (3) adio de
anticorpos que bloqueiam a atividade da galactosiltransferase, e (4) colocao de
um excesso de galactosiltransferase no meio (a enzima em excesso iria ligar-se zona
e inibir o espermatozide de se ligar) (Lopez et al., 1985; Shur e Neely, 1988). Alm
disso, membranas de espermatozide de camundongo iro transferir um acar de
UDP-galactose especificamente para ZP3 (Miller et al., 1992). Assim, a galactosil-
transferase da superfcie do espermatozide parece reconhecer um grupo carboidrato
na protena ZP3 da zona pelcida do camundongo. A agregao dessas
galactosiltransferases ocasiona a ativao de uma protena G que pode ser impor-
tante na iniciao da reao acrossmica (Gong et al., 1995).
RECEPTOR DE QUINASE DA ZONA (ZRK). Uma terceira protena espermtica

que se liga zona pelcida do camundongo parece ser uma protena transmembra-
na de 95-kDa com dois stios funcionais. O stio extracelular liga especificamente
ZP3, enquanto o stio intracelular tem atividade enzimtica de tirosina quinase
(Leyton et al., 1992). Essa atividade estimulada quando a protena liga ZP3. Isso
implica que a protena de 95-kDa uma tirosina quinase de receptor, e que pode
iniciar a reao acrossmica atravs da fosforilao das suas protenas alvo (veja
Captulo 3). O espermatozide humano tem uma protena semelhante, e a ZP3 hu-
mana estimula a atividade da quinase. Alm disso, peptdios sintticos que
mimetizam o domnio extracelular (que liga ZP3) dessa protena, inibem a ligao
do espermatozide zona pelcida humana, sugerindo possvel uso como
contraceptivo (Burks et al., 1995).
INDUO DA REAO ACROSSMICA EM MAMFEROS POR ZP3. Uma vez

que o espermatozide capacitado ligou-se zona pelcida, como ocorre a reao
acrossmica nos mamferos? A reao induzida pela poro protica de ZP3
(Endo et al., 1987; Leyton e Saling,1989a), e ZP3 parece atuar perfazendo ligao
cruzada com seus receptores na membrana espermtica. Esse tipo de ligao abre
os canais de clcio, aumentando a concentrao do on no espermatozide (Leyton
e Saling, 1992b). O mecanismo pelo qual age o ZP3 e a subseqente exocitose do
acrossomo permanece controversa, mas pode envolver a trajetria IP3 (Florman,
1994; Suarez e Dai, 1995). [fert5.html]
LIGAO SECUNDRIA DO ESPERMATOZIDE ZONA PELCIDA. Durante

a reao acrossmica, a parte anterior da membrana plasmtica do espermatozide
solta (veja Figura 4.10). ali que esto localizadas as protenas ligantes de ZP3 e,
ainda assim, o espermatozide deve permanecer ligado zona para abrir, por lise, um
caminho atravs dela. Em camundongos, parece que uma ligao secundria zona
conseguida por protenas na membrana acrossmica interna que se ligam especi-
ficamente a ZP2 (Bleil et al., 1988). Enquanto espermatozide com acrossomo intacto
no ir se ligar ZP2 glicoprotena, o espermatozide cujo acrossomo reagiu o far.
Alm disso, anticorpos contra a protena ZP2 no iro impedir a ligao do esper-
matozide com acrossomo intacto zona, mas iro inibir a fixao do espermatozide
que j tenha reagido. A estrutura da zona consiste de unidades repetitivas de ZP3 e
ZP1 ZP2, ocasionalmente ainda ligadas por ZP1 (Figura 4.18). Parece que os espermato-
zides com acrossomo que reagiram, transferem sua ligao com ZP3 para as mol-
culas adjacentes de ZP2. Aps a entrada de espermatozide de camundongo no vulo,
ZP2 os grnulos corticais do ovo liberam seu contedo. Uma das protenas liberadas a
protease que especificamente altera ZP2 (Moller e Wassarman, 1989). Isso inibe ou-
tros espermatozides, cujo acrossomo j reagiu, de mover-se mais para perto do vulo.
Resduos de No conhecido quais das protenas do espermatozide do camundongo se
ZP3 carboidratos
ligam ZP2. No espermatozide porcino, ligao secundria zona parece ser medi-
ada por proacrosina. Proacrosina torna-se a protease acrosina, h muito tempo co-
nhecida por estar envolvida na digesto da zona pelcida. No entanto, proacrosina
tambm uma protena ligante da fucose que mantm a conexo entre espermatozi-
de que reagiu com acrosina e a zona pelcida (Jones et al., 1988). possvel que a
proacrosina se ligue zona, sendo depois convertida na enzima ativa que digere
localmente a zona pelcida.
Figura 4.18 Na cobaia, ligao secundria zona considerada ser mediada pela protena
Diagrama da estrutura fibrilar da zona pelcida PH-20. Quando essa protena da membrana acrossmica interna foi injetada em
do camundongo. Filamentos principais da
cobaias macho ou fmea, 100% desses animais tornaram-se estreis por vrios me-
zona pelcida so compostos por dmeros
repetitivos das protenas ZP2 e ZP3. Esses ses (Primakoffet al., 1988). O soro sangneo dessas cobaias estreis tinha uma
filamentos esto ocasionalmente ligados por concentrao extremamente alta de anticorpos para PH-20. O anti-soro de cobaias
ZP1, formando uma esteira de malhas. (Se- esterilizadas por injees de PH-20 no s se ligou especificamente a essa pro-
gundo Wassarman, 1989.) tena, como tambm bloqueou a adeso espermatozide-zona in vitro. O efeito
contraceptivo perdurou por vrios meses, aps os quais a fertilidade foi restabelecida.
Os animais foram temporariamente esterilizados por esses anticorpos. O anlogo
humano da protena PH-20 no ainda conhecido, porm, certos antgenos do es-
permatozide apresentam um padro semelhante de localizao no espermatozide.
As protenas da zona pelcida humana e suas funes ainda no foram estabeleci-
das to claramente como no camundongo. Ainda assim, esses experimentos mos-
tram que o princpio da contracepo imunolgica est bem fundamentado.
Fuso de gametas e a preveno da polispermia

Fuso entre as membranas do vulo e do espermatozide
O reconhecimento do espermatozide pelo envoltrio vitelnico ou zona seguido

pela lise da poro do envoltrio ou zona na regio da cabea do espermatozide
(Colwin e Colwin, 1960; Epel, 1980). Essa lise seguida pela fuso da membrana
espermtica com a membrana do vulo.
A entrada do espermatozide no vulo do ourio-do-mar est ilustrada na Figura
4.19. A superfcie do vulo est coberta de pequenas microvilosidades; a fuso
espermatozide-vulo parece causar a polimerizao da actina e a extenso de vrias
microvilosidades para formar o cone de fertilizao (Summers et al., 1975; Schatten
e Schatten, 1980, 1983). A homologia entre vulo e espermatozide novamente
(A) (B)
Figura 4.19
Varredura ao microscpio eletrnico da entrada
do espermatozide em vulo de ourio-do-mar.
(A) Contato da cabea do espermatozide com
microvilosidades do vulo atravs do processo
acrossmico. (B) Formao do cone de fertili-
zao. (C) Internalizao do espermatozide no
vulo. (D) Micrografia de transmisso ao mi-
croscpio eletrnico da internalizao do es-
permatozide atravs do cone de fertilizao.
(A-C de Schatten e Mazia, 1976, cortesia de G.
Schatten; D cortesia de F. J. Longo.)
(C) (D)
demonstrada, porque o cone de fertilizao transitrio, tal como o processo

acrossmico, parece se prolongar pela polimerizao da actina. Aps a juno, pode-
se encontrar material do espermatozide na membrana do vulo (Gundersen et al.,
1970). O ncleo e a cauda do espermatozide passam pela ponte citoplasmtica, que
alargada pela polimerizao da actina. Yanagimachi e Noda (1970) mostraram que
processo semelhante ocorre na fuso de gametas de mamferos (Figura 4.20).
No ourio-do-mar, todas as regies do vulo so capazes de se fundir com o
espermatozide; em vrias outras espcies, existem regies especializadas na mem-
brana para o reconhecimento e fuso com o espermatozide (Vacquier, 1979). A
fuso um processo ativo, freqentemente mediado por protenas fusognicas
especficas. Protenas como a HA do vrus da influenza e a protena F do vrus
Sendai promovem a fuso celular, sendo possvel que a bindina tambm seja uma
dessas protenas. Glabe (1985) mostrou que a bindina do ourio-do-mar promove a
fuso de vesculas fosfolipdicas e que, tal como as protenas fusognicas virais, a
bindina contm uma longa regio de aminocidos hidrofbicos perto do terminal
amino. Em abalones, a lisina que dissolve o envoltrio vitelnico tambm demons-
trou ter atividade fusognica (Hong e Vacquier, 1986).
As protenas fertilinas da membrana do espermatozide dos mamferos so
essenciais para fuso espermatozide-vulo (Primakoff et al., 1987; Blobel et al.,
1992; Myles et al., 1994). A fertilina do camundongo tem regies hidrofbicas seme-
lhantes s das protenas fusognicas virais, alm de uma seqncia que sugere
ligao com uma integrina da membrana do vulo. Evidncia atual sugere que a
fertilina do camundongo liga-se integrina 61 da membrana assumindo-se que a
regio hidrofbica da fertilina pode, em seguida, mediar a unio das duas membra-
nas (Almeida et al., 1995). Quando as membranas se fundem, o ncleo, mitocndrias,
centrolo e flagelo podem penetrar no ovo.
Preveno da Polispermia
Assim que um espermatozide tiver penetrado o vulo, a capacidade de fuso da
membrana do vulo, que fora to necessria para conseguir a penetrao, torna-se
um risco. No ourio-do-mar, como na maioria dos animais estudados, qualquer es-
permatozide que penetra o vulo, pode prover um ncleo haplide e um centrolo
para o vulo. Na monospermia normal, na qual somente um espermatozide penetra
o vulo, um ncleo haplide do espermatozide e um do vulo se combinam para
formar o ncleo diplide do ovo fertilizado (zigoto), restaurando o nmero de cro-
mossomos apropriado para a espcie. O centrolo, provindo do espermatozide, se
dividir para formar os dois plos do fuso mittico durante a clivagem.
A entrada de mltiplos espermatozides polispermia conduz conse-
qncias desastrosas na maioria dos organismos. No ourio-do-mar, a fertiliza-
o por dois espermatozides resulta em um ncleo triplide, no qual cada
cromossomo est representado no duas, mas trs vezes. Pior ainda, como o
centrolo se divide para formar os dois plos do aparelho mittico, aqui, em
vez de um fuso mittico bipolar separar os cromossomos em duas clulas, os
cromossomos triplides se dividiriam em quatro clulas. Como no h meca-
nismos para assegurar que cada uma das quatro clulas receba o nmero e o
tipo apropriado de cromossomos, esses sero distribudos de maneira desigual.
Algumas clulas receberiam cpias extra de certos cromossomos e outras c-
lulas no os teriam. Theodor Boveri demonstrou em 1902 que tais clulas ou
morreriam ou se desenvolveriam anormalmente (Figura 4.21). [fert6.html]
As espcies desenvolveram maneiras de prevenir a unio de mais de dois
ncleos haplides. A mais comum a de impedir a entrada de mais de um
espermatozide no vulo. O vulo do ourio-do-mar tem dois mecanismos que
evitam a polispermia: uma reao rpida, efetivada por uma mudana eltrica
na membrana plasmtica do vulo, e uma reao mais lenta, causada pela
exocitose dos grnulos corticais.
(A) (B) (C)
Zona
Segmento
(E) Ncleo equatorial do
Membrana
acrossomo
acrossmica
interna
Figura 4.20
Entrada de espermatozide no vulo do hamster dourado. (A) Micrografia eletrnica de
varredura do ato da fuso. O ponto calvo (sem microvilosidades) o local abandona-
do pelo corpo polar. (B) Vista prxima da ligao espermatozide-zona. (C ) Microgra-
fia eletrnica de transmisso mostrando a cabea do espermatozide atravessando a
zona. (D) Micrografia eletrnica de transmisso, do espermatozide fundindo em para-
lelo a membrana do plasma do vulo. (E) Diagrama da fuso do acrossomo do esper-
matozide e membranas plasmticas com as microvilosidades do vulo. (Segundo
Yanagimachi e Noda, 1970; Yanagimachi, 1994; fotografias cortesia de R. Yanagimachi.)
O BLOQUEIO RPIDO DA POLISPERMIA. A membrana celular do vulo notvel

no somente por sua habilidade de se fundir com a membrana espermtica, mas tam-
bm por sua capacidade de resistir a uma ulterior fuso imediatamente aps a entrada
de um espermatozide (Just, 1919).
O bloqueio rpido polispermia, conseguido pela mudana do potencial eltrico
da membrana do vulo. Essa prov uma barreira seletiva entre o citoplasma e o ambi-
ente exterior; a concentrao inica do vulo difere muito daquela do ambiente, uma
diferena especialmente pronunciada para os ons de sdio e potssio. A gua do mar
tem uma alta concentrao do on sdio, ao passo que o citoplasma do vulo tem
relativamente pouco sdio. O oposto acontece com os ons potssio. Essa condio
mantida pela membrana celular, que constantemente inibe a entrada de sdio no
(A) Figura 4.21

Centrossomo do Desenvolvimento aberrante de um vulo de ourio-do-mar fecundado por dois espermato-
espermatozide
Ocito zides. (A) Fuso de trs ncleos haplides, cada um contendo 18 cromossomos, e
diviso dos dois centrolos espermticos para formar quatro plos mitticos. (B, C) Os
Proncleos 54 cromossomos se distribuem aleatoriamente nos quatro fusos. (D) Na anfase da
do esperma- Proncleos
primeira diviso, os cromossomos duplicados so arrastados para os quatro plos. (E)
tozide do ocito Quatro clulas contendo nmeros e tipos diferentes de cromossomos so formadas,
causando a morte prematura do embrio (F). (Segundo Boveri, 1907.)
Fuso pronuclear
(B)
ocito e impede o escoamento de ons de potssio para o ambiente. Quando inse-

rimos um eletrodo no vulo e colocamos um outro fora do ocito, podemos medir
a constante diferena potencial da membrana plasmtica do vulo. Esse potencial
1a clivagem de repouso da membrana geralmente cerca de 70 mV, e usualmente expresso
(C)
como 70 mV porque o interior da clula est carregado negativamente em relao
ao exterior. [fert7.html]
Dentro de 1-3 segundos aps a ligao do primeiro espermatozide, o potencial
da membrana muda para um nvel positivo (Longo et al., 1986). Um pequeno influxo
de ons de sdio no vulo permitido, trazendo a diferena de potencial para +20 mV
(Figura 4.22 A). Embora o espermatozide possa se fundir com membranas tendo um
potencial de 70 mV, no pode se fundir com membranas com um potencial de repou-
so positivo. No conhecido como a ligao ou a entrada do espermatozide sina-
(D) liza a abertura dos canais de sdio; porm, Gould e Stephano (1987, 1991) fornece-
ram o que poder ser uma pista importante para a compreenso desse processo. Os
autores isolaram do espermatozide de Urechis (um verme equiuride marinho) uma
protena cromossmica capaz de abrir canais de sdio de vulos de Urechis. Quan-
do tais vulos so expostos a essa protena, a mudana da velocidade do influxo de
sdio e do potencial de membrana resultante so muito parecidos com aqueles
produzidos pelo espermatozide vivo. A abertura dos canais de sdio no vulo,
parece ser causada pela ligao do espermatozide ao vulo.
Jaffe e seus colaboradores mostraram que a polispermia podia ser induzida
quando vulos foram supridos artificialmente com uma corrente eltrica que man-
(E)
tinha negativo o seu potencial de membrana. Reciprocamente, a fertilizao podia
ser inteiramente prevenida conservando tal potencial positivo (Jaffe, 1976). O
bloqueio rpido da polispermia podia tambm ser evitado baixando-se a concen-
trao do sdio da gua (Figura 4.22B-D). Se os ons de sdio no forem suficien-
tes para ocasionar um deslocamento positivo do potencial de membrana, ocorre a
polispermia (Gould-Somero et al., 1979; Jaffe, 1980). No conhecido como dife-
renas no potencial de membrana atuam sobre o espermatozide bloqueando a
segunda fecundao. Muito provavelmente, o espermatozide conduz um compo-
(F) nente (possivelmente uma protena fusognica carregada positivamente), sendo a
insero desse componente na membrana do vulo, provavelmente, regulada pela
carga eltrica transmembrana (Iwao e Jaffe, 1989). Um bloqueio eltrico polispermia
tambm ocorre em rs (Dross e Elinson, 1980), mas provavelmente no na maioria
dos mamferos (Jaffe e Cross, 1983).
Clulas em desintegrao; O BLOQUEIO LENTO DA POLISPERMIA. vulos do ourio-do-mar (e muitos ou-

morte do embrio tros) tm um segundo mecanismo para assegurar que mltiplos espermatozides no
penetrem no citoplasma do vulo (Just, 1919). O bloqueio rpido transitrio, o po-
tencial de membrana do vulo do ourio-do-mar somente permanece positivo por
cerca de um minuto. Essa curta mudana de potencial no suficiente para prevenir a
polispermia de maneira permanente. Carroll e Epel (1975) demonstraram que a
Figura 4.22
Potencial de membrana de vulos de ourio-do-mar antes
e aps a fertilizao. (A) antes da adio do espermato-
zide, a diferena de potencial atravs da membrana celu-
lar do vulo de aproximadamente 70 mV. De 1 a 3 se-
gundos aps o espermatozide fertilizante ter entrado em
Adio de contato com o vulo, o potencial se desloca na direo
espermatozide positiva. (B) Ovos controle desenvolvendo-se em Na+
490 mM. (C) Polispermia em ovos fertilizados em Na+
(A) 120 mM (colina foi substituda por sdio). Os ovos de
Segundos Lytechinus foram fotografados durante a primeira
clivagem. (D) Tabela mostrando a elevao da polispermia
com o decrscimo da concentrao do on sdio. (de Jaffe,
1980, fotografias cortesia de L. A. Jaffe.)
Porcentagem de
[Na+] (mM) ovos polisprmicos
(B) (C) (D)
polispermia ainda pode ocorrer se os espermatozides ligados ao envoltrio

vitelnico no forem removidos de alguma maneira. Essa remoo conseguida
pela reao dos grnulos corticais, um bloqueio mecnico mais lento da polispermia
que se torna ativo cerca de 1 minuto aps a primeira ligao bem sucedida esper-
matozide-vulo.
Diretamente abaixo da membrana do vulo do ourio-do-mar existem 15.000
grnulos corticais, cada um com 1 um de dimetro (veja Figura 4.6B). Com a entra-
da do espermatozide, esses grnulos se fundem com a membrana plasmtica do
vulo, liberando seu contedo para o espao entre a membrana e a esteira fibrosa
das protenas do envoltrio vitelnico. H vrias protenas associadas com esse
processo de exocitose de grnulos corticais. As primeiras so proteases. Essas
enzimas dissolvem os postos vitelnicos que conectam as protenas do envoltrio
vitelnico membrana celular, secionando o receptor de bindina e todo espermato-
zide a ele ligado (Vacquier et al., 1973; Glabe e Vacquier, 1978). Outras protenas,
mucopolissacardeos liberados dos grnulos, produzem um gradiente osmtico
que permite a entrada da gua no espao entre a membrana celular e o envoltrio
e, dessa forma, o envoltrio vitelnico se expande e passa a ser chamado de
envoltrio de fertilizao (Figuras 4.23 e 4.24). Uma terceira protena, produto dos
grnulos corticais, uma peroxidase, enrijece o envoltrio de fertilizao atravs de
ligaes cruzadas entre resduos de tirosina em protenas adjacentes (Foerder e
Shapiro, 1977; Mozingo e Chandler, 1991). Como mostra a Figura 4.23, o envoltrio
de fertilizao comea a se formar no local da entrada do espermatozide e conti-
nua sua expanso ao redor do vulo. medida que esse envoltrio se forma, os
espermatozides so liberados. O processo se inicia cerca de 20 segundos aps a
fixao do espermatozide e se completa ao fim do primeiro minuto da fertilizao.
Finalmente, uma quarta protena granular, a hialina, forma uma capa em volta do
vulo (Hylander e Summers, 1982). A clula estende microvilosidades alongadas
cujas extremidades se ligam a essa camada hialina, que fornece apoio para os
blastmeros durante a clivagem.
Em mamferos, a reao granular no cria um envoltrio de fertilizao, porm, o
efeito o mesmo. Enzimas liberadas modificam os receptores de espermatozide da
Figura 4.23 (A) (B)

Formao do envoltrio de fertilizao e remo-
o do excesso de espermatozide. Espermato-
zide foi adicionado a vulos de ourio-do-mar,
e a suspenso foi fixada em formaldedo para
evitar futuras reaes. (A) Dez segundos aps
a adio de espermatozide, esses foram vistos
rodeando o vulo. (B,C) 25 e 35 segundos aps
a inseminao, um envoltrio de fertilizao se
forma em volta do vulo, iniciado no ponto de
entrada do espermatozide. (D) O envoltrio
de fertilizao est completo, e o excesso de
espermatozide removido. (de Vacquier e
Payne, 1973, cortesia de V. D. Vacquier.)
(C) (D)
zona pelcida de maneira que esses no mais podem ligar-se a espermatozide (Bleil
e Wassarman, 1980). Essa modificao chamada reao da zona. Durante essa
reao, tanto ZP3 como ZP2 so modificadas. Florman e Wassarman (1985), propu-
seram que os grnulos corticais do vulo do camundongo contm uma enzima que
corta os resduos terminais de acares de ZP3, com isso liberando espermatozide
ligado zona e evitando a fixao de mais espermatozide. Esses grnulos corticais
contm N-acetilglicosaminidases capazes de clivar N-acetilglicosamina de cadeias
de carboidrato de ZP3. Miller e colaboradores (1992, 1993) demonstraram que aps
a fertilizao, o resduo de N-acetilglicosamina removido, ZP3 no serve como
substrato para a ligao de galactosiltransferase. ZP2 cortada pelas proteases
granulares perdendo tambm sua habilidade de ligar espermatozide (Moller e Was-
sarman, 1989). Assim, o espermatozide no pode mais iniciar ou manter sua ligao
zona pelcida e rapidamente descartado.
CLCIO COMO O INICIADOR DA REAO GRANULAR CORTICAL . O meca-

nismo da reao dos grnulos corticais semelhante aquele da reao acrossmica.
Aps a fertilizao, a concentrao intracelular de clcio do ovo aumenta muito.
Nessas concentraes, as membranas corticais se fundem com aquelas do ovo,
causando exocitose de seu contedo (veja Figura 4.24). Aps a fuso dos grnulos
corticais ao redor do ponto de entrada do espermatozide, uma onda de exocitose se
propaga ao redor do corte at o lado oposto do ovo.
A liberao de clcio armazenado na regio intracelular, pode ser monitorada visu-
almente pelo uso de corantes luminescentes (isolados da gua-viva luminescente)
como a aequorina ativado pelo clcio, ou de corantes como fura-2. Esses corantes
emitem luz quando ligam ons livres de clcio. Os vulos so injetados com o corante
e fecundados. A Prancha 12 mostra a notvel onda de liberao de clcio que se
propaga atravs do vulo do ourio-do-mar; comeando no ponto de entrada do
(i) Membrana plasmtica Figura 4.24

Envoltrio do vulo Microvilosidade Exocitose de grnulos corticais. (A) Diagrama
vitelnico esquemtico mostrando os eventos levando
formao do envoltrio de fertilizao e a ca-
mada hialina. medida que os grnulos
corticais sofrem exocitose, liberam proteases
que cortam as protenas que ligam o envoltrio
vitelnico membrana celular. Mucopolissa-
Grnulo cardeos liberados pelos grnulos formam um
cortical
(B) gradiente osmtico, causando a entrada de gua
Espermatozide
supranumerrio no e tumefao do espao entre o envoltrio
(ii)
envoltrio vitelnico vitelnico e a membrana celular. Outras enzimas
liberadas dos grnulos corticais endurecem o
envoltrio vitelnico (agora o envoltrio de fer-
tilizao) e liberam espermatozide a ele liga-
do. (B,C) Micrografias eletrnicas de trans-
misso e de varredura do crtex de um ovo no
fertilizado de ourio-do-mar. (D, E) Microgra-
Enzimas proteolticas e fias eletrnicas de transmisso e varredura da
mucopolissacardeos so liberados (C) mesma regio de um ovo recm-fertilizado,
(iii) mostrando a elevao do envoltrio de fertili-
zao e os pontos nos quais os grnulos
corticais fundiram com a membrana plasmti-
ca do ovo (flechas em D). (A segundo Austin,
1965; B-E de Chandler e Heuser, 1979, corte-
sia de D. E. Chandler.)
Microfilamentos
Hialina
(iv) Envoltrio de (D)
fertilizao
Espermatozide liberado
Membrana
Camada hialina celular
(A) (E)
espermatozide um feixe de luz atravessa a clula (Steinhardt et al., 1977; Gilkey et al.,
1978; Hafner et al., 1988). Como documentado pelas fotografias, os ons de clcio no
se difundem simplesmente atravs do vulo a partir do ponto da entrada do esperma-
tozide. Ao contrrio, a liberao de clcio inicia-se de um lado da clula e termina do
outro. O mecanismo dessa onda ser discutido logo adiante (veja Informaes adici-
onais & Especulaes, pgina 147). A total liberao de ons de clcio completada, a
grosso modo, em 30 segundos no ovo do ourio-do-mar; os ons livres de clcio so
re-seqestrados pouco aps sua liberao. Quando dois espermatozides entram no
citoplasma do vulo, a liberao de clcio pode ser vista comeando em dois pontos
separados da superfcie celular (Hafner et al., 1988).
Vrios experimentos demonstraram que ons de clcio so responsveis diretos
pela propagao da reao cortical e que so armazenados dentro do prprio vulo.
A droga A23187 um ionforo que transporta ons de clcio atravs de membranas,
permitindo a esses ctions atravessar barreiras antes impermeveis. A colocao de
ovos no-fertilizados de ourio-do-mar em gua do mar contendo A23187, leva

reao granular cortical e elevao do envoltrio de fertilizao, mesmo na ausn-
cia de ons de clcio na gua do mar. Portanto, A23187 provoca a liberao de ons
de clcio j seqestrados em organelas dentro do vulo (Chambers et al., 1974;
Steinhardt e Epel, 1974). Estudos posteriores (Hollinger e Schuetz, 1976; Fulton e
Whittingham, 1978; Hamaguchi e Hiramoto, 1981; Kline, 1988) mostraram que o on
de clcio inicia reaes granulares corticais quando injetado em ovos de ourio-do-
mar, camundongo e r.
Os ons de clcio internos so armazenados no retculo endoplasmtico do
vulo (Eisen e Reynolds, 1985; Terasaki e Sardet, 1991). No ourio-do-mar e na r,
cujos vulos sofrem uma reao granular cortical, esse retculo pronunciado no
crtex e rodeia os grnulos (Figura 4.25; Gardiner e Grey, 1983; Luttmer e Longo,
1985). Na r Xenopus, o retculo endoplasmtico cortical fica 10 vezes mais abun-
dante durante o amadurecimento do vulo e desaparece localmente dentro de um
minuto aps a ocorrncia da onda de exocitose em qualquer regio do crtex. Jaffe
(1983) compara esse retculo endoplasmtico seqestrador de clcio, ao retculo
sarcoplasmtico do msculo esqueltico ou cardaco. Uma vez iniciada, a libera-
o de clcio autopropagada. Clcio livre capaz de liberar clcio seqestrado
de seus locais de armazenamento, causando assim uma onda libertadora do on
clcio e exocitose granular cortical.
Variaes em estratgias preventivas da polispermia existem em toda a nature-
za. Nos mamferos, a polispermia minimizada pelo pequeno nmero de esperma-
tozides que atingem o local da fecundao (Braden e Austin, 1954). O bloqueio
polispermia em hamsters parece ser controlado somente pela liberao de stios
que ligam o espermatozide na zona pelcida (Miyazaki e Igusa, 1981; Jaffe e
Gould, 1985). Coelhos, no entanto, se apoiam num bloqueio da polispermia a nvel
da membrana, e ningum iria disputar o seu grau de sucesso. Finalmente, certos
mamferos tm defesas para a polispermia sobre as quais pouco sabemos. Nos
vulos ricos em gema de certas aves, rpteis e salamandras, vrios espermatozi-
des realmente penetram o citoplasma do vulo. De uma maneira desconhecida,
todos menos um so induzidos a se desintegrar no citoplasma aps a fuso do
proncleo do vulo com um dos proncleos do espermatozide (Ginzburg, 1985;
Elinson, 1986). Qualquer que seja o mecanismo, somente um ncleo haplide de
espermatozide pode fundir-se com o ncleo haplide do vulo.
Figura 4.25
Retculo endoplasmtico rodeando grnu-
lo cortical no vulo de ourio-do-mar. (A)
O retculo foi corado com smio-iodeto de
zinco para permitir a visualizao por mi-
crografia de transmisso eletrnica. O gr-
nulo visto rodeado pelo retculo. (B) Re-
trato de um vulo inteiro corado por anti-
corpos fluorescentes para os canais de li-
berao de clcio. Os anticorpos mostram
esses canais no retculo endoplasmtico
cortical. (A de Luttmer e Longo, 1985, cor-
tesia de S. Luttmer; B de McPherson et
al., 1992, cortesia de F. J. Longo.) (A) (B)
& Especulaes
A Ativao do Metabolismo dos Gametas

S e a liberao do on clcio neces-
sria para ativao do ocito, como
o espermatozide motiva essa libe-
rao? Realmente no se sabe. Como se
toda clula, comeando no ponto da en-
trada do espermatozide; os grnulos
corticais se fundem com a membrana
celular na presena de concentraes
nio das clulas. O resultado disso a ele-
vao de clcio e do pH intracelulares.
O outro segundo mensageiro, DAG,
considerado ativar a protena quinase
pronunciou um investigador (Berridge, altas de clcio, respondem com uma C (PKC) da membrana, que transferida
1993): Exatamente como o espermatozi- onda de exocitose que segue os ons do citosol para a membrana plasmtica
de dispara o processo explosivo da libe- de clcio. do ovo pouco aps a fecundao, e pode
rao do clcio no vulo, ainda permane- IP 3 tambm capaz de liberar ons ser responsvel pela ativao da prote-
ce algo misterioso. Dados recentes su- de clcio em vulos de vertebrados, e o na que troca ons de sdio por ons de
gerem que produo do inositol 1,4,5, tri- bloqueio do seu receptor em vulos de hidrognio (Swann e Whitaker, 1986;
fosfato (IP3) o evento primrio para a hamster impede a liberao de clcio no Nishizuka, 1986; Shen e Burgart, 1986;
liberao de ons clcio do seu local de ato da fertilizao. Como em ourio-do- Olds et al., 1995). O bloqueio da PKC em
armazenamento intracelular. mar IP3 tambm parece mediar a libera- vulos de ourios-do-mar inibe a alcali-
IP3 injetado pode liberar ons clcio o de clcio de stios no retculo en- nizao do citosol observada durante a
seqestrados no vulo e muitos outros doplasmtico (Lechleiter e Clapham, fertilizao normal (Shen e Buck, 1990).
tipos de clulas (Swann e Whitaker, 1992; Miyazaki et al., 1992; Ayabe et al., A protena que faz a troca Na + /H+, tam-
1986; Berridge, 1993); o aumento na con- 1995). Xu e colaboradores (1994) mos- bm necessita de ons clcio para sua
centrao de IP 3 intracelular visto traram que o bloqueio da mediao por atividade. Assim, tanto DAG como IP 3
ocorrer dentro de 10 segundos aps a IP3 da sada de clcio, impede todos os esto envolvidos nas ativao do vu-
fecundao de ovos do ourio-do-mar aspectos da ativao do vulo pelo es- lo. A etapa regulatria chave a ativa-
(Ciapa e Whitaker, 1986). A libertao permatozide incluindo exocitose gra- o da fosfolipase C, que produz esses
de ons clcio e a reao dos grnulos nular, recrutamento de mRNA e recome- dois compostos. Jaffe e seus colabora-
corticais rapidamente seguem a forma- o do ciclo celular. dores encontraram a protena G em vu-
o ou injeo de IP3 (Whitaker e Irvine, A questo ento : o que inicia a pro- los de ourio-do-mar e r; e quando in-
1984; Busa et al., 1985). Os efeitos me- duo de IP3? H dois caminhos que pa- jetaram ativadores da protena G nes-
diados por IP3 podem ser abortados pela recem estimular a liberao de clcio: aque- ses vulos, causaram exocitose granu-
pr-injeo de agentes quelantes de le do receptor ligado protena G, larga- lar na ausncia de espermatozide
clcio no vulo (Turner et al., 1986), mente conhecido como liberadora de ons (Turner et al., 1986; Kline et al., 1991).
confirmando que IP3 estimula a libera- de clcio na contrao muscular, cresci- Tal ativao foi inibida por quelantes
o de clcio armazenado. mento celular, secreo hormonal, percep- de clcio, como o EGTA. [fert8.html]
Canais de clcio respondendo ao IP3 o sensorial e liberao de neurotrans- Parece, portanto, que uma protena
foram encontrados no retculo endo- missores (Berridge, 1993). O outro cami- G pode estar envolvida na regulao de
plasmtico do vulo. O IP3 formado no nho o do receptor da tirosinoquinase ons seqestrados de clcio, e na exoci-
local da entrada do espermatozide em cascata, que tambm usado na proli- tose de grnulos corticais. Existem vri-
considerado ligar-se a esses receptores ferao e diferenciao celular. Conforme as maneiras pelas quais isso pode acon-
de IP3 no retculo endoplasmtico, oca- apresentado no Captulo 3, o primeiro ca- tecer. Em primeiro lugar, a ligao do es-
sionando uma liberao local de clcio minho se inicia pela ligao de um ligante permatozide a um receptor na membra-
(Ferris et al., 1989; Furuichi et al., 1989; extracelular (como a acetilcolina ou a na celular do vulo pode mudar a sua
Terasaki e Sardet, 1991). Uma vez libera- serotonina) uma protena receptora conformao de modo a ativar a prote-
dos, os ons de clcio podem difundir transmembrana. No interior da membrana na G e iniciar a cascata (Figura 4.26A),
diretamente, ou facilitar a liberao de plasmtica esse receptor ligado prote- conforme demonstrado por Kline e co-
mais ons de clcio de receptores sens- na trimrica G. Esse receptor ativa a pro- laboradores (1988, 1991). Eles levanta-
veis ao clcio localizados no retculo en- tena G (veja Figuras 3.33 e 3.35), levando ram a hiptese que se essa protena
doplasmtico (McPherson et al., 1992). sua dissociao em subunidades, capa- mediar a fertilizao por ser ativada por
A ligao de ons de clcio a esses re- zes de ativar um conjunto de enzimas cha- um receptor ligante de espermatozide,
ceptores libera mais clcio, e esse pode madas de fosfolipase C. Essa cataliza a ento a mesma protena G poderia ser
continuar a onda, ligando-se a mais re- hidrlise de fosfatidilinositol 4,5-bifosfato ativada por um neurotransmissor se o
ceptores e assim por diante. Mohri e co- (PIP2) em dois segundos mensageiros: ovo contiver um receptor para neuro-
laboradores (1995) mostraram que o cl- inositol 1,4,5 trifosfato (IP3) e diacilglicerol transmissor capaz de ativar a protena
cio liberado por IP3 necessrio e sufi- (DAG). O primeiro capaz de abrir canais G. Eles injetaram mRNA para o receptor
ciente para liberao de clcio. Essa de clcio. DAG estimula a troca de prtons de serotonina ou de acetilcolina em vu-
onda de ons de clcio propagada por que permite o efluxo de ons de hidrog- los de r. Esses receptores da superfcie
celular foram sintetizados e foram de- Entretanto, a cascata ligada prote- PDGF) foi injetado em ocitos de estre-
tectados na membrana celular do vu- na-G no o nico caminho capaz de ge- la-do-mar, o receptor PDGF foi sintetiza-
lo. Os vulos puderam ser fertilizados rar IP3 (veja Captulo 3). Evidncias re- do e incorporado nas membranas celula-
por serotonina e acetilcolina e foi ob- centes (Moore et al., 1994; Shilling et al., res desse organismo. Quando, aps a
servado a reao cortical. Experimentos 1994; Yim et al., 1994) demonstram que a maturao dos ocitos, PDGF foi adicio-
semelhantes mostraram que quando ativao do receptor da tirosinoquinase nado gua banhando os vulos, esses
neurotransmissores ativam o caminho tambm produz IP3 e ativa a onda de cl- apresentaram aumento de clcio intrace-
da protena GIP3 em ocitos de camun- cio e a reao granular cortical (Figura lular livre, exocitose de grnulos corticais
dongo, so induzidos os eventos da fer- 4.26b). Quando o mRNA para o receptor e sntese de DNA. Alguns se desenvol-
tilizao (Williams et al., 1992; Moore et dessa quinase (o receptor para o fator de veram em larvas. Quando o mRNA con-
al., 1993). crescimento derivado das plaquetas, tinha um ponto de mutao que impedia
Figura 4.26
Mecanismos possveis da ativao do vulo. (A) Trajetria do fosfatidilinositol medi-
ado pela G-protena. (B) Trajetria do receptor da tirosinoquinase (RTK). (C) Trajet-
ria da tirosinoquinase citoplasmtica. (D) Trajetria na qual a G protena ou
tirosinoquinase ativadas na membrana espermtica ativam trajetrias no vulo. (E)
Trajetrias de ativadores solveis.
CAMINHOS ANTERIORES FUSO DO ESPERMATOZIDE
(A) (B) (C)

Espermatozide
Fosfolipase C (PLC)
Receptor
G-protena
Receptor de Tirosinoquinase
Tirosinoquinase
Receptor de IP3
Retculo endoplasmtico
APS A FUSO DO ESPERMATOZIDE

(D)
Fator solvel Fatores solveis

do vulo do Espermatozide
G-protena
Receptor de IP3
Retculo endoplasmtico
o receptor interagir com a fosfolipase C, Outra possibilidade que a ativa- gura 4.26 D, a bindina meramente liga o
nenhuma dessas reaes ocorreu (Shilling o do caminho do IP3 no devida vulo ou, talvez, motive a fosforilao
et al., 1994). Assim, tanto o caminho liga- ligao do espermatozide e vulo, mas de protenas necessrias em fases mais
do ao receptor protena-G como aquele fuso das membranas do vulo e do avanadas do desenvolvimento.)
do receptor da tirosinoquinase, parecem espermatozide. Mc Culloch e Chambers Ainda outra possibilidade que o
ser capazes de ativar essa fosfolipase, (1992) obtiveram evidncia eletrofisio- agente ativo na liberao de clcio ligado
criar IP3 e induzir o fluxo de clcio no lgica que a ativao dos vulos do venha do citosol do espermatozide.
vulo. O receptor da bindina no ofere- ourio-do-mar no ocorre at depois da Parrington e colaboradores (1996) isola-
ce pistas para explicar como ocorre essa juno do espermatozide com o vulo. ram uma protena de 33-kDA, chamada
ativao, por no ter semelhante em ou- Eles sugerem que os componentes oscilina, localizada no escasso citoplas-
tras protenas transmembrana. No entan- ativadores do vulo se localizam na ma da cabea do espermatozide (Figura
to, 5 segundos aps ligar a bindina, fica membrana ou no citoplasma do esper- 4.26 E). A microinjeo dessa protena em
fosforilado em um dos seus resduos matozide. at mesmo possvel que vulos de camundongo pode iniciar libe-
tirosina citoplasmticos (Abassi e Foltz, por ocasio da fuso das membranas, rao de clcio, porm, os outros parme-
1994). Isso sugere que o receptor de as protenas G da membrana espermti- tros da ativao do vulo (exocitose dos
bindina ligado, pode interagir com a ca ou as tirosinoquinases (ativadas pela grnulos, recrutamento de mRNA e reto-
tirosinoquinase plasmtica tal como gelia do vulo para iniciar a reao a- mada do ciclo celular) no so observa-
aqueles que medeiam a liberao de cl- crossmica) ativem a cascata polifosfo- dos. No conhecido qual o papel que
cio durante a ativao de clulas T (Fi- inositdica para liberao de clcio do essa protena pode ter na fisiologia da ati-
gura 4.26 C; Hall et al., 1993). vulo. (No cenrio apresentado na Fi- vao do vulo.
Ativao do metabolismo do vulo

Embora a fertilizao seja freqentemente descrita como mero meio de juno de dois
ncleos haplides, ela tem um papel igualmente importante na iniciao de processos
que iniciam o desenvolvimento. Esses eventos acontecem no citoplasma e ocorrem
sem o envolvimento dos ncleos.*
O vulo do ourio-do-mar maduro uma clula metabolicamente lenta, reativada
pelo espermatozide. Essa ativao apenas o estmulo; aciona um conjunto de
eventos metablicos pr-programados. As respostas do vulo ao espermatozide
podem ser divididas em precoces que ocorrem em poucos segundos aps a
reao cortical e tardias que acontecem vrios minutos aps o inicio da fertiliza-
o (Tabela 4.1).
Respostas precoces
O contato entre o espermatozide do ourio-do-mar ativa dois principais bloqueios
polispermia: o bloqueio rpido, iniciado pelo influxo de sdio na clula, e o bloqueio
lento, iniciado pela liberao intracelular de ons de clcio. A ativao de todos os
vulos parece depender do aumento da concentrao de ons livres de clcio dentro
do vulo. Em protostomatas, como lesmas e vermes, ao menos parte do clcio geral-
mente entra no vulo vindo de fora. Em deuterostomatas, tais como: peixes, rs,
ourios-do-mar e mamferos, a ativao acompanhada pela liberao de ons de
clcio do retculo endoplasmtico, resultando na onda de clcio varrendo o vulo
(Jaffe, 1983; Terasaki e Sardet, 1991).
*Em certas salamandras, essa funo desenvolvimental da fertilizao est totalmente divor-
ciada da funo gentica. A salamandra prateada (Ambystoma platineum) uma espcie hbrida
que consiste somente de fmeas. Cada uma produz um ovo com um nmero no-reduzido de
cromossomos. Esse ovo, porm, no pode se desenvolver sozinho; assim, a salamandra prateada
copula com o macho da salamandra Jefferson (A. jeffersonianum). O espermatozide desse macho
somente estimula o desenvolvimento do ovo; no contribui com material gentico (Uzzell,
1964). Para detalhes desse complexo mecanismo de procriao veja Bogart et al., 1989.
Tabela 4.1 Eventos da fertilizao do ourio-do-mar

Tempo apro ximado
aproximado
Evento aps a inseminaoa
Ligao espermatozide-vulo O segundos

Elevao do potencial de fertilizao (bloqueio rpido da polispermia) dentro de 1 sec
Fuso das membranas espermatozide-vulo dentro de 6 sec
Primeira deteco de aumento de clcio 6 sec
Exocitose das vesculas corticais (bloqueio lento da polispermia) 15-60 sec
Ativao da NAD quinase comea em 1 min
Aumento de NADH e NADPH comea em 1 min
Aumento do consumo de O2 comea em 1 min
Entrada do espermatozide 1-2 min
Efluxo de cido 1-5 min
Aumento de pH (permanece alto) 1- 5 min
Descondensao da cromatina do espermatozide 2-12 min
Migrao do ncleo do espermatozide para o centro do vulo 2-12 min
Migrao do ncleo do vulo para o ncleo do espermatozide 5-10 min
Ativao da sntese protica comea em 5-10 min
Ativao do transporte de aminocidos comea em 5-10 min
Iniciao da sntese de DNA 20-40 min
Mitose 60-80 min
Primeira clivagem 85- 95 min
Principais fontes: Whitaker e Steinhardt, 1985; Mohri et al., 1995.

a
Tempos aproximados baseados em dados de S. purpuratus (15-17oC), L. pictus (16-18oC), A .
punctulata (18-20oC) e L. variegatus (22-24oC). A contagem de tempo para os eventos dentro do
primeiro minuto melhor conhecida para Lytechinius variegatus, assim os tempos apresentados
referem-se essa espcie.
Essa liberao de clcio essencial para a ativao do desenvolvimento do embrio.

Se o quelante de clcio EGTA for injetado no vulo do ourio-do-mar, no ocorre exoci-
tose dos grnulos corticais, mudana do potencial da fertilizao, descondensao do
espermatozide, nem reincio da diviso celular (Kline, 1988). Reciprocamente, vulos
podem ser ativados artificialmente na ausncia de espermatozide por procedimentos
que liberam clcio livre no ocito. Steinhardt e Epel (1974) acharam que quantidades
micromolares do ionforo A23187 induzem no vulo a maioria das respostas caracters-
ticas de um ovo fertilizado normalmente. A elevao do envoltrio de fertilizao, o
aumento do pH intracelular, o surto de utilizao de oxignio e o aumento da sntese de
protena e DNA so todos gerados com sua seqncia prpria. Essa ativao acontece
na ausncia total de ons de clcio na gua do mar. Na maioria desses casos, o desenvol-
vimento cessa antes da primeira mitose porque os ovos ainda so haplides e desprovi-
dos do centrolo espermtico necessrio para a diviso.
Essa liberao de clcio ativa uma srie de reaes metablicas (Figura 4.27). Uma
delas a ativao da enzima NAD+ quinase, que converte o NAD+ em NADP+ (Epel et
al., 1981). Essa mudana pode ter importantes conseqncias para o metabolismo
lipdico, pois NADP+ (mas no o NAD+) pode ser utilizado como coenzima para
biossntese lipdica. Assim, a mudana de NAD+ em NADP+ pode ser importante na
construo de novas membranas exigidas durante a clivagem. Outro efeito dessa
mudana se refere ao consumo de oxignio. Um surto de reduo de oxignio visto
ocorrer durante a fertilizao, e muito desse surto respiratrio usado para cruza-
mento ligado da membrana de fertilizao. A enzima responsvel por essa reduo do
oxignio (para gua oxigenada) tambm dependente de NADPH (Heinecke e Shapiro,
1989). Por ltimo, o NADPH ajuda na regenerao da glutationa e de ovotiois (ovothiols)
que podem ser cruciais para remoo de radicais livres que poderiam de outra maneira
prejudicar o DNA do ovo e do embrio precoce (Mead e Epel, 1995).
Alterao do potencial Bloqueio rpido

Influxo de Na+ da membrana da polispermia
Ativao da Converso de
NAD+ quinase NAD+ em NADP+
Ligao e/ou fuso de Bloqueio lento

espermatozide da polispermia
Liberao Exocitose
membrana celular do vulo Produo
de Ca2+ de grnulos
de IP3
corticais Formao da
Estimulao de camada hialina
Ativao de
protena G ou
fosfolipase C
de tirosinoquinase?
Estimulao de sntese
Produo de Ativao de protica, replicao de
diacil-glicerol proteno-quinase C DNA, e movimentos
citoplasmticos de
material morfogentico
Troca Aumento do pH
Figura 4.27 Na+/H+ intracelular
Modelo de um possvel mecanismo de ativa-
o do vulo do ourio-do-mar. (Segundo Epel,
1980 e L. A. Jaffe, comunicao pessoal.)
Respostas tardias
Pouco tempo aps o aumento dos nveis de ons clcio, o pH intracelular tambm
aumenta. Acredita-se que essas duas condies inicas (> [Ca2+], < [H+] ajam em
conjunto para fornecer o espectro completo dos eventos da fertilizao, incluindo a
sntese de protenas e de DNA (Winkler et al., 1980; Whitaker e Steinhardt, 1982). O
aumento do pH intracelular comea com o segundo influxo de ons de sdio, causan-
do uma troca 1:1 entre ons de sdio da gua do mar e os ons hidrognio do vulo*.
Essa perda de hidrognio faz o pH elevar-se de 6.8 a 7.2, ocasionando enormes mudan-
as na fisiologia do ovo (Shen e Steinhardt, 1978).
As respostas tardias da fertilizao produzidas por essas alteraes inicas, inclu-
em a ativao da sntese de DNA e da protena. O surto de sntese de protena ocorre
vrios minutos aps a entrada do espermatozide e no depende da sntese de novo
RNA mensageiro (Figura 4.28). Em seu lugar, a sntese de protena nova utiliza mRNAs
j presentes no citoplasma do ocito (muito mais sobre isso ser mencionado no
Captulo 12). Esses RNAs incluem aqueles que codificam protenas como histonas,
tubulinas, actinas e fatores morfogenticos que so utilizados durante o desenvolvi-
mento precoce. Tal surto de sntese protica pode ser induzido pelo aumento artificial
do pH citoplasmtico por ons amnio (Winkler et al., 1980). Reciprocamente, agentes
que bloqueiam o aumento do pH inibem eventos da fertilizao tardia como a sntese
de DNA e protena. Quando ovos recm-fertilizados so colocados em solues con-
tendo baixas concentraes de ons de sdio e amiloride (uma droga que inibe a troca
Na+/H+), a sntese protica falha, os movimentos dos proncleos do vulo e do esper-
matozide so prevenidos, e a diviso celular no ocorre (Dube et al., 1985).
*Novamente, a variao espcie-para-espcie est solta. No vulo muito menor do camun-

dongo, no h elevao do pH aps a fertilizao. Similarmente no camundongo, no h um
aumento dramtico na sntese protica imediatamente em seguida fertilizao.
Figura 4.28
protena/mg protena (cpm x 10-3)

Surto de sntese protica na fertilizao emprega mRNA armazena-
Incorporao de valina[14C] na
do no citoplasma do ocito. (A) Sntese protica em vulos do ouri- gua do mar
normal
o-do-mar Arbacia punctulata fertilizada na presena ou ausncia
de actinomicina D, um inibidor da transcrio. Durante as primeiras
horas, a sntese protica ocorre sem nova transcrio dos ncleos
do zigoto ou embrio. Um segundo surto de sntese protica ocorre
durante os estgios medianos de blstula, e isso representa tradu-
o de mensagens recm-transcritas (e, portanto, no visto em
embries crescendo em actinomicina). (B) Aumento na porcenta- gua do mar tratada
gem de ribossomos recrutados para polissomos durante as primei- por actinomicina
ras horas do desenvolvimento do ourio-do-mar, especialmente du-
rante o primeiro ciclo celular. (A segundo Gross et al., 1964; B
segundo Humphreys, 1971.)
Horas aps a fertilizao
Porcentagem de ribossomos
em polissomos
Tempo de desenvolvimento (horas)
Fuso do material gentico

Em ourios-do-mar, o ncleo do espermatozide penetra o vulo perpendicular-
mente superficie do vulo. Aps a fuso das membranas do espermatozide e do
vulo, o ncleo do espermatozide e seu centrolo se separam das mitocndrias e
do flagelo. A mitocndria e o flagelo se desintegram dentro do vulo; assim,
poucas, se tanto, mitocndrias derivadas do espermatozide so encontradas em
organismos em desenvolvimento ou em adultos (Dawid e Blackler, 1972; Giles et
al., 1980). Em camundongos estima-se que 1 em cada 10.000 mitocndrias so
derivadas do espermatozide (Gyllensten et al., 1991). Assim, embora cada gameta
contribua para o zigoto com um genoma haplide, o genoma mitocondrial trans-
mitido principalmente pelo parente materno. Reciprocamente, em quase todos os
animais estudados (o camundongo sendo a principal exceo), o centrossomo
necessrio para a produo do fuso mittico das divises subseqentes deriva-
do do centrolo espermtico (Sluder et al., 1989, 1993).
O ncleo do vulo sendo haplide chamado de proncleo feminino. Dentro do
citoplasma do vulo, o ncleo do espermatozide descondensa para formar o
proncleo masculino. Uma vez dentro do vulo, o proncleo masculino sofre uma
dramtica transformao. O envoltrio pronuclear forma vesculas com pequenos
pacotes, expondo, com isso, a compacta cromatina do espermatozide ao citoplas-
ma do vulo (Longo e Kunkle, 1978). As protenas que prendem a cromatina no seu
estado condensado, inativa, so trocadas por protenas derivadas do citoplasma do
vulo. Essa troca permite a descondensao da cromatina do espermatozide. Em
ourios-do-mar, a descondensao parece ser iniciada pela fosforilao de duas
(A) (B)
Proncleo do vulo
Ponte internuclear
Tempo (seg) Proncleo do

espermatozide
Figura 4.29
histonas espermatozide-especficas, que se ligam fortemente ao DNA. Esse pro- Eventos nucleares na fertilizao do ourio-
do-mar. (A) Migrao dos proncleos do
cesso comea quando o espermatozide entra em contato com uma glicoprotena na
vulo e do espermatozide em um ovo de
gelia do vulo que eleva o nvel da atividade proteinoquinase cAMP-dependente. Clypeaster japonicus. O proncleo do es-
(Tais proteino-quinases cAMP-dependentes foram mencionadas no Captulo 1.) permatozide est rodeado por microtbu-
Essas quinases fosforilam vrios resduos bsicos das histonas espermatozide- los do seu ster. (B) Fuso de proncleos no
especficas interferindo, desse modo, com sua ligao ao DNA (Garbers et al., 1980, ovo do ourio-do-mar. (A de Hamaguchi e
1983; Porter e Vacquier, 1986). Esse afrouxamento considerado facilitar a substitui- Hiramoto, 1980, cortesia dos autores; B cor-
o das histonas espermatozide-especficas por outras histonas que haviam sido tesia de F. J. Longo.)
estocadas no citoplasma do ocito (Poccia et al., 1981; Green e Poccia, 1985). Uma
vez descondensado, o DNA pode iniciar a transcrio e a replicao. [fert9.html]
Depois que o espermatozide do ourio-do-mar entra no citoplasma do vulo, o
proncleo masculino gira 180o fazendo com que o centrolo fique entre o proncleo do
espermatozide e o proncleo do vulo. Em seguida, o centrolo espermtico age
como um centro organizador de microtbulos, estendendo seus prprios microtbu-
los e integrando-os com os microtbulos do vulo formando um ster*. Esses
microtbulos se estendem atravs de todo o vulo, contatam o proncleo feminino, e
trazem os dois proncleos um para perto do outro (Hamaguchi e Hiramoto, 1980;
Bestor e Schatten, 1981). A fuso forma o ncleo zigtico diplide (Figura 4.19). A
iniciao da sntese de DNA pode ocorrer no estgio pronuclear (durante a migrao)
ou depois da formao do ncleo zigtico.
Em mamferos, o processo da migrao pronuclear dura aproximadamente 12
horas, comparado com menos de uma hora no ourio-do-mar. O espermatozide do
mamfero entra quase tangencialmente superfcie do vulo em vez de aproxim-la
perpendicularmente, e funde com numerosas microvilosidades (veja Figura 4.20). O
ncleo do espermatozide mamfero tambm se parte quando sua cromatina
descondensa, sendo depois reconstrudo por vesculas coalescentes. O DNA do
ncleo espermtico ligado por protenas bsicas chamadas protaminas; essas
protenas nucleares esto firmemente compactadas atravs de ligaes dissulfeto.
Uma vez no vulo, a glutationa reduz essas ligaes de dissulfeto, permitindo o
desdobramento da cromatina do espermatozide (Calvin e Bedford, 1971; Kvist et
*Quando Oskar Hertwig observou esse arranjo radial de steres de espermatozide no seu
recm-fertilizado ovo de ourio-do-mar, chamou-o de sol dentro do ovo, e considerou-o feliz
indicao de uma fertilizao bem-sucedida (Hertwig, 1877). Mais recentemente, Simerly e
colaboradores (1994) descobriram que certos tipos de infertilidade em homens eram devidos a
defeitos na capacidade do centrossoma formar esses steres microtubulares. Essa deficincia
causa a falncia da migrao pronuclear e a interrupo do desenvolvimento.
(A) (B) (C)
Figura 4.30
Movimento pronuclear em hamster. (A)
Entrada de espermatozide na clula e al., 1980). O proncleo masculino dos mamferos aumenta enquanto o ncleo do
tumefao do proncleo do espermatozi- ocito completa sua segunda diviso meitica (Figura 4.30 A).
de. (B) Aposio dos proncleos do es- O centrossomo que acompanha o proncleo masculino produz seus steres
permatozide e do vulo. (C ) Estgio
(principalmente a partir de protenas armazenadas no ocito) e contata o pron-
bicelular mostrando duas clulas de tama-
nhos iguais com ncleos bem definidos.
cleo feminino. Ento, cada proncleo migra ao encontro do outro, replicando seu
Entulho no espao perivitelnico so os cor- DNA ao longo do trajeto. No encontro, os dois envoltrios nucleares se desinte-
pos polares em degenerao. (de Bavister, gram (Figura 4.30B). No entanto, em lugar de produzir um ncleo zigtico comum
1980, cortesia de B. D. Bavister.) (como acontece na fertilizao do ourio-do-mar), a cromatina condensa-se para
formar cromossomos que se orientam num fuso mittico comum. Assim, um ncleo
zigtico verdadeiro em mamferos visto primeiro no no zigoto, mas no estgio
bicelular (Figura 4.30 C). [fert10.html]
& Especulaes
A No-Equivalncia dos Proncleos de Mamferos
G
ERALMENTE ASSUME-SE que lizando um vulo no qual o proncleo vulos se desenvolvam na ausncia de
machos e fmeas portam geno- feminino est ausente. Aps penetrar no espermatozide. A habilidade de desen-
mas haplides equivalentes. vulo, os cromossomos do espermato- volver um embrio sem contribuio es-
Um dos princpios fundamentais da ge- zide se duplicam restaurando seu n- permtica chamada partenognese (do
ntica Mendeliana que os genes deri- mero diplide. Assim, todo o genoma grego, significando nascimento vir-
vados do espermatozide so funcional- derivado do espermatozide (Jacobs et gem). Os vulos de muitos invertebra-
mente equivalentes aqueles derivados al., 1980; Ohama et al., 1981). Aqui ve- dos e de alguns vertebrados so capa-
do vulo. No entanto, estudos recentes mos uma situao em que as clulas so- zes de se desenvolver normalmente na
mostram que em mamferos o genoma de- brevivem, se dividem e tm um nmero ausncia do espermatozide se o vulo
rivado do vulo pode ser funcionalmen- normal de cromossomos, porm, apre- for ativado artificialmente. Nessas situa-
te diferente e ter papel complementar du- sentam um desenvolvimento anormal. Em es, a contribuio do espermatozide
rante certos estgios do desenvolvimen- vez de formar um embrio, o ovo se trans- para o desenvolvimento parece dispen-
to. A primeira evidncia dessa no-equi- forma numa massa de clulas placento- svel. Os mamferos, no entanto, no a-
valncia veio de estudos de um tumor smiles. No h desenvolvimento normal presentam a partenognese. A colocao
humano chamado mola hidatidiforme. quando o genoma inteiro vem do paren- de ocitos de camundongo em um meio
Esses tumores parecem tecido placent- te masculino. Evidncia para a no-equi- de cultura que artificialmente ativa o
rio. A maioria dessas molas se desenvol- valncia dos proncleos mamferos vem ocito, ao mesmo tempo suprimindo a for-
ve de um espermatozide haplide ferti- tambm de tentativas de conseguir que mao do segundo corpo polar, produz
ovos diplides de camundongo cuja Tabela 4.2 Experimentos de transplantes pronucleares

herana deriva somente do vulo
(Kaufman et al., 1977). Essas clu- Classe de zigotos Nmero de transplantes Nmero de
las se dividem para formar embri- reconstrudos Operao bem-sucedidos sobrevivente
es com medula espinhal, mscu-
los, esqueleto e rgos, incluindo Bimaternal 339 0
coraes latejantes. Porm, o de-
senvolvimento no continua e no Bipaternal 328 0
dia 10 ou 11 (metade do tempo da
gestao), observam-se profundas
diferenas entre os embries nor- Controles 348 18
mais e os partenogenticos, esses
deteriorando e ficando grosseira- Fonte: McGrath e Solter, 1984.
mente desorganizados (Figura
4.31). Nem no homem nem no ca-
mundongo o desenvolvimento
pode ser completado com cromossomos se desenvolvem at o nascimento, ao las somente o alelo de genes derivado
derivados somente do vulo. passo que alguns ovos controle (con- paternalmente funcional. (Na maioria
A hiptese que proncleos masculi- tendo um proncleo masculino e um fe- dos genes, naturalmente, os alelos deri-
nos e femininos so diferentes, tambm minino de zigotos diferentes) que sofre- vados do macho e da fmea so equiva-
ganha apoio de experimentos de trans- ram tal transplante se desenvolvem nor- lentes e so ativados no mesmo grau
plante pronuclear (Surani e Barton, 1983; malmente (Tabela 4.20). Ainda mais, os em cada clula. Aqui estamos tratando
Surani et al., 1986; McGrath e Solter, embries bimaternos ou bipaternos ces- de excees a essa regra Mendeliana.)
1984). Proncleos recm-fertilizados de sam o desenvolvimento ao mesmo tem- Por exemplo, o fator de crescimento in-
machos ou fmeas podem ser removidos po que camundongos partenogenticos. sulina-smile II (IGF-II) promove o cres-
e adicionados a outros ovos recm-ferti- Portanto, embora os dois proncleos cimento de rgos embrionrios e fetais.
lizados. (Os dois proncleos podem ser sejam equivalentes em muitos animais, Em embries de camundongos, o alelo
diferenciados nesse estgio, porque o fe- nos mamferos existem importantes dife- de IGF-II derivado paternalmente ati-
minino fica debaixo dos corpos polares.) renas funcionais entre eles. vo em todo o embrio, ao passo que o
Assim, podem ser construdos zigotos A razo para essas mortes embrio- alelo derivado maternalmente em ge-
com dois proncleos masculinos ou dois nrias que em algumas clulas somen- ral inativo (exceto em algumas clulas
femininos. Embora ocorra a clivagem em- te o alelo de certos genes derivado da neurais). Assim, se um camundongo
brionria, nenhum desse tipos de ovos me ativo, enquanto em outras clu- herda um alelo mutante IGF-II de sua
me, ir se desenvolver at o tamanho
normal (j que o alelo derivado mater-
nalmente no expresso); porm, se o
Figura 4.31 mesmo alelo mutante for herdado do pai,
(A) Embries controle e (B) partenogenti-
o camundongo ter crescimento preju-
cos (dois proncleos femininos) de camun-
dongos no 11 o dia de gestao. Os camun- dicado (DeChiara et al., 1991). O padro
dongos estavam se desenvolvendo na mes- oposto de expresso allica se encon-
ma fmea. Alm de serem menores e em de- tra para um dos receptores de IGF-II.
teriorao, os embries partenogenticos Aqui, o gene paterno para o receptor
tambm tinham placentas muito menores. (de mal transcrito, enquanto o alelo mater-
Surani e Barton, 1983, cortesia dos autores.) no ativo (Barlow et al., 1991). As dife-
renas entre os alelos ativos e inativos
so consideradas ser causadas por mo-
dificaes do DNA que ocorrem de ma-
neira diferente nos ncleos do vulo e
do espermatozide (sero discutidos
posteriormente no Captulo 11). Como
certos genes importantes para o desen-
volvimento somente so ativos quando
provindos do espermatozide e outros
tais genes s so ativos quando vm do
vulo, tanto proncleos maternos como
paternos so necessrios para o desen-
volvimento completo dos mamferos.
Rearranjo do citoplasma do vulo

A fertilizao pode iniciar deslocamentos radicais nos materiais citoplasmticos do
vulo. Esses rearranjos do citoplasma do ocito so muitas vezes cruciais para a
diferenciao nas etapas seguintes do desenvolvimento. Como veremos nos cap-
tulos 13 e 14, o citoplasma do vulo freqentemente contm determinantes
morfogenticos que ficam segregados em clulas especficas durante a clivagem.
Esse determinantes, em ltima anlise, conduzem ativao ou represso de genes
especficos conferindo, dessa maneira, certas propriedades s clulas que os incor-
poram. O arranjo espacial correto desses determinantes crucial para o desenvolvi-
mento adequado.
Em algumas espcies, esse rearranjo na orientao pode ser visualizado pela pre-
sena de grnulos pigmentados citoplasmticos. Um exemplo o vulo do tunicado
Styela partita (Conklin, 1905). O ovo no-fertilizado desse animal est apresentado na
Figura 4.32A. Um citoplasma cinzento central est envolvido por uma camada cortical
contendo incluses lipdicas amarelas. Durante a meiose, a desintegrao nuclear
libera uma substncia clara que se acumula no hemisfrio animal (superior) do vulo.
Dentro de 5 minutos aps a entrada do espermatozide, o citoplasma interno claro e o
cortical amarelo migram para o hemisfrio vegetal (inferior) do vulo. Quando o pron-
cleo masculino migra do plo vegetal para o equador da clula, ao longo do futuro
lado posterior do embrio, as incluses lipdicas migram com ele. Essa migrao forma
um crescente amarelo, que se estende do plo vegetal ao equador (Figura 4.32B),
trazendo o citoplasma amarelo para a rea onde mais tarde clulas musculares iro se
formar na larva tunicada. O movimento dessas regies citoplasmticas depende de
microtbulos que so gerados pelo centrolo e por uma onda de ons de clcio que
Figura 4.32 contraem o citoplasma do plo animal (Sawada e Schatten, 1989; Speksnijder et al.,
Rearranjo citoplasmtico no vulo do 1990; Roegiers et al., 1995).
tunicado Styela partita. (A) Antes da fer- Movimento citoplasmtico tambm visto em vulos de anfbios. Na r, um nico
tilizao, citoplasma cortical amarelo ro-
espermatozide pode entrar em qualquer lugar do hemisfrio animal; quando o faz,
deia citoplasma cinzento, tipo gema. (B)
Aps a entrada do espermatozide, o cito-
altera o padro citoplasmtico do vulo. Originalmente, o vulo radialmente simtri-
plasma cortical amarelo e o citoplasma cla- co em torno do eixo animal-vegetal. Aps a entrada do espermatozide, porm, o
ro derivado da degradao do ncleo do citoplasma cortical (externo) se desloca cerca de 30 relativos ao citoplasma interno,
ocito escorrem vegetativamente em dire- em direo ao ponto de entrada do espermatozide (Manes e Elinson, 1980; Vincent et
o ao espermatozide. (C) medida que al., 1986). Em algumas rs (como Rana), uma regio do vulo que antes estava coberta
o proncleo do espermatozide migra para pelo citoplasma cortical escuro do hemisfrio animal fica agora exposta (Figura 4.33).
o plo animal em direo ao proncleo do Esse citoplasma subjacente, localizado perto do equador, no lado oposto do ponto de
vulo, os citoplasmas amarelo e claro os entrada do espermatozide, contm grnulos pigmentados difusos e, por isso, tem
acompanham. (D) A posio final dos ci-
aparncia cinzenta. Essa regio tem sido referida como o crescente cinzento (Roux,
toplasmas amarelo e claro, marcam os lo-
cais onde as clulas do origem ao mesn-
1987; Ancel e Vintenberger, 1948). Como veremos em captulos subseqentes, o cres-
quima e aos msculos, respectivamente. cente cinzento demarca a regio onde se iniciar a gastrulao em embries de anfbios.
(Segundo Conklin, 1905.)
Plo animal
Citoplasma Ncleo do Material do
Cortical ocito ncleo do ocito
Citoplasma
amarelo claro
Gema cinzenta
(A) (B) (C) (D)

Crio Proncleo do Citoplasma Proncleo do Citoplasma Crescente Material
Plo vegetal espermatozide amarelo espermatozide amarelo amarelo da gema
(A) (B)
Ponto de
entrada do
espermatozide Crescente
cinzento
Crtex
Citoplasma
interno Zona de
deslizamento
Figura 4.33
Reorganizao do citoplasma no ovo recm-fertilizado da r. (A) Corte transversal
esquemtico de um ovo na metade do primeiro ciclo de clivagem. O ovo tem simetria
radial em torno do seu eixo animal-vegetal. O espermatozide entrou por um lado e
seu ncleo est migrando para o interior. O crtex est representado como o de Rana,
com um hemisfrio animal altamente pigmentado e um hemisfrio vegetal transparen-
te. (B) Quando est aproximadamente em 80% de seu caminho na primeira clivagem,
o citoplasma cortical gira cerca de 30 o em relao ao citoplasma interno. Essa rotao
importante porque a gastrulao ir comear na regio oposta ao ponto de entrada do
espermatozide onde ocorre o maior deslocamento do citoplasma. (Segundo Gerhart
et al., 1989.)
Em rs como Xenopus, nas quais no se v um crescente cinzento, podemos assim

mesmo, observar a rotao do citoplasma cortical em relao camada interna,
subcortical. Esse movimento foi demonstrado por Vincent e seus colaboradores (1986).
Esses investigadores imprimiram uma grade hexagonal de corante (Azul Nilo) sobre o
citoplasma abaixo do crtex enquanto aplicavam outro tipo de corante (uma lectina
ligada fluorescena) superfcie do ovo. Quando o ovo foi mantido em sua posio
por incluso em gelatina, os pontos de Azul Nilo puderam ser vistos rodar de 30 em
relao s manchas da lectina fluorescente (Figura 4.34). Em ovos normais, no inclu-
sos, a superfcie do ovo considerada girar enquanto o citoplasma subcortical, torna-
do pesado pelas plaquetas de gema, permanece estabilizado por gravidade.
O motor para esses movimentos citoplasmticos em ovos de anfbios parece ser
um conjunto de microtbulos paralelos que ficam entre os citoplasmas interno e cortical
do hemisfrio vegetal, na direo da rotao citoplasmtica. Os rastros dos
microtbulos so primeiramente vistos imediatamente antes do comeo da rotao, e
desaparecem quando esse movimento cessa (Figura 4.35; Elinson e Rowning, 1988).
Tratamento do ovo com colchicina ou radiao ultravioleta interrompe a formao
desses microtbulos, com isso parando as rotaes citoplasmticas. Usando anticorpos
ligantes desses microtbulos, Houliston e Elinson (1991a) acharam que esses rastros
eram formados por microtbulos derivados do espermatozide e do vulo, e que o
centrolo espermtico direciona sua polimerizao, fazendo com que cresam para o
interior da regio vegetal do ovo. Ao atingir o crtex vegetal, esses microtbulos se
desviam do ponto de entrada do espermatozide, em direo ao plo vegetal. A posi-
o descentralizada do centrolo espermtico quando esse inicia a polimerizao
microtubular, proporciona direo rotao. A fora motriz para a rotao possivel-
mente, fornecida pela ATPase cinesina. Tal como a dinena e a miosina, a cinesina
pode fixar-se s fibras e produzir energia pela hidrlise de ATP. Essa ATPase est
localizada nos microtbulos vegetais e nas membranas do retculo endoplasmtico
cortical (Houliston e Elinson, 1991b).
O movimento do citoplasma cortical relativo ao citoplasma interno causa profunda
movimentao nesse ltimo. Danilchik e Denegre 1991) marcaram plaquetas da gema
(A) (B)
(C) (D)
Figura 4.34
Rotao do citoplasma subcortical relativa ao citoplasma de superfcie da clula. (A)
Um ovo recentemente fertilizado foi marcado com uma grade hexagonal de corante
Azul Nilo (que cora os lpidios nas plaquetas de gema). O ovo foi embebido em
gelatina, e as posies originais de alguns dos pontos marcados na superfcie celular
com fluorescena (crculos em A). O ponto de entrada do espermatozide est marcado
com um S. (B,C) Com o progredir do primeiro ciclo, os pontos do citoplasma
subcortical mudaram de aproximadamente 30 o em relao superfcie externa imobili-
zada do ovo. O local no ovo designando a futura superfcie dorsal do embrio est
marcado com um D. (D) Sumrio desses movimentos na regio vegetal (inferior) do
ovo. (de Vincent et al., 1986, fotografias cortesia de J. C. Gerhart.)
com Azul Nilo e observaram seu movimento por microscopia fluorescente (o corante
ligado emite fluorescncia vermelha). Durante a parte intermediria do primeiro ciclo
celular, a massa do citoplasma central do ovo flui do presumvel lado ventral (abdome),
para o futuro lado dorsal (posterior) do embrio (Prancha 7). Ao fim da primeira divi-
so, o citoplasma presumivelmente do lado dorsal do embrio, distintamente diferen-
te daquele do provvel lado ventral. O que havia sido um embrio radialmente simtri-
co, agora um embrio bilateralmente simtrico.
Como veremos nos Captulos 6 e 15, esses movimentos citoplasmticos iniciam
uma cascata de eventos que determina o eixo dorso-ventral da r. Realmente, os
microtbulos paralelos que permitem esses rearranjos parecem estender-se ao longo
do futuro eixo dorso-ventral (Klag e Ubbels, 1975; Gerhart et al., 1983).
Preparao para a Clivagem

O aumento dos nveis de ons livres de clcio intracelular tambm inicia a movimen-
tao de aparelhagem para a diviso celular. O mecanismo iniciador da clivagem
provavelmente difere entre espcies, dependendo do estgio de meiose em que
Figura 4.35
Arranjo paralelo de microtbulos se esten-
dem ao longo do hemisfrio vegetal, ao longo
do futuro eixo dorso-ventral. (A) Arranjo pa-
ralelo de microtbulos vistos na segunda par-
te do primeiro ciclo celular por anticorpos
fluorescente tubulina. (B) Antes da rotao
citoplasmtica (cerca de metade do ciclo) ne-
nhum arranjo pode ser visto. (C) No trmino
da rotao do citoplasma, os microtbulos
despolimerizam. (de Elinson e Rowning,
(B) 1988, cortesia de R. Elinson.)
(A) (C)
ocorre a fecundao. No entanto, em todas as espcies estudadas, o ritmo das

divises celulares regulado pela sntese e degradao de ciclina. A ciclina mantm
as clulas em metfase, e a sua degradao permite s clulas voltarem para interfase.
Alm de suas outras atividades, os ons de clcio tambm parecem iniciar a degrada-
o da ciclina (Watanabe et al., 1991). Uma vez degradada a ciclina, os ciclos de
diviso celular podem se reiniciar.
A clivagem tem uma relao especial com essas regies citoplasmticas. Em embri-
es tunicados, a primeira clivagem secciona o ovo em imagens duplicadas em um
espelho. Desse estgio em diante, cada diviso em um lado do sulco de clivagem tem
uma imagem em espelho do lado oposto. De maneira semelhante, o crescente cinzento
seccionado pelo sulco da primeira clivagem em ovos de anfbios. Assim, a posio
da primeira clivagem no aleatria, mas tende a ser especificada pelo ponto de
entrada do espermatozide e a subseqente rotao do citoplasma do ovo. A coorde-
nao do plano de clivagem e dos rearranjos citoplasmticos provavelmente media-
da pelos microtbulos do ster do espermatozide (Manes et al., 1978; Gerhart et al.,
1981; Elinson, 1985).
Portanto, perto do fim do primeiro ciclo celular , o citoplasma se rearranja, os
proncleos se encontram, o DNA est se replicando e novas protenas esto sendo
sintetizadas. O palco est preparado para o desenvolvimento de um organismo
multicelular. [fert11.html], [other.html#fert13]
LITERATURA CITADA
Abassi, Y. A. and Foltz, K. R. 1994. Tyrosine Amos, L. A. and Klug, A. 1974. Arrangement Asai, D. J. 1996. Functional and molecular
phosphorylation of the sperm receptor at ferti- of subunits in flagellar microtubules. J. Cell diversity of dynein heavy chains. Semin. Cell
lization. Dev. Biol. 164: 430-443. Sci. 14: 523-549. Dev. Biol. 7: 311-320.
Afzelius, B. A. 1976. A human syndrome caused Ancel, P. and Vintenberger, P. 1948. Re- Austin, C. R. 1952. The capacitation of
by immotile cilia. Science 193: 3173-19. cherches sur le determinisme de la mammalian sperm. Nature 170: 326.
symmetrie bilatrale dans loeuf des
Almeida, E. A. C. and ten others. 1995. Mouse Austin, C. R. 1960. Capacitation and the
amphibiens. Bull. Biol. Fr. Belg. [Suppl.]
egg integrin a P functions as a sperm recep- release of hyaluronidase. J. Reprod. Fert. 1:
31: 1-182.
tor. Cell 81: 1095-1104. 310-311.
Austin, C. R. 1965. Fertilization. PrenticeHall, 1992. A potential fusion peptidle and an integrin Ciapa, B. and Whitaker, M. 1986. Two
Englewood Cliffs, New Jersey. domain in a protein active in spermegg fusion. phases of inositol polyphosphate and
Nature 356: 248-251. diacylglycerol production at fertilization.
Ayabe, T., Kopf, G. S. and Schultz, R. M. 1995. FEBS Lett. 195: 347-351.
Regulation of mouse egg activation: presence Bogart, J. P., Elinson, R. P. and Licht, L. E.
of ryanodine receptors and effects of microin- 1989. Temperature and sperm incorporation in Clermont, Y. and Leblond, C. P. 1955. Spermi-
jected ryanodine and cyclic ADP ribose on polyploid salamanders. Science 246: 1032-1034. ogenesis of man, monkey, and other animals as
uninseminated and inseminated eggs. Develop- shown by the periodic acidSchiff technique.
ment 121: 2233-2244. Bookbinder, L. H., Cheng, A., and Bleil, J. D. Am. J. Anat. 96: 229-253.
1995. Tissue- and species-specific expression
Baltz, J. M., Katz, D. F. and Cone, R. A. 1988. of sp56, a mouse sperm fertilization protein. Colwin, A. L. and Colwin, L. H. 1963. Role of
The mechanics of sperm-egg interaction at the Science 269: 86-87. the gamete membranes in fertilization in
zona pellucida. Biophys. J. 54: 643-654. Saccoglossus kowalevskii (Enteropneustra). I.
Boveri, T. 1902. On multipolar mitosis as a means The acrosome reaction and its changes in early
Barlow, D. P., Stger, R., Herrmann, B. G., Saito, of analysis of the cell nucleus. (Translated by S. stages of fertilization. J. Cell Biol. 19: 477-500.
K. and Schweifer, N. 1991. The mouse insulin- Gluecksohn-Waelsch.) In B. H. Willier and J. M.
like growth factor type-2 receptor is imprinted Oppenheimer (eds.), Foundations of Experimen- Colwin, L. H. and Colwin, A. L. 1960. Formation of
and closely linked to the Time locus. Nature tal Embryology. Hafner, New York, 1974. sperm entry holes in the vitelline membrane of
349: 84-87. Hydroides hexagonis (Annelida) and evidence of their
Boveri, T. 1907. Zellenstudien VI. Die Entwi- lytic origin. J. Biophys. Biochem. Cytol. 7: 315-320.
Bavister, B. D. 1980. Recent progress in the cklung dispermer Seeigeleier. Ein Beitrge zur
study of early events in mammalian fertilizati- Befruchtungslehre und zur Theorie des Kernes. Conklin, E. G. 1905. The orientation and cell-
on. Dev. Growth Differ. 22: 385-402. Jena Z. Naturwiss. 43: 1-292. lineage of the ascidian egg. J. Acad. Nat. Sci.
Phila. 13: 5-119.
Bentley, J. K., Shimomura, H. and Garbers, D. L. Braden, A. W. H. and Austin, C. R. 1954. The
1986. Retention of a functional resact receptor number of sperm about the eggs in mammals Cook, S. P. and Babcock, D. F. 1993. Selective
in isolated sperm plasma membranes. Cell 45: modulation by cGMP of the K+ channel activated
and its significance for normal fertilization. Aust.
281-288. by speract. J. Biol. Chem. 268: 22402-22407.
J. Biol. Sci. 7: 543-551.
Berridge, M. J. 1993. Inositol triphosphate and Corselli, J. and Talbot, P. 1987. In vivo
Burks, D. J., Carballacla, R., Moore, H. D. M.
calcium signalling. Nature 361: 315-325. penetration of hamster oocyte-cumulus com-
and Saling, P. M. 1995. Interaction of a tyrosine
plexes using physiological numbers of sperm.
Bestor, T. M. and Schatten, G. 1981. Antitubulin kinase from human sperm with the zona pellucida
Dev. Biol. 122: 227-242.
immunofluorescence microscopy of microtubu- at fertilization. Science 269: 83-86.
les present during the pronuclear movements of Cross, N. L. and Elinson, R. P. C. 1980. A fast
Busa, W. B., Ferguson, J. E., Joseph, S. K.,
sea urchin fertilization. Dev. Biol. 88: 80-91. block to polyspermy in frogs mediated by
Williamson, J. R. and Nuccitelli, R. 1985. changes in the membrane potential. Dev. Biol.
Bi, G.-Q., Alderton, J.M. and Steinhardt, R.A. 1995. Activation of frog (Xenopus laevis) eggs by 75:187-198.
Calcium-mediated exocytosis is required for cell inositol triphosphate. I. Characterization of Ca2+
membrane resealing. J. Cell Biol. 131:1747-1758. release from intracellular stores. J. Cell Biol. Dan, J. C. 1967. Acrosome reaction and lysins. In
100: 677-682. C. B. Metz and A. Monroy (eds.), Fertilization,
Bleil, J. D. and Wassarman, P. M. 1980. Vol. 1. Academic Press, New York, pp. 237-367.
Mammalian sperm and egg interaction: Identi- Calvin, H. I. and Bedford, J. M. 1971. Formati-
fication of a glycoprotein in mouseegg zonae on of disulfide bonds in the nucleus and accessory Danilchik, M. V. and Denegre, J. M. 1991. Deep
pellucidae possessing receptor activity for sperm. structures of mammalian spermatozoa during cytoplasmic rearrangements during early deve-
Cell 20: 873-882. maturation in the epididymis. J. Reprod. Fertil. lopment in Xenopus laevis, Development Ill:
[Suppl.] 13: 65-75. 845-856.
Bleil, J. D. and Wassarman, P. M. 1986.
Autoradiographic visualization of the mouse Carroll, E. J. and Epel, D. 1975. Isolation and Davis, B. K. 1981. Timing of fertilization in
eggs sperm receptor bound to sperm. J. Cell biological activity of the proteases released by mammals: Sperm cholesterol/ phospholipid ratio
Biol. 102:1363-1371. sea urchin eggs following fertilization. Dev. Biol. as determinant of capacitation interval. Proc.
44: 22-32. Nall. Acad. Sci. USA 78: 7560-7564.
Bleil, J. D. and Wassarman, P. M. 1988.
Galactose at the nonreducing terminus of O- Chambers, E. L., Pressman, B. C. and Rose, B. Dawid, I. B. and Blackler, A. W. 1972. Maternal
1974. The activity of sea urchin eggs by the and cytoplasmic inheritance of mitochondria in
linked oligosaccharides of mouse egg zona
divalent ionophores A23187 and X 537A. Xenopus. Dev. Biol. 29: 152-161.
pellucida glycoprotein ZP3 is essential for the
glycoproteins sperm receptor activity. Proc. Biochem. Biophys. Res. Commun. 60: 126-132. DeChiara, T. M., Robertson, E. J. and Efstradiatis,
Natl. Acad. Sci. USA 85: 6778-6782. A. 1991. Parental imprinting of the mouse insulin-
Chandler, D. E. and Heuser, J. 1979. Membrane
fusion during secretion: Cortical granule exocytosis like growth factor II gene. Cell 64: 849-859.
Bleil, J. D. and Wassarman, P. M. 1990. Identi-
fication of a ZP3-binding protein on acrosome- in sea urchin eggs as studied by quick-freezing and De Robertis, E. D. P., Saez, F. A. and De Robertis,
intact mouse sperm by photoaffinity crosslin- freeze fracture. J. Cell Biol. 83: 91-108. E. M. F. 1975. Cell Biology, 6th Ed., Saunders,
king. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 5563-5567. Philadelphia.
Chang, M. C. 1951. Fertilizing capacity of
Bleil, J. D., Greve, J. M. and Wassarman, P, M. spermatozoa deposited into the fallopian tubes. Dube, F., Schmidt, T., Johnson, C. H. and Epel,
1988. Identification of a secondary sperm re- Nature 168: 697-698. D. 1985. The hierarchy of requirements for an
ceptor in the mouse egg zona pellucida: Role in elevated pH during early development of sea
Cherr, G. N., Lambert, H., Meizel, S. and Katz,
maintenance of binding of acrosome-reacted urchin embryos. Cell 40: 657-666.
D. F. 1986. In vitro studies of the golden hamster
sperm to eggs. Dev. Biol. 28: 376-385.
sperm acrosomal reaction: Completion on zona Eisen, A . and Reynolds, G. T. 1985. Sources and
Blobel, C. P, Wolfsberg, T. G., Turck, C. W., pellucida and induction by homologous zonae sinks for the calcium release during fertilization of
Myles, D. G., Primakoff, P. and White, J. M. pellucidae. Dev. Biol. 114:119-131. single sea urchin eggs. J. Cell Biol. 100: 1522-1527.
Eisenbach, M. 1995. Sperm changes enabling Fol, H. 1877. Sur le commencement de Ihmo- Glabe, C. G. 1985. Interaction of the sperm
fertilization in mammals. Curr. Opin. Endocri- gnie chez divers animaux. Arch. Zool. Exp. Gn. adhesive protein, bindin, with phospholipid
nol. Diabetes 2: 468-475. 6: 145-169. vesicles. II. Bindin induces the fusion of mixed-
phase vesicles that contain phosphatidylcholine
Elinson, R. P. 1985. Changes in levels of Foltz, K. R., Partin, J. S. and Lennarz, W. J.
and phosphatidylserine in vitro. J. Cell Biol.
polymeric tubulin associated with activation and 1993. Sea urchin egg receptor for sperim:
100: 800-806.
dorsoventral polarization of the frog egg. Dev. Sequence similarity of binding domain to hsp70.
Biol. 109: 224-233. Science 259: 1421-1425. Glabe, C. G. and Lennarz, W. J. 1979. Species-
specific sperm adhesion in sea urchins: A
Elinson, R. P. 1986. Fertilization in amphibians: Franklin, L. E. 1970. Fertilization and the role
quantitative investigation of bindin-mediated egg
The ancestry of the block to polyspermy. Int. of the acrosomal reaction in non-mammals.
agglutination. J. Cell Biol. 83: 595-604.
Rev. Cytol. 101: 59-100. Biol. Reprod. [Suppl.] 2:159-176.
Glabe, C. G. and Vacquier, V. D. 1977. Species-
Elinson, R. P. and Rowning, B. 1988. A transient Fulton, B. P. and Whittingham, D. G. 1978.
specific agglutination of eggs by bindin isolated
array of parallel microtubules in frog eggs: Activation of mammalian oocytes by intracellu-
from sea urchin sperm. Nature 267: 836-838.
Potential tracks for a cytoplasmic rotation that lar injection of calcium. Nature 273: 149-151.
specifies the dorso-ventral axis. Dev. Biol. Glabe, C. G. and Vacquier, V. D. 1978. Egg
Furuichi, T., Yoshikawa, S., Miyawaki, A., Wada,
128:185-197. K., Maeda, N. and Mikoshiba, K. 1989. Primary surface glycoprotein receptor for sea urchin
structure and functional expression of the sperm bindin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Endo, Y. G., Kopf, G. S. and Schultz, R. M.
inositol 1,4,5-trisphosphatebinding protein 75: 881-885.
1987. Effects of phorbol ester on mouse eggs:
Dissociation of sperm receptor activity from P400. Nature 342: 32-38. Gong, X., Dubois, D.H., Miller, D. J., and Shur, B.
acrosome reaction-inducing activity of the Garbers, D. L., Tubb, D. J. and Kopf, G. S. 1980. D. 1995. Activation of a G protein complex by
mouse zona pellucida protein, ZP3. Dev. Biol Regulation of sea urchin sperm cAMP-dependent aggregation of -1,4-galactosyltransferase on the
123: 574-577 protein kinases by an egg associated factor. Biol. surface of sperm. Science 269: 1718-1721.
Epel, D. 1977. The program of fertilization. Reprod. 22: 526-532. Gonzlez-Martfnez, M. T., Guerrero, A.,
Sci. Am. 237(5): 128-138. Garbers, D. L., Kopf, G. S., Tubb, D, J, and Olson, Morales, E., de la Torre, L. and Darszon, A.
G. 1983. Elevation of sperm adenosine 3':5'- 1992. A depolarization can trigger Ca2+ uptake
Epel, D. 1980. Fertilization. Endeavour N.S. 4: and the acrosome reaction when preceded by a
26-31. monophosphate concentrations by a fucose
sulfate-rich complex associated with eggs. I. hyperpolarization in L. pictus sea urchin sperm.
Epel, D., Patton, C., Wallace, R. W. and Cheung, Structural characterization. Biol. Reprod. 29: Dev. Biol. 150: 193-202.
W. Y. 1981. Calmodulin activates NAD kinase 1211-1220. Gould, M. and Stephano, J. L. 1987. Electrical
of sea urchin eggs: An early response. Cell 23: response of eggs to acrosomal protein similar to
543-549. Gardiner, D. M. and Grey, R. D. 1983. Membrane
junctions in Xenopus eggs: Their distribution those induced by sperm. Science 235: 1654-1656.
Ferris, C. D., Huganir, R. L., Supattapone, S. and suggests a role in calcium regulation. J. Cell Biol. Gould, M. and Stephano, J. L. 1991. Peptides
Snyder, S. H. 1989. Purified inositol 1,4,5- 96: 1159-1163. from sperm acrosomal protein that activate de-
trisphosphate receptor mediates calcium flux in velopment. Dev. Biol. 146: 509-518.
reconstituted lipid vesicles. Nature 342: 87-89. Gerhart, J., Ubbels, G., Black, S., Hara, K. and
Kirschner, M. 1981. A reinvestigation of the Gould-Somero, M., Jaffe, L. A. and Holland, L.
Florman, H. M. 1995. Sequential focal and glo- role of the grey crescent in axis formation in Z. 1979. Electrically mediated fast polyspermy
bal elevations of sperm intracellular Ca2+ are Xenopus laevis. Nature 292: 511-516. block in eggs of the marine worm, Urechis
initiated by the zona pellucida during acrosomal caupo. J. Cell Biol. 82: 426-440.
exocytosis. Dev. Biol. 165: 152-164. Gerhart, J., Black, S., Gimlich, R. and Scharf, S.
1983. Control of polarity in the amphibian egg. Green, G. R. and Poccia, E. L. 1985. Phos-
Florman, H. M. and Storey, B. T. 1982. Mouse In W. R. Jeffery and R. A. Raft (eds.), Time, phorylation of sea urchin sperm H1 and H2B
gamete interactions: The zona pellucida is the Space, and Pattern in Embryonic Development. histories precedes chromatin decondensation
site of the acrosome reaction leading to fertili- Alan R. Liss, New York, pp. 261-286. and H1 exchange during pronuclear formation.
zation in vitro. Dev. Biol. 91:121-130. Dev. Biol. 108: 235-245.
Gerhart, J., Danilchik, M., Doniach, T.,
Florman, H. M. and Wassarman, P. M. 1985. Roberts, S., Rowning, B. and Stewart, R. 1989. Gross, P. R., Malkin, L. I., and Moyer, W. 1964.
O-linked oligosaccharides of mouse egg ZP3 Cortical rotation of the Xenopus egg: Conse- Templates for the first proteins of embryonic
account for its sperm receptor activity. Cell quences for the anterioposterior pattern of development. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 51:
41: 313-324. embryonic dorsal development. Development 407-414.
1989 [Suppl.]: 37-51.
Florman, H. M., Bechtol, K. B. and Wassarman, Gundersen, G. G., Medill, L. and Shapiro, B. M.
P. M. 1984. Enzymatic dissection of the Giles, R. E., Blanc, H., Cann, H. M. and Wallace, 1986. Sperm surface proteins are incorporated
functions of the mouse eggs receptor for sperm. D. C. 1980. Maternal inheritance of human into the egg membrane and cytoplasm after fer-
Dev. Biol. 106: 243-255. mitochondrial DNA. Proc. Natl, Acad. Sci. USA tilization. Dev. Biol. 113: 207-217.
77: 6715-6719.
Florman, H, M., Corron, M. E., Kim, T. D. H. Gwatkin, R. B. L. 1976. Fertilization. In G.
and Babcock, D. F. 1992. Activation of voltage- Gilkey, J. C., Jaffe, L. F., Ridgway, E. G. and Poste and G. L. Nicolson (eds.), The Cell
dependent calcium channels of mammalian Reynolds, G. T. 1978. A free calcium wave Surface in Animal Embryogenesis and
sperm is required for zona pellucida-induced traverses the activating egg of the medaka, Deveopment. Elsevier North-Holland, New
acrosomal exocytosis. Dev. Biol. 152: 304-314. Oryzias latipes. J. Cell Biol. 76: 448-466. York, pp. 1-53.
Foerder, C. A. and Shapiro, B. M. 1977. Release Ginzburg, A. S. 1985. Phylogenetic changes in Gyllensten, U., Wharton, D., Josefson, A.
of ovoperoxiclase from sea urchin eggs hardens the type of fertilization. In J. Mlkovsky and V. and Wilson, A. 1991. Paternal inheritance
fertilization membrane with tyrosine crosslinks. J. A. Novk (eds.), Evolution and Morphogene- of mitochondrial DNA in mice. Nature 352:
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74: 4214-4218. sis. Academia, Prague, pp. 459-466. 255-258.
Hafner, M., Petzelt, C., Nobiling, R., Pawley, J. Jacobs, P. A., Wilson, C. M., Sprenkle, J. A., Kvist, U., Afzelius, B. A. and Nilsson, L. 1980.
B., Kramp, D. and Schatten, G. 1988. Wave of Rosenshein, N. B. and Migeon, B. R. 1980. The intrinsic mechanism of chromatin decon-
free calcium at fertilization in the sea urchin egg Mechanism of origin of complete hydatidiform densation and its activation in human sperma-
visualized with Fura-2. Cell Motil. Cytoskel. 9: moles. Nature 286: 714-716. tozoa. Dev. Growth Differ. 22: 543-554.
271-277.
Jaffe, L. A. 1976. Fast block to polyspermy Langlais, J., Kan, F. W. K., Granger, L.,
Hall, C. G., Sancho, J., and Terhorst, C. 1993. in sea urchins is electrically mediated. Nature Raymond, L., Bleau, G. and Roberts, K. D.
Reconstitution of T cell receptor -mediated 261: 68-71. 1988. Identification of sterol acceptors that
calcium mobilization in nonlymphoid cells. stimulate cholesterol efflux from human
Jaffe, L. A. 1980. Electrical polyspermy block
Science 261: 915-918. spermatozoa during in vitro capacitation.
in sea urchins: Nicotine and low sodium
Gamete Res, 20: 185-201.
Hamaguchi, M. S. and Hiramoto, Y. 1980. Fertili- experiments. Dev. Growth Differ. 22: 503-507.
zation process in the heart-urchin, Clypaester Lechleiter, J. D. and Clapham, D. E. 1992. Molecular
Jaffe, L. A. 1996. Egg membranes during fertili-
japonicus, observed with a differential interferen- mechanisms of intracellular calcium excitability in
zation. In S. G. Schultz et al. (eds.), Molecular
ce microscope. Dev. Growth Differ. 22: 517-530. X. laevis oocytes. Cell 69: 283-294.
Biology of Membrane Transport Disorders.
Hamaguchi, M. S. and Hiramoto, Y. 1981. Plenum, NY, pp. 367-378. Leeuwenhoek, A. van. 1685. Letter to the Royal
Activation of sea urchin eggs by microinjection Society of London. Quoted in E. G. Ruestow,
Jaffe, L. A. and Cross, N. L. 1983. Electrical
of calcium buffers. Exp. Cell Res, 134: 171-179. 1983, Images and ideas: Leeuwenhoeks
properties of vertebrate oocyte membranes. Biol.
perception of the spermatozoa. J. Hist. Biol.
Hardy, D. M., Harumi, T. and Garbers, D. L. Reprod. 30: 50-54.
16:185-224.
1994. Sea urchin sperm receptors for egg
Jaffe, L. A. and Gould, M. 1985. Polyspermy-
peptides. Sem. Dev. Biol. 5: 217-224. Levine, A. E., Walsh, K. A. and Fodor, E. J. B.
preventing mechanisms. Biol. Fert. 3: 223-250.
1978. Evidence of an acrosin-like enzyme in
Hartsoeker, N. 1694. Essai de dioptrique. Paris.
Jaffe, L. F. 1983. Sources of calcium in egg sea urchin sperm. Dev. Biol. 63: 299-306.
Heinecke, J. W. and Shapiro, B. M. 1989. activation: A review and hypothesis. Dev, Biol.
Leyton, L. and Saling, P. 1989a. 95 kd sperm
Respiratory oxygen burst of fertilization. Proc. 99: 265-276.
proteins bind ZP3 and serve as tyrosine kinase
Natl. Acad. Sci. USA 86: 1259-1263.
Jones, R., Brown, C. R. and Lancaster, R. T. substrates in response to zona binding. Cell 57:
Hertwig, 0. 1877. Beitrge zur Kenntniss der 1988. Carbohydrate-binding properties o boar 1123-1130.
Bildung, Befruchtung, und Theilung des sperm proacrosin and assessment of its role in
Leyton, L. and Saling, P. 1989b. Evidence that
theirischen Eies. Morphol. Jahr. 1: 347-452. sperm-egg recognition and adhesion during fer-
aggregation of mouse sperm receptors by ZP3
tilization. Development 102: 781-792.
Hollinger, T. G. and Schuetz, A. W. 1976. triggers the acrosome reaction. J. Cell Biol. 108:
Cleavage and cortical granule breakdown in Just, E. E. 1919. The fertilization reaction in 2163-2168.
Rana pipiens oocytes induced by direct micro- Echinarachinus parma. Biol. Bull. 36: 1-10.
Leyton, L., Leguen, P., Bunch, D. and Saling, P.
injection of calcium. J. Cell Biol. 71: 395-401.
Kaufman, M. H., Barton, S.C. and Surani, M. A. M. 1992. Regulation of mouse gametic interac-
Hong, K. and Vacquier, V. D. 1986. Fusion of H. 1977. Normal postimplantation development tion by a sperm tyrosine kinase. Proc. Natl. Acad.
liposomes induced by a cationic protein from of mouse parthenogenetic embryos to the Sci. USA 93: 1164-1169.
the acrosomal granule of abalone spermatozoa. forelimb bud stage. Nature 265: 53-55.
Longo, F. J. 1986. Surface changes at fertilizati-
Biochemistry 25: 543-549.
Keller, S. H. and Vacquier, V. D. 1994a. Nlinked on: Integration of sea urchin (Arbacia punctu-
Houliston, E. and Elinson, R. P. 1991a. Patterns oligosaccharides of sea urchin egg jelly induces lata) sperm and oocyte plasma membranes. Dev.
of microtubule polymerization relating to the sperm acrosome reaction. Dev. Growth Biol. 116: 143-159.
cortical rotation in Xenopus laevis eggs. Deve- Differ. 36: 551-556.
Longo, F. J. and Kunkle, M. 1978. Transforma-
lopment 112:107-117.
Keller, S. H. and Vacquier, V. D. 1994b. The tion of sperm nuclei upon insemination. In A.
Houliston, E. and Elinson, R. P. 1991b. isolation of acrosome-reaction-inducing A. Moscona and A. Monroy (eds.), Current Topics
Evidence for the involvement of microtubu- glycoproteins from sea urchin egg jelly. Dev. in Developmental Biology, Vol. 12. Academic
les, endoplasmic reticulum, and kinesin in Biol. 162: 304-312. Press, New York, pp. 149-184.
cortical rotation of fertilized frog eggs. J. Cell
Klag, J. J. and Ubbels, G. A. 1975. Regional Longo, F. J., Lynn, J. W., McCulloh, D. H. and
Biol. 114: 1017-1028.
morphological and cytochemical differentiati- Chambers, E. L. 1986. Correlative ultrastructural
Humphreys, T. 1971. Measurements of mes- on of the fertilized egg of Discoglossus pictus and electrophysiological studies of sperm-egg
senger RNA entering polysomes upon fertiliza- (Anura). Differentiation 3: 15-20. interactions of the sea urchin Lytechinus
tion in sea urchins. Dev. Biol. 26: 201-208. variegatus. Dev. Biol. 118: 155-166.
Kline, D. 1988. Calcium-dependent events
Hunter, R. H. F. 1989. Ovarian programming at fertilization of the frog egg: Injection of Lopez, L. C., Bayna, E. M., Litoff, D., Shaper,
of gamete progression and maturation in the a calcium buffer blocks ion channel opening, N. L., Shaper, J. H. and Shur, B. D. 1985. Recep-
female genital tract. Zool. J. Linn. Soc. 95: exocytosis, and formation of pronuclei. Dev. tor function of mouse sperm surface galactosyl-
117-124. Biol. 126: 346-361. transferase during fertilization. I. Cell Biol. 101:
1501-1510.
Hylander, B. L. and Summers, R. G. 1982. An Kline, D., Simoncini, L., Mandel, G., Maue, R., Kado,
ultrastructural and immunocytochemical locali- R. T. and Jaffe. L. A. 1988. Fertilization events Luttmer, S. and Longo, F. J. 1985. Ultrastructural
zation of hyaline in the sea urchin egg. Dev. induced by neurotransmitters after injection of and morphometric observations of cortical
Biol. 93: 368-380. mRNA into Xenopus eggs. Science 241: 464-467. endoplasmic reticulum in Arbacia, Spisula, and
mouse eggs. Dev. Growth Differ. 27: 349-359.
Iwao, Y. and Jaffe, L. A. 1989. Evidence that Kline, D, Kopf, G., Muncy, L. F. and Jaffe, L. A.
the voltage-dependent component in the ferti- 1991. Evidence for the involvement of a pertussis Manes, M.E. and Elinson, R.P. 1980. Ultraviolet
lization porcess is contributed by the sperm. Dev. toxin-insensitive G-protem in egg activation of light inhibits gray crescent formation in the frog
Biol. 134: 446-451. the frog Xenopus laevis. Dev. Biol. 143: 218-229. egg. Wilhelm Roux Arch. Dev. Biol. 189: 73-76.
Manes, M. E., Elinson, R. P. and Barbieri, F. D. pellucida glycoprotein ZP2 following activation Poirier, G. R. and Jackson, J. 1981. Isolation
1978. Formation of the amphibian gray crescent: of mouse eggs. Dev. Biol. 132: 103-112. and characterization of two proteinase inhibitors
Effects of colchicine and cytochalasin-B. from the male reproductive tract of mice.
Moore, G. D., Kopf, G. S. and Schultz, R M. 1993. Gamete Res. 4: 555-569.
Wilhelm Roux Arch. Dev. Biol. 185: 99-104.
Complete mouse egg activation in the absence of
McCulloh, D. H. and Chambers, E. L. 1992. sperm by stimulation of an exogenous G protein- Porter, D. C. and Vacquier, V. D. 1986. Phos-
Fusion of membranes during fertilization. J. Gen. coupled receptor. Dev. Biol. 159: 669-678. phorylation of sperm histone HI is induced by
Physiol. 99:137-175. the egg jelly layer in the sea urchin Strongylo-
Moore, G. D., Ayabe, T., Visconti, P. E., Schultz, centrotus purpuratus. Dev. Biol. 116: 203-212.
McGrath, J. and Solter, D. 1984. Completion of R. M. and Kopf, G. 1994. Roles of heteromeric
mouse embryogenesis requires both the mater- and monomeric G proteins in sperm-induced Prevost, J. L. and Dumas, J. B. 1824.
nal and paternal genome. Cell 37: 179-183. activation of mouse eggs. Development 120: Deuxieme mmoire sur la gnration. Ann.
3313-3323. Sci. Nat. 2: 129-149.
McPherson, S. M., McPherson, P. S., Mathews,
L., Campbell, K. P. and Longo, F. J. 1992. Moy, G. W. and Vacquier, V. D. 1979. Immuno- Primakoff, P., Hyatt, H. and Tredick-Kline, J.
Cortical localization of a calcium release channel peroxidase localization of bindin during the 1987. Identification and purification of a sperm
in sea urchin eggs. J. Cell Biol. 116: 111-1121. adhesion of sperm to sea urchin eggs. Curr. Top. cell surface protein with a potential role in
Dev. Biol. 13: 31-44. sperm-egg membrane fusion. 1. Cell Biol. 104:
Mead, K. S. and Epel, D. 1995. Beakers and 141-149.
breakers: how fertisation in the laboratory differs Mozingo, N. M. and Chandler, D. E. 1991.
from fertisation in nature. Zygote 3: 95-99. Evidence for the existence of two assembly Primakoff, P., Lathrop, W., Woolman, L.,
domains within the sea urchin fertilization en- Cowan, A. and Myles, D. 1988. Fully effective
Meizel, S. 1984. The importance of hydro- contraception in male and female guinea pigs
velope. Dev. Biol. 146: 148-157.
lytic enzymes to an exocytotic event, the immunized with the sperm protein PH-20.
mammalian sperm acrosome reaction. Biol. Multigner, L., Gagnon, J., Dorsselaer, A. van Nature 335: 543-546.
Rev. 59: 125-157. and Job, D. 1992. Stabilization of sea urchin
flagellar microtubules by histone H1. Nature 360: Ralt, D. and eight others. 1991. Sperm attraction
Metz, C. B. 1978. Sperm and egg receptors to a follicular factor(s) correlates with human
33-39.
involved in fertilization. Curr. Top. Dev. Biol. egg fertilizability. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
12:107-148. Myles, D. G., Kimmel, L. H., Blobel, C. P., 88: 2840-2844.
White, J. M. and Primakoff, P. 1994. Identifi-
Miller, D. J., Macek, M. B. and Shur, B. D. 1992. Ramarao, C. S. and Garbers, D. L. 1985. Recep-
cation of a binding site in the disintegrin domain
Complementarity between sperm surface -1,4- tor-mediated regulation of guanylate cyclase
of fertilin required for sperm-egg fusion. Proc.
galactosyltransferase and egg-coat ZP3 mediates activity in spermatozoa. J. Biol. Chem. 260:
sperm-egg binding. Nature 357: 589-593. 8390-8396.
Nishizuka, Y. 1986. Studies and perspectives of
Miller, D.L., Gong, X., Decker, G. and Shur, B. Ravnik, S. E., Zarutskie, P. W. and Muller, C. H.
protein kinase C. Science 233: 305-312.
D. 1993. Egg cortical granule N-acetylglucosa- 1992. Purification and characterization of a
minidase is required for the mouse zona block to Ogawa, K., Mohri, T. and Mohri, H. 1977. Iden- human follicular fluid lipid transfer protein that
polyspermy. J. Cell Biol. 123: 1431-1440. tification of dynein as the outer arms of sea stimulates human sperm capacitation. Biol.
urchin sperm axonomes. Proc. Natl. Acad. Sci. Reprod. 47: 1126-1133.
Miller, R. L. 1978. Site-specific agglutination
USA 74: 5006-5010.
and the timed release of a sperm chemoattractant Roegiers, F., McDougall, A. and Sardet, C. 1995.
by the egg of the leptomedusan, Orthopyxis Ohama, K., Kajii, T., Okamoto, E., Fukada Y., The sperm entry point defines the orientation
caliculata. J. Exp. Zool. 205: 385-392. Imaizumi, K., Tsukahara, M., Kobayashi, K. and of the calcium-induced contraction wave that
Hagiwara, K. 1981. Dispermic origin of XY directs the first phase of cytoplasmic reorgani-
Miller, R. L. 1985. Sperm chemo-orientation in
hydaticliform moles. Nature 292: 551-552. zation in the ascidian egg. Development 121:
the metazoa. In C. B. Metz, Jr. and A. Monroy
3457-3466.
(eds.), Biology of Fertilization, Vol. 2. Academic Olds, J. L. and thirteen others. 1995. Imaging
Press, New York, pp. 275-337. protein kinase C activation in living sea urchin Rossignol, D. P., Earles, B. J., Decker, G. L. and
eggs after fertilization. Dev. Biol. 172: 675-682. Lennarz, W. J. 1984. Characterization of the sperm
Miyazaki, S. and Igusa, Y. 1981. Fertilizati-
receptor on the surface of eggs of Strongylocen-
on potential in golden hamster eggs consists Parrington, J., Swann, K., Shevchenko V. I., Sesay,
trotus purpuratus. Dev. Biol. 104: 308-321.
of recurring hyperpolarizations. Nature 290: A. K. and Lai, F. A. 1996. Calcium os cillations
702-704. in mammalian eggs triggered by a soluble sperm Roux, W. 1887. Beitrge zur Entwicklungsmecha-
protein. Nature 379: 364-368. nik des Embryo. Arch. Mikrosk. Anat. 29: 157-212.
Miyazaki, S.-I, Yuzaki, M., Nakada, K.,
Shirakawa, H., Nakanishi, S., Nakade, S. and Perreault, S. D., Barbee, R. R., and Slott, V. L. Saling, P. M. 1989. Mammalian sperm interac-
Mikoshiba, K. 1992. Block of Ca2+ wave and 1988. Importance of glutathione in the acquisition with extracellular matrices of the egg.
Ca2+ oscillation by antibody to the inositol 1,4,5- tion and maintainance of sperm nuclear Oxford Rev. Reprod. Biol. 11: 339-388.
trisphosphate receptor in fertilized hamster eggs. decondensing activity in maturing hamster
Saling, P. M., Sowinski, J. and Storey, B. T. 1979.
Science 257: 251-255. oocytes. Dev. Biol. 125: 181-186.
An ultrastructural study of epididymal mouse
Mohri, T., Ivonnet, P. I. and Chambers, E. Pinto-Correia, C. 1997. The Ovary of Eve: Eggs spermatozoa binding to zonae pellucida in vitro:
L. 1995. Effect of sperm-induced activation and Sperm and Preformation. University of Sequential relationship to acrosome reaction. J.
current and increase of cytosolic Ca 2+ by Chicago Press, Chicago. Exp. Zool. 209: 229-238.
agents that modify the mobilization of
Poccia, D., Salik, J. and Krystal, G. 1981. Sawada, T. and Schatten, G. 1989. Effects of
[Ca 2+] i I. Heparin and pentosan polysulfate.
Transitions in histone variants of the male cytoskeletal inhibitors on ooplasmic segregation
Dev. Biol. 172: 139-157.
pronucleus following fertilization and evidence and microtubule organization during fertilizati-
Moller, C. C. and Wassarman, P. M. 1989. Cha- for a maternal store of cleavagestage histones on and early development in the ascidian
racterization of a proteinase that cleaves zona in the sea urchin egg. Dev. Biol. 82: 287-296. Molgula occidentalis. Dev. Biol. 132: 331-342.
Schackmann, R. W. and Shapiro, B. M. 1981. A Simerly, C. and ten others. 1994. The paternal Swann, K. and Whitaker, M. 1986. The part
partial sequence of ionic changes associated with inheritance of the centrosome, the cells micro- played by inositol trisphosphate and calcium in
the acrosome reaction of Strongylocentrotus tubule-organizing center, in humans, and the the propagation of the fertilization wave in sea
purpuratus. Dev. Biol. 81: 145-154. implications for infertility. Nat. Med. 1: 1-10. urchin eggs. J. Cell Biol. 103: 2333-2342.
Schatten, G. and Mazia, D. 1976. The penetration Sluder, G., Miller, F. J., Lewis, K., K., Davison, Terasaki, M. and Sardet, C. 1991. Demonstrati-
of the spermatozoan through the sea urchin egg E. D. and Reider, C. L. 1989. Centrosome on of calcium uptake and release by sea urchin
surface at fertilization: Observations from the inheritance in starfish zygotes: Selective loss of egg cortical endoplasmic reticulum. J. Cell Biol.
outside on whole eggs and from the inside on isolated the maternal centrosome after fertilization. Dev. 115: 1031-1037.
surfaces. Exp. Cell Res. 98: 325-337. Biol. 131: 567-579.
Tilney, L. G., Bryan, J., Bush, D. J., Fujiwara, K.,
Schatten, G. and Schatten, H. 1983. The Sluder, G., Miller, F. J. and Lewis, K. 1993. Mooseker, M. S., Murphy, D. B. and Snyder, D.
energetic egg. The Sciences 23(5): 28-35. Centrosome inheritance in starfish zygotes II. H. 1973. Microtubules: Evidence for 13
Selective suppression of the maternal centrosome protofilaments. J. Cell Biol. 59: 267-275.
Schatten, H. and Schatten, G. 1980. Surface activity
during meiosis. Dev. Biol. 155: 58-67.
at the plasma membrane during sperm incorporation Tilney, L. G., Kiehart, D. P., Sardet, C. and
and its cytochalasin-B sensitivity: Scanning electron Snell, W. J. and White, J. M. 1996. The molecules Tilney, M. 1978. Polymerization of actin.
micrography and time-lapse video microscopy du- of mammalian fertilization. Cell 85: 629-637. IV. Role of Ca 2+ and H + in the assembly of
ring fertilization of the sea urchin Lytechinus actin and in membrane fusion in the
Speksnijder, J. E., Sardet, C. and Jaffe, L. F. 1990.
variegatus. Dev. Biol. 78: 435-449. acrosomal reaction of echinoderm sperm. J.
The activation wave of calcium in the ascidian
Cell Biol. 77: 536-560.
Schroeder, T. E. 1979. Surface area change at egg and its role in ooplasmic segregation. J. Cell
fertilization: Resorption of the mosaic Biol. 110: 1589-1598. Tombes, R. M. and Shapiro, B. M. 1985.
membrane. Dev. Biol. 70: 306-326. Metabolite channeling: A phosphocreatine
Steinhardt, R. A. and Epel, D. 1974. Activation
shuttle to mediate high-energy phosphate
SeGall, G. K. and Lennarz, W. J. 1979. Chemical of sea urchin eggs by a calcium ionophore. Proc.
transport between sperm mitochondrion and tail.
characterization of the component of the jelly Natl. Acad. Sci. USA 71: 1915-1919.
Cell 41: 325-334.
coat from sea urchin eggs responsible for
Steinhardt, R., Zucker, R. and Schatten, G. 1977.
induction of the acrosome reaction. Dev. Biol. Turner, P. R., Jaffe, L. A. and Fein,A. 1986.
Intracellular calcium release at fertilization in
71: 33-48. Regulation of cortical vesicle exocytosis in sea
the sea urchin egg. Dev. Biol. 58: 185-196.
urchin eggs by inositol 1,4,5-trisphosphate and
Shen, S. S. and Buck, W. R. 1990. A synthestic
Storey, B. T. 1995. Interactions between gametes GTP-binding protein. J. Cell Biel. 102: 70-76.
peptide of the pseudosubstrate domain of protein
leading to fertilization: The sperms eye view.
kinase C blocks cytoplasmic alakalinization du- Turner, P. R., Jaffe, L. A. and Primakoff, P.
Reprod. Fert. Dev. 7: 927-942.
ring activation of the sea urchin egg. Dev. Biol. 1987. A cholera toxin-sensitive G-protein
140: 272-280. Suarez, S. S. and Dai, X. 1995. Intracellular stimulates exocytosis in sea urchin eggs. Dev.
calcium reaches different levels of elevation in Biol. 120: 577-583.
Shen, S. S. and Burgart, L. J. 1986. 1,2-
hyperactivated and ac rosome-reacted hamster
Diacylglycerols mimic phorbol 12-myristate 13- Uzzell, T. M. 1964. Relations of the diploid and
sperm. Mol. Reprod. Dev. 42: 325-333.
acetate activation of the sea urchin egg. J. Cell. triploid species of the Ambystoma jeffersonia-
Physiol. 127: 330-340. Suarez, S. S., Katz, D. F., Owen, D. H., Andrew, J. num complex. Copeia 1964: 257-300.
B. and Powell, R. L. 1991. Evidence for the
Shen, S. S. and Steinhardt, R. A. 1978. Direct Vacquier, V D. 1979. The interaction of sea
function of hyperactivated motility in sperm.
measurement of intracellular pH during meta- urchin gametes during fertilization. Am.
Biol. Reprod. 44: 375-381.
bolic depression of the sea urchin egg. Nature Zool. 19: 839-849.
272: 253-254. Summers, R. G. and Hylander, B. L. 1974. An
Vacquier, V. D. and Moy, G. W. 1977. Isolation
ultrastructural analysis of early fertilization in
Shilling, F. M., Carroll, D. J., Muslin, A. J., of bindin: The protein responsible for adhesion
the sand dollar, Echinarachnius parma. Cell Tiss.
Escobodo, J. A., Williams, L. T. and Jaffe, L. A. of sperm to sea urchin eggs. Proc. Natl. Acad.
Res. 150: 343-368.
1994. Evidence for both tyrosine kinase and G- Sci. USA 74: 2456-2460.
protein-coupled pathways leading to starfish egg Summers, R. G. and Hylander, B. L. 1975. Vacquier, V. D. and Payne, J. E. 1973. Methods
activation. Dev. Biol. 162: 590-599. Species-specificity of acrosome reaction and for quantitating sea urchin sperm in egg binding.
Shimomura, H., Dangott, L. J. and Garbers, primary gamete binding in echinoids. Exp. Cell Exp. Cell Res. 82: 227-235.
D. L. 1986. Covalent coupling of a resact Res. 96: 63-68.
Vacquier, V. D., Tegner, M. J. and Epel, D.
analogue to guanylate cyclase. J. Biol. Chem. Summers, R. G., Hylander, B. L., Colwin L H. 1973. Protease release from sea urchin eggs
261: 15778-15782. and Colwin, A. L. 1975. The functional anatomy at fertilization alters the vitelline layer and
Shur, B. D. and Hall, N. G. 1982a. Sperm surface of the echinoderm spermatozoon and its inte- aids in preventing polyspermy. Exp. Cell Res.
galactosyltransferase activities during in vitro raction with the egg at fertilization. Am. Zool. 80: 111-119.
capacitation. J. Cell Biol. 95: 567-573. 15: 523-551.
Vincent, J. P., Oster, G. F. and Gerhart, J. C.
Shur, B. D. and Hall, N. G. 1982b. A role for Surani, M. A. H. and Barton, S. C. 1983. Deve- 1986. Kinematics of gray crescent formation in
mouse sperm surface galactosyltransferase in lopment of gynogenetic eggs in the mouse: Im- Xenopus eggs. The displacement of subcortical
sperm binding for the egg zona pellucida. J. Cell plications for parthenogenetic embryos. Science cytoplasm relative to the egg surface. Dev. Biol,
Biol. 95: 574-579. 222: 1034-1036. 113: 484-500.
Shur, B. D. and Neely, C. A. 1988. Plasma Surani, M. A. H., Barton, S. C. and Norris, M. L. Visconti, P. E., Bailey, J. L., Moore, G. D., Pan, D.,
membrane association, purification, and 1986. Nuclear transplantation in the mouse: Olds-Clarke, P. and Kopf, G. S. 1995a. Capacitation
partial characterization of mouse sperm Hereditable differences between parental of mouse spermatozoa I. Correlation between
1,4-galactosyltransferase. J. Biol. Chem. genomes after activation of the embryonic capacitation state and protein tyrosine phospho-
263: 17706-17714. genome. Cell 45: 127-136. rylation. Development 121: 1129-1137.
Visconti, P. E. and seven others. 1995b. Whitaker, M. and Irvine, R. F. 1984. Inositol Xu, Z., Kopf, G. S. and Schultz, R. M. 1994.
Capacitation of mouse spermatozoa II. Protein 1,4,5-triphosphate microinjection activates sea Involvement of inositol-1,4,5-trisphospha-
tyrosine phosphorylation and capacitation are urchin eggs. Nature 312: 636-639. te-mediated Ca 2+ release in early and late
regulated by a cAMP-dependent pathway. De- events of mouse egg activation. Develop-
velopment 121: 1139-1150. Whitaker, M. and Steinhardt, R. 1982. Ionic ment 120: 1851-1859.
regulation of egg activation. Q. Rev. Biophys.
von Kolliker, A. 1841. Beitrge zur Kenntnis 15: 593-666. Yanagimachi, R. 1994. Mammalian fertilizati-
der Geschlectverhdltnisse und der Samenflssi- on. In E. Knobil and J. D. Neill (eds.), The
gkeit wirbelloser Thiere, nebst einem Versuch Wilcox, A. J., Weinberg, C. R. and Baird, D. D. Physiology of Reproduction, 2nd Ed. Raven
ber Wesen und die Bedeutung der sogenannten 1995. Timing of sexual intercourse in relation Press, NY.
Samenthiere, Berlin. to ovulation: Effects on the probability of con-
ception, survival of pregnancy, and the sex of Yanagimachi, R. and Noda, Y. D. 1970.
Ward, C. R. and Kopf, G. S. 1993. Molecular Electron microscope studies of sperm
the baby. N. Engl. J. Med. 333: 1517-121.
events mediating sperm activation. Dev. Biol. incorporation into the golden hamster egg.
158: 9-34. Williams, C. J., Schultz, R. M. and Kopf, G. S. Am. J. Anat. 128: 429-462.
1992. Role of G proteins in mouse egg activation:
Ward, G. E., Brokaw, C. J., Garbers, D. L. and Yirn, D. L., Opresko, L. K., Wiley, H. S. and
Stimulatory effects of acetylcholine on the ZP2
Vacquier, V. D. 1985. Chemotaxis of Arbacia Nuccitelli, R. 1994. Highly polarized EGF re-
to ZP2f conversion and pronuclear formation ceptor tyrosine kinase activity initiates egg
punctulata spermatozoa to resact, a pepticle from in eggs expressing a functional ml muscarinic
the egg jelly layer. J. Cell Biol. 101: 2324-2329. activation in Xenopus. Dev. Biol. 162: 41-55.
receptor. Dev. Biol. 151: 288-296.
Wassarman, P. 1987. The biology and chemistry Yoshida, M., Inabar, K. and Morisawa, M. 1993.
Wilson, W. L. and Oliphant, G. 1987. Isolation Sperm chemotaxis during the process of fertili-
of fertilization. Science 235: 553-560. and biochemical characterization of the subunits zation in the ascidians Ciona savignyi and Ciona
Wassarman, P. M. 1989. Fertilization in mam- of the rabbit sperm acrosome stabilizing factor. intestinalis. Dev. Biol. 157: 497-506.
mals. Sci. Am. 256(6): 78-84. Biol. Reprod. 37: 159-169.
Zeng, Y., Clark, E. N. and Florman, H. M.
Watanabe, N., Hunt, T., Ikawa, Y. and Sagata, Winkler, M. M., Steinhardt, R. A., Grainger, J. 1995. Sperm membrane potential: Hyper-
N. 1991. Independent inactivation of MPF and L. and Minning, L. 1980. Dual ionic controls polarization during capacitation regulates
cytostatic factor (Mos) upon fertilization of for the activation of protein synthesis at ferti- zona pellucida-dependent acrosomal secre-
Xenopus eggs. Nature 352: 247-249. lization. Nature 287: 558-560. tion. Dev. Biol, 171: 554-563.
CAPTULO 5 Clivagem: Criando multicelularidade 167
Clivagem: Criando multicelularidade

5
Para nossa limitada inteligncia, pode pa-
recer simples dividir um ncleo em partes
iguais. A clula, manifestadamente, abriga
uma opinio muito diferente.
E. B. WILSON, (1923)
N OTVEL COMO S ELA , a fertilizao o passo inicial do desenvolvi-
mento. O zigoto, com o seu novo potencial gentico e com sua nova dispo-
sio do citoplasma, inicia agora a produo de um novo organismo
multicelular. Em todas as espcies de animais conhecidas, isso comea por um proces-
so chamado clivagem, uma srie de divises mitticas pelo qual o enorme volume do
citoplasma do ovo dividido em numerosas pequenas clulas nucleadas. Essas clulas
Deve-se mostrar o mximo respeito por em estado de clivagem so chamadas de blastmeros.
tudo que cresce exponencialmente, no
Na maioria das espcies (mamferos sendo a principal exceo) a velocidade da
importa o seu tamanho.
diviso celular e a colocao dos blastmeros um em relao ao outro esto comple-
GARRETT HARDIN, (1968)
tamente sob controle das protenas e dos mRNAs armazenados no ocito pela me. O
genoma zigtico transmitido por mitose para todas as outras clulas, no funciona em
embries com clivagem precoce. Poucos, se alguns, mRNAs so produzidos mais
tarde durante a clivagem, o embrio pode dividir-se apropriadamente at mesmo quan-
do produtos qumicos so usados para inibir a transcrio. Tambm em muitas espci-
es, no h aumento do volume embrionrio durante a clivagem. Isso difere da maioria
dos casos de proliferao de clulas, do qual existe um perodo de crescimento celular
entre as mitoses: a clula se expande para quase o dobro de seu volume, da se divide.
Esse crescimento produz um aumento total de clulas enquanto mantm uma razo
relativamente constante entre volume nuclear e volume citoplasmtico. Durante a cliva-
gem embrionria, no entanto, o volume citoplasmtico no aumenta. Antes, o enorme
volume do citoplasma zigtico dividido cada vez mais em clulas menores. O primeiro
ovo dividido ao meio, em seguida em quartos, em oitavos, e assim por diante. Essa
diviso do citoplasma do ovo, sem o aumento do seu volume, acompanhada pela
abolio do perodo de crescimento entre as divises, enquanto a clivagem dos ncleos
ocorre numa razo to rpida nunca vista antes (nem mesmo em clulas de tumor). Um
ovo de r, por exemplo, pode ser dividido em 37.000 clulas em apenas 43 horas. A
mitose na Drosophila, em estgio de clivagem, ocorre a cada dez minutos por mais de
duas horas, e em apenas 12 horas forma algo em torno de 50.000 clulas. Esse aumento
em nmero de clulas pode ser apreciado comparando a clivagem com outras fases do
desenvolvimento. A Figura 5.1 mostra o logaritmo de nmeros celulares em um embrio
de r representado graficamente em funo do tempo de desenvolvimento (Sze, 1953).
Ela ilustra uma evidente descontinuidade entre clivagem e gastrulao.
Uma conseqncia dessa diviso rpida a razo do volume citoplasmtico/nucle-
ar se tornar cada vez menor assim que a clivagem progride. Em muitos tipos de embri-
es, a diminuio da razo entre os volumes citoplasmtico e nuclear crucial na
167
Figura 5.1
Formao de novas clulas du- Clivagem Gastrulao
rante o desenvolvimento preco-
clulas por embrio

Log10 do nmero de
ce da r Rana pipiens. (Segundo
Sze, 1953.)
Horas a 150C
regulagem do tempo da ativao de certos genes. Por exemplo, na r Xenopus laevis,

a transcrio de novas mensagens s ativada aps 12 divises. A essa altura, a razo
da clivagem diminui, os blastmeros tornam-se mveis e os genes nucleares comeam
a ser transcritos. sabido que algo no ovo est sendo titulado pela recm-produzida
cromatina, porque o tempo dessa transio pode ser mudado experimentalmente alte-
rando na clula a razo da cromatina para o citoplasma (Newport and Kirschner,
1982a,b), ainda que a clivagem comece logo aps a fertilizao e termine assim que o
embrio atinja um novo equilbrio entre o ncleo e o citoplasma.
Q PADRES DE CLIVAGEM EMBRIONRIA

Clivagem um processo muito bem coordenado e regulado pelas leis genticas. O
padro da clivagem embrionria de uma dada espcie determinado por dois parme-
tros principais: (1) a quantidade e a distribuio de protena do vitelo dentro do
citoplasma e (2) aqueles fatores no citoplasma do ovo que influenciam no ngulo do
fuso mittico e na determinao do tempo de sua formao.
A quantidade e distribuio de vitelo determina onde a clivagem pode ocorrer e o
tamanho relativo dos blastmeros. Quando um plo do ovo relativamente livre de
vitelo, a diviso celular ocorre nesse plo de uma forma mais rpida do que a do plo
oposto. O plo rico em vitelo chamado de plo vegetal; a concentrao de vitelo no
Tabela 5.1 Classsificao dos tipos de clivagem
Simetria
Padro de clivagem Posio do vitelo de clivagem Animais representativos
Holoblstica Isolcito (oligolcito) Radial Equinodermos, Amphioxus

(clivagem completa) (vitelo escasso, distribudo por igual) Espiral Maioria dos moluscos,
aneldeos, nematelmintos, platelmintos
Bilateral Ascdios
Rotacional Mamferos
Mesolcito (moderadamente telolcito) Radial Anfbios
Meroblstica Telolcito (vitelo denso, concentrado Bilateral Moluscos cefalpodos
(clivagem incompleta) em uma extremidade do ovo) Discoidal Rpteis, peixes, aves
Centrolcito (vitelo concentrado no Superficial Maioria dos artrpodos
centro do ovo)
plo animal relativamente baixa. O ncleo do zigoto freqentemente deslocado em

direo ao plo animal. No geral, o vitelo inibe a clivagem. A Tabela 5.1 fornece a
classificao dos tipos de clivagem e mostra a influncia do vitelo no padro e na
simetria da clivagem. Em zigotos com relativamente pouco vitelo (ovos isolcitos e
mesolcitos) a clivagem holoblstica, significando que o sulco da clivagem se extende
por todo o ovo. Zigotos contendo grande acmulo de protena vitelnica sofrem cliva-
gem meroblstica, onde somente uma poro do citoplasma clivado. O sulco da
clivagem no chega a penetrar na poro de vitelo do citoplasma. Clivagem meroblstica
pode ser discoidal, como nos ovos das aves, ou superficial, como em zigotos de
insetos, dependendo onde o depsito de vitelo estiver localizado, de um lado (telolcito)
ou no centro do citoplasma (centrolcito), respectivamente.
O vitelo uma extraordinria adaptao que permite ao embrio se desenvolver na
ausncia de uma fonte externa de alimentao. Animais desenvolvidos sem grandes
concentraes de vitelo, como os ourios-do-mar, normalmente formam o estgio
larval muito rapidamente. Esse estgio larval pode se alimentar por si s, o desenvol-
vimento continua com a larva nadando livre. Embries de mamferos, que tambm
no possuem uma grande quantidade de vitelo, adotam uma outra estratgia: a pla-
centa, como veremos adiante, se torna a primeira diferenciao do embrio mamfero
separando as clulas que iro formar a placenta. Esse rgo fornece alimento e oxig-
nio para o embrio durante sua longa gestao.
No outro extremo esto os ovos dos insetos, peixes, rpteis e aves. A maior parte
do seu volume celular vitelo. O vitelo deve ser o suficiente para nutrir esses animais,
sendo que eles se desenvolvem sem um estgio larval ou placentrio. A correlao
entre grandes concentraes de vitelo e a falta do estado larval conhecida em algu-
mas espcies de rs. Algumas rs tropicais, tais como as Eleutherodactylus e a
Arthroleptella no passam pelo estgio de girino. Ao contrrio, eles provm seus
ovos com quantidades enormes de concentrao de vitelo (Lutz, 1947). Os ovos no
necessitam ser colocados na gua porque o estgio de girino foi eliminado. (Isso ser
discutido mais adiante no Captulo 19.)
No entanto, o vitelo somente um fator influenciando o padro de clivagem em
uma espcie. Existem tambm padres herdados de divises celulares que so adicio-
nados s restries do vitelo. Isso pode ser prontamente observado em ovos isolcitos,
nos quais muito pouco vitelo est presente. Na ausncia de grandes quantidades de
vitelo, quatro tipos principais de clivagem podem ser observados: holoblstica radial,
holoblstica espiral, holoblstica bilateral e clivagem holoblstica rotacional.
Clivagem holoblstica radial

Clivagem holoblstica radial a forma mais simples de clivagem de se entender. Nesse
tipo de clivagem os sulcos tm orientao paralela e perpendicular ao eixo animal-
vegetal do ovo. Esse tipo de clivagem caracterstico de equinodermos e do
protocordato Amphioxus, assim como de rs e salamandras.
A holotria, Synapta
A clivagem padro da holotria, Synapta digita, ilustrada na Figura 5.2. Aps a
unio dos proncleos, o eixo da primeira haste mittica formado perpendicularmen-
te ao eixo animal-vegetal do ovo. Para esse fim, o primeiro sulco da clivagem passa
diretamente atravs dos plos animal e vegetal, criando duas clulas filhas do mesmo
tamanho. Essa clivagem conhecida como meridional porque passa pelos dois plos
como um meridiano no globo. Os sulcos da segunda clivagem esto no ngulo reto
dos sulcos da primeira clivagem, mas continuam perpendiculares ao eixo animal-ve-
getal do ovo. Os dois sulcos da clivagem aparecem simultaneamente em ambos
blastmeros e tambm passam pelos dois plos. Dessa maneira, as primeiras duas
divises so, ao mesmo tempo, meridional e perpendicular uma com a outra. A terceira
diviso equatorial: as hastes mitticas de cada blastmero esto agora em posio
Figura 5.2 Plo animal Plano de clivagem Plano de

Clivagem holoblstica no equinodermo Synapta meridional clivagem
digita, levando formao de uma blstula oca, equatorial
conforme mostrado no corte (ltimo painel).
(Segundo Saunders, 1982.)
Plo vegetal
Metade Animal Plo animal
Blstula oca
Metade Vegetal (aberta por corte) Plo vegetal
paralela ao eixo animal-vegetal, e o sulco resultante da clivagem separa os dois plos um

do outro, dividindo o embrio em oito blastmeros iguais. Cada blastmero na metade
animal do embrio est agora diretamente acima do blastmero da metade vegetal.
A quarta diviso meridional novamente, produzindo duas fileiras de 8 clulas
cada, enquanto a quinta diviso equatorial, produzindo quatro fileiras de 8 clulas
cada. Sucessivas divises produzem embries de 64,128 e 256 clulas, com divises
meridionais alternando com divises equatoriais. Os embries resultantes consistem
de blastmeros dispostos em fileiras horizontais ao longo de uma cavidade central.
Em ambos os plos do embrio, os blastmeros se movem, uns em direo aos ou-
tros, para criar uma esfera oca composta de uma nica camada de clulas. Essa esfera
oca chamada de blstula, e a cavidade central referida como blastocele. A qual-
quer momento durante a clivagem da Synapta, um embrio seccionado atravs de
qualquer meridiano produz a imagem refletida de duas metades. Esse tipo de simetria
caracterstico de uma esfera ou cilindro e chamada de simetria radial. Dessa manei-
ra, Synapta tem clivagem holoblstica radial.
Ourio--do
Ourio -Mar
do-Mar
O ourio-do-mar tambm apresenta clivagem holoblstica radial, mas com algumas
importantes modificaes. A primeira e a segunda clivagem so similares as da
Synapta; ambas so meridionais e perpendiculares em relao a outra. Similarmen-
te, a terceira clivagem equatorial, separando os dois plos um do outro (Figura
5.3). Na quarta clivagem, no entanto, os eventos so bem diferentes. As quatro
clulas da camada animal se dividem meridionalmente em oito blastmeros, cada
qual com o mesmo volume. Essas clulas so chamadas mesmeros. A camada
vegetal, no entanto, sofre uma clivagem equatorial desigual para produzir no plo
vegetal quatro clulas grandes, os macrmeros, e quatro pequenas, os micrmeros
(Figura 5.4; Summers et al., 1993). Assim que a clula com 16 embries clivar, os
oito mesmeros se dividem para formar duas camadas animais, an1 e an2, uma se
equilibrando em cima da outra. Os macrmeros se dividem meridionalmente, for-
mando uma camada de oito clulas abaixo de an2. Os micrmeros tambm se divi-
dem, produzindo um pequeno grupo abaixo da camada maior. Todos os sulcos de
clivagem da sexta diviso so equatoriais; a stima clivagem meridional, produzin-
do uma blstula com 128 clulas.
(A) Plo animal Figura 5.3

Clivagem no ourio-do-mar. (A) Planos de cli-
vagem nas primeiras trs divises e formao
de camadas particulares de clulas nas divi-
ses 3-6. (B-D) Fotomicrografias de embries
vivos do ourio-do-mar Lytechinus pictus, vi-
so de cima para baixo do plo animal. (B) O
estgio de 2 clulas. (C) O estgio de 4 clulas.
Plo vegetal
(D) O estgio de 32 clulas, mostrado sem a
membrana de fertilizao para permitir a vi-
sualizao dos mesmeros do plo animal, os
Mesmeros an 1 derivados macrmeros centrais e dos micrmeros vege-
Metade animal
tais em ngulo para o centro. (Fotografia cor-
an 2
derivados tesia de G. Watchmaker.)
veg1
veg2
Metade vegetal
Micrmeros Macrmeros
(B) (C) (D)
Em 1939, Sven Hrstadius realizou um experimento simples demonstrando que o

controle do tempo e colocao de cada clivagem de ourio-do-mar independente de
clivagens preexistentes. Ele demonstrou que se inibisse a primeira, a segunda e tercei-
ra clivagens, sacudindo os ovos, ou colocando-os em gua do mar hipotnica, a
clivagem desigual (quarta) que forma os micrmeros, ainda ocorreria no tempo apro-
priado. Sendo assim, Hrstadius concluiu que existem trs fatores que determinam a
clivagem em um embrio de 8 clulas: (1) existem mudanas progressivas no citoplasma,
Figura 5.4
Formao de micrmeros durante a quarta di-
viso de embries de ourios-do-mar. Os p-
los vegetais dos embries so visualizados por
baixo. (A) A localizao e orientao do fuso
mittico na parte baixa das clulas vegetais
so visualizadas com luz polarizada no em-
brio vivo. (B) A clivagem atravs desses fu-
sos, colocados assimetricamente, produziu mi-
crmeros e macrmeros. (de Inou, 1982, cor-
(A) (B) tesia de S. Inou.)
Clio
Blastocele
(A) Blstula jovem (B) Blstula mais velha com (C)

placa vegetal achatada e tufo ciliar
Figura 5.5
Blstulas de ourio-do-mar. (A) Esquema de um corte controle atravs de uma blstula precoce
de ourio-do-mar, mostrando uma camada nica de clulas arredondadas rodeando uma grande
blastocele. (B) Com a contnua diviso, as clulas da blstula tardia mostram diferenas de forma
medida que as clulas da placa vegetal se alongam, (C) Junes apertadas (flecha) formando
se entre clulas de uma blstula de equinodermo com 1024 clulas. (A e B segundo Giudice,
1973; C de Dan-Sohkawa e Fujisawa, 1980, cortesia dos autores.)
algum tempo aps a fertilizao, que direcionam os fusos formados para uma certa
direo; (2) deve haver material formador de micrmero no citoplasma vegetal; e (3)
deve haver algum mecanismo pelo qual o material formador de micrmeros seja ativa-
do no tempo correto (Hrstadius,1973).
No desenvolvimento do ourio-do-mar, o estgio de blstula comea na fase de
128 clulas. Nesse estgio, as clulas formam uma esfera oca circundando a blastocele
central (Figura 5.5A,B). Nessa altura, todas as clulas so do mesmo tamanho, os
micrmeros tendo diminuda sua diviso celular e clivando menos freqentemente.
Toda a clula est em contato com o fluido proteinceo da blastocele e com a camada
hialina dentro do envoltrio de fertilizao. Durante esse tempo, os contatos entre as
clulas so estreitados. Dan-Sohkawa a Fujisawa (1980) analisaram esse mtodo em
embries de estrela-do-mar e mostraram que o fechamento da cavidade esfrica
contempornea com a formao de junes apertadas entre os blastmeros. Essas
junes unem as clulas frouxamente conectadas num tecido epitelial onde a blastocele
isolada do ambiente externo (Figura 5.5C). Dando prosseguimento a sua diviso, a
camada celular expandida e se afina. Durante esse perodo, a blstula permanece
como uma camada unicelular grossa.
Duas teorias surgiram para explicar a concomitante proliferao de clulas e
formao da blastocele. Dan (1960) conjeturou que o motivo maior dessa expan-
so o influxo de gua na cavidade da blastocele. J que o blastmero secreta
protena na blastocele, seu fluido torna-se espesso. Esse fluido absorve grandes
quantidades de gua por osmose, exercendo presso nos blastmeros para se ex-
pandirem. Essa presso tambm alinha o longo eixo de cada clula para que a
diviso nunca seja para dentro da blastocele. Isso criaria uma expanso adicional
fazendo com que a populao fosse orientada somente para um plano. Wolpert e
Gustafson (1961) e Wolpert e Mercer (1963) propuseram que a presso da
blastocele no necessria para se conseguir esse efeito. Eles enfatizaram o papel
de adesividade das clulas entre si e a camada hialina. Eles mostraram que en-
quanto permanecessem fortemente atracadas na camada hialina, as clulas no
tm alternativa a no ser a de se expandir. Essa expanso cria a blstula ao invs
do contrrio. Certamente, a camada hialina vital para expanso da blastocele, e
se a adeso de clulas da camada hialina inibida por anticorpos para a hialina,
ento a expanso da blastocele cessa (Adelson e Humphreys, 1988). Em um tra-
balho recente (Ettensohn e Ingersoll, 1992) concluram que provvel que ambos
mecanismos expandem a blastocele. Durante a clivagem precoce, a adeso cama-

da hialina parece ser o fator mais importante, enquanto que em estgios mais
tardios, a presso osmtica tambm parece exercer o seu papel.
A clulas da blstula desenvolvem clios em sua superfcie externa (Figura 5.6),
desse modo, causando a rotao da blstula dentro do envoltrio de fertilizao. Logo
aps, as clulas da parte animal do embrio sintetizam e secretam uma enzima de
ecloso que lhes permite digerir a membrana fertilizante (Lepage et al., 1992), o em-
brio se torna uma blstula eclodida livre para nadar.
Anfbios
Clivagem na maioria dos embries de rs e salamandras radialmente simtrica e
holoblstica, como na clivagem do equinodermo. O ovo do anfbio, no entanto, con-
tm muito mais vitelo. Esse vitelo, que concentrado no hemisfrio vegetal, um
impedimento clivagem. Sendo assim, a primeira diviso comea no plo animal e
vagarosamente se estende at a regio vegetal (Figura 5.7). Na salamandra axolotle, o
sulco da clivagem se estende atravs do hemisfrio animal a uma velocidade prxima
de 1mm/min. O sulco da clivagem seciona o crescente cinzento e depois diminui para
menos de 0.02-0.03mm/min ao se aproximar do plo vegetal (Hara, 1977).
A Figura 5.8A uma varredura no microscpio eletrnico, mostrando a primeira
clivagem em um ovo de r. Podemos notar as dobras nos sulcos da clivagem e a
diferena entre os sulcos nos hemisfrios animal e vegetal. A Figura 5.8B mostra que
enquanto o sulco da primeira clivagem ainda est tentando clivar o vitelo
citoplasmtico do hemisfrio vegetal, a segunda clivagem j comeou prxima ao
plo animal. Essa clivagem est em ngulos retos em relao primeira, e tambm
meridional. A terceira clivagem, como era de se esperar, equatorial. No entanto,
por causa do vitelo vegetalmente colocado, esse sulco da clivagem em ovos anfbios
muito mais prximo do plo animal. Ele divide o embrio de r em quatro
blastmeros animais pequenos (micrmeros) e quatro grandes blastmeros
(macrmeros) na regio vegetal. Essa clivagem holoblstica desigual estabelece duas Figura 5.6
regies embrionrias principais: uma de diviso rpida de micrmeros, prxima ao Clulas ciliadas da blstula. Cada clula desen-
volve um nico clio. (Cortesia de W. J.
plo animal, e outra de macrmeros, mais lenta (Figura 5.8C). Assim que a clivagem
Humphreys.)
progride, a regio animal se torna abarrotada com numerosas clulas pequenas,
enquanto a regio vegetal contm uma pequena quantidade de grandes macrmeros
carregados de vitelo (ver Figura 5.7).
Embries anfbios contendo de 16 a 64 clulas so freqentemente chamados
mrulas (do Latim amora, da qual sua forma vagamente reminiscente). No estgio
de 128 clulas a blastocele se torna aparente e o embrio considerado uma blstula.
(A) (B) (C) (D)
Figura 5.7
Clivagem de um ovo de r. Sulcos de clivagem,
designados por nmeros romanos, esto enu-
Crescente merados por ordem de aparecimento. (A, B)
Cinzento O vitelo vegetal impede a clivagem fazendo
(E) (F) (G) (H) com que a segunda diviso comece na regio
Blastocele animal do ovo, antes da primeira diviso ter
dividido o citoplasma vegetal. (C) A terceira
diviso deslocada em direo ao plo animal.
(D-H) No final, o hemisfrio vegetal contm
blastmeros mais longos e mais escassos que
os da metade animal. (Segundo Carlson, 1981.)
(A) Figura 5.8

Micrografias ao microscpio eletrnico da clivagem de um ovo de r. (A) Primeira clivagem. (B)
Segunda clivagem (4 clulas). (C) Quarta clivagem (16 clulas), mostrando a discrepncia de
Pregas tamanho entre as clulas animais e vegetais aparecendo aps a terceira diviso. (A de Beams e
Sulco de Kessel, 1976, cortesia dos autores; B e C cortesia de L. Biedler.)
clivagem
Na realidade, a formao da blastocele foi traada desde o primeiro sulco de clivagem.

Kalt (1971) demonstrou que na r Xenopus laevis o primeiro sulco da clivagem se
alarga no hemisfrio animal para criar uma pequena cavidade intercelular que isolada
do ambiente externo por junes intercelulares muito apertadas (Figura 5.9). Essa
cavidade se expande durante clivagens subseqentes para se tornar uma blastocele.
(B)
A blastocele provavelmente presta duas principais funes no embrio das rs: (1)
uma cavidade que permite migrao celular durante a gastrulao, e (2) previne
clulas que esto abaixo interagir prematuramente com as clulas de cima. Quando
Nieuwkoop (1973) tirou clulas do topo da blastocele de um embrio de salamandra
aqutica e colocou-as junto a clulas do vitelo vegetal na base da blastocele, essas
clulas animais se tornaram mesoderma ao invs de ectoderma. Como o tecido meso-
drmico normalmente formado dessas clulas animais, que so adjacentes aos pre-
cursores do endoderma, parece plausvel que clulas vegetais influenciam clulas ad-
jacentes para se diferenciar em tecidos mesodrmicos. Sendo assim, a blastocele apa-
rece para prevenir o contato do endoderma com clulas destinadas para dar origem
pele e aos nervos.
Enquanto essas clulas esto dividindo-se, numerosas clulas com molculas de
(C) adeso mantm as clulas juntas. Uma das mais importantes dessas molculas a EP-
caderina. O mRNA para essa protena fornecido no citoplasma do ocito, e se essa
mensagem destruda (injetando no ocito oligonucleotdeos antisense complemen-
tares para esse mRNA), a EP-caderina no produzida e a adeso entre os blastme-
ros dramaticamente reduzida (Heasman et al., 1994). Isso resulta na obliterao da
blastocele (Figura 5.10).
Figura 5.9
Formao da blastocele num ovo de r. (A)
Primeiro plano de clivagem mostrando uma
pequena fenda, que posteriormente se desen-
volve na blastocele. (B) embrio de oito clu-
las mostrando uma pequena blastocele (fle-
cha) na juno de trs planos de clivagem. (de
Kalt, 1971, cortesia de M. R. Kalt.) (A) (B)
(A) (B)
Figura 5.10
Depleo de EP-caderina mRNA no ocito de Xenopus, resultando na perda de adeso entre os
blastmeros e na obliterao da blastocele. Oligonucleotdeos antisense complementares men-
sagem da EP-caderina foram injetados no embrio unicelular, prevenindo a expresso da EP-
caderina. A blastocele obliterada em embries depletados de EP-caderina, mas (B) no pelos
controles. (de Heasman et al., 1994; fotografia, cortesia de J. Heasman.)
Clivagem holoblstica espiral

Clivagem espiral caracterstica de vermes aneldeos, platelmintos turbelrios, ver-
mes nemertinos e todos os moluscos, exceto cefalpodos. Difere da clivagem radial
em muitas maneiras. Primeiro, os ovos no se dividem em paralelo ou em orientaes
perpendiculares ao eixo animal-vegetal do ovo; de preferncia, a clivagem se d em
ngulos oblquos, formando a disposio espiral de blastmeros filhos. Segundo, as
clulas se tocam entre si em mais lugares do que em embries clivados radialmente.
Na realidade, elas assumem o empacotamento com a orientao termodinamicamente
mais estvel, parecido com o de bolhas de sabo adjacentes (Figura 5.11). Terceiro,
embries de clivagem espiral normalmente realizam menos divises antes de comear
a gastrulao, tornando possvel saber o destino de cada clula da blstula. Quando os
destinos das clulas individuais em embries de aneldeos, platelmintos turbelrios e
moluscos foram comparados, as mesmas clulas foram vistas no mesmo lugar e o seus
destinos, de uma maneira geral, foram idnticos (Wilson, 1898). As blstulas ento
produzidas no tm blastocele e so chamadas de estereoblstulas.
As Figuras 5.12 e 5.13 retratam a clivagem de embries de moluscos. As duas
primeiras clivagens so quase meridionais, produzindo quatro grandes macrmeros
(marcados A, B, C e D). Em muitas espcies, os blastmeros so de tamanhos diferen-
tes (D sendo o maior), uma caracterstica que permite serem individualmente identifi-
cados. Em cada sucessiva clivagem, cada macrmero origina um pequeno micrmero
no seu plo animal. Cada quarteto sucessivo de micrmeros deslocado para a direita
ou para a esquerda de seu macrmero irmo, criando um relacionamento espiral ca-
racterstico da clivagem. Observando o embrio pelo plo animal, as partes superiores
do eixo mittico parecem alternar entre o sentido horrio e o anti-horrio. Isso faz
Figura 5.11
com que micrmeros alternados se formem obliquamente para a esquerda e para a
Diagrama mostrando o arranjo de quatro e oito
direita do seu macrmero. Na terceira clivagem, o macrmero A dar origem a duas bolhas de sabo num prato ligeiramente cn-
clulas filhas, macrmero 1A e micrmero 1a. As clulas B, C e D se comportam cavo. O arranjo termodinmico maximiza o
similarmente, produzindo o primeiro quarteto de micrmeros. Na maioria das espci- contato e muito reminiscente daquele de em-
es, os micrmeros esto direita do seu macrmero (olhando para o plo animal), bries que se clivam em espiral. (Segundo
uma disposio indicando uma espiral dextra (oposta sinistra). Na quarta clivagem, Morgan, 1927.)
(A) Vista do plo animal
(B) Vista lateral
Figura 5.12
Clivagem em espiral do molusco Trochus vista
do plo animal (A) e de um lado (B). Em B,
as clulas derivadas do blastmero A esto
coloridas. Os fusos mitticos, esquematizados o macrmero 1A se divide para formar o macrmero 2A e o micrmero 2a; e o micrmero
nos estgios precoces, dividem as clulas de- 1a se divide para formar mais dois micrmeros, 1a1 e 1a2. Mais clivagens iro produzir
sigualmente e em ngulo aos eixos vertical e
blastmeros 3A e 3a a partir do macrmero 2A; e micrmeros, como por exemplo o 1a2,
horizontal.
se dividem para produzir clulas tais como as 1a21 e 1a22.
A orientao da clivagem plana para a esquerda ou para a direita controlada por
fatores citoplasmticos dentro do ocito. Isso foi descoberto analisando mutaes da
espiral do caracol. Alguns caracis tm sua espiral aberta direita da concha, enquan-
to outros tm sua abertura para esquerda. Normalmente, a rotao da espiral a
mesma para todos os membros de uma determinada espcie. Todavia, ocasionalmen-
te, ainda so encontrados mutantes. Exemplificando, em espcies em que a espiral
abre para a direita, sero encontrados alguns indivduos com a abertura espiral para a
esquerda. Crampton (1984) analisou os embries desses caracis aberrantes e obser-
vou que sua clivagem precoce difere da normal.
Figura 5.13
Clivagem espiral do caracol Ilyanassa. O blas-
tmero D maior que os outros, permitindo a
identificao de cada clula. A clivagem dextra.
(A) estgio de 8 clulas. PB o corpo polar.
(B) Metade da quarta clivagem; os macrmeros
j se dividiram em clulas grandes e pequenas
orientadas espiralmente. (de Craig e Morrill,
1986, cortesia dos autores.)
(A) Enrolamento sinistrogiro
(B) Enrolamento dextrogiro
Figura 5.14
Olhando do plo animal de caracis enrolados para a direita e para a esquerda. A origem do
enrolamento para direita e para a esquerda do caracol pode ser reconhecida pela orientao do
fuso mittico na segunda clivagem. Os caracis sinistrogiros e dextrogiros se desenvolvem como
imagens espelhares uma da outra. (Segundo Morgan, 1927.)
A orientao das clulas aps a segunda clivagem estava diferente (Figura 5.14),
graas a uma orientao diferente do aparelho mittico nos caracis com enrolamento
sinistrogiro. Todas as subseqentes divises em embries de espiral para a esquerda
so imagens espelhares daqueles embries com espirais dextras. Na Figura 5.14, pode-
mos notar que a posio do blastmero 4d (o qual muito importante, j que sua
prognie ir formar os rgos mesodrmicos) diferente nos dois tipos de espirais
dos embries. Geralmente, os dois caracis so formados com seus corpos em lados
diferentes da abertura da espiral.
A direo da abertura na espiral da concha do caracol controlada por um nico
par de genes (Sturtevant, 1923; Boycott et al., 1930). No caracol Limnaea peregra a
maioria dos indivduos so espiralados para a direita. Raros mutantes, exibindo aber-
tura esquerda, foram encontrados e acasalados com caracis tipo-selvagem. Esses
acasalamentos mostraram que existe um alelo D dextrogiro que dominante em
relao ao alelo d sinistrogiro. No entanto, a direo da clivagem no determinada
pelo gentipo do caracol em desenvolvimento, mas pelo gentipo da me do caramujo.
Caramujo fmea do tipo dd pode produzir somente herdeiros de espiral sinistra, mes-
mo quando o gentipo dos herdeiros Dd. Um indivduo Dd ir se espiralar tanto
para a direita quanto para a esquerda dependendo do genoma de sua me. Esses cru-
zamentos produzem o seguinte quadro:
Os fatores genticos envolvidos no enrolamento do caracol so trazidos ao

embrio no citoplasma do ocito. o gentipo do ovrio, no qual o fentipo se
desenvolve, que determina em que direo a clivagem vai ocorrer. Quando Freeman
e Lundelius (1982) injetaram no ovo de mes dd, uma pequena quantidade de cito-
plasma proveniente de caracis com espirais dextras, os embries resultantes apre-
sentaram espirais para a direita. Citoplasmas de caracis com espiral esquerda no
afetaram os embries com a espiral direita. Isso confirma a observao que mes do
tipo selvagem estavam colocando um fator em seus ovos que estava ausente ou
defeituoso nas mes dd. [cleave1.html]
Outra descoberta emocionante com relao a clivagem dos moluscos est na co-
municao entre os blastmeros. Nos moluscos de blastmeros de igual tamanho no
estgio de quatro clulas*, a determinao de que a clula que originar a clula pre-
cursora mesodrmica ser alcanada entre a quinta e a sexta clivagem. Nessa altura, o
macrmero 3D se estende para dentro entrando em contato com os micrmeros do
plo animal. Sem esse contato, a clula 4d produzida pelos macrmeros 3D no pro-
duz mesoderma (van den Biggelaar e Guerrier, 1979). Injetando corantes de baixo
peso molecular, de Laat e colegas (1980) demonstraram que na hora do contato (e
no antes), pequenas molculas so capazes de difundirem-se entre os macrmeros
3D e os micrmeros centrais. Imagens ao microscpio eletrnico mostram que nesse
momento, aparecem junes de fenda na superfcie dessas clulas.
*No se preocupe, daremos no Captulo 16 mais informaes sobre embries de moluscos com
blastmeros de tamanhos desiguais.
& Especulaes
Adaptao pela modificao da clivagem embrionria
E VOLUO causada pela altera-

o hereditria do desenvolvimen-
to embrionrio. s vezes, somos
capazes de identificar uma modificao da
embriognese que impediu o organismo de
tos so sedentrios e as larvas que nadam
livremente seriam sempre carregadas cor-
renteza abaixo. Essas ostras, no entanto, re-
solveram esse problema efetuando duas mo-
dificaes no seu desenvolvimento. A pri-
dula capaz de produzir uma concha macia.
Essas larvas (chamadas gloqudias) asse-
melham-se a pequenas armadilhas para
urso; possuem plos sensveis que permi-
tem as vlvulas da concha fecharem-se
sobreviver diferentemente em ambientes meira altera a clivagem embrionria. Na tpi- abruptamente quando tocadas pelas guel-
hostis. Uma dessas modificaes, descober- ca clivagem dos moluscos, ou todos os
Figura 5.15 Formao de larvas de gloqudia
ta por Frank Lillie em 1898, causada pela macrmeros so iguais em tamanho, ou o
pela modificao da clivagem em espiral. Aps
alterao do padro tpico da clivagem es- blastmero 2D a maior clula no estgio
formao do embrio de 8 clulas (A), a dispo-
piral na famlia uniondeo das ostras. embrionrio. No entanto, a diviso desse sio do fuso mittico motiva a maioria do
Ao contrrio da maioria das ostras, Unio Unio tal que o blastmero 2d fica com a citoplasma D penetrar no blastmero 2d (B).
e seus aparentados vivem em locais de gua maior parte do citoplasma (Figura 5.15). Essa Esse blastmero grande 2d se divide (C), para
corrente. As correntes criam um problema clula se divide para produzir a maior parte finalmente originar a grande concha armadi-
para a disperso das larvas, porque os adul- das estruturas larvais, incluindo uma gln- lha de urso da larva (D). (Segundo Raff e
Kaufman, 1983.)
(A) (B) (C) (D)

ras ou barbatanas dos peixes que por ali Figura 5.16 Peixe falso sobre o molusco
estiverem passando. Elas pegam uma ca- uniondeo lampsilis ventricosa. O peixe ,
rona com o peixe at estarem prontas para na verdade, a bolsa da cria e o manto do
cair e, atravs de metamorfose, transformar- molusco. (Fotografia, cortesia de J. H. Welsh.)
se em moluscos adultos. Dessa maneira,
podem se espalhar correnteza acima. imitam o comportamento e a forma de pe-
Em algumas espcies, as gloqudias so quenos peixes nadando. Para tornar a ilu-
liberadas da bolsa de criao da fmea e so mais completa, desenvolveram uma
meramente aguardam um peixe passar. Ou- mancha preta em forma de olho (ocelo) de
tras espcies, tal como a Lampsilis ventri- um lado e uma nadadeira do outro. O pei-
cosa, aumentaram as chances de suas lar- xe visto na Figura 5.16 no um peixe real,
vas encontrarem um peixe realizando outra mas sim a bolsa de criao e o manto abaixo
modificao no seu desenvolvimento dela. Quando o peixe que estiver ao alcance
(Welsh, 1969). Muitos moluscos desenvol- for atrado, o molusco despeja as gloqudias
vem um manto fino e saliente em volta da da bolsa de criao. Dessa maneira, a modi-
concha circundando a bolsa de criao. Em ficao de padres de comportamentos j
alguns uniondeos, a forma da bolsa de cri- existentes permitiram moluscos uniondeos
ao (marspio) e as ondulaes do manto sobreviver em ambientes hostis.
Clivagem Holoblstica Bilateral

Clivagem holoblstica bilateral encontrada primariamente nos ascdios (tunicados).
A Figura 5.17 mostra a clivagem padro de um tunicado, Styela partita. O fenmeno
mais admirvel nesse tipo de clivagem que o primeiro plano de clivagem estabelece
o nico plano de simetria no embrio, separando o embrio do que ser o seu futuro
lado direito e esquerdo. Cada diviso sucessiva orienta-se em relao a esse plano de
simetria, e o meio embrio formado de um lado da primeira clivagem a imagem espelhar
do meio embrio do outro lado. A segunda clivagem meridional, como a primeira Figura 5.16
diviso; mas ao contrrio da primeira diviso, no passa atravs do centro do ovo. Em Simetria bilateral em um ovo de tunicado.
vez disso, ela cria duas grandes clulas anteriores (blastmeros A e D) e duas peque- (A) Ovo no-clivado, mostrando os desti-
nas clulas posteriores (blastmeros B e C). Cada lado tem agora um blastmero nos das vrias regies citoplasmticas. (B)
embrio de oito clulas, mostrando os blas-
grande e um pequeno. Durante as trs prximas divises, as diferenas no tamanho e
tmeros e os destinos das vrias clulas.
na forma destacam a simetria bilateral desses embries. No estgio de 32 clulas, uma Pode ser visualizado como duas metades de
pequena blastocele se forma e comea a gastrulao. 4 clulas; daqui em diante, cada diviso no
Como foi mencionado no captulo 4, certos tunicados (incluindo S. partita) con- lado direito do embrio tem uma diviso
tm regies citoplasmticas coloridas. Durante a clivagem, essas se tornam fracionadas espelhar do lado esquerdo. (C, D) Vistas de
em clulas diferentes. Alm do mais, o tipo de citoplasma que a clula recebe determi- embries mais tardios do plo vegetal. (As
na seu destino. Clulas recebendo citoplasmas claros se tornam ectoderma; aquelas regies do citoplasma destinadas a formar
contendo citoplasma amarelo se transformam em clulas mesodrmicas; as clulas determinados rgos esto marcadas em A e
so codificadas por cor em todo o diagra-
ma.) (Segundo Balinsky, 1981.)
(A (B) (C) (D)
Ectoderma
Ectoderma
neural
Msculo
Notocorda
Mesnquima
Endoderma
Plo vegetal Plo vegetal Vista do plo vegetal

que incorporam incluses ardsia se tornam endoderma e as clulas cinza claro, o

tubo neural e a notocorda. Esses plasmas coloridos esto localizados bilateralmente
em volta do plano de simetria e, assim, eles sero divididos pelo sulco da primeira
clivagem em metades direita e esquerda do embrio. A segunda clivagem motiva o
provvel mesoderma se posicionar nas duas clulas posteriores, enquanto o provvel
tubo neural e cordomesoderma sero formados pelas duas clulas anteriores. Mais
adiante, a terceira diviso ir repartir essas regies citoplasmticas, de modo que as
clulas formadoras do mesoderma so confinadas aos dois blastmeros vegetais pos-
teriores, e as clulas do cordomesoderma so restritas as duas clulas vegetais anteri-
ores. O destino de cada clula do embrio precoce de Styela tem sido acompanhado e
ser discutido em detalhe no Captulo 13.
Clivagem holoblstica rotacional

No surpresa alguma que o estudo da clivagem em mamferos tenha-se tornado um
desafio. Os ovos de mamferos esto entre os menores do reino animal, tornando
difcil seu manuseio experimental. O zigoto humano, por exemplo, tem somente 100
m de dimetro, praticamente invisvel, sendo seu volume menor de um milsimo do
ovo de Xenopus. Tambm, zigotos de mamferos no so produzidos em nmeros
comparveis aos embries do ourio-do-mar ou de rs. Normalmente, menos de 10
ovos so ovulados por uma fmea em um determinado tempo, tornando difcil a ob-
teno de material para estudos bioqumicos. E como uma barreira final, o desenvol-
vimento dos embries dos mamferos se completa dentro de outro organismo ao invs
de um ambiente externo. S recentemente foi possvel a duplicao de algumas dessas
condies internas e observar o desenvolvimento in vitro.
Com todas essas dificuldades, valeu a pena esperar o conhecimento da clivagem
de mamferos, j que a clivagem nos mamferos completamente diferente de ou-
tros padres de diviso celular embrionria. O ocito dos mamferos liberado pelo
ovrio e varrido pelas fmbrias at o oviduto (Figura 5.18). A fertilizao ocorre na
ampola do oviduto, regio prxima ao ovrio. A meiose ento completada, e a
primeira clivagem comea um dia depois. A clivagem nos mamferos est entre as
mais lentas do reino animal de 12 a 24 horas de separao. Enquanto isso, os clios
no oviduto empurram o embrio em direo ao tero; a primeira clivagem ocorre
durante essa jornada.
Existem vrias caractersticas da clivagem dos mamferos que as distinguem de
outros tipos de clivagem. A primeira relativa a lentido das divises. A segunda
diferena fundamental a singular orientao dos blastmeros dos mamferos um em
relao ao outro. A primeira clivagem uma diviso meridional normal; no entanto, na
Estgio de 2 clulas
Zona pelcida
tero
Primeira clivagem
Figura 5.18 Oviduto
Desenvolvimento de um embrio humano des-
de a fertilizao at a implantao. A compac- Mrula
tao em embries humanos ocorre no dia 4,
quando ele est no estgio de 10 clulas. O ovo Blastocisto
eclode da zona quando alcana o tero, e Ovrio
provvel que a zona evite a adeso das clulas Estgio precoce Fertilizao
em clivagem de se colarem ao oviduto, em lu- da implantao
Ovulao
gar de viajar para o tero. (Segundo Tuchmann-
Duplessis et al., 1972.)
Plano de Plano de Figura 5.19

Plano de clivagem I Plano de clivagem I Comparao da clivagem precoce (A) em
clivagem II clivagem IIA
equinodermos (clivagem radial) e (B) em mam-
feros (clivagem rotacional). Nematides tambm
tm uma forma rotacional de clivagem, porm,
no formam a estrutura blastocstica caracters-
tica dos mamferos. Detalhes sobre a clivagem
dos nematides sero fornecidos no Captulo 13.
(Segundo Gulyas, 1975.)
Plano de
clivagem IIB
(A) EQUINODERMO (B) MAMFERO

(Ourio-do-mar) (Coelho)
segunda clivagem um dos dois blastmeros se divide meridionalmente e o outro se

divide equatorialmente (Figura 5.19). Esse tipo de clivagem chamada de clivagem
rotacional (Gulyas, 1975).
A terceira principal diferena entre a clivagem nos mamferos e a da maioria dos
outros embries marcada pela falta de sincronizao das divises precoces. Os
blastmeros de mamferos no se dividem ao mesmo tempo. Dessa maneira, embries
de mamferos no aumentam por igual do estgio de 2 para 4 e para 8 clulas, mas
freqentemente contm nmeros mpares de clulas. Tambm, diferente dos outros
genomas animais, o genoma mamfero ativado durante a clivagem precoce, sendo o
responsvel pela produo de protena necessria para a clivagem. No camundongo e
na cabra, a mudana do controle maternal para o zigtico ocorre no estgio de duas
clulas (Piko e Clegg, 1982; Prather 1989). [cleave2.html]
Compactao
Talvez a diferena mais crucial entre a clivagem de mamfero e todos os outros tipos
envolva o fenmeno da compactao. Como mostra a Figura 5.20, blastmeros mam-
feros, atravessando o estgio de 8 clulas, formam um arranjo solto com espao sufi-
ciente entre eles. Seguindo a terceira clivagem, no entanto, os blastmeros passam
(A) (B) (C )
Figura 5.20
Clivagem de um nico embrio de camundon-
go in vitro. (A) estgio de 2 clulas. (B) estgio
de 4 clulas. (C) incio do estgio de 8 clulas.
(D) Estgio de 8 clulas compactado. (E)
Mrula. (F) Blastocisto. (de Mulnard, 1967,
(D) (E) (F) cortesia de J. G. Mulnard.)
(A) (B)
Figura 5.21
Micrografia ao microscpio eletrnico de embries de camundongos de 8 clulas. (A) no-
compactados e (B) compactados. (Cortesia de C. Ziomek.)
por uma mudana espetacular em seu comportamento. De repente, se amontoam,

maximizando seu contato com outros blastmeros, formando uma bola compacta de
clulas (Figuras 5.20C,D e 5.21). Esse pacote estabilizado por junes apertadas
que se formam entre as clulas, selando o interior da esfera (Figura 5.22). As clulas
no interior da esfera formam junes com espaos, desse modo, permitindo pequenas
molculas e ons passarem entre elas.
As clulas do embrio compactado se dividem para produzir uma mrula de 16
clulas. Essa mrula consiste de um pequeno grupo de clulas internas rodeadas por
um grupo maior de clulas externas (Barlow et al.,1972). A maior parte dos descen-
dentes das clulas externas se tornam clulas do trofoblasto (trofectoderma). Esse
grupo de clulas no produz estruturas embrionrias. Ao invs disso, formam o tecido
do crio, a parte embrionria da placenta. O crio permite ao feto conseguir oxignio
e nutrientes da me. Tambm secreta hormnios para que o tero da me retenha o
feto e produza reguladores de resposta imune, fazendo com que a me no rejeite o
embrio como faria com um rgo transplantado. No entanto, clulas do trofoblasto
no so capazes de produzir clulas do prprio embrio. Elas so necessrias para
implantar clulas do embrio na parede uterina (Figura 5.23).
O embrio do camundongo derivado dos descendentes das clulas internas do
estgio de 16 clulas, suplementada por clulas divididas do trofoblasto durante a
transio para o estgio de 32 clulas (Pedersen et al., 1986; Fleming, 1987). Essas
clulas geram a massa celular interna que dar origem ao embrio, acompanhada da
bolsa com vitelo, alantide e mnio. Essas clulas no aparentam ser somente diferen-
tes das clulas do trofoblasto, mas tambm sintetizam protenas diferentes nesse est-
gio do desenvolvimento precoce. Durante o estgio de 64 clulas, a massa celular
interna (aproximadamente 13 clulas) e as clulas do trofoblasto se tornam camadas
de clulas separadas, nenhuma delas contribuindo para clulas do outro grupo (Dyce
et al., 1987; Fleming, 1987). Dessa forma, a distino entre os blastmeros do trofo-
blasto e da massa celular interna representa o primeiro evento diferenciado no desen-
volvimento dos mamferos.
Inicialmente, a mrula no tem uma cavidade interna. No entanto, durante um
processo chamado cavitao, a clula do trofoblasto secreta um fluido para dentro da
mrula para criar a blastocele. A massa celular interna fica posicionada de um lado do
anel de clulas do trofoblasto (veja Figuras 5.20, 5.22 e 5.23). Essa estrutura chamada
blastocisto e outro marco da clivagem de mamferos.
(A) Estgio precoce de 8 clulas: no-polar, porm com efeitos de contato local Figura 5.22
Compactao e formao do blastocisto de
camundongo. (A,B) embrio de 8 clulas, (C)
mrula de 16 clulas, (D) blastocisto de 32
clulas. O lado esquerdo representa o organis-
mo inteiro ou sua viso em corte. O lado direi-
to detalha as mudanas associadas com o ama-
durecimento do trofoblasto. (Figuras direita
segundo Fleming, 1992.)
(B) Compacto de 8 clulas: polar, correntes inicas.

Basolateral: adeso de E-caderina; junes de fendas, ZO-1. Microtbulos acetilados.
Apical: microvilosidades, actina cortical, endossomos, actina citoplasmtica, microtbulos
Apical
Junes apertadas
Lateral
Basal
(C) 16 clulas:
Adeso basolateral intensificada, laminina, cingulina, mitocndria, vesculas lipdicas.
Basal: lisossomos, Golgi
Junes apertadas
entre clulas exteriores
Junes de fendas
entre clulas interiores
(D) 32 clulas: transporte vetorial de fluido.

Basolateral: desmossomos. Basal: Na+, K+ - ATPase. Apical: transportadores e canais
Microvilosidades
Massa celular
interna (ICM)
Blastocele
Trofoblasto
E-caderinaDesmossomos Desmossomos Junes apertadas (ZO-1)
Direo da corrente inica Lisossomos secundrios (ZO-1) + cingulina
Na+, K+ - ATPase Golgi Actina cortical

Junes de fendas Filamentos de Microvilosidades
citoqueratina
Protenas da membrana Microtbulos e actina Mitocndrias
apical citoplasmtica
Figura 5.23
Implantao de blastocistos de mamferos
no tero. (A) Blastocistos de camundongo
entrando no tero. (B) Implantao inicial
do blastocisto no tero de um macaco
Rhesus. (A de Rugh, 1967; B cortesia da
Carnegie Institution of Washington, Chester
Reather, fotgrafo.)
(A) (B)
& Especulaes
A Superfcie da Clula e o Mecanismo de Compactao
C OMPACTAO CRIA AS cir-

cunstncias que trazem tona a pri-
meira diferenciao no desenvolvi-
mento de mamferos: a separao do trofo-
bm conhecida como uvomorulina), uma
glicoprotena adesiva de 120-kDa, sinteti-
zada no estgio de 2 clulas distribuda
uniformemente por toda a membrana celu-
blasto da massa celular interna. Como isso lar. No entanto, com a ocorrncia da
feito? Existe uma crescente evidncia que a compactao, a E-caderina se torna restrita
compactao realizada por intermdio de aqueles stios da membrana celular que es-
eventos que ocorrem na superfcie das clu- to em contato com os blastmeros adjacen-
las dos blastmeros adjacentes. No primeiro tes. Anticorpos para essa molcula causam
estgio da compactao, cada um dos oito a descompactao da mrula (Figura 5.25;
blastmeros interage com os seus vizinhos (A) Peyrieras et al., 1983; Johnson et al., 1986).
para sofrer polarizao da membrana. A poro de carboidrato dessa glicoprote-
Componentes diferentes da superfcie das c- na pode ser essencial para o seu funciona-
lulas migram para regies diferentes da c- mento, sendo a tunicamicina (droga que ini-
lula (veja Figura 5.22; Ziomek e Johnson, be a glicosilao das protenas) tambm
1980). Isso pode ser observado, marcando capaz de prevenir a compactao.
certas molculas da superfcie celular com Experimentos recentes mostraram que
corantes fluorescentes. Uma dessas marca- a via do fosfatidilinositol tambm pode ser
es, que reconhece a classe das glicoprote- importante para inicializar a compactao.
nas, mostra que no estgio de 4 clulas, es- Se embries de 4 clulas de camundongo
sas glicoprotenas so aleatoriamente distri- forem colocados em um meio contendo dro-
budas por toda a membrana (Figura 5.24A). gas que ativam a protena quinase C, ocorre
No entanto, na metade do estgio de 8 clu- compactao prematura. Similarmente
las, essas molculas so encontradas predo- diacilglicerdeos podem momentaneamen-
minantemente nos plos mais distantes do (B) te provocar a compactao de embries de
centro do agregado (Figura 5.24B). A pola- 4 clulas. Quando isso ocorre, a E-caderina
Figura 5.24 Polarizao de componentes
rizao da membrana influenciada por in- acumula-se especificamente nas junes
da membrana em blastmeros de camundongo
teraes clula a clula porque acontece so- durante o estgio de 8 clulas. (A) Distribui- entre os blastmeros (Winkel et al., 1990).
mente quando a clula est em contato, no o homognea, no-polar, de componentes Esses resultados sugerem que a ativao da
mnimo, com um outro blastmero. Se um da membrana marcados com concanavalina A protena quinase C pode iniciar a compac-
blastmero for separado do resto do embrio fluorescente no estgio de 4 clulas. (B) Dis- tao mudando a localizao da E-caderina.
perde sua polarizao. tribuio heterognea, polar, desses compo- E finalmente, a membrana celular pode
Protenas especficas da superfcie ce- nentes no estgio de 8 clulas. (A de Fleming tambm ser modificada durante a compac-
lular cumprem o seu papel na compactao. et al., 1986; B de Levy et al., 1986. Fotografi- tao, por meio de reorganizao do citoes-
Uma dessas molculas, E-caderina (tam- as cortesia dos autores.) queleto. As microvilosidades, extendidas
por actino-filamentos, aparecem na superf-

cie de clulas adjacentes, unindo uma clu-
la outra. Essas microvilosidades podem
ser os stios onde a E-caderina est funcio-
nando para mediar adeso intercelular. O
achatamento dos blastmeros um contra o
outro pode, portanto, ter acontecido em vir-
tude do encolhimento do blastmero atra-
vs da despolimerizao da actina (Pratt et
al., 1982; Sutherland e Calarco-Gillam, 1983).
Dessa maneira, existem evidncias cres- (A) (B)
centes de que a compactao causada
por mudanas na arquitetura da superfcie Figura 5.25
celular dos blastmeros. No entanto, no Preveno da compactao por anti-soro contra a glicoprotena da superfcie celular, E-caderina,
est totalmente certo como esses eventos promotora da adeso. (A) Compactao normal ocorrendo em ausncia do anti-soro. (B) Proli-
se relacionam um com o outro, ou como ferao sem compactao ocorrendo na presena de anticorpos contra a E-caderina. (Fotografias
so coordenados e integrados na cadeia cortesia de C. Ziomek.)
de eventos que causa a compactao.
Formao da massa celular interna

O processo crucial para o precoce desenvolvimento dos mamferos a criao da
massa celular interna distinta do trofoblasto. Como a clula direcionada para um ou
outro desses caminhos? Como a clula informada que dar origem a uma poro do
mamfero adulto ou que dar origem a um singular tecido de sustentao que ser
descartado no nascimento? As observaes de embries vivos sugerem que essa im-
portante deciso est meramente no fato de a clula estar no lugar certo na hora certa.
At o estgio de 8 clulas, no existem diferenas bvias na bioqumica, morfologia
ou potncia de qualquer um dos blastmeros. No entanto, a compactao forma clu-
las internas ou externas com propriedades muito diferentes. Marcando os vrios blas-
tmeros, muitos investigadores descobriram que as clulas que estavam do lado de
fora formariam o trofoblasto, enquanto que as clulas do lado de dentro formariam o
embrio (Tarkowski e Wrblewska,1967; Sutherland et al.,1990).*Hillman e colegas
(1972) mostraram que quando cada blastmero de um embrio de camundongo de 4
clulas colocado na superfcie externa de uma massa de blastmeros agregados, as
clulas externas transplantadas somente daro origem ao tecido trofoblasto. Portanto,
a opo da clula transformar-se em trofoblasto ou embrio depende se essa clula era
externa ou interna aps a compactao.
Fuga da Zona P elcida

Pelcida
Enquanto o embrio est se movendo atravs do oviduto, rumo ao tero, o blastocis-
to se expande dentro da zona pelcida (a matriz extracelular do vulo foi essencial
para a ligao do espermatozide durante a fertilizao). As membranas celulares das
clulas trofectodrmicas contm uma bomba para o sdio (a Na+/K+-ATPase) de fren-
te para a blastocele; as protenas bombeiam sdio para a cavidade central. Essa acu-
mulao de ons de sdio permite que a gua entre por osmose, dessa maneira, dila-
tando a blastocele (veja Figura 5.22; Borland, 1977; Wiley, 1984). Durante esse pero-
do, essencial que a zona pelcida previna o blastocisto de aderir s paredes do
oviduto. Quando tal aderncia acontece em humanos, chamada de ectpica ou
* As clulas internas mostraram virem mais freqentemente da primeira clula a se dividir no estgio
de 2 clulas. Essa clula normalmente produz o primeiro par de blastmeros a alcanar o estgio de 8
clulas, e essas clulas se dividem de tal modo que elas esto soltas dentro dos blastmeros agregados
(Graham e Kelly, 1977).
gravidez tubria. Essa condio especialmente grave, porque a implantao do

embrio no oviduto pode causar uma hemorragia com perigo de morte. Quando o
embrio alcana o tero, no entanto, ele deve livrar-se da zona pelcida para que
possa aderir parede uterina.
O blastocisto do camundongo se livra da zona pelcida perfurando um pequeno
buraco e se espremendo atravs dele enquanto se expande (Figura 5.26). Uma protease
semelhante tripsina, a estripsina, localizada na membrana celular lisa a matriz fibrilar
da zona pelcida (Perona e Wassarman, 1986; Yamazaki e Kato, 1989). Uma vez fora,
o blastocisto pode fazer contato direto com o tero. O epitlio uterino agarra o
blastocisto em uma matriz extracelular contendo colgeno, laminina, fibronectina, cido
hialurnico e receptores heparan sulfato. As clulas do trofoblasto contm os elemen-
tos que iro se juntar ao colgeno uterino, fibronectina e laminina; eles sintetizam o
proteoglicano heparan sulfato dramaticamente no momento anterior implantao
(veja Carson etal., 1983). Uma vez na clula epitelial uterina, o trofoblasto secreta
outro conjunto de proteases, incluindo colagenase, estromelisina e ativador de
Figure 5.26 plasminognio. Essas enzimas digestoras de protenas digerem a matriz extracelular
Blastocisto de camundongo eclodindo da zona do tecido uterino, impedindo o blastocisto de cobrir a si mesmo com a parede uterina
pelcida. (Fotografia de Mark et al., 1985, cor-
(Strikland et al., 1976; Brenner et al.,1989).
tesia de E. Lacy.)
& Especulaes
Gmeos e clulas embrionrias precursoras
A S CLULAS PRECOCES do em-

brio podem substituir uma
outra e compensar uma clula
ausente. Isso foi primeiramente demons-
Gmeos humanos so classificados
em dois grandes grupos: gmeos mono-
zigticos (um ovo ou idnticos) e gme-
os dizigticos (dois ovos ou fraternos).
nria, o mnio. Esse tecido forma a bolsa
amnitica (ou bolsa de gua), envolvendo
o embrio com fluido amnitico, protegen-
do-o da dessecao e movimentos brus-
trado em 1952, quando Seidel destruiu Gmeos fraternos so o resultado de dois cos (veja Captulo 6). Se a separao do
uma clula de um embrio de coelho e eventos separados de fertilizao, ao pas- embrio acontecesse aps a formao do
demonstrou que a clula remanescente so que, gmeos idnticos so formados crio, no quinto dia, mas antes da forma-
poderia produzir o embrio por inteiro. de um nico embrio cujas clulas, de al- o do mnio, no nono dia, os embries
Uma vez que a massa celular interna guma forma, dissociam uma da outra. G- resultantes deveriam ter um crio e dois
(ICM) se separou do trofoblasto, as c- meos idnticos so provavelmente pro- mnios (Figura 5.27B). Isso acontece em
lulas da ICM constituem um grupo de duzidos pela separao de blastmeros aproximadamente dois teros dos casos de
equivalncia onde cada clula da ICM precoces ou mesmo pela separao da gmeos humanos idnticos. Uma pequena
tem a mesma potncia (nesse caso, cada massa celular interna em duas regies no porcentagem de gmeos idnticos nascem
clula pode originar todos os tipos de mesmo blastocisto. [cleave3.html] com um nico crio e mnio (Figura 5.27C).
clulas do embrio, menos o trofoblas- Casos de gmeos idnticos ocorrem em Isso significa que a diviso do embrio
to), e seus respectivos destinos sero aproximadamente 25% dos nascimentos aconteceu aps o nono dia, e tais recm-
determinados por interaes entre os humanos. Cerca de 33 % dos gmeos idn- nascidos correm o risco de serem gmeos
seus descendentes. Gardiner e Rossant ticos tm dois crios completos e separa- ligados (Siameses). [cleave4.html]
(1976) tambm mostraram que se as clu- dos, indicando que a separao ocorreu A habilidade de produzir um embrio
las da massa celular interna (mas no c- antes da formao do tecido trofoblasto, completo, a partir de clulas que normal-
lulas do trofoblasto) so injetadas no no quinto dia (Figura 5.27A). O restante mente iriam produzir somente uma poro,
blastocisto, tambm contribuem para um dos gmeos idnticos compartilham do chamada de regulao e discutida no
novo embrio. J que seus blastmeros mesmo crio, sugerindo que a separao Captulo 15. Regulao tambm vista na
podem gerar qualquer tipo de clula no ocorreu dentro da massa celular interna, habilidade que dois ou mais embries pre-
corpo, a massa celular interna tem sido aps a formao do trofoblasto. No nono coces tm para formar um camundongo qui-
referida, s vezes, como pluriblasto dia, o embrio humano j completou a cons- mrico ao invs de gmeos, trigmeos ou
(Johnson e Selwood, 1996). truo de uma outra camada extra-embrio- um monstro de mltiplas cabeas. Camun-
Embrio Saco vitelnico 2 Crios
mnio
(A)
2 mnios
Massa celular interna
1 Crio
(B)
2 mnios
Embrio
bicelular
Blastocele
1 Crio
(C)
1 mnio
Crio
Figura 5.27
Diagrama mostrando a relao entre a formao de gmeos monozigticos humanos e as mem-
branas extra-embrionrias. (A) A ciso ocorre antes da formao da trofectoderma, de modo que
cada gmeo tem o seu prprio crio e mnio. (B) A ciso ocorre aps a formao da trofectoderma,
porm, antes da formao do mnio, resultando em gmeos que tm sacos amniticos individu-
ais, porm, compartilhando um crio. (C) Ciso aps a formao do mnio conduz a gmeos em
um saco amnitico, e um nico crio. (Segundo Langman, 1981.)
dongos quimricos so o resultado de duas humanos podem formar quimeras (de la Alm disso, eles mostraram que cada um
ou mais clivagens precoces (normalmente Chappelle et al.,1974; Mayr et al.,1979). Es- dos trs embries deram origem a precur-
4- ou 8-clulas) de embries que foram agre- ses indivduos tm dois tipos de clulas di- sores dos gametas. Quando um quimri-
gados artificialmente para formar um embrio ferentes (XX e XY) dentro do mesmo cor- co (preto/marrom/branco) fmea de ca-
composto. Como mostrado na Figura po, cada uma com o seu conjunto de carac- mundongo acasalava com um macho de
5.28A, as zonas pelcidas de dois embries tersticas genticas. A explicao mais sim- pelugem de cor branca (recessivo), a ni-
geneticamente diferentes so removidas e ples para tal fenmeno que esses indiv- nhada era um de cada cor.
os embries so unidos para formar um duos resultaram da agregao de dois em- De acordo com nossas observaes
blastocisto em comum. Esses blastocistos bries, um macho e outro fmea, que esta- sobre formao de gmeos e camundon-
preparados so implantados no tero da me vam se desenvolvendo ao mesmo tempo. gos quimricos, cada blastmero da mas-
adotiva. Quando nascem, os descendentes Se essa explicao estiver correta, ento dois sa celular interna deve ser capaz de pro-
quimricos tm algumas clulas de cada em- gmeos fraternos se fundem para criar um duzir qualquer clula do corpo. Essa hi-
brio. Isso prontamente observado quan- nico indivduo composto. ptese tem sido confirmada, e ter impor-
do os blastmeros agregados vm de uma Markert e Petters (1978) mostraram que tantes conseqncias no estudo do de-
linhagem que difere na cor da pelugem. embries precoces de 8-clulas podem se senvolvimento dos mamferos.
Quando blastmeros de linhagem preta e unir para formar uma mrula compactada Quando as massas celulares internas
branca so agregados o resultado normal- comum (Figura 5.29) e que o camundon- so isoladas e crescem sob certas condi-
mente um camundongo malhado (Figura go resultante pode ter a cor da pelugem es, permanecem indiferentes e continu-
5.28B). Existe at evidncia que embries de trs linhagens diferentes (prancha 21). am a se dividir em cultura (Evans e Kaufman,
(A) Figura 5.28

Produo de camundongos quimricos. (A)
Procedimento experimental para a produo
de camundongos quimricos. Embries de ca-
Zona mundongos geneticamente distintos (aqui
Pronase aqueles com diferentes cores do plo) no in-
pelcida
cio do estgio de 8 clulas so isolados dos
ovidutos dos camundongos e reunidos aps
remoo de suas zonas pelcidas por ao de
enzimas proteolticas. As clulas formam um
blastocisto composto, que implantado no
tero de uma me de criao. (B) Um camun-
dongo adulto quimrico mostrando contribui-
Blastmeros es dos embries pigmentados (pretos) e
no-pigmentados (brancos). (Fotografia cor-
(A)
tesia de B. Mintz.)
1981; Martin, 1981). Essas clulas so cha-

madas de clulas-tronco embrionrias (c-
Blastocisto lulas ES). Como foi mostrado no captulo
2, essas clulas podem ser alteradas na pla-
Blastocistos implantados ca de Petri. Genes clonados podem ser in-
na me de criao seridos dentro de seu ncleo, ou genes
existentes podem ser mutados. Quando
essas clulas ES so injetadas nos
blastocistos de um outro gene de camun-
dongo, elas podem integrar a sua massa
(B)
celular interna hospedeira. O embrio re-
sultante tem clulas vindas de ambos teci-
dos, hospedeiro e doador. Essa tcnica se
tornou extremamente importante para de-
terminar a funo dos genes durante o de-
senvolvimento de mamfero.
(B)
(C )
Figura 5.29
Agregao e compactao de trs embries de ca-
mundongo, no estgio de 8 clulas, para formar um
nica mrula compactada. Clulas de trs diferen-
tes embries (A) so agregadas para formar uma
mrula (B) que sofre compactao para formar um
blastocisto nico (C). O camundongo quimrico re-
sultante mostrado na Prancha 21. (de Markert e
Petters, 1978, cortesia de C. Markert.)
Clivagem Meroblstica
Como j foi mencionado anteriormente, concentraes de vitelo cumprem um papel
importante na clivagem celular. Em parte alguma isso est to aparente como nos tipos
de clivagem meroblstica. Aqui, as grandes concentraes de vitelo probem a clivagem
no seu todo, exceto em uma pequena poro do citoplasma do ovo. Na clivagem
discoidal, a diviso celular limitada a um pequeno disco de citoplasma sem vitelo no

topo de um monte formado por vitelo. Na clivagem superficial, o vitelo centralizado
permite a clivagem somente na borda perifrica do ovo.
Clivagem discoidal
Clivagem discoidal uma caracterstica de aves, peixes e rpteis.
AVES. A Figura 5.30 mostra a clivagem de um ovo de ave. A massa do ocito Sulcos de clivagem
tomada pelo vitelo, permitindo que a clivagem ocorra somente no blastodisco, uma
regio de citoplasma ativo de aproximadamente 2-3mm de dimetro no plo animal
do ovo. Porque essas clivagens no se estendem para o vitelo citoplasmtico, as
clulas da clivagem precoce so, na realidade, contnuas nas suas bases. O primeiro
sulco de clivagem aparece centralizado no blastodisco, e outras clivagens se seguem
para criar um blastoderma de camada nica. Num primeiro instante, essa camada
celular est incompleta, j que as clulas permanecem contnuas ao vitelo subjacente.
Da por diante, clivagens equatoriais e verticais dividem o blastoderma em um teci-
do de cinco a seis camadas celulares. Essas clulas permanecem ligadas com jun-
es apertadas (Bellairs et al.,1975; Eyal-Giladi, 1991). Entre o blastoderma e o
vitelo existe um espao chamado cavidade subgerminal, criado quando uma clula
blastodrmica absorve fluido da albumina (branco do ovo) e secreta-o entre si e o
vitelo (New, 1956). Nesse estgio, as clulas mais profundas do centro do blastoderma
so descartadas para criar uma zona pelcida unicelular (as clulas descartadas
Blastoderma
parecem morrer). O anel perifrico das clulas blastodrmicas que no so descarta-
das constituem a zona opaca.
Quando uma galinha se considera pronta para botar um ovo, o blastoderma j
contm 60.000 clulas. Algumas dessas clulas so delaminadas em cavidades
subgerminais para formar uma segunda camada (Figura 5.31). Dessa maneira, logo
aps a galinha ter botado o ovo, esse contm duas camadas de clulas: a superior
epiblasto e a inferior hipoblasto. Entre elas est a blastocele. Detalharemos a forma- Figura 5.30
o do hipoblasto no prximo captulo. Clivagem discoidal em um ovo de galinha,
vista do plo animal. Os sulcos de clivagem
PEIXES. Nos ltimos anos, o peixe zebra, Danio rerio, se tornou o organismo favo- no penetram no vitelo, e produzido um
rito para quem deseja estudar o desenvolvimento dos vertebrados. Esses peixes tm blastoderma formado por uma nica camada
grandes crias, procriam o ano inteiro, so facilmente mantidos, tm embrio transpa- de clulas.
rente que se desenvolve fora da me (uma caracterstica importante para a microscopia),
e pode ser criado para que mutantes possam ser protegidos e propagados. Ademais,
eles se desenvolvem rapidamente, para que 24 horas aps a fertilizao, o embrio j
tenha formado a maior parte de seus tecidos e rgos primordiais, apresentando como
caracterstica a forma semelhante ao girino (veja Granato e Nsslein-Volhard, 1996;
Langeland e Kimmel, 1997).
Os ovos de peixes com muito vitelo desenvolvem-se similarmente aos das aves,
Figura 5.31
com a diviso celular ocorrendo somente no blastodisco do plo animal. Observa-
Formao de um embrio do pinto com duas
es da clivagem de ovos de peixe atravs de micrografia ao microscpio eletrnico camadas. Essa seo sagital prxima margem
posterior, mostra uma camada superior con-
sistindo de um epiblasto central que ir entrar
nas clulas da foice de Koller (ks) e na zona
marginal posterior (mz). Certas clulas do epi-
blasto caem (delaminam) da camada superior
para formar ilhas de polinvaginao (pi) com 5
a 20 clulas cada. Essas clulas sero acresci-
das por aquelas clulas hipoblsticas (hyp)
que migraram anteriormente da foice de Koller
para formar a camada inferior (hipoblstica).
(Sc a cavidade subgerminal; gwm a margem
da parede germinal). (de Eyal-Giladi et al.,
1992, cortesia de H. Eyal-Giladi.)
(A) (B) (C)
(D)
Figura 5.32
Clivagem discoidal em um peixe-zebra, cri-
ando uma regio celular acima do vitelo den- (E) (F)
so. Em (A), BD significa a regio do
blastodisco. (de Beams e Kessel, 1976, cor-
tesia dos autores.)
de varredura mostram, de uma bela maneira, a natureza incompleta da clivagem
discoidal (Figura 5.32). Como nos embries de anfbios e de ourios-do-mar, divi-
ses com clivagens precoce seguem um padro altamente reprodutvel de clivagem
meridional e equatorial. Essas divises so rpidas, com periodicidade de aproxima-
damente 15 minutos cada. As primeiras 12 divises ocorrem sincronicamente, for-
mando um monte celular situado no plo animal de uma grande clula de vitelo.
Inicialmente, todas as clulas mantm conexes abertas umas com as outras e com a
clula de vitelo subjacente para que clulas de tamanho moderado (17-kDa) passem
livremente de um blastmero ao outro (Kimmel e Law, 1985). Comeando por vol-
ta da dcima diviso, pode ser detectado o incio da transio da blstula intermedi-
ria: comea a transcrio do gene zigtico, desacelerao das divises celulares e o
movimento celular evidente (Kane e Kimmel, 1993).
Neste ponto, duas populaes de clulas podem ser distinguidas. A primeira a
camada de vitelo sincicial (YSL). A YSL formada no nono ou dcimo ciclo, quan-
do as clulas da parte vegetal do blastoderma se fundem com a clula do vitelo adja-
cente. Isso produz um anel de ncleos com essa parte do citoplasma da clula do
vitelo localizado bem embaixo do blastoderma. Expandindo vegetalmente, o
blastoderma envolve a clula do vitelo, parte do vitelo sincicial se mover para baixo
do blastoderma, para formar a YSL interna e parte dos ncleos se mover vegetalmente,
ficando frente da margem do blastoderma, para formar a YSL externa (Figura 5.33A,B).
A funo da YSL ainda no foi esclarecida.
A segunda populao celular distinguida na transio da blstula intermediria a
camada envolvente (EVL; veja Figura 5.33A). Essas so as clulas mais superficiais do
(A) (B)
Camada
envolvente (EVL)
Blastoderma
Clulas
profundas
YSL interna
Ncleos
sinciciais
do vitelo
YSL externa
Microtbulos
Clula do vitelo
Figura 5.33
(C) Plo animal A blstula do peixezebra. (A) antes da gastrulao, clulas profun-
Nariz, das esto rodeadas pelo EVL. A superfcie animal do vitelo achatada
olho e contm os ncleos do YSL. Microtbulos se estendem atravs do
citoplasma vitelnico e da regio externa do YSL. (B) Estgio tardio de
Epiderme Crebro
Ectoderma blstula, mostrando a YSL. Os ncleos dessas clulas so derivados
Crista neural Medula espinhal de clulas da margem do blastoderma, que liberou seus ncleos para o
Mesoderma citoplasma vitelnico. (C) Mapa do destino das clulas profundas
Somito do msculo Cabea depois que a mistura de clulas cessou. A vista lateral mostrada, e
Ventral Prnefron Dorsal
Sangue Nadadeiras Corao Msculo Notocorda no todos os destinos dos rgos esto identificados (para clareza). O
Intestino Faringe Endoderma mapa gerado injetando clulas com corante de alto peso molecular,
Fgado
Margem do blastoderma
determinando em seguida, quais rgos as clulas carregadas de corante
geraram. (A e C segundo Langeland e Kimmel, 1996; B de Trinkaus,
1993, cortesia do autor.)
Clula do vitelo
Plo vegetal
blastoderma, e a EVL uma cobertura epitelial fina composta apenas de uma camada
de clulas. A EVL finalmente forma a periderme, uma proteo extra-embrionria co-
brindo o que se pensa ser descartado mais tarde durante o desenvolvimento.
Entre a EVL externa e a YSL interna esto as clulas profundas, das quais surgir
o embrio propriamente dito. Os destinos das clulas blastodrmicas precoces no
esto determinados, e os estudos de linhagem celular (onde um corante fluorescente
no difusvel injetado em uma das clulas e os descendentes daquela clula podem
ser seguidos) mostram que existe muita mistura de clulas durante a clivagem. Alm
do mais, qualquer clula pode dar origem a uma variedade imprevisvel de descenden-
tes de tecido (Kimmel e Warga, 1987; Helde et al., 1994). O destino da clula
blastodrmica parece ser fixado pouco antes do comeo da gastrulao. Nesse pero-
do, clulas em regies especficas do embrio originam certos tecidos de uma maneira
altamente previsvel, permitindo que um mapa do destino possa ser traado (Figura
5.33C; Kimmel et al., 1990).
O processo pelo qual a clula contribui para o tecido envolve uma narrativa progressi-
va de possveis destinos para o desenvolvimento de uma determinada clula. Esse com-
portamento pode ser observado em algumas das primeiras clulas a terem seu destino
estabelecido - as clulas precursoras do corao (Stainer et al., 1993; Lee et al., 1994).
Figura 5.34 (A) (B)

Mapa do destino das clulas profundas da
blstula do peixe-zebra. Injeo de um nico
blastmero na blstula precoce (estgio de
256-512 clulas) com rodamino-dextrano. Se Ventral Dorsal Clula do vitelo
a clula estiver perto da margem, a meio ca-
minho entre os plos dorsal e ventral, a pro-
gnie da clula est restrita a formar parte do Saco
corao. Nesse estgio, as clulas marcadas vitelnico
formam descendentes que podem popular
tanto a aurcula como o ventrculo. Se a inje-
o em tais clulas for feita em um estgio
mais tardio da blstula, seus descendentes iro
popular uma cmara somente. (Segundo
Clulas individuais que margeiam na metade do caminho as futuras superfcies
Stainier et al., 1993.)
dorsal e ventral de um embrio em estgio de meia clivagem, podem dar origem s
clulas que povoam ambos, o endocrdio e o miocrdio (Figura 5.34A,B). Um
pouco mais tarde, os descendentes de qualquer clula podem povoar somente o
miocrdio ou o endocrdio. Mais tarde ainda, os descendentes de uma clula so-
mente sero capazes de povoar subcompartimentos especficos de tecido. Por
exemplo, clulas da blstula intermediria podem contribuir para a prognie de
ambos, trio e ventrculo do corao.
Figura 5.35
Clivagem superficial em embrio de Droso-
phila. O numeral acima de cada embrio Clivagem Superficial
corresponde ao nmero de minutos decorrido A maior parte dos ovos dos insetos passa por clivagem superficial, onde uma grande
aps a deposio do ovo; o numeral abaixo de quantidade de vitelo centralizada confina a clivagem para a borda citoplasmtica do
cada embrio indica o nmero de ncleos pre- ovo. Um dos detalhes fascinantes desse tipo de clivagem que as clulas no se for-
sentes. Clulas polares (que formaro as clu- mam at que os ncleos tenham se dividido. A clivagem de um ovo de inseto mostra-
las germinativas) so vistas no estgio de 512 da na Figura 5.35. O ncleo do zigoto sofre vrias divises mitticas dentro da parte
ncleos, embora o blastoderma celular se for-
central do ovo. Na Drosophila, 256 ncleos so produzidos por uma srie de divises
me 3 horas mais tarde. Os tempos so repre-
nucleares durando, em mdia, 8 minutos cada. Depois o ncleo migra para a periferia
sentativos, j que a durao de cada ciclo de
diviso depende, em parte, da temperatura em do ovo, onde as mitoses continuam, embora com uma velocidade diminuda. O em-
que o ovo est sendo incubado.
Ncleos
(enrgides)
Enrgides migram Clulas Blastoderma Clulas polares

para a periferia polares celular
brio chamado agora de blastoderma sincicial, significando que todas clivagens

nucleares esto contidas em um nico citoplasma. Nenhuma membrana celular existe
a no ser a do prprio ovo. Aqueles ncleos migrando para o plo posterior do ovo
logo ficam envolvidos pelas novas membranas celulares para formar o plo de clulas
do embrio. Essas clulas do origem s clulas germinativas dos adultos. Dessa ma-
neira, um dos primeiros eventos do desenvolvimento dos insetos a separao das
futuras clulas germinativas do resto do embrio.
Aps as clulas polares terem sido formadas, a membrana do ocito dobra-se para
dentro, entre os ncleos, conseqentemente, separando cada ncleo somtico para
uma nica clula (Figura 5.36). Isso forma o blastoderma celular, com todas as
clulas arranjadas como uma cobertura de camada nica envolvendo o ncleo do ovo.
Como qualquer outra formao celular, a criao do blastoderma celular envolve uma
interao delicada entre microtbulos e microfilamentos. A primeira fase da
celularizao do blastoderma caracterizada pela invaginao das membranas celula-
res e sua rede de actina subjacente nas regies entre o ncleo. Esse processo inibido
por drogas que bloqueiam os microtbulos. Aps as membranas e sua actina terem
passado o nvel do ncleo, a segunda fase da celularizao ocorre. Aqui a velocidade
da invaginao aumenta, e o complexo de actino-membranas comea a apertar o que
ser o terminal basal da clula (Schejter e Wieschaus, 1993; Foe et al., 1994). Na
Drosophila, essa camada composta por aproximadamente 6000 clulas e formada
4 horas aps a fertilizao. [cleave5.html]
Embora os ncleos se dividam originalmente dentro de um citoplasma em comum,
isso no significa que o citoplasma seja uniforme. Karr e Alberts (1986) mostraram que
cada ncleo dentro do blastoderma sincicial est contido dentro de seu prprio pe-
queno territrio de protenas citoesquelticas. Quando o ncleo alcana a periferia
durante o dcimo ciclo da clivagem, cada ncleo fica cercado por microtbulos e
Superfcie do ovo
Fuso mittico
Sulco de clivagem
ster
Ncleo
Canal do sulco
Microtbulos
Figura 5.36
Alongamento nuclear e celularizao do blas-
toderma de Drosophila. (Segundo Fullilove e
Membrana vitelnica Jacobson, 1971.)
(A) (B) (C)

Prfase 12
Ncleos Microfilamentos Microtbulos
Figura 5.37
Localizao do citoesqueleto em volta de ncleos no blastoderma sincicial de Drosophila. Um
embrio de Drosophila entrando na prfase da dcima-segunda diviso mittica, foi secionado
e corado triplamente. (A) Os ncleos foram localizados por um corante que se liga ao DNA. (B)
Microfilamentos foram identificados usando anticorpo fluorescente para actina. (C) Microt-
bulos foram reconhecidos por um anticorpo fluorescente para tubulina. Domnios do citoesque-
leto podem ser vistos em volta de cada ncleo. (de Karr e Alberts, 1986, cortesias de T. L. Karr.)
microfilamentos. O ncleo e suas ilhas citoplasmticas associadas so chamados

enrgides. A Figura 5.37 mostra o ncleo e seu microfilamento essencial e os domnios
do microtbulo na prfase da dcima segunda diviso mittica.
Aps o ncleo alcanar a periferia, o tempo necessrio para completar cada uma
das prximas quatro divises se torna gradualmente maior. Enquanto os ciclos de 1 a
10 duram 8 minutos cada, o ciclo 13, o ltimo ciclo no blastoderma sincicial, leva 25
minutos para se completar. O embrio de Drosophila forma clulas no ciclo 14 (i.e.
aps 13 divises), e o ciclo 14 assincrnico. Alguns grupos de clulas completam
esse ciclo em 75 minutos, enquanto outro grupo leva 175 minutos (Foe, 1989). A
transcrio desses ncleos (que comea por volta do dcimo primeiro ciclo) muito
intensificada. A desacelerao da diviso celular da Drosophila e o aumento
concomitante na transcrio do RNA freqentemente referido como transio da
blstula intermediria (midblastula transition). Tais transies tambm so vistas
nos embries de inmeros vertebrados e de filos invertebrados. O controle dessa
desacelerao mittica (em embries de Xenopus, ourio-do-mar, estrela-do-mar e
Drosophila) aparenta sofrer efeito da razo da cromatina para o citoplasma (Newport
e Kirshner, 1982a; Edgard et al., 1986). Edgard e seus colegas compararam o desen-
volvimento inicial de embries de Drosophila do tipo selvagem com os do mutante
haplide. Os embries haplides de Drosophila tm a metade da cromatina a cada
diviso celular, em comparao com os do tipo selvagem. Daqui para frente, um em-
brio haplide no oitavo ciclo celular tem a mesma quantidade de cromatina quanto
um embrio do tipo selvagem no stimo ciclo. Esses investigadores descobriram que
enquanto embries do tipo selvagem formam sua camada celular imediatamente aps
a dcima terceira diviso, os embries haplides passaram por uma diviso extra, a
dcima quarta, antes da celularizao. Alm do mais, a durao dos ciclos 11 a 14 em
embries do tipo selvagem, corresponde aos ciclos 12 ao 15 em embries haplides.
Dessa maneira, os embries haplides seguem um padro similar aos embries do tipo
selvagem, porm, com defasagem de uma diviso celular.
Se essa defasagem fosse devida ao fato dos mutantes haplides terem uma
razo de cromatina para o citoplasma de metade, em relao a do tipo selvagem,
em um determinado ciclo, ento seria possvel acelerar a celularizao amarrando
(ligando) algum citoplasma, fazendo com que os ncleos se dividam em um volu-
me menor. Quando essa ligao foi realizada, o padro mittico do embrio foi
acelerado. A diviso final do blastoderma, sinalizando o fim do perodo de clivagem,
alcanada quando existe um ncleo para cada 61 m3 de citoplasma. Em Xeno-

pus, uma desacelerao similar na taxa mittica observada aps a dcima segun-
da diviso celular. Aqui tambm, as divises daqui para frente se tornam
assincrnicas. Experimentos de ligao sugerem que o tempo de durao da tran-
sio dessa blstula intermediria tambm funo da razo volumes cromatina/
citoplasma (Newport e Kirschner, 1982a,b).
Em ambos, Drosophila e Xenopus, a iniciao da transcrio pode ser induzida
prematuramente aumentando artificialmente a durao do ciclo celular. Quando
cicloheximida (um inibidor da sntese protica) atrasa a diviso celular, a transio da
blstula intermediria induzida precocemente em Xenopus, e uma exploso de trans-
cries ocorre em Drosophila (Edgard et al., 1986; Kimelman et al., 1987).
& Especulaes
Excees, Generalizaes,
e Clivagem Parastica da Vespa
O QUE CONSIDERAMOS nor-
mal e o que marginalizamos
como excees, freqentemen-
te reflete quais animais so mais acess-
volvimento conhecem apenas o desenvol-
vimento de uma espcie: Drosophila me-
lanogaster. A Drosophila ganhou proe-
minncia somente depois que se fez ne-
tro do ovo de uma outra espcie. Com o
desenvolvimento do ovo hospedeiro (nor-
malmente de uma mariposa), o mesmo acon-
tece com o ovo do parasita. No entanto,
veis para o estudo e mais facilmente do- cessrio relacionar fenmenos embriol- enquanto o ovo do hospedeiro comea o
mesticados para o laboratrio. No ne- gicos com genes particulares. Em 1941, o seu desenvolvimento no padro superfici-
cessrio dizer, que isso no reflete neces- maior compndio do desenvolvimento de al usual, o ovo da vespa divide holoblas-
sariamente as condies do mundo natu- insetos (Embriologia dos insetos e ticamente. Ademais, ao invs de diferenci-
ral. Pelo contrrio, nossas discusses de Miripodes, Johannsen e Butt) sequer ar o eixo do corpo, as clulas do embrio
desenvolvimento animal so freqente- mencionava essa espcie em seu ndice. parasita dividem-se repetidamente para se
mente dificultadas por certos organismos Insetos so um excepcionalmente bem- tornar uma massa de clulas no diferenci-
em particular. O desenvolvimento de anf- sucedido e espalhado subfilo, no sendo adas chamadas poligerme. Em duas sema-
bios geralmente representado pelo Xe- surpreendente encontrar uma grande vari- nas, a poligerme em crescimento fica
nopus laevis, e o camundongo e o ho- abilidade no seu desenvolvimento. O de- suspensa no hospedeiro, permanecendo
mem so os nicos mamferos cujos desenvolvimento da vespa parasita Copido- frouxamente atada ao crebro e traquia
senvolvimentos so usualmente estuda- somopsis tanytmemus difere marcadamente larvais (Figura 5.38A; Cruz, 1986a).
dos. Similarmente, embora haja mais de daquele da Drosophila cannica. Como Figura 5.38 Desenvolvimento de vespas
800.000 espcies de insetos conhecidas, muitas outras espcies parasitrias, a f- parasitrias (Encyrtidae). (A) Clivagem
a maior parte dos biologistas do desen- mea C. tanytmemus deposita seu ovo den- holoblstica do ovo de Copidosomopsis
tanytmenus produz uma poligerme de clulas
no-diferenciadas. (B) Larvas precoces de um
Olho/cabea da gnero relacionado, Pentalitomastix, atacam a
lagarta hospedeira larva de Trathala dentro do mesmo hospedei-
ro. A fotografia de um hospedeiro recm-
aberto. (A segundo Cruz, 1986a; B de Cruz,
1981, cortesia de Y. Cruz.)
Mrula de Esfago
4 dias
Corpo gorduroso
do hospedeiro
Ovo
(A)
Poligerme
Poligerme
precoce
(B)
Poligerme em expanso
Com o crescimento, a poligerme se divi- reproduzem, morrendo assim que as larvas pulam (a maioria das vezes sobre o corpo
de em dzias (s vezes milhares, dependen- normais se formam. Enquanto elas vivem, no do hospedeiro morto), acham um novo
do da espcie) de discretos grupos de clu- entanto, vo at o embrio hospedeiro ma- hospedeiro para depositar os seus ovos
las. Cada um desses grupos se torna um tando as larvas parasitas de outros indivdu- e morrem logo em seguida.
embrio! A vespa poliembrionria Copido- os (de espcies diferentes e de outros clones Tal ciclo de vida incomodava Charles
soma floridanum produz at 2000 indivdu- da mesma espcie). Em outras palavras, as Darwin, fazendo-o questionar o conceito de
os de um nico ovo fertilizado (Grbic et al., larvas precoces so formas predatrias que uma divindade benigna conhecida por to-
1996). Essa habilidade que um ovo tem para eliminam possveis competidores (Cruz, 1981, dos. Em 1860 ele escreveu ao biologista
se transformar em uma massa de clulas, 1986b; Grbic and Strand, 1992). americano Asa Gray: Eu no consigo me
que rotineiramente forma numerosos embri- Com a morte das larvas precoces (e convencer de que o benevolente e onipo-
es, chamada de poliembrionia. (Poliem- suas presas), a larva normal emerge da tente Deus tenha planejado e criado a
brionia caracterstica de certos grupos de sua primeira mudana de pele, comea a Ichneumonidae com a expressa inteno
insetos e certas espcies de mamferos, tais se alimentar vorazmente dos rgos da delas se alimentarem dentro dos corpos vi-
como o tatu de nove bandas, cujos ovos larva hospedeira. Em 40 dias, a criao vos de lagartas. No entanto, alm de sua
formam qudruplos idnticos.) A maior par- parasita j se alimentou dos msculos do utilidade de provocar noes de descon-
te desses embries de vespa parasita se de- hospedeiro, gordura corporal, gnadas, forto no que se refere a ordem natural e na-
senvolvem em larvas normais que levam glndulas de seda, intestinos, cordes tureza da individualidade, as vespas pa-
aproximadamente 30 dias para se desenvol- nervoso e hemolinfa, e o hospedeiro um rasitas podem ter conseqncias econmi-
ver. Um grupo menor, de cerca de 10 pouco mais do que um saco de pele segu- cas importantes. Macrocentrus grandii
porcento do nmero total de embries, se rando cerca de 70 larvas pupantes de ves- uma vespa poliembrionria que parasita a
tornam larvas precoces (Figura 5.38B), que pa. Aps outros 5 ou 6 dias, os novos broca Europia do milho. A habilidade de
se desenvolvem em uma semana. Elas no adultos perfuram o tegumento do hospe- um inseto se formar de um embrio por cli-
s se desenvolvem precocemente, como tm deiro e, em uma cena recordando o filme vagem holoblstica, deve tambm nos en-
muito pouca estrutura e no sofrem meta- Alien, provocam a abertura e a sada do corajar a apreciar a plasticidade da natureza,
morfose. So essencialmente um conjunto hospedeiro, literalmente por comer o seu desencorajando generalizaes precipitadas
de mandbulas mveis. Essas larvas no se corpo. Esses adultos freqentemente co- sobre um completo subfilo de organismos.
MECANISMO DE CLIVAGEM
Regulando o ciclo da clivagem
O ciclo celular das clulas somticas funcionalmente dividido em quatro estgios
(Figura 5.39A). Aps a mitose (M), temos o intervalo da pr-replicao (G1), em
seguida acontecendo a sntese do DNA (S). Aps o perodo da sntese, temos o inter-
valo pr-mittico (G2), seguido pela mitose. A progresso dessas fases regulada por
fatores de crescimento. Em blastmeros de clivagem precoce, no entanto, a diviso
celular pode ser muito simples. Blastmeros precoces de ourio-do-mar no tm G1
replicando o seu DNA durante a ltima parte (telfase) da mitose prvia (Hinegardner
et al., 1964). Os ncleos de Xenopus e Drosophila eliminaram as fases G1 e G2 duran-
te a clivagem precoce. (Embries de Xenopus adicionam essas fases ao ciclo celular,
algum tempo aps a dcima segunda clivagem. Drosophila adiciona G2 durante o ciclo
14 e G1 durante o ciclo 17.) Nas primeiras 12 divises, Xenopus divide-se sincronica-
mente em um ciclo celular bifsico: S para M e M para S (Figura 5.39B; Laskey et al.,
1977; Newport e Kirschner, 1982a).
Os fatores que regulam esse ciclo bifsico esto localizados no citoplasma. Ocitos
normais de Xenopus, quando aumentam, so detidos na primeira prfase meitica. So
incapazes de se dividirem. Se os ncleos de clulas divididas forem transplantados
para esses ocitos, tambm param a diviso. Quando ocitos normais so estimulados
por progesterona, retomam sua diviso meitica e param na metfase da segunda
meiose. Se o ncleo de clulas no divididas (como neurnios) so colocados no
citoplasma de ocitos tratados com progesterona, tambm iniciam a diviso e param
(A) (B)
Ciclina B
Ciclina D
Ciclina A
Ciclina E
Ciclina A
Figura 5.39
Ciclos celulares de clulas somticas e blastmeros precoces. (A) Ciclo celular de uma clula
somtica tpica. A Mitose (M) seguida por uma condio de interfase. Esse ltimo perodo
subdividido em fases G1, S (sntese) e G2. Clulas que esto se diferenciando so geralmente
removidas do ciclo celular e esto numa fase G1 estendida chamada G0. As ciclinas e suas
respectivas quinases, responsveis para progresso atravs do ciclo celular, so mostradas no
seu ponto de regulao do ciclo celular. (B) Ciclo celular bifsico mais simples dos blastmeros
precoces de anfbios, tendo somente dois estados, S e M. (A segundo Nigg, 1995.)
na metfase (Gurdon, 1968). O citoplasma de ocitos estimulados com progesterona

ainda passam por contraes corticais peridicas (caracterstica da diviso), mesmo
na ausncia de ncleos ou centrolos. Se fragmentos clonados de DNA so injetados
nesses embries anucleados, sua replicao sofre o controle desse ciclo (Hara et al.,
1980; Harland e Laskey, 1980; Karsentiket al.,1984). Dessa maneira, a capacidade de
diviso celular regulada pelo citoplasma.
Fator promotor de maturao

Alguns dos fatores que governam a sntese do DNA e a diviso celular foram iden-
tificados. O fator induzido por progesterona que permite o ncleo do ocito reto-
mar suas divises uma fosfoprotena de duas subunidades chamada de fator de
promoo da maturao (MPF, tambm conhecida como fator promotor da mitose.
O MPF foi primeiro descoberto como o principal fator responsvel pela retomada
das divises celulares meiticas no ovo ovulado de r (Smith e Ecker, 1969; Masui
e Markert, 1971). Esse mesmo fator continua realizando o seu papel aps a fertili-
zao, regulando o ciclo bifsico dos blastmeros precoces de Xenopus. Gerhart e
colegas (1984) mostraram que o MPF sofre mudanas cclicas nos nveis de ativida-
de nas clulas mitticas. A atividade do MPF de blastmeros precoces de rs
maior durante M e no detectvel durante S. Durante essa fase S, o MPF existe em
estado inativo. Essa ciclicidade tambm observada em blastmeros anucleados.
Newport e Kirschner (1984) demonstraram que a replicao do DNA (S) e mitose
(M) so dirigidas somente pelo ganho ou perda de atividade do MPF, mesmo na
ausncia de sntese protica. As clulas em clivagem pode ficar presas na fase S,
incubando-as com um inibidor de sntese protica. Quando o MPF microinjetado
nessas clulas, elas entram em M. Seus envoltrios nucleares se partem e suas
cromatinas condensam-se em cromossomos. Aps uma hora, o MPF degradado e
os cromossomos retornam fase S.
& Especulaes
MPF e Seus Reguladores

A pequena subunidade do MPF: (Cisek e Corden, 1989), e a fosforilao da A pequena subunidade de MPF tem
A cdc2 Quinase (Quinase- RNA polimerase pode ser a responsvel sido notavelmente conservada atravs da
Ciclina-dependente, CDK) pela inibio da transcrio durante a evoluo e quase idntica quela da fos-
MPF tem uma subunidade grande e outra mitose. Um quarto alvo da quinase pare- foprotena indutora de mitose, p34, sinteti-
pequena. A pequena subunidade de MPF ce ser a subunidade reguladora de miosina zada pelo gene cdc2 da levedura (Dunphy
uma protena quinase que, quando ativada, citoplasmtica. Quando essa protena et al., 1988; Gautier et al., 1988). De fato, o
pode fosforilar uma variedade de protenas. fosforilada, ela se torna inativa e incapaz gene humano que codifica a protena cor-
Dessa forma, MPF funciona adicionando de funcionar como uma ATPase dirigindo respondente pequena subunidade do
grupos fosfatos s protenas especficas. os filamentos de actina envolvidos na di- MPF de Xenopus pode ser inserido no ge-
Um desses alvos a histona H1, que se liga viso celular (Satterwhite et al., 1992). A noma da levedura e causar diviso nos
ao DNA. A fosforilao dessa protena pode inibio dessa miosina durante os estgi- mutantes de levedura deficientes em cdc2
levar condensao cromossmica. Outro os iniciais da mitose, pode prevenir divi- (Lee e Nurse, 1987). A protena p34 pode
alvo o envoltrio nuclear. Quinze minutos ses da clula at depois dos cromosso- existir em formas fosforiladas e desfosfori-
aps a adio do MPF, as trs protenas mos terem-se separado. lada. A forma ativa parece ser fosforilada
principais (as lminas) do envoltrio nucle-
ar se tornam hiperfosforiladas, e nos prxi-
mos 15 minutos, o envoltrio se despolime- Figura 5.40 O desenvolvimento da regulao do ciclo celular na embriognese de Drosophila.
rizou e est se desfazendo (Miake-Lye e (A) Ciclina e protena cdc25 (cordo) so abundantes antes da fertilizao. Portanto, durante os
Kirschner, 1985; Arion et al., 1988). A MPF primeiros sete ciclos celulares, a atividade da MPF quinase permanece constante e as divises
quinase purificada j foi mostrada fosforilar celulares prosseguem to rapidamente quanto funcionam as enzimas e os substratos. medida
que a ciclina degradada, sua sntese (de mRNA estocado no citoplasma) torna-se limitante no
esses envoltrios nucleares de protenas, e
ciclo 8. No ciclo 14, o mRNA materno para ciclina desapareceu, e deve ser sintetizado de genes
realizar sua despolimerizao in vitro (Peter
nucleares. Alm disso, a degradao das protenas do cordo comanda nova sntese a partir do
et al., 1990; Ward e Kirschner, 1990). Um
ncleo. Pr-MPF acumula mas no ativado at que a fosfatase cordo cliva os fosfatos T-14 e
terceiro alvo parece ser a RNA polimerase Y-15 da cdc2 quinase. O mecanismo que relaciona a atividade do MPF com o trmino da sntese
de DNA e a iniciao da citocinese esto sendo investigados. (Segundo Edgar et al., 1994.)
Regulado maternalmente Regulado zigoticamente
Ciclina maternal Protena maternal de cordo presente

e protenas de
cordo presentes Ciclina
Pr-MPF MPF ativo
Ciclina Desfosforilao Ciclina
MPF ativo Ciclina mRNA Ciclina
Degradao Sntese de
Protena Ciclina ciclina cdc 25/cordo
(zigtica) fosfatase (zigtica)
Ciclina Ciclina
Sntese de MPF ativo

ciclina
Ciclina
Degradao da ciclina
Mitose Mitose Mitose Mitose
Quinase ativa de Ciclo dirigido pela traduo de Ciclo dirigido pela cdc25/fosfatase de cordo
protenas maternas nova ciclina de mRNA materno
(limita substrato)
Ciclo
Divises nucleares
em treonina-161 (T-161) e desfosforilada em xo MPF. A ciclina permite a subunidade ximo ciclo, o cordo mRNA materno de-
tirosina-15 (Y-15). Ambas condies so quinase cdc2 tornar-se fosforilada nos re- gradado; se o ncleo no transcrever seu
importantes para a atividade da quinase sduos treonina-14 (T14), tirosina-15 (Y15) prprio cordo mRNA, as clulas no se
(Gould e Nurse, 1989; Solomon, 1993). e treonina-161 (Figura 5.40). A fosforilao dividiro. Edgard e OFarrel (1989) mos-
no T-161 necessria para a atividade do traram que aquelas clulas que se divi-
A maior subunidade do MPF: MPF, mas fosforilaes nos T-14 e Y-15 a dem esto sintetizando a sua prpria
Ciclina inibem. Dessa forma, quando fosforilada fosfatase cdc25, enquanto aquelas que
Ento, como regulado o MPF? Desde que nessas posies a quinase permanece ina- no so capazes de se juntar a esse ciclo,
a clivagem de Xenopus parecia ser regulada tiva, porm, potencialmente funcional. O no realizaro a diviso (Figura 5.41). Essa
por uma protena similar quela que regula a suprimento de molculas MPF potencial- degradao e a necessidade de re-sinteti-
diviso celular da levedura, pensou-se que mente funcionais (pr-MPF) acumula du- zar essa protena explicariam a mudana
qualquer regulador da protena da levedura rante o perodo tardio de S. de controle citoplasmtico para controle
teria contrapartida no embrio animal. Um nuclear da diviso como visto no ciclo 14.
dos principais reguladores da protena MPF A Fosfatase cdc25: Em Drosophila, existe uma maturao
de levedura o produto do gene cdc13, uma Iniciadora de Mitose desenvolvimental da regulao da quinase
protena 56-kDa chamada p56cdc13. Esse gene A mitose se inicia com uma abrupta MPF ativa (veja Figura 5.40; Edgard et al.,
foi clonado, e a seqncia de sua protena co- desfosforilao de todas essas subunidades 1994). Na ovulao, o complexo pr-MPF
dificada foi considerada muito semelhante s MPF quinase na posio 15. Isso conse- armazenado no ovo desfosforilado em T-
protenas ciclina B encontradas em numero- guido pelo aparecimento da fosfatase cdc25 14 e Y-15 pelo recm-traduzido cordo
sos animais (Goebl e Byers, 1988; Solomon (Edgar e OFarrell, 1989; Gautier et al., (cdc25) da protena. Durante os primeiros
et al., 1988). As protenas ciclina B em clu- 1991; Jessus e Beach, 1992; Lee et al., sete ciclos nucleares, o MPF ativo perma-
las em estgio de clivagem mostram um com- 1992). Dessa maneira, a acumulao gra- nece em nveis altos, e o ncleo divide-se
portamento peridico, acumulando duran- dual do MPF convertida em uma breve to rapidamente quanto as enzimas sinte-
te a fase S e sendo degradada durante a exploso de atividade quinase que inicia tizadoras de DNA permitem. Durante os
mitose (Evans et al., 1983; Swenson et al., a mitose. Essa fosfatase (que tem sido en- ciclos 8-13, a ciclina comea a ser degrada-
1986). Ciclinas so freqentemente codifi- contrada em inmeros organismos) ela da na metfase, levando a flutuaes peri-
cadas pelo mRNA armazenado no citoplas- prpria regulada pelo desenvolvimento. dicas de atividade MPF-quinase. A snte-
ma do ocito, e se sua transformao em Na Drosophila, a fosfatase cdc25 (pro- se da ciclina do mRNA armazenado no
protenas seletivamente inibida, a clula duto do gene string, de cordo) inicial- ocito armazenado se torna o passo
no entrar em mitose (Minshull et al., mente sintetizada pelo mRNA armazena- limitante para a mitose. A degradao do
1989). A protena ciclina B combina com a do no ocito durante os 13 primeiros ci- cordo da ocito-protena leva parada
quinase cdc2 do MPF para criar o comple- clos celulares. No entanto, durante o pr- do ciclo celular na interfase do ciclo 14.
Figura 5.41 Correlao da expresso do gene string (cordo) com

a diviso celular em embries de Drosophila. (A) Nesse exemplo, um
embrio de estgio tardio 14 corado com uma seqncia nucleotdica
radioativa que especificamente reconhece e liga o mRNA cordo (visto
aqui como pontos brancos na auto-radiografia). (B) Um embrio ligei-
ramente mais velho corado com anticorpos fluorescentes para tubu-
lina para mostrar os microtbulos dos fusos mitticos. Uma compara-
o da microfotografia de fluorescncia com a auto-radiografia obtida
da ligao da sonda radioativa mostra que somente aquelas clulas
capazes de se dividirem, sintetizam mRNA string. (C) Anticorpos
para a protena ciclina A mostram que ela degradada aps a mitose e
(A) no vista nas regies que contm a protena de cordo. (de Edgar e
OFarrell, 1989, cortesia de B. A. Edgar.)
(B) (C)
Grandes concentraes de pr-MPF se replicao do DNA (Duronio e OFarrell, comeo da mitose; mas a prpria monta-
acumulam. As mitoses para as divises 14, 1994). Certamente, quando as clulas saem gem do fuso necessria para o funciona-
15 e 16 so iniciadas somente quando essa normalmente do ciclo para comear a se dimento apropriado da ciclina B (Minshull et
pr-MPF desfosforilada nas posies T- ferenciarem, expressam a protena Dacapo, al., 1994). Se os fusos so formados incor-
14 e Y-15 pela protena cordo. Essa prote- um inibidor de ciclina E/cdk2 (Lane et al., retamente, a ciclina B cessa seu funciona-
na derivada de transcrio nuclear ao 1996; de Nooij et al., 1996). mento, e a mitose pra. Tambm parece ha-
final de cada perodo G2. A mitose passou A regulao das ciclinas uma funo ver retroalimentao entre a cromatina re-
do controle citoplasmtico para o nuclear. crtica no desenvolvimento. Primeiro, ima- plicante e as quinases ciclina-dependen-
gine as clulas da cartilagem de nossas per- tes, fazendo com que a mitose no comece
Outras ciclinas e quinases ciclina- nas sofrendo mais uma diviso celular; ser- at que o DNA tenha comeado a replicar-
dependentes amos muito maiores do que agora. Pior, ima- se, e somente uma rodada de replicao
MPF o primeiro membro descoberto de gine que essa desregulao ocorresse em normalmente permitida durante a diviso
uma famlia de protenas dimricas que tm somente uma de nossas pernas. Ainda pior, celular (Chong et al., 1995; Madine et al.,
estruturas muito similares. Cada uma des- imagine se a diviso da cartilagem no fos- 1995). As molculas que mediam essas tro-
sas protenas contm uma ciclina e uma se coordenada com a diviso da pele e dos cas esto agora sendo estudadas.
quinase ciclina-dependente, que quando de- vasos sangneos. A regulao desses
pendente do MPF chamada cdk1. Pelo eventos coordenada atravs de hormni- Fator Citosttico
menos outras sete quinases ciclina-depen- os e fatores de crescimento que, por fim, A sntese e a degradao do MPF leva a
dentes esto envolvidas em clulas madu- regulam as ciclinas que controlam a passa- ciclagem das clulas. No entanto, se a de-
ras de vertebrados, e mais de uma dzia de gem atravs dos ciclos das clulas. Segun- gradao da ciclina for prevenida, o MPF
ciclinas foram identificadas. Os papis de do, quando a ciclina se torna ativa sem re- permanece ativo e a clula travada na
algumas dessas quinases foram determina- gulao externa ou quando ciclinas se tor- metfase (Murray et al., 1989). Isso o que
dos (como mostra a Figura 5.39). Entre es- nam estimuladas por protenas mutantes, o acontece, aparentemente, durante o desen-
sas enzimas, uma das mais crticas a ciclina crescimento das clulas continua sem con- volvimento do ocito da r. O ocito ma-
E/cdk2. Enquanto MPF (ciclina B/cdk1) trole externo, e se desenvolve um tumor. Em duro da r cessa a diviso celular produ-
crtica para a entrada na mitose (M), ciclina clulas maduras de vertebrados, as ciclino- zindo uma protena chamada fator citost-
E/cdk2 crtica para a habilidade da clula enzimas D/cdk4,6 cumprem um papel crucial tico (CSF), que mantm o ocito preso na
entrar na fase S, permitindo a ocorrncia de no desenvolvimento. Em diversos tipos de metfase da segunda diviso meitica (Fi-
sntese do DNA. A regulamentao do de- clulas, controlam a dicotomia entre a divi- gura 5.42). Essa protena contm os pro-
senvolvimento dessa protena uma fase so e a diferenciao celular. [cleave6.html] dutos dos genes c-mos e cdk-2, e parece
crtica no desenvolvimento da Drosophila. agir bloqueando a degradao da ciclina
Embries de Drosophila adicionam um Pontos de Controle para Diviso Ce- (veja o Captulo 22). Uma vez que a ciclina
estgio G2 antes da mitose, quando a prote- lular: DNA e Fusos no degradada, MPF permanece ativo, e
na de cordo se torna limitante no ciclo 14. O ciclo celular exige uma excepcional intri-
A fase G1 adicionada ao ciclo 17 quando cada coreografia da citocinese, replicao
ciclina E se torna o fator limitante para a de DNA, montagem de fusos e metabolis-
replicao do DNA. Em embries precoces, mo celular. Nesse conjunto, ciclinas e Figura 5.42
ciclina E e cdk2 esto sempre presentes, quinases ciclina-dependentes so alvos e Nveis do fator promotor de amadurecimento
seus mRNA sendo fornecidos pelo ocito e causadores da regulao. O sistema ciclina- (MPF) durante o desenvolvimento precoce da
traduzidos atravs de todos os primeiros 15 quinase parece coordenar esses eventos. r Xenopus laevis. O sinal normal de matura-
ciclos de diviso. A mensagem para ciclina Por exemplo, a fibra do fuso mittico no o o hormnio progesterona, que estimula a
degradada durante o ciclo 16, levando pode formar at a ciclina B/cdk1 sinalizar o ovulao dos ocitos e o incio da meiose. (Se-
deficincia dessa protena no ciclo 17. Des- gundo Murray e Kirschner, 1989.)
sa forma, a maioria das clulas param no G1
desse ciclo, no entrando no perodo de sn- Entrada de espermatozide, aumento
Estmulo para amadurecimento de Ca2+ livre, inativao de CSF
tese do DNA. A comeam a diferenciar-se. (progesterona ou MPF)
(As excees so as clulas precursoras CSF estabiliza MPF
dos nervos que continuam a proliferar, e as Alta
clulas do intestino, que continuam a pro-
duzir DNA na ausncia de diviso celular. Atividade
Nesses casos, a ciclina E derivada dos de MPF
genes zigticos.) Se ciclina E induzida
ectopicamente, as clulas retidas sofrem uma Baixa
nova rodada de sntese de DNA (Knoblich
et al., 1994). Pensa-se que a ciclina E contro-
la a sntese do DNA, fosforilando certos
fatores de transcrio que regulam as trans- Ocito Meiose Meiose Ocito Primeira Segunda
cries das protenas necessrias para a Imaturo I II maduro clivagem clivagem
o ocito permanece na metfase. A libera- liberao de ons de clcio na fertilizao Enquanto os ons de clcio esto ocupa-
o de ons de clcio durante a fertilizao de iniciar a degradao da ciclina e permitir dos desligando a mitose, os sinais da fer-
ativa a protease que especificamente inati- que a clula comece a replicao do DNA. tilizao que ativam a protena quinase C
va o CSF (Watanabe et al., 1991). Quando Em seguida, os ritmos da diviso celular esto estabelecendo condies de inter-
o CSF degradado, a ciclina pode ento so controlados pela atividade do MPF, fase: descondensao da cromatina e re-
ser degradada, e a clula pode retornar que por sua vez baseada nos ritmos forma do envoltrio nuclear (Bement e
fase S. Dessa maneira, um dos efeitos da cclicos da sntese e degradao da ciclina. Capco, 1991).
O mecanismo citoesqueltico da mitose

Clivagem na verdade o resultado de dois processos coordenados. O primeiro desses
processos cclicos a cariocinese, a diviso mittica do ncleo, cujo agente mecnico
o fuso mittico, com seus microtbulos compostos de tubulina (o mesmo tipo de
protena componente do flagelo do espermatozide). O segundo processo a
citocinese, a diviso da clula. O agente mecnico da citocinese o anel contrtil de
microfilamentos feitos de actina (o mesmo tipo de protena que alonga os microvilos
do vulo e o processo acrossmico do espermatozide). A Tabela 5.2 apresenta uma
comparao desses sistemas de diviso. O relacionamento e coordenao entre os
dois sistemas durante a clivagem representado na Figura 5.43A, onde o ovo do
ourio-do-mar mostrado passando pela primeira clivagem. O fuso mittico e o anel
contrtil esto perpendiculares um com o outro, e o fuso interno ao anel contrtil. O
sulco da clivagem finalmente seciona o plano da mitose criando, portanto, dois blast-
meros geneticamente equivalentes.
Os microfilamentos de actina so encontrados no crtex do ovo ao invs do cito-
plasma central. Sob o microscpio eletrnico, o anel de microfilamentos pode ser visto
formando uma banda cortical distinta de 8-10 m de espessura (Figura 5.43B). Esse
anel contrtil existe somente durante a clivagem e se estende por 0.1m para o centro
do ovo. responsvel por exercer a fora que separa o zigoto em blastmeros; se
interrompido, a citocinese pra. Schroeder (1973) props um modelo de clivagem em
que o anel contrtil parte o ovo como um fecho de bolsa apertando o ovo, enquanto a
clivagem continua. Esse aperto dos anis de microfilamentos cria o sulco da clivagem.
Embora a cariocinese e a citocinese sejam normalmente coordenadas, elas so, s
vezes, separadas por condies naturais ou experimentais. Nos ovos dos insetos, a
cariocinese ocorre diversas vezes antes da citocinese. Outra maneira de induzir esse
estado tratar os embries com a droga citocalasina B, que inibe a formao e a
organizao de microfilamentos no anel contrtil, assim, interrompendo a clivagem
sem parar a cariocinese (Schroeder, 1972). Em alguns momentos, o ncleo continua a
se dividir e expressar protenas reguladoras do desenvolvimento, mesmo quando a
clivagem bloqueada (Lillie, 1902; Whittaker, 1979).
Tabela 5.2 Cariocinese e citocinese
Principal Principal droga

Processo Agente mecnico composio protica Localizao disruptora
Cariocinese Fuso mittico Microtbulos de tubulina Citoplasma central Colchicina, nocodazola

Citocinese Anel contrtil Microfilamentos de actina Citoplasma cortical Citocalasina B
a
Como foi verificado que a colchicina inibe independentemente vrias funes da membrana, incluindo a osmorregulao e o transporte de ons e
nucleosdeos, nocodazol tornou-se a principal droga usada para inibir processos mediados por microtbulos (veja Hardin, 1987).
Figura 5.43 (A) (B)

Papel dos microtbulos e microfilamentos na Microfilamentos
diviso celular. (A) Diagrama da telfase da (anel contrtil)
primeira clivagem. Os cromossomos esto sen-
do arrastados para os centrolos por microt-
bulos, enquanto o citoplasma est sendo aper-
tado pela contrao dos microfilamentos. (B)
Localizao de microfilamentos da actina no
sulco de clivagem. Marcao fluorescente dos
microfilamentos de actina mostra o anel
contrtil no sulco da primeira clivagem (fle-
cha) de um ovo de ourio-do-mar na telfase.
(C) marcao fluorescente da tubulina mostra Centrolo Microtbulos
os steres microtubulares de um ovo de ouri- Cromossomo
o-do-mar durante a telfase da primeira cli-
vagem. (B de Bonder et al., 1988; C de White (C)
et. al., 1987.)
Um dos mais intrigantes problemas no resolvidos da clivagem embrionria,

como a citocinese e a cariocinese so coordenadas entre si. Pesquisas in vitro
sugerem que a replicao do DNA pode controlar a fosforilao da subunidade
quinase cdc2 do MPF e que essa fosforilao pode controlar a habilidade da actina
de se contrair (Smythe e Newport, 1992). No entanto, essas observaes podem
no ser consistentes com as observaes feitas em clulas embrionrias precoces
(Ferrell et al., 1991). O nmero e o local desses sulcos de clivagem parecem ser
controlados pelos steres dos microtbulos. Esses steres (Figura 5.43C) so rai-
os microtubulares que se estendem dos plos do fuso mittico para a periferia da
clula. Clivagem normal ocorre somente se um par de steres est presente (Wil-
son, 1901), e ovos polisprmicos (obtendo centrolos de cada espermatozide)
formam sulcos de clivagem mltiplos no mesmo ovo (veja Figura 4.20). Em estudos
mais recentes, Raff e Glover (1989) mostraram que no embrio de Drosophila, se
os centrolos migram ao plo posterior, eles podem formar clulas polares, mesmo
na ausncia de ncleo. Dessa maneira, parece que os steres so elementos sine
qua non da clivagem.
O segundo tipo de evidncia ligando os steres com a formao do sulco de
clivagem vem de experimentos nos quais a direo de clivagem mudada pela coloca-
o do ovo sob presso. Pflger (1884) descobriu que quando um zigoto de rs
levemente comprimido entre duas placas de vidro, as direes das primeiras trs
clivagens so todas perpendiculares ao plano das placas. Ambos, Driesch e Morgan
(revisto por Morgan, 1927) fizeram observaes semelhantes com embries de ourio-
Zigotos Sulco de clivagem normal Sulco extra de clivagem extra

(A) (B) (C) (D)
Bola de vidro steres Interrupo do Fuso

deslocando o sulco de clivagem Figura 5.44
aparelho mittico Criao de um novo sulco de clivagem pelo
deslocamento dos steres. (A,B) Pela inter-
rupo de um sulco de clivagem com uma bola
de vidro, cria-se uma clula com forma de fer-
do-mar. Em ambos os casos, o plano da terceira clivagem (que normalmente paralelo
radura. Na prxima diviso (C,D), cria-se um
ao equador do ocito) foi deslocado em 90o. Dessa maneira, com a mudana do local novo sulco de clivagem, apesar de no haver
do fuso mittico, pode-se alterar a direo do sulco de clivagem. fuso mittico que o atravessa. (de Rappaport,
Rappaport (1961) estendeu esse tipo de experimento, deslocando os fusos 1961, cortesia de R. Rappaport.)
mitticos para os lados das clulas. Na Figura 5.44, uma bola de vidro foi usada para
deslocar os steres do centro da clula em direo periferia. O sulco de clivagem
resultante se estende somente enquanto a bola no aparece do outro lado. Dessa
maneira, formada uma clula binucleada, em forma de ferradura. Na prxima divi-
so, dois aparelhos de fuso se formam entre quatro steres, mas so gerados trs
sulco de clivagem! Cada brao da ferradura tem o seu prprio fuso mittico e sulcos
de clivagem como esperado, mas um terceiro sulco aparece entre os dois steres no
topo da ferradura (Figura 5.44C). Isso demonstra claramente que se os dois steres
estiverem prximos um do outro, suas interaes causam a formao de um sulco de
clivagem, mesmo na ausncia de um fuso mittico entre eles. Novamente ns obser-
vamos que a diviso celular pode ocorrer sem diviso nuclear enquanto os steres
estiverem presentes.
A formao de novas membranas

Nossa ltima considerao sobre clivagem embrionria envolve a formao de novas
membranas celulares. Sero essas membranas recm-sintetizadas ou so meras exten-
ses da membrana celular do ocito? A resposta que provavelmente ambos mecanis-
mos contribuem para as membranas celulares internas.
Embries de anfbios fornecem evidncias que novos componentes da membrana
esto sendo sintetizados durante a clivagem precoce. A Figura 5.45A mostra o primei-
ro sulco da clivagem de um zigoto pigmentado de r. Ao passo que a membrana
original tem uma regio cortical pigmentada associada a ela, a nova membrana bran-
ca. Essa nova membrana tem tambm propriedades de condutividade eltrica diferen-
tes daquelas da membrana original. Byers e Armstrong (1986) radiorotularam compo-
nentes de membrana de ovos de Xenopus recm-fertilizados e seguiram a redistribuio
dessas molculas atravs da clivagem, por auto-radiografia. Durante a primeira clivagem,
a membrana da superfcie externa do embrio e a membrana da borda principal do
sulco de clivagem so altamente marcadas (mostrando serem as regies originais da
membrana). Entre elas h uma grande regio desprovida de rtulo radioativo (Figura
5.45B). Dessa maneira, a membrana do sulco um mosaico de diferentes partes. A
membrana da parte onde o sulco termina derivada de uma superfcie externa
preexistente do ovo, marcada, mas a maior parte da membrana do sulco derivada de
regies que so inacessveis aos marcadores de superfcie. Byers e Armstrong especu-
lam que o domnio da membrana intensamente marcada, na borda do sulco, contm as
membranas ncoras para o anel subjacente de microfilamentos corticais. A borda do
(A) Nova membrana no-pigmentada (B) Figura 5.45

Formao de novas membranas na primeira clivagem
do ovo de Xenopus. (A) A membrana antiga tem grnu-
los de pigmento. A nova membrana aparece clara por-
que no tem esses grnulos. (B) Auto-radiografia de
protenas de membrana no sulco da primeira clivagem.
A superfcie celular foi radiativamente marcada antes
da diviso. (A de Laat e Bluemink, 1974; B de Byers e
Armstrong, 1986, cortesia dos autores.)
sulco em embries precoces de Xenopus, tambm contm microtbulos curtos, dis-

postos radialmente. Pensa-se que esses microtbulos poderiam fornecer um caminho
para o movimento de vesculas das membranas em direo ao lugar onde so inseridos
na membrana (Danilchik e Funk, 1996).
Esses processos de clivagem dividem o citoplasma do zigoto em numerosas
clulas. Cada clula pode ter os mesmos genes nucleares, mas seus respectivos
citoplasmas podem diferir significativamente. No prximo captulo veremos como
esses blastmeros se locomovem e interagem um com o outro para iniciar a estru-
tura do corpo.
LITERATURA CITADA
Adeslon, D. C. and Humphreys, T. 1988. Sea Boycott, A. E., Diver, C., Garstang, S. L. and development in embryos of Ilyanassa obsoleta.
urchin morphogenesis and cell-hyalin adhesion Turner, F. M. 1930. The inheritance of sinestrality Int. J. Invert. Reprod. Dev. 9: 209-228.
are perturbed by a monoclonal antibody specific in Limnaea peregra (Mollusca: Pulmonata).
Crampton, H. E. 1894. Reversal of cleavage
for hyalin. Development 104: 391-402. Philos. Trans. R. Soc. Lond. [B] 219: 51-131. in a sinistral gastropod. Ann. N.Y. Acad. Sci.
Arion, D., Meijer, L., Brizuela, L. and Beach, Brenner, C. A., Adler, R. R., Rappolee, D. A., 8: 167-170.
D. 1988. cdc2 is a component of the M phase- Pedersen, R. A. and Werb, Z. 1989. Genes for Cruz, Y. R. 1981. A sterile defender morph in a
specific histone H1 kinase: Evidence for identity extracellular matrix-degrading metalloproteases
polyembryonic hymenopteran parasite. Nature
with MPF. Cell 55: 371-378. and their inhibitor, TIMP, are expressed during
294: 446-447.
early mammalian development. Genes Dev. 3:
Balinsky, B. 1. 1981. Introduction to Embryology, 848-859. Cruz, Y. P. 1986a. Development of the polyem-
5th Ed. Saunders, Philadelphia. bryonic parasite Copidosomopsis tanytmemus
Byers, T. J. and Armstrong, P. B. 1986. (Hymenoptera: Encyrtidae). Ann. Entomol. Soc.
Barlow, P., Owen, D. A. J. and Graham, C. 1972. Membrane protein redistribution during Xenopus
DNA synthesis in the preimplantation mouse Am. 79: 121-127.
first cleavage. J. Cell Biol. 102: 2176-2184.
embryo. J. Embryol. Exp. Morphol. 27: 432-445. Cruz, Y. P. 1986b. The defender role of the
Carlson, B. M. 1981. Pattens Foundations of
Beams, H. W. and Kessel, R. G. 1976. Cytoki- precocious larvae of Copidosomopsis tanytmemus
Embryology. McGraw-Hill, New York. Caltagirone (Encyrtidae, Hymenoptera). J. Exp.
nesis: A comparative study of cytoplasmic
division in animal cells. Am. Sci. 64: 279-290. Carson, D. D., Tang, J.-P. and Julian, J. 1993. Zool. 237: 309-318.
Heparan sulfate proteoglycan (perlecan) ex- Dan, K. 1960. Cytoembryology of echinoderms
Bellairs, R., Breathnach, A. S. and Gross, M. pression by mouse embryos during acquisiti-
1975. Freeze-fracture replication of junctional and amphibia. Int. Rev. Cytol. 9: 321-367.
on of attachment competence. Dev. Biol. 155:
complexes in unincubated and incubated chick 97-106. Danilchik, M. and Funk, C. 1996. Abstracts of
embryos. Cell Tissue Res. 162: 235-252. the Sixth InternatI. Xenopus Conference. Wind
Chong, J. P. J., Mahbubani, H. M., Khoo,
Bement, W. M. and Capco, D. G. 1991. Parallel Rivers Lodge, Estes Park, CO.
C.Y., and Blow, J. J. 1995. Purification of
pathways of cell cycle control during Xenopus an MCM-containing complex as a compo- Dan-Sohkawa, M. and Fujisawa, H. 1980. Cell
egg activation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: nent of the replication licensing system. dynamics of the blastulation process in the starfish,
5172-5176. Nature 375: 418-421. Asterina pectinifera. Dev. Biol. 77: 328-339.
Bonder, E. M., Fishkind, D. J., Henson, J. H., Cisek, L. J. and Corden, J. L. 1989. Phosphory- Darwin, C. 1860. Letter to Asa Gray, May 22,
Cotran, N. M. and Begg, D. A. 1988. Actin in lation of RNA polyrnerase by the murine homo- 1860. In F. Darwin (ed.), The Life and Letters
cytokinesis: Formation of the contractile logue of the cell-cycle control protein cdc2. of Charles Darwin, Vol. 2. Appleton, New York.
apparatus. Zool. Sci. 5: 699-711. Nature 339: 679-684 [p.105]
Borland, R. M. 1977. Transport processes in the Craig, M. M. and Morrill, J. B. 1986. Cellular de Laat, S. W. and Bluemink, J. G. 1974. New
mammalian blastocyst. Dev. Mammals 1: 31-67. arrangements and surface topography during early membrane formation during cytokinesis in
normal and cytochalasin B-treated eggs of Ferrell, J. E., Wu, M., Gergart, J. C. and Martin, velopment of the mouse. In M. Karkinen-
Xenopus laevis. II. Electrophysical observa- G. S. 1991. Cell cycle tyrosine phosphorylation Jaaskelainen, L. Saxn and L. Weiss (eds.),
tions. J. Cell Biol. 60: 529-540. of p34cdc2 and a microtubule associated protein Cell Interactions in Differentiation. Academic
kinase hornologue in Xenopus oocytes and eggs. Press, New York, pp. 45-57.
de Laat, S. W., Tertoelen, L. G. J., Dorresteijn, A.
Mol. Cell. Biol. 11: 1965-1971.
W. C and van der Biggelaar, J. A. M. 1980. Granato, M. and Nsslein-Volhard, C. 1996.
Intercellular communication patterns are involved Fleming, I P. 1987. Quantitative analysis of cell Fishing for genes controlling development. Curr.
in cell determination in early muscular develop- allocation to trophectoderm and inner cell mass Opin. Gen. Dev. 6: 461-468.
ment. Nature 287: 546-548. in the mouse embryo. Dev. Biol. 119: 520-531.
Grbic, M. and Strand, M. R. 1992. Sibling rivalry
de la Chappelle, A., Schroder, J., Rantanen, Fleming, T. P. 1992. Trophectoderm biogenesis and brood sex ratios in polyembryonic wasps.
P., Thomasson, B., Niemi, M., Tilikainen, A., in the preimplantation mouse embryo. In T. P. Nature 360: 254-256.
Sanger, R. and Robson, E. E. 1974. Early Fleming, (ed.) Epithelial Organization and De-
fusion of two human embryos? Ann. Hum. velopment. Chapman and Hall, London, pp. Grbic, M., Nagy, L. M., Carroll, S. B. and Strand,
Genet. 38: 63-75. 111-134. M. 1996. Polyernbryonic development: insect
pattern formation in a cellularized environment.
de Nooij, J.C., Letendre, M.A. and Hariharan, Fleming, T. P., Pickering, S. J., Qasim, F. and Maro
Development 122: 795-804.
I.K. 1996. A cyclin-dependent kinase inhibitor, B. 1986. The generation of cell surface polarity in
Dacapo, is necessary for timely exit from the cell mouse 8-cell blastomeres: The role of cortical Gulyas, B. J. 1975. A reexamination of the
cycle during Drosophila embryogenesis. Cell 87: microfilaments analyzed using cytochalasin D. J. cleavage patterns in eutherian mammalian
1237-1247. Embryol. Exp. Morphol. 95: 169-191. eggs: Rotation of the blastomere pairs during
Foe, V. 1989. Mitotic domains reveal early second cleavage in the rabbit. J. Exp. Zool.
Dunphy, W. G., Brizuela, L., Beach, D. and
committment of cells in Drosophila embryos. 193: 235-248.
Newport, J. 1988. The Xenopus cdc2 protein is
a component of MPF, a cytoplasmic regulator of Development 107: 1-25. Gurdon, J. B. 1968. Changes in somatic nuclei
mitosis. Cell 54: 423-431. Foe, V. E., Odell, G. M., and Edgar, B. A. 1994. inserted into growing and maturing amphibian
Duronio, R. J. and OFarrell, P. 1994. Develop- Mitosis and morphogenesis in the Drosophila oocytes. J. Embryol. Exp. Morphol. 20: 401-414.
mental control of a GI-S transcription program embryo: point and counterpoint. In The Deve- Hara, K. 1977. The cleavage pattern of the axolotl
in Drosophila. Development 120: 1503-1515. lopment of Drosophila melanogaster, B. M. egg studied by cinematography and cell counting.
Bate, (ed.). Cold Spring Harbor Press, Cold Wilhelm Roux Arch. Entwicklungsmech. Org.
Dyce, J., George, M., Goodall, H. and Fleming, Spring Harbor.
T. P. 1987. Do trophectoderm and inner cell mass 181: 73-87.
cells in the mouse blastocyst maintain discrete Freeman, G. and Lundelius, J. W. 1982. The de-
Hara, K., Tydeman, P. and Kirschner, M. W.
lineages? Development 100:685-698. velopmental genetics of dextrality and sinistrality
1980. A cytoplasmic clock with the same period
in the gastropod Limnea peregra. Wilhelm Roux
Edgar, B. A. and OFarrell, P. H. 1989. Genetic Arch. Dev. Biol. 191: 69-83. as the division cycle in Xenopus eggs. Proc. Natl.
control of cell division patterns in the Drosophi- Acad. Sci. USA 77: 462-466.
la embryo. Cell 57: 177-187. Fullilove, S. L. and Jacobson, A. G. 1971. Nu-
clear elongation and cytokinesis in Drosophila Hardin, J. D. 1987. Archenteron elongation in
Edgar, B. A., Kiehle, C. P. and Schubiger, G. montana. Dev. Biol. 26: 560-577. the sea urchin embryo is a microtubule indepen-
1986. Cell cycle control by the nucleo-cytoplas- dent process. Dev. Biol. 121: 253-262.
mic ratio in early Drosophila development. Cell Gardiner, R. C. and Rossant, J. 1976. Determi-
nation during embryogenesis in mammals. Ciba Harland, R. M. and Laskey, R. A. 1980. Regula-
44: 365-372.
Found. Symp. 40: 5-18. ted replication of DNA microinjected into eggs
Edgar, B., Sprenger, F., Duronio, R. J., Leopold, of X. laevis. Cell 21: 761-771.
P. and OFarrell, P. 1994. MPF regulation during Gautier, C., Norbury, C., Lohka, M., Nurse, P.
and Maller, J. 1988. Purified maturationpromo- Heasman, J., Ginsberg, D., Goldstone, K., Pratt,
the embryonic cell cycles of Drosophila. Genes
ting factor contains the product of Xenopus T., Yoshidanaro, C. and Wylie, C. 1994. A
Dev. 8: 440-453.
homolog of the fission yeast cell cycle control functional test for maternally inherited cadherin
Ettensohn, C. A. and Ingersoll, E. P. 1992. gene cdc2. Cell 54: 433-439. in Xenopus shows its importance in cell adhesion
Morphogenesis of the sea urchin embryo. In E. at the blastula stage. Development 120: 49-57.
F. Rossomondo and S. Alexander (eds.), Gautier, J., Solomon, M. J., Booher, R. N.,
Morphogenesis. Marcel Dekker, New York, pp. Bazan, J. F. and Kirschner, M. W. 1991. cdc25 Helde, K. A., Wilson, E. T., Cretekos, C, J. and
189-262. is a specific tyrosine phosphatase that directly Grunwald, D. J. 1994. Contribution of early cells
activates p34cdc2. Cell 67: 197-211. to the fate map of the zebrafish gastrula. Science
Evans, M.J. and Kaufman, M. H. 1981. Esta- 265: 517-520.
blishment in culture of pluripotent cells from Gerhart, J. C., Wu, M. and Kirschner, M. 1984.
mouse embryos. Nature 292: 154-156. Cell dynamics of an M-phase-specific cytoplas- Hillman, N., Sherman, H. I. and Graham, C. F.
mic factor in Xenopus laevis oocytes and eggs. 1972. The effects of spatial arrangement of cell
Evans, T., Rosenthal, E., Youngblom, J., Distel, J. Cell Biol. 98: 1247-1255. determination during mouse development. J.
D. and Hunt, T. 1983, Cyclin: A protein speci- Embryol. Exp. Morphol. 28: 263-278.
fied by maternal mRNA in sea urchin eggs that Giudice, A. 1973. Developmental Biology of the
is destroyed at each cleavage division. Cell 33: Sea Urchin Embryo. Academic Press, New York. Hinegardner, R. T., Rao, B. and Feldman, D. E.
389-396. Goebl, M. and Byers, B. 1988. Cyclin in fission 1964. The DNA synthetic period during early
yeast. Cell 54: 739-740. development of the sea urchin egg. Exp. Cell Res.
Eyal-Giladi, H. 1991. The early embryonic de-
36: 53-61.
velopment of the chick, an epigenetic process. Gould, K. and Nurse, P. 1989. Tyrosine phos-
Crit. Rev. Poultry Biol. 3: 143-166. phorylation of the fission yeast cdc2 protein Hrstadius, S. 1939. The mechanics of sea urchin
kinase regulates entry into mitosis. Nature 342: development, studied by operative methods. Biol.
Eyal-Giladi, H., Debby, A. and Harel, N. 1992.
39-45. Rev. 14: 132-179.
The posterior section of the chicks area pellucida
and its involvement in hypoblast and primitive Graham, C. F. and Kelly, S. J. 1977. Interacti- Hrstadius, S. 1973. Experimental Embryology
streak formation. Development 116: 819-830. ons between embryonic cells during early de- of Echinoderms. Clarendon Press, Oxford.
Inou, S. 1982. The role of self-assembly in the proliferation during Drosophila development. Mayr, W. R., Pausch, V. and Schnedl, W. 1979.
generation of biologic form. In S. Subtelny and Cell 87: 1225-1235. Human chimaera detectable only by investigation
B. P. Green (eds.), Developmental Order: Its Langman, J. 1981. Medical Embryology, 4th Ed. of her progeny. Nature 277: 210-211.
Origin and Regulation, Alan R. Liss, New York,
Williams & Wilkins, Baltimore. Miake-Lye, R. and Kirschner, M. W. 1985.
pp. 35-76. Induction of early mitotic events in a cellfree
Laskey, R. A., Mills, A. D. and Morris, N. R.
Jessus, C. and Beach, D. 1992. Oscillation of system. Cell 41: 165-175.
1977. Assembly of SV40 chromatin in a cellfree
MPF is accomplished by periodic association system from Xenopus eggs. Cell 10: 237-243. Minshull, J., Blow, J. J. and Hunt, T. 1989.
between cdc25 and cdc2-cyclin B. Cell 68: Translation of cyclin mRNA is necessary for
323-332. Lee, M. and Nurse, P. 1987. Complementation
used to clone a human homologue of the fission extracts of activated
Joharnnsen, O.A. and Butt, F.H. 1941. Embryo- yeast cell cycle control gene cdc2+. Nature 335: Xenopus eggs to enter mitosis. Cell 56: 947-956.
logy of Insects and Myriapods. McGrawHill, NY.
251-254. Minshull, J., Sun, H., Tonks, N. K. and Murray,
Johnson, M. H. and Selwood, L. 1996. The
Lee, M. S., Ogg, S., Xu, M., Parker, M., A. W. 1994. A MAP kinase-dependent spindle
nomenclature of early development in mammals.
Donoghue, D. J., Maller, J. L. and Piwnica- assembly checkpoint in Xenopus egg extracts.
Reprod. Fert. Dev. 8: 759-764. Worms, H. 1992. cdc25 encodes a protein Cell 79: 475-486.
Johnson, M. H., Chisholm, J. C., Fleming, T. P. phosphatase the dephosphorylates p34cdc2. Mol. Mintz, B. 1970. Clonal expression in allophenic
and Houliston, E. 1986. A role for cytoplasmic Biol. Cell 3: 73-84. mice. Symp. Int. Soc. Cell Biol. 9: 15.
determinants in the development of the early
Lee, R. K., Stainier, D. Y. R., Weinstein, B. M. Morgan, T. H. 1927. Experimental Embryology.
mouse embryo. J. Embryol. Exp. Morphol. and Fishman, M. C. 1994. Cardiovascular deve-
[Suppl.]: 97-117. Columbia University Press, New York.
lopment in the zebrafish. II. Endocardial
Kalt, M. R. 1971. The relationship between progenitors are sequestered within the heart field. Mulnard, J. G. 1967. Analyse microcinematogra-
cleavage and blastocoel formation in Xenopus Development 120: 3361-3366. phique du developpement de loeuf de souris du
laevis. I. Light microscopic observations. J. stade II au blastocyste. Arch. Biol. (Liege) 78:
Lepage, T., Sardet, C. and Gache, C. 1992. 107-138.
Embryol. Exp. Morphol. 26: 37-49. Spatial expression of the hatching enzyme gene
Kane, D. and Kimmel, C. B. 1993. The midblas- in the sea urchin embryo. Dev. Biol. 150: 23-32. Murray, A. W. and Kirschner, M. W. 1989. Cyclin
tula transition in zebrafish. Development 119: synthesis drives the early embryonic cell cycle.
Levy, J. B., Johnson, M. H., Goodall, H. and
447-456. Nature 339: 275-280.
Maro, B. 1986. The timing of compaction:
Karr, T. L. and Alberts, B. M. 1986. Organization Control of a major developmental transition in Murray, A. W., Solomon, M. J. and Kirschner,
of the cytoskeleton in early Drosophila embryos. mouse early embryogenesis. J. Embryol. Exp. M. W. 1989. The role of cyclin synthesis and
J. Cell Biol. 102: 1494-1509. Morphol. 95: 213-237. degradation in the control of maturation
promoting factor activity. Nature 339: 280-286.
Karsenti, E., Newport, J., Hubble, R. and Lillie, F. R. 1898. Adaptation in cleavage.
Kirschner, M. 1984. The interconversion of In Biological Lectures of the Marine Biolo- New, D. A. T. 1956. The formation of subblasto-
metaphase and interphase microtubule arrays, as gical Laboratory of Woods Hole. Ginn, dermic fluid in hens eggs. 1. Embryol. Exp.
studied by the injection of centrosomes and nuclei Boston, pp. 43-67. Morphol. 43: 221-227.
into Xenopus eggs. J. Cell Biol. 98: 1730-1745. Newport, J. W. and Kirschner, M. W. 1982a. A
Lillie, F. R. 1902. Differentiation without
Kimelman, D., Kirschner, M. and Scherson, T. cleavage in the egg of the annelid Chaetopterus major developmental transition in early Xenopus
1987. The events of the midblastula transition in pergamentaceous. Wilhelm Roux Arch. Entwi- embryos: I. Characterization and timing of
Xenopus are regulated by changes in the cell cklungsmech. Org. 14: 477-499. cellular changes at midblastula stage. Cell 30:
cycle. Cell 48: 399-407. 675-686.
Lutz, B. 1947. Trends towards non-aquatic and
Kimmel, C.B. and Law, R.D. 1985. Cell lineage direct development in frogs. Copeia 4: 242-252. Newport, J. W. and Kirschner, M. W. 1982b. A
of zebrafish blastomeres. II. Formation of the yolk major developmental transition in early Xenopus
Madine, M. A., Khoo, C.-Y., Mills, A. D. and embryos: II. Control of the onset of transcripti-
syncytial layer. Dev. Biol. 108: 86-93. Laskey, R. A. 1995. MCM3 complex required on. Cell 30: 687-696.
Kimmel, C. B. and Warga, R. M. 1987. Indeter- for cell cycle regulation of DNA replication in
minate cell lineage of the zebrafish embryo. Dev. vertebrate cells. Nature 375: 421-424. Newport, J. W. and Kirschner, M. W. 1984.
Biol. 124: 269-280. Regulation of the cell cycle during Xenopus laevis
Mark, W. H., Signorelli, K. and Lacy, E. 1985.
development. Cell 37: 731-742.
Kimmel, C. B., Warga, R. M. and Schilling, T. An inserted mutation in a transgenic mouse line
F. 1990. Origin and organization of the zebrafish results in developmental arrest at day 5 of Nieuwkoop, P. D. 1973. The organization
fate map. Development 108: 581-594. gestation. Cold Spring Harbor Symp. Quant. center of the amphibian embryo: Its origin,
Biol. 50: 453-463. spatial organization, and morphogenetic action.
Knoblich, J. A., Sauer, K., Jones, L., Richardson,
Adv. Morphogenet. 10: 1-39.
H., Saint, R. and Lehner, C. F. 1994. Cyclin E Markert, C. L. and Petters, R. M. 1978.
controls S phase progression and its down- Manufactured hexaparental mice show that adults Nigg, E. A. 1995. Cyclin-dependent protein
regulation during Drosophila embryogenesis is are derived from three embryonic cells. Science kinases: key regulators of the eukaryotic cell
required for the arrest of cell proliferation. Cell 202: 56-58. cycle. BioEssays 17: 471-480.
77: 107-120. Martin, G. R. 1981. Isolation of a pluripotent cell Pedersen, R. A., Wu, K. and Batakier, H. 1986.
Langeland, J. and Kimmel, C. 1997. The line from early mouse embryos cultured in Origin of the inner cell mass in mouse embryos:
embryology of fish. In S. F. Gilbert and A. M. medium conditioned by teratocarcinoma stem Cell lineage analysis by microinjection. Dev. Biol.
Raunio (eds.), Embryology: Constructing the cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 7634-7638. 117: 581-595.
Organism. Sinauer Associates, Sunderland, MA. Masui, Y. and Markert, C. L. 1971. Cytoplasmic Perona, R. M. and Wassarman, P. M. 1986.
Lane, M.E., Sauer, K., Wallace, K., Jan, Y N., control of nuclear behavior during meiotic Mouse blastocysts hatch in vitro by using a
Lehner, C.F. and Vaessin, H. 1996. Dacapo, a maturation of frog oocytes. J. Exp. Zool. 177: trypsin-like proteinase associated with cells of
cyclin-dependent kinase inhibitor, stops cell 129-146. mural trophectoderm. Dev. Biol, 114: 42-52.
Peter, M., Nakagawa, J., Dore, M., Labb, J. Sugetierei. Naturwissenschaften 39: 355-356. van den Biggelaar, J. A. M. and Guerrier, P. 1979.
C. and Nigg, E. A. 1990. In vitro disassembly of Smith, L. D. and Ecker, R. E. 1969. Role of the Dorsoventral polarity and mesentoblast determi-
the nuclear lamina and M phasespecific phos- oocyte nucleus in the physiological maturation nation as concomitant results of cellular
phorylation of lamins by cdc2 kinase. Cell 61: interactions in the mollusc Patella vulgata. Dev.
in Rana pipiens. Dev. Biol. 19: 281-309.
591-602. Biol. 68: 462-471.
Smythe, C. and Newport, J. W. 1992. Coupling
Peyrieras, N., Hyafil, F., Louvard, D., Ploegh, H. Ward, G. E. and Kirschner, M. W. 1990. Identi-
of mitosis to the completion of S phase in
L. and Jacob, F. 1983. Uvomorulin: A non-inte- Xenopus occurs via modulation of the tyrosine fication of cell cycle-regulated phosphorylation
gral membrane protein of early mouse embryo. kinase that phosphorylates p34cdc2. Cell 68: cites on nuclear lamin C. Cell 61: 561-577.
Proc. NatI. Acad. Sci. USA 80: 6274-6277.
787-797. Watanabe, N., Hunt, T., Ikawa, Y. and Sagata,
Piko, L. and Clegg, K. B. 1982. Quantitative Solomon, M. J. 1993. Activation of the various N. 1991. Independent inactivation of MPF and
changes in total RNA, total poly(A), and cytostatic factor (Mos) upon fertilization of
cyclin/cdc2 protein kinases. Curr. Opin. Cell
ribosomes in early mouse embryos. Dev. Biol. Biol. 5: 180-186. Xenopus eggs. Nature 352: 247-249.
89: 362-378. Welsh, J. H. 1969. Mussels on the move. Nat.
Solomon , M., Booher, R., Kirschner, M. and
Pflger, E. 1884. Uber die Einwirkung der Beach, D. 1988. Cyclin in fission yeast. Cell 54: Hist. 78: 56-59.
Schwerkraft und anderer Bedingungen auf die
738-739. White, J. C., Amos, W. B. and Fordham, M. 1987.
Richtung der Zeiltheilung. Arch. Ges. Physiol. 3: 4.
Stainier, D. Y. R., Lee, R. K. and Fishman, M. An evaluation of confocal versus conventional
Prather, R. S. 1989. Nuclear transfer in mammals imaging of biological structures by fluorescence
C. 1993. Cardiovascular development in the
and amphibia. In H. Schatten and G. Schatten zebrafish. I. Myocardial fate map and heart tube light microscopy. J. Cell Biol. 105: 41-48.
(eds.), The Molecular Biology of Fertilization. formation. Development 119: 31-40. Whittaker, J. R. 1979. Cytoplasmic determinants
Academic Press, New York, pp. 323-340.
Strickland, S., Reich, E. and Sherman, M. I. 1976. of tissue differentiation in the ascidian egg. In S.
Pratt, H. P. M., Ziomek, Z. A., Reeve, W. J. D. Plasminogen activator in early embryogenesis: Subtelny and 1. R. Konigsberg (eds.), Determi-
and Johnson, M. H. 1982. Compaction of the nants of Spatial Organization. Academic Press,
Enzyme production by trophoblast and parietal
mouse embryo: An analysis of its components. J. endoderm. Cell 9: 231-240. New York, pp. 29-51.
Embryol. Exp. Morphol. 70: 113-132. Wiley, L. M. 1984. Cavitation in the mouse pre-
Sturtevant, M. H. 1923. Inheritance of direction
Raff, J. W. and Glover, D. M. 1989. Centrosomes, of coiling in Limnaea. Science 58: 269-270. implantation embryo: Na/K ATPase and the
not nuclei, initiate pole cell formation in Droso- origin of nascent blastocoel fluid. Dev. Biol. 105:
phila embryos. Cell 57: 611-619. Summers, R. G., Morrill, J. B., Leith, A., Marko, 330-342.
M., Piston, D. W. and Stonebraker, A. T. 1993.
Raff, R. A. and Kaufman, T. C. 1983. Embryos, Wilson, E. B. 1898. Cell lineage and ancestral
A stereometric analysis of karyogenesis, cytoki-
Genes, and Evolution: The Developmental- reminiscences. In Biological Lectures of the
nesis, and cell arrangements during and following
Genetic Basis of Evolutionary Change. Macmi- fourth cleavage period in the sea urchin, Lyte- Marine Biological Laboratory of Woods Hole.
llan, New York. chinus variegatus. Dev. Growth Diff. 35: 41-57. Ginn, Boston, pp. 21-42.
Rappaport, R. 1961. Experiments concerning Sutherland, A. E. and Calarco-Gillam, P. G. 1983. Wilson, E. B. 1901. Experiments in cytology.
cleavage stimulus in sand dollar eggs. J. Exp. II. Some phenomena of fertilization and cell
Analysis of compaction in the preimplantation
Zool. 148: 81-89. division in etherized eggs. III. The effect on
mouse embryo. Dev. Biol. 100: 327-338.
Rugh, R. 1967. The Mouse. Burgess, Minnea- cleavage of artificial obliteration of the first
Sutherland, A. E., Speed, T. P. and Calarco, P. G. cleavage furrow. Wilhelm Roux Arch. Entwi-
polis. 1990. Inner cell allocation in the mouse morula: cklungsmech. Org. 13: 353-395.
Satterwhite, L. L., Lohka, M. J., Wilson, K. L., The role of oriented division during fourth
Winkel, G. K., Ferguson, J. E., Takeichi, M. and
Scherson, T. Y., Cisek, L. J. and Pollard, T. D. cleavage. Dev. Biol. 137: 13-25.
1992. Phosphorylation of myosin-II light chain Nuccitelli, R. 1990. Activation of protein kinase
Swenson, K. L., Farrell, K. M. and Ruderman, C triggers premature compaction in the 4-cell
by cyclin-p34cdc2: A mechanism for the timing of
J. V. 1986. The clam embryo protein cyclin A stage mouse embryo. Dev. Biol. 138: 1-15.
cytokinesis. J. Cell Biol. 118: 595-605. induces entry into M phase and the resumption
Saunders, J. W., Jr. 1982. Developmental of meiosis in Xenopus oocytes. Cell 47: 861-870. Wolpert, L. and Gustafson, T. 1961. Studies in
the cellular basis of morphogenesis of the sea
Biology. Macmillan, New York. Sze, L. C. 1953. Changes in the amount of urchin embryo: The formation of the blastula.
Schejter, E. D. and Wieschaus, E. 1993. deoxyribonucleic acid in the development of Rana Exp. Cell Res. 25: 374-382.
Bottleneck acts as a regulator of the microfila- pipiens. J. Exp. Zool. 122: 577-601.
Wolpert, L. and Mercer, E.H. 1963. An electron
ment network governing cellularization. of the
Tarkowski, A. K. and Wrblewska, J. 1967. De- microscope study of the development of the
Drosophila embryo. Cell 75: 373-385.
velopment of blastomeres of mouse eggs isolated blastula of the sea urchin embryo and its radial
Schroeder, T. E. 1972. The contractile ring. II. at the 4- and 8-cell stage. J. Embryol. Exp. polarity. Exp. Cell Res. 30: 280-300.
Determining its brief existence, volumetric Morphol. 18: 155-180.
Yamazaki, K. and Kato, Y. 1989. Sites of zona
changes, and vital role in cleaving Arbacia eggs. Trinkaus, J. P. 1993. The yolk syncytial layer of pellucida shedding by mouse embryo other
J. Cell Biol. 53: 419-434.
Fundulus: Its origin and history and its signifi- than mural trophectoderm. J. Exp. Zool. 249:
Schroeder, T. E. 1973. Cell constriction: cance for early embryogenesis. J. Exp. Zool. 265: 347-349.
Contractile role of microfilaments in division and 258-284.
Ziomek, C. A. and Johnson, M. H. 1980. Cell
development. Am. Zool. 13: 687-696. Tuchmann-Duplessis, H., David, G. and Haegel, surface interactions induce polarization of
Seidel, F. 1952. Die Entwicklungspotenzen einer P. 1972. Illustrated Human Embryology, Vol. 1. mouse 8-cell blastomeres at compaction. Cell
isolierten Blastomere des Zweizellenstadiums im Springer-Verlag, New York. 21: 935-942.
Gastrulao:
Reorganizando as clulas embrionrias
6
Meu querido amigo..... a vida infinitamen-
te mais complexa do que qualquer coisa que
a mente humana possa imaginar. No ou-
saramos sequer conceber as coisas que so
meros detalhes da existncia.
G ASTRULAO o processo pelo qual movimentos altamente integrados
de clulas e tecidos, dramaticamente, reorganizam as clulas da blstula. A
blstula consiste de numerosas clulas, cujas posies foram estabelecidas
durante a clivagem. Durante a gastrulao, essas clulas recebem novas posies e
novos vizinhos, e estabelecido o multifacetado plano do corpo do organismo. As
A. CONAN DOYLE (1891) clulas que formaro os rgos endodrmicos e mesodrmicos so trazidas para den-
tro do embrio, ao passo que as precursoras da pele e do sistema nervoso so distri-
No o nascimento, o casamento ou a mor- budas na superfcie externa. Assim, as trs camadas germinativas ectoderma exter-
te, mas a gastrulao que verdadeira- no, endoderma interno e mesoderma intersticial so produzidas inicialmente durante
mente a parte mais importante de nossa vida. a gastrulao. Ainda, o palco est montado para as interaes desses tecidos recm-
LEWIS WOLPERT (1986)
posicionados.
Os movimentos da gastrulao envolvem o embrio inteiro, e migraes celula-
res em uma parte do organismo gastrulante devem estar intimamente coordenadas
com outros movimentos ocorrendo simultaneamente. Mesmo que o padro de
gastrulao seja extremamente variado em todo o reino animal, relativamente pou-
cos mecanismos esto envolvidos. A gastrulao, geralmente, envolve os seguintes
tipos de movimentos:
Epibolia. O movimento de camadas epiteliais (usualmente de clulas ectodr-
micas) que se espalham como uma unidade e no individualmente, para envol-
ver as camadas mais profundas do embrio.
Invaginao. O dobrar para dentro de uma regio de clulas, de maneira seme-
lhante cavidade formada quando se empurra com o dedo a superfcie de uma
bola de borracha macia.
Involuo. A internao ou movimento de interiorizaro de uma camada exter-
na em expanso, de modo a se espalhar na superfcie interna das clulas exter-
nas remanescentes.
Ingresso de clulas. A migrao de clulas individuais da camada superficial
para o interior do embrio.
Delaminao. A separao de uma camada celular em duas ou mais camadas
mais ou menos paralelas.
Ao considerarmos gastrulao em diferentes tipos de embrio, devemos levar em
conta as seguintes questes (Trinkaus, 1984a):
Qual a unidade da atividade migratria? a migrao dependente do
movimento de clulas individuais, ou so as clulas parte de uma camada
migrante? Por mais extraordinrio que possa parecer, propriedades migratrias
regionais podem ser totalmente controladas por fatores citoplasmticos que
209
so independentes da celularizao. F. R. Lillie (1902) conseguiu ativar, parte-

nogeneticamente, vulos do aneldeo Chaetopterus e suprimir sua clivagem.
Muitos eventos do desenvolvimento precoce ocorreram mesmo na ausncia
de clulas. O citoplasma do zigoto se separou em regies definidas, e os clios
se diferenciaram nas partes apropriadas do ovo. Ainda mais, o citoplasma claro
externo migrou para baixo em direo regio vegetativa, de uma maneira
muito parecida epibolia das clulas do hemisfrio animal durante o desenvol-
vimento normal. Isso ocorreu precisamente no momento em que ocorreria a
epibolia durante a gastrulao. Assim, a epibolia pode ser (pelo menos em
alguns aspectos) independente das clulas que formam a regio migratria.
A expanso ou dobramento de uma camada celular deve-se a fatores intrn-
secos prprios, ou s foras extrnsecas que a estendem ou a distorcem?
essencial conhecer a resposta a essa pergunta se queremos entender como os
vrios movimentos celulares da gastrulao so integrados. Por exemplo, es-
to as clulas involutivas puxando as clulas epibolizantes para baixo em sua
direo, ou so os dois movimentos independentes?
Existe uma expanso ativa do tecido total, ou a margem limitante que se
expande e arrasta o resto da camada celular, passivamente?
So as mudanas na forma e na motilidade celular, durante a gastrulao,
conseqncias de mudanas nas propriedades da superfcie celular, tais como
adesividade ao substrato ou a outras clulas?
Considerando essas questes, observaremos os vrios padres de gastrulao en-
contrados em equinodermos, anfbios, peixes, aves e mamferos*.
Gastrulao em ourio-do-mar
A blstula do ourio-do-mar consiste de uma nica camada de mais ou menos 1000
clulas. Essas clulas derivadas de diferentes regies do zigoto tm tamanhos e pro-
priedades diferentes. As Figuras 6.1 e 6.2 mostram o destino das vrias regies do
zigoto enquanto ele se desenvolve atravs da clivagem e da gastrulao na larva
pluteus, caracterstica dos ourios-do-mar. O destino de cada camada pode ser visto
atravs de seus movimentos durante a gastrulao.
Ingresso do Mesnquima Primrio

FUNO DAS CLULAS PRIMRIAS DO MESNQUIMA. Logo aps a ecloso
da blstula da membrana de fecundao, o seu hemisfrio vegetal comea a se espes-
sar e achatar (Figura 6.2, 9 horas). No centro dessa placa vegetativa achatada, um
aglomerado de pequenas clulas comea a se modificar. Essas clulas apresentam
movimentos de vibrao em suas superfcies internas, estendendo e contraindo lon-
gos e finos processos (30x5 m) chamados filopdios. As clulas ento se dissociam
da monocamada epitelial e ingressam na blastocele (Figura 6.2, 9-10 horas). Essas
clulas so chamadas de mesnquima primrio e so derivadas dos micrmeros. As
64 ou mais clulas mesenquimatosas primrias do ourio-do-mar so as descendentes
dos quatro blastmeros que se formaram pela quarta clivagem assimtrica.
Gustafson e Wolpert (1961) usaram filmes com exposio contnua para seguir os
movimentos microscpicos das clulas mesenquimatosas dentro da blastocele. No
*A discusso da gastrulao de Drosophila ser transferida para o Captulo 14, quando ela ocorre
no contexto da formao do eixo. Lembre-se do alerta feito pelo pesquisador de gastrulao, Ray
Keller (comunicao pessoal) Estudantes NO deveriam ler esse material apressadamente, ao
contrrio uma cena tpica aquela em que um pobre coitado est debruado sobre este texto s 2.30
horas da madrugada com uma xcara de caf, examinando desesperadamente as figuras para ver se ele
ou ela podem entender o que est se passando. Gastrulao (como diz Wolpert na citao no
comeo deste captulo) a poca mais importante da sua vida. Vale a pena examin-la criticamente
e apreci-la vagarosamente.
CAPTULO 6 Gastrulao: Reorganizando as clulas embrionrias 211
Animal
(A) (B) (C) (D) (E) (F) (G)
Mesmeros
Macrmeros
veg1
Vegetal Micrmetros veg2
Tufo ciliar
(H) (I) (J) (K) (L)
Mesnquima (Vista lateral)
secundrio Estomodeu
Mesnquima (boca)
primrio
Envoltrio
Endoderma (M) ectodrmico
invaginante
Bastonetes
Figura 6.1 esquelticos
Desenvolvimento normal do ourio-do-mar, seguindo o destino das camadas celulares da bls- (mesoderma)
tula. (A-F) Clivagem at o estgio de 60 clulas (omitindo o estgio de 2-clulas). (G) Blstula Intestino
precoce com clios. (H) Blstula tardia com tufo ciliar e placa vegetal achatada. (I) Blstula com (endoderma)
mesnquima primrio. (J) Gstrula com mesnquima secundrio. (K) Larva em estgio prismtico.
(L,M) Larva pluteus. Os destinos do citoplasma zigtico podem ser seguidos pelas variaes
no sombreamento. (N) Fotomicrografia de uma larva pluteus viva de ourio-do-mar. (A-M (Vista ventral)
segundo Hrstadius, 1939; N cortesia de G. Watchmaker.) (N)
Boca
nus
Bastonetes
esquelticos
9 hs. 9.5 hs. 10 hs. 10.5 hs.
11 hs. 11.5 hs. 12 hs. 13 hs.
Figura 6.2
Seqncia completa da gastrulao em
Lytechinus variegatus. O tempo mostra
15 hs. 17 hs. 18 hs.
a durao do desenvolvimento a 25oC.
13.5 hs. (Cortesia de J. Morrill.)
(A)
(B)
Figura 6.3
Formao dos cordes sinciciais por clulas mesenquimatosas do ourio-do-mar. (A) Clulas
mesenquimatosas primrias da gstrula precoce se alinham e se fundem para depositar a matriz
da espcula de carbonato de clcio. (B) microfotografia eletrnica de varredura de espculas
formadas pela fuso das clulas mesenquimatosas primrias para formar os cordes sinciciais.
(C) Anel de clulas mesenquimatosas em volta do arquntero (intestino primitivo). A metade
animal e todo o arquntero foram removidos. (D) Colocao das clulas mesenquimatosas
primrias na larva precoce de Lytechinus variegatus. (A e D de Ettensohn, 1990; B e C de
Morrill e Santos, 1985; todas as fotografias, cortesia dos autores.)
comeo, as clulas parecem se movimentar ao acaso, ao longo da superfcie interna da

(C) blastocele, ativamente produzindo e quebrando conexes filopdicas com a parede da
blastocele. Finalmente, essas clulas tornam-se localizadas dentro da provvel regio
Agregados Ventrolaterais ventrolateral da blastocele, onde considera-se que sua aderncia seja maior. Aqui, as
clulas mesenquimatosas primrias se fundem em cordes sinciciais, que formaro o
eixo das espculas de carbonato de clcio do esqueleto larval (Figura 6.3). Estudos
mais recentes (Cherr et al., 1992) sugerem que a migrao inicial das clulas mesenqui-
matosas primrias dirigida pela parede da blastocele e pelas fibrilas paralelas do
material da matriz extracelular que invadem a blastocele. As clulas mesenquimatosas
primrias parecem migrar ao longo da superfcie da blastocele e so envolvidas no
emaranhado dessas fibrilas (Figura 6.4).
IMPORTNCIA DA LMINA EXTRACELULAR NO INTERIOR DA BLASTOCELE.

Os eventos que se do no citoplasma e na superfcie celular so fundamentais para o
Cadeia Cadeia Espcula ingresso e a migrao das clulas mesenquimatosas primrias. Gustafson e Wolpert
dorsal ventral (1967) propuseram um modelo no qual o ingresso dos micrmeros se d atravs de
(D) modificaes de sua adeso a outras clulas e s matrizes extracelulares que os rodei-
am. Em 1985, Fink e McClay confirmaram as especulaes de Gustafson e Wolpert,
medindo as foras de adeso dos blastmeros de ourio-do-mar, em relao camada
hialina, lmina basal e a outras clulas. Originalmente todas as clulas da blstula
esto ligadas pela sua superfcie externa camada hialina e sua superfcie interna
ligada lmina basal secretada pelas clulas (veja Captulo 3). Na sua lateral, cada
clula tem outra clula como vizinha. Fink e McClay verificaram que os futuros
ectoderma e endoderma (descendentes dos macrmeros e mesmeros, respectiva-
mente) se ligam fortemente entre si e camada hialina, mas aderem fracamente lmina
basal (Tabela 6.1). Os micrmeros da blstula mostram, originalmente, um padro simi-
lar de ligao. Entretanto, o padro de ligao dos micrmeros muda na gastrulao.
(A)
(B)
Figure 6.4 (C)
Fotografias ao estreo-microscpio eletrnico de varredura de clulas mesenquimatosas prim-
rias dentro da matriz extracelular de fibrilas da blastocele. (A) Clulas mesenquimatosas prim-
rias enredadas na matriz extracelular da gstrula precoce de Strongylus centrotus. (B,C) migra-
o de clulas mesenquimatosas em estgio de gstrula. As fibrilas da matriz extracelular da
blastocele ficaram paralelas ao eixo animal-vegetal e esto intimamente associadas com as clu-
las mesenquimatosas primrias. (de Cherr et al., 1992; cortesia de G. Cherr.)
Enquanto outras clulas mantm sua forte ligao camada hialina e s clulas vizi-
nhas, as precursoras do mesnquima primrio perdem sua afinidade a essas estruturas
(para aproximadamente 2% do valor original), enquanto que sua afinidade aos compo-
nentes da lmina basal e matriz extracelular aumenta 100 vezes. Essa mudana na
afinidade faz com que os micrmeros percam suas ligaes com a camada hialina
externa e com as clulas circundantes e, atrados pela lmina basal, migram para o
interior da blastocele (Figura 6.5). As modificaes na afinidade celular foram
Tabela 6.1 Afinidades de clulas mesenquimatosas e no-mesenquimatosas

aos componentesa celulares e extracelulares
Fora de deslocamento (em dinas)
Tipo celular Hialino Monocamadas de Lmina basal

clulas gastrulares
Micrmeros em
estgio de 16 clulas 5.8 x 10-5 6.8 x 10-5 4.8 x 10-7
Clulas mesenquimatosas
em estgio migratrio 1.2 x 10-7 1.2 x 10-7 1.5 x 10-5
Ectoderma e
endoderma gastrular 5.0 x 10-5 5.0 x 10-5 5.0 x 10-7
Fonte: Segundo Fink e McClay, 1985.
a
Clulas testadas foram colocadas em placas contendo hialino, lmina basal extracelular, ou
monocamadas celulares. As placas foram invertidas e centrifugadas a vrias foras para deslocar
as clulas. A fora de deslocamento calculada pela fora centrfuga necessria para remover as
clulas teste do substrato.
Matriz Clulas
extracelular fibrilar Mesenquimatosas primrias
Blastocele
Lmina basal
(A) (B) (C) (D) (E)

Camada Clios
hialina
Figure 6.5
Ingresso de clulas mesenquimatosas primrias. (A-E) Diagramas interpretativos descrevendo
alteraes nas interaes adesivas nas presumidas clulas mesenquimatosas primrias (cor).
Essas clulas perdem suas afinidades pelo hialino e por seus blastmeros vizinhos enquanto
adquirem afinidade pela lmina basal. Blastmeros no-mesenquimatosos retm suas originais
afinidades pelo hialino e clulas vicinais. (F) Montagem de micrografia eletrnica de varredura
mostrando o ingresso de clulas primrias de Lytechinus variegatus. (F cortesia de J. B. Morrill
e D. Flaherty.)
correlacionadas com modificaes nas molculas da superfcie celular que ocorreram

durante esse perodo (Wessel e McClay, 1985).
Como mostra a Figura 6.4, h uma alta concentrao de material da lmina extracelular
ao redor das clulas mesenquimatosas primrias ingressantes (Galileo e Morrill, 1985;
Cherr et al., 1992). Alm disso, uma vez dentro da blastocele, as clulas mesenquimato-
sas primrias parecem migrar ao longo da matriz extracelular da parede da blastocele,
(F) extendendo seus filopdios a sua frente (Galileo e Morrill, 1985; Karp e Solursh, 1985). A
orientao das fibrilas, ao longo do eixo animal-vegetal, pode estar guiando as clulas
em sua migrao. Trs protenas parecem ser importantes nessa migrao. Uma a
fibronectina, uma grande glicoprotena (400-kDa), que um componente comum das
lminas basais, incluindo aquela da blastocele do ourio-do-mar (Wessel et al., 1984).
Fink e McClay mostraram que durante a gastrulao, a afinidade dos micrmeros por
essa molcula especfica aumenta dramaticamente. O segundo grupo de molculas con-
siste de proteoglicanos sulfatados encontrados na superfcie das clulas mesenquima-
tosas ingressantes (veja Captulo 3; Sugiyama, 1972; Lane e Solursh, 1991). Se a sntese
(ou sulfatao) desses proteoglicanos inibida, as clulas mesenquimatosas entram na
blastocele, mas no continuam a migrar* (Figura 6.6; Karp e Solursh, 1974; Anstrom et
al., 1987). A terceira protena, ECM18, encontrada nas matrizes extracelulares das clu-
las da blastocele e expressa somente durante a gastrulao. Bloquear ECM18 com
anticorpos previne tanto a migrao mesenquimatosa primria quanto a invaginao
secundria do endoderma (Berg et al., 1996).
Porm, esses sinais de orientao no so suficientes, pois os micrmeros sabem
quando parar seu movimento e formar espculas perto do equador da blastocele. As
clulas mesenquimatosas primrias se organizam em forma de anel em uma posio
especfica ao longo do eixo animal-vegetal. Em dois stios perto do futuro lado ventral da
larva, muitas dessas clulas mesenquimatosas primrias se agrupam para iniciar a forma-
o de espculas (Figura 6.3). Se um micrmero marcado de outro embrio injetado na
blastocele em gastrulao de um embrio de ourio-do-mar, ele migra para o local correto
*Em um dos primeiros experimentos em embriologia qumica, Curt Herbst (1904)

observou que embries de ourio-do-mar no gastrulavam adequadamente quando
colocados em gua do mar que no continha ons sulfato. Na poca, ele no podia
entender o porqu.
(A) (B) Figura 6.6

Efeito da privao de sulfato no movimento
do mesnquima primrio do ourio-do-mar Ly-
techinus. (A) Gstrula normal. (B) Gstrula
anormal formada quando embries so culti-
vados em gua do mar livre de sulfato. (de
Karp e Solursh, 1974, cortesia de M. Solursh.)
e contribui para a formao das espculas embrionrias (Prancha 35). Se clulas mesen-
quimatosas primrias de embries mais velhos so injetadas em gstrulas mais jovens,
elas atrasaro sua diferenciao, migraro como as clulas mais jovens e sero incorpo-
radas normalmente no mesnquima do hospedeiro. Alm disso, se todas as clulas
mesenquimatosas do hospedeiro so removidas antes da injeo de clulas mesenqui-
matosas mais velhas, essas repetiro os estgios iniciais de sua migrao, formando um
anel mesenquimatoso e o esqueleto, normalmente (Ettensohn, 1990). Considera-se que
essa informao posicional fornecida pelas futuras clulas ectodrmicas e suas lmi-
nas basais (von bisch, 1939; Harkey e Whiteley, 1980). Somente clulas mesenquima-
tosas primrias (e no outros tipos de clulas ou partculas de ltex) so capazes de
responder a esses sinais modeladores (Ettensohn e McClay, 1986). Miller e colegas
(1995) observaram a existncia de filopdios extremamente delgados (0.3 m de dime-
tro) no mesnquima esqueletognico (skeletonogenic); esses parecem explorar e sentir
a parede da blastocele (Figura 6.7). Esses filopdios contm actina e no so considera-
dos como locomotores. Em lugar disso, so considerados como sensores do ambiente,
da mesma maneira que os filopdios nas pontas dos cones de crescimento axonal. Essas
extenses delgadas podem ser responsveis pela captao de sinais modeladores
dorsoventral e animal-vegetal, a partir do ectoderma (Malinda et al., 1995).
Primeiro estgio da invaginao do arquntero

Enquanto se forma o anel de clulas mesenquimatosas primrias no plo vegetal da
blastocele, mudanas importantes esto ocorrendo nas clulas que permanecem na
Figura 6.7
Videomicrografia de Nomarski mostrando um filopdio longo e fino estendendo-se
de uma clula mesenquimatosa primria at a parede ectodrmica da gstrula,
assim como um filopdio mais curto estendendo-se para dentro do ectoderma. Os
filopdios mesenquimatosos estendem-se atravs da matriz extracelular e contatam
diretamente a membrana celular das clulas ectodrmicas. (de Miller et al., 1995;
fotografia cortesia de D. McClay.)
placa vegetativa. Essas clulas permanecem ligadas umas s outras e camada hialina
do ovo, e se movem para ocupar os vazios deixados pelo ingresso do mesnquima;
portanto, a placa vegetal se achata ainda mais. Verifica-se, tambm, que a placa vegetal
se dobra para dentro e se estende por um quarto ou at a metade do seu caminho para
a blastocele (veja Figura 6.2, 10.5-11.5 horas; Figura 6.8A). Ento, repentinamente, a
invaginao cessa. A regio invaginada chamada de arquntero (intestino primitivo)
e sua abertura no plo vegetal chamada de blastporo.
Quais foras atuam para invaginar essas clulas? Lane e colaboradores (1993)
mostraram que o envergamento semelhante aquele produzido pelo aquecimento de
uma faixa bimetlica. A camada hialina , na verdade, formada de duas lminas: uma
externa, formada primariamente de protena hialina, e uma interna, composta de prote-
nas fibropelinas* (Hall e Vacquier. 1982; Bisgrove et al., 1991). As clulas da placa
vegetal (e somente essas clulas) secretam um proteoglicano de condroitina sulfato
na lmina interna da camada hialina, diretamente abaixo delas. Essa molcula
higroscpica (absorvente de gua) incha a lmina interna mas no a externa. Isso
causa o envergamento da camada hialina (Figura 6.8B,C). Um pouco mais tarde, uma
*Fibropelinas so armazenadas em grnulos secretores dentro dos ocitos. So secretadas desses

grnulos aps a liberao da protena hialina pela exocitose granular cortical. No estgio de blstula,
as fibropelinas j formaram um envoltrio, tipo rede, sobre a superfcie do embrio.
(A)
Figura 6.8
Invaginao da placa vegetal. (A) Invaginao da placa vegetal de Lytechinus variegatus vista
por micrografia eletrnica de varredura da superfcie externa da gstrula precoce. O blastporo
est claramente visvel. (B) a camada hialina consiste de lminas internas e externas. Microvi-
losidades da placa vegetal estendem-se atravs da camada hialina e seu citoplasma contm
vesculas secretoras que armazenam um proteoglicano de sulfato de condroitina (CSPG). (C)
Os grnulos de armazenamento secretam o proteoglicano para dentro da lmina interna da
camada hialina. O proteoglicano absorve gua e entumece a lmina interna, enquanto a lmina
externa, ao qual est fixado, no entumece. Isso ocasiona a curvatura para dentro do envoltrio
hialino e do epitlio a ele ligado. (A de Morrill e Santos, 1985, cortesia de J. B. Morrill e C
segundo Lane et al., 1993.)
(B) (C) Clulas da placa vegetal empurradas para cima
Blastocele interior
Clulas de placa vegetal
Vesculas secretoras CSPG secretado para

com proteoglicano de a lmina interna absorve
Lmina interna sulfato de condroitina gua, causando tumefao
Camada hialina Microvilosidades
Lmina externa (CSPG)
Gastrulao precoce Gastrulao tardia Figura 6.9

Rearranjo celular durante a extenso do
arquntero em embries de ourio-do-mar.
Nessa espcie, o arquntero precoce tem 20 a
30 clulas ao redor de sua circunferncia. Mais
tardiamente na gastrulao, o arquntero tem
uma circunferncia constituda de somente 6
a 8 clulas. Clones marcados fluorescente-
mente podem ser vistos estendendo-se
blastporo apicalmente. (Segundo Hardin, 1990.)
segunda fora resultante dos movimentos das clulas epiteliais adjacentes placa
vegetal, pode facilitar essa invaginao puxando para dentro a camada envergada
(Burke et al., 1991).
Segundo e terceiro estgios da invaginao do arquntero

A invaginao das clulas vegetais ocorre em trs estgios discretos. Aps uma breve
pausa, comea a segunda fase da formao do arquntero. Durante essa fase, o
arquntero se estende dramaticamente, algumas vezes triplicando seu comprimento.
No processo de extenso, o largo e curto intestino rudimentar transformado em um
tubo longo e delgado; mas no so formadas novas clulas (veja Figura 6.2, 12 horas;
Figura 6.9). Para produzir essa extenso, as clulas do arquntero se reorganizam
migrando umas sobre as outras e sofrendo um achatamento (Ettensohn, 1985; Hardin
e Cheng, 1986). Esse fenmeno, onde clulas se intercalam para estreitar o tecido e, ao
mesmo tempo, lev-lo adiante chamado extenso convergente.
Em pelo menos algumas espcies de ourio-do-mar, ocorre um terceiro estgio no
alongamento do arquntero. Essa ltima fase iniciada pela tenso propiciada pelas
clulas mesenquimatosas secundrias, que se formam na ponta do arquntero e l
permanecem (veja Figura 6.2, 13 horas; Figura 6.10). Os filopdios se estendem dessas
clulas atravs do fluido da blastocele e fazem o contacto com a superfcie interna da
Figura 6.10
Estgio de gstrula intermediria do ourio-
do-mar Lytechinus pictus, mostrando exten-
ses de filopdios do mesnquima secund-
rio estendendo-se da ponta do arquntero at
a parede da blastocele. (A) Clulas mesen-
quimatosas estendendo filopdios da ponta
do arquntero. (B) Cabos de filopdios
conectando a parede da blastocele ponta do
arquntero. A tenso nos cabos pode ser ava-
liada pela trao exercida sobre a parede da
blastocele no ponto de fixao. (Fotografias
(A) (B) cortesia de C. Ettensohn.)
parede da blastocele (Dan e Okazaki, 1956; Schroeder, 1981). Os filopdios se ligam

parede nas junes entre as clulas do blastoderma e, em seguida, se contraem, arras-
tando o arquntero para cima. Hardin (1988) removeu as clulas mesenquimatosas
secundrias com um laser, e como conseqncia o arquntero s pode se alongar
aproximadamente em dois teros do seu comprimento total. Quando algumas clulas
mesenquimatosas secundrias foram deixadas, o alongamento continuou, embora em
velocidade menor do que nos controles. As clulas mesenquimatosas secundrias
tm, ento, um papel essencial em elevar o arquntero at a parede da blastocele
durante a ltima fase da invaginao.
Mas, podem os filopdios mesenquimatosos secundrios se ligar a qualquer parte
da parede da blastocele, ou existe um alvo especfico no hemisfrio animal que precisa
estar presente para que a ligao ocorra? Existe alguma regio da parede da blastocele
que predestinada a se tornar o lado ventral da larva? Estudos de Hardin e McClay
(1990) mostram que existe um alvo especfico para os filopdios do hemisfrio ani-
mal, que difere de outras regies. Os filopdios das clulas mesenquimatosas secun-
drias se estendem, tocam a parede da blastocele ao acaso e, em seguida, se retraem.
Entretanto, quando os filopdios atingem uma regio especfica da parede, eles per-
manecem ligados naquele local, se achatam contra essa regio e puxam o arquntero
em direo a ela. Quando Hardin e McClay comprimiram o outro lado da parede da
blastocele, de modo que o contato com a regio se tornou mais eficiente, os filopdios
continuaram a se estenderem e a se contrarem ao tocar a parede daquela regio.
Somente quando os filopdios encontraram o alvo que cessaram os movimentos.
Com a gstrula contrada de modo a impedir que os filopdios jamais atingissem a rea
alvo, as clulas secundrias mesenquimatosas continuaram sua explorao at que
finalmente se afastaram do arquntero e encontraram o tecido alvo, como clulas
migratrias livres. Parece ento, que existe uma regio alvo destinada a se transformar
na regio ventral da larva, que reconhecida pelas clulas mesenquimatosas secun-
drias e que posiciona o arquntero na regio onde se formar a boca.
Quando o topo do arquntero encontra a parede da blastocele nessa regio, as
clulas mesenquimatosas secundrias se dispersam no interior da blastocele, onde
proliferam para formar os rgos mesodrmicos (veja Figura 6.2, 13.5 horas). Onde o
arquntero contata a parede se formar, finalmente, uma boca que se fundir a ele
formando um tubo digestivo contnuo. Assim, como caracterstico para os
deuterostomatas, o blastporo marca a posio do nus.
Gastrulao em peixes
A transio da blstula intermediria
e a aquisio de motilidade celular
Durante o dcimo ciclo de clivagem do peixe-zebra, as divises celulares perdem

sua sincronia, novos genes so expressos e as clulas se tornam mveis. Essa
transio da blstula intermediria (MBT) tambm evidente em rs e em Droso-
phila. Como discutido no Captulo 5, a MBT parece ser regulada pela relao entre
cromatina e citoplasma. Peixes haplides entram na MBT um ciclo mais tarde;
peixes tetraplides entram um ciclo antes (Kane e Kimmel, 1993). Parece que algu-
ma coisa na cromatina est removendo por titulao alguma substncia (at
agora desconhecida) do citoplasma.
O primeiro movimento celular a epibolia das clulas blastodrmicas sobre o
vitelo. Na fase inicial, as clulas blastodrmicas internas se movem para o exterior e se
intercalam com as clulas mais superficiais (Warga e Kimmel, 1990). Mais tarde, as
clulas se movem sobre a superfcie do vitelo envolvendo-o completamente (Figura
6.11). Esse movimento no devido a um arrasto ativo dos blastmeros. Pelo contr-
rio, o movimento propiciado pela expanso autnoma da camada sincicial do vitelo
(YSL) dentro do citoplasma do hemisfrio animal. A camada envolvente (EVL) est
(A) Figura 6.11

30% DE EPIBOLIA (4.7 HS) Movimentos celulares durante a gastrulao do telesteo Danio rerio. (A) O
blastoderma com epibolia 30 porcento completa. (B) Formao do hipoblasto,
Camada envolvente Plo animal
por involuo de clulas na margem do blastoderma em epibolizao ou por
delaminao de clulas do epiblasto. (C) Detalhe da regio marginal. (D) Com
Camada profunda 90 porcento de epibolia, o mesoderma pode ser visto rodeando o vitelo, entre
o ectoderma e o endoderma. (E) Trmino da gastrulao. (Segundo Driever,
Camada sincicial 1995, e Langeland e Kimmel, 1997.)
do vitelo
Ventral Dorsal
Clula do vitelo
Ncleo do vitelo
Plo vegetal
(B) (C)
ESCUDO (6.0 HS.) Plo animal Ingresso celular
Epiblasto
Hipoblasto
Hipoblasto Camada envolvente

Escudo
Epiblasto
Ventral Dorsal
Clulas em involuo
Clulas em no-
involuo
Sinal indutor Sinais indutores
mesodrmico Camada sincicial
mesodrmicos do vitelo
Plo Vegetal e dorsais
Grnulo do vitelo
(D) Plo animal (E) Plo animal

Mesoderma Anterior Regio ceflica
dorsal
Camada Camada
envolvente envolvente
Somito #1
Ventral Dorsal
Ventral Dorsal
Mesoderma
Ectoderma,
neuroectoderma Coto caudal Regio do
Plo vegetal Mesendoderma: precursores tronco
para mesoderma e endoderma Posterior
Endoderma Plo animal

(90% EPIBOLIA (9 HS) 1 SOMITO (10.3 HS)
fortemente ligada YSL e arrastada junto com ela. As clulas mais profundas do
blastoderma enchem o espao entre a YSL e a EVL enquanto a epibolia se desenvolve.
Isso pode ser demonstrado cortando a ligao entre YSL e EVL. Quando isso feito,
as clulas blastodrmicas retornam ao topo do vitelo enquanto YSL continua sua
expanso ao redor da clula do vitelo (Trinkaus, 1984b, 1992). A expanso de YSL tem
como base uma rede de microtbulos em sua estrutura, e radiao ou drogas que
impedem a polimerizao de tubulina inibem a epibolia (Strahle e Jesuthasan, 1993;

Solnica-krezel e Driever, 1994).
Durante a migrao, um dos lados do blastoderma se torna visivelmente mais
grosso do que o outro. Experimentos com marcao de clulas indicam que o lado mais
delgado marca o stio da futura superfcie dorsal do embrio (Schmidt e Campos-
Ortega, 1995).
Formao das camadas germinais

Depois que as clulas blastodrmicas cobrem aproximadamente a metade da clula do
vitelo do peixe-zebra (e mais cedo em ovos de peixes com vitelos maiores) um
espessamento ocorre ao longo de toda a margem. Esse espessamento chamado de
anel germinativo, e composto de uma camada superficial, o epiblasto, e uma camada
interna, o hipoblasto. No entendemos como produzido o hipoblasto. Alguns labo-
ratrios alegam que o hipoblasto formado pela involuo das clulas superficiais
abaixo da margem, seguida por sua migrao para o plo animal (veja Figura 6.11). A
involuo comea na futura poro dorsal do embrio, mas ocorre na margem inteira.
Outros laboratrios alegam que essas clulas hipoblsticas ingressam para formar o
hipoblasto (veja Trinkaus, 1996). ( possvel que ambos os mecanismos ocorram com
diferentes maneiras de formar o hipoblasto predominando em espcies diferentes.)
Uma vez formado o anel, as clulas profundas de ambos, epiblasto e hipoblasto, se
intercalam no futuro lado dorsal do embrio, para formar um espessamento localizado,
o escudo embrionrio (Figura 6.12). Esse escudo funcionalmente equivalente ao
lbio dorsal do blastporo de anfbios, pois ele pode organizar um eixo embrionrio
secundrio quando transplantado a um embrio hospedeiro (Oppenheimer, 1936; Ho,
1992; veja discusso de gastrulao em anfbios).
Assim, enquanto as clulas realizam a epibolia em torno do vitelo, elas tambm
esto involuindo nas margens e convergindo anteriormente e dorsalmente em direo
Figura 6.12
(A) Plo animal
Convergncia e extenso no peixe-zebra. (A) Vista dorsal de movimentos de
Extenso convergncia e extenso durante a gastrulao do peixe-zebra. A epibolia es-
tende o blastoderma sobre o vitelo; a involuo ou o ingresso geram o hipoblasto;
Escudo convergncia e extenso trazem clulas do hipoblasto e epiblasto para o lado
embrionrio dorsal para formar o escudo embrionrio. Dentro do escudo, a intercalao
estende o cordomesoderma em direo ao plo animal. (B,C) Extenso con-
vergente do cordomesoderma mostrada por aquelas clulas exprimindo o
Convergncia
gene no tail (sem cauda), um gene que expresso pelas clulas da notocorda.
(D,E) Extenso convergente de clulas mesodrmicais adaxiais (marcadas pela
Involuo
sua expresso de gene snail para flanquear a notocorda. (de Langeland e
Epibolia Kimmel, 1997.)
Clula do
vitelo
(B) (C) (D) (E)

(A) (B) (C)

Manchas de
Vidro para corante no embrio
Discos de gar
segurar o com corante Lbio dorsal
embrio do blastporo
Embrio
Figura 6.13 Seco em

Colorao vital de embries de anfbios. (A) Mtodo de Vogt para marcao de clulas espec- plano de
ficas da superfcie embrionria com corantes vitais. (B-D) Vistas da superfcie do corante em viso (E)
embries sucessivos. (E) Embrio de trito dissecado no plano mediano para mostrar clulas (D)
coradas no interior. (Segundo Vogt, 1929.)
ao escudo embrionrio (Trinkaus, 1992). As clulas hipoblsticas do escudo embrio-

nrio convergem e se estendem anteriormente, finalmente estreitando-se ao longo da
linha dorsal mdia do hipoblasto. Esse o cordomesoderma, o primrdio da notocorda
(Figura 6.12B,C). As clulas adjacentes ao cordomesoderma, as clulas adaxiais, so
as precursoras dos somitos mesodrmicos (Figura 6.12D,E). A convergncia e a exten-
so no epiblasto traz as clulas presuntivas do crebro de todo o epiblasto para a linha
mdia dorsal onde formam a quilha neural. O resto do epiblasto se torna a pele do (E)
peixe. O mapa de destino do peixe-zebra, ento, no to diferente daquele da r ou
outros vertebrados (como logo veremos). Se abrirmos, conceitualmente, uma blstula
de Xenopus no plo vegetal e esticarmos a abertura em um anel marginal, o mapa de
destino resultante se parece muito com aquele do embrio do peixe-zebra quando
metade do vitelo estava coberto pelo blastoderma (Langeland e Kimmel, 1997).
Gastrulao de anfbios
O estudo da gastrulao em anfbios ao mesmo tempo uma das mais antigas e uma
das mais novas reas da embriologia experimental; mesmo considerando que gastru-
lao de anfbios foi estudada extensamente no sculo passado, a maior parte de
nossas teorias relacionadas aos mecanismos do movimento no desenvolvimento,
foram revisadas na dcada passada. O estudo da gastrulao em anfbios foi compli-
cado pelo fato de existir mais de um tipo de gastrulao nos anfbios. Espcies diferen-
tes empregam diferentes maneiras para atingir o mesmo objetivo (Smith e Malacinski,
1983; Lundmark, 1986). Nos ltimos anos, a pesquisa mais intensa se concentrou em
Xenopus, portanto, daremos nfase ao seu processo de gastrulao.
Movimentos celulares durante a gastrulao de anfbios

As blstulas de anfbios tm as mesmas tarefas que seus companheiros, equinoder-
mos e peixes, ou seja, trazer para dentro aquelas reas destinadas a formar os rgos
endodrmicos, envolver o embrio com clulas capazes de formar o ectoderma e colo-
car as clulas mesodrmicas no lugar apropriado entre elas. Os movimentos pelos
quais isso conseguido podem ser visualizados pela tcnica de colorao vital. Vogt
(1929) saturou fragmentos de gar com corante, como vermelho neutro ou sulfato de
azul do Nilo, os quais coram mas no danificam as clulas embrionrias. Esses frag-
mentos corados de gar foram pressionados contra a superfcie da blstula e uma
parte do corante foi transferida para as clulas contatadas (Figura 6.13). Os movimen-
tos de cada grupo de clulas coradas foram acompanhados atravs da gastrulao, e
Figura 6.14 Epiderme

Mapas do destino da blstula da r Xenopus
laevis. Mapas de destino (A) de clulas exte- Placa neural
riores e (B) interiores indicam que a maioria
dos derivados mesodrmicos so formados Endoderma
Mesoderma Notocorda
de clulas interiores. Nessa vista lateral, o acima do
lateral
ponto em que se forma o lbio dorsal do blastporo
blastporo est indicado por uma flecha. (Se- Endoderma Blastporo Blastporo
gundo Keller, 1976.) abaixo do blastporo Somitos
(A) EXTERIOR (B) INTERIOR
os resultados sumariados em mapas de destino. Esses mapas foram recentemente

confirmados e ampliados por tcnicas de microscopia eletrnica de varredura e de
injeo de corantes (Smith e Malacinski, 1983; Lundmark, 1986).
Estudos com corantes vitais de Lvtrup (1975; Landstrom Lvtrup, 1979) e de
Keller (1975, 1976) mostraram que as clulas da blstula de Xenopus tm diferentes
destinos, conforme se encontrem nas camadas profundas ou superficiais do embrio
(Figura 6.14). Em Xenopus, os precursores mesodrmicos existem somente na camada
profunda, enquanto que o ectoderma e endoderma se originam da camada superficial
do embrio. Os precursores da notocorda e outros tecidos mesodrmicos esto loca-
lizados abaixo da superfcie, na regio equatorial (marginal) do embrio. Em urodelos
(salamandras, tais como: Triturus e Ambystoma) e em algumas rs sem ser o Xenopus,
os precursores da notocorda e do mesoderma so encontrados em ambas, nas clulas
da superfcie e nas clulas marginais profundas (Purcell e Keller, 1993).
A gastrulao em embries de r iniciada no futuro lado dorsal do embrio, logo
abaixo do equador na regio do crescente cinzento (Figura 6.15). Nesse ponto, as
futuras clulas endodrmicas locais invaginam dando lugar formao de um blastporo
em forma de fenda. Essas clulas modificam sua forma dramaticamente. O corpo prin-
cipal de cada clula deslocado na direo interna do embrio, mas o contacto com a
superfcie externa mantido por um delgado filamento semelhante a um pescoo
(Figura 6.16). Essas clulas garrafa revestem o arquntero inicial. Assim, como na
gastrulao do ourio-do-mar, uma invaginao de clulas inicia a formao do
arquntero. Entretanto, ao contrrio da gastrulao em ourio-do-mar, a gastrulao
na r no comea no plo vegetativo, mas na zona marginal prxima ao equador da
blstula, onde se encontram os hemisfrios animal e vegetal. Aqui, as clulas
endodrmicas no so to grandes e nem to ricas em vitelo como os blastmeros do
plo vegetativo.
A prxima fase da gastrulao envolve a involuo das clulas da zona marginal,
enquanto as clulas do plo animal sofrem epibolia e convergem no blastporo. Quando
as clulas marginais migratrias chegam ao lbio dorsal do blastporo, elas se dirigem
para dentro e migram ao longo da superfcie interna das lminas celulares externas.
Dessa forma, as clulas que constituem o lbio do blastporo esto constantemente
mudando. As primeiras clulas que compem o lbio dorsal so as clulas garrafa que
invaginam para formar a borda anterior do arquntero. Essas clulas, mais tarde, se
tornam as clulas farngeas do intestino anterior. Enquanto essas primeiras clulas
passam para o interior do embrio, o lbio do blastporo passa a ser composto de
clulas que involuem para dentro do embrio, tornando-se os precursores do
mesoderma da cabea. As prximas clulas involuindo para o embrio, atravs do
lbio dorsal do blastporo, so as clulas cordomesodrmicas. Essas clulas formaro
a notocorda, uma espinha dorsal mesodrmica transitria que essencial para o
incio da diferenciao do sistema nervoso.
medida que as novas clulas migram para dentro do embrio, a blastocele
deslocada para o lado oposto ao lbio dorsal do blastporo. Enquanto isso, o lbio do
blastporo se expande lateral e ventralmente, bem como os processos de formao
das clulas garrafa e involuo continuam no blastporo. O blastporo em expanso
Plo animal (AP)

Arquntero
Blastocele
Lbio dorsal Mesoderma
Clulas do blastporo
superficiais
Blastocele
Clulas deslocada Endoderma
profundas
(A) (B) (C)
Plo vegetal
Mesoderma dorsal Mesnquima

Ectoderma Ectoderma
Arquntero
Notocorda Notocorda
Lbio dorsal Lbio dorsal
do blastporo do blastporo Lbio lateral
Lbio lateral do blastporo
do blastporo
Endoderma
Tampo do
(D) (E) (F)
vitelo
Ectoderma
Endomesoderma Lbio ventral
do blastporo Mesoderma
anterior ventral
Figura 6.15
Movimentos celulares durante a gastrulao da r. As sees so cortadas atravs da
metade do embrio, e so posicionadas de modo que o plo vegetal seja inclinado na
direo do observador e ligeiramente para a esquerda. Os principais movimentos celula-
res esto indicados por flechas, e as clulas superficiais do hemisfrio animal esto
coloridas para permitir o seguimento de sua movimentao. (A,B) Gastrulao precoce.
Clulas de garrafa da margem movem-se para o interior para formar o lbio do blastporo,
e precursores mesodrmicos involuem sob o teto da blastocele. AP marca a posio do
Figura 6.16
plo animal, que ir mudar medida que a gastrulao prossegue. (C,D) Gastrulao
Estrutura do lbio do blastporo. (A) Dia-
intermediria. O arquntero se forma e desloca a blastocele, e as clulas migram dos
grama de clulas de uma seo da gastrula-
lbios lateral e ventral do blastporo para dentro do embrio. As clulas do hemisfrio
o do embrio da salamandra, mostrando a
animal migram em direo da regio vegetal, movendo o blastporo para regio prxima
extenso das clulas-garrafa do blastporo.
do plo vegetal. (E,F) Perto do fim da gastrulao, a blastocele obliterada, o embrio
(B) Viso de superfcie de um lbio dorsal
fica envolvido pelo ectoderma, o endoderma foi internalizado, e as clulas mesodrmicas
precoce do blastporo de Xenopus. A dife-
se posicionaram entre o ectoderma e o endoderma. (Segundo Keller, 1986.)
rena de tamanho entre os blastmeros ani-
mais e vegetais est claramente aparente. (C)
Detalhe da regio onde as clulas do hemis-
frio animal esto involuindo atravs do l-
bio do blastporo. (A segundo Holtfreter,
1943; B e C, micrografias de varredura ele-
(A) (B)
trnica cortesia de C. Phillips.)
(C)
Clulas-
garrafa
Blastporo
(A) (B) Lbio dorsal

i ii iii
Obturador Lbio lateral

do vitelo
Lbio do
blastporo iv v
Lbio ventral Obturador

do vitelo
Figura 6.17
Epibolia do ectoderma. (A) Movimentos morfogenticos de clulas migrando para o interior do
blastporo e em seguida sob a superfcie. (B) Mudanas na regio ao redor do blastporo
quando se formam sucessivamente os lbios dorsal, lateral e ventral. Quando o lbio ventral
completa o crculo, o endoderma torna-se progressivamente internalizado. Nmeros ii-v corres-
pondem s Figuras 6.15B-E, respectivamente. (B de Balinsky, 1975, cortesia de B. I. Balinsky.)
como um crescente, desenvolve lbios laterais e, finalmente, um lbio ventral sobre

o qual passam clulas precursoras adicionais, mesodrmicas e endodrmicas. Com a
formao do lbio ventral, o blastporo forma uma anel ao redor das grandes clulas
endodrmicas que permanecem expostas na superfcie do plo vegetativo. Esse peda-
o remanescente de endoderma chamado de rolha ou obturador do vitelo; ele tam-
bm finalmente internalizado (Figura 6.17). Naquele ponto, todos os precursores
endodrmicos foram trazidos para o interior do embrio, o ectoderma envolveu a
superfcie e o mesoderma foi colocado entre eles.
Posicionando o blastporo
Tendo visto os aspectos gerais da gastrulao em anfbios, podemos agora nos ocu-
par de cada passo em detalhe. A gastrulao no existe como um processo indepen-
dente na vida do animal. Na verdade, a preparao para a gastrulao j pode ser
visualizada no preciso momento da fuso vulo-espermatozide. O vulo tem uma
polaridade ao longo do eixo animal-vegetal. O destino geral dessas regies pode ser
previsto antes da fecundao. A superfcie do hemisfrio animal se transformar nas
clulas do ectoderma (pele e nervos), o hemisfrio vegetal formar as clulas do intes-
tino e rgos associados (endoderma), e as clulas mesodrmicas sero formadas a
partir do citoplasma interno, ao redor do equador. Assim, as camadas germinativas
podem ser mapeadas no vulo; porm, isso nada diz sobre qual parte do ovo formar
a frente e qual as costas. Os eixos dorsoventral (dorso-frente), ntero-posterior e
direito-esquerdo ainda no foram determinados.
Os eixos dorsoventral e ntero-posterior so especificados pelo deslocamento
do citoplasma do zigoto durante a fecundao. No Captulo 4 discutimos a rotao
do citoplasma cortical relativo ao citoplasma interno no ovo da r. O citoplasma
interno permanece orientado em relao gravidade devido a sua densa acumula-
o de vitelo, enquanto o citoplasma cortical gira 30o na direo do hemisfrio ani-
mal (para cima) em direo ao ponto de entrada do espermatozide (veja Figura 4.34).
Essa rotao faz com que o eixo animal-vegetal da superfcie do ovo se desloque 30o Normal Girada
relativo ao eixo animal-vegetal do citoplasma interno. Dessa maneira, um novo esta-
Porcentagem de embries
do de simetria adquirido. Enquanto que o vulo era radialmente simtrico em
relao ao eixo animal-vegetal, o ovo fecundado agora tem um eixo dorsoventral e
bilateralmente simtrico (tem lados direito e esquerdo). O citoplasma interno tam-
bm se move, e microscopia de fluorescncia de embries precoces mostrou que os
padres citoplasmticos das clulas presuntivas dorsais so diferentes daqueles
das clulas presuntivas ventrais (Prancha 7).
Esses movimentos citoplasmticos ativam o citoplasma oposto ao ponto de
entrada do espermatozide, a iniciar a gastrulao (Figura 6.18). O lado pelo qual
entra o espermatozide marca a futura superfcie ventral do embrio; o lado oposto,
onde se inicia a gastrulao, marca o futuro dorso (costas) do embrio (Gerhart et al., ngulo do lbio do blastporo
1981; Vincent et al., 1986). Mesmo que o espermatozide no seja necessrio para do ponto de entrada de espermatozide
induzir esses movimentos no citoplasma do ovo, ele importante na determinao
da direo dessa rotao. Se um ovo artificialmente estimulado anucleado, a rota- Figura 6.18
o cortical ainda se d no tempo correto. Entretanto, a direo desse movimento Relao entre o ponto da entrada do esper-
imprevisvel. (De fato, em ovos disprmicos existe uma nica direo de rotao.) O matozide e o lbio dorsal do blastporo em
espermatozide parece fornecer um sinal espacial que orienta a rotao autnoma ovos de r normais e naqueles que sofreram
do citoplasma, mas a rotao citoplasmtica que essencial para o futuro desen- rotao. Ovos de Xenopus foram fertilizados,
volvimento. Alm disso, se essa rotao cortical bloqueada, no h o desenvolvi- desgeleificados e colocados em Ficoll para de-
sidratar o espao perivitelino. A entrada do
mento dorsal, e o embrio morre como uma massa de clulas ventrais (primariamente
espermatozide foi marcada com corante. Os
intestinais) (Vincent e Gerhart, 1987). A direo do movimento citoplasmtico deter- ovos sofreram rotao, foram inclinados em
mina qual lado ser o dorsal e qual ser o ventral. 900, com o ponto de entrada do espermato-
A direo preferencial fornecida pelo ponto de entrada do espermatozide pode zide virado para cima, 50-80 minutos aps
ser sobrepujada por um redirecionamento mecnico da relao espacial entre os a fertilizao. (Segundo Gerhart et al., 1981.)
citoplasmas cortical e subcortical. Quando se impede a rotao do ovo (por imerso
em um polissacardeo que provoca o colapso do espao perivitelino entre o ovo e o
envoltrio de fertilizao) ele pode sofrer uma rotao de 90o de modo que o eixo
animal-vegetal fique horizontal e no vertical e o ponto de entrada do espermatozi-
de voltado para cima (Gerhart et al., 1981; Kirschner e Gerhart, 1981; Cooke, 1986).
Quando ovos fecundados so inclinados dessa maneira por trinta minutos, partindo
da metade do primeiro ciclo de clivagem, o citoplasma gira de tal maneira que quase
todos os embries iniciam a gastrulao no mesmo lado da entrada do espermatozi-
de (veja Figura 6.18).
A discusso precedente sugere que deve ser possvel ter dois stios de iniciao
de gastrulao se houver a combinao de rotao orientada pelo espermatozide
com uma rotao do ovo artificialmente induzida. Black e Gerhart (1985) permitiram a
rotao inicial orientada pelo espermatozide, mas em seguida imobilizaram os ovos
em gelatina e os centrifugaram levemente, de modo que o citoplasma interno se mo-
vesse para o ponto de entrada do espermatozide. Quando foi permitido que os ovos
centrifugados se desenvolvessem em gua normal, apareceram dois stios de gastru-
lao, levando ao aparecimento de larvas gmeas ligadas (Figura 6.19). A hiptese de
Black e Gerhart (1986) que tal produo de gmeos causada pela formao de duas
reas de interao: um eixo se forma onde a rotao cortical normal deu origem s
interaes citoplasmticas no plo vegetal da clula; o outro eixo se forma onde o
citoplasma dirigido pela centrifugao interage com os componentes do plo vegetal.
Gmeos tambm podem ser produzidos em gravidade normal, colocando o lado do
ovo onde penetra o espermatozide voltado para cima, aps remover o envoltrio de
fertilizao (Gerhart et al., 1981).
A possibilidade de se obter dois lbios funcionais dos blastporos tambm sugere
que no h nada especial a respeito do crescente cinzento, onde se observa pela
primeira vez o incio da gastrulao. Na verdade, os fatores indutores da gastrulao
parecem ser criados pelas interaes dos citoplasmas animal e vegetal, interaes
essas que, provavelmente, ativam algum componente do citoplasma vegetal. Gimlich
e Gerhart (1984) realizaram uma srie de experimentos de transplante que confirmaram
(A) (B)
Figura 6.19
Blastporos gmeos produzidos pela rotao
de ovos desgeleificados de Xenopus com o lado
ventral para cima (ponto de entrada do esper-
matozide), no momento da primeira cliva-
gem. (A) Dois blastporos so instrudos para
formar: o original (oposto ao ponto de entrada
do espermatozide) e o novo, criado pelo des-
locamento de material citoplasmtico. (B) Es-
ses ovos desenvolvem dois eixos completos, a hiptese de que os fatores que iniciam a gastrulao originalmente esto no cito-
que formam girinos gmeos, ligados ventral- plasma profundo das clulas vegetativas dorsais, e no no crescente cinzento. Eles
mente. (Cortesia de J. Gerhart.) demonstraram que em um embrio de Xenopus, no estgio de 64 clulas, os trs
blastmeros vegetais mais dorsais so capazes de induzir a formao do lbio dorsal
do blastporo e de um eixo dorsal completo em embries hospedeiros irradiados com
luz ultravioleta (que, de outra maneira, no seriam capazes de iniciar a gastrulao;
Figura 6.20A). Alm disso, esses trs blastmeros, situados abaixo da regio do
prospectivo lbio dorsal, podem tambm induzir uma invaginao secundria e um
eixo quando transplantados para o lado ventral de um embrio normal, no estgio de
64 clulas, no irradiado (Figura 6.20B). Esse pequeno grupo de blastmeros vegetais
permite a invaginao de clulas marginais adjacentes e a formao do eixo mesodr-
mico dorsal do embrio. Holowacz e Elinson (1993) observaram que o citoplasma
cortical, das clulas vegetativas dorsais do embrio de Xenopus, no estgio de 64
clulas, era capaz de induzir a formao de eixos secundrios quando injetado em
clulas vegetativas ventrais. Nem o citoplasma cortical de clulas animais e nem o
citoplasma profundo das clulas ventrais puderam induzir esses eixos.
Parece, ento, que os rearranjos internos do citoplasma, provavelmente orienta-
dos pela entrada do espermatozide, so responsveis pela distribuio assimtrica
de fatores subcelulares. Essa assimetria cria uma distino dorsoventral no ovo que,
em ltima instncia, dirige o posicionamento do blastporo acima de um conjunto de
blastmeros vegetais e oposto ao ponto de entrada do espermatozide. As molculas
que podem estar envolvidas na formao do stio vegetal de iniciao da gastrulao
(o centro de Nieuwkoop) sero discutidas no Captulo 15.
Movimentos celulares e a construo do arquntero
O INCIO DA GASTRULAO. A gastrulao em anfbios iniciada quando um

grupo de clulas endodrmicas marginais, na superfcie dorsal da blstula, penetra no
interior do embrio. As superfcies externas (apicais) dessas clulas se contraem dra-
maticamente, enquanto seus terminais internos (basais) se expandem. O comprimento
apical-basal dessas clulas aumenta bastante, originando a forma caracterstica de
garrafa. Na salamandra, essas clulas parecem ter um papel ativo nos movimentos
iniciais da gastrulao. Johannes Holtfreter (1943, 1944) observou que as clulas gar-
rafa de gstrulas precoces de salamandra poderiam aderir s lamnulas de vidro e guiar
o movimento das clulas ligadas a elas. At mais convincentes foram os experimentos
(A) (B)
DOADOR RECEPTOR DOADOR RECEPTOR

Ponto de Ponto de
NORMAL IRRADIADO POR UV NORMAL NORMAL
entrada do Ponto de entrada entrada do
espermatozide do espermatozide espermatozide
UV
Sem transplante
Transplante
Pea embrionria Novo local de

ventral carente de gastrulao e forma
eixo corporal de eixo corporal
Figura 6.20
Experimentos de transplante demonstrando
que as clulas vegetativas, abaixo das regies
de recombinao de Holtfreter, nos quais clulas da zona marginal dorsal (que dariam do futuro lbio dorsal do blastporo, so res-
origem ao lbio dorsal do blastporo) foram combinadas com o tecido endodrmico ponsveis pelo incio da gastrulao. (A) Sal-
interno. Quando as clulas da zona marginal dorsal foram removidas e colocadas no vamento de embries irradiados pelo trans-
plante de blastmeros do segmento mais dor-
prospectivo tecido endodrmico interno, as clulas precursoras do blastporo forma-
sal (cor) de um embrio, no estgio de 64 clu-
ram clulas garrafas e se aprofundaram abaixo da superfcie do endoderma interno las, para uma cavidade criada pela remoo de
(Figura 6.21). Mais ainda, ao se aprofundarem, criaram uma depresso reminiscente do um nmero semelhante de clulas vegetais. Um
blastporo precoce. Sendo assim, Holtfreter sugeriu que a habilidade de invaginar zigoto irradiado sem tal transplante no sofre
com profundidade para dentro do endoderma uma propriedade inata das clulas da gastrulao normal. (B) Formao de um novo
zona marginal dorsal. local para gastrulao e eixo corporal pelo trans-
plante das clulas vegetativas, mais dorsais,
de um embrio de 64 clulas, para regio vege-
tal mais ventral, de outro embrio de 64 clu-
las. (Segundo Gimlich e Gerhart, 1984.)
Clulas
Implante endodrmicas Sulco no blastporo
Figura 6.21
Um implante de clulas de anfbios da regio do lbio dorsal do blastporo submerge para
dentro de uma camada de clulas endodrmicas e forma um sulco do blastporo. (Segundo
Holtfreter, 1944.)
A situao no embrio da r um pouco diferente. R. E. Keller e seus orientados

(Keller, 1981; Hardin e Keller, 1988) mostraram que apesar das clulas garrafa terem um
papel na iniciao da involuo da zona marginal ao adquirem a forma de garrafa, elas
no so essenciais para a continuao da gastrulao. A forma peculiar de garrafa
dessas clulas necessria para iniciar a gastrulao; a constrio das clulas que
puxa a zona marginal na direo vegetativa, enquanto empurra as clulas vegetativas
para dentro (Figura 6.22 A,B). O estiramento da zona marginal permite a expanso do
ectoderma em direo ao plo vegetal e o envolvimento do embrio; empurrar as
clulas vegetais permite a esses precursores da mesoderme anterior contatar o lado de
Clulas
(A) (B) (C) (D)
marginais
profundas
Endoderma
Intercalao Clulas
radial de clulas garrafa
profundas
Clulas
Futuro marginais
mesoderma superficiais
posterior Clulas- Lbio dorsal
garrafa do blastporo
Morfologia de O lbio se
Futuro Blastporo mudanas das extende lateral
IMZ mesoderma anterior clulas profundas e vegetalmente
profunda
Clulas garrafa
(E) Precursores do (F) Ectoderma Precursores do
mesoderma ceflico do mesoderma ceflico do
endoderma da faringe endoderma da faringe
Clulas garrafa Plo animal

re-espalhadas
Blastocele
IMZ superficial
movendo-se em
direo do plo animal
Endoderma
Intercalao
medianolateral
Figure 6.22
Modelo integrativo dos movimentos celulares durante a gastrulao precoce de Xenopus.
(A) Estrutura da zona marginal involutiva (IMZ) antes da gastrulao. A IMZ profunda
consiste do futuro mesoderma anterior e do futuro mesoderma posterior. (B) Constrio
das clulas garrafa arrasta o futuro mesoderma anterior para cima e gira a IMZ para fora. (C)
Os precursores do mesoderma anterior conduzem o movimento do mesoderma para dentro
da blastocele. (D) Ocorre intercalao radial (interdigitao) das clulas profundas da IMZ.
O mesoderma move-se na direo ao plo animal, arrastando as clulas superficiais e as
clulas garrafa por involuo. (E) medida que continua a gastrulao, as clulas marginais
profundas se achatam, e as clulas previamente superficiais formam a parede do arquntero.
(F) Intercalao como em (D), olhando da superfcie dorsal para baixo em direo do lbio
dorsal do blastporo. Na NIMZ (zona marginal no involutiva) e parte superior da IMZ,
clulas profundas (mesodrmicas) esto se intercalando radialmente, configurando uma fita
estreita de clulas achatadas. Esse estreitamento de vrias camadas em poucas outras causa
extenso na direo lbio do blastporo. Imediatamente acima do lbio, intercalao
medianolateral das clulas produz tenses que arrastam a IMZ por cima do lbio, a interca-
lao medianolateral continua, alongando e estreitando o mesoderma axial. (Segundo Hardin
e Keller, 1988; Wilson e Keller, 1991.)
baixo dos precursores mesodrmicos posteriores e comear a migrar no teto da blasto-

cele (Hardin e Keller, 1988).
Entretanto, aps comear esses movimentos, as clulas garrafa do Xenopus no
so mais necessrias. Quando as clulas garrafa so removidas aps sua formao, a
involuo, a formao do blastporo e o fechamento continuam. O fator principal no
movimento das clulas para dentro do embrio parece ser a involuo das clulas
marginais subsuperficiais mais do que as superficiais. Parece que essas clulas
subsuperficiais ou clulas da zona marginal involutiva profunda se viram para dentro
e migram em direo ao plo animal, ao longo das superfcies internas das clulas
profundas remanescentes (Figura 6.22C-E), e que a camada superficial forma o reves-
timento do arquntero unicamente porque ela est ligada s clulas profundas, que
esto migrando ativamente. O movimento das clulas garrafa mais profundamente
dentro do embrio depende da sua ligao s clulas profundas subjacentes. A remo-
o das clulas garrafa no afeta a involuo das clulas profundas ou das clulas
superficiais da zona marginal para dentro do embrio, mas a remoo das clulas
marginais dorsais profundas e sua substituio por clulas do hemisfrio animal (que
normalmente no sofrem involuo) interrompe a formao do arquntero.
A FORMAO DO MESODERMA DURANTE A GASTRULAO DE XENOPUS

A Figura 6.22 (D-F) esboa o comportamento dessas clulas da zona marginal
involutiva (IMZ) em sucessivos estgios da gastrulao em Xenopus (Keller e
Schoenwolf, 1977; Keller, 1980, 1981; Hardin e Keller, 1988). Pouco antes de sua
involuo atravs do lbio do blastporo, as vrias camadas de clulas IMZ profun-
das se intercalam radialmente para formar uma fina e larga camada. Essa intercalao
estende ainda mais a IMZ vegetalmente. Ao mesmo tempo, as clulas superficiais se
espalham se dividindo e achatando. Quando as clulas profundas atingem o lbio
do blastporo, elas involuem para dentro do embrio e iniciam um segundo tipo de
intercalao. Essa intercalao causa uma extenso convergente ao longo do eixo
mediolateral (Figura 6.22F) que integra vrias correntes mesodrmicas para formar
um longa e estreita banda. A parte anterior dessa banda migra em direo ao hemis-
frio animal. Assim a corrente mesodrmica continua a migrar em direo ao plo
animal e a camada superposta de clulas superficiais (incluindo as clulas garrafa)
so passivamente puxadas em direo ao hemisfrio animal, formando o teto do
arquntero (Figuras 6.15 e 6.22E). Portanto, ainda que as clulas garrafa possam ser
responsveis pela indentao inicial, a fora motivadora para essa involuo parece
vir da camada profunda de clulas marginais. Mais ainda, a intercalao radial e
mediolateral da camada de clulas profundas parece ser responsvel pelo movimen-
to contnuo do mesoderma para dentro do embrio.
Migrao do mesoderma involutivo

Com o progresso dos movimentos mesodrmicos, a expanso convergente tambm
continua a estreitar e encompridar a zona marginal involutiva. A IMZ contm o
prospectivo teto endodrmico do arquntero na sua camada superficial (IMZS) e as
prospectivas clulas mesodrmicas, incluindo aquelas da notocorda na sua regio
profunda (IMZD). Durante o tero mdio da gastrulao, a lmina em expanso do
mesoderma converge em direo linha mediana do embrio. Esse processo dirigido
pela contnua intercalao mediolateral de clulas ao longo do eixo ntero-posterior,
estreitando ainda mais a banda. No fim da gastrulao, a notocorda localizada central-
mente se separa do mesoderma somtico em ambos os lados, e as clulas sofrem
elongao separadamente (Wilson e Keller, 1991). Essa extenso convergente do
mesoderma parece ser autnoma, porque os movimentos dessas clulas ocorrem mes-
mo se essa regio do embrio isolada do resto (Keller, 1986).
Durante a gastrulao, o plo animal e as clulas da zona marginal no-involutiva
(NIMZ) expandem-se por epibolia cobrindo todo o embrio. A poro dorsal das clu-
las marginais no-involutivas expande-se mais rapidamente que a poro ventral,
assim, causando o movimento dos lbios do blastporo em direo ao lado ventral.

Enquanto essas clulas mesodrmicas, entrando atravs do lbio dorsal do blastporo,
do origem ao mesoderma dorsal axial, o resto do mesoderma do corpo (o qual forma
o corao, os rins, sangue, ossos e partes de vrios outros rgos) entra atravs dos
lbios ventral e lateral para criar o manto mesodrmico. O endoderma derivado das
clulas da IMZS que formam o revestimento do teto do arquntero e das clulas
vegetativas sub-blastoporais que se tornam o assoalho do arquntero (Keller, 1986).
& Especulaes
Reguladores moleculares do desenvolvimento:

Fibronectinas e as vias da migrao mesodrmica
C omo que as clulas involutivas Figura 6.23
so informadas para aonde ir, uma Fibronectinas e gastrulao de anfbio. (A) Imunofluorescncia revela uma rede fibrilar de
vez que se encontram no interior fibronectina na superfcie basal de prospectivas clulas ectodrmicas forrando o teto da blasto-
do embrio? Na salamandra, parece que cele do embrio da salamandra. (B-E) Micrografias ao microscpio eletrnico de varredura de
os precursores mesodrmicos involutivos gastrulao normal (B,C) e anormal (D,E) da salamandra. A blastocele em (D) e (E) foi injetada
migram em direo ao plo animal em uma com o fragmento ligante clula de fibronectina, enquanto a blstula gastrulando normalmente
foi injetada com a soluo controle. (B) Seo durante gastrulao intermediria. (C) O obtura-
rede de fibronectina secretada pelas clu-
dor do vitelo ao fim da gastrulao. (D,E) Os estgios finais da gastrulao detida, onde os
las do teto da blastocele. Pouco antes da
precursores mesodrmicos, tendo fixado fibronectina sinttica, no conseguem reconhecer a
gastrulao, o ectoderma presuntivo do
via de migrao normal forrada de fibronectina. O arquntero no se forma, e os precursores no-
teto da blastocele secreta uma matriz ex- involudos do mesoderma permanecem na superfcie. (ar, arquntero; bc, blastocele; bl, blastporo;
tracelular que contm fibrilas de fibronec- ec, ectoderma; en, endoderma; mes, mesoderma; yp, obturador do vitelo.) (A de Boucaut et al.,
1985; B-E de Boucaut et al., 1984, cortesia de J. C. Boucaut e J.-P. Thiery.)
(A)
(B) (C)
(D) (E)
tina (Figura 6.23A; Boucaut et al., 1984; cele de gstrulas precoces de salamandra reconhea a fibronectina. Alm disso, as
Nakatsuji et al., 1985). O mesoderma e os depositaram em recipientes de plsti- clulas das DMZ no migraram ao acaso,
involutivo parece migrar nessas fibras de co com suas matrizes extracelulares tocan- mas migraram em direo ao plo animal
fibronectina. Isso foi confirmado pela sn- do o plstico (Figura 6.24A). O eixo do da matriz extracelular que havia sido ab-
tese qumica de uma falsa fibronectina blastporo ao plo animal foi marcado e, sorvida no plstico (Figura 6.24B).
que pode competir com a genuna da ma- aps 2 horas, o explante foi removido, dei- Em Xenopus, a extenso convergente
triz extracelular. Clulas se ligam a uma xando sua matriz extracelular. Um explante empurra as clulas migratrias para cima,
certa regio da protena fibronectina que menor da zona marginal dorsal foi removi- em direo ao plo animal. Entretanto, a
contm uma seqncia de trs aminocido de outra gstrula precoce e colocado fibronectina parece delinear os limites
dos (Arg-Gly-Asp; RGD). Boucaut e co- sobre a matriz com seu prprio eixo dentro dos quais esses movimentos po-
laboradores injetaram grandes quantida- blastporo-plo animal, perpendicular dem ocorrer. A fibronectina das gstrulas
des de um pequeno peptdio contendo quele da matriz. Seria possvel s clulas de Xenopus no forma grades complexas,
essa seqncia na blastocele de embri- desse explante migrarem na matriz, e se mas se organiza em pequenos aglomera-
es de salamandra, pouco antes do incio migrassem o fariam em uma direo parti- dos fibrilares. Se a fibronectina for sinte-
da gastrulao. Se a fibronectina fosse es- cular? Foi verificado que as clulas mi- tizada mas no organizada nessas fibrilas,
sencial para a migrao celular, ento as graram, e que a migrao podia ser inibida as clulas mesodrmicas dorsais vo ade-
clulas ligadas a esse fragmento solvel por anticorpos que impedem que a clula rir superfcie basal do ectoderma
de peptdio, em lugar da fibronectina real presuntivo, mas no migraro (Winklbau-
ligante de clulas, deveriam parar. Impos- er e Nagel, 1991). As fibrilas de fibronecti-
sibilitadas de encontrar sua estrada, as na so necessrias para que as clulas
clulas mesodrmicas deveriam cessar sua mesodrmicas da cabea se achatem e es-
involuo. Isso precisamente o que tendam largos processos (lameliformes)
ocorreu (Figura 6.23B-E). No foram vis- (A) na direo da migrao (Winklbauer et al.,
tas clulas migratrias ao longo do lado 1991; Winklbauer e Keller, 1996). A impor-
de baixo do ectoderma. Em vez disso, os Plo animal tncia dessas fibrilas de fibronectina
precursores mesodrmicos permaneceram tambm vista em hbridos interespecficos
fora do embrio, formando uma massa ce- que se detm na gastrulao. Delarue e
lular convoluta. Outros pequenos pept- colegas (1985) mostraram que certos h-
dios sintticos (incluindo outros fragmen- bridos inviveis, entre duas espcies de
tos da molcula de fibronectina) no im- sapos, morrem durante a gastrulao por-
pediram a migrao. que no secretam essas fibrilas de fibro-
Considera-se que as clulas mesodr- nectina. Parece ento, que a matriz extra-
micas aderem fibronectina atravs da celular do teto da blastocele, e particular-
v1 protena integrina (Alfandari et al., mente seu componente fibronectina, im-
1995). A migrao mesodrmica pode ser portante na migrao das clulas mesodr-
tambm interrompida pela microinjeo de micas durante a gastrulao em anfbios.
anticorpos contra fibronectina ou contra
a subunidade 1 de integrina que funcio-
na como parte do receptor de fibronecti-
na (DArribre et al., 1988, 1990). Alfandari Figura 6.24
e colegas (1995) mostraram que logo aps A direo da migrao das clulas da zona mar-
a fecundao, a subunidade v da integri- ginal dorsal (DMZ) depende da orientao da
na progressivamente perdida das mem- matriz extracelular do teto da blastocele. (A)
branas das clulas do blastmero. Entre- (B) Explantes do teto da blastocele do blastforo
tanto, pouco antes e durante a gastrula- (BP) para o plo animal (AP) foram disseca-
o, a subunidade v expressa na su- dos de embries de salamandra em estgio pre-
perfcie das clulas mesodrmicas migra- coce de gastrulao e colocados em placas pls-
ticas. A matriz extracelular aderiu placa, e o
trias. Parece ento, que a sntese desse
tecido foi ento removido. Um explante me-
receptor de fibronectina pode sinalizar o
nor de uma gstrula precoce, contendo clulas
tempo para o mesoderma comear e con-
da DMZ, foi ento colocado sobre essa ma-
tinuar a migrao. triz, com o seu prprio eixo perpendicular
A matriz extracelular contendo fibro- aquele da matriz. (B) Clulas da DMZ do
nectina, permite a ligao das clulas AP
explante migraram para o plo animal da ma-
mesodrmicas rede de fibronectina e, triz. A linha pontilhada indica a borda original
alm disso, parece fornecer sinais para a do explante, e a flecha branca representa seu
direo da migrao celular. Shi e cole- eixo blastporo-plo animal. (de Shi et al.,
gas (1989) removeram os tetos da blasto- 1989, fotografia cortesia dos autores.)
Epibolia do ectoderma
Enquanto a involuo est ocorrendo no lbios do blastporo, os precursores
ectodrmicos esto se expandindo sobre todo o embrio. Keller (1980) e Keller e
Schoenwolf (1977) usaram microscopia eletrnica de varredura para observar as mo-
dificaes tanto nas clulas superficiais como nas clulas profundas das regies
animal e marginal. O mecanismo principal de epibolia na gastrulao do Xenopus
parece ser um aumento no nmero de clulas (atravs de diviso), acoplado a uma
concomitante integrao de vrias camadas profundas em uma s (Figura 6.25). Du-
rante a gastrulao precoce, trs rodadas de diviso celular aumentam o nmero de
camadas de clulas profundas no hemisfrio animal. Ao mesmo tempo, completa
integrao de numerosas clulas profundas em uma camada tambm ocorre. A camada
mais superficial se expande por diviso e achatamento celular. O espalhamento de
clulas nas zonas marginais dorsal e ventral, se d provavelmente pelo mesmo meca-
nismo, ainda que mudanas na forma celular parecem ter um papel mais importante do
que no hemisfrio animal. O resultado dessas expanses a epibolia das clulas
superficiais e profundas do plo animal e regies marginais no involutivas sobre a
superfcie do embrio (Keller e Danilchik, 1988). A maior parte das clulas da regio
marginal, como mencionado anteriormente, involuem para se juntar corrente de clu-
las mesodrmicas dentro do embrio.
Gastrulao no Xenopus uma orquestrao de vrios eventos distintos. A primei-
ra indicao de gastrulao envolve a invaginao local das clulas garrafa do
endoderma na zona marginal, em tempo e lugar precisamente definidos. Em seguida, a
involuo das clulas marginais atravs do lbio do blastporo, comea a formao
do arquntero. Essas clulas involutivas, na margem anterior do manto mesodrmico,
migram ao longo da superfcie interna do teto do blastporo, e o prospectivo cordo-
mesoderma atrs delas, se estreita e se alonga posteriormente, por extenso conver-
gente, na poro dorsal do embrio. Ao mesmo tempo, as clulas precursoras ectodr-
micas epibolizam vegetalmente por diviso celular e pela integrao de camadas celu-
lares previamente independentes. O resultado desses movimentos celulares o posi-
cionamento adequado das trs camadas germinativas em preparao para sua diferen-
ciao em rgos do corpo. Estudos moleculares (a serem discutidos no Captulo 15)
esto comeando a nos dar pistas relacionadas a mecanismos pelos quais as clulas
so informadas de como comear e finalizar essas migraes
Estgio
Figura 6.25
Micrografias eletrnicas de varredura do teto da blastocele de Xenopus, mostrando as mudanas
na forma e arranjo das clulas. Os estgios 8 e 9 so de blstula; estgios 10-11.5 representam
gstrulas progressivamente mais avanadas. (de Keller, 1980, cortesias de R. E. Keller.)
Gastrulao em aves
Generalidades sobre gastrulao em aves
A clivagem em embrio de aves cria um blastodisco acima de um enorme volume de

vitelo. Essa massa subjacente e inerte de vitelo impe vrias restries aos movimen-
tos celulares, e a gastrulao em aves parece, primeira vista, ser muito diferente
daquela do ourio-do-mar ou da r. Realmente, logo veremos que existem numerosas
similaridades entre a gastrulao em aves e as gastrulaes que j estudamos. Alm
disso, veremos que embries de mamferos - que no tem vitelo- retm movimentos de
gastrulao muito parecidos com aqueles dos embries de aves e rpteis.
FORMAO DO HIPOBLASTO E EPIBLASTO. As clulas centrais do blastodisco

das aves so separadas do vitelo por uma cavidade subgerminativa e parecem mais
claras - por isso, o centro do blastodisco chamado de rea pelcida. Em contraste, as
clulas da margem da rea pelcida parecem opacas, devido a seu contato com o
vitelo, formam a rea opaca (Figura 6.26). Enquanto a maioria das clulas permanece na
superfcie formando o epiblasto, certas clulas migram individualmente para a cavida-
de subgerminativa, para formar as ilhas de polinvaginao (hipoblasto primrio), um
arquiplago de aglomerados desconectados contendo cada um de 5 a 20 clulas (veja
Figuras 6.26 e 5.33). Pouco tempo depois, uma lmina de clulas da margem posterior
do blastoderma (crescente de Koller e a zona marginal atrs dele) migra em direo
anterior para se juntar s ilhas de polinvaginao e formar o hipoblasto secundrio
(Eyal-Giladi et al.,1992). O blastoderma de duas camadas (epiblasto e hipoblasto) tem
as camadas unidas na margem da rea opaca, e o espao entre as camadas uma
blastocele. Assim, a estrutura do blastodisco das aves no diferente da blstula de
anfbios ou equinodermos.
Blastoderma
Anterior Epiblasto
Zona marginal
posterior
rea opaca
Espao subgerminativo Vitelo
Clulas do hipoblasto
delaminando-se do epiblasto
rea pelcida
Figura 6.26
Formao do blastoderma de duas camadas
do embrio da galinha. As primeiras clulas
hipoblsticas delaminam individualmente,
para formar ilhas de clulas sob o epiblasto.
rea opaca rea opaca
Clulas da margem posterior (clulas de foice
de Koller e clulas marginais posteriores) pro-
duzem uma populao de clulas que migra
Epiblasto
Blastocele abaixo do blastodisco e incorpora as ilhas
poli-invaginadas. Essa camada inferior torna-
se o hipoblasto. A camada superior o
epiblasto. medida que o hipoblasto se move
no sentido anterior, clulas do epiblasto se
Clulas do hipoblasto migrando de agregam na regio anterior foice de Koller
clulas profundas da regio posterior para formar a linha primitiva.
O mapa de destino para o embrio de aves restrito ao epiblasto. Ou seja, o

hipoblasto no contribui com clulas para o embrio em desenvolvimento (Rosenquist,
1966, 1972). Em lugar disso, as clulas do hipoblasto formam pores da membrana
externa, especialmente o saco vitelnico e o pednculo, que liga a massa do vitelo ao
tubo digestivo endodrmico. Todas as trs camadas germinativas do embrio propri-
amente dito (mais uma quantidade considervel de membrana extra-embrionria) so
formadas das clulas epiblsticas. Mapas de destino de epiblasto de galinha esto
representados na Figura 6.27. Esses mapas integram vrios tipos de mapeamento.
Corantes vitais e transplantes de clulas radioativas foram teis no mapeamento de
tendncias prioritrias, pois com esses mtodos se marcam grupos de clulas que se
difundem ao prosseguir o desenvolvimento. Transplantar clulas marcadas genetica-
mente, tais como clulas de codorna colocadas em embries de galinha, contornou o
problema de difuso, mas ainda assim marcava aglomerados relativamente grandes de
clulas. Recentemente, o uso de vrus ou corantes fluorescentes permitiu aos pesqui-
sadores acompanhar clulas individuais atravs do desenvolvimento (Schoenwolf,
1991). Como pode ser visto nessas figuras, existe uma significante extenso conver-
gente enquanto a linha primitiva progride anteriormente. Mesmo que clulas em uma
regio especfica da gstrula tendam a se transformarem em tipos especficos de clu-
las, elas ainda podem produzir diferentes tipos celulares se transplantadas a uma outra
regio do embrio.
FORMAO DA LINHA PRIMITIVA. A estrutura majoritria caracterstica da gas-

trulao em aves, rpteis e mamferos a linha primitiva. Essa linha visvel inicial-
mente como um espessamento de uma camada de clulas do epiblasto, na regio
posterior do embrio, imediatamente anterior ao crescente de Koller (Figura 6.27A).
Esse espessamento causado pelo ingresso de clulas mesodrmicas do epiblasto
para dentro da blastocele, e pela migrao de clulas da regio lateral do epiblasto
posterior em direo ao centro (Figura 6.27B; Vakaet, 1984; Bellairs, 1986; Eyal-Giladi
et al., 1992). medida que a rea espessada se estreita, ela se move anteriormente e
se contrai para formar a linha primitiva definitiva. Essa linha se estende em 60-75%
do comprimento da rea pelcida e marca o eixo ntero-posterior do embrio (Figura
6.27C-E). Enquanto as clulas convergem para formar a linha primitiva, se forma uma
depresso na linha. Essa depresso chamada fenda primitiva, e serve como um
blastporo, atravs do qual as clulas migratrias passam para a blastocele. Assim,
a fenda primitiva anloga ao blastporo de anfbios. Na ponta anterior da linha
primitiva h um espessamento regional de clulas chamado ndulo primitivo ou
ndulo de Hensen. O centro desse ndulo contm uma depresso em forma de funil
(algumas vezes chamada cova primitiva), atravs da qual as clulas passam para a
blastocele. O ndulo de Hensen o equivalente funcional do lbio dorsal do
blastporo de anfbios. [gast1.html]
To logo se forma a linha primitiva, as clulas do epiblasto comeam a migrar sobre
os lbios dessa e para dentro da blastocele (Figura 6.28). De maneira similar ao
blastporo de anfbios, a linha primitiva tem uma populao celular se modificando
constantemente. Clulas migrando atravs do ndulo de Hensen passam para dentro
da blastocele, migram anteriormente formando o intestino anterior, o mesoderma da
cabea e a notocorda; clulas passando atravs das pores laterais da linha primitiva
do origem maioria dos tecidos endodrmicos e mesodrmicos (Schoenwolf et al.,
1992). Em contraste com o mesoderma de Xenopus, o qual migra como lminas de
clulas para a blastocele, clulas entrando no embrio de aves o fazem individualmen-
te. Em lugar de formar uma lmina de clulas fortemente organizadas, a populao
ingressante cria um mesnquima fracamente conectado. Alm disso, no se forma um
verdadeiro arquntero na gstrula de aves.
Enquanto as clulas entram na linha primitiva, essa se estende na direo da futura
regio da cabea. Ao mesmo tempo, as clulas do hipoblasto secundrio esto conti-
nuando a migrar da margem posterior do blastoderma, na direo anterior. A elongao
(A) Anterior (B) (I) Endoderma
rea opaca Ectoderma

Mesoderma
Axial
Paraxial (vrtebras, rins, musculatura)
rea pelcida
Placa lateral (incluindo o corao)
rea de Extra-embrionria
Posterior engrossamento
(C) do blastoderma (D)
(J)
rea opaca
rea
pelcida
Figura 6.27
Linha primitiva
Movimentos celulares da linha primitiva do
tomando forma
embrio de galinha. (A-E) Viso dorsal da for-
(E) Anterior (F) (K) mao e alongamento da linha primitiva. O blas-
toderma visto em (A) 3-4 horas, (B) 5-6
Ndulo Processo
horas, (C) 7-8 horas, (D) 10-12 horas e (E) 15-
de Hensen ceflico
16 horas. O movimento precoce das clulas
rea epiblsticas HNK-1+ mostrado por flechas.
pelcida (F-H) A formao da notocorda e somitos
mesodrmicos medida que a linha primitiva
rea regride mostrada em (F) 19-22 horas, (G)
opaca Ndulo 23-24 horas e (H) no estgio de quatro somitos.
de Hensen (I-K) Mapas do destino do epiblasto em dois
estgios da gastrulao. Extenso convergente
Sulco primitivo mostrada na linha mediana, e as clulas pre-
Ectoderma da cursoras endodrmicas ingressam mais rapi-
(G) Borda anterior
do mesoderma dobra ceflica (H) damente que as clulas precursoras mesodr-
Dobra ceflica
micas. (Adaptado de vrias fontes, especial-
Intestino mente Spratt, 1946, e Balinsky, 1975; I-K se-
Dobra neural anterior gundo Vakaet, 1985.)
Somito
Notocorda
Ndulo Placa
de Hensen segmental
Linha primitiva
da linha primitiva parece ser coincidente com a migrao em direo anterior dessas
clulas do hipoblasto secundrio.
MIGRAO ATRAVS DA LINHA PRIMITIVA: FORMAO DO ENDODERMA E

MESODERMA. As primeiras clulas a migrarem atravs da linha primitiva so
aquelas destinadas a se transformarem no intestino anterior. Essa situao, novamen-
te, similar quela vista nos anfbios. Uma vez dentro da blastocele, essas clulas
migram anteriormente e finalmente deslocam as clulas do hipoblasto na poro ante-
rior do embrio. As clulas hipoblsticas esto confinadas a uma regio na poro
anterior da rea pelcida. Essa regio, o crescente germinativo, no forma estruturas
Figura 6.28 (A)

Migrao de clulas endodrmicas e mesodr-
micas atravs da linha primitiva. (A) Micro-
grafia eletrnica de varredura mostra clulas
epiblsticas passando para a blastocele, es-
tendendo seus terminais apicais para transfor-
marem em clulas garrafa. (B) Estereograma
de um embrio gastrulante de galinha, mos-
trando a relao da linha primitiva, das clulas
migratrias e das duas camadas originais do
blastoderma. A camada inferior se transforma
em um mosaico de clulas hipoblsticas e
endodrmicas; porm, as clulas hipoblsticas
finalmente se separam para formar uma cama-
da abaixo daquela do endoderma e contribuem
para o saco vitelnico. (A de Solursh e Revel,
1978, cortesia de M. Solursh; B segundo
Balinsky, 1975.)
Ndulo de Hensen
(B) Linha primitiva
Epiblasto
Blastocele
Hipoblasto
Endoderma
Clulas migratrias
(mesnquima)
embrionrias, mas contm os precursores das clulas germinativas, que mais tarde
migram atravs dos vasos sangneos at as gnadas. As prximas clulas que en-
tram na blastocele atravs do ndulo de Hensen (e o primeiro quarto anterior da linha
primitiva) tambm se movem anteriormente, mas no se movem to ventralmente como
as clulas presuntivas endodrmicas do intestino anterior. Essas clulas permanecem
entre o endoderma e o epiblasto para formar as clulas do mesoderma da cabea e do
cordomesoderma (notocorda) (veja Psychoyos e Stern, 1996). Essas clulas de ingres-
so precoce se moveram todas anteriormente, empurrando para cima a regio mediano-
anterior do hipoblasto, a fim de formar o processo ceflico (Figura 6.29). Enquanto
isso, as clulas continuam a migrar para dentro, atravs da poro lateral da linha
primitiva. Quando entram na blastocele, essas clulas se separam em duas correntes.
Uma corrente se move mais profundamente e encontra o hipoblasto em sua regio
mediana, deslocando as clulas hipoblsticas para os lados. Essas clulas de movi-
mento profundo do origem a todos os rgos endodrmicos do embrio, assim como
a maioria das membranas extra-embrionrias (o hipoblasto forma o restante). A segun-
da corrente migratria se espalha atravs da blastocele como uma camada frouxa, mais
ou menos a meio caminho entre o hipoblasto e o epiblasto. Essa camada origina as
pores mesodrmicas do embrio e das membranas extra-embrionrias. Aps 22 ho-
ras de incubao, a maior parte das clulas presuntivas endodrmicas esto no interi-
or do embrio, apesar das clulas presuntivas mesodrmicas continuarem a migrar
para o interior por um tempo mais longo.
Endoderma Ilhas
farngeo de sangue Dobra
ceflica
Processo ceflico Intestino anterior
(notocorda anterior)
Sulco neural
Ndulo de Somito
Hensen
Linha primitiva
rea
pelcida
Linha primitiva
rea opaca
(A) (B) (C)
Alongamento da notocorda
Linha de
referncia
Regr
es
da li s o
p r i m nha
itiva
Borda posterior da rea pelcida
Horas
(D) (E) Figura 6.29
Gastrulao do embrio de galinha de aproxi-
madamente 24 at perto de 28 horas. (A) A
Agora comea uma nova fase da gastrulao. Enquanto continua o ingresso do linha primitiva totalmente estendida (24 ho-
mesoderma, a linha primitiva comea a regredir, movendo o ndulo de Hensen de uma ras). O processo ceflico (notocorda anterior)
posio prxima do centro da rea pelcida, para uma posio mais posterior (veja pode ser visto estendendo-se a partir do n-
Figura 6.29). Ela deixa em seu lugar o eixo dorsal do embrio e o processo ceflico. Ao dulo de Hensen. (B) Estgio de dois somitos
mesmo tempo que o ndulo avana posteriormente, a poro remanescente (posteri- (25 horas). Anteriormente v-se o endoderma
or) da notocorda estabelecida. Finalmente, o ndulo regride para sua posio mais farngeo, enquanto a notocorda anterior em-
posterior, formando a regio anal. Nesse ponto, o epiblasto composto inteiramente purra para cima o processo ceflico que estava
de clulas ectodrmicas presuntivas. embaixo. A linha primitiva est regredindo. (C)
Estgio de quatro somitos (27 horas). (D) Aps
Como uma conseqncia desse processo de gastrulao em duas etapas, os em-
28 horas, a linha primitiva regrediu at a por-
bries de aves (e mamferos) exibem um distinto gradiente de maturidade de desenvol- o caudal do embrio. (E) Regresso da linha
vimento ntero-posterior. Enquanto clulas das pores posteriores do embrio esto primitiva, deixando a notocorda em seu rastro.
gastrulando, clulas da poro anterior j esto comeando a formar rgos. Pelos Vrios pontos da linha foram acompanhados
prximos dias, a ponta anterior estar mais avanada no seu desenvolvimento (pode- aps atingir seu comprimento mximo. O tem-
se dizer que teve uma vantagem inicial) do que a poro posterior. po representa as horas decorridas aps atingir
Enquanto as clulas presuntivas do mesoderma e do endoderma se moviam para o comprimento mximo em aproximadamente
dentro, os precursores ectodrmicos proliferavam para se tornar a nica populao de 18 horas. (Fotografias cortesia de K. Linask; E
clulas remanescente na camada superior. Ainda mais, clulas ectodrmicas migraram segundo Spratt, 1947.)
para fora do blastodisco para envolver o vitelo por epibolia. O enclausuramento do
vitelo (novamente reminiscente da epibolia do ectoderma de anfbios) uma tarefa de
Hrcules, que dura 4 dias para ser completada e envolve a produo contnua de novo
material celular e a migrao das clulas ectodrmicas presuntivas ao longo da super-

fcie inferior do envoltrio vitelnico. Assim, chegando ao fim da gastrulao em aves,
o ectoderma envolveu o vitelo, o endoderma substituiu o hipoblasto e o mesoderma
se posicionou entre essas duas regies.
Mecanismos de gastrulao em aves
O PAPEL DO HIPOBLASTO E A FORMAO DOS EIXOS EMBRIONRIOS. O

eixo dorso-ventral (costa-frente) crtico para a formao do hipoblasto e para o
contnuo desenvolvimento do embrio. Esse eixo estabelecido quando as clulas em
clivagem do blastoderma, produzem uma barreira entre a albumina bsica (pH 9.5)
acima do blastodisco e o espao subgerminativo cido (pH 6.5), abaixo do disco.
gua e ons de sdio so transportados da albumina atravs das clulas para dentro
do espao subgerminativo criando uma diferena de potencial de membrana de 25 mV
atravs da camada de clulas (positivo no lado ventral das clulas). Isso cria dois
lados para as clulas: um lado frente albumina negativa e bsica, e outro lado frente
ao fluido do espao subgerminativo positivo e cido. O lado frente albumina se torna
o dorsal, e aquele frente ao espao subgerminativo se torna o ventral. Isso pode ser
revertido ou invertendo o gradiente de pH ou invertendo a diferena de potencial
atravs da camada de clulas (reviso em Stern e Canning, 1988).
A converso de um blastoderma radialmente simtrico em uma estrutura simtrica
bilateral determinada pela gravidade. Enquanto o vulo rola oviduto abaixo, ele gira
a uma velocidade de 10 a 15 revolues por hora. O citoplasma que dever se tornar a
camada celular est sempre girando para baixo, mas deslocado para cima pelo vitelo
mais denso. Portanto, no est em cima do vitelo, mas um pouco deslocado para o
lado. A poro mais alta do blastodisco se transforma na ponta caudal (rabo) do
blastoderma, a parte onde comea a gastrulao (Kochav e Eyal-Giladi, 1971). Assim,
os eixos ntero-posterior e dorsolateral so determinados antes da gastrulao, en-
quanto o vulo est lentamente rolando oviduto abaixo.
O blastoderma do embrio de galinha age como um sistema nico integrado para
formar um nico embrio; se o blastoderma separado em partes, cada uma tendo
sua zona marginal, cada parte vai formar seu prprio embrio (Spratt e Haas, 1960).
O controle desse campo parece residir na zona marginal posterior, a regio onde
comea a formao do hipoblasto. Essas clulas marginais posteriores no s con-
tribuem com as clulas indutoras do hipoblasto, como tambm impedem que outras
regies marginais induzam seus hipoblastos. Khaner e Eyal-Giladi (1989) verificaram
que na transposio da zona marginal posterior para uma rea marginal lateral (Figu-
ra 6.30A), o rasgo posterior cicatriza e duas linhas primitivas aparecem. Similarmen-
te, se uma regio posterior reciprocamente transposta com uma regio lateral (Fi-
gura 6.30B), somente se forma uma linha primitiva e ela provm da regio posterior
original. Entretanto, se uma zona marginal posterior colocada em um embrio que
retm sua margem posterior original (Figura 6.30C), somente a margem posterior
original do hospedeiro forma o hipoblasto que est subjacente linha primitiva.
Khaner e Eyal-Giladi sugerem que as clulas da zona marginal formam um gradiente
de atividade cujo pico est na ponta posterior. As clulas posteriores formaro o
hipoblasto e, ao mesmo tempo, evitaro que qualquer clula, com menos atividade,
forme hipoblastos prprios.*
*Pesquisadores anteriores (Waddington, 1932; Azar e Eyal-Giladi, 1981) consideravam que o

hipoblasto induzia formao da linha primitiva e a contemplava com uma polaridade ntero-
posterior. Entretanto, Khaner (1995) girou o epiblasto com relao ao hipoblasto, em diferentes
estgios do desenvolvimento da galinha, e mostrou que o epiblasto inicia a formao da linha
primitiva e mantm sua polaridade independentemente da orientao do hipoblasto.
EXPERIMENTO RESULTADOS INTERPRETAO
(A)
Anterior
Zona marginal
rea
opaca
Epiblasto
Cicatriz
Posterior Linhas primitivas
(B)
(C)
Figura 6.30
Experimentos de Khaner e Eyal-Giladi de-
monstrando que a poro posterior da zona
ACUMULAO CELULAR NA LINHA PRIMITIVA. Evidncias dos estudos de marginal (PMZ) contribui para as clulas
Stern e Canning (1990) sugerem que o epiblasto no um tecido homogneo, no- indutoras da linha primitiva do hipoblasto e
diferenciado, como foi assumido por muito tempo. Pelo contrrio, parece haver dife- impedem outras regies marginais de criarem
renciao nas clulas epiblsticas mesmo antes que a formao da linha primitiva se seus prprios hipoblastos. (Segundo Khaner
inicie. Esses estudos mostram que certas clulas, dispersas ao acaso no epiblasto, e Eyal-Giladi, 1989.)
podem ser distinguidas por uma molcula especfica na superfcie celular (HNK-1,
uma forma sulfatada do cido glucurnico). As clulas expressando HNK-1 ingres-
sam individualmente na blastocele e migram para a regio posterior. provvel que
o tecido marginal posterior secrete uma substncia que atrai as clulas que expres-
sam HNK-1, enquanto o tecido marginal anterior secreta uma molcula repelente
(Jephcott e Stern, citado em Stern, 1991). As clulas expressando HNK-1, que se
juntam na margem posterior, produziro o endoderma e o mesoderma, e nenhuma
clula expressando HNK-1 formar derivados ectodrmicos. Se as clulas HNK-1
so seletivamente destrudas (por anticorpos), enquanto ainda esto no epiblasto,
o embrio no formar mesoderma nem endoderma. Essas clulas HNK-1 positivas
interagem com as clulas do epiblasto acima delas, para formar o rudimento inicial da
linha primitiva. Esse rudimento de linha sofre um processo de extenso convergente
que o estreita e alonga. Quando a linha chega ao seu comprimento quase total, as
clulas HNK-1 positivas dissolvem a lmina basal do epiblasto central para formar
uma canal atravs da linha primitiva. Isso permite que clulas do epiblasto (que
nunca expressaram HNK-1) sejam recrutadas para a linha que est se estendendo
anteriomente e, assim, contribuir (junto com as clulas HNK-1 positivas) para os
mesoderma e endoderma embrionrios.
Movimento dentro da blastocele amniota feito por clulas individuais, e no por
uma camada epitelial. Mas, como na gastrulao de anfbios, clulas de aves passan-
do pelo blastporo sofrem uma constrio no seu terminal apical e se tornam clulas
garrafa (Figura 6.28). Na ponta anterior do canal, ndulo de Hensen, a destruio da
lmina basal e a liberao dessas clulas do epiblasto pode ser realizada por uma
protena de 190-kDa chamada fator de espalhamento (Stern et al., 1990). O fator de
espalhamento secretado somente no ndulo de Hensen, e tem sido implicado na
dissociao de clulas nessa regio e na induo do tecido neural a partir do epiblas-
to, na vizinhana do ndulo (Streit et al., 1995). Quando se implantam resinas conten-
do o fator de espalhamento abaixo do epiblasto de embries de galinha, em gastrula-
o precoce, novas regies da linha primitiva podem ser induzidas. O fator de
espalhamento se liga a receptores tirosina quinase em clulas adjacentes, e agindo
atravs da cascata da protena G, fosforila as -cateninas que ancoram as E-caderinas
membrana celular (Hartmann et al., 1994). Na ausncia de E-caderina funcional, a
lmina epitelial se desmonta naquela regio e as clulas se tornam mesnquima. As
clulas, uma vez liberadas da linha primitiva, entram na blastocele, so achatadas e
passam a fazer parte de uma corrente de clulas migratrias independentes.
Polissacardeos extracelulares podem tambm ter um papel importante nessa migra-
o. Um desses complexos polissacardeos o cido hialurnico, um polmero linear
de cido glucurnico e N-acetilglicosamina (veja Figura 3.35). Esse composto produ-
zido pelas clulas ectodrmicas e se acumula na blastocele, onde reveste a superfcie
das clulas que esto chegando. Fisher e Solursh (1977) mostraram que quando esse
material digerido (injetando a enzima hialuronidase na blastocele), as clulas mesen-
quimatosas se aglomeram e no conseguem migrar adequadamente. Muito estudos
tm mostrado que o cido hialurnico importante para manter as clulas mesenqui-
matosas migratrias separadas umas das outras. Alm disso, o cido hialurnico co-
mea a se acumular precisamente no momento em que as primeiras clulas entram na
blastocele. O cido hialurnico capaz de manter as clulas separadas, provavelmen-
te devido a sua capacidade de se expandir em gua. Em ambiente aquoso, esse polmero
pode expandir em at 1000 vezes o seu volume original. Portanto, o cido hialurnico
pode ser um fator importante para manter as clulas mesenquimatosas dispersas du-
rante sua migrao, assegurando que a migrao continue.
cido hialurnico e outros polissacardeos facilitam a migrao de clulas indivi-
duais (veja Captulo 3), mas no parecem dirigir o movimento dessas clulas (Fisher e
Solursh, 1979). Na verdade, o movimento dessas clulas est ligado, mais uma vez,
presena de uma rede de fibronectina na lmina basal extracelular das clulas do
epiblasto. Essa camada rica em fibronectina aparece na superfcie inferior das clulas
da camada de cima, pouco antes da formao da linha primitiva e desaparece na regio
da linha. Dentro da linha, as clulas se separam e migram lateralmente ao longo da
membrana basal do epiblasto, rica em fibronectina (Duband e Thiery, 1982). No existe
evidncia clara de que essa fibronectina essencial para o direcionamento do movi-
mento celular que afasta as clulas lateralmente da linha primitiva.
FORMAO SECUNDRIA DA NOTOCORDA. Enquanto a poro anterior da

notocorda formada pelo ingresso de clulas atravs do ndulo de Hensen e a subse-
qente migrao anterior, a notocorda posterior formada de maneira diferente. Aps
o somito 17 (da galinha), a notocorda se forma pela condensao de tecido mesodrmico
que ingressou atravs da linha primitiva (isto , no atravs do ndulo de Hensen).
Isso se estende posteriormente para o broto da cauda do embrio (incluindo os
somitos 28-50) (Le Douarin et al., 1996).
EPIBOLIA DO ECTODERMA. Durante a gastrulao, as clulas precursoras do ecto-

derma se expandem externamente para envolver o vitelo. Essas clulas esto ligadas
entre si por ligaes firmes e migram como uma unidade, mas no individualmente.
Nas aves, a superfcie superior da rea opaca adere fortemente superfcie inferior do
envoltrio vitelnico e se espalha ao longo dessa superfcie interna. O mesmo compor-
tamento visto em cultura de clulas. New (1959) demonstrou que o blastoderma
isolado se estende normalmente sobre o envoltrio vitelnico isolado, e Spratt (1963)
demostrou que esse espalhamento no ocorre com outros substratos. Essas observa-
es sugerem que o envoltrio vitelnico essencial para a extenso da lmina celular.
interessante observar que somente as clulas marginais (isto , as clulas da rea
opaca) se ligam firmemente superfcie vitelnica. A maioria das clulas blastodrmicas
aderem frouxamente, quando o fazem. As clulas marginais so inerentemente diferen-
tes das outras clulas blastodrmicas, pois podem estender longos processos cito-
plasmticos (500m) em direo ao envoltrio vitelnico. Esses filopdios alongados
so considerados o aparelho locomotor das clulas marginais.
Existem vrias linhas de evidncia indicando que as clulas marginais da rea
opaca so os agentes da epibolia ectodrmica. Em primeiro lugar, o blastoderma se
espalha somente quando as margens esto se expandindo. Se as clulas marginais so
removidas, a epibolia do ectoderma cessa. Segundo, quando as clulas marginais so
isoladas do resto do blastoderma, elas continuam a migrar sozinhas. Assim, parece
que as clulas precursoras do ectoderma so levadas junto com as clulas ativamente
migratrias da rea opaca (Schlesinger, 1958). Existe tambm uma relao especfica
entre as membranas celulares das clulas marginais e a superfcie inferior da membrana
vitelnica. New (1959) mostrou que quando o blastoderma colocado sobre o envoltrio
vitelnico de forma invertida (camada profunda em contato com o envoltrio vitelnico),
as bordas do blastoderma se curvam para dentro de modo que as clulas marginais da
camada superior esto, mais uma vez, em contato com a superfcie vitelnica (Figura
6.31). Lash e seus colaboradores (1990) expandiram esses resultados mostrando que a
fibronectina est presente na superfcie interna do envoltrio vitelnico. Ento, como
no experimento discutido anteriormente, no qual Boucaut e colaboradores injetaram o
composto sinttico contendo a seqncia do stio de ligao fibronectina (RGD), na
blastocele de salamandra, Lash e colegas aplicaram a seqncia RGD ao envoltrio
vitelnico enquanto as clulas migravam sobre ele. Esse tratamento quebrou especifi-
camente o contato entre as clulas marginais e o envoltrio vitelnico, causou retrao
dos filopdios das clulas marginais e parou a migrao do blastoderma.
Identificamos muitos dos processos envolvidos na gastrulao de aves, mas ig-
noramos como esses processos so realizados; no sabemos ainda como se forma a
cavidade subgerminativa, como certas clulas so destinadas a se tornarem clulas do
hipoblasto, como certas clulas expressam HNK-1, enquanto suas vizinhas no o
fazem, como clulas expressando HNK-1 migram para a margem posterior e como l
interagem com as clulas do epiblasto, como a linha primitiva se estende e se retrai, ou
como as clulas so designadas aos seus respectivos destinos. Recentemente, Gary
Figura 6.31
Propriedades migratrias dos precursores
ectodrmicos de galinha. (A) Quando um blas-
toderma de galinha colocado no envoltrio
vitelnico, com os precursores em contato com
Endoderma a superfcie vitelnica, as clulas marginais mi-
Presuntivo Ectoderma gram e cobrem o envoltrio vitelnico com ec-
(camada Presuntivo toderma. (B) Quando as camadas profundas
profundas) Envoltrio Vitelnico so colocadas em contato com o envoltrio
vitelnico, a camada blastodrmica se enrola
(A) para permitir que as clulas da camada super-
ficial possam aderir e migrar sobre a camada
(B) vitelnica. O resultado uma vescula fechada.
(Segundo New, 1959.)
Schoenwolf (1991) comentou: A despeito de tudo que foi escrito, certo dizer que o
que sabemos sobre gastrulao e neurulao em aves consideravelmente menos do
que ainda resta conhecer.
Gastrulao em mamferos
Aves e mamferos so descendentes de espcies de rpteis. Portanto, no sur-
preendente que o desenvolvimento de mamferos se d paralelamente ao dos rp-
teis e aves. O que surpreendente que os movimentos de gastrulao de embri-
es de rpteis e aves, que evoluram como uma adaptao a ovos com vitelo, so
mantidos mesmo na ausncia de grandes quantidades de vitelo no embrio mam-
fero. A massa celular interna nos mamferos pode ser visualizada como assentada
sobre uma bola imaginria de vitelo, seguindo instrues que parecem mais apro-
priadas a seus ancestrais.
Modificaes para desenvolvimento dentro de outro organismo

Em lugar de desenvolver-se isoladamente dentro do ovo, a maioria dos mamferos
evoluiu para uma admirvel estratgia de desenvolvimento dentro da prpria me.
O embrio mamfero obtm seus nutrientes diretamente da me e no depende de
vitelo armazenado. Essa evoluo ensejou uma dramtica reestruturao da ana-
tomia materna (tal como a expanso do oviduto para formar o tero) como tam-
bm o desenvolvimento de um rgo fetal capaz de absorver os nutrientes ma-
ternos. Esse rgo fetal -a placenta- derivado primariamente de clulas
trofoblsticas embrionrias, suplementado por clulas mesodrmicas derivadas
da massa celular interna.
TECIDOS
EMBRIONRIOS
Ectoderma
embrionrio
Epiblasto Mesoderma
embrionrio embrionrio
Epiblasto Linha primitiva
Massa celular Ectoderma Endoderma

interna amnitico amnitico
Endoderma Envoltrio Mesoderma

Hipoblasto
extra-embrionrio vitelnico extra-embrionrio
Blastocisto
TECIDOS
EXTRA-EMBRIONRIOS
Trofoblasto Citrofoblasto Sinciciotrofoblasto
Figura 6.32
Diagrama esquemtico mostrando a derivao de tecidos de embries humanos e do macaco
rhesus. (Segundo Luckett, 1978, e Bianchi et al., 1993.)
(A) Blastocisto, 7 dias (B) 8 dias

Revestimento uterino
Capilar maternal
Epitlio uterino
(endomtrio) Sinciciotrofoblasto
proliferando no
tecido uterino
Massa celular interna
Blastocele
Trofoblasto
Epiblasto
Cavidade amnitica Blastocele

Trofoblasto
(C) 9 dias Lacunas (D) 10-11 dias
trofoblsticas
Cavidade
amnitica
Lacunas
trofoblsticas
(suprimento de
sangue materno)
Epiblasto Sinciciotrofoblasto Retculo

Formao de
Hipoblasto mesoderma extra- extra-embrionrio
Blastocele
Cavidade embrionrio
Trofoblasto
Amnitica
Figura 6.33
Formao de tecido no embrio humano entre 7 e 12 dias. (A,B) Blastocisto humano imediata-
mente antes da gastrulao. A massa celular interna delaminam clulas hipoblsticas que forram
o trofoblasto, formando, com isso, o envoltrio vitelnico primitivo e um blastodisco de duas
camadas (epiblasto e hipoblasto), semelhante aquele visto em embries de aves. O trofoblasto
em alguns mamferos pode ser dividido em trofoblasto polar, que cobre a massa de clulas
internas, e o trofoblasto mural, que no o faz. O trofoblasto se divide no citotrofoblasto que
forma as vilosidades, e o sinciciotrofoblasto que ir ingressar no tecido uterino. (C) Ao mesmo
tempo o epiblasto se divide em ectoderma amnitico (que rodeia a cavidade amnitica) e epiblasto
embrionrio. O mamfero adulto se forma das clulas do epiblasto embrionrio. (D) O endoderma
extra-embrionrio forma o saco vitelnico. (Segundo Gilbert, 1989, e Larsen, 1993.)
As origens dos tecidos mamferos precoces esto sumariadas na Figura 6.32. A

primeira segregao de clulas dentro da massa celular interna envolve a formao do
hipoblasto (algumas vezes chamado endoderma primitivo) (Figura 6.33). Essas clulas
se separam da massa celular interna para revestir a cavidade da blastocele onde elas
originam a endoderme do saco vitelnico. Como em embries de aves, essas clulas no
produzem partes do organismo neonato. O tecido da massa celular interna remanescen-
te, acima do hipoblasto, agora chamado de epiblasto. As clulas do epiblasto so sepa-
radas por pequenas fendas que coalescem para separar o epiblasto embrionrio das outras
clulas do epiblasto, as quais formam o revestimento do mnio (Figuras 6.33C e 6.34). Uma
Figura 6.34 (A)

Estrutura do mnio e movimentos celulares
durante a gastrulao humana. (A) Embrio Sinciciotrofoblasto
humano e conexes uterinas aps 15 dias de
gestao. Na representao superior, o embrio Mesoderma
Extra-embrionrio Disco germinativo
foi cortado sagitalmente atravs da linha medi- bilaminar
ana; a representao inferior olha de cima para
baixo sobre a superfcie dorsal do embrio. (B)
Os movimentos das clulas epiblsticas para Cavidade amnitica
dentro da linha primitiva e o ndulo de Hensen, Epiblasto
e por baixo do epiblasto esto sobrepostas na Sulco primitivo
viso da superfcie dorsal. Aos dias 14 e 15, o
epiblasto ingressante considerado substituir Hipoblasto
as clulas hipoblsticas (que contribuem ao Saco vitelnico
forro do saco vitelnico), enquanto no dia 16,
as clulas ingressantes se espalham como um
leque para formar a camada mesodrmica. (Se-
gundo Larsen, 1993.).
(B)
14-15 dias
Cavidade Sulco
amnitica Primitivo
Ndulo de
Sulco Hensen
Epiblasto
primitivo
Hipoblasto Endoderma
16 dias
Saco
vitelnico
Mesoderma Endoderma
Mesoderma
extra-embrionrio
vez completado o revestimento do mnio, ele se enche com uma secreo chamada
fluido amnitico, que serve como absorvente de choques para o embrio em desen-
volvimento, enquanto impede a sua dessecao.
O epiblasto embrionrio parece conter todas as clulas que vo dar origem ao
prprio embrio e , de muitas maneiras, semelhante ao epiblasto de ave. Kirstie Lawson
e seus colegas (1991) marcaram clulas individuais do epiblasto com peroxidase de
rabanete (horseradish) o que lhes permitiu construir um detalhado mapa de destino do
epiblasto de camundongo (Figura 6.35). Como as clulas do epiblasto de galinha, o
mesoderma e o endoderma de mamfero migram atravs da linha primitiva. Enquanto
penetram a linha, as clulas do epiblasto deixam de expressar E-caderina, que mantm
as clulas unidas, e elas migram como clulas individuais (Burdsal et al., 1993). As
clulas migrando atravs do ndulo de Hensen do origem notocorda. Na formao
da notocorda do camundongo, as clulas devem se integrar no endoderma do intesti-
no primitivo, portanto, de maneira diferente da formao da notocorda da galinha
(Jurand, 1974; Sulik et al., 1994). Essas clulas podem ser vistas como uma banda de
clulas pequenas e ciliadas se estendendo para cima do ndulo de Hensen (Figura
6.36). Elas formam a notocorda convergindo mediamente e se dobrando em uma dire-
o dorsal com afastamento do teto do intestino.
Figura 6.35 (A) Cone ectoplacentrio

Mapa do destino do embrio do camundongo. (A) O estgio do ovo cilndrico, 6 dias aps a do trofoblasto
fertilizao. Notar que ao contrrio dos epiblastos da galinha e humano, o epiblasto do camun- Cavidade amnitica
dongo firmemente curvado. Os endodermas parietal e visceral so derivados do hipoblasto,
no do trofectoderma. (B) Mapa do destino de um epiblasto de 7 dias na gastrulao precoce. (O
mapa do destino do camundongo foi achatado e deve ser visto como enrolado para cima com a Epiblasto
linha primitiva nas bordas.) (Segundo Lawson et al., 1991.)
tero
Endoderma
visceral
Os precursores ectodrmicos esto localizados anteriormente linha primitiva Endoderma parietal
completamente estendida, posio similar que ocupam no epiblasto de galinha; mas
Saco vitelnico
enquanto o mesoderma de galinha se forma de clulas posteriores ao fim da linha, o
mesoderma de camundongos se forma de clulas anteriores linha primitiva. Em al- Trofoblasto
guns casos, clones de clulas do origem a descendentes em mais de uma camada
embrionria ou para ambos os derivados, embrionrio e extra-embrionrio. Assim, no
estgio de epiblasto, as linhagens no se separaram umas das outras. Como nos
embries de aves, as clulas migrando entre as camadas de hipoblasto e epiblasto (B)
Anterior mnio
parecem estar envolvidas em cido hialurnico cuja sntese se inicia durante a forma-
o da linha primitiva (Solursh e Morriss, 1977). Considera-se (Larsen, 1993) que a Ectoderma
substituio das clulas hipoblsticas pelos precursores endodrmicos ocorre nos Mesoderma
dias 14-15 da gestao, enquanto que a migrao de clulas formando o mesoderma Endoderma
no comea antes do dia 16. Notocorda
Mesoderma
Formao de membranas extra-embrionrias extra-embrionrio
Enquanto o epiblasto embrionrio est apresentando movimentos celulares Posterior Linha primitiva
reminiscentes daqueles vistos na gastrulao de rpteis e aves, as clulas extra-embri-
onrias esto produzindo os tecidos distintivos dos mamferos que permitem ao feto
sobreviver dentro do tero materno. Apesar da aparncia normal das clulas
trofoblsticas iniciais no camundongo e no homem, elas do origem a uma populao
de clulas onde a diviso nuclear se d em ausncia de citocinese. O tipo inicial de
clula trofoblstica constitui uma camada chamada citotrofoblasto, enquanto que o
tipo de clula multinucleada forma o sinciciotrofoblasto. O citotrofoblasto adere
parede uterina (endomtrio) atravs de uma srie de molculas de adeso que foram
discutidas no Captulo 3. As clulas citotrofoblsticas humanas tambm contm enzimas
proteolticas que lhes permitem entrar no tero e remodelar os vasos sangneos
uterinos, de modo que o sangue materno possa banhar os vasos sangneos fetais. O
Tubo neural
presuntivo
Mesnquima
Endoderma
Notocorda
presuntiva
Figura 6.36
Formao da notocorda no camundongo. (A)
A superfcie ventral do embrio de 7.5 dias
vista pelo microscpio eletrnico de varredu-
Tubo neural ra. As clulas presuntivas da notocorda so
pequenas clulas ciliadas na linha mediana,
flanqueadas pelas clulas endodrmicas maio-
Notocorda res do intestino primitivo. (B) Formao da
notocorda pela dobra dorsal das pequenas c-
lulas ciliadas. (de Sulik et al., 1994, cortesia de
(A) (B) K. Sulik e G. C. Schoewolf.)
tecido do sinciciotrofoblasto parece promover a progresso do embrio para dentro

do tero. A atividade proteoltica cessa aps a dcima segunda semana de gestao
(Fisher et al., 1989). O tero, por sua vez, supre essa rea com vasos sangneos
que, por fim, entram em contato com o sinciciotrofoblasto. Pouco depois, o tecido
mesodrmico se estende para fora do embrio em gastrulao (veja Figura 6.33).
Estudos recentes com embries humanos e de macaco rhesus sugerem que o saco
vitelnico (e portanto o hipoblasto) a fonte desse mesoderma extra-embrionrio
(Bianchi et al., 1993), que se junta s extenses trofoblsticas e d origem aos vasos
sangneos que levam nutrientes da me para o embrio. O estreito pednculo de
conexo do mesoderma extra-embrionrio que liga o embrio ao trofoblasto forma os
vasos do cordo umbilical. O rgo completamente desenvolvido, consistindo de
tecido trofoblstico e mesoderma contendo vasos sangneos, chamado crio e
esse se funde com a parede uterina para formar a placenta. Assim, a placenta tem
uma poro materna (o endomtrio uterino que modificado durante a gravidez) e
um componente fetal, o crio. Esse pode estar fortemente justaposto ao tecido
materno, mas ainda passvel de separao (como na placenta de contato no porco),
ou to intimamente integrado que os dois tecidos no podem ser separados sem
causar dano para a me e para o feto em desenvolvimento (como na placenta decdua
da maioria dos mamferos, incluindo o homem).* [gast2.html]
A Figura 6.37 mostra as relaes entre os tecidos embrionrios e extra-embrionri-
os de embrio humano de 6 semanas. O embrio encontra-se envolvido pelo mnio e
protegido pelo crio. Os vasos sangneos se estendendo do crio ao embrio e
desse ao crio so facilmente observados, como tambm as vilosidades que se proje-
tam da superfcie externa do crio. Essas vilosidades contm os vasos sangneos e
*Existem numerosos tipos de placenta, e as membranas extra-embrionrias se formam de

maneira diferente nas diferentes ordens de mamferos (veja Cruz e Pedersen, 1991). Mesmo que o
camundongo e o homem gastrulam e implantam da mesma maneira, suas estruturas extra-embrio-
nrias so distintas. muito arriscado extrapolar fenmenos de desenvolvimento de um grupo de
mamferos para outro. At Leonardo da Vinci errou (Renfree, 1982). Seu extraordinrio desenho do
feto humano dentro da placenta excelente arte, mas pobre cincia: a placenta de vaca.
Figura 6.37
Embrio humano e placenta aps 40 dias de gestao. O embrio est deitado
dentro do mnio, e seus vasos sangneos podem ser vistos estendendo-se para
dentro das vilosidades corinicas. A esfera direita do embrio o saco vitelnico.
(Instituto Carnegie de Washington, cortesia de C. F. Reather.)
Para o feto Figura 6.38

Relao entre as vilosidades corinicas e o sangue materno no tero.
Do feto Do feto
Artrias umbilicais
Veia umbilical
mnio
Vilosidades
corinicas
Crio (poro fetal da placenta)
Clulas trofoblsticas
Poro maternal da placenta (clulas deciduais)
Para a me Veia maternal

Da me Artria maternal
permitem ao crio ampliar a rea exposta ao sangue materno. Assim, apesar de no

haver fuso dos sistemas circulatrios materno e fetal, a difuso de substncias sol-
veis pode ocorrer atravs das vilosidades (Figura 6.38). Dessa maneira, a me propor-
ciona nutrientes e oxignio ao feto, e o feto envia seus produtos descartveis (princi-
palmente dixido de carbono e uria) para a circulao materna. Os vasos sangneos
das vilosidades corinicas so formados do mesoderma extra-embrionrio que pene-
tra nos pequenos montes de tecido citotrofoblstico chamados vilosidades primrias
(Figura 6.39). As estruturas resultantes, as vilosidades secundrias, se formam na
segunda semana de gestao. No fim da terceira semana, uma parte desse mesoderma
extra-embrionrio produziu vasos sangneos, e essas vilosidades tercirias esto
aptas a trazer nutrientes e oxignio da me para o embrio. [other.html#gast4]
O trofoblasto necessrio para a aderncia e entrada do embrio nos tecidos
uterinos, e o crio permite troca de gases e nutrientes entre a me e o feto. Mas o
crio tem uma importncia at maior; tambm um rgo endcrino. A poro
sinciciotrofoblstica do crio produz trs hormnios essenciais para o desenvol-
vimento dos mamferos. Primeiro, ele produz a gonadotrofina corinica, um horm-
nio peptdico que capaz de induzir outras clulas da placenta (e do ovrio mater-
no) a produzir progesterona. A progesterona o hormnio esteride que mantm
a parede uterina espessada e cheia de vasos sangneos. Nos primatas, os ovri-
os podem ser removidos depois do primeiro tero da gravidez, sem danos para o
desenvolvimento do feto, porque o crio tem capacidade para produzir os
esterides necessrios para manter a gestao (Zander e von Mnstermann, 1956).
A progesterona placentria tambm usada pela glndula supra-renal fetal como
um substrato para a produo de hormnios corticosterides biologicamente
(A) Vilosidade primria (B) Vilosidade secundria (C) Vilosidade terciria
Endomtrio Endomtrio
Espao entre
Casca
vilosidades
citotrofoblstica
Sinciciotrofoblasto
Sinciciotrofoblasto
Citotrofoblasto
Espao entre
Mesoderma extra- vilosidades
embrionrio Citotrofoblasto
Capilares das
vilosidades
Figura 6.39 Mesoderma

Desenvolvimento das vilosidades corinicas extra-embrionrio
em humanos. (A) Vilosidade primria compos-
ta de tecido citotrofoblstico encaixado no
sinciciotrofoblasto. (B) Vilosidade secundria
formada quando o mesoderma extra-embrio-
nrio subjacente penetra na vilosidade prim-
importantes. O terceiro hormnio produzido pelo crio a somatomamotropina
ria. Tais vilosidades secundrias juntam-se s corinica (freqentemente chamada lactognio placentrio). Esse hormnio res-
vilosidades adjacentes para formar a casca ponsvel pelo desenvolvimento do seio materno durante a gestao, assim, per-
citotrofoblstica que ir ancorar as vilosidades mitindo a produo de leite mais tarde.
ao endomtrio. (C) dentro do mesoderma ex- Estudos recentes indicam que o crio pode ter ainda outra funo, que a de
tra-embrionrio, formam-se capilares que iro proteger o feto da resposta imune da me. Uma pessoa com um sistema imune normal
se conectar aos ramos da artria e veia umbili- reconhece e rejeita clulas estranhas dentro do seu corpo; esse fato demonstrado
cais. (Segundo Gilbert, 1989.) pela rejeio a transplantes de pele e de rgos de indivduos geneticamente diferen-
tes. As glicoprotenas responsveis por essa rejeio so chamadas de antgenos de
histocompatibilidade principais e, provavelmente, diferem de indivduo a indivduo.
Uma criana expressa antgenos de histocompatibilidade principais de ambos, o pai e
a me, e o corpo da me rejeitar a pele ou rgos de seus descendentes porque eles
contm antgenos derivados do pai. Como ento, pode o feto humano permanecer 9
meses dentro do corpo da me? Porque a me no rejeita imunologicamente o seu feto,
como ela rejeitaria um rgo daquela criana? Parece que o crio desenvolveu vrios
mecanismos pelos quais ele pode inibir a resposta imune contra o feto (Chaouat,
1990). Ele pode secretar protenas solveis que bloqueiam a produo de anticorpos,
e pode promover a produo de certos tipos de linfcitos que impedem a resposta
imune normal dentro do tero. As clulas citotrofoblsticas tambm contm uma for-
ma de antgeno de histocompatibilidade principal, especfico da placenta, que parece
proteger o embrio de ser reconhecido pelo sistema imune da me (Carosella et al.,
1996; Pazmany et al., 1996). Assim, as funes da placenta incluem no s suporte
fsico e troca nutricional, mas tambm a regulao das relaes endcrinas e
imunolgicas entre a me e o feto. [gast3.html]
Na gastrulao, observamos uma srie incrivelmente bem coordenada de movi-
mentos celulares pelos quais os blastmeros do estgio de clivagem so rearranjados
e comeam a interagir com seus vizinhos. Alm disso, apesar de haver diferenas entre
os movimentos na gastrulao de embries de ourio-do-mar, anfbios, aves e mamfe-
ros, certos mecanismos so comuns a todos. Cada grupo tem o problema de trazer as
clulas precursoras do mesoderma e do endoderma para dentro do corpo, e envolver
o embrio com precursores ectodrmicos. Dadas as diferentes quantidades e distri-
buies de vitelo, como tambm outras consideraes ambientais, cada tipo de orga-
nismo foi capaz de desenvolver uma maneira de conseguir esse objetivo. O palco est,
agora, pronto para a formao dos primeiros rgos.
LITERATURA CITADA
Alfandari, D., Whittaker, C.A., DeSimone, D. Bursdal, C. A., Damsky, C. H. and Pedersen, R. Ettensohn, C. A. and McClay, D. R. 1986.
W. and Darribre, T. 1995. Integrin av subunit is A. 1993. The role of E-cadherin and integrins The regulation of primary mesenchyme cell
expressed on mesodermal cell surfaces during in mesoderm differentiation and migration at migration in the sea urchin embryo: Trans-
amphibian gastrulation. Dev. Biol. 170: 249-261. the mammalian primitive streak. Development plantations of cells and latex beads. Dev. Biol.
Anstrom, J. A., Chin, J. E., Leaf, D. S., Parks, A. 118: 829-844. 117: 380-391.
L. and Raff, R. A. 1987. Localization and Carosella, E.D., Dausset, J. and Kirszenbaum, Eyal-Giladi, H., Debby, A. and Harel, N. 1992.
expression of msp130, a primary mesenchyme M. 1996. HLA-G revisited. Immunol. Today 17: The posterior section of the chicks area
lineage-specific cell surface protein of the sea 407-409. pellucida and its involvement in hypoblast and
urchin embryo. Development 101: 255-265. primitive streak formation. Development 116:
Chaouat, G. 1990. The Immunology of the Fetus.
Azar, Y. and Eyal-Giladi, H. 1981. Interaction 819-830.
CRC Press, Boca Raton, FL.
of epiblast and hypoblast in the formation of Fink, R. D. and McClay, D. R. 1985. Three cell
the primitive streak and the embryonic axis in Cherr, G. N., Summers, R. G., Baldwin, J. D. and
recognition changes accompany the ingression
chick, as revealed by hypoblast rotation Morrill, J. B. 1992. Preservation and visualization
of sea urchin primary mesenchyme cells. Dev.
experiments. J. Embryol. Exp. Morphol. 61: of the sea urchin blastocoelic extracellular matrix.
Biol. 107: 66-74.
133-141. Microsc. Res. Tech. 22: 11-22.
Fisher, M. and Solursh, M. 1977. Glycosamino-
Balinsky, B. I. 1975. Introduction to Embryolo- Cooke, J. 1986. Permanent distortion of
glycan localization and role in maintenance of
gy, 4th Ed. Saunders, Philadelphia. positional system of Xenopus embryo by brief
tissue spaces in the early chick embryo. J.
early perturbation in gravity. Nature 319: 60-63.
Bellairs, R. 1986. The primitive streak. Anat. Embryol. Exp. Morphol. 42: 195-207.
Embryol. 174: 1-14. Cruz, Y. P. and Pedersen, R. A. 1991. Origin of
Fisher, M. and Solursh, M. 1979. Influence of
Berg, L. K., Chen, S. W. and Wessel, G. M. 1996. embryonic and extraembryonic cell lineages in
local environment on the organization of
An extracellular matrix molecule that is mammalian embryos. In Animal Applications
mesenchymel cells. J. Embryol. Exp. Morphol.
selectively expressed during development is of Research in Mammalian Development. Cold
49: 295-306.
important for gastrulation in the sea urchin Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, pp.
embryo. Development 122: 703-713. 147-204. Fisher, S. J., Cui, T.-Y, Zhang, L., Grahl, K.,
Guo-Yang, Z., Tarpey, J. and Damsky, C. H.
Bianchi, D. W., Wilkins-Haug, L. E., Enders, A. Dan, K. and Okazaki, K. 1956. Cyto-embryolo-
1989. Adhesive and dlegradative properties of
C. and Hay, E. D. 1993. Origin of extraembryo- gical studies of sea urchins. III. Role of secondary
the human placental cytotrophoblast cells in
nic mesoderm in experimental animals: Relevance mesenchyme cells in the formation of the
vitro. J. Cell Biol. 109: 891-902.
to chorionic mosaicism in humans. Am. J. Med. primitive gut in sea urchin larvae. Biol. Bull.
Genet. 46: 542-550. 110: 29-42. Galileo, D. S. and Morrill, J. B. 1985. Patterns
of cells and extracellular material of the sea
Bisgrove, B. W., Andrews, M. E. and Raff, R. A. DArribre, T., Yamada, K. M., Johnson, K. E.
urchin Lytechinus variegatus (Echinoderma-
1991. Fibropellins, products of an EGF repeat- and Boucaut, J.-C. 1988. The 140-kD fibronec-
ta; Echinoidea) embryo, from hatched
containing gene, form a unique extracellular tin receptor complex is required for mesodermal
blastula to late gastrula. J. Morphol. 185:
matrix structure that surrounds the sea urchin cell adhesion during gastrulation in the amphibian
387-402.
embryo. Dev. Biol. 146: 89-99. Pleurodeles waltii. Dev. Biol. 126: 182-194.
Gerhart, J., Ubbels, G., Black, S., Hara, K. and
Black, S. D. and Gerhart, J. 1985. Experimental DArribre, T., Guida, K., Larjava, H., Johnson,
Kirschner, M. 1981. A reinvestigation of the
control of the site of embryonic axis formation K. E., Yamada, K. M., Thiery, J.-P. and Bou-
role of the grey crescent in axis formation in
in Xenopus laevis eggs centrifuged before first caut, J.-C. 1990. In vivo analysis of integrin 1
Xenopus laevis. Nature 292: 511-516.
cleavage. Dev. Biol. 108: 310-324. subunit function in fibronectin matrix assembly.
J. Cell Biol. 110: 1813-1823. Gerhart, J. and seven others. 1986. Amphibian
Black, S. D. and Gerhart, J. 1986. High frequency
twinning of Xenopus laevis embryos from eggs early development. BioScience 36: 541-549.
Delarue, M., DArribre, T., Aimar, C. and Bou-
centrifuged before first cleavage. Dev. Biol. 116: caut, J.-C. 1985. Bufonid nucleocytoplasmic Gilbert, S. G. 1989. Pictorial Human Embryolo-
228-240. hybrids arrested at the early gastrula stage lack gy. University of Washington Press, Seattle.
a fibronectin-containing fibrillar extracellular
Boucaut, J.-C., DArribre, T., Poole, T. J., Gimlich, R. L. and Gerhart, J. C. 1984. Early
matrix. Wilhelm Roux Arch. Dev. Biol. 194:
Aoyama, H., Yamada, K. M. and Thiery, J. P. cellular interactions promote embryonic axis
275-280.
1984. Biologically active synthetic peptides as formation in Xenopus laevis. Dev. Biol. 104:
probes of embryonic development: A competi- Driever, W. 1995. Axis formation in zebrafish. 117-130.
tive peptide inhibition of fibronectin function Curr. Opin. Genet. Dev. 5: 610-618.
inhibits gastrulation in amphibian embryos and Gustafson, T. and Wolpert, L. 1961. Studies on
neural crest cell migration in avian embryos. J. Duband, J. L. and Thiery, J. P. 1982. Appearance the cellular basis of morphogenesis in sea urchin
Cell Biol. 99: 1822-1830. and distribution of fibronectin during chick embryos: Directed movements of primary me-
embryo gastrulation and neurulation. Dev. Biol, senchyme cells in normal and vegetalized larvae.
Boucaut, J.-C., DArribre, T., Li, S. D, 94: 337-350. Exp. Cell Res. 24: 64-79.
Boulekbache, H., Yamada, K. M. Q Thiery, J. P.
1985. Evidence for the role of fibronectin in Ettensohn, C. A. 1985. Gastrulation in the sea Gustafson, T. and Wolpert, L. 1967. Cellular
amphibian gastrulation. J. Embryol. Exper. urchin embryo is accompanied by the rearran- movement and contact in sea urchin morpho-
Morphol. 89 [Suppl.]: 211-227. gement of invaginating epithelial cells. Dev, Biol. genesis. Biol. Rev. 42: 442-498.
112: 383-390.
Burke, R. D., Myers, R. L., Sexton, T. L. and Hall, H. G. and Vacquier, V. D. 1982. The apical
Jackson, C. 1991 Cell movements during the Ettensohn, C. A. 1990. The regulation of lamina of the sea urchin embryo: Major glyco-
initial phase of gastrulation in the sea urchin primary mesenchyme cell patterning. Dev. Biol. protein associated with the hyaline layer. Dev.
embryo. Dev. Biol. 146: 542-557. 140: 261-271. Biol. 89: 168-178.
Hardin, J. 1988. The role of secondary mesen- cells and their role in directed migration of the Langeland, J. and Kimmel, C. B. 1997. The
chyme cells during sea urchin gastrulation primary mesenchyme in vitro. Dev. Biol. 112: embryology of fish. In Gilbert, S. F. and Raunio,
studied by laser ablation. Development 103: 276-283. A. M. (eds.), Embryology: Constructing the
317-324. Organism. Sinauer Associates, Sunderland, MA.
Keller, R. E. 1975. Vital dye mapping of the
Hardin, J. 1990. Context-dependent cell gastrula and neurola of Xenopus laevis. I. Larsen, W. J. 1993. Human Embryology.
behaviors during gastrulation. Semin. Dev. Biol. Prospective areas and morphogenetic movements Churchill Livingston, New York.
1: 335-345. of the superficial layer. Dev. Biol. 42: 222-241.
Lash, J. W., Gosfield, E, III, Ostrovsky, D. and
Hardin, J. D. and Cheng, L. Y. 1986. The Keller, R, E. 1976. Vital dye mapping of the Bellairs, R. 1990. Migration of chick blastoderm
mechanisms and mechanics of archenteron gastrula and neurula of Xenopus laevis. I. under the vitelline membrane: The role of fi-
elongation during sea urchin gastrulation. Dev. Prospective areas and morphogenetic move- bronectin. Dev. Biol. 139: 407-416.
Biol. 115: 490-501. ments in the deep layer. Dev. Biol. 51: 118-137.
Lawson, K. A., Meneses, J. J. and Pedersen, R.
Hardin, J. D. and Keller, R. 1988. The behaviour Keller, R. E. 1980. The cellular basis of epiboly: A. 1991. Clonal analysis of epiblast fate during
and function of bottle cells during gastrulation An SEM study of deep cell rearrangement du- germ layer formation in the mouse embryo.
of Xenopus laevis. Development 103: 211-230. ring gastrulation of Xenopus laevis. J. Embryol, Development 113: 891-911.
Exp. Morphol. 60: 201-243. Le Douarin, N., Grapin-Botton, A. and Catala,
Hardin, J. and McClay, D. R. 1990. Target re-
cognition by the archenteron during sea urchin Keller, R. E. 1981. An experimental analysis of M. 1996. Patterning of the neural primordium in
gastrulation. Dev. Biol. 142: 87-105. the role of bottle cells and the deep marginal the avian embryo. Semin. Dev. Biol. 7: 157-167.
zone in the gastrulation of Xenopus laevis. J. Lillie, F. R. 1902. Differentiation without
Harkey, M. A. and Whiteley, A. M. 1980.
Exp. Zool. 216: 81-101. cleavage in the egg of the annelid Chaetopterus
Isolation, culture and differentiation of echinoid
primary mesenchyme cells. Wilhelm Roux Arch. Keller, R. E. 1986. The cellular basis of amphibian pergamentaceous. Wilhelm Roux Arch. Entwi-
Dev. Biol. 189: 111-122. gastrulation. In L. Browder (ed.), Developmental cklungsmech. Org. 14: 477-499.
Biology: A Comprehensive Synthesis, Vol. 2. Lvtrup, S. 1975. Fate maps and gastrulation in
Hartmann, G., Weidner, K. M., Scharz, H. and
Plenum, New York, pp. 241-327. amphibia: A critique of current views. Can. J.
Birchmeier, W. 1994. The motility signal of
scatter factor /hepatocyte growth factor Keller, R. and Danilchik, M. 1988. Regional Zool. 53: 473-479.
mediated through the receptor tyrosine kinase expression, pattern and timing of convergence Luckett, W. P. 1978. Origin and differentiation
Met requires intracellular action of Ras. J. Biol. and extension during gastrulation of Xenopus of the yolk sac and extraembryonic mesoderm
Chem. 269: 21936-21939. laevis. Development 103: 193-209. in presomite human and rhesus monkey
Herbst, C. 1904. ber die zur Entwicklung des Keller, R. E. and Schoenwolf, G. C. 1977. An embryos. Am. J. Anat. 152: 59-98.
Seeigellarven notwendigen anorganischen Stoffe, SEM study of cellular morphology, contact, and Lundmark, C. 1986. Roles of bilateral zones of
ihre Rolle und Vertretbarkeit. II. Wilhelm Roux arrangement as related to gastrulation in ingressing superficial cells during gastrulation of
Arch. Entwicklungsmech. Org.17: 306-520. Xenopus laevis. Wilhelm Roux Arch. Dev. Biol. Ambystoma mexicanum. J. Embryol. Exp.
182: 165-186. Morphol. 97: 47-62.
Ho, R. K. 1992. Cell movements and cell fate
during zebrafish gastrulation. Development Khaner, 0. 1995. The rotated hypoblast of the Malinda, K. M., Fisher, G.W., and Ettensohn, C.
Suppl. 1992: 65-73. chicken embryo does not initiate an ectopic A. 1995. Four-dimensional microscopic analysis
axisin the epiblast. Proc. Natl. Aca Sci. USA 92: of the filopodial behavior of primary mesenchyme
Holowacz, T. and Elinson, R. P. 1993. Cortical
10733-10737. cells during gastrulation in the sea urchin embryo.
cytoplasm, which induces dorsal axis formation
Dev. Biol. 172: 552-566.
in Xenopus, is inactivated by UV irradiation of Khaner, 0. and Eyal-Giladi, H. 1989. The chicks
the oocyte. Development 119: 277-285. marginal zone and primitive streak formation. Miller, J. R., Fraser, S. E. and McClay, D. R. 1995.
I. Coordinative effect of induction and inhibiti- Dynamics of thin filopodia during sea urchin
Holtfreter, J. 1943. A study of the mechanics of
on. Dev. Biol. 134: 206-214. gastrulation. Development 121: 2505-2511
gastrulation: Part I. J. Exp. Zool. 94: 261-318.
Kirschner, M. W. and Gerhart, J. C. 1981. Spatial Morrill, J. B. and Santos, L. L. 1985. A scanning
Holtfreter, J. 1944. A study of the mechanics of
and temporal changes in the amphibian egg. electron micrographical overview of cellular and
gastrulation: Part II. J. Exp. Zool. 95: 171-212.
BioScience 31: 381-388. extracellular patterns during blastulation and gas-
Hrstadius, S. 1939. The mechanics of sea urchin trulation in the sea urchin, Lytechinus variegatus.
Kochav, S. M. and Eyal-Giladi, H. 1971. Bilate- In R. H. Sawyer and R. M. Showman (eds.), The
development, studied by operative methods.
ral symmetry in the chick embryo determinati- Cellular and Molecular Biology of Invertebrate
Biol. Rev. 14: 132-179.
on by gravity. Science 171: 1027-1029. Development. University of South Carolina Press,
Jurand, A. 1974. Some aspects of the develop- pp. 3-33.
Lane, M. C. and Solursh, M. 1991. Primary
ment of the notochord in mouse embryos. J.
mesenchyme cell migration requires a chondroi- Nakatsuji, N., Smolira, M. A. and Wylie, C. C.
Embryol. Exp. Morphol. 32: 1-33.
tin sulfate/ dermatan sulfate proteoglycan. Dev. 1985. Fibronectin visualized by scanning electron
Kane, D. A. and Kimmel, C. B. 1993. The Biol. 143: 389-397. microscope immunocytochemistry on the
zebrafish midblastula transition. Development substratum for cell migration in Xenopus laevis
119: 447-456. Lane, M. C. Koehl, M. A. R., Wilt, F. and Keller,
gastrulae. Dev. Biol. 107: 264-268.
R. 1993. A role for regulated secretion of apical
Karp, G. C. and Solursh, M. 1974. Acid matrix during epithelial invagination in the sea New, D. A. T. 1959. Adhesive properties and
mucopolysaccharide metabolism, the cell surface, urchin. Development 117: 1049-1060. expansion of the chick blastoderm. J. Embryol.
and primary mesenchyme cell activity in the Exp. Morphol. 7: 146-164.
sea urchin embryo. Dev. Biol. 41: 110-123. Landstrom, U. and Lvtrup, S. 1979. Fate maps
and cell differentiation in the amphibian embryo: Oppenheimer, J. M. 1936. Transplantation
Karp, G. C. and Solursh, M. 1985. Dynamic An experimental study. J. Embryol. Exp. experiments on developing teleosts (Fundulus
activity of the filopodia of sea urchin embryonic Morphol. 54: 113-130. and Perca). J. Exp. Zool. 72: 409-437.
Pazmany, L., Mandelboim, 0., ValsGmez, M., Solursh, M. and Morriss, G. M. 1977. Glycosa- Trinkaus, J. P. 1984a. Cells into Organs: The
Davis, D.M., Reyburn, H.T. and Strominger, J.L. minoglycan synthesis in rat embryos during the Forces that Shape the Embryo, 2nd Ed. Prentice-
1996. Protection from natural killer cell- formation of the primary mesenchyme and Hall, Englewood Cliffs, NJ.
mediated lysis by HLA-G expression on target neural folds. Dev. Biol. 57: 75-86.
Trinkaus, 1984b. Mechanisms of Fundulus
cells. Science 274: 792-795.
Solursh, M. and Revel, J. P. 1978. A scanning epibolya current view. Am. Zool. 24: 673-688.
Psychoyos, D. and Stern, C. D. 1996. Fates and electron microscope study of cell shape and
Trinkaus, J. P. 1992. The midblastula transi-
migratory routes of primitive streak cells in the cell appendages in the primitive streak region
tion, the YSL transition, and the onset of gas-
chick embryo. Development 122: 1523-1534. of the rat and chick embryo. Differentiation
trulation in Fundulus. Development Suppl.,
11: 185-190.
Purcell, S. M. and Keller, R. 1993. A different 1992: 75-80.
type of amphibian mesoderm morphogenesis in Spratt, N. T., Jr. 1946. Formation of the pri-
Trinkaus, J.P. 1996. Ingression during early
Ceratophrys ornata. Development 117: 307-317. mitive streak in the explanted chick blastoderm
gastrulation of Fundulus. Dev. Biol. 177:
marked with carbon particles. J. Exp. Zool. 103:
Renfree, M. B. 1982. Implantation and placen- 356-370.
259-304.
tation. In C. R. Austin and R. V. Short (eds.),
Vakaet, L. 1984. The initiation of gastrula
Embryonic and Fetal Development. Cambridge Spratt, N. T., Jr. 1947. Regression and shorte-
ingression in the chick blastoderm. Am. Zool.
University Press, Cambridge, pp. 26-69. ning of the primitive streak in the explanted
24: 555-562.
chick blastoderm. J. Exp. Zool. 104: 69-100.
Rosenquist, G. C. 1966. A radioautographic study
Vakaet, L. 1985. Morphogenetic movements
of labeled grafts in the chick blastoderm. Deve- Spratt, N. T., Jr. 1963. Role of the substratum,
and fate maps in the avian blastoderm. In G.
lopment from primitive-streak stages to stage supracellular continuity, and differential growth
M. Edelman (ed.), Molecular Determinants of
12. Carnegie Inst. Wash. Contrib. Embryol. 38: in morphogenetic cell movements. Dev. Biol.
Animal Form. Alan R. Liss, New York, pp.
31-110. 7: 51-63.
99-109.
Rosenquist, G. C. 1972. Endoderm movements Spratt, N. T. Jr. and Haas, H. 1960. Integrative
Vincent, J. P. and Gerhart, J. C. 1987. Subcor-
in the chick embryo between the short streak mechanisms in development of early chick
tical rotation in Xenopus eggs: An early step
and head process stages. J. Exp. Zool. 180: blastoderm. I. Regulated potentiality of separate
in embryonic axis formation. Dev. Biol. 123:
95-104. parts. J. Exp. Zool. 145: 97-138.
526-539.
Schlesinger, A. B. 1958. The structural signifi- Stern, C. D. 1991. Mesoderm formation in the
Vincent, J. P., Oster, G. F. and Gerhart, J. C.
cance of the avian yolk in embryogenesis. J. chick embryo revisited. In R. Keller, W. H. Clark,
1986. Kinematics of gray crescent formation in
Exp. Zool. 138: 223-258. Jr. and F. Griffin (eds.), Gastrulation: Movements,
Xenopus eggs. Displacement of subcortical
Patterns, and Molecules. Plenum, New York,
Schoenwolf, G. C. 1991. Cell movements in cytoplasm relative to the egg surface. Dev. Biol.
pp. 29-41.
the epiblast during gastrulation and neurulation 113: 484-500.
in avian embryos. In R. Keller, W. H. Clark, Jr. Stern, C. D. and Canning, D. R. 1988. Gastru-
Vogt, W. 1929. Gestaltungsanalyse am Amphi-
and F. Griffin (eds.), Gastrulation: Movements, lation in birds: A model system for the study
bienkeim mit ortlicher Vitalfarbung. II. Teil Gas-
Patterns, and Molecules. Plenum, New York, of animal morphogenesis. Experientia 44:
trulation und Mesodermbildung bei Urodelen und
pp. 1-28. 651-657.
Anuren. Wilhelm Roux Arch. Entwicklungsmech.
Schoenwolf, G. C., Garcia-Martinez, V. and Diaz, Stern, C. D. and Canning, D. R. 1990. Origin of Org. 120: 384-706.
M. S. 1992. Mesoderm movement and fate cells giving rise to mesoderm and endoderm in
von bisch, L. 1939. Keimblattchimarenfors-
during amphibian gastrulation and neurulation. chick embryo. Nature 343: 273-275.
chung an Seeigellarven. Biol. Rev. Cambr. Philos.
Dev. Dynam. 193: 235-248.
Stern, C. D., Ireland, G. W., Herrick, S. E., Soc. 14: 88-103.
Schroeder, T. 1981. Development of a primi- Gherardi, E., Gray, J., Perryman, M. and Stoker,
Waddington, C. H. 1932. Experiments in the
tive sea urchin (Eucidaris tribuloides): Irregu- M. 1990. Epithelial scatter factor and develop-
development of chick and duck embryos
larities in the hyaline layer, micromeres, and ment of the chick embryonic axis. Develop-
cultivated in vitro. Philos. Trans. R. Soc. Lond.
primary mesenchyme. Biol. Bull. 161: 141-151. ment 110: 1271-1284.
[B] 13: 221.
Shi, D.-L., DArribre, T., Johnson, K. E. and Strahle, U. and Jesuthasan, S. 1993. Ultraviolet
Warga, R. M. and Kimmel, C. B. 1990. Cell
Boucaut, J.-C. 1989. Initiation of mesodermal irradiation impairs epiboly in zebrafish embryos:
movements during epiboly and gastrulation in
cell migration and spreading relative to gastru- evidence for a microtubule-dependent mecha-
zebrafish. Development 108: 569-580.
lation in the urodele amphibian Pleurodeles nism of epiboly. Development 119: 451-453.
walti. Development 105: 351-363. Wessel, G. M. and McClay, D. R. 1985.
Streit A., Stem, C. D., Thery, C., Ireland, G. W.,
Sequential expression of germ layer specific
Schmidt, B. and Campos-Ortega, J. 1994. Aparicio, S., Sharpe, M. J. and Gherardi, E. 1995.
molecules in the sea urchin embryo. Dev. Biol.
Dorsoventral polarity of the zebrafish embryo A role for HGF/SF in neural induction and its
111: 451-463.
is distinguishable prior to the onset of gastru- expression in Hensens node during gastrulation.
lation. Wilhelm Roux Arch. Dev. Biol. 203: Development 121: 813-824. Wessel, G. M., Marchase, R. B. and McClay, D.
374-380. R. 1984. Ontogeny of the basal lamina in the
Sugiyama, K. 1972. Occurrence of mucopoly-
sea urchin embryo. Dev. Biol. 103: 235-245.
Smith, J. C. and Malacinski, G. M. 1983. The saccharides in the early development of the sea
origin of the mesoderm in an anuran, Xenopus urchin embryo and its role in gastrulation. Dev. Wilson, P. and Keller, R. 1991. Cell rearrange-
laevis, and a urodele, Ambystoma mexicanum. Growth Differ. 14: 62-73. ment during gastrulation of Xenopus: Direct
Dev. Biol. 98: 250-254. observation of cultured explants. Development
Sulik, K., Dehart, D. B., Carson, J. L.,
112: 289-300.
Solnica-Krezel, L. and Driever, W. 1994. Mi- Vrablic, T., Gesteland, K. and Schoenwolf,
crotubule arrays of the zebrafish yolk cell: G. C. 1994. Morphogenesis of the murine Winklbauer, R. and Keller, R. E. 1996. Fibro-
organizationand function during epiboly. Deve- node and notochordal plate. Dev. Dynam. nectin, mesoderm migration, and gastrulation
lopment 120: 2443-2455. 201: 260-278. in Xenopus. Dev. Biol. 177: 413-426.
Winklbauer, R. and Nagel, M. 1991. Directional Winklbauer, R., Selchow, A., Nagel, M., Stoltz, Zander, J. and von Miinstermann, A, M. 1956.
mesoderm cell migration in the Xenopus gastrula. C. and Angres, B. 1991. Mesodermal cell migra- Progesteron in menschlichem Blut und Gewe-
Dev. Biol. 148: 573-589. tion in the Xenopus gastrula. In R. Keller, W. H. ben. III. Klin. Wochenschr. 34: 944-953.
Clark, Jr. and F. Griffin (eds.), Gastrulation:
Movements, Patterns, and Molecules. Plenum,
New York, pp. 147-168.
CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma 253

Neurulao e ectoderma
7
Porque a verdadeira maravilha, se voc qui-
ser se maravilhar, este processo. Voc ini-
cia como uma nica clula derivada da unio
entre um espermatozide e um vulo; essa
se divide em duas, depois quatro, depois oito
E M 1828 KARL ERNST VON BAER, o mais eminente embriologista de sua
poca*, anunciou: Eu tenho dois pequenos embries preservados em lco-
ol, que esqueci de identificar. No momento, no consigo determinar o gne-
ro ao qual pertencem. Eles podem ser lagartos, pequenas aves ou mesmo mamfe-
ros. A Figura 7.1 permite-nos apreciar seu dilema e ilustra as quatro leis gerais da
e assim por diante e, em um certo estgio embriologia propostas por von Baer. De seu estudo detalhado sobre o desenvolvi-
aparece uma nica clula, cuja descendn- mento da galinha e da comparao de tais embries com embries de outros
cia total o crebro humano. A mera exis-
vetebrados, von Baer estabeleceu quatro generalizaes, ilustradas aqui com al-
tncia de tal clula deveria ser uma das coi-
guns exemplos de vertebrados.
sas assombrosas da Terra. As pessoas deve-
riam vagar o dia inteiro, enquanto acorda-
das, chamando umas s outras, maravilha- 1. As caractersticas gerais de um grande grupo de animais aparecem no em-
das, falando de nada exceto da clula. brio mais cedo do que os aspectos especializados. Todos os vertebrados em
LEWIS THOMAS (1979) desenvolvimento (peixes, rpteis, anfbios, aves e mamferos) so muito seme-
lhantes logo aps a gastrulao. Somente mais tarde no desenvolvimento que
Ainda mais atraente do que a mata vir- as caractersticas especiais da classe, ordem e, finalmente, espcie aparecem
gem, era a floresta que se estendia a mi- (veja Figura 7.1). Todos os embries de vertebrados tm arcos de guelras,
nha frente naquele momento: o sistema notocordas, medulas espinhais e rins pronfricos.
nervoso central. 2. Caracteres menos gerais so desenvolvidos a partir dos mais gerais, at
RITA LEVI-MONTALCINI (1988) finalmente aparecerem os caracteres mais especializados. Inicialmente todos
os vertebrados tm o mesmo tipo de pele. Somente mais tarde se desenvolvem
as escamas de peixes, as escamas de rpteis, as penas das aves, ou o plo,
garras e unhas dos mamferos. Da mesma maneira, o desenvolvimento precoce
de membros essencialmente o mesmo em todos os vertebrados. Somente
mais tarde que diferenas entre pernas, asas e braos se tornam evidentes.
3. Cada embrio de uma dada espcie, em lugar de passar atravs de todos os
estgios adultos de outros animais, se afasta mais e mais deles. As fendas
viscerais em embries de aves e mamferos no se parecem em detalhe s
fendas das guelras de peixes adultos. Ao contrrio, elas se parecem s fendas
viscerais de peixes embrionrios e outros vertebrados embrionrios. Enquan-
to peixes preservam e elaboram essas fendas tornando-as verdadeiras guelras,
os mamferos as convertem em estruturas tais como os tubos de Eustquio
(entre o ouvido e a boca).
4. Assim, o embrio precoce de um animal superior nunca como um animal infe-
rior, mas somente como seu embrio precoce. Von Baer verificou que diferentes
* K. E. von Baer descobriu a notocorda, o ovo de mamfero e o ovo humano, alm de contribuir
para o progresso conceitual aqui descrito. Seu trabalho ser mais discutido no Captulo 23.
253
Figura 7.1
Ilustrao das leis de von Baer. Embries pre-
coces de vertebrados mostram aspectos co-
I
muns ao subfilo inteiro. Com o progresso do
desenvolvimento, os embries se tornam re-
conhecveis como membros de sua classe, sua
ordem, sua famlia e, finalmente, sua espcie.
(de acordo com Romanes, 1901).
II
III
Peixe Salamandra Tartaruga Galinha Porco Boi Coelho Homem
grupos de animais compartilham aspectos comuns durante o desenvolvimento

embrionrio precoce e que esses aspectos se tornam mais e mais caractersti-
cos da espcie medida que progride o desenvolvimento. Embries humanos
nunca passam por estgios equivalentes a um peixe ou uma ave adultos; real-
mente, embries humanos inicialmente compartilham caractersticas comuns
com embries de peixes e aves. Mais tarde, os embries de mamferos e outros
divergem, nenhum deles passando pelos estgios dos outros.
Von Baer tambm reconheceu que existe um modelo comum para todo o desenvol-
vimento de vertebrados: as trs camadas germinativas originam diferentes rgos, e
essa derivao dos rgos constante se o organismo um peixe, uma r ou uma
galinha. O ectoderma forma a pele e os nervos; o endoderma forma os sistemas respi-
ratrios e digestivos; e o mesoderma forma o tecido conjuntivo, as clulas do sangue,
o corao, o sistema urogenital e partes da maioria dos rgos internos. Neste captu-
lo acompanharemos o desenvolvimento precoce do ectoderma; este, e o captulo
seguinte enfocam a formao do sistema nervoso nos vertebrados. O Captulo 9 acom-
panhar o desenvolvimento precoce dos rgos endodrmicos e mesodrmicos.
Q FORMAO DO SISTEMA NERVOSO CENTRAL

Neurulao: aspectos gerais
Talvez a mais intrigante de todas as perguntas se o crebro suficientemente pode-
roso para resolver o problema da sua prpria criao. Assim Gregor Eichele (1992)
terminou, recentemente, uma reviso de pesquisa sobre desenvolvimento do crebro de
mamferos. A construo de um rgo que reconhece, pensa, ama, odeia, lembra, troca,
engana a si mesmo, e coordena nossos processos corporais conscientes ou inconscien-
tes indubitavelmente o mais desafiante dos enigmas do desenvolvimento. Uma combi-
nao de abordagens genticas, celulares e orgnicas est fornecendo uma compreen-
so preliminar de como a anatomia bsica do crebro se torna ordenada.
O processo pelo qual o embrio forma o tubo neural, o rudimento do sistema

nervoso central, chamado neurulao, e um embrio sofrendo essas transformaes
chamado nurula. Existem dois caminhos principais para a formao do tubo neural.
Em neurulao primria, o cordomesoderma estimula o ectoderma, que o recobre, a
se proliferar, invaginar e a se destacar da superfcie formando um tubo oco. Na
neurulao secundria, o tubo neural se origina de um slido cordo de clulas que
se embebe no embrio e subseqentemente se torna oco (forma uma cavidade) para
formar o tubo neural (veja Schoenwolf, 1991b). O quanto essas formas de construo
so usadas depende da classe de vertebrados. A neurulao em peixes exclusiva-
mente secundria. Em aves, as pores anteriores do tubo neural so construdas por
neurulao primria, ao passo que o tubo neural, caudal ao par somito 27 (isto , tudo
posterior aos membros posteriores), construdo por neurulao secundria (Pasteels,
1937; Catala et al., 1996). Em anfbios, como o Xenopus, a maior parte do tubo neural do
girino produzida por neurulao primria, mas o tubo neural caudal derivado de
neurulao secundria (Gont et al., 1993). Em camundongo (provavelmente no ho-
mem, tambm), a neurulao secundria comea aproximadamente ao nvel do somito
35 (Schoenwolf, 1984; Nievelstein et al., 1993).
Neurulao primria (A)
Em vertebrados, a gastrulao cria um embrio com uma camada endodrmica interna,

uma camada mesodrmica intermediria e um ectoderma externo. A interao entre o
mesoderma dorsal e o ectoderma que a ele se sobrepem uma das interaes mais
importantes em todo o desenvolvimento de tetrpodes, porque ela inicia a
organognese, a criao de tecidos e rgos especficos. Nessa interao, o cordo- Placa neural Prega neural
mesoderma estimula o ectoderma acima dele a formar o tubo neural oco, que se dife-
renciar em crebro e medula espinhal. Os eventos da neurulao primria esto no
(B)
(C) Crista neural
Figura 7.2 Epiderme

Neurulao em anfbios e amniotas. (A) Diagrama representativo da formao do tubo neural.
As clulas ectodrmicas esto representadas como precursoras da crista neural (preto) ou como
precursoras da epiderme (cor). O ectoderma se dobra no ponto mais dorsal, formando a epiderme
externa e um tubo neural interno conectados pelas clulas da crista neural. (B) Fotomicrografias
de neurulao em um embrio de galinha de 2 dias. (C) Formao do tubo neural vista em sees
transversais do embrio de galinha na regio do futuro mesencfalo (setas em B). Cada fotografia
em C corresponde outra acima dela. (HF, prega ceflica; HP, processo ceflico; HN, ndulo de
Hensen; M, mesencfalo; NP, placa neural.) (Fotomicrografias, cortesia de R. Nagele.) Tubo neural
Figura 7.3 diagrama da Figura 7.2. Durante a neurulao primria, o ectoderma original dividido
Quatro vistas da neurulao em um embrio em trs conjuntos de clulas: (1) o tubo neural posicionado internamente, que formar
de anfbio, mostrando em cada caso nurulas o crebro e a medula espinhal, (2) a epiderme da pele posicionada externamente, e (3)
precoce (esquerda), mdia (centro) e tardia
as clulas da crista neural, as quais migram da regio de conexo entre o tubo neural e
(direita). (A) Seo transversal no centro do
embrio. (B) A mesma seqncia olhando a
a epiderme, e iro gerar os neurnios perifricos e a glia, as clulas pigmentadas da
superfcie dorsal do embrio inteiro, de cima pele e vrios outros tipos de clulas. O fenmeno de induo embrionria, que inicia a
para baixo. (C) Seo sagital pelo plano medi- neurulao na regio dorsal do embrio, ser detalhada no Captulo 15. Neste captulo
ano do embrio. (D) Simulao computadori- estamos considerando a resposta dos variados tecidos ectodrmicos.
zada em trs dimenses da constrio, exten-
so e levantamento da placa neural. (A-C de
acordo com Balinsky, 1975; D de acordo com
Jacobson e Gordon, 1976.)
Placa Placa neural Tubo neural

neural Notocorda
Prega neural Notocorda Mesoderma Notocorda Cavidade
Mesoderma
do intestino
Arquntero Cavidade do intestino
(A)
SEO
TRANSVERSAL
Endoderma Endoderma
Mesoderma Endoderma Epiderme
Epiderme Epiderme
Notocorda Notocorda
Tubo neural
Placa neural Placa neural
Prega neural Prega neural
Prega neural
Epiderme Blastporo
Blastporo
(B)
SEO
SAGITAL Cavidade do Cavidade do
Arquntero intestino intestino
Mesoderma Mesoderma
Mesoderma Epiderme
Resto da Endoderma Epiderme Endoderma
blastocele Endoderma Divertculo
do fgado
Tubo neural
Placa neural Prega neural Placa neural Prega neural
Pregas
neurais
(C) fundidas
VISTA DA
SUPERFCIE
DORSAL
Blastporo Blastporo
(D)
SIMULAO
COMPUTADORIZADA
DA DEFORMAO
DA LMINA DE
ECTODERMA (LINHA C)
(A) Formao das pregas neurais (B) Elevao das pregas neurais (C)
Epiderme
presuntiva Notocorda
Placa neural
presuntiva Formao
de cunha
Zona de
transio Formao
de sulco
Placa neural
Epiderme Ancoragem
Notocorda
Figura 7.4
Representao esquemtica do dobramento do
epitlio durante a neurulao na galinha. (A)
Formao das pregas neurais ocorre quando as
O processo de neurulao primria em embries de r est descrito na Figura 7.3 e clulas epidrmicas presuntivas se movem para
parece ser similar em anfbios, rpteis, aves e mamferos (Galera, 1971). A primeira dentro, na direo da linha mdia do embrio.
indicao que uma regio do ectoderma est destinada a se tornar tecido neural uma Essa epiderme presuntiva empurra a placa
mudana na forma celular (Figura 7.4). As clulas ectodrmicas da linha mdia tornam- neural abaixo dela, enquanto se move. (B) En-
se alongadas, enquanto as clulas destinadas a formar a epiderme se tornam mais quanto as clulas da linha mdia da placa neural
(clulas da placa do assoalho) so ancoradas
achatadas. O alongamento das clulas ectodrmicas dorsais causa a elevao dessas
notocorda, as pregas neurais so elevadas. Es-
regies neurais presuntivas acima do ectoderma circundante, criando assim, a placa ses movimentos parecem continuar enquanto
neural. At 50% do ectoderma est includo nessa placa. Logo aps, as bordas da a epiderme, se movendo para o meio, puxa
placa neural se engrossam e se movem para cima formando as pregas neurais, en- com ela a placa neural, resultando na justapo-
quanto um sulco neural, em forma de -U- aparece no centro da placa, dividindo os sio das pregas neurais. (C) Nas trs regies
futuros lados direito e esquerdo do embrio (veja Figuras 7.3 e 7.4). As pregas neurais de articulao (no ponto de articulao media-
migram em direo linha mdia do embrio, finalmente se fundindo para formar o no MHP e nos dois pontos de articulao
tubo neural abaixo do ectoderma sobreposto. As clulas da poro mais dorsal do dorsolateral a -DLHP), as clulas da placa
tubo neural se tornam as clulas da crista neural. neural mudam seu comprimento e sofrem uma
constrio nos seus pices. (De acordo com
Moury e Schoenwolf, 1995.)
A mecnica da neurulao primria
A neurulao ocorre com algumas variaes em diferentes regies do corpo. A cabea,
o tronco e a cauda formam, cada um, sua regio do tubo neural de maneira a refletir a
relao da notocorda com o ectoderma que a ela se sobrepe. Tanto as regies da
cabea como as do tronco, sofrem variantes da neurulao primria, e esse processo
pode ser dividido em cinco estgios distintos, mas espacialmente e temporalmente se
superpondo estgios (Schoenwolf, 1991a; Catala et al., 1996): (1) a formao da placa
neural, (2) a formao do assoalho da placa neural, (3) a modelagem da placa neural, (4)
o dobramento da placa neural para formar o sulco neural, e (5) o fechamento do sulco
neural para formar o tubo neural.
A formao da placa neural

A formao da placa neural como uma regio distinta de outras clulas ectodrmicas
ser discutida em detalhe nos Captulos 8 e 15. Em geral, considera-se que o mesoder-
ma dorsal subjacente (em colaborao com outras regies do embrio) sinaliza s
clulas ectodrmicas acima dela para se desenvolverem em clulas colunares da placa
neural (Smith e Schoenwolf, 1989; Keller et al., 1992; discusso posterior neste captu-
lo). Como resultado dessa induo neural, as clulas da placa neural presuntiva se
distinguem do ectoderma circundante, a qual se transformar em epiderme. As clulas
da placa neural e as clulas da epiderme possuem seus prprios movimentos intrnse-
cos (Moury and Schoenwolf, 1995). Se a epiderme ao redor da placa neural isolada,
as clulas se movem em direo ao centro (ou seja, em direo rea onde estava a
placa neural). Se a placa neural isolada, suas clulas convergem e se estendem para
formar uma placa mais delgada, mas no se fundem para formar um tubo neural. Esses
movimentos da placa neural e da epiderme originam as pregas neurais. Inicialmente, o
ectoderma torcido e logo a epiderme presuntiva comea a recobrir a placa neural.
(Realmente, se a regio de transio contendo os dois tecidos isolada, ela formar
pequenas pregas neurais em cultura). Esses movimentos coordenados finalmente
causaro a elevao e o dobramento do tubo neural (veja Figura 7.4; Jacobson e
Moury, 1995; Moury e Schoenwolf, 1995).
Formao do assoalho da placa neural

Anteriormente, considerava-se que somente as clulas da linha mdia da placa neural
formavam a placa do assoalho do tubo neural. Ou seja, no fechamento da placa para
formar o tubo neural, suas clulas mais centrais se localizariam no fundo do tubo. As
partes mais perifricas, as pregas neurais, se tornariam as pores mais dorsais do tubo
neural. Provavelmente assim que se forma a regio da cabea. Evidncia recente,
entretanto, sugere que o assoalho do tubo neural do tronco tem uma outra origem - que
se origina em parte do ndulo de Hensen e inserido no centro da placa neural.
Esse modelo foi proposto por Catala e colaboradores (1995) baseado nos seus
dados e em estudos anteriores de vrios laboratrios. Para acompanhar as clulas
embrionrias individuais do ndulo eles usaram o sistema de quimera galinha-co-
dorna. Embries de galinha e codorna se desenvolvem de maneira muito semelhante
(especialmente no desenvolvimento precoce), e quando pores do embrio de
codorna so enxertadas em uma regio equivalente do embrio de galinha, as clu-
las se integram no embrio e participam da construo dos rgos adequados. O
enxerto pode ser feito enquanto o embrio ainda est dentro do ovo, e o pinto que
eclode uma quimera, tendo uma poro do seu corpo composta de clulas de
codorna (Figura 7.5; Le Douarin, 1969; Le Douarin e Teillet, 1973). As clulas de
galinha e codorna, entretanto, tm duas diferenas crticas. Primeiro, na codorna a
heterocromatina do ncleo est concentrada ao redor dos nuclolos. Isso cria uma
grande massa que se cora intensamente e facilmente distinta da heterocromatina
difusa da galinha. Segundo, existem alguns antgenos que so especficos para a
(A)
Figura 7.5
Uma quimera galinha-codorna. (A) Duas quimeras galinha-codorna
e uma galinha controle 4 dias aps a ecloso. Nas quimeras, o tubo
neural dorsal anterior da codorna substituiu uma regio equivalente
da galinha no embrio de 12-somitos. Melancitos de codorna,
originrios da crista neural, migram para as penas da cabea, ao
nvel do enxerto. (B) Uma regio do embrio contendo tanto clulas
de codorna (com sua cromatina altamente condensada) como clu-
las de galinha (com sua cromatina mais difusa). (de Le Douarin et
al., 1996; fotografias, cortesia de N. M. Le Douarin.)
(B)
Clula de
galinha
Clula
de codorna
(A) Somito 6 (B)
Tubo
neural
Somito
Ndulo
de
Hensen
Codorna Galinha
codorna e no so encontrados em clulas da galinha. Os dois fenmenos permitem

distinguir clulas individuais de codorna, mesmo quando a populao celular , na
Endoderma
sua maioria, de galinha. dorsal
Esses pesquisadores removeram o ndulo de Hensen e o trmino caudal da notocor-
da em alongao de embries de galinha com 6-somitos (1.5 dias) e os substituiram com
seus equivalentes de codorna. Daquele nvel at a cauda, tanto a notocorda como a Figura 7.6
placa do assoalho foram compostas de clulas de codorna. As paredes do tubo neural A placa do assoalho do tubo neural do tronco
foram produzidas da placa neural da galinha (Figura 7.6). interessante notar que (como da galinha derivado do ndulo de Hensen.
previsto pela regresso do ndulo, discutida no Captulo 6) a placa do assoalho e as (A) Esquema da operao pela qual o ndulo
de um embrio de galinha de 6-somitos subs-
clulas da notocorda, associadas com a placa neural, se localizavam mais em direo
titudo pelo seu correspondente de codorna.
cauda do que o prprio ndulo. Portanto, o ndulo de Hensen contm as clulas neces- (B) Anlise do eixo quimrico (marcado com
srias para a formao da placa do assoalho caudal e da notocorda. antgeno especfico para a codorna) mostran-
As clulas da placa do assoalho se inserem na parte central do ectoderma dorsal e do clulas de codorna na notocorda (flecha) e
somente mais tarde que a notocorda se separa da placa do assoalho pela formao placa do assoalho (cabeas de flecha). (B de
de uma membrana basal entre elas (Figura 7.7).* O tubo neural tem duas fontes distin- Catala et al., 1996; fotografia, cortesia de N.
tas - uma ectodrmica e uma do ndulo de Hensen. M. Le Douarin.)
A modelagem e dobramento da placa neural

Foras intrnsecas placa neural esto envolvidas na sua modelagem. Ao se tornarem
mais colunares, as clulas provocam um estreitamento da placa neural, mas a modela-
gem mais importante da placa produzida pelas suas clulas da linha mediana que se
situam diretamente acima da notocorda. Em aves e mamferos, essas clulas da linha
mediana da placa neural so chamadas clulas do ponto de articulao mediano (MHP)
e so derivadas da placa neural imediatamente anterior ao ndulo de Hensen e da sua
linha mdia anterior (do ndulo de Hensen) (Schoenwolf, 1991a,b; Catala et al., 1996).
Tanto em anfbios como amniotas, as clulas da placa neural sofrem uma extenso
convergente pela intercalao de vrias camadas de clulas no meio de poucas cama-
das (Jacobson e Sater, 1988; Schoenwolf e Alvarez, 1989). Dessa maneira, elas alon-
gam e estreitam a placa neural (veja Figura 7.3c).
O dobramento da placa neural conseqncia de foras intrnsecas e extrnsecas
s suas clulas. Na galinha, a placa neural comea a dobrar-se mesmo quando ainda
est sendo modelada. As clulas MHP ficam ancoradas notocorda, abaixo delas,
* A idia de que a notocorda e a placa do assoalho so derivadas da mesma populao de clulas

de apreciao recente, mas esse fenmeno j havia sido documentado em um famoso livro de
embriologia. O livro Induo embrionria e desenvolvimento de Hans Spemann em 1938 tem uma
ilustrao do famoso experimento de enxerto de Spemann e Mangold. Nas pginas 144 e 146 daquele
livro (e reproduzido aqui na Figura 15.12), o enxerto do lbio dorsal do blastporo mostrado como
dando origem ao mesoderma dorsal (notocorda e somitos) e placa do assoalho do tubo neural.
Placa neural
Poo do ndulo de
Hensen
Articulao cordoneural
Figura 7.7
O ndulo de Hensen contribui tanto para a notocorda como para a placa do assoalho neural.
Seo atravs do ndulo de Hensen no estgio do somito-6, mostrando que esse contribui
para a camada superior das clulas embrionrias. (de Catala et al., 1996; fotografia, cortesia
de N. M. Le Douarin.)
originando uma articulao em forma de sulco na linha mdia dorsal. Essas clulas so
induzidas pela notocorda a diminuir sua altura e adquirir a forma de cunha (van Straaten
et al., 1988; Smith e Schoenwolf, 1989). As clulas laterais MHP no sofrem essas
mudanas (Figuras 7.4 e 7.8). Logo aps, duas outras regies de articulaes formam
sulcos prximos conexo da placa neural ao restante do ectoderma. Essas regies
so chamadas pontos de articulao dorsolateral (DLHPs), e esto ancoradas ao
ectoderma da superfcie da prega neural. Essas clulas aumentam sua altura e adqui-
rem a forma de cunha. Essa transformao (modelagem como cunha) est intimamente
ligada s modificaes da forma celular. Nos pontos de articulao dorsolateral, tanto
microtbulos como microfilamentos esto envolvidos nessas transformaes. A
colchicina, um inibidor de polimerizao de microtbulos, inibe o alongamento dessas
clulas, enquanto citocalasina B, um inibidor da formao de microfilamentos, impede
a constrio apical dessas clulas impedindo, assim, a formao de cunha (Burnside,
1971, 1973; Karfunkel, 1972; Nagele e Lee, 1980, 1987). Depois da formao inicial de
sulcos, a placa neural se dobra ao redor dessas regies com articulaes. Cada uma
delas age como um eixo que dirige a rotao das clulas ao seu redor (Smith e
Schoenwolf, 1991).
Enquanto isso, foras extrnsecas tambm esto em ao. O ectoderma superfcial
do embrio de galinha empurra na direo central do embrio, fornecendo mais uma
fora motora para o dobramento da placa neural (veja Figura 7.4 B,C; Alvarez e
Schoenwolf, 1992). Esse movimento da epiderme presuntiva e a ancoragem da placa
neural ao mesoderma subjacente deve ser tambm importante para assegurar que o
tubo neural se dobre para dentro do embrio e no para fora. Se pequenos pedaos da
placa neural so isolados do resto do embrio (incluindo o mesoderma) eles tendem a
se enrolar para fora (Schoenwolf, 1991a).
Fechamento do tubo neural

O tubo neural se fecha ao se aproximarem os pares de dobras neurais na linha mdia
dorsal; as dobras aderem umas s outras e as clulas das duas partes se renem. Em
algumas espcies, as clulas nessa juno formam as clulas da crista neural. Mas em
aves, as clulas da crista neural no migram da regio dorsal at que o tubo neural
tenha sido fechado naquele local. Em mamferos, entretanto, as clulas da crista neural
cranial (que formam as estruturas da face e do pescoo) migram enquanto as dobras
neurais esto se elevando (ou seja, antes do fechamento do tubo), enquanto que na
regio da medula espinhal, as clulas da crista esperam at que o fechamento ocorra
(Nichols, 1981; Erickson e Weston, 1983).
(A)
(B)
(C)
Figura 7.8
Micrografia eletrnica de varredura da formao do tubo neural no embrio de galinha. (A) Sulco
neural rodeado por clulas mesenquimatosas. (B) Clulas neuroepiteliais alongadas formam um
tubo, enquanto as clulas epidrmicas achatadas so trazidas linha mdia do embrio. As
clulas MHP formam uma articulao no fundo do tubo, enquanto as clulas da placa neural,
ligadas rea basal do ectoderma da superfcie formam as regies de articulaes dorsolaterais.
Essas trs articulaes podem ser vistas como sulcos. (C) A formao do tubo neural comple-
tada. As clulas que eram a placa neural esto agora dentro do embrio. A epiderme presuntiva
se localiza acima do tubo, e o tubo neural ladeado pelos somitos mesodrmicos e no fundo
limitado pela notocorda. (Fotografias, cortesia de K. W. Tosney.)
A formao do tubo neural no ocorre simultaneamente ao longo do ectoderma.

Isso pode ser melhor observado naqueles vertebrados (como aves e mamferos) cujo
eixo corporal se alonga antes da neurulao. A Figura 7.9 detalha a neurulao em um
embrio de galinha com 24 horas. A neurulao na regio ceflica (cabea) est bas-
tante adiantada, enquanto a regio caudal (rabo) do embrio est ainda gastrulando. A
regionalizao do tubo neural tambm ocorre como resultado de mudanas na forma
Figura 7.9 Ectoderma da cabea Anterior Ectoderma do blastoderma

Estereograma de um embrio de galinha de 24
horas. As pores ceflicas esto terminando Mesnquima
Prega neural
a neurulao enquanto as pores caudais es- Notocorda
to ainda gastrulando. (de Patten, 1971; de
Espao Sulco neural
acordo com Huettner, 1949.)
subceflico Intestino
Celoma extra- Mesoderma extra-
embrionrio embrionrio
Vitelo
Prega lateral
do corpo Prega neural
Regio Placa neural

pericrdica
do celoma Endoderma
Vitelo
aderente ao Porta
endoderma intestinal
anterior
Sulco
Somito
neural
Prega Mesoderma
neural intermedirio
Mesoderma
Placa somtico
neural
Celoma
Endoderma do Mesoderma
intestino mdio esplncnico
Somito
Divergncia
das pregas
N de Hensen
neurais
Poo
primitivo
Ilhota Mesoderma
sagnea
Sulco
Linha primitivo
primitiva
Margem
primitiva
Posterior
do tubo. Na ponta ceflica (onde se formar o crebro) a parede do tubo larga e

grossa. Aqui, uma srie de inchaos e constries definiro os vrios compartimentos
do crebro. Na parte caudal regio da cabea, entretanto, o tubo neural permanece
um simples tubo que se afina em direo cauda. As duas pontas abertas do tubo
neural so chamadas neurporo anterior e neurporo posterior.
O fechamento do tubo neural nos mamferos, diversamente da galinha, se inicia
em vrios locais ao longo do eixo ntero-posterior (Golden e Chernoff, 1993; Van
Allen et al., 1993). Vrios defeitos no tubo neural so causados pelo no fechamento
em alguns segmentos (Figura 7.10). Falha no fechamento na regio posterior do
tubo neural humano aos 27 dias (ou a ruptura subseqente do neurporo posterior
logo em seguida) resulta na condio denominada espinha bfida, cuja severidade
depende de quanto da medula espinhal permanece aberta. Falha no fechamento do
(A) (B) (C) (D) (E)

Prega neural Neurporo
Ectoderma Crista anterior
Intumescncia
pericardaca da superfcie neural
Placdio Intumescncia
tico pericardaca
Somitos
Tubo neural
Somitos
Borda
cortada do Sulco
mnio neural Neurporo
posterior
22 dias 23 dias Normal Anencefalia Espinha bfida
Figura 7.10
Neurulao em embries humanos. (A) Sees dorsal e transversal de um embrio humano de 22
dias, iniciando a neurulao. Ambos neurporos, anterior e posterior, esto abertos ao lquido
amnitico. (B) Vista dorsal de um embrio humano em neurulao, um dia depois. A regio do
neurporo anterior est se fechando, enquanto o neurporo posterior permanece aberto. (C)
Regies de fechamento do tubo neural postulado por evidncia gentica (superimposta ao corpo
do recm-nascido). (D) Anencefalia devido a falta de fuso da placa neural na regio 2. (E)
Espinha bfida devida a falta de fuso na regio 5 (ou pela falta de fechamento do neurporo mais
posterior). (C-E de acordo com Van Allen et al., 1993.)
tubo neural anterior resulta em uma condio letal, anencefalia. Aqui, o crebro
anterior permanece em contato com o lquido amnitico e em seguida degenera. O
desenvolvimento do crebro anterior fetal cessa, e a abboda do crnio no se
forma. Essas anormalidades no so raras em humanos, pois esto presentes em
aproximadamente um em cada quinhentos nascimentos viveis. Defeitos de fecha-
mento do tubo neural podem freqentemente ser identificados durante a gravidez
por vrios testes fsicos e qumicos.
O fechamento do tubo neural humano envolve uma complexa interao entre fato-
res genticos e ambientais. Certos genes, Pax3, sonic hedgehog e openbrain, so
essenciais para a formao do tubo neural de mamferos, mas fatores da dieta como
colesterol e cido flico parecem ser crticos.* Foi estimado que aproximadamente
50% dos defeitos do tubo neural poderiam ser evitados se as mulheres grvidas
tomassem suplementos de cido flico (vitamina B12), e o Servio de Sade Pblica
dos Estados Unidos da Amrica recomendam que todas as mulheres em idade frtil
tomem 0.4mg dirios de folato para reduzir o risco de defeitos do tubo neural durante
a gravidez (Milunsky et al., 1989; Czeizel e Dudas, 1992; CDC, 1992). [ecto1.html]
O tubo neural finalmente forma um cilindro fechado que se separa do ectoderma da
superfcie. Considera-se que essa separao mediada pela expresso de diferentes
molculas de adeso celular. As clulas que se tornaro o tubo neural, originalmente
expressam E-caderina, mas elas param de expressar essa protena ao se formar o tubo
e, em vez disso, sintetizam N-caderina e N-CAM (veja Figura 3.17). Como resultado,
os dois tecidos no aderem mais um ao outro. Se o ectoderma da superfcie passar a
expressar N-caderina (injetando mRNA de N-caderina em uma das clulas do embrio
de Xenopus de duas cabeas), a separao do tubo neural da epiderme presuntiva
dramaticamente impedida (Detrick et al., 1990; Fujimori et al., 1990).
*Colesterol parece ser necessrio para a autoclivagem da protena Sonic hedgehog. Mutaes da
Sonic hedgehog podem impedir o fechamento do tubo neural em camundongos e no homem (Chiang
et al., 1996; Roessler et al., 1996); a poro ativa da Sonic hedgehog sua regio N-terminal. Essa
regio clivada da molcula precursora em uma reao que requer colesterol como um cofator
(Porter et al., 1996). No homem, certas sndromes envolvendo falhas no fechamento do tubo
neural foram relacionadas s mutaes na sntese de colesterol (Kelley et al., 1996).
& Especulaes
A modelagem dorsoventral do sistema nervoso
E NQUANTO O TUBO NEURAL

est sendo formado, ele est rece-
bendo sinais de dois outros con-
juntos de tecidos. Esses sinais so instru-
Sonic hedgehog. O destino dorsal do
tubo neural determinado pelas prote-
nas morfogenticas do osso, provavel-
mente BMP4 e BMP7. Essas protenas so
expressas na epiderme dorsal presuntiva
msx1 e Pax3 na poro dorsal do tubo
neural), alm de promover a expresso de
outros genes dorsalmente especficos (Fi-
gura 7.11D). O papel dessas protenas foi
confirmado por experincias in vitro nas
es para que o tubo neural tenha uma de-
terminada polaridade dorsoventral. O tubo (Figura 7.11B,C) e foi demonstrado que quais tubos neurais isolados foram expos-
neural ventral parece ser modelado pela elas contrariam o efeito da Sonic hedgehog tos a produtores desses sinais (Yamada et
protena Sonic hedgehog originria da no- (permitindo a expresso de genes como al., 1993; Liem et al., 1995).
tocorda e das clulas da placa do assoalho
(veja Figura 7.7B; Ericson et al., 1996). Essa (B) Figura 7.11
protena induz certas clulas do lado A modelagem dorsoventral do tubo neural.
ventrolateral do tubo neural a expressar (A) Diferenciao de neurnios motores vis-
genes que as transformam em neurnios ta nos neurnios ventrolaterais; se as clulas
motores (Figura 7.11A; Prancha 32). Sonic da placa do assoalho ou as clulas que ex-
hedgehog tambm funciona reprimindo a pressam o Sonic hedgehog so transferidas
expresso de genes como dorsalin, Pax3 para uma posio lateral, neurnios motores
e msx1 da poro ventral do embrio. Es- tambm sero formados. (B) BMP4 expres-
ses genes seriam expressos normalmente so na epiderme dorsal presuntiva durante a
ao longo do tubo neural mas so inibidos (C) formao do tubo neural. (C) Expresso de
pelo sinal, ventralmente produzido pela BMP7 enquanto o tubo neural se fecha. (E)
Resumo das interaes pela quais Sonic hed-
gehog promove o desenvolvimento de neur-
nios motores e inibe sinais de dorsalizao.
(de Yamada et al., 1993; Liem et al., 1995;
fotografias, cortesia de K.Liem.)
(A) Conjunto secundrio de
neurnios motores
(E)
Placa do assoalho Sinais dorsais
ventral doada
(D)
por outro embrio
Inibio dos sinais
dorsais por Sonic
hedgehog
Neurnios
motores
Induo de neurnios
motores ventrolaterais
Placa do assoalho ventral
Neurulao secundria
A neurulao secundria envolve a formao do cordo medular e seu subseqente
esvaziamento interno formando o tubo neural. Na r e na galinha, esse tipo de neuru-
lao geralmente identificado na formao das vrtebras lombar e da cauda. Em
ambos os casos, a neurulao secundria pode ser vista como continuao da gastru-
lao. Entretanto, as clulas do lbio dorsal do blastporo continuam a crescer
Canal Medula espinhal

Notocorda ependimrio Intestino
Te t o Assoalho
Blastocele Placa neural
presuntiva
Notocorda
Movimentos Movimentos de Articulao
involutivos extenso posterior cordoneural
Parede
posterior
Ectoderma Lbio dorsal tardio
(A) (B) (articulao cordoneural) (C)
nus Canal neurentrico
Figura 7.12
Movimentos celulares durante a neurulao secundria em Xenopus. (A) Involuo da mesoder-
ma no estgio de gstrula mdia.(B) Movimentos do lbio dorsal do blastporo nos estgios de
gstrula tardia/ gstrula precoce. A involuo cessou e ambos, o ectoderma e o mesoderma do
lbio tardio do blastporo se movem posteriormente. (C) Estgio de girino precoce, onde as
clulas revestindo o blastporo formam o canal neurentrico, parte do qual se torna o lmen do
tubo neural secundrio. (de Gont et al., 1993.)
ventralmente, em lugar de involuir para o embrio (Figura 7.12A,B). A regio em cres-

cimento, na ponta do lbio, chamada articulao cordoneural (Pasteels, 1937), e
contm precursores da poro mais posterior da placa neural e a poro posterior da
notocorda. O crescimento dessa regio converte a gstrula aproximadamente esfrica,
1.2mm de dimetro, em um girino linear com 9mm de comprimento. A ponta da cauda
um descendente direto do lbio dorsal do blastporo, e as clulas que revestem o
blastporo formam o canal neurentrico. A parte proximal do canal neurentrico,
funde com o nus, enquanto que a poro distal se torna o canal ependimrio (isto ,
o lmen do tubo neural) (Figura 7.12C; Gont et al., 1993).
Na galinha, os tecidos localizados posteriomente ao neurporo recentemente
fechado so chamados de broto da cauda. Como o broto da cauda da r, essa
estrutura no uma massa no diferenciada de clulas. Enxertando pequenas regi-
es do broto da cauda da codorna no broto da cauda da galinha, Catala e colabora-
dores (1995) mostraram que o broto de cauda precoce, j tem clulas com um destino
determinado. Exatamente como no Xenopus, existe uma articulao cordoneural, e
essa regio contm as clulas que dividem-se para formar ambas, a notocorda e a
corda medular. Como se d na r, essas clulas se movem posteriomente. O tubo
neural se forma medida que a corda medular produz pequenas cavidades, que se
fundem umas s outras (Figura 7.13).
Diferenciao do tubo neural

A diferenciao do tubo neural nas vrias regies do sistema nervoso central ocorre
simultaneamente de trs maneiras diferentes. Em nvel anatmico macro, o tubo neural
e seu lmen se expandem e se contraem para formar as cmaras do crebro e a medula
espinhal. A nvel de tecido, a populao celular da parede do tubo neural se rearranja
para formar as regies funcionalmente diferentes do crebro e da medula espinhal.
Finalmente, no nvel celular, as prprias clulas neuroepiteliais se diferenciam em
numerosos tipos de neurnios e clulas de suporte (gliais) presentes no corpo.
Formao das regies do crebro

O desenvolvimento precoce da maioria dos crebros de vertebrados parecido, mas
como o crebro humano provavelmente a matria mais organizada do sistema solar e
o rgo mais interessante do reino animal, nos concentraremos no desenvolvimento
daquele que supostamente faz o Homo sbio.
(A) Figura 7.13

Formao do tubo neural secundrio no embrio de galinha de 25-somitos. (A) A formao do
cordo medular na ponta mais caudal do broto da cauda da galinha. (B) Cordo medular pouco
mais anterior no broto da cauda. (C) Formao de cavidades do tubo neural e formao da
notocorda. (D) Lumens coalescem para formar o canal central do tubo neural. (de Catala et al.,
1995; fotografias, cortesia de N. M. Le Douarin.)
O tubo neural precoce de mamferos uma estrutura reta. Entretanto, mesmo antes
(B) que a poro posterior do tubo se forme, a poro mais anterior est sofrendo mudan-
as drsticas. Nessa regio anterior, o tubo neural se expande em trs vesculas prim-
rias (Figura 7.14): crebro anterior (prosencfalo), crebro mdio (mesencfalo) e cre-
bro posterior (rombencfalo). Quando se fecha a ponta posterior do tubo neural,
dilataes secundrias -as vesculas pticas- se estendem lateralmente de cada lado
do crebro anterior em desenvolvimento.
O crebro anterior se subdivide no telencfalo anterior e o diencfalo mais cau-
dal. O telencfalo formar os hemisfrios cerebrais, e o diencfalo formar o tlamo
e o hipotlamo e tambm a regio que recebe os impulsos neurais da retina. Na
(C) verdade, a prpria retina uma derivao do diencfalo. O mesencfalo no se
subdivide e seu lmen se tornar o aqueduto cerebral. O rombencfalo se subdividi-
r em um mielencfalo posterior e um metencfalo mais anterior. O mielencfalo vai
dar origem medula oblongata (Bulbo), cujos neurnios do origem aos nervos que
regulam os movimentos respiratrios, gastrointestinais e cardiovasculares. O
metencfalo d origem ao cerebelo, a parte do crebro responsvel pela coordena-
Notocorda o dos movimentos, postura e equilbrio. O crebro posterior (rombencfalo) de-
senvolve um modelo segmentado que especifica os lugares de onde se originam
certos nervos. Alargamentos peridicos chamados rombmeros dividem o
(D)
Figura 7.14
Desenvolvimento precoce do crebro humano. As trs vesculas cerebrais primrias so subdi-
vididas enquanto o desenvolvimento continua. A direita esto os derivados em adultos, forma-
dos pelas paredes e cavidades do crebro. (De acordo com Moore e Persaud, 1993.)
Derivados Adultos
Lobos olfativos - Cheiro

3 vesculas primrias 5 vesculas primrias Hipocampo - Armazenamento de memria
Crebro - Associao
Parede Cavidade
Retina - Viso
Telencfalo Epitlamo - Glndula pineal
Tlamo - Centro de retransmisso para neurnios
Crebro anterior Diencfalo
pticos e auditivos
(Prosencfalo) Hipotlamo - Temperatura, sono e
regulao respiratria
Crebro mdio Mesencfalo
(Mesencfalo) Crebro mdio - Fibras nervosas entre os crebro
anterior e posterior,
Metencfalo lobos pticos e tectum.
Crebro posterior
(Rombencfalo) Cerebelo - Coordenao de movimentos
Mielencfalo musculares complexos
Ponte - Fibras nervosas entre o crebro e o
cerebelo (somente mamferos)
Medula - Centro reflexo de atividades

Medula espinhal involuntrias
rombencfalo em compartimentos menores. Os rombmeros representam territri-

os separados de desenvolvimento onde clulas de cada rombmero podem se 2
misturar livremente dentro dele, mas no com clulas de rombmeros adjacentes
(Guthrie e Lumsden, 1991). Alm disso, cada rombmero tem um destino de desen-
volvimento diferente. Isso foi extensivamente estudado na galinha, onde os primei-
ros neurnios aparecem nos rombmeros de nmero par, r2, r4 e r6 (Figura 7.15;
Lumsden e Keynes, 1989). Neurnios dos gnglios r2 formam o quinto nervo cranial 4
(trigmeo); aqueles do r4 formam o stimo nervo cranial (facial) e o oitavo
(vestibuloacstico); o nono nervo cranial (glossofarngeo) nasce do r6. [ecto2.html]
A expanso do crebro embrionrio precoce notvel em sua velocidade, exten-
6
so e no fato de que isso resulta primariamente em um aumento de tamanho de cavida-
de e no de crescimento de tecido. Em embries de galinha, o volume do crebro
expande 30 vezes entre os dias 3 e 5 do desenvolvimento. Considera-se que essa
rpida expanso causada por uma presso fluida positiva, exercida contra as paredes
do tubo neural pelo fluido no seu interior. Seria de se esperar que essa presso do
fluido fosse dissipada pela medula espinhal, mas isso parece no acontecer. Na verda- Figura 7.15
de, enquanto as pregas neurais vo fechando a regio entre o crebro presuntivo e a O crebro posterior (Rombencfalo) de um em-
medula espinhal, o tecido dorsal circundante empurra para dentro, produzindo uma brio de galinha de 2 dias, aberto para mostrar
constrio no tubo, na base do crebro (Figura 7.16; Schoenwolf e Desmond, 1984; as paredes laterais. Neurnios foram visuali-
Desmond e Schoenwolf, 1986; Desmond e Field, 1992). Essa ocluso (que tambm zados pela marcao com anticorpo para pro-
ocorre no embrio humano) efetivamente separa a regio cerebral presuntiva da futura tenas de neurofilamentos. Rombmeros 2, 4 e
medula espinhal (Desmond, 1982). Se for removida a presso do fluido na poro 6 podem ser identificados pela alta densidade
de axnios nesse estgio precoce do desenvol-
anterior de um tubo neural assim ocludo, o crebro da galinha aumenta a uma veloci-
vimento. (de Lumsden e Keynes, 1989, corte-
dade muito menor e contm um nmero menor de clulas, quando comparado com sia de A. keynes.)
embries controles, normais. A regio ocluda do tubo neural abre novamente aps a
expanso inicial, rpida, dos ventrculos cerebrais.
(A) (B) (D)
Figura 7.16
Ocluso do tubo neural para permitir a expan-
so da futura regio do crebro. (A) Corante
injetado na poro anterior do tubo neural de
galinha de 3 dias, enche a regio do crebro
mas no passa para a regio espinhal. (B,C)
Seo do tubo neural da galinha na base do
crebro (B) antes da ocluso e (C) durante a
ocluso. (D) A reabertura da ocluso, aps au-
mento inicial do crebro, permite a passagem
do corante da regio do crebro para a da me-
dula espinhal. (Cortesia de M. Desmond.)
& Especulaes
Determinando as regies
do crebro anterior e crebro mdio
A
identidade ntero-posterior de pode ser crtica na modelagem da regio Prosencfalo Mesencfalo
cada vescula do crebro de mado crebro anterior. Essa interface Mes/Met
mferos especificada durante a corresponde a uma zona limitans e tam- limite
gastrulao pelo mesoderma precordal e bm a fonte de Sonic hedgehog, uma pro-
pela notocorda. Essa especificao pare- tena difusvel considerada indutora de
ce ser estabilizada no estgio de placa modelagem durante a gastrulao e for-
neural, por interaes a nvel do ectoder- mao de membros (Figura 7.18; Rubens-
Meten-
ma. Somente as molculas principais en- tein e Puelles, 1994).
cfalo
volvidas na especificao dos crebros Uma das regies crticas para o de-
anterior e mdio sero aqui discutidas; os senvolvimento do crebro mdio a bor-
detalhes da especificao do crebro pos- da entre o metencfalo/mesencfalo que Rombencfalo
terior e da medula espinhal pelo gene Hox normalmente dar origem aos tecidos do
sero discutidos no Captulo 16. istmo. Aqui no se verifica uma fronteira
As regies dos crebros anterior e morfolgica, mas ela marcada pela por-
mdio so definidas pelo mesoderma o mais posterior, onde se expressa o
subjacente e pela notocorda anterior. Os gene Otx2. Quando tecido da juno Medula espinhal
genes Lim1 e Otx2 so expressos por mesencfalo mdio e anterior transplan-
esses tecidos mesodrmicos anteriores. tado ao diencfalo ou rombencfalo, ele En (Engrailed) Fgf8 (Fator de
Se um deles no est presente, o embrio induz as clulas que o rodeiam a desen- Wnt1 crescimento do fibroblasto)
no forma o crebro anterior ou o mdio. volver destinos mesenceflicos (no shh (Sonic
Na parte caudal, em relao ao romb- diencfalo) ou cerebelares (no rombenc- hedgehog)
mero 2, os embries parecem normais (Fi- falo) (Figura 7.19A; Bally-Cuif e Wassef, Figura 7.18
gura 7.17; Acampora et al., 1995; Shawlot Estrutura neuromrica do crebro com super-
e Behringer, 1995). posio dos hipotticos eventos indutivos. A
Rubenstein e Puelles (1994) propu- rea limite mesencfalo/metencfalo positi-
seram que o crebro anterior composto va para a expresso dos genes Fgf8 e Wnt1. A
por seis regies neuromricas chamadas borda p2/p3 considerada a fonte da protena
prosmeros. Os prosmeros p1-p3 cor- Sonic hedgehog. (de acordo com Bally-Cuif e
respondem ao diencfalo e os prosme- Wassef, 1995.)
ros p4-p6 ao hipotlamo (ventralmente)
e ao telencfalo (dorsalmente). Os limi-
tes prosomricos coincidem com os limi-
tes de expresso de vrios genes que so
considerados importantes na especifica-
o neural. Eles tambm so considera- 1994; Marin e Puelles, 1994). Se a juno
dos como limitantes de respostas a cer- for girada pode se dar uma triplicao,
tos estmulos externos. A interface p2/p3 pois tecidos em ambos os lados do enxer-
to so induzidos (Figura 7.19B).
Essa regio indutora mes/met parece
ser controlada pelo fator de crescimento
Figura 7.17
de fibroblasto 8 (FGF8). Crossley e cole-
Fentipo sem cabea de camundongo defici-
ente em Lim1. Dois camundongos com
gas (1996) verificaram que esse tecido for-
knockout de Lim1 esto na parte de baixo mador de istmo secreta FGF8. Mais ainda,
da figura; um filhote do tipo selvagem est na quando transplantaram partculas conten-
parte de cima. A maioria dos mutantes Lim1 do FGF8 para o diencfalo ou o romben-
morrem antes do nascimento. As pinas do ou- cfalo, eles obtiveram duplicadas as mes-
vido (flechas) so as estruturas mais anterio- mas estruturas do crebro mdio. Partcu-
res nesses mutantes. (de Shawlot e Behringer, las controle embebidas em salina no
1995; cortesia dos autores.) mostraram essa duplicao. As partculas
com FGF8 tambm induziram a expresso deficientes em Wnt1 no possuem a re- Figura 7.19
de trs genes nos tecidos circundantes - gio do crebro mdio e nem o cerebelo A regio da juno mesencfalo/metencfalo
(mes/met) pode agir como um indutor do
Wnt1, Engrailed-2 e o prprio Fgf8. Es- (McMahon e Bradley, 1990; Thomas e
desenvolvimento do crebro mdio e da ex-
ses trs genes so normalmente expres- Cappecchi, 1990). Wnt1 parece manter a presso engrailed quando rodada ou trans-
sos na regio do istmo. Wnt1 e Engrailed expresso do gene Engrailed nas clulas plantada a outras regies do crebro. (A) O
so considerados importantes na forma- precursoras cerebelares, permitindo a sua transplante da juno mes/met induz a expres-
o do cerebelo. Mesmo que o cerebelo proliferao (Dickinson et al., 1994; so do gene engrailed e das estruturas do cre-
no expresse genes Wnt1, camundongos Danielian e McMahon, 1996). [ecto3.html] bro mdio e cerebelo em posies ectpicas.
(B) Rotao da juno mes/met causa tripli-
cao de certas estruturas, como o tectum
ptico. Abreviaes: gt, griseum tectale; TS,
torus semicircularis: P1, segmento pre-tectal;
(A) P2, segmento talmico dorsal; cb, cerebelo; ot,
Mesencfalo Crebro mdio e cerebelo tectum ptico; ist, istmo; III, terceiro nervo
Tectum
cranial ou oculomotor; IV, quarto nervo cranial
Diencfalo Mes/Met ou troclear. A polaridade postulada repre-
limite sentada por flechas. (B de acordo com Ru-
benstein e Puelles, 1994.)
Regio expressando En
Telencfalo Metencfalo
En (Engrailed) Crebro mdio

Wnt1
Fgf8 (Fator de Cerebelo
Rombencfalo
crescimento do fibroblasto)
Crebro posterior
(B)
Pea
invertida
Diencfalo
Mesencfalo
ist/cb
istmo/
cerebelo Induo Duplicao e polarizao
da estrutura relativa ao tecido cerebelar
mesenceflica En mais prximo
Rombencfalo
Mesencfalo Mesencfalo
Diencfalo
Diencfalo
Eixo longo
Rombencfalo Rombencfalo
Arquitetura de Tecido no Sistema Nervoso Central

Tecido
Os neurnios do crtex cerebral esto organizados em camadas, cada uma tendo dife-
rentes funes e conexes. O tubo neural original composto de um neuroepitlio
embrionrio, formado por uma nica camada de clulas. Essa populao de clulas
divide-se rapidamente. Sauer (1935) e outros mostraram que essas clulas esto presen-
tes na parede do tubo neural continuamente, da borda luminal at a borda externa, mas
como seus ncleos esto em diferentes alturas, tem-se a impresso que a parede do tubo
neural composta por diversas camadas de clulas. A sntese de DNA (fase S) ocorre
quando o ncleo est na borda externa do tubo, e o ncleo migra luminalmente enquanto
a mitose continua (Figura 7.20). A mitose ocorre no lado luminal da camada celular.
Durante o desenvolvimento precoce de mamferos, 100% das clulas do tubo neural
incorporam timidina radioativa ao DNA (Fujita, 1964). Logo em seguida, certas clulas
no mais incorporam esses precursores de DNA, indicando que no esto mais partici-
pando da sntese de DNA e da mitose. Essas clulas neurnicas e da glia podem, agora,
se diferenciar na periferia do tubo neural (Fujita, 1966; Jacobson, 1968).
Se clulas em diviso so marcadas com timidina radioativa em um nico estgio
de seu desenvolvimento e seus descendentes so identificados no crtex externo
do crebro adulto, isso significa que os neurnios tiveram que migrar para sua
posio cortical a partir do neuroepitlio embrionrio. Isso acontece quando a clu-
la se divide verticalmente em lugar de horizontalmente. Nesses casos, a clula
adjacente ao lmen fica ligada superfcie ventricular, enquanto a outra clula filha
se afasta (Chenn McConnell, 1995). Essa diviso a ultima do neurnio e chamada
de aniversrio do neurnio. Diferentes neurnios e clulas gliais tm seus aniver-
srios em tempos diferentes. Marcao em diferentes pontos do desenvolvimento
mostra que clulas com aniversrios mais precoces migram distncias mais curtas.
Clulas com aniversrios mais tardios, migram atravs dessas camadas para formar
as regies superficiais do crtex. A diferenciao que se segue depende da posio
que esses neurnios ocupam uma vez fora da regio de clulas em diviso
(Letourneau, 1977; Jacbson, 1991).
Figura 7.20
Seo esquemtica do tubo neural de um embrio de galinha, mostrando a posio do ncleo de
uma clula neuroepitelial como funo do ciclo celular. Clulas mitticas so encontradas prxi-
mo ao centro do tubo neural, adjacente ao lmen. (B) Micrografia eletrnica de varredura de um
tubo neural de galinha, recm-formado, mostrando clulas em diferentes estgios do ciclo celular. (B)
(A de acordo com Sauer, 1935; B, cortesia de K. Tosney.)
(A) Estgio do ciclo celular
Lmen do tubo neural

Placa cortical (CP) Lmina dissecans (L)

Zona intermediria (I) Zona marginal (M)
Medula espinhal Camada ependimria (E) Camada granular (GL)
Zona ventricular Zona
germinal (V) subventricular (S)
Camada granular Camada das clulas
externa (EG) de Purkinje (P)
Camada molecular
de axnios das
clulas granulares
Cerebelo
Tubo neural
Camada molecular
Neocrtex
Crtex cerebral
Massa branca
Enquanto as clulas adjacentes ao lmen continuam a se dividirem, as clulas Figura 7.21

migratrias formam uma segunda camada ao redor do tubo neural original. Essa Diferenciao das paredes do tubo neural. Se-
camada se torna progressivamente mais espessa medida que mais clulas do o de um tubo neural humano de 5 semanas,
neuroepitlio embrionrio so adicionadas. Essa nova camada chamada zona do contendo 3 zonas: ependimria, manto e mar-
ginal. Na medula espinhal e no bulbo (linha
manto (ou intermediria) e o epitlio embrionrio agora chamado de zona
superior), o epndima a nica fonte de neu-
ventricular (e, mais tarde, epndima) (Figura 7.21). As clulas da zona do manto se rnios e clulas gliais. No cerebelo (linha do
diferenciam em neurnios e clulas gliais. Os neurnios fazem conexes entre si e meio) uma segunda camada mittica, a cama-
emitem axnios se afastando do lmen, criando portanto uma zona marginal pobre da granular externa, se forma na regio mais
em clulas. Clulas gliais cobrem muitos desses axnios da zona marginal com bai- remota do epndima. Neuroblastos dessa ca-
nhas de mielina, dando-lhes uma aparncia esbranquiada. Assim, a zona do manto, mada migram de volta para a zona intermedi-
contendo os corpos celulares, freqentemente referida como massa cinzenta, e a ria para formar as clulas do grnulo. No crtex
camada marginal, axonal, como massa branca. cerebral (linha inferior), os neuroblastos ou
O esquema bsico de trs camadas: a ependimria, a do manto e a marginal glioblastos em migrao formam uma placa
cortical contendo seis camadas. (De acordo com
mantido durante todo o desenvolvimento, tanto na medula espinhal como no bulbo. A
Jacobson, 1991.)
massa cinzenta (manto) gradualmente adquire uma estrutura com forma de borboleta
rodeada pela massa branca; ambas so envolvidas por tecido conjuntivo. medida
que o tubo neural amadurece, um sulco longitudinal -sulcus limitans- aparece para
dividi-lo em duas partes, dorsal e ventral. A poro dorsal recebe estmulos dos
(A) (B) (C) (D)

Epiderme
Sulcus
Regio Regio
limitans
presuntiva basal presuntiva alar
(E) Gnglio da Figura 7.22

raiz dorsal Desenvolvimento da medula espinhal huma-
na. (A-D) O tubo neural funcionalmente di-
Neurnio de associao Nervo vidido nas regies dorsal (alar, A) e ventral
espinhal (basal, B), separadas pelo sulcus limitans.
Raiz dorsal Enquanto os condroblastos da regio escler-
Neurnio
sensorial toma do somito formam as vrtebras espinhais,
o tubo neural se diferencia nas zonas ependi-
mria, do manto e marginal, e o teto e o
Neurnio assoalho se tornam distintos. (E) Um segmen-
somtico motor to da medula espinhal com suas razes senso-
riais (alar) e motoras (basal). (De acordo com
Larsen, 1993.)
Camada marginal Camada Camada ependimria

do manto (ventricular)
neurnios sensoriais, enquanto a poro ventral est envolvida na realizao de vri-

as funes motoras (Figura 7.22).
Organizao do cerebelo
No encfalo, a migrao celular, o crescimento diferencial e a morte celular seletiva
produzem modificaes no modelo de trs camadas, especialmente no cerebelo e no
crebro. Alguns neurnios penetram a massa branca para diferenciarem-se em aglo-
merados de neurnios chamados ncleos. Cada ncleo desempenha o papel de uma
unidade funcional, servindo como uma estao de retransmisso entre as camadas
externas do cerebelo e outras partes do encfalo. Alm disso, as clulas neurnicas
precursoras, em diviso, neuroblastos, migram para a superfcie externa do cerebelo
em desenvolvimento, formando uma nova zona embrionria, camada embrionria
externa, prxima ao limite externo do tubo neural. No limite externo da camada embri-
onria externa (na espessura de uma ou duas clulas), os neuroblastos proliferam. Na
parte interna da camada esto os neuroblastos ps-mitticos que so os precursores
dos neurnios mais importantes do crtex do cerebelo, as clulas granulares. Essas
clulas neuronais pr-granulares migram de volta para a massa branca do cerebelo em
desenvolvimento para produzir clulas neurnicas granulares em uma regio chamada
camada granular interna. Enquanto isso, a camada ependimria original do cerebelo
origina uma grande variedade de neurnios e clulas gliais, incluindo os notveis e
grandes neurnios de Purkinje. Cada um deles tem um enorme aparelho dendrtico,
que se espalha como um leque sobre o corpo celular em forma de bulbo. Uma clula
de Purkinje tpica pode formar at 100.000 sinapses com outros neurnios, mais do que
qualquer outro neurnio estudado. Cada neurnio de Purkinje tambm emite um axnio
delgado que se comunica com outras clulas nos ncleos cerebelares profundos.
O desenvolvimento de uma organizao espacial crtico para o funcionamento
correto do cerebelo. Todos os impulsos regularo a atividade da clulas de Purkinje,
que so os nicos neurnios que liberam impulsos para fora do crtex cerebelar. Para
que isso acontea, as clulas adequadas devem se diferenciar no tempo e local ade-
quados. Como isso acontece?
Um mecanismo considerado importante para posicionar neurnios jovens dentro
de encfalo de mamferos em desenvolvimento o direcionamento glial (Rakic, 1972;
Hatten, 1990). Atravs do crtex, os neurnios parecem caminhar no monotrilho da
glia para seu respectivo destino. No cerebelo, os precursores das clulas granulares
caminham nos longos prolongamentos da glia de Bergmann (Figura 7.23; Rakic e
Sidman, 1973; Rakic, 1975). A interao neuroglial consiste em uma complexa e fasci-
nante srie de eventos, envolvendo reconhecimento recproco entre a glia e o
neuroblasto (Hatten, 1990; Komuro e Rakic, 1992). O neurnio mantm sua adeso
clula da glia atravs de vrias protenas, a mais importante sendo uma protena de
adeso chamada astrotactina. Se a astrotactina na clula nervosa mascarada pelo
seu respectivo anticorpo, a clula nervosa no adere ao prolongamento da glia
(Edmondson et al., 1988; Fishell e Hatten, 1991).
A anlise de mutaes neurolgicas no camundongo poder, em breve, fornecer Figura 7.23
conhecimentos novos sobre os mecanismos de ordenao espacial. Mais de 30 muta- Migrao neurnica em prolongamentos gliais.
es conhecidas afetam o arranjo de neurnios cerebelares. Muitos dos mutantes (A) Diagrama com um neurnio cortical mi-
cerebelares foram encontrados porque o fentipo de tais mutantes - principalmente a grando em um prolongamento da clula glial.
(B) Micrografia eletrnica da regio onde a
inabilidade de manter o equilbrio ao andar - pode ser facilmente reconhecido. Por
soma do neurnio adere ao prolongamento glial.
razes bvias essas mutaes so identificadas na lngua inglesa com nomes como (C) Fotografias seqenciais de um neurnio
weaver, reeler, staggerer e waltzer. [ecto4.html], [ecto5.html] migrando em um prolongamento de glia
cerebelar. A extremidade anterior do neurnio
apresenta vrias extenses filopdicas. Ela
atinge velocidades de 60 m/hora em sua mi-
grao nos prolongamentos gliais. (A de acor-
do com Rakic, 1975; B de Gregory et al., 1988;
C de Hatten, 1990, cortesia de M. Hatten.)
(B)
(A)
Processo condutor
do neurnio
(C)
Neurnio em
migrao
Processo da
clula glial
Organizao cerebral
A disposio em trs zonas tambm modificada no crebro, que organizado de

duas maneiras distintas. Primeiro, de maneira anloga ao cerebelo, a organizao ver-
tical feita em camadas que interagem entre si (veja Figura 7.21). Certos neuroblastos
da zona do manto migram na glia atravs da massa branca para dar origem a uma
segunda zona de neurnios. Essa nova zona de manto chamada crtex do neopleo.
Esse crtex se estratifica em seis camadas de corpos celulares e a forma adulta desses
neurnios do neopleo s se completa na metade da infncia. Cada camada do crtex
cerebral diferente da outra em relao s suas propriedades funcionais, os seus tipos
de neurnios e os conjuntos de conexes que produzem. Por exemplo, neurnios da
camada 4 recebem seu principal estmulo do tlamo (a regio que se forma do
diencfalo), enquanto os neurnios na camada 6 enviam sua maior produo de volta
para o tlamo. Segundo, horizontalmente o crtex cerebral est organizado em mais de
40 regies que regulam, anatomica e funcionalmente, processos distintos. Por exem-
plo, neurnios da camada cortical 6 do crtex visual projetam axnios para o ncleo
lateral geniculado do tlamo, enquanto neurnios da camada 6 do crtex auditivo
(localizado mais anteriormente que o crtex visual) projetam axnios ao ncleo mdio
Figura 7.24 geniculado do tlamo.
Gradiente invertido na formao do crtex Nem a organizao vertical e nem a horizontal so especificamente clonadas. Na
cerebral no macaco rhesus. Os aniversrios verdade, existe um grande nmero de movimentos celulares que misturam a descen-
dos neurnios corticais foram determinados dncia de vrias clulas precursoras. Aps sua mitose final, a maioria dos neurnios
injetando [3H]-timidina endovenosamente nos recm- gerados migram radialmente, ao longo dos prolongamentos da glia, para fora
animais em determinados tempos de gestao. da zona ventricular (ependimria) e formam a placa cortical abaixo da pia-mater do
Aps o nascimento dos animais, verificou-se crebro. Assim como no crtex cerebelar, os neurnios com os aniversrios mais
que as clulas mais fortemente marcadas eram
cedo formam a camada mais prxima do ventrculo. Os neurnios subseqentes cami-
aquelas que estavam na fase S do seu ltimo
nham distncias maiores para formar as camadas mais superficiais do crtex. Isso
ciclo de diviso. Essas clulas migraram para
vrias regies e foram detectadas por auto- forma um gradiente de desenvolvimento ao avesso (ou invertido) (Figura 7.24;
radiografia de cortes microscpicos. A figura Rakic, 1974). Uma nica clula germinativa pode produzir neurnios (e clulas gliais)
representa a posio desses neurnios indica-
dos no crtex visual. O tempo de gestao no
macaco rhesus de 165 dias. Os neurnios
mais jovens esto na periferia do tubo neural
(De acordo com Rakic, 1974.)
Injees de [3H] - timidina
Camadas
corticais
Massa
branca
Camada
ventricular
Dias de gestao Nascimento

(A) [3H]-timidina no dia embrionrio 29 (C) (D)
Migrao neural
do hospedeiro
Migrao
neural do
Porcentagem de neurnios marcados com [3H]-timidina
hospedeiro
Camadas corticais
Camada
intermediria
Massa
branca
Camadas corticais
[3H]-timidina no dia ps-natal 1 Camada

ventricular Clula glial
Destino independente da Destino condicionado ao

clula quando transplantada hospedeiro quando
aps ltima fase S. transplantado na fase S.
Figura 7.25
Determinao de identidade laminar em crebro de doninha. (A) Precursores neuronais pre-
coces (aniversrios no dia embrionrio 29) migram para a camada 6. (B) Precursores neuronais
tardios (aniversrios no dia ps-natal 1) migram mais adiante para as camadas 2 e 3. (C)
Quando os precursores precoces (vermelho) so transplantados em zonas ventriculares mais
velhas, aps sua ltima fase S mittica, os neurnios que eles formam migram para a camada
Massa 6. (D) Se esses precursores so transplantados antes ou durante sua ltima fase S, seus
branca neurnios migram (com os neurnios do hospedeiro) para a camada 2. (De acordo com
Camadas corticais McConnell e Kaznowski,1991.)
em qualquer das camadas corticais (Walsh e Cepko, 1988). Mas, como que a clula
reconhece a camada na qual deve entrar? McConnell e Kaznowski (1991) mostraram
que a determinao da identidade laminar (isto , para qual camada a clula migrar)
feita durante a diviso celular final. Clulas transplantadas de crebros jovens (onde
elas formariam a camada 6) para crebros mais velhos, cujos neurnios migratrios
esto formando a camada 2 aps sua ltima diviso, mantm seu destino e migram
somente para a camada 6. Entretanto, se as clulas so transplantadas antes de sua
diviso final (na metade da fase S), elas no tm destino fixo e podem migrar para a
camada 2 (Figura 7.25). Os destinos de clulas progenitoras mais velhas so mais
determinados. As clulas cerebrais corticais progenitoras precoces tm o potencial
para transformarem-se em qualquer neurnio (nas camada 2 ou 6, por exemplo), mas as
clulas corticais progenitoras tardias do origem somente a neurnios da camada
superior (camada 2) (Frantz e McConnell, 1996). Ainda no conhecemos a natureza da
informao transmitida clula ao ser fixado o seu destino.
Nem todos os neurnios migram radialmente. ORourke e seus colegas (1992)
marcaram neurnios jovens com corante fluorescente e seguiram sua migrao atra-
vs do crebro. Enquanto mais ou menos 80% dos jovens neurnios migraram radial-
mente em processos gliais, da zona ventricular para a placa cortical, aproximadamente
12% deles migraram lateralmente de uma regio funcional do crtex para outra. Essas
observaes esto de acordo com aquelas de Walsh e Cepko (1992), que infectaram
clulas ventriculares com um retrovrus e conseguiram corar essas clulas e seus
descendentes aps o nascimento. Eles descobriram que os descendentes neurais de
uma nica clula ventricular estavam dispersos atravs das regies funcionais do
crtex. Quando neurnios do crtex do crebro anterior foram transplantados para a
regio que formaria o corpo estriado, essas clulas adquiriram a morfologia do estriado
(Fishell, 1995). Portanto, a especificao de funes determinadas pelas reas corticais
ocorre aps a neurognese. Considera-se que chegando a seu destino final, as clulas
produzem molculas adesivas especficas que as organizam e as agrupam como ncle-
os cerebrais (Matsunami e Takeichi, 1995).
O crebro bastante plstico e o desenvolvimento do crtex neopleo humano
particularmente notvel a esse respeito. O crebro humano continua a se desenvolver
na velocidade do desenvolvimento fetal, mesmo aps o nascimento (Holt et al., 1975).
Baseado em critrios morfolgicos e de comportamento, Portmann (1941, 1945) suge-
riu que, comparada com outros primatas, a gestao humana deveria durar 21 meses
em lugar de 9. Entretanto, nenhuma mulher poderia dar luz um feto de 21 meses, pois
sua cabea no passaria pelo canal do parto; assim a espcie humana d luz aps 9
meses. Montagu (1962) e Gould (1977) sugeriram que durante o primeiro ano de vida,
somos essencialmente fetos extra-uterinos, e eles especulam que a inteligncia huma-
na vem da estimulao do sistema nervoso que est se formando durante aquele
primeiro ano.*
Tipos de neurnios
O crebro humano consiste de mais de 1011 clulas nervosas (neurnios) associadas
com mais de 1012 clulas gliais. Aquelas clulas que permanecem como componentes
integrais do revestimento do tubo neural se transformam em clulas ependimrias.
Essas clulas podem dar origem a precursores de neurnios e clulas gliais. Conside-
ra-se que a diferenciao dessas clulas precursoras principalmente determinada
pelo ambiente no qual elas entram (Rakic e Goldman, 1982) e que, em pelo menos
alguns casos, uma determinada clula precursora pode formar ambos, neurnios e
clulas gliais (Turner e Cepko, 1987). Existe uma grande variedade de tipos de neur-
nios e clulas gliais (como fica evidente pela comparao entre uma clula granular
relativamente pequena e o enorme neurnio de Purkinje). As delgadas extenses das
clulas, usadas para captar impulsos eltricos so chamadas dendritos (Figura 7.26).
Alguns neurnios desenvolvem somente alguns dendritos, enquanto outras clulas
(como os neurnios de Purkinje) desenvolvem extensas reas para interaes celula-
res. Muito poucos dendritos so encontrados em neurnios corticais no nascimento,
mas uma das coisas maravilhosas, a respeito do primeiro ano de vida do ser humano,
o aumento do nmero dessas regies receptivas nos neurnios corticais. Durante
esse ano, cada neurnio cortical desenvolve um nmero suficiente de dendritos (ou
superfcie dendrtica) para acomodar at 100.000 conexes com outros neurnios. O
neurnio cortical, em mdia, se conecta com 10.000 outros neurnios. Esse padro de
conexes neurais (sinapses) permite ao crtex humano funcionar como o centro para
o aprendizado, raciocnio e memria, e a desenvolver a capacidade de expresso sim-
blica, bem como a produo de respostas a estmulos interpretados.
Outra caracterstica importante de um neurnio em desenvolvimento seu axnio
(s vezes chamado um neurito). Enquanto os dendritos so freqentemente numero-
sos e no se extendem muito alm do corpo da clula nervosa, ou soma, os axnios
podem se alongar por vrios centmetros. Os receptores da dor no dedo grande (hlux)
do p, por exemplo, precisam transmitir suas mensagens por um longo caminho at a
* Ao contrrio do que afirma um filme antiaborto, amplamente divulgado, o crtex cerebral

humano no tem conexes neurnicas na 12a semana de gestao (e, portanto, no pode se mover
em resposta a um pensamento, nem mostrar conscincia ou medo). A atividade eltrica mensurvel,
caracterstica de clulas neurais (o padro do eletroencefalograma, ou EEG) verificada inicialmen-
te aos 7 meses de gestao. Morowitz e Trefil (1992) sugeriram provocativamente que tendo a
sociedade, nos Estados Unidos, aceito que a definio de morte a perda do padro de EEG, talvez
ela devesse aceitar a aquisio do padro de EEG como o comeo da vida humana.
Dendritos Figura 7.26

Diagrama de um neurnio motor. Impulsos recebidos pelos dendritos e o neurnio estimula-
do podem transmitir impulsos eltricos atravs do axnio (que podem ter 60 a 90 cm de
comprimento) para o tecido alvo. A bainha de mielina que promove o isolamento do axnio
formada pelas clulas de Schwann adjacentes. (De acordo com Bloom e Fawcett, 1975.)
RECEPTOR
Cone do
axnio
Segmento
inicial
do axnio Chegada de impulsos
via axnios de outros
neurnios
CONDUTOR N de
Ranvier
Impulso
nervoso
Clula de
Schwann
Bainha de mielina
EFETOR
Msculo esqueltico
medula espinhal. Um dos conceitos fundamentais da neurobiologia que o axnio

uma extenso contnua do corpo da clula nervosa. Na virada do sculo vinte, vrias
teorias competiam para explicar a formao de axnios. Schwann, um dos fundadores
da teoria celular, acreditava que numerosas clulas neurais se ligavam umas s outras,
em forma de cadeia, para formar um axnio. Hensen, o descobridor do ndulo embrio-
nrio, admitia que o axnio se formava ao redor de fibras citoplasmticas pr-existen-
tes entre as clulas. Wilhelm His (1886) e Santiago Ramn y Cajal (1890) postularam
que o axnio era, na verdade, uma projeo (apesar de extremamente grande) do corpo
celular (soma). Em 1907, Ross Harrison demonstrou a validade da teoria da projeo
com um elegante experimento que foi a pedra fundamental tanto da cincia do desen-
volvimento neurobiolgico como da tcnica de cultura de tecidos. Harrison isolou
uma poro de um tubo neural de um girino de r de 3mm; nesse estgio, logo aps o
fechamento do tubo neural, no h uma diferenciao visvel dos axnios. Ele colocou
esses neuroblastos em uma gota de linfa de r sobre uma lamnula e a inverteu sobre
outra lmina com depresso, de modo a poder observar o que se passava nessa gota
pendente. O que Harrison viu foi a emergncia de axnios como projees dos neu-
roblastos, alongando a 56 m/hora.
Esse prolongamento do nervo liderado pela ponta do axnio, chamada de cone
de crescimento (Figura 7.27). Esse cone no progride em linha reta, mas vai abrindo
caminho ao longo do substrato. O cone de crescimento se move por elongao e
contrao de filopdios afilados, chamados microespculas. Essas microespculas
contm microfilamentos, orientados paralelamente ao eixo longo do axnio (essa
uma situao similar quela dos microfilamentos filopdicos das clulas mesenquima-
tosas secundrias em equinodermos). Tratando os neurnios com citocalasina B, as
microespculas de actina so destrudas, inibindo seu avano ulterior (Yamada et al.,
1971; Forscher e Smith, 1988). Dentro do prprio axnio, o suporte estrutural
Microespculas
Cone de crescimento
(A) (B) (C)
Figura 7.27
Microespculas de actina em cones de crescimento de axnios como vistos por (A) microscopia
eletrnica de transmisso, (B) microscopia de contraste da interface diferencial e (C) microscopia
de fluorescncia com anticorpos fluorescentes actina. (A de Letourneau,1979; B e C de
Forscher e Smith, 1988. Todas fotografias, cortesia dos autores.)
fornecido por microtbulos, e o axnio se retrair se for colocado em uma soluo de

colchicina. Assim, o neurnio em desenvolvimento retm as mesmas cartactersticas
que foram observadas nas regies de articulao dorsolateral do tubo neural, a saber,
alongamento por microtbulos e modificaes da forma apical pelos microfilamentos.
Como na maioria das clulas migratrias, os filopdios exploratrios do axnio aderem
ao substrato e exercem uma fora que puxa o resto da clula para frente. Os axnios
no crescero se o cone de crescimento no conseguir avanar (Lamoureux et al.,
1989). Alm da funo estrutural na migrao de axnios, os filopdios tm tambm
uma funo sensorial. Explorando o ambiente frente do cone de crescimento, cada
filopdio faz a amostragem dos microambientes e manda sinais de volta para o corpo
da clula (Davenport et al., 1993). Como veremos no Captulo 8, os filopdios so as
organelas fundamentais envolvidas na determinao do caminho do neurnio.
Neurnios transmitem impulsos eltricos de uma regio a outra. Usualmente esses
impulsos vo dos dendritos soma do nervo, de onde so focalizados nos axnios.
Para impedir a disperso do sinal eltrico e facilitar a sua conduo, o axnio, no
sistema nervoso central isolado em intervalos por processos que se originam de um
tipo de clula glial chamada oligodendrcito. Um oligodendrcito se enrola ao redor
do axnio em desenvolvimento; produz, ento, uma membrana especializada que rica
em protena bsica mielina e se espirala ao redor do axnio central (Figura 7.28). Essa
membrana especializada chamada bainha de mielina. (No sistema nervoso perifrico,
uma clula glia chamada clula de Schwann realiza essa mielinizao.) A bainha de
mielina essencial para uma adequada funo neural, e a desmielinizao das fibras
nervosas est associada convulses, paralisia e vrios outros problemas de sade,
debilitantes ou mortais. No mutante trembler do camundongo, as clulas de Schwann
no conseguem produzir um determinado componente protico da bainha de mielina,
fazendo com que a mielinizao do sistema nervoso perifrico seja deficiente, mas
normal no sistema nervoso central. Ao contrrio, em outro mutante de camundongo,
jimpy, o sistema nervoso central deficiente em mielina, enquanto o perifrico no
afetado (Sidman et al., 1964; Henry e Sidman, 1988).
O axnio tambm precisa ser especializado na secreo de neurotransmissores
especficos nos pequenos espaos (fendas sinpticas) que separam o axnio da su-
perfcie da clula alvo (soma, dendritos, ou o axnio de um neurnio receptor ou um
Figura 7.28
Mielinao nos sistemas nervosos central e perifrico. (A) No
Clula oligodendroglial sistema nervoso perifrico, as clulas de Schwann se enrolam ao
redor do axnio; no sistema nervoso central, a mielinao reali-
zada por prolongamentos de oligodendrcitos. (B) O mecanismo
desse enrolamento leva produo de um enorme complexo de
membrana. (C) Micrografia de um axnio envolvido pela mem-
Axnio MIELINIZAO brana de mielina de uma clula de Schwann. (Fotografia cortesia
NO SISTEMA
de C. S. Raine.)
NERVOSO CENTRAL
N de Ranvier
Axnio MIELINIZAO NO
SISTEMA NERVOSO PERIFRICO
(A) Clula de Schwann
(B) Clula de Schwann
Axnio (C)
stio receptor em um rgo perifrico). Alguns neurnios so capazes de sintetizar e

secretar acetilcolina, enquanto outros desenvolvem vias enzimticas para sintetizar e
secretar epinefrina, norepinefrina, octopamina, serotonina, cido aminobutrico,
dopamina, ou algum outro neurotransmissor. Cada neurnio precisa ativar aqueles
genes responsveis pela produo de enzimas capazes de sintetizar seus
neurotransmissores. Portanto, o desenvolvimento neurnico envolve diferenciao
tanto estrutural como molecular.
Desenvolvimento do olho em vertebrados

O indivduo conhece seu ambiente pelos seus rgos sensoriais. Os principais rgos
do sentido da cabea se desenvolvem a partir das interaes do tubo neural com uma
srie de espessamentos epidrmicos chamados de placdios ectodrmicos cranianos.
Os placdios mais anteriores so os dois placdios olfativos que formam os gnglios
dos nervos olfativos, responsveis pelo sentido do olfato. Os placdios auditivos, da
mesma maneira, se invaginam para formar o labirinto do ouvido interno, cujos neur-
nios formam o gnglio acstico que nos permite ouvir. Nessa parte, focalizaremos o
olho porque esse rgo, mais que qualquer outro do corpo, precisa se desenvolver
com uma coordenao exata.
Dinmica do desenvolvimento tico
A histria do desenvolvimento tico comea na gastrulao, quando o endoderma

involutivo e o mesoderma interagem com o adjacente, prospectivo ectoderma da cabe-
a. Essa interao induz o ectoderma da cabea formao de lentes (cristalino) (Saha
et al., 1989). *Mas, nem todas as partes do ectoderma da cabea formam os cristalinos,
e o cristalino deve ter uma relao precisa com a retina. A ativao dessa habilidade
* As indues que permitem a formao do olho sero detalhadas no Captulo 17.

Ectoderma Parede do
Camada
da cabea crebro anterior
pigmentada
Vescula Camada
ptica neural
primria Vescula
ptica Cristalino
Vescula
do
Placdio cristalino
do
cristalino
(A) Embrio de 4-mm (B) Embrio de 4.5-mm (C) Embrio de 5-mm (D) Embrio de 7-mm
Figura 7.29
Desenvolvimento do olho de vertebrado. (A)
A vescula ptica evagina do crebro e contata latente na formao do cristalino e o posicionamento do cristalino em relao retina
o ectoderma sobreposto. (B,C) O ectoderma realizado pela vescula ptica. No homem, as vesculas pticas tm incio como duas
sobreposto diferencia-se em clulas do crista- protuberncias nas paredes laterais do diencfalo em embries de 22 dias (Figura
lino enquanto as vesculas pticas se dobram 7.29). Essas protuberncias continuam a crescer lateralmente ao tubo neural e esto
sobre si mesmas e os placdios do cristalino ligadas ao diencfalo por pednculos pticos. Subseqentemente, quando essas
se tornam vesculas do cristalino. (C) A vescula vesculas atingem o ectoderma da cabea, essa se espessa formando o placdio do
ptica se torna a retina neural e pigmentada,
cristalino. A necessidade de um contato ntimo entre as vesculas pticas e o ectoder-
enquanto o cristalino internalizado. (D) A
vescula do cristalino induz o ectoderma so-
ma superficial comprovada experimentalmente e em certos mutantes. Por exemplo, no
breposto a se tornar crnea. (Ilustraes su- mutante de camundongo, eyeless, as vesculas pticas no fazem contato com a su-
periores de acordo com Mann, 1964; micro- perfcie e a formao do olho cessa (Webster et al., 1984).
grafias A-C de Hilfer e Yang, 1980, cortesia de Uma vez formado, o placdio do cristalino causa, de maneira recproca, modifica-
S. R. Hilfer; D, cortesia de K. Tosney.) es na vescula ptica que sofre uma invaginao formando um clice ptico de
parede dupla (veja Figura 7.29C). medida que a invaginao continua, a conexo
entre o clice ptico e o crebro reduzida, tornando-se alongada e estreita. Ao
mesmo tempo, as duas camadas do clice ptico comeam a se diferenciar em direes
diferentes. As clulas da camada externa produzem pigmentos e finalmente se trans-
formam na retina pigmentada (um dos poucos tecidos, alm das clulas da crista
neural, que podem sintetizar sua prpria melanina). As clulas da camada interna
proliferam rapidamente e do origem a uma variedade de glia, neurnios ganglionrios,
interneurnios e neurnios fotorreceptores sensveis luz. Coletivamente, essas cons-
tituem a retina neural. Os axnios das clulas ganglionares da retina neural se encon-
tram na base do olho e se dirigem para baixo, pelo pednculo ptico. O pednculo
ento chamado nervo ptico.
Diferenciao da retina neural

Como os crtices cerebral e cerebelar, a retina neural se desenvolve em uma sucesso
de camadas com diferentes tipos de neurnios (Figura 7.30). Essas camadas incluem
as clulas fotorreceptoras sensveis luz e cor (bastonetes e cones), os corpos
celulares das clulas ganglionrias e os interneurnios bipolares que transmitem o
Bastonetes e cones
dos fotorreceptores
Corpos celulares
Camada dos fotorreceptores
neuroblstica
externa Camada
plexiforme externa
Camada dos
nervos bipolares
Camada
neuroblstica Camada
interna plexiforme interna
Camada de clulas ganglionares
Fibras do nervo ptico
Clulas ganglionares Luz
(A) (B) (C) (D)
estmulo eltrico dos bastonetes e cones s clulas ganglionrias. Alm disso, existem Figura 7.30
numerosas clulas gliais de Mller que mantm a integridade da retina, bem como Desenvolvimento da retina humana. Neur-
neurnios amcrinos (sem grandes axnios) e neurnios horizontais que transmitem nios da retina se distribuem em camadas fun-
impulsos eltricos no plano da retina. cionais durante o desenvolvimento. (A,B)
Separao inicial de neuroblastos dentro da
Nos estgios iniciais do desenvolvimento da retina, a diviso celular de uma cama-
retina. (C) As trs camadas de neurnios na
da embrionria e a migrao e morte diferencial das clulas resultantes formam o retina adulta e as camadas sinpticas entre
padro laminar, estriado, da retina neural. A formao desse tecido altamente estruturado elas. (D) Uma apresentao funcional dos
um dos problemas mais intensamente estudado em neurobiologia do desenvolvi- principais caminhos dos neurnios na retina.
mento. Mostrou-se que (Turner e Cepko, 1987) uma nica clula precursora do A luz atravessa as camadas at ser recebida
neuroblasto retinal pode dar origem a pelo menos trs tipos de neurnios ou dois pelos fotorreceptores. Os axnios dos fotorre-
tipos de neurnios e uma clula glia. Essa anlise foi feita usando uma tcnica enge- ceptores fazem sinapse com neurnios bipo-
nhosa para marcar as clulas geradas por uma clula precursora especfica. Ratos lares que transmitem a despolarizao para
recm-nascidos (cujas retinas ainda esto se desenvolvendo) foram injetados, no os neurnios ganglionares. Os axnios das
clulas ganglionares se renem para formar o
fundo do olho, com um vrus que se integra ao seu DNA. Esse vrus continha um gene
nervo ptico que entra no crebro. (A e B
da -galactosidase (no presente na retina do rato) que seria expresso somente nas segundo Mann, 1964; fotografia cortesia de
clulas infectadas. Um ms aps a infeco dos ratos, as retinas foram removidas e G. Grunwald.)
coradas para detectar a presena de -galactosidase. Somente os descendentes das
clulas infectadas deveriam ser coradas de azul. A Figura 7.31 mostra uma fita de
clulas derivadas de uma clula precursora infectada. A colorao pode ser vista em
cinco bastonetes, um neurnio bipolar e uma clula glia (Mller).
(A) Figura 7.31

(B)
Determinao da linhagem de uma clula pre-
cursora na retina do rato. (A) Tcnica pela
qual um vrus contendo um gene de -
galactosidase funcional injetado na parte dor-
Remova a
retina, fixe sal do olho para infectar algumas das clulas
e core e precursoras da retina. Aps um ms ou 6 se-
analise os manas, o olho removido e a retina corada
clones para -galactosidase. (B) Clulas coradas for-
4-6 semanas
Cristalino mando uma banda atravs da retina neural, in-
cluindo 5 bastonetes (r), um neurnio bipolar
(bp), um neurnio terminal (t) e clulas gliais
Retina de Mller (mg). As identidades dessas clulas
foram confirmadas por microscopia de con-
Epitlio traste Nomarski. (Barra de escala, 20 m). (de
pigmentado Turner e Cepko, 1987, fotografia cortesia de
D. Turner.)
Muitas clulas do crebro anterior expressam um fator de transcrico chamado

Pax6. Essa protena parece ser especialmente importante para o desenvolvimento da
retina. Na verdade, pode ser um denominador comum para clulas fotorreceptoras em
todos os filos. O gene Pax6 tem provavelmente muitos papis, e um deles determinar
tecidos a se tornarem olhos. Se o gene Pax6 do camundongo inserido no genoma da
Drosophila e ativado casualmente, olhos se formam nas clulas onde o Pax6 do
camundongo est sendo expresso (Halder et al., 1995)! Apesar do gene ser tambm
expresso no crebro anterior e posterior e em placdios nasais murinos, os olhos
parecem ser os mais sensveis sua falta. No homem e no camundongo, heterozigotos
Pax6 tm olhos pequenos, enquanto homozigotos nas mesmas espcies (e na Droso-
phila) no tm olhos (Jordan et al., 1992; Glaser et al., 1994; Quiring et al., 1994). Esse
gene ser mais discutido no Captulo 23.
& Especulaes
Porque os bebs no enxergam bem
R ecm-nascidos humanos no
tm boa viso. Devem existir v-
rias razes para isso, mas a que
mais chama a ateno a imaturidade dos
basais. A Figura 7.32 destaca as diferen-
as entre os fotorreceptores em retinas
neonatal e adulta. A retina neonatal tem
receptores fracamente diferenciados, e
mero de fotorreceptores por rea da reti-
na tambm impede bebs de discriminar
dois pontos distncia. Essa pode ser a
razo pela qual os bebs apenas respon-
fotorreceptores da retina. Estudos anat- aqueles que existem so to largos que dem a estmulos visuais quando esses so
micos realizados por Yuodelis e Hendrick- poucos cabem em uma dada rea. Banks e trazidos prximo s suas faces. O desen-
son (1986) e estudos fsicos por Banks e Bennett calcularam que isso causa um volvimento dos fotorreceptores da retina
Bennett (1988) mostraram que os cones decrscimo de absoro de luz na regio no homem um excelente exemplo de di-
fotorreceptores da retina central do recm- central da retina do recm-nascido que ferenciao que comea cedo no desen-
nascido tm mais de 7.5m de dimetro, 350 vezes pior do que a absoro de uma volvimento, mas que no se completa at
que diminui at o valor adulto normal de mesma rea no adulto. Esse pequeno n- anos aps o nascimento.
2m em cerca de 3 anos. Durante esse tem-
po, a densidade em cones nessa regio
aumenta de 18 fotorreceptores para 42 por
100 m, e os fotorreceptores desenvol-
vem tanto seus segmentos externos (que
captam a luz) quanto os seus axonais
Figura 7.32
Desenvolvimento de cones fotorreceptores na
regio central da retina humana. Sees de
microscopia de luz foram fotografadas e um
cone em cada retina delineado para clareza. O
epitlio pigmentado (PE), a camada plexiforme (A)
externa (OPL), a glia de Mller (M), e os seg-
mentos externos do fotorreceptor (OS) foram
(B)
marcados. (A) Feto de gestao de 22 semanas.
(B) Neonato 5 dias aps o nascimento. (C) Pes-
soa de 72 anos. A flecha aponta para a membra-
na limitante externa, que originalmente serviu
como borda para os axnios da retina. O axnio
delineado em (C) na realidade mais curto que
o normal, permitindo que a sinapse com o
neurnio bipolar possa ser mostrada na figura.
(C)
A sinapse formada no pedculo sinptico do
cone (CP). (de Yuodelis e Hendrickson, 1986,
cortesia de A. Hendrickson.)
Diferenciao do cristalino e da crnea
Durante o seu desenvolvimento progressivo em cristalino, o placdio do cristalino se

arredonda e contata o novo ectoderma que o recobre (veja Figura 7.29D). O ectoderma
ento induzido pela vescula do cristalino a formar a crnea transparente. Aqui,
parmetros fsicos tm um papel importante no desenvolvimento do olho. Presso de
fluido intraocular necessria para uma correta curvatura da crnea, de modo que a
luz possa ser focalizada na retina. A importncia dessa presso ocular pode ser de-
monstrada experimentalmente; a crnea no desenvolver sua curvatura caractersti-
ca quando um pequeno tubo de vidro for inserido atravs da parede do olho da
galinha em desenvolvimento, para drenar os fluidos intraoculares (Coulombre, 1956,
1965). A presso intraocular sustentada por um anel de ossos esclerais (provavel-
mente derivados da crista neural), que funciona como uma restrio sem elasticidade.
A diferenciao do tecido do cristalino em uma membrana transparente capaz de
dirigir a luz na retina envolve modificaes na estrutura e forma celulares, assim como
a sntese de protenas especficas do cristalino chamadas cristalinas (Figura 7.33). As
cristalinas so sintetizadas enquanto a clula muda de forma, assim, fazendo com que
a vescula do cristalino se torne o cristalino definitivo. As clulas da poro interna da
vescula do cristalino se alongam, e sob a influncia da retina neural, produzem as
fibras do cristalino (Piatigorski, 1981). Enquanto as fibras continuam a crescer, elas
sintetizam cristalinas, as quais acabam enchendo a clula, causando a extruso do
ncleo. As fibras sintetizadoras de cristalinas continuando a crescer e preenchem o
espao entre as duas camadas da vescula do cristalino. As clulas anteriores da
vescula do cristalino constituem um epitlio embrionrio que continua a se dividir.
Essas clulas em diviso se movem em direo ao equador da vescula, e ao passar
pela regio equatorial elas tambm comeam a se alongar (Figura 7.33D). Assim, o
cristalino contm trs regies: uma zona anterior com clulas epiteliais em diviso,
uma zona equatorial de elongao celular e uma zona posterior e central de clulas
fibrosas contendo cristalinas. Esse arranjo persiste ao longo da vida do animal, pois
as fibras so continuamente depositadas. Na galinha adulta, a diferenciao de uma
clula epitelial em uma fibra do cristalino leva 2 anos (Papaconstantinou, 1967).
Figura 7.33
Diferenciao das clulas do cristalino. (A)
Vescula do cristalino conforme mostrada na
Figura 7.29. (B) Alongamento das clulas in-
Cavidade teriores, produzindo fibras do cristalino. (C)
oca da Cristalino cheio de clulas sintetizando o cris-
vescula do talino. (D) Novas clulas do cristalino deriva-
cristalino das do epitlio anterior do cristalino. (E)
medida que o cristalino cresce, novas fibras
se diferenciam e os ncleos degeneram. (Se-
Epitlio gundo Paton e Craig, 1974.)
do cristalino
(A) (B) Cpsula anterior

Fibras primrias
do cristalino
se alongando
Epitlio
anterior
do cristalino
Regio
equatorial
Fibras secundrias
Fibras
do cristalino
primrias
(C) (D) (E)
do cristalino Fibras Cpsula Fibras primrias
secundrias do cristalino posterior do cristalino do cristalino
Diretamente frente do cristalino, est um tecido muscular pigmentado chamado

ris. Esses msculos controlam o tamanho da pupila (e d ao indivduo a cor caracte-
rstica de seus olhos). Parte da ris derivada da camada ectodrmica, o que diferente
de outros msculos do corpo (que so derivados do mesoderma). Especificamente,
essa regio da ris se desenvolve de uma poro do clice ptico que contnua com
a retina neural, mas no produz fotorreceptores.
Q A CRISTA NEURAL
A crista neural e seus derivados
Embora derivada do ectoderma, a crista neural algumas vezes considerada a quarta
camada germinativa devido sua importncia. Tem sido dito, talvez hiperbolicamente,
que a nica coisa interessante a respeito dos vertebrados a crista neural (citado
em Thorogood, 1989). As clulas da crista neural se originam na regio mais dorsal do
tubo neural. Experimentos com transplantes, onde uma placa neural de codorna
enxertada no ectoderma no-neural de galinha, mostram que justapondo esses teci-
dos se induz a formao de clulas da crista neural e que ambas, as prospectivas placa
neural e a epiderme, contribuem para a crista neural (Selleck e Bronner-Fraser, 1995;
Mancilla e Mayor, 1996). As clulas da crista migram extensivamente dando origem a
um incrvel nmero de tipos de clulas diferenciadas. Esses incluem (1) os neurnios
e clulas gliais dos sistemas nervosos sensorial, simptico e parassimptico, (2) as
clulas produtoras de epinefrina (medula) da glndula supra-renal, (3) as clulas
pigmentares da epiderme, e (4) muitos dos componentes dos tecidos esquelticos e
conjuntivos da cabea. O destino das clulas da crista neural depende, na sua maioria,
do lugar para onde elas migram e onde se instalam. A crista neural pode ser dividida em
quatro principais (mas parcialmente sobrepostos) domnios:
A crista neural ceflica (cabea), cujas clulas migram dorsolateralmente para
produzir o mesnquima craniofacial que se diferencia em cartilagem, osso, neu-
rnios cranianos, glia e tecidos conjuntivos da face. Essas clulas tambm
entram nas bolsas farngeas para originar as clulas do timo, odontoblastos
dos primrdios dos dentes e a cartilagem do ouvido interno e o queixo.
A crista neural do tronco, cujas clulas tomam um de dois caminhos princi-
pais. Clulas da crista neural, que se tornam os melancitos sintetizadores de
pigmentos, migram dorsolateralmente para o ectoderma, e continuam em seu
caminho em direo linha mdia ventral do abdmen. Entretanto, a maioria da
clulas da crista neural do tronco passa ventrolateralmente atravs da metade
anterior de cada esclertomo. (Esclertomos so blocos de clulas mesodrmi-
cas que cercam o tubo neural e diferenciam-se na cartilagem vertebral da espi-
nha.) Essas clulas da crista neural do tronco que permanecem nos esclertomos
formam os gnglios dorsais da raiz. As clulas que continuam mais ventral-
mente formam os gnglios simpticos, a medula da supra-renal e o agrupa-
mento de nervos circundando a aorta.
A crista neural cervical e sacral, cujas clulas do origem aos gnglios
parassimpticos (entricos) do intestino (Le Douarin e Teillet, 1973; Pomeranz
et al., 1991). A crista cervical tem posio oposta aos somitos 1-7 da galinha,
enquanto que a crista neural sacral posterior ao somito 28. A ausncia de
migrao da clula da crista neural para o clon resulta na falta de gnglios
entricos e, portanto, a ausncia de movimento peristltico nessa regio.
Isso resulta na obstruo funcional, dilatao e aumento da regio acima do
clon (megaclon).
Tabela 7.1 Alguns derivados da crista neural
Derivado Tipo de clula ou estrutura derivados
Sistema nervoso perifrico Neurnios, incluindo gnglios sensoriais

(PNS) gnglios simpticos e parassimpticos,
e plexos
Clulas neurogliais
Clulas de Schwann
Derivados endcrinos e Medula supra-renal

paraendcrinos Clulas secretoras de calcitonina
Clulas do tipo I do corpo carotdeo
Clulas pigmentadas Clulas epidrmicas pigmentadas
Cartilagem facial e ossos Cartilagem facial e ventral anterior do crnio e ossos
Tecido conjuntivo Endotlio e estroma corneano

Papilas dentais
Derme, msculo liso e tecido adiposo da
pele da cabea e do pescoo
Tecido conjuntivo das glndulas salivares,
lacrimais, do timo, tireide e pituitria
Tecido conjuntivo e msculo liso nas
artrias originadas do arco artico
Fonte: Segundo Jacobson, 1991, baseado em mltiplas fontes.
A crista neural cardaca pode estar localizada entre as cristas ceflica e do

tronco. Existem evidncias de que essas clulas da crista neural esto situadas
desde o primeiro at o terceiro somito de embries de galinha, sobrepondo-se
poro vagal anterior da crista neural que se estende do primeiro ao stimo
somito (Kirby, 1987; Kirby e Waldo, 1990). Essas clulas da crista neural podem
se desenvolver em melancitos, neurnios, cartilagem e tecido conjuntivo (do
terceiro, quarto e sexto arcos farngeos). Alm disso, essa regio da crista
neural produz a parede total do tecido muscular conjuntivo das grandes artri-
as ao se originarem do corao, como tambm contribui para o septo que
separa a circulao pulmonar da aorta (Le Livre e Le Douarin, 1975).
A Tabela 7.1 sumariza alguns tipos de clulas derivadas da crista neural.
A crista neural do tronco

Vias de migrao das clulas da crista neural do tronco
Como mostra a Figura 7.2, a crista neural do tronco uma estrutura transitria, pois
suas clulas se dispersam logo aps o fechamento do tubo neural. Existem duas vias
principais seguidas pelas clulas migratrias da crista neural (Figura 7.34).
A VIA DORSOLATERAL. Uma via possvel para migrao das clulas da crista neural
do tronco a via dorsolateral, pela qual os precursores dos melancitos se movem
pela periferia do embrio atravs do mesoderma subjacente derme. Elas penetram no
ectoderma atravs de minsculos orifcios na membrana basal (as quais elas podem
produzir) e colonizam a pele e os folculos, onde elas se diferenciam em melancitos
Epiderme
Tubo neural Caudal
Dermomitomo
Esclertomo
Notocorda
Clulas da Via 2 tomam um
rota dorsolateral entre a epiderme
Aorta Post.
e o dermomitomo
Ant.
Somito
Rostral
Clulas da Via 1
viajam ventralmente atravs
Figura 7.34 do mitomo anterior
Migrao das clulas da crista neural no tron-
co do embrio do pinto. Via 1: As clulas via-
jam ventralmente atravs do esclertomo an-
terior (aquela poro do somito que gera a car-
tilagem vertebral). Aquelas clulas inicialmen-
te opostas s pores posteriores dos
esclertomos migram ao longo do tubo neural
at alcanar uma regio anterior. Essas clulas
contribuem para os gnglios simpticos e
parassimpticos assim como para as clulas
da medula supra-renal e os gnglios da raiz (Mayer, 1973; Erickson et al., 1992). Essa via foi demonstrada em uma srie de experi-
dorsal. Via 2: Algum tempo depois, clulas pe- mentos clssicos por Mary Rawles e outros (1948), que transplantaram o tubo neural
netram na rota dorsolateral abaixo do ectoder- e a crista de uma linhagem pigmentada de galinha para o tubo neural de um embrio de
ma. Essas clulas se tornam melancitos pro- galinha albina. O resultado foi uma galinha branca com penas coloridas em uma regio
dutores de pigmento. especfica (Figura 7.35A). A crista neural responsvel pela produo de todas as
clulas contendo melanina no organismo (com exceo de certos derivados neurais
como a retina pigmentada).
A VIA VENTRAL. Enxertando uma parte do tubo neural e a crista associada de embri-
es de galinha, radioativos ou geneticamente marcados, em outros embries, foi pos-
svel identificar outra rota principal de migrao das clulas da crista neural do tronco
(Weston, 1963; Le Douarin e Teillet, 1974), investigadores foram capazes de traar uma
outra rota maior de migrao das clulas da crista neural (Figura 7.35B,C). Estudos
mais recentes estenderam essas pesquisas usando anticorpos fluorescentes, corantes
vitais, ou clulas transformadas por vrus para marcar e seguir clulas individuais da
crista neural at seu destino. As clulas saindo pela via ventral se tornam neurnios
sensoriais (raiz dorsal) e simpticos, clulas adrenomedulares e clulas de Schwann.
Como pode ser visto na Figura 7.36 e Prancha 19, essas clulas da crista neural do
tronco migram ventralmente atravs da poro anterior, mas no da poro posterior
dos esclertomos (Rickmann et al., 1985; Bronner-Fraser, 1986; Loring e Erickson,
1987; Teillet et al. 1987). Teillet e colaboradores associaram o procedimento com
anticorpos a um transplante de clulas da crista neural de codornas geneticamente
marcadas, a embries de galinha. O anticorpo marcador reconhece e marca as clulas
da crista neural de ambas espcies; o marcador gentico permite aos pesquisadores
(A) (B)
Hospedeiro
Doador marcado
radioativamente
Figura 7.35 (C)

Migrao das clulas da crista neural. (A) Pinto resultante do transplante de uma regio da crista
neural do tronco de uma linhagem pigmentada de galinhas para uma regio da crista neural do
tronco de uma linhagem no-pigmentada. As clulas da crista que deram origem ao pigmento
foram capazes de migrar para a pele da asa. (B) Tcnica de enxerto para o mapeamento de clulas
da crista neural. Um pedao de eixo dorsal excisado de um embrio doador; o tubo neural e a
crista associada so isolados e implantados no embrio hospedeiro, cujo tubo neural e crista
haviam sido excisados. Quando as clulas da crista do doador so marcadas radioativamente
(com timidina tritiada) ou marcadas geneticamente (de uma espcie ou variedade diferentes),
seus descendentes podem ser detectados no embrio hospedeiro durante o processo do desen-
volvimento. (C) Auto-radiografia mostrando localizaes de clulas da crista neural que migra-
ram da crista neural radioativa doadora para formar melanoblastos (M), gnglios simpticos
(SG), gnglios da raiz dorsal (DRG) e clulas gliais (G). (A, fotografia original dos arquivos de
B. Willier; B segundo Weston, 1963; C cortesia de J. Weston.)
distinguir entre clulas de codorna e galinha. Esses estudos mostram que clulas da
crista neural, antes opostas regio posterior dos somitos, migram anteriormente ou
posteriormente ao longo do tubo neural penetrando, assim, na regio anterior de seus
somitos ou de outros adjacentes. Essas clulas da crista neural se juntam com outras
que inicialmente estavam opostas poro anterior dos somitos, e formam a mesma
estrutura. Dessa maneira, cada gnglio da raiz dorsal composto de trs populaes
de crista neural: uma da crista neural oposta poro anterior do somito e uma de cada
lado das regies de crista neural adjacentes, opostas s pores posteriores dos
somitos. Em regies especficas do tronco, clulas da crista migrando pela mesma via,
se agregam para formar gnglios simpticos e as clulas secretoras de epinefrina da
medula da supra-renal. A diviso parassimptica do sistema nervoso perifrico tam-
bm formada pelas clulas da crista neural migrando por essa via, mas somente nas
regies sacral e cervical do embrio.
A matriz extracelular e a migrao da crista neural do tronco
Em qualquer anlise de migrao (seja de pssaros, borboletas ou clulas da crista

neural) deve-se fazer trs perguntas: Como se inicia a migrao? Como os agentes
migratrios conhecem a via a ser percorrida? Quais sinais indicam que o destino foi
alcanado e que a migrao deve terminar? Mais ainda, deve -se perguntar se o agente
competente para responder a esses sinais. Clulas da crista neural, pr-migratrias,
expressam a protena Slug, um fator de transcrio. Oligonucleotdeos antisense
contra o mRNA do slug impediro a migrao da crista neural, sugerindo que a protena
Esclertomo Tubo Slug deve ser necessria para que a clula epitelial imvel se torne um migrante (Nieto
do somito neural et al., 1994). Outro fator em potencial na iniciao da migrao da clula da crista neural
a molcula de adeso N-caderina. Originalmente na superfcie da clula da crista
neural, ela regulada para decrescer na poca da migrao celular. Clulas da crista em
Anterior migrao no tm N-caderina em sua superfcie, mas comeam a express-la nova-
mente enquanto se agregam para formar a raiz dorsal e os gnglios simpticos (Takeichi,
1988; Akitaya e Bronner-Fraser, 1992). Ao mesmo tempo que as clulas da crista neural
Posterior perdem sua N-caderina e se tornam aptas a migrar como clulas individuais, a superf-
cie extracelular que as rodeia se torna mais adesiva (Perris et al., 1990). Parece haver
vias especficas que devem ser seguidas pelas clulas da crista neural e quando as
Anterior clulas, ou seus derivados, so colocadas (por transplante ou por injeo) em sua via
normal de migrao em um embrio hospedeiro, elas migram ao longo dessa (Bronner-
Fraser e Cohen, 1980; Erickson et al., 1980).
O caminho das clulas da crista neural controlado pela matriz extracelular do
Posterior
embrio (Newgreen e Gooday, 1985; Newgreen et al., 1986). Pesquisas sobre o desen-
volvimento de salamandra indicaram que a direo de migrao das clulas da crista
neural determinada pela matriz extracelular sobre a qual elas migram. Em salamandras
Anterior axolotle existe uma mutao onde h formao da crista neural mas suas clulas no
migram pela via dorsolateral. Isso pode ser visto facilmente pela falta de clulas
pigmentadas em todos os lugares, com exceo do topo do tubo neural desses ani-
Posterior mais (Figura 7.37), e essas clulas finalmente degeneram. Quando cristas neurais do
tipo selvagem so transplantadas para embries mutantes, as clulas da crista so
incapazes de migrar. Entretanto, quando cristas de embries mutantes so transplan-
tadas em embries selvagens, suas clulas migram normalmente (Spieth e keller, 1984).
Figura 7.36 Assim, o defeito nesse mutante est no ambiente em que as clulas encontram e no
Migrao de clulas da crista neural. Fotomi- nas prprias clulas. (A estrada deficiente mas no o veculo.) Lfberg e colaborado-
crografias de fluorescncia de sees longitu- res (1989) usaram essa informao para mostrar que a matriz extracelular contm com-
dinais de um embrio de pinto de dois dias, postos que so crticos na regulao da migrao das clulas da crista neural. Eles
marcadas com anticorpo HNK-1, que reco- adsorveram, em microtransportadores da membrana, a matriz extracelular da regio
nhece seletivamente as clulas da crista neural. subepidrmica da pele (atravs da qual migrariam as clulas da crista neural formado-
Extensa marcao vista na metade anterior,
ras de pigmentos). Os microtransportadores foram ento colocados junto s cristas
porm, no na posterior do esclertomo. (de
neurais de embries mutantes e do tipo selvagem, pouco antes do momento quando
Bronner-Fraser, 1986, cortesia de M.
Bronner-Fraser.) ocorreria a migrao. Os microtransportadores sozinhos no estimularam a migrao
em nenhum dos dois embries. Os microtransportadores contendo matriz extracelular
de mutantes tambm no estimularam migrao primativa de clulas da crista neural
em nenhum dos embries. Entretanto, aqueles transportadores contendo a matriz
extracelular do tipo selvagem estimularam a migrao de clulas da crista neural tanto
no embrio mutante como no selvagem, demonstrando assim a importncia da matriz
extracelular na migrao de clulas da crista neural.
Uma situao semelhante se d em embries de galinha, pois o transplante de
diferentes regies do mesoderma para a rea adjacente crista neural pode produzir
diferentes modelos de migrao (Goldstein et al., 1990; Bronner-Fraser e Stern, 1991).
As regies que permitem migrao de clulas da crista neural so determinadas no
mesoderma antes que ocorra a migrao.
Mas quais so as molculas que permitem ou impedem a migrao de clulas da
crista neural? A matriz extracelular que suporta essa migrao uma mistura rica em
molculas como fibronectina, laminina, tenascina, vrias molculas de colgeno e
proteoglicanos. Experimentos programados para estudar esse aspecto devem ser
cuidadosamente planejados, pois as clulas da crista neural podem ter necessidades
de migrao diferentes em diferentes espcies e mesmo em diferentes partes do mes-
mo embrio. Uma soluo preparar anticorpos contra molculas das regies da
matriz extracelular s quais as clulas se ligam. Quando esses anticorpos so injetados
no embrio, bloqueando as regies da matriz, verifica-se alguma perturbao na migra-
o das clulas da crista neural? A migrao das clulas da crista neural craniana de
galinha pode ser severamente alterada quando so injetados, no embrio em desen-
(A) (B)
(C) (D)
Figura 7.37
Deficincia na migrao das clulas da crista neural no mutante d/d do axolotle. (A) As
larvas de axolotles do tipo selvagem so caracterizadas por clulas pigmentadas por todo o
corpo exceto nas pores mais ventrais. (B) No mutante d/d, as clulas pigmentadas deri-
vadas da crista neural formam uma estria ao longo da linha mediana dorsal da larva. (C,D)
Micrografias eletrnicas de varredura da crista neural embrionria mostram que (C) as
clulas da crista dos embries de tipo selvagem migram sobre o tubo neural para o interior
dos somitos, enquanto (D) aquelas do mutante permanecem sobre o tubo neural. (de Lfberg
et al., 1989, cortesia dos autores.)
volvimento, anticorpos fibronectina, a receptores de fibronectina, tenascina, ou ao

proteoglicano laminina-heparan sulfato (Poole e Thiery, 1986; Perris e Bronner-Fraser,
1989). Entretanto, esses anticorpos no alteram significativamente a migrao de clu-
las da crista neural do tronco na galinha.
No momento, existem dois candidatos principais para o papel de molculas
modeladoras das clulas da crista neural do tronco. Uma delas o receptor de aglutinina
do amendoim, um composto que liga resduos especficos de carboidratos de glicopro-
tenas. Quando troncos de embrio de galinha so tratados com aglutinina de amendo-
im, as clulas da crista neural migram na mesma velocidade, tanto para a metade caudal
como para a ventral dos somitos (Krull et al., 1995). A outra molcula uma tirosina
quinase receptora relacionada Eph. Essas molculas so capazes de guiar os axnios
(veja Captulo 8) e sua expresso est ligada aos rombmeros do crebro posterior que
excluem as clulas da crista neural (Irving et al., 1996; Weinstein et al., 1996).
Em 1963, Weston sugeriu que no eram necessrias molculas especficas para
sinalizar a via de migrao das clulas da crista neural do tronco; na verdade, essas
clulas seriam capazes de usar qualquer espao livre para sua migrao, desde que
essa no fosse ativamente inibida. Ele girou a crista neural, de modo a coloc-la na
parte de baixo do tubo neural e notou que quando as clulas emergiam da regio
ventral do tubo, elas migravam na direo ventro-dorsal (o inverso da migrao normal)
atravs da metade anterior do esclertomo. Assim, parece no haver um direcionamento
inerente migrao de clulas da crista. As clulas vo para onde h lugar para elas.
Tanto barreiras qumicas como fsicas podem criar os modelos de migrao das clulas
da crista neural.
& Especulaes
Anlise das mutaes que afetam o

desenvolvimento das clulas da crista neural
A S PROPRIEDADES MIGRAT-
RIAS e a diferenciao das clu-
las da crista neural tambm esto
sendo estudadas levando em considera-
o mutaes que prejudicam uma ou mais
Lethal-spotting e Piebald-lethal.
Nessas mutaes, a deficincia de
endotelina-3 e seu receptor, o receptor de
endotelina-B. Endotelina-3 um fator de
crescimento que estimula a proliferao
homem, essa condio chamada doen-
a de Hirschsprung. A ausncia de
endotelina-3 d origem ao padro de man-
chas dos melancitos e, tambm, a falta
de gnglios no intestino (Baynish et al.,
linhagens de clulas da crista neural. As de clulas como as da crista neural, e 1994; Hosoda et al., 1994; Puffenberger et
mutaes incluem as seguintes: critico para o desenvolvimento de mela- al., 1994; Lahav et al., 1996).
ncitos e neurnios entricos que cau-
White-spotting. As clulas da crista sam o peristaltismo no trato digestivo. A Ret e GDNF. Como o receptor de
neural desses camundongos no tm c- ausncia homozigtica de genes para o endotelina-B, o receptor tirosina quinase Ret
kit tirosina quinase receptor funcional. A receptor de endotelina-B produz o mega- necessrio para a diferenciao dos neu-
condico homozigtica geralmente letal clon, a distenso do intestino grosso rnios entricos. Os camundongos que no
mas os heterozigotos sobrevivem e po- devido a impossibilidade de evacuar. No apresentam o receptor no tm neurnios
dem ser reconhecidos pelas manchas sem entricos nem rins (a importncia de Ret para
pigmentos em seu plo. No homem, os o desenvolvimento do rim ser discutida no
heterozigotos tm um fentipo com man- Captulo 17). No homem, a perda de um dos
chas brancas e escuras. onde regies do genes ret pode produzir outra forma de do-
cabelo e da pele so brancas, por no te- ena de Hirschsprung- um megaclon
rem melancitos (Spritz et al., 1992). ganglinico (Edery, 1994; Romeo et al., 1994).
O ligante para a protena Ret parece ser o
Steel. Esses camundongos no tm o fator de crescimento derivado da glia, GDNF
fator da clula germinativa, o ligante para (Pichel et al., 1996). Camundongos sem as
a protena quinase c-kit. Esse fator protenas GDNF tambm no tm rins nem
secretado por tecidos ao longo da rota de neurnios entricos.
migrao e usado pelas clulas migrat-
rias da crista neural, alm de estimular a Microphthalmia. Esses camundongos
diviso celular. A condio do homozigo- no tm um fator de transcrio determina-
to letal na maioria dos casos, e o hetero- do, levando surdez e deficincias melano-
zigoto tem uma pelagem de cor cinza cticas. A condio heterozigtica humana
esmaecida (veja White, 1990). induz a sndrome de Waardenburg (tipo II)
(Hemesath et al., 1994; Steingrimsson et al.,
Splotch. Os camundongos no tm o 1994; Tassbehji et al., 1994).
fator de transcrio Pax3. Como j men-
cionado, essa protena expressa na re- Silky. Essa mutao na galinha envol-
gio dorsal do tubo neural. Camundon- ve a via da pigmentao. Em adio a um
gos homozigotos para esse gene tm de- fentipo onde o adulto retm as penas
feitos no fechamento do tubo neural e macias de sua juventude, os rgos inter-
Figura 7.38
nas estruturas derivadas das clulas da Superfcie ventral de um camundongo heterozi- nos so pigmentados pela migrao e pro-
crista neural, especialmente gnglios gtico para a mutao White. O camundongo liferao de melancitos. Em contraste, as
cranianos e nervos (Figura 7.38). O tem nmeros reduzidos de clulas sangneas, penas permanecem brancas. Estudos com
heterozigoto tem regies de pigmenta- clulas germinativas e melancitos. A mancha transplantes (Hallet e Ferrand, 1984) mos-
o e outras sem pigmento. No homem, a branca no ventre caracterstica de heterozigo- traram que esse defeito no devido aos
condio heterozigtica conhecida tos, pois esses no tm melancitos suficientes precursores dos melancitos, mas sim de-
como sndrome de Waardenburg (tipo I) para circundar o camundongo. Animais White vido ao ambiente para onde migram as
(Tremblay et al., 1995). viveis no tm pigmento no tronco. clulas da crista neural. [ecto6.html]
A potncia de desenvolvimento das clulas da crista neural do tronco
EVIDNCIA INDICANDO PLURIPOTNCIA DAS CLULAS DA CRISTA NEURAL

DO TRONCO. Uma das caractersticas mais notveis das clulas da crista neural
sua pluripotencialidade. Uma nica clula da crista neural pode se diferenciar em
vrios tipos diferentes de clulas, dependendo de sua localizao no embrio. Por
exemplo, os neurnios parassimpticos, formados pelas clulas da crista neural cervical
(pescoo) (opostas aos somitos 1-7) produzem tanto a acetilcolina como seu neuro-
transmissor; so portanto neurnios colinrgicos. Os neurnios simpticos forma-
dos pelas clulas da crista neural torcica produzem norepinefrina; esses so os neu-
rnios adrenrgicos. Mas, quando cristas neurais cervicais e torcicas da galinha so
reciprocamente transplantadas, a crista torcica original produz os neurnios
colinrgicos dos gnglios parassimpticos, e a crista cervical original forma neurnios
adrenrgicos nos gnglios simpticos (Le Douarin et al., 1975). Kahn e colaboradores
(1980) mostraram que clulas da crista neural do tronco, pr-migratrias, tanto da
regio cervical como da torcica, tm enzimas para sintetizar tanto acetilcolina como
norepinefrina. Dessa maneira, clulas da crista torcica so capazes de desenvolve-
rem-se em neurnios colinrgicos quando so colocadas no pescoo, e as clulas da
crista cervical podem se tornar neurnios adrenrgicos se colocadas no tronco.
A pluripotncia de algumas clulas da crista neural de tal ordem, que regies da
crista que nunca produzem nervos em embries normais podem faz-lo em certas
condies. Clulas da crista neural mesenceflica normalmente migram para o olho e
interagem com a retina pigmentada, se diferenciando nas clulas da esclertica (Noden,
1978). Entretanto, se essa regio da crista neural transplantada para a regio do
tronco, pode formar neurnios dos gnglios sensoriais, clulas adrenomedulares,
gliais e clulas de Schwann (Schweizer et al., 1983).
As pesquisas citadas estudaram o potencial de populaes de clulas. Ainda no
est claro se a maioria das clulas que deixam a crista neural so pluripotentes ou se a
maioria j teve seu destino restrito a certas funes. Bronner- Fraser e Fraser (1988,
1989) mostraram que algumas, se no a maioria das clulas individuais da crista neural,
so pluripotentes ao deixar a crista. Eles injetaram molculas de dextrano fluorescente
em clulas individuais da crista neural, enquanto as clulas ainda estavam acima do
tubo neural e verificaram em que tipos de clulas elas se diferenciaram, aps a migra-
o. A prognie de uma nica clula da crista neural podia se transformar em neurni-
os sensoriais, clulas pigmentares, clulas adrenomedulares e gliais (Figura 7.39).
Alm disso, verificaram que marcando clulas individuais da crista do tronco enquan-
to migravam ventralmente pelo embrio, a marcao podia ser encontrada mais tarde
em vrios tipos de clulas, incluindo neurnios sensoriais, neurnios simpticos e
clulas de Schawnn. Em mamferos, a clula da crista neural tambm vista como uma
clula germinativa que pode dar origem a outras clulas multipotentes da crista neural.
Entretanto, se algumas das clulas migratrias da crista neural so pluripotentes ou-
tras tm destinos mais restritos (Stemple e Anderson, 1992).
EVIDNCIAS INDICANDO POTNCIA RESTRITA DE CLULAS DA CRISTA

NEURAL DO TRONCO. At na poca de emigrao, algumas clulas da crista neural
podem estar mais determinadas do que outras. Tambm, a potncia se torna mais
restrita medida que a clula envelhece. Clulas da crista neural do tronco na galinha
que migram mais cedo podem formar uma ampla variedade de derivados, incluindo
clulas pigmentares, neurnios e clulas adrenrgicas. Clulas migrando mais tarde,
na sua maioria, se tornam melancitos (Serbedzija et al., 1989; Artinger e Bronner-
fraser, 1992). Realmente, as emigrantes tardias da crista neural parecem j estar desti-
nadas a se tornarem melancitos antes de entrarem na via dorsolateral (Erickson e
Goins, 1995). Existe evidncia de que alguma restrio de potncia pode ser identificada
mesmo em algumas clulas emigrantes precoces. Vrios pesquisadores (veja Sieber-
Blum e Sieber, 1984; Stocker et al., 1991; Weston, 1991) verificaram que um nmero
Figura 7.39 Injeo Injeo Resultados Resultados

Pluripotncia das clulas da crista neural do Caso 1 Caso 2 Caso 1 Caso 2
tronco. Uma nica clula da crista neural in-
Melancitos
jetada com uma molcula de dextrano altamen- Dextrano
te fluorescente. A descendncia dessa clula fluorescente Gnglios da
Crista neural
ir, cada uma, receber algumas dessas molcu- raiz dorsal
las fluorescentes. (A) Injeo de dextrano flu- Clulas de Schwann
orescente pouco antes da migrao das clulas da raiz ventral
da crista neural ser iniciada. (B) Aps dois
dias, tecidos derivados da crista contm clu- Gnglios
las marcadas, descendentes do precursor que simpticos
foi injetado. A figura resume dados de dois Aorta
experimentos diferentes (caso 1 e caso 2). (Se- Medula supra-renal
gundo Lumsden, 1988).
(A) (B)
significante de clulas da crista neural formam clones contendo relativamente poucos

tipos de clulas. Alm disso, estudos com transplantes por Le Douarin e Smith (1988)
sugerem que muitas clulas derivadas da crista neural que formam os neurnios sen-
soriais dos gnglios da raiz dorsal, so incapazes de formar os neurnios autonmicos
dos gnglios sensoriais, e vice-versa. Esses estudos sugerem que algumas das clu-
las da crista neural j tm uma potencialidade restrita ao iniciar a migrao. Dois tipos
de clulas da crista neural que teriam papis pr-determinados seriam o precursor do
melancito-clula de Schwann (Nichols e Weston, 1977; Ciment, 1990), e um precursor
simpatoadrenal que pode originar somente gnglios simpticos e clulas
adrenomedulares (Landis e Patterson, 1981; Anderson e Axel, 1986).
O mecanismo para o sucesso diferencial dessas clulas pr-determinadas pode
envolver diferentes fatores de crescimento. Os precursores determinados dos neur-
nios ganglionares da raiz dorsal parecem necessitar de um fator neurotrfico derivado
do crebro (BDNF), um fator de crescimento produzido pelo prprio tubo neural. Se
uma membrana fina impermevel for colocada entre o tubo neural e a futura regio do
gnglio da raiz dorsal, os gnglios no se formaro. Aquelas clulas da crista neural
que continuaram sua migrao ventral para as regies dos gnglios do simptico,
conseguiram sobreviver. A inibio na produo de gnglios da raiz dorsal pode ser
revertida revestindo a barreira com um extrato de tubo neural ou com BDNF (Kalcheim
et al., 1987; Sieber-Blum, 1991). Essa concluso fortalecida pela observao de que o
gene BDNF enfraquecido em embries de camundongo provoca o desaparecimento
dos gnglios da raiz dorsal e dos neurnios sensoriais dos placdios, mas no afeta
os neurnios motores (Ernfors et al., 1994; Jones et al., 1994). As clulas da crista
neural determinadas a formar gnglios simpticos no necessitam do fator de cresci-
mento para sobreviver. Na verdade, sua diferenciao parece ser estimulada pelo fator
de crescimento bsico dos fibroblastos e o fator neurotrfico derivado da glia (Kalcheim
e Neufeld, 1990; Maxwell et al., 1996).
Diferenciao final das clulas da crista neural
A diferenciao final das clulas autonmicas da crista neural principalmente deter-

minada pelo ambiente no qual as clulas se desenvolvem. A diferenciao no envol-
ve a morte seletiva daquelas clulas j determinadas a secretar outro tipo de neuro-
transmissor (Coulombe e Bronner-Fraser, 1987). As clulas do corao, por exemplo,
secretam uma protena, fator de inibio da leucemia (LIF), que pode converter neur-
nios adrenrgicos do simptico em neurnios colinrgicos, sem mudar sua sobrevi-
vncia ou crescimento (Chun e Patterson, 1977; Fukada, 1980; Yamamori et al., 1989).
Figura 7.40
Diferenciao final de uma clula da crista
neural destinada a ser uma clula adrenome-
NGF
dular (cromafim) ou um neurnio simptico.
Incapacidade de Neurnio Glicocorticides parecem agir em dois luga-
Clula NGF responder a
GF simptico res. Primeiro, inibindo as aes daqueles fa-
bF competente glicocorticides
tores que promovem a diferenciao neural;
segundo, induzindo as enzimas caractersti-
cas das clulas adrenais. As clulas expostas
Gl seqencialmente ao fator de crescimento fi-
ico
Clula co broblstico bsico (bFGF) e ao fator de cres-
Clula rtic
pluripotente id cimento nervoso (NGF) se diferenciam em
precursora es
da crista bipotente neurnios simpticos.
neural Glicocorticides
Inibio da
diferenciao
neural Promoo
Clula de enzimas Clula cromafim
precursora cromafim (adrenomedular)
cromafim especificas
Analogamente, a protena morfogentica do osso 2 (BMP2), uma protena secretada

pelo corao, pulmo e aorta dorsal, influencia clulas da crista neural do rato a dife-
renciarem-se em neurnios colinrgicos. Esses neurnios formam os gnglios simp-
ticos na regio desses rgos (Shah et al., 1996). Enquanto BMP2 pode induzir essas
clulas da crista neural a se tornarem neurnios, o fator de crescimento da glia (GGF;
neuregulina) suprime a diferenciao neurnica e dirige o desenvolvimento para des-
tinos gliais (Shah et al., 1994). possvel que outro fator parcrino, endotelina-3,
estimule a produo de melancitos (Lahav et al., 1996).
Assim, parece que o destino de uma clula determinada da crista neural pode ser
dirigido pelo ambiente tissular no qual ela se estabelece. As clulas da crista neural do
tronco da galinha que migram para a regio destinada a se tornar a medula da supra-
renal podem se diferenciar em duas direes. A presena da protena morfogentica
do osso 7 (BMP7) pode induzir essas clulas a se tornarem produtoras de epinefrina
(Varley et al., 1995). Essas clulas usualmente se diferenciam em neurnios
noradrenrgicos do simptico. Entretanto, se essas clulas da crista neural recebem
glicocorticides, como aqueles produzidos pelas clulas corticais da glndula supra-
renal, elas se diferenciam em clulas adrenomedulares (Figura 7.40; Anderson e Axel,
1986; Vogel e Weston, 1990). O tipo de matriz importante na diferenciao das clulas
da crista neural da salamandra. Se clulas da crista de axolotle so cultivadas em
matrizes de regies subepidrmicas (onde esto as clulas pigmentares), elas se tor-
nam melancitos. Entretanto, se as mesmas clulas da crista so cultivadas em matri-
zes da regio dos gnglios da raiz dorsal, elas desenvolvem um fentipo neuronal
(Perris et al., 1988).
A crista neural ceflica

Vias migratrias das clulas da crista neural ceflica
O rosto principalmente o produto da crista neural ceflica (cranial), e a evoluo

dos maxilares, dentes, cartilagem facial resulta de mudanas na colocao dessas
clulas (veja Captulo 23). Como j mencionado, o crebro posterior segmentado
ao longo do eixo ntero-posterior em rombmeros. As clulas da crista neural ceflica
da galinha migram de acordo com sua origem rombomrica e existem trs vias princi-
pais usadas por essas clulas migratrias (Figura 7.41; Lumsden e Guthrie, 1991). Na
(A) Pregas Clulas migratrias (B)

neurais da crista neural s
ero
m
mb
Ro
Tubo
neural
Gnglios IX, X
Bolsa farngea III
Clulas migratrias
da crista neural
Gnglios Bolsa farngea II

VII e VIII
Primeiro arco farngeo
(C) (D)
Clulas migratrias
Bolsa farngea
da crista neural
Cartilagem
facial
e
Tubo neural
Martelo Bigorna Tronco arterial
Cartilagem Estribo Bulbus cordis

de Meckel Processo
estilide Aorta descendente
Osso hiide
Artria vitelnica
Cartilagem tireide
Cartilagem cricide
Artria
Anis traqueais umbilical
Figura 7.41
Migrao de clulas da crista neural na cabea de mamferos. (A) Micrografia de varredura
eletrnica de um embrio de rato com parte de seu ectoderma lateral removido da superfcie.
A migrao da crista neural pode ser vista sobre o mesencfalo, e a migrao da coluna de
clulas da crista neural migrando para o futuro arco farngeo evidente. (B) A anlise da
migrao de clulas cranianas da crista neural de rombmeros 4-6 no camundongo sugere que
h uma migrao maior para os arcos farngeos e uma migrao menor para formao de
gnglios dos nervos cranianos. (C) Estruturas formadoras na face humana pelas clulas ecto-
mesenquimatosas da crista neural. Os elementos cartilaginosos das bolsas farngeas esto
indicados por cores, e a regio pontilhada indica o esqueleto facial produzido pelas regies
anteriores da crista ceflica. (D) Formao do septo tronco-conal (entre a aorta e a veia
pulmonar) das clulas da crista neural cardaca. Clulas da crista do crebro posterior humano
migram para os arcos farngeos 4 e 6 durante a quinta semana da gestao e entram no tronco
arterial para gerar os septos. (A de Tan e Morriss-Kay, 1985, cortesia de S.-S. Tan; B, segundo
Sechrist et al. 1993; D segundo Kirby e Waldo, 1990.)
primeira, clulas do rombmero 2 migram para a primeira bolsa farngea (mandibular) e

tambm geram o gnglio do nervo trigmeo. Elas tambm so levadas pela epiderme
em expanso a formar o processo naso-frontal (anterior). Na segunda via, clulas do
rombmero 4 populam a segunda bolsa farngea (formando a cartilagem hiide do
pescoo) e tambm produzem os gnglios para os nervos geniculado e o vestbulo-
acstico. Na terceira via, clulas do rombmero 6 migram para a terceira e quarta
bolsas farngeas para formar as glndulas timo, paratireide e tireide, como tambm
os gnglios dos nervos vago e glossofarngeo. Se a crista neural removida dessas
regies incluindo o rombmero 6, o timo, as glndulas paratiride e a tireide no se
formam (Bockman e Kirby, 1984). As clulas da crista neural dos rombmeros 3 e 5 no
migram atravs do mesoderma que os envolve, mas sofrem morte celular apopttica
ou entram nas correntes de clulas da crista em cada um de seus lados (Graham et al.,
1993; Sechrist et al., 1993; Graham et al., 1994).
Em embries de mamferos, clulas da crista neural cranial migram antes que o
tubo neural se feche (Tan e Morriss-Kay, 1985) e do origem ao mesnquima facial
(Johnston et al., 1985). As clulas da crista que se originam nos crebros anterior e
mdio contribuem para o processo nasal, palato e o mesnquima da primeira bolsa
farngea. Essa estrutura se torna parte do aparelho da guelra dos peixes; no homem
origina os ossos da mandbula e os ossos martelo e bigorna do ouvido mdio. As
clulas da crista neural, originando na regio anterior do crebro posterior, do
origem ao mesnquima do segundo arco farngeo, que produz o osso estribo no
homem, como tambm a maior parte da cartilagem facial (veja Figura 7.41 C; Tabela
7.2). As clulas da crista neural cervical do origem ao mesnquima do terceiro,
quarto e sexto arcos farngeos (no homem, o quinto degenera) os quais produzem os
ossos do pescoo e os msculos.
Como discutido no Captulo 2, uma srie de genes parecem especificar os destinos
das clulas da crista neural e suas vias migratrias. Chisaka e Capecchi (1991) elimina-
ram o gene Hoxa-3 de camundongos intracruzados encontrando que esses animais
mutantes tinham as glndulas do timo, paratireide e tireide fortemente deficientes
ou ausentes, vrtebras do pescoo encurtadas, e os principais vasos do corao mal
formados. possvel que os genes Hoxa-3 sejam responsveis pela especificao das
clulas da crista neural cranial que do origem cartilagem do pescoo e aos deriva-
dos do arco farngeo. Entretanto, esse gene no controla a migrao menor das clulas
da crista neural que formam os gnglios neurais cranianos. Essa via migratria
afetada quando os genes Hoxb-1 so eliminados. Nesse mutante, existem defeitos na
produo do nervo facial* (Goddard et al., 1996; Studer et al., 1996).
Potncia de desenvolvimento das clulas da crista neural ceflica
Pela discusso anterior, pode parecer que todas as clulas da crista neural so
idnticas na sua potncia original. Entretanto, este no o caso. Aqui, novamente
as clulas da crista neural cranial so diferentes das clulas do tronco porque so-
mente as primeiras so capazes de formar a cartilagem da cabea. Quando a crista
neural craniana transplantada para a regio do tronco, ela participa da formao da
cartilagem do tronco, que normalmente no produzida a partir de componentes da
crista neural. Em alguns casos, essas clulas da crista neural craniana so instrudas
precocemente a respeito de quais tecidos estaro aptas a formar. Noden (1983)
removeu regies da crista neural da galinha, que normalmente deveria gerar o se-
gundo arco farngeo, e as substituiu por clulas que migrariam para o primeiro arco
farngeo. Os embries hospedeiros desenvolveram dois conjuntos de estruturas
* O fentipo dos camundongos mutantes, Hoxb-1, se assemelha ao de certas condies huma-

nas como a Paralisia de Bell e a Sndrome de Moebius (paralisia facial congnita) e pode fornecer
possveis esclarecimentos para essa condio.
Tabela 7.2 Alguns derivados dos arcos farngeos
Arco farngeo Elementos Arcos, artrias Msculos Nervos cranianos

esquelticos (mesoderma) (mesoderma) (tubo neural)
(crista neural mais
mesoderma)
1 Bigorna e martelo Ramo maxilar da Msculos do Divises maxilares
(da crista neural); artria cartida queixo, soalho e mandibulares do
mandbula, maxila (para ouvido, bucal; msculos nervo trigmeo
e regies do osso nariz e queixo) do ouvido e do
temporal (da crista palato mole
do mesnquima
drmico)
2 Osso estribo do Artrias para a Msculos da Nervo facial (VII)
ouvido mdio regio do ouvido: expresso facial;
apfise estilide artria crtico- msculos do
do osso temporal; timpnica (adulto); queixo e pescoo
parte do osso hiide artria estribal superior
do pescoo (todos (embrio)
da cartilagem da
crista neural)
3 Borda inferior e Artria cartida Estilofarngeo Glossofarngeo
cornos maiores do comum; raiz da (para elevar a (IX)
osso hiide (da cartida interna faringe)
crista neural)
4 Cartilagens laringeanas Arco da aorta; Constritores Ramo superior
(do mesoderma da artria subclvia da faringe e laringeano do
placa lateral) direita; bicos artrias cordas vocais nervo vago
originais de pulmonares
6 Cartilagens laringeanas Duto arterioso; Msculos Ramo recorrente
(do mesoderma da razes das artrias intrnsecos laringeano do nervo vago
placa lateral) pulmonares definitivas da laringe
Fonte: Baseado em Larsen, 1992
mandibulares, pois as clulas derivadas do enxerto tambm produziram uma mandbu-

la. A base para essa instruo ser discutida no Captulo 16.
Quando clulas da crista neural ceflica da galinha ou codorna so cultivadas, se
obtm uma populao heterognea de clulas (Baroffio et al., 1991). Algumas das
clulas so pluripotentes, e seus clones contm clulas de vrios tipos. Outras clulas
da crista do derivados mais restritos. interessante notar que nem todas as combina-
es de cartilagem, glia, neurnios colinrgicos, melancitos e neurnios adrenrgicos
so observadas. A Figura 7.42 mostra os tipos de clones que emergem e traa vias
hipotticas para os tipos restritos de clula
A crista neural cardaca

Como ser detalhado no Captulo 9, o corao formado inicialmente na regio do
pescoo, diretamente abaixo dos arcos farngeos, e no surpreendente que adquira
clulas da crista neural. Entretanto, as contribuies da crista neural ao corao s
foram consideradas recentemente. A regio caudal da crista cfalica algumas vezes
chamada de crista neural cardaca, porque essas clulas da crista neural (e somente
essas clulas determinadas da crista) podem dar origem ao endotlio das artrias do
arco artico e o septo entre a aorta e a artria pulmonar (veja Figura 7.41D). Na galinha,
a crista neural cardaca se localiza acima da regio do tubo neural a partir do rombme-
ro 7 at a medula espinhal, oposta ao terceiro somito, e essas clulas da crista migram
para os arcos farngeos 3, 4 e 6. Se a crista neural cardaca for removida e substituda
Neurnios Figura 7.42

colinrgicos Restrio hipottica de linhagem nas c-
lulas da crista neural ceflica da codor-
na. Um total de 533 clones, cada um
Cartilagem Clulas adrenrgicas derivado de uma nica clula, foram ob-
Clulas semelhantes
s germinativas
servados para os tipos celulares deriva-
Melancitos Clulas gliais dos de cada clula. Os resultados so
consistentes com a restrio progressi-
va do destino celular de clula germina-
Clulas tiva pluripotente, atravs de clulas ger-
germinativas de minativas mais restritas, at uma clula
linhagem restrita progenitora unipotente. (A, neurnio
adrenrgico; C, cartilagem; G, clulas da
glia; M, melancitos; N, neurnios
colinrgicos.) (Segundo Le Douarin et
al., 1994.)
Progenitores
unipotentes
Tipos celulares
derivados da
Cartilagem Neurnios Clulas gliais Clulas Melancitos
crista neural
colinrgicos adrenrgicas
pela crista neural do tronco ou pela crista ceflica anterior, ocorrem anormalidades
cardacas (especialmente a falta da separao artica-pulmonar). Fica evidente, que a
crista cardaca j est determinada para gerar clulas cardacas, e outras regies da
crista neural no podem substitu-la (Kirby, 1989; Kuratani e Kirby, 1991). Defeitos
cardacos congnitos no homem com freqncia ocorrem com defeitos nas glndulas
paratireide, tireide e timo. No seria surpresa se esses estivessem ligados a defeitos
na migrao de clulas da crista neural. [ecto7.html]
Q A EPIDERME E A ORIGEM DAS ESTRUTURAS CUTNEAS

A origem das clulas epidrmicas
As clulas que cobrem o embrio aps a neurulao formam a epiderme presuntiva.
Inicialmente, esse tecido tem a espessura de uma camada de clulas, mas na maioria
dos vertebrados, logo em seguida se transforma em uma estrutura de duas camadas. A
camada externa d origem periderme, uma cobertura temporria que descartada to
logo se diferencia a camada inferior para formar a verdadeira epiderme. A camada
interna, chamada camada basal (ou estrato germinativo), um epitlio germinativo
que d origem a todas as clulas da epiderme (Figura 7.43). A camada basal se divide
dando origem a uma outra, composta de uma populao de clulas externas chamada
camada espinhosa. Essas duas camadas epidrmicas so conhecidas como a camada
de Malpighi. As clulas da camada de Malpighi se dividem para produzir a camada
granular da epiderme, assim chamada porque as clulas so caracterizadas por grnu-
los da protena queratina. De maneira diferente das clulas que permanecem na cama-
da de Malpighi, as clulas da camada granular no se dividem, mas comeam a se
diferenciar em clulas da pele, ou queratincitos. Os grnulos de queratina se tornam
mais proeminentes medida que as clulas da camada granular envelhecem e migram
para fora. Aqui, elas formam a camada crnea (estrato crneo), na qual as clulas se
Figura 7.43 Membrana

Diagrama das camadas da epiderme humana. plasmtica engrossada Queratina
As clulas basais so mitoticamente ativas,
enquanto as clulas totalmente queratinizadas,
caractersticas da pela externa, esto mortas Camada crnea
e so descartadas. Os queratincitos obtm
esse pigmento pela transferncia de melanos-
somos dos processos de melancitos que res- Grnulos de queratina
Clula de transio
tam na camada basal. (Segundo Montagna e
Parakkal, 1974.)
Melanossomos
Camada granular
Camada
espinhosa
Camada
de Malpighi
Camada
basal
Lmina basal
Melancito
transformaram em sacos achatados da protena queratina. A profundidade da camada

crnea varia de lugar a lugar, mas usualmente tem a espessura de 10 a 30 clulas. Os
ncleos dessas clulas so deslocados para uma de suas margens. Logo aps o
nascimento, as clulas da camada crnea so descartadas e substitudas por clulas
novas da camada granular. Por toda a vida, as clulas mortas queratinizadas da cama-
da crnea so eliminadas (os seres humanos perdem 1.5 gramas dessas clulas cada
dia)* e so substitudas por clulas novas, originrias das clulas mitticas da camada
de Malpighi. As clulas pigmentadas da crista neural tambm se situam na camada de
Malpighi, onde transferem seus grnulos de pigmentos (melanossomos) aos
queratincitos em desenvolvimento.
As clulas germinativas epidrmicas da camada de Malpighi esto ligadas mem-
brana basal por suas protenas, integrinas. Entretanto, ao se tornarem determinadas
para diferenciar elas suprimem suas integrinas e as perdem enquanto migram para a
camada espinhosa (Jones e Watt, 1993).
Existem dois fatores de crescimento estimulando o desenvolvimento da epiderme.
O primeiro o fator de crescimento transformador- (TGF- ). O TGF- produzido
pelas clulas basais e estimula sua prpria diviso. Quando um fator de crescimento
produzido pela mesma clula que o recebe ele chamado fator de crescimento
autcrino. Esses fatores precisam ser cuidadosamente regulados porque se tiverem
seus nveis aumentados, mais clulas so rapidamente produzidas. Na pele adulta,
uma clula nascida na camada de Malpighi leva aproximadamente 8 semanas para
* A maior parte dessa pele se transforma em poeira de casa em cima de mveis e no assoalho.
Se voc tem alguma dvida, queime uma poro dessa poeira; o cheiro ser de pele chamuscada.
alcanar o estrato crneo e permanece na camada crnea mais ou menos duas sema-
nas. Em indivduos com psorase, uma doena caracterizada por esfoliao de uma
enorme quantidade de clulas epidrmicas, o tempo de permanncia na camada crnea
de somente dois dias (Weinstein e van Scott, 1965; Halprin, 1972). Essa condio
est ligada a uma super expresso de TGF- (a qual ocorre secundariamente a uma
inflamao imune) (Elder et al., 1989). Analogamente, se o gene TGF- for ligado a um
promotor para queratina 14 (uma das principais protenas da pele), e inserido no pro-
ncleo do camundongo, os animais transgnicos ativam o gene TGF- em suas clu-
las da pele e no podem suprimi-lo. O resultado um camundongo com pele escamosa,
pouco plo e um enorme excesso de epiderme queratinizada sobre uma nica camada
de clulas basais (Figura 7.44C; Vassar e Fuchs, 1991).
O outro fator de crescimento necessrio para a produo de epiderme o fator de
crescimento do querancito (KGF; tambm chamado fator de crescimento fibroblsti-
co 7) um fator parcrino que produzido pelos fibroblastos da derme subjacente
(derivada do mesoderma). O KGF recebido pelas clulas basais que esto acima dos
fibroblastos da derme e se considera que ele regula a proliferao dessas clulas
basais. Se o gene KGF fundido com o promotor de queratina 14 e so produzidos
camundongos transgnicos, o KGF se torna autcrino. Os animais resultantes (Figura
7.44A) tm uma epiderme espessada, pele solta, muitas clulas basais e no tm folculos
de plo, nem mesmo folculos do bigode (Guo et al., 1993). Essas clulas basais so
foradas a entrar na via de diferenciao da epiderme. A alternativa para a clula
basal ajudar a gerar o folculo do plo.
Apndices cutneos
A epiderme e a derme tambm interagem em stios especficos para criar as glndulas
sudorparas e os apndices cutneos: plos, escamas ou penas (dependendo da esp-
cie). A primeira indicao de que um folculo do plo se formar em um local especfico
uma agregao de clulas na camada basal da epiderme. Essa agregao dirigida
pelas clulas dermais subjacentes e ocorre em diferentes tempos e locais no embrio.
As clulas basais se alongam, se dividem e penetram na derme. As clulas dermais
(B) (C)
(A)
Figura 7.44
Fatores de crescimento e proliferao epidr-
mica. (A) Um camundongo transgnico ex-
pressando baixos nveis de KGF em seus que-
ratincitos. Notar a rarefao do plo ao re-
dor das patas, olhos e focinho. (B) Um ca-
mundongo de tipo selvagem. (C) Um compa-
nheiro de ninhada de (B) que est expressan-
do altos nveis de TGF- em seus queratin-
citos. Tem pele descamada e muito pouco
plo. Abaixo de cada camundongo est um
corte atravs de sua pele. O animal expres-
sando KGF em excesso no tem folculos
pilosos e um nmero aumentado de clulas
epidrmicas basais. O camundongo expres-
sando TGF- tem camadas muito extensas
de epitlio queratinizado, o qual ele descarta.
(de Vassar e Fuchs, 1991, e Guo et al., 1993.
KGF Tipo selvagem TGF- Fotografias cortesia de E. Fuchs.)
(A) (B) (C) (D)
Ectoderma Canal piloso em Plo

epidrmico desenvolvimento
Mesoderma Mesoderma Ponta do plo

condensado drmico
Glndula
Papila drmica sebcea
Bulbo contendo
clulas germinativas
pluripotentes do
Figura 7.45 folculo piloso
Desenvolvimento de folculos pilosos na pele
fetal humana. (A) Clulas epidrmicas basais
tornam-se colunares e se abaulam ligeiramente
para dentro da derme. (B) Clulas epidrmicas
respondem a esse ingresso de clulas epidrmicas basais formando um pequeno n-
continuam a proliferar, e clulas mesenquima-
dulo (a papila dermal) abaixo do tampo epidrmico. A papila drmica, em um movi-
tosas da derme se agregam na base do germe
primrio do plo. (C) Comea a diferenciao mento ascendente, estimula as clulas basais germinativas a dividirem-se mais rapida-
da haste do plo no germe piloso alongado. mente e produzir clulas ps-mitticas que se diferenciaro na haste queratinizada do
(D) A haste pilosa queratinizada se estende da plo (veja Hardy, 1992; Miller et al., 1993). Melanoblastos, que estavam presentes
raiz do plo, o broto secundrio forma a gln- entre as clulas epidrmicas enquanto ingressavam, diferenciam-se em melancitos e
dula sebcea, e por baixo existe uma regio que transferiam seu pigmento haste (Figura 7.45). Enquanto isso ocorre, duas intumes-
pode conter as clulas germinativas pilosas cncias epiteliais comeam a crescer nos lados do folculo. As clulas da intumescn-
para o prximo ciclo produtor de plo. (E) cia inferior podem reter uma populao de clulas germinativas que regeneraro a
Fotografia de um germe piloso alongado. (Se-
haste do plo periodicamente, quando ela for descartada (Pinkus e Mehregan, 1981;
gundo Hardy, 1992, e Miller et al., 1993. Fo-
Cotsarelis et al., 1990). As clulas da intumescncia superior formaro as glndulas
tografia cortesia de W. Montagna.)
sebceas que produzem uma secreo oleosa, o sebo. Em muitos mamferos, incluindo
o homem, o sebo se mistura com clulas peridrmicas escamadas para formar a vernix
caseosa, esbranquiada, que envolve o feto no nascimento. [ecto8.html]
Os primeiros plos do embrio humano so finos, localizados muito prximos, e
formam o chamado lanugo. Esse tipo de plo geralmente descartado antes do nasci-
mento e substitudo (pelo menos em parte, por novos folculos) por plos curtos e
sedosos, o velo. Velo permanece em muitas partes do corpo humano, usualmente
consideradas sem plos como a testa e as plpebras. Em outras partes do corpo, o velo
d lugar para o plo definitivo. Durante a vida de uma pessoa, alguns dos folculos
que produziram velo podem, mais tarde, formar plos definitivos, depois reverter para
a produo de velo. As axilas das crianas, por exemplo, tm folculos que produzem
velo at a adolescncia. Nessa fase, as hastes definitivas so produzidas. Inversa-
mente, em calvcie normal masculina, os folculos do couro cabeludo voltam a produzir
plos velos muito finos e no pigmentados (Montagna e Parakkal, 1974). A localizao
e o padro de plos, penas, escamas e glndulas sudorparas envolve interaes da
epiderme e da derme, e essas sero discutidas em detalhe no Captulo 17. Da mesma
forma que existe uma clula germinativa neural, cuja descendncia se torna clulas
neurais e clulas gliais, tambm parece existir uma clula germinativa epidrmica
pluripotente, cujos descendentes podem se tornar epiderme, glndulas sebceas e
hastes de plo.
Concluses
Neste captulo acompanhamos a diferenciao do ectoderma embrionrio em uma
ampla variedade de tecidos. Vimos que o ectoderma produz trs conjuntos de clulas
durante a neurulao: (1) O tubo neural que d origem aos neurnios, s clulas gliais
e s clulas ependimrias do sistema nervoso central; (2) as clulas da crista neural,

que do origem ao sistema nervoso perifrico, clulas pigmentadas, medula da supra-
renal e certas reas da cartilagem da cabea; e (3) a epiderme da pele, que contribui
para a formao das estruturas cutneas como o plo, penas, escamas e glndulas
sudorparas e sebceas, como tambm a cobertura protetora externa dos nossos cor-
pos. Tambm observamos como as interaes das clulas epidrmicas esto envolvi-
das na origem dos vrios tecidos do olho.
Os Captulos posteriores (16 e 17) discutem com mais detalhe a induo do tubo
neural e o desenvolvimento coordenado do olho. No prximo captulo discutiremos
os mecanismos pelos quais os neurnios so dirigidos para locais especficos, assim,
permitindo o desenvolvimento de reflexos e comportamentos.
LITERATURA CITADA
Acampora, D., Mazan, S., Lallemand, Y., Yanagisawa, M. 1994. Interaction of endothelin- Centers for Disease Control. 1992. Recom-
Avantaggiato, V., Maury, M., Simeone, A. and 3 with endothelin-B receptor is essential for mendations for the use of folic acid to reduce
Brulet, P. 1995. Forebrain and midbrain regions development of epidermal melanocytes and the number of cases of spina bifida and other
are deleted in Otx2 -/- mutants due to a defective enteric neurons. Cell 79: 1277-1285. neural tube defects. Morb. Mortal. Wkly. Rep.
anterior neuroectoderm specification during Bloom, W. and Fawcett. D. W. 1975. Textbook 41: 1-7.
gastrulation. Development 121: 3279-3290. of Histology, 10th Ed. Saunders, Philadelphia. Chenn, A. and McConnell, S. K. 1995. Cleavage
Akitaya, T. and Bronner-Fraser, M. 1992. Ex- Bockman, D. E. and Kirby, M. L. 1984. orientation and the asymmetric inheritance of
pression of cell adhesion molecules during Dependence of thymus development on de- Notch1 immunoreactivity in mammalian
initiation and cessation of neural crest cell mi- rivatives of the neural crest. Science 223: neurogenesis. Cell 82: 631-641.
gration. Dev. Dyn. 194: 12-20. 498-500. Chiang, C., Litingung, Y., Lee, E.,Young, K. K.,
Alvarez, I. S. and Schoenwolf, G. C. 1992. Bronner-Fraser, M. 1986. Analysis of the early Corden, J. E., Westphal, H. and Beachy, P. A.
Expansion of surface epithelium provides the stages of trunk neural crest migration in avian 1996. Cyclopia and defective axial patterning
major extrinsic force for bending of the neural embryos using monoclonal antibody HNK-1. in mice lacking Sonic hedgehog gene function.
plate. J. Exp. Zool. 261: 340-348. Dev. Biol. 115: 44-55. Nature 383: 407-413.
Anderson, D. J. and Axel, R. 1986. A bipotential Bronner-Fraser, M. and Cohen, A. M. 1980. Chisaka, 0. and Capecchi, M. 1991. Regionally
neuroendocrine precursor whose choice of cell Analysis of the neural crest ventral pathway using restricted developmental defects resulting from
fate is determined by NGF and glucocorticoids. injected tracer cells. Dev. Biol. 77: 130-141. targeted disruption of the mouse homeobox gene
Cell 47: 1079-1090. Hox1.5. Nature 350: 473-479.
Bronner-Fraser, M. and Fraser, S. E. 1988. Cell
Artinger, K. B. and Bronner-Fraser, M. 1992. lineage analysis reveals multipotentency of some Chun, L. L. Y. and Patterson, P. H. 1977. Role
Partial restriction in the developmental potential avian neural crest cells. Nature 335: 161-164. of nerve growth factor in development of rat
of late emigrating avian neural crest cells. Dev. sympathetic neurons in vitro. Survival, growth,
Biol. 149: 149-157. Bronner-Fraser, M. and Fraser, S. 1989. Deve-
and differentiation of catecholamine producti-
lopmental potential of avian trunk neural crest
Balinsky, B. I. 1975. Introduction to Embryolo- on. J. Cell Biol. 75: 694-704.
cells in situ. Neuron 3: 755-766.
gy, 4th Ed. Saunders, Philadelphia. Ciment, G. 1990. The melanocyte/Schwann cell
Bronner-Fraser, M. and Stern, C. 1991. Effects progenitor: A bipotent intermediate in the
Bally-Cuif, L. and Wassef, M. 1994. Ectopic of mesodermal tissues on avian neural crest cell
induction and reorganization of Wnt-1 expres- neural crest lineage. Commun. Dev. Neurobiol.
migration. Dev. Biol. 143: 213-217.
sion in quail/chick chimeras. Development 120: 1: 207-223.
Burnside, B. 1971. Microtubules and microfi-
3379-3394. Cotsarelis, G., Sun, T.-T. and Lavker, R. M. 1990.
laments in newt neurulation. Dev. Biol. 26:
Bally-Cuif, L. and Wassef, M. 1995. Determi- Label-retaining cells reside in the bulge area of
416-441.
nation events in the nervous system of the pilosebaceous unit: Implications for follicular
Burnside, B. 1973. Microtubules and microfila- stem cells, hair cycle and skin carcinogenesis.
vertebrate embryo. Curr. Opin. Genet. Dev. 5:
ments in amphibian neurulation. Am. Zool. 13: Cell 61: 1329-1337.
450-458.
989-1006.
Banks, M. S. and Bennett, P. J. 1988. Optical Coulombe, J. N. and Bronner-Fraser, M. 1987.
Catala, M., Teillet, M.-A. and Le Douarin, N. Cholinergic neurones acquire adrenergic
and photoreceptor immaturities limit the spatial
M. 1995. Organization and development of the neurotransmitters when transplanted into an
and chromatic vision of human neonates. J. Opt.
tail bud analyzed with the quailchick chimaera
Soc. Am. 5: 2059-2079. embryo. Nature 324: 569-572.
system. Mech. Dev. 51: 51-65.
Baroffio, A., Dupin, E. and Le Douarin, N. M. Coulombre, A. J. 1956. The role of intraocular
Catala, M., Teillet, M.-A., De Robertis, E. M.
1991. Common precursors for neural and pressure in the development of the chick eye. I.
and Le Douarin, N. M. 1996. A spinal cord fate
mesectodermal derivatives in the cephalic neural Control of eye size. J. Exp. Zool. 133: 211-225.
map in the avian embryo: while regressing,
crest. Development 112: 301-305. Hensens node lays down the notochord and floor Coulombre, A. J. 1965. The eye. In R. DeHaan
Baynish, A. G., Hosoda, K., Giaid, A., Richard- plate thus joining the spinal cord lateral walls. and H. Ursprung (eds.), Organogenesis. Holt,
son, J. A., Emoto, N., Hammer, R. E. and Development 122: 2599-2610. Rinehart & Winston, New York, pp. 217-251.
Crossin, K. L., Chuong, C.-M. and Edelman, G. Erickson, C. A. and Goins, T. L. 1995. Avian Goldstein, R. S., Teillet, M.-A. and Kalcheim, C.
M. 1985. Expression sequences of cell adhesion neural crest cells can migrate in the dorsolateral 1990. The microenvironment created by
molecules. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 6942- path only if they are specified as melanocytes. grafting rostral half-somites is mitogenic for
6946. Development 121: 915-924. neural crest cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Crossley, P. H., Martinez, S. and Martin, G. R. Erickson, C. A., Tosney, K. W. and Weston, J. 87: 4476-4480.
1996. Midbrain development induced by FGF8 A. 1980. Analysis of migrating behaviour of Gont, L. K., Steinbeisser, H., Blumberg, B. and
in the chick embryo. Nature 380: 66-68. neural crest and fibroblastic cells in embryonic De Robertis, E. M. 1993. Tail formation as a
tissues. Dev. Biol. 77: 142-156. continuation of gastrulation: The multiple cell
Czeizel, A. and Dudas, I. 1992. Prevention of
first occurence of neural tube defects by Erickson, C. A., Duong, T. D. and Tosney, K. W. populations of the Xenopus tailbud derive from
periconceptional vitamin supplementation. N. 1992. Descriptive and experimenta analysis of the late blastopore lip. Development 119: 991-
Engl. J. Med. 327: 1832-1835. the dispersion of neural crest cells along the 1004.
dorsolateral pathway and their entry into Gould, S. J. 1977. Ontogeny and Phylogeny.
Danielian, P. S. and McMahon, A. P. 1996. En-
ectoderm in the chick embryo. Dev. Biol. 151: Harvard University Press, Cambridge, MA.
grailed-1 as a target of the Wnt-1 signaling
251-272. Graham, A., Heyman, I. and Lumsden, A. 1993.
pathway in vertebrate midbrain development.
Nature 383: 332-334. Ernfors, P., Lee, K. F. and Jaenisch, R. 1994. Even-numbered rhombomeres control the
Mice lacking brain-derived neurotrophic factor apoptotic elimination of neural crest cells from
Davenport, R. W., Dou, P., Rehder, V. and Kater, develop with sensory deficits. Nature 368: 147- odd-numbered rhombomeres of the chick
S. B. 1993. A sensory role for neuronal growth 150. hindbrain. Development119: 233-245.
cone filopodia. Nature 361: 721-724.
Fishell, G. 1995. Striatal precursors adopt cortical Graham, A, Francis-West, P., Brickell, P. and
Desmond, M. E. 1982. A description of the identities in response to local cues. Develop- Lumsden, A. 1994. The signalling molecule
occlusion of the lumen of the spinal cord in ment 121: 803-812. BMP-4 mediates apoptosis in the rhombence-
early human embryos. Anat. Rec. 204: 89-93.
Fishell, G. and Hatten, M. E. 1991. Astrotactin phalic neural crest. Nature 372: 684-686.
Desmond, M. E. and Field, M. C. 1992. provides a receptor system for gliaguided neuronal Guo, L., Yu, Q.-C. and Fuchs, E. 1993. Targetting
Evaluation of neural fold fusion and coincident migration. Development 113: 755-765. expression of keratinocyte growth factor to
initiation of spinal cord occlusion in the chick
Forscher, P. and Smith, S. J. 1988. Actions of keratinocytes elicits striking changes in epithelial
embryo. J. Comp. Neurol. 319: 246-260. differeentiation in transgenic mice. EMBO J.
cytochalasins on the organization of actin
Desmond, M. E. and Schoenwolf, G. C. 1986. filaments and microtubules in a neural growth 12: 973-986.
Evaluation of the roles of intrinsic and cone. J. Cell Biol. 107: 1505-1516. Guthrie, S. and Lumsden, A. 1991. Formation
extrinsic factors in occlusion of the spinal and regeneration of rhombomere boundaries in
Frantz, G. D. and McConnell, S. K. 1996.
neurocoel during rapid brain enlargement in Restriction of late cerebral cortical progenitors the developing chick hindbrain. Development
the chick embryo. J. Embryol. Exp. Morphol. to an upper-layer fate. Neuron 17: 55-61. 112: 221-229.
97: 25-46.
Fujimori, T., Miyatani, S. and Takeichi, M. Gregory, W. A., Edmondson, J. C., Hatten, M.
Detrick, R. J., Dickey, D. and Kintner, C. R. 1990. Ectopic expression of N-cadherin perturbs E. and Mason, C. A. 1988. Cytology and neural-
1990. The effects of N-cadherin misexpression histogenesis in Xenopus embryos. Development glial apposition of migrating cerebellar granule
on morphogenesis in Xenopus embryos. Neuron 110: 97-104. cells in vitro. J. Neurosci. 8: 1728-1738.
4: 493-506.
Fujita, S. 1964. Analysis of neuron differentiati- Halder, G., Callaerts, P. and Gehring, W. J. 1995.
Dickinson, M. E., Krumlauf, R. and McMa- on in the central nervous system by tritiated Induction of ectopic eyes by targeted expressi-
hon, A. P. 1994. Evidence for a mitogenic thymidine autoradiography. J.Comp. Neurol. on of the eyeless gene in Drosophila. Science
effect of Wnt-1 in the developing mammalian 122: 311-328. 267: 1788-1792.
central nervous system. Development 120:
Fujita, S. 1966. Application of light and electron Hallet, M. M. and Ferrand, R. 1984. Quail
1453-1471. melanoblast migration in two breeds of fowl and
microscopy to the study of the cytogenesis of
Edery, P. and nine others. 1994. Mutations of the forebrain. In R. Hassler and H. Stephen (eds.), their hybrids: Evidence for a dominant genic
the RET proto-oncogene in Hirschsprungs Evolution of the Forebrain. Plenum, New York, control of the mesodermal pigment pattern
disease. Nature 367: 378-380. pp. 180-196. through tissue environment. J. Exp. Zool. 230:
Edmondson, J. C. Liem, R. K. H., Kuster, J. C. Fukada, K. 1980. Hormonal control of neuro- 229-238.
and Hatten, M. E. 1988. Astrotactin: A novel transmitter choice in sympathetic neuron Halprin, K. M. 1972. Epidermal turnover
neuronal cell surface antigen that mediates cultures. Nature 287: 553-555. time-a reexamination. J. Invest. Dermatol. 86:
neuronal-astroglial interactions in cerebellar 14-19.
Gallera, J. 1971. Primary induction in birds. Adv.
microcultures. J. Cell Biol. 106: 509-517. Morphogenet. 9: 149-180. Hardy, M. H. 1992. The secret life of the hair
Eichele, G. 1992. Budding thoughts. The Sciences follicle. Trends Genet. 8: 55-61.
Glaser, T., Jepeal, L., Edwards, J. G., Young, S.
(Jan., 1992): 30-36. R., Favor, J. and Maas, R. L. 1994. PAX6 gene Harrison, R. G. 1907. Observations on the living
Elder, J. T. and eight others. 1989. Overexpres- dosage effect in a family with congenital developing nerve fiber. Anat. Rec. 1: 116-118.
sion of transforming growth factor in psoriatic cataracts, aniridia, anophthalmia and central Hatten, M. E. 1990. Riding the glial monorail: A
epidermis. Science 243: 811-814. nervous system defects. Nat. Genet. 7: 463-471. common mechanism for glialguided neuronal
Ericson, J., Morton, S., Kawakami, A., Roelinck, Goddard, J. M., Rossel, M., Manley, N. R. and migration in different regions of the mammalian
H. and Jessell, T. M. 1996. Two critical periods Capecchi, M. R. 1996. Mice with targeted brain. Trends Neurosci. 13: 179-184.
of Sonic hedgehog signaling required for the disruption of Hoxb-1 fail to form the motor Hemesath, T. J. and nine others. 1994. micro-
specification of motor neuron identity. Cell 87: nucleus of the VIIth nerve. Development 122: phthalmia, a critical factor in melanocyte de-
661-673. 3217-3228. velopment defines a discrete transcription factor
Erickson, C. A. and Weston, J. A. 1983. An SEM Golden, J. A. and Chernoff, G. F. 1993. family. Genes Dev. 8: 2770-2780.
analysis of neural crest migration in the mouse. Intermittent pattern of neural tube closure in Henry, E. W. and Sidman, R. L. 1988. Long
J. Embryol. Exp. Morphol. 74: 97-118. two strains of mice. Teratology 47: 73-80. lives for homozygous trembler mutant mic-e
despite virtual absence of peripheral nerve Kahn, C. R., Coyle, J. T. and Cohen, A. M. 1980. Le Douarin, N. M. 1969. Particularits du noyau
myelin. Science 241: 344-346. Head and trunk neural crest in vitro: Autonomic interphasique chez la Caille japonaise (Coturnix
Hilfer, S. R. and Yang, J.-J. W. 1980. Accumula- neuron differentiation. Dev. Biol. 77: 340-348. coturnix japonica). Utilisation de ces particulari-
tion of CPC-precipitable material at apical cell Kalcheim, C. R. and Neufeld, G. 1990. Expressi- ts comme marquage biologique dans les
surfaces during formation of the optic cup. Anat. on of basic fibroblast growth factor in the recherches sur les interactions tissulaires et les
Rec. 197: 423-433. nervous system of early avian embryos. Deve- migrations cellulaires au cours de lontogense.
lopment 109: 203-215. Bull. Biol. Fr. Belg. 103: 435-452.
His, W, 1886. Zur Geschichte des menschlichen
Rckenmarks und der Nervenwurzeln. Ges. Wiss. Kalcheim, C., Barde, Y.-A., Thoenen, H. and Le Le Douarin, N. M., and Teillet, M.-A. 1973. The
BD 13, S. 477. Dourain, N. M. 1987. In vivo effect of brain- migration of neural crest cells to the wall of the
derived neurotrophic factor on the survival of digestive tract in avian embryo. J. Embryol. Exp.
Holt, A. B., Cheek, D. B., Mellitz, E. D. and Morphol. 30: 31-48.
Hill, D. E. 1975. Brain size and the relation of neural crest precursor cells of the dorsal root
the primate to the non-primate. In D. B. ganglia. EMBO J. 6: 2871-2873. Le Douarin, N. M. and Teillet, M.-A. 1974. Ex-
Cheek (ed.), Fetal and Postnatal Cellular Karfunkel, P. 1972. The activity of microtubu- perimental analysis of the migration and diffe-
Growth: Hormones and Nutrition. Wiley, New les and microfilaments in neurulation in the rentiation of neuroblasts of the autonomic
chick. J. Exp. Zool. 181: 289-302. nervous system and of neuroectodermal mesen-
York, pp. 23-44.
chyme derivatives, using a biological cell marking
Hosoda, K., Hammer, R. E., Richardson, J. A., Keller, R., Shih, J., Sater, A. K. and Moreno, C.
technique. Dev. Biol. 41:162-184.
Baynish, A. G., Cheung, J. C., Gialid, A. and 1992. Planar induction of convergence and
extension of the neural plate by the organizer Le Douarin, N. M., Dupin, E. and Ziller, C. 1994.
Yanagisawa, M. 1994. Targeted and natural
of Xenopus. Dev. Dyn. 193: 218-234. Genetic and epigenetic control in neural crest
(Piebald-lethal) mutations of endothelin-B re-
development. Curr. Opin. Genet. Dev. 4: 685-
ceptor gene produce megacolon associate with Kelley, R. I. and seven others. 1996 Holopro-
695.
spotted coat color in mice. Cell 79: 1267-1276. sencephaly in RSH/Smith-Lemli-Opitz syndro-
me: Does abnormal cholesterol metabolism Le Douarin, N. M., Dieterlen-Livre, F. and
Huettner, A. F. 1949. Fundamentals of Compa-
affect the function of Sonic hedgehog? Am. J. Teillet, M.-A. 1996. Quail-chick transplantati-
rative Embryology of the Vertebrates, 2nd Ed.
Med. Genet. 66: 478-484. ons. Methods Cell Biol. 51: 23-61.
Macmillan, New York.
Kirby, M. L. 1987. Cardiac morphogenesis: Recent Le Douarin, N. M., Renaud, D., Teillet, M.-A.
Irving, C., Flenniken, A., AlIdus, G. and
research advances. Pediatr. Res. 21: 219-224. and Le Douarin, G. H. 1975. Cholinergic diffe-
Wilkinson, D. G. 1996. Cell-cell interactions
rentiation of presumptive adrenergic neuro-
and segmentation in the developing vertebrate Kirby, M. L. 1989. Plasticity and predetermina-
blasts in interspecific chimeras after heteroto-
hindbrain. Biochem. Soc. Symp. 1996: 85-95. tion of mesencephalic and trunk neural crest
pic transplantation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Jacobson, A. G. 1981. Morphogenesis of the transplanted into the region of the cardiac neural
72: 728-732.
neural plate and tube. In I. G. Connely et al. crest. Dev. Biol. 134: 401-412.
Le Livre, C. S. and Le Douarin, N. M. 1975.
(eds.), Morphogenesis and Pattern Formation. Kirby, M. L. and Waldo, K. L. 1990. Role of Mesenchymal derivatives of the neural crest:
Raven Press, New York, pp. 233-263. neural crest in congenital heart disease. Analysis of chimaeric quail and chick embryos.
Jacobson, A. G. and Moury, J. G. 1995. Tissue Circulation 82: 332-340. J. Embryol. Exp. Morphol. 34: 125-154.
boundaries and cell behavior during neurulation. Komuro, H. and Rakic, P. 1992. Selective role Letourneau, P. C. 1977. Regulation of neuronal
Dev. Biol. 171: 98-110. of N-type calcium channels in neuronal migra- morphogenesis by cell-substratum adhesion. Soc.
Jacobson, A. G. and Sater, A. K. 1988. Features tion. Science 157: 806-809. Neurosci. Symp. 2: 67-81.
of embryonic induction. Development 104: Krull, C. E, Collazo, A., Fraser, S. E. and Letourneau, R C. 1979. Cell substratum adhesion
341-359. Bronner-Fraser, M. 1995. Segmental migration of neurite growth cones, and its role in neurite
Jacobson, M. 1968. Cessation of DNA synthesis of trunk neural crest. Time lapse analysis reveals elongation. Exp. Cell Res. 124: 127-138.
in retinal ganglion cells correlated with the time a role for PNA binding molecules. Development
121: 3733-3743. Liem, K., Tremmi, G., Roelink, H. and Jessell,
of specification of their central connections. T. M. 1995. Dorsal differentiation of neural plate
Dev. Biol. 17: 219-232. Kuratani, S. C. and Kirby, M. L. 1991. Initial cells induced by BMP-mediated signals from
Jacobson, M. 1991. Developmental Neurobio- migration and distribution of the cardiac neural epidermal ectoderm. Cell 82: 969-979.
logy, 2nd Ed. Plenum, New York. crest in the avian embryo: An introduction to
Lfberg, J., Perris, R. and Epperlin, H. H. 1989.
the concept of the circumpharyngeal crest. Am.
Johnston, M. C., Sulik, K. K., Webster, W. S. Timing in the regulation of neural crest cell mi-
J. Anat. 191: 215-227.
and Jarvis, B. L. 1985. Isotretinoin embryopa- gration: Retarded maturation of regional extra-
thy in a mouse model: Cranial neural crest in- Lamoureux, P., Buxbaum, R. E. and Heidemann, cellular matrix inhibits pigment cell migration
volvement. Teratology 31: 26A. S. R. 1989. Direct evidence that growth cones in embryos of the white axolotl mutant. Dev.
pull. Nature 340: 159-162. Biol 131: 168-181.
Jones, K. R., Farinas, I., Backus, C. and Reichart,
L. F. 1994. Targeted disruption of the BDNF Lahav, R., Ziller, C., Dupin, E. and Le Douarin, Loring, J. F. and Erickson, C. A. 1987. Neural
gene perturbs brain and sensory neuron develo- N. M. 1996. Endothelin 3 promotes neural crest crest cell migratory pathways in the trunk of
pment, but not motor neuron development. Cell cell proliferation and mediates a vast increase the chick embryo. Dev. Biol. 121: 220-236.
76: 989-999. in melanocyte number in culture. Proc. Natl.
Lumsden, A. 1988. Multipotent cells in the avian
Acad. Sci. USA. 93:.3892-3897. neural crest. Trends Neurosci. 12: 81-83.
Jones, P. H. and Watt, F. M. 1993. Separation
of human epidermal stem cells from transit Landis, S. C. and Patterson, P. H. 1981. Neural Lumsden, A. and Guthrie, S. 1991. Alternating
amplifying cells of the basis of differences in crest cell lineages. Trends Neurosci. 4: 172-175. patterns of cell surface properties and neural
integrin function and expression. Cell 73: Larsen, W. J. 1993. Human Embryology. crest cell migration during segmentation of the
713-724. Churchill Livingstone, New York. chick embryo. Development [Suppl.] 2: 9-15.
Jordan, T. and seven others. 1992. The human Le Douarin, N. and Smith, J. 1988. Development Lumsden, A. and Keynes, R. 1989. Segmental
PAX6 gene is mutated in two patients with of the peripheral nervous system from the neural patterns of neuronal development in the chick
aniridia. Nat. Genet. 1: 328-332. crest. Annu. Rev. Cell Biol. 4: 375-404. hindbrain. Nature 337: 424-428.
Mancilla, A. and Mayor, R. 1996. Neural crest Microfilament-mediated changes in cell shape specific phenotypes in neural crest cells. Science
formation in Xenopus laevis: Mechanisms of during uplifting of neural folds. J. Exp. Zool. 241: 86-89.
Xslug induction. Dev. Biol. 177: 580-589. 213: 391-398. Perris, R., Lfberg, J. Fllstrm, C., von Boxburg,
Mann, I. 1964. The Development of the Human Nagele, R. G. and Lee, H. Y. 1987. Studies in the Y, Olsson, L. and Newgreen, D. F. 1990. Structural
Eye. Grune and Stratton, New York. mechanism of neurulation in the chick. and compositional divergencies in the extrace-
Marin, F. and Puelles, L. 1994. Patterning of Morphometric analysis of the relationship llular matrix encountered by neural crest cells in
embryonic avian midbrain after experimental between regional variations in cell shape and the white mutant axlotl embryo. Development
inversion: a polarizing activity for the isthmus. sites of motive force generation. J. Exp. Biol. 109: 533-551.
Dev. Biol. 163: 19-28. 24: 197-205. Piatigorsky, J. 1981. Lens differentiation in
Matsunami, H. and Takeichi, M. 1995. Fetal Newgreen, D. F. and Gooday, D. 1985. Control vertebrates: A review of cellular and molecular
brain subdivisions defined by T- and Ecadherins of onset of migration of neural crest cells in features. Differentiation 19: 134-153.
expressions: evidence for the role of cadherin avian embryos: Role of Ca++-dependent cell Pichel. J. G. and eleven others. 1996. Defects in
activity in region-specific, cell-cell adhesion. adhesions. Cell Tiss. Res. 239: 329-336. enteric innervation and kidney development in
Dev. Biol. 172: 466-478. Newgreen, D. F., Scheel, M. and Kaster, V. 1986. mice lacking GDNF. Nature 382: 73-76.
Mayer, T. C. 1973. The migratory pathway of Morphogenesis of sclerotome and neural crest Pinkus, H. and Mehregan, A. H. H. 1981. A Guide
neural crest cells into the skin of mouse embryos. cells in avian embryos. In vivo and in vitro studies to Dermohistopathology. Appleton Century
Dev. Biol. 34: 39-46. on the role of notochordal extracellular materi- Crofts, New York.
al. Cell Tiss. Res, 244: 299-313.
Maxwell, G. D., Reid, K., Elefanty, A., Bartlett, Pomeranz, H. D., Rothman, T. P. and Gershon,
P. F. and Murphy, M. 1996. Glial cell line- Nichols, D. H. 1981. Neural crest formation in M. D. 1991. Colonization of the postumbilical
derived neurotrophic factor promotes the de- the head of the mouse embryo as observed using bowel by cells derived from the sacral neural
velopment of adrenergic neurons in mouse a new histological technique. J. Embryol. Exp. crest: Direct tracing of cell migration using an
neural crest cultures. Proc. Natl. Acad. Sci. Morphol. 64: 105-120. intercalating probe and a replication-deficient
USA 93: 13274-13279. Nichols, D. H. and Weston, J. A, 1977. retrovirus. Development 111: 647-655.
McConnell, S. K. and Kaznowski, C. E. 1991. Melanogenesis in cultures of peripheral nervous Poole, T. J. and Thiery, J. P. 1986. In H. C.
Cell cycle dependence of laminar determinati- tissue. I. The origin and prospective fates of Slavkin (ed.), Progress in Clinical and Biologi-
on in developing cerebral cortex. Science 254: cells giving rise to melanocytes. Dev. Biol. 60: cal Research, Vol 217. Alan R. Liss, New York,
282-285. 217-225. pp. 235-238.
McMahon, A. P. and Bradley, A. 1990. The Wnt- Nieto, M. A., Sargent, M. G., Wilkinson, D. G. Porter, J. A., Young, K. E. and Beachy, P. A.
1 (int-1) proto-oncogene is required for the de- and Cooke, J. 1994. Control of cell behavior 1996. Cholesterol modification of Hedgehog
velopment of a large region of the mouse brain. during vertebrate development by slug, a zinc signaling proteins in animal development.
Cell 62: 1073-1085. finger gene. Science 264: 835-839. Science 274: 255-259.
Milunsky, A., Jick, H., Jick, S. S., Bruell, C. L., Nievelstein, R. A. J., Hartwig, N. G., Vermeij- Portmann, A. 1941. Die Tragzeiten der Primaten
Maclaughlen, D. S., Rothman, K. J. and Willett, Keers, C. and Valk, J. 1993. Embryonic deve- und die Dauer der Schwangerschaft beim
W. 1989. Multivitamin folic acid supplementa- lopment of the mammalian caudal neural tube. Menschen: Ein Problem der vergleichen
tion in early pregnancy reduces the prevalence Teratology 48: 21-31. Biologie. Rev. Suisse Zool. 48: 511-518.
of neural tube defects. JAMA 262: 2847-2852. Noden, D. M. 1978. The control of avian Portmann, A. 1945. Die Ontogenese des
Miller, S. J., Lavker, R. M. and Sun, T.-T. 1993. cephalic neural crest cytodifferentiation. I. Menschen als Problem der Evolutionsforschung.
Keratinocyte stem cells of corneal, skin, and Skeletal and connective tissue. Dev. Biol. 69: Verh. Schweiz. Naturf. Ges. 125: 44-53.
hair follicle. Semin. Dev. Biol. 4: 217-240. 296-312.
Puffenberger, E. G., Hosoda, K., Washington, S.
Montagna, W. and Parakkal, P. F. 1974. The Noden, D. M. 1983. The role of the neural crest S., Nakao, K., deWilt, D., Yanagisawa, M. and
piliary apparatus. In W. Montagna (ed.), The in patterning of avian cranial skeletal, connec- Chakvarti, A. 1994. A missense mutation of the
Structure and Formation of Skin. Academic tive, and muscle tissues. Dev. Biol. 96: 144-165. endothelin-B receptor gene in multigenic
Press, New York, pp. 172-258. ORourke, N. A., Dailey, M. E., Smith, S. J. and Hirschsprungs disease. Cell 79: 1257-1266.
Montagu, M. F. A. 1962. Time, morphology, McConnell, S. K. 1992. Diverse migratory Quiring, R., Walldorf, U., Kloter, U., and
and neoteny in the evolution of man. In M. F. pathways in the developing cerebral cortex. Gehring, W. J. 1994. Homology of the eyeless
A. Montagu (ed.), Culture and Evolution of Man. Science 258: 299-302. gene of Drosophila to the Small eye gene in
Oxford University Press, New York. Papaconstantinou, J. 1967. Molecular aspects of mice and Aniridia in humans. Science 265:
Moore K. L. and Persaud, T. V. N. 1993. Before lens cell differentiation. Science 156: 338-346. 785-789.
We Are Born: Essentials of Embryology and Birth Pasteels, J. 1937. Etudes sur la gastrulation des Rakic, P. 1972. Mode of cell migration to su-
Defects. W. B. Saunders, Philadelphia. vertbrs mroblastiques. III. Oiseaux. IV. perficial layers of fetal monkey neocortex. J.
Morowitz, H. J. and Trefil, J. S. 1992. The Facts Conclusions gnrales. Arch. Biol. 48:: 381-488. Comp. Neurol. 145: 61-84.
of Life: Science and the Abortion Controversy. Paton, D. and Craig, J. A. 1974. Cataracts: De- Rakic, P. 1974. Neurons in rhesus visual cortex:
Oxford University Press, New York. velopment, diagnosis, and management. Ciba Systematic relation between time of origin and
Moury, J. D. and Schoenwolf, G. C. 1995. Clin. Symp. 26(3): 2-32. eventual disposition. Science 183: 425-427.
Cooperative model of epithelial shaping and Patten, B. M. 1971. Early Embryology of the Rakic, P. 1975. Cell migration and neuronal
bending during avian neurulation: Autonomous Chick, 5th Ed. McGraw-Hill, New York. ectopias in the brain. In D. Bergsma (ed.), Mor-
movements of the neural plate, autonomous Perris, R. and Bronner-Fraser, M. 1989. Recent phogenesis and Malformations of Face and
movements of the epidermis, and interactions advances in defining the role of the extracellu- Brain. Birth Defects Original Article Series 11(7):
in the neural plate/epidermis transition zone. lar matrix in neural crest development. 95-129.
Dev. Dyn. 204: 323-337. Commun. Dev. Neurobiol. 1: 61-83. Rakic P. and Goldman, P. S. 1982. Develop-
Nagele, R. G. and Lee, H. Y. 1980. Studies on Perris, R., von Boxburg, Y. and Lfberg, J. 1988. ment and modifiability of the cerebral cortex.
the mechanism of neurulation in the chick: Local embryonic matrices determine region- Neurosci. Rev. 20: 429-611.
Rakic, P. and Sidman, R. L. 1973. Organization Selleck, M. A. and Bronner-Fraser, M. 1995. derived. cells of avian embryos. Development
of cerebellar cortex secondary to deficit of gra- Origins of the avian neural crest: the role of 111: 635-645.
nule cells in weaver mutant mice. J. Comp. neural plate-epidermal interactions. Develop- Studer, M., Lumsden, A., Ariza-McNaughton, L.,
Neurol. 152: 133-162. ment 121: 525-538. Bradley, A. and Krumlauf, R. 1996. Altered
Ramn y Cajal, S. 1890. Sur lorigene et les Serbedzija, G. N., Bronner-Fraser, M. and Fraser, segmental identity and abnormal migration of
ramifications des fibres neuveuses de la moelle S. E. 1989. A vital dye analysis of the timing and motor neurons in mice lacking Hoxb-1. Nature
embryonnaire. Anat. Anz. 5: 111-119. pathways of avian trunk neural crest cell 384: 630-634.
Rawles, M. E. 1948. Origin of melanophores migration. Development 106: 809-816. Takeichi, M. 1988. The cadherins: Cell-cell
and their role in development of color patterns Shah, N. M. Groves, A. K. and Anderson, D. J. adhesion molecules controlling animal morpho-
in vertebrates. Physiol. Rev. 28: 383-408. 1996. Alternative neural crest cell fates are genesis. Development 102: 639-656.
Rickmann, M., Fawcett, J. W. and Keynes, R. J. instructively promoted by TGF-b superfamily Tan, S.-S. and Morriss-Kay, G. 1985. The de-
1985. The migration of neural crest cells and memebers. Cell 85: 331-343. velopment and distribution of the cranial
the growth of motor neurons through the rostral Shah, N. M., Marchionni, M. A., Isaacs, I, neural crest in the rat embryo. Cell Tiss. Res.
half of the chick somite. J. Embryol. Exp. Stroobant, P. and Anderson, D. J. 1994. Glial 240:403-416.
Morphol. 90: 437-455. growth factor restricts mammalian neural crest Tassabehji, M., Newton, V. E. and Read, A. P.
Roessler, E. and seven others. 1996. Mutations stem cells to a glial fate. Cell 77: 349-360. 1994. Waardenburg syndrome type 2 caused by
in the human Sonic hedgehog gene cause Shawlot, W. and Behringer, R. R. 1995. Require- mutations in the human microplithalmia (MITF)
holoprosencephaly. Nat. Genet. 14: 357-360. ment for Lim1 in head-organizer function. Nature gene. Nat, Genet. 8: 251-255.
Romanes, G. J. 1901. Darwin and After Darwin. 374: 425-430. Teillet, M.-A., Kalcheim, C. and Le Douarin,
Open Court Publishing, London. Sidman, R. L., Dickie, M. M. and Appel, S. H. N.M. 1987. Formation of the dorsal root ganglia
Romeo, G. and ten others. 1994. Point mutations 1964. Mutant mice (quaking and jimpy) with in the avian embryo: Segmental origin and
affecting the tyrosine kinase domain of the RET deficient myelination in the central nervous migratory behavior of neural crest progenitor
proto-oncogene in Hirschsprungs disease. Nature system. Science 144: 309-311. cells. Dev. Biol. 120: 329-347.
367: 377-378. Sieber-Blum, M. 1991. Role of neurotrophic Thomas, K. R. and Cappecchi, M. R. 1990.
Rubenstein, J. L. R. and Puelles, L. 1994. factors BDNF and NGF in the commitment of Targeted disruption of the murine int-1 proto-
Homeobox gene expression during development pluripotent neural crest cells. Neuron 6: 949-955 oncogene resulting in severe abnormalities in
of the vertebrate brain. Curr. Top. Dev. Biol. Sieber-Blum, M. and Sieber, F. 1984. Heteroge- midbrain and cerebellar development. Nature
29: 1-63. neity among early quail neural crest cells. Dev. 346: 847-850.
Saha, M., Spann, C. L. and Grainger, R. M. Brain Res. 14: 241-246. Thorogood, P. 1989. Review of Developmental
1989. Embryonic lens induction: More than Smith, J. L. and Schoenwolf, G. C. 1989. and Evolutionary Aspects of the Neural Crest.
meets the optic vesicle. Cell Differ. Dev. 28: Notochordal induction of cell wedging in the Trends Neurosci. 12: 38-39.
153-172. chick neural plate and its role in neural tube Tremblay, P., Kessel, M. and Gruss, P. 1995.
Sauer, F. C. 1935. Mitosis in the neural tube. J. formation. J. Exp. Zool. 250: 49-62. A transgenic neuroantornical marker identi-
Comp. Neurol. 62: 377-405. Smith, J. L. and Schoenwolf, G. C. 1991. Further fies cranial neural crest deficiencies associated
evidence of extrinsic forces in bending of the with the Pax3 mutant Splotch. Dev. Biol. 171:
Schoenwolf, G. C. 1984. Histological and
neural plate. J. Comp. Neurol. 307: 225-236. 317-329.
ultrastructural studies of secondary neurulation
in mouse embryos. Am. J. Anat. 169: 361-374. Spemann, H. 1938. Embryonic Development Turner, D. L. and Cepko, C. L. 1987. A common
and Induction. Yale University Press, New progenitor for neurons and glia persists in rat
Schoenwolf, G. C. 1991a. Cell movements driving
Haven. retina late in development. Nature 328: 131-136.
neurulation in avian embryos. Development 2
[Suppl.]: 157-168. Spieth, J. and Keller, R. E. 1984. Neural crest Vogel, K. S. and Weston, J. A. 1990. The
cell behavior in white and dark larvae of sympathoadrenal lineage in avian embryos. II.
Schoenwolf, G. C. 1991b. Cell movements in
the epiblast during gastrulation and neurulation Ambystoma mexicanum: Differences in cell Effects of glucocorticoids on cultured neural crest
in avian embryos. In R. Keller et al. (eds)., Gas- morphology, arrangement, and extracellular cells. Dev. Biol. 139: 13-23.
trulation. Plenum, New York, pp. 1-28. matrix as related to migration. J. Exp. Zool. Van Allen, M. I. and fifteen others. 1993.
229: 91-107. Evidence for multi-site closure of the neural tube
Schoenwolf, G. C. and Alvarez, I. S. 1989. Roles
of neuroepithelial cell rearrangement and Spritz, R. A., Gielbel, L. B. and Holmes, S. A. in humans. Am. J. Med. Genet. 47: 723-743.
division in shaping of the avian neural plate. 1992. Dominant negative and loss of function van Straaten, H. W. M., Hekking, J. W. M.,
Development 106: 427-439. mutations of the c-kit (mast/Stem cell growth Wiertz-Hoessels, E. J. L. M., Thors, F. and
factor) proto-oncogene in human piebaldism. Drukker, J. 1988. Effect of the notochord on
Schoenwolf, G. C. and Desmond, N. E. 1984.
Am. J. Hum. Genet. 50: 261-269. the differentiation of a floor plate area in the
Descriptive studies of the occlusion and
reopening of the spinal canal of the early chick Stemple, D. L. and Anderson, D. J. 1992. neural tube of the chick embryo. Anat. Embryol.
embryo. Anat. Rec. 209: 251-263. Isolation of a stem cell for neurons and glia 177: 317-324.
Schweizer, G., Ayer-LeLivre, C. and Le from the mammalian neural crest. Cell 71: Varley, J. E., Wehby, R. G., Rueger, D. C. and
Douarin, N. M. 1983. Restrictions in develop- 973-985. Maxwell, G. D. 1995. Number of adrenergic and
mental capacities in the dorsal root ganglia du- Steingrimsson, E. and ten others. 1994. islet-1 immunoreactive cells is increased in avian
ring the course of development. Cell Differ. Molecular basis of mouse microphthalmia (mi) trunk neural crest cultures in the presence of
13:191-200. mutations helps explain their developmental human recombinant osteogenic protein-1. Dev.
Sechrist, J., Serbedzija, G. N., Scherson T., Fraser, and phenotypic consequences. Nat. Genet. 8: Dyn. 203: 434-447.
S. E. and Bronner-Fraser, M. 1993. Segmental 256-261. Vassar, R. and Fuchs, E. 1991. Transgenic mice
migration of the hindbrain neural crest does not Stocker, K. M., Sherman, L., Rees, S. and Ciment, provide new insights into the role of TGF-a
arise from its segmental origin. Development G. 1991. Basic FGF and TGF-b1 influence during epidermal development and differentia-
118: 691-703. commitment to melanogenesis in neural crest- tion. Genes Dev. 5: 714-727.
von Baer, K. E. 1828. Entwicklungsgeschichte Weinstein, G. D. and van Scott, E. J. 1965. factors from notochord and floor plate. Cell 73:
der Thiere: Beobachtung und Reflexion. Turnover times of normal and psoriatic epider- 673-686.
Borntrger, Konigsberg. mis. J. Invest. Dermatol. 45: 257-262. Yamamori, T., Fukada, K., Aebersold, R.,
Walsh, C. and Cepko, C. L. 1988. Clonally Weston, J. 1963. A radiographic analysis of the Korsching, S., Fann, M.-J. and Patterson, P.
related cortical cells show several migration migration and localization of trunk neural crest H. 1989. The cholinergic neuronal differen-
patterns. Science 241: 1342-1345. cells in the chick. Dev. Biol. 6: 274-310. tiation factor from heart cells is identical to
Walsh, C. and Cepko, C. L. 1992. Widespread Weston, J. A. 1991. Sequential segregation and leukemia inhibitory factor. Science 246:
dispersion of neuronal clones across functional fate of developmentally restricted intermediate 1412-1416.
regions of the cerebral cortex. Science 255: cell populations in the neural crest lineage. Curr. Yuodelis, C. and Hendrickson, A. 1986. A
434-440. Top. Dev. Biol. 25: 133-153. qualitative and quantitative analysis of the
Webster, E. H., Silver, A. F. and Gonsalves, N. I. Witte, 0. N. 1990. Steel locus defines new human fovea during development. Vision Res.
1984. The extracellular matrix between the multipotent growth factor. Cell 63: 5-6. 26: 847-855.
optic vesicle and the presumptive lens during Yamada, K. M., Spooner, B. S. and Wessells, N.
lens morphogenesis in an anophthalmic strain K. 1971. Ultrastructure and function of growth
of mice. Dev. Biol. 103: 142-150. cones and axons of cultured nerve cells. J. Cell
Weinstein, D. C., Rahman, S. M., Ruiz, J. C. and Biol. 49: 614-635.
Hemmati-Brivanlou, A. 1996. Embryonic Yamada, T., Pfaff, S. L., Edlund, T. and Jessell,
expression of EPH signaling factors in Xenopus. T. M. 1993. Control of cell pattern in the neural
Mech. Dev. 57: 133-144. tube: Motor neuron induction by diffusible
Especificidade axnica
8
Assim, para alm de questes de quantida-
de, existem questes de padres que so es-
senciais para a compreenso da Natureza.
ALFRED NORTH WHITEHEAD (1934)
N O SOMENTE AS CLULAS PRECURSORAS NEURONIAIS MIGRAM
para os seus locais de atuao, como tambm o fazem os seus axnios.
Diferentemente da maioria das clulas cujas partes permanecem no mesmo
lugar, a clula nervosa capaz de alongar axnios que podem se estender por metros.
O axnio tem seu prprio aparelho locomotor residindo no cone de crescimento, que
Tal como o entomologista procura de bor- pode responder aos mesmos tipos de sinais que as clulas migratrias podem perce-
boletas brilhantes coloridas, minha ateno ber. Assim, o movimento axnico pode ser direcionado pela quimiotaxia, galvanotaxia,
perseguiu no jardim da matria cinzenta, e conduo por contato, tal como as clulas migratrias. Os sinais para a migrao
clulas de formas delicadas e elegantes, as axnica podem, alm disso, ser ainda mais especficos que aqueles empregados para
misteriosas borboletas da alma.
conduzir certos tipos de clulas para determinadas reas. O crebro humano, por
S. RAMN Y CAJAL (1937)
exemplo, a matria mais organizada conhecida. Cada um dos seus 1011 neurnios
tem o potencial de interagir especificamente com milhares de outras clulas, e um
neurnio grande (tal como uma clula de Purkinje ou um neurnio motor) pode
receber informaes de mais de 105 outras clulas (Figura 8.1; Gershon et al., 1985).
O entendimento da gerao dessa complexidade organizada um dos maiores desa-
fios para a cincia moderna.
Goodman e Doe (1993) enumeram oito estgios de neurognese: (1) induo e
padronizao de uma regio formadora de neurnios (neurognica); (2) nascimento e
migrao de neurnios e glia; (3) gerao de destinos celulares especficos; (4) condu-
o de cones de crescimento para alvos especficos; (5) formao de conexes sinp-
ticas; (6) ligao de fatores trficos para a sobrevivncia e diferenciao; (7) rearranjo
competitivo de sinapses funcionais; e (8) continuada plasticidade sinptica durante a
vida do organismo. Os dois primeiros processos foram tpicos do captulo anterior.
Aqui, continuamos a investigar o processo do desenvolvimento neural. [axon1.html]
A gerao da diversidade neuronial

Neurnios so moldados em uma maneira hierrquica. A primeira deciso se uma
determinada clula dever ser um neurnio ou algo diferente. Se a clula deve tornar-
se um neurnio, a deciso seguinte informa o neurnio sobre seu tipo. Ele dever
tornar-se um neurnio motor, um neurnio sensorial, um neurnio comissural, ou
algum outro tipo? Aps esse destino ter sido determinado, ainda tomada outra
deciso, dando ao neurnio um alvo especfico. Para ilustrar essa especificao pro-
gressiva, iremos enfocar os neurnios motores de vertebrados e Drosophila.
307
Figura 8.1
Conexes de axnios a um neurnio do
hipocampo cultivado. O neurnio foi delinea-
do pela protena sinptica sinaptotagmina, que
est presente nos terminais dos axnios que
contatam o neurnio. (Cortesia de M. Matteoli
e P. De Camilli.)
Especificao do Neurnio Motor de V ertebrado

Vertebrado
Vertebrados formam um tubo neural dorsal, enquanto invertebrados, tal como a
Drosophila, formam um tubo neural ventral. No entanto, a especificao do ectoder-
ma neural mediada pela ligao de protenas semelhantes. Em Xenopus (e prova-
velmente outros vertebrados) a notocorda secreta as protenas Chordin e Noggin.
Essas protenas ligam BMP4, e o ectoderma na vizinhana da notocorda desenvolve
a capacidade de formar neurnios. Se o ectoderma est exposto a BMP4, ele torna-se
epidrmico (Sasai et al., l995; Piccolo et al., 1996; veja Captulo 16). Na ausncia de
estimulao por BMP4 as clulas ectodrmicas dos vertebrados parecem sintetizar
um fator de transcrio (ou um conjunto de fatores de transcrio) que compromete
as clulas uma linhagem neural. Posteriormente, as clulas iro sintetizar outras
protenas (tal como a NeuroD) que levam-nas a expressar seu fentipo neural (Turner
e Weintraub, 1994; Lee et al., 1995).
As decises relativas ao tipo de neurnio parecem ser controladas pela posio
do precursor neuronial no interior do tubo neural e pelo momento quando esse sofre
sua ltima diviso celular. Conforme descrito no captulo anterior, os neurnios na
margem ventro-lateral tornam-se neurnio motores, enquanto os neurnios sensori-
ais so derivados de clulas na regio dorsal do tubo. Como transplante de clulas da
placa ectpica do assoalho ou notocorda (que secretam a protena Sonic hedgehog)
para reas laterais pode re-especificar clulas dorsolaterais em neurnios motores,
essa deciso quanto ao tipo de neurnio provavelmente uma funo de sua posio
em relao placa do assoalho. Ericson e colega (1996) mostraram que so necessri-
os dois perodos de sinalizao de Sonic hedgehog para especificar os neurnios
motores: um perodo precoce durante o qual as clulas so instrudas para se tornarem
neurnios ventrais e um perodo mais tardio (que inclui a fase S de sua diviso de
aniversrio) que especifica que o neurnio ventral est para se tornar um neurnio
motor (em vez de um interneurnio). A primeira fase provavelmente regulada pela
secreo de Sonic hedgehog pela notocorda, enquanto o estgio mais tardio mais
CAPTULO 8 Especificidade Axnica 309
provavelmente regulado pelas clulas da placa do assoalho. A Sonic hedgehog parece

especificar os neurnios motores pela induo do fator de transcrio Islet-1. Essa
protena encontrada em todos os neurnios motores mas em nenhum outro tipo de
neurnio (Ericson et al., 1992; veja Prancha 32). Outro fator que afeta o tipo neuronial
a idade da clula por ocasio da ltima diviso. Como discutido no captulo anterior,
o aniversrio de uma clula determina em que camada do crtex ela ir penetrar.
A prxima deciso envolve a especificidade do alvo. Se uma clula se destina a ser
um neurnio e, especificamente, um neurnio motor, esse neurnio motor ir inervar a
coxa, o membro anterior, ou a lngua? A determinao da especificidade parece ser
regulada pela posio do neurnio motor ao longo dos eixos ntero-posterior e media-
no-lateral do tubo neural. O tubo neural tem uma distinta polaridade ntero-posterior do
prosencfalo ao longo da medula espinhal. No Captulo 16 iremos discutir o complexo do
gene Hox que determina essa polaridade dentro da medula espinhal e que fornece
especificidade de alvo aos respectivos neurnios motores. Esses genes trabalham em
combinao para definir a identidade posicional de cada regio do embrio. Landmesser
(1978) e Holliday (1980b) mostraram que os neurnios motores que tm a mesma especi-
ficidade esto agrupados. Os corpos celulares de neurnios motores que se projetam
para um nico msculo esto agregados em uma coluna longitudinal formando um
pool. Os pools esto agregados formando colunas maiores de acordo com seu alvo.
Neurnios motores na Coluna de Terni (CT) se projetam ventralmente para dentro dos
gnglios simpticos. Pools motores da coluna motora lateral (LMC) se estendem para
a musculatura dos membros, enquanto os neurnios motores na coluna motora mediana
(MMC) se projetam para dentro dos msculos axiais. As colunas dos membros e as
axiais so subdivididas ao longo do eixo mediano-lateral de maneira a se correlacionar
com a posio dorsoventral dos seus respectivos alvos (Figura 8.2; Tosney et al., 1995).
Esse arranjo de neurnios motores constante para os vertebrados. [axon2.html]
As especificidades dos alvos desses neurnios motores so especificadas antes
de seus axnios se estenderem para a periferia. Isso foi mostrado por Lance-Jones e
Landmesser (1980), que reverteram segmentos da medula espinhal de pintos fazendo
com que os neurnios motores se encontrassem em novos locais. Os axnios se
dirigiram para seus alvos originais, no para aqueles esperados devido suas novas
posies (Figura 8.3). A base molecular dessa especificidade poderia residir em mem-
bros da famlia de protenas LIM (veja Figura 8.2; Tsushida et al., 1994). A famlia LIM
inclui Islet-1. Islet-2, LIM-1, LIM-2 e LIM-3, e cada uma dessas protenas um fator de
transcrio. As protenas LIM foram implicadas na especificao do destino de clu-
las em nematides (nos quais o gene LIM mec-3 especifica um neurnio receptor de
Colunas de um lado Ordem da Neurnio Projeo de neurnios

Nveis do tubo neural expresso gnica motor dentro de cada coluna
Figura 8.2
Tubo neural Torcica Organizao de neurnios motores e especifi-
Cervical
cao LIM. esquerda est metade da medula
Msculo
espinhal. Os neurnios nessas colunas apre-
Membro Dorsal
sentam conjuntos especficos de genes LIM, e
Parede
anterior do corpo neurnios dentro de cada coluna fazem deci-
ses semelhantes quanto escolha de trajetri-
as. Neurnios motores CT projetam-se ven-
Ventral tralmente para os gnglios simpticos. A colu-
Torcico Membro posterior na MMC projeta-se para os msculos axiais, e
Msculo a LMC envia axnios para a musculatura dos
Dorsal
membros. Quando essas colunas so subdivi-
didas, as subdivises medianas (m) se proje-
Membro ou
tam para as posies ventrais e as subdivises
posterior laterais (l) enviam axnios para as regies dor-
Ventral
sais dos tecidos alvo. (Segundo Tsushida et
Tempo al., 1994; Tosney et al., 1995.)
(A) Estgio 15-16
Estgio 28.5 Estgio 28.5
Plexo Plexo
crural crural
Axial
Axial
Sartrio Sartrio
(B) Controle (C) Revertido
Figura 8.3
Compensao por pequenos deslocamentos da posio de iniciao axnica no embrio do pinto.
(A) Um pedao da medula espinhal compreendendo vrios segmentos T7-S3 (stimo torcico ao
terceiro lombo-sacral) revertido no embrio de 2.5 dias. (B) Padro normal de projeo axnica
para diferentes msculos aos 6 dias. (C) Projees axnicas no segmento revertido. Os neurni-
os localizados ectopicamente finalmente acharam seus caminhos neurais apropriados e inervaram
os msculos apropriados. (de Lance-Jones e Landmesser, 1980.)
toque; Way e Chalfie, 1988) e so importantes para o desenvolvimento cerebral em

camundongos (Shawlot e Behringer, 1995). Por exemplo, todos os neurnios motores
expressam Islet-1 e (um pouco depois) Islet-2. Se nenhum outro desses genes LIM for
expresso, os neurnios se projetam para os msculos da parede ventral do corpo.
Aqueles neurnios na coluna mediana da MMC tambm expressam LIM-3, o que os
distingue dos outros neurnios motores. Os pools laterais da coluna de LMC so
distinguidos pela sua expresso curta de LIM-1, enquanto os neurnios motores CT
param de expressar Islet-2. Assim, cada projeo caracterizada por uma constelao
particular de fatores de transcrio LIM.
Especificao dos Neurnios Motores em Drosophila

A especificao do ectoderma neural em vertebrados e artrpodes parece ser conduzida
de maneira surpreendentemente semelhante. A especificao do ectoderma neurognico
em Drosophila envolve a secreo do homlogo de Chordin da Drosophila, a prote-
na Short-gastrulation. Essa protena produzida pelas clulas ventro-laterais do blas-
toderma, e liga-se ao homlogo da BMP4 da Drosophila, a protena Decapentaplegic
(veja Figura 15.32; Holley et al., 1995). As clulas que secretam a protena Short-
gastrulation so poupadas dos efeitos lateralizantes da Decapentaplegic, e tornam-se
capazes de formar o cordo nervoso ventral. Durante a gastrulao, as clulas coloca-
das mais vegetalmente, as precursoras do mesoderma, invaginam para o interior da
blastocele vitelnica, causando a localizao do ectoderma neurognico na regio
ventral do embrio (Figura 8.4). O ectoderma delamina cerca de 60 clulas (30 de cada
lado) dentro do embrio, e essas (em conjunto com as clulas da linha mediana ven-
tral) so as precursoras dos neurnios, os neuroblastos. O compromisso de tornar-se
ectoderma uma conseqncia do posicionamento ao longo do eixo dorsoventral do
embrio e ser discutido em captulos subseqentes. O compromisso de tornar-se um
neuroblasto em lugar de uma clula epidrmica feito por um grupo de genes chamados
Figura 8.4
Desenvolvimento da regio neurognica de in-
setos. No blastoderma, o neuroectoderma
Embrio de Drosophila presuntivo est localizado em um outro lado
dos precursores mesodrmicos. Durante a gas-
trulao e extenso da banda germinativa, o
mesoderma se invagina da superfcie para o
interior do embrio. As clulas precursoras da
linha neural mediana so agora as clulas mais
ventrais do embrio. O ectoderma delamina
neuroblastos para dentro do embrio (junta-
Alongamento da Delaminao
mente com clulas da linha mediana ventral)
Blastoderma
Gastrulao para formar o sistema nervoso central. Os neu-
celular banda geminativa do neuroblasto
roblastos geram uma srie de clulas-me gan-
Ectoderma glionares, cada uma das quais gera dois neur-
superficial
nios. No caso, mostrado o neuroblasto 1-1.
Neuroectoderma (Segundo Goodman e Doe, 1993.)
presuntivo
Clulas presuntivas
da linha mediana Neuroblastos
Precursores
Mesoderma Ectoderma ventral (do da linha
ectoderma neurognico) mediana
Neurnios
Clula-me do Crescimento
gnglio axnico
Neuroblasto
NB 1-1
Interno
Externo
genes proneurais (Figura 8.5). Esses constituem um conjunto de fatores de transcri-

o encontrados em arranjos de cerca de quatro a seis clulas na regio ectodrmica.*
Cada arranjo forma uma zona de interao onde uma (e apenas uma) das clulas se
torna um neuroblasto. Uma clula compromissada para formar um neuroblasto, inibe
as outras clulas de seu arranjo de se tornarem neuroblastos. Isso conseguido pela
interao com um grupo de genes chamados de genes neurognicos. As protenas
Notch e Delta so crticas nessas reaes. Essas protenas se integram na membrana
celular. Suas interaes sugerem que a clula que est destinada a se tornar um
neuroblasto diminui a regulao da sua protena Notch, que leva suas vizinhas a
diminuir a regulao das suas protenas Notch. Essa deciso comunicada atravs de
protenas Delta. Dessa maneira, o neuroblasto inibe lateralmente outras clulas do
agregado de se tornarem neuroblastos (veja Captulo 17). [axon3.html]
Tal como acontece em vertebrados, a especificao de neuroblasto em Drosophila
conseguida pela expresso combinatria de diferentes genes. (De maneira interes-
sante, esses genes foram usados anteriormente para especificar cada regio do
blastoderma da Drosophila). Se quaisquer desses genes no forem capazes de funci-
onar, os neuroblastos se comportam como se fossem outros tipos de neurnios, fre-
qentemente formando nervos que enviam seus axnios para alvos errados (Chu-
LaGraff et al., 1995). [axon4.html]
*Esses fatores de transcrio so membros da famlia achaete-scute. Interessantemente, alguns

dos fatores de transcrio envolvidos na determinao neural de vertebrados so tambm membros
dessa famlia (Turner e Weintraub, 1994).
Figura 8.5
Especificao seqencial da linhagem de neuroblastos. (A) O ectoderma neurognico especi-
ficado por sinais posicionais ao longo dos eixos dorsoventral e ntero-posterior. (B,C) Agrega-
dos de neuroblastos potencias esto especificados por genes proneurais como o achaete (mostra-
do em F). (D) Interao entre neuroblastos potenciais seleciona uma clula do agregado para ser
neuroblasto, e essa clula inibe as outras clulas do agregado de se tornarem neuroblastos. (E) Os
neuroblastos brotam das clulas-me ganglionares (da maneira que ser discutida no Captulo
Ectoderma 13), cada uma indo formar dois neurnios. (F) Embrio de Drosophila corado para o transcrito
superficial
de achaete. Os agregados neurognicos expressam esse gene. Os parnteses indica um domnio
de atividade neurognica. (Segundo Goodman e Doe, 1993; fotografia de Skeath e Carrol, 1922;
cortesia de J. Skeath.)
Ectoderma
neurognico Formao de padres no sistema nervoso
O funcionamento do crebro vertebrado no depende somente da diferenciao e do
(A) Sinais posicionais:
posicionamento das clulas neurais, mas tambm das conexes especficas dessas
genes de segmentao (A/P),
genes dorso/ventrais
clulas entre si e seus alvos perifricos. De alguma maneira, os nervos de um rgo
sensorial como o olho devem se conectar a neurnios especficos no crebro, que
podem interpretar estmulos visuais, e os axnios do sistema nervoso tm que atra-
(B) Especificao neuroblstica
vessar grandes extenses de tecidos antes de inervar o tecido alvo apropriado. Como
genes de identidade neuroblstica
sabe o axnio nervoso atravessar numerosas outras clulas alvos em potencial para
fazer sua conexo especifica? Harrison (1910) sugeriu que a especificidade do cresci-
mento axnico devida s fibras nervosas pioneiras, que avanam na frente de outros
axnios e servem como guias para elas.* Essa observao simplifica, mas no resolve,
(C) Formao neuroblstica
o problema de como os neurnios formam padres apropriados de interconexes.
genes proneurais
Harrison tambm observou que os axnios devem crescer em um substrato slido, e
especulou que diferenas nas superfcies embrionrias podem permitir aos axnios
viajar em certas regies especficas. As conexes finais ocorreriam por interaes
complementares na superfcie celular:
(D) Inibio lateral
Que deve haver uma espcie de reao na superfcie entre cada tipo de fibra
genes neurognicos
nervosa e a estrutura particular a ser inervada parece claro a partir do fato de
que fibras sensoriais e motoras, embora correndo prximas no mesmo feixe,
ainda assim formem conexes perifricas apropriadas, umas com a epiderme e as
outras com o msculo... Esses Fatos sugerem que pode haver aqui certa analo-
(E) Linhagem celular neuroblstica gia com a unio do vulo com o espermatozide.
clulas-me ganglionares e genes
de identidade neural
Pesquisa sobre a especificidade de conexes neuroniais tem enfocado dois tipos
Neurnios principais de sistemas: neurnios motores, cujos axnios viajam de um nervo para um
Clulas-me
ganglionares msculo especfico, e o sistema ptico, cujos axnios originando na retina encontram
Neuroblastos
seu caminho de retorno ao crebro. Em ambos, a especificidade das conexes axnicas
desenrola-se em trs etapas (Goodman e Shatz, 1993):
(F)
Seleo de trajetria, onde os axnios viajam por uma rota que os conduz a
uma regio particular do embrio.
*Os cones de crescimento dos neurnios pioneiros migram para seus tecidos alvos enquanto as
distncias embrionrias ainda so curtas e o tecido embrionrio interveniente ainda relativamente
no-complicado. Mais tardiamente no desenvolvimento, os outros neurnios que inervam o tecido
alvo se ligam (fasciculam) ao neurnio pioneiro e assim penetram no tecido alvo. Klose e Bentley
(1989) mostraram que em alguns casos, os neurnios pioneiros morrem aps outros neurnios
terem atingido sua destinao. No entanto, tivesse esse neurnio pioneiro sido impedido de se
diferenciar, os outros axnios no teriam atingido seu tecido alvo.
Seleo de alvo, onde os axnios, uma vez atingido a rea correta, reconhecem
e ligam-se a um conjunto de clulas com as quais podem formar conexes
estveis.
Seleo de endereo, onde os padres iniciais so refinados fazendo cada
axnio se ligar a um pequeno subconjunto (s vezes de somente um) de seus
possveis alvos.
Os dois primeiros processos so independentes da atividade neuronial. O terceiro

envolve interaes entre diversos neurnios ativos e converte projees sobrepos-
tas, em um padro de conexes finalmente concatenadas. conhecido desde 1930 que
os axnios motores podem encontrar seus msculos apropriados mesmo quando a
atividade neural dos axnios est bloqueada. Twitty (que havia sido aluno de Harrison)
e seus colegas acharam que os embries do trito Taricha torosa secreta uma toxina,
tetrodotoxina, que bloqueava a transmisso neural em outras espcies. Transplantan-
do pedaos de Taricha torosa para outros embries de salamandra, eles foram capa-
zes de paralisar os embries hospedeiros por dias enquanto ocorria o desenvolvimen-
to. Aproximadamente no momento em que os girinos iriam se alimentar, a toxina desa-
parecia, e as salamandras nadaram e se alimentaram normalmente (Twitty e Johnson,
1934; Twitty, 1973). Experimentos mais recentes usando mutantes do peixe-zebra ten-
do receptores neurotransmissores no-funcionais, demonstraram de maneira seme-
lhante que os neurnios motores estabeleciam seus padres normais de inervao na
ausncia de atividade neuronial (Westerfield et al., 1990).
Porm, permanecia a questo, Como so instrudos os axnios a respeito do local
para onde devem ir? Conforme mencionado no Captulo 3, as clulas migratrias rece-
bem seus sinais de substncias difusivas, ons, ou da matriz extracelular sobre a qual
viajam. O cone de crescimento capaz de responder ao mesmo tipo de sinais, e conduz
o axnio da soma da clula neural para o seu tecido alvo. Deve-se recordar do captulo
anterior que o cone de crescimento arrasta o axnio para frente. O axnio no estica-
do pelos empurres vindos do corpo celular.
Seleo de trajetrias: Orientao pela matriz extracelular

A matriz extracelular pode prover informao para a navegao de vrias maneiras
algumas mais especficas que outras. Canais e pregas na matriz extracelular podem
restringir o caminho de crescimento axnico uma certa regio; isso uma maneira
muito crua de orientao. Alm disso, certas protenas da lmina basal podem ser mais
adesivas que outras e estender vis para a movimentao axnica ao longo da mem-
brana basal. Finalmente, molculas na matriz extracelular podem repelir ativamente
certos axnios, causando o colapso do cone de crescimento. Como veremos, todos
esses mecanismos parecem atuar no embrio.
Orientao pelo T erreno Fsico: Orientao por Contato

Terreno
Uma das primeiras hipteses a respeito da especificidade do crescimento axnico
envolve a orientao por contato, ou estereotropismo. Aqui, sinais fsicos do substrato
dirigem o crescimento neural. Harrison desenvolveu uma tcnica de desenvolver
axnios em cogulos sangneos, e usando essa tcnica, Weiss (1955) observou que
os axnios em crescimento no somente necessitavam de um substrato slido para
migrar, mas tambm que a migrao tendia a seguir descontinuidades no cogulo.
Quando as fibras do cogulo se orientavam de maneira aleatria, os axnios seguiam
esse padro aleatrio. Porm, quando as fibras foram produzidas paralelas pela aplica-
o de tenso sobre o cogulo, os axnios do nervo caminhavam ao longo dessas
fibras, no se afastando da retido (veja Figura 3.31). Singer e seus colaboradores (1979)
encontraram evidncia que tais fatores fsicos operam in vivo para guiar os cones de
crescimento. Eles detectaram grandes canais entre clulas epidrmicas da medula
espinhal da salamandra, atravs das quais migram os axnios em crescimento. Eles
consideraram a hiptese de que esses canais proviam sinais para guiar os axnios
em direo s regies apropriadas do crebro. Canais celulares foram tambm detec-
tados na retina do camundongo (Silver e Sidman, 1980), e parecem guiar os cones de
crescimento das clulas ganglionares da retina para o caule ptico durante seu
desenvolvimento.
A presena de canais preexistentes provavelmente no crtica para o crescimento
da maioria dos axnios. O cone de crescimento parece capaz de digerir seus prprios
canais atravs de uma matriz extracelular secretando enzimas proteolticas para sua
vizinhana imediata (Pittman, 1985).
Orientao para Gradientes de Adeso: Haptotaxia

O cone de crescimento de um axnio em desenvolvimento encontra numerosos
microambientes, e alguns locais podem conter molculas que so mais adesivas que
outras encontradas em outros locais. A capacidade de um cone de crescimento (ou de
uma clula) para migrar subindo um gradiente de adesividade chamada haptotaxia. O
cone de crescimento tem receptores que reconhecem protenas encontradas em certas
lminas basais e o cone conduz o axnio ao longo de caminhos recobertos por essas
protenas. A hiptese da especificidade adesiva diferencial postula que o cone de cres-
cimento ir encontrar um ambiente irregular e que reconhece o seu caminho por ter
receptores particulares para certas molculas no ambiente. Isso pode ser visto in vitro.
Quando colocado em cultura, um pedao de tecido da retina neural no emite facilmente
A B
C
Figura 8.6
Efeitos dos fatores do substrato no crescimento
neural. (A,B) Efeitos de fibronectina no cres-
cimento neural de agregados da retina neural.
O agregado em (A) foi cultivado por 36 horas
em plstico de cultura de tecidos no-tratado.
O agregado em (B) foi cultivado em plstico
tratado com 50g de fibronectina por milili-
tro. (C) Crescimento de neurnios sensoriais
colocados em substrato padronizado consis-
tindo de faixas paralelas de laminina aplica-
das sobre um fundo de colgeno de tipo IV.
(A e B de Akers et al., 1981, cortesia de J.
Lilien; C de Gundersen, 1987, cortesia de R.
W. Gundersen.)
axnios para a placa de plstico. Porm, se a placa for recoberta com fibronectina ou Cadeia A
laminina, crescimento de longos axnios so observados (Figura 8.6). Reciprocamente,
glicosaminoglicanos, outro conjunto de protenas associadas com matrizes extracelulares,
Regio de ligao Local de fixao
parecem impedir esses crescimentos neurais (Tosney e Landmesser, 1985). de clulas epiteliais de clulas RDG
A presena de tais molculas delineia as trajetrias atravs do embrio (Akers et
al., 1981; Gundersen, 1987), e muitos dos caminhos percorridos pelos axnios parecem Cadeia B1 Cadeia B2
ser pavimentados por laminina. Letourneau e colaboradores (1988) mostraram que os
axnios de certos neurnios espinhais migram atravs do neuroepitlio por uma su-
perfcie transitoriamente recoberta por laminina que indica precisamente o caminho
desses axnios. De maneira semelhante, existe muito boa correlao entre o alonga- Domnio de
Local YIGSR ligao de
mento dos axnios da retina e a presena de laminina nas clulas neuroepiteliais e colgeno
de fixao celular
astrcitos no crebro do embrio do camundongo (Cohen et al., 1986, 1987; Liesi e e migrao tipo IV
Silver, 1988). Depsitos puntiformes de laminina so vistos nas superfcies das clulas
gliais ao longo do caminho levando da retina para o tectum ptico, ao passo que reas
adjacentes onde o nervo tico deixa de crescer no h tais depsitos de laminina.
Aps os axnios da retina terem alcanado o tectum, as clulas gliais se diferenciam e
perdem sua laminina. Nesse ponto, os neurnios ganglionares da retina que formaram o Regio de
nervo tico perdem seu receptor integrina para a laminina. Depsitos de laminina podem crescimento
de neuritos
tambm ser necessrios para a regenerao do tecido neural. Clulas astrogliais conten-
do laminina puntiforme em suas superfcies podem induzir a regenerao quando colo-
cadas em embries nos quais os caminhos neuroniais do corpo caloso foram rompidos.
Existem ao menos quatro regies da glicoprotena laminina que podem sustentar
a migrao e o crescimento axnico (Figura 8.7). Primeiro, as integrinas do cone de
crescimento podem se ligar seqncia RGD da protena laminina. Segundo, outro Regio ligante de
receptor do cone de crescimento pode reconhecer a seqncia de aminocidos YIGSR heparina e axnio
na laminina, enquanto a regio de 10 aminocidos rica em isoleucina do peptdeo B2
crtica para o crescimento neurtico de certos neurnios (Matsuzawa et al., 1996). O Figura 8.7
quarto receptor para laminina do cone de crescimento a glicosiltransferase que Estrutura de laminina e propostas para regies
ligantes.
reconhece certas cadeias laterais de carboidrato da molcula de laminina (Begovac e
Shur, 1990; Thomas et al., 1990). Esses carboidratos podem residir no domnio de
crescimentos neurticos da cadeia A da laminina.
Conduo por Sinais Migratrios Especficos do Axnio:

A Hiptese das Trajetrias Marcadas
Por serem encontradas em muitos lugares atravs do embrio, molculas da matriz
extracelular como a laminina e N-CAM podem usualmente proporcionar somente si-
nais gerais para a movimentao dos cones de crescimento. Seria difcil para tais
molculas generalizadas dirigir cones de crescimento de diferentes tipos em direes
diferentes. Apesar disso, em Drosophila, gafanhotos e Caenorhabditis (e provavel-
mente na maioria dos invertebrados), a padronizao do movimento axnico um
processo surpreendentemente preciso, e os axnios adjacentes esto dando instru-
es migratrias diferentes de seus ambientes. Por exemplo, de dentro de cada seg-
mento do gafanhoto emergem 61 neuroblastos (30 de cada lado e um no centro). Um
desses, o neuroblasto 7-4, uma clula germinativa e d origem a uma famlia de seis
neurnios, chamados C, G, Q1, Q2, Q5 e Q6. Essa famlia de neurnios est mostrada na
Figura 8.8, do mesmo modo que os neurnios amarelos na Prancha 20. Os cones de
crescimento axnico desses neurnios alcanam seus alvos seguindo caminhos es-
pecficos formados por outros neurnios precoces. Q1 e Q2 seguem um caminho reto
juntos, atravessando numerosas outras clulas, at encontrar o axnio do neurnio
precursor da linha mediana dorsal (dMP2), na qual eles seguem posteriormente. Os
outros quatro neurnios da famlia 7-4 migram atravs do axnio dMP2 como se esse
no existisse. Axnios do neurnios C e G progridem juntos por um longo caminho,
mas finalmente C segue os nervos X1 e X2 para a parte posterior do segmento, en-
quanto G adere aos axnios P1 e P2 (que prosseguiro posteriormente) e move-se
anteriormente sobre suas superfcies (Goodman et al., 1984, Taghert et al., 1984).
Precursor da linha mediana
Neuroblasto lateral
Neuroblasto 7-4
Neuroblasto mediano
Neuroblasto 7-4
Clulas-me ganglionares
Prognie:
Neurnios irmos
Axnios
Cones de
crescimento
Fascculos axnicos
Figura 8.8
Cada um dos 17 segmentos do embrio preco-
ce do gafanhoto tem o mesmo padro de neu-
roblastos. Existem 30 neuroblastos laterais de O cone de crescimento G ter encontrado mais de 100 superfcies diferentes s quais
cada lado, um neuroblasto mediano e 7 precur- poderia aderir, mas ele especfico para os neurnios P. Se os neurnios P so destrudos
sores na linha mediana. Os neuroblastos da por laser, os cones de crescimento G agem anormalmente, seus filopdios procurando
linha mediana se dividem uma vez, enquanto
aleatoriamente pela superfcie migratria apropriada. Se qualquer dos outros cento e
os neuroblastos so clulas-tronco que divi-
dem-se repetidamente para formar as clulas- tantos neurnios forem destrudos, o cone de crescimento G comporta-se normalmente.
me ganglionares. Cada uma das clulas se Essa formulao de encontro de trajetrias axnicas em insetos foi chamada de
divide uma vez para fornecer dois neurnios hiptese de trajetrias marcadas porque significa que um dado neurnio pode reco-
irmos. O neuroblasto 7-4 tem uma prognie nhecer especificamente a superfcie de outro neurnio que se desenvolveu anterior-
de quase 100 neurnios, dos quais os primei- mente. A evidncia para essa especificidade vem de estudos usando anticorpos
ros 6 so aqui mostrados. (Segundo Goodman monoclonais (Bastiani et al., 1987). Neurnios aCC e pCC so neurnios irmos no
e Bastiani, 1984.) gafanhoto (ambos so derivados do neuroblastos 1-1) que tm destinos muito dife-
rentes. Alm disso, conjuntos diferentes de axnios aderem a cada um deles, criando
feixes independentes de axnio, chamados fascculos. A especificidade dessa
fasciculao depende da presena da protena fasciclina I. Essa protena encontra-
da nos dois neurnios aCC de cada segmento do embrio de 10 horas, mas no est
presente nos neurnios pCC. Perto da hora 11, porm, outros neurnios (mas no
pCC) so vistos expressar essa molcula da superfcie celular. Esses neurnios so
precisamente aqueles (RP1, RP2, U1, U2 ) cujos axnios fasciculam com aCC. Existem
pelo menos quatro molculas de fasciclina expressas em diferentes subconjuntos de
neurnios, e cada uma dessas molculas permite aos cones de crescimento de certos
neurnios reconhecer especificamente aqueles axnios com os quais iro fascicular
(Harrelson e Goodman, 1988; Zinn et al., 1988).
Em outros animais com sistemas nervosos relativamente simples, tal como a san-
guessuga, existe evidncia de que cada neurnio teria molculas de superfcie celular
qualitativamente diferentes e que essas molculas poderiam ser importantes na espe-
cificidade sinptica. O sistema nervoso da sanguessuga consiste de 34 gnglios
(A) (B)
Figura 8.9
Neurnios funcionais especficos corados por
pareados contendo cerca de 400 neurnios cada. Foram identificados neurnios indi- anticorpos monoclonais para componentes da
viduais, e as funes de muitos desses neurnios so conhecidas. Zipser e Mckay superfcie celular. (A) Anticorpos Lan 3-1 re-
(1981) injetaram o sistema nervoso da sanguessuga em camundongos e obtiveram conhecem um nico par de neurnios em um
determinado gnglio. Esses neurnios funcio-
centenas de anticorpos monoclonais que se ligaram a vrias regies do sistema nervo-
nam na everso peniana. (B) Um conjunto de
so. Em alguns casos, essas diferenas puderam ser correlacionadas com funo. O neurnios reconhecidos pelos anticorpos Lan
anticorpo monoclonal Lan 3-1 se ligou especificamente a um nico par de neurnios 3-2; esses neurnios respondem estimulao
em cada um dos gnglios do corpo mediano (Figura 8.9). Esses pares de neurnios so nociva da pele da sanguessuga. (de Zipser e
conhecidos por controlar o processo da everso peniana nas sanguessugas em Mckay, 1981, cortesia de B. Zipser.)
copulao. Outro anticorpo monoclonal, Lan 3-2, reconheceu todos os quatro neur-
nios em cada gnglio, que respondem a estmulos mecnicos nocivos. A situao,
de acordo com Zipser e Mckay parece bastante anloga a cabos eltricos codifica-
dos por cores contendo muitos fios, onde cada fio tem sua prpria molcula (corante)
para facilitar o reconhecimento apropriado e conexo terminais.
Estudos sobre trajetrias marcadas especificamente em vertebrados esto muito
atrasados em comparao com aqueles em invertebrados, mas estudos recentes nos
neurnios motores do peixe-zebra indicam que as trajetrias marcadas tambm funci-
onam aqui. O peixe-zebra poder tornar-se o organismo de escolha em neurobiologia
desenvolvimental em vertebrados, porque tem desenvolvimento muito rpido, muitos
indivduos podem ser comparados, e os embries so transparentes, permitindo aos
neurobiologistas observar o crescimento dos axnios em embries vivos. Neurnios
podem ser identificados pela injeo de substncias marcadas por fluorescncia em
percursores neuroniais (Kimmel e Law, 1985), e o crescimento axnico pode ser segui-
do visualmente ou por registro em vdeo. Eisen e colegas (1986) observaram o alonga-
mento axnico de trs neurnios motores pioneiros nesses embries. Aps deixar a
medula espinhal, todos os trs seguiram o mesmo caminho ao longo de um msculo
at alcanarem um determinado local no embrio. Nesse ponto, eles divergiram em trs
trajetrias especficas levando aos msculos apropriados. A hiptese das trajetrias
marcadas tem sido extremamente importante tanto como modelo para a gerao de
pesquisas, como em um contexto no qual podem ser inseridos dados existentes sobre
a especificidade neuronial.
Orientao pela Repulso Especfica de Cones de Crescimento

Alm da adeso especfica existe tambm a possibilidade da repulso especfica pela
matriz extracelular. Axnios dos neurnios dos gnglios da raiz dorsal do tronco pas-
sam somente atravs da parte anterior da rea de cada somito (assim como as clulas da
crista neural iro migrar somente atravs dessas regies e no das regies posteriores)
(A)
Esclertomo
Tubo neural Notocorda
(B) (C)
Figura 8.10
Repulso de cones de crescimento de gnglios da raiz dorsal. (A)
Padro segmentado do crescimento axnico atravs do mesoderma
somtico. Axnios (corados de negro com tetrxido de zinco) movem-
se atravs da poro anterior de cada somito, mas no da posterior. O
limite entre anterior e posterior est assinalado com uma estrela. (B)
Cone de crescimento de um axnio do neurnio ganglionar da raiz
dorsal crescendo sobre laminina. Seus lamelipdios e filipdios po-
dem ser facilmente visualizados. (C) Cone de crescimento colapsado
de um neurnio ganglionar da raiz dorsal quando a protena inibitria
foi adicionada cultura. (A segundo Keynes e Stern, 1984; B e C
segundo Raper e Kapfhammer, 1990. Todas as fotografias cortesia
dos autores.)
(Figura 8.10A). A superfcie celular da poro posterior do somito pode estar inibin-
do essa migrao. Davies e colegas (1990) mostraram que membranas isoladas da
poro posterior do somito causam o colapso dos cones de crescimento dos neur-
nios dos gnglios da raiz dorsal (Figura 8.10B,C). Alm disso, eles isolaram uma
frao de glicoprotena da soma de pinto, que causa o colapso desses cones; e os
componentes dessa frao so especificamente encontrados na poro posterior
dos somitos. Em insetos, a semaforina I (tambm conhecida como fasciculina IV)
uma protena transmembrana que expressa em uma banda de clulas epiteliais no
membro em desenvolvimento. Essa protena parece inibir os cones de crescimento
dos neurnios sensoriais Ti1 moverem-se para frente, levando-os a se virarem (Fi-
gura 8.11; Kolodkin et al., 1992, 1993).
G-Sema I
Figura 8.11
A ao da semaforina I no membro em desenvolvimento
do gafanhoto. Axnios de neurnios sensoriais Ti1 se
projetam para o sistema nervoso central (CNS). (As lon-
gas flechas escuras representam etapas seqenciais do ca- Ti1
minho.) Quando encontram a banda de clulas epiteliais Membro em
expressando semaforina-I, eles reorientam seus cones de Desenvolvimento
crescimento e se extendem ventralmente ao longo da borda
distal das clulas expressando a semaforina I. Quando CNS
seus filipdios se conectam ao par de clulas Cx1, eles
atravessam a borda e se projetam para o CNS. Quando a
semaforina bloqueada por anticorpos, os cones de cres-
cimento procuram aleatoriamente as clulas Cx1. (Segun-
do Kolodkin et al., 1993.) Cordo nervoso ventral
& Especulaes
Sexo, Odor e Adeso Especfica
E M FINAIS DO SCULO DEZENO-

VE, o professor John Mackenzie
da Universidade Johns Hopkins
(1898), o psiquiatra alemo Wilhelm Fliess
(Schwanzel-Fukada e Pfaff, 1989; Wray et
al., 1989) fizeram a supreendente desco-
berta que os neurnios secretores de
GnRH no se originavam no hipotlamo.
migrem primeiro e que os neurnios
secretores de GnRH sigam os fascculos
do nervo olfativo para dentro do crebro
(Livne et al., 1993). O gene cuja ausncia
(1887) e o sexologista vienense Richard Ao contrrio, eles se originavam no ou anormalidade causa a sndrome foi
Von Krafft-Ebing (1886) compartilharam a epitlio olfativo (o rgo vomeronasal) no clonado, e sua seqncia de cDNA prediz
viso errnea de que havia semelhanas rudimento nasal e migravam para a regio uma protena de adeso celular da super-
entre o desenvolvimento do pnis e do hipotalmica do crebro durante o desen- famlia das imunoglobulinas (Franco et al.,
nariz. Todos trs investigadores usaram volvimento fetal (Figura 8.12). Os neur- 1991; Legouis et al., 1991). Membros des-
o mesmo estudo de caso como evidncia; nios receptores olfativos do nariz origi- sa classe de protenas so conhecidas por
o relato de um homem que no tinha sen- nam-se do mesmo lugar. Os axnios dos mediar adeso clula-clula ou axnio-
sao de olfato ausncia de nervos ol- neurnios receptores olfativos penetram axnio (Grumet, 1991), e eles incluem N-
fativos ou nasais e cujos rgo genitais no crebro para fazer sinapse com o bul- CAM, L1, LFA-1, CD4, fascilina II,
eram muito menores que o normal. bo olfativo, enquanto os corpos celula- contactina e neurogliana. A protena da
Tais pessoas so agora conhecidas res desses neurnios permanecem no na- sndrome de Kallmann tambm contm
por ter a sndrome de Kallmann, uma do- riz em desenvolvimento. Pacientes com a regies que se assemelham molcula de
ena ligada ao X, caracterizada por sndrome de Kallmann no tm bulbo ol- fibronectina, uma molcula da matriz ex-
anosmia (sem sensao de olfato), geni- fativo no crebro, pois o desenvolvimen- tracelular de importncia crtica para nu-
tlia pequena e gnadas estreis. A to desse bulbo requer inervao dos neu- merosas migraes celulares durante o de-
anosmia devida a falta de neurnios ce- rnios olfativos (Stout e Gradziadi, 1980). senvolvimento. No entanto, os testes para
rebrais que recebem influxo de axnios O defeito na sndrome de Kallmann verificar se essa protena se encontra nos
oriundos de neurnios nasais. As gna- pode ser atribudo falncia dos neurni- trajetos seguidos pelas clulas migratri-
das e a genitlia pequenas so resultado os secretores de GnRH e dos cones de as e se os axnios alongam-se do epitlio
da falta do hormnio liberador de gono- crescimento dos neurnios olfativos que olfativo, no foram ainda realizados em
dotrofina (GnRH). GnRH um hormnio migram para o crebro de origem do mamferos; tampouco determinou-se se os
peptdico secretado pelo hipotlamo que placdio olfativo (Scwanzel-Fukada et al., axnios ou clulas dessa regio realmen-
instrui a hipfise anterior a secretar o hor- 1989). Admite-se que o axnios olfativos te se ligam essa protena.
mnio luteinizante, necessrio para o de-
senvolvimento das gnadas e amadure- Figura 8.12
cimento genital. O que une esses dois pro- Modelo para a etiologia da sndrome de Kallmann. Na ilustrao esquerda, neurnios senso-
blemas? Em 1989, dois laboratrios riais do epitlio olfativo estendem axnios para o bulbo olfativo do crebro. Na sndrome de
Kallmann, o bulbo olfativo degenerou, e essa perda considerada secundria carncia de
axnios dos neurnios sensoriais. A srie de cortes sagitais da cabea de camundongos embri-
onrios mostra a migrao de neurnios secretores de GnRH (colorido) do primrdio nasal
para dentro da poro hipotalmica do crebro. Essa migrao no ocorre na sndrome de
Kallmann. (Segundo Calof, 1992.)
Lobo Bulbo
Frontal olfativo Hipotlamo rea
Bulbo olfativo
pr-ptica
Epitlio Olfativo
Lngua
Cavidade Epitlio Nariz Maxilar

Nasal olfativo
Dia 11 Dia 13 Dia 14 Dia 15
Clula Clula
neurossensorial neurossensorial
primria secundria
(A) Seleo de trajetria: Orientao por molculas difusveis

A idia de que sinais quimiotticos guiam os axnios no sistema nervoso em desen-
volvimento foi primeiro proposta por Ramn y Cajal (1982). Ele sugeriu que os neur-
Gradiente de
nios comissurais da medula espinhal poderiam viajar de suas posies dorsais para a
netrina-2
placa ventral do assoalho por meio de fatores difusveis. Os axnios desse neurnio
comeam a crescer ventralmente abaixo do lado do tubo neural. Porm, aproximada-
Neurnio
mente a dois-teros do caminho, sua direo muda, e eles se projetam atravs da rea
comissural do neurnio (motor) ventrolateral do tubo neural em direo s clulas da placa do
assoalho (Figura 8.13). [axon1.html], [axon5.html]
Em 1994, Serafini e colegas desenvolveram um ensaio que lhes iria permitir seleci-
Gradiente de onar tais molculas difusveis. Quando explantes da medula espinhal dorsal foram
netrina-1 colocados sobre placas de colgeno, a presena de clulas da placa de assoalho nas
Placa do assoalho proximidades promoveria o crescimento dos axnios comissurais desses explantes.
Serafini e seus colegas tomaram fraes de crebro de embries de pinto e homogenaram
(B) e testaram essas fraes para ver se alguma de suas protenas imitaria essa atividade.
Isso resultou na identificao de duas protenas, netrina-1 e netrina-2. Netrina-1
produzida e secretada pelas clulas da placa de assoalho, enquanto netrina-2 sinte-
tizada na regio mais inferior da medula espinhal, mas no na placa de assoalho (veja
Figura 8.13). Os efeitos quimiotticos dessas netrinas foram mostrados pela transfor-
mao de clulas COS (que em geral no produzem essas protenas) com um vetor
contendo um gene netrin ativo (Kennedy et al., 1994). Agregados das clulas COS
secretoras de netrina provocaram o crescimento do axnio comissural de explantes da
espinha dorsal do rato, enquanto aquelas clulas COS tratadas com o vetor sem o
gene netrin ativo no provocaram tal atividade (Figura 8.14). Ambas netrinas se asso-
ciam matriz extracelular.* possvel que os neurnios comissurais primeiro encon-
trem um gradiente de netrina-2, que os trazem para os domnios do gradiente mais
Placa do assoalho ngreme da netrina-1 (veja Figura 8-13).
As netrinas tm numerosas regies de homologia com UNC-6, uma protena en-
Figura 8.13 volvida no direcionamento da migrao circunferencial de axnios ao redor do corpo
Trajetria dos axnios comissurais da medula de Caenorhabditis elegans. No nematide de tipo selvagem, a UNC-6 induz axnios
espinhal do rato. (A) Desenho esquemtico de de certas posies centrais a moverem-se ventralmente, e isso induz alguns corpos
um modelo onde os neurnios comissurais celulares localizados ventralmente a estenderem o axnio dorsalmente (Figura 8.15).
experienciam pela primeira vez um gradiente Em mutaes de perda-de-funo do gene unc-6, nenhum desses movimentos axnicos
de netrina-2 e depois um gradiente mais ngrime ocorre (Hedgecock et al., 1990; Ishii et al., 1992; Hamelin et al., 1993). Mutaes do
de netrina-1. Os axnios comissurais so gui-
gene unc-40 interrompem a migrao axnica ventral (mas no a dorsal), enquanto
ados quimiotaticamente em direo ventral des-
mutaes do gene unc-5 somente previnem a migrao dorsal. Culotti (1994) props
cendo a margem lateral da medula espinhal em
direo placa do assoalho. Ao ating-la, os que a protena UNC-6 pode atrair o conjunto de axnios que sintetiza UNC-40 e repelir
axnios comissurais mudam sua direo devi- os axnios que produzem UNC-5. Estudos recentes (Wadsworth et al., 1996) mostram
do conduo por contato das clulas do que a UNC-6 restrita espacialmente s clulas mais ventrais da hipoderme (pele) e
assoalho. (B) Localizao auto-radiogrfica do sistema nervoso, e que as propriedades atrativas e repulsivas dessa molcula so
mRNA de netrina-1 pela hibridizao in situ mediadas pelas regies diferentes da protena. Alm disso, os sinais da netrina tam-
para o crebro de um embrio de rato de 16 bm guiam clulas mesodrmicas assim como axnios.**
dias usando RNA antisenso. A hibridizao d Se a UNC-6 atrativa para certos neurnios e repulsiva para outros, poder-se-ia
um intenso sinal dos neurnios da placa de
pensar que esse duplo papel tambm seria atribudo s netrinas. Colamarino e Tessier-
assoalho. (B de Kennedy et al., 1994; fotogra-
Lavigne (1995) mostraram que isso o caso observando a trajetria do nervo troclear
fia cortesia de M. Tessier-Lavigne.)
*A ligao de um fator solvel matriz extracelular cria uma ambigidade interes-

sante entre quimiotaxia, haptotaxia e trajetrias marcadas. A natureza no se conforma
necessariamente s nossas categorias.
**No somente UNC-6 homloga netrina, mas UNC-40 homloga ao recep-
tor de netrina dos mamferos e da Drosophila (Chan et al., 1996; Keino-Masu et al.,
1996; Kolodziej et al., 1996). Em todos os tipos de organismos, a molcula de netrina
parece proporcionar orientao para a migrao de clulas portando seu receptor.
(A) (B) Figura 8.14

Agregados de clulas COS secretando netrinas
provocam o crescimento de axnios comissu-
rais oriundos de explantes de medula espinhal
dorsal de embrio de rato de 11-dias. (A) O
crescimento do neurnio comissural visto
quando o explante da medula espinhal dorsal
(tecido superior) encontra um explante da pla-
ca do assoalho. (B) No h crescimento quan-
do o explante dorsal exposto s clulas COS
agregadas que foram transfectadas com o vetor
clonador somente (sem o gene netrin). (C,D)
Crescimentos de neurnios comissurais de c-
lulas COS agregadas, que estavam expressan-
do o gene para netrina-1 (C) e para netrina -2
(D). Sua identidade como neurnios comissu-
rais foi confirmada por imunohistologia mos-
trando antgenos especficos das comissuras
nesses axnios. (Barra de escala, 100 m.) (de
(C) (D)
Kennedy et al., 1994; fotografias cortesia de
M. Tessier-Lavigne.)
(quarto craniano). Em seu caminho para inervar um msculo do olho, os axnios do

nervo troclear se originam na placa do assoalho do pednculo cerebral e migram
dorsalmente afastando-se da regio da placa dorsal. Essa trajetria mantida quando
as regies do pednculo cerebral so explantadas para gis de colgeno. O crescimen-
to dorsal dos neurnios trocleares pode ser impedido colocando as clulas da placa
do assoalho ou clulas COS secretoras de netrina-1 dentro de 450m da poro dorsal
do explante. Esse crescimento dorsal no foi impedido pelos explantes dorsais do
tubo neural ou pelas clulas COS que no continham o gene netrim-1 ativo (Figura
8.16). Portanto, netrinas e UNC-6 parecem ser quimiotticas para certos neurnios e
quimiorepulsivas para outros.
A famlia semaforina compreende outro conjunto de molculas quimiorepulsivas
(ainda no foram encontrados membros atrativos nessa famlia). A semaforina I
encontrada em insetos e uma protena ligada membrana que inibe a ramificao dos
axnios quando a encontram em um membro (Kolodkin et al., 1992). A semaforina
secretada em Drosophila por nico grande msculo torcico. Dessa maneira, o ms-
culo torcico previne a si mesmo de ser inervado por axnios inapropriados (Matthes
Figura 8.15
Expresso de UNC e funo na conduo axnica. (A) No corpo
do embrio do tipo selvagem de C.elegans, neurnios sensoriais
projetam-se ventralmente e neurnios motores projetam-se dor- C. elegans
salmente. Os epidermoblastos da parede ventral do corpo expres-
sando unc-6 so preenchidos. (B) Nos embries mutantes unc-6 (A) (B)
no ocorre migrao alguma. (C) As mutaes de perda-de-
funo unc-5 somente afetam os movimentos dorsais dos neur-
nios motores. (D) As mutaes de perda-de-funo unc-40 so- neurnios Tipo
mente afetam a migrao ventral dos cones de crescimento senso- sensoriais selvagem
de unc 40+
riais. (Segundo Goodman, 1994.)
Epidermoblastos Neurnios
da parede ventral motores unc5+
do corpo
(C) (D)
et al., 1995). A semaforina III, encontrada em mamferos e aves, tambm conhecida

como colapsina (Luo et al., 1993). Essa protena secretada causa o colapso de
cones de crescimento originrios dos gnglios da raiz dorsal (veja Figura 8.10C).
H vrios tipos de axnios nos gnglios da raiz dorsal que penetram na medula
espinhal dorsal. A maioria desses axnios impedida de viajar adiante e de pene-
trar a medula espinhal ventral. Entretanto, um subconjunto desses neurnios viaja
ventralmente atravs das clulas neurais (Figura 8.17). Esses neurnios particula-
res (responsivos NT-3) no so inibidos pela semaforina III, enquanto os outros
neurnios o so (Messersmith et al., 1995). Isso sugere que semaforina/colapsina
padronizam as projees sensoriais dos gnglios da raiz dorsal repelindo seletiva-
mente axnios para que terminem dorsalmente.
(A) (B) (C) (D)
Figura 8.16
Netrina inibe o crescimento de axnios trocleares da medula espinhal dorsal. Axnios trocleares,
corados para antgeno especfico do axnio troclear, emergem dorsalmente e no so inibidos
pelo explante de medula espinhal dorsal (A) ou pelas clulas COS (B). Eles so inibidos pelas
clulas COS secretando netrina-1 (C) ou pela placa do assoalho da medula espinhal (D). (Segun-
do Colamarino e Tessier-Lavigne, 1995; fotografias cortesia de M. Tessier-Lavigne).
(A) Gnglio da raiz dorsal
Neurnios aferentes Ia
(responsivos NT-3)
Aferente para mecanorreceptores
de baixo limiar
Receptores de temperatura e dor
(B)
Figura 8.17
Semaforina III como inibidor seletivo de projees axnicas para a medula espinhal
ventral. (A) Trajetria de axnios em relao expresso de semaforina III na medula
espinhal do embrio de rato de 14 dias. Os neurnios responsivos neurotrofina-3
podem viajar para a regio ventral da medula espinhal, mas os neuritos aferentes para os
mecanorreceptores e neurnios receptores de temperatura e dor terminam dorsalmente.
(B) Clulas COS secretoras de semaforina III inibem o crescimento de axnios
mecanorrecepores (aqui mostrados crescendo num meio tratado com NGF, mas inibi-
dos de crescer em direo fonte de semaforina III). (C) Os neurnios que so
responsivos NT-3 para crescimento no so inibidos de se estenderem em direo
fonte de semaforina III. (A segundo Marx, 1995; B e C segundo Messersmith et al.,
1995; fotografias cortesia de A. Kolodkin.)
Sinais para conduo mltipla

Neurnios Motores V ertebrados
Vertebrados
Um dos mais importantes programas de pesquisa em neurobiologia do desenvolvi-
mento refere-se inervao dos msculos dos membros. Crescimento axnico de
neurnios motores ocorre muito cedo no desenvolvimento, antes da soma dos neur-
nios motores ter migrado para suas posies definitivas na medula espinhal e antes
dos msculos terem se condensado fora do mesnquima (Landmesser, 1978; Hollyday,
1980a). Esse estgio pode ser visto na Figura 8.18. Para inervar a musculatura dos
Tubo neural
(medula
espinhal)
Nervos
espinhais
Rudimento
renal
Intestino
Broto de
membro Figura 8.18
Micrografia eletrnica de varredura de um corte
de um embrio de pinto de 4-dias, mostrando a
Sulco emergncia de nervos espinhais para dentro do
ectodrmico broto do membro em desenvolvimento. (de
apical
Tosney e Landmesser, 1985, cortesia de
K.Tosney.)
(A) Medula espinhal (B)

Barreira
Neurnios e Esclertomo posterior
motores
Nervos epaxiais Trajetria
(para o dorso) Esclertomo
dorso-anterior
Plexo
Barreira
Nervo espinhal precursor do
Trajetria cinturo plvico
Tronco nervoso Mesnquima
dorso-anterior Barreira
Tronco Nervo do Mesnquima do plexo
nervoso ventro- msculo perinotocordal
anterior
Figura 8.19
Trajetrias de axnios motores na regio do
membro posterior do embrio do pinto. (A)
Padro neural do membro posterior. Axnios membros, o axnio se estende sobre centenas de clulas em um ambiente complexo
do neurnio motor unem-se no plexo e em se- e cambiante. Pesquisa recente descobriu vrias trajetrias e vrias barreiras que
guida se separam em troncos nervosos dorsal e ajudam a conduo dos axnios para seus destinos apropriados. Conforme mencio-
ventral. Um plexo anterior; o outro, posterior. nado acima, em cada lado da medula espinhal h blocos de tecido mesodrmico
(B) Os componentes ambientais que criam o
chamados somitos. Pouco antes dos axnios iniciarem seu alongamento, o somito
padro neural. A segmentao dos nervos es-
pinhais criada pelo esclortomo. O esclerto-
se cinde em dois tipos de tecido. A poro dorsal torna-se o dermomitomo (que
mo dorsal anterior permite a migrao, enquanto produz a derme e a musculatura do dorso), enquanto a poro ventral do somito
o esclertomo dorsal posterior e todo o ventral passa a ser o esclertomo (que produz a cartilagem vertebral). Lateralmente aos
(o mesnquima perinotocordal) uma barreira somitos, na base do broto do membro, est o mesnquima do plexo e as
para os axnios do nervo motor. O plexo prospectivas clulas do cinturo escapular. Os corpos celulares dos neurnios
mesenquimatoso permissivo, mas o cinturo motores esto nas regies ventrolaterais do tubo neural (Figura 8.19). Axnios
plvico forma uma barreira. Os dois orifcios dos neurnios motores que iro inervar os msculos dos membros esto mistura-
nessa barreira permitem a passagem e extenso dos quando emergem da medula espinhal. Populaes de axnios de vrios nveis
dos troncos nervosos. (Segundo Tosney, 1991.)
segmentais da medula espinhal podem formar um nervo espinhal comum. Esses
nervos espinhais se renem em um plexo. Nesses plexos, porm, os axnios de
diferentes regies percorrem trajetrias diferentes. Por exemplo, na Figura 8.19,
neurnios motores para msculos diferentes divergem para apropriados troncos
nervosos e finalmente se projetam para msculos singulares.
Por meio de vrias manipulaes cirrgicas foram descobertas, no embrio pre-
coce do pinto, alguns dos sinais ambientais que direcionam essa migrao. A parte
ventral do esclertomo que circunda a notocorda forma uma barreira contra o alon-
gamento do axnio motor. Apesar das clulas nessa regio parecerem soltas e facil-
mente evitadas, elas repelem os axnios em sua vizinhana. Quando o tubo neural
girado para fazer com que os neurnios motores emerjam ventralmente para essa
regio, eles imediatamente giram para evit-la, migrando somente atravs do escle-
rtomo dorsal anterior (Figura 8.19B). Assim, o esclertomo perinotocordal uma
barreira para o crescimento do axnio motor, enquanto o esclertomo anterior dorsal
uma trajetria (Tosney e Oakley, 1990; Tosney, 1991). Os axnios que progredirem
atravs do esclertomo dorsal anterior (juntamente com as clulas da crista neural
que seguem pela mesma rota) chegam ao plexo mesenquimatoso na base do broto do
membro, tambm um ambiente favorvel para o crescimento axnico. Porm, pouco
alm do mesnquima do plexo ficam as clulas precursoras do cinturo plvico.
Essas clulas inibem o crescimento axnico e os axnios se afastam delas. H dois
orifcios no tecido precursor do cinturo plvico cheios de plexo mesenquimatoso;
axnios se estendem por esses orifcios para formar os troncos nervosos anterior e
posterior que penetram no membro. Se outros orifcios forem feitos esperimental-

mente no tecido precursor do cinturo plvico, os axnios os atravessam pronta-
mente (Tosney e Landmesser, 1984, 1985).
Os nervos podem at mesmo alcanar seus respectivos destinos se as clulas
formadoras de msculos tiverem sido removidas (Phelan e Hollyday, 1990), e pro-
vvel que as outras clulas mesenquimatosas no broto do membro (tal como aque-
las que formam a derme ou a cartilagem) estejam provendo os sinais direcionais.
Essas trajetrias para as regies musculares dos membros parecem ser muito bem
definidas. Quando se redireciona axnios de uma origem diferente (como um gnglio
diferente) para o membro, eles se ramificam como o fazem os axnios que original-
mente inervaram o membro. Em outras palavras, o membro capaz de ditar o padro
de inervao para um conjunto de axnios que normalmente no o penetrariam
(Hamburger, 1939; Hollyday et al., 1977). Ainda mais, se segmentos da medula espi-
nhal do pinto forem revertidos fazendo com que seus neurnios motores se encon-
trem em novas localizaes, seus axnios iro encontrar seus alvos originais (veja
Figura 8.3; Lance-Jones e Landmesser, 1980). No entanto, quando membros se de-
senvolvem com reas duplicadas (como duas coxas), os neurnios inervando a
segunda coxa no sero neurnios especficos da coxa, mas neurnios que usual-
mente inervam a panturrilha (Whitelaw e Holliday, 1983). Esses experimentos apre-
sentam um paradoxo ainda a ser resolvido: Axnios particulares esto predispos-
tos a crescer para lugares especficos; no entanto, axnios de pools de neurnios
motores diferentes podem substituir um outro no estabelecimento de padres ner-
vosos normais (Purves e Lichtman, 1985). A explicao mais plausvel que vrios
mecanismos atuam simultaneamente para assegurar que os axnios cheguem a seus
lugares apropriados. Um desses mecanismos parece ser a conduo da superfcie
celular de clulas mesenquimatosas no formadoras de msculos no broto do mem-
bro, enquanto outro mecanismo provavelmente envolve a quimiotaxia de mioblastos
do broto do membro (Goodman e Shatz, 1993).
Axnios da Retina
Tambm se postularam sinais de orientao mltipla para explicar como neurnios
retinianos individuais so capazes de enviar axnios para a rea apropriada do cre-
bro, mesmo quando transplantados para longe do nervo ptico (Harris, 1986). Essa
capacidade indica que os sinais de orientao no esto distribudos somente ao
longo da trajetria normal, mas existem atravs de todo o crebro embrionrio. Orien-
tar um axnio de um corpo celular nervoso para seu destino atravs do embrio um
fenmeno complexo, e vrios tipos de sinais diferentes podem ser usados simultane-
amente para assegurar que sejam estabelecidas as conexes corretas.
Os primeiros passos para levar os axnios retinianos para suas regies especfi-
cas no tectum ptico se realizam no interior da retina (Figura 8.20A). medida que
as clulas ganglionares retinianas se diferenciam, sua posio na margem interna da
retina determinada pelas molculas de caderina (N-caderina assim como a R-caderina
especfica da retina) das suas membranas celulares (Matsunaga et al., 1988; Inuzuka
et al, 1991). Os axnios dessas clulas crescem ao longo da superfcie interna da
retina em direo cabea do nervo ptico (Figura 8.20B). A adeso e o crescimento
dos axnios das clulas da retina podem ser controlados pela lmina basal contendo
laminina. Porm, a fixao laminina no pode explicar o direcionamento do cresci-
mento. possvel que um gradiente da molcula inibidora do proteoglicano de sulfa-
to de condroitina da matriz extracelular tenha um papel na especificao da direo
do crescimento (Hynes e Lander, 1992).
Quando os axnios penetram no nervo ptico, eles crescem sobre as clulas gliais
em direo ao crebro. Estudos in vitro sugerem que numerosas molculas de adeso
celular N-CAM, caderinas e integrinas tm funes na orientao do axnio para
o tectum ptico (Neugebauer et al., 1988). N-CAM parece ser especialmente importan-
te aqui, pois a migrao direcionada dos cones de crescimento ganglionares retinianos
(A) Estabelecimento das camadas retinianas

(clulas ganglionares na superfcie interna)
Anti-N-caderina causa desarranjo
(B)
Crescimento axnico direcionado
Retina Anti-N-CAM interfere
Forte crescimento neurtico em laminina in vitro
(C) Progresso organizada para o nervo ptico

Nervo ptico Anti-N-CAM rompe. Possveis papis para laminina e
caderinas. Enfeixamento axnico especfico para posio
Trato ptico (D)

Deciso de atravessar ou girar
Possveis sinais inibidores e especificidade da fasciculao
(E) Voltando para a regio alvo

Possvel papel para laminina. Sinais para a posio global
(F)
Chegada ao alvo
Perda de laminina in vivo
Perda de resposta laminina in vitro
Te c t (G)
um ptic Estabelecimento de um mapa topogrfico
o Inibidores especficos para posio. Possibilidade
de outros sinais graduados
Figura 8.20
Sinais para a orientao mltipla direcionam o movimento dos axnios dos gnglios retinianos
para o tectum ptico. (Segundo Hynes e Lander, 1992.)
dependem dos ps terminais gliais expressando N-CAM na superfcie interna retiniana

(Figura 8.20C; Stier and Schlosshauer, 1995). Ao chegar no nervo ptico, os axnios
fasciculam com axnios que j esto presentes. N-CAM tambm crtica para essa
fasciculao, e anticorpos contra N-CAM (ou remoo do seu componente polisilico)
faz com que os axnios entrem no nervo ptico de maneira desordenada, causando-os
a emergir em posies erradas no tectum (Thanos et al., 1994; Yin et al., 1995).
Ao entrar no crebro, os axnios retinianos de mamferos atingem o quiasma
ptico, onde eles tm que decidir se iro continuar diretamente em frente ou se giram
90 e entram do outro lado do crebro (Figura 8.20D). Parece que aqueles axnios no
destinados a atravessar para o outro lado do crebro, so repelidos de assim o fazerem
quando entram no quiasma (Godement et al., 1990); a base molecular dessa repulso
no conhecida. No trajeto para o tectum ptico, os axnios viajam por uma via (o
trato ptico), sobre clulas gliais cujas superfcies so recobertas por laminina (Figura
8.20E). Muito poucas reas no crebro tm laminina, e a laminina nesse trajeto existe
somente quando as fibras do nervo ptico esto nele crescendo (Cohen et al., 1987).
O axnio que migra da retina para o tectum encontra numerosas outras clulas e
alvos potenciais para inervao. No entanto, a combinao de vrios sinais de orien-
tao, provavelmente envolvendo tanto atrao como repulso, orientam o axnio ao
longo de seu caminho. Nesse ponto, os axnios retinianos alcanaram a regio ptica
do crebro (Figura 8.29F), e comea a seleo de alvos.
Seleo de alvos
Quando os axnios chegam ao fim desse trajeto forrado de laminina, eles se espa-
lham e acham seus alvos especficos. Estudos em rs e peixes (onde os neurnios
retinianos de cada olho se projetam para o lado oposto do crebro) indicaram que
cada axnio retiniano envia seu impulso para um local especfico (uma clula ou
TECTUM DIREITO TECTUM ESQUERDO
Caudal
Rostral
Dorsal Dorsal
Posterior
Posterior
Anterior
Campo Campo
visual direito visual esquerdo
Ventral Ventral
OLHO ESQUERDO OLHO DIREITO
Figura 8.21
Mapa da projeo retinotectal normal no Xenopus adulto. O olho direito inerva o tectum esquer-
do, e o olho esquerdo inerva o tectum direito. Os nmeros nos campos visuais (retina) e os tecta
mostram regies de correspondncia; isto , estimulao do ponto 15 na retina direita envia
impulsos eltricos para a regio tectal esquerda 15. As flechas negras e coloridas sumariam o
padro das conexes retinotectais. (de Jacobson, 1967.)
pequeno grupo de clulas) dentro do tectum (Sperry, 1951). Como mostra a Figura
8.21, existem dois tecta ptico no crebro da r. Os axnios do olho direito entram no
tectum ptico esquerdo, enquanto aqueles do olho esquerdo formam sinapses com
as clulas do tectum ptico direito. O crescimento de neurnios no trato ptico de
Xenopus parece ser mediado por fatores de crescimento fibroblstico secretados
pelas clulas forrando o trato. Os axnios ganglionares retinianos expressam recep-
tores FGF nos seus cones de crescimento. Porm, medida que as clulas ganglio-
nares atingem o tectum, a quantidade de FGF diminui, talvez retardando os axnios
e permitindo-lhes achar seus alvos (McFarlane et al., 1995).
O mapa das conexes retinianas at o tectum ptico da r (a projeo retinotectal)
foi detalhada por Marcus Jacobson (1967). Jacobson definiu esse mapa lanando um
estreito feixe de luz numa regio pequena e limitada da retina e anotou, por meio de um
eletrodo registrador no tectum, quais clulas tectais estavam sendo estimuladas. A
projeo retinotectal de Xenopus laevis mostrada na Figura 8.21. A luz iluminando a
parte ventral da retina estimula clulas na superfcie lateral do tectum. Da mesma
maneira, luz focalizada na parte posterior da retina estimula clulas na poro caudal
do tectum. Esses estudos demonstraram uma correspondncia ponto-por-ponto entre
as clulas da retina e do tectum. Quando um grupo de clulas da retina ativado, um
grupo muito pequeno e especfico de clulas tectais estimulado. Podemos tambm
observar que os pontos formam um contnuo; em outras palavras, pontos adjacentes
na retina se projetam sobre pontos adjacentes no tectum. Esse arranjo permite r ver
uma imagem inteira. Essa intrincada especificidade levou Sperry (1965) a lanar a
hiptese da quimioafinidade:
Os complicados circuitos das fibras nervosas cerebrais crescem, se juntam e se

organizam atravs de intricados cdigos qumicos sob controle gentico. No
incio do desenvolvimento, as clulas nervosas, contadas em milhes, adquirem
e retm depois disso, tarjas de identificao individual, de natureza qumica,

Nmero de clulas retinianas dorsais marcadas
pelas quais podem ser distinguidas e reconhecidas de outras.

com 32p aderindo metade tectal
Teorias atuais no propem uma especificidade ponto-para-ponto entre cada axnio

e o nervo contatado. Ao contrrio, a presente evidncia demonstra que gradientes de
adesividade (em especial aqueles envolvendo a repulso) tm um papel na definio
de territrios nos quais os axnios entram e que a competio gerada pela atividade
entre esses neurnios determina a conexo final de cada axnio.*
Especificidades A desivas em Diferentes R

Adesivas egies do T
Regies ectum
Tectum
Existe boa evidncia que as clulas ganglionares retinianas podem distinguir entre
as regies do tectum. Clulas preparadas da metade ventral da retina neural do pinto
aderem-se preferencialmente s metades dorsais do tectum (Figura 8.22; Roth e
Tempo de coleta (horas)
Marchase, 1976). Gottlieb e colaboradores (1976) acharam que neurnios retirados
da parte mais dorsal da retina do pinto aderem-se preferencialmente poro mais
Figura 8.22 ventral do tectum e que os neurnios do extremo ventral da retina aderem-se prefe-
Adeso diferencial de clulas dorsais radioa- rencialmente aos extremos mais dorsais do tectum. Esses resultados foram confir-
tivas da retina do pinto s metades tectais dor- mados sob outras condies experimentais usando extremidades axnicas em lugar
sal e ventral. Clulas radioativas da metade de neurnios inteiros (Halfter et al., 1981).
dorsal de retinas de pinto de 7 dias foram adi- Um gradiente que foi identificado funcionalmente um gradiente de repulso que
cionadas s metades dorsal (cor) e ventral (ne-
mais alto no tectum posterior e mais fraco no tectum anterior. Bonhoeffer e colegas
gro) de tecta pticos de pintos de 12 dias. Os
dados mostram a adeso seletiva das clulas (Walter et al., 1987) prepararam um tapete de membranas tendo tiras alternadas
retinianas dorsais ao tecido tectal ventral. (Se- derivadas dos tecta posterior e anterior. Eles deixaram, ento, clulas das regies nasal
gundo Roth e Marchase, 1976). (anterior) ou temporal (posterior) da retina estenderem axnios nesse tapete. As clu-
las ganglionares da poro nasal da retina estendem axnios igualmente bem nas
membranas anterior e posterior do tectum. Os neurnios do lado temporal da retina,
porm, estenderam axnios somente nas membranas tectais anteriores (Figura 8.23). A
base dessa especificidade parece ser o fator repulsivo nas membranas das clulas
tectais posteriores. Quando o cone de crescimento de um axnio retiniano temporal
contata a membrana da clula tectal posterior, os filopdios do cone se retraem, e o
cone de crescimento entra em colapso e se retrai (Cox et al., 1990). Baier e Bonhoffer
(1992) demonstraram que um gradiente de uma substncia inibidora isolada da poro
posterior do tectum capaz de guiar os axnios temporais da retina.
Duas dessas molculas repulsivas foram identificadas em embries de pinto.
Chamadas RAGS (sinal repulsivo de orientao axnica) e ELF-1 (famlia ligante de
Eph 1), esto presentes num gradiente caudal-para-rostral atravs do tectum, e a
protena clonada capaz de repelir axnios (Figura 8.24; Drescher et al., 1995). RAGS
e ELF-1 revelaram ser ligantes para uma famlia de tirosina quinases receptores
chamadas Quinases receptoras Eph. Essas quinases foram encontradas nas clulas
ganglionares da retina do pinto, e elas so expressas em um gradiente temporal-
para-nasal ao logo dos axnios da retina (Cheng et al., 1995). Parece haver vrios
receptores Eph na retina e ligantes no tectum que podem ter o papel de empurra-e-
puxa na orientao dos axnios retinianos temporais para o tectum anterior e permi-
tir os axnios retinianos se projetarem para a poro posterior do tectum.
*Nos ltimos anos, os pesquisadores encontraram dzias de mutantes no peixe-zebra que

afetam a migrao dos axnios retinianos para o tectum ou a especificidade das conexes retinotectais.
Esses mutantes vm somente sendo analisados agora, porm, prometem fornecer vises da maior
importncia dos mecanismos pelos quais nossa descarga sensorial entra no crebro. A publicao de
dezembro de 1996 (volume 123) de Development contm vrios artigos mapeando os genes envol-
vidos na migrao do axnio da retina para o crtex ptico. Foram encontrados mais de 30 genes
mutantes que afetam ou a capacidade dos axnios retinianos do peixe-zebra acharem o tectum
ptico, ou a capacidade dos axnios encontrarem suas apropriadas conexes dentro do tectum
(Karlstrom et al., 1997).
Membranas tectais Figura 8.23

Repulso diferencial de axnios temporais da
Anterior retina sobre membranas tectais. Fitas alterna-
das de membranas tectais anteriores e posterio-
Posterior res foram absorvidas em papel de filtro. Quan-
do os axnios das clulas ganglionares
Anterior
retinianas temporais (posterior) cresceram em
tais tapetes alternados, elas preferencialmente
estenderam axnios sobre membranas tectais
Posterior
anteriores. (de Walter et al., 1987.)
Anterior
Posterior
Anterior
A possvel importncia de ELF-1 no tectum ptico foi demonstrada por Nakamoto

e colegas (1996). Quando infectaram regies do crebro posterior do pinto com um
vrus expressando ELF, pedaos de ELF-1 ficaram expressos em regies do tectum que
normalmente pouco expressam essa molcula. Axnio da regio temporal (mas no
Nasal
Olho
Crebro
Temporal Temporal
Tectum
Receptor Eph da
tirosina quinase
(A) (Mek-4) Ligantes (RAGS, ELF-1)
Retina
Anterior Posterior
Nasal Temporal
Tectum
Figura 8.24
(B) Gradiente da protena ligante Adeso retinotectal diferencial por gradientes
nas membranas tectais receptoras Eph da tirosina quinase e seus
ligantes. (A) Representao dos dois gradien-
tes duplos receptor Eph da tirosina quinase
(Mek-4) na retina, e seu ligante (RAGS, ELF-
1) no tectum. (B) Experimento mostrando que
axnios temporais, mas no nasais, da retina
respondem a um gradiente das membranas
tectais posteriores, se afastando ou se retardan-
Retina temporal Retina nasal do. (Segundo Barinaga, 1995.)
aqueles da regio nasal) da retina evitaram as regies expressando ELF-1. Assim, ELF-
1 pode prover sinais negativos para as regies temporais da retina.
O aparecimento de RAGS e ELF-1 regulado pela expresso da protena Engrailed.
A protena Engrailed expressa no dia 2 do desenvolvimento do pinto em uma banda
que inclui a poro caudal (posterior) do futuro tectum ptico (veja Figura 7.18). Se a
protena Engrailed for induzida experimentalmente na poro rostral do tectum, tam-
bm essa adota um fentio caudal. Quando isso ocorre, RAGS e ELF-1 so expressos
atravs de todo o tectum, e os axnios temporais so repelidos das duas metades
(Logan et al., 1996). Assim, a expresso precoce de Engrailed parece induzir a expres-
(A) Cone de crescimento contata miotbulo (D)
Axnios
Miotbulo
Receptores de ACh
(B) Agrina neuronial induz agregao (E)

de receptores de ACh
Miotbulo
(C) Forma-se a lmina basal sinptica (F)

Envolvimento pelas
clulas de Schwann
Vescula
Matriz extracelular neurotransmissora
2
laminina
Figura 8.25
Diferenciao da sinapse do neurnio motor com o msculo. Partes (E) e (G) esto represen-
tadas em menor aumento que outras para dar uma viso panormica da regio onde o axnio (G) Na maturidade
encontra o msculo. (A) Um cone de crescimento se aproxima de uma clula muscular em
desenvolvimento. (B) O axnio pra e forma um contato no-especializado na superfcie do
miotbulo. A agrina, liberada pelo tubo neural, causa a agregao de receptores de aceticolina.
(C) Vesculas neurotransmissoras penetram no axnio terminal, e uma matriz extracelular
conecta o axnio terminal com a clula muscular medida que a sinapse se alarga. Essa matriz
contm uma laminina especfica do nervo. (D) Outros axnios convergem para o mesmo local
sinptico. (E) Viso geral da inervao muscular por vrios axnios (vista em mamferos no
nascimento). (F) Todos os axnios menos um so eliminados. O axnio remanescente pode se
ramificar para formar uma juno complexa com o msculo. Cada terminal do axnio est
recoberto por um processo de uma clula de Schwann e dobras se formam na membrana da
clula muscular. (G) Viso panormica da inervao muscular vrias semanas aps o nasci-
mento. (Segundo Hall e Sanes, 1993; Purves, 1994; Hall, 1995.)
so de RAGS e ELF-1, e essas duas protenas mediam a excluso dos axnios retinianos
temporais da poro caudal (posterior) do tectum.
Seleo de endereo:
Desenvolvimento dependente de atividade
Quando um axnio contata seu alvo (em geral um msculo ou outro neurnio)
forma uma juno especializada chamada sinapse. Neurotransmissores do terminal
do axnio so liberados nessas sinapses para despolarizar ou hiperpolarizar a mem-
brana da clula do outro lado da fenda sinptica. A construo de uma sinapse
envolve vrios passos (Figura 8.25). Quando neurnios motores na medula espinhal
estendem axnios para os msculos, os cones de crescimento que contatam as
recm-formadas clulas musculares migram sobre suas superfcies. Quando o cone
de crescimento adere primeiro membrana da clula muscular, a especializao no
pode ser vista em membrana alguma. Porm, logo os terminais axnicos comeam a
acumular vesculas sinpticas contendo neurotransmissores, as membranas de ambas
as clulas se engrossam na regio de contato, e a fenda entre as clulas se enche
com matriz extracelular que inclui uma forma especfica de laminina. Essa laminina
derivada do msculo, especificamente liga os cones de crescimento dos neurnios
motores e pode agir como um sinal de parada para o crescimento axnico (Martin
et al., 1995; Noakes et al., 1995). Aps esse primeiro contato, os cones de crescimen-
to de outros axnios convergem para esse local para formar sinapses adicionais.
Durante o desenvolvimento, todos os msculos de mamferos estudados parecem
ser inervados por, ao menos, dois axnios. No entanto, essa inervao polineuronial
transitria. Durante a fase precoce da vida ps-natal, todos esses ramos axnicos,
menos um, so recolhidos. Esse rearranjo est baseado na competio entre os
axnios (Purves e Lichtman, 1980; Thompson, 1983). Quando um dos neurnios
motores est ativo, ele suprime as sinapses dos outros neurnios, possivelmente
atravs de um mecanismo dependente de xido ntrico (Dan e Poo, 1992; Wang et al.,
1995). Finalmente, as sinapses menos ativas so eliminadas. O terminal axnico
remanescente se expande e revestido pela clula de Schwann.
A formao de sinapse dependente de atividade tambm parece estar envolvida
nos estgios finais da projeo da retina para o crebro. Em embries de r, ave e
roedor tratados com tetrodotoxina, os axnios iro crescer normalmente para seus
respectivos territrios e iro estabelecer sinapses com os neurnios tectais. Porm,
o mapa retinotectal grosseiro, carente de resoluo fina. Tal como na especificao
final da sinapse do neurnio motor, a atividade neuronial necessria para a proje-
o retiniana ponto-por-ponto at os neurnios tectais (Harris, 1984; Fawcett e
OLeary, 1985; Kobayashi et al., 1990). Essa eliminao de contatos retinianos tran-
sitrios pelo tectum tambm pode envolver a expresso do xido ntrico pelas clu-
las tectais alvo (Wu et al., 1994).
Sobrevivncia diferencial aps a inervao:

Fatores neurotrficos
Refletindo sobre sua vida como um embrio, Lewis Thomas (1992) escreve,
At o momento do meu nascimento, mais de mim havia morrido do que sobrevivi-

do. No de se admirar que eu no possa recordar; durante aquele tempo passei
por crebro aps crebro durante nove meses, finalmente conseguindo aquele
modelo que podia ser humano, equipado para a linguagem.
Realmente, um dos fenmenos mais intrigantes no desenvolvimento do sistema

nervoso a morte da clula neuronial. Em muitas partes dos sistemas nervosos
central e perifrico de vertebrados, mais da metade dos neurnios morrem durante
o progresso normal do desenvolvimento. Alm disso, no parece ter semelhanas

entre as espcies. Por exemplo, na retina do gato, cerca de 80 porcento das clulas
ganglionares retinianas morrem, enquanto na retina do pinto, esse nmero de
somente 40 porcento. Nas retinas de peixes e anfbios no parece haver morte das
clulas ganglionares retinianas (Patterson, 1992).
A extino de um neurnio no causada por qualquer defeito bvio. Na realida-
de, esses neurnios se diferenciaram e estenderam com sucesso axnios para seus
alvos. Ao contrrio, parece que o tecido alvo regula o nmero de axnios que o
inerva limitando um suprimento de algum fator crtico de sobrevivncia. Parece
haver competio por esse fator limitante. Por exemplo, se mais de um tecido alvo
transplantado no alvo original, mais axnios sobrevivem, e se o tecido alvo for
removido antes dos axnios o alcanarem, quase todos os neurnios morrem. Esses
fatores neurotrficos foram isolados e mostrados regular a sobrevivncia de dife-
rentes subconjuntos de neurnios.
O fator neurotrfico melhor caracterizado o fator de crescimento do nervo
(NGF), uma glicoprotena composta de duas subunidades 13-kDa idnticas. O
NGF necessrio para a sobrevivncia de neurnios simpticos e sensoriais.
Tratar embries de camundongo com anticorpos anti-NGF reduz o nmero de
neurnios ganglionares e da raiz dorsal do trigmeo simptico para 20% do seus
valores controle (Levi-Montalcini e Booker, 1960; Pearson et al., 1983). O NGF
parece funcionar aps ter ocorrido a inervao, j que o NGF no secretado
pelos tecidos alvos at depois da inervao, e axnios em crescimento carecem de
receptores para NGF, ento eles no podem responder antes (Davies et al., 1987).
A remoo desses tecidos alvos causa a morte dos neurnios que os teriam
inervado, e existe uma boa correlao entre a quantidade de NGF secretado e a
sobrevivncia dos neurnios que inervam esses tecidos (Korsching e Thoenen,
1983; Harper e Davies, 1990). [axon1.html]
Outras protenas neurotrficas foram caracterizadas. Duas dessas protenas fa-
tor neurotrfico derivado do crebro (BDNF) e neurotrofina 3 (NT-3) repartem a
mesma estrutura bsica que NGF. Porm, elas favorecem a sobrevivncia de grupos de
neurnios um tanto diferentes. Enquanto alguns neurnios respondem a todos os
trs fatores, outros respondem somente a um ou dois (Figura 8.26; Oppenheim et al.,
1992). O NGF suporta o crescimento e a diferenciao de clulas ganglionares do
simptico e de certos neurnios sensoriais, mas no parecem influenciar a sobrevi-
vncia dos neurnios motores. O BNDF, porm, pode salvar neurnios motores fetais
in vivo da morte celular que ocorre normalmente e da morte celular induzida aps
remoo de seus tecidos alvo. Os resultados desses estudos in vitro foram corrobo-
rados por experimentos de eliminao de genes, onde a deleo de determinados
fatores neurotrficos causa a perda de somente certos subconjuntos de neurnios
(Crowley et al., 1994; Jones et al., 1994). A NT-3 produzida pelos tecidos alvo podem
sustentar a sobrevivncia de neurnios viscerais que no so responsivos ao NGF
(Hohn et al., 1990; Maisonpierre et al., 1990). BDNF, NT-3 e duas outras molculas
neurotrficas neurotrofina 4/5 (NT-4/5) e fator 5 de crescimento de fibroblastos
(FGF5)- so sintetizadas em clulas musculares dos membros de ratos quando axnios
dos neurnios motores esto crescendo para dentro do msculo e competindo por
tais fatores de sobrevivncia. Alm disso, BNDF, NT-3, NT-4/5 e vrios FGFs previnem
a morte de neurnios motores embrionrios de rato em cultura (Henderson et al, 1993,
Hughes et al., 1993). Outra recm-descoberta neurotrofina, fator neurotrfico deriva-
do da linhagem de clula glial (GDNF), estimula a sobrevivncia de outro grupo de
neurnios: os neurnios dopaminrgicos do mesencfalo cuja destruio caracteriza a
doena de Parkinson (Lin et al., 1993). Esse fator pode evitar a morte desses neurnios
em crebros adultos (veja Lindsay, 1995). Ainda outra neurotrofina, fator neurotrfico
ciliar (CNTF), parece apoiar a sobrevivncia de neurnios motores embrionrios; CNTF
capaz de evitar a degenerao de neurnios motores em um mutante de camundongo
caracterizado pela perda progressiva de neurnios motores (Sendtner et al., 1992).
(A) Simptico (B) Raiz dorsal (C) Nodoso Figura 8.26

Efeitos do NGF (parte superior) e BDNF (em
baixo) no crescimento de neuritos de (A)
gnglios simpticos, (B) gnglios da raiz dor-
sal, e (C) gnglios nodosos. Enquanto tanto
NGF como BDNF tinham um leve efeito es-
timulante do crescimento axnico do gnglio
da raiz dorsal, os gnglios simpticos respon-
deram ao NGF e quase de modo algum ao
BDNF, enquanto o contrrio se demonstrou
para o gnglio nodoso. (de Ibez et al., 1991.)
A sobrevivncia real de um dado neurnio no embrio pode depender de uma

combinao de genes. Schmidt e Kater (1993) mostraram que fatores neurotrficos,
despolarizao, e interaes com o substrato se combinam sinergicamente para
determinar a sobrevivncia neuronial. Por exemplo, a sobrevivncia de neurnios do
gnglio ciliar do pinto em cultura foi promovida pelo FGF, laminina ou despolarizao.
Porm, o FGF no promoveu sobrevivncia quando a laminina estava ausente, e os
efeitos combinados da laminina, FGF e despolarizao foram maiores do que a soma
dos efeitos de cada um deles (Figura 8.27). Os fatores neurotrficos e os outros
agentes ambientais parecem funcionar pela supresso de um programa suicida
que seria expresso constitutivamente se no fosse reprimido por esses fatores (veja
Captulo 13; Raff et al., 1993). A sobrevivncia das clulas ganglionares retinianas
em cultura est baseada em fatores neurotrficos, mas essas clulas somente podem
responder a esses fatores se tiverem sido despolarizadas (Meyer-Franke et al., 1995).
Alm disso, j que a atividade neuronial estimula a produo de fatores neurotrficos
pelos nervos ativos, provvel que neurnios recebendo um sinal produzam mais
fator neurotrfico (Thoenen, 1995). Esse fator poderia ter um efeito sobre as sinapses
prximas que esto ativas (i.e., capazes de responder a esse fator), com isso estabi-
lizando um conjunto de sinapses ativas com excluso das inativas.
A descoberta e purificao dessas protenas neurotrficas e a anlise de suas
interaes com substratos e condies eltricas pode possibilitar novas terapias para
doenas neurodegenerativas. Numerosas companhias farmacuticas esto iniciando
testes clnicos de fatores neurotrficos para o possvel alvio de leses na medula
espinhal (NGF), doena de Parkinson (GNDF), esclerose lateral amotrfica (BDNF,
CNTF), neuropatias perifricas (NGF, NT-3) e doena de Alzheimer (NGF, GDNF).
Neurnios revestidos com laminina

Sobrevivncia neuronial (%)
Neurnios revestidos com colgeno IV

Figura 8.27
Interaes entre substrato, despolarizao e fator neurotrfico bsico
FGF (FGF2) na sobrevivncia de neurnios do gnglio ciliar. Neu-
rnios foram revestidos com laminina (um substrato favorecendo
sobrevivncia) ou colgeno IV (que no favorece sobrevivncia
neuronial) e observados aps 24 horas de cultura na presena ou
ausncia de despolarizao ou FGF2. Quando as clulas foram
despolarizadas e se desenvolveram na presena de FGF2, no im-
Sem FGF2 Despolarizao FGF2 portou em qual substrato elas cresceram. Todavia, quando o FGF2
adio de + estava presente sem despolarizao, o substrato causou uma grande
agentes Despolarizao diferena. (de Schmidt e Kater, 1993.)
& Especulaes
Neurnios Fetais em Hospedeiros Adultos

E m 1976, Lund e Hauschka implan- dor e recipiente no precisavam ser paren- no so a nica maneira de se restaurar a
taram tecido cerebral fetal de rato tes, j que o crebro separado do sistema anatomia funcional da substncia nigra
no crebro de um rato recm-nas- imune pela barreira hematoenceflica, que em pacientes com Parkinson. Em primeiro
cido. Os neurnios fetais fizeram as cone- protege transplantes de tecidos no cre- lugar, os estudos de Isacson e colegas
xes apropriadas com o crebro do hospe- bro da rejeio pelo sistema imune. Dentro (1995) sugerem que as clulas embrion-
deiro. Esse estudo ofereceu a possibilidade 5 meses, o transplante tinha restaurado rias do doador no necessitam ser de hu-
de de que transplantes de neurnios fetais muito da dopamina normalmente produzi- manos. Clulas do mesencfalo do em-
possam ser capazes de reparar regies da pela substncia nigra, assim como a brio de porco reconstruram as conexes
danificadas no crebro humano. H mui- capacidade para movimentos voluntrios neuroniais normais quando injetadas no
tas doenas degenerativas neuroniais, e a do paciente. Dois outros laboratrios rela- estriado de ratos adultos com uma doen-
doena de Parkinson uma das mais fre- taram restauraes semelhantes de funo a semelhante doena de Parkinson. Em
qentes, afetando cerca de um milho de aps transplantes de neurnios fetais em segundo lugar, quando Gash e colegas
pessoas na Amrica. Nessa doena, neu- pacientes (Freed et al., 1992; Spencer et al., (1996) injetaram fator de crescimento de-
rnios produtores de dopamina da subs- 1992). Segundo Bjrkland (1987), o tecido rivado da glia nos crebros de macacos
tncia nigra (um conjunto de clulas no doador timo aquele contendo presumi- que haviam sido induzido para ter sndro-
pednculo cerebral) so destrudos, e seus dos neurnios secretores de dopamina, que mes semelhantes ao Parkinson pela inje-
terminais axnicos no ncleo caudado e tinham passado pela sua ltima diviso o de MPTP, os macacos injetados mos-
putmen (dois ncleos cerebrais) degene- celular mas ainda no haviam formado extraram recuperao funcional de seus sin-
ram. Isso leva a tremores musculares, difi- tensas conexes sinpticas. Em 1992, tomas. Ainda mais, eles tinham substan-
culdade para iniciar movimentos volunt- Widner e colegas mostraram que enxertos cialmente mais dopamina e neurnios pro-
rios e problemas de cognio. A injeo de de mesencfalos fetais foram capazes de dutores de dopamina. Como a doena de
L-dopa (que o organismo metaboliza em restaurar funes motoras em dois pacien- Parkinson progressiva, no sabido se
dopamina) alivia temporariamente esses tes que haviam destrudo suas substnci- os neurnios enxertados ou recm-divi-
sintomas, mas a L-dopa perde seu efeito as nigras injetando-os com uma de hero- didos sero acometidos pelo mesmo pro-
com o uso prolongado e algumas vezes na sinttica contaminada com o biproduto cesso que havia destrudo os neurnios
tem efeitos adversos. MPTP. Esse composto havia criado uma endgenos. Porm, parece provvel que
Em 1990, Lindvall e colegas implanta- condio que parecia com a severa doen- enxertos fetais e neurnios novos so ca-
ram clulas neuroniais humanos da subs- a de Parkinson. pazes de reestabelecer conexes sinpti-
tncia nigra de fetos de 8 a 9 semanas, em Dois estudos recentes mostraram que cas que os neurnios destrudos haviam
um paciente com mal de Parkinson. Doa- transplantes de clulas humanas fetais estabelecido.
O desenvolvimento de comportamentos:
Constncia e plasticidade
Um dos aspectos mais fascinantes da neurobiologia do desenvolvimento a correla-
o de certas conexes neuroniais com certos comportamentos. Existem dois aspec-
tos notveis desse fenmeno. Primeiro h aqueles casos nos quais os padres com-
plexos do comportamento esto inerentemente presentes no circuito do crebro no
nascimento. O ritmo cardaco de um embrio de pinto de 19 dias se acelera quando ele
escuta o chamado de aflio, e nenhum outro chamado provocar essa resposta
(Gottlieb, 1965). Alm disso, um pinto recm-eclodido imediatamente ir buscar abrigo
se apresentado sombra de um gavio. O gavio verdadeiro no necessrio a
sombra pela sua silhueta em papel ser suficiente, mas sombra de nenhuma outra ave
causar essa resposta (Tinbergen, 1951). Parece, portanto, que so certas conexes
neuroniais que levam a comportamentos inerentes em vertebrados.
So igualmente notveis os exemplos em que o sistema nervoso to plstico que
novas experincias podem modificar o conjunto original de conexes neuroniais,
causando a criao de novos neurnios ou a formao de novas sinapses entre neur-

nios existentes. Iremos discutir a plasticidade neuronial em maior detalhe no Captulo
21, mas suficiente dizer neste ponto que o crebro no cessa de se desenvolver com
o nascimento. O trabalho ganhador do prmio Nobel de Hubel e Wiesel (1962, 1963)
demonstrou que havia competio entre neurnios retinianos de cada olho por alvos
no crtex, e que suas conexes tinham que ser fortalecidas pela experincia. Em pssa-
ros canoros, alm disso, novos neurnios so criados e novas sinapses formadas
quando os pssaros aprendem seu canto (Alvarez-Buylla et al., 1990), e quando ratos
adultos aprendem novas atitudes, seus neurnios corticais desenvolvem novas
sinapses (Black et al., 1990). Assim, o sistema nervoso continua a se desenvolver na
vida adulta, e o padro de conexes neuroniais um produto de padronizao herdada
e padronizao produzida pela experincia. [axon6.html]
Como um investigador (Purves, 1994) recentemente concluiu em sua anlise do
desenvolvimento cerebral:
Embora a grande maioria dessa construo deve se originar de programas

desenvolvimentais configurados durante a evoluo de cada espcie, a ativida-
de neuronial pode modular e instruir esse processo, armazenando assim a
imensido de informao idiossincrtica que cada um de ns adquire pela expe-
rincia individual e prtica.
LITERATURA CITADA
Akers, R. M., Mosher, D. F. and Lilien, J. E. of adult rats. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: of retinal ganglial cell axons. Dev. Biol. 122:
1981. Promotion of retinal neurite outgrowth 5568-5572. 407-418.
by substratum-bound fibronectin. Dev. Biol. 86:
Calof, A. L. 1992. Sex, nose, and genotype. Curr. Colamarino, S. A. and Tessier-Lavigne, M. 1995,
179-188.
Biol. 2: 103-105. The axonal chemoattractant netrin-1 is also a
Alvarez-Buylla, A., Kirn, J. R. and Nottebohm, chemorepellent for trochlear motor axons. Cell
Chan, S. S.-Y., Zbeng, H., Su, M.-W., Wilk, R.,
F. 1990. Birth of projection neurons in adult 81: 621-629.
Killeen, M. T., Hedgecock, E. M. and Culotti, J.
avian brain may be related to perceptual or
G. 1996. UNC-40, a C. elegans homolog of DCC Cox, E. C., Mller, B. and Bonhoeffer, F. 1990.
motor learning. Science 249: 1444-1446.
(Deleted in Colonorectal Cancer), is required in Axonal guidance in chick visual system: Poste-
Baier, H. and Bonhoeffer, F. 1992. Axon motile cells responding to UNC-6 netrin cues. rior tectal membranes induce collapse of growth
guidance by gradients of a target-derived Cell 87: 186-195. cones from temporal retina. Neuron 2: 31-37.
component. Science 255: 472-475.
Cheng, H.-J., Nakamoto, M., Bergemann, A. D. Crowley, C. and ten others. 1994. Mice lacking
Barinaga, M. 1995. Receptors find work as and Flanagan, J. G. 1995. Complementary nerve growth factor display perinatal loss of
guides. Science. 269: 1668-1670. gradients in expression and binding of ELF-1 sensory and sympathetic neurons yet develop
and Mek4 in development of the topographic basal forebrain cholinergic neurons. Cell 76:
Bastiani, M. J., Harrelson, A. L., Snow, P. M.
retinotectal projection map. Cell 82: 371-381. 1001-1011.
and Goodman, C. S. 1987. Expression of fasciclin
I and II glycoproteins on subsets of axon Chu-LaGraff, Q., Schmid, A., Leidel, J., Brnner, Culotti, J. G. 1994. Axon guidance mechanisms
pathways during neuronal development in the G., Jckle, H. and Doe, C. 1995. huckebein in Caenorhabditis elegans. Curr. Opin. Genet.
grasshopper. Cell 48: 745-755. specifies aspects of CNS precursor identity Dev. 4: 587-595.
required for motoneuron axon pathfinding.
Begovac, P. C. and Shur, B. D. 1990. Cell surface Dan, Y. and Poo, M.-M. 1992. Hebbian
Neuron 15: 1041-1051.
galactosyItransferase mediates the initiation of depression of isolated neuromuscular synapses
neurite outgrowth from PC12 cells on laminin. Cohan, C. S. and Kater, S. B. 1986. Suppression in vitro. Science 256: 1570-1573.
J. Cell Biol. 110: 461-470. of neurite elongation and growth cone motility
by electrical activity. Science 232: 16318-1640. Davies, A. M., Brandtlow, C., Heumann, R.,
Bjrkland, A. 1987. Brain implants, trans- Korsching, S., Rohrer, H. and Thoenen, H. 1987.
plants. In G. Adelman (ed.), Encyclopedia of Cohen, J., Burne, J. F., Winter, J. and Bartlett, Timing and site of nerve growth factor synthesis
Neuroscience, Vol. 1. Birkhauser, Boston, pp. P. 1986. Retinal ganglial cells lose responsive- in developing skin in relation to innervation and
165-167. ness to lamina with maturation. Nature 322: expression of the receptor. Nature 326: 353-358.
465-467.
Black, J. E., Issacs, K. R., Anderson, B. J. Davies, J. A., Cook, G. W. M., Stern, C. D. and
Alcantara, A. A. and Greenough, W T. 1990. Cohen, J., Burne, J. F., McKinlay, C. and Winter, Keynes, R. J. 1990. Isolation from chick somites of
Learning causes synaptogenesis, whereas motor J. 1987. The role of laminin and the laminin/ a glycoprotein fraction that causes collapse of dor-
activity causes angiogenesis, in cerebellar cortex fibronectin receptor complex in the outgrowth sal root ganglion growth cones. Neuron 2: 11-20.
Drescher, U., Kremoser, C., Handwerker, C., Goodrnan, C. S. and Bastiani, M. J. 1984. How Harris, W. A. 1986. Homing behavior of axons
Lschinger, J., Noda, M. and Bonhoeffer, F. embryonic nerve cells recognize one another. in the embryonic vertebrate brain. Nature 320:
1995. In vitro guidance of retinal ganglion cell Sci. Am. 251(6): 58-66. 266-269.
axons by RAGS, a 25 kDa protein related to
Goodman, C. S. and Doe, C. Q. 1993. Embryonic Harrison, R. G. 1910. The outgrowth of the
ligands for Eph receptor tyrosine kinases. Cell
development of the Drosophila central nervous nerve fiber as a mode of protoplasmic move-
82: 359-370.
system. In Bate, M. and Martinez Arias, A., The ment. J. Exp. Zool. 9: 787-848.
Eisen, J., Meyers, P. Z. and Westerfield, M. 1986. Development of Drosophila melanogaster. Cold
Hedgecock, E. M., Culotti, J. G. and Hall, D. H.
Pathway selection by growth cones of identified Spring Harbor Press, Cold Springs Harbor, NY
1990. The unc-5, unc-6, and unc-40 genes guide
motoneurones in live zebra fish embryos. Nature pp. 1131-1206.
circumferential migrations of pioneer axons and
320: 269-271.
Goodman, C. S. and Shatz, C. J. 1993. mesodermal cells on the epidermis in C. elegans.
Ericson, J., Thor, S., Edlund, T., Jessell, T. J. and Developmental mechanisms that generate pre- Neunon 2: 61-85.
Yamada, T. 1992. Early stages of motor neuron cise patterns of neuronal connectivity. Neuron
Henderson, C. E. and tweIve others. 1993.
differentiatiory revealed by expression of 10 [SuppL]: 77-98.
Neurotrophins promote motor neuron survival
homeobox gene isIet-1. Science 256: 1555-
Goodman, C. S., Bastiani, M. J., Doe, C. Q., du and are present in embryonic limb bud. Nature
1560.
Lac, S., Helfand, S. L., Kuwada, J. Y. and Thomas, 363: 266-270.
Ericson, J., Morton, S., Kawakarni, A., Roelink, J. B. 1984. Cell recognition during neuronal de-
Hohn, A., Leibrock, J., Bailey, K. and Barde, Y-
H. and Jessell, T. M. 1996. Two critical periods velopment. Science 225: 1271-1287.
A. 1990. Identification and characterization of
of sonic hedgehog signaling required for the
Gottlieb, D. l., Rock, K. and Glaser, L. 1976. A a novel member of the nerve growth factor/
specification of motor neuron identity. Cell 87:
gradient of adhesive specificity in developing avian brain-derived neurotrophic factor family. Nature
661-673.
retina. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73: 410-414. 344: 339-341.
Fawcett, J. W. and OLeary, D. D. M. 1985. The
Gottlieb, G. 1965. Prenatal auditory sensitivity Holley S. A., lackson, P. D., Sasai, Y., Lu, B., De
role of electrical activity in the formation of
in chickens and ducks. Science 147: 1596-1598. Robertis, E. M., Hoffmann, F. M. and Ferguson,
topographic maps in the nervous system. Trends
E. L. 1995. A conserved system for dorsal-ven-
Neurosci. 8: 201-206. Grumet, M. 1991. Cell adhesion molecules and
tral patterning in insects and vertebrates involving
their subgroups in the nervous system, Curr. Opin.
Fliess, W. 1897. Quoted in J. Geller, 1992. The sog and chordiii. Nature 376: 249-253.
Neurobiol. 1: 370-376.
cultural constructioti of the other. In H. Eilberg-
Hollyday, M. 1980a. Motoneuron histogenesis
Schwartz (ed.), People of the Body. State Gundersen, R. W. 1987. Response of sensory
and the development of limb innervation. Curr.
University of New York Press, Albany, pp. 243- neurites and growth cones to patterned substrata
Top). Dev. Biol. 15: 181-215.
282. of laminin and fibronectin in vitro. Dev. Biol.
121: 423-431. Hollyday, M. 1980b. Organization of motor
Flor, H. and seven others. 1995. Phantomlimb
pools in the chick lumbar lateral motor column.
pain as a perceptual correlate of cortical reorga- Halfter, W., Claviez, M. and Schwarz, U. 1981.
J. Comp. Neurol. 194: 143-170.
nization following arm amputation. Nature 375: Preferential adhesion of tectal membranes to
482-484. anterior embryonic chick retina neurites. Nature Hollyday, M., Hamburger, V. and Farris, J. M. G.
292: 67-70. 1977. Localization of motor neuron pools
Franco, B. and fifteen others. 1991. A gene
supplying identified muscles in normal and
deleted in Kallmanns syndrome shares homology Hall, Z. W. 1995. Laminin b (S-laminin): A new
supernumerary legs of chick embryos. Proc. Natl.
with neural cell adhesion and axonal path-finding player at the synapse. Science 269: 362-363.
Acad. Sci. USA 74: 3582-3586.
molecules. Nature 353: 529-536.
Hall, Z. W. and Sanes, J. R. 1993. Synaptic
Hubel, D. H. and Wiesel, T. N. 1962. Receptive
Freed, C. R. and eighteen others. 1992. Survival structure and development: The neuromuscular
fields, binocular interaction and functional
of implanted dopamine cells and neurological junction. Neuron 10 [Suppl.]: 99-121.
architecture in the cats visual cortex. J. Physiol.
iprovement 12 to 46 months after transplanta-
Hamburger, V. 1939. The development and 160: 106-154.
tion for Parkinsons disease. N. EngI. J. Med.
327: 1549-1555. innervation of transplanted limb primordia of
Hubel, D. H. and Wiesel, T. N. 1963. Receptive
chick embryos. J. Exp. Zool. 80: 347-389.
fields of cells in striate cortex of very young,
Gash, D. M. and eleven others. 1996. Functional
Hamelin, M., Zhou, Y., Su, M.-W., Scott, I. M. visually inexperienced kittens. J. Neutropliysiol.
recovery in parkinsonnian monkeys treated with
and Culotti, J. G. 1993. Expression of the unc-5 26: 944-1002.
GDNF. Nature 380: 252-255.
guidance receptor in the touch neurons of C.
Hughes, R. A., Sendtner, M., Goldfarb, M.,
Gershon, M. D., Schwartz, J. H. and Kandel, elegans steers their axons dorsally. Nature 364:
Linholm, D. and Thoenen, H. 1993. Evidence
E. R. 1985. Morphology of chemical synapses 327-330.
that fibroblast growth factor 5 is a major muscle-
and pattern of interconnections. In E. R.
Harper, S. and Davies, A. M. 1990. NGF mRNA derived survival factor for cultured spinal
Kandel and J. H. Schwartz (eds.), Princilyles
expression in developing cutaneous epithelium motoneurons. Neuron 10: 369-377.
of Neural Science, 2nd Ed. Elsevier, New York,
pp. 132-147. related to innervation density. Development 110:
Hynes, R. 0. and Lander, A. D. 1992. Contact
515-519.
and adhesive specificities in the associations,
Godement, P., Salaun, J. and Mason, C. A. 1990.
Harrelson, A. L. and Goodrnan, C. S. 1988. migrations, and targeting of cells and axons. Cell
Retinal axon pathfinding in the optic chiasm:
Growth cone guidance in insects: Fasciclin II is a 68: 303-322.
Divergence of crossed and uncrossed fibers.
Neuron 5: 173-186. member of the immunoglobulin superfamily.
Ibez, C. F., Ebendal, T. and Persson, H. 1991.
Science 242: 700-708.
Chimeric molecules with multiple neurotrophic
Goodman, C. S. 1994. The likeness of being:
Harris, W. A. 1984. Axonal pathfinding in the activities reveal structural elements determining
Phylogenetically conserved molecular me-
absence of normal pathways and impulse activity. the specificities of NGF and BDNF EMBO J. 10:
chanisms of growth cone guidance. Cell 78:
J. Neurosci. 4: 1153-1162. 2105-2110.
353-356.
Inuzuka, H., Miyatani, S. and Takeichi, M. 1991. 1992. Fasciclin IV: Sequence, expression, and Biochemical differentiation and intercellular
R-cadherin: A novel Ca2,-dependent cell-cell function during growth cone guidance in the interactions of migratory GnRH cells in the
adhesion molecule expressed in the retina. grasshopper embryo. Neturon 9: 831-845 mouse. Dev. Biol. 159: 643-666.
Neuron 7: 69-79.
Kolodziej, P. A., Timpe, L. C., Mitchell, K. J., Logan, C., Wizenmann, A., Drescher, U.,
Ishii, N., Wadsworth, W. G., Stern, B. D., Culotti, Fried, S. R., Goodman, C. S., Jan, L. Y. and Jan, Monschau, B., Bonhoeffer, F. and Lumsden, A.
J. G. and Hedgecock, E. M. 1992. UNC-6, a Y. N. 1996. Frazzled encodes a Drosophila 1996. Rostral optic tectum acquires caudal
laminin-related protein, guides pioneer axon member of the DCC immunoglobulin subfamily characteristics following ectopic Engrailed
migrations in C. elegans. Neuron 9: 873-881. and is required for CNS and motor axon guidance. expression. Curr. Biol. 6: 1006-1014.
Cell 87: 197 204.
Isacson, O., Deacon, T., Pakzaban, P., Galpern, Lund, R. D. and Hauschka, S. D. 1976.
W. R., Dinsmore, J. and Burns, L. H. 1995. Korsching, S. and Thoenen, H. 1983. Nerve Transplanted neural tissue develops con nection
Transplanted xenogeneic neural cells in growth factor in sympathetic ganglia and with host rat brain. Science 193: 582-584.
neurodegenerative disease models exhibit corresponding target organs of the rat:
remarkable axonal target specificity and distinct correlation with density of sympathetic Luo, Y., Raibile, D. and Raper, J. A. 1993.
growth patterns of glial and axonal fibres. Nat. innervation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: Collapsin: A protein in brain that induces the
Med. 1: 1189-1194. 3513-3516. collapse and paralysis of neuronal growth co-
nes. Cell 75: 217-227.
Jacobson, M. 1967. Retinal ganglion cells: Krafft-Ebing, R. von. 1886. Psychopathia
Specification of central connections in larval Sexualis. Enke, Stuttgart. Mackenzie, J. L. 1898. The physiological and
Xenopus laevis. Science 155: 1106-1108. pathological relations between the nose and the
Lance-jones, C. and Landmesser, L. 1980, Mo- sexual apparatus of man. Johns Hopkins Hosp.
Jones, K. R., Farinas, I., Backus, C. and Reichardt, tor neuron projection patterns in chick hindlimb Bull. 82: 10-17.
L. F. 1994. Targeted disruption of the BDNF following partial reversals of the spinal cord. J.
gene purturbs brain and sensory neuron develo- Physiol. 302: 581-602. Maisonpierre, P. C., Belluscio, L., Squinto, S.,
pment but not motor neuron development. Cell Ip, N. Y., Furth, M. E., Lindsay, R. M. and
Landmesser, L. 1978. The development of Yancopoulos, G. D. 1990. Neurotrophin-3: A
76: 989-999.
motor projection patterns in the chick hindlimb. neurotrophic factor related to NGF and BDNF.
KarIstrom, R. 0., Trowe, T. and Bonhoeffer, J. Physiol. 284: 391 414. Science 247: 1446-1451.
F. 1997. Genetic analysis of axon guidance
Lee, J. E., Hollenberg, S. M., Snider, L., Turner, Martin, P. T., Ettinger, A. J. and Sanes, J. R.
and mapping in the zebrafish. Trends Neurosci.
D. L., Lipnick, N. and Weintraub, H. 1995. 1995. Synaptic localization domain in the
20: 3-8.
Conversion of Xenopus ectoderm into neurons synaptic cleft protein laminin b2 (slaminin).
Keino-Masu, K. Masu, M., Hinck, L. Leonardo, by NeuroD, a basic helixloop-helix protein. Science 269: 413-416.
E. D. Chan, S. S.-Y., Culotti, J. G. and Tessier- Science 268: 836-844.
Lavigne, M. 1996. Deleted in Colonorectal Marx, J. 1995. Helping neurons find their way.
Legouis, R. and fourteen others. 1991. The Science 268: 971-973.
Cancer (DCC) encodes a netrin receptor. Cell
candidate gene for X-linked Kallmann syndrome
87: 175-185. Matthes, D. J., Sink, H., Kolodkin, A. L. and
encodes a protein related to adhesion molecules.
Kennedy, T. E., Serafini, T., de la Torre, J. R. CeIl 67: 423-435. Goodman, C. S. 1995. Semaphorin II can
and Tessier-Lavigne, M. 1994. Netrins are function as a selective inhibitor of specific
Letourneau, P., Madsen, A. M., Palm, S. M. and synaptic arborizations. Cell 81: 631-639.
diffusible chemotropic factors for commissural
Furcht, L. T. 1988. Immunoreactivity for
axons in the embryonic spinal cord. Cell 78: Matsunaga, M., Hatta, K. and Takeichi, M. 1988.
laminin in the developing ventral longitudinal
425-435. Role of N-cadherin cell adhesion molecules in the
pathway of the brain. Dev. Biol. 125: 135-144.
Keynes, R. J. and Stern, C. D. 1984. Segmentation histogenesis of neural retina. Neuron 1: 289-295.
Levi-Montalcini, R. and Booker, B. 1960.
in the vertebrate nervous system. Nature 310: Matsuzawa, M., Weight, F. F., Potember, R. S.
Destruction of the sympathetic ganglia in
786-787. and Liesi, P. 1996. Directional neurite outgrowth
mammals by an antiserum to the nerve growth
Kimmel, C. B. and Law, R. D. 1985. Cell lineage factor protein. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 46: and axonal differentiation of embryonic
of zebrafish blastomeres I. Cleavage pattern and 384-390. hippocampal neurons is promoted by a neurite
cytoplasmic bridges between cells. Dev. Biol. 108: outgrowth domain of the B2-chain of laminin.
Liesi, P. and Silver, J. 1988. Is astrocyte laminin Inter. I. Dev. Neurosci. 14: 283-295.
78-101.
involved in axon guidance in the mammalian
Klose, M. and Bentley, D. 1989. Transient CNS? Dev. Biol. 130: 774-785. McFarlane, S., McNeill, L. and Holt, C. E. 1995.
pioneer neurons are essential for formation of FGF signaling and target recognition in the
Lin, L.-F. H., Doherty, D. H., Lile, J. D., developing Xenopus visual system. Neutron 15:
an embryonic peripheral nerve. Science
Bektesh, S. and Collins, F. 1993. GDNF: A glial 1017-1028.
245:982-984.
cell-line derived neurotrophic factor for
Kobayashi, T. Nakamura, H. and Yasuda, M. midbram dopaminergic neurons. Scienct, 260: Messersmith, E. K., Leonardo, E. D., Shatz, C.
1990. Disturbance of refinement of retintectal 1130-1132. J., Tessier-Lavigne, M., Goodrnan, C. S. and
projection in chick embryos by tetrodotoxin Koloclkin, A. 1995. Semaphorin III can
Lindsay, R. M. 1995. Neuron saving schemes. function as a selective chemorepellent to
and grayanotoxin. Dev. Brain Res. 57: 29-35.
Nature 373: 289-290. pattern sensory projections in the spinal cord.
Kolodkin, A. L., Matthes, D. J. and Goodman, Neuron 14: 949-959.
Lindvall, O., Brundin, P. and Widner, H. 1990.
C. S. 1993. The semaphorin genes encode a
Grafts of fetal dopamine neurons survive and Meyer-Franke, A., Kaplan, M. R., Pfrieger, F.
family of transmembrane and secreted growth
improve motor functions in Parkinsons disease. W. and Barres, B. A. 1995. Characterization of
cone guidance molecules. Cell 75: 1389-1399.
Science 247: 574-577. the signaling interactions that promote the
Kolodkin, A. L., Matthes, D. J., OConnor, T. survival and growth of developing retinal
P., Patel, N. H., Bentley, D. and Goodman, C. S. Livne, l., Gibson, M. J. and Silverman, A. J. 1993. ganglion cells in culture. Neuron 15: 805-819.
Nakarnoto, M. and several others. 1996. Roth, S. and Marchase, R. B. 1976. An in vitro Stier, H. and Schlosshauer, B. 1995. Axonal
Topographically specific effects of ELF-1 on assay for retinotectal specificity. In S. H. guidance in the chicken retina. Development
retinal axon guidance in vitro and retinal axon Barondes (ed.), Neuronal Recognition. Plenum, 121: 1443-1454.
mapping in vivo. Cell 86: 755-766. New York, pp. 227-248.
Stout, R. P. and Gradziadi, P. P. C. 1980.
Neugebauer, K. M., Tomaselli, K. J., Lilien, J. and Sasai, Y., Lu, B., Steinbeisser, H. and De Influence of the olfactory placode on the deve-
Reichardt, L. F. 1988. N-cadherin, NCAM, and Robertis, E. M. 1995. Regulation of neural lopment of the brain in Xenopus laevis (Daudin).
integrins promote retinal neurite outgrowth en induction by the Chd and Bmp-4 antagonsistic Neuroscience 5: 2175-2186.
astrocytes in vitro. J. Cell Biol. 107: 1177-1187. patterning signals in Xenopus. Nature 376:
Taghert, P. H., Doe, C. Q. and Goodman, C. S.
333-336.
Noakes, P. G., Gautam, M., Mudd, J., Sanes, J. R. 1984. Cell determination and regulation during
and Merlie, J. P. 1995. Aberrant differentiations Schmidt, M. and Kater, S. B. 1993. Fibroblast development of neuroblasts and neurones in
of neuromuscular junctions in mice lacking s- growth factors, depolarization, and substrate grasshopper embryo. Nature 307: 163-165
laminin/laminin b2. Nature 374: 258-262. interact in a combinatorial way to promote
Thanos, S., Bonhoeffer, F. and Rutischauser, U.
neuronal survival. Dev. Biol. 158: 228-237.
Oppenheim, R. W., Qin-Wei, Y, Prevette, D. and 1984. Fiber-fiber interaction and tectal cues
Yan, Q. 1992. Brain-derived neurotrophic growth Schwanzel-Fukada, M. and Pfaff, D. W. 1989. influence the development of the chicken
factor rescues developing avian motoneurons Origin of luteinizing hormone-releasing retinotectal projection. Proc. Natl. Acad. Sci.
from cell death. Nature 360: 755-757. hormone neurons. Nature 338: 161-164. USA 81: 1906-1910.
Patterson, P. H. 1992. Neuron-target interacti- Schwanzel-Fukada, M., Bick, D. and Pfaff, Thoenen, H. 1995. Neurotrophins and neuronal
ons. In Z. Hall, (ed.), An Introduction to D. W. 1989. Luteinizing hormone-releasing plasticity. Science 270: 593-598.
Molecular Neurobiology. Sinauer Associates, hormone (LHRH)-expressing cells do not
Thomas, L. 1992. The Fragile Species.
Sunderland, MA, pp. 428-459. migrate normally in an inherited hypogo-
Macmillan, New York.
nadal (Kallman) syndrome. Mol. Brain Res.
Pearson, J., Johrison, E. M., Jr. and Brandeis, L.
6: 311-326. Thomas, W. A., Schaeffer, A. W. and Treadway,
1983. Effects of antibodies to nerve growth
R. M. Jr. 1990. Galactosyl transferasedependence
factor on intrauterine development of derivati- Sendtner, M., Schmalbruch, H., StckIi, K. A.,
of neurite outgrowth on substratum-bound
ves of cranial neural crest and placode in the Carroll, P., Kreutzberg, G. W. and Thoenen, H.
laminin. Development 110: 1101-1114.
guinea pig. Dev. Biol. 96: 32-36. 1992. Ciliary neurotrophic factor prevents
degeneration of motor neurons in mouse Thompson, W J. 1983. Synapse elimination in
Phelan, K. A. and Hollyday, M. 1990. Axon
mutant progressive motor neuropathy. Nature neonatal rat muscle is sensitive to pattern of
guidance in muscleless chick wings: The role of
358: 502-504. muscle use. Nature 302: 614-616.
muscle cells in motoneural pathway selection
and muscle nerve formation. J. Neurosci. 10: Serafini, T., Kennedy, T. E., Galko, M. J., Tinbergen, N. 1951. The Study of Instinct.
2699-2716. Mirayan, C., Jessell, T. M. and Tessier-Lavigne, Clarendon Press, Oxford.
M. 1994. The netrins define a family of axon
Piccolo, S., Sasai, Y., Lu, B. and De Robertis, E. Tosney, K. W. 1991. Cells and cell interactions
outgrowth-promoting proteins homologous to
M. 1996. Dorsoventral patterning in Xenopus: that guide motor axons in the developing chick
C. elegans UNC-6. Cell 78: 409-424.
Inhibition of ventral signals by direct binding of embryo. BioEssays 13: 17-23.
chordin to BMP-4. Cell 86: 589-598. Shawlot, W. and Beliringer, R. R. 1995.
Requirement for Lim1 in head organizer function. Tosney, K. W. and Landmesser, L. T. 1984.
Pittman, R. N. 1985. Release of plasminogen Pattern and specificity of axonal outgrowth
Nature 374: 425-430.
activator and a calcium-dependent metallopro- following varying degrees of limb ablation. J.
tease from cultured sympathetic and sensory Silver, J. and Sidman, R.L. 1980. A mechanism Neurosci. 4: 2158-2527.
neurons. Dev. Biol. 110: 91-101. for guidance and topologic patterning of
retinal ganglion cell axons. J. Comp. Neurol. Tosney, K. W. and Landmesser, L. T. 1985.
Purves, D. 1994. Neural Activity and the Development of the major pathways for neurite
189: 101-111.
Growth of the Brain. Cambridge University outgrowth in the chick hindlimb. Dev. Biol. 109:
Press, New York. Singer, M., Norlander, R. and Egar, M. 1979. 193-214.
Axonal guidance during embryogenesis and
Purves, D. and Lichtman, J. W. 1980. Elimina- Tosney, K. W. and Oakley, R. A. 1990.
regeneration in the spinal cord of the newt:
tion of synapses in the developing nervous Perinotochordal mesenchyme acts as a barrier
The blueprint hypothesis of neuronal
system. Science 210: 153-157. to axon acvance in the chick embryo:
pathway patterning. J. Comp. Neural.
185:1-22. Implications for a general mechanism of axon
Purves, D. and Lichtman, J. W 1985. Principles
guidance. Exp. Neurol. 109: 75-89.
of Neural Development. Sinauer Associates,
Spencer, D. D. and fifteen others. 1992. Unila-
Sunderland, MA. Tosney, K. W., Hotary, K. B. and LanceJones,
teral transplantation of human fetal mesence-
phalic tissue into the caudate nucleus of patients C. 1995. Specificity of motoneurons. BioEssays
Raff, M. C., Barres, B. A., Burne, J. F., Coles, H.
with Parkinson disease. N. Engl. J. Med. 327: 17: 379-382.
S., lshizaki, Y and Jacobson, M. D. 1993.
Programmed cell death and the control of cell 1541-1548. Tsushida, T., Ensini, M., Morton, S. B.,
survival: Lessons from the nervous system. Baldassare, M., Edlund, T., Jessell, T. M. and
Sperry, R. W. 1951. Mechanisms of neural
Science 262: 695-700. Pfaff, S. L. 1994. Topographic organization of
maturation. In S. S. Stevens (ed.), Handbook of
Experimental Psychology. Wiley, New York, pp. embryonic motor neurons defined by expression
Ramn y Cajal, S. 1892. Le Rtine de Vertbrs.
236-280. of LIM homeobox genes. Cell 79: 957-970.
La Cellule 9: 119-258.
Sperry, R. W. 1965. Embryogenesis of behavioral Turner, D. L. and Weintraub, H. 1994. Expression
Raper, J. A. and Kapfhammer, J. P. 1990. The
nerve nets. In R. L. DeHaan and H. Ursprung of achaete-scute homolog 3 in Xenopus embryos
enrichinent of a neuronal growth cone collapsing
(eds.), Organogenesis. Holt, Rinehart & converts ectodermal cells to a neural fate. Genes
activity from embryonic chick brain. Neuron 4:
Winston, New York, pp. 161-186. Dev. 8: 1434-1447.
21-29.
Twitty, V. C. 1937. Experiments on the Weiss, P. A. 1955. Nervous system. In B. H. Willier, Wu, H. H., Williams, C. V. and McLoon, S. C.
phenomenon of paralysis produced by a toxin P. A. Weiss and V. Hamburger (eds.), Analysis of 1994. Involvement of nitic oxide in the
occuring in Triturus embryos. J. Exp. Zool. 76: Development. Saunders, Philadelphia, pp. 346-402. elimination of a transient retinotectal projection
67-104. in development. Science 265: 1593-1596.
Westerfield, M., Liu, D. W., Kimmel, C. B. and
Twitty, V. C. and Johnson, H. H. 1934.. Motor Walker, C. 1990. Pathfinding and Yin, X., Watanabe, M. and Rutishauser, U. 1995.
inhibition in Amblystorna produced by Triturus Effects of polysialic acid on the behavior of
transplants. Science 80: 78-79. synapse formation in a zebrafish mutant lacking
retinal ganglion cell axons during growth into
functional acetylcholine receptors. Neuron 4:
Wadsworth, W. G., Bhatt, H. and Hedgecock, E. M. the optic tract and tectum. Development 121:
867-874.
1996. Neuroglia and pioneer neurons express UNC- 3439-3446.
6 to provide global and local netrin cues for guiding Whitelaw, V. and Hollyday, M. 1983. Position-
Zinn, K., McAllister, L. and Goodman, C. S.
migrations in C. elegans. Neuron 16: 35-46. dependent motor innervation of the chick
1988. Sequence analysis and neuronal expression
hindlimb following serial and parallel duplications
Walter, J., Henke-Fahle, S. and Bonhoeffer, F. of fasciclin I in grasshopper and Drosophila.
of limb segments. J. Neurosci. 3: 1216-1225.
Cell 53: 577-587.
1987. Avoidance of posterior tectal membranes
by temporal retinal axons. Development 101: Widner, H. and eight others. 1992. Bilateral fetal
Zipser, B. and McKay, R. 1981. Monoclonal
909-913. mesencephalic grafts in two patients with
antibodies distinguish identifiable neurones in the
parkinsonism induced by 1-methyl-4phenyl-
leech. Nature 289: 549-554.
Wang, T., Xie, Z. and Lu, B. 1995. Nitric oxide 1,2,3,6 tetrahydropryridine (MPTP). N. EngI.
mediates activity-dependent synaptic suppres- J. Med. 327: 1556-1563.
sion at developing neuromuscular synapses.
Nature 374: 262-266. Wray, S., Grant, P. and Gainer, H. 1989.
Evidence that cells expressing luteinizing
Way, J. C. and Chalfie, M. 1988. mec-3, a hormone-releasing hormone mRNA in the mouse
homeobox-containing gene that specifies are derived from progenitor cells on the
differentiation of the touch receptor neurons in olfactory placode. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
C. elegans. CeIl 54: 5-16. 86: 8132-8136
CAPTULO 9 Mesoderma e Endoderma 341

Mesoderma e endoderma
9
Da fisiologia de alto a baixo, eu canto,
Nem fisionomia somente nem crebro somen-
te so dignos da Musa,
Eu digo a forma completa de longe mais
valorosa,
N OS CAPTULOS 7 e 8 acompanhamos os vrios tecidos formados pelo ecto-
derma em desenvolvimento. Neste captulo acompanharemos o desenvolvi-
mento precoce das camadas germinativas mesodrmica e endodrmica. Ve-
remos que o endoderma forma o revestimento dos tubos digestivo e respiratrio, com
seus rgos associados; o mesoderma ser observado gerando todos os rgos entre
A Fmea igualmente com o Macho eu canto. a parede ectodrmica e os tecidos endodrmicos.
WALT WHITMAN (1867)
Teorias vm e teorias vo. A r permanece. QMESODERMA

JEAN ROSTAND (1960)
O mesoderma de um embrio em estgio de nurula pode ser dividido em cinco regies
(Figura 9.1). A primeira regio o cordomesoderma. Esse tecido forma a notocorda, um
rgo transitrio cuja principal funo inclui a induo da formao do tubo neural e
estabelece o eixo corporal ntero-posterior. Como observamos no Captulo 6, o
cordomesoderma se forma no centro do embrio no futuro lado dorsal. A segunda
regio o mesoderma dorsal somtico. O termo dorsal se refere observao de que
os tecidos em desenvolvimento originrios dessa regio estaro na parte de trs do
embrio, ao longo da espinha. As clulas nessa regio formam somitos, blocos de
clulas mesodrmicas em ambos os lados do tubo neural que iro produzir muitos dos
tecidos conjuntivos das costas (osso, msculo, cartilagem e derme). O mesoderma
intermedirio forma o sistema urinrio e os dutos genitais; discutiremos essa regio
em detalhe em captulos posteriores. Mais distante da notocorda, o mesoderma da
placa lateral d origem ao corao, vasos sangneos e clulas sangneas do siste-
ma circulatrio, como tambm ao revestimento da cavidade do corpo e de todos os
componentes mesodrmicos dos membros exceto os msculos. Ele tambm ir formar
uma srie de membranas extra-embrionrias que so importantes para o transporte de
nutrientes para o embrio. Por ltimo, o mesnquima da cabea ir contribuir para os
tecidos conjuntivos e a musculatura da face.
Mesoderma dorsal: A notocorda e a diferenciao dos somitos

Mesoderma Paraxial
Uma das principais tarefas da gastrulao criar uma camada mesodrmica entre o
endoderma e o ectoderma. Como mostra a Figura 9.2, a formao de rgos mesodrmicos
341
Zigoto
Clulas
Gametas germinativas
primordiais Clivagem
Ectoderma embr. ext. Glndulas
do mnio e crio sudorparas*
Bexiga urinria
Gastrulao Unhas
Glndulas mamrias*
Alantide* ENDODERMA Cabelo
Fgado Traquia* INTESTINO
brnquios* ECTODERMA EPITLIO EXTERNO
Pncreas* PRIMITIVO
Pulmes DO CORPO
NOTOCORDA
Tubo digestivo* (CORDOME-
Cristalino do olho Glndulas
SODERMA)
sebceas*
Vescula
Tireide FARINGE MESODERMA auditiva* Epitlio
estomodeal
Bolsas farngeas*
Mecanismo do
ouvido interno Epitlio oral
Ouvido mdio* Recessos MESODERMA
tubo de eustquio tonsilares* PARAXIAL Epitlio nasal e olfativo Esmalte dentrio
DORSAL e nervo olfativo
Timo primitivo*, Lbulo anterior da hipfise
Paratireides*
paratireides* Epitlio
Corpos proctodeal
ps-branquiais* Pars neuralis
Esqueleto Razes dos nervos
Esclertomos motores espinhais da hipfise
axial Canal
Medula espinhal
Esqueleto Brotos dos anal*
Mitomos
apendicular apndices
TUBO NEURAL
Msculos dos Msculos
apndices esquelticos do tronco Retina* e
Vesculas pticas Crebro
Camadas de tecido Dermtomos nervo ptico
conjuntivo da pele Nervos motores cranianos
Epiddimo CRISTA NEURAL
vasos deferentes
Divertculo metanfrico, Nervos e gnglios Razes dos nervos
ureteres pelve renal, cranianos sensoriais sensoriais espinhais
Dutos mesonfricos
tbulos coletores
Gnglios da raiz Medula da
Mesonefro, dutos MESODERMA dorsal espinhal supra-renal
eferentes INTERMEDIRIO
Dentina
Metanefro, Dutos mulerianos Pronefro Gnglios
dentria Crnio e
tbulos renais* simpticos
MESODERMA cartilagens
Vagina* Ovidutos* tero* MESNQUIMA branquiais
LATERAL Camadas externas
DA CABEA
Mes. embr. ext. do da cabea
Ms.emb. ext. Tecido conectivo
mnio e crio ceflico
do saco vitelnico
Mesoderma somtico e alantide
Msculos
Pleura, Mesoderma Crtex da
Mesentrios Peritnio visceral
pericrdio, esplncnico supra-renal
peritnio Epimiocrdio
Estroma epicrdio Corao
Mesnquima
das gnadas Pleura visceral miocrdio
Tecido hemangioblstico
* O esquema indica somente a origem
da parte epitelial do rgo. Todos esses Tecido conjuntivo e Corpsculos Endotlio dos Endocrdio
rgos tm investimentos de sustenta- msculo liso das vsceras e sangneos vasos sangneos
o secundria de origem mesodrmica. vasos sangneos
Figura 9.1
O esquema ilustra a linhagem das partes especializadas do corpo, derivadas das trs camadas
germinativas embrionrias. As clulas germinativas esto representadas como uma linhagem
de clulas separada das trs camadas germinativas somticas pois, apesar dos precursores das
clulas germinativas se localizarem no endoderma ou mesoderrma presuntivos, elas so pro-
vavelmente um nico tipo celular. (Segundo Carlson, 1981.)
e ectodrmicos no subseqente formao do tubo neural, mas ocorre sincronica-

mente. A formao da notocorda foi discutida no Captulo 6. Essa haste epitelial se
estende desde a base da cabea at a cauda. Em cada lado da notocorda existem faixas
grossas de clulas mesodrmicas. Essas faixas de mesoderma paraxial so referidas
como as placas segmentares (nas aves) e mesoderma no segmentado (nos mamfe-
ros). Com a regresso dos sulcos primitivos, as dobras neurais comeam a se aglome-
rar no centro do embrio, o mesoderma paraxial se separa em blocos de clulas chama-
das somitos. Embora os somitos sejam estruturas transitrias, elas so muito impor-
tantes na organizao do padro segmentar de embries de vertebrados. Como vimos
no captulo anterior, os somitos determinam os caminhos da migrao das clulas da
crista neural e axnios do nervo espinhal. Os somitos geram clulas que formam (1) as
vrtebras e costelas, (2) a derme e a pele dorsal, (3) os msculos esquelticos das
costas e (4) os msculos esquelticos da parede do corpo e membros.
Somitmeros e a Iniciao da Formao do Somito

Os primeiros somitos aparecem na parte anterior do embrio, e os novos somitos
brotam da extremidade rostral do mesoderma paraxial em intervalos regulares (Figu-
ras 9.2C,D e 9.3). Devido aos embries poderem se desenvolver em taxas um pouco
diferentes (da mesma maneira que acontece com embries de galinha quando so
incubados em temperaturas um pouco diferentes), o nmero de somitos presentes
Sulco primitivo Epiblasto
(A) Endoderma Clulas mesodrmicas migratrias
Epiderme Placa neural
(B) Endoderma Mesoderma paraxial Notocorda Mesoderma lateral
Tubo neural Mesoderma somtico

Epiderme Mesoderma
Esplncnico
Somito
(C) Mesoderma intermedirio Celoma
Esclertomo do somito Figura 9.2

Mitomo
Dermtomo do somito O desenvolvimento progressivo do embrio
do somito
Notocorda do pinto, enfocando o componente mesodr-
Celoma intra-embrionrio mico. (A) Regio do sulco primitivo mostran-
do precursores migratrios mesodrmicos e
endodrmicos. (B) Formao da notocorda e
Celoma do mesoderma paraxial. (C,D) Diferenciao
extra-embrionrio dos somitos, celoma e das duas aortas (as quais
finalmente iro se fundir). A-C, embrio de
(D) Aortas dorsais 24 horas; D, embrio de 48 horas.
geralmente o melhor indicador para definir o progresso do desenvolvimento. A

quantidade final de somitos formados uma caracterstica de cada espcie.
O mecanismo para a formao do somito no foi ainda bem estabelecido, mas
diversos estudos em pintos mostraram que as clulas da placa segmentar esto orga-
nizadas em espirais de clulas chamadas somitmeros (Meier, 1979; Packard e Meier,
1983). A converso de somitmero para somito observada quando as clulas mais
anteriores do somitmero se tornam compactas. Essa transio de um somitmero
frouxamente compactado para um somito epitelial est correlacionada com a sntese
de duas protenas da matriz extracelular, fibronectina e N-caderina (Figura 9.4A;
Ostrosky et al., 1984; Lash e Yamada, 1986; Hatta et al., 1987). Essas protenas, por sua
vez, podem ser reguladas pela expresso de Notch1 e Paraxis. O gene Notch1 codifi-
ca o fator transcrio que est ativo na regio mais anterior do mesoderma dorsal no
segmentado, e camundongos com falta desse fator desenvolvem somitos desalinha-
dos de vrios tamanhos (Figura 9.4B,C; Conlon et al., 1995). Paraxis, um gene codifi-
cando um outro fator de transcrio, expressado na extremidade rostral (anterior) do
mesoderma no segmentado de embries de camundongos e pintos. A injeo de
oligonucleotdeos antisenso complementares ao Paraxis produz defeitos de
segmentao somtica (Burgess et al., 1995; Barnes et al., 1997). Clulas de somitos
normais recm-formados so organizadas aleatoriamente, mas logo se tornam organi-
Figura 9.3
zadas em uma bola de clulas epiteliais colunares que circundam uma pequena cavida-
Tubo neural e somitos. Micrografia ao micros-
cpio eletrnico de varredura, mostrando de repleta de clulas frouxamente conectadas. As clulas epiteliais se fixam umas s
somitos bem-formados e mesoderma paraxial outras atravs de junes apertadas. A Paraxis uma parte essencial dessa converso
(embaixo direita) que ainda no se separou de mesnquima em epitlio (Burgess et al.,1996).
em somitos distintos. Um arredondamento do
mesoderma paraxial em um somitmero pode Gerao de Tipos de Clulas Somticas
ser visto na parte inferior esquerda, e as clulas
da crista neural podem ser vistas em migrao Quando o somito primeiro formado, qualquer uma de suas clulas pode se tornar
ventral, a partir do teto do tubo neural. (Corte- qualquer das estruturas derivadas de somitos. No entanto, com a maturao do
sia de K. W. Tosney.)
somito, as vrias regies do somito se tornam comprometidas em formar somente
certos tipos de clulas. A clulas mediano-ventrais do somito (aquelas clulas loca-
lizadas o mais distante das costas, mas prximas ao tubo neural) sofrem mitose,
perdem sua caracterstica epitelial redonda, se tornando clulas mesenquimatosas
(A)
(B) Notch1 Mesoderma

presente Somitos paraxial (pr-somtico)
Figura 9.4
Transio de um somitmero para um somito. (A) A expres- Concentrao de
so da N-caderina se correlaciona com a converso de clulas protena Notch
( C ) Notch1
mesenquimatosas soltas em um somito epitelial. (B) Nos em- ausente
bries de tipo selvagem, expresso de Notch1 vista na re- Somitos Transio Mesoderma paraxial
gio mais anterior do mesoderma paraxial no segmentado
(i.e., a poro que est sendo organizada em um somito). (C)
Em embries deficientes em Notch1, a organizao dos
somitos perturbada. (A de Hatta et al., 1987; cortesia de M.
Takeichi; B e C segundo Conlon et al., 1995.) Anterior Posterior
Clulas do (A) Condensao (B) Figura 9.5

esclertomo de condrcitos Diagrama de uma seo transversal atravs
em migrao Dermtomo das clulas do do tronco de (A) um embrio humano preco-
esclertomo ce de 4 semanas e (B) um embrio tardio de 4
semanas, mostrando a formao das estrutu-
Mitomo ras do somito. (A) As clulas do esclertomo
comeam a migrar afastando-se do dermto-
mo e mitomo. (B) Ao fim da quarta semana,
as clulas do esclertomo esto se conden-
Aorta dorsal sando para formar vrtebras cartilaginosas, o
Nefrtomo do rim dermtomo comea a formar a derme, e as
em desenvolvimento clulas do mitomo estendem-se ventralmen-
te ao longo das paredes do embrio. (C-E) A
Celoma estrutura do somito do pinto em mudana
intra-embrionrio Camada enquanto ocorrema migraes celulares. (A e
Camada Camada
mesodrmica mesodrmica Intestino mesodrmica B segundo Langman, 1981; C-E segundo
somtica esplncnica somtica Ordahl, 1993).
(C) (D) (E)

Tubo neural Dermamitomo Dermtomo
Clulas migratrias
(Musculatura dos membros
e ventrolateral)
Medial Lateral Esclertomo Mitomo
Notocorda Esclertomo
novamente. A poro do somito que d origem a essas clulas chamada de escler-

tomo, e essas clulas mesenquimatosas no final se tornam condrcitos vertebrais
(Figuras 9.2 e 9.5). Os condrcitos so responsveis pela secreo de um tipo especial
de colgeno e GAGs (tais como o sulfato de condroitina) caractersticos da cartilagem.
Esses condrcitos em particular sero responsveis pela construo do esqueleto
axial (vrtebras, costelas, cartilagem e ligamentos). As clulas da poro lateral do
somito (a regio mais distante do tubo neural) tambm se dispersam. Essas clulas
formam os precursores dos msculos, dos membros e da parede do corpo. Ordahl e Le
Douarin (1992) seguiram essas clulas transplantando pores de somitos de codorna
em somitos de embries de galinha. As clulas dos pintos e das codornas podem ser
distinguidas pela sua morfologia nucleolar. Os pesquisadores notaram que aquelas
clulas que estavam mais distantes do tubo neural migram para formar a parede do
corpo e a musculatura dos membros, mesmo se essas clulas doadoras forem original-
mente da poro medial do somito.
Uma vez que o esclertomo e os precursores das clulas musculares dos mem-
bros e da parede do corpo migraram para longe dos somitos, as clulas somticas
prximas ao tubo neural migram ventralmente em direo poro epitelial remanes-
cente do somito para formar uma slida camada epitelial dupla chamada
dermamitomo (veja Figuras 9.2 e 9.5 ). A camada dorsal dessa estrutura chamada
de dermtomo, sendo a responsvel pela gerao do tecido conectivo
mesenquimatoso da pele dorsal: a derme. (A derme de outras reas do corpo se forma
de outras clulas mesenquimatosas e no de somitos.) A camada interna de clulas
chamada de mitomo, e essas clulas do origem aos msculos vertebrais que
(A)
Ectoderma dorsal Musculatura apaxial Ectoderma dorsal
Derme Medial Dermamitomo

Msculos da
NT-3 parede corporal
Derme
Wnt
?Wnt Clulas
musculares apaxiais
Tubo
Lateral
Tubo neural
Myf5
neural
BMP4 Msculos
?FGF5 dos
Shh membros
Aorta dorsal Esclertomo
Myf5 c-met, MyoD

Notocorda Mesoderma lateral Notocorda Pax3 Pax1 Mesoderma lateral
Figura 9.6
Modelo das principais interaes postuladas
para a modelagem do somito. (A) Sonic hed- circundam as vrtebras permitindo que as costas se curvem (Chevallier et al., 1977;
gehog da notocorda e placa do assoalho induz Christ et al., 1977). Dessa maneira, os somitos so essenciais para a formao das
formao do esclertomo; Wnt do tubo neural costas de nosso corpo: as vrtebras que circundam a espinha dorsal, os msculos e
induz a regio do mitomo que forma muscu- o tecido conectivo que seguram as junes vertebrais, a subcamada drmica da pele
latura apaxial, e a combinao da protena Wnt
das costas, e a musculatura das costas. E o que acontece com a notocorda, aquela
da epiderme e BMP4 (e talvez FGF5) do me-
soderma da placa lateral induz a poro do
estrutura mesodrmica central? Aps ter fornecido a integridade axial do embrio
mitomo que d origem aos msculos da pare- precoce, e induzido a formao do tubo neural dorsal, a maior parte degenera. Em
de corporal. Neurotrofina 3 do tubo neural pode qualquer lugar onde as clulas do esclertomo formaram o corpo vertebral, as clu-
causar a diferenciao das clulas do derma- las da notocorda morrem. No entanto, entre as vrtebras, as clulas da notocorda
mitomo. (B) diferentes fatores de transcrio formam o tecido dos discos intervertebrais, chamados ncleos pulposos. Esses so
nas diferentes regies do somito anunciam o os discos que se deslocam em certos tipos de leses nas costas.
destino celular. As clulas do esclertomo ex- A especificao do somito completada pela interao de diversos tecidos que
pressam Pax1, enquanto as clulas medianas formam o seu ambiente. A poro mediana-ventral do somito induzida a se tornar
do dermamitomo expressam a protena
esclertomo por fatores, especialmente pela protena Sonic hedgehog, secretada
miognica Myf5. As clulas laterais do derma-
mitomo expressam o fator de transcrio
pela notocorda e pela placa do assoalho do tubo neural (Fan e Tessier-Lavigne,
miognico o MyoD assim como o receptor c- 1994; Johnson et al., 1994). Se pores da notocorda (ou outra fonte de Sonic
met para o fator de espalhamento. A poro hedgehog) forem transplantadas prximas a outras regies do somito, essas regi-
central do dermamitomo torna-se a derme e es, tambm, se tornaro clulas do esclertomo. Essas clulas expressam um novo
expressa Pax3. (Segundo Cossu et al., 1996b.) fator de transcrio, Pax1, que ativa genes especficos da cartilagem e cuja presena
necessria para a formao das vrtebras (Figura 9.6; Smith e Tuan, 1996). Elas
tambm expressam I-mf, um inibidor da famlia de fatores de transcrio MyoD que
d incio formao muscular (Chen et al., 1996). Por caminhos similares, o mitomo
induzido por dois sinais distintos. As clulas musculares epaxiais (que circundam
o eixo do corpo) vm da poro medial do somito e so induzidas por fatores do tubo
neural dorsal, provavelmente membros da famlia Wnt (Mnsterberg et al., 1995;
Stern et al., 1995). Os msculos hipaxiais (que so formados pela poro medial do
somito e formam a musculatura dos membros e parede do corpo) so provavelmente
induzidos atravs da combinao de protenas Wnt procedentes da epiderme e da
protena-4 morfogentica do osso, (BMP4) da placa lateral do mesoderma (Cossu et
al., 1996a; Pourqui et al., 1996). Esses fatores levam as clulas do mitomo a expres-
sarem fatores de transcrio particulares (MyoD e Myf5) que ativam os genes espe-
cficos do msculo. O dermtomo se diferencia em resposta a outro fator secretado
pelo tubo neural, neurotrofina 3 (NT-3). Anticorpos que bloqueiam as atividades da
NT-3 previnem a converso do dermtomo epitelial em mesnquima drmico solto

que migra por baixo da epiderme (Brill et al., 1995). Alm desses sinais positivos,
existem pelo menos dois outros conjuntos de protenas necessrias para a padroni-
zao do somito em suas regies particulares. Um desses fatores previne a ativao
de um grupo de clulas pelas protenas inapropriadas. Por exemplo, o sinal BMP4 do
mesoderma da placa lateral neutralizado por um fator do tubo neural que previne
nveis reduzidos de BMP4 de agir em mais clulas mediais. O outro conjunto de
protenas necessrio para a manuteno do padro da expresso do gene iniciada
pelo sinal original (Pownall et al., 1996). [mesend1.html]
Miognese: Diferenciao do Msculo Esqueltico
A clula do msculo esqueltico extremamente grande, clula alongada que con-

tm muitos ncleos. Em meados da dcada de 1960, biologistas do desenvolvimento
debateram se cada um dessas clulas (freqentemente chamadas de miotubos) era
derivada de uma fuso de diversas clulas precursoras musculares mononucleadas
(mioblastos) ou de um nico mioblasto que sofre diviso nuclear sem citocinese.
Evidncia da fuso de mioblastos esquelticos para a formao de miotubos
multinucleados vem de duas fontes independentes. A evidncia crucial para a fuso
do mioblasto esqueltico veio de camundongos quimricos. Esses camundongos
podem ser formados pela fuso de dois embries precoces, que se ajustam para
produzir um nico camundongo contendo duas populaes de clulas distintas
(veja Figura 5.28). Mintz e Baker (1967) fundiram embries de camundongos que
produziam diferentes tipos da enzima isocitrato desidrogenase. Essa enzima, encon-
trada em todas as clulas, composta de duas subunidades idnticas. Dessa manei-
ra, se miotubos so formados de uma clula cujo ncleo se divide sem citocinese,
esperava-se encontrar duas formas distintas de enzimas, isto , as duas formas
parentais no camundongo alofnico (Figura 9.7). Mas se os miotubos so formados
pela fuso entre as clulas, a expectativa seria de se encontrar clulas musculares
expressando no somente os dois tipos parentais de enzimas (AA e BB), mas tam-
bm uma terceira classe composta de uma subunidade procedente de cada tipo
parental (AB). As formas diferentes de isocitrato desidrogenase podem ser separa-
das e identificadas pela sua mobilidade eletrofortica. Os resultados demonstraram
claramente que apesar dos dois tipos parentais estarem presentes em todos os
outros tecidos do camundongo alofnico, a enzima hbrida (AB) estava presente em
extratos de tecido muscular esqueltico. Dessa maneira, os miotubos devem ter se
formado pela fuso de inmeros mioblastos.
Essa evidncia foi importante para mostrar que a fuso do mioblasto realmente
ocorreu dentro do embrio. A anlise de como essa fuso acontece foi baseada em
eventos de fuso ocorridos em cultura. Konigsberg (1963) descobriu que mioblastos
isolados de embries de pinto proliferariam em placas de Petri revestidas com col-
geno. Aps aproximadamente dois dias, no entanto, esses mioblastos pararam de se
dividir e comearam a se fundir com seus vizinhos para produzir extensos miotubos
sintetizantes de protenas especficas do msculo. A sntese de DNA e a diviso
nuclear no foram encontradas em miotubos multinucleados. Esse processo de fu-
so uma complexa orquestrao de eventos bioqumicos na superfcie da clula
mioblasto. A primeira etapa parece ser a retirada das clulas do ciclo da primeira
diviso. Enquanto existir fatores de crescimento no meio (particularmente fatores de
crescimento do fibroblasto), o mioblasto vai proliferar sem se diferenciar. Quando
esses fatores so exauridos, o mioblasto cessa de se dividir, secreta fibronectina
para sua matriz extracelular, fixando-se a essa atravs da sua integrina 51 , o
principal receptor de fibronectina (Menko e Boettiger, 1987; Boettiger et al., 1995).
Se essa adeso bloqueada, no resulta desenvolvimento muscular adicional al-
gum, e parece que o sinal da ligao integrina-fibronectina decisivo para iniciar a
diferenciao do mioblasto em clula muscular (Figura 9.8). A segunda etapa o
(A) Modelo de diviso (B) Modelo de fuso
Mioblastos
Msculo
Homogenize e coloque
Msculo na origem de uma
placa de eletroforese
Miotubos
Enzimas de isocitrato
desidrogenase vistas
por eletroforese Enzima hbrida
formada
Origem Origem
AA AA
AB
BB BB
Gentipo AA Polipeptdeo A Enzima AA

Gentipo BB Polipeptdeo B Enzima BB
Enzima AB
Figura 9.7
Os dois mecanismos possveis da formao do msculo esqueltico, e como distingu-los. Ca-
mundongos quimricos so produzidos da fuso de embries de duas raas diferentes de camun-
dongos, cada uma produzindo uma forma diferente da enzima isocitrato desidrogenase. Essa
enzima composta de duas subunidades; uma raa produz isocitrato desidrogenase AA (indicada
em negro) e a outra produz BB (colorida). (A) Se as enzimas forem produzidas em uma nica
clula ou em clulas multinucleadas surgindo de divises nucleares dentro de uma nica clula, a
enzima ser puramente AA ou BB. (B) Se houver dois diferentes ncleos em uma mesma clula,
porm, um poder codificar para subunidades B enquanto o outro poder codificar para A, com
o resultado de que algumas molculas da enzima sero hbridas (AB). Por eletroforese pode-se
separar esses trs tipos de molculas. A presena de molculas AB no msculo esqueltico (mas
no em outro tipos de clulas) confirma o modelo de fuso. (Segundo Mintz e Bakerr, 1967.)
alinhamento dos mioblastos em cadeias. Essa etapa mediada por glicoprotenas

das membranas celulares, incluindo diversas caderinas e CAMs (Knudsen,1985:
Knudsen et al., 1990). O reconhecimento e alinhamento entre clulas acontece
somente se as duas clulas forem mioblastos. A fuso pode acontecer mesmo
Figura 9.8 entre os mioblastos de rato e galinha (Yaffe e Feldman,1965); as identidades das
Auto-radiografia mostrando sntese de DNA espcies no so cruciais em cultura.
em mioblastos e sada de clulas em fuso do A terceira etapa consiste no prprio evento da fuso celular. Como na maioria
ciclo celular. Fosfolipase C pode congelar das fuses de membranas, ons de clcio so cruciais, e a fuso pode ser ativada
os mioblastos aps eles terem se alinhado com pelos ionforos de clcio tais como A23187, que transporta ons de clcio atravs
outros mioblastos, mas antes da fuso das das membranas celulares (Shainberg et al., 1969; David et al., 1981). A fuso parece
membranas. Esses mioblastos cultivados fo- ser mediada por um conjunto de metaloproteinases chamadas meltrinas. Essas pro-
ram tratados com fosfolipase C e expostos
tenas foram descobertas durante uma pesquisa para se encontrar protenas de
timidina radioativa. Mioblastos no fixados
ainda se dividem e incorporam a timidina ra-
mioblastos que poderiam ser homlogas fertilina, uma protena envolvida na fuso
dioativa em seu DNA. Clulas alinhadas (mas vulo-espermatozide. Yagami-Hiromasa e colegas (1995) descobriram que uma des-
ainda no fundidas) (setas) no incorporam o sas meltrinas (meltrina-) expressa em mioblastos aproximadamente ao mesmo
marcador. (de Nameroff e Munar, 1976, cor- tempo em que comea a fuso, e que o RNA antisenso para a mensagem meltrina-
tesia de M. Nameroff.) inibiu a fuso quando adicionado aos mioblastos.
& Especulaes
Construo Muscular e a Famlia MyoD

de Reguladores Transcricionais
C omo uma clula mesenquimatosa Protenas especficas do msculo

embrionria instruda a formar (desmina, cadeias pesadas de miosina)
uma clula muscular em lugar de
uma clula da cartilagem, um fibroblasto Gene MyoD
ou uma clula adiposa? Quais molculas Neuroblastos,
comprometem seu destino para uma linha- clulas
gordurosas,
gem e no para outra? Em 1986, Lassar e
fibroblastos
colaboradores tomaram DNA de clulas Promotor viral ativo
mioblastos e o transfectaram em um certo
tipo de clula embrionria de camundon- Ncleo
1
go, a clula C3H10T 2 . Essa clula tem um
aspecto semelhante ao do fibroblasto, mas Receptores especficos do msculo
Miotubo
parece mesnquima primitivo, pois pode e molculas de membrana
Figura 9.9
se tornar clula adiposa, uma clula mus- Sumrio de vrios experimentos em que o gene MyoD foi ativado por um promotor viral e
cular ou cartilagem. Quando DNA do ms- transfectado para clulas no musculares. A protena MyoD parece no levar em conta os
culo foi adicionado a essas clulas, as clu- reguladores originais do fentipo celular, convertendo as clulas em msculos.
1
las C3H10T 2 foram transformadas em c-
lulas musculares. DNA isolado de fibro- a protena MyoD parece ativar diretamente 10). A transfeco de qualquer desses ge-
blastos ou de outros tipos celulares no o gene da fosfoquinase da creatina espe- nes miognicos para um extenso espectro
pode efetuar essa converso. Atravs de cfica do msculo, ligando-se ao DNA de clulas em cultura tambm as converte
clonagem de subtrao (veja Captulo 2), imediatamente superior aquele (Lassar et em msculo. A expresso de MyoD leva
foi encontrado um mRNA especfico do al., 1989). De maneira semelhante, h dois expresso da miogenina, e a transfeco dos
mioblasto que tambm podia efetuar essa stios ligantes de MyoD no DNA adja- genes da miogenina ativa a expresso de
mudana em um fentipo diferenciado. O cente uma subunidade do gene do re- MyoD. Assim, h um enlace de retroalimen-
mRNA mioblasto codificava uma protena ceptor da acetilcolina do msculo da gali- tao recproca positiva que faz com que
chamada protena 1 de determinao do nha (Piette et al., 1990). Ele tambm ativa a quando miogenina ou MyoD ativado, tam-
mioblasto ou, mais comumente, MyoD si prprio diretamente. Uma vez que o gene bm o o outro gene (Thayer et al., 1989).
(Davis et al., 1987). O gene MyoD somente MyoD est ligado, seu produto protico No pinto, MyoD ativado em clulas
expresso em clulas das linhagens muscu- liga-se ao DNA imediatamente a montan- somticas que geram a musculatura abdo-
lares. Parece ser um gene comutador-mor te do gene MyoD e o impede de ser desli- minal e dos membros, enquanto myf5 ati-
pois pode converter outros tipos celulares gado (Thayer et al., 1989). Em outros ca- vado em clulas produzindo os msculos
em msculo se esse gene nelas for ativo. sos, os efeitos de MyoD podem ser indi- do dorso. Em ambos os casos, essa ativa-
Essa hiptese foi testada clonando o gene retos. Nem todos os genes envolvidos na o compromete as clulas somticas li-
MyoD em um vetor viral de modo a mant- produo do fentipo muscular podem ser nhagem miognica. Ambos grupos celula-
lo sob o controle de um promotor viral ativados diretamente pela protena MyoD. res expressam miogenina e MRF4 para
constitutivamente ativo (estava sempre li- MyoD provavelmente atua indiretamente produzir seus miotubos e miofibras (Figu-
gado). Quando esse gene de fuso MyoD ativando outros genes reguladores, que ra 9.10; Lyons e Buckingham, 1992; Pownall
foi transfectado em vrias clulas, clulas em seguida ativam os genes estruturais e Emerson, 1992a,b; Braun e Arnold, 1996;
pigmentadas, clulas nervosas, clulas especficos do msculo. Cossu et al., 1996a).
adiposas, fibroblastos e clulas do fgado, MyoD no o nico gene comutador Em alguns casos, esses fatores de
foram convertidas em clulas semelhantes de msculo. H uma famlia de protenas transcrio miognica podem compensar
s musculares (Figura 9.9; Weintraub et al., semelhantes MyoD que tem estruturas para a perda de um ou de outro. Usando
1989). Assim, MyoD parece ser suficiente muito semelhantes e parecem ser capazes uma tcnica de alvejar genes (veja Cap-
para ativar os genes especficos do mscu- de substituir extensamente uma a outra. Essa tulo 2), Rudnicki e colegas (1992) mostra-
lo que compem o fentipo muscular. famlia (algumas vezes chamada a famlia ram que Myf5 e MyoD podem realizar as
MyoD codifica uma protena nuclear MyoD ou protenas miognicas bHLH) mesmas funes. Quando camundongos
ligante de DNA que pode se ligar a regi- inclui miogenina, Myf5 e MRF4; essas pro- carecem de ambos genes MyoD, a expres-
es do DNA adjacentes aos genes espec- tenas parecem ligar-se a stios semelhan- so do gene myf5 assume o controle. Os
ficos do msculo, e ativ-los. Por exemplo, tes no DNA (a ser discutido no Captulo camundongos resultantes tm desenvol-
(A)
Myf5
ou
MyoD Miogenina MRF4
Clula no somito Mioblasto Miotubo Miofibra
Mesoderma Paraxial Tubo neural Dermtomo Mitomo
(B) Clulas do sangue Notocorda (C)

Figura 9.10
Comprometimento e diferenciao muscular mediada pela famlia MyoD de fatores de transcrio. (A) Papis
postulados para protenas miognicas durante a formao do msculo esqueltico no camundongo. (B)
Hibridizao in situ indicando a ausncia do mRNA myf5 no mesoderma paraxial no segmentado do
embrio. O lado esquerdo mostra fotografia sob o microscpio ptico da rea. (C) Hibridizao in situ
mostrando a presena do mRNA myf5 no mitomo do somito embrionrio do camundongo. (A segundo
Rudnicki et al., 1993; fotografias cortesia de G. Lyons.)
vimento muscular normal. Quando os ca- tos na formao de suas clulas muscula- al., 1995). O segundo mecanismo envolve
mundongos carecem de seus genes myf5, res (Hasty et al., 1993; Nabeshima et al., a sub-regulao de seus receptores para
eles tambm tm desenvolvimento mus- 1993). Os somitos se formaram normal- o fator de crescimento. Um dos principais
cular normal. Porm, a ausncia da prote- mente e foram compartimentalizados em fatores de crescimento que promove a di-
na Myf5 atrasa em vrios dias a formao mitomo, esclertomo e dermtomo, mas viso das clulas mioblastos o fator de
do mitomo, causando falha no desen- os mioblastos deixaram de se diferenciar crescimento fibroblstico bsico. O FGF2
volvimento adequado da poro lateral do em miofibras (Venuti et al, 1995). promove diviso da clula mioblasto, ao
esclertomo. Embora esses camundongos MyoD e seus parentes parecem ser cr- mesmo tempo que inibe a diferenciao
tenham msculos normais, suas caixas ticos para a remoo de mioblastos do cido mioblasto suprimindo a transcrio de
torcicas esto distorcidas e eles so in- clo celular. Conforme j mencionado, MyoD e myogenina (Vaidya et al., 1989;
capazes de respirar (Braun et al., 1992). mioblastos em diviso no se diferenciam. Brunetti e Goldfine, 1990). Os receptores
Experimentos recentes no laboratrio de Essa distino entre diviso e diferencia- FGF so perdidos quando o mioblasto se
Rudolf Jaenisch (Rudnicki et al., 1993) o caracterstica de vrios tipos celula- diferencia em uma clula muscular (Olwin
mostram que quando os genes myf5 e res derivados de populaes de clulas e Hauschka, 1988; Moore et al., 1990).
MyoD esto ambos ausentes do embrio, germinativas (Bischoff e Holtzer, 1969; Como so ativadas as protenas da fa-
no se formam msculos e costelas.* En- Holtzer et al., 1975). Parece haver duas mlia MyoD? Novos experimentos forne-
quanto MyoD e Myf5 podem substituir maneiras pelas quais o mioblasto se retira ceram as bases para algumas fascinantes
uma a outra, no parece haver redundn- do ciclo celular. O primeiro mecanismo especulaes. George-Weinstein e seus
cia nas funes da miogenina. Camun- inibir o caminho da diviso celular. Para colegas (1996) demonstraram que quan-
dongos homozigotos para uma mutao isso, a protena MyoD induz a expresso do epiblastos de galinha so isolados do
alvejada no gene myogenina morrem logo de p21, um inibidor de quinases depen- resto da gstrula e separados em clulas
aps o nascimento por causa dos defei- dentes de ciclina (Figura 9.11; Halevy et individuais, essas clulas epiblastos se
tornam msculo. Alm disso, os pesqui-
*Isso significa que existe alguma redundncia no desenvolvimento dos msculos esquelticos. sadores acharam que o mRNA de MyoD
Tal redundncia j do conhecimento dos embriologistas h longa data (Spemann, 1938), mas os
(e talvez a protena) est presente nessas
geneticistas a esto redescobrindo (para sua consternao, j que confunde a interpretao de tais
experimentos). Gould (1990) considera a redundncia desenvolvimental essencial para evoluo clulas. Parece que clulas epiblastos tm
ocorrer, j que um dos scios redundantes fica livre para conseguir uma nova funo enquanto o a capacidade preferencial de ficarem
outro scio mantm a funo original. comprometidas com os mioblastos, e que
(A) Figura 9.11 ce, mas em seguida se torna especifica-

Proliferao Diferenciao Comutao entre proliferao e diferenciao. mente ausente no mitomo (Spicer et al.,
(A) Condies favorecendo proliferao (como 1996). possvel que MyoD e outras pro-
quando h abundncia de fatores de crescimen-
tenas bHLH miognicas j estejam pre-
Ciclina D1 MyoD to de fibroblastos no meio) favorecem a conti-
nuada expresso da quinase 4 dependente de sentes nas clulas epioblastos mas que
Cdk4 ciclina. Essa quinase capaz de reprimir a estejam proibidas de funcionar at que a
expresso de MyoD. (B) Reciprocamente, uma protena twist fique sub-regulada. Essa
p21 vez formada, o MyoD pode suprimir cdk4 sub-regulao pode possivelmente vir
Ativao atravs das ativao da protena p21. Dessa como um resultado da secreo da prote-
Inibio
maneira, as clulas em diviso no se diferen- na Wnt (pela epiderme ou tubo neural), que
ciaro e as clulas diferenciadas no se dividi-
poderia anular um efeito inibitrio media-
ro. (Segundo Halevy et al., 1995.)
do por Notch1.
(B)
somente suas interaes com outros Alm das protenas bHLH, outro fator
Proliferao Diferenciao tipos de clulas que as previnem de se de transcrio, MEF2A, parece ser de im-
tornarem msculos. Nesse caso, os fato- portncia para o desenvolvimento muscu-
res que promovem a miognese (como as lar esqueltico. MEF2A tambm induz fibro-
Ciclina D1 MyoD
protenas Wnt) podem faz-lo atravs da blastos a se tornarem msculos, e parece
Cdk4 represso dos inibidores. Um desses ini- cooperar com MyoD nos intensificadores
bidores pode ser a protena Twist. Essa de genes especficos do msculo. Kaushal
p21 protena um ligante de DNA muito pare- e colegas (1994) especulam que MEF2A for-
cido com MyoD. Porm, ela parece inibir nece especificidade adicional para a adeso
MyoD e outras protenas ligadas aos pro- do MyoD de tal forma que MyoD no ative
motores de seus genes-alvo especficos inadvertidamente genes no musculares
do msculo. O gene twist est original- que possuam seqncias de regulao ca-
mente presente em todo o somito preco- pazes de ligar protenas bHLH.
Osteognese: O Desenvolvimento dos Ossos
Algumas das estruturas mais bvias que derivam do mesoderma somtico so os

ossos. Neste captulo descreveremos em linhas gerais os mecanismos da formao
dos ossos, e estudantes que gostariam de obter maiores detalhes podem faz-lo ao
consultar livros de histologia os quais dedicam captulos inteiros a esse tema. Existem
trs linhagens que geram o esqueleto. O esclertomo gera o esqueleto axial, o mesoderma
da placa lateral gera o esqueleto dos membros, e a crista neural craniana d origem ao
arco branquial e os ossos craniofaciais e a cartilagem.* Existem dois modos principais
de formao dos ossos, ou osteognese, e ambos envolvem a transformao de um
tecido mesenquimatoso prexistente no tecido sseo. A converso direta do tecido
mesenquimatoso em osso chamada de ossificao intramembranosa. Isso ocorre
primeiramente nos ossos do crnio. Em outros casos, as clulas mesenquimatosas se
diferenciam em cartilagem, e essa cartilagem posteriormente reposta pelo osso. Esse
processo pelo qual uma cartilagem intermediria resposta por clulas sseas cha-
mada de ossificao endocondral.
OSSIFICAO INTRAMEMBRANOSA. Ossificao intramembranosa o meio ca-

racterstico pelo qual so formados os ossos chatos do crnio. Clulas mesenquima-
tosas derivadas da crista neural interagem com a matriz extracelular das clulas epiteliais
da cabea para formar o osso. Se as clulas mesenquimatosas no contatam essa
matriz, no ser formado osso algum (Tyler e Hall, 1977; Hall, 1988). Isso foi demons-
trado in vitro por Hall e colegas (1983), que isolaram clulas mesenquimatosas da
* O desenvolvimento da cartilagem craniofacial foi discutido no Captulo 7 e ser revisado no

Captulo 23; o desenvolvimento dos membros ser detalhado no Captulo 18.
Figura 9.12 Espculas do

Diagrama esquemtico da ossificao mem- Matriz Osso Clula ssea osso parietal
branosa. (A) Clulas mesenquimatosas, pro- Osteoblastos osteide calcificado (ostecito)
vavelmente derivadas da crista neural, se con-
densam para produzir osteoblastos, que de- Espculas do
osso frontal
positam matriz osteide. Esses osteoblastos
ficam enfileirados ao longo da regio
calcificada da matriz. Osteoblastos aprisiona-
dos dentro da matriz ssea tornam-se
ostecitos. (B) Espalhamento de espculas
sseas do local da ossificao primria nos
ossos chatos do crnio de um embrio huma-
no de trs meses. Os ossos mostrados em
negro so formados por ossificao endocon-
dral. (Segundo Langman, 1981.) (A) Mesnquima frouxo Osteoblastos (B)
cabea e as colocaram em placas de cultura. Se nenhuma matriz extracelular estiver

presente na superfcie dessas placas, as clulas permanecem mesenquimatosas. No
entanto, se clulas epiteliais da cabea tivessem secretado primeiro uma matriz extra-
celular na superfcie, as clulas se diferenciariam em clulas sseas.
Os mecanismos responsveis pela converso de clulas mesenquimatosas em
clulas sseas ainda desconhecido, mas evidncias recentes apontam para um gru-
po de molculas em particular na juno epitlio-mesnquima. Protenas
morfogenticas do osso podem ser isoladas do osso adulto e injetadas em msculo
embrionrio ou tecidos conjuntivos. Quando isso realizado, a cartilagem se desen-
volve das clulas dentro desses tecidos e posteriormente substituda pelas clulas
sseas (Syftestad and Caplan, 1984; Urist et al., 1984; veja Captulo 17).
Durante a osssificao intramembranosa, as clulas mesenquimatosas se prolife-
ram e se condensam em nodos compactos. Algumas dessas clulas se desenvolvem
em capilares, outras mudam sua forma para se tornar osteoblastos, clulas capazes de
secretar a matriz ssea. A matriz colgeno-proteoglicana secretada capaz de aglome-
rar sais de clcio, levados para essa regio atravs dos capilares. Desse modo, a matriz
se torna calcificada. Na maioria dos casos, os osteoblastos so separados da regio
de calcificao por uma camada de matriz pr-ssea (osteide) secretada por eles.
Ocasionalmente, esses osteoblastos ficam presos na matriz calcificada e se tornam
ostecitos - clulas sseas. Com a continuidade da calcificao, as espculas sseas
se irradiam para fora do centro, que onde comeou a ossificao (Figura 9.12).
Ademais, a regio inteira de espculas calcificadas fica rodeada por clulas mesenqui-
matosas compactas que formam o peristeo. As clulas da parte interna do peristeo
tambm se tornam osteoblastos e depositam matriz ssea em paralelo com quela das
espculas j existentes. Dessa maneira, muitas camadas de osso so formadas.
OSSIFICAO ENDOCONDRAL. Ossificao endocondral envolve a formao de

tecido cartilaginoso de clulas mesenquimatosas agregadas e a subseqente reposi-
o desse tecido por osso (Horton, 1990). O tecido cartilaginoso um modelo para o
osso que o sucede. Os componentes esquelticos da coluna vertebral, a plvis, e as
extremidades so primeiramente formados de cartilagem e posteriormente mudados
para osso. Esse processo notvel coordena a condrognese (produo de cartilagem)
com a osteognese (crescimento do osso); os elementos esquelticos esto simulta-
neamente suportando uma carga, crescendo em largura e respondendo a estresses
locais. As clulas que formam tecidos cartilaginosos expressam Scleraxis, um fator de
transcrio ao qual atribuda a ativao de genes especficos da cartilagem (veja
Figura 9.13; Pgina de rosto; Cserjesi et al., 1995). Dessa maneira, a Scleraxis expres-
sa nos esclertomos, no mesnquima facial que forma os precursores cartilaginosos
Figura 9.13
Localizao da mensagem da scleraxis nos
locais de formao dos condrcitos. (A) Ex-
presso de scleraxis em somitos de um em-
brio de camundongo de 12,5 dias. Essa seo
foi cortada tangencialmente, e o tubo neural
corre ao longo do eixo ntero-posterior. (B)
Seo atravs de um embrio de camundongo
de 11,5 dias onde transcries de scleraxis so
vistas na cartilagem condensada do nariz e face
e nos precursores dos membros e costelas. (Se-
gundo Cserjesi et al., 1995; fotografias corte-
sia do Dr. E. Olson.)
(A) (B)
do osso e no mesnquima do membro. Essa protena se mantm ativa at a cartilagem

comear a ser substituda por tecido sseo. [mesend2.html]
A formao da cartilagem pode ser dividida em trs fases: proliferao do
mesnquima, condensao do mesnquima pr-cartilaginoso e diferenciao do
condrcito. A condrognese iniciada quando as clulas mesenquimatosas dividi-
das da pr-cartilagem comeam a expressar protenas da matriz extracelular causan-
do-as a se condensarem em ndulos. A N-caderina parece ser importante na inicia-
o dessas condensaes, e N-CAM tambm aparenta ser essencial para mant-las
nessa situao (Oberlender e Tuan, 1994; Hall e Miyake, 1995). Uma vez condensadas,
as clulas se tornam condrcitos e comeam a secretar proteoglicanos e colgenos
especficos do condrcito.*
Em humanos, os ossos longos dos brotos dos membros embrionrios se formam
de clulas mesenquimatosas que formam ndulos nessa regio que iro se transfor-
mar em ossos. Essas clulas se tornam condrcitos, e secretam a matriz extracelular da
cartilagem. As clulas mesenquimatosas em sua volta se tornam o peristeo (Figura
* Mutaes que afetam a formao de ndulos freqentemente causam anomalias nos membros.
Nas galinhas, as mutaes talpid so caracterizadas pela duplicao e fuso dos membros. Isso, por
sua vez, descobriu-se, ter sido causado por condensaes pr-condrognicas anormalmente grandes.
Esses grandes ndulos so causados pelo excesso de adesividade das clulas mesenquimatosas nessas
condensaes, e foi diretamente ligado a uma super expresso de N-CAM (Ede 1983; Chuong et al.,
1993). Em humanos, o gene SOX9 expresso por condensaes pr-cartilaginosas, e isso codifica
uma protena ligante de DNA. As mutaes do gene SOX9 causa displasia camptomelica, uma
doena rara do desenvolvimento esqueltico, causando uma srie de deformidades nos ossos do
corpo. A maioria dos bebs afetados morrem de parada respiratria devido a m-formao das
cartilagens traqueobronquiais e das costelas. (Wright et al., 1995).
Cartilagem epifisria
Osteoblastos
Mesnquima Cartilagem Condrcitos (osso) Vasos Condrcitos
hipertrficos sangneos proliferando
Placa de
cresci-
mento
Medula
ssea
Osso
Placa de
cresci-
(A) (B) (C) (D) (E) (F) mento
Figura 9.14 (G)

Diagrama esquemtico da ossificao endocon-
dral. (A,B) Clulas mesenquimatosas se con- Centro de
densam em ndulos cartilaginosos que formam (H)
ossificao
o modelo do osso. (C) Condrcitos no centro secundria
da haste sofrem hipertrofia e alteram sua matriz
extracelular, permitindo a entrada de vasos
sangneos. (D,E) Vasos sangneos trazem
osteoblastos que se ligam matriz cartilaginosa
em degenerao e deposita matriz ssea. (F-H) 9.14). Logo aps o modelo cartilaginoso ser formado, as clulas na parte central do
Formao das placas de crescimento epipifisrio
modelo se tornam dramaticamente maiores e comeam a secretar um tipo diferente de
pelos condrcitos, que se proliferam antes de
hipertrofiar. Centros secundrios de ossificao
matriz, que contm tipos diferentes de colgeno, mais fibronectina e menos inibidor de
tambm se formam quando vasos sangneos protease. Essas clulas so os condrcitos hipertrficos. A sua matriz mais suscep-
penetram perto das extremidades do osso. (Se- tvel invaso pelas clulas de vasos sangneos do peristeo. Um capilar do peristeo
gundo Horton, 1990.) invade, em seguida, o centro da haste da cartilagem previamente avascular. Com a
degradao da matriz da cartilagem, as clulas da cartilagem hipertrfica morrem, e
osteoblastos (clulas formadoras de ossos), transportados pelos vasos sangneos,
comeam a secretar matriz ssea sobre a cartilagem parcialmente degradada (Hattori et
al.,1995). Finalmente toda a cartilagem substituda por osso.
Como o centro do modelo da cartilagem convertido em osso, formada uma
frente de ossificao entre o osso recm-sintetizado e o restante da cartilagem. O lado
da cartilagem dessa frente contm a cartilagem hipertrfica que prepara a haste para a
invaso pelos vasos sangneos, e o lado do osso contm as clulas osteoblsticas
depositando a matriz ssea. Essa frente se espalha de dentro para fora em ambas as
direes a partir do centro, enquanto mais cartilagem se transforma em osso. Se isso
fosse tudo, no entanto, no existiria crescimento, e nossos ossos seriam somente do
tamanho do modelo cartilaginoso original. Porm, com a frente de ossificao se apro-
ximando dos finais do modelo cartilaginoso, os condrcitos prximos frente de
ossificao se proliferam antes de sofrer hipertrofia. Isso estica a parte final cartilaginosa
do osso, fornecendo uma fonte para nova cartilagem. Essas regies cartilaginosas no
final dos ossos longos so chamadas placas de crescimento epifisrio. Essas placas
contm trs regies: uma regio de proliferao de condrcitos, uma regio de
condrcitos maduros, e uma regio de condrcitos hipertrofiados (Figura 9.15; Chen
et al.,1995). Como essa cartilagem se hipertrofia e a frente de ossificao se estende
mais adiante, a cartilagem remanescente na placa epifisria se prolifera. Essa cartila-
gem forma a rea de crescimento do osso. Dessa maneira, o osso se mantm em
crescimento pela produo de novas clulas cartilaginosas que sofrem hipertrofia,
permitindo aos vasos sangneos entrarem, e morrem medida que a matriz ssea
(B) (C)
Cartilagem
de reserva
Clulas
cartilaginosas
em proliferao
Zona de
(A)
condrcitos
maduros
Hipertrofia e
calcificao das
clulas
cartilaginosas
Zona de
degenerao
e ossificao de
cartilagem
Osso calcificado
Figura 9.15
Proliferao de clulas na placa epifisria em
resposta ao hormnio de crescimento. (A) Re-
depositada. Enquanto as placas de crescimento epifisrio forem capazes de produzir gio cartilaginosa em um rato jovem tornado
condrcitos o osso continua a crescer. deficiente em hormnio de crescimento pela
As placas de clulas de crescimento epifisrio so muito sensveis a hormnios, e remoo de sua hipfise. (B) A mesma regio
sua proliferao estimulada pelo hormnio de crescimento e fatores de crescimento no rato aps injeo de hormnio de cresci-
semelhantes insulina. Nilsson e colegas (1986) mostraram recentemente que mento. (C) Cartilagem corada em regies parti-
hormnios de crescimento estimulam a produo do fator I de crescimento semelhan- culares da placa de crescimento. (Fotografias
te insulina (IGF-I) nesses condrcitos e que esses condrcitos respondem a isso de I. Gersh, de Bloom e Fawcett, 1975: C de
Chen et al., 1995; cortesia de P. Goetinck.)
proliferando-se. Quando eles adicionaram hormnio de crescimento placa de cresci-
mento da tbia de um camundongo jovem (que no conseguia fabricar o seu prprio
hormnio de crescimento porque suas hipfises haviam sido removidas), os hormnios
de crescimento estimularam a formao de IGF-I dos condrcitos na zona proliferativa
(veja Figura 9.15). A combinao de hormnios de crescimento e IGF-I parece fornecer
um sinal mittico extremamente forte. Os pigmeus da floresta Ituri, no Zaire, tm nveis
normais de hormnios de crescimento e IGF-I at a puberdade. No entanto, na puber-
dade, os nveis de IGF-I nos pigmeus caem para aproximadamente um tero em compa-
rao com os de outros adolescentes. Parece que IGF-I essencial para uma arrancada
normal no crescimento durante a puberdade (Merimee et al., 1987). Hormnios tambm
so responsveis pela interrupo no crescimento. No final da puberdade, nveis eleva-
dos de estrgeno e testosterona fazem com que a cartilagem remanescente da placa
epifisria sofra hipertrofia. Essas clulas cartilaginosas crescem, morrem e so substitu-
das por ossos. Sem alguma cartilagem adicional, o crescimento desses ossos cessa.
A reposio de condrcitos por osteoblastos parece depender da mineralizao
da matriz extracelular. Em embries de galinha, a fonte de clcio o carbonato de
clcio da casca do ovo, e durante o seu desenvolvimento, o sistema circulatrio da
galinha transloca aproximadamente 120 mg de clcio da casca do ovo para o esque-
leto (Tuan, 1987). Quando embries de galinha so removidos de suas cascas no
terceiro dia e crescem em cultura sem a casca (em envelopes plsticos) durante o
restante do seu desenvolvimento, muito do esqueleto cartilaginoso deficiente em
clcio no se desenvolve em tecido sseo (Figura 9.16; Tuan e Lynch, 1983). Nos
mamferos, o clcio transferido atravs da placenta e depositado na matriz pelos
Figura 9.16
Mineralizao esqueltica em um embrio de
pinto de 17 dias que se desenvolve (A) em
uma cultura sem casca e (B) dentro da casca
durante a incubao normal. Os embries fo-
ram fixados e corados com vermelho de
Alizarina par mostrar a matriz calcificada. (de
Tuan e Lynch, 1983, cortesia de R. Tuan.)
(A) (B)
condrcitos. J foi demonstrado que condrcitos hipertrficos mudam a respirao

de aerbica para anaerbica (Brighton e Hunt, 1974; Brighton, 1984), causando uma
diminuio no ATP celular e no emprego de uma via para energia mediada pela
fosfocreatina, tal como a usada em msculos esgotados de oxignio (Shapiro et al.,
1992). Por algum mecanismo ainda desconhecido, imagina-se que essas mudanas
metablicas resultem em depsito de clcio na matriz extracelular, dentro de peque-
nas estruturas limitadas por membranas, conhecidas como vesculas da matriz
(Wuthier, 1982). Isso inicia o processo da calcificao e permite os osteoblastos
aderir e iniciar a formao do osso (Figura 9.17).
medida que novo material sseo adicionado perifericamente da superfcie
interna do peristeo, ocorre uma cavitao na regio interna para formao da cavida-
de da medula ssea. Essa destruio de tecido sseo devida aos osteoclastos,
clulas multinucleadas que adentram o osso atravs dos vasos sangneos (Kahn e
Simmons, 1975; Manolagas e Jilka, 1995). Osteoclastos so provavelmente derivados
dos mesmos precursores que as clulas sangneas, e so responsveis pela dissolu-
o de ambas pores da matriz do osso, a inorgnica e a protena (Ash et al., 1980;
Blair et al., 1986). Os osteoclastos estendem numerosos processos celulares na matriz,
bombeando ons de hidrognio oriundos do osteoclasto para o material em seu redor,
acidificando-o e solubilizando-o (Figura 9.18; Baron et al., 1985, 1986). Os vasos
sangneos tambm importam as clulas formadoras de sangue, que iro residir na
medula pelo resto da vida do organismo.
Clcio na matriz
Condrcitos extracelular
Figura 9.17
Deposio de clcio pelos condrcitos na regio distal da zona hipertrfica. Clcio (corado em
escuro nesta montagem de micrografia eletrnica) colocado na matriz pelas clulas em cresci-
mento. (de Brighton e Hunt, 1974; cortesia de C. T. Brighton.)
Porcentagem do osso solubilizado

45
Ca
[3H] Prolina
(A) (B) (C) Tempo (horas)
Figura 9.18
Atividade osteoclstica na matriz ssea. (A) Micrografia eletrnica da membrana franzida de um
osteoclasto de pinto cultivado em uma matriz ssea reconstituda. (B) Seo da membrana
franzida corada para detectar presena de uma ATPase capaz de transportar ons de hidrognio da
clula. A ATPase est restrita membrana do processo celular. (C) Solubilizao de componentes
inorgnicos e colagenosos da matriz (conforme medido pela liberao de [45Ca] e prolina [3H],
respectivamente) pelos 10.000 osteoclastos incubados sobre fragmentos sseos marcados. (A e
C de Blair et al., 1986; B de Baron et al., 1986, cortesia dos autores.)
& Especulaes
Controle da Condrognese na Placa de Crescimento

D
mutao dominante causada por muta- A matriz extracelular da cartilagem
ESCOBERTAS RECENTES de mu- es na regio transmembrana do recep- tambm crtica para a diferenciao e
taes do desenvolvimento es- tor 3 do fator de crescimento fibroblsti- organizao apropriadas de condrcitos
queltico de seres humanos e murinos for- co (FGFR3). Aproximadamente 95% dos da placa de crescimento. Mutaes que
neceram notveis vises sobre como a di- anes acondroplsicos tm a mesma mu- afetam o colgeno do tipo IV ou a
ferenciao, proliferao e padronizao de tao de FGFR3, uma substituio do par sulfatao de proteoglicanos da cartila-
condrcitos so reguladas. de bases que converte glicina em arginina gem podem causar severas anomalias
na posio 380 na regio transmembrana esquelticas. Camundongos com defici-
Receptores do Fator de Crescimento da protena. Alm disso, mutaes na por- ncia de colgeno de tipo XI morrem ao
Fibroblstico o extracelular da protena FGFR3 ou no nascer com anormalidades nas cartila-
A proliferao das clulas epifisrias das domnio da tirosina quinase intracelular gens dos membros, mandbula, costelas
clulas da placa de crescimento e da carti- resultaram na displasia tanatofrica, uma e traquia (Li et al., 1995). Falncia em
lagem facial pode ser interrompida pela forma letal de nanismo que se parece com adicionar grupos sulfato a glicoproteo-
presena de fatores de crescimento fibro- a acondroplasia homozigota (Figura 9.19; glicanos da cartilagem causa displasia
blstico (Deng et al., 1996; Webster e Bellus et al., 1995; Tavormina et al., 1995). distrfica, um nanismo humano caracte-
Donoghue, 1996). Esses fatores parecem Mutaes em FGFR1 podem causar a sn- rizado por uma severa curvatura da espi-
instruir os precursores da cartilagem de drome de Pfeiffer, caracterizada por de- nha, p torto e lbulos da orelha defor-
se diferenciarem em vez de se dividirem. feitos nos membros e fuso prematura mados (Hstbacka et al., 1994).[cell6.html]
Em humanos, mutaes nos receptores das suturas cranianas (craniosinostose),
para fatores de crescimento de fibroblas- resultando em formas anormais do cr- Receptores de Estrgeno
tos podem fazer com que esses recepto- nio e da face. Mutaes diferentes em Hormnios tambm so conhecidos por ter
res se tornem prematuramente ativados. FGFR2 podem originar vrias anomalias um efeito marcado sobre a epfise humana.
Isso d origem aos principais tipos de nanos membros e/ou face (Park et al., 1995; O surto de crescimento puberal e amadu-
nismo humano. A acondroplasia uma Wilkie et al., 1995). [cell7.html] recimento subseqente da placa epifisria
(A) (B) (C)
Figura 9.19
Displasia ssea humana causada por mutaes (i.e., a converso de clulas em prolifera- ainda possua proliferao de condrcitos
dominantes ativadoras do receptor 3 do fator o para cartilagem madura e osso) so aos 28 anos de idade. Sua idade ssea - a
de crescimento fibroblstico. (A) Displasia induzidas por hormnios sexuais (Kaplan quantidade de cartilagem epifisria que ha-
tanatofrica, uma condio fatal caracterizada e Grumbach, 1990). Em condies de pu- via retido - era aproximadamente a metade
por severo encurtamento das costelas e mem- berdade precoce, existe uma arrancada no de sua idade cronolgica. Descobriu-se que
bros devido cobertura das epfises por tecido crescimento inicial (tornando o indivduo nessa pessoa no estava presente qualquer
sseo. A morte devido a problemas respira- mais alto do que o seu par), seguido pela receptor de estrgeno funcional. Portanto,
trios. (B) Fotografia por raios-X de um infan- interrupo da diviso celular epifisria o estrgeno cumpre um papel na maturao
te nascido com displasia tanatofrica. (C) Se- (permitindo que seu par alcance e ultra- epifisria no sexo masculino tanto quanto
o microscpica mostrando a desorganizao passe o seu peso). No se pensava que, no feminino. Hormnios da tireide e
de uma epfise na displasia tanatofrica. Notar
no sexo masculino, o estrgeno tivesse al- hormnios relacionados paratireide tam-
a ausncia de condrcitos em diviso. (de
guma participao nesses eventos. No en- bm so importantes na regulao da matu-
Gilbert-Barness e Opitz, 1996.)
tanto, em 1994 Smith e colegas relataram o rao e no programa de hipertrofia da placa
caso verdico de um homem cujo cresci- de crescimento epifisrio (Ballock e Reddi,
mento ainda era linear apesar de ter passa- 1994). Dessa forma, crianas com hipotireoi-
do por uma puberdade normal. Suas pla- dismo so susceptveis a desenvolver do-
cas epifisrias no haviam maturado, e ele enas da placa de crescimento.[limb3.html]
Mesoderma da Placa Lateral

Nem todos os mantos mesodrmicos so organizados em somitos. Adjacente ao
mesoderma somtico est a regio mesodrmica intermediria. Essa corda de clu-
las mesodrmicas se desenvolve no tbulo pronfrico, que precursor do rim e dos
dutos genitais. O desenvolvimento desses sistemas de rgos ser discutido em
detalhe nos Captulos 17 e 19, respectivamente. Mais adiante lateralmente em cada
lado chegamos placa mesodrmica lateral. Essas placas se dividiem horizontal-
mente em mesoderma (parietal) somtico dorsal, abaixo do ectoderma e o mesoderma
(visceral) esplncnico ventral, que se superpe ao endoderma (veja Figura 9.2C).
Entre essas camadas est a cavidade corporal - o celoma - que se estende da futura
regio do pescoo at a parte posterior do corpo. Mais tarde no desenvolvimento,
os celomas do lado direito e esquerdo se fundem e se dobram alongando-se do
(A) EMBRIO DE R
Placa neural Crista neural
Tubo neural
Somito
Notocorda Celoma
Mesoderma
somtico
Endoderma
Mesoderma
Esplncnico
Intestino Mesoderma
mdio da placa
lateral
(B) EMBRIO DO PINTO

Cortes para remoo do embrio
Figura 9.20
Comparao entre o desenvolvimento meso-
drmico em embries de r e pinto. (A) Em-
Intestino primitivo bries de r em estgio de nurula mostrando
Vitelo Rasgo Rasgo desenvolvimento progressivo do mesoderma
e celoma. (B) Seo transversa de um em-
brio de pinto. (C) Quando o embrio de pin-
( C ) PINTO TRANSFORMADO EM R
to separado da sua enorme massa de vitelo,
Tubo neural
parece uma nurula anfbia em estgio seme-
Somito lhante. (A segundo Rugh, 1951; B e C segun-
Celoma do Patten, 1951.)
Intestino
primitivo
Vitelo
EMBRIO DE PINTO EMBRIO DE R

(removido do vitelo;
margens rejuntadas)
mesoderma somtico, dividem o celoma em cavidades separadas. Nos mamferos, o

celoma subdividido em espaos pleural, pericardaco e peritoneal, envolvendo o
trax, corao e abdome, respectivamente. O mecanismo para a criao de somitos
mesodrmicos e revestimento corporais mudou pouco atravs da evoluo dos
vertebrados, e o desenvolvimento do mesoderma da galinha pode ser comparado
com estgios similares nos embries da r (Figura 9.20).
Formao das Membranas Extra-Embrionrias
O desenvolvimento embrionrio nos rpteis, aves e mamferos tomou uma nova dire-
o. Os rpteis desenvolveram um mecanismo para depositar ovos na terra seca,
dessa forma liberando-os para explorar nichos que no estavam to perto das guas.
Para conseguir isso, o embrio produziu quatro conjuntos de membranas extra-em-
brionrias para medi-lo com o ambiente, e mesmo que a maior parte dos mamferos
tenha desenvolvido placentas ao invs de cascas, o padro bsico das membranas
extra-embrionrias permaneceu o mesmo. Em rpteis, aves e mamferos em desenvolvi-
mento, inicialmente no existe distino entre domnios embrionrios e extra-embrio-
nrios. No entanto, como o corpo do embrio toma forma, o epitlio lateral se divide
desigualmente para criar dobras corporais, isolando o embrio do vitelo e delineando
quais reas devero ser embrionrias e quais extra-embrionrias (Miller et al., 1994).
(A) (B)
Dobra da
Cabea do embrio Celoma Celoma
Dobra da cabea do mnio cabea do mnio Embrio
extra-embrionrio extra-embrionrio
Ectoderma Ectoderma Dobra caudal
do mnio
Mesoderma somtico Mesoderma somtico
Mesoderma esplncnico Mesoderma esplncnico
Endoderma Endoderma
Envoltrio vitelnico Envoltrio vitelnico
Vitelo Vitelo
(C)
Crio Cavidade amnitica
Ectoderma
mnio
Tubo neural Cavidade crio-amnitica
Notocorda
Aorta
Intestino mdio
Mesnquima Intestino posterior
Endoderma
Mesoderma
Esplncnopleura
do saco vitelnico Proctdeo
Alantide adentrando o
Invaginao Alantica celoma extra-embrionrio
(D) (E)
Embrio Membrana
alantica Embrio
mnio Intestino
Alantide
Intestino mnio
Cavidade Cavidade
amnitica amnitica
Crio
Crio
Vitelo Vitelo
Saco vitelnico
Membrana
Figura 9.21 alantica
Desenho esquemtico das membranas extra-
embrionrias do pinto. O embrio est corta-
do longitudinalmente e os revestimentos de
albumina e da casca no so mostrados. (A)
embrio de 2 dias. (B) Embrio de 3 dias. (C)
Diagrama esquemtico detalhado da regio As dobras membranosas so formadas pela extenso do epitlio ectodrmico e
caudal (posterior) do embrio do pinto, mos- endodrmico escorado pelo mesoderma. A combinao de ectoderma e mesoderma,
trando a formao da alantide. (D) Embrio freqentemente referida como somatopleura, forma as membranas do mnio e crio e
de 5 dias. (E) Um embrio de 9 dias. (Segun- a combinao de endoderma e mesoderma - a esplancnopleura - forma o saco vitelnico
do Carlson, 1981.) e a alantide. Os tecidos endodrmicos e ectodrmicos agem como clulas epiteliais
funcionais; e o mesoderma gera o suprimento de sangue essencial para l e para c do
epitlio. A formao dessas dobras pode ser observada na Figura 9.21.
O primeiro problema de um ovo vivendo na terra a dessecao. Clulas embri-

onrias secariam rapidamente se no estivessem em um ambiente aquoso. Esse
ambiente suprido pelo mnio. As clulas dessa membrana secretam fluido amnitico;
assim, a embriognese ainda acontece na gua. Esse avano evolucionrio to
significativo e caracterstico que rpteis, aves e mamferos esto agrupados como
vertebrados amniticos.
O segundo problema desses ovos a troca de gases. Essa troca realizada pelo
crio, a membrana extra-embrionria mais externa. Nas aves e rpteis, essa membrana
se adere casca, permitindo a troca de gases entre o ovo e o ambiente. Nos mamferos,
como havamos dito, o crio evoluiu tornando-se placenta, que tem muitas funes
alm da respirao.
A alantide armazena resduos urinrios e media a troca de gases. Nos rpteis e
aves, a alantide se torna um grande saco, j que no existe outro modo para manter os
subprodutos do metabolismo do embrio em desenvolvimento. A camada mesodrmica
da membrana da alantide freqentemente alcana e se funde com a camada
mesodrmica do crio para criar a membrana corioalantica. Esse envelope extrema-
mente vascularizado crucial para o desenvolvimento da ave, e o responsvel pelo
transporte de clcio da casca do ovo para o embrio para produo de ossos (Tuan,
1987). Nos mamferos, o tamanho da alantide depende do sucesso da remoo dos
resduos de nitrognio pela placenta corinica. Em humanos a alantide um saco
vestigial; enquanto nos porcos um rgo grande e importante.
O saco vitelnico a primeira membrana extra-embrionria a ser formada, visto que
ele medeia a nutrio em aves e rpteis em desenvolvimento. Ele derivado de clulas
endodrmicas que crescem sobre o vitelo para englob-lo. O saco vitelnico conectado
ao intestino mdio por um tubo aberto, o duto vitelnico, para que as paredes do saco
vitelnico e do intestino sejam contnuas. Os vasos sangneos dentro do mesoderma
da esplancnopleura transportam nutrientes do vitelo para o corpo, pois o vitelo no
levado diretamente para o corpo atravs do duto vitelnico. Ao contrrio, clulas
endodrmicais digerem a protena em aminocidos solveis, que podem ento ser
passados aos vasos sangneos envolvendo o saco vitelnico. Outros nutrientes,
incluindo vitaminas, ons e cidos graxos so armazenados no saco vitelnico e trans-
portados pela circulao embrionria. Por esses caminhos, as quatro membranas ex-
tra-embrionrias permitem que o embrio se desenvolva em terra.
O Corao
O sistema circulatrio uma das grandes conquistas do mesoderma da placa lateral.

Consistindo de um corao, clulas sangneas e um intricado sistema de vasos san-
gneos, o sistema circulatrio fornece a nutrio para o embrio vertebrado em de-
senvolvimento. O sistema circulatrio a primeira unidade funcional no embrio em
desenvolvimento, e o corao o primeiro rgo funcional. O corao vertebrado
surge de duas regies do mesoderma esplncnico que interagiu com tecido adjacente
para se tornar especfico para o desenvolvimento do corao. Essas clulas
cardiognicas migram para uma posio mediana ventral e se fundem para se tornar
um tubo simples de clulas musculares que se contraem. Esse corao tubular se
contorce formando uma estrutura em forma de S, com um nico trio e um nico
ventrculo. Com a continuao do desenvolvimento, o ventrculo forma suas camadas
e se prolifera mais rapidamente que o trio, os septos separam as cmaras do corao
e as vlvulas se desenvolvem.
FUSO DOS RUDIMENTOS DO CORAO. Nos anfbios, as duas provveis

regies formadoras do corao so inicialmente encontradas na posio mais an-
terior da manta mesodrmica. Enquanto o embrio est sofrendo neurulao, es-
sas duas regies se juntam na regio ventral do embrio para formar uma cavidade
pericardial comum. Nas aves e mamferos, o corao tambm se desenvolve pela
Clulas se
tornam
Anterior (rostral) notocorda
m distante do ndulo de Hensen
Clulas se
tornam
Ndulo de Hensen corao
Tronco
arterioso
Ventrculo
Bulbus cordis
Seio venoso
(A) Posterior (caudal) (B)
+ = promotor de determinantes cardacos

- = repressor de determinantes cardacos
Figura 9.22
Ectoderma Clulas formadoras do corao no embrio do pinto. (A) Origem de clulas cardacas no embrio
precoce do pinto (estgio 3b). O padro ntero-posterior geral do sulco primitivo visto no
endocrdio e miocrdio do corao. (B) Modelo para a especificaco do mesoderma cardaco.
Os caminhos da migrao mesodrmica nas vrias regies do sulco primitivo esto representados
por setas. Sinais que induzem miognese cardaca esto representados por + , e inibidores da
Mesoderma
induo cardaca esto representados como - . O mesoderma migratrio na regio 1 no encontra
indutores ou repressores. Clulas migrando da regio 3 encontram ambos. Somente clulas
migrando da regio 2 encontram o indutor sem o inibidor. (C) Micrografia eletrnica de varredura
do mesoderma formador do corao no embrio de pinto de 24 horas. O mesoderma facilmente
separado do ectoderma, mas permanece em ntima associao com o endoderma. (A segundo
Garcia-Martinez e Schoenwolf, 1993; B segundo Schultheiss et al., 1995; C de Linask e Lash,
1986, cortesia de K. Linask.)
Endoderma
(C)
fuso de primrdios pareados, mas a fuso desses dois rudimentos ocorre muito
mais tardiamente no desenvolvimento. Nesses vertebrados amniticos, o embrio
um disco achatado, e o mesoderma da placa lateral no circunda completamente
o saco vitelnico. As provveis clulas do corao se originam no sulco primitivo
precoce, um pouco posterior ao ndulo de Hensen e se estendem at cerca da
metade do seu comprimento (Figura 9.22A). Essas clulas migram atravs do sulco
e formam dois grupos de clulas mesodrmicas laterais ao (e no mesmo nvel do)
ndulo de Hensen (Figura 9.22B; Garcia-Martinez e Schoenwolf, 1993). Quando o
embrio do pinto tiver somente 18 a 20 horas de idade, essas provveis clulas do
corao se movem anteriormente entre o ectoderma e o endoderma em direo ao
meio do embrio, permanecendo em estreito contato com a superfcie endodrmica
(Figura 9.22C; Linask e Lash, 1986). Quando as clulas alcanam a rea onde o
intestino se estendeu at a regio anterior do embrio, a migrao cessa. O
direcionamento para essa migrao parece ser fornecido pelo endoderma. Se o
endoderma da regio cardaca girado com respeito ao resto do embrio, a migra-
o das clulas mesodrmicas pr-cardacas invertida. Pensa-se que o compo-
nente endodrmico responsvel por esse movimento um gradiente ntero-pos-
terior de concentrao da fibronectina. Anticorpos contra a fibronectina interrom-
pem a migrao, enquanto anticorpos contra outros componentes da matriz extra-
celular no o fazem (Linask e Lash, 1988a,b).
O endoderma tambm faz com que as clulas pr-cardacas comecem seu desen-
volvimento como msculos do corao. O endoderma anterior pode fazer com que as
clulas mesodrmicas no cardacas expressem protenas especficas do corao tan-
to em aves como em anfbios (Jacobson, 1961; Sugi e Lough, 1994; Nascone e Mercola,
1995; Schultheiss et al., 1995). Essa diferenciao ocorre independentemente nos dois
primrdios formadores do corao, um migrando ao encontro do outro. As presuntivas
clulas do corao de aves e mamferos formam um tubo de parede dupla consistindo
de um endocrdio interior e um epimiocrdio exterior. O endocrdio formar o revesti-
mento interno do corao, e o revestimento externo formar a camada dos msculos
do corao que iro bombear por toda a vida do organismo.
Com a continuao da neurulao, o intestino anterior fechado pelo dobramento
interno do mesoderma esplncnico (Figura 9.23). Esse movimento junta os dois tubos,
finalmente unindo o epimiocrdio em um tubo nico. Os dois endocrdios ficam em
uma cmara comum por um curto perodo, mas tambm iro se fundir. Nessa altura, a
dupla cmara celmica original se une para formar a cavidade do corpo que aloja o
corao. A origem bilateral do corao pode ser demonstrada atravs de interveno
cirrgica, prevenindo a fuso do mesoderma da placa lateral (Grper, 1907; DeHaan,
1959). Isso resulta em uma condio chamada crdia bfida, na qual um corao em
separado se forma em cada lado do corpo (Figura 9.24). A prxima etapa na formao
do corao a fuso dos tubos endocrdicos para formao de uma nica cmara de
bombeamento (veja Figura 9.23C,D). Essa fuso ocorre aproximadamente s 29 horas
do desenvolvimento das aves e na terceira semana da gestao humana. As partes
posteriores no fundidas do endocrdio se tornam as aberturas das veias vitelnicas
para o corao (Figura 9.25). Essas veias vo carregar nutrientes do saco vitelnico
para o seio venoso. O sangue ento passa atravs de uma lmina semelhante vlvula
de forma achatada, para a regio atrial do corao. Contraes do tronco arterioso
aceleram o sangue para a aorta.
As pulsaes do corao comeam enquanto os primrdios pareados ainda esto
se fundindo. O marcapasso dessa contrao o seio venoso. Contraes comeam
aqui e uma onda de contrao muscular ento propagada at o corao tubular.
Desse modo, o corao pode bombear sangue mesmo antes do seu intricado sistema
de vlvulas ter sido completado. As clulas musculares do corao tm na sua prpria
herana a habilidade de contrair, e clulas do corao isoladas de um rato com 7 dias
ou de embries de pintos, vo continuar a bater em placas de Petri (Harary e Farley,
1963; DeHaan, 1967). No embrio, essas contraes se tornam reguladas por estmu-
los eltricos procedentes da medula oblongata via nervo vago, e em 4 dias, o
eletrocardiograma de um embrio de pinto se aproxima daquele de um animal adulto.
FORMAO DAS CMARAS DO CORAO. Em um embrio de pinto de 3 dias ou

um embrio humano de 5 semanas, o corao um tubo de duas cmaras, com um trio
e um ventrculo. Em um embrio de pinto podemos observar a olho nu, o extraordinrio
ciclo do sangue entrando na cmara de baixo e sendo bombeado para fora atravs da
aorta. A separao desse tubo em um trio e um ventrculo distintos completada
quando clulas do miocrdio produzem um fator (provavelmente o fator transforma-
dor de crescimento 3) que faz com que as clulas do endocrdio adjacente se des-
prendam e entrem na gelatina cardaca rica em hialuronato situada entre as duas
camadas (Markwald et al., 1977; Potts et al., 1991). Nos seres humanos, essas clulas
causam a formao do colcho endocrdico que divide o tubo nos canais trio-
ventriculares direito e esquerdo (Figura 9.26). Enquanto isso, o trio primitivo dividi-
do pelo crescimento de dois septos que crescem ventralmente em direo aos col-
ches endocrdicos. Os septos, no entanto, possuem orifcios para que o sangue
ainda possa atravess-los. Esse atravessar do sangue necessrio para a sobrevivn-
cia do feto antes que a circulao para os pulmes funcionais seja estabelecida. Na
primeira respirao, no entanto, esses orifcios se fecham e os circuitos circulatrios
direito e esquerdo ficam estabelecidos (veja Informaes Adicionais e Especulaes
Figura 9.23 (A)

Formao do corao. Sees transversais atra- Ectoderma da placa neural Sulco Mesnquima ceflico
vs da regio formadora do corao do pinto neural
de (A) 25 horas, (B) 26 horas, (C) 28 horas e Notocorda Ectoderma superficial
(D) 29 horas. (Segundo Carlson, 1981.)
Somatopleura
Cavidade
Intestino pericardial Esplncnopleura
Epimiocrdio (mesoderma Endoderma

esplncnico engrossado) Conjuntos celulares
angiogenticos
(B)
Sulco neural (fechando) Mesnquima ceflico
Somatopleura
Cavidade
pericardial Esplancnopleura
Primrdio do Primrdio
epicrdio endocrdio
(C)
Canal neural Intestino anterior
Somatopleura
Cavidade Pericrdica
Esplancnopleura
Tubo endocrdico
Mesocrdio ventral
Epimiocrdio
(D)
Tubo neural Intestino anterior
Somatopleura
Cavidade Pericrdica
Esplancnopleura
Tubo endocrdico
Epimiocrdio Mesocrdio ventral

(desaparecendo)
na pgina 372). A separao entre esses ventrculos completada pelo crescimento do

septo ventricular em direo ao colcho endocrdico. Com essa separao (que nor-
malmente ocorre na stima semana do desenvolvimento humano), o corao uma
estrutura com quatro cmaras com um tronco pulmonar conectado ao ventrculo direi-
to e a aorta conectada ao esquerdo.
Figura 9.24
Fuso dos rudimentos cardacos esquerdos e
direitos para formar um tubo cardaco nico.
(A) Embrio de pinto ( 30 horas) mostrando
os primrdios do corao pareados, encon-
trando-se nas linhas medianas ventrais. (B)
Crdia bfida no embrio do pinto causado pelo
impedimento da fuso de dois primrdios car-
dacos. (A cortesia de K. Linask; B cortesia de
R. L. DeHaan.)
(A) (B)
Uma questo que surge nesses estudos , como a polaridade direita-esquerda

surge no corao se esses lados comeam igualmente? Por que o lado esquerdo do
corao se torna diferente do lado direito? Estudos em fetos com coraes mal
formados que possuem dois lados direitos ou dois lados esquerdos, mostram uma
correlao entre a presena do bao e o lado esquerdo do corao. Polisplenia (um
(A) (B) (C)
Razes articas
Bulbus Bulbus
cordis cordis Sulco
bulboventricular trio
esquerdo
Ventrculo Ventrculo
trio trio
Seio Venoso
Veias Seio venoso
vitelnicas
21 dias 22 dias 24 dias
(D) (E) Figura 9.25

Tronco arterioso Formao da cmara cardaca durante a tercei-
Razes trio direito
ra semana do desenvolvimento humano, mos-
articas
trio esquerdo trio esquerdo trando a formao das cmaras a partir de um
Bulbus tubo simples. Vistas A-D mostram o corao
cordis Ventrculo em desenvolvimento do lado esquerdo; E
Esquerdo uma viso frontal. Embora os trios sejam dis-
Ventrculo tintos externamente, no esto separados den-
direito tro do corao. Note que h duas razes articas
Ventrculo e que essas se ramificam para formar os arcos
esquerdo Veias vitelnicas Sulco interventricular articos (veja Figura 9.27). (Segundo
25 dias 29 dias Langman, 1981, e Larsen, 1993.)
Veia cava superior

Septo primrio Septo atrial
secundrio
Forame primrio
Septo
Seio venoso atrial
Canal primrio
trio-ventricular
esquerdo Vlvula da
veia cava
inferior
Vlvula
Colches do seio
endocrdicos coronrio
fundidos
Veia cava inferior

Septo
interventricular
(A) 25 dias (B) 40 dias
Figura 9.26
Formao das cmaras do corao. (A) Corte
diagramtico transversal do corao humano
de 4,5 semanas. Os septos do rtrio e do ven-
trculo esto crescendo em direo ao colcho
endocrdico. (B) Seo transversal do cora- bao tanto do lado esquerdo como direito do corpo) est associada a coraes com
o humano antes do nascimento. O sangue dois lados esquerdos, enquanto asplenia (ausncia do bao) est associada a cora-
pode passar do lado direito do corao para o es com dois lados direitos (Anderson et al., 1990; Ho et al., 1991). O mecanismo
esquerdo, atravs das aberturas nos septos para a assimetria esquerda-direita no entendido, mas Tsuda e colegas (1996)
primrios e secundrios do trio. (Segundo mostraram uma deposio assimtrica precoce da protena flectina, da matriz extra
Larsen, 1993.) celular, a qual pode predispor um lado do corao a se desenvolver diferentemente
do outro (Prancha 33)*.
Formao dos Vasos Sangneos

Vasos
LIMITAES RELATIVAS CONSTRUO DE VASOS SANGNEOS. Existem

trs limitaes principais para a construo de vasos sangneos. A primeira
fisiolgica. Diferentemente de novas mquinas, que no necessitam funcionar at
terem sado da linha de montagem, os organismos novos precisam funcionar mes-
mo enquanto se desenvolvem. As clulas embrionrias precisam obter nutrientes
antes que exista um intestino, fazer uso do oxignio antes que existam pulmes, e
excretar resduos antes que os rins estejam prontos. Portanto, a fisiologia ciculatria
do embrio em desenvolvimento difere daquela do organismo adulto, e o seu
sistema circulatrio reflete tais diferenas. O alimento no absorvido atravs do
intestino, mas pelo vitelo ou placenta, e a respirao no conduzida pelas guel-
ras ou pulmes, mas atravs da membranas corinicas ou alanticas. Os princi-
pais vasos sangneos embrionrios devem ser construdos para servir a essas
estruturas extra-embrionrias.
A segunda limitao evolucionria. O embrio mamfero estender vasos san-
gneos at o saco vitelnico mesmo no havendo vitelo no interior. Alm disso, o
sangue que deixa o circuito do corao passa por cima do intestino anterior para
formar a aorta localizada dorsalmente. Os seis pares de arcos articos passam por cima
da faringe (Figura 9.27). Nos peixes primitivos, esses arcos persistem e permitem que
*Discutiremos polaridade direita-esquerda no Captulo 16.

Figura 9.27 (A) 29 dias

Os arcos articos do embrio humano. (A) Originalmente, o tronco arterioso bombeia sangue
para a aorta, que se ramifica para ambos os lados do intestino anterior. Os seis arcos articos
tomam sangue da aorta ventral e o permitem fluir para a aorta dorsal. (B) Os arcos comeam a
se desintegrar ou se modificar: as linhas pontilhadas indicam estruturas em degenerao. (C)
Finalmente, os arcos remanescentes so modificados e o sistema arterial adulto formado.
(Segundo Langman, 1981.) Arcos
articos
as guelras oxigenem o sangue. Na ave ou mamfero adultos, onde os pulmes oxige-

nam o sangue, tal sistema faz pouco sentido, mas todos os seis pares de arcos articos Tronco arterioso
so formados nos embries mamferos e das aves antes que o sistema finalmente seja
Aorta dorsal direita
simplificado em um nico arco. Dessa maneira, mesmo que nossa fisiologia no re-
queira tal estrutura, nossa condio embrionria reflita nossa histria evolutiva. Aorta dorsal esquerda
O terceiro conjunto de limitaes fsico. De acordo com a lei dos movimentos
dos fluidos, o transporte mais efetivo de fluidos obtido por grandes tubos. Quan-
do o raio dos vasos sangneos fica menor, a resistncia ao fluxo aumenta de r4 (Lei (B) 49 dias
Artrias
de Poiseuille). Um vaso sangneo que metade da largura de outro tem uma resis- Artria cartidas externas
tncia ao fluxo 16 vezes maior. No entanto, a difuso dos nutrientes ocorre somente cartida
interna
quando o sangue flui vagarosamente e tem acesso membrana. Ento temos aqui
um paradoxo: As restries na difuso ordenam que os vasos sangneos sejam Artria
pequenos, enquanto que a lei da hidrulica ordena que os vasos sejam grandes. Artria pulmonar
cartida
Organismos vivos resolveram esse paradoxo desenvolvendo um sistema circulat-
comum
rio com uma hierarquia no tamanho dos vasos (LaBarbera, 1990). Essa hierarquia Arco
formada muito cedo no desenvolvimento, como pode ser visto em embries de pinto Artria da
de 3 dias. Nos ces, o sangue dos vasos grandes (aorta e veia cava) flui 100 vezes subclvia aorta
mais rapidamente do que nos capilares. Havendo vasos grandes especializados direita Duto
para o transporte e pequenos especializados para a difuso (onde o sangue passa a arterioso
maior parte do tempo), nutrientes e oxignio podem alcanar as clulas individuais Stima artria
do organismo em crescimento. Mas essa no a estria completa. Se um fluido sob intersegmental
Aorta
presso constante move-se diretamente de um tubo de grande dimetro para um
tubo de pequeno dimetro (como um bico de esguicho), a velocidade do lquido
aumenta. A soluo evolucionria para esse problema foi o surgimento de muitos
(C) 56 dias
vasos pequenos ramificados de um vaso sangneo de maior tamanho, tornando o
corte secional coletivo de todos os vasos pequenos, maior que o daquele do grande Artria cartida
Artria cartida
externa esquerda
vaso. Esse relacionamento (conhecido como lei de Murray) explica que o cubo do externa direita
raio do vaso parental se aproxima da soma dos cubos dos raios de vasos menores. A Artria cartida
construo de qualquer sistema circulatrio precisa negociar entre essas limitaes Artria comum esquerda
fsicas, fisiolgicas e evolucionrias. subclvia
Artria
Direita
subclvia
VASCULOGNESE: FORMAO DE VASOS SANGNEOS DE ILHAS DE SAN- Esquerda
GUE. A criao de vasos sangneos de novo a partir do mesoderma chamada vascu-
lognese (Pardanaud et al., 1989). No intestino, pulmo, aorta e tambm no revesti-
mento mesodrmico esplncnico do saco vitelnico, uma rede de vasos capilares sur-
Ligamento
ge independentemente dentro de seus prprios tecidos (Auerbach et al.,1989;
Pardanaud et al., 1989). Nesses casos, os capilares no aparecem como extenses Aorta ascendente
cada vez menores de vasos sangneos originados do corao. Pelo contrrio, o
mesoderma de cada um desses rgos contm clulas chamadas angioblastos que se Artria pulmonar Aorta descendente
organizam em vasos capilares. Essa rede de capilares especficos do rgo finalmente
se liga s extenses dos principais vasos sangneos.
No pinto, existem duas fontes de angioblastos (Figura 9.28; Pardanaud et al.,
1996). A primeira fonte o mesoderma paraxial. O mesoderma paraxial ceflico fornece
angioblastos para os vasos sangneos da cabea (Couly et al., 1995), enquanto o
mesoderma paraxial somtico do tronco contm angioblastos que migram para formar
os vasos da parede do corpo, membros, rins e pores dorsais da aorta. A segunda
fonte de angioblastos o mesoderma esplancnopleural. Esses angioblastos colonizam
Figura 9.28 Mesoderma

Somito
Duas fontes de angioblastos no embrio Tubo neural intermedirio
Somito Aorta
do pinto formam os endotlios de regi- Somatopleura
es separadas. Os angioblastos dos Broto dos
somitos migram atravs do mesoderma membros
intermedirio (rim), somatopleura e re-
gies laterais do assoalho da aorta. Os
angioblastos da esplancnopleura formam
os vasos do intestino e rgos viscerais Notocorda Esplancnopleura Veia
assim como do assoalho da aorta. Os Aorta cardinal
angioblastos do assoalho da orta tambm 1 dias
produzem clulas sangneas. (Segundo
Pardanaud et al., 1996.)
Intestino
3 dias
os rgos viscerais, intestino e o assoalho da aorta. Esses angioblastos so na reali-

dade hemangioblastos, porque no s geram revestimento endotelial como tambm
fornecem os precursores das clulas sangneas (Pardanaud et al.,1996).
A agregao de clulas do mesoderma esplncnico crucial para o progresso do
desenvolvimento amnitico porque esses agrupamentos angiogenticos (por vezes
chamados de ilhas de sangue) que forram o saco vitelnico produzem as veias vitelnicas
(onfalomesentricas) que trazem nutrientes para o corpo e transportam os gases de
ida e volta para os lugares onde so realizadas trocas gasosas (Figura 9.29). Essas
clulas so primeiro vistas na rea opaca no estgio da dobra da cabea na embriog-
nese do pinto, quando o sulco primitivo est totalmente estendido (Pardanaud et al.,
1987). Esses cordes de clulas logo cavitam transformando-se em tubos com parede
dupla anlogos aos tubos duplos do corao. A parede interna se torna o revestimen-
to liso de clulas endoteliais do vaso, e as clulas externas se tornam msculo liso.
Entre essas camadas existe a lmina basal contendo um tipo de colgeno especfico
para vasos sangneos. Pensa-se que essa lmina basal inicia a diferenciao dos
tipos de clulas no vaso (Murphy e Carson, 1978; Kubota et al., 1988). As clulas
centrais das ilhas de sangue se diferenciam em clulas sangneas embrionrias. Com
o crescimento, as ilhas de sangue finalmente se juntam para formar a rede capilar
drenando as duas veias vitelnicas, que trazem alimento e clulas sangneas para o
corao recm- formado.
Figura 9.29 Trs fatores de crescimento podem ser responsveis pela iniciao da vasculog-
Vasculognese. A formao de vasos sang- nese. Um deles, o fator de crescimento fibroblstico bsico (FGF2) necessrio para
neos primeiro vista na parede do saco a gerao de angioblastos a partir do mesoderma. Quando as clulas do blastodisco
vitelnico onde (A) mesnquima indiferen- das codornas so dissociadas em cultura, elas no formam ilhas de sangue ou clulas
ciado se condensa para formar (B) conjuntos endoteliais. No entanto, quando essas clulas so cultivadas em FGF2, surgem ilhas
de clulas angiogenticas. (C) O centro desde sangue na cultura, e essas formam clulas endoteliais (Flamme e Risau, 1992). O
ses agregados forma as clulas sangneas, e
FGF2 sintetizado na membrana corioalantica do embrio de pinto e responsvel
a parte externa dos agregados desenvolve as
clulas endoteliais dos vasos sangneos. (Se- pela vascularizao desse tecido (Ribatti et al., 1995). A segunda protena o fator de
gundo Langman, 1981.)
(A) (B) (C)

Endoderma do saco vitelnico Agregado de clulas angiogenticas Clula sangnea primitiva
Clulas mesenquimatosas Clula endotelial

(A) Mesoderma Sulco Veia

perifrico Avascular ectodrmico apical marginal Anterior
Somitos
Estgio
Artria Subclvia Veia marginal
Figura 9.30 posterior
Vascularizao do membro anterior do pinto. (A) Desenvolvimento do sistema vascular durante
o desenvolvimento precoce do broto alar do pinto. A periferia do broto avascular; e mais
regies avasculares se formaro nas regies onde os condrcitos iro se condensar para formar
os precursores cartilaginosos para o osso. (B) Vista dorsal do broto alar injetado com tinta da
China no estgio 22. (A segundo Feinberg, 1991; B de Feinberg e Cafasso, 1995; fotografia
cortesia do Dr. R. N. Feinberg.)
crescimento vascular endotelial (VEGF), que parece ser especfica para permitir a
diferenciao dos angioblastos e sua multiplicao para formar os tubos endoteliais.
Alm disso, os receptores para VEGF so encontrados nas ilhas de sangue e em
outros lugares onde VEGF pode estar ativo (Millauer et al., 1993). Se embries de
camundongos no possuem os genes codificando o principal receptor para VEGF
(FlK1 tirosina quinase) as ilhas de sangue do saco vitelnico no aparecem, e a vascu-
(B)
lognese no ocorre. Camundongos carentes de genes para o segundo receptor para
VEGF (Flt1 tirosinoquinase), tm as clulas endoteliais e ilhas de sangue diferencia-
das, mas essas clulas no so organizadas em vasos sangneos (Fong et al.,1995;
Shalaby et al., 1995). Um terceiro fator, angiopoietina-1, intermedia a interao entre as
clulas endoteliais e os msculos lisos recrutados para cobri-las. Mutaes de cada
uma dessas angiopoietinas ou seus receptores levam a vasos sangneos mal-forma-
dos, deficientes em msculos lisos que normalmente os envolvem (Davis et al.,1996;
Suri et al., 1996; Vikkula et al., 1996).
ANGIOGNESE: O SURGIMENTO DOS VASOS SANGNEOS. Vasculognese no

o nico meio de se produzir vasos sangneos. Em outros rgos (notavelmente nos
brotos dos membros, nos rins e no crebro), vasos sangneos existentes se desen-
volvem e enviam clulas endoteliais para o rgo em desenvolvimento (Wilson, 1983;
Sariola, 1985). Esse tipo de formao de vaso sangneo, no qual novos vasos emer-
gem da proliferao de vasos sangneos preexistentes chamado angiognese. No
broto do membro anterior, por exemplo, a rede de capilares derivada do brotamento
de clulas procedentes da aorta (Evans, 1909; Feinberg, 1991). Dentro dessa rede de
capilares, uma artria central (que se torna a subclvia) forma o principal vaso de
alimentao. O sangue retorna ao corpo atravs da veia marginal que se forma dos
capilares anteriores e posteriores (Figura 9.30). Acredita-se que as regies formadoras
de rgos secretam fatores de angiognese que promovem a mitose e a migrao de
clulas endoteliais para aquela rea. VEGF (mencionado anteriormente como um fator
de vasculognese) tambm promove a migrao de clulas endoteliais procedentes de
vasos sangneos da superfcie do rgo para esses rgos. O grau de vascularizao
dos membros est ligado aos nveis de VEGF no broto dos membros, e os padres
espao-temporais da expresso de VEGF correlacionam-se bem com a hora e o lugar
onde vasos sangneos penetram nos rins e no crebro (Figura 9.31; Breier et al., 1992;
Millauer et al., 1993; Flamme et al., 1995).
Figura 9.31
Produo do fator da angiognese pelo tecido
fetal de camundongo. Hibridizao in situ mos-
tra que mRNA para VEGF secretado sinteti-
zado pelos glomrulos do rim fetal do camun-
dongo de 15 dias. A fotografia em campo ilu-
minado esquerda corresponde a auto-radio-
grafia em campo escuro direita. (de Breier et
al., 1992, cortesia de W. Risau.)
Alguns rgos parecem produzir seus prprios fatores de angiognese. A placen-

ta um rgo cuja funo depende do redirecionamento de vasos sangneos existen-
tes dentro dela. Quando a placenta primeiro formada, induz a angiognese secretan-
do a proliferina (PLF), um fator parecido com o hormnio de crescimento. Quando os
vasos sangneos placentrios se estabeleceram (no camundongo aps o dcimo
segundo dia), a placenta secreta uma protena relacionada proliferina (PRP), um
peptdeo que age como um inibidor da angiognese (Jackson et al., 1994). O osso em
desenvolvimento um outro rgo que redireciona vasos sangneos para si enquan-
to est em formao. Como j foi mencionado, a cartilagem normalmente um tecido
avascularizado, exceto quando os capilares invadem a placa de crescimento para con-
verter cartilagem em osso. Cartilagem hipertrfica (mas no cartilagem em diviso ou
madura) secreta um fator de angiognese de 120-kDa (Alini et al., 1996). interessante
que esse fator produzido somente quando os condrcitos hipertrficos precoces
foram expostos a vitamina D. Isso ajudaria explicar as deformidades nos ossos vistas
em pacientes com raquitismo.
A angiognese crucial no crescimento de qualquer tecido, incluindo os tumores.
Os tumores so bem sucedidos somente quando so capazes de direcionar para si
os vasos sangneos. Portanto, os tumores secretam fatores de angiognese. A habi-
lidade de inibir tais fatores pode se tornar uma maneira extremamente importante para
prevenir o crescimento de tumores e metstases (Fidler e Ellis, 1994).[mesend3.html]
CIRCULAO EMBRIONRIA. O sistema circulatrio embrionrio para e do embrio

do pinto e saco vitelnico mostrado na Figura 9.32. O sangue bombeado atravs da
aorta dorsal passa sobre os arcos articos e se direciona para baixo, entrando no
embrio. Parte desse sangue deixa o embrio atravs das artrias vitelnicas entrando
no saco vitelnico. Nutrientes e oxignio so absorvidos, e o sangue retorna atravs
das veias vitelnicas para o corao atravs do seio venoso. Nos embries de mamfe-
ros, alimento e oxignio so obtidos da placenta. Dessa maneira, embora o embrio de
mamfero possua vasos anlogos s veias vitelnicas, o principal suprimento de oxig-
nio e alimento procede da veia umbilical, que une o embrio com a placenta (Figura
9.33). Essa veia, que leva o sangue oxigenado e carregado de alimento de volta ao
embrio derivada do que seria nas aves a veia vitelnica direita. A artria umbilical,
carregando os resduos da placenta, derivada do que teria sido a artria alantica do
pinto. Ela estende-se da poro caudal da aorta e prossegue ao longo da alantide e
emergindo depois para a placenta.
Aps a sua entrada no corao embrionrio do mamfero, o sangue bombeado
para uma srie de arcos articos que circundam a faringe para trazer o sangue dor-
salmente. Nos mamferos, o membro esquerdo dos quarto par de arcos articos o
nico que sobrevive para alcanar a aorta. O membro direito desse par se tornou a
raiz da artria subclvia. O terceiro arco artico se modificou para formar artrias
cartidas comuns, que fornecem sangue para o crebro e cabea. O sexto arco
modificado para formar a artria pulmonar; o primeiro, o segundo e o quinto arcos
degeneram. A aorta e a artria pulmonar, portanto, tm uma abertura para o corao
em comum, durante a maior parte do seu desenvolvimento. Finalmente, divises se
(A) (B) Veia vitelnica

anterior
Arcos articos
Corao
Aorta Veia
dorsal vitelnica
Artria
vitelnica
Capilares
Seio terminal
Figura 9.32
Sistema circulatrio do embrio de ave pre-
coce. (A) Construo da vasculatura em um
formam dentro do tronco arterioso para criar dois vasos diferentes. Somente quan- somito 7 de embrio de codorna corado com
do a primeira respirao do animal recm-nascido indica que os pulmes esto pre- um anticorpo fluorescente que reconhece c-
parados para a oxigenao do sangue, o corao se modifica para bombear sangue lulas endoteliais. A ilhas de sangue podem
ser vistas nas margens. (B) Sistema circulat-
separadamente para a artria pulmonar.
rio de um embrio de pinto de 44 horas. Esta
viso mostra artrias em cor; as veias esto
pontilhadas. O seio terminal o limite externo
do sistema circulatrio e o local da gerao
das clulas do sangue. (Montagem fotogrfi-
Veia cardinal ca de Pardanaud et al., 1987; cortesia do Dr.
posterior
Vilosidades F. Dieterlen-Livre; B segundo Carlson, 1981.)
Artria Veia cardinal comum
corinicas
e veia Aorta dorsal
vitelnica
Broto pulmonar
Bolsa farngea IV
Arco artico III
Raiz artica ventral
Veia cardinal anterior
Placenta Veia
umbilical Artria
cartida Figura 9.33
Artria Interna Sistema circulatrio de um embrio humano de
Umbilical
4 semanas. Embora nesse estgio todos os
vasos sangneos principais estejam pareados
esquerda e direita, somente so mostrados
os vasos direita. As artrias esto coloridas.
Saco vitelnico
(de Carlson, 1981.)
& Especulaes
Redirecionando o Fluxo Sangneo no

Mamfero Recm-nascido
E MBORA O FETO EM DESEN-
VOLVIMENTO divida com o adul-
to a necessidade de conseguir
oxignio e nutrientes para seus tecidos, a
fisiologia do feto mamfero difere drasti-
Hemoglobina
fetal
H
em
c
ia
s
fe
ia
ta
s
is
m
at
e rn
ai
s
Saturao com O2 (%)

camente daquela do adulto. A principal em
H
diferena a falta de pulmes e intestinos
funcionais. Todo oxignio e nutrientes
devem provir da placenta. Isso levanta
duas questes. Primeiro, como o feto ob-
tm oxignio do sangue materno? E se-
gundo, como a circulao do sangue Hemoglobina
redirecionada aos pulmes uma vez que o adulta
cordo umbilical for cortado e a respira-
o se fizer necessria?
A soluo para o problema do feto con-
seguir oxignio do sangue de sua me en-
volve o desenvolvimento de uma hemo- Presso de O2
globina fetal. A hemoglobina das hemcias Figura 9.34
fetais difere um pouco daquela do corps- Transferncia de oxignio da me para o feto em embries humanos. Molculas adultas e fetais
culo adulto. Dois dos quatro peptdeos das de hemoglobina diferem em suas subunidades proticas. A cadeia fetal liga difosfoglicerato
cadeias da hemoglobina do adulto e do feto menos avidamente que o faz a cadeia adulta. Conseqentemente, a hemoglobina fetal pode ligar
so idnticos - a cadeia alfa () - mas a o oxignio mais eficientemente que a hemoglobina adulta. Na placenta, h um fluxo lquido de
hemoglobina do adulto tem duas cadeias oxignio (seta) do sangue materno (que cede oxignio ao tecido com menor presso de oxignio)
beta (), onde o feto tem duas cadeias gama para o sangue fetal, que ainda o est recolhendo.
() (Figura 9.34). Cadeias normais fixam o
regulador natural difosfoglicerato, que aju-
da na descarga do oxignio. As cadeias Mas uma vez que o feto no est con- trio esquerdo, e depois entrar no ventr-
isoformas no fixam difosfoglicerato to seguindo oxignio da me, como ele re- culo esquerdo (Figura 9.35). Quando ocor-
bem e portanto tm uma maior afinidade estrutura sua circulao para conseguir re a primeira respirao, o oxignio no san-
pelo oxignio. No ambiente de baixa oxignio de seus prprios pulmes? Du- gue faz com que os msculos que envol-
oxigenao da placenta, o oxignio libe- rante o desenvolvimento fetal, uma aber- vem o duto arterioso feche a abertura. O
rado da hemoglobina adulta. Nesse mes- tura - o duto arterioso - direciona a passa- aumento da presso sangnea no lado es-
mo ambiente, a hemoglobina fetal no dis- gem do sangue da artria pulmonar para a querdo do corao causa o fechamento do
tribui oxignio, mas o fixa. Essa pequena aorta (e conseqentemente para a placen- septo sobre o forame oval, com isso sepa-
diferena na afinidade pelo oxignio media ta). Como o sangue no retorna da veia rando a circulao sistmica e pulmonar**.
a transferncia do oxignio da me para o pulmonar no feto, mamferos em desen- Dessa maneira, quando comea a respira-
feto (Figura 9.34). No feto, a mioglobina dos volvimento tm que ter alguma outra ma- o, a circulao respiratria desviada da
msculos fetais tem uma afinidade ainda neira de obter sangue no seu ventrculo placenta para os pulmes. [other.html#4]
maior por oxignio, fazendo com que mol- esquerdo para ser bombeado. Isso con-
culas de oxignio passem de hemoglobina seguido pelo forame oval, uma abertura **Em algumas crianas, o septo no se fe-
fetal para armazenagem e uso pelos mscu- no septo separando o trio direito do es- cha, e o formen oval deixado aberto. Em
los fetais. A hemoglobina fetal no nociva geral, a abertura to pequena que essas crianas
querdo. O sangue pode entrar no trio di-
ao recm-nascido, e em humanos, a reposi- no apresentam sintomas fsicos, e o formen
reito, passar pelo forame em direo ao finalmente acaba se fechando. No entanto, se o
o de clulas sangneas contendo hemo- segundo septo falha na sua formao, a abertura
globina fetal por clulas sangneas con- *A base molecular para essa mudana septal do trio pode causar um aumento do lado
tendo hemoglobina adulta no se completa nas globinas ser posteriormente discutida direito do corao, que pode levar falncia
at 6 meses aps o nascimento.* no Captulo 11. cardaca durante a idade adulta jovem.
De e para a cabea FETO
Veia cava superior De e para o brao

Ducto
Artria arterioso
pulmonar
De e para o brao
Forame oval
Forame oval
est aberto
Veia cava
inferior
Ducto venoso Pulmo
Parede
corporal
Rim
Fgado
Veia
umbilical De e para o NEONATO
Intestino
Artrias
umbilicais Ducto arterioso
se fecha
De e para as pernas
Forame oval
se fecha
Placenta
Figura 9.35
Redirecionamento do fluxo sangneo no nascimento. A expanso de ar para os pulmes causa
alteraes de presso que redirecionam o fluxo de sangue para o neonato. O ducto arterioso se
comprime e se fecha, rompendo a conexo entre a aorta e a artria pulmonar, e o forame oval, uma
passagem entre os trios esquerdo e direito, tambm se fecha. Dessa maneira, a circulao
pulmonar fica separada da circulao sistmica.
O Desenvolvimento de clulas sangneas

O Conceito de Clula-Tronco
Clula-T
Enquanto muitas das clulas que possumos hoje so as mesmas clulas que adquiri-
mos quando ramos embries, existem diversas populaes de clulas que esto
constantemente se regenerando. Perdemos e repomos aproximadamente 1011 hemcias
e pequenas clulas intestinais cada dia. De onde vm essas clulas de reposio? Elas
so procedentes de populaes de clulas-tronco. Uma clula-tronco capaz de
Auto-manuteno Figura 9.36

Modelo da dinmica da proliferao e diferenciao da clula-tronco. A proliferao est repre-
sentada por crculos horizontais, e a diferenciao se d ao longo do eixo vertical progredindo
diferenciao
Maturao e
para baixo, para tipos mais diferenciados de clulas. As clulas-tronco iniciais (S) podem
permanecer quiescentes (na fase G0 ) ou entrar no ciclo celular. Clulas-tronco que produzem
mais clulas-tronco permanecem em um nvel, mas podem se dividir para produzir um tipo de
clula de transio que cai para o prximo nvel. Em cada nvel mais baixo, a probabilidade de
cair ainda mais na prxima diviso aumenta. Finalmente, uma clula madura diferenciada
gerada. (Segundo Potten e Loeffer, 1990).
Clula-tronco
Fase S extensa proliferao, criando mais clulas-tronco (auto-renovao) assim como uma
prognie celular mais diferenciada. Clulas-tronco so, na realidade, uma populao
embrionria de clulas, que sofrem um desenvolvimento posterior dentro de um orga-
Ciclo
celular
nismo adulto. Nossas clulas sangneas, clulas das criptas intestinais, epiderme e
espermatcitos (em homens) so populaes em estado estvel de equilbrio no qual
a produo de clulas equilibra-se com a perda de clulas (Hay, 1966). Na maioria dos
casos, as clulas-tronco podem regular a produo de mais clulas-tronco ou mais
Mitose (M) Reabastecendo nicho clulas diferenciadas, quando o equilbrio estressado por leso ou pelo meio ambi-
do tronco (renovao
Diferenciao
/regenerao) ente. (Isso percebido pelo aumento da produo de uma grande quantidade de
hemcias quando o organismo sofre anoxia.) As clulas-tronco foram identificadas em
Clula-tronco intermediria
todos os tecidos mencionados anteriormente, mas elas so mais estudadas no desen-
tipo 1 volvimento das hemcias.
Potten e Loeffler (1990) apresentaram uma viso na qual algumas clulas-tronco
so potencialmente clulas-tronco no-cclicas presas em Go, enquanto outras clu-
las-tronco esto ativamente no ciclo celular. Uma clula-tronco em ciclo, normalmente
se divide para criar mais clulas-tronco, mas tambm pode gerar um tipo de clula-
tronco transitrio intermedirio (T1). Uma clula T1 pode regenerar-se, mas normal-
Clula-tronco mente prossegue para produzir um segundo tipo de clula transitria, T2. (Sob certas
intermediria tipo 2
condies, uma clula T1 pode regenerar a clula-tronco original se a populao de
clulas-tronco original estiver muito esgotada.) A clula T2 pode se manter, mas nor-
malmente se divide para criar clulas T3. Finalmente, um tipo de clula transitria
produzida, que sempre amadurece para um tipo de clula diferenciada (Figura 9.36).
Assim, o corpo vertebrado retm populaes de clulas-tronco, e essas clulas-tron-
Clula-tronco co podem produzir tanto populaes de clulas-tronco como de clulas que passaro
intermediria tipo 3 por um desenvolvimento futuro.
O caminho do desenvolvimento pelo qual uma clula-tronco passa depende do
meio molecular no qual ela reside. Isso se tornou aparente quando evidncias experi-
mentais mostrou que hemcias (eritrcitos), clulas brancas (granulcitos, neutrfilos
Blastoclula comprometida e plaquetas), e linfcitos compartilham de um precursor comum, a clula-tronco
com a diferenciao
hematopoitica pluripotencial (por vezes chamada de clula-tronco hematopotica
repopuladora a longo prazo).
Clulas--Tronco Pluripotenciais e
Clulas
Microambientes Hematopoticos
Clula madura
totalmente diferenciada
O CFU-S. A clula-tronco hematopotica pluripotencial uma das clulas mais im-
pressionantes do nosso corpo. A partir dela iro surgir eritrcitos, neutrfilos,
M Reproduo (diviso / mitose) basfilos, eosinfilos, plaquetas, mastcitos, moncitos, macrfagos dos tecidos,
Auto-reproduo / replicao osteoclastos, e os linfcitos T e B. A existncia de uma clula-tronco hematopotica
Reproduo / Replicao pluripotencial foi mostrada por Till and McCulloch (1961), que injetaram clulas da
medula ssea em camundongos fatalmente irradiados, procedentes da mesma linha-
gem gentica que os doadores da medula. (A irradiao mata as clulas
hematopoiticas do hospedeiro, permitindo que se veja as novas colnias do ca-
mundongo doador.) Algumas dessas clulas doadoras produzem ndulos discretos
no bao do animal hospedeiro (Figura 9.37). Estudos microscpicos mostraram que
esses ndulos so compostos de precursores de eritrcitos, granulcitos e plaquetas.
Assim, uma nica clula oriunda da medula ssea foi capaz de formar muitos dos
diferentes tipos de clulas sangneas. A clula responsvel foi chamada de CFU-S,

(colony-forming unit), unidade formadora de colnias do bao. Estudos mais avan-
ados usaram marcadores cromossmicos para provar que os diferentes tipos de
clula em uma colnia foram formados de uma mesma CFU-S. Aqui, clulas da medu-
la foram irradiadas para que poucas pudessem sobreviver. Muitas das que sobrevi-
veram tinham cromossomos anormais que puderam ser detectados microscopica-
mente. Quando essas clulas CFU-S irradiadas foram injetadas em um camundongo
cujas clulas-tronco formadoras de sangue haviam sido destrudas, cada clula da
colnia do bao, fosse precursora de granulcito ou de eritrcito, apresentou a
mesma anormalidade cromossmica (Becker et al., 1963). Uma parte importante do
conceito de clula-tronco o requisito de que a clula-tronco seja capaz de formar
mais clulas-tronco alm dos seus tipos de clulas diferenciadas. E realmente isso
tem acontecido. Quando colnias do bao derivadas de uma nica CFU-S so
resuspensas e injetadas em outros camundongos, muitas colnias do bao so
vistas emergir (Jurskov e Tkadlecek, 1965; Humphries et al., 1979). Assim, vemos
que uma nica clula da medula consegue formar numerosos tipos de clulas dife- Figura 9.37
rentes e tambm pode sofrer auto-renovao; em outras palavras, a CFU-S uma Colnias formadoras de sangue isoladas.
clula-tronco hematopotica pluripotencial. Quando a medula ssea contendo clulas-
A informao anterior indica que embora as CFU-S possam gerar diversos tipos tronco hematopoiticas injetada em um ca-
mundongo irradiado, discretas colnias de
de clulas sangneas, elas no so capazes de gerar linfcitos. Essa concluso
clulas de sangue so vistas na superfcie do
amparada pelos experimentos de Abramson e seus colegas (1977), que mostrou que bao desse camundongo. (de Till, 1981, cor-
ambos CFU-S e linfcitos so derivados de uma outra clula-tronco hematopotica tesia de J. E, Till.)
pluripotencial, por vezes chamada de unidade formadora de colnias de clulas
mielides e linfides, ou CFU-M,L. Quando eles injetaram clulas da medula ssea
irradiadas em camundongos com deficincia hereditria na formao de clulas san-
gneas, os pesquisadores encontraram as mesmas anormalidades cromossmicas
em colnias do bao e em linfcitos circulantes. Esse trabalho foi confirmado por
estudos nos quais clulas da medula foram injetadas com certos tipos de vrus que
se incorporam ao DNA celular aleatoriamente. Os mesmos genes derivados viralmente
foram encontrados nos mesmos lugares do genoma, nos linfcios e clulas sang-
neas (Keller et al., 1985; Lemischka et al., 1986). Em 1995, Berardi e colegas isola-
ram uma frao de clulas que pode ser a CFU-M,L humana. Eliminando todas as
clulas que se dividem quando expostas a citocinas que iriam ativar clulas-tron-
co, foi deixada uma clula nucleada para cada 10.000 originalmente presentes na
medula ssea. Essas clulas podem gerar ambas linhagens, sangnea e linfide.
LINHAGENS SANGNEAS E LINFOCTICAS. A Figura 9.38 sumariza diversos estu-

dos. A primeira clula-tronco hematopotica pluripotencial a CFU-M. L. O desenvolvi-
mento dessa CFU-M,L parece ser dependente do fator de transcrio SLC. Camundon-
gos carentes dessa protena morrem por ausncia de todas linhagens de clulas
sangneas e linfocticas. SLC pode especificar o mesoderma ventral como o destino de
uma clula sangnea ou pode envolver a formao ou manuteno de clulas CFU-M,L
(Porcher et al., 1996; Robb et al., 1996). Essa clula d origem s CFU-S (clulas sangneas)
e aos CFU-L (linfcitos). As CFU-S e as CFU-L tambm so clulas-tronco pluripotenciais
porque sua prognie pode se diferenciar em numerosos tipos de clulas. A prognie
imediata da CFU-S, no entanto, so clulas-tronco restritas s linhagens. Cada uma
pode produzir somente um tipo de clula alm de renovar a si mesma. A BFU-E (unidade
formadora de rompimento de eritride), por exemplo, formada da CFU-S e ela pode
formar somente um tipo de clula alm de si mesma. Essa nova clula a CFU-E (unidade
formadora de colnia de eritride), a qual capaz de responder ao hormnio eritropoetina
para produzir o proeritroblasto, o primeiro membro diferenciado reconhecvel da linha-
gem do eritrcito. Eritropoetina uma glicoprotena que rapidamente induz a sntese do
mRNA para globina (Krantz e Goldwasser, 1965). Ela produzida predominantemente no
rim, e sua sntese responde s condies ambientais. Se o nvel de oxignio do sangue
cair, a produo de eritropoeitina aumentada, um evento levando produo de mais
CLULAS-
TRONCO RESTRI-
CLULAS-TRONCO CLULAS EM CLULAS
TIVAS DE LINHA-
PLURIPOTENTES DIFERENCIAO DIFERENCIADAS
GEM (COMPRO-
METIDAS)
Clula pr-T Clula T Clula T ativada
Clula-tronco
linfide Clula plasma
Clula pr-B Clula-B
e
F ent
SC mbi
oa
i cr Basfilos
M
Clula-tronco
de granulcitos Eosinfilos
Mic
roa
SCF i e n t e
mb
Neutrfilos
Clula-tronco
totipotente auto- Moncito
renovadora
Clula-tronco
mielide
Macrfagos
CFC-Meg
Megacaricito
Plaquetas
Eriotroblasto
Clulas sangneas
Proeritroblasto Reticulcito
vermelhas (hemcias)
(Eritrcitos)
Figura 9.38
Um modelo para a origem de clulas linfides e de sangue de mamferos. (Outros modelos so
consistentes com os dados e este sumariza aspectos de diversos modelos). EPO, eritropoietina;
G-CSF, fator estimulador de colnias de granulcitos; GM-CSF, fator estimulador de colnias
de granulcitos-macrfagos; IL, interleucina; LIF, fator inibidor de leucemia; M-CSF, fator
estimulador de colnias de macrfagos; SCF, fator de clulas-tronco. (Segundo Nakauchi e
Gachelin, 1993.)
hemcias. Com a maturao, as hemcias se tornam eritroblastos, capazes de sinteti-

zar enormes quantidades de hemoglobina. Finalmente, o eritroblasto mamfero expele
o seu ncleo, tornando-se um reticulcito. Os reticulcitos j no conseguem mais
sintetizar mRNA da globina, mas ainda conseguem traduzir mensagens existentes na
globina. O estgio final da diferenciao o eritrcito. Nesse estgio no h diviso,
sntese de RNA ou sntese de protena. As clulas deixam a medula ssea para exercer
o seu papel de fornecedoras de oxignio aos tecidos corporais. Similarmente, existem
clulas-tronco restritivas de linhagem para plaquetas e granulcitos (neutrfilos,
basfilos e eosinfilos) e macrfagos.
Alguns fatores de crescimento hematopoitico (tal como o IL-3) estimulam a
diviso e a maturao de outras clulas-tronco mais primitivas, desse modo au-
mentando o nmero de tipos de clulas sangneas. Outros fatores (como a
eritropoetina) so especficos somente para algumas linhagens de clulas. A habi-
lidade da clula em responder a esses fatores depende da presena de receptores
para esses fatores na sua superfcie. O nmero desses receptores muito baixo.
Existem somente cerca de 700 receptores para eritropoetina em uma CFU-E, e a
maioria das outras clulas progenitoras tem o mesmo baixo nmero de receptores
do fator de crescimento. A exceo o receptor para o fator de estimulao de
colnia de macrfagos -M-CSF, tambm conhecido como CSF-1- do qual pode
haver at 73.000 por clula em algumas clulas progenitoras.
MICROAMBIENTES HEMATOPOITICOS INDUTIVOS. Alguns fatores de cresci-

mento hematopoitico so formados por clulas estromticas (fibroblastos e outros
elementos do tecido conjuntivo) da prpria medula ssea. Outros fatores de cresci-
mento viajam atravs do sangue e so retidos pela matriz extracelular das clulas
estromticas. No bao, as clulas-tronco esto comprometidas com o desenvolvi-
mento do eritride. Na medula ssea, o desenvolvimento de granulcitos predomi-
na. O caminho do desenvolvimento percorrido pelos descendentes de uma clula-
tronco pluripotencial depende de quais fatores de crescimento ela encontra, e isso
determinado pelas clulas estromticas da medula ssea. Wolf e Trentin (1968) de-
monstraram que interaes de curto alcance entre as clulas estromticas e as clu-
las-tronco determinam o destino do desenvolvimento da prognie das clulas-tron-
co. Esses investigadores colocaram plugues de medula ssea no bao e, em segui-
da, injetaram clulas-tronco. As colnias no bao eram predominantemente eritrides,
ao passo que aquelas que se formaram nos plugues de medula eram predominante-
mente granulcitos. De fato, aquelas colnias que cobriam as bordas, se tornaram
predominantemente eritrides no bao e granulocticas na medula. As regies de
determinao so referidas como microambientes hematopoiticos indutivos (HIMs)
As clulas estromticas da medula ssea criam HIMs atravs da sua habilidade de
agregar fatores de crescimento hematopoitico (Hunt et al., 1987; Whitlock et al.,
1987). GM-CSF e o fator de crescimento multilinhagens IL-3 ligam-se ao
glicosaminoglicano heparan sulfato do estroma da medula ssea (Gordon et al., 1987;
Roberts et al., 1988). Alm disso, eles permanecem ativos quando ligados. Desse
modo, os fatores de crescimento podem ser concentrados e compartimentalizados,
estimulando clulas-tronco em uma rea para se diferenciarem em um tipo de clula,
permitindo que esse mesmo tipo de clula-tronco em outra rea se diferencie em outro
tipo de clula. Sem esses fatores de crescimento, as clulas-tronco morrem.
Desenvolvimento Osteoclstico
Como vimos, as clulas-tronco so influenciadas por numerosos fatores de cresci-

mento hematopoitico. Alm disso, esses fatores so, eles mesmos, influenciados
pelo meio hormonal do organismo. Esse fato pode ser de extrema importncia na
osteoporose ps-menopausa. A perda da funo ovariana em muitas fmeas de
mamferos causa uma perda de massa ssea que pode ser freqentemente prevenida
pelo fornecimento de estrgeno ao indivduo, e essa perda ssea foi associada com
o aumento da produo de osteoclastos. Acredita-se que o osteoclasto (clula res-
ponsvel para formar buracos nos ossos, como descrito anteriormente) proceden-
te da mesma clula-tronco que os macrfagos e granulcitos, o CFU-GM (Kurihara
et al., 1990; Hattersley et al., 1991). O fator de crescimento interleucina 6 (IL-6)
estimula a produo de osteoclastos. No entanto, a produo de IL-6 inibida pelo
estrgeno que, quando adicionado s clulas de medula de camundongo em cul-
tura, tanto a produo de IL-6 como a de osteoclastos so inibidas (Girasole et al,
1992). Jilka e colegas (1992) mostraram que a remoo dos ovrios do camundongo
causa um aumento no nmero de CFU-GMs, acentuando o desenvolvimento do
osteoclasto, e um aumento no nmero de osteoclastos encontrados no osso. Essas
mudanas podem ser prevenidas injetando nesses camundongos estrgeno ou IL-
6. Isso sugere que o estrgeno normalmente suprime a produo de IL-6 e a forma-
o de osteoclastos em fmeas de mamferos, e que a perda ssea ps-menopausa
pode ser devida produo de novos osteoclastos pela IL-6.* [mesend4.html]
Locais de Hematopoiese
Nas espcies avcolas e anfbias, as primeiras clulas do sangue derivam do vitelo ou

saco vitelnico. Essa populao celular, no entanto, transitria; as clulas-tronco
hematopoiticas que perduram por toda vida do organismo so derivadas da rea
mesodrmica que envolve a aorta. Isso foi demonstrado no pinto atravs de uma srie
de experimentos elegantes por Dieterlen-Livre, que enxertou o blastoderma de um
*Ento, como os machos - que no tm ovrios ou mesmo estrgeno - normalmente no sofrem

perda ssea osteoportica? Parece que a testosterona tambm suprime o desenvolvimento osteoclstico
(Bellido et al., 1995). Nos seres humanos machos, a produo de testosterona normalmente mantida
com a chegada da idade. Dada a fisiologia do osteoclasto, ns podemos apreciar a intuio presciente
de H. L. Menken (1919): A vida uma luta, mas no contra o pecado ou o Poder Econmico, ou
contra o malicioso magnetismo animal, mas contra os ons de hidrognio.
(B)
Clula
de pinto
Clula
Figura 9.39
de codorna
Mapeamento de clulas sangneas por quime-
ras pinto-codorna. (A) Fotografia de uma qui-
mera de saco vitelnico onde o blastoderma de
uma codorna foi transplantado para o saco
vitelnico de um pinto. (B) Fotografia de clu-
las de pinto e de codorna no timo de um animal
quimrico, mostrando a diferena na colorao
nuclear. As clulas linfides so todas de pin-
to, enquanto as clulas estruturais do timo so
originrias da codorna. (C) Seo atravs da
aorta de um embrio de pinto de trs dias, mos-
trando as clulas (setas) que do origem s c-
lulas-tronco hematopoiticas. Se clulas dessa
regio forem retiradas de embries de codorna
e colocadas em embries de pinto, os embries
de pinto tero sangue de codorna. (de Martin
et al., 1978, e Dieterlen-Livre e Martin, 1981,
fotografias cortesia de F. Dieterlen-Livre.) (A) (C)
pinto em um vitelo de codorna japonesa (Figura 9.39). As clulas do pinto so facil-

mente distinguidas daquelas da codorna porque o ncleo celular da codorna escurece
muito mais (devido a seus densos nuclolos), assim fornecendo uma marca permanen-
te para a distino entre os dois tipos de clulas. Usando essas quimeras do saco
vitelnico, Dieterlen-Livre e Martin (1981) mostraram que as clulas-tronco do saco
vitelnico no contribuem com clulas para o animal adulto, mas que as verdadeiras
clulas-tronco so formadas dentro dos ndulos do mesoderma que revestem os
principais vasos sangneos e o mesentrio. Esses so os hemangioblastos que so
derivados da esplancnopleura (veja Figura 9.28; Pardanaud et al., 1996). No embrio
de pinto de 4 dias, a parede da orta parece ser a fonte mais importante de clulas
sangneas novas, onde foi encontrado numerosas clulas-tronco hematopoiticas
(Cormier e Dieterlen-Livre, 1988).
Nos mamferos a situao mais controversa, mas comea a ficar bem parecida
com a do pinto. As primeiras ilhas sangneas no embrio do camundongo aparecem
no mesoderma extra-embrionrio e saco vitelnico. Essas clulas parecem ter ativida-
de de CFU-C. Essa populao derivada do saco vitelnico provavelmente transit-
ria ou pode suprir somente as necessidades respiratrias do embrio (produzindo
hemcias nucleadas). No dcimo primeiro dia, clulas-tronco hematopoiticas e c-
lulas CFU-S podem ser encontradas na regio mesodrmica embrionria do camun-
dongo que inclui a aorta, gnadas e mesonefro (a regio AGM; Kubai e Auerbach,
1983; Godlin et al., 1993; Medvinsky et al., 1993). Essas so as precursoras das
clulas sangneas que iro colonizar o fgado e constituir o sistema circulatrio do
feto e do adulto (Medvinsky e Dzierak, 1996). Mller e colegas (1994) propuseram
(A) (B)
AGM
Saco vitelnico
Aorta dorsal
Prnefro
Mesonefro
Sulco genital
AGM CFU-C no
rudimento heptico
CFU-C
CFU-S
Figura 9.40 Clula-tronco
hematopoiticas no fgado
Colonizao de fgado de camundongo por duas ondas hematopoitica

Inco das atividades
de clulas-tronco hematopoiticas. As duas principais fon- pluripotente

tes das clulas progenitoras hematopoiticas so o saco
vitelnico e a regio AGM. (A) No dia 9 o saco vitelnico Segunda onda
contribui com uma linha precoce de clulas CFU-C que
provavelmente no permanecem muito tempo aps o nas-
cimento, e que produz um populao predominante de Primeira onda
clulas sangneas vermelhas. Essa considerada a prin-
cipal fonte da primeira onda hematopoitica do fgado.
(B) No dia 10, as clulas derivadas da AGM fornecem
clulas CFU-S e clulas-tronco hematopoiticas
pluripotentes. Essas constituem as principais clulas da
segunda onda. (Segundo Dzierzak e Medvinsky, 1995). Dias aps o coito
que duas ondas de clulas colonizam o fgado fetal. A populao menor dessas
clulas viriam do saco vitelnico e seriam predominantemente clulas CFU-C. A mai-
or parte da populao viria de stios AGM e constituiriam tanto CFU-S como clulas-
tronco hematopoiticas pluripotentes (Figura 9.40). Essa proposta foi fortalecida
com a descoberta de que camundongos com deficincia no fator de transcrio
AML1 possuem hematopoiese normal dos sacos vitelnicos, mas no tem
hematopoiese (AGM) definitiva (Okuda et al., 1996). Esses camundongos mutantes,
morrem no dia embrionrio 12,5. O seu fgado contm um pequeno nmero de hemcias
nucleadas primitivas, enquanto os fgados controles esto repletos de clulas
sangneas derivadas da AGM. A protena AML essencial para a ativao dos
genes envolvidos na hematopoiese difinitiva. Ao redor da poca do nascimento, as
clulas-tronco do fgado povoam a medula ssea, que assim se torna o principal
local formador de sangue por toda a vida adulta.
QENDODERMA
Faringe
A funo do endoderma embrionrio construir o revestimento de dois tubos den-
tro do organismo. O primeiro se estende atravs do comprimento do corpo; o tubo
digestivo. Brotos desse tubo formam o fgado, vescula biliar e o pncreas. O segun-
do, o tubo respiratrio, que cresce a partir do tubo digestivo, finalmente se bifur-
cando e se transformando nos dois pulmes. Os tubos digestivo e respiratrio
dividem uma cmara comum na regio anterior do embrio; essa regio chamada de
faringe. Bolses epiteliais exteriores da faringe do origem as amgdalas, as glndu-
las tireide, timo e paratireide.
Os tubos digestivo e respiratrio so ambos derivados do intestino primitivo
(Figura 9.41). Com o avano do endoderma em direo ao centro do embrio, so
formados o intestino anterior e posterior. Antes, a parte terminal oral bloqueada por
uma regio do ectoderma chamada placa oral, ou estomodeu. Finalmente (aproximada-
mente aps 22 dias nos embries humanos), o estomodeu se rompe, criando a abertura
oral do tubo digestivo. Essa abertura revestida por clulas ectodrmicas. Esse arran-
jo cria uma situao interessante, porque o ectoderma da placa oral est em contato
com o ectoderma do crebro, qual se curvou ao redor da poro ventral do embrio. As
duas regies ectodrmicas interagem mutualmente uma com a outra. A cobertura da
regio oral forma a bolsa de Rathke e se torna a parte glandular da glndula pituitria.
O tecido neural no assoalho do diencfalo d origem ao processo infundibular, que se
torna a poro neural da pituitria. Assim, a glndula pituitria tem um dupla origem:
essa natureza dupla se reflete em suas funes no adulto.
A poro endodrmica dos tubos digestivo e respiratrio, se inicia na faringe.
Aqui, o embrio de mamfero produz quatro pares de bolsas farngeas (Figura 9.42).
Em vertebrados aquticos, essas estruturas produzem as guelras, porm, as bolsas
farngeas humanas foram modificadas para o ambiente terrestre. Como discutido no
Captulo 7, clulas da crista neural craniana migram para essas bolsas para formar o
componente mesenquimatoso ou cartilaginoso dessas estruturas revestidas de
endoderma. Entre essas estruturas esto os arcos farngeos. O primeiro par das
bolsas farngeas se torna as cavidades auditivas do ouvido mdio e os tubos de
eustquio associados. O segundo par d origem s paredes das amgdalas. O timo
derivado do terceiro par de bolsas farngeas; ele ir direcionar a diferenciao dos
linfcitos T durante os estgios tardios do desenvolvimento. Um par das glndulas
paratireides tambm deriva do terceiro par das bolsas farngeas; o outro par deriva
do quarto. Alm dessas bolsas pareadas, um pequeno divertculo central formado
entre as segundas bolsas farngeas no assoalho da faringe. Essa bolsa de endoderma
e mesnquima brotar da faringe e migrar descendo pelo pescoo para se tornar a
glndula tireide.
(A) (B)
Ndulo de Hensen
Notocorda Vilosidade corinica
Cavidade Pregas neurais

Placa neural amnitica comeando a se fundir
mnio
Intesti (secionado)
Primrdio Intestino anterior no po
Corao sterio
r Intestino
cardaco Intestino primitivo
mdio
Celoma
Saco vitelnico Divertculo
Ilha pericardaco Saco
alantico no Pednculo
sangnea vitelnico
pednculo Portal Portal de conexo
de conexo intestinal intestinal
anterior posterior
Sulco neural
mnio
Somito
Cavidade
amnitica Mesoderma somtico
Mesoderma esplncnico
Saco vitelnico
Intestino mdio
(C) (D) Estmago

Broto pulmonar
Pncreas
Tireide
Aorta dorsal
Tireide Estomodeo
(agora aberto) Notocorda
Placa
Faringe da cloaca Alantide
Pulmo Bolsa
de Rathke Corao
Estomodeu Fgado Saco
Broto Infundbulo Proctodeu
Corao Saco vitelnico
Neurporo caudal
anterior vitelnico Fgado
Pednculo mnio
Crebro
corporal (secionado)
Mesentrio
Dorsal Tubo Neural
Mesentrio Tubo
Mesoderma dorsal
Somtico neural
Pncreas
Intestino Cavidade dorsal
Mdio abdominal
Peritnio
visceral
Saco vitelnico Peritnio
Duodeno
parietal
Mesentrio
Dorsal
Figura 9.41
Formao do sistema digestivo humano, apresentado aps aproximadamente (A) 16 dias, (B) 18
dias, (C) 22 dias e (D) 28 dias. (Segundo Crelin, 1961.)
(A) (B) 29 dias (C) 32 dias

Embrio
Infundbulo secionado ao
Hipfise Notocorda nvel mostrado
Processo
esquerda
Bolsa de Rathke mandibular Broto
(da bolsa lingual lateral
farngea I) Broto
lingual mediano
Sulcos Expanso do
farngeos Arcos segundo arco
farngeos
Traquia
Duto heptico
Esfago Entrada para
Vescula biliar Fgado o esfago
Pednculo vitelnico Estmago (D) 42 dias

Alantide Pncreas dorsal
Abertura
Membrana da cloaca Pncreas ventral auditiva
externa Tubo auditivo
Seio urogenital
Cavidade peritoneal Amgdala Seio cervical lateral
Intestino caudal
Reto Glndula
paratireide
inferior
Figura 9.42 Glndula
Desenvolvimento endodrmico de um embrio paratireide
humano de 6 semanas. (A) viso sagital do superior
embrio. A regio estomacal comeou a se di-
latar, e o pncreas est representado por dois
brotos que no final iro se fundir. (B-D) Se- O tubo digestivo e seus derivados
es atravs do embrio de 6 semanas nos pla-
nos em (A), mostrando os destinos dos sulcos Posteriormente faringe, o tubo digestivo se constringe para formar o esfago, o qual
farngeos. O primeiro sulco forma as passa- seguido na seqncia pelo estmago, intestino menor e intestino maior. As clulas
gens auditivas externas, enquanto o segundo
endodrmicas geram somente o revestimento do tubo digestivo e de suas glndulas,
se expande, para finalmente cobrir os sulcos 2,
3 e 4. (Segundo Larsen, 1993.) pois clulas mesenquimatosas mesodrmicas iro rodear esse tubo provendo os ms-
culos para o peristaltismo.
A Figura 9.42 mostra que o estmago se desenvolve como uma regio dilatada
prxima faringe. Mais caudalmente, se desenvolvem os intestinos, e a conexo entre
o intestino e o saco vitelnico posteriormente cortada. Na terminao caudal do
intestino forma-se uma depresso onde o endoderma encontra o ectoderma
sobrejacente. Aqui, uma fina membrana cloacal separa os dois tecidos. Essa por fim
se rompe, formando a abertura que ir originar o nus. O desenvolvimento das vrias
regies do tubo digestivo ser detalhado no Captulo 17.
Fgado, Pncreas e Vescula Biliar

Vescula
O endoderma tambm forma o revestimento de trs rgos acessrios que se desen-

volvem imediatamente em posio caudal ao estmago. O divertculo heptico o
tubo de endoderma que se estende do intestino anterior para dentro do mesnquima
circunjacente. O mesnquima induz o endoderma a se proliferar, ramificar e formar o
epitlio glandular do fgado. Uma poro do divertculo heptico (aquela regio mais
prxima do tubo digestivo) continua a funcionar como um duto de drenagem do
fgado e um ramo desse duto produz a vescula biliar (Figura 9.43).
O pncreas se desenvolve da fuso dos divertculos dorsal e ventral distintos.
Ambos primrdios nascem do endoderma imediatamente caudal ao estmago, e
medida que eles crescem se aproximam um do outro, para finalmente se fundirem. Em
seres humanos, somente o duto ventral sobrevive para transportar enzimas para o
intestino. Em outras espcies (tais como o co), tanto o duto dorsal como o ventral
se esvaziam no intestino. Tal como outros rgo endodrmicos, o pncreas se
Broto Estmago Duto biliar Duto

Heptico pancretico acessrio
Duto
Heptico
Pncreas Duto
dorsal Duto biliar
pancretico Duto
Vescula Vescula biliar Vescula biliar Dorsal Duodeno pancretico
biliar Broto Broto ventral
Pncreas Duodeno Duto
pancretico pancretico ventral pancretico ventral Duto
ventral dorsal pancretico principal
(A) (B) (C) (D)
Figura 9.43
Desenvolvimento pancretico em humanos. (A)
Aps 30 dias, o broto pancretico ventral est
prximo aos primrdios hepticos. (B) Aos 35
desenvolve atravs de interaes entre o epitlio e seu mesnquima associado. dias comea a migrar posteriormente e (C) en-
Ambos tecidos tm especificidades proporcionadas por sua posio ao longo do tra em contato com o broto pancretico dorsal
eixo ntero-posterior (a ser discutido nos Captulos 16 e 17). Se o epitlio pancreti- durante a sexta semana do desenvolvimento.
co cultivado num ambiente permissivo na ausncia de mesnquima, ele se diferen- (D) Na maioria dos indivduos, o broto pan-
cretico dorsal perde o seu duto para o duodeno;
cia quase inteiramente em clulas de llhotas, secretoras de insulina e glucagon. No
porm, em cerca de 10 porcento da populao,
so produzidas estruturas acinares (secretoras de quimotripsina ou amilase) nem o sistema duplo de dutos persiste. (Segundo
dutos (Gittes et al., 1996). Isso sugere que a condio de ausncia de comando do Langman, 1981.)
epitlio pancretico a de produzir hormnios endcrinos e que as clulas secretoras
e os dutos caractersticos de sua funo digestiva (excrina) so resultado de suas
interaes com o mesnquima. O gene pdx-1 parece fornecer ao epitlio pancretico
a capacidade de responder a seu mesnquima. Camundongos carentes desse gene
no apresentam pncreas, embora seu epitlio seja capaz de se diferenciar em
clulas pr-ilhotas que sintetizam pequenas quantidades de glucagon e insulina
(Johnson et al., 1994; Ahlgren et al., 1996; Offield et al., 1996). O epitlio pancre-
tico, portanto, pode ter capacidade endcrina autnoma, mas necessita interagir
com o mesnquima para formar clulas excrinas e os dutos que transportam suas
secrees para o duodeno.
OTubo R
Tubo espiratrio
Respiratrio
Os pulmes tambm so um derivado do tubo digestivo, embora no tenham papel na

digesto. No centro do assoalho farngeo, entre o quarto par de bolsas farngeas, o
sulco laringotraqueal estende-se ventralmente (Figura 9.44). Esse sulco se bifurca em
seguida em dois ramos, que formam o par de brnquios e pulmes. O endoderma
laringotraqueal torna-se o revestimento da traquia, os dois brnquios e os sacos
areos (alvolos) dos pulmes. Como veremos em um prximo captulo, a ramificao
desse tubo endodrmico depende de interaes com os diferentes tipos de clulas
mesodrmicas ao longo de sua trajetria.
Os pulmes so uma novidade evolucionria, e esto entre os ltimos rgos do
mamfero a se diferenciar totalmente. Os pulmes tm que ser capazes de recolher
oxignio no momento da primeira respirao do beb. Para consegu-lo, as clulas
alveolares secretam um surfactante para o fluido que banha os pulmes. Esse
surfactante, consistindo de fosfolipdios tais como a esfingomielina e a lecitina,
secretado muito tardiamente na gestao, e usualmente atinge nveis teis fisiologica-
mente ao redor da semana 34 da gestao humana. Esses compostos permitem s
clulas alveolares tocarem-se mutuamente, sem se colarem. Assim, infantes nascidos
prematuramente, freqentemente tm dificuldade respiratria e tm que ser colocados
em respiradores at o amadurecimento de suas clulas produtoras de surfactante.
Figura 9.44 Intestino

Diviso do destino anterior em esfago e anterior
divertculo respiratrio durante as terceira e Faringe
quarta semanas de gestao humana. (A) Vi-
so lateral, fim da semana 3. (B,C) Viso ven-
tral, semana 4. (Segundo Langman, 1981.)
Traquia
Brotos dos
Divertculo respiratrio membros
(Sulco laringotraqueal)
Esfago
(A) (B) (C)
Isso conclui nosso levantamento dos aspectos precoces do desenvolvimento

animal. Agora nos dedicaremos aos mecanismos que permitem a ocorrncia desse
desenvolvimento. Na parte III, enfocamos os eventos moleculares que direcionam a
diferenciao celular. Na parte IV, vemos os papis dessas molculas na formao dos
eixos do corpo embrionrio. A parte V ir discutir as foras genticas, celulares e
ambientais que interagem durante a formao dos rgos.
LITERATURA CITADA
Abrarnson, S., Miller, R. G. and Phillips, R. A. in chemically defined medium. J. Cell Biol. 126: Berardi, A. C., Wang, A., Levne, J. D., Lopez,
1977. The identification in adult bone marrow 1311-1318. P. and Scadden, D. T. 1995. Functional
of pluripotent and restricted stem cells of the Barnes, G. L., Hsu, C. W., Mariani, B. D. and characterization of human hematopoietic stem
rnyeloid and lymphoid systems. J. Exp. Med. Tuan, R. S. 1997. Cloning and characterization cells. Science 267: 104-108.
145: 1567-1579.
of chicken paraxis: A regulator of somite Bischoff, R. and Holtzer, H. 1969. Mitosis and
Ahlgren, U., Jonnson, J. and Edlund, H. 1996. segmentation. Dev. Biol. In press. processes of differentiation of myogenic cells
The morphogenesis of the pancreatic mesen- in vitro. J. Cell Biol. 41: 188-200.
Baron, R., Neff, L., Louvard, D. and Courtoy,
chyme is uncoupled from that of the pancreatic P. J. 1985. Cell mediated extracellular Blair, H. C., Kahn, A. J., Crouch, E. C., Jeffrey, J.
epithelium in IPF/PDX1-deficient mice. Deve-
acidification and bone resorption: Evidence for J. and Teitelbaum, S. L. 1986. Isolated osteoclasts
lopment 122: 1409-1416.
a low pH in resorbing lacuna and localization resorb the organic and inorganic components of
Alini, M., Marriott, A., Chen, T., Abe, S. and of a 100-kD lysosornal membrane protein at bone. J. Cell Biol. 102: 1164-1172.
Poole, A. R. 1996. A novel angiogenic molecule the osteoclast ruffled border. J. Cell Biol. 101:
Bloom, W. and Fawcett, D. W. 1975. Textbook
produced at the time of chondrocyte hypertro- 2210-2222.
of Histology, 10th Ed. Saunders, Philadelphia.
phy during endochondral bone formation. Dev.
Baron, R., Neff, L., Roy, C., Boisvert, A. and
Biol. 176: 124-132. Caplan, M. 1986. Evidence for a high and Boettiger, D., Enomoto-Iwamoto, M., Yoon,
Anderson, C., Devine, W. A., Anderson, R. H., specific concentration of (Na+,K+) ATPase in H. Y., Hofer, U., Menko, A. S. and Chiquet-
Debich, D. E. and Zuberbuhler, J. R. 1990. the plasma membrane of the osteoclast. Cell Ehrismann, R. 1995. Regulation of integrin (a5bl
Abnormalities of the spleen in relation to congenital 46: 311-320. affinity during myogenic differentiation. Dev.
malformation of the heart: A survey of necropsy Biol. 169: 261-272.
Becker, A. J., McCulloch, E. A. and Till, J. E.
findings in children. Br. Heart J. 63: 122-128. 1963. Cytological demonstration of the clonal Braun, T. and Arnold, H.-H., 1996. Myf-5 and
Ash, P. J., Loutit, J. F. and Townsend, K. M. S. nature of spleen cells derived from transplanted myoD genes are activated in distinct mesenchy-
1980. Osteoclasts derived from haematopoietic mouse marrow cells. Nature 197: 452-454. mal stem cells and determine different skeletal
stem cells. Nature 283: 669-670. muscle lineages. EMBO J. 15: 310-318.
Bellido, T. and seven others. 1995. Regulation
Auerbach, R., Alby, L., Morrissey, L., Tu, M. of interleukin-6, osteoclastogenesis, and bone Braun, T., Rudnicki, M. A., Arnold, H.-H. and
and Joseph, J. 1985. Expression of organspecific mass by androgens: The role of the androgen Jaenisch, R. 1992. Targeted inactivation of the
antigens on capillary endothelial cells. Micro- receptor. J. Clin. Invest. 95: 2886-2895. muscle regulatory gene Myf-5 results in abnormal
vasc. Res. 29: 401-411. rib development and perinatal death. Cell 71:
Bellus, G. A. and eight others. 1995. A recurrent 369-382.
Ballock, R. T. and Reddi, A. H. 1994. Thyroxine mutation in the tyrosine kinase domain of
is the serum factor that regulates morphogenesis fibroblast growth factor receptor 3 causes Breier, G., Albrecht, U., Sterrer, S. and Risau, W.
of columnar cartilage from isolated chondrocytes hypochondroplasia. Nat. Genet. 10: 357-359. 1992. Expression of vascular endothelial growth
factor during embryonic angiogenesis and segmentation of somites. Development 121: Evans, H. M. 1909. On the earliest blood vessels
endothelial cell differentiation. Development 1533-1545. in the anterior limbs of bircs and their relation
114:521-532. Cormier, F. and Dieterlen-Livre, F. 1988. The to the primary subclavian artery. Am. J. Anat.
9: 281-319.
Brighton, C. T. 1984. The growth plate. Orthop. wall of the chick aorta harbours M-CFC, G-
Clin. North Am. 15: 571-594. CFC, GM-CFC and BFU-E. Development 102: Fan, C. M. and Tessier-Lavigne, M. 1994.
279-285. Patterning of mammalian somites by surface
Brighton, C. T. and Hunt, R. M. 1974. ectoderm and notochord: Evidence for sclero-
Mitochondrial calcium and its role in calcifica- Cossu, G., Kelly, R., Tajbakhsh, S., Di Donna, S.,
tome induction by a hedgehog homolog. Cell
tion. Clin. Orthop. 100: 406-416. Vivarelli, E. and Buckingham, M. 1996a.
79: 1175-1186.
Activation of different rnyogenic pathways:
Brill, G., Kahane, N., Carmeli, C., von myf-5 is induced by the neural tube and MyoD Feinberg, R. N. 1991. Vascular development in
Schack, D., Barde, Y.-A. and Kalcheim, C. by the dorsal ectoderm in mouse paraxial the embryonic limb bud. In R. N. Feinberg, G. K.
1995. Epithelial-mesenchymal conversion mesoderm. Development 122: 429-437. Sherer, and R. Auerbach (eds.), The Developrnent
of dermatome progenitors requires neural of the Vascidar Systein. Issues in Biornedicine
tube-derived signals: Characterization of the Cossu, G., Tajbakhsh, S. and Buckingham, M.
14. Karger, Basel, pp. 136-148.
role of neurotrophin-3. Development 121: 1996b. How is rnyogenesis initiated in the
2583-2594. embryo? Trends Genet. 12: 218-223. Feinberg, R. N. and Cafasso, E. 1995. Macro-
molecular permeability of chick wing microves-
Brunetti, A. and Goldfine, I. D. 1990. Role of Couly, G., Coltey, P., Eichmann, A. and
sels: An intravital study. Anat. Embryol. 191:
rnyogenin in myoblast differentiation and its LeDouarin, N. M. 1995. The angiogenic
337-342.
regulation by fibroblast growth factor. J. Biol. potentials of the cephalic mesoderm and the
Chem. 265: 5960-5963. origin of brain and head blood vessels. Mech. Fidler, I. J. and Ellis, L. M. 1994. The implications
Dev. 53: 97-112. of angiogenesis for the biology and therapy of
Burgess, R., Cserjesi, P., Ligon, K. L. and Olson, cancer metastsis. Cell 70: 185-188.
E. N. 1995. Paraxis: A basic helixlop-helix Creliri, E. S. 1961. Development of the
protein expressed in paraxial mesoderm and gastrointestinal tract. Clin. Symp. 13: 68-82. Flamme, I. and Risau, W. 1992. Induction of
developing somites. Dev. Biol. 168: 296-306. vasculogenesis and hematogenesis in vitro. De-
Cserjesi, P. and seven others. 1995. A basic helix-
velopment 116: 435-439.
Burgess, R., Rawls., Brown, D., Bradley, A. and loop-helix protein that prefigures skeletal
Olson, E. N. 1996. Requirement of the praxis formation during mouse embryogenesis. Deve- Flamme, I., von Reutern, M., Dexter, H. C. A.,
gene for somite formation and musculoskeletal lopment 121: 1099-1110. Syedali, S. and Risau, W. 1995. Overexpression
patterning. Nature 384: 570-573. of vascular endothelial growth factor in avian
David, J. D., See, W. M. and Higginbotham, C.
embryos induces hypervascularization and
Carlson, B. M. 1981. Pattens Foundations of A. 1981. Fusion of chick embryo skeletal
increased vascular permeability without
Embryolqg,y. McGraw-Hill, New York. myoblasts: Role of calcium influx preceding
alterations of embryonic pattern formation. Dev.
membrane union. Dev. Biol. 82: 297-307.
Chen, C.-M., Kraut, N., Groudine, M. and Biol. 171: 399-414.
Weintraub, H. 1996. I-mf, a novel myogenic Davis, R. L., Weintraub, H. and Lassar, A. B.
1987. Expression of a single transfected cDNA Fong, G.-H., Rossant, J., Gertenstein, M. and
repressor, interacts with members of the MyoD Breitman, M. L. 1995. Role of the Flt-1 recep-
family. Cell 86: 731-741. converts fibroblasts into myoblasts. Cell 51:
987-1000. tor tyrosine kinase in regulating the assembly of
Chen, Q., Johnson, D. M., Haudenschild, D. R. vascular endothelium. Nature 376: 66-70.
and Goetinck, P. F. 1995. Progression and Davis, S. and ten others. 1996. Isolation of
angiopoietin-1, a ligand for the TIE2 receptor, Garcia-Martinez, V. and Schoenwolf, G. C.
recpitulation of the chondrocyte differentiati- 1993. Primitive-streak origin of the cardio-
on program: Cartilage matrix protein is a by secretion trap expression cloning. Cell 87:
1161-1169. vascular system in avian embryos. Dev. Biol.
marker for cartilage maturation. Dev. Biol. 172: 159: 706-719.
293-306. DeHaan, R. 1959. Cardia bifida and the develo-
pment of pacemaker function in the early George-Weinstein, M. and nine others. 1996.
Chevallier, A., Kieny, M., Mauger, A. and Sengel, Skeletal myogenesis: The preferred pathway of
P. 1977. Developmental fate of the somitic chicken heart. Dev. Biol. 1: 586-602.
chick embryo epiblast cells in vitro. Dev. Biol.
mesoderm in the chick embryo. In D. A. Ede, J. DeHaan, R. L. 1967. Regulation of sponta- 173: 279-291.
R. Hinchliffe and M. Balls (eds.), Vertebrate Limb neous activity and growth of embryonic chick
and Somite Morphogenesis. Cambridge Univer- heart cells in tissue culture. Dev. Biol. 16: Gilbert-Barness, E. and Opitz, J. M. 1996.
sity Press, Cambridge, pp. 421-432. 216-249. Abnormal bone development: Histopatholo-
gy and skeletal dysplasias. In M. E. Martini-
Christ, B., Jacob, H. J. and Jacob, M. 1977. Ex- Deng, C., Wynshaw-Boris, A., Zhou, F., Kuo, A. Neri, G. Neri, and J. M. Opitz, (eds.), Gene
perimental analysis of the origin of the wing and Leder, P. 1996. Fibroblast growth factor Regulation and Fetal Development: March
musculature in avian embryos. Anat. Embryol. receptor-3 is a negative regulator of bone growth. of Dimes Birth Defects Fonndation Original
150: 171-186. Cell 84: 911-921. Article Series 30 (1), Wiley-Liss, NY. pp.
Chuong, C.-M., Widelitz, R. B., Jiang, T.-X., Dieterlen-Livre, F. and Martin, C. 1981. 103-156.
Abbott, U. K., Lee, Y.-S. and Chen, H.-M. 1993. Diffuse intraembryonic hemopoiesis in normal Girasole, G., Jilka, R. L., Passeri, G., Boswell, S.,
Roles of adhesion molecules NCAM and and chimeric avian development. Dev. Biol. Boder, G., Williams, D. C. and Manolanas, S. C.
tenascin in limb skeletogenesis: Analysis with 88: 180-191. 1992.17-Estradiol inhibits interleukin-6 produc-
antibody pertubations, exogenous gene tion by bone marrow derived stromal cells and
Dzierzak, E. and Medvinsky, A. 1995. Mouse
expression, talpid2 mutants and activin osteoblasts in vitro: A potential mechanism for
embyonic hematopoiesis. Trends Genet. 11:
stimulation. In J. F. Fallon, (ed.) Limb Develo- the antiosteoporotic effect of estrogens. J. Clin.
359-366.
pment and Regeneration. Wiley-Liss, New Invest. 89: 883-891.
York, pp. 465-474. Ede, D. A. 1983. Cellular condensations and
chondrogenesis. In B. K. Hall (ed.), Cartilage, Vo- Gittes, G., Galante, P. E., Hanahan, D., Rutter,
Conlon, R. A., Reaume, A. G. and Rossant, J. lume 2: Development, Differentiation, and Growth. W. J. and Debas, H. T. 1996. Lineagespecific
1995. Notchl is required for the coordinate Academic Press, New York, pp. 143-185. morphogenesis in the developing pancreas:
Role of mesenchymal factors. Development Hay, E. 1966. Regeneration. Holt, Rinehart & Knudsen, K. A. 1985. The calcium-dependent
122: 439-447. Winston, New York. rnyoblast adhesion that precedes cell fusion is
Godlin, I. E., Garcia-Porrero, J. A., Coutinho, mediated by glycoproteins. J. Cell Biol. 101:
Ho, S. Y., Cook, A., Anderson, R. H., Allan, L.
A., Dieterlen-Livre, F. and Marcos, M. A. R. 891-897.
D. and Fagg, N. 1991. Isomerism of the atrial
1993. Para-aortic splanchnopleura from early appendages in the fetus. Pediatr. Pathol. 11: Knudsen, K. A., McElwee, S. A. and Myers, L.
mouse embryos contain B1a cell progenitors. 589-608. 1990. A role for the neural cell adhesion
Nahire 364: 67-70. molecule, N-CAM, in myoblast interaction
Holtzer, H., Rubinstem, N., Fellini, S., Yeoh, G.,
during myogenesis. Dev. Biol. 138: 159-168.
Gordon, M. Y., Riley, G. P., Watt, S. M. and Chi, J., Birbaum, J. and Okayama, M. 1975.
Greaves, M. F. 1987. Compartmentalizati- Lineages, quantal cell cycles, and the generation Konigsberg, I. R. 1963. Clonal analysis of
on of a haematopoietic growth factor of cell diversities. Q. Rev. Biophys. 8: 523-557. myogenesis. Science 140: 1273-1284.
(GMCSF) by glycosaminoglycans in the Krantz, S. B. and Goldwasser, E. 1965. On the
Horton, W. A. 1990. The biology of bone
bone marrow microenvironment. Nature
growth. Growth Genet. Horm. 6(2): 1-3. mechanism of erythropoietin induced differen-
326: 403-405. tiation. II. The effect on RNA synthesis.
Humphries, R. K., Jacky, P. B., Dill, F. J., Eaves,
Gould, S. J. 1990. An earful of jaw. Nat. Hist. Biochim. Biophys. Acta 103: 325-332.
A. C. and Eaves, C. J. 1979. CFUs in individual
1990(3): 12-23. Kubai, L. and Auerbach, R. 1983. A new source
erythroid colonies derived in vitro from adult
Grper, L. 1907. Untersuchungen ber die mature mouse marrow. Nature 279: 718-720. of embryonic lymphocytes in the mouse. Nature
Herzbildung der Vgel. Wilhelm Roux Arch. 301: 154-156.
Hunt, P., Robertson, D., Weiss, D., Rennick, D.,
Entwicklungsmech. Org. 24: 375-410. Kubota, Y., Kleinman, H. K., Martin, G. R.
Lee, F. and Witte, O. N. 1987. A single bone
Halevy, O. and seven others. 1995. Correlation marrow stromal cell type supports the in vitro and Lawley, T. J. 1988. Role of laminin and
of terminal cell cycle arrest of skeletal muscle growth of early lymphoid and rnyeloid cells. basement membrane in the morphological
with induction of p21 by MyoD. Science 267: Cell 48: 997-1007. differentiation of human endothelial cells into
1018-1021. capillary-like structures. J. Cell Biol. 107:
Jacobson, A. G. 1961. Heart determination in
1589-1598.
Hall, B. K. 1988. The embryonic development the newt. J. Exp. Zool. 146: 139-152.
of bone. Am. Sci. 76: 174-181. Kurihara, N., Chenu, C., Miller, M., Civin, C.
Jackson, D., Volpert, O. V., Bouk, N. and
and Roodman, G. D. 1990. Identification of
Hall, B. K. and Miyake, T. 1995. Divide, Linzer, D. I. H. 1994. Stimulation and
accumulate, differentiate: Cell condensations in committed mononuclear precursors for osteo-
inhibition of angiogenesis by placental
skeletal development revisited. Int.J. Dev. Biol. clast-like cells in long term human marrow
proliferin and proliferin-related protein.
cultures. Endocrinology 126: 2733-2741.
39: 881-893. Science 266: 1581-1584.
Hall, B. K., van Exan, R. J. and Brunt, S. L. LaBarbera, M. 1990. Principles of design of
Jilka, R. L. and eight others. 1992. Increased os-
fluid transport systems in zoology. Science
1983. Retention of epithelial basal lamina teoclast development after estrogen loss:
allows isolated mandibular mesenchyme to 249:992-1000.
Mediation by interleukin-6. Science 257: 88-91.
form bone. J. Craniofac. Genet. Dev. Biol. 3: Langman, J. 1981. Medical Embryology, 4th
Jonnson, J., Carlsson, L., Edlund, T., and Edlund,
253-267. Ed. Williams & Wilkins, Baltimore.
H. 1994. Insulin-promote-f actor 1 is required
Harary, I. and Farley, B. 1963. In vitro studies for pancreas development in mice. Nature 371: Larsen, W. J. 1993. Human Embryology.
on single beating rat heart cells. II. Intercellular 606-608. Churchill-Livingstone, New York.
communication. Exp. Cell Res. 29: 466-474. Johnson, R. L., Laufer, E., Riddle, R. D. and Lash, J. W. and Yamada, K. M. 1986. The
Hstbacka, J., de la Chapelle, A. and Mahtani, Tabin, C. 1994. Ectopic expression of Sonic adhesion recognition signal of fibronectin: A
M. M. 1994. The diastrophic dysplasia gene hedgehog alters dorsal-ventral patterning of possible trigger mechanism for compaction
encodes a novel sulfate transporter: Positional somites. Cell 79: 1165-1173. during somitogenesis. In R. Bellairs, D. H. Ede
cloning by fine-structure linkage disequilibrium and J. W. Lash (eds.), Somites in Developing
Jurskov V. and Tkadlecek, L. 1965. Character
mapping. Cell 78: 1073-1087. Embryos. Plenum, New York, pp. 201-208.
of primary and secondary colonies of haemato-
Hasty, P., Bradley, A., Morris, J. H., Edmondson, poiesis in the spleen of irradiated mice. Nature Lassar, A. B., Paterson, B. M. and Weintraub, H.
D. G., Venuti, J. M., Olson, E. and Klein, W. H. 206: 951-952. 1986. Transfection of a DNA locus that mediates
1993. Muscle deficiency and neonatal death in the conversion of 10T1/2 fibroblasts into
Kahn, A. J. and Simmons, D. J. 1975. Investiga-
mice with a targeted mutation in the inyogenin myoblasts. Cell 47: 649-656.
tion of cell lineage in bone using a chimaera of
gene. Nature 364: 501-506. chick and quail embryonic tissue. Nature 258: Lassar, A. B., Buskin, J. N., Lockshon, D., Davis,
Hatta, K., Takagi, S., Fujisawa, H. and Takeichi, 325-327. R. L., Apone, S., Hauschka, S. D. and Weintraub.
M. 1987. Spatial and temporal expression of N- H. 1989. MyoD is a sequence-specific DNA
Kaplan, S. L. and Grumbach, M. M. 1990.
cadherin cell adhesion molecule correlated with binding protein requiring a region of myc
Pathophysiology and treatment of sexual
morphogenetic processes of chicken embryo. homology to bind to the muscle creatine kinase
precocity. 1. Clin. Endocrinol. Metab. 71: 785-
Dev. Biol. 120: 218-227. enhancer. Cell 58: 823-831.
789.
Hattersley, G., Kirby, J. A. and Chambers, T. J. Lemischka, I. R., Raulet, D. H. and Mulligan, R.
Kaushal, S., Schneider, J. W., Nadel-Ginard, B.
1991. Identification of osteoclast precursors in C. 1986. Developmental potential and dynamic
and Mahdavi, V 1994. Activation of the
multilineage hematopoietic colonies. Endocri- behavior of hematopoietic stem cells. Cell 45:
myogenie lineage by MEF2A, a factor that
nology 128: 259-262. 917-927.
induces and cooperates with MyoD. Science 266:
Hattori, M., Klatte, K. J., Teixeira, C. C. and 1236-1240. Li, Y. and sixteen others. 1995. A fibrillar
Shapiro, I. M. 1995. End labeling studies of collagen gene, Col11a1, is essential for skeJetal
Keller, G., Paige, C., Gilboa, E. and Wagner, E.
fragmented DNA in avian growth plate: Evidence morphogenesis. Cell 80: 423-430.
F. 1985. Expression of a foreign gene in myeloid
for apoptosis in terminally differentiating and lymphoid cells derived from multipotent Linask, K. K. and Lash, J. W. 1986. Precardiac
chondrocytes. J. Bone Miner. Res. 10: 1960-1968. hematopoietic precursors. Nature 318: 149-154. cell migration: Fibronectin localization at
mesoderm-endoderm interface during directional Moore, J. W., Dionne, C., Jaye, M. and Swain, J. Ordahl, C. P. and Le Douarin, N. 1992. Two
movement. Dev. Biol. 114: 87-101. 1991. The mRNAs encoding acidic FGF, basic myogenic lineages within the developing somite.
Linask, K. K. and Lash, J. W. 1988a. A role for FGF, and FGF receptor are coordinately Development 114: 339-353.
fibronectin in the migration of avian precardiac downregulated during myogenic differentiation.
Ostrovsky, D., Cheney, C. M., Seitz, A. W. and
cells I. Dose-dependent effects of fibronectin Development 111: 741-748. Lash, J. W. 1984. Fibronectin distribution during
antibody. Dev. Biol. 129: 315-323. Mller, A. M., Medvinsky, A., Strouboulis, J., somitogenesis in the chick embryo. Cell Differ.
Linask, K. K. and Lash, J. W. 1988b. A role for Grosveld, F. and Dzierzak, E. 1994. Develop- 13: 217-223.
fibronectin in the migration of avian precardiac ment of hematopoietie stem cell activity in the Packard, D. S., Jr. and Meier, S. 1983. An expe-
cells II. Rotation of the heartforming region mouse embryo. Immunity 1: 291-301.
rimental study of somitomeric organization of
during different stages and their effects. Dev. Mnsterberg, A. E., Kitajewski, J., Bumcroft, D. the avian vegetal plate. Dev. Biol. 97: 191-202.
Biol. 129: 324-329. A., McMahon, A. P. and Lassar, A. B. 1995.
Pardanaud, L., Altmann, C., Kitos, P., Dieterlen-
Lyons, G. E. and Buckingham, M. E. 1992. Combinatorial signaling by sonic hedgehog and Livre, F. and Buck, C. 1987. Vasculogenesis in
Developmental regulation of myogenesis in the Wnt family members induce myogenic bHLH the early quail blastodisc as studied with a
mouse. Semin. Dev. Biol. 3: 243-253. gene expression in the somite. Genes Dev. 9:
monoclonal antibody recognizing endothelial
2911-2922. cells. Development 100: 339-349.
Manolagas, S. and Jilka, R. L. 1995. Bone marrow,
cytokines, and bone remodeling. N. Engl. I. Med. Murphy, M. E. and Carlson, E. C. 1978.
Pardanaud, L., Yassine, F. and Dieterlen-Livre,
332: 305-310. Ultrastructural study of developing extracellu- F. 1989. Relationship between vasculogenesis,
lar matrix in vitelline blood vessels of the early
Markwald, R. R., Fitzharris, T. P. and Manasek, angiogenesis, and hemopoiesis during avian
chick embryo. Am. J. Anat. 151: 345-375.
J. J. 1977. Structural development of endocardial ontogeny. Development 105: 473-485.
cushions. Am. J. Anat 148: 85-120. Nabeshima, Y., Hanaoka, K., Hayasaka, M.,
Pardanaud, L., Luon, D., Prigent, M., Bourcheix,
Esumi, E., Li, S., Nonaka, I. and Nabeshima, Y. L.-M., Catala, M., and Dieterlen-Livre, E 1996.
Martin, C., Beaupain, D. and Dieterlen-Livre, 1993. Myogenin gene disruption results in
F. 1978. Developmental relationships between Two distinct endothelial lineages in ontogeny,
perinatal lethality because of severe muscle
vitelline and intraembryonic haemopoiesis one of them related to hemopoiesis. Develop-
defect. Nature 364: 532-535. ment 122: 1363-1371.
studied in avian yolk sac chimeras. Cell Differ. 7:
115-130. Nakauchi, H. and Gachelin, G. 1993. Les cellules
Park, W.-J., Bellus, G. and Jabs, E. W. 1995.
souches. La Recherche 254: 537-541. Mutations in fibroblast growth factor receptors:
Medvinsky, A. and Dzierak,E. 1996. Definitive
hematopoiesis is autonomously initiated by the Nameroff, M. and Munar, E. 1976. Inhibition Phenotypic consequences during eukaryotic de-
AGM region. Cell 86: 897-906. of cellular differentiation by phospholipase C. velopment. Am. I. Hum. Genet. 57: 748-754.
II. Separation of fusion and recognition among Patten, B. M. 1951. Early Embryo1ogy of the
Medvinsky, A. L., Samoy1ina, N. L., Mller, A. myogenie cells. Dev. Biol. 49: 288-293.
M. and Dzierzak, E. A. 1993. An early pre-liver Chick, 4th Ed. McGraw-Hill, New York.
intraembryonic source of CFU-S in the Nascone, N. and Mercola, M. 1995. An inductive Piette, J., Bessereau, J.-L., Huchet, M. and
developing mouse. Nattire 364: 64-67. role for the endoderm in Xenopus cardiogenesis.
Changeaux, J.-P. 1990. Two adjacent MyoD1-
Development 121: 515-523. binding sites regulate expression of the
Meier, S. 1979. Development of the chick
mesoblast: Formation of the embryonic axis and Ni1sson, A., Isgaard, J., Lindahl, A., Dahlstrm, acetylcholine receptor a-subunit gene. Nature
the establishment of the metameric pattern. Dev. A., Skottner, A. and lsaksson, O. G. P. 1986. 345: 353-355.
Biol. 73: 25-45. Regulation by growth hormone of number of
Porcher, C., Swat, W., Rockwell, K., Fujiwara, Y.,
chondrocytes containing IGFI in rat growth
Mencken, H. L. 1919. Exeunt omnes. Smart Set Alt, F. W. and Orkin, S. H. 1996. The T cell leukemia
plate. Science 233: 571-574. oncoprotein SCL/tal-1 is essential for development
60: l38-l45.
Oberlender, S. A. and Tuan, R. S. 1994. of all hematopoietic lineages. Cell 86: 47-57.
Menko, A. S. and Boettiger, D. 1987. Occupation Expression and functional involvement of N-
of the extracellular matrix integrin is a control point Pourqui, O. and nine others. 1996. Lateral and
cadherin in embryonic limb chondrogenesis.
for myogenic differentiation. Cell 51: 51-57. axial signals involved in somite patterning: A
Development 120: 177-187. role for BMP4. Cell 84: 461-471.
Merimee, T. J., Zapf, J., Hewlett, B. and Cavalli- Offield, M. F. and seven others. 1996. PDX1 is
Sforza, L. L. 1987. Insulin-like growth factors Potten, C. S. and Loeffler, M. 1990. Stem cells:
required for pancreatic outgrowth and differen- attributes, spirals, pitfalls, and uncertainties.
in pygmies. The role of puberty in determining tiation of the rostral duodenum. Development
final stature. N. EngI. J. Med. 316: 906-911. Lessons for and from the Crypt. Development
122: 983-995.
110: 1001-1020.
Millauer, B., Wizigmann-Voos, Schnrch, H., Okuda, T., van Deursen, J., Hiebert, S. W.,
Martinez, R., Mller, N. P. H., Risau, W and Potts, J. D., Dagle, J. M., Walder, J. A., Weeks,
Grosveld, G. and Downing, J. R. 1996. AML, the
Ullrich, A. 1993. High-affinity VEGF binding D. L. and Runyon, R. B. 1991. Epithelial-me-
target of multiple chromosomal translocations senchymal transformation of embryonic cardiac
and developmental expression suggest flk-l as a in human leukemia, is essential for normal fetal
major regulator of vasculogenesis and angioge- endothelial cells is inhibited by a modified
liver hematopoiesis. Cell 84: 321-330.
nesis. Cell 72: 835-846. antisense oligodeoxynucleotide to transforming
Olwin, B. B. and Hauschka, S. D. 1988. Cell growth factor b3. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Miller, S. A., Bresee, K. L., Michaelson, C. L. surface fibroblast growth factor and epidermal 88: 1516-1520.
and Tyrell, D. A. 1994. Domains of differential growth factor receptors are permanently lost
cell proliferation and formation of amnion folds Pownall, M. E. and Emerson, C. E., Jr. 1992a.
during skeletal muscle terminal differentiation
in chick embryo ectoderm. Anat. Rec. 238: Sequential activation of three myogenic
in culture. J. Cell Biol. 107: 761-769.
225-236. regulatory genes during somite morphogenesis
Ordahl, C. P. 1993. Myogenic lineages within in quails. Dev. Biol. 151: 67-79.
Mintz, B. and Baker, W. W. 1967. Normal the developing somite. In M. Bernfield (ed.),
mammalian muscle differentiation and gene Pownall, M. E. and Emerson, C. E., Jr. 1992b.
Molecular Basis of Morphogenesis. Wiley-Liss, Molecular and embryological studies of avian
control of isocitrate dehydrogenase synthesis. New York, pp. 165-170.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 58: 592-598. myogenesis. Semin. Dev. Biol. 3: 229-241.
Pownall, M. E., Strunk, K. E. and Emerson, C. E. jr. receptor gene in a man. N. Engl. J. Med. 331: Vaidya, T. B., Rhodes, S. J., Taparowsky, E. J.
1996. Notochord signal controls the transcriptional 1056-1061. and Konieczny, S. F. 1989. Fibroblast growth
cascade of myogenic bHLH genes in somites of factor and transforming growth factor-b repress
Spemann, H. 1938. Embryonic Development and
quail embryos. Developmetit 122: 1475-1488. transcription of the myogenic regulatory gene
Induction, Yale University Press, New Haven.
Ribatti, D., Urbinati, C., Nico, B., Rusnati, M., MyoD1. Mol. Cell Biol. 9: 3576-3579.
Spicer, D. B., Rhee, J., Cheung, W. L. and Lassar,
Roncali, L. and Presta, M. 1995. Endogenous basic Venuti, J. M., Morris, J. H., Vivian, J. L., Olson,
A. B. 1996. Inhibition of myogenic bHLH and
fibroblast growth factor is implicated in the E. N. and Klein, W. H. 1995. Myogenesis is
MEF2 transcription factors by the bHLH protein
vascularization of the chick embryo chorioallantoic required for late but not early aspects of
Twist. Science 272: 1476-1480.
membrane. Dev. Biol. 170: 39-49. myogenesis during mouse development. J. Cell
Stern, H. M., Brown, A. M. C. and Hauschka, S. Biol. 128: 563-576.
Robb, L., Elwood, N. J., Elefanty, A. G. Kntgen, D. 1995. Myogenesis in paraxial mesoderm:
F., Li, R., Barnett, L. D. and Begley, C. G. 1996. Vikkula, M. and eleven others. 1996. Vascular
preferential induction by dorsal neural tube and
The scl gene product is required for the dysmorphogenesis caused by an activating
by cells expressing Wnt-1. Development 121:
generation of all hematopoietic lineages in the mutation in the receptor tyrosine kinase TIE2
3675-3686.
adult mouse. EMBO J. 15: 4123-4129. Cell 87:1181-1190.
Sugi, Y. and Lough, J. 1994. Anterior endoderm
Roberts, R., Gallagher, J., Spooncer, E., Allen, Webster, M. K. and Donoghue, D. J. 1996.
is a specific effector of terminal cardiac myocyte
T. D., Bloomifield, F. and Dexter, T. M. 1988. Constitutive activation of fibroblast growth
differentiation of cells from the embryonic heart
Heparan sulphate-bound growth factors: A factor receptor 3 by the transmembrane domain
forming region. Dev. Dyn. 200: 155-162.
mechanism for stromal cell mediated haemo- point mutation found in achondroplasia. EMBO
poiesis. Nature 332: 376-378. Suri, C. and seven others. 1996. Requisite role J. 15: 520-527.
of angiopoietin-1, a ligand for the TIE2 recep-
Rudnicki, M. A., Braun, T., Hinuma, S. and Weintraub, H., Tapscott, S. J., Davis, R. L.,
tor, during embryonic angiogenesis. Cell 87:
Jaenisch, R. 1992. Inactivation of MyoD in mice Thayer, M. J., Adam, M. A., Lassar, A. B. and
1171-1180.
leads to up-regulation of the myogenic HLH Miller, D. 1989. Activation of muscle-specific
gene Myf-5 and results in apparently normal Syftestad, G. T. and Caplan, A. I. 1984. A fraction genes in pigment, nerve, fat, liver, and fibroblast
muscle development. Cell 71: 383-390. from extracts of demineralized adult bone cell lines by forced expression of MyoD. Proc.
stimulates conversion of mesenchymal cells into Natl. Acad. Sci. USA 86: 5434-5438.
Rudnicki, M. A., Schnegelsberg, P. N. J., Stead, chondrocytes. Dev. Biol. 104: 348-356.
R. H., Braun, T., Arnold, H.-H. and Jaenisch, R. Whitlock, C. A., Tidmarsh, G. F., Muller-Sieburg,
1993. MyoD or Myf-5 is required in a Tavormina, P. L. and nine others. 1995. C. and Weissman, I. L. 1987. Bone marrow
functionally redundant manner for the formation Thanatophoric dysplasia (types I and II) caused stromal cell lines with lymphopoietic activity
of skeletal muscle. Cell 75: 1351-1359. by distinct mutations in fibroblast growth factor express high levels of a pre-B neoplasia-
receptor 3. Nat. Genet. 9: 321-328. associated molecule. Cell 48: 1009-1021.
Rugh, R. 1951. The Frog: Its Reproduction and
Development. Blakiston, Philadelphia. Thayer, M. J., Tapscott, S. J., Davis, R. L., Wilkie, A. O. M., Morriss-Kay, G. M., Jones, E.
Wright, W E., Lassar, A. B. and Weintraub, H. Y. and Heath, J. K. 1995. Functions of fibroblast
Sariola, H. 1985. Interspecies chimeras: An ex- 1989. Positive autoregulation of the myogenic growth factors and their receptors. Curr. Biol. 5:
perimental approach for studies on embryonic determination gene MyoD1. Cell 58: 241-248. 500-507.
angiogenesis. Med. Biol. 6: 43-65.
Till, J. E. 1981. Cellular diversity in the blood- Wilson, D. 1983. The origin of the endothelium
Schultheiss, T. M., Xyclas, S. and Lassar, A. B. forming system. Am. Sci. 69: 522-527. in the developing marginal vein of the chick
1995. Induction of avian cardiac inyogenesis wing bud. Cell Differ. 13: 63-67.
Till, J. E. and McCulloch, E. A. 1961. A direct
by anterior endoderm. Developmeiit 121:
measurement of the radiation sensitivity of nor- Wolf, N. S. and Trentin, J. J. 1968. Hernopoietic
4203-4214.
mal mouse bone marrow cells. Radiat. Res. 14: colony studies. V. Effect of hemopoietic organ
Shainberg, A., Yagil, G. and Yaffe, D. 1969. 213-222. stroma on differentiation of pluripotent stem
Control of myogenesis in vitro by Ca2+ cells. J. Exp. Med. 127: 205-214.
Tsuda, T., Philp, N., Zile, M. H. and Linask, K.
concentration in nutritional medium. Exp. Cell
K. 1996. Left-right asymmetric localization of Wright, E. and eight others. 1995. te Sry-related
Res. 58: 163-167.
flectin in the extracellular matrix during heart gene Sox9 is expressed Juring chondrogenesis in
Shalaby, F., Rossant, J., Yamaguchi, T. P., looping. Dev. Biol. 173: 39-50. mouse embryos. Nat. Genet. 9: 15-20.
Gertenstein, M., Wu, X.-F., Breitman, M. L.
Tuan, R. 1987. Mechanisms and regulation of Wuthier, R. 1982. A review of the primary
and Schuh, A. C. 1995. Failure of blood-island
calcium transport by the chick embryonic mechanism of endochondral ossification with
formation and vasculogenesis in flk-1deficient
chorioallantoic membrane. J. Exp. Zool. special emphasis on the role of cells, mitochon-
mice. Nature 376: 62-66
[Suppl.] 1: 1-13. dria, and matrix vesicles. Clin. Orthop. Rel. Res.
Shapiro, L, DeBolt, K., Funanage, V., Smith, S. 169: 219-242.
Tuan, R. S. and Lynch, M. H. 1983. Effect of
and Tuan, R. 1992. Developmental regulation
experimentally induced calcium deficiency on Yaffe, D. and Feldman, M. 1965. The formation
of creatine kinase activity in cells of the
the developmental expression of collagen types of hybrid multinucleated muscle fibres from
epiphyseal growth plate. J. Bone Miner. Res. 7:
in chick embryonic skeleton. Dev. Biol. 100: myoblasts of different genetic origin. Dev. Biol.
493-500.
374-386. 11: 300-317.
Smith, C. A. and Tuan, R. S. 1996. Functional
Tyler, M. S. and Hall, B. K. 1977. Epithelial Yagami-Hiromasa, T., Sato, T., Kurisaki, T.,
involvement of Pax-1 in somite development:
influence on skeletogenesis in the mandible of Karnijo, K., Nabeshima, Y.-l. and Fujisawa-
Somite dysmorphogenesis in chick embryos
the embryonic chick. Anat. Rec. 206: 61-70. Sehara, A. 1995. A metalloprotease-disintegrin
treated with pax-1 paired-box antisense
participating in myoblast fusion. Nature 377:
oligonucleotide. Teratology 52: 333-345. Urist, M. R. and eight others. 1984. Purfication
652-656.
of bovine bone morphogenetic protein by
Smith, E. P. and eight others. 1994. Estrogen
hydroxyapatite chromatography. Proc. Natl.
resistance caused by a mutation in the estrogen-
Acad. Sci. USA 81: 371-375.
Mecanismo da
Diferenciao Celular
10 Regulao transcricional da expresso gnica: Fatores de transcrio
e a ativao de promotores especficos 391
III
11 Regulao transcricional da expresso gnica: A ativao da cromatina 431
12 Controle do desenvolvimento pelo processamento e traduo

diferencial do RNA 461
Regulao transcricional
da expresso gnica: Fatores de transcrio
e a ativao de promotores especficos
10
Quaisquer que sejam as operaes imedia-
tas dos genes, elas certamente pertencem
categoria de processos do desenvolvimento
e, portanto, se enquadram no espao da em-
briologia. Esse problema central da biolo-
D DIFERENTES TIPOS DE CLULAS produzem diferentes conjuntos de prote-
nas, mesmo que seus genomas sejam idnticos. Cada ser humano tem apro-
ximadamente 150.000 genes em cada ncleo, mas cada clula usa somente
um pequeno subgrupo desses genes. Alm disso, diferentes tipos de clulas usam
diferentes subgrupos de genes. As clulas vermelhas do sangue produzem globinas,
gia bsica est sendo, atualmente, tratado as clulas do cristalino produzem cristalinas, as clulas nervosas produzem
sob vrios aspectos, tanto por fisiologistas neurotransmissores e as glndulas endcrinas produzem seus hormnios especficos.
como bioqumicos e por geneticistas; mas
Gentica do desenvolvimento a disciplina que examina como o gentipo se transfor-
essencialmente um problema embriolgico.
ma no fentipo, e o paradigma principal da gentica do desenvolvimento a expres-
C. H. WADDINGTON (1956)
so gnica diferencial a partir do mesmo repertrio nuclear. A regulao da expres-
Entramos na clula, a manso onde nasce- so gnica pode ser realizada em vrios nveis:
mos e estamos comeando o inventrio da
riqueza que adquirimos. Transcrio gnica diferencial, regulando quais dos genes nucleares so trans-
ALBERT CLAUDE (1974) critos em RNA
Processamento seletivo do RNA nuclear, regulando quais dos RNAs transcri-
tos passaro para o citoplasma tornando-se RNAs mensageiros
Traduo seletiva de RNA mensageiro, regulando quais dos RNAs mensagei-
ros no citoplasma sero traduzidos em protena
Modificao protica diferencial, regulando quais protenas permanecero ou
funcionaro na clula
Alguns genes (tais como aqueles codificando as protenas globina da hemoglo-

bina) so regulados em cada um desses nveis. Neste e no prximo Captulo sero
discutidos os mecanismos da transcrico gnica diferencial: como genes diferentes
so ativados em diferentes tipos de clulas em tempos determinados. Os fenmenos
bsicos da transcrio diferencial de genes foram discutidos no Captulo 2. Os tufos
de cromossomos politnicos representam a ativao de grupos de genes em respos-
ta a um hormnio produzido na larva do inseto. Analogamente, a expresso de genes
especficos do endoderma na larva do ourio-do-mar foi controlada ao nvel da
transcrio do gene. Nestes Captulos, discutiremos os mecanismos pelos quais
diferentes genes podem ser ativados ou reprimidos em clulas especficas enquanto
elas se diferenciam.
391
392 PARTE III Mecanismo da Diferenciao Celular
xons e ntrons
Quando genes so observados, a primeira coisa que se torna aparente que a maioria
dos genes de eucariotos no se parecem maioria dos genes procariotos. Genes
eucariotos no so colineares com seus produtos peptdicos. Ao contrrio, os termi-
nais 3' e 5' do mRNA eucarioto se originam de regies no-contguas no cromossomo.
Entre as regies de codificao de protenas no DNA-xons- esto seqncias inter-
caladas-ntrons- que no tm relao com a seqncia de aminocidos da protena.*
A estrutura do gene da -globina humana est ilustrada na Figura 10.1. Esse gene
consiste dos seguintes elementos:
1. Uma regio promotora responsvel pela ligao da RNA polimerase e subse-

qente iniciao da transcrio. Essa regio promotora do gene da -globina
humana tem trs unidades distintas e se estende de 95 a 26 pares de base
antes (a montante de) do stio de iniciao da transcrio (isto , de -95 a -
26).
2. A seqncia ACATTTG, onde a transcrio se inicia. Essa freqentemente
chamada seqncia de capeamento (cap) porque representa o terminal 5' do
RNA, que receber um capeamento de nucleotdeos modificados logo aps
sua transcrio. A seqncia especfica do capeamento varia entre os genes.
3. O cdon ATG para o incio da traduo. Esse cdon est localizado 50 pares
de base depois do ponto de iniciao da transcrio (apesar dessa distncia
variar muito em genes diferentes). A seqncia interposta de 50 pares de
nucleotdeos entre os pontos de iniciao da trancrio e a traduo chama-
da seqncia lder. A seqncia lder pode determinar a velocidade de inicia-
o da traduo.
4. O primeiro xon contendo 90 pares de bases codificando para os aminocidos
1-30 da -globina humana.
5. Um ntron contendo 130 pares de bases sem seqncias codificadoras para a
globina. A estrutura desse ntron importante para permitir que o RNA seja
processado a RNA mensageiro e saia do ncleo.
6. Um xon contendo 222 pares de bases codificando para os aminocidos 31- 104.
7. Um grande ntron- 850 pares de bases- sem relao com a estrutura da prote-
na globina.
8. Um xon contendo 126 pares de bases codificando para os aminocidos 105- 146.
9. Um cdon de terminao da traduo, TAA.
10. Uma regio 3' no-traduzida que, apesar de transcrita, no traduzida em
protena. Essa regio inclui a seqncia AATAAA, a qual necessria para
colocar uma cauda de cerca de 200 a 300 resduos adenilados no transcrito
de RNA. Essa cauda de poli(A) confere estabilidade e traduzibilidade ao mRNA,
e inserida no RNA cerca de 20 bases a jusante da seqncia AAUAAA.
Entretanto, a transcrio continua alm do stio AATAAA por ainda 1000
nucleotdeos aproximadamente, antes de ser terminada. Dentro da seqncia
3' transcrita mas no traduzida (mais ou menos 600 a 900 pares de bases do
stio AATAAA) est uma seqncia de DNA que serve como um intensifica-
dor. Essa seqncia necessria para a expresso temporal e especfica de
tecido do gene da -globina em precursores das clulas vermelhas do sangue
de adulto (Trudel e Constantin, 1987).
* O termo xon tem dois significados sobrepostos. No sentido original, isso definido
anatomicamente como uma seqncia nucleotdica cujo RNA sai do ncleo. O termo tomou
tambm a definio funcional de uma seqncia de nucleotdeos que codifica uma protena. Para
discusso aqui, usaremos a primeira definio e definiremos as seqncias lderes e as seqncias 3'
no traduzidas como xons no traduzidos. Alguns genes eucariotos (como os genes de histonas) no
tm seqncias interpostas, e qualquer hiptese sobre funes de ntrons deve considerar essas
excees. Por conveno, direes a montante, a jusante, 5' e 3' so especficas em relao ao RNA.
Assim, o promotor est a montante do gene, perto de seu terminal 5'.
CAPTULO 10 Fatores de transcrio e promotores especficos 393
(A) Stio de iniciao Stio de iniciao da Stio de terminao Stio de adio

da transcrio traduo de Aminocido (aa) 1 da traduo de poli(A)
(capeamento)
Regio do promotor
Stio terminal
da transcrio
Elementos
promotores a
montante Lder (Regio no traduzida 5) Regio no traduzida 3
TATA
Box
Figura 10.1
(B) Seqncia nucleotdica do gene da -globina
humana. (A) Representao esquemtica da
localizao da regio do promotor, stio de
iniciao da transcrio (capeamento), se-
qncia lder, xons e ntrons do gene da -
globina. xons esto coloridos; os nmeros
que os ladeiam, indicam a posio dos ami-
nocidos que codificam na -globina. (B) A
seqncia nucleotdica do gene da -globina,
mostrada do terminal 5 ao terminal 3 do
RNA. As seqncias promotoras esto en-
quadradas, como tambm esto os cdigos de
incio de traduo e terminao, ATG e TAA.
As letras maisculas grandes enquadradas em
cores correspondem a xons, e os aminoci-
dos para os quais codificam esto abreviadas
acima dos quadros. As letras maisculas pe-
quenas so as bases das seqncias interpos-
tas. Os cdons representados por letras mai-
sculas aps o trmino da traduo esto no
mRNA da globina mas no so traduzidas em
protenas. Dentro desse grupo est a seqn-
cia considerada necessria para a poliadenila-
o. Um G no primeiro ntron (seta) mutado
para um A em uma forma de +-talassemia.
(Seqncia de Lawn et al., 1980.)
O RNA nuclear original transcrito para tal gene contm a seqncia do capeamento, a
seqncia lder, os xons, os ntrons e a regio 3' no traduzida (Figura 10.2). Em
adio, ambos terminais se modificam. Um capeamento consistindo de guanosina
metilada colocado no terminal 5' do RNA em polaridade oposta ao prprio RNA.
Assim, enquanto todas as bases no precursor da mensagem esto ligadas 5a 3', a
ATG: AATAAA:
Iniciao da cdon iniciador seqncia de
Regio promotora transcrio da traduo TAA: cdon adio de poli(A)
terminador da Seqncia
(ligao da RNA
traduo terminadora da
polimerase)
transcrio
GENE (DNA) PARA

Lder -GLOBINA
Seqncia
ATA
Transcrio Stio de adio de poli(A)
RNA NUCLEAR
(capeamento) Cauda
Processamento
RNA MENSAGEIRO
Lder Cauda
Traduo
PROTENA -GLOBINA
Modificao ps-traduo
Figura 10.2
Sumrio das etapas envolvidas na produo
da -globina e hemoglobina.
HEMOGLOBINA
estrutura do capeamento est ligada 5' a 5'. Isso significa que no h grupo fosfato 5'
livre no RNA nuclear (Figura 10.3). Molculas de RNA mensageiro esto igualmente
capeadas, apesar de no se ter certeza se o capeamento do mRNA o original
recebido no ncleo. O capeamento 5' necessrio para a ligao do mRNA ao ribossomo
e para a subseqente traduo (Shatkin, 1976).
O terminal 3' usualmente modificado no ncleo pela adio de uma cauda de
cerca de 200 resduos adenilados. Esses resduos de cido adenlico so ligados
enzimaticamente e adicionados ao transcrito. Eles no so parte da seqncia do
gene. Ambas as modificaes 3' e 5' podem proteger o RNA das exonucleases
(Sheiness e Darnell, 1973; Gedamu e Dixon, 1978), assim estabilizando a mensa-
gem e seu precursor.
Estrutura e funo do promotor

Alm da estrutura do gene que acabamos de discutir, existem seqncias reguladoras
que podem estar em um ou outro terminal do gene (ou mesmo dentro dele). Essas seqncias,
ANTES DO CAPEAMENTO
Terminal 5 da molcula
APS O CAPEAMENTO
7-metil guanosina
Direo da traduo
Direo da
traduo
Figura 10.3 Terminal 3

Capeamento do terminal 5 de um mRNA eucaritico. Um da molcula
capeamento de 7-metil-guanilato ligado 5 a 5 com a primeira
base do mRNA recentemente transcrito. O terminal 5 original
do mRNA tinha trs grupos fosfato. O mecanismo de
capeamento une o GTP com o terminal, usando um grupo fosfato
de GTP e dois grupos fosfato do mRNA. Em seguida, uma
enzima metila a guanosina na posio 7; a primeira e a segunda Terminal 3
bases de mRNA original so, com certa freqncia, tambm da molcula
metiladas. (De acordo com Rottman et al., 1974.)
os promotores e intensificadores (introduzidas no Captulo 2), so necessrias para

controlar onde e quando um determinado gene transcrito.
Dois tipos de elementos reguladores so necessrios para efetuar a transcrio nos
stios adequados. O primeiro conjunto de elementos reguladores chamado de cis-
reguladores. Esses representam seqncias especficas de DNA em um dado cromos-
somo. Cis-reguladores agem somente em genes adjacentes. O segundo grupo de
elementos reguladores chamado trans-reguladores. Esses so molculas solveis
(incluindo protenas e RNAs) que so produzidas por um gene e interagem com genes
no mesmo ou em diferentes cromossomos. Relembrando a induo gnica no operon
lac de E.coli, foi visto que um gene repressor produz uma protena repressora que
interage com a seqncia operadora dos genes do operon lac. Nesse caso, o DNA
operador um elemento cis-regulador porque controla somente o operon lac adjacen-
te no seu prprio cromossomo. A protena repressora, entretanto, um trans regula-
dor porque ele pode ser produzido por um cromossomo e se ligar ao operador cis-
regulador em outro cromossomo.
Em genes eucariotos que codificam RNA mensageiro, foram descobertos dois
tipos de seqncias de DNA cis-reguladoras que influenciam tais genes serem trans-
critos em tais clulas. Esses so os promotores e os intensificadores. Promotores,
tipicamente esto localizados imediatamente a montante do stio onde se inicia a
transcrio e geralmente tm centenas de pares de bases na sua cadeia. Eles so
necessrios para a ligao da RNA polimerase II e para a exata iniciao da transcri-
o. RNA polimerases de eucariotos requerem fatores proticos adicionais para a
ligao eficiente ao promotor. O intensificador uma seqncia de DNA que pode
ativar a utilizao do promotor, controlando a velocidade e eficincia de transcrio
daquele promotor especfico. Intensificadores s podem ativar promotores ligados
aos cis (ou seja, promotores no mesmo cromossomo), mas podem faz-lo a grandes
distncias (algumas to grandes como 50 quilobases alm do promotor). Alm disso,

intensificadores no precisam estar no lado 5' (a montante) do gene. Eles podem
estar no lado 3', nos ntrons, ou mesmo na fita de DNA complementar (Maniatis et
al., 1987). Como o promotor, os intensificadores funcionam ligando protenas espe-
cficas trans-reguladoras chamadas fatores de transcrio.
Um tipo de intensificador um intensificador negativo, tambm chamado
silenciador. Quando fatores de transcrio se ligam a silenciadores, eles reprimem a
transcrio dos promotores ligados aos cis. Algumas seqncias podem agir como
intensificadores positivos em certas clulas e como negativos em outras, dependendo
de outros fatores de transcrio presentes na clula.
Estrutura do promotor
Promotores de genes que transcrevem quantidades relativamente grandes de mRNA

tm estruturas similares. Eles tm uma seqncia TATA (algumas vezes chamada TATA
box ou Goldberg-Hogness box) cerca de 30 pares de base a montante do stio onde
se inicia a transcrio, bem como um ou mais elementos promotores ainda mais a
montante (Figura 10.4; Grosschedl e Birnstiel, 1980; McKnight e Tjian, 1986). A
anatomia funcional de uma regio promotora pode ser analisada determinando-se
quais de suas bases so necessrias para uma transcrio eficiente. Genes clonados
podem ser precisamente transcritos quando colocados nos ncleos de ocitos de r ou
de fibroblastos ou quando incubados com RNA polimerase na presena de nucleotde-
os e extratos nucleares (Wasylyk et al., 1980). Depois que a transcrio de um gene
confirmada, usa-se enzimas de restrio para fazer delees especficas no gene ou em
regies vizinhas. Pode-se observar se um gene assim modificado ainda ser transcrito
precisamente. Tais estudos nos genes da -globina (Grosveld et al., 1982; Dierks et
al.,1983) mostraram que os primeiros 109 pares de bases precedendo o stio do
capeamento eram suficientes para a correta iniciao da transcrio do gene da -
globina pela RNA polimerase.
Myers e colaboradores (1986) melhoraram essa anlise clonando a regio de um
gene de -globina de camundongo, desde 106 pares de bases a montante do comeo da
transcrio (-106) at os primeiros 475 pares de bases (+ 475) do primeiro xon. Esses
clones foram submetidos a mutagnese in vitro (onde mutaes especficas podem ser
colocadas em um gene clonado). Dessa maneira, 130 substituies de base nica dife-
rentes foram introduzidas na regio do promotor do gene da globina. Esses genes
Elementos clonados foram colocados em plasmdeos contendo um intensificador de um gene nor-
promotores a TATA Iniciao de malmente expresso em todos os tecidos. Os plasmdeos recombinantes foram em segui-
montante box mRNA da introduzidos por transfeco em clulas cultivadas que normalmente no produzem
globina. Deveriam essas clulas transcreverem uma mensagem de globina truncada (475
bases) a partir dos clones? A Figura 10.5 mostra os resultados. Na maioria dos casos,
mutando uma base na regio flanqueando o terminal 5' no afetou a eficncia da transcri-
o do gene da globina. Entretanto, as mutaes reduziram drasticamente as transcri-
es em trs agrupamentos de nucleotdeos. Um agrupamento foi na seqncia TATA,
outro no elemento promotor a montante, CAAT, e um terceiro foi na regio CACCC,
aproximadamente 95 a 87 pares de bases a montante do stio de capeamento.
As seqncias CAAT e TATA foram consideradas elementos crticos em nume-
rosos promotores eucariotos (Efstratiadis et al., 1980), mas a seqncia CACCC
raramente encontrada a no ser nos promotores do gene da -globina em vrias
Figura 10.4 espcies. Em humanos, essa seqncia parece ser crtica. Uma mutao natural nes-
Regio promotora tpica de um gene eucarioto sa seqncia causa a perda total da transcrio do gene da -globina (Orkin e
codificando uma protena. O gene no diagrama Kazazian, 1984), e essa seqncia reconhecida por um fator de transcrio espec-
contm uma seqncia TATA de elementos
fico de eritrcitos (Mantovani et al., 1988). Duas mutaes, nas posies -78 e -79,
promotores a montante. Exemplos de alguns
desses elementos a montante esto ilustrados realmente aumentaram a transcrio a um nvel trs vezes maior que o tipo selvagem.
abaixo do diagrama. (De acordo com Maniatis Considera-se que essas modificaes facilitam a interao do promotor com as pro-
et al., 1987.) tenas trans-reguladoras.
Figura 10.5
Nvel relativo de transcrio
O efeito de mutaes pontuais especficas no

promotor da -globina do camundongo na ha-
bilidade do promotor de iniciar a transcrio.
Cada linha representa o nvel de transcrio
de um promotor mutante relativo ao nvel de
transcrio de um promotor da globina do
tipo selvagem testado simultaneamente. Os
pontos escuros representam nucleotdeos
para os quais no foram produzidas muta-
es. O diagrama abaixo do histograma mos-
Posio tra a posio da seqncia TATA e os dois
elementos promotores a montante no gene da
Stio do -globina do camundongo. (De acordo com
capeamento
Myers et al., 1986.)
Funo do promotor
Promotores podem funcionar no somente na ligao da RNA polimerase, mas tam-

bm na especificao do lugar e tempo que a transcrio pode ocorrer daquele gene.
Essa funo dos promotores pode ser claramente demonstrada em certos animais
transgnicos. Aqui, um novo gene construdo, onde o promotor normal de um deter-
minado gene substitudo pelo promotor de algum outro gene, e o gene fundido
colocado no proncleo de um zigoto de mamfero. Palmiter e colaboradores (1982)
isolaram o gene do hormnio de crescimento do rato e deletaram sua regio promoto-
ra 5'. Nesse espao, eles substituram a seqncia promotora de outro gene-Mt-1 por Figura 10.6
metalotionena 1 de camundongo, uma pequena protena envolvida na regulao dos Funo do promotor vista em camundongos
nveis de zinco no soro. O gene hbrido est ilustrado na Figura10.6A. O gene Mt-1 transgnicos. (A) Plasmdeo recombinante
pode ser induzido pela presena de metais pesados tais como zinco e cdmio, e as contendo o gene estrutural do hormnio de
seqncias responsveis por essa induo esto no promotor desse gene. Fundindo crescimento do rato, a regio reguladora da
metalotionena do camundongo e o plasmdeo
essa regio do promotor de metalotionena ao gene do hormnio de crescimento do
bacteriano pBR322. O plasmdeo, pMGH, foi
injetado nos ocitos do camundongo. Os
seqncia ladeando 5 de Mt-1 enquadramentos escuros no plasmdeo inje-
(A) tado correspondem aos xons do gene GH. A
seqncia ladeando 5 de GH direo da transcrio indicada por uma seta.
Seqncias reguladoras do Mt-1 no transcrito Gene GH do rato (B) Um camundongo derivado dos ovos inje-
tados com pMGH (esquerda) e um membro
normal da ninhada (direita). (de Palmiter et
al., 1982; fotografia cortesia de R. L. Brinster.)
Seqncias reguladoras do Mt-1 do camundongo
Gene GH do rato
rato (rGH), esse colocado sob o controle do promotor da metalotionena. Nesse

caso, a mensagem para o hormnio de crescimento do rato deve ser concretizada
quando o promotor de Mt-1 for ativado pela presena do zinco ou cdmio.
Um plasmdeo contendo esse gene fundido foi cultivado em bactrias (veja Cap-
tulo 2), o pedao Mt-1/rGH foi isolado, e cerca de 600 cpias desse fragmento foram
injetadas nos proncleos de ovos de camundongos recentemente fertilizados.
Hibridizao de DNA mostrou que muitos desses camundongos recm-nascidos havi-
am incorporado, em seus cromossomos, numerosas cpias do gene do hormnio de
crescimento do rato. Esses animais transgnicos foram ento alimentados com uma
dieta com suplemento de zinco. Os fgados desses camundongos foram induzidos pelo
zinco a secretar grandes quantidades de hormnio de crescimento do rato. (O fgado
o local onde usualmente produzida a metalotionena, ao passo que o hormnio de
Figura 10.7 crescimento secretado pela glndula pituitria.) A quantidade de hormnio de cres-
Funo do promotor vista em carneiros trans- cimento secretado foi correlacionada com o tamanho desses camundongos. Os ca-
gnicos. O gene estrutural para uma protena mundongos transgnicos se tornaram enormes, at 80% maiores do que os membros
de importncia farmacutica como a 1- normais da ninhada (Figura 10.6B).* O promotor da metalotionena regulou a sntese
antitripsina ou peptdeos do fator de coagu-
do hormnio de crescimento nesses camundongos transgnicos.
lao so ligados ao promotor para a -
lactalbumina (ou casena) do leite de carnei- Atualmente, essa estratgia est sendo utilizada por indstrias farmacuticas para
ro. O gene recombinante injetado no pron- produzir grandes quantidades de produtos proticos tais como hormnios peptdicos,
cleo de um ovo de carneiro recentemente fer- 1-antitripsina (usada por pacientes com enfisema) e fatores de coagulao do san-
tilizado, e o ovo implantado no tero de gue. Proncleos de vacas, carneiros e cabras foram injetados com DNA recombinante
uma me adotiva. Os carneiros recm-nasci- contendo a seqncia do gene da protena desejada, fundida aos promotores dos genes
dos so analisados (por PCR ou transfern- para casena, lactalbumina, ou -lactoglobulina (trs principais protenas do leite).
cia Southern) para verificar a presena do Vacas em lactao sintetizam enormes quantidades de protenas do leite, e a maior
transgene. Quando os carneiros transgnicos parte dessa produo regulada pela transcrio de novas mensagens. A esperana
fmeas maturam, o transgene deveria ser ati-
que os animais ao transcreverem os genes para a casena ou lactalbumina (em resposta
vado na glndula mamria e a protena
secretada no leite. Do leite pode-se isolar o ao hormnio prolactina) tambm transcrevam e sintetizem os genes para essas prote-
composto de importncia farmacutica. (De nas teraputicas. Por exemplo, em um caso, um gene humano para a protena 1-
acordo com Watson et al., 1992.) antitripsina foi fundido a um promotor da -lactoglobulina e injetado nos proncleos
de zigotos de carneiro. Um desses embries de carneiro se desenvolveu em uma f-
mea cujo leite continha 35 g/L de protena 1-antitripsina humana (Figura 10.7; Wright
Gene 1-antitripsina (AAT) et al., 1991).** Os promotores, ento, exercem um papel na especificao de qual
gene transcrito em qual clula durante o desenvolvimento.
Promotor da
-lactoglobulina
*Dois fatos surgiram desse experimento. O primeiro nossa potencial habilidade para curar
doenas genticas fertilizando ovos in vitro e injetando um gene normal dentro de um proncleo.
vulo de Esses ovos podem iniciar seu desenvolvimento e, em seguida, ser retornados ao tero da mulher. O
carneiro segundo fato que surgiu foi nossa responsabilidade (que geralmente proporcional ao nosso poder,
quer queiramos ou no).
DNA **A maior parte da secreo no leite do animal transgnico no to grande assim, provavelmente
recombinante porque os genes no esto ligados aos seus intensificadores apropriados, como veremos mais tarde.
injetado no
proncleo
Implante na me adotiva
Pipeta
suporte
Prognie transgnica Obteno de leite de Fracionamento de

identificada por PCR animais trransgnicos protenas do leite
Expresso de AAT restrita Protena ATT

ao tecido mamrio secretada no leite
Protena ATT pura

& Especulaes
RNA polimerase e os fatores

trans-reguladores no promotor
A TRANSCRIO REQUER a inte-
rao entre a RNA polimerase e
o DNA promotor. As clulas eu-
cariticas possuem trs tipos de RNA po-
limerases, cada uma com funes e pro-
com RNA polimerase purificada e nucleo-
sdeos trifosfato. necessrio adicionar ex-
tratos nucleares para que se inicie uma
transcrio exata. Quais so esses fatores
que permitem o incio da transcrio? Pelo
veremos no prximo captulo) estabiliza
nucleossomos e impede a transcrico na
regio onde ela se liga. A adio de histona
H1 impede que TFIID encontre os stios de
TATA e, dessa maneira, a transcrio no
priedades especficas (Rutter et al., 1976). menos seis protenas nucleares foram conse d; a inibio superada se TFIID adi-
RNA polimerase I encontrada na regio sideradas como necessrias para uma ini- cionado antes (Laybourn e Kadonaga,
nucleolar do ncleo e responsvel pela ciao adequada da transcrio pela RNA 1991). A ligao de TFIID facilitada e esta-
transcrio dos grandes RNAs riboss- polimerase II (Figura 10.8; Buratowski et bilizada pelo fator de transcrio TFIIA
micos; RNA polimerase II transcreve pre- al., 1989; Sopta et al., 1989). (Buratowski et al., 1989; Maldonado et al.,
cursores do RNA mensageiro; e RNA po- 1990). Muitos fatores de transcrio ativam
limerase III transcreve RNAs pequenos TFIID e TFIIA.** Na primeira etapa da trans- a funo transcrio recrutando TFIID e ati-
tais como RNA de transferncia, RNA crio do mRNA, o complexo TFIID se liga vando-o de modo que TFIID possa ligar
ribossmico 5S e outras pequenas se- seqncia TATA. Isso foi demonstrado outros membros do complexo de transcri-
qncias de DNA.* Nenhuma das RNA em experimentos de proteo de DNase o (Chi e Carey, 1996; Stargell e Struhl,
polimerases eucariticas se ligam eficien- onde TFIID foi adicionado a genes clonados 1996). Assim, a deciso de transcrever ou
temente ao DNA. Na realidade, existem e o DNA, ento, foi digerido pela DNase. A no um gene particular depende do equil-
famlias de protenas ligantes de DNA que nica maneira de salvar o DNA da diges- brio entre os fatores inibidores (como as
se ligam inicialmente ao DNA, e uma vez to lig-lo ao TFIID, impedindo o acesso histonas) e TFIID e TFIIA.
ligadas, interagem com a RNA polimerase da DNase. Dessa maneira, Sawadogo e
para iniciar a sntese de RNA. Roeder (1984) demonstraram que TFIID se
liga especificamente regio TATA dos TFIIB e RNA polimerase II. O complexo
O elemento TATA e a RNA polimerase II. genes. TFIID uma protena multimrica e TFIID/TFIIA no pode formar um comple-
O diagrama clssico de transcrio mostra um de seus componentes-a protena ligante xo estvel diretamente com a RNA polime-
que o DNA, na presena da RNA polime- da seqncia TATA (TBP)- se liga direta- rase II. Em lugar disso TFIID liga o fator
rase e ribonucleosdeos trifosfato, trans- mente no sulco menor da seqncia TATA TFIIB. A ligao de TFIIB a TFIID parece
creve molculas de RNA. Mas esse esque- (Lee et al., 1991; Starr e Hawley, 1991). O ser a etapa limitante mais importante da ve-
ma simples no leva em considerao difi- complexo TFIID tem vrias atividades; a pri- locidade de transcrio de numerosos genes.
culdades como (1) fazer com que o RNA se meira ligar a seqncia TATA e servir como Essa velocidade pode ser dramaticamente
inicie no local correto e (2) fazer com que a fundao ao complexo transcricional. Ou- aumentada pela proximidade de certos fa-
transcrio de um gene especfico ocorra tro papel do TFIID impedir a estabilizao tores de transcrio ligantes de promotores
somente em tempos e clulas especficos. de nucleossomos na regio do promotor. e intensificadores. Esses fatores de transcri-
Devem existir fatores que permitam que a Quando DNA contendo promotor incor- o so especficos de seqncias e podem
RNA polimerase se ligue somente a pro- porado nos nucleossomos, esses genes no determinar quais genes sero transcritos. O
motores de determinados genes. Aqui, dis- podem ser transcritos quando TFIID, RNA domnio ativador desses fatores de trans-
cutiremos aquelas protenas e seqncias polimerase II e outros fatores so adiciona- crio se liga diretamente com TFIIB e fa-
de DNA que localizam a RNA polimerase dos mais tarde. Entretanto, quando TFIID cilita sua montagem com TFIID (Lin e
nos stios promotores. A enzima respons- adicionado antes ou durante a formao de Greene, 1991; Lin et al., 1991). Uma vez
vel pela transcrio de RNAs mensageiros nucleossomos, a cromatina resultante que TFIIB est localizado, ele pode ligar a
a RNA polimerase II. Entretanto, no vai transcricionalmente ativa (Workman e RNA polimetrase II. A maior parte da RNA
haver uma transcrio exata dos genes clo- Roeder, 1987). Bloqueando a formao de polimerase posicionada pela sua interao
nados, in vitro, se esses forem incubados nucleossomos, TFIID parece agir antago- com TFIIB, mas a cauda carboxiterminal da
nicamente histona H1. Histona H1 (como subunidade grande da RNA polimerase II
* Na maioria das clulas, os RNAs ribossmico interage diretamente com TFIID (veja Fi-
e de transferncia so sintetizados constitutivamente. gura 10.8D). Dessa maneira, RNA polime-
Entretanto, os animais desenvolveram mecanismos **TF significa fator de transcrio; II indica que
rase II situada no promotor.
extraordinrios para acelerar a sntese de rRNA em o fator foi, inicialmente, considerado necessrio para
seus ocitos. Assim, adiaremos a discusso sobre a RNA polimerase II; as designaes de letras se
RNA polimerases I e III at o detalhamento de even- referem s fraes da coluna de fosfocelulose que TFIIE/F e TFIIH. Imediatamente antes ou
tos na oognese no Captulo 22. tinham a atividade. durante sua ligao a TFIIB, a RNA poli-
(A) O complexo TFIID se liga sequncia merase II se associa ao TFIIF e TFIIE

TATA atravs da subunidade TBP (Buratowski et al., 1991; Conaway et al.,
1991). TFIIF tem uma atividade enzimti-
+1 ca necessria para desenrolar a hlice do
Stio de iniciao DNA. TFIIE uma ATP-ase dependente
da transcrio de DNA e provavelmente necessria para
gerar a energia para a transcrio (Bunick
et al., 1982; Sawadogo e Roeder, 1984).
(B) Mas qual a vantagem de tudo isso, se a
TFIID estabilizado pelo TFIIA
RNA polimerase permanece ligada a esse
complexo na seqncia TATA? Para que
haja transcrio, a RNA polimerase deve
ser liberada da regio do promotor. Essa
atividade de liberao parece ser funo
do TFIIH. A RNA polimerase est forte-
mente ligada pelo seu domnio carboxi-
terminal (CTD) ao FTIID. Entretanto,
(C) TFIIB e TFIIH se juntam ao TFIID somente se ligar forma no fos-
complexo na sequncia TATA forilada de CTD. Nos mamferos CTD
contm 52 repeties da seqncia de
sete aminocidos YSPTSPS. Quando o
complexo de iniciao est formado, o
complexo completo ativa a protena qui-
RNA
nase serina/treonina do TFIIH, o qual
polimerase II fosforila cada uma das 52 repeties (veja
Figura 10.8E; Koleske et al., 1992; Lu et
al., 1992; Usheva et al., 1992). TFIID no
Domnio carboxi-terminal (CTD)
pode ligar essa regio altamente fosfori-
lada e libera a RNA polimerase. Ao passo
Um complexo de RNA polimerase II, TFIIE
que a primeira ligao fosfodiester pode
(D) RNA polimerase II e TFIIF posicionado pelo TFIIB e seu
domnio carboxi-terminal ligado pelo TFIID ser feita sem a fosforilao do CTD, essa
fosforilao parece ser essencial para a
transcrio posterior do RNA mensagei-
ro (Akoulitchev et al., 1995).
TAFs e a ativao da transcrio basal.

TFIID uma protena multimrica, mas
somente uma de suas unidades se liga
seqncia TATA. Algumas das outras su-
(E) O CTD fosforilado pelo TFIIH e liberado bunidades so chamadas fatores associa-
pelo TFIID; comea a transcrio dos das protenas ligantes de TATA
(TAFs). Purificao das TAFs, a partir de
TFIID do homem e da Drosophila, mos-
trou que essas so compostas por um con-
junto protenas (Figura 10.9; Dynlacht et
al., 1991). Considera-se que as TAFs ser-
vem a duas funes: (1) elas podem deter-
Transcrito de RNA minar se TFIID permanece ou no no pro-
motor, e (2) elas podem funcionar como
co-ativadores, fazendo uma ponte entre as
Figura 10.8
protenas ligadas ao intensificador e o com-
Formao do complexo de iniciao ativo nos eucariotos. O diagrama representa os comple-
xos formados na seqncia TATA pelos fatores de transcrio e RNA polimerase II. (A) O plexo de transcrio atravs de interaes
complexo TFIID se liga seqncia TATA atravs de sua subunidade TBP. (B) TFIID protena-protena.
estabilizado pelo TFIIA. (C) TFIIB eTFIIH se juntam ao complexo na seqncia TATA de importncia para o gene se as pro-
enquanto TFIIE e TFIIF se associam RNA polimerase II. (D) RNA polimerase posicionada tenas ligantes de TATA permanecem no
pelo TFIIB, e seu domnio carboxi-terminal (CTD) ligado pelo TFIID. (E) O CTD promotor. Se elas sarem, o gene no ser
fosforilado pelo TFIIH e liberado pelo TFIID. A RNA polimerase II est agora competente transcrito. Verrijzer e colegas (1995) mos-
a transcrever o mRNA do gene. traram que as TAFs de 250- e 150- kDa
(A) Um complexo mnimo de TBP e um TAF Figura 10.9

no ativa a transcrio (Sp1 e NTF no Esquema de experimentos sugerindo que diferentes TAFs interagem com diferentes fatores de
podem se associar com TBP) transcrio para ativar a transcrio. O complemento total das TAFs ilustrado em (D). O
ativador em (D) uma protena ligada uma seqncia de DNA que foi estabilizada pelas
outras interaes. (De acordo com Chen et al., 1994.)
tm importncia crtica ao determinar se bries de Drosophila (Sauer et al., 1996).

TBP permanece ligado seqncia TATA. Da mesma forma, o fator de transcrio
Os TAFs reconhecem elementos a montan- NTF-1 de Drosophila se liga a ambos os
te do promotor, os quais, se presentes, es- TAFs de 60- e 150- kDa, e no homem, a
tabilizam ou desestabilizam o TBP no ativao transcricional pelo receptor de
promotor. Isso significa que alguns pro- estrgeno consumada pela sua ligao
motores so intrinsicamente mais dif- ao TAF de 30-kDa (Jacq et al., 1994). Na
(B) Adio do TAF p150 ou TAF p60 permite a
ceis de serem transcritos e que certos verdade, Jacq e colegas mostraram que
ativao transcricional pelo NTF, mas no
Sp1 fatores deveriam estar presentes para pro- nem todos TBPs tinham o TAF de 30-kDa.
duzir esses promotores transcritveis. Parece que alguns TAFs so encontra-
Como veremos adiante, alguns promo- dos em todos TFIIDs, enquanto outros
tores (como aquele para interferon- hu- parecem ser mais especficos.
mano) so transcritos somente aps
Iniciao da grande esforo em dobr-los, contorc- Promotores sem elementos TATA.
transcrio los de modo a envolver o frgil complexo Existem muitos genes (a maioria codifican-
de transcrio. do protenas metablicas gerais e no pro-
A associao de TBP com diferentes tenas especficas em clulas) que usam
TAFs permite a ativao do complexo de RNA polimerase II, mas cujos promotores
transcrio por protenas ligadas a stios de no tm a seqncia TATA. Nesse caso, ou-
intensificadores e a montante dos promoto- tras protenas se ligam na regio do promo-
res. Alm disso, diferentes TAFs podem tor; usualmente so protenas ligantes de
co-ativarem com fatores trans diferentes. promotores tais como o SP1. A protena Sp1
Iniciao da
transcrio
Por exemplo, um dos fatores de transcri- no promotor rico em GC liga-se ao TFIID,
o mais comum o Sp1. Essa protena diretamente ou atravs de um TAF. O TFIID
no-TAF se liga s seqncias promoto- est agora apto a iniciar a cascata de fatores
ra ou intensificadora GGGCGG atravs de que formaro o complexo de iniciao da
seu terminal carboxila mas regula a ativi- transcrio e a ligao de uma protena da
(C) Adio do TAF p110 e do TAF p150 permite dade transcricional, via seu terminal amino RNA polimerase II regio do promotor
a ativao de ambos, NTF e Sp1 (Dynan e Tjian, 1985; Kadonaga et al., (Figura 10.10; Pugh e Tjian, 1991; Rigby,
1988). Provavelmente, esse fator encon- 1993). Mesmo que esses promotores no
trado em todas as clulas e, portanto, no tenham uma seqncia TATA, TFIID ain-
regula expresso gnica diferencial. Ape- da o fator decisivo para a regulao da
sar disso, ele parece estar envolvido em ocorrncia da transcrio.
Iniciao da interaes entre as regies promotora e
transcrio intensificadora de maneira a produzir Protena ligante
TAFs de TATA
transcrio diferencial de determinados
genes em determinadas clulas. Sp1 ne-
cessita se ligar ao TAF de 110-kDa para
(D) O holo-TFIID suporta a ativao por que seja ativado o complexo de transcri-
vrios fatores e permitir o acesso de o. Dessa maneira, esse TAF faz uma
outras protenas de ativao ao ponte entre o Sp1 e o TBP formando uma
complexo transcricional ala no DNA (Hoey et al., 1993; Chen et
al., 1994). TAFs permitiriam a formao de Sp1 RNA polimerase II
e fatores basais
alas no DNA de maneira que os elemen-
tos Sp1 no intensificador encontrariam a Figura 10.10
protena TFIID no promotor (veja Figura Configurao possvel para fatores de trans-
Iniciao da 10.9). O fator de transcrio Bicoid se liga crio mediando a ligao da RNA polimerase
transcrio aos TAFs de 110- e 60- kDa, e mutaes II a um promotor sem TATA contendo um
em quaisquer desses TAFs reduzem a stio de ligao de Sp1. (De acordo com Pugh e
Protena de transcrio dependente de Bicoid em em- Tjian, 1991; Comai et al., 1992.)
ativao
ligante de DNA
Estrutura e funo dos intensificadores

Necessidade de intensificadores
Alm de promotores, os intensificadores tambm so importantes na regulao da

transcrio de genes vizinhos. Um dos primeiros intensificadores celulares encontra-
do foi demonstrado controlando a especificidade celular da transcrio do gene da
imunoglobulina. As clulas B so as nicas do corpo que produzem a protena imuno-
globulina (anticorpo). Gillies e seus colaboradores (1983) transfectaram um gene
clonado da cadeia pesada da imunoglobulina, em clulas cultivadas de linfcitos B de
tumores que haviam perdido sua habilidade de produzir sua prpria cadeia pesada.
Essas clulas transfectadas passaram a sintetizar a cadeia pesada codificada pelo gene
incorporado. Porm, adicionando o mesmo gene - mas sem uma pequena regio de
um determinado ntron- nessas clulas B defeituosas foi observada apenas uma pe-
quena transcrio do gene inserido. Havia uma regio intensificadora dentro do ntron
que era necessria para a transcrio (Figura 10.11).
Intensificadores so tambm elementos primrios responsveis pela transcrio
especfica para tecidos: os genes clonados de imunoglobulina no so transcritos
quando inseridos nos ncleos de clulas outras que as clulas B (Banerji et al., 1983;
Linhagem de clulas de
mieloma produzindo IgG
Figura 10.11 Isolamento e clonagem do gene da

Especificidade tecidual do efeito do elemento cadeia pesada de imunoglobulina
intensificador. O gene da cadeia pesada da imu-
Gene da cadeia
noglobulina foi isolado e clonado de uma li-
pesada de Ig
nhagem de clulas de mieloma produzindo IgG.
Alguns dos clones foram mantidos intactos,
enquanto em outros, vrias regies do ntron Transfectar com Remover pores do ntron Transfectar com
entre os xons VDJ e Cg (que sero discutidos gene normal gene normal
mais tarde) foram excisadas com enzimas de
restrio. DNA dos clones resultantes foi
transfectado em clulas de mieloma que havi-
am perdido seus genes de imunoglobulina. O Mielomas de Transfeco com
mRNA acumulado das clulas transfectadas camundongos diferentes
sem genes da pores faltantes Sem Fibroblasto de
foi isolado e separado por eletroforese em gel
cadeia pesada do ntron transfeco camundongo
de poliacrilamida, junto com mRNAs de um
fibroblasto normal de camundongo e da clula
original do mieloma. O RNA foi transferido
para papel de nitrocelulose e hibridizado com
um fragmento de enzima de restrio radioati-
va da regio C. Se a regio C estivesse sendo
transcrita desses genes clonados, a sonda radi- Extrair mRNA, separar em gel, transferir para papel,
oativa deveria se ligar a ela. A sonda detectou a hibridizar com fragmento radioativo C de DNA
mensagem de C somente dos clones que con-
tinham uma certa regio do ntron (indicada
pela barra colorida dentro do ntron). Quando
transfectado em clulas fibroblsticas de ca-
mundongo, entretanto, mesmo o gene clonado
inteiro no transcreveria mRNA de C. ( Pro- Posio do mRNA
tocolo e dados de Gillies et al., 1983.) de C normal
Gillies et al., 1983). Alm disso, quando a regio do intensificador da cadeia pesada da
imunoglobulina inserida em um gene clonado de -globina, ele estimula a transcrio
daquele gene da hemoglobina somente se o gene inserido em uma clula B. Ambos,
os elementos reguladores cis e os fatores reguladores trans so necessrios para a
transcrio de gene especfico da clula.
Funo do intensificador:
Modelos temporais e espaciais de transcrio
Intensificadores podem regular a expresso temporal e especfica do tecido de todos

os genes regulados diferencialmente, e genes ativos em tipos de clulas adjacentes
tm diferentes intensificadores. No pncreas, por exemplo, os genes para as protenas Figura 10.12
excrinas (para as protenas quimotripsina, amilase e tripsina) tm intensificadores Especificao tissular de intensificadores de
diferentes daqueles do gene para a protena endcrina insulina. Esses intensificadores genes pancreticos. As regies ladeando o ter-
minal 5 do gene da insulina (I) e o gene da
se situam nas seqncias ladeando o terminal 5 dos seus respectivos genes. Walker e
quimotripsina (C) foram separadamente inse-
colegas (1983) colocaram essas regies de flanco no gene para o cloranfenicol acetill ridos prximo ao gene para CAT bacteriano.
transferase de bactria (CAT), um gene cujo produto enzimtico no encontrado em Como um controle positivo, o intensificador
clulas de mamfero. Atividade de CAT facilmente determinada em clulas de mam- do vrus do sarcoma de Rous (V), que parece
feros e usada como um gene reprter para mostrar ao pesquisador se um determi- operar em todos os tipos de clulas, foi tam-
nado intensificador est funcionando. Em seguida, os pesquisadores transfectaram bm colocado prximo ao gene CAT. Os trs
esses genes hbridos em (1) clulas de ovrio (que no secretam insulina ou quimo- clones foram transfectados em trs tipos de
tripsina), (2) em uma linhagem de clulas que secretam insulina, e (3) em uma linha- clulas, (A) uma linhagem de clulas ovarianas
gem de clulas excrinas, e mediram a atividade da enzima marcadora em cada uma que no produzem nem insulina nem quimo-
tripsina, (B) uma linhagem de clulas secre-
dessas clulas. Como mostrado na Figura 10.12, nenhuma das seqncias
tando insulina, ou (C) uma linhagem de clulas
intensificadoras promoveu a produo da enzima nas clulas ovarianas. Nas clulas secretando quimotripsina. A atividade de CAT
secretoras de insulina, a regio flanqueando a posio 5 do gene da insulina permitiu foi ensaiada em todos lisatos celulares. As in-
a expresso do gene da cloranfenicol acetiltransferase, mas a regio flanqueando a 5 seres mostram auto-radiografias tpicas do
do gene da quimotripsina, no o permitiu. Inversamente, quando os clones foram ensaio de CAT onde cloranfenicol radioativo
colocados na linhagem de clulas pancreticas excrinas, a regio flanqueando a 5 da (o substrato da reao de CAT) pode ser sepa-
quimotripsina permitiu a expresso de CAT enquanto o intensificador da insulina no rado do cloranfenicol monoacetato (o produto
da reao de CAT) por cromatografia. (De acor-
do com Walker et al., 1983.)
(A) Linhagem de clulas ovarianas (B) Linhagem de clulas pancreticas (C) Linhagem de clulas pancreticas
secretando insulina excrinas (secretando quimotripsina)
Cloranfenicol
monoacetato (produto)
Cloranfenicol
(substrato)
Intensificador
viral
Intensificador de
quimotripsina
Intensificador
de insulina
Tempo de incubao em minutos Tempo de incubao em minutos Tempo de incubao em (horas)

Stio de ligao de Regio do o permitiu. Os intensificadores para 10 protenas excrinas compartilham uma seqn-
protena especfica intensificador
cia de consenso de 20 pares de bases, sugerindo que essas seqncias similares
do sexo yp2
tenham um papel na ativao desses genes nas clulas excrinas do pncreas (Boulet
et al., 1986). Assim, parece que a expresso dos genes em clulas endcrinas e excrinas
do pncreas controlada por intensificadores diferentes.
yp1
Intensificadores so crticos para a regulao do desenvolvimento normal, durante
Intensificador a ltima dcada foram feitas cinco generalizaes que enfatizam sua importncia para
do ovrio
a expresso gnica diferencial:
Intensificador
dos corpos 1. A maioria dos genes requer intensificadores para sua transcrio.
gorduros
2. Intensificadores so os principais determinantes do tempo e do espao (tipo
celular) na transcrio diferencial.
3. Estando o intensificador a uma distncia relativamente grande do promotor
Figura 10.13 isso significa que pode haver mltiplos sinais para determinar se um dado gene
Estrutura modular da regio do intensificador transcrito. Um gene pode ter vrios stios de intensificadores a ele ligados, e
da protena do vitelo de Drosophila. Os dois cada intensificador pode se ligar a mais de um fator (que pode regular, seja
genes da protena do vitelo ( yp1, yp2) so
inibindo ou estimulando, a transcrio).
regulados por um intensificador entre eles.
Uma regio do intensificador liga fatores de 4. A interao entre as protenas ligadas aos stios intensificadores com o sistema
transcrio nos ncleos ovarianos e permite a de transcrio agrupado no promotor considerada como regulador da trans-
expresso desses genes no ovrio. Outra re- crio. O mecanismo dessa associao no inteiramente conhecido, e nem
gio do intensificador permite a expresso do entendemos como o promotor integra todos esses sinais.
gene nos corpos gordurosos. Dentro da regio 5. Intensificadores so modulares. Existem elementos de DNA que conferem ex-
controlando a expresso dos genes das prote- presso gnica temporal e espacial, e esses podem ser misturados e pareados.
nas do vitelo nos corpos gordurosos existem Por exemplo, o intensificador da protena do vitelo da Drosophila melanogaster
seqncias de DNA que ligam fatores de trans- construdo de tal forma que um dos elementos do DNA permite a expresso
crio especficos do sexo.
do gene nos corpos gordurosos, outro elemento de DNA permite a expresso
nos ovrios e o terceiro elemento liga protenas especficas do sexo (as prote-
nas Doublesex). A protena Doublesex especfica da fmea estimula a transcri-
o; a protena especfica do macho inibe a transcrio. Assim, o gene da
protena do vitelo ativado somente nos corpos gordurosos e ovrios da
mosca fmea (Figura 10.13; Garabedian et al., 1985; An e Wensink, 1995). O
elemento de DNA para expresso nos corpos gordurosos compartilhado com
outros genes que so expressos nesse rgo, e o elemento de DNA ligado s
protenas Doublesex tambm compartilhado pelos genes cuja expresso
especfica para o sexo.
Fatores de transcrio:
Os trans-reguladores dos promotores e dos intensificadores
Fatores de transcrio so protenas que se ligam s regies intensificadoras ou pro-
motoras e que interagem de tal maneira que a transcrio ocorre somente a partir de um
pequeno grupo de promotores numa dada clula. A maioria dos fatores de transcrio
pode se ligar s seqncias especficas de DNA, e essas protenas trans-reguladoras
podem ser agrupadas em famlias baseadas em similaridades de estrutura. Dentro de
cada famlia, as protenas compartilham uma armao estrutural comum nos seus res-
pectivos stios de ligao ao DNA, e pequenas diferenas de aminocidos no stio de
ligao podem alterar a seqncia do DNA ao qual elas se ligam. Alm de terem o
domnio ligante de DNA que especfico para uma seqncia, os fatores de transcri-
o contm um domnio envolvido na ativao da transcrio do gene cujo promotor
ou intensificador ele ligou. Freqentemente, esse domnio trans-ativador permite ao
fator de transcrio interagir com protenas envolvidas na ligao da RNA polimerase.
Essa interao com freqncia aumenta a eficincia com a qual o complexo transcricio-
nal bsico pode ser construdo e ligar a RNA polimerase II. Existem vrias famlias de
fatores de transcrio; as aqui discutidas so de alguns tipos principais.
Figura 10.14
O homeodomnio da protena Engrailed se liga em um stio espec-
fico do DNA. A hlice 3 contata os pares de bases no sulco princi-
pal, enquanto a poro amino-terminal do homeodomnio entra no
sulco menor. (Segundo Pabo e Sauer, 1992.)
Protenas de homeodomnio
Uma famlia extremamente importante de fatores trans-reguladores o conjunto de

protenas de homeodomnio. Essas protenas so crticas para a especificao dos
eixos corporais ntero-posteriores em todo o reino animal; elas sero mais detalha-
das nos Captulos 14 e 16. O homeodomnio consiste de 60 aminocidos organiza-
dos em hlice-giro-hlice, de tal maneira que a terceira hlice se estende para dentro
do sulco principal do DNA que ela reconhece. Os aminocidos da poro amino-
terminal do homeodomnio tambm contactam as bases no sulco menor (Figura
10.14). Esse homeodomnio foi visto pela primeira vez em protenas que especificam
a identidade de segmentos na Drosophila. Mutaes nessas protenas causaram a
transformao de um segmento do corpo em outro (uma transformao conhecida
como homeosis, que ser discutida em detalhe no Captulo 14). Vrias protenas de
homeodomnio na Drosophila melanogaster foram clonadas, seqenciadas e testa-
das para sua habilidade de regular a transcrio. A Tabela 10.1 mostra nove prote-
nas de Drosophila contendo homeodomnios e as seqncias de DNA que elas
reconhecem. O reconhecimento de promotores especficos pelas protenas conten-
do o homeodomnio tem sido considerado essencial para o desenvolvimento da
Drosophila. A protena Bicoid, por exemplo, um fator de transcrio de homeodo-
mnio que se liga aos promotores do gene hunchback. Essa ligao ativa a transcri-
o desse gene; a protena Hunchback resultante tambm um fator de transcrio,
e se liga aos intensificadores daqueles genes necessrios para a formao da cabe-
a e do trax da Drosophila (Driever e Nsslein-Volhard, 1989; Struhl et al., 1989).
Pequenas modificaes na composio de aminocidos do stio de ligao ao DNA
podem mudar a seqncia de DNA reconhecida pela protena. Treisman e seus
colegas (1989) demonstraram que alterando um nico aminocido no homeodomnio
podia-se modificar os promotores que essa protena ativaria.
Tabela 10.1 Principais protenas de homeodomnio da Drosophila

melanogaster e seus stios de ligao ao DNA.
Protena Stio(s) de ligao ao DNA
Abdominal B TAATTTGCAT
TCAATTAAAT
Antennapedia TAATAATAATAATAA
Bicoid TCCTAATCCC
Engrailed TCAATTAAAT
Even-skipped TCAATTAAAT
TAATAATAATAATAA
TCAGCACCG
Fushi tarazu TCAATTAAAT
TAATAATAATAATAA
Paired TCAATTAAAT
Ultrabithorax TAATAATAATAATAA
Zerknlt TCAATTAAAT
Os fatores de transcrio POU
Alguns fatores de transcrio tm tanto um homeodomnio como uma segunda regio

de ligao ao DNA (Figura 10.15). Em alguns casos, essa regio que compreende o
homeodomnio e a segunda regio de ligao ao DNA chamada domnio POU (Herr
et al., 1988). As iniciais so de quatro protenas nas quais pela primeira vez foram
vistas contendo tais domnios: Pit-1 (tambm chamada GHF1), um fator especfico da
pituitria que ativa os genes, codificando o hormnio de crescimento, prolactina e
outras protenas da pituitria; Oct1, uma protena de ampla distribuio que reconhe-
ce uma certa seqncia de oito pares de bases chamada seqncia octa (octa box), e
Oct2, a protena especfica da clula B que reconhece a octa box e ativa os genes da
imunoglobulina; e UNC-86, um produto gentico do nematdeo envolvido na determi-
nao do destino de clulas neuroniais. O homeodomnio de Pit-1 reconhece a se-
qncia ATATTCAT, enquanto o homeodomnio de Oct2 reconhece a seqncia simi-
lar ATTTGCAT. Se o elemento de DNA reconhecido pela Pit-1 alterado em dois
lugares, ele se torna um stio de ligao de Oct-2, e o gene de prolactina expresso em
linfcitos B (Elsholtz et al., 1990). Assim, uma modificao de duas bases no intensifi-
cador reconhecido pela protena POU pode converter uma transcrio especfica da
pituitria em uma transcrio especfica do linfcito.
Domnio POU
Principal POU-especfico Homeodomnio

domnio
Alta afinidade, Interao
trans-ativador
stio-especfico, protena-protena,
ligante de DNA, ligante de DNA
interao
protena-protena
dependente de DNA
Figura 10.15
Os domnios dos fatores de transcrio da famlia POU
Gene Pit-1 do Figura 10.16

primrdio da Transcrio do gene
Determinao do tipo celular por combina-
pituitria no Pit-1 especfico Traduo de Pit-1 Somatotrofos
do rgo especfico da clula es de protenas trans-reguladoras. O mRNA
expresso para o fator de transcrio Pit-1 transcrito
em todos tipos de clulas destinadas a residir
Estrgeno Lactotrofos na pituitria anterior. Entretanto, a protena
Pit-1 traduzida somente nas clulas
tireotrficas, somatotrficas e lactotrficas.
Embrio de Embrio de Tireotrofos Somatotrofos sintetizam hormnio de cres-
14 dias 16 dias cimento aps a traduo de Pit-1. Lactotrofos
sintetizam alguma prolactina concomitante
Corticotrofos com a traduo de Pit-1 mas produzem quan-
tidade significante de prolactina quando so-
mente co-estimulados com estrgeno (e sua
Gonadotrofos protena receptora trans-reguladora). O me-
canismo distinguindo a transcrio do hor-
mnio estimulador da tireide parece envol-
A protena Pit-1 encontrada somente em clulas da pituitria. Quando genes do ver a regio do silenciador (veja Figura 10.17).
hormnio de crescimento (que so ativos na pituitria) so clonados e colocados em (De acordo com Simmons et al., 1990.)
extratos nucleares de clulas outras que no as da pituitria, esses genes no so
transcritos, ao passo que a transcrio se dar se os genes do hormnio de crescimen-
to forem colocados em extratos nucleares de clulas da pituitria anterior. Alm disso,
a adio de Pit-1 ao extrato nuclear das clulas no pituitrias permitir a transcrio
do gene do hormnio de crescimento (Bodner e Karin, 1987). Conclui-se, ento, que a
expresso especfica do gene do hormnio de crescimento na pituitria anterior
mediada por uma protena trans-reguladora especfica para o tecido. Inversamente,
quando outros genes (tais como aqueles para a globina) so clonados prximo s
seqncias ligantes de Pit-1 e so usados para produzir camundongos transgnicos,
esses genes mostram uma transcrio especfica da pituitria (Behringer et al., 1988).
O intensificador ligante da protena Pit-1 , por sua vez, regulado pelo desenvol-
vimento (Doll et al., 1990; Simmons et al., 1990). Transcrio do gene Pit-1 do
camundongo detectada dentro de um dia aps o aparecimento histolgico da bol-
sa de Rathke, o primrdio da pituitria anterior, mas a traduo desse mRNA em
protena no ocorre antes de 2 ou 3 dias. O mRNA do hormnio de crescimento
primeiro detectado quando o gene Pit-1 traduzido. interessante notar que em
dois tipos de clulas da pituitria anterior, os corticotrofos que sintetizam a
corticotrofina (tambm chamada hormnio adrenocorticotrfico, ou ACTH) e os
gonadotrofos que sintetizam gonadotrofinas, o mRNA de Pit-1 produzido, mas
no traduzido (Figura 10.16). Somente nas clulas da pituitria dos somatotrofos
(produzem hormnio do crescimento), lactotrofos (produzem prolactina) e tireotrofos
(que sintetizam hormnio estimulador da tireide) a mensagem do Pit-1 traduzida
em protena nuclear que liga DNA. O intensificador ligante da protena Pit-1 no
somente mediador da transcrio dos produtos diferenciados dessas clulas, mas
necessrio para a formao das clulas da pituitria anterior na bolsa de Rathke.
Duas mutaes dwarf em camundongos so causadas por uma mutao na protena
Pit-1. Esses camundongos no tm as clulas tireotrficas, lactotrficas e
somatotrficas da pituitria anterior (Li et al., 1990).
INTERAES COMBINATRIAS E FORMAO DE ALAS NA REGULAO DA

TRANSCRIO DO GENE DA PROLACTINA. A atividade da protena Pit-1 no gene
para a prolactina ilustra muitas das caractersticas dos fatores de transcrio. Primei-
ro, o intensificador do gene prolactina liga vrios fatores diferentes cuja interao
regula a transcrio. O gene prolactina ativado durante a gravidez para produzir o
hormnio da pituitria (prolactina) que estimula a produo de leite; esse gene esti-
mulado ao mximo pela combinao de Pit-1 e estrgeno. Essa combinao regula o
lugar (a glndula pituitria) e o tempo (gravidez e logo aps) para a sntese de prolac-
tina. Simmons e colegas (1990) mostraram que esse sinergismo ocorre na regio do
Figura 10. 17 (A)

Sinergismo combinatrio no intensificador da
Pit-1 Estrgeno
prolactina. (A) Sinergismo entre stios do in-
tensificador da prolactina no rato. O intensi-
ficador da prolactina foi fundido com um gene
reprter (luciferinase) e o nvel de atividade
do gene reprter determinado quando o gene
fundido foi adicionado a clulas cultivadas.
Quando Pit-1 ou estrgeno estavam presen-
tes nessas clulas havia somente um pequeno
aumento no nvel de transcrio. Entretanto,
Nmero de vezes da estimulao acima da linha de base
a adio de ambas as substncias causou um
aumento de 1400 vezes no nvel da transcri- (B)
o. (B) Sinergismo entre os stios intensifi- Especificidade celular na expresso
cadores e promotores do gene da prolactina do transgene da prolactina
Construes do
no camundongo. Genes fundidos foram pro- promotor da prolactina Lactotrofos Tireotrofos
duzidos portando o gene reprter e (1) a re-
Seqncia
gio inteira 5 do intensificador da prolactina, flanqueadora Promotor
seqncias laterais e o promotor da prolactina;
(2) somente o intensificador especfico do te-
cido e o promotor da prolactina; (3) s o
promotor de prolactina; (4) o intensificador Intensificador
da prolactina mais o promotor do gene
timidina quinase (TK); e (5) somente o pro-
motor do gene Tk. Essas construes foram
colocadas em zigotos de camundongos, e a
expresso do gene reprter foi monitorada
em clulas lactotrficas e tireotrficas da
pituitria. (C) Modelo para a regulao da
expresso do gene da prolactina. Ambos, o
promotor e o intensificador tm quatro stios
de ligao de Pit-1. O receptor de estrgeno
liga-se ao elemento responsivo de estrgeno (C) Sinergismo promotorintensificador
(ERE) da regio do intensificador. As regies
que inibem a transcrio de prolactina em
Sinergismo do Promotor
tireotrofos e somatotrofos esto escuras.( A intensificador
de acordo com Simmons et al., 1990; B de
acordo com Crenshaw et al., 1989.) Regies
Ativantes:
DNA
Regies Somatotrofos Somatotrofos

restritivas: Tireotrofos Tireotrofos
intensificador do gene. A protena Pit-1 se liga a uma regio do intensificador en-

quanto o estrgeno, atravs da sua protena receptora, se liga a outra regio do
intensificador. Quando esses fatores esto presentes ao mesmo tempo, a transcrio
muito maior que aquela resultante da adio de cada um separadamente (Figura
10.17A). Mais ainda, parece haver regies silenciadoras flanqueando o intensifica-
dor que so necessrias para desligar o gene da prolactina nos tireotrofos (que de
outra maneira ativariam o gene da prolactina) (Figura 10.17B,C; Crenshaw et al.,
1989). Assim, Pit-1 age de forma combinatria com outros fatores de transcrio
para regular seus genes alvos.
Segundo, h um sinergismo entre o intensificador e o promotor do gene da prolac-
tina. O intensificador do gene da prolactina no estimular o promotor de outro gene
to eficientemente como estimular o seu prprio promotor (Figura 10.17B,C; Crenshaw
et al., 1989). Esse sinergismo entre os stios promotor e intensificador parece ser
causado pela formao de alas no DNA entre os dois stios. No gene da prolactina do
rato, o intensificador est localizado a mais de 1300 pares de bases a montante do seu
promotor. Usando um ensaio que funde DNA aproximado por interaes protena-
protena, Cullen e colegas (1993) mostraram que as regies do promotor e do intensi-
ficador so reunidas somente quando Pit-1 e estrgeno esto presentes. Parece que
o receptor do estrgeno ligado ao hormnio no intensificador capaz de estabilizar a
interao entre essa regio e a do promotor, assim permitindo a interao entre as
protenas ligadas ao intensificador (Pit-1 e receptor do estrgeno) com o sistema de
transcrio do promotor.
Terceiro, a protena Pit-1 regula positivamente sua prpria sntese. Um dos al-
vos da protena Pit-1 o intensificador do prprio gene Pit-1 (Rhodes et al., 1993).
Uma vez que o gene Pit-1 foi ativado (por outros fatores de transcrio), a protena
Pit-1 se liga ao seu prprio intensificador e mantm a transcrio do gene Pit-1.
Esse tipo de auto-regulao positiva importante como um mecanismo que compro-
mete a clula a um determinado caminho de desenvolvimento. Assim o gene Pit-1,
uma vez ativo, mantm o fentipo da pituitria. Tal auto-regulao tambm se d para
a protena MyoD (que envolve a clula na via do desenvolvimento da clula muscu-
lar) e para vrias protenas de Drosophila que mantm os limites especficos dos
segmentos e individuais do sexo.
& Especulaes
Regulao da transcrio dos genes

de cadeia leve das imunoglobulinas
A HABILIDADE de se obter linha-

gens clonadas de clulas con-
geladas em um estgio deter-
minado do seu desenvolvimento nos
permite amostrar os fatores de transcri-
Anticorpos so produzidos quando uma
substncia estranha o antgeno - entra em
contato com as clulas B, que residem nos
ndulos linfticos e no bao. Mesmo antes
do contato com o antgeno, cada uma das
pontes de dissulfeto (Figura 10.18). A especi-
ficidade da molcula de anticorpo (isto , se
ela se ligar a um poliovrus, uma clula de E.
coli ou alguma outra molcula) determinada
pela seqncia de aminocidos na regio va-
o presentes naquele momento. Tais clulas B em repouso produz protenas rivel. Essa regio composta dos amino-
clones so obtidos de tumores de certos imunoglobulinas mas no as secretam. Em terminais das cadeias leve e pesada. As regi-
tecidos, e leucemias de linfcitos B (c- lugar disso, as molculas de imunoglobuli- es variveis das molculas de anticorpo so
lulas B) do sistema imune permitiu aos nas so inseridas nas membranas das clu- ligadas s regies constantes que do ao an-
pesquisadores identificar muitos dos las B e so usadas como receptores de ticorpo suas propriedades efetuadoras ne-
elementos reguladores cis e trans, ne- antgenos. Esses receptores, ao se ligarem cessrias para inativar o antgeno. Durante d-
cessrios para o desenvolvimento da li- aos antgenos, sinalizam para a clula se di- cadas, os imunologistas se espantavam con-
nhagem de clulas B. vidir e em seguida se diferenciar. Cada clu- siderando como o sistema imune teria condi-
la B produz um anticorpo que reconhece o de produzir tantos tipos diferentes de an-
A estrutura dos genes da imunoglobulina. uma e somente uma forma antignica. Por- ticorpos. Poderiam todos os 107 diferentes ti-
At agora, nosso modelo tem sido aque- tanto, um anticorpo reconhecendo o pos de protena de anticorpo serem codifica-
le em que cada clula do corpo contm envoltrio protico de um poliovrus no dos no genoma? Isso tomaria uma quantida-
exatamente os mesmos genes. Isso pro- deveria reconhecer a toxina da clera, mem- de enorme de espao cromossmico. Mais
vavelmente verdade para a maioria dos branas da E. coli ou caspa de zebra. ainda, como o sistema imune saberia como
tipos de clulas, mas os linfcitos so Todas as protenas do anticorpo na mem- produzir um anticorpo contra uma molcula
diferentes. Em cada clula B, o genoma brana da clula B tm uma estrutura muito se- que nem encontrada fora do laboratrio?
foi organizado de tal forma que cada uma melhante. Cada uma consiste de dois pares de Surpreendentemente, foi descoberto que a
capaz de produzir um tipo de anticorpo subunidades polipeptdicas. Existem duas ca- produo de molculas especficas de anti-
(de um repertrio contendo possivelmen- deias pesadas idnticas e duas cadeias leves corpos envolve a criao de novos genes du-
te mais de 10 milhes de anticorpos). idnticas; as cadeias esto ligadas entre si por rante a diferenciao da clula B.
Sitio de combinao Stio de combinao eletroforese, o gel foi cortado em vrios

do antgeno do antgeno pedaos, cada um contendo pedaos de
DNA de um certo tamanho. O DNA em cada
segmento de gel foi eludo e desnaturado
em cadeias nicas. Parte desse DNA foi
hibridizado com RNA radioativo, que co-
dificava a cadeia leve inteira e foi isolado
do tumor de clula B original. A outra parte
Cadeia leve foi hibridizada com RNA radioativo codifi-
cando somente a regio C da cadeia leve (a
Pontes de dissulfeto metade 3 da mensagem do RNA). Em dois
segmentos do gel, o DNA do embrio li-
gou o mRNA da cadeia leve. O DNA do
primeiro segmento tinha um peso molecular
Cadeia pesada Sito efetuador (MW) de aproximadamente 6 milhes; o
peso do DNA do segundo segmento foi
de 3.9 milhes. Quando o DNA do embrio
HOOC COOH de camundongo foi hibridizado com o
Figura 10.18 mRNA da regio C da cadeia leve, somente
Estrutura de uma protena imunoglobulina tpica (anticorpo). Duas cadeias pesadas idnticas
so ligadas por pontes de dissulfeto. O stio de combinao do antgeno composto de regies o DNA de peso molecular 6 milhes se li-
variveis (branco) de cadeias leves e pesadas, enquanto o stio efetuador do anticorpo (que gou ao RNA. Portanto, no embrio do ca-
controla se aglutina antgenos, se liga aos macrfagos, ou entra em secrees mucosas) deter- mundongo, a regio C estava codificada
minado pela seqncia de aminocidos da regio constante da cadeia pesada (colorida). dentro de fragmentos de DNA com peso
molecular de 6 milhes (entre os stios de
Criao dos genes de cadeia seqncia do segmento J, um rearranjo que BamHI), enquanto a regio V estava codi-
leve dos anticorpos elimina o DNA interveniente. ficada dentro de uma regio de peso
Os genes para as cadeias pesadas e leves Esse rearranjo dos genes foi visto inici- molecular de 3.9 milhes (Figura 10.20).
dos anticorpos esto organizados em seg- almente por Hozumi e Tonegawa (1976), que O DNA do tumor linfoctico, entretan-
mentos. Genes de cadeia leve de mamferos isolaram DNA de um embrio de camundon- to, deu resultados muito diferentes. O nico
contm trs segmentos (Figura 10.19). O go e de uma clula B de tumor secretando a DNA linfoctico que ligou o mRNA de ca-
primeiro segmento do gene, V, codifica os cadeia leve.* Eles digeriram separadamente deia leve tinha um peso molecular de 2.4
primeiros 97 aminocidos da regio varivel os dois DNAs com a enzima de restrio milhes, e ele tambm ligou o mRNA da
da cadeia leve. Existem aproximadamente BamHI (veja Captulo 2), que cliva o DNA regio C da cadeia leve. Assim, tanto a re-
300 seqncias V, unidas umas as outras no sempre que ela localiza a seqncia gio C como a V foram codificadas no mes-
genoma do camundongo. O segundo seg- GGATCC. O resultado foi uma srie de frag- mo fragmento de DNA! A explicao mais
mento, J, consiste de 4 ou 5 seqncias pos- mentos de DNA, de tamanho determinado simples (confirmada por numerosos labo-
sveis de DNA para os ltimos 15-17 resdu- pelo comprimento da molcula de DNA en- ratrios e mtodos; veja Bernard et al., 1978;
os da regio varivel da cadeia leve do tre dois stios de clivagem. Os fragmentos Brack et al., 1978) foi a de que dois frag-
anticorpo. O terceiro segmento a regio de DNA foram colocados em uma cavidade mentos de genes, um codificando a re-
constante (C) da cadeia leve. Durante a dina extremidade de um gel e submetidos gio C da cadeia leve e outro codificando
ferenciao da clula B, um dos 300 seg- eletroforese. Enquanto o DNA migrava para uma regio V especfica da cadeia leve se
mentos V e um dos cinco segmentos J se o eletrodo positivo, os fragmentos menores fundiram para formar um novo gene du-
combinam para formar a regio varivel do se moviam mais rapidamente do que os mai- rante o desenvolvimento do linfcito. O
gene do anticorpo. Isso feito movendo ores, separando efetivamente os fragmen- modelo proposto para tal sntese do gene
uma seqncia do segmento V para uma tos de acordo com o tamanho. Aps a est apresentado na Figura 10.21.
* Tumores de clula B (mielomas) foram usa-

Figura 10.19 dos porque produzem uma quantidade enorme de
Rearranjo dos genes da cadeia leve durante o desenvolvimento do linfcito B. Enquanto a clula uma imunoglobulina especfica (e do mRNA para
B em desenvolvimento ainda est maturando na medula ssea, um dos 300 ou mais segmentos aquela imunoglobulina).
V do gene, se combina com um dos cinco segmentos J do gene e se aproxima do segmento
constante do gene (C).
Organizao original do gene
Organizao do gene em linfcitos B

produzindo anticorpos de Vn-1 e J4
Figura 10.20 Clulas de mieloma Camundongo embrionrio

Protocolo e resultados do experimento de Hozumi e Tonegawa. DNAs de c-
lulas de embrio de camundongo e clulas B de tumores (mielomas) foram DNA extrado de clulas
digeridos separadamente em BamHI, separados por eletroforese e eludos do de mieloma e
gel. Aps a desnaturao, cada amostra de DNA eludo foi hibridizada com camundongos embrionrios
mRNA radioativo codificando as regies V e C da cadeia leve da imunoglobu-
lina (total) ou com um mRNA radioativo fragmentado codificando somente a
regio C daquela protena de cadeia leve (a metade 3). Para o DNA embrio-
nrio, as regies V e C da protena de cadeia leve foram encontradas em dois
pedaos diferentes de DNA (regio V em um pedao com peso molecular de
3.9x106, e a regio C em um fragmento de DNA de peso molecular de 6x106).
No tumor linfoctico, as regies V e C foram encontradas juntas em um nico
fragmento de DNA de peso molecular 2.4x106.
Criao de genes de cadeia

Enzimas de
pesada do anticorpo
restrio
Os genes de cadeia pesada dos anticorpos
contm mais segmentos do que a cadeia
leve. Segmentos do gene de cadeia pesada DNA tratado com enzimas
incluem um segmento V (200 diferentes sede restrio dando fragmentos de
qncias para os primeiros 97 aminocidos), DNA
um segmento D (10 a 15 seqncias diferen- Sonda
tes codificando de 3 a 14 aminocidos), e de V-CmRNA
um segmento J (4 seqncias para os lti- ou
sonda
mos 15 a 17 aminocidos da regio V). O de CmRNA
prximo segmento codifica a regio C. A re-
gio varivel da cadeia pesada formada Fragmentos so
justapondo um segmento V a um segmento desnaturados e
tratados com a
D e a um segmento J (Figura 10.22A,B). Essa sonda marcada para
seqncia da regio varivel VDJ est ago- V-C ou C
ra adjacente primeira regio constante dos
genes de cadeia pesadaa regio C, es- As duas sondas se ligam aos mesmos
pecificamente para anticorpos que podem fragmentos de DNA do mieloma, mas
ser inseridos na membrana plasmtica. As- as sondas se ligam a diferentes
sim formada uma molcula de imunoglo- fragmentos de DNA embrionrio
bulina a partir de dois genes criados duran-
te o desenvolvimento do linfcito B no es-
tgio independente do antgeno. Podem ser
formadas cerca de 103 cadeias leves e 104 DNA de mieloma DNA de embrio
cadeias pesadas. Como cada uma forma- V-CRNA V-CRNA
da independentemente da outra, cerca de C-RNA C-RNA
107 tipos de anticorpos podem ser criados
cpm no hbrido
cpm no hbrido
pela unio de uma cadeia leve e uma cadeia

pesada dentro da clula. Cada clula pro-
duz somente um desses 10 7 tipos de
anticorpos e os coloca na membrana celular
para serem usados como receptores de
antgenos. O genoma de cada clone de
linfcito pode ser bastante diferente daquele
de qualquer outra clula. Tamanho do fragmento Tamanho do fragmento
ligando-se sonda ligando-se sonda
Mais tarde no desenvolvimento adulto,
algumas clulas B sofrem outro arranjo cha-
mado troca de classe. Aqui, toda a seqn-
cia VDJ do gene de cadeia pesada transfe- e aparelho digestivo, onde protegem o cor- seu receptor de antgeno (Fujimoto e
rido da regio C a outra regio C. A nova po contra antgenos no ar e nos alimentos. Yamagishi, 1987). As enzimas responsveis
regio C ter propriedades diferentes. Na A clula B no o nico tipo celular pela mediao dos eventos de recombina-
Figura 10.22C e D, a seqncia VDJ que altera seu genoma durante a diferenci- o do DNA parecem ser os mesmos nas
transferida para uma regio C. A seqncia ao. A outra clula importante do sistema linhagens de clulas B e T. Chamadas
C codifica a regio constante que permite imune, o linfcito T, tambm deleta uma recombinases (Schatz et al., 1989; Oettinger
que anticorpos sejam secretados na mucosa poro do seu genoma na construo do et al., 1990), essas duas protenas reconhecem
PM 3.9x106 PM 6x106
Stio Bam HI
DNA embrionrio
DNA de clula B de tumor
as regies sinalizadas de DNA imediatamen-

te a montante do DNA recombinvel e for- PM 2.4x106
ma um complexo que inicia as quebras na Figura 10.21
fita dupla (Hiom e Gellert, 1997). Os genes Modelo de modificaes no DNA entre clulas embrionrias e o linfcito B, de acordo com os
para essas enzimas, so ativos somente nas dados de Hozumi e Tonegawa (1976).
clulas pr-B e clulas pr-T, onde os genes
esto sendo recombinados. Esses genes de mas relacionados origem da diversidade Um desses elementos, a montante do pro-
recombinases no so ativos em clulas mados anticorpos. Entretanto, outros proble- motor, chamado seqncia octa (octa box)
duras, tanto B como T, e tambm no esto mas foram criados. Cada segmento V tem (Bergman et al., 1984; Parslow et al., 1984),
na maioria de outros tipos de clulas.* seu prprio promotor a ele ligado. Por que devido a seus oito pares de bases:
no h expresso de cada gene dos seg- ATTTGCAT. Essa seqncia octa foi en-
Regies cis-reguladoras dos mentos V? Mapeamentos de deleo em contrada em todos os promotores da ca-
genes de imunoglobulinas. genes clonados mostrou que o promotor deia leve da imunoglobulina estudados. O
A descoberta da juno de V(D)J e a troca da cadeia leve da imunoglobulina contm promotor do gene de cadeia pesada da imu-
de classe resolveu a maioria dos proble- vrias regies crticas para a transcrio. noglobulina tem uma sequncia octa in-
(A)
Formao da regio varivel
(B)
Figura 10.22
Troca de classe
Formao da regio varivel do gene e troca de classe na produo de cadeias pesadas da
imunoglobulina. (A) uma cadeia pesada contm trs segmentos (V, D e J) que se juntam
para formar a regio varivel (V) e a regio constante (C). As quatro principais classes
de anticorpos so classificadas com base na regio constante (IgA contm C: IgM, C;
(C) IgG, C). (B) Antes da apresentao do antgeno, a regio varivel se forma pela unio
dos segmentos V, D e J. Esse segmento VDJ do gene est adjacente regio C e o
anticorpo resultante est localizado na membrana celular. (C) Aps a apresentao do
antgeno, pode ser feita uma ala na regio do DNA, de tal maneira que o segmento VDJ
fique adjacente a uma outra regio C (nesse caso, a regio C, que permite a anticorpos
penetrar em secrees mucosas). (D) Essa troca de classes mediada por uma srie de
seqncias (S) de trocas, adjacentes a cada uma das regies constantes. (De acordo com
Davis et al., 1980a,b.)
* At recentemente, considerava-se que as pro-
tenas recombinase eram encontradas somente em
linfcitos, mas evidncia recente (Chun et al., 1991;
Matsuoka et al., 1991) mostrou que eventos de
recombinao e recombinases existem tambm no
tecido cerebral. No se conhece a funo nas clu-
las neurais, mas fascinante especular que alguns
dos receptores que ligam o axnio da clula nervo-
sa ao seu alvo especfico podem ser feitos pela
recombinao de vrias regies do gene.
(A) Gene da linhagem germinativa: sem transcrio

Regio D Regio J Intensificador
Figura 10.23
Modelo para a atividade do intensificador da
(B) Gene rearranjado: transcrio da imunoglobu- imunoglobulina. (A) A regio do intensifica-
lina dor do gene de cadeia pesada da imunoglobu-
lina parece envolver seqncias entre o seg-
mento J do gene e as seqncias de troca (S)
Intensificador precedendo C. Se o intensificador removi-
DNA do, a transcrio muito diminuda. O promo-
tor 5 precede cada um dos segmentos da re-
gio V do gene e est originalmente muito dis-
tante do intensificador. (B) O rearranjo VDJ
RNA nuclear do gene trs um promotor para perto do inten-
sificador e permite que a transcrio se con-
cretize. (C) Durante a troca de classe, o inten-
mRNA sificador permanece com os segmentos VDJ
enquanto eles so colocados perto de uma nova
regio constante (C).
(C) Gene trocado de classe: Transcrio de nova classe de imunoglobulina
Intensificador O rearranjo no gene coloca um deter-
DNA minado promotor na proximidade de um in-
tensificador. Um evento semelhante ocor-
re com o gene de cadeia pesada, e durante
RNA nuclear a troca de classe (quando uma regio do
DNA transformada em ala e deletada), a
regio do intensificador permanece prxi-
mRNA ma ao pedao VDJ (Figura 10.23).
vertida: ATGCAAAT. Quando a seqncia translocada para genes de globina trans-Regulao da sntese
cia octa colocada a montante de um gene clonados, a transcrio desses genes tam- de imunoglobulinas
da globina em um linfcito B cultivado, a bm pode ocorrer especificamente em linf- O rearranjo de genes em si, no sufici-
transcrio do gene de globina aumenta citos (Picard e Schaffner, 1984). Para que a ente para sua ativao, pois um gene de
de 11 a 18 vezes. Esse aumento visto so- transcrio ocorra no linfcito, o promotor imunoglobulina rearranjado no transcre-
mente em clulas linfides e no foi obser- deve ser trazido para a proximidade do inver ativamente quando colocado em um
vado em fibroblastos (Wirth et al., 1987). tensificador. Todos os segmentos V levam fibroblasto ou clula do fgado. Devem
A seqncia do intensificador do gene um promotor, mas somente o segmento V estar presentes fatores trans-reguladores
de cadeia leve da imunoglobulina est loca- trazido prximo regio constante (com seu especficos para a clula em questo.
lizada no primeiro ntron entre a seqncia intensificador) ser ativado (Mather e Perry, Staudt e colaboradores, em 1986, identifi-
VJ e a regio C (Queen e Baltimore, 1983; 1982). Essa localizao ocorre durante a caram dois fatores que se ligam a promo-
Bergman et al.,1984). Quando essa seqn- construo do gene da imunoglobulina. tores. Para isso, eles incubaram um pe-
queno pedao de DNA contendo uma
Pre-B B PC Non-B seqncia octa com extratos nucleares de
vrias clulas. Os produtos resultantes fo-
ram analizados em um gel. Se o extrato
Figura 10.24
Ligao no Ensaio de troca de mobilidade em gel. Extratos nucleares de clulas
especfica da linhagem B [pr-B, B e clulas de plasma (PC)] e clulas no-B
(linhagens de clulas cervicais, de fibroblastos, de clulas precur-
soras dos glbulos vermelhos do sangue) foram misturadas com
um pequeno segmento de DNA contendo o octmero. Aps incuba-
Ligao especfica o, as misturas foram separadas eletroforeticamente em um gel,
da linhagem B transferidas para papel de nitrocelulose, e hibridizadas com DNA
radioativo complementar seqncia do octmero. Na ausncia de
uma ligao, fragmento contendo o octmero migra rapidamente
para o fundo do gel. Todos os ncleos contm uma protena que se
liga no-especificamente ao octmero e impede fortemente a mi-
Fragmento de DNA grao. Os ncleos da linhagem de clulas B, entretanto, tambm
somente contm outra protena que inibe a migrao ligando-se seqncia
do octmero. (de Staudt et al., 1986, cortesia de D. Baltimore.)
Figura 10.25 Receptor de

Regulao de NF-B por I-B. I-B se liga Receptor de antgeno
lipopolissacardeo
Receptor do fator de
subunidade maior de NF-B e impede a entrada de clula T ou B necrose tumoral
Entrada
do complexo no ncleo. I-B pode ser fosforila-
do vrus
do por vrias quinases que so ativadas pela
replicao de vrus, antgenos, lipopolissacardeos
ou o fator de necrose tumoral. A fosforilao
de I-B libera NF-B que pode ento entrar no Protena Outras
ncleo e se ligar aqueles stios promotores e in- ds RNA quinase C protenas quinases
tensificadores que ele reconhece. Esses genes in- quinase
cluem os que codificam a cadeia leve da imuno-
globulina kappa, fator de necrose tumoral, IB inativo
interleucina 2, e o receptor para interleucina 2. O
Fosforilao
vrus da imunodeficincia humana tambm tem
de IB
stios para ligao de NF-B. NF-B ativo
Complexo
nuclear no tivesse uma protena capaz
de se ligar a esse DNA, o pequeno frag- inativo
Ncleo
mento de DNA deveria migrar rapidamen-
te pelo gel. Mas, se uma protena se ligou Stio B Outros stios
a esse DNA, a migrao deveria ser preju-
dicada. Esse ensaio de mudana de mobi-
lidade (Figura 10.24) demonstrou que cada
ncleo tinha pelo menos um fator capaz
de se ligar ao fragmento de DNA. Entre-
tanto, a linhagem de clulas B (clulas pr-
B, clulas B e clulas de plasma) conti-
nham, alm disso, um outro fator capaz de
se ligar especificamente seqncia octa
do DNA. Essas protenas ligantes foram
isoladas, e a protena especfica para lin-
fcitos foi denominada Oct2 (NF-A2).
Ensaios similares foram usados para
encontrar uma protena nuclear restrita
linhagem de clulas B, que se ligasse es-
pecificamente s seqncias intensifica-
doras dos genes de cadeia leve das imu-
noglobulinas (Sen e Baltimore, 1986a; al., 1992). Assim, NF-B pode reconhecer a ra NF-B e permite sua entrada no ncleo
Atchinson e Perry, 1987). Uma tal prote- regio do seu intensificador somente na- (Ghosh e Baltimore, 1990; Kerr et al., 1991).
na, NF- B, foi encontrada somente em c- quelas clulas que ou no sintetizam ou no Alm da regulao positiva na trans-
lulas B maduras e clulas de plasma, e reativam seu IB- ou seja, em linfcitos madu- crio do gene da imunoglobulina identi-
conhecia a seqncia de ligao 5- ros (Sen e Baltimore, 1986b; Baeuerle e ficada nas clulas B, tambm existe regu-
GGGACTTTCC-3 no intensificador da ca- Baltimore, 1988). A sntese de cadeias leves lao negativa da produo de imunoglo-
deia leve. Alm disso, quando clulas pr- de imunoglobulinas provavelmente inici- bulina em clulas no-B. Parece haver v-
B so induzidas a se tornarem clulas B, ada quando um sinal na superfcie celular ati- rios stios ladeando os genes da imuno-
aparece a protena ativa NF-B*. va protenas quinases que podem fosforilar globulina, que so ligados pelas prote-
Neste ponto o problema da atividade IB. Considera-se que essa fosforilao libe- nas que inibem a transcrio dos genes
gnica diferencial levado a outro nvel: O
que controla a sntese dos fatores trans- * As clulas B so as nicas clulas que sintetizam imunoglobulinas. A clula pr-B pode produzir
reguladores especficos da clula B, como a cadeia pesada mas no a cadeia leve da protena imunoglobulina. NF-B ativo tambm foi
Oct2 ou NF-B? (Ou seja, para explicar como encontrado em clulas T ativadas (mas no em inativadas). Genes especficos para a clula T, tais
como os que codificam a interleucina 2 (fator de crescimento da clula T) e seu receptor tm
so produzidas especificamente em uma c- intensificadores que ligam NF-B. Essa responsividade a NF-B pode ser importante na propagao
lula, devemos explicar como essas prote- do vrus da imunodeficincia humana (HIV). Quando HIV infecta uma clula T, ele induz a formao
nas nucleares so produzidas nessas clu- do NF-B ativo (Sen e Baltimore, 1986b; Lenardo e Baltimore, 1989). A produo de NF-B ativo
las especficas.) Parece que a protena NF- estimula os genes da clula T, que tm stios nos intensificadores para essa protena. Assim, a clula
B est presente em vrios tipos de clula, T estimulada a se proliferar. Ao mesmo tempo, HIV tambm tem elementos intensificadores de
NF-B que tambm o permitem transcrever seus produtos rapidamente. bvio que a NF-B tem
mas est ligada por uma protena de 65-kDa
um papel muito importante no desenvolvimento de linfcitos normal ou alterado.
chamada I B (inibidor de kappa). No esta- Pode-se conjecturar o que a protena, no especfica, ligante da seqncia octa, est fazendo em clulas
do ligado, NF-B no pode entrar no ncleo no-B. Embora as protenas Oct1 e Oct2 possam se ligar mesma seqncia octa, elas exercem seus efeitos
e se ligar ao DNA (Figura 10.25; Henkel et interagindo com outras protenas em certos promotores (Tanaka et al., 1992).
(Calame, 1989). Protenas capazes de se ras, dependendo do histrico do desen- final na diferenciao de uma clula. Sa-
ligar a essas regies silenciadoras dos volvimento da clula. bemos que a transcrio desse gene da
genes da imunoglobulina tambm foram A anlise da transcrio especfica da imunoglobulina depende da atividade an-
identificadas em clulas no-B. Conclui- clula dos genes de cadeia leve da imu- terior de duas protenas nucleares, Oct2 e
se que a transcrio pode ser estimulada noglobulina progrediu, ento, para um NF-B, cuja atividade vista somente em
ou inibida por protenas trans-regulado- nvel onde se considera mais o produto linhagens de clulas B.
Fatores de transcrio bsicos do tipo hlice-ala-hlice. HOOC COOH
Hlice Hlice
Outro arranjo proeminente, identificado em protenas que se ligam aos promotores e
intensificadores do DNA, o motivo (motif) bsico hlice-ala-hlice (bHLH). Os
fatores de transcrio especficos do msculo, MyoD e miogenina (discutidos no
Captulo 9) contm esse motivo, tal como vrias outras protenas da Drosophila que Ala Ala
determinam as clulas do seu sistema nervoso perifrico: os produtos dos genes
daughterless, achaete-scute e extramacrochaetae. Como veremos no Captulo 20, os Hlice Hlice
genes que determinam o sexo na Drosophila tambm contm o modelo bHLH. As
protenas bHLH se ligam ao DNA atravs de uma regio de aminocidos bsicos Domnio de Domnio de
(tipicamente resduos 10 a 13) que precede a primeira -hlice (Figura 10.26). A hlice ligao do ligao do
contm aminocidos hidrofbicos em cada terceira ou quarta posio, fazendo com DNA DNA
que a hlice apresente uma superfcie de resduos hidrofbicos ao ambiente. Isso
permite protena um pareamento, por interaes hidrofbicas, com a mesma protena
ou outra relacionada, que apresenta tal superfcie (Jones, 1990).
Estudos recentes mostraram que homodmeros (entre duas protenas bHLH idn- Figura 10.26
ticas) no se ligam adequadamente ao DNA. Na realidade, as protenas bHLH reco- Domnios dos fatores de transcrio bsicos
nhecem suas seqncias promotoras de acordo com o seguinte paradigma (Tabela hlice-ala-hlice.
10.2). Existe uma protena bHLH ubqua, sintetizada pela maioria das clulas que
pode formar um dmero com qualquer um de dois parceiros em potencial. Um deles
um regulador positivo (que estimula a transcrio); o outro parceiro um regulador
negativo. Quando o regulador positivo se dimeriza com a protena bHLH ubqua,
forma-se um complexo ativador que estimula a transcrio dos genes que ele reconhe-
ce. Quando a dimerizao da protena com o regulador negativo, o produto resul-
tante reprime a transcrio desses mesmos genes. Por exemplo, a famlia de protenas
MyoD ativa na promoo da miognese quando complexada com as protenas E12
ou E 47- duas protenas bHLH ubquas (French et al., 1991; Lassar et al., 1991). O
desenvolvimento do msculo inibido quando as protenas MyoD, E12 ou E47 esto
ligadas protena Id (inibidor da diferenciao). A protenas Id contm o motivo
HLH, mas no a regio bsica que se liga ao DNA. Dimerizao de Id com MyoD, E12
ou E47 interfere com a habilidade dessas protenas se ligarem ao DNA, e a expresso
de Id na clula impede a atividade das protenas MyoD (Benezra et al., 1990). A prote-
na Id produzida enquanto os precursores da clula muscular ainda esto se dividin-
do, e desaparecem quando os mioblastos deixam o ciclo celular para comear a se
diferenciarem em miotubos. Se Id for super expressa em mioblastos cultivados, eles
no se diferenciaro em miotubos (Jen et al., 1992).
Tabela 2 Dmeros bHLH no desenvolvimento

Neurognese de Miognese de Diviso celular
Dmero Drosophila Mamfero de Mamfero
Protena onipresente daughterless E12, E47 Max
Regulador positivo achaete-scute Famlia MyoD myc
Regulador negativo extramacrochaetae Id Mad ou Max
& Especulaes
Regulando as protenas bHLH miognicas:

Governando a troca entre proliferao e diferencia-
o de clulas musculares
E XISTEM DUAS MANEIRAS de regu-
lar protenas bHLH miognicas,
alm da dimerizao com Id. Sabe-
se h muito tempo (Stockdale e Holtzer, 1961;
esto presentes para estimular a mitose, a
miognese no ocorre mesmo que prote-
nas MyoD ou Myf-5 estejam presentes na
clula (Olson, 1992). A inativao dessas
mente em certas reas. Esse parece ser o
caso na expresso de MyoD no somito
onde Twist inibe a expresso de MyoD no
dermtomo e no esclertomo. (Captulo 9).
Bischoff e Holter, 1969) que clulas muscu- protenas bHLH est associada a sua inabi- MyoD pode tambm ser suprimida pela
lares geralmente no se diferenciam at que lidade em se ligar seqncia CANNTG do sinalizao da protena do receptor Notch.
a proliferao esteja terminada. As clulas DNA (onde N qualquer base) (Brennan et A protena Notch ativada estimula a trans-
musculares em proliferao no expressam al., 1991). Por que essas protenas bHLH crio do gene hes-1 que codifica outra pro-
o fentipo especfico do msculo, enquan- miognicas no podem funcionar? Fatores tena bHLH. Essa protena parece se ligar
to que msculos diferenciados no mais se de crescimento tal como o fator de cresci- MyoD, e inibir sua habilidade de funcionar
dividem. Crescimento e diferenciao so mento de fibroblastos (FGF) no somente como um fator de transcrio indutor do
considerados estados mutuamente exclusi- estimulam a transcrio de Id mas tambm msculo (Sasai et al., 1992; Kopan et al., 1994;
vos no desenvolvimento do msculo es- ativam a protena quinase C. Essa quinase Jarriault et al., 1995). Como as clulas do
queltico, e uma vez que a clula muscular induz a fosforilao das protenas bHLH epiblasto da galinha expressam MyoD e se
abandonou o ciclo celular, ela no pode miognicas exatamente no seu stio de liga- tornam msculos quando dissociados em
voltar, mesmo que sejam fornecidos fato- o ao DNA (Li et al., 1992). Quando esse cultura, possvel que um sinal, mediado
res de crescimento (Konigsberg et al., stio fosforilado as bHLH miognicas no por contacto de clula justaposta, como o
1960; Nadal-Ginard, 1978). Essa exclusivi- ligaro DNA. Assim, enquanto os fatores de Notch, seja responsvel pela inibio des-
dade mtua entre diferenciao e prolife- crescimento estiverem presentes e aptos a sa expresso e reteno da pluripotncia do
rao tambm vista no desenvolvimen- serem recebidos, a miognese no ocorrer. epiblasto (Kopan et al., 1994; George-
to de neurnios, adipcitos, clulas do O segundo tipo de regulao envolve Weinstein et al., 1996).
sangue e queratincitos da pele. Os me- o impedimento da expresso de MyoD MyoD freqentemente chamado um
canismos para essas trocas durante a onde ela no necessria. MyoD um dos gene regulador mestre, pois seu produto
miognese parecem envolver a regulao mais poderosos reguladores de transcri- capaz de converter quase todas as clu-
das protenas bHLH miognicas. o. Como discutido no Captulo 9, se o las em msculo. O paradoxo que qual-
O primeiro desses mecanismos respon- regulador expresso dentro da maioria das quer gene controlador mestre tem que
svel pela preveno da diferenciao mus- clulas, essas clulas se tornam msculo. ser controlado com maestria. Seus produ-
cular prematura quando as protenas bHLH Isso significa que ele deve ser fortemente tos so to poderosos que a clula desen-
miognicas comeam a aparecer. Protenas controlado. Um mecanismo fazer as clu- volveu numerosos meios- em diferentes
bHLH miognicas so extremamente sens- las sintetizarem um inibidor potente da fun- nveis- para impedir sua expresso nas c-
veis a fatores de crescimento. Enquanto eles o de MyoD e liberar esse controle so- lulas erradas e nos momentos imprprios.
Fatores de transcrio do zper bsico da leucina
A estrutura dos fatores de transcrio do zper bsico da leucina muito semelhante

a das protenas bHLH. As protenas bZip so dmeros, cada uma de suas subunida-
des, tendo no carboxi terminal, um domnio bsico ligante de DNA logo seguido por
uma hlice contendo vrios resduos de leucina. Essas leucinas esto colocadas
na hlice de tal maneira que elas interagem com outros resduos de leucinas similar-
mente espaados em outras protenas bZIP, para formar um zper de leucina entre
elas, causando a formao de dmeros. Esse domnio seguido por um domnio
regulador que interage com o promotor para estimular ou reprimir a transcrio
(Landschulz et al., 1988; Pathak e Sigler, 1992). Os fatores de transcrio C/EBP, AP1
e o GCN4 de levedo so membros da famlia bZip. Mtodos genticos e de
cristalografia de Raios X convergiram em um modelo de ligao de DNA mostrado
Figura 10.27
Representao estereoscpica da regio ligante de DNA da prote-
na bZip, C/EBP, interagindo com 20 pares de bases contendo a
seqncia CCAAT. (Topo) Vista dorsal olhando para baixo,
para uma dupla hlice do DNA e paralelamente ao zper de leucina.
(Embaixo) Vista lateral em ngulo reto ao diagrama acima e per-
pendicularmente ao eixo do DNA. Resduos de leucina conectando
as duas subunidades podem ser vistas embaixo, como tambm as
alas da tesoura no DNA. (Se voc no est acostumado a cru-
zar seus olhos para ver a estreo imagem composta, use um
estereptico.) (de Pathak e Sigler, 1992.)
na Figura 10.27 (Vinson et al., 1989; Pu e Struhl, 1991). Na figura, as duas hlices
contendo a regio ligante de DNA esto inseridas no sulco maior desse DNA, cada
hlice encontrando uma idntica seqncia de DNA. A ligao resultante assume a
aparncia de uma tesoura ou hemostato.
Sabe-se que existem vrias protenas bZIP que podem se ligar seqncia CCAAT;
uma das mais importantes chamada protena ligante do intensificador CCAAT
(C/EBP). C/EBP tem um papel na adipognese semelhante ao das protenas
miognicas bHLH na miognese. Expresso precoce de C/EBP em clulas pr-
adiposas em diviso causa a cessao da diviso celular e a iniciao do fentipo
adiposo (Umek et al., 1991). (Ao contrrio das protenas bHLH miognicas, as quais
podem converter clulas nervosas e fibroblastos em msculos, C/EBP no parece
converter outros tipos de clulas na linhagem de adipcitos). A protena bZIP C/EBP
se liga aos intensificadores de numerosos genes especficos de adipose quando a
adipognese iniciada em cultura (Figura 10.28; Christy et al., 1989; Kaestner et al.,
1990). mRNA antisenso contra C/EBP suprime a expresso coordenada de mensa-
gens especficas de adipcitos e a diferenciao de pr-adipcitos em adipcitos.
(Samuelsson et al., 1991; Lin e Lane, 1992).
C/EBP tambm enriquecido nas clulas hepticas, e um dos mais importantes
reguladores da expresso gnica especfica do fgado. Em hepatcitos de camundongo,
(A) (B) (C)
Figura 10.28
Adipognese (formao de clulas gordurosas) mediada pelo fator de transcrio C/EBP.
Colorao de lipdios mostrada no quadro da direita. A coluna da esquerda mostra os
mRNAs para as protenas SCD1 e GLUT4 que esto envolvidas na diferenciao de adipcitos.
(A) Adipognese normal na linhagem de clulas pr-adipcitos 3T3-L1 em cultura. Os genes
SCD1 e GLUT4 so ativados, e as clulas sintetizam e acumulam grandes quantidades de
triglicerdeos. (B,C) Duas linhagens de clulas 3T3-L1 transfectadas com RNA antisenso
contra a mensagem C/EBP. Nenhum dos genes est bem expresso, e os nveis de triglicerdeos
so 15 e 5 % do normal (de Lin e Lane, 1992.)
outros fatores de transcrio se ligam s regies do promotor e intensificador de

genes especficos do fgado durante o desenvolvimento. Entretanto, esses genes no
transcrevem grandes quantidades de protena (tal como a albumina) at que C/EBP
seja expresso nessas clulas imediatamente antes do nascimento (Milos e Zaret, 1992).
Outro gene especfico de fgado, ativado por C/EBP, o gene para o fator IX da
coagulao do sangue. Mutaes no gene desse fator da coagulao causam a hemofilia
B. Em alguns pacientes, a causa dessa doena foi relacionada s mutaes no stio de
ligao da C/EBP na regio promotora do gene do fator IX. Essas mutaes impedem
a ligao de C/EBP ao gene (Crossley e Brownlee, 1990).
& Especulaes
Armadilhas do intensificador: natural e experimental

Leucemias induzidas por translocao ao mesmo stio que o complexo c-Myc/ tinuar a se proliferar, aumentando portan-
Um fator de transcrio crtico muito im- Max, ou seja CACGTG (Ayer et al., 1993). to o risco de formao de tumor.
portante para a regulao da diviso celu- O gene c-myc o homlogo celular do Considerando que os intensificadores
lar a protena c-Myc. Essa um membro gene produtor de cncer, ou oncogene, v- esto aptos a controlar a expresso dos
da classe de protenas ligantes ao DNA myc do vrus da mielocitomatose aviria genes reprteres no relacionados aos seus
que incorporaram um zper de leucina e um (Donner et al., 1982). O gene c-myc sintetiza alvos normais, pareceria que essas seqn-
motivo bsico hlice-ala-hlice. As pro- mRNA de curta durao e produtos proti- cias so reguladores muito poderosos da
tenas c-Myc funcionam de maneira simi- cos quando estimulado por uma variedade especificidade da transcrio de genes. O
lar s protenas bHLH e bZIP, formando de fatores de crescimento (Kelly et al., 1983). que aconteceria, se uma transposio cro-
heterodmeros que ligam DNA (veja Tabe- Esses produtos do gene c-myc aparecem mossmica espontnea trouxesse um inten-
la 10.2). A c-Myc forma um complexo repentinamente enquanto as clulas so sificador para uma protena adjacente a um
ativador quando unida protena de am- induzidas do estado G0 ao estado G1 e so gene estrutural para outra protena? Na mai-
pla distribuio Max. O complexo entre degradados logo em seguida. As protenas oria dos casos isso no seria importante.
Max e uma protena inibidora, Mad, cria a c-Myc sinalizam a diviso celular, e se no Mesmo que o intensificador estimulasse a
protena repressora Mad-Max, que se liga so degradadas rapidamente, a clula con- expresso do gene na clula errada, o pro-
duto de uma nica clula seria regulado de (A)

forma anormal. Talvez a clula morresse e
fosse substituda por outra. tambm pos- Elemento de transposio
svel que os descendentes dessa clula for- contendo um gene
reprter em um promotor
massem um clone de clulas expressando Promotor Reprter
fraco
uma protena que as outras clulas no teci- fraco
do no produziam. Entretanto, se pela
translocao o gene c-myc fosse colocado
prximo a um intensificador de um gene ati-
vamente transcrito, o gene c-myc seria ati- Ativao Transcrio
vado para transcrever grandes quantidades
da mensagem enquanto a clula se diferen-
ciava. Nesse caso, a clula nica daria ori- Intensificador Promotor fraco Reprter Gene normalmente
gem a um tumor. regulado pelo
Translocaes cromossmicas envol- intensificador
vendo o gene c-myc parecem ser respons-
(B)
veis por tumores das clulas B sintetizado-
ras de imunoglobulinas do nosso sistema
imune (Croce, 1987). Aqui, o gene c-myc no
fim do brao curto do cromossomo 8 huma-
no foi translocado para o cromossomo 14, 22
ou 2. Esses trs cromossomos contm os
genes para as protenas imunoglobulinas, e
o gene c-myc foi translocado para a regio
dos intensificadores do gene da imunoglo-
bulina (Leder et al., 1983; Croce, 1985). A quan-
tidade de mRNA de c-myc transcrito desses
cromossomos translocados se correlaciona
com a ativao dos genes da imunoglobuli-
na. Assim, quando os intensificadores dos
genes da imunoglobulina so ativados (du-
rante o desenvolvimento da clula B), eles
ativam o gene adjacente -que agora c-myc.
O mRNA de c-myc produzido em quantida-
des enormes e traduzido em fator de trans-
crio c-Myc. Esse fator instrui a clula a se Figura 10.29
dividir, o que ela continua fazendo na pre- Tcnica da armadilha para intensificadores. (A) um gene reprter fundido a um promotor fraco
sena contnua do fator, assim, se forma o que no pode dirigir uma transcrio sozinho. A construo injetada no ncleo do ovo e se
tumor chamado linfoma de Burkitt (Nishikura integra no genoma, aleatoriamente. Se a integrao for prxima de um intensificador, o gene
et al., 1983; Croce et al., 1984). Nessas situa- reprter ser expresso quando o intensificador for ativado, mostrando um padro de expresso
es, a translocao do gene c-myc a um de um gene normalmente associado ao intensificador. (B) Expresso do gene reprter em Dro-
intensificador de imunoglobulina em uma ni- sophila injetada com uma armadilha de intensificador. Esses intensificadores so ativos no
ca clula pode ser o causador de toda a desenvolvimento do sistema nervoso do inseto e no estavam identificados antes deste proce-
dimento. (Fotografias cortesia Y. Hiromi.)
leucemia. Realmente, a maior parte das
leucemias resulta de uma nica clula.
Vrios tipos de leucemias so causa- Identificao de intensificadores reprter sem a ajuda de um intensificador.
das quando outros genes de fatores de por meio de genes reprteres Essa armadilha de intensificador recombi-
transcrio so translocados a regies dos A habilidade de um intensificador em ativar nante ento introduzida em um ovo ou
intensificadores dos genes da imunoglo- outros genes foi usada pelos cientistas para ocito de vrias maneiras (veja Captulo 2),
bulina. Esses tipos de rearranjos entre re- encontrar novos intensificadores e os genes onde ele se integra aleatoriamente ao geno-
gies codificando fatores de transcrio que os regulam. Para fazer isso faz-se uma ma. Se o gene reprter for expresso, isso signi-
e regies reguladoras especficas para lin- armadilha para intensificador. A armadilha fica que ele deve ter entrado no domnio de
fcitos, podem ser erros causados pelas consiste de um gene reprter (como o gene um intensificador ativo (Figura 10.29). Isolan-
recombinases VDJ que so especficas para a -galactosidade de E. coli ou a prote- do essa regio do genoma em moscas do tipo
para linfcitos e explicariam porque essas na fluorescente verde) fundido a um pro- selvagem ou camundongos, o gene normal
translocaes so vistas em tantas motor eucarioto relativamente fraco. Esse ativado por esse intensificador pode ser des-
leucemias (Rabbitts, 1991). promotor no iniciar a transcrio do gene coberto (OKane e Gehring, 1987). [trancr1.html]
Transativao Ligao a DNA Transativao

Interface de dimerizao,
Figura 10.30 ligao de HSP90,
Domnios funcionais dos fatores de transcrio dedo de zinco. funo inibitria, transativao
Cistena (C) e histidina (D) coordenam um tomo de zinco,
causando a formao de alas, dedos de zinco.
Fatores de Transcrio Dedo de Zinco
Outro tipo de domnio ligante a DNA o motivo dedo de zinco. Protenas dedo de zinco
incluem: WT-1 (um fator de transcrio importante, crtico na formao dos rins e das
gnadas); o fator de transcrio de ampla distribuio, Sp1; o fator de transcrio de
5S rRNA, TFIIIA de Xenopus; Krox 20 (uma protena que regula a expresso gnica no
desenvolvimento do crebro posterior); Egr-1 (que compromete o desenvolvimento
dos leuccitos para a linhagem dos macrfagos); Krppel (uma protena que especifi-
ca as clulas abdominais na Drosophila); e numerosos fatores de transcrio ligantes
de esterides. Cada uma dessas protenas tem dois ou mais dedos ligantes de DNA,
domnios em hlice, cujos aminocidos centrais tendem a ser bsicos. Esses domni-
os esto ligados em fila e so estabilizados por um on de zinco localizado centralmen-
te e coordenado por duas cistenas (na base da hlice) e duas histidinas internas
(Figura 10.30). A estrutura cristalina mostra que os dedos de zinco se ligam no sulco
principal do DNA.
A protena WT-1 contm quatro regies dedos de zinco, e usualmente expressa
nos rins e gnadas fetais. Pessoas com um alelo mutante WT1 (geralmente uma deleo
do gene ou da regio de dedo de zinco) apresentam malformaes urogenitais e de-
senvolvem o tumor de Wilm nos rins (Haber et al., 1990; Bruening et al., 1992; veja
Captulo 17). Em camundongos, ambos os genes WT1 podem ser deletados por
endereamento de genes (gene targeting), e os camundongos resultantes morrem
no tero, no tendo nem rins nem gnadas (Kriedberg et al., 1993). O fator WT1 se liga
s regies reguladoras de vrios genes que so ativos durante o desenvolvimento dos
rins e tambm se considera que ele inibe a expresso de certos fatores de crescimento
(especialmente o fator de crescimento II semelhante insulina) no rim em desenvolvi-
mento (Drummond et al., 1992).
Receptores Nucleares de Hormnios e

Seus Elementos Responsivos a Hormnios
Hormnios esteride especficos so conhecidos por aumentar a transcrio de deter-

minados conjuntos de genes. Uma vez que o hormnio entra na clula, ele se liga
protena de seu receptor especfico, que assume uma conformao que lhe permite
penetrar no ncleo e ligar seqncias particulares de DNA (Miesfeld et al., 1986; Green
e Chambon, 1988). A famlia dos receptores de hormnios esterides inclui protenas
que reconhecem estrgenos, progesterona, testosterona e cortisona, como tambm
lipdios no esterides como o cido retinico, a tiroxina e a vitamina D. As seqncias
de DNA capazes de ligar receptores nucleares de hormnios so chamadas elementos
responsivos a hormnios, e podem ser promotores ou intensificadores. Um grupo de
(A) PROTENA Trans- Ligao Ligao a

ativao a DNA hormnio
(B)
Dedos de zinco
Cadeia principal
da protena
Mdulo 1 Mdulo 2
(C) DNA
Elemento responsivo a glicocorticide
Figura 10.31
Elemento responsivo a estrgeno
Organizao estrutural do receptor de hor-
mnios de protenas ligantes de DNA. (A)
Elemento responsivo tiroxina
e ao cido retinico Estrutura geral de uma protena ligante de
hormnio esterides. As funes de cada fra-
o foram determinadas analisando os efeitos
de mutaes em cada uma dessas regies e
esterides inclui os hormnios glicocorticides (cortisona, hidrocortisona e o horm- produzindo molculas de protenas quimri-
cas tendo regies derivadas de diferentes pro-
nio sinttico dexametasona). Esses se ligam aos receptores de hormnios glicocorti-
tenas receptoras. Uma estrutura similar
cides e lhes permitem se ligar aos elementos responsivos aos glicocorticides nos vista no receptor do cido retinico e no re-
cromossomos (Figura 10.31). ceptor do hormnio tireoideano. (B) Regio
Os elementos responsivos aos hormnios esterides so muito semelhantes entre dedo de zinco, ligante de DNA do receptor de
si e so reconhecidos pelas protenas muito relacionadas. As protenas receptoras de glicocorticides. Resduos enquadrados no
esterides contm, cada uma, trs domnios funcionais: (1) um domnio ligante de mdulo 1 discriminam entre elementos
hormnio, (2) um domnio ligante de DNA que reconhece o elemento responsivo ao responsivos a estrgenos ou glicocorticides.
hormnio, e (3) um domnio de trans-ativao que est envolvido na mediao do sinal Resduos nos crculos esto envolvidos na
para o incio da transcrio. Essas funes podem sobrepor-se parcialmente, e todos dimerizao. (C) A regio dedo de zinco do
receptor de glicocorticide ligada a seu ele-
os domnios parecem ter algum papel na ativao da transcrio (Beato, 1989). Para
mento responsivo. As seqncias de DNA
ocorrer a ativao transcricional, o receptor deve penetrar no ncleo e dimerizar com para os elementos responsivos esto mostra-
uma protena similar ligante de hormnio. A ligao do hormnio ao seu domnio das esquerda. Note que elas so palndro-
ligante de hormnio pode ser necessria para a dimerizao, translocao para o n- mos invertidos, de modo que cada dmero
cleo, e habilidade da regio ligante de DNA em reconhecer o elemento responsivo a exposto ao mesmo stio. N, qualquer base;
hormnio. (Kumar et al., 1987) GRE, elemento responsivo a glicocorticide
Os elementos responsivos aos hormnios dentro do DNA foram inicialmente (e progesterona); ERE, elemento responsivo
identificados por ensaios de ligao competitiva (Pfahl, 1982; Karin, 1984), onde a estrgeno; TRE, elemento responsivo
fragmentos de restrio especficos do DNA foram testados para verificar sua habi- tiroxina e cido retinico. A distino entre
receptores ligando glicocorticides ou
lidade de ligao a receptores de hormnios carregando hormnios radioativos.
progesterona versus receptores ligando
Usando vrios fragmentos derivados de enzimas de restrio do DNA e comparan- tiroxina ou cido retinico determinada pelo
do as seqncias de vrios elementos responsivos a glicocorticides, foi determi- espaamento dos elementos responsivos, por
nado que a seqncia de consenso do elemento responsivo ao glicocorticide quantidades limitantes de receptores, e por
AGAACANNNT-GTTCT (onde N pode ser qualquer base). Mostrou-se que essas outras interaes de elementos cis. (De acor-
seqncias ligantes de glicocorticides agem como intensificadores: quando o do com Kaptein, 1992.)
(A) Gene viral responsivo a hormnio Figura 10.32

Teste para a seqncia do intensificador de gli-
cocorticide. (A) Um vrus recombinante con-
tendo o intensificador responsivo ao glicocorti-
Seqncia ligante Gene viral no responsivo ao cide do vrus de tumor mamrio de camundon-
de glicocorticide hormnio (timidina quinase) go e o gene da timidina quinase do vrus de Her-
pes simplex podem se integrar no genoma de
Enzimas de Enzimas de uma clula sem o gene da timidina quinase. Pelo
restrio restrio
tratamento com glicocorticides, o gene recom-
binante transcreve a timidina quinase viral. P,
regio promotora; TK, gene da timidina quinase;
VG, gene viral do vrus do tumor mamrio de
Ligao camundongo. (B) Micrografia eletrnica dos ele-
e mentos intensificadores de glicocorticides,
seleo mostrando o receptor de hormnio ligado que-
la regio do gene. (A modificado de Chandler et
al., 1983: B de Payvar et al., 1983, cortesia de
K. R. Yamamoto.)
Precipitar vrus contendo gene
recombinante com fosfato de clcio e
sobrepor em clulas sem timidina quinase
(B)
Algumas clulas incorporam

o gene recombinante em
seus cromossomos
Estimular com
glicocorticide
Timidina quinase induzida
elemento responsivo ao glicocorticide foi ligado a genes que normalmente no so

dependentes de hormnio, aqueles genes se tornaram responsivos aos glicocorti-
cides (Figura 10.32; Chandler et al.,1983).
A ligao da protena receptora ao elemento intensificador responsivo ao hor-
mnio feita atravs da regio do dedo de zinco no domnio de ligao ao DNA
(Green et al., 1988). Quando so produzidas protenas quimricas, onde o domnio
do dedo de zinco do receptor de estrgeno substitui a mesma regio do receptor
de glicocorticide, a protena reconhece o DNA que tem elementos responsivos a
estrgenos e faz com que o gene seja responsivo aos glicocorticides. Os amino-
cidos crticos parecem se localizar na articulao do dedo de zinco (Danielsen
et al., 1989; Umesono e Evans, 1989). Mesmo mudando somente dois aminocidos
na articulao da regio do dedo de zinco j haver mudana na especificidade da
protena ligante. Assim, mesmo que os domnios de ligao a DNA das protenas
receptoras de hormnios sejam muito semelhantes, eles podem distinguir diferen-
as sutis nas seqncias dos intensificadores. Por exemplo, a seqncia
(palindrmica) 5-GGTCACTGTGACC-3 um forte elemento intensificador
responsivo a estrgeno que ligar a protena receptora contendo estrgeno. Duas
mutaes simtricas nessa seqncia, dando 5-GGACACTGTGTCC-3, converte-
r esse DNA em um intensificador responsivo ao glicocorticide (Klock et al.,
1987; Martinez et al., 1987). Dadas as similaridades entre protenas receptoras de (A)
Enhanceosome
hormnios e as similaridades entre os elementos responsivos a hormnios, prov-
vel que cada hormnio esteride o mediador de sua ativao transcricional usan-
do o mesmo mecanismo geral.
Protenas que dobram o DNA

Alm das protenas ligantes de DNA, existe um conjunto de fatores de transcrio que
funciona primariamente como protenas que dobram o DNA. A maioria dessas prote-
nas se caracteriza por um elemento de ligao ao DNA chamado HMG box, um con-
Sistema basal da transcrio
junto de cerca de 80 aminocidos que medeia a ligao dessas protenas ao sulco
menor do DNA. Essas protenas incluem o fator determinante do sexo do cromosso-
mo Y, SRY (a ser discutido no Captulo 20), a protena LEF-1 intensificadora do
linfcito, e as protenas HMG-1(Y) e HMG-2 da cromatina. Considera-se que essas
protenas no ativam a transcrio pela interao direta com o aparelho de transcri-
o. Ao contrrio, a hiptese que elas dobram o DNA de modo que ativadores e
repressores so colocados em contacto. Por exemplo, a ligao de SRY ao DNA
causa uma dobra de 70o-80o na hlice, convertendo o I em um L. Mutaes pon-
tuais que impedem esse dobramento tambm impedem a protena de mediar a forma-
o de testculos. Considera-se que a protena SRY dobra o DNA de modo que fato-
res que, de outra forma, estariam afastados no cromossomo so colocados em contacto
(veja Figura 20.5; Werner et al., 1995).
As protenas que dobram DNA podem criar estruturas tridimensionais chamadas
enhanceosomes (Thanos e Maniatis, 1995). Um modelo para tal enhanceosomes
mostrado na Figura 10.33A. Thanos e Maniatis mostraram que interaes protena- Figura 10.33
protena diretas entre fatores de transcrio so muito facilitadas pela presena de Estrutura de um enhanceosome. (A) A pro-
tena que dobra DNA, HMG-I(Y), empaco-
HMG-1, uma protena dobradora de DNA. Existem trs stios para essa protena dentro
ta uma espiral 60 pares de bases do DNA ao
do intensificador para o gene interferon- humano (IFN), e esses stios so essenci- redor de ativadores transcricionais NF-B
ais para a ativao sinrgica do complexo pelos fatores de transcrio. Eles tambm (o complexo p50/p65), IRF1, e ATF2/c-Jun.
mostraram que a mera presena desses fatores de transcrio no suficiente para a O HMG-I(Y) est no sulco menor, enquan-
ativao do promotor de IFN. Os fatores de transcrio tinham que estar na ordem to os outros fatores de transcrio operam
correta no intensificador. Embaralhando os elementos de ligao do DNA, eles produ- no sulco principal da dupla hlice. Uma vez
ziram diferentes combinaes. Somente a combinao do tipo selvagem foi eficiente. que o enhanceosome montado, ele
Thanos e Maniatis mostraram tambm que a fase helicoidal importante. Adicionando contata o sistema basal de transcrio em
um pouco de DNA que causava uma meia volta da hlice, o intensificador era inativado. vrios stios. (B) O DNA tem inclinao de
20o, antes da formao do enhanceosome.
Inserindo outra volta de meia hlice, tornava o intensificador novamente ativo. Por-
Aps a formao do enhanceosome ele se
tanto, o arranjo linear dos fatores de transcrio e sua organizao tridimensional era inclina na direo oposta +26o. Esse ltimo
crtica. A protena HMG-1 ligava todos eles no enhanceosome. Quando esse estava complexo estimula a transcrio. (A de acor-
completo, o DNA que antes tinha uma inclinao natural de 20o, agora estava com do com Thanos e Maniatis, 1995; B de acor-
uma inclinao de +26o. Mais ainda, um intensificador inativo foi transformado em um do com Falvo et al., 1995.)
ativador (Figura 10.33B; Falvo et al., 1995).
Ativao dependente de contexto ou silenciamento

As interaes entre os receptores de esterides e outras protenas reguladoras da
transcrio podem determinar se o efeito do esteride positivo ou negativo. Diamond
e colaboradores (1990) demonstraram que o efeito dos hormnios glicocorticides
na transcrio do gene Proliferin do camundongo pode ser positivo ou negativo
dependendo do estado fisiolgico anterior da clula. Uma seqncia de 25 pares de
bases a montante do gene Proliferin pode ligar o receptor de glicocorticide e o
dmero bZip de c-Jun e c-Jun ou de c-Jun e cFos. A ligao de c-Jun a esse stio
necessria para a funo do receptor de glicocorticide. Se o dmero c-Jun/c-Jun
estivesse presente nesse stio (sem o receptor de glicocorticide) haveria pouca
transcrio. Essa transcrio dramaticamente aumentada pela adio de glico-
corticides (Figura 10.34). Entretanto, se o dmero c-Jun/c-Fos estivesse presente
Figura 10.34 Sem glicocorticide Com glicocorticide

Efeitos alternativos intensificadores e silenciadores dos elementos
Hormnio
responsivos a glicocorticides a montante do gene Proliferin do ca-
mundongo. O efeito do glicocorticide depende da condio anterior Stio de iniciao Receptor de
da clula (isto , se altas concentraes de c-Fos estavam sendo da transcrio glicocorticide
sintetizadas). As setas representam transcrio do gene Proliferin.
O crculo grande representa o receptor de glicocorticide ligado ao Sem c-Jun
hormnio. A protena c-Jun representada como um crculo menor, nem c-Fos
enquanto a protena c-Fos um pequeno quadrado. (De acordo com Sem transcrio Sem transcrio
Diamond et al., 1990.)
c-Jun:c-Jun
c-Jun: c-Jun
Pouca transcrio Muita transcrio
c-Jun: c-Fos
c-Jun: c-Fos
Muita transcrio Pouca transcrio
no stio, ele poderia dirigir uma transcrio extremamente eficiente do gene Proliferin.
Essa transcrio inibida pela presena de glicocorticides. Assim, se o
glicocorticide tem um efeito estimulador ou inibidor na transcrio do gene
Proliferin depende do estado fisiolgico anterior da clula. Uma nica seqncia de
DNA ligando um determinado receptor de hormnio pode ser tanto um intensifica-
dor como um silenciador para a mesma protena.
Existem outras maneiras para um elemento cis-regulador ser ativador em algumas
situaes e repressor em outras. Por exemplo, o fator de transcrio Krppel da
Drosophila (uma protena cuja atividade veremos no Captulo 14, responsvel
pela formao do trax e abdmen superior da mosca) um ativador em baixas
concentraes e um repressor em altas concentraes. Em baixas concentraes, ele
se liga a seu elemento cis-regulador no DNA, e interage com TFIIB para facilitar a
construo do complexo de iniciao da transcrio. Em altas concentraes, ele se
liga a si mesmo, e os dmeros resultantes no complexam com TFIIB (Sauer et al.,
1995). Em lugar disso, os dmeros interagem com TFIIE e podem bloquear sua fun-
o. Se a protena p53 supressora de tumor um ativador ou repressor depende da
estrutura do promotor do gene especfico. Se existe no promotor um elemento ligante
de p53, a protena p53 age como um ativador. Se no existe um elemento p53 no
promotor, p53 pode se ligar a TAF em TFIID e impedir a transcrio. Ela pode tam-
bm interagir com o fator de transcrio WT1. Esse fator usualmente um ativador
de transcrio, mas se est ligado p53, se torna um repressor* (Figura 10.35; Seto
et al., 1992; Maheswaran et al., 1993).
*Temos boa e m novidades. A boa novidade que at o fim desta dcada, conheceremos a maioria,
seno todos os fatores de transcrio ativos em muitos tipos de clulas, e como eles interagem para iniciar
ou reprimir a transcrio. A m notcia que muitos de ns teremos que aprender fsico-qumica para
entender esses dados.
(A) Figura 10.35

Ativao Sem ativao
Protena Fatores de transcrio podem ser ativadores
Protena
Krppel ou repressores, dependendo do contexto. (A)
Krppel
Protena Krppel em baixas concentraes
estimula TFIIB e ativa a transcrio. Em al-
tas concentraes, forma dmeros que no se
Elemento Elemento ligam a TFIIB (e que podem interferir com
ligante de Kr ligante de Kr TFIIE). (B) A protena p53 um ativador
onde existem stios especficos de ligao. Em
(B) Ativao Sem ativao alguns promotores, entretanto, ela pode se
ligar a TFIID e inativ-lo quando tais stios
esto ausentes. (C) A protena WT1 um
ativador quando p53 est ausente. Na pre-
sena de altas concentraes de p53, a ligao
Elemento de WT1 bloqueia a transcrio.
ligante de p53
(C) Ativao Sem

ativao
Elemento Elemento
ligante de WT1 ligante de WT1
Regulao da atividade do fator de transcrio

Se os fatores de transcrio so protenas que regulam a expresso de determinados
genes, ento como os fatores de transcrio so regulados por si prprios? Uma ma-
neira bvia regular a sntese dos fatores de transcrio por outros fatores de trans-
crio. Esse mtodo est presente no desenvolvimento de Drosophila, no qual existe
uma cascata de snteses de fatores de transcrio (veja Captulo 14). Em mamferos,
vrios fatores de transcrio so igualmente regulados pela sntese de outros fatores
de transcrio. A ativao do fator de transcrio Pit-1 na pituitria de mamferos, por
exemplo, realizada pela ligao do fator de transcrio contendo o homeodomnio
Prop1 seqncia ladeando o terminal 5 do gene Pit-1 durante um estgio anterior do
desenvolvimento da pituitria (Sornson et al., 1996).
Alm disso, fatores de transcrio freqentemente tm intensificadores muito com-
plexos e promotores que permitem sua expresso somente em certas clulas. O gene
Myogenin do camundongo, por exemplo, expresso no mitomo, arcos farngeos e
brotos dos membros. Parece haver pelo menos trs stios separveis na regio regula-
dora a montante para esse gene. O stio mais prximo necessrio para a transcrio
desse gene nos brotos dos membros. Se esse stio mutado, o gene Myogenin no
l transcrito. Um segundo stio, mais a montante, necessrio para a expresso de
Myogenin nos brotos de membros, arcos farngeos e clulas centrais dos somitos
posteriores (Figura 10.36; Cheng et al., 1993; Yeo e Rigby, 1993). Um terceiro stio,
ainda mais a montante, necessrio para aumentar a eficincia da transcrio do gene.
Esses trs stios ligam diferentes fatores de transcrio. Uma situao semelhante
parece existir para myf-5, onde regies diferentes do DNA regulam os diferentes ele-
mentos dos padres de expresso (Prancha 24; Patapoutian et al., 1993).
Outro mecanismo de regulao da atividade de fatores de transcrio por fosfo-
rilao. Em um grupo de casos, a protena do fator de transcrio est presente, mas
inativa, e a fosforilao ativa a protena dormente. Como discutimos antes, a fosforila-
o de uma fator de transcrio seqestrado ou seu inibidor (como IB) pode liberar a
(A) (B) (C)
Figura 10.36
A expresso de Myogenin no embrio de camundongo de 10.5 dias. Um gene reprter da -
galactosidase foi ligado s seqncias reguladoras a montante do gene Myogenin, e isso foi usado
para produzir camundongos transgnicos. Os embries transgnicos com 10.5 dias foram cora-
dos para identificar a presena da -galactosidade bacteriana. (A) Regio promotora de Myogenin
selvagem, mostrando todos os lugares onde o gene Myogenin usualmente expresso. (B) Ex-
presso de um promotor de Myogenin com uma mutao em um stio prximo ao gene Myogenin.
No h transcrio desse gene nos brotos dos membros. (C) Expresso de um promotor de
Myogenin com uma mutao em um stio mais a montante do gene. No vista transcrio do
promotor nos arcos farngeos, membros ou clulas centrais posteriores do mitomo. (de Cheng
et al., 1993.)
inibio e permitir ao fator de transcrio (nesse caso NF-B) penetrar no ncleo e

ligar sua seqncia de DNA. A fosforilao tambm pode funcionar mais diretamente.
Como discutido no Captulo 3, os fatores de transcrio JAK/STAT esto presentes
no citoplasma mas somente entram no ncleo quando so fosforilados em resposta a
um sinal na membrana celular. A fosforilao tambm pode ser usada para reprimir
fatores de transcrio, como quando a ligao de DNA por Pit-1, Oct1, ou miogenina
inibida por estarem fosforilados (Hunter e Karin, 1992).
Conclumos que a atividade dos fatores de transcrio pode ser regulada em dife-
rentes nveis. Como cada gene freqentemente regulado por vrios fatores de trans-
crio, a clula tem muitas opes sobre como expressar certos genes em somente
certos tipos de clulas. Nos ltimos cinco anos, nosso conhecimento sobre fatores de
transcrio progrediu imensamente e nos deu uma nova e dinmica viso da expresso
gnica. O gene, ele prprio, no mais visto como uma entidade independente con-
trolando a sntese de protenas. Ao contrrio, o gene dirige e dirigido pela sntese
de protenas. Angier (1992) escreve:
Uma srie de novas descobertas sugere que o DNA mais parecido a um certo
tipo de poltico, rodeado por um rebanho de manipuladores e consultores de
protenas que devem massage-lo vigorosamente, torc-lo e, ocasionalmente,
reinvent-lo antes que o grande plano do corpo possa fazer algum sentido.
Certamente, as interaes entre o DNA e seus fatores de transcrio esto levando

a relao interativa do ncleo e do citoplasma a novos e esplendidamente complexos
nveis. At agora, focalizamos nossa ateno no relacionamento dos fatores de trans-
crio ao DNA. Mas os fatores de transcrio no contemplam um mero DNA. Ao
contrrio, eles se confrontam com um complexo de protena e DNA altamente
estruturado chamado cromatina. Para iniciar a transcrio, necessrio considerar
estruturas celulares de ordem maior; continuaremos nossa discusso sobre a regula-
o transcricional do desenvolvimento no prximo captulo.
LITERATURA CITADA
Akoulitchev, S., Mkel, T. P., Weinberg, R. A. Brack, C., Hirama, M., Lenhard-Schuller, R. and Chun, J. J. M., Schatz, D. G., Oettinger, M. A.,
and Reinberg, D. 1995. Requirement for TFIIH Tonegawa, S. 1978. A complete immunoglobu- Jaenisch, R. and Baltimore, D. 1991. The
kinase activity by RNA polymerase II. Nature lin gene is created by somatic recombination. recombination activating gene 1 (RAG-1) is
377: 557-560. Cell 15: 1-14. present in the murine central nervous system.
Cell 64: 189-200.
An, W. and Wensink, P. C. 1995. Three protein Brennan, T., Edmondson, D. G., Li, L. and Olson,
binding sites form an enhancer that regulates sex- E. N. 1991. Transforming growth factor P Comai, L., Tanese, N. and Tjian, R. 1992.
and fat body-specific transcription of Drosophi- represses the actions of myogenin through a The TATA-binding protein and associated
la yolk protein gene. EMBO J. 14: 1221-1230. mechanism independent of DNA binding. Proc. factors are integral components of the RNA
Nall. Acad. Sci. USA 88: 3822-3826. polymerase I transcription factor, SLI. Cell
Angier, N. 1992. A first step in putting genes 68:965-976.
into action: Bend the DNA. New York Times, Bruening, W. and seven others. 1992. Germline
August 4,1992, pp. C1, C7. intronic and exonic mutations in the Wilms Conaway, R. C., Pfeil-Garrett, K., Hanley, J. P.
tumor gene (WTI) affecting urogenital and Conaway, J. W. 1991. Mechanism of promoter
Atchinson, M. L. and Perry, R. P. 1987. The development. Nat. Genet. 1: 144-148. selection by RNA polymerase II: Mammalian
role of K-enhancer and its binding factor NF- transcription factors a and bg promote entry of
KB in the developmental regulation of K gene Bunick, D., Zandomeni, R., Ackerman, S. and
polymerase into the preinitiation complex. Proc.
transcription. Cell 48: 121-128. Weinmann, R. 1982. Mechanism of RNA
polymerase II-specific initiationof transcription
Ayer, D. E., Kretzner, L. and Eisenman, R. N. in vitro: ATP requirement and uncapped runoff Crenshaw, E. B., Kalla, K., Simmons, D. M.,
1993. Mad: A heterodimeric partner for Max transcripts. Cell 29: 877-886. Swanson, L. W. and Rosenfeld, M. G. 1989. Cell-
that antagonizes Myc transcriptional activity. specific expression of the prolactin gene in
Cell 72: 211-222. Buratowski, S., Hahn, S., Guarente, L. and Sharp, P.
transgenic mice is controlled by synergistic
A. 1989. Five initiation complexes in transcription
Baeuerle, P. A. and Baltimore, D. 1988. IKB: A interactions between promoter and enhancer
initiation by RNA polymerase II. Cell 56: 549-561.
specific inhibitor of the NF-kB transcription elements. Genes Dev. 3: 959-972.
factor. Science 242: 540-545. Buratowski, S., Sopta, M., Greenblatt, J. and
Croce, C. M. 1985. Chromosomal translocati-
Sharp, P. 1991. RNA polymerase II-associated
Banerji, J., Olson, L. and Schaffner, W. 1983. A ons, oncogenes, and B-cell tumors. Hosp. Pract.
proteins are required for a DNA conformation
lymphocyte-specific cellular enhancer is located 20(l): 41-48.
change in the transcription initiation complex.
downstream of the joining region in immunoglo- Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 7509-7513. Croce, C. M. 1987. Role of chromosome trans-
bulin heavy chain genes. Cell 33:729-740. locations in human neoplasia. Cell 49: 155-156.
Calame, K. L. 1989. Immunoglobulin gene
Beato, M. 1989. Gene regulation by steroid transcription: Molecular mechanisms. Trends Croce, C. M., Thierfelder, W., Erikson, J.,
hormones. Cell 56: 335-344. Genet. 5: 395-399. Nishikura, K., Finan, J., Lenoir, G. M. and
Behringer, R. R., Mathews, L. S., Palmiter, R. Nowell, P. C. 1984. Transcriptional activation
Chandler, V. L., Maier, B. A. and Yamamoto,
D. and Brinster, R. L. 1988. Dwarf mice produced of an unarranged and untranslocated c-myc
K.R. 1983. DNA sequences bound specifically
by genetic ablation of growth hormone- oncogene by translocation of a C2, locus in
by glucocorticoid receptor in vitro render a
expressing cells. Genes Dev. 2: 453-461. Burkitt lymphoma cells. Proc. Natl. Acad. Sci.
heterologous promoter hormone responsive in
LISA 80: 6922-2926.
Benezra, R., Davis, R. L., Lockshon, D., Turner, vivo. Cell 33: 489-499.
D. L. and Weintraub, H. 1990. The protein Id: A Crossley, M. and Brownlee, G. G. 1990.
Chen, J. -L., Attardi, L. D., Verrijzer, C. P.,
negative regulator of helixloop-helix DNA Disruption of a C/EBP binding site in the factor
Yokomori, K. and Tjian, R. 1994. Assembly of
binding proteins. Cell 61: 49-59. IX promoter is associated with haemophilia B.
recombinant TFIID reveals differential cofactor
Nature 345: 444-446.
Bergman, Y., Rice, D., Grosschedl, R. and requirements for distinct transcriptional
Baltimore, D. 1984. Two regulatory elements for activators. Cell 79: 93-105. Cullen, K. E., Kladde, M. P. and Seyfred, M. A.
immunoglobulin ic light chain gene expression. 1993. Interaction between transcriptional
Chen, P.-L., Scully, P., Shew, J.-Y., Wang, J. Y. J.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:7041-7045. regulatory regions of prolactin chromatin.
and Lee, W.-H. 1989. Phosphorylation of the
Science 261: 203-206.
Bernard, O., Hozumi, N. and Tonegawa, S. 1978. retinoblastoma gene product is modulated during
Sequences of mouse immunoglobulin light chain the cell cycle and cellular differentiation. Cell Danielsen, M. Hinck, L. and Ringold,G. M. 1989.
genes before and after somatic change. Cell 15: 58: 1193-1198. Two amino acids within the knuckle of the first
1133-1144. zinc finger specify DNA response element
Cheng, T.-C., Wallace, M., Merlie, J. P. and Olson,
activation by the glucocorticoid receptor. Cell
Bischoff, R. and Holtzer, H. 1969. Mitosis and E. N. 1993. Separable regulatory elements
57: 1131-1138.
the processes of differentiation of myogenic cells govern myogenin transcription in mouse
in vitro. J. Cell Biol. 41: 188-200. embryogenesis. Science 261: 215-218. Davis, M. M., Calame, K., Early, P. W., Livant,
D. L., Joho, R., Weissman, 1. L. and Hood, L.
Bodner, M. and Karin, M. 1987. A pituitaryspecific Chi, T. and Carey, M. 1996. Assembly of the
1980a. An immunoglobulin heavy chain gene is
trans-acting factor can stimulate transcription isomerized TFIIA-TFIID-TATA ternary complex
formed by at least two recombinational events.
from the growth hormone promoter in extracts is necessary and sufficient for gene activation.
Nature 283: 733-739.
of non-expressing cells. Cell 50: 267-275. Genes Dev. 10: 2540-2550.
Davis, M. M., Kim, S. K. and Hood, L. 1980b.
Boulet, A. M., Erwin, C. R. and Rutter, W. J. Christy, R. J. and seven others. 1989. Differentiation-
Immunoglobulin class switching: Developmen-
1986. Cell-specific enhancers in the rat induced gene expression in 3T3-Ll preadipocytes:
tally regulated DNA rearrangements during
exocrine pancreas. Proc. Nall. Acad. Sci. USA CCAAT/enhancer binding protein interacts with and
differentiation. Cell 22: 1-2.
83:3599-3603. activates the promoter of two adipocyte-specific
genes. Genes Dev. 3: 1323-1335.
Diamond, M. I., Miner, J. N., Yoshinaga, S. K. Garabedian, M. J., Hung, M.-C. and Wensink, P. Hozumi, N. and Tonegawa, S. 1976. Evidence
and Yamamoto, K. R. 1990. Transcription C. 1985. Independent control elements that for somatic rearrangement of immunoglobulin
factor interactions: Selectors of positive and determine yolk protein gene expression in genes coding for variable and constant regions.
negative regulation from a single DNA element. alternative Drosophila tissues. Proc. Natl. Acad. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73: 3628-3632.
Science 249: 1266-1272. Sci. USA 82:1396-1400.
Hunter, I and Karin, M. 1992. The regulation
Dierks, P., van Ooyen, A., Chochran, M. D., Gedamu, L. and Dixon, G. H. 1978. Effect of of transcription by phosphorylation. Cell 70:
Dobkin, C., Reiser, J. and Weissman, C. 1983. enzymatic clecapping on protamine messenger 375-387.
Three regions upstream from the cap site are RNA translation in wheat-germ S30. Biocheni.
Jacq, X., Brou, C., Lutz, Y., Davidson, I.,
required for efficient and accurate transcription Biophys. Res. Commun. 85: 114-124.
Chambon, P. and Tora, L. 1994. Human
of the rabbit P-globin gene in mouse 3T6 cells.
George-Weinstein, M. and nine others. 1996. Skeletal TAFI130 is present in a distinct TFIID complex
Cell 32: 695-706.
myogenesis: The preferred pathway of chick epiblast and is required for transcriptional activation by
Doll, P., Castrillo, J.-L., Theill, L. E., Deerinck, cells in vitro. Dev. Biol. 173: 279-291. the estrogen receptor. Cell 79: 107-117.
T., Ellisman, M. and Karin, M. 1990. Expression
Ghosh, S. and Baltimore, D. 1990. Activation in Jarriault, S., Brou, C., Logeat, C., Schroeter, E.
of GHF-1 protein in mouse pituitaries correlates
vitro of NF-KB by phosphorylation of its H. , Kopan, R. and Israel, A. 1995. Signalling
both temporally and spatially with the onset of
inhibitor, IKB. Nature 344: 678-682. downstream of activated mammalian Notch.
growth hormone gene activity. Cell 60: 809-820.
Nature 377: 355-358.
Gillies S. D., Morrison, S. L., Oi, V T. and
Donner, P., Greiser-Wilka, 1. and Moelling, K.
Tonegawa, S. 1983. A tissue-specific transcription Jen, Y., Weintraub and Benezra, R. 1992.
1982. Nuclear localization and DNA binding of
enhancer element is located in the major intron Overexpression of Id protein inhibits the muscle
the transforming gene product of avian
of a rearranged immunoglobulin heavy chain gene. differentiation program: In vivo association of
myelocytornatosis virus. Nature 296:262-266.
Cell 33: 717-728. Id and E2A proteins Genes Dev. 6:1466-1479.
Driever, W. and Nsslein-Volhard, C. 1989. The
Green, S. and Chambon, P. 1988. Nuclear receptors Jones, N. 1990. Transcriptional regulation by
bicoid protein is a positive regulator of
enhance our understanding of transciptional dimerization: Two sides to an incestuous
hunchback transcription in the early Drosophi-
regulation. Trends Genet. 4: 309-314. relationship. Cell 61: 9-11.
la embryo. Nature 337: 138-143.
Green, S., Kumar, V., Thenlaz, I., Wahli, W. and Kadonaga, J. T., Courey, A. J., Ladika, J. and
Drummond, 1. A., Madden, S. L., Rohwer, N. P.,
Chambon, P. 1988. The N-terminal DNA binding Tjian, R. 1988. Distinct regions of Spl modulate
Bell, G. I., Sukhatme, V. P. and Rauscher, E 111.
zinc finger of the oestrogen and glucocorticoid DNA binding and transcriptional activation.
1992. Repression of the insulin-like growth
receptors determines target gene specificity. Science 242: 1566-1570.
factor 11 gene by the Wilms tumor suppressor
EM130 f. 7: 30373044.
gene WT1. Science 257: 674-678. Kaestner, K. H., Christy, R. J. and Lane, M. D.
Grosschedl, R. and Birnstiel, M. L. 1980. Spacer 1990. Mouse insulin-responsive glucose
Dynan, W. S. and Tjian, R. 1985. Control of
DNA upstream from the TATAATA sequence transporter gene: Characterization of the gene
eukaryotic messenger RNA synthesis by sequence-
are essential for promotion of H2A histone gene and trans-activation by the CCAAT/enhancer
specif ic DNA-binding proteins. Nature 316:
transcription in vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. USA binding protein. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:
774-778.
77: 7102-7106. 251-255.
Dynlacht, B. D., Hoey, T. and Tjian, R. 1991.
Grosveld, E , de Boer, E., Shewmaker, C. K. and Kaptein, R. 1992. Zinc-finger structures. Curr.
Isolation of cofactors associated with the TATA-
Flavell, R. A. 1982. DNA sequences necessary Opin. Struct. Biol. 2:109-115.
binding protein that mediate transcriptional
for the transcription of the rabbit P-globin gene
activation. Cell 66: 563-576. Karin, M., Haslinger, A., Holtgreve, H., Richards,
in vivo. Nature 295: 120-126.
R. I., Krautner, P., Westphal, H. M. and Beato,
Efstratiadis, A. and fourteen others. 1980. The
Haber, D. A and seven others. 1990. An internal M. 1984. Characterization of DNA sequences
structure and evolution of the human P-globin
deletion within an 1IpI3 zinc finger gene through which cadmium and glucocorticoid
gene family. Cell 21: 653-668.
contributes to the development of Wilmstumor. hormones induce human metallothionein-II
Elsholtz, H. P., Albert, V. R., Treacy, M. N. and Cell 61:1257-1269. gene. Nature 308: 513-519.
Rosenfeld, M. G. 1990. A two-base change in a
Henkel, T., Zabel, U., van Zee, K., MiAler, J. Kelly, K., Cochrane, B. H., Stiles, C. D. and
POU factor-binding site switches pituitary
M., Fanning, E. and Baeuerle, P. A. 1992. Leder, P. 1983. Cell-specific regulation of the
specific to lymphoidspecific gene expression.
Intramolecular masking of the nuclear location c-myc gene by lymphocyte mitogens and
Genes Dev. 4: 43-51.
signal and dimerization domain in the precursor platelet-derived growth factor. Cell 35: 603-610.
Falvo, J. V., Thanos, D. and Maniatis, 1995. for the p50 NFvicB subunit. Cell 68:1121-1133.
Kerr, L. D., Inoue, J.-I., Davis, N., Link, E.,
Reversal of intrinsic DNA bends in the IFNP
Herr, W. and eleven others. 1988. The POU Baeurle, P. A., Bose, H. R. Jr. and Verma, 1. M.
gene enhancer by transcription factors and
domain: A large conserved region in the 1991. The rel-associated pp40 protein prevents
the archetectural protein HMG I(Y). Cell 83:
mammalian pit-1, oct-1, oct-2, and Caenorhab- DNA binding at rel and NF-KB: Relationship
1101-1111.
ditis elegans unc-86 gene products. Genes Dev. 2: with IKB and regulation by phosphorylation.
French, B. A., Chow, K.-L., Olson, E.N. and 1513-1516. Genes Dev. 5: 1464-1476.
Schwartz, R. J. 1991. Heterodimers of myogenic
Hiom, K. and Gellert, M. 1997. A stable RAGI- Klock, G., Strdhle, U. and Schtiutz, G. 1987.
regulatory factors and E12 bind a complex
RAG2-DNA complex that is active in V(D)J Oestrogen and glucocorticoid responsive
element governing myogenic induction of the
cleavage. Cell 88: 65-72. elements are closely related but distinct. Nature
avian a-actin promoter. Mol. Cell. Biol. II:
329: 734-736.
2439-2450. Hoey, T, Weinzierl, R. 0. J., Gill, G ., Chen, J -L.,
Dynlacht, B. D. and Tjian, R. 1993. Molecular Koleske, A. J., Buratowski, S., Nonet, M. and
Fujimoto, S. and Yamagishi, H. 1987. Isolation
cloning and functional analysis of Drosophila Young, R. A, 1992. A novel transcription factor
of an excision product of T cell receptor a-
TAF110 reveal properties expected of coacti- reveals a functional link between the RNA poly-
chain gene rearrangements. Nature 327:242-243.
vators. Cell 72: 247-260. merase 11 CTD and TFIID. Cell 69: 883-894.
Konigsberg, I. R., McElvain, N., Tootle, M. Lin, Y.-S. and Green, M. R. 1991. Mechanism Nadal-Ginard, B. 1978. Commitment, fusion,
and Herrmann, H. 1960. The dissociability of action of an acidic transcriptional activator and biochemical differentiation of a myogenic
of deoxyribonucleic acid synthesis from the in vitro. Cell 64: 971-981. cell line in the absence of DNA synthesis. Cell
development of multinuclearity of muscle 15: 855-866.
cells in culture. J. Biophys. Biochem. Cytol. Lin, Y.-S., Ha, L, Maldonado, E., Reinberg, D.
and Green, M. R. 1991. Binding of general Nishikura, K., Rushdim, A., Erikson, J., Watt,
8: 333-343.
transcription factor TF11B to an acidic R., Rovera, G. and Croce, C. M. 1983.
Kopan, R., Nye, J. S. and Weintraub, H. 1994. activating region. Nature 353: 569-571. Differential expression of the normal and of
The intracellular domain of mouse Notch: a the translocated human c-myc oncogenes in B
Lu, FL, Zawel, L., Fisher, L., Egly, M. and
constutively actived repressor of myogenesis cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 4822-4286.
directed at the basic helixloop-helix region of Reinberg, D. 1992. Human general transcription
factor 11H phosphorylates the Cterminal Oettinger, M. A., Schatz, D. G., Gorka, C. and
MyoD. Development 120:2421-2430.
domain of RNA polymerase 11. Natu re 358: Baltimore, D. 1990. RAG-1 and RAG-2, adjacent
Kreidberg, J. A., Saviola, H., Loring, J. M., Maeda, 641-645. genes that synergistically activate V(D)J
M., Pelletier, J., Housman, D. and Jaenisch, R. recombination. Science 248: 1517 -1522.
Maheswaran, S. , Park, S., Bernard, A., Morris,
1993. WT-1 is required for early kidney
J., Rauscher, F. J. 111, Hill, D. E. and Haber, D. OKane, C. J. and Gehring, W. J. 1987.
development. Cell 74: 679-691.
A. 1993. Physical and functional interactions Detection in situ of genomic regulatory
Kumar, V., Green, S., Stack, G., Berry, M., Jin, between WTI and p53 proteins. Proc. Natl. elements in Drosophila. Proc. Natl. Acad. Sci.
J.-R. and Chambon, P. 1987. Functional Acad. Sci. USA 90: 51005104 LISA 84: 9123-9127.
domains of the human estrogen receptor. Cell
51: 941-951. Maldonado, E., Ha, L, Cortes, P., Weis, L. Olson, E. N. 1992. Interplay between prolifera-
and Reinberg, D. 1990. Factors involved in tion and differentiation within myogenic lineage.
Landschulz, W. H., Johnson, P. E and McKnight, specific transcription by mammalian RNA Dev. Biol. 154: 261-272.
S. L. 1988. The leucine zipper: A hypothetical polymerase II: Role of transcription factors
structure common to a new class of DNA-binding Orkin, S. and Kazazian, H. H. 1984. The
IIA, IID, and JIB during formation of a
mutation and polymorphism of the human P-
proteins. Science 240: 1759-1764. transcription competent complex. Mol. Cell
globin gene and its surrounding DNA. Annu. Rev.
Biol. 10: 6335-6347.
Lassar, A. B. and seven others. 1991. Functional Genet. 18:131-171.
activity of myogenic HLH proteins requires Maniatis, T., Goodbourn, S. and Fischer, J. A.
Pabo, C. 0. and Sauer, R. T. 1992. Transcription
hetero-oligomerization with E12/E47-like 1987. Regulation of inducible and fissuespecific
factors: Structural families and principles of
proteins in vivo. Cell 66: 305-315. gene expression. Science 236: 1237-1245.
DNA recognition. Annu. Rev. Biochem. 61:
Lawn, R. M., Efstratiadis, A., OConnell, C. and Mantovani, R. and eight others. 1988. An 1053-1095.
Maniatis, T. 1980. The nucleotide sequence of erythroid-specific nuclear factor binding to the
Palmiter, R. D., Brinster, R. L., Hamm, R. E.,
the human P-globin gene. Cell 21: 647-651. proximal CACCC box of the P-globin gene
Trumbauer, M. E., Rosenfeld, M. G., Birnberg,
promoter. Nucleic Acid Res. 16: 4299-4313.
Laybourn, P. J. and Kadonaga, J. T. 1991. Role N. C. and Evan, R. M. 1982. Dramatic growth
of nucleosome cores and histone H1 in regulation Martinez, E., Givel, F. and Wahl, W. 1987. An of mice that develop from eggs microinjected
of transcription by RNA polymerase 11. Science estrogen-responsive element as an inducible with metallothionein growth hormone fusion
254: 238-245. enhancer: DNA sequence requirements and genes. Nature 300: 611-615.
conversion to a glucocorticoidresponsive
Leder, P. and seven others. 1983. Translocati- Parslow, T. G., Blair, D. L., Murphy, W. J.
element. EMBO J. 6: 3719-3727.
ons among antibody genes in human cancer. and Granner, D. K. 1984. Structure of the 5'
Science 222: 765-771. Mather, E. L. and Perry, R. P. 1982. Transcrip- ends of immunoglobulin genes: A novel
tional regulation of the immunoglobulin V genes. conserved sequence. Proc. Natl. Acad. Sci.
Lee, D. K., Horikoshi, M. and Roeder, R. G.
Nucleic Acids Res. 9: 6855-6867. USA 81: 2650-2654.
1991. Interaction of TFIID in the minor groove
of the TATA element. Cell 67: 1241-1250. Matsuoka, M., Nagawa, F., Okazaji, K., Patapoutian, A., Miner, J. H., Lyons, G. E. and
Kingsbury, L., Yoshida, K., Muller, U Larue, Wold, B. 1993. Isolated sequences from the
Lenardo, M. J. and Baltimore, D. 1989. NFKB:
D.T., Winer, J. A. and Sakano, H. 1991. linked Myf-5 and MRF-4 genes drive distinct
A pleiotropic mediator of inducible and tissue-
Detection of somatic DNA recombination in patterns of muscle-specific expression in
specific gene control. Cell 58: 227-229.
the transgenic mouse brain. Science 254: 81-86. transgenic mice. Development 118: 61-69.
Li, L., Zhou, J., Guy, J., Heller-Harrison, R.,
McKnight, S. and Tjian, R. 1986. Transcriptio- Pathak, D. and Sigler, P. B. 1992. Updating
Czech, M. P. and Olson, E. N. 1992. FGF
nal selectivity of viral genes in mammalian cells. structure-function relationships in the bZip
inactivates myogenic helix-loop-helix proteins
Cell 46: 795-805. family of transcription factors. Curr. Opin.
through phosphorylation of a conserved protein
Struct. Biol. 2: 116-123.
kinase C site in their DNA-binding domains. Cell Miesfeld, R. and seven others. 1986. Genetic
71:1181-1194. complementation of a glucocorticoid receptor Payvar, F. and seven others. 1983. Sequence-
deficiency by a cloned receptor cDNA. Cell 46: specific binding of glucocorticoid receptor to
Li, S., Crenshaw, E. B. 111, Rawson, E. J.,
389-399. MTV DNA at sites within and upstream of the
Simmons, D. M., Swanson, L. W. and Rosenfeld,
transcribed region. Cell 35: 381-392.
M. G. 1990. Dwarf locus mutants lacking three Milos P M. and Zaret, K. S. 1992. A ubiquitous
pituitary cell types result from mutations in the iactor is required for C/EBP-related proteins to Pfahl, M. 1982. Specific binding of the
POU-domain gene pit-1. Nature 347: 528-533. form stable transcription complexes on an glucocorticoid-receptor complex to the mouse
ovalbumin promoter segment in vitro. Genes mammary tumor proviral promoter region. Cell
Lin, F.-T. and Lane, M. D. 1992. Antisense
Dev. 6: 183-196. 31: 475-482.
CCAAT/enhancer-binding protein RNA suppresses
coordinate gene expression and triglyceride Myers, R. M., Tilly, K. and Maniatis, T. 1986. Picard, D. and Schaffner, W. 1984. A lympho-
accumulation during differentiation of 3T3-Ll Fine structure genetic analysis of a globin cyte-specific enhancer in the mouse immuno-
pre-adipocytes. Genes Dev. 6:533-544. promoter. Science 232: 613-618. globulin K gene. Nature 307: 80-82.
Pu, W.T. and Struhl, K. 1991. The leucine zipper Sen, R. and Baltimore, D. 1986b. Inducibility of Trudel, M. and Constantmi, E 1987. A 3'
symmetrically positions the adjacent regions for K immunoglobulin enhancer-binding protein NF- enhancer contributes to the stage-specific
specific DNA binding. Proc. Natl. Acad. Sci. USA KB by a posttranslational mechanism. Cell 47: expression of the human P-globin gene. Genes
88: 6901-6905. 921-928. Dev. 1: 954-961.
Pugh, B. F. and Tjian, R. 1991. Transcription from Seto, E. and seven others. 1992. Wild-type p53 Umek, R. M., Friedman, A. D. and McKnight, S.
a TATA-less promoter requires a mulfisubunit binds to TATA-binding protein and represses L. 1991. CCAAT-enhancer binding protein: A
TFIID complex. Genes Dev. 5: 1935-1944. transcription. Proc. Natl, Acad. Sci. LISA 89: component of a differentiation switch. Science
12028-12032. 251: 288-292.
Queen, C. and Baltimore, D. 1983. Immunoglo-
bulin gene transcription is activated by downstream Shatkin, A. J. 1976. Capping of eucaryotic Umesono, K. and Evans, R. M. 1989. Determi-
sequence elements. Cell 33: 741-748. mRNAs. Cell 9: 645-653. nants of target gene specificity for steroid/
thyroid hormone receptors. Cell 57: 1139-1146.
Rabbitts, T, H, 1991. Translocations, master Sheiness, D. and Darnell, J. E. 1973. Polyade-
genes, and the differences between the origins of nylic segment in mRNA becomes shorter with Usheva, A., Maldonado, E., Goldring, A., LuH.,
acute and chronic leukemias. Cell 67:641-644. age. Nat. New Biol. 241: 265-268. Houbavi, C., Reinberg, D. and Alom, Y. 1992.
Specific interaction between the noriphospho-
Rhodes, S. J. and seven others. 1993. A fissue-specific Simmons, D. M., Voss, J. W., Ingraham, IT. A
rylated form of RNA polymerase 11 and the
enhancer confers Pit-l-dependent morphogen Holloway, J. M., Broide, R. S., Rosenfeid, M. G.
TATA-binding protein. Cell 69: 871-881.
inducibility on the pit-I gene. Genes Dev. 7: 913-932. and Swanson, L. W. 1990. Pituitary cell
phenotypes involve cell-specific Pit-I mRNA Verrijzer, C. P., Chen, J.-L. and Yokomori, K.
Rigby, P. W. J. 1993. Three in one and one in
translation and synergistic interactions with 1995. Binding of TAIs to core elements directs
three: It all depends on TBP Cell 72: 7-10.
other classes of transcription factors. Genes Dev. promoter selectivity by RNA polymerase 11.
Rottman, F. A., Shatkin, A. J. and Perry, R. P. 4: 695-711. Cell 81:1115-1125.
1974. Sequences containing methylated nucleoticles
Sopta, M., Burton, Z. F. and Greenblatt, J. 1989. Vinson, C. R., Sigler, P. B. and McKnight, S. L.
at the 5' termini of messenger RNAs: Possible
Structure and associated DNA helicase activity 1989. Scissors-grip model for DNA recognition
applications for processing. Cell 3: 197-199.
of a general transcription factor that binds to by a family of leucine zipper proteins. Science
Rutter, W., Jr., Valenzuela, P., Ball, G. E., Holland, RNA polymerase II. Nature 341: 410-414. 246: 911-916.
M., Hager, G. L., Degennero, L. J. and Bishop, R. J.
Sornson, M. W. and fourteen others. 1996. Walker, M. D., Edlund, T., Boulet, A. M. and
1976. The role of DNA-dependent RNA polyme-
Pituitarv lineage determination by the Prophet Rutter, W J. 1983. Cell-specific expression
rase in transcriptive specifici~y. In E. M. Bradbury
of Pit-I homeodomain factor defective in Ames controlled by the 5' flanking region of the insulin
and K. Jaucherian (eds.), The Organization and
dwarfism. Nature 384: 327333. and chymotrypsin genes. Nature 306:557-561.
Expression of the Eukaryotic Genome. Academic
Press, New York, pp. 279-293. Stargell, L. A. and Strubl, K. 1996. Mechanism Wasylyk, B., Kedinger, C., Corden, J., Brison,
of transcriptional activation in vivo: Two steps D. and Chambon, P. 1980. Specific in vitro
Samuelsson, L., Str6mberg, K., Vikman, K.,
forward. Trends Genet. 12: 311315. initiation of transcription on conalbumin and
Bjursell, G. and EnerWck, S. 1991. The CCAAT/
ovalbumin genes and comparison with adenovirus
enhancer binding protein and its role in adipocyte Starr, D. B. and Hawley, D. K. 1991. TFIID
2 early and late genes. Nature 285: 367-373.
differentiation: Evidence for direct involvement binds in the minor groove of the TATA box.
in terminal adipocyte development. EMBO J. Cell 67: 1231-1240. Watson, J. D., Gilman, M., Witkowski, J. and
10: 37873793. Zoller, M. 1992. Recombinant DNA, 2nd Ed.
Staudt, L. M., Singh, H., Sen, R., Wirth, T.,
Scientific American Books, New York.
Sasai, Y., Kageyama, R., Tagawa, Y., Shigemoto, Sharp, P. A. and Baltimore, D. 1986. A
R. and Nakanishi, S. 1992. Two mammalian lymphoid-specific protein binding to the Werner, M. H., Huth, J. R., Gronenborn, A. M.
helix-loop-helix factors structurally related to octamer motif of immunoglobulin genes. and Clore, G. M. 1995. Molecular basis of human
Drosophila hairy and Enhancer of split. Genes Nature. 323: 640-643. 46 X,Y sex reversal revealed from the three
Dev. 6: 2620-2634. dimensional solution structure of the human SRY-
Stockdale, F. E. and Holter, H. 1961. DNA
DNA complex. Cell 81: 705-714.
Sauer, F., Wassarman, D. A., Rubin, G. M., and synthesis and myogenesis. Exp. Cell Res. 24:
Tjian, R. 1996. TAF,,s mediate activation of 508-520. Wirth, T., Staudt, L. and Baltimore, D. 1987.
transcription in the Drosophila embryo. Cell An octamer oligonucleotide upstream of a TATA
87:1271-1284. Struhl, G., Struhl, K. and Macdonald, P M.
motif is sufficient for lymphoid-specific
1989. The gradient morphogen bicoid is a
promoter activity. Nature 329: 174-178.
Sauer, F., Fondell, J. D., Ohkuma, Y., Roeder, R. concentration-dependent transcriptional
G. and Jackle, H. 1995. Control of transcription activator. Cell 57: 1259-1273. Workman, J. L. and Roeder, R, G. 1987. Binding
by KrUppel through interactions with TFIIB of transcription factor TFIID to the major late
and TFIIEP. Nature 375: 162-164. Tanaka, M., Lai, J.-S. and Herr, W. 1992.
promoter during in vitro nucleosome assembly
Promoter-specific activation domains in Oct-l
potentiates subsequent initiation by RNA poly-
Sawadogo, M. and Roeder, R. G. 1984. Energy and Oct-2 direct differential activation of an
merase 11. Cell 51: 613-622.
requirement for specific transcription by the snRNA and mRNA promoter. Cell 68: 755-767.
human RNA polymerase II system. 1. Biol. Wright, G. and eight others. 1991. High level
Chem. 259: 5321-5326. Thanos, D. and Maniatis, T. 1995. Virus induction
expression of active human al-anfitrypsin in the
of human IFNb gene expression requires the
milk of transgenic sheep. BioTech. 9: 830-834.
Schatz, D. G., Oettinger, M. A. and Baltimore, assembly of an enhanceosome., Cell 83: 1091-
D. 1989. The V(D)J recombination activating 1100. Yeo, S. P. and Rigby, P. W. J. 1993. The regulation
gene, RA G-1. Cell 59: 1035-1048. of myogenin gene expression during embryonic
Treisman, J., Gbnczy, P., Vashishta, M., Harris,
development of the mouse. Genes Dev. 7:1277-
Sen, R. and Baltimore, D. 1986a. Multiple nu- E. and Desplan, C. 1989. A single amino acid
1287.
clear I actors interact with the immunoglobulin can determine the DNA binding specificity of
enhancer sequences. Cell 46: 705-716. homeodomain proteins. Cell 59: 553-562.
Regulao transcricional da
expresso gnica: A ativao da cromatina
11
Enquanto meu companheiro contemplava
com seriedade e satisfao a magnfica apa-
rncia das coisas, eu me deleitava em investi-
gar suas causas.... Curiosidade, pesquisa sin-
cera para conhecer as leis misteriosas da na-
A T AGORA, limitamos nossa discusso sobre a transcrio de RNA mensa-
geiro estrutura do prprio gene. Mas genes no existem em uma forma
isolada dentro do ncleo, facilmente acessvel RNA polimerase ou s pro-
tenas ligantes de intensificador ou promotor. Ao contrrio, cromossomos eucariticos
contm tanta protena (por peso) quanto cido nucleico, e esse complexo DNA-prote-
tureza, satisfao perto do xtase enquanto na chamado cromatina. As protenas mais abundantes da cromatina so polipeptdeos
elas a mim se revelavam, esto entre as sen- bsicos chamados histonas, que so organizados em nucleossomos.
saes mais antigas que posso lembrar.
MARY WOLLSTONECRAFT SHELLEY (1817)
Alm dos nucleossomos, que so inibidores gerais da transcrio, outros elemen-
tos prioritrios na cromatina tambm podem ser importantes na regulao da expres-
Ento, no podemos negar categoricamen- so gnica. Assim, existem regies controladoras de loco (LCRs) regulando a expres-
te que em ltima anlise poderemos tritu- so de uma regio do cromossomo; existem regies associadas matriz (MARs)
rar genes em um almofariz e em seguida onde o DNA est ancorado matriz nuclear e onde podem estar ativas protenas que
cozinh-los em um bquer. desenrolam o DNA; e existem insulantes, seqncias que separam domnios regu-
H. J. MULLER (1922) ladores e assim impedem que elementos reguladores, positivos e negativos, em um
domnio possam agir em genes no domnio adjacente.
Nucleossomos e a ativao da cromatina reprimida

O nucleossomo a unidade bsica da estrutura da cromatina. composto de um
octmero de histona (duas molculas cada, de histonas H2A-H2B e histonas H3-
H4) envolvido por duas alas de DNA com aproximadamente 140 pares de bases
(Figura 11.1; Kornberg e Thomas, 1974). A cromatina pode ento ser visualizada
como um cordo de contas nucleossmicas ligadas por 10 a 100 pares de bases de
DNA. Enquanto geneticistas clssicos consideravam que genes se pareciam a
contas em um cordo, geneticistas moleculares acham que os genes se asseme-
lham a cordo nas contas.
Os fatores de transcrio devem ser capazes de encontrar seqncias de DNA,
apesar da maior parte desse estar acondicionado nos nucleossomos. Atualmente se
considera que tornar um gene competente para transcrever RNA envolve (1) a liga-
o de fatores de transcrio ao DNA e (2) a excluso de nucleossomos da regio
promotora do gene. As interaes de fatores de transcrio especficos e o DNA que
eles ligam causam o fenmeno da transcrio gnica temporal e tissularmente espe-
cficos. Assim que a RNA polimerase comea a transcrio, possvel deslocar
431
432 PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
Figura 11.1 (A) (B)

Estrutura da cromatina e do nucleossomo. (A)
Modelo da estrutura do nucleossomo como Ligante
visto por cristalografia de Raios-X a uma re-
soluo de 0.33nm. A unidade protica H1
bicncova central (branca) o tetrmero H3-
H4. Cada um dos dois ovides escuros Partcula central:
flanqueando o tetrmero um dmero H2A-
H2B. (B) Relacionamento da histona H1 ao 2 H2A;
nucleossomo central (contendo duas cpias de 2H2B;
cada histona, H2A, H2B, H3, e H4). (C) H1 2H3;
pode juntar o DNA em formas compactas e 2H4
pode aglomerar os nucleossomos. Aproxima- (C) (D)
damente 140 pares de bases envolvem o DNA
octmero da histona, e quase 60 pares de ba- Nucleossomo central
H1
DNA
ses de DNA juntam os nucleossomos. (D)
Modelo para a disposio dos nucleossomos Nucleossomo
em uma estrutura de cromatina em solenide,
e altamente compacta. Um modelo alternati-
vo, colocando H1 entre o octmero do nucle-
ossomo e uma ala do DNA foi proposto re-
centemente e est sendo testado (Pruss et al.,
1996). Aqui, uma ponta da H1 se liga ao nucle-
ossomo, enquanto a outra liga o DNA. (A de Histonas H1
Burlingame et al., 1985; B-D de acordo com
Wolfe, 1993.)
Cromatina
DNA ligante
temporariamente o DNA do nucleossomo e sintetizar RNA (Clark e Felsenfeld, 1992;

veja Lewin, 1994). [chrom1.html]
Os nucleossomos no so os nicos impedimentos na ligao dos fatores de trans-
crio s suas seqncias de DNA, porque os prprios nucleossomos esto enrola-
dos como solenides rgidos estabilizados pela histona H1. A histona H1 encon-
trada nos aproximados 60 pares de bases do DNA ligante entre os nucleossomos
(Figuras 11.1 e 11.2; Weintraub, 1984). Essa conformao dos nucleossomos depen-
dente de H1 inibe a transcrio de genes nas clulas somticas pelo empacotamento
de nucleossomos adjacentes em conjuntos to apertados que impedem o acesso de
fatores de transcrio e RNA polimerases (Thoma et al., 1979; Schlissel e Brown, 1984).
Acessibilidade a fatores trans reguladores

trans-reguladores
realmente incrvel que o DNA possa se tornar acessvel a fatores trans-reguladores.

Existe DNA suficiente em um nico corpo humano para estender o dimetro do siste-
ma solar (Crick, 1966), e essa enorme extenso precisa estar rigidamente empacotada
nos ncleos de nossas clulas. Mas apesar disso, nossa biblioteca gentica pode ser
especificamente acessada em cada tipo celular. Experimentos de hibridizao solvel
sugerem que no mnimo existem 10.000 genes especficos para tecidos no genoma da
maioria dos vertebrados; de modo que no surpreendente que em um dado tipo de
clula, a maioria desses genes estejam reprimidos. Geralmente, ento, considera-se
que a condio de ausncia da cromatina um estado reprimido e que genes
CAPTULO 11 A Regulao Transcricional da Expresso Gnica 433
(A) (B)
Figura 11.2
O papel da H1 na compactao da cromatina.
(A) Cromatina de fgado de galinha observada
no microscpio eletrnico. As contas repre-
especficos de tecidos so ativados pela interrupo local de fatores repressivos sentam os nucleossomos. (B) A mesma cro-
matina aps a remoo da histona H1 por
(Weintraub, 1985). Como j mencionado, o principal mecanismo de represso geral do
eluio salina. A cromatina se tornou muito
gene provavelmente a compactao do DNA em aglomerados de nucleossomos, e a menos compacta (de Oudet et al., 1975; foto-
iniciao da transcrio depende da remoo dos nucleossomos da regio promotora grafias cortesia de P. Chambon.)
do gene. Existem duas maneiras pelas quais isso pode ser feito. Primeiro, durante a
sntese de DNA (fase S no ciclo celular), nucleossomos so removidos de uma fita de
DNA e so repostos pouco tempo depois. Nesse tempo de substituio, poderia
haver competio pelos stios promotores entre histonas e fatores de transcrio tais
como o TFIID ligante de TATA. Segundo, parece haver ativadores transcricionais
(tais como o receptor de glicocorticide) que podem se ligar aos nucleossomos exis-
tentes e desorganiz-los (Rigaud et al., 1991; Adams e Workman, 1993). Uma vez que
os nucleossomos esto dissociados na regio promotora, outros fatores de transcri-
o podem se ligar (Figura 11.3).
A habilidade dos fatores de transcrio em remover nucleossomos de genes ati-
vos e seus promotores pode ser vista em experimentos com nucleases. A acessibilida-
de de um gene s protenas nucleares pode ser detectada tratando a cromatina de um
tecido com pequenas quantidades de DNase I. Essa DNase pancretica digere regies
acessveis do DNA, mas o DNA coberto pelos nucleossomos protegido. Aps a
digesto, o DNA da cromatina tratada extrado e misturado com cDNA radioativo de
um determinado gene (Figura 11.4). Se o cDNA encontra seqncias as quais pode se
ligar, ento o gene foi protegido da digesto pelas protenas da cromatina- ou seja, ele
no estava acessvel DNase, e provavelmente no estaria acessvel tambm aos
fatores de transcrio ou RNA polimerase. Entretanto, se a sonda de cDNA no
encontra seqncias as quais possa se ligar, ento o gene foi exposto DNase e
provavelmente seria acessvel RNA polimerase e a fatores trans-reguladores.
Foi determinado que a susceptibilidade de um determinado gene ao da DNase I
dependente do tipo de clula na qual ele reside (Tabela 11.1; Weintraub e Groudine,
1976). Tratando cromatina de clulas vermelhas do sangue de pinto em desenvolvimen-
to com DNase I, e misturando o DNA extrado com cDNA radioativo de globina, esse
encontrou muito poucas possibilidades de ligao. Os genes da globina na cromatina
foram digeridos por uma pequena quantidade de DNase I. Entretanto, tratando cromati-
na de clulas de crebro com as mesmas quantidades de DNase I, essa no destruiu os
genes da globina. Portanto, o gene da globina estava acessvel s enzimas externas na
cromatina de clulas vermelhas do sangue em desenvolvimento mas no na cromatina
de clulas do crebro. De modo semelhante, o gene da ovalbumina (clara de ovo)
suscetvel digesto pela DNase I em cromatina do oviduto mas no na cromatina das
Figura 11.3 Nucleossomo

A ligao de um fator de transcrio (TF) a um nucleos-
somo pode desestabiliz-lo, permitir a remoo de DNA est enrolado ao
redor de um ncleo da
histonas e expor a regio a outros fatores de transcri-
histona, formando
o. (De acordo com Adams e Workman, 1993.) nucleossomos
TF se ligando ao
Um TF (fator de transcrio) nucleossomo
inicial se liga a um nucleossomo
central, deslocando parte do
ncleo da histona
Fatores adicionais podem Histona H1

Outros TFs
se ligar ao complexo,
desestabilizando mais ainda
o ncleo da histona
Quando as histonas so
deslocadas, outros TFs
podem se ligar
Outros TFs
Histona ou
protenas carreadoras
clulas vermelhas do sangue. Quando a cromatina tratada com DNase I e o DNA

extrado, o cDNA da ovalbumina capaz de encontrar seqncias na preparao de
eritrcitos mas no no DNA da cromatina de oviduto tratada. Temos, aqui, uma clara
correlao entre regulao gnica diferencial e a estrutura da cromatina.
Stios hipersensveis DNase I
Algumas regies da cromatina so identificadas como stios hipersensveis DNase

I. Esses stios, identificados em transferncias Southern (Southern blots) por peque-
Tabela 11.1 Estudos de ligao com cromatina tratada com DNase I

Porcentagem de
ligao mxima
do cDNA radioativo
Tratamento Sonda de cDNA ao DNA extrado da
Origem (galinha) com DNase radioativo cromatina tratada
DNA da clula - cDNA da globina 94
vermelha do sangue
Cromatina da clula + cDNA da globina 90-100
do crebro
Cromatina do + cDNA da globina 90-100
fibroblasto
Cromatina da clula + cDNA da globina 25
vermelha do sangue
Cromatina da clula + cDNA da ovalbumina 90-100
vermelha do sangue
Fonte: De acordo com Weintraub e Groudine, 1976.
Eritrcito nucleado Figura 11.4

ou clula do Protocolo para a determinao de especificidade na digesto
oviduto da cromatina por DNase I. Veja na Tabela 11.1 os resultados
Extrair
cromatina do experimento de digesto com DNase I.
Regies sensveis
DNase I
Fibra, 30-nm
Digesto com DNase I at

digeto de 10% do DNA
Isolar DNA da cromatina
Produzir fita nica, hibridizar com

sonda
Hbrido de
sonda e DNA
Medida de nucleotdeos
radioativos ligados
nos fragmentos de DNA radioativo, so destrudos por quantidades muito pequenas

de DNase, indicando que eles so altamente acessveis s molculas externas. Essa
acessibilidade parece decorrer da quase total ausncia de nucleossomos nessa regio
de DNA nos tecidos que os expressam (Elgin, 1988). Os stios hipersensveis DNase
I marcam regies da cromatina, tais como promotores e intensificadores ativos, onde
esto ligadas protenas ligantes de DNA. Regies hipersensveis DNase I esto
portanto, associadas a genes especficos de tecido regulados pelo desenvolvimento.
(Elgin, 1981; Conklin e Groudine, 1984). Por exemplo, genes da globina nas clulas
vermelhas do sangue e seus precursores imediatos contm stios hipersensveis
DNase I, mas genes da globina em outras clulas no os contm (Stalder et al.,1980;
Groudine et al., 1983). A regio flanqueando a extremidade 5 do gene da vitelogenina
do pinto contm vrios stios hipersensveis na cromatina do fgado de galinhas em
postura; mas esses stios no esto presentes na cromatina do fgado de machos,
fgado embrionrio, crebro ou linfcitos (Burch e Weintraub, 1983).
Os stios hipersensveis DNase I freqentemente se situam dentro ou nas
adjacncias de stios que tm funes intensificadoras, e certos fatores trans-regu-
ladores so capazes de induzir a formao desses stios hipersensveis. Zaret e
Yamamoto (1984), estudando o intensificador responsivo a glicocorticides do v-

rus do tumor mamrio do camundongo, demonstraram que antes da adio do hor-
mnio s clulas contendo o vrus, essa seqncia intensificadora no mostrou
sensibilidade especial DNase I. Aps a administrao do hormnio, um stio dis-
cretamente hipersensvel DNase I se desenvolveu nessa regio. A formao do
Nucleossomo stio hipersensvel coincidiu com o incio da transcrio do gene viral; quando o
hormnio foi retirado, ambos o stio hipersensvel e a transcrio do gene viral
desapareceram. Zaret e Yamamoto especularam que a interao entre o complexo do
receptor de glicocorticide e o intensificador de DNA altera a configurao da
cromatina para facilitar a transcrio do promotor vizinho. Esse seria o caso se,
como j mencionado, o receptor de glicocorticide pudesse remover nucleossomos
da regio contendo a seqncia de DNA onde ele se liga.
Ruptura e reorganizao de nucleossomos:

o papel dos complexos de ruptura
Como possvel remover nucleossomos? Estudos recentes identificaram dois

Fatores de fatores que podem ser importantes nesse processo. O fator de transcrio GAGA
transcrio (uma protena constitutiva expressa em Drosophila que est ligada a numerosos
promotores tendo seqncias GA) um desses fatores que podem romper nucle-
ossomos. Quando esse se liga a um nucleossomo contendo a seqncia TATA do
gene hsp70 (codificando a protena do choque trmico de 70-kDa), o nucleossomo
se rompe e cria um stio hipersensvel DNase I no stio da seqncia TATA. Esse
processo muito eficiente quando o nucleossomo no tem histona H1. O fator
GAGA no produz esse efeito isoladamente, mas funciona em conjunto com uma
protena contendo quatro peptdios chamada fator de remodelagem de nucleosso-
Figura 11.5 mos (NURF). Na ausncia de fatores de transcrio, o NURF pode perturbar o
Modelo para o mecanismo proposto para o nucleossomo em uma maneira dependente de ATP. Isso permite que fatores de
NURF em um nucleossomo. NURF pode transcrio tal como o GAGA se liguem s regies promotoras, rompendo os nu-
hidrolizar ATP e utilizar a energia para
cleossomos mais distante (Figura 11.5; Tsukiyama et al., 1994; Tsukiyama e Wu,
reconfigurar as interaes histona-DNA (ou
histona-histona). Essas perturbaes pare- 1995). Outro complexo protico capaz de romper nucleossomos, o complexo SW1/
cem facilitar a acessibilidade dos fatores de SNF, foi originalmente descoberto no levedo, mas j foi encontrado na Drosophila
transcrio ao DNA nucleossmico. Isso e no homem (Peterson e Tamkun, 1995). Quando a seqncia TATA incorporada
pode levar a novas modificaes na estrutu- no DNA nucleossmico, ela no est acessvel protena ligante de TATA e a
ra do nucleossomo. (De acordo com transcrio severamente reduzida. Essa inibio pode ser anulada por modifica-
Tsukiyama e Wu, 1995.) es do nucleossomo dependentes de ATP, efetuadas por SW1/SNF (Imbalzano
et al., 1994). De maneira semelhante, SW1/SNF pode romper os nucleossomos nas
regies intensificadoras e permitir a ligao de fatores de transcrio (Kwon et al.,
1994; Pazin et al., 1994). Parece que o complexo SW1/SNF realmente parte da
RNA polimerase e est ligado ao seu domnio carboxi-terminal (Wilson et al., 1996).
Esse complexo pode ser ativado por fatores de transcrio capazes de romper
nucleossomos.
Uma das principais vias de ruptura de nucleossomos atravs de acetilao.
Existe uma boa correlao entre a acetilao de histona e a atividade transcricional de
uma determinada regio da cromatina. Regies transcricionais extremamente ativas
tm nucleossomos que so altamente acetilados, enquanto que domnios de transcri-
o reprimida tm histonas hipoacetiladas em seus nucleossomos (Braunstein et al.,
1993; Jeppesen e Turner, 1993; Hebbes et al., 1994). Quando grupos acetil so coloca-
dos nas lisinas das caudas das histonas h uma mudana na estrutura total do nucle-
ossomo (Figura 11.6 ; Lee et al., 1993; Garcia-Ramirez et al., 1995). As caudas se movem
para fora, perdendo o contato com a dupla hlice, e tambm perdendo severamente
seu domnio sobre o DNA. O DNA se torna muito mais acessvel ao fatores de trans-
crio. Uma acetiltransferase da histona, que acetila histonas em nucleossomos foi
identificada em Tetrahymena, e um homlogo de um ativador transcricional do leve-
do (Brownell et al., 1996). Mais ainda, foi demonstrado recentemente que a subunidade
TAF (250-kDa) de TFIID capaz de acetilar histonas H3 e H4 (Mizzen et al., 1996). Essa
atividade enzimtica pode ter um papel importante permitindo que TFIID substitua os Histona
nucleossomos. acetiltransferase
Ruptura e reorganizao de nucleossomos:

o papel da competio de histonas DNA
A competio entre histonas e fatores de transcrio foi inicialmente sugerida para a

regulao dos genes de rRNA 5S em Xenopus. Foi demonstrada uma competio entre
o fator de transcrio TFIIIA e a histona H1 pelos stios regulando a sntese de rRNA Histona
5S. Se esse gene fosse incubado com TFIIIA antes da histona H1, mesmo em presena deacetilase
de histonas centrais, havia a formao do complexo transcricional. Se H1 estivesse
presente antes de TFIIIA, a transcrio era bloqueada (Schlissel e Brown, 1984). Prioleau
e colegas (1994) relacionaram a competio entre histonas e a protena ligante de Figura 11.6
TATA e a ocorrncia da transio da blstula intermediria. Genes ativados na transi- Histona acetiltransferase pode modificar as
caudas da histona e modificar sua conforma-
o da blstula intermediria so reprimidos durante a clivagem precoce. Quando tais
o com o DNA nucleossmico. Isso permite
genes so injetados em ncleos de Xenopus na fertilizao ou em estgios precoces a soltura do DNA do nucleossomo central. (De
da clivagem, eles so envolvidos pela cromatina e so reprimidos. Aps a transio da acordo com Lee et al., 1993.)
blstula intermediria, os genes injetados so transcritos. A represso durante a
clivagem precoce pode ser aliviada por uma pr-incubao dos genes injetados com a
protena ligante de TATA. Portanto, em alguns sistemas possvel que a competio
entre fatores de transcrio e histonas possa regular a expresso gnica. O grau de
metilao do DNA (a ser logo discutido) pode ser crtico para essa competio, pois
histona H1 se liga mais avidamente ao DNA metilado do que ao no metilado (McArthur
e Thomas, 1996).
Regies de controle de loco: transcrio do gene da globina

Regies controladoras de loco (LCRs) so seqncias de DNA que so essenciais
para o estabelecimento de uma configurao aberta da cromatina. Ou seja, essas
regies podem inibir a represso normal da transcrio em uma rea relativamente
grande contendo vrios genes. Uma das LCRs melhor estudada a que regula a
expresso especfica de tecido dos genes da famlia das -globinas no homem,
camundongo e pinto.
Em muitas espcies, incluindo o pinto e o homem, a hemoglobina embrionria
ou fetal diferente daquela encontrada em clulas vermelhas do sangue de adul-
tos. Um diagrama esquemtico dos tipos de hemoglobina humana e dos genes que
as codificam est apresentado na Figura 11.7. Hemoglobina embrionria humana
consiste principalmente de duas cadeias da globina, duas cadeias da globina e
quatro molculas de heme. Durante o segundo ms da gestao humana a sntese
de - e -globinas cessa abruptamente, enquanto que a sntese de e globinas
aumenta (Figura 11.8). A associao de duas cadeias de -globina com duas de -
globina produz a hemoglobina fetal (22). No terceiro ms de gestao os genes
da e globinas comeam a ficar ativos, e seus produtos crescem vagarosamente
enquanto que os nveis de -globina gradualmente decrescem. Essa troca alta-
mente acelerada aps o nascimento, e a hemoglobina fetal substituda pela he-
moglobina adulta: ( 22). O perfil da hemoglobina adulta normal de 97 porcento
22, 2-3 porcento 22, e 1 porcento 22. No homem, os genes das globinas - e
- esto no cromossomo 16, e os genes das -, -, - e -globinas esto ligados
entre si na ordem de aparecimento, no cromossomo 11. Parece existir, ento, um
mecanismo que dirige a troca seqencial dos genes do cromossomo 11 das globinas
embrionrias s fetais s adultas.
Alm dos stios hipersensveis DNase nos promotores e intensificadores perto e
dentro de cada gene de globina, ainda existe uma regio controladora do loco bem a
montante do membro mais 5 () do complexo de genes da -globina. Essa LCR
Figura 11.7 Cromossomo Cromossomo

Ativao gnica seqencial na sntese da hemoglobina
durante o desenvolvimento. Embrionrio
Fetal
Genes da globina
Genes da globina
Adulto
minoritrio
Adulto
majoritrio
Protenas
globina
contm quatro stios que so hipersensveis DNase I somente em clulas precurso-

ras de eritrides e que parecem ser necessrios para altos nveis de ativao da trans-
crio especfica nessas clulas, da famlia inteira dos genes da -globina (-, -, - e
-globinas) no cromossomo 11 humano (Grosveld et al., 1987). Deleo ou mutao da
LCR causa o silenciamento de todos esses genes. Inversamente, se a LCR colocada
adjacente a genes que no so usualmente expressos nas clulas vermelhas do san-
gue (como o gene especfico da clula T, thy-1) e ento transfectados nas clulas
precursoras de eritrides, esses novos genes so expressos nas clulas vermelhas do
sangue. Esse efeito especfico para precursores das clulas vermelhas do sangue,
pois somente elas teriam os fatores trans-reguladores apropriados para se ligar a essa
regio (Blom van Assendelft et al., 1989; Fiering et al., 1993).
A LCR responsvel por permitir expresso gnica em uma regio inteira. Alm
disso, se os genes da globina permanecem ligados LCR, eles podem ser expressos
em clulas eritrides independentemente de onde elas residem no genoma. Se eles so
separados da LCR, os genes da globina so reprimidos, mesmo nas clulas eritrides
que transcreveriam os genes da globina. Ryan e colaboradores (1989) produziram
Stio da eritropoiese
Fgado
Bao Medula ssea
Saco vitelnico
Porcentagem da sntese
total de globina
Figura 11.8
Porcentagens de cadeias polipeptdicas de
hemoglobina em funo do desenvolvimento
humano. A importncia fisiolgica da cadeia
de globina na hemoglobina fetal foi exami-
nada no Captulo 9. (De acordo com Karlsson Idade ps-concepo Nascimento Idade ps-natal
e Nienhaus, 1985.) (semanas) (semanas)
(A) LCR Stios hipersensveis DNase Figura 11.9

Diagrama da famlia de genes da globina
humana no cromossomo 11. (A) A regio LCR
especfica para eritrides est localizada de 6 a
22 quilobases a montante do gene da globina.
Deleo nessa rea Genes da globina Deleo nessa rea causa Os quatro stios hipersensveis DNase I den-
causa a, , , , persistncia da hemoglobina tro dessa regio esto indicados por setas. Um
-talassemia fetal quinto stio hipersensvel DNase I a jusante
do gene da globina est tambm marcado, e
(B) Nucleossomos uma deleo dessa regio causa a persistncia
da transcrio do gene da globina. Dois ge-
nes quase idnticos da globina (fetal) esto
(i)
LCR Garfo de a jusante do gene da globina (embrionrio).
replicao Em seqncia a esses esto os genes da e
globinas adultas. (B) Um modelo possvel
para a atividade de LCR. Fatores de transcri-
o ligados a promotores da globina so esta-
Protenas ligantes do promotor Promotor ou bilizados no garfo de replicao pela ligao
intensificador
LCR. Dessa forma, o complexo no seria
dissociado, e as regies associadas LCR per-
(ii) maneceriam livres de nucleossomos. (A de acor-
Nucleossomo do com Ryan et al., 1989; B de acordo com
O complexo promotor-LCR formando no DNA Felsenfeld, 1992.)
estabilizado pelas protenas replicado
ligantes de promotores durante
Promotor
a construo do nucleossomo
LCR
Protenas ligantes
do promotor
(iii)
LCR
Promotor ou
intensificador
hipersensveis
camundongos transgnicos contendo o gene da -globina humana e seus promoto-

res e intensificadores imediatos. Estes animais transgnicos produziram somente pe-
quenas quantidades da -globina humana (menos de 0.3 porcento da -globina celu-
lar total). Entretanto, quando os pesquisadores adicionaram LCR, a -globina humana
correspondia a mais da metade da globina total nesses camundongos. Esse resultado
explica observaes clnicas em pacientes que no tinham essa regio e mostravam
deficincias de -, -, -, e -globinas, apesar de seus genes para essas protenas
estarem intactos e os genes de globinas no outro cromossomo funcionarem normal-
mente (Tuan et al., 1987).
A regio controladora do loco est abarrotada com stios de ligao de fatores
trans-reguladores. Como foi observado por Gary Felsenfeld (1992) Os domnios pa-
recem ter sido montados por um estudante super-entusiasmado determinado a cons-
truir um poderoso elemento atuante como cis. Ele sugere que uma das funes da
LCR formar uma ala ao redor de uma das regies promotoras durante a replicao do
DNA e se ligar a ela de maneira a impedir que nucleossomos se formem naquele
promotor de globina (Figura 11.9). Realmente, os promotores da globina no so
hipersensveis DNase I exceto na presena da LCR.
& Especulaes
Trocas no gene de globina
A PESAR DE SER BVIO que a trans-

crio do gene da globina passa
pelas isoformas embrionria, fetal
e adulta durante o desenvolvimento, no
(Behringer et al., 1987; Trudel e Constantini,
1987). Como mostra a Figura 11.10, essas re-
gies cis-reguladoras tm numerosos stios
para fatores de transcrio ubquos e espe-
no acontece com algumas pessoas. Es-
ses indivduos retm a transcrio de seu
gene da -globina e so consideradas como
tendo persistncia hereditria da hemo-
conhecemos o mecanismo dessa troca. cficos para eritrides. Um dos fatores espe- globina fetal ((HPFH). Isso no lhes causa
Modelos recentes da troca de globina fo- cficos para eritride mais importante a pro- dano.* As mutaes que do origem
calizam a competio e cooperao entre tena dedo de zinco, GATA-1 (Orkin, 1992). HPFH se agrupam nas regies cis-regula-
intensificadores, promotores e a regio con- Esse fator se liga s seqncias GATA, que doras. Mutaes deletivas que removem
troladora de loco. [chrom2.html] so encontradas ao longo das LCR bem as regies promotoras ou intensificadoras
como nos promotores e intensificadores de da -globina so suficientes para elevar
Regulao do gene da globina humana numerosos genes que so expressos nas c- os nveis de -globinas em clulas adultas.
lulas vermelhas do sangue (incluindo alguns Mutaes pontuais nos promotores de um
O sistema de trocas na expresso gnica dos genes para globina, sntese de heme e o ou outro gene da -globina podem tam-
das globinas humanas complicado. Exis- receptor de eritropoietina). Experimentos de bm causar HPFH (Martin et al., 1989). Uma
tem vrios elementos cis-reguladores endereamento de genes (gene-targeting) dessas mutaes cria um novo stio de li-
para a -globina. J discutimos a regio mostram que camundongos sem o gene para gao para GATA-1, enquanto a outra cria
promotora da -globina e a regio con- GATA-1 no produzem a linhagem de clu- um stio de ligao forte para o fator ub-
troladora do loco que mantm toda a re- las eritrides (Pevny et al., 1991). Um segun- quo Sp1 (Ottolenghi, 1992). Assim, parece
gio do cromossomo pronta para ser do fator de transcrio crtico parece ser o
transcrita. Alm disso, h um intensifica- NF-E2. Esse fator de transcrio bZIP espe-
*Indivduos com HPFH so fenotipicamen-
dor 3 (a montante do gene da -globina) cfico para eritrides se liga a reas da LCR e te normais e so identificados atravs de varre-
que regula a expresso temporal do gene, pode mediar a comunicao entre a LCR e as duras de populaes para identificar outras anor-
e existe um outro intensificador intrag- regies promotoras (talvez se ligando malidades de globinas (como talassemia e ane-
nico que ajuda a regulao da especifici- GATA-1) (Talbot and Grosveld, 1991; Gong mia falciforme). Pesquisadores gostariam mui-
dade tissular na expresso do gene da - and Dean, 1993). Gata-1 e NF-E2 so tambm to de saber reativar o gene da globina em
pessoas sofrendo de talassemia, anemia
globina. Esse ltimo intensificador est necessrios para a formao de um dos sti- falciforme e outras doenas da globina. Se o
realmente localizado dentro do terceiro os hipersensveis DNase I na LCR (Stama- gene da -globina fosse reativado, mesmo fra-
xon do prprio gene da -globina toyannopoulos et al., 1995). camente, muitos dos sintomas dessas doenas
poderiam ser aliviados. Estudos recentes suge-
Persistncia hereditria da rem que a administrao de butirato ou a com-
Figura 11.10 binao de hidroxiuria e eritropoietina podem
Representao esquemtica do gene da hemoglobina fetal
provocar a elevao da hemoglobina fetal em
globina humana e suas regies regulado- clulas vermelhas do sangue recm-geradas
ras. As reas sombreadas representam di- A maioria das pessoas trocam a globina fetal (Perrine et al., 1993; Rodgers et el., 1993).
ferentes fatores de transcrio e as setas pela adulta ao redor do nascimento, mas isso Esto em andamento estudos de avaliao des-
duplas indicam que mais de um fator pode ses procedimentos.
se ligar naquele stio. (De acordo com
Ottalenghi, 1992.)
Protenas ligantes de promotor Protenas ligantes de intensificador
Intensificador intragnico
Promotor Gene da Intensificador flanqueando

globina a extremidade 3
haver uma competio entre os promoto- Fator de transcrio no stio

Aglomerado de genes
res dos genes de - e -globinas (Enver hipersensvel 3
semelhantes globina
et al., 1990). Essa competio influenci-
ada pela presena de fatores trans-regu-
ladores intensificadores e silenciadores.
Existem tambm mutaes pontuais que
causam HPFH impedindo a ligao de um
regulador negativo ao promotor da -
globina em clulas adultas (Berry et al.,
1992). Bacon e colegas (1995) tiveram evi-
dncia de que a relao entre os fatores
de transcrio GATA-1 e Sp1 muda ao lon- Embrionrio Fetal Adulto
go do tempo e que o tipo de globina pode
depender da concentrao relativa des-
ses fatores. Holocomplexo
A LCR e a troca de globina no homem

Figura 11.11
A principal competio pode no ser para a Mecanismo proposto para ativao da famlia das globinas pela LCR. (A) O stio hipersen-
ativao pelo intensificador 3 (que pode svel 3 da LCR ativado por um fator transativador. (B) Uma vez aberto o stio 3, os outros
funcionar localmente), mas pela LCR. En- stios hipersensveis abrem e ligam seus fatores de transcrio. Interaes entre essas protenas
quanto alguns investigadores consideram formam um holocomplexo de DNA e protena. Esse pode formar uma ala e interagir com os
que o principal efeito da LCR manter a promotores dos genes da globina. Competio por essa interao, pela presena de diferentes
cromatina contendo locos da globina em concentraes de fatores de transcrio, permitiria a ativao diferencial e seqencial desses
genes durante o desenvolvimento dos eritrcitos. (De acordo com Ellis et al., 1996.)
uma conformao transcricionalmente per-
missiva (veja Martin et al., 1996), outros pes-
quisadores imaginam interaes especficas
entre diferentes promotores do gene da hipersensvel DNase aberto por um fator -globinas so produzidas normalmente.
globina e as regies da LCR. interessante de transcrio trans-ativador. Uma vez aber- Entretanto, a troca para -globina no
notar que a distncia entre a LCR e os genes to esse stio, os outros trs stios especfi- feita. Isso sugere que o holocomplexo da
da globina afetam sua ativao (Hanscombe cos para tecidos tambm se abrem. Intera- LCR continua a interagir com os promo-
et al., 1991). Quando unido prximo LCR, es protena-protena entre esses stios os tores do gene da -globina a no ser que
o gene da -globina humana expresso em agrupa para formar um holocomplexo, que seja estabilizado ao promotor do gene da
clulas embrionrias de camundongos espalha a alterao na estrutura da cromati- -globina pelo EKLF (Wijgerde et al.,
transgnicos. Sua ativao correta (somen- na atravs da regio da -globina. O holo- 1996). Inversamente, fatores de transcri-
te em clulas adultas) restaurada somente complexo formaria uma ala de interao com o tais como GATA1 e YY1 podem inter-
quando ele colocado mais longe da LCR. cada um dos genes da globina, e interagiria ferir com a ligao de LCR com um promo-
De maneira semelhante, o gene da -globina seqencialmente com as regies promoto- tor, enquanto eles intensificam a ligao
humana reprimido mais cedo (como o gene ras de cada gene. Os fatores de transcrio da LCR a outro promotor (Raich et al.,
normal da -globina) quando ele est mais envolvidos nas sndromes de HPFH podem 1996; Wandersee et al., 1996). As intera-
separado da LCR. Isso sugere que a intera- ser aqueles que so mediadores nas interaes entre stios de LCR e promotores e
o entre LCR e os genes da globina pola- es entre os promotores e os stios hiper- como essas poderiam ser reguladas por
rizada (veja Figura 11.10; Hanscombe et al., sensveis da LCR. Alm disso, esses stios diferentes relaes e tipos de fatores de
1991): os genes da globina mais perto da no so permutveis (isto , o stio 4 no transcrio ainda devem ser elucidadas,
LCR so ativados mais cedo, enquanto os pode substituir o stio 3) e, portanto, devem mas essas interaes entre intensificado-
mais distantes o so mais tarde. Presumi- ter diferentes papis nessas interaes res, promotores e a LCR devem fornecer
velmente, existe um contato fsico entre a (Bungert et al., 1995). uma estria fascinante sobre a expresso
LCR e os promotores e intensificadores es- Nesses modelos, h uma competio gnica diferencial em clulas humanas.*
pecficos dos genes. entre os promotores pela LCR. Um fator de * Se voc acha que as coisas esto complica-
O mecanismo pelo qual a distncia da transcrio recentemente descoberto, das, voc est certo. Harold Weintraub, que foi
LCR poderia regular a ativao de diferen- EKLF (fator de eritride semelhante ao um dos lderes da pesquisa em cromatina disse:
tes promotores em diferentes tempos ainda Krppel), pode ser crucial na regulao Um intensificador complexo pode ter 10 stios
tem que ser explicado. Um modelo (Figura dessa competio por estabilizar as intera- de ligao, uma LCR provavelmente outro tan-
to, um complexo de transcrio pode conter 15
11.11; Ellis et al., 1996) foi recentemente pro- es entre LCR e o promotor da -globina.
protenas e a RNA polimerase talvez 12. Que
posto considerando que camundongos Em camundongos sem EKLF, mas tendo confuso! (H. Weintraub, comunicao pesso-
transgnicos contm pedaos de LCR no um sistema funcional do gene da -globina al). No sabemos porque existem tantos fatores
seu genoma. Nesse modelo, o terceiro stio humana (incluindo a LCR humana), as - e diferentes regulando a transcrio desses genes.
Metilao de DNA e atividade gnica

Freqentemente, assume-se que o gene contm exatamente os mesmos nucleot-
deos na forma ativa ou inativa. Um gene da -globina em precursores de clulas
vermelhas do sangue deveria ter os mesmos nucleotdeos que um gene da -
globina em um fibroblasto ou clula retiniana do mesmo animal. Existem, entretan-
to, diferenas sutis no DNA. Em 1948, R. D. Hotchkiss descobriu uma quinta
base no DNA, 5-metilcitosina. Em alguns eucariotos, essa base produzida
enzimaticamente aps replicao do DNA, e aproximadamente 5% das citosinas
em DNA de mamferos so convertidas em 5-metilcitosina. Essa converso s
pode ocorrer quando o resduo de citosina seguido por uma guanosina (CpG).
Estudos recentes mostraram que o grau de metilao das citosinas em um gene
pode tambm controlar a transcrio do gene. Em outras palavras, a metilao do
DNA pode mudar a estrutura do gene e, assim fazendo, regula sua atividade. A
metilao da citosina parece ser um mecanismo majoritrio na regulao transcrici-
onal em vertebrados. Entretanto, Drosophila, nematdeos e talvez a maioria dos
invertebrados no metilam o seu DNA.
Existem trs reas nas quais a metilao do DNA parece contribuir para a ativi-
dade gnica diferencial. Primeiro, a metilao de seqncias do promotor contribui
para a regulao temporal e espacial dos genes codificando protenas especficas
de tecidos. Segundo, a metilao do DNA considerada responsvel pela distin-
o entre certos genes derivados do vulo ou do espermatozide nos mamferos,
assim permitindo a expresso de somente um deles durante o desenvolvimento
precoce. Terceiro, a metilao do DNA considerada responsvel pela repres-
so continuada de genes em um dos dois cromossomos X em cada clula femini-
na de mamferos.
Correlaes entre metilao do promotor e inatividade gnica
A primeira evidncia de que a metilao do DNA ajuda a regular a atividade do gene

vem de estudos mostrando correlao entre atividade gnica e baixa metilao da
citosina (hipometilao), especialmente na regio promotora do gene. Em clulas
vermelhas do sangue em desenvolvimento, no homem e no pinto, o DNA envolvido
na sntese da globina est completamente (ou quase completamente) no metilado,
enquanto que os mesmos genes, em clulas que no produzem globinas, esto
altamente metilados (Figura 11.12). Clulas de fgado fetal que produzem hemoglobi-
na no desenvolvimento precoce tm genes no metilados para a hemoglobina fetal.
Esses genes so metilados no tecido adulto (van der Ploeg e Flavell, 1980; Groudine
e Weintraub, 1981; Mavilio et al., 1983).
Modelos de metilao com especificidade tissular podem tambm ser encontra-
dos no gene da ovalbumina do pinto; o gene no est metilado nas clulas do
oviduto, mas em outros tecidos do pinto est metilado (Mandel e Chambon, 1979).
Desmetilao acompanha a troca de classe na sntese das imunoglobulinas (Rogers
e Wall, 1981) e se correlaciona com a habilidade de linfcitos murinos em produzir a
protena ligante de metais, metalotionena I (Compere e Palmiter, 1981). Em somitos
de camundongo, a desmetilao de um intensificador MyoD precede sua transcrio
e essencial para a especificao dessas clulas como precursores musculares
(Brunk et al., 1996). Portanto, a ausncia de metilao do DNA tem boa correlao
com a expresso especfica de tecido de certos genes.
Um segundo tipo de evidncia indicando a metilao do DNA como um proces-
so regulador vem de experimentos nos quais a expresso de genes clonados
alterada pela introduo ou remoo de grupos metila em seus resduos de citosina.
Quando Busslinger e colaboradores (1983) adicionaram genes de globina clonados
a clulas (por co-precipitao com fosfato de clcio), essas absorveram o DNA e, em
muitos casos, o incorporaram em seus ncleos. Em tais casos, os genes da globina
Promotor no Promotor Figura 11.12

metilado metilado Metilao de genes da globina em clulas
Gene da globina Gene da globina sangneas embrionrias em humanos. A ativi-
dade dos genes da globina tem correlao in-
6 semanas DNA versa com a metilao de seus promotores.
Ativo Inativo (De acordo com Mavilio et al., 1983.)
globina
12 semanas
Inativo Ativo
globina
clonados foram transcritos. Se certas regies dos genes de globina clonados forem
protegidos da metilao, antes de adicion-los s clulas, ser possvel criar clones
nos quais os genes da globina tm seqncias idnticas mas diferentes padres de
metilao. Um gene completamente no metilado transcrito, enquanto que um gene
completamente metilado (grupo metila em cada apropriado resduo C) no transcrito.
Usando clones parcialmente metilados, Busslinger e colaboradores mostraram que a
metilao na regio 5 do gene da globina (nucleotdeos 760 a +100) previne a
transcrio. Parece, portanto, que a metilao no terminal 5 de um gene tem um
papel direto na regulao da expresso gnica. De modo geral, a metilao da regio
promotora inibe a transcrio de genes.
Metilao e a manuteno dos padres de transcrio
Diferenas na metilao podem ser responsveis pela manuteno (como o oposto

iniciao) de um padro de atividade transcricional ao longo de vrias geraes
de clulas (Holliday, 1987). Durante a replicao, cada fita de DNA serve como um
molde para sua fita complementar. Nas regies de metilao, os grupos metila esto
nas duas fitas da dupla hlice, visto que uma CpG em um lado do DNA refletida por
uma CpG antiparalela no outro lado. Se o C em uma das fitas est metilado, o C na na
outra fita tambm est (Figura 11.13). Durante a replicao, uma fita de DNA (a fita
molde) teria o padro de metilao, ao passo que a fita recm-sintetizada no o teria.
Entretanto, a enzima DNA (citosina-5)-metiltransferase tem uma forte preferncia
por DNA com uma fita metilada, e quando encontra um metil-CpG em um lado do
DNA, a enzima metila a nova citosina no outro lado (Gruenbaum et al., 1982; Bestor
Replicao
e Ingram, 1983).
duvidoso que modificaes na metilao realmente iniciam modificaes na
atividade do gene, pois a DNA metiltransferase no tem uma especificidade ine-
rente em relao a uma seqncia (salvo uma propenso geral para reas ricas em Novas fitas de DNA
CpG). Como o padro de metilao deve ser herdado aps cada diviso celular,
alguma outra coisa deve reconhecer os genes de clulas diferenciadas no seu
estado metilado e subseqentemente desmetil-los. Isso foi demonstrado
transfectando um gene metilado de -actina para clulas cultivadas de mioblastos
(que normalmente transcrevem aquele gene). Quando transfectado para os Metilao de
mioblastos, esse gene foi desmetilado e transcrito. Entretanto, se transferido a novas fitas de DNA
Figura 11.13
Modelo para a propagao de padres de metilao. Quando o DNA se replica, somente uma
das duas fitas (a fita velha) retm o padro original de metilao. A outra fita (a fita nova)
no metilada. Uma enzima metilante especfica para CpG seria capaz de se ligar aos pares de
CpG onde um resduo C estava metilado, e ento metilaria o resduo C na fita complementar.
(De acordo com Browder, 1984.)
outros tipos de clulas, esse gene especfico para o msculo permaneceu metilado.
A desmetilao especfica para o msculo no necessitou de sntese de novo
DNA mas certas seqncias cis-DNA foram necessrias (Yisraeli et al., 1986;
Paroush et al., 1990). Uma situao semelhante foi vista na desmetilao de genes
da imunoglobulina e vitelogenina (protena do vitelo) (Frank et al., 1990; Jost,
1993). Portanto, a metilao pode ser necessria para estabilizar o padro de trans-
crio do gene, mas a ativao inicial do gene provavelmente realizada por
fatores de transcrio especficos para tecidos.
Como que a metilao impede a transcrio? Uma possibilidade que os fatores
de transcrio no podem se ligar s suas seqncias intensificadoras ou promoto-
ras se o DNA estiver metilado (Iguchi-Ariga e Schaffner, 1989). Outra possibilidade
que o DNA metilado seja especificamente reconhecido por certas protenas que
competem contra os fatores de transcrio por esses stios. Boyse e Bird (1991,
1992) forneceram evidncias para esse segundo modelo mostrando que seqncias
promotoras metiladas esto ligadas por uma protena ligante de metil-CpG. Essa
protena parece competir com a ligao de fatores de transcrio, desse modo redu-
zindo a transcrio desses stios.
A metilao do DNA pode tambm influenciar a formao de nucleossomos. Keshet
e colaboradores (1986) demonstraram que a metilao afeta a estrutura da cromatina e
sugerem que a desmetilao cria stios hipersensveis DNase I. Quando eles
transfectaram genes da globina desmetilados em ncleos de fibroblastos de camun-
dongo, os genes foram empacotados em cromatina sensvel DNase (independente
da habilidade transcricional do gene). Quando os mesmos genes foram metilados em
todos os stios CpG, as regies sensveis DNase no se formaram, possivelmente
porque sua metilao os levou a um empacotamento de forma inacessvel. possvel
que quando os fatores trans-reguladores removem os nucleossomos do DNA, essas
regies se tornam desmetiladas. Essa desmetilao pode ser necessria para estabili-
zar essas regies de atividade. Os grupos metila interagiriam com as histonas para
permitir que os nucleossomos se formem somente no DNA metilado e no no DNA
desmetilado, deixando as regies ativas livres de nucleossomos no DNA (Keshet et
al., 1986). Uma vez estabelecidas essas regies, seria mais fcil para outros elementos
trans-reguladores encontrar essas regies livres de nucleossomos.
& Especulaes
Metilao e impresso gnica

N O CAPTULO 4, vimos que os
genomas do espermatozide e do
vulo nos mamferos no so
equivalentes. Os zigotos no se desenvol-
vem adequadamente se seus ncleos so
tem aproximadamente uma dzia de genes
para os quais importante se ele deriva do
espermatozide ou do vulo. Em algumas
mutaes no camundongo e no homem, uma
situao severa ou letal se desenvolve se o
2r) para uma protena ligante desse fator de
crescimento no cromossomo 17 ativo so-
mente quando transmitido pela me (Barlow
et al., 1991; DeChiara et al., 1991; Bartolomei
e Tilghman, 1992). Igf-2r age ligando e de-
derivados de dois proncleos do vulo ou gene mutante derivado de um genitor, mas gradando o excesso de Igf-2. Um filhote de
do espermatozide. Essa inabilidade de de- o mesmo gene mutante no tem efeito dele- camundongo que herda uma deleo do
senvolvimento provavelmente devida a trio se herdado do outro genitor. Por exem- gene Igf-2r de seu pai normal, mas se a
certos genes que somente so ativos se plo, em camundongos, o gene para o fator mesma deleo herdada da me, o cresci-
forem derivados do espermatozide ou do de crescimento II semelhante insulina (Igf- mento do feto intensificado e ele morre
vulo. Para a maioria dos genes (como foi 2) no cromossomo 7 ativo em embries tardiamente na gestao.* No homem, a per-
previsto pela gentica Mendeliana) no im- precoces somente no cromossomo trans- da de um segmento especfico do brao lon-
porta se ele provem do pai ou da me, exis- mitido pelo pai. Inversamente, o gene (Igf- go do cromossomo 15 resulta em diferentes
Tabela 11.2 Evidncia que a impresso gnica afeta o fentipo em temporal e espacialmente a atividade gnica
distrbios do gene humano no cromossomo 15 (loco 11q13) e o comportamento cromossmico.
Swain e colaboradores (1987) acompa-
Origem genitora nharam esses eventos seguindo um gene
especfico que sofre metilao diferencial no
Me Pai Fentipo espermatozide e no vulo. Eles produzi-
ram uma linhagem de camundongos trans-
Alelo normal Alelo mutante Sndrome de Prader-Willi
gnicos nos quais um gene particular, c-myc,
Alelo mutante Alelo normal Sndrome de Angelman foi inserido em uma regio particular do ge-
noma do camundongo. Quando esse gene
Duas cpias do alelo Alelo ausente Sndrome de Prader-Willi foi herdado do genitor macho, ele foi trans-
crito especificamente no corao e em ne-
Alelo ausente Duas cpias do alelo Sndrome de Angelman
nhum outro tecido. Quando esse gene foi
Fonte: De acordo com Nicholls et al., 1993. herdado do genitor fmea, ele no se ex-
pressou. O padro de expresso foi
correlacionado com o grau de metilao;
esse gene metilado durante a maturao
fentipos, dependendo se a perda no cro- A Figura 11.14 mostra o resultado de do vulo mas permanece hipometilado du-
mossomo derivado do homem ou da mulher um experimento onde DNA de espermato- rante a formao do espermatozide. Em
(Tabela 11.2). Se o cromossomo com o seg- zide foi isolado e tratado com HpaII ou animais que herdam o transgene do macho,
mento defeituoso ou ausente vem do pai, a MspI. A sonda foi um DNA radioativo do o gene no est metilado e expresso no
criana nasce com a sndrome de Prader- segundo xon do gene da globina. A corao. Em animais que adquirem o
Willi, uma doena associada a um ligeiro auto-radiografia de fragmentos da diges- transgene de suas mes, o gene metilado
retardamento mental, obesidade, gnadas to com MspI mostra que essa sonda se e silencioso. Em ambos, macho e fmea, o
pequenas e baixa estatura. Se o gene defei- liga a fragmentos de DNA com 1400 pares padro de metilao eliminado nas clulas
tuoso ou ausente vem da me, a criana tem de bases entre os stios CCGG. A auto- germinativas (Chaillet et al., 1991; Kafri et
a sndrome de Angelman, caracterizada por radiografia da digesto de HpaII mostra al., 1992). No camundongo, diferenas de
severo retardamento mental, convulses, que no espermatozide esses stios (e pro- metilao dos gametas tambm so vistas
falta de fala e riso inapropriado (Knoll et al., vavelmente numerosos outros) so meti- na impresso dos genes para Igf-2r e H19
1989; Nicholls et al., 1989). [chrom3.html] lados e que essa seqncia de DNA agora (Ferguson-Smith et el., 1993; Stger et al.,
Atualmente, considera-se que a maio- reside em um pedao de 25000 pares de 1993). Alm disso, se esses genes so colo-
ria, seno todas, as diferenas entre genes bases do DNA onde todos os stios CCGG cados em uma linhagem de camundongos
pronucleares de machos e de fmeas em so metilados (Groudine e Conklin, 1985).
mamferos, envolvem diferenas em seus Essa tcnica mostrou que os ncleos Msp I Hpa II
padres de metilao do DNA. A distribui- das clulas germinativas primordiais nos
o dos CG metilados ou no pode ser ana- mamferos, macho e fmea, so surpreen-
=25
lisada cortando o DNA com duas enzimas dentemente hipometilados (Monk et al.,
de restrio, HpaII e MspI (McGhee e 1987; Driscoll e Migeon, 1980), mas ambos
Pares de bases (x103)
Ginder, 1979). Ambas as enzimas cortam no os genes do espermatozide e do vulo

mesmo stio-CCGG- mas HpaII no cortar sofrem extensa metilao no amadurecimen-
o DNA se o C central est metilado, en- to dos gametas. Parece que na formao
quanto MspI corta se a seqncia est ou das clulas germinativas, informaes pr-
no metilada. Portanto, o DNA de certo vias sobre metilao so apagadas e, du-
tipo de clula pode ser digerido separada- rante a meiose, nova informao introdu-
mente com HpaII e MspI e os fragmentos zida no genoma. O padro de metilao em
1.4
de DNA obtidos transferidos pela tcnica um determinado gene pode diferir entre o
Southern e hibridizados com uma sonda espermatozide e o vulo, e essas diferen-
radioativa especfica para o gene (veja Ca- as de metilao especficas dos genes Figura 11.14
ptulo 2). Diferenas no padro de bandas podem ser vistas nos cromossomos das Deteno de stios de metilao no DNA. DNA
foi isolado de espermatozide de galinha e di-
na autoradiografia dos fragmentos cliva- clulas embrionrias (Reik et al., 1987; gerido com MspI (pista 1) ou HpaII (pista 2).
dos por MspI ou HpaII podem ser relacio- Sanford et al., 1987; Sapienza et al., 1987; Os fragmentos foram separados por eletrofo-
nadas s diferenas de metilao. Chaillet et el., 1991; Kafri et al., 1992). Por- rese, transferidos para papel e hibridizados
tanto, diferenas de metilao entre os por uma sonda de DNA radioativo do segundo
*O aumento de 30% no crescimento cau- genes do espermatozide e do vulo po- xon do gene da globina. Essa sonda se li-
sado por um excesso de Igf-2. A letalidade gou a um fragmento de 1400 bases no digerido
dem especificar um gene vindo do pai ou
provavelmente devida a defeitos lisossmicos, de MspI, mas a um fragmento de 25.000 bases
pois a protena ligante de Igf-2 tambm serve da me. Essa impresso materna ou paterno digerido de HpaII. (De acordo com
para direcionar enzimas lisossmicas para na adiciona informao aos genomas her- Groudine e Conklin, 1985; fotografia cortesia
aquela organela. (Wang et al., 1994.) dados, informao essa que pode regular de M. Groudine.)
mutantes que no possui a enzima capaz de negativo ou positivo para a transcrio. macho e fmea, no zigoto. Elas fornecem
metilar os stios CpG, a transcrio do gene Essas diferenas de metilao especfica tambm um lembrete de que o organismo
H19 ocorre a partir do alelo previamente si- para gametas fornecem uma explicao plau- no pode ser explicado somente na base de
lencioso, enquanto que a transcrio de Igf- svel para a falta de desenvolvimento nos seus genes. So necessrios conhecimen-
2r perdida (Li et al., 1993). Assim, em genes mamferos partenogenticos e para a neces- tos tanto de parmetros desenvolvimentais
impressos, a metilao pode ser um sinal sidade da presena de ambos os proncleos, como genticos.
Compensao de dosagem do cromossomo X de mamferos

Em animais to diversos como a Drosophila e o homem, as fmeas se caracterizam
por terem dois cromossomos X por clula, enquanto os machos s tem um por
clula. Em contraste com o cromossomo Y, o cromossomo X tem milhares de genes
essenciais para a atividade celular. Mas, apesar das clulas femininas possurem um
nmero de cromossomos X que o dobro das masculinas, as clulas de ambos tm
quantidades aproximadamente iguais de produtos gnicos codificados pelo cro-
mossomo X. Essa equalizao chamada compensao de dosagem. As taxas de
transcrio dos cromossomos X foram alteradas de tal forma que clulas masculinas
e femininas transcrevem a mesma quantidade de RNAs de seus cromossomos X. Na
Drosophila, ambos os cromossomos X na fmea so ativos, mas h uma crescente
transcrio do cromossomo X do macho, de modo que o nico cromossomo X das
clulas do macho produz tanto produto quanto os dois cromossomos nas clulas
femininas (Lucchesi e Manning, 1987). Isso possibilitado pela ligao de fatores
de transcrio especficos a centenas de stios ao longo do cromossomo X do
macho (Kuroda et al., 1991).
Nos mamferos a compensao de dosagem do cromossomo X ocorre por inativa-
o de um cromossomo X em cada clula feminina. Dessa forma, cada clula somtica
em mamferos, seja de macho ou de fmea, tem somente um cromossomo X funcional.
Esse fenmeno chamado inativao do cromossomo X. A cromatina do cromossomo
X inativo convertida em heterocromatina- cromatina que permanece condensada ao
longo da maior parte do ciclo celular e se replica aps a maior parte da cromatina do
ncleo (a eucromatina). Essa heterocromatina, em uma formao chamada corpo de
Barr (Figura 11.15), freqentemente vista no envoltrio nuclear de clulas femininas
(Barr e Bertram, 1949). A inativao do cromossomo X deve ocorrer precocemente no
desenvolvimento. Tagaki e Abe (1990) usando um cromossomo X mutado que no se
inativava, mostraram que a expresso de dois cromossomos X por clula em embries
de camundongo leva morte das clulas ectodrmicas e ausncia de formao do
mesoderma, finalmente causando a morte embrionria no 100 dia de gestao.
Figura 11.15
Ncleos de clulas do epitlio oral humano coloridos com Cresil violeta. (A) Clula de um
homem normal XY, mostrando ausncia do corpo de Barr. (B) Clula de uma mulher normal XX,
mostrando um nico corpo de Barr (seta). (C) Clula de uma mulher com trs cromossomos X.
Dois corpos de Barr podem ser vistos, e somente um cromossomo por clula ativo. (De acordo
com Moore, 1977.)
CLIVAGEM IMPLANTAO
PRECOCE
NA FERTILIZAO
Corpos de Barr
Cromossomo X
materno
Cromossomo
X paterno
Zigoto feminino Os dois cromossomos X Inativao ao acaso de
com dois so ativos em todas um cromossomo X
(A)
cromossomos X as clulas em todas as
clulas do embrio
(B)
Figura 11.16
Inativao do cromossomo X em mamferos. (A) Diagrama esquemtico ilus-
trando inativao ao acaso do cromossomo X. Considera-se que a inativao
ocorra aproximadamente na poca da implantao. (B) Um camundongo fmea
heterozigoto para o gene dappled, da colorao da pelagem, ligado ao X. Po-
dem ser observadas regies distintamente pigmentadas. (Fotografia cortesia
de M. F. Lyon.)
A inativao precoce de um cromossomo X por clula tem conseqncias

fenotpicas importantes. Uma das primeiras anlises da inativao do cromossomo
X foi feita por Mary Lyon (1961), que observou os padres de colorao na pelagem
de camundongos. Se o animal heterozigoto para um gene autossmico controlan-
do a pigmentao do plo, ento ele se parece a um dos dois genitores ou tem uma
cor intermediria. Em qualquer caso, o camundongo tem uma cor nica. Mas se um
camundongo fmea heterozigoto para o gene da pigmentao no cromossomo X, o
resultado diferente: faixas da cor de um dos genitores se alternam com outras da
cor do outro genitor (Figura 11.16). Lyon props a seguinte hiptese para explicar
esses resultados:
1. Muito precocemente no desenvolvimento de mamferos do sexo feminino, ambos

cromossomos X so ativos.
2. Prosseguindo o desenvolvimento, um cromossomo X desligado em cada
clula.
3. Essa inativao ao acaso. Em algumas clulas, o cromossomo X derivado do
pai o inativado; em outras aquele proveniente da me.
4. Esse processo irreversvel. Uma vez que um cromossomo X foi inativado, o
mesmo cromossomo X inativado em toda a prognie daquela clula. (As
reas de pigmentao nesses camundongos so manchas amplas, no um
padro de sal e pimenta.) Desse modo, todos os tecidos em fmeas de mam-
feros so mosaicos de dois tipos de clulas.
Algumas das evidncias mais impressionantes em favor desse modelo vm de

estudos bioqumicos em clones de clulas humanas. Em humanos, existe uma
doena gentica- Sndrome de Lesch-Nyhan- que se caracteriza pela falta de uma
enzima ligada ao cromossomo X, hipoxantina fosforibosiltransferase (HPRT). A
sndrome de Lesch-Nyhan transmitida atravs do cromossomo X ou seja,
homens que tm essa mutao em seu nico cromossomo X sofrem (e morrem) da
doena. Em indivduos do sexo feminino, entretanto, a presena do gene mutante
HPRT pode ser mascarada pelo outro cromossomo X, que carrega o alelo do tipo
selvagem. Uma mulher que tem filhos com essa doena considerada uma porta-
dora, pois ela tem um gene HPRT mutante em um cromossomo, e um gene HPRT do
tipo selvagem no outro cromossomo X. Se a hiptese de Lyon correta, cada
clula dessa mulher deveria estar produzindo HPRT ativa ou inativa, dependendo
de qual cromossomo X est ativo. Barbara Migeon (1971) testou essa possibilida-
de tomando clulas da pele de uma mulher heterozigota para o gene HPRT e colo-
cando-as em cultura. Cada uma dessas clulas se dividiu formando clones de
Figura 11.17 clulas. Migeon usou mtodos de colorao para detectar a presena de HPRT
Reteno da inativao do cromossomo X. tipo selvagem nesses clones, verificando que aproximadamente metade dos clones
Aproximadamente 30 clulas de uma mulher tinham a enzima e a outra metade no ( Figura 11.17).
heterozigota para a deficincia de HPRT fo-
A hiptese de Lyon sobre a inativao do cromossomo X fornece uma excelen-
ram colocadas em uma placa de Petri e permi-
tido o seu crescimento. As clulas foram te explicao sobre a inativao gnica diferencial a nvel da transcrio. Algumas
visualizadas por auto-radiografia aps incu- excees em relao regra geral mostram ainda mais sua importncia. Primeiro, a
bao em um meio contendo hipoxantina radi- inativao do cromossomo X somente se d em clulas somticas, no em clulas
oativa. Clulas com HPRT incorporam o com- germinativas. Em clulas germinativas femininas, o cromossomo X inativo
posto radiomarcado em seu RNA e escurecem reativado imediatamente antes que as clulas entrem em meiose (Gartler et al.,
a emulso fotogrfica colocada sobre elas. Os 1973; Migeon e Jelalian,1977; Kratzer e Chapman, 1981). Assim, em ocitos madu-
clones de clulas sem HPRT parecem mais claros, ambos cromossomos X esto ativos. Em cada gerao, a inativao do cro-
ros porque suas clulas no podem incorporar mossomo X tem que ser renovada.
o composto radioativo. (De acordo com
Segundo, existem algumas excees regra do acaso no padro da inativao. A
Migeon, 1971, cortesia de B. Migeon.)
primeira inativao do cromossomo X no camundongo vista no trofectoderma,
onde o cromossomo X paterno especificamente inativado (Tagaki, 1974; West et
al., 1977). Terceiro, a inativao do cromossomo X no se estende a cada gene no
cromossomo X humano. Existem vrios genes no brao curto do cromossomo X
(como aquele codificando a sulfatase de esterides) que escapam da inativao
relacionada dosagem (Mohandas et al., 1980; Brown e Willard, 1990), e mesmo no
brao longo, existem alguns genes que so transcritos de ambos os cromossomos X
em cada clula somtica feminina. Portanto, no homem, a heterocromatizao no se
estende por todo o cromossomo X.
A quarta exceo, na verdade, acaba provando a regra. Existem alguns mamfe-
ros machos, cujos padres da cor de pelagem no poderia ser encontrada a no ser
que os animais exibissem inativao do cromossomo X. Felinos machos tipo ma-
lhado e casco de tartaruga esto entre esses exemplos. Esses modelos de pelagem
com manchas so normalmente encontrados em fmeas e considerados resultan-
tes de uma inativao ao acaso do cromossomo X. Mas raros machos exibem
tambm esses tipos de pelagem. Como pode ser isso? Acontece que esses felinos
so XXY. O cromossomo Y os torna machos (veja Captulo 20), mas um cromosso-
mo X inativado, como nas fmeas, de modo que h somente um X ativo por clula
(Centerwall e Benirschke, 1973). Dessa forma, esses felinos tm clulas com um
corpo de Barr e inativao ao acaso do cromossomo X. Est claro, ento, que um
dos mecanismos para o controle do nvel de transcrio da regulao gnica
produzir um grande nmero de genes heterocromticos e portanto transcricional-
mente inertes.
& Especulaes
O mecanismo de inativao do cromossomo X

O de inativao do cro-
MECANISMO
mossomo X ainda no bem co-
nhecido, mas pesquisa recente
nos d algumas indicaes dos fatores
res humanos, nos locos que escapam
inativao do cromossomo X, ambos os
cromossomos X sintetizam o transcrito.
Aqui o transcrito provinha somente do X
loco de Xist em uma clula XX impede-
se a inativao do X naquele cromosso-
mo (Penny et al., 1996). Terceiro, a trans-
ferncia de um segmento de 450 quiloba-
que podem estar envolvidos na iniciao inativo.) Esse transcrito, XIST, estava ses contendo o gene Xist do camundon-
e manuteno de um cromossomo X he- sendo produzido por um gene dentro da go para um autossomo de clulas pre-
terocromtico. regio XIC. Alm disso, esse transcrito cursoras embrionrias masculinas causa
no parece codificar uma protena. Ele per- a inativao aleatria daquele autosso-
Iniciao da inativao do cromossomo X: manece dentro do ncleo e interage com mo ou do cromossomo X endgeno (Lee
O gene Xist a cromatina X inativa do corpo de Barr et al., 1996). O autossomo contado
(Brown et al., 1992). Uma situao similar como um cromossomo X. A expresso de
As primeiras indicaes sobre a existn- existe no camundongo, onde o gene Xist Xist somente necessria para a inicia-
cia de um iniciador na inativao do cro- do cromossomo X inativo sintetiza um o da inativao do cromossomo X.
mossomo X vieram de estudos genticos RNA nuclear cuja seqncia no pode co- Uma vez ocorrida a inativao ele se tor-
onde cromossomos X rearranjados em dificar uma protena* (Borsani et al., 1991; na dispensvel (Brown e Willard, 1994).
camundongos no podiam ser inativados Brockdorrf et al., 1992). Ainda no se sabe o que o RNA do Xist
(Russell, 1963; Cattanach et al., 1969; O gene Xist um excelente candida- faz para inativar o cromossomo.
Mattei et al., 1981). Esses cromossomos to para o iniciador da inativao do X. O loco do Xist est impresso nos
no tinham uma certa regio, chamada Primeiro, os transcritos do gene Xist so gametas, e a impresso efetuada pela
posteriormente de centro de inativao do vistos em embries de camundongo an- metilao diferencial na regio promotora
cromossomo X (XIC). Em 1991, Brown e tes da inativao do cromossomo X, o do Xist. Durante a espermatognese, trs
seus colegas encontraram um transcrito que seria de se esperar se o gene tem um stios CG no promotor do Xist so desme-
de RNA originado unicamente de um cro- papel em iniciar essa inativao (Kay et tilados, enquanto que os mesmos stios
mossomo X inativo de humano. (Nos se- al., 1993). Segundo, derrubando um so completamente metilados durante a
oognese. Em clulas somticas, o gene
Xist ativo (no cromossomo X inativo)
praticamente no metilado, enquanto que
Clulas germinativas: o gene Xist inativo (no cromossomo X
ativo) est completamente metilado (Fi-
DNA gura 11.18; Norris et al., 1994; Ariel et al.,
TATA
1995; Zuccotti e Monk, 1995). Esse pa-
Espermato- dro de expresso do Xist mantido nos
zide tecidos extra-embrionrios do camundon-
TATA go (de tal modo que o Xist de origem pa-
vulo terna est desmetilado e ativo, levando
inativao daquele cromossomo). Entre-
tanto, as clulas do epiblasto embrion-
Clulas somticas: TATA rio perdem os padres de impresso de
X-inativo seus ancestrais e reestabelecem as dife-
renas de metilao ao acaso.
TATA
X-ativo *A lista de tipos de RNA est crescendo. Alm
dos bem conhecidos mRNA, tRNA, rRNA e pe-
Stios de correlao quenos RNAs nucleares (envolvidos nas emen-
da transcrio das de RNA), existem tambm RNA H19 e RNA
do gene Xist, nenhum dos quais codificam protenas. Em
Captulos mais adiante discutiremos RNAs de
Figura 11.18 controle de traduo (antisenso natural) e RNAs
Sumrio dos padres de metilao do Xist no espermatozide, vulo e dois cromossomos X em como X1srt usados para localizar mensagens para
clulas somticas. Quadrados abertos representam stios CG no metilados; quadrados cheios regies do citoplasma de ocitos. O embrio usa
representam stios CG metilados. As reas sombreadas indicam stios correlacionados com a RNAs de maneiras muito mais criativas do que
transcrio dos genes. (De acordo com Zuccotti e Monk, 1995.) os organismos adultos.
Impedindo a transcrio: (A) (B)

O nucleossomo no acetilado.
O que est impedindo que a transcrio do

DNA do cromossomo X inativo seja como
aquela do ativo? Um estudo recente de
Jeppeson e Turner (1993) sugere que os cro-
mossomos X ativo e inativo diferem entre
si pela acetilao de suas respectivas
histonas H4. Uma das melhores maneiras
de liberar protenas do DNA adicionar
cargas negativas s protenas. Isso pode
ser feito adicionando grupos fosfato ou
Figura 11.19
acetato s regies da protena ligante de
O cromossomo X inativo de clulas de indivduos humanos do sexo feminino contm histonas
DNA. A acetilao de histona H4 tem sido
H4 subacetiladas. (A) Esfregao metafsico de uma clula fibroblstica feminina humana
correlacionada a genes transcrevendo ati- corada com Hoechst 33258, que cora cromatina. (Cromossomos 7 e 11 esto numerados, e a
vamente. Nucleossomos de regies pro- seta aponta o X inativo.) (B) A mesma preparao corada com anticorpo fluorescente para a
motoras com CG no metilados tm prote- histona H4 acetilada. Enquanto todos os outros cromossomos esto claramente visveis o X
nas H4 altamente acetiladas, e a acetilao inativo no est. (de Jeppesen e Turner, 1993; fotografias cortesia dos autores.)
da histona H4 se correlaciona com a ati-
vao de certos genes (Chahal et al., 1980;
Tazi e Bird, 1990). Alm disso, apesar do
fator de transcrio TFIIIA no poder se HPRT estava no cromossomo X inativo, assim que um novo padro de inativao
ligar ao gene do RNA 5S se esse estiver o DNA no produzia a enzima na clula do cromossomo X ocorra na prxima ge-
envolvido em um nucleossomo, aquele fa- hospedeira deficiente em HPRT. Entretan- rao. Durante o primeiro trimestre do
tor pode se ligar ao gene se as histonas to, se o DNA era derivado do clone de desenvolvimento humano, estabeleci-
do nucleossomo estiverem acetiladas (Lee clulas expressando o gene HPRT no seu do de novo o padro adulto de metilao
et al., 1993). A acetilao de histonas pa- cromossomo X ativo, as clulas trans- e inativao do cromossomo X (Migeon
rece no ser obrigatria para a transcri- fectadas produziram HPRT desse gene. et al., 1991).*
o do gene, mas pode facilitar a transcri- Logo em seguida, Mohandas e colegas Ainda no conhecemos o mecanismo
o em vrios sistemas (Turner, 1991). (1981) demonstraram que 5-azacitidina pelo qual o transcrito de Xist regula o esta-
Usando um anticorpo que reconhece a (uma droga que inibe a citosina metiltrans- do da cromatina e como se d o espalha-
histona H4 acetilada (mas no a no ace- ferase) poderia reativar localmente esses mento da inativao. Tambm, ainda no
tilada), Jeppesen e Turner encontraram genes no cromossomo X inativo. Pesqui- conhecemos as vias pelas quais a transcri-
que cromossomos X ativos, no homem e sas posteriores, usando enzimas de res- o de Xist, a modificao dos nucleosso-
no camundongo, tm tanta histona H4 trio e sondas de cDNA, mostraram que mos e a metilao do DNA se relacionam
acetilada como a maioria dos outros cro- as ilhas de CG nos stios promotores heterocromatizao de um cromossomo X.
mossomos. Entretanto, o cromossomo X de vrios genes esto metilados no cro- Ainda no sabemos como feita original-
inativo tem pouqussima histona H4 ace- mossomo X inativo e no metilados no mente a escolha entre os dois cromosso-
tilada (Figura 11.19). No se sabe como a cromossomo ativo (Wolf et al., 1982; mos X ou como o RNA de Xist transcrito
expresso de Xist causaria a ocorrncia Keith et al., 1986). Esses modelos de mede uma regio rodeada por genes inativa-
de H4 no acetilada nos nucleossomos tilao so removidos durante a formados. Ainda h muito que aprender a respei-
do cromossomo X inativo. o da clula germinativa, permitindo to desse crtico fenmeno nos mamferos.
Trancamento dos padres de transcrio: *Como mencionado em captulos anteriores, difcil extrapolar de um grupo de mamferos para
metilao do DNA outro. Certamente o caso da inativao do cromossomo X. Somente porque a inativao do
cromossomo X acontece dessa maneira na placenta do camundongo, no significa que acontece da
O trancamento do estgio transcricional mesma maneira na placenta de todos os mamferos. Nas vilosidades corinicas humanas, algumas
clulas contm dois cromossomos X ativos, e os cromossomos X inativados podem ser reativados
inativo feito pela metilao. A primeira
(Migeon et al., 1985, 1986). Tambm a inativao do cromossomo X na placenta humana parece ser
evidncia indicando tais cis diferenas ao acaso; qualquer um dos dois cromossomos derivados do pai ou da me podem ser extintos. Nos
entre o estado ativo e o inativo do DNA marsupiais, o cromossomo X derivado do pai preferencialmente inativado em todo o embrio
do cromossomo X foi obtida quando (Cooper et al., 1971; Sharman, 1971; Samollow et al., 1987). No homem, existem regies bvias do
Liskay e Evans (1980) transfectaram o cromossomo X que escapam inativao. As diferenas somticas entre humanos com os caritipos
gene ligado ao X para HPRT para clulas XX e XO tambm predizem que devem existir genes ligados ao X que seriam necessrios em duas doses
para o desenvolvimento normal de mulheres. No camundongo, a inativao do cromossomo X parece
de camundongo deficientes em HPRT em se estender ao cromossomo todo (Ashworth et al., 1991). Na determinao do sexo (Captulo 20),
cultura. Quando o DNA vinha de um crucial que os genes para a compensao de dosagem do X sejam ligados aos genes responsveis pelo
clone de clulas nas quais o gene para fentipo sexual. Se a dosagem no equalizada, o embrio geralmente morre.
Associao do DNA ativo com a matriz nuclear

Ligao da cromatina ativa a uma matriz nuclear
As enzimas de replicao dentro do ncleo, de alguma maneira, devem encontrar

seus stios para a iniciao da sntese de DNA; os fatores de transcrio e as polime-
rases devem encontrar seus promotores e intensificadores; os fatores de
processamento de RNA devem encontrar seus stios de emendas no RNA; e o RNA
mensageiro deve eficientemente encontrar os poros atravs dos quais ele sair do
ncleo. Isso muito para se esperar de molculas em soluo. Deveria se esperar
que os vrios fatores envolvidos na transcrio estivessem flutuando no fluido
nuclear trombando ao acaso no DNA. O RNA assim formado seria ento emendado
e estaria se movimentando no ambiente nuclear, ao acaso, at encontrar um poro
atravs do qual deixaria o ncleo.
Um modelo alternativo sugere que o RNA transcrito em um substrato slido no
qual todas as enzimas necessrias para transcrio, processamento e transporte
esto situadas juntamente. Existem precedentes para pensar nesses termos. A ca-
deia de transporte de eltrons das mitocndrias um agregado com tal ordenao, e
conhecido h muito tempo que as enzimas de sntese de DNA em bactrias residem
na face interna da membrana celular. Ento, o que se deve perguntar o seguinte:
Existe um retculo nuclear onde tais enzimas poderiam ser encontradas? Se existe tal
rede, esto os genes transcricionalmente ativos nela localizados? Se tal rede existe,
esto as enzimas de sntese de RNA nela localizados?
Uma matriz nuclear pode ser isolada dissolvendo ncleos em detergentes
lipdicos e solubilizando a maior parte do DNA com DNases (Berezney e Coffey,
1977; Capco et al., 1982). Microscopia eletrnica de transmisso de tais comple-
xos mostra um emaranhado de protenas que se estende atravs do ncleo e se
conecta ao citoesqueleto no envoltrio nuclear (Figura 11.20). Essa matriz
vista em todos os ncleos eucariotos at agora examinados (Wilson, 1985; Nel-
son et al., 1986).
Quando se isola tal matriz, a DNase j removeu cerca de 98% do DNA. Est o
DNA ainda ligado a essa matriz (e presumivelmente protegido da DNase por estar
to fortemente associado matriz) enriquecida para transcrever genes ativamente?
Existe evidncia que isso verdade para alguns genes. O gene da ovalbumina
preferencialmente associado com a matriz nuclear em clulas do oviduto de galinhas
adultas mas no em clulas do fgado ou eritrcitos na mesma espcie. Os genes da
globina, entretanto, no esto associados com a matriz nuclear das clulas do oviduto
(Robinson et al., 1982; Thorburn e Knowland, 1993). Ciejek e colaboradores (1983)
confirmaram e estenderam essas observaes, mostrando que a unidade inteira da
transcrio induzvel por hormnio do gene da ovalbumina est ligado matriz
nuclear. Dentro de 100.000 pares de bases dessa unidade nenhum outro gene est
associado a essa matriz. Alm disso, quando o estrgeno foi retirado dos animais, a
conexo especfica desses genes matriz nuclear foi abolida. Os genes parecem Figura 11.20
estar ligados matriz nuclear somente quando esto ativados. Micrografia de transmisso eletrnica
Em 1985, Hutchinson e Weintraub mostraram que stios sensveis DNase no (47.000x) de uma poro da matriz nuclear e
so encontrados uniformemente por todo o ncleo. Eles trataram ncleos com DNase citoplasma ao redor. Filamentos do citoes-
I e ento repararam os cortes com nucleotdeos radioativos. O DNA marcado deveria queleto so claramente visveis. As clulas
representar somente os genes transcrevendo ativamente (ou seja, sensveis DNase fibroblsticas do camundongo foram extra-
I). Os resultados desse tratamento mostraram que o DNA sensvel DNase I estava das com detergente para remover lipdios e
localizado na periferia do ncleo e ao longo dos canais ou fibras que se ligavam ao em seguida tratadas com DNase I. Em 1895,
E. B. Wilson, usando o microscpio de luz,
envoltrio nuclear (Figura 11.21). Ento, possvel que genes ativos esto especifi-
relatou que o ncleo era atravessado por fi-
camente associados ao envoltrio nuclear ou matriz. bras que eram contnuas com aquelas do
Outro tipo de evidncia indicando a participao da matriz nuclear na transcri- retculo citoplasmtico e que rodeavam a
o a demonstrao de que a maioria do RNA recm-sintetizado (alguns conside- cromatina. (de Capco et al., 1982, cortesia
ram 95%) parece estar ligado matriz nuclear (Herman et al., 1978; Miller et al., 1978; de S. Penman.)
(A) (B) Alas de DNA cromossmico conectadas matriz

nuclear atravs de origens de replicao. O empacotamento
em nucleossomos e fibras de 30nm no mostrado
para simplificao
Genes ativos ligados aos

canais da matriz atravs de
domnios reguladores e
RNA polimerase
temporariamente imobilizada
Canal da
matriz
Figura 11.21 nuclear
Presena de cromatina ativa ao longo da periferia e canais nucleares. mRNA coberto
(A) Ncleos de eritrcitos tratados com DNase I, que parecem cortar com protenas
regies de cromatina transcrevendo ativamente. Esse corte foi cura-
do por traduo de corte dentro do ncleo em presena de nucleot-
deos, cuja presena pode ser detectada por fluorescncia. Os nucleo- DNA
tdeos marcados foram encontrados na periferia do ncleo e ao longo
de estruturas levando para dentro a partir do envoltrio nuclear. (B)
Modelo especulativo da organizao da cromatina na interfase, ima-
RNA sendo Matriz nuclear
ginando a matriz nuclear como uma srie de canais internos. (A de transportado
Hutchinson e Weintraub, 1985, cortesia de N. Hutchinson; B de para o citoplasma
acordo com Razin e Gromova, 1995.)
Citoplasma Poro nuclear
van Eekelen e van Venrooij, 1981; Mariman et al., 1982). Essa ligao parece ser
mediada por um conjunto de protenas da matriz nuclear. Essas protenas incluem
laminina B1, um componente principal do envoltrio nuclear (Ludrus et al., 1992),
uma protena ligante de DNA especfica do timo que desenrola o DNA adjacente ao
seu stio de ligao (Dickinson et al., 1992), e o fator de transcrio YY1/NF-E1 que
foi considerado idntico protena 1 da matriz nuclear (NMP-1) (Guo et al., 1995).
Considerando que genes ativos, RNA polimerase, e transcritos nascentes parecem
estar ligados a uma matriz nuclear, Jackson e Cook (1985) propuseram que a transcri-
o no ocorre pela migrao de uma polimerase ao longo do gene. Ao contrrio,
eles imaginaram uma RNA polimerase acorrentada matriz nuclear, com o DNA
migrando atravs dela.
Existe tambm alguma evidncia de que o DNA ativo possa estar ligado matriz
nuclear atravs de seqncias de DNA ricas em AT e denominadas regies associa-
das matriz (MARs), ou regies associadas a andaimes (Gasser e Laemmli, 1986). A
maior parte dessas MARs se localizam perto ou dentro de intensificadores ou promo-
tores. A importncia dessas regies foi mostrada por Stief e colaboradores (1989), que
identificaram duas MARs no gene da lisozima do pinto. Nesse caso, as MARs no
estavam no intensificador e por essa razo puderam ser separadas. Quando eles fun-
diram o intensificador e o promotor da lisozima do pinto ao gene CAT reprter e
transfectaram o clone em clulas produtoras de lisozima, isso no produziu muita
protena CAT. Ento eles produziram um gene similar que continha o promotor, o
intensificador e seqncias CAT e o conjunto foi flanqueado por duas MARs. Quando
Figura 11.22
Importncia das regies associadas matriz na
Intensificador transcrio. Na transfeco de clones consistin-
Promotor
do de promotor da lisozima, intensificador e o
gene CAT, para uma linhagem celular secretora
de lisozima, muito pouca protena CAT pro-
duzida, como determinado pela atividade
enzimtica de CAT. Entretanto, se as duas MARs
Gene CAT so includas no gene clonado, muito mais pro-
tena CAT pode ser encontrada nessas clulas.
(De acordo com Stief et al., 1989.)
Regio associada matriz
Topoisomerase II
Produtos
Substrato
Stios de ligao para
topoisomerase II
Resultados da transfeco
esse clone foi transfectado em clulas produtoras de lisozima, a sntese de CAT foi
enormemente aumentada (Figura 11.22). Da mesma forma, duas MARs flanqueiam um
intensificador do loco da cadeia pesada da imunoglobulina de camundongo, e a
transcrio desse gene requer a presena tanto do intensificador como das duas
MARs. As MARs parecem cooperar com o intensificador para estender uma regio de
cromatina acessvel a fatores, ao promotor do gene da imunoglobulina (Forrester et al.,
1994; Jenuwein et al., 1997).
Topoisomerases e transcrio gnica
Em vrios estudos, foram identificadas regies associadas matriz que continham

RNA polimerase
ou eram adjacentes a uma seqncia de DNA que reconhecida por uma enzima-
topoisomerase II que pode ser essencial transcrio (Cockerill e Garrard, 1986;
Adachi et al., 1989; Scheuermann e Chen, 1989). Estudos recentes sugeriram que
desenrolar a hlice de DNA importante para a facilitao da transcrio. Cromatina
ativa transcricionalmente tem que ser torcida para permitir o desenrolar das fitas
(Ryoji e Worcel, 1984), e a toro realizada por superespiralamento da hlice de
DNA (Figura 11.23). Villeponteau e colaboradores (1984) mostraram que stios sens-
veis DNase I em genes ativos so formados somente quando os genes esto sob
tenso torcional. A topoisomerase II a enzima responsvel pela toro do DNA e Superespiral
separao das fitas. Usando anticorpos para essa protena, Berrios e colegas (1985) negativa
Figura 11.23
Superespiralamento do DNA durante a transcrio. Topoisomerase II junta duas regies do
DNA e introduz o superespiralamento quebrando transitoriamente e recombinando as fitas de
DNA. Como resultante da distoro, uma poro da dupla hlice se separa em duas fitas,
permitindo RNA polimerase (e presumivelmente a outros fatores trans-reguladores) iniciar a
transcrio. Os stios de ligao da topoisomerase foram encontrados no DNA ligado matriz
(Cockerill e Garrard, 1986). (De acordo com Darnell et al., 1986.)
Figura 11.24
Uma das quatro regies do intensificador do
gene de cadeia pesada da imunoglobulina pro-
tegida pela protena NF-NR. NF-NR foi
adicionada ao DNA da regio do intensificador Stio de ligao da Seqncia de Protegida por
e o DNA foi digerido com DNase. Somente as topoisomerase ligao matriz NF-NR
seqncias cobertas pela NF-NR seriam pre-
servadas. A regio protegida (cinza) inclui uma
seqncia associada matriz e um stio de liga-
o da topoisomerase II (colorido). (De acor-
do com Scheuermann e Chen, 1989.)
demonstraram que a topoisomerase II est localizada no complexo matriz nuclear-

envoltrio nuclear. A proximidade entre as MARs e as regies de ligao da
topoisomerase II sugerem que a ancoragem do DNA matriz deve ser necessria
para impedir a rotao livre do DNA, permitindo assim que as topoisomerases liga-
das matriz toram a cromatina (Bode et al., 1992).
Se a ligao matriz essencial para a transcrio do RNA, possvel que prote-
nas reguladoras negativas como os silenciadores possam inibir essa associao.
Essa possibilidade foi sugerida por Scheuermann e Chen (1989), que isolaram uma
protena que inibe a transcrio do gene de cadeia pesada da imunoglobulina. Essa
protena, NF-NR, expressa em clulas no B e nos estgios precoces do desenvol-
vimento da clula B, mas est ausente em clulas B maduras que transcrevem grandes
quantidades de genes da imunoglobulina. Essa protena se liga em quatro locais
flanqueando o intensificador da cadeia pesada: duas seqncias de consenso MAR e
duas seqncias de consenso topoisomerase II ( Figura 11.24). possvel que, com a
presena de NF-NR no ncleo, essa se ligue s regies flanqueando o intensificador
e impea a associao do gene de cadeia pesada da imunoglobulina com a matriz
nuclear e a topoisomerase. Quando a protena no est presente, essas associaes
no ocorrem resultando na transcrio do gene. A demonstrao de que a protena da
matriz nuclear NMP-1 a mesma que o fator de transcrio YY1 especialmente
interessante, pois YY1 foi implicado no silenciamento do gene de -globina uma vez
que os genes da -globina so expressos (Raich et al., 1995; Wandersee et al., 1996).
Isoladores e domnios
O genoma eucarioto no meramente parcelado em determinados genes. Na verda-
de, ele parece estar dividido em regies de desenvolvimento relativamente indepen-
dentes freqentemente denominadas domnios. Evidncia para os domnios veio de
estudos onde blocos de DNA foram colocados prximos a genes reprteres que podi-
am ser normalmente ativados por um intensificador. Certas seqncias impediram o
intensificador de ativar o gene reprter, enquanto que outras seqncias no o fizeram
(Geyer e Corces, 1992). Foi proposto que essas seqncias isoladoras ligam protenas
que impedem a interao de intensificadores e promotores no seu outro lado. Desse
modo, elas poderiam estabelecer fronteiras: a ativao poderia ocorrer em um de seus
lados, mas no cruzar para o outro lado. Algumas dessas seqncias fronteirias
foram isoladas de DNA de Drosophila, como tambm algumas das protenas ligantes.
Kellum e Schedl (1991) mostraram que o gene hsp70 (para a protena do choque
trmico em Drosophila) estava confinado por duas seqncias, scs e scs, que impedi-
am os efeitos da cromatina adjacente de influenciar sua transcrio. Zhao e colegas
(1995) identificaram uma protena de 32-kDa que se liga ao elemento de fronteira scs e
est localizada entre as bandas de numerosos genes na Drosophila (veja Prancha 31;
Zhao et al., 1995). Isso pode ser visto quando os genes formam tufos e a colorao
dessas protenas as mostram nas bordas dos tufos. O stio scs no complexo Bithorax
parece estar localizado aps o ltimo gene (AbdB), de modo que a unidade inteira
possa ser regulada como um nico loco gentico.
Resumo
A transcrio gnica diferencial uma via majoritria na regulao do desenvolvi-
mento. As regies cis-reguladoras no DNA e as protenas trans-reguladoras que
ativam e reprimem a transcrio esto sendo identificadas e seus mecanismos de
ao delineados. Parece que certos fatores de transcrio rompem ou previnem a
formao de nucleossomos nos intensificadores e regies promotoras, assim permi-
tindo a ligao da RNA polimerase II ao promotor e a transcrio do gene. Certos
fatores de transcrio estimulam o processo interagindo com o complexo transcrici-
onal e acelerando sua formao. A desmetilao e o desenrolamento de regies
genticas na matriz nuclear provavelmente tambm esto envolvidas na regulao
da expresso gnica. Como disse Albert Claude, ns apenas comeamos a apreciar
nossa riqueza adquirida.
LITERATURA CITADA
Adachi, Y., Ks, E. and Laemmli, U. 1989. Berrios, M., Osheroff, N. and Fisher, P. A. 1985. Brockendorrf, N. and seven others. 1992. The
Preferential, cooperative binding of DNA In situ localization of DNA topoiso-merase II, a product of the mouse Xist gene is a 15-kb inactive
topoisomerase II to scaffold-associated re-gions. major polypeptide component of the Droso- X-specific transcript containing no conserved ORF
EMBO J. 8: 3997-4006. phila nuclear matrix fraction. Proc. Natl. Acad. and located in the nu-cleus. Cell 71: 515-526.
Sci. USA 82: 4142-4146.
Adams, C. C. and Workman, J. L. 1993. Nu-cleosome Browder, L. W. 1984. Developmental Biology,
displacement in transcription. Cell 72: 305-308. Berry, M., Grosveld, F. and Dillon, N. 1992. A 2nd Ed. Saunders, Philadelphia.
single point mutation is the cause of the Greek
Ariel, M, Robinson, E., McCarrey, J. R. and Brown, C. J. and Willard, H. F. 1990. Local-
form of hereditary persistence of fetal
Cedar, H. 1995. Gamete-specific methyla-tion ization of a gene that escapes inactivation to
hemoglobin. Nature 358: 499-502.
correlates with imprinting of the murine Xist the X chromosome proximal short arm:
gene. Nat. Genet. 9: 312-315. Bestor, T. H. and Ingram, V. M. 1983. Two DNA Implications for X inactivation. Am. J. Hum.
methyltransferases from murine ery-throleuke- Genet. 46: 273-279.
Ashworth, A., Rastan, S., Lovell-Badge, R. and
mia cells: Purification, sequence specificity, and
Kay, G. F. 1991. X inactivation may ex-plain Brown, C. J. and Willard, H. F. 1994. The human
mode of interaction with DNA. Proc. Natl. Acad.
the difference in viability of XO hu-mans and X-inactivation centre is not re-quired for
Sci. USA 82: 2674-2678.
mice. Nature 351: 406-408. maintenance of X-chromosome inactivation.
Blom van Assendelft, G., Hanscombe, O., Nature 368: 154-156.
Bacon, E. R., Dalyot, N., Filon, D., Schreiber,
Grosveld, F. and Greaves, D. R. 1989. The b-
L., Rachmilewitz, E. A. and Op-penheim, A. Brown, C. J. and six others. 1991a. A gene from
globin dominant control region activates
1995. Hemoglobin switching in humans is the region of the human X inactiva-tion center
homologous and heterologous promoters in a
accompanied by changes in the ratio of the is expressed exclusively from the inactive X
tissue-specific manner. Cell 56: 969-977.
transcription factors GATA-1 and SP1. Molec. chromosome. Nature 349: 38-44.
Med. 1: 295-305. Bode, J., Kohwi, Y., Dickinson, L., Joh, T., Klehr,
Brown, C. J. and nine others. 1991b. Local-
D., Mielke, C. and Kohwi-Shige-matsu, T. 1992.
Barlow, D. P., Stoger, R., Herrmann, B. G., Saito, K. ization of the X chromosome inactivation
Biological significance of unwinding capability
and Schweifer, N. 1991. The mouse insulin-like center on the human X chromosome. Na-ture
of nuclear matrix-as-sociated DNA. Science
growth factor type-2 re-ceptor is imprinted and 349: 82-84.
255:195-197.
closely linked to the Tme locus. Nature 349: 84-87.
Brown, C. J., Hendrich, B. D., Rupert, J. L.,
Borsani, G. and thirteen others. 1991. Char-
Barr, M. L. and Bertram, E. G. 1949. A mor- Lafreniere, R. G., Xing, Y., Lawrence, J. and
acterization of a murine gene expressed from
phological distinction between neurones of the Willard, H. F. 1992. The human XIST gene:
the inactive X chromosome. Nature 351:
male and female, and the behavior of the Analysis of a 17-kb inactive X-specific RNA
325-329.
nucleolar satellite during accelerated nucleopro- that contains conserved repeats and is highly
tein synthesis. Nature 163: 676. Boyse, J. and Bird, A. 1991. DNA methyla-tion localized within the nucleus. Cell 71: 527-542.
inhibits transcription indirectly via a methyl-
Bartolomei, M. S. and Tilghman, S. M. 1992. Brownell, J. E., Zhou, J., Ranalli, T.,
CpG binding protein. Cell 64: 1123-1134.
Parental imprinting of mouse chro-mosome 7. Kobayashi, R., Edmonson, D. G., Roth, S. Y.
Semin. Dev. Biol. 3: 107-117. Boyse, J. and Bird, A. 1992. Repression of genes and Allis, C. D. 1996. Tetrahymena histone
by DNA methylation depends upon CpG density acetytransferase A: A homolog to yeast GCN5
Behringer, R., Hammer, R., Brinster, R.,
and promoter strength: Evi-dence for involve- linking histone acetylation to gene activation.
Palmiter, R. and Townes, T. 1987. Two 3' se-
ment of a methyl-CpG binding protein. EMBO Cell 84: 843-851.
quences direct adult erythroid-specific ex-
J. 11: 327-333.
pression of human b-globin genes in trans-genie Brunk, B. P., Goldhammer, D. J. and Emer-son,
mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 7056-7060. Braunstein, M., Rose, A. B., Holmes, S. G., C. P. Jr. 1996. Regulated demethylation of the
Allis, C. D. and Broach, J. R. 1993. Tran- myoD distal enhancer during skeletal myogenesis.
Berezney, R. and Coffey, D. S. 1977. Nuclear
scriptional silencing in yeast is associated with Dev. Biol. 177: 490-503.
matrix: Isolation and characterization of a
reduced nucleosome acetylation. Genes Dev.
framework structure from rat liver nuclei. J. Cell Bungert, J., Dav, U., Lim, K.-C., Lieuw, K. H.,
7: 592-604.
Biol. 73: 616-637. Shavit, J. A., Liu, Q. and Engel, J. D. 1995.
Synergistic regulation of human b-globin gene Crick, F. H. C. 1966. Of Molecules and Men. Garcia-Ramirez, M., Rocchini, C. and Ausio, J.
switching by locus control re-gion elements HS3 University of Washington Press, Seattle. 1995. The modulation of chro-matin folding by
and HS4. Genes Dev. 9: 3083-3096. histone acetylation. J. Biol. Chem. 270: 17923-
Darnell, J., Lodish, H. and Baltimore, D. 1986.
17928.
Burch, J. B. and Weintraub, H. 1983. Tem-poral Molecular Cell Biology. Scientific American
order of chromatin structral changes associated Books, New York. Gartler, S. M., Liskay, R. M. and Grant, N. 1973.
with activation of the major chick vitellogenin Two functional X chromosomes in human fetal
DeChiara, T. M., Robertson, E. J. and Efs-
gene. Cell 33: 64-76. oocytes. Exp. Cell Res. 82: 464-66.
tratiadis, A. 1991. Parental imprinting of the
Burlingame, R. W., Love, W. E., Wang, B.-C., mouse insulin-like growth factor II gene. Cell Gartler, S. M., Rivest, M. and Cole, R. E. 1980.
Hamlin, R., Xuong, N.-H. and Moudri-anakis, 64: 849-859. Cytological evidence for an inactive X
E. N. 1985. Crystallographic struc-ture of the chromosome in murine oogonia. Cytogenet.
Dickinson, L. A., Job, T., Kohwi, Y. and Kohwi-
octameric histone core of the nucleosome at a Cell Genet. 28: 203-207.
Shigematsu, T. 1992. A tissue-spe-cific MAR/
resolution of 3.3 . Science 228: 246-253.
SAR DNA-binding protein with unusual binding Gasser, S. M. and Laemmli, U. K. 1986. Co-
Busslinger, M., Hurst, J. and Flavell, R. A. 1983. site recognition. Cell 70: 631-645. habitation of scaffold binding regions with
DNA methylation and the regulation of globin upstream/enhancer elements of three de-
Driscoll, D. J. and Migeon, B. R. 1990. Sex
gene expression. Cell 34:197-206. velopmentally regulated genes in D. melano-
difference in methylation of single-copy genes
gaster. Cell 46: 521-530.
Capco, D. G., Wan, K. M. and Penman, S. 1982 in human meiotic germ cells: Impli-cations for
The nuclear matrix: Three-dimensional architecture X chromosome inactivation, parental imprin- Geyer, P. K. and Corces, V. G. 1992. DNA
and protein composition. Cell 29: 847-858. ting, and the origin of PGC mutations. Somat. position-specific repression of transcription by
Cell Mol. Genet. 16: 267-268. a Drosophila zinc finger protein. Genes Dev. 6:
Cattanach, B. M., Pollard, C. E. and Perez, J. N.
1865-1873.
1969. Controlling elements in the mouse X Elgin, S. 1981. DNase I-hypersensitive sites of
chromosome. 1. Interaction with the X-linked chromatin. Cell 27: 413-415. Gong, Q. and Dean, A. 1993. Enhancer-de-
genes. Genet. Res. 14: 223-235. pendent transcription of the e-globin pro-moter
Elgin, S. C. R. 1988. The formation and
requires promoter-bound GATA-1 and enhancer
Centerwall, W. R. and Benirschke, K. 1973. Male function of DNase-I hypersensitivity sites in
bound AP-/NF-E2. Mol. Cell Biol. 13: 911-917.
tortoiseshell and calico (T-C) cats. J. Hered. 64: the process of gene activation. J. Biol. Chem.
272-278. 263: 9259-9262. Grosveld, F., Blom van Assendelft, G., Greaves,
D. R. and Kollins, G. 1987. Posi-tion-dependent
Chahal, S. S., Matthews, H. R. and Brad-bury, Ellis, J., Tan-Un, K. C., Harper, A., Michael-
high-level expression of the human b-globin gene
E. M. 1980. Acetylation of histone H4 and its ovich, D., Yannoutsos, N., Philipsen, S. and
in transgenic mice. Cell 51: 975-985.
role in chromatin structure and function. Nature Grosveld, F. 1996. A dominant chromatin-
287: 76-79. opening activity in 5' hypersensitive site 3 of Groudine, M. and Conklin, K. F. 1985.
the human b-globin locus control region. EMBO Chromatin structure and de novo methyla-
Chaillet, J. R., Vogt, T. F., Beier, D. R. and Leder,
J. 15: 562-568. tion of sperm DNA: Implications for acti-
P. 1991. Parental-specific methyla-tion of an
vation of the paternal genome. Science 228:
imprinted transgene is estab-lished during Enver, T., Raich, N., Ebens, A. J., Pa-payanno-
1061-1068.
gametogenesis and progres-sively changes during poulou, T., Costantini, F. and Stamatoyannopou-
embryogenesis. Cell 66: 77-83. los, G. 1990. Develop-mental regulation of human Groudine, M. and Weintraub, H. 1981. Ac-
fetal-to-adult globin gene switching in transgenic tivation of globin genes during chick de-
Ciejek, E. M., Tsai, M.-J. and OMalley,B. W.
mice. Nature 344: 309-312. velopment. Cell 24: 393-401.
1983. Actively transcribed genes are associated
with the nuclear matrix. Nature 306: 607-609. Felsenfeld, G. 1992. Chromatin as an essen-tial Groudine, M., Kohwi-Shigematsu, T, Geli-nas,
part of the transcriptional mechanism. Nature R., Stamatoyannopoulos, G. and Papayannopou-
Clark, D. J. and Felsenfeld, G. 1992. A nu-
355: 219-224. lo, T. 1983. Human fetal to adult hemoglobin
cleosome core is transferred out of the path of a
switching: Changes in chromatin structure of
transcribing polymerase. Cell 71: 11-22. Ferguson-Smith, A. C., Sasaki, H., Cat-tanach,
the b-globin gene locus. Proc. Natl. Acad. Sci.
B. M. and Surani, M. A. 1993. Parental origin-
Cockerill, P. N. and Garrard, W. T. 1986. USA 80: 7551-7555.
specific epigenetic modifi-cation of the mouse
Chromosome loop anchorage of the immuno-
H19 gene. Nature 362: 751-755. Gruenbaum, Y., Ceder, H. and Razin, A. 1982.
globulin gene occurs next to the en-hancer in a
Substrate and sequence specificity of a eukaryotic
region containing topoiso-merase II sites. Cell Fiering, S., Kim, C. G., Epner, E. M. and
DNA methylase. Nature 295: 620-622.
44: 273-282. Groudine, M. 1993. An in-out strategy using
gene targeting and FLP recombinase for the Guo, B and eight others. 1995. The nuclear matrix
Compere, S. J. and Palmiter, R. D. 1981. DNA
functional dissection of complex DNA protein NMP-1 is the transcritpion factor YY1.
methylation controls the inducibility of the
regulatory elements: Analysis of the b-globin Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 10526-10530.
mouse metallothionein-I gene in lymphoid cells.
locus control region. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Cell 25: 233-240. Hanscombe, O., Whyall, D., Fraser, P., Yan-
90: 8469-8473.
noutsos, N., Greaves, D., Dillon, N. and Grosveld,
Conklin, K.F. and Groudine, M. 1984. Chro-
Forrester, W. C., Genderen, C. van, Jenuwein, T. F. 1991. Importance of globin gene order for
matin structure and gene expression. In A. Razin,
and Grosschedl, R. 1994. De-pendence of correct developmental ex-pression. Genes Dev.
H. Cedar and A. D. Riggs (eds.), DNA Methylation.
enhancer-mediated transcrip-tion of the im- 5: 1387-1394.
Springer-Verlag, New York, pp. 293-351.
munoglobulin m gene on nu-clear matrix
Hebbes, T. R., Clayton, A. L., Thorne, A. W.
Cooper, D. W., Vandeberg, J. L., Sharmen, G. B. attachment regions. Science 265: 1221-1225.
and Crane-Robertson, C. 1994. Core his-tone
and Poole, W. E. 1971. Phosphoglyc-erate
Frank, D., Lichtenstein, M., Paroush, Z., acetylation co-maps with generalized DNase I
kinase polymorphism in kangaroos provides
Bergmann, Y, Shani, M., Razin, A. and Ceder. H. sensitivity in the chick b-globin chromsomal
further evidence for paternal X inactivation.
1990. Demethylation of genes in animal cells. domain. EMBO ]. 7: 1395-1402.
Nat. New Biol. 230: 155-157.
Philos. Trans. R. Soc. Land. [B] 326: 241-251.
Herman, R., Weymouth, L. and Penman, S. Keshet, I., Lieman-Hurwitz, J. and Cedar, H. Mariman, E. C. M., van Eekelen, C. A. G., Reinders,
1978. Heterogeneous nuclear RNA-protein fibers 1986. DNA methylation affects the for-mation R. J., Berns, A. J. M. and van Ven-rooji, W. J.
in chromatin depleted nuclei. J. Cell Biol. 78: of active chromatin. Cell 44: 535-543. 1982. Adenoviral heterogenous nuclear RNA is
663-674. associated with the host nuclear matrix during
Knoll, J. H. M., Nicholls, R. D., Magenis, R. E.,
splicing. J. Mol. Biol. 154: 103-119.
Holliday, R. 1987. The inheritance of epige- Graham, J. M., Jr., Lalande, M. and Latt, S. A.
netic defects. Science 238:163-170. Hotchkiss, 1989. Angelman and Prader-Willi syn-dromes Martin, D. I. K., Tsai, S.-F. and Orkin, S. H. 1989.
R. D. 1948. The quantitative sep-aration of share a common chromosome 15 deletion but Increased g-globin expression in a nondeletion
purines, pyrimidines, and nucle-osides by paper differ in the parental origin of the deletion. Am. HPFH mediated by an ery-throid-specific DNA-
chromatography. J. Biol. Chem. 175: 315-332. ]. Med. Genet. 32: 285-290. binding factor. Nature 338: 435-437.
Hutchinson, N. and Weintraub, H. 1985. Kornberg, R. D. and Thomas, J.D. 1974. Martin, D. I. K., Fiering, S. and Groudine, M.
Localization of DNase I-sensitive se-quences to Chromatin structure: Oligomers of his-tones. 1996. Regulation of b-globin gene ex-pression:
specific regions of interphase nuclei. Cell 43: Science 184: 865-868. straightening out the locus. Curr. Opin. Genet.
471-482. Dev. 6: 488-495.
Kratzer, P. G. and Chapman, V. M. 1981. X-
Iguchi-Ariga, S. M. M. and Schaffner, W. 1989. chromosome reactivation in oocytes of Mus caroli. Mattei, M. G., Mattei, J. F., Vidal, I. and Gi-raud,
CpG methylation of the cAMP-re-sponsive Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 3093-3097. F. 1981. Structural anomalies of the X chromo-
enhancer/promoter sequence TGACGTCA some and activation center. Hum. Genet. 56:
Kuroda, M. I., Kernan, M. J., Kreber, R.,
abolishes specific factor bind-ing as well as 401-408.
Ganetzky, B. and Baker, B. S. 1991. The
transcriptional activation. Genes Dev. 3: 612-619.
maleless protein associates with the X chro- Mavilio, F. and nine others. 1983. Molecu-lar
Imbalzano, A. N., Kwon, H., Green, M. R. and mosome to regulate dosage compensation in mechanisms for human hemoglobin switching:
Kingston, R. E. 1994. Facilitated bind-ing of Drosophila. Cell 66: 935-947. Selective undermethylation and expression of
TATA-binding protein to nucleo-some DNA. globin genes in embryonic, fetal, and adult
Kwon, H., Imbalzano, A. N., Khavari, P. A.,
Nature 370: 481-485. erythroblasts. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:
Kingston, R. E.,and Green, M.R. 1994. Nu-
6907-6911.
Jackson, D. A. and Cook, P. R. 1985. Tran- cleosome disruption and enhancement of
scription occurs at a nucleoskeleton. EMBO J. activator binding by a human SW1/SNF complex. McArthur, M. and Thomas, J. O. 1996. A
4: 919-925. Nature 370: 477-481. preference of histone H1 for methylated DNA.
EMBO J. 15: 1705-1714.
Jenuwein, T., Forrester, W. C., Fernandez- Lee, D. Y, Hayes, J. J., Pruss, D. and Wolffe, A.
Herrero, L. A., Laible, G., Dull, M and Grosschedl, P. 1993. A positive role for histone acety-lation McGhee, J. D. and Ginder, G. D. 1979. Spe-cific
R. 1997. Extension of chro-matin accessibility on transcription factor access to nu-cleosomal DNA methylation sites in the vicinity of the
by nuclear matrix at-tachment regions. Nature DNA. Cell 72: 73-84. chick b-globin genes. Nature 280: 419-420.
385: 269-272. Jeppesen, P. and Turner, B. M.
Lee, J. T., Strauss, W. M., Dausman, J. A. and Migeon, B. R. 1971. Studies of skin fibrob-lasts
1993. The in-active X chromosome in female
Jaenisch, R. 1996. A 450 kb transgene displays from ten families with HGPRT defi-ciency, with
mammals is distinguished by a lack of histone
properties of the mammalian X-inactivation reference to X-chromosomal inactivation. Am.
H4 acetylation, a cytogenetic marker for gene
center. Cell 86: 83-94. J. Hum. Genet. 23: 199-209.
expression. Cell 74: 281-289.
Lewin, B. 1994. Chromatin and gene ex- Migeon, B. R. and Jelalian, K. 1977. Evi-dence
Jost, J. P. 1993. Nuclear extracts of chicken
pression: Constant questions, but changing for two active X chromosomes in germ cells
embryos promote an active demethylation of
answers. Cell 79: 397-406. of female before meiotic entry. Nature 269:
DNA by excision repair of 5-methyldeoxycyti-
242-243.
dine. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 4684-4688. Li, E., Beard, C. and Jaenisch, R. 1993. The role
of DNA methylation in genomic im-printing. Migeon, B. R., Wolf, S. F., Axelman, J., Kaslow,
Kafri, T. and seven others. 1992. Develop-men-
Nature 36: 362-365. D.C. and Schmidt, M. 1985. Incom-plete X
tal pattern of gene-specific DNA methylation
chromosome dosage compensation in chorionic
in the mouse embryo and germ line. Genes Dev. Liskay, R. M. and Evans, R. 1980. Inactive X
villi of human placenta. Proc. Natl. Acad. Sci.
6: 705-714. chromosome DNA does not function in DNA-
USA 82: 3390-3394.
mediated cell transformation for the hypoxan-
Karlsson, S. and Nieuhaus, A. W. 1985. De-
thine phosphoribosyltransferase gene. Proc. Migeon, B. R., Schmidt, M., Axelman, J. and
velopmental regulation of human globin genes.
Natl. Acad. Sci. USA 77: 4895-4898. Cullen, C. R. 1986. Complete reactiva-tion of
Annu. Rev. Biochem. 54: 1071-1108.
X chromosomes from human chori-onic villi
Lucchesi, J. C. and Manning, J. E. 1987. Gene
Kay, G. P., Penny, G. D., Patel, D., Ash-worth, with a switch to early DNA repli-cation. Proc.
dosage and compensation in Drosophila mela-
A., Brockdorrf, N. and Rastan, S. 1993. Natl. Acad. Sci. USA 83: 2182-2186.
nogaster. Adv. Genet. 24: 371-29.
Expression of Xist during mouse de-velopment
Migeon, B. R., Holland, M. M., Driscoll, D. J. and
suggests a role in the initiation of X chromosome Ludrus, L. A., M. E. E., de Graaf, A., Mat-tia, E.,
Robinson, J. C. 1991. Programmed demethylation
inactivation. Cell 72: 171-182. den Blaauwen, J. L., Grande, M. A., de Jong, L. and
in CpG islands during human fetal development.
van Driel, R. 1992. Binding of matrix attachment
Keith, D. H., Singersam, J. and Riggs,A. D. 1986. Somatic Cell Molec. Genet. 17:159-168.
regions to lamin Bl. Cell 70: 949-959.
Active X-chromosome DNA is un-methylated
Miller, T. E., Huang, C.-Y. and Pogo, A. O. 1978.
at eight CCGG sites clustered in a guanine-plus- Lyon, M. F. 1961. Gene action in the X chro-
Rat liver nuclear skeleton and ribonu-cleoprotein
cytosine-rich island at the 5' end of the gene for mosome of the mouse (Mus musculus L.)
complexes containing hnRNA. J. Cell Biol.
phosphoglycerate kinase. Mo/. Cell Biol. 6: Nature: 190: 372-373.
76:675-691.
4122-4125.
Mandel, J. L. and Chambon, P. 1979. DNA
Mizzen, C. A. and eleven others. 1996. The
Kellum, R. and Schedl, P. 1991. A position-effect methylation differences: Organ-specific variations
TAF II 250 subunit of TFIID has histone
assay for boundaries of higher order chromatin in methylation pattern within and around
acetyltransferase activity. Cell 87: 1261-
domains. Cell 64: 941-950. ovalbumin and other chick genes. Nucleic Acids
1267.
Res. 7: 2081-2103.
Mohandas, T., Sparkes, R. S., Hellkuhl, B., gene expression in the b-globin disorders. N. Engl. Ryoji, M. and Worcel, A. 1984. Chromatin
Brzeschik, K. H. and Shapiro, L. J. 1980. Ex- J. Med. 328: 81-86. assembly in Xenopus oocytes: In vitro stud-ies.
pression of an X-linked gene from an inac-tive Cell 37: 21-32.
Peterson, C. L. and Tamkun, J. W. 1995. The
human X chromosome in mouse-human hybrid
SW1/SNF complex: A chromatin remodel-ing Samollow, P. B., Ford, A. L. and VandeBerg, J. L.
cells: Further evidence for the non-inactivation
machine? Trends Biochem. Sci. 20: 143-146. 1987. X-linked gene expression in the Virginia
of the steroid sulfatase locus in man. Proc. Natl.
opossum: Differences between the paternally
Acad. Sci. USA 77: 6759-6763. Pevny, L. and seven others. 1991. Erythroid
derived Gpd and Pgk-A loci. Ge-netics 115: 185-
differentiation in chimeric mice blocked by a
Mohandas, T., Sparkes, R. S. and Shapiro, L. J. 195.
targeted mutation in the gene for tran-scription
1981. Reactivation of an inactive human X
factor GATA-1. Nature 349: 257-261. Sanford, J. P., Clark, H. J., Chapman, V. M. and
chromosome: Evidence for X in-activation by
Rossant, J. 1987. Differences in DNA methylation
DNA methylation. Science 211: 393-396. Prioleau, M.-N., Huett, J., Sentenac, A. and
during oogenesis and sper-matogenesis and their
Mchali, M. 1994. Competition between
Monk, M., Boubelik, M. and Lehnert, S. 1987. persistence during early embryogenesis in the
chromatin and transcription complex as-sembly
Temporal and regional changes in DNA mouse. Genes Dev. 1:1039-1046.
regulates gene expression during early develop-
methylation in the embryonic, ex-traembryonic,
ment. Cell 77: 439-449. Sapienza, C., Peterson, A. C., Rossant, J. and
and germ cell lineages dur-ing mouse embryo
Balling, R. 1987. Degree of methylation of
development. Develop-ment 99: 371-382. Pruss, D., Bartholomew, B., Persinger, J., Hayes,
transgenes is dependent on gamete of origin.
J., Arents, G., Moudrianakis, E. and Wolffe, A.
Moore, K. L. 1977. The Developing Human. Nature 328: 251-254.
P. 1996. An asymmetric model for the
Saunders, Philadelphia.
nucleosome: A binding site for link-ing histones Scheuermann, R. H. and Chen, U. 1989. A
Nelson, W. G., Pienta, K. J., Barrack, E. R. and inside the DNA gyres. Science 274: 614-617. developmental-specific factor binds to sup-
Coffey, D. S. 1986. The role of the nu-clear pressor sites flanking the immunoglobulin heavy-
Raich, N., Clegg, C. H., Grofti, J., Romo, P.-H.
matrix in the organization and func-tion of DNA. chain enhancer. Genes Dev. 3: 1255-1266.
and Stamatoyannopoulos, G. 1995. GATA1 and
Annu. Rev. Biophys. Chem. 15: 457-475.
YY1 are developmental repres-sers of the Schlissel, M. S. and Brown, D. D. 1984. The
Nicholls, R. D., Kroll, J. H. M., Butler, M. G., human e-globin gene. EMBO J. 14: 801-809. transcriptional regulation of Xenopus 5S RNA
Karma, S. and Lalande, M. 1989. Ge-netic im- genes in chromatin: The roles of ac-tive stable
Razin, S. V. and Gromova, I. I. 1995. The
printing suggested by maternal heterodisomy in transcription complex and his-tone H1. Cell 37:
channels model of nuclear matrix structure
non-deletion Prader-Willi syndrome. Nature 903-913.
BioEssays 17: 443-450.
342: 281-285.
Sharman, G. B. 1971. Late DNA replication in
Reik, W., Collick, A., Norris, M. L., Barton, S.
Norris, D. P. Patel, D., Kay, G. F., Penny, G. D., the paternally derived X chromosome of female
C. and Surani, M. A. 1987. Genomic im-printing
Brockdorff, N., Sheardown, S. A. and Rastan, S. kangaroos. Nature 230: 231-232.
determines methylation of pater-nal alleles in
1994. Evidence that random and imprinted Xist
transgenic mice. Nature 328: 248-250. Stalder, J., Larsen, A., Engel, J. D., Dolan, M.,
expression is controlled by preemptive
Groudine, M. and Weintraub, H. 1980. Tissue-
methylation. Cell 77: 41-51. Rigaud, G., Roux, J., Pictet, R. and Grange, T.
specific DNA cleavages in the glo-bin chromatin
1991. In vivo footprinting of rat TAT gene:
Orkin S. H. 1992. GATA-binding transcrip-tion domain introduced by DNase I. Cell 20: 451-460.
Dynamic interplay between gluco-corticoid re-
factor in hematopoietic cells. Blood 80: 575-581.
ceptor and a liver-specific fac-tor. Cell 67: Stamatoyannopoulos, J. A., Goodwin, A., Joyce,
Ottolenghi, S. 1992. Developmental regula-tion 977-986. T. and Lowrey, C. M. 1995. NF-E2 and GATA
of human globin genes: A model for cell diffe- binding motifs are required for the formation
Robinson, S. I., Nelkin, B. D. and Vogel-stein, B.
rentiation in the hematopoietic system. In V. E. of DNase-I hypersensitive site-4 of the human
1982. The ovalbumin gene is asso-ciated with
Russo et al., (eds.), Develop-ment: The Molecu- P-globin locus control region. EMBO J. 14:
the nuclear matrix of chicken oviduct cells. Cell
lar Genetic Approach. Springer-Verlag, New 106-116.
28: 99-106.
York, pp. 519-536.
Stief, A., Winter, D. M., Strtling, W. H. and
Rodgers, G. P., Dover, G. J., Vyesaka, N.,
Oudet, P., Gross-Bellard, M. and Chambon, P. Sippel. A. E. 1989. A nuclear DNA attach-ment
Noguchi, C. T., Schecter, A. N. and Nieuhuis, A.
1975. Electron microscope and biochemi-cal element mediates elevated and posi-tion-
W. 1993. Augmentation by erythropoietin of
evidence that chromatin structure is a repeating dependent gene activity. Nature 341: 343-345.
the fetal hemoglobin re-sponse to hydroxyurea
unit. Cell 4: 281-300.
in sickle cell dis-ease. N. Engl. J. Med. 328: 73- Stger, R., Kublicka, P, Liu, C.-G., Kafri, T, Razin,
Paroush, Z., Keshet, I., Yisraeli, J. and Cedar, 80. A., Cedar, H. and Barlow, D. P. 1993. Maternal-
H. 1990. Dynamics of demethylation and specific methylation of the im-printed mouse
Rogers, J. and Wall, R. 1981. Immunoglobu-lin
activation of the a-actin gene in my-oblasts. Igf2r locus identifies the ex-pressed locus as
heavy-chain genes: Demethylation ac-compa-
Cell 63: 1229-1337. carrying the imprinting signal. Cell 73: 61-71.
nies class switching. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Pazin, M. J., Kamakaka, R. T.,and Kadon-aga, 78: 7497-7501. Swain, J. L., Stewart, T. A. and Leder, P. 1987.
J. T. 1994. ATP-dependent nucleosome Parental legacy determines methyla-tion and
Russell, L. B. 1963. Mammalian X chromo-some
reconfiguration and transcriptional activa-tion expression of an autosomal trans-gene: A mole-
action: Inactivation limited in spread and region
from preassembled chromatin tem-plates. cular mechanism for parental imprinting. Cell
of origin. Science 140: 976-978.
Science 266: 2007-2011. 50: 719-727.
Ryan, T. M., Behringer, R. B., Martin, N. C.,
Penny, G. D., Kay, G. F., Sheardown, S. A., Tagaki, N. 1974. Differentiation of X chro-
Townes, T. M., Palmiter, R. D. and Brinster, R.
Rastan, S. and Brockendorff, N. 1996. Re- mosomes in early female mouse embryos. Exp.
L. 1989. A single erythroid-specific DNase I
quirement for Xist in X chromosome inacti- Cell Res. 86:127-135.
super-hypersensitivity site acti-vates high levels
vation. Nature 379:131-137.
of human b-globin gene expression in transgenic Tagaki, N. and Abe, K. 1990. Detrimental effects
Perrine, S. P. and eight others. 1993. A short- mice. Genes Dev. 3: 314-323. of two active X chromosomes on early mouse
term trial of butyrate to stimulate fetal globin development. Development 109: 189-201.
Talbot, D. and Grosveld, F. 1991. The 5' HS2 van der Ploeg, L. H. T. and Flavell, R. D. 1980. Wilson, C. J., Chao, D. M., Imbalzano, A. N.,
of the globin locus control region en-hances DNA methylation in the human g-d-b globin Schnitzler, G. R., Kingston, R. E. and Wilson, E. B.
transcription through the interac-tion of a locus in erythroid and non-ery-throid cells. Cell 1895. An Atlas of the Fertiliza-tion and
multimeric complex binding at two functionally 19: 947-958. Karyogenesis of the Ovum. Macmil-lan, New York.
distinct NF-E2 binding sites. EMBO J. 10:
van Eekelen, C. A. G. and van Venrooij, W. J. Wolf, S. F., Jolly, D. J., Lunnen, K., Fried-mann,
1391-1398.
1981. HnRNA and its attachment to a nu-clear T. and Migeon, B. R. 1982. Methyla-tion of the
Tazi, J. and Bird, A. P. 1990. Alternative chro- protein matrix. J. Cell Biol. 88: 554-563. hypoxanthine phosphoribosyl-transferase locus
matin structure at CpG islands. Cell 60: 909-920. on the human X chromosome: Implications for
Villeponteau, B., Lundell, M. and Martin-son,
X chromo-some inactivation. Proc. Natl. Acad.
Thoma, F., Koller, T. and Klug, A. 1979. In- H. 1984. Torsional stress promotes the DNase
Sci. USA 81: 2806-2810.
volvement of histone H1 in the organiza-tion hypersensitivity of active genes. Cell 39:
of the nucleosome and of the salt-de-pendent 469-478. Wolf, S. F., Dintgis, S., Toniolo, D., Persico, G.,
superstructures of chromatin. J. Cell Biol. 83: Lunnen, K. D., Axelman, J. and Migeon, B. R.
Wandersee, N. J., Ferris, R. C., and Ginder, G. D.
403-427. 1984. Complete concordance between glucose-
1996. Intronic and flanking sequences are
6-phosphate dehydrogenase activ-ity and
Thorburn, A. and Knowland, J. 1993. At- required to silence enhancement of an embryonic
hypomethylation of 3' CpG clus-ters: Implication
tachment of vitellogenin genes to the nu- beta-type globin. Mol. Cell Biol. 16: 236-246.
for X chromosome dosage compensation. Nucleic
cleoskeleton accompanies their activation.
Wang, Z.-Q., Fung, M. R., Barlow, D. P. and Acids Res. 12: 9333-9348.
Biochem. Biophys. Res. Commun. 191: 308-313.
Wagner, E. F. 1994. Regulation of embry-onic
Wolfe, S. L. 1993. Molecular and Cellular Bi-
Trudel, M. and Constantini, F. 1987. A 3' en- growth and lysosomal targeting by the imprinted
ology. Wadsworth, Belmont, CA.
hancer contributes to the stage-specific ex- Igf2/Mpr gene. Nature 372: 464-467.
pression of the human b-globin gene. Genes Dev. Yisraeli, J., Adelstein, R. S., Melloui, D., Nudel,
Weintraub, H. 1984. Histone H1-dependent
1: 954-961. U., Yaffe, D. and Ceder, H. 1986. Muscle-specific
chromatin superstructures and the sup-pression
activation of a methylated chimeric actin gene.
Tsukiyama, T. and Wu, C. 1995. Purifica-tion of gene activity. Cell 38:17-27.
Cell 46: 409-416.
and properties of an ATP-dependent nucleosome
Weintraub, H. 1985. Assembly and propa-gation
remodeling factor. Cell 83: 1011-1020. Young, R. A. 1996. RNA polymerase II
of repressed and derepressed chro-mosomal
holoenzyme contains SWI/SNF regulators
Tsukiyama, T., Becker, P. B. and Wu, C. 1994. states. Cell 42: 705-711.
involved in chromatinremodeling. Cell 84:
ATP-dependent nucleosome disrup-tion at a heat-
Weintraub, H. and Groudine, M. 1976. Chromo- 235-244.
shock promoter mediated by binding of GAGA
somal subunits in active genes have an altered
transcripion factor. Na-ture 367: 525-531. Zaret, K. S. and Yamamoto, K. R. 1984. Re-
configuration. Science 193: 848-856.
versible and persistent changes in chro-matin
Tuan, D., Abeliovich, A., Lee-Oldham, M.
West, J. D., Frels, W. I., Chapman, V. M. and structure accompany activation of a glucocor-
and Lee, D. 1987. Identification of regula-
Papaioannou, V. E. 1977. Preferential ex-pression ticoid-dependent enhancer ele-ment. Cell 38:
tory elements in human b-like globin genes.
of the maternally derived X chro-mosome in the 29-38.
In G. Stamatoyannopoulos and A. W. Nienhuis
mouse yolk sac. Cell 12: 873-882.
(eds.), Developmental Control of Globin Zhao, K., Hart, C. M. and Laemmli, U. K. 1995.
Gene Expression. Alan R. Liss, New York, Wijgerde, M., Gribnau, J., Trimborn, T., Nuez, Visualization of chromosomal do-mains with
pp. 211-220. B., Philipsen, S., Grosvelde, F. and Fraser, P. boundary element-associated factor BEAF-32.
1996. The role of EKLF in human b-globin gene Cell 81: 879-889.
Turner, B. M. 1991. Histone acetylation and
competition. Genes Dev. 10: 2894-2902.
control of gene expression. J. Cell Sci. 99: 13-20. Zuccotti, M. and Monk, M. 1995. Methyla-tion
of the mouse Xist gene in sperm and eggs
correlates with imprinted Xist ex-pression and
paternal X-inactivation. Nat. Genet. 9: 316-320.
Controle do desenvolvimento
pelo processamento e traduo
diferencial do RNA
12
Entre a concepo
E a criao...
Entre a potncia
E a existncia
Entre a essncia
A REGULAO DA EXPRESSO GNICA no est restrita transcrio dife-
rencial do DNA. Mesmo que um determinado transcrito de RNA seja sinte-
tizado, no h garantia que ele ir criar uma protena funcional na clula. Para
se formar uma protena ativa, o RNA tem que ser: (1) processado em um RNA mensa-
geiro pela remoo de ntrons, (2) trasladado do ncleo para o citoplasma, e (3) tradu-
E a origem zido pelo aparelho sintetizador de protenas. Em alguns casos, a protena sintetizada
Cai a Sombra. no est em sua forma madura e (4) tem que ser modificada, aps a traduo, para
T. S. ELIOT (1936)
tornar-se ativa. A regulao pode ocorrer em qualquer um desses passos durante o
desenvolvimento.
No h descanso para o mensageiro at
a mensagem ser entregue.
JOSEPH CONRAD (1920) Q CONTROLE DO DESENVOLVIMENTO
PELO PROCESSAMENTO DIFERENCIAL DE RNA
A essncia da diferenciao a produo de diferentes conjuntos de protenas em

diferentes tipos de clulas. Nas bactrias, a expresso diferencial de genes pode ser
efetuada a nvel da transcrio, traduo e modificao das protenas. Nos eucariotos,
porm, outro nvel possvel de diferenciao existe, a saber, o controle ao nvel do
processamento e transporte de RNA. Este captulo ir apresentar duas maneiras pelas
quais o processamento diferencial do RNA pode regular o desenvolvimento. A primei-
ra envolve a censura pela qual transcritos nucleares podem ser processados em
mensagens citoplasmticas. Aqui, diferentes clulas podem selecionar diferentes trans-
critos nucleares para ser processados e colocados no citoplasma como o RNA mensa-
geiro. O mesmo pool de transcritos nucleares pode, com isso, dar origem a diferen-
tes populaes de mRNAs citoplasmticos em diferentes tipos de clulas. O segundo
modo de processamento diferencial do RNA se refere a emendar precursores de mRNA
em protenas diferentes usando diferentes combinaes de xons em potencial. Se um
precursor de mRNA deve passar a ter cinco xons em potencial, uma clula poderia
usar xons 1, 2, 4 e 5, uma outra clula poderia utilizar xons 1, 2 e 3, e ainda outra clula
poderia usar uma combinao diferente. Assim, um gene pode criar uma famlia de
protenas relacionadas.
461
Controle do desenvolvimento precoce

pela seleo de RNA nuclear
Em fins da dcada de 70, numerosos investigadores acharam que o mRNA no era o
transcrito primrio dos genes. Ao contrrio, os genes transcreviam um RNA nuclear
(nRNA), s vezes chamado RNA nuclear heterogneo (hnRNA) devido ao seu amplo
espectro de tamanhos. Esse nRNA era freqentemente vrias vezes mais comprido
que a mensagem, e parecia decair mais rapidamente. Hoje sabemos que o RNA nuclear
contm ntrons que so excisados durante a passagem do ncleo para o citoplasma.
Ainda, estudos em ourios-do-mar sugeriram que transcritos inteiros so degradados
em algumas clulas e processados para mRNA em outras. Em outras palavras, esses
estudos sugeriram que diferentes tipos celulares podem estar transcrevendo o mesmo
tipo de RNA nuclear, mas que diferentes subconjuntos dessa populao esto sendo
processados para mRNA em diferentes tipos de clulas. [RNA1.html]
Kleene e Humphreys (1977, 1985) mostraram que o RNA nuclear de larvas pluteus
intactas e de blstulas eram (dentro do erro experimental) idnticos. Ambos se ligavam
aos mesmos 30% do genoma. Quando a complexidade foi analisada, o nRNA de clu-
las da blstula ligava-se a 15 porcento desse DNA (i.e., a 30% do DNA de cpia nica
do genoma). Semelhantemente, o nRNA do estgio plteo, mesmo quando presente
em grande excesso, tambm se ligava aos 30 porcentos do DNA de cpia nica. Sero
esses dois conjuntos de seqncias de DNA os mesmos, ou sero diferentes? Essa
questo foi examinada misturando-se RNAs nucleares de blstula e plteo e adicio-
nando-os ao DNA de cpia nica desnaturado. Se as seqncias fossem completa-
mente diferentes, poder-se ia esperar 30 porcento do DNA estar combinado (i. e., 60
porcento do genoma estaria codificando para o conjunto combinado de mensagens
de blstula e plteo). Se fossem idnticos, poder-se ia esperar 15 porcento do DNA
estar ligado. O resultado est mostrado na Figura 12.1. A mistura ligou-se somente a 15
porcento do DNA. As seqncias de nRNA de blstula e plteo se ligavam ao mesmo
DNA. Dentro do erro experimental, o nRNA de clulas da blstula e do plteo eram
idnticos. Wold e colegas (1978) estenderam essas observaes mostrando que se-
qncias presentes no RNA mensageiro da blstula (isolado de polissomos em tradu-
o) mas ausentes no mRNA da gstrula e do tecido adulto estavam, apesar disso,
presentes no RNA nuclear da gstrula e do tecido adulto. Esses resultados foram
interpretados como indicando que mais genes so transcritos no ncleo do que aque-
les permitidos se tornarem mRNAs no citoplasma (Figura 12.2; Tabela 12.1).
Porcentagem de [3H]DNA nos hbridos RNA:DNA
Figura 12.1
Hibridizao de RNA nuclear de embries de
ourio-do-mar com [3H]DNA de cpia nica.
RNA de
DNA de cpia nica radioativo foi misturado blstula + plteo
com RNA de blstula, RNA de plteo ou RNA
da mistura de blstula e plteo. As misturas RNA de blstula
foram incubadas para permitir o pareamento de
todas as seqncias complementares. (O eixo
RNA Cot a concentrao do RNA vezes o RNA de plteo
tempo deixado para incubar). Nos trs casos,
cerca de 15 porcento do DNA hibridizou com
o RNA. (Segundo Kleene e Humphreys, 1977.)
CAPTULO 12 Processamento diferencial do RNA e Traduo 463
Tabela 12.1 Comparaes entre tecidos das seqncias de genes estruturais em RNA mensageiros e RNA nucleares
Reao normalizada Reao normalizada Reao normalizada

com mRNA parental com outro mRNA com nRNA
Pista referencial
complementar a mRNA % mRNA % nRNA %
OURIO-DO-MAR
mRNA de blstula (DNA de cpia nica) Blstula 100 Intestino 12 Intestino 97
Celomcito 13 Celomcito 101
CAMUNDONGO
mRNA cerebral (cDNA total) Crebro 100 Rim 78 Rim 102
mRNA cerebral (cDNA Crebro 100 Rim 56 Rim 100
representando mensagens raras)
Fonte: Davidson e Britten, 1979.
(A)
Complexidade do RNA (106 nucleotdeos)
mRNA das blstula

Porcentagem de [3H]DNA reativo nos hbridos RNA:DNA
RNA do citoplasma intestinal
Figura 12.2
Seqncias encontradas no RNA nuclear de
(B) (C) vrios tipos de clulas mas no no mRNA. (A)
Clula tipo 1 Especificidade do cDNA mensageiro da
blstula do ourio-do-mar. Hibridizao do
cDNA mensageiro da blstula (cDNA ao
mRNA da blstula) com mRNA de blstula e
RNA do citoplasma intestinal mostra que os
mRNAs so muito diferentes. (B) A hibridiza-
o do cDNA mensageiro da blstula com
RNAs nucleares (nRNAs) de gstrulas e
celomcitos adultos e clulas intestinais suge-
re a identidade de todos os RNAs nucleares.
Clula tipo 2 (C) Modelo especulativo baseado no proces-
samento diferencial do RNA. Em ambos tipos
celulares, os mesmos RNAs (a, b, c, d, e) so
nRNA do celomcito transcritos, mas em um tipo celular, as seqn-
nRNA da gstrula cias c, d e e so processadas para mRNA
nRNA do intestino citoplasmtico, enquanto em outro tipo de c-
lula, seqncias a, b e c so processadas e envi-
adas para o citoplasma. (A e B segundo Wold
et al., 1978.)
Figura 12.3
Ensaios para deteco do acmulo de uma
mensagem no citoplasma. (A) Ensaio de pro- Dividir o tecido
teo de ribonuclease. RNA isolado e puri- em duas amostras
ficado de tecido embrionrio. Uma sonda de
RNA radioativo sintetizada, complementar
(A) (B)
a um pequeno trecho do RNA que est sendo Ensaio de proteo de RNase Ensaio run-on nuclear
analisado. Se o RNA especfico estiver pre-
sente, a sonda radioativa se ligar a ele. RNase
adicionada em seguida, destruindo todo o
RNA exceto aquele da regio de dupla fita
que contm o oligonucleotdeo radioativo.
Esse pode ser submetido eletroforese em gel Isolar RNA Isolar ncleos
e auto-radiografado. (B) Ensaio nuclear run-
on (isola o ncleo e usa marcador radioativo Ncleo
para marcar o transcrito). Ncleos so isola-
dos de tecido embrionrio. UTP radioativa
adicionada aos ncleos. O mRNA que est
sendo sintetizado incorpora a marca radioati-
va enquanto continua sendo transcrito. O
mRNA pode ser isolado e hibridizado com
seqncias complementares de DNA imobi-
lizadas em papel. Se o transcrito radioativo
ligar, ser detectado por auto-radiografia. RNA polimerase
Adicionar
oligonucleotdeo Transcrito nascente
radioativo de RNA
Adicionar UTP radioativo
Ajunte RNase; RNA

degradado
Poro radioativa
de RNA
Isolar RNA; hibridizar

para DNA por
transferncia Southern
Eletroforese em gel
Auto-radiografia Filtro de papel Auto-radiograma

Esse controle ps-transcricional do processamento do RNA foi confirmado para (A)

mensagens especficas por ensaios de proteo de ribonuclease e ensaios run-on
(isola-se o ncleo e usa-se marcador radioativo para marcar o transcrito) de transcri-
o nuclear. O ensaio de proteo de ribonuclease um teste sensvel para determinar
a presena (ou ausncia) de uma determinada seqncia em uma populao de RNAs ntron Cyllla
(Figura 12.3). Produz-se um RNA relativamente pequeno, marcado radiotivamente,
que complementar a uma seqncia especfica do RNA que se deseja detectar. Essa
xon Cyllla
sonda de RNA misturada com o RNA celular que est sendo testado para a presen-
a de uma determinada sequncia. Se a seqncia estiver presente, a sonda se liga
ela. Ento, ribonuclease (RNase, uma enzima que digere RNA de cadeia nica) adicio- Ectoderma Endoderma +
nada mistura para clivagem e remoo de todo o RNA que no est hibridizado. O mesoderma
Vetor
RNA de dupla fita formado pela hibridizao dos RNAs radioativo e celular no (B)
clivado. Esse RNA de dupla fita pode ser corrido em um gel e detectado por auto- Spec1
radiografia. Se a seqncia de RNA estiver presente, uma banda de um determinado
tamanho dever aparecer na auto-radiografia. Gagnon e colaboradores (1992) realiza-
ram essa anlise nos transcritos dos genes Spec1 e CyllIa do ourio-do-mar Stron-
gylocentrotus purpuratus. Esses genes codificam protenas ligantes de clcio e actina, Figura 12.4
respectivamente, que so expressas somente no ectoderma aboral da larva plteo. Regulao da expresso do gene especfico do
Usando sondas que se ligam a um xon e a um ntron, eles acharam que esses genes ectoderma por processamento de RNA. (A)
estavam sendo transcritos no apenas nas clulas ectodrmicas mas tambm no me- Auto-radiografias do ensaio de proteo de
ribonuclease. A coluna esquerda representa
soderma e endoderma. A anlise do gene CyIIIa mostrou que a concentrao de
RNA isolado do tecido ectodrmico da gstrula;
ntrons era a mesma tanto no ectoderma da gstrula como nas amostras de mesoderma a coluna do lado direito representa RNA isola-
e endoderma, sugerindo que esse gene estava sendo transcrito com a mesma veloci- do dos tecidos endodrmicos e mesodrmicos.
dade em todos os tipos celulares (Figura 12.4A). O xon, porm, se acumulava no A banda superior o RNA protegido por uma
ectoderma (que expressa a protena), mas no no mesoderma ou endoderma (que no sonda que se liga a uma seqncia de ntron
o fazem). Assim, enquanto os genes parecem ser transcritos com velocidades seme- (que deve ser encontrada somente no ncleo)
lhantes no ectoderma e outros tecidos, o mRNA para essas protenas (representado de Cyllla. A banda inferior representa o RNA
pelos xons) se acumula somente no ectoderma. protegido por uma sonda complementar a uma
Essa concluso foi confirmada quando ncleos foram isolados de tecidos da seqncia de xon. (B) Resultados de um en-
saio run-on de um transcrito nuclear. RNAs
gstrula. UTP radioativo permitiu aos pesquisadores seguir qualquer RNA que esti-
radioativos sintetizados in vitro por ncleos
vesse sendo transcrito no momento em que os ncleos foram isolados. Tanto os ectodrmicos (esquerda) e ncleos mesodr-
ncleos do ectoderma como endoderma/mesoderma estavam transcrevendo o gene micos e endodrmicos(direita) foram hibridi-
Spec1 no estgio de gstrula (Figura 12.4B). Assim, a expresso dos genes Spec1 e zados com um ntron do gene Spec1 afixado a
CyIIIa est no nvel do processamento de RNA na gstrula. Mais tardiamente no um filtro. Ncleos tanto do ectoderma como
desenvolvimento (no estgio plteo), esses genes ficam sob o controle transcricional, endoderma/mesoderma estavam transcrevendo
no qual a transcrio dos genes cessa nas clulas que no esto expressando essas esse gene na gstrula do ourio-do-mar, apesar
protenas. Parece, assim, que o processamento de RNA tem um papel majoritrio no da mensagen Spec1 ser vista somente nas clu-
controle da expresso gnica em embries precoces do ourio-do-mar. las do ectoderma. (de Gagnon et al., 1992, cor-
tesia de R. e L. Angerer.)
Os mecanismos de emenda de RNA: Spliceosomes
A emenda do pr-mRNA mediada atravs de uma partcula nuclear 60S chamada
spliceosome. O spliceosome composto de cinco RNAs nucleares pequenos
(sn) (os snRNAs U1, U2, U4, U5 e U6) e numerosas protenas. Essas protenas fre-
qentemente se associam aos snRNAs para formar pequenas partculas nucleares de
ribonucleoprotenas (snRNPs), assim chamadas por seus snRNAs associados (tal
como o snRNP U2). O spliceosome no existe como um complexo pr-formado
boiando no ncleo, mas reunido no pr-mRNA por um processo de mltiplas etapas.
O local da emenda 5 primeiramente identificado pelo snRNA U1 por complementari-
dade de bases. O local da emenda 5 no comeo de cada ntron tem uma seqncia
consensual que reconhecida pelo snRNA U1 (Figura 12.5). O final 3 do ntron
reconhecido pelo fator auxiliar snRNA U2, U2AF (Ruskin et al., 1988; Wu e Maniatis,
1993). Esse reconhecimento do local da emenda estabelece um complexo de compro-
metimento onde outros snRNAs iro se associar com essas protenas e finalmente
catalisar a remoo do ntron (Hodges e Beggs, 1994). [RNA2.html]
COMPLEXO DE COMPROMETIMENTO O pr-mRNA vertebrado mdio consiste de xons relativamente curtos (em mdia
cerca de 140 bases), separados por ntrons que so usualmente muito mais compridos.
ntron
Qualquer mecanismo coordenador das emendas em um RNA multi-xon tem que pro-
ver uma explicao de como xons pequenos so conservados e separados dos ntrons
grandes. Berget (1995) props a noo que a emenda feita de um terminal do xon
para o outro, em vez de atravs do ntron. Essa hiptese da definio do xon sustenta
que o tamanho reduzido dos xons permite ao snRNA U2 (no terminal 5 do xon)
conectar-se com o snRNA U1 no outro terminal. Seguindo essa definio dos limi-
tes do xon, os vrios xons so ajuntados.
O processamento de mRNA maduro tambm requer a adio de uma cauda poli
(A) ao mRNA nuclear. O terminal 3 da maioria dos mRNA eucariticos (mensagens
xon de histonas sendo as nicas excees conhecidas) formado pela clivagem do
xon
transcrito original e adio de segmentos de resduos de adenilato. A regio 3
no-traduzida da maioria dos precursores do mRNA contm a seqncia AAUAAA,
que essencial para a clivagem do RNA, 10 a 30 bases a jusante desse stio
(Proudfoot e Brownlee, 1976). Mutaes nessa seqncia previnem a formao do
SPLICEOSOME
terminal 3 do mRNA (Wickens e Stephenson, 1984; Orkin et al., 1985). Outro ele-
xon
mento de atuao cis uma seqncia rica em GU ou U, usualmente localizada
mais a jusante (3) da clivagem. Essa seqncia parece ser crtica para a clivagem
eficiente do RNA nuclear no stio de processamento 3 (McDevitt et al., 1984;
Christofori e Keller, 1988). [RNA3.html]
Emenda alternativa do RNA:

Criando protenas alternativas a partir do mesmo gene
xon
Um Gene, Muitas Protenas Relacionadas
Em adio deciso sobre quais RNAs tero entrada no citoplasma, a regulao

do desenvolvimento pelo processamento do RNA tambm pode ocorrer pela emenda
xon xon alternativa do RNA. A maioria dos pr-mRNAs mamferos contm numerosos
ntrons. Pelo seu reconhecimento seletivo pode-se ter uma emenda alternativa do
RNA. Isso pode ocorrer de vrias maneiras (ver Figura 12.6). As clulas podem
diferir em sua habilidade de reconhecer o stio de emenda 5 ou o stio de emenda
3. Ou algumas clulas poderiam no reconhecer uma seqncia como um ntron,
conseqentemente retendo-o dentro da mensagem. Se uma clula vai reconhecer
ntron
os stios das emendas, depende de certos fatores no ncleo que podem interagir
com esses stios e competir ou cooperar com as protenas que normalmente os
reconhecem. O stio de emenda 5 reconhecido pelo snRNA U1, mas somente
com a cooperao de uma protena chamada fator 2 de emenda (SF2; fator de
emenda alternativa). Em pelo menos alguns casos, a escolha entre os stios da
Figura 12.5 emenda 5 alternativo influenciada pela razo da protena SF2 e outra protena,
Emendar o ntron e conectar os xons adjacen-
hnRNP-A1. Em geral, um excesso de SF2 resulta na utilizao do stio de emenda 5
tes. No complexo de comprometimento le-
vando formao do spliceosome, as duas
proximal (mais prximo), enquanto um excesso de hnRNP-A1 resulta na utilizao
junes de emenda 5 e 3 no ntron foram pelo spliceosome do stio de emenda 5 distal (mais distante) (Mayeda e Krainer,
reconhecidas pelo snRNA U1 e pela protena 1992). A escolha de stios de emenda 3 alternativos muitas vezes controlada por
U2AF, respectivamente. Ambas so estabili- aquele stio de emenda que melhor pode ligar U2AF.
zadas por protenas da famlia SR. As prote- O que um ntron no ncleo de uma clula pode ser um xon no ncleo de
nas U2AF e SR so consideradas ser substitu- outra clula. Processamento alternativo de RNA foi encontrado controlando as
das por riboprotenas nucleares pequenas formas alternativas de expresso de mais de 100 protenas. Deleo de certos
(snRNPs) que facilitam a clivagem do ntron e xons em potencial em algumas clulas mas no em outras permite a um gene criar
a ligao de dois xons adjacentes. (Segundo
uma famlia de protenas estreitamente relacionadas. Em vez de um gene-um
Hodges e Beggs, 1994.)
polipeptdeo pode-se ter um gene-uma famlia de protenas. Por exemplo, o precur-
sor mRNA para a molcula de adeso N-CAM pode ser alternadamente processa-
do para mais de 100 formas diferentes, dependendo de quais xons so includos
no mRNA. Embora somente quatro formas principais dessa protena so usual-
EMENDA CONSTITUTIVA
TIPOS SELECIONADOS DE EMENDA ALTERNATIVA

xons emendados
Figura 12.6
Diagrama esquemtico da emenda alternativa do pr-mRNA. xons esto representados
como caixas sombreadas, xons emendados alternativamente esto representados por caixas
hachuradas, e ntrons esto representados por linhas grossas. Por conveno, a trajetria da
emenda mostrada por linhas finas em forma de V. (A) As bordas xon-ntron, mostrando
as seqncias consensuais nos terminais 3 e 5 do ntron. R representa qualquer purina, Y
qualquer pirimidina, e N qualquer nucleotdeo. (B) a emenda de um pr-mRNA com 5
xons. (C-F) Emenda alternativa por (C) stios de emenda 5 alternativa, (D) stio de emenda
3 alternativa (em alguns casos isso iria prover terminais diferentes ao mRNA, e ambos
stios necessitariam de uma seqncia de poliadenilao, aqui mostrada como An), (E) uma
deciso emenda/no emenda, e (F) incluso de xon/ excluso de xon. (Segundo Horowitz
e Krainer, 1994.)
mente vistas em qualquer embrio, algumas das formas menos importantes so

vistas no crebro e no corao (Zorn e Krieg, 1992). De maneira semelhante, a
emenda alternativa do RNA permite que o gene para tropomiosina codifique
tanto as formas do msculo esqueltico como as do fibroblasto dessa protena. O
RNA nuclear para a tropomiosina contm 11 xons. xons 1-5, 8 e 9 so comuns
a todos os RNAs expressos por esse gene. xons 6 e 11 so tambm usados em
fibroblastos e clulas de msculo liso, enquanto xons 7 e 10 so usados na
sntese da tropomiosina do msculo esqueltico (Figura 12.7). Nos msculos
lisos e nos fibroblastos formada uma protena que impede spliceosomes de se
formarem nos stios de emenda especficos dos msculos esquelticos (Guo et al.,
1991; dOrval et al., 1991). No sistema nervoso, a diversidade do canal de K+ tem
um papel importante na regulao da excitabilidade da membrana. Essas diferen-
as cinticas foram correlacionadas com a emenda alternativa de precursores de
mensagens do gene shaker (Mottes e Iverson, 1995).
Figura 12.7 mRNA da tropomiosina

Diagrama esquemtico da emenda alternati- especfico de msculo estriado
va do RNA no precursor do mRNA da -
tropomiosina. No msculo esqueltico, xons
possveis 6 e 11 so evitados (e transforma-
dos em ntrons), enquanto em fibroblastos e Processamento de
clulas do msculo liso, xons possveis 7 e clula muscular
10 so tornados ntrons, e 6 e 11 so usados
como xons.
Processamento de fibroblasto, Precursor RNA nuclear
clula do msculo liso de tropomiosina
mRNA de tropomiosina de
fibroblasto e msculo liso
Em alguns casos, as propriedades das protenas emendadas alternativamente po-

dem ter conseqncias importantes durante o desenvolvimento. As cinco diferentes
protenas fibronectinas humanas so geradas por um par de genes idnticos da
fibronectina. As formas diversas (e em alguns casos especficas de rgos) da
fibronectina vm de mRNAs diferentes gerados pela emenda de diferentes xons dos
precursores do mRNA da fibronectina (Tamkun et al., 1984; Hynes, 1987). Algumas
formas de fibronectina so encontradas nas trajetrias sobre as quais migram clulas
embrionrias, enquanto outras no o so, o que sugere que formas de fibronectina
emendadas alternativamente tm diferentes funes embrionrias (ffrench-Constant e
Hynes, 1989). Algumas isoformas emendadas do fator 8 de crescimento fibroblstico
(FGF8) somente interagem com receptores gerados da emenda particular de RNA.
Assim, o FGF8b (uma das sete variantes emendadas de FGF8) se ligar a receptores
FGF 2c e 3c, mas no aos receptores FGF 1b, 1c, 2b ou 3b. No camundongo em
desenvolvimento, o FGF8b produzido do sulco ectodrmico apical no broto dos
membros e dos arcos branquiais e fossas nasais da cabea. Em cada um desses locais,
o mesnquima subjacente expressa o receptor FGFR2c (Fotografia de rosto, Crossley
e Martin, 1995; MacArthur et al., 1995).
Processamento Alternativo de RNA e Determinao Sexual em Drosophila

A emenda alternativa do RNA pode gerar famlias de protenas cujos membros
podem ter diferentes funes. Nada previne tal emenda alternativa de produzir prote-
nas de fatores de transcries alternativas, e essa tcnica foi usada pela Drosophila
para controlar sua diferenciao sexual. Alm disso, a diferenciao sexual em
Drosophila regulada por uma cascata de eventos processadores de RNA (veja
Baker et al., 1987; MacDougall et al., 1995).
Conforme veremos no Captulo 20, o desenvolvimento do fentipo sexual em
Drosophila mediado por uma srie de genes que convertem a relao cromosso-
mo X-autossomo em uma clula de macho ou uma de fmea. Quando a relao 1
(i.e., quando existem dois cromossomos por clula diplide), o embrio se desen-
volve em uma mosca fmea. Quando a relao de 0.5 (i.e., quando a mosca XY
com apenas um cromossomo X por clula diplide), o embrio se desenvolve em
um macho (Figura 12.8).
Um dos genes chave nessa trajetria o transformer (tra1). Esse gene neces-
srio para produo de fmeas, e sua perda resulta em moscas macho, independen-
temente da relao cromossmica. Atravs de todo o perodo larval, o gene tra1
sintetiza ativamente um transcrito que processado em um mRNA geral (que
encontrado tanto em fmeas como em machos), ou em um mRNA especfico para

XX;AA XY;AA
fmeas (Figura 12.9). Somente fmeas contm a mensagem emendada alternativa-
mente. O mRNA geral encontrado tanto em machos como em fmeas contm um
cdon de parada precoce (UGA) no segundo xon, e a pequena protena produzida
por esse mRNA no funcional. Portanto, o transcrito no-especfico geral no est Sex lethal Sex lethal
relacionado com a determinao do sexo (Belote et al., 1989). Porm, na mensagem
mRNA especfico mRNA no
especfica para fmeas, esse cdon UGA est em um ntron que desemendado de fmea funcional
durante a formao do mRNA e no interfere com a traduo da mensagem. Em
outras palavras, o transcrito fmea o nico transcrito funcional desse gene. De transformer transformer
fato, quando o cDNA desse transcrito especfico de fmea incorporado nos geno-
mas de moscas XY, essas moscas se tornam fmeas. A protena codificada pelo mRNA especfico mRNA no
de fmea funcional
mRNA especfico de fmea parece ser um peptdeo rico em arginina com comprimen-
to de 196 aminocidos (Boggs et al., 1987). Doublesex Doublesex
O que faz o gene transformer (tra1) processar um transcrito especfico de
fmea em clulas XX e no em clulas XY? Parece que a emenda alternativa espe- mRNA especfico mRNA especfico
cfica do sexo do nRNA tra1 envolve competio entre dois possveis stios de de fmea de macho
emenda 3 (aceptores) no ntron. Sosnowski e seus colegas (1989) apresentaram
evidncia de que essa competio alterada pela presena ou ausncia de um
produto funcional do gene Sex-lethal. O gene Sex-lethal (Sxl) um dos primeiros Fentipo Fentipo
genes na via do fentipo sexual, e age antes do transformer. Se a relao X-para- feminino masculino
autossomo for 1, a protena funcional SXl ser produzida*. Esse gene no produz
Figura 12.8
uma protena funcional em embries XY ou larvas. Quando o gene Sex-lethal
Determinao do sexo em Drosophila. Esse
funcional, o gene transformer produz tanto o transcrito geral como o transcrito esquema simplificado mostra que a razo X-
especfico de fmea e a mosca se tornar uma fmea. Se o gene Sex-lethal for autossomo monitorada pelo gene Sex-lethal.
deletado ou mutado, o gene transformer s produzir o transcrito no-funcional e Se esse gene estiver ativo, ele processa o pr-
a mosca se tornar um macho. Parece que o produto do gene Sex-lethal controla mRNA transformer em uma mensagem funci-
qual dos stios de emenda 3 est sendo usado. onal especfica de fmea. Na presena da pro-
H duas maneira principais pelas quais a protena Sex- lethal poderia controlar tena Transformer especfica de fmea, o trans-
qual stio de emenda 3 usado. Uma, bloquear o uso do stio geral do aceptor de crito do gene doublesex processado de forma
modo que somente o stio alternativo aceptor especfico de fmea pode ser usado. A especfica de fmea, levando produo do
fentipo feminino. Se o gene transformer no
outra maneira ativar o stio aceptor especfico de fmea de um modo positivo.
produzir um produto especfico de fmea (i.e.,
Valcrcel e colegas (1993) mostraram que a protena Sex-lethal inibe a emenda no se o gene Sex-lethal no for ativado), o trans-
stio aceptor (no especfico de fmea), ligando-se especificamente ao seu trato crito double-Sex emendado da maneira espe-
polipirimidina. Isso bloqueia a ligao de um fator de emenda, U2AF, ao stio geral, cfica de macho, levando obteno de um
levando-o a usar o stio de menor afinidade especfico de fmea. Portanto, parece fentipo masculino. (Os detalhes dessa trajet-
que se o stio de emenda aceptor geral 3 do transformer estiver bloqueado (seja por ria sero discutidos no Captulo 20.)
mutao ou pela protena Sex-lethal), o stio aceptor alternativo especfico ser
usado (veja Figura 12.9). O resultado ser uma mosca fmea.
A protena Transformer-1 , ela prpria, um fator de emenda alternativo, e regula
a emenda do transcrito nuclear do gene doublesex (dsx). Esse gene necessrio
para a produo de ambos fentipos sexuais, e mutaes de dsx podem reverter o
fentipo esperado, fazendo com que embries XX se tornem machos, ou embries
XY se tornem fmeas. Durante o estgio de crislida, doublesex produz um transcri-
to que pode ser processado de duas maneiras alternativas. Pode gerar um mRNA
especfico de fmea ou um mRNA especfico de macho (veja Figura 12.9; Nagoshi et
al., 1988). Em fmeas e machos, os trs primeiros xons so os mesmos. Porm, os
quartos xons so diferentes. O RNA especfico de macho deleta uma grande seo
do RNA precursor que inclui o xon especfico de fmea.
Tian e Maniatis (1992) mostraram que o processamento especfico do sexo do pr-
mRNA dsx envolve a ativao do stio de emenda 3 especfico de fmea pelos produ-
tos dos genes transformer e transformer-2. A polipirimidina (rica em U/C) do trato em
*A protena Sxl ela prpria um produtor de um complexo tipo de emenda alternativa do RNA.
Mais ser dito sobre isso no Captulo 20.
Stios de emenda alternativa 3
xon ntron ntron xon

gene tra1
Cdon de parada Cdon de parada
FMEA MACHO
Protena Sx1 funcional Sem protena Sx1 funcional
pr- pr-
mRNA mRNA
tra1 tra1
Sx1 bloqueia ligao de U2AF se liga s regies
U2AF (e spliceosome) ao ricas em polipirimidina
stio mais eficiente; assim, para stios de emenda 3
stio de emenda 3 menos
eficiente usado
mRNA transformer
RNA Transformer (macho e fmea)
feminino constitutivo produz
protena truncada,
no-funcional
Protena transformer Protena degrada
Gene
doublesex
Stio de emenda 3 ineficiente
Pr-mRNA Pr-mRNA
doublesex doublesex
Protenas Tra ajudam ligao

de U2AF ao stio ineficiente
mRNA doublesex mRNA doublesex

especfico de fmea especfico de macho
Protena
Doublesex (DSX) Protena
especfica de fmea Doublesex (DSX)
especfica de macho
Ativa genes especficos de fmea Ativa genes especficos de macho

Suprime genes especficos de macho suprime genes especficos de fmea
Figura 12.9
Representao esquemtica de eventos de emenda alternativa na trajetria da determinao

do sexo em Drosophila. A trajetria feminina est esquerda, a trajetria masculina est
direita, e os genes transformer-1 e doublesex esto no centro. Na trajetria feminina, a
protena Sxl ativa produzida quando a razo X-para-autossomo for 1. (Como isso ocorre
ser discutido no Captulo 20.) A protena Sxl ativa bloqueia o stio usual de emenda 3 do
primeiro ntron do pr-mRNA tra1. Isso obriga o spliceosome a usar um outro stio de
emenda 3. Na trajetria masculina, no produzida a protena Sxl, e o spliceosome usa o
stio mais eficiente. Isso conduz incorporao no mRNA de seqncias que codificam
precocemente um cdon de parada precoce (UAG) na mensagem. O peptdeo truncado
produzido dessa mensagem no parece ter uma funo. como se o gene fosse inativo. Na
trajetria feminina, a protena Tra1 ativa se combina com a protena Tra2 para estabilizar
U2AF, e a assemblia de spliceosome no stio de emenda 3 do terceiro ntron do pr-
mRNA doublesex. Isso leva formao de um mRNA contendo o quarto xon. Em machos,
a ausncia da protena Tra1 previne a ligao de U2AF e a assemblia do spliceosome
nesse stio. Em vez disso, xons 5 e 6 so utilizados no mRNA masculino. (Segundo
MacDougall et al., 1995.)
frente ao xon 4 no precursor do mRNA doublesex geralmente um ligante fraco de

U2AF, porque ele quebrado por um grupo de resduos de purina (representado pela
linha serrilhada na Figura 12.9). Portanto, ele usualmente no um eficiente stio de
emenda 3. Porm, na presena das protenas Transformer (e Transformer 2), esse stio
torna-se um stio utilizado eficientemente (Tian e Maniatis, 1993). Isso significa que o
stio de emenda ser utilizado em fmeas (que tm as protenas Transformer ativas),
mas no em machos (que no as tm). O mRNA doublesex masculino no ter o xon
4, enquanto o transcrito feminino o tem. As protenas Doublesex produzidas por esses
mRNAs so ambas fatores de transcrio. Alm disso, elas reconhecem a mesma
seqncia de DNA. Porm, enquanto a protena Doublesex feminina ir ativar inten-
sificadores especficos de fmea (como aqueles que produzem protenas do vitelo), as
protenas Doublesex masculinas iro inibir a transcrio desses mesmos intensifica-
dores (Coschigano e Wensink, 1993; Jursnich e Burtis, 1993). Reciprocamente, a pro-
tena Doublesex feminina pode inibir a transcrio a partir de genes que seriam, de
outra maneira, ativados pela protena Doublesex masculina. A pesquisa sobre a
determinao do sexo em Drosophila mostra que o processamento diferencial do
RNA tem papel extremamente importante ao longo de todo o desenvolvimento.
Uso Disseminado do Processamento

de RNA para o Controle da Expresso Gnica
Ainda sabemos relativamente pouco sobre os mecanismos de processamento alterna-

tivo do mRNA ou sobre as vias pelas quais algumas clulas processam transcritos que
outras clulas no seguem. O mecanismo subjacente a tal processamento diferencial
de RNA pode nos fornecer uma viso sobre a verdadeira essncia da diferenciao
celular e da determinao embrionria.
Q REGULAO DA TRADUO DOS

PROCESSOS DESENVOLVIMENTAIS
Aps o RNA mensageiro ter sido transcrito, processado e exportado do ncleo, ele
ainda precisa ser traduzido para formar a protena codificada no genoma. Nas sees
seguintes, iremos ver que a regulao a nvel da traduo um mecanismo extrema-
mente importante no controle da expresso gnica. Nesses casos, a mensagem j est
presente no citoplasma mas pode ou no ser traduzida, dependendo de certas condi-
es celulares. Assim, o controle da traduo da expresso gnica pode ser usado
quando uma exploso de sntese protica necessria imediatamente (como no caso
de ovos recm-fecundados), ou pode ser usado como um mecanismo afinado para
assegurar que uma quantidade muito precisa de protena seja produzida do suprimen-
to disponvel de mensagens (como a sntese de hemoglobina). Iremos tambm ver que
h vrias maneiras para realizar o controle da traduo e que clulas diferentes desen-
volveram diferentes meios de o fazerem.
Mecanismos da traduo eucaritica

Traduo o processo pelo qual a informao contida numa seqncia de
nucleotdeo do mRNA instrui a sntese de um determinado polipeptdeo. Esse
processo, esquematizado na Figura 12.10, foi dividido em trs fases - iniciao,
alongamento e terminao - e regulado por protenas solveis chamadas (apro-
priadamente) fatores de iniciao, fatores de alongamento e fatores de terminao
(Hershey, 1989; Safer, 1989).
A iniciao consiste de reaes pelas quais o primeiro RNA de transferncia
do aminoacil e o mRNA so ligados ao ribossomo. O nico RNA de transferncia
(tRNA) capaz de iniciar a traduo um tRNA iniciador especial (tRNAi), que
transporta o aminocido metionina. Conforme mostrado na Figura 12.11, as primei-
ras reaes envolvem a formao de um complexo de iniciao consistindo do
tRNA iniciador do metionil ligado uma subunidade ribossmica 40S (pequena).
Essa reao catalisada pela forma ativa do fator 2 de iniciao eucaritica (eIF2-
GTP) que liga o iniciador Met-tRNA subunidade ribossmica 40S. Note que essa
Figura 12.10 ligao ocorre na ausncia de mRNA. O mRNA adicionado em seguida. Primeiro,
Representao esquemtica dos eventos da tra- uma protena cap ligante-eIF4E - liga-se ao cap de metil-guanosina no terminal 5
duo eucaritica. Os passos da iniciao re- da mensagem. Sem esse cap, a ligao do mRNA subunidade ribossmica
nem as subunidades ribossmicas 40S e 60S,
muitas vezes no completada (Shatkin, 1976, 1985), e o eIF4E crtico para o
mRNA e o tRNA iniciador, que est comple-
xado ao aminocido metionina (Met). Durante prosseguimento da traduo. No entanto, h menos eIF4E do que o nmero de
o alongamento, aminocidos so trazidos para mensagens na clula, o que faz pensar que cada mRNA tem que competir por essa
o polissomo, e ligaes peptdicas so forma- protena cap ligante (Thach, 1992). O fator 4A de iniciao se complexa em seguida
das entre os aminocidos. A seqncia de ami- com o eIF4E e se posiciona numa ala helicoidal fechada na seqncia lder do
nocidos na protena em crescimento mRNA. O eIF4A (estimulado por eIF4B e ATP) desenrola a hlice. Esse passo pode
direcionada pela seqncia de cdons de ci- ser limitante se a eIF4A da ala helicoidal fechada for ocultada por alguma outra
dos nuclicos no mRNA. Aps a ltima liga- estrutura secundria estvel. A subunidade ribossmica 40S viaja em seguida ao
o peptdica da protena ter sido feita, um dos longo da mensagem at atingir o cdon AUG no contexto adequado. Kozak (1986)
cdons UAG, UGA, ou UAA sinaliza o tr-
mostrou que no apenas qualquer um AUG ir servir. Para que a subunidade
mino da traduo. As subunidades ribossmicas
e a mensagem podem ser reutilizadas.
INICIAO ALONGAMENTO TERMINAO
Polipeptdeo Polipeptdeo
nascente completado
tRNA
iniciador Ligao
peptdica
Ribossomo
Fator de
Subunidades
liberao
ribossmicas
Subunidades
ribossmicas
recicladas
Unidade Figura 12.11

ribossmica Fase de iniciao da traduo eucaritica. To-
pequena dos os fatores de iniciao esto representados
Ligao do fator de iniciao como crculos. O primeiro complexo produ-
zido pela unio da subunidade ribossmica 40S
com o tRNA iniciador. O tRNA iniciador foi
complexado com a forma ativa (GTP) do fator
tRNA
Iniciador
2 de iniciao. Aps a formao desse com-
plexo, o mRNA posicionado com o auxlio
da protena cap ligante (eIF4E) e outras subu-
nidades eIF4. Uma vez estando o mRNA co-
locado em seu lugar, o eIF5 media a juno da
subunidade ribossmica 60S e a liberao dos
prvios fatores de iniciao. O eIF2, agora em
sua forma inativa (GDP), reativado por
eIF2B. (Segundo Hershey, 1989; Thach, 1992;
Cooper, 1996.)
Escaneamento
Reciclagem
de eIF2
Subunidade 60S
ribossmica pare e inicie a traduo, os nucleotdeos ao redor de AUG tambm so

importantes. Mutando genes clonados e analisando a traduo de seus RNAs,
Kozak achou que a seqncia tima seria ACCAUGG. Mutaes nos nucleot-
deos nos flancos podiam reduzir a traduo em 20 vezes. A importncia dos nucle-
otdeos nos flancos tambm foi vista in vivo. Morle e colaboradores (1985) repor-
taram o caso de um paciente cuja talassemia (deficincia da subunidade
globina da hemoglobina) era devida uma alterao nessa seqncia de ACCAUGG
para CCCAUGG. A ligao da subunidade 40S AUG da mensagem posiciona o
Figura 12.12
Polissomo individual transcrevendo o mRNA
gigante do puff BR2 de Chironomus tentans.
(A) Microscopia eletrnica de um polissomo
contendo 24 ribossomos. As protenas nas-
centes podem ser vistas se estendendo dos
ribossomos e crescendo medida que os
ribossomos se movimentam do terminal 5 da
mensagem para o terminal 3. Prximo do ter-
minal 3 esto ribossomos dos quais a prote-
na se destacou. (B) Um tal polissomo sob
maior aumento; o polissomo foi esticado du-
rante a preparao do espcime. A relao entre
o mRNA e as subunidades ribossmicas e o
polipeptdeo nascente pode ser vista. (de
Francke et al., 1982; fotografias cortesia de J.
E. Edstrom.)
(A) (B)
tRNA iniciador sobre o cdon AUG. Somente aps o mRNA ter sido posicionado
apropriadamente na subunidade ribossmica pequena, pode a unidade ribossmica
60S (grande) se ligar. Isso completa a reao de iniciao. Durante esse proces-
so, o GTP no eIF2 hidrolisado em GDP. Para o eIF2 captar um novo tRNA inicia-
dor, esse tem que ser regenerado para eIF-GTP pelo eIF2B.
O alongamento envolve a ligao seqencial de tRNAs do aminoacil ao
ribossomo e a formao de ligaes peptdicas entre os aminocidos medida que
eles abandonam seqencialmente seus tRNAs transportadores (veja Figura 12.10).
medida que aminocidos so ajuntados, o ribossomo viaja ao longo da mensa-
gem, expondo novos cdons para a ligao de tRNA. Isso permite a um outro
ribossomo iniciar sua viajem no terminal 5 da mensagem. Assim, em geral, qual-
quer mRNA ter vrios ribossomos ligados a ele. Essa estrutura ento chamada
poliribossomo- ou mais comumente, polissomo (Figura 12.12). A terminao da
sntese protica ocorre quando um dos cdons mRNA UAG, UAA ou UGA ex-
posto no ribossomo. Esses tripletes de nucleotdeos (chamados cdons de termi-
nao) no so reconhecidos pelos tRNAs e portanto no codificam para quais-
quer aminocidos. Ao contrrio, eles so reconhecidos pelos fatores de liberao,
que hidrolizam o peptdeo do ltimo tRNA, destacando-o do ribossomo. O
ribossomo se separa em duas unidades, e o ciclo da traduo recomea.
Controle da sntese protica

pela longevidade diferencial do mRNA
Uma das principais maneiras de regular a expresso gnica ao nvel de traduo envol-
ve degradao ou estabilizao seletiva do mRNA. Se o mRNA fosse degradado
rapidamente aps penetrar no citoplasma, ele somente poderia gerar poucas prote-
nas. Porm, se a mensagem com uma meia-vida relativamente curta for seletivamente
estabilizada em certas clulas em certos momentos, ento ele poderia produzir grandes
quantidades de uma protena particular em certos momentos e em certos locais.
Degradao Seletiva de mRNAs
LONGEVIDADE DE UM mRNA E SUA REGIO 3 NO TRADUZIDA. Nem todos os

mRNAs tm a mesma estabilidade dentro da clula. Uma mensagem estvel como a
globina tem uma meia-vida de cerca de 17 horas, enquanto os mRNAs para vrios
fatores de crescimento tm meia-vida de menos de 30 minutos. Assim, a quantidade
de protena produzida de uma nica mensagem de globina deve ser muito maior que
aquela de uma mensagem de um nico fator de crescimento. Dados recentes, suma-
riados por Decker e Parker (1994), sugerem que as seqncias de RNA dentro da
regio 3 no-traduzida (3UTR) podem promover a rpida desadenilao da cauda Figura 12.13
do poliadenilato 3. Isso leva perda da cobertura do terminal 5 da mensagem e de Regulao da longevidade do mRNA por uma
sua subseqente degradao 5 a 3. Portanto, os principais determinantes regula- seqncia na regio 3 no traduzida. (A) O
terminal 3 do gene -globina do coelho foi
dores da meia-vida da mensagem parecem residir na 3 UTR. As espcies mais efmeras
alterado pela insero de um fragmento de 62
de RNA contm uma ou mais seqncias ricas em AU nessa regio. Shaw e Kamen pares de base derivado do terminal 3 do gene
(1986) inseriram uma regio rica em AT com 51 pares de bases oriundas da 3UTR do humano GM-CSF ou uma seqncia relacio-
gene para o fator de crescimento GM-CSF na 3UTR do gene da globina do coelho nada, na qual vrios pares AT foram substitu-
(Figura 12.13). A mensagem da globina resultante tinha uma meia-vida de menos de dos por pares GC (indicados em cores). (B)
30 minutos. Uma seqncia semelhante, mas contendo 14 resduos G e C, foi inserida Os clones foram injetados em culturas de c-
em um outro gene da globina como um controle. Sua mensagem para globina lulas de camundongo, e a presena da mensa-
normalmente tinha a meia-vida longa. gem aps 30 horas foi medida incubando-se
A capacidade de degradar seletivamente mRNAs crtica para a funo celular. extratos celulares com DNA marcado com 32P,
complementar ao terminal 5 da mensagem.
Por exemplo, o gene c-fos codifica um fator de transcrio necessrio para a diviso
Se a mensagem -globina ainda existisse, o
celular normal do fibroblasto (Holt et al., 1986). Tal como a mensagem do fator de cDNA radioativo a ela se ligaria e seria, por-
crescimento GM-CSF, o mRNA para c-fos contm grandes regies 3 no-traduzidas tanto, resistente nuclease S1 (que destri
ricas em seqncias AU. Se essas regies forem deletadas (experimentalmente ou somente cidos nuclicos de fita nica). Se a
por mutao natural), a mensagem ganha uma meia-vida mais longa. Conseqente- mensagem no estivesse presente, a nuclease
mente, mais protena C-fos produzida, e a clula recebe sinalizao contnua para S1 adicionada iria digerir a sonda at mono-
se dividir. O resultado um tumor das clulas que tm o gene c-fos, carente da 3 nucleotdeos, e nenhum DNA radioativo se-
UTR rica em AU (Meijlink et al., 1985). Wilson e Treisman (1988) descobriram que ria ligado. As solues resultantes foram cor-
essa regio estimula a remoo da cauda poli(A) quando a mensagem traduzida. ridas em um gel e auto-radiografadas. Pista
1: Extratos de clulas incorporando o tipo sel-
Quando a regio rica em AU foi deletada ou substituda por uma outra seqncia, a
vagem (WT) do gene clonado da -globina.
cauda poli(A) permanecia, e a mensagem tinha uma meia-vida mais longa. Foram Pista 2: Extrato de clulas incorporando o gene
encontradas vrias protenas que reconhecem essas regies 3UTR ricas em AU, e -globina do coelho com o terminal 3 rico
elas podem acelerar a degenerao das mensagens quando ligada elas (Chen et al, em AT (no mostrando mRNA aps 30 ho-
1992, 1994). Reciprocamente, a 3UTR do RNA de longa vida da globina contm ras). Pista 3: Extrato de clulas incorporando
trs regies ricas em C que ligam protenas que parecem estabilizar a mensagem o gene da -globina de coelho com o terminal
(Kiledjian et al., 1995). 3 substitudo por GC (mostrando mRNA
Encurtamento diferencial da cauda poli(A) tem um papel decisivo no ciclo vital do estvel aps 30 horas). O gene e a sonda
fungo limoso Dictyostelium. Nesse organismo, um novo conjunto de mensagens para 2-microglobulina (produzindo um
mRNA longevo) foram usados como con-
transcrito durante a mudana do crescimento vegetativo (ameba) para o desenvolvi-
trole. (Segundo Shaw e Kamen, 1986.)
Terminais 3 alternativos RNA globina
RNA de controle
2-microglobulina
CAP ntron ntron
(A) (B)
Porcentagem da marcao
Com prolactina
(pulso) inicial
Sem prolactina
Perodo aps o rastreamento (horas)
Figura 12.14
Degradao de mRNA da casena na presena e ausncia de prolactina. Clulas mamrias em
cultura foram tratadas com precursores radiativos de RNA (pulso) e aps um dado perodo foram
lavadas e alimentadas com precursores no-radiativos (rastreamento). O mRNA da casena
sintetizado durante o tempo de pulsao foi em seguida isolado e contado. Na ausncia de
prolactina, o mRNA da casena recm-sintetizado decaiu rapidamente, com uma meia-vida de 1.1
horas. Quando o mesmo experimento foi feito em um meio contendo prolactina, a meia-vida
estendeu-se para 28.5 horas. (Segundo Guyette et al., 1979.)
mento (grex). Ao mesmo tempo, as caudas poli(A) dos mRNAs existentes no estgio
vegetativo so dramaticamente encurtadas. Como resultado, as mensagens recm-
transcritas so traduzidas, enquanto as mensagens pr-existentes no o so (Palatnik
et al., 1984). Esse mecanismo tambm foi observado em glndulas salivares na larva de
Drosophila (Restifo e Guild, 1986).
ESTABILIZAO HORMONAL DE RNAs MENSAGEIROS ESPECFICOS. Produtos

diferenciados de genes so freqentemente sintetizados em resposta induo
hormonal. Em alguns casos, hormnios no aumentam a transcrio de certas mensa-
gens, mas atuam a nvel de traduo. Um desses casos envolve a sntese da casena
por mamferos em lactao. A casena a principal fosfoprotena do leite sendo, por
isso, um produto diferenciado da glndula mamria. Como ser discutido mais
detalhadamente no Captulo 19, a glndula mamria preparada pela ao seqencial
de vrios hormnios. Prolactina, porm, o hormnio responsvel pela lactao isto
, a real produo do leite. A prolactina aumenta a transcrio de mensagens da casena
somente cerca de duas vezes; seu principal efeito parece ser a estabilizao do mRNA
da casena (Guyette et al., 1979). A prolactina aumenta a longevidade da mensagem da
casena fazendo com que ela exista por um tempo 25 vezes maior que a maioria das
outras mensagens na clula (Figura 12.14). Conseqentemente, cada mRNA da casena
pode ser usado para mais repeties da traduo. Dessa maneira, um nmero maior do
que o normal pode ser sintetizado de cada mensagem de casena. A Tabela 12.2 resume
esses dados e mostra que outros hormnios tambm aumentam a estabilidade de
RNAs mensageiros especficos.
Controle da traduo de mensagens do ocito

Na maioria das espcies animais, o ncleo diplide no expresso imediatamente. A
evidncia que o desenvolvimento precoce controlado por fatores armazenados no
ou produzidos pelo ocito veio de diversos experimentos no fim do sculo XIX (revi-
sados por Davidson, 1976). Esses experimentos demonstraram claramente a dominncia
de traos maternos durante o estgio inicial da embriognese, e uma troca para carac-
tersticas paternas ou hbridas surgindo somente mais tardiamente no desenvolvi-
mento. Tais efeitos maternos de longo alcance j foram mencionados em nossa dis-
Tabela 12.2 Estabilizao de RNAs mensageiros especficos pelos hormnios
mRNA Clula ou tecido Efetuador Meia-vida (horas)

Regulatrio +Efetuador -Efetuador
Viteologenina Fgado de Xenopus Estrgeno 500 16
Albumina Fgado de Xenopus Estrgeno 10 3
Vitelogenina Fgado de ave Estrgeno 22 ~2.5
Apo VLDL II Fgado de ave Estrgeno 26 3
Casena Glndula mamria de rato Prolactina 92 5
Hormnio do crescimento Culturas de clula Dexametasona e tiroxina 202
pituitria de rato
Insulina Clulas de ilhotas Glicose 77 29
pancreticas de rato
Ovalbumina Oviduto de galinha Estrgeno, progesterona ~24 2-5
Fonte: Segundo Shapiro et. al., 1987.
cusso sobre a orientao da clivagem em embries de lesmas, nos quais o citoplasma

do ocito contm um fator que direciona as rotaes dos planos de clivagem nas
direes direita ou esquerda. [cleave1.html]
Caracterizao de RNAs Mensageiros Armazenados em Ocitos
TIPOS DE mRNAS ARMAZENADOS EM OCITOS. Davidson e seus colegas avali-

aram a complexidade do mRNA do ocito de maneira semelhante quela empregada em
sua anlise da complexidade do RNA nuclear. RNA (em grande excesso) foi hibridizado
com DNA desnaturado, e a metade do valor Cot da hibridizao foi encontrada ser
proporcional s quantidades das diferentes seqncias de RNA presentes. Por essa
anlise, eles estimaram que cada ocito (em numerosos filos) tinha seqncias
nucelotdicas diferentes em nmero suficiente para se responsabilizar por aproximada-
mente 1600 cpias cada de 20.000 a 50.000 tipos de RNA (Galau et al., 1976; Hough-
Evans et al., 1977). Essa a maior complexidade de mensagens de qualquer tipo de
clula conhecida, e isso reflete o enorme potencial do desenvolvimento do ocito.
Relativamente poucas dessas mensagens foram caracterizadas. Alm disso, muitos
desses mRNAs no so utilizados no ocito, mas so armazenados e traduzidos aps
a fecundao. Isso foi primeiro demonstrado usando inibidores da sntese protica;
mais recentemente, ensaios de PCR e de proteo de RNase tambm mostraram a
existncia de RNAs armazenados no ocito e primeiro traduzidos durante a maturao
(imediatamente antes e durante a ovulao), fecundao ou clivagem precoce. A Tabe-
la 12.3 apresenta uma lista parcial desses mRNAs armazenados. [RNA4.html]
Alguns desses RNAs so para protenas que sero necessrias durante a
clivagem, quando o embrio produz quantidades enormes de cromatina, membra-
nas celulares e componentes do citoesqueleto. Uma das situaes mais notveis
a armazenagem da informao necessria para produzir ribonucleotdeo redutase
para o embrio do molusco. A grande subunidade armazenada como uma prote-
na no citoplasma do ocito. A pequena unidade armazenada como uma mensa-
gem materno no-traduzvel. Somente aps a fecundao, quando o mRNA para a
pequena subunidade tiver sido traduzida, pode a recm-sintetizada pequena
subunidade combinar-se com a grande subunidade pr-formada para gerar a enzima
funcional (Standart et al., 1986).
Alguns desses mRNAs armazenados regulam o perodo da diviso celular pre-
coce. Em muitas espcies (incluindo o ourio-do-mar e a Drosophila) a taxa e o
padro das divises celulares precoces no requerem um ncleo. Ao contrrio, eles
requerem sntese de protena contnua a partir do mRNA materno armazenado
(Wagenaar e Mazia, 1978). A razo dessa dependncia de mensagens armazenadas
foi mostrada em 1983, quando Evans e colegas acharam uma classe de protenas que
Tabela 12.3 Alguns mRNAs armazenados no citoplasma do ocito

e traduzidos prximo ou na fecundao
mRNAs codificando Funo(es) Organismo(s)
Ciclinas Regulao da diviso Ourio-do-mar, molusco,

celular estrela-do-mar, r
Actina Movimento celular Camundongo, estrela-do-mar
e contrao
Tubulina Formao de fusos Molusco, camundongo
mitticos, clios, flagelos
Pequena subunidade da Sntese de DNA Ourio-marinho, molusco,
ribonucleotdeo redutase estrela-do-mar
Hipoxantina fosforil-transferase Sntese de purinas Camundongo
Vg1 Determinao R
mesodrmica (?)
Histonas Formao de cromatina Ourio-do-mar, r, molusco

Caderinas Adeso de blastmeros R
Metaloproteinases Implantao no tero Camundongo
Fatores de crescimento Crescimento celular;
crescimento de clulas Camundongo
uterinas (?)
Fator FEM-3 de Formao de espermatozide C. elegans
determinao do sexo
Produtos gnicos PAR Segregam determinantes
morfognicos C. elegans
Morfgeno SKN-1 Determinao do destino
do blastmero C. elegans
Morfgeno Hunchback Determinao do destino
do anterior Drosophila
Morfgeno Caudal Determinao do destino
do posterior Drosophila
Morfgeno Bicoid Determinao do destino
do anterior Drosophila
Morfgeno Nanos Determinao do destino
do posterior Drosophila
Morfgeno GLP 1 Determinao do destino
do anterior C. elegans
Protena Germ cell-less Determinao da clula
germinativa Drosophila
Protena Oskar Localizao da

clula germinativa Drosophila
Ornitina transcarbamilase Ciclo da uria R
Fator de alongamento 1 Sntese protica R
Protenas ribossmicas Sntese protica R, Drosophila
Fontes: Compilado de numerosas fontes, incluindo Raff, 1980; Shiokawa et al., 1983; Rappollee
et al., 1988; Brenner et al., 1989; Standart, 1992.
chamaram ciclinas. Essas protenas regulam a diviso celular (conforme discutido

no Captulo 5) e so codificadas por mRNAs materno. O que surpreendente sobre
as ciclinas que elas so destrudas na diviso celular e tm que ser resintetizadas
a partir de mensagens armazenadas aps o trmino de cada clivagem. A sntese de
ciclinas oriundas de mensagens estocadas vista declinar medida que o embrio
se aproxima do estgio de blstula.
Outras mensagens armazenadas codificam protenas que determinam o desti-
no celular. As mensagens bicoid e nanos da Drosophila, o mRNA vg1 de Xeno-
pus, e o mRNA glp-1 de C. elegans so todas crticas para a determinao do
destino celular. Como veremos posteriormente neste captulo, no somente o pe-
rodo de sua traduo crtico, como tambm o a localizao do mRNA quando
ele traduzido.
(A) Figura 12.15

Demonstrao de mensagens localizadas nos plos animal e vegetal do
ocito de Xenopus. RNA foi obtido do ovo inteiro (T), do hemisfrio
pigmentado animal (A) ou do hemisfrio pigmentado vegetal (V) e separa-
do eletroforeticamente em gel. O RNA foi transferido para papel pelo
procedimento Northern, e o papel incubado com DNA radioativo de clones
derivados de cDNA complementar mensagem do ocito. O DNA radioa-
tivo do clone An2 hibridiza para a mensagem presente no plo animal, mas
no no plo vegetal. A distribuio oposta vista para a mensagem
hibridizando para o DNA do clone vg1. (B) Hibridizao in situ mostrando
a mensagem vg1 em diferentes estgios de localizao no ocito de Xeno-
pus. No ocito maduro, ela reside somente no crtex vegetal. (O RNA vg1
foi recentemente mostrado codificar um fator crtico para a determinao do
eixo dorso-ventral em vertebrados e ser discutido mais extensamente no
Captulo 15.) (A de Rebagliati et al., 1985, cortesia de D. Melton; B de
Melton, 1987.)
(B)
LOCALIZAO DE mRNAS ARMAZENADOS. Alguns mRNAs armazenados no so

uniformemente distribudos no ocito (Rodgers e Gross, 1978). Rebagliati e colabora-
dores (1985) mostraram que enquanto a maioria das mensagens maternas encontra-
da distribuda uniformemente atravs do ovo no-fecundado de Xenopus, alguns
mRNAS armazenados se localizam no plo animal ou vegetal do citoplasma. Eles
extraram RNA contendo poli(A) de ocitos e usaram transcriptase reversa e DNA
polimerase para converter os RNAs em uma populao de DNAs de dupla fita. Esses
DNAs foram em seguida inseridos em vetores clonados e cultivados separadamente
em E. coli. Cerca de 2 milhes de clones foram derivados dessa maneira. O DNA
desses clones (a biblioteca do ocito de Xenopus) foi ento transferido para dois
pedaos de papel de filtro e desnaturado sob condies de fornecer DNA de fita
simples. Em seguida, os investigadores cortaram o plo animal ou vegetal do ovo e
extraram o RNA contendo poli(A) dessas regies. cDNAs radioativos foram produzi-
dos a partir dos RNAs, e um grupo e filtros contendo DNA foi incubado em cDNAs
das mensagens animal, enquanto o outro foi incubado em cDNAs das mensagens
vegetal. Quando a ligao de cDNAS radioativos foi medida, a maioria dos clones
ligaram quantidades iguais de cDNA dos plos animal e vegetal, indicando que essas
mensagens estavam igualmente distribudas. Porm, cerca de 1.2 porcento dos clones
somente ligaram cDNA produzido de mensagens do plo animal, e cerca de 0.2 porcento
dos clones somente se ligaram ao cDNA derivado do mRNA do plo vegetal.
O DNA dos clones especfico para mensagens animal ou vegetal pde, ento, ser
usado para identificar os mRNAs localizados. RNA foi extrado de ovos inteiros ou
de seus plos animal e vegetal e corrido em gel. Os RNAs foram separados
eletroforeticamente e foram transferidos para papel de nitrocelulose (transferncia
Northern) e examinados com sondas de DNA radioativo para cada um dos clones
especficos para a regio. Dois dos resultados esto mostrados na Figura 12.15 e
Prancha 8. A localizao desses mRNAs em regies especficas do ovo conseguida
atravs do citoesqueleto e ser detalhada nos Captulos 13 e 20.
& Especulaes
Determinando o Destino Celular por Meio do

mRNA Localizado do Ocito
M
UITAS DAS ATIVIDADES do RNA hunchback Figura 12.16
RNA nanos
RNA Controle da polaridade ntero-posterior em
desenvolvimento precoce ocor-
bicoid RNA oskar embries de Drosophila pelo mRNA materno.
rem sem ativao do ncleo em- (A) As mensagens bicoid, nanos, oskar e
brionrio. J que a especificao dos eixos Anterior Posterior
hunchback so fornecidas ao ovo pelas clulas
embrionrios em geral um dos primeiros Localizao do RNA nutrizes ovarianas. Elas so codificadas pelo
processos da embriognese, durante mui- Poliadenilao de genoma materno. O mRNA oskar entra pri-
to tempo foi considerado que esses even- caudas de RNA para meiro, transportado para o plo posterior e
bicoid, traduzido na meia oognese, antes da chegada
tos poderiam ser regulados pelo mRNA
derepresso de nanos de outras mensagens. A mensagem bicoid
materno. Nos anos recentes, isso foi de- amarrada no anterior do ovo pela sua 3UTR. A
monstrado ser o caso. Gradiente Gradiente mensagem nanos direcionada pela sua 3UTR
O eixo ntero-posterior (cabea-cauda) de protena de protena para ir ao plo posterior, onde interage com a
da Drosophila especificado principalmen- bicoide nanos protena Oskar. O mRNA hunchback visto
te pelas protenas codificadas pelos genes (AJ P) (A I P) em todo o ocito. (B) Aps fecundao e ativa-
o do ovo, o mRNA bicoid poliadenilado e
bicoid, nanos e hunchback (Figura 12.16). Nanos de liga 3
se torna ativo para traduo, formando um gra-
Embora suas atuaes sero detalhadas de UTR hunchback
diente ntero-posterior da protena Bicoid. O
maneira mais completa nos prximos captu- mRNA nanos no plo posteror torna-se com-
los, discutiremos suas regulaes de tradu- petente para traduo e comea a produzir um
o aqui. Primeiramente, os mRNAs de gradiente posterior-para-anterior da protena
Nanos. (C) A protena Nanos liga-se 3UTR
bicoid e nanos so transportados das clu- da mensagem hunchback para impedir a tradu-
Gradiente de protena hunchback
las foliculares do ovrio para dentro do ovo. o. A protena Bicoid liga-se a regio intensifi-
O RNA bicoid permanece na regio mais an- a mensagem nanos ligada no citoplasma cadora do gene hunchback para promover a
terior do ocito, enquanto a mensagem nanos posteror traduzida (Gavis e Lehmann, transcrio de novas mensagens hunchback. O
vai para o plo posterior do ovo. A mensa- 1994). O posicionamento correto dessa men- resultado um gradiente ngreme da protena
Hunchback. Essa protena ir ativar diferentes
gem bicoid parece ser amarrada pelas suas sagem tambm devido as suas 3UTR e se
genes em diferentes concentraes, com isso
3UTR aos microtbulos anteriores pelos outros mRNAs (tal como aquele para a especificando as diferentes regies do embrio.
produtos dos genes swallow e staufen (Fer- tubulina) tiverem sido dado a 3UTR de
randon et al., 1994; veja Captulo 22). A men- nanos, essas mensagens ficaro localizadas duzida em protena que se mantm no plo
sagem bicoid colocada no ocito tem uma no posterior do ocito. Quando traduzida, a posterior (Kim-H et al., 1995). Tal como as
cauda poli(A) relativamente curta, de cerca protena Nanos se difunde atravs da parte mensagens bicoid e nanos, sua localizao
de 70 resduos. Porm, dentro do primeiro posterior do embrio e especifica aquelas e momento de traduo dependem de sua
ciclo de diviso, a mensagem poliadenilada clulas que a rtem para tornarem-se abdo- 3UTR. Os mRNAs nanos e oskar tm ex-
de maneira a sua cauda quase dobrar de ta- minais. A mensagem nanos parece ser repri- tenses relativamente curtas de poli(A) que
manho (Salls et al., 1994; Lieberfarb et al., mida durante a traduo pela ligao da pro- no so significativamente alongadas quan-
1996). Essa poliadenilao coincide com a tena Smaug a dois stios em sua 3UTR do as mensagens se tornam traduzveis. Isso
capacitao da mensagem bicoid ser tradu- (Smibert et al., 1996). Essa represso sugere que h ao menos dois mecanismos
zida. A protena Bicoid se difunde atravs da abolida uma vez que o mRNA nanos se lo- de ativao das mensagens materna em
poro anterior do embrio precoce, sendo caliza no plo posterior. A protena Oskar ovos de Drosophila (Salles et al., 1994). O
responsvel pela especificao das regies pode estar aqui envolvida na ligao da men- primeiro depende da posio, e no envol-
da cabea e trax da larva de Drosophila. Os sagem nanos ao citoesqueleto, e a protena ve o crescimento da cauda poli(A) (p.ex.,
produtos dos genes cortex e grauzone pare- Vasa pode atuar como helicase para desen- oskar e nanos). O segundo independe da
cem ser crticos para a poliadenilao do rolar o RNA (Lian et al., 1994). A protena posio e requer sntese de poli(A) (bicoid,
mRNA bicoid porque mutaes nesse gene Oskar propriamente regulada por tradu- e tambm mensagens de Toll e torso).
previnem a poliadenilao e traduo da men- o. Porm, em contraste com a mensagem As protenas Bicoid e Nanos realizam
sagem bicoid. nanos, que traduzida aps a fecundao, suas funes regulando a sntese da prote-
O mRNA nanos est localizado no plo o mRNA oskar sintetizado e transportado na Hunchback. Essa ir finalmente especi-
posterior do ovo durante a oognese, mas para o interior do ocito precocemente na ficar a cabea e o trax da mosca de uma
quantidades significativas permanecem dis- oognese e fica localizado no plo posteri- maneira dependente da concentrao. A pro-
tribudas atravs do citoplasma. Durante o or durante os estgios medianos da oog- tena Bicoid (agora ativa no anterior) age
desenvolvimento precoce, porm, somente nese. Uma vez localizada, a mensagem tra- como um fator de transcrio para ativar o
gene hunchback, produzindo assim mais (A)

mRNA hunchback
mensagem hunchback e protena no ante-
rior do embrio. A protena Nanos, porm, Poly (A)
trabalha ao nvel de traduo para inibir a
produo da protena Hunchback a partir
do mRNA hunchback existente. Isso cria um
gradiente pelo qual a sntese da protena
Hunchback aumentada no anterior do
embrio e ativamente reprimida no posteri- mRNA glp-1
or (Wharton e Struhl, 1991; Wang et al., Poly (A)
1994). A 3 UTR do mRNA contm vrios
stios que ligam dois fatores (Pumilio e uma
protena de 55-kDa) que por si no bloque- Figura 12.18
iam a traduo. Porm, essas duas protenas (B) Semelhanas na a regulao de mRNAS
parecem formar uma stio de aterrisagem Hunchback GLP-1 (C. hunchback e glp-1 atravs de suas 3UTRs.
para a protena Nanos. Quando Nanos se (Drosophila) elegans) (A) A 3UTR da mensagem hunchback con-
tm vrias regies consideradas essenciais para
liga, a traduo do mRNA hunchback inibi- a ligao de Nanos e a supresso da traduo.
da (Murata e Wharton, 1995). Esses elementos de resposta nanos consis-
A protena Bicoid tambm trabalha a tem nos motivos GUUGU e AUUGUA. Os
nvel de traduo para bloquear a sntese mesmos elementos podem ser vistos na
3UTR da mensagem glp-1. (B) Modelo para
Protena a regulao da traduo de hunchback e glp-1.
mRNA Ambas mensagens esto distribudas unifor-
glp-1 Protena
GLP-1 memente atravs do ovo e embrio precoce.
Anterior Posterior da protena Caudal. Como Nanos, a prote- Em ambos os casos, a mensagem reprimida
na Caudal crtica para o estabelecimento na parte posterior do embrio. O regulador da
dos segmentos posteriores da mosca, mas traduo hunchback a protena Nanos locali-
ao contrrio da mensagem nanos, o mRNA zada posteriormente. O regulador da traduo
de glp-1 ainda no conhecido mas pode ser a
caudal materno distribudo uniforme- protena PAL-1. (Segundo Evans et al., 1994.)
mente atravs do ovo da Drosophila. A
protena Bicoid liga-se 3UTR do mRNA especificar destinos das clulas anteriores
caudal, impedindo-o de ser traduzido na (veja Captulo 17). Ela ativa entre os est-
parte anterior do embrio (Dubnau e Struhl, gios de clivagem de 4 28 clulas. Colora-
1996). Os mecanismos pelos quais a regu- o por anticorpos mostra que as nicas
lao gnica da traduo determina o eixo clulas que contm essa protena so os
ntero-posterior do embrio de Drosophi- descendentes da clula anterior do estgio
la sero detalhados no Captulo 14. de 2 clulas. Porm, hibridizao in situ mos-
Isso parece ser uma soluo exeqvel trou que a mensagem materna para essa pro-
para a especificao axial quando o embrio tena encontrada em todas as clulas do
do estgio precoce de clivagem permanece embrio (Figura 12.17). A clula posterior do
um sinccio que permite a formao de tais estgio bicelular e sua prognie parecem ter
gradientes. Porm, experimentos recentes um inibidor da traduo do RNA glp-1. Esse
(Evans et al., 1994) mostraram que tal con- inibidor no foi ainda encontrado, mas o
Figura 12.17 trole da traduo da especificao celular seqenciamento das 3UTR mostrou que o
Comparao entre a localizao da protena tambm pode ocorrer em embries que for- mRNA gip-1 tem uma 3UTR com as mes-
GLP-1 e a mensagem glp-1. A mensagem glp- mam clulas logo aps a fecundao. No mas seqncias que reconhecem Pumilio e
1 materna encontrada atravs do desenvolvi- nematdeo C. Elegans, muito da embriog- Nanos (Figura 12.18). Assim, as clulas an-
mento precoce em cada clula do embrio de C.
elegans. A protena GLP-1, porm, vista so- nese precoce depende da protena GLP-1. teriores de C. Elegans, tal como as de Dro-
mente na prognie da clula anterior formada na Essa um receptor da superfcie da clula sophila, so especificadas pela regulao
primeira diviso. (Segundo Evans et al., 1994.) que recebe sinais de clulas posteriores para gnica da traduo.
Mecanismos para a regulao

da traduo das mensagens dos ocitos
No Captulo 4, vimos evidncia de que o ocito contm RNAs mensageiros que esta-
vam presentes mas no traduzidos at a fecundao ou ativao do ocito (como na
ativao da progesterona da r pouco antes da fecundao). H atualmente ao menos
5 mecanismos que regulam a traduo do mRNA do ocito. Trs deles envolvem a
disponibilidade de mRNAs; os outros dois envolvem a eficincia da traduo do

mRNA. A maioria das espcies provavelmente usa mais de um mecanismo para
regular a traduo do mRNA do ocito. A pergunta fundamental , Como so recru-
tados os mRNAs para os polissomos? Embora o ocito e os blastmeros precoces
contenham a mesma populao de mensagens, diferentes subconjuntos esto sen-
do traduzidos no ovo e no embrio (Young e Raff, 1979; Mermod et al., 1980; Rosenthal
et al., 1990; Taylor e Smith, 1985). A pergunta ento se torna, Como mRNAS que
estavam dormentes no citoplasma do ocito repentinamente adquirem a competn-
cia de serem traduzidos?
A Hiptese da Mensagem Materna Mascarada
Essa hiptese sustenta que as mensagens do ocito esto mascaradas fisicamente

pelas protenas, prevenindo os mRNAs se prenderem aos ribossomos. Na matura-
o ou fecundao, as protenas mascaradoras se desligariam, permitindo ao mRNA
ser traduzido. RNA mensageiro nunca encontrado sem protenas. Porm, o tipo de
protena associada com o RNA pode variar. Spirin, em 1966, props que o mRNA do
ocito estocado em informossomos (informosomes), complexos de ribonucleo-
protenas nos quais o mRNA est mascarado. As mensagens mascaradas seriam
incapazes de se ligar aos ribossomos, e assim no seriam traduzidas. Na fecundao,
as protenas mascaradoras seriam liberadas (possivelmente devido s alteraes
inicas ocorrendo durante a fecundao) e a mensagem estaria livre para iniciar a
traduo. Apoio para essa hiptese apareceu rapidamente. Em 1968, Infante e Nemer
acharam que o ovo no-fecundado do ourio-do-mar contm partculas de RNP que
sedimentam mais lentamente que os ribossomos, e Gross e colaboradores (1973)
acharam que essas partculas contm vrios mRNAs.
Apoio para a hiptese da mensagem materna mascarada veio de experimentos
mostrando que enquanto o mRNA do ovo no-fecundado estocado em RNPs no
pode ser traduzido, os mesmos RNAs podiam ser traduzidos se seus RNPs fossem
colocados em solues mimetizando o estado inico mudado do ovo aps a fecunda-
o (Jenkins et al, 1978; Raff, 1980). Foi proposto que o influxo de sdio durante a
fecundao poderia desestabilizar a partcula de RNP, permitindo assim a traduo de
seu mRNA. Tal desmascaramento poderia estar ocorrendo no molusco bivalve Spisula,
no qual os mRNAs codificando a pequena subunidade de ribonucleotdeo redutase e
ciclina A so severamente reprimidos nos ocitos, e eles no so traduzidos at a
fecundao. Dois procedimentos podem desmascarar essas mensagens. Primeiro,
altas concentraes de sal (KCL 0,5 M) permitem a esses mRNAs produzir protenas;
assim tambm o faz a remoo de certas seqncias de bases nas regies 3 no-
traduzidas dessas mensagens (Figura 12,19; Standart et al., 1990). H regies nas
3UTRs de ambas mensagens que so muito semelhantes, podendo constituir stios
de ligao para uma protena de 82-kDA que se liga 3UTR desses mRNAs (Standart,
1992). Na fecundao, essa protena fosforilada, e parece que a forma fosforilada no
pode mais bloquear a traduo. A fosforilao dessa protena poderia ser conseguida
pela quinase cdc2 que ativada na fecundao (Walker et al., 1996).
Outro apoio para a hiptese da mensagem mascarada vem da anlise da traduo
da mensagem codificando o receptor-1 do fator de crescimento do fibroblasto de
Xenopus. Essa mensagem est presente, mas no traduzida em ocitos em cresci-
mento. Ela comea a ser traduzida quando a progesterona inicia a maturao meitica.
Robbie e colaboradores (1995) mostraram que a nova traduo no depende do
alongamento da cauda poli(A) nem da translocao da mensagem. Ao contrrio,
parece haver uma protena de 43-kDA que est associada com a 3UTR do mRNA
Xfgfr1 e que possivelmente removida quando a progesterona estimula a maturao
do ocito. Essa associao estoca o RNA 5S sob uma forma inativa at ser mais
tarde incorporado em novos ribossomos. Ocitos de anfbios contm protenas
especficas que se ligam a alguns mRNAs mas no a outros (Richter e Smith, 1984;
(A) (B)
Extrato RNA KCI
RNA
antisenso (ug/ml)
Figura 12.19
Desmascarando a pequena subunidade da ribonucleo-
Peso molecular (KDa)
tdeo redutase (RR) em ocitos de moluscos. (A) A

mensagem RR do molusco est presente mas no
traduzida nos ocitos. Extratos de ocitos (pista 1) ou
ovos ativados (pista 2) foram misturados com
ribossomos, fatores de traduo, aminocidos radioati-
vos e traduzidos in vitro. As protenas foram corridas
em um gel, e auto-radiografadas. A protena RR
produzida no extrato do ovo, mas no no extrato do
ocito. Quando o mRNA dos ocitos (Pista 3) e dos
ovos (pista 4) foram isolados e separados de todas as
protenas (por extrao com fenol), a mensagem RR foi
traduzida em ambos os casos. (B) O grau de
desmascaramento depende da presena de uma alta con-
centrao de sal ou da adio de mRNA antisenso, que
bloqueia o stio ligante de protena da 3UTR. (Segun-
do Standart et al., 1990.)
Audet et al., 1987; Swiderski e Richter, 1988), mas no sabido se essas protenas
mascaram funcionalmente RNAs endgenos. possvel que essas protenas facili-
tem a ligao de uma protena mascaradora de RNA geral que se associaria com o
mRNA fazendo com que ele fique intraduzvel. A protena FGRY2 ativa em ocitos de
Xenopus poderia ser uma tal protena mascaradora geral (Bouvet e Wolffe, 1994).
Essa protena se complexa com certos transcritos de ocitos que esto sendo trans-
critos no ncleo e capaz de silenciar tais mensagens. O desempacotamento
global de tais mensagens na fecundao pode envolver alteraes inicas, a fosfo-
rilao de certas protenas, ou mudanas na composio do RNP.
A Hiptese da Cauda Poli(A)
Estudos recentes demonstraram que a poliadenilao alterada crtica para esta-

belecer o momento da traduo do mRNA do ocito e que essa poliadenilao alterada
regulada pela regio 3 no-traduzida.
A 3UTR pode regular a eficincia da traduo de mensagens do ocito contro-
lando o tamanho da cauda poli(A). Em ocitos, o encurtamento dessa cauda no
condena a mensagem extino. Apenas reprime sua capacidade de ser traduzida
(Hyman e Wormington, 1988). Essa represso muitas vezes temporria. Em ocitos
de camundongo, aqueles mRNAs que esto sendo usados para o crescimento e
metabolismo do ocito retm suas longas caudas poli(A) e so imediatamente tradu-
zidos. Entretanto, aqueles mRNAs que devero ser estocados no ocito para tradu-
o na maturao meitica (logo antes da ovulao) ou na fecundao tendem a
perder a maior parte da suas caudas poli(A) quando entram no citoplasma. Esses
Ncleo
Ocito
mRNA nuclear poliadenilado
Remoo da
cauda poli(A)
Mensagem Mensagem Cauda poli(A)
Ocito primrio
imaturo e em
crescimento
Dormente Ativamente traduzido
Recomeo da
meiose Adenilao Desadenilao
Cauda poli(A)
Ocito em
maturao
Ativamente traduzido Dormente
Figura 12.20
Modelo para a regulao da traduo dos mRNAs do ocito do camundongo. Os mRNAs a
serem usados no metabolismo do ocito tm seqncias de poliadenilao em suas 3UTRs e
retm suas caudas poli(A). Esses mRNAs so traduzidos at a maturao meitica (logo antes da
ovulao), quando perdem suas caudas poli(A). Aqueles mRNAs que permanecem
traducionalmente dormentes at a maturao meitica tm elementos de poliadenilao citoplas-
mtica (CPEs), assim como suas seqncias de poliadenilao, e eles perdem suas caudas
poli(A) no citoplasma do ocito imaturo. Quando a maturao meitica comea, as caudas so
restauradas e a traduo dessas mensagens iniciada.
RNAs somente retm entre 15 e 90 resduos de adenilato (Figura 12.20). Na matura-

o meitica, uma inverso ocorre. Aqueles mRNAs que haviam sido ativamente
traduzidos perdem suas caudas poli(A) e no mais funcionam, enquanto aqueles
mRNAs pouco adenilados que haviam sido estocados, rapidamente adquirem lon-
gas caudas poli(A) (150 a 600 adenilatos) e so traduzidos em protenas (Vassalli et
al., 1989; Huarte et al., 1992).
Em mamferos, as mensagens que so traduzidas no ocito imaturo tm uma se-
qncia padro AAUAAA de poliadenilao. Essas mensagens retm suas caudas
poli(A) at o recomeo da maturao meitica. Nesse momento, suas caudas so
desadeniladas, e se tornam inativas para a traduo. Aqueles mRNAs que iro ser
estocados no citoplasma do ocito imaturo para traduo aps a maturao tm suas
caudas poli(A) cortadas imediatamente aps abandonarem o ncleo. Essas mensa-
gens tem dois sinais em suas 3UTR: a seqncia de poliadenilao AAUAAA e uma
seqncia conhecida como o elemento de poliadenilao citoplasmtica (CPE), tam-
bm chamado de elemento de controle da adenilao (ACE); sua seqncia consensual
em camundongos e rs UUUUUAU (Fox et al., 1989; Bachvarova, 1992; Huarte et al.,
1992). Quando recomea a maturao do ocito, esses transcritos estocados so
novamente poliadenilados (provavelmente pela mesma enzima de poliadenilao en-
contrada no ncleo) e tornam-se ativos para traduo. A aquisio de uma longa
cauda crtica para o comeo da traduo do mRNA estocado do ocito; o controle
desse alongamento depende da presena ou ausncia de um CPE.
Em ocitos de Xenopus, a histria semelhante porm com algumas variaes.*

Tal como os mRNAs de ocitos de mamferos, uma longa cauda poli(A) necessria
para a traduo da mensagem. Uma troca na traduo de RNA ocorre durante a
maturao. Quando a vescula germinativa (o ncleo haplide) se desintegra para
iniciar a diviso meitica, liberam-se fatores de desadenilao. Os mRNAs sem CPEs
so desadenilados, enquanto as mensagens contendo CPEs so capazes de ser
poliadeniladas (Fox e Wickens, 1990; Varnum e Wormington, 1990; Varnum et al.,
1992). Tanto a seqncia de adenilao como o CPE so necessrios para a ativao
da traduo dessas mensagens, mas em alguns casos, a presena per se de uma
cauda poli(A) no suficiente. Nesses casos o processo de poliadenilao crtico
para a traduo da mensagem. Isto , um mRNA injetado com uma cauda poli(A) pr-
existente no ser traduzido. possvel que o processo da poliadenilao tambm
remova um inibidor protico que mascara a mensagem (Fox et al., 1989; McGrew et
al., 1989). Existem algumas diferenas entre os CPEs, e essas diferenas podem pro-
duzir diferentes padres de poliadenilao nas mensagens que os contm (Paris e
Richter, 1990). Por exemplo, um certo CPE com um trecho de 12 bases U inibe a
poliadenilao daqueles mRNAs que os contm, durante o perodo de maturao do
ocito. Porm, aps a fecundao, os mRNAs contendo esse CPE so poliadenilados
e traduzidos em protenas (Simon et al., 1992).
Isso sugere que h fatores especficos que se ligam a esses CPEs em diferentes
perodos. Joel Richter e colaboradores (Paris et al., 1991; Hake e Richter, 1994) de-
monstraram que uma protena do ocito de 58k-Da, CPEB, se liga a um CPE especfico
(UUUUUAAU). Essa protena foi isolada por cromatografia de afinidade de RNA, na
qual protenas do ocito de Xenopus foram incubadas com partculas de sefarose
ligada a RNAs contendo um CPE com a seqncia UUUUUAAU. A ligao de CPEB
a esse CPB previne a poliadenilao e pode inibir a traduo dessas mensagens at a
maturao do ocito (logo antes da fecundao). Nesse momento, CPEB fosforilada
por quinase cdc2. (A quinase cdc2 ativada pela progesterona, que estimula o ocito
a reiniciar a meiose antes da fecundao.) Essa fosforilao parece permitir a CEPB
recrutar uma polimerase poli(A) citoplasmtica para a mensagem (Ballantyne et al.,
1995; Gebauer e Richter, 1995). Essas mensagens ficam poliadeniladas e so subse-
qentemente traduzidas.
A quinase cdc2 (conforme lembramos do Captulo 5) somente ativa quando
complexada com uma ciclina. As protenas ciclinas tambm esto sob regulao para
traduo, e as 3UTRs dos mRNAs das ciclinas determinam os momentos que elas
sero traduzidas. Em ocitos de Xenopus, os mRNAs para ciclinas A1, B1 e B2 tm
todos, caudas poli(A) truncadas. Cinco horas aps o sinal de progesterona (na
primeira metfase meitica), as caudas poli(A) dessas mensagens de ciclina so
alongadas, e comea sua traduo (Sheets et al., 1994). Isso demonstra que avisos
desenvolvimentais podem regular qual conjunto de mRNAs deve tornar-se funcio-
nal. Isso mostra tambm que existem cascatas de regulao gnica da traduo
durante as horas precedendo a ativao do ncleo.
A ativao de mensagens pela poliadenilao parece ser um processo de im-
portncia crtica no desenvolvimento. No entanto, ainda no sabemos porque
caudas poli(A) curtas no so capazes de iniciar a traduo, enquanto caudas
*As funes das seqncias poli(A) e CPEs diferem entre ocitos de camundongo e de r. Nos
ocitos de r, a desadenilao que ocorre na maturao o estado de ausncia, e desadenilao
e inativao para traduo ocorrem, a no ser que CPE esteja presente. A poliadenilao ir ativar
a mensagem mascarada e manter a traduo dos mRNAs associados aos polissomos. Em ocitos
de camundongo, o CPE controla tanto a poliadenilao como a desadenilao. Em ocitos
imaturos, mensagens sem CPE so imediatamente traduzidas, enquanto mRNAs contendo CPE
so desadenilados e inativados para a traduo. Na maturao, o sistema do camundongo torna-se
semelhante ao de Xenopus, e os RNAs contendo CPE so agora poliadenilados e ativados para
traduo (Huarte et al., 1992).
Figura 12.21
Evidncia da ineficincia da sntese protica em nveis de pH pr-fecundao. O sistema de
[3H] Valina incorporada na protena (cpm x 103)
traduo in vitro feito de ovos no-fecundados mantido a pH 6.9 ou dializado para pH 7.4.
Mensagens endgenas so traduzidas muito mais eficientemente no pH ps-fecundao. (Se-
gundo Winkler e Steinhardt, 1981.)
maiores o podem. Uma possibilidade (Kuge e Richter, 1995) que a adio de

3poli(A) estimula a metilao do cap 5. Eles encontraram que a maturao
meitica estimulada por progesterona causava a metilao de caps de mRNA, e
que essa metilao podia ser inibida prevenindo-se a poliadenilao. Assim, os
terminais 3 e 5 da mensagem parecem interagir. Outra possibilidade (Hentze, 1997)
que a cauda poli(A) se ligue a um fator de inibio na subunidade ribossmica
40S para estimular a traduo.
A Hiptese da Eficincia da Traduo
Tempo (minutos) Os modelos precedentes da regulao da traduo assumem que o aparelho de

traduo capaz de traduzir eficientemente qualquer mensagem, mas que o mRNA
e os ribossomos so conservados separados por meios fsicos ou qumicos. Isso
no precisa ser o caso. O baixo pH inicial do ocito por si mesmo capaz de
impedir a sntese protica. Conforme discutido no Captulo 4, h uma dramtica
liberao de ons de hidrognio durante a fecundao do ovo do ourio-do-mar,
resultando em uma elevao do pH citoplasmtico. Quando Winkler e Steinhardt
(1981) aumentaram o pH de um lisado de ocitos (pH 6.9) para aquele do zigoto
(pH 7.4), eles obtiveram um surto de sntese de protena semelhante aquele obser-
vado durante a fecundao (Figura 12.21).
Hille e colegas (1985; Danilchik et al., 1986) sugeriram que a mudana de pH ativa
o aparelho de traduo do ovo. Ribossomos e fatores de iniciao derivados de
ovos no-fecundados eram menos ativos na traduo que aqueles derivados de
ovos fecundados. Ainda mais, a injeo de mensagem exgena de globina em ovos
no-fecundados no aumentou a quantidade de protena sendo sintetizada. O mRNA
da globina estava sendo traduzido s custas de outras mensagens, sugerindo que
h uma quantidade limitada de alguma poro do aparelho tradutor. O fator limitante
, provavelmente, um fator iniciador da traduo. A adio de eIF2B (o fator reciclante
ligante de GTP) ou eIF4F (que contm protenas cap ligantes) a um lisado preparado
de ovos no fecundados aumentou a eficincia tradutora desse lisado (Colin et al.,
1987; Lopo et al., 1988). A alcalinizao do citoplasma do ovo pode servir tanto para
desmascarar o mRNA (fisicamente ou atravs da poliadenilao) como para ativar
fatores de iniciao. Apoio para essa noo vem de Winkler e colegas (1985; Kelso-
Winemiller e Winkler, 1991), que viram aumentar de trs vezes a ligao do mRNA a
ribossomos aps elevao do pH.
Outros sistemas de ativao do mRNA:

Mensagens sem Cap e Mensagens Seqestradas
mRNA SEM cap. Os terminais 3 e 5 modificados do RNA mensageiro so necess-

rios para a traduo eficiente. J vimos como diferenas no comprimento da cauda
3poli(A) pode efetuar traduo diferencial de RNA em ocitos de Xenopus e Spisula.
Certas mariposas usam um mecanismo para controle de traduo envolvendo mu-
danas no cap 5 (Kastern et al., 1982). Para serem traduzidas eficientemente,
quase todas as mensagens eucariticas necessitam de um cap de 7-metilguanosina
em seus terminais 5 (Shatkin, 1976). As mensagens armazenadas da lagarta chifruda
do tabaco tm um cap no-metilado. A guanosina est presente, mas o grupo
metila no foi adicionado. Tais mensagens no so traduzidas em protenas em um

sistema livre de clulas. Porm, na fecundao, h um surto de metilao nesses
ocitos, e o caps so completados. Os mRNAs com os cap completos so ento
capazes de se ligar aos ribossomos e iniciar a traduo. Dados sobre mensagens
artificiais sugerem que estruturas secundrias (como alas tipo grampos de cabelo)
na regio 5 no-traduzida, tambm podem regular o perodo da traduo do RNA no
ocito (Fu et al., 1991).
mRNA SEQESTRADO. Em alguns casos, o aparelho sintetizador de protenas est

compartimentalizado, impedindo que o mRNA (dentro do RNP) chegue perto dos
ribossomos (Moon et al., 1982). Os mRNAs das histonas do ocito do ourio-do-
mar parecem ser regulados por esse tipo de restrio. As mensagens de histona do
ocito no so encontradas no citoplasma. Em lugar disso, esto localizadas no
grande proncleo do ovo no-fecundado. Somente quando o proncleo se desinte-
gra no fim da fecundao, o mRNA da histona entra no citoplasma (Figura 12.22; De
Leon et al., 1983). Isso pode no ser o caso para outras mensagens. Menos de 0.1
porcento do mRNA total do ovo no-fecundado se encontra no proncleo (Angerer
e Angerer, 1981; Showman et al., 1982). A observao de que algumas mensagens
maternas assim como ribossomos individuais esto ligadas ao citoesqueleto (Moon
et al., 1983) sugere que o citoesqueleto tambm pode separar mRNAs dos ribossomos.
possvel que todos esses mecanismos de controle da traduo sejam utilizados no
mesmo ocito. O ovo desenvolveu numerosos meios de regular a traduo do seu
mRNA armazenado, e as espcies esto habilitadas a usar vrios desses mecanis-
mos ao mesmo tempo.
70 minutos 80 minutos
80 minutos 90 minutos
Figura 12.22
Seqestro das mensagens de histona do ocito do ourio-do-mar. A sonda de cDNA que reco-
nhece a mensagem da histona hibridizada para ovos de ourio-do-mar fixados em vrios
perodos ps-fecundao. A auto-radiografia mostra a mensagem a ser seqestrada no proncleo
materno at sua degradao 80-90 minutos aps a entrada do espermatozide. (Segundo DeLeon
et al., 1983, cortesia de L. e R. Angerer.)
& Especulaes
A Ativao do Genoma Embrionrio

O PERODO de eventos do desen-
Sntese de RNA (gros por ncleo) (o)

volvimento difere enormemente
Densidade da banda de tRNA ()

entre espcies animais. Vinte e
Frao de clulas mveis ()

Frao de clulas
quatro horas aps a fecundao, larvas de com membranas
Drosophila eclodiram e esto ocupadas mveis
comendo; embries de anfbios esto ou
nos estgios de gstrula tardia, ou nurula
precoce; e o embrio do ourio-do-mar
uma blstula tardia ou gstrula precoce Densidade da banda
com centenas de clulas. Embries de ma-
Sntese de RNA
mferos no se apressam. Aps 24 horas
de desenvolvimento, um zigoto de camun-
dongo somente se dividiu uma vez, e o ovo
humano ainda tem 6 horas at sua primeira Clivagem
clivagem. Os organismos tambm diferem Tempo (minuto)
no perodo e aspereza, da transio do con-
trole citoplasmtico para a regulao do Figura 12.23
desenvolvimento pela transcrio nuclear. Ativao da transcrio e motilidade da membrana em Xenopus aps a dcima segunda diviso.
A transcrio foi avaliada por auto-radiografia, pelo nmero de gros de prata sobre os ncleos
Na maioria das espcies estudadas, o em- de embries imersos em uridina radioativa e pela ativao de um gene de tRNA clonado, cujo
brio precoce um mundo de RNA onde produto radioativo podia ser analisado medindo-se a densidade da banda no gel auto-radiografa-
o genoma nada conta (Wickens, 1992). Em do. A motilidade foi avaliada determinando-se a frao de clulas mostrando pseudpodos ou
outros embries, a transcrio nuclear se vesculas em registros de vdeo. (Segundo Davidson, 1986).
inicia logo aps a fecundao, e novos pro-
dutos dos genes so vistos durante o pri- sio na blstula intermediria, o desenvol- senvolvimento. Ele liga-se uma seqncia
meiro ciclo celular (Tabela 12.4). vimento emprega os materiais estocados no de DNA de 14 pares de bases encontrada
Embries de Xenopus parecem se de- citoplasma do ocito. Finalmente, a trans- nos promotores de vrios genes que so
senvolver atravs do estgio de clivagem crio iniciada no ncleo do embrio. Aps acionados no momento, ou pouco depois
sem necessidade de transcrio nuclear. a transio da blstula intermediria, dife- da transio da blstula intermediria
Conforme mencionado no Captulo 5, o n- rentes genes so acionados em momentos (Ovsenek et al., 1992). Se outros genes
cleo essencialmente inativo at a transi- diferentes, mas os genes ativados primeiro (como o gene -globina de Xenopus) esti-
o da blstula intermediria ao fim da 12 podem estar sendo ativados por fatores ma- verem conectados a essa seqncia, eles
diviso celular (Figura 12.23; Newport e ternos no ocito. A protena OZ1 um fator ficaro expressos na transio da blstula
Kirschner, 1982). At o momento dessa tran- de transcrio produzido no ocito em de- intermediria; porm, se a seqncia for
Tabela 12.4 Ativao de genomas embrionrios e durao do mRNA materno funcional
Perodo da primeira transcrio Perodo da maior Longevidade da

Organismo observvel do ncleoa nova transcrio nucleara mensagem materna funcional
Mamfero Estgio tardio de 1-clula (11-17 h) Mrula precoce de 8-16 clulas Estgio de clivagem
(Mus musculus) (dia 3) de 4 clulas (dia 2-4)
Anfbio Clivagem precoce ( 32 clulas) da 12a clivagem (4000 clulas) Estgio de nurula
v
(Xenopus laevis) blstula intermediria (3 h) da blstula intermediria (7 h) (15-30 h)

Equinodermo Zigoto (estgio pronuclear) Blstula intermediria Blstula tardia
(S. purpuratus e ( 0.5 h) (~128 clulas) (11h) (15 h)
v
outros ourios-
do-mar)
Inseto Blastoderma sincicial aps a Blastoderma celular aps a Organognese intermediria
(Drosophila 10a diviso nuclear (2.5 h) 14a diviso nuclear (3.5 h) (~15 h)
melanogaster)
Fonte: Adaptado de Wilt, 1964; Woodland e Ballantine, 1980; Clegg e Piko, 1983; Gilbert e Solter, 1985; Poccia et al., 1985; Weir e Kornberg,
1985; Davidson, 1986; Edgar e Schubiger, 1986; Shiokawa et al., 1989.
a Perodos indicam incubao nas temperaturas apropriadas.
mutada eles no sero corretamente expres-

sados (Figura 12.24). possvel que essa
Auto-radiograma Sem molde
protena OZ1 seja por si mesma inativa, at
que algum outro fator (talvez associado com
o alongamento do ciclo celular) a ative.
O conceito de que protenas maternas
Sem intensificador MBT globina
podem ativar o genoma durante a transio
da blstula intermediria apoiado por in-
vestigaes sobre o mutante o da salaman-
dra axolotle. Essa uma mutao de efeito Intensificador MBT
globina
materno no qual fmeas homozigotas pro- tipo selvagem
duzem ovos que so fecundados com su-
cesso sendo completamente normais at os
estgios de clivagem tardia e blstula pre- Intensificador
MBT mutante globina
coce (Briggs e Cassens, 1966). Na blstula
intermediria, ovos descarregados por uma
fmea o/o tm mitoses mais lentas e conti-
nuam a formar um lbio do blastporo dor- Outro intensificador
MBT mutante globina
sal, mas sempre param na gastrulao.
Malacinski (1971) e Carroll (1974) mostra-
ram que em embries de fmeas do tipo sel-
vagem, RNA novo e sntese protica come- Figura 12.24
am nesse estgio de blstula intermediria. Efeito do intensificador da transio da blstula intermediria (MBT) ligante de OZ1. A seqn-
No entanto, as blstulas intermedirias de cia de DNA que ativa a transcrio na MBT para o gene GS17 de Xenopus laevis foi colocada
em um gene da -globina e injetada em ocitos de Xenopus. Essa construo de globina ficou
ovos de mes o/o no sofrem esse surto de expressa no estgio de blstula intermediria. Genes de globina sem esse intensificador ou com
sntese de protena e tm um padro de pro- um intensificador MBT mutado no mostraram expresso significativa nesse estgio. (Segundo
tenas idntico aquele produzido por zigotos Ovsenek et al., 1992.)
enucleados (Figura 12.25). Briggs e Cassens
dendo-se artificialmente o perodo G2 de Ourios-do-mar no apresentam uma
(1966) demonstraram que os embries de
embries jovens com cicloheximida. Essa transio da blstula intermediria distin-
mes o/o no tinham um fator que ativa o
ativao pode ser conseguida com embri- ta. Embora seus ovos enucleados possam
genoma nuclear da blstula intermediria. Na
es to jovens como os do dcimo ciclo, se desenvolver atravs dos estgios de
ausncia de tal fator, o nico desenvolvimento
mas no antes. Parece, portanto, que a mai- blstula, e embora certamente h um sur-
que ocorre aquele que pode ser provido
oria dos genes ficam capacitados para a ati- to de transcrio nuclear a partir dos n-
pelo mRNA estocado no ocito. Em anfbi-
vao durante o ciclo 10, mas no iniciam cleos da blstula intermediria, no pare-
os, h material estocado no ocito suficiente
sua transcrio at o ciclo 14. ce haver perodo no desenvolvimento do
para permitir ao embrio entrar na gastrula-
o. Porm, sem a sntese de novo RNA, no
pode ocorrer ulterior desenvolvimento.
Em Drosophila tambm parece haver
uma transio da blstula intermediria dos
mRNAs e protenas do citoplasma do ocito
para a transcrio nuclear. Essa transio
primeiro vista aps a dcima diviso nucle-
ar. Esse o primeiro ciclo com uma fase G2,
que aumenta de comprimento entre 10 mi-
nutos aps o dcimo ciclo at 60 minutos
aps o dcimo quarto. Na fase G2 do dci-
mo quarto ciclo, o genoma est transcre-
vendo no mais alto nvel de atividade visto
durante a embriognese (Anderson e
Lengyel, 1979; Weir e Kornberg, 1985). Ed-
gar e Schubiger (1986) mostraram que n-
cleos de Drosophila tornam-se competen- Figura 12.25
tes para transcrever no ciclo 10 mas que a Incorporao de [3H]uridina no RNA dos embries de axolotles tipo selvagem e mutante o/o.
maioria dos genes necessita de fases G2 mais Embries em estgio de blstula foram incubados no precursor RNA radioativo por 3 horas,
lavados, fixados, corados e observados por auto-radiografia. (A) Clulas embrionrias normais
longas para ficarem ativados. A alta ativida- mostrando intensa radioatividade, indicando sntese de RNA. (B) Embrio de uma fmea o/o.
de transcricional de embries de ciclo 14 Colorao est presente, mas no se v marcao significativa, indicando que pouca ou nenhuma
pode ser induzida prematuramente, esten- transcrio havia ocorrido. (Segundo Carroll, 1974.)
ourio-do-mar em que o ncleo embrio- te o estgio de 2 clulas. Entre os estgi- toplasma de embries tardios de 1 clula
nrio no esteja funcionando. Baixos n- os de 1 e 2 clulas do embrio, mais de o suporta. Como inibidores da protena-
veis de transcrio (incluindo novas men- dois teros das protenas sofrem uma al- quinase (PKA) dependente de cAMP ini-
sagens de histonas) podem ser vistos em terao de cinco vezes em sua sntese bem a competncia do citoplasma para
proncleos mesmo antes de sua fuso (Latham et al., 1991, 1992). Quando culti- suportar a transcrio, possvel que a
(Poccia et al., 1985). Essas mensagens re- vadas com o inibidor da transcrio a- ativao de PKA seja essencial para a
cm-transcritas entram no pool maior aminitina (que bloqueia a RNA polimera- aquisio pelo citoplasma de seu estado
do mRNA materno. A cromatina das quase II), ovos de camundongo so bloquea- transcricionalmente permissivo. Outros
tro primeiras clivagens feita primaria- dos no estgio bicelular (Flach et al., 1982). mamferos no seguem necessariamente
mente com histonas estocadas no cito- Em camundongos, os mRNAs maternos o mesmo programa. A sntese do mRNA
plasma do ocito e histonas sintetizadas persistem por cerca de dois dias- a gros- humano primeiro vista no estgio de 4
de mensagens maternas. Do estgio de so modo, o mesmo tempo que em outros clulas, e inibidores da transcrio blo-
16 clulas em diante, porm, a maioria das filos- e em seguida, durante o segundo queiam o desenvolvimento no estgio de
histonas sintetizada de mensagens dia, os mensageiros maternos so rapida- 4- a 8-clulas. Em vacas e ovelhas, a ati-
transcritas de ncleos de clulas embrio- mente degradados (Clegg e Piko, 1983; vidade transcricional vista nos estgi-
nrias (Goustin e Wilt, 1981). Esse padro Paynton et al., 1988). medida que os os de 8- a 16-clulas (Braude et al., 1988;
est em contraste marcado com aquele de produtos gnicos codificados pelas men- Telford et al., 1990).
embries de Xenopus, nos quais um gran- sagens maternas decaem, eles so subs- Em todas as espcies animais obser-
de pool de protena histona estocada titudos por novas protenas produzidas vadas, h um perodo de tempo em que
pela me, e um grande suprimento de men- de mRNA que est sendo recm-transcri- os fenmenos do desenvolvimento pre-
sagem histona estocada no ocito so uti- to do ncleo. Na maioria dos casos, os coce so controlados pelas mensagens
lizados por milhares de clulas. cromossomos derivados do espermatozi- e protenas estocadas no citoplasma do
Embries de mamferos, ascdios, de so provavelmente ativados simulta- ocito. Na maioria das espcies (os ma-
nematides e moluscos tambm parecem neamente com cromossomos derivados do mferos sendo a exceo), o genoma nu-
iniciar a transcrio dentro do primeiro ovo (Gilbert e Solter, 1985). Latham e cole- clear ativado muito antes das mensa-
ciclo celular (Schauer e Wood, 1990). Po- gas (1992) transplantaram ncleos para di- gens maternas serem degradadas, fazen-
rm, tal como em muitos eventos do deferentes citoplasmas e demonstraram que do com que ambos conjuntos de mRNAs
senvolvimento, no se pode dizer que os o citoplasma muda durante a parte tardia sejam traduzidos simultaneamente. Final-
mamferos tenham aperfeioado uma es- do estgio de 1 clula. O citoplasma da mente, quando as mensagens maternas
tratgia uniforme. No grupo mamfero mais clula precoce do embrio de 1 clula no tiverem sido degradadas nos dias 1 e 2,
estudado, os camundongos, o genoma suporta a transcrio de genes de ncleos transcritos do genoma embrionrio se
embrionrio extremamente ativo duran- os de embries mais tardios. Porm, o ci- tornaro mais importantes.
Regulao dos genes da traduo em larvas e adultos

O controle da traduo no existe somente para ovos e seus embries precoces.
Estudos recentes mostraram o uso generalizado da regulao dos genes da traduo
para vrios processos crticos do desenvolvimento mais tardio. Tal como em estudos
sobre a embriognese precoce, as 3UTR mostraram ter um papel crtico. Essa regio
da mensagem por muito tempo vista como terra perdida de informao gentica
(Wickens, 1992) est comeando a se tornar uma das reas mais interessantes da
regulao gnica do desenvolvimento.
Determinao de Gametas em C. elegans
Um papel particularmente dramtico para a 3UTR no mRNA mascarado visto em

Caenorhabditis elegans. Esse verme nematide tem um corpo feminino, mas herma-
frodita, produzindo tanto espermatozide como vulo em perodos diferentes. As
primeiras clulas germinativas a se diferenciarem no nematide tornam-se espermato-
zide, os quais so armazenados no tero para uso posterior. Aps a quarta muda (de
larva para adulto), as clulas germinativas deixam de produzir espermatozide e come-
am a produzir vulos. Esses vulos iro finalmente ser fecundados pelo espermatozi-
de estocado. O processo determinando qual o caminho a clula germinativa segue
para espermatozide ou para vulo depende da represso da traduo de mensagens
diferentes. A iniciao da formao de espermatozide conseguida pela represso da
mensagem tra-2. A protena TRA-2 essencial para o desenvolvimento de vulos e

clulas do organismo feminino, e a represso da traduo do mRNA tra-2 em clulas no-traduzido traduzido
germinativas faz com que elas se tornem espermatozide. A 3UTR dessa mensagem vulos
espermatozides
contm duas regies de 28 nucleotdeos, cada uma das quais parece ligar uma protena
repressora putativa que sintetizada durante estgios larvais associados esperma- traduzido no-traduzido
tognese. Se essas regies forem mutadas, a traduo de mRNA tra-2 no reprimida,
nenhum espermatozide produzido, e o nematide fmea funcional em lugar de
hermafrodita (Evans et al., 1992). Uma protena que se liga a essas regies foi isolada; Figura 12.26
e pode mediar a represso da traduo (Figura 12.26; Goodwin et al., 1993). A transio de espermatognese para oogne-
se durante o quarto instar da larva de C. elegans
A histria no termina aqui. A mudana de espermatognese para ovognese
regulada pela traduo das mensagens tra-2 e
tambm requer a supresso da traduo de mRNA fem-3 atravs de sua 3UTR. A fem-3. Em ambos os casos, o bloqueio da tra-
protena FEM-3 crtica para a especificao de clulas do organismo masculino e duo ocorre atravs da ligao de uma prote-
produo de espermatozide. A transcrio do gene fem-3 inibida pela protena na inibidora respectiva 3 UTR.
TRA-2, mas a represso de mensagens fem-3 existentes tambm necessria. A re-
presso da traduo parece ser afetada pela ligao de um inibidor de traduo pela
3UTR do mRNA fem-3 (veja Figura 12.26; Ahringer and Kimble, 1991; Evans et al.,
1992). Assim, a iniciao da espermatognese em nematides hermafroditas e a transi-
o de espermatognese para ovognese parece ser regulada pela represso da tradu-
o atravs da 3UTR.
RNA Antisenso Natural
Parece que tudo que as protenas podem fazer, os RNAs tambm podem. Se protenas
podem regular a traduo ligando-se a stios especficos na 3UTR de RNAs mensa-
geiros, assim tambm o podem fazer RNAs pequenos. O RNA de controle da tradu-
o foi originalmente proposto por Bester e colaboradores, em 1975. Desde ento, foi
encontrado em C. elegans e pintos.
Caenorhabditis elegans faz jus a seu nome, tendo desenvolvido uma soluo par-
ticularmente elegante para o problema do controle da expresso gnica larval (Lee et al.,
1993; Wightman et al., 1993). Altos nveis do fator de transcrio LIN-14 especificam a Figura 12.27
sntese protica em rgos larvais precoces. Depois disso, a protena LIN-4 no mais Modelo hipottico para a regulao do mRNA
vista, embora mensagens lin-4 sejam detectadas atravs de todo o desenvolvimento. C. lin-14 pelos mRNAs lin-4. (Isso no foi con-
firmado experimentalmente.) O gene lin-4 no
elegans capaz de inibir a sntese de LIN-14 de seu mRNA, ativando o gene lin-4. Em
produz um mRNA. Em lugar disso, ele produz
mutaes de perda-de-funo de lin-4, a protena LIN-14 sintetizada continuamente, e RNAs pequenos que no produzem protenas.
o desenvolvimento precoce do nematide interrompido. O gene lin-4 no codifica Esses RNAs so complementares a uma se-
protena alguma. Em vez disso, ele codifica dois pequenos mRNAs (o mais abundante qncia repetida na 3UTR do mRNA lin-14.
tendo 25 nucleotdeos de comprimento, o outro continuando por mais 40 nucleotdeos) (Segundo Wickens e Takayama, 1994.)
Seqncia de codificao
Poli(A)
que so complementares a um stio imperfeitamente repetido na 3UTR de lin-14. A

Figura 12.27 mostra um esquema hipottico do que pode estar acontecendo. Parece que
a ligao desses transcritos lin-4 para a 3UTR do mRNA lin-14 no sinaliza a destrui-
o da mensagem; antes, previne a mensagem de ser traduzida. [RNA5.html]
No embrio do pinto, mRNA antisenso visto regular a sntese do fator do
crescimento do fibroblasto bsico (FGF2). Alguns tecidos (como o mesonefro)
tm mensagens Fgf2 sem o transcrito antisenso, enquanto outros tecidos (como
uma linha no-diferenciada do mesoderma de membros) contm tanto o mRNA de
Fgf2 como seu complemento antisenso. Acredita-se que o RNA antisenso conduz
a sua prpria degradao e a do transcrito Fgf2 (Kimelman e Kirschner, 1989;
Savage e Fallon, 1995).
Disjuntores do Controle da Traduo
A regulao oposta e coordenada das duas principais protenas ligantes de ferro

de mamferos, ferritina e o receptor de transferrina, foi recentemente elucidada
(veja Klausner e Harford, 1989; Klausner at al., 1993). Os mRNAs tanto da ferritina
como do receptor de transferrina contm regies que ligam uma protena ligante
responsiva ao ferro (IRE-BP). A mensagem da ferritina tem essa seqncia em sua
seqncia lder (5 para a regio codificadora de protena), enquanto a mensagem
do receptor de transferrina contm duas dessas seqncias na sua regio 3 no-
traduzida. Quando o ferro celular est em baixo suprimento, a protena ligante de
ferro no pode ligar o ferro e encontra-se em uma conformao para se ligar a
esses mRNAs. Quando se liga seqncia lder da mensagem da ferritina, ela
bloqueia sua traduo, impedindo assim a sntese dessa protena de armazenagem
de ferro. Simultaneamente a protena se liga ao terminal 3 da mensagem do recep-
tor de transferrina, estabilizando-a contra a degradao e permitindo a produo
de mais receptores de transferrina. Os receptores de transferrina trazem mais ferro
para o interior da clula (Figura 12.28).
mRNA da FERRITINA
IRE-BP ausente IRE-BP presente
Seqncias de reconhecimento para IRE-BP liga-se seqncia

protena reguladora ligante de ferro de reconhecimento
(IRE-BP)
Regio codificadora Traduo Sem traduo de mRNA

de protena de mRNA
mRNA DO RECEPTOR DE TRANSFERRINA

IRE-BP ausente IRE-BP presente
Seqncias de
Figura 12.28 reconhecimento para IRE-BP
Regulao da traduo coordenada e oposta
da ferritina e do receptor da transferrina.
Ambas mensagens contm regies que so
reconhecidas por uma protena reguladora
ligante de ferro (IRE-BP). Na ausncia de fer-
ro intracelular, essa protena se liga a essas
Regio
mensagens inibindo a traduo do mRNA da
codificadora
ferritina e estabilizando o mRNA para o rede protena
ceptor de transferrina. (Segundo Klausner e
Harford, 1989.) Degradao de mRNA Sem degradao de mRNA
Editorao do RNA
Um dos mecanismos mais inesperados do controle da traduo foi visto recente-

mente na regulao das protenas apolipoprotenas-B. Protenas apo-B so compo-
nentes de protenas sricas portadoras de lipdios, e so consideradas como tendo
um papel preponderante na gnese da arteriosclerose. Apo-B48 (48-kDA) sinteti-
zada no intestino e torna-se parte do complexo de quilomcrons necessrios para
absoro e transporte do colesterol e triglicerdeos dietticos. Apo-B100 (100-KDA)
produzida no fgado e a principal componente das protenas portadoras de lipdios
de densidade muito-baixa, baixa e intermediria. Apo-B100 e Apo-B48 so transcri-
tas do mesmo gene e no se nota processamento diferencial algum para gerar mRNAs
diferentes para essas duas protenas. A anlise dos DNAs de Apo-B indica que a
mensagem apo-B no fgado codifica todo o peptdeo Apo-B100. A mensagem intes-
tinal, porm, difere daquela do fgado por apenas uma base. Uma transio C-para-
U ocorreu, mudando um cdon normal de glutamina (CAA) para um cdon terminador
(UAA) no cdon 2153. Essa diferena resulta na formao de uma protena Apo-B48
mais curta no intestino (Chen et al, 1987; Powell et al., 1987). Essa editorao do RNA
um exemplo de uma situao em que uma mudana especfica de base feita em um
RNA existente, com isso alterando a mensagem. O transcrito primrio do gene apo-
B no parece ser editado, e a editorao C-para-U pode estar sendo conseguida por
um fator contido no ncleo. Por isso, Lau e colegas (1991) concluram que essa
editorao do RNA realizada durante os passos de processamento do RNA. A
protena responsvel por essa editorao a citidina desaminase (Navaratnam et al.,
1995); e pela alterao da estrutura seqencial do RNA prximo da citosina editada,
Chen e colaboradores (1990) descobriram duas regies que so crticas para a
editorao. Uma a regio de nucleotdeos conservada por vrias espcies de mam-
feros, e a outra uma seqncia espcie-especfica mais a jusante. Eles postulam
uma enzima que reconhece essas duas regies e coloca seu stio cataltico sobre a
citosina em questo. A desaminao dessa citosina converte-a em um resduo de
uridina (Figura 12.29). At agora tem sido um axioma da biologia molecular que a
seqncia de nucleotdeos de uma mensagem, uma vez transcrita, no pode ser
alterada. Embora a editorao do RNA seja um evento excepcionalmente raro,
tambm visto em certas mensagens de organelas (veja Scott, 1995; Simpson e
Thiemann, 1995), na alterao da permeabilidade do on de clcio de certos canais
inicos com portal de glutamato, durante o desenvolvimento do crebro de mamfe-
ros (Sommer et al., 1991; Higuchi et al., 1993), e na alterao do fator de transcrio
WT1 (Sharma et al., 1994).
Enzima editora
Figura 12.29
Modelo de um mecanismo enzimtico que
poderia permitir a desaminao de uma
citosina especfica do mRNA apo-B. Duas
mRNA Apo-B 5 3 regies so necessrias para a editorao do
RNA: uma regio que conservada em vri-
No espcie- Espcie-especfico os mamferos e um elemento espcie-espe-
NH 3 U cfico que tem uma estrutura tipo grampo de
especfico
cabelo que poderia ser reconhecida pela
Stio cataltico Stio de reconhecimento enzima. (Segundo Chan, 1993.)
Subunidades
Heme
Heme
Heme
Heme
Subunidades
Figura 12.30
A estrutura da hemoglobina do humano adulto, com quatro cadeias polipeptdicas (duas , duas
) e quatro molculas de heme. (Segundo Dickerson e Geis, 1983.)
Controle da traduo e sntese protica coordenada:

Produo de Hemoglobina
Um dos principais problemas da regulao gnica a produo coordenada de vrios
produtos de diferentes regies do genoma. Quando uma clula sangnea vermelha
em desenvolvimento sintetiza hemoglobina, ela deve garantir que as cadeia de
globina, globina e molculas de heme estejam na relao 2:2:4 (Figura 12.30). Qual-
Succinil coenzima
quer desvio maior dessa relao resulta em molstias severamente debilitantes.
A + glicina A molcula de heme parece regular a sntese proporcional dos componentes da
hemoglobina. Esse feito conseguido de duas maneiras. Primeiro, um excesso de
sintase DALA heme (i.e., heme no ligado uma protena como a globina) desliga sua prpria sntese
(Karibian e London, 1965), inativando sintase aminolevulinato (sintase DALA), a
primeira enzima na via de produo de heme (Figura 12.31). Assim, quando existe mais
cido aminolevulnico
heme presente do que molculas para o ligar, ele no ser mais produzido. Em segundo
lugar, o excesso de heme estimula a produo da protena globina (Gribble e Schwartz,
Inibio
Porfobilingeno 1965; Zucker e Schulman, 1968). Quando heme (ou sua forma oxidada, hemina)
adicionado a um sistema de traduo isento de clulas mas que inclui todos os fatores
necessrios para traduzir mRNAs (Tabela 12.5), a sntese da globina muito estimula-
Protoporfirina IX da (Figura 12.32A). Portanto, se no h globina para ligar o heme, o excesso de heme
desliga sua prpria sntese e estimula a produo de mais globina.
Heme Vrios laboratrios investigaram como uma molcula to pequena como o heme
pode regular a sntese protica. Em 1972, Adamson e colegas demonstraram que o
Figura 12.31 efeito estimulador do heme na sntese da globina podia ser imitado pela adio ao
Regulao por retroalimentao (feedback) da sistema de traduo daquelas protenas que esto frouxamente associadas aos
sntese do heme. (Segundo Harris, 1975.) ribossomos. Como tais solues so ricas em fatores de iniciao da traduo, cada
Tabela 12.5 Componentes do sistema de traduo in vitro contendo lisato de reticulcitos de coelho
Concentrao Concentrao
Componente (em 100 l) Componente (em 100 l)
Lisato de reticulcitos (1:1) 50 l KCl 76 mM

Tampo tris-HCl (pH 7.6) 10 mM Mistura proporcional de aminocidos 6-170 M
ATP 1 mM [14 C]Leucina 0.8 Ci
GTP 0.2 mM leucina fria 26 M
Fosfato de creatina 5 mM Hemina 10-30 M
Fosfoquinase de creatina 10 g H2O para trazer o volume da reao
Acetato de magnsio 2 mM para 100 l
Fonte: Segundo London et al., 1976.
fator foi testado separadamente. Achou-se que o fator 2 de iniciao eucaritica (eIF2)
restaurava a sntese protica para lisatos deficientes de heme no sistema de traduo
(Figura 12.32B). Esse fator de iniciao responsvel pela combinao com o tRNA
iniciador e complex-lo subunidade ribossmica 40S.
Qual, ento, a relao entre heme e eIF2? Para responder a isso, London e cola-
boradores (Levin et al., 1976; Ranu et al., 1976; Ramaiah et al., 1992) adicionaram
lisatos deficientes de heme a sistemas de traduo suplementados com heme. Eles
acharam que uma poro do lisato deficiente de heme podia realmente deprimir a
sntese da globina no sistema de traduo ao qual ele fora adicionado. Esse achado
indicou que um inibidor estava presente. Essa protena inibidora responsiva ao heme,
HRI, foi isolada e verificou-se que era uma quinase capaz de fosforilar eIF2. A hemina
liga-se a essa quinase, inativando-a (veja Chen e London, 1995).
O eIF2 finalmente ir parar a traduo. Normalmente, uma vez que as subunida-
des ribossmicas se juntam, o eIF2 liberado como um complexo com GDP
(Raychaudhury et al., 1985). Para o eIF2 ser novamente usado na iniciao, ele
+Hemina
[14C]Leucina incorporada (cpm x 10-4)
[14C]Leucina incorporada (cpm x 10-3)
+Hemina
Figura 12.32
Sem adies
Regulao da traduo por hemina e pelo fa-
tor 2 de iniciao eucaritica. (A) Traduo do
mRNA da globina no sistema de sntese
protica in vitro do reticulcito de coelho. A
incluso de hemina ocasiona uma dramtica
elevao da sntese protica. (B) Efeito da adi-
-Hemina o do fator 2 de iniciao eucaritica no siste-
ma de traduo in vitro do reticulcito de coe-
lho. O eIF2 elevou o nvel da sntese protica
para perto daquele do sistema estimulado pela
hemina. (A segundo London et al., 1976; B
(A) Tempo (minutos) (B) Tempo (minutos) segundo Clemens et al., 1974.)
Figura 12.33
Subunidade ribossmica 40S Traduo
Esquema para o controle da traduo da sntese
Complexo de iniciao
da globina. Como um resultado da inativao
pela protena quinase, o eIF2 depletado a no
ser que o heme inative a protena quinase.
Protena Heme Protena quinase
quinase ativa inativa
eIF2 - P (Seqestra o
fator de reciclagem)
dever complexar-se com o eIF2B (fator de reciclagem). Esse eIF2B troca GTP por
GDP (veja Figura 12.11), e o complexo eIF2-GTP resultante capaz de entrar num
outro ciclo de iniciao. Porm, se a subunidade do eIF2 for fosforilada, o fator de
reciclagem eIF2B se liga mas no consegue se despregar (Gross et al., 1985; Thomas
et al., 1985). Por fim, todo eIF2B (cuja concentrao 10- a 20-vezes mais baixa que
aquela do eIF2) ligado a esses complexos, e a traduo cessa. A adio de eIF2B a
lisatos deficientes em heme restitui a sntese protica aos nveis dos sistemas
suplementados com heme (Grace et al., 1984). Heme em excesso capaz de se ligar
protena quinase, inativando-a (Fagard e London, 1981). Quinase inativada no ir
fosforilar eIF2, fazendo com que a traduo prossiga. Assim, enquanto heme esti-
ver presente, a sntese da globina continuar (Figura 12.33).
A histria do controle da traduo da sntese da globina no termina aqui. Confor-
me discutimos no Captulo 11, h quatro genes globina ativos por clula diplide e
somente dois genes globina ativos. Se cada gene fosse transcrito e traduzido com
a mesma velocidade, esperar-se-ia duas vezes mais molculas globina que globina.
Isso claramente no o caso. Encontra-se uma relao 1.4:1 de mRNA :, mas uma
relao 1:1 de protenas (Lodish, 1971). A igualizao das protenas parece envolver
regulao da traduo.
Kabat e Chappell (1977) sugeriram que a igualizao feita no estgio de inicia-
o da traduo. Eles mostraram que o mRNA da globina compete com a mensa-
gem da globina para fatores de iniciao e que a mensagem da globina parece
ser o melhor competidor. A mensagem da globina reconhecida mais eficiente-
mente pelos fatores de iniciao sendo por isso traduzida mais freqentemente.
Quando os dois mRNAs esto presentes em quantidades iguais, mas com um supri-
mento de fatores de iniciao severamente limitante, somente 3% da protena resul-
tante era globina. Porm, quando o mRNA no-fracionado (mensagens e
globinas de clulas lisadas) foi adicionado a um excesso de tais fatores de iniciao,
todos os mRNAs foram traduzidos com igual eficincia e a relao : resultante foi
de 1.4:1. A protena cap ligante foi implicada como sendo o fator responsvel pela
discriminao entre os dois tipos de mensagem da globina (Ray et al., 1983; Sarkar et
al., 1984). Enquanto ainda no conhecido como se d a discriminao, conhecido
que a estrutura secundria da seqncia lder 5 afeta a eficincia da traduo (Pelletier
e Sonenberg, 1985). Como pode ser visto na Figura 12.34, os terminais 5 das mensa-
gens e globina diferem significativamente. Assim, as razes apropriadas de
globina e globina, e heme so estabelecidas no passo de iniciao da traduo.
Embora a sntese da hemoglobina envolva regulao nos nveis de transcrio e
processamento de RNA, a molcula final construda atravs da coordenao fina
ao nvel da traduo.
mRNA da globina
mRNA da globina
Fator 12.34
Ao mesmo tempo, outro notvel exemplo da regulao da traduo est ocorrendo Provveis estruturas secundrias para os ter-
minais 5 das cadeias de -globina e de -
dentro da clula vermelha do sangue. O mRNA codificando a enzima 15-lipoxigenase
globina do camundongo. Os cdons AUG ini-
(15-LOX) transcrito durante os estgios precoces do desenvolvimento da clula ciadores da traduo esto coloridos. (Segun-
vermelha do sangue na medula ssea, mas ele somente traduzido quando a clula do Pavlakis et al., 1980.)
vermelha do sangue est a ponto de entrar na circulao perifrica. Essa enzima
responsvel pela digesto das mitocndrias durante os ltimos estgios da formao
da clula vermelha sangnea. A 3 UTR do mRNA 15-lox tem 10 repeties acopladas
de uma seqncia rica em pirimidina que liga uma protena de 48-kDA especfica para
eritrcitos. Essa protena reprime a traduo da mensagem 15-lox at o eritrcito estar
pronto para entrar na circulao (Ostarek-Lederer et al., 1994). No ainda conhecido
como essa protena repressora regulada durante o desenvolvimento da clula ver-
melha sangnea.
Eplogo: Regulao Ps-traduo

O controle da traduo, portanto, um mecanismo importante e largamente emprega-
do para regular a expresso gnica durante o desenvolvimento. Ele pode ser usado
para ativar um certo conjunto de mRNAs existente em um certo momento ou para
regular a relao pela qual diferentes mRNAs competitivos podem ser traduzidos. Os
animais desenvolveram vrios mecanismos pelos quais mRNAs podem ser armazena-
dos no ocito para posterior uso durante a embriognese precoce. As bases molecu-
lares desses mecanismos reguladores da traduo esto sendo estudadas.
Porm, a histria ainda no acabou quando o peptdeo sintetizado. Uma vez
que uma protena tiver sido produzida, ela torna-se parte de um nvel mais elevado
de organizao. Ela pode tornar-se parte da estrutura de suporte da clula, ou ela
pode se envolver em um dos variados caminhos enzimticos para a sntese ou degra-
dao de metablitos celulares. De qualquer maneira, a protena individual agora
parte de um complexo ecossistema que a integra em um relacionamento com nu-
merosas outras protenas. Assim, ainda podem ocorrer vrias mudanas que deter-
minam se uma protena est ou no ativa. Em primeiro lugar, algumas protenas
recmsintetizadas so inativas sem ulteriores modificaes que podem envolver a
remoo por clivagem de certos setores inibitrios da protena, ou a ligao de um
pequeno composto para intensificar sua atividade. Segundo, algumas protenas
podem ser inativadas seletivamente. Em alguns casos, a inativao envolve a degra-
dao da prpria protena; em outros, a inativao pode ser causada pela ligao de
um ligante inibidor. Terceiro, algumas protenas tm que ser endereadas a seus
destinos intracelulares especficos. A clula no simplesmente um saco de enzimas:
protenas so muitas vezes seqestradas em certas regies, tais como membranas,
lisossomos, ncleos ou mitocndrias. Em quarto lugar, algumas protenas tm que
se juntar a outras protenas para formar uma unidade funcional. A protena hemoglo-
bina, o microtbulo e o ribossomo so todos exemplos de numerosas protenas
juntadas para formar uma unidade funcional. Portanto, a expresso da informao
gentica ainda pode ser influenciada no nvel ps-traduo. Alguns desses casos
(como a fosforilao do fator promotor da mitose) j foram discutidos, enquanto
outros sero discutidos medida que aparecerem. Neste ponto, abandonaremos
nossa discusso dos aspetos moleculares da expresso gnica e voltaremos para a
dinmica do embrio em desenvolvimento. Podemos agora olhar para processos
desenvolvimentais precoces para estudar mecanismos moleculares para a determi-
nao do destino celular e da estrutura tissular.
LITERATURA CITADA
Adamson, S. D., Yau, P. M. P., Herbert, E. and dynamic changes during oocyte maturation and Chan, L. 1993. RNA editing: Exploring one
Zucker, W. V. 1972. Involvement of hemin, a early development. RNA 1: 64-78. mode with apolipoprotein B mRNA. BioEs-
stimulatory fraction from ribo-somes, and a says 15: 33-41.
Belote, J. M., McKeown, M., Boggs, R. T.,
protein synthesis inhibitor in the regulation of
Ohkawa, R. and Sosnowski, B. A. 1989. Molecu- Chen, C.-Y. A., You, Y. and Shyu, A.-B. 1992.
hemoglobin synthesis. J. Mol. Biol. 63: 247-264.
lar genetics of transformer, a genetic switch Two cellular proteins bind specifi-cally to a
Ahringer, J. and Kimble, J. 1991. Control of the controlling sexual differentiation in Drosophi- purine-rich sequence necessary for the destabili-
sperm-oocyte switch in Caenorhabditis elegans la. Dev. Genet. 10: 143-154. zation function of a c-fos protein coding region
by the fem-3 3' untranslated region. Nature 349: determinant of mRNA instability. Mol. Cell. Biol.
Berget, S. M. 1995. Exon recognition in ver- 12: 5748-5757.
346-348.
tebrate splicing. J. Biol. Chem. 270: 2411-2414.
Anderson, K. W. and Lengyel, J. A. 1979. Rates Chen, C.-Y. A., Chen, T.-M. and Shyu, A.-B.
Bester, A. J., Kennedy, D. S. and Heywood, S. M. 1994. Interplay of two functionally and
of synthesis of major classes of RNA in Droso-
1975. Two classes of translational con-trol RNA: structurally distinct domains of the c-fos AU-
phila embryos. Dev. Biol. 70: 217-231.
Their role in the regulation of protein synthesis. rich element specifies its mRNA-desta-bilizing
Angerer, L. M. and Angerer, R. C. 1981. De- Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72: 1523-1527. function. Mol. Cell. Biol. 14: 416-426.
tection of poly A+ RNA in sea urchin eggs and
Boggs, R. T. Gregor, P., Idriss, S., Belote, J. M. Chen, J.-J. and London, I. M. 1995. Regula-tion
embryos by quantitative in situ hy-bridization.
and McKeown, M. 1987. Regulation of sexual of protein synthesis by heme-regu-lated eIF-2a
Nucleic Acids Res. 9: 2819-2840.
differentiation in D. melanogaster via alternative kinase. Trends Bioch. Sci. 20: 105-108.
Audet, R. G., Goodchild, J. and Richter, J. D. splicing of RNA from the trans-former gene. Cell
1987. Eukaryotic initiation factor 4A stimulates 50: 739-747. Chen, S.-H. and 12 others. 1987. Apolipoprotein
translation in microinjected Xenopus oocytes. B48 is the product of a messenger RNA with an
Bouvet, P. and Wolffe, A. P. 1994. A role for organ-specific in-frame stop codon. Science
Dev. Biol. 121: 58-68.
transcription and FRGY2 in masking ma-ternal 238: 363-366.
Axel, R., Feigleson, P. and Schutz, G. 1976. mRNA within Xenopus oocytes. Cell 77: 931-941.
Chen, S.-H., Li, X., Liao, W. S. L., Wu, J. H. and
Analysis of the complexity and diversity of
Braude, P., Bolton, V. and Moore, S. 1988. Chan, L. 1990. RNA editing of apolipoprotein
mRNA from chicken liver and oviduct. Cell 7:
Human gene expression first occurs be-tween B mRNA: Sequence speci-ficity determined by
247-254.
the four- and eight-cell stages of preimplantation in vitro coupled tran-scription-editing. J. Biol.
Bachvarova, R. F. 1992. A maternal tail of development. Nature 332: 459-461. Chem. 265: 6811-6816.
poly(A): The long and the short of it. Cell 69:
Briggs, R. and Cassens, G. 1966. Accumula-tion Christofori, G. and Keller, W. 1988. 3' cleav-age
895-897.
in the oocyte nucleus of a gene prod-uct essential and polyadenylation of mRNA precur-sors in
Baker, B., Nagoshi, R. N. and Burtin, K. C. 1987. for embryonic development beyond gastrulati- vitro requires a poly(A) polymerase, a cleavage
Molecular genetic aspects of sex de-termination on. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 55: 1103-1109. factor, and a snRNP. Cell 54: 875-889.
in Drosophila. BioEssays 6: 66-70. Clegg, K. B. and Piko, L. 1983. Poly(A) length,
Carroll, C. R. 1974. Comparative study of the
Ballantyne, S., Bilger, A. strom, J., Virta-nen, early embryonic cytology and nucleic acid cytoplasmic adenylation, and syn-thesis of
A. and Wickens, M. 1995. Poly(A) polymerases synthesis of Ambystoma mexicanum normal and poly(A)+ RNA in early mouse em-bryos. Deo.
in the nucleus and cytoplasm of frog oocytes: o mutant embryos. J. Exp. Zoo/. 187: 409-422. Biol. 95: 331-341.
Clemens, M. J., Henshaw, E. C., Ra-haminoff, Fagard, R. and London, I. M. 1981. Rela-tionship Goustin, A. S. and Wilt, F. H. 1981. Protein
H. and London, I. M. 1974. Met-tRNAfmet binding between phosphorylation and ac-tivity of heme- synthesis, polyribosomes, and peptide elongation
to 40S ribosomal units: A site for the regulation regulated eukaryotic initia-tion factor 2 kinase. in early development of Strongylocentrotus
of initiation of pro-tein synthesis by hemin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 866-870. purpuratus. Dev. Biol. 82: 32-40.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 71: 2946-2950.
Ferrandon, D., Elphick, L., Nsslein-Vol-hard Grace, M. and eight others. 1984. Protein
Colin, A. M., Brown, B. D., Dholakia, J. N., C. and St. Johnon, D. 1994. Staufen protein synthesis in rabbit reticulocytes: Character-istics
Woodley, C. L., Wahba, A. J. and Hille, M. B. associates with the 3' UTR of bicoid to form of the protein factor RF that reverses inhibition
1987. Evidence for simultaneous derepres-sion particles that move in a micro-tubule-dependent of protein synthesis in heme-de-ficient
of messenger RNA and the guanine nucleotide manner. Cell 79: 1221-1232. reticulocyte lysates. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
exchange factor in fertilized sea urchin eggs. 79: 6517-6521.
ffrench-Constant, C. and Hynes, R. O. 1989.
Deo. Biol. 123: 354-363.
Alternative splicing of fibronectin is tem-porally Gribble, T. J. and Schwartz, H. C. 1965. Ef-fect
Cooper, G. M. 1996. The Cell: A Molecular and spatially regulated in the chicken embryo. of protoporphyrin on hemoglobin syn-thesis.
Approach. Sinauer Associates, Sunderland, MA. Development 106: 375-388. Biochim. Biophys. Acta 103: 333-338.
Coschigano, K. T. and Wensink, P. 1993. Sex- Flach, G., Johnson, M. H., Braude, P. R., Taylor, Gross, K. W., Jacobs-Lorena, M., Baglioni, G.
specific transcriptional regulation by the male R. A. S. and Bolton, V. N. 1982. The transition and Gross, P. R. 1973. Cell-free transla-tion of
and female doublesex proteins of Drosophila. from maternal to embryonic con-trol in the 2- maternal messenger RNA from sea urchin eggs.
Genes Dev. 7: 42-54. cell mouse embryo. EMBO J. 1: 681-686. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 70: 2614-2618.
Crossley, P. H. and Martin, G. R.1995. The mouse Fox, C. A. and Wickens, M. 1990. Poly(A) Gross, M., Redman, R. and Kaplansky, D. A.
Fgf8 gene encodes a family of polypeptides and removed during oocyte maturation: A de-fault 1985. Evidence that the primary effects of
is expressed in regions that direct outgrowth and reaction selectively prevented by spe-cific phosphorylation of eukaryotic initiation factor
patterning in the developing embryo. Develop- sequences in the 3' UTR of certain ma-ternal 2a in rabbit reticulocyte lysate is in-hibition of
ment 121: 439-451. mRNAs. Genes Dev. 4: 2287-2298. the release of eukaryotic initia-tion factor 2-
GDP from 60S ribosomal sub-units. J. Biol.
Danilchik, M. V., Yablonka-Reuveniz, Z., Moon, Fox, C. A., Sheets, M. D. and Wickens, M. 1989.
Chem. 260: 9491-9500.
R. T., Reed, S. K. and Hille, M. B. 1986. Separate Poly(A) addition during maturation of frog
ribosomal pools in sea urchin embryos: oocytes: distinct nuclear and cyto-plasmic Guo, W., Mulligan, G. J., Wormsley, S. and
Ammonia activates a movement between pools. activities and regulation by the se-quence Helfman, D. M. 1991. Alternative splicing of
Biochemistry 25: 3696-3702. UUUUUAU. Genes Dev. 3: 2151-2162. (b-tropomyosin pre-mRNA: Cis-acting el-
ements and cellular factors that block the use of
Davidson, E. H. 1976. Gene Activity in Early Francke, C., Edstrom, J. E., McDowell, A. W.
a skeletal muscle exon in nonmuscle cells. Genes
Development. 1st Ed. Academic Press, New York. and Miller, O. L. 1982. Microscopic visu-
Dev. 5: 2096-2107.
alization of a discrete class of giant transla-tion
Davidson, E. H. 1986. Gene Activity in Early
units in salivary gland cells of Chirono-mus Guyette, W. A., Matusik, R. J. and Rosen, J. M.
Development, 3rd Ed. Academic Press, New York.
tentans. EMBO J. 1: 59-62. 1979. Prolactin-mediated transcriptional and
Davidson, E. H. and Britten, R. J. 1979. Reg- post-transcriptional control of casein gene
Fu, L., Ye, R., Browder, L. and Johnston, R.
ulation of gene expression: Possible role of expression. Cell 17:1013-1023.
1991. Translational potentiation of mRNA with
repetitive sequences. Science 204:1052-1059.
secondary structure in Xenopus. Sci-ence 251: Hake, L.E. and Richter, J. D. 1994. CPEB is a
Decker, C. J. and Parker, R. 1994. Mecha-nisms 807-810. specificity factor that mediates cytoplas-mic
of mRNA degradation in eukaryotes. Trends polyadenylation during Xenopus oocyte
Gagnon, M. L., Angerer, L. M. and Angerer, R.
Biochem. 19: 336-340. maturation. Cell 79: 617-627.
C. 1992. Posttranscriptional regulation of
DeLeon, C. V., Cox, K. H., Angerer, L. M. and ectoderm-specific gene expression in early sea Harris, H. 1975. Principles of Human Bio-
Angerer, R. C. 1983. Most early variant histone urchin embryos. Development 114: 457-467. chemical Genetics. Elsevier North-Holland,
mRNA is contained in the pronu-cleus of sea New York.
Galau, G., Kelin, W. H., Davis, M. M., Wold, B.,
urchin eggs. Dev. Biol. 100: 197-206.
Britten, R. J. and Davidson, E. H. 1976. Hentze, M. W. 1997. eIF4G: A multipurpose
Dickerson, R. E. and Geis, I. 1983. Hemoglo- Structural gene sets active in embryos and adult ribosome adapter? Science 275: 500-501.
bin Benjamin/Cummings, Menlo Park, CA. tissues of the sea urchin. Cell 7: 487-505.
Hershey, J. W. B. 1989. Protein phosphory-
Dubnau, J. and Struhl, G. 1996. RNA recog-nition Gavis, E. R. and Lehmann, R. 1994. Transla- lation controls translation rates. J. Biol. Chem.
and translational regulation by a homeodomain tional regulation of nanos by RNA localiza-tion. 264: 20823-20826.
protein. Nature 379: 694-699. Nature 369: 315-318.
Higuchi, M., Single, F. N., Khler, M., Som-
Edgar, B. A. and Schubiger, G. 1986. Para-meters Gebauer, F. and Richter, J. D. 1995. Cloning and mer, B., Sprengel, R. and Seeburg, P. H. 1993.
controlling transcriptional activa-tion during early characterization of a Xenopus poly(A) poly- RNA editing of AMPA receptor sub-unit GluR-
Drosophila development. Cell 44: 871-877. merase. Mol. Cell. Biol. 15:1422-1430. B: A base-pair intron-exon struc-ture determi-
nes position and efficiency. Cell 75: 1361-1370.
Evans, T. C., Goodwin, E. B. and Kimble, J. Gilbert, S. F. and Solter, D. 1985. Onset of pa-
1992. Translational regulation of develop-ment ternal and maternal Gpi-2 expression in Hille, M. B., Danilchik, M. V., Colin, A. M. and
and maternal RNAs in Caenorhabditis elegans. preimplantation mouse embryos. Dev. Biol. 109: Moon, R. T. 1985. Translational control in
Semin. Dev. Biol. 3: 381-389. 515-517. echinoid eggs and early embryos. In R. H. Sawyer
and R. M. Showman (eds.), The Cellular and
Evans, T. C., Crittenden, S. L., Kodoyianni, V. Goodwin, E. B., Okkema, P. G., Evans, T. C. and
Molecular Biology of Invertebrate Development.
and Kimble, J. 1994. Translational control of Kimble, J. 1993. Translational regula-tion of
University of South Carolina Press, pp. 91-124.
maternal glp-1 mRNA establishes an asymmetry tra-2 by its 3' untranslated region controls sexu-
in the C. elegans embryo. Cell 77: 183-194. al identity in C. elegans. Cell 75: 329-339. Hodges, P. E. and Beggs. J. D. 1994. U2 ful-fills
a commitment. Curr. Biol. 4: 264-267.
Holt, J. T., Gopal, T. V., Moulton, A. D. and no, a newly discovered RNA-binding protein, is Lieberfarb, M. E., Chu, T., Wreden, C., Theurkauf,
Nienhuis, A. W. 1986. Inducible production of c- essential. Cell 81: 403-412. W., Gergen, J. P. and Strickland, S. 1996.
fos antisense RNA inhibits 3T3 cell pro-liferation. Mutations that perturb poly(A)-de-pendent ma-
Kimelman, D. and Kirschner, M.W. 1989. An
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 4794-4798. ternal mRNA activation block the initiation of
antisense messenger RNA directs the covalent
development. Development 122: 579-588.
Horowitz, D. S. and Krainer, A. R. 1994. modification of the transcript en-coding
Mechanisms for selecting 5' splice sites in fibroblast growth factor in Xenopus occytes. Cell Lodish, H. F. 1971. Alpha and beta globin
mammalian pre-mRNA splicing. Trend Genet. 59: 687-696. messenger ribonucleic acid. Different amounts
10: 100-106. and rates of translation. J. Biol. Chem. 246:
Klausner, R. D. and Harford, J. B. 1989. Cis-
7131-7138.
Hough-Evans, B. R., Wold, B. J., Ernst, S. G., trans models for post-transcriptional gene
Britten, R. J. and Davidson, E. H. 1977. regulation. Science 246: 870-872. London, I. M., Clemens, M. J., Ranu, R. S., Levin,
Appearance and persistence of maternal RNA D. H., Cherbas, L. F. and Ernst, V. 1976. The role
Klausner, R. D., Rouault, T. A. and Harford, J. B.
sequences in sea urchin development. Dev. Biol. of hemin in the regulation of protein synthesis in
1993. Regulating the fate of mRNA: The control
260: 258-277. erythroid cells. Fed. Proc. 35: 2218-2222.
of cellular iron metabolism. Cell 72: 19-28.
Huarte, J. and seven others. 1992. Transient Lopo, A. C., MacMillan, S. and Hershey, J. W. B.
Kleene, K. C. and Humphreys, T. 1977. Similarity
translational silencing by reversible mRNA 1988. Translational control in early sea urchin
of hnRNA sequences in blastula and pluteus stage
deadenylation. Cell 69: 1021-1030. embryogenesis: Initiation factor eIF4F stimulates
sea urchin embryos. Cell 12: 143-155.
protein synthesis in lysates from unfertilized eggs
Hyman, L. E. and Wormington, W. M. 1988.
Kleene, K. C. and Humphreys, T. 1985. of S. purpura-tus. Biochemistry 27: 351-357.
Translational inactivation of riboso-mal protein
Transcription of similar sets of rare mater-nal
messenger RNAs during Xeno-pus oocyte MacArthur, C. A., Lawsh, A., Xu, J., San-tos-
RNAs and rare nuclear RNAs in sea urchin
maturation. Genes Dev. 2: 598-605. Ocampo, S., Heikinheimo, M., Chella-iah, C.
blastulae and adult coelomocytes. J. Embryol.
and Ornitz, D. M. 1995. FGF-8 iso-forms
Hynes, R. O. 1987. Fibronectins: A family of Exp. Morphol. 85: 131-149.
activate receptor splice forms that are expressed
complex and versatile adhesive glycopro-teins
Kozak, M. 1986. Point mutations define a in mesenchymal regions of mouse development.
derived from a single gene. Harvey Lect.
sequence flanking the AUG initiator codon that Development 121: 3603-3613.
81:133-152.
modulates translation by eukaryotic ri-bosomes.
MacDougall, C., Harbison, D. and Bownes, M.
Infante, A. and Nemer, M. 1968. Heteroge-neous Cell 44: 283-292.
1995. The developmental consequences of
RNP particles in the cytoplasm of sea urchin
Kuge, H. and Richter, J. D. 1995. Cytoplas-mic 3' alternative splicing in sex determination and
embryos. J. Mol. Biol. 32: 543-565.
poly(A) addition induces 5' cap ri-bose methylation: differentiation in Drosophila. Dev. Biol. 172:
Jenkins, N. A., Kaumeyer, J. R., Young, E. M. Implications for transla-tional control of mater- 353-376.
and Raff, R. A. 1978. A test for masked message: nal mRNA. EMBOJ. 14: 6301-6310.
Malacinski, G. M. 1971. Genetic control of
The template activity of messen-ger ribonucleo-
Latham, K. E., Garrels, J. I., Chang, C. and Solter, qualitative changes in protein synthesis during
protein particles isolated from sea urchin eggs.
D. 1991. Quantitative analysis of protein early amphibian (Mexican axolotl) embryoge-
Dev. Biol. 63: 279-298.
synthesis in mouse embryos. I. Ex-tensive nesis. Dev. Biol. 26: 442-451.
Jurnich, V. A. and Burtis, K. C. 1993. A posi-tive reprogramming at the one- and two-cell stages.
Mayeda, A. and Krainer, A. R. 1992. Regu-lation
role in differentiation of the male dou-blesex Development 112: 821-932.
of alternative pre-mRNA splicing by hnRNP A1
protein of Drosophila. Dev. Biol. 155: 235-249.
Latham, K. E., Solter, D. and Schultz, R. M. and splicing factor SF2. Cell 68: 367-375.
Kabat, D. and Chappell, M. R. 1977. Com- 1992. Acquisition of a transcriptionally
McDevitt, M. A., Imperiale, M. J., Ali, H. and
petition between globin messenger ribonu-cleic permissive state during the 1-cell stage of mouse
Nevins, J. R. 1984. Requirement of a downstream
acids for a discriminating initiation factor. J. embryogenesis. Dev. Biol. 149:457-462.
sequence for the generation of poly(A) addition
Biol. Chem. 252: 2684-2690.
Lau, P. P., Xiong, W., Zhu, H.-J., Chen,S.-H. and site. Cell 37: 329-338.
Karibian, D. and London, I. M. 1965. Con-trol Chan, L. 1991. Apolipoprotein B mRNA editing
McGrew, L., Dworkin-Rastl, E., Dworkin, M. B.
of heme synthesis by feedback inhibi-tion. is an intranuclear event that occurs posttrans-
and Richter, J. D. 1989. Poly(A) elon-gation
Biochem. Biophys. Res. Commun. 18: 243-249. criptionally coincident with splicing and polya-
during Xenopus oocyte maturation is required for
denylation. J. Biol. Chem. 266: 20550-20554.
Kastern, W. H., Swindlehurst, M., Aaron, C., translational recruitment and is mediated by a
Hooper, J. and Berry, S. J. 1982. Control of Lee, R. C., Feinbaum, R. L. and Ambros, V. 1993. short sequence element. Genes Dev. 3: 803-815.
mRNA translation in oocytes and devel-oping The C. elegans heterochromatic gene lin-4
Meijlink, F., Curran, T., Miller, A. D. and Verma,
embryos of giant moths. I. Functions of the 5' encodes small RNAs with antisense complemen-
I. M. 1985. Removal of a 67-base pair sequence
terminal cap in the tobacco hornworm tarity to lin-14. Cell 75: 843-854.
in the non-coding region of protooncogene fos
Manduca sexta. Dev. Biol. 89: 437-449.
Levin, D., Ranu, R., Ernst, V. and London, I. M. converts it to a trans-forming gene. Proc. Natl.
Kelso-Winemiller, L. and Winkler, M. M. 1991. 1976. Regulation of protein synthesis in Acad. Sci. USA 82: 4987-4991.
Unmasking of stored maternal mRNAs and the reticulocyte lysates: Phosphorylation of
Melton, D. 1987. Translocation of a local-ized
activation of protein syn-thesisat fertilization in methionyl-tRNAf binding factor by protein
maternal mRNA to the vegetal pole of Xenopus
sea urchins. Develop-ment 111: 623-633. kinase activity of translational inhibitor iso-lated
oocytes. Nature 328: 80-82.
from heme-deficient lysates. Proc. Natl. Acad.
Kiledjian, M., Wang, X. and Liebhaber, S. A.
Sci. USA 73: 3112-3116. Mermod, J. J., Schatz, G. and Croppa, M. 1980.
1995. Identification of two KH domain pro-
Specific control of messenger transla-tion in
teins in the a-globin mRNP stability com-plex. Liang, L., Diehl-Jones, W. and Lasko, P. 1994.
Drosophila oocytes and embryos. Dev. Biol. 75:
EMBO J. 14: 4357-4364. Localization of vasa protein to the Drosophi-
177-186.
la pole plasm is dependent on its RNA-binding
Kim-Ha, J., Kerr, K. and Macdonald, P. M. 1995.
and helicase activities. Devel-opment 120: Moon, R. T., Danilchik, M. V. and Hille, M. 1982.
Translational regulation of oskar mRNA by bru-
1201-1211. An assessment of the masked mes-senger
hypothesis: Sea urchin egg messen-ger ribonucleo- Paris, J. and Richter, J. D. 1990. Maturation- Raychaudhury, P., Chaudhuri, A. and Maitra, U.
protein complexes are effi-cient templates for in specific polyadenylation and translational 1985. Formation and release of eukaryotic
vitro protein synthesis. Dev. Biol. 93: 389-03. control: Diversity of polyadenylation ele-ments, initiation factor 2 GDP complex during eukaryotic
influence of poly(A) tail size and the formation ribosomal polypeptide chain initiation complex
Moon, R. T., Nicosia, R. E, Olsen, C, Hille, M.
of stable polyadenylation complexes. Mol. Cell. formation. J. Biol. Chem. 260: 2140-2145.
B. and Jeffery, W. R. 1983. The cytoskele-tal
Biol. 10: 5634-5645.
framework of sea urchin eggs and em-bryos: Rebagliati, M. R., Weeks, D. L., Harvey, R. P.
Developmental changes in the asso-ciation of Paris, J., Swensen, K., Piwnica-Worms, H. and and Melton, D. A. 1985. Identification and
messenger RNA. Dev. Biol. 95: 447-458. Richter, J. D. 1991. Maturation-specific cloning of localized maternal RNAs from Xeno-
polyadenylation: In vitro activation by p34cdc2 pus eggs. Cell 42: 769-777.
Morle, F., Lopez, B., Henni, T. and Godet, J.
and phosphorylation of a 58-kD CPE-binding
1985. a-Thalassaemia associated with the deletion Restifo, L. L. and Guild, G. M. 1986. Poly(A)
protein. Genes Dev. 5: 1697-1708.
of two nucleotides at positions -2 and -3 preceding shortening of coregulated tran-scripts in Droso-
the AUG codon. EMBO J. 4: 1245-1250. Pavlakis, G. N., Lockard, R. E., Vam-vakopo- phila. Dev. Biol. 115: 507-510.
lous, N., Rieser, L., Rajbhandary, U. L. and
Mottes, J. R. and Iverson, L. E. 1995. Tissue- Richter, J. D. and Smith, L. D. 1984. Re-versible
Vournakis, J. N. 1980. Secondary structure of
specific alternative splicing of hybrid shaker/lacZ inhibition of translation by Xeno-pus oocyte-
mouse and rabbit a- and b-globin mRNAs:
genes correlates with kinetic dif-ferences in shaker specific proteins. Nature 309: 378-380.
Differential accessibility of ini-tiator AUG
K+ currents in vivo. Neu-ron 14: 613-623.
codons towards nucleases. Cell 19: 91-102. Robbie, E. P., Peterson, M., Amaya, E. and Musci,
Murata, Y. and Wharton, R. P. 1995. Bind-ing T. J. 1995. Temporal regulation of the Xenopus
Paynton, B. V., Rempel, R. and Bachvarova, R.
of pumillio to maternal hunchback mRNA is FGF receptor in development: A translation
1988. Changes in states of adenylation and time
required for posterior patterning in Drosophila inhibiting element in the 3' untranslated region.
course of degradation of maternal mRNAs during
embryos. Cell 80: 747-756. Development 121: 1775-1785.
oocyte maturation and early embryonic deve-
Nagoshi, R. N., McKeown, M., Burtis, K. C., lopment in the mouse. Dev. Biol. 129: 304-314. Rodgers, W. H. and Gross, P. R. 1978. Inho-
Belote, J. M. and Baker, B. S. 1988. The control mogeneous distribution of egg RNA se-quences
Pelletier, J. and Sonenberg, N. 1985. Inser-tional
of alternative splicing at genes reg-ulating sexu- in the early embryo. Cell 14: 279-288.
mutagenesis to increase secondary structure
al differentiation in D. melanogaster. Cell 53:
within the 5' noncoding region of a eukaryotic Rosenthal, E., Hunt, T. and Ruderman, J. V. 1980.
229-236.
mRNA reduces translational efficiency. Cell 40: Selective translation of mRNA con-trols the
Navaratnam, N., Bhattacharya, S., Fujino, T., 515-526. pattern of protein synthesis dur-ing early deve-
Patel, D., Jarmuz, A. L. and Scott, J. 1995. lopment of the surf clam, Spisula solidissima.
Poccia, D., Wolff, R., Kragh, S. and Williamson, P.
Evolutionary origins of apoB editing: catalysis Cell 20: 487-494.
1985. RNA synthesis in male pronuclei of the sea
by a cytidine deaminase that has acquired a
urchin. Biochim. Bio-phys. Acta 824: 349-356. Ruskin, B., Zamore, P. D. and Green, M. R.
novel RNA-binding motif at its active site. Cell
1988. A factor, U2AF, is required for U2 snRNP
81:187-195. Powell, L. M., Wallis, S. C., Pease, R. J., Ed-wards,
binding and splicing complex as-sembly. Cell
Y. H., Knott, T. J. and Scott, J. 1987. A novel form
Newport, J. and Kirschner, M. 1982. A major 52: 207-219.
of tissue-specific RNA pro-cessing produces
developmental transition in early Xenopus
apolipoprotein-B48 in in-testine. Cell 50: 831-840. Safer, B. 1989. Nomenclature of initiation,
embryos. II. Control of the onset of transcription.
elongation and termination factors for translation
Cell 30: 687-696. Proudfoot, N. J. and Brownlee, G. G. 1976. 3'
in eukaryotes. Eur. J. Biochem. 186: 1-3.
Non-coding region sequences in eukary-otic
Orkin, S. H., Cheng, T.-C., Antonarakis, S. E.
messenger RNA. Nature 263: 211-214. Salls, F. J., Liebfarb, M. E., Wreden, C., Gergen,
and Kazazian, H. H., Jr. 1985. Tha-lassemia due
J. P. and Strickland, S. 1994. Coor-dinate
to a mutation in the cleavage-polyadenylation Raff, R. A. 1980. Masked messenger RNA and
initiation of Drosophila development by
signal of the human b-globin gene. EMBO J. 4: the regulation of protein synthesis in eggs and
regulated polyadenylation of maternal messenger
453-456. embryos. In D. M. Prescott and L. Goldstein
RNAs. Science 266:1996-1999.
(eds.), Cell Biology: A Comprehen-sive Treatise,
dOrval, B. C., Carafa, Y. dA., Sirand-Pugnet,
Vol. 4. Academic Press, New York, pp. 107-136. Sarkar, G., Edery, L, Gallo, R. and Sonen-berg, N.
P., Gallego, M., Brody, E. and Marie, J. 1991.
1984. Preferential stimulation of rabbit a-globin
RNA secondary structure re-pression of a Ramaiah, K. V. A., Dhindsa, R. S., Chen, J. J.,
mRNA translation by a cap-binding protein
muscle-specific exon in HeLa cell nuclear London, I. M. and Levin, D. 1992. Recy-cling
complex. Biochim. Bio-phys. Acta 783: 122-129.
extracts. Science 252: 1823-1828. and phosphorylation of eukaryotic initiation
factor 2 on 60S subunits of 70S initiation Savage, M. P. and Fallen, J. F. 1995. FGF-2
Ostareck-Lederer, A., Ostareck,D. H., Stan-dart,
complexes and polysomes. Proc. Natl. Acad. messenger RNA and its antisense message are
N. and Thiele, B. 1994. Translation of 15-
Sci. USA 89:12063-12067. expressed in a developmentaly specific manner
lipoxygenase mRNA is inhibited by a protein
in the chick limb bud and mesonephros. Dev.
that binds to a repeated sequence in the 3' Ranu, R. S., Levin, D. H., Delaunay, J., Ernst, U.
Dyn. 202: 343-353.
untranslated region. EMBO J. 13: 1476-1481. and London, I. M. 1976. Regula-tion of protein
Characteristics of inhibition of protein synthesis Schauer, I. E. and Wood, W. B. 1990. Early C.
Ovsenek, N., Zorn, A. M. and Krieg, P. A. 1992.
by a translational in-hibitor from heme-deficient elegans embryos are transcriptionally ac-tive.
A maternal factor, OZ-1, activates em-bryonic
lysates and its relationship to the initiation factor Development 110:1303-1317.
transcription of the Xenopus laevis GS17 gene.
which binds Met-tRNAf. Proc. Natl. Acad. Sci.
Development 115: 649-655. Scott, J. 1995. A place in the world for RNA
USA 73: 2720-2726.
editing. Cell 81: 833-836.
Palatnik, C. M., Wilkins, C. and Jacobson, A.
Ray, B. K. and eight others. 1983. Role of mRNA
1984. Translational control during early Sharma, P. M., Bowman, M., Madden, S. L.,
competition in regulating transla-tion: Further
Dictyostelium development: Possible in- Rauscher, F. J. Ill and Sukumar, S. 1994. RNA
characterization of mRNA discriminatory
volvement of poly(A) sequences. Cell 36: editing in the Wilms tumor suppres-sor gene,
initiation factors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
1017-1025. WT-1. Genes Dev. 8: 720-731.
80: 663-667.
Shatkin, A. J. 1976. Capping of eukaryotic Swiderski, R. E. and Richter, J. D. 1988. Wang, C., Dickinson, L. K. and Lehmann, R.
mRNAs. Cell 9: 645-653. Photocrosslinking of proteins to maternal mRNA 1994. Genetics of nanos localization in Droso-
in Xenopus oocytes. Dev. Biol. 128: 349-358. phila. Dev. Dyn. 199: 103-115.
Shatkin, A. J. 1985. mRNA cap binding pro-
teins: Essential factors for initiating transla-tion. Tamkun, J. W., Schwartzbauer, J. E. and Hynes, Weir, M. P. and Kornberg, T. 1985. Patterns of
Cell 40: 223-224. R. O. 1984. A single rat fibronectin gene engrailed and fushi tarazu transcripts re-veal
generates three different mRNAs by alternative novel intermediate stages of Drosophila
Shaw, G. and Kamen, R. 1986. A conserved AU
splicing of a complex exon. Proc. Natl. Acad. segmentation. Nature 318: 433-439.
sequence from the 3' untranslated re-gion of GM-
Sci. USA 81: 5140-5144.
CSF mRNA mediates selective mRNA degradation. Wharton, R. P. and Struhl, G. 1991. RNA
Cell 46: 659-667. Taylor, M. A. and Smith, L. D. 1985. Quan-titative regulatory elements mediate control of Droso-
changes in protein synthesis during oogenesis in phila body pattern by the posterior morphogen,
Sheets, M. D., Fox, C. A., Hunt, T., Vande Woude,
Xenopus laevis. Dev. Biol. 110: 230-237. nanos. Cell 67: 955-967.
G. and Wickens, M. 1994. The 3' untranslated
region of c-mos and cyclin mRNAs stimulate Telford, N. A., Watson, A. J. and Schultz, G. A. Wickens, M. and Stephenson, P. 1984. Role of
translation by regulating cytoplasmic polyade- 1990. Transition from maternal to em-bryonic the conserved AAUAAA sequence: Four
nylation. Genes Dev. 8: 926-938. control in early mammalian devel-opment: A AAUAAA point mutants prevent 3' end
comparison of several species. Mol. Reprod. Dev. formation. Science 226: 1045-1051.
Showman, R. M., Wells, D. E., Anstrom, J.,
26: 90-100.
Hursh, D. A. and Raff, R. A. 1982. Message- Wickens, M. 1992. Introduction: RNA and the
specific sequestration of maternal histone mRNA Thach, R. E. 1992. Cap recap: The involve- early embryo. Semin. Dev. Biol. 3: 363-365.
in the sea urchin egg. Proc. Natl. Acad. Sci. USA ment of eIF-4F in regulating gene expres-sion.
Wickens, M. and Takayama, K. 1994. De-
79: 5944-5947. Cell 69:177-180.
viantsor emissaries. Nature 367:17-18.
Simon, R., Tassan, J.-P. and Richter, J. D. 1992. Thomas, N. S. B., Matts, R. L., Levin, D. H. and
Wightman, B., Ha, I. and Ruvkun, G. 1993.
Translational control by poly(A) elon-gation London, I. M. 1985. The 60S ribosomal subunit
Posttranslational regulation of the hete-
during Xenopus development: Dif-ferential as a carrier of eukaryotic initiation factor 2 and
rochronic gene lin-14 by lin-4 mediates tempo-
regressions and enhancement by a novel the site of reversing factor ac-tivity during protein
ral pattern formation in C. elegans. Cell 75:
cytoplasmic polyadenylation ele-ment. Genes synthesis. /. Eiol. Chem. 260: 9860-9866.
855-862.
Dev. 6: 2580-2591.
Tian, M. and Maniatis, T. 1993. Positive control
Wilson, T. and Treisman, R. 1988. Removal of
Simpson, L. and Thiemann, O. H. 1995. Sense of pre-mRNA splicing in vitro. Sci-ence 256:
poly(A) and consequent degradation of c-fos
from nonsense: RNA editing in mito-chondria 237-240.
mRNA facilitated by 3' AU-rich se-quences.
of kinetoplastid protozoa and slime molds. Cell
Tian, M. and Maniatis, T. 1993. A splicing Nature 336: 396-399.
81: 837-840.
enhancer complex controls alternative splicing
Winkler, M. M. and Steinhardt, R. A. 1981.
Smibert, C. A., Wilson, J. E., Kerr, K. and of doublesex pre-mRNA. Cell 74: 105-114.
Activation of protein synthesis in a sea urchin
Macdonald, P. M. 1996. Smaug protein re-presses
Varnum, S. M. and Wormington, W. M. 1990. cell-free system. Dev. Biol. 84: 432-439.
translation of unlocalized nanos mRNA in the
Deadenylation of maternal mRNAs during Xe-
Drosophila embryo. Genes Dev. 10: 2600-2609. Winkler, M. M., Nelson, E. M., Lashbrook, C.
nopus oocyte maturation does not require cis
and Hershey, J. W. B. 1985. Multiple lev-els of
Sommer, B., Khler, M., Sprengel, R. and sequences: A default mechanism for translational
regulation of protein synthesis at fer-tilization
Seeburg, P. H. 1991. RNA editing in brain controls control. Genes Dev. 4: 2278-2286.
in sea urchin eggs. Dev. Eiol. 107: 290-300.
a determinant of ion flow in gluta-mate-gated
Valcrcel, J., Singh, R., Zamore, P. D. and Greene,
channels. Cell 67: 11-19. Wold, B. J., Klein, W. H., Hough-Evans,B. R.,
M. R. 1993. The protein Sex-lethal antagonizes
Britten, R. J. and Davidson, E. H. 1978. Sea
Sosnowski, B. A., Belote, J. M. and McKe-own, the splicing factor U2AF to regulate alternative
urchin embryo mRNA sequences ex-pressed in
M. 1989. Sex-specific alternative splic-ing of splicing of transformer pre-mRNA. Nature 362:
nuclear RNA of adult tissues. Cell 14: 941-950.
RNA from the transformer gene re-sults from 171-175.
sequence-specific splice site blockage. Cell 58: Wu, J. and Maniatis, T. 1993. Specific inter-
Varnum, S., Hurney, C. A. and Worming-ton, W.
449-459. actions between proteins implicated in splice
M. 1992. Maturation-specific dead-enylation in
site selection and regulated alterna-tive splicing.
Spirin, A. S. 1966. On masked forms of mes- Xenopus oocytes requires nu-clear and cytoplas-
Cell 75: 1061-1070.
senger RNA in early embryogenesis and in other mic factors. Dev. Biol. 153: 283-290.
differentiating systems. Curr. Top. Dev. Eiol. Young, E. M. and Raff, R. A. 1979. Messen-ger
Vassalli, J. D. and seven others. 1989. Regu-
1: 1-38. ribonucleoprotein particles in develop-ing sea
lated polyadenylation controls mRNA transla-
urchin embryos. Dev. Biol. 72: 24-40.
Standart, N. 1992. Masking and unmasking of tion during meiotic maturation of mouse oocytes.
maternal mRNAs. Semin. Dev. Biol. 3: 367-379. Genes Dev. 3: 2163-2171. Zorn, A. M. and Krieg, P. A. 1992. Develop-
mental regulation of alternative splicing in the
Standart, N., Hunt, T. and Ruderman, J.V. 1986. Wagenaar, E. B. and Mazia, D. 1978. The ef-
mRNA encoding Xenopus laevis neural cell
Differential accumulation of ribonu-cleotide fect of emetine on the first cleavage divi-sion
adhesion molecule (N-CAM). Dev. Biol. 149:
reductase subunits in clam oocytes: The large of the sea urchin, Strongylocentrotus purpuratus.
197-205.
subunit is stored as a polypeptide, the small In E. R. Dirksen, D. M. Prescott and L. F. Fox
subunit as untrans-lated mRNA. J. Cell Biol. 103: (eds.), Cell Reproduction: In Honor of Daniel Zucker, W. V. and Schulman, H. M. 1968.
2129-2136. Mazia. Academic Press, New York, pp. 539-545. Stimulation of globin-chain initiation by hemin
in the reticulocyte cell-free system. Proc. Natl.
Standart, N., Dale, M., Stewart, E. and Hunt, T. Walker, J. Dale, M. and Standart, N. 1996.
Acad. Sci. USA 59: 582-589.
1990. Maternal mRNA from clam oocytes can Unmasking messenger RNA in clam oocytes:
be specifically unmasked in vitro by antisense Role of phosphorylation of a 3UTR masking
RNA complementary to the 3' untranslated element-binding protein at fertilization. Dev.
region. Genes Dev. 4: 2157-2168. Biol. 173: 292-305.
Especificao do Destino
Celular e os Eixos Embrionrios
13 Especificao celular autnoma por determinantes citoplasmticos

14 A gentica da especificao axial em Drosophila 543
IV505
15 Especificao do destino celular por interaes clula-clula progressivas 591

16 Estabelecimento dos eixos corporais em mamferos e aves 635
Especificao celular autnoma
por determinantes citoplasmticos 13
Considero provvel que nas clulas
germinativas existem tnues diferenas in-
ternas que predeterminam a transformao
subseqente s substncias determinantes;
essas diferenas no so meras potncias pre-
C ADA ORGANISMO METAZORIO formado por uma complexa variedade
de clulas especializadas. Por exemplo, as clulas vermelhas e brancas do
sangue no s diferem umas das outras mas tambm diferem das clulas do
corao, responsveis pela propulso dessas clulas pelo corpo. Tambm so dife-
rentes dos neurnios alongados que conduzem impulsos neurnicos do crebro ao
sentes nas clulas germinativas, mas dife- corao, e de clulas glandulares que secretam hormnios no sangue. A Tabela 13.1
renas materiais reais to pequenas que at apresenta uma lista incompleta dos tipos de clulas especializadas, seus produtos
agora no pudemos demonstr-las. caractersticos e suas funes.
R. VIRCHOW (1858)
Estudando a fase de clivagem nos aproxi-

Comprometimento celular e diferenciao
mamos da nascente de onde emergem os rios
progressivamente ramificados da diferenci- O desenvolvimento de tipos especializados de clulas de um nico ovo fertilizado
ao que desguam finalmente em plcidas chamado diferenciao. Essa evidente mudana na bioqumica e funo celular
lagoas, as clulas individuais do complexo precedida por um processo envolvendo um comprometimento dissimulado das clu-
organismo adulto. las a um destino em particular ou a um conjunto de destinos. Nessa fase, a clula no
E. E. JUST (1939) parece ser fenotipicamente diferente do seu estado no comprometido, mas de algu-
ma forma o seu desenvolvimento se tornou restrito. Embora os embriologistas tenham
usado rotineiramente a palavra determinao para descrever esse comprometimento
oculto, um tipo de tecido em particular pode ser classificado como determinado, ou
no determinado, dependendo de qual ensaio foi usado para a determinao (ver
Harrison, 1933). Slack (1991) dividiu esse comprometimento em dois estgios,
especificao e determinao. Uma clula ou tecido pode ser especificado quando
capaz de diferenciar-se de forma autnoma quando colocado em um ambiente neutro
tal como uma placa de petri. (Esse ambiente neutro em relao via do desenvol-
vimento.) Uma clula ou tecido pode ser determinado quando capaz de diferenciar-
se de maneira autnoma quando colocado em outra regio do embrio. Se a diferenci-
ao se d de acordo com o destino original mesmo com a colocao em outra regio
do embrio, assume-se que o comprometimento irreversvel.
Ns conhecemos trs vias principais pelas quais esse comprometimento pode
acontecer (Tabela 13.2). O primeiro mecanismo de comprometimento, envolve a segre-
gao citoplasmtica de molculas determinativas durante a clivagem embrionria
pelo qual os planos de clivagem separam regies qualitativamente diferentes do cito-
plasma do zigoto em clulas-filha diferentes. Cada clula se torna especfica pelo tipo
de citoplasma que ela adquire durante a clivagem, de modo que o destino da clula
determinado sem nenhuma referncia s clulas vizinhas. Esse mecanismo de compro-
meter o destino das clulas chamado de especificao autnoma, porque as clulas
505
506 PARTE III Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Tabela 13.1 Alguns tipos de clulas diferenciadas e seus principais produtos

Produto da clula
Tipo de clula diferenciada Funo especializada
Queratincito Queratina Proteo contra abraso
(clula da pele) e dessecao
Eritrcito
(clula vermelha do sangue) Hemoglobina Transporte de oxignio
Clula do cristalino Cristalinas Transmisso de luz
Linfcito B Imunoglobulinas Sntese de anticorpos
Linfcito T Antgenos da superfcie Destruio de clulas
celular (linfocinas) estranhas; regulao
da resposta imune
Melancito Melanina Produo de pigmento
Clulas das Insulina Regulao do
ilhotas pancreticas metabolismo de
carboidratos
Clula de Leydig () Testosterona Caractersticas sexuais
masculinas
Condrcito Sulfato de condroitina; Tendes e ligamentos
(clula da cartilagem) colgeno tipo II
Osteoblasto
(clula formadora de osso) Matriz ssea Suporte do esqueleto
Micito Actina e miosina Contrao
(clula muscular) do msculo
Hepatcito
(clula do fgado) Albumina do soro; Produo de protenas
numerosas enzimas do soro e numerosas
funes enzimticas
Neurnios Neurotransmissores Transmisso de
(acetilcolina, impulsos eltricos
epinefrina, etc.)
Clula tubular ( ) Ovalbumina Protenas do
do oviduto da galinha albmen do
ovo e proteo
do embrio
Clula folicular ( ) Protenas corinicas Protenas da casca do
do oviduto de inseto ovo para proteo
do embrio
so especificadas pelos seus prprios componentes citoplasmticos internos

(Davidson, 1991). Dessa maneira, se um determinado blastmero fosse removido pre-
cocemente no desenvolvimento, esse produziria as mesmas clulas como quando
ainda fazia parte de um embrio maior, e o embrio remanescente no possuiria aquelas
clulas (e somente aquelas clulas) que teriam sido formadas pelas clulas que foram
retiradas (veja Figura 1.29). A especificao autnoma faz surgir um padro de embrio-
gnese referido como desenvolvimento em mosaico, uma vez que o embrio parece ser
formado por um mosaico de peas autodiferenciadas.
Uma segunda maneira de comprometer o destino das clulas envolve a interao
com clulas vizinhas. Aqui, as clulas originalmente tm a habilidade de seguir mais de
um caminho de diferenciao, e a interao dessas clulas com outras clulas ou
tecidos restringe os destinos de um ou ambos os participantes. Esse tipo de determi-
nao do destino celular muitas vezes chamado de especificao condicional, por-
que o destino de uma clula depende das condies nas quais ela se encontra. Se um
blastmero fosse removido de um embrio precoce de um organismo com especificao
condicional de suas clulas, as clulas embrionrias remanescentes poderiam alterar
seus destinos normais para que o papel da clula desaparecida fosse preenchido.
Dessa maneira, a especificao condicional faz surgir um padro de embriognese
chamado de desenvolvimento regulador. Como ainda veremos, todos os organismos
CAPTULO 13 Especificao celular autnoma por determinantes citoplasmticos 507
Tabela 13.2 Modelos de especificao do tipo celular e suas caractersticas
I. Especificao autnoma
Caracterstica da maioria dos invertebrados.
Especificao pela aquisio de certas molculas citoplasmticas presentes no ovo.
Clivagens invariantes produzem as mesmas linhagens em cada embrio da espcie.
Destinos dos blastmeros so geralmente invariantes.
Linhagens de Clulas ncoras so usualmente especificadas de maneira autnoma
nos plos dos eixos embrionrio.
Especificao do tipo celular precede qualquer migrao celular embrionria em larga escala.
Produz desenvolvimento em mosaico (determinativo): clulas no podem
modificar o destino se um blastmero perdido.
II. Especificao condicional

Caracterstica de todos vertebrados e poucos invertebrados.
Especificao por interaes entre clulas. Posies relativas so importantes.
Clivagens variveis no produzem destinaes invariantes para as clulas.
Enormes rearranjos e migraes celulares precedem ou acompanham a especificao.
Capacidade para desenvolvimento regulativo: permite que as clulas adquiram
diferentes funes.
III. Especificao sincicial

Caracterstica da maioria das classes de insetos.
Especificao das regies do corpo por interaes entre regies citoplasmticas
antes da celularizao do blastoderma.
Clivagem varivel no produz destinos celulares rgidos para certos ncleos.
Aps a celularizao, a especificao condicional vista com freqncia.
Fonte: De acordo com Davidson, 1991.
usam ambos os meios, autnomo e condicional para especificar diferentes tipos de

clulas, existindo um espectro de variaes entre o desenvolvimento em mosaico e o
desenvolvimento regulativo. No entanto, na maioria dos invertebrados a especifica-
o do tipo celular predominantemente autnoma, enquanto os vertebrados so
caracterizados pelo uso extensivo da especificao condicional.
Muitos insetos tambm usam uma terceira via para a determinao do destino
celular. Nesses casos, interaes entre componentes maternos dentro do blastoderma
sincicial ocorrem antes que tenham se formado as membranas celulares que separam
os ncleos. Na especificao sincicial, grande parte das decises quanto aos desti-
nos das clulas so feitas antes mesmo que as clulas tenham sido formadas. Este
captulo focalizar experimentos que demonstram a especificao autnoma, enquan-
to que os captulos seguintes iro cobrir os modos condicionais e sinciciais do com-
prometimento celular durante a embriognese precoce.
Pr-formao e epignese
Qualquer explicao sobre a diferenciao das diversas clulas corporais, a partir do
ovo fertilizado tem que explicar (1) a constante morfologia de cada espcie (i.e., que
galinhas somente geram galinhas, e no crocodilos) e (2) a diversidade entre as partes
corporais de cada organismo. Na verdade, uma das principais caractersticas do de-
senvolvimento que cada espcie reproduz seu padro de desenvolvimento. O de-
senvolvimento envolve a expresso das propriedades herdadas pelas espcies.
No sculo dezessete, a unio de herana e desenvolvimento foi obtida com a
hiptese do pr-formacionismo. De acordo com essa viso, todos os rgos do adul-
to estariam prefigurados em miniatura dentro do espermatozide ou (mais usualmente)
no vulo. Os organismos no eram considerados como desenvolvidos, mais sim
desenrolados. Essa hiptese encontrava apoio na cincia e na filosofia (Gould,
1977; Roe, 1981). Primeiro, porque todos os rgos eram prefigurados, o desenvolvi-
mento embrionrio meramente requeria o crescimento de estruturas existentes, e no a
formao de novas. Nenhuma fora misteriosa extra era necessria para o desenvolvi-
mento embrionrio. Segundo, assim como o organismo adulto era prefigurado em
clulas germinativas, a outra gerao j existia em estado prefigurado dentro das
clulas germinativas da primeira gerao prefigurada. Esse corolrio, chamado de
embitment (encapsulao), assegurava que as espcies sempre permaneceriam cons-
tantes. Embora alguns microscopistas alegassem enxergar miniaturas humanas total-
mente desenvolvidas dentro do espermatozide ou do vulo, os maiores proponentes
dessa hiptese - Albrecht von Haller e Charles Bonnet- sabiam que o desenvolvimen-
to dos sistemas orgnicos se dava em velocidades diferentes e que as estruturas
embrionrias no precisavam estar no mesmo lugar daquelas do recm-nascido.
Os pr-formacionistas no tinham uma teoria celular para fornecer um limite inferi-
or para o tamanho dos seus organismos pr-formados, e nem tinham uma viso do
domnio do ser humano sobre a Terra como sendo infinito. Pelo contrrio, como disse
Bonet (1764) O trabalho da natureza to pequeno quanto ela deseja, e a espcie
humana existia no finito espao compreendendo a criao e a ressurreio. Isso esta-
va de acordo com a melhor cincia da poca, e de acordo com o princpio do matem-
tico e filsofo francs Ren Descartes sobre a divisibilidade infinita de uma natureza
mecnica iniciada, mas no interferida por Deus.
A pr-formao era uma teoria conservadora, enfatizando a falta de mudanas
entre geraes. Sua principal falha era a inabilidade em explicar as variaes j conhe-
cidas pela limitada evidncia gentica da poca. Sabia-se, por exemplo, que a unio
entre uma pessoa branca e outra negra gerava filhos de uma cor intermediria entre as
duas, uma impossibilidade se a herana e o desenvolvimento ocorressem somente
atravs do vulo ou do espermatozide. Em experimentos com um controle maior, o
botnico alemo, Joseph Klreuter (1766) produziu plantas hbridas de tabaco conten-
do caractersticas de ambas as espcies. Ademais, cruzando o hbrido tanto com o
ascendente masculino ou o feminino, Klreuter foi capaz de reverter as caractersti-
cas do hbrido de volta quelas de um ou outro ascendente, aps vrias geraes.
Dessa maneira, a herana parecia depender de uma mistura de componentes dos pais.
E mais, a pr-formao no podia explicar a gerao de monstruosidades e determi-
nados desvios, tal como o hexadactilismo (seis dedos em cada mo), quando ambos
os pais eram normais.
Desenvolveu-se, ento, uma hiptese alternativa: epignese. De acordo com essa
hiptese, cada organismo adulto se desenvolveria novamente a partir de uma condi-
o no diferenciada. Essa viso do desenvolvimento, tendo razes filosficas remon-
tando a Aristteles, foi revivida por Kaspar Friedrich Wolff, um embriologista alemo
que trabalhava em St. Petersburg. Observando cuidadosamente embries de pinto,
Wolff demonstrou que as partes embrionrias se desenvolvem de tecidos que no tm
contrapartida no organismo adulto. O corao e os vasos sangneos (que de acordo
com os pr-formacionistas, tinham que estar presentes desde o comeo para assegu-
rar o crescimento embrionrio) podiam ser vistos se desenvolvendo de novo em cada
embrio. Similarmente, foi visto que o tubo intestinal se originava das dobras de um
tecido originalmente plano. Essa ltima observao foi explicitamente detalhada por
Wolff (1767) que declarou: Quando a formao do intestino por essa maneira for
adequadamente avaliada no existir nenhuma dvida, eu acredito, sobre a verdade
da epignese. No entanto, para explicar como o organismo criado novamente a cada
gerao, Wolff teve que postular uma fora desconhecida, a vis essentialis (fora
essencial), a qual agindo como a gravidade ou o magnetismo organizaria o desenvol-
vimento embrionrio.
O pr-formacionismo explica melhor a continuidade das geraes, enquanto que a
epignese explica melhor a variao e as observaes diretas na formao dos rgos.
Uma certa reconciliao entre as partes foi tentada pelo filsofo alemo Immanuel
Kant (1724-1804) e seu colega, o biologista Friedrich Blumenbach (1752-1840). Na
tentativa de construir uma teoria cientfica de descendncia racial, Blumenbach postu-

lou uma fora mecnica, objetivamente dirigida chamada Bildungstrieb (fora de
desenvolvimento). Tal fora, dizia ele, no era terica, mas poderia ser demonstrada
atravs de experimentao. A Hydra, quando cortada, regenera suas partes amputa-
das atravs de um remanejamento de elementos existentes. Algum tipo de fora
organizadora proposital podia ser observada nessa operao, e essa fora era uma
propriedade do prprio organismo. Imaginava-se que essa Bildungstrieb fosse uma
herana adquirida atravs de clulas germinativas. Dessa maneira, o desenvolvimento
poderia prosseguir epigeneticamente atravs de uma fora predeterminada inerente
matria do embrio (Cassirer, 1950; Lenoir, 1980). Ademais, acreditava-se que tal fora
era suscetvel a mudanas, como demonstrado pela variante da concha do caracol,
com espirais voltadas para o lado esquerdo.
Nessa hiptese, onde o desenvolvimento epigentico direcionado por instru-
es pr-formadas, no estamos muito distantes da viso de alguns biologistas mo-
dernos considerando que A descrio completa do organismo j est escrita no ovo
(Brenner, 1979). No entanto, at a redescoberta dos trabalhos de Mendel, no comeo
do sculo vinte, no havia uma teoria gentica consistente na qual se poderia encaixar
tais idias sobre variaes herdadas, e cada cientista era livre para especular sobre os
mecanismos pelos quais os padres de desenvolvimento so herdados.
Os Teratologistas F
Teratologistas ranceses
Franceses
As tentativas de encontrar hipteses que explicassem a constncia das espcies e o

desenvolvimento epigentico levaram criao da moderna embriologia. As buscas
por tais hipteses foram executadas sob duas tradies intelectuais diferentes. Uma,
centralizada na Frana, buscava os mecanismos pelos quais erros embriolgicos cau-
savam o nascimento de crianas com anormalidades de desenvolvimento. Essa cin-
cia ficou conhecida como teratologia, ou estudo de malformaes congnitas. A se-
gunda busca estava centralizada na Alemanha, e estava voltada para a fisiologia dos
processos do desenvolvimento. Ambas as correntes de pesquisa iniciaram a manipu-
lao de embries para verificar como um organismo em desenvolvimento iria respon-
der a essas perturbaes (Churchill, 1973; Fischer e Smith, 1984).
Os experimentos teratolgicos franceses comearam na dcada de 1820 com os
estudos de Etienne Geoffrey Saint-Hilaire e seu filho, Isadore. Essas investigaes
tentaram mostrar que nascimentos anmalos eram produtos de uma falha no desen-
volvimento fetal ao invs de aberraes pr-formadas. Eles buscavam produzir ano-
malias de desenvolvimento artificialmente, alterando as condies de incubao do
ovo de galinha em desenvolvimento. Apesar dos inmeros fracassos dessas tentati-
vas (suas tcnicas rudimentares, ou permitiam a continuao do desenvolvimento
normal ou terminavam por matar os embries), eles abriram o caminho para as anlises
mais refinadas de Dareste em 1877. Dareste realizou milhares de experimentos e acom-
panhou anormalidades no desenvolvimento de aves desde os primeiros estgios do
seu desenvolvimento.
Mas o embrio de pinto foi uma m escolha de organismo para estudar os primei-
ros estgios da embriognese. Se a inteno era examinar se perturbaes nos primei-
ros estgios do desenvolvimento afetavam as estruturas adultas, dever-se-ia usar um
outro organismo. Em 1866, um francs, estudante de medicina, Laurent Chabry, come-
ou a estudar a teratognese no embrio de tunicado, um organismo mais acessvel.
Essa foi uma escolha muito feliz, porque esses embries desenvolvem-se rapidamente
em larvas, com relativamente poucas variedades de clulas. Chabry se concentrou em
produzir malformaes especficas, lancetando blastmeros especficos de embries
de tunicados em clivagem. Ele descobriu que cada blastmero era responsvel pela
produo de um conjunto particular de tecidos larvares. Na ausncia dessas clulas,
a larva deixava de apresentar justamente as estruturas normalmente formadas por
aquelas clulas. Alm disso, ele observou que quando algumas clulas em particular
eram isoladas do resto do embrio, elas formavam sua estrutura caracterstica inde-
pendentemente do contexto das outras clulas. Dessa maneira, cada uma das clulas
tunicadas aparentavam estar se desenvolvendo de maneira autnoma.* Como discu-
timos anteriormente, essa habilidade de cada clula desenvolver-se independente-
mente de outras clulas embrionrias freqentemente chamada de desenvolvimento
autnomo ou em mosaico, porque o embrio aparenta ser um mosaico de partes
autodiferenciadas.
Especificaes autnomas em embries de tunicados

Estudos mais recentes mostraram que o embrio de tunicado de fato se assemelha a
um mosaico de partes autodiferenciadas construdo com informaes armazenadas
no citoplasma do ocito. Com a diviso do embrio, diferentes clulas incorporam
diferentes regies do citoplasma. Acredita-se que essas diferentes regies
citoplasmticas contenham determinantes morfogenticos que controlam o compro-
misso da clula com um determinado tipo de clula. Estudos de determinao em
Figura 13.1
Segregao dos determinantes citoplasmticos *Essa no foi a resposta pela qual Chabry esperava ou pretendia encontrar. Na Frana do sculo
por ocasio da fertilizao. (A) Mapa de desti- dezenove, os conservadores favoreciam a viso dos pr-formacionistas, que era interpretada como
no das regies citoplasmticas do tunicado apoio s desigualdades hereditrias dos membros de uma comunidade. O que voc era, era determi-
Halocynthia roretzi logo aps o trmino dos nado pela sua linhagem. Os liberais, especialmente os socialistas, aprovaram as vises epigenticas,
movimentos citoplasmticos da fertilizao. as quais foram interpretadas como indicando que todos comeavam com a mesma dotao heredi-
Anterior para a esquerda, posterior para a tria, e que ningum tinha o direito a uma posio mais alta do que a do outro. Chabry, um
socialista que odiava os direitos hereditrios dos aristocratas, se esforou para no extrapolar seus
direita. (B) Os rgos da larva tunicada. (A de
dados para nada alm dos embries tunicados.
acordo com Nishida, 1987.)
Clulas pigmentadas
(A) VISTA ANIMAL
VISTA LATERAL Tronco cerebral
Medula espinhal
Medula espinhal Epiderme Msculo
Tronco cerebral Msculo Palpos Notocorda
Clulas
pigmentadas Crebro Mesnquima
Tronco cerebral
Medula espinhal Clulas filamentosas
Crebro Notocorda endodrmicas
Palpos
Endoderma
Clulas Clulas filamentosas endodrmicas
pigmentadas Epiderme
Tronco cerebral
Medula espinhal Msculo Clulas laterais do tronco
VISTA VEGETAL
Clulas laterais
Msculo do tronco
Endoderma (B) Manto
Notocorda
Notocorda (Ectoderma)
Mesnquima
Mancha ocelar Crebro
Msculo Cordo nervoso Notocorda
Boca
Tronco
cerebral Clulas
filamentosas Palpo
endodrmicas
Estmago Clula
muscular
Medula espinhal
Msculo Mesnquima Faringe Corao
(endoderma) Endstilo
Clulas
Notocorda (endoderma)
laterais do tronco
clulas de tunicados tm sido imensamente auxiliados por ovos de certas espcies

que segregam o seu citoplasma em uma srie de regies coloridas, imediatamente aps
a fertilizao (Prancha11).
O determinante formador de msculos do crescente amarelo
Em 1905, E. G. Conklin descreveu como esses plasmas coloridos se repartiam em vrios

blastmeros. A primeira clivagem separa o ovo em duas partes, imagens espelhares
direita e esquerda. Da em diante, cada diviso celular em um lado paralela a uma
diviso celular do outro lado. Observando o destino de cada blastmero do tunicado
Styela partita, Conklin tirou a surpreendente concluso de que cada regio colorida
do citoplasma delineia um destino embrionrio especfico (Figura 13.1). O citoplasma
do crescente amarelo d origem s clulas musculares; o crescente equatorial cinza
produz a notocorda e o tubo neural; o citoplasma claro do plo animal se torna a
epiderme larval; e a regio vegetativa cinza do vitelo d origem ao intestino larval.
Reverberi e Minganti (1946) analisaram a determinao tunicada em uma srie de
experimentos de isolamento, e eles tambm observaram a autodiferenciao de cada
blastmero isolado e o restante do embrio. O resultado de um desses experimentos
mostrado na Figura 13.2. Quando o embrio de oito clulas separado em seus quatro
pares (os lados direito e esquerdo sendo equivalentes), a determinao em mosaico
a regra. O par posterior de blastmeros do plo animal do origem ao ectoderma; o par
posterior do plo vegetal produz o endoderma, o mesnquima e o tecido muscular,
como esperado pelo mapa de destino. O desenvolvimento neural uma exceo. As
clulas produtoras de nervos so geradas por ambos os quadrantes anteriores, animal e
vegetal, e nenhum deles as produz sozinho. Todavia, quando esses pares anteriores so
reunidos surgem os tecidos do crebro e do palpo. Mesmo em embries estritamente
PLO ANIMAL
Ectoderma
ANTERIOR
POSTERIOR
Sistema nervoso
Mesnquima
Notocorda
Msculo
Endoderma PLO VEGETAL
Separao dos pares

de blastmeros
Ectoderma Ectoderma
Notocorda Figura 13.2

Msculo Determinao em mosaico nos tunicados.
Mesnquima Quando os quatro pares de blastmeros do
embrio de oito clulas esto dissociados, eles
Endoderma se desenvolvem como indicado, cada um for-
Endoderma mando estruturas separadas. (De acordo com
Reverberi e Minganti, 1946.)
Estgio celular
Horas a 100 C
A6.1 endoderma
A7.3 notocorda
Tronco cerebral
Vegetal A7.5 endoderma Medula espinhal
A7.6 clulas laterais do tronco
A7.7 notocorda
medula espinhal
msculo
Animal
crebro Crebro
palpos
Faringe primordial
Anterior
epiderme palpos
Clula pigmentada
epiderme Crebro
epiderme
epiderme
endoderma Endoderma
Filamento
mesnquima
Esquerda
endodrmico
notocorda
Posterior
msculo
Msculo
Vegetal
Endoderma
filamento endodrmico
mesnquima Msculo
Medula espinhal
Direita
msculo Filamento
endodrmico
Animal
epiderme
Tronco cerebral
epiderme Medula espinhal
Msculo
epiderme
b5.4 epiderme
Figura 13.3
Linhagem determinativa de blastmeros
tunicados. (A) Mapa de destino de linhagem
determinados como os dos tunicados, algumas interaes indutivas acontecem entre
no desenvolvimento embrionrio do tunicado os blastmeros. De fato, Ortolani (1959) mostrou que essa regio do ectoderma no
H. roretzi. Como as metades direita e esquerda est determinada para originar tecido nervoso at o estgio de 64 clulas, pouco antes
se desenvolvem da mesma maneira, somente da gastrulao. Dessa maneira, embora a maioria dos tecidos sejam determinados
metade do embrio aqui representado. (B) imediatamente aps a segregao do citoplasma do ovo, certos tecidos nesses em-
Linhagens das clulas musculares. (A de acor- bries tm uma determinao condicional por interao clula a clula.
do com Nishida, 1987; B de acordo com Pelos estudos de linhagem celular de Conklin e outros (Figuras 13.2 e 13.3), j era
Nishida, 1992a.) conhecido que somente um par de blastmeros (vegetativo posterior; B4.1) no em-
brio de oito clulas capaz de produzir o tecido muscular da cauda. Quando o
citoplasma transferido do blastmero B4.1 (formador de msculo) para o blastmero
b4.2 (formador do ectoderma) de um embrio tunicado de 8 clulas, o blastmero

Figura 13.4
Localizao do citoplasma formador de msculos durante o desenvolvimento precoce de ascdios.
Regies do citoplasma foram transferidas para o blastmero a4.2 (epiderme presuntiva) e inves-
tigadas para detectar protenas especficas do msculo produzidas por clulas derivadas de a4.2.
A regio colorida representa o crescente amarelo, que deve conter os determinantes da forma-
o muscular. Porcentagens indicam a frao do espcimen mostrando expresso do gene
muscular. (A) embrio de oito clulas; (B) ovo no fertilizado; (C) ovo fertilizado na primeira fase
dos movimentos citoplasmticos. (D) ovo fertilizado na segunda fase dos movimentos citoplas-
mticos. (De acordo com Nishida, 1992b.)
(B)
Estgio de
64 clulas
Estgio de
32 clulas
Estgio de
16 clulas
Estgio de 8 clulas
Especificao muscular
Especificao muscular autnoma condicionada
formador do ectoderma gera clulas musculares como tambm sua prognie ectodrmica
normal (Whittaker, 1982). Alm disso, o citoplasma da rea de plasma amarelo do ovo
fertilizado pode tambm fazer com que o blastmero 4.2a expresse protenas especfi-
cas do msculo (Figura 13.4; Nishida, 1992a). Tung e colegas (1977) mostraram o
inverso, que quando os ncleos larvais so transplantados a fragmentos enucleados
de ovos de tunicados, as clulas recm-formadas mostram uma estrutura tpica daque-
las clulas que fornecem o citoplasma, e no daquelas clulas que fornecem o ncleo.
(A) 8 clulas (B) ovo no fertilizado (C) Segregao da (D) Segregao da

primeira fase segunda fase
Crescente
amarelo
Lateral
Podemos concluir, ento, que certos determinantes que existem no citoplasma causam
a formao de certos tecidos. Esses determinantes morfogenticos parecem agir ati-
vando (ou inativando) seletivamente genes especficos. A determinao dos
blastmeros e a ativao de certos genes so controlados pela localizao espacial de
determinantes morfogenticos dentro do citoplasma do ovo. [cyto1.html]
Existe a hiptese de que o determinante miognico do crescente amarelo regula a
transcrio de genes especficos para o msculo. Imaginava-se que os tunicados
poderiam segregar uma protena semelhante MyoD dentro do crescente amarelo. No
entanto, embora essa protena seja vista nas clulas musculares do embrio tunicado,
ela s comea a funcionar no estgio de 32 clulas no sendo ento o fator do crescen-
te amarelo (Satoh et al.,1995). Um melhor candidato a determinante miognico do
crescente amarelo o RNA materno que parece estar ligado ao citoesqueleto do
ocito e que segregado junto com o citoplasma formador de msculos. Esse RNA
encontrado no crtex de ocitos maduros, segregado juntamente com o citoplasma
amarelo formador de msculos para a coroa do plo vegetal na primeira fase dos
movimentos citoplasmticos durante a fertilizao, e a partir da muda para a regio
vegetativa posterior do zigoto enquanto se forma o crescente amarelo definitivo (Fi-
gura 13.5; Swalla e Jeffery, 1995). Esse RNA provavelmente no codifica uma protena,
e no se sabe se pode direcionar o desenvolvimento muscular quando inserido em
uma clula no muscular.
Especificao citoplasmtica das linhagens

endodrmicas e epidrmicas e o eixo ntero-posterior
A anlise das clulas endodrmicas e epidrmicas foi feita de maneira semelhante.

Reverberi e Minganti (1946) confirmaram o mapa de destino de Conklin, e Whittaker
(1977) mostrou que enzimas especficas do endoderma eram sintetizadas somente nas
clulas destinadas a formar o intestino. Mais recentemente, Nishida (1993) fundiu
Figura 13.5 clulas e fragmentos de clulas para seguir os determinantes que davam origem s
Localizao espacial de um RNA (YC-RNA)
que se segrega com o citoplasma formador de
msculo do crescente amarelo. Hibridizaes (A) (B)
in situ foram realizadas em vrios estgios do
desenvolvimento de Styela clava. (A) Ovo no
fertilizado. (B) Aps a primeira fase dos movi-
mentos de fertilizao do citoplasma oognico.
(C) Seo frontal de um embrio de 4 clulas
mostrando expresso em ambos os blastmeros
vegetais. (D) Seo frontal de um embrio de
32 clulas mostrando expresso em seis clu-
las musculares posteriores. (E) Embrio com
broto caudal mostrando expresso de YC-RNA
em clulas musculares progenitoras em ambos
os lados da notocorda. (de Swalla e Jefferey,
1995; fotografias cortesia dos autores.)
(C) (D) (E)

Primeira fase Segunda fase Embrio de Figura 13.6

da segregao da segregao 8 clulas Comparao dos movimentos dos determinan-
tes citoplasmticos em trs tipos de tecidos
de tunicados. Estas figuras representam so-
Msculo mente a superfcie dos ovos. (De acordo com
Nishida, 1994a.)
Endoderma
Epiderme
linhagens de clulas epidrmicas e endodrmicas. Aps a fuso da clula ou do frag-

mento de clula a uma clula de outra linhagem, Nishida usou um marcador bioqumico
ou antignico para determinar se aquela clula assumiu o novo destino. Os
determinantes epidrmicos migram para a regio apical da clula durante a fertilizao
e entram nos blastmeros da coroa do plo animal (o par a4.2 e o par b4.2) do embrio
de 8 clulas. Inversamente, foi encontrado que os determinantes endodrmicos mi-
gram para o hemisfrio vegetal do zigoto e se distribuem entre os blastmeros
vegetativos (Figura 13.6; Nishida, 1994a).
O eixo ntero-posterior tambm determinado durante a migrao das regies
citoplasmticas do ocito. Pela remoo de aproximadamente 10% do citoplasma da
regio vegetativa posterior do ovo, aps o segundo movimento ooplsmico, a maioria
dos embries no formou o eixo ntero-posterior. Em lugar disso, os embries se
desenvolveram em larvas radialmente simtricas com destinos anteriores. Esse cito-
plasma vegetativo posterior (PVC) era dominante em relao a outros citoplasmas,
pois ao se transplantar o PVC para a regio vegetativa anterior de zigotos que tiveram
seu prprio PVC removido, o anterior da clula se transformou no novo posterior, e o
eixo foi invertido (Nishida, 1994b). Esses resultados sugerem que o destino posterior
determinado por um determinante especfico do citoplasma, enquanto que o destino
anterior determinado pela ausncia do citoplasma vegetativo posterior. Isso se
correlaciona bem com a observao de que a maioria dos destinos celulares posterio-
res (como o msculo e o endoderma) so especificados pelo citoplasma, mas os des-
tinos celulares anteriores (como o crebro e a notocorda) so gerados por indues
(Figura 13.7).
No embrio de tunicado, os movimentos ooplsmicos na fertilizao criam domni-
os citoplasmticos distintamente diferentes, que se distribuem proporcionalmente
nos blastmeros. A identidade desses determinantes e seus mecanismos de ao
ainda no foram esclarecidos.
Localizao citoplasmtica em embries de moluscos

O tipo de diferenciao em mosaico largamente difundido no reino animal, especial-
mente em organismos protostomatas, tais como ctenforo, aneldeos, nematdeos e
moluscos, os quais, em sua totalidade, iniciam a gastrulao na futura extremidade
anterior, aps somente algumas divises celulares. Moluscos fornecem alguns dos
exemplos mais impressionantes de desenvolvimento em mosaico e do fenmeno de
Figura 13.7
Comparao de embries normais de tunicados e embries cujo citoplasma vegetativo posterior
(PVC) foi removido. (A) Larva do tipo selvagem. (B) Larva radialmente simtrica de ovo cujo
PVC foi removido. A larva no tem o eixo ntero-posterior. Essas larvas consistem de uma
camada epidrmica externa, uma massa notocordal central e uma camada endodrmica intermedi-
ria. (C) Vista vegetal de um embrio normal com 76 clulas. (D) Vista vegetal de um embrio
radialmente simtrico cujo PVC foi removido. (De acordo com Nishida, 1994b.)
localizao citoplasmtica, onde os determinantes morfogenticos so encontrados

em uma regio especfica do ocito. Alm disso, esses fatores citoplasmticos so
ativamente transportados para um plo da clula, de tal modo que um blastmero
tendo esses fatores pode restringir sua transmisso para somente uma de suas clu-
las-filha. O destino das duas clulas-filha definido por qual delas recebe o
determinante morfogentico.
E. B. Wilson, o famoso embriologista americano do comeo do sculo XX, isolou
blastmeros precoces de embries do molusco Patella coerulea e comparou seu
desenvolvimento com o das mesmas clulas deixadas dentro de outros embries de
Patella. A Figura 13.8 mostra um grupo de resultados publicados por Wilson em 1904.
Os blastmeros isolados no s seguiram seus destinos normais de desenvolvimento
(nesse caso, para produzir as clulas trocoblsticas ciliadas), como tambm completa-
ram o nmero normal de divises celulares precisamente ao mesmo tempo que as
Desenvolvimento normal de Patella
Trocoblasto
Figura 13.8 presuntivo
(A-C) Diferenciao de clulas trocoblsticas
no embrio normal do molusco Patella. (A)
Estgio de 16 clulas visto de lado; as clulas
trocoblsticas presuntivas esto sombreadas.
(B) Estgio de 48 clulas. (C) Estgio de larva
ciliada, visto do plo animal. So observados
clios nas clulas trocoblsticas. (D-G) Dife- (A) (B) (C)
renciao de clulas trocoblsticas isoladas e
cultivadas in vitro. (D) Clula trocoblstica iso- Desenvolvimento do trocoblasto isolado
lada. (E,F) Resultados da primeira e segunda
divises em cultura. (G) Produto ciliado de (F).
Mesmo em cultura isolada as clulas se tornam
ciliadas no momento correto. (De acordo com
Wilson, 1904.) (D) (E) (F) (G)
Citoplasma Figura 13.9

animal claro Clivagem no molusco Dentalium. A extruso
Citoplasma e a reincorporao do lbulo polar ocorre duas
equatorial vezes. (De acordo com Wilson, 1904.)
granular
Citoplasma
vegetal claro Lbulo
polar
Lbulo polar absorvido Segunda extruso Lbulo polar

no blastmero CD do lbulo polar absorvido no
blastmero D
clulas permanecendo dentro do embrio. Suas clivagens se deram na orientao

correta, e as clulas derivadas se tornaram ciliadas na poca apropriada. Desses expe-
rimentos, Wilson concluiu que essas clulas possuam dentro de si todos os fatores
que determinavam a forma e o ritmo da clivagem e que a diferenciao complexa e
caracterstica que elas sofriam era completamente independente de sua relao com o
resto do embrio. [cyto2.html]
O lbulo polar
Em seu experimento seguinte, Wilson pde demonstrar que tal desenvolvimento era
assegurado pela segregao de determinantes morfogenticos especficos em
blastmeros especficos. Certos embries clivando espiralmente (principalmente nos
(A)
filos molusco e aneldeo) expelem um bulbo de citoplasma imediatamente antes da
primeira clivagem (veja Figura 13.9). Essa protruso chamada lbulo polar. Em certas
espcies de caracis, a regio unindo o lbulo polar ao resto do ovo se torna um tubo
delgado. A primeira clivagem divide o zigoto assimetricamente, de tal forma que o
lbulo polar est ligado somente ao blastmero CD. Em vrias espcies, quase um
tero do volume citoplasmtico total est presente nesses lbulos anucleados dando-
lhes a aparncia de outra clula. Essa estrutura trilobulada freqentemente referida
como o embrio no estgio triflio (Figura 13.10). O blastmero CD absorve ento o
material do lbulo polar, mas o extruda novamente antes da segunda clivagem (Figura
13.9). Aps essa diviso, o lbulo polar est ligado somente ao blastmero D, que (B)
absorve seu material. A partir da, no mais se forma o lbulo polar.
Wilson mostrou que se o lbulo polar for removido no estgio triflio, as clulas Figura 13.10
Lbulos polares de moluscos. (A) Micro-
remanescentes dividem-se normalmente. Entretanto, em lugar de produzir uma larva
grafia eletrnica de varredura do lbulo po-
trocfora normal (caracol), elas produzem uma larva incompleta, sem seus rgos
lar em extenso no ovo no clivado de
mesodrmicos - msculos, boca, glndula da concha e p.* Ainda mais, Wilson de- Buccinum undatum. As cristas superficiais
monstrou que o mesmo tipo de embrio anormal pode ser produzido removendo o so restritas regio do lbulo polar. (B)
Seo atravs da primeira clivagem ou est-
A glndula da concha um rgo formado por induo pelas clulas mesodrmicas. Sem o gio triflio do embrio de Dentalium. A seta
mesoderma, no existem clulas presentes para induzir o ectoderma competente. Mais uma vez aponta o grande lbulo polar grande. (Cor-
vemos alguma induo limitada em um embrio em mosaico. tesia de M. R. Dohmen.)
(A)
Figura 13.11
Desenvolvimento do blastmero D. (A) Dia-
gramas esquemticos da linhagem do blast-
mero D em embries de Ilyanassa. (i) Embrio
de 4 clulas. (ii) Blastmeros 1D e 1d no est-
gio de 8 clulas. (iii) Estgio de 16 clulas con-
tendo blastmeros 2D e 2d (derivados de 1D).
As clulas derivadas do D (coloridas) freqen-
temente se dividem mais tarde do que as ou-
tras. (iv) Diviso do macrmero 2D para gerar
clulas 3D e 3d, enquanto a clula 2d se divide
em 2d1 e 2d2. (v) Estgio de 64 clulas. O
blastmero 3D produz as clulas 4D e 4d. (vi)
O blastmero 4d divide-se simetricamente para
produzir os dois mesentoblastos ME1 e ME2.
(B) Embrio de 8 clulas. A pequena clula
PB o lbulo polar e no parte do embrio.
(C) Embrio de 12 clulas (1a-1d ainda no blastmero D do embrio de 4 clulas. O pesquisador concluiu que o citoplasma do
dividiram). (D) Embrio de 32 clulas. (A de lbulo polar contm os determinantes mesodrmicos e que esses do ao blastmero
acordo com Clement, 1962; fotografias de Craig sua capacidade formadora do mesoderma. Wilson mostrou tambm que a localizao
e Morrill, 1986, cortesia dos autores.) dos determinantes mesodrmicos estabelecida logo aps a fertilizao, demonstran-
do assim que uma regio citoplasmtica especfica do ovo, destinada a ser inclusa no
blastmero D, contm os fatores (quaisquer que sejam) necessrios para os ritmos de
clivagem especiais desse blastmero e para a diferenciao do mesoderma.
Os determinantes morfogenticos seqestrados dentro do lbulo polar esto pro-
vavelmente localizados no citoesqueleto ou no crtex e no no citoplasma difusvel
do embrio. Isso foi evidenciado a partir de estudos de A. C. Clement (1968). Quando
o hemisfrio animal separado do vegetal no caracol Ilyanassa obsoleta, o hemisfrio
animal forma rgos ectodrmicos que se assemelham a embries formados de ovos
sem lbulos. Clement usou aqueles embries que haviam iniciado a reabsoro do seu
segundo lbulo polar e os colocou em placas de gelatina. Em seguida, ele centrifugou
os embries embebidos, forando o fluido citoplasmtico do vitelo da parte vegetativa
da clula para dentro do hemisfrio animal. Centrifugando esses embries em um
segundo meio viscoso, ele causou a separao dos hemisfrios animal e vegetal. As
metades animais desses embries centrifugados no desenvolveram mais estruturas
mesodrmicas e endodrmicas do que aquelas de ovos no centrifugados. Portanto,
os determinantes do lbulo polar no foram transferidos ao hemisfrio animal pelo
contedo fludico do hemisfrio vegetal. Van den Biggelaar obteve resultados seme-
lhantes quando removeu o citoplasma do lbulo polar com uma micropipeta. O cito-
plasma de outras regies da clula fluram para o lbulo polar, repondo a poro que
havia sido removida O desenvolvimento subseqente desses embries foi normal.
Alm disso, quando o citoplasma solvel do lbulo polar foi adicionado ao blastmero
B, no houve duplicaes de estruturas (Verdonk e Cather, 1983). Portanto, a parte
difusvel do citoplasma no contm esses determinantes morfogenticos. Eles prova-
velmente se localizam no citoplasma cortical, no fluido, ou no citoesqueleto.
(A) (B) (C)
Clement tambm analisou o desenvolvimento subseqente do blastmero D para

observar a futura partio desses determinantes. O desenvolvimento do blastmero D
est ilustrado na Figura 13.11. Esse macrmero, tendo recebido o contedo do lbulo
polar, maior do que os outros trs. Se for removido o blastmero D ou o seu primeiro
ou segundo macrmeros derivados (1D ou 2D), obtm-se uma larva incompleta, sem
corao, intestino, velum (a borda ciliada da larva), glndula da concha, olhos e p. Se
o blastmero removido o 3D (aps a diviso da clula 2D para formar o blastmero
3d), obtm-se um embrio quase normal, tendo olhos, p, velum e parte da glndula da
concha, mas sem corao ou intestino (Figura 13.12). Portanto, alguns dos
determinantes morfogenticos originalmente presentes no blastmero D foram reser-
vados para a clula 3d. Aps a produo da clula 4d (pela diviso do blastmero 3D),
a remoo do derivado de D (a clula 4D) no produz diferena qualitativa no desen-
volvimento. Realmente, todos os determinantes essenciais para a formao do cora-
o e intestinos esto agora no blastmero 4d, e a remoo daquela clula resulta em
uma larva sem corao e intestino (Clement, 1986). O blastmero 4d responsvel pela
formao (na sua prxima diviso) dos dois mesentoblastos, as clulas que do ori-
gem a ambos rgos, mesodrmico (corao) e endodrmico (intestinos).
Figura 13.12
Importncia do lbulo polar no desenvolvimen-
to de Ilyanassa. (A) Larva vliger normal. (B)
Larva anormal, tpica para os casos onde o l-
bulo polar do blastmero D removido. (E,
olho; F, p; S, concha; ST, estatocisto, rgo de
equilbrio; V, velum; VC, clios velares; Y, vitelo
residual; ES, estomodeu evertido; DV, velum
desorganizado.) (de Newrock e Raff, 1975,
cortesia de K. Newrock.)
(A) Embrio normal (B) Embrio duplo
Figura 13.13
Formao de embries gmeos suprimindo a formao do lbulo polar em Dentalium. (A)
Embrio normal no estgio da sexta clivagem. (B) Embries gmeos formados quando
baixas concentraes de citocalasina inibem a formao do lbulo polar e o material do
lbulo polar distribudo para ambos os blastmeros, AB e CD. (De acordo com Guerrier
et al., 1978.)
O material do lbulo polar tambm responsvel pela organizao da polaridade

dorso-ventral (costas-ventre) do embrio. Quando permitido que material do lbulo
polar passe para o blastmero AB, como tambm para a clula CD, so formadas larvas
gmeas unidas por suas superfcies ventrais (Figura 13.13; Guerrier et al., 1978; Henry
e Martindale, 1987).
Resumindo, experimentos mostraram que o citoplasma no difusvel do lbulo
polar extremamente importante para o desenvolvimento normal de moluscos porque:
1. Contm os determinantes para um adequado ritmo e orientao de clivagem do

blastmero D.
2. Contm certos determinantes (aqueles entrando no blastmero 4d e, portanto,
levando produo dos mesentoblastos) para a diferenciao mesodrmica e
intestinal.
3. Permite interaes indutivas (atravs do material entrando no blastmero 3d)
que levam formao da glndula da concha e o do olho.
4. Contm determinantes necessrios para a especificao do eixo dorso-ventral
do embrio.
Apesar da evidente importncia do lbulo polar no desenvolvimento normal do cara-

col, ainda no se conhece os mecanismos desses efeitos. Parece no haver diferenas
importantes no mRNA ou na sntese de protenas entre embries com ou sem o lbulo
polar (Brandhorst e Newrock, 1981; Collier, 1983, 1984). Um possvel indcio foi forne-
cido por Atkinson (1987), que observou clulas diferenciadas no velum, aparelho
digestivo e glndula da concha no embrio sem lbulo. Embries sem lbulo podem
produzir essas clulas, mas parecem incapazes de organiz-las em tecidos e rgos
funcionais. Tecidos do trato digestivo podem ser encontrados, mas no so ligados;
micitos esto espalhados ao redor da larva sem lbulo, mas no esto organizados
em um tecido muscular funcional. Parece, assim, que as funes do lbulo polar no
desenvolvimento so muito complexas. [cyto3.html], [evo2.html]
Especificao celular no nematdeo Caenorhabditis elegans

A habilidade em analisar o desenvolvimento exige organismos apropriados. Ouri-
os-do-mar h muito tempo tm sido o organismo favorito dos embriologistas por-
que pode-se facilmente obter seus gametas em grande nmero, seus ovos e embri-
es so transparentes, e a fertilizao e o desenvolvimento podem ocorrer em con-
dies de laboratrio. Mas, ourios-do-mar dificilmente podem ser criados no labo-
ratrio por mais de uma gerao, dificultando o estudo de sua gentica. Geneticis-
tas, de outro lado (especialmente aqueles que trabalham com eucariotos
multicelulares), preferem a Drosophila. O rpido ciclo vital, facilidade de reprodu-
o e os cromossomos politnicos da larva da mosca (que permite a localizao de
genes) tornam esse animal soberbamente adequado para anlises hereditrias. Mas
o desenvolvimento da Drosophila muito complexo e difcil de estudar. Um progra-
ma de pesquisa encabeado por Sidney Brenner (1974) foi organizado para identifi- Figura 13.14
car um organismo onde se pudesse identificar cada gene envolvido no desenvolvi- Caenorhabditis elegans. (A) Vista lateral do
mento, como tambm seguir a linhagem de cada clula individual. Tal organismo o adulto hermafrodita. No incio do seu desen-
Caenorhabditis elegans, um pequeno nematdeo (1mm de comprimento) de vida volvimento, o espermatozide formado. Esse
livre encontrado no solo (Figura 13.14 A). um organismo com um rpido perodo de espermatozide armazenado durante os est-
embriognese (aproximadamente 16 horas), que pode ser realizada em placas de gios posteriores, de tal forma que um vulo
maduro passe atravs do espermatozide no
Petri e relativamente poucos tipos de clulas. Alm disso, sua forma predominante
seu caminho para a vulva. Dessa maneira, o
hermafrodita, cada indivduo contendo vulos e espermatozides. Esses nematdeos hermafrodita une os seus prprios espermato-
podem reproduzir-se ou por autofertilizao ou fertilizao cruzada com machos que zide e vulo. (B) Mapa completo da linhagem
ocorrem com pouca freqncia. O corpo de um C. elegans hermafrodita contm celular para C. elegans. Cada linha vertical
exatamente 959 clulas somticas, cuja linhagem total foi identificada atravs de sua representa uma clula; cada linha horizontal
cutcula transparente (Figura 13.14 B; Sulston e Horvitz, 1977; Kimble e Hirsch,1979; representa uma diviso celular. (De acordo com
Sulston et al.,1983). Alm disso, ao contrrio das linhagens de clulas dos vertebrados, Pines, 1992, baseado em Sulston e Horvitz,
1977, e Sulston et al., 1983.)
(A)
Intestino Gnada Faringe
Sistema
nervoso
nus
vulo Vulva
Reto
Espermatozide
vulo
(B)
Celulas
Clulas produtoras germinativas
de cutcula Vulva
Sistema nervoso Gnada
Faringe Intestino
Ovo fertilizado
PO (zigoto)
Hipoderme
Neurnios
Msculos farngeos
Um msculo do corpo
Glndulas Msculos do corpo
(389 clulas) Msculos farngeos Intestino
Neurnios (20 clulas)
Glndulas Hipoderme
(80 clulas) Msculos do corpo Msculos do corpo
Dois neurnios (20 clulas)
(47 clulas)
Linhagem germinativa
Figura 13.15
Mapa resumido da linhagem celular de C.
elegans, enfatizando os precursores da linha-
gem germinativa (clulas P, P0-P4) que rece-
bem os grnulos P. O nmero de clulas (em
parnteses) se refere s clulas presentes na a linhagem de clulas do C. elegans quase inteiramente invarivel de um indivduo
larva recm-eclodida. Algumas dessas conti-
para o outro. Existem poucas possibilidades para o acaso (Sulston et al., 1983). (Essa
nuam a se dividir para produzir as 959 clulas
somticas do adulto. (de Strome e Wood, 1983, uma conseqncia da organizao espacial da segregao citoplasmtica.)
cortesia de W. Wood.) Caenorhabditis tambm tem um pequeno nmero de genes para um organismo
multicelular- aproximadamente 15.000 (Sulston et al., 1992).
A polaridade inicial parece residir no ovo alongado, o eixo ntero-posterior sendo
o eixo longo do ovo. Entretanto, a deciso sobre qual ponta se tornar a anterior e qual
ser a posterior parece depender do espermatozide. A posio de entrada do esper-
matozide no ncleo define o plo posterior (Goldstein e Hird, 1996).
O esquema de diviso de C. elegans (Figura 13.15) semelhante ao da linhagem
de clulas precursoras, pois durante a clivagem precoce, divises assimtricas pro-
duzem uma clula-filha diferenciada (coletivamente chamadas de clulas ncoras
e denominadas como AB, MS, E, C e D) e outra clula precursora (a linhagem P1-P4).
A localizao das substncias citoplasmticas em blastmeros especficos foi ele-
gantemente demonstrada nessas divises assimtricas. Dentro do ovo est um con-
junto de grnulos da linhagem germinativa, ou grnulos P, que so redistribudos
no zigoto, pouco depois da fertilizao e so restritos s clulas capazes de formar
gametas. Usando anticorpos fluorescentes contra um dos componentes dos grnu-
los P, Strome e Wood (1983) descobriram que durante a migrao pronuclear no
zigoto, os grnulos P aleatoriamente espalhados passam a se localizar na ponta
posterior do zigoto (em direo ao stio de entrada do espermatozide), de modo que
somente entram no blastmero (P1) formado do citoplasma posterior (Figura 13.16;
Prancha 10). Aps a clivagem, os grnulos P se dispersam atravs do blastmero P1
at o incio da mitose, quando eles novamente migram para a ponta posterior da
clula. Aqui eles ficam reservados para o blastmero P2. Finalmente, os grnulos P
se localizaro na clula P4, cuja descendncia se torna os espermatozides e os
vulos do adulto. A localizao dos grnulos P requer microfilamentos mas pode
ocorrer na ausncia de microtbulos. Tratando os zigotos com citocalasina D (um
inibidor de microfilamentos), se impede a segregao desses grnulos na poro
posterior da clula, enquanto que demicolcina (um inibidor microtubular semelhante
colchicina) no impede esse movimento (Strome e Wood,1983). Uma vez dentro da
regio posterior do zigoto, os grnulos P l permanecem, mesmo que os
microfilamentos sejam destrudos (Hill e Strome, 1987, 1990). [other.html#cyto4]
Figura 13.16
Localizao assimtrica dos grnulos P durante a fertilizao e a primeira
clivagem. As figuras esquerda esto coradas para mostrar o DNA; as
figuras direita mostram as mesmas clulas marcadas com anticorpos
fluorescentes contra a protena do grnulo P. (A) Um zigoto antes da migra-
o pronuclear mostra uma disperso aleatria dos grnulos P. (B) Com a
aproximao dos proncleos, os grnulos se localizam na periferia posteri-
(A) or do zigoto. (C) Um embrio de duas clulas no qual P1 est entrando na
prfase mittica; Os grnulos P esto agora posicionados na periferia
posterior para serem transportados para a clula P2. (de Strome e Wood,
1983, cortesia de S. Strome.)
(B)
(C)
Os mecanismos para o movimento e a ancoragem desses grnulos citoplasmticos

ainda so desconhecidos, mas eles so regulados pelos genes par que controlam a
partio do citoplasma durante as primeiras clivagens do C. elegans. Mutaes em seis
genes par (defectivos na partio) so expressas como mutantes com efeito materno,
onde as distribuies de microfilamentos so aberrantes e os grnulos P so distribu-
dos anormalmente (Kemphues et al., 1988; Kirby et al., 1990). Clivagens precoces nesses
Figura 13.17
Actina anormal e distribuio de grnulos P
no mutante par-3. Distribuio da actina ci-
toplasmtica no embrio do tipo selvagem
(A) e no embrio de uma fmea deficiente
em par-3 (B). A distribuio dos grnulos P
assimtrica no embrio do tipo selvagem
(C), mas simtrica no embrio deficiente em
par-3 (D). No embrio mutante de 4 clulas
(E), os grnulos P podem ser vistos em to-
das as quatro clulas. (de Kirby, 1992, corte-
(A) (B) sia de C. M. Kirby.)
(C) (D) (E)

embries mutantes so simtricas e sincronizadas, e os grnulos P so encontrados em

vrios blastmeros (Figura 13.17). Os fentipos dos mutantes par-2 e par-3 se parecem
aos embries do tipo selvagem quando esses so expostos a um inibidor de
microfilamentos por um perodo de 10 minutos durante o primeiro ciclo celular (Hill e
Strome, 1990). Alm disso, pelo menos trs das protenas (PAR-1, PAR-2 e PAR-3) so
elas mesmas assimetricamente distribudas no crtex do zigoto (Etemad-Moghadam et
al., 1995; Guo e Kemphues, 1995; Boyd et al., 1996). A protena PAR-2 uniformemente
distribuda pelo crtex do ocito, mas se torna localizada no crtex posterior no embrio
de uma clula. Na primeira clivagem, a protena PAR-2 entra somente na clula-filha
posterior, P1. De forma similar, PAR-2 se torna restrita ao plo posterior de P1, P2 e P3. A
protena PAR-2 parece ser crtica para a manuteno da protena PAR-1 no crtex poste-
rior, e PAR-1 parece estar envolvida em ligao com os grnulos P (Boyd et al., 1996).
Controle maternal da identidade do blastmero: O controle

gentico das clulas progenitoras farngeas de C. elegans.
A determinao na maior parte do embrio de C. elegans autnoma, sendo os desti-

nos celulares determinados por fatores citoplasmticos internos, e no por interaes
entre clulas vizinhas. Considera-se que os fatores proticos podem determinar o
destino celular entrando no ncleo de blastmeros especficos e ativando ou repri-
mindo certos genes determinantes do destino. Foram encontrados fatores de transcri-
o em linhagens celulares determinadas de maneira autnoma? Apesar dos grnulos
P de C. elegans estarem localizados de maneira consistente com um papel de
determinante morfogentico, eles no entram no ncleo e sua funo no desenvolvi-
mento ainda desconhecida. Entretanto, a protena SKN-1 do embrio de C. elegans
uma candidata muito promissora para um morfgeno de fator de transcrio.
A protena SKN-1 um polipeptdeo especificado maternalmente que pode contro-
lar o destino do blastmero EMS, a clula que gera a faringe posterior. Aps a primeira
clivagem, somente o blastmero posterior, P1, tem a habilidade de produzir as clulas
farngeas de maneira autnoma quando isolado. Depois da diviso de P1, somente o
EMS capaz de gerar clulas musculares farngeas, mesmo quando isolado das outras
clulas do corpo (Priess e Thomson, 1987). Similarmente, quando a clula EMS se
divide, somente uma de sua prognie, MS, tem a habilidade intrnseca para gerar
tecido farngeo. Isso sugere que o destino da clula farngea pode ser determinado
autonomamente por fatores maternos residindo no citoplasma que destinado parti-
cularmente para essas clulas. Bowerman e seus colaboradores (1992) procuraram
mutantes de efeito materno que no tm clulas farngeas, e eles isolaram uma muta-
o no gene skn-1. Embries de mes homozigotas, deficientes em skn-1, no tm
derivativos farngeos e intestinais de EMS (Figura 13.18). Em lugar de produzir as
estruturas farngeas e intestinais normais, esses embries parecem produzir tecido
hipodrmico (pele) extra, onde deveriam estar a faringe e o intestino. Somente aquelas
clulas destinadas a formar faringe ou intestino so afetadas por essa mutao. Alm
disso, a protena que seria codificada por essa mensagem tem uma seqncia no stio
de ligao do DNA semelhante aquele visto na famlia bZIP de fatores de transcrio
(Blackwell et al.,1994).
Bowerman e colegas (1993) mostraram que a protena SKN-1 est presente no
citoplasma do ovo. Entretanto, aps a primeira clivagem muito mais dessa protena
entra no ncleo P1 do que no ncleo AB (Figura 13.19). Aps a segunda diviso,
ambos os derivados P1 recebem a protena SKN-1 em seus ncleos. Assim, possvel
que a protena SKN-1 seja um morfgeno que ativa certos genes na clula P1 e seus
descendentes. Entretanto, alguma coisa a mais necessria para restringir a funo de
SKN-1 clula EMS e para impedir seu funcionamento em P2.
Restringir a identidade de EMS a um nico blastmero do embrio de 4 clulas
requer a atividade de dois outros genes, ambos parecendo regular skn-1. Mutaes
dos genes pie-1 (pharyngeal, intestinal excess) e mex-1 (muscle excess) alteram a
Tipo selvagem Mutante skn-1 Figura 13.18

Deficincias de intestino e faringe de mutantes
skn-1. Embries de fmeas do tipo selvagem
(A,C) e de fmeas homozigotas para o mutan-
te skn-1 (B,D) foram testados para verificar a
Antgeno do presena de msculos farngeos (A,B) e gr-
msculo nulos especficos do intestino (C,D). O
da faringe anticorpo especfico para o msculo farngeo
marca a musculatura da faringe nos embries
derivados de fmeas do tipo selvagem, mas
no se liga a nenhuma estrutura dos embries
(A) (B) de fmeas mutantes de skn-1. Analogamente,
os grnulos birrefringentes do intestino esto
ausentes nos embries derivados das fmeas
mutantes para skn-1. (de Bowerman et al.,
1992,cortesia de B.Bowerman.)
Grnulos
especficos
do intestino
(C) (D)
determinao de clulas no embrio de oito clulas de C. elegans de tal maneira que

vrias clulas adicionais no embrio so determinadas como clulas MS (Mello et al.,
1992). Em embries derivados de fmeas deficientes em pie-1 os blastmeros irmos
P3 e C so convertidos em blastmeros E e MS, respectivamente, enquanto que embri-
es derivados de fmeas deficientes em mex-1, todos os descendentes da clula AB
so redefinidos como clulas MS. Fmeas simultaneamente deficientes nos produtos
de mex-1 e pie-1 geram embries nos quais as seis clulas anteriores so clulas MS
e as duas posteriores, clulas E. Desse modo, as protenas PIE-1 e MEX-1 agem
independentemente- MEX-1 durante a primeira diviso e a protena PIE-1 durante a
segunda diviso (Figura 13.20; Bowerman et al., 1993). Em todos os casos o gene do
tipo selvagem SKN-1 necessrio para a formao das clulas MS extras, e embries
sem skn-1 no tm faringe. Isso relaciona as protenas MEX-1 e PIE-1 ativao (mais
Tipo selvagem mex-1
Figura 13.19
Localizao citoplasmtica da protena SKN-
1. Anticorpos protena SKN-1 mostram que
ela est presente predominantemente no n-
cleo da clula P1, aps a primeira diviso.
Aps a segunda diviso, essa protena se acu-
mula nas duas clulas derivadas de P1, mas
no nas clulas derivadas de AB (compare as
intensidades dos ncleos indicados pelas se-
tas). Em mutantes mex-1 a protena SKN-1
est distribuda igualmente em todos os
blastmeros. (de Bowerman et al., 1993, cor-
tesia de B. Bowerman.)
Figura 13.20 (A) Ovo

Modelo esquemtico da determinao da clu-
la MS em embries do tipo selvagem e mutan-
tes. (A) O determinante MS (considerado como
o produto do gene skn-1) est presente no esta-
do inativo dentro do ovo. Durante a primeira
diviso nos embries do tipo selvagem, o de- Tipo selvagem
terminante MS est localizado no blastmero
posterior (P1), e na segunda diviso, ele vai se
localizar na clula EMS. Na terceira diviso, a
clula EMS se divide na clula MS (onde o
fator ativado) e a clula E. Em embries deri-
vados de fmeas deficientes em mex-1, o fator
no se segrega na primeira diviso, mas a se-
gregao a partir de P1 normal na diviso
seguinte. Em embries derivados de fmeas
deficientes em pie-1, a segregao inicial do
determinante de MS para o P1 normal, mas a
segunda distribuio assimtrica do determi-
nante (para a clula EMS) defeituosa. No
mutante combinado, os padres so superpos-
tos, de modo que todas as clulas do embrio
de 4 clulas tm o determinante MS inativo.
(B) Sumrio das interaes envolvendo skn-1,
pie-1 e mex-1. (A de acordo com Mello et al., (B)
1992; B de acordo com McGhee, 1995.)
Em mutantes mex-1, O produto de pie-1
a protena SKN-1 pode reprimir
tambm encontrada atividade de
nos ncleos AB skn-1 no ncleo P2
A protena SKN-1
normalmente P2 precisa contactar
encontrada nos EMS para haver
ncleos de EMS e P2 diferenciao do intestino
do que a localizao) de SKN-1*. Assim, a protena SKN-1 localizada no citoplasma do

ovo pode ser um fator de transcrio que ativa genes especficos no blastmero MS,
determinando o seu destino. A protena PIE-1 impede que SKN-1 especifique a faringe
em P2 e, provavelmente tambm um fator de transcrio que antagoniza sua ao
(Mello et al., 1996; Seydoux et al., 1996).
provvel que PIE-1 tambm tenha um papel positivo. Durante cada diviso, a
protena PIE-1 retida pelo centrossomo da clula que se torna o prximo blastmero
da linhagem germinativa. Mutaes do gene pie-1 materno resultam em blastmeros
da linhagem germinativa que adotam destinos somticos, com a clula P2 se com-
portando como um blastmero EMS do tipo selvagem. A localizao e as proprieda-
des genticas de PIE-1 sugerem que esse reprime a determinao celular somtica e
preserva a totipotncia da linhagem das clulas germinativas (Mello et al., 1996;
Seydoux et al., 1996).
A localizao adequada de SKN-1 parece depender de protenas PAR, especialmente PAR-3 e

PAR-6 (Watts et al., 1996).
Na terceira diviso, o blastmero EMS d origem ao E (que forma o intestino) e MS

(que predominantemente forma a faringe e as clulas da parede muscular). As clulas
EMS contm SKN-1, e cada um dos seus descendentes contm quantidades iguais de
SKN-1. Assim, enquanto SKN-1 crtica na determinao de qual clula pode dar
origem ao mesoderma farngeo (ou seja, qual blastmero se torna a clula EMS),
alguma coisa alm de SKN-1 especifica MS excluindo E. Estudos de Lin e colegas
(1995) mostraram que a protena POP-1 crtica na especificao de MS. Na ausncia
de POP-1, a clula MS adota o destino de outro blastmero E do tipo selvagem.
Nesses mutantes de efeito maternal, a clula MS no produz nem clulas farngeas
nem musculares, e em lugar disso produz clulas intestinais. A protena POP-1 prova-
velmente um fator de transcrio, e pode interagir com SKN-1 para especificar o de-
senvolvimento de MS. [cyto5.html], [cyto6.html]
Regulao em C. elegans
O desenvolvimento de C. elegans principalmente autnomo, mas interaes

regulatrias entre clulas tambm so importantes na especificao do destino celular.
Se o blastmero EMS separado de todas as outras clulas no estgio de 4 clulas
logo aps sua formao, ele no formar os grnulos de rabditina (rhabditin), espec-
ficos do intestino. Mas se for recombinado com o blastmero P2 formar esses grnu-
los; mas isso no acontecer se combinado com ABa, ABp, ou com ambos os deriva-
dos de AB (Figura 13.21; Goldstein,1992). Interaes celulares so necessrias para
esse estgio de determinao intestinal.
Como o nematdeo tem linhagens celulares invariantes, tem tambm interaes
clula-clula invariantes. No embrio de 4 clulas, os blastmeros irmos Aba (anteri-
or) e ABp (posterior) tm diferentes destinos no desenvolvimento. ABa produz neur-
nios, clulas hipodrmicas e clulas farngeas anteriores, enquanto ABp produz so-
mente neurnios e clulas hipodrmicas. Entretanto, se sua posio invertida expe-
rimentalmente, seus destinos tambm so invertidos e se forma um embrio normal.
Em outras palavras, ABa e ABp so clulas equivalentes cujos destinos so determi-
nados por suas posies dentro do embrio (Priess e Thomson, 1987). Entretanto, em
circunstncias normais, o esquema invariante de clivagem embrionria determina que
os descendentes de ABa, no ABp, produzam 19 clulas farngeas. Clulas-filha de
(A)
Figura 13.21
(B) Intestino se diferencia
Resultados de experimentos de isolamento e
Intestino no se diferencia
recombinao mostrando que so necessrias
interaes celulares para que a clula EMS
forme determinantes da linhagem intestinal.
(A) Quando o blastmero EMS separado
logo aps a sua formao, ele no pode pro-
duzir grnulos especficos para o intestino.
(C) Se ele deixado por perodos mais longos,
ento, ele pode produzir. (B) Se a clula EMS
recombinada com cada um ou ambos deri-
vados do blastmero AB, no formar grnu-
los especficos para o intestino. (C) Se re-
combinado com o blastmero P2, a clula
Tempo de separao EMS dar origem a estruturas especficas do
(minutos antes da clivagem de EMS) intestino.(de Goldstein, 1992.)
ABa se diferenciam nessas clulas musculares farngeas devido sua interao com o
blastmero EMS ou seus descendentes (os quais produzem 18 clulas musculares da
faringe de maneira autnoma).
Estudos genticos mostraram que ABp se torna diferente de ABa pela interao
com a clula P2. Alm disso, esses estudos mostraram que essa interao mediada
pela protina GLP-1 na clula ABp e a protena APX-1 (anterior pharynx excess) no
blastmero P2. Em um embrio no manipulado, tanto ABa como ABp contactam o
blastmero EMS, mas somente ABp contacta a clula P2. Se a clula P2 destruda na
fase precoce do estgio de 4 clulas, a clula ABp no gera as clulas da vlvula
intestinal, o que normalmente faria (Bowerman et al., 1992). O contato entre ABp e P2
essencial para a especificao do destino das clulas ABp, e a clula ABa pode ser
mudada em um tipo de clula ABp se for forado seu contacto com P2 (Hutter e
Schnabel, 1994; Mello et al., 1994). O produto materno do gene glp-1 parece ser crtico
na distino entre ABa e ABp. Nos embries de mes com glp-1 mutante, o ABp
transformado em uma clula ABa (Hutter e Schnabel, 1994; Mello et al., 1994). Usando
alelos de glp-1 sensveis temperatura, foi mostrado que o momento para a interao
dependente de GLP-1 entre os estgios de 4 a 12 clulas, quando P2 necessrio
para o estabelecimento dos destinos de ABp (Figura 13.22). A protena um membro
de uma famlia amplamente conservada chamada de protenas Notch, que servem
como receptores de membranas celulares em muitas interaes clula-clula e tambm
detectada nas clulas ABa e ABp (Evans et al 1994).*
Um dos ligantes mais importantes para protenas Notch como GLP-1 uma outra
protena de superfcie chamada Delta. No C. elegans uma protena semelhante Delta
a APX-1 encontrada na clula P2 (Mango et al., 1994; Mello et al., 1994). Esse sinal
APX-1 parece quebrar a simetria entre ABa e ABp, pois estimula a protena GLP-1
somente no descendente AB que toca, ou seja, o blastmero ABp. Fazendo assim, a
clula P2 inicia o eixo dorsoventral de C. elegans.
* Como discutido no captulo anterior, a protena GLP1 est localizada nos blastmeros ABa e
ABp mas o mRNA do glp-1, maternalmente codificado, encontrado em todo o embrio. Evans e
colegas (1994) postularam que deve haver algum determinante de traduo no blastmero AB que
permite que a mensagem glp-1 seja traduzida nos seus descendentes. O gene glp-1 tambm ativo
na regulao das interaes clula-clula ps-embrionrias. Ele usado mais tarde pela clula da
extremidade distal da gnada para controlar o nmero de clulas germinativas entrando em meiose;
da o nome proliferao da linhagem germinativa (em ingls: germinal line proliferation) (veja
Captulos 17 e 22; Austin e Kimble, 1987).
farngea derivada do blastmero AB (%)
Larvas com musculatura
Figura 13.22
Experimento com deslocamento de temperatura para determinar em qual
estgio o produto do gene glp-1 materno est ativo. Neste mutante a
protena GLP-1 funciona a 15o C, mas no a 25o C. Variando a temperatura
em diferentes estgios embrionrios foi determinado que a protena GLP-
1 era necessria entre os estgios de 4 a 28 clulas. (De acordo com Priess Nmero total de clulas no embrio
et al., 1987.) quando a temperatura variou.
Prancha 2
Unidades de transcrio ativa em
um cromossomo de trito
Ocitos de anfbios como Notophtalmus viridescens tm
cromossomos tipo escova-de-lmpada nos quais os genes
sintetizadores de RNA ativos se projetam para fora. O eixo
do DNA dessas projees est corado com um corante bran-
co. A mancha vermelha de um anticorpo que se liga s
protenas ligantes de RNA. Captulo 22. (Fotografia cortesia
de M. B. Roth e J. Gall.)
Prancha 1
Um clone de rs Xenopus
Os ncleos de todos os membros desse clone vieram de um nico indivduo um
girino fmea do estgio de broto de membro, cujos antecessores (painel superior
direita) foram ambos marcados com genes albinos. Os ncleos foram transferi- Prancha 3
dos para ovos no-fecundados, enucleados e ativados de uma fmea do tipo O fator de crescimento do fibroblasto
selvagem. As rs resultantes eram todas fmeas e albinas (painel inferior). Cap- essencial para produo dos mesodermas
tulo 2. (Fotografia cortesia de J. Gurdon.) lateral e ventral em Xenopus
Quando ovos de Xenopus so injetados com um re-
ceptor mutante negativo e dominante para o fator de
crescimento de fibroblasto (FGF), o embrio inca-
paz de responder ao FGF. Na ausncia do sinal do
FGF, os mesodermas lateral e ventral no se formam,
e o embrio carece de tronco e cauda. Captulos 3 e
15. (Fotografia cortesia de M. Kirschner.)
Prancha 4
Capacidade do lbio
dorsal do blastporo
gerar o eixo neural
secundrio em anfbios
O lbio dorsal do blastporo
de embries de anfbios pode
organizar um segundo eixo
embrionrio quando trans-
plantado para o lado ventral
de outra gstrula. Esta foto-
grafia foi tirada de uma l-
mina real preparada por
Hilde Mangold e mostra que
as estruturas dorsais secun-
drias contm tanto tecidos
do hospedeiro (no pigmen- (A)
tados) quanto do doador
(pigmentados). Captulo 15.
(Fotografia cortesia de P.
Fssler e K. Sander.)
Prancha 5
Salvamento de
estruturas dorsais pela
protena Noggin
A protena Noggin pode ser
crtica para a induo do
mesoderma dorsal e do tubo
neural. Quando ovos de Xe- (B)
nopus so expostos irradia-
o UV antes da primeira
clivagem, no se formam es-
truturas dorsais (painel supe-
rior). Se uma clula precoce
de tal embrio for injetada com
RNA de noggin, os embries
formam estruturas dorsais. Se
a mensagem noggin for inje-
tada em demasia, os embries
produzem muito mais tecido
anterior dorsal (painel inferi-
or). Captulo 15. (Fotografias
cortesia de R. M. Harland.)
(C)
Prancha 6 ( direita)
O gene noggin transcrito no mesoderma dorsal e tecido mesodrmico
O RNA de noggin se acumula na regio da zona marginal dorsal (A) e visto no lbio dorsal
do blastporo (B). Quando essas clulas involuem, a expresso de noggin vista na notocorda
e endoderma farngeo (C), que se estende anteriormente, no centro do embrio (D). Captulo
15. (Fotografias cortesia de R. M. Harland.) (D)
(A) (B) (C)
(D) (E) (F)
Prancha 7
Rearranjos do citoplasma em Xenopus laevis
O ovo no-fertilizado de Xenopus laevis tem simetria radial. (B) Movimentos citoplasmticos
so vistos medida que o ovo comea a clivar, 90 minutos aps a fecundao. O citoplasma
do futuro lado dorsal ( direita) difere daquele do futuro lado ventral ( esquerda). Essas
diferenas podem ser vistas durante toda a clivagem embrionria (C,D) e resultam no
posicionamento dos determinantes morfogenticos dorsais, no lado do embrio oposto ao
ponto de entrada do espermatozide. (E) Os movimentos citoplasmticos se correlacionam
com o deslocamento da -catenina. No estgio bicelular precoce, a -catenina (cor laranja)
est localizada predominantemente na futura superfcie dorsal do embrio. Esse padro
persiste no estgio de blstula (F). Captulos 4, 6 e 15. (A-D cortesia de M. V. Danilchik; E
e F cortesia de R. T. Moon.)
Prancha 8 Prancha 9
Localizao de um RNA Efeito do cido retinico na
especfico numa regio do ovo regenerao de membros
O RNA de vg1 que codifica um fator O cido retinico (RA) faz com que as clulas
de crescimento da famlia TGF-, aps em regenerao esqueam sua posio ori-
hibridizao in situ, encontrado resi- ginal. Tecido do pulso da salamandra em re-
dindo exclusivamente na regio vege- generao, usualmente formar somente um
tal do ovo de Xenopus. O crescente pulso. Aps tratamento com RA, porm, o
branco no fundo do ovo devido tecido em regenerao (aqui de uma salaman-
radioatividade da sonda que reconhe- dra pigmentada escura) regenera todo o ante-
ce o RNA; o resto do ovo verde brao (membro inferior direito) quando en-
devido colorao com o corante xertado em um membro posterior cortado de
Giemsa. Captulos 12, 15 e 22. (Foto- um animal com pigmentao diferente. Cap-
grafia cortesia de D. A. Melton.) tulo 18. (Cortesia de K. Crawford.)
Prancha 10
Localizao progressiva no citoplasma Prancha 11
A segregao de certos grnulos citoplasmticos (grnulos P) vista progredin- Localizao citoplasmtica em
do para dentro das clulas mais posteriores do embrio de Caenorhabditis elegans. embries de tunicados
Essas clulas geram o espermatozide e o vulo do nematide. Quando os A clivagem separa regies do citoplasma em clulas
proncleos se encontram durante a fecundao, os grnulos P se movem para a particulares. O crescente amarelo do embrio de Styela
poro posterior da clula. Esse movimento prossegue at os grnulos serem fica localizado em um pequeno grupo de clulas que
encontrados somente na clula P que d origem aos gametas. A coluna esquerda iro gerar a musculatura larval. Esta figura mostra os
est corada para mostrar a posio dos ncleos, enquanto a coluna direita est estgios de 2-, 4-, 16- e 64-clulas. Captulo 13. (Foto-
corada para mostrar os grnulos P. Captulo 13. (Fotografias cortesia de S. Strome.) grafias cortesia de J. R. Whittaker.)
Prancha 12
Onda de ons de clcio atravs de ovos do
ourio-do-mar durante a fertilizao
Quando o espermatozide se funde com o vulo, uma onda de clcio se
inicia no local da entrada do espermatozide e se propaga atravs do vulo.
Isso pode ser monitorado pr-carregando o ovo com um corante que fluoresce
quando liga o clcio. A onda leva 30 segundos para atravessar o ovo.
Captulo 4. (Fotografia cortesia de G. Schatten.)
(A)
Prancha 13
Regies responsivas ao cido
retinico do embrio de camundongo
Um transgene consistindo de um elemento
responsivo ao cido retinico fundido a um
gene da -galactosidase foi inserido em um
embrio de camundongo. Colorao para -
galactosidase deve revelar as clulas que res-
pondem s concentraes endgenas de cido
retinico. (A) O estgio de 3-somitos mos-
trando responsividade ao cido retinico na
regio mediana do embrio; (B) Embries de
11,5 dias mostrando colorao regio fronto-
nasal e crebro anterior; (C) Embrio de 14,5
dias mostrando colorao no maxilar, regio
ptica, coxim do bigode e regies interdigitais
(B) (C) do membro. Captulos 11, 18 e 21. (Fotogra-
fias cortesia de J. Rossant.)
Prancha 14
Formao de padres em Drosophila
(A) O eixo ntero-posterior especificado por mRNAs e protenas
citoplasmticas. O gradiente da protena Bicoid especialmente im-
portante. Altas concentraes dessa protena (amarelo a vermelho)
causam formao da cabea e do trax ativando o gene hunchback.
(B) Os gradientes de protenas no embrio precoce ativam os genes
gap. Os produtos proticos dos genes gap (tais como hunchback e
Krppel) definem grandes domnios no corpo do inseto. Essas pro-
tenas interagem para formar limites especficos no embrio. Aqui,
as protenas Hunchback (laranja) e Krppel (verde) se sobrepem
para formar um limite (amarelo). (C) Os nveis das protenas gap
promovem a ativao de genes pair-rule especficos (aqui visveis
pelas bandas escuras) que dividem o embrio em segmentos ao longo
do eixo ntero-posterior. (D) No estgio da banda germinativa esten-
dida, as 14 bandas do gene da polaridade segmentar engrailed podem
ser vistas. Captulo 14. (Fotografias cortesia de (A) W. Driever e C.
Nsslein-Volhard; (B) C. Rushlow e M. Levine; (C) T. Karr e (D) S.
Carroll e S. Padock.)
Prancha 15
Compartimentao do disco imaginal da asa de Drosophila
O corante imunofluorescente vermelho marca as clulas onde a pro-
tena Vestigial produzida (a futura asa ventral); o corante verde
marca as clulas que expressam a protena Apterous (necessria para
a formao da asa dorsal). A rea sobreposta amarela. Captulo 19.
(Fotografia cortesia de S. Carroll.)
Prancha 16
Localizao da RNA polimerase II nos
ocitos do bicho-da-seda gigante
Fotomicrografia de fluorescncia (usando lentes
confocais) da cmara do ovo de Hyalophora cecropia.
Fluorescncia laranja indica a presena da RNA polimerase
II (corada com amanitina marcada). Fundo verde indica a
localizao da actina. (B) Maior aumento da regio cortical
do ocito de Antherea polyphemus e clulas foliculares.
Laranja indica RNA polimerase II. As outras cores so
colorao de fundo de grnulos do vitelo e clulas
foliculares. Captulo 22. (Fotografias cortesia de S. Berry.)
Prancha 17 ( acima )
Mariposa ginandromorfa
Um mosaico sexual (ginandromorfo) de uma mariposa lo, dividido bilateralmente
em uma metade feminina rosa-pardacenta e uma metade masculina amarela, de
asa menor. Tais mosaicos sexuais so causados quando um cromossomo X
perdido de um ncleo durante a diviso mittica precoce. Captulo 20. (Fotogra-
fia de T. R. Manley; cortesia do The Journal of Heredity.)
Prancha 18 (esquerda)
Controle do desenvolvimento pelo ambiente
Lagartas de Nemoria arizonaria que eclodem na primavera ingerem flores do
carvalho e desenvolvem uma cutcula que mimetiza as flores. Lagartas da mesma
espcie que eclodem no vero (aps o desaparecimento das flores) ingerem fo-
lhas de carvalho; essas lagartas desenvolvem cutculas que se parecem com as
folhas do carvalho. Substncias qumicas nas folhas parecem modificar o desen-
volvimento da cutcula. Captulo 21. (Fotografias cortesia de E. Greene.)
Prancha 19
Migrao das clulas da crista neural do pinto
Clulas da crista neural do pinto podem ser seguidas em sua migrao corando-as com
um anticorpo monoclonal marcado, fluorescente. As clulas da crista neural (coradas de
verde) so consideradas migrar atravs das regies anteriores (A) mas no das regies
posteriores (B) do tecido somtico. Esse padro especfico de migrao das clulas da
crista neural tem um papel na determinao da colocao dos neurnios perifricos.
Captulo 7. (Fotografias cortesia de M. Bronner-Fraser.)
Prancha 20
Vias de migrao neural em insetos
Axnios neurais em embries de insetos migram de acordo
com padres muito especficos. Neurnios derivados de
um precursor comum (aqui mostrados com a mesma colo-
rao) produzem axnios que migram seletivamente com
outros axnios. O axnio Q1, por exemplo, viaja at en-
contrar o axnio dMP2 e em seguida viaja com esse, en-
quanto o axnio do neurnio G continua a mover-se em
uma linha reta at encontrar o axnio P1. Captulo 8. (Foto-
grafia cortesia de C. Goodman.)
Prancha 21
Um camundongo com seis pais
O camundongo multicolorido foi formado misturando clu-
las de trs embries do estgio de 4 clulas: Um embrio
oriundo de dois camundongos pretos; um embrio oriundo
de dois camundongos brancos; e um embrio oriundo de
dois camundongos castanhos. Em lugar de formar um mons-
tro de trs cabeas, o embrio regulou-se para formar um
camundongo de tamanho normal com contribuies de cada
um dos trs embries. Cada um dos trs embries tambm
proveu clulas da linhagem germinativa, o que foi mostrado
acasalando esse camundongo com um camundongo recessivo
(branco); esse acasalamento produziu descendncia de todas
as trs cores. Captulo 5. (Fotografia cortesia de C. Markert
eThe Journal of Heredity.)
O eixo esquerdo-direito determinado mais tarde, no estgio de 12 clulas quando

o blastmero MS contacta metade da prognie das clulas ABa e ABp, convertendo-
as em ABal (anterior esquerda) e ABpl (posterior esquerda), enquanto as outras duas
clulas se tornam as contrapartidas do lado direito. O sinal da clula MS parece ativar
GLP-1 na prognie de AB (Evans et al., 1994). Entretanto, o ligante dando esse sinal
diferente de APX-1 e ainda no foi descoberto (Hutter e Schnabel, 1995).
& Especulaes
Ser ou No Ser: Esse o Fentipo

C ERTAMENTE, estamos sempre
enfrentando decises de vida ou
morte, mas essa dicotomia exis-
tencial raramente to inflexvel como
independentemente em cada clula do
embrio; possvel que cada clula do
embrio esteja preparada para morrer, e
aquelas que sobrevivem o fazem porque
que parecem ativar o gene BCL-2. Alm
disso, se genes BCL-2 em um promotor
constitutivamente ativo so transferidos
para clulas que vo morrer logo, a prote-
aquela vista na linhagem celular de C. um gene ced-9 ativo impede a ocorrn- na BCL-2 produzida e os intervalos de
elegans. Durante o desenvolvimento nor- cia da morte celular programada.[cyto7.html] vida das clulas so significativamente
mal de C. elegans, 131 clulas se suici- No se sabe como CED-9 impede a aumentados (Nuez et al., 1990). Isso
dam. Essa morte celular programada, ou morte das clulas, nem como a protena feito naturalmente pelo vrus de Epstein
apoptose, um evento ativo iniciado por se torna diferencialmente regulada, ape- Barr (que causa mononucleose). Linfci-
dois genes, ced-3 e ced-4. Quando esses sar de outros genes produzirem produtos tos infectados com o vrus de Epstein-
genes so expressos, as clulas que os que a ativam. Genes similares esto sen- Barr no morrem como seria usual porque
expressam morrem. Mutaes de perda de do descritos tambm nos mamferos. O uma das protenas virais induz a ativida-
funo em qualquer um desses genes per- gene BCL-2 codifica uma protena da de do gene BCL-2 (Henderson et al., 1991).
mitem a sobrevivncia de clulas que nor- membrana intracelular que previne ou atra- As similaridades entre ced-9 e BCL-2
malmente sofreriam apoptose. Os produ- sa a apoptose normal de neurnios e so to impressionantes que se o gene
tos de ced-3 ou ced-4 so considerados linfcitos humanos (Hockenbery et al., humano BCL-2 ativo colocado em em-
txicos para a clula ou causam a forma- 1990; Williams et al., 1990; Allsopp et al., bries de C. elegans, ele impede que a
o de compostos txicos a partir de ou- 1993). A maioria dos linfcitos e seus pre- morte celular ocorra normalmente (Vaux
tros metablitos (Ellis e Horvitz, 1986; cursores morrem durante sua maturao, et al., 1992). Isso sugere que BCL-2 funci-
Yuan e Horvitz, 1990) e aqueles que sobrevivem tm um limita- ona no homem por sua ao nos homlo-
O que determina quais clulas vive- do tempo de vida. Eles so protegidos da gos humanos de ced-3 e ced-4. Os hom-
ro e quais morrero? Estudos no labo- morte por certos fatores de crescimento logos humanos de ced-3 foram encontra-
ratrio de Robert Horvitz (Hengartner et dos, e constituem uma famlia de proteases
al., 1992) demonstraram que o gene ced- (A) Inibe ced-3 de cistena que inclui apopana (CPP32). A
ced-9 Morte
9 inibe as atividades de ced-3 e ced-4. bcl-2 ced-4 celular apopana capaz de inativar, no incio da
Mutaes que inativam a protena CED- (apopain) apoptose, a enzima poli(ADP-ribose)
9 fazem com que numerosas clulas que (B) Sobrevivncia polimerase, uma protena que necess-
normalmente sobreviveriam ativem seus ced-9 da clula ria para a estrutura e integridade do geno-
genes ced-3 e ced-4 e morram. Isso leva ma (Nicholson et al., 1995). Considera-se
Morte celular
morte do embrio. Inversamente, mu- ainda que a apopana deva ser negativa-
tantes de ganho de funo de ced-9 im- Figura 13.23 mente regulada por BCL-2. Certas doen-
pedem a morte de clulas que normal- Modelo para o funcionamento do gene ced-9 as degenerativas (como a apoptose
em C. elegans. (A) ced-9 age como em regula-
mente sofrem apoptose. (Essas so as dor negativo de ced-3 e ced-4, os dois genes
linfoctica induzida por vrus na AIDS, ou
mesmas clulas que sobrevivem nos cujas atividades causam a morte celular. Em doenas neurodegenerativas como apo-
mutantes ced-3 e ced-4.) Portanto, a fun- mamferos, o homlogo de ced-9 o Bcl-2 e o plexias) podem se originar da inativao
o normal de CED-9 impedir as clu- homlogo de ced-3 o apopain. Ainda no foi ou do impedimento da ativao de genes
las, que devero viver, que iniciem o pro- encontrado o homlogo para ced-4. (B) A troca como BCL-2. Se for mostrado que esse
grama de morte celular (Figura 13.23). O binria efetuada por ced-9. Quando na forma o caso, aqueles genes ativos em impedir a
ligada, as atividades de ced-3 e ced-4 so inibi-
gene ced-9 parece funcionar como um das e a clula sobrevive. Se ced-9 no est liga- morte celular no desenvolvimento podem
comutador binrio regulando a escolha do, os produtos dos genes ced-3 e ced-4 matam se situar entre os genes do nosso corpo
entre vida ou morte. Essa deciso feita a clula. (De acordo com Hengartner et al.,1992.) mais importantes para a medicina.
Divises celulares assimtricas no desenvolvimento tardio

Estudos do desenvolvimento do sistema nervoso da Drosophila forneceram evidn-
cia de que a segregao de determinantes morfogenticos podem ocorrer no desen-
volvimento tardio, aps o estabelecimento do plano principal do corpo. Na formao
do sistema nervoso central da larva da Drosophila, clulas-tronco neurais (neuro-
blastos) se dividem formando dois tipos distintos de clulas. Uma clula-filha outro
neuroblasto (ou seja, outra clula-tronco para manter o crescimento da populao),
enquanto a outra clula-filha uma clula-me ganglionar cuja prognie est com-
prometida a se tornar neurnios (Captulo 8). Essa clula-me ganglionar contm um
distinto conjunto de protenas, incluindo a protena de membrana Numb e o fator de
transcrio Prospero, que especificam seu comprometimento neuronial. Surpreen-
dentemente, tanto a protena Numb como a Prospero no so sintetizadas na clula-
me ganglionar; elas so sintetizadas no neuroblasto. Esse paradoxo foi resolvido
quando os pesquisadores encontraram que enquanto no neuroblasto, as protenas
Numb e Prospero permanecem no citoplasma. Entretanto, quando aquela clula come-
a a se dividir, essas protenas se associam membrana que ir formar a clula-me
ganglionar. Quando a diviso termina, todas as protenas Numb e Prospero foram
repartidas para a clula-me ganglionar onde elas exercem suas respectivas funes
(Figura 13.24; Hirata et al., 1995; Knoblich et al., 1995; Spana e Doe, 1995). Essas duas
protenas compartilham uma seqncia de aminocidos considerada responsvel pela
sua segregao assimtrica. Quando esse segmento de aminocidos removido des-
sas protenas, elas se distribuem aleatoriamente em ambas as clulas-filha. [cyto8.html]
(B) Metfase
Protena Prospero se acumula
na membrana polar
Anfase
(A)
Clula-me
ganglionar
Clula-tronco do (C)
neuroblasto
(D)
Telfase
Interfase
Figura 13 24
Distribuio assimtrica da protena Prospero durante o desenvolvimento da clula-me
ganglionar. (A) Clula-tronco do neuroblasto sintetiza a protena Prospero, a qual permanece
difusamente distribuda no citoplasma. (B) Na metfase, toda a protena Prospero est acumu-
lada em um dos plos do neuroblasto em diviso. (C) Na anfase e telfase, a protena Prospe-
ro entra na clula-me ganglionar e excluda do neuroblasto. (D) A protena Prospero, sendo
um fator de transcrio, entra no ncleo da clula-me ganglionar. A protena Numb se junta
Prospero ao deixarem o neuroblasto, mas no entra no ncleo do neuroblasto. (De acordo
com Hirata et al., 1995.)
Localizao citoplasmtica de
determinantes de clulas germinativas
Determinantes localizados no citoplasma so encontrados em todo o reino animal. Os
determinantes observados mais freqentemente so os responsveis pela determina-
o de precursores de clulas germinativas, ou seja, as clulas que do origem aos
gametas. Mesmo em embries onde outros aspectos do desenvolvimento precoce
so reguladores, aquelas clulas contendo determinadas regies do citoplasma do
ovo so destinadas a se tornarem precursoras de clulas germinativas.
Determinao de clulas germinativas em nematdeos
Theodor Boveri (1862-1915) foi o primeiro a observar os cromossomos de um organis-

mo ao longo do seu desenvolvimento. Nesse estudo, ele descobriu um aspecto fasci-
nante do desenvolvimento do nematdeo Parascaris aequorum (antes Ascaris
megalocephala). Esse nematdeo tem somente dois cromossomos por clula haplide,
permitindo assim observaes detalhadas dos cromossomos individuais. O plano de
clivagem da primeira diviso embrionria pouco usual, porque sendo equatorial
separa a metade animal da metade vegetal do zigoto (Figura 13.25A). Mais estranho,
no entanto, o comportamento dos cromossomos na diviso subseqente desses
Figura 13.25
primeiros dois blastmeros. As extremidades dos cromossomos no blastmero deriva-
Distribuio do plasma germinativo (colorido)
do do hemisfrio animal se fragmentam em dezenas de pedaos imediatamente antes durante a clivagem de zigotos de Parascaris
da clivagem dessa clula. Esse fenmeno chamado diminuio cromossmica, por- (A) normais e (B) centrifugados. (A) O plas-
que somente sobrevive uma parte do cromossomo original. Numerosos genes so ma germinativo conservado normalmente no
perdidos nessas clulas pela fragmentao dos cromossomos, e esses genes no blastmero mais vegetal, como mostrado pela
esto includos nos ncleos recentemente formados (Tobler et al., 1972). Enquanto falta de diminuio cromossmica naquela c-
isso, no blastmero vegetativo, os cromossomos permanecem normais. Durante a lula especfica. Desse modo, no estgio de 4
segunda diviso, a clula animal cindida meridionalmente, enquanto a clula vegetal clulas, o embrio tem uma clula-tronco para
novamente se divide equatorialmente. Ambas as clulas derivadas vegetativamente seus gametas. (B) Quando a primeira clivagem
deslocada 90o pela centrifugao, ambas as
tm cromossomos normais. Entretanto, os cromossomos de um dos dois blastmeros
clulas resultantes tm plasma germinativo ve-
vegetativos, o mais prximo do plo animal, fragmentam-se antes da terceira diviso. getal, e nenhuma delas sofre diminuio de cro-
Desse modo, no estgio de 4 clulas, somente uma clula- a mais vegetal- contm um mossomos. Aps a segunda clivagem, essas
conjunto completo de genes. Em clivagens sucessivas, ncleos somticos so emitidos duas clulas do origem s clulas-tronco ger-
minativas. (De acordo com Waddington, 1996.)
(A) Diminuio de
cromossomos
Sem diminuio
Plasma germinativo de cromossomos Clulas-tronco
(B)
Sem diminuio
Plasma germinativo de cromossomos Clulas-tronco
dessa linhagem, a mais vegetal, at o estgio de 16 clulas quando existem somente

duas clulas com cromossomos no diminudos. Um desses dois blastmeros d
origem s clulas germinativas; o outro finalmente sofre diminuio de cromossomos
e forma clulas somticas. Os cromossomos s permanecem intactos nas clulas des-
tinadas a formar a linhagem germinativa. Se esse no fosse o caso, haveria degenera-
o da informao gentica ao se passar de uma gerao para a outra. As clulas que
sofreram diminuio de cromossomos originam as clulas somticas.*
Boveri foi considerado o ltimo dos grandes observadores da embriologia e o
primeiro dos grandes experimentadores. No satisfeito em observar a reteno do
completo conjunto cromossmico pela clula germinativa, ele se disps a investigar
se uma regio especfica do citoplasma protege o ncleo nela inserido da diminuio.
Se esse fosse o caso, qualquer ncleo localizado nessa regio deveria ser protegido.
Boveri (1910) testou essa possibilidade, centrifugando ovos de Parascaris pouco
antes da primeira clivagem. Esse tratamento modificou a orientao do fuso mittico.
Quando o fuso se forma perpendicularmente sua orientao normal, ambos os
blastmeros resultantes devem conter parte do citoplasma vegetativo (veja Figura
13.25). De fato, Boveri encontrou que depois da primeira diviso, nenhum ncleo
sofreu diminuio cromossmica. Entretanto, a prxima diviso foi equatorial ao lon-
go do eixo animal-vegetal. Agora, ambos os blastmeros animais resultantes sofreram
diminuio, mas no as duas clulas vegetativas. Boveri concluiu que o citoplasma
vegetativo contm um fator (ou fatores) que protege os ncleos da diminuio cro-
mossmica e os determina que sejam clulas germinativas.
O plasma do plo dos nematdeos, incluindo o de C. elegans, permanece pouco
caracterizado. A RNA helicase parece se localizar no plasma germinativo tanto de C.
elegans como de Ascaris, e estudos com anticorpos sugerem que essas enzimas
podem ser parte dos grnulos P (Roussell e Bennett, 1993; Kuznicki et al., 1996).
Determinao da clula germinativa em insetos
O citoplasma germinativo de insetos diferente de qualquer outro citoplasma no ovo.

Hegner (1911) mostrou que quando se removia ou destrua essa regio de ovos de
besouro, antes que ocorresse a formao da clula polar, os embries resultantes no
possuiam clulas germinativas e eram estreis. Geigy (1931) mostrou que irradiando o
plasma polar do ovo da Drosophila com luz ultravioleta eram produzidas moscas
estreis; Okada e colaboradores (1974) estenderam essa linha de experimentao mos-
trando que a adio do plasma polar de embries doadores no irradiados, podia curar
a esterilidade de ovos irradiados (Figura 13.26). Nenhuma outra parte do citoplasma
podia reverter essa esterilidade. O plasma polar posterior convenientemente marca-
do com os grnulos polares (Figura 13.27A). No se conhece o seu papel na determi-
nao das clulas germinativas, mas sua constante associao com o plasma polar e
as clulas polares dele derivadas, fazem dos grnulos um marcador conveniente des-
sa regio. A regio das clulas polares identificada facilmente no microscpio eletr-
nico de varredura (Figura 13.27B). [cyto9.html]
Trabalhos recentes sobre o citoplasma da clula polar esto focalizados principal-
mente em embries de Drosophila. Os ncleos de embries de Drosophila no estgio
sincicial so totipotentes e podem dar origem a qualquer tipo celular. Quaisquer dos
ncleos que se encontram no plo posterior so os primeiros a formar clulas e incor-
porar o plasma germinativo. Essas clulas se tornam os precursores dos gametas
(Schbiger e Wood, 1977). A natureza confirmou a importncia do plasma polar e de
seus grnulos polares. Fmeas homozigotas de Drosophila para a mutao grand-
childless produzem descendentes normais mas estreis: GG x gg UGg (estril).
* Enquanto esses casos de diminuio e eliminao de cromossomos so excees da regra geral

de que clulas diferenciadas retm genes no usados, no h evidncia que diferentes clulas somticas
em Parascaris retm diferentes partes do genoma.

(A)
Agulha
Agulha
Plasma polar removido Plasma polar injetado (ligeiramente fora

do ovo doador do centro) no ovo hospedeiro irradiado
(B)
Blastoderma
Blastoderma Blastoderma
Clulas Clulas
polares polares
Figura 13.26
Habilidade do plasma polar para corrigir a esterilidade induzida por radiao. (A) Tcnica de
transplante de plasma polar de um doador no irradiado a um hospedeiro irradiado. (B) Sees
longitudinais da poro posterior do embrio de Drosophila fixado ao se completar a clivagem.
(i) Embrio normal com o blastoderma completo e clulas polares. (ii) Embrio irradiado durante
a clivagem precoce. O blastoderma se formou, mas as clulas polares esto ausentes. (iii)
Embrio irradiado durante a clivagem precoce, mas subseqentemente injetado com plasma polar
de embries normais. O blastoderma e clulas polares esto presentes. (De acordo com Okada
et al., 1974, cortesia de M. Okada.)
Mahowald e colegas (1979) mostraram que essas fmeas cruzadas com machos nor-
mais produzem embries cujos ncleos nunca migram para o plasma polar no ovo. No
se formam clulas polares, e os adultos resultantes no tm clulas germinativas
primordiais para a produo de gametas. Outra mutao de efeito materno agametic-
causa a ausncia de clulas germinativas em cerca de metade das gnadas dos des-
cendentes de moscas fmeas homozigotas. Nesse caso, so formadas clulas polares
em nmero normal, mas os grnulos polares degeneram logo aps a fertilizao
(Engstrom et al., 1982). Experimentos com transplantes demonstram que o defeito est
no citoplasma polar e no no ambiente ovariano. Dessa maneira, temos agora evidn- (A)
cia bastante segura que o plasma polar est diretamente envolvido na determinao
da clula germinativa.
Figura 13. 27
O plasma polar de Drosophila. (A) Micrografia eletrnica de grnulos polares de uma frao
particulada de clulas polares de Drosophila. (B) Micrografia eletrnica de varredura de clulas
polares de um embrio de Drosophila pouco antes do trmino da clivagem. As clulas polares
podem ser vistas direita da fotografia. (Fotografias, cortesia de A. P. Mahowald.) (B)
Componentes do plasma polar da Drosophila
O que so os determinantes do plasma polar da Drosophila e como eles se localizam

na parte posterior do embrio? Grnulos polares de Drosophila foram isolados e
parecem ser compostos de protena e RNA (Mahowald, 1971a,b; Waring et al., 1978),
mas a identidade dessas macromolculas (e existem ainda algumas de identidade des-
conhecida) no foi estabelecida at que fosse usado um procedimento gentico. Um
dos componentes do plasma germinativo o mRNA do gene germ cell-less (gcl). Esse
gene foi descoberto por Jongens e seus colegas (1992) quando eles mutaram Droso-
phila e fizeram uma varredura procurando as fmeas que no tinham netos (descen-
dentes de segunda gerao?). A argumentao era que se uma fmea no colocasse o
plasma germinativo funcional em seus vulos, ela ainda podia ter descendentes, mas
esses seriam estreis (pois no possuam clulas germinativas). O gene gcl do tipo
selvagem transcrito nas clulas nutrizes do ovrio da mosca, e seu mRNA transpor-
tado para o vulo atravs dos canais anelares. Uma vez dentro do vulo, ele trans-
portado para a poro mais posterior e permanece dentro do que ser o plasma polar
(Figura 13.28AB). Essa mensagem traduzida em protena durante os estgios preco-
ces da clivagem (Figura 13.28C,D). A protena codificada pelo gcl parece entrar no
ncleo e essencial para a produo de clulas polares. Moscas mutantes para esse
gene no tm clulas germinativas, e quando RNA antisenso contra a mensagem de
glc colocado no embrio, a habilidade em formar clulas germinativas tambm
destruda (Figura 13.29).
O segundo candidato a determinante de plasma germinativo a protena Nanos. A
mensagem nanos est localizada no plo posterior do vulo e a protena Nanos dela
traduzida necessria para a formao do abdmen na Drosophila. Recentemente,
Kobayashi e colegas (1996) mostraram que a protena tambm necessria para a
formao de clulas germinativas. Clulas polares sem Nanos no migram para as
gnadas e no se tornam gametas.
Um terceiro candidato plasma germinativo foi uma grande surpresa: RNA
ribossmico grande das mitocndrias. Usando o sistema de ensaio com ovos irradia-
dos com luz ultravioleta, Kobayashi e Okada (1989) mostraram que a injeo de RNA
ribossmico grande das mitocndrias (mtlrRNA) restaura a habilidade de formar clu-
las polares por esses embries. Alm disso, em ovos normais de mosca, o mtlrRNA
est localizado fora das mitocndrias somente no plasma polar de embries em estgio
de clivagem, onde aparece como um componente dos grnulos polares (Kobayashi et
al., 1993: Amikura et al., 1996). Apesar do mtlrRNA estar envolvido na formao de
clulas polares, elas no o contm.
Tipo selvagem Mutante

Figura 13.28
Localizao dos produtos do gene germ cell-
RNA
less na parte posterior do ovo e do embrio. O
gcl
mRNA de gcl pode ser visto no plo posterior
em embries produzidos por fmeas do tipo
selvagem, na fase precoce de clivagem (A), (A) (B)
mas no nos embries produzidos por fmeas
mutantes deficientes em gcl (B). Anticorpos
contra a protena codificada pelo gene gcl po-
dem ser detectados no estgio de blastoderma Protena
celular de embries produzidos por fmeas do Gcl
tipo selvagem (C), mas no em embries de
fmeas mutantes (D). (De acordo com Jongens
et al.,1992, cortesia de T. A. Jongens.) (C) (D)
Tipo selvagem Mutante Figura 13.29

Migrao de clulas germinativas em embries
produzidos por fmeas do tipo selvagem e em
embries produzidos por mutantes que no
podem sintetizar a protena do gene germ cell-
less. A marcao das clulas germinativas
obtida por anticorpos dirigidos contra Vasa,
um componente do grnulo polar que no
mutado em nenhum dos tipos de Drosophila.
Um embrio de fmea do tipo selvagem no
(A) (B) estgio de blastoderma precoce (A), tem clu-
las polares no plo posterior. Embries de f-
meas mutantes de glc (B) no as tm. Em em-
bries de fmeas do tipo selvagem, essas clu-
las polares podem ser removidas para o
primrdio do intestino mdio posterior (C) de
onde elas migram para as gnadas (E). Essas
clulas no so vistas em embries de fmeas
(C) (D) sem a atividade do gene germ cell-less (D,F).
(De acordo com Jongens et al., 1992, cortesia
de T. A. Jongens.)
(E) (F)
Um quarto componente do plasma polar da Drosophila (e um que se localiza nos

grnulos polares) um RNA no traduzvel chamado componente do grnulo polar
(Pgc). Sua exata funo permanece desconhecida, mas as clulas polares de moscas
transgnicas fmeas que produzem RNA antisenso contra Pgc no migram para as
gnadas (Nakamura et al., 1996).
O que dirige o mRNA de germ cell-less, a mensagem de nanos, e o mtlrRNA (e
provavelmente outras molculas do plasma polar) parte posterior do ovo? Existem
pelo menos outros sete mutantes incapazes de formar clulas germinativas, e esses
mutantes tambm tm abdomens malformados. Essas mutaes esto nos genes
capuccino, spire, staufen, oskar, vasa, valois e tudor. Cada um desses genes ativo
no ovrio e coloca um de seus produtos no ocito em crescimento. Sondando a
localizao do mRNA ou protena para um gene em um mutante que no possui um
outro gene, pode-se colocar as aes desses genes em uma ordem definida (Figura
13.30). Esses estudos (revisados por Strome, 1992; Ephrussi e Lehmann, 1992) mos-
tram que duas protenas, aquelas produzidas pelos genes capuccino e spire, so
necessrias para a localizao da protena Staufen no lado posterior. (Ou seja, a prote-
na Staufen no ser colocada no posterior dos vulos de mes cujos ovrios no
podem produzir Capuccino ou Spire.) A protena Staufen necessria para a localiza-
o posterior do mRNA de oskar. A protena produzida pela mensagem oskar um
componente dos grnulos polares e crtica para a localizao posterior da protena
Vasa, outro componente dos grnulos polares. Mutantes de tudor e valois no afetam
o posicionamento de Vasa, mas parecem ser crticos para a manuteno do plasma
polar, uma vez formado (Hay et al., 1990; Lasko e Ashburner, 1990).
A construo do plasma polar organizada pela mensagem oskar. A quantidade e
posio desse mRNA determina o nmero de clulas polares e o lugar onde elas se
Figura 13.30 (A)

(A) Diagrama explicativo da determi-
nao de etapas da via gentica que leva
os determinantes da clula germinativa Staufen afeta a posio do
a uma localizao posterior. (B) Sum- mRNA de oskar. oskar no
rio dessas etapas. Sonda oskar no ovo Sonda oskar no ovo afeta a posio do mRNA de
do tipo selvagem deficiente de staufen staufen. Portanto, a funo do
gene staufen precede a funo
do gene oskar
Sonda staufen no Sonda staufen no ovo

ovo do tipo selvagem deficiente de oskar
(B)
cappucino staufen oskar vasa tudor Determinantes da
spire (localizado posteriormente) clula germinativa
formam.* Embries derivados de fmeas com somente uma cpia do gene oskar pro-
duzem de 10 a 15 clulas polares no estgio de blastoderma celular, enquanto aquelas
que contm duas cpias do gene produzem aproximadamente 35 clulas polares. Au-
mentando-se o nmero de cpias do gene oskar para quatro, sero formadas cerca de
50 clulas polares. Alm disso, Ephrussi e Lehmann (1992) demonstraram que clulas
germinativas sero formadas onde estiver localizada a mensagem oskar e os estgios
que a precedem so cruciais somente na colocao do mRNA de oskar no plo poste-
rior do ovo. Se a mensagem oskar se localiza na parte anterior do embrio (o que pode
ser feito experimentalmente), o plasma e as clulas germinativas se formaro no ante-
rior. A protena Oskar provavelmente constri a primeira parte estrutural dos grnulos
polares. As protenas Vasa e Tudor se ligam Oskar tornando a estrutura mais comple-
xa e apta a ligar os determinantes da clula germinativa (Breitwieser et al., 1996). A
localizao do mRNA de gcl e do mtlrRNA no plo posterior do ovo frustrada por
qualquer uma das mutaes precedentes. Em mutantes valois e tudor, pequenas quan-
tidades da mensagem de glc podem ser vistas no plasma posterior em embries em
clivagem precoce, mas essa localizao perdida na clivagem tardia (Jongens et al.,
1992). Assim, os grnulos polares incluem os determinantes das clulas germinativas
e a estrutura que os mantm no posterior do ovo e do embrio. A estrutura ligar o
mRNA do germ cell-less (e provavelmente produtos gnicos para outros determinantes
de clulas germinativas). Essas mensagens so traduzidas em protenas durante a
clivagem precoce, entram no ncleo das clulas polares, e (de uma forma ainda no
conhecida) determinam que essas clulas devam ser germinativas.
Determinao de clulas germinativas em anfbios
A localizao citoplasmtica de determinantes de clulas germinativas foi tambm

observada em embries de vertebrados. Bounoure (1934) mostrou que a regio
vegetativa de ovos fertilizados de r contm um material com propriedades de colora-
o semelhantes s do plasma polar de Drosophila (Figura 13.31). Ele conseguiu
*O nome oskar no vm de Grouch nem do rei da Noruega, mas do anti-heri ano do romance
de Gnter Grass, The Tin Drum. A traduo especfica de regio do mRNA do oskar em isoformas
especficas um processo complexo. A mensagem oskar translocada atravs do ovo ao plo
posterior por uma estrutura contendo tropomiosina que ligada pela protena repressora Bruno,
para prevenir sua traduo prematura (Erdyli et al., 1995; Kim-Ha et al., 1995). Com a localizao
do mRNA no plo posterior, a protena Staufen permite sua traduo. A protena Oskar necessria
para reter o mRNA de oskar (e a protena Oskar) no plo posterior (Markussen et al., 1995; Rongo
et al., 1995; Captulo 22).
Plaquetas de vitelo Plasma germinativo
(A) Plasma Plo vegetativo do zigoto (B) Fuso Plaquetas

germinativo mittico de vitelo
Figura 13.31
Plasma germinativo de embries de r. (A) Plasma germinativo (reas escuras) perto do plo Clula Plaquetas
vegetativo de um zigoto recentemente fertilizado. (B) Clula contendo plasma germinativo na somtica de vitelo
regio endodrmica da blstula na anfase mittica. Note o plasma germinativo penetrando em
somente uma das clulas-filha carregadas com vitelo. (C) Clula germinativa primordial e clulas
somticas perto do assoalho da blastocele na gstrula precoce. (Cortesia de A. Blackler.)
seguir esse citoplasma cortical at algumas clulas no endoderma presuntivo que

normalmente migraria para a crista genital. Transplantando clulas geneticamente
marcadas de um embrio para outro, Blackler (1962) mostrou que essas clulas eram
precursoras das clulas germinativas primordiais. Os movimentos precoces do plasma
germinativo foram analisados em detalhe por Savage e Danilchik (1993), que marcaram
o plasma germinativo com corante fluorescente. Eles encontraram que o plasma
germinativo de ovos no fertilizados consiste de pequenas ilhas que parecem estar (C) Clula germinativa
amarradas massa do vitelo prximo ao crtex vegetativo. Essas ilhas do plasma
germinativo se movem com essa massa de vitelo vegetativo durante a rotao cortical
na fertilizao. Aps a rotao, as ilhas so liberadas da massa de vitelo e comeam a
se fundir e migrar para o plo vegetal. Essa agregao depende de microtbulos, e o
movimento desses conjuntos ao plo vegetal dependente de uma protena seme-
lhante quinesina que pode funcionar como um motor no movimento do plasma
germinativo (Robb et al., 1996). Mais tarde, contraes peridicas da superfcie da
clula vegetativa parecem empurrar esse plasma germinativo ao longo dos sulcos nos
blastmeros recmformados, permitindo-lhe penetrar no embrio.
Quando luz ultravioleta aplicada superfcie vegetativa (e em nenhum lugar
mais) do embrio da r, os animais resultantes so normais mas no tm clulas
germinativas em suas gnadas (Bounoure, 1939; Smith, 1966). Muito poucas clulas
germinativas primordiais chegam s gnadas, e as que chegam tm cerca de um dci-
mo do volume das clulas germinativas primordiais normais e tm ncleos com formas
aberrantes (Zst e Dixon, 1977). Savage e Danilchik (1993) mostraram que a luz UV
impede as contraes da superfcie vegetativa e inibe a migrao do plasma germinativo
ao plo vegetal. Os homlogos do Xenopus de Nanos (uma protena da Drosophila
essencial para a migrao da clula polar) e Vasa so especificamente localizadas
nessa regio (Forristal et al., 1995; Ikenishi et al., 1996; Zhou e King, 1996). Ento,
como no plasma polar da Drosophila, o citoplasma da regio vegetativa dos zigotos
de r contm os determinantes para a formao das clulas germinativas.
Resumo
Temos evidncia que em certos organismos a determinao do destino de uma clula
devida poro do citoplasma do ovo que ela adquire durante a clivagem. Tal clula
diferencia-se independentemente das outras clulas, e os organismos que utilizam o
mecanismo tendem a um tipo de desenvolvimento em mosaico ou determinado. Essa
forma de desenvolvimento exibida por moluscos, tunicados e nematdeos. A localiza-
o dos determinantes morfogenticos dentro do citoplasma do ovo, sua redistribuio
durante o desenvolvimento do ovo e a fertilizao e os padres de clivagem celular so
importantes para determinar o destino de cada clula. Cada um desses fenmenos uma
funo do ovo. Apesar da maior parte do desenvolvimento desses organismos seguir o
padro de mosaico, alguma determinao interativa tambm existe. Em tunicados, o
sistema nervoso e alguns msculos so formados por interaes indutivas entre
blastmeros, e os caracis e nematdeos tambm tm certos rgos formados de manei-
ra interativa. No prximo captulo nos ocuparemos de certos organismos nos quais as
interaes entre molculas no blastoderma sincicial de ovos de insetos constituem o
mecanismo primrio da determinao do destino celular.
LITERATURA CITADA
Allsopp, T. E., Wyatt, S., Paterson, H. F. and Bounoure, L. 1939. Lorigine des Cellules Re- Cassirer, E. 1950. Developmental mechan-ics
Davies, A. M. 1993. The proto-oncogene bcl- productries et le Probleme de la Ligne Germi- and the problem of cause in biology. In E. Cassirer
2 can selectively rescue neurotrophic factor- nale. Gauthier-Villars, Paris. (ed.), The Problem of Knowledge. Yale
dependent neurons from apoptosis. Cell 73: University Press, New Haven.
Boveri, T. 1910. ber die Teilung cen-trifugierter
295-307.
Eier von Ascaris megalocephala. Wilhelm Roux Chabry, L. M. 1887. Contribution a 1em-
Amikura, R., Kobayashi, S., Saito, H. and Okada, Arch. Entwicklungsmech. Org. 30:101-125. bryologie normale tratologique des asci-dies
M. 1996. Changes in subcellular lo-calization of simples. J. Anat. Physiol. Norm. Pathol. 23:
Bowerman, B., Eaton, B. A. and Priess, J. R. 1992.
mtlrRna outside mitochondria in oogenesis and 167-321.
skn-1, a maternally expressed gene re-quired to
early embryogenesis of Drosophila melanogas-
specify the fate of ventral blas-tomeres in the Churchill, F. B. 1973. Chabry, Roux and the ex-
ter. Dev. Growth Differ. 38: 489-498.
early C. elegans embryo. Cell 68:1061-1075. perimental method in nineteenth century
Atkinson, J. W. 1987. An atlas of light mi- embryology. In R. N. Giere and R. S. West-fall
Bowerman, B., Draper, B. W., Mello, C. C. and
crographs of normal and lobeless larvae of the (eds.), Foundations of Scientific Method: The
Priess, J. R. 1993. The maternal gene skn-1
marine gastropod Ilyanassa obsoleta. Int. J. Nineteenth Century. Indiana University Press,
encodes a protein that is distributed unequally in
Invert. Reprod. Dev. 9:169-178. Bloomington, pp. 161-205.
early C. elegans embryos. Cell 74: 443-452.
Austin, J. and Kimble, J. 1987. glp-1 is re-quired Clement, A. C. 1962. Deveopment of Ilyanassa
Boyd, L., Guo, S., Levitan, D., Stinchcomb, D.T.
in the germ line for regulation of the decision following removal of the D macro-mere at
and Kemphues, K.J. 1996. PAR-2 is asymmetri-
between mitosis and meiosis in C. elegans. Cell successive cleavage stages J. Exp. Zool. 149:
cally distributed and promotes association of P
51: 589-600. 193-215.
granules and PAR-1 with the cortex in C. elegans
Blackler, A. W. 1962. Transfer of primordial embryos. Develop-ment 122: 3075-3084. Clement, A. C. 1968. Development of the vege-
germ cells between two subspecies of Xeno-pus tal half of the Ilyanassa egg after re-moval of
Brandhorst, B. P. and Newrock, K. M. 1981.
laevis. J. Embryol. Exp. Morphol. 10: 641-651. most of the yolk by centrifugal force, compared
Post-transcriptional regulation of protein
with the development of animal halves of similar
Blackler, A. W. 1966. The role of a germi-nal synthesis in Ilyanassa embryos and isolated po-
visible composi-tion. Dev. Biol. 17: 165-186.
plasm in the formation of primordial germ cells lar lobes. Dev. Biol. 83: 250-254.
in Rana pipiens. Dev. Biol. 14: 330-347. Clement, A. C. 1986. The embryonic value of
Breitwieser, W., Marhussen, F.-H., Horts-mann,
the micromeres in Ilyanassa obsoleta, as
Blackwell. T. K., Bowerman, B., Priess, J. R. and H. and Eybrussi, A. 1996. Oskar pro-tein
determined by deletion experiments. III. The
Weintraub, H. 1994. Formation of a monomeric interaction with Vasa represents an es-sential
third quartet cells and the mesento-blast cell,
DNA binding domain by SKN bZIP and step in polar granule assembly. Genes Dev. 10:
4d. Int. J. Invert. Reprod. Dev. 9: 155-168.
homeodomain elements. Science 266: 621-628. 2179-2188.
Collier, J. R. 1983. The biochemistry of mol-luscan
Bonnet, C. 1764. Contemplation de la Nature. Brenner, S. 1974. The genetics of Caenorhab-
development. In N. H. Verdonk, J. A. M. van den
Marc-Michel Ray, Amsterdam. ditis elegans. Genetics 77: 71-94.
Biggelaar and A. S. Tompa (eds.), The Mollusca,
Bounoure, L. 1934. Recherches sur la ligne Brenner, S. 1979. Cited in H. F. Judson, The Vol. 3. Academic, New York, pp. 215-252.
germinale chez la grenouille rousse aux premiers Eighth Day of Creation. Simon and Schuster,
Collier, J. R. 1984. Protein synthesis in nor-mal
stades du dveloppement. Ann. Sci. Natl. 10e New York, p. 219.
and lobeless gastrulae of llyanassa obso-leta. Bid.
Wer. 17: 67-248.
Bull 167: 371-377.
Conklin, E. G. 1905a. The organization and cell Goldstein, B. 1992. Induction of gut in Caenor- Hutter, H. and Schnabel, R. 1994. glp-1 and
lineage of the ascidian egg. J. Acad. Nat. Sci. habditis elegans embryos. Nature 357: 255-257. inductions establishing embryonic axes in C.
Phila. 13: 1-119. elegans. Development 120: 2051-2064.
Goldstein, B. and Hird, S. N. 1996. Specifi-cation
Conklin, E. G. 1905b. Organ-forming sub-stances of the anterioposterior axis in Caenorhabditis Hutter, H. and Schnabel, R. 1995. Establish-ment
in the eggs of ascidians. Biol. Bull. 8: 205-230. elegans. Development 122: 1467-1474. of left-right asymmetry in the Caenorhabditis
elegans embryo: A multistep process involving
Conklin, E. G. 1905c. Mosaic development in Gould, S. J. 1977. Ontogeny and Phylogeny.
a series of inductive events. Development 121:
ascidian eggs. J. Exp. Zool. 2: 145-223. Belknap Press, Cambridge, MA.
3417-3424.
Craig, M. M. and Morrill, J. B. 1986. Cellu-lar Guerrier, P., van den Biggelaar, J. A. M., Dongen,
Illmensee, K. 1968. Transplantation of em-
arrangements and surface topology during early C. A. M. and Verdonk, N. H. 1978. Significance
bryonic nuclei into unfertilized eggs of Droso-
development in embryos of llyanassa obsoleta. of the polar lobe for the deter-mination of
phila melanogaster. Nature 219: 1268-1269.
Int. J. Invert. Reprod. Dev. 9: 209-228. dorsoventral polarity in Den-talium vulgare (da
Costa). Dev. Biol. 63: 233-242. Ikenishi, K., Tanaka, T. S. and Komiya, T. 1996.
Dareste, C. 1877. Recherches sur la Produc-
Spatio-temporal distribution of the protein of
tion Artificielle des Monstruosits ou Essais de Guo, S. and Kemphues, K. J. 1995. par-1, a gene
the Xenopus vasa homologue (Xenopus vasa-
Tratogenie Experimental. Reinwald, Paris. required for establishing polarity in C. elegans
like gene-1, XVLG1) in em-bryos. Dev. Growth
embryos, encodes a putative ser/thr kinase that
Davidson, E. H. 1991. Spatial mechanisms of Differ. 38: 527-535.
is asymmetrically distributed. Cell 81: 611-620.
gene regulation in metazoan embryos. Develop-
Jongens, T. A., Hay, B., Jan, L. Y. and Jan, Y. N.
ment 113: 1-26. Harrison, R. G. 1933. Some difficulties of the
1992. The germ cell-less gene product: A
determination problem. Am. Natur.. 67: 306-321.
Ellis, R. E. and Horvitz, H. R. 1986. Genetic posteriorly localized component necessary for
control of programmed cell death in the ne- Hay, B., Jan, L. Y. and Jan, Y. N. 1990. Local- germ cell development in Drosophila. Cell 70:
matode C. elegans. Cell 44: 817-829. ization of vasa, a component of Drosophila polar 569-584.
granules, in maternal effect mutants that alter
Engstrom, L., Caulton, J. H., Underwood, E. M. Kemphues, K. J., Priess, J. R., Morton, D. G. and
embryonic anteroposterior polar-ity. Develop-
and Mahowald, A. P. 1982. Develop-mental Cheng, N. 1988. Identification of genes required
ment 109: 425-433.
lesions in the agametic mutant of Drosophila for cytoplasmic localization in early C. elegans
melanogaster. Dev. Eiol. 91: 163-170. Hegner, R. W. 1911. Experiments with chryso- embryos. Cell 52: 311-320.
melid beetles. III. The effects of killing parts of
Ephrussi, A. and Lehmann, R. 1992. Induc-tion Kim-Ha, J., Kerr, K. and Macdonald, P. M. 1995.
the eggs of Leptinotarsa de-cemlineata. Biol.
of germ cell formation by oskar. Nature 358: Translational regulation of oskar mRNA by Bru-
Bull. 20: 237-251.
387-392. no, an ovarian RNA-binding protein, is essential.
Henderson, S. and seven others. 1991. In-duction Cell 81: 403-412.
Erdlyi, M., Michon, A.-M., Guichet, A., Glotzer,
of bcl-2 expression by Epstein-Barr virus latent
J. B. and Ephrussi, A. 1995. Re-quirement for Kimble, J. and Hirsch, D. 1979. The postem-
membrane protein 1 protects infected B cells
Drosophila cytoplasmic tropomyosin in oskar bryonic cell lineages of the her-maphrodite and
from programmed cell death. Cell 65: 1107-1115.
mRNA localization. Nature 377: 524-527. male gonads in Caenorhab-ditis elegans. Dev.
Hengartner, M. O., Ellis, R. E. and Horvitz, H. Biol. 70: 396-17.
Etemad-Moghadam, B., Guo, S. and Kem-phues,
R. 1992. Caenorhabditis elegans gene ced-9
K. J. 1995. Asymmetrically distrib-uted PAR-3 Kirby, C. M. 1992. Cytoplasmic reorganiza-tion
protects cell from programmed cell death.
protein contributes to cell po-larity and spindle and the generation of asymmetry in Caenorhab-
Nature 356: 494-499.
alignment in early C. elegans embryos. Cell 83: ditis elegans, with an emphasis on par-3, a ma-
743-752. Henry, J. J. and Martindale, M. Q. 1987. The ternal-effect gene essential for both processes.
organizing role of the D quadrant as re-vealed PhD dissertation, Cornell University, Ithaca, NY.
Evans, T. C., Crittenden, S. L., Kodoyianni, V.
through the phenomenon of twin-ning in the
and Kimble, J. 1994. Translational control of Kirby, C. M., Kusch, M. and Kemphues, K.
polychaete Chaetopterus variope-datus. Wilhelm
maternal glp-1 mRNA establishes an asymmetry 1990. Mutations in the par genes of Caenor-
Roux Arch. Dev. Biol. 196: 449-510.
in the C. elegans embryo. Cell 77:183-194. habditis elegans affect cytoplasmic re-
Hill, D. P. and Strome, S. 1987. An analysis of organization during the first cell cycle. Dev.
Fischer, J.-L. 1991. Laurent Chabry and the Biol. 142: 203-215.
the role of microfilaments in the estab-lishment
beginnings of experimental embryology in
and maintainance of asymmetry in Caenorhab-
France. In S. Gilbert (ed.), A Conceptual His- Knoblich, J. A., Jan, L. Y. and Jan, Y. N. 1995.
ditis elegans zygotes. Dev. Biol. 125: 75-84.
tory of Modern Embryology. Plenum, New York, Asymmetric segregation of Numb and Prospero
pp. 31-41. Hill, D. P. and Strome, S. 1990. Brief cy-tochalasin- during cell division. Nature 377: 624-627.
induced disruption of microfila-ments during a
Fischer, J.-L. and Smith, J. 1984. French em- Kobayashi, S. and Okada, M. 1989. Restora-
critical interval in 1-cell C. elegans embryos alters
bryology and the mechanics of develop-ment tion of pole-cell forming ability to UV-irra-diated
the positioning of developmental instructions to
from 1887 to 1910: L. Chabry, Y. De-lage and Drosophila embryos by injection of mitochon-
the 2-cell embryo. Development 108:159-172.
E. Bataillon. Hist. Phil. Life Sci. 6: 25-39. drial IrRNA. Development 107: 733-742.
Hirata, J., Nakagoshi, H., Nabeshima, Y-I. and
Forristall, C., Pondel, M., Chen, L. and King, Kobayashi, S., Amikura, R. and Okada, M. 1993.
Matsuzaki, F. 1995. Asymmetric segre-gation
ML. 1995. Patterns of localization and Presence of mitochondrial large ribo-somal RNA
of the homeodomain protein Prospero during
cytoskeletal association of two vege-tally outside mitochondria in germ plasm of Droso-
Drosophila development. Na-ture 377: 627-630.
localized RNAs, Vg1 and Xcat2. Devel-opment phila melanogaster. Science 260: 1521-1524.
121: 201-208. Hockenbery, D. M., Nuez, G., Milliman, C.,
Kobayashi, S., Yamada, M., Asaoka, M. and
Schreiber, R. D. and Korsmeyer, S. J. 1990. Bcl-
Geigy, R. 1931. Action de 1ultra-violet sur le Kitamura, T. 1996. Essential role of the pos-
2 is an inner mitochondrial mem-brane protein
pole germinal dans 1oeuf de Drosophila mela- terior morphogen nanos for germline de-
that blocks programmed cell death. Nature 348:
nogaster (castration et mutabilit). Rev. Suisse velopment in Drosophila. Nature 380: 708-711.
334-336.
Zool. 38:187-288.
Klreuter, J. G. 1766. Vorlufige Narchricht von Nakamura,A., Amikura, R., Mukai, M., Kobayashi, Priess, R. A., Schnabel, H. and Schnabel, R. 1987.
einigen das Geschlecht der Pflanzen betef-fenden S. and Lasko, P. F 1996. Re-quirement for a The glp-1 locus and cellular interac-tions in early
Versuchen und Beobachtungen, nebst Fortset- noncoding RNA in Drosophila polar granules for C. elegans embryos. Cell 51: 601-611.
zugen 1, 2 und 3. Leipzig. germ cell es-tablishment. Science 274: 2075-2079.
Reverberi, G. and Minganti, A. 1946. Fenomeni
Kuznicki, K., Gruidl, M., Smith, P., Mc-Crone, Newrock, K. M. and Raff, R. A. 1975. Polar di evocazione nello sviluppo delluovo di
S. and Bennett, K. 1996. C. elegans germline lobe specific regulation of translation in embryos Ascidie. Risultati dellindagine spermentale
RNA helicases: Are they all com-ponents of the of llyanassa obsoleta. Dev. Biol. 42: 242-261. sullouvo di Ascidiella aspersa e di Ascidia
P granules? Dev. Biol. 175: 379 malaca allo stadio di 8 blastomeri. Pubbl. Staz.
Nicholson and fifteen others. 1995. Identifi-
Zool. Napoli 20: 199-252. (Quoted in Rever-
Lasko, P. F. and Ashburner, M. 1990. Poste-rior cation and inhibition of the ICE/CED-3 protease
beri, 1971, p. 537.)
localization of vasa protein correlates with, but necessary for mammalian apopto-sis. Nature
is not sufficient for, pole cell de-velopment. 376: 37-43. Robb, D. L., Heasman, J., Raats, J. and Wylie, C.
Genes Dev. 4: 905-921. 1996. A kinesin-like protein is re-quired for germ
Nishida, H. 1987. Cell lineage analysis in ascidian
plasm aggregation in Xenopus. Cell 87: 823-831.
Lenoir, T. 1980. Kant, Blumenbach, and vital embryos by intracellular injection of a tracer
materialism in German biology. Isis 71: 77-108. enzyme. III. Up to the tissue re-stricted stage. Roe, S. 1981. Matter, Life, and Generation:
Dev. Biol. 121: 526-541. Eighteenth-Century Embryology and the Haller-
Lin, R., Thompson, S. and Priess, J. R. 1995.
Wolff Debate. Cambridge University Press,
pop-l encodes an HMG box protein re-quired Nishida, H. 1990. Determinative mecha-nisms
Cambridge.
for the specification of a mesoderm precursor in secondary muscle lineages of as-cidian
in early C. elegans embryos. Cell 83: 599-609. embryos: Development of muscle-specific Rongo, C., Gavis, E. R. and Lehmann, R. 1995.
features in isolated muscle progenitor cells. De- Localization of oskar RNA regulates oskar trans-
Mahowald, A. P. 1971a. Polar granules of Dro-
velopment 108: 559-568. lation and requires Oskar pro-tein. Development
sophila. III. The continuity of polar gran-ules
121: 2737-2746.
during the life cycle of Drosophila. J. Exp. Zool. Nishida, H. 1992a. Determination of devel-
176: 329-343. opmental fates of blastomeres in ascidian Roussell, D. L. and Bennett, K. L. 1993. glh, a
embryos. Dev. Growth Differ. 34: 253-262. germline putative RNA helicase from Caenor-
Mahowald, A. P. 1971b. Polar granules of Dro-
habditis, has four zinc fingers. Proc. Natl. Acad.
sophila. IV. Cytochemical studies show-ing loss Nishida, H. 1992b. Regionality of egg cyto-plasm
Sci. USA 90: 9300-9304.
of RNA from polar granules dur-ing early stages that promotes muscle differentiation in embryo
of embryogenesis. J. Exp. Zool. 176: 329-343. of the ascidian Halocynthia roretzi. Develop- Satoh, Y, Kusakabe, T., Araki, I. and Satoh, N.
ment 116: 521-529. 1995. Timing of initiation of muscle-spe-cific
Mahowald, A. P., Caulton, J. H. and Gehring, W.
gene expression in the ascidian em-bryo prece-
J. 1979. Ultrastructural studies of oocytes and Nishida, H. 1993. Localized regions of egg
des that of developmental fate restriction in
embryos derived from fe-male flies carrying the cytoplasm that promote expression of en-
lineage cells. Dev. Growth Diff. 37: 319-327.
grandchildless muta-tion in Drosophila doderm-specific alkaline phosphatase in embryos
subobscura. Dev. Biol 69: 118-132. of the ascidian Halocynthia roretzi. Develop- Savage, R. M. and Danilchik, M. V. 1993.
ment 118:1-7. Dynamics of germ plasm localization and its
Mango, S. E., Thorpe, C. J., Martin, P. R.,
inhibition by ultraviolet irradiation in early
Chamberlain, S. H. and Bowerman, B. 1994. Two Nishida, H. 1994a. Localization of egg cyto-
cleavage Xenopus eggs. Dev. Biol. 157: 371-382.
maternal genes, apx-1 and pie-1, are required to plasm that promotes differentiation to epi-
distinguish the fates of equivalent blastomeres dermis in embryos of the ascidian Halocyn-thia Schubiger, G. and Wood, W. J. 1977. Deter-
in early C. elegans embryos. Development 120: roretzi. Development 120: 235-243. mination during early embryogenesis in Droso-
2305-2315. phila melanogaster. Am. Zool. 17: 565-576.
Nishida, H. 1994b. Localization of determi-nants
Markussen, F.-H., Michon, A.-M., Bre-itwieser, for formation of the anterior-poste-rior axis in Seydoux, G., Mello, C. C., Pettitt, J., Wood, W.
W. and Eprussi, A. 1995. Transla-tional control eggs of the ascidian Halocynthia roretzi. Deve- B., Priess, J. R. and Fire, A. 1996. Repres-sion
of oskar generates short OSK, the isoform that lopment 120: 3093-3104. of gene expression in the embryonic germ lineage
induces pole plasm assem-bly. Development 121: of C. elegans. Nature 382: 713-716.
Nuez, G., London, L., Hockenbury, D.,
3723-3732.
Alexander, M., McKearn, J. P. and Ko-rsmeyer, Slack, J. M. W. 1991. From Egg to Embryo:
McGhee, J. D. 1995. Cell fate decisons in the S. J. 1990. Deregulation of blc-2 gene expression Regional Specification in Early Development.
early embryo of the nematode Caenorhabdi-tis selectively prolongs sur-vival of growth factor- Cambridge University Press, New York.
elegans. Dev. Genet. 17: 155-166. deprived hemopoi-etic cells. J. Immunol. 144:
Smith, L. D. 1966. The role of a germinal
3602-3610.
Mello, G. C., Draper, B. W., Krause, M., plasm in the formation of primordial germ cells
Weintraub, H. and Priess, J. R. 1992. The pie-1 Okada, M., Kleinman, I. A. and Schneider-man, in Rana pipiens. Dev. Biol, 14: 330-347.
and mex-1 genes and maternal control of H. A. 1974. Restoration of fertility in sterilized
Strome, S. 1992. The germ of the issue. Na-ture
blastomere identity in early C. elegans embryos. Drosophila eggs by transplanta-tion of polar
358: 368-369.
Cell 70: 163-176. cytoplasm. Dev. Biol. 37: 43-54.
Strome, S. and Wood, W. B. 1983. Genera-tion
Mello, C. C, Draper, B. W. and Priess, J. R. Ortolani, G. 1959. Richerche sulla in-duzione
of asymmetry and segregation of germ-like gra-
1994. The maternal genes apx-1 and glp-1 and del sistema nervoso nelle larve delle Ascidie. Boll.
nules in early Caenorhabditis elegans embryos.
establishment of dorsal-ventral polar-ity in the Zool. 26: 341-348.
Cell 35:15-25.
early C. elegans embryo. Cell 77: 95-106.
Pines, M. (ed.). 1992. From Egg to Adult. Howard
Spana, E. P. and Doe, C. Q. 1995. The pros-
Mello, C. C., Schubert, C., Draper, B., Zhang, Hughes Med. Inst., Bethesda, pp. 30-38.
pero transcription factor is asymmetrically
W., Lobel, R. and Priess, J. R. 1996. The PIE-1
Priess, R. A. and Thomson, J. N. 1987. Cel-lular localized to the cell cortex during neurob-last
protein and germline specifica-tion in C. elegans
interactions in early C. elegans em-bryos. Cell mitosis in Drosophila. Development 121:
embryos. Nature 382: 710-712.
48: 241-250. 3187-3195.
Sulston, J. and Horvitz, H. R. 1977. Postem- Waddington, C. H. 1966. Principles of Devel- Wilson, E. B. 1904. Experimental studies on
bryonic cell lineages of the nematode Caenor- opment and Differentiation. Macmillan, New germinal localization. I. The germ regions in
habditis elegans. Dev. Biol. 56:110-156. York. the egg of Dentalium. II. Experiments on the
cleavage-mosaic in Patella and Dental-ium. J.
Sulston, J. E., Schierenberg, J., White, J. and Waring, G. L., Allis, C. D. and Mahowald, A. P.
Exp. Zool. 1: 1-72.
Thomson, N. 1983. The embryonic cell lin- 1978. Isolation of polar granules and the
eage of the nematode Caenorhabditis elegans. identification of polar granule-specific protein. Wolff, K. P. 1767. De formatione intestino-
Dev. Biol. 100: 64-119. Dev. Biol. 66: 197-206. rum praecipue. Novi Commentarii Academ-ine
Scientarum Imperialis Petropolitanae.
Sulston, J. and eighteen others. 1992. The C. Watts, J. L. and seven others. 1996. par-6, a
elegans genome sequencing project: A be-ginning. gene involved in the establishment of asymmetry Yuan, J. Y. and Horvitz, H. R. 1990. The Cae-
Nature 356: 37-42. in early C. elegans embryos, mediates the norhabditis elegans genes ced-3 and ced-4 act
asymmetric localization of PAR-3. Development cell autonomously to cause pro-grammed cell
Swalla, B. J. and Jeffery, W. R. 1995. A ma-
122: 3133-3140. death. Dev. Biol. 138: 33-41.
ternal RNA localized in the yellow crescent is
segregated to the larval muscle cells dur-ing Whittaker, J. R. 1977. Segregation during Zhou, Y. and King, M. L. 1996. Localization of
ascidian development. Dev. Biol. 170: 353-364. cleavage of a factor determining endoder-mal Xcat-2, a putative germ plasm compo-nent, to
alkaline phosphatase development in ascidian the mitochondrial cloud in Xenopus stage I
Tobler, H., Smith, K. D. and Ursprung, H. 1972.
embryos. J. Exp. Zool. 202: 139-153. oocytes. Development. 122: 2947-2953.
Molecular aspects of chromatin elim-ination in
Ascaris lumbricoides. Dev. Biol. 27: 190-203. Whittaker, J. R. 1982. Muscle cell lineage can Zst, B. and Dixon, K. E. 1977. Events in the
change the developmental expression in germ cell lineage after entry of the pri-mordial
Tung, T. C., Wu, S. C., Yel, Y. F., Li, K. S. and
epidermal lineage cells of ascidian em-bryos. Dev. germ cells into the genital ridges in normal and
Hsu, M. C. 1977. Cell differentiation in as-cidians
Biol. 93: 463-70. UV-irradiated Xenopus lae-vis. J. Embryol. Exp.
studied by nuclear transplantation. Scientia
Morphol. 41: 33-46.
Sinica 20: 222-233. Whittaker, J. R., Ortolani, G. and Farinella-Ferruzza,
N. 1977. Autonomy of acetyl-cholinesterase di-
Vaux, D. L., Weissman, I. L. and Kim, S. K.
fferentiation in muscle lin-eage cells in ascidian
1992. Prevention of programmed cell death in
embryos. Dev. Biol. 55: 196-200.
Caenorhabditis elegans by human bcl-2. Science
258:1955-1957. Williams, G. T., Smith, C. A., Spooncer, E.,
Dexter, T. M. and Taylor, D. R. 1990.
Verdonk, N. H. and Gather, J. N. 1983. Mor-
Haemopoietic colony stimulating factors
phogenetic determination and differentia-tion.
promote cell survival by suppressing apop-tosis.
In N. H. Verdonk, J. A. M. van den Biggelaar and
Nature 343: 76-79.
A. S. Tompa (eds.), The Mol-lusca. Academic
A gentica da especificao axial
em Drosophila 14
Quando um espermatozide penetra no vu-
lo, entra em um sistema celular que j al-
canou um certo grau de organizao.
ERNST HADORN (1955)
N O LTIMO CAPTULO, discutimos as especificaes de clulas embrionri-
as precoces, quando adquirem diferentes determinantes citoplasmticos que
estavam armazenados no ocito. As membranas celulares estabelecem a re-
gio do citoplasma incorporado em cada clula, e acredita-se que determinantes
morfogenticos direcionam, em seguida, a expresso gnica nesses blastmeros. Du-
Aqueles de ns que esto trabalhando com rante o desenvolvimento de Drosophila, as membranas celulares no se formam antes
Drosophila encontram um aspecto da ques- da dcima terceira diviso nuclear. Antes disso, todos os ncleos dividem entre si um
to. Pois o material disponvel tudo que se citoplasma comum, e o material pode difundir atravs do embrio. Nesses embries, a
pode desejar, e mesmo experimentos embrio-
especificao de clulas ao longo dos eixos ntero-posterior e dorsoventral
lgicos podem ser realizados... Depende de
conseguida pelas interaes de materiais citoplasmticos dentro de uma nica clula
ns utilizarmos essas oportunidades. Temos
multinucleada. Alm disso, o incio das diferenas entre os eixos controlada pela
uma histria completa a desemaranhar, pois
podemos trabalhar as coisas por ambos tr- posio do vulo dentro do ovrio materno. Embora o local da entrada do espermato-
minos aos mesmo tempo. zide possa fixar os eixos em ascdios e nematides, os eixos ntero-posterior e dorso-
JACK SCHULTZ (1935) ventral da mosca so especificados por interaes entre o vulo e suas clulas folicu-
lares que o circunda.
Inicialmente a principal vantagem da Resumo do desenvolvimento de Drosophila

Drosophila foi uma que escapou viso
dos historiadores: era um organismo exce- Como discutido no Captulo 3, os embries de Drosophila desenvolvem-se muito
lente para projetos de estudantes. rapidamente atravs de um srie de divises nucleares que formam um blastoderma
ROBERT E. KOHLER (1994) sincicial. Durante o nono ciclo da diviso, cerca de cinco ncleos alcanam a superf-
cie do plo posterior do embrio. Esses ncleos ficam envolvidos pelas membranas
celulares e geram as clulas polares que do origem aos gametas do adulto. A maioria
dos outros ncleos chegam periferia do embrio no ciclo dez e em seguida sofrem
mais quatro divises com velocidades progressivamente menores. Aps o ciclo 13,
membranas celulares crescem entre os ncleos para formar o blastoderma celular de
cerca de 6000 clulas (Turner e Mahowald, 1977; Foe e Alberts, 1983). No ciclo 14, o
nvel da transcrio geral, que era muito baixo, aumenta dramaticamente. Ao mesmo
tempo, o embrio de 2 a 3 horas inicia a gastrulao.
Os primeiros movimentos da gastrulao de Drosophila segregam o mesoderma, o
ectoderma e o endoderma presuntivos (Figura 14.1). O mesoderma presuntivo - apro-
ximadamente 1000 clulas contendo a linha ventral mediana - se dobram para produzir
o sulco ventral. Esse sulco se desprende da superfcie para tornar-se o tubo ventral no
543
544 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
(A) (B) (C)
Invaginao
do intestino
anterior
Sulco ceflico
Sulco ventral Sulco ventral
Clulas polares
na invaginao
do intestino
mdio
(D) (E)
Clipeolabro
Regio proceflica
Crista
(F) Segmento anterior
ptica
Crista
dorsal
Figura 14.1
Gastrulao em Drosohila. (A) Sulco ventral comeando a formar medida que as clulas
flanqueando a linha mediana ventral se invaginam. (B) O sulco se fecha, com clulas mesodrmi-
cas colocadas internamente e ectoderma superficial flanqueando a linha mediana ventral. (C)
Vista dorsal de um embrio um pouco mais velho mostrando as clulas polares e o endoderma
posterior mergulhando no embrio. (D) Vista lateral mostrando migrao completa da banda
germinativa. Sutis reentrncias marcam o comeo da segmentao ao longo da banda germinati-
va: Ma, Mx e Lb correspondem aos segmentos mandibular, maxilar e labial da cabea. T1-T3,
segmentos torcicos; A1-A8, segmentos abdominais. (E) Banda germinativa revertendo sua
direo. Os segmentos reais so agora visveis, assim como os outros territrios da cabea dorsal,
tal como o clipeolabro, a regio proceflica, a crista ptica e a crista dorsal. (F) Larva recm-
eclodida do primeiro instar. (Cortesia de F. R. Turner.)
CAPTULO 14 Especificao axial em Drosophila 545
interior do embrio. Em seguida, se achata para formar uma camada de tecido mesodr-
mico sob o ectoderma ventral. O endoderma prospectivo invagina em duas bolsas nos
terminais anterior e posterior do sulco ventral. As clulas polares so internalizadas
juntamente com o endoderma. Nesse momento, o embrio se curva para formar o sulco
ceflico e as dobras transversais anterior e posterior. [other.html#droso1]
As clulas que permanecem na superfcie (o ectoderma) sofrem convergncia e
extenso, migrando para a linha ventral mediana para formar a banda germinativa. Essa
se estende posteriormente e talvez devido ao invlucro do ovo, se enrola em volta da
superfcie superior (dorsal) do embrio. Assim, ao final da formao da banda
germinativa, as clulas destinadas a formar as estruturas larvais mais posteriores
esto localizadas logo aps a futura regio da cabea. Nesse momento, comeam a
aparecer os segmentos corporais, dividindo o ectoderma e o mesoderma. A banda
germinativa se retrai em seguida, colocando os presuntivos segmentos posteriores na
extremidade posterior do embrio.
Enquanto a banda germinativa estiver em sua posio estendida, vrios proces-
sos chaves morfogenticos ocorrem: organognese, segmentao e segregao dos
discos imaginais.* Alm disso, o sistema nervoso forma-se a partir de duas regies de
clulas ectodrmicas localizadas ventralmente. Conforme descrito no Captulo 8, os
neuroblastos se diferenciam desse ectoderma neurognico dentro de cada segmento
(e tambm da regio no-segmentada do ectoderma da cabea). Portanto, em insetos
como a Drosophila, o sistema nervoso est localizado ventralmente, em vez de ser
derivado do tubo neural dorsal, como nos vertebrados.
AS ORIGENS DA POLARIDADE NTERO-POSTERIOR

Viso panormica
O plano geral do corpo da Drosophila o mesmo no embrio, na larva e no adulto,
cada qual tendo um terminal da cabea e um da cauda distintos, entre os quais esto
unidades repetitivas segmentares (Figura 14.2). Trs desses segmentos formam o
trax, enquanto outros oito segmentos formam o abdome. Cada segmento da mosca
*Os detalhes da diferenciao do disco imaginal sero discutidos no Captulo 19. Para maiores
informaes sobre a anatomia do desenvolvimento de Drosophila veja Bate e Martinez-Arias,
1993; Tyler e Schetzer, 1996; e Schwalm, 1997.
Cabea
Protrax
Mesotrax
Metatrax
Figura 14.2
Comparao entre segmentao larval e adulta
Segmentos em Drosophila. Os trs segmentos torcicos
abdominais podem ser distinguidos por seus apndices: T1
(protorcico) somente tem patas; T2 (mesoto-
rcico) tem asas e patas; T3 (metatorcico) tem
halteres e patas.
Polaridade adulta tem a sua prpria identidade. O primeiro segmento torcico por exemplo, somente
citoplasmtica
tem patas; o segundo segmento torcico contm patas e asas. O terceiro segmento
(efeito
materno) torcico tem patas e halteres (equilibradores). Os segmentos torcicos e abdominais
tambm podem ser diferenciados por suas cutculas. Como aparece esse padro? Duran-
te a ltima dcada, a combinao de mtodos da biologia molecular, gentica e embriologia,
levou a um modelo detalhado descrevendo como gerado o padro peridico ao longo
Gradiente de do eixo ntero-posterior, e como cada segmento diferenciado dos outros.
protena
Hunchback
A polaridade ntero-posterior no embrio, na larva e no adulto tem sua origem na
polaridade ntero-posterior do ovo(Figura 14.3). Os genes de efeito materno nos
ovrios da mosca produzem RNAs mensageiros que so colocados em diferentes
regies do ovo. Esse codifica protenas regulatrias transcricional e de traduo que
Genes
gap se difundem atravs do blastoderma sincicial, e ativam ou reprimem a expresso de
certos genes zigticos. Um par dessas protenas, Bicoid e Hunchback, regula a produ-
o de estruturas anteriores, enquanto outro par de protenas especificado maternal-
mente, Nanos e Caudal, regulam a formao da parte posterior do embrio. Em segui-
Genes
pair-rule
da, os genes zigticos regulados por esses fatores maternos so expressos em certos
domnios largos (cerca de trs segmentos de largura), parcialmente sobrepostos. Es-
ses genes so chamados genes gap (genes de fenda-porque suas mutaes causam
fendas no padro de segmentao) e esto entre os primeiros genes transcritos no
embrio. As diferentes concentraes das protenas dos genes gap causam a transcri-
o dos genes pair-rule que dividem o embrio em unidades peridicas. O padro de
transcrio desses genes pair-rule fornece um padro de listas de sete bandas verti-
Genes de Genes cais perpendiculares ao eixo ntero-posterior. As listas das protenas dos genes pair-
polaridade hometicos rule ativam a transcrio dos genes de polaridade segmentar (segment polarity genes).
segmentar Seus mRNAs e produtos proticos dividem o embrio em 14 unidades de largura
segmentar. Isso estabelece a periodicidade do embrio. Ao mesmo tempo, protenas
Figura 14.3
Modelo generalizado da formao do padro dos genes gap, pair-rule e de polaridade segmentar interagem para regular outra
de Drosophila. O padro estabelecido por classe de genes, os genes hometicos, cuja transcrio determina o destino desenvol-
genes de efeito materno que formam gradien- vimental de cada um desses segmentos.
tes e regies de protenas morfognicas. Es-
ses determinantes morfognicos criam um gra- Os genes de efeito materno
diente da protena Hunchback que ativa dife-
rencialmente os genes gap que definem terri- Evidncia Embriolgica da Regulao da Polaridade
trios amplos do embrio. Os genes gap per-
pelo Citoplasma do Ocito
mitem a expresso de genes pair-rule cada qual
dividindo o embrio em regies de largura
aproximada equivalente a dois segmentos pri- Experimentos embriolgicos clssicos demonstraram que existem pelo menos dois
mordiais. Os genes da polaridade segmentar centros de organizao no ovo do inseto. Um o centro de organizao anterior, o
dividem o embrio em unidades de tamanho outro o centro de organizao posterior. Klaus Sander (1975) postulou que essas duas
segmentar ao longo do eixo ntero-posterior. reas de organizao formam dois gradientes, um iniciado no terminal anterior, e o
A combinao desses genes define os dom- outro no terminal posterior. Cada um desses gradientes forma as suas estruturas
nios espaciais dos genes hometicos que de- prprias nos plos e interage com o outro gradiente para formar a estrutura central do
finem as identidades de cada segmento. Des- embrio. Sander baseou esse modelo em experimentos envolvendo a ligao do em-
sa maneira, periodicidade gerada a partir de
brio em vrios tempos durante o desenvolvimento, e transplantando regies do
no-periodicidade, e cada segmento recebe
uma nica identidade. citoplasma polar de uma regio do ovo para outra (Figura 14.4). Primeiro, quando ele
moveu o citoplasma do plo posterior para mais anteriormente, obteve um pequeno
embrio anterior ao plasma do plo posterior, enquanto segmentos extras, no organi-
zados em um embrio, formavam-se atrs dele (veja Figura 14.4D). Em segundo lugar,
ele quando ligava o ovo precocemente durante o desenvolvimento, separando a re-
gio anterior da posterior, metade se desenvolveu em um embrio anterior, enquanto a
outra metade se desenvolveu em um embrio posterior, porm, nenhuma das metades
continha os segmentos medianos do embrio. Quanto mais tardiamente no desenvol-
vimento era feita a ligadura, menos segmentos medianos estavam faltando. Assim,
pareceu que realmente havia gradientes emanando dos dois plos durante a clivagem
e que esses gradientes interagiam para produzir a informao posicional determinante
da identidade de cada segmento.
Anterior
Prosencfalo
Segmentos
da cabea
Segmentos
torcicos
Segmentos
abdominais
Posterior
Figura 14.4
Experimento de ligadura de Sander no embrio do inseto saltador de folhas Euscelis. (A) Em-
brio normal em viso ventral. A bola preta na base representa um agregado de bactrias simbiticas
que marca o plo posterior. (B) Aps ligadura do embrio precoce, forma-se um embrio parcial,
mas a cabea e os segmentos torcicos esto ausentes em ambos embries. (C) Quando ligados
mais tarde (no estgio de blastoderma) so formados mais dos segmentos faltantes, mas a maioria
dos embries ainda no tem os segmentos mais centrais. (D) Quando o citoplasma do plo
posterior transplantado para um embrio ligado no estgio de blastoderma, um embrio peque-
no, porm completo, forma-se na metade anterior, enquanto a metade posterior forma um embrio
parcial invertido. Esses resultados podem ser explicados em termos de gradientes nos plos do
embrio que ativam um conjunto de estruturas e reprimem a formao de outras. (Segundo
Sander, 1960, e French, 1988.)
A possibilidade do mRNA ser responsvel pela gerao do gradiente anterior foi

sugerida por uma srie de experimentos de Kalthoff e Sander (1968). Esses autores
acharam que quando a poro anterior de ovo de Smittia (mosquito plvora) foi
exposta luz ultravioleta de comprimentos de onda capazes de inativar RNA (265 e 285
nm), os embries desenvolviam dois abdomes e telsos (caudas) com simetria de ima-
gem espelhar: telso-abdome-abdome-telso (Figura 14.5). Evidncia adicional que o
RNA importante para a especificao da poro anterior do embrio da mosca foi
obtida por Kandler-Singer e Kalthoff (1976), que submergiram ovos de Smittia em
solues contendo vrias enzimas e em seguida puncionaram os ovos em regies
especficas. Abdomes duplos resultaram da permisso para a entrada de RNase no
terminal anterior. Outras enzimas no causaram essa anormalidade, nem a RNase cau-
sou esse efeito quando penetrou em outras regies do ovo. Assim, o laboratrio de
Sander postulou a existncia de um gradiente em cada terminal do ovo, e pareceu
provvel que o ovo seqestrou um RNA que gerava um gradiente de material ntero-
formador.
O Modelo Molecular: Gradientes Proticos no Embrio Precoce

Figura 14.5
Em 1988, a hiptese do gradiente foi unida com uma metodologia gentica de estudo
Embries normal e irradiado do mosquito-pl-
da embriognese de Drosophila. Se houvesse gradientes, quais eram os morfgenos vora (Smittia). O embrio normal (no alto)
cujas concentraes mudavam ao longo do espao? Quais eram os genes que molda- mostra uma cabea esquerda e segmentos
vam esses gradientes? E essas substncias agiriam ativando ou inibindo certos genes abdominais direita. O embrio irradiado com
nas reas onde estavam concentradas? Christiane Nsslein-Volhard conduziu um pro- luz UV no tem a regio da cabea mas tem
grama de pesquisa que encontrou um conjunto de genes que codificava morfgenos segmentos abdominais em ambos os lados. (De
de gradientes para a parte anterior do embrio, outro conjunto de genes que codificava Kalthoff, 1969, cortesia de K. Kalthoff.)
Tabela 14.1 Genes de efeito materno que afetam a polaridade ntero-posterior do embrio de Drosophila
Gene Fentipo Funes e estruturas propostas
GRUPO ANTERIOR
bicoid (bcd) Cabea e trax deletados, substitudos Morfgeno anterior graduado contm
por telso invertido homeodomnio, reprime caudal
exuperantia (exu) Estruturas anteriores da cabea deletadas ncora mRNA bicoid
swallow (swa) Estruturas anteriores da cabea deletadas ncora mRNA bicoid
GRUPO POSTERIOR
nanos (nos) Sem abdome Morfgeno posterior; reprime huchback
tudor (tud) Sem abdome, sem clulas polares Localizao de Nanos
oskar (osk) Sem abdome, sem clulas polares Localizao de Nanos
vasa (vas) Sem abdome, sem clulas polares; Localizao de Nanos
oognese defeituosa
valois (val) Sem abdome, sem clulas polares; Estabilizao da localizao do
celularizao defeituosa complexo Nanos
pumilio (pum) Sem abdome Ajuda protena Nanos ligar mensagem
hunchback
caudal (cad) Sem abdome Ativa genes do terminal posterior
GRUPO TERMINAL
torso (tor) Sem terminais Possvel morfgeno para terminais
trunk (trk) Sem terminais Transmite sinal torsolike para torso
fs(1)Nasrat[fs(1)N] Sem terminais; ovos em colapso Transmite sinal torsolike para torso
fs(1)polehole[fs(1)ph] Sem terminais; ovos em colapso Transmite sinal torsolike para torso
Fonte: Segundo Anderson, 1989
os morfgenos responsveis pela organizao da regio abdominal do embrio e um

terceiro conjunto codificava protenas que produziam as regies terminais de ambas
as extremidades do embrio (Figura 14.6; Tabela 14.1). Esse trabalho resultou em um
Prmio Nobel para a pesquisadora e seu colega Eric Wieschaus, em 1995. [droso1.html]
O eixo ntero-posterior para o embrio de Drosophila parece ser padronizado
antes mesmo do ncleo comear a funcionar (Figura 14.7). As clulas nutrizes do
ovrio depositam mRNAs no ocito em desenvolvimento, e esses mRNAs se tornam
poro de diferentes regies da clula. Em especial, quatro mRNAs so crticos para a
formao do eixo ntero-posterior:
mRNAs bicoid e hunchback, cujos produtos proticos so crticos para a
formao da cabea e do trax
mRNAs nanos e caudal cujos produtos proticos so crticos para a formao
dos segmentos abdominais
Os mRNAs bicoid so amarrados aos microtbulos anteriores, enquanto as mensa-
gens nanos so ligadas ao citoesqueleto cortical posterior. Os mRNAs hunchback e
caudal so distribudos atravs de todo o ocito. Aps a fecundao, os mRNAs
podem ser traduzidos em protenas. No plo anterior o RNA bicoid traduzido em
protena Bicoid, que forma um gradiente mais alto no anterior. No plo posterior, a
mensagem nanos traduzida em protena Nanos, que forma o gradiente mais alto no

Figura 14.6
Trs vias genticas independentes interagem para formar o eixo ntero-posterior do embrio de
Drosophila. Em cada caso, a assimetria inicial estabelecida durante a oognese, e o padro
organizado pelos produtos maternos logo aps a fertilizao. A realizao do padro ocorre
quando os produtos maternos localizados ativam ou reprimem genes zigticos especficos em
diferentes regies do embrio. (Segundo St. Johnston e Nsslein-Volhard, 1992.)
Meia- Concluso da Blastoderma Blastoderma Expresso Fentipo
oognese oognese sincicial celular gnica
Protena Tipo selvagem

mRNA bicoid Protena Bicoid RNA do gene cron
gap anterior Hunchback
Cabea
mRNA Clulas
bicoid nutrizes Trax
Abdome
Telso
Deficiente em bicoid
Telso
Protena Clulas Clulas
Ocito
Caudal embrionrias polares
Clulas nutrizes ovarianas mRNA bicoid mRNA bicoid Protena Bicoid ativa Abdome
secretam mRNA bicoid localizado no anterior traduzido forma os genes gap anterior,
para o ocito, cujo ncleo por produtos de gradiente protico; orthodentical
interage com clulas exuparantia e reprime traduo de buttonhead,
foliculares posteriores swallow mRNA caudal e o gene hunchback
Anterior Bicoid: Telso
Protena
RNA Hunchback
hunchback
Materno
RNA nanos Deficiente em nanos
cron
Cabea
Trax
Protena
Nanos RNA giant Telso
Protena RNA RNA
Staufen oskar RNA nanos Knirps
Clulas nutrizes mRNA nanos mRNA nanos traduzido nanos ativa genes
ovarianas secretam secretado por clulas bloqueia traduo gap posteriores
forma posterior para nutrizes ovarianas da mensagem (tais como
ligar mRNA nanos localizadas no hunchback no knirps e giant)
plo posterior posterior do embrio
Posterior: Nanos
Protena Protena mRNA
Protena Torsolike Torso ativada tailess e
Protena
Torsolike huckebein
Torso
Deficiente em torso
Cabea
Trax
Protena
Torsolike Abdome
Clulas
Clulas foliculares
foliculares
ovarianas produzem mRNA tailess
protena Torsolike Torsolike ativa e huckebein Torso ativa
nas extremidades Torso nas genes gap
anterior e posterior extremidades terminais
Terminal: Torso
A) Ocito (C)
ANTERIOR
Concentrao
mRNA bicoid
Cortex,
Bicoid Hunchback Nanos Grauzone,
caudal
Staufen
mRNA caudal
Anterior Posterior Protena Bicoid
(B) Embrio de clivagem precoce
Protena Caudal
PROTENA
POSTERIOR
Hunchback
Concentrao
Bicoid mRNA nanos

Caudal
Nanos Smaug Oskar mRNA
hunchback
Protena
Nanos Pumilio p55
Anterior Embrio de Posterior
Protena
clivagem precoce
Hunchback
Figura 14.7
Um modelo da gerao do padro ntero-posterior por genes de efeito materno. (A) Os RNA
mensageiros bicoid, nanos, hunchback e caudal so colocados no ocito pelas clulas nutrizes
ovarianas. A mensagem bicoid seqestrada anteriormente. A mensagem nanos enviada para
o plo posterior. (B) Na traduo, o gradiente da protena Bicoid enviado para o plo posterior,
e o gradiente da protena Nanos se estende do posterior para o anterior. Nanos inibe traduo da
mensagem hunchback (no posterior), enquanto Bicoid previne a traduo da mensagem caudal
(no anterior). Isso resulta na oposio dos gradientes Caudal e Hunchback. O gradiente Hunchback
reforado secundariamente pela transcrio do gene hunchback dos ncleos anteriores (j que
Bicoid age como um fator de transcrio ativando a transcrio do gene hunchback). (C) Intera-
es paralelas pelas quais a regulao da traduo gnica estabelece o padro ntero-posterior do
embrio de Drosophila. No anterior do embrio, o mRNA bicoid ligado ao citoesqueleto
anterior e impedido de ser traduzido por ter uma pequena cauda poliadenilada. Na fecundao, a
cauda estendida de maneira dependente das protenas Cortex, Grauzone e Staufen, e o mRNA
bicoid traduzido. A protena Bicoid suprime a traduo do mRNA caudal. Na regio posterior
do embrio, o mRNA nanos suprimido no ocito pela protena Smaug (que se liga sua
3UTR). Na fertilizao, Oskar ajuda em sua traduo e a protena Nanos age como um supressor
da traduo de mRNA hunchback. (C segundo Macdonald e Smibert, 1996.)
posterior. A protena Bicoid inibe a traduo do RNA caudal, permitindo com isso que
a protena Caudal seja somente sintetizada na parte posterior da clula. Reciprocamen-
te, a protena Nanos, em conjunto com a protena Pumilio, liga-se ao RNA hunchback,
impedindo sua traduo na parte posterior do embrio. Bicoid tambm eleva o nvel da
protena Hunchback no anterior do embrio ligando-se aos intensificadores do gene
hunchback e estimulando sua transcrio (Figura 12.18). O resultado dessas intera-
es a criao de quatro gradientes proticos no embrio precoce:
Um gradiente anterior-para-posterior da protena Bicoid
Um gradiente anterior-para-posterior da protena Hunchback
Um gradiente posterior-para-anterior da protena Nanos
Um gradiente posterior-para-anterior da protena Caudal
O palco est agora preparado para a ativao dos genes zigticos naqueles ncleos que
tinham sido ocupados dividindo-se enquanto esse gradiente estava sendo estabelecido.
& Especulaes
Modelos de Gradientes da Informao Posicional
C OMO PODEM CLULAS ser in- sificador que liga o morfgeno fracamen- (A) (C)
formadas de sua posio no te. Somente quando houver uma grande
embrio e em seguida usar tal concentrao do morfgeno esse gene
informao para diferenciar-se no tipo estaria ativo. O(s) gene(s) responsveis
apropriado de clula? Uma explicao pro- pela formao do trax, por outro lado,
pe gradientes de substncias morfoge- poderiam apresentar um intensificador que
(B) (D)
nticas (Boveri, 1901; Child, 1941; Wol- ligasse o morfgeno mais eficazmente, o Gradiente Q
Concentrao Q
pert, 1971). Nesses modelos, uma subs- que o habilitaria a responder a nveis rela- Gradiente P
tncia solvel (morfgeno) posicionada tivamente baixos daquele morfgeno. As
de forma a se difundir de uma fonte (onde clulas da cabea expressariam ambos os
produzida) para um ralo (onde degra- genes, enquanto os genes do trax ex-
dada), estabelecendo um intervalo cont- pressariam somente aquele gene cujo in-
nuo de concentraes dentro dessa re- tensificador puder ligar baixas quantida- Centro da
Veias alares
pinta ocular
gio. Consideraes tericas (veja Crick, des do morfgeno. As clulas das por-
1970) sugerem que cada um desses gradi- es posteriores do corpo no veriam Figura 14.9
entes somente pode atuar ao longo de dis- quantidade alguma desse morfgeno, e Modelo de um gradiente de informao
posicional proposto para explicar pintas em asas
tncias curtas, menos que 100 clulas de nenhum desses genes seria ativado. Des- de borboleta. (A) Fotografia de uma pinta ocu-
dimetros. Em modelos de gradientes, a sa maneira, as clulas poderiam sentir a lar na asa de Morpho peleides. (B) Diagrama
concentrao de morfgenos muda com presena de um morfgeno e responder de um modelo de dois gradientes que pode ex-
a distncia, as concentraes mais altas diferentemente. O sensor no precisaria plicar a maneira pela qual a pinta foi gerada. A
esto prximas da fonte do morfgeno. ser um intensificador; poderia bem ser origem do morfgeno est no centro da pinta e
As clulas teriam que ter sensores que um receptor para um fator de crescimen- corresponde ao pice de um cone, cuja altura
reflete sua concentrao. A concentrao Q re-
responderiam diferentemente a concentra- to especfico na superfcie celular (veja presenta o nvel de morfgeno necessrio para
es diferentes do gradiente. Se o Captulo 17). alcanar o limiar de sensibilidade para forma-
morfgeno for um fator de transcrio, A maioria dos modelos de gradiente o de cor naquelas clulas alares. (C) Foto-
elementos intensificadores ou promoto- assume que todas as clulas que podem grafia da asa de Smyrna blomfildia, na qual as
res poderiam ligar o morfgeno com for- responder a um gradiente so equivalen- pintas oculares so elpticas. (D) Orientaes
diferentes do gradiente de sensibilidade Q po-
as diferentes (Figura 14.8). Por exemplo, tes. Todas essas clulas interpretam o si- dem resultar em tais pintas elpticas. (Segundo
se um morfgeno estiver sendo produzi- nal do morfgeno da mesma maneira e a Nijhout, 1981, cortesia de H. F. Nijhout.)
do no anterior do corpo, os genes res- concentrao de morfgeno que recebem
ponsveis pela organizao do desenvol- determina sua identidade. Porm, a inter-
amente linear. Considere por exemplo, uma
vimento da cabea poderiam ter um inten- pretao dos gradientes no necessari-
srie de notas de um exame que se esten-
de uniformemente de 100 a 60. Em um es-
Ambos Gene A inativo Ambos genes
genes Gene B ativo inativos
quema (uma leitura linear), uma nota
ativos Figura 14.8 entre 100 e 90 A, 89-80 B, 79-70 C e
Gene A Modelo hipottico para gradientes estabelecen- 69-60 D. Em uma outra classe (usando
do informao posicional. A concentrao do leitura curva), 100-95 A, 94-85 B, 84-
Gene B morfgeno diminui a partir da origem. Neste 70 C e 69-60 D. Nijhout (1981) usou um
diagrama, os receptores para o morfgeno so modelo de dois gradientes para explicar o
elementos intensificadores para dois genes que desenvolvimento dos padres marcas de
Concentrao do morfgeno
controlam o destino celular, porm, os recepto- olhos das asas de borboleta. Um gradi-
res tambm poderiam ser citoplasmticos ou ente consiste de uma difuso linear de
de membrana. Um dos receptores (neste caso, morfgeno. O segundo envolve a inter-
Limiar A
Limiar B
o intensificador no gene A) necessita de uma pretao desse morfgeno; ou seja, o li-

alta concentrao de morfgeno para atuar. Em miar de sensibilidade das clulas envolvi-
altas concentraes de morfgeno, ambos ge-
das difere em diferentes regies das asas.
nes A e B so ativos. Em concentraes mode-
A existncia do segundo gradiente d ori-
radas, somente o gene B ativo. Onde a con-
centrao do morfgeno cai abaixo de outro
gem a uma marca elptica, no a marca cir-
limiar, nenhum dos genes ativo. (Segundo cular que resultaria se no existisse o gra-
Distncia da fonte Wolpert, 1978.) diente de sensibilidade (Figura 14.9).
Figura 14.10 (A) (B)

Fentipo de um embrio fortemente
afetado, oriundo de uma fmea defi-
ciente no gene bicoid. (A) Padro da
cutcula de um tipo selvagem. (B)
Mutante bicoid. A cabea e o trax
foram substitudos por um segundo
conjunto de estruturas do telso pos-
terior. Abreviaes: fk, filzkrper;
ap, placas anais (ambas estruturas de telsos);
T1-T3, segmentos torcicos; A1, A8, os dois
segmentos abdominais terminais; mh, cs, es- Evidncia que o Gradiente da Protena Bicoid Constitui o
truturas da cabea. (de Driever et al. 1990. Centro de Organizao Anterior
Cortesia de W. Driever.)
Em Drosophila, o fentipo do mutante bicoid muito interessante em ternos de
gradientes. Em lugar de ter estruturas anteriores (cron, cabea e trax) seguidas por
estruturas abdominais e um telso, a estrutura do mutante bicoid telso-abdome-
abdome-telso (Figura 14.10). Parece que esses embries carecem de todo morfgeno
necessrio para as estruturas anteriores. Alm disso, pode-se postular que a substn-
cia da qual esses mutantes carecem aquela sugerida por Sander e Kalthoff de ativar
os genes para as estruturas anteriores e desligar genes para as estruturas do telso
(Compare as Figuras 14.10 e 14.5).
Outros estudos reforaram o ponto de vista de que o produto do gene bicoid do
tipo selvagem (bcd) o morfgeno que controla o desenvolvimento anterior. Em
primeiro lugar, bicoid um gene de efeito materno. O RNA mensageiro dos genes
(A)
(B)
(C)
Concentrao da protena Bicoid
Figura 14.11
Gradiente da protena Bicoid no embrio precoce de Drosophila.
(intensidade da mancha)
(A) Localizao do mRNA bicoid na extremidade anterior do

embrio. (B) Gradiente da protena Bicoid logo aps a fecunda-
o. Notar que a concentrao mais alta anteriormente, diminu-
indo posteriormente. Notar tambm que a protena Bicoid est
Tipo selvagem
concentrada nos ncleos do embrio. (C) Escaneamento
densidomtrico do gradiente da protena Bicoid. A curva superi-
Mutante bicoid
or representa o gradiente da protena Bicoid em embries tipo
selvagem. A curva inferior representa a protena Bicoid em em-
bries de mes deficientes em bicoid. (A de Kaufman et al.,
1990; B e C de Driever e Nsslein-Volhard, 1988a; fotografias
cortesia dos autores.) Anterior Posterior
bicoid materno colocado no embrio pelas clulas ovarianas maternas (Frigerio et

al., 1986; Berleth et al., 1988; detalhes no Captulo 22). O RNA bicoid est estritamente
localizado na parte anterior do ocito (Figura 14.11A). Driever e Nsslein-Volhard
(1988a) mostraram que quando a protena Bicoid traduzida desse RNA durante a
clivagem precoce, forma um gradiente com a concentrao mais alta no anterior do
ovo e com nveis de fundo na terceira parte posterior do ovo. Alm disso, essa prote-
na logo fica concentrada nos ncleos embrionrios da poro anterior do embrio
(Figura 14.11B,C; Prancha 14A).
Mais evidncia que a protena Bicoid o morfgeno anterior veio de experimentos
que alteraram a inclinao do gradiente. Dois genes, exuperantia e swallow, so
responsveis pela manuteno da mensagem bicoid no plo anterior do ovo. Em sua
ausncia, a mensagem bicoid difunde mais para o posterior do ovo, e o gradiente da
protena Bicoid aumenta mais vagorosamente (Driever e Nsslein-Volhard, 1988b). O
fentipo produzido por esses dois mutantes semelhante aquele de embries defici-
entes em bicoid, porm, menos severo. Esses embries carecem de suas estruturas
anteriores e tm uma boca e regio torcica estendida. Assim, alterando-se o gradiente
da protena Bicoid, em correspondncia altera-se o destino das regies embrionrias.
A confirmao que a protena Bicoid crucial para o incio da formao da cabea
e do trax veio de experimentos nos quais RNA bicoid purificado foi injetado nos
embries em clivagem precoce (Figura 14.12; Driever et al., 1990). Quando injetado no
anterior de embries deficientes de bicoid (cujas mes no tinham genes bicoid), o
RNA bicoid salvou os embries e fez com que tivessem polaridade ntero-posterior
normal. Alm disso, qualquer local no embrio onde as mensagens bicoid haviam sido
injetadas, tornaram-se cabea. Quando RNA bicoid foi injetado no centro do embrio,
essa regio mediana tornou-se a cabea e as laterais tornaram-se estruturas torcicas.
Se uma grande quantidade de RNA bicoid foi colocada no plo posterior de um
embrio de tipo selvagem (com sua prpria mensagem bicoid no plo anterior), duas
cabeas emergiram, uma em cada terminal. Portanto, o gene bicoid atualmente con-
siderado codificar o morfgeno anterior do embrio de Drosophila. Figura 14.12
A prxima questo que emergiu foi: Como foi conseguida essa localizao do RNA Representao esquemtica do experimento
bicoid? As teorias correntes sero detalhadas no Captulo 22, mas resumidamente, o demonstrando que o gene bicoid codifica o
citoesqueleto anterior ancora o RNA bicoid atravs da regio 3 no-traduzida da morfgeno responsvel pelas estruturas da ca-
mensagem 3. O citoesqueleto posterior tem locais especficos de ancoragem que iro bea em Drosophila. Os fentipos dos embri-
es deficientes em bicoid e tipo selvagem so
mostrados nos lados. Quando embries defi-
cientes em bicoid so injetados com mRNA
bicoid, o local da injeo forma as estruturas
da cabea. Quando o plo posterior de um
embrio de clivagem precoce do tipo selva-
gem injetado com mRNA bicoid, estruturas
mRNA bicoid de cabea se formam em ambos os plos. (Se-
gundo Driever et al., 1990.)
Tipo selvagem Tipo selvagem
Fentipo deficiente Fentipo

em bicoid tipo selvagem
cron Cabea Trax Abdome Telso

Figura 14.13 (A) Estgio 1-6 (?) (B) Estgio 6-7 (C) Estgio 7-8
A importncia das interaes ocito-folculo
Clulas Ncleo do
na formao dos eixos dorsoventral e ntero-
nutrizes Ocito gurken ocito
posterior de Drosophila. (A) O ncleo do
ocito fica localizado no lado posterior do ovo.
Ele localiza um fator (a protena Gurken) que
recebido pelas clulas no terminal posterior da
cmara do ovo. (B,C) Isso faz com que as clu-
las foliculares se diferenciem em clulas foli-
culares posteriores e secretem algum fator que Clulas Ncleo do Clulas Clulas
motiva o ocito a realinhar seus microtbulos. foliculares ocito com foliculares foliculares
possvel que esse fator atue ativando a prote- polares no- mRNA gurken anteriores posteriores
na quinase A (PKA) na membrana celular do comprometidas
ocito (veja Captulo 22). (D) Essa reorganiza- Mensagem gurken
o permite o transporte da protena Oskar e mRNA bcd
(D) Estgio 9 sobre o ncleo
mRNA nanos para o plo posterior do ovo e Clulas foliculares dorsais
retm a mensagem bicoid no plo anterior do
Microtbulos
ovo. Ao mesmo tempo, o ncleo do ocito vi-
aja ao longo dos microtbulos repolarizados Clulas foliculares
em direo regio dorso-anterior do ovo. Aqui, posteriores
o mesmo sinal (a protena Gurken) inicia o eixo
dorsoventral sinalizando essas clulas para tor- mRNA osk
narem-se clulas foliculares dorsais. (Segundo
Gonzles-Reyes et al., 1995.) Clulas foliculares ventrais
reconhecer a 3UTR da mensagem nanos. Assim, a organizao global do citoesque-

leto do ocito crucial para o desenvolvimento. Como ocorre essa organizao do
citoesqueleto? No meio da oognese, o ncleo do ocito est posicionado perto do
plo posterior do ocito (i.e., longe das clulas nutrizes). O ncleo do ocito serve
como um local de coleta para o RNA gurken, uma mensagem que codifica um
homlogo do fator de crescimento epidrmico e cuja sntese no bem compreendida.
A mensagem gurken se coleta diretamente sobre o ncleo, entre o ncleo e as clulas
foliculares dorsais posteriores. Aqui, ele traduzido em protena Gurken e secretado
pelo ocito para aquelas clulas foliculares mais prximas do ncleo as clulas
foliculares posteriores. Isso altera essas clulas foliculares motivando-as a secretar
um fator que induz a reorganizao dos microtbulos do ocito. Esses microtbulos
iniciam a reorganizao do citoesqueleto do ocito permitindo ao ncleo mover-se de
sua posio posterior para a poro dorso-anterior do ocito em crescimento (Figura
14.13; Gonzles-Reyes et al., 1995; Roth et al., 1995). Assim, o primeiro sinal para o eixo
ntero-posterior do embrio vem das clulas foliculares maternas. A distino entre
clulas foliculares anteriores e posteriores no ovrio causa a distino entre o eixo
anterior e posterior do embrio.
A prxima questo emergiu em seguida: Como podia um gradiente da protena
Bicoid controlar a determinao do eixo ntero-posterior? Evidncia recente sugere
que Bicoid age de duas maneiras para especificar o anterior do embrio de Drosophi-
la. Primeiro, agindo como um repressor da formao do posterior. Ela faz isso ligando
e suprimindo a traduo do RNA caudal que encontrado em todo o ovo e no embrio
precoce. O homeodomnio da protena Bicoid liga-se uma regio especfica da regio
3 no-traduzida da mensagem caudal (Dubnau e Struhl, 1996; Rivera-Pomar et al.,
1996). Essa supresso necessria, pois se a protena Caudal for produzida no anteri-
or, cabea e trax no sero formados de maneira apropriada. O segundo modo de
funo de Bicoid a nvel da ativao transcricional. A protena Bicoid parece pene-
trar nos ncleos dos embries em clivagem. Aqui, ela ativa o gene hunchback (hb). A
transcrio de hunchback somente vista na metade anterior do embrio a regio
onde vista a protena Bicoid. Mutantes deficientes em protena Hunchback materna
e zigtica carecem de partes orais e estruturas torcicas. Em fins da dcada de 1980,
dois laboratrios demonstraram, independentemente, que a protena Bicoid se liga e

ativa o gene hunchback (Driever e Nsslein-Volhard, 1989; Struhl et al., 1898). A
protena Hunchback derivada da sntese do novo mRNA hunchback junta-se prote-
na Hunchback sintetizada pela traduo de mensagens materna no anterior do em-
brio. A protena Hunchback, tambm um fator de transcrio, considerada reprimir
genes abominais especficos, permitindo com isso que a regio de expresso hunchback
forme a cabea e o trax. Usando determinao da pegada (footprinting) de DNase
(na qual as protenas so ligadas a um segmento de DNA, DNase adicionada, e o
nico DNA que permanece aquele protegido pela protena ligante de DNA), os
pesquisadores encontraram que a protena Bicoid se liga a cinco stios na regio
promotora a montante do gene hunchback. Todos esses stios tm a seqncia
consensual 5-TCTAATCCC-3.
Porm, ligao no significa necessariamente ativao. A ativao desse gene
pela protena Bicoid foi demonstrada fundindo esses stios promotores de hunchback
com genes reprteres da acetiltransferase cloroanfenicol (CAT) e injetando esses
genes em embries precoces de Drosophila. Em todos os casos, a protena Bicoid
foi necessria para ativar os genes reprteres. Quando injetada em embries defici-
entes em bicoid no se produziu CAT (Figura 14.14). Tambm, enquanto alguma
ativao foi vista quando somente uma das cinco seqncias ligantes de Bicoid
estava presente, a expresso total do gene reprter (e presumivelmente de
hunchback) apareceu quando trs dos cinco stios estavam presentes. Assim, o
gradiente da protena Bicoid provavelmente atua ativando a transcrio do gene
hunchback na poro anterior do embrio.
A protena Hunchback tambm trabalha com a Bicoid gerando o padro anterior do
embrio. Driever e colaboradores (1989) predisseram que ao menos um outro gene
anterior alm de hunchback deve ser ativado por Bicoid. Primeiro, delees de
hunchback produzem somente alguns dos defeitos observados no fentipo mutante
bicoid. Segundo, conforme vimos nos experimentos com swallow e exuparentia,
somente nveis moderados da protena Bicoid so necessrios para ativar a formao
do trax (i.e., expresso gnica hunchback), mas a formao da cabea necessita de
concentraes mais altas. Driever et al. (1989) predisseram que promotores tais como
o gene gap especfico da cabea teriam stios de ligao de baixa afinidade para a
protena Bicoid. Esse gene somente seria ativado em concentraes extremamente
altas da protena Bicoid - isto , perto da extremidade anterior do embrio. Desde
ento, trs genes gap da cabea dependentes de concentraes muito altas da prote-
na Bicoid para sua expresso foram descobertos (Cohen e Jrgens, 1990; Finkelstein
e Perrimon, 1990; Grossniklaus et al., 1994). Os genes buttonhead (bth), empty spiracles
(sem) e orthodenticle (otd) so necessrios para especificar progressivamente as
Stios ligantes do promotor hunchback Gene transferido para:

para o promotor bicoid Embries deficientes
em bicoid
Embries tipo selvagem
Figura 14.14
Influncia da protena Bicoid na ativao do gene hunchback. Dife-
rentes regies do promotor hunchback foram fundidas com o gene
reprter CAT e injetadas em outros embries tipo selvagem, ou
embries de mes deficientes em bicoid. Quanto mais stios ligantes
de Bicoid havia na regio promotora, tanto mais eficaz era sua
expresso nos embries de tipo selvagem. Em embries sem prote-
na Bicoid, nenhuma transcrio resultou de qualquer dos genes
Gene movimentados pelo promotor hunchback. (Segundo Driever e
CAT Atividade CAT Nsslein-Volhard, 1989.)
regies anteriores da cabea. Em adio sua necessidade por nveis altos de Bicoid
para ativao, esses genes tambm requerem a presena da protena Hunchback para
serem transcritos (Simpson-Brose et al., 1994; Reinitz et al., 1995). As protenas Bicoid
e Hunchback atuam sinergicamente como intensificadores desses genes da cabea
promovendo suas transcries.
O Centro de Organizao Posterior:

Localizando e Ativando o Produto de nanos
O centro de organizao posterior definido pelas atividades do gene nanos (Lehmann

e Nsslein-Volhard, 1991; Wang e Lehmann, 1991; Wharton e Struhl, 1991). O RNA
nanos produzido no ovrio e transportado para o vulo, onde se liga na regio
posterior (a mais distante das clulas nutrizes ovarianas). Os produtos de vrios
outros genes (oskar, valois, vas, staufen e tudor) os mesmos produtos gnicos que
colocam o determinante do plasma germinativo no plasma do plo posterior (veja
Captulo 13) so necessrios para colocar RNA nanos na parte posterior do ovo.* Se
nanos ou qualquer desses genes de efeito materno esto ausentes na me, no h
formao de abdome embrionrio (Lehmann e Nsslein-Volhard, 1986; Schpbach e
Wieschaus, 1986).
A mensagem nanos traduzida em protena logo aps a fecundao, tal como
acontece com a mensagem bicoid. Tautz (1988) mostrou que durante a formao nor-
mal do abdome, o produto protico do gene nanos reprime a traduo do RNA
hunchback (veja Figura 14.7). Esse RNA hunchback est inicialmente presente em
todo o embrio, embora mais dele possa ser produzido a partir de ncleos zigticos se
forem ativados pela protena Bicoid. Assim, a combinao das protenas Nanos e
Bicoid causa um gradiente de protena Hunchback atravs do ovo (Figura 14.15). A
protena Bicoid ativa a transcrio do gene hunchback na parte anterior do embrio,
enquanto a protena Nanos inibe a traduo do RNA hunchback na parte posterior do
embrio. Se o produto do gene nanos no estivesse presente, a protena Hunchback
seria fabricada em todo o embrio, e presumivelmente inibiria a expresso de genes
gap geradores do abdome, como knirps (Hlskamp et al., 1989; Irish et al., 1989;
Struhl, 1990). O gene hunchback, portanto, parece ser o ponto focal sob regulao
tanto do centro organizador anterior como do posterior, h muito conhecido existir no
desenvolvimento dos insetos. Esses estudos de funes nanos e bicoid podem agora
explicar experimentos embriolgicos. Luz ultravioleta ou tratamento com RNase iria
destruir RNA bicoid, causando a perda de estruturas anteriores e a duplicao do
abdome; procedimentos de ligao podem bloquear o espalhamento de Nanos, permi-
tindo assim o acmulo de nveis mais altos da protena Hunchback.
Embora Nanos seja considerado o principal morfgeno posterior, duas outras
protenas, Pumilio e Caudal, tambm so importantes para a construo dos segmen-
tos posteriores da Drosophila. A protena Nanos no se liga diretamente mensagem
hunchback. Em seu lugar, Pumilio, uma protena encontrada por todo o embrio, liga-
se a 3UTR da mensagem hunchback formando um stio de ligao ao qual Nanos
pode se ligar (Barker et al., 1992; Murata e Wharton, 1995). A ligao de Nanos crtica
para a represso da traduo da mensagem hunchback. A protena Caudal tambm
importante para a formao de estruturas posteriores. Embora embries possam
*Tal como a colocao da mensagem bicoid, a localizao da mensagem nanos determinada

pela sua regio 3 no-traduzida. Se a 3UTR bicoid for colocada sobre a regio codificadora do RNA
nanos, a mensagem nanos ser colocada na parte anterior do ovo. Quando o RNA for traduzido, a
protena Nanos ir inibir a traduo dos mRNAs bicoid e hunchback e o embrio formar dois
abdomens um no anterior do embrio e um no posterior (Gavis e Lehmann, 1992). A localizao
do RNA nanos ir, em ltima anlise, depender das interaes entre o ocito e as clulas foliculares
vizinhas que localizam a mensagem oskar no plo posterior e localizam o RNA bicoid no plo
anterior (veja Captulo 22).
(A) MATERNOS Figura 14.15

Fatores de transcrio
Converso de gradientes maternos em expresso zigtica do gene gap.
(A) Os gradientes dos fatores de transcrio maternos Bicoid, Caudal
e Hunchback regulam a transcrio dos genes gap. As protenas
Hunchback e Caudal vm de ambas mensagens maternas e nova trans-
crio zigtica. (B) A concentrao das protenas Bicoid, Hunchback
e Caudal crtica na especificao das posies onde os genes gap so
transcritos. Essas protenas se difundem, e a interao entre elas ser
crtica para ativao da transcrio dos genes pair-rule. Nos dois ter-
minais, a interao entre Torso e Torsolike ativa os genes gap tailless
e huckebein. (Segundo Rivera-Pomar e Jckle, 1996.)
ZIGTICOS
cron Cabea Trax Abdome Telso
formar segmentos abdominais na ausncia de Caudal, esses segmentos so freqen-

temente fundidos uns aos outros ou esto parcialmente ausentes (MacDonald e Struhl,
1986; Mlodzik e Gehring, 1987).
O Grupo Gene Terminal

Terminal
Quando ambos os centros de organizao, anterior e posterior, forem no-funcionais,

um embrio pode ainda desenvolver algum padro ntero-posterior (Nsslein-Volhard
et al., 1987). Quando fmeas so tornadas duplamente mutantes tanto para o morfgeno
anterior como para o posterior, seus embries produzem dois telsos, um em cada
terminal do embrio. Assim, existe um terceiro conjunto de genes de efeito materno
que ajudam a criar os extremos do eixo ntero-posterior. Mutaes nesses genes
terminais resultam na perda das extremidades no-segmentadas do organismo: o cron
anterior e o telso posterior. Na ausncia dos produtos desses genes, a poro seg-
mentada do embrio se expande at as extremidades (Degelmann et al., 1986; Klingler
et al., 1988). Portanto, o conjunto de genes terminais define os limites das partes
segmentadas do corpo.
O gene crtico aqui parece ser torso, um gene codificando uma tirosina quinase
receptora (veja Figura 14.6). O RNA torso sintetizado por clulas ovarianas, deposi-
tado no ocito e traduzido aps a fecundao. A protena transmembrana Torso no
est restrita espacialmente aos terminais do ovo, mas est distribuda uniformemente
pela membrana plasmtica (Casanova e Struhl, 1989). Uma mutao dominante de
torso, que proporciona atividade constitutiva ao receptor, converte toda a metade
anterior do embrio em um cron e toda a metade posterior em um telso. Assim, Torso
precisa normalmente ser ativada somente nos terminais do ovo. Realmente, Stevens e
seus colegas (1990) mostraram que a protena Torso ativada por clulas foliculares
em cada plo do embrio. O ativador da protena Torso provavelmente Torsolike,
Figura 14.16 Torsolike

Modelo hipottico da sinalizao de Torso. A prote-
na Torsolike, secretada pelas clulas foliculares an-
teriores e posteriores ligada pelo receptor Torso RAS
Extracelular
(que encontrado por toda a membrana do ocito).
Ligao do ligante conduz ativao de torso e
autofosforilao em resduos especficos de tirosina. Citoplasma
Os grupos fosfotirosina sero reconhecidos pelo Ativao
domnio da protena Drk. O domnio SH3 da prote- de RAS
na Drk liga-se protena SOS, com isso ativando a
GTPase da protena Ras. Isso ir ativar a protena
Ativao
Raf que o primeiro membro de uma cascata de serina/ de Torso
treonina. Essa cascata em geral funciona fosforilando
um fator de transcrio permitindo-lhe com isso en- MAP quinase quinase
trar ou funcionar no ncleo. Esse fator no foi ainda
identificado. O resultado final a estimulao da trans-
crio dos genes gap huckebein e tailless. (Segundo
Duffy e Perrimon, 1994.) MAP quinase
Fator de transcrio
Transcrio dos genes

huckebein e tailless
pois a mutao de perda-de-funo do gene torsolike cria um fentipo quase idntico

ao produzido por torso. O gene torsolike expresso nas clulas foliculares anteriores
e posteriores, e a protena Torsolike secretada permanece prxima dessas clulas
(Martin et al., 1994). Stevens e colegas mostraram que quando as clulas foliculares
nos plos da cmara do ovo so deficientes no gene torsolike (mesmo quando outras
clulas foliculares expressam o alelo tipo selvagem desse gene), o embrio resultante
ter o fentipo semelhante quele de torso. Parece que a protena Torsolike secretada
por clulas foliculares e que ativa a protena Torso na membrana do ocito.
A ativao da tirosina quinase do receptor de Torso envolve a autofosforilao de
resduos de tirosina e a subseqente ativao das protenas Ras e Raf (Figuras 14.15
e 14.16; Duffy e Perrimon, 1994). Essas protenas ativam a cascata da quinase MAP
(veja Captulo 3), que (de uma maneira ainda desconhecida) estimula a transcrio dos
genes gap, tailless e huckebein. Esses genes em seguida especificam os terminais do
embrio. A distino entre os terminais anterior e posterior depende da presena de
Bicoid. Se os genes terminais agem sozinhos, clulas se diferenciam em telsos. Porm,
se Bicoid estiver tambm presente, as regies formam um cron (Pignoni et al., 1992).
O eixo ntero-posterior do embrio portanto especificado por trs conjuntos de
genes: aqueles que definem o centro de organizao anterior, aqueles que definem o
centro de organizao posterior, e aqueles que definem a regio limtrofe terminal. O
centro de organizao anterior est localizado no terminal anterior do embrio e age
atravs de um gradiente da protena Bicoid que ativa os genes gap especficos do
anterior e suprime genes gap especficos do posterior. O centro de organizao
posterior est localizado no plo posterior e age atravs da formao da protena

Nanos, que transportada para a regio abdominal. Aqui, Nanos inibe o inibidor da
expresso gnica especfica do abdome e ativa aqueles genes que formam o abdome.
Os limites do cron e do telso so definidos pelo produto do gene torso, que ativado
nas extremidades do embrio.
Os genes da segmentao
Uma Viso Panormica
O compromisso do destino celular em Drosophila parece ser um processo de duas

etapas: especificao e determinao (Slack, 1983). Precocemente no desenvolvimen-
to, o destino de uma clula depende de sinais ambientais tais como aqueles fornecidos
pelos gradientes j mencionados. Essa especificao do destino celular flexvel e
ainda pode ser alterada em resposta a sinais ambientais. Finalmente, as clulas iro
sofrer uma transio desse tipo de comunicao frouxa para uma determinao
irreversvel. Aqui, o destino da clula tornou-se intrnseco da clula.* A transio de
especificao para determinao em Drosophila mediada pelos genes de segmentao
(segmentation genes). Esses genes dividem o embrio precoce em uma srie repetitiva
de primrdios segmentares ao longo do eixo ntero-posterior. Mutaes em genes de
segmentao causam ao embrio tornar-se carente de certos segmentos ou partes de
segmentos; essas mutaes demonstram a existncia de trs classes de genes de
segmentao (Tabela 14.2). Freqentemente essas mutaes afetam parasegmentos,
regies do embrio separadas por engrossamentos mesodrmicos e sulcos
ectodrmicos e que dividem o embrio em 14 regies (Martinez-Arias e Lawrence,
1985). Os parasegmentos do embrio no se transformam nos segmentos da larva ou
do adulto. Ao invs disso, incluem a parte posterior do segmento anterior e a poro
anterior do segmento que o sucede (Figura 14.17). Embora os segmentos sejam as
principais divises anatmicas do plano corporal da larva e do adulto, esses segmen-
tos so construdos de acordo com regras que usam o parasegmento como a unidade
bsica da construo.
* Aficionados da teoria da informao iro reconhecer que o processo pelo qual a informao
ntero-posterior em gradientes morfogenticos transferida para domnios discretos de genes
seletores hometicos representa uma transio de especificao analgica para digital. Especifica-
o analgica, determinao digital. Isso permite que a informao transitria dos gradientes no
blastoderma sincicial seja estabilizada de modo a poder ser utilizada muito mais tarde no desenvol-
vimento (Baumgartner e Noll, 1990).
TABELA 14.2 Principais locais afetando o padro de segmentao em Drosophila
Categoria Locais Categoria Locais
Genes gap Krppel (Kr) Genes pair-rule fushi tarazu (ftz)

knirps (kni) (secundrios) odd-paired (op)
hunchback (hb) odd-skipped (odd)
giant (gt) sloppy-paired (slp)
tailless (tll) paired (prd)
huckebein (hkb)
buttonhead (btd) Genes de polaridade engrailed (en)
empty spiracles (ems) segmentar wingless (wg)
cubitus interruptusD (ciD)
Genes pair-rule orthodenticle (otd) hedgehog (hh)
(primrios) hairy (h) fused (fu)
even-skipped (eve) armadillo (arm)
runt (run) patched (ptc)
gooseberry (gsb)
pangolin (pan)
Segmentos
Comportamentos
Parasegmento
Figura 14.17
Segmentos e parasegmentos. A e P representam os compartimentos anterior e posterior
dos segmentos. Os parasegmentos so mudados para um compartimento frente. Ma, Mx
e Lb representam trs dos segmentos da cabea (mandibular, maxilar e labial), os segmen-
tos T so torcicos, e os segmentos A so abdominais. Os parasegmentos esto numerados
de 1 at 14. Abaixo do mapa esto os limites da expresso gnica observada pela hibridi-
Embrio zao in situ do cDNA radioativo do gene pair-rule fushi tarazu (ftz). (Segundo Martinez-
Embrio mais Larva Arias e Lawrence, 1985.)
precoce tardio Larva (mutante
(normal) (normal) (normal) letal)
rea da rea da Existem trs classes de genes de segmentao, cada classe expressa aps outra
ao gnica ao gnica Bandas de
dentcula (Figura 14.3). A transio de um embrio caracterizado por gradientes de morfgenos
para um embrio tendo unidades distintas realizada por produtos dos genes gap. Os
genes gap so ativados ou reprimidos pelos genes de efeito materno, e dividem o
embrio em largas regies contendo vrios primrdios parasegmentares. O gene
krppel, por exemplo, expresso primeiramente nos parasegmentos 4-6 no centro do
embrio de Drosophila (Figuras 14.18A e 14.19; Prancha 14A); a ausncia de krppel
faz com que o embrio no apresente essas regies. Os produtos proticos dos genes
(A) Gap: Krppel gap interagem com as suas protenas vizinhas codificadas por genes gap e ativam a
transcrio de genes pair-rule. A transcrio desses genes subdivide os largos dom-
nios do gene gap em parasegmentos. Mutaes dos genes pair-rule (como em fushi
tarazu; Prancha 14C) usualmente deleta pores de cada segmento alternante. As
Figuras 14.18 e 14.20 comparam o morfologia do embrio de tipo selvagem com aquela
do mutante fushi tarazu. Finalmente, os genes de polaridade segmentar so respons-
veis pela manuteno de certas estruturas repetitivas dentro de cada segmento. Mu-
taes nesse grupo de genes faz com que uma poro de cada segmento seja deletada
e substituda por uma estrutura em imagem espelhar de outra poro do segmento. Por
exemplo, em mutantes engrailed, as pores posteriores de cada segmento so subs-
(B) pair-rule: fushi tarazu titudas por duplicatas da regio anterior do segmento subseqente (Figura 14.18C;
Prancha 14D). Assim, os genes de segmentao so fatores de transcrio que tomam
os gradientes do embrio de clivagem precoce e transformam o embrio em uma peri-
dica estrutura parasegmentar.
Figura 14.18
Trs tipos mutantes de padres de segmentao. O painel esquerda mostra o embrio em estgio
de clivagem, com a regio onde um determinado gene normalmente transcrito no embrio tipo
selvagem mostrado em cores. Nos trs painis direita, as reas coloridas foram deletadas
(C) Polaridade segmentar: engrailed medida que esses mutantes se desenvolvem. (Segundo Mange e Mange, 1990.)
Aps os limites parasegmentares terem sido produzidos, os genes pair-rule e gap

interagem para regular os genes hometicos que determinam a identidade de cada
segmento. No fim do estgio de blastoderma celular, a cada primrdio segmentar foi
atribuda uma identidade individual por sua constelao nica de produtos de genes
gap, pair-rule e hometicos (Levine e Harding, 1989).
Os Genes de gap Figura 14.19

Expresso do gene Krppel no centro e no
Os genes gap foram originalmente definidos por uma srie de mutantes cujos embri- posterior do embrio de Drosophila (setas).
es no tinham grupos de segmentos consecutivos (Nsslein-Volhard e Wieschaus, Um embrio de 25 horas foi hibridizado com
1980). Conforme mostra a Figura 14.21, delees causadas pelos genes hunchback cDNA que reconhecia acumulaes de mRNA
(hb), Krppel (Kr) e knirps (kr) cobrem toda regio segmentar do embrio da Krppel. (de Levine e Harding, 1989, cortesia
de M. Levine.)
Drosophila. O gene gap giant (gt), superpe-se a esses trs genes e os fentipos
dos mutantes tailless e huckebein deletam pores dos terminais no-segmenta-
dos do embrio.
A expresso desses genes dinmica. Em geral, h um baixo nvel de atividade
transcricional atravs de todo o embrio que se define em discretas regies de alta
atividade medida que a clivagem continua (Jckle et al., 1986). O elemento crtico
parece ser a expresso da protena Hunchback, que ao fim do ciclo 12 da diviso
nuclear, est em nveis altos na parte anterior do embrio e em seguida forma um
gradiente ngreme por 15 ncleos. O ltimo tero do embrio no tem expresso de
detectvel Hunchback. Os padres de transcrio dos genes gap anterior so
iniciados pelas diferentes concentraes das protenas Hunchback e Bicoid.
(A)
(B)
Pr-ceflico
Maxilar
Figura 14.20
Defeitos constatados no embrio ftz-. (A) Micrografia eletrnica
de varredura de um embrio do tipo selvagem, visto lateralmente.
(B) O mesmo estgio em um embrio ftz-. As linhas brancas
conectam as pores homlogas de uma banda germinativa seg-
mentada. (C) Diagrama da segmentao embrionria do tipo selva-
Clipeolabro
gem. As regies sombreadas mostram os parasegmentos da banda
Labial
germinativa que esto faltando no embrio ftz-. (Segundo Kaufman
(C) Mandbula et al., 1990, fotografias cortesia de T. Kaufman.)
hunchback
krppel
Knirps
tailless
giant
Figura 14.21
Delees segmentares em mutantes de genes gap. A tabela sob as fotografias indica por
barras brancas regies segmentares faltantes. Em mutantes hunchback, a regio estendida
(sobreamento mais claro) quando tanto a me como o zigoto no tm atividade do gene
hunchback. Os reais domnios da expresso hunchback no foram completamente expres-
sos. (Segundo Gaul e Jckle, 1990; expresso huckebein segundo Weigel et al., 1990;
fotografias cortesia de E. Wieschaus.)
Altos nveis da protena Hunchback induzem a expresso de giant, enquanto os

transcritos de Krppel aparecem sobre a regio onde Hunchback comea a decli-
nar (veja Figura 14.15). Tambm, altos nveis da protena Hunchback previnem a
transcrio dos genes gap posterior (tal como knirps) na parte anterior do em-
brio (Struhl et al., 1992).
No posterior, a protena Hunchback encontra-se em nveis baixos ou ausente.
Considera-se que um gradiente da protena Caudal, mais alto no plo posterior,
seja responsvel pela ativao dos genes gap abdominais knirps e giant. O gene
giant tem dois modos de ativao um para sua banda de expresso anterior, e um
para a banda de expresso posterior (veja Figura 14.15; Rivera-Pomar, 1995; Schultz
e Tautz, 1995).
Aps a colocao inicial dessas protenas pelos genes de efeito materno e
Hunchback, elas se estabilizam e so mantidas por interaes entre os diferentes
genes gap*. Por exemplo, a expresso do gene Krppel regulada negativamente
no seu limiar anterior pela protena Hunchback, e no seu limiar posterior pelas
protenas Knirps e Tailless (Jckle et al., 1986; Harding e Levine, 1988; Hoch et al.,
1992). Se a atividade de Hunchback est faltando, o domnio da expresso de
Krppel estende-se anteriormente. Se a atividade Knirps estiver faltando, a ex-
presso gnica Krppel estende-se mais posteriormente. Os limites entre as regi-
es de transcrio dos genes gap so provavelmente criados por represso m-
tua. Tal como as protenas Giant e Hunchback podem controlar o limite anterior da
transcrio de Krppel, assim tambm Krppel pode determinar os limites poste-
riores da transcrio de giant e hunchback. Se um embrio no tiver o gene Krppel,
a transcrio de hunchback continua para dentro da rea usualmente reservada
para Krppel (Jckel et al., 1986; Kraut e Levine, 1991). Essas inibies formado-
ras de limites so consideradas ser mediadas diretamente pelos produtos dos
genes gap, porque todos os principais genes gap (hb, gt, Kr e kni) codificam
protenas ligantes de DNA que podem ativar ou reprimir a transcrio (Kniple et
al., 1985; Gaul e Jckle, 1990; Capovilla et al., 1992).
Alm do mais, essas interaes so altamente especficas e o produto de um
gene gap pode se ligar aos promotores de outros genes gap. A determinao da
pegada (footprinting) de DNase I mostra que a protena codificada pelo gene
Krppel tipo selvagem liga-se regio promotora do gene hunchback (que ele
inibe) e regio promotora do gene knirps (que ele estimula). A regio promotora de
knirps tambm reconhecida pelo produto protico do gene tailless, que inibe a
transcrio de knirps. A protena Hunchback (alm de reconhecer o promotor de
Krppel) tambm reconhece seu prprio promotor, sugerindo que hunchback est
envolvido na regulao de sua prpria expresso (Pankratz et al., 1990; Stanojevc et
al., 1989; Treisman e Desplan, 1989).
Os Genes pair-rule
A primeira indicao de segmentao no embrio da mosca vem quando os genes

pair-rule so expressos durante o dcimo-terceiro ciclo da diviso. Os padres de
transcrio desses genes so marcantes porque cada um divide o embrio em reas
precursoras do plano do corpo segmentado. Como pode ser visto na Figura 14.22 e
Prancha 14C, uma faixa vertical de ncleos (as clulas esto apenas comeando a se
formar) expressa esse gene, seguida por outra faixa de ncleos que no o expressa, e
em seguida por outra faixa que o faz. O resultado um padro de faixa de zebra ao
longo do eixo ntero-posterior, dividindo-o em 15 subunidades (Hafen et al., 1984).
Oito genes atualmente so conhecidos como capazes de dividir o embrio precoce
desse modo; eles esto listados na Tabela 14.2. importante notar que nem todos os
ncleos expressam os mesmos genes pair-rule. Realmente, em cada parasegmento,
cada fila de ncleos provavelmente tem sua prpria constelao de genes pair-rule
que a distingue de qualquer outra fila.
Como so instrudos alguns ncleos do embrio de Drosophila a transcrever
um determinado gene, enquanto seus vizinhos so instrudos para no o fazer? A
resposta parece vir da distribuio de produtos proticos dos genes gap. En-
quanto o RNA de cada um dos genes gap tem uma distribuio muito discreta que
*As interaes entre genes e produtos de genes so facilitadas pelo fato de que essas reaes
ocorrem dentro de um sinccio. As membranas celulares ainda no se formaram.
(A) Figura 14.22

Regies promotoras especficas do gene even-skipped (eve) controlam bandas de transcrio
especficas no embrio. (A) um gene -galactosidase reprter foi fundido regio do promotor
even-skipped e inseridos no genoma da mosca. A regio promotora completa produz as sete
faixas normais de transcrio. (B) Se somente os 480 pares de bases mais proximais esto
presentes, somente se formam as faixas 2, 3 e 7. (C) Mapa parcial do promotor eve, mostrando as
regies responsveis pelas vrias faixas e pela auto-regulao. (Fotografias cortesia de S. Carroll
e M. Levine.)
(B)
(C)
Faixa #4, #5, #6 Faixa #1 Auto-regulao Faixa #3 Faixa #2 + #7
define projetando ou ligeiramente superpondo regies de expresso, os produtos

proticos desses genes estendem-se mais extensamente. Na realidade, eles se
superpem por ao menos 8-10 ncleos (que nesse estgio contam com dois a trs
segmentos primordiais). Isso foi demonstrado de uma maneira marcante por
tanojevc e colaboradores (1989). Esses autores fixaram blastodermas
celularizantes, coraram a protena Hunchback com um anticorpo contendo um
corante vermelho, e simultaneamente coraram a protena Krppel com anticorpo
contendo um corante verde. As regies celularizantes que continham ambas pro-
tenas ligaram ambos anticorpos e foram coradas de amarelo brilhante (Prancha
14B). De maneira semelhante, a protena Krppel superps-se protena Knirps
na regio posterior (Pankratz et al., 1990).
Trs genes so conhecidos como os genes pair-rule primrios. Esses genes
hairy, even-skipped e runtso essenciais para a formao do padro peridico
e so os genes diretamente controlados pelas protenas Gap. Os promotores dos
genes pair-rule primrios so reconhecidos por protenas do gene gap, e acredi-
ta-se que as diferentes concentraes dessas protenas determinam se o gene vai
ser transcrito ou no. Os promotores desses genes so freqentemente
moduladores: o controle sobre cada faixa est localizado em uma discreta regio
do DNA. Por exemplo, uma deleo particular da regio promotora do gene even-
skipped previne a formao da terceira faixa even-stripped, enquanto uma deleo
pouco mais abaixo causa a perda da segunda faixa even-skipped (Figura 14.23). A
determinao da pegada da DNase I dessa regio final mostra que ela contm
seis stios para a protena Krppel, trs para Hunchback e cinco para Bicoid.
Evidncia gentica mostra que se alguns desses stios so deletados, a posio
da segunda faixa se movimenta. tanojevc e colaboradores (1991) mostraram que
a segunda faixa even-skipped reprimida tanto pelas protenas Giant como Krppel
e ativada pela protena Hunchback, em baixas concentraes de Bicoid. Esse mo-
delo mostrado na Figura 14.23B,C. A regio responsvel pela terceira faixa de
transcrio even-skipped contm 20 stios de ligao Hunchback e nenhum stio
para a protena Krppel (tanojevc et al., 1989). Essa situao permitir ao stio
responder a nveis muito baixos do produto do gene hunchback. Protenas Gap
ativam a transcrio de alguns genes pair-rule enquanto reprimem transcrio de
outros. O resultado o padro de faixas de transcrio que emergem medida que
o embrio se desenvolve.
Uma vez iniciado por protenas Gap, o padro de transcrio dos genes primrios
pair-rule fica estabilizado por suas interaes (Levine e Harding, 1989). Os genes
primrios pair-rule tambm formam o contexto que permite ou inibe a expresso dos
(A) hunchback Figura 14.23

Hiptese para a formao da segunda faixa de transcrio do gene
krppel Knirps giant even-skipped. (A) O gene ativo onde concentraes da maioria das
protenas Gap baixa. (B) Assim, os limites da transcrio de eve
giant so determinados por concentraes altas dessas protenas. Diferen-
tes elementos intensificadores contm seqncias de ligao para
diferentes fraes. No intensificador para a segunda banda de trans-
crio eve, a ligao da protena Hunchback estimula a transcrio.
(C) Elementos intensificadores para a regulao da faixa 2, contendo
(B) Faixas eve
seqncias ligantes para protenas Krppel, Giant, Bicoid e
Hunchback. Notar que quase cada stio ativador est intimamente
ligado a um stio repressor, sugerindo interaes competitivas nes-
sas posies. (A e B segundo Reinitz e Sharp, 1995; C segundo
tanojevc et al., 1991.)
(C) Bicoid Hunchback

Ativadores
Repressores
Giant Krppel
genes pair-rule secundrios de ao tardia. Um desses genes pair-rule secundrios

o fushi tarazu (ftz, japons demasiadamente poucos segmentos). No comeo do
ciclo 14, o RNA ftz e a protena so vistos atravs de toda a regio segmentada do
embrio. No entanto, medida que as protenas dos genes pair-rule primrios come-
am a interagir com o promotor ftz, o gene ftz reprimido em certas faixas de ncleos
para criar as regies inter-faixas. Nesse perodo, a protena Ftz interage com seu pr-
prio promotor para estimular mais transcrio do gene ftz (Figura 14.24; Edgar et al.,
1986; Karr e Kornberg, 1989; Shier e Gehring, 1992).
Os Genes de Polaridade Segmentar (segmentation genes)

(A)
At aqui, nossa discusso identificou interaes entre molculas dentro do embrio

sincicial. Porm, uma vez formadas as clulas, interaes passam a acontecer entre
elas. Essas interaes intercelulares so mediadas pelos genes da polaridade seg-
mentar e realizam duas tarefas importantes. Primeiro, reforam a periodicidade (B)
parasegmentar estabelecida por fatores transcricionais anteriores. Em segundo lu-
gar, atravs dessa sinalizao celular, os destinos das clulas so estabelecidos
dentro de cada parasegmento.
Muitos genes de polaridade segmentar codificam protenas que so constituin- (C)
tes de trajetos sinalizadores celulares. Por exemplo, Wingless e Hedgehog so pro-
tenas secretadas que agem como ligantes, enquanto Patched uma protena
transmembrana que age como receptor (para Hedgehog). Outros genes de polarida-
de segmentar, como disheveled, zeste white-3 e fused, codificam transdutores de (D)
sinais (veja Captulo 3), e alguns, como engrailed, armadillo e cubitus interruptus,
so considerados fatores de transcrio ativados por essas trajetrias. Mutaes
nesses genes de polaridade segmentar levam a defeitos na segmentao e padroni-
zao atravs do parasegmento.
(E)
Figura 14.24
Transcrio do gene ftz. (A-D) No comeo do ciclo 14, h baixa transcrio em cada ncleo da
regio segmentada do embrio de Drosophila. Dentro dos prximos 30 minutos, o padro da
expresso se altera enquanto a transcrio de ftz intensificada em certas regies (que formam as
faixas) e reprimida nas regies entre as faixas. (E) Dupla marcao dos transcritos even-skipped
(bandas mais escuras) e fushi tarazu (bandas mais claras), mostrando que ftz expresso entre a
bandas. (A-D segundo Karr e Kornberg, 1989; E cortesia de M. Levine.)
O desenvolvimento de padres normais se baseia no fato de que alguns desses

genes so transcritos em domnios espaciais especficos (Prancha 14D). Por exemplo,
wingless, engrailed e hedgehog so cada um expressos em 14 bandas distintas da
clula. Em particular, wingless expresso numa faixa de clulas anteriormente adjacen-
te uma faixa de clulas que co-expressam engrailed e hedgehog. A expresso err-
nea de qualquer desses genes destri o padro do parasegmento. O estabelecimento
desses padres restritos de expresso determinado pelas protenas par-rules. A
transcrio do gene wingless reprimida por protenas Fushi tarazu e Even-skipped e
estimulada por ativadores gerais encontrados em todo o embrio. Ao mesmo tempo, o
gene engrailed est ativo nas clulas contendo a protena Fushi tarazu (que estimula
a transcrio de engrailed) e carente de Odd-skipped (que inibe tal transcrio). Isso
faz com que o wingless seja transcrito somente na clula diretamente anterior s
clulas onde engrailed transcrito (Figura 14.25 A).
Uma vez que a expresso de wingless e engrailed estiver estabelecida em clulas
adjacentes, esse padro tem que ser mantido para que seja conservada a periodicida-
de parasegmentar do plano corporal, estabelecida pelos genes pair-rule. Deve ser
lembrado que os mRNAs e as protenas envolvidos na iniciao desses padres so
de vida curta, mas que esses padres tm que ser mantidos depois que os iniciadores
de padro no estiverem mais sendo sintetizados. A manuteno desses padres
regulada por interaes entre as clulas expressando wingless e aquelas expressando
engrailed. A protena Wingless, secretada por clulas expressando wingless, sinaliza
para clulas adjacentes, ligando-se protena transmembrana D-Frizzled-2 (veja Figu-
ra 3.38; Bhanot et al., 1996). Isso ativa o transdutor de sinais Disheveled, que ir
causar a reduo da atividade da quinase Zeste white-3. Acredita-se que a diminuio
da regulao dessa quinase permite a entrada da protena no-fosforilada Armadillo
(-catenina) no ncleo, onde age como um fator de transcrio regulando positiva-
mente e, assim, mantendo a expresso do gene engrailed (Siegfried et al., 1994).
A ativao inicia outra poro dessa trajetria recproca. A protena Engrailed
ativa a transcrio do gene hedgehog (hh). Esse gene codifica uma protena secretada
que ativa uma trajetria sinalizadora de transduo nas clulas que esto respon-
dendo anteriormente, levando manuteno da transcrio de gene wingless na
clula vizinha. O resultado um enlace recproco pelo qual as clulas sintetizando
Engrailed secretam a protena Hedgehog, que mantm a expresso do gene wingless
na clula vizinha, enquanto a clula secretora de Wingless conduz expresso dos
genes engrailed e hedgehog em outra clula (Heemskerk et al., 1991; Ingham et al.,
1991; Mohler e Vani, 1992). Dessa maneira, o padro de transcrio dessas duas
clulas permanece estabilizado.
A segunda tarefa realizada pelos genes de polaridade segmentar estabelecer os
destinos celulares atravs de cada parasegmento. Isso no est completamente com-
preendido, mas o grupo de clulas estabilizadas flanqueando o limiar parasegmentar
expressando wingless e hedgehog, respectivamente, essencial. Isso pode ser obser-
vado na epiderme dorsal, onde as filas de clulas produzem diferentes estruturas
cuticulares, dependendo de suas posies dentro do segmento. A 1a fila consiste de
grandes dentculos pigmentados. Posteriormente a essas clulas, a 2a fila produz uma
cutcula epidrmica lisa. As prximas duas filas tm um 3o destino, produzindo peque-
nos plos grossos; e so seguidas por vrias filas de clulas que adotam o 4o destino,
que o de produzir plos finos.
As clulas expressando wingless ficam dentro da regio que diferencia os plos
finos, enquanto as clulas expressando hedgehog esto prximas das clulas da 1a
fila. Os destinos das clulas podem ser alterados experimentalmente, aumentando ou
diminuindo os nveis das protenas Hedgehog ou Wingless (Heemskerek e DiNardo,
1994; Bokor e DiNardo, 1996; Porter et al., 1996). Por exemplo, se hedgehog for coloca-
do num promotor de choque trmico e os embries forem criados numa temperatura
que ativa o gene hh, mais protena Hh ser produzida, e as clulas normalmente mos-
trando destinos da 3a fila tornar-se-o clulas do segundo tipo. As filas de clulas da
Figura 14.25
Modelo para a transcrio dos genes de po-
laridade segmentar engrailed (en) e wingless
(wg). (A) A expresso de wg e en iniciada
por genes pair-rule. O gene engrailed ex-
presso quando as clulas contm altas con-
centraes das protenas Even-skipped ou
Fushi tarazu. O gene wingless transcrito
Segmento Segmento Segmento Segmento quando nem o gene eve nem ftz esto ativos,
Parasegmento Parasegmento Parasegmento Parasegmento mas um terceiro gene (provavelmente odd-
paired) expresso. (B) A expresso cont-
(A) Iniciao por produtos de genes pair-rule nua de wg e en mantida pela interao entre
clulas expressando engrailed e wingless. A
produtos dos genes
Concentrao de
protena Wingless secretada e se difunde

para as clulas circunjacentes. Nas clulas
Eve Ftz Eve Ftz com competncia para expressar engrailed
(tendo protenas Eve ou Ftz), a protena
Wingless ligada pelo receptor Frizzled. Isso
Anterior Posterior permite a ativao do gene engrailed. A pro-
tena Engrailed ativa a transcrio do gene
Clulas hedgehog e tambm ativa a transcrio de
seu prprio gene (engrailed). A protena
(B) Interao entre engrailed e wingless Hedgehog se difunde dessas clulas e se liga
protena Patched. Essa ligao impede a
protena Patched de inibir a sinalizao da
Um segmento protena Smoothened. O sinal permite a trans-
Anterior Posterior crio do gene wingless e a subseqente se-
creo da protena Wingless.
Engrailed competente wingless competente engrailed competente
Difuso da protena Wingless
Expresso wingless Expresso engrailed
Difuso da protena
Receptores Patched Hedgehog
Protena Wingless
Frizzled
Transcrio
de wingless
Armadillo
Transcrio
Cubitus interruptus Receptores de engrailed,
Patched hedgehog
Hedgehog
Protena smoothened
Gradiente Gradiente
Hedgehog Wingless
Figura 14.26
Especificao celular pelo centro sinalizador Wingless/Hedgehog. (A) Fotografia em campo
iluminado de embrio tipo selvagem de Drosophila, mostrando a posio do terceiro segmento
abdominal. (B) Aproximao da rea dorsal do segmento A3, mostrando as diferentes estrutu-
ras cuticulares produzidas pelas 1a, 2 a, 3a e 4a filas de clulas. (C) Modelo para o papel de
Wingless e Hedgehog. Cada sinal responsvel por aproximadamente metade do padro. Cada
sinal, ou age de uma maneira gradual (aqui mostrada como gradientes diminuindo a partir de
suas respectivas fontes) para especificar os destinos de clulas distantes dessas fontes, ou cada
sinal pode agir localmente sobre clulas vizinhas para iniciar uma cascata de indues (aqui
mostrada como setas em seqncia). (Segundo Heemskerk e DiNardo, 1994; fotografias
cortesia dos autores).
4a mais distante das clulas secretoras de Wg tambm podem tornar-se de 3a ou 2a.

Parece que as clulas mais prximas das secretoras de Wg no podem responder a Hh,
e Hh no pode, por si s, especificar o 1o destino. (Isso pode requerer a expresso dos
produtos do gene pair-rule, especialmente Engrailed.) Assim, Hedgehog e Wingless
parecem necessrias para a elaborao de todo o padro de tipos celulares do
parasegmento. Porm, o mecanismo pelo qual conseguem tal especificao no est
claro. Ou esses sinais agem de uma forma gradual como morfgenos, ou agem local-
mente iniciando uma cascata de eventos do local de sinalizao, onde cada interao
usa um ligante e um receptor diferentes (Figura 14.26). O padro dos destinos celula-
res tambm muda o foco da padronizao de parasegmento em segmento. Tem-se
agora marcadores externos, as clulas expressando engrailed tornando-se as clulas
mais posteriores de cada segmento.
Os genes de seleo hometica

Padres de Expresso dos Genes Hometicos
Aps os limites segmentais terem sido estabelecidos, as estruturas caractersticas de

cada segmento so especificadas. Essa especificao conseguida pelos genes
seletores hometicos (Lewis, 1978). Existem duas regies do cromossomo 3 da Droso-
phila que contm a maioria desses genes hometicos (Figura 14.27). Uma regio, o
complexo Antennapedia, contm os genes hometicos labial (lab), Antennapedia
(Antp), Sex comb reduced (Scr), Deformed (Dfd) e proboscipedia (pb). Os genes
labial e Deformed especificam os segmentos da cabea, enquanto Sex comb reduced
e Antennapedia contribuem para dar identidade aos segmentos torcicos. O gene
proboscipedia parece atuar somente em adultos, mas em sua ausncia, os palpos
labiais da boca so transformados em patas (Wakimoto et al., 1984; Kaufman et al.,
1990). A segunda regio de genes hometicos o complexo bithorax (Lewis, 1978).
Existem trs genes codificadores de protenas nesse complexo: Ultrabithorax (Ubx),
que necessrio para a identidade do terceiro segmento torcico, e abdominal A
(abdA) e Abdominal B (AbdB), que so responsveis pelas identidades dos segmen-
tos abdominais (Snchez-Herrero et al., 1985). O fentipo letal do mutante de trs-
pontos Ubx-, abdA-, AbdB- idntico aquele de uma deleo de todo o complexo
bithorax (Casanova et al., 1987). A regio do cromossomo contendo tanto o complexo
Antennapedia como o complexo bithorax freqentemente referida como o complexo
hometico (Hom-C).
(A)
Figura 14.27
Os domnios funcionais dos genes dos complexos bithorax e Antenna-
Complexo Antennapedia Complexo Bithorax pedia em Drosophila. (A) O complexo bithorax foi dividido em trs
grupos complementares letais identificados por E. B. Lewis. Os genes
(B) do complexo Antennapedia so labial (lab), Deformed (Dfd), Sex comb
reduced (Scr) e Antennapedia (Antp). (B) Sumrio do controle dos
genes AbdA e AbdB em Drosophila. Os limites so controlados pelos
genes gap. As sries de mutaes infra-abdominal controlam os ele-
mentos reguladores desses genes. (A segundo Dessain et al., 1992; B
segundo Casares e Snchez-Herrero, 1995.)
Figura 14.28 (A)

(A) Cabea de uma mosca tipo selvagem. (B)
Cabea de uma mosca contendo a mutao
Antennapedia que converte antenas em patas.
(Segundo Kaufman et al., 1990, cortesia de T.
C. Kaufman.)
Como esses genes so responsveis pela especificao das partes corporais da

mosca, suas mutaes levam a fentipos bizarros. Em 1984, William Bateson chamou
esses organismos de mutantes hometicos, que fascinaram biologistas do desen-
volvimento por dcadas. O gene Antennapedia, por exemplo, considerado especifi-
car a identidade do segundo segmento torcico. Na mutao dominante de
Antennapedia, esse gene expresso na cabea bem como no trax, e os discos imaginais
da regio da cabea so especificados como torcicos. Com isso, patas em lugar de
antenas crescem dos soquetes da cabea (Figura 14.28). No mutante recessivo de
Antennapedia, o gene deixa de ser expresso no segundo segmento torcico, e ante-
nas brotam das posies das patas (Struhl, 1981; Frischer et al., 1986; Schneuwly et al.,
1987). De maneira semelhante, quando o gene Ultrabithorax deletado, o terceiro
segmento torcico (caracterizado por halteres) se transforma em outro segundo seg-
mento torcico. O resultado (Figura 14.29) uma mosca com quatro asas - uma situa-
o embaraosa para um dptero clssico*.
*Dpteros (insetos com duas asas como as moscas) so considerados ter evoludo de insetos
normais com quatro asas; possvel que essa mudana ocorreu atravs de alteraes no complexo
bithorax. O Captulo 23 inclui mais especulaes sobre a relao entre genes bithorax e a evoluo.
Figura 14.29
A mosca das frutas de quatro asas foi construda juntando-se
trs mutaes em reguladores cis do gene Ultrabithorax.
Essas mutaes transformam eficazmente o terceiro segmen-
to torcico em outro segundo segmento torcico (i.e., halteres
em asas). (Cortesia de E. B. Lewis.)
Segmentos:
gene en:
Parasegmentos:
gene ftz:
Complexo Antennapedia
labial Epiderme
(lab)
Sistema
nervoso
central (CNS)
Deformed
(Dfd) Epi
CNS
Sex combs reduced

(Scr)
Epi
CNS
Antennapedia
(Antp)
Epi
CNS
Complexo bithorax
Ultrabithorax
(Ubx)
Epi
CNS
abdominal A
(abdA)
Epi
CNS
Abdominal B
(AbdB)
Epi
CNS
caudal
(cad)
Epi
Figura 14.30
Regies de expresso gnica hometica (tanto
mRNA como protena) no blastoderma e (al-
Esses principais genes seletores hometicos foram clonados e sua expresso ana- gumas horas mais tarde) no sistema nervoso
lisada por hibridizao in situ (Harding et al., 1985; Akam, 1987). Os resultados desses central do embrio de Drosophila. As reas
experimentos esto sumariados na Figura 14.30. Transcritos de cada loco so detecta- escurecidas so segmentos ou parasegmentos
dos em regies especficas do embrio sendo especialmente proeminentes no sistema com mais produto. As barras adjacentes ilus-
nervoso central. Em mutantes hometicos, essa expresso normal fica alterada. Por trao representam a expresso gnica dentro
exemplo, em alelos dominantes de Antennapedia, o gene Antennapedia foi invertido dos limites parasegmentares. (Segundo
no cromossomo, fazendo com que perdesse seu prprio promotor ficando sob o con- Kaufman et al., 1990.)
trole de um promotor diferente, ativo na cabea. Isso causa a expresso ectpica de
Antp na cabea. De maneira semelhante, se o gene Ultrabithorax for colocado em um
novo promotor e expresso na regio da cabea, as antenas comeam a produzir estru-
turas especficas de patas e protenas (Mann e Hogness, 1990).
Iniciando os Padres da Expresso dos genes Hometicos
A iniciao dos domnios dos genes hometicos influenciada pelos genes gap e
genes pair-rule. Por exemplo, a expresso dos genes abdA e AbdB reprimida
pelas protenas Gap Hunchback e Krppel. Essa inibio impede esses genes que
(A) especificam para o abdome, serem ativos na cabea e no trax (Casares e Snchez-
Herrero, 1995). Reciprocamente, o gene Ultrabithorax ativado por certos nveis
da protena Hunchback, fazendo com que seja originalmente transcrito em uma
larga banda no meio do embrio, e a protena Gap Krppel ative a transcrio de
Antennapedia (Figura 14.31; Harding e Levine, 1988; Struhl et al., 1992). Os limites
de expresso dos genes hometicos so logo confinados a parasegmentos defini-
dos pela protenas Fushi tarazu e Even-skipped (Ingham e Martinez-Arias, 1986;
(B) Mller e Bienz, 1992).
Figura 14.31 Mantendo os Padres de Expresso dos genes Hometicos

A expresso inicial do gene hometico An-
tennapedia (B) est baseada na expresso
anterior de Krppel (A) na mesma rea. Se a
A expresso de genes hometicos um processo dinmico. O gene Antp, por exemplo,
colocao da expresso Krppel for altera- embora expresso inicialmente no parasegmento 4 presuntivo, logo aparece no
da, assim tambm a ser a expresso de An- parasegmento 5. medida que a banda germinativa se expande, a expresso do gene
tennapedia. (de Levine e Harding, 1989, cor- Antp vista no tubo neural presuntivo to posteriormente quanto o segmento 12.
tesia dos autores.) Durante o desenvolvimento ulterior, o padro se contrai novamente, e transcritos
Antp esto fortemente localizados nos parasegmentos 4 e 5. Tal como outros genes
hometicos, a expresso Antp regulada negativamente por todos os produtos de
genes hometicos posteriores a ele (Harding e Levine, 1989; Gonzlez-Reyes e Morata,
1990). Em outras palavras, cada um dos genes do complexo bithorax reprime a expres-
so de Antennapedia. Se Ultrabithorax for deletado, a atividade de Antp se estende
atravs da regio que normalmente teria expresso Ubx e pra onde a regio Abd
comea. (Isso permite que o terceiro segmento torcico forme asas tal como o segun-
do segmento torcico, como est na Figura 14.29). Se todo o complexo bithorax for
deletado, a expresso de Antp se estende atravs de todo abdome. (A larva no
sobrevive, mas o padro da cutcula atravs de todo o abdome aquele do segundo
segmento torcico).
As protenas Gap e as protenas Pair-rule so transitrias, mas as identidades dos
parasegmentos tm que ser conservadas para que possa ocorrer a diferenciao espe-
cfica. Assim, uma vez que os padres de transcrio dos genes hometicos estiverem
estabilizados, eles so presos nos seus lugares por alteraes na conformao da
cromatina nesses genes. A represso dos genes hometicos parece ser mantida pela
famlia de protenas Polycomb, enquanto a estrutura ativa da cromatina parece ser
mantida pela protena trithorax (Ingham e Whittle, 1980; McKeon e Brock, 1991;
Simon et al., 1992).
GENES REALIZADORES. Foi desencadeada a procura por genes realizadores,

genes que so alvos dos genes hometicos e que funcionam para formar os
primrdios de tecidos especficos ou rgos. Um mtodo, pioneiro no laboratrio
de Walter Gehring, usou armadilhas de intensificadores para detectar aqueles
genes regulados por Antennapedia. Aqui, um transpson contendo um gene re-
prter da -galactosidase acoplado a um promotor fraco e introduzido aleatoria-
mente no genoma de diferentes Drosophila. A expresso da -galactosidase (que
pode ser facilmente detectada por colorao) fica sob o controle de intensificado-
res na vizinhana do promotor. Se o intensificador for regulado pela protena
Antennapedia (que est presente na regio torcica, mas no na cabea do em-
brio), ento a atividade da -galactosidase deveria ser diferente quando tecidos
torcico e da cabea so comparados. Usando essa tcnica, Wagner-Bernholz e
colaboradores (1991) encontraram o que pode ser o gene crtico regulado por
Antennapedia. Esse gene, salm, no ativo em discos imaginais de pata do trax,
Disco antenal
(A) (B) (C)
Figura 14.32
A armadilha de intensificador do transpson transporta um gene -galactosidase, ativado
quando colocado perto de um intensificador. Em uma linhagem, o transpson ficou incorporado
perto de um gene regulado diferencialmente na cabea e no trax. (A) Discos imaginais da pata de
larvas do tipo selvagem (no terceiro instar logo antes da transformao em crislida) no expres-
sam um gene particular salm. (B) Os discos antenais da mesma larva expressam salm. (C) Discos
antenais de um mutante de Antennapedia mostram que esse gene est reprimido nesse mutante.
(Segundo Wagner-Bernholz et al., 1991, cortesia de W. J. Gehring.)
mas expresso no disco imaginal da antena (Figura 14.32). Assim, salm parece ser
um gene que reprimido pela protena Antennapedia. A represso do gene salm
pode ser crtica para a formao de tecido das patas, em lugar de tecido antenal,
dos discos imaginais torcicos.
Outro mtodo empregado para achar tais genes tem sido o seqenciamento. O
seqenciamento de genes mostrou que alguns genes tm elementos intensificadores
que ligam os genes hometicos, com isso, fazendo com que eles sejam regulados por
padres de expresso dos genes hometicos. Um gene alvo, decapentaplegic, tem
um stio de ligao em seu intensificador para a protena Ultrabithorax. Isso permite
protena Decapentaplegic ser expressa no mesoderma visceral do parasegmento 7,
onde necessria para o desenvolvimento do intestino mdio (Immergluck et al., 1990;
Panganiban et al., 1990).
Outro alvo das protenas hometicas, o gene Distal-less (ele prprio um gene
contendo um homeobox) necessrio para o desenvolvimento dos membros e
ativo somente no trax. A expresso Distal-less reprimida no abdome, provavel-
mente por uma combinao de protenas Ubx e AbdA que podem-se ligar a seu
intensificador e bloquear a transcrio (Vachon et al., 1992; Castelli-Gair e Akam,
1995). Isso apresenta um paradoxo, j que ambos, o parasegmento 5 (inteiramente
torcico e produtor de patas) e o parasegmento 6 (que inclui a maior parte do
primeiro segmento abdominal livre de patas) expressam Ultrabithorax. Como po-
dem dois segmentos to diferentes ser especificados pelo mesmo gene? Castelli-
Gair e Akam (1995) mostraram que a mera presena da protena Ubx em um grupo
de clulas no suficiente para a especificao. Em vez disso, o momento e o local
de sua expresso dentro do parasegmento podem ser crticos. Antes da expresso
Ubx, os parasegmentos 4-6 tm potenciais semelhantes. No estgio 10, a expres-
so de Ubx nas partes anteriores dos parasegmentos 5 e 6 impede-os de formarem
estruturas (como a espiral anterior), caractersticas do parasegmento 4. Alm dis-
so, no compartimento posterior do parasegmento 6 (mas no do parasegmento 5),
a protena Ultrabithorax bloqueia a formao do primrdio dos membros reprimin-
do os genes Distal-less. No estgio 11, quando Ubx tiver alcanado todo
parasegmento 6, o gene Distal-less tornou-se auto-regulatrio e no pode ser
reprimido por Ultrabithorax (Figura 14.33).
Figura 14.33 Anterior Posterior

Representao esquemtica das diferenas entre a expresso de Ubx Segmentos:
nos parasegmentos 5 e 6. (A) Antes da expresso de Ubx, cada seg- (A)
mento tem competncia para produzir espirculos e patas. (B) No
estgio 10, a expresso precoce de Ubx (sombreada) bloqueia a forma- Primrdio
o do espirculo anterior em PS5 e PS6, e previne a formao de do espirculo
patas no compartimento posterior de PS6. A protena AbdA prov o
mesmo papel nos outros segmentos abdominais. (C) No estgio 11, o Primrdio da pata
domnio da expresso Ubx se estende ao primrdio das patas de PS5 Para-
e PS6, mas vem tarde demais para reprimir a expresso do gene segmentos
Distal-less. (Segundo Castelli-Gair e Akam, 1995.)
Protena Ubx
(B)
Protena AbdA
(C)
Os Elementos Cis-Reguladores e o Complexo Bithorax
As diferenas temporais e espaciais na expresso de Ubx entre os parasegmentos

5 e 6 sugerem que Ubx regulado por diferentes elementos reguladores. Lewis e
seus colegas (Lewis, 1978, 1985; Bender et al., 1983; Karch et al, 1985) identifica-
ram essas regies cis-reguladoras. No princpio (antes que os trs genes do com-
plexo bithorax fossem identificados), essas regies foram consideradas codificar
protenas especficas. Hoje, sabe-se que elas regulam a transcrio de um dos trs
genes do complexo bithorax em parasegmentos especficos. Por exemplo, os mu-
tantes anterobithorax (abx) e bithorax (bx) faz com que o compartimento anterior
do terceiro segmento torcico (equilibradores anteriores) assuma a identidade do
compartimento anterior do segundo segmento torcico (asas anteriores). De ma-
neira semelhante, os mutantes posterobithorax (pbx) e bithoraxoid (bxd) faz
com que o compartimento posterior do terceiro segmento torcico se parea aque-
le do segundo segmento torcico. A combinao das mutaes abx, pbx e bxd em
um nico embrio, causa a transformao total do terceiro segmento torcico em
um outro segundo segmento torcico. (O resultado a mosca mostrada na Figura
14.29). Embora essas mutaes tivessem originalmente sido consideradas estar
em genes separados, parece agora que so mutaes de elementos intensificado-
res que possibilitam a expresso especfica da posio do gene Ubx (Lewis, 1985;
Peifer et al., 1987).
A relao entre as mutaes cis-reguladoras e as trs unidades de transcrio do
complexo bithorax mostrada na Figura 14.34. As regies codificadoras da protena
do complexo bithorax ocupam menos que um dcimo do DNA nesse complexo. As
mutaes reguladoras em geral, colocam-se nas regies flanqueadoras desses trs
genes ou em ntrons no seu interior. Evidncia adicional que abx, bx e bxd so
elementos cis-reguladores vem da anlise de mutaes e delees especficas. A
deleo do gene Ubx resulta na transformao hometica do parasegmento 5 (T2
posterior e T3 anterior) e parasegmento 6 (T3 posterior e A1 anterior) em cpias do
Segmentos
Compartimentos
Parasegmentos
Mutaes
Ultrabithorax
Mutaes
reguladoras
Seqncias reguladoras
Genes estruturais
Unidades de transcrio
Figura 14.34
Mutaes reguladores no complexo bithorax. A mosca adulta esquematizada dividida em
segmentos e compartimentos anterior e posterior. As regies reguladoras do gene Ultrabithorax
esto mostradas abaixo da mosca. As reas sombreadas representam a regio especificada pelo
domnio regulador particular. A linha contnua abaixo desse representa a regio de 300.00 pares
de bases do complexo. As trs unidades de transcrio que codificam as trs protenas hometi-
cas do complexo bithorax esto mostradas em relao aos locais reguladores. Cada um desses
genes transcrito da direita para a esquerda. Os xons so mostrados como caixas escuras, os
ntrons por linhas interrompidas. Acima da linha esto as seqncias reguladoras definidas por
mutaes genticas, e a cor das linhas corresponde ao gene que a seqncia regula positivamente.
(Segundo Peifer et al., 1897; Beachy, 1990; Casares e Snchez-Herrero, 1995.)
parasegmento 4 (T1 posterior e T2 anterior). Tal transformao letal; o embrio

morre antes de eclodir. Nos mutantes abx e bx, porm, somente o parasegmento 5
transformado no parasegmento 4, quando a expresso de Ubx reduzida no
parasegmento 5 (Casanova et al., 1985; Peifer e Bender, 1986). Da, a asa anterior
emerge no que, de outra maneira, seria um haltere anterior. De modo semelhante, as
mutaes bxd reduzem a expresso Ubx no parasegmento 6 (Peifer et al. 1987). O
elemento regulador bithorax para Ubx, contm um intensificador que liga as prote-
nas codificadas pelos genes de segmentao: tailless, fushi tarazu e hunchback
(Quian et al, 1991). Na regio abdominal, as seqncias cis-reguladoras
intraabdominal (iab) 2-8 direcionam a expresso de abdA ou AbdB nos vrios
segmentos (Boulet et al., 1991; Snchez-Herrero, 1991).
& Especulaes
Regulao Molecular do Desenvolvimento:

As Protenas do Homeodomnio
O Homeodomnio protena quimrica construda em maior milares de reconhecimento. Por exemplo, o
Protenas do homeodomnio so uma fam- parte por Antennapedia, mas com o termi- prximo par de bases reconhecido pelo ami-
lia de fatores de transcrio caracterizados nal carboxlico (incluindo o homeodomnio) nocido 9 dentro da hlice de reconhecimen-
por um domnio de 60 aminocidos que se de Ultrabithorax, a protena pode ser subs- to. Estudos de mutaes mostraram que os
ligam a certas regies do DNA. O homeo- tituda por Ultrabithorax e especificar as homeodomnios das protenas Bicoid e An-
domnio foi primeiro visto naquelas prote- clulas apropriadas como parasegmento 6 tennapedia usam, respectivamente, lisina ou
nas cuja ausncia ou m-regulao causa (Mann e Hogness, 1990). O homeodom- glutamina na posio 9 para distinguir stios
transformaes hometicas em segmentos nio isolado de Antennapedia ir se ligar de reconhecimento relacionados. A lisina do
da Drosophila. Considera-se que protenas aos mesmos promotores que a protena homeodomnio de Bicoid reconhece o G de
do homeodomnio ativem baterias de genes Antennapedia inteira, indicando que a li- pares CG, ao passo que a glutamina do ho-
que especificam as propriedades particula- gao dessa protena depende de seu homeodomnio de Antennapedia reconhece A
res quele segmento. Tais protenas con- meodomnio (Mller et al., 1988). de um par AT (Figura 14.35; Hanes e Brent,
tendo homeodomnios incluem os produ- O homeodomnio se dobra em trs -h- 1991). Se essa lisina for substituda por glu-
tos dos oito genes hometicos do comple- lices, as ltimas duas se dobrando em uma tamina, uma protena Bicoid ir reconhecer
xo hometico, assim como outras protenas, conformao hlice-giro-hlice que carac- stios ligantes de Antennapedia (Hanes e
como Fushi tarazu, Caudal e Bicoid. Fatores terstica de uma famlia de fatores de transcri- Brent, 1989, 1991). Outras protenas com ho-
de transcrio do homeodomnio so impor- o que ligam DNA ao sulco maior da dupla meodomnios mostram um padro semelhan-
tantes para a determinao dos eixos ntero- hlice (Otting et al., 1990; Percival-Smith et te, reconhecendo a seqncia comum, en-
posteriores tanto de invertebrados como de al., 1990). A terceira hlice a hlice de reco- quanto outra poro reconhece uma estru-
vertebrados. Em Drosophila, a presena de nhecimento, e aqui que os aminocidos tura especfica prxima ao TAAT.
certas protenas contendo homeodomnios entram em contato com as bases do DNA.
tambm necessria para a determinao Uma seqncia de quatro bases, TAAT, Figura 14.35
de neurnios especficos. Sem esses fato- conservada em quase todos os stios reco- Interaes homeodomnio-DNA. (A) homeo-
domnio hlice-giro-hlice dentro do sulco
res de transcrio, os destinos desses nhecidos pelos homeodomnios; ela prova-
maior do DNA. (B) Pareamento proposto en-
neurnios so alterados (Doe et al., 1988). velmente distingue aqueles stios aos quais
tre a lisina do homeodomnio Bicoid e o par de
O homeodomnio codificado por um as protenas do homeodomnio podem se li-
bases CG da seqncia de reconhecimento, e
homeobox de 190 pares bases (veja Cap- gar. O terminal T 5 parece ser crtico para entre a glutamina do homeodomnio de Anten-
tulo 10). Os homeodomnios parecem es- esse reconhecimento, pois se mutado ele des- napedia e o par de bases TA de sua seqncia
pecificar os stios de ligao para essas tri toda ligao do homeodomnio. Os pares de reconhecimento. Em ambos os casos o nono
protenas e so crticos para a especifica- de bases que seguem a seqncia TAAT so aminocido da hlice se liga ao par de bases
o do destino celular. Por exemplo, se uma importantes para distinguir entre os stios si- imediatamente posterior seqncia TAAT. (A
(A) (B) segundo Riddihough, 1992; B. segundo Hanes
e Brent, 1991.)
Stio bicoid, 7 pares de bases
Citosina Guanina Stio Antp, 7 pares de bases
Timina Adenina
Hlice III
Co-fatores para os Genes Hom-C Extradenticle, ela ir transformar esse fator de transcrio dedo de zinco ne-
Os genes hoemticos do complexo ho- segmento em A3. Alm disso, as prote- cessrio para o funcionamento do pro-
metico da Drosophila especificam o des- nas Exd e Ubx so necessrias para a re- duto Scr distinguindo entre os segmen-
tino segmentar, mas podem requerer al- gulao de decapentaplegic, e a estru- tos labial e primeiro torcico. Ele crti-
guma ajuda para isso. Os stios ligantes tura do promotor decapentaplegic suco para a especificao da identidade
de DNA reconhecveis pelos homeodo- gere que a protena Extradenticle pode do protorcico anterior (parasegmento
mnios das protenas Hom-C so muito dimerizar com a protena Ubx no intensi- 3), e pode ser o gene que especifica a
semelhantes, e h alguma superposio ficador desse gene de alvo (Raskolb e condio basal do complexo home-
em suas especificidades de ligao. Em Wieschaus, 1994; van Dyke e Murre, tico. Se o complexo bithorax e o gene
1990, Peifer e Wieschaus descobriram 1994). A protena Extradenticle inclui um Antennapedia forem removidos, todos
que o produto do gene Extradenticle homeodomnio, e a protena humana os segmentos se tornam protrax ante-
(Exd) interage com vrias protenas PBX1 se parece com a protena Extraden- rior. A funo do gene teashirt parece
Hom-C e pode ajudar na especificao ticle e pode ter um papel semelhante ser crtica para o trabalho com a prote-
de identidades segmentais. Por exemplo, como um co-fator para genes hometi- na Scr, distinguindo o trax da cabea e
a protena Ubx responsvel pela espe- cos humanos. trabalhando atravs do tronco para im-
cificao da identidade do primeiro seg- O produto do gene teashirt tambm pedir a formao de estruturas da cabe-
mento abdominal (A1); sem a protena pode ser um co-fator importante. Esse a (Roder et al., 1992). [droso2.html]
A GERAO DA POLARIDADE DORSOVENTRAL EM DROSOPHILA

Em 1936, o embriologista E. E. Just criticou os geneticistas que achavam que podiam
explicar o desenvolvimento olhando as mutaes especficas que afetam a cor dos
olhos, o nmero de cerdas e a forma das asas. Ele dizia que no estava interessado no
desenvolvimento das cerdas nas costas de uma mosca; ao contrrio, ele queria saber
como o embrio da mosca produzia as prprias costas. Cinqenta anos mais tarde,
embriologistas e geneticistas esto finalmente respondendo essa pergunta*.
A protena Dorsal:
Morfgeno para a polaridade dorsoventral
A polaridade dorsoventral estabelecida pelo gradiente de um outro fator protico de
transcrio, Dorsal. Em contraste com Bicoid, cujo gradiente estabelecido dentro de
um sinccio, o gradiente Dorsal forma-se sobre um campo de clulas estabelecido
como uma conseqncia de eventos celulares sinalizadores.
A especificao do eixo dorsoventral pode ser dividida em vrias etapas. A etapa
crtica a translocao da protena Dorsal do citoplasma para os ncleos das clulas
ventrais durante o ciclo da dcima quarta diviso. Anderson e Nsslein-Volhard (1984)
isolaram 11 genes de efeito materno, cuja ausncia de cada um est associada com a
falta de estruturas ventrais (Figura 14.36). Alm disso, a ausncia de outro gene de
efeito materno, cactus, causa a ventralizao de todas as clulas. As protenas codifi-
cadas por esses genes maternos so crticas para certificar que a protena Dorsal entre
somente em ncleos da superfcie ventral do embrio. As etapas posteriores
translocao da protena Dorsal afetam aquilo que essa protena faz para especificar
as diferentes regies do embrio. Aqui, diferentes concentraes da protena Dorsal
parecem especificar os diferentes destinos dessas clulas.
Translocao da Protena Dorsal
A protena que realmente distingue o dorso do ventre o produto protico do gene

dorsal. O RNA dos genes dorsais da me colocado no interior do vulo pelas clulas
*De uma maneira que no poderia ter sido predita por Just, revela-se que alguns dos genes (como
o decapentaplegic) envolvidos na regulao do nmero de cerdas ou forma das asas tambm tm
funes anteriores na regulao da polaridade dorsoventral.
ovarianas da mosca me. Porm, a protena Dorsal no sintetizada a partir da mensa-

gem materna antes de decorridos 90 minutos aps a fecundao. Quando essa prote-
na traduzida, ela encontrada em todo o embrio, no somente no lado ventral ou
dorsal. Como pode ento essa protena atuar como um morfgeno, se existe por todo
o embrio? Em 1989, a surpreendente resposta foi encontrada (Roth et al., 1989; Rushlow
et al., 1989; Steward, 1989). Enquanto a protena Dorsal pode ser encontrada em todo
o blastoderma sincicial no embrio precoce de Drosophila, ela somente transporta-
da para os ncleos celulares na parte ventral do embrio (Figura 14.37A,B). Aqui, a
protena Dorsal se liga a certos genes nucleares para ativar ou suprimir suas transcri-
es. Se a protena Dorsal no penetrar no ncleo, os genes ventralizantes (snail e
twisted) no so transcritos, os genes dorsalizantes (decapentaplegic e zerknllt)
(A) no so reprimidos, e todas as clulas do embrio so especificadas como clulas
dorsais. Essa hiptese de que o eixo dorsoventral da Drosophila especificado pelo
transporte seletivo da protena morfognica Dorsal para o ncleo reforada pela
anlise de mutaes com um fentipo inteiramente dorsalizado ou ventralizado (Figu-
ra 13.37C,D). Nesses mutantes quando todas a clulas estiverem dorsalizadas (confor-
me se evidencia pela sua cutcula dorsal), a protena Dorsal no penetra no ncleo de
nenhuma clula. Reciprocamente, nos mutantes cujas clulas tm um fentipo ventral,
(B) a protena Dorsal encontrada em todos os ncleos.
Figura 14.36
Salvamento da larva por injeo de mRNA do Provendo o sinal assimtrico para a
tipo selvagem em ovos destinados a ter o translocao da protena Dorsal
fentipo snake. (A) Larva deformada consis-
tindo inteiramente de clulas dorsais. Larvas
como essas se desenvolvem de ovos de uma
Sinal do Ncleo do Ocito para as Clulas Foliculares
fmea homozigota para o alelo snake. (B) Apa-
rncia tipo selvagem de larvas desenvolvendo- Se a protena Dorsal for encontrada no todo do embrio, mas se for transladada so-
se de ovos snake que haviam recebido injees mente para os ncleos das clulas ventrais, algo mais deve estar provendo os sinais
de mRNA de ovos tipo selvagem. (de Anderson assimtricos (Figura 14.38). Parece que tal sinal mediado atravs de uma complexa
e Nsslein-Volhard, 1984. Cortesia de C. interao entre o ocito e suas clulas foliculares adjacentes. O epitlio folicular ao
Nsslein-Volhard.) redor do ocito em desenvolvimento inicialmente simtrico, mas essa simetria
Figura 14.37
Incluso da protena Dorsal em ncleos ventrais, mas no laterais ou dorsais. (A) Mapa de
destinos atravs do centro do embrio de Drosophila. A parte mais ventral vira o mesoderma, a
parte superior seguinte vira o ectoderma neurognico (ventral). O ectoderma lateral e epidrmico
pode ser distinguido na cutcula, e a regio mais dorsal torna-se a amnioserosa, a camada extra-
embrionria que envolve o embrio. (B-D) Seo transversal de embries corados com anticorpo
para mostrar a presena da protena Dorsal. Em todos os casos, a mancha escura representa a
protena Dorsal. (B) Um embrio tipo selvagem, mostrando a protena Dorsal nos ncleos mais
ventrais. (C) Um mutante dorsalizado, mostrando ausncia de protena Dorsal em todos os
ncleos. (D) Um mutante ventralizado; a protena Dorsal penetrou no ncleo de cada clula. (A
de Rushlow et al., 1989; B-D de Roth et al., 1989, cortesia dos autores.)
(A) Dorsal (B) (C) (D)
Amnioserosa
Ectoderma dorsal
Ectoderma lateral
Ectoderma
neurognico
Mesoderma
Ventral
Viso lateral Seo transversal
(A) (B) Dorsal (C)
Clulas nutrizes Ocito

ovarianas Torpedo
Destino da Ncleo
s clulas do
rsais
Dorsal
Cactus
Protena
Sinal Toll
Toll
Clulas
Inibio da
foliculares
sntese das Membrana
protenas celular
Windbeutel,
Ncleo Nudel, Pipe Sptzle
Sptzle
mRNA ativado
gurken
Nenhum
sinal para o Protease
Easter Easter
lado ventral
ativada
Sntese de Windbeutel,
Nudel, Pipe Snake
Gastrulation
defective
Envoltrio
las ventrais Windbeutel Nudel Pipe vitelnico
das clu
Destino
Ventral
1. Ncleo do ocito viaja para o lado dorsal 5. Clulas foliculares ventrais sintetizam pro-
anterior do ocito. Ele coleta mRNA tenas Windbeutel, Nudel e Pipe
cornichon e gurken
Figura 14.38 6. Protenas foliculares ventrais absorvem
Representao esquemtica de um modelo para 2. Mensagens cornichon e gurken traduzidas. protenas Snake e Gastrulation-defective
a gerao da polaridade dorsoventral em Dro- A protena Gurken recebida pelas prote- para realizar ciso do zimgeno Easter, pro-
sophila. (A) O ocito desenvolve um folculo nas Torpedo durante a meia oognese duzindo protease Easter ativa, somente no
ovariano consistindo de 15 clulas nutrizes (que lado ventral
3 a. O sinal Torpedo faz com que as clulas fo-
suprem protenas maternas e mensagens ao ovo
liculares se diferenciem para uma morfolo- 7. Easter cinde Sptzle, que se liga protena
em desenvolvimento) e clulas foliculares. (B) gia dorsal receptora Toll
O ncleo do ocito reside no local que ir tor-
nar-se o lado dorsal. Os genes cornichon e 3 b. Sntese de protenas Windbeutel, Nudel e 8. Sinal Toll causa fosforilao e degradao
gurken do ocito sintetizam um sinal que re- Pipe inibida nas clulas foliculares dorsais da protena Cactus, liberando-a de Dorsal.
cebido pelo receptor produzido pelo gene tor-
pedo das clulas foliculares. Dada a curta 4. Protenas Cornichon e Gurken no se di- 9. A protena Dorsal entra no ncleo e
difusibilidade do sinal, somente as clulas foli- fundem para o lado ventral ventraliza a clula
culares mais prximas do ncleo do ocito (i.e.,
as clulas foliculares dorsais) recebem esse si- uma enzima ativa que ir cindir a forma
nal. O sinal do receptor Torpedo faz com que zimognica da protena Easter numa protease
as clulas foliculares se diferenciarem para uma Easter ativa. Essa ltima, cinde a protena
morfologia dorsal caracterstica e (de alguma Sptzle para uma forma que pode se ligar ao
maneira) inibir a sntese das protenas receptor Toll (que encontrado em toda a mem-
Windbeutel, Nudel e Pipe. Portanto, essas pro- brana celular). Assim, somente o lado ventral
tenas somente so produzidas pelas clulas recebe o sinal Toll. Esse sinal separa a protena
foliculares ventrais. (C) As trs protenas foli- Cactus da protena Dorsal, permitindo essa l-
culares ventrais so consideradas ser incorpo- tima ser translocada para o ncleo. A protena
radas na membrana vitelnica, porm, somente Dorsal entra no ncleo e ventraliza as clulas.
no lado ventral. Elas cindem os produtos dos (Segundo Schpbach et al., 1991; Roth, 1994;
genes snake e gastrulation defective para criar Hong e Hashimoto, 1995.)
quebrada por um sinal do ncleo do ocito. Conforme j mencionado neste captulo,

o ncleo do ocito est inicialmente localizado no terminal posterior do ocito, longe
das clulas nutrizes. Em seguida, ele transladado anteriormente, abaixo de uma su-
perfcie cortical do ocito, para uma posio dorsal anterior, ao longo de uma trilha de
microtbulos. O ncleo do ocito ento sinaliza para as clulas foliculares a ele sobre-
postas, e as dorsaliza (Montell et al., 1991; Schpbach et al., 1991). As clulas foliculares
acima do ncleo assumem uma forma mais colunar que outras clulas foliculares.
Essas diferenas de forma e empacotamento tornam-se acentuadas medida que o
vulo amadurece, terminando por distinguir as clulas foliculares dorsais das ven-
trais. O sinal dorsalizante do ncleo do ocito parece ser produzido pelos produtos
dos genes gurken e cornichon (Schpbach, 1987; Forlani et al., 1993). Mutaes
desses genes no ocito provocam a ventralizao tanto do embrio como de suas
clulas foliculares circunjacentes. (Se a mutao se der nas clulas foliculares e no no
vulo, o embrio normal.)
O sinal dorsalizante parece ser recebido pelas clulas foliculares atravs de um
receptor codificado pelo gene torpedo. A anlise molecular mostrou que gurken codi-
fica um homlogo do fator de crescimento epidrmico (EGF), enquanto torpedo codi-
fica um homlogo do receptor EGF de vertebrado (Price et al., 1989; Neuman-Silberberg
e Schpbach, 1995). Deficincia materna de torpedo causa a ventralizao do embrio.
Alm disso, o gene torpedo ativo nas clulas foliculares ovarianas e no no embrio.
Isso foi descoberto produzindo quimeras da linhagem germinativa/somtica. Schpbach
(1987) transplantou precursores de clulas germinativas de embries tipo selvagem
para embries cujas mes carregavam a mutao torpedo. Reciprocamente, foi feito o
transplante dessas clulas de embries torpedo para embries tipo selvagem (Figura
Figura 14.39 14.39). Os resultados foram surpreendentes pois os ovos do tipo selvagem produzi-
Quimeras de linhagem germinativa produzidas ram embries ventralizados quando esses ovos se desenvolveram em folculos do
trocando-se clulas do plo (precursoras de c- mutante torpedo. Os ovos desse mutante foram capazes de produzir embries normais
lulas germinativas) entre embries de tipo sel- quando se desenvolviam dentro de um ovrio do tipo selvagem. Assim, diferentemen-
vagem e embries de mes homozigotas para o te dos produtos dos genes gurken e cornichon, o gene torpedo do tipo selvagem
gene torpedo. Esses transplantes produzem
necessrio nas clulas foliculares, no no vulo propriamente.
fmeas do tipo selvagem cujos embries vm
de ovos das mes mutantes, e embries defici-
entes em torpedo com ovos do tipo selvagem. Sinalizao das Clulas Foliculares para o Citoplasma do Ocito
Os ovos das mes deficientes em torpedo pro-
duzem embries normais se os ovos se desen- Os genes nudel (nd), pipe (pip) e windbeutel (wind) tambm so necessrios na
volvem no ovrio do tipo selvagem, enquanto clula folicular e no no ocito. Se a me no tiver algum desses trs genes, o embrio
os ovos do tipo selvagem produzem embries
ventralizados se os ovos se desenvolvem no
ovrio mutante.
Clulas germinativas
Embrio de me deficientes em torpedo em
tipo selvagem uma fmea tipo selvagem
Eixo
dorsoventral
Ocito deficiente
Clulas polares
Troca entre em torpedo no
(precursoras das
clulas polares folculo tipo selvagem
clulas germinativas)
Clulas germinativas tipo

selvagem em uma fmea No h eixo
Embrio de deficiente em torpedo dorsoventral
me deficiente (o todo do
no gene embrio
torpedo dorsal)
Clulas germinativas tipo
selvagem em um folculo
deficente em torpedo
forma um fentipo totalmente dorsalizado. Esses genes so desligados pela ativao

do receptor de Torpedo (Stein et al., 1991). Se forem permitidos ser ativos (como
normalmente ocorre no caso de clulas foliculares ventrais), suas protenas so con-
sideradas como incorporadas na poro ventral do envoltrio vitelnico que secretado
ao redor do envoltrio adjacente ao ovo pelas clulas foliculares (Hecht e Anderson,
1992; Stein e Nsslein-Volhard, 1992). Dessa maneira, um sinal assimtrico est agora
presente no envoltrio adjacente ao ovo, e dele separado pelo fluido perivitelnico. No
entanto, essas protenas no so suficientes para criar o sinal para a translocao da
protena Dorsal para o ncleo. Mais uma vez, retornamos ao ocito (agora um em-
brio) para suprir componentes essenciais que iro gerar o sinal ventral das clulas
foliculares para o embrio.
O complexo formado pelas protenas Nudel, Pipe e Windbeutel considerado
ativar trs proteases serina secretadas pelo embrio para o fluido perivitelnico (veja
Figura 14.38; Hong e Hashimoto, 1995). Essas proteases so os produtos dos genes
gastrulation defective (gd), snake (snk) e easter (ea). Como a maioria das proteases
extracelulares, elas so secretadas em uma forma inativa, tornando-se ativas por
clivagem peptdica. Considera-se que o complexo Nudel-Pipe-Windbeutel primeiro
arrasta e ativa a protena Gastrulation defective. Essa protena uma protease, e cliva
a protena Snake. Essa clivagem ativa a atividade protesica da protena Snake; em
seguida, a protena Snake ativada cliva a protena Easter, que cliva a protena Sptzle
(Chasan et al., 1992; Hong e Hashimoto, 1995).
A protena Sptzle clivada agora capaz de se ligar a um receptor na membrana
celular do ocito, o produto do gene Toll. A protena Toll tambm um produto
materno regularmente distribudo na membrana celular do ovo (Hashimoto, 1988,
1991). A mutao recessiva de Toll tem um fentipo dorsalizado semelhante, e inje-
es de RNA de ovos do tipo selvagem iro restaurar a polaridade dorsoventral de
ovos postos por mes Toll-/Toll-. No entanto, diferentemente do caso de snake ou
dos outros 10 genes maternos, o local da injeo importante. Qualquer parte inje-
tada do ovo torna-se a regio ventral do embrio resgatado (Anderson et al., 1985).
Isso sugere que ovos Toll-/Toll- no tm um eixo dorsoventral (enquanto em snake,
a regio ventral est no seu lugar normal). No desenvolvimento normal, o receptor
Toll est espalhado atravs de toda a membrana celular do ocito, mas torna-se
somente ativo no local onde se liga protena Sptzle, produzida no lado ventral do
ovo. Dessa maneira, os receptores Toll no lado ventral do ovo esto efetuando a
transduo de um sinal para o interior do ovo, ao passo que os receptores Toll do
lado dorsal do ovo no o fazem.
O Estabelecimento do Gradiente da Protena Dorsal
SEPARAO DAS PROTENAS DORSAL E CACTUS. O desenlace crucial da sina-

lizao atravs do receptor Toll o estabelecimento de um gradiente da protena
Dorsal. Como estabelecido esse gradiente? Parece que a protena Cactus est assen-
tada na poro da protena Dorsal que lhe permite penetrar nos ncleos. Enquanto a
protena Cactus est ligada protena Dorsal, essa permanece no citoplasma. Porm,
esse complexo sistema de sinalizao est organizado para cindir a protena Cactus da
protena Dorsal na parte ventral do ovo. Quando Sptzle se liga e ativa a protena Toll,
essa pode ativar a quinase da protena Pelle. (A protena Tube provavelmente
necessria para trazer Pelle at a membrana celular, onde pode ser ativada; Gallindo et
al., 1995). A quinase da protena Pelle pode ento fosforilar a protena Cactus. Uma vez
fosforilada, Cactus degradada, e a protena Dorsal pode entrar no ncleo (Kidd,
1992; Shelton e Wasserman, 1993; Whalen e Steward, 1993; Reach et al., 1996). O
resultado um gradiente de localizao de Dorsal nas clulas ventrais do embrio,
com as mais elevadas concentraes da protena dorsal nos ncleos mais ventrais.
O processo descrito para a translocao da protena Dorsal para os ncleos
muito parecido com aquele descrito no Captulo 10 para a translocao do fator de
(A) Embrio de Drosophila (B) Linfcito mamfero
Sptzle IL-1
Membrana Receptor Membrana

Receptor
plasmtica IL-1 plasmtica
Toll
Citoplasma Citoplasma do
quinase pelle
do ocito Quinase linfcito
Cactus
Dorsal
Dorsal Ncleo Ncleo
Regulao de genes
ventralmente especficos Regulao de genes das imunoglobulinas
Figura 14.40
Modelo de uma trajetria conservada para re-
gular o transporte nuclear de fatores de trans-
crio em Drosophila e mamferos. (A) Em
Drosophila, a protena Toll liga o sinal da pro- transcrio NF-B para o ncleo de linfcitos de mamferos. De fato, existe uma subs-
tena Sptzle e ativa a regio da quinase da tancial homologia entre NF-B e Dorsal, entre IB e Cactus, entre a protena Toll e o
protena Pelle. A protena Pelle fosforila receptor da interleucina 1 (IL-1), entre a protena Pelle e uma protena quinase associ-
Cactus e Dorsal, fazendo com que as duas ada a IL-1, e entre as seqncias de DNA reconhecidas por Dorsal e NF-B (Gonzles-
protenas se separem uma da outra. A prote- Crespo e Levine, 1944; Cao et al., 1996). Assim, a via bioqumica usada para especificar
na Dorsal pode ento entrar no ncleo e regu- a polaridade dorsoventral em Drosophila parece ser a mesma que aquela usada para
lar a transcrio de genes ventralmente espe- diferenciar linfcitos em mamferos (Figura 14.40).*
cficos. (B) Em linfcito de mamferos, o re-
ceptor IL-1 pode causar a fosforilao de IB
LEITURA DO GRADIENTE DA PROTENA DORSAL. O que faz a protena Dorsal
(atravs de uma protena quinase ainda no
identificada). Isso permite protena NF-B uma vez localizada nos ncleos das clulas ventrais? Olhando o mapa de destino do
penetrar no ncleo e efetuar a transcrio de corte transversal pelo meio do embrio de Drosophila no dcimo quarto ciclo da
vrios genes especficos do linfcito. (Segun- diviso (veja Figura 14.37), torna-se bvio que as 16 clulas com a mais alta concentra-
do Shelton e Wasserman, 1993.) o da protena Dorsal so as que geram o mesoderma. A prxima clula acima dessa
regio gera as clulas especializadas da glia e as clulas neurais da linha mediana. As
prximas duas clulas so aquelas que do origem epiderme ventral e cordo nervoso
*Lemaitre e colegas (1996) mostraram que Toll e seu ligante (Sptzle) tambm esto envolvi-
dos na resposta imune da Drosophila s infeces fngicas.
Figura 14.41
Gastrulao em Drosophila. Nesta seo trans-
versal, as clulas mesodrmicas na poro ven-
tral do embrio se dobram para o interior, for-
mando um tubo que em seguida se achata e
forma os rgos mesodrmicos. Os ncleos
esto corados por anticorpos contra a protena
Twist. (de Leptin, 1991b, cortesia de M. Leptin.)
ventral, enquanto as nove clulas acima dessas produzem a epiderme dorsal. O grupo
mais dorsal de seis clulas no se divide; ele gera a cobertura amnioserosa do embrio
(Ferguson e Anderson, 1991).
Esse mapa de destinos gerado pelo gradiente da protena Dorsal nos ncleos.
Grandes quantidades especificam que as clulas sejam mesoderma, enquanto quanti- Figura 14.42
as menores especificam-nas para ser tecido glial ou ectodrmico (Jiang e Levine, Subdiviso do eixo dorsoventral pelo gradi-
1993). O primeiro evento morfogentico da gastrulao de Drosophila a invaginao ente de protena Dorsal nos ncleos. A pro-
das 16 clulas mais ventrais do embrio (Figura 14.41). Todos os derivados mesodr- tena Dorsal ativa os genes zigticos
micos dos msculos, corpos gordurosos e gnadas originam-se dessas clulas (Foe, rhomboid, twist e snail de acordo com sua
1989). A protena Dorsal especifica essas clulas para tornarem-se mesoderma de duas concentrao nuclear. A protena Snail, for-
maneiras. Primeiro, a protena pode ativar genes especficos que criam o fentipo mada mais ventralmente, inibe a transcrio
da protena Rhomboid. A protena Dorsal
mesodrmico. Trs dos genes alvo de Dorsal so twist, snail e rhomboid (Figura
inibe a expresso de tolloid, decapentaple-
14.42). Esses genes so transcritos somente nos ncleos da clulas ventrais que gic e zerknllt na regio ventral. Diferentes
receberam altas concentraes da protena Dorsal, pois esses intensificadores no se concentraes da protena Zerknllt determi-
nam os destinos das clulas dorsais. (Segun-
do Steward e Govind, 1993.)
zerknllt Padronizao ventral Padronizao dorsal

Dorsal Amnioserosa (ativao) (represso)
dorsal dorsal
Ectoderma dorsal
Ativao Inibio
tolloid
decapentaplegic rhomboid twist snail tolloid dpp zerknllt
Inibio
Ectoderma lateral
rhomboid
Ectoderma neurognico
twist Mesectoderma
snail
Ventral
Mesoderma
ligam protena Dorsal com alta afinidade (Thisse et al., 1988; Jiang et al., 1991; Pan et
al., 1991). A protena Twist ativa genes mesodrmicos, enquanto a protena Snail
reprime genes no-mesodrmicos em particular que poderiam, de outro modo, ser
ativos. O gene rhomboid interessante porque ativado por Dorsal mas reprimido
por Snail. Assim, a expresso de rhomboid no encontrada nas clulas mais ventrais
(i.e., as precursoras do mesoderma), mas expressa nas clulas adjacentes ao
mesoderma que formam o neuroectoderma presuntivo (veja Figura 14.42; Jiang e Levine,
1993). Tanto snail como twist so necessrios para produzir o fentipo mesodrmico
e gastrulao apropriada (Leptin et al., 1991a). A borda aguda entre as clulas
mesodrmicas e as clulas elas adjacentes que geram as clulas gliais produzida
pela presena de produtos dos genes snail e twist nas clulas mais ventrais (Kosman
et al., 1990). Em mutantes de snail, as clulas mais ventrais ainda tm o gene twist
ativado, e parecem-se com as clulas mais laterais (Nambu et al., 1990).
A protena dorsal tambm determina o mesoderma diretamente. Alm de ativar
genes estimuladores do mesoderma (twist e snail), ela inibe diretamente os genes
dorsalizantes zerknllt (zen) e decapentaplegic (dpp). Assim, nas mesmas clulas, a
protena Dorsal pode agir como um ativador de certos genes e um repressor de outros.
A opo se funciona como um ativador ou um repressor, depende da estrutura dos
Figura 14.43
Ativao e represso pela protena Dorsal. Um intensificador em um gene ativado pela protena
Dorsal (como twist ou snail) tem mltiplos stios de ligao de baixa afinidade para a protena
Dorsal e nenhum stio ligante de DSP1. Intensificadores naqueles genes que so reprimidos por
Dorsal contm tanto stios ligantes de Dorsal, como um stio ligante de DSP1. (A) Na ausncia
da protena Dorsal (i.e., naquelas futuras clulas ectodrmicas nas quais a protena Dorsal no
penetrou no ncleo) os genes twist e snail no so ativados e genes como zerknllt no so
reprimidos. (B) Reciprocamente, na presena da protena Dorsal no ncleo, os genes twist e snail
tornam-se ativos e o gene zerknllt desligado. (Segundo Ip, 1995.)
Embrio de Drosophila
Dorsal Co-repressores putativos

(A)
que ligam seqncias ricas
DSP1
em AT de AT1-3
Ectoderma Sem twist

dorsal ou snail
Dorsal Inibio
Neuroectoderma (B)
Mesoderma Ativao
twist,
Gradiente de Snail
Dorsal nuclear Stios de ligao de Dorsal
Ventral
intensificadores dos genes. O intensificador zen contm um stio de ligao para uma
protena chamada DSP1 (protena de comutao dorsal 1). Essa protena encontra-
da em todo o embrio. Quando a protena Dorsal est ausente, no parece ter efeito
algum sobre a transcrio. Porm, quando Dorsal tambm est presente no stio do
intensificador, ela converte a funo ativadora de Dorsal em funo repressora (Figura
14.43; Lehming et al., 1994; Ip, 1995). Mutantes de dorsal expressam genes dpp e zen
atravs do embrio (Rushlow et al., 1987), e embries deficientes em dpp e zen deixam
de formar estruturas dorsais (Irish e Gelbart, 1987). Assim, em embries tipo selvagem,
os precursores mesodrmicos expressam twist e snail (mas no zen e dpp); precurso-
res da epiderme dorsal e da amnioserosa expressam zen e dpp, mas no twist ou snail;
precursores da glia (mesectoderma) expressam somente snail; enquanto os precurso-
res neuroectodrmicos laterais no expressam qualquer um desses quatro genes
(Kosman et al., 1991; Ray et al., 1991). Assim, em conseqncia das respostas ao
gradiente da protena Dorsal, o eixo fica subdividido em mesoderma, mesectoderma,
ectoderma neurognico, epiderme e amnioserosa. [droso3.html]
PRIMRDIOS DE RGOS E EIXOS

O modelo de coordenadas cartesianas e a
especificao dos primrdios dos rgos
Os eixos ntero-posterior e dorsoventral de embries de Drosophila formam um siste-
ma coordenado que pode ser empregado para especificar posies no embrio. Teori-
camente, clulas que inicialmente so equivalentes quanto a seu potencial de desen-
volvimento podem responder s suas coordenadas expressando diferentes conjuntos
de genes. Isso foi visto na formao dos rudimentos da glndula salivar (Panzer et al,
1992). Primeiro, glndulas salivares s se formam na faixa de clulas definidas pelo
gene Sex combs reduced (Scr) ao longo do eixo ntero-posterior (parasegmento 2).
Glndulas salivares no so formadas em mutantes deficientes em Scr. Alm disso, se
Scr motivado a funcionar atravs de todo o embrio, os genes das glndulas saliva-
res so expressos em uma faixa ventrolateral ao longo da parte mais longitudinal do
embrio. A posio da glndula salivar ao longo do eixo dorsoventral reprimida tanto
Scr Ativa
por Decapentaplegic como por Dorsal. Essas protenas inibem a formao de glndu-
las salivares tanto dorsal como ventralmente. Assim, a glndula salivar se forma na
interseo da banda de expresso vertical de Scr (segundo parasegmento) e a regio Inibe dpp
horizontal no meio da circunferncia do embrio que no apresenta produtos de genes
decapentaplegic nem dorsal (Figura 14.44). As clulas que formam a glndula salivar
so direcionadas a assim o fazer pela atividade de genes que intersectam os eixos
ntero-posterior e dorsoventral.
Uma situao semelhante vista em tecidos encontrados em todos os segmentos
da mosca. Neuroblastos se formam de 10 agregados de 4 a 6 clulas cada um, que se
Inibe grupo
formam duas vezes em cada segmento na faixa do neuroectoderma da linha mediana dl, spitz
do embrio (Skeath e Carroll, 1992). O potencial para formar clulas neurais conferido
a essas clulas pela expresso de genes proneurais do complexo de genes achaete-
scute: achaete (ac), scute (sc) e lethal of scute (lsc). As clulas em cada agregado Figura 14.44
interagem (nos modos discutidos nos Captulos 8 e 17) para gerar uma nica clula Sistema de coordenadas cartesianas para ex-
neural do agregado. Skeath e colegas (1993) mostraram que o padro de transcrio de presso de genes que originam as glndulas
achaete e de scute imposto por um sistema de coordenadas. Sua expresso repri- salivares. Os genes so ativados pelo produto
protico do gene hometico Sex combs reduced
mida pelas protenas Decapentaplegic e Snail ao longo do eixo dorsoventral, enquan-
ao longo do eixo ntero-posterior, e so inibi-
to reforo positivo pelos genes pair-rule ao longo do eixo ntero-posterior causa sua dos nas regies marcadas por produtos dos
repetio em cada meio-segmento. O intensificador reconhecido por essas protenas genes decapentaplegic e dorsal ao longo do
especificadoras do eixo fica entre os genes achaete e scute e parece regular ambos. eixo dorsoventral. Isso permite que as glndu-
muito provvel, portanto, que as posies dos primrdios dos rgos so especificadas las salivares se formem na linha mediana do
por toda a mosca atravs de um sistema de coordenadas bidimensional baseado na segundo parasegmento do embrio. (Segundo
interseo dos eixos ntero-posterior e dorsoventral. Panzer et al., 1992.)
Resumo: Alguns princpios do

desenvolvimento da Drosophila
Estamos comeando a aprender como o genoma influencia a construo do organis-
mo. Os genes regulando a formao de padres em Drosophila operam de acordo com
certos princpios.
Existem morfgenos - tais como Bicoid e Dorsal cujos gradientes determinam
a especificao de diferentes tipos celulares. Esses morfgenos podem ser
fatores de transcrio ou atuar como molculas sinalizadoras.
Existe uma ordem temporal pela qual diferentes classe de genes so transcri-
tos, e os produtos de um gene freqentemente regulam a expresso de outro
gene. Em Drosophila, limites de expresso de genes podem ser criados pela
interao entre fatores de transcrio e seus alvos gnicos. Aqui, os fatores de
transcrio transcritos anteriormente regulam a expresso do prximo conjun-
to de genes.
O controle da traduo extremamente importante no embrio precoce; mRNAs
localizados so crticos para a padronizao do embrio.
Destinos celulares individuais no so imediatamente definidos. Em seu lugar,
h uma especificao gradativa onde um dado campo dividido e subdividido,
finalmente regulando os destinos de clulas individuais.
Estudos genticos no embrio de Drosophila desvendaram numerosos genes que
so responsveis pela especificaes dos eixos ntero-posterior e dorsoventral.
Estamos longe de entender completamente a formao de padres formadores em
Drosophila, mas estamos muito mais conscientes de sua complexidade do que est-
vamos h cinco anos atrs. As mutaes de Drosophila nos forneceram nossos pri-
meiros vislumbres dos mltiplos nveis de regulao de padres em um organismo
complexo e permitiram o isolamento desses genes e seus produtos. Alm disso, con-
forme veremos nos captulos subseqentes, esses genes podem proporcionar pistas
para um mecanismo geral de formao de padres usado em todo o reino animal.
LITERATURA CITADA
Akam, M. E. 1987. The molecular basis for Bateson, W. 1894. Materials for the Study of Bokor, P. and DiNardo, S. 1996. The roles of
metameric pattern in the Drosophila embryo. Variation. Macmillan, London. Hedgehog and Wingless in patterning the dorsal
Development 101: 1-22. epidermis in Drosophila. Development 122:
Baumgartner, S. and Noll, M. 1990. Networks
1083-1092.
Anderson, K. V. and Nsslein-Volhard, C. 1984. of interaction among pair-rule genes regulating
Information for the dorsal-ventral pattern of paired expression during primordial segmentation Boulet, A. M., Lloyd, A., Sakonju, S. 1991.
the Drosophila embryo is stored as maternal of Drosophila. Mech. Dev. 1: 1-18. Molecular definition of the morphogenetic and
mRNA. Nature 311: 223-227. regulatory functions and the cis-regu-latory
Beachy, P. A. 1990. A molecular view of the
elements of the Drosophila Abd-B gene. Deve-
Anderson, K., Bokla, L. and Nsslein-Volhard, Ultrabithorax homeotic gene of Drosophila.
lopment 111: 393-05.
C. 1985. Establishment of dorsal-ventral Trends Genet. 6(2): 46-51.
polarity in the Drosophila embryo: The Boveri, T. 1901. ber die Polaritt des
Bender, W. and seven others. 1983. Molecular
induction of polarity by the Toll gene product. Seeigeleiers. Eisverh. Phys. Med. Ges. Wrzburg
genetics of the bithorax complex in Drosophila
Cell 42: 791-798. 34: 145-175.
melanogaster. Science 221: 23-29.
Barker, D. D., Wang, C., Moore, J., Dickinson, Cao, Z., Henzel, W. J. and Gao, X. 1996. IRAK:
Berleth, T. and seven others. 1988. The role of
L. K. and Lehmann, R. 1992. Pumillio is A kinase associated with the inter-leukin-1 re-
localization of bicoid RNA in organizing the
essential for function but not for distribution of ceptor. Science 271: 1128-1131.
anterior pattern of the Drosophila embryo.
the Drosophila abdominal determinant, Nanos.
EMBO J. 7: 1749-1756. Capovilla, M., Eldon, E. D. and Pirrotta, V. 1992.
Genes Dev. 6: 2312-2326.
The giant gene of Drosophila encodes a bZIP
Bhanot, P. and eight others. 1996. A new
Bate, M. and Martinez-Arias, A. 1993. The De- DNA-binding protein that regulates the
member of the frizzled family from Drosophi-
velopment of Drosophila melanogaster. Cold expression of other segmentation gap genes.
la functions a s a Wingless receptor. Nature
Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Development 114: 99-112.
382: 225-230.
Harbor, NY.
Casanova, J. and Struhl, G. 1989. Localized zygotic gene expression in the Drosophila Gaul, U. and Jckle, H. 1990. Role of gap genes
surface activity of torso, a receptor tyrosine embryo by the affinity of binding sites for the in early Drosophila development. Annu. Rev.
kinase, specifies body pattern in Drosophila. bicoid morphogen. Nature 340: 363-367. Genet. 27: 239-275.
Genes Dev. 3: 2025-2038.
Driever, W., Siegel, V. and Nsslein-Volhard, C. Gavis, E. R. and Lehmann, R. 1992. Localization
Casanova, J., Sanchez-Herrero, E. and Morata, 1990. Autonomous determination of anterior of nanos RNA controls embryonic polarity. Cell
G. 1985, Prothoracic transformation and structures in the early Drosophila embryo by the 71: 301-313.
functional structure of the Ultra-bithorax gene bicoid morphogen. Development. 109: 811-820.
Gonzlez-Crespo, S. and Levine, M. 1994.
of Drosophila. Cell 42: 663-669.
Dubnau, J. and Struhl, G. 1996. RNA recognition Related target enhancers for dorsal and NF-kB
Casanova, J., Sanchez-Herrero, E., Busturia, A. and translational regulation by a homeodomain signalling pathways. Science 264: 255-258.
and Morata, G. 1987. Double and triple mutant protein. Nature 379: 694-699.
Gonzlez-Reyes, A and Morata, G. 1990. The
combination of the bithorax complex of Dro-
Duffy, J. B. and Perrimon, N. 1994. The torso developmental effect of overexpress-ing a Ubx
sophila. EMBO J. 6: 3103-3109.
pathway in Drosophila: Lessons on receptor product in Drosophila embryos is dependent on
Casares, F. and Snchez-Herrero, E. 1995. tyrosine kinase signaling and pattern formation. its interactions with other homeotic products.
Regulation of the infraabdominal regions of the Dev. Biol. 166: 380-395. Cell 61: 515-522.
bithorax complex of Drosophila by gap genes.
Edgar, B. A. and Schubiger, G. 1986. Parameters Gonzles-Reyes, A., Elliot, H. and St. Johnson,
controlling transcriptional activation during early D. 1995. Polarization of both major body axes
Castelli-Gair, J. and Akam, M. 1995. How the Drosophila development. Cell 44: 871-877. in Drosophila by gurken-torpedo signalling.
Hox gene Ultrabithorax specifies two different Nature 375: 654-658.
Edgar, B. A., Weir, M. P., Schubiger, G. and
segments: the significance of spatial and tem-
Kornberg, T. 1986. Repression and turnover Grossniklaus, U., Cadigan, K. M. and Gehring,
poral regulation within metameres. Development
pattern of fushi tarazu RNA in the early Droso- W. J. 1994. Three maternal coordinate systems
121: 2973-2982.
phila embryo. Cell 47: 747-754. cooperate in the patterning of the Drosophila
Chasan, R., Jin, Y. and Anderson, K. V. 1992. head. Development 120: 3155-3171.
Ferguson, E. L and Anderson, K. V. 1991. Dor-
Activation of the easter zymogen is regulated by five
sal-ventral pattern formation in the Drosophi- Hafen, E., Levine, M. and Gehring, W. J. 1984.
other genes to define dorsal-ventral polarity in the
la embryo The role of zygotically active genes. Regulation of Antennapedia transcript distribu-
Drosophila embryo. Development 115: 607-615.
Curr. Top. Dev. Biol. 25: 17-43. tion by the bithorax complex in Drosophila.
Child, C. M. 1941. Patterns and Problems of De- Nature 307: 287-289.
Finkelstein, R. and Perrimon, N. 1990. The
velopment. University of Chicago Press, Chicago.
orthodenticle gene is regulated by bicoid and torso Hanes, S. D. and Brent, R. 1989. DNA
Cohen, S. M. and Jirgens, G. 1990. Mutations and specifies Drosophila head development. specificity of the bicoid activator protein is
of Drosophila head development by gap-like Nature 346: 485-488. determined by homeodomain recognition helix
segmentation genes. Nature 346: 482-485. residue 9. Cell 57: 1275-1283.
Foe, V. E. 1989. Mitotic domains reveal early
Crick, F. H. C. 1970. Diffusion in embryoge- committment of cells in Drosophila embryos. Hanes, S. D. and Brent, R. 1991. A genetic model
nesis. Nature 225: 420-422. Development 107: 1-22. for interaction of the homeodomain recognition
helix with DNA. Science 251: 426-430.
Degelmann, A., Hardy, P. A., Perrimon, N. and Foe, V. E. and Alberts, B. M. 1983. Studies of
Mahowald, A. P. 1986. Developmental analysis of nuclear and cytoplasmic behavior during the five Harding, K. and Levine, M. 1988. Gap genes
the torso-like phenotype in Drosophila produced by mitotic cycles that precede gas-trulation in Dro- define the limits of Antennapedia and Bithorax
a maternal-effect locus. Dev. Biol. 115: 479-489. sophila embryogenesis. J. Cell Sci. 61: 31-70. gene expression during early development in
Drosophila. EMBO J. 7: 205-214.
Dessain, S., Gross, C. T., Kuziora, M. A. and Forlani, S., Ferrandon, D., Saget, O. and Mohier, E.
McGinnis, W. 1992. Antp-type home-odomains 1993. A regulatory function for K10 in the Harding, K. and Levine, M. 1989. Drosophila:
have distinct DNA-binding specificities that establishhment of dorsoventral polarity in the Dro- The zygotic contribution. In D. M. Glover and
correlate with their different regulatory functions sophila egg and embryo. Mech. Dev. 41: 109-120. B. D. Hames (eds.), Genes and Embryos. IRL,
in embryos. EMBO Journal 11: 991-1002. New York, pp. 38-90.
French, V. 1988. Gradients and insect seg-
Doe, C. Q., Hiromi, Y, Gehring, W. J. and mentation. In V. French, P. Ingham, J. Cooke Harding, K., Wedeen, C., McGinnis, W. and
Goodman, C. S. 1988. Expression and function and J. Smith (eds.), Mechanisms of Segmentation. Levine, M. 1985. Spatially regulated expression
of the segmentation gene fushi tarazu during Company of Biologists, Cambridge, pp. 3-16. of homeotic genes in Drosophila. Science 229:
Drosophila neurogenesis. Science 239: 170-175. 1236-1242.
Frigerio, G., Burri, M., Bopp, D., Baumgart-ner, S.
Driever, W. and Nsslein-Volhard, C. 1988a. A and Noll, M. 1986. Structure of the segmentation Hashimoto, C., Hudson, K. L. and Anderson, K. V.
gradient of bicoid protein in Drosophila embryos. gene paired and the Drosophila PRD gene set as 1988. The Toll gene of Drosophila, required for
Cell 54: 83-93. part of a gene network. Cell 47: 735-746. dorsal-ventral embryonic polarity, appears to encode
a transmembrane protein. Cell 52: 269-279.
Driever, W. and Nsslein-Volhard, C. 1988b. The Frischer, L. E., Hagen, F. S. and Garber, R. L.
bicoid protein determines position in the Dro- 1986. An inversion that disrupts the An- Hashimoto, C., Gerttula, S. and Anderson, K. V.
sophila embryo in a concentration-dependent tennapedia gene causes abnormal structure and 1991. Plasma membrane localization of the Toll
manner. Cell 54: 95-104. localization of RNAs. Cell 47: 1017-1023. protein in the syncytial Drosophila embryo:
importance of trans-membrane signalling for
Driever, W. and Nsslein-Volhard, C. 1989. The Galindo, R. L., Edwards, D. N., Gillespie, S. K.
dorsal-ventral pattern formation. Development
bicoid protein is a positive regulator of H. and Wasserman, S. A. 1995. Interaction of
11: 1021-1028.
hunchback transcription in the early Drosophi- the pelle kinase with the membrane-associated
la embryo. Nature 337: 138-143. protein tube is required for transduction of the Hecht, P. M. and Anderson, K. V. 1992. Ex-
dorsoventral signal in Drosophila embryos. De- tracellular proteases and embryonic pattern
Driever, W., Thoma, G. and Nusslein-Volhard,
velopment 121: 2209-2218. formation. Trends Cell Biol. 2: 197-202.
C. 1989. .Determination of spatial domains of
Heemskerk, J., DiNardo, S., Kostriken, R. and Kalthoff, K. 1969. Der Einfluss ver-shiedener Lemaitre, B., Nicolas, E., Michaut, L., Re-
OFarrell, P. H. 1991. Multiple modes of Versuchparameter auf die Hu-figkeit der ichhart, J.-M. and Hoffmann, J. A. 1996. The
engrailed regulation in the progression towards Missbildung Doppelabdomen in UV-bestrahlten dorsoventral regulatory gene casette sptzle/
cell fate determination. Nature 352: 404-410. Eiern von Smittia sp. (Diptera,Chironomidae). Toll/cactus controls the potent an-tifungal
Zool. Anz. Suppl. 33: 59-65. response in Drosophila adults. Cell 86: 973-983.
Heemskerk, J. and DiNardo, S. 1994. Drosophi-
la hedgehog acts as a morphogen in cellular Kalthoff, K. and Sander, K. 1968. Der En- Leptin, M. 1991a. twist and snail as positive and
patterning. Cell 76: 449-460. wicklungsgang der Missbildung Doppelabdomen negative regulators during Drosophila mesoderm
im partiell UV-bestrahlten Ei von Smittia development. Genes Dev. 5: 1568-1576.
Hoch, M., Gerwin, N., Taubert, H. and Jckie,
parthenogenetica (Diptera, Chi-ronomidae).
H. 1992. Competition for overlapping sites in Leptin, M. 1991b. Mechanics and genetics of
Wilhelm Roux Arch. Entwick-lungsmech. Org.
the regulatory region of the Drosophila gene cell shape changes during Drosophila ventral
161: 129-146.
Krppel. Science 256: 94-97. furrow formation. In R. Keller et al. (eds.), Gas-
Kandler-Singer, I. and Kalthoff, K. 1976. RNase trulation: Movements, Patterns, and Molecules.
Hong, C. C. and Hashimoto, C. 1995. An unusual
sensitivity of an anterior morpho-genetic Plenum, New York, pp. 199-212.
mosaic protein with a protease domain, encoded
determinant in an insect egg (Smittia sp.,
by the nudel gene, is involved in defining Levine, M. S. and Harding, K. W. 1989. Droso-
Chironomidae, Diptera). Proc. Natl. Acad. Sci.
embryonic dorsoventral polarity in Drosophi- phila: The zygotic contribution. In D. M. Glover
USA 73: 3739-3743.
la. Cell 82: 785-794. and B. D. Hames (eds.), Genes and Embryos.
Karch, F. and seven others. 1985. The abdominal IRL, New York, pp. 39-94.
Hlskamp, M., Schrder, C., Pfeifle, C., Jckle,
region of the bithorax complex. Cell 43: 81-96.
H. and Tautz, D. 1989. Posterior seg-mentation Lewis, E. B. 1978. A gene complex controlling
of the Drosophila embryo in the absence of a Karr, T. L. and Kornberg, T. B. 1989. fushi tarazu segmentation in Drosophila. Nature 276: 565-570.
maternal posterior organizer gene. Nature 338: protein expression in the cellular blastoderm of
Lewis, E. B. 1985. Regulation of the genes of
629-632. Drosophila detected using a novel imaging
the bithorax complex in Drosophila. Cold
technique. Development 105: 95-103.
Immergluck, K., Lawrence, P. A. and Bienz, M. Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50: 155-164.
1990. Induction across germ layers in Drosophila Kaufman, T. C., Seeger, M. A. and Olsen, G.
Macdonald, P. M. and Smibert, C. A. 1996.
mediated by a genetic cascade. Cell 62: 261-268. 1990. Molecular and genetic organization of the
Translational regulation of maternal mRNAs.
Antennapedia gene complex of Drosophila
Ingham, P. W. and Martinez-Arias, A. 1986. Curr. Opin. Genet. Dev. 6: 403-07.
melanogaster. Adv. Genet. 27: 309-362.
The correct activation of Antennapedia and
Macdonald, P. M. and Struhl, G. 1986. A mole-
bithorax complex genes requires the fushi tarazu Kidd, S. 1992. Characterization of the Drosophila
cular gradient in early Drosophila embryos and
gene. Nature 324: 592-597. cactus locus and analysis of interactions between
its role in specifying the body pattern. Nature
cactus and dorsal proteins. Cell 71: 623-635.
Ingham, P. W. and Whittle, R. 1980. Tritho- 324: 537-545.
rax: A new homeotic mutation of Drosophila Klingler, M., Erdlyi, M., Szabad, J. and Nsslein-
Mange, A. P. and Mange, E. J. 1990. Genet-
causing transformations of abdominal and Volhard, C. 1988. Function of torso in
ics: Human Aspects. Sinauer Associates,
thoracic imaginal segments. I. Putative role during determining the terminal anlagen of the Droso-
Sunderland, MA.
embryogenesis. Mol. Gen. Genet. 179: 607-614. phila embryo. Nature 335: 275-277.
Mann, R. S. and Hogness, D. S. 1990. Func-
Ingham, P. W., Taylor, A. M. and Nakano, Y. Knipple, D. C., Seifert, E., Rosenberg, U. B.,
tional dissection of Ultrabithorax proteins in D.
1991. Role of Drosophila patched gene in Preiss, A. and Jckle, H. 1985. Spatial and tem-
melanogaster. Cell 60: 597-610.
positional signalling. Nature 353: 184-187. poral patterns of Krppel gene expression in
early Drosophila embryos. Nature 317: 40-44. Martin, J. R., Railbaud, A. and Ollo, R. 1994.
Ip. Y. T. 1995. Converting an activator into a
Terminal elements in Drosophila embryo induced
represser. Curr. Biol. 5:1-3. Kosman, D., Ip, Y. T, Levine, M. and Arora, K.
by torso-like protein. Nature 367: 741-745.
1991. Establishment of the mesoderm-
Irish, V. F. and Gelbart, W. M. 1987. The de-
neuroectoderm boundary in the Drosophila Martinez-Arias, A. and Lawrence, P. A. 1985.
capentaplegic gene is required for dorsal-ven-
embryo. Science 254: 118-122. Parasegments and compartments in the Droso-
tral patterning of the Drosophila embryo. Genes
phila embryo. Nature 313: 639-642.
Dev. 1: 868-879. Kraut, R. and Levine, M. 1991. Mutually re-
pressive interactions between the gap genes giant McKeon, J. and Brock, H. W. 1991. Interac-
Irish, V., Lehmann, R. and Akam, M. 1989. The
and Krppel define middle body regions of the tions of the Polycomb group of genes with
Drosophila posterior-group gene nanos
Drosophila embryo. Development 111: 611-621. homeotic loci of Drosophila. Roux Arch. Dev.
functions by repressing hunchback activity.
Biol. 199: 387-396.
Nature 338: 646-648. Lehmann, R. and Nsslein-Volhard, C. 1986.
Abdominal segmentation, pole cell formation, Mlodzik, M. and Gehring, W. J. 1987. Expression
Jckle, H., Tautz, D., Schuh, R., Seifert, E. and
and embryonic polarity require the localized of the caudal gene in the germ line of Drosophi-
Lehmann, R. 1986. Cross-regulatory interactions
activity of oskar, a maternal gene in Drosophi- la: Formation of an RNA and protein gradient
among the gap genes of Drosophila. Nature 324:
la. Cell 47: 141-152 during early embryogenesis. Cell 48: 465-78.
668-670.
Lehmann, R. and Nusslein-Volhard, C. 1991. The Mohler, J. and Vani, K. 1992. Molecular or-
Jiang, J. and Levine, M. 1993. Binding affinities
maternal gene nanos has a central role in poste- ganization and embryonic expression of the
and cooperative interactions with bHLH
rior pattern formation of the Drosophila hedgehog gene involved in cell-cell com-
activators delimit threshold responses to the
embryo. Development 112: 679-691. munication in segmental patterning in Droso-
dorsal gradient morphogen. Cell 72: 741-752.
phila. Development 115: 957-971.
Jiang, J., Kosman, D., Ip, Y. T. and Levine, M.
Lehming, N., Thanos, D., Brickman, J. M., Ma, Montell, D. J., Keshishian, H. and Spradling, A.
1991. The dorsal morphogen gradient regulates
J., Maniatis, T. and Ptashne, M. 1994. An HMG- C. 1991. Laser ablation studies of the role of the
the mesoderm determinant twist in early Droso-
like protein that can switch a transcriptional Drosophila oocyte nucleus in pattern formation.
phila embryos. Genes Dev. 5: 1881-1891.
activator to a represser. Nature 371: 175-179. Science 254: 290-293.
Mller, J. and Bienz, M. 1992. Sharp anterior Peifer, M. and Wieschaus, E. 1990. Mutations Rivera-Pomar, R., Niessling, D., Schmidt-Ott,
boundary of homeotic gene expression in the Drosophila gene extradenticle affect the U., Gehring, W. J. and Hckle, H. 1996. RNA
conferred by the fushi tarazu protein. EMBO way specific homeodomain proteins regulate binding and translational suppression by bicoid.
J.11: 3653-3661. segment identity. Genes Dev. 4: 1209-1223. Nature 379: 746-749.
Mller, M. Affolter, M., Leupin, W., Otting, G., Peifer, M., Karch, F. and Bender, W. 1987. The Roder, L., Vola, C. and Kerridge, S. 1992. The
Wthrich, K. and Gehring, W. J. 1988. Isolation bithorax complex: Control of segmen-tal role of teashirt in trunk segmental identity in
and sequence-specific DNA binding of the Anten- identity. Genes Dev. 1: 891-898. Drosophila. Development 115: 1017-1033.
napedia homeodomain. EMBO J. 7: 4299-4304.
Percival-Smith, A., Mller, M., Affolter, M. and Roth, S. 1994. Proteolytic generation of a
Murata, Y. and Wharton, R. P. 1995. Binding of Gehring, W. J. 1990. The interaction with DNA morphogen. Curr. Biol. 4: 755-757.
pumilio to maternal hunchback mRNA is required of wild-type and mutant fushi tarazu homeodo-
Roth, S., Stein, D., Nsslein-Volhard, C. 1989. A
for posterior patterning in Drosophila embryos. mains. EMBO J. 9: 3967-3974.
gradient of nuclear localization of the dorsal
Cell 80: 747-756.
Pignoni, F., Steingrmsson, E. and Lengyel, J. A. protein determines dorsoventral pattern in the
Nambu, J. R., Franks, R. G., Hong, S. and Crews, 1992. bicoid and the terminal system activate Drosophila embryo. Cell 59: 1189-1202.
S. 1990. The single-minded gene of Drosophila tailless expression in the early Drosophila
Roth, S., Neuman-Silberberg, F. S., Barcelo, G.
is required for the expression of genes important embryo. Development 115: 239-251.
and Schpbach, T. 1995. cornichon and the EGF
for the development of CNS midline cells. Cell
Porter, J. A. and ten others. 1996. Hedgehog receptor signalling process are necessary for both
63: 63-75.
patterning activity. Role of a lipophilic anterior-posterior and dorsal-ventral pattern
Neuman-Silberberg, F. S. and Schiipbach, T. 1993. modification by the carboxy-terminal auto- formation in Drosophila. Cell 81: 967-978.
The Drosophila dorsoventral patterning gene processing domain. Cell 86: 21-34.
Rushlow, C., Frasch, J., Doyle, H. and Levine,
gurken produces a dorsally localized RNA and
Price, J. V., Clifford, R. J. and Sch pbach, T. M. 1987. Maternal regulation of a homeobox
encodes a TGF-a-like protein. Cell 75: 165-174.
1989. The maternal ventralizing gene torpedo gene controlling differentiation of dorsal tissues
Nijhout, H. F. 1981. The color patterns of butterflies is allelic to faint little ball, an embryonic lethal, in Drosophila. Nature 330: 583-586.
and moths. Sci. Am. 245 (5): 140-151. and encodes the Drosophila EGF receptor
Rushlow, C. A., Han, K., Manley, J. L. and Levine,
homolog. Cell 56: 1085-1092.
Nsslein-Volhard, C. and Wieschaus, E. 1980. M. 1989. The graded distribution of the dorsal
Mutations affecting segment number and Qian, S., Capovilla, M. and Pirrotta, V. 1991. morphogen is initiated by selective nuclear
polarity in Drosophila. Nature 287: 795-801. The bx region enhancer, a distant ciscontrol transport in Drosophila. Cell 59: 1165-1177.
element of the Drosophila Ubx gene and its
Nsslein-Volhard, C., Frhnhofer, H. G. and Snchez-Herrero, E. 1991. Control of the
regulation.by hunchback and other segmentati-
Lehmann, R. 1987. Determination of anterio- expression of the bithorax complex genes ab-
on genes. EMBO J. 10: 1415-1425.
posterior polarity in Drosophila. Science 238: dominal-A and Abdominal-B by cis-regula-tory
1675-1681. Raskolb, C. and Wieschaus, E. 1994. Coordinate regions in Drosophila embryos. Development
regulation of downstream genes by extradenticle 111: 437-449.
Otting, G., Qian, Y. Q., Billeter, M., M ller, M.,
and homeotic selector proteins. EMBO J. 15:
Affolter, M., Gehring, W. J. and Wthrich, K. Snchez-Herrero, E., Vernos, I., Marco, R. and
3561-3569.
1990. Protein-DNA contacts in the structure of Morata, G. 1985. Genetic organization of Dro-
a homeodomain-DNA complex determined by Ray, R. Arora, K., Nsslein-Volhard, C. and sophila bithorax complex. Nature 313: 108-113.
nuclear magnetic resonance spectroscopy in Gelbart, W. M. 1991. The control of cell fate
Sander, K. 1960. Analyse des ooplasmatis-chen
solution. EMBO J. 9: 3085-3092. along the dorsal-ventral axis of the Drosophila
Reaktionssystems von Euscelis pleba-jus Fall
embryo. Development 113: 35-54.
Pan, D., Huang, J.-D. and Courey, A. J. 1991. (Circadina) durch Isolieren und Kombinieren von
Functional analysis of the Drosophila twist Reach, M., Galindo, R. L., Towb, P., Allen, J. L., Keimteilen. II. Die Dif-ferenzierungsleistungen nach
promoter reveals a dorsal-binding ventral Karin, M. and Wasserman, S. A. 1996. A gradient Verlagern von Hinterpolmaterial. Wilhelm Roux
activator region. Genes Dev. 5: 1892-1901. of Cactus protein degredation establishes Arch. Entwicklungsmech. Org. 151: 660-707.
dorsoventral polarity in the Drosophila embryo.
Panganiban, G. E. F., Reuter, R., Scott, M. P. and Sander, K. 1975. Pattern specification in the
Dev. Biol. 180: 353-364.
Hoffmann, F. M. 1990. A Drosophila growth insect embryo. In Cell Patterning. CIBA
factor homolog, Decapentaplegic, regulates Reinitz, J., Mjolsness, E. and Sharp, D. H. 1995. Foundation Symp. 29: 241-263.
homeotic gene expression within and across germ Model for cooperative control of positional
Schier, A. F. and Gehring, A. J. 1992. Direct
layers during midgut morphogenesis. Develop- information in Drosophila by bicoid and mater-
homeodomain-DNA interaction in the au-
ment 110: 1041-1050. nal hunchback. J. Exp. Zool. 271: 47-56.
toregulation of the fushi tarazu gene. Nature
Pankratz, M. J., Seifert, E., Gerwin, N., Billi, B., Reinitz, J. and Sharp, D. H. 1995. Mechanism of 356:804-807.
Nauber, U. and Jckle, H. 1990. Gradients of eve stripe formation. Mech. Dev. 49: 133-158.
Schneuwly, S., Kuroiwa, A. and Gehring, W. J. 1987.
Krppel and knirps gene products direct pair-
Riddihough, G. 1992. Homing in on the Molecular analysis of the dominant homeotic
rule gene stripe patterning in the posterior region
homeobox. Nature 357: 643-644. Antennapedia phenotype. EMBO J. 6: 201-206.
of the Drosophila embryo. Cell 61: 309-317.
Rivera-Pomar, R. and Jckle, H. 1996. From Schulz, C. and Tautz, D. 1995. Zygotic caudal
Panzer, S., Weigel, D. and Beckendorf, S. K.
gradients to stripes in Drosophila embryo- regulation by hunchback and its role in abdomi-
1992. Organogenesis in Drosophila melanogas-
genesis: Filling in the gaps. Trends Genet. 12: nal segment formation of the Drosophila
ter: embryonic salivary gland determination is
478-183. embryo. Development 121: 1023-1028.
controlled by homeotic and dorsoventral
patterning genes. Development 114: 49-57. Rivera-Pomar, R., Lu, X., Perrimon, N., Taubert, Schpbach, T. 1987. Germ line and soma
H. and Jckle, H. 1995. Activation of posterior cooperate during oogenesis to establish the
Peifer, M. and Bender, W. 1986. The antero-
gap gene expression in the Drosophila blastoderm. dorsoventral pattern of egg shell and embryo in
bithorax and bithorax mutations of the bithorax
Nature 376: 253-256. Drosophila melanogaster. Cell 49: 699-707.
complex. EMBO J. 5: 2293-2303.
Schpbach, T. and Wieschaus, E. 1986. Maternal Stein, D. and Nsslein-Volhard, C. 1992. Multiple Turner, F. R. and Mahowald, A. P. 1977. Scanning
effect mutations altering the anterior-posterior extracellular activities in Drosophila egg electron microscopy of Drosophila melanogas-
pattern of the Drosophila embryo. Roux Arch. perivitelline fluid are required for establishment ter embryogenesis. Dev. Biol. 57: 403-416.
Dev. Biol. 195: 302-317. of embryonic dorsal-ventral polarity. Cell 68:
Tyler, M. S. and Schetzer, J.W. 1996. The Lives
429-440.
Schpbach, T., Clifford, R. J., Manseau, L. J. and of a Fly. Videocassette. ASAP Media Services,
Price, J. V. 1991. Dorsoventral signaling pro- Stein, D., Roth, S., Vogelsang, E., Nsslein- Orono; Sinauer Associates, Sunderland, MA.
cesses in Drosophila oogenesis. In J. Ger-hart, Volhard, C. 1991. The polarity of the dorsoventral
Vachon, G., Cohen, B., Pfeifle, C., McGuf-fin,
(ed.) Cell-Cell Interactions in Early De- axis in the Drosophila embryo is defined by an
M. E., Botas, J. and Cohen, S. M. 1992.
velopment. Wiley-Liss, New York pp. 163-174. extracellular signal. Cell 65: 725-735.
Homeotic genes of the bithorax complex repress
Schwalm, R 1997. Insects. In S.F. Gilbert and A. Stevens, L. M., Frohnhfer, H. G., Klingler, M. limb development in the abdomen of the Dro-
M. Raunio, (eds.), Embryology: Constructing the and Nsslein-Volhard, C. 1990. Localized sophila embryo through the target gene Distal-
Organism. Sinauer Associates, Sunderland, MA. requirement for torso-like expression in follicle less. Cell 71: 437-450.
cells for development of terminal anlagen of
Shelton, C. A. and Wasserman, S. A. 1993. pelle Van Dyke, M. A. and Murre, C. 1994. Ex-
the Drosophila embryo. Nature 346: 660-662.
encodes a protein kinase required to establish tradenticle raises the DNA binding specificity
dorsoventral polarity in the Drosophila embryo. Steward, R. 1989. Relocalization of the dorsal of homeotic selector gene products. Cell 78:
Cell 72: 515-525. protein from the cytoplasm to the nucleus 617-624.
correlates with its function. Cell 59: 1179-1188.
Siegfried, E., Wilder, E. L. and Perrimon, N. Wagner-Bernholz, J. T., Wilson, C., Gibson, G.,
1994. Components of wingless signalling in Steward, R. and Govind, S. 1993. Dorsal-ventral Schuh, R. and Gehring, W. J. 1991. Identification
Drosophila. Nature 367: 76-80. polarity in the Drosophila embryo. Curr. Opin. of target genes of the homeotic gene Antenna-
Genet. Dev. 3: 556-561. pedia by enhancer detection. Genes Dev. 5:
Simon, J., Chiang, A. and Bender, W. 1992. Ten
2467-2480.
different Polycomb genes are required for spatial Struhl, G. 1981. A homeotic mutation trans-
control of the abdA and AbdB homeotic products. forming leg to antenna in Drosophila. Nature Wakimoto, B. T., Turner, F. R. and Kaufman, T.
Development 114: 493-505. 292: 635-638. C. 1984. Defects in embryogenesis in mutants
associated with the Antennapedia gene complex
Simpson-Brose, M., Treisman, J. and Des-plan, Struhl, G. 1989. Differing strategies for or-
of Drosophila melanogaster. Dev. Biol. 102:
C. 1994. Synergy between the hunchback and ganizing anterior and posterior body pattern in
147-172.
bicoid morphogens is required for anterior Drosophila embryos. Nature 338: 741-744.
patterning in Drosophila. Cell 78: 855-865. Wang, C. and Lehman, R. 1991. Nanos is the
Struhl, G., Struhl, K. and Macdonald, P. M. 1989.
localized posterior determinate in Drosophila.
Skeath, J. B. and Carroll, S. B. 1992. Regulation The gradient morphogen bicoid is a concentra-
Cell 66:637-647.
of proneural gene expression and cell fate during tion-dependent transcriptional activator. Cell 57:
neuroblast segregation in the Drosophila embryo. 1259-1273. Weigel, D., Jirgens, G., Klingler, M. and Jckle,
Development 114: 939-946. H. 1990. Two gap genes mediate maternal ter-
Struhl, G., Johnson, P. and Lawrence, P. 1992. Control
minal information in Drosophila. Science 248:
Skeath, J. B., Panganiban, G., Selegue, J. and of a Drosophila body pattern by the hunchback
495-498.
Carroll, S. B. 1993. Gene regulation in two morphogen gradient. Cell 69: 237-249.
dimensions: The proneural achaete and scute Whalen, A. M. and Steward, R. 1993. Disso-
Tautz, D. 1988. Regulation of the Drosophila
genes are controlled by combinations of axis- ciation of the dorsal-cactus complex and
segmentation gene hunchback by two maternal
patterning genes through a common intergenic phosphorylation of the dorsal protein correlate
morphogenetic centers. Nature 332: 281-284.
control region. Genes Dev. 6: 2606-2619. with the nuclear localization of dorsal. J. Cell.
Thisse, B., Stoetzel, C., Gorostiza-Thisse, C. and Biol. 123: 523-534.
Slack, J. M. W. 1983. From Egg to Embryo:
Perrin-Schmidt, F. 1988. Sequence of the twist
Determinative Events in Early Development. Wharton, R. P. and Struhl, G. 1991. RNA
gene and nuclear localization of its protein in
Cambridge University Press, Cambridge. regulatory elements mediate control of Droso-
endomesodermal cells of early Drosophila
phila body pattern by the posterior morphogen
St. Johnston, D. and Nsslein-Volhard, C. 1992. embryos. EMBO J. 7: 2175-2183.
nanos. Cell 67: 955-967.
The origin of pattern and polarity in the Droso-
Thisse, C, Perrin-Schmidt, F., Stoetzel, C. and
phila embryo. Cell 68: 201-219. Wolpert, L. 1971. Positional information and
Thisse, B. 1991. Sequence-specific trans
pattern formation. Curr. Top. Dev. Biol. 6: 183-
tanojevic, D., Hoey, T. and Levine, M. 1989. activation of the Drosophila twist gene by the
224.
Sequence-specific DNA-binding activities of the dorsal gene product. Cell 65: 1191-1201.
gap proteins encoded by hunchback and Krppel Wolpert, L. 1978. Pattern formation in bio-
Treisman, J. and Desplan, C. 1989. The products
in Drosophila. Nature 341: 331-335. logical development. Sci. Am. 239(4): 154-164.
of the Drosophila gap genes hunchback and
tanojevic, D., Small, S. and Levine, M. 1991. Krppel bind to the hunchback promoters.
Regulators of a segmentation stripe by overlap- Nature 341: 335-336.
ping activators and repressers in the Drosophila
embryo. Science 254: 1385- 1387.
Especificao do destino celular por
interaes clula-clula progressivas 15
O estudo da funo dos genes na ontogenia
um campo da fisiologia do desenvolvimen-
to. Isso no quer dizer que o geneticista ser
excludo na resoluo desse problema - ele
se tornar um embriologista gentico expe-
N O LTIMO CAPTULO, observamos que a determinao celular e a especi-
ficao do eixo podem ser causadas por interaes de substncias plasmticas
especficas dentro de uma clula sincicial. Somente mais tarde ocorrem inte-
raes clula-clula que fixam o destino celular. Mas, a maioria dos tipos de organis-
mos no possui o estgio sincicial na embriognese precoce. Em muitas espcies,
rimental. Aps uma longa jornada onde al- incluindo a maioria dos vertebrados, as clulas so especificadas pelas suas intera-
gumas vezes ele se distanciou de seus colees com clulas vizinhas.
gas biologistas, ele volta para casa com al-
guns novos conceitos e instrumentos.
CURT STERN (1936)
Desenvolvimento regulativo
Nos mantemos eretos e andamos com partes Em deuterostomatas, tais como ourio-do-mar e vertebrados, o destino da clula de-
de nosso corpo que poderiam ser usadas para pende de sua posio no embrio e no da parte do citoplasma que ela adquiriu.
raciocinar se elas tivessem se desenvolvido Sidney Brenner (Citado em Wilkins, 1993) observou que o desenvolvimento animal
em outras partes do embrio. pode se dar de duas maneiras. Alguns organismos so especificados predominante-
HANS SPEMANN (1943) mente no estilo Europeu; ou seja, cada clula determinada por quem eram seus
ancestrais. A linhagem o fator importante. Inversamente, os blastmeros da maioria
dos vertebrados so especificados predominantemente no estilo Americano; existe
uma grande mistura de clulas e cada clula determinada pela natureza de suas
vizinhas. Toda clula se inicia com um potencial similar e se desenvolve de acordo com
o que encontra. Nesses embries, em pelo menos parte da clivagem, cada clula
capaz de se desenvolver no embrio todo se ela for separada das outras, e as clulas
remanescentes so capazes de alterar seu destino para produzir o embrio completo
(como na formao de gmeos). Esse tipo de comprometimento chamado especificao
condicional (ou dependente), e d origem ao desenvolvimento regulativo.
Durante o desenvolvimento autnomo, o eixo do embrio determinado pela dis-
tribuio de materiais em cada um dos blastmeros. Entretanto, no desenvolvimento
regulativo, os eixos se formam a partir de interaes das clulas constituintes. Neste
captulo acompanharemos os experimentos que se iniciaram h mais de um sculo para
entender como se d a especificao do sistema nervoso nos anfbios.
591
Testando a teoria do plasma germinativo

August Weismann: A teoria do plasma germinativo
A descoberta da determinao regulativa tem suas razes no insucesso das teorias do

desenvolvimento em mosaico formuladas na Alemanha no fim do sculo dezenove.
Em 1883, August Weismann comeou propondo uma teoria que integrava fenmenos
biolgicos diversos como hereditariedade, desenvolvimento, regenerao, reprodu-
o sexual e evoluo por seleo natural. Esse modelo mecnico para a diferenciao
celular foi chamado de teoria do plasma germinativo. Baseado no escasso conheci-
mento sobre fertilizao existente na poca, Weissmann audaciosamente props que
a contribuio cromossmica do espermatozide e do vulo ao novo organismo era
igual, no s quantitativa como qualitativamente. Ainda mais, foi postulado que os
cromossomos transportavam os potenciais herdados pelo novo organismo e foram
considerados como a base da continuidade entre geraes.* Entretanto, era conside-
rado que nem todos os determinantes dos cromossomos entravam em cada clula do
embrio; em lugar de dividir-se igualmente, a hiptese era que os cromossomos se
dividiam de tal maneira que diferentes determinantes nucleares entravam em clulas
diferentes. Enquanto o ovo fertilizado estaria levando a carga completa de determi-
nantes, certas clulas conteriam os determinantes formadores do sangue e outras
os determinantes formadores dos msculos. Somente os ncleos daquelas clulas
destinadas a se tornarem gametas (as clulas germinativas) reteriam, como se pensa-
va, todos os tipos de determinantes. Os ncleos de todas as outras clulas teriam
somente uma frao dos tipos determinantes originais.
A hiptese de Weismann propunha a continuidade do plasma germinativo e a
diversidade das linhagens somticas. A diferenciao era devida segregao
de determinantes nucleares para vrios tipos de clulas. Os cromossomos, ape-
sar de iguais em todas as clulas, seriam desiguais em suas qualidades. Somente a
linhagem das clulas germinativas manteria todos os determinantes, e essa linha-
gem seria totalmente independente das clulas somticas. Assim, no haveria
herana de caractersticas adquiridas pelas clulas somticas. Weismann conse-
guiu suporte para esse modelo, cortando a cauda de camundongos recm-nasci-
dos por 19 geraes. Os animais de cada gerao subseqente tinham caudas de
tamanho normal, indicando que a linhagem germinativa estava protegida contra
os insultos ao tecido somtico.**
A teoria do plasma germinativo de Weismann est ilustrada na Figura 15.1. A teoria
enfatiza a continuidade e a imortalidade da linhagem germinativa em contraste com a
natureza temporria do organismo adulto, mostrando, como notado pelo fisiologista
Michael Foster, que o corpo animal na realidade um veculo para os vulos. E. B.
Wilson, que considerava seu extraordinrio livro, The Cell in Development and
Inheritance (1896), como oriundo da hiptese de Weismann, tambm reconheceu as
implicaes desse esquema:
* Os embriologistas pensavam nesses termos cerca de 15 anos antes da redescoberta do trabalho

de Mendel. Weismann (1892, 1893) tambm especulou que esses determinantes nucleares da heran-
a funcionavam elaborando substncias que se tornavam ativas no citoplasma.
** Nessa poca, o ponto de vista alternativo mais importante era o da pangnese. Essa
hiptese, defendida como uma hiptese provisria por Charles Darwin, propunha que cada clula
somtica continha partculas (pangenes) que migravam de volta para as clulas sexuais para permi-
tir a transmisso das caractersticas daquelas clulas. De acordo com essa teoria, Weismann deveria
ter obtido camundongos com caudas mais curtas. Mais recentemente, Thomas Jukes, comentando
os resultados de Weismann citou a intuio de Hamlet que existe uma divindade que d forma aos
nossos fins, no importa a crueza com que os fazemos. Deve ser notado que a independncia da
linhagem germinativa em relao somtica no absoluta em todos os organismos. Em esponjas,
platelmintos, hidrozorios e tunicados coloniais, as clulas germinativas podem se desenvolver de
tecidos somticos, e mudanas genticas feitas nesses tecidos somticos podem ser herdados (Berrill
e Liu, 1948; Buss, 1987).
CAPTULO 15 Especificao Condicional 593
Diferenciao das
Clulas clulas somticas
somticas
A clula germinativa Continuidade das clulas germinativas
Figura 15.1
A teoria da herana de Weismann. A clula germinativa d origem s clulas somticas diferenciveis
do corpo (indicadas em cor), como tambm s novas clulas germinativas. (de Wilson, 1986.)
A morte de um indivduo no envolve soluo de continuidade na srie de divi-

ses celulares pelas quais a vida da raa continua. O indivduo morre, verda-
de, mas as clulas germinativas continuam, levando com elas as tradies da
raa da qual se originaram e as repassando aos seus descendentes.
Wilhelm Roux: Desenvolvimento em mosaico
Weismann intuiu que os cromossomos so os portadores da informao herdada para

o desenvolvimento. Mais importante que isso, ele props uma hiptese de desenvol-
vimento que podia ser testada imediatamente. Weismann dizia que quando a primeira
diviso da clivagem separava a futura metade direita do embrio da futura metade
esquerda, haveria uma separao dos determinantes direitos dos determinantes
esquerdos nos blastmeros resultantes. Essa afirmao foi testada por Wilhelm
Roux, um jovem embriologista alemo. Em 1888, Roux publicou o resultado de uma
srie de experimentos nos quais usou embries de r de 2 e 4 clulas, e destruiu
algumas das clulas com uma agulha aquecida. A hiptese de Weismann predizia a
formao de embries pela metade, direita ou esquerda; Roux obteve mrulas incom-
pletas (metades), justamente como havia sido previsto por Weismann (Figura 15.2).
Essas se desenvolveram em nurulas tendo somente um lado completo, direito ou
esquerdo, com uma dobra medular, uma fossa auditiva e assim por diante. Portanto, ele
concluiu que o embrio da r era um mosaico de partes autodiferenciveis e era prov-
vel que cada clula estivesse recebendo um conjunto especfico de determinantes e se
diferenciava de acordo com isso. Com essa srie de experimentos, Roux inaugurou seu
programa de mecnica do desenvolvimento (Entwicklungsmechanik), um enfoque
fisiolgico experimental da embriologia (veja Sander, 1991a,b). Nunca mais, insistia
Roux, ser a embriologia submetida por estudos evolucionrios. Pelo contrrio, a
embriologia assumiria seu papel como uma cincia experimental independente.
Figura 15.2
O desenvolvimento em mosaico, como Roux
tentou mostrar. A destruio de uma clula
de um embrio de r com 2 clulas resulta
no desenvolvimento de somente uma meta-
de do embrio.
Tecido Tecido
Agulha quente morto vivo Meio embrio
Clivagem
Metade destruda
(tecido morto)
Ovo fertilizado de r Estgio de 2 clulas Estgio de blstula Estgio de nurula
(A) Larva pluteus normal (B) Plutei desenvolvidas de clulas isoladas de embrio de 4 clulas
Figura 15.3
Demonstrao do desenvolvimento regulativo por Driesch. (A) Uma larva pluteus normal. (B)
Plutei menores, mas normais, cada uma delas se desenvolveu a partir de um blastmero de um
embrio dissecado de 4 clulas. (Todas as larvas esto desenhadas na mesma escala.) (De acordo
com Hrstadius e Wolsky, 1936.) Note que as larvas derivadas dessa maneira no so idnticas,
apesar de sua capacidade de gerar todos os tipos celulares necessrios. Essas variaes tambm
esto presentes nos ourios-do-mar adultos formados dessa maneira (Marcus, 1979).
Hans Driesch: Desenvolvimento Regulativo
Ningum mais do que Hans Driesch apreciava a abordagem experimental embriologia.

A meta de Driesch era explicar o desenvolvimento em termos das leis da fsica e da
matemtica. Sua investigao inicial era semelhante de Roux. Os experimentos de
Roux eram, tecnicamente, estudos de defeitos, que respondiam questo de como os
blastmeros remanescentes de um embrio se desenvolveriam quando uma parte de-
les era destruda. Driesch (1892) procurou estender essa pesquisa realizando experi-
mentos de isolamento. Blastmeros de ourio-do-mar eram separados uns dos outros
por agitao vigorosa (ou, mais tarde, colocando-os em gua do mar sem clcio). Para
a surpresa de Driesch, cada um dos blastmeros de um embrio de 2 clulas se desen-
volveu em uma larva completa. Analogamente, quando Driesch separou os blastmeros
de embries de 4 e 8 clulas, algumas das clulas produziram larvas plutei inteiras
(Figura 15.3). Esse era um resultado drasticamente diferente daquele previsto por
Weismann e Roux. Em lugar de se autodiferenciar como sua futura parte embrionria,
cada blastmero podia regular seu desenvolvimento de modo a produzir um organis-
mo completo. Essa era a primeira situao experimentalmente observvel do desenvol-
vimento regulativo.
O desenvolvimento regulativo tambm foi demonstrado em outro experimento de
Driesch. Em ovos de ourio-do-mar, os primeiros dois planos de clivagem so meridi-
onais passando pelos plos animal e vegetal, enquanto que a terceira diviso equa-
torial, dividindo o embrio em quatro clulas superiores e quatro inferiores (veja Figu-
ra 5.3). Driesch (1893) mudou a direo da terceira clivagem comprimindo suavemente
os embries precoces entre duas placas de vidro, por conseguinte, fazendo com que
a terceira diviso fosse meridional tal como as duas clivagens precedentes. Aps a
diminuio da presso, a quarta diviso foi equatorial. Esse procedimento relocou os
ncleos, de modo que um ncleo normalmente localizado na regio destinada a formar
o endoderma estivesse agora na regio ectodrmica presuntiva. Alguns ncleos que
8 clulas Vista 16 clulas 8 clulas Vista 16 clulas

superior superior
Vista lateral
Placa de vidro
Vista lateral
(A) CLIVAGEM NORMAL (B) CLIVAGEM SOB PRESSO
Figura 15.4
Experimento de Driesch com placas de presso para alterar a distribuio dos ncleos. (A)
Clivagem normal de embries de ourio-do-mar com 8 a 16 clulas, com vistas do plo animal
(seqncia superior) e lateral (seqncia inferior). (B) Planos de clivagem anormal formados
sob presso, como observados do plo animal e lateralmente. (De acordo com Huxley e
deBeer, 1934.)
normalmente produziriam estruturas dorsais agora eram encontrados em clulas ven-

trais (Figura 15.4). Se a segregao dos determinantes nucleares tivesse ocorrido
(como havia sido proposto por Wiesmann e Roux), o embrio resultante deveria estar
estranhamente desorganizado. Entretanto, Driesch obteve larvas normais desses em-
bries. Ele concluiu que A posio relativa de um blastmero dentro do conjunto
provavelmente definir de um modo geral o que com ele originar.
As conseqncias desses experimentos foram monumentais para a embriologia e
pessoalmente para Driesch. Primeiro, Driesch havia demonstrado que a potncia
prospectiva de um blastmero isolado (aqueles tipos de clulas que ele tinha a pos-
sibilidade de formar) maior do que seu destino prospectivo (os tipos de clulas
que normalmente originaria no curso inalterado do seu desenvolvimento). De acordo
com Weismann e Roux, a potncia prospectiva e o destino prospectivo de um blast-
mero deveriam ser idnticos. Segundo, Driesch concluiu que o embrio do ourio-do-
mar era um sistema eqipotencial harmonioso, porque todas essas partes potencial-
mente independentes funcionavam juntas para formar um nico organismo. Terceiro,
ele concluiu que o destino de um ncleo dependia unicamente da sua localizao
dentro do embrio. Driesch (1894) hipotetizou uma srie de eventos onde o desenvol-
vimento prosseguia por interaes do ncleo e do citoplasma:
Como contm um ncleo, cada clula carrega durante a ontognese a totalida-

de dos primrdios; como ela contm um corpo celular citoplasmtico especfico,
est especificamente apta a responder somente a efeitos especficos... Ento quan-
do o material nuclear ativado, sob seu controle, o citoplasma de uma clula
que a princpio havia influenciado o ncleo por sua vez modificado, e ento
est estabelecida a base para um novo processo elementar, o qual no somente
o resultado mas tambm a causa.
Esse surpreendente conceito moderno de interao ncleo-citoplasma e equivalncia

nuclear, por fim, fez Driesch abandonar a cincia. Ele no podia mais imaginar o em-
brio como uma mquina fsica, porque esse podia ser subdividido em partes, cada
uma capaz de reformar o organismo todo. Em outras palavras, Driesch passou a acre-
ditar que o desenvolvimento no podia ser explicado por foras fsicas. Ele foi levado
Tabela 12.2
151 Procedimentos
Estabilizao de
experimentais
RNAs mensageiros
e resultados
especficos
de Roux
por e
hormnios
Driesch
Interpretao em relao
Pesquisador Organismo Tipo de experimento Concluso potncia e destino
Roux (1888) R (Rana fusca) Defeito Desenvolvimento em Potncia prospectiva

mosaico (autnomo) igual ao destino prospectivo
Driesch (1892) Ourio-do-mar Isolamento Desenvolvimento regulativo Potncia prospectiva maior
(Echinus (condicional) que o destino prospectivo
microtuberculatus)
Dreisch (1893) Ourio-do-mar Recombinao Desenvolvimento Potncia prospectiva maior
(Echinus e regulativo (condicional) que o destino prospectivo
Paracentrotus)
a invocar uma fora vital, entelechy (fora dirigida por uma meta interna), para explicar
como prosseguia o desenvolvimento. Essencialmente, ele acreditava que o embrio
era imbudo de uma psique interna e sabedoria para conseguir suas metas, apesar dos
obstculos colocados no seu caminho por embriologistas. Incapaz de explicar seus
resultados pela Fsica de sua poca, Driesch renunciou ao estudo da fisiologia do
desenvolvimento e se tornou um professor de filosofia, proclamando o vitalismo at
sua morte em 1941. Outros, especialmente Oscar Hertwig (1894), puderam incorporar
os experimentos de Driesch em uma embriologia experimental mais sofisticada.*
As diferenas entre os experimentos de Roux e os de Driesch esto resumidas na
Tabela 15.1. A diferena entre experimentos de isolamento e de defeitos e a importncia
das interaes fornecidas pelos blastmeros destrudos foi enfatizada em 1910, quan-
do J. F. McClendon mostrou que blastmeros isolados de r se comportam exatamente
como clulas isoladas de ourio-do-mar. Portanto, o desenvolvimento em mosaico
dos primeiros dois blastmeros da r no estudo de Roux foi um artefato do experimen-
to de defeito. Alguma coisa dentro do blastmero morto ou sobre ele ainda informava
s clulas vivas que ele existia. Ns j vimos que blastmeros precoces de mamferos
tm um desenvolvimento do tipo regulativo. Como discutimos no Captulo 5, cada
blastmero isolado de uma massa de clulas internas do camundongo capaz de gerar
um animal inteiro e frtil. A habilidade de dois ou mais embries precoces de camun-
dongo se fundirem em um embrio normal (veja Figura 5.28) e o fenmeno de gmeos
idnticos (veja Figura 5.27) tambm atestam a habilidade regulativa dos blastmeros
de mamferos. Portanto, mesmo que Weismann e Roux tenham sido pioneiros no estu-
do da fisiologia do desenvolvimento, sua proposio que a diferenciao causada
pela segregao de determinantes nucleares logo se mostrou incorreta.
*Esses experimentos reforaram dentro da embriologia um tipo de filosofia mecanstica cha-

mada organicismo holstico. Essa filosofia se refere aos conceitos que (1) as propriedades do todo
no podem ser previstas unicamente a partir das propriedades das partes componentes, e (2) as
propriedades das partes so informadas pela sua relao ao todo. Como uma analogia, o significado
de uma sentena obviamente depende do significado de suas partes componentes, as palavras.
Entretanto, o significado de cada palavra depende da sentena toda. Na sentena Os lderes do
partido estavam divididos no palanque, o significado possvel de cada substantivo e verbo limita-
do pelo significado da sentena toda e pelas relaes com outras palavras dentro da sentena.
Similarmente, uma clula no embrio desenvolve seu fentipo dependendo de suas interaes dentro
do embrio inteiro. O conceito materialista oposto o reducionismo, que mantm que as proprie-
dades do todo podem ser conhecidas se todas as propriedades das partes forem conhecidas. Tradici-
onalmente, a embriologia tem apoiado o organicismo holstico, enquanto que a gentica tem se
caracterizado como sendo uma disciplina reducionista (Haraway, 1976; Roll-Hansen, 1978; Allen,
1985; Tauber e Sarkar, 1992; Gilbert e Faber, 1996). Driesch se tornou um conhecido opositor do
Nazismo, e foi um dos primeiros professores no judeus a se aposentar foradamente quando Hitler
assumiu o poder (Harrington, 1996).
Sven Hrstadius: Potncia e gradientes em ocitos
Mas Driesch tambm no estava totalmente correto. Como vimos no captulo anterior,
existem numerosos animais que desenvolvem-se principalmente como um mosaico de
partes autodiferenciadas. Mais importante, no entanto, que mesmo o embrio do
ourio-do-mar no uma coleo de clulas completamente eqipotenciais. Em uma
srie de experimentos realizados entre 1928 e 1935 o biologista sueco Sven Hrstadius
separou, com finas agulhas de vidro, vrias camadas de embries precoces de ourio-
do-mar, e observou seu desenvolvimento subseqente (Hrstadius, 1928, 1939). Quan-
do o embrio de 8 clulas foi dividido meridionalmente atravs do plo animal ao
vegetal, as duas metades produziram larvas plutei, exatamente como Driesch havia
previsto. Mas quando embries no mesmo estgio foram divididos equatorialmente
(separando os plos animal e vegetal), nenhuma das partes se desenvolveu em uma
larva completa (Figura 15.5). Em lugar disso, a metade animal se tornou uma bola vazia
de clulas epidrmicas ciliadas (chamada uma dauerblstula), e a metade vegetal se
desenvolveu em um embrio ligeiramente anormal com um intestino expandido.
Hrstadius conseguiu duplicar esses resultados cortando pela metade vulos no
fertilizados de ourio-do-mar e fertilizando as metades separadamente. No ourio-do-
mar, os fragmentos dos ovos (merognias) podem se dividir e se desenvolver mesmo
tendo somente um ncleo haplide. Se o espermatozide penetrar na metade que no
tem o ncleo haplide do vulo, a merognia ainda se desenvolver (Figura 15.6).
Quando o vulo foi partido meridionalmente, embries normais se formaram das duas
metades do vulo. Entretanto, quando o ocito foi cortado equatorialmente, a fertiliza-
o produziu uma bola animal ciliada ou um embrio com um intestino expandido a
partir do plo vegetal. Portanto, mesmo em embries do ourio-do-mar parece haver
certo grau de mosaicismo, pelo menos ao longo do eixo animal-vegetal. Isso foi confir-
mado por Maruyama e colaboradores (1985) que, analogamente, dividiram
meridionalmente ou equatorialmente vulos no fertilizados de ourio-do-mar. Eles
observaram que ao separar a metade animal da metade vegetal, somente a metade
vegetal fertilizada era capaz de formar micrmeros e gastrular. Portanto, os determinan-
tes que permitem a formao de micrmeros e a gastrulao parecem estar localizados
na poro vegetal do vulo. [regul1.html]
(A) (B)
Plo animal Plo animal
Agulha
de vidro
Plo vegetal Plo vegetal
Figura 15.5
Assimetria precoce no embrio de ourio-do-
mar. (A) Quando os 4 blastmeros do plo
animal so separados dos quatro blastmeros
Clios do plo vegetal e permitido que cada metade
se desenvolva, as clulas animais formam uma
dauerblstula ciliada e as clulas vegetativas
formam uma larva com o intestino expandido.
(B) Quando o embrio de 8 clulas dividido
de modo que cada metade contenha clulas ani-
Dauerblstula Larva Larva Larva (pequena, mais e vegetativas, desenvolvem-se larvas pe-
(blstula permanente) (levemente anormal) (pequena, mas normal) mas normal) quenas com aparncia normal.
Figura 15.6 (A) Plo (B) Plo

Assimetria no ovo de ourio-do-mar. (A) Quan- animal animal
do Hrstadius dividiu o ovo do ourio-do-mar
meridionalmente, de modo que ambas mero-
gnias contivessem citoplasma vegetal e ani-
mal, se desenvolveram pequenas plutei com
aparncia normal. (B) Quando o vulo do ou-
rio-do-mar foi dividido em metades animal e
vegetal (merognias) e as metades foram ferti- Plo
Plo vegetal
lizadas por espermatozides, a metade animal vegetal
se desenvolveu em uma dauerblstula ciliada, e
a metade vegetal produziu uma pluteus com
um intestino expandido.
Merognias Merognias
Fertilizao Fertilizao
Larva Larva Dauerblstula Larva

(pequena, (pequena, (blstula anormal) (quase normal)
mas normal) mas normal)
REGULAO DO DESTINO CELULAR EM EMBRIES DE CLIVAGEM TARDIA.

Essas observaes levaram Hrstadius a realizar algumas das experincias mais exci-
tantes da histria da embriologia. Primeiro, Hrstadius (1935) acompanhou o desen-
volvimento normal de cada uma das 6 camadas de clulas do embrio de ourio-do-
mar com 64 clulas. Como mostrado na Figura 15.7A, as clulas animais e a primeira
camada vegetativa normalmente produzem o ectoderma; a segunda camada vegetativa
d origem ao endoderma e parte do mesoderma larval; e os micrmeros geram o esque-
leto mesodrmico.
Em seguida, Hrstadius removeu a membrana de fertilizao dos embries de 64
clulas, separou as camadas com finas agulhas de vidro e as recombinou de vrias
maneiras. O hemisfrio animal isolado se tornou uma bola de clulas ectodrmicas
ciliadas (Figura 15.7B). Essa dauerbstula ciliada foi chamada de animalizada. Quan-
do Hrstadius recombinou um hemisfrio animal isolado com a camada veg1 (Figura
15.7C), a larva resultante estava menos animalizada. O desenvolvimento ciliar foi su-
primido, e foi formada uma poro do intestino. Entretanto, quando o hemisfrio ani-
mal foi combinado com a camada veg2 (Figura 15.7D), desenvolveu-se uma larva pluteus
normal. Nessa combinao, as clulas veg2, que normalmente formam somente o
arquntero e seus derivados, esto agora formando tambm as estruturas esquelticas.
Analogamente, quando a metade animal foi combinada com somente os micrmeros
(Figura 15.7E), uma pequena pluteus normal foi formada, mas nesse caso o endoderma
foi completamente derivado das clulas animais. Nesse caso, o intestino foi formado
por clulas que normalmente teriam dado origem ao ectoderma ciliado. Esses experi-
mentos mostraram que as clulas animais tm potencial gentico para se tornarem
clulas do intestino mesmo no estgio de 64 clulas.
Formao de um organismo integrado:

Restringindo a potncia das clulas vizinhas
Driesch se referiu ao embrio como um sistema harmnico eqipotencial porque

cada uma das clulas que o compem abdica da maior parte de seu potencial para fazer
parte de um nico organismo completo. Cada clula poderia sozinha se tornar um
(A) Desenvolvimento normal Figura 15.7

Demonstrao da regulao em ourio-do-mar
Hemisfrio por Hrstadius. (A) Destino de cada camada
animal de clulas do embrio de ourio-do-mar de 64
clulas, desde a blstula at o estgio de larva
pluteus. As diferentes camadas de clulas es-
to marcadas como na Figura 6.1. (B) Destino
da metade animal isolada. (C) Recombinao
Micrmeros da metade animal com a camada de clulas veg1.
Larva pluteus (D) Recombinao da metade animal com a
camada de clulas veg2. (E) Recombinao da
Dauerblstula metade animal mais os micrmeros. Em cada
(B) Somente metade animal caso, o destino original das clulas foi alterado
pelos novos vizinhos. (De acordo com
Hrstadius, 1939.)
Animalizao
completa
(C) Metade animal e veg1
Animalizao
(incompleta)
(D) Metade animal e veg2
Larva reconhecvel;
mesoderma da
camada veg2
(E) Metade animal e micrmeros
Larva reconhecvel;
endoderma das
camadas animais
animal completo, mas no o faz. O que fazia as clulas cooperarem em lugar de se

tornarem entidades autnomas? No caso dos caracis e tunicados, a resposta era
simples. O citoplasma materno no permite que cada clula se torne autnoma; cada
clula pode somente se desenvolver em uma poro do embrio. Em ourio-do-mar e
outros embries que mostram regulao, a resposta mais complexa.
Evidncia recente sugere que o sistema harmnico eqipotencial causado por
eventos de induo negativa que restringem mutuamente o destino de clulas vizi-
Mesmeros nhas. Jon Henry e colegas no laboratrio de Rudolf Raff (1989) mostraram que se
forem isolados pares de clulas do hemisfrio animal pigmentado de um embrio de
ourio-do-mar com 16 clulas, essas clulas podem originar componentes tanto
ectodrmicos como mesodrmicos. Entretanto, sua capacidade de formar mesoderma
severamente restringida se elas so agregadas a outros pares do hemisfrio animal
Macrmeros pigmentado. Assim, a presena de clulas vizinhas, mesmo sendo do mesmo tipo,
restringe a potncia de ambos os parceiros. Ettensohn e McClay (1988) mostraram que
a potncia tambm restringida quando uma clula combinada com suas vizinhas ao
longo do eixo animal-vegetal. Primeiro, eles demonstraram que o nmero de clulas
mesenquimatosas primrias parece ser fixo e pode ser regulado por variaes nos
macrmeros. Se todas as 60 clulas mesenquimatosas primrias de Lytechinus
variegatus so removidas da gstrula precoce, um nmero igual de clulas
mesenquimatosas secundrias (do arquntero que havia sido macrmeros do plo
vegetal) se convertem em mesnquima primrio e comeam a formar espculas. Se so
Micrmeros
removidas 20 clulas mesenquimatosas primrias, cerca de 20 clulas mesenquimatosas
secundrias se tornam clulas mesenquimatosas primrias formadoras de espculas. E
Figura 15.8 assim por diante. Portanto, as clulas mesenquimatosas primrias tm uma influncia
Sumrio das indues inibitrias na blstula
restritiva, impedindo a formao de novas clulas mesenquimatosas primrias a partir
do ourio-do-mar. Setas duplas ilustram as in-
teraes mutuamente restritivas entre clulas
do arquntero, havendo ento a ocorrncia de uma induo negativa. No conhece-
adjacentes. (De acordo com Henry et al., 1989.) mos o mecanismo pelo qual as clulas mesenquimatosas primrias impedem que o
arquntero forme o mesnquima primrio e estabelecem um limite para o nmero de
tais clulas na blastocele.
Recombinando clulas de vrias camadas, Khaner e Wilt (1990, 1991) observaram
que na maioria dos casos, a clula de uma camada restringe a habilidade de uma clula
de outra camada em expressar seus destinos potenciais (Figura 15.8). A exceo mais
importante - como mencionado acima- a recombinao das clulas mesomricas do
plo animal com certos micrmeros do plo vegetal para formar tecido intestinal dos
mesmeros. Entretanto, no desenvolvimento normal de ourio-do-mar, essas clulas
nunca se associam entre si.
Regulao durante o desenvolvimento de anfbios

Hans Spemann: Determinao progressiva das clulas embrionrias
Nas sees anteriores descrevemos a evidncia do desenvolvimento regulativo.

Notamos que dois aspectos principais da regulao - primeiro, que um blastmero
isolado tem uma potncia maior do que seu destino embrionrio normal, e segundo,
que o destino de uma clula determinado por interaes entre clulas vizinhas-
sendo verdadeiro durante os estgios precoces da clivagem em ourio-do-mar. Fi-
nalmente, entretanto, os blastmeros se tornam comprometidos a certos destinos.
Em 1918, Hans Spemann, da Universidade de Freiburg, descobriu que existia uma
situao similar no ovo da salamandra. Os experimentos pelos quais ele e seus
colegas analisaram esse fenmeno nos 20 anos seguintes formam a base de boa
parte de nosso conhecimento da fisiologia embrionria e deram o Prmio Nobel a
Spemann em 1935.
Spemann, assim como Roux e Driesch, pretendia verificar a hiptese de Weismann
e por um mtodo engenhoso, ele demonstrou que os blastmeros precoces da
salamandra aqutica tm ncleos idnticos, cada um capaz de produzir uma larva
completa. Logo aps a fertilizao de um vulo dessa salamandra, Spemann usou um
fio de cabelo de beb para laar o zigoto no plano da primeira clivagem. Ele ento
produziu uma constrio parcial do ovo fazendo com que todas as divises nucleares
acontecessem em um dos lados da constrio. Freqentemente, at no estgio de 16
clulas, um ncleo escapava atravs da constrio para o lado no nucleado. Assim se
iniciava a clivagem tambm nesse lado, quando o lao foi apertado ainda mais at que
as duas metades estivessem completamente separadas. Larvas gmeas se desenvol-
Ligadura
Estgio de 8 clulas Estgio de 16 clulas 140 dias

Figura 15.9
Demonstrao da eqivalncia nuclear na
clivagem da salamandra aqutica feita por Spe-
veram, uma ligeiramente mais velha do que a outra (Figura 15.9). Spemann concluiu mann. (A) Quando o ovo fertilizado da sala-
desse resultado que os ncleos precoces de anfbios so geneticamente idnticos e mandra Triturus taeniatus foi constringido por
que cada clula capaz de originar um organismo completo. Nesse respeito, os uma ligadura, o ncleo foi restrito a uma meta-
blastmeros de anfbios eram similares aqueles de ourio-do-mar. de do embrio. A clivagem daquele lado do
Alm do mais, quando Spemann realizou um experimento similar com uma constrio embrio atingiu o estgio de 8 clulas enquanto
ainda longitudinal, mas perpendicular ao plano da primeira clivagem (separando as o outro lado permaneceu no dividido. (B) No
futuras regies dorsal e ventral e no os lados direito e esquerdo), ele obteve um estgio de 16 clulas, um nico ncleo pene-
resultado completamente diferente. Os ncleos continuaram a se dividir em ambos os trou na parte no dividida, e a ligadura foi
constringida de modo a completar a separao
lados da constrio, mas somente um lado - o futuro lado dorsal do embrio- dava
das duas metades. (C) Aps 140 dias, cada
origem a uma larva normal. O outro lado produzia um massa desorganizada de tecido metade tinha se desenvolvido em um embrio
com clulas ventrais, que Spemann chamou de Bauchstck - poro ventral. Essa normal. (De acordo com Spemann, 1938.)
massa de tecido era uma bola de clulas epidrmicas (ectoderma) contendo sangue e
mesnquima (mesoderma) e clulas de intestino (endoderma), mas nenhuma estrutura
dorsal tal como sistema nervoso, notocorda ou somitos (Figura 15.10).
Porque deveriam esses dois experimentos dar resultados diferentes? Poderia ser
que quando o ovo dividido perpendicularmente ao plano da primeira clivagem,
algumas substncias citoplasmticas no so igualmente divididas entre as duas
(A) (B)
Primeira clivagem
Crescente
Cinzento
Separao dos
blastmeros e
desenvolvimento
Figura 15.10
Assimetria no ovo de anfbio. (A) Quando o plano da primeira clivagem divide o
ovo em dois blastmeros, de modo que cada um receba uma metade do crescente
cinzento, cada clula separada experimentalmente se desenvolve em um embrio
Poro
normal. (B) Quando somente um dos dois blastmeros recebe todo o crescente
ventral
cinzento, ele sozinho forma um embrio normal. O outro pedao no tem estru-
Desenvolvimento Desenvolvimento Desenvolvimento turas dorsais e permanece como uma massa desorganizada de tecidos. (De
Normal Normal Normal acordo com Spemann, 1938.)
metades? Felizmente, o ovo da salamandra era um bom lugar para procurar respos-
tas. Como foi visto nos Captulos 4 e 6, existem movimentos dramticos do citoplas-
ma cortical aps a fertilizao de ovos de anfbios, e em alguns deles esses movi-
mentos expem uma rea cinzenta do citoplasma em forma de um crescente na regio
diretamente oposta ao ponto de entrada do espermatozide. Alm disso, o primeiro
plano de clivagem normalmente divide essa regio em partes iguais, dando origem a
dois blastmeros. Se essas clulas forem separadas, duas larvas completas se de-
senvolvem. Entretanto, se esse plano de clivagem for anormal (em um raro evento
natural ou em um experimento onde o investigador faz uma constrio com um fio de
cabelo, perpendicularmente ao plano normal de clivagem) o material do crescente
cinzento passa para somente um dos dois blastmeros. Spemann observou que
quando esses dois blastmeros so separados, somente aquele contendo o cres-
cente cinzento se desenvolve normalmente.
Parece, ento, que algo contido na regio do crescente cinzento essencial para o
desenvolvimento embrionrio adequado. Mas como isso funciona? Qual o seu papel
no desenvolvimento normal? A pista mais importante veio do mapa de destino dessa
rea do ovo, ao mostrar que a regio do crescente cinzento origina as clulas que
iniciam a gastrulao. Essas clulas formam o lbio dorsal do blastporo. Como visto
no Captulo 6, as clulas do lbio dorsal do blastporo so de certa maneira compro-
metidas a invaginar para dentro da blstula, iniciando assim a gastrulao e a forma-
o do arquntero. Porque o desenvolvimento futuro do anfbio depende da interao
das clulas rearranjadas durante a gastrulao, Spemann especulou que a importncia
do crescente cinzento era devida sua habilidade em iniciar a gastrulao, onde
ocorriam mudanas cruciais para o desenvolvimento.
Em 1918, Spemann demonstrou que enormes modificaes na potncia celular de
fato ocorriam durante a gastrulao. Ele verificou que as clulas da gstrula precoce
no estavam comprometidas com respeito diferenciao final, mas que o destino das
clulas da gstrula tardia eram fixos. Spemann trocou os tecidos de gstrulas preco-
ces de duas espcies pigmentadas de salamandra aqutica (Figura 15.11). Quando a
regio das clulas epidrmicas prospectivas foi transplantada para uma rea de forma-
o da placa neural, as clulas transplantadas deram origem ao tecido neural. Quando
clulas da prospectiva placa neural foram transplantadas regio destinada a se
tornar pele do ventre, as clulas se tornaram epidrmicas (Tabela 15.2). Portanto, essas
clulas da gstrula precoce ainda no estavam comprometidas a um tipo especfico de
diferenciao. Suas potncias prospectivas eram ainda maiores que seus destinos
prospectivos. Essas clulas exibem desenvolvimento condicional (regulativo ou
Tabela 15.2 Resultados com transplantes de tecidos durante os estgios

de gstrulas precoce e tardia na salamandra aqutica
Diferenciao do
Regio doadora Regio hospedeira tecido doador Concluso
GSTRULA PRECOCE
Neurnios prospectivos Epiderme Epiderme Desenvolvimento
prospectiva dependente (condicional)
Epiderme prospectiva Neurnios Neurnios Desenvolvimento

prospectivos dependente (condicional)
GSTRULA TARDIA
Neurnios prospectivos Epiderme Neurnios Desenvolvimento
prospectiva (determinado)
independente (autnomo)
Epiderme prospectiva Neurnios Epiderme Desenvolvimento

(determinada) prospectivos independente (autnomo)
(A) Ectoderma Epiderme Figura 15.11

neural presuntivo presuntiva Determinao do ectoderma durante a gastru-
lao da salamandra aqutica. O ectoderma
Placa neural neural presuntivo de um embrio de salaman-
dra transplantado a uma regio de outro
embrio que normalmente se torna epiderme.
(A) Quando a transferncia feita na gstrula
TRANSPLANTE EM precoce, o tecido neural presuntivo se desen-
GSTRULA PRECOCE volve em epiderme e se observa somente uma
placa neural. (B) Quando o mesmo experi-
Forma-se
a epiderme mento feito em tecidos da gstrula tardia, as
Ectoderma clulas neurais presuntivas formam tecido
(B) neural presuntivo Epiderme neural, causando a formao de duas regies
presuntiva Placa neurais no hospedeiro. (De acordo com Saxn
neural e Toivonen, 1962.)
TRANSPLANTE EM
GSTRULA TARDIA
Forma-se a placa
neural secundria
dependente) porque seu destino final depende da sua localizao no embrio. Entre-
tanto, quando os mesmos experimentos de transplantes heteroplsticos (entre espci-
es) foram feitos entre gstrulas tardias, Spemann obteve resultados completamente
diferentes. Em lugar de regular sua diferenciao de acordo com sua nova localizao
as clulas transplantadas exibiram desenvolvimento autnomo (ou independente, ou
em mosaico). Seus destinos prospectivos estavam determinados e as clulas se de-
senvolveram independentemente de sua nova localizao embrionria. Especifica-
mente, clulas neurais prospectivas agora se desenvolviam em tecido cerebral mesmo
quando localizadas na regio prospectiva da epiderme, e epiderme prospectiva forma-
va epiderme mesmo na regio do prospectivo tubo neural. Durante o intervalo de
tempo entre a gastrulao precoce e a tardia, as clulas ficavam restritas s suas vias
de diferenciao. Essas clulas so consideradas como determinadas: elas no podem
mais regular sua diferenciao em outros tipos de clulas. Deve ser notado que os
critrios para a determinao so puramente operacionais. No ocorrem modificaes
bvias nas clulas e no se detecta qualquer diferenciao. A base molecular da
determinao permanece como uma das principais incgnitas do desenvolvimento.
Hans Spemann e Hilde Mangold: Induo embrionria primria
Os mais espetaculares experimentos com transplantes foram publicados por Hans

Spemann e Hilde Mangold em 1924*. Eles mostraram que ao se colocar tecidos em
novos locais, o lbio dorsal do blastporo a nica regio autodiferencivel da gstrula.
Quando o tecido do lbio dorsal do blastporo de uma gstrula precoce foi transplan-
tado para o ectoderma ventral de outra gstrula, ele no s continuou a ser o lbio do
blastporo, como tambm iniciou a gastrulao e a embriognese no tecido vizinho.
Nesses experimentos, Spemann e Mangold usaram embries de duas espcies de
* Hilde Proescholdt Mangold morreu em um trgico acidente quando seu aquecedor a gasolina
explodiu. Na poca, ela tinha 26 anos e seu trabalho estava sendo publicado. Sua tese de doutoramento
foi uma das poucas teses em biologia que resultaram diretamente na concesso do Prmio Nobel.
Para maiores informaes sobre Hilde Mangold e sua poca veja Hamburger (1984) e Fssler e
Sander (1996).
(A) Blastocele
Notocorda
presuntiva
Somitos presuntivos
Lbio dorsal Endoderma Epiderme Invaginao

do blastporo presuntivo presuntiva primria
Estruturas
(B) secundrias induzidas Estruturas primrias
Somito Lmen do intestino
Tubo neural Notocorda

Notocorda Somito
Lmen do Endoderma
intestino
Tubo neural
Invaginao Invaginao
secundria primria
(C)
Figura 15.12
Autodiferenciao do tecido do lbio dorsal do blastporo. (A) O lbio dorsal do blastporo da
gstrula precoce transplantado em outra gstrula precoce na regio que normalmente se torna
epiderme ventral. (B) O tecido se invagina e forma um segundo arquntero e depois um segundo
eixo embrionrio. Tanto o tecido do doador como o do hospedeiro visto no tubo neural,
notocorda e somitos. (C) Finalmente, se forma um segundo embrio ligado ao hospedeiro. Esta
ilustrao e a Prancha 4 mostram o experimento onde o lbio dorsal do blastporo pigmentado de
T. taeniatus foi implantado em uma gstrula precoce de um T. cristatus hospedeiro.
salamandra aqutica com pigmentao diferente: Triturus taeniatus com pigmentao

escura e Triturus cristatus sem pigmentao. Ao preparar esses transplantes, Spe-
mann e Mangold podiam identificar o tecido hospedeiro e o doador baseados na
colorao. O lbio dorsal do blastporo (o tecido da regio marginal dorsal) de gstrulas
precoces de T. cristatus foram removidos e implantados em regies da gstrula preco-
ce de T. taeniatus destinadas a se tornar epiderme ventral (Figura 15.12). Diferente-
mente de outros tecidos da gstrula jovem, que se desenvolveram de acordo com sua
nova localizao, o lbio do blastporo doado no se tornou epiderme ventral. Ao
contrrio, ele invaginou como o faria normalmente (mostrando autodeterminao) e
desapareceu sob as clulas vegetativas. O tecido no pigmentado doador continuou
sua autodiferenciao em cordomesoderma e outras estruturas mesodrmicas que
constituam o destino original do tecido do blastporo. Com a formao do eixo, as
clulas do hospedeiro comearam a participar da formao do novo embrio, tornan-
do-se rgos que normalmente nunca formariam. Assim, podia-se ver somitos conten-
do tanto tecido incolor (doador) como pigmentado (hospedeiro). Mais espetacular
(A) (B) Tubo neural Embrio

Transplante do ndulo induzido hospedeiro
de Hensen do pato
Embrio de pato Embrio de pinto
Figura 15.13
Induo de um novo eixo embrionrio pelo ndulo de Hensen. (A) O tecido do ndulo de Hensen
removido de um embrio de pato e implantado em um embrio de pinto hospedeiro. (B) Um
tubo neural accessrio induzido no local do enxerto. (De acordo com Waddington, 1933.)
ainda, era que as clulas do lbio dorsal do blastporo podiam interagir com os teci-
dos do hospedeiro para formar uma placa neural completa a partir do ectoderma do
hospedeiro. Por fim, formou-se um embrio secundrio, face a face com o seu hospe-
deiro (veja Figura 15.12; Prancha 4). Essas experincias, tecnicamente difceis, foram
repetidas recentemente com marcadores nucleares e os resultados de Spemann e
Mangold foram confirmados (Gimlich e Cook, 1983; Smith e Slack, 1983; Jacobson,
1984; Recanzone e Harris, 1985).* [regul2.html]
Spemann (1938) se referiu s clulas do lbio dorsal do blastporo como o
organizador porque (1) elas induziam os tecidos ventrais do hospedeiro a mudar seus
destinos para formar um tubo neural e tecido mesodrmico dorsal e (2) elas organiza-
vam esses tecidos do doador e do hospedeiro em um embrio secundrio com ntidos
eixos ntero-posterior e dorsoventral. Ele props que durante o desenvolvimento
normal, essas clulas organizariam o ectoderma dorsal em um tubo neural e transfor-
mariam o mesoderma dos flancos no eixo do corpo. Sabe-se agora (graas principal-
mente a Spemann e seus alunos) que a interao entre o cordomesoderma e o ectoder-
ma no suficiente para organizar o embrio completo. Em lugar disso, essa intera-
o inicia uma srie de eventos indutivos seqenciais. O processo pelo qual uma
regio embrionria interage com uma segunda regio para influenciar a sua diferenci-
ao ou comportamento (da segunda regio) chamado de induo. Como existem
numerosas indues durante o desenvolvimento embrionrio, essa induo principal
onde as clulas do lbio do blastporo induzem o eixo dorsal e o tubo neural tradici-
onalmente chamada de induo embrionria primria.**
Sabemos tambm que o lbio dorsal do blastporo ativo na organizao de
embries secundrios em Amphioxus, ciclstomos e em uma variedade de anfbios.
Em aves e mamferos, o organizador se origina na foice de Koller (margem posterior do
embrio), e o ndulo de Hensen age como o lbio dorsal do blastporo. Clulas
migrando atravs do ndulo de Hensen se tornam o endoderma e o cordomesoderma
da cabea, enquanto que clulas migrando atravs de outras partes da linha primitiva
se tornam clulas mesodrmicas laterais e ventrais. Quando o ndulo de Hensen de
uma gstrula jovem transplantado em um epiblasto de outra gstrula jovem ele induz
a formao de outro eixo secundrio completo (Figura 15.13; Waddington, 1933; Storey
et al., 1992; Khaner, 1995).
*O laboratrios de Spemann e de seus alunos usavam embries de salamandra para seus

experimentos. Foi demonstrado que o ectoderma de r muito mais difcil de ser induzido do que
o desses urodeles.
** Esse termo clssico tem sido uma fonte de confuso, porque a induo do tubo neural pela
notocorda no mais considerada como o primeiro processo indutivo no embrio. Logo discutire-
mos os eventos indutivos que precedem essa induo primria.
O centro de Nieuwkoop
Apesar do considervel volume de pesquisa realizada com embries de anfbios,
estamos apenas comeando a conhecer os mecanismos bsicos da induo embrion-
ria primria. Na ltima dcada, numerosos laboratrios focalizaram seus esforos para
explicar a induo embrionria em um anfbio Xenopus laevis e existe um consenso
em relao s linhas gerais da induo embrionria primria nesse organismo.
Os dados indicam uma orquestrao da induo que tem pelo menos quatro
estgios. O primeiro estgio da induo se d na fertilizao. O vulo no fertiliza-
do radialmente simtrico ao redor do eixo animal-vegetal. A entrada do esperma-
tozide quebra essa simetria causando a rotao do citoplasma interno do ovo em
relao ao crtex (veja Captulo 4). Essa assimetria especifica o eixo dorsoventral
pela mistura dos citoplasmas animal e vegetal nas clulas vegetativas que se
formam em oposio ao ponto de entrada do espermatozide. Parece que a mistura
dos citoplasmas ativa determinantes da dorsalizao nessas clulas vegetativas.
Essas clulas vegetativas dorsalizadas so chamadas centro de Nieuwkoop. No
segundo estgio, os descendentes dessas clulas vegetativas induzem as clulas
acima delas a se tornarem o organizador de Spemann-Mangold. As outras clulas
vegetativas induzem as clulas marginais acima delas a se tornarem os mesodermas
lateral e ventral. Portanto, existe uma induo antes da induo primria. No
terceiro estgio, o organizador converte o mesoderma vizinho em mesoderma dor-
sal, e instrui o ectoderma dorsal a se tornar tecido neural. O quarto estgio envol-
ve a caracterizao regional do tecido neural induzido (crebro anterior, crebro
posterior, medula espinhal, etc.).
Fragmentos de blstula dissecada do A formao do centro de Nieuwkoop e a polaridade mesodrmica

origem a diferentes tecidos em cultura:
O endoderma capaz de instruir as clulas acima dele a se tornarem o mesoderma.
Clulas do Alm disso, a polaridade do endoderma transferida s clulas mesodrmicas. Pieter
hemisfrio Nieuwkoop (1969, 1973, 1977) demonstrou a importncia das clulas vegetativas
animal
Ectoderma (endoderma presuntivo) na induo do mesoderma. Ele removeu as clulas equatori-
pigmentado
ais da blstula e mostrou que nem o hemisfrio vegetal nem o animal produziram tecido
Clulas
equatoriais
Mesoderma mesodrmico. Entretanto, quando os dois hemisfrios foram recombinados, as clulas
do hemisfrio animal foram induzidas a formar estruturas mesodrmicas tais como a
Clulas Endoderma
vegetativas notocorda, msculos, clulas renais e clulas do sangue (Figura 15.14). A polaridade
dessa induo (se a regio das clulas animais formava notocorda ou msculos, etc.)
Fragmentos animais e vegetais do mesoderma
dependia da polaridade dorsoventral do fragmento endodrmico. Esse conjunto de
Hemisfrio animal fatores capazes de induzir o mesoderma dorsal tem sido chamado de centro de
pigmentado (ectoderma
presuntivo) convertido a Nieuwkoop (Gehart et al.,1989), e em Xenopus laevis, ele se localiza nas clulas
Mesoderma vegetativas mais dorsais da blstula ( Figura 15.15). [regul5.html]
por fatores liberados As clulas vegetativas ventrais e laterais tambm tm papis na especificao
das clulas vegetativas do mesoderma. Enquanto as clulas vegetativas ventrais e laterais especificam os
tipos intermedirio (msculo e mesnquima) e ventral (mesnquima, sangue, rim
Figura 15.14 pronfrico) do mesoderma, as clulas vegetativas mais dorsais especificam os
Sumrio dos experimentos de Nieuwkoop e os componentes mesodrmicos axiais (notocorda e somitos; Figura 15.16). Parece
de Nakamura e Takasaki, mostrando induo haver dois sinais: (1) um geral de todas as clulas vegetativas, vamos produzir
mesodrmica pelo endoderma vegetativo. C- mesoderma e (2) um sinal mais especfico essas clulas acima de ns so o
lulas isoladas do hemisfrio animal pigmentado mesoderma dorsal (organizador), vindo das clulas vegetativas mais dorsais (D1).
se tornam uma massa de epiderme ciliada; c- Dale e Slack (1987) forneceram evidncia para um terceiro sinal indutivo, vindo
lulas vegetativas isoladas geram tecido seme-
das clulas organizadoras (aquelas clulas marginais diretamente acima do centro
lhante a intestino, e clulas isoladas equatoriais
(zona marginal) se tornam mesoderma. Se as
de Nieukoop) que dorsalizam as clulas mesodrmicas marginais adjacentes a
clulas do hemisfrio animal pigmentado so elas. Quando as clulas marginais ventrais so isoladas, elas originam principal-
combinadas com clulas do hemisfrio vege- mente os tecidos mesodrmicos ventrais. Entretanto, se elas so cultivadas adja-
tal, muitas das clulas do hemisfrio animal centes s clulas marginais dorsais (ou seja, o organizador), elas geram tecido
pigmentado geram tecido mesodrmico. mesodrmico intermedirio. Um quarto sinal parece vir da regio ventral que se
ope aos sinais do organizador. Assim, existe evidncia para uma especificao
do mesoderma em trs etapas (Figura 15.17): (1) a induo da atividade do
organizador pelas clulas vegetativas mais dorsais (o centro de Nieuwkoop), (2) a Organizador
induo do mesoderma ventral pelas outras clulas vegetativas e (3) a dorsalizao
das clulas marginais laterais adjacentes s clulas marginais dorsais para produ-
zir o mesoderma intermedirio enquanto que outras clulas marginais seguem des-
tinos ventrais. Na dcada passada foram feitas tentativas para identificar as
interaes moleculares que originam essa modelagem mesodrmica.
Sinais dorsais
A especificao da polaridade dorsoventral na fertilizao (Vg1, Noggin,
activina, Wnt)
Sinais ventrais
Como vimos nos Captulos 4 e 6, a especificao dorsoventral consumada pela (FGF, BMP-4) Centro de
Nieuwkoop
rotao do citoplasma interno do ovo em relao ao crtex. Se essa rotao inibida
por luz ultravioleta, o embrio no formar estruturas dorso-anteriores (Vincent e
Gerhart, 1987). Render e Elinson (1986) e Wakahara (1989) cortaram ovos em frag- Figura 15.15
Modelo para induo do mesoderma em Xeno-
mentos antes e depois dessa rotao. Se o ovo fosse cortado antes da rotao,
pus. Um sinal ventral (provavelmente FGF2
ambos os lados desenvolviam estruturas dorso-anteriores: cabea, notocorda e ou BMP4) liberado em toda a regio vegetal
tubo neural. Se o corte era feito aps a rotao, um fragmento desenvolvia a cabea, do embrio. Isso induz as clulas marginais a
corao, e algumas estruturas mesodrmicas dorsais, enquanto o outro fragmento se tornarem mesoderma. BMP4 pode especifi-
se desenvolvia essencialmente em um Bauchstck, consistindo quase unicamente car as clulas marginais a se tornarem meso-
de clulas ventrais, tendo pouco ou nada de mesoderma dorsal e sem sistema nervo- derma posterior. No lado dorsal (fora do local
so. Sakai (1996) mostrou que se o citoplasma vegetativo do ovo fosse deletado de entrada do espermatozide), um sinal (pro-
antes da rotao, no se formaria o eixo dorsal, e certos determinantes dorsais se vavelmente iniciado por Vg1 e propagado pe-
movem do crtex vegetativo para a zona marginal no futuro lado dorsal. Parece las protenas activina, Noggin e Wnt) libera-
do pelas clulas vegetativas do centro de
ento, que essa rotao citoplasmtica movimenta os determinantes que so
Nieuwkoop. Esse sinal dorsal induz a forma-
ativadores dorsais em direo ao futuro lado dorsal do ovo. o do organizador de Spemann nas clulas da
zona marginal sobreposta ao centro. (De acor-
do com De Robertis et al., 1992.)
Porcentagem de indues totais

Dorsal Intermediria Ventral
Plo
animal
Plo
vegetal
Figura 15.16
Plo Especificidade regional na induo do meso-
animal derma pela recombinao de clulas do em-
brio de Xenopus com 32 clulas. As clulas
do plo animal de embries de 32 clulas fo-
ram combinadas com blastmeros vegetativos
individuais. As clulas do plo animal foram
Camada D marcadas com polmeros fluorescentes para
identificao de seus descendentes. As
indues resultantes dessas recombinaes es-
Plo to resumidas direita. (De acordo com Dale e
vegetal Slack, 1987.)
Blastocele Endoderma Blastocele Arquntero Arquntero

farngeo
a
erm
tod
Ec
Mesoderma Mesoderma
ventral dorsal
Animal
Figura 15.17
Mesoderma
intermediria
Interaes indutivas durante o desenvolvimento precoce de Xenopus. Durante a oognese, o eixo
animal-vegetal se eleva. A fertilizao causa rearranjos citoplasmticos que subdividem a regio
vegetal nas reas dorso-vegetal (DV) e ventro-vegetal (VV). Durante a clivagem, a induo
mesodrmica ocorre de tal modo que a regio DV induz a atividade do organizador (O) nas
clulas marginais dorsais acima dela, enquanto a VV induz as clulas acima para se tornarem
mesoderma ventral (M). Um sinal do organizador converte o mesoderma ventral prximo em
mesoderma lateral (M2, M3, M4). Durante a gastrulao, os mesodermas ventral e lateral vo
para os lados da gstrula (no mostrado), enquanto o mesoderma dorsal se expande e induz a
Gastrulao
polaridade nas clulas ectodrmicas. Isso faz com que as clulas ectodrmicas se tornem diferen-
tes regies do tubo neural (N1, N2, N3, N4). C representa a glndula do cimento, a estrutura mais
anterior do girino. A polaridade do endoderma assim transferida ao tecido neural. O ectoderma
no induzido se torna epiderme. (De acordo com Smith et al., 1985; Slack e Tannahill, 1992.)
Animal
Mesoderma
ventral
Dorsalizao do
mesoderma ventral
Mesoderma Espermatozide
dorsal (organizador)
Animal Animal
Mesoderma
ventral
Clivagem
Vegetal
Centro de Nieuwkoop
Induo do mesoderma por

clulas vegetativas
Oognese
No estgio de 32 clulas, os determinantes dorso-anteriores esto contidos nos

blastmeros mais dorsais (D1) (Figura 6.20; Gimlich e Gehart, 1984; Gimlich, 1985,
1986). Essa localizao foi confirmada por experimentos de recombinao (veja Figu-
ra 15.16). Dale and Slack (1987) recombinaram blastmeros vegetativos isolados de
um embrio de Xenopus de 32 clulas com a camada animal mais superior de um
embrio no mesmo estgio, marcado por fluorescncia. A clula vegetativa mais
dorsal, como esperado, induziu as clulas do plo animal a se tornarem mesoderma
dorsal. As clulas vegetativas remanescentes de modo geral induziam as clulas
animais a produzirem tecidos mesodrmicos intermedirios ou ventrais. Portanto,
clulas vegetativas dorsais podem induzir clulas animais a se tornarem tecido
mesodrmico dorsal.
Deve ser notado que em Xenopus (e outros vertebrados), a formao do eixo
ntero-posterior se segue a formao do eixo dorsoventral. Uma vez estabelecida a
poro dorsal do embrio, o movimento do mesoderma involutivo estabelece o eixo
ntero-posterior. O mesoderma que migra inicialmente atravs do lbio dorsal do
blastporo d origem s estruturas anteriores; o mesoderma na margem ventral forma
as estruturas posteriores.
A base molecular da induo mesodrmica

Estabelecendo a regionalizao dorsal:
o possvel papel da catenina
A catenina uma protena multifuncional que pode funcionar como uma ncora
para as caderinas da membrana celular (Captulo 3) ou como um fator de transcrio
nuclear. Em embries de Xenopus, a rotao cortical da fertilizao remove as
cateninas para a futura parte dorsal do ovo. A catenina continua a se acumular
preferencialmente no lado dorsal durante a clivagem precoce, e essa acumulao
observada nos ncleos das clulas dorsais (Figura 15.18 A,B; Prancha 7E,F; Schneider
et al., 1996; Larabell et al., 1997). Essa regio de acumulao de catenina original-
mente parece conter tanto o centro de Nieuwkoop como as regies do organizador.
Durante as clivagens posteriores, as clulas com catenina podem se localizar espe-
cificamente no centro de Nieuwkoop (Heasman et al., 1994; Guger e Gumbiner, 1995).
A catenina necessria para a formao do eixo dorsal, pois a depleo de
transcritos de catenina com oligonucleotdeos antisenso resulta na falta de estrutu-
ras dorsais (Heasman et al., 1994). Alm disso, a injeo de catenina exgena no
lado ventral do embrio produz um eixo secundrio (Funayama et al., 1995; Guger e
Gumbiner, 1995). A catenina parte da via Wnt de transduo sinalizadora e
negativamente regulada pela quinase 3 da sntese glicognio (GSK-3; Captulo 3).
GSK-3 tambm crtica para a formao de eixo e GSK-3 ativada bloqueia a formao
de eixo quando adicionada ao ovo (Pierce e Kimelman, 1995; He et al., 1995; Yost et al.,
1996). Se o GSK-3 endgeno eliminado por uma mutao negativa dominante nas
clulas ventrais do embrio precoce, um segundo eixo se forma (Figura 15.18C). Expe-
rimentos com marcao (Yost et al., 1996; Larabell et al., 1997) sugerem que a
catenina inicialmente sintetizada (a partir de mensagens maternas) em todo o em-
brio, mas que degradada pela fosforilao de GSK-3 especificamente nas clulas
ventrais. No se conhece a causa dessas variaes regionais na atividade de GSK-3.
Experimentalmente a GSK-3 endgena pode ser inibida pela adio de protenas Wnt
ao ovo, e foi observado que essas Wnts induzem eixos secundrios (McMahon e
Moon, 1989; Sokol et al., 1991). Mas Wnts podem no ser as reguladoras naturais de
GSK-3 no lado dorsal do embrio; mutaes dominantes negativas de protenas Wnt
e seus receptores no conseguem bloquear a formao do eixo normal (Hoppler et al.,
1996; Sokol, 1996). Atualmente esto sendo realizados estudos para verificar se a
rotao cortical em ovos de Xenopus de certa maneira regula a atividade de GSK-3 e se
existe um outro agente (alm das protenas Wnt) capaz de inativar GSK-3.
(A) (B) (C)
-catenina ativada
Figura 15.18
(D) Papel da via das protenas Wnt na especificao do eixo dorsoventral. (A,B) Translocao
dorsalmente por
rotao cortical diferencial da protena -catenina para os ncleos de blastmeros de Xenopus. (A) Lado dorsal
presuntivo de uma blstula de Xenopus corado para -catenina mostra a localizao do ncleo.
(B) Tal localizao nuclear no vista no lado ventral do mesmo embrio. (C) Formao do
eixo dorsal causado pela injeo de ambos os blastmeros de um embrio de Xenopus de 2
clulas com GSK-3 inativa dominante. O destino dorsal ativamente suprimido pela GSK-
3 tipo selvagem. (D) Modelo irnico pelo qual o centro de Nieuwkoop (caracterizado pela
expresso do gene Siamois e a habilidade para induzir o mesoderma dorsal) criado pelo
sinergismo da ativao dorsal da -catenina e a ativao vegetal de Vg1. (A e B de Schneider
et al., 1996, fotografias cortesia de P. Hausen; C de Pierce e Kimelman, 1995, fotografia
cortesia de D. Kimelman.)
A catenina um fator de transcrio do tipo HMG-box e pode ser uma protena

de dobramento de DNA. Ela pode tornar clulas diferentes predispostas a respon-
der de maneiras diferentes aps o incio da expresso gnica na transio da blstula
intermediria. Uma vez dentro do ncleo das clulas vegetativas dorsais, ela ativa
Traduo, Expresso mxima
processamento de Siamois: centro determinados genes alvo, um deles sendo o gene Siamois que contm a seqncia
e difuso de Vg1 de Nieuwkoop homeobox. Esse gene expresso no centro de Nieuwkoop imediatamente aps a
transio da blstula intermediria. Se esse gene expresso ectopicamente nas
clulas vegetativas ventrais, um eixo secundrio emerge no antigo lado ventral do
embrio, e se a rotao cortical impedida, a expresso de Siamois eliminada
(Lemare et al., 1995; Brannon e Kimelman, 1996). Estudos recentes (Brannon e
Kimelman, 1996) sugerem que a expresso mxima de Siamois ocorre quando h
sinergismo entre GSK-3/catenina e um sinal TGF- vegetalmente expresso. A ro-
tao cortical pode ativar as cateninas e permitir a expresso de Siamois na regio
dorsal do embrio. Ao mesmo tempo, a traduo das mensagens localizadas
vegetalmente codificando um fator da famlia TGF- pode produzir uma protena que
permite uma melhor ativao da catenina nas clulas vegetativas do que nas
clulas animais (Figura 15.18D). Cui e colegas (1996) mostraram que esse membro da
famlia TGF- a protena Vg1 madura, uma protena expressa somente nas clulas
vegetativas. O resultado que Siamois seria expresso nas clulas vegetativas mais
dorsais que constituem o centro de Nieuwkoop.
O funcionamento do centro de Nieuwkoop:

funes para Vg1 e Noggin
A PROTENA VG1 ATIVADA. Existem vrias maneiras de induzir o mesoderma dorsal.

Primeira, a protena Vg1 pode induzir a formao do mesoderma dorsal nas clulas
acima dela. O mRNA para Vg1 restrito pela massa de vitelo vegetativo durante a
oognese e permanece no hemisfrio vegetal durante a clivagem (Captulos 4 e 12;
Prancha 8). Aps a fertilizao, a protena Vg1 produzida no hemisfrio vegetal da
Controle
Vg madura
EF1 (controle)
Actina cardaca
(mesoderma dorsolateral)
Xbra
(A) (mesoderma geral)
Gsc (mesoderma
dorsal anterior)
Noggin (mesoderma
dorsal anterior)
Xwnt8 (mesoderma
ventrolateral)
NCAM (neural)
(B) (C)
Figura 15.19
Protena Vg1 madura induz movimentos
morfogenticos e expresso gnica mesodr-
mica dorsal em explantes ectodrmicos.
blstula, mas est na forma de um precursor inativo que precisa ser cindido para ser Explantes de hemisfrio animal pigmentado no
ativo. A protena Vg1 ativada capaz de (1) induzir o mesoderma dorsal nas clulas do estgio de blstula foram cultivados (A) em
hemisfrio animal; (2) induzir um eixo embrionrio completo quando microinjetada em meio no tratado ou (B) em meio contendo a
protena Vg1 madura (clivada). A protena Vg1
clulas vegetativas ventrais; e (3) recuperar o eixo dorsal em ovos irradiados com luz
induziu movimentos de extenso convergente
UV quando microinjetada nas clulas vegetativas dorsais (Dale et al., 1993; Thomsen no hemisfrio animal pigmentado. Quando
e Melton, 1993; Kessler e Melton, 1995). deixados no meio tratado por um tempo maior
Kessler e Melton (1995) mostraram que a protena Vg1 ativada causava a (C) os explantes do hemisfrio animal
elongao ativa do mesoderma da notocorda como tambm a ativao dose-depen- pigmentado formaram estruturas semelhantes
dente dos marcadores mesodrmicos. Quando coroas do plo animal, no estgio de larva, incluindo a notocorda, msculos, olhos,
blstula so colocadas em baixa concentrao de Vg1 processada, a protena Vg1 glndula do cimento e eixo ntero-posterior.
induz a expresso de genes como Brachyury, que caracteriza o mesoderma geral. (D) Com o aumento de sua concentrao, a
Doses ligeiramente maiores de Vg1 induz a expresso de marcadores mesodrmicos protena Vg1 induz um conjunto mais dorsal
de marcadores mesodrmicos. A concentra-
laterais (Xwnt8 e actina), e em altas concentraes, a Vg1 induz essas clulas a
o mais baixa 0 (controle), seguida por 1, 3,
expressar os marcadores mesodrmicos dorsais goosecoid e noggin (Figura 15.19). 10 e 30% em sobrenadante de Vg1. (De acor-
Entretanto, Cui e colaboradores (1996) encontraram que a Vg1, sozinha, no capaz do com Kessler e Melton, 1995; fotografias
de causar diferenciao da notocorda in vivo. Para que isso ocorra, as clulas ne- cortesia de D. A. Melton.)
cessitam dos produtos de Vg1 e Wnt. (A via Wnt no foi suficiente para induzir
sozinha o mesoderma dorsal.) possvel que a combinao de Vg1 com algum
produto especificado pelo gene Siamois seja capaz de induzir a especificao do
mesoderma dorsal e sua diferenciao na notocorda*.
A protena Vg1 madura (processada) parece ser crtica para o funcionamento (se
no o estabelecimento) do centro de Nieuwkoop nos anfbios. Vg1 tambm
identificada na regio homloga do embrio de galinha - a zona marginal posterior.
Alm disso, quando a protena Vg1 introduzida experimentalmente em reas laterais
* Alternativamente, isso pode ser outro exemplo do conceito de Spemann (1938) chamado de
dupla certeza. O embrio poderia especificar o mesoderma dorsal pelo sinergismo de Vg1 e -
catenina (sem um centro de Nieuwkoop). O mesmo resultado poderia ser obtido a partir de um sinal
iniciado pelo gene Siamois do centro de Nieuwkoop abaixo dele. Spemann considerava dupla
certeza em analogia a usar tanto um cinto como suspensrios.
do blastoderma do pinto, um novo centro de Nieuwkoop formado e um eixo secun-

drio induzido (Seleiro et al., 1996).
Induo de especificidade mesodrmica ventral e lateral
At aqui discutimos a induo do mesoderma dorsal pelas clulas vegetativas mais

dorsais. Mas, no s isso. As outras clulas vegetativas so capazes de induzir as
clulas acima delas a se tornarem mesoderma ventral. Experimentos de Smith e seus
colegas (1991) mostraram que na blstula intermediria os blastmeros vegetativos
ventrolaterais e dorsais de Xenopus induzem a expresso do gene Brachyury nas
clulas marginais acima deles. O mRNA de Brachyury codifica um fator de transcri-
o cuja funo crucial para a formao do mesoderma. Ele expresso antes da -
actina e outras protenas que so produtos das clulas mesodrmicas, e se o gene
Brachyury expresso em clulas onde o fator de transcrio est normalmente
inativo, aquelas clulas se tornam mesodrmicas (Cunliffe e Smith, 1992). Se o he-
misfrio animal contendo as clulas da zona marginal removido do hemisfrio
vegetal na blstula intermediria no se forma o mesoderma no hemisfrio animal.
Entretanto, se clulas vegetativas so adicionadas de volta aos hemisfrios ani-
mais, o gene brachyury expresso, e as clulas que o expressam se tornam
mesodrmicas. Desse modo, as clulas vegetativas induzem a expresso de genes
mesodrmicos em clulas da zona marginal. Sem essa interao, as clulas da zona
marginal permanecem ectodrmicas.
FATORES DE CRESCIMENTO FIBROBLSTICO. Existe muito debate sobre a

identidade dos indutores da mesodrmicos gerais encontrados nas clulas
vegetativas ventrais e laterais. Os fatores de crescimento fibroblstico (e suas
mensagens) foram encontrados no ovo e no embrio de Xenopus, e se considera
que eles permitem s clulas marginais responderem Vg1 (ou a outra protena
semelhante a activina) (Cornell e Kimelman, 1994; LaBonne e Whitman, 1994). O
significado funcional dessas molculas FGF secretadas foi demonstrado pela des-
truio dos receptores para FGF no embrio por mutaes dominantes negativas
(Captulo 3). Quando esse experimento foi feito, os embries que no tinham re-
ceptores FGF funcionais tinham reduzido dramaticamente as quantidades de
mesoderma posterior e lateral (Prancha 3). Uma possibilidade que a quantidade
graduada de Vg1 ativa cria o padro, com pequena quantidade induzindo o
mesoderma ventral, quantidades maiores induzindo o mesoderma lateral e ainda
maiores concentraes induzindo o mesoderma dorsal. Tais gradientes foram vis-
tos em cultura.
BMP4. Outra molcula considerada importante para a especificao do mesoderma

a protena morfogentica 4 do osso (BMP4). Parece haver uma relao antagni-
ca entre a BMP4 e o mesoderma dorsal. Se o mRNA para a BMP4 injetado em
ovos de Xenopus com uma clula, todo o mesoderma no embrio se torna
mesoderma ventrolateral, e no ocorre involuo no lbio do blastporo (Dale et
al., 1992; Jones et al., 1992). Experimentos de implantao produziram mais evidn-
cia em relao ao papel da BMP4 na induo do mesoderma ventrolateral. Quando
o hemisfrio animal pigmentado de embries injetados com a mensagem bmp4 foi
Figura 15.20 isolada e implantada na blastocele de blstulas jovens de Xenopus, elas causaram
A importncia de BMP4 na produo de estru- a formao de uma cauda extra (Figura 15.20). Inversamente, a super expresso de
turas posteriores pode ser vista quando o
um receptor negativo dominante de bmp4 resultou na formao de dois eixos
mRNA de bmp4 foi injetado em embries e as
clulas da coroa animal resultantes foram trans-
dorsais (Graff et al., 1994; Maeno et al., 1994). possvel que a BMP4 esteja
plantadas diretamente abaixo do ectoderma de induzindo um conjunto de fatores de transcrio que especificam o mesoderma
gstrulas jovens. As larvas tratadas, de modo para que seja lateral ou posterior (Stennard et al., 1996; Zhang e King, 1996).
geral, desenvolveram uma cauda extra. (de Jones Assim, a formao do mesoderma posterior (ventrolateral) parece ser originada
et al., 1992, cortesia de B. Hogan.) pelas aes de FGF e BMP4.
A criao da atividade do organizador

Protenas secretadas do organizador
O organizador induzido pelo centro de Nieuwkoop. Enquanto as clulas do centro de

Nieuwkoop permanecem endodrmicas, as clulas do organizador se tornam o
mesoderma dorsal (mesoderma da cabea, notocorda, mesoderma paraxial) e se
posicionam abaixo do ectoderma dorsal. Nesse local, induziro a formao do sistema
nervoso central. As propriedades do tecido organizador podem ser divididas em cinco
funes principais:
1. A habilidade de se tornar mesoderma dorsal (notocorda, etc.)

2. A habilidade de dorsalizar o mesoderma circundante em mesoderma lateral
(que de outra maneira formaria o mesoderma ventral)
3. A habilidade de dorsalizar o ectoderma em ectoderma neural
4. A habilidade de iniciar os movimentos da gastrulao
5. A habilidade de fazer com que a placa neural se torne o tubo neural
As clulas do organizador, em ltima anlise, contribuem para quatro tipos de

clulas endoderma da faringe, mesoderma da cabea, notocorda e a dobradia
cordoneural (Keller, 1976; Gont et al., 1993). O endoderma farngeo lidera a migra-
o do tecido organizador e parece induzir as estruturas mais anteriores da cabe-
a. O mesoderma da cabea induz o crebro anterior e o intermedirio, a notocorda
induz o crebro posterior e o tronco, e a dobradia cordoneural induz a extremida-
de da cauda. Recentemente, Vodicka e Gerhart (1995) correlacionaram tcnicas de
marcao fluorescente de clulas e hibridizao in situ para obter um mapa da
clulas que do origem ao organizador. Foi encontrado que a poro mais animal
(10%) era derivada dos blastmeros A1 da blstula de 32 clulas; a regio central
(70%) era derivada da prognie dos blastmeros B1; e cerca de 20% (as clulas
vegetativas e as profundas) era derivada do blastmero C1 diretamente acima das
clulas D1 do centro de Nieuwkoop. Todos os seis blastmeros, A1, B1 e C1
produziram clulas profundas e superficiais. A prognie do blastmero C1 produz
a parte mais vegetal, lder do organizador, e essas so as clulas que formam o
mesoderma da cabea.
Quando o organizador foi inicialmente descrito, iniciou-se o primeiro programa
de pesquisa realmente internacional - a procura das molculas do organizador.
Pesquisadores da Inglaterra, Alemanha, Frana, Estados Unidos, Blgica, Finln-
dia, Japo e Unio Sovitica, todos tentaram encontrar essas extraordinrias mo-
lculas (veja Gilgert e Saxn, 1993). R. G. Harrison (citado por Twitty, 1966) se
referiu gstrula dos anfbios como o novo Yukon para o qual mineiros ansiosos
estavam se dirigindo rapidamente para escavar ouro ao redor do blastporo.
Infelizmente, suas ps e picaretas se mostraram muito rudes para descobrir essas
molculas. A anlise das molculas do organizador teve que esperar at que a
tecnologia do DNA recombinante permitisse a produo de clones de cDNA do
mRNA do lbio do blastporo para verificar qual desses clones codificava fatores
que poderiam dorsalizar o embrio. A formao do mesoderma dorsal (organizador)
envolve a ativao de vrios genes. Considera-se que as protenas secretadas no
centro de Nieuwkoop ativam um conjunto de fatores de transcrio nas clulas
mesodrmicas acima dele. Esses fatores de transcrio ativariam os genes codifi-
cando os produtos secretados pelo organizador. Vrias protenas especficas do
organizador foram encontradas e se acham listadas na Tabela 15.3. Como as pro-
priedades do organizador dependem desses fatores secretados, comearemos com
essas protenas. [regul3.html]
Vrias fontes evidenciaram a presena de sinais difusveis da notocorda, princi-
palmente a partir dos estudos crticos com transfiltros pelo grupo de pesquisadores
Tabela 15.3 Protenas expressas somente, ou quase exclusivamente,

no organizador (lista parcial)
Protenas nucleares Protenas secretadas
Lim1 Chordin
XANF1 Noggin
Goosecoid Follistatin
Protenas relacionadas Sonic hedgehog
A HNF3 (p.ex., Forkhead, Pintallavis) Cerberus
Protenas relacionadas Nodal (vrias)
Filandeses (Saxn, 1961; Toivonen et al., 1975; Toivonen e Wartiovaara, 1976). O lbio
dorsal da salamandra aqutica foi colocado em um lado de um filtro suficientemente
fino, de modo que nenhum processo pudesse atravessar os poros, e o ectoderma
competente de gstrula foi colocado no outro lado do filtro. Aps vrias horas, estru-
turas neurais foram observadas no tecido ectodrmico (Figura 15.21). As identidades
desses fatores difundindo do organizador levaram um quarto de sculo para serem
definidas. Atualmente, vrias dessas molculas esto sendo estudadas: Chordin,
Noggin, Follistatin, Sonic hedgehog e Cerberus.
(A)
CHORDIN. Um dos papis iniciais do organizador se proteger contra a
ventralizao. A BMP4 produzida em toda a blstula de Xenopus e ativamente
produz mesoderma ventral (Graff et al., 1994). Em outras palavras, a produo do
mesoderma ventral no meramente devida ausncia de sinais dorsais; ela
ativamente construda. Alm do mais, como j descrito, a BMP4 pode bloquear os
sinais dorsais. O mesoderma dorsalizado bloqueia o sinal de BMP4 secretando
Chordin e Noggin (Sasai et al., 1994; Holley et al., 1995). Chordin uma protena
secretada que ativada pelos fatores de transcrio Goosecoid e Xnot2 contendo
o homeodomnio. A protena originalmente detectada na zona marginal dorsal
cerca de uma hora antes da gastrulao; ao se iniciar a gastrulao, a mensagem
chordin vista somente no lbio dorsal do blastporo (Figura 15.22). Daqui em
diante, chordin expressa na placa precordal (o mesoderma da cabea que prece-
de anteriormente a notocorda) e na notocorda. Quando esto ocorrendo as lti-
mas indues na cauda, Chordin encontrada na dobradia cordoneural, o ltimo
vestgio do organizador. Chordin pode induzir um eixo secundrio quando
microinjetada nos lados ventrais da blstula de Xenopus, possivelmente por inter-
(B) ferir com a ao de BMP4.
Figura 15.21 BMP4 inicialmente expressa nas regies ectodrmicas e mesodrmicas da
Fatores indutivos solveis e sua identificao. blstula tardia. Entretanto, durante a gastrulao, transcritos de bmp4 esto res-
(A) Estruturas neurais induzidas no ectoderma tritos zona marginal ventrolateral (Hemmati-Brivanlou e Thomsen, 1995; Northrop
presuntivo pelo lbio dorsal da salamandra aqu- et al., 1995). A protena BMP4 induz a expresso de vrios fatores de transcrio
tica, separado do ectoderma por um filtro (Xvent-1, Vox, Mix.1, Xom) que so reguladores-chaves no desenvolvimento do
Nucleopore com poros de dimetro mdio de mesoderma ventral. Portanto, a BMP4 ativa a expresso gnica ventral. Os fatores
0.05 m. Clulas neurais do tipo anterior so de transcrio induzidos por BMP4 reprimem goosecoid e outros genes dorsais,
evidentes, incluindo alguns olhos induzidos.
enquanto ao mesmo tempo ativam protenas mesodrmicas ventrolaterais (Gawantka
(B) Tipo similar de induo visto quando o
hemisfrio animal pigmentado de Xenopus (ec-
et al., 1995; Hawley et al., 1995; Mead et al., 1996; Schmidt et al., 1996). Dessa
toderma presuntivo) injetado com mRNA de maneira, a BMP4 ativa o desenvolvimento mesodrmico e suprime o desenvolvi-
chordin e tratado com FGF2 solvel. (A de mento dorsal. Em Xenopus, chordin e noggin se ligam diretamente e inativam a
Toivonen, 1979; B de Sasai et al., 1996; foto- BMP4, impedindo assim que a protena aja em clulas prximas ao organizador
grafias cortesia de L. Saxn e E. De Robertis, (Figura 15.23; De Robertis e Sasai, 1996; Piccolo et al., 1996; Sasai et al., 1996;
respectivamente.) Zimmerman et al., 1996).
(A) (B) (C)
Figura 15.22
Localizao do mRNA de chordin. (A) Montagem total da hibridizao in situ mostra que
imediatamente antes da gastrulao, a mensagem chordin expressa na regio que se tornar o
lbio dorsal do blastporo. (B) Quando a gastrulao comea, chordin expresso no lbio dorsal
do blastporo, e (C) visto nos tecidos do organizador. (de Sasai et al., 1994; fotografias cortesia
de E. De Robertis.)
(A)
Animal
Ectoderma
Ectoderma neural
epidrmico
Ventral Dorsal
MOLCULAS DO ORGANIZADOR:
Chordin, Noggin, Follistatin, Xnr3
Mesoderma
Endoderma dorsal
Vegetal
(B)
Screw
Genes homeobox
Tolloid Decapentaplegic no neurais
Chordin
Short gastrulation
Cordados
Drosophila
Figura 15.23
Modelo para a ao do organizador. (A) BMP4 (e outras certas molculas) so poderosos fatores
ventralizantes. Protenas do organizador como Chordin e Noggin podem bloquear a ao de
BMP4. (Follistatin pode inibir a ao de BMP7, que combina com BMP4 para ativ-lo.) Os
efeitos antagnicos dessas protenas podem ser vistos em todas as trs camadas germinativas. (B)
Vias do desenvolvimento homlogo na formao do sistema nervoso central de um vertebrado
(Xenopus) e de um invertebrado (Drosophila). O fator vertebrado est em preto, a protena
homloga da Drosophila em cor. (De acordo com De Robertis e Sasai, 1996; Sasai et al., 1996.)
& Especulaes
BMP4 e a lagosta de Geoffroy
R ECENTEMENTE, os laboratri-
os de De Robertis e Kimelman
mostraram que a reao que
leva formao do tubo neural dorsal no
Xenopus so as mesmas reaes que le-
do short-gastrulation injetado nas re-
gies ventrais de embries de Xenopus,
ele induz a notocorda e o tubo neural do
embrio. A injeo do mRNA de chordin
em Drosophila origina tecido nervoso
um dos mais calorosos e crticos con-
frontos em biologia quando ele props
que a lagosta era um vertebrado de ca-
bea para baixo. Ele acreditava que o
lado ventral da lagosta (com seu cor-
vam formao do cordo nervoso ven- ventral. Apesar da Chordin de Xenopus do nervoso) era homlogo ao lado dor-
tral nos insetos (veja Figura 15.23B; funcionar como um dorsalizador do em- sal dos vertebrados (Appel, 1987). Pa-
Holley et al., 1995; Schmidt et al., 1995). brio, ela ventraliza o embrio de Droso- rece que ele tinha razo ao nvel mole-
Em Drosophila, o homlogo do gene phila. Isso porque na mosca a Dpp cular, mas no no anatmico. De Robertis
bmp4 o decapentaplegic (dpp). Como produzida dorsalmente. Em Xenopus, e Sasai (1996) propuseram que todos os
discutido no captulo anterior, a protena BMP4 produzida ventralmente. Em am- filos bilatrios tinham uma origem co-
Dpp responsvel pela modelagem do bos os casos, Sog/Chordin produz teci- mum- uma criatura hipottica (denomi-
eixo dorsoventral na Drosophila, e est do neural bloqueando os efeitos de Dpp/ nada Urbilateria) de cerca de 600 mi-
presente na poro dorsal do embrio e BMP4. Em Drosophila, a Dpp interage lhes de anos atrs que era o ancestral
difunde-se ventralmente. Aqui, ela sofre com o produto do gene screw para seu de ambos os subreinos, protostomatas
a oposio de uma protena chamada funcionamento. Em Xenopus, o homlogo e deuterostomatas. A interao BMP4
Short-gastrulation (Sog). A Short-gastru- de screw, Bmp7, parece ser essencial para (Dpp)/Chordin(Sog) um exemplo de
lation a homloga de Chordin na Dro- o efeito ventralizante de BMP4 (Hawley processos homlogos, sugerindo uma
sophila. Esses homlogos no s se et al., 1995). unidade de princpios de desenvolvi-
parecem como tambm podem ser subs- Em 1822, o anatomista francs mento em todos os animais (Gilbert et
titudos um pelo outro. Quando o mRNA Etienne Geoffroy Saint-Hilaire provocou al., 1996).
NOGGIN. Um dos outros agentes do organizador deve ser o produto do gene noggin.
Smith e Harland (1991, 1992) isolaram esse gene construindo uma biblioteca de cDNAs
de gstrulas dorsalizadas (tratadas com ltio). RNAs sintetizados de conjuntos desses
plasmdeos foram injetados em embries ventralizados produzidos por irradiao com
luz UV. Os conjuntos de plasmdeos cujos RNAs recuperavam o eixo dorsal foram
divididos em conjuntos menores, e assim por diante, at o isolamento de clones ni-
cos cujos mRNAs eram capazes de restaurar o eixo dorsal nesses embries. Um des-
ses clones continha noggin. Smith e Harland (1992) mostraram que mRNA do noggin,
recentemente transcrito, est localizado inicialmente na regio do lbio dorsal do
blastporo e depois expresso na notocorda (Prancha 6). Ainda mais, se o embrio
precoce tratado com cloreto de ltio (LiCl) de modo que o manto mesodrmico inteiro
se torne um tecido organizador semelhante notocorda, ento o mRNA de noggin
encontrado no manto mesodrmico inteiro. Tratamento do embrio precoce com luz
ultravioleta (que impede a formao do lbio dorsal do blastporo) inibe a sntese do
mRNA de noggin. Injeo de mRNA de noggin em embries de uma clula, irradiados
com luz ultravioleta, restaura completamente o eixo dorsal e permite a formao do
embrio completo (Prancha 5). Se muita protena Noggin sintetizada nessa ocasio,
o embrio se torna hiperdorsal, formando somente a regio da cabea (da o nome
noggin). O mRNA para a protena Noggin j est presente no ovo fertilizado, e a
seqncia da protena (como deduzida pelo gene) sugere fortemente que Noggin
uma protena secretada. Parece ento, que Noggin um excelente candidato para
mediar algumas das funes do organizador.
Evidncia recente sugere que a protena Noggin pode realizar duas funes impor-
tantes do organizador de Spemann-Mangold: ela induz o tecido neural do ectoderma
dorsal, e dorsaliza as clulas mesodrmicas que, de outra maneira, contribuem para o
mesoderma ventral. Smith e colaboradores (1993) mostraram que a protena Noggin
pode dorsalizar as clulas da zona marginal ventral na gastrulao e reespecificar seu
destino a partir do mesoderma ventral (mesnquima e clulas do sangue) a destinos
mais intermedirios (msculo, corao e rim pronfrico). Quando Smith e colaborado-
res removeram as zonas marginais ventrais (o mesoderma ventral presuntivo) da gstrula
de Xenopus e as colocaram em um meio contendo a protena Noggin solvel, esses
explantes produziram um mRNA especfico para msculo que normalmente reserva-
do para explantes marginais dorsais. Esses explantes tambm se tornaram alongados
(outra caracterstica do desenvolvimento dorsal). Entretanto, os explantes alongados
no coravam como tecido notocordal. Esses experimentos mostram que a protena
solvel Noggin pode induzir clulas mesodrmicas ventrais da gstrula a se tornarem
msculo (mas no notocorda) e, portanto, ela se assemelha ao sinal do organizador
que dorsaliza o tecido mesodrmico lateral (veja Figura 15.17).
A protena Noggin tambm pode induzir tecido neural no ectoderma da gstrula
sem a presena de qualquer mesoderma dorsal (Lamb et al.,1993). Quando Noggin
adicionada ao ectoderma da gstrula (ou hemisfrio animal pigmentado), as clulas
ectodrmicas so induzidas a expressar marcadores neurais especficos para o crebro
anterior. Alm disso, os produtos gnicos para as clulas do msculo ou da notocorda
no so induzidos pela protena Noggin. Como Noggin uma protena secretada
sintetizada pelos derivados do organizador (o mesoderma da cabea e o
cordomesoderma) durante a gastrulao (quando se d a induo), e desde que ela
inativa a BMP4 (a qual ventraliza o embrio), considera-se que Noggin tem um papel
na dorsalizao do mesoderma e na dorsalizao do ectoderma dorsal.*
FOLLISTATIN. Hemmati-Brivanhou e Melton (1994) demonstraram que a protena

Follistatin, ligante de activina, est presente no lbio dorsal do blastporo e poste-
riormente se torna restrita notocorda. Embora originalmente se pensasse ligar
somente a activina, agora existe evidncia (Yamashida et al., 1995) que a Follistatin
pode inibir as atividades da BMP7. A BMP7 necessria para a ativao da BMP4,
assim pela inibio da BMP7, a Follistatin pode tambm prevenir a ventralizao do
mesoderma. A Follistatin tambm tem um papel na dorsalizao do ectoderma. Pare-
ce que a activina (ou, provavelmente, uma protena semelhante activina, tal como
a BMP7) necessria para a represso da induo neural. Ligando essa protena
Follistatin a inibio liberada e permite que o tecido se torne neural (Hemmati-
Brivanlou et al., 1994; Hawley et al., 1995).
interessante que Noggin, Chordin e Follistatin so todas inibidoras. Aqui vemos
um princpio que a base de boa parte do desenvolvimento: a ativao freqente-
mente realizada inibindo um repressor. Isso pode ser explicado pelo fato de que em
cada ncleo a maioria dos genes esto reprimidos. Para ativar um determinado gene,
necessrio um inibidor dessa represso. Analogamente, a inibio freqentemente
realizada pela supresso do inibidor do repressor. (Biologistas do desenvolvimento se
acostumam a falar com negativas duplas e triplas). Nesse caso, o estado default do
ectoderma se tornar neural, a no ser que sofra a ao de BMP4. As protenas do
mesoderma organizador impedem a ao de BMP4 no ectoderma.
*Noggin pode tambm estar funcionando como parte do centro de Nieuwkoop. Um material do
mRNA de noggin traduzido na blstula precoce (Smith e Harland, 1992) e uma investigao
recente (Lustig et al., 1996) mostra que Noggin funciona com um co-fator, Xenopus nodal related-
1(Xnr-1), para induzir a gstrula precoce. Xnr-1 pode tambm estar envolvido na formao do eixo
esquerdo-direito em Xenopus. Durante a neurulao, ele expresso assimetricamente no mesoderma
da placa lateral, estando presente somente no lado esquerdo do embrio. Esse modelo de expresso
se assemelha aquele dos genes nodal em pintos e camundongos, onde a expresso de nodal crtica
para o estabelecimento do eixo esquerdo-direito (Captulo 16).
Placa do assoalho Conjunto de neurnios Placa do assoalho ventral

ventral secundrio motores secundrios doadora ou outras clulas
Conjunto de neurnios secretando Hedgehog
motores secundrios
Regio do
neurnio
Motor Notocorda
doadora
Placa do
assoalho ventral
Notocorda
(A) (B) (C) (D)
Figura 15.24
Cascasta de indues iniciada pela notocorda
no tubo neural recm-formado. (A) Dois tipos SONIC HEDGEHOG. Sonic hedgehog utilizada aps a concretizao da maioria
de clulas no tubo neural recm-formado. As dos eventos indutivos da neurulao. Ela usada para padronizar o tubo neural
clulas mais perto da notocorda se tornam as recm-formado. Sonic hedgehog expressa na notocorda e a poro aminoterminal
clulas da placa do assoalho ventral. Os neur- dessa protena secretada (veja Figura 7.11). Se fragmentos da notocorda de um
nios motores emergem nos lados ventrolaterais. embrio so transplantados para as laterais de um tubo neural hospedeiro, esse
(B) Se uma segunda notocorda transplantada formar, nas suas laterais, outro conjunto de clulas da placa do assoalho. Se um
adjacente ao tubo neural, ela induz um novo pedao da notocorda removido de um embrio, o tubo neural adjacente regio
conjunto de clulas da placa do assoalho e dois deletada no tem clulas da placa do assoalho (Figura 15.24; Placzek et al., 1990;
novos conjuntos de neurnios motores. (C) Se
Yamada et al.,1991). Essas clulas da placa do assoalho, uma vez induzidas, induzem
as clulas da placa do assoalho ventral so trans-
plantadas adjacentes ao tubo neural, novos con- a formao dos neurnios motores em um de seus lados. O mesmo resultado pode
juntos de neurnios motores se diferenciam. ser obtido se os fragmentos de notocorda so substitudos por aglomerados de
(D) As interaes indutivas entre essas clu- clulas secretando Sonic hedgehog (Echelard et al., 1993; Roelink et al., 1994). A
las. As setas vermelhas representam a secreo Sonic hedgehog das clulas da placa do assoalho capaz, em seguida, de polarizar
da protena Sonic hedgehog. (De acordo com o tubo neural. Ela induz os neurnios motores nas regies ventrolaterais, e impede
Placzek, et al., 1990.) a dorsalizao do tubo neural ventral antagonizando os efeitos de BMP4 originada
na epiderme dorsal* (veja Captulo 7).
CERBERUS. A induo da estruturas mais anteriores da cabea realizada por uma

protena secretada chamada Cerberus. Diferentemente de outras protenas secretadas,
Cerberus promove a formao da glndula do cimento, olhos e placdios olfatrios.
Entretanto, diferente de Noggin e Chordin, a protena Cerberus suprime a formao do
mesoderma dorsal, enquanto induz o mesoderma cardaco e fgado (um derivado
endodrmico do intestino anterior). Quando o mRNA de Cerberus foi injetado no
conjunto de blastmeros vegetativos ventrais (D4) no estgio de 32 clulas, se forma-
ram estruturas ectpicas da cabea (Figura 15.25; Bouwmeester et al., 1996). Essas
estruturas da cabea foram produzidas tanto a partir das clulas injetadas como das
clulas circundantes. O gene cerberus expresso naquelas clulas que lideram o
movimento anterior das clulas em gastrulao para dentro do embrio. Essas so as
clulas do endoderma involutivo (na camada profunda do organizador) que do ori-
gem ao intestino anterior e seus derivados, os quais esto sob a cabea. A mensagem
*BMP4 age como um agente ventralizador na formao do tubo neural (impedindo ativamente
sua formao na parte ventral do embrio), mas uma vez que o tubo neural est produzido, a
protena pode agir como um agente dorsalizante, sendo secretada da epiderme superior para dorsalizar
o tubo neural (veja Captulo 7). Um parceiro verstil, ela estimular o desenvolvimento do msculo
no mitomo, padroniza o desenvolvimento do dente, e at destri a rede formada entre nossos
dedos da mo e do p. A BMP4 freqentemente pareada com a Sonic hedgehog na formao dos
primrdios dos rgos.
Figura 15.25
O mRNA de Cerberus injetado em um nico blastmero D4 (vegetativo
ventral) de um embrio de Xenopus de 32 clulas induz estruturas da
cabea como tambm um corao e um fgado duplicados. Um olho
secundrio (um nico olho ciclpico) e um placdio olfatrio podem ser
vistos facilmente. (de Bouwmeester et al., 1996; fotografia cortesia de E.
M. De Robertis.)
do cerberus dependente da atividade do resto do organizador, e a sua transcrio

ativada por Follistatin, Noggin e Chordin. Isso pode explicar porque a transcrio de
cerberus limitada regio do endoderma involutivo mais prxima ao organizador,
uma regio que se sobrepe expresso de chordin.
Fatores de transcrio induzidos no organizador
Considera-se que as atividades do centro de Nieuwkoop ativam um conjunto de genes

codificando fatores de transcrio no mesoderma acima dele. Foram encontrados v-
rios fatores de transcrio especficos do organizador; ou seja, eles so expressos
somente no lbio dorsal do blastporo e na notocorda resultante. Duas dessas prote-
nas so XANF-1 e Goosecoid.
XANF-1 um fator de transcrio contendo o homeodomnio que pode ser um dos
primeiros a ser expresso. No comeo da gastrulao, a XANF-1 est predominante-
mente nas camadas profundas do lbio dorsal do blastporo, os precursores do
mesoderma da cabea, e uma injeo de mRNA de XANF-1 nos blastmeros ventrais
induz a formao de um eixo secundrio. Essas clulas injetadas se tornam o mesoderma
anterior do eixo secundrio (Zaraisky et al., 1995). Assim, a XANF-1 parece controlar
o comportamento migratrio das clulas profundas do lbio dorsal do blastporo e a
diferenciao dessas clulas em tecido do organizador.
Goosecoid parece funcionar de maneira muito semelhante XANF-1. A mensa-
gem para a Goosecoid foi encontrada fazendo uma varredura das bibliotecas de
cDNA do lbio dorsal do blastporo com sondas para genes que so ativos na
formao do eixo em Drosophila (Blumberg et al., 1991; Cho et al., 1991a). Os trans-
critos de goosecoid so detectados inicialmente no estgio de blstula tardia, indi-
cando que esse um gene controlado pelo ncleo, e esses transcritos se acumulam
na rea localizada diretamente sobre o lbio dorsal do blastporo nas clulas precur-
soras mesodrmicas dorsais (blastmero C1). Em culturas do hemisfrio animal
pigmentado, a protena Vg1 ou a activina, mas no FGF2 ou Noggin, podem induzir
a transcrio do gene goosecoid (Cho et al., 1991a; Thomsen e Melton, 1993). A
expresso do mRNA de goosecoid tambm se correlaciona com o domnio do
organizador em animais tratados experimentalmente. Quando LiCl usado para au-
mentar o mesoderma indutor do dorso-anterior da zona marginal, a expresso de
goosecoid da mesma forma aumentado. Inversamente, quando ovos so tratados
com luz UV antes da primeira clivagem, ambas, a induo dorso-anterior e a expres-
so de goosecoid, so significativamente inibidas. Injeo do comprimento total da
mensagem goosecoid nos dois blastmeros ventrais do embrio de Xenopus com 4
(A) (B) (C) (D)
Figura 15.26
Habilidade do mRNA de goosecoid para induzir um novo eixo. (A) Na gstrula, o embrio
controle (no injetado ou injetado com mRNA semelhante a goosecoid mas sem o homeobox)
tem um lbio dorsal do blastporo. (B) Um embrio no estgio de 16 clulas cujos blastmeros
vegetativos ventrais foram injetados com a mensagem goosecoid. Note o lbio dorsal do blastporo
secundrio. (C) Superior, duas nurulas injetadas com mRNA de goosecoid, mostrando dois
eixos; inferior, duas nurulas controle. (D) Embrio duplicado produzido pela injeo de goosecoid.
Foram induzidas estruturas completas da cabea. (De acordo com Cho et al., 1991a; Niehrs et al.,
1993; cortesia de E. De Robertis.)
clulas faz com que a prognie desses blastmeros involuam, sofram extenso con-
vergente e formem o mesoderma dorsal e o endoderma da cabea do eixo secundrio
(Figura 15.26; Niehrs et al., 1993). Alm disso, experimentos com marcao (Niehrs et
(A) al., 1993) mostram que clulas injetadas com goosecoid so tambm capazes de
recrutar para o eixo dorsal clulas vizinhas do hospedeiro. Resumindo, o centro de
Nieuwkoop ativa o gene goosecoid codificando uma protena ligante de DNA que
(1) ativa as propriedades de migrao (involuo e extenso convergente) das clu-
las do lbio dorsal do blastporo, (2) de forma autnoma, determina os destinos
endodrmico da cabea e mesodrmico dorsal das clulas que o expressam, e (3)
permite s clulas que expressam goosecoid recrutarem clulas vizinhas para dentro
Xbra do eixo dorsal. Foi observado que Goosecoid ativa o gene Xotx2 no mesoderma
Noggin anterior e no ectoderma presuntivo do crebro (Blitz e Cho, 1995). Xotx2 o homlogo
Goosecoid do gene orthodenticle em Xenopus que essencial para o desenvolvimento do
Xnr3
crebro em moscas e camundongos.
(B) A expresso gnica especfica para o organizador pode ser usada para subdi-
vidir o organizador precoce em regies tendo diferentes combinaes dessas men-
sagens (Figura 15.27; Vodicka e Gerhart, 1995). No comeo da gastrulao, enquanto
as clulas do organizador involuem para o embrio, essas configuraes mudam.
Dentro das clulas profundas, o goosecoid agora visto nas pores mais anterio-
res (na maior parte construda de clulas C1), especialmente o mesoderma da placa
precordal da cabea. A sobreposio parcial dos genes noggin e Xbra define a
notocorda, e a regio tendo Xbra sem noggin define o domnio destinado a se
tornar o endoderma posterior. Um segundo domnio de expresso de noggin visto
na placa neural anterior. [regul6.html]
Figura 15.27
Estrutura fina do organizador. (A) No comeo da gastrulao, o Xbra est nas clulas mais
animais do organizador, enquanto o noggin est mais vegetal. As clulas vegetativas involuem
primeiro e se localizam mais anteriormente. (B) Os mesmos fatores vistos perto do fim da
gastrulao. As zonas de expresso so mais discretas e menos superpostas, e no h correlao
entre a localizao original das clulas e seu padro de expresso gnica posterior. (De acordo
com Vodicka e Gerhart, 1995.)
& Especulaes
Como o Organizador Neuraliza o Ectoderma?
M
ESMO QUE a identidade das da Protena Quinase C (PKC) nas suas natural foi novamente confirmada quan-
molculas sinalizadoras este- membranas celulares. Vrios estudos do Otte e colaboradores (1991; Otte e
ja sendo estabelecida, o me- (Davids et al., 1987; Davids, 1988; Otte Moon, 1992) demonstraram que a PKC
canismo de suas aes ainda um enig- et al., 1988, 1989) mostraram que se so- do ectoderma dorsal difere do PKC do
ma. provvel que alm de bloquear o mente um desses eventos ocorre, no ectoderma ventral, tanto na sua estru-
sinal ventralizante (BMP4), o organiza- h formao do tecido neural. Entretan- tura como na sua habilidade de ser ati-
dor deve tambm ativar as clulas ecto- to, se a Protena Quinase C e a adenil vada por compostos externos. Somente
drmicas para se tornarem a placa ciclase forem ativadas artificialmente a PKC encontrada no ectoderma dorsal
neural. Apesar de no se conhecer a(s) nas membranas das clulas ectodrmi- pode ser correlacionada com a habilida-
molcula(s) responsvel(s), possvel cas, o tecido neural gerado. Nesse de de responder a indutores naturais.
que a neuralizao possa se dar pela modelo, a induo neural realizada por possvel que ningum ainda tenha con-
combinao de duas reaes separadas: duas reaes, e cada reao pode ser seguido isolar o fator indutor neural
o aumento do AMP cclico intracelular iniciada por uma molcula diferente. A natural porque vrios fatores esto agin-
nas clulas ectodrmicas e a ativao participao de PKC na induo neural do simultaneamente.
A especificidade regional da induo

A determinao das diferenas regionais
Um dos mais fascinantes fenmenos na induo neural a especificidade regional

das estruturas neurais que so produzidas. As regies do crebro anterior
(arquenceflica), do crebro posterior (deuterenceflica) e espinocaudal do tubo
neural devem estar exatamente organizadas em uma direo anterior para posterior.
Dessa maneira, o tecido organizador no somente induz o tubo neural mas tambm
especifica as regies do tubo neural. Essa induo especfica da regio foi demons-
trada por Otto Mangold (1933) em uma srie de experimentos onde vrias regies do
teto do arquntero de Triturus (salamandra-aqutica) foram transplantadas para
embries em gstrula precoce (Figura 15.28). Aps a remoo da placa neural
superadjacente, quatro sees sucessivas do teto do arquntero foram retiradas de
embries que tinham acabado de completar a gastrulao e colocadas em blastoceles
de gstrulas precoces. A poro mais anterior do teto do arquntero induziu os
equilibradores e as pores do aparelho oral (Figura 15.28A); a prxima poro mais
anterior induziu a formao de vrias estruturas da cabea, incluindo nariz, olhos,
equilibradores e vesculas ticas (Figura 15. 28B); a terceira seo induziu a estrutu-
ra do crebro posterior (Figura 15.28C); e o segmento mais posterior induziu a forma-
o do tronco dorsal e o mesoderma da cauda (Figura 15.28D). A induo do
mesoderma dorsal- e no do ectoderma dorsal do sistema nervoso- pela ponta pos-
terior da notocorda foi confirmada por Bjtel (1931) e Spofford (1945) que mostraram
que o quinto posterior da placa neural d origem aos somitos da cauda e s pores
posteriores do ducto pronfrico do rim.
Alm disso, quando lbios dorsais do blastporo de embries precoces de
salamandra (gstrulas precoces) foram colocados em outros embries precoces de
salamandra, eles formaram cabeas secundrias. Quando os lbios dorsais de em-
bries em estgio mais avanado foram transplantados a embries precoces de
salamandra, eles induziram a formao de caudas secundrias (Figura 15.29; Mangold,
Figura 15.28 (A)

A especificidade regional da induo pode ser
demonstrada implantando diferentes regies
(coloridas) do teto do arquntero em gstrulas
precoces de Triturus. Os animais resultantes
Animal
tm partes secundrias. (A) Cabea com Poro do teto do resultante
equilibradores. (B) Cabea com equilibradores, arquntero transplantado
olhos e crebro anterior. (C) Parte posterior da para gstrula precoce
(B)
cabea, deuterencfalo e vesculas ticas. (D)
Segmento tronco-cauda. (De acordo com
Mangold, 1933.)
(C)
(D)
(A) Transplante do lbio dorsal de gstrula jovem
(B) Transplante do lbio dorsal de gstrula avanada
Figura 15.29
Ao indutora especfica regionalmente do lbio dorsal do blastporo. (A) Labios dorsais de
blastporos jovens (que formaro a poro anterior do mesoderma dorsal) induzem estruturas
anteriores quando colocadas em gstrulas jovens da salamandra aqutica. (B) Lbios dorsais de
blastporos mais velhos colocados em gstrulas de salamandra similares produzem estruturas
mais posteriores. (de Saxn e Toivonen, 1962, fotografias cortesia de L. Saxn.)
1933). Isso significa que as primeiras clulas do organizador a entrarem no embrio

induzem a formao de crebros e cabeas, enquanto as clulas que formam o lbio
dorsal do blastporo de embries em estgio mais avanado induzem as clulas acima
delas a se tornarem medulas espinhais e caudas. Um fenmeno similar ocorre em
embries de pinto (Storey et al., 1992).
O modelo do duplo gradiente
Nos anos de 1950, P. Nieuwkoop (1952) e Toivonen e Saxn (1955) propuseram mode- Anterior Posterior
los para a especificidade regional que envolviam duas etapas. Na primeira delas, o
tecido neural era induzido pelo organizador. Esse tecido neural era o tecido Figura 15.30
arquenceflico do crebro anterior. A segunda etapa consistia em um sinal de Evidncia para um modelo de induo neural
posteriorizao distribudo como um gradiente, com maior concentrao caudal. O em dois estgios: ativao e transformao.
sinal de posteriorizao agia no ectoderma anterior transformando-o em crebro pos- Uma dobra do ectoderma de gstrula foi im-
terior e tecido da medula espinhal. A evidncia de Nieuwkoop veio de transplantes de plantada em uma regio da placa neural. As
estruturas mais anteriores esto no lado esquer-
dobras do ectoderma competente em vrias posies ao longo do eixo ntero-poste-
do e 1-4 representam diferentes estruturas
rior da gstrula hospedeira. As pores proximais dessas dobras produziram estrutu-
neurais. Dobras do ectoderma de gstrula no
ras tpicas da regio de insero do hospedeiro, enquanto que a parte mais distal da especfica tendiam a se diferenciar em estrutu-
dobra se desenvolveu em estruturas neurais de natureza mais anterior do que da ras neurais anteriores, mas eram posteriorizadas
insero (Figura 15.30). A evidncia de Toivonen e Saxn veio de estudos com indutores por material oriundo do posterior do embrio.
artificiais especficos de tecidos. Foi observado que a medula ssea de cobaia, por (De acordo com Doniach, 1993.)
exemplo, induz somente estruturas mesodrmicas. Fragmentos de fgado de cobaia,
entretanto, podiam induzir estruturas do crebro anterior. Eles implantaram os dois
indutores juntamente dentro da blastocele da mesma gstrula precoce. Enquanto o
fgado induziria somente o crebro anterior e a medula ssea induziria somente o
mesoderma, os dois juntos induziram tudo normal; o crebro anterior, o crebro poste-
rior, a medula espinhal e o mesoderma do tronco (Toivonen e Saxn, 1955). Portanto, a
especificidade regional da induo neural pode ser devida a gradientes opostos de
substncias indutoras do crebro anterior e da medula espinhal (Figura 15.31). Resul-
tados semelhantes vieram de estudos onde o ectoderma neural anterior foi misturado
(A)
Medula Fgado
ssea
Figura 15.31
Evidncia para o modelo de induo em
(B) Fgado Fgado + medula Medula ssea gradiente duplo. (A) Implantao simult-
113 casos ssea 66 casos 34 casos nea de um indutor neuralizante (fgado de
Crebro anterior cobaia) e um indutor de mesoderma (me-
Olho dula ssea de cobaia) na blastocele de uma
Nariz gstrula precoce da salamandra aqutica.
Equilibrador (B) Resultados dessa implantao. Estru-
Crebro posterior
turas do crebro posterior e da medula es-
Vescula do ouvido pinhal que eram intermedirias entre o c-
Medula espinhal rebro anterior e o mesoderma no mapa de
destino da placa neural, no foram bem in-
Notocorda duzidas por cada um dos indutores. Quan-
Somitos
do os dois indutores foram implantados
Prnefros
Nadadeira
em conjunto, essas estruturas foram pro-
duzidas. (De acordo com Toivonen e
Saxn, 1955.)
Crebro anterior
Crebro posterior
Medula espinhal
Porcentagem
Figura 15.32
Evidncia para a induo em gradiente duplo e
dois estgios no embrio de anfbios. A regio com diferentes quantidades de mesoderma dorsal posterior (Figura 15.32; Toivonen e
anterior da placa neural (ou seja, clulas j in- Saxn, 1968). Assim, o tecido neural foi determinado a ser inicialmente crebro anterior,
duzidas naturalmente por um indutor do cre- mas em seguida foi posteriorizado de maneira gradativa por substncias caudais. A
bro anterior, aqui vistas em cor) e clulas da maioria dos modelos de induo neural convergiram a um esquema que inclui (1) uma
notocorda posterior foram removidas e mistu-
etapa de ativao inicial que determina que as clulas tm capacidade de se conver-
radas em diferentes propores. A freqncia
de estruturas intermedirias (crebro posteri- terem em clulas neurais do crebro anterior e (2) uma etapa de transformao na
or) aumenta medida que a propores de c- qual um gradiente de material do mesoderma posterior causa a posteriorizao da
lulas da placa neural anterior e clulas especificao neural (Figura 15.33). [regul4.html]
mesodrmicas se aproxima de 1:1. Isso sugere
que a especificao regional ocorre aps a de- Correlatos moleculares da caudalizao neural
terminao das clulas da placa neural como
neurais. (de Gilbert e Saxn, 1993.) Cada um dos indutores neurais: Chordin, Noggin e Follistatin induz exclusivamente
tecidos neurais anteriores (tipo de crebro anterior). Ento, quais podem ser o(s)
fator(es) que posteriorizam o tubo neural? Vrios estudos recentes apontam para o
FGF como sendo o fator que especifica que o ectoderma neural se torne mais caudal
(Cox e Hemmati-Brivanlou, 1995; Lamb e Harland, 1995). Quando o ectoderma de
gstrula precoce (ainda sem a subcamada de mesoderma dorsal) foi isolado e
Formao da cabea Transformao

anterior (Cerberus) posterior
Ativao neural
(Chordin, Noggin,
Anterior Follistatin) Posterior
Ativao: Transformao posterior

(Chordin FGF, RA, Wnt?
Noggin
Follistatin Posterior
Figura 15.33 Xnr3)
O modelo de ativaotransformao na pa-
dronizao neural. De acordo com este mode- Ativao da cabea
anterior (Cerberus) Mesoderma dorsal
lo, a induo neural original (ativao) faz
com que o ectoderma neural seja especificado
como o tipo de clulas neurais mais anteriores. Anterior
A caudalizao (transformao) dessas clu- Lbio dorsal do blastporo
las realizada por um gradiente de uma outra Endomesoderma
substncia, cuja concentrao a mais alta pos- anterior
teriormente. (De acordo com Doniach, 1995.) Ectoderma Endoderma
Concentrao de RA cido
em contato com a retinico
nurula tardia
No tratada Controle
rRNA
Glndula do cimento
XCG-1
Glndula do
cimento XAG-1
XA-1 Cabea
XIF-1 Cabea
XIHbox6 Tronco
Sistema neural N-CAM
Xhox36 Cauda
Figura 15.34
cido retinico (RA) causa a posteriorizao de estruturas neurais. (A) Embries em nurula
tardia foram expostos continuamente a diferentes concentraes de cido retinico e seu
crescimento foi permitido at que os controles atingissem o estgio de girinos. (B) Efeito na
expresso do mRNA do marcador neural quando as blstulas so tratadas com 10-6 M de cido
retinico por 2 horas (suficiente para produzir girinos aceflicos). Efeito inibitrio pode ser visto
nos genes expressos mais anteriormente. (A de acordo com Ruiz i Altaba e Jessell, 1991; B de
acordo com Sive et al., 1990.)
neuralizado por Noggin, Chordin ou Follistatin foram encontrados marcadores neurais

do tipo anterior. Quando o tecido foi incubado com um indutor neural mais FGF2, o
ectoderma expressou marcadores neurais mais posteriores. Realmente, o FGF2 capaz
de induzir o crebro anterior a expressar genes especficos do crebro posterior. Quan-
do a sinalizao de FGF bloqueada in vivo por um receptor dominante negativo do
FGF, os girinos resultantes no tm seus segmentos posteriores (Amaya et al., 1991).
O FGF2 provavelmente no o FGF posteriorizador natural em Xenopus, pois no
secretado e no est localizado em lado nenhum do embrio. Entretanto, uma forma
embrionria de FGF (eFGF, um FGF de Xenopus semelhante ao FGF4 de mamferos)
encontrada no mesoderma posterior e do broto da cauda de Xenopus e tem os mesmos
efeitos que FGF2 (Isaacs et al., 1992). A super expresso de eFGF estimula vrios
genes expressos posteriormente, incluindo o homlogo de caudal em Xenopus. Isso,
por sua vez, parece ativar a expresso de genes Hox mais posteriores, levando maior
especificao posterior do sistema nervoso (Pownall et al., 1996).
Alm dos FGFs, outros fatores podem estar envolvidos na padronizao do siste-
ma nervoso de Xenopus. Quando gstrulas precoces de Xenopus so tratadas com
concentraes nanomolares a micromolares de cido retinico (AR), seu desenvolvi-
mento do crebro anterior e intermedirio prejudicado de forma dependente das
concentraes usadas (Figura 15.34A; Papalopulu et al., 1991; Sharpe, 1991). Quando
so usadas concentraes mais baixas, a induo do tecido neural no parece ser
inibida, mas so produzidas menos mensagens e estruturas do crebro anterior (Figu-
ra 15.34B; Durston et al., 1989, 1991; Sive et al., 1990). O cido retinico parece afetar
tanto o mesoderma como o ectoderma. Ruiz i Altaba e Jessell (1991) verificaram que o
mesoderma dorsal anterior de gstrulas tratadas com cido retinico eram incapazes
o
jetad
Figura 15.35
o
Xwnt3a pode caudalizar o tecido neural anteri-
Embri
a
No in
Xwnt3
or. Explantes de ectoderma competente liga-
dos ao lbio dorsal do blastporo foram isola-
dos como na Figura 15.30. Os mRNAs espe-
cficos expressos foram identificados por PCR XAG1 Glndula do cimento
de transcriptase reversa. Nesta figura, os
marcadores neurais expressos mais anterior-
XANF2 Glndula pituitria
mente esto localizados mais ao alto. A
superexpresso de Wnt3a no embrio com
Xwnt3a anulou os marcadores neurais mais OtxA Crebro anterior
anteriores. As regies ectodrmicas de em-
bries no injetados ou aquelas superexpres-
sando uma protena controle (prolactina) no En2 Crebro intermedirio
foram afetadas. (de McGrew et al., 1995; foto-
grafia cortesia de R. T. Moon.) Krox20 Crebro posterior
Xlhbox6 Medula espinhal
NCAM Neural (geral)
Actina muscular Mesoderma
de induzir estruturas da cabea em embries hospedeiros, e Sive e Cheng (1991)

encontraram que o ectoderma tratado com cido retinico no respondia induo
anterior do mesoderma de gstrulas no tratadas. Outro candidato para fator de
caudalizao o Wnt3a de Xenopus (McGrew et al., 1995). Essa protena encontrada
no ectoderma neural da nurula precoce. Quando o ectoderma isolado das gstrulas
de Xenopus mas permanece ligada ao lbio dorsal do blastporo, o ectoderma desen-
volve uma seqncia de marcadores neurais ntero-posteriores. Se o embrio tivesse
sido injetado com RNA de Xwnt3a (causando a super expresso dessa protena), os
marcadores anteriores seriam perdidos (Figura 15.35).
& Especulaes
Sinais verticais e horizontais do organizador
N OSSA DISCUSSO se limitou,

at o momento, aos sinais que
vo verticalmente do organiza-
dor ao ectoderma que a ele se sobrepe.
Sabe-se agora que existe um segundo
volvidos nas atividades neuralizantes do
organizador. possvel que eles forneam
os sinais que faltam para ativar a neurula-
o (como oposto aos sinais que bloque-
iam a ventralizao). Se sinais planares
movimentando-se do lbio dorsal do
blastporo atravs do ectoderma so res-
ponsveis pela induo neural, ento a
fonte original de tais sinais deveria ser o
Sinais
conjunto de sinais que produzido pelo verticais Sinal
lbio dorsal do blastporo e enviado planar
horizontalmentre atravs do plano do
Figura 15.36
ectoderma (Figura 15.36). Dados recentes Duas maneiras de induzir o eixo dorsal. No Arquntero
sugerem que ambas, a induo vertical mecanismo planar, molculas so transferidas
atravs do cordomesoderma e a induo do tecido do lbio dorsal do blastporo atravs
horizontal (planar) atravs do ectoderma, do plano do ectoderma. No mecanismo verti- Lbio dorsal
so necessrias para a induo embrio- cal, molculas solveis do cordomesoderma Blastocele do blastporo
nria completa. E qual seria o papel des- derivado do lbio dorsal do blastporo indu-
ses sinais? Primeiro, existe alguma evidn- zem as clulas acima delas para se tornarem
cia que sinais planares podem estar en- tecido neural. (de Doniach, 1993.) Anterior Posterior
epitlio da zona marginal dorsal e no as (A) Plo (B)

clulas mesenquimatosas profundas da- animal
Corte
quela zona do organizador. Shih e Keller
(1992) mostraram que isso correto. Eles
repetiram os experimentos de Spemann e Ventral
Mangold, mas em lugar de usar a zona
marginal dorsal (DMZ) inteira, eles trans-
plantaram as clulas epiteliais ou as clu- Corte
las profundas da DMZ (as quais marca- Blastporo
ram com partculas fluorescentes de
dextrano). As clulas epiteliais tinham to- Dorsal
das as propriedades indutivas do organi-
zador de Spemann e se diferenciaram em
tecido mesodrmico. O epitlio tambm
recuperou os embries ventralizados por
irradiao com luz ultravioleta. Essas ati-
vidades do organizador no puderam ser
realizadas nem pelas clulas profundas da
DMZ nem pelas clulas marginais ven-
trais. Uma protena indutora, recentemen-
te descoberta, Xenopus nodal-related-3
(Xnr3), foi encontrada nessa camada su- (C) Embrio controle (D) Tecido do explante
perficial do organizador, e pode converter
hemisfrios pigmentados do plo animal Figura 15.37
em ectoderma neural anterior. Ao contr- Padro de expresso dos marcadores neurais induzidos por contato com o lbio dorsal do
rio de outros indutores, ela no dorsaliza blastporo no plano do ectoderma. (A) Seo sagital de gstrula precoce de Xenopus mostrando
o mesoderma. Ainda no se sabe se essa onde foram feitos os cortes. (B) Explante demonstrando a polaridade ntero-posterior esperada
protena parte do sistema sinalizador pelo mapa de destino: a regio branca a epiderme; a regio pontilhada o neuroectoderma
planar (Hansen et al., 1997). presuntivo; a regio colorida o mesoderma dorsal; a regio estriada o teto do arquntero. Os
Entretanto, os sinais planares no so explantes foram colocados sob lamnulas para impedir a migrao do mesoderma. (C) Expresso
considerados suficientes para a induo dos marcadores neurais no embrio controle, estgio 21. Os genes homeobox engrailed-2 e
neural. Nieuwkoop e Koster (1995) impedi- XlHbox6 so expressos na borda do crebro do posteriorintermedirio e na medula espinhal,
ram a ocorrncia de induo vertical du- respectivamente; o gene Krox-20 da protena do dedo de zinco expresso nos rombmeros 3 e 5
rante a gastrulao de Xenopus, e obser- do crebro posterior. (D) A mesma ordem de expresso vista no ectoderma daqueles explantes
varam que no houve diferenciao neural. tendo uma conexo com o lbio dorsal do blastporo. (De acordo com Doniach et al., 1992.)
Alm do mais, se o fragmento ligante de
fibronectina, RGD, for injetado na blasto- precoces de Xenopus de tal forma que o d atravs da notoplaca (o ectoderma
cele de gstrulas de Rana pipiens, o ectoderma retm contato com o lbio dor- acima da notocorda).
mesoderma axial no migra em direo ao sal do blastporo mas no com o meso- No terceiro modelo, os sinais plana-
plo animal. Em lugar disso, ela se divide derma, no s so induzidos no ectoderma res complementam os sinais verticais na
em dois ramos que involuem horizontal- os marcadores pan-neurais NCAM e NF- criao do tubo neural. Os sinais plana-
mente ao longo do equador do embrio, 3, mas tambm so expressos quatro res parecem estar envolvidos na induo
formando duas notocordas localizadas la- marcadores neurais especficos para po- da extenso convergente do crebro pos-
teralmente. Cada notocorda induz uma pla- sio -engrailed-2, Krox-20, XlHbox1 e terior e do ectoderma da medula espinhal
ca neural, mas uma placa neural no se for- XlH-box6- no explante de ectoderma na adjacente a ele (enquanto que o dobra-
ma no ectoderma dorsal, onde os sinais seqncia ntero-posterior apropriada mento da placa neural em um tubo neural
planares se espalhariam (Saint-Jeannet e (Figura 15.37). Parece ento que os sinais parece ser induzido pela notocorda) (Keller
Dawid, 1994). Assim, nesse modelo, os si- horizontalmente indutivos do lbio dor- et al., 1992; Nieuwkoop e Koster, 1995).
nais planares so redundantes ou podem sal do blastporo so suficientes para in- Ainda estamos tentando localizar todos
apoiar os sinais verticais da notocorda. duzir o padro neural ntero-posterior. os pedaos do quebra-cabea da induo,
No segundo modelo, os sinais plana- Ruiz i Altaba (1992) tambm confirmou uma enquanto novos pedaos esto sendo
res podem ser importantes contribuintes extensa padronizao neural nessas exo- descobertos. Spemann previu que os ci-
para a especificidade regional da induo. gstrulas, mostrando que o padro de entistas descobririam que o embrio usa-
Doniach e seus colegas (1992) mostraram marcadores neurais nas exogstrulas re- va mais de um mecanismo (segurana
que informaes instrutivas, posicional- flete os padres normais, com exceo dupla) para atingir seus objetivos. O
mente especficas so fornecidas por sido crebro anterior e regies ventrais. embrio pode muito bem estar usando
nais planares atravessando o ectoderma. Ele tambm fornece evidncia de que a ambos os sinais planares e verticais para
Quando so usados explantes de gstrulas transmisso desses sinais horizontais se induzir seu sistema nervoso.
Genes homeobox na especificao neural
Uma das mais espetaculares descobertas desta dcada foi que moscas e camundon-
gos usam os mesmos genes homeobox para especificar regies ao longo do eixo
ntero-posterior. Entretanto, a anlise dos genes homeobox em Xenopus no pro-
grediu tanto devido a impossibilidade de se fazer anulao (knock out) de genes
nessas rs. Como veremos no Captulo 16, o cido retinico capaz de converter
uma parte do corpo do camundongo em uma parte mais posterior, causando a ex-
presso de genes homeobox que so caractersticos da regio mais posterior. Isso
tambm se d em Xenopus. Tanto o cido retinico como o eFGF se mostraram
capazes de alterar a expresso de genes Hox. Pownall e colegas (1996) mostraram
que o eFGF promove a expresso de genes Hox posteriores no ectoderma de Xeno-
pus, e tanto Cho e colegas (1991b) como Sive e Cheng (1991) mostraram que o cido
retinico altera a expresso de genes homeobox em uma direo posterior tanto no
ectoderma como no mesoderma. Assim, em uma variao do modelo de dois estgi-
os antes proposto, agora prope-se que a induo neural leva criao de uma
determinao neural anterior (do tipo crebro anterior) que influenciada por um
gradiente posterior de cido retinico, eFGF ou Wnt3a para a criao de
especificidades regionais (Otte et al., 1991; Sharpe, 1991). Tal gradiente de cido
retinico (dez vezes maior no posterior do que no anterior) foi detectado no meso-
derma dorsal de nurulas precoces de Xenopus (Chen et al., 1994).
Competncia e cascatas indutivas

As interaes indutivas primrias, apesar de complexas, no podem construir o em-
brio inteiro. Entretanto, a formao do tubo neural, mesoderma dorsal, endoderma
farngeo e outros tecidos cria as condies para uma cascata de eventos indutivos
posterior. Interaes pelas quais um tecido interage com outro para dirigir especifica-
mente seu destino so chamadas interaes secundrias.*
Qualquer sistema de induo embrionria tem pelo menos dois componentes: um
tecido capaz de produzir o estmulo indutor e um tecido capaz de receber e responder
ao estmulo. At agora, estivemos vendo a especificidade de produo; agora precisa-
mos ver a especificidade das clulas que respondem ao estmulo. A habilidade para
responder de uma forma especfica a um dado estmulo chamada competncia. Ns
vimos que na gstrula precoce, um lbio do blastporo implantado pode induzir uma
nova placa neural e eixo embrionrio em qualquer lugar do embrio onde ele pode
encontrar ectoderma. Entretanto, com o aumento da idade embrionria, o ectoderma
perde sua habilidade de responder, e a implantao de um lbio dorsal do blastporo
abaixo da epiderme prospectiva de um embrio em estgio de nurula, no causar a
formao de uma nova placa neural. O embrio perdeu sua competncia para respon-
der ao novo lbio do blastporo.
Apesar do ectoderma da nurula tardia no ser mais competente para responder
ao lbio do blastporo, ela se tornou competente para responder a novos indutores.
Essa competncia pode ser localizada em reas determinadas. Durante a gastrulao
e neurulao precoce, o ectoderma da cabea (mas no o ectoderma do tronco) se
torna competente para formar o cristalino, o nariz e os placdios do ouvido. Essa
competncia adquirida porque a regio da placa neural est atuando sobre ele
(Henry e Grainger, 1990). Assim, a regio da cabea na nurula agora competente
para responder ao contato da vescula ptica (derivada do crebro anterior) para se
tornar cristalino.
*Apesar das indues que se seguem s indues embrionrias primrias terem, freqente-
mente, sido chamadas de secundrias, no existe diferena conceitual entre elas. Retornaremos s
indues secundrias no Captulo 17.
Mais ainda, uma vez que um tecido foi induzido, ele pode induzir outros tecidos.
Os blastmeros D1 do centro de Nieuwkoop induzem as clulas acima dele a se torna-
rem o organizador. O organizador ento induz o ectoderma acima dele a se tornar o
tubo neural. O tubo neural pode induzir o ectoderma da cabea a formar o cristalino. E
as indues continuam. Mais ainda, um tecido pode induzir vrios outros. O organiza-
dor induz tanto o mesoderma como o ectoderma. A Sonic hedgehog da notocorda no
induz somente a placa do assoalho no tubo neural; originando-se tanto da placa do
assoalho como da notocorda, A Sonic hedgehog induz o somito ventral mediano a se
tornar o esclertomo formador de cartilagem (veja Figura 9.6; Fan e Tessier-Lavigne,
1994; Johnson et al., 1994). Continuaremos nossa discusso de indues secundrias
no Captulo 17.
Estamos finalmente dando nomes aos agentes e fatores solveis dos embrio-
logistas experimentais. Estamos finalmente delineando as vias intercelulares dos fato-
res parcrinos e fatores de transcrio que constituem os primeiros passos nos pro-
cessos da organognese. O programa internacional de pesquisa iniciado pelo labora-
trio de Spemann na dcada de 1920 est chegando a sua concluso. Mas essa pes-
quisa encontrou nveis de complexidade muito mais profundos que Spemann teria
concebido, e da mesma forma que seus experimentos nos mostraram o quanto no
sabamos, assim hoje, enfrentamos um novo conjunto de problemas gerados pelas
nossas solues aos problemas mais velhos: Como iniciado o centro de Nieuwkoop?
Qual a atividade de Siamois? Como o mesoderma se torna padronizado? Como so
limitados os sinais da notocorda? Como a notocorda se diferencia? Como o ectoderma
adquire sua competncia?
Analisando o campo em 1927, Spemann observou:
Ns ainda estamos em presena de enigmas, mas no sem a esperana de os
resolver. E enigmas com esperana de soluo - o que mais um cientista poderia
desejar?
O desafio ainda permanece.
LITERATURA CITADA
Allen, G. E. 1985. Thomas Hunt Morgan: Blumberg, B., Wright, C. V. E., De Robertis, E. Cho, K. W. Y, Morita, A. A., Wright, C. V. E.
Materialism and reductionism in the develop- M. and Cho, K. W. Y. 1991. Organizer-specific and De Robertis, E. M. 1991b. Overex-pression
ment of modern genetics. Trends Genet. 3: 151- homeobox genes in Xenopus laevis embryos. of a homeodomain protein confers axis-forming
154; 186-190. Nature 253: 194-196. activity to uncommitted Xenopus embryonic
cells. Cell 65: 55-64.
Appel, T. A. 1987. The Cuvier-Geoffroy Deba- Bouwmeester, T., Kim, S.-H., Sasai, Y., Lu, B.
te: French Biology in the Decades before and De Robertis, E. M. 1996. Cerberus is a head- Cooke, J. and Webber, J. A. 1985. Dynamics of
Darwin. Oxford University Press, NY. inducing secreted factor expressed in the anteri- the control of body pattern in the development
or endoderm of Spemanns organizer. Nature 382: of Xenopus laevis. J. Embryol. Exp. Morphol.
Amaya, E., Musci. T. J. and Kirschner, M. W.
595-601. 88: 85-99.
1991. Expression of a dominant negative mutant
of the FGF receptor disrupts mesoderm forma- Brannon, M. and Kimelman, D. 1996. Activation Cornell, R. A. and Kimelman, D. 1994. Ac-tivin-
tion in Xenopus embryos. Cell 66: 257-270. of Siamois by the Wnt pathway. Dev. Biol. 180: mediated mesoderm induction requires FGF. De-
344-347. velopment 120: 453-462.
Berrill, N. J. and Liu, C. K. 1948. Germplasm,
Weismann, and hydrozoa. Q. Rev. Biol. Buss, L. 1987. The Evolution of Individuality. Cornell, R. A., Musci, T. J. and Kimelman, D. 1995.
23:124-132. Princeton University Press, Princeton, NJ. FGF is a prospective competence factor for early
activin-type signals in Xenopus mesoderm
Bjtel, J. H. 1931. ber die Entwicklung des Chen, Y. P., Huang, L. and Solursh, M. 1994. A
induction. Development 121: 2429-2437.
Schwanzes bei Amphibien. Wilhelm Roux Arch. concentration gradient of retinoidsin the early
Entwicklungsmech. Org. 125: 448-486. Xenopus laevis embryo. Dev. Biol,161: 70-76. Cox, W. G. and Hemmati-Brivanlou, A.
1995. Caudalization of neural fate by tissue
Blitz, I. L. and Cho, K. W. Y. 1995. Anterior Cho, K. W. Y, Blumberg, B., Steinbeisser, H.
recombination and bFGF. Development 121:
neurectoderm is progressively induced during and De Robertis, E. 1991a. Molecular nature
4349-4358.
gastrulation: the role of the Xenopus of Spemanns organizer: The role of the Xe-
homeobox gene orthodenticle. Development nopus homeobox gene goosecoid. Cell 67:
121: 993-1004. 1111-1120.
Cui, Y., Tian, Q. and Christian, J. L. 1996. Interactions in Early Development. Wiley-Liss, Gimlich, R. L. and Cook, J. 1983. Cell lineage
Synergistic effects of Vgl and Wnt signals in the New York, pp. 109-127. and the induction of nervous systems in
specification of dorsal mesoderm and endoderm. amphibian development. Nature 306: 471-473.
Dev. Biol. 180: 22-34. Durston, A., Timmermans, A., Hage, W. J.,
Hendriks, H. F. J., de Vries, N. J., Heideveld, M. and Gimlich, R. L. and Gerhart, J. C. 1984. Early cellular
Cunliffe, V. and Smith, J. C. 1992. Ectopic Nieuwkoop, P. D. 1989. Retinoic acid causes an interactions promote embryonic axis formation
mesoderm formation in Xenopus embryos caused anteroposterior transformation in the developing in Xenopus laevis. Dev. Biol. 104: 117-130.
by widespread expression of a Brachyury homo- central nervous system. Nature 330: 140-144.
Gont, L. K., Steinbeisser, H., Blumberg, B.
logue. Nature 358: 427-430.
Echelard, Y, Epstein, D. J., St-Jacques, B., Shen, and De Robertis, E. M. 1993. Tail formation
Dale, L. and Slack, J. M. W. 1987. Regional L., Mohler, J., McMahon, J. A. and McMahon, A. as a continuation of gastrulation: the multiple
specificity within the mesoderm of early 1993. Sonic hedgehog, a member of a family of tail populations of the Xenopus tailbud deri-
embryos of Xenopus laevis. Development 100: putative signaling molecules, is implicated in the ve from the late blastopore lip. Development
279-295. regulation of CNS polarity. Cell 75: 1417-1430. 119: 991-1004.
Dale, L. Howes, G., Price, B. M. J. and Smith, J. Ettensohn, C. A. and McClay, D. R. 1988. Cell Graff, J. M., Thies, R. S., Song, J. J., Celeste, A.
C. 1992. Bone morphogenetic protein 4: a lineage conversion in the sea urchin embryo. J. and Melton, D. A. 1994. Studies with a Xeno-
ventralizing factor in early Xenopus develop- Dev. Biol. 125: 396-409. pus BMP receptor suggest that ventral meso-
ment. Development 115: 573-585. derm-inducing signals override dorsal signals in
Fan, C.-M. and Tessier-Lavigne, M. 1994. vivo. Cell 79: 169-179.
Dale, L., Matthew, G. and Coleman, A. 1993. Patterning of mammalian somites by surface
Secretion and mesoderm-inducing activity of the ectoderm and notochord: Evidence for sclero- Guger, K. A. and Gumbiner, B. M. 1995. b-
TGF-b related domain of Xenopus Vg1. EMBO tome induction by sonic hedgehog. Cell 79: catenin has wnt-like activity and mimics the
J. 12: 4471-1480. 1175-1186. Nieuwkoop signaling center in Xenopus dorsal-
ventral patterning. Dev. Biol. 172: 115-125.
Davids, M. 1988. Protein kinases in amphibian Fssler, P. E. and Sander, K. 1996. Hilde Mangold
ectoderm induced for neural differentiation. (1898-1924) and Spemanns organizer: Achie- Hamburger, V. 1984. Hilde Mangold, co-discoverer
Wilhelm Roux Arch. Dev. Biol. 197: 339-344. vement and tragedy. Roux Arch. Dev. Biol. 205: of the organizer. J. Hist. Biol. 17: 1-11.
323-332.
Davids, M., Loppnow, B., Tiedemann, H. and Hamburger, V. 1988. The Heritage of Experi-
Tiedemann, H. 1987. Neural differentiation of Funayama, N., Fagotto, F., McCrea, P. and mental Embryology: Hans Spemann and the
amphibian gastrula ectoderm exposed to phorbol Grumbiner, B. M. 1995. Embryonic axis Organizer. Oxford University Press, Oxford.
ester. Wilhelm Roux Arch. Dev. Biol 106: 137- induction by the armadillo repeat domain of b-
Hansen, C. S., Marion, C. D., Steele, K., George, S.
140. catenin: Evidence for intracellular signalling. J.
and Smith, W. C. 1997. Direct neural induction
Cell Biol. 128: 959-968.
De Robertis, E. M. and Sasai, Y. 1996. A common and selective inhibition of mesoderm and epidermis
plan for dorsoventral patterning in Bilateria. Gawantka, V., Delius, H., Hirschfeld, K., inducers by Xnr3. Development 124: 483-492.
Nature 380: 37-40. Blumenstock, C. and Niehrs, C. 1995. Antagoni-
Haraway, D. J. 1976. Crystals, fabrics and Fields:
zing the Spemann organizer: Role of the homeobox
De Robertis, E. M., Blum, M., Niehrs, C. and Metaphors of Organicism in Twentieth-Century
gene Xvent-1. EMBO J. 14: 6268-6279.
Steinbeisser, H. 1992. Goosecoid and the Biology. Yale University Press, New Haven.
organizer. Development 1992 Suppl.: 167-171. Geoffroy Saint-Hilaire, E. 1822. Considrations
Harrington, A. 1996. Reenchanted Science: Holism
gnrales sur la vertbre. Mm. Mus. Hist. Natur.
Doniach, T. 1993. Planar and vertical induction in German Culture from Wilheim II to Hitler.
9: 89-119.
of anteroposterior pattern during the develop- Princeton University Press, Prince-ton, NJ.
ment of the amphibian central nervous system. Gerhart, J. C., Danilchik, M., Doniach, T., Roberts,
Hawley, S. H. B. Wnnenberg,-Stapleton, K.,
J. Neurobiol. 24: 1256-1275. S., Browning, B. and Stewart, R. 1989. Cortical
Hashimoto, C., Laurent, M. N., Watabe, T.,
rotation of the Xenopus egg: Consequences for
Doniach, T. 1995. Basic FGF as an induced Blumberg, B. W. and Cho, K. W. Y. 1995.
the anteroposterior pattern of embryonic dorsal
of anteroposterior neural pattern. Cell 83: Disruption of BMP signals in embryonic Xeno-
development. Development [Suppl.] 107: 37-51.
1067-1070. pus ectoderm leads to direct neural induction.
Gilbert. S. F. and Faber, M. 1996. Looking at Genes Dev. 9: 2923-2935.
Doniach, T., Phillips, C. R. and Gerhart, J. C.
embryos: The visual and conceptual aesthetics
1992. Planar induction of anteroposterior He, X., Saint-Jeannet, J .-P., Woodgett, J. R.,
of embryology. In A. I. Tauber (ed.) The Elusive
pattern in the developing central nervous system Varmus, H. E. and Dawid, I. B. 1995. Glycogen
Synthesis.: Aesthetics and Science. Kluwer Press,
of Xenopus laevis. Science 257: 542-545. synthase kinase-3 and dorsoventral patterning
Dordecht. pp. 125-151.
in Xenopus embryos. Nature 374: 617-622.
Driesch, H. 1892. The potency of the first two
Gilbert, S. F., Opitz, J. and Raff, R. A. 1996.
cleavage cells in echinoderm development. Ex- Heasman, J. M. and eight others. 1994.
Resynthesizing evolutionary and developmen-
perimental production of partial and double Overexpression of cadherins and underex-
tal biology. Dev. Biol. 173: 357-372.
formations. In B. H. Willier and J. M. pression of b-catenin inhibit dorsal mesoderm
Oppenheimer (eds.), Foundations of Experimen- Gilbert, S. F. and Saxn, L. 1993. Spemanns induction in early Xenopus embryos. Cell 79:
tal Embryology. Hafner, New York. Organizer: Models and molecules. Mech. Dev. 791-803.
41: 73-89.
Driesch, H. 1893. Zur Verlagerung der Blasto- Hemmati-Brivanlou, A. and Melton, D. A. 1992.
meren des Echinideneies. Anat. Anz. 8: 348-357. Gimlich, R. L. 1985. Cytoplasmic localization A truncated activin receptor inhibits mesoderm
and chordamesoderm induction in the frog induction and formation of axial structures in
Driesch, H. 1894. Analytische Theorie de or-
embryo. J. Embryol. Exp. Morphol. 89: 89-111. Xenopus embryos. Nature 359: 609-614.
ganischen Entwicklung. W. Engelmann, Leipzig.
Gimlich, R. L. 1986. Acquisition of develop- Hemmati-Brivanlou, A. and Melton, D. 1994.
Durston, A. and Otte, A. P. 1991. A hierarchy of
mental autonomy in the equatorial region of Inhibition of activin signalling promotes
signals mediates neural induction in Xenopus
the Xenopus embryo. Dev. Biol. 116: 340-352. neuralization in Xenopus. Cell 77: 273-281.
laevis. In J. Gerhart (ed.), Cell-Cell
Hemmati-Brivanlou, A. and Thomsen, G. H. Kageura, H. and Yamana, K. 1983. Pattern Maeno, M., Ong, R. C., Suzuki, A., Ueno, N. and
1995. Ventral mesodermal patterning in Xeno- regulation in isolated halves and blastomeres of Kung, H. F. 1994. A truncated bone morphoge-
pus embryos: Expression patterns and activities early Xenopus laevis. J. Embryol. Exp. Morphol. nesis protein-4 receptor alters the fate of ven-
of BMP-2 and BMP-4. Dev. Genet. 17: 78-89. 74: 221-234. tral mesoderm to dorsal mesodermrole of ani-
mal pole tissue in the development of ventral
Henry, J. J. and Grainger, R. M. 1990. Early Kageura, H. and Yamana, J. 1986. Pattern for-
mesoderm. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:
tissue interactions leading to embryonic lens mation in 8-cell composite embryos of Xenopus
10260-10264.
formation in Xenopus laevis. Dev. Biol. 141: laevis. J. Embryol. Exp. Morphol. 91: 79-100.
149-163. Mangold, O. 1933. ber die Induktions-fahigkeit
Keller, R. E. 1976. Vital dye mapping of the
der verschiedenen Bezirke der Neurula von
Henry, J. J., Amemiya, S., Wray, G. A. and Raff, gastrula and neurula of Xenopus laevis II.
Urodelen. Naturwissenschaften 21: 761-766.
R. A. 1989. Early inductive interac-tions are Prospective areas and morphogenetic move-
involved in restricting cell fates of mesomeres ments of the deep layer. Dev. Biol. 51: 118-137. Marcus, N. H. 1979. Developmental aberrations
in sea urchin embryos. Dev. Biol. 136: 140-153. associated with twinning in laboratory-reared sea
Keller, R., Shih, J., Sater, A. K. and Moreno, C.
urchins. Dev. Biol. 70: 274-277.
Hertwig, O. 1894. Zeit- und Streitfragen der 1992. Planar induction of convergence and
Biologie I. Prformation oder Epigenese? extension of the neural plate by the or-ganizer Maruyama, Y. K., Nakaseko, Y. and Yagi, S.
Grundzge einer Entwicklungstheorie der of Xenopus. Dev. Dyn. 193: 218-234. 1985. Localization of the cytoplasmic determi-
Organismen. Gustav Fischer, Jena. nants responsible for primary mes-enchyme
Kessler, D. S. and Melton, D. A. 1995. In-duction
formation and gastrulation in the unfertilized
Holley S. A., Jackson, P. D., Sasai, Y., Lu, B., De of dorsal mesoderm by soluble, mature Vg1
eggs of the sea urchin Hemicen-trotus pulcher-
Robertis, E. M., Hoffmann, F. M. and Ferguson, protein. Development 121: 2155-2164.
rimus. J. Exp. Zool. 236: 155-163.
E. L. 1995. A conserved system for dorsal-ven-
Khaner, O. 1995. The rotated hypoblast of the
tral patterning in insects and vertebrates involving McClendon, J. F. 1910. The development of
chicken embryo does not initiate an ectopic axis
sog and chordin. Nature 376: 249-253. isolated blastomeres of the frogs egg. Am. J.
in the epiblast. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:
Anat. 10: 425-430.
Hoppler, S, Brown, J. D. and Moon, R. T. 1996. 10733-10737.
Expression of a dominant negative Wnt blocks McGrew, L. L., Lai, C.-J. and Moon, R. T. 1995.
Khaner, O. and Wilt, F. 1990. The influence of
induction of MyoD in Xenopus embryos. Genes Specification of the anteroposterior neural axis
cell interactions and tissue mass on dif-
Dev. 10: 2805-2817. through synergistic interaction of the wnt
ferentiation of sea urchin mesomeres. De-
signaling cascade with noggin and follistatin. Dev.
Hrstadius, S. 1928. ber die Determination des velopment 109: 625-634.
Biol. 172: 337-342.
Keimes bei Echinodermen. Acta Zool. 9:1-191.
Khaner, O. and Wilt, F. 1991. Interactions of
McMahon, A. P. and Moon, R. T. 1989. Ectopic
Hrstadius, S. 1935. ber die Determination im different vegetal cells with mesomeres during
expression of the proto-oncogene int-1 in Xe-
Verlaufe der Eiachse bei Seeigeln. Publ. Staz. early stages of sea urchin development. Deve-
nopus leads to duplication of the embryonic axis.
Zool. Napoli 14: 251-479. lopment 112: 881-890.
Cell 58: 1075-1084.
Hrstadius, S. 1939. The mechanics of sea urchin Ku, M. and Melton, D. A. 1993. Xwnt-11, a
Mead, P. E., Brivanlou, I. H., Kelly, C. M. and
development studied by operative methods. Biol. maternally expressed Xenopus wnt gene. Deve-
Zon, L. I. 1996. BMP-4-responsive regulation
Rev. 14: 132-179. lopment 119: 1161-1173.
of dorsal-ventral patterning by the homeobox
Hrstadius, S. and Wolsky, A. 1936. Studien ber LaBonne, C. and Whitman, M. 1994. Mesoderm protein Mix.l. Nature 382: 357-360.
die Determination der Bilateral-symmetrie des induction by activin requires FGF-mediated
Nakamura, O. and Takasaki, H. 1970. Further
jungen Seeigelkeimes. Wil-helm Roux Arch. intracellular signals. Development 120: 463-472.
studies on the differentiation capacity of the
Entwicklungsmech. Org. 135: 69-113.
Lamb, T. M. and Harland, R. M. 1995. Fi-broblast dorsal marginal zone in the morula of Triturus
Huxley, J. S. and deBeer, G. R. 1934. Elements of growth factor is a direct neural inducer, which pyrrhogaster. Proc. Japan Acad. 46: 700-705.
Experimental Embryology. Cambridge Univer- combined with noggin generates anterior-pos-
Niehrs, C., Keller, R., Cho, K. W. Y. and De
sity Press, Cambridge. terior pattern. Development 121: 3627-3636.
Robertis, E. M. 1993. The homeobox gene
Isaacs, H. V., Tannahill, D. and Slack, J. M. W. Lamb, T. M. and seven others. 1993. Neural goosecoid controls cell migration in Xenopus
1992. Expression of a novel FGF in the Xeno- induction by the secreted polypeptide noggin. embryos. Cell 72: 491-503.
pus embryo. A new candidate inducing factor for Science 262: 713-718.
Nieuwkoop, P. D. 1952. Activation and
mesoderm formation and anteroposterior
Larabell, C. A. and seven others. 1997. organization of the central nervous system in
specificiation. Development 114: 711-720.
Establishment of the dorsal-ventral axis in Xe- amphibians.III. Synthesis of a new working
Jacobson, M. 1984. Cell lineage analysis of neural nopus embryos is presaged by early asymmetries hypothesis. J. Exp. Zool. 120: 83-108.
induction: Origins of cells forming the induced in b-catenin which are modulated by the Wnt
Nieuwkoop, P. D. 1969. The formation of the
nervous system. Dev. Biol. 102: 122-129. signaling pathway. J. Cell Biol. 136: 1123-1136.
mesoderm in urodele amphibians. I. Induction
Johnson, R. L., Laufer, E., Riddle, R. D. and Lemaire, P., Garrett, N. and Gurdon, J. B. 1995. by the endoderm. Wilhelm Roux Arch. Entwi-
Tabin, C. 1994. Ectopic expression of sonic Expression cloning of Siamois, a Xenopus cklungsmech. Org. 162: 341-373.
hedgehog alters dorsal-ventral patterning of homeobox gene expressed in dorsal-vegetal cells
Nieuwkoop, P. D. 1973. The organisation
somites. Cell 79: 1165-1173. of blastulae and able to induce a complete
center of the amphibian embryo: Its origin,
secondary axis. Cell 81: 85-94.
Jones, C. M., Lyons, K. M., Lapan, P. M., spatial organisation and morphogenetic action.
Wright, C. V. E. and Hogan, B. L. M. 1992. Lustig, K. D., Kroll, K., Sun, E., Ramos, R., Adv. Morphogen. 10: 1-39.
Elmendorf, H. and Kirschner, M. W. 1996. A Xe-
DVR-4 (bone morphogenetic protein-4) as a Nieuwkoop, P. D. 1977. Origin and esta-
nopus nodal-related gene that acts in synergy with
posterior-ventralizing factor in Xenopus meso- blishment of embryonic polar axes in
noggin to induce complete secondary axis and
derm induction. Development 115: 639-647. amphibian development. Curr. Top. Dev.
notochord formation. Development 122: 3275-3282.
Biol. 11: 115-132.
Nieuwkoop, P. D. and Koster, K. 1995. Vertical Roll-Hansen, N. 1978. Drosophila genetics: A Seleiro, E. A. P., Connolly, D. J. and Cooke, J.
versus planar induction in amphibian early deve- reductionist research program. J. Hist. Biol. 11: 1996. Early developmental expression and ex-
lopment. Develop. Growth Differ. 37: 653-688. 159-210. perimental axis determination by the chick Vg1
gene. Curr. Biol. 6: 1476-1486.
Northrop, J., Woods, A., Seger, R., Suzuki, A., Roux, W. 1888. Contributions to the develop-
Ueno, N., Krebs, E. and Kimelman, D. 1995. mental mechanics of the embryo. On the artificial Sharpe, C. R. 1991. Retinoic acid can mimic
BMP-4 regulates the dorsal-ventral differences production of half-embryos by destruction of one endogenous signals involved in transformation of
in FGF/MAPKK-mediated mesoderm induction of the first two blastomeres and the later develop- the Xenopus nervous system. Neuron 7: 239-247.
in Xenopus. Dev. Biol. 172: 242-252. ment (postgeneration) of the missing half of the
Shih, J. and Keller, R. 1992. The epithelium of
body. In B. H. Willier and J. M. Oppenheimer
Otte, A. P. and Moon, R. T. 1992. Protein kinase the dorsal marginal zone of Xenopus has organizer
(eds.), 1974, Foundations of Experimental
C isozymes have distinct roles in neural induction properties. Development 116: 887-899.
Embryology. Hafner, New York, pp. 2-37.
and competence in Xenopus. Cell 68: 1021-1029.
Sive, H. L. and Cheng, P. F. 1991. Retinoic acid
Ruiz i Altaba, A. 1992. Planar and vertical signals
Otte, A. P., Kramer, I. J. M. and Durston, A. J. perturbs the expression of Xhox.lab genes and
in the induction and patterning of the Xenopus
1991. Protein kinase C and regulation of the alters mesodermal determination in Xenopus
nervous system. Development 115: 67-80.
local competence of Xenopus ectoderm. Science laevis. Genes Dev. 5: 1321-1332.
251: 570-573. Ruiz i Altaba, A. and Jessell, T. 1991. Retinoic
Sive, H. L., Draper, B. W., Harland, R. M. and
acid modifies mesodermal patterning in early
Otte, A. P., Koster, C. H., Snoek, G. T. and Weintraub, H. 1990. Identification of a retinoic
Xenopus embryos. Genes Dev. 5: 175-187.
Durston, A. J. 1988. Protein kinase C mediates acid sensitive period during primary axis formation
neural induction in Xenopus laevis. Nature 334: Saint-Jeannet, J.-P. and Dawid, I. B. 1994. Ver- in Xenopus laevis. Genes and Devel 4: 932-942.
818-620. tical versus planar neural induction in Rana
Slack, J. M. W. and Tannahill, D. 1992.
pipiens embryos. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Otte, A. P., van Run, P., Heideveld, M., van Mechanism of anteroposterior axis specification
91: 3049-3053.
Driel, R. and Durston, A. J. 1989. Neural in vertebrates: Lessons from the amphibians.
induction is mediated by cross-talk between the Sakai, M. 1996. The vegetal determinants Development 114: 285-302.
protein kinase C and cyclic AMP pathways. Cell required for the Spemann organizer move
Smith, J. C. and Slack, J. M. W. 1983. Dor-
58: 641-648. equatorially during the first cell cycle. Develop-
salization and neural induction: Properties of
ment 122: 2207-2214.
Papalopulu, N., Clarke, J. D. W., Bradley, L., the organizer in Xenopus laevis. J. Embryol.
Wilkinson, D., Krumlauf, R. and Holder, N. Sander, K. 1991a. Wilhelm Roux and his Exp. Morphol. 78: 299-317.
1991. Retinoic acid causes abnormal develop- programme for developmental biology. Wilhelm
Smith, J. C., Dale, L. and Slack, J. M. W. 1985.
ment and segmental patterning of the anterior Roux Arch. Dev. Biol. 200: 1-3.
Cell lineage labels and region-specific markers
hindbrain in Xenopus embryos. Development
Sander, K. 1991b. Mosaic work and assimi- in the analysis of inductive interactions. J.
113: 1145-1158.
lating effects in embryogenesis: Wilhelm Rouxs Embryol. Exp. Morphol. [Suppl.] 89: 317-331.
Piccolo, S., Sasai, Y. Lu, B. and De Robertis, E. conclusions after disabling frog blastomeres.
Smith, J. C., Price, B. M. J., Green, J. B. A.,
M. 1996. Dorsoventral patterning in Xenopus: Wilhelm Roux Arch. Dev. Biol. 200: 237-239.
Weigel, D. and Herrmann, B. G. 1991. Expressi-
Inhibition of ventral signals by direct binding of
Sasai, Y., Lu, B., Steinbeisser, H., Geissert, D., on of a Xenopus homolog of Brachyury (T) is
chordin to BMP-4. Cell 86: 589-598.
Gont, L. K. and De Robertis, E. M. 1994. Xe- an immediate-early response to mesoderm
Pierce, S. B. and Kimelman, D. 1995. Regulation nopus chordin: A novel dorsalizing factor induction. Cell 67: 79-87.
of Spemann organizer formation by the activated by organizer-specific homeobox
Smith, W. C. and Harland, R. M. 1991. Injected
intracellular kinase Xgsk-3. Development 121: genes. Cell 79: 779-790.
wnt-8 RNA acts early in Xenopus embryos to
755-765.
Sasai, Y, Lu, B., Piccolo, S. and De Robertis, E. promote formation of a vegetal dorsalizing
Placzek, M., Tessier-Lavigne, M., Yamada, T., M. 1996. Endoderm induction by the organizer- center. Cell 67: 753-765.
Jessell, T. and Dodd, J. 1990. Mesoder-mal control secreted factors chordin and noggin in Xenopus
Smith, W. C. and Harland, R. M. 1992. Expres-
of neural cell identity: Floor plate induction by animal caps. EMBO J. 15: 4547-555.
sion cloning of noggin, a new dorsalizing factor
the notochord. Science 250: 985-988.
Saxn, L. 1961. Transfilter neural induction of localized to the Spemann orga-nizer in Xenopus
Pownall, M. E., Tucker, A. S., Slack, J. M. W. amphibian ectoderm. Dev. Biol. 3: 140-152. embryos. Cell 70: 829-840.
and Isaacs, H. V. 1996. eFGF, Xcad3 and Hox
Saxn, L. and Toivonen, S. 1962. Embryonic Smith, W. C., Knecht, A. K., Wu, M. and Harland,
genes form a molecular pathway that establishes
Induction. Prentice-Hall, Englewood Cliffs, NJ. R. M. 1993. Secreted noggin mim-ics the Spe-
the anteropostior axis in Xenopus. Development
mann organizer in dorsalizing Xenopus
122: 3881-3892. Schmidt, J., Francoise, V, Bier, E. and Kimelman,
mesoderm. Nature 361: 547-549.
D. 1995. Drosophila short gastrulation induces
Recanzone, G. and Harris, W. A. 1985.
an ectopic axis in Xenopus: Evidence for Sokol, S, Y. 1996. Analysis of Dishevelled
Demonstration of neural induction using nucle-
conserved mechanisms of dorso-ventral signalling pathways during Xenopus develop-
ar markers in Xenopus. Wilhelm Roux Arch. Dev.
patterning. Development 121: 4319-4328. ment. Curr. Biol. 6: 1456-1467.
Biol. 194: 344-354.
Schmidt, J. E., Dassow, G. van and Kimel-man, D. Sokol, S., Wong, G. and Melton, D. A. 1990. A
Render, J. and Elinson, R. P. 1986. Axis
1996. Regulation of dorsal-ventral patterning: the mouse macrophage factor induces head structu-
determination in polyspermic Xenopus eggs.
ventralizing effects of the novel Xenopus res and organizes a body axis in Xenopus. Science
Dev. Biol. 115: 425-433.
homobox gene Vox. Development 122: 1711-1721. 249: 561-564.
Roelink, H. and ten others. 1994. Floor plate
Schneider, S., Steinbeisser, H., Warga, R. M. and Sokol, S.. Christian, J. L., Moon, R. T. and Melton,
and motoneuron induction by vhh-1, a vertebrate
Hausen, P. 1996. b-catenin transloca-tion into D. A. 1991. Injected wnt RNA induces a com-
homolog of hedgehog expressed by the
nuclei demarcates the dorsalizing centers in frog plete body axis in Xenopus embryos. Cell 67:
notochord. Cell 76: 761-775.
and fish embryos. Mech. Dev. 57: 191-198. 741-752.
Spemann, H. 1918. ber die Determination der Toivonen, S. and Saxn, L. 1968. Morphogene- Wilkins, A. S. 1993. Genetic Analysis of Animal
ersten Organanlagen des Amphibi-enembryo. tic interaction of presumptive neural and Development, 2nd ed. Wiley-Liss, New York.
Wilhelm Roux Arch. Entwicklungsmech. Org. mesodermal cells mixed in different ratios.
Wilson, E. B. 1896. The Cell in Development
43: 448-555. Science 159: 539-540.
and Inheritance. Macmillan, New York.
Spemann, H. 1927. Neue Arbieten ber Organi- Toivonen, S. and Wartiovaara, J. 1976.
Yamada, T., Placzek, M., Tanaka, H., Dodd, J.
satoren in der tierischen Entwicklung. Naturwis- Mechanism of cell interaction during primary
and Jessell, T. M. 1991. Control of cell pattern
senschaften 15: 946-951. induction studied in transfilter experiments. Di-
in the developing nervous system: Polarizing
fferentiation 5: 61-66.
Spemann, H. 1938. Embryonic Development activity of floor plate and noto-chord. Cell 64:
and Induction. Yale University Press, New Toivonen, S., Tarin, D., Saxn, L., Tarin, P. J. 635-647.
Haven. and Wartiovaara, J. 1975. Transfilter studies
Yamana, K. and Kageura, H. 1987. Reexamina-
on neural induction in the newt. Differentiati-
Spemann, H. and Mangold, H. 1924. Induction tion of the regulative development of
on 4: 1-7.
of embryonic primordia by implantation of amphibian embryos. Cell Differ. 20: 3-10.
organizers from a different species. In B. H. Twitty, V. C. 1966. Of Scientists and Salaman-
Yamashida, H. and seven others. 1995.
Willier and J. M. Oppenheimer (eds.), Founda- ders. Freeman, San Francisco. [p. 39]
Osteogenic protein-1 binds to activin type II
tions of Experimental Embryology. Hafner, New
Vincent, J.-P. and Gerhart, J. C. 1987. Sub-cortical receptors and induces certain activin-like
York, pp. 144-184.
rotation in Xenopus eggs: An early step in effects. J. Cell Biol. 130: 217-226.
Spofford, W. R. 1945. Observations on the pos- embryonic axis specification. Dev. Biol. 123:
Yost, C., Torres, M., Miller, J. R., Brown, CJ.
terior part of the neural plate in Amblystoma. J. 526-539.
D., Lai, C.-J. and Moon, R. T. 1996. The axis-
Exp. Zool. 99: 35-52.
Vodicka, M. A. and Gerhart, J. C. 1995. inducing ability, stability, and subcellular
Stennard, F., Carnac G. and Gurdon, J. B. 1996. Blastomere derivation and domains of gene ex- localization of b-catenin is regulated in Xeno-
The Xenopus T-box gene, Antipodean, encodes pression in the Spemann Organizer of Xenopus pus embryos by glycogen synthase kinase 3.
a vegetally localised maternal mRNA and can laevis. Development 121: 3505-3518. Genes Dev. 10: 1443-1454.
trigger mesoderm formation. Development 122:
Waddington, C. H. 1933. Induction by the Zaraisky, A. G., Ecochard, V., Kazanskaya, O.
4179-4188.
primitive streak and its derivatives in the chick. V., Lukyanov, S. A., Fesenko, I. V. and Duprat-
Storey, K., Crossley, J. M., De Robertis, E., J. Exp. Biol. 10: 38-46. A.-M. 1995. The homeobox-con-tainming gene
Norris, W. E. and Stern, C. D. 1992. Neural XANF-1 may control development of the Spe-
Wakahara, M. 1989. Specification and establish-
induction and regionalisation in the chick mann organizer. Development 121: 3839-3847.
ment of dorsal-ventral polarity in eggs and
embryo. Development 114: 729-741.
embryos of Xenopus laevis, Dev. Growth Diff. Zhang, J. and King, M. L. 1996. Xenopus VegT
Tauber, A. I. and Sarkar, S. 1992. The human 31: 197-207. RNA is localized to the vegetal cortex during
genome project: Has blind reductionism gone oogenesis and encodes a novel T-box transcrip-
Weismann, A. 1892. Essays on Heredity and
too far? Perspec. Biol. Med. 35: 220-235. tion factor involved in mesodermal patterning.
Kindred Biological Problems. Translated by E.
Thomsen, G. H. and Melton, D. A, 1993. B. Poulton, S. Schoenland and A. E. Ship-ley.
Processed Vgl protein is an axial mesoderm Clarendon, Oxford. Zimmerman, L. B., De Jess-Escobar, J. and
inducer in Xenopus. Cell 74: 433-441. Harland, R. M. 1996. The Spemann organizer
Weismann, A. 1893. The Germ-Plasm: A Theory
signal noggin binds and inactivates bone
Toivonen, S. 1979. Transmission problem in of Heredity. Translated by W. Newton Parker
morphogenetic protein 4. Cell 86: 599-606.
primary induction. Differentiation 15: 177-181. and H. Ronnfeld. Walter Scott Ltd., London.
Toivonen, S. and Saxn, L. 1955. The simul-
taneous inducing action of liver and bone
marrow of the guinea pig in implantation and
explantation experiments with embryos of
Triturus. Exp. Cell Res. [Suppl.] 3: 346-357.
CAPTULO 16 Estabelecimento dos eixos corporais em mamferos e aves 635
Estabelecimento dos eixos corporais

em mamferos e aves 16
Entre o quinto e o dcimo dia, a pequena
massa disforme de clulas germinativas di-
ferencia-se no plano geral da construo do
embrio [do camundongo] e de seus rgos.
um pouco como uma massa de ferro trans-
E STE CAPTULO DETALHA parte da pesquisa que forneceu conhecimentos
sobre a maneira como foram estabelecidos os eixos do organismo dos mam-
feros e aves. Muito deste trabalho utiliza dados fornecidos pela anlise de
embries cujo desenvolvimento ficou malformado atravs de mutaes ou rompido
por determinados produtos qumicos.
formando-se numa nave espacial. Realmen- Apesar das tentativas do citado savant Geoffroy Saint-Hilaire (que acreditava que
te, esse o maior milagre que ns ainda po- todos os animais do mundo compartilhavam de um plano corporal em comum), a
demos imaginar e aceitar, e ao mesmo tempo maioria dos biologistas do desenvolvimento no teria predito que o plano corporal de
to comum, que temos que nos forar para
moscas e de mamferos seria especificado pelo mesmo conjunto de genes. Tendo
nos maravilhar com o carter maravilhoso
divergido h 500 milhes de anos atrs, o corpo da mosca e o corpo do vertebrado
dessa maravilha.
parecem excepcionalmente diferentes. A maioria dos insetos especifica seus eixos no
MIROSLAV HOLUB (1990)
citoplasma comum do blastoderma sincicial, ao passo que os eixos de vertebrados so
sabido que a natureza trabalha constan- especificados pelas interaes indutivas entre grupos de clulas. No embrio de
temente com os mesmos materiais. Ela en- Drosophila, o plano corporal geral especificado enquanto as clulas so uma mono-
genhosa em variar apenas as formas. Como camada cilndrica envolvendo o vitelo; nos mamferos, as clulas j sofreram extensa
se ela estivesse restrita s mesmas idias pri- movimentao quando suas partes corporais so especificadas. A formao dos apn-
mitivas, vemo-la tendendo sempre a fazer dices nos insetos resulta da extenso dos discos imaginais, ectodrmicos enquanto o
com que os mesmos elementos reapaream, membro do mamfero gerado por complexas interaes indutivas entre as clulas
com o mesmo nmero, nas mesmas circuns- mesodrmicas e as ectodrmicas que migraram para essas reas. Porm, estudos re-
tncias e com as mesmas conexes. centes mostraram que o eixo ntero-posterior de mamferos em desenvolvimento
E. GEOFFROY SAINT-HILAIRE (1807) especificado pelos mesmos genes hometicos que especificam o eixo do corpo de
Drosophila. Realmente, a seqncia homeobox foi chamada a pedra de Rosetta da
Biologia do desenvolvimento (Riddihough, 1992; Slack e Tannahill, 1993), porque nos
permite transferir nosso conhecimento gentico de embries de Drosophila para a
regio menos conhecida do desenvolvimento dos mamferos.
Iniciando o eixo ntero-posterior

Estabelecendo um Centro de Nieuwkoop
O estabelecimento do organizador parece ser semelhante para todos os vertebrados.

Nos peixes telesteos, as clulas do blastoderma permanecem relativamente coeren-
tes at a gastrulao, e os precursores mesodrmicos formam um cinto ao redor da
margem, adjacente s clulas vitelnicas (Wilson et al., 1995). Existe evidncia
635
Figura 16.1 Redistribuio citoplasmtica Distribuio de

Uma estratgia comum para estabelecer o cen- ativa localmente os determinantes ativados
tro de Nieuwkoop em vertebrados. Durante a determinantes maternos na blstula tardia
oognese, determinantes maternos inativos
(crculos abertos) so transportados (talvez com
o vitelo) para um novo ambiente citoplasmtico.
Isso resulta em sua converso para uma forma Anfbio Dorsal
ativa (crculos cheios). No ovo de anfbio isso
conseguido por rotao citoplasmtica. Nos
embries de telesteos e aves o mecanismo no
conhecido, mas os determinantes ativados
ficam concentrados perto de um grupo de clu-
las da margem mesodrmica. (Segundo
Grunwald e Wilson, 1996.)
Telesteo Dorsal
Clula
do vitelo
Ave
Vitelo
(Openheimer, 1936; Tung et al., 1945; Grunwald e Wilson, 1996) que o futuro lado
dorsal da clula vitelnica age como um centro de Nieuwkoop, transferindo fatores
maternos para o blastoderma (Figura 16.1). Nos embries de aves (e presumivelmente
tambm em mamferos) a zona marginal posterior (PMZ) pode ser equivalente ao cen-
tro de Nieuwkoop (Eyal-Giladi e Khaner, 1989; Khaner e Eyal-Giladi, 1989). Experimen-
tos de transplante demonstraram que esse o local onde as clulas se renem para
formar a linha primitiva. Pensou-se que o hipoblasto tinha habilidade indutora de
eixos, mas estudos recentes (Khaner, 1995) sugerem que essa capacidade reside so-
mente na PMZ. O hipoblasto parece apenas dirigir os movimentos subseqentes da
linha. A identificao da zona marginal posterior do pinto com o centro de Nieuwkoop
reforada pela descoberta de que o homlogo Vg1 do pinto transcrito nessa
regio. Alm disso, quando clulas cultivadas secretando a protena Vg1 madura
(processada) do pinto so colocadas ao longo das bordas laterais do blastoderma,
elas induzem a formao de novas linhas primitivas (Seleiro et al., 1996). Tal como o
centro Nieuwkoop de anfbios, a futura posio da PMZ fixada pouco depois da
fecundao e depende da gravidade e rotao.
Expresso Gnica em Tecidos Organizadores

Tecidos
Conforme mencionado no Captulo 6, o homlogo mamfero do lbio dorsal do

blastporo dos anfbios o seu ndulo no terminal anterior da linha primitiva. Em
aves, esse chamado ndulo de Hensen, e em mamferos (apesar de ter sido primeiro
descrito por Hensen em coelhos), essa estrutura freqentemente chamada apenas
de ndulo. A linha primitiva porta-se como os lbios laterais do blastporo. O ndulo
contm muitas das mesmas protenas encontradas no organizador da r, incluindo
Goosecoid, Nodal, Lim-1 e HNF3. O gene nodal essencial para a iniciao da linha
primitiva e para sua contnua manuteno. Sua expresso primeiro vista na margem
ventral (onde comea a gastrulao). Em seguida, a protena Nodal vista na regio
mais anterior da linha (Figura 16.2; Conlon et al., 1994). Quando esse gene deletado,
o embrio em desenvolvimento tem uma linha defeituosa e no pode gastrular. Mais
tardiamente na gastrulao (como veremos), a expresso do gene nodal importante
na formao do eixo esquerdo-direito do embrio.
De maneira semelhante, o mRNA goosecoid primeiro visto nas clulas da foice de

Koller, quando as clulas que formam a linha primitiva a se agregam. Ele , em seguida,
detectado no ndulo de Hensen, medida que a linha se movimenta para frente.
Porm, quando o ndulo regride, as clulas expressando goosecoid permanecem no
mesoderma da cabea e no endoderma farngeo (placa precordal) tal como nos anfbi-
os; medida que se forma a regio da cabea, a expresso de goosecoid ocorre nas
clulas mais anteriores (Izpisa-Belmonte et al., 1993). Sua expresso nessas clulas
parece ser crtica para a induo dos genes envolvidos na formao da cabea. Se os
genes goosecoid forem deletados em embries de camundongo, os eixos se formam
normalmente, mas a cabea no se forma adequadamente (Rivera-Prez et al., 1995).
Outro gene, Lim-1, tambm expresso nessas clulas, e camundongos que tm os
seus genes Lim-1 erradicados no desenvolvem cabeas (veja Figura 7.17).
O gene HNF-3 se parece com genes semelhantes no organizador de Xenopus
(XFH1, XFD1/1 e pintallavis). O HNF-3 encontrado no mesoderma precordal que
considerado induzir a especificidade regional no crebro anterior e no mesencfalo,
e quando o gene deletado, no se forma o ndulo. Os embries tm severas deficin- Figura 16.2
cias no seu mesoderma da cabea e na notocorda, deixam de gastrular adequadamen- Expresso do gene organizador em embries
te, e no apresentam estruturas do prosencfalo e mesencfalo (Ang e Rossant, 1994; de camundongo em desenvolvimento. Expres-
Weinstein et al., 1994). so do gene nodal durante a extenso da linha
Enquanto Goosecoid, Lim-1 e HNF-3 parecem ser necessrias para especificar primitiva. (Fotografia cortesia de M. R. Kuehn.)
clulas do mesoderma dorsal anterior, o eixo dorsal mdio e posterior parece ser
especificado pela protena Brachyury (T) (MacMurray e Shin, 1988; Yanagisawa,
1990; Stott et al., 1993). A formao e a diferenciao da notocorda requerem a
expresso do gene T (Gluecksohn-Schoenheimer, 1938; Herrmann, 1991; Rashbass
et al., 1991), e mutaes do gene Brachyury causam malformaes do eixo posterior
(Figura 2.25C).
medida que o ndulo comea a se formar, ele comea a secretar fator de
espalhamento (scatter factor). Essa protena parece promover a habilidade das clu-
las epiblsticas responderem a sinais de induo do ndulo e/ou da notocorda (Streit
et al., 1995.) Conforme discutido no Captulo 6, a linha primitiva se alonga, e o tubo
neural formado ao longo da linha mediana do embrio. O mesoderma precordal
considerado induzir as estruturas da cabea, ao passo que a notocorda pode induzir o
crebro posterior e a medula espinhal. medida que o tubo neural depositado,
torna-se especificado para o tipo de tubo neural que vir a ser - prosencfalo,
mesencfalo, crebro posterior ou medula espinhal. O mesoderma e o endoderma so
padronizados de maneira semelhante. Estudos recentes sugerem agora que essa espe-
cificao conseguida pelos mesmos genes homeobox, que especificam o eixo ntero-
posterior em Drosophila.
Especificando o eixo ntero-posterior de mamfero:

A hiptese do cdigo Hox
Homologia dos Complexos de Genes Hometicos entre
Drosophila e Mamferos
O complexo de genes hometicos de Drosophila (HOM-C) no cromossomo 3, con-
tm as classes Antennapedia e Bithorax de genes hometicos e pode ser visto como
uma unidade funcional nica. (Realmente, em outros insetos, como o caruncho da
farinha Tribolium, ele uma unidade nica.) Os genes HOM-C esto arranjados na
mesma ordem geral que seu padro de expresso ao longo do eixo ntero-posterior,
os genes mais 3 (labial) sendo requeridos para produo das estruturas mais ante-
riores, os genes mais 5 (AbdB) especificando o desenvolvimento do abdome poste-
rior. Genomas humanos e do camundongo contm quatro cpias de HOM-C por
conjunto haplide (Hox A a D no camundongo, HOXA a D em humanos; Boncinelli
et al., 1988; McGinnis e Krumlauf, 1992; Scott, 1992). No somente so encontrados
os mesmos tipos gerais de genes hometicos em ambos, moscas e mamferos, mas

a ordem desses genes nos respectivos cromossomos notavelmente semelhante. E
caso essa semelhana no seja suficiente para argumentar a favor de um esquema
comum de formao axial, foi descoberto que o padro de expresso desses genes
segue o mesmo modelo: aqueles genes de mamferos homlogos aos genes de
Drosophila: labial, proboscipedia e Deformed so expressos anteriormente, en-
quanto os genes homlogos aos genes Abdominal-B da Drosophila so expressos
posteriormente. Os genes mamferos Hox/HOX so numerados de 1 a 13, comean-
do daquele terminal do complexo sendo expressos mais anteriormente. A Figura 16.3
mostra as relaes entre os conjuntos de genes hometicos da Drosophila do ca-
mundongo. Os genes equivalentes em cada complexo do camundongo (como Hoxa-
1, Hoxb-1 e Hoxd-1) so chamados de grupo parlogo. considerado que os quatro
complexos Hox de mamferos foram formados de duplicaes cromossmicas. Como
no existe uma correspondncia um-para-um entre os genes HOM-C de Drosophila
e os genes Hox de mamferos, provvel que tenham ocorridos duplicaes inde-
pendentes depois que esses dois ramos animais divergiram (Hunt e Krumlauf, 1992).
Expresso de Genes Hox no

Sistema Nervoso Central e seus Derivados
A expresso do gene Hox pode ser vista ao longo do eixo dorsal (tubo neural,
crista neural, mesoderma paraxial e mesoderma superficial) do limiar anterior do
crebro posterior at a cauda. Tambm vista nos derivados desses tecidos,
especialmente os derivados das clulas da crista neural. Por exemplo, a regio do
crebro anterior da cabea d origem no s ao crebro anterior e seus gnglios
cranianos, mas tambm cartilagem das orelhas, mandbula e pescoo, arcos
articos, e rgos como as glndulas tireide, paratireide e timo. Conforme dis-
cutido no Captulo 7, o tubo neural do crebro posterior divide-se em unidades
segmentais chamadas rombmeros. A migrao das clulas da crista neural craniana
tambm parece estar organizada no padro rombomrico fazendo com que um
gnglio craniano especfico e o arco branquial por ele inervado se originem da
crista do mesmo rombmero (Lumsden et al., 1991). Essas clulas da crista neural
tambm parecem reter informao posicional de seu lugar original ao longo do eixo
ntero-posterior. Quando clulas pr-migratrias da crista neural de aves que nor-
malmente migrariam para o primeiro arco branquial (para formar a cartilagem da
mandbula) so colocadas na regio da crista cujas clulas normalmente migram
para o segundo arco branquial (para formar a cartilagem hiide), as clulas enxer-
tadas da crista neural migram para o segundo arco branquial, mas elas formam as
estruturas (cartilagem da mandbula) caractersticas do primeiro arco. Alm disso,
elas iro interagir com o ectoderma superficial e o mesoderma paraxial para formar
a musculatura do primeiro arco (bico e msculos da mandbula). Isso sugere
marcadamente que antes de migrar, as clulas da crista neural j esto comprome-
tidas a formar ao menos algumas das estruturas apropriadas para seu nvel no eixo
ntero-posterior (Noden, 1988).
Esse compromisso posicional pode ser o resultado dessas clulas expressarem
combinaes particulares de genes Hox. Por exemplo, os genes Hox-B so expres-
sos no presuntivo tubo neural do camundongo antes da formao da crista neural,
e quando as clulas da crista neural migrarem, iro reter o padro de expresso do
gene Hox-B caracterstico do seu lugar de origem (Hunt et al., 1991a). Com uma
nica exceo conhecida (Hoxb-1), o limite anterior de cada gene Hox pra no
rombmero mais prximo, dois rombmeros frente do mais anterior do prximo
gene Hox (Wilkinson et al., 1989; Keynes e Lumsden, 1990). Conforme representa-
do na Figura 16.4, os genes homeobox Hoxb-2, -3, e 4 so encontrados atravs
de toda a medula espinhal, mas o Hoxb-2 pra no limiar dos rombmeros 2 e 3; o
Hoxb-3 pra no limiar 4/5, e o Hoxb-4 pra na fronteira entre o sexto e stimo
(A) Figura 16.3

Conservao evolucionria da organizao
HOM-C de gnica hometica e expresso transcricional em
Drosophila moscas e camundongos. (A) Conservao en-
tre o agregado homeobox no cromossomo 3 de
Drosophila e os quatro agregados de genes
Hox no genoma murino. As regies sombrea-
Hox-A das mostram semelhanas estruturais particu-
Camundongo larmente fortes entre as espcies, e pode-se ver
que a ordem nos cromossomos foi conserva-
da. Os genes no terminal 5 (como todos genes
homeobox murinos so transcritos na mesma
direo) so aqueles que so expressos mais
posteriormente, so expressos mais tarde, e
podem ser induzidos somente por altas doses
de cido retinico. Genes tendo estruturas se-
melhantes, as mesmas posies relativas em
cada um dos quatro cromossomos, e padres
Subgrupos de expresso semelhantes pertencem ao mes-
Parlogos mo grupo parlogo. (B) Comparao entre os
3 Anterior Crebro posterior Tronco Posterior padres de transcrio dos genes HOM-C e
Hox-B de Drosophila (10 horas) e camundon-
Precoce Tardio
gos (12 dias), respectivamente. Outro conjun-
Forte resposta de Fraca resposta de to de genes que controla a formao da cabea
cido retinico cido retinico da mosca (orthodenticle e empty spiracles) tem
homlogos no camundongo que se expressam
no crebro intermedirio e anterior. Os genes
(B) homlogos humanos so chamados (em mai-
sculas) genes HOX. (A segundo Krumlauf,
Drosophila 1993; B segundo McGinnis e Krumlauf, 1992.)
Camundongo
Medula
espinhal
Cervical
Tor
cica
ar
mb
Crebro
Lo
intermedirio
Crebro Crebro
anterior posterior
(A) (B)
Arcos viscerais Sistema nervoso
Mesnquima Gnglios Tubo

Ectoderma
do arco craniais neural
superficial
Rombmero 2
Arco
branquial 1
Arco 4 3 2
Branquial 2
Figura 16.4
Arco Transcrio do gene Hox. (A) Diagrama do padro de transcrio
Branquial 3 do gene Hox no camundongo. Notar que o padro est distribudo
entre o tubo neural e o mesoderma (de modo que as clulas da crista
do terceiro rombmero entrem no segundo arco branquial) e os
Medula limites da expresso do gene Hox coincide com os limites
Arco espinhal
rombmeros. (B) Padres de transcrio de genes hometicos Hox-
Branquial 4
B no crebro posterior do camundongo de 9,5 dias. (A de McGinnis
e Krumlauf, 1992; B de Hunt et al., 1991a.)
rombmero. Os genes Hox, mais 5 so encontrados somente nas regies poste-

riores do tubo neural, onde formam tambm um conjunto aninhado. Os genes
mais 5 tm limites de expresso mais posteriores que os genes menos 5. Quando
as clulas da crista neural entram em contato com o ectoderma superficial levam as
clulas ectodrmicas a expressarem o mesmo conjunto de genes Hox (Figura 16.4
A; Hunt et al., 1991b).
Alguns dos genes Hox de mamferos so to semelhantes a seus homlogos de
Drosophila, que eles podem substituir um ao outro. O gene do camundongo Hox-6
pode realizar algumas das funes reguladoras do gene Antennapedia da Drosophila
quando o gene murino transfectado para a Drosophila. O gene humano HOXD-4
tambm pode executar algumas das funes do seu homlogo da Drosophila,
Deformed (Malicki et al., 1990; McGinnis et al., 1990). Alm disso, a regio intensifica-
dora do gene Deformed da Drosophila (um gene especificando a expresso gnica
especfica da cabea em Drosophila) pode causar expresso gnica no crebro poste-
rior do camundongo; e as seqncias reguladoras do homlogo humano de Deformed
fornecem expresso gnica especfica da cabea em embries de Drosophila
(Awgulewitsch e Jacobs, 1992; Malicki et al., 1992).
Um padro semelhante da expresso gnica de Hox parece existir tambm dentro
do tronco. Aqui os padres da expresso gnica correspondem a limiares somticos
(em lugar de rombomricos) (Kessel e Gruss, 1991), e alguns genes parlogos so
expressos em limiares somticos ligeiramente diferentes (Figura 16.5).
Anlise Experimental de um Cdigo Hox: Gene Alvo
Os padres de expresso dos genes Hox murinos sugerem um cdigo pelo qual certas
combinaes de genes Hox especificam uma determinada regio do eixo ntero-poste-
rior (Hunt e Krumlauf, 1991). Conjuntos particulares de genes parlogos fornecem
identidade segmentria ao longo do eixo ntero-posterior do corpo. A evidncia para
tal cdigo vem de trs fontes:
Vrtebras Vrtebras Vrtebras Vrtebras Vrtebras Vrtebras

occipitais cervicais torcicas lombares sacrais caudais
cido retinico causa a

expresso de genes em
segmentos mais posteriores
cido retinico causa a

expresso de genes em
segmentos mais anteriores
Figura 16.5
O cdigo do somito Hox no tronco e no pes-
coo do embrio do camundongo. As reas
principais de expresso esto indicadas em
cor mais escura, enquanto as regies poste-
riores da expresso no so to definidas como
Experimentos de eliminao (knock-out) ou de gene alvo (gene targeting) sugere a cor mais clara. O efeito do cido
(veja Captulo 2) nos quais so construdos camundongos carentes de ambas retinico o de empurrar a expresso gnica
cpias de um ou mais genes Hox particulares. anterior mais posteriormente e a expresso
Homeose induzida por cido retinico, na qual embries de camundongo gnica posterior mais anteriormente. (Segun-
do Kessel, 1992.)
tratados com o cido retinico tm um padro de expresso diferente do gene
Hox ao longo do eixo ntero-posterior e diferenciao anormal de suas estru-
turas axiais.
Anatomia comparada, pela qual tipos de vertebrados em diferentes espcies
so correlacionados com a constelao de genes Hox nesses vertebrados.
Quando Chisaka e Capecchi (1991) expulsaram o gene Hox-3 de camundongos
endgamos, os mutantes homozigotos Hoxa-3 morreram logo aps o nascimento. Na
autpsia mostrou-se que esses animais tinham a cartilagem do pescoo anormalmente
curta e grossa e as glndulas tireides, paratiredes e timos severamente deficientes
ou ausentes. Seus coraes e vasos sangneos estavam tambm malformados (Figu-
ra 16.6). Esse conjunto de malformaes muito semelhante desordem congnita
humana, a sndrome de DiGeorge, na qual so encontradas essas mesmas deficincias
em estruturas derivadas da crista neural. Anlises ulteriores mostraram que o nmero
e a migrao de clulas da crista neural que formam essas estruturas so normais.
Assim, parece que os genes Hoxa-3 so responsveis pela especificao do destino
das clulas da crista neural craniana e pela permisso para que essas clulas se dife-
renciem e se proliferem formando a cartilagem do pescoo e os derivados do quarto e
sexto arcos farngeos (Manley e Capecchi, 1995).
Figura 16.6
Desenvolvimento deficiente de estrutura de arcos farngeos derivados
da crista neural em camundongos deficientes em Hox-3. direita, um
embrio de 10,5 dias de um camundongo Hox-3 heterozigoto mostrando
desenvolvimento normal do timo (bolsa 3), paratireide (bolsa 4) e ou-
tras estruturas. esquerda, um mutante homozigoto deficiente em Hox-
3 no apresenta desenvolvimento apropriado dessas estruturas. (de
Chisaka e Capecchi, 1991.)
Mutante Tipo selvagem
Outro experimento de alvejar genes eliminou o gene Hoxa-1 (Lufkin et al., 1991). A
expresso de Hoxa-1 se sobrepe ao gene Hoxa3, mas tambm expressa mais
anteriormente que Hoxa-3. Esses embries sem genes Hoxa-1 funcionais mostram
uma constelao de anormalidades que indicam especificao deficiente dos
rombmeros 4-7. Esses mutantes freqentemente deixam de fechar seus tubos neurais,
no tm estruturas do ouvido interno, e no tm os gnglios do crebro posterior (que
formam os nervos acstico, glossofarngeo e vago), derivados desses rombmeros.
No entanto, no foram encontradas malformaes dos arcos farngeos, glndulas
tireide, paratireide e timo, ou cartilagem do pescoo. Assim, defeitos dos mutantes
Hoxa-1 somente so vistos na regio anterior da rea de expresso desse gene. (
possvel que suas funes no sejam requeridas ou sejam redundantes na poro
posterior a seu alcance.) Ao contrrio dos defeitos (que se limitam crista neural) de
camundongos Hox3 deficientes, os defeitos de Hox-1 so notados no sistema nervo-
so central e no tecido derivado do placdio, assim como no mesoderma paraxial. A
eliminao de Hoxa-2 tambm produz camundongos cujas clulas da crista neural
foram re-especificadas. Elementos cranianos normalmente formados pelas clulas da
crista neural do segundo arco branquial (estribo, ossos estilides) esto faltando e
so substitudos pela duplicao de estruturas do primeiro arco branquial (bigorna,
martelo, etc.) (Gendron-Maguire et al., 1993; Rijli et al., 1993). Assim, sem certos genes
Hox, alguns rgos regionalmente especficos ao longo do eixo ntero-posterior dei-
xam de se formar ou so re-especificados para outras regies. A evidncia inicial apia
a noo que diferentes conjuntos de genes Hox so necessrios para a especificao
completa de toda regio do eixo e que um conjunto de genes parlogos pode ser
responsvel por diferentes subconjuntos de rgos nessas regies.
Transformao Parcial de Segmentos por

Eliminao de Genes Hox Expressos no Tronco
Se os genes Hox realmente formam um cdigo que especifica o eixo ntero-posterior,

poder-seia esperar que a alterao da constelao de genes Hox expressos em qual-
quer regio particular do embrio poderia alterar uma estrutura em outra ao longo do
eixo ntero-posterior. Isso mostrou ser o caso quando o gene Hoxc-8 deletado do
embrio por mira ao gene alvo (Le Mouellic et al., 1992). Nesses camundongos, vrios
segmentos esquelticos axiais parecem mais com segmentos anteriores, de tipo muito
semelhante ao que se v em mutaes hometicas de perda-de-funo em Drosophi-
la. Como pode ser visto na Figura 16.7, nesse camundongo a primeira vrtebra lombar
formou uma costela algo caraterstico das vrtebras anteriores ela. A eliminao do
gene Hoxb-4 converte parcialmente a segunda vrtebra cervical (a vrtebra axial) em
(A) (B) (C)
Figura 16.7.
uma cpia da primeira vrtebra cervical (o atlas), e a deleo do gene Hoxa-5 causa a Transformaes hometicas no camundongo
transformao posterior da stima vrtebra cervical (pescoo) em uma vrtebra torcica induzidas por eliminao de genes expressos
formadora de costela (Jeannotte et al., 1993; Ramirez-Solis et al., 1993). no tronco. (A) Transformao parcial da pri-
Pode-se conseguir severas transformaes axiais eliminando dois ou mais genes do meira vrtebra lombar em uma vrtebra torcica
conjunto parlogo. Camundongos homozigotos para a deleo de Hoxd-3 tm anorma- pela eliminao de um gene Hox-8. Vrtebras
lidades moderadas da juno crnio-cervical (o atlas est reduzido em tamanho), en- torcicas, mas no lombares, apresentam asso-
quanto camundongos homozigotos para a deleo de Hoxa-3 no tm anormalidades ciao com as costelas. (B,C) Transformao
parcial da segunda vrtebra cervical em uma
nessa juno (veja a discusso anterior sobre esse mutante). Quando os dois mutantes
segunda cpia da primeira vrtebra cervical pela
so criados juntos, ambos conjuntos de problemas ficam mais severos. Os camundon- eliminao do gene Hoxb-4. (B) O camundon-
gos sem conjuntos de genes Hoxa-3 nem Hoxd-3 no tm osso atlas algum, e as cartila- go tipo selvagem tem a primeira vrtebra carac-
gens hiide e tireide so de tamanho to reduzido que h buracos no esqueleto (Condie terizada por um tubrculo ventral. (C) No ca-
e Capecchi, 1994). Parece que ocorrem interaes sinrgicas entre os produtos dos mundongo mutante, a segunda vrtebra cervical
genes Hox e que para algumas funes, um dos parlogos pode substituir ao outro. tambm tem esse tubrculo (seta). (A de Le
A regulao dos genes Hox de vertebrados parece ser controlada por fatores Mouellic et al., 1992; B e C de Ramirez-Solis
semelhantes aqueles que regulam os genes HOM-C em moscas. Em Drosophila, h et al., 1993; Fotografias cortesia dos autores.)
um gene homeobox, caudal, que reside externamente ao complexo HOM-C. Esse gene
de efeito materno em Drosophila funciona para co-direcionar a expresso dos genes
HOM-C mais posteriores (AbdB). Um homlogo mamfero desse gene, Cdx1, tem um
papel semelhante no mesoderma paraxial. Ele torna-se expresso na linha primitiva
durante a gastrulao, quando a especificao do eixo ntero-posterior est sendo
feita; e desligado pouco depois. Se esse gene for deletado do embrio do camundon-
go, os padres de expresso dos genes Hox mudam posteriormente para um somito, e
estruturas esquelticas anteriores so encontradas mais posteriormente (Subramanian
et al., 1995). De maneira semelhante, a represso de genes Hom-C de Drosophila
mediada por um conjunto de genes que inclui extra sex combs (esc). Se o homlogo
murino desse gene (embryonic ectoderm development; eed) desempenhar o mesmo
papel, poder-se-ia esperar que mutaes em eed resultassem na anti-depresso de
genes Hox e na transformao hometica de estruturas anteriores em posteriores.
Isso realmente acontece. Genes eed mutantes causam a transformao de estruturas
esquelticas anteriores em posteriores (Schumacher et al., 1996).
Anlise Experimental do Cdigo Hox:

Teratognese do cido R etinico
Retinico
Tais alteraes hometicas tambm podem ser vistas quando a embries de camun-
dongos so administradas doses teratognicas de cido retinico. O cido retinico
exgeno dado a embries in utero pode fazer com que certos genes Hox sejam expres-
(A) (B) (C) (D)
Figura 16.8
Embries de camundongos cultivados sob con-
dies controle no dia 8 (A,C), ou em um meio sos em grupos de clulas que usualmente no os expressam (Conlon e Rossant, 1992;
contendo retinides teratognicos (B,D). No Kessel, 1992). Alm disso, as anormalidades crnio-faciais de embries murinos de
dia 2 (A,B), o primeiro arco farngeo dos em- mes tratadas com doses teratognicas de cido retinico (Figura 16.8) podem ser
bries tratados tem uma aparncia encurtada e mimetizadas quando se faz com que o Hoxa-7 se expresse atravs do embrio (Balling
achatada e aparentemente se fundiu com o se-
et al., 1989). Se doses altas de cido retinico podem ativar genes Hox em clulas
gundo arco farngeo. No dia 17 (C,D) podem
ser vistas malformaes crnio-faciais na carti-
inapropriadas ao longo do eixo ntero-posterior, e se essa constelao de genes hox
lagem derivada da crista neural dos embries ativos especifica a regio do eixo ntero-posterior, ento camundongos tratados com
tratados. A cartilagem de Meckel est comple- cido retinico no tero devem mostrar transformaes hometicas manifestadas por
tamente deslocada da regio mandibular (ma- malformaes ocorrendo ao longo desse eixo. Kessel e Gruss (1991) acharam que esse
xilar inferior) para a regio maxilar (boca supe- era o caso. Camundongos tipo selvagem tm 7 vrtebras cervicais (pescoo), 13 vr-
rior). As cartilagens do martelo e da bigorna tebras torcicas, e 6 vrtebras lombares (em adio s vrtebras sacrais e caudais).
tambm no se formaram. (A e B de Goulding Quando expostos ao cido retinico no dia 8 da gestao, a primeira ou as duas
e Pratt, 1986; C e D de Morriss-Kay, 1993; primeiras vrtebras lombares foram transformadas em vrtebras torcicas, enquanto a
Fotografias cortesia dos autores.)
primeira vrtebra sacral freqentemente se tornou uma vrtebra lombar (Figura 16.9).
Em alguns casos, a regio posterior inteira do embrio de rato deixou de se formar.
Essas alteraes estruturais eram correlacionadas com alteraes na constelao dos
genes Hox expressos nesses tecidos. Por exemplo, quando o cido retinico foi dado
a embries no dia 8 (durante a gastrulao), a expresso de Hoxa-10 foi deslocada
posteriormente, e um conjunto adicional de costelas se formou onde havia a primeira
(A) (B) (C)
Figura 16.9
cido retinico administrado a ratas grvidas
altera a expresso do gene Hox e o fentipo
em fetos. A figura mostra mudanas no es-
queleto axial (vrtebras e costelas) causadas
por exposio ao cido retinico no tero no
dia 8. (A) O tipo selvagem tem 7 vrtebras
cervicais, 13 torcicas, 6 lombares, 4 vrte-
bras sacrais fundidas e vrtebras caudais.
Esse arranjo alterado pelo cido retinico
dado s mes. Em alguns casos (B,C) o cido
retinico causou a perda de vrtebras lomba-
res, sacrais e caudais. (A e B segundo Kessel
e Gruss, 1991; C de Kessel, 1992; Fotografi-
as cortesia dos autores.)
Figura 16.10 Dia 8.5

O cido retinico media a transformao hometica em regies do crebro posterior. Em em- Controle + cido retinico
bries de camundongo no tratados, no dia 8.5, a expresso de Hoxb-1 se limita ao rombmero
r4. Quando expostos ao cido retinico nesse momento, a expresso de Hoxb-1 se expande Crebro
anteriormente em direo ao crebro intermedirio. Aps 2 dias, em embries normais Hoxb-1 intermedirio
expresso nas clulas descendentes do rombmero r4 e em clulas da linha mediana de r5, que
geram o nervo motor facial (mnVII). Em embries tratados com cido retinico, o padro normal
de r4/5 foi duplicado em r2/3. A expresso da crista neural de Hoxb-2 tambm est duplicada, e
um segundo nervo motor facial formado. Isso sugere que o cido retinico media a transforma-
o hometica de r2/3 em r4/5. (Segundo Krumlauf, 1993.)
Crebro
Posterior
vrtebra lombar. Quando genes Hox posteriores no foram expressos, a parte caudal
do embrio deixou de se formar. *
No sistema nervoso central, o cido retinico induz a expresso anterior dos genes
hox que usualmente so somente expressos mais posteriormente, e fazem com que os Medula
rombmeros 2 e 3 assumam a identidade dos rombmeros 4 e 5 (Figura 16.10; Marshall Espinhal
et al., 1992; Kessel, 1993). Nessa situao, o nervo trigmeo (que se origina do
rombmero 2) transformado em outro nervo facial (caracterstico do rombmero 4), e Dia 10.5
anormalidades do primeiro arco branquial indicam que as clulas da crista neural do
segundo e terceiro rombmeros foram transformadas em fentipos mais posteriores.
O cido retinico provavelmente desempenha um papel na especificao axial
durante o desenvolvimento normal, e a fonte desse cido provavelmente o ndulo
de Hensen (Hogan, 1992; Maden et al., 1996). Desde que o ndulo precoce parece
conter os precursores tanto de estruturas anteriores como posteriores, possvel
que a especificao dessas clulas dependa da quantidade de tempo despendido no
meio de alta concentrao de cido retinico no ndulo. Quanto mais tempo for
despendido no ndulo, mais posterior ser a especificao. Isso visto ocorrer em
cultura, quando clulas embrionrias de carcinoma expressam mais genes Hox pos-
teriores quanto maior for o tempo de sua exposio ao cido retinico (Simeone et
al., 1990). Alm disso, Hoxa-1, Hoxb-1 e Hoxd-4 tem, cada um, elementos sensveis
Vescula
ao cido retinico nas regies reguladoras a montante (veja Captulo 21). A adminis- tica
trao de cido retinico exgeno iria mimetizar a situao normalmente encontrada
somente pelas clulas posteriores. Avantaggiato e colegas (1996) mostraram que
quando o cido retinico dado a embries durante os estgios de meia-linha, as
regies mais anteriores do tubo neural no se formam e so substitudas por tecido Expresso de hoxb-1
parecendo o crebro anterior. Isso se correlaciona com uma perda de expresso Expresso de Krox-20
gnica (Emx1, Emx2) do crebro anterior e mdio nessa regio, e sua substituio Expresso hoxb-2
por genes Hox especficos para o crebro posterior como Hoxb-1. A evidncia aponta da crista neural
para um cdigo Hox enquanto constelaes diferentes de genes Hox especificam as
caractersticas regionais ao longo do eixo ntero-posterior. Alm disso, como esses
padres de expresso so semelhantes para mamferos e insetos, parece que existe
um plano de desenvolvimento comum sobre o qual construdo o eixo ntero-
posterior da maioria dos animais.
Evidncia para um Cdigo Hox da Anatomia Comparada
Um novo tipo de embriologia comparada est atualmente emergindo. Gaunt (1994) e

Burke e seus colaboradores (1995) compararam as vrtebras do camundongo e do
pinto. Embora ambos tenham um nmero semelhante de vrtebras, elas distribuem-
nas diferentemente. Camundongos (como todos os mamferos, sejam elas girafas ou
baleias) tm somente 7 vrtebras cervicais (pescoo). Essas so seguidas por 13
*Hoxa-10 tambm importante para a especificao do padro axial dos dutos genitais.
Eliminaes de Hoxa-10 criam camundongos cuja regio uterina superior transformada em tecido
parecendo o oviduto. Essa regio coincide com o limite anterior da expresso de Hoxa-10 no duto
Mlleriano tipo selvagem (Benson et al., 1996).
Figura 16.11
Representao esquemtica do padro verte-
bral do camundongo e do pinto ao longo do Cervical Torcico Lombar Sacral Coccgeas
eixo ntero-posterior. Os limites de certos genes
Hox foram colocados nestes domnios. Pinto
Vrtebras
Somitos
Vrtebras
Camundongo
Cervical Torcico Lombar Sacral Caudal
Occipital Cervical Torcico Lombar Sacral Caudal Transicional
vrtebras torcicas (ligadas s costelas), 6 vrtebras lombares, 4 sacrais e um nmero

varivel (20+) de vrtebras caudais (Figura 16.11). O pinto, por outro lado, tem 14
vrtebras cervicais, sete vrtebras torcicas, 12 ou 13 vrtebras lombosacrais (depen-
dendo da variedade), e 5 vrtebras coccgeas. A pergunta : A constelao de genes
Hox correlaciona-se com o tipo de vrtebra (e.g., cervical ou torcica) ou com a posi-
o relativa das vrtebras (e.g., nmero 8 ou 9)? A resposta que a constelao de
genes Hox prediz o tipo de vrtebra. No camundongo, a transio entre vrtebras
cervicais e torcicas ocorre entre as vrtebras 7 e 8; no pinto est entre as vrtebras 13
e 14. Em ambos os casos, os parlogos de Hox-5 so vistos nas ltimas vrtebras
cervicais, enquanto o limite anterior dos parlogos de Hox-6 se estende at a primeira
vrtebra torcica. De maneira semelhante, em ambos os casos a transio torcico/
lombar vista no limite entre os grupos parlogos de Hox-9 e de Hox-10. Parece que
h um cdigo de expresso do gene Hox que determina o tipo de vrtebra ao longo do
eixo ntero-posterior.
& Especulaes
Animais como Variaes sobre o

Mesmo Tema Desenvolvimental
U
M DOS MAIS CELEBRADOS (e nica coisa ligando uma pata de inseto, um de uma natureza composta de espcies
custicos) debates em biologia foi p de molusco e uma perna de vertebrado intrinsecamente diferentes, todos os ani-
realizado no apogeu da Revolu- era a sua funo locomotora. Anatmica e mais estavam unidos em uma espcie de
o Francesa em Paris. A, na Academie des embriologicamente, elas eram entidades dis- irmandade, reminescente da egalit et
Sciences, E. Geoffroy Saint-Hilaire contes- tintas, no-comparveis. fraternit revolucionrias (Appe, 1987).
tou Georges Cuvier sobre a natureza do rei- Geoffroy Saint-Hilaire enfatizou as se- Desde aquele tempo, diferentes tradi-
no animal. Cuvier, o eminente anatomista melhanas entre todos os filos. Ele argu- es biolgicas enfatizaram as diferenas,
comparativo que tinha tornado a zoologia mentou que todos os animais estavam or- ou as semelhanas entre os organismos. A
uma cincia francesa enfatizou as diferen- ganizados de acordo com os mesmos prin- anatomia comparada (seguindo Cuvier)
as que separam os filos entre si. No pode- cpios bsicos, e que um inseto no era enfatiza as diferenas, enquanto a morfolo-
ria haver uma Corrente de Existncia li- mais que um vertebrado virado de cabea gia (seguindo Geoffroy Saint-Hilaire) cele-
gando todos os organismos, nem poderia para baixo. Uma cabea era formada em bra as unidades subjacentes. A Gentica
haver qualquer maneira que partes de um uma extremidade, uma cauda na outra, e e a Biologia celular olham para todos os
inseto poderiam ser vistas como homlogas todos os animais tinham tubos neurais, animais (e plantas) como compostos basi-
daquelas de um molusco ou vertebrado. A fossem eles dorsais ou ventrais. Em lugar camente da mesma maneira, seguindo as
mesmas leis, enquanto a embriologia tradi- Recebendo uma Cabea: Mais Drosophila Camundongo
cionalmente via cada espcie se desenvol- Homologias Vertebradas e Invertebradas
vendo de uma maneira diferente. Em Drosophila, o crebro composto de Crebro
anterior
Recentemente, porm, a embriologia trs neurmeros. Esses so especificados
est fornecendo evidncia para a unidade por dois genes contendo homeobox que Crebro
subjacente da natureza animal. Jonathan no esto ligados regio HOM-C; esses interme-
dirio
Slack e seus colegas (1993) definiram um genes so orthodenticle (old), que ex-
animal como um organismo que exibe um presso predominantemente no neurmero
particular padro espacial de expresso do mais anterior, e empty spiracle (ems), ex- Crebro
gene Hox. eles propem que o plano cor- presso nos dois neurmeros cerebrais posterior
poral de cada filo tipificado em um parti- posteriores. Mutaes de perda-de-fun- r1-r8
cular estgio filotpico durante seu de- o de old eliminam o neurmero mais
senvolvimento. Para vertebrados, isso se- anterior do embrio de Drosophila em
ria o estgio do broto caudal (onde, apesar desenvolvimento, e mutaes de perda-
de suas diferentes clivagens e gastrulaes, de-funo de ems eliminam o segundo e
os embries de vertebrados convergem e terceiro neurmeros (Hirth et al., 1995). Em
tm brotos caudais e bolsas farngeas); para rs e camundongos, os homlogos des-
insetos, a banda germinativa completamen- ses genes (Otx-1, Otx-2, Emx-1, Emx-2)
Medula
te segmentada o local onde os embries tambm so expressos no crebro (Simeo- espinhal
convergem. Nesse estgio, o padro de ne et al, 1992), embora os padres exatos
expresso gnica hometica dos genes de transcrio no sejam idnticos (Figu-
Hox/HOM-C visto mais claramente, sen- ra 16.12). O gene Otx-2 foi eliminado como
do notavelmente semelhante em todos ani- gene alvo (Acampora et al., 1995; Matsuo
mais. Os genes parecendo com Deformed et al., 1995; Ang et al., 1996), e os camun-
e labial so expressos no anterior do em- dongos resultantes tinham deficincias
brio; aqueles parecendo com Abdominal neurais e mesodrmicas da cabea anteri-
B so expressos no posterior. Mesmo ores para o rombmero r3. Em seres hu-
nematides e hidras tm agregados de manos, mutaes de EMX-2 levam uma
genes hometicos que parecem ser expres- condio rara conhecida como esquizo-
sos da mesma maneira ntero-posterior encefalia, na qual h sulcos atravessan-
(Schummer et al., 1992; Wang et al., 1993). do todo o crtex cerebral (Brunelli et al., Figura 16.12
Embora fungos e plantas tenham genes 1996). Apesar dos genes old e ems de Expresso dos genes reguladores em Droso-
homeobox, esses no so homlogos com Drosophila serem especificados pelos phila e no camundongo enfatizando os genes
aqueles dos animais, nem esto arranjados gradientes Bicoid e Hunchback, e os trans- expressos na cabea. A1-9 so segmentos ab-
na mesma ordem cromossmica, nem es- critos Otx e Emx serem induzidos pelo dominais; b1-3 so segmentos neurmeros
to expressos pelo mesmo padro ntero- mesoderma dorsal anterior, parece que (cerebrais); 1b, md e mx so os segmentos
posterior. Assim, o padro espacial da ex- esses mesmos genes so usados para es- labial, mandibular e maxilar, respectivamente;
presso do gene Hox est sendo usado pecificar as regies cerebrais. r, rombmero; T1-3, segmentos torcicos. (Se-
como a caracterstica subjacente primria gundo Thor, 1995.)
definindo a existncia animal. Essa obser-
*Alm de expressar os homlogos dos genes contendo homeobox ems e otd, o crebro de
vao ainda no foi testada em vrios filos, mamfero tambm expressa o homlogo do gene tailess. Esse gene expresso nas pores mais
e ser muito interessante ver se esse pa- anteriores e posteriores do embrio de Drosophila, e um membro da famlia dos receptores
dro geral visto em todo o reino animal. esterides (Monaghan et al., 1995).
Eixos dorsoventral e esquerdo-direito em mamferos e aves

Muito pouco conhecido sobre a maneira pela qual mamferos formam o eixo
dorsoventral. Em pintos, o eixo determinado por gravidade que coloca o
hipoblasto no lado ventral (veja Captulo 5). Em camundongos e humanos, o
hipoblasto se forma no lado da massa celular interna que est exposta ao fluido
blastocstico. medida que prossegue o desenvolvimento, a notocorda mantm a
polaridade dorsoventral, induzindo padres dorsoventrais de expresso gnica
no tubo neural (Goulding et al., 1993). [mamaxis1.html]
Tambm muito pouco sabemos sobre a formao de eixo equerdo-direito. O
corpo do mamfero no simtrico. O corao demarcado para o lado esquerdo
(A) da cavidade torcica, embora se forme no centro. O bao encontrado somente no

lado esquerdo do abdome, enquanto o principal lobo heptico fica no lado direito.
No conhecido o que regula essas assimetrias. Porm, achados recentes suge-
rem que dois nveis regulam o eixo esquerdo-direito: um nvel global e um nvel
especfico do rgo.
No camundongo, so conhecidos dois genes cujas mutaes destrem a
assimetria esquerda-direita normal. O primeiro gene, situs inversus viscerum (iv),
aleatoriza o eixo esquerdo-direito para cada rgo assimtrico (Hummel e Chapman,
1959; Layton, 1976). Isso significa que o corao pode se voltar para a esquerda
em um animal homozigoto, ou se voltar para a direita em outro. Alm disso, a
direo da volta do corao no est coordenada com a colocao do bao ou do
estmago. Isso pode causar srios problemas, at mesmo a morte. O segundo
gene, inversion of embryonic turning (inv), causa um fentipo mais global. Ca-
mundongos homozigotos para uma mutao de insero nesse local, foram encon-
trados tendo todos seus rgo assimtricos no lado errado do corpo (Yokoyama
et al., 1993).* J que todos os rgo esto invertidos, essa assimetria no tem
conseqncias danosas para os camundongos. Embora no saibamos quais pro-
(B)
tenas so codificadas por iv e inv, alguns dos componentes dessa trajetria fo-
ram recentemente descobertos.
No camundongo, os genes lefty e nodal so expressos somente no mesoderma da
placa lateral esquerda, e sua expresso precede a caracterstica volta direita do
corao e a rotao direita do embrio (Figura 16.13; Collignon et al., 1996; Lowe et
al, 1996; Meno et al., 1996). Em camundongos homozigotos para a mutao inversion
of embryonic turning, esses genes so expressos somente no lado direito do meso-
derma da placa lateral, enquanto que em camundongos com a mutao aleatria situs
inversus viscerum, a expresso de nodal e lefty ou normal, trocada ou est ausente.
(C) Esses genes codificam fatores parcrinos da famlia TGF-, e no conhecido quais
os tecidos eles influenciam. Um possvel local da influncia o tubo cardaco simtri-
co que se forma na linha mediana do embrio. Entre o endocrdio interno e o miocrdio
externo desse tubo de parede dupla est uma matriz extracelular (gelia cardaca) que
contm a protena Flectina. No embrio do pinto, essa protena expressa
assimetricamente na hora do volteamento cardaco, acumulando-se predominante-
mente no lado esquerdo da matriz (Prancha 33; Tsuda et al., 1996).
Os mecanismos que dariam transcrio assimtrica de nodal e lefty ainda no
esto claros, mas indcios esto vindo de estudos com o embrio do pinto (Levin
et al., 1995). A observao crtica que durante a gstrula intermediria, a mensa-
gem sonic hedgehog (shh) transcrita simetricamente atravs de todo o ndulo de
Hensen. Algumas horas depois, porm, a transcrio do lado direito cessa, e a
transcrio de shh vista somente do lado esquerdo do ndulo. Ao mesmo tempo
que se desenvolve essa assimetria, o gene receptor IIa da activin (cActRIIa)
Figura 16.13
Assimetria da expresso gnica no embrio do expresso somente do lado direito do ndulo (Figura 16.14). Esse receptor pode ser
camundongo. (A) Hibiridizao in situ para o induzido pela activina. A expresso de sonic hedgehog no lado esquerdo no
mRNA nodal no embrio murino de 5 somitos. permanece por muito tempo, desaparecendo aps aproximadamente 24 horas de
A expresso do gene nodal est restrita ao incubao, e a expresso do gene nodal do pinto fica expressa somente do lado
mesoderma da placa lateral no lado esquerdo esquerdo (Prancha 25). tentador colocar esses genes em um trajeto em comum
do embrio. (B) Seo transversal atravs do onde a activina (ou uma molcula semelhante activina) seria somente produzida
embrio no mesmo estgio que em (A). (C) do lado direito do ndulo de Hensen do embrio do pinto. Isso induziria a sntese
Em camundongos com a mutao inverted (iv), do receptor da activina IIa e funcionaria atravs desse receptor para bloquear a
a expresso de nodal vista no mesoderma da
expresso sonic hedgehog onde quer que esse receptor estivesse localizado. Assim,
placa lateral em ambos os lados do embrio. O
corao tem a mesma chance de voltear para o
outro lado. (Segundo Lowe et al., 1996; foto-
grafias cortesia de M.R.Kuehn.)
*Esse gene foi descoberto acidentalmente quando Yokoyama e colegas (1993) produziram
camundongos transgnicos com o transgene (para a enzima tirosinase) inserido aleatoriamente
no genoma. Em um caso, esse gene se inseriu em uma regio do cromossomo 4, eliminando o
gene existente.
Figura 16.14 (A) ESQUERDO DIREITO

Caminho para a assimetria esquerda-direita no embrio do pinto. (A) Topo: padro de expresso
de genes sonic hedgehog, activin receptor IIa e cNR-1, em relao ao ndulo de Hensen. O 12-13 horas
receptor de activina o primeiro, seguido por sonic hedgehog e por ltimo por cNR-1. Base:
Aps um dia, a assimetria vista no lao do lado direito do corao. O caminho hipottico entre
esses genes mostrado abaixo deles. (B,C) Vistas dorsal e em aproximao da hibridizao in
situ do mRNA sonic hedgehog. (D,E) Vistas dorsal e em aproximao da mensagem de activin
receptor IIa. (A segundo Roush, 1995, e Wolpert e Brown, 1995; B-E de Levin,et al., 1995,
cortesia de C. Tabin e C. Stern.)
sonic hedgehog
cNR-1 Notocorda
(nodal)
Receptor IIa
da activina
Ndulo de
Hensen
Linha primitiva
(A) (C) (D) (E)
sonic hedgehog
isso iria bloquear a transcrio no lado direito do ndulo. Sonic hedgehog seria
assim somente expresso no lado esquerdo do ndulo. A protena Sonic hedgehog
seria ento secretada no lado esquerdo do embrio ativando o gene nodal no Sonic
mesoderma da placa lateral que contm os precursores do corao. A, poderiam hedgehog Activina
causar acmulo da protena flectina no lado esquerdo da matriz extracelular. Expe-
rimentos sugerem que esse caminho uma boa aproximao. A activina realmen- cNR-1 no Receptor
te sintetizada no momento apropriado e somente do lado direito do ndulo de mesoderma IIa da
da placa lateral activina
Hensen. Se bloqueada pela adio experimental de Follistatin, a assimetria da
expresso de sonic hedgehog desaparece, e o corao tem uma chance igual de
voltar-se para qualquer dos lados (Levin et al., 1997). Quando gotas impregnadas
com activina foram colocadas no lado esquerdo do ndulo de Hensen, induziram
a sntese de cActRIIa nesse lado, e o gene shh (usualmente expresso somente do Tubo cardaco
lado esquerdo) foi reprimido. Isso, por sua vez, suprimiu a transcrio de nodal.
Nessa situao, o tubo cardaco se formou aleatoriamente, tendo uma probabilida-
de igual de ir para a esquerda ou para a direita. Uma condio semelhante foi
produzida quando clulas secretando Sonic hedgehog foram implantadas no lado
direito do ndulo. Nesse caso, Nodal foi induzida simetricamente no mesoderma
da placa lateral, e o corao teve 50 porcento de chance de ter um tubo esquerda
(Figura 16.15). A formao do eixo esquerdo-direito no camundongo tambm pare-
ce usar receptores de activina e protena nodal, porm no parece ligar os dois
atravs de Sonic hedgehog (Collignon et al., 1996). O pinto e o camundongo
parecem ter variaes sutis sobre como construir seus eixos. [mamaxis2.html] 40-45 horas
Vrios caminhos diferentes teratognese, eliminao de genes, estudos de genes
organizadores especficos, gentica clnica, at mesmo gentica da mosca das frutas
esto nos conduzindo compreenso de um mistrio fundamental: como o embrio
vertebrado comea a saber distinguir o lado de cima do lado de baixo, a boca do nus,
e a esquerda da direita. Aprendemos mais sobre isso nos ltimos cinco anos do que
em todos os anos que os precederam.
(A)
Notocorda
Ndulo de Hensen
(B)
Pastilha de
Sonic hedgehog
Figura 16.15
Expresso ectpica de sonic hedgehog leva expresso simtrica de cNR-1 (nodal) e aleatorizao
do volteamento cardaco. (A) Expresso tipo selvagem de cNR-1, mostrando expresso no lado
esquerdo. Quase todos os coraes desenvolvem voltas do lado direito. Esse padro tambm
visto quando pastilhas contendo substncias controles so implantadas no lado direito do ndulo
ou quando uma pastilha contendo Sonic-hedgehog implantada no lado esquerdo (onde shh em
geral expresso). (B) Quando pastilhas de Sonic hedgehog so implantadas no lado direito do
ndulo, a expresso de cNR-1 se torna bilateralmente simtrica. (de Levin et al., 1995; fotografias
cortesia dos autores.)
LITERATURA CITADA
Acampora, D., Mazan, S., Lallemand, Y., Awgulewitsch, A. and Jacobs, D. 1992. Deformed Burke, A. C., Nelson, A. C., Morgan, B. A. and
Avantaggiato, V., Maury, M., Simeone, A. and autoregulatory element from Drosophila Tabin, C. 1995. Hox genes and the evolution of
Brulet, P. 1995. Forebrain and midbrain regions functions in a conserved manner in transgenic vertebrate axial morphology. Development 121:
are deleted in Otx2-/- mutants due to a defective mice. Nature 358: 341-344. 333-346.
anterior neuroectoderm specification during gas-
Balling, R., Mutter, G., Gruss, P. and Kessel, M. Chisaka, O. and Capecchi, M. 1991. Regionally
trulation. Development 121: 3279-3290.
1989. Craniofacial abnormalities induced by restricted developmental defects resulting from
Ang, S. L. and Rossant, J. 1994. HNF-3Fb is ectopic expression of the homeobox gene Hox- targeted disruption of the mouse homeobox gene
essential for node and notochord formation in 1.1 in transgenic mice. Cell 58: 337-347. Hox-1.5. Nature 350: 473-479.
mouse development. Cell 78: 561-574.
Benson, G. V., Lim, H., Paria, B. C., Satokata, I., Collignon, J., Varlet, I. and Robertson, E. J. 1996.
Ang, S. L., Jin, O., Rhinn, M., Daigle, N., Dey, S. K. and Maas, R. L. 1996. Mechanisms of Relationship between asymmetric nodal
Stevenson, L. and Rossant, J. 1995. A targeted reduced fertility in Hoxa-10 mutant mice: expression and the direction of embryonic
mouse otx2 mutation leads to severe defects in Uterine homeosis and loss of maternal Hoxa-10 turning. Nature 381: 155-158.
gastrulation and formation of axial mesoderm expression. Development 122: 2687-2696.
Condie, B. G. and Capecchi, M. R. 1994. Mice
and to deletion of rostral brain. Development
Boncinelli, E., Somma, R., Acampora, D., with targeted disruptions in the paralogous genes
122: 243-252.
Pannese, M., DEsposito, M., Faiella, A. and hoxa-3 and hoxd-3 reveal synergistic interac-
Appel, T. A. 1987. The Cuvier-Geoffroy Deba- Simeone, A. 1988. Organization of human tions. Nature 370: 304-307.
te: French Biology in the Decades before Darwin. homeobox genes. Hum. Reprod. 3: 880-886.
Conlon, F. L., Lyons, K. M., Takaesu, N., Barth,
Oxford University Press, New York.
Brunelli, S., Faiella, A., Capra, V., Nigro, V., K. S., Herrmann, B. and Robertson, E. J. 1994.
Avantaggiato, V. Acampora, D., Tuorto, F. and Smeone, A., Cama, A. and Boncinelli, E. 1996. A primary requirement for nodal in the
Simeone, A. 1996. Retinoic acid induces Germline mutations in the homeobox gene Emx2 formation of the primitive streak in the mouse.
stagespecific repatterning of the rostral central in patients with severe schizencephaly. Nat. Development 120: 1919-1928.
nervous system. Dev. Biol. 175: 347-357. Genet. 12: 94-96.
Conlon, R. A. and Rossant, J. 1992. Exogenous gratory and migratory neural crest. Develop- Lumsden, A., Sprawson, N. and Graham, A. 1991.
retinoic acid rapidly induces anterior ectopic ment 112: 43-50. Segmental origin and migration of neural crest
expression of murine Hox-2 genes in vivo. De- cells in the hindbrain region of the chick embryo.
Izpisa-Belmonte, J. C., De Robertis, E. M., Storey,
velopment 116: 357-368. Development 113: 1281-1291.
K. G. and Stern, C. D. 1993. The homeobox gene
Eyal-Giladi, H. and Khaner, O. 1989. The goosecoid and the origin of organizer cells in the MacMurray, A. and Shin, H.-S. 1988.The
chicks marginal zone and primitive streak early chick blastoderm. Cell 74: 645-659. antimorphic nature of the Tc allele at the mouse
formation. II. Quantification of marginal zones T locus. Genetics 120: 545-550.
Jeannotte, L., Lemieux, M., Cherron, J., Poirier,
potenciestemporal and spatial aspects. Dev.
F. and Robertson, E. J. 1993. Specification of Maden, M., Gale, E., Kostetski, I. and Zile, M.,
Biol. 134: 215-221.
axial identity in the mouse: Role of the Hoxa-5 1996. Vitamin A-deficient quail embryos have
Gaunt, S. J. 1994. Conservation in the Hox code (Hox 1.3) gene. Genes Dev. 7: 2085-2096. half a hindbrain and other neural defects. Curr:
during morphological evolution. Int. J. Dev. Biol. Biol. 6: 417-426.
Kessel, M. 1992. Respecification of vertebral
38: 549-552.
identities by retinoic acid. Development 115: Malicki, J., Schugart, K. and McGinnis, W. 1990.
Gendron-Maguire, M., Mallo, M., Zhang, M. 487-501. Mouse Hox-2.2 specifies thoracic segmental
and Gridley, T. 1993. Hoxa-2 mutant mice identity in Drosophila embryos and larvae. Cell
Kessel, M. 1993. Reversal of axonal pathways
exhibit homeotic transformation of skeletal 63: 961-967.
from rhombomere 3 correlates with extra Hox
elements derived from cranial neural crest. Cell
expression domains. Neuron 10: 379-393. Malicki, J. Cianetti, L. C., Peschle, C. and
75: 1317-1331.
McGinnis, W. 1992. Human HOX4B regulatory
Kessel, M. and Gruss, P. 1991. Homeotic
Gluecksohn-Schoenheimer, S. 1938. The deve- element provides headspecific expression in
transformations of murine vertebrae and
lopment of two tailless mutants in the house Drosophila embryos. Nature 358: 345-347.
concomitant alteration of Hox codes induced by
mouse. Genetics 23: 573-584.
retinoic acid. Cell 67: 89-104. Manley, N. R. and Capecchi, M. R. 1995. The
Goulding, E. H. and Pratt, R. M. 1986. Isotretinoin role of Hoxa-3 in mouse thymus and thyroid
Keynes, R. and Lumsden, A. 1990. Segmentation
teratogenicity in mouse whole embryo culture. J. development. Development 121: 1989-2003.
and the origin of regional diversity in the vertebrate
Craniofac. Genet. Dev. Biol. 6: 99-112.
central nervous system. Neuron 2: 1-9. Marshall, H., Nonchev, S., Sham, M. H.,
Goulding, M. D., Lumsden, A. and Gruss, P. 1993. Muchamore, L, Lumsden, A. and Krumlauf, R.
Khaner, O. 1995. The rotated hypoblast of the
Signals from the notochord and floor plate 1992. Retinoic acid alters hindbrain Hox code
chicken embryo does not initiate an ectopic axis
regulate the regionspecific expression of two and induces transformation of rhombomeres 2/
in the epiblast. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:
Pax genes in the developing spinal cord. Deve- 3 into a 4/5 identity. Nature 360: 737-741.
10733-10737.
lopment 117: 1001-1016.
Matsuo, I., Kuratani, S., Kimura, C., Takeda, N.
Khaner, O. and Eyal-Giladi, H. 1989. The chicks
Grunwald, D. J. and Wilson, E. T. 1996. A and Aizawa, S. 1995. Mouse Otx2 functions in
marginal zone and primitive streak formation.
unifying model for the origin of the vertebrate the formation and patterning of the rostral head.
I. Coordinative effects of induction and
organizer. Netherl. J. Zool. 46: 22-46. Genes Dev. 9: 2646-2658.
inhibition. Dev. Biol. 134: 206-214.
Herrmann, B. G. 1991. Expression pattern of McGinnis, W. and Krumlauf, R. 1992. Ho-
Krumlauf, R. 1993. Hox genes and pattern
the Brachyury gene in wholemount Twis/Twis meobox genes and axial patterning. Cell 68:
formation in the branchial region of the
mutant embryos. Development 113: 913-917. 283-302.
vertebrate head. Trends. Genet. 9: 106-112.
Hirth, F., Therianos, S., Loop, T., Gehring, W. McGinnis, N., Kuziora, M. A. and McGinnis,
Layton, W. M. Jr. 1976. Random determination
J., Reichart, H. and Furukubo-Tokunaga, K. W. 1990. Human Hox 4.2 and Drosophila
of a developmental process. J. Hered. 67: 336-
1995. Developmental defects in brain segmen- Deformed encode similar regulatory specifici-
338.
tation caused by mutations of the homeobox ties in Drosophila embryos and larvae. Cell 63:
genes orthodenticle and empty spiracles in Dro- Le Mouellic, H., Lallemand, Y. and Brulet, P. 969-976.
sophila. Neuron 15: 769 -778. 1992. Homeosis in the mouse induced by a null
Meno, C. and seven others. 1996. Leftright
mutation in the Hox-3.1 gene. Cell 69: 251-264.
Hogan, B. L. M., Thaller, C. and Eichele, G. asymmetric expression of the TGFb-family
1992. Evidence that Hensens node is a site of Levin, M., Johnson, R. L., Stern, C., Kuehn, M. member lefty in mouse embryos. Nature 381:
retinoic acid synthesis. Nature 359: 237-241. and Tabin, C. 1995. A molecular pathway 151-155.
determining leftright asymmetry in chick em-
Hummel, K. P. and Chapman, D. B. 1959. Monaghan, P. , Grau, E., Bock, D. and Schulz, G.
bryogenesis. Cell 82: 803-814.
Visceral inversion and associated anomalies in 1995. The mouse homolog of the orphan nu-
the mouse. J. Hered. 50: 9-13. Levin, M., Pagan, S., Roberts, D. J., Cooke, J., clear receptor tailless is expressed in the
Kuehn, M. R. and Tabin, C. J. 1997. Different developing brain. Development 121: 839-851.
Hunt, P. and Krumlauf, R. 1991. Deciphering
aspects of laterality are independently controlled
the Hox code: Clues to patterning branchial Morriss-Kay, G. 1993. Retinoic acid and
by an apparently streakautonomous signaling
regions of the head. Cell 66: 1075-1078. craniofacial development: Molecules and
pathway initiating by activin. In press.
morphogenesis. BioEssays 15: 9-15.
Hunt, P. and Krumlauf, R. 1992. Hox codes and
Lowe, L. A. and eight others. 1996. Conserved
positional specification in vertebrate embryonic Nature Genetics (editorial). 1995. Risk assess-
leftright asymmetry of nodal expression and
axes. Annu. Rev. Cell Biol. 8: 227-256. ment and religion. Nat. Genet. 11: 105-106.
alterations in murine situs inversus. Nature 381:
Hunt, P. and seven others. 1991a. A distinct 158-161. Noden, D. 1988. Interactions and fates of avian
Hox code for the branchial region of the head. craniofacial mesenchyme. Development [Suppl.]
Lufkin, T., Dierich, A., LeMeur, M., Mark, M.
Nature 353: 861-864. 103: 121-140.
and Chambon, P. 1991. Disruption of the Hox-
Hunt, P., Wilkinson, D. and Krumlauf, R. 1991b. 1.6 homeobox gene results in defects in a region Oppenheimer, J. M. 1936. The development of
Patterning the vertebrate head: Murine Hox-2 corresponding to its rostral domain of expressi- isolated blastoderms of Fundulus heteroclitus.
genes mark distinct subpopulations of premi- on. Cell 66: 1105-1119. J. Exp. Zool. 72: 247-269.
Ramirez-Solis, R., Zheng, H., Whiting, J., Scott, M. 1992. Vertebrate homeobox gene Tsuda, T., Philp. N., Zile, M. H. and Linask, K.
Krumlauf, R. and Bradley, A. 1993. Hoxb-4 (Hox nomenclature. Cell 71: 551-553. K. 1996. Leftright asymmetric localization of
2.6) mutant mice show homeotic transformation flectin in the extracellular matrix during heart
Seleiro, E. A. P., Connolly, D. J. and Cooke, J.
of a cervical vertebra and defects in the closure looping. Dev. Biol. 173: 39-50.
1996. Early developmental expression and ex-
of the sternal rudiments. Cell 73: 279-294.
perimental axis determination by the chicken Tung, T.-C., Vhang, C.-Y. and Tung, Y.-F.-Y.
Rashbass, P. R., Cook, L. A., Herrmann, B. G. Vg1 gene. Curr. Biol. 6: 1476-1486. 1945. Experiments on the developmental
and Beddington, R. S. P. 1991. A cell autonomous potencies of blastoderms and fragments of
Simeone, A., Acampora, D., Arcioni, L.,
function of Brachiyury in T/T embryonic stem telestean eggs separated latitudinally. Proc. Zool.
Boncinelli, E. and Mavilio, F. 1990. Sequential
cell chimeras. Nature 353: 348-351. Soc. Lond. 115: 175-188.
activation of Hox 2 genes by retinoic acid in
Riddihough, G. 1992. Homing in on the human embryonal carcinoma cells. Nature 34: Wang, B. B., Mller-Immergluck, M. M., Aystin,
homeobox. Nature 357: 643-644. 763-766. J., Robinson, N. T., Chisholm, A. and Kenyon,
C. 1993. A homeotic gene cluster patterns the
Rijli, F. M., Mark, M., Lakkaraju, S., Dierich, Simeone, A., Gulisano, M., Acampora, Stor-
anteroposterior body axis of C. elegans. Cell
A., Doll, P. and Chambon, P. 1993. A homeotic naiuolo, A., Rambaldi, M. and Boncinelli, E.
74: 29-42.
transformation is generated in the rostral 1992. Two vertebrate homeobox genes related
branchial region of the head by disruption on to Drosophila empty spiracles are expressed in Weinstein, D. C., Ruiz i Altaba, A., Chen, W. S.,
Hoxa-2, which acts as a selector gene. Cell 75: the embryonic cerebral cortex. EMBO J. Hoodless, P., Prezioso, V. R., Jessell, T. M. and
1333-1349. 11:2541-2550. Darnell, J. E. Jr. 1994. The wingedhelix
transcription factor HNF-3b is required for
Rivera-Prez, J. A., Mallo, M., Gendron- Slack, J. M. W. and Tannahill, D. 1992.
notochord development in the mouse embryo.
Maguire, M., Gridley, T. and Behringer, R. R. Mechanism of anteroposterior axis specification
Cell 78: 575-588.
1995. Goosecoid is not an essential component in vertebrates: Lessons from the amphibians.
of the mouse gastrula organizer but is required Development 114: 285-302. Wilkinson, D. G., Bhatt, S., Cook, M.,
for craniofacial and rib development. Develop- Boncinelli, E. and Kruflauf, R. 1989. Segmental
Slack, J. M. W., Holland, P. W. H. and Graham,
ment 121: 3005-3012. expression of Hox-2 homeobox-containing
C. F. 1993. The zootype and the phylotypic
genes in the developing mouse hindbrain.
Roush, W. 1995. Embryos travel forking path as stage. Nature 361: 490-492.
Nature 341: 405-409.
they tell left from right. Science 269: 1514-1515.
Stott, D., Kisbert, A. and Herrmann, B. G. 1993.
Wilson, E. T., Cretekos, C. J. and Helde, K. A.
Schumacher, A., Faust, C. and Magnuson, T. Rescue of the tail defect of Brachyuriy mice.
1995. Cell mixing during epiboly in the zebrafish
1996. Positional cloning of a global regulator of Genes Dev. 7: 197-203.
embryo. Dev. Genet. 17: 6-15.
anterior-posterior patterning in mice. Nature
Streit, A., Stern, C. D., Thry, C., Ireland, G. W.,
383: 250-253. Wolpert, L. and Brown, N. A. 1995. hedgehog
Aparacio, S., Sharpe, M. J. and Gherardi, E. 1995.
keeps to the left. Nature 377: 103-104.
Schummer, M., Scheurlen, I., Schaller, C. and A role for HGF/SF in neural induction and its
Galliot, B. 1992. HOM/HOX homeobox genes expression in Hensens node during gastrulati- Yanagisawa, K. O. 1990. Does the T gene deter-
are present in hydra (Chlorohydra viridissima) on. Development 121: 813-824. mine the anterior-posterior axis of the mouse
and are differentially expressed during regenera- embryo? Japan. J. Genet. 65: 287-297.
Subramanian, V, Meyer, B. I. and Gruss, P. 1995.
tion. EMBO J. 11: 1815-1825.
Disruption of the murine homeobox gene Cdx1 Yokoyama, T., Copeland, N . G., Jenkins, N. A.,
affects axial skeletal identities by altering the Montgomery, C. A., Elder, F. F. B. and Overbeek,
mesodermal expression domains of Hox genes. P. A. 1993. Reversal of leftright symmetry: A
Cell 83: 641-653. situs inversus mutation. Science 260: 679-682.
Thor, S. 1995. The genetics of brain develop-
ment: Conserved programs in flies and mice.
Neuron 15: 975-977.
Interaes Celulares
Durante a Formao do rgo
17 Interaes proximais de tecidos: Induo secundria

18 Desenvolvimento do membro de tetrpode
20 Determinao do sexo 773

701
655 V
19 Interaes celulares distncia: Hormnios como mediadores do desenvolvimento 733
21 Regulao ambiental do desenvolvimento animal 805

22 A saga da linhagem germinativa 843
23 Mecanismos desenvolvimentais da mudana evolucionria 883
CAPTULO 17 Interaes Proximais de Tecidos 655
Interaes proximais de tecidos:

Induo secundria 17
Tratando-se de um sistema to complexo
como o embrio em desenvolvimento ftil
perguntar se certo rudimento de rgo de-
terminado e se alguma propriedade de sua
vizinhana, com excluso de outras, o de-
RGOS SO ESTRUTURAS COMPLEXAS compostas de numerosos ti-
pos de tecidos. No olho do vertebrado, por exemplo, a luz transmitida
atravs do tecido corneano transparente e focalizada pelo tecido do crista-
lino (cujo dimetro controlado pelo tecido muscular), para finalmente atingir o
tecido neural da retina. O arranjo preciso dos tecidos nesse rgo no pode ser
termina. Uma srie de diferentes fatores alterado sem lesar a sua funo. Tal coordenao na construo dos rgos
pode estar envolvida e seus efeitos entrela- conseguida por um grupo de clulas modificando o comportamento de um conjunto
ados da maneira mais intrincada. Para re- adjacente de clulas, desse modo, fazendo com que elas mudem sua forma, velocida-
solver esse emaranhado temos que inquirir
de mittica ou diferenciao. Essa ao queima-roupa, s vezes chamada intera-
de que maneira o sistema sob considerao
o proximal ou induo secundria, permite a um grupo de clulas responder a um
reage com outras partes do embrio durante
segundo grupo de clulas, em modificao, tornando-se freqentemente capazes de
os sucessivos estgios do desenvolvimento,
sob uma variedade de condies experimen- alterar um terceiro conjunto de clulas.
tais to ampla o quanto for possvel impor.
R. G. HARRISON (1933) Interaes instrutivas e permissivas
Aspirar a verdade mais precioso do que Howard Holtzer (1968) distinguiu dois modos principais de interao entre tecidos
assegurar sua posse. proximais. Na interao instrutiva, um sinal da clula indutora necessrio para
G. E. LESSING (1778) iniciar nova expresso gnica na clula responsiva. Sem a clula indutora, a clula
responsiva no seria capaz de se diferenciar de uma maneira particular. Por exemplo,
no Captulo 15 discutimos a capacidade da notocorda induzir a formao de clulas
da placa do assoalho no tubo neural. Todas as clulas do tubo neural so capazes
de responder ao sinal da notocorda, porm, somente aquelas mais prximas da
notocorda so induzidas. As outras clulas no se tornam clulas da placa do
assoalho. Ainda mais, se removermos a notocorda do embrio, as clulas que nor-
malmente se tornariam clulas da placa do assoalho no se diferenciaro nesse tipo
de clula, e se adicionarmos uma notocorda lateralmente placa neural, essa nova
notocorda ir induzir um conjunto secundrio de clulas da placa do assoalho. As
clulas responsivas do tubo neural seriam, de alguma maneira, comandadas a ex-
pressar um conjunto de genes diferentes do conjunto de genes que expressariam, se
no tivessem estado em contato com a notocorda. A notocorda considerada ser
um tecido indutor que age instrutivamente. Wessell (1977) props quatro princpios
gerais caractersticos da maioria das interaes instrutivas:
655
656 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
1. Na presena do tecido A, o tecido responsivo B desenvolve-se em uma certa

maneira.
2. Na ausncia do tecido A, o tecido responsivo B no se desenvolve dessa
maneira.
3. Na ausncia do tecido A, mas em presena de tecido C, o tecido B no se
desenvolve dessa maneira.
4. Na presena da tecido A, um tecido D que normalmente desenvolve-se diferen-
temente, mudado para desenvolver-se como B.
O segundo tipo de interao tissular proximal a interao permissiva. Aqui, o

tecido responsivo contm todo o potencial necessrio para ser expresso, e somente
requer um ambiente que permita a expresso desses traos. Por exemplo, muitos teci-
dos em desenvolvimento necessitam de um substrato slido contendo fibronectina
ou laminina para se desenvolver. A fibronectina ou laminina no altera o tipo de clula
que dever ser produzido, somente permite sua expresso*.
Competncia e receptores
Deve-se notar que nos princpios acima, o tecido responsivo deve ser competente
para responder. Competncia a capacidade de responder a um sinal indutivo
(Waddington, 1940). Isso no um estado passivo, mas uma condio adquirida.
Quando detalhamos a induo do tubo neural, observamos que o ectoderma da
gstrula capaz de ser induzido pelo lbio dorsal do blastporo ou seus derivados
mesodrmicos. Assim, o ectoderma da gstrula dito ser competente para respon-
der a estmulos indutivos. Essa competncia para a induo neural adquirida du-
rante a clivagem tardia e perdida durante os estgios tardios da gstrula. medida
que essa competncia para responder induo pelo lbio dorsal diminui, algumas
regies do ectoderma adquirem competncia para responder a indutores do cristali-
no. Mais tarde ainda, a competncia dos indutores do cristalino perdida, mas o
ectoderma pode responder a indutores do placdio do ouvido (Serventnick e
Grainger, 1991). Portanto, a prpria competncia um fentipo diferenciado que
distingue clulas tanto espacial como temporalmente.
Considera-se, em geral, que a competncia pode ser adquirida de vrias maneiras.
Primeiro, uma clula pode tornar-se competente sintetizando um receptor para a mol-
cula indutora. Como veremos mais adiante neste captulo, uma clula B no compe-
tente para responder induo por clulas T at que tenha ligado antgenos. Quando
os antgenos so ligados, eles criam um conjunto de receptores que os capacitam a
responder s molculas indutoras secretadas pelas clulas T. Esse mecanismo de
competncia tambm visto na induo da diferenciao de neurnios simpticos
(Birren e Anderson, 1990; Cattanco e McKay, 1990). Desde o incio da dcada de 1960,
era conhecido que a diferenciao dos neurnios simpticos depende do fator de
crescimento nervoso (NGF); porm, quando as clulas progenitoras desses neurnios
foram isoladas, elas no responderam ao NGF. Alm disso, no tinham receptores
capazes de ligar NGF. Em vez disso, para se diferenciarem, essas clulas tinham que ser
primeiro expostas ao fator de crescimento de fibroblasto (FGF). Essa exposio resul-
tava na expresso de NGF nas suas membranas celulares. Tais clulas tratadas por
FGF podiam responder ao NGF (Figura 17.1). A clula progenitora original no era
competente para ser induzida pelo NGF porque no tinha o receptor NGF. Quando
esse foi induzido pelo FGF, tornou-se competente para responder ao NGF.
* fcil distinguir as relaes permissivas e instrutivas por uma analogia com uma situao mais
familiar. Este livro foi possvel ser feito pelas interaes permissivas e instrutivas. Os revisores
podem convencer-me a alterar o material no captulo. Isso uma interao instrutiva, j que a
informao passar a ser diferente daquela que teria sido. Porm, a informao no livro no poderia
ter sido expressa sem as interaes permissivas com o editor e o impressor.
Clula progenitora do nervo

simptico
FGF Responsivo, NGF no responsivo

Receptor FGF
Ligao FGF sinaliza a

sntese do receptor NGF
Neurnio primitivo
Receptor NGF
Ligao de NGF sinaliza a clula

para se diferenciar em um
neurnio simptico maduro
Neurnio
simptico maduro
Neurnio dependente de NGF
Figura 17.1
Induo e competncia de uma linhagem precursora de neurnio simptico. A clula germinativa
original uma clula mitoticamente ativa que no tem receptores NGF, mas que pode responder
a FGF. Isso d origem a uma clula neural primitiva que tem processos, mas ainda se divide. Esse
neurnio primitivo tem receptores para NGF. A clula responsiva ao NGF pode se diferenciar em
um neurnio simptico maduro que no se divide (caracterizado pelo seu grande soma, nuclolos
proeminentes, extensos processos e dependncia de NGF para a sobrevivncia). (Segundo Birren
e Anderson, 1990.)
Em segundo lugar, uma clula pode alcanar a competncia sintetizando uma mo-
lcula que permite o funcionamento do receptor. Receptores podem ligar o indutor,
mas isso no significa que os receptores sejam funcionais. Freqentemente, um recep-
tor atua enviando um sinal para o ncleo. Como vimos no Captulo 3, uma vez que o
receptor tenha fixado um ligante, ele ativa enzimas que fabricam o sinal para diviso ou
diferenciao. Se alguma dessas enzimas no estiver presente, o sinal no transmiti-
do. Assim, uma clula pode alcanar competncia sintetizando um elo faltante na
trajetria da sinalizao.
Em terceiro lugar, a competncia pode ser adquirida pela represso de um inibidor.
Se o inibidor estiver presente, uma clula poder ligar o indutor, enviar o sinal para o
ncleo e, apesar disso, no ser capaz de ser induzida. Por exemplo, os indutores
freqentemente causam alteraes da forma celular (como na induo do tubo neural).
Se a clula estiver inibida de mudar sua forma, ela no ser capaz de responder.
Fatores parcrinos
Interaes proximais so em geral mediadas por protenas que podem difundir-se ao
longo de curtas distncias para induzir mudanas em suas clulas vizinhas. Essas
protenas so muitas vezes chamadas de fatores parcrinos ou fatores de diferenciao
e crescimento (GDFs).* Enquanto os fatores endcrinos (hormnios) circulam pelo

sangue para exercer seus efeitos, os fatores parcrinos (como FGF e NGF menciona-
dos anteriormente) so secretados para os espaos imediatamente ao redor da clula
que os produz. Durante a dcada retrasada, os biologistas do desenvolvimento des-
cobriram que a formao de numerosos rgos realmente efetuada por uma popula-
o relativamente pequena de protenas. O embrio herda uma caixa de ferramentas
relativamente compacta e usa muitas das mesmas protenas para construir o corao,
os rins, os dentes, os olhos e outros rgos. Alm disso, as mesmas protenas so
utilizadas atravs do reino animal, e os fatores ativos na criao do olho ou corao de
Drosophila so muito semelhantes aqueles usados na gerao de rgos de mamfe-
ros. Essas protenas podem ser agrupadas em quatro famlias principais na base de
suas estruturas. Essas famlias so: a famlia do fator de crescimento fibroblstico
(FGF), a famlia Hedgehog, a famlia Wingless (Wnt) e a superfamlia TGF.
Os Fatores de Crescimento Fibroblstico
A famlia FGF tem nove membros relacionados estruturalmente. FGF1 tambm

conhecido como FGF acdico, FGF2 s vezes chamado de FGF bsico e FGF7, fator
de crescimento de queratincitos. Embora existam nove genes FGF distintos, esses
podem gerar uma variedade de isoformas de protenas variando suas emendas de
RNA ou do cdon de iniciao em diferentes tecidos (Lappi, 1995).Os FGFs ativam
um conjunto de tirosina quinases receptoras chamado de receptores do fator de
crescimento fibroblstico As reaes iniciadas por esses fatores de crescimento
fibroblstico ativados foram discutidas no Captulo 3. Os FGFs esto associados
com vrias funes desenvolvimentais, incluindo a angiognese, a formao do
mesoderma e a extenso axnica. Enquanto os FGFs muitas vezes podem substituir
um ao outro, seus padres de expresso lhes do funes separadas. O FGF2
especialmente importante na angiognese, e o FGF8 importante para o desenvolvi-
mento do crebro intermedirio (Crossley et al., 1996). No camundongo, rompimen-
tos de certos genes FGF produzem anormalidades especficas. A ausncia de Fgf3
leva formao desorganizada de somitos, vrtebras caudais anormais, e defeitos
do ouvido interno, enquanto a ausncia de Fgf4 resulta em morte embrionria preco-
ce causada pela falncia do crescimento da massa celular interna. O nico problema
de camundongos deficientes em Fgf5 parece ser plo anormalmente longo (Figura
17.2; Herbert et al., 1994; Wilkie et al., 1995).
Os FGFs so tambm ativos na placa de crescimento dos ossos longos e na sutu-
ras dos ossos cranianos (Muenke e Schell, 1995). Mutaes levando a ativao pre-
matura de receptores de FGF so a principal causa do nanismo (maturao precoce
das placas de crescimento dos ossos longos) e craniosinostoses (fuso prematura de
ossos cranianos) (Figura 9.19). [cell7.html]
*Os fisiologistas descreveram trs maneiras principais pelas quais molculas solveis efetuam
mudanas em clulas. Os fatores parcrinos so molculas solveis que efetuam mudanas nas
clulas adjacentes, ou prximas, clula secretora. Em embriologia, tais fatores tm tambm sido
chamados de morfgenos. Os fatores endcrinos (hormnios) so molculas solveis que viajam
pelo sangue para realizar mudanas em clulas distantes da clula secretora. Os fatores autcrinos
so molculas que efetuam mudanas nas clulas que os secretaram. Para que os efeitos autcrinos
ocorram, a clula sintetiza uma molcula para qual ela tenha seu receptor prprio. Embora a
estimulao autcrina no seja comum, ela vista em clulas citotrofoblsticas placentrias que
sintetizam e secretam o fator de crescimento derivado das plaquetas, cujo receptor est na membra-
na celular daquelas clulas (Goustin et al., 1985). O resultado a proliferao explosiva daquele
tecido. Existe aprecivel debate sobre at que ponto fatores parcrinos podem operar. A activina,
por exemplo, pode difundir-se por muitos dimetros celulares e pode induzir diferentes conjuntos de
genes em diferentes concentraes (Gurdon et al., 1994, 1995). As protenas Vg1, BMP4 e Nodal,
porm, provavelmente somente trabalham sobre seus vizinhos adjacentes (Jones et al., 1996; Reilly
e Melton, 1996). Esses fatores podem induzir a expresso de outros fatores de curto alcance desses
vizinhos, e uma cascata de indues parcrinas pode ser iniciada.
(A) Figura 17.2

Papis dos fatores de crescimento fibroblsti-
co e seus receptores. Crescimento do plo em
um camundongo deficiente em FGF5 (a muta-
o angor) (A) torna o plo muito mais longo
que o dos companheiros de ninhada no contro-
le (B). (Fotografias cortesia de C. Peterson.)
(B)
A famlia hedgehog
Em Drosophila, a protena Hedgehog tem vrios papis crticos na padronizao da

mosca em desenvolvimento. No embrio precoce, ela atua de maneira dependente da
concentrao na especificao de cada parasegmento embrionrio e como veremos
nos prximos captulos, hedgehog tambm trabalha mais tardiamemte no desenvolvi-
mento, especificando os eixos da pata e dos discos imaginais alares (Basler e Struhl,
1994; Heemskerk e DiNardo, 1994). Os vertebrados tm pelo menos trs homlogos do
gene hedgehog de Drosophila: sonic hedgehog (shh), desert hedgehog (dhh) e
indian hedgehog (ihh). O Desert hedgehog expresso nas clulas de Schwann e
Sertoli, e camundongos homozigotos para um alelo zero (null) de dhh tm
espermatognese defeituosa. O indian hedgehog expresso no intestino e na cartila-
gem (Bitgood e McMahon, 1995; Bitgood et al., 1996).
Entre os trs homlogos de vertebrados Sonic hedgehog a mais empregada.
Confeccionada pela notocorda, a protena responsvel pela induo de clulas da
placa de assoalho e neurnios motores no tubo neural (Placzek et al., 1990; Yamada et
al., 1993; veja Captulo 8). A protena Hedgehog secretada pela notocorda (na realida-
de, os dois-teros do N-terminal dessa protena) tambm responsvel pela induo
do esclertomo nos somitos (Fan e Tessier-Lavigne, 1994; Johnson et al., 1994). A
Sonic hedgehg foi mostrada mediar a formao do eixo esquerdo-direito em pintos,
iniciar o eixo ntero-posterior nos membros, e induzir o eixo polarizado do intestino
(Riddle et al., 1993; Levin et al., 1995; Roberts et al., 1995). Freqentemente, a Sonic
hedgehog trabalha com outros fatores parcrinos, como Wnt e FGF. Como veremos
no prximo captulo, o shh no broto dos membros induz a expresso de FGF4 no
mesoderma posterior, e a combinao de FGF4 e Wnt7a necessria para manter a
expresso de shh. No dente em desenvolvimento, Sonic hedgehog, FGF4, e outros
fatores parcrinos esto concentrados em regies onde ocorrem interaes celulares
(Figura 17.3; Vaahtokari et al., 1996a).
Bucal
(bochecha)
Mesial N de esmalte
(interno)
N de esmalte
Figura 17.3
Concentrao do fator parcrino de crescimen-
to e fatores de diferenciao na regio onde a
A famlia Wnt
morfognese e a diferenciao esto ocorrendo
no molar inferior do embrio do camundongo
de 14 dias. (O limite do epitlio dental mos- Esta famlia compreende uma famlia de glicoprotenas ricas em cistena; existem pelo
trado em branco.) Os fatores parcrinos esto menos 15 membros dessa famlia em vertebrados. Seu nome advm da fuso do nome
sendo secretados pela clulas epiteliais no se do gene da polaridade segmentria de Drosophila, wingless, com o nome de um dos
dividindo, o n de esmalte. (O painel esquer- seus homlogos vertebrados, integrated. Como vimos no Captulo 7, a Wnt1 parece
da mostra que as clulas do n de esmalte no ser ativa na induo do mitomo nos somitos e no estabelecimento dos limites do
esto replicando DNA.) Acima de cada hibri- crebro intermedirio (McMahon e Bradley, 1990; Ku e Melton, 1993; Stern et al.,
dizao in situ est a reconstruo seriada da 1995). Conforme veremos em captulos subseqentes, os genes Wnt tambm so im-
rea de expresso. Veja pgina 682 para deta-
portantes no estabelecimento da polaridade dos membros vertebrados, tal como o
lhes. (de Jernvall, 1995; fotografias cortesia de
A. Vaahtokari, J. Jernvall e I. Thesleff.) wingless estabelece a polaridade durante o desenvolvimento dos membros dos inse-
tos. interessante que em ambos os casos ocorrem interaes com membros da
famlia hedgehog. Durante a gastrulao do camundongo Wnt3a, Wnt5a e Wnt5b so
todos expressos em regies sobrepostas mas distintas na linha primitiva. A Wnt3a a
nica protena Wnt vista nessa regio da linha que ir gerar o mesoderma dorsal
(somito), e camundongos homozigotos para o alelo zero do gene Wnt3a no tm
somitos caudais aos membros anteriores (Figura 17.4; Takada et al., 1994).
A trajetria sinalizando Wnt est intimamente conectada trajetria hedgehog.
Como mostrado na Figura 3.38, hedgehog estimula a expresso de wg e a protena
Wingless estimula a expresso de hedgehog. Em Drosophila, uma das coisas
feitas por Hedgehog para ativar a expresso gnica de wingless de contrapor a
represso da protena Patched. Uma vez eliminada a represso do gene patched, o
wingless pode ser expresso. A expresso ectpica do gene patched inibe o cresci-
mento celular. Pensa-se existir uma trajetria semelhante em humanos, e cada uma
das molculas na trajetria de Drosophila tem um homlogo humano. Em huma-
nos, mutaes espordicas de perda-defuno do gene patched em tecidos
somticos causam carcinomas de clulas basais, o tipo mais comum do cncer
(A) (B) Figura 17.4

Ausncia de somitos caudais em embries de
camundongos homozigotos para um alelo zero
de Wnt3a. (A) Embrio de camundongo do
tipo selvagem de 12,5 dias. (B) O mesmo est-
gio em um embrio de um mutante Wnt3a,
mostrando falta de broto caudal e um eixo trun-
cado. (C) Seo transversal atravs da rea do
membro posterior de um embrio tipo selva-
gem de camundongo de 9,5 dias. (D) Seo
transversal no mesmo estgio de um embrio
mutante Wnt3a. No so vistos somitos (A
massa de clulas perto da medula espinhal
mais provavelmente oriunda da crista neural.)
(de Takada et al., 1994; fotografias cortesia de
A. P. McMahon.)
(C) (D)
humano. Mutaes herdveis do gene pathched do origem sindrome nevus da

clula basal, uma condio autossmica dominante caraterizada por anomalias
desenvolvimentais (alteraes craniofaciais e das costelas, dedos ligados) e tu-
mores malignos (meduloblastomas e carcinomas de clulas basais) (Hahn et al.,
1996; Johnson et al., 1996).*
A superfamlia TGF
Existem mais de 30 membros estruturalmente relacionados da superfamlia TGF, que

regulam algumas das interaes mais importantes do desenvolvimento (Figura 17.5).
Os peptdeos codificados pelos genes dessa superfamlia so processados de modo
que a regio carboxlica terminal contenha o peptdeo maduro. Esses peptdeos so
dimerizados em homodmeros (consigo mesmo) ou heterodmeros (com outros
peptdeos TGF) e secretados pela clula. A superfamlia TGF inclui a famlia TGF
, a famlia activina, as protenas da morfognese ssea (BMPs), a famlia Vg1, e outras
protenas, incluindo a Dorsalina (ativa na padronizao do tubo neural, veja Captulo
7), o fator neurotrfico derivado da glia (necessrio para a diferenciao dos neurnios
entricos e renais), e o fator inibidor Mlleriano (que envolvido na determinao
sexual dos mamferos, veja Captulo 20). Em Drosophila, a protena decapentaplegic
homloga BMP4 de vertebrado.
Os receptores que ligam os membros da superfamlia TGF transmitem o sinal
para o ncleo pela ativao de protenas smad especficas. Essas protenas resi-
dem no citoplasma, mas quando os receptores ligam membros da superfamlia
* Carcinomas de clulas basais, tumores da camada de clulas basais da epiderme, afligem cerca
de 750.000 pessoas cada ano nos Estados Unidos, a maioria desses cnceres se originando aps
exposio luz solar de pessoas de origem norte-europia. Por outro lado, a sndrome nevus de
clulas basais (s vezes chamada de sndrome de Gorlin) extremamente rara.
Famlia BMP
TGF, eles ativam (provavelmente por fosforilao) um desses polipeptdeos de
50-kDa. Isso converte a protena smad em um fator de transcrio que pode pene-
trar no ncleo e ativar genes especficos (Graff et al., 1996; Hoodless et al., 1996;
osteogenina Liu et al., 1996).
Dorsalina 1 (pinto)
A FAMLIA TGF . Essa famlia inclui TGF1, 2, 3 e 5. TGF1 parece ser impor-
tante para a formao de rgo ramificados. TGF1 exgeno foi achado inibir o
crescimento de duetos em glndulas mamrias do camundongo (Daniel, 1989;
(braquipodismo) Silberstein et al., 1992), causar malformaes de glndulas salivares embrionrias
murinas (Hardman et al, 1994), e prevenir a ramificao dos rins embrionrios (Ritvos
(orelha curta) et al.,1995). Assim, TGF1 pode ser crtico no processo normal de ramificao,
talvez mediando esse e outros processos, intensificando a produo de componen-
tes da matriz extracelular como a fibronectina, colgenos I e IV (Ignotz e Massagu,
1968; Penttinen et al, 1988), osteonectina (Wrana e al., 1991) e proteoglicanos (Bassols
(camundongo)
e Massagu, 1988; Morales e Roberts, 1988), enquanto inibe a protelise da matriz
celular (Edwards et al, 1987; Saksela et al., 1987). Isso poderia ter um efeito lquido de
estabilizao da estrutura tissular. Os efeitos exatos das protenas TGF depen-
dem, muitas vezes, do tipo celular que encontram, e a mesma TGF pode ter efeitos
(Xenopus)
(ourio-do-mar) opostos (tal como interrompendo ou acelerando a diviso celular) em diferentes
tipos de clulas.
Screw (Drosophila) Os efeitos de TGF so de difcil separao porque componentes da famlia
Nodal
parecem funcionar de maneira semelhante e podem compensar por perdas dos outros
activina quando expressos conjuntamente. Alm disso, delees apontadas para o gene Tgfb1
activina so difceis de interpretar, pois a me pode suprir esse fator atravs da placenta e do
leite (Letterio et al., 1994).
A FAMLIA BMP. Embora originalmente descoberta devido sua habilidade em

induzir o crescimento sseo, as BMPs regulam processos desenvolvimentais to
diversos como proliferao celular, apoptose, migrao celular, diferenciao ce-
Inibina lular e morfognese (Hogan, 1996). (Revelou-se que a BMP1 no membro dessa
famlia.) BMPs se distinguem dos outros grupos da superfamlia TGF por terem
Figura 17.5
sete, em vez de nove, cistenas conservadas no peptdeo maduro. J vimos prote-
Relacionamentos entre membros da superfa- nas BMP tal como a Nodal (ativa na formao do eixo tanto em Xenopus como em
mlia TGF-b. (Segundo Hogan, 1996.) * camundongos), BMP4 (importante na especificao mesodrmica, polaridade do
tubo neural e padronizao de somitos), e Decapentaplegic (que determina a pola-
*Infelizmente, laboratrios diferentes usam ridade dorsoventral em Drosophila). A BMP4 tambm est implicada na induo
letras maisculas e/ou hifens para os nomes desde apoptose em clulas da crista neural migrando de rombmeros de nmeros
ses e de outros fatores de maneiras diferentes. A
nossa ortografia particular no foi planejada para
mpares (Graham et al., 1993) e membrana entre dedos dos ps dos embries de
priorizar qualquer desses laboratrios ou con- pintos (veja Captulo 23). BMP4 e Decapentaplegic so extremamente semelhan-
venes. Porm, lembramos o dito (Cohen, tes, e genes BMP4 humanos podem salvar embries de moscas carentes de dpp
1982) que Acadmicos podem mais facilmente (Padgett et al., 1993). A ausncia de algumas BMPs causa anormalidades
compartilhar suas escovas de dentes do que a
nomenclatura um do outro.
esquelticas especficas (Kingsley et al., 1994; Storm et al., 1994). Mutaes do
gene BMP5 resultam em um esqueleto pequeno e orelhas pequenas devido
reduo de condensaes da precartilagem, enquanto mutaes de gdf5 causam
membros curtos e um nmero reduzido de dedos do p. Como os outros membros
TGF, as BMPs funcionam dimerizando receptores nas clulas-alvo e ativando
suas quinases serina/treonina (Liu et al., 1995).
Sinalizao Justcrina (juxtacrine)
Embora a maioria dos reguladores da induo conhecidos sejam protenas difusveis,

algumas protenas podem permanecer ligadas superfcie celular. Certas protenas
Wnt, por exemplo, carecem de um sinal para secreo e podem interagir com recepto-
res de suas vizinhas enquanto ligadas suas membranas celulares. De maneira seme-
lhante, as protenas Hedgehog podem existir em forma ligada membrana antes de seu
Citoplasma Figura 17.6

Sinalizao clula-clula entre duas clulas justapostas. Este mode-
lo especulativo para a sinalizao Delta-Notch baseado em evi-
dncia gentica de cruzamentos de Drosophila. A protena receptora
Serrate Delta
Notch pode se ligar s protenas Serrate ou Delta das clulas adja-
centes atravs de seus domnios extracelulares. A protena Delta
age como um ligante e dimeriza a protena Notch na membrana
desse ltimo. Essa dimerizao estabilizada por interaes entre
Monmero as protenas, que podem permitir a troca da protena Suppressor of
Notch
Notch Hairless com Deltex. A protena Suppressor of Hairless estava
ligada ao lado citoplasmtico da molcula Notch, mas uma vez
Extracelular
liberada, torna-se um fator de transcrio. Esse fator pode controlar
o destino da clula, direcionando-a a tornar-se pele em vez de tecido
Citoplasma neural. (Segundo Artavanis-Tsakonas et al., 1995.)
Deltex
Suppressor
of Hairless Suppressor of Hairless
Ncleo Hairless
processamento proteoltico. Nessa sinalizao, as clulas teriam que estar em contato

direto para o sinal ser eficaz. Tal caminho foi visto para o sinal Delta recebido pela
protena Notch, um sinal cujas funes desenvolvimentais em Drosophila sero dis-
cutidas mais tarde. Notch se estende atravs da membrana celular, e sua superfcie
externa contata protenas Delta ou Serrate que se estendem de clulas adjacentes.
Quando as protenas Delta se conectam Notch, estabilizam a sua dimerizao e
permitem a ocorrncia de mudanas conformacionais no lado citoplasmtico da prote-
na Notch. Essas mudanas permitem protena Deltex trocar com a protena chamada
Suppressor of Hairless. Quando se separa da protena Notch, a protena Suppressor
of Hairless entra no ncleo para se tornar um fator de transcrio (Figura 17.6; Artavanis-
Tsakonas et al, 1995). Assim, a protena Notch capaz de receber o sinal de Delta
somente quando as clulas esto justapostas. Por isso, esse tipo de sinalizao , s
vezes, chamado de sinalizao juxtcrina (juxtacrine). [prox1.html]
Interaes epitlio-mesnquima
Alguns dos casos melhor estudados de induo secundria so aqueles envolvendo as
interaes de lminas epiteliais com clulas mesenquimatosas adjacentes. So chama-
das interaes epitelio-mesnquima. O epitlio pode originar-se de qualquer camada
germinativa, enquanto o mesnquima geralmente derivado de tecido mesodrmico
frouxo ou da crista neural. Exemplos dessas interaes esto listados na Tabela 17.1.
Especificidade Regional da Induo
Usando como nossos exemplos a induo de estruturas cutneas, iremos examinar

as propriedades das interaes epitlio-mesnquima. O primeiro fenmeno a
especificidade regional da induo. A pele composta de dois tecidos principais: a
Tabela 17.1 Algumas interaes epitlio-mesnquima
rgo Componente epitelial Componente

mesenquimatoso
Estruturas cutneas (plo, Epiderme (ectoderma) Derme (mesoderma)

penas, glndulas sudorparas,
glndulas mamrias)
Membro Epiderme (ectoderma) Mesnquima
(mesoderma)
rgos viscerais (fgado, pncreas, Epitlio (endoderma) Mesnquima
glndulas salivares) (mesoderma)
rgos associados farngeo e Epitlio (endoderma) Mesnquima
respiratrio (pulmo, timo, tireide) (mesoderma)
Rim Epitlio do broto uretrico Mesnquima
(mesoderma) (mesoderma)
Dente Epitlio maxilar (ectoderma) Mesnquima
(crista neural)
epiderme externa, derivada do ectoderma e a derme derivada do mesoderma. A

epiderme do pinto sinaliza as clulas drmicas subjacentes a formarem condensaes
(provavelmente secretando Sonic hedgehog e TGF2); o mesoderma condensado
responde secretando fatores que causam a formao de estruturas cutneas regio-
nalmente especficas, compostas quase inteiramente de clulas ectodrmicas (Nohno
et al., 1995; Tingerret e Chuong, 1996; Prancha 23). Essas so as penas largas das
asas, penas estreitas das coxas, e as escamas e garras das patas. Aps separar o
epitlio embrionrio e o mesnquima um do outro, pode-se recombin-los de dife-
rentes maneiras (Saunders et al., 1957). Algumas das recombinaes esto ilustra-
das na Figura 17.7. Conforme se v, o mesnquima responsvel pela especificidade
da induo no ectoderma competente. Esse mesmo tipo de ectoderma se desenvol-
ve de acordo com a regio de onde foi retirado o mesoderma. Aqui, o mesnquima
tem um papel instrutivo, chamando a participao de diferentes conjuntos de genes
nas clulas responsivas.
Essa especificidade regional da induo crtica durante o desenvolvimento
dos sistemas digestivo e respiratrio. Na morfognese dos tubos endodrmicos, o
Fonte do mesoderma Ectoderma alar Induo especfica
Asa Pena
da asa
Coxa Pena
Figura 17.7 da coxa
Especificidade regional da induo. Quan-
do clulas da derme (mesoderma) so re-
combinadas com a epiderme (ectoderma) no
pinto, o tipo de estrutura cutnea produzida P Escamas,
pelo ectoderma determinado pela localiza- garra
o original do mesoderma. (Adaptado de
Saunders, 1980.)
epitlio endodrmico capaz de responder diferentemente aos diferentes mesnqui-

mas especficos regionalmente. Isso capacita o tubo digestivo e o tubo respiratrio
desenvolverem diferentes estruturas em diferentes regies do tubo. Assim, medi-
da que o tubo digestivo encontra novos mesnquimas, se diferencia em esfago,
estmago, intestino delgado e clon (Gumpel-Pinot et al., 1978; Fukumachi e
Takayama, 1980). Essa especificidade regional da induo do mesnquima fica dra-
maticamente aparente na formao do sistema respiratrio. No mamfero em desen-
volvimento, o tubo respiratrio epitelial responde de duas maneiras distintas. Quan-
do na regio do pescoo, ele cresce de modo reto, formando a traquia. Aps pene-
trar no trax, ele se ramifica, formando os dois brnquios e depois o pulmo. O
epitlio respiratrio pode ser isolado logo depois de ter se dividido nos dois
brnquios, e os dois lados podem ser tratados de maneira diferente. A Figura 17.8
mostra o resultado de tal experimento. O epitlio bronquial direito manteve seu
mesnquima pulmonar, enquanto o brnquio esquerdo foi rodeado pelo mesnqui-
Figura 17.8
ma traqueal (Wessells, 1970). O brnquio direito se proliferou e se ramificou sob a
Capacidade do epitlio presuntivo pulmonar de
influncia do mesnquima pulmonar, enquanto o lado esquerdo continuou a crescer se diferenciar em relao fonte do mesnqui-
de uma maneira no-ramificada. Assim, o epitlio extremamente malevel e pode se ma indutor. Aps o epitlio pulmonar do ca-
diferenciar de acordo com suas instrues mesenquimatosas. mundongo ter se ramificado em dois brnquios,
A especificidade do mesoderma considerada ser controlada por suas interaes o rudimento inteiro excisado e cultivado. O
com o tubo endodrmico durante os estgios precoces do desenvolvimento. Roberts brnquio direito deixado intocado, enquanto
e colegas (1995) implicaram a Sonic hedgehog nessa especificao. No incio do de- a extremidade do brnquio esquerdo coberta
senvolvimento, a expresso de shh limitada ao endoderma posterior do intestino com mesnquima traqueal. A extremidade do
terminal. Isso parece ser necessrio para a induo no mesoderma de um conjunto brnquio direito forma os ramos caractersti-
cos do pulmo, mas no ocorre ramificao na
aninhado de genes Hox que se parece com o conjunto posterior de genes HOM-C de
extremidade do brnquio esquerdo. (de
Drosophila. Tal como a situao nas vrtebras, as margens anteriores do padro de Wessells, 1970, cortesia de N. Wessells.)
expresso delineiam os limites morfolgicos das regies que iro formar a cloaca, o
intestino grosso, o ceco, ceco mdio (na margem intestino mdio/intestino terminal), e
a poro posterior do intestino mdio (Prancha 22; Figura 17.9). Assim, a expresso
endodrmica de Sonic parece induzir uma expresso aninhada de genes Hox no meso-
derma. Esses genes Hox provavelmente especificam o mesoderma de modo que eles
possam interagir com o tubo endodrmico e especificar suas regies.
Grupo
paralogo
Hox Intestino delgado
Ceco mediano
Ceco
Neurulao
precoce Intestino
grosso Figura 17.9
Especificao regional do mesoderma visceral
atravs de interaes com o endoderma do in-
testino posterior. A expresso e secreo de
Sonic hedgehog no endoderma gera um con-
junto aninhado de expresso do gene Hox no
mesoderma adjacente. Aps o mesoderma ter
Cloaca sido especificado, ele pode atuar sobre o tubo
endodrmico para induzir regies morfolgicas
Estgio do broto mediano especficas. (Segundo Roberts et al., 1995.)
Especificidade Gentica da Induo
Enquanto o mesnquima pode instruir o epitlio sobre quais conjuntos de genes

deve ativar, o epitlio responsivo somente pode obedecer a essa informao at o
ponto que seu genoma permitir. Em um experimento clssico, Hans Spemann e Oscar
Schott (1932) transplantaram ectoderma do flanco de uma gstrula precoce de r
para regio de uma gstrula de salamandra destinada a se tornar parte da boca. De
maneira semelhante, o tecido ectodrmico presuntivo do flanco de uma gstrula de
salamandra foi colocado na presuntiva regio oral de embries de rs. As estrutu-
ras da regio oral diferem muito entre as larvas de salamandras e rs. A larva da
salamandra Triturus tem equilibradores em forma de clava sob a boca, enquanto os
girinos de rs produzem glndulas secretoras de muco e sugadores (Figura 17.10).
Os girinos de rs tm tambm um maxilar cornificado sem dentes, enquanto a sala-
mandra tem um conjunto de dentes de calcrio em sua mandbula. As larvas resultan-
tes dos transplantes eram quimeras. As larvas da salamandra tinham bocas seme-
lhantes s das rs, e os girinos de rs tinham dentes de salamandra e equilibradores.
Em outras palavras, as clulas mesodrmicas instruram o ectoderma a produzir uma
boca, mas o ectoderma respondeu produzindo a nica boca que saba como pro-
duzir, no importa quo inadequada.*
A mesma especificidade gentica encontrada em combinaes de pele de pinto e
pele de camundongo (Coulombre e Coulombre, 1971). Quando ectoderma normalmen-
te destinado a se tornar crnea isolado de embries de pinto e combinado com
*Spemann reportado como tendo descrito dessa maneira: O ectoderma diz ao indutor, voc
me diz como produzir uma boca; est bem, assim o farei, porm, no posso produzir o seu tipo de
boca; s posso produzir a minha e isso farei. (Citado por Harrison, 1933.)
Doador Hospedeiro Resultado
rea do
presuntivo ectoderma oral
Gstrula Gstrula de
de r salamandra Sugador
Salamandra com
sugadores de
girino de r
Figura 17.10
Especificidade gentica da induo. O trans-
plante recproco entre as presuntivas regies Gstrula Gstrula de R
ectodrmicas orais das gstrulas da salaman- de salamandra
dra e da r conduz a larvas de salamandra com
Equilibradore
sugadores de girino e girino de r com Girino de r com
equilibradores de salamandra. (Segundo equilibradores de
Hamburgh, 1970.) salamandra
Figura 17.11
Especificidade gentica da induo cutnea. (A)
Seo da regio corneana de um embrio de
pinto de 17 dias. Aos 5 dias de incubao, o
cristalino deste olho foi substitudo pela derme
do flanco de um embrio precoce de camun-
dongo. Uma condensao de clulas embrio-
nrias murinas est localizada diretamente sob
o epitlio do pinto. (B) Formao de penas a
partir do epitlio corneano de tal espcimen.
(A) (B) Clulas de camundongo esto presentes no ru-
dimento das penas. (de Coulombre e Coulom-
bre, 1971, cortesia de A. J. Coulombre.)
mesoderma de pele de pinto, o ectoderma produz botes de penas tpicos da pele do

pinto. Alm disso, quando o mesmo tecido - ectoderma presuntivo da crnea -
combinado com ectoderma da pele de camundongo, botes de penas tambm apare-
cem (Figura 17.11). O mesoderma do camundongo instruiu a crnea do pinto a produ-
zir uma estrutura cutnea. No camundongo, isso normalmente seria plo. O ectoderma
competente do pinto, porm, faz o melhor que pode, desenvolvendo suas estruturas
cutneas ou seja, penas.
Assim, as instrues enviadas pelo tecido mesenquimatoso podem atravessar
barreiras entre espcies. Salamandras respondem a sinais de rs, e tecido de pinto
responde a indutores de mamferos. A resposta do epitlio, porm, espcieespec-
fica. Enquanto a especificidade do tipo de rgo (pena ou garra) usualmente contro-
lada pelo mesnquima dentro de uma espcie, a especificidade da espcie controlada
pelo epitlio responsivo. [prox2.html]
Cascatas de induo embrionria: Induo do cristalino

Os Fenmenos da Induo do Cristalino
As interaes entre clulas prximas provem um mecanismo pelo qual o desenvolvi-

mento coordenado pode ocorrer, para um tecido responsivo tambm poder tornar-se
um tecido indutor. Estudos recentes mostraram que a induo secundria um pro-
cesso muito complexo. Na verdade, o que tradicionalmente estivemos chamando de
indues secundrias usualmente so apenas a ltima induo em uma cascata que
comeou muito antes na embriognese, e muitos tecidos adquirem sua competncia
atravs de uma induo prvia. Embora esses tecidos possam parecer inalterados ao
microscpio, eles foram induzidos para poder responder a um novo indutor. Isso
provavelmente acontece nas indues epidrmicas mencionadas acima, e certamente
verdadeiro para a induo secundria mais estudada, a formao do cristalino.
O MODELO DO CLICE PTICO NA INDUO DO CRISTALINO. Conforme

discutido no Captulo 7, as clulas que formam o cristalino derivam da regio do
ectoderma da cabea que contatado pela vescula ptica do crebro anterior.
Esse trabalho pioneiro de Hans Spemann e sua reviso desses estudos em 1938,
tornaram a induo do cristalino o paradigma dos eventos indutivos secundrios.
Os experimentos bsicos foram como segue. Primeiro, quando Spemann (1901)
destruiu o primrdio da vescula ptica da r Rana temporaria, no ocorreu o
desenvolvimento do cristalino. Assim, Spemann conclui que o contato da vescula
ptica com o ectoderma acima dela foi essencial para a formao do cristalino.
Segundo, Warren Lewis (1904, 1907) confirmou e estendeu essa concluso. Ele
removeu vesculas pticas de nurulas de estgio tardio e transplantou-as para o
ectoderma da cabea de regies que usualmente no formariam cristalino. Ele achou
que o ectoderma da cabea dessa regio formaria ento estruturas semelhantes ao
cristalino, e concluiu que a vescula ptica era suficiente para induzir a formao
de tecido do cristalino em ectoderma, que de outra maneira no o teria formado.
Pareceu que o contato com a vescula ptica era tudo o que era necessrio para
induzir cristalino no ectoderma sobrejacente.
DESACORDOS COM O MODELO DO CLICE PTICO. Houve dissidentes dessa

viso; Mencl (1908) notou que certos peixes tinham defeitos congnitos devido aos
quais no formavam olhos. Apesar disso, esses peixes tinham cristalino no seu
ectoderma da cabea. Mais importante, quando King (1905) tentou repetir os experi-
mentos de Spemann, ele encontrou ao contrrio do esperado que o cristalino ainda se
formava mesmo quando rudimentos da vescula ptica tinham sido obliterados. Esses
e outros investigadores comearam a achar que os cristalinos podiam se formar sem
contato com a vescula ptica.*
medida que mais dados se acumulavam, pareceu que havia um alto grau de
diversidade de espcies. Algumas espcies pareciam formar cristalinos sem a neces-
sidade de vesculas pticas, ao passo que em outras espcies, os cristalinos pareci-
am depender inteiramente do contato com essa vescula. Spemann (1938) reconci-
liou esses resultados argumentando que um organismo podia evoluir com uma mar-
gem de segurana, desenvolvendo duas maneiras de formar determinado tecido.
Assim, o cristalino normalmente se originaria pelo contato com a vescula ptica,
porm, essa falhando, poderia originar-se separadamente se assim ele tivesse que
fazer. Esse conceito foi chamado de hiptese da dupla segurana. Em 1966, Jacobson
integrou mais dados nesse modelo. Ele notou que o ectoderma formador do cristali-
no entra seqencialmente em contato com o endoderma presuntivo do intestino
anterior, o endoderma presuntivo do corao e a vescula ptica. Ele sugeriu que
cada um desses tecidos atuaria de uma maneira aditiva para induzir a formao do
cristalino nesse tecido. Em algumas espcies, o limiar para a induo do cristalino
seria baixo, e o contato com o ectoderma seria suficiente. Em outras, o limiar seria
alto, e todos os trs indutores teriam que estar ativos. Assim, a formao do crista-
lino parecia depender da vescula ptica, mas na realidade, essa seria somente o
ltimo dos trs indutores.
A Base Celular da Induo do Cristalino
Sem descartar o papel do mesoderma e endoderma, estudos recentes em Xenopus

enfatizam a importncia da placa neural anterior como um indutor precoce do
ectoderma do cristalino. Esses experimentos indicam que o ectoderma presuntivo
do cristalino recebe sua habilidade de tornar-se cristalino muito cedo durante o
desenvolvimento (durante os estgios de gstrula tardia para meia-nurula) e que a
vescula ptica apenas localiza a diferenciao desse tecido j autnomo. Em outras
palavras, o ectoderma da cabea formar cristalinos sem o contato do clice ptico,
mas esse necessrio para a completa diferenciao do cristalino e seu
posicionamento adequado em relao ao restante do olho. Este modelo (Figura
17.12; Saha et al., 1989; Grainger, 1992) divide a determinao do ectoderma do
cristalino em quatro estgios: competncia, propenso, determinao e diferencia-
o final. Competncia para responder ao sinal indutor inicial vista como um pro-
cesso autnomo dentro do ectoderma, e a propenso para produzir cristalino
provida pela placa neural anterior. A especificao do cristalino ocorre ao tempo do
fechamento da placa neural, quando a vescula ptica se aproxima do ectoderma da
cabea, e a determinao final induzida pela vescula ptica.
*A interpretao desses experimentos foi extremamente difcil devido s diferenas especficas

nos mecanismos de induo, a temperatura na qual ocorre induo mxima, e a dificuldade de
conseguir pedaos de tecidos no contaminados para transplante. Veja Jacobson e Sater (1988) e
Saha et al. (1989, 1991) para revises sobre esses dissidentes e seus experimentos.
(A) Gstrula precoce Figura 17.12

(competncia pr-cristalino) Ectoderma Um modelo corrente da induo do cristalino.
Os sinais indutivos esto indicados por setas.
(A) Na gstrula precoce, o ectoderma ainda
Mesoderma
no alcanou a competncia para tornar-se cris-
talino (embora tenha competncia para tornar-
(B) Gstrula intermediria tardia se tecido neural). (B) Durante a gstrula inter-
Endoderma
(competncia do cristalino) mediria, o ectoderma formador do cristalino
rea da retina
torna-se competente para responder ao sinal
indutor do cristalino da presuntiva placa neural
rea
do cristalino
(possivelmente as presuntivas clulas da reti-
na). Durante a gstrula tardia, esse sinal do
ectoderma neuralizado (provavelmente a regio
presuntiva do olho) induz o presuntivo ecto-
derma formador do cristalino. Um sinal indutivo
Placa adicional pode estar vindo do mesoderma
( C ) Nurula precoce neural
(vis de formao do cristalino)
presuntivo ou do endoderma do intestino ante-
rea do cristalino
rior. (C) Na nurula precoce, os sinais da re-
Ectoderma do gio neural anterior causaram o vis de forma-
cristalino o do cristalino no ectoderma da cabea. Esse
sinal pode ser reforado pela induo do meso-
derma lateral anterior. (D) No estgio de nurula
tardia, a vescula ptica contata o ectoderma
formador do cristalino, sinalizando a determi-
(D) Nurula tardia Tubo nao final desse tecido em cristalino. (E) No
(especificao do cristalino) Vescula estgio de girino, o presuntivo ectoderma do
neural
ptica
cristalino diferencia-se em tecido do cristalino.
Ectoderma (Segundo Saha et al., 1989; Grainger, 1992.)
do cristalino
Crebro em
desenvolvimento
(E) Girino jovem
(diferenciao do cristalino) Clice ptico
Cristalino
COMPETNCIA ECTODRMICA E PROPENSO DO CRISTALINO. Em 1987,

Henry e Grainger demonstraram que a determinao da habilidade de formao do
cristalino ocorre muito precocemente no desenvolvimento de Xenopus. Eles trans-
plantaram ectoderma de embries de Xenopus para a regio formadora do cristalino da
nurula. Seria esse ectoderma capaz de formar um cristalino quando contatado horas
mais tarde pela vescula ptica? Ectoderma de gstrulas muito jovens no foi compe-
tente. Porm, quando ectoderma de gstrula tardia foi transplantado para nurulas,
mostrou-se capaz de responder vescula ptica com a formao de um cristalino
(Tabela 17.2). Tecido algum respondeu dessa maneira. Outras regies ectodrmicas de
gstrulas tambm tinham uma habilidade limitada de formar cristalinos, porm, essa
era perdida durante o prosseguir do desenvolvimento.
Parecia, pois, que o ectoderma formador de cristalino alcanava a competncia
muito antes de ser contatado pela vescula ptica. Quando e como era alcanado
esse estado formador de cristalino? Experimentos por Nieuwkoop (1952) haviam
sugerido que um sinal da placa neural podia viajar atravs do ectoderma. Poderia a
placa neural induzir a epiderme presuntiva lateral, a se tornar ectoderma formador de
Tabela 17.2 Aumento com a idade da capacidade responsiva do ectoderma prospectivo do cristalino
Operao
Estgio do Doador Nurula Nmero Cristalinos Corpo Espessamento Corpo sem Sem Total
Doador hospedeira examinados induzidos semelhante ectodrmico cristalino resposta positivo
(%) ao cristalino (%) (%) (%)
%
Gstrula
intermediria 24 0 4 38 8 50 1 (4%)
Gstrula tardia 21 10 14 42 10 24 5 (24%)
Nurula precoce 24 75 8 0 4 13 20 (83%)
Nurula tardia 20 95 5 0 0 0 20 (100%)
Fonte: Segundo Henry e Grainger, 1987.
cristalino? Henry e Grainger (1990) testaram essa hiptese combinando a regio

prospectiva anterior da placa neural de embries em gstrula tardia com ectoderma
da regio que iria finalmente tornar-se cristalino. Enquanto o ectoderma isolado de
uma potencial regio formadora de cristalino no produzia protenas do cristalino
quando cultivado sozinho, a mesma regio produzia protenas do cristalino quando
cultivada prxima do tecido prospectivo da placa neural anterior. Embora a diferen-
ciao do cristalino era freqentemente rudimentar, ela era muito especfica. As
protenas do cristalino no foram produzidas quando o ectoderma da gstrula foi
combinado com outros tecidos, incluindo o endoderma do intestino anterior ou o
mesoderma cardaco (Figura 17.13A). Esses experimentos mostram que a poro
anterior da prospectiva placa neural (a qual contm a futura regio da retina) fornece
um sinal que predispe esse tecido a se tornar o cristalino.
Porm, todos os tecidos so capazes de responder a um sinal vindo da placa
neural anterior? Servetnick e Grainger (1991) mostraram que somente o ectoderma
de gstrula intermediria gstrula tardia competente para responder a esses
sinais. Eles removeram ectodermas do hemisfrio animal pigmentado de vrios
estgios de gstrula e transplantaram-nos para a regio presuntiva do cristalino
de embries em estgio de placa neural (Figura 17.13B). O ectoderma de gstrulas
precoces mostrou pouca ou nenhuma competncia para formar cristalinos (quan-
do testado por meio da produo de protenas cristalinas), porm, o ectoderma de
estgios um pouco mais tardios foi capaz de formar cristalinos. No fim da gastru-
lao, essa capacidade de responder ao sinal da placa neural tinha se perdido.
Essa competncia foi verificada ser inerente ao prprio ectoderma e no ser induzida
por outros tecidos circunjacentes. O ectoderma do hemisfrio animal pigmentado
de vrios estgios embrionrios podia ser removido, cultivado in vitro por certos
perodos, e colocado novamente em embries no estgio de placa neural. Tal
ectoderma mostrou o mesmo padro de competncia, apesar de ter permanecido
durante parte de seu desenvolvimento em uma placa de Petri. Parece, portanto,
que o ectoderma adquire a competncia de responder a sinais indutores da placa
neural anterior nos estgios precoces da gstrula intermediria, e que durante a
gstrula tardia, a placa neural anterior induz um vis na formao do cristalino
nesse tecido. Esse vis pode ser demonstrado transplantando-se o tecido para
outras regies da cabea e tornando-o cristalino (enquanto o ectoderma dos est-
gios anteriores no pode faz-lo).
DETERMINAO E DIFERENCIAO DO CRISTALINO. A determinao do cris-

talino pode ser mostrada isolando-se ectoderma e cultivando-o separado do embrio.
No momento do fechamento do tubo neural, o ectoderma das regies laterais do
(A) FONTE DE ATIVIDADE PRECOCE INDUTIVA DE CRISTALINO Figura 17.13

Indutor Resposta do
Determinao precoce da capacidade formado-
Operao ra do cristalino do ectoderma de Xenopus. (A)
putativo cristalino
A fonte do sinal formador do cristalino foi acha-
da ser a placa neural anterior. O ectoderma
presuntivo do cristalino foi cultivado com ou
sem endoderma lateral/mesoderma, ou com a
Endomesoderma placa neural anterior (os dois principais tecidos
lateral
a ele adjacentes). O ectoderma somente for-
mou protenas do cristalino quando cultivado
com a placa neural. (B) O perodo no qual as
Cultura clulas da placa neural anterior podiam induzir
competncia no ectoderma foi determinado
transplantando ectoderma presuntivo de
gstrulas de doadores de estgio diferente para
a regio formadora do cristalino da nurula.
Placa Somente o ectoderma de embries em gstrula
neural intermediria foi competente para responder aos
sinais. (Segundo Grainger, 1992.)
Cultura
(B) DETERMINAO DO PERODO COMPETENTE DO CRISTALINO

Estgio Operao Resposta
do cristalino
Gstrula
precoce
Gstrula
intermediria
Gstrula
tardia
crebro anterior ir dar origem pequenos cristalinos, mesmo sob essas condies. O
clice ptico no contatou ainda esse tecido, mostrando que no crtico para a
induo do cristalino em Xenopus. Porm, ele exerce uma funo em capacitar o fentipo
completo do cristalino para ser expresso. Os cristalinos que se formam na ausncia da
vescula ptica so em geral muito rudimentares. No conhecido se a influncia da
vescula ptica diretamente positiva, promovendo a diferenciao do placdio do
cristalino para um cristalino totalmente diferenciado, ou se tal influncia se d remo-
vendo um inibidor da diferenciao do cristalino. Foi proposto (von Woellwarth, 1961;
Henry e Grainger, 1987) que as clulas da crista neural impedem a diferenciao do
cristalino e que o contato com a vescula ptica serve como escudo do placdio do
cristalino, frente a esses sinais inibidores.
O fator de transcrio Pax6 participa de vrias maneiras nos processos de determi-

nao e diferenciao do tecido ocular. Mutantes homozigotos Pax6 de humanos,
camundongos, ratos e moscas no tm olhos. O ectoderma do embrio de ratos defi-
cientes em Pax6 incapaz de tornar-se cristalino, mesmo quando cultivado com
vesculas pticas de embries de tipo selvagem. O ectoderma da cabea no foi deter-
minado por sinais anteriores da placa neural ou do mesoderma (Fujiwara et al., 1994).
Pax6 tambm crtico para a expresso das cristalinas cristalino. No somente so
vistos stios ligantes de Pax6 nas regies reguladoras de vrios genes do cristalino,
mas a expresso especfica do cristalino dessas protenas depende da expresso de
Pax6 (Cvekl et al., 1995; Richardson et al., 1995).
O cristalino est situado entre as cmaras anterior e vtrea do olho, e acredita-
se que sua diferenciao (discutida no Captulo 7) seja mediada por fatores de
crescimento emanando dessas duas cmaras. A cmara anterior parece concentrar
uma protena mitognica (cuja identidade permanece desconhecida) que espec-
fica para causar mitose e inibir a diferenciao no epitlio formador do cristalino.
Essa protena tida como proveniente dos capilares sangneos para a cmara
anterior. Na cmara vtrea, FGF1 e 2 estimulam o alongamento e a diferenciao das
clulas do cristalino e bloqueiam a atividade mitognica do fator de crescimento
da cmara anterior (Hyatt e Beebe, 1993; Schulz et al., 1993). O resultado o
alongamento daquelas clulas do cristalino na superfcie dorsal do placdio do
cristalino, e a continuada proliferao de clulas no lado ventral do placdio do
cristalino (Figura 17.14).
Formao da Crnea
Aps ter invaginado, o placdio do cristalino fica coberto por duas camadas
de clulas do ectoderma adjacente. Agora, o cristalino em desenvolvimento pode
atuar como um indutor. O ectoderma destinado a se tornar crnea, provavelmente
j havia sido determinado durante um estgio anterior do desenvolvimento (Meier,
1977). Agora, a diferenciao da crnea ocorre sob influncia do cristalino. O
ectoderma sobrejacente torna-se colunar e se enche de grnulos secretores. Es-
ses grnulos migram para a base das clulas e secretam um estroma primrio con-
tendo cerca de 20 camadas de colgeno dos tipos I e II (veja Figura 17.14). As
clulas endoteliais vizinhas migram para essa regio (no estroma primrio) e
secretam cido hialurnico para essa matriz. O cido hialurnico faz com que a
matriz se expanda e se torne um bom substrato para a migrao de duas ondas de
clulas mesenquimatosas derivadas da crista neural. Ao penetrar a matriz, a se-
gunda onda dessas clulas a permanece, secretando colgeno do tipo I e
hialuronidase. Essa causa o encolhimento do estroma. Sob a influncia da tiroxina
da glndula tireide em desenvolvimento, esse estroma secundrio desidratado,
e a matriz rica em colgeno dos tecidos epitelial e mesnquima, transforma-se na
crnea transparente (veja Hay, 1980; Bard, 1990).
Podemos ver, assim, que simples interaes indutivas so na realidade dramas
bem coordenados, nos quais os atores tm que vir ao palco e falar seus trechos no
momento e posio corretos. Por adquirir nova informao, elas podem tambm trans-
mitir informaes para outros usarem. Tendo isso em mente, ns podemos agora
passar a estudar alguns dos princpios sobre a induo secundria, obtidos de outros
rgos em desenvolvimento.
Formao de rgos parenquimatosos

As interaes epitlio-mesnquima so tambm vistas na formao de rgos forma-
dores de dutos, como o rim, fgado, pulmo, glndula mamria e pncreas. Na forma-
o desses rgos, notamos a induo recproca do mesnquima atuando sobre o
epitlio e vice-versa.
Cristalino Figura 17.14

Desenvolvimento corneano e do cristalino. O
Borda do clice ptico induz a determinao final do cris-
clice ptico talino. Protenas mitognicas (setas pretas) na
cmara anterior mantm uma linha de clulas
Mesnquima Clice ptico induz a formao do
Vtreo em proliferao na superfcie ventral do crista-
da cabea cristalino
lino, enquanto fatores de crescimento fibrobls-
Cmara anterior
tico (setas coloridas) estimulam a diferencia-
Epitlio o do epitlio dorsal do cristalino. Sob a influ-
Fatores de crescimento das cmaras ncia indutiva do cristalino, o epitlio corneano
anterior e vtrea fazem com que as se diferencia e secreta estroma primrio con-
clulas dorsais se diferenciem e as sistindo em camadas de colgeno; clulas
clulas ventrais se proliferem endoteliais ento secretam cido hialurnico para
essa regio, permitindo a entrada de clulas
Mesnquima Cmara vtrea mesenquimatosas da crista neural. Em segui-
da, a hialuronidase (secretada pelo mesnqui-
ma ou pelo endotlio) digere o cido hialurnico,
Endotlio levando o estroma primrio a se encolher. (Se-
Epitlio
corneano gundo Hay e Revel, 1969; Hyatt e Beebe, 1993.)
Mesnquima
O cristalino induz o ectoderma
sobrejacente em epitlio colunar e
secretor
Estroma
primrio
Mesnquima
Grnulos induzidos secretam estroma

primrio contendo colgeno
Endotlio Estroma
primrio
Clulas endoteliais entram e secre-
tam cido hialurnico, levando o
estroma a engrossar; clulas me-
Cristalino Mesnquima
senquimatosas entram
Epitlio
Estroma secundrio Secrees das clulas mesenquimato-

sas levam o estroma a encolher; sob
Endotlio a influncia de tiroxina o estroma
Cristalino ir finalmente tornar-se crnea
Morfognese do Rim de Mamfero
A PROGRESSO DOS TBULOS RENAIS. Como o olho, o rim mamfero uma

estrutura extraordinariamente intrincada. Sua unidade funcional, o nefro, contm mais
de 10.000 clulas de no mnimo 12 tipos diferentes, cada tipo localizado em um espao
particular em relao aos outros ao longo do nefro. O desenvolvimento do rim mam-
fero progride atravs de trs estgios. No incio do desenvolvimento (dia 22 em huma-
nos, dia 8 em camundongos), o duto pronfrico surge no mesoderma intermedirio
imediatamente ventral aos somitos anteriores. As clulas desse duto migram
caudalmente, e a regio anterior do duto induz o mesnquima adjacente a formar os
tbulos pronfricos do rim (Figura 17.15 A). Embora os tbulos pronfricos formam
rins funcionais em peixes e em larvas de anfbios, eles so considerados inativos em
amniotas mamferos. Em mamferos, os tbulos pronfricos e a poro anterior do duto
pronfrico degeneram, mas as pores mais caudais do duto persistem tornando-se o
(A) (B) (C) (D)
Tbulos
mesonfricos
Prnefros
Duto nfrico
Gnada
Cordo Gnada
nefrognico
Mesonefros
Mesonefros
Duto nfrico
(Wolffiano)
Mesnquima
Cordo nefrognico Mesnquima
metanefrognico
metanefrognico
Ureter
Cloaca Broto uretrico
Duto nfrico
Figura 17.15
Esquema geral do desenvolvimento do rim ver-
tebrado. (A) Os tbulos originais, constituin-
do o rim pronfrico, so induzidos a partir do componente central do sistema excretor atravs de todo seu desenvolvimento
mesnquima nefrognico pelo duto pronfrico (Toivonen, 1945; Saxn, 1987). Esse duto remanescente freqentemente referido
migrando caudalmente. (B) medida que o como duto nfrico ou Wolffiano.
prnefro de degenera, formam-se os tbulos
medida que os tbulos pronfricos degeneram, a poro mediana do duto
mesonfricos. (C) O rim mamfero final, o
metanefro, induzido pelo broto uretrico. (D) nfrico inicia um novo conjunto de tbulos renais no mesnquima adjacente.
Seo de um rim de camundongo mostrando a Esse conjunto de tbulos constitui o mesonefro, ou rim mesonfrico. No ser
iniciao do rim mesonfrico (abaixo) enquan- humano, comeando ao redor do dia 25, formam-se cerca de 30 tbulos
to o mesonefro ainda est aparente. O tecido do mesonfricos. Porm, medida que mais tbulos so induzidos caudalmente, os
duto est corado com um anticorpo fluorescen- tbulos mesonfricos anteriores comeam a regredir (embora em camundongos,
te para citoqueratina encontrada no duto meso- os tbulos anteriores permanecem, ao passo que os posteriores regridem; Figu-
nfrico e seus derivados. ( A-C segundo Saxn, ra 17.15B). Em fmeas de mamferos essa regresso completa. Porm, como
1987; D cortesia de S. Vainio.) discutiremos no Captulo 20, alguns desses tbulos mesonfricos persistem em
machos para se transformar em tubos carreadores de espermatozide (vasos
deferentes e dutos deferentes) dos testculos.
O rim permanente dos aminotas, o metanefro, gerado por alguns dos mesmos
componentes dos tipos anteriores transitrios do rim, e acredita-se ser originado
atravs de uma complexa interao entre componentes mesenquimatosos e epiteliais
do mesoderma intermedirio. Nos dois primeiros passos, o mesnquima
metanefrognico se forma em regies localizadas posteriormente do mesoderma
intermedirio, e induz a formao de um ramo de cada um dos dutos nfricos
pareados. Esses tubos epiteliais so chamados de brotos uretricos. Esses brotos
finalmente se separam do duto nfrico para tornarem-se os ureteres que levam a
urina para a bexiga. Quando os brotos uretricos emergem do duto nfrico, entram
no mesnquima metanefrognico. No terceiro e quarto passos, os brotos uretricos
induzem esse tecido mesenquimatoso a se condensar ao redor dos brotos e se
diferenciar nos nefros do rim dos mamferos. O quinto passo da iniciao renal
ocorre quando esse tecido formador do nefro induz a ramificao adicional do
broto uretrico (Figura 15C,D).
Dutos
coletores
Mesnquima
Metanefrognico
Ureter Ureter
Broto
uretrico
Tbulos
Renais
Tbulo distal
Mesnquima Tbulo
Proximal
Broto Corpo com Cpsula de

Uretrico forma de S Bowman do Clulas
glomrulo endoteliais
Figura 17.16
Induo recproca no desenvolvimento do rim
dos mamferos. medida que o broto
uretrico penetra no mesnquima metanefro-
INDUO RECPROCA DURANTE O DESENVOLVIMENTO RENAL. Esses dois
gnico, esse o induz a se ramificar. Nas extre-
tecidos mesodrmicos, o broto uretrico e o mesnquima metanefrognico interagem midades dos ramos, o epitlio induz o mesn-
e induzem um ao outro reciprocamente (Figura 17.16). O mesnquima metanefrognico quima a se agregar e cavitar para formar os
leva o broto uretrico a se alongar e se ramificar. Na ponta dessas ramificaes, o broto tbulos renais. A formao de nefro a partir
uretrico induz as clulas mesenquimatosas frouxas a formarem um agregado epitelial. das clulas mesenquimatosas mostrada na
Cada agregado de cerca de 20 clulas prolifera-se e se diferencia na intrincada estrutu- insero. Aps se agregar nos ramos, as clu-
ra do nefro renal. Primeiro, cada ndulo se alonga tomando a forma de uma vrgula, las mesenquimatosas formam um ndulo
formando em seguida o caracterstico tubo em forma de S. Logo em seguida forma- epitelial que se estende em um tubo em forma
o do tubo em forma de S, as clulas desse epitlio comeam a se diferenciar em tipos de S, e se funde com o epitlio do broto
uretrico. (Insero segundo Romanoff, 1960.)
regionais de clulas especficas, como as clulas da cpsula, os podcitos e as clulas
dos tubos renais distal e proximal. Nesse perodo, desenvolve-se uma conexo entre o
broto uretrico e o tubo recm-formado que permite a passagem de material de um para
o outro. Os tubos recm-formados derivados do mesnquima formam os nefros
secretores do rim funcional, e o broto uretrico ramificado d origem aos dutos coleto-
res renais e ao ureter, que drena a urina do rim.
Clifford Grobstein (1955, 1956) documentou essa induo recproca, in vitro. Ele
separou o broto uretrico do mesnquima e cultivou-os individualmente ou em con-
junto. Na ausncia do mesnquima, os brotos uretricos no se ramificam. Na ausn-
cia do broto uretrico, o mesnquima logo morre. Quando eles so colocados juntos,
porm, o broto uretrico cresce e se ramifica, e tbulos se formam atravs do
mesnquima (Figura 17.17). Embora certos outros tecidos (em especial o tubo neural)
permitam ao mesnquima metanefrognico formar tbulos renais, o broto uretrico
somente se ramifica sob instrues do mesnquima metanefrognico. Mesnquimas
que induzem ramificao em outros epitlios (tais como a glndula salivar) no induzi-
ro a ramificao do broto uretrico (Bishop-Calame, 1996).
Tbulos renais Dutos coletores
(A) (B)
Figura 17.17
Induo de rim estudada in vitro. (A) Um rudimento metanfrico do
camundongo de 11 dias inclui tanto o broto uretrico como o me-
snquima metanefrognico. (B) Aps o primeiro dia em cultura,
podem ser vistos tbulos nas extremidades dos ureteres em ramifi-
cao. (C) Os dutos coletores ramificados formados pelo broto
uretrico e os tbulos renais formados pelas condensaes mesen- (C)
quimatosas nas extremidades desses brotos podem ser claramente
vistos aps 8 dias de cultura. (A e B de Saxn e Sariola, 1987; C de
Grobstein, 1955; todas fotografias cortesia dos autores.)
Os primeiros nefros metanfricos so, ento, imediatamente ligados aos dutos

coletores. medida que o ureter continua a crescer, esses nefros so levados em
direo externa para o mesnquima metanefrognico (Figura 17.18A). Os terminais
dos brotos uretricos, porm, conservam sua capacidade de induzir a formao dos
tbulos nesse mesnquima, e o resultado a formao de arcadas tubulares (Figura
17.18B). medida que o ramo uretrico migra atravs do mesnquima, so formados
novos nefros que se renem no mesmo duto coletor (Figura 18.18C; Osathanondh e
Potter, 1963).
Os Mecanismos da Organognese Renal
Parece haver ao menos seis conjuntos de sinais operando na induo recproca do

metanefro.
SINAL 1: FORMAO DO MESNQUIMA METANEFROGNICO. Uma coisa

afirmar que o broto uretrico induz o mesnquima metanefrognico a se tornar o
epitlio dos nefros. Outra compreender como esse processo ocorre. Tal como o
desenvolvimento do cristalino pela vescula ptica, considera-se que a induo do
mesnquima metanefrognico pelo broto uretrico seja apenas a ltima etapa que
engatilha uma cascata de eventos no mesnquima competente. Somente o mesnqui-
ma metanefrognico tem a capacidade de responder ao broto uretrico para formar
tbulos renais; se induzido por outros tecidos (tais como a glndula salivar ou o tubo
neural embrionrios), o mesnquima metanefrognico ir responder formando tbulos
renais e nenhuma outra estrutura (Saxn, 1970; Sariola et al., 1982). Assim, o mesnqui-
ma metanefrognico no pode tornar-se qualquer outro tecido que seno os tbulos
renais. A competncia para responder a indutores do broto uretrico considerada ser
regulada por WT1, um fator de transcrio encontrado no mesnquima metanefrog-
nico; e se esse mesnquima no tiver esse fator, as clulas no-induzidas morrem
(Kriedberg et al., 1993). A hibridizao in situ mostra que Wt1 normalmente primeiro
expressa no mesoderma intermedirio antes da formao do rim, sendo depois expres-
sa no rim em desenvolvimento, gnadas e mesotlio (Pritchard-Jones et al., 1990; van
Heyningen et al., 1990; Armstrong et al., 1992). Embora esse mesnquima parea ser
homogneo, o mesnquima metanefrognico, pode conter tanto tecido derivado do
Broto uretrico
(A)
Mesnquima
condensando Glomrulo
(B)
Ureter
(C)
mesoderma como algumas clulas originrias da crista neural (Le Douarin e Tiellet,
1974; Sariola, 1989; Sainio et al., 1994).
SINAL 2: FORMAO DO BROTO URETRICO. O segundo sinal no desenvol-

vimento do rim um conjunto de molculas difusivas que causa o crescimento de
dois brotos uretricos dos dutos nfricos. Pesquisas recentes mostraram que o
fator neurotrfico derivado da glia (GDNF), um componente crtico desse sinal. O
GDNF sintetizado no mesnquima metanefrognico, e camundongos cujos genes
gdnf foram eliminados morrem logo aps o nascimento em conseqncia da falta de
rins (Moore et al., 1996; Pichel et al., 1996; Snchez et al., 1996). O receptor GDNF (a
protena c-Ret) sintetizado nos dutos Wolffianos e posteriormente se concentra Figura 17.18
nos brotos uretricos em crescimento (Figura 17.19: Schuchardt et al., 1996; Trupp Representao esquemtica do desenvolvi-
et al., 1996). Camundongos carentes de GDNF tambm morrem em conseqncia de mento do nefro humano. (A) Formao de
agnese renal. Outra protena sintetizada pelo mesnquima metanefrognico o nefros precoces diretamente ligados ao epitlio
fator de crescimento heptico (HGF; fator de espalhamento); o receptor de HGF do broto uretrico. (B) Formao de arcadas
produzido pelos brotos uretricos. Anticorpos contra HGF bloqueiam o crescimento de nefros nas quais vrios nefros so ligados
ao mesmo duto coletor. (C) O arranjo geral
expansivo dos brotos uretricos em rudimentos renais em cultura (Santos et al.,
dos nefros humanos no nascimento. Os nefros
1994; Woolf et al., 1995). A sntese de GDNF e HGF pelo mesnquima considerada mais profundos constituem uma arcada, en-
ser regulada pelo gene WT1. quanto os nefros mais prximos da superfcie
Em outra mutao murina, o mutante Danforth short-tail, o broto uretrico inici- esto diretamente conectados aos dutos cole-
ado mas no penetra no mesnquima metanefrognico (Gluecksohn-Schoenheimer, tores do ureter. (Segundo Osathanondh e
1943). Aqui, tambm, o rim no se forma. A falta de crescimento dos brotos uretricos Potter, 1963.)
tem sido correlacionada com a ausncia da expresso Wnt11 nas extremidade do broto
uretrico. A expresso de Wnt11 mantida por proteoglicanos produzidos pelo
mesnquima. Parece que uma vez que o broto entra na regio mesenquimatosa, os
proteoglicanos mesenquimatosos estimulam seu contnuo crescimento mantendo a
expresso e secreo de Wnt11 (Davies et al., 1995; Kispert et al., 1996).
SINAL 3: PREVENO DA APOPTOSE MESNQUIMA. O terceiro sinal envia-

do do broto uretrico ao mesnquima, e altera o destino das clulas mesenquimatosas.
Se deixadas no induzidas pelo broto uretrico, as clulas mesenquimatosas sofrem
apoptose (Koseki et al., 1992). Porm, se induzidas pelo broto uretrico, as clulas
Duto
Duto Wolffiano Wolffiano
Broto
uretrico
Broto
Duto uretrico
Wolffiano
(A) (B) (C)
Receptor
Ret Duto
Wolffiano
Broto
Mesnquima Receptor uretrico
metanefrognico Ret
(D)
Figura 17.19
O crescimento do broto uretrico depende de mesenquimatosas so salvas do precipcio da morte e so convertidas em clulas
GDNF (fator neurotrfico derivado da glia) e germinativas em proliferao (Bard e Ross, 1991; Bard et al., 1996). Os fatores
seu receptor. (A) O broto uretrico do rim de secretados do broto uretrico incluem o fator 2 de crescimento fibroblstico (FGF2)
um embrio murino do tipo selvagem de 11,5 e a protena morfogentica 7 do osso (BMP7). O FGF2 tem trs modos de ao,
dias cultivado durante 72 horas tem padro de inibindo a apoptose, promovendo a condensao de clulas mesenquimatosas e
ramificao caracterstico. (B) Em camundon- mantendo a sntese de WT1 (Perantoni et al., 1995). O BMP7 tem efeitos semelhan-
gos embrionrios heterozigotos para os genes
tes, e na ausncia de BMP7, o mesnquima do rim sofre apoptose (Figura 17.20;
codificando GNDF, o tamanho do broto
uretrico e o nmero e comprimento de seus
ramos est reduzido. (C) Em camundongos sem
ambas cpias dos genes gdnf, o broto uretrico
no se forma a partir do duto Wolffiano. (D) Rim
Os receptores para GDNF esto concentrados Glndula
na poro posterior do duto Wolffiano. O Supra-renal
GDNF secretado pelo mesnquima metanefro- Rim
gnico estimula o crescimento do broto uretrico
desse duto. Em estgios posteriores, o recep-
tor de GDNF somente encontrado nas extre-
midades dos brotos uretricos. Barras de esca-
la iguais a 100m. (A-C de Pichel et al., 1996;
fotografias cortesia de J. G. Pichel e H. Sariola;
D segundo Schuchardt et al., 1995.)
Figura 17.20
Malformao renal em um embrio de camundongo deficiente em BMP7. No dia embrionrio 19,
os rins mutantes so significativamente menores que aqueles dos embries tipo selvagem. (de
Dudley et al., 1995; fotografia cortesia de E. J. Robinson.)
Figura 17.21
O proteoglicano syndecan da matriz extrace-
lular no sintetizado ou secretado por clu-
las do mesnquima at aps a induo. Essa
molcula provavelmente est envolvida na
estruturao do novo epitlio tubular, e dis-
tingue as clulas do tbulo, do mesnquima
remanescente. (A) Colorao imunolgica de
syndecan mostra sua presena nas clulas
mesenquimatosas recm-induzidas (T) que es-
to se tornando epiteliais. Alguma colorao
(U) tambm vista no epitlio do broto
epitelial. (B) Colorao intensa de syndecan
vista na regio tubular em desenvolvimento
que ir se tornar o glomrulo renal (G). (de
Vainio et al., 1989, cortesia de L. Saxn.)
(A) (B)
Dudley et al., 1995; Luo et al., 1995). As clulas mesenquimatoses induzidas tambm
sintetizam receptores para o fator de crescimento epidrmico e o fator de crescimen-
to neural, e podem responder essas protenas com a proliferao.
SINAL 4: CONVERSO DE CLULAS MESENQUIMATOSAS EM EPITLIO. O

broto uretrico causa mudanas dramticas na matriz extracelular das clulas do
mesnquima metanefrognico. O mesnquima no-induzido secreta uma matriz extra-
celular consistindo predominantemente de fibronectina e colgenos dos tipos I e II.
Aps a induo, essas protenas desaparecem e so substitudas por uma lmina
epitelial basal feita de laminina e colgeno do tipo IV. As alteraes na matriz extrace-
lular parecem ser crticas para formao dos tbulos, pois o mesnquima induzido
secreta um receptor para laminina que permite sua participao na formao epitelial
(Ekblom et al., 1994). O citoesqueleto tambm muda de uma caracterstica de clulas
mesenquimatosas para um tpico de epitlio (Ekblom et al., 1983, Lehtonen et al., 1985).
Dessa maneira, as clulas mesenquimatosas frouxas so ligadas umas s outras como
um epitlio polarizado sobre uma lmina basal.
Antes dessas mudanas o mesnquima metanefrognico rcem-induzido sinteti-
za duas protenas adesivas, E-caderina e Syndecan. A Syndecan um proteoglicano
primeiro notado ao redor das clulas mesenquimatosas envolvendo o broto uretrico
quando entra na regio do mesnquima. Quando o broto inicia sua primeira ramifica-
o, toda a regio mesnquima ao redor do ramos se cora positivamente para
Syndecan (Figura 17.21). O mRNA de Syndecan est presente no mesnquima renal
no-induzido, mas no traduzido em protena a no ser que o mesnquima seja
induzido (Figura 17.22; Vainio et al., 1989a, 1992). No s pode Syndecan regular a
condensao do mesnquima em um epitlio, como pode tambm promover a proli-
ferao dessas clulas. Por marcao de clulas em proliferao com bromodeoxiu-
ridina (que incorporada em DNA somente em clulas em diviso) e marcando as
clulas expressando Syndecan com anticorpos fluorescentes essa protena, Vainio
e colegas (1992) demonstraram uma estreita correlao entre as clulas em diviso e
aquelas expressando Syndecan.
Alm disso, o fator de transcrio Pax2 sintetizado no mesnquima induzido.*
Quando o RNA antisenso ao Pax2 previne a traduo do mRNA de Pax2 que trans-
crito em resposta induo, as clulas do mesnquima de rudimentos de rim em
cultura, deixam de se condensar (Rothenpieler e Dressler, 1993). [prox3.html]
* Pax2 tem vrios papis durante o desenvolvimento renal. Sua funo mais crtica ocorre at
mesmo antes da converso do mesnquima, pois parece que o Pax2 pode ser importante na
especificao do mesoderma intermedirio. Em mutantes de Pax2 de camundongo no se forma o
sistema urogenital (Torres et al., 1995).
Figura 17.22
Expresso de syndecan em mesnqui-
mas renais induzidos e no-induzidos.
(A) Hibridizao in situ localizando
mRNA de syndecan nos agregados
mesenquimatosas de um rim embrion-
rio de camundongo de 15 dias. A vi-
sualizao da auto-radiografia feita por
iluminao de campo escuro. (B) Me-
snquima renal isolado (M) induzido por
medula espinhal (SPC) mostra expres-
so intensa de syndecan aps colorao
com anticorpos ao syndecan, fluores-
centes. O mesnquima no-induzido no
(A)
o faz. (C) A quantidade de syndecan
(marcado com enxofre radioativo) iso-
lada de um mesnquima induzido de rim
dez vezes maior que aquela isolada de
um quantidade semelhante de mesnqui- Induzido
Syndecan isolado (contagem/min)

ma no-induzido. (Segundo Vainio et
al., 1992, cortesia de S. Vainio.)
No-induzido
(B) (C)
Uma vez induzido e aps ter comeado a se condensar, o mesnquima comea a

secretar Wnt4, que atua de uma maneira autcrina para completar a transio de massa
do mesenquimatosas para o epitlio (Stark et al., 1994). A expresso de Wnt4 detec-
tada nas clulas mesenquimais em condensao e nos agregados em forma de vrgula.
No agregado em forma de S, ele encontrado na regio na qual as clulas rcem-
epitelizadas se fundem com as pontas do broto uretrico. Em camundongos sem os
genes Wnt4, o mesnquima permanece indiferenciado morfologicamente, no se for-
mando agregados pr-tubulares.
SINAL 5: CONVERSO DAS CLULAS AGREGADAS EM UM NEFRO. No

quinto estgio da formao do rim, o epitlio condensado especificado em
diferentes tipos celulares do nefro; e os genes responsveis pela especificao
celular esto ativados. Nos ltimos anos foram encontrados trs genes cujos
produtos podem ser importantes para essa especificao. O primeiro o gene
para protena gap da juno, Conexina 43. Essa protena vista no mesnquima
condensado e conecta as clulas do corpo em forma de S (Sainio et al., 1992). O
segundo gene o Pax2, que est ativo no mesnquima condensado e desliga-
do quando as clulas se diferenciam. Se ele permanecer ativo, os podcitos, os
glomrulos e as clulas tubulares proximais se formam de maneira anormal
(Dressler et al., 1993). O terceiro gene codifica o receptor de baixa afinidade do
fator de crescimento nervoso, NGFR. Esse fator est ausente no mesnquima
no condensado, mas se apresenta em abundncia nas clulas condensadas que
posteriormente formam os nefros. Quando oligonucletidos antisenso para o

NGFR foram adicionados a rudimentos renais em cultura, as clulas condensadas
deixaram de formar tbulos renais (Figura 17.23; Sariola et al., 1991). O sinal que
converte agregados em nefros no conhecido.
SINAL 6: O CRESCIMENTO CONTNUO DO BROTO URETRICO E A DIFEREN-

CIAO DO NEFRO. Aps as interaes iniciais terem criado os primeiros agrega-
dos, as clulas do mesnquima metanefrognico perto da margem renal comeam a
proliferar para formar clulas germinativas. Essas clulas podem interagir com os ra-
mos do broto uretrico para formar novos nefros, ou podem produzir clulas do estroma.
Essas clulas migram para a parte central do rim e produzem fatores (ainda desconhe-
cidos) que (1) permitem o crescimento contnuo do broto uretrico e (2) estimulam a
diferenciao do nefro em tbulos renais convolutos, ala de Henle, glomrulos e
aparelho justaglomerular. O fator de transcrio BF2 sintetizado nessas clulas
estromticas, e quando eliminado de embries de camundongo, o rim resultante no
tem a rvore uretrica ramificada (ramifica somente trs ou quatro vezes em lugar de
sete ou oito, resultando em uma reduo de 8 a 16 vezes no nmero de ramos), e os
agregados no se diferenciam em nefros (Hatini et al., 1996). Assim, parece que os
fatores necessrios para essas duas funes so sintetizados pelas clulas do estroma
e regulados pelo fator de transcrio BF2.
Existe tambm evidncia que interaes recprocas entre o broto uretrico e o
mesnquima metanefrognico podem ser crticas para a manuteno dessas clulas
estromticas. A combinao de FGF2 e um meio condicionado de linhagens celulares
do broto uretrico do rato capaz de induzir a completa diferenciao de nefros no
mesnquima metanefrognico isolado. O FGF2 necessrio para induzir a agregao
de clulas mesenquimatosas, porm as substncias secretadas para o meio de cultura
pelas clulas do broto uretrico so capazes de transformar esses agregados em nefros
(Karavonova et al., 1996). provvel que os fatores do broto uretrico (que permane-
cem no identificados) estimulam as clulas estromticas a produzirem seus fatores
(que tambm permanecem no identificados), de modo que o agregado possa se dife-
renciar em nefro e assim as ramificaes podem continuar a crescer. A identificao
desses fatores tornou-se um dos novos focos de importncia para a biologia do
desenvolvimento (Bard, 1996).
(A) (B) (C)
Figura 17.23
Papel do receptor NGF de baixa afinidade na morfognese do rim. (A) Hibridizao in situ mostra a localizao de
mRNA de NGFR nos mesnquimas condensados de um rim embrionrio de rato de 18 dias. (B) Maior aumento do
padro de ramificao do broto uretrico (corado com anticorpos para uma citoqueratina epitelial especfica) em rim de
13 dias cultivado durante 5 dias, in vitro. (C) Broto uretrico de um rim igual aquele em (B) mas cultivado em presena
de oligonucletidos antisenso ao mRNA de NGFR . (de Sariola et al., 1991, cortesia de H. Sariola.)
& Especulaes
Diferenciao Coordenada e Morfognese no Dente
D URANTE A MORFOGNESE de
qualquer rgo ocorrem numero-
sos dilogos entre os tecido em
interao. Nas interaes epitlio-mesn-
fatores de transcrio, incluindo protenas
contendo os homeodomnios Msx1 e Msx2.
A induo da diferenciao do mesnqui-
ma pode ser mimetizada colocando-se BMP4
das a sintetizar a protena de membrana
syndecan e a protena da matriz extracelu-
lar tenascina. Essas protenas (que podem
se ligar uma outra) aparecem na ocasio
quima, o mesnquima influencia o epitlio; em partculas de agarose e aplicando-as em que o epitlio induz a agregao do
o tecido epitelial, uma vez modificado pelo massa mesenquimatosa (Vainio et al., 1993). mesnquima; Thesleff e colegas (1990)
mesquima, pode secretar fatores que al- Assim, a BMP4 parece ser um sinal morfog- propuseram que essas duas molculas
teram o mesnquima. Tais interaes con- nico crtico do epitlio para o mesnquima. podem interagir para efetivar essa con-
tinuam at que seja formado um rgo com Um evento crtico na anlise do de- densao. Como no rim, a expresso de
clulas mesenquimatosas especficas do senvolvimento dental foi a descoberta que syndecan tambm se correlaciona com a
orgo e epitlio especfico. A identificao o centro de sinalizao para o desenvol- proliferao das clulas mesenquimatosas
das substncias envolvidas nessas con- vimento dental um obscuro grupo de agregadas, sugerindo que ela est regu-
versas inter-tissulares est sendo estuda- clulas epiteliais referidas como o n do lando a diviso celular assim como a agre-
da em diversos laboratrios. Algumas das esmalte (Jernvall et al., 1994). Esse grupo gao (Vainio et al., 1991).
interaes mais investigadas so aquelas de clulas, primeiro visto no comeo do Depois de se agregarem, as clulas
que formam os dentes dos mamferos. Aqui, estgio de hemisfrio pigmentado, apare- mesenquimatosas comeam a secretar
o epitlio da mandbula se diferencia em ce como uma populao de clulas em no FGF3, BMP3, BMP4, HGH e activina
ameloblastos, enquanto as clulas mesen- diviso, no centro das cspides em cres- (Wilkinson et al., 1989, Thesleff e Sahlberg,
quimatosas derivadas da crista neural se tor- cimento (veja Figura 17.3). Alm disso, a 1996). Esses sinais, presumivelmente, in-
nam os odontoblastos secretores da dentina. hibridizao in situ mostrou que esse n duzem a formao do n de esmalte no
Em primeiro lugar, o epitlio faz com de esmalte a fonte da secreo de Sonic epitlio. O n em seguida secreta seu po-
que o mesnquima se agregue em locais hedgehog, FGF4, BMP7, BMP4 e de tente coquetel de fatores de crescimento
especficos. Nesse momento, o epitlio BMP2 (Koyoma et al., 1996; Vaahtokari et e diferenciao, os quais promovem o
possui o potencial de gerar estruturas al., 1996a). Sendo uma populao que no crescimento e a diferenciao tanto do me-
dentais a partir de vrios tipos de clulas se divide, secretando fatores de cresci- soderma como do epitlio. As clulas
mesenquimatosas (Mina e Kollar, 1987; mento capazes de serem recebidos tanto mesenquimatosas comeam a se diferen-
Lumsden, 1988). Porm, esse potencial pelo epitlio como pelo mesnquima, o n ciarem em odontoblastos, e a tenascina
de formao do dente logo transferido de esmalte considerado dirigir a morfo- induzida para ser expressa em nveis mui-
para o mesnquima que se agrega abaixo gnese das cspides do dente e ser crti- to mais elevados e nos mesmos locais que
dele. Essas clulas mesenquimatosas co no direcionamento das mudanas a fosfatase alcalina. Essas protenas fo-
formam a papila dental e so agora capa- evolutivas na estrutura dentria nos ma- ram associadas com a diferenciao do
zes de induzir a morfognese dental em mferos (Jernvall, 1995). osso e da cartilagem, e podem promover a
outros epitlios (Kollar e Baird, 1970). Um resumo de pesquisas recentes mineralizao da matriz extracelular
Nesse estgio, o epitlio maxilar perdeu correlacionando induo e diferenciao (Mackie et al., 1987).
sua capacidade de instruir a formao do do mesnquima mostrado na Figura Por ltimo, medida que emerge o
dente em outros mesnquimas. Assim, o 17.24. Como se pode ver, o mesnquima fentipo do odontoblasto, so secreta-
potencial odontognico passou do em um estgio diferente daquele em ou- dos osteonectina e colgeno de tipo I
epitlio para o mesnquima. Na membra- tros. As clulas mesenquimatosas so pri- como componentes da matriz extracelu-
na basal que separa o epitlio do mesn- meiro induzidas (pela expresso epitelial lar. O n de esmalte desaparece por
quima, o epitlio induz o mesnquima a de BMP4, BMP2, BMP7 e provavelmente apoptose (Vaahtokari et al., 1996b). Por
se transformar em odontoblastos, en- FGF8) a expressar um conjunto de fatores esse processo em etapas, as clulas da
quanto o mesnquima induz o epitlio a de transcrio que incluem Msx1 e Lef1. crista neural craniana da mandbula po-
se transfornar em clulas ameloblsticas Se os genes para cada uma dessas prote- dem ser transformadas em odontoblastos
(Figura 17.24; Thesleff et al., 1989). nas so eliminados, o camundongo em secretores de dentina. Essas interaes
Esse deslocamento do potencial odon- desenvolvimento no tem dentes. No ser ocorrem durante perodos especficos do
tognico coincide com o deslocamento da humano, numa condio causada por uma desenvolvimento e so correlacionadas
sntese da protena morfogentica 4 do osso mutao de MSX1, os pacientes tm fa- com a maturao do epitlio. Em condi-
(BMP4). Durante as fases mais precoces do lhas dentrias (Satokata e Maas, 1994; es normais, dois fenmenos indepen-
desenvolvimento do dente, a BMP4 sin- Kratochwil et al., 1996; Vastardis et al., dentes morfognese e diferenciao
tetizada no epitlio; e induz a diferenciao 1996). medida que as clulas mesenqui- celular - so coordenados na formao
do mesnquima e estimula-o a expressar trs matosas condensam-se, elas so induzidos rgos.
Ectomesnquima Condensao Papila dental Formao da cspide Odontoblastos
Epitlio
Mesnquima N de esmalte Pr-odontoblastos

Osteonectina
Nvel de diferenciao
Colgeno tipo I
BMP2, 4, 7 Fosfatase alcalina,

Sonic hedgehog Tenascina
FGF4 do n de receptor EGF
FGF3 esmalte metaloprotenas
BMP4, 3 BMP4 do
activina- A mesnquima
do mesnquima
ao epitlio
BMP2, Syndecan, tenascina
4 FGF8 do TGF- no mesnquima
epitlio ao msx1, 2
mesnquima
Iniciao Agregao Morfognese Diferenciao terminal
Idade desenvolvimental
Figura 17.24
Diferenciao coordenada e morfognese no dente do mamfero. medida que progride o desen-
volvimento, o mesnquima da mandbula derivado da crista neural sofre diferenciao gradual
interagindo com o epitlio mandibular (Segundo Thesleff et al., 1990; Thesleff e Sahlberg, 1996.)
Mecanismos de ramificao na formao

de rgos parenquimatosos
A gerao dos padres de ramificao epitelial especfica do rgo permanece uma rea
largamente inexplorada. Estudos anteriores (para revises, veja Bard, 1990; Mizuno e
Yasugi, 1990) revelaram trs padres principais pelos quais o mesnquima regula a
especificidade da ramificao. No rim, somente um tipo de mesnquima pode causar
ramificao (Saxn, 1987). Nas glndulas salivares e mamrias, o mesnquima especifica
o padro de ramificao, mas a diferenciao do epitlio determinada de modo autno-
mo pelo epitlio (Lawson, 1974; Sakakura et al., 1976). Nos tubos epiteliais que formam
os tratos contendo diferentes regies em ramificao (tais como os tratos respiratrio,
digestivo e reprodutivo), os mesnquimas regionais especificam tanto o padro de
ramificao como os tipos de protena em cada regio (Wessells, 1979; Cunha et al.,
1976a,b; Hilfer et al., 1985; Haffen et al., 1987). Por exemplo, na regio do tubo endodrmico
que ir se tornar o fgado, o mRNA para a albumina (uma protena especfica do fgado)
sintetizado na regio heptica do epitlio, mesmo antes das clulas se agregarem para
formar o rudimento do fgado. Tudo que necessrio para a sntese do mRNA da albumina
que o epitlio esteja em estreito contato com as clulas mesenquimatosas dessa rea.
Tanto no fgado como no pncreas, essas interaes precoces com o mesnquima espec-
fico da regio produzem um baixo nvel de expresso gnica especfica na regio do tubo
endodrmico em proliferao (Rutter et al., 1964; Cascio e Zaret, 1991). Esse padro inicial
ser amplificado quando os rgos formarem suas estruturas morfolgicas.
A Matriz Extracelular como um Elemento Crtico na Ramificao
Os mecanismos para essa ramificao podem ter tanto os componentes gerais como
os especficos (Grobstein, 1967), e podem depender da interao entre as foras que
esto promovendo o crescimento celular e as foras que esto promovendo a coeso
intercelular. Os componente gerais so considerados envolver a degradao seletiva
da membrana epitelial basal nos locais da ramificao (Bernfield et al., 1984; Mizuno e
Yasugi, 1990).
Conforme visto no rim e em muitos outros rgos, o mesnquima pode interagir
com um tubo epitelial levando-o a se ramificar. Isso ocorre quando os crescimentos
epiteliais so divididos por fendas, apresentando lbulos de cada lado da fenda.
Esses lbulos crescem criando ramos. A ramificao dos brotos epiteliais depende da
presena do mesnquima. Em alguns casos, tal como na interao do epitlio respira-
trio com mesnquimas diferentes, a interao instrutiva. Na maioria dos casos,
porm, a interao meramente permissiva. Os brotos so preparados para ramificar e
formar cinos, mas necessitam do apoio do mesnquima. hoje admitido que o
mesnquima promova a formao de fendas e ramificaes cindindo o lbulo e dige-
rindo seletivamente parte da lmina basal do tecido epitelial.
O controle da formao de fendas parece ser, em parte, uma funo das molculas
de colgeno. Fibras de colgeno III so produzidas por clulas mesenquimatosas, mas
se acumulam somente dentro das fendas lobulares (Figura 17.25; Grobstein e Cohen,
1965; Nakanishi et al., 1988a). Alm disso, a extenso da ramificao pode ser regulada
artificialmente pela preservao ou remoo das molculas de colgeno (Nakanishi et
al., 1986a). A Figura 17.26 mostra a ramificao de um rudimento de 12 dias de uma
glndula submandibular sob condies que impedem a degradao das fibras de
colgeno (um inibidor de colagenase foi adicionado ao meio). Sem o colgeno, no se
vem fendas, mas quando a colagenase endgena incapaz de remover o colgeno
em excesso, aparecem fendas extranumerrias.
Clulas
mesenquimatosas
Clula
epitelial
Colgeno na
fenda entre
clulas epiteliais
Figura 17.25
Micrografia eletrnica de varredura da acu-
mulao de fibras de colgeno dentro da fen-
da precoce da glndula salivar de um em-
brio de camundongo de 12 dias. (de Naka-
nishi et al., 1986b, cortesia de Y. Nakanishi.)
1 hr 18 hr 25 hr Figura 17.26
Controle da formao da fenda epitelial pelo
colgeno do mesnquima. Rudimentos da gln-
dula salivar de um rato de 12 dias foram culti-
vados e observados em 1, 18 e 25 horas. (Li-
nha A) Desenvolvimento normal, mostrando
trs principais lbulos. (Linha B) Crescimento
do lbulo mas sem ramificao quando a
colagenase exgena (5g/ml) foi adicionada ao
meio. (Linha C) Ramos supranumerrios quan-
do o inibidor de colagenase (5g/ml) foi adici-
(A) Controle onado ao meio para suprimir a atividade da
colagenase endgena. (Segundo Nakanishi et
al., 1986a; cortesia de Y. Nakanishi.)
(B) Adio de colagenase
(C) Adio de inibidor de colagenase
O mecanismo pelo qual o colgeno inicia essa ramificao permanece inexplicado.

Nakanishi e colaboradores (1986b) propuseram que as clulas mesenquimatosas
alinham as fibras de colgeno por trao para formar cristas que cortam o epitlio
lobular formando fendas. Essas fendas ficam mais claramente definidas medida
que mais clulas mesenquimatosas migratrias deformam o lbulo por tracionamento
(Nakanishi et al., 1987). As fibras de colgeno podem tambm ser responsveis pelo
desenvolvimento da fenda em ramos distintos. Bernfield e Banerjee (1982) propuse-
ram que o colgeno pode proteger a lmina basal das clulas epiteliais contra a
hialuronidase secretada pelas clulas mesenquimatosas. Eles mostraram que essas
clulas realmente digerem o glicosaminoglicano (GAG) do lbulo (Banerjee e Bernfield,
1979) e que os GAGs nas pontas so mais susceptveis que aqueles nas fendas.
Quando GAGs de heparan sulfato so removidos de rudimentos de glndula salivar
em cultura, a ramificao cessa (Nakanishi et al., 1993). A degradao da lmina basal
permitiria a expanso do ramo pelo aumento das mitoses estimuladas nessa rea.
Nesse modelo, mostrado na Figura 17.27, o mesnquima promove o crescimento
epitelial, degrada o GAG, e deposita fibras de colgeno na fenda. O epitlio sintetiza
materiais da lmina basal e estimula a sntese de colgeno do mesnquima. Isso
resulta na degradao diferencial da lmina basal nas extremidades dos lobos, per-
mitindo assim s clulas em diviso do lobo formarem ramos. Aqui, a interao de
clulas mesenquimatosas com a matriz extracelular do epitlio ir determinar o pa-
dro de ramificao do rgo.
(A) Fenda estreita (B) Hialuronidase Degradao da matriz

Colgeno extracelular causada por
hialuronidase
Fibras de
colgeno
Mais
mitose
GAG
Clulas Clulas
mesenquimais epiteliais Clulas Clulas Colgeno
mesenquimais epiteliais
Figura 17.27
Um modelo para a formao e ramificao em
um rudimento de glndula salivar de camun-
O colgeno tambm importante para a estabilizao das ramificaes formadas.
dongo. (A) Um sulco produzido no lbulo Quando se adiciona colagenase a rudimentos de glndula salivar aps a ramificao,
pela contrao de um feixe de fibras de colge- o colgeno removido e os ramos coalescem em um globo (Grobstein e Cohen, 1965;
no (mostrado aqui como uma estrutura torcida, Wessels e Cohen, 1968).
como corda) pela trao das clulas mesenqui-
matosas. Como mostrado na Figura 17.25, as Fatores Parcrinos Efetuando Padres de Ramificao
fibras se estendem entre dois grupos de clulas
mesenquimatosas. (B) Alongamento dos dois Ainda no temos certeza sobre as identidades das molculas secretadas pelo
lbulos separados em ramos pode ocorrer, j
mesnquima que so responsveis pela induo desses padres de ramificao
que as GAGs nas extremidades dos lbulos
so mais sensveis hialuronidase, pois eles
epitelial. Evidncia recente implicou vrios fatores parcrinos nesses eventos. O
no tm a proteo das fibras de colgeno. O primeiro candidato o fator 1 de crescimento transformado (TGF1). Essa mol-
talo do lbulo estvel, enquanto o aumento da cula abundante em rgos embrionrios. Quando o TGF1 exgeno adicionado
diviso nas extremidades (estimulado pelo a culturas de glndulas mamrias, ou de glndulas salivares embrionrias, pulmo,
mesnquima) empurra o lbulo para a frente. ou rudimentos de rim, o fator previne o epitlio de se ramificar (Figura 17.28; Silberstein
(A de Nakanishi et al., 1986b; B segundo et al., 1990; Hardman et al., 1994; Serra et al., 1994; Ritvos et al., 1995). O TGF1
Wessells, 1977.) sabido promover a sntese de protenas da matriz extracelular e de inibir as
metaloproteinases que podem digerir essas matrizes (Penttinen et al., 1988; Nakamura
et al., 1990). possvel que esse fator tenha um papel na estabilizao dos ramos
aps seus surgimentos.
Uma segunda molcula que pode ter importncia na ramificao epitelial a activina.
A activina conhecida por sua importncia na especificao do eixo esquerdo/direito
em pintos, e foi detectada em glndulas salivares, pncreas e rins de embries de
camundongos. Quando a activina adicionada exogenamente ao rim, ou rudimentos
salivar ou pancretico do embrio de rato, a activina distorce severamente o padro de
ramificao normal (Figura 17.29; Ritvos et al., 1995). As clulas epiteliais no esto
mortas e ainda so capazes de induzir as clulas mesenquimatosas a formarem nefros,
mas os ramos esto muito desorganizados. As semelhanas entre os rudimento da
glndula salivar tratada com colagenase e aqueles tratados com activina sugerem que
essa ltima possa desencadear a digesto de matriz extracelular no local de um novo
ramo, e que a sua adio exgena promove a destruio da matriz extracelular atravs
de todo o epitlio.
Vrios fatores parcrinos adicionais parecem ser responsveis pela induo da
ramificao do epitlio pulmonar. Uma forma de fator de crescimento derivado das
plaquetas pode induzir a ramificao pulmonar, e o RNA antisenso contra sua men-
sagem o inibe (Souza et al., 1995). Epitlio pulmonar em cultura tambm pode ser
Figura 17.28
O efeito do TGF-1 na morfognese do epitlio
renal. (A) Um rim de camundongo de 11 dias
cultivado por 4 dias no meio controle tem rami-
ficao normal. (B) Um rim de um camundon-
go de 11 dias cultivado em TGF-1 s apre-
senta ramificao na periferia do mesnquima,
e os ramos formados so alongados. (Segundo
Ritvos et al., 1995.)
(A) (B)
estimulado a se ramificar expondo-o anfiregulina, um fator parcrino semelhante ao

fator de crescimento epidrmico. Anticorpos contra anfiregulina iro inibir a ramifica-
o nessas culturas (Schugar et al., 1996). O mesnquima do pulmo do embrio do
camundongo secreta FGF7, enquanto o epitlio pulmonar sintetiza o receptor FGF7.
Oligonucletidos antisenso para FGF7 ou seu receptor bloqueiam a ramificao epitelial
em rudimentos de pulmo em cultura, assim como o fazem as mutaes de perda-de-
funo desse receptor* (Peters et al., 1994; Post et al., 1996). Alm da secreo de
anfiregulina e FGF7 pelo mesnquima, a Sonic hedgehog parece ser secretada pelos
terminais distais dos brotos pulmonares (Bellusci et al., 1996).
Induo ao nvel de uma nica clula

A induo embrionria ocorre quando interaes entre clulas indutoras e
responsivas trazem mudanas na trajetria desenvolvimental da clula responsiva
(Jacobson e Sater, 1988). Sem a induo, a clula responsiva se tornaria um tipo de
* Em uma notvel coincidncia, a formao do sistema traqueal de Drosophila tambm depen-

de de FGF (Glazer e Shilo, 1991; Samakoulis et al., 1996). Os pulmes e as traquias dos vertebrados
so novidades evolucionrias que no tm semelhanas anatmicas ou embrionrias com as traqui-
as dos insetos.
Figura 17.29
Os efeitos da activina na morfognese do epitlio
da glndula salivar. Rudimentos da glndula
salivar embrionria foram cultivados por 4 dias
em meio controle (A), e em meio contendo
activina 7.5 nM (B). Aps 4 dias, os rgos
foram fixados e corados para citoqueratina
(A) (B) epitelial. (de Ritvos et al., 1995.)
clula; com a induo, torna-se um outro. Nossas discusses sobre induo usual-
mente ocuparam-se de tecidos e no de clulas. Porm, a induo tambm pode
ocorrer ao nvel da nica clula. Os primeiros exemplos desse fenmeno vieram de
estudos com o sistema imune. Aqui, a recepo de antgeno (substncias estranhas)
pela clula B deu-lhe a competncia de responder a fatores parcrinos e justcrinos
sintetizados pelas clulas T auxiliares. H um dilogo recproco entre as clulas B e
as clulas T pelo qual ambas se diferenciam e se proliferam na presena de antgeno
estranho (Clark e Ledbetter, 1994; Essen et al., 1995). Na verdade, a AIDS uma
doena de induo, na qual a clula T auxiliar foi destruda e no pode induzir a
diferenciao de clulas B e macrfagos.* [prox4.html]
Pesquisas recentes sobre o desenvolvimento de Drosophila e Caenorhabditis
mostraram que a induo realmente ocorre no nvel clula-para-clula. Alguns dos
exemplos melhor estudados envolvem a formao dos fotorreceptores da retina do
olho da Drosophila. A retina consiste de cerca de 800 unidades chamadas omatdios
(Figura 17.30). Cada omatdio composto de 20 clulas organizadas em um padro
preciso. O olho desenvolve-se na camada epitelial plana do disco imaginal do olho
da larva. No h clulas diretamente acima ou abaixo dessa camada, de modo que as
interaes so limitadas s clulas vizinhas em duas dimenses. A diferenciao das
clulas epiteliais arranjadas de maneira aleatria nos fotorreceptores da retina e seu
tecido do cristalino ao redor ocorre durante o ltimo (terceiro) estgio larval. Uma
Figura 17.30
Microfotografia eletrnica de varredura de um reentrncia se forma na margem posterior do disco imaginal, e esse sulco
olho composto de Drosophila. Cada faceta morfogentico comea a trafegar para frente em direo ao anterior do epitlio (Fi-
um nico omatdio. Uma cerda sensorial se gura 17.31). O movimento do sulco depende das protenas do conjunto marcador,
projeta de cada omatdio. (Cortesia de T. Hedgehog e Decapentaplegic. Hedgehog expresso por clulas imediatamente pos-
Venkatesh.) teriores ao sulco (i.e., aquelas que acabaram de se diferenciar) e induz a expresso da
protena decapentaplegic dentro do sulco (Heberlein et al., 1993; Ma et al., 1993).
medida que as clulas da retina comeam a se diferenciar atrs do sulco, elas secretam
a protena Hedgehog, que empurra o sulco anteriormente (Brown et al., 1995). Quan-
do o sulco passa atravs de uma regio de clulas, essas comeam a se diferenciar
em uma ordem especfica. A primeira clula a se desenvolver o fotorreceptor cen-
tral (R8). (Ainda no sabido como o sulco instru certas clulas a se tornarem
fotorreceptores R8, mas possvel que as protenas DPP e Hedgehog na regio do
sulco induzam a determinao de R8). A clula R8 considerada induzir a clula
anterior e a clula posterior a ela (em relao ao sulco), para se tornarem os fotorre-
ceptores R2 e R5, respectivamente. Os fotorreceptores R2 e R5 so funcionalmente
equivalentes, sendo o sinal de R8 provavelmente o mesmo para ambas (Tomlinson e
Ready, 1987). Sinais dessas clulas induzem mais quatro clulas adjacentes a torna-
rem-se os fotorreceptores R3, R4, e depois R1 e R6. Em ltimo lugar aparece o
fotorreceptor R7. As outras clulas ao redor desses fotorreceptores tornam-se clu-
las do cristalino. A determinao do cristalino a condio de revelia (default) se
as clulas no forem induzidas. [prox5.html]
Uma srie de mutaes foram encontradas bloquear alguns dos passos dessa
cascata indutora. A mutao rough (ro), por exemplo, bloqueia a induo dos fotorre-
ceptores R3 e R4. A mutao sevenless (sev) e a mutao bride of sevenless (boss)
pode, cada uma, prevenir as clulas R7 de se diferenciarem. (Essas clulas tornam-se
ento clulas do cristalino). A anlise dessas mutaes mostrou que elas esto envol-
vidas no processo indutivo. O gene sevenless requerido na prpria clula R7. Se
embries mosaico so produzidos de modo que algumas das clulas do disco ocular
sejam heterozigotas (normais) e algumas homozigotas para a mutao sevenless, o
fotorreceptor R7 visto desenvolver-se somente se o precursor R7 tem o alelo sevenless
* Em seres humanos, essas clulas T so chamadas clulas T auxiliares / indutoras, um nome que
reconhece seu papel no desenvolvimento. A glicoprotena CD4 normalmente est envolvida na
mediao celular da adeso no-especfica entre a clula T auxiliar/indutora e os linfcitos B (Doyle
e Strominger, 1987).
Figura 17.31
Diferenciao de fotorreceptores no disco
imaginal do olho da larva tardia. O sulco
morfogentico (seta) atravessa o disco do
posterior (esquerda) ao anterior (direita).
Atrs do sulco, as clulas fotorreceptoras se
diferenciam em uma seqncia definida (mos-
trada abaixo). A primeira clula fotorreceptora
a se diferenciar a R8, que parece induzir a
diferenciao de R2 e R5; a cascata de induo
continua at que o fotorreceptor R7 tenha se
diferenciado. (Segundo Tomlinson, 1988,
fotografia cortesia de T. Venkatesh.)
Poro antenal
do disco
Diferenciao mais Diferenciao precoce

tardia (posterior ao (entrando no sulco
sulco morfogentico) morfogentico)
tipo selvagem (Basler e Hafen, 1989; Bowtell et al., 1989). Anticorpos para essa prote-
na encontram-na na membrana celular, e a seqncia do gene sevenless sugere que ela
uma protena transmembrana com um stio tirosina quinase em seu domnio
citoplasmtico (Banerjee et al., 1987; Hafen et al., 1987). Isso consistente com a
suposio da protena ser um receptor para algum sinal.
Esse sinal para o precursor R7 diferenciar-se no fotorreceptor R7, provavelmente
vem diretamente de uma protena codificada pelo alelo tipo selvagem de bride of
sevenless (boss). Moscas homozigotas para a mutao boss no tm os fotorrecep-
tores R7. Estudos com genes de mosaico onde algumas das clulas do disco imaginal
so normais e algumas das clulas so homozigotas para mutao boss mostram que
o gene boss tipo selvagem no necessrio na clula precursora R7. Ao contrrio, o
fotorreceptor R7 somente se diferencia se o gene boss tipo selvagem expresso na
clula R8. Assim, o gene bride of sevenless est codificando alguma protena cuja
existncia na clula R8 necessria para a diferenciao da clula R7.* O sinal
produzido pela protena Boss provavelmente trabalha por contato celular. Genes
* Todos os precursores de fotorreceptores sintetizam a protena Sev, e o sinal Boss dado pelo
fotorreceptor R8 provavelmente dado e recebido por todas as clulas circunjacentes. O que,
ento, impede as clulas R1-R6 de tambm se tornarem clulas R7? O agente restritivo prova-
velmente o produto do gene seven-up (sup). Em mutante deficientes em sup, os precursores R1,
R3, R4 e R6 todos desenvolvem o fentipo R7. O gene sup codifica um fator de transcrio da
famlia receptora de esterides (Mlodzik et al., 1990). Isso, porm, no toda a histria. Prova-
velmente existe um caminho paralelo, pelo qual o receptor Sevenless tambm ativa a protena
Corkscrew. Corkscrew ativa a protena Daughter-of-sevenless (dos). A protena Dos facilita a
ativao de Ras (Herbst et al., 1996).
boss tipo selvagem numa clula R8 em um omatdio no iro corrigir a deficincia de

alelo boss mutante nos omatdios adjacentes, e o domnio extracelular da protena
Boss suficiente para ativar a tirosina quinase sevenless em uma clula vizinha
(Reinke e Zipursky, 1988; Hart et al., 1993). Um resumo das indues clula-para-
clula conhecidas na retina de Drosophila (Figura 17.32) mostra que clulas indivi-
duais so capazes de induzir outras clulas individuais a criar o arranjo preciso de
clulas em tecidos particulares.
Figura 17.32 Induo Vulvar no Nematide Caenorhabditis elegans
Vulvar
Sumrio de genes conhecidos por estarem en-
volvidos na induo dos fotorreceptores de
Drosophila. Para que o desenvolvimento con- A vulva de Caenorhabditis elegans um caso onde um sinal indutor pode gerar
tinue para alm da diferenciao dos fotorre- uma variedade de tipos celulares. Esse rgo se forma durante o estgio larval de
ceptores R8, R2 e R5, o gene rough (ro) deve seis clulas do blasto chamadas clulas precursoras vulvares (VPCs). A clula que
estar presente tanto nas clulas R2 como nas conecta a gnada sobrejacente clulas precursoras vulvares chamada clula
R5. Para a diferenciao do fotorreceptor R7, o ncora. Ela secreta a protena LIN-3, um parente do fator de crescimento epidrmico
gene sevenless (sev) deve estar ativo na clula (Hill e Sternberg, 1992). Se a clula ncora destruda (ou se o gene lin-3 mutado),
precursora R7, enquanto o gene bride of as VPCs no formam uma vulva; elas tornam-se parte da hipoderme (pele) (Kimble,
sevenless (boss) deve estar ativo no fotorre- 1981). As seis clulas precursoras vulvares sob influncia da clula ncora formam
ceptor R8. (Segundo Rubin, 1989.)
um grupo de equivalncia. Cada membro desse grupo competente para ser induzi-
do pela clula ncora e pode assumir um de trs destinos, dependendo de sua
proximidade essa clula (Figura 17.33). A clula diretamente abaixo da clula nco-
ra se divide para formar as clulas vulvares centrais. As duas clulas flanqueando a
clula central se dividem para tornarem-se as clulas vulvares laterais, enquanto as
trs clulas mais distantes da clula ncora geram as clulas hipoblsticas. Se a
clula ncora destruda, todas as seis clulas do grupo de equivalncia dividem-se
uma vez e contribuem para o tecido hipodrmico. Se as trs clulas centrais forem
destrudas, as trs clulas externas, que normalmente formam clulas hipodrmicas,
geram clulas vulvares em seu lugar. A protena LIN-3 recebida pela tirosina quinase
do receptor LET-23 nas VPCs, e o sinal transferido para o ncleo atravs da traje-
tria Ras-MAP quinase (veja Captulo 3).
(A) Gnada Clula ncora
VPCs (clulas precursoras vulvares)
(B) Membrana basal Clula ncora
Gnada
Cutcula
Figura 17.33
As VPCs e seus descendentes. (A) Localizao da gnada, clula
ncora, e VPCs no segundo instar da larva de um C. elegans herma- (C)
frodita. (B,C) Relao da clula ncora com as seis VPCs e suas
linhagens subseqentes. As primeiras linhagens resultam em clulas
vulvares centrais; as segundas constituem as clulas vulvares laterais;
as terceiras geram as clulas hipodrmicas. O esquema da vulva
mostrado no quarto instar da larva, os crculos representando as posi-
es do ncleo. (Segundo Katz e Sternberg, 1996.)
H trs mecanismos pelos quais tais indues podem ocorrer (Katz e Stern-
berg, 1996):
1. A hiptese do sinal graduado. Aqui, a VPC mais prxima da clula ncora

recebe as mais altas concentraes de protena LIN-3 e gera as clulas vulvares
centrais. As duas VPCs adjacentes recebem uma baixa quantidade de LIN-3 e
se tornam as clulas vulvares laterais. As VPCs mais distantes da clula ncora
no recebem LIN-3 suficiente, e se tornam hipoderme (Katz et al., 1995).
2. O modelo da induo seqencial. Aqui, a protena LIN-3 trabalha somente
sobre a clula imediatamente abaixo a ela. Essa clula ir gerar a linhagem
vulvar central. Ir tambm sinalizar lateralmente para as duas clulas adjacen-
tes e instru-las para gerar linhagens vulvares laterais. Essas clulas no iro
instruir as clulas perifricas de VPCs de fazer algo; por isso, essas tornam-se
hipoderme (Koga e Oshima, 1995; Simske e Kim, 1995).
3. O modelo da no-equivalncia. Aqui, as VPCs podem substituir uma a outra,
mas no so idnticas. Elas tm os seus vieses e podem responder at a baixas
concentraes da protena LIN-3. Porm, os vieses fazem com que a clula
abaixo da clula ncora gere a linhagem vulvar central (Sternberg, 1989;
Sternberg e Horvitz, 1989).
Interessante, existe evidncia que todos os trs modelos funcionam durante o

desenvolvimento normal (Kenyon, 1995; Katz e Sternberg, 1996). Provavelmente h
um sinal graduado de LIN-3 da clula ncora, que refora os vieses das VPCs j
existentes. Alm disso, uma vez que a VPC abaixo da clula ncora fica determinada a
formar a linhagem vulvar central, ela sinaliza as clulas a ela adjacentes proibindo-as
de tambm formar clulas vulvares centrais. Essa inibio lateral das clulas precur-
soras vulvares secundrias pelas VPC primria conseguida atravs das prote-
nas LIN-12 (Figura 17.34; Sternberg, 1988). Se todos esses sistemas estiverem operan-
do durante o desenvolvimento normal, conforme nota Kenyon (1995), ento em con-
junto elas poderiam produzir as to-perfeitas pequenas vulvas pelas quais C. elegans
to famoso.
LET-3
Sinal ativa genes Vulval
Sinal Sinal
ativa ativa
lin-12 lin-12
Vul ligado Vul ligado Vol ligado Figura 17.34

lin-12 ligado lin-12 ligado Modelo para determinao de linhagens de
clulas vulvares em C. elegans. O sinal LIN-
3 da clula ncora promove a determinao da
clula P6.p gerar a linhagem vulvar central.
Doses menores de LIN-3 fazem com que as
clulas P5.p e P7.p formem as linhagens
vulvares laterais. A clula P6.p (linhagem cen-
tral) tambm secreta um sinal de curto alcance
que induz as clulas vizinhas a ativarem a pro-
tena LIN-12. Isso tambm previne as clulas
P5.p e P7.p de gerarem a linhagem primria
Hipoderme Vulva Hipoderme de clulas vulvares centrais.
& Especulaes
Interaes Clula-Clula e Possibilidade na

Determinao de Tipos Celulares
O DESENVOLVIMENTO da vulva Sinal Receptor um neuroblasto. O gene Notch de Droso-

em C. elegans mostra vrias si- (A) phila tambm canaliza uma clula bipo-
tuaes de indues ao nvel tencial em uma de duas trajetrias alter-
celular. A primeira situao se refere nativas. Logo aps a gastrulao, uma
induo da clula ncora gonadal. A for- regio de cerca de 1800 clulas ectodr-
mao da clula ncora mediada pelo micas encontra-se ao longo da linha me-
gene lin-12, que codifica uma protena (B) diana ventral do embrio de Drosophila.
receptora da superfcie celular. Em herma- Essas clulas tm o potencial de formar o
froditas do tipo selvagem, duas clulas cordo nervoso ventral do inseto, e cerca
adjacentes, Z1.ppp e Z4.aaa, tm o poten- de um-quarto delas se tornam neuroblas-
cial de se tornarem clula ncora gonadal. tos, enquanto o resto se torna precurso-
(C)
Elas interagem de maneira a causar uma ras da hipoderme. As clulas que do ori-
delas ser a clula ncora, enquanto a ou- gem aos neuroblastos esto intermistura-
tra se torna o precursor do tecido uterino. das com as clulas que so destinadas a
Em mutantes recessivos lin-12, ambas dar origem a precursores hipodrmicos.
clulas se tornam clulas ncora, enquanto (D) Assim, cada clula ectodrmica nas regies
em mutantes dominantes, ambas se tor- formadoras de nervos do embrio da mos-
nam precursores uterinos (Greenwald et ca pode dar origem ou a clulas hipodr-
al., 1983). Estudos usando mosaicos ge- micas ou a clulas precursoras neurais
nticos e ablaes celulares mostraram Clula ncora Precursor (Hartenstein e Campos-Ortega, 1984), Na
uterino ventral
que essa deciso feita no segundo est- ausncia de transcrio do gene Notch
gio larval e que o gene lin-12 somente Figura 17.35 no embrio, as clulas se desenvolvem
Modelo para a gerao de dois tipos de clulas
precisa funcionar na clula destinada a se (clula ncora e precursor uterino ventral) de em precursores neurais em lugar de uma
tornar a clula precursora uterina. A duas clulas equivalentes (Z1.ppp e Z4.aaa). (A) mistura de clulas precursoras neurais e
presuntiva clula ncora no o necessita. As clulas comeam como equivalentes, com hipodrmicas (Figura 17.36; Artavanis-
Seydoux e Greenwald (1989) especulam quantidades flutuantes de sinal (seta) e receptor Tsakonis et al., 1983; Lehmann et al., 1983).
que essas duas clulas originalmente sin- (seta invertida). O gene lag-2 considerado co- Esses embries morrem, com um grande
dificar o sinal; o gene lin-12 considerado codi-
tetizam o sinal para a diferenciao uterina excesso de clulas neurais, s custas da
ficar o receptor. A recepo do sinal diminui a
(a protena LAG-2) e o receptor para essa produo de LAG-2 e aumenta a de LIN-12. hipoderme ventral e da cabea (Poulson,
molcula (a protena LIN-12) (Figura 17.35; (B) Um evento estocstico (aleatrio) causa uma 1937; Hoppe e Greenspan, 1986). O gene
Wilkinson et al., 1994). Durante um certo clula a produzir mais substncia sinalizadora Notch foi clonado (Kidd et al., 1983;
perodo no desenvolvimento larval, a c- que outra em certo perodo crtico. Isso estimula Yedvobnick et al., 1985) e encontrado ser
lula que por acaso estiver secretando mais mais atividade de LIN-12 na clula vizinha. (C) transcrito durante a metade precoce da
Essa diferena ampliada, j que a clula com
desse sinal de diferenciao faz com que mais LIN-12 no produz tanto sinal. (D) Final- embriognese (e mais tarde no estgio
sua vizinha pare de produzir a molcula mente, uma clula envia o sinal, e outra o recebe. pupal precoce). Tanto a protena Notch
sinalizadora e aumente a produo da pro- A clula sinalizadora torna-se a clula ncora; a como a LIN-12 compartilham notveis
tena LIN-12. A clula secretando o sinal clula receptora torna-se o precursor uterino ven- homologias seqenciais entre si. Ambas
se torna a clula ncora gonadal, enquan- tral. (Segundo Greenwald e Rubin, 1992.) so protenas transmembrana que podem
to a clula recebendo o sinal atravs de atuar como receptores de sinais de clu-
sua protena LIN-12 se torna a clula pre- a diferena inicial entre elas criada pelo las adjacentes (Yochem et al., 1988).
cursora uterina ventral. Assim, as duas acaso. Segundo, essas diferenas iniciais Heitzler e Simpson (1991) propuseram
clulas so consideradas determinar uma so reforadas por retroalimentao. Tal que a protena Notch, tal como a LIN-12, fun-
a outra antes de seus respectivos even- determinao tambm vista na determi- ciona como um receptor para sinais interce-
tos de diferenciao. nao de qual das clulas epidrmicas, lulares envolvendo a distino entre clulas
A deciso clula ncora/precursora originalmente equivalentes, do embrio do equivalentes. Alm disso, elas provem evi-
uterina ventral ilustra dois aspectos im- inseto geram os neurnios do sistema dncia que outra protena transmembrana,
portantes da determinao de duas clu- nervoso perifrico. Aqui, a escolha en- produto do gene delta (cuja ausncia cria
las originalmente equivalentes. Primeiro, tre tornar-se uma pele (hipodrmica) ou um fentipo muito semelhante aquele das
Figura 17.36
Representao do efeito da mutao Notch. Em embries tipo selvagem, as
clulas ectodrmicas neurognicas geram tanto neuroblastos como clulas de
pele (hipodrmicas). Em embries deficientes em Notch, porm, todo o ecto-
derma neurognico gera neuroblastos. A proporo de neuroblastos para
clulas hipodrmicas difere entre as regies do embrio.
Neuro-
Tipo selvagem
blasto
Dorsal
Hipo-
derme
Clulas
ectodrmicas
neurognicas
Ventral
Mutante
notch
deficincias Notch) o ligante de Notch.
Mosaicos genticos mostram que enquan-
to Notch requerido por clulas que de-
vem se tornar epiderme, o gene delta ne-
cessrio nas clulas que induzem o
fentipo epidrmico.
Greenwald e Rubin (1992) propuseram
principalmente pelo nmero aleatrio de bm determinada pela posio aleat-
um modelo baseado na hiptese LIN-12
receptores hormonais nas clulas folicu- ria da clula durante a compactao. Tais
para explicar o espaamento dos neuroblas-
lares. De maneira semelhante, a deciso fatores aleatrios podem ocasionar inte-
tos nos agregados pr-neurais de precur-
sobre se uma clula tornar-se- ou no raes que so amplificadas, distinguin-
sores epidrmicos e neurais (Figura 17.37).
parte do embrio ou parte do trofoblasto do, finalmente, entre dois tipos celulares
Inicialmente, todas as clulas tm potenci- certamente uma deciso fundamental naquilo que havia sido uma populao
ais e sinalizaes iguais. Porm, quando
no desenvolvimento do mamfero tam- celular homognea.
uma das clulas, por acaso, produz mais
sinal (como o produto delta), ela ativa os
receptores em clulas adjacentes, reduzin- Figura 17.37
do o nvel de sinalizao. Como os nveis Modelo para explicar os padres de espaamento de neuroblastos entre as clulas ectodrmicas
de sinalizao em clulas adjacentes so neurognicas inicialmente equivalentes. Baseando-se no modelo para duas clulas mostrado na
Figura 17.36, cada clula tanto d como recebe o mesmo sinal. (A) Um campo de clulas equivalen-
baixos, as vizinhas das clulas de baixa si-
tes, todas sinalizando e recebendo igualmente. (B) Um evento aleatrio causa uma das clulas
nalizao tendero ser sinalizadores de alto (sombreamento mais intenso) a produzir mais sinalizao. Suas clulas circunjacentes recebem essa
nvel. Dessa maneira, um espaamento de quantidade aumentada de sinal e reduzem seu prprio nvel de sinalizao (sombreado mais leve).
neuroblastos produzido. (C) O restante do padro est agora constrangido. Aquelas clulas que reprimiram sua prpria
O papel do acaso na determinao sinalizao (em resposta aos eventos em B), provavelmente no expressaro mais sinalizao que
celular no to incomum como se pode suas clulas vizinhas. As clulas rodeadas por sinalizadores mais reprimidos tero maior probabi-
lidade de se tornar sinalizadoras. (D,E) Os destinos das clulas atravs do campo ficam especificadas
supor. Conforme discutiremos no Captu- medida que a amplificao dos sinais cria populaes de sinalizadores rodeados por populaes de
lo 22, o amadurecimento de somente um receptores. No caso dos genes neurognicos, o sinal considerado emanar da protena Delta, o
vulo por ms em humanos determinado receptor sendo a protena Notch. (Segundo Greenwald e Rubin, 1992.)
(A) (B) (C) (D) (E)
Induo o processo iniciado quando uma clula ou grupo de clulas sinaliza

clulas ou grupos de clulas vizinhas para mudar seu destino desenvolvimental. Em
organismos to complexos como os mamferos, as interaes indutivas recprocas so
essenciais para coordenar as partes em um todo coerente.
LITERATURA CITADA
Armstrong, J. F., Pritchard-Jones, K., Bickmore, Bernfield, M., Banarjee, S. D., Koda, J. E. and uterus and vagina in mice. J. Exp. Zool. 196,
W. A., Hastie, N. D. and Bard, J. B. L. 1992. The Rapraegar, A. C. 1984. Remodeling of basement 361-370.
expression of the Wilms tumor gene, WT-1, in membrane as a mechanism of morphogenetic
Cvekl, A., Sax, C. M., Li, X., McDermott, J. B.
the developing mammalian embryo. Mech. Dev. tissue interaction. In R. L. Trelstad (ed.), The
and Piatigorsky, J. 1995. Pax-6 and lensspecific
40: 85-97. Role of Extracellular Matrix in Development.
transcription of the chicken d1-crystallin gene.
Alan R. Liss, New York, pp. 545-547.
Artavanis-Tsakonis, S., Muskavitch, M. A. T. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 4681-4685.
and Yedvobnick, Y. 1983. Molecular cloning of Birren, S. J. and Anderson, D. J. 1990. A vmyc-
Daniel, C. W. (1989). TGF-Jb1 induced inhibition
Notch, a locus affecting neurogenesis in Droso- immortalized sympathoadrenal progenitor cell
of mouse mammary ductal growth: developmen-
phila melanogaster. Proc. Natl. Acad. Sci. USA line in which neuronal differentiation is initiated
tal specificity and characterization. Dev. Biol.
80:1977-1981. by FGF but not NGF. Neuron 4: 189-201.
134: 20-30.
Artavanis-Tsakonas, S., Matsuno, K. and Fortini, M. Bishop-Calame, S. 1966. tude experimentale
Davies, J. A., Lyon, M., Gallagher, J. and Garrod,
E. 1995. Notch signaling. Science 268: 225-232. de 1organogenese du systme urognital de
D. R. 1995. Sulphated proteoglycan is required
1'embryon de poulet. Arch. Anat. Microsc.
Banerjee, S. and Bernfield, M. 1979. Develop- for collecting duct growth and branching but not
Morphol. Exp. 55: 215-309.
mentally regulated neutral hyaluronidase activity nephron formation during kidney development.
during epithelial mesenchymal interaction. J. Bitgood, M. J. and McMahon, A. P. 1995. Hed- Development. 121: 1507-1517.
Cell Biol. 83: 469a. gehog and BMP genes are coexpressed at many
Deuchar, E. M. 1975. Cellular Interactions in
diverse sites of cell-cell interaction in the mouse
Banerjee, U., Renfranz, P. J., Pollock, J. A. and Animal Development. Chapman and Hall,
embryo. Dev. Biol. 172: 126-158.
Benzer, S. 1987. Molecular characterization and London.
expression of sevenless, a gene involved in neu- Bitgood, M. J., Shen, L. and McMahon, A. P. 1996.
Doyle, C. and Strominger, J. L. 1987. Interaction
ronal pattern formation in the Drosophila eye. Sertoli cell signalling by desert hedgehog regulates
between CD4 and class II MHC molecules
Cell 49: 281-291. the male germline. Curr. Biol. 6: 298-304.
mediates cell adhesion. Nature 330: 256-259.
Bard, J. B. L. 1990. Morphogenesis: The Bowtell, D. D. L., Simon, M. A. and Rubin, G. M.
Dressler, G. R., Wilkinson, J. E., Rothenpieler,
Cellular and Molecular Processes of Develop- 1989. Ommatidia in the developing Drosophila
V. W., Patterson, L. T., Williams-Simons, L.
mental Anatomy. Cambridge University Press, eye require and can respond to sevenless for
and Westphal, H. 1993. Deregulation of Pax-2
Cambridge. only a restricted period. Cell 56: 931-936.
expression in transgenic mice generates severe
Bard, J. B. L. 1996. A new role for the stromal cells Brown, N. L., Sattler, C. A., Paddock, S. W. and kidney abnormalities. Nature 362: 65-67.
in kidney development. BioEssays 18: 705-707. Carroll, S. B. 1995. Hairy and Emc negatively
Dudley, A. T, Lyons, K. M. and Robertson, E. J.
regulate morphogenetic furrow progression in
Bard, J. B. L. and Ross, A. S. A. 1991. LIF, the 1995. A requirement for bone morphogenesis
the Drosophila eye. Cell 80: 879-887.
ES cell inhibition factor, reversibly blocks protein-7 during development of the mammali-
nephrogenesis in cultured mouse kidney Cascio, S. and Zaret, K. S. 1991. Hepatocyte an kidney and eye. Genes Dev. 9: 2795-2807.
rudiments. Development 113: 193-198. differentiation initiates during endodermal-
Edwards, D. R. and seven others. 1987.
mesenchymal interactions prior to liver
Bard, J. B. L., Davies, J. A., Karavanova, I., Transforming growth factor beta modulates the
formation. Development 113: 217-225.
Lehtonen, E., Sariola, H. and Vainio, S. 1996. expression of collagenase and metalloproteinase
Kidney development: the inductive interacti- Cattanco, E. and McKay, R. D. G. 1990. Proli- inhibitor. EMBO J. 6, 1899-1904.
ons. Semin. Cell Dev. Biol. 7: 195-202. feration and differentiation of neuronal stem
Ekblom, P., Thesleff, I., Saxn, L., Miettinen,
cells regulated by nerve growth factor. Nature
Basler, K. and Hafen, E. 1989. Ubiquitous ex- A. and Timpl, R. 1983. Transferrin as a fetal
347: 762-765.
pression of sevenless: Position-dependent growth factor: Acquisition of responsiveness
specification of cell fate. Science 243: 931-934. Clark, E. A. and Ledbetter, J. A. 1994. How B and related to embryonic induction. Proc. Natl. Acad.
T cells talk to each other. Nature 367: 425-428. Sci. USA 80: 2651-2655.
Basler, K. and Struhl, G. 1994. Compartment boun-
daries and the control of Drosophila limb pattern Cohen, M. M. Jr. 1982. The Child with Multiple Ekblom, P. and eight others. 1994. Role of
by hedgehog protein. Nature 368: 208-214. Birth Defects. Raven Press, NY. mesenchymal nidogen for epithelial morphoge-
nesis in vitro. Development 120: 2003-2014.
Bassols, A. and Massagu, J. 1988. Transforming Coulombre, J. L. and Coulombre, A. J. 1971.
growth factor b regulates the expression and Metaplastic induction of scales and feathers in Essen, D. van, Kikutani, H. and Gray, D. 1995.
structure of extracellular matrix chondroitin/ the corneal anterior epithelium of the chick CD40 ligandtransduced costimulation of T cells
dermatan sulfateproteoglycans. J. Biol. Chem. embryo. Dev. Biol. 25: 464-478. in the development of helper function. Nature
263,3039-3045. 378: 620-623.
Crossley, P. H., Martinez, S. and Martin, G. R.
Bellusci, S., Henderson, R., Winnier, G., Oikawa, 1996. Midbrain development induced by FGF8 Fan, C. M. and Tessier-Lavigne, M. 1994.
T. and Hogan, B. L. M. 1996. Evidence from in the chick embryo. Nature 380: 66-68. Patterning of mammalian somites by surface
normal expression and targeted misexpression ectoderm and notochord: Evidence for sclero-
Cunha, G. R. 1976a. Epithelialstromal interac-
that bone morphogenesis protein-4 (BMP-4) tome induction by a hedgehog homolog. Cell
tions in the development of the urogenital tract.
plays a role in mouse embryonic lung morpho- 79: 1175-1186.
Int. Rev. Cytol. 47,137-194.
genesis. Development 122: 1693-1702.
Fujiwara, M., Uchida, T., Osumi-Yamashita, N.
Cunha, G. R. 1976b. Stromal induction and
Bernfield, M. and Banerjee, S. D. 1982. The and Eto, K. 1994. Uchida rat (rSey): a new
specification of morphogenesis and cytodiffe-
turnover of basal lamina glycosaminoglycan mutant rat with craniofacial abnormalities
rentiation of the epithelia of the Mllerian ducts
correlates with epithelia morphogenesis. Dev. resembling those of the mouse Sey mutant. Di-
and urogenital sinus during development of the
Biol. 90: 291-305. fferentiation 57: 31-38.
Fukumachi, H. and Takayama, S. 1980. Epithe- Hafen, E., Basler, K., Edstrom, J. E. and Rubin, G. tion of lensforming potential in embryonic
lial-mesenchymal interaction in differentiation M. 1987. sevenless, a cell-specific homeotic gene ectoderm. Dev. Biol. 124: 200-214.
of duodenal epithelium of fetal rats in organ of Drosophila, encodes a putative transmembrane
Henry, J. J. and Grainger, R. M. 1990. Early tissue
culture. Experientia 36: 335-336. receptor with a tyrosine kinase domain. Science
interactions leading to embryonic lens formation
236: 55-63.
Glazer, L. and Shilo, B. Z. 1991. The Drosophila in Xenopus laevis. Dev. Biol. 141: 149-163.
FGF-R homolog is expressed in the embryonic Haffen, K., Kedinger, M. and Simonassmann, P.
Herbst, R., Carroll, P. M., Allard, J. D., Schilling,
tracheal system and appears to be required for directed 1987. Mesenchyme-dependent differentiation
J., Raabe, T. and Simon, M. A. Daughter of
tracheal cell extension. Genes Dev. 5: 697-705. of epithelial progenitor cells in the gut. J. Pediat.
sevenless is a substrate of the phosphotyrosine
Gastroent. 6: 15-23.
Gluecksohn-Schoenheimer, S. 1943. The phosphatase corkscrew and functions during
morphological manifestations of a dominant Hahn, H. and twenty others. 1996. Mutations sevenless signaling. Cell 85: 899-909.
mutation in mice affecting tail and urogenital of the human homolog of Drosophila patched
Hilfer, S. R., Rayner, R. M. and Brown, J. W.
system. Genetics 28: 341-348. in the nevoid basal cell carcinoma syndrome.
1985. Mesenchymal control of branching pattern
Cell 85: 841-851.
Goustin, A. S. and nine others. 1985. Coexpressi- in the fetal mouse lung. Tissue Cell 17: 523-538.
on of the sis and myc proto-oncogenes in Hamburgh, M. 1970. Theories of Differentiati-
Hill, R. J. and Sternberg, P. W. 1992. The gene
developing human placenta suggests autocrine on. Elsevier, New York.
lin-3 encodes an inductive signal for vulval de-
control of trophoblast growth. Cell 41: 301-312.
Hardman, P., Landels, E., Woolf, A. S. and velopment in C. elegans. Nature 358: 470-476.
Graff, J. M, Bansal, A. and Melton, D. A. 1996. Spooner, B. S. 1994. TGF-b1 inhibits growth
Hogan, B. L. M. 1996. Bone morphogenesis pro-
Xenopus Mad proteins transduce distinct subsets and branching morphogenesis in embryonic
teins: multifunctional regulators of vertebnrate
of signals for the TGF-b superfamily. Cell 85: mouse submandibular and sublingual glands in
development. Genes Dev. 10: 1580-1594.
479-87. vitro. Devel. Growth Differ. 36: 567-577.
Holtzer, H. 1968. Induction of chondrogenesis:
Graham, A., Heyman, I. and Lumsden, A. 1993. Harrison, R.G. 1933. Some difficulties of the
A concept in terms of mechanisms. In R.
Evennumbered rhombomeres control the determination problem. Am. Nat. 67: 306-321.
Gleischmajer and R. E. Billingham (eds.),
apoptotic elimination of neural crest cells from
Hart, A. C., Krmer, H. and Zipursky, S. L. 1993. Epithelial-Mesenchymal Interactions. Williams
odd-numbered rhombomeres in the chick
Extracellular domain of the boss transmembrane & Wilkins, Baltimore, pp. 152-164.
hindbrain. Development 119: 233-245.
ligand acts as an antagonist of the the sev recep-
Hoodless, P. A., Haerry, T., Abdollah, S.,
Grainger, R. M. 1992. Embryonic lens induction: tor. Nature 361: 732-736.
Stapleton, M., OConnor, M. B., Attisano, L.
Shedding light on vertebrate tissue determination.
Hartenstein, V. and Campos-Ortega, J. A. 1984. and Wrana, J. L. 1996. MADR1, a MAD-related
Trends Genet. 8: 349-355.
Early neurogenesis in wildtype Drosophila me- protein that functions in BMP2 signaling
Greenwald, I. and Rubin, G. M. 1992. Making a lanogaster. Wilhelm Roux Arch. Dev. Biol. 193: pathways. Cell 85: 489-500.
difference: The role of cell-cell interactions in 308-325.
Hoppe, P. E. and Greenspan, R. J. 1986. Local
establishing separate identities for equivalent
Hatini, V., Huh, S. O., Herzlinger, D., Scares, V. C. function of the Notch gene for embryonic
cells. Cell 68: 271-281.
and Lai, E. 1996. Essential role of stromal mor- ectodermal pathway choice in Drosophila. Cell
Greenwald, I., Sternberg, P. W. and Horvitz, H. phogenesis in kidney morphogenesis revealed by 46: 773-783.
R. 1983. The lin-12 locus specifies cell fates in targeted disruption of winged helix transcription
Hyatt, G. A. and Beebe, D. C. 1993. Regulation
Caenorhabditis elegans. Cell 34: 435-444. factor, BF-2. Genes Dev. 10: 1467-1478.
of lens cell growth and polarity by embryonic-
Grobstein, C. 1955. Induction interaction in the Hay, E. D. 1980. Development of the vertebrate specific growth factor and by inhibitors of lens
development of the mouse metanephros. J. Exp. cornea. Int. Rev. Cytol. 63: 263-322. cell proliferation and differentiation. Develop-
Zool. 130: 319-340. ment 117: 701-709.
Hay, E. D. and Revel, J. -P. 1969. Fine structure
Grobstein, C. 1956. Transfilter induction of of the developing avian cornea. In A. Wolsky Ignotz, R. A. and Massague, J. (1986).
tubules in mouse metanephrogenic mesenchyme. and P. S. Chen (eds.), Monographs in Develop- Transforming growth factor beta stimulates the
Exp. Cell Res. 10: 424-440. mental Biology. Karger, Basel. expression of fibronectin and collagen and their
incorporation into the extracellular matrix. J.
Grobstein, C. 1967. Mechanisms of organogene- Heberlein, U., Wolff, T. and Rubin, G. M. 1993.
Biol. Chem. 261, 4337-4345.
tic tissue interaction. Natl. Cancer Inst. Monogr. The TGF-b homolog dpp and the segment
26: 279-299. polarity gene hedgehog are required for Jacobson, A. G. 1966. Inductive processes in
propagation of a morphogenetic wave in the embryonic development. Science 152: 25-34.
Grobstein, C. and Cohen, J. 1965. Collagenase:
Drosophila retina. Cell 75: 913-926.
Effect on the morphogenesis of embryonic salivary Jacobson, A. G. and Sater, A. K. 1988. Features
epithelium in vitro. Science 150: 626-628. Hebert, J., Rosequist, T., Gotz, J. and Martin, G. of embryonic induction. Development 104:
1994. FGF-5 as regulator of hair growth cycle: 341-359.
Gumpel-Pinot, M., Yasugi, S. and Mizuno, T.
Evidence from targeted and spontaneous
1978. Differentiation dpithliums endodermi- Jernvall, J. 1995. Mammalian molar cusp
mutations. Cell 78: 1-20.
ques associaes au msoderme splanchnique. patterns: Developmental mechanisms of
Comp. Rend. Acad. Sci. (Paris) 286: 117-120. Heemskerk, J. and DiNardo, S. 1994. Drosophi- diversity. Acta Zool. Fennica 198: 1-61.
la hedgehog acts as a morphogen in cellular
Gurdon, J. B., Harger, P., Mitchell, A. and Jernvall, J., Kettunen, P., Karavanova, I.,
patterning. Cell 76: 449-460.
Lemaire, P. 1994. Activin signalling and response Martin, L. B. and Theseleff,I. 1994. Evidence
to a morphogen gradient. Nature 371: 487-492. Heitzler, P. and Simpson, P. 1991. The choice for the role of the enamel knot as a control
of cell fate in the epidermis of Drosophila. Cell center in mammalian tooth cusp formation:
Gurdon, J. B., Mitchell, A. and Mahony, D. 1995.
64: 1083-1092. nondividing cells express growth stimulating Fgf-
Direct and continuous assessment by cells of
4 gene. Int. J. Dev. Biol. 38: 463-69.
their position in a morphogen gradient. Nature Henry, J. J. and Grainger, R. M. 1987. Inductive
376: 520-521. interactions in the spatial and temporal restric-
Johnson, R. L., Laufer, E., Riddle, R. D. and Tabin, Koyama, E. and ten others. 1996. Polarizing Liu, F., Hata, A., Baker, J. C., Doody, J., Crcamo,
C. 1994. Ectopic expression of Sonic hedgehog activity, sonic hedgehog, and tooth develop- J., Harland, R. M. and Massagu, J. 1996. A
alters dorsal-ventral patterning of somites. Cell ment in embryonic and postnatal mouse. Dev. human Mad protein acting as a BMP-regulated
79: 1165-1173. Dyn. 206: 59-72. transcription factor. Nature 381: 620-623.
Johnson, R. L. and ten others. 1996. Human Kratochwil, K., Dull, M., Farinas, I., Galceran, Lumsden, A. G. S. 1988. Spatial organization of
homolog of patched, a candidate gene for the basal J. and Grosschedl, R. 1996. Lef1 expression is the epithelium and the role of neural crest cells
cell nevus syndrome. Science 272: 1668-1671. activated by BMP-4 and regulates inductive in- in the initiation of the mammalian tooth germ.
teractions in tooth and hair development. Genes Development 103 [Suppl.]: 155-169.
Jones, C. M., Armes, N. and Smith, J. C. 1996.
Dev. 10: 1382-1394.
Signalling by TGF-b family members: Shortrange Luo, G., Hofmann, C., Bronckers, A. L. J. J.,
effects of Xnr-2 and BMP4 contrast with the long Kreidberg, J. A., Sariola, H., Loring, J. M., Maeda, Sohocki, M., Bradley and Karsenty, G. 1995.
range effects of activin. Curr. Biol. 6: 1468-1475. M., Pelletier, J., Housman, D. and Jaenisch, R. BMP-7 is an inducer of nephrogenesis and is
1993. WT-1 is required for early kidney develop- also required for eye development and skeletal
Karavanova, I. D., Dove, L. F., Resau, J. H. and
ment. Cell 74: 679-691. patterning. Genes Dev. 9: 2808-2820.
Perantoni, A. O. 1996. Conditioned medium
from a rat ureteric bud cell line in combination Ku, M. and Melton, D. A. 1993. Xwnt-11, a Ma, C., Zhou, Y., Beachy, P. A. and Moses, K. 1993.
with bFGF induces complete differentiation of maternally expressed Xenopus wnt gene. Deve- The segment polarity gene hedgehog is required for
isolated metanephric mesenchyme. Develop- lopment 119: 1161-1173. progression of the morphogenetic furrow in the
ment. 122: 4159-4167. developing Drosophila retina. Cell 75: 927-938.
Lappi, D. A. 1995. Tumor targeting through
Katz, W. S. and Sternberg, P. W. 1996. Inter-cellular fibroblast growth factor receptors. Semin. Cancer Mackie, E. J., Thesleff, I. and Chiquet-
signalling in Caenorhabditis elegans vulval pattern Biol. 6: 279-288. Ehrismann, R. 1987. Tenascin is associated with
formation. Semin. Cell Dev. Biol. 7: 175-183. chondrogenic and osteogenic differentiation in
Lawson, K. A. 1974. Mesenchyme specificity in
vivo and promotes chondrogenesis in vivo. J.
Katz, W., Hill, R. J., Clandenin, T. R. and Stern- rodent salivary gland development: the response
Cell Biol. 105: 2569-2579.
berg, P. W. 1995. Different levels of the C. of salivary epithelium to lung mesenchyme in
elegans growth factor LIN-3 promote distinct vitro. J. Embryol. Exp. Morphol. 32: 469-493. McCormick, F. 1989. ras GTPase activating
vulval precursor fates. Cell 82: 297-307. protein: Signal transmitter and signal terminator.
Le Douarin, N. and Tiellet, M.-A. 1974. Expe-
Cell 56: 5-8.
Kenyon, C. 1995. A perfect vulva every time: rimental analysis of the migration and diffe-
gradients and signaling cascades in C. elegans. rentiation of neuroblasts of the autonomic ner- McMahon, A. P. and Bradley, A. 1990. The Wnt-
Cell 82: 171-174. vous system and of neuroectodermal derivatives, 1 (int-1) protooncogene is required for the de-
using a biological cell marking technique. Dev. velopment of a large region of the mouse brain.
Kidd, S., Lockett, T. J. and Young, M. W. 1983.
Biol. 41: 162-184. Cell 62: 1073-1085.
The Notch locus of Drosophila melanogaster.
Cell 34: 421-433. Lehmann, R., Jimenez, F., Dietrich, U. and Cam- Meier, S. 1977. Initiation of corneal differen-
pos-Ortega, J. A. 1983. On the phenotype and tiation prior to cornealens association. Cell
Kimble, J. 1981. Alterations in cell lineage
development of mutants of early neurogenesis Tissue Res. 184: 255-267.
following laser ablation of cells in the somatic
in Drosophila melanogaster. Wilhelm Roux Arch.
gonad of Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 87: Mencl, E. 1908. Neue Tatsachen zur Selbstdiffe-
Dev. Biol. 192: 62-74.
286-300. renzierung der Augenlinse. Wilhelm Roux Arch.
Lehtonen, E., Virtanen, I. and Saxn, L. 1985. Entwicklungsmech. Org. 25: 431-450.
King, H. D. 1905. Experimental studies on the
Reorganization of the intermediate cytoskeleton
eye of the frog embryo. Wilhelm Roux Arch. Mina, M. and Kollar, E. J. 1987. The induction
in induced mesenchyme cells is independent of
Entwicklungsmech. Org. 19: 85-107. of odontogenesis in nondental mesenchyme
tubule morphogenesis. Dev. Biol. 108: 481-90.
combined with early murine mandibular arch
Kingsley, D. M., Bland, A. E., Grubber, J. M.,
Letterio, J. J., Geiser, A. G., Kulkarni, A. B., epithelium. Arch. Oral Biol. 32: 123-127.
Marker, P. C., Russell, L. B., Copeland, N. G.
Roche, A. B., Sporn, N. S. and Roberts, A. B.
and Jenkins, N. A. 1994. The mouse short ear Mizuno, T. and Yasugi, S. 1990. Susceptibility
1994. Maternal rescue of TGF-b1-null mice.
skeletal morphogenesis locus is associated with of epithelia to directive influences of mesen-
Science 264: 1936-1938.
defects in a bone morpho-genesis protein of the chymes during organogenesis: Uncoupling of
TGF-b superfamily. Cell 71: 399-410. Levin, M., Johnson, R. L., Stern, C., Kuehn, M. morphogenesis and cytodifferentiation. Cell
and Tabin, C. 1995. A molecular pathway Differ. Devel. 31, 151-159.
Kispert, A., Vainio, S., Shen, L., Rowitch, D. R.
determining leftright asymmetry in chick em-
and McMahon, A. P. 1996. Proteoglycans are Mlodzik, M., Hiromi, Y., Weber, U., Goodman,
bryogenesis. Cell 82: 803-814.
required for maintenance of Wnt-11 expression C. S. and Rubin, G. M. 1990. The Drosophila
in the ureter tips. Development 122: 3627-3637. Lewis, W. 1904. Experimental studies on the seven-up gene, a member of the steroid recep-
development of the eye in amphibia. I. On the tor gene superfamily, controls photoreceptor
Koga, M. and Ohshima, Y. 1995. Mosaic analysis
origin of the lens, Rana palustris. Am. J. Anat. cell fates. Cell 60: 211-224.
of the let-23 gene function in vulval induction
3: 505-536.
of Caenorhabditis elegans. Development 121: Morales, T. I. and Roberts, A. B. 1988. Transfor-
2655-2666. Lewis, W. 1907. Experimental studies on the ming growth factor b regulates the metabolism of
development of the eye in amphibia. III. On the proteoglycans in bovine cartilage organ cultures.
Kollar, E. J. and Baird, G. 1970. Tissue interaction
origin and differentiation of the lens. Am. J. J. Biol. Chem. 263, 12828-12831.
in developing mouse tooth germs. II. The
Anat. 6: 473-509.
inductive role of the dental papilla. /. Embryol. Moore, M. W. and nine others. 1996. Renal and
Exp. Morphol. 24: 173-186. Liu, F., Ventura, F., Doody, J. and Maasague, J. neuronal abnormalities in mice lacking GDNF
1995. Human Type II receptor for bone Nature 382: 76-79.
Koseki, C., Herzlinger, D. and Al-Auqati, Q.
morphogenesis proteins (BMPs): Extension of
1992. Apoptosis in metanephric development. Muenke, M and Schell, U. 1995. Fibroblast
the twokinase receptor model to the BMPs. Mol.
J. Cell Biol. 119: 1327-1333. growth factor receptor mutations in human
Cell Biol. 15: 3479-3486.
skeletal disorders. Trends Genet. 11: 308-313.
Nakamura, T. Okuda, S., Miller, D., Ruoslahti, Targeted expression of a dominant negative FGF Rutter, W. J., Wessells, N. K. and Grobstein, C.
E. and Border, W. 1990. Transforming growth receptor blocks branching morphogenesis and 1964. Controls of specific synthesis in the
factorb (TGF-b) regulates production of epithelial differentiation of the mouse lung. developing pancreas. Natl. Cancer Inst. Monogr.
extracellular matrix (ECM) components by EMBO J. 13: 3296-3301. 13: 51-65.
glomerular epithelial cells. Kidney Int. 37, 221.
Pichel, J. G.and eleven others. 1996. Defects in Saha, M. S. 1991. Spemann seen through a lens.
Nakanishi, Y., Sugiura, F., Kishi, J.-I. and Hayakawa, enteric innervation and kidney development in In S. F. Gilbert (ed.), A Conceptual History of
T. 1986a. Collagenase inhibitor stimulates cleft mice lacking GDNF. Nature 382: 73-76. Modern Embryology. Plenum, New York, pp.
formation during early morphogenesis of mouse 91-108.
Placzek, M., Tessier-Lavigne, M., Yamada, T.,
salivary gland. Dev. Biol. 113: 201-206.
Jessell, T. and Dodd, J. 1990. Mesodermal control Saha, M. S., Spann, C. L. and Grainger, R. M.
Nakanishi, Y., Sugiura, F., Kishi, J.-I. and of neural cell identity: Floor plate induction by 1989. Embryonic lens induction: More than
Hayakawa, T. 1986b. Scanning electron micros- the notochord. Science 250: 985-988. meets the optic vesicle. Cell Differ. Dev. 28:
copic observations of mouse embryonic subman- 153-172.
Post, M., Souza, P., Liu, J., Tseu, I., Wang, J.,
dibular glands during initial branching: Preferen-
Kuliszewski, M. and Tanswell, A. K. 1996. Sainio, K., Nonclercq, D., Saarma, M., Palgi, J.,
tial localization of fibrillar structures at the
Keratinocyte growth factor and its receptor are Saxn, L. and Sariola, H. 1994. Neuronal
mesenchymal ridges participating in cleft for-
involved in regulating early lung branching. De- characteristics of embryonic renal stroma. Int.
mation. J. Embryol. Exp. Morphol. 96: 65-77.
velopment 122: 3107-3115. J. Dev. Biol. 38: 77-84.
Nakanishi, Y., Morita, T. and Nogawa, H. 1987.
Poulson, D. F. 1937. Chromosomal deficiencies Sainio, K. and seven others. 1992. Differential
Cell proliferation is not required for the initiation
and the embryonic development of Drosophila expression of gap junction mRNAs and proteins
of early cleft formation in mouse embryonic
melanogaster. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 23: in the developing murine kidney and in
submandibular epithelium in vitro. Development
133-137. experimentally induced nephric mesenchymes.
99: 429-437.
Pritchard-Jones, K. and eleven others. 1990. The
Nakanishi, Y, Nogawa, H., Hashimoto, Y., Kishi,
candidate Wilms tumour gene is involved in Sakakura, T, Nishizuka, Y. and Dawe, C. J. 1976.
J.-I. and Hayakawa, T. 1988. Accumulation of
genitourinary development. Nature 346: 194-197. Mesenchyme-dependent morphogenesis and
collagen III at the cleft points of developing mouse
epithelium-specific cytodifferentiation in mouse
submandibular gland. Development 104: 51-59. Reilly, K. M. and Melton, D. A. 1996. Shortrange
mammary gland. Science 194, 1439-1441.
signaling by candidate morphogens of the TGF-
Nakanishi, Y, Uematsu, J., Takamatsu, H., Fukuda,
b family and evidence for a relay mechanism of Saksela, O., Moscatelli, D. and Rifkin, D. B.
Y. and Yoshida, K. 1993. Removal of heperan
induction. Cell 86: 743-754. 1987. The opposing effects of basic fibroblast
sulfate chains halted epithelial branching mor-
growth factor and transforming growth factor b
phogenesis of developing mouse submandibular Reinke, R. and Zipursky, A. L. 1988. Cell-cell
on the regulation of plasminogen activator
gland in vitro. Dev. Growth Differ. 35: 371-384. interaction in the Drosophila retina: The bride
activity in capillary endothelial cells. J. Cell Biol.
of sevenless gene is required in photoreceptor cell
Nieuwkoop, P. 1952. Activation and organization 105, 957-963.
R8 for R7 cell development. Cell 55: 321-330.
of the central nervous system in amphibians. J.
Samakoulis, C., Hacohen, N., Manning, G.,
Exp. Zool. 120: 1-108. Richardson, J., Cvekl, A and Wistow, G. 1995.
Sutherland, D. C., Guillemin, K. and Krasnow,
Pax-6 is essential for lensspecific expression of
Nohno, T. W. Kawakami, Y, Ohuchi, H., M. A. 1996. Development of the Drosophila
zcrystallin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 4674-
Fujiwara, A., Yoshioka, H. and Noji, S. 1995. tracheal system occurs by a series of morpholo-
4680.
Involvement of the sonic hedgehog gene in gically distinct but genetically coupled branching
chick feather formation. Biochem. Biophys. Res. Riddle, R. D., Johnson, R. L., Laufer, E. and Tabin, events. Development 122: 1395-1407.
Comm. 206: 33-39. C. 1993. Sonic hedgehog mediates the polarizing
Snchez, M. P., Silos-Santiago, I., Frisn, J., He,
activity of the ZPA. Cell 75: 1401-1416.
Osathanondh, V. and Potter, E. 1963. Develop- B., Lira, S. A. and Barbacid, M. 1996. Renal
ment of human kidney as shown by microdis- Ritvos, O., Tuuri, T, Ermaa, M., Sainio, K., agenesis and the absence of enteric neurons in
section. III. Formation and interrelationships Hilden, K., Saxn, L. and Gilbert, S. R 1995. mice lacking GDNF. Nature 382: 70-73.
of collecting tubules and nephrons. Arch. Pathol. Activin disrupts epithelial branching morpho-
Santos, O. F. P., Baras, E. J. G., Yang, X.-M.,
76: 290-302. genesis in developing murine kidney, pancreas,
Matsumoto, K., Nakamura, T., Park, M. and
and salivary gland. Mech. Dev. 50: 229-245.
Padgett, R. W., Wozney, J. M. and Gelbart, W. Nigam, S. K. 1994. Involvement of hepatocyte
M. 1993. Human BMP sequences can confer Roberts, D. J., Johnson, R.L. Burke, A. C., Nel- growth factor in kidney development. Dev. Biol.
normal dorsalventral patterning in the Droso- son, C. E., Morgan, B. A. and Tabin, C. 1995. 163: 525-529.
phila embryo. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: Sonic hedgehog is an endodermal signal inducing
Sariola, H., Ekblom, P. and Saxn, L. 1982.
2905-2909. Bmp-4 and Hox genes during induction and
Restricted developmental options of the
regionalization of the chick hindgut. Develop-
Penttinen, R. P., Kobayashi, S. and Bornstein, P. metanephric mesenchyme. In M. Burger and R.
ment 121: 3163-3174.
1988. Transforming growth factor-(3 increases Weber (eds.), Embryonic Development, Part B:
mRNA for matrix proteins in the presence and in Romanoff, A. L. 1960. The Avian Embryo. Cellular Aspects. Alan R. Liss, New York, pp.
the absence of the changes in mRNA stability. Macmillan, New York. 425-431.
Rothenpieler, U. W. and Dressier, G. R. 1993. Sariola, H., Holm-Sainio, K. and Henke-Fahle,
Perantoni, A. O., Dove, L. F. and Karavanova, Pax-2 is required for mesenchymeto-epithelium S. 1989. The effect of neuronal cells on kidney
I.1995. Basic fibroblast growth factor can mediate conversion during kidney development. Deve- differentiation. Int. J. Dev. Biol. 33: 149-155.
the early inductive events in renal development. lopment 119: 711-720.
Sariola, H. and seven others. 1991. Depen-
Proc. Natl. Acad. Sci USA 92: 4696-4700.
Rubin, G. M. 1989. Development of the Droso- dence of kidney morphogenesis on the ex-
Peters, K., .Werner, S., Liao, S., Wert, S., phila retina: Inductive events studied at single pression of nerve growth factor receptor.
Whitsett, J. A. and Williams, L. T. 1994. cell resolution. Cell 57: 519-520. Science 254: 571-573.
Satokata, I. and Maas, R. 1994. Msx1 deficient Souza, P., Kuliszewski, M., Wang, J., Tseu, I., Toivonen, S. 1995. ber die Entwicklung der
mice exhibit cleft palate and abnormalities of Tanswell, A. K. and Post, M. 1995. Vor und Uriniere biem Kaninchen. Ann. Acac.
craniofacial and tooth development. Nat. Genet. Sci. Fenn. ser. A 8: 1-27.
PDGF-AA and its receptor influence early lung
6: 348-355.
branching via an epithelial-mesenchymal Tomlinson, A. 1988. Cellular interactions in the
Saunders, J. W., Jr. 1980. Developmental Biolo- interaction. Development 121: 2559-2567. developing Drosophila eye. Development 104:
gy. Macmillan, New York. 183-193.
Spemann, H. 1901. ber Correlationen in der
Saunders, J. W., Jr., Cairns, J. M. and Gasseling, Entwicklung des Auges. Verh. Anat. Ges. 15 Vers. Tomlinson, A. and Ready, D. F. 1987. Cell fate
M. T. 1957. The role of the apical ectodermal Bonn. 61-79. in the Drosophila ommatidium. Dev. Biol. 123:
ridge of ectoderm in the differentiation of the 264-275.
Spemann, H. 1938. Embryonic Development and
morphological structure of and inductive
Induction. Yale University Press, New Haven. Torres, M., Gomez-Pardo, E., Dressler, G. R.
specificity of limb parts of the chick. J. Morphol.
and Gruss, P. 1995. Pax2 controls multiple steps
101: 57-88. Spemann, H. and Schott, O. 1932. ber
of urogenital development. Development 121:
xenoplatische Transplantation als Mittel zur
Saxn, L. 1970. Failure to demonstrate tubule 4057-4065.
Analyse der embryonalen Induction. Naturwis-
induction in heterologous mesenchyme. Dev.
senschaften 20: 463-467. Trupp, M. and twelve others. 1996. Functional
Biol. 23: 511-523.
receptor for GDNF encoded by the c-ret
Stark, K., Vainio, S., Vassileva, G. and McMahon,
Saxn, L. 1987. Organogenesis of the Kidney. protooncogene. Nature 381: 785-789.
A. P. 1994. Epithelial transformation of meta-
Cambridge University Press, Cambridge.
nehric mesenchyme in the developing kidney Vaahtokari, A., Aberg, T, Jernvall, J., Kernen,
Saxn, L. and Sariola, H. 1987. Early organoge- regulated by Wnt-4. Nature 372: 679-683. S. and Thesleff, I. 1996a. The enamel knot as a
nesis of the kidney. Pediat. Nephrol. 1: 385-392. signalling center in the developing mouse tooth.
Stern, H. M., Brown, A. M. C. and Hauschka, S.
Mech. Dev. 54: 39-43.
Schuchardt, A., D-Agati, V., Pachnis, V. and D. 1995. Myogenesis in paraxial mesoderm:
Constantini, F. 1996. Renal agenesis and preferential induction by dorsal neural tube and Vaahtokari, A., Aberg, T. and Thesleff, I. 1996b.
hypodysplasia in ret-k- mutant mice result from by cells expressing Wnt-1. Development 121: Apoptosis in the developing tooth: association
defects in ureteric bud development. Develop- 3675-3686. with an embryonic signaling center and
ment 122: 1919-1929. suppression by EGF and FGF-4. Development
Stern, M. J. and eight others. 1993. The human
122: 121-129.
Schugar, L., Johnson, G. R., Gilbride, K., Plowman, GRB2 and Drosophila drk genes can functionally
D. D. and Mandel, R. 1996. Amphiregulin in lung replace the Caenorhabditis elegans cell signalling Vainio, S., Lehtonen, E., Jalkanen, M., Bernfield,
branching morphogenesis: interaction with gene sem-5. Mol. Biol. Cell. 4: 1175-1188. M. and Saxn, L. 1989. Epithelial-mesenchymal
heparan sulfate proteoglycan modulates cell pro- interactions regulate the stagespecific expressi-
Sternberg, P. W. 1988. Lateral inhibition during
liferation. Development. 122: 1759-1767. on of a cell surface proteoglycan, syndecan, in
vulval induction in Caenorhabditis elegans.
the developing kidney. Dev. Biol. 134: 382-391.
Schulz, M. W., Chamberlain, C. G., de Longh, R. Nature 335: 551-554.
U. and McAvoy, J. W. 1993. Acidic and basic Vainio, S., Jalkanen, M., Vaahtokari, A., Sahlberg,
Sternberg, P. W. and Horvitz, H. R. 1989. The
FGF in ocular media and lens: Implications for C., Mali, M., Bernfield, M. and Thesleff, I. 1991.
combined action of two intercellular signalling
lens polarity and growth patterns. Development Expression of syndecan gene is induced early, is
pathways specifies three cell fates during vulval
118: 117-126. transient, and correlates with changes in
induction in C. elegans. Cell 58: 679-693.
mesenchymal proliferation during tooth
Serra, R., Pelton, R. W. and Moses, H. 1994
Storm, E. E., Huynh, T. V, Copeland, N. G., organogenesis. Dev. Biol. 147: 322-333.
TGFb1 inhibits branching morphogenesis and
Jenkins, N. A., Kingsely, D. M. and Lee, S. J.
N-myc expression in lung bud organ cultures. Vainio, S., Jalkanen, M., Bernfield, M. and Saxn,
1994. Limb alterations of brachyopodism mice
Development 120: 2153-2161. L. 1992. Transient expression of syndecan in
due to mutations in a new member of the TGF-
mesenchymal cell aggregates of the embryonic
Servetnick, M. and Grainger, R. M. 1991. Changes b superfamily. Nature 368: 639-643.
kidney. Dev. Biol. 152: 221-232.
in neural and lens competence in Xenopus
Takada, S., Stark, K. L., Shea, M. J., Vassileva,
ectoderm: Evidence for an autonomous develop- Vainio, S. Karavanova, I., Jowett, A. and Thesleff,
G., McMahon, J. A. and McMahon, A. P. 1994.
mental timer. Development 112: 177-188. I. 1993. Identification of BMP-4 as a signal
Wnt-3a regulates somite and tailbud formation
mediating secondary induction between epithe-
Seydoux, G. and Greenwald, I. 1989. Cell in the mouse embryo. Genes Dev. 8: 174-189.
lial and mesenchymal tissues during early tooth
autonomy of lin-12 function in a cell fate
Thesleff, I. and Sahlberg, C. 1996. Growth factors development. Cell 75: 45-58.
decision in C. elegans. Cell 57: 1237-1245.
as inductive signals regulating tooth morphoge-
van Heyningen, V. and eleven others. 1990. Role
Silberstein, G. B., Flanders, K. C., Roberts, A. B. nesis. Semin. Cell Dev. Biol. 7: 185-193.
for Wilms tumor gene in genital development?
and Daniel, C.W. 1992. Regulation of mammary
Thesleff, I., Vainio, S. and Jalkanen, M. 1989. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 5383-5386.
morphogenesis: Evidence for extracellular matrix
Cell-matrix interaction in tooth development.
inhibition of ducted budding by transforming Vastardis, H., Karimbux, N., Guthua, S. W.,
Int J. Dev. Biol. 33: 91-97.
growth factor b-1. Dev. Biol. 152: 354-362. Seidman, J. G. and Seidman, C. E. 1996. A human
Thesleff, I., Vaahtokari, A. and Vainio, S. 1990. MSX1 homeodomain missense mutation causes
Silberstein, G. B., Strickland, P., Coleman, S. and
Molecular changes during determination and di- selective tooth agenesis. Nat. Genet. 13: 417-
Daniel, C. W. 1990. Epithelium-de-pendent
fferentiation of the dental mesenchyme cell 421.von Woellwarth, V. 1961. Die Rolle des
extracellular matrix synthesis in transforming
lineage. J. Biol. Bucalle 18: 179-188. neuralleistenmaterials und der Temperatur bei
growth factor-b1-growth-inhibited mouse
der Determination der Augenlinse. Embriologia
mammary gland. J. Cell Biol. 110: 2209-2219. Ting-Berreth, S. A. and Chuong, C.-M. 1996. 6: 219-242.
Local delivery of TGFb2 can substitute for
Simske, J. S. and Kim, S. K. 1995. Sequential
placode epithelium to induce mesenchymal Waddington, C. H. 1940. Organisers and Genes.
signaling during Caenorhabditis elegans vulval
condensation during skin morphogenesis. Dev. Cambridge University Press, Cambridge.
induction. Nature 375: 142-146.
Biol. 179: 347-359.
Wessells, N. K. 1970. Mammalian lung deve- Wilkinson, H. A., Fitzgerald, K. and Greenwald, Yamada, T., Pfaff, S. L., Edlund, T. and Jessell,
lopment: Interactions in formulation and mor- I. 1994. Reciprocal changes in expression of T. M. 1993. Control of cell pattern in the neural
phogenesis of tracheal buds. J. Exp. Zool. 175: the receptor lin-12 and its ligand lag-2 prior to tube: Motor neuron induction by diffusible
455-466. commitment in a C. elegans cell fate decision. factors from notochord and floor plate. Cell
Cell 79: 1187-1198. 73: 673-686.
Wessells, N. K. 1977. Tissue Interaction and
Development. Benjamin, Menlo Park, CA. Woolf, A. S. and eight others. 1995. Roles of Yedvobnick, B., Muskavitch, M. A. T., Wharton,
hepatocyte growth factor/scatter factor and the K. A., Halpern, M. E., Paul, E., Grimwade, B. G.
Wessells, N. K. and Cohen, J. H. 1968. Effects
Met receptor in the early development of the and Artavanis-Tsakonas, S. 1985. Molecular
of collagenase on developing epithelia in vitro:
metanephros. J. Cell Biol. 128: 171-184. genetics of Drosophila neurogenesis. Cold Spring
lung, ureteric bud and pancreas. Dev. Biol. 18:
Harbor Symp. Quant. Biol. 50: 841-854.
294-309. Wrana, J. L., Overall, C. M. and Sodek, J. 1991.
Regulation of a secreted acidic protein rich in Yochem, J., Weston, K. and Greenwald, I. 1988.
Wilkie, A. O. M, Morriss-Kay, G. M., Jones, E.
cysteine (SPARC) in human fibroblasts by The Caenorhabditis elegans lin-12 gene encodes
Y. and Heath, J. K. 1995. Functions of fibroblast
transforming growth factor-b. Eur. J. Biochem. a transmembrane protein with overall similarity
growth factors and their receptors. Curr. Biol.
197: 519-528. to Drosophila Notch. Nature 335: 547-550.
5: 500-507.
Yamada, T, Placzek, M., Tanaka, H., Dodd, J.
Wilkinson, D. G., Bhatt, S. and McMahon, A. P.
and Jessell, T. M. 1991. Control of cell pattern
1989. Expression of the FGF-related protoon-
in the developing nervous system: Polarizing
cogene int-2 suggests multiple roles in fetal de-
activity of floor plate and notochord. Cell 64:
velopment. Development 105: 131-136.
635-647.
CAPTULO 18 Desenvolvimento do Membro de Tetrpode 701
Desenvolvimento do
membro de tetrpode 18
Meus braos so mais longos do que mi- Padronizao no membro
nhas pernas.... Eu sou meu prprio escultor:
estou partindo do meu interior e me mode- PADRONIZAO um processo pelo qual as clulas embrionrias formam arranjos de
lando com materiais vivos, molhados e tecidos diferenciados, espacialmente ordenados. A possibilidade de realizao des-
maleveis: qual outro artista teve sua disse processo uma das propriedades mais dramticas do organismo em desenvolvi-
posio um desenho to perfeito como esse mento, provocando um senso de estupefao em cientistas e leigos. Como que o
disposio de meus martelos e cinzis: as embrio capaz no s de produzir os diferentes tipos de clulas do corpo, mas
clulas migram para o local exato para cons-
tambm produzi-las de maneira a formar tecidos e rgos funcionais? Uma coisa
truir um brao: a primeira vez que elas o
diferenciar os condrcitos e ostecitos que sintetizam a cartilagem e as matrizes dos
fizeram, nunca antes e nunca mais, enten-
ossos, respectivamente; outra coisa produzir essas clulas em uma orientao
dem vocs mercies benz o que eu estou
dizendo? Eu nunca serei repetido. temporal e espacial gerando um osso funcional. E ainda outra coisa produzir um
CARLOS FUENTES (1989) osso que um mero e no uma pelve ou um fmur. A habilidade das clulas dos
membros em pressentir suas posies relativas e diferenciar-se de acordo com essas
O que pode ser mais curioso do que a mo de posies tem sido o tema de intensos debate e experimentao. Como que as
um homem, formada para pegar, a de uma clulas que se diferenciam em cartilagem do osso embrionrio so especificadas de
toupeira para cavar, a perna de um cavalo, a modo a formar dedos em uma ponta e o ombro na outra? (Seria um apndice quase
nadadeira de um boto e a asa de um morce- desnecessrio se a ordem fosse inversa.) Aqui, os tipos de clulas so os mesmos,
go, todos devem ser construdos no mesmo mas os padres que os originam so diferentes.
modelo e devem incluir ossos similares na O membro dos vertebrados um rgo muito complexo com uma distribuio
mesma posio relativa? assimtrica de partes. Os ossos do membro anterior, seja uma asa, uma mo, uma
CHARLES DARWIN (1859) nadadeira ou uma barbatana, consistem de um mero proximal (adjacente parede do
corpo), um rdio e um cbito na regio mediana, e os ossos distais do pulso e dos
dedos (Figura 18.1). Originalmente, essas estruturas so cartilaginosas, mas final-
mente a maioria delas substituda por ossos. A posio de cada um dos ossos e dos
msculos no membro precisamente determinada. A polaridade tambm existe em
outras dimenses. No homem, bvio que cada mo se desenvolve como a imagem
espelhar da outra. possvel tambm a existncia de outros arranjos- como o polegar
se desenvolver no lado esquerdo de ambas as mos- mas isso no comum. Analo-
gamente, a palma (ventral) facilmente distinta do pulso (dorsal). De alguma manei-
ra, a estrutura tridimensional do membro anterior produzida rotineiramente. O pro-
blema fundamental da morfognese- como estruturas especficas se situam em luga-
res determinados- exemplificado no desenvolvimento dos membros. Como que o
mesoderma da placa lateral desenvolve capacidades formadoras de membros? Como
que dedos se formam em uma das extremidades do membro e em nenhum outro
lugar? Como que o dedo mnimo se desenvolve em uma margem do membro e o
polegar em outra?
701
Figura 18.1
Padro esqueltico da asa de pinto. De acordo com a conveno, os Rdio
dgitos so numerados II,III, IV. Dgitos I e V no so encontrados mero
em asas de pinto. (De acordo com Saunders, 1982.)
Dgitos
Metacarpos
Cbito Anterior
Proximal Distal
Posterior
As regras morfogenticas bsicas para a formao dos membros parecem ser as

mesmas para todos tetrpodes (veja Hinchliffe, 1991). Fallon e Crosby (1977) mostra-
ram que enxertos de pedaos de brotos membros de mamferos ou de rpteis podem
dirigir a formao de membros de pinto, e Sessions e colaboradores (1989) demonstra-
ram que regies dos brotos de membros de salamandra e r podem, uns aos outros,
dirigir a padronizao dos seus membros. Ainda mais, a regenerao dos membros da
salamandra parece seguir as mesmas regras do desenvolvimento (Muneoka e Bryant,
1982). Mas quais so essas regras morfogenticas?
A informao posicional necessria para construir um membro deve funcionar em
um sistema coordenado tridimensional.* Durante os ltimos cinco anos, foram
identificadas certas protenas que tm um papel na formao de cada um dos eixos do
membro. O crescimento prximo-distal (ombro-dedo; coxa-artelho) parece ser regula-
do pela famlia de protenas do fator de crescimento dos fibroblastos (FGF). O eixo
ntero-posterior (polegar-dedo mnimo) deve ser regulado pela protena Sonic hedge-
hog, e o eixo dorsoventral (n dos dedos-palma da mo) regulado, pelo menos em
parte, por Wnt7a. A interao dessas protenas determina a diferenciao dos tipos de
clulas, alm de se apoiarem mutuamente.
Formao do broto do membro

O campo do membro
Um campo morfogentico pode ser descrito como um grupo de clulas cuja posio e
destino so especificados em relao ao mesmo conjunto de limites (Weiss, 1939;
Wolpert, 1977). Um campo especfico de clulas dar origem a seu rgo particular
(membro anterior, olho, cauda, etc.) quando transplantado a uma parte diferente do
embrio, e as clulas do campo podem regular seus destinos, contornando a falta de
clulas no campo (Huxley e De Beer, 1934; Opitz, 1985; De Robertis et al., 1991). Um
dos primeiros campos a serem identificados foi o campo do membro.
As clulas mesodrmicas que originam o membro de vertebrados podem ser
identificadas por (1) remoo de certos grupos de clulas e observando se um membro
se desenvolve em sua ausncia (Detwiler, 1918; Harrison, 1918), (2) transplantando
certos grupos de clulas a novos locais e observando se elas formam um membro
(Hertwig, 1925), e (3) marcando grupos de clulas com corantes ou precursores radio-
ativos e observando quais descendentes das clulas marcadas participam no de-
senvolvimento dos membros (Rosenquist, 1971). Com esses procedimentos, a rea
prospectiva dos membros foi precisamente localizada em muitos embries de verte-
* Realmente, um sistema tetradimensional no qual o tempo o quarto eixo. Biologistas do

desenvolvimento se acostumam a ver a natureza em quatro dimenses.
brados. A Figura 18.2 mostra a rea prospectiva do membro anterior no estgio de Somitos Rim
pronfrico
broto caudal da salamandra Ambystoma maculatum. O centro desse disco normal-
mente destinado a originar o prprio membro. Adjacente a ele esto as clulas que Guelras
formaro o tecido do flanco peribraquial e a cinta do ombro. Essas duas regies
compreendem o clssico disco do membro usado em experimentos citados neste
captulo. Entretanto, se todas essas clulas so extirpadas do embrio, ainda se forma-
r um membro, ainda que mais tarde, a partir de um anel adicional de clulas que
envolve essa rea. Se esse anel de clulas for includo no tecido extirpado, no haver
desenvolvimento do membro. Essa regio maior, representando todas as clulas na Tecido do Membro Cinta do
rea capazes de formar um membro, chamada campo do membro. flanco livre ombro
O campo do membro originalmente tem a habilidade de regular a perda ou a peribraquial
adio de partes. No estgio de broto da cauda em Ambystoma, qualquer das meta- Figura 18.2
des do disco do membro capaz de regenerar o membro completo quando enxertado Campo prospectivo do membro anterior da sa-
em um novo stio (Harrison, 1918). Esse potencial tambm pode ser evidenciado lamandra Ambystoma maculatum. A rea cen-
dividindo verticalmente o disco do membro em dois ou mais segmentos e colocando tral contm aquelas clulas destinadas a formar
delgadas barreiras entre os segmentos para impedir sua reunio. Quando isso o membro propriamente dito; as clulas rode-
feito, cada parte se desenvolve em um membro completo. A habilidade reguladora do ando o membro livre so aquelas que do ori-
broto do membro foi realada recentemente em um admirvel experimento da nature- gem ao tecido do flanco peribraquial e a cinta
do ombro. As clulas fora dessas regies ge-
za. Em um pequeno lago em Santa Cruz, Califrnia, foram encontrados numerosas
ralmente no so includas nos membros, mas
salamandras e rs com vrias pernas (Figura 18.3). A presena desses apndices
podem formar um membro se os tecidos mais
extras foi relacionada infestao do abdmen das larvas por vermes trematides centrais so extirpados. (De acordo com Stocum
parasticos. Os ovos desses vermes provavelmente dividiram o broto do membro em e Fallon, 1982.)
vrios locais enquanto o girino estava iniciando a formao dessas estruturas
(Sessions e Ruth, 1990). Assim, como um embrio precoce de ourio-do-mar, o cam-
po do membro representa um sistema eqipotencial harmonioso onde a clula
pode ser instruda a formar qualquer parte do membro.
Especificao dos campos do membro:

Genes Hox e cido retinico
Os membros no se formaro simplesmente em qualquer lugar ao longo do eixo corpreo.

Ao contrrio, existem posies muito distintas onde os campos do membro so origi-
nados. Interessantemente, em todos os vertebrados existem somente quatro brotos
de membros por embrio, e eles so sempre opostos entre si em relao linha medi-
ana. Membros de diferentes vertebrados podem diferir em relao ao nvel do somito
de onde se originam, mas sua posio constante em relao ao nvel de expresso do Figura 18.3
gene Hox ao longo do eixo ntero-posterior. Por exemplo, nos peixes (onde as nada- Habilidade reguladora do campo do membro,
deiras peitorais e plvicas correspondem aos membros anteriores e posteriores, res- vista quando os campos dos membros poste-
pectivamente), anfbios, aves e mamferos, os brotos dos membros anteriores so riores precoces de um girino de Hyla regila
encontrados na regio mais anterior expressando o gene Hoxc-6, a posio da primei- foram divididos por numerosos ovos de
ra vrtebra torcica (Oliver et al., 1988; Molven et al., 1990; Burke et al., 1995). A placa trematides. (Cortesia de S. Sessions.)
mesodrmica lateral na regio dos membros tambm especial, pois induz os mioblastos
a sair dos somitos e penetrar no broto do membro. Isso no feito por nenhuma outra
regio da placa mesodrmica lateral (Hyashi e Ozawa, 1995). [limb1.html], [mesend1.html]
O cido retinico parece ser crtico para o incio do crescimento dos brotos dos
membros, pois bloqueando a sntese de cido retinico com certas drogas se impede
a iniciao do broto do membro (Stratford et al., 1996). Bryant e Gardiner (1992) suge-
rem que um gradiente de cido retinico ao longo do eixo ntero-posterior pode ativar
certos genes hometicos em clulas particulares que so, dessa forma, especificadas
para serem includas no campo do membro. A fonte de cido retinico seria o ndulo
de Hensen (Hogan et al., 1992). A especificao de um campo de membro pelos genes
Hox, ativados por cido retinico, pode explicar uma observao estranha feita por
Mohanty-Hejmadi e colaboradores (1992) e repetida por Maden (1993). Quando cau-
das de girinos foram amputadas e o coto exposto ao cido retinico durante os primei-
ros dias de regenerao, esses girinos regeneraram vrias pernas do coto de sua
cauda (Figura 18.4). possvel que o cido retinico tenha causado uma transforma-
o hometica na cauda em regenerao, reespecificando o tecido da cauda em cam-
pos de membros (Mller et al., 1996).
Crescimento do broto de membro precoce: fatores de crescimento

dos fibroblastos como indutores do broto do membro
O desenvolvimento dos membros comea quando as clulas mesenquimatosas come-

Figura 18.4
am a proliferar a partir da camada somtica do mesoderma da placa lateral do campo do
Regenerao de pernas a partir do blastema da
membro (precursores esquelticos do membro), e a partir dos somitos (precursores
cauda de um girino de r balo marmorizado
(marbled balloon). O blastema da cauda foi tra- musculares do membro) (Figura 18.5). As clulas acumulam-se sob o tecido epidrmico
tado com cido retinico aps a amputao. (de da nurula. A protuberncia circular na superfcie do embrio chamada broto do mem-
Mohanty-Hejmadi et al., 1992, cortesia de P. bro. As clulas mesenquimatosas no broto do membro se multiplicam para criar uma
Monhanty-Hejmadi.) protuberncia que vai se proliferar para formar um membro. Os estgios iniciais dessa
proliferao podem ser regulados pelo mesoderma intermedirio vizinho, tal como os
mesonefros (o rim primitivo). Se nesse estgio, o mesonefro de um dos lados do embrio
removido, ou se uma delgada membrana impermevel inserida entre o mesonefro e um
broto de membro, as clulas mesenquimatosas daquele broto de membro especfico
param de se multiplicar (Stephens et al., 1991; Geduspan e Solursh, 1992).
Experimentos recentes (Crossley et al., 1996) sugerem que a molcula proveniente
do mesoderma intermedirio o fator 8 de crescimento do fibroblasto (FGF8). No
mesnquima mesonfrico do pinto, nos estgios 14 e 15 (quando os prospectivos
brotos do membro comeam a aparecer), as regies de expresso de FGF8 nos
mesonefros coincidem com as regies onde se formaro os brotos de membro (Figura
18.6). Alm disso, os FGFs podem induzir a formao de membros. Uma partcula
embebida em FGF8 (ou FGFs relacionados) pode ser inserida na regio intramembro
(oposta aos somitos 21-25; veja Figuras 18.6 e 18.7) no estgio 15. Aps uma semana
de incubao, um membro ectpico l se forma. [limb2.html]
Induo da crista ectodrmica apical
A habilidade do FGF8 (ou outros FGFs) em induzir o crescimento mesodrmico do broto

do membro precoce pode ser somente uma atividade permissiva, e no instrutiva. A
formao do broto do membro necessita, alm de um indutor mesodrmico ativo, de um
ectoderma competente. O ectoderma competente para formar um broto de membro pare-
ce se localizar somente na borda entre as superfcies dorsal e ventral do embrio.
Mitomo
do somito
Precursor do
Medula msculo
espinhal do membro
Clulas
Notocorda mesodrmicas Broto do
membro
Prnefro
Figura 18.5
Formao do broto do membro. A proliferao Precursor
das clulas mesodrmicas da regio somtica esqueltico
do mesoderma da placa lateral causa uma pro- do membro
jeo externa do broto do membro no embrio Endoderma
de anfbio. Essas clulas do origem aos ele-
mentos esquelticos do membro. (Migrao de Mesoderma Mesoderma
clulas somticas para o broto do membro gera da placa lateral da placa lateral
a musculatura do membro.)
Enquanto o broto do membro se forma, as clulas mesodrmicas induzem o ecto- Estgios embrionrios
derma sobrejacente a formar uma estrutura chamada crista ectodrmica apical (AER;
Figura 18.8; Kieny, 1960; Saunders e Reuss, 1974). Essa crista corre ao longo da Somitos
margem distal do broto do membro e se tornar o principal centro sinalizador para o
Mesoderma
membro em desenvolvimento. Suas funes incluem (1) manter o mesoderma abaixo
intermedirio
Membro anterior
dela em uma fase plstica e proliferativa permitindo o crescimento linear (prximo-
distal) do membro; (2) manter a expresso daquelas molculas que geram o eixo ntero-
posterior (polegar-dedo mnimo); e (3) interagir com as protenas especificando os
eixos ntero-posterior e dorsoventral permitindo a cada clula receber instrues de
como se diferenciar.
A AER est localizada na juno entre o ectoderma dorsal e o ventral. No broto
do membro precoce, s o ectoderma nessa juno tem a habilidade de formar uma
AER (Goetinck, 1964; Fraser e Abbott, 1971). Nos mutantes onde o ectoderma do
Membro posterior
Expresso
broto do membro est dorsalizado (como o mutante limbless de pinto), a AER no se de FGF8
forma e o desenvolvimento do membro cessa (Carrington e Fallon, 1988). Ainda
mais, partculas embebidas com FGF no induziro uma AER quando colocadas Mesoderma
abaixo do ectoderma puramente dorsal ou ventral das costas ou do ventre. A juno segmentrio
dorsoventral parece ser crtica. Experimentos recentes (Laufer et al., 1997; Rodriguez
e Izpisa-Belmonte, 1997; Tanaka et al., 1997) demonstraram que a aposio do Figura 18.6
ectoderma dorsal e ventral do broto do membro do pinto necessria para causar a Expresso de FGF8 no mesoderma intermedi-
formao de uma AER. Quando o ectoderma dorsal do broto do membro foi enxerta- rio do embrio de pinto nos estgios 13-15.
do no ectoderma ventral de outro broto do membro, uma nova AER se formou em Diagrama esquemtico representando a meta-
adio original (Figura 18.9). Parece que no estgio 15 (justamente antes da forma- de lateral do embrio durante a induo do bro-
o do broto do membro), o ectoderma dorsal est sintetizando uma protena secretora to do membro. Os nmeros esquerda indi-
chamada Radical fringe.* Ao emergir, o broto do membro (no estgio 17) se produz cam nveis de somitos. (Os somitos so repre-
sentados como crculos se desprendendo do
*Assim chamada devido ao gene fringe de Drosophila. A procura dos homlogos do gene fringe mesoderma segmentrio, que est representa-
nos vertebrados foi motivada por estudos (a serem discutidos no prximo captulo) mostrando que do por uma barra colorida). A faixa sombreada
a formao da margem da asa na Drosophila depende da expresso marginal desse gene. Como os
indica a posio do mesoderma intermedirio;
genes hedgehog e wingless parecem ter funes na formao de membros tanto nos vertebrados
como nos insetos, vrios laboratrios procuraram os genes fringe em vertebrados para verificar se
a expresso de FGF8 nesse mesoderma inter-
haveria a criao do equivalente margem da asa, ou seja, a AER. Foi previsto que expresses medirio mostrada pelas regies mais escu-
limtrofes entre as regies dorsal e ventral seriam crticas na formao de membros vertebrados e ras na faixa. As posies dos membros
invertebrados (Bryant et al., 1981; Meinhardt, 1984; Javois e Iten, 1986), mas as molculas prospectivos, anterior e posterior foram
envolvidas s agora esto sendo identificadas. marcadas em cinza. (De acordo com Crossley
et al., 1996.)
Figura 18.7
Membro ectpico formado pela implantao de uma partcula embebida em FGF
no mesoderma entre-membros no estgio 15. Embrio tardio mostrando mem-
bro anterior, membro posterior e membro intermedirio induzido pela partcula
embebida em FGF. (Fotografia cortesia de G.R. Martin.)
uma forte demarcao entre as clulas dorsais que expressam o gene radical fringe
e as clulas do ectoderma ventral que no o expressam. Durante o crescimento do
broto, a expresso do radical fringe se restringe quase exclusivamente quelas
clulas do ectoderma dorsal na margem dorsal/ventral do broto do membro. Essas
clulas comeam a expressar Fgf8 e se tornam a AER. (Como veremos, a FGF8
secretada da AER considerada crtica por sua capacidade em manter a proliferao
do mesoderma abaixo dela e manter a expresso do gene sonic hedgehog para a
organizao do eixo ntero-posterior; veja Figura 18.10.)
A importncia da margem expressando ou no o radical fringe confirmada em
estudos onde esse gene expresso ectopicamente em retrovrus. Se as clulas ven-
trais do broto do membro so infectadas com um retrovrus expressando radical
fringe, um novo limite criado entre as clulas que expressam o gene e aquelas que
no o expressam, e uma nova AER nela originada. Inversamente, se a expresso
ectpica de radical fringe destri a fronteira entre as clulas que o expressam e as que
no o expressam, aquela regio da AER original no se forma.
A formao da AER pode envolver uma interao entre a secreo de FGFs (tal
Crista ectodrmica apical
como FGF8) pelo mesoderma e o limite de expresso de radical fringe ao longo da
Figura 18.8 borda dorsoventral do ectoderma. A secreo limitada de FGFs pode ser crtica na
Micrografia eletrnica de varredura de um bro- identificao de quais clulas, ao longo do flanco dorsoventral do embrio produzem
to de membro precoce de pinto, com sua crista os brotos do membro. Ainda no se conhece como a borda entre expresso e no
ectodrmica apical em primeiro plano. (Corte- expresso de radical fringe e os FGFs induzem a formao da AER.
sia de K. W. Tosney.)
Produo do eixo prximo-distal dos membros
Figura 18.9
Formao de uma AER ectpica quando tecido A crista ectodrmica apical: O componente ectodrmico
ventral transplantado para o tecido dorsal do
broto do membro. (A) Procedimento onde ec- O crescimento prximo-distal e a diferenciao do broto do membro possibilitado
toderma ventral de um broto do membro poste-
por uma srie de interaes entre o mesnquima do broto do membro e a AER (Figura
rior de pinto transplantado para a superfcie
dorsal de um broto do membro posterior hos- 18.11; Harrison, 1918; Saunders, 1948):
pedeiro, no mesmo estgio. (B) Aps 26 horas
de incubao se forma uma AER ectpica (a 1. Quando a AER removida em qualquer tempo durante o desenvolvimento do
AER original est indicada por uma flecha e a membro, cessa o desenvolvimento posterior de elementos esquelticos do
AER ectpica por uma cabea de flecha). (C) membro distal.
Enquanto a AER se forma, a expresso de ra-
dical fringe (cabea de flecha) no broto do
membro se torna confinada s clulas dorsais
na juno D/V que formar a AER. (de Laufer
et al., 1997; fotografias cortesia de E. Laufer.) (B) (C)
Estgio 18/19 Estgio 18/19

Broto da perna Jaqueta ectodrmica
do hospedeiro do doador
(A)
Enxerto
ectodrmico AER
Somitos
Estgio 15 Estgio 16 Estgio 17 Estgio 18 Figura 18.10

Um modelo molecular para a iniciao do bro-
to do membro. FGF8 secretado pelo meso-
AER derma intermedirio e/ou expresso de radi-
cal fringe na margem ectodrmica induz a ex-
Proliferao
Induzido Proliferao presso de FGF8 no ectoderma superficial que
Sinal mantida por
por Fgf8 mantida a recobre. A borda ntero-posterior est pre-
dependente FGF8 + FGF4
de Fgf8? por FGF8 sente no estgio 16 (e talvez antes). A secre-
Anterior o de FGF8 pelo ectoderma induz a prolife-
Posterior rao nas clulas mesenquimais e induz a ex-
shh shh mantido Fgf4
induzido
presso de Sonic hedgehog na regio posteri-
induzido por FGF8 or do broto do membro. A Sonic hedgehog
por FGF8 +FGF4 por Shh
induz a expresso de FGF4 na poro poste-
Somitos Mesoderma Mesoderma da Ectoderma rior do ectoderma do broto do membro. A
intermedirio placa lateral superficial FGF2 tambm produzida pelo ectoderma,
Fgf8 (Fator de crescimento dos fibroblastos) apesar de no estar claro se induzido pelo
FGF8 do mesoderma mesofrnico. (De acor-
shh (sonic hedgehog) do com Crossley et al., 1995.)
Fgf4 +Fgf8
2. Quando uma AER extra enxertada em um broto de membro existente, so

formadas estruturas supranumerrias, freqentemente na direo da extremi-
dade distal do membro.
3. Quando mesnquima da perna colocado diretamente abaixo da AER da asa,
se desenvolvem estruturas distais do membro posterior (artelhos) na ponta do
membro. (Entretanto, se esse mesnquima colocado mais longe da AER, o
mesnquima do membro posterior se integra s estruturas da asa.)
4. Quando mesoderma no proveniente de membros enxertado abaixo da AER,
a AER regride e o desenvolvimento do membro cessa.
AER
removida
Cessa
desenvolvimento
do membro
AER
extra
Asa
Mesoderma
do membro
anterior Perna
Asa
Mesoderma
da Perna
AER regride; cessa

desenvolvimento Figura 18.11
do membro Sumrio do efeito da crista ectodrmica apical
Mesoderma (AER) sobre o mesnquima subjacente. (Mo-
no de membro dificado de Wessells, 1977.)
Figura 18.12
Corte transversal atravs da regio distal de
um membro de pinto, 3 dias aps a retirada de
uma fatia de AER de uma rea que formaria
tecido interdigital. Em lugar de degenerar, o
tecido interdigital remanescente formou um
dgito extra. (de Hurle et al., 1989, cortesia
dos autores.)
Portanto, apesar das clulas mesenquimatosas induzirem e sustentarem a AER, e

determinarem o tipo de membro a ser formado, a AER ainda a responsvel pelo
contnuo crescimento e desenvolvimento do membro (Zwilling, 1955; Saunders et al.,
1957; Saunders, 1972; Krabbenhoft e Fallon, 1989). A AER mantm o mesnquima
diretamente subjacente em um estado de proliferao mittica e impede a formao de
cartilagem pelas clulas mesenquimatosas. Hurle e colaboradores (1989) mostraram
que pelo corte de pequena poro da AER de uma regio que normalmente cairia entre
os dgitos da perna do pinto, um dgito extra emerge naquele lugar (Figura 18.12).
Parece mesmo que uma funo da AER manter as clulas mesenquimatosas se pro-
liferando e, portanto, impedindo que formem cartilagem.
A zona progressiva: O componente mesodrmico
O eixo prximo-distal definido somente aps a induo da crista ectodrmica apical

pelo mesoderma subjacente. O broto do membro se alonga pela proliferao das clu-
las mesenquimatosas abaixo da AER. Essa regio de diviso celular chamada zona
progressiva, e se estende cerca de 200 m para dentro da AER. Considera-se que as
molculas da AER mantm as clulas mesenquimatosas da zona progressiva em divi-
so e que essas molculas responsveis so os FGFs (Savage e Fallon, 1995; Crossley
et al., 1996). Quando as clulas mesenquimatosas deixam a zona progressiva, elas se
diferenciam de maneira regionalmente especfica. As primeiras clulas deixando a zona
progressiva formam as estruturas proximais; aquelas clulas que sofreram numerosas
divises na zona progressiva se tornam as estruturas mais distais (Saunders, 1948;
Summerbell, 1974). Portanto, quando a AER removida de um broto de asa em estgio
precoce, as clulas da zona progressiva param de se diferenciar e somente um mero
se forma. Quando a AER removida um pouco mais tarde, se formam o mero, o rdio
e o cbito (Figura 18.13; Rowe et al., 1982).
A polaridade prximo-distal reside no compartimento mesodrmico do membro. Se
a AER fornece a informao posicional- de certa maneira instruindo o mesoderma
subjacente, no diferenciado, sobre quais estruturas produzir- ento as AERs mais
velhas combinadas com mesoderma mais jovem deveriam produzir membros com
delees na sua parte mediana, enquanto as AERs mais jovens combinadas com
mesoderma mais velho deveriam produzir duplicaes de estruturas. Mas no foi isso
o que se encontrou (Rubin e Saunders, 1972). Ao contrrio, se formaram membros
normais em ambos os experimentos. Mas quando a zona progressiva inteira, incluindo
o mesoderma e a AER de um embrio precoce foi colocada no broto do membro de um
embrio em estgio mais avanado, novas estruturas proximais foram produzidas alm
daquelas j presentes. Inversamente, quando zonas progressivas mais velhas so
adicionadas a brotos de membros jovens, imediatamente se desenvolveram estruturas
distais, de tal forma que se viu dgitos emergindo do mero, sem o rdio e o cbito
intermedirios (Figura 18.14; Summerbell e Lewis, 1975).
(A) (B) (C)
(D) (E)
Figura 18.13
Vista dorsal do padro esqueltico do pinto aps remoo total da AER do broto da asa direita de
embries em vrios estgios. A ltima foto (E) do esqueleto de uma asa normal. (de Iten, 1982,
cortesia de L. Iten.)
Genes Hox e a especificao do eixo prximo-distal do membro
A anlise de mutaes naturais ou experimentalmente induzidas deu origem a hiptese

de que os genes Hox 5 (Abdominal-B) especificam pores individuais do eixo pr- Figura 18.14
Controle da especificao prximo-distal por
ximo-distal do membro. As extremidades 5 da srie de genes parlogos Hoxa e Hoxd
clulas da zona progressiva (PZ). (A) Con-
(parlogos 9-13) parecem ser ativas no broto do membro anterior do camundongo. junto extra de cbito e rdio formado quando
Davis e colegas (1995) eliminaram todos os quatro locus para os genes parlogos PZ de broto precoce transplantada para o
Hoxa-11 e Hoxd-11. (No existem genes Hoxb-11 em camundongo, e Hocx-11 no broto tardio da asa que j formou o cbito e o
bem expresso no membro anterior, apesar de s-lo no membro posterior.) Os camun- rdio. (B) Falta de estruturas intermedirias
dongos resultantes no tinham o cbito e o rdio de seus membros anteriores (Figura observada quando a PZ de broto tardio trans-
18.15A,B). Com base nos padres de expresso dos genes das sries Hoxa e Hoxd, plantada para broto precoce de membro. A
onde os genes mais 5 dos conjuntos Hox so expressos mais distalmente, esses posio das dobradias indica o local dos en-
xertos. (de Summerbell e Lewis, 1975, corte-
sia de D. Summerbell.)
(A) (B)
(A) (C)
Grupos parlogos de Hox cognatos
(B) (D)
Figura 18.15
Deleo de elementos sseos do membro por deleo dos genes Hox parlogos. (A) Membro
anterior de camundongo tipo selvagem. (B) Membro anterior de camundongo produzido dupla-
mente mutante, com a falta funcional dos genes Hoxa-11 e Hoxd-11. O cbito e o rdio esto
ausentes. (C) Sinpolidactilia resultante de homozigosidade nos locos HOXD-13. (D) Hiptese
considerando que os parlogos 5 dos genes Hox poderiam especificar determinadas regies do
membro anterior. (A, B e D de acordo com Davis et al., 1995; fotografia cortesia de M. Capecchi.
C de Muragaki et al., 1996, cortesia de B. Olsen.)
pesquisadores propuseram um modelo onde os genes parlogos especificam a identi-

dade de uma regio do membro (Figura 18.15D). Esse modelo est sendo testado e faz
previses bvias em relao ao fentipo de outros camundongos com dupla ou tripla
eliminao (quando os parlogos 13 ou 12 so deletados).
Esse modelo tem suporte na anlise de duas mutaes naturais. Camundongos
homozigotos para um alelo de perda-de-funo de Hoxa-13 apresentam severa
malformao nas quatro patas, que desenvolvem somente um dgito, uma verso
malformada do dgito 4 (Mortlock et al., 1996). Homozigotos humanos para uma
mutao de perda-de-funo de Hoxd-13 mostram anormalidades nos ps e nas
mos onde ossos metacrpicos e metatrsicos so transformados em ossos crpicos
e trsicos curtos. Isso resulta na fuso dos dgitos (Figura 18.15C; Muragaki et al.,
1996). Em ambos os casos, o autpodo (a poro mais distal do membro) afetado
pela perda-de-funo do gene Hox mais 5. O mecanismo pelo qual os genes Hox
podem especificar o eixo prximo-distal ainda no est esclarecido, mas uma pista
vem da anlise do Hoxa-13 de galinha. A expresso ectpica desse gene (que
usualmente expresso nas extremidades distais dos membros em desenvolvimento
do pinto) parece tornar mais pegajosas as clulas que o expressam. Isso, por sua
vez, causaria condensao de ndulos cartilaginosos em formas especficas
(Yokouchi et al., 1995; Newman, 1996).
Interaes entre a AER e a zona progressiva
Os sinais moleculares da interao entre a AER e o mesnquima da zona progressiva

esto comeando a ser identificados. A diviso das clulas mesenquimatosas na zona
progressiva parece ser regulada pela secreo de membros da famlia FGF, tais como
FGF2 (Fallon et al., 1994), FGF4 (Niswander et al., 1993) e FGF8 (Mahmood et al., 1995;
Crossley et al., 1996; Vogel et al., 1996). Considera-se que esses fatores de crescimento
do fibroblasto so secretados da AER para o mesnquima adjacente (veja Capa; Figu-
ra 18.16). Ainda mais, se a AER removida, ela poder ser substituda pela implantao
de partculas esfricas (contas) cheias de FGF2, FGF8 ou FGF4 (Figura 18.17). Parece,
portanto, que a AER promove o crescimento pela secreo de fatores de crescimento
do fibroblasto (Crossley et al., 1996; Vogel et al., 1996). O FGF8 uma das primeiras
molculas identificadas na regio do ectoderma que se torna a AER, e sua expresso
crtica no crescimento do broto do membro (Figura 18.16).
Mutaes nas interaes entre a zona progressiva e a AER
A relao entre a AER e o mesnquima do broto do membro pode ser melhor apreciada
em mutaes no desenvolvimento de membros do pinto. A mutao polydactylous,
como o nome sugere, adiciona dgitos extras em cada membro. Recombinando tecidos
(A) (B) (C) (D)
Figura 18.16
FGF8 e morfognese de membros. (A) Hibridizao in situ mostrando expresso da mensagem
de Fgf8 no ectoderma enquanto o broto do membro comea a se formar. (B) Expresso do RNA
Fgf8 na crista ectodrmica apical, a fonte de sinais mitticos para o mesoderma subjacente. (C)
Em embries normais de pinto (estgio 17; cerca de 24 horas), FGF8 expresso na crista
ectodrmica apical de ambos os brotos do membro, anteriores e posteriores. tambm expresso
em vrios outros lugares no embrio. (D) No mutante limbless de galinha, FGF8 no expresso
nos brotos do membro, apesar de no estar perdido em outras regies do embrio. Aqui, os
brotos do membro se formam mas no se desenvolvem em membros (A e B cortezia de J. C.
Izpisa Belmonte; C e D cortesia de A. Lpez-Martnez e J. F. Fallon.)
(A)
Remover 20 horas
AER
Forma o mero
Sem
AER
(B)
Adicionar
Remover partcula com
AER soluo salina 20 horas
Forma o
mero
Partcula
(C)
Remover Adicionar partcula 20 horas mero

AER contendo FGF2 Rdio
Cbito
Partcula
Dgitos
(D)
mero
Rdio
Cbito
Remover Adicionar partcula 24 horas 20 horas
AER contendo FGF2
Implantar
segunda
partcula
contendo
FGF2 Carpos
Segunda
partcula
Figura 18.17
Habilidade de FGF2 para substituir a crista ectodrmica apical no broto do membro anterior em
desenvolvimento do pinto. (A) Quando a AER removida dos brotos da asa do pinto no estgio
20, somente se forma o mero. (B) Se uma partcula gelatinosa de lenta liberao embebida em
soluo salina colocada no mesnquima da zona progressiva, o membro ainda fica truncado e
forma somente o mero. (C) Quando um broto embebido em FGF2 colocado na zona progres-
siva o crescimento do broto do membro continua, e o cbito e o rdio so formados. (D) Se uma
segunda partcula contendo FGF2 colocada na zona progressiva aps a dissipao da maioria
do FGF2 da primeira partcula, o broto do membro continua a crescer e a produzir metacarpos e
dgitos. (De acordo com Fallon et al., 1994.)
Tabela 18.1 Mutaes que afetam as interaes recprocas entre a AER e seu
mesnquima subjacentea
Mesoderma Epiderme Resultado Concluso
POLIDCTILO
Polidctilo Tipo selvagem Polidctilo Mesoderma afetado
Tipo selvagem Polidctilo Tipo selvagem pela mutao
EUDIPLOPODIA
Eudiplopodia Tipo selvagem Tipo selvagem Ectoderma afetado
Tipo selvagem Eudiplopodia Eudiplopodia pela mutao
LIMBLESS
Limbless Tipo selvagem Tipo selvagem Ectoderma
Tipo selvagem Limbless Limbless afetado pela mutao
aPor transplante recproco entre o tipo selvagem e AER mutante e mesnquima, o comparti-
mento aberrante da induo pode ser identificado.
mutantes e do tipo selvagem (Tabela 18.1), os defeitos podem ser traados para as
clulas mesodrmicas que induzem amplamente uma AER. No mutante eudiplopodia
(Grego, dois bons ps), alm dos dgitos extras aparecem duas seqncias comple-
tas de dedos em cada membro posterior (Figura 18.18). Experimentos semelhantes com
reconstituio mostram que aqui o defeito est no tecido ectodrmico. Embries de
pintos homozigotos para a mutao limbless iniciam a formao do broto do membro,
mas a AER no se forma. Experimentos de recombinao mostram que o ectoderma de
limbless incapaz de formar uma AER, mesmo quando colocado no mesoderma de
membro do tipo selvagem; uma crista normal pode ser formada quando ectoderma
normal enxertado no campo do membro em lugar do ectoderma mutante (Figura
18.19; Carrington e Fallon, 1988).
Alm disso, existem vertebrados naturalmente sem membros, cuja falta de mem-
bros pode ser relacionada s deficincias na interao AER-mesnquima. A praga
contra cobras no Livro do Gnesis parece ter sido dirigida extremidade distal do
broto do membro, pois a AER desses rpteis degenera-se prematuramente e ao mesmo
tempo em que ocorre a morte celular no mesnquima adjacente (Lande, 1978). No se
sabe se o defeito inicial est no mesnquima ou na AER. [limb3.html]
(A) (B)
Figura 18.18
Seces transversais dos brotos dos mem-
bros posteriores em eudiplopodia de em-
bries de pinto. (A) Duas AERs no broto do
membro posterior; crescimento extra no lado
dorsal formar um conjunto extra de dedos.
(B) Ambas as regies de crescimento esto
cobertas por uma AER. Recentemente foi
demonstrado (Laufer et al., 1997) que duas
reas de radical fringe aparecem no broto do
membro desse mutante, e cada uma se asso-
cia com a nova AER. (De Goetinck,1964,
cortesia de P. Goetinck.)
Figura 18.19
O embrio limbless no forma AER, e o defeito parece residir no ectoder-
ma. Se o ectoderma de codorna do tipo selvagem substitui o ectoderma
mutante do pinto na regio que forma o membro anterior, a asa se desen-
volver naquele lado do embrio. No se forma outro membro. (De acordo
com Carrington e Fallon, 1988; fotografia cortesia de J. Fallon.)
& Especulaes
A regenerao dos membros da salamandra e a

reteno do eixo prximo-distal
F REQENTEMENTE TIL en-

contrar modelos adultos de desen-
volvimento embrionrio. Durante
dois sculos, a regenerao do membro
o (veja Chernoff e Stocum, 1995). Duran-
te os prximos 4 dias as clulas abaixo do
hemisfrio em desenvolvimento sofrem uma
dramtica desdiferenciao: clulas sseas,
de anfbios foi no somente uma das mais clulas da cartilagem, fibroblastos, micitos
extraordinrias demonstraes de regula- e clulas neurais perdem suas caractersti-
o, mas tambm um modelo para o de- cas diferenciadas e se destacam umas das
senvolvimento do membro tetrpode nos outras. Genes expressos em tecidos dife-
vertebrados. Quando um membro da sa- renciados (como os genes MRF4 e Myf5
lamandra amputado, as clulas remanes- expressos em clulas musculares) so repri-
centes so capazes de reconstruir um midos, enquanto h um dramtico aumento
membro completo com todas suas clulas na expresso de genes, tal como msx1, que
diferenciadas organizadas de maneira cor- so associados com o mesnquima da zona
reta. extraordinrio que no s o mem- progressiva em proliferao (Simon et al.,
bro tenha sido regenerado, mas tambm 1995). Portanto, a bem estruturada regio
que as clulas que ficaram mantiveram a do membro, na face cortada do toco, forma
informao especificando sua prpria uma massa proliferante de clulas indistin-
posio como tambm a das clulas re- tas e desdiferenciadas, logo abaixo do he-
movidas. Em outras palavras, as novas misfrio ectodrmico apical. Essa massa de
Figura 18.20
clulas constroem somente as estruturas clulas desdiferenciadas chamada de
Regenerao do membro anterior da salaman-
perdidas e nada mais; por exemplo, quan- dra. Na esquerda, a amputao foi feita abaixo
blastema de regenerao, e essas clulas
do um punho amputado, a salamandra do ombro; a amputao mostrada direita cor- continuaro a se proliferar e se diferenciar
forma um novo punho e no um novo tou atravs do mero. Em ambos os casos, a para formar as novas estruturas do mem-
cotovelo (Figura 18.20). De certa maneira, informao posicional correta foi reespecificada. bro. Se as clulas do blastema forem
o membro da salamandra sabe onde o (de Goss, 1969, cortesia de R. J. Goss) destrudas, a regenerao no se dar
eixo prximodistal foi cortado e pode (Butler, 1935). Ainda mais, uma vez que as
regener-lo daquele ponto em diante. Os- migram para cobrir a superfcie do ferimento, clulas se desdiferenciaram para formar um
car Schott disse que daria seu brao di- formando a epiderme do ferimento. Essa blastema, elas recuperaram sua plasticida-
reito para conhecer o segredo da regene- estrutura em monocamada necessria para de embrionria.
rao do membro (em Goss, 1991). a regenerao do membro. Ela se prolifera Na maioria dos casos, entretanto, o te-
Ao se amputar um membro, forma-se um para formar o hemisfrio ectodrmico apical. cido neural essencial para a formao do
cogulo de plasma; e dentro de 6-12 horas, A inervao do membro se degenera em uma novo membro pelas outras clulas. Singer
clulas epidrmicas do coto remanescente, curta distncia a partir do plano de amputa- (1954) demonstrou que um nmero mnimo
em todas as clulas em diviso (pois a 1982). Um membro completo (comeando

redutase ribonucleotdica, a enzima limitando osso mais proximal) se desenvolve a
te da velocidade na sntese de DNA, repartir do coto do membro, independente-
quer um on frrico no seu stio ativo). mente do nvel original da amputao.
Quando so removidos os membros pos- possvel que o cido retinico cause a re-
teriores, o nervo citico transporta a especificao das clulas para a posio
transferrina pelo axnio e libera grandes mais proximal (Figura 18.22; Prancha 9;
quantidades dessa protena no blastema Crawford e Stocum, 1988b).
(Munaim e Mescher, 1986; Mescher, 1992). O cido retinico sintetizado na
Tanto extratos neurais como transferrina epiderme do ferimento do membro em re-
so capazes de estimular a diviso celular generao, formando um gradiente ao lon-
(A)
em membros enervados, e a quelao dos go do eixo prximo-distal do blastema
ons frricos nos extratos neurais impede (Brockes, 1992; Scadding e Maden, 1994).
sua atividade mittica (Munaim e Mescher, Esse gradiente de cido retinico pode
1986; Albert e Boilly, 1988). Um terceiro ativar os genes diferencialmente em regi-
candidato o FGF2. Mullen e colaborado- es diferentes do blastema. Um dos genes
res (1996) mostraram que o hemisfrio ec- responsivos ao cido retinico o msx1
todrmico apical transcreve grandes quan- que associado proliferao do mesn-
tidades de Dlx3, um homlogo anfbio de quima (Shen et al., 1994; Viviano et al.,
Distal-less de Drosophila. Durante os es- 1995). Outro conjunto de genes que po-
tgios de regenerao dependentes de dem ser reespecificados pelo cido reti-
neurnios, a expresso ectodrmica de Dlx3 nico so os genes HoxA. Gardiner e co-
dependente da inervao. Existe uma laboradores (1995) mostraram que o pa-
correlao entre a presena de Dlx3 e uma dro da expresso de certos genes HoxA
(B)
epiderme permissiva de crescimento. Nos nas clulas distais do blastema em rege-
Figura 18.21
estgios tardios da regenerao, a expres- nerao modificado pelo cido retini-
Efeitos da vitamina A (um retinide) em mem-
so de Dlx3 no depende dos neurnios. co exgeno para um padro de expresso
bros de salamandra em regenerao. (A) Mem-
bro normal regenerado de axolotle (9x) com Se membros amputados so enervados em caracterstico de clulas mais proximais.
mero, rdio e cbito pareados, carpos e dgi- um estgio dependente de neurnios, a provvel que durante a regenerao nor-
tos. A linha pontilhada mostra o plano de am- expresso de Dlx3 e a regenerao podem mal, a epiderme do ferimento/hemisfrio
putao. (B) Regenerao aps a amputao ser mantidas por partculas contendo FGF2 ectodrmico apical secrete cido retini-
atravs da rea do corpo, mas aps a colocao (Mullen et al., 1996). co que ativa os genes necessrios para a
do blastema do membro em palmitato de retinol O cido retinico parece ter uma fun- proliferao celular, reprima os genes es-
por 15 dias. Aparecem um novo mero, cbito, o importante tanto na desdiferenciao pecficos para clulas diferenciadas e, fi-
rdio, conjunto de carpos e conjunto de dgitos das clulas para formar o blastema de re- nalmente, ative um conjunto de genes Hox
(5x). (de Maden et al., 1982; fotografias corte- generao como no processo de reespeci- que orientam as clulas quanto ao lugar
sia de M. Maden.) ficao quando as clulas rediferenciam. onde esto e quanto devem crescer. O me-
Se os blastemas de membros de salaman- canismo pelo qual isso realizado pelos
de fibras nervosas devem estar presentes dra em regenerao so mergulhados em genes Hox no conhecido, mas foram
para que se d a regenerao. Considera- solues com concentraes adequadas verificadas variaes tanto na adeso c-
se que os neurnios liberam um fator esti- de cido retinico (ou outros retinides), lula-clula como em outras qualidades de
mulante de mitose que aumenta a prolife- os membros em regenerao tm duplica- superfcie das clulas (Nardi e Stocum,
rao das clulas do blastema (Singer e es ao longo do eixo prximo-distal (Fi- 1983; Stocum e Crawford, 1987; Bryant e
Caston, 1972; Mescher e Tassava, 1975). gura 18.21; Niazi e Saxena, 1978; Maden Gardiner, 1992).
Aps uma fase inicial dependente de neu-
Soluo Soluo de
rnios, a regenerao pode prosseguir sem cido retinico
controle
estimulao neural. Um candidato para essa
substncia neural crucial o fator de cres-
cimento da glia (GGF). Sabe-se que esse
peptdeo produzido pelas clulas neurais Blastema forma Colocar blastema BLASTEMA Colocar blastema de Proximalizao
da salamandra aqutica, est presente no punho e dgitos de punho doador na de punho punho doador na regio do dos destinos
blastema e perdido na enervao. Quan- regio do ombro doador ombro do membro do blastema
do membro cortado cortado do hospedeiro
do o GGF adicionado ao blastema do hospedeiro
enervado, as clulas mitoticamente repri-
Figura 18.22 - Blastemas de punho de membros de axolotle recentemente cortados regeneram
midas so aptas a dividir-se novamente
o punho quando colocados em membros hospedeiros cortados na rea do ombro (Veja Captulo
(Brockes e Kinter, 1986). Outro candidato 3). Entretanto, se forem colocados em soluo de cido retinico, esses blastemas comearo a se
a transferrina, uma protena transporta- regenerar no local onde foram colocados no tecido hospedeiro, e geram estruturas proximais
dora de ferro que necessria para a mitose quelas do punho. (Dados de Crawford e Stocum, 1998a,b.)
Assim, estamos frente a uma situao contendo um mero, que no deve pro-
onde as clulas adultas de um organismo duzir outro mero e nem comear imedia-
podem retornar a uma condio embrio- tamente a produzir dgitos. No somente
nria e comeam novamente a formao o blastema regenera essas estruturas co-
de um membro. Exatamente como no de- meando no nvel prximo-distal apropri-
senvolvimento embrionrio, o blastema ado no membro, como tambm as polari-
forma sucessivamente estruturas mais dades dos eixos ntero-posterior (pole-
distais (Rose, 1962). Portanto, o blastema gar-dedo mnimo) e dorsoventral (punho-
deve conter alguma informao posicio- palma da mo) tambm correspondem
nal que informa ao blastema de um coto quelas do coto.
Especificao do eixo ntero-posterior dos membros

A zona de atividade polarizante
Uma autodiferenciao do eixo ntero-posterior a primeira modificao da condio

pluripotente. Em pintos, esse eixo especificado muito antes que o broto do membro
seja reconhecvel. Hamburger (1938) mostrou que j no estgio precoce de 16 somitos,
o mesoderma prospectivo da asa transplantada para a rea do flanco se desenvolve
em um membro com as polaridades ntero-posterior e dorsoventral do enxerto doado
e no daquelas do tecido hospedeiro (Figura 18.23).
Anterior
Dorsal Ventral Desenvolvimento

normal dos brotos
do membro nas asas
Posterior
Brotos enxertados
diferem do hospedeiro
no eixo dorsoventral
Relacionamento
de eixos entre Brotos enxertados
enxerto diferem do
(sombreado) hospedeiro no eixo
e hospedeiro ntero-posterior
Figura 18.23
Especificao dos eixos ntero-posterior e
dorsoventral na asa do pinto. O broto do mem-
bro enxertado se desenvolve de acordo com
sua prpria polaridade e no adota a polarida-
de do seu hospedeiro. As asas que se desen- Brotos enxertados
volvem dos brotos do membro enxertados diferem do
esto coloridas. Para maior clareza, as asas hospedeiro nos
que o hospedeiro normalmente desenvolve eixos ntero-posterior
e dorsoventral
no esto apresentadas. (De acordo com
Hamburger, 1938.)
Estgio 17
Figura 18.24
Dgitos duplicados aparecem como imagem espelhar de dgitos normais quando Estgio 19
ZPA enxertada no mesoderma do broto do membro anterior. (de Honig e
Smmerbell, 1985, fotografia cortesia de D. Summerbell.)
Considera-se que a diferenciao das estruturas prximo-distais depende do n-

mero de divises realizadas pela clula enquanto na zona progressiva, mas a informa-
o posicional instruindo a clula quanto sua posio nos eixos ntero-posterior e
dorsoventral deve vir de outras fontes. Vrios experimentos (Saunders e Gasseling, Estgio 21
1968; Tickle et al.,1975; Summerbell, 1979) sugerem que o eixo ntero-posterior espe-
cificado por um pequeno bloco de tecido mesodrmico perto da juno posterior do
jovem broto do membro com a parede do corpo. Quando esse tecido de um jovem
broto de membro transplantado para uma posio no lado anterior de outro broto de
membro (Figura 18.24), o nmero de dgitos na asa resultante duplicado. Alm disso
as estruturas do conjunto extra de dgitos a imagem espelhar daquelas estruturas
normalmente produzidas. A polaridade foi mantida, mas agora a informao vem ao
mesmo tempo das direes anterior e posterior. Essa regio do mesoderma chamada Estgio 23
de zona de atividade polarizante (ZPA).
A distribuio e a fora da atividade de sinalizao posicional da ZPA na asa do
pinto e brotos da perna foram mapeados (Hinchliffe e Sansom, 1985; Honig e
Summerbell, 1985). Como indicado nos desenhos da Figura 18.25, a atividade polarizante
(medida aps o enxerto das clulas marginais posteriores na margem anterior do broto
do membro) maior em uma regio determinada da margem posterior e de l vai dimi-
nuindo. A atividade enfraquece enquanto progride o desenvolvimento.
Sonic hedgehog como definidor da ZPA

ZPA Estgio 25
A procura de molcula(s) conferindo atividade polarizante ao broto do membro do

pinto se tornou uma das mais intensas buscas da biologia do desenvolvimento. Os
candidatos atuais a fatores da ZPA foram identificados a partir de estudos que assu-
miram uma homologia evolucionria dos sistemas reguladores do desenvolvimento
entre a Drosophila e os vertebrados. Como deve ser lembrado do Captulo 16, os Estgio 27
genes hometicos da Drosophila tm contrapartidas nos vertebrados os quais tm
Figura 18.25
Mapa da atividade sinalizadora de posio enquanto o membro se desenvolve. As cores represen-
tam a intensidade de expresso de sonic hedgehog. Os nmeros representam a porcentagem de
enxertos mostrando duplicaes completas quando essas regies foram transplantadas para a
margem anterior do broto do membro precoce. (Desenhos de acordo com Honig e Summerbell,
1985, dados de expresso de Riddle et al., 1993.) Estgio 29
Transfectar vrus expressando shh e Figura 18.26

permitir que o vrus se espalhe Ensaio para a atividade polarizante de Sonic hedgehog. O gene sonic hedgehog foi inserido no
promotor ativo de um vrus de pinto, e o vrus recombinante colocado em clulas fibroblsticas
cultivadas de embrio de pinto. As clulas infectadas pelo vrus foram compactadas e implantadas
na margem anterior do broto do membro de um embrio de pinto resistente infeco por esse
vrus. O vrus no podia infectar o hospedeiro, mas podia expressar e secretar altos nveis de
Sonic hedgehog. Os membros resultantes mostraram que o material secretado tinha atividade
Cepa infectvel de polarizante. (De acordo com Riddle et al., 1993.)
clulas fibroblsticas
do embrio de pinto
Clulas compactadas
por centrifugao
funes desenvolvimentais crticas. E como foi mencionado no Captulo 14, o gene
hedgehog responsvel pela polaridade de segmentos parece codificar uma protena
difusvel que interage com as clulas vizinhas. Seria muito perguntar se existe um
homlogo nos vertebrados que realiza uma funo semelhante?
Usando a seqncia conhecida do gene hedgehog em Drosophila, Riddle e
seus colaboradores (1993), usaram a reao da cadeia de polimerase para identifi-
car uma mensagem semelhante a hedgehog em brotos de membros de pinto. Eles
nomearam o gene como sonic hedgehog*. Hibridizao in situ mostrou que a
expresso de sonic hedgehog no se d no broto do membro inteiro, mas locali-
Implante na poro anterior do broto do zada exatamente na regio que, segundo Honig e Summerbell, contm a maior
membro (Embrio no estgio 19-23)
atividade de ZPA (Figura 18.25).
Riddle e colaboradores mostraram que a secreo da protena Sonic hedgehog
Anterior poderia ser suficiente para a atividade de ZPA. Eles transfectaram fibroblastos embri-
Plete de onrios de pinto (que normalmente nunca sintetizariam essa protena) com um vetor
Cepa resistente clulas viral contendo o gene sonic hedgehog (Figura 18.26). O gene foi expresso e traduzido
do embrio secretando nesses fibroblastos, os quais foram inseridos em uma crista anterior de um broto de
hospedeiro Shh membro precoce do pinto. Foi demonstrada tambm a reverso de polaridade dos
dgitos, de maneira semelhante ZPA. Mais recentemente, partculas contendo a
Posterior protena Sonic hedgehog provocaram as mesmas duplicaes (Lpez-Martinez et al.,
1995). Portanto, a Sonic hedgehog parece ser o agente ativo da ZPA.
Interaes entre a AER e a ZPA para integrar crescimento e padro

ZPA
Como Sonic hedgehog determina o padro ntero-posterior do membro? Pesquisas

recentes indicam que a protena no age sozinha e que a cooperao com sinais da
AER crtica para sua funo. Essas interaes podem estabelecer padres de expres-
so do gene Hox que especificariam o eixo ntero-posterior.
SONIC HEDGEHOG COMO INICIADOR DE SECREO DE MORFGENOS. Ain-

da no se sabe como a ZPA especifica o eixo ntero-posterior. Um modelo sugere que
sinais de curto alcance especificam as clulas que produziro os dgitos e que essas
clulas migram atravs do broto do membro (Figura 18.27A). Entretanto, essa migra-
o no foi observada. Isso conduz a dois outros modelos. No modelo da cascata
indutiva (Figura 18.27B), uma progresso de sinais de curto alcance sucessivamente
propagada da ZPA para os tecidos responsivos. Portanto, Sonic hedgehog no se
difunde atravs do broto do membro em um gradiente suavemente decrescente. Em
lugar disso, Sonic hedgehog se difunde a uma curta distncia e induz as clulas
*Sim, como o personagem do desenho Sega. O gene hedgehog em Drosophila, como na

maioria dos genes, tem o nome do seu fentipo mutante. (Isso causa muita confuso. Os genes
para falta de olhos ou de membros so na verdade aqueles genes cujos produtos impedem essas
deficincias.) Em Drosophila, a deficincia da expresso do hedgehog resulta em uma cutcula
tendo mais dentculos pontiagudos, portanto, parecendo um hedgehog (porco-espinho).
(A) Sinalizao de curto alcance e deslocamento (B) Sinalizao seqncial de curto alcance
Difuso de
curto alcance
(C) Espalhamento progressivo de um sinal graduado e promoo em uma via
Difuso de alcance
mais longo com o
passar do tempo
Figura 18.27
Modelos de atividade da ZPA. (A) Modelo de funo da ZPA por sinalizao de curto alcance e
subseqente deslocamento do tecido especificado. (B) Modelo de funo da ZPA por sinais
seqenciais de curto alcance. (C) Modelo de funo de ZPA por espalhamento progressivo de um
sinal graduado, onde o tecido responsivo responde a gradiente de concentrao. (De acordo com
Tickle, 1995.)
responsivas a secretar outra protena. Essa segunda protena se difunde tambm em

uma curta distncia para ativar as clulas na sua vizinhana e essas clulas secretam
uma terceira protena, e assim por diante. Dessa maneira, uma srie de sinais enviada
da fonte de Sonic hedgehog em direo parte anterior do broto do membro (veja
Lpez-Martnez et al., 1995). O terceiro modelo chamado de modelo do morfgeno
solvel (Figura 18.27C; Wolpert, 1969, 1977; Tickle, 1981) onde o tecido responde de
maneira diferente a diferentes concentraes de molculas solveis secretadas pela
ZPA. Inicialmente, o tecido mais perto da ZPA recebe baixas concentraes do
morfgeno e especificado para ser o dgito mais distal. Entretanto, ao continuar a
secreo, aquele tecido exposto a uma maior concentrao e reespecificado como
um dgito mais proximal (posterior). A prxima regio de clulas, ligeiramente mais
afastada da ZPA, recebe uma baixa concentrao do morfgeno e se torna especificada
para estruturas mais distais (anteriores). Isso continua at que todos os dgitos so
especificados atravs do broto do membro.
Nenhum dos dois ltimos modelos foi excludo, mas existe evidncia que mesmo
que a Sonic hedgehog defina ou energiza a ZPA, a protena no o morfgeno
solvel responsvel pela especificao dos dgitos. Deve existir uma cascata de sinais
indutivos. Foi demonstrado que a parte ativa da protena Sonic hedgehog a sua
regio N-terminal, que cindida do resto da protena em membros do pinto. Essa
extremidade ativa pode se difundir da clula, mas essa difuso no vai muito longe de
sua fonte no broto do membro posterior (Lpez-Martnez et al., 1995). Quando ela se
FGF4
cido
retinico Manter proliferao na
zona progressiva; Desenvolvimento
ativar a expresso do esqueltico posterior
gene HoxD
Wnt7a
Sonic
hedgehog
Figura 18.28
Algumas interaes moleculares pelas quais
o broto do membro iniciado e mantido. Pa-
dro de expresso dinmica do gene HoxD difunde, parece ativar protenas morfogenticas do osso, especialmente a BMP2 (Francis
durante uma parte da morfognese da asa do et al., 1994; Laufer et al., 1994). Essas protenas tambm no se difundem para muito
pinto. Algumas das principais ligaes inclu- longe, e pesquisadores esto a procura de outras molculas que podem ser ativadas
em (1) a manuteno de Sonic hedgehog (Shh) pelas protenas morfogenticas do osso.
pela combinao de Wnt7a e FGF4; (2) a
manuteno de Shh pela combinao de cido SONIC HEDGEHOG COMO CO-ATIVADOR DE GENES HOX E PROLIFERAO
retinico e FGF4; (3) a induo recproca de CELULAR. Alm da ativao dos genes para as protenas morfogenticas do osso
FGF4 e Shh para a manuteno de cada um;
(especialmente a BMP2), existem outros dois importantes alvos para Sonic hedgehog.
(4) a interao entre FGF4 e Shh para ativar a
expresso dos genes HoxD e para manter a O primeiro conjunto de alvos podem ser os genes Hoxd 5 (Figura 18.28; Hoxd-9 a
diviso celular no mesnquima da zona pro- Hoxd-13). Durante o desenvolvimento normal dos membros de pinto ou camundon-
gressiva. (De acordo com Nelson et al., 1996; go, desenvolve-se um padro caracterstico de expresso de genes Hoxd concentri-
Niswander et al., 1994.) camente aninhados e centrados na margem posterior que tinha sido definida como a
ZPA (Doll et al., 1989; Nelson et al., 1996). A regio mais prxima do centro tem todos
esses genes Hoxd 5 expressos, mas a expresso desses genes cai seqencialmente
medida que as clulas esto progressivamente mais afastadas da ZPA. Alm disso, o
transplante de ZPA ou de clulas secretoras de Sonic hedgehog para a margem ante-
rior leva formao de padres de imagens espelhares na expresso dos genes Hoxd
e padres de imagens espelhares de dgitos (Izpisa-Belmonte et al., 1991; Nohno et
al., 1991; Riddle et al., 1993).
Originalmente parecia haver um cdigo pelo qual a expresso dos diferentes genes
HoxD especificaria o padro ntero-posterior dos dgitos, mas estudos recentes mos-
tram que o problema mais complexo. Sonic hedgehog pode estar agindo em conjun-
o com sinais da AER na especificao de padres. Primeiro, a expresso de genes
Hoxd controlada pela cooperao de AER e ZPA. Na ausncia de uma AER, a Sonic
hedgehog incapaz de induzir a expresso de genes Hoxd (Laufer et al., 1994). Entre-
tanto, a adio de cido retinico pode substituir a falta de AER (Helms et al., 1996;
Ogura et al., 1996).* H muito tempo se sabe que o cido retinico induz polarizao de
membros. Partculas embebidas em cido retinico podem mimetizar o tecido ZPA, e
induzir uma reverso da imagem espelhar na polaridade ntero-posterior (Tickle et al.,
1982, 1985), e uma nica partcula embebida com cido retinico pode substituir uma
ZPA quando o tecido ZPA normal foi removido (Eichele, 1989). Entretanto, o contedo
de cido retinico na ZPA no parece suficientemente alto para ativar genes
responsivos ao cido (Prancha 13; Noji et al., 1991; Rossant et al., 1991), e considera-
es tericas (veja Wanek et al., 1991) indicam que pouco provvel que o cido
retinico seja o agente ativo da ZPA. De outro lado, estudos recentes sugerem que o
O cido retinico morfogeneticamente ativo no broto do membro pode diferir de acordo com
a espcie. No membro do pinto, o cido retinico ativo parece ser o cido didehidroretinico.
Entretanto, essa forma no encontrada no broto do membro de camundongo (Stratford et al.,
1996).
cido retinico induz um co-fator de Sonic hedgehog. Enquanto Sonic hedgehog

sozinha poderia induzir Hoxd-9 at Hoxd-11, a induo dos genes mais 5 Hoxd,
Hoxd-12 e Hoxd-13, somente pode ser realizada na presena de cido retinico (Ogura
et al., 1996). Experimentos com enxertos mostram que esses fatores induzidos pelo
cido retinico so produzidos na AER (Helms et al.,1996).
Um candidato para fator induzido por cido retinico o FGF4. O cido retinico
induz a expresso de Fgf4 na AER, e o faz independentemente da Sonic hedgehog
detectvel (Niswander et al., 1994). Ainda mais, quando uma partcula contendo FGF4
substitui a AER, a expresso dos genes HoxD promovida (Laufer et al., 1994). Duprez
e colegas (1996) verificaram que o cido retinico induz a BMP2 e essa, por sua vez,
induz tanto o FGF4 na AER como a expresso de Hoxd11 e 13 no mesoderma. Portan-
to, a induo normal dos genes mais 5 Hox (que no pode ser feita por Shh sozinha)
feita por uma combinao de BMP2 e FGF4.
Isso cria uma situao interessante porque Sonic hedgehog e FGF4 se ativam
mutuamente. A Sonic hedgehog ativa a expresso do gene Fgf4 na regio posterior da
AER (veja Figura 18.9), enquanto a expresso de Fgf4 necessria para a expresso
normal do gene sonic hedgehog. (Tal relao foi sugerida pelos estudos de Todt e
Fallon, 1987, mostrando que a AER era necessria para a funo da ZPA). Existe,
ento, uma ala de retroativao positiva onde a Sonic hedgehog do mesoderma
posterior ativa o Fgf4 na AER, e o FGF4 (provavelmente em conjunto com o FGF8) da
AER mantm a expresso de sonic hedgehog (veja Figura 18.28; Laufer et al., 1994;
Niswander et al., 1994).
Especificando a ZPA
ZPA
Ainda no sabemos o que causa a ativao dos genes sonic hedgehog, especifica-
mente nas clulas do broto do membro posterior e no nas clulas mais anteriores.
possvel que o gene sonic hedgehog esteja sendo ativado por uma protena FGF
oriunda da crista ectodrmica apical, recentemente formada, e FGF8 estando presente
na AER capaz de ativar sonic hedgehog. Mas por que no h ativao de todas as
clulas mesenquimatosas abaixo da crista? A resposta pode estar na diferente compe-
tncia de certas clulas mesenquimatosas em responder ao sinal de FGF. Charit e
colegas (1994) sugeriram que a protena Hoxb-8 pode ser crtica no fornecimento
dessa competncia restrita. Eles observaram que o gene Hoxb-8 era geralmente ex-
presso na metade posterior do broto do membro anterior do camundongo. Ento, eles
produziram camundongos transgnicos nos quais o gene Hoxb-8 estava sob o con-
trole de um novo promotor que causava sua expresso em todos os brotos de mem-
bros anteriores. Isso resultou na expresso de sonic hedgehog na poro anterior dos
brotos dos membros, a criao de uma nova ZPA, uma nova regio de expresso de
genes HoxD e duplicaes de membros anteriores como imagens espelhares. Essa
evidncia sugere que a protena Hoxb-8 est envolvida na especificao da expresso
de sonic hedgehog e portanto no estabelecimento da ZPA.
A produo do eixo dorsoventral

O terceiro eixo do membro define sua parte dorsal (ns dos dedos, unhas) e sua
parte ventral (palmas e solas). Em 1974, MacCabe e colaboradores demonstraram que
a polaridade dorsoventral do broto do membro determinada pelo seu envolvimento
pelo ectoderma. Se o ectoderma gira 180o em relao ao mesnquima do broto do
membro, o eixo dorsoventral parcialmente revertido; os elementos distais (dgitos)
esto de cabea para baixo. Isso sugeriu que a especificao tardia do eixo dorso-
ventral do membro regulada pelo seu componente ectodrmico. O gene Wnt7a
expresso no ectoderma dorsal (mas no no ventral) dos brotos de membros do pinto e
do camundongo (Deally, 1993; Parr et al., 1993). In 1995, Parr e MacMahon deletaram
geneticamente o Wnt7a do embrio do camundongo. Os embries resultantes tinham
(A) (B)
Figura 18.29
Transformaes dorsal-para-ventral de regies do membro em camundongos deficientes de
ambos os genes Wnt7a. (A) Seco histolgica (corada com hematoxilina e eosina) da pata do
membro anterior em embrio de camundongo de 15.5 dias. Os tendes ventrais e as almofadas
ventrais dos ps so facilmente vistas. (B) A mesma seo atravs de um embrio mutante
deficiente em Wnt7a. Tendes e almofadas dos ps esto agora duplicados no que seria a face
dorsal da pata. dt, tendes dorsais; dp almofada dorsal do p; vp, almofada ventral do p; vt,
tendo ventral. Os nmeros indicam identidade dos dgitos. (de Parr e McMahon, 1995;
fotografias cortesia dos autores.)
solas em ambas as superfcies de suas patas, mostrando que a Wnt7a era necessria
para a padronizao dorsal do membro (Figura 18.29). A Wnt7a induz o gene Lmx1 no
mesnquima dorsal, e esse gene codifica um fator de transcrio que parece ser essen-
cial para a especificao do destino das clulas dorsais no membro (Riddle et al., 1995;
Vogel et al., 1995). Se esse fator expresso nas clulas do mesnquima ventral, elas
desenvolvem um fentipo dorsal.
Os camundongos deficientes em Wnt7a tambm no tinham dgitos posteriores,
sugerindo que o Wnt7a tambm era necessrio para o eixo ntero-posterior. Yang e
Niswander (1995) fizeram observaes similares no embrio de pinto. Esses pesqui-
sadores removeram o ectoderma dorsal do membro em desenvolvimento e observa-
ram que esse procedimento resultou na perda dos elementos esquelticos posterio-
res dos membros. Esses membros no tinham dgitos posteriores porque a expres-
so de sonic hedgehog e Fgf4 estavam faltando. A expresso de Wnt7a induzida por
vrus podia substituir o ectoderma dorsal e restaurar a expresso de sonic hedgehog
e o padro posterior. A sntese de Sonic hedgehog estimulada pela combinao
das protenas Wnt7a e FGF4. Os trs eixos do embrio de pinto so todos inter-
relacionados e coordenados.
Distinguindo o membro anterior do membro posterior

At agora, tratamos os membros anteriores e os posteriores como se fossem os mes-
mos. Realmente, ele seguem as mesmas regras da formao do padro. Mas seus
padres so diferentes. Um p no uma mo, e uma perna de pinto certamente no
uma asa. Ento, como eles se tornam diferentes? Parece que as clulas da precartilagem
da asa e da perna do pinto respondem de maneira muito diferente aos fatores de
crescimento, e isso faz com que se associem umas as outras e se diferenciem de
diferentes maneiras (Downie e Newman, 1994). Em culturas de clulas embrionrias, o
cido retinico aumenta a condrognese no mesnquima da asa e inibe a condrognese
no mesnquima da perna. O TGF-1 converte ndulos formadores da cartilagem da
perna em camadas, mas no tem efeito nos ndulos cartilaginosos da asa exceto para
promover a condrognese. As clulas da precartilagem da asa produzem um padro
diferente de fibronectina daquele produzido pelas clulas correspondentes da cartila-
gem da perna (Figura 18.30).
Asa
Perna
Soro TGF cido retinico Rede de fibronectina
Figura 18.30
Resposta diferencial de clulas da precartilagem da asa e da perna (estgio24) a fatores
morfogenticos especficos. Fotografias das clulas em soro, TGF- e cido retinico so
fotografias macroscpicas de colnias de clulas. As fotografias das redes de fibronectina
depositadas pelas clulas so fotomicrografias fluorescentes em aumento de 40x. (de Downie
e Newman, 1994.)
Essa deposio variada de fibronectina pode ser muito importante consideran-

do as diferenas entre a perna e a asa. A localizao, temporalidade e arquitetura
na deposio de cartilagem em culturas de tecido do broto do membro so estrita-
mente paralelas deposio de fibronectina. Em culturas de asa, as condensaes
de cartilagem eram amplas e planas; em culturas de perna, elas eram compactas e
esferoidais. Em ambos os casos, a deposio de cartilagem era paralela localiza-
o da fibronectina (Downie e Newman, 1995). Portanto, existem diferenas ine-
rentes entre as clulas mesenquimatosas precartilaginosas nos membros anterio-
res e posteriores, e que so responsveis pelas respostas diferentes aos fatores
de crescimento e pela diferente deposio de fibronectina. A disposio de
fibronectina crtica no direcionamento da colocao e extenso da condrognese.
O mecanismo pelo qual se d a formao e bifurcao da cartilagem para formar o
esqueleto do membro assunto de grande interesse. [limb4.html]
Recentemente foi demonstrada a expresso diferenciada de pares relacionados de
fatores de transcrio em brotos de membros anteriores e posteriores. No pinto, Hoxc-
4 e Hocx-5 so expressos nos brotos das asas, enquanto que Hocx-9, Hocx-10 e
Hocx-11 so expressos exclusivamente nos brotos das pernas (Nelson et al., 1996). O
gene tbx5 semelhante ao Brachyury transcrito nos membros anteriores do camun-
dongo, enquanto o gene estreitamento relacionado, o tbx4 expresso nos membros
posteriores (Gibson-Brown et al., 1996). Ainda tem que ser verificado se qualquer um
desses genes causalmente envolvido ao direcionar a especificao para membros
anteriores ou membros posteriores*. Entretanto, a perda de TBX5 humana resulta na
sndrome de Holt-Oram, caracterizada por anormalidades do corao e membros supe-
riores (Basson et al., 1996; Li et al., 1996). As pernas no so afetadas.
*Quando se refere mo tem-se um conjunto ordenado de nomes para especificar cada dgito
(Digitus pollicis, d. indicis, d. medius, d. annularis e d. minimus, respectivamente do polegar ao
dedo mnimo). No existe tal nomenclatura para os dgitos do p, mas o plano proposto por Phillips
(1991) tem muito mrito. Os dgitos do p, desde o hlux at o dedinho, seriam chamados porcellus
fori, p. domi, p. carnivorus, p. non voratus e p. plorans domi, respectivamente.
& Especulaes
Lies de limbless
C OMO J MENCIONADO, o mu-

tante limbless pode formar bro-
tos de membros, mas esses bro-
tos regridem porque no forma uma
Em primeiro lugar, o broto do membro
limbless no expressa nem FGF4 nem
FGF8, implicando que essas protenas no
so necessrias para o brotamento nor-
sncia da AER. Interessantemente, o mem-
bro formado bi-dorsal, expressando Wnt7a
em todo o ectoderma. Isso levanta a possi-
bilidade de que a induo da AER necessita
AER. Estudos recentes sobre a expres- mal. Segundo, o mesoderma do limbless de uma interface ectodrmica dorsoventral.
so gnica nesse mutante mostra que o expressa os genes Hoxd-11 a Hoxd-13 de O mutante limbless tambm sugere a
brotamento do membro acompanhado forma aninhada posteriormente, junto com possibilidade de que o mesoderma da placa
por padres normais de expresso a expresso assimtrica de BMP4 e Wnt5a. lateral j tem a habilidade para expressar os
gnica que no so estabelecidos pe- Isso se d na ausncia de expresso genes padronizadores ntero-posterior e
los trs centros de sinalizao. Esses detectvel de sonic hedgehog ou de uma prximo-distal, e que esse pr-padro sub-
dados sugerem que os padres de ex- AER (Grieshammer et al., 1996; Noramly seqentemente estabilizado, mantido ou
presso gnica, normalmente associa- et al., 1996; Ros et al., 1996). aumentado pela AER e Sonic hedgehog. O
dos ao desenvolvimento do membro A anlise experimental do broto do mem- membro um rgo complicado e pesquisa
tetrpode, teriam se dado de qualquer bro de limbless revela que esse formar atual o faz parecer ainda mais complexo. A
maneira e representam um pr-padro AERs e membros se receber partculas anlise do desenvolvimento do membro
que dirige o desenvolvimento desse secretando FGFs. Mais ainda, essas part- tetrpode deu aos biologistas alguns dos
membro (Ros et al., 1996). Os centros culas induzem Sonic hedgehog na regio maiores sucessos no entendimento do de-
sinalizadores somente reforam e supor- posterior, mostrando que existe uma polari- senvolvimento, mas tambm tem levantado
tam esse padro. dade no broto do membro, mesmo em au- alguns dos nossos maiores desafios.
Morte celular e a formao de dgitos

A morte celular tambm tem uma funo na escultura do membro. Na verdade essen-
cial para a formao de juntas e para a separao dos dedos (Zaleske, 1985). A morte
(ou a falta de morte) em clulas especficas do membro de vertebrados geneticamen-
te programada e foi selecionada durante a evoluo. Um dos casos envolve a forma-
o ou no da membrana interdigital nos ps. A diferena entre um p de galinha e um
de pato envolve a presena ou ausncia de morte celular entre os dgitos (Figura
18.31A,B). Saunders e colaboradores (1962; Saunders e Fallon, 1966) mostraram que
na galinha, aps certo estgio, as clulas entre a cartilagem dos dgitos esto destina-
das a morrer e o faro mesmo que transplantadas a outra regio do embrio ou coloca-
das em cultura. Entretanto, se antes desse estgio forem transplantadas para um
membro de pato elas sero salvas. Entre a poca em que a morte celular determinada
e quando ela realmente se d, os nveis de DNA, RNA e sntese de protenas decres-
cem dramaticamente (Pollack e Fallon, 1976).
Alm da zona necrtica interdigital, existem trs outras regies que so escul-
pidas pela morte celular. O cbito e o rdio so separados entre si por uma zona
necrtica interior, e duas outras regies, as zonas necrticas anterior e posterior,
acabam a modelagem do fim do membro (Figura 18.31B; Saunders e Fallon, 1966).
Apesar dessas zonas serem chamadas necrticas, isso uma herana da poca
quando no se distinguia entre morte celular necrtica e morte celular apopttica.
Essas clulas morrem por apoptose, e a morte do tecido interdigital est associada
fragmentao de DNA (Mori et al., 1995). Em humanos, existem vrias sndromes
caracterizadas por dedos ligados (sndromes sindctilas), mas a mutao respon-
svel conhecida somente em um situao (Vortkamp et al., 1991; Hui e Joyner,
1993), na qual o gene codifica um fator de transcrio que expresso no mesnqui-
ma interdigital. O sinal para apoptose em membros de pinto pode ser a protena
BMP4. A expresso de BMP4 observada nos espaos interdigitais em membros de
(A) PRIMRDIO DA PERNA DO PATO

Morte celular mnima
Zona
necrtica
interior
(B) PRIMRDIO DA PERNA DO PINTO

Morte celular extensa
Zona necrtica
interdigital
Zona Zona
necrtica necrtica
anterior posterior
Zona
necrtica
interior
(C) Expresso gnica em regies da perna do

embrio de pinto antes da morte celular
Receptor de CRBP msx-1

cido retinico
Figura 18.31
Padres de morte celular em primrdios de pernas de embries de (A) pato e (B,C) de pinto.
Sombreamento indica reas de morte celular. No pato, a morte celular mnima, enquanto que
existem regies de extensa morte celular no tecido interdigital da perna do pinto (De acordo com
Saunders e Fallon, 1966.)
pinto, e a inibio da sinalizao de BMP4 impede a apoptose em clulas interdigitais.

interessante considerar que essa expresso de BMP no vista nessa fase no
mesnquima interdigital embrionrio do pato (Gaan et al., 1996; Zou e Niswander,
1996; veja Captulo 23).
Os membros tm sido uma pedra fundamental no estudo da produo de padres
em vertebrados. Isso se origina de numerosos processos inter-relacionados que en-
volvem a disposio e crescimento do broto do membro, a induo da AER, a manu-
teno do mesnquima da zona progressiva, a formao e manuteno mtua de ZPA
e AER, a formao do eixo dorsoventral, a gerao de condensaes precartilaginosas
do mesnquima que formaro os tecidos cartilaginoso e sseo, e a imposio de
assimetria ao broto do membro pela ZPA. Ainda existem animados debates em relao
aos mecanismos desses processos e considervel controvrsia sobre as molculas
que poderiam regular tais fenmenos.
& Especulaes
Evoluo do membro tetrpode

Sobre nadadeiras e membros (A) Perna do pinto (B) Peixe (Danio) (como previamente se acreditava) atravs
Macroevoluo, a produo de novidades do quarto dgito (produzindo os raios da
morfolgicas na evoluo de novas esp- nadadeira homlogos aos outros dgitos),
cies e grupos taxonmicos mais altos, re- mas atravs de um arco de condensaes
sulta de alteraes do desenvolvimento. distais de punho (metaptergio) que co-
Algumas das mais importantes modifica- Estgio 21 meam posteriormente e se dirigem ante-
es macroevolucionrias resultaram da Mesn- riormente atravs do mesnquima distal
quima
transio de animais aquticos para terres- Mesn- (Figura 18.33). Portanto, a borda de ex-
tres. Uma das mudanas mais bvias foi a quima presso do gene 5 HoxD segue o eixo
da nadadeira do peixe para a perna do anf- Dobra ectodrmica metaptergio que Shubin e Alberch
apical da nadadeira
bio. Como apontado por Richard Owen hipotetizaram como sendo a origem dos
(1849) existe uma considervel homologia dgitos. Sordino e colegas propuseram
entre os ossos da nadadeira e do membro que a localizao proximal dos transcritos
tetrpode, sendo as nadadeiras peitorais e do gene HoxD representa o padro origi-
plvicas do peixe homlogas aos membros nal e comum a todos os vertebrados. A
anterior e posterior, respectivamente. Foi fase reorientada, distal, da expresso do
possvel fazer homologias especficas en- Estgio 26 gene HoxD representa uma condio nova
tre os elementos proximais da nadadeira e e derivada. Isso, por sua vez, pode ter
do membro (zeugpode; tbia e fbula), mas Figura 18.32 evoludo em resposta s modificaes na
as homologias entre o autpode do mem- Diferenas na expresso de Hoxd-11 em apn- regulao dos genes 5 HoxD. O padro
bro (a mo ou o p na ponta distal) e os dices embrionrios nos peixes e no pinto. (A) precoce de HoxD formado independen-
raios da nadadeira no se consolidaram. Regies de expresso de Hoxd-11 no membro temente de Sonic hedgehog, mas o pa-
posterior do camundongo desde o estgio de
Isso era verdade mesmo ao se comparar o broto precoce at um estgio mais tardio. Du- dro de expresso distalizado pode ser
membro tetrpode s nadadeiras dos pei- rante os estgios mais tardios, o padro de ex-
xes crossoptergios (nadadeiras lobulares), presso de Hoxd-11 atravessa a borda ntero-
considerados como estreitamente relacio- posterior da zona progressiva. (B) Na nadadei-
nados aos ancestrais dos anfbios (veja ra peitoral do peixe zebra, Hoxd-11 continua a
ser expresso posteriormente, mas no se esten-
Coates, 1994; Hinchliffe, 1994). O proble- de anteriormente. hpf, horas aps a fertilizao
ma fica mais vexatrio quando se observa (De acordo com Sordino et al., 1995.)
os membros dos primeiros tetrpodes co-
nhecidos. Em lugar de ter cinco dgitos restritos extremidade posterior do broto
cannicos, esses anfbios primitivos tido membro. Algo semelhante ocorre no
nham seis (Turlepedon), sete (Ichthyoste- broto da nadadeira do peixe zebra (Figura
(A) (B) (C)
ga), ou mesmo oito (Acanthostega) dgi- 18.32). Entretanto, nos tetrpodes, existe
tos em seus membros. Esses membros no uma segunda fase onde muda a expres- Figura 18.33 Origem dos dgitos (autpodos)
possuem raios semelhantes s nadadeiras so dos genes HoxD semelhantes a Abd. como uma novidade evolucionria dependente
associadas a eles, e considera-se que fun- Em lugar de ficar restrita ao posterior do da expresso 5 do gene HoxD (semelhante a
AbdB). (A) Representao de uma nadadeira
cionavam mais como remos em poas ra- broto do membro, a expresso dos genes primitiva de peixe, mostrando um eixo central
sas de gua do que como suporte do peso 5 HoxD perpassa o mesnquima distal, (preto) com raios irradiando anteriormente (cin-
do corpo em terra. Novamente, apesar da logo abaixo da AER. Essa banda de ex- za claro) e posteriormente (cinza escuro). (B)
homologia para os elementos proximais do presso coincidente como o arco digi- Representao da hiptese mais antiga do de-
membro, o autpode parece algo novo- o tal do qual se formam os dgitos (Morgan senvolvimento do membro tetrpode. O eixo
central est curvado atravs do quarto dgito. O
que os biologistas evolucionrios chamam e Tabin, 1994; Sordino et al., 1995; Nelson quinto dgito era considerado homlogo a um
de estrutura neomrfica. et al., 1996). Esses estudos mostram que raio posterior; o primeiro, segundo e terceiro
Estudos recentes fortemente sugeri- enquanto o padro de expresso do gene dgitos eram considerados homlogos aos raios
ram que a localizao do terminal 5 (se- HoxD homlogo nas regies proximais, anteriores. (C) Viso atual da formao autpode.
melhante a Abd) dos genes Hox do grupo a expresso no mesnquima distal do bro- O eixo originalmente se estende posteriormente,
HoxD pode ser crucial na troca de nada- e em seguida se dobra anteriormente atravs da
to tardio nova. Isso tambm confirma os
cartilagem metaptergia. Considera-se que a t-
deiras para membros. Nos brotos de mem- estudos paleonto-desenvolvimentais de bia se ramifica anteriormente mas os dgitos no
bros precoces de pintos e de camundon- Shubin e Alberch (1986), que propuseram so homlogos aos raios. (De acordo com Nel-
go, os genes 5 (Hoxd-11, 12, 13) esto que a via de formao dos dgitos no era son e Tabin,1995.)
governado pela expresso de Sonic hed- Expresso experimental de hedgehog

gehog. O p e a mo parecem ser novas Desenvolvimento normal
no primrdio do membro anterior
estruturas na evoluo, e provvel que
tenham sido formados por um reposicio-
Pinto Broto do
namento da expresso do gene HoxD du- membro
rante o desenvolvimento da nadadeira.
desnecessrio enfatizar que essa no a Membro
nica modificao que ocorreu na cria- Expresso embrionrio
o dos dgitos. Outros genes Hox e de shh
provavelmente sonic hedgehog muda- Expresso de hh
ram tambm seu padro de expresso. Drosophila
Estamos chegando a um ponto na biolo-
gia onde mudanas na expresso gnica
podem ser relacionadas s grandes vari-
aes evolucionrias.
Disco Asa
Sobre pernas de moscas e imaginal da asa adulta
pernas de galinha
Evoluo envolve modificao com des- Figura 18.34

cendncia. Isso foi freqentemente do- Homologia de processos de formao dos eixos ntero-posterior em Drosophila e apndices em
pinto. (A) Um broto de membro do pinto expressa sonic hedgehog na sua regio posterior. Se
cumentado com homologias. A nadadei-
sonic hedehog tambm for expresso em uma regio anterior, o membro em desenvolvimento
ra de uma foca, a asa de um morcego, o
desenvolve uma duplicao que a imagem espelhar do eixo ntero-posterior. (B) Um disco da
brao de um esquilo e o brao de um ho- asa da Drosophila expressa hedgehog no seu compartimento posterior. Se hedgehog tambm for
mem so todos baseados em um mesmo expresso em um compartimento anterior, a asa desenvolve uma duplicao que a imagem
plano homlogo, mas com modifica- especular do eixo ntero-posterior. (De acordo com Ingham, 1994.)
es. Cada um uma modificao dife-
rente do plano de membros reptilianos,
que por sua vez homlogo ao dos ver-
tebrados. Uma das mais importantes des- consideradas como derivadas de uma durante a metamorfose), a protena Hed-
cobertas da moderna biologia do desen- mesma estrutura. gehog usualmente expressa na poro
volvimento est relacionada homologia Membros de moscas e membros de posterior do disco. Se for expressa anteri-
de processos e estruturas. Como vere- vertebrados tm pouco em comum a no ormente surgiro duplicaes que so
mos no Captulo 23, certas vias de de- ser sua funo. Entretanto, ambos os imagens espelhares da asa (Figura 18.34;
senvolvimento e interaes foram con- membros do vertebrado e da mosca pare- Basler e Struhl, 1993; Ingham, 1994).
servadas durante o tempo da evoluo e cem ser formados atravs da mesma via Alm disso, certos genes regulados por
foram modificadas por diferentes grupos de desenvolvimento. (Parece haver uma Hedgehog tambm foram conservados
animais. Isso pode ser visto com o de- homologia de processos subjacente (Marigo et al., 1996), e os compartimentos
senvolvimento do membro. Membros de analogia de estruturas). Como vimos, ventrais dos membros de insetos e verte-
mosca e membros de vertebrados so sonic hedgehog usualmente expresso brados parecem ser regulados pela expres-
exemplos familiares de analogia (como o na parte posterior do broto do membro. so do gene engrailed (Davis et al., 1991;
oposto da homologia). Onde estruturas Se for expresso na parte anterior do bro- Loomis et al., 1996). Assim, parece que a
homlogas so vistas como modificaes to, aparecem duplicaes que so imagens natureza descobriu como produzir um mem-
de uma estrutura original e podem agora espelhares (Riddle et al., 1993). bro somente uma vez, e ambos artrpodos
ter diferentes funes, as estruturas an- No disco da asa da Drosophila (o (Drosophila) e vertebrados (galinhas e ca-
logas tm a mesma funo mas no so campo de clulas que d origem a asa mundongos) usam esse processo at hoje.
LITERATURA CITADA
Albert, P. and Boilly, B. 1988. Effect of FGF8 in the induction, initiation, and mainte- Francis, P. H., Richardson, M. K., Brickell, P.
transferrin on amphibian limb regeneration: A nance of chick Development of the tetrapod M. and Tickle, C. 1994. Bone morphogenesis
blastema cell culture study. Roux Arch. Dev. Biol. limb. Cell 84: 127-136. proteins and a signalling pathway that controls
197: 193-196. patterning in developing chick limb. Develop-
Davis, A. P., Witte, D. P., Hsieh-Li, H. M.,
ment 120: 209-218.
Basler, K. and Struhl. G. 1993. Compartment boun- Potter, S. and Capecchi, M. R. 1995. Absence of
daries and the control of Drosophila limb pattern radius and ulna in mice lacking hoxa-11 and hoxd- Fraser, R. A. and Abbott, U. K. 1971. Studies on
by hedgehog protein. Nature 368: 208-214. 11. Nature 375-791-795. limb morphogenesis VI. Experiments with early
stages of the polydactylous mutant Eudiplopo-
Basson, C. T., and thirteen others. 1996. Davis, C. A., Holmyard, D. P., Millen, K. J. and
dia. J. Exp. Zool. 176: 237-248.
Mutations in human TBX5 cause limb and Joyner, A. L. 1991. Examining pattern formation
cardiac malformation in Holt-Oram syndrome. in mouse, chicken and frog embryos with an En- Gaan, Y., Macias, D., Duterque-Coquil-laud, M.,
Nat. Genet. 15: 30-35. specific antiserum. Development 111: 287-298. Ros, M. A. and Hurle, J. M. 1996. Role of TGF-
bs and BMPs as signals controlling the position
Brockes, J. P. 1992. Introduction of a retinoid Dealy, C. N., Roth, A., Ferrari, D., Brown, A. M.
of the digits and the areas of interdigital cell
reporter gene into the urodele limb blastema. C. and Kosher, R. A. 1993. Wnt-5a and Wnt-7a
death in the developing chick autopod. Deve-
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 11386-11390. are expressed in the developing chick limb bud
lopment 122: 2349-2357.
in a manner that suggests roles in pattern for-
Brockes, J. P. and Kinter, C. R. 1986. Glial growth
mation along the proximodistal and dorsoven- Gardiner, D. M., Blumberg, B., Konine, Y. and
factor and nerve-dependent proliferation in the
tral axes. Mech. Dev. 43: 175-186. Bryant, S. V. 1995. Regulation of HoxA expres-
regeneration blastema of urodele amphibians.
sion in developing and regenerating axolotl limbs.
Cell 45: 301-306. De Robertis, E. M., Morita, E. A. and Cho, K.
W. Y. 1991. Gradient fields and homeobox genes.
Bryant, S. V. and Gardiner, D. M. 1992. Retinoic
Development 112: 669-678. Geduspan, J. S. and Solursh, M. 1992. A growth-
acid, local cell-cell interactions, and pattern for-
promoting influence from the mesonephros
mation in vertebrate limbs. Dev. Biol. 152: 1-25. Detwiler, S. R. 1918. Experiments on the deve-
during limb outgrowth. Dev. Biol. 151: 242-250.
lopment of the shoulder girdle and the anterior
Bryant, S. V., French V. and Bryant, P. J. 1981.
limb of Amblystoma punctatum. J. Exp. Zool. Gibson-Brown, J. J., Agulnik, S. I., Chapman, D.
Distal regeneration and symmetry. Science 21:
25: 499-538. L., Alexiou, M., Garvey, N., Silver, L. M. and
993-1002.
Papaioannou, V. E. 1996. Evi-dence of a role
Doll, P., Izpisa-Belmonte, J.-C., Falkenstein,
Burke, A. C., Nelson, C. E., Morgan, B. A. and for T-box genes in the evo-lution of limb mor-
H., Renucci, A. and Duboule, D. 1989. Coordinate
Tabin, C. 1995. Hox genes and the evolution of phogenesis and the spec-ification of forelimb/
expression of the murine Hox-5 complex
vertebrate axial morphology. Development 121: hindlimb identity. Mech. Dev. 56: 93-101.
homeobox-containing genes during limb pattern
333-346.
formation. Nature 342: 767-772. Goetinck, P. 1964. Studies on limb morphoge-
Butler, E. G. 1935. Studies on limb regeneration nesis. III. Experiments with the polydactylous
Downie, S. A. and Newman, S. A. 1994. Mor-
in X-rayed Ambystoma larvae. Anat. Rec. 62: mutant Eudiplopodia. Dev. Biol. 10: 71-91.
phogenetic differences between fore and hind
295-307.
limb precartilage mesenchyme: Relation to Goss, R. J. 1969. Principles of Regeneration.
Carrington, J. L. and Fallon, J. F. 1988. Initial mechanisms of skeletal pattern formation. Dev. Academic Press, New York.
limb budding is independent of apical ectodermal Biol. 162: 195-208.
Goss, R. J. 1991. The natural history (and mystery)
ridge activity: Evidence from a limbless mutant.
Downie, S. A. and Newman, S.A. 1995. Different of regeneration. In C. E. Dinsmore (ed.), A History
roles for fibronectin in the generation of fore of Regeneration Research. Cambridge Universi-
Charit, J., Graaff, W. de, Shen, S. and Duchamps, and hind limb precartilage condensations. Dev. ty Press, New York, pp. 7-23.
J. 1994. Ectopic expression of Hoxb-8 causes Biol. 172: 519-530.
Grieshammer, U., Minowada, G., Pisenti, J. M.,
duplications of the ZPA in the forelimb and
Duprez, D. M., Kostakopoulou, K., Francis- Abbott, U. and Martin, G. R. 1996. The limbless
homeotic transformation of axial structures. Cell
West, P. H., Tickle, C. and Brickell, P. M. 1996. mutation causes abnormalities in limb dorsal
78: 559-601.
Activation of Fgf-4 and HoxD gene expression ventral patterning implication for the mecha-
Chernoff, E. A. G. and Stocum, D. 1995. Deve- by BMP-2 expressing cells in the developing nism of apical ridge formation. Development
lopmental aspects of spinal cord and limb rege- chick limb. Development 122: 1821-1828. 122: 3851-3861.
neration. Dev. Growth Diff. 37: 133-147.
Eichele, G. 1989. Retinoic acid induces a pattern Hamburger, V. 1938. Morphogenetic and axial
Coates, M. I. 1994. The origin of vertebrate of digits in anterior half wing buds that lack the self-differentiation of transplanted limb
limbs. Development 1994 Suppl. 169-180. zone of polarizing activity. Development 107: primordia of 2-day chick embryos. J. Exp. Zool
863-867. 77: 379-400.
Crawford, K. and Stocum, D. L. 1988a. Retinoic
acid coordinately proximalizes regenerate pattern Fallon, J. F. and Crosby, G. M. 1977. Polarizing Hayashi, K. and Ozawa, E. 1995. Myogenic cell
and blastema differential affinity in axolotl limbs. zone activity in limb buds of amniotes. In D. A. migration from somites is induced by tissue
Development 102: 687-698. Ede, J. R. Hinchliffe and M. Balls (eds.), Vertebrate contact with medial region of the presumptive
Limb and Somite Morphogenesis. Cambridge limb mesoderm in chick embryos. Development
Crawford, K. and Stocum, D. L. 1988b. Retinoic University Press, Cambridge. 121: 661-669.
acid proximalizes level-specific properties
responsible for intercalary regeneration in Fallon, J. F., Lopez, A., Ros, M. A., Savage, M. Harrison, R. G. 1918. Experiments on the deve-
axolotl limbs. Development 104: 703-712. P., Olwin, B. B. and Simandl, B. K. 1994. FGF-2: lopment of the forelimb of Amblystoma, a self-
Apical ectodermal ridge growth signal for chick differentiating equipotential system. J. Exp. Zool
Crossley, P. H., Monowada, G., MacArthur, C. Development of the tetrapod limb. Science 264: 25: 413-461.
A. and Martin, G. R. 1996. Roles for 104-107.
Helms, J. A., Kim, C. H., Eichele, G. and Thaller, Krabbenhoft, K. M. and Fallon, J F. 1989. The Molven, A., Wright, C. V. E., Bremiller, R., De
C. 1996. Retinoic acid signaling is required during formation of leg or wing specific structures by Robertis, E. M. and Kimmel, C. B. 1990. Ex-
early chick Development of the tetrapod limb. leg bud cells grafted to the wing bud is influenced pression of a homeobox gene product in normal
Development 122: 1385-1394. by proximity to the apical ridge. Dev. Biol. 131: and mutant zebrafish embryos: Evolution of the
373-382. tetrapod body plan. Development 109: 279-288.
Hertwig, O. 1925. Haploidkernige Transplante
als Organisatoran diploidkeniger Extremitaten Lande, R. 1978. Evolutionary mechanisms of Morgan, B. A. and Tabin, C. 1994. Develop-
be Triton. Anat. Anz. [Suppl.] 60: 112-118. limb loss in tetrapods. Evolution 32: 73-92. ment 1994 Suppl., p. 181-186.
Hinchliffe, J. R. 1991. Developmental approa- Laufer, E., Nelson, C. E., Johnson, R. L., Morgan, Mori, C., Nakamura, N., Kimura, S., Irie, H.,
ches to the problem of transformation of limb B. A. and Tabin, C. 1994. Sonic hedgehog and Takigawa, T. and Shiota, K. 1995. Programmed
structure in evolution. In J. R. Hinchliffe (ed.), Fgf-4 act through a signalling cascade and cell death in the interdigital tissue of the fetal
Developmental Patterning of the Vertebrate feedback loop to integrate growth and patterning mouse limb is apoptosis with DNA fragmentati-
Limb. Plenum, New York, pp. 313-323, of the developing limb bud. Cell 79: 993-1003. on. Anat. Rec. 242: 103-110.
Hinchliffe, J. R. 1994. Evolutionary biology of Laufer, E. and seven others. 1997. The Radical Mortlock, D. P., Post, L. C. and Innis, J. W.
the tetrapod limb. Development 1994 Suppl. fringe expression boundary in the limb bud ectoderm 1996. The molecular basis of hypodactyly (Hd):
163-168. regulates AER formation. Nature. 386: 366-367. a deletion in Hoxa13 leads to arrest of digital
arch formation. Nat. Genet. 13: 284-289.
Hinchliffe, J. R. and Sansom, A. 1985. The dis- Li, Q. Y. and sixteen others. 1996. Holt-Oram
tribution of the polarizing zone (ZPA) in the syndrome is casued by mutations in TBX5, a Mullen, L. M., Bryant, S.V., Torok, M. A.,
legbud of the chick embryo. J. Embryol. Exp. member of the Brachyury (T) gene family. Nat. Blumberg, B. and Gardiner, D. M. 1996. Nerve
Morphol. 86: 169-175. Genet. 15: 21-29. dependency of regeneration: the role of Distal-
less and FGF signaling in amphibian limb rege-
Hogan, B. L. M., Thaller, Thaller, C. and Eichele, Loomis, C. A., Harris, E., Michaud, J. Wurst, J.,
neration. Development. 122: 3487-3497.
G. 1992. Evidence that Hensens node is a source Hanks, W. and Joyner, A. L. 1996. The mouse
of retinoic acid synthesis. Nature 359: 237-241. Engrailed-1 gene and ventral limb patterning. Mller, G., Streicher, J. and Mller, R. 1996.
Nature 382: 360-363. Homeotic duplicate of the pelvic body segment
Honig, L. S. and Summerbell, D. 1985. Maps of
in regenerating tadpole tails induced by retinoic
strength of positional signaling activity in the Lpez-Martnez, A. and seven others. 1995.
acid. Dev. Genes Evol. 206: 344-348.
developing chick wing bud. J. Embryol. Exp. Limb-patterning activity and restricted posteri-
Morphol. 87: 163-174. or localization of the amino-terminal product of Munaim, S. I. and Mescher, A. L. 1986.
sonic hedgehog cleavage. Curr. Biol. 5: 791-796. Transferrin and the trophic effect of neural tissue
Hui, C.-C. and Joyner, A. L. 1993. A mouse
on amphibian limb reneration blastemas. Dev.
model of Grieg cephalopolysyndactyly MacCabe, J. A., Errick, J. and Saunders, J. W. Jr.
Biol. 116: 138-142.
syndrome: the extra-toes mutation contains an 1974. Ectodermal control of dorso-ventral axis
intragenic deletion of the Gli3 gene. Nat. Genet. in leg bud of chick embryo. Dev. Biol. 39: 69-82. Muneoka, K. and Bryant, S. V. 1982. Evidence
3: 241-246. that patterning mechanisms in developing and
Maden, M. 1982. Vitamin A and pattern formati-
regenerating limbs are the same. Nature 298:
Hurle, J. M., Gaan, Y. and Macias, D. 1989. on of the regenerating limb. Nature 295: 672-675.
369-371.
Experimental analysis of the in vivo chondro-
Maden, M. 1993. The homeotic transformation
genic potential of the interdigital mesenchyme Muragaki, Y., Mundlos, S., Upton, J. and Olsen,
of tails into limbs in Rana temporaria by
of the chick limb bud subjected to local B. 1996. Altered growth and branching patterns
retinoids. Dev. Biol. 159: 379-391.
ectodermal removal. Dev. Biol. 132: 368-374. in synpolydactyly caused by mutations in
Mahmood, R. and nine others. 1995. A role for HOXD13. Science 272: 548-551.
Huxley, J. S. and De Beer, G. R. 1934. The
FGF-8 in the initiation and maintenance of
Elements of Experimental Embryology. Cam- Nardi, J. B. and Stocum, D. L. 1983. Surface
vertebrate limb outgrowth. Curr. Biol. 5: 797-806.
bridge University Press, Cambridge. properties of regenerating limb cell: Evidence
Marigo, V., Johnson, R. L., Vortkamp, A., and for gradation along the proximodis-tal axis. Di-
Ingham, P. W. 1994. Hedgehog points the way.
Tabin, C. J. 1996. Sonic hedgehog differentially fferentiation 25: 27-31.
Curr. Biol. 4: 345-350.
regulates expression of GLI and GLI3 during
Nelson, C. E. and Tabin, C. 1995. Footnote on
Iten, L. E. 1982. Pattern specification and Development of the tetrapod limb. Develop-
limb evolution. Nature 375: 630-631.
pattern regulation in the embryonic chick limb ment 180: 273-283.
bud. Am. Zool. 22:117-129. Nelson, C. E. and nine others. 1996. Analysis of
Meinhardt, H. 1984. Models for positioning
Hox gene expression in the chick limb bud. De-
Izpisa-Belmonte, J.-C, Tickle, C., Doll, P., signaling, the threefold subdivision of segments
velopment 122: 1449-1466.
Wolpert, L. and Duboule, D. 1991. Expression and the pigmentation pattern of molluscs. J
of the homeobox Hox-4 genes and the Embryol. Exp. Morphol. 83 Suppl.: 289-311. Newman, S. A. 1996. Sticky fingers: Hox genes
specification of position in chick wing develop- and cell adhesion in vertebrate Development of
Mescher, A. L. 1992. Trophic activity of
ment. Nature 350: 585-589. the tetrapod limb. BioEssays 18:171-174.
regenerating peripheral nerves. Comments Dev.
Javois, L. C. and Iten, L. E. 1986. The hand- Neurobiol. 1: 373-390. Niazi, I. A. and Saxena, S. 1978. Abnormal
edness and origin of supernumerary limb struc- hindlimb regeneration in tadpoles of the toad
Mescher, A. L. and Tassava, R. A. 1975.
tures following 180 rotation of the chick limb Bufo andersonii exposed to excess vitamin A.
Denervation effects on DNA replication and
bud on its stump. J. Embryol. Exper. Morphol. Folia Biol. (Krakow) 26: 3-8.
mitosis during the initiation of limb regenerati-
91: 135-152.
on in adult newts. Dev. Biol. 44: 187-197. Niswander, L. and Martin, G. M. 1993. FGF-4
Kieny, M. 1960. Rle inducteur du msoderme and BMP-2 have opposite effects on limb
Mohanty-Hejmadi, P., Dutta, S. K. and
dans la diffrenciation prcoce du bourgeon de growth. Nature 361: 68-71.
Mahapatra, P. 1992. Limbs generated at the site
membre chez 1embryon de poulet. J. Embryol.
of tail amputation in marbled balloon frog after Niswander, L., Tickle, C., Vogel, A., Booth, I.
Exp. Morphol. 8: 457-467.
vitamin A treatment. Nature 355: 352-353. and Martin, G. R. 1993. FGF-4 replaces the
apical ectodermal ridge and directs outgrowth the apical ectodermal ridge at the dorsoventral logical structure and inductive specificity of limb
and patterning of the limb. Cell 75: 579-587. boundary of the vertebrate limb. Nature 386: parts of the chick. J. Morphol. 101: 57-88.
360-366.
Niswander, L., Jeffrey, S., Martin, G. R. and Saunders, J. W., Jr., Gasseling, M. T. and Saunders,
Tickle, C. 1994. A positive feedback loop Ros, M. A., Lopez-Martinez, A., Simandl, B. K., L.C. 1962. Cellular death in morphogenesis of
coordinates growth and patterning in the Rodriguez, C., Belmonte, J. C. I., Dahn, R. and the avian wing. Dev. Biol. 5: 147-178.
vertebrate limb. Nature 371: 609-612. Fallon, J. F. 1996. The limb field mesoderm de-
Savage, M. P. and Fallon, J. F. 1995. FGF-2 mRNA
termines initial limb bud anteroposterior
Nohno, T. and seven others. 1991. Involve- and its antisense message are expressed in a
asymmetry and budding independent of sonic
ment of the Chox-4 chicken homeobox genes developmentally specific manner in the chick limb
hedgehog or apical ectodermal gene expressions.
in determination of anteroposterior axial bud and mesonephros. Dev. Dyn. 202: 343-353.
polarity during Development of the tetrapod
Scadding, S. R. and Maden, M. 1994. Retinoic
limb. Cell 64: 1197-1205. Rose, S. M. 1962. Tissue-arc control of regene-
acid gradients during limb regeneration. Dev. Biol.
ration in the amphibian limb. In D. Rudnick (ed.),
Noji, S. and ten others. 1991. Retinoic acid 162: 608-617.
Regeneration. Ronald, New York, pp. 153-176.
induces polarizing activity but is unlikely to be
Sessions, S. and Ruth, S. B. 1990. Explanation
a morphogen in the chick limb bud. Nature Rosenquist, G. C. 1971. The origin and
for naturally occurring supernumary limbs in
350: 83-86. movement of the limb-bud epithelium and
amphibians. J. Exp. Zool. 254: 38-47.
mesenchyme in the chick embryo as determined
Noramly, S., Pisenti, J., Abbott, U. and Morgan,
by radioautographic mapping. J. Embryol. Exp. Sessions, S. K., Gardiner, D. M. and Bryant, S. V.
B. 1996. Gene expression in the limbless mutant:
Morphol. 25: 85-96. 1989. Compatible limb patterning mechanisms
Polarized gene expression in the absence of Shh
in urodeles and anurans. Dev. Biol. 131: 294-301.
and AER. Dev. Biol. 179: 339-346. Rossant, J., Zirngibl, R., Cado, D., Shago, M.
and Gigure, V. 1991. Expression of a retinoic Shen, R. Q., Chen, Y. P., Huang, L., Vitale, E.
Ogura, T., Alvarez, I. S., Vogel, A., Rodrigez, C.,
acid response element-hsplacZ transgene defi- and Solursh, M. 1994. Characterization of the
Evans, R. M. and Belmonte, J. C. I. 1996.
nes specific domains of transcriptional activity human msx-1 promoter and an enhancer
Evidence that Shh cooperates with a retinoic
during mouse embryo-genesis. Genes Dev. 5: responsible for retinoic acid induction. Cell. Mol.
acid inducible co-factor to establish ZPA-like
1333-1344. Biol. Res. 40: 297-312.
activity. Development 122: 537-542.
Rowe, D. A., Cairnes, J. M. and Fallon, J. F. Shubin, N. H. and Alberch, P. 1986. A mor-
Oliver, G., Wright, C. V. E., Hardwicke, J. and De
1982. Spatial and temporal patterns of cell death phogenetic approach to the origin and basic
Robertis, E. M. 1988. A gradient of homeodomain
in limb bud mesoderm after apical ectodermal organization of the tetrapod limb. Evol. Biol.
protein in developing forelimbs of Xenopus and
ridge removal. Dev. Biol. 93: 83-91. 20: 319-387.
mouse embryos. Cell 55: 1017-1024.
Rubin, L. and Saunders, J. W., Jr. 1972. Ec- Simon, H. G., Nelson, C., Goff, D., Laufer, E.,
Opitz, J. M. 1985. The developmental field
todermal-mesodermal interactions in the growth Morgan, B. A. and Tabin, C. 1995. The differential
concept. Am. J. Med. Genet. 21: 1-11.
of limbs in the chick embryo: Constancy and expression of myogenic regulatory genes and
Owen, R. 1849. On the Nature of Limbs. J. Van temporal limits of the ectodermal induction. Dev. msx-1 during dedifferentiation and redifferen-
Voor, London. Biol. 28: 94-112. tiation of regenerating amphibian limbs. Dev.
Dyn. 202: 1-12.
Parr, B. A. and McMahon, A. P. 1995. Saunders, J. W., Jr. 1948. The proximal-distal
Dorsalizing signal wnt-7a required for normal sequence of origin of the parts of the chick wing Singer, M. 1954. Induction of regeneration of
polarity of D-V and A-P axes of the mouse limb. and the role of the ectoderm. J. Exp. Zool. 108: the forelimb of the postmetamorphic frog by
Nature 374: 350-353. 363-404. augmentation of the nerve supply. J. Exp. Zool.
126: 419-472.
Parr, B. A., Shea, M. J., Vassileva, G. and Saunders, J. W., Jr. 1972. Developmental control
McMahon, A. P. 1993. Mouse Wnt genes exhibit of three-dimensional polarity in the avian limb. Singer, M. and Caston, J. D. 1972. Neurotrophic
discrete domains of expression in early Ann. N.Y. Acad. Sci. 193: 29-42. dependence of macromolecular synthesis in the
embryonic CNS and limb buds. Development 119: early limb regenerate of the newt, Triturus. J.
Saunders, J. W., Jr. 1982. Developmental Biolo-
247-261. Embryol. Exp. Morphol. 28: 1-11.
gy. Macmillan, New York.
Phillips, J. 1991. Higgledy, piggledy. N. Engl. J. Sordino, P., Hoeven, F. van der and Duboule,
Saunders, J. W., Jr. and Fallon, J. F. 1966. Cell
Med. 324: 497. D. 1995. Hox gene expression in teleost fins
death in morphogenesis. In M. Locke (ed.),
and the origin of the vertebrate digits. Nature
Pollak, R. D. and Fallon, J. F. 1976. Autora- Major Problems of Developmental Biology.
375: 678-681.
diographic analysis of macromolecular synthesis Academic Press, New York, pp. 289-314.
in prospectively necrotic cells of the chick limb Stephens, T. D. and seven others. 1991. Axial
Saunders, J. W., Jr. and Gasseling, M. T. 1968.
bud. II. Nucleic acids. Exp. Cell Res. 100: 15-22. and paraxial influences on limb morphogenesis.
Ectodermal-mesodermal interactions in the
J. Morphol. 208: 367-379.
Riddle, R. D., Johnson, R. L., Laufer, E. and Tabin, origin of limb symmetry. In R. Fleis-chmajer
C. 1993. Sonic hedgehog mediates the polarizing and R. E. Billingham (eds.), Epithelial-Mesen- Stocum, D. L. and Crawford, K. 1987. Use of
activity of the ZPA. Cell 75: 1401-1416. chymal Interactions. Williams & Wilkins, retinoids to analyse the cellular basis of memory
Baltimore, pp. 78-97. in regenerating amphibian limbs. Biochem. Cell
Riddle, R. D., Ensini, M., Nelson, C., Tsuchida,
Biol. 65: 750-761.
T., Jessell, T. M. and Tabin, C. 1995. Induction Saunders, J., Jr. and Reuss, C. 1974. Inductive
of the LIM homeobox gene Lmx1 by WNT7a and axial properties of prospective wing-bud Stocum, D. L. and Fallon, J. F. 1982. Control of
establishes dorsoventral patter in the vertebrate mesoderm in the chick embryo. Dev. Biol. 38: pattern formation in urodele limb on-togeny: A
limb. Cell 83: 631-640. 4150. review and a hypothesis. J. Embryol. Exp.
Morphol. 69: 7-36.
Rodriguez-Esteban, C., Schwabe, J. W. R., De La Saunders, J. W., Jr., Cairns, J. M. and Gas-seling,
Pena, J., Foys, B., Eshelman, B. and Izpisa- M. T. 1957. The role of the apical ridge of Stratford, T., Horton, C. and Maden, M. 1996.
Belmonte, J. C. 1997. Radical fringe positions ectoderm in the differentiation of the morpho- Retinoic acid is required for the initiation of
outgrowth in the chick limb bud. Curr Biol. 6: Tickle, C., Alberts, B., Wolpert, L. and Lee, J. Wanek, N., Gardiner, D. M., Mueoka, K. and
1124-1133. 1982. Local application of retinoic acid to the Bryant, S. V. 1991. Conversion by retinoic acid
limb bud mimics the action of the polarizing of anterior cells into ZPA cells in the chick wing
Summerbell, D. 1974. A quantitative analysis
region. Nature 296: 564-566. bud. Nature 350: 81-83.
of the effect of excision of the AER from the
chick limb bud. J. Embryol. Exp. Morphol. 32: Tickle, C., Lee, J. and Eichele, G. 1985. A Weiss, P. 1939. Principles of Development. Holt,
651-660. quantitative analysis of the effect of alltrans- Rinehart & Winston, New York.
retinoic acid on the pattern of chick wing deve-
Summerbell, D. 1979. The zone of polarizing Wessells, N. K. 1977. Tissue Interaction and
lopment. Dev. Biol. 109: 82-95.
activity: Evidence for a role in abnormal chick Development. Benjamin, Menlo Park, CA.
limb morphogenesis. J. Embryol. Exp. Morphol. Todt, W. L. and Fallon, J. F. 1987. Posterior
Wolpert, L. 1969. Positional information and
50: 217-233. apical ectodermal ridge removal in chick wing
the spatial pattern of cellular formation. J.
bud triggers a series of events resulting in
Summerbell, D. and Lewis, J. H. 1975. Time, Theoret. Biol. 25:1-47.
defective anterior pattern. Development 101:
place and positional value in the chick limb bud.
505-515. Wolpert, L. 1977. The Development of Pattern
J. Embryol. Exp. Morphol. 33: 621-643.
and Form in Animals. Carolina Biological,
Tosney, K. W. and Landmesser, L. T. 1985.
Tabin, C. J. 1991. Retinoids, homeoboxes, and Burlington, NC.
Development of the major pathways for neurite
growth factors: Toward molecular models for De-
outgrowth in the chick hindlimb. Dev. Biol. 109: Yang, Y. Z. and Niswander, L. 1995. Interaction
velopment of the tetrapod limb. Cell 66: 99-217.
193-214. between signaling molecules Wnt7a and Shh
Tabin, C. J. 1992. Why we have (only) five during vertebrate limb development: Dorsal
Viviano, C. M., Horton, C. E., Maden, M. and
fingers per hand: Hox genes and the evolution signals regulate anteroposte-rior patterning. Cell
Brockes, J. P. 1995. Synthesis and release of 9-
of paired limbs. Development 116: 289-296. 80: 939-947.
cis retinoic acid by the urodele wound epidermis.
Tanaka, M., Tamura, K., Noji, S., Nohno, T. Development 121: 3753-3762. Yokouchi, Y, Nakazato, S., Yamamoto, M.,
and Ide, H. 1997. Induction of additional limb at Goto, Y, Kameda, T., Iba, H. and Kuroiwa, A.
Vogel, A., Rodriguez, C., Warnken, W. and Izpisa-
the dorsal-ventral boundary of a chick embryo. 1995. Misexpression of Hoxa-13 induces
Belmonte, J.-C. 1995. Dorsal cell fate specified
Dev. Biol. 182:191-203. cartilage homeotic transformation and changes
by chick Lmx1 during vertebrate Development
in adhesiveness in chick limb buds. Genes Dev.
Tickle, C. 1981. The number of polarizing region of the tetrapod limb. Nature 378: 716-720.
9: 2509-2522.
cells required to specify additional digits in the
Vogel, A., Rodriguez, C. and Izpisa-Belmonte,
developing chick wing. Nature 289: 295-298. Zaleske, D. J. 1985. Development of the upper
J.-C. 1996. Involvement of FGF-8 in initiation,
limb. Hand Clin. 1985(3): 383-390.
Tickle, C. 1995. Vertebrate Development of the outgrowth, and patterning of the vertebrate limb.
tetrapod limb. Curr. Biol. 5: 478-484. Development 122: 1737-1750. Zou, H. and Niswander, L. 1996. Requirement
for BMP signaling in interdigital apoptosis and
Tickle, C., Summerbell, D. and Wolpert, L. 1975. Vortkamp, A., Gessler, M. and Grzeschik, K.-
scale formation. Science 272: 738-741.
Positional signaling and specification of digits in H. GLI3 zinc-finger gene interrupted by trans-
chick limb morphogenesis. Nature 254: 199-202. locations in Grieg syndrome family. Nature 352: Zwilling, E. 1955. Ectoderm-mesoderm
539-540. relationship in the development of the chick
embryo limb bud. J. Exp. Zool. 128: 423-441.
Interaes celulares distncia:
Hormnios como mediadores
do desenvolvimento
19
Mudou a velha ordem cedendo seu espao
para a nova.
ALFRED LORD TENNYSON (1886)
As fases iniciais presas na terra construram

A FORMAO DE RGOS NOS ANIMAIS consumada por interaes de
numerosos tipos de clulas. Nos dois captulos precedentes discutimos
como as interaes no desenvolvimento podem ser mediadas por popula-
es celulares adjacentes. Neste captulo discutiremos a regulao do desenvolvi-
mento pelas molculas difusveis que se deslocam em longas distncias, de um tipo de
aparelhos digestivos enormes e os movimen- clula a outro. Reguladores difusveis do desenvolvimento que se deslocam pelo
tou sobre ps de lagartas. Mais tarde na his-
sangue para promover modificaes na diferenciao ou morfognese de outros teci-
tria da vida, esses recursos puderam ser li-
dos so chamados hormnios.
quidados e reinvestidos na construo de um
organismo inteiramente novo- uma mqui-
na voadora dedicada ao sexo.
CARROLL M. WILLIAMS (1958) Metamorfose: o direcionamento
hormonal do desenvolvimento
extremamente difcil isolar hormnios de embries pois quantidades muito pequenas
desses so suficientes para concretizar sua ao. Portanto, algumas das anlises mais
detalhadas do controle hormonal do desenvolvimento foram centralizadas na dram-
tica reprogramao do desenvolvimento conhecida como metamorfose.
Em muitas espcies de animais, o desenvolvimento embrionrio leva a um estgio
larval com caratersticas muito diferentes daquelas do organismo adulto. Muito freqen-
temente, as formas larvais so especializadas para algumas funes tais como cresci-
mento ou disperso. A larva pluteus do ourio-do-mar, por exemplo, pode se deslocar em
correntes ocenicas, enquanto o ourio adulto leva uma existncia sedentria. As lar-
vas, em forma de lagarta, das borboletas e mariposas so especializadas para a alimenta-
o, ao passo que suas formas adultas so especializadas para o vo e a reproduo e
freqentemente no possuem as partes da boca necessrias para a alimentao. A divi-
so de funes entre a larva e o adulto freqentemente bastante distinta (Wald, 1981).
As efemridas eclodem de ovos e se desenvolvem durante vrios meses. Todo esse
desenvolvimento lhes permite passar um dia como insetos alados completamente de-
senvolvidos, acasalando rapidamente antes de morrer. Como seria de se esperar dessa
discusso, a forma larval e o adulto com freqncia vivem em ambientes diferentes. Mais
ainda, como primeiro observado por Weismann (1875), as larvas devem ter sua prpria
adaptao para lhes ajudar a sobreviver. A borboleta viceroy adulta (limenitis archippus)
mimetiza a menos apetitosa borboleta monarca, mas a lagarta viceroy no se parece com
a bonita lagarta da monarca. Ao contrrio, a larva viceroy escapa da deteco parecendo
excremento de pssaros (Begon et al., 1986).
733
734 PARTE V Interaes Durante a Formao do rgo
Durante a metamorfose, hormnios especficos reativam processos do desenvol-

vimento, e o organismo inteiro se modifica preparando-se para sua nova existncia.
Essas modificaes no so somente na forma. Em girinos de anfbios, a metamorfose
causa no s a maturao desenvolvimental de enzimas do fgado, da hemoglobina e
de pigmentos do olho, como tambm remodela os sistemas nervoso, digestivo e
reprodutor. Portanto, a metamorfose uma fase de mudanas dramtica no desenvol-
vimento, afetando o organismo todo.
Este captulo focaliza trs casos nos quais os hormnios reativam os processos de
desenvolvimento aps o nascimento: metamorfose em anfbios, metamorfose em inse-
tos e desenvolvimento das mamas do camundongo.
Metamorfose anfbia
Em anfbios, a metamorfose geralmente associada com as mudanas que preparam
um organismo aqutico para uma existncia terrestre. Em urodelos (salamandras), as
modificaes incluem a reabsoro das nadadeiras da cauda, a destruio das guel-
ras externas e a mudana da estrutura da pele. Nos anuros (rs e sapos), as mudan-
as metamrficas so mais surpreendentes, e quase todos os rgos so modifica-
dos (Tabela 19.1). As modificaes na forma so muito bvias (Figura 19.1). Mudan-
as regressivas incluem a perda dos dentes crneos e das guelras internas do girino,
como tambm a destruio de sua cauda. Ao mesmo tempo, so evidentes os pro-
Tabela 19.1 Resumo de algumas modificaes metamrficas em anuros
Sistema Larva Adulto
Locomotivo Aqutica; nadadeiras de cauda Terrestre; tetrpode sem cauda
Respiratrio Guelras, pele, pulmes; Pele, pulmes; hemoglobinas adultas

hemoglobinas larval
Circulatrio Arcos articos; aorta; Arco cartido; arco sistmico;

veias cardinais anteriores, veias jugulares
posteriores e comuns
Nutricional Herbvoros: longo intestino em Carnvoros: intestino curto- proteases;

espiral- simbiontes intestinais; boca grande- lngua longa
boca pequena- mandbulas
corneadas, dentes labiais
Nervoso Falta da membrana nictitante; Desenvolvimento de msculos

porfiropsina, sistema de linha oculares, membrana nictitante,
lateral- Neurnios de Mauthner rodopsina, perda do sistema de linha
lateral- degenerao dos neurnios de
Mauthner; membrana timpnica
Excretrio Principalmente amnia, Principalmente uria, alta atividade das

pouca uria (amonotlico) enzimas do ciclo ornitina-uria
(ureotlico)
Integumentrio Epiderme fina com bicamada e Epiderme escamosa estratificada com

derme fina; sem glndulas queratinas adultas; derme bem
mucosas ou granulares desenvolvida contm glndulas
mucosas e granulares secretando
peptdeos antimicrobianos
Fonte: Dados de Turner e Bagnara, 1976; Reilly et al., 1994.
CAPTULO 19 Hormnios e metamorfose 735
cessos construtivos como o desenvolvimento dos membros e a construo da gln-

dula dermide. Para a locomoo, a cauda tipo remo retrocede enquanto os membros
anteriores e posteriores se diferenciam. O crnio cartilaginoso do girino substitu-
do pelo crnio predominantemente sseo da pequena r. Os dentes crneos,
construdos para dilacerar plantas das lagoas, desaparecem enquanto a boca e a
mandbula assumem novas formas e se desenvolve o msculo da lngua. Enquanto
isso, o amplo intestino caracterstico dos herbvoros se encurta para se adaptar
dieta mais carnvora da r adulta. As guelras regridem e os arcos das guelras dege-
neram. Os pulmes aumentam, e msculos e cartilagem se desenvolvem para bom-
bear ar para dentro e para fora dos pulmes. O sistema sensorial muda, tambm,
assim como o sistema da linha lateral do girino degenera e o olho e o ouvido sofrem
mais diferenciaes. No ouvido se desenvolve o ouvido mdio e a membrana do
tmpano, to caracterstica de rs e sapos. No olho, aparecem as membranas nictitantes
e as plpebras; o pigmento do olho tambm muda. Nos girinos, como nos peixes de
gua doce, o fotopigmento mais importante da retina a porfiropsina, um complexo
entre a protena opsina e o aldedo da vitamina A2. Em rs adultas, o pigmento muda
para rodopsina, o fotopigmento caracterstico dos vertebrados terrestres e marti-
mos. A Rodopsina um conjugado de opsina e o aldedo da vitamina A1 (Wald, 1945,
1981; Smith-Gill e Carver, 1981; Hanken e Hall, 1988).
Outros eventos bioqumicos tambm esto associados metamorfose. A hemo-
globina do girino liga o oxignio mais rapidamente e o libera mais lentamente do que
a hemoglobina do adulto (McCutcheon, 1936). Alm disso, Riggs (1951) mostrou
que a ligao do oxignio pela hemoglobina do girino independente do pH, ao
passo que a hemoglobina da r (como a maioria das outras hemoglobinas de verte-
brados) mostra um aumento na ligao de oxignio com o aumento do pH (efeito de
Bohr). Outra mudana bioqumica na metamorfose de certas rs a induo daque-
las enzimas necessrias para a produo de uria. Girinos, como a maioria dos peixes
de gua doce so amonotlicos; ou seja, eles excretam amnia. Muitas rs adultas
(tal como o espcie Rana mas no o Xenopus) so ureotlicos, excretando uria,
como a maioria dos vertebrados terrestres. Durante a metamorfose, o fgado desen-
volve enzimas necessrias para produzir uria de dixido de carbono e amnia. Figura 19.1
Seqncia da metamorfose na r Rana pipiens.
Essas enzimas constituem o ciclo da uria, e cada uma delas aparece durante a
(A) Girino premetamrfico. (B) Girino
metamorfose (Figura 19.2).
prometamrfico mostrando crescimento do
membro posterior. (C) Incio do clmax
Controle hormonal da metamorfose de anfbios metamrfico ao emergirem os membros anteri-
ores. (D,E) Estgios do clmax.
Todas essas variadas modificaes so induzidas pela secreo dos hormnios da
tireide tiroxina (T4) e triiodotironina (T3), durante a metamorfose (Figura 19.3). Atu-
almente se acredita que T3 o hormnio ativo, pois ele causa mudanas metamrficas
em girinos tireoidectomizados em concentraes muito menores do que o faria o T4
(Kistler et al., 1977; Robinson et al., 1977). O controle da metamorfose pelos hormnios
da tireide foi demonstrado por Gudernatsch (1912), observando que girinos sofriam
uma metamorfose prematura ao serem alimentados com a glndula tireide de carneiro
pulverizada. Allen (1916) e Hoskins e Hoskins (1917) mostraram que pela retirada do
rudimento da tireide de girinos precoces, a larva no sofria metamorfose tornando-
se, em lugar disso, um girino gigante.
MODIFICAES REGIONALMENTE ESPECFICAS. Os vrios rgos do corpo

respondem de maneira diferente estimulao hormonal. O mesmo estmulo causa a
degenerao de certos tecidos enquanto outros se desenvolvem e se diferenciam. Por
exemplo, a degenerao das estruturas da cauda so claramente associadas a nveis
crescentes de hormnios da tireide. A degenerao das estruturas da cauda relati-
vamente rpida, pois o esqueleto sseo no se estende at a cauda, que somente
suportada pela notocorda (Wassersug, 1989). Essa degenerao pode ser mostrada in
vitro (Weber, 1967) quando pedaos isolados de cauda so colocados em recipientes
Figura 19.2 (A) Carbamoilfosfato

Desenvolvimento do ciclo da uria durante a sintase
metamorfose de anuros. (A) Os principais as- Carbamoilfosfato
pectos do ciclo da uria, pelo qual resduos
Ornitina
nitrogenados podem ser detoxificados e
carbamoiltransferase
excretados. (B) Emergncia de atividades
enzimticas do ciclo da uria correlacionada
com mudanas metamrficas na r Rana
Ornitina Citrulina
catesbeiana. (De acordo com Cohen, 1970.)
Aspartato
Argininosuccinato
Uria sintetase
Arginase Argininosuccinato
Arginina
Argininosuccinato
liase
Fumarato
(B)
Carbamoilfosfato sintase
Porcentagem de nveis de enzimas
Ornitina carbamoiltransferase
Argininosuccinato sintetase
ps-metamrficas
Argininosuccinato liase
Excreo de uria
Estgio do desenvolvimento
com gar e submetidos a tratamentos qumicos. As caudas cultivadas em meio no

tratado permanecem sadias, enquanto aquelas colocadas em meio contendo hormni-
os da tireide sofrem uma regresso caracterstica. Alm disso, a prolactina inibe a
degenerao da cauda induzida pelos hormnios da tireide (Brown e Frye, 1969).
Considera-se que a regresso da cauda se d em quatro estgios. Primeiro, a sntese
de protena diminui nas clulas do msculo estriado da cauda (Little et al., 1973). Em
seguida, h um aumento das enzimas do lisossoma. As concentraes de proteases,
RNase, DNase, colagenase, fosfatase e glicosidases aumentam na epiderme, notocor-
da e clulas do cordo nervoso (Fox, 1973). Provavelmente a morte celular causada
pela liberao dessas enzimas no citoplasma. A epiderme ajuda a digesto do tecido
muscular, possivelmente pela liberao dessas enzimas digestivas. Se a epiderme
cirurgicamente removida das extremidades da cauda, essas no sofrero regresso
quando cultivadas em tiroxina (Eisen e Gross, 1965; Niki et al., 1982). Aps essa morte
celular, macrfagos se acumulam na regio da cauda, digerindo os detritos com suas
prprias enzimas proteolticas (Kaltenbach et al., 1979). O resultado que a cauda se
Tiroxina (T 4 )
Triiodotironina (T 3 )
Figura 19.3
Frmulas da tiroxina (T4) e da triiodotironina (T3).
torna uma grande sacola de enzimas proteolticas (Figura 19.4). As principais enzimas
proteolticas parecem ser as colagenases e outras metaloprotenases cuja sntese de-
pende dos hormnios da tireide. Se um inibidor de metaloprotenases (TIMP) adi-
cionado s caudas, ele impede a regresso da cauda induzida pelo hormnio da tireide
(Oofusa e Yoshizato, 1991; Patterson et al., 1995).
A resposta aos hormnios da tireide intrnseca ao prprio rgo e no depen-
de dos tecidos vizinhos. Na epiderme, a resposta aos hormnios tireoidianos de-
pende de qual parte do corpo a epiderme est cobrindo. As clulas epidrmicas da
cabea e do corpo do girino sofrem uma lenta renovao (como esperado na pele), e
T3 no modifica essa velocidade. Na cauda, entretanto, T3 causa um rpido aumento
na queratinizao e morte dessas clulas. Tambm se d uma supresso, especfica
para a cauda, das divises das clulas precursoras que poderiam originar mais clu-
las epidrmicas. O resultado a morte das clulas epidrmicas da cauda enquanto
Concentrao da protease catepsina lisossmica
(unidades/g nitrognio)
Figura 19.4
Aumento da atividade protesica lisossmica
durante a regresso da cauda em Xenopus
laevis. As enzimas lisossmicas so conside-
radas responsveis pela digesto das clulas da
Comprimento relativo da cauda (%) cauda. (De acordo com Karp e Berrill, 1981.)
(A) (B)
Extremidade da
cauda transplantada
no tronco
Figura 19.5
Especificidade de rgos durante a metamor-
fose da r. (A) Extremidades da cauda regridem Cauda
mesmo quando transplantadas no tronco, en-
quanto (B) os clices oculares permanecem
intactos mesmo quando transplantados para a
cauda em regresso. (De acordo com Schwind,
1933; fotografias de Geigy, 1941, cortesia do
Journal of Experimental Zoology.)
que a epiderme da cabea e do corpo continua a funcionar (Nishikawa et al., 1989).

Essas respostas epidrmicas locais parecem ser controladas pela especificidade
regional do mesoderma drmico. Se as clulas do dermtomo da cauda (que do
origem a derme da cauda) so transplantadas para o tronco, a epiderme que elas
contactam sofrer degenerao na metamorfose. Inversamente, quando o dermto-
mo do tronco transplantado para a cauda, aquelas regies da pele persistem.
Modificando o ectoderma no se altera a resposta regional aos hormnios da tireide
(Kinoshita et al., 1989).
Essa resposta especfica dos rgos dramaticamente demonstrada quando extre-
midades da cauda so transplantadas para a regio do tronco ou quando clices
oculares so colocadas na cauda (Schwind, 1933; Geigy, 1941). A extremidade da
cauda extra colocada no tronco no protegida da degenerao, mas o olho retm sua
integridade apesar de estar colocado dentro da cauda em degenerao (Figura 19.5).
Portanto, a degenerao da cauda representa uma morte celular autnoma programa-
da. Somente tecidos especficos morrem quando dado o sinal. Essas mortes celula-
res programadas so importantes na modelagem do corpo. Em humanos, a degenera-
o programada ocorre nos tecidos entre os dedos e os artelhos, e a degenerao da
cauda humana durante a semana 4 do desenvolvimento se parece regresso da
cauda do girino (Fallon e Simandl, 1978).
COORDENAO DAS MUDANAS NO DESENVOLVIMENTO. Um dos princi-

pais problemas da metamorfose a coordenao dos eventos desenvolvimentais. A
cauda no deve degenerar at que outro meio de locomoo- os membros- estejam
desenvolvidos, e as guelras no devem regredir at que o animal possa utilizar os seus
msculos pulmonares recm-desenvolvidos. A maneira de coordenar os eventos
metamrficos parece ser atravs de diferentes quantidades de hormnio que produ-
zem diferentes efeitos especficos (Kollros, 1961). Esse modelo chamado de conceito
do limite. Com o crescimento gradual da concentrao de hormnios da tireide,
diferentes eventos ocorrem dependendo do nvel de concentrao do hormnio. Quan-
do girinos privados de suas tireides so colocados em uma soluo diluda de hor-
mnios da tireide, os nicos efeitos morfolgicos so o encurtamento dos intestinos
e o crescimento acelerado dos membros posteriores. Entretanto, em concentraes
mais altas do hormnio, a regresso da cauda observada antes da formao dos
membros posteriores. Esses experimentos sugerem que ao se elevarem os nveis de
hormnio da tireide, os membros posteriores se desenvolvem primeiro e depois regride
a cauda. Analogamente, quando girinos recebem T3 induz-se a formao dos ossos
precoces nas dosagens mais baixas e os mais tardios em dosagens mais altas,
mimetizando a situao natural (Hanken e Hall, 1988). Portanto, o planejamento na
metamorfose regulado pela competncia dos diferentes tecidos em responder aos
hormnios da tireide.
MUDANAS NEURONIAIS. Mas o que acontece com o sistema nervoso quando o

animal est construindo um novo organismo a partir do velho? A anatomia adaptiva
de uma r certamente difere daquela de seu girino. Uma conseqncia imediata da
metamorfose nos anuros observada na transferncia dos olhos para frente, a partir
de sua posio lateral original (Figura 19.6).* Os olhos laterais do girino so tpicos
de herbvoros como presa, ao passo que os olhos frontais da r so mais adequados
*Um dos movimentos mais espetaculares de olhos durante a metamorfose ocorre nos peixes
chatos como o linguado. Originalmente, os olhos esto em lados opostos da face. Todavia, durante
a metamorfose, um dos olhos migra dorsalmente para encontrar o outro no topo da cabea,
permitindo ao peixe permanecer no fundo, olhando para cima (Martin e Drewry, 1978).
Figura 19.6
A migrao do olho e mudanas neuroniais
associadas durante a metamorfose do girino de
Xenopus laevis. Os olhos do girino so locali-
zados lateralmente, por isso, existe um plano
binocular relativamente pequeno. Os olhos
migram dorsalmente e rostralmente durante a
metamorfose, criando um amplo campo
binocular para a r adulta. Abaixo do girino em
metamorfose est uma representao da regio
ptica de seu crebro. Quando se injeta
peroxidase de rabanete (horseradish) na retina,
os neurnios pticos a transportam para o lado
contralateral (oposto) do crebro (flecha pe-
quena), mas no para o lado ipsilateral. Com a
continuao da metamorfose, as projees
ipsilaterais (envolvidas na viso binocular) co-
meam a ser vistas (flecha grande). (de Hoskins
e Grobstein, 1984, cortesia de P. Grobstein.)
ao seu estilo predatrio de vida. Para alcanar sua presa, a r deve enxergar em trs
dimenses. Ou seja, ela deve adquirir um campo de viso binocular onde os sinais
de ambos os olhos convergem no crebro. No girino, o olho direito inerva o lado
esquerdo do crebro e vice-versa. No existem projees ipsilaterais (do mesmo
lado) dos neurnios da retina. Entretanto, durante a metamorfose essas vias
ipsilaterais adicionais emergem, permitindo que sinais de ambos os olhos atinjam a
mesma rea do crebro (Currie e Cowan, 1974; Hoskins e Grobstein, 1985a). Em
Xenopus, essas novas vias neuroniais no resultam da remodelao de neurnios
existentes, mas da formao de novos neurnios que se diferenciam em resposta
aos hormnios da tireide (Hoskins e Grobstein, 1985a,b). Tanto o movimento dos
olhos para sua nova posio como a diferenciao de novos neurnios que esten-
dem processos ipsilaterais para o crebro so modificaes dependentes de horm-
nios da tireide.
Outros neurnios tambm sofrem mudanas profundas. Algumas clulas nervo-
sas morrem, como aquelas que inervam os msculos da cauda de girinos (Forehand e
Farel, 1982). Essa morte neuronial parece ser uma outra resposta ao hormnio da
tireide, e no causada pela morte do tecido alvo. Outros neurnios, como certos
neurnios motores na mandbula do girino trocam sua fidelidade do msculo larval
para o msculo adulto recm-formado (Alley e Barnes, 1983). E ainda outros neurni-
os, como aqueles inervando a lngua (um msculo recm-formado, no presente na
larva) estiveram dormentes durante o estgio de girino e s iniciam a formao de
conexes durante a metamorfose (Grobstein, 1987). O crebro tambm sofre mudanas
em sua estrutura durante a metamorfose. Portanto, o sistema nervoso dos anuros
sofre enorme reestruturao durante a metamorfose. Alguns neurnios morrem, ou-
tros nascem, e outros mudam sua especificidade.
MUDANAS DE COMPORTAMENTO. A metamorfose tambm traz mudanas de

comportamento; obviamente, o comportamento de uma r diferente do seu girino.
Recentemente, o estudo de rs tropicais demonstrou comportamentos surpreen-
dentes envolvendo inter-relaes r-girino. A r flecha de veneno, Dendrobates,
encontrada nas florestas tropicais da Amrica Central. A maior parte do tempo,
essas rs altamente txicas vivem nos detritos foliares do solo da floresta. Aps a
postura dos ovos sobre uma folha mida, um dos pais (s vezes o macho, outras a
fmea) serve de guardio dos ovos. Quando os ovos se transformam em girinos, o
guardio permite que eles se aboletem em suas costas (veja Prancha 34). A r sobe
ento para a copa das rvores at encontrar bromlias com poas de gua em suas
folhas da base, onde deposita um de seus girinos. Em seguida, vai buscar outro, e
assim por diante at que a ninhada toda tenha sido depositada em numerosas pe-
quenas poas de gua. Em seguida, a fmea retorna todos os dias a essas poas
onde deposita ovos no fertilizados, e reabastece o suprimento de alimento para os
girinos, quando esse escasseia, at que se complete a metamorfose (Mitchell, 1988;
vanWijngaarden e Bolanos, 1992; Brust, 1993). No se sabe como a fmea se lembra-
ou informada- onde foram depositados os girinos.
Repostas Moleculares aos Hormnios

da Tireide Durante a Metamorfose
Evidncia de experimentos com inibidores sugeriram que os hormnios da tireide

controlam a metamorfose ao nvel da transcrio. Weber (1967) demonstrou que a
injeo de actinomicina D em girinos prometamrficos normais inibiu a regresso da
cauda e a remodelao da cabea. No fgado (que remodelado na metamorfose e no
destrudo ou substitudo) as mudanas metamrficas so acompanhadas por aumen-
tos dramticos da sntese de RNA ribossmico e mensageiro, com a velocidade de
sntese de protenas aumentada quase 100 vezes dentro de 4 horas aps a estimulao
pelos hormnios da tireide (Cohen et al., 1978). Muitos desses novos mRNAs esto
codificando as novas enzimas do fgado adulto. Mori e colaboradores (1979) mostra-

ram que muito do aumento de carbamoilfosfato sintase pode ser atribudo ao aumento
da transcrio do seu gene.
O mtodo de transferncia de manchas, onde mRNA radioativo de girinos da r boi
(bullfrog) na fase premetamrfica e em metamorfose hibridizado com genes clonados,
demonstrou trs tipos de resposta aos hormnios da tireide. A transcrio de um
conjunto de genes aumenta em resposta a uma metamorfose induzida natural ou ex-
perimentalmente; a transcrio de um outro conjunto de genes dramaticamente redu-
zida; e um terceiro conjunto de genes permanece inalterado pelos hormnios da tireide
(Lyman e White, 1987; Mathison e Miller, 1987). A transcrio dos mRNAs para
albumina, globina adulta, queratina da pele adulta e o homlogo de Sonic hedgehog
em Xenopus controlada por T3. A transcrio do gene sonic hedgehog interessan-
te, pois sugere que o padro regional de formao de rgos durante a metamorfose
pode ser conseqncia do reaparecimento de algumas das mesmas molculas que
haviam estruturado o embrio (Stolow e Shi, 1995).
Mas essas so respostas ao T3 relativamente tardias. A resposta a T3 mais precoce
a ativao transcricional dos genes do receptor do hormnio da tireide (TR) (Yaoita
e Brown, 1990; Kawahara et al., 1991). Os receptores de hormnios da tireide so
membros de uma superfamlia de receptores de hormnios esterides dos fatores de
transcrio. Existem dois tipos principais de TR, TR e TR, e os mRNAs de ambos
esto presentes em nveis relativamente baixos antes do incio da metamorfose (Tabe-
la 19.2; Kawahara et al., 1991; Baker e Tata, 1992). Entretanto, a sntese desses mRNAs
acelerada dramaticamente ao se iniciar a metamorfose. A injeo de T3 exgeno causa
um aumento de 2 a 5 vezes na mensagem de TR e um aumento de 20 a 50 vezes no
mRNA para TR. Essa auto-induo da mensagem do receptor de T3 pelo prprio T3
pode ter um papel significativo na acelerao da metamorfose (Figura 19.7). Quanto
mais receptores de T3 tiver um tecido, mais competente ele ser para responder
pequenas quantidades de T3. Portanto, o clmax metamrfico, quando as mudanas
visveis da metamorfose ocorrem rapidamente, pode ser conseqncia de um aumento
na produo e induo de mais receptores de T3. O mecanismo dessa induo no
conhecido, mas Kanamori e Brown (1992) mostraram que a acelerao na formao do
mRNA de TR significativamente bloqueada por inibidores da sntese de protenas.
Assim, outras protenas esto provavelmente envolvidas na responsividade de genes
de TR ao T3. O TR no funciona sozinho, mas forma um dmero com o receptor retinide,
RX. Esse dmero liga hormnios da tireide e pode entrar no ncleo para efetuar a
transcrio (Wong e Shi, 1995).
Tabela 19.2 Acumulao relativa de

mRNA TR e em
girinos de Xenopus
aps tratamento com
T3 e prolactina
Unidades relativas
Tratamento
TR
TR
Nenhum 505 24
T3 1290 368
Prolactina + T3 799 <10
Prolactina 405 43
Fonte: De acordo com Baker e Tata, 1992.

(A) PREMETAMORFOSE (B) METAMORFOSE PRECOCE (C) CLMAX METAMRFICO

(PROMETAMORFOSE)
Concentrao baixa de tirotropina Concentrao de tirotropina aumenta Alta concentrao de tirotropina
Alta Alta
Concentrao de Concentrao concentrao do
Concentrao Concentrao baixa concentrao
T 3 e T4 aumenta do receptor receptor de T3
baixa de T3 e T4 do receptor de T3 de T3 e T4
de T3 aumenta
Gene do receptor de T3
Transcrio Transcrio
(Nenhuma transcrio) Ligao ao receptor

de T3 estimula a
Outros genes responsivos a T3 produo de mais
receptores de T3
Aumenta transcrio
dos genes induzidos
por T 3
Transcrio
Transcrio Transcrio
Ligao ao receptor de T3 estimula

a transcrio de outros genes Transcrio
Algumas protenas induzidas por T3

estimulam mais mensagem de T3
Figura 19.7
Modelo hipottico para a acelerao da metamorfose em Xenopus pela auto-induo de receptores
de T3 por T3. (A) No girino, a premetamorfose caracterizada por baixos nveis de tirotropina
(fator de liberao do hormnio da tireide), hormnios da tireide e receptores de T3. (B) No
incio da metamorfose, os nveis de tirotropina aumentam (provavelmente devido maturao
desenvolvimental da glndula pituitria). Isso aumenta a quantidade de T3 que se liga pequena
quantidade de seu receptor estimulando a transcrio de mais mRNA do receptor de T3. Algumas
outras protenas induzidas por T3 tambm so necessrias para a transcrio de mais mensagem
de T3. (C) No clmax metamrfico, as grandes concentraes de T3 induzem, ainda mais, a sntese
de seus receptores, o que causa uma resposta mais rpida ao T3.
Foi observado que o hormnio prolactina tambm inibe o aumento de mRNAs de

TR e TR. Ainda mais, se a acelerao dos receptores da tireide bloqueada pela
prolactina, a cauda no reabsorvida, e o gene de queratina especfico para o adulto
no ativado (Tata et al., 1991; Baker e Tata, 1992). Injees de prolactina estimulam
o crescimento larval e inibem a metamorfose (Bern et al., 1967; Etkin e Gona, 1967),
mas controverso se isso reflete o papel natural da prolactina (Taka hashi et al.,
1990; Buckbinder e Brown, 1993). Ainda no conhecemos o mecanismo de regulao
dos nveis de hormnios da tireide no girino, nem como a recepo do hormnio
desencadeia respostas diferentes (proliferao, diferenciao, morte celular) em te-
cidos diferentes.
& Especulaes
Heterocronia
A MAIORIA DAS ESPCIES animais

se desenvolve atravs de uma fase
larval. Entretanto, algumas esp-
cies modificaram seus ciclos de vida alon-
gando ou encurtando seu perodo larval. O
fenmeno pelo qual os animais modificam o
perodo de aparecimento e a velocidade de
desenvolvimento de caracteres j presen-
tes em seus ancestrais chamado hetero-
cronia. Aqui discutiremos trs tipos extre-
mos de heterocronia. Neotenia, se refere
reteno da forma juvenil devido a um atra-
so no desenvolvimento do corpo, em rela-
o s clulas germinativas e s gnadas,
cuja maturidade alcanada em tempo nor-
mal. Prognese tambm se refere reten-
o da forma juvenil, mas nesse caso as
gnadas e a linhagem germinativa se de-
senvolvem mais rapidamente do que o nor- (A) (B)
mal e elas se tornam sexualmente maduras,
Figura 19.8
enquanto o resto do corpo est ainda na
Metamorfose induzida no axolotle. (A) Condio normal do axolotle. (B) Espcimen tratado com
fase juvenil. No desenvolvimento direto, os tiroxina para induzir a metamorfose. (Cortesia de G. Malacinski.)
embries abandonam completamente os es-
tgios de desenvolvimento larval e passam larvas, acasalamentos bem sucedidos. Em De Beer (1940) e Gould (1977) especu-
a construir um pequeno adulto. parte do seu habitat, A. tigrinum uma laram que a neotenia um dos fatores im-
salamandra neotnica, se deslocando atra- portantes na evoluo de grupos taxon-
Neotenia vs dos frios lenis de gua das Monta- micos mais complexos. Retardando o de-
Em certas salamandras, a maturidade se- nhas Rochosas. Entretando, na parte mais senvolvimento de tecidos somticos, se d
xual ocorre em uma fase que considera- quente do seu habitat, a forma larval de A. seleo natural um substrato mais flex-
da larval. O sistema reprodutivo e as clu- tigrinum transitria, originando-se a sa- vel. De acordo com Gould, a neotenia esta-
las germinativas amadurecem, enquanto lamandra tigre terrestre. Populaes ria fornecendo um escape da especializa-
o resto do corpo retm a forma juvenil ao neotnicas das Rochosas podem ser indu- o. Os animais podem abandonar suas
longo de sua vida. Na maioria dos casos, zidas a sofrer metamorfose quando colo- formas adultas especializadas, retornar
a metamorfose no se concretiza, e a ma- cadas em guas mais quentes. Parece que labilidade da juventude e se preparar para
turidade sexual se d em um corpo larval. o hipotlamo dessas espcies no pode novas direes evolucionrias.
A axolotle Mexicana, Ambystoma me- produzir o fator liberador de TSH em bai-
xicanum, no sofre metamorfose na natu- xas temperaturas. Prognese
reza porque sua glndula pituitria no li- Algumas salamandras, entretanto, so Na prognese, a maturao das gnadas
bera a forma ativa do hormnio estimulan- permanentemente neotnicas, mesmo no acelerada enquanto o resto do corpo se
te da tireide (TSH) para que seja estimula- laboratrio. Enquanto a tiroxina capaz de desenvolve normalmente a um certo est-
da a sntese de T3 em sua glndula tireide produzir a antiga forma adulta perdida de A. gio. A prognese permitiu que certas es-
(Prahlad e De-Lanney, 1965; Norris et al., mexicanum (Figura 19.8), as espcies pcies de salamandra encontrassem novos
1973; Taurog et al., 1974). Assim, quando neotnicas Necturus e Siren no respon- nichos ecolgicos. Bolitoglossa occiden-
os pesquisadores forneceram A. mexica- dem a hormnios da tireide (Frieden, 1981); talis uma salamandra tropical diferente
num o hormnio da tireide ou TSH, eles sua neotenia permanente. Yaoita e Brown de outros membros do seu gnero, por vi-
observavam uma metamorfose em um adul- (1990) notaram que o mRNA para o receptor ver em rvores. Essa salamandra palm-
to no encontrado na natureza (Huxley, do hormnio da tireide est ausente em pedes e tem um corpo pequeno, condies
1920). Outras espcies como a A. tigrinum, Necturus e, portanto, no pode ser induzi- adequadas para uma vida arbrea; os ps
s sofrem metamorfose se receberem sido por T3. As leses genticas considera- produzem a suco para a subida e o cor-
nais do ambiente. Isso no acontecendo, das responsveis pela neotenia em vrias po pequeno torna a trao eficiente.
elas se tornam neotnicas e realizam, como espcies esto mostradas na Figura 19.9. Alberch e Alberch (1981) mostraram que
Estmulos externos mento direto, tpico em espcies de rs emerge do ovo gelatinoso, trs semanas
que no tm girinos e ourios-do-mar que aps a fertilizao, no um girino, mas
no tm larvas pluteus. Elinson e seus uma pequena r (Figura 19.10D). A peque-
Hipotlamo colegas (del Pino e Elinson, 1983; Elinson, na r tem uma cauda durante a primeira
1987) estudaram uma pequena r, Eleu- parte de sua vida, mas ela usada para
Ambystoma tigrinum therodactylus coqui, que um dos ani- respirao e no para a locomoo. Tais
Ambystoma gracilus mais mais abundantes na ilha de Porto rs com desenvolvimento direto no ne-
Rico. Diversamente dos ovos de Rana e cessitam de gua para seus estgios
Hormnio liberador de Xenopus, os ovos de E. coqui so fertili- larvais e podem, portanto, colonizar no-
tirotropina (TSH-RF) zados enquanto esto no corpo da fmea. vas regies inacessveis a outras rs.
Cada ovo tem 3.5mm de dimetro (cerca Raff (1987) estudou o desenvolvimen-
Pituitria
de 20 vezes o volume dos ovos de Xeno- to direto em ourios-do-mar. Em ourios-
pus). Aps a postura, o macho permane- do-mar tpicos, as clulas mesenquima-
ce levemente apoiado sobre os embries, tosas primrias invaginam e secretam o
Ambystoma mexicanum
protegendo-os de predadores e da des- esqueleto de carbonato de clcio da larva
secao (Taigen et al., 1984). O desenvol- pluteus. Essas larvas se alimentam e cres-
Hormnio
vimento precoce semelhante maioria cem at que se formem as vesculas
estimulante da tireide
das rs. A clivagem holoblstica, a gas- celmicas (tambm derivadas dos micr-
trulao iniciada na posio subequa- meros) nos lados do intestino (Pehrson e
torial (Figura 19.10A), e as dobras neurais Cohen, 1986). O celoma esquerdo conti-
Tireide
se elevam a partir da superfcie (Figura nua a crescer produzindo uma hidrocele
19.10B). Entretanto, logo aps o fecha- que induz o ectoderma sobrejacente a
Tiroxina,
Triiodotironina
mento do tubo neural, os brotos dos mem- invaginar formando um vestbulo. A
bros aparecem na superfcie (Figura hidrocele e o vestbulo formam um rudi-
Eurycea neotenes
19.10C). Essa emergncia precoce de bro- mento que cresce dentro da larva at ser
Espcies de Necturus tos de membros a primeira indicao de liberado na metamorfose para se tornar
e Siren
que o desenvolvimento direto e que no um ourio-do-mar juvenil (Figura 19.11).
passar pelo estgio de girino sem mem- Vrias espcies de ourio-do-mar tm
Tecidos alvo capazes
bros. Mais ainda, a emergncia dos mem- estgios suprimidos da larva pluteus en-
de sofrer metamorfose bros no depende de hormnios da quanto aceleram o desenvolvimento do ru-
tireide (Lynn e Peadon, 1955). O que dimento adulto. Como no desenvolvimento
Figura 19.9
Estgios ao longo do eixo hipotlamo-pituitria- (A) (B)
tireide da salamandra onde se considera que
vrias espcies tm bloqueio da metamorfose.
Eurycea, Necturus e Siren parecem ter um de-
feito no receptor dos tecidos responsivos.
Eurycea ter metamorfose ao ser exposta con-
centraes extremamente altas de tiroxina, en-
quanto que Necturus e Siren no respondem a
qualquer dose. (De acordo com Frieden, 1981.)
B. accidentalis se assemelha aos juvenis

(C) (D)
das espcies relacionadas B. subpalmata
e B. rostrata (cujos jovens so peque-
nos, com dgitos que ainda no ultrapas-
saram a interligao). Considera-se que
B. occidentalis se tornou um adulto se-
xualmente maduro com um tamanho mui-
to menor do que seus predecessores. Isso
deu-lhe um fentipo que possibilitou a
vida em rvores.
Figura 19.10
Desenvolvimento direto Desenvolvimento direto da r Eleutherodactylus coqui. (A) Gstrula precoce mostrando o lbio
Enquanto alguns animais estenderam o do blastporo. (B) Vista dorsal da nurula mostrando a elevao das dobras neurais. (C) Um dia
perodo larval de sua vida, outros acele- aps o fechamento das dobras neurais, pode se ver os brotos dos membros. (D) Trs semanas
raram seu desenvolvimento abandonan- aps a fertilizao eclode uma pequena r, aqui vista ao lado de uma moeda de um penny
do suas formas larvais normais. Esse Canadense (a inflao da cauda um artefato causado pelos fixadores qumicos usados para
ltimo fenmeno, chamado desenvolvi- preparar o espcimen). (de Elinson, 1987, cortesia de R. P. Elinson.)
(A) (B) A natureza forneceu uma excelente

comparao em duas espcies australia-
nas de ourio-do-mar do gnero Helioci-
daris. Heliocidaris erythrogramma e H.
tuberculata so espcies comuns, que de
acordo com dados morfolgicos e de se-
qenciamento de DNA, so estreitamen-
te relacionadas. Eles vivem lado a lado e
desovam ao mesmo tempo no vero. En-
Rudimento do Estmago tretanto, H. erythrogramma tem um ovo
ourio-do-mar com o dimetro de 425m e de desen-
(C) (D) volvimento direto; H. tuberculata produz
um ovo com 95m de dimetro e se de-
senvolve atravs de uma larva pluteus t-
pica. Uma comparao entre as duas es-
pcies revela que o desenvolvimento di-
reto eliminou os estgios larvais e h um
prosseguimento direto para a formao do
celoma e a construo do ourio-do-mar
juvenil (Figura 19.12). A larva pluteus
destinada natao e alimentao (Strath-
mann, 1971, 1975), usando seus braos
como suporte de faixas de clios que var-
rem partculas de alimento para dentro da
boca. As clulas nos organismos de de-
Rudimento do Apndices senvolvimento direto mudaram seus des-
ourio-do-mar adultos
tinos de modo a no se formar o esquele-
Figura 19.11
to larval ou a boca. Tambm, na gastrula-
Metamorfose normal da larva pluteus para adulto no ourio-do-mar Lytechinus pictus. (A) Larva
pluteus, 8 dias aps a fertilizao. (B) Larva pluteus de 11 dias com rudimento do ourio-do-mar o desses ourios-do-mar de desenvol-
e bolsa celmica esquerda. (C) Uma pluteus de 19 dias com o rudimento do ourio-do-mar em vimento direto no se observa descen-
desenvolvimento. (D) Cerca de 11 minutos aps a fixao ao substrato, os braos da larva dentes das clulas do micrmero que
comeam a ser reabsorvidos. (De Hinegardner, 1969, cortesia de R. T. Hinegardner.) invaginam para formar o esqueleto larval.
Pelo contrrio, essas clulas so imedia-
direto na r, esse desenvolvimento em ou- (portanto, no se alimentam). Essas esp- tamente envolvidas na formao da espi-
rio-do-mar depende de um ovo grande cies mostram um crescimento acelerado nha calcria do jovem adulto. Tambm, a
com vitelo. De fato, Raff encontrou uma do rudimento adulto, de modo que um ou- extremidade do arquntero nas formas de
correlao entre o volume do ovo e a ex- rio-do-mar juvenil, capaz de se alimentar, ourio-do-mar com desenvolvimento di-
tenso do desenvolvimento direto (Tabela produzido rapidamente. Existem alguns reto forma uma extensa hidrocele que
19.3). Ourios-do-mar na Amrica do Nor- ovos com vitelo alcanando um dimetro interage com o vestbulo ectodrmico para
te e na Europa tm ovos cujo dimetro va- de 2mm (prximo do volume de ovos de formar o rudimento de ourio-do-mar na
ria de 60 a 200 m. Essas espcies tm um Xenopus). Esses embries desenvolvem- gastrulao. No desenvolvimento indire-
desenvolvimento indireto atravs da larva se diretamente sem qualquer estgio to, somente duas clulas iniciam a forma-
pluteus. Ovos no intervalo de 300-350 m pluteus. O estgio de alimentao no o do vestbulo, e essas interagem com
produzem larvas pluteus parciais que pos- necessrio porque a nutrio garantida a hidrocele depois do estabelecimento da
suem o esqueleto larval mas no o intestino pelo vitelo. estrutura de pluteus (Wray e Raff, 1990,
1991). Dessa forma, temos um interessan-
te paradoxo. De um lado, o desenvolvi-
Tabela 19.3 Relao entre o tipo de desenvolvimento e o tamanho do mento dos estgios larvais parecem estar
ovo em ourios-do-mar fortemente contidos. Larvas de diferen-
Nmero de Espcies Intervalos de tamanho Tipo de desenvolvimento tes classes de equinodermos so muito
m)
de ovo ( parecidas, e os girinos de diferentes gru-
pos de rs so tambm muito semelhan-
83 60 - 345 Larva pluteus com alimentao
tes. Entretanto, essas contenes podem
1 280 Pluteus com alimentao facultativa ser eliminadas se for abandonada a ne-
2 300 - 350 Pluteus abreviada, sem alimentao cessidade de um estgio larval para ali-
mentao. O aumento da quantidade de
19 400 - 2000 Pluteus perdida; desenvolvimento direto vitelo disposio do embrio parece tor-
Fonte: De acordo com Raff, 1987. nar isso possvel.
Figura 19.12 DESENVOLVIMENTO INDIRETO

Modificaes no destino celular e gastrulao
S. purpuratus, H. tuberculata
no ourio-do-mar em desenvolvimento direto
e indireto. Os mapas de destino no estgio de
32 clulas mostram as diferenas de destino
celular. Os destinos vegetais (indicados por
sombreamento) incluem o celoma (C), intesti-
no (G), clulas pigmentadas (P) e mesnquima
esqueletognico (S). As clulas dando origem Seqestro do adulto
aos tecidos neurais so denotadas como N. para o primrdio
Note que o desenvolvimento direto no produ- da bolsa celmica
ziu micrmeros e macrmeros separados. No
desenvolvimento indireto forma-se uma pluteus, Destinos em 32 clulas Pluteus
e dentro dessa estrutura larval as interaes 4 semanas
formam o rudimento do ourio-do-mar juvenil
(colorido). No desenvolvimento direto, tais in-
teraes entre o celoma e as clulas do vestbu-
lo ocorrem imediatamente na gastrulao, e o DESENVOLVIMENTO DIRETO
rudimento juvenil (colorido) formado sem o Ourio-do-mar
estgio larval de alimentao. Ambos os tipos juvenil
de desenvolvimento geram as mesmas estrutu-
ras adultas. (De acordo com Raff, 1994.) H. erythtogramma 4 dias
Sem alongamento do
arquntero, iniciao
do esqueleto larval,
formao do intestino
larval ou seqestro
Destinos em
do primrdio embrionrio
32 clulas
Metamorfose em insetos
Everso e Diferenciao dos Discos Imaginais
Enquanto a metamorfose em anfbios caracterizada pela remodelao de tecidos

existentes, a metamorfose nos insetos freqentemente envolve a destruio de teci-
dos larvais e sua substituio por uma populao de clulas totalmente diferente.
Existem trs padres principais de desenvolvimento dos insetos. Alguns poucos
insetos, como os poduras (subordem dos colmbolos) no tm o estgio larval e se
desenvolvem diretamente. Outros insetos, notavelmente gafanhotos e insetos
rastejantes, sofrem uma metamorfose gradual hemimetablica (Figura 19.13A). r-
gos adultos so formados sem uma descontinuidade intensa. Os rudimentos da asa,
rgos genitais e outras estruturas adultas esto presentes na ecloso, e se tornam
mais maduros em cada muda. Na ltima muda, o inseto emergente um adulto alado e
sexualmente maduro. A forma larval do inseto hemimetablico chamada de ninfa.
Nos insetos holometablicos (moscas, besouros, mariposas e borboletas) existe
uma transformao dramtica e sbita entre os estgios de larva e adulto (Figura
19.13B). A larva juvenil (lagarta, verme, larva de inseto) sofre uma srie de mudas
enquanto se torna maior. Uma larva de inseto recm-eclodida coberta com uma dura
cutcula. Para crescer, o inseto precisa produzir uma cutcula nova e maior, como
tambm descartar a cutcula velha. Portanto, o desenvolvimento ps-embrionrio
(A) DESENVOLVIMENTO (B) DESENVOLVIMENTO

HEMIMETABLICO HOLOMETABLICO
Muda Muda
Muda Muda
Muda
Muda
Muda
Muda Muda e metamorfose pupa
Muda e metamorfose Metamorfose
Adulto Adulto
Figura 19.13
(A) Metamorfose hemimetablica (incompleta). (B) Metamorfose holometablica (completa).
desses insetos consiste em uma sucesso de mudas. O nmero de mudas antes da

fase adulta caracterstico das espcies, apesar de fatores ambientais poderem au-
mentar ou diminuir esse nmero. Os estgios entre essas mudas so chamados insta-
res. Os estgios instar crescem em degraus, cada um sendo qualitativamente maior do
que o anterior. Aps o ltimo estgio instar, a larva sofre uma muda metamrfica para
se tornar uma pupa. A pupa no se alimenta, e sua energia deve se originar daqueles
alimentos ingeridos enquanto larva. Durante a pupao, as estruturas adultas so
formadas e substituem as estruturas larvais. Finalmente, uma muda imaginal permite
ao adulto descartar o invlucro pupal e emergir.
A Drosophila sofre quatro mudas no seu ciclo vital. O embrio se desenvolve no
primeiro instar da larva e muda, em seguida, para se tornar a larva do segundo instar.
Mudas subseqentes separam o segundo instar do terceiro, do terceiro para a pupa e
da pupa para o adulto. Em cada muda, as clulas epidrmicas se separam da cutcula e
secretam um fluido de muda nos espaos intervenientes. Aps a secreo da nova
cutcula, as clulas epidrmicas degradam a velha pela ativao de enzimas no fluido
de muda (Hepburn, 1985). A transformao de juvenil para adulto ocorre dentro da
cutcula pupal. A maior parte do corpo antigo da larva sistematicamente destrudo ao
se desenvolverem novos rgos adultos a partir de ninhos de clulas no diferenciadas,
Figura 19.14 Discos para:

As localizaes e os destinos desenvolvi-
mentais dos discos imaginais de Drosophi- Parte da boca
la melanogaster. (De acordo com Fristrom
et al., 1969.) Placa frontal e
Discos imaginais
lbio superior
Antena
Cabea
Olho
Trax
Perna
Haltere
Asa Abdmen
Genitlia
Larva de Metamorfose Adulto de

Drosophila Drosophila
os discos imaginais (e, em alguns insetos, os histoblastos). Quando o organismo

adulto (imago) est desenvolvido, a muda imaginal resulta no descarte da cutcula e
na emergncia do inseto adulto. Em larvas holometablicas, ento, existem dois tipos
de populaes celulares: as clulas larvais, usadas para as funes do juvenis, e as
milhares de clulas imaginais, as quais esperam em aglomerados o sinal para diferen-
ciar. A Figura 19.14 mostra a localizao dos discos imaginais na Drosophila e as
estruturas nas quais eles se desenvolvem.
Na Drosophila existem 10 pares principais de discos imaginais, que reconstroem o
adulto inteiro (com exceo do abdmen), e um disco genital que forma as estruturas
reprodutivas. A epiderme abdominal se forma de um pequeno grupo de clulas imagi-
nais chamadas histoblastos, que se situam na regio do intestino larval, e outros
ninhos de histoblastos localizados em toda a larva formam os rgos internos do
adulto. Os discos imaginais podem ser vistos na larva recm eclodida como
espessamentos locais da epiderme. Na Drosophila esses discos recm-eclodidos do
olho-antena, asa, halteres, pernas e genitais contm 70, 38, 20, 36-45 e 64 clulas,
respectivamente (Madhavan e Schneiderman, 1977). Enquanto que a maioria das clu-
las larvais tem uma capacidade mittica limitada, os discos imaginais dividem-se rapi-
damente em tempos caracteristicamente especficos. Ao se proliferarem, as clulas
formam um epitlio tubular que se dobra sobre si mesmo em uma espiral compacta
(Figura 19.15A). O disco maior, o da asa, contm cerca de 60.000 clulas, ao passo que
os discos da perna e do haltere contm 10.000 (Fristrom, 1972). Na metamorfose, essas
clulas se diferenciam e se alongam (Figura 19.15B).
O mapa do destino e a seqncia de alongamento do disco da perna esto ilustra-
dos na Figura 19.16. No fim do desenvolvimento larval, o disco da perna um saco
epitelial conectado epiderme larval por um delgado pednculo. Em um lado do saco,
o epitlio est dobrado em uma srie de dobras concntricas, reminescentes da rosca
Dinamarquesa (Kalm et al., 1995). No fim do perodo larval, as clulas do centro do
disco se projetam para fora para se tornarem as pores mais distais da perna- a garra
e o tarso. As clulas de fora se tornam as estruturas proximais- a coxa e a epiderme
(A) (B)
Figura 19.15
Alongamento do disco imaginal. Eletromicrografia de varredura do disco da perna de Drosophila
no terceiro instar antes (A) e aps (B) o alongamento. (De Fristrom et al., 1977, cortesia de D.
Fristrom.)
adjacente. Aps a diferenciao, as clulas dos apndices e epiderme secretam uma

cutcula apropriada para a regio especfica. Apesar dos discos serem compostos
primariamente de clulas epidrmicas, um pequeno nmero de clulas adepiteliais
migram para o disco no incio do desenvolvimento. Durante o perodo pupal, essas
clulas do origem aos msculos e nervos que servem essa estrutura.
O processo de alongamento pode ser iniciado em cultura colocando-se discos
imaginais em soluo contendo o hormnio de muda, 20-hidroxiecdisona. Ainda mais,
tal everso pode ser inibida adicionando um de trs conjuntos de drogas. (1) Inibidores
de sntese de RNA e de protenas inibem a everso quando adicionados a discos
imaginais cultivados, ao mesmo tempo que o 20-hidroxiecdisona. Sabe-se que a snte-
se de RNA e de protena ocorrem antes do alongamento e que algumas dessas protenas
so necessrias para que isso ocorra. (2) Citocalasina B, um inibidor da funo de
microfilamentos, tambm inibe o alongamento, indicando assim a necessidade de
microfilamentos de actina. (3) Inibidores de proteases tambm inibem o alongamento
(Pino-Heiss e Schubiger, 1989), pois proteases da superfcie das clulas so necess-
rias para a liberao de constritores da forma celular. Em conjunto, esses dados suge-
rem que a everso de discos imaginais requer sntese de novas protenas, um sistema
bem desenvolvido de microfilamentos de actina e alguma comunicao celular atravs
da superfcie da clula (Fristrom et al., 1977; Kalm, 1995).
Estudos de Condic e seus colegas (1990) demonstraram que o alongamento do
disco imaginal devido primariamente s mudanas da forma celular dentro do epitlio
Coxa
Trocanter Membrana
peripodial T2-5
Trax Fmur
Fmur T1 T1 Trocanter
presuntivo Tbia Tbia Tbia Fmur Tbia T1 T2-5 Fmur
Coxa
Garra
Trocanter Fmur Coxa Tbia
Trax Fmur Trax Trax
Coxa presuntivo Trocanter presuntivo (D)
Trocanter presuntivo
T2-5 T1
(A) Garras (B) (C)
Tarso
Figura 19.16
Seqncia de alongamento do disco da perna de Drosophila. (A) Vista da superfcie do disco no Garras
invertido. (B,C) Seco longitudinal atravs do disco da perna em alongamento e completamente
invertido. t1, basitarso; t2-5, segmentos tarsais 2-5. (D) Perna adulta. (de Fristrom e Fristrom,
1975, cortesia de D. Fristrom.)
Figura 19.17 (A) (B) (C)

Modificaes na forma da clula durante o alon-
gamento do disco imaginal da perna da Droso-
phila. Superior: Sees pticas atravs do se-
gundo disco da perna em alongamento. As fle-
chas marcam os segmentos basitarsais, e a bar-
ra de calibrao representa 100m. Inferior:
Aumento maior (barra de calibrao representa
10m) dos pices celulares atravs da rea
basitarsal. Os limites celulares esto marcados
com faloidina marcada por fluorescncia. (A)
Incio do estgio prepupal. (B) Prepupa com 6
horas. (C) Disco da perna de uma prepupa em
fase inicial tratada com tripsina. As clulas
basitarsais esto inicialmente comprimidas ao
longo do eixo prximo-distal. Por tratamento
com hidroxiecdisona ou tripsinizao, a com-
presso liberada, e as clulas se expandem
para alongar o tecido. (de Condic et al., 1990,
cortesia dos autores.)
do disco. Usando faloidina marcada por fluorescncia para corar os microfilamentos

perifricos das clulas do disco da perna, eles mostraram que as clulas dos discos
precoces do terceiro instar esto fortemente comprimidas ao longo do eixo prximo-
distal. Essa compresso mantida por vrias rodadas de diviso celular. Ento, ao se
iniciar o alongamento do tecido, a compresso removida e as clulas saltam para
sua forma mais arredondada (Figura 19.17). Essa converso de um epitlio de clulas
comprimidas em um epitlio mais longo de clulas no comprimidas representa um
novo mecanismo para a extenso de um rgo durante o desenvolvimento.
& Especulaes
A determinao dos discos imaginais da perna e da asa

Determinao dos discos do ectoderma or da expresso da protena Wingless (Wg) haltere. Portanto, os discos da perna e da
A biologia molecular da metamorfose de e a banda horizontal de clulas expressan- asa tm uma origem comum (Figura 19.18).
insetos comea com a especificao de do a protena Decapentaplegic (Dpp).
certas clulas epidrmicas para se torna- Ambas as protenas so solveis e tm um Determinao da identidade do disco
rem precursoras do disco imaginal. Como alcance limitado. No embrio precoce de Apesar de sua origem comum, bvio que
foi discutido no Captulo 14, os rudimen- Drosophila (em uma extenso da banda os discos da perna e da asa so determi-
tos de rgos na Drosophila so especifi- germinativa cerca de 4.5 horas aps a ferti- nados para se tornarem estruturas dife-
cados em uma grade ortogonal pela lizao), um nico grupo de clulas na rentes. Como detalhado anteriormente, a
interseco dos sinais ntero-posterior e interseco desses domnios forma os pre- especificao desses discos para seus
dorsoventral. Na maioria dos segmentos, cursores do disco imaginal no abdmen. destinos particulares provavelmente re-
os produtos do gene homeobox impedem Essas clulas (e somente elas) expressam alizada pelas interaes dos genes home-
a expresso do gene Distal-less e o esta- a protena Distal-less. Enquanto as clulas ticos. Mesmo assim, ainda no conhece-
belecimento de primrdios dos membros; expressando dpp so movidas dorsalmen- mos as molculas que especificam que os
mas naqueles segmentos especificados te, essas clulas expressando Distal-less discos da perna sejam diferentes dos dis-
para serem torcicos permitida a forma- se movem para estabelecer um agrupamen- cos da asa, ou que os discos do olho se-
o de membros (veja Figura 14.33). Cohen to secundrio de clulas imaginais (deri- jam diferentes dos discos da antena. Sa-
e colegas (1993) demonstraram que a per- vadas do agrupamento ventral original). Os bemos sim que quando certos genes ho-
na e a asa se originam do mesmo conjunto agrupamentos iniciais formam os discos meticos so expressos nos lugares erra-
de precursores imaginais, especificados na imaginais da perna, enquanto que os se- dos (como a expresso de Antennapedia
interseco entre as faixas ntero-posteri- cundrios formam os discos da asa e do no disco do olho-antena), os discos se
Clula expressando Distal-less
Alcance do sinal Wg
Alcance do sinal Dpp
Clula expressando dpp
Clula expressando wg
4.5 horas 10 horas Embrio maduro

Figura 19.18
Modelo esquemtico para a alocao e separao do disco perna-asa no trax da Drosophila. O
embrio dividido em uma grade ortogonal com faixas verticais de Wingless (Wg) e uma banda
horizontal de sntese e secreo de Decapentaplegic (Dpp). O disco inicial se forma na interseco engrailed est ausente, todas as clulas
desses domnios secretores. As clulas secretoras de Dpp migram dorsalmente, trazendo com do disco se tornam anteriorizadas. O limite
elas algumas clulas do disco imaginal. Essas clulas do disco dorsal geram o disco da asa, entre os compartimentos anterior e poste-
enquanto as clulas remanescentes formam o disco da perna. (De acordo com Cohen et al., 1993.) rior estritamente observado. Clulas de
um lado no podem produzir descenden-
reespecificam (de modo que pernas nas- ciais, um sistema polar coordenado (se- tes que cruzam o limite para o outro lado.
cem do disco da antena). A determinao melhante aquele discutido no captulo No disco da asa, as clulas posteriores
do disco da asa parece ser regulada pelo anterior, para o desenvolvimento do mem- expressam a protena Hedgehog que age
gene vestigial, que regula a sua (do disco bro de vertebrados) pode subdividir mais como um sinal de curto alcance para indu-
da asa) identidade. Usando um sistema precisamente as regies (Held, 1995). zir a expresso de Dpp nas clulas anterio-
de endereamento da expresso gnica, res adjacentes, enquanto a expresso de
Kim e colegas (1996) fizeram com que o O eixo ntero-posterior engrailed nas clulas posteriores as torna
gene vestigial fosse expresso nos discos Durante o primeiro instar larval, os discos no responsivas Hedgehog que elas se-
do olho, antena e perna (Figura 19.19). imaginais da perna e da asa adquirem seu cretam. A protena Dpp age como um sinal
Quando isso acontece, regies da estru- eixo ntero-posterior (A/P). Os discos se de longo alcance para estabelecer o eixo
tura normal so convertidas em asa. tornam divididos em dois compartimentos ntero-posterior da asa (Guillen et al., 1995;
representando as futuras regies anterior Tabata et al., 1995; Nellen et al., 1996).
Determinao da polaridade do disco e posterior dos apndices (ou seja, da fren- No disco da perna, o compartimento
Evidncia recente sugere que os eixos da te para trs da asa). O compartimento pos- posterior tambm secreta a protena Hed-
perna e da asa so especificados por inte- terior definido pela expresso do gene gehog. Aqui, entretanto, Hedgehog induz
raes nos limites de seus compartimen- engrailed nas clulas posteriores do dis- as clulas dorsais do compartimento ante-
tos (Meinhardt, 1980; Causo, 1993; co (Figura 19.20; Garcia-Bellido et al., 1973; rior a secretar Dpp enquanto essa induz as
Tabata, 1995). Aps essas interaes ini- Lawrence e Morata, 1976). Se a funo clulas ventrais do mesmo compartimento
a secretar Wingless (Jiang e Struhl, 1996).
(A)
Gene vestigial O eixo dorsoventral
Protena No segundo instar da larva, um segundo
GAL4
eixo, o dorsoventral determinado no disco
Intensificador GAL4 Elemento da asa. O limite D/V se situa na futura mar-
do olho ligante de gem da lmina da asa, assim separando as
GAL4 (USP)
Vestigial expresso superfcies superior e inferior da asa (Bryant,
(B) ectopicamente nas 1970; Garcia-Bellido et al., 1973). O gene
clulas do olho envolvido nesse evento de compartimenta-
Vista ventral da cabea da Drosophila
o o apterous. Clulas expressando o
Crescimento semelhante
asa a partir do olho ventral
gene apterous se tornam as clulas dorsais
Olho
Figura 19.19 O gene vestigial determina a identidade do disco da asa. (A) Kim e colegas
construram linhagens de Drosophila que possuem a protena ativadora transcricional do levedo
GAL4 acoplada a um intensificador, tal como o intensificador do olho mostrado nesta figura. Apesar
de GAL4 ser expressa nos olhos dessas moscas, no h ligao a qualquer DNA da Drosophila.
Entretanto, se a mosca cruzada com outra espcie que contm o gene vestigial a vazante do elemento
ligante de GAL4 (a seqncia ativadora a montante - UAS), a protena GAL4 ativa esse gene.
Portanto, nessas moscas, a protena GAL4 produzida no disco do olho e ativa a expresso do gene
vestigial. (B) O olho resultante contm regies do tecido da asa. (De acordo com Kim et al., 1996.)
Primeiro instar Figura 19.20 membro (ou seja, a garra). Essa regio
Anterior
Compartimentao e expresso gnica no dis- comea a expressar os genes Distal-less
Posterior
co da asa. (A) No primeiro instar da larva foi e arista-less que caracterizam a regio da
formado o eixo ntero-posterior e manifesta-
extremidade distal e estimulam o cresci-
do pela expresso do gene engrailed no com-
partimento posterior. No segundo instar, for- mento e a diferenciao das clulas (Fi-
Segundo instar gura 19.21A; Campbell et al., 1993; Basler
Ventral
ma-se o eixo dorsoventral, e visto pela ex-
Dorsal A presso do gene apterous na futura superfcie e Struhl, 1994; Diaz-Nenjumea et al., 1994).
dorsal. No terceiro instar da larva, as bordas da Se a protena Dpp produzida por um
expresso de engrailed se estendem ligeiramen- aglomerado de clulas no compartimento
te alm do limite de A/P. Onde h interao das anterior ventral ou se a protena Wingless
protenas secretadas e da membrana na juno
expressa por um pequeno grupo de c-
dos eixos D/V e A/P, as clulas so determina-
das a se tornar a extremidade distal da asa (X). lulas no compartimento anterior dorsal
Fim do terceiro instar Margem (ativando genes), um eixo prximo-distal
(De acordo com Blair, 1995.)
Ventral inteiramente novo ser formado no local
perna realizada por interaes nos limi- da expresso (Figura 19.21B; Prancha 27).
Dorsal tes entre os eixos D/V e A/P. A situao na asa um pouco mais dif-
Na perna, a protena Hedgehog do cil de compreender. A protena Hedgehog
compartimento posterior induz as clulas do compartimento posterior induz as clu-
mais prximas do compartimento anterior las adjacentes dos compartimentos anterior
Lmina da asa dorsal, a secretar a protena Decapenta- dorsal e anterior ventral a secretar Dpp. Isso
Adulto plegic e induz a protena Wingless das estabelece as condies de crescimento
clulas mais prximas do compartimento celular e padronizao ao longo do eixo A/
Dorsal Ventral anterior ventral. Ambas as protenas, De- P. Nas clulas que do origem margem, as
Margem capentaplegic e Wingless ativam o gene clulas da superfcie dorsal que expressam
optomotorblind, cujo produto protico
promove o crescimento dos apndices do
(A)
membro (Wilder e Perrimon, 1995; Grimm
e Pflugfelder, 1996). Ainda mais, onde es-
sas trs protenas difusveis se encontram Distalless
se define a extremidade mais distal do
engrailed
apterous
ambos
(B) Anterior Posterior
(Prancha 15; Frontispcio; Blair, 1993; Diaz-

Benjumea et al., 1993). Quando o apterus
deletado, todas as clulas no disco adqui- (C)
rem destinos ventrais. Tanto engrailed
como apterous so considerados genes
seletores pois eles regulam o destino de um
compartimento. Da mesma maneira que os
genes hometicos seletores discutidos no
Captulo 14, esses genes contm homeobo-
xes que parecem codificar fatores de trans-
crio. Na asa, no h crescimento ao longo
do eixo D/V, pois o ectoderma permanece
com a espessura de uma camada de clulas
em cada lado da margem da asa. No se Figura 19.21 Modelo da formao do eixo na perna da Drosophila em desenvolvimento.
sabe o que causa a polaridade inicial do D/ (A) A protena Hedgehog somente sintetizada e secretada pela clulas sintetizadoras de Engrailed
no lado posterior do disco. A protena Hedgehog se difunde em uma distncia de alguns dime-
V no disco da perna.
tros celulares e induz a faixa de clulas posteriores adjacentes na regio dorsal do disco a
expressarem os genes decapentaplegic. A protena Dpp ento se difunde e padroniza o lado
O eixo prximo-distal dorsal anterior do disco. A secreo de Hedgehog pelas clulas posteriores instrui as clulas
A interao entre os eixos D/V e A/P nos anteriores ventrais, adjacentes s clulas posteriores, a sintetizarem e secretarem a protena Wingless.
seus limites crtica para o crescimento Isso ajudar a padronizar a asa anterior ventral. (B) Quando um clone de clulas expressando
ao longo do eixo prximo-distal. Durante Wingless produzido na regio dorsal do disco (pela manipulao de um transgene wingless),
esse organiza a formao de um novo eixo do membro. Aqui, esse eixo pode ser visto quando
a metamorfose, a distalizao do eixo corado para a presena de expresso do gene Distalless. (C) Novo eixo de membro formado
prximo-distal da base do trax para fora quando um clone de clulas expressando Dpp expresso ectopicamente. (B e C de Diaz-
em direo extremidade da asa ou da Benjumea et al., 1994; fotografias cortesia dos autores.)
Prancha 22
Expresso de sonic hedgehog no
embrio do pinto de trs dias. Prancha 23
O sonic hedgehog est envolvido em numerosas inte- Expresso de sonic hedgehog no embrio
raes indutivas nas quais um tecido influencia a dife- do pinto de dez dias.
renciao de outro tecido. Hibridizao in situ da Depois de mediar vrias interaes importantes durante a formao de
montagem total encontra mRNA de sonic hedgehog rgos, sonic hedgehog torna-se expresso no ectoderma dos germes das
na notocorda, clulas da placa do assoalho neural, penas em desenvolvimento e escamas dos ps. Essa hibridizao in situ
intestino anterior e mediano e no mesoderma do broto da montagem total mostra o arranjo hexagonal do padro das penas.
do membro posterior. Captulos 7, 8 , 15 e 18. (Foto- Captulo 17. (Fotografia cortesia de Won-Sun Kim e John F. Fallon.)
grafia cortesia de C. Tabin.)
Prancha 24
A protena Myf-5 expressa em precursores da clula muscular
expressa muscular..
Os elementos genticos regulando a expresso temporal e espacial do gene Myf-5
podem ser discernidos fundindo-se o gene da -galactosidase com as seqncias
envolvendo o loco Myf-5. Aqui, uma seqncia particular a montante do gene Myf-
5 causa a expresso do gene (cor preta) nos msculos do pescoo, arcos farngeos,
msculos oculares, msculos dos membros anteriores, e mitomos segmentados do
embrio de camundongo de 13.5 dias. Captulos 2 e 9. (Fotografia cortesia de A.
Patapoutian, G. Lyons, J. Miner e B. Wold.)
Prancha 25
Expresso assimtrica do gene nodal no
embrio do pinto de 24 horas.
Hibridizao in situ da montagem total usando sondas para o gene nodal do
pinto encontra-o expresso no mesoderma da placa lateral somente do lado
esquerdo. Pode aqui ser visto como a regio de cor prpura. Esse gene
importante para o estabelecimento do eixo esquerdo-direito do pinto. Cap-
tulo 16. (Cortesia de C. Stern.)
Prancha 26
Regulao da expresso
hometica dos genes na
formao das patas dos insetos.
Ao contrrio das lagartas das borboletas, as
larvas das moscas no tm pr-pernas. Aqui,
os produtos dos genes hometicos Ultrabi-
thorax e abdominal-A esto corados de ver-
de e a protena Distal-less (necessria para o
desenvolvimento dos membros) est cora-
da de laranja. Na larva precoce da borboleta
do castanheiro Precis, os membros torcicos
(de T1-3) so facilmente vistos. Alguns seg-
mentos abdominais (A3-6) comeam a pro-
duzir buracos em seu domnio de expres-
so das protenas hometicas. Abaixo, quan-
do a lagarta cresceu, a expresso de Distal-
less pode ser vista nessas regies. (O ama-
relo indica sobreposio de domnios de
expresso.) Captulos 14, 19 e 23. (Foto-
grafias cortesia de B. Warren, S. Paddock e
S. Carroll.)
Prancha 27
A protena Wingless tem um papel crtico na orga-
nizao do disco alar imaginal de Drosophila
Drosophila..
Clulas na juno entre os compartimentos dorsal e ven- Prancha 28
tral do disco alar induzem a expresso da protena Wingless Expresso ectpica do gene eyeless de Drosophila causa a
em uma estreita faixa de clulas abarcando esse limite. A formao de novos olhos em outras regies do adulto.
protena Wingless induz ento a expresso de outras pro- Aqui, o gene eyeless foi ativado experimentalmente nas regies da larva
tenas tal como a Vestigial (aqui corada de vermelho) a da mosca que formam a cutcula da cabea. Na metamorfose, olhos
vrios dimetros de distncia. Captulo 19. (Fotografia compostos pigmentados emergiram desse tecido. Captulo 23. (Foto-
cortesia de K. Basler.) grafia cortesia de W. Gehring e Science.)
Prancha 30
Expresso do fator de transcrio Oct4
no blastocisto do camundongo.
O fator de transcrio Oct4 encontrado nas clulas que
iro formar o embrio, ao passo que est ausente naquelas
clulas que iro formar a placenta. A cromatina est corada
com iodeto de propdio (vermelho) enquanto a protena
Prancha 29 Oct4 est corada de verde. A sobreposio indicada pela
Polifenismo sazonal de Araschina levana
levana,, cor amarela que mostra a presena de Oct4 somente nas
a borboleta mapeada europia. clulas da massa celular interna. Captulos 5 e 22. (Foto-
Vrias espcies de borboletas desenvolvem-se de maneira diferente nas dife- grafia cortesia de H. R. Schler.)
rentes estaes do ano. Em A. levana, a forma de vero representada no alto;
a forma de primavera representada abaixo. Neste caso, as diferenas
desenvolvimentais so produzidas pelo ambiente, especificamente as diferen-
as na durao do dia. Captulo 21. (Fotografia cortesia de H. F. Nijhout.)
Prancha 31
Isoladores da expresso gnica.
A protena BEAF-32 liga-se a centenas de stios nos
cromossomos politnicos de Drosophila, dividindo
os cromossomos em domnios funcionais. Suspeita-
se que sinais regulatrios de um domnio no atra-
vessem o limite para o prximo. O DNA foi corado
de vermelho com iodeto de propdio. O anticorpo da
protena BEAF-32 est corado de verde e a
sobreposio aparece em amarelo. Captulo 11. (Fo-
tografia cortesa de U. K Laemmli.)
Prancha 33
Expresso assimtrica da protena Flectina no
corao em desenvolvimento do pinto.
Essa protena da matriz extracelular (corada de ama-
Prancha 32 relo) acumula-se predominantemente no lado esquer-
Polaridade dorsoventral do tubo neural do pinto. do do embrio do pinto no estgio 10. Captulos 9 e
Sinais difusveis da notocorda (tubo verde em baixo) induzem a forma- 16. (Fotografia confocal laser de varredura cortesia
o da placa do assoalho no lado ventral do tubo neural (verde). As de K. Linask.)
clulas da placa do assoalho induzem a formao de duas regies de
neurnios motor (dourado) nos lados ventrolaterais. A notocorda tam-
bm restringe a expresso da protena Dorsalin (necessria para o de-
senvolvimento das clulas da crista neural) para a regio mais dorsal do
tubo neural (azul). Captulos 7 e 17. (Fotografia cortesia de T. M. Jessell.)
Prancha 35
Localizao das clulas mesenquimatosas
ourio--do
primrias no embrio do ourio -mar
-mar..
do-mar
Prancha 34 Nesta micrografia confocal imunofluorescente somente mos-
Cuidado parental de girinos de r. trada parte da blstula mesenquimatosa. As clulas mesenqui-
Girinos da r de jato-venenoso reticulada (poison-dart frog) so matosas primrias esto coradas de verde e a -catenina est
carregados no dorso de seus pais para pequenas poas de gua na base corada de vermelho. -catenina vista nas junes aderentes das
de folhas de bromlia no dossel da floresta tropical. A fmea das membranas celulares embrionrias, e tambm encontrada no
espcies amaznicas do Peru, em seguida, supre ovos no-fertilizados citoplasma e ncleos das clulas que servem de alvos para a
como alimento aos girinos em desenvolvimento. Captulo 9. (Foto- migrao das clulas mesenquimatosas primrias. Captulo 6.
grafia por M. Fogden/DRK Foto.) (Fotografia cortesia de J. R. Miller e D. McClay.)
Segmentos da antena ANTENA usadas pelos discos imaginais para espe-

cificar informao posicional podem ser
Arista as mesmas na mosca inteira. Ou seja, os
discos podem especificar os destinos res-
pectivos de suas clulas pelos mesmos
mecanismos. Isso chamado de especifi-
cao homloga. Portanto, clulas no dis-
Garras PERNA
co do olho podem responder s mesmas
deixas posicionais que as clulas no
Coxa disco da perna. Especificao homloga
pode ser vista com certos mutantes ho-
Segmentos tarsais meticos como Antennapedia, na qual
Trocanter
estruturas antenais so transformadas em
pernas (Postlethwait e Schneiderman,
1971). Ocasionalmente, a antena inteira se
Tbia torna uma perna inteira, mas mais co-
Fmur
mum que somente uma poro da antena
seje parecida com a perna. No ltimo caso,
a troca absolutamente especfica da po-
sio. As clulas do disco da antena que
normalmente formariam a extremidade
Figura 19.22 distal da antena (arista) so transforma-
Correspondncia entre pores da antena e pores da perna. No mutante Antennapedia, regies das na poro mais distal da perna (gar-
da antena so transformadas em estruturas da perna. As flechas mostram as pores da antena ra); clulas especificadas para dar origem
que formam pores correspondentes especficas da perna. Essa correspondncia foi tambm segunda poro da antena so transfor-
observada nos padres de transcrio de genes tais como salm. (De acordo com Postlethwait e madas na segunda poro (trocanter) da
Schneiderman, 1971.) perna. As partes correspondentes das
duas estruturas esto ilustradas na Figu-
apterous se encontram com as clulas superfcies dorsal e ventral da asa so coor- ra 19.22. Ento, aparente que os dois
ventrais que no expressam apterous. O denados. As superfcies dorsal e ventral da discos determinados diferentemente usam
fator de transcrio de Apterous ativa a ex- asa so grudadas pelas integrinas em am- um mecanismo comum para a especifica-
presso dos genes fringe e serrate nas c- bos epitlios (Brower e Jaffe, 1989; Kim et o dos destinos das clulas dentro dos
lulas dorsais (Irvine e Wieschaus, 1994; al., 1996). [meta1.html] respectivos discos.*
Williams et al., 1994; Kim et al., 1995). As A hiptese do limite aqui discutida, Sim, muito complexo e provvel que
protenas Fringe e Serrate agem promoven- no explica certas observaes envolven- fique ainda mais complexo. Mas no h falta de
humor. Sidney Brenner (1996) relembra a frus-
do a transcrio dos genes vestigial e do a polaridade D/V da perna ou a
trao do Prmio Nobel Francis Crick com essa
wingless nas clulas que revestem a fron- distalizao dos apndices. Held (1995) complexidade dizendo Deus sabe como esses
teira D/V (Frontispcio). O fator de transcri- sugere que existe um gradiente da prote- discos imaginais funcionam. Brenner fantasiou
o Vestigial ativa os genes especficos da na Dpp que estimula a sntese de molcu- uma reunio onde Crick pergunta a Deus como
asa ventral, enquanto que a protena las (ainda no identificadas) necessrias ele construiu essas entidades e fazendo com que
o prprio Deus tambm se supreendesse com
Wingless se difunde da clula para sinalizar para estender o apndice e estabelecer a
essa complexidade. Finalmente tudo o que Deus
a clula dorsal adjacente que expresse seus polaridade nas trs dimenses. pde fazer foi assegurar a Crick que estamos
genes especficos da asa dorsal. Dessa ma- construindo moscas aqui por 200 milhes de anos
neira, o crescimento e a diferenciao das Especificao homloga. As molculas e no tivemos nenhuma reclamao.
Remodelao do sistema nervoso
Como na metamorfose de anuros, a metamorfose de insetos causa uma grande

reestruturao do sistema nervoso do organismo. Alguns nervos morrem, outros as-
sumem novas funes. No Captulo 17, vimos o desenvolvimento de fotorreceptores
a partir das clulas epiteliais do disco do olho. Aqui, um novo conjunto de neurnios
gerado para assumir uma nova funo. Os neurnios que se conectaram para matar
tecidos, ou morrem com o tecido ou so reespecificados para novas funes. O nervo
do msculo proleg da lagarta da mariposa Manduca independentemente sensvel
ecdisona e morre simultaneamente com o tecido alvo larval. Entretanto, o neurnio
motor inervando o segundo msculo oblquo da larva sobrevive a morte de seu alvo,
para inervar um msculo adulto recm-formado (o quarto msculo externo dorsal) que
se diferencia durante a metamorfose (Truman et al., 1985).
Em alguns casos, as funes larvais so assumidas por diferentes regies no
adulto. O vaga-lume larval tem suas lanternas pareadas no oitavo (ltimo) segmento
abdominal; os neurnios desse segmento controlam a luminescncia da larva. Duran-
te a pupao, o sexto e o stimo segmentos tambm desenvolvem os fotocitos produ-
tores de luz e os nervos para controlar a regulagem do flash. No fim da pupao,
somente o sexto e o stimo segmentos tm lanternas funcionais. Ainda mais, se as
lanternas larvais forem removidas, as lanternas adultas ainda se formaro (Strause et
al., 1979). Portanto, o que havia sido uma funo neural dos gnglios do oitavo seg-
mento se tornou uma funo dos gnglios do sexto e stimo segmentos.
Controle Hormonal da Metamorfose de Insetos
O controle hormonal da metamorfose de insetos foi mostrado nos experimentos

dramticos de Wigglesworth (1934), que estudou o Rodnius prolixus, um inseto
sugador de sangue que tem cinco instares antes de sofrer uma surpreendente meta-
morfose. Quando uma larva de Rodnius do primeiro instar foi decapitada e fundida
a uma larva em muda do quinto instar, o diminuto primeiro instar desenvolveu a
cutcula, a estrutura do corpo e a genitlia do adulto. Isso mostrou que os hormni-
os carreados pelo sangue so responsveis pela induo da metamorfose.
Wigglesworth tambm mostrou que a corpora allata, perto do crebro do inseto,
produz um hormnio que contra ataca essa tendncia para sofrer metamorfose. Se a
corpora allata fosse removida de uma larva do terceiro instar, a prxima muda trans-
formaria a larva em um adulto precoce. Inversamente, se a corpora allata de uma
larva do quarto instar fosse implantada em uma larva do quinto instar, essas larvas
se tornariam larvas enormes do sexto instar e no adultos. Sabemos atualmente
que a corpora allata secreta o hormnio juvenil, um inibidor natural da metamorfose
(que ser discutido em breve).
Transplante de tecidos em insetos, realizados em vrios laboratrios, permitiram
o estabelecimento de uma viso integrada de como se d a metamorfose. Ainda que
o mecanismo detalhado da metamorfose seja diferente entre as espcies, o padro
geral da ao hormonal usualmente bastante similar (Figura 19.23). Como na meta-
morfose dos anfbios, a metamorfose nos insetos parece ser regulada por hormnios
efetores controlados por hormnios peptdicos neurosecretores no crebro (para
revises, veja Gilbert e Goodman,1981; Granger e Bollenbacher, 1981). O processo
de muda iniciado no crebro, onde clulas neurosecretoras liberam o hormnio
protoracicotrpico (PTTH) em resposta a fatores neurais, hormonais ou ambientais.
PTTH uma famlia de hormnios peptdicos com um peso molecular de aproximada-
mente 40.000, que estimulam a produo de ecdisona pela glndula protorcica
(Figura 19.24). A ecdisona, entretanto, no um hormnio ativo, mas um pr-horm-
nio que precisa ser convertido para a forma ativa. Essa converso realizada por
uma oxidase contendo heme nas mitocndrias e microssomos de tecidos perifricos
como o corpo gorduroso. Aqui a ecdisona transformada no hormnio ativo 20-
hidroxiecdisona (Figura 19.25).*
Cada muda ocasionada por um ou mais pulsos de 20-hidroxiecdisona. Para uma
muda de uma larva, o primeiro pulso produz um pequeno aumento na concentrao de
hidroxiecdisona na hemolinfa da larva (sangue) e produz uma mudana no comprome-
timento celular. O segundo, grande pulso de hidroxiecdisona inicia os eventos de
Desde sua descoberta em 1954, quando Butenandt e Karlson isolaram 25mg de ecdisona a partir
de 500kg de pupas da mariposa do bicho-da-seda, a 20-hidroxiecdisona teve vrios nomes, incluindo
-ecdisona, ecdisterona e crustecdisona.
Hormnio protora- PTTH

cicotrpico (PTTH)
Ecdisona
Glndula
protorcica
Clulas
neurossecretoras Corpus
Crebro cardiacum Hidroxiecdisona
20-hidroxiecdisona
Regulao
Corpus
allatum Epiderme L/P L/P Epiderme
Disco
imaginal
P,L/A
Protena ligante Hormnio juvenil P/A Epiderme
(JHBP) discos P/A
imaginais
Hormnio
juvenil (JH)
JH-JHBP
Dia do quarto Dia do quinto instar Pupa

instar
Figura 19.23
Diagrama esquemtico ilustrando o controle da muda e da metamorfose na mariposa do
verme chifrudo do tabaco. Parecem haver perodos criticamente sensveis quando a presena
ou ausncia de JH determina se um tecido retido no mesmo estgio ou se muda a um estado
de maior maturidade. Diferentes tecidos tm diferentes perodos sensveis. (De acordo com
Nijhout, 1994.)
diferenciao associados com a muda. A hidroxiecdisona produzida por esses pulsos

compromete e estimula as clulas epidrmicas a sintetizar enzimas que digerem e reciclam
os componentes da cutcula. Em alguns casos, condies ambientais podem controlar
a muda, como no caso da mariposa do bicho-da-seda Hyalophora cecropia. Aqui, a
secreo de PTTH cessa aps a formao da pupa. A pupa permanece nesse estado de
suspenso chamado diapausa, durante todo o inverno. Se no for exposta ao frio, a
diapausa pode durar indefinidamente. Mas se for exposta ao frio por duas semanas, a
pupa pode sofrer uma muda quando retornada a uma temperatura mais quente (Williams,
1952,1956; veja Captulo 21).
O segundo importante hormnio efetor no desenvolvimento de insetos o hor-
mnio juvenil (JH). A estrutura de um ativo hormnio juvenil comum em borboletas
e lagartas de mariposas est ilustrada na Figura 19.25A. O JH secretado pela Figura 19.24
corpora allata. As clulas secretoras da corpora allata so ativas durante as mudas Localizao celular do mRNA de PTTH na
larvais mas inativas na muda metamrfica. Esse hormnio responsvel pela pre- larva de Bombyx mori (mariposa do bicho-
veno da metamorfose. Enquanto o JH est presente, as mudas estimuladas por da-seda). Hibridizao in situ de um gene
hidroxiecdisona resultam em um novo instar larval. No ltimo instar larval, o nervo radioativo clonado para o peptdeo de 224
mediano do crebro corpora allata inibe a produo do hormnio juvenil pela aminocidos localiza o mRNA do PTTH em
duas clulas neurossecretoras no hemisfrio
glndula, e h um aumento simultneo na habilidade do corpo em degradar o JH
esquerdo do crebro e duas clulas neuros-
existente (Safranek e Williams, 1989). Ambos os mecanismos causam uma queda dos secretoras no hemisfrio direito. Nesta se-
nveis de JH a um valor abaixo do limite crtico. Isso desencadeia a liberao de o, uma clula secretora de PTTH pode ser
PTTH do crebro (Nijhout e Williams, 1974; Rountree e Bollenbacher, 1986). PTTH, vista em cada lado. A barra representa
por sua vez, estimula as glndulas protorcicas a secretar uma pequena quantidade 100m. (de Kawakami et al., 1990, cortesia
de ecdisona. A hidroxiecdisona resultante, na ausncia de JH, compromete as clulas de H. Ishizaki e A. Kawakami.)
para o desenvolvimento pupal. Os mRNAs especficos para as larvas no so subs-

titudos e novos mRNAs so sintetizados, cujos produtos proticos inibem a trans-
crio das mensagens larvais. Aps o segundo pulso de ecdisona, so sintetizados
Hormnio juvenil novos produtos de genes especficos de pupas (Riddiford, 1982), e a muda subse-
qente transforma o organismo de larva para pupa. Parece, portanto, que o primeiro
pulso de ecdisona durante o ltimo instar larval desencadeia o processo que inativa
os genes especficos da larva e prepara para transcrio os genes especficos de
pupa. O segundo pulso de ecdisona transcreve os genes especficos para a pupa e
inicia a muda (Nijhout, 1994).
At recentemente e desde a dcada de 1950, acreditava-se que o tipo de muda era
determinado pela concentrao de hormnio juvenil no momento dos pulsos de
ecdisona. Altos nveis de JH induziam as larvas, nveis intermedirios produziam pupas
e baixos nveis de JH produziam adultos (veja Piepho,1951; veja tambm o Captulo 20
da Quarta Edio deste livro). Entretanto, quando o ttulo de JH pde efetivamente ser
Ecdisona determinado, encontrou-se que ele flutuava durante o perodo do ltimo instar, tendo
picos e vales especficos. A metamorfose no est correlacionada a um declnio pro-
gressivo na atividade de JH e nem causada por ele. O controle da metamorfose deve
ser mais complexo.
Na mariposa chifruda do tabaco Manduca sexta, existem momentos quando
diferentes clulas so sensveis a hormnios juvenis (veja Figura 19.23). Como regra
geral, se o JH est presente em um perodo sensvel ao hormnio, o estado corrente
do desenvolvimento mantido, mas se o JH estiver ausente nesse perodo esse
tecido progredir a um estgio de desenvolvimento mais maduro. O incio e a dura-
o do perodo sensvel ao JH parece ser um estado autnomo da clula e no
20-hidroxiecdisona controlado por hormnios (Nijhout, 1994). (Foi considerado que esse deve ser um
momento quando receptores de JH esto disposio nesses tecidos.) Em cada
Figura 19.25 instar larval existe um perodo quando a presena de JH impede a transformao da
Estruturas de um hormnio juvenil de ocorrn- epiderme larval em epiderme pupal. Se o JH est presente, a epiderme continua a ser
cia comum, ecdisona, e do hormnio ativo da larval; se o JH est ausente, ela se torna pupal. Em larvas no penltimo instar, os
muda, 20-hidroxiecdisona. ttulos de JH conseguem reter a epiderme no seu estado larval. Durante o ltimo
instar existem duas janelas de sensibilidade ao JH. A primeira para a epiderme;
nesse momento, entretanto, os nveis de JH j baixaram significativamente e a
epiderme ser transformada de larval a pupal. O segundo perodo sensvel ao JH diz
respeito ao tecido do disco imaginal. Nesse momento, todavia, o ttulo de JH aumen-
tou novamente, de modo que os discos imaginais no so instrudos para inverter
ou diferenciar. A muda transforma a larva em pupa (Nijhout e Wheeler, 1982). No
momento seguinte, ocorrem pulsos de ecdisona, e no se identifica JH nos perodos
crticos. A epiderme se transforma de pupal adulta, e os discos imaginais podem
inverter e se diferenciar. A injeo de JH na pupa nesse momento pode fazer com que
ele mude para uma segunda pupa (Williams, 1959).
Como na metamorfose da r, a regulagem da ecdise deve ser meticulosamente
coordenada. Muitos dos comportamentos vistos durante a metamorfose so caracte-
rsticos daquele estgio, e o fracasso em realiz-los deixa o inseto fatalmente enredado
na sua velha cutcula. A coordenao dos movimentos e trocas de cutcula provavel-
mente regulada por uma cascata de hormnios, onde o hormnio da ecloso do cre-
bro ativa a secreo de hormnios desencadeadores de ecdise pelas clulas na base
de cada espirculo. Os hormnios desencadeadores de ecdise sinalizariam os gnglios
abdominais de cada segmento para iniciar os movimentos que permitem que a larva
descarte sua velha casca (itan et al., 1996).
Na Drosophila, existe uma variao desse tema geral (Riddiford, 1993). A ecdisona
liberada pela glndula em anel (uma estrutura tendo regies similares tanto ao
corpus allatum como a glndula protorcica). Um pulso de ecdisona com ttulo alto
no fim do terceiro instar sinaliza o incio da metamorfose. A larva cessa o movimento,
inverte seus espirculos e permite que a cutcula larval endurea em um puparium
(casulo pupal) que envolve o organismo durante sua metamorfose. Nesse estgio,
os discos imaginais se invertem para formar o esquema bsico do corpo adulto, mas
ainda com a cabea presa dentro da cavidade do corpo. Aps 12 horas (a 25C), um
breve pulso de ecdisona desencadeia a emergncia da cabea a partir do trax e a
transio de prepupa pupa. A cabea empurrada para fora pela contrao de
msculos abdominais, que empurram uma bolha de ar para o interior, produzindo um
espao para a cabea everter (Fristrom e Fristrom, 1993). Um surto subseqente de
ecdisona completa a diferenciao final da pupa de Drosophila para a forma adulta,
imediatamente antes da ecloso, a produo do adulto a partir do casulo pupal.
Como em outros insetos, a Drosophila tem um hormnio de ecloso que inicia os
movimentos e comportamentos que permitem ao adulto se desvencilhar de seu ca-
sulo pupal para um mundo maior.
A biologia Molecular da Atividade da Hidroxiecdisona
A LIGAO DE HIDROXIECSIDONA AO DNA. Durante a muda e a metamorfose,

certas regies dos cromossomos politnicos da Drosophila formam tufos em certas
clulas (Veja Figura 2.13; Clever, 1966; Ashburner, 1972; Ashburner e Berondes,
1978). Esses tufos cromossmicos representam reas onde o DNA est sendo ativa-
mente transcrito. Mais ainda, o padro especfico de rgos de formao de tufos
pode ser reproduzido cultivando o tecido larval e adicionando hormnios ao meio
ou fornecendo hidroxiecdisona larva em um estgio precoce. Quando a hidroxi-
ecdisona adicionada s glndulas salivares da larva, certos tufos so produzidos e
Figura 19.26
Tufos induzidos por ecdisona em clulas cultivadas da glndula salivar de
D. melanogaster. Aqui, a regio do cromossomo a mesma da Figura
2.13. A formao de tufos induzida pela ecdisona. (i) Controle no
induzido. (ii-v) Cromossomos estimulados por hidroxiecdisona aps 25
minutos, 1, 2 e 4 horas. (Cortesia de M. Ashburner.)
outros regridem (Figura 19.26). A formao de tufos mediada pela ligao de hidro-
xiecdisona a locais especficos nos cromossomos; anticorpos fluorescentes contra
a hidroxiecdisona encontram esse hormnio localizado nas regies sensveis a ele
(Gronemeyer e Pongs, 1980).
DIFERENTES RECEPTORES DE HIDROXIECDISONA EM DIFERENTES TECI-

DOS. Os tecidos de larvas em instares tardios podem ser grosseiramente divididos
em trs tipos com base em suas respostas hidroxiecdisona: (1) os tecidos estrita-
mente larvais (tais como, glndulas salivares, msculo e intestino) que sofrem morte
celular em resposta hidroxiecdisona; (2) os tecidos imaginais que se dividem e se
diferenciam para produzir estruturas adultas quando expostos hidroxiecdisona; e
(3) tecidos que sofrem extensas modificaes ou remodelagem, tais como o corpo
gorduroso ou o sistema nervoso central. No se sabe como um grupo de clulas
prolifera enquanto outro degenera recebendo o mesmo sinal, mas estudos recentes
(Talbot et al., 1993; Truman et al., 1994) sugerem que nem todos os receptores de
ecdisona so os mesmos em cada tecido. O gene para o receptor de ecdisona (EcR)
pode ser alternativamente emendado dentro de trs mRNAs que fornecero trs
protenas diferentes, mas relacionadas: EcR-A, EcR-B1 e EcR-B2 (Figura 19.27). To-
das as clulas parecem ter um pouco de cada uma, mas os tecidos estritamente
larvais e os neurnios regressivos so caracterizados por sua abundncia em EcR-
B1 em comparao com EcR-A. Discos imaginais e neurnios diferenciados, de ou-
tro lado, mostram uma preponderncia da isoforma EcR-A sobre EcR-B1. possvel,
portanto, que os diferentes receptores ativem diferentes conjuntos de genes quan-
do ligam hidroxiecdisona.
O BROAD-COMPLEX. Outra razo para a resposta especfica de tecidos ecdisona

pode ser a presena de outros fatores de transcrio nesses tecidos. Um dos genes
precoces estimulados pela ecdisona o gene Broad-Complex (Br-C). Esse um
gene complexo, composto de unidades de transcrio parcialmente superpostas
que criam vrias protenas de fatores de transcrio atravs de mensagens diferen-
cialmente emendadas. Em alguns mutantes de BR-C, as glndulas salivares no
morrem como normalmente o fazem na metamorfose. Em outros mutantes, a cabea
Figura 19.27 no emerge ou o SNC no sofre remodelao. A marcao com anticorpos especfi-
Formao dos receptores de ecdisona. Emen- cos para as isoformas mostra uma fascinante correlao entre o tipo de protena BR-
das alternativas no mRNA de transcritos do C no ncleo e o tipo de resposta ecdisona. rgos como as glndulas salivares,
receptor de ecdisona (EcR) cria trs tipos de destinadas histlise durante a metamorfose, expressam a isoforma Z1; os discos
mRNAs de EcR. Esses geram protenas com imaginais destinados diferenciao celular expressam a isoforma Z2; e o sistema
os mesmos stios de ligao tanto para o DNA
nervoso central (que sofre intensa remodelao na metamorfose) expressa todas as
como para a hidroxiecdisona, mas com amino-
terminais muito diferentes. (De acordo com
isoformas, com Z3 predominando (Figura 19.28; Emery et al., 1994). Moscas
Talbot et al., 1993.)
A1 A2 A3
Sntese de mRNA Protena EcR
Seqncias lider ou
seguidora (no traduzidas)
xons traduzidos
ntrons
Stio de Stio de ligao

ligao de ecdisona
de DNA
(A) (B) Figura 19.28

Anti Z3 Colorao de DNA Especificidade das isoformas do Broad-
Complex. Anticorpos fluorescentes localizam
Corpo gorduroso Glndula salivar Corpo gorduroso Glndula salivar a isoforma Z3 nos ncleos do corpo gorduroso
mas no nos ncleos das glndulas salivares.
(A) Preparaes de cromossomos do corpo
gorduroso (esquerda) e da glndula salivar (di-
reita) marcados com anticorpos especficos
isoforma Z3 do Broad-Complex. (B) As mes-
mas preparaes coradas para DNA. (Foto-
grafias cortesia de I. Emery.)
transgnicas demonstraram que essas diferenas so funcionalmente importantes.

Transcrio de genes dependente de ecdisona nas glndulas salivares (finalmente
levando sua destruio) envolve a expresso precoce, dependente de ecdisona,
da isoforma Z1 do Broad-Complex. As protenas Z2, Z3, ou Z4 no sero suficientes Complexo receptor
(Crossgrove et al., 1996). Essas isoformas tambm tm correlao com os tipos de de ecdisona (EcR)
mutao gerados pelos alelos mutantes nesse loco. Portanto, a especificidade de
resposta pode ser controlada por uma isoforma especfica do Broad-Complex que
estimulada pela ecdisona. Entretanto, algum outro fator no tecido larval deve interagir Hidroxiecdisona
com o mecanismo de emenda na clula produzindo a estrutura especfica do xon na EcR
mensagem BR-C.
DIFERENTES RECEPTORES DE ECDISONA DENTRO DE UMA NICA CLULA.

As respostas hidroxiecdisona devem ser coordenadas tanto temporal quanto espa-
cialmente. Assim, em adio heterogeneidade de respostas hidroxiecdisona entre
tecidos, existe tambm uma heterogeneidade de respostas dentro de uma clula indi-
Tufo precoce Tufo tardio
vidual. Os tufos sensveis hidroxiecdisona ocorrendo nos estgios tardios da larva
no terceiro instar (ao se preparar para formar a pupa) podem ser divididos grosseira-
mente em trs categorias: tufos que regridem devido hidroxiecdisona; tufos que a Sntese de
protena
hidroxiecdisona induz rapidamente; e tufos vistos inicialmente algumas horas aps a
estimulao. Por exemplo, nas glndulas salivares da larva, cerca de seis tufos emer-
gem dentro de poucos minutos aps o tratamento com hidroxiecdisona. Esses genes
no necessitam de sntese de protena para serem ativos. Um conjunto muito maior de
genes induzido mais tarde no desenvolvimento, e esses necessitam de sntese protica Figura 19.29
para serem transcritos. Ashburner (1974, 1990) predisse que os genes precoces Modelo de Ashburner da regulao de hidro-
produzem uma protena que essencial para a ativao dos genes tardios. Ainda xiecdisona da transcrio. A hidroxiecdisona
se liga ao seu receptor e esse composto se liga
mais, essa prpria protena desligaria a transcrio do gene precoce (Figura 19.29).
a um gene de tufo precoce e a um gene de tufo
Pesquisas recentes suportam essa idia e sugere que os genes precoces represen- tardio. O gene do tufo precoce ativado, e seu
tam fatores de transcrio que podem mediar o efeito da ecdisona. Os receptores de produto protico (1) reprime a transcrio de
ecdisona (EcRs) constituem uma famlia de fatores de transcrio derivados de um seu prprio gene e (2) ativa o gene do tufo
nico gene, e eles ligam esse hormnio esteride e o trazem regio especfica do tardio, talvez por deslocar o receptor de
DNA. Como nos receptores ligantes de esterides dos vertebrados, os EcRs formam ecdisona. (De acordo com Richards, 1992.)
Figura 19.30 (A) Formao do puparium

Padres de expresso gnica regulada por
ecdisona na metamorfose de Drosophila. (A)
Padro temporal da expresso gnica. Os pul-
sos de ecdisona so as barras verticais na parte
superior, a altura corresponde intensidade dos
pulsos. O desenvolvimento progride da esquer-
da para a direita, comeando com o terceiro
instar, as mudas so representadas por linhas Pupa
pontilhadas. (B) Interaes subjacentes aos Larva do terceiro instar Prepupa
Picos de ecdisona
padres de transcrio temporal. Flechas re-
presentam ativao, enquanto as linhas bloque-
adas representam os efeitos repressivos. (De
acordo com Thummel, 1996.) mRNAs precoces
mRNA precoce-tardio
mRNA prepupal intermedirio
Genes de adeso Genes de resposta

Genes tardios L71 secundria
(B) Larva
precoce do Larva tardia Prepupa Prepupa
terceiro do terceiro intermediria tardia
instar instar
Baixa Alta Baixa Alta
concentra- concentra- concentra- concentra-
o de o de o de o de
ecdisona ecdisona ecdisona ecdisona
Genes Genes Genes

Genes ng tardios tardios
Pig-1 de adeso
L71
heterodmeros. Os receptores de ecdisona no ligam ecdisona ou suas respectivas

seqncias de DNA sem antes formar um heterodmero com o produto do gene
ultraspiracle (USP) (o anlogo do receptor retinide em Drosophila; Yao et al., 1992;
Thomas et al., 1993). Quando o heterodmero EcR/USP est formado, ele liga a hidro-
xiecdisona e ativa os genes responsivos ecdisona mais precoces.
Algumas dessas interaes esto sendo elucidadas. Como ilustrado na Figura
19.30, os genes EcR, BR-C e E74B so expressos em baixas concentraes de ecdisona,
tais como aquelas encontradas no final do perodo do terceiro instar. As protenas BR-
C so necessrias para manter a transcrio dos genes das protenas de aderncia (as
protenas de aderncia permitem pupa da Drosophila aderir ao seu substrato) e a
reprimir genes larvais anteriores. E74B necessria tanto para manter a ativao dos
genes de aderncia como para reprimir genes como o L71 cujas protenas formam o
puparium. No fim do perodo do terceiro instar, existe um pulso alto e caracterstico de
ecdisona. Essas concentraes mais altas de ecdisona reprimem os genes da aderncia
e substituem a transcrio do gene E74 que em lugar de sintetizar E74B passa a

transcrever a protena E74A relacionada.* Enquanto E74B inibia a expresso do gene
L71, E74A a estimula (Urness e Thummel, 1995). Nesse e em outros casos, est ocor-
rendo a transio de larva para pupa.
Alm disso, a cascata de ativaes e represses transcricionais pode gerar novos
receptores de ecdisona. Quando o gene EcR desacelerado na formao do puparium,
os produtos dos genes E75 ou E78 podem assumir suas funes (Koelle et al 1991;
Stone e Thummel, 1993). Dessa maneira, a ecdisona induz uma cascata de fatores de
transcrio que podem ativar ou reprimir diferentes conjuntos de genes.
Assim, possvel que a ecdisona inicie ondas de ativao transcricional, e que
diferentes nveis do hormnio possam ativar diferentes conjuntos de genes. Dessa
maneira, o desenvolvimento da Drosophila parece ser semelhante ao dos anfbios, a
coordenao das mudanas sendo orquestradas por diferentes concentraes de
hormnios. Os alvos desses fatores de transcrio esto comeando a ser identifi-
cados. Alguns desses alvos parecem ser fatores de competncia que do a outros
genes a possibilidade de serem induzidos mais tarde no desenvolvimento. Por exem-
plo, na metade do estgio prepupal o ttulo de ecdisona diminudo. Isso torna poss-
vel a transcrio de outro fator, FTZ-F1. O gene codificando FTZ-F1 necessita ter
um pulso anterior de ecdisona para se tornar potencialmente ativo, mas ele inicia a
transcrio somente quando o ttulo do hormnio diminudo. Outros alvos podem
incluir os genes reaper e hid, que se tornam ativados naqueles tecidos (como as
glndulas salivares) que sofrem morte celular dependente de ecdisona.
A biologia molecular est comeando a interpretar uma das mais fascinantes redes
de interaes conhecidas da biologia do desenvolvimento e certamente um dos pri-
meiros exemplos de desenvolvimento animal que conhecemos- a metamorfose da lar-
va para um inseto adulto.
* As protenas E74A e E74B se originam do mesmo gene pela ativao de diferentes promoto-
res. Ambas partilham a mesma ponta carboxi-terminal com sua regio de ligao a DNA. Entretan-
to, a protena E74A tem um amino terminal mais longo. Os mRNAs de E74B so transcritos em
concentraes de ecdisona dez vezes menores do que aquelas necessrias para ativar a transcrio
das mensagens de E74A (Karim e Thummel, 1991).
& Especulaes
Controle ambiental sobre a

forma e a funo da larva
A MAIORIA DAS DISCUSSES

no desenvolvimento se limitam
ao interior do corpo do organis-
mo. Entretanto, o desenvolvimento de um
organismo algumas vezes pode ser regu-
Carroll Williams em Harvard, ele trouxe
consigo seu principal animal experimen-
tal, o inseto de plantas Europeu Pyrrho-
coris apterus. Para a consternao geral
as larvas. Os resultados foram tanto con-
clusivos como surpreendentes: larvas
cultivadas sobre papel Europeu (incluin-
do pginas da revista Nature) sofriam
do laboratrio, os insetos no sofreram metamorfose como sempre, mas as larvas
lado por fatores ambientais, fora do cor- metamorfose no fim do quinto instar, mas criadas em papel Americano (tais como
po. Existem vrios tipos de fenmenos se tornaram grandes larvas do sexto ins- cpias descartadas da revista Science)
desenvolvimentais onde substncias pro- tar- o que nunca havia sido observado no no sofreram metamorfose. Finalmente, foi
duzidas por um organismo (freqentemen- laboratrio ou na natureza- e no fim mor- verificado que a fonte do papel America-
te de outra espcie) induz modificaes reram antes de se tornarem adultos. Aps no era um abeto balsmico, uma rvore
no desenvolvimento de outro organismo. o teste de muitas variveis, foram testa- indgena do Norte dos Estados Unidos e
Quando Karel Slma veio da Checos- das as toalhas de papel que forravam os Canad. Essa rvore sintetiza um compos-
lovquia para trabalhar no laboratrio de recipientes para verificar seu efeito sobre to muito semelhante ao hormnio juvenil
Adulto
Segundo Terceiro Quarto Quinto
estgio estgio estgio estgio
Primeiro da ninfa da ninfa da ninfa da ninfa
estgio
da ninfa
Precoceno 1
Aps tratamento
com precocenos
no estgio 2 Figura 19.31
Metamorfose precoce no inseto Dysdercus causada por precocenos. (A) Es-
trutura de dois precocenos ativos encontrados em plantas. (B) Desenvolvi-
Adulto precoce mento inibido no Dysdercus. Quando ninfas no segundo estgio so tratadas
Precoceno 2
com precocenos, elas se metamorfoseiam em adultos precoces estreis em
lugar de continuar sua seqncia de mudas do desenvolvimento normal. (De
(A) (B) acordo com Bowers et al., 1976.)
(Bowers et al., 1966; Slma e Williams, cenos e suas estruturas qumicas esto hormnio juvenil tambm responsvel
1966; Williams, 1970), e provavelmente usa representadas na Figura 19.31A. Quando pela maturao do ovo do inseto (Captu-
esse anlogo do hormnio juvenil para se as larvas ou ninfas desses insetos so lo 21). Sem esse hormnio, as fmeas so
livrar de certos predadores de insetos. pulverizadas com qualquer um dos com- estreis. Assim, os precocenos podem
Outras plantas tm compostos que postos, elas sofrem mais uma muda e se proteger as plantas causando uma meta-
produzem o mesmo efeito- a morte de pre- metamorfoseia forma adulta (Figura morfose prematura de certas larvas de in-
dadores de insetos- mas o fazem induzin- 19.31B). Precocenos causam a morte sele- setos a adultos estreis.*
do a metamorfose muito cedo. Dois com- tiva das clulas do corpus allatum no in-
postos que foram isolados de ervas com- seto imaturo (Schooneveld, 1979; Pratt et
postas causam metamorfose precoce em al., 1980). Essas clulas so responsveis
larvas de certos insetos transformando- pela sntese do hormnio juvenil. Sem esse Muitas mais dessas mudanas induzidas pelo
os em adultos estreis (Bowers et al., 1976). hormnio, a larva comea suas mudas ambiente no desenvolvimento das larvas sero
Esses compostos so chamados preco- metamrficas e imaginais. Mais ainda, o discutidas no Captulo 21.
Interaes hormonais mltiplas no

desenvolvimento da glndula mamria
O desenvolvimento das mamas iniciado durante o desenvolvimento embrionrio,
mas somente completado no mamfero lactante no fim da gravidez. Durante o desen-
volvimento da mama, diferentes hormnios fornecem informao variada ao tecido
rudimentar. O desenvolvimento da mama pode ser dividido em quatro estgios: o
estgio embrionrio; o estgio adolescente, a gravidez e a lactao. Os produtos
diferenciados das glndulas mamrias, casena e outras potenas do leite, so produ-
zidos somente durante o estgio final (Topper e Freeman, 1980).
Estgio embrionrio
No desenvolvimento normal da fmea do camundongo, duas bandas elevadas de

tecido epidrmico aparecem em ambos os lados da linha mediana ventral no dia 11
da gestao. Esse tecido chamado de crista mamria. Dentro de cada crista, as
clulas se renem em centros de concentrao e l permanecem formando os brotos
mamrios (Figura 19.32). No camundongo existem cinco desses brotos em cada
lado; nos humanos, somente um por lado. Nos dias imediatamente antes do nasci-
mento, as clulas epiteliais nesses lugares proliferam-se rapidamente, dando origem
(A) Figura 19.32

Seqncia do desenvolvimento precoce da glndula mamria no camun-
dongo fmea. (A) Broto mamrio no feto de 12 dias. Clulas ectodrmicas
epiteliais invadem o mesnquima. (B) Corda mamria de um feto de 15
dias. Uma pequena fenda no fundo sinaliza o incio da ramificao. (C)
Cavidade da corda se estendendo para formar um lmen oco no feto de 20
dias. (de Hogg et al., 1983, cortesia de C. Tickle.)
(B) (C)
corda mamria. Essa corda abre na pele, em uma extremidade, formando um mamilo
enquanto a outra extremidade comea a se ramificar em dutos. Aqui o desenvolvi-
mento cessa at a puberdade.
O desenvolvimento do tecido mamrio no camundongo macho idntico ao da
fmea at 13-15 dias de gestao. Nessa poca, o mesnquima se condensa ao redor
do centro do broto mamrio, e as clulas da corda morrem. Portanto, uma pequena
corda de clulas epiteliais destacada da pele (Figura 19.33), e a glndula mamria no
se estende at a superfcie. No ocorre desenvolvimento adicional.
Essa morte celular na corda mamria dos machos tem sido estudada cultivando
os brotos mamrios in vitro. Tais brotos de camundongos fmeas normalmente
desenvolvem lbulos conectados superfcie (Figura 19.34). Entretanto, se testos-
terona adicionada ao meio de cultura, os brotos se degeneram. Os brotos mamrios
de camundongos machos tambm desenvolvem lbulos quando cultivados em au-
sncia de testosterona; portanto, o hormnio testosterona impede o desenvolvi-
mento mamrio no macho. A testosterona motiva essa morte celular especfica ins-
truindo as clulas mesenquimatosas a destruir a corda epitelial. Isso foi mostrado
por uma srie de experimentos de recombinao. Existe em camundongos (e tambm
em humanos) uma mutao chamada sndrome de insensibilidade andrognica, na
qual indivduos cromossomicamente machos (XY) no produzem um receptor funci-
onal de testosterona. Assim, apesar desses indivduos possurem testculos que
esto secretando testosterona ativamente, eles so incapazes de responder a ela.
Um dos resultados que esses indivduos tm um desenvolvimento mamrio do
tipo feminino (veja Figura 19.9). Kratochwil e Schwartz (1976) isolaram clulas epiteliais
e mesenquimatosas a partir de brotos mamrios normais e mutantes e os cultivaram Figura 19.33
em vrias combinaes. Algumas culturas tiveram a adio de testoterona e outras Rudimento mamrio em um feto de camun-
no. Os resultados esto mostrados na Figura 19.35. Quando ambos, o mesnquima dongo macho. O rudimento (flecha) se sepa-
e o epitlio, eram do tipo selvagem, o rudimento se desenvolvia em tecido mamrio. rou da epiderme. (de Raynaud, 1961.)
Figura 19.34 Epiderme

Papel da testosterona como mediador do desli-
gamento da corda mamria. (A) O tecido ma-
mrio do camundongo fmea, in vivo ou em
cultura, crescer para baixo a partir da epiderme
e se ramifica. (B) Quando o tecido mamrio do
camundongo fmea cultivado na presena de
Broto Derme
testosterona, o broto se alonga, mas as clulas
mesenquimatosas se agregam ao redor da has-
te e a poro inferior separada, exatamente
como no desenvolvimento normal do macho.
(C) Quando o tecido mamrio do camundongo
macho cultivado em ausncia de testosterona,
o desenvolvimento o mesmo que o da fmea.
(De acordo com Kratochwil, 1971.)
Haste
Lbulos
(A) TECIDO NORMAL (B) TECIDO DE FMEA (C) TECIDO DE MACHO
DE FMEA MAIS TESTOSTERONA SEM TESTOSTERONA
Quando testosterona foi adicionada, o mesnquima se condensou ao redor do broto

e a corda foi separada. Quando epitlio normal foi cultivado com mesnquima mu-
tante (que no podia responder testosterona), o desenvolvimento normal da mama
ocorreu na presena de testosterona. Entretanto, quando o mesnquima era normal
e o epitlio mutante, a testosterona era capaz de causar a degenerao da corda
Figuras 19.35
Evidncia de que a clula mesenquimatosa o
alvo da testosterona na interrupo do desen-
volvimento mamrio. (A) Cultivo de um rudi- (A) (B)
mento mamrio de um embrio de fmea de 14
dias. (B) Rudimento mamrio de um embrio
de macho de 14 dias comeando sua resposta
testosterona. (C) Broto mamrio recombinado
contendo clulas epiteliais do tipo selvagem e
mesnquima insensvel a andrgenos, cultiva-
do com testosterona. No se verifica resposta a
andrgenos. (D) Broto mamrio recombinado
contendo clulas epiteliais insensveis a
andrgenos e mesnquima do tipo selvagem,
cultivado com testosterona. As clulas mesen-
quimatosas esto condensando na constrio
do broto. (de Kratochwil e Schwartz, 1976,
cortesia de K. Kratochwil.) (C) (D)
mamria. Assim, o alvo da testosterona o mesnquima e no o epitlio. O mesn-

quima deve ser responsivo testosterona para que sua ao ocorra. Nos machos, a
testosterona induz o mesnquima mamrio a destruir seu epitlio adjacente. O efeito
especfico para o rgo visto que nenhum outro mesnquima destruir o epitlio
mamrio, e nenhum outro epitlio pode ser destrudo pelo mesnquima mamrio
(Drnberger e Kratochwil, 1980).
Adolescncia
Durante a adolescncia (que no camundongo ocorre da semana 4 semana 6), o

sistema de dutos da glndula mamria prolifera extensivamente. As clulas alveolares
secretoras de leite nas extremidades dos dutos ainda no se diferenciaram e o leite no
produzido. A extensa diviso celular est sob o controle de hormnios estrognio e
de crescimento e parece estar concentrada nas extremidades dos dutos. Estudos da
pesquisadora Coleman e seus colegas (1988) implicaram o fator de crescimento
epidrmico (EGF) como o fator responsvel pelo crescimento dos dutos nesse pero-
do. Eles implantaram pletes plsticos de lenta liberao contendo EGF em glndulas
mamrias de camundongos de 5 semanas. Os ovrios desses camundongos haviam
sido removidos e, portanto, seu desenvolvimento mamrio foi interrompido. Os dutos
adjacentes ao implante de EGF reiniciaram seu crescimento e desenvolvimento
morfolgico, ao passo que os dutos mais distantes no o fizeram (Figura 19.36). Ainda
mais, quando seces da glndula mamria foram incubadas com EGF radioativo, o
EGF foi detectado na extremidade dos dutos e associado com as clulas sofrendo
mitose. Provavelmente o EGF age diretamente causando o crescimento das glndulas
mamrias durante a adolescncia.*
Gravidez e lactao Figura 19.36

Crescimento da glndula mamria dependente
Entre a adolescncia e a gravidez, as clulas da mama no camundongo esto mitotica- de EGF em ausncia de estrognio. (A) No se
mente dormentes e indiferenciadas. Esse estado se modifica durante a segunda meta- observa crescimento de dutos ou diferenciao
de da gravidez. Sob a influncia dos hormnios estrognio e progesterona (o ltimo em camundongos deficientes em estrognio
da placenta), novos dutos so formados, e suas clulas distais comeam a desenvol- quando um plete de albumina de soro bovino
ver as caractersticas de um tecido secretor. (*) implantado na glndula mamria. (B)
Quando um plete contendo EGF implantada
O receptor do fator de crescimento epidrmico (EGFR) pode ser um elemento chave na na glndula mamria deficiente em estrognio,
etiologia dos cnceres de mama (que afetam uma em cada oito mulheres nos Estados Unidos). dutos vizinhos aumentam de tamanho e desen-
Considera-se que alguns cnceres de mama podem se desenvolver se o estrognio induz TGF-, um volvem tecido lobular em suas extremidades
ligante alternativo para o EGFR. A ativao de EGFR causaria a contnua proliferao do tecido (flechas). (C) Desenvolvimento normal dos
mamrio (Sainsbury et al., 1985; Klijn et al., 1992; McIntyre et al., 1995). dutos mamrios em um camundongo controle
de 5 semanas virgem. (de Coleman et al., 1988,
cortesia de S. Coleman.)
(A) (B) (C)

Clula precursora Clula secretora

secretando casena
Insulina e hidrocortisona
(diviso celular e Prolactina
diferenciao) (sem diviso celular)
Insulina (diviso celular)
Retculo
endoplasmtico
rugoso
(A)
(B)
Figura 19.37
Diferenciao da glndula mamria dependen-
te de hormnios. (A) Diagrama esquemtico
do desenvolvimento dependente de hormnio
da glndula mamria in vitro. (B) Auto-radio-
grafia da glndula mamria de um camundon-
go virgem com uma sonda de cDNA radioati-
vo para o mRNA da casena. (C) Auto-radio-
grafia da glndula mamria de um camundon-
go em lactao, com uma sonda de cDNA re-
conhecendo a mensagem da casena. (D) Auto-
radiografia da glndula mamria de um camun-
dongo virgem incubada com insulina, hidro-
cortisona e prolactina, 72 horas antes de ser
submetida a uma sonda de cDNA para a men-
sagem da casena. (A de acordo com Turkington,
1968; B-D de Liscia et al., 1988; fotografias
cortesia de G. Smith.)
(C) (D)
Quando glndulas mamrias da metade da gravidez so cultivadas in vitro, a maior

parte das clulas tem pouco retculo endoplasmtico rugoso e aparelho de Golgi e no
tem grnulos de casena. Quando insulina ou outro promotor de sntese de DNA
adicionado a essas culturas, as clulas se tornam responsivas a outros hormnios
(Turkington et al., 1965). ( provvel que a insulina esteja apenas mimetizando os
efeitos dos lactognios placentrios, hormnios que tm uma estrutura semelhante e
so produzidos durante a gravidez). Glucocorticides ento induzem a formao do
retculo endoplasmtico rugoso, onde a casena e outras protenas so sintetizadas.
Quando o camundongo d luz, a prolactina secretada. A prolactina causa a trans-
crio do gene da casena e estabiliza a mensagem da casena uma vez formada (Figura
19.37). Durante o perodo de lactao (quando os filhotes esto mamando), um camun-
dongo fmea pode produzir cerca de 10% do seu peso corporal em leite por dia. Quase
80% das protenas daquele leite so casenas, e destas, a -casena a mais abundante.
O promotor do gene da -casena no camundongo est localizado imediatamente a
montante do gene de -casena e ligado por um fator de transcrio, o fator da
glndula mamria (MGF). Altos nveis desse fator de transcrio se acumulam perto
do fim da gravidez e na lactao, mas o fator inativo a no ser que seja fosforilado. A
fosforilao de MGF ocorre quando a prolactina rene seus dois receptores na super-
fcie da clula. Isso ativa seus domnios de tirosina quinase, que fosforilam uma tirosina
Insulina + hidrocortisona
Figura 19.38 (A)
Insulina, hidrocortisona
Nveis de mRNA de -casina em culturas de clulas da glndula mamria de camundongo em
Insulina + prolactina
diferentes condies de cultura. (A) mRNA endgeno de -casena quando as clulas foram
Somente Insulina
cultivadas durante 6 dias em matriz extracelular ou plstico em meio contendo hormnios como
insulina, hidrocortisona ou prolactina. A matriz extracelular e a prolactina foram essenciais. (B)
+ prolactina
Expresso do gene reprter CAT quando fundido a uma construo contendo o intensificador e Hormnios
o promotor de -casena. O gene fundido foi transfectado para clulas mamrias do camundongo
cultivadas durante 6 dias sob vrias condies de substrato e hormnios. O gene fundido foi
expresso somente em presena de prolactina e matriz extracelular. Sem o intensificador (tendo
somente o promotor), no houve transcrio em nenhuma das condies. (De acordo com
Matriz extracelular
Matriz extracelular
Matriz extracelular
Matriz extracelular
Schmidhauser et al., 1992.)
Substratos
Plstico
Plstico
Plstico
Plstico
especfica na molcula de MGF. O MGF fosforilado pode entrar no ncleo e se ligar
regio do promotor nos genes das protenas do leite (Groner e Gouilleux, 1995). A Auto-radiograma
separao dos filhotes da me durante a lactao resulta em um rpido decrscimo da
atividade de MGF. A volta amamentao dos filhotes faz com que a atividade volte ao -casena
seu mximo dentro de 4 horas. O efeito pode ser mediado pelos hormnios pituitrios
ou hipotalmicos que so responsivos suco (Schmitt-Ney et al., 1992).
A casena sintetizada nas clulas mamrias competentes em resposta prolactina
somente quando as clulas esto ancoradas a uma matriz extracelular (Figura 19.38). O (B)
intensificador de -casena responsivo a ambos, a prolactina e a matriz extracelular.
Usando um gene reprter (CAT) ligado a diferentes regies da seqncia flanqueando
Sntese de CAT
a ponta 5, Schmidhauser e colegas (1992) encontraram uma seqncia com 160 pares
de bases, a 1517 pares de bases do stio de incio da transcrio (Figura 19.39). Esse
stio intensificador s funciona em clulas mamrias, e responsivo prolactina e
matriz extracelular (veja Figura 19.38B).
Portanto, o desenvolvimento da glndula mamria envolve uma complexa interao
de vrios hormnios, protenas parcrinas e fatores ambientais em quatro diferentes
estgios da vida: embrionrio, adolescncia, gravidez e lactao. A glndula mamria
nunca se desenvolve em machos normais e no se torna um rgo completamente Intensificador Promotor Gene
de -casena de -casena CAT
diferenciado nas fmeas at a metade da gravidez no organismo adulto. Estudos desse
rgo nos deu uma viso da complexidade do controle local e hormonal no desenvol-
vimento de mamferos.
Atividade de CAT
CAT (cpm convertidas/min/g)
Delees no 5 da -casena
Figura 19.39
Construes importantes na identificao do intensificador do gene da -casena no camundon-
go. O gene CAT foi usado como um reprter e foi fundido ponta 5 do gene da -casena no
camundongo. A exonuclease removeu pedaos sucessivamente maiores da regio do gene
flanqueando a ponta 5. Enquanto o gene contendo 1677 pares de bases na seqncia flanqueando
a ponta 5 foi totalmente ativo, a seqncia contendo somente 1517 pares de bases apresentou
pouca atividade. Portanto, foi postulado que o intensificador estava dentro dos 160 pares de
bases. (De acordo com Schmidhauser et al., 1992.)
Vimos que a regulao difusvel nas interaes clula-clula so tambm importan-

tes na regulao do desenvolvimento. Estudando a reativao do desenvolvimento
que ocorre durante a metamorfose e o desenvolvimento da mama, podemos identificar
o papel dos hormnios na elicitao de novos padres de diferenciao e morfogne-
se. Podemos tambm ver as interaes entre o desenvolvimento do organismo e o
ecossistema do qual ele faz parte. No prximo captulo, estudaremos os papis de
fatores difusveis e autnomos da clula nos processos responsveis pelo desenvol-
vimento das gnadas e pela determinao do sexo.
LITERATURA CITADA
Alberch, P. and Alberch, J. 1981. Hete-rochronic Blair, S. S. 1995. Compartments and appendage Cohen, B., Simcox, A. A. and Cohen, S. M. 1993.
mechanisms of morphological diversification development in Drosophila. Bio. Essays 17: Allocation of the thoracic imaginal primordia
and evolutionary change in the neotropical 299-309. in the Drosophila embryo. Development 117:
salamander Bolitoglossa occidentalis (Amphibia: 597-608.
Bowers, W. S., Fales, H. M., Thompson, M. J.
Plethodontidae). J. Morphol. 167: 249-264.
and Uebel, E. C. 1966. Identification of an Cohen, P. P. 1970. Biochemical differentiation
Allen, B. M. 1916. Extirpation experiments in active compound from balsam fir. Science 154: during amphibian metamorphosis. Science 168:
Rana pipiens larva. Science 44: 755-757. 1020-1021. 533-543.
Alley, K. E. and Barnes, M. D. 1983. Birth-dates Bowers, W. S., Ohta, T., Cleere, J. S. and Marsella, Cohen, P. P., Brucker, R. F. and Morris, S. M.
of trigeminal motor neurons and metamorphic P. A. 1976. Discovery of insect anti-juvenile 1978. Cellular and molecular aspects of thyroid-
reorganization of the jaw myoneural system in hormones in plants. Science 193: 542-547. hormone action during amphibian metamorpho-
frogs. J. Comp. Neurol. 218: 395-405. sis. Harm. Prot. Peptides 6: 273-381.
Brenner, S. 1996. Francisco Crick in Paradiso.
Ashburner, M. 1972. Patterns of puffing activity Curr. Biol. 6:1202. Coleman, S., Silberstein, G. B. and Daniel, C.
in the salivary glands of Drosophila. VI. W. 1988. Ductal morphogenesis in the mouse
Brower, D. L. and Jaffe, S. M. 1989. Requirements
Induction by ecdysone in salivary glands of D. mammary gland: Evidence supporting a role
for integrins during Drosophila wing develop-
melanogaster cultured in vitro. Chromosoma for epidermal growth factor. Dev. Biol. 127:
ment. Nature 342: 285-287.
38: 255-281. 304-315.
Brown, P. S. and Frye, B. E. 1969. Effect of
Ashburner, M. 1974. Sequential gene activation Condic, M. L., Fristrom, D. and Fristrom, J. W.
prolactin and growth hormone on growth and
by ecdysone in polytene chromosomes of Dro- 1990. Apical cell shape changes during Drosophila
metamorphosis of tadpoles of the frog Rana
sophila melanogaster. II. Effects of inhibitors imaginal leg disc elongation: A novel morphogenetic
pipiens. Gen. Comp. Endocrinol. 13: 139-145.
of protein synthesis. Dev. Biol. 39: 141-157. mechanism. Development 111: 23-33.
Brust, D. G. 1993. Maternal brood care by
Ashburner, M. 1990. Puffs, genes, and hormones Crossgrove, K., Bayer, C. A., Fristrom, J. W.
Dendrobates pumilio: A frog that feeds its young.
revisited. Cell 61: 1-3. and Guild, G. M. 1996. The Drosophila Broad
J. Herpatol. 26: 102-105.
Complex early gene directly regulates late gene
Ashburner, M. and Berondes, H. D. 1978. Puffing
Bryant, P. J. 1970. Cell lineage relationships in transcription during the ecdysone-in-duced
of polytene chromosomes. In The Genetics and
the imaginal wing disc of Drosophila melano- puffing cascade. Dev. Biol. 180: 745-758.
Biology of Drosophila, Vol. 2B. Academic Press,
gaster. Dev. Biol. 22: 389-411.
New York, pp. 316-395. Currie, J. and Cowan, W. M. 1974. Evidence for
Buckbinder, L. and Brown, D. D. 1993. Expres- the late development of the uncrossed retino-
Baker, B. S. and Tata, J. R. 1992. Prolactin
sion of the Xenopus prolactin and thyrotropin thalamic projections in the frog Rana pipiens.
prevents the autoinduction of thyroid hormone
genes during metamorphosis. Proc. Natl. Acad. Brain Res. 71: 133-139.
receptor mRNAs during amphibian metamor-
Sci. USA 90: 3820-3824.
phosis. Dev. Biol. 149: 463-467. De Beer, G, 1940. Embryos and Ancestors.
Butenandt, A. and Karlson, P. 1954. ber die Clarendon Press, Oxford.
Basler, K. and Struhl, G. 1994. Compartment
Isolierung eines Metamorphosen-Hormons der
boundaries and the control of Drosophila limb del Pino, E. M. and Elinson, R. P. 1983. A
Insekten in kristallisierter Form. Z. Naturforsch.,
pattern by hedgehog pro-tein. Nature 368: novel development pattern for frogs: Gastru-
Teil B 9: 389-391.
208-214. lation produces an embryonic disk. Nature 306:
Campbell, G., Weaver, T. and Tomlinson, A. 589-591.
Begon, M., Harper, J. L. and Townsend, C. R.
1993. Axis specification in the developing Dro-
1986. Ecology: Individuals, Populations, and Diaz-Benjumea, F. J. and Cohen, S. M. 1993.
sophila appendage: The role of wingless, deca-
Communities. Blackwell Scientific, Oxford. Interaction between dorsal and ventral cells in
pentaplegic, and the homeobox gene aristaless.
the imaginal disc directs wing development in
Bern, H. A., Nicoll, C. S. and Strohman, R. C. Cell 74: 1113-1123.
Drosophila. Cell 75: 741-752.
1967. Prolactin and tadpole growth. Proc. Soc.
Causo, J. P., Bate, M. and Martnez-Arias, A.
Exp. Biol. Med. 126: 518-521. Diaz-Benjumea, F. J., Cohen, B and Cohen, S,
1993. A wingless-dependent polar coordinate
M. 1994. Cell interaction between compart-
Blair, S. S. 1993. Mechanisms of compartment system in Drosophila imaginal discs. Science
ments establishes the proximal-distal axis of
formation: Evidence that non-proliferating cells 259: 484-489.
Drosophila wings. Nature 372: 175-179.
do not play a role in defining the D/V lineage
Clever, U. 1966. Induction and repression of
restriction in the develop ing wing of Drosophi- Drnberger, H. and Kratochwil, K. 1980.
a puff in Chironomus tentans. Dev. Biol. 14:
la. Development 119: 339-351. Specificity of tissue interaction and origin of
421-438.
mesenchymal cells in the androgen response Garcia-Bellido, A., Ripoll, P. and Morata, G. 1973. Hinegardner, R. T. 1969. Growth and develop-
of the embryonic mammary gland. Cell 19: Developmental compartmentalization of the ment of the laboratory cultured sea urchin. Biol
465-471. wing disc of Drosophila. Nat. New Biol. 245: Bull. 137: 465-475.
251-253.
Eisen, A. Z. and Gross, J. 1965. The role of Hogg, N. A. S., Harrison, D. J. and Tickle, C.
epithelium and mesenchyme in the production Geigy, R. 1941. Die metamorphose als Folge 1983. Lumen formation in the mammary gland.
of a collagenolytic enzyme and a hyaluronidase gewebsspezifischer determination. Rev. Suisse J. Embryol. Exp. Morphol. 73: 39-57.
in the anuran tadpole. Dev. Biol. 12: 408-418. Zoo/. 48: 483-494.
Hoskins, E. R. and Hoskins, M. M. 1917. On
Elinson, R. P. 1987. Change in developmental Gilbert, L. I. and Goodman, W. 1981. Chemistry, thyroidectomy in amphibia. Proc. Soc. Exp. Biol.
patterns: Embryos of amphibians with large eggs. metabolism, and transport of hormones con- Med. 14: 74-75.
In R. A. Raff and E. C. Raff (eds.), Development trolling insect metamorphosis. In L. I. Gilbert
Hoskins, S. G. and Grobstein, P. 1984. Thy-roxine
as an Evolutionary Process. Alan R. Liss, New and E. Frieden (eds.), Metamorphosis: A Pro-
induces the ipsilateral retinothala-mic projection
York, pp. 1-21. blem in Developmental Biology. Plenum, New
in Xenopus laevis. Nature 307: 730-733.
York, pp. 139-176.
Emery, I. F., Bedian, V. and Guild, G. M. 1994.
Hoskins, S. G. and Grobstein, P. 1985a. Develop-
Differential expression of Broad-Complex trans- Gould, S. J. 1977. Ontogeny and Phylogeny.
ment of the ipsilateral retinothalamic projection
cription factors may forecast tissue-specific de- Harvard University Press, Cambridge, MA, p. 283.
in the frog Xenopus laevis. II. Ingrowth of optic
velopmental fates during Drosophila metamor-
Granger, N. A. and Bollenbacher, W. E. 1981. nerve fibers and production of ipsilaterally
phosis. Development 120: 3275-3287.
Hormonal control of insect metamorphosis. In projecting cells. J. Neurosci. 5: 920-929.
Etkin, W. and Gona, A. G. 1967. Antagonism L. I. Gilbert and E. Frieden (eds.), Metamorpho-
Hoskins, S. G. and Grobstein, P. 1985b. Deve-
between prolactin and thyroid hormone in sis: A Problem in Developmental Biology.
lopment of the ipsilateral retinothalamic
amphibian development. J. Exp. Zool. 165: Plenum, New York, pp. 105-138.
projection in the frog Xenopus laevis. III. The
249-258.
Grimm, S. and Pflugfelder, G. O. 1996. Control role of thyroxine. J. Neurosci. 5: 930-940.
Fallon, J. F. and Simandl, B. K. 1978. Evidence of a of the gene optomotor-blind in Drosophila wing
Huxley, J. 1920. Metamorphosis of axolotl
role for cell death in the disappearance of the development by decapentaplegic and wingless.
caused by thyroid feeding. Nature 104: 436.
embryonic human tail. Am. J. Anal. 152: 111-130. Science 271: 1601-1604.
Irvine, K. D.and Wieschaus, E. 1994. fringe, a
Forehand, C. J. and Farel, P. B. 1982. Spinal cord Grobstein, P. 1987. On beyond neuronal specificity:
boundary-specific signaling molecule, mediates
development in anuran larvae. I. Primary and Problems in going from cells to networks and from
interactions between dorsal and ventral cells
secondary neurons. J. Comp. Neurol. 209: 386-394. networks to behavior. In P. Shinkman (ed.),
during Drosophila wing development. Cell 79:
Advances in Neural and Behavioral Development,
Fox, H. 1973. Ultrastructure of tail degeneration 595-606.
Vol. 3, Ablex, Nor-wood, NJ, pp. 1-58.
in Rana temporaria larva. Folia Morphol. 21:
Jiang, J. and Struhl, G. 1996. Complementary
103-112. Gronemeyer, H. and Pongs, O. 1980. Localiza-
and mutually exclusive activities of decapenta-
tion of ecdysterone on polytene chromosomes
Frieden, E. 1981. The dual role of thyroid plegic and wingless organize axial patterning
of Drosophila melanogaster. Proc. Natl. Acad.
hormones in vertebrate development and during Drosophila leg develop-ment. Cell 86:
Sci. USA 77: 2108-2112.
calorigenesis. In L. I. Gilbert and E. Frieden (eds.), 401-409.
Metamorphosis: A Problem in Developmental Groner, B. and Gouilleux F. 1995. Prolactin-
Kalm, L., von, Fristrom, D. and Fristrom, J. 1995.
Biology. Plenum, New York, pp. 545-564. mediated gene activation in mammary ep-ithelial
The making of a fly leg: a model for epithelial
cells. Curr. Opin. Genes Dev. 5: 587-594.
Fristrom, D. and Fristrom, J. W. 1975. The morphogenesis. BioEssays 17: 693-702.
mechanisms of evagination of imaginal disks of Gudernatsch, J. F. 1912. Feeding experiments
Kaltenbach, J. C., Fry, A. E. and Leius, V. K.
Drosophila melanogaster. I. General considera- on tadpoles. I. The influence of specific organs
1979. Histochemical patterns in the tadpole tail
tions. Dev. Biol. 43: 1-23. given as food on growth and differentiation. A
during normal and thyroxine-induced metamor-
contribution to the knowledge of organs with
Fristrom, D. and Fristrom, J. W. 1993. The phosis. II. Succinic dehydrogenase, Mg- and Ca-
internal secretion. Wilhelm Roux Arch. Entwi-
metamorphic development of the adult adenosine triphosphatases, thiamine pyrophos-
cklungsmech. Org. 35: 457-483.
epidermis. In M. Bate and A. Martinez-Arias, phatase, and 5' nucleotidase. Gen. Comp.
(eds.) The Development of Drosophila melano- Guillen, I., Mullor, J. L., Capdevilla, J., Sanchez- Endocrinol. 38: 111-126.
gaster. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Herrero, E., Morata, G. and Guerrero, I. 1995.
Kanamori, A. and Brown, D. D. 1992. The
Cold Spring Harbor, pp. 843-897. The function of engrailed and the specification
regulation of thyroid hormone receptor b genes
of Drosophila wing pattern. Development 121:
Fristrom, J. W. 1972. The biochemistry of by thyroid hormone in Xenopus lae-vis. J. Biol.
3447-3456.
imaginal disc development. In H. Ursprung and Chem. 267: 739-745.
R. Nothiger (eds.), The Biology of Imaginal Hanken, J. and Hall, B. K. 1988. Skull develop-
Karim, F. D. and Thummel, C. S. 1991. Ecdysone
Discs. Springer-Verlag, Berlin, pp. 109-154. ment during anuran metamorphosis II. Role of
coordinates the timing and amounts of E74A
thyroid hormones in osteogenesis. Anat.
Fristrom, J. W., Raikow, R., Petri, W. and and E74B transcription in Drosophila. Genes
Embryol. 178: 219-227.
Stewart, D. 1969. In vitro evagination and RNA Dev. 5: 1067-1079.
synthesis in imaginal discs of Drosophila mela- Held, L. I. Jr. 1995. Axes, boundaries and
Karp, G. and Berrill, N. J. 1981. Development.
nogaster. In E. W. Hanley, Problems in Biolo- coordinates: the ABCs of fly leg development.
McGraw-Hill, New York.
gy: RNA in Development. University of Utah BioEssays 18: 721-732.
Press, Salt Lake City. Kawahara, A., Baker, B. S. and Tata, J. R.
Hepburn, H. R. 1985. Structure of the integu-
1991. Developmental and regional expressi-
Fristrom, J. W., Fristrom, D., Fekete, E. and ment. In G. A. Kerkut and L. I. Gilbert (eds.),
on of thyroid hormone receptor genes during
Kuniyuki, A. H. 1977. The mechanism of Comprehensive Insect Physiology, Biochemistry,
Xenopus metamorphosis. Development 112:
evagination of imaginal discs of Drosophila and Pharmacology, Vol 3. Perga-mon Press,
933-943.
melanogaster. Am. Zool. 17: 671-684. Oxford, pp. 1-58.
Kawakami, A. and 9 others 1990. Molecular Lynn, W. G. and Peadon, A. M. 1955. The role Norris, D. O., Jones, R. E. and Criley, B. B.
cloning of the Bombyx mori prothoraci-cotropic of the thyroid gland in direct development of 1973. Pituitary prolactin levels in larval,
hormone. Science 247: 1333-1335. the anuran Eleutherodactylus martinicenis. neotenic, and metamorphosed salamanders
Growth 19: 263-286. (Ambystoma tigrinum). Gen. Comp. Endocrinol.
Kim, J., Irvine, K. D. and Carroll, S. B. 1995.
20: 437-42.
Cell recognition, signal induction, and symme- Madhavan, M. M. and Schneiderman, H. A.
trical gene activation at the dorsal-ventral 1977. Histological analysis of the dynamics of Oofusa, K. and Yoshizato, K. 1991. Biochemical
boundary of the developing Drosophila wing. growth of imaginal disc and histioblast nests and immunological characterization of collage-
Cell 82: 795-802. during the larval development of Drosophila nase in tissues of metamorphosing bullfrog
melanogaster. Wilhelm Roux Arch. Dev. Biol. tadpoles. Dev. Growth Differ. 33: 329-339.
Kim, J., Sebring, A., Esch, J. J., Kraus, M. E.,
183: 269-305.
Vorwrk, K., Magee, J. and Carroll, S. B. 1996. Patterson, D., Hayes, W. P. and Shi, Y. B. 1995.
Integration of positional information and Martin, F. D. and Drewry, G. E. 1978. Develop- Transcriptional activation of the metallopro-
identity by Drosophila vestigial gene. Nature ment of Fishes of the Mid-Atlantic Bight, Vol. 6. U. teinase gene stromelysin-3 coincides with thyroid
382: 133-138. S. Department of the Interior, Washington, D.C. hormone-induced cell death during frog
metamorphosis. Dev. Biol. 167: 252-262.
Kinoshita, T., Takahama, H., Sasaki, F. and Mathison, P. M. and Miller, L. 1987. Thyroid
Watanabe, K. 1989. Determination of cell death hormone induction of keratin genes: A two-step Pehrson, J. R. and Cohen, L. H. 1986. The fate
in the developmental process of anu-ran larval activation of gene expression dur-ing develop- of the small micromeres in sea urchin develop-
skin. J. Exp. Zool. 251: 37-46. ment. Genes Dev. 1: 1107-1117. ment. Dev. Biol. 113: 522-526.
Klijn, I. G. M., Berns, P. M. J. J., Schmitz, P. I. McCutcheon, F. H. 1936. Hemoglobin function Piepho, H. 1951. ber die Lenkung der In-
M. and Foekens, J. A. 1992. The clinical during the life history of the bullfrog. J. Cell. sektenmetamorphose durch Hormone. Verh.
significance of EGF-R in human breast cancer: A Comp. Physiol. 8: 63-81. dtsch. Zool. Gessel. 62-76.
review of 5232 patients. Endocr. Rev. 13: 3-17.
McIntyre, B. S., Birkenfeld, H. P. and Sylvester, Pino-Heiss, S. and Schubiger, G. 1989. Extrace-
Kistler, A., Yoshizato, K. and Frieden, E. 1977. P. W. 1995. Relationship between EGFR levels, llular protease production by Drosophila
Preferential binding of tri-substituted thyronine autophosphorylation, and mitogenic resposive- imaginal discs. Dev. Biol. 132: 282-291.
analogs by bullfrog tadpole tail fin cytosol. ness in normal mouse mammary epithelial cells
Postlethwait, J. H. and Schneiderman, H. A.
Endocrinology 100: 134-137. in vitro. Cell Pro-lif. 28: 45-56.
1971. Pattern formation and determination in
Koelle, M. R., Talbot, W. S., Segraves, W. A., Meinhardt, H. 1980. Cooperation of compart- the antenna of the homeotic mutant Antenna-
Bender, M. T., Cherbas, P. and Hogness, D. S. ments for the generation of positional informa- pedia of Drosophila melanogaster. Dev. Biol.
1991. The Drosophila EcR gene encodes an tion. Z. Naturforsch. 35c: 1086-1091. 25: 606-640.
ecdysone receptor, a new member of the steroid
Mitchell, A. W. 1988. The Enchanted Canopy. Prahlad, K. V. and DeLanney, L. E. 1965. A
receptor superfamily. Cell 67: 59-77.
Macmillan, New York. study of induced metamorphosis in the ax-olotl.
Kollros, J. J. 1961. Mechanisms of amphibian J. Exp. Zool. 160:137-146.
Mori, M., Morris, S. M., Jr. and Cohen, P. P.
metamorphosis: Hormones. Am. Zool. 1: 107-114.
1979. Cell-free translation and thyroxine Pratt, G. E., Jennings, R. C., Hammett, A. F. and
Kratochwil, K. 1971. In vitro analysis of the induction of carbamylphosphate synthetase I Brooks, G. T. 1980. Lethal metabolism of
hormonal basis for sexual dimorphism in the messenger RNA in tadpole liver. Proc. Natl. precocene-I to a reactive epoxide by locust
embryonic development of the mouse mammary Acad. Sci. USA 76: 3179-3183. corpora allata. Nature 284: 320-323.
gland. /. Embryol. Exp. Morphol. 25:141-153.
Nellen, D., Burke, R., Struhl, G. and Basler, K. Raff, R. A. 1987. Constraint, flexibility, and
Kratochwil, K. and Schwartz, P. 1976. Tissue 1996. Direct and long-range action of a Dpp phylogenetic history in the evolution of direct
interaction in androgen response of embryonic morphogen gradient. Cell 85: 357-368. development in sea urchins. Dev. Biol. 119: 6-19.
mammary rudiment of mouse: Identification of
Nijhout, H. F. 1994. Insect Hormones. Princeton Raff, R. A. 1994. Developmental mechanisms
target tissue for testosterone. Proc. Natl. Acad.
University Press, Princeton, NJ. in the evolution of animal form: Origins and
Sci. USA 73: 4041-4044.
evolvability of body plans. In S. Bengtson, (ed.),
Nijhout, H. F. and Wheeler, D. E. 1982. Juvenile
Lawrence, P. A. and Morata, G. 1976. Compart- Early Life on Earth, Columbia University Press,
hormone and the physiological basis of insect
ments of the wing of Drosophila: a study of the New York, pp. 489-500.
polymorphisms. Quart. Rev. Biol. 57: 109-133.
engrailed gene. Dev. Biol. 50: 321-337.
Raynaud, A. 1961. Morphogenesis of the mammary
Nijhout, H. F. and Williams, C. M. 1974. Control
Liscia, D. S., Doherty, P. J. and Smith, G. H. gland. In S. K. Kon and A. T. Cowrie (eds.), Milk:
of moulting and metamorphosis in the tobacco
1988. Localization of a-casein gene transcripti- The Mammary Gland and Its Secretion, Vol. 1.
hornworm, Manduca sexta: Cessation of
on in sections of epoxy resin-embedded mouse Academic Press, New York, pp. 3-46.
juvenile hormone secretion as a trigger for
mammary tissues by in situ hybridization. J.
pupation. J. Exp. Biol. 61: 493-501. Reilly, D. S., Tomassini, N. and Zasloff, M. 1994.
Histochem. Cytochem. 36: 1503-1510.
Expression of magainin antimicrobial peptide
Niki, K., Namiki, H., Kikuyama, S. and
Little, G., Atkinson, B. G. and Frieden, E. 1973. genes in the developing granular glands of Xe-
Yoshizato, K. 1982. Epidermal tissue require-
Changes in the rates of protein synthesis and nopus skin and induction by the thyroid
ment for tadpole tail regression induced by
degradation in the tail of Rana catesbeiana hormone. Dev. Biol. 162: 123-133.
thyroid hormone. Dev. Biol. 94: 116-120.
tadpoles during normal metamorphosis. Dev. Biol.
Richards, G. 1992. Switching partners? Curr. Biol.
30: 366-373. Nishikawa, A., Kaiho, M. and Yoshizato, K. 1989.
2: 657-658.
Cell death in the anuran tadpole tail:
Lyman, D. F. and White, B. A. 1987. Molecular
Riddiford, L. M. 1982. Changes in translatable
cloning of hepatic mRNAs in Rana catesbeiana Thyroid hormone induces keratinization and
mRNAs during the larval-pupal transformation
response to thyroid hormone during induced and tail-specific growth inhibition of epidermal cells.
of the epidermis of the tobacco hornworm. Dev.
spontaneous metamorphosis. J. Biol. Chem. 262: Dev. Biol. 131: 337-344.
Biol. 92: 330-342.
5233-5237.
Riddiford, L. M. 1993. Hormones and Droso- Stone, B. L. and Thummel, C. S. 1993. Droso- Cohen and F. Strumwasser (eds.), Comparative
phila development. In M. Bate and A. Martinez- phila 78C early-late puff contains E78, an Neurobiology. Wiley, New York, pp. 25-14.
Arias (eds.), The Development of Drosophila ecdysone-inducible gene that encodes a novel
Truman, J. W., Talbot, W. S., Fahrbach, S. E. and
melanogaster, Cold Spring Harbor Laboratory member of the nuclear hormone superfamily.
Hogness, D. S. 1994. Ecdysone receptor expression
Press, Cold Spring Harbor, pp. 899-939 Cell 75: 1-20.
in the CNS correlates with stage-specific responses
Riggs, A. F. 1951. The metamorphosis of Strathmann, R. R. 1971. The feeding behavior to ecdysteroids during Drosophila and Manduca
hemoglobin in the bullfrog. J. Gen. Physiol. of planktotrophic echinoderm larvae: Mecha- development. Development 120: 219-234.
35: 23-40. nisms, regulation and rates of suspension feeding.
Turkington, R. W. 1968. Hormone-dependent
Exp. Mar. Biol. Ecol. 6: 109-160.
Robinson, H., Chaffee, S. and Galton, V. A. 1977. differentiation of mammary gland in vitro. Curr.
Sensitivity of Xenopus laevis tadpole tail tissue Strathmann, R. R. 1975. Larval feeding in Top. Dev. Biol. 3: 199-218.
to the action of thyroid hormones. Gen. Comp. echinoderms. Am. Zool. 15: 717-730.
Turkington, R. W., Juergens, W. G. and Topper,
Endocrinol. 32: 179-186.
Strause, L. G., DeLuca, M. and Case, J. F. 1979. Y. J. 1965. Hormone-dependent synthesis of
Rountree, D. B. and Bollenbacher, W. E. 1986. Biochemical and morphological change accom- casein in vitro. Biochem. Biophys. Acta 111:
The release of the prothoracicotropic hormone panying light organ development in the firefly, 573-576.
in the tobacco hornworm, Manduca sexta, is Photuris pennsylvanica. J. Insect Physiol. 125:
Turner, C. D. and Bagnara, J. T. 1976. General
controlled intrinsically by juvenile hormone. J. 339-347.
Endocrinology, 6th ed. Saunders, Philadelphia.
Exp. Biol. 120: 41-58.
Tabata, T, Schwartz, E., Gustavson, E., Ali, Z.
Urness, L.D. and Thummel, C. D. 1995. Mole-
Safranek, L. and Williams, C. M. 1989. and Kornberg, T. B. 1995. Creating a Drosophi-
cular analysis of a steroid-induced regulatory
Inactivation of the corpora allata in the final la wing de novo, the role of engrailed, and the
hierarchy: The Drosophila E74A protein directly
instar of the tobacco hornworm, Manduca sex- compartment border hypothesis. Development
regulates L71-6 transcription. EMBO J. 14:
ta, requires integrity of certain neural pathways 121: 3359-3369.
6239-6246.
from the brain. Biol. Bull. 177: 396-400.
Taigen, T. L., Plough, F. H. and Stewart, M. M.
van Wijngaarden, R. and Bolanos, F. 1992.
Sainsbury, J. R. C., Malcolm, A. J., Appleton, D. 1984. Water balance of terrestrial anuran (Eleu-
Parental care in Dendrobates granuliferus
R., Farndon, J. R. and Harris, A. L. 1985. Presence therodactylus coqui) eggs: Importance of pa-
(Anura, Dendrobatidae) with a description of
of epidermal growth factor receptor as an indicator ternal care. Ecology 65: 248-255.
the tadpole. J. Herpetol. 26: 102-105.
of poor prognosis in patients with breast cancer.
Takahashi. N., Yoshihama, K., Kikuyama, S.,
J. clin. Pathol. 38: 1225-1228. Wald, G. 1945. The chemical evolution of vision.
Yamamoto, K., Wakabayashi, K. and Kato, Y.
Harvey Lect. 41: 117-160.
Schmidhauser, C., Casperson, G. F., Myers, C. 1990. Molecular cloning and nucleotide sequence
A., Sanzo, K. T., Bolten, S. and Bissell, M. J. of complementary DNA for bullfrog prolactin. Wald, G. 1981. Metamorphosis: An overview.
1992. A novel transcriptional enhancer is J. Mol. Endocrinol. 5: 281-287. In L. I. Gilbert and E. Frieden (eds.), Metamor-
involved in the prolactin- and extracellular phosis: A Problem in Developmental Biology.
Talbot, W. S., Swyryd, E. A. and Hogness, D. S.
matrix-dependent regulation of b-casein gene Plenum, New York, pp. 1-39.
1993. Drosophila tissues with different
expression. Mol Biol. Cell 3: 699-709.
metamorphic responses to ecdysone express Wassersug, R. J. 1989. Locomotion in amphibian
Schmitt-Ney, M., Happ, B., Ball, R. K. and different ecdysone receptor isoforms. Cell 73: larvae (or why arent tadpoles built like fish).
Groner, B. 1992. Developmental and environ- 1323-1337. Am. Zool. 29: 65-84.
mental regulation of a mammary gland-specific
Tata, J. R., Kawahara, A. and Baker, B. S. 1991. Weber, R. 1967. Biochemistry of amphibian
nuclear factor essential for the transcription of
Prolactin inhibits both thyroid hormone-induced metamorphosis. In R. Weber (ed.), The
the gene encoding b-casein. Proc. Natl. Acad.
morphogenesis and cell death in cultured Biochemistry of Animal Development, Vol. 3.
Sci. USA 89: 3130-3134.
amphibian larval tissues. Dev. Biol 146: 72-80. Academic Press, New York, pp. 227-301.
Schooneveld, H. 1979. Precocene-induced
Taurog, A., Oliver, C., Porter, R. L., McKen- Weismann, A. 1875. ber den Saison-Dimor-
collapse and resorption of corpora allata in
zie, J. C. and McKenzie, J. M. 1974. The role of phismus der Schmetterlinge. In Studien Zur
nymphs of Locusta migratoria. Experientia 35:
TRH in the neoteny of the Mexican axolotl Descendenz-Theorie. Engelmann, Leipzig.
363-364.
(Ambystoma mexicanum). Gen. Comp. Endo-
Schwind, J. L. 1933. Tissue specificity at the crinol. 24: 267-279. Wigglesworth, V. B. 1934. The physiology of
time of metamorphosis in frog larvae. J. Exp. ecdysis in Rhodnius prolixus (Hemiptera). II.
Thomas, H. E., Stunnenberg, H. G. and Stewart, Factors controlling moulting and metamorpho-
Zool. 66: 1-14.
A. F. 1993. Heterodimerization of the Droso- sis. Q. J. Microsc. Sci. 77: 121-222.
Slama, K. and Williams, C. M. 1966. The juvenile phila ecdysone receptor with retinoid X recep-
hormone. V. The sensitivity of the bug, Pyrrho- tor and ultraspiracle. Nature 362: 471-475. Wilder, E. L. and Perrimon, N. 1995. Dual
coris apterus, to a hormonally active factor in function of wingless in the Drosophila leg
Thummel, C. S. 1996. Flies on steroids: Droso- imaginal disc. Development 121: 477-488.
American paper-pulp. Biol. Bull. 130: 235-246.
phila metamorphosis and the mechanisms of
Smith-Gill, S. J. and Carver, V. 1981. Biochemical steroid hormone action. Trends Genet. 12: 306- Williams, C. M. 1952. Physiology of insect
characterization of organ differentiation and 310. diapause. IV. The brain and prothoracic glands
maturation. In L. I. Gilbert and E. Frieden (eds.), as an endocrine system in the Cecropia
Topper, Y. J. and Freeman, C. S. 1980. Multiple silkworm. Biol. Bull. 103: 120-138.
Metamorphosis: A Problem in Developmental
hormone interactions in the develop mental
Biology. Plenum, New York, pp. 491-544. Williams, C. M. 1956. The juvenile hormone of
biology of the mammary gland. Physiol. Rev.
Stolow, M. A. and Shi, Y. B. 1995. Xenopus sonic 60: 1049-1106. insects. Nature 178: 212-213.
hedgehog as a potential morphogen during embryo- Williams, C. M. 1959. The juvenile hormone. I.
Truman, J. W., Weeks, J. and Levine, R. B. 1985.
genesis and thyroid hormone dependent metamor- Endocrine activity of the corpora allata of the adult
Developmental plasticity during the metamor-
phosis. Nucleic Acids Res. 23: 2555-2562. Cecropia silkworm. Biol. Bull. 116: 323-338.
phosis of an insect nervous system. In M. J.
Williams, C. M. 1970. Hormonal interactions Wray, G. A. and Raff, R. A. 1990. Novel origins Yaoita, Y. and Brown, D. D. 1990. A correlation
between plants and insects. In E. Sondheimer of lineage founder cells in the direct-developing of thyroid hormone receptor gene expression
and J. B. Simeone (eds.), Chemical Ecology. sea urchin, Heliocidaris erythro-gramma. Dev. with amphibian metamorphosis. Genes Dev. 4:
Academic Press, New York, pp. 103-132. Biol. 141: 41-54. 1917-1924.
Williams, J. A., Paddock, S. W, Vorwek, K. and Wray, G. A. and Raff, R. A. 1991. Rapid evolution itan, D., Kingan, T. G., Hermesman, J. L. and
Carroll, S. B. 1994. Organization of wing for- of gastrulation mechanisms in a sea urchin with Adams, M. E. 1996. Identification of ecdysis-
mation and induction of a wing patterning gene lecithotrophic larvae. Evolution 45: 1741-1750. triggering hormone from an epitracheal
at the dorsal/ventral compartment boundary. endocrine system. Science 271: 88-91.
Yao, T.-P, Segraves, W. A., Oro, A. E., McK-
Nature 368: 299-305.
eown, M. and Evans, R. M. 1992. Drosophi-
Wong, J. M. and Shi, Y. B. 1995. Coordinated la ultraspiracles modulates ecdysone recep-
regulation and transcriptional activation of Xe- tor function via heterodimer formation. Cell
nopus thyroid hormone and retinoid-X recep- 71: 63-72.
tors. J. Biol. Chem. 270: 18479-18483.
Determinao do sexo
20
A reproduo sexual ... a obra-prima da
Natureza.
ERASMUS DARWIN (1791)
curioso notar que o nmero de especula-

O S MECANISMOS pelos quais determinado o sexo de um indivduo uma
das grandes perguntas da embriologia desde a antigidade. Aristteles, que
colecionava e dissecava embries, afirmava que o sexo era determinado pelo
calor do parceiro masculino durante a relao sexual. Quanto mais calorosa a paixo,
maior era a probabilidade de uma prognie masculina. (Aristteles aconselhava ho-
es conectadas com a natureza do sexo pra- mens idosos a conceber no vero se quisessem ter herdeiros masculinos.) Aristteles
ticamente dobraram desde que Drelincourt, (ca. de 335 A.C.) promulgou uma hiptese muito direta para determinao sexual: as
no sculo dezoito, reuniu duzentas e ses-
mulheres eram homens cujo desenvolvimento havia parado porque o frio do ventre
senta e duas hipteses sem fundamento,
materno suplantara o calor do smen masculino. Mulheres eram mais frias e mais
e desde que Blumenbach causticamente ob-
passivas que os homens, e os rgos sexuais femininos no haviam amadurecido at
servou que nada era mais certo do que a
teoria do prprio Drelincourt constituir a
o ponto em que poderiam prover sementes ativas. Essa viso foi aceita pela igreja
ducentsima sexagsima terceira hiptese. crist e por Galeno (cujos textos de anatomia foram o padro durante mais de 1000
J. A. THOMSON (1926) anos). Ao redor do ano 200 D.C., Galeno escreveu:
Assim como a espcie humana a mais perfeita de todos os animais, assim

dentro da humanidade, o homem mais perfeito que a mulher, e a razo para
essa perfeio seu excesso de calor, pois o calor o instrumento primrio da
Natureza... a mulher menos perfeita que o homem em relao s suas partes
geradoras. Porque as partes foram formadas em seu interior enquanto ela
ainda era um feto, mas devido ao defeito do calor, no podiam emergir e se
projetar para o exterior.
O ponto de vista que as mulheres eram apenas homens subdesenvolvidos e que seus
rgos genitais eram iguais aos dos homens, somente virados de dentro para fora, foi
muito popular durante mais de mil anos. Mesmo em 1543, Andreas Vesalius, o anatomista
paduano que derrubou muito da anatomia de Galeno (e que se arriscou censura pela
igreja por reiterar que homens e mulheres tm o mesmo nmero de costelas), manteve
esse conceito. As ilustraes de seus dois principais trabalhos, De Humanis Corporis
Fabrica e Tabulae Sex, mostram que ele via a genitlia feminina como uma represen-
tao interna da genitlia masculina (Figura 20.1). Apesar disso, o livro de Vesalius
iniciou uma revoluo na anatomia, e ao fim do sculo XVI, os anatomistas descarta-
ram as representaes galnicas da anatomia feminina. Durante os sculos XVII e
XVIII, seres femininos foram reconhecidos como produtores de ovos que podiam
773
(A) transmitir traos parentais, e a fisiologia dos rgos sexuais comeou a ser estudada.
Ainda assim, no havia consenso sobre como os sexos eram determinados (veja
Horowitz, 1976; Tuana, 1988; Schiebinger, 1989).
Naquele tempo o ambiente em especial, calor e nutrio - eram acreditados ser
de importncia para a determinao do sexo. Em 1890, Geddes e Thomson resumiram
todos os dados disponveis sobre a determinao sexual, e chegaram concluso que
constituio, idade, nutrio e ambiente dos pais deveriam ser especialmente consi-
derados em qualquer dessas anlises. Eles argumentavam que fatores favorecendo a
armazenagem de energia e nutrientes influenciavam a favor de prognie feminina,
enquanto que fatores favorecendo a utilizao da energia e nutrientes influenciavam
a favor de prognie masculina.
Essa viso ambiental da determinao sexual permaneceu a nica teoria cientfica
importante at a descoberta do trabalho de Mendel em 1900 e da redescoberta do
cromossomo sexual por McClung em 1902. Baseado em seu conhecimento do
Mendelismo, Correns especulou que a relao sexual 1:1 da maioria das espcies,
podia ser conseguida se o macho fosse heterozigoto e a fmea homozigota para algum
fator determinante do sexo. Porm, somente em 1905 a correlao (em insetos) do sexo
(B) feminino com os cromossomos sexuais XX e do sexo masculino com os cromossomos
XY ou XO foi estabelecida (Stevens, 1905; Wilson, 1905). Isso sugeriu fortemente que
um componente nuclear especfico era responsvel pelo direcionamento do desenvol-
vimento do fentipo sexual. Assim, acumulou-se evidncia que a determinao sexual
ocorria por herana nuclear em vez de por circunstncias ambientais.
Hoje, achamos que tanto os mecanismos ambientais como os internos da determi-
nao sexual podem atuar em diferentes espcies. Iremos primeiro discutir os mecanis-
mos cromossmicos da determinao do sexo, e em seguida considerar os meios pelos
quais o ambiente regula o fentipo sexual.
Determinao cromossmica do sexo em mamferos

Determinao Sexual Primria
A determinao sexual primria se refere determinao das gnadas. Nos mamfe-

ros, a determinao do sexo estritamente cromossmica e no usualmente influen-
ciada pelo ambiente. Na maioria dos casos, a fmea XX e o macho XY. Cada
indivduo tem que ter ao menos um cromossomo X. Como a fmea XX, cada um de
Figura 20.1 seus vulos tem um nico cromossomo X. O macho, sendo XY, pode gerar dois tipos
Representaes de Vesalius (1538, 1543) dos de espermatozide: metade contm o cromossomo X, metade o Y. Se o vulo receber
rgos reprodutivos femininos. (A) Interpre- outro cromossomo X do espermatozide, o indivduo resultante XX, forma ovrios,
tao de Vesalius concepo de Galeno do e feminino; se o vulo recebe um cromossomo Y do espermatozide, o indivduo
trato feminino da vagina ao tero. (B) Interpre- XY, forma testculos, e masculino. O cromossomo Y carrega um gene que codifica um
tao de Vesalius do sistema reprodutivo femi- fator determinador de testculos. Esse fator organiza a gnada em um testculo em vez
nino. (Reproduzido em Schiebinger, 1989.) de um ovrio. Diferentemente do caso da Drosophila (a ser discutido adiante), o
cromossomo Y do mamfero um fator crucial para determinao do sexo nessa esp-
cie. Uma pessoa com cinco cromossomos X e um cromossomo Y (XXXXXY) seria
macho. Alm disso, um indivduo com somente um nico cromossomo X e nenhum
segundo X ou Y (i.e., XO) se desenvolve como fmea e comea a formar ovrios, mas
incapaz de manter os folculos ovarianos.
Determinao Secundria do Sexo
A determinao secundria do sexo se refere ao fentipo corporal externo s g-

nadas. Um mamfero masculino tem um pnis, vesculas seminais, uma glndula
prstata, e freqentemente tamanho, cartilagem vocal e musculatura especficos
do sexo. Um mamfero feminino tem a vagina, crvix, tero, ovidutos, glndulas
mamrias, e freqentemente tamanho, cartilagem vocal e musculatura especficos
CAPTULO 20 Determinao do Sexo 775
Clulas Genitlia interna

Foliculares feminina (tero,
OVRIO Folculos oviduto, crvix,
Clulas vagina superior)
tecais
Gnada
Sulco Genital
bipotencial Duto Mlleriano
Clulas
de Sertoli Regresso
TEST-
CULOS Seio urogenital do
Clulas tubrculo genital
Testosterona
de Leydig
Pnis,
prstata
Duto
Genitlia interna
Wolffiano
masculina
(epiddimo, vasos
deferentes, vescula
seminal)
Figura 20.2
do sexo. As caractersticas sexuais secundrias so geralmente determinadas pelos Cascatas postuladas levar formao de
hormnios secretados pelas gnadas. Porm, na ausncia das gnadas, gerado o fentipos sexuais em mamferos. A converso
fentipo feminino. Quando Jost (1953) removeu as gnadas de fetos de coelhos antes do sulco genital na gnada bipotencial necessi-
da sua diferenciao, os coelhos resultantes eram fmeas, independentemente de ta dos genes SF1 e WT1, pois camundongos
serem XX ou XY. Cada um tinha ovidutos, um tero e uma vagina, mas no tinha um carentes de um ou de outro desses genes no
pnis ou estruturas acessrias masculinas. tm gnadas. A gnada bipotencial parece ser
O esquema da determinao do sexo de mamferos est mostrado na Figura 20.2. Se conduzida para a via feminina pelos genes
WNT4 e DAX1, e para a via masculina pelo
o cromossomo Y estiver ausente, os primrdios gonadais desenvolvem-se em ovri-
gene SRY (do cromossomo Y), em conjunto
os. Os hormnios estrognicos produzidos pelo ovrio permitem o desenvolvimento com genes autossmicos como SOX9. O ov-
do duto Mlleriano em tero, ovidutos e terminal superior da vagina. Se o cromosso- rio produz clulas tecais e clulas granulosas,
mo Y estiver presente, formam-se testculos que secretam dois hormnios principais. que juntas so capazes de sintetizar estrgeno.
O primeiro -hormnio anti-duto Mlleriano (AMH; tambm chamado de substncia Sob estrgeno (primeiro provindo da me, em
inibidora Mlleriano, (MIS) -destri o duto Mlleriano. O segundo hormnio -testos- seguida das gnadas), o duto Mlleriano se
terona- masculiniza o feto estimulando a formao do pnis, escroto e outras pores diferencia em genitlia feminina e a prole de-
da anatomia masculina, inibindo tambm o desenvolvimento dos primrdios do seio. senvolve caractersticas sexuais secundrias
Assim, o corpo tem o fentipo feminino a no ser que seja mudado pelos dois horm- femininas. Os testculos produzem dois hor-
mnios principais, o fator anti-duto Mlleriano
nios elaborados pelos testculos fetais. Olharemos agora mais detalhadamente para
(AMH), que causa regresso do duto, e a tes-
esses eventos. tosterona, que causa a diferenciao do duto
Wolffiano em genitlia interna masculina. Na
As Gnadas em Desenvolvimento regio urogenital, a testosterona convertida
em diidrotestosterona (DHT) que causa a mor-
O desenvolvimento das gnadas uma situao embriolgica nica. Todos os outros fognese do pnis e da prstata. (Segundo
rudimentos de rgos normalmente se diferenciam em um nico tipo de rgo. Um Marx, 1995).
rudimento de pulmo somente pode tornar-se pulmo e um rudimento de fgado so-
mente se desenvolve em fgado. O rudimento da gnada, porm, tem duas opes
normais. Quando se diferencia, pode desenvolver-se em um ovrio ou em um testcu-
lo. O tipo de diferenciao seguido por esse rudimento determina o desenvolvimento
sexual futuro do organismo. Porm, antes dessa deciso ser tomada, a gnada do
mamfero se desenvolve primeiro atravs de um estgio indiferente (bipotencial) du-
rante o qual no tem caractersticas femininas nem masculinas. Em humanos, o rudi-
mento da gnada aparece no mesoderma intermedirio durante a quarta semana e
permanece sexualmente indiferente at a stima semana. Durante esse estgio, o epitlio
do sulco genital se prolifera para dentro do tecido mesenquimatoso conjuntivo frouxo
acima dele (Figura 20.3A,B). Essas camadas epiteliais formam as cordas sexuais, que
iro envolver as clulas germinativas que migram para a gnada humana durante a
GNADAS INDIFERENTES
Duto Duto
Wolffiano Glomrulo Aorta Wolffiano
Duto
Sulco Tbulo Epitlio Cordas sexuais
Sulco Mesentrio Mlleriano
mesonfrico mesonfrico celmico em primitivas
Genital Dorsal
excretrio proliferao
(A) 4 SEMANAS (B) 6 SEMANAS
DESENVOLVIMENTO TESTICULAR DESENVOLVIMENTO OVARIANO
Tbulo mesonfrico Tbulo

Duto Wolffiano
em degenerao mesonfrico em Mesnquima
(vasos deferentes)
degenerao urogenital
Cordas da Duto Wolffiano
rede testicular Cordas
sexuais corticais
Cordas
testiculares
Duto Mlleriano
Epitlio
Tnica albugnea
Duto Mlleriano superficial
(C) 8 SEMANAS (E) 8 SEMANAS
Cordas da
rede testicular Cordas sexuais
em degenerao
Dutos eferentes Epitlio
(vasos eferentes) Tnica
Superficial
albugnea
Duto Wolffiano Cordas

(vasos deferentes) testiculares Oognia
Duto Wolffiano
Folculos
Duto Mlleriano Duto Mlleriano ovarianos
(D) 16 SEMANAS (F) 20 SEMANAS
Figura 20.3
Diferenciao das gnadas humanas mostrada em seo transversal. (A) Sulco genital de um embrio de
4 semanas. (B) Sulco genital de uma gnada indiferente de 6 semanas mostrando cordas sexuais primiti-
vas. (C) Desenvolvimento testicular na oitava semana. As cordas sexuais perdem contato com o epitlio
cortical e desenvolvem a rede testicular. (D) Na dcima-sexta semana de desenvolvimento, as cordas
testiculares so contnuas com a rede testicular e se conectam com o duto Woffiano. (E) O desenvolvimen-
to ovariano em um embrio humano de 8 semanas, quando as cordas sexuais primitivas degeneram. (F)
O ovrio humano de 20 semanas no se conecta ao duto Wolffiano, e novas cordas sexuais corticais
rodeiam as clulas germinativas que migaram para o sulco genital. (Segundo Langman, 1981.)
sexta semana. Tanto em gnadas XY como XX, as cordas sexuais permanecem

conectadas ao epitlio superficial.
Se o feto for XY, as cordas sexuais continuam a proliferar durante a oitava sema-
na, estendendo-se profundamente no tecido conjuntivo.* Essas cordas fundem-se
uma com a outra, formando uma rede de cordas sexuais internas (medulares) e, em
seu terminal mais distal, a rede testicular (rete testis) mais fina (Figura 20.3C,D). No
fim, as cordas testiculares perdem o contato com o epitlio superficial e dele ficam
separadas pela grossa matriz extracelular, a tnica albugnea. Assim, as clulas ger-
minativas so encontradas nas cordas dentro dos testculos. Durante a vida fetal e
a infncia, essas cordas permanecem slidas. Na puberdade, porm, ficam ocas para
formar os tbulos seminferos, e as clulas germinativas comeam a produo de
espermatozide. O espermatozide transportado do interior dos testculos atravs
da rede testicular, que se junta com os dutos eferentes. Esses tbulos eferentes so
os remanescentes da rim mesonfrico, e ligam os testculos ao duto Wolffiano. Esse
duto tinha sido o tubo coletor do rim mesonfrico. Em machos, o duto Wolffiano se
diferencia em vasos deferentes, o tubo atravs do qual o espermatozide passa para
uretra e para fora do corpo. No intervalo, durante o desenvolvimento fetal as clulas
mesenquimatosas intersticiais dos testculos se diferenciaram em clulas de Leydig,
que produzem a testosterona. As clulas das cordas testiculares se diferenciam em
clulas de Sertoli, que criam o espermatozide e secretam o hormnio anti-duto
Mlleriano.
Em fmeas, as clulas germinativas iro residir perto da superfcie externa da gnada.
Ao contrrio das cordas sexuais nos machos, que continuam sua proliferao, as
cordas sexuais iniciais de gnadas XX degeneram. Porm, o epitlio logo passa a
produzir um novo conjunto de cordas sexuais, que no penetram profundamente no
mesnquima, mas permanecem perto da superfcie externa (crtex) do rgo. Por isso,
so chamadas cordas sexuais corticais. Essas cordas so divididas em agregados,
cada qual envolvendo uma clula germinativa (Figura 20.2E,F). A clula germinativa se
transformar em vulo, e as cordas sexuais epiteliais que a rodeiam iro se diferenciar
em clulas granulosas. As clulas mesenquimatosas do ovrio diferenciam-se em
clulas tecais. Juntas, as clulas tecais e granulosas formam os folculos que envol-
vem as clulas germinativas e secretam hormnios esterides. Cada folculo ir conter
uma nica clula germinativa. Em fmeas, o duto Mlleriano permanece intacto, e se
diferencia em ovidutos, tero, crvix e vagina superior; o duto Wolffiano, privado de
testosterona, degenera. Um resumo do desenvolvimento dos sistemas reprodutivos
dos mamferos encontra-se na Figura 20.4. [sex1.html]
Determinao sexual primria dos mamferos:

Genes cromossmicos Y para a determinao dos testculos
Vrios genes cuja funo necessria para a diferenciao sexual normal foram en-
contrados. Ao contrrio do que ocorre em outros rgos em desenvolvimento, os
genes envolvidos na determinao do sexo diferem extensamente entre os filos, fazen-
do com que no se possa olhar para genes determinantes de sexo em Drosophila
esperando ver seus homlogos direcionando a determinao sexual de mamferos.
Todavia, desde que o fentipo de mutaes em genes determinantes do sexo muitas
vezes a esterilidade, estudos clnicos foram empregados para identificar aqueles
genes ativos na determinao do sexo em humanos femininos ou masculinos. As
manipulaes experimentais visando confirmar as funes desses genes puderam ser
realizadas em camundongos.
* Em camundongos e coelhos, algumas clulas do mesonefro (o rim primitivo) migram para o

sulco genital e tornam-se parte da populao celular intersticial. Essas parecem ser necessrias para
estabelecer a estrutura normal da corda (Buehr et al., 1993).
Figura 20.4 (A) SEXUALMENTE INDIFERENTES

Sumrio do desenvolvimento das gnadas e
Gnadas
seus dutos em mamferos. Notar que tanto os
dutos Wolffiano como o Mlleriano esto pre-
sentes no estgio da gnada indiferenciada.
O desenvolvimento dos dutos Wolffianos de- Rim metanfrico
pende do mesnquima que eles encontram. Mesonefro
As partes inferiores do duto Wolffiano que
normalmente formariam o epiddimo forma- Ureter
Duto Wolffiano
ro o tecido da vescula seminal se cultivados
com mesnquima associado com pores su- Duto
periores (vescula seminal) do duto. (Higgins Mlleriano
Cloaca
et al, 1989.)
Epiddimo Rins
Testculos metanfricos Ovrios Oviduto
Ureteres
Duto Mlleriano Duto Wolffiano

degenerado degenerado
Bexiga Bexiga Duto Mlleriano
urinria urinria (oviduto)
Duto Wolffiano
(vasos deferentes) Uretra Uretra tero
Vagina
(B) MASCULINO (C) FEMININO
GNADAS
Tipo gonadal Testculos Ovrio
Cordas sexuais Medular (interno) Cortical (externo)
DUTOS
Dutos remanescentes para Wolffiano Mlleriano
clulas germinativas
Diferenciao do duto Vasos deferentes Oviduto, tero, crvix,
Epiddimo, vescula seminal parte superior da vagina
SRY:: O Determinante Se
SRY xual do Cromossomo Y
Sexual
Em seres humanos, o principal gene para o fator determinante dos testculos reside no
brao curto do cromossomo Y. Indivduos que nascem com o brao curto, porm, sem
o brao longo do cromossomo Y so machos enquanto que indivduos que nascem
com o brao longo do cromossomo Y, mas no o brao curto, so fmeas. Analisando
o DNA de homens XX e fmeas XY, a posio do gene determinador dos testculos foi
restringida uma regio de 35.000 pares de bases do cromossomo Y, localizada perto
da extremidade do brao curto [sex2.html]. Nessa regio, Sinclair e colaboradores
(1990) encontraram uma seqncia de DNA especfica de macho que podia codifi-
car um peptdio de 223 aminocidos. Tal peptdio provavelmente seria um fator de
transcrio, j que contm um domnio ligante de DNA chamado de seqncia (box)

HMG. Esse domnio HMG (grupo de alta mobilidade) encontrado em vrios fatores
de transcrio e protenas de cromatina no-histnicas; ele induz curvatura na regio
de DNA qual ele se liga (Figura 20.5: Giese et al., 1992). O gene foi chamado SRY
(regio determinante do sexo do Y) e existe evidncia que realmente ele codifica o fator
determinante dos testculos humanos. O SRY encontrado em machos XY e nos raros
machos XX, estando ausente em fmeas normais XX e em muitas fmeas XY. Outro
grupo de fmeas XY foi achado ter mutaes de ponta ou de mudana de moldura no
gene SRY, e essas mutaes impedem a protena SRY de se ligar ao DNA ou curv-lo
(Pontiggia et al., 1994; Werner et al., 1995). Pelo menos dois genes envolvidos na
determinao sexual secundria (os genes para AMH e a aromatase P450 envolvida na
sntese de esterides) contm stios ligantes de SRY em seus promotores (Haqq et al.,
1993), a ligao especfica de sequncia de SRY a um outro gene especfico de testcu-
lo leva ativao daquele gene (Cohen et al., 1994).
Se SRY realmente codifica o principal fator determinante dos testculos, poder-
se-ia esperar que ele atuasse no sulco genital imediatamente antes, ou durante, a
diferenciao dos testculos. Essa previso foi confirmada por estudos do gene
homlogo encontrado em camundongos. O gene do rato (Sry) tambm se correla-
ciona com a presena de testculos; ele est presente em machos XX e ausente de
Figura 20.5
fmeas XY (Gubbay et al., 1990; Koopman et al., 1990). O gene Sry expresso nas
Associao de DNA com a protena SRY pode
clulas somticas da gnada indiferenciada do camundongo, imediatamente antes levar o DNA a se curvar de 70o - 80o. As partes
ou durante sua diferenciao em um testculo; sua expresso desaparece em se- escuras representam a seqncia (box) HMG
guida (Hacker et al, 1995). da protena SRY. A espiral vermelha a dupla
A evidncia mais convincente de que o Sry o gene para o fator determinante dos hlice do DNA ligado especificamente por
testculos vem de camundongos transgnicos. Se Sry induz os testculos, a insero SRY. Nesse caso, uma regio do promotor
de seu DNA no genoma de um zigoto de camundongo XX normal deve lev-lo a formar do gene do hormnio anti-Mlleriano. (Segun-
testculos. Koopman e colaboradores (1991) tomaram a regio de 14 kilobases do DNA do Haqq et al., 1994; Werner et al., 1995.)
que inclui o gene Sry (e presumivelmente seus elementos regulatrios) e microinjetaram
essa seqncia em proncleos de zigotos de camundongos recm-fertilizados. Em
vrios casos, os embries XX assim injetados, desenvolveram testculos, rgos aces-
srios masculinos e pnis (Figura 20.6). (No se formou espermatozide funcional;
porm, isso era esperado porque a presena de dois cromossomos X previne a formao
Controle
(A) (B)
Figura 20.6
Um camundongo XX transgnico para Sry macho. (A) A reao da cadeia de polimerase
seguida por eletroforese mostra a presena do gene Sry em machos XX normais, e em um
camundongo Sry XX transgnico. O gene est ausente na fmea XX da ninhada. (B) A genitlia
externa do camundongo transgnico masculina (direita) e essencialmente a mesma como a de
um macho XY (esquerda). (Segundo Koopman et al., 1991; fotografia cortesia dos autores.)
de espermatozide em camundongos e homens XXY.) H, por isso, boas razes para

se pensar que Sry/SRY o gene principal no cromossomo Y para a determinao de
testculos em mamferos.
O gene determinante de testculos do cromossomo Y necessrio mas no sufici-
ente para o desenvolvimento dos testculos em mamferos. Estudos em camundongos
(Eicher e Washburn, 1983; Washburn e Eicher, 1989) haviam mostrado que a SRY de
algumas variedades de ratos deixam de produzir testculos quando colocados em meio
autossmico diferente. Quando a protena SRY se liga a seus stios no DNA, provavel-
mente cria grandes alteraes conformacionais. Desenrola a dupla hlice em sua vizi-
nhana e curva o DNA em at 80o (Pontiggia et al., 1994; Werner et al., 1995). Essa
curvatura pode levar protenas ligadas distncia do aparelho de transcrio a um
maior contato, permitindo-lhes interagir e influenciar a transcrio. A identidade des-
sas protenas ainda no conhecida. [sex3.html]

Genes autossmicos na determinao de testculos
SOX9: Reverso Autossmica na Displasia Campomlica
Se SRY for um fator de transcrio, deveria ser esperado ativar ou reprimir uma bateria
de genes no sulco genital. Um candidato para tal gene o SOX9 em seres humanos. O
SOX9 codifica um fator de transcrio putativo que tambm contm uma seqncia
HMG. Indivduos sem uma cpia funcional desse gene tm uma sndrome chamada de
displasia campomlica, uma doena envolvendo numerosos sistemas do esqueleto e
rgos; eles morrem logo aps o nascimento em conseqncia de dificuldades respi-
ratrias decorrentes de brnquios e traquias defeituosos (Foster et al., 1994; Wagner
et al., 1994; Mansour et al., 1995). Cerca de 75 porcento dos pacientes XY com essa
sndrome desenvolvem-se como fentipos femininos ou hermafroditas. Parece que
SOX9 essencial para a formao de testculos. Alm disso, o homlogo murino desse
gene, Sox9, expresso somente nos sulcos genitais masculinos (XY), mas no nos
femininos (XX), e nas mesmas clulas do sulco genital que Sry. Sox9 expresso
somente pouco aps a expresso de Sry (Wright et al., 1995; Kent et al., 1996).
Masculinass
SF1: A Ligao Entre SRY e as Trajetrias Desenvolvimentais Masculina
Uma outra protena que poderia ser ativada por SRY e ser um cofator com SRY o fator
de transcrio SF1. O SF1(fator 1 esteroidognico) uma protena que ativa vrios
genes envolvidos na sntese de esterides. Na verdade, ele atua nas clulas de Leydig
dos testculos, ativando genes que codificam as enzimas da via da testosterona. Toda-
via, o SF1 foi recentemente mostrado ter duas outras funes crticas (Figura 20.7).
Primeiro, deletando os genes Sf1 dos camundongos, esses se desenvolvem sem as
glndulas supra-renais ou as gnadas (Luo et al., 1994). (As gnadas se desenvolvem
mas degeneram em seguida, e os camundongos morrem por falta de corticosterona.)
Segundo, o SF1 parece estar relacionado ao desenvolvimento dos testculos. medi-
da que os nveis de SF1 declinam no sulco genital dos embries XX, o SF1 permanece
nos testculos em desenvolvimento. Acredita-se que a SRY ative o gene Sf1, e que a
protena SF1, em seguida, ative ambos componentes da diferenciao sexual masculi-
na (o AMH de Sertoli e a via Leydig da testosterona) (Shen et al., 1994). Tanto SRY
como SF1 podem ser necessrias para ativar o gene AMH, sugerindo que interaes
entre essas protenas sejam importantes (Haqq et al. 1994, Shen et al., 1994).
A pesquisa de reverso de sexo em camundongos mostrou que o cromossomo Y
de um tipo no necessariamente produz testculos em outra linhagem de camundon-
gos. Parece que as protenas SRY divergiram tanto que elas podem, no muito dis-
tante, interagir com outra protenas do aparelho de transcrio (Coward et al., 1994;
Eicher, 1994).
Rim
Rim
Epiddimo
Testculo
Oviduto
(A) (B) (C)
Figura 20.7
Funes de SF1 durante a gonadognese. (A). Eliminao do gene SF1 do embrio do camun-
dongo leva perda tanto das supra-renais como dos testculos. (O duto Mlleriano persiste e
torna-se o oviduto.) (B) Um controle mostrando epiddimo e testculos. (C) Hibridizao in situ
mostrando a ativao do gene Sf1 atravs do desenvolvimento testicular de um embrio de
camundongo de 12.5 dias. (A de Luo et al., 1994; C de Shen et al., 1994.)

Desenvolvimento ovariano
DAX1: Um Potencial Gene Determinante de Ovrio no Cromossomo X
Em 1980, Bernstein e colaboradores descreveram o caso de duas irms geneticamente

XY. Seus cromossomos Y eram normais, mas tinham duplicado uma pequena poro
do brao curto do cromossomo X (Xp21). Subseqentes casos foram encontrados;
concluiu-se que quando houvesse duas cpias dessa regio no cromossomo X ativo,
o sinal SRY seria revertido (Figura 20.8). Uma dose dupla dessa regio interromperia a
formao dos testculos, mas a ausncia dessa regio foi compatvel com a formao
de testculos. Bardoni e colegas (1994) propuseram que essa regio continha um gene
que compete com o fator SRY e que foi importante para o direcionamento do desenvol-
vimento do ovrio. No desenvolvimento testicular, esse gene seria suprimido, mas a
presena de duas cpias ativas do gene se sobreporia a essa represso. Esse gene,
DAX1, foi clonado e mostrou codificar um membro da famlia do receptor do hormnio
nuclear (Muscatelli et al., 1994; Zanaria, 1994). Dados preliminares (Zanaria, 1994)
sugerem que o DAX1 expresso nos sulcos genitais do embrio de camundongo.
Wnt4a: Um potencial Gene Determinante de Ovrio em um Autossomo
O gene WNT4a outro gene que pode ser crtico para a determinao ovariana. Esse
gene expresso no sulco genital do camundongo quando ele ainda est no seu
estgio indiferenciado. Depois, se torna indetectvel nas gnadas XY (que se tornam
Gentipo
DAX1
inativo
2 cpias
de DAX1
Gnadas Testculos Ovrio Disgnese gonadal

Fentipo Macho Fmea Fmea
Figura 20.8
Reverso sexual fenotpica em seres humanos tendo duas cpias do loco DAX1. DAX1 (no cromos-
somo X) mais SRY no Y produzem testculos. DAX1 sem SRY (pois o outro loco DAX1 est no
cromossomo X inativo) produz ovrios. Duas cpias ativas de DAX1 (no cromossomo X ativo)
mais um SRY (do cromossomo Y) levam a uma gnada mal-formada. Como a gnada no produz
AMH nem testosterona, o fentipo feminino. (Segundo Genetics Review Group, 1995.)
testculos), enquanto que a expresso de WNT4a mantida nas gnadas XX quando

elas comeam formar ovrios. Se forem criados camundongos sem os genes WNT4a,
o ovrio no se forma de maneira adequada, e suas clulas expressam marcadores
especficos do testculo, incluindo AMH e testosterona produzindo enzimas (Vainio e
McMahon, 1996).
possvel que SRY forme testculos reprimindo a expresso de WNT4a no sulco
genital, como tambm promovendo SF1. Deve-se compreender que tanto o desenvol-
vimento dos testculos como o do ovrio so processos ativos. Em mamferos, a
determinao sexual primria em caso algum um estado revelia (Eicher e Washburn,
1986). Embora os ltimos anos tenham presenciado notvel progresso, ns ainda no
sabemos o que fazem os genes determinantes do testculo ou do ovrio, e o problema
da determinao sexual primria permanece (como desde a pr-histria), uma das gran-
des questes no resolvidas da biologia. [sex4.html]
Determinao sexual secundria em mamferos

Regulao Hormonal do Fentipo Sexual
A determinao sexual primria envolve a formao de um ovrio ou de um testculo de

uma gnada indiferenciada. Isso, porm, no fornece o fentipo sexual completo. A
determinao sexual secundria se refere ao desenvolvimento dos fentipos masculi-
no e feminino por hormnios secretados pelos ovrios e testculos. A determinao
sexual secundria, tanto masculina como feminina, tem dois componentes temporais
principais. O primeiro ocorre dentro do embrio durante a organognese; o segundo
ocorre durante a adolescncia.
Conforme mencionado anteriormente, se gnadas indiferentes so removidas de
um animal embrionrio concebido o fentipo feminino. Os dutos Mllerianos se
desenvolvem enquanto o duto Wolffiano se degenera. Isso tambm visto em certos
seres humanos que nascem sem gnadas funcionais. Indivduos cujas clulas tm
somente um cromossomo X (e nenhum cromossomo Y) originalmente desenvolvem
ovrios; porm, esses ovrios se atrofiam antes do nascimento, e as clulas germina-

tivas morrem antes da puberdade. Porm, sob a influncia de estrgeno primeiramente
derivado do ovrio, mas depois da me e da placenta, essas crianas nascem com um
trato genital feminino (Langman e Wilson, 1982).*
A formao do fentipo masculino envolve a secreo de hormnios testiculares
que promovem o desenvolvimento do duto Wolffiano e promovem atrofia do duto
Mlleriano. O primeiro desses hormnios o hormnio anti-duto Mlleriano, o hor-
mnio da clula de Sertoli que causa a degenerao do duto Mlleriano. O segundo
desses hormnios a testosterona esteride, que secretado pelas clulas de Leydig
testiculares fetais. Esse hormnio causa a diferenciao do duto Wolffiano em
epiddimo, vasos deferentes e vesculas seminais, e causa o desenvolvimento de
tumefaes urogenitais e seios no interior do escroto e pnis. A existncia desses dois
sistemas independentes de masculinizao demonstrada em pessoas tendo sndrome
da insensibilidade andrgena. Esses indivduos XY tm o gene do fator determinante
testicular e, por isso, tm testculos que produzem testosterona e AMH. Porm, essas
pessoas no tm a protena receptora de testosterona e portanto no podem respon-
der testosterona produzida em seus testculos (Meyer et al., 1975). Porque elas so
capazes de responder ao estrgeno produzido em suas glndulas supra-renais, elas
so de aparncia distintamente feminina (Figura 20.9). Porm, apesar dessa aparncia
feminina, esses indivduos tm testculos, e embora no possam responder testoste-
rona, eles respondem ao AMH. Assim, seus dutos Mllerianos degeneram. Essas Figura 20.9
pessoas se desenvolvem como mulheres normais mas so estreis, no tendo um Um indivduo XY com a sndrome da in-
sensibilidade andrgena. Apesar do caritipo
tero ou ovidutos e tendo testculos em seu abdome.**
XY e da presena de testculos, o indivduo
desenvolve caractersticas sexuais secun-
Testosterona e Diidrotestosterona drias femininas. Internamente, porm, a
mulher no tem os derivados do duto
Existem dois diferentes hormnios masculinizantes, testosterona e AMH. Existe evidn- Mlleriano e tem testculos no descidos.
cia que a testosterona, em certos tecidos, pode no ser o hormnio ativo. A testosterona (Cortesia de C. B. Hammond.)
parece ser responsvel pela promoo da formao de estruturas reprodutivas masculi-
nas (o epiddimo, vesculas seminais e vasos deferentes) do primrdio do duto Wolffiano.
No entanto, a testosterona no masculiniza diretamente a uretra masculina, prstata,
-diidrotestosterona.
pnis ou escroto. Essas funes posteriores so controladas pela 5
Siiteri e Wilson (1974) mostraram que a testosterona convertida em 5-
diidrotestosterona nos seios urogenitais e tumefaes, mas no no duto Wolffiano.
Imperato - McGinley e colegas (1974) acharam uma pequena comunidade na Rep-
blica Dominicana na qual vrios habitantes tinham uma deficincia gentica da enzima
5-cetoesteride redutase 2, que converte testosterona em diidrotestosterona. Indiv-
*Os mecanismos pelos quais o estrgeno poderia promover a diferenciao dos dutos Mllerianos
no so bem compreendidos. Durante o desenvolvimento embrionrio, o duto extremamente
sensvel a compostos estrognicos, conforme conhecido pelos efeitos teratognicos da
dietilstilbesterol (DES). Esse composto um estrgeno sinttico que foi dado s mulheres nas
dcadas de 1940 at 1960 para manuteno da gravidez. As filhas nascidas dessas mulheres que
usaram essa droga apresentaram alta incidncia de anomalias do duto Mlleriano, incluindo malfor-
maes dos epitlios vaginal e cervical, anomalias estruturais dos ovidutos e tero, e uma incidncia
acima do normal de cncer vaginal (Robboy et al., 1982; Bell, 1986).
**A sndrome da insensibilidade andrgena uma de vrias condies chamadas pseudo-
hermafroditismo. Os hermafroditas verdadeiros (raros em humanos e na maioria dos mamferos,
mas normal em certos invertebrados) contm tecidos gonadais tanto masculino como feminino.
Hermafroditas mamferos verdadeiros tm anormalidades na determinao sexual primria e po-
dem ocorrer quando o cromossomo Y translocado para o cromossomo X. Se o X translocado for
inativado, o Y ser desligado. Algumas das clulas gonadais sero XX e outras XY (Berkovitz et al.,
1992). Na condio pseudo-hermafrodita, existe somente um tipo de gnada, mas as caractersticas
sexuais secundrias diferem daquilo que esperado do sexo gonadal. Em humanos, pseudo-herma-
froditas masculinos podem resultar da sndrome da insensibilidade andrgena, ou da incapacidade de
produzir testosterona devido a um defeito gnico em uma das enzimas levando sua sntese (Geissler
et al., 1994). Pseudo-hermafroditas femininos ocorrem quando o organismo tem uma superprodu-
o de testosterona.
Bexiga urinria
Reto
Pbis Vescula
seminal
Prstata
Pnis
Uretra
Vaso deferente
Epiddimo
Testculo
Dependente de diidrotestosterona
Dependente de testosterona
Figura 20.10
Regies dependentes de testosterona e diidrotestosterona no sistema genital do feto humano
masculino. (Segundo Imperato-McGinley et al., 1974.)
duos afetados no tinham um gene funcional para essa enzima (Andersson et al.,
1991; Thigpen et al, 1992). Embora esses indivduos XY tenham testculos funcionantes,
eles tm uma bolsa vaginal cega e um clitris aumentado. Pareciam meninas e so
criadas como tais. Suas anatomia interna, porm, masculina: testculos, desenvolvi-
mento de duto Wolffiano e degenerao do duto Mlleriano. Assim, parece que a
formao da genitlia externa est sob o controle da diidrotestosterona, enquanto que
a diferenciao do duto Wolffiano controlada pela prpria testosterona (Figura
20.10). interessante que a genitlia externa torna-se responsiva testosterona na
puberdade, causando bvia masculinizao em uma pessoa originalmente considera-
da como sendo uma menina.
Hormnio Anti-Mlleriano
O hormnio anti-duto Mlleriano (AMH) uma glicoprotena com 560 aminocidos

(Cate et al., 1986) produzido nas clulas de Sertoli (Tran et al., 1977). Quando fragmen-
tos de testculos fetais ou clulas de Sertoli isolados so colocados ao lado de seg-
mentos em cultura, contendo pores dos dutos Wolffiano e Mlleriano, o duto
Mlleriano se atrofia apesar de nenhuma alterao ocorrer no duto Wolffiano (Figura
20.11). Essa atrofia causada tanto pela morte celular como pela transformao em
mesnquima e migrao de clulas epiteliais do duto (Trelstad et al., 1982). O gene
AMH de camundongo tem uma seqncia promotora que ligada tanto pela protena
SF1 como por SRY (Haqq et al., 1994; Shen et al., 1994). [sex5.html]
Vemos assim, que uma vez formados, os testculos secretam dois hormnios que
causam a masculinizao do feto. Um desses hormnios - testosterona - pode ser
convertido em uma forma mais ativa pelos tecidos que criam a genitlia externa. Em
fmeas, o estrgeno secretado pelos ovrios fetal parece ser suficiente para induzir a
diferenciao do duto Mlleriano em tero, ovidutos e crvix. Dessa maneira, os
cromossomos sexuais controlam o fentipo sexual de um indivduo.
Figura 20.11
Exame da atividade do hormnio anti-duto
Mlleriano no segmento anterior do trato
reprodutivo de um feto de rato de 15.5 dias,
aps 3 dias em cultura. (A) Tanto o duto
Mlleriano (seta esquerda) quanto o duto
Wolffiano (seta direita) esto abertos. (B) O
duto Wolffiano (seta) est aberto, mas o duto
Mlleriano se degenerou e se fechou. (Corte-
sia de N. Josso.)
(A) (B)
O Sistema Nervoso Central
Uma das reas mais controversas da determinao sexual secundria envolve o de-
senvolvimento de comportamentos especficos do sexo. Em aves canoras, a testoste-
rona vista regular o crescimento de agregados neuroniais especficos do macho no
crebro. Machos de canrios e tentilhes-zebra cantam eloqentemente, enquanto as
fmeas cantam pouco ou nunca. Esses cantos servem para marcar territrios e atrair
consortes. A habilidade de cantar controlada por seis diferentes agregados de neu-
rnios (ncleos) no crebro da ave (Figura 20.12). Neurnios conectam cada uma
dessas regies entre si. Em canrios machos, esses ncleos so vrias vezes maiores
que agregados correspondentes de neurnios em canrios-fmea; em fmeas de
tentilhes-zebra, uma dessas regies pode at estar inteiramente ausente (Arnold,
1980; Konishi e Akutagawa, 1985).
A testosterona tem um papel importante na produo do canto. Em machos adul-
tos de tentilhes-zebra, Prve (1978) demonstrou uma correlao linear entre a quan-
tidade de canto e a concentrao de testosterona srica. Foi mostrado que mudanas
sazonais nos nveis de testosterona esto correlacionadas com os padres canoros
desses pssaros. Quando os nveis de testosterona esto baixos, no somente ocorre
um decrscimo de canto do pssaro mas tambm uma diminuio do tamanho dos
ncleos cerebrais especficos de machos (Nottebohm, 1981). Em tentilhes adultos, a
castrao elimina o canto, mas a injeo de testosterona induz tais pssaros a cantar
mesmo em Novembro, o que normalmente no fazem (Thorpe, 1958). Em vrias espci-
es de pssaros, as fmeas podem ser induzidas a cantar pela injeo de testosterona
(Nottebohm, 1980). Quatro regies controladoras do canto no crebro dessas aves
crescem 50-69 porcento em tais pssaros, enquanto outras regies cerebrais no o Tentilho-zebra macho
fazem. Estudos auto-radiogrficos (Arnold et al., 1976) mostraram que os neurnios
dos ncleos controladores do canto incorporam testosterona radioativa, enquanto
outras regies do crebro no o fazem. Parece, portanto, que os hormnios das gna-
das tm um papel importante no desenvolvimento das regies do sistema nervoso que
geram comportamentos especficos do sexo.
Syrinx
Figura 20.12
Dimorfismo sexual no crebro avicular. O diagrama esquemtico indica as principiais rea neurais Tentilho-zebra fmea
acreditadas estar envolvidas na produo do canto no tentilho-zebra. Os crculos representam
reas cerebrais especficas; o tamanho de cada crculo proporcional ao volume ocupado por
essa regio. Crculos com linhas hachuriadas so volumes estimados. Os nmeros dentro de
cada crculo representam a porcentagem de clulas que incorporam testosterona radioativa. As
diferenas de volume entre trs dessas regies (HVc, RA e NXIIts) so significantes entre os
sexos, e a rea X no foi observada nos crebros de tentilhes fmeas. As diferenas na ligao
de testosterona nas regies HVc e MAN so significativas, e no foram observadas diferenas
sexuais relativas ligao de hormnio esteride em outras regies do crebro. As setas indicam
as vias axnicas conectando as regies no tentilho macho. (Segundo Arnold, 1980.)
A situao menos clara em mamferos, porque a h menos comportamentos que

caracterizam exclusivamente um sexo. A penetrao peniana em ratos um desses
comportamentos, e controlado por neurnios motores dos msculos levator ani e
bulbocavernoso. Ambos neurnios se originam de um ncleo espinhal que especifi-
camente concentra testosterona. Em ratas, esses msculos so vestigiais, e o volume
dos seus neurnios controladores muito reduzido (Breedlove e Arnold, 1980; Tobin
e Joubert, 1992). A testosterona parece promover dois tipos de mudanas nesses
neurnios responsivos. Em fetos e ratos recm-nascidos, a testosterona impede a
morte normal de neurnios nessa regio. Ratas perdem at 70 porcento dos neur-
nios desse ncleo espinhal, enquanto ratos machos perdem somente 25 porcento. Em
ratos adultos, a testosterona atua nesse ncleo para manter o tamanho das clulas
nevosas e seus dendritos. A rea do soma e o comprimento dos dendritos desse
ncleo espinhal so reduzidos metade quando um rato adulto castrado. Essa
reduo revertida pela injeo de testosterona (Nordeen et al., 1985; Kurz et al.,
1986). Em seres humanos, as diferentes taxas de crescimento entre os sexos produzem
aspectos anatmicos ligeiramente diferentes. Embora os crebros humanos femininos
sejam 10 porcento menores que os masculinos, a camada granular de algumas regies
corticais contm neurnios empacotados mais densamente em comparao com regi-
es semelhantes de crebros masculinos (Witelson et al., 1995).
A testosterona no o nico esteride capaz de mediar o comportamento. No
crebro do mamfero, tambrm so vistos neurnios sensveis ao estrgeno. Esses
neurnios esto colocados em posies dos circuitos neurais conhecidas por mediar
o comportamento reprodutivo: o hipotlamo, a hipfise e a amgdala (Figura 20.13;
McEwen, 1981). Pfaff e McEwen (1983) demonstraram que o estrgeno altera as pro-
priedades eltricas e qumicas dos neurnios hipotalmicos capazes de ligar estrgeno
em sua cromatina. Terasawa e Sawyer (1969) j tinham encontrado que a atividade
eltrica desses neurnios varia durante o ciclo estrognico sazonal do rato, aumen-
tando no perodo da ovulao. Alm disso, o estrgeno parece estimular aqueles
neurnios nas regies que induzem o comportamento reprodutivo feminino. Ratas
ovariectomizadas injetadas com estrgeno diretamente no hipotlamo exibem lordose,
uma posio que estimula o comportamento de monta em camundongos machos,
enquanto que ratas ovariectomizadas controles no mostraram tal comportamento
(Barfield e Chen, 1977; Rubin e Barfield, 1980). O mecanismo pelo qual o estrgeno
promove atividade neuronial especfica nesses perodos considerado envolver au-
mento da permeabilidade ao potssio desses neurnios (Nabekura et al., 1986).
Telencfalo Diencfalo Mesen- Rom- Medula

cfalo benc- espinhal
falo
Cerebelo
Te t o
Crtex ptico
Bulbo
olfativo
Figura 20.13
Representao das regies ligantes de estrge-
Septo rea Hipotlamo Hipfise
no no crebro de uma rata. (Segundo Kandel e Medula
pre-ptica
Schwartz, 1985.) espinhal
& Especulaes
O Desenvolvimento de Comportamentos Sexuais

A Hiptese da Organizao/Ativao o principal componente do sangue fetal e podem levar pessoas semelhantes bi-
A exposio pr-natal (ou neonatal) a cer- fluido crebro-espinhal. Ela se ligar ao ologicamente a divergirem extensa-
tos hormnios impe mudanas especfi- estrgeno, mas no testosterona. mente em suas atividade sexuais.
cas do sexo no sistema nervoso central? Tentativas de estender a hiptese da
Tais mudanas neurais especficas do organizao/ativao aos comportamentos Homossexualidade Masculina
sexo foram demonstradas nas regies do sexuais voluntrios so mais controver- Certos comportamentos so freqentemen-
crebro que regulam a fisiologia sexual sos porque no h um comportamento verte citados como sendo parte do fentipo
involuntria. A secreo cclica de hor- dadeiramente especfico do sexo que dis- completo masculino ou feminino. Tem-
mnio luteinizante pela hipfise da rata tinga os dois sexos de muitos mamferos e se dito que o crebro do homem maduro
adulta depende da falta de testosterona porque existem mltiplos efeitos do trata- formado de forma que ele tenha o desejo
durante a sua primeira semana de vida. A mento hormonal no mamfero em desen- de copular com uma mulher madura, e o
secreo do hormnio luteinizante das volvimento. Por exemplo, a injeo de tes- crebro da mulher madura faz com que ela
ratas pode ser tornada no-cclica dando- tosterona em uma rata de uma semana ir deseje copular com um homem maduro.
lhes testosterona 4 dias aps o nascimen- aumentar seus impulsos plvicos e dimi- Porm, por mais importantes que sejam os
to; inversamente, as secrees do horm- nuir sua quantidade de lordose (Phoenix desejos em nossas vidas, eles no podem
nio luteinizante em machos podem ser tor- et al., 1959; Kandel et al., 1995). Essas mu- ser detectados por hibridizao in situ nem
nadas cclicas removendo seus testcu- danas podem ser atribudas s alteraes isolados por anticorpos monoclonais. No
los dentro de um dia aps o nascimento mediadas por testosterona no sistema ner- sabemos ainda se os desejos sexuais so
(Barraclough e Gorski. 1962). Acredita-se voso central, mas tambm podem ser devi- instilados em ns pela nossa educao
que os hormnios sexuais podem atuar das a efeitos hormonais em outros tecidos. social ou se so armados em nossos c-
durante o estgio fetal ou neonatal da vida A testosterona possibilita o crescimento rebros por genes ou hormnios durante
dos mamferos para organizar o sistema dos msculos que permitem o impulsiona- nosso desenvolvimento intra-uterino ou
nervoso e que durante a vida adulta, os mento plvico. Visto que a testosterona es- por outros meios.
mesmos hormnios podem ter efeitos timula o amplo crescimento das fmeas e o Em 1991, Simon LeVay props que par-
ativadores transitrios. Isso chamado fechamento de seus orifcios vaginais, no te do hipotlamo anterior de homens ho-
hiptese da organizao/ativao. se pode concluir que a ausncia de lordose mossexuais tinha a forma anatmica tpica
Interessantemente, o principal horm- seja somente devida s mudanas mediada mulher em lugar daquela de homens
nimo responsvel pelo padro do crebro das pela testosterona no circuito nervoso heterossexuais. O hipotlamo considera-
masculino o estradiol.* A testosterona (Harris e Levine, 1965; De Jonge et al., 1988; do ser a fonte de nossas necessidades se-
do sangue fetal ou neonatal pode ser con- Moore, 1990; Moore et al., 1992; Fausto- xuais, e ratos tm uma rea sexualmente
vertida em estradiol pela aromatase P450; Sterling, 1995). dimrfica no hipotlamo anterior que pare-
e essa converso ocorre no hipotlamo e A extrapolao de ratos para huma- ce regular o comportamento sexual. Esse
no sistema lmbico -duas reas do crebro nos um empreendimento muito arrisca- estudo gerou muita publicidade e discus-
conhecidas por regular os comportamen- do, j que nenhum comportamento espe- so. Os principais resultados esto mos-
tos reprodutivos e hormonais (Reddy et cfico do sexo foi identificado em huma- trados na Figura 20.14. Os ncleos
al., 1974; MdEwen et al., 1977). Assim, a nos, e o que masculino em uma cultu- intersticiais do hipotlamo anterior (INAH)
testosterona capaz de causar seus efei- ra pode ser considerado feminino em foram divididos em quatro regies. Trs
tos atravs da converso em estradiol. Mas outra (veja Jacklin, 1981; Bleier, 1984; delas no mostraram sinais de dimorfismo
o ambiente fetal rico em estrgenos oriun- Fausto-Starling, 1992). Conforme conclui sexual. Uma delas, INAH3, mostrou uma
dos das gnadas e da placenta. O que im- uma reviso (Kandel et al., 1995): diferena estatstica significativa entre
pede os estrgenos de masculinizar o sis- machos e fmeas; foi apregoado que o
tema nervoso de um feto feminino? O Existe ampla evidncia que a organi- INAH3 masculino , em mdia, mais de
estrgeno fetal (tanto masculino como fe- zao neural dos comportamentos duas vezes maior que o INAH3 feminino.
minino) ligado -fetoprotena. Essa pro- reprodutivos, enquanto influenciada Alm disso, os dados de LeVay sugeriram
tena produzida no fgado fetal e torna-se de maneira importante por eventos que o INAH3 de homens homossexuais
Os termos estrgeno e estradiol so freqen- hormonais durante um perodo pr- era semelhante ao das mulheres e tinha
temente usados indistintamente. Todavia, o natal crtico, no exerce uma influn- menos da metade do tamanho do INAH3
estrgeno refere-se uma classe de hormnios cia imutvel sobre o comportamento de homens heterossexuais. Esse achado,
esterides responsveis pela estabilizao e ma- sexual do adulto, ou mesmo sobre uma proclamou LeVay, sugere que a orienta-
nuteno das caractersticas femininas especfi-
cas. O estradiol um desses hormnios, e na
orientao sexual individual. Ao lon- o sexual tem um substrato biolgico.
maioria dos mamferos (incluindo os humanos) go da vida de um indivduo, motivos Houve vrias crticas essa interpre-
ele o mais potente dos estrgenos. religiosos, sociais ou psicolgicos tao dos dados por LeVay. Em primeiro
Figura 20.14 xuais masculinos (homens homossexuais

Uma parte dos dados que podem sugerir uma que tinham um irmo homossexual). Entre
base biolgica para o homossexualismo.
40 pares de irmos homossexuais dos quais
INAH4 e INAH3 so dois grupos de neurni-
os hipotalmicos. O INAH4 no mostra di- um havia herdado uma regio particular no
morfismo sexual no volume, enquanto o cromossomo X de sua me, 33 deles tinham
INAH3 mostra agregao estatisticamente sig- irmos que tambm haviam herdado essa
nificativa, embora o intervalo seja semelhante. regio (Hamer et al., 1993). Era de se espe-
O INAH3 de autpsias de crebros masculi- rar que isso tivesse ocorrido, em mdia, em
nos homossexuais mostra agregao em di-
reo da distribuio feminina. Porm, no se somente 20 deles. Novamente, isso so-
pode posicionar uma relao causa e efeito. mente uma concordncia estatstica, que
(Segundo LeVay, 1991.) poderia ser coincidente. Alm disso, o con-
trole (a observao se o mesmo marcador
Mulheres Homens Homens tanto, no um fentipo no sentido usual existia nos homens no-homossexuais
heterosse- homosse- da palavra. Em terceiro lugar, os crebros dessas famlias) no foi apresentado, e o
xuais xuais vis estatstico das observaes foi ques-
dos homens homossexuais eram de paci-
presumidos presumidos
entes que tinham falecido de AIDS. A AIDS tionado, especialmente porque outros la-
afeta o crebro, e seu efeito sobre os neur- boratrios no foram capazes de repetir o
nios hipotalmicos no conhecido. Em resultado (Risch et al., 1993; Marshall,
quarto lugar, como o estudo foi feito em c- 1995). Em um estudo mais recente do mes-
rebros de sujeitos mortos, no se pode infe- mo laboratrio, Hu e colegas (1995) encon-
rir causa e efeito. Conforme mencionado no tram pouco ou nenhum aumento nessa re-
Captulo 1, tais dados mostram apenas cor- gio quando homens homossexuais foram
relaes, no causas. comparados com seus irmos no-homos-
to provvel comportamentos pode- sexuais. Os autores concluram que essa
rem afetar o tamanho da densidade neu- regio era nem necessria nem suficiente
ronial regional como a densidade neuroni- para uma orientao homossexual. Assim,
al regional poder afetar comportamentos. apesar de relatos desses estudos na mdia
Se os dados forem interpretados como in- pblica, no foi encontrado o gene gay.
Mulheres Homens Homens
heterosse- homosse- dicando que o INAH3 de homossexuais Merece ser lembrado que genes codi-
xuais xuais masculinos menor que aquele de hete- ficam RNAs e protenas, no comporta-
presumidos presumidos rossexuais masculinos, ainda no se sabe mentos. Enquanto os genes podem cau-
se isso um resultado da homossexuali- sar vis em resultados comportamentais,
lugar, os dados provinham de populaes, dade ou uma causa. Em quinto lugar, mes- no temos evidncia para sua ao con-
no de indivduos. Pode-se tambm dizer mo se a diferena existe, no h evidncia troladora sobre eles. A existncia de pes-
que h um intervalo estatstico e que ho- que a diferena tenha algo a ver com sexu- soas com a sndrome da personalidade
mens e mulheres tm o mesmo intervalo geral. alidade. Em sexto lugar, esses estudos no mltipla indica que um gentipo pode
Na realidade, o INAH3 de um homem ho- indicam quando tais diferenas (se existi- apoiar um grande intervalo de personali-
mossexual era maior do que de todos, rem) emergem. A questo se diferenas de dades. Isso certamente um problema
exceto de um dos 16 homens heterossexu- INAH3 entre homens, mulheres e homens para qualquer definio de um fentipo
ais. Em segundo lugar, os homens hete- homossexuais ocorrem durante o desen- homossexual, j que muitas pessoas al-
rossexuais no eram necessariamente he- volvimento embrionrio, logo aps o nas- ternam entre comportamentos homosse-
terossexuais, nem os homens homossexu- cimento, durante os primeiros anos de vida, xual e heterossexual. Assim, a pergunta
ais eram necessariamente homossexuais; durante a adolescncia, ou em um outro se desejos homossexuais so formados
os crebros vieram de cadveres de pesso- momento, no foi estudada. por genes dentro do ncleo, por horm-
as cujas preferncias sexuais no eram co- Em 1993, foi feita um correlao entre nios sexuais durante o desenvolvimento
nhecidas. Isso levanta um outro aspecto: o uma certa seqncia de DNA no cromos- fetal, ou por experincias ps-nascimen-
homossexualismo tem muitas formas e, por- somo X e um certo subgrupo de homosse- to ainda permanece uma questo aberta.
Determinao sexual cromossmica em Drosophila

A Via do Desenvolvimento Sexual
Os mecanismos determinantes do sexo em mamferos e insetos como Drosophila so

muito diferentes. Nos mamferos, o cromossomo Y tem papel de piv na determinao
do sexo masculino. Assim, mamferos XO so fmeas, com ovrios, tero, ovidutos
(em geral, porm, com pouqussimos, se tanto, vulos). Em Drosophila, a determinao
Tabela 20.1 Razes de cromossomos X para autossomos em diferentes

fentipos sexuais de Drosophila melanogaster
Cromossomos X Conjuntos de Relao X:A Sexo
Autossomos (A)
3 2 1.50 Metafmea
4 3 1.33 Metafmea
4 4 1.00 Fmea normal
2 3 0.66 Intersexo
1 2 0.50 Macho normal
1 3 0.33 Metamacho
Fonte: Segundo Strickberger, 1968.
sexual conseguida por um equilbrio entre determinantes femininos no cromossomo

X e determinantes masculinos nos autossomos (cromossomos no-sexuais). Se hou-
ver ao menos um cromossomo X em uma clula diplide (1X:2A), a mosca ser macho.
Se houver dois cromossomos X em um clula diplide (2X:2A) a mosca ser fmea
(Bridges, 1921,1935). Assim, Drosophila XO so machos estreis. A Tabela 20.1 mos-
tra as diferentes relaes X-para-autossomos e o sexo resultante.
Em Drosophila, e insetos em geral, podem-se observar ginandromorfos ani-
mais nos quais certas regies so masculinas e outras femininas (Figura 20.15;
Prancha 17). Isso pode acontecer quando um cromossomo X perdido de um ncleo
embrionrio. As clulas descendentes daquela clula, em vez de serem XX (fmeas)
so XO (masculinas). Como no h hormnios sexuais para modular tais eventos em
insetos, cada clula produz a sua prpria deciso sexual. As clulas XO exibem
caractersticas masculinas, enquanto as clulas XX exibem traos femininos. Essa
situao fornece um belo exemplo da associao entre cromossomos X e sexo. Con-
forme pode ser visto nesse exemplo, o cromossomo Y no tem qualquer papel na
determinao do sexo em Drosophila. Ele somente necessrio para garantir fertili-
dade em machos. O cromossomo Y somente ativo tardiamente no desenvolvimen-
to, durante a formao de espermatozide.
Qualquer teoria de determinao sexual em Drosophila precisa explicar como lida
a razo X-para-autossomo, e como essa informao transmitida aos genes que con-
trolam os fentipos masculinos ou femininos. Embora ns ainda no conheamos os
mecanismos ntimos pelo qual a razo X:A tornada conhecida para as clulas, a
pesquisa durante a ltima dcada revolucionou nossa viso da determinao sexual
em Drosophila. Muito dessa pesquisa se ocupou da identificao e anlise dos genes
que so necessrios para a diferenciao sexual e a colocao desses genes em uma
seqncia desenvolvimental. Mutaes de perda-de-funo na maioria desses genes-
Sex-lethal (Sxl), transformer (tra) e transformer-2 (tra2)- transformam indivduos
Crista sexual masculina
Figura 20.15
eosin eye
Ginandromorfo de D. melanogaster no qual o
Tipo eosin eye
selvagem lado esquerdo feminino (XX) e o lado direito
miniature wing miniature wing masculino (XO). O lado masculino perdeu
um cromossomo portando os alelos tipo selva-
gem da cor dos olhos e forma das asas, permi-
tindo com isso a expresso dos alelos recessi-
vos eosin eye e miniature wing no cromosso-
mo X remanescente. (Segundo Morgan, 1919.)
Razo X:A
No-ativado (sem
protena funcional)
No-ativado (sem
protena tra funcional)
Reprime
genes Protenas Dsx Protenas Dsx Genes
msl especficas especficas msl
da fmea da macho
ix Reprime Reprime
Genes de Genes de Genes de Genes de
Genes Genes
diferenciao diferenciao diferenciao diferenciao
ligados ao X ligados ao X
feminina masculina masculina feminina
Taxa de Fentipo Fentipo Taxa de

transcrio feminino masculino transcrio
feminina masculina
Figura 20.16
Cascata da regulao proposta para a deter-
minao sexual somtica em Drosophila. XX em machos. Tais mutaes no tm efeito sobre a determinao sexual em machos
Setas representam ativao, enquanto um blo- XY. A homozigozidade do gene intersex (ix) leva moscas XX a desenvolver um fentipo
co no fim de uma linha indica supresso. Os intersexual que tem pores de tecido masculino e feminino no mesmo rgo. O gene
locos msl, sob o controle do gene Sxl, regu- doublesex (dsx) importante para a diferenciao sexual dos dois sexos. Se dsx esti-
lam a transcrio compensatria de dosagem ver ausente, tanto moscas XX como XY se transformam em intersexuais (Baker e
do cromossomo X masculino. (Segundo
Ridge, 1980; Belote et al., 1985a).
Baker et al., 1987.)
A posio desses genes numa trajetria desenvolvimental est baseada (1) nas
interpretaes de cruzamentos genticos resultando em moscas tendo duas ou mais
dessas mutaes e (2) na determinao do que acontece quando ocorre ausncia total
dos produtos de um desses genes. Tais estudos geraram o modelo da cascata regulatria
visto na Figura 20.16.
O Gene Sex-lethal como o Piv para a Determinao do Sexo
INTERPRETANDO A RAZO X:A. A primeira fase da determinao sexual em

Drosophila requer a leitura da razo X:A. Quais elementos no cromossomo X so
contados e como usada essa informao? Parece que valores altos da razo
X:A so responsveis pela ativao do gene comutador feminilizante Sex-lethal
(Sxl). Em valores baixos (machos), Sxl permanece inativo durante os estgios
precoces do desenvolvimento (Cline, 1983; Salz et al., 1987). Em Drosophila XX,

Sxl ativado durante as primeiras duas horas aps a fecundao, e esse gene
transcreve um particular tipo embrionrio de mRNA Sxl que somente encontrado
durante mais duas horas (Salz et al., 1989). Uma vez ativado, esse gene permanece
ativo apesar de ulteriores mudanas na razo X:A (Snchez e Nthiger, 1983).
Funo precoce de Sxl necessria para que embries XX iniciem a via desenvol-
vimental feminina e mantenham um nvel apropriado de transcrio de dois cro-
mossomos X.
Essa ativao especfica da fmea de Sxl considerada ser estimulada pelos
elementos numeradores no cromossomo X que constituem a parte X da razo
X:A. Cline (1988) demonstrou que dois desses elementos numeradores so os genes
sisterless-a e sisterless-b. O gene Sxl no parece sentir esses elementos numerado-
res sem a presena de produtos dos genes runt e daughterless (da). A falta da
protena Daughterless previne a ativao de Sxl. Isso no afeta os embries XY (j
que de qualquer maneira eles no ativam Sxl), mas letal em embries femininos, j
que o mecanismo para a compensao de dosagem faz com que os dois cromosso-
mos X sejam transcritos com uma taxa maior (masculina) (Cline, 1986; Cronmiller e
Cline, 1987; Duffy e Gergen, 1991) da o nome da mutao. Assim, pouco aps a
fecundao, os genes sis-a, sis-b, runt e da permitem o Sxl ser somente transcricio-
nalmente ativo em embries femininos.
Os elementos denominadores so aqueles genes que so contados dos
autossomos. Um dos principais elementos denominadores parece ser o gene
deadpan (YoungerShepherd et al., 1992). Machos com uma razo demasiadamen-
te alta de sis-b para deadpan ativam Sxl e morrem, enquanto que fmeas com essa
razo demasiadamente baixa no ativam o Sxl e morrem. Outro gene denominador
codifica Extramachrochaetae, uma protena que compete com a ligao de
Daughterless ao promotor Sxl (Van Doren et al., 1991). Os genes daughterless, sis-
a, sis-b e deadpan so todos fatores de transcrio Hlice-lao-hlice (HLH), e
possvel que as protenas denominadora e numeradora formem heterodmeros uma
com a outra. Presumivelmente, as protenas denominadoras so capazes de formar
heterodmeros que bloqueiam aqueles das protenas ativadoras (Sis e Daughterless)
(Figura 20.17). Parece, portanto, que a razo X:Autossomo medida pela competi-
o da ativao codificada pelo X e repressores codificados autossomicamente
no promotor do gene Sxl. [sex6.html]
MANUTENO DA FUNO SXL. Pouco aps a transcrio de Sxl, um segundo

promotor no gene Sex-lethal ativado, e esse gene transcrito tanto em machos
como em fmeas. Porm, a anlise de cDNA do mRNA Sxl mostra que o mRNA Sxl
dos machos difere daquele das fmeas (Bell et al., 1988). Isso o resultado do
processamento diferencial do RNA. Alm disso, a protena Sxl parece ligar-se a seu
prprio precursor de mRNA emendando-o da maneira feminina. Como machos no
tm protena Sxl disponvel, os seus novos transcritos so processados da maneira
masculina (Keyes et al., 1992). O mRNA Sxl masculino no funcional. Enquanto a
mensagem Sxl especfica de fmea codifica uma protena de 354 aminocidos, o
transcrito Sxl especfico de macho contm um cdon de terminao tradutora (UGA)
posterior ao aminocido 48. O processamento diferencial do RNA que coloca esse
cdon de terminao no mRNA especfico para machos est mostrado nas Figuras
20.17B e 20.18. Em machos, o transcrito nuclear emendado de uma maneira que
fornece trs xons, e o cdon de terminao est no interior do xon central. Em
fmeas, o processamento de RNA fornece somente dois xons, e o xon central
especfico de macho est agora externalizado como um grande ntron. Assim, o
mRNA especfico de fmea carece do cdon de terminao.
A protena produzida pelo transcrito Sxl especfico de fmea pode ser predita a
partir de sua seqncia nucleotdica. Essa protena conteria duas regies que so
importantes para ligao ao RNA compartilhadas com protenas nucleares ligantes de
(A) 2X:2A feminino (B) 1X:2A masculino
TRANSCRIO PROMOTORA PRECOCE Fatores de transcrio de heterodmeros no iniciam a transcrio de Sxl
dos promotores precoces
Gene Sxl Gene Sxl
Transcrio
No h transcrio de Sxl,
traduo ou subseqente atividade
Protena Sxl do fator de emenda da protena Sxl
Cdon Emenda e
Iniciador traduo
TRANSCRIO PROMOTORA TARDIA TRANSCRIO PROMOTORA TARDIA
Transcrio Transcrio
Sem
M Protena
Cdon Cdon
Protena Sxl age como fator iniciador Terminao
de emenda para remover
o xon do transcrito Emenda masculina revelia inclui
cdon de parada no transcrito de
RNA; protena no traduzida
Figura 20.17
Ativao diferencial do gene Slx em machos e fmeas. (A) em Drosophila tipo selvagem com
dois cromossomos X e dois conjuntos de autossomos (XX; AA), as subunidades do fator
de transcrio numerador (sis-a, sis-b, etc.) no esto totalmente complexadas pelas
subunidades inibidoras derivadas dos genes (como deadpan) nos autossomos. Esses fatores
numeradores ativam o promotor precoce do gene Sxl, que produz um transcrito que auto-
maticamente emendado no mRNA especfico de fmea que codifica a protena Sxl funcional.
Por fim, a transcrio constitutiva de Sxl comea a partir do promotor tardio. Se Sxl j estiver
disponvel (i.e., de uma transcrio precoce), o mRNA de Sxl ser emendado para formar a
mensagem funcional especfica de fmea. (B) Em Drosophila de tipo selvagem com um
cromossomo X e dois conjuntos de autossomos (XO; AA), os fatores de transcrio nume-
radores so ligados pelas subunidades denominadoras e no podem ativar o promotor preco-
ce. Quando o gene Sxl for transcrito do promotor tardio, a emenda de RNA no ir excluir
o xon especfico de macho no mRNA. A mensagem resultante codifica um peptdio trunca-
do e no-funcional, visto que o xon especfico de macho contm um cdon de terminao
da traduo. (Segundo Keyes et al. 1992.)
RNA tais como quelas em snRNPs. Bell e colegas (1988) propuseram que existem dois
alvos para a protena ligante de RNA codificada pelo Sxl. Um desses alvos o pr-
mRNA do prprio Sxl. Isso seria o mecanismo que manteria o estado feminino da
trajetria aps a ocorrncia do evento ativador inicial. O segundo alvo seria o pr-
mRNA do prximo gene da trajetria, transformer.
Os Genes transformer
O gene Sxl regula a determinao sexual somtica controlando o processamento do

transcrito do gene transformer. Como vimos no Captulo 12, o gene transformer (tra)
emendado alternadamente em machos e fmeas. Existe um mRNA especfico de
fmea e tambm um mRNA no-especfico encontrado tanto em fmeas como em
machos. Tal como a mensagem Sxl masculina, o mRNA tra contm um cdon de
terminao precoce na mensagem, tornando a protena no-funcional (Boggs et al.,
1987). Em tra, o segundo xon do mRNA no-especfico tem um cdon de terminao.
Esse xon no utilizado na mensagem especfica de fmea (veja Figura 20.18). Como
fmeas produzem um transcrito diferente dos machos? Acredita-se que a protena
especfica de fmea do gene Sxl ative um local de emenda 3 especfico de fmea no
pr-mRNA do transformer fazendo com que ele seja processado de uma maneira que
expele o segundo xon. Para isso, a protena Sxl bloqueia a ligao do fator de emenda
U2AF ao stio de emenda no-especfico, ligando-se especificamente ao trato de
polipirimidina adjacente. Isso leva o U2AF a se ligar ao local de emenda 3 de menor
afinidade (especfico de fmea) e gerar um mRNA especfico de fmea (Valcrcel et al.,
1993). A protena codificada por essa mensagem crtica para a determinao do sexo
feminino. Se o transcrito especfico de fmea for produzido artificialmente em moscas
XY, essas moscas se tornam fmeas. O transcrito no-especfico no tem efeito quer
em machos quer em fmeas (McKeown et al., 1988).
O produto de tra especfico de fmea age em conjunto com o gene transformer-2
(tra2) para ajudar a gerar o fentipo feminino. (O gene tra2 no necessrio para a
determinao do sexo masculino, embora seja necessrio mais tarde para a espermato-
gnese.) O gene tra2 constitutivamente ativo e produz o mesmo produto protico
em machos e fmeas. Essa protena TRA-2, tal como a protena especfica de fmea Sxl,
contm um domnio ligante de RNA (Amrein et al., 1988; Goralski et al., 1988). Prope-
se que o gene tra2 pode se ligar ao transcrito do gene doublesex, mas somente na
presena da protena Tra especfica de fmea (Baker, 1989).
Figura 20.18
doublesex
doublesex:: O Gene Comutador da Determinao Sexual O padro de emenda do RNA especfico do
sexo em trs principais genes determinantes
O gene doublesex ativo tanto em machos como fmeas, mas seu transcrito prim- do sexo em Drosophila. Os pr-mRNAs es-
rio processado de uma maneira especfica do sexo (veja Figura 12.9; Baker et al., to localizados no centro do diagrama e so
1987). Os transcritos masculino e feminino so idnticos atravs dos trs primeiros idnticos nos ncleos masculinos e femini-
xons. Os xons 3 diferem marcadamente. O que um xon para os transcritos espe- nos. Em cada caso, o transcrito especfico de
cficos de fmea parte do terminal 3 no-traduzido da mensagem especfica de ma- fmea mostrado esquerda, enquanto o
transcrito revelia (seja masculino ou no-
cho. Alm disso, anlises moleculares das mutaes dsx dominantes revelam que elas
especfico) mostrado direita. xons esto
numerados, e as posies dos cdons termi-
nais e stios poli(A) esto marcados. (Se-
gundo Baker, 1989.)
mRNA feminino Emenda Pr-mRNA Emenda mRNA masculino

especfica revelia ou no-especfico
de fmea Sex-lethal
AAA
Cdon de parada
Transformer
AAA
Cdon de parada
Doublesex
AAA
contm inseres no xon especfico de fmea. Se existir um alelo dsx dominante em

um indivduo XX, a mosca se torna um macho.
O processamento alternativo de RNA parece ser o resultado dos genes transformer
(veja Figura 20.18). As protenas Tra2 e as protenas especficas de fmea Tra1
ligam-se especificamente uma seqncia de DNA adjacente ao local de emenda 3
especfica de fmea do pr-RNA dsx, e recruta fatores de emenda no-especficos
para esse stio (Tian e Maniatis, 1993). Se tra no for produzido, o transcrito doublesex
emendado de uma maneira especfica de macho. O stio de emenda 3 a jusante
usado para produzir um transcrito especfico de macho. Esse codifica uma protena
ativa que inibe traos femininos e promove traos masculinos. Por outro lado, se o
gene trasnformer estiver produzindo sua protena ativa especfica de fmea d-se
um tipo diferente de processamento (Ryner e Bruce, 1991). As protenas Transformer
se ligam seqncia no interior do xon especfico de fmea e ativam o stio de
emenda 3 especfico de fmea. (A alternativa seria elas bloquearem o stio 3 espec-
fico de macho). Essa ativao, de um outro modo no usada do stio de emenda 3
especfico de fmea, produz um mRNA codificando uma protena especfica de f-
mea que ativa genes especficos de fmea (como aqueles das protenas do vitelo) e
inibe o desenvolvimento masculino.
As funes das protenas Doublesex podem ser observadas na formao da
genitlia de Drosophila. Aqui, tanto genitlia masculina como feminina derivam de
populaes celulares diferentes. Em moscas masculinas (XY), o primrdio feminino
reprimido e o masculino se diferencia em estruturas genitais adultas. Em moscas
femininas (XX), o primrdio masculino reprimido, e o feminino se diferencia. Se o
gene doublesex estiver ausente (e a nenhum transcrito ser produzido), ambos
primrdios, masculino e feminino, se desenvolvem e sero produzidas genitlias
intersexuais. Assim, um dos papis dos transcritos doublesex especficos do sexo
o de inibir ativamente o crescimento da genitlia inapropriada. Transcritos dsx mas-
culinos inibem o desenvolvimento da fmea; transcritos dsx especficos de fmea
inibem o desenvolvimento masculino (Nthiger et al., 1977; Schpbach et al., 1978).
De acordo com esse modelo (Baker, 1989), a cascata da determinao sexual se reduz
a qual tipo de mRNA ser processado do transcrito doublesex. Se a razo X:A for 1,
ento Sxl produz um fator de emenda especfico de fmea que faz com que o trans-
crito do gene tra seja emendado de uma maneira especfica de fmea. Essa protena
especfica de fmea interage com o fator de emenda Tra2 para levar o pr-mRNA
doublesex a ser emendado de uma maneira especfica de fmea. Se o transcrito
doublesex no sofre tal atuao, ele ser processado revelia para produzir a men-
sagem especfica de macho.
Genes-alvo para a Cascata de Determinao Sexual
Muitas protenas esto presentes em um sexo de Drosophila e no no outro. Em

fmeas, essas incluem as protenas do vitelo e as da casca do ovo (crio). Em ma-
chos, as cristas sexuais das patas so estruturas especficas do sexo. Coschigano e
Wensink (1993) mostraram que tanto os transcritos doublesex masculinos como os
femininos se ligam a trs stios no interior do intensificador de 127 pares de bases
dos genes yolk protein (protenas do vitelo). Seus estudos de ligao e mutagnese
demonstram que o produto Doublesex especfico de macho inibe a transcrio ligan-
do-se a esses stios, enquanto a protena Doublesex especfica de fmea ativa a
transcrio gnica a partir dos mesmos stios. Alm disso, a protena Doublesex
masculina pode tambm exercer um papel positivo na promoo da diferenciao
das cristas sexuais masculinas (Jursnich e Burtis, 1993).
Mutaes termosensveis dos genes determinantes do sexo podem capacitar pes-
quisadores a determinarem os momentos crticos em que certos genes-alvo esto
sensveis a uma comutao determinante do sexo. Quando alelos sensveis tempera-
tura (ts) do gene tra2 foram usados, as vias de desenvolvimento sexual em Drosophila
mostraram-se ativas desde os estgios larvais tardios at o perodo adulto. O gene

tra2ts um alelo sensvel temperatura no qual o fentipo feminino expresso em
temperaturas permissivas (mais frias) e o fentipo masculino em temperaturas no-
permissivas (mais quentes). Durante estgios tardio larval e de pupa, o aumento da
temperatura de nveis permissivos para no-permissivos faz com que uma larva ou
pupa XX se desenvolva em macho. Alm disso, quando mutantes adultos so conser-
vados a temperaturas baixas, o corpo gorduroso adulto produz protenas do vitelo
(yolk proteins) que iro penetrar no ocito. Quando movidos para temperatura mais
altas, no-permissivas, a transcrio dos genes yolk protein cessa (Belote et al.,
1985b). Um achado notvel foi que se moscas adultas XX tra2ts so conservadas em
temperatura no-permissiva durante vrios dias, elas comeam a exibir comportamen-
to de cortejar masculino (Belote e Baker, 1987).
Hermafroditismo
Hermafroditismo no Nematide C. elegans
O nematide Caenorhabditis elegans tem usualmente dois tipos sexuais: hermafrodi-

ta e macho. A maioria dos indivduos dessa espcie so hermafrodticos,* tendo
tanto testculos como ovrios. Quando larvas, esses hermafroditas produzem esper-
matozide, que armazenado no trato genital do nematide (Figura 20.19). O ovrio
adulto produz vulos que so fertilizados quando migram para o tero. (O espermato-
zide j est presente no hermafrodita adulto.) A autofertilizao quase sempre produz
mais hermafroditas. Somente 0.2 porcento da prognie so machos. Esses, porm,
podem copular com hermafroditas; como seu espermatozide tem uma vantagem com-
petitiva sobre o espermatozide hermafrodita endgeno, a razo sexual resultante de
tais unies de cerca 50% hermafroditas e 50% machos (Hodgkin, 1985).
Em C. elegans, o hermafrodita XX, e o macho XO. Como em Drosophila, o sexo
determinado pela razo de cromossomos X para autossomos. Em espcies estreita-
mente relacionadas de nematides so encontradas fmeas XX, sugerindo que os
hermafroditas evoluram de fmeas. Somaticamente, as fmeas e os hermafroditas so
idnticos, a nica diferena sendo a produo de espermatozide durante o desenvol-
vimento precoce antes dos hermafroditas mudarem para a produo de vulos. Em C.
elegans existe uma mutao dominante (tra-1D) que transforma indivduos XX ou XO
*Hermafroditas receberam o nome em homenagem ao filho de Hermes (Mercrio) e Afrodite

(Vnus). Tendo herdado a beleza de ambos os pais, excitou o amor da ninfa da fonte de Salmacis.
Enquanto ele se banhava nessa fonte, ela o abraou, pedindo aos deuses que eles ficassem unidos para
sempre. Ela conseguiu seu desejo da forma mais literal possvel.
Hermafrodita: XX
Espermatozide Ovrio
Ovrio na espermateca
vulos no
tero
Boca nus
Ocitos
rgo
copulatrio
Macho: XO Vulva
Figura 20.19
Esperma- Cloaca Diagramas esquemticos do macho e do her-
tozide Vasos mafrodita de Caenorhabditis elegans, enfati-
deferentes zando seus sistemas reprodutivos. (de
Testculos Hodgkin, 1985.)
1.0 Baixo Alto Baixo Alto Baixo Alto
Hermafrodita
Ratio
X:A
Alto Baixo Alto Baixo Alto Baixo
Macho
Figura 20.20
Modelo esquemtico da determinao sexual
somtica em C. elegans. O gene sdc-1 postu-
lado estar envolvido na transmisso da razo
X/A. Ele controla compensao de dosagem em fmeas frteis. Em colnias com tal alelo, trs sexos so possveis e funcionais
do cromossomo X assim como a supresso do (Hodgkin, 1980).
gene her-1 se a razo for 1. A designao alto/ Como em Drosophila, a determinao do sexo em C. elegans envolve vrios genes
baixo reflete a atividade funcional do gene. A autossmicos que lem e respondem razo X:A. O gene que integra os numeradores
atividade dos genes sdc, ao final, leva ativi- e denominadores do desenvolvimento de C. elegans o xol-1 (XO-lethal). Nveis
dade do gene tra-1, cuja atividade promove o
altos de XOL-1 durante a gastrulao desligam a trajetria para o desenvolvimento
fentipo hermafrodita. Os genes scd podem
ser inibidos pelo gene xol, que somente ativo hermafrodtico, transformando com isso o animal em um macho (Rhind et al., 1995).
em XO (machos). (Segundo Hodgkin, 1985; XOL-1 parece conseguir isso reprimindo os genes sdc (controle da determinao do
Miller et al., 1988.) sexo), cujas atividade tornam o animal hermafrodita (Miller et al., 1988).
A trajetria para determinao do sexo em C. elegans foi decifrada encontrando-se
mutaes em genes necessrios para o desenvolvimento hermafrodita (os genes tra),
bem como outros necessrios para a expresso do fentipo masculino (os genes her
e fem). Criando gentipos carreando diferentes combinaes dessas mutaes Hodgkin
(1980) e outros foram capazes de construir um modelo para essa via desenvolvimental
(Figura 20.20). Por exemplo, mutaes tra-2 suprimiram a mutao her-1, indicando
que her-1 mais tardio na trajetria.
O gene crucial na trajetria para a determinao sexual parece ser o tra-1. Se o
tipo selvagem tra-1 for ativo, o indivduo um hermafrodita. Se esse gene no for
funcional, o indivduo um macho. Os outros genes parecem regular esse gene
singular de troca.
Porm, o que tem essa via gentica linear a ver com os reais eventos celulares
levando determinao sexual? Estudos recentes indicam que alguns desses genes
codificam protenas de uma via sinalizadora entre clulas. A anlise de mosaicos
genticos sugere que sdc-1 e her-1 no so necessariamente ativos nas clulas
que os produzem. Ao contrrio, esses genes parecem produzir produtos secreta-
dos. Em contraste, tra-1 age de um modo celular autnomo e, portanto, provavel-
mente parte de um aparelho receptor de sinais. A seqncia do gene tra-1 sugere
que esse codifica um fator de transcrio dedo de zinco (Hunter e Wood, 1990;
Zarkower e Hodgkin, 1992; Perry et al., 1993). Kuwabara e Kimble (1992) propuse-
ram recentemente um modelo que integra essa via gentica com a biologia celular
da determinao do sexo. A protena HER-1 considerada promover o desenvolvi-
mento masculino em nematides XO inibindo a TRA-2. A protena codificada por
tra-2, porm, no um fator de transcrio ou um fator de emenda, mas sim uma
protena integral de membrana com mltiplos domnios transmembrana. Alm dis-
so, seu mRNA encontrado (em quantidade diferentes) tanto em machos como em
fmeas. De acordo com esse modelo especulativo (Figura 20.21), as protenas
FEM se combinam para criar um grande complexo de protena FEM, e esse comple-
xo est ligado pela protena TRA-2 da membrana. Em indivduos XX, esse comple-
xo ligado membrana, e a protena TRA-1 pode entrar no ncleo. Em nematides
XO, porm, a protena HER-1 se liga regio extracelular da protena TRA-2,
causando a liberao do complexo FEM. Esse complexo, uma vez livre no citoplas-
ma, pode ligar a protena TRA-1 e impedir sua entrada no ncleo. Desde que a
Hermafroditas XX Machos XO Figura 20.21

Esquema hipottico para as aes dos genes
determinantes do sexo em C. elegans. Em indi-
vduos XX, as protenas FEM esto seqestra-
das prximo da membrana celular pelos pro-
dutos dos genes tra-2. Na ausncia das prote-
nas FEM, a protena TRA-1 penetra no ncleo
para transcrever os genes necessrios para o
desenvolvimento hermafrodtico. Em indiv-
duos XO, a protena HER-1 se liga ao produto
de TRA-2, levando-o a liberar as protenas
FEM. Uma vez livres no citoplasma, essas pro-
tenas podem se ligar ao produto de TRA-1,
Citoplasma impedindo-o de penetrar no ncleo. (Segundo
Kuwabara e Kimble, 1992.)
Ncleo
protena TRA-1 (um fator de transcrio putativo) no pode entrar no ncleo, ela
no poder ativar os genes especficos do hermafrodita. Mais estudos tero que
ser realizados para confirmar ou desaprovar esse modelo que, no entanto, til
por sugerir novas pesquisas e por visualizar como os genes poderiam gerar vias
para a determinao sexual em C. elegans.
Um dos problemas mais interessantes desse nematide seu hermafroditismo.
Como se originou essa condio em um organismo que provavelmente tinha um siste-
ma sexual macho/fmea? Quais mudanas genticas apareceram, e haveria outras
solues que poderiam ter prevalecido? Os genes determinantes do sexo de uma
espcie estreitamente relacionada, a C. ramanei (com indivduos macho e fmea)
esto sendo agora identificados para se poder responder a essas perguntas. [sex7.html]
Hermafroditismo em Peixes
Embora o hermafroditismo no seja incomum em vermes e insetos, s visto raramen-

te em vertebrados. Em aves e mamferos, o hermafroditismo geralmente uma condi-
o patolgica causando infertilidade. Os hermafroditas vertebrados mais comuns
so peixes, que exibem vrios tipos de hermafroditismo (Yamamoto, 1969). Alguns
peixes, porm, so gonocorsticos; isso , eles tm um sexo determinado cromossomi-
camente como macho ou fmea. Peixes hermafroditas podem ser divididos em trs
grupos. Os primeiros so os hermafroditas sincrnicos, nos quais ovrios e tecidos
testiculares existem ao mesmo tempo e nos quais tanto espermatozide como vulos
so produzidos. Uma dessas espcies Servanus scriba. Na natureza e em aqurios,
esses peixes formam pares procriadores. Assim que um dos peixes pe seus ovos, o
outro peixe os fertiliza. Em seguida os peixes invertem seus papis, e o peixe que havia
sido macho pe seus ovos para que possam ser fertilizados pelo espermatozide de
seu parceiro (Clark, 1959).
Em outras espcies hermafroditas, um indivduo passa por uma mudana sexual
geneticamente programada durante seu desenvolvimento. Nesses caso, as gnadas
so dimrficas, tendo tanto reas femininas como masculinas. Uma ou outra predo-
mina durante certa fase da vida. Em hermafroditas protginos (fmea primeiro), o
animal comea sua vida como uma fmea para mais tarde tornar-se um macho. O
reverso acontece em espcies protndreas (machos primeiro). A Figura 20.22
Figura 20.22 (A) FASE MASCULINA (B) FASE TRANSITRIA (C) FASE FEMININA
Alteraes nas gnadas no peixe hermafrodita
Sparus auratus, mostradas em seo atravs Ovrio
da gnada de (A) a fase masculina, (B) a fase
transitria e (C) a fase feminina final. (Cortesia Ovrio
da famlia de T. Yamamoto.) Ovrio
Testculo
Testculo
Testculo
mostra as mudanas gondicas no peixe hermafrodita protndreo Sparus auratus. A

princpio predomina o tecido testicular, mas aps um perodo de transio no qual so
vistos tanto tecidos testiculares como ovarianos, as clulas ovarianas predominam.
Determinao ambiental do sexo

Determinao Sexual Dependente de T
Sexual emperatura em Rpteis
Temperatura
Enquanto o sexo da maioria das serpentes e lagartos determinado pelos cromosso-

mos sexuais no momento da fecundao, o sexo da maioria das tartarugas e todas as
espcies de crocodilos determinado pelo ambiente aps a fecundao. Nesses rp-
teis, a temperatura dos ovos durante um certo perodo do desenvolvimento o fator
decisivo na determinao do sexo (Bull, 1980), e pequenas alteraes na temperatura
podem causar mudanas dramticas na razo sexual. Em geral, ovos incubados baixa
temperatura (22o 27oC ) produzem um sexo, enquanto ovos incubados a temperaturas
mais altas (30oC e acima) produzem o outro. H somente um pequeno intervalo de
temperatura que permite tanto machos como fmeas emergir de um mesmo choco de
ovos. A Figura 20.23 mostra mudana abrupta causada por mudana de temperatura
nas razes sexuais para certas espcies de tartarugas. Se os ovos forem incubados
abaixo de 28oC, todas as tartarugas sero machos. Acima de 32oC cada ovo origina uma
fmea. Em temperaturas intermedirias daro origem a indivduos de ambos os sexos.
Existem variaes disso. Os ovos das tartarugas mordedoras (snapping turtles), por
exemplo, sero fmeas no frio (20oC ou abaixo) ou no calor (30oC ou acima). Entre esses
extremos, predominam os machos.
Um dos rpteis melhor estudados a tartaruga europia de lagoas, Emys obicularis.
No laboratrio, a incubao de ovos de Emys temperaturas acima de 30oC produz
fmeas, enquanto abaixo de 25oC as crias sero todas masculinas. A temperatura limite
(na qual a razo sexual 1) de 28.5oC (Pieau et al., 1994). O perodo desenvolvimental
durante o qual ocorre a determinao sexual, pode ser estudado incubando ovos na
temperatura produtora de machos por um certo perodo, e em seguida mudando os
ovos para uma incubadora temperatura produtora de fmeas (e vice-versa). Em
Emys, a ltima tera parte do desenvolvimento parece ser o perodo mais crtico para a
determinao sexual. No se acredita que as tartarugas possam reverter seu sexo aps
esse perodo.
Os caminhos para a masculinidade e feminilidade esto apenas sendo delineados.
O estrgeno induz a diferenciao ovariana temperaturas masculinizantes, e o per-
odo sensvel para os efeitos do estrgeno coincide com quele em que a determinao
(A) Lagartos (B) Tartarugas Graptemys (3 espcies)

Chrysemys picta
Todos machos Todos machos
Porcentagem de nascimentos masculinos
Porcentagem de nascimentos masculinos

Agama Testudo
agama Emys obicularis graeca
Eublepharis
macularius
Caretta
caretta
Todas fmeas Todas fmeas
Figura 20.23
Relao entre a razo sexual e a temperatura de incubao em rpteis. (A) Duas espcies de
lagartos nas quais temperaturas mais altas resultam na gerao de prole masculina. (B) Sete
espcies de tartarugas nas quais temperaturas mais altas resultam em prole feminina. (Segundo
Bull, 1980.)
do sexo normalmente ocorre (Bull et al., 1988; Gutzke e Chymiy, 1988). Parece que a
enzima aromatase (que pode converter testosterona em estrgeno) importante. A
atividade da aromatase de Emys muito baixa temperatura masculina de 25oC.
temperatura feminina de 30oC, a atividade da aromatase aumenta dramaticamente
durante o perodo crtico para a determinao do sexo (Desvages et al., 1993; Pieau et
al., 1994). Atividade dependente de temperatura de aromatase tambm vista em
terrapneos (tartarugas-diamondback terrapins), e sua inibio masculiniza suas
gnadas (Jeyasuria et al., 1994). possvel que o regulador da atividade da aromatase
seja o hormnio anti-Mlleriano. AMH conhecido por diminuir a atividade da aroma-
tase em gnadas de Emys (Desvages e Pieau, 1992).
Ferguson e Joanen (1982) estudaram a determinao sexual no jacar do Mississipi, Probscide
tanto no laboratrio como no campo; eles concluram que o sexo determinado entre
7 e 21 dias de incubao. Ovos criados a 30oC ou abaixo produzem fmeas, enquanto
aqueles incubados a 34oC ou acima produzem somente machos. Alm disso, ninhos
construdos sobre barragens (perto de 34oC) produzem machos, enquanto aqueles
construdos em pntanos midos (perto de 300C) produzem fmeas. As vantagens e
desvantagens da determinao sexual dependente de temperatura so discutidas no
Captulo 21.
Determinao Sexual Dependente da Localizao (A)

em Bonellia viridis e Crepidula fornicata (B)
O sexo do verme equiuride Bonellia depende de onde a larva se aloja. Bonellia

fmea marinha, habita rochas, tem um corpo de cerca de 10 cm (Figura 20.24), Tem,
porm, uma probscide que pode se estender por mais de um metro. Essa probscide
tem duas funes. Em primeiro lugar, varrer comida das rochas para o trato digestivo
da fmea. Em segundo lugar, se uma larva aterrissar na probscide, essa entra na boca
do animal, migra at o tero, e se diferencia em macho simbitico de 1-3 mm de compri-
Figura 20.24
mento. Assim, quando uma larva se aloja numa superfcie rochosa, torna-se uma f-
Dimorfismo sexual extremo em Bonellia viridis.
mea, mas se a mesma larva se aloja sobre a probscide de uma fmea, se torna um (A) Fmea, de cerca de 10 cm, com uma
macho. O macho de Bonellia passa sua vida no interior do corpo da fmea, fecundan- probscide capaz de se estender por mais de
do seus ovos. um metro. (B) Macho simbitico (muito au-
Baltzer (1914) demonstrou que quando larvas eram cultivadas na ausncia de mentado comparado com a fmea), 1-3 mm de
fmeas adultas, cerca de 90 porcento se tornavam fmeas. Porm, quando essas larvas comprimento. (Segundo Barnes, 1968.)
gua do mar pura

gua do mar
e fragmentos de probscide
Porcentagem
Indiferentes
Figura 20.25
Anlise in vitro da diferenciao de Bonellia. Larvas foram colocadas em gua do mar normal ou
em gua do mar contendo fragmentos de probscide feminina. A maioria dos animais cultivados
na presena dos fragmentos de probscide tornaram-se machos, enquanto normalmente se torna-
riam fmeas. (Segundo Leutert, 1974.)
eram cultivadas na presena de uma fmea adulta ou de sua probscide isolada, 70

porcento aderiam probscide e desenvolviam estruturas masculinas. Esses resulta-
dos foram mais recentemente confirmados por Leutert (1974; Figura 20.25).
A(s) molcula(s) responsvel pela masculinizao das larvas podem ser extradas
da probscide de fmeas adultas. Quando larvas so cultivadas em gua do mar
normal, na ausncia de fmeas adultas, a maioria se torna fmea. Quando cultivadas
em gua do mar contendo extratos aquosos de tecido da probscide, a maioria adquire
forma de macho ou intermediria, nem totalmente masculina nem feminina (Nowinski,
1934; Agius, 1979). O composto ou compostos que atraem a larva para a probscide e
causam sua masculinizao esto sendo purificados.
Outro exemplo em que a determinao sexual afetada pela posio do organismo
o caso do caramujo escorregador Crepidula fornicata. Aqui, indivduos se empilham
uns em cima dos outros para formar um montculo (Figura 20.25). Indivduos jovens
so sempre machos. Essa fase seguida pela degenerao do sistema reprodutivo
masculino e um perodo de labilidade. A prxima fase pode ser masculina ou feminina,
dependendo da posio do animal no montculo. Se a lesma est fixada uma fmea,
torna-se macho. Se tal lesma for removida da fixao, torna-se fmea. Da mesma manei-
ra, a presena de um grande nmero de machos ir fazer com que alguns dos machos
se tornem fmeas. Porm, uma vez que o indivduo se torna fmea, no ir reverter para
macho (Coe, 1936).
Resumo
A Natureza forneceu muitas variaes em sua obra prima. Em algumas espcies, o sexo
determinado somente por cromossomos, enquanto em outras, sexo uma questo
de condies ambientais. Entre essas grandes categorias, existem numerosas varia-
es. Um catlogo completo dos mecanismos de determinao sexual conhecidos iria
requerer um volume em separado (e muito interessante).
Figura 20.26
Agregados de lesmas Crepidula. Dois indivduos esto mudando de machos para fmeas.
Morto
Aps esses moluscos se tornarem fmeas, sero fecundados pelo macho acima deles. (Segun-
do Coe, 1936.)
LITERATURA CITADA
Agius, L. 1979. Larval settlement in the Belote, J. M. and Baker, B. S. 1987. Sexual sex-transforming maternal effect linking sex
echiuran worm Bonellia vividis: Settlement on behavior: Its genetic control during devel opment determination and dosage com pensation in Dro-
both the adult proboscis and body trunk. Mar. and adulthood in Drosophila melanogaster. Proc. sophila melanogaster. Dev. Biol. 95: 260-274.
Biol. 53: 125-129. Natl. Acad. Sci. USA 84: 8026-8030.
Cline, T. W. 1986. A female-specific lethal lesion
Amrein, H., Gorman, M. and Nthiger, R. 1988. Belote, J. M., McKeown, M. B., Andrew, D. J., in an X-linked positive regulator of the Droso-
The sex-determining gene tra-2 of Drosophila Scott, T. N., Wolfner, M. F. and Baker, B. S. phila sex determination gene, Sexlethal.
encodes a putative RNA binding protein. Cell 1985a. Control of sexual differentiation in Dro- Genetics 113: 641-663.
55: 1025-1035. sophila melanogaster. Cold Spring Harbor
Cline, T. W. 1988. Evidence that sisterless-a
Symp. Quant. Biol. 50: 605-614.
Andersson, S., Berman, D. M., Jenkins, E. P. and sisterless-b are two of several discrete
and Russell, D. W. 1991. Deletion of steroid 5a- Belote, J. M., Handler, A. M., Wolfner, M. F, numerator elements of the X/A sex determi-
reductase 2 gene in male pseudoher-maphrodi- Livak, K. L. and Baker, B. S. 1985b. Sex-specific nation signal in Drosophila that switch Sxl
tism. Nature 354: 159-161. regulation of yolk protein gene expression in between two alternative stable expression states.
Drosophila. Cell 40: 339-348. Genetics 119: 829-862.
Aristotle. The generation of animals. Translated
by A. Platt. In J. Barnes (ed.), 1984, The Com- Berkovitz, G. D. and seven others. 1992. The Coe, W. R. 1936. Sexual phases in Crepidula. J.
plete Works of Aristotle, Vol. 8. Princeton Uni- role of the sex-determining region of the Y chro- Exp. Zool. 72: 455-477.
versity Press, Princeton, NJ. mosome (SRY) in the etiology of 46, XX true
Cohen, D. R., Sinclair, A. H. and McGovern, J.
hermaphrodites. Hum. Genet. 88: 411-416.
Arnold, A. P. 1980. Sexual differences in the D. 1994. SRY protein enhances transcription of
brain. Am. Sci. 68: 165-173. Bernstein, R., Jenkins, T, Dawson, B., Wagner, Fos-related antigen 1 promoter constructs. Proc.
J., Devald, G., Koo, G. C. and Wachtel, S. S. 1980. Natl. Acad. Sci. USA 91: 4372-4376.
Arnold, A. P., Nottebohm, F. and Pfaff, D. W. 1976.
Female phenotype and multiple abnormalities in
Hormone concentrating cells in vocal control and Coschigano, K. T. and Wensink, P. C. 1993.
sibs with a Y chromosome and partial X-chro-
other brain regions of the zebra finch (Poephila Sex-specific transcriptional regulation of the
mosome duplication: H-Y antigen and Xg blood
guttata). J. Comp. Neurol. 165: 487-512. male and female doublesex proteins of Droso-
group findiungs. J. Med. Genet. 17: 291-300.
phila. Genes Dev. 7: 42-54.
Baker, B. S. 1989. Sex in flies: The splice of life.
Bleier, R. 1984. Science and Gender. Pergamon,
Nature 340: 521-524. Coward, P., Nagai, K., Chen, D., Thomas, H. D.,
Nagamine, C. M. and Lau, Y-F. C. 1994.
Baker, B. S. and Ridge, K. A. 1980. Sex and the
Boggs, R. T, Gregor, P., Idriss, S., Belote, J. M. Polymorphism of a CAG trinucleo-tide repeat
single cell. I. On the action of major loci
and McKeown, M. 1987. Regulation of sexual within Sry correlates with B6YDom sex reversal.
affecting sex determination in Drosophila me-
differentiation in D. melanogaster via alterna- Nat. Genet. 6: 245-250.
lanogaster. Genetics 94: 383-423.
tive splicing of RNA from the transformer gene.
Cronmiller, C. and Cline, T. W. 1987. The Dro-
Baker, B. S., Nagoshi, R. N. and Burtis, K. C. 1987. Cell 50: 739-747.
sophila sex determination gene daughterless has
Molecular genetic aspects of sex determination in
Breedlove, S. M. and Arnold, A. P. 1980. different functions in the germ line versus the
Drosophila. BioEssays 6: 66-70.
Hormone accumulation in a sexually dimorphic soma. Cell 48: 479-87.
Baltzer, F. 1914. Die Bestimmung und der Di- motor nucleus of the rat spinal cord. Science
De Jonge, F. H., Muntjewerff, J.-W., Louw-erse,
morphismus des Geschlechtes bei Bonellia. Sber. 210: 565-566.
A. L. and Van de Poll, N. E. 1988. Sex-ual behavior
Phys.-Med. Ges. Wrzb. 43: 1-4.
Bridges, C. B. 1921. Triploid intersexes in Dro- and sexual orientation of the female rat after
Bardoni, B. and eleven others. 1994.A dosage sensitive sophila melanogaster. Science 54: 252-254. hormonal treatment during various stages of de-
locus at chromosome Xp21 is involved in male to velopment. Horm. Behav. 22:100-115.
Bridges, C. B. 1925. Sex in relation to
female sex reversal. Nat. Genet. 7: 497-501.
chromosomes and genes. Am. Nat. 59: 127-137. Desvages, G. and Pieau, C. 1992. Time required
Barfield, R. J. and Chen, J. J. 1977. Activation for temperature-induced changes in gonadal aro-
Buehr, M., Gu, S. and McLaren, A. 1993.
of estrous behavior in ovariectomized rats by matase activity and related go-nadal structure in
Mesonephric contribution to testis differentiation
intracerebral implants of estradiol benzoate. turtle embryos. Differentiation 52: 13-18.
in the fetal mouse. Development 117: 273-281.
Endocrinology 101: 1716-1725.
Desvages, G., Girondot, M. and Pieau, C. 1993.
Bull, J. J. 1980. Sex determination in reptiles.
Barnes, R. D. 1968. Invertebrate Zoology. Sensitive stages for the effects of temperature
Q. Rev. Biol. 55: 3-21.
Saunders, Philadelphia. on gonadal aromatase activity in embryos ofthe
Bull, J. J., Gutzke, W, H. N. and Crews, D. 1988. marine turtle Dermochelys coriacea. Gen.
Barraclough, C. A. and Gorski, R. A. 1962. Studies Comp. Endocrinol. 92: 54-61.
Sex reversal by estradiol in three reptilian orders.
on mating behavior in the androgen-sterilized fe-
Gen. Comp. Endocrinol. 70: 425-428.
male rat in relation to the hypothalamic regulati- Duffy, J. B. and Gergen, J. P. 1991. The Droso-
on of sexual behavior.J. Endocrinol. 25: 175-182. Cate, R. L. and eighteen others. 1986. Isolation phila segmentation gene runt acts as a position-
of the bovine and human genes for Mllerian specific numerator element necessary for the
Bell, S. E. 1986. A new model of medical uniform expression of the sex determining gene
inhibiting substance and expression of the gene
technology development: A case study of DES. sex-lethal. Genes Dev. 5: 2176-2187.
in animal cells. Cell 45: 685-698.
Sociol. Health Care 4: 1-32.
Clark, E. 1959. Functional hermaphro-ditism Eicher, E. M. 1994. Sex and trinucleotide repeats.
Bell, L. R., Maine, E. M., Schedl, P. and Cline, Nat. Genet. 6: 221-223.
and self-fertilization in a serranid fish. Science
T. W. 1988. Sex-lethal, a Drosophila sex
129: 215-216.
determination switch gene, exhibits sex-specific Eicher, E. M. and Washburn, L. L. 1983. Inherited
RNA splicing and sequence similarity to RNA Cline, T. W. 1983. The interaction between sex reversal in mice: Identification of a new sex-
binding proteins. Cell 55: 1037-1046. daughterless and Sex-lethal in triploids: A novel determining gene. J. Exp. Zool. 228: 297-304.
Fausto-Sterling, A. 1992. Myths of Gender. Basic Harris, G. W. and Levine, S. 1965. Sexual Konishi, M. and Akutagawa, E. 1985. Neuronal
Books, New York. physiology of the brain and its experimental growth, atrophy, and death in a sexually
control. J. Physiol. 181: 379-400. dimorphic song nucleus in the zebra finch brain.
Fausto-Sterling, A. 1995. Animal models for the
Nature 315: 145-147.
development of human sexuality: A critical Higgins, S. J., Young, P. and Cunha, G. R. 1989.
evaluation. J. Homosexuality 28: 217-236. Induction of functional cytodifferentiation in Koopman, P., Miinsterberg, A., Capel, B., Vivian,
the epithelium of tissue recombinants II. N. and Lovell-Badge, A. 1990. Expression of a
Ferguson, M. W. J. and Joanen, T. 1982.
Instructive induction of Wolffian duct epithelia candidate sex-determining gene during mouse
Temperature of egg incubation determines sex in
by neonatal seminal vesicle mesenchyme. De- testis differentiation. Nature 348: 450-452.
Alligator mississippiensis. Nature 296: 850-853.
velopment 106: 235-250.
Koopman, P., Gubbay, J., Vivian, N., Good-fellow,
Foster, J. W. and eleven others. 1994. Cam-
Hodgkin, J. 1980. More sex-determination P. and Lovell-Badge, R. 1991. Male develop-
pomelic dysplasia and autosomal sex reversal
mutants of Caenorhabditis elegans. Genetics 96: ment of chromosomally female mice transgenic
caused by mutations in an SRY-re-lated gene.
649-664. for Sry. Nature 351: 117-121.
Nature 372: 525-530.
Hodgkin, J. 1985. Males, hermaphrodites, and Kurz, E. M., Sengelaub, D. R. and Arnold, A. P.
Galen, C. On the Usefulness of the Parts of the
females: Sex determination in Caenorhabditis 1986. Androgens regulate the dendritic length
Body. Translated by M. May, 1968. Cornell
elegans. Trends Genet. 1: 85-88. of mammalian motoneurons in adulthood.
University Press, Ithaca, NY.
Science 232: 395-397.
Horowitz, M. C. 1976. Aristotle and women. J.
Geddes, P. and Thomson, J. A. 1890. The
Hist. Biol. 9: 183-213. Kuwabara, P. E. and Kimble, J. 1992. Molecular
Evolution of Sex. Walter Scott, London.
genetics of sex determination in C. elegans.
Hu, S., Pattatucci, A. M. L., Patterson, C., Li,
Genetics Review Group. 1995. One for a boy, Trends Genet. 8: 164-168.
L., Fulker, D. W., Cherny, S. S., Kruglyak, L.
two for a girl? Curr. Biol. 5: 37-39.
and Hamer, D. H. 1995. Linkage betwen sequal Langman, J. 1981. Medical Embryology, 4th
Giese, K., Cox, J. and Grosschedl, R. 1992. The orientation and chromosome Xq28 in males but Ed. Williams & Wilkins, Baltimore.
HMG domain of lymphoid enhancer factor 1 bends not in females. Nat. Genet. 11: 248-256.
Langman, J. and Wilson, D. B. 1982. Embryo-
DNA and facilitates the assembly of functional
Hunter, C. P. and Wood, W. B. 1990. The tra-1 logy and congenital malformations of the fe-
nucleoprotein structures. Cell 69:185-195.
gene determines sexual phenotype cell-autono- male genital tract. In A. Blaustein (ed.),
Geissler, W. M. and nine others. 1994. Male mously in C. elegans. Cell 63: 1193-1204. Pathology of the Female Genital Tract, 2nd Ed.
pseudohermaphroditism caused by muta-tions of Springer-Verlag, New York, pp. 1-20.
Imperato-McGinley, J., Guerrero, L., Gau-tier, T.
testicular 17b-hydroxysteroid de-hydrogenase 3.
and Peterson, R. E. 1974. Steroid 5a-reductase Leutert, T. R. 1974. Zur Geschlechtsbestim-mung
Nat. Genet. 7: 34-39.
deficiency in man: An inherited form of male und Gametogenese von Bonellia vividis Rolan-
Goralski, T. J., Edstrm, J.-E. and Baker, B. S. pseudohermaphroditism. Science 186: 1213- 1215. do. J. Embryol. Exp. Morphol. 32: 169-193.
1988. The sex determination locus transformer-2
Jacklin, D. 1981. Methodological issues in the study LeVay, S. 1991. A difference in hypothalamic
of Drosophila encodes a polypeptide with similarity
of sex-related differences. Dev. Rev. 1: 266-273. structure between heterosexual and homosexual
to RNA binding proteins. Cell 56: 1011-1018.
men. Science 253: 1034-1037.
Jeyasuria, P., Roosenburg, W. M. and Place, A. R.
Gubbay, J. and eight others. 1990. A gene
1994. Role of P-450 aromatase in sex determi- Luo, X., Ikeda, Y. and Parker, K. L. 1994. A
mapping to the sex-determining region of the
nation of the diamondback terrapin, Malademys cell-specific nuclear receptor is essential for
mouse Y chromosome is a member of a novel
terrapin. J. Exper. Zool. 270: 95-111. adrenal and gonadal development and sexual di-
family of embryonically expressed genes. Nature
fferentiation. Cell 77: 481-490.
346: 245-250. Josso, N., Picard, J.-Y and Tran, D. 1977. The
anti-Mllerian hormone. Recent Prog. Horm. Mansour, S., Hall, C. M., Pembrey, M. E. and Young,
Gutzke, W. H. N. and Chymiy, D. B. 1988.
Res. 33:117-167. I. D. 1995. A clinical and genetic study of campo-
Sensitive periods during embryology for
melic dysplasia. J. Med. Genet. 32: 415-420.
hormonally induced sex determination in turtles. Jost, A. 1953. Problems of fetal endocrinology:
Gen. Comp. Endocrinol. 71: 265-267. The gonadal and hypophyseal hormones. Recent Marshall, E. 1995. NIHs gay gene study
Prog. Harm. Res. 8: 379-418. questioned. Science 268: 1841.
Hacker, A., Capel, B., Goodfellow, P. and Lovell-
Badge, R. 1995. Expression of Sry, the mouse sex Jursnich, V. A. and Burtis, K. C. 1993. A positive Marx, J. 1995. Mammalian sex determination:
determining gene. Development 121: 1603-1614. role in differentiation for the male doublesex Snaring the genes that divide sexes for mammals.
protein of Drosophila. Dev. Biol. 155: 235-249. Science 269: 1824-1825.
Hamer, D. H., Hu, S., Magnuson, V. L., Hu, N.
and Pattatucci, A. M. L. 1993. A linkage between Kandel, E. R. and Schwartz, J. H. 1985. Principles McClung, C. E. 1902. The accessory chromo-
DNA markers on the X chromosome and male of Neural Science. Elsevier, NY. somesex determinant? Biol. Bull. 3: 72-77.
sexual orientation. Science 261: 321-327.
Kandel, E. R., Schwartz, J. H. and Jessell, T. M. McEwen, B. S. 1981. Neural gonadal steroid
Haqq, C. M., King, C. Y, Donahoe, P. K. and 1995. Essentials of Neural Science and Behavior. actions. Science 211: 1303-1311.
Weiss, M. A. 1993. Sry recognizes conserved Appleton and Lange, Norwalk, CT.
McEwen, B. S., Leiberburg, I., Chaptal, C. and
DNA sites in sex-specific promoters. Proc. Natl.
Kent, J.,Wheatley, S. C., Andrews, J. E., Sinclair, Krey, L. C. 1977. Aromatization: Important for
Acad. Sci. USA 90: 1097-1101.
A. H. and Koopman, P. 1996. A male-specific sexual differentiation of the neonatal rat brain.
Haqq, C., King, C.-Y, Ukiyama, E., Falsafi, S., role for SOX9 in vertebrate sex determination. Horm. Behav. 9: 249-263.
Haqq, N., Donahoe, P. K. and Weiss, M. A. 1994. Development 122: 2813-2822.
McKeown, M., Belote, J. M. and Boggs, R. T.
Molecular basis of mammalian sexual determi-
Keyes, L. N., Cline, T. W. and Schedl, P. 1992. 1988. Ectopic expression of the female trans-
nation: Activation of Mller-ian inhibiting
The primary sex determination signal of Dro- former gene product leads to female differentia-
substance gene expression by SRY. Science 266:
sophila acts at the level of transcription. Cell tion of chromosomally male Drosophila. Cell
1494-1500.
68: 933-943. 53: 887-895.
Meyer, W. J., Migeon, B. R. and Migeon, C. J. mediating mat-ing behavior in the female guinea Shen, W-H., Moore, C. C. D., Ikeda, Y., Parker,
1975. Locus on human X chromosome for dihy- pig. En-docrinology 65: 369-382. K.L. and Ingraham, H. A. 1994. Nu-clear recep-
drotestosterone receptor and androgen insensiti- tor steroidogenic factor 1 regu-lates the Mllerian
Pieau, C., Girondot, N., Richard-Mercier, G,
vity. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72: 1469-1472. inhibiting substance gene: a link to the sex de-
Desvages, M., Dorizzi, P and Zaborski, P. 1994.
termination cas-cade. Cell 77: 651-661.
Miller, L. M., Plenefisch, J. D., Casson, L. P. Temperature sensitivity of sexual dif-ferentia-
and Meyer, B. 1988. xol-1: A gene that controls tion of gonads in the European pond turtle. J. Siiteri, P. K. and Wilson, J. D. 1974. Testos-
the male mode of both sex determination and X Exper. Zool. 270: 86-93. terone formation and metabolism during male
chromosome dosage compensation in C. elegans. sexual differentiation in the human embryo. J.
Pontiggia, A., Rimini, R., Goodfellow, P. N.,
Cell 55: 167-183. Clin. Endocrinol. Metab. 38: 113-125.
Lovell-Badge, R. and Bianchi, M. E. 1994. Sex-
Moore, C. L. 1990. Comparative development reversing mutations affect the architec-ture of Sinclair, A. H. and nine others. 1990. A gene
of vertebrate sexual behavior: Levels, cascades, Sry/DNA complexes. EMBO J. 13: 6115-6124. from the human sex-determining region encodes
and webs. In D. A. Dewsbury (ed.), Issues in a protein with homology to a con-served DNA-
Prve, E. 1978. Courtship and testosterone in
Comparative Psychology. Sin-auer Associates, binding motif. Nature 346: 240-244.
male zebra finches. Z. Tierpsychol. 48: 47-67.
Sunderland, MA, pp. 278-299.
Stevens, N. M. 1905. Studies in spermato-genesis
Reddy, V. R., Naftolin, F. and Ryan, K. J. 1974.
Moore, C. L., Dou, H. and Juraska, J. M. 1992. with especial reference to the ac-cessory chro-
Conversion of androstenedione to es-trone by
Maternal stimulation affects the number of mo- mosome. Carnegie Inst. Wash-ington Rep. 36.
neural tissues from fetal and neonatal rats.
tor neurons in a sexually dimorphic nucleus of
Endocrinology 94: 117-121. Terasawa, E. and Sawyer, C. H. 1969. Changes
the lumbar spinal cord. Brain Res. 572: 52-56.
in electrical activity in rat hypo-thalamus related
Rhind, N. B., Miller, L. M., Kopczynski, J. B.
Morgan, T. H. 1919. The Physical Basis of to electrochemical stimu-lation of adenohypo-
and Meyer, B. J. 1995. xol-1 acts as an early
Heredity. Lippincott, Philadelphia. physeal function. En-docrinology 85: 143-149.
switch in the C. elegans male/her-maphrodite
Muscatelli, F. and fourteen others. 1994. Mutations decision. Cell 80: 71-82. Thigpen, A. E., Davis, D. L., Imperato-
in the DAX-1 gene give rise to both X-linked McGinley, J. and Russell, D. W 1992. The mole-
Risch, N., Squires-Wheeler, E. and Keats, B. J.
adrenal hypoplasia con-genita and hypogonado- cular basis of steroid 5a-reductase de-ficiency in
B. 1993. Male sexual orientation and ge-netic
tropic hypogo-nadism. Nature 372: 672-634. a large Dominican kindred. N. Engl. J. Med.
evidence. Science 262: 2063-2065.
327: 1216-1219.
Nabekura, J., Oomura, Y, Minami, T, Mizuno,
Robboy, S. J., Young, R. H. and Herbst, A. L. 1982.
Y. and Fukuda, A. 1986. Mechanism of the rapid Thorpe, W. H. 1958. The learning of song
Female genital tract changes re-lated to prenatal
effect of 17b-estradiol on medial amygdala patterns by birds with especial reference to the
diethylstilbesterol expo-sure. In A. Blaustein (ed.),
neurons. Science 233: 226-228. song of the chaffinch, Fringilla coelebs. Ibis
Pathology of the Female Genital Tract, 2nd Ed.
100: 535-570.
Nordeen, E. J., Nordeen, K. W., Sengelaub, D. R. Springer-Ver-lag, New York, pp. 99-118.
and Arnold, A. P. 1985. Androgens prevent Tian, M. and Maniatis, T. 1993. A splicing
Rubin, B. S. and Barfield, R. J. 1980. Prim-ing of
normally occurring cell death in a sexually enhancer complex controls alternative splicing
estrus responsiveness by implants of 17b-estradiol
dimorphic spinal nucleus. Science 229: 671-673. of doublesex pre-mRNA. Cell 74: 105-114.
in the ventromedial hypothal-amic nuclei of fe-
Nthiger, R., Dbendorfer, A. and Epper, F. 1977. male rats. Endocrinology 106: 504-509. Tobin, C. and Joubert, Y. 1992. Testos-terone-
Gynandromorphs reveal two separate primordia induced development of the rat lev-ator ani
Ryner, L. C. and Bruce, B. S. 1991. Regula-tion
for male and female geni-talia in Drosophila muscle. Dev. Biol. 146: 131-138.
of doublesex pre-mRNA processing oc-curs by
melanogaster. Wilhelm Roux Arch. 181:367-373.
3'-splice site activation. Genes Dev. 5: 2071-2085. Tran, D., Meusy-Dessolle, N. and Josso, N. 1977.
Nottebohm, F. 1980. Testosterone triggers Anti-Mllerian hormone is a func-tional marker
Salz, H. K., Cline, T. W. and Schedl, P. 1987.
growth of brain vocal control nuclei in adult of foetal Sertoli cells. Nature 269: 411-412.
Functional changes associated with struc-tural
female canaries. Brain Res. 189: 429-436.
alterations induced by mobilization of a P Trelstad, R. L., Hayashi, A., Hayashi, K. and
Nottebohm, F. 1981. A brain for all seasons: element inserted into the Sex-lethal gene of Donahoe, P. K. 1982. The epithelial-mesen-
Cyclical anatomical changes in song con-trol nuclei Drosophila. Genetics 117: 221-231. chymal interface of the male rate Mtillerian
of the canary brain. Science 214: 1368-1370. duct: Loss of basement mem-brane integrity and
Salz, H. K., Maine, E. M., Keyes, L. N., Samuels,
ductal regression. Dev. Biol. 92: 27-40.
Nowinski, W. 1934. Die vermnnlichende M. E., Cline, T. W. and Schedl, P. 1989. The
Wirkung fraktionierter Darmextrakte des Drosophila female-specific sex-de-termination Tuana, N. 1988. The weaker seed. Hypatia 3:
Weibchens auf die Larven der Bonellia viridis. gene, Sex-lethal, has stage-, tis-sue-, and sex- 35-59.
Pubbl. Staz. Zool. Napoli 14: 110-145. specific RNAs suggesting multiple modes of re-
Vainio, S. and McMahon, A. 1996. Wnt-4a as a
gulation. Genes Dev. 3: 708-719.
Perry, M. D., Li, W., Trent, C., Robertson, B., signal regulating sex organogenesis. WNT
Fire, A., Hageman, J. M. and Wood, W. B. 1993. Snchez, L. and Nthiger, R. 1983. Sex de- Meeting Abstracts, Stanford, CA.
Molecular characterization of the her-1 gene termination and dosage compensation in Dro-
Valcrcel, J., Singh, R., Zamore, P. and Greene,
suggests a direct role in cell signal-ing during sophila melanogaster: Production of male clones
M. R. 1993. The protein Sex-lethal antagonizes
Caenorhabditis elegans sex deter-mination. in XX females. EMBO J. 1: 485-491.
the splicing factor U2AF to regulate alternati-
Genes Dev. 7: 216-228.
Schiebinger, L. 1989. The Mind Has No Sex? ve splicing of transformer pre-mRNA. Nature
Pfaff, D. W. and McEwen, B. S. 1983. The Harvard University Press, Cambridge, MA. 362: 171-175.
actions of estrogens and progestins on nerve
Schpbach, T, Wieschaus, E. and Nthiger, R. Van Doren, Ellis, H. M. and Posakony, J. W.
cells. Science 219: 808-814.
1978. The embryonic organization of the 1991. The Drosophila extramacrochaetae
Phoenix, C. H., Goy, R. W., Gerall, A. A. and Young, genital disc studied in genetic mosaics of Dro- protein antagonizes sequence-specific DNA
W. C. 1959. Organizing action of prenatally sophila melanogaster. Wilhelm Roux Arch. 185: binding by daughterless/achaete-scute protein
administered testosterone proprionate on the tissues 249-270. complexes. Development 113: 245-255.
Wagner, T. and thirteen others. 1994. Auto- Wilson, E. B. 1905. The chromosomes in re- Younger-Shepherd, S., Vaessin, H., Bier, E., Jan,
somal sex reversal and campomelic dyspla-sia lation to the determination of sex in insects. L. Y. and Jan, Y. N. 1992. deadpan, an es-sential
are caused by mutations in and around the SRY- Science 22: 500-502. pan-neural gene encoding an HLH protein, acts
related gene SOX9. Cell 79: 1111-1120. as a denominator in Drosophila sex determina-
Witelson, S. F., Glezer, I. I. and Kigar, D. L.
tion. Cell 70: 911-922.
Washburn. L. L. and Eicher, E. M. 1989. Nor- 1995. Women have greater density of neu-rons
mal testis determination in the mouse depends in posterior temporal cortex. J. Neu-rosci. 15: Zanaria, E. and thirteen others. 1994. An unusual
on genetic interaction of a locus on chromoso- 3418-3428. member of the nuclear hormone receptor
me 17 and the Y chromosome. Genetics 123: superfamily responsible for X-linked adrenal
Wright, E. and eight others. 1995. The Sry-
173-179. hypoplasia congenita. Na-ture 372: 635-641.
related gene Sox9 is expressed during chondro-
Werner, M. H., Huth, J. R., Groneborn, A. M. genesis in mouse embryos. Nat. Genet. 9: 15-20. Zarkower, D. and Hodgkin, J. 1992. Molec-ular
and Clore, G. M. 1995. Molecular basis of human analysis of the C. elegans sex-determin-ing gene
Yamamoto, T.-O. 1969. Sex differentiation. In
46X,Y sex reversal revealed from the three- tra-1: A gene encoding two zinc finger proteins.
W. S. Hoar and D. J. Randall (eds.), Fish
dimensional solution structure of the human SRY- Cell 70: 237-249.
Physiology, Vol. 3. Academic Press, New York,
DNA complex. Cell 81: 705-714.
pp. 117-175.
Regulao ambiental do
desenvolvimento animal 21
Podemos agora passar a considerar adapta-
es para o ambiente externo; e inicialmente
as adaptaes diretas.... nas quais um ani-
mal, durante seu desenvolvimento, modi-
ficado por fatores externos de tal maneira
N A PRIMEIRA METADE do sculo 19, biologia era o estudo do organis-
mo em relao s suas condies de existncia, e a investigao do orga-
nismo vivo era geralmente realizada em seu habitat original. Somente ao
redor de 1850, que a fisiologia emergiu como uma tentativa de quantificar o fen-
meno biolgico no laboratrio. A embriologia permaneceu dentro do reino da biologia,
que h um aumento da eficincia com que enquanto a fisiologia investigava as estruturas e funes dos organismos adultos
esses fatores so tratados. independentemente dos seus ambientes originais (Nyhart, 1995).
C. H. WADDINGTON (1957)
Dentro desse contexto biolgico, a embriologia foi vista como o motor da mu-
dana evolucionria, e o desenvolvimento como sendo condicionado pelo ambiente.
Por exemplo, Augusto Weismann (1875) verificou que borboletas da mesma espcie
eclodindo em estaes diferentes podiam apresentar cores diferentes, e ele podia
transformar a forma do vero na forma da primavera, resfriando as pupas. Carl Siebold
mostrou que alguns afdios partenogenticos podiam dar origem a machos e fmeas
sexuadas tardiamente na poca de reproduo para produzir um ovo que hibernava (e
que invariavelmente eclodia como uma fmea partenogentica), e vrios pesquisado-
res estudaram a determinao sexual pelo ambiente na Bonellia e em colmias de
insetos (veja Hertwig, 1894). A primeira gerao de embriologistas experimentais
estudou os efeitos do ambiente sobre o desenvolvimento, incluindo o efeito de falta
de ons ou de nutrientes na determinao do sexo e na morfognese (Selenka 1876;
Born, 1881; Herbst, 1893). (Os estudos de Born mostrando que o sexo de embries de
rs podia ser alterado por fatores ambientais foi mostrado com proeminncia no filme
Jurassic Park.)
Mas a mar estava mudando. Nas dcadas de 1870 e de 1880, jovens zoologistas
se afastavam dessas questes biolgicas em direo s questes de fisiologia
interna e anatomia. Embriologistas mais velhos, como Carl Siebold e Ernst Haecke,
que desenvolveram seus trabalhos em um contexto evolucionrio ou ambiental, se
desesperavam porque a prxima gerao de zoologistas cientficos somente co-
nheceria cortes seccionais e tecidos corados, mas nem o animal inteiro e nem seu
modo de vida (Haeckel, 1881). Eles estavam atnitos pela falta de interesse dos
805
jovens pesquisadores em estudar o embrio vivo no seu habitat natural.* Siebold

justificou esses excessos observando que a presso para publicar exercida sobre os
jovens cientistas os forava a realizar pesquisa que podia ser feita em poucos me-
ses, em lugar das que ele realizava e que levavam anos para serem completadas
(Nyhart, 1995). Quando Wilhelm Roux tentou unir a embriologia experimental
com a fisiologia, ele postulou que o desenvolvimento era causado por fatores inter-
nos, especialmente aqueles dentro do ncleo. A embriologia experimental se afas-
tou das explicaes ambientais e se concentrou naquelas foras dentro do ovo fer-
tilizado que permitem o desenvolvimento do embrio. Essa tem sido a direo ge-
ral da biologia do desenvolvimento.
Agora, com o novo interesse na relao entre desenvolvimento e evoluo, com a
surpreendente perda de diversidade nos organismos e os efeitos dos poluentes
ambientais, existe uma renovada preocupao com a regulao do desenvolvimento
pelo ambiente (veja Weele, 1995). Algumas pessoas esto convencidas de que o
DNA fornece o programa que controla o desenvolvimento do embrio (Wolpert,
1991) ou que tudo que necessrio para formar o embrio est dentro do ovo fertiliza-
do. Entretanto, existem numerosos exemplos (e o Homo sapiens fornece os melhores)
onde o ambiente tem um papel crtico na determinao do fentipo do organismo. Ns
j discutimos a regulao ambiental do desenvolvimento quando estudamos a deter-
minao do sexo em Bonellia, Crepidula e muitos rpteis (veja Captulo 20). Natural-
mente, a habilidade gentica para responder a tais fatores ambientais deve ser herda-
da, mas nesses casos o ambiente que pode dar os diferentes fentipos a partir do
mesmo gentipo nuclear.
Q REGULAO AMBIENTAL DO
DESENVOLVIMENTO NORMAL
Sugestes ambientais usadas pelos organismos

para completar seus desenvolvimentos
Certas sugestes ambientais, tais como um campo gravitacional de 1G ou um oceano
salino a 0.85%, podem ser utilizados durante o desenvolvimento. Portanto, no
surpreendente que muitos ovos usam a gravidade como a fora que assegura a pola-
ridade de seus ocitos, e a perturbao da gravidade pode desregular o desenvolvi-
mento em rs e aves (Pflger, 1883; Born, 1884). Analogamente, vimos no Captulo
4 que ocitos de ourio-do-mar (e sem dvida os ocitos de muitas outras espcies)
usam ons de sdio da gua do mar para substituir os ons de hidrognio e ajudar a
ativar o ovo (Jaffe, 1980). Embries de mamferos esto intimamente ligados ao seu
alimento, oxignio e fontes inicas durante seu inteiro desenvolvimento pr-natal.
Nesses casos, as sugestes para o desenvolvimento normal no esto no ocito, mas
assume-se que esto presentes no ambiente onde o ovo se desenvolve.
A colonizao larval
A incluso de sugestes ambientais no desenvolvimento normal ocorrem durante a

colonizao de larvas marinhas. Aqui, as sugestes podem no ser universais, mas
devem ser parte do ambiente se o desenvolvimento deve prosseguir. Uma larva
planctnica freqentemente necessita se estabelecer prximo a uma fonte de alimen-
to ou a um substrato firme no qual sofre a metamorfose. Se a presa ou as ncoras
fornecem molculas solveis, essas molculas podem ser usadas pelas larvas como
* Essas preocupaes e a retrica que as expressa so extraordinariamente similares quelas dos

embriologistas mais velhos de hoje que se desesperam porque os pesquisadores mais jovens so somente
clonadores de genes sem conhecimentos sobre a estrutura total dos embries (veja Nyhart, 1995).
CAPTULO 21 Regulao Ambiental do Desenvolvimento Animal 807
Tabela 21.1 Substratos especficos para a colonizao de larvas de moluscos
Espcies de moluscos Substrato
GASTROPODA (caracis, nudibrnquios)

Nassarius obsoletus Lama do habitat do adulto
Philippia radiata Porites lobata (um cnidrio)
Adalaria proxima Electra pilosa (um briozorio)
Doridella obscura Electra crustulenta (um briozorio)
Phestila sibogae Porites compressa (um cnidrio)
Rostanga pulchra Ophlitaspongia pennata (uma esponja)
Trinchesia aurantia Tubularia indivisa (um cnidrio)
Elysia chlorotica Filme primrio de microorganismos do habitat do adulto
Haminoea solitaria Filme primrio de microorganismos do habitat do adulto
Aplysia californica Laurencia pacifica (uma alga vermelha)
Aplysia juliana Ulva spp. (algas verdes).
Aplysia parvula Chondrococcus hornemanni (uma alga vermelha)
Stylocheilus longicauda Lyngbya majuscula (uma cianobactria)
Onchidoris bilamellata Crustceos vivos
AMPHINEURA (CHITONS)
Tonicella lineata Lithophyllum sp. e Lithothamnion sp. (algas vermelhas)
LAMELLIBRANCHIA (Bivalvos)
Teredo sp. Madeira
Bankia gouldi Madeira
Mercenaria mercenaria Lquidos de moluscos; areia
Placopecten magellanicus Concha adulta; areia; etc.
Mytilus edulis Algas filamentosas; outro material no biolgico de seda
Crassostrea virginica Lquido da concha; extrato do corpo; glicognio de crustceo
sugestes para iniciar sua colonizao. Nos moluscos, freqentemente existem su-
gestes muito especficas para a colonizao (Tabela 21.1). A maioria das larvas dos
nudibrnquios (lesma do mar) sofrem metamorfose somente se induzida por uma
presa adulta viva (que diferente de espcie a espcie). Em alguns casos, foi identi-
ficado o produto solvel da presa que dispara a metamorfose (Hadfield, 1977). A
larva do teredo (shipworm) Teredo navalis induzida a se estabelecer por compostos
liberados pela madeira, e material solvel eludo de conchas de ostras induzem a
colonizao das larvas de ostras.*
O haliote vermelho (abalone) Haliotis rufescens tem larvas que somente coloni-
zam quando entram em contacto fsico com algas vermelhas coralinas. Somente um
contacto breve necessrio para que a larva competente pare de nadar e comece a
metamorfose. Ainda no foi isolado o agente qumico responsvel por essa modifica-
o, mas o reconhecimento de um peptdeo de algas induz a metamorfose em larvas
competentes. As larvas que no so competentes para a induo da metamorfose
parecem no ter esse receptor. Considera-se que esse receptor esteja ligado a uma
* Em 1880, William Keith Brooks, um embriologista na Universidade de Johns Hopkins (e supervisor

da tese de T. H. Morgan, E. B. Wilson, R.G. Harrison e E. G. Conklin), foi solicitado a ajudar a
problemtica indstria de ostras de Chesapeake Bay. Durante dcadas, as ostras foram dragadas da baa,
e sempre havia uma nova colheita em seu lugar. Mas, recentemente, a produo estava caindo ano a ano.
O que seria responsvel por esse declnio? Realizando experimentos com larvas de ostras, Brooks
descobriu que a ostra Americana (diferentemente de sua prima Europia- melhor conhecida) necessitava
de um substrato rgido no qual sofriam metamorfose. Durante anos, os pescadores de ostras jogavam as
conchas de volta para o mar, mas com o advento das caladas suburbanas, os pescadores estavam
vendendo as conchas para as fbricas de cimento. A soluo de Brooks: jogar as conchas de volta na baa.
A populao de ostras respondeu: o cais de Baltimore at hoje vende seus descendentes.
protena G semelhante quelas encontradas em vertebrados, e a ativao dessa prote-

na G pode ser necessria para a induo da colonizao larval e a metamorfose
(Morse et al., 1984; Baxter e Morse, 1992; Degnan e Morse, 1995).
O alimento no a nica sugesto usada na colonizao larval. A larva da mosca
preta, por exemplo, se adere a superfcies duras nos rios e se alimenta passivamente
das partculas suspensas no fluxo. Essas larvas procuram ativamente reas com cor-
rentes de alta velocidade. Nessa zona de alta velocidade as larvas so relativamente
imunes aos ataques dos platelmintos. Em experimentos de laboratrio (Hansen et al.,
1991), platelmintos no podiam capturar larvas da mosca preta em fluxos mais rpidos
que 35 cm/segundo. A razo disso que os platelmintos ingerem sua presa elevando
a cabea para fora da superfcie. Isso expe sua superfcie frontal ao fluxo e reduz a
rea da superfcie de aderncia ao substrato. Portanto, em correnteza de alta veloci-
dade, os platelmintos correm o risco de serem levados rio abaixo se eles tentam se
alimentar. Dessa maneira, as moscas pretas sobrevivem, sofrem metamorfose e difi-
cultam a vida dos prximos acampados.
Refeies de sangue
Em muitos mosquitos, a produo de ovos induzida por uma refeio sangnea.

(Na Drosophila a sugesto ambiental para a produo de ovos parece ser o
fotoperodo.) Nos mosquitos, s a fmea pica e ela no produz vitelogenina antes
dessa refeio. No Aedes aegypti, os produtos digeridos do alimento sangneo
estimulam o crebro a secretar o hormnio neurosecretor para o desenvolvimento
do ovo (EDNH, tambm conhecido como hormnio ecdisteroidognico ovariano,
OEH). Esse estimula o ovrio a produzir ecdisterides, os quais instruem as clu-
las do corpo gorduroso a produzir vitelogenina para os ocitos (Fallon et al., 1974;
Hagedorn, 1983; Borovsk et al., 1990). A vitelogenina crtica para a produo de
ovos. Portanto, sem uma refeio sangnea, no h vitelogenina e nem ovos
(Figura 21.1).
No inseto sugador de sangue, Rhodinus prolixus, as fmeas adultas produzem
uma nova carga de ovos toda vez que sugam sangue. Esse alimento sangneo serve
a dois propsitos. As protenas do sangue fornecem os aminocidos necessrios para
a sntese de vitelogenina, e o estiramento fsico do abdmen pelo sangue inicia o
estmulo endcrino que ativa a secreo do hormnio juvenil pela corpora allata. O
hormnio juvenil estimula a sntese de vitelogenina no ovrio e no corpo gorduroso
(veja Nijhout, 1994). Alm disso, o estiramento causado por uma nica refeio
sangnea induz a muda larval. Se esse inseto se alimentar com vrias pequenas
refeies, ele sobreviver, mas no sofrer muda e nem crescer. Nessa situao,
mamferos so usados em parte do desenvolvimento de insetos.
Simbiose no desenvolvimento
Em alguns dos exemplos acima, o desenvolvimento de um indivduo possvel

pela presena de outro indivduo de uma espcie diferente. Em alguns organismos,
essa relao se tornou simbitica (Sapp, 1994). Aqui, os simbiontes esto forte-
mente integrados ao organismo hospedeiro, e esse no pode se desenvolver sem
eles. A lula adulta Euprymna scolopes est equipada com um rgo de luz compos-
to de sacos contendo a bactria luminosa Vibrio fischeri. A lula juvenil no tem
esses simbiontes emitentes de luz e nem as estruturas para abrig-los. Na verdade,
a lula adquire a bactria atravs da gua do mar bombeada atravs da cavidade de
sua cobertura. As bactrias se ligam a um epitlio ciliado que se estende nessa
cavidade. As bactrias induzem a morte dessas clulas, sua substituio por um
epitlio no ciliado e a diferenciao das clulas epiteliais vizinhas para se tornar
receptculos de armazenagem das bactrias (Figura 21.2; McFall-Ngai e Ruby,
1991; Montgomery e McFall-Ngai, 1995).
Emergncia Refeio de sangue Figura 21.1

Diagrama de fluxo mostrando as interaes
que permitem a produo de ovos no mosqui-
Crebro to Aedes aegypti. (De acordo com Hagedorn,
Crebro
1983; Nijhout, 1994.)
Corpora allata
EDNH
Acasalamento e
JH comportamento alimentar
Ovrio Competncia Ovrio no

imaturo crescimento estgio de repouso
Corpo
gorduroso Vitelogenina Ovrio vitelognico Ovos e ovrio
ps-vitelognico
Competncia Corpo gorduroso Ecdisterides

competente
A simbiose entre massas de ovos e algas fotossintticas crtica para o desenvol-

vimento de certas espcies. O suprimento de oxignio limita a taxa de desenvolvimen-
to quando os ovos esto agrupados em massas compactas, e o desenvolvimento dos
embries na parte interna do aglomerado retardado em comparao com aqueles
mais prximos da superfcie (Strathmann e Strathmann, 1995). Apesar do forte gradien-
te de oxignio partindo de fora do aglomerado para seu interior, os embries parecem
ter resolvido o problema envolvendo-se com uma fina camada de algas fotossintticas.
Em ninhadas de ovos de anfbios e caracis, fotossntese infratora das algas permi-
te produo lquida de oxignio na luz, enquanto a respirao excede a fotossntese no
escuro (Bachmann et al., 1986; Pinder e Friet, 1994; Cohen e Strathmann, 1996). Portan-
to, as algas salvam os ovos pela fotossntese.
Uma ligao ainda mais intensa entre morfognese e simbiose verificada na
cigarrinha Euscelis incisus. Aqui, a simbiose ocorre dentro do ovo. Existem bactrias
simbiticas nessas espcies que esto dentro do citoplasma do ovo e que so
transferidas atravs de geraes, exatamente como as mitocndrias. Essas bactrias
se tornaram to especializadas que s podem se multiplicar dentro do citoplasma do
organismo, e o embrio do hospedeiro se tornou to dependente da bactria que lhe
Figura 21.2
Micrografia eletrnica de varredura do primrdio do rgo
de luz de uma lula juvenil E. scolopes de 3 dias. (A) rgo
de luz em um juvenil no infectado. (B) rgo de luz de um
juvenil infectado com a bactria simbitica V. fischeri. Re-
gresso do epitlio bvia em (B). (De acordo com
Montgomery e McFall-Ngai, 1995; fotografias cortesia de
(A) (B) M. McFall-Ngai.)
Figura 21.3
Simbiontes microbianos so necessrios para Trax
a formao do intestino da cigarrinha Euscelis Cabea Abdmen
incisus. (A) Embrio controle com simbion-
tes tem formao normal do intestino. (B)
Embrio anormal com formao deficiente
do intestino quando antibiticos eliminaram
a maioria das bactrias do ovo. (De acordo
com Schwemmler, 1974; fotografias corte-
sia de W. Schwemmler.)
0.1 mm
(A)
Cabea Trax Abdmen
0.1 mm
(B)
impossvel completar a embriognese sem ela. De fato, considera-se que os simbiontes

bacterianos so essenciais para a formao do intestino embrionrio. Se as bactrias
so removidas cirurgicamente ou metabolicamente (alimentando as larvas ou os adul-
tos com antibiticos), elas podem ser eliminadas dos ovos em desenvolvimento. Es-
ses ocitos livres de simbiontes se desenvolvem em embries que no tm o abdmen
(Figura 21.3; Sander, 1968; Schwemmler, 1974, 1989). O endossimbionte pode estar
secretando um fator que penetra no citoplasma do ovo.
Existe at uma simbiose desenvolvimental no intestino de mamferos. As bact-
rias colonizam o intestino desde o momento do nascimento, e a sucesso ecolgica
no intestino humano progride atravs de uma srie de colonizaes envolvendo
cerca de 400 espcies bacterianas. As clulas epiteliais do intestino de camundon-
gos mantidos livres de germens, no sintetizam certos mRNAs que codificam deter-
minadas enzimas de glicosilao (Bry et al., 1996). Entretanto, se uma determinada
cepa de bactrias comea a colonizar seus intestinos, esses micrbios induzem o
mRNA a se tornar expresso. [env1.html]
Diferenas ambientais previsveis

como sugestes para o desenvolvimento
Sazonalidade e sexo: Afdios e V
sex olvox
olvox
Volvo
Como j mencionado, vrias espcies de afdios partenogenticos tm um fascinan-

te estilo de vida onde os ovos eclodidos do origem vrias geraes de fmeas
reproduzindo-se assexualmente. Entretanto, durante o outono produzido um de-
terminado tipo de fmea, cujos ovos podem dar origem a machos e fmeas sexuadas.
Essas formas sexuadas se acasalam, e o ovo que se forma est apto a sobreviver o
inverno. Quando esse eclode, uma nova gerao de fmeas assexuadas produzida.
Um dos grandes mistrios desse tipo de partenognese foi resolvido em 1909 por
Nmero de
cromossomos Oognese completa
Ovo com 12 Ovo haplide

Fmea
cromossomos
sexuada
Ovo Ovo Espermatognese Cruzamento

Me precursora Fema
hibernal partenognico completa Fertilizao
assexuada capaz de
produzir
gerao Ovo com 10 Macho
sexuada cromossomos sexuado Degenerao
Figura 21.4
Mudanas cromossmicas durante o ciclo vital do afdio da famlia Phylloxeridal. O clima
do outono induz a produo de machos e fmeas, que se cruzam para produzir o ovo
hibernal.
Thomas Hunt Morgan (antes dele comear a trabalhar com a mosca da fruta). Morgan
analisou os cromossomos do afdio da nogueira (hickory) durante vrias geraes
(Figura 21.4). Ele encontrou que o nmero diplide das fmeas de afdios 12.
Durante a oognese, somente um corpo polar expelido do vulo em desenvolvi-
mento, de modo que o nmero diplide de 12 retido. Esse ovo desenvolve-se
partenogeneticamente sem ser fertilizado. Nas fmeas que podem dar origem a ovos
que se tornam macho ou fmea, ocorre uma modificao dessa oognese. Nos ovos
produtores de fmeas, seis pares de cromossomos penetram no nico corpo polar.
Portanto, o nmero diplide de 12 retido. Nos ovos produtores de machos, entre-
tanto, um par extra de cromossomos entra no corpo polar. O nmero diplide do
macho 10. Esses machos e fmeas so sexuados e tm divises meiticas comple-
tas. A fmea produz ocitos com um conjunto haplide de 6 cromossomos. Os
machos, entretanto, dividem os seus 10 cromossomos para produzir uma parte do
espermatozide com o nmero haplide de 4 cromossomos e a outra parte com o
nmero haplide de 6 cromossomos. O espermatozide com 4 cromossomos se
degenera. O espermatozide com 6 cromossomos fertiliza o ovo com esses para
restaurar o nmero diplide de cromossomos a 12. Quando o ovo eclode, aps o
inverno, uma fmea.
Isso resolveu uma charada. A outra, de como o clima do outono regula se a
fmea sexuada ou partenognica ou se o organismo alado ou ptero permanece
sem soluo. Da mesma maneira, no sabemos o que regula o ocito diplide a
produzir ovos dando machos ou fmeas. Alm disso, fatores ambientais so usa-
dos de maneiras diferentes pelas vrias espcies. A Figura 21.5 mostra um tipo de
ciclo vital encontrado em afdios. Nos afdios da nogueira e na Megoura viciae,
existe uma alternncia de geraes sexuadas e assexuadas. Em Megoura, a tempe-
ratura determina o sexo precocemente no desenvolvimento (temperaturas extre-
mas favorecendo a produo de fmeas). No desenvolvimento da fmea, o
fotoperodo e a temperatura determinam se a fmea se reproduzir sexualmente ou
partenogeneticamente, e uma combinao de temperatura e densidade populacional
determinar se a fmea alada ou sem asas (Beck, 1980). possvel que o horm-
nio juvenil controle a troca partenogentica/sexual (adio de hormnio juvenil a
adultos produzindo descendentes sexuados os leva a ter descendentes parteno-
genticos) e inibe a formao de asas (Hardie, 1981; Hardie e Lees, 1985). Mas no
se sabe como as mudanas ambientais se transformam em ttulos de hormnio
juvenil ou como o clima de outono ou a luz solar causam o movimento diferencial
dos cromossomos para o corpo polar.
Figura 21.5 (A)

Efeitos ambientais no ciclo vital do afdio
Megoura viciae. (A) Alternncia de geraes Primavera Vero
sexuadas e assexuadas, onde a gerao
sexuada produzida no outono. (B) Alterna-
tivas de desenvolvimento fornecidas por fa-
tores ambientais no ciclo vital de Megoura.
(A de acordo com Nijhout, 1994; B de acor- Fmea Fmea
do com Beck, 1980.) assexuada alada assexuada
sem asas
Ovo hibernal Macho
Inverno Outono
Fmea sexual
Fmeas
(B) assexuadas
aladas
Aglomerao,
baixa temperatura
Dia longo, Isolamento,

alta temperatura alta temperatura Fmeas
assexuadas
Temperatura Dia curto, sem asas
alta ou baixa temperatura mdia
Fmea
sexuada
Temperatura
mdia
Macho
No Captulo 1, discutimos o ciclo vital do volvox e sua dependncia da temperatu-

ra. Aqui, tambm, a temperatura responsvel pela troca das formas assexuadas do
organismo pelas formas sexuadas. A fmea reproduzindo-se assexualmente d origem
a descendentes que produzem espermatozides ou vulos. O resultado dessa fertili-
zao o zigoto cuja camada externa pode proteg-lo da dessecao e do frio ao secar
a lagoa e chegada do inverno.
Diapausa
Muitas espcies de insetos desenvolveram uma estratgia chamada diapausa.

Diapausa a suspenso do desenvolvimento que pode ocorrer no estgio embrio-
nrio, larval, pupal ou adulto, dependendo das espcies. Em algumas espcies, a
diapausa facultativa e ocorre somente quando induzida por condies ambientais;
em outras espcies, a diapausa se tornou uma parte obrigatria do ciclo vital. Essa
ltima freqentemente encontrada em insetos da zona temperada, onde a diapausa
induzida por mudanas no fotoperodo (a durao relativa dos dias e das noites).
O comprimento do dia onde 50% da populao entrou em diapausa chamado de
comprimento crtico do dia, e geralmente bastante repentino (Figura 21.6). Insetos
entrando na diapausa quando o comprimento do dia cai abaixo desse limite so
chamados de insetos de dia longo. Os insetos que se desenvolvem normalmente
quando existem somente algumas horas de luz solar e que entram em diapausa
quando expostos a dias mais longos so chamados de insetos de dia curto. O com-
primento crtico do dia uma propriedade geneticamente determinada (Danilevskii,
1965; Tauber et al., 1986).
A diapausa no uma resposta fisiolgica desencadeada por condies drsticas.
porcentagem de indivduos entrando na diapausa

Laspeyresia
Sem dvida, ela induzida por estmulos sinalizadores que so um pressgio de molesta
mudana no ambiente, antes que as condies adversas realmente se instalem. A
Pieris
diapausa especialmente importante para os insetos da zona temperada, permitindo- brassicae
lhes sobreviver o inverno. Embries do bicho-da-seda Bombyx mori passam o inver-
no como embries, entrando na diapausa pouco antes da segmentao. A mariposa Acronycta
rumicis
cigana Lymantia dispar inicia sua diapausa como uma larva completamente formada,
pronta a eclodir assim que a diapausa termine. Outros insetos experimentam a diapausa Leptinotarsa
decemlineata
como ovos, pupas ou mesmo como adultos.
No bicho-da-seda Bombyx, a diapausa embrionria parece ser regulada pelo
hormnio da diapausa, um peptdeo de 24 aminocidos que produzido no gnglio
subesofagiano (Fukuda, 1952; Hasegawa, 1952). Esse hormnio age nos ocitos
em maturao no estgio pupal e leva interrupo do desenvolvimento, uma vez
que o embrio alcance 12.000 clulas (Kitazawa et al., 1963). A diapausa larval,
entretanto, parece ser controlada pela inibio de produo do PTTH (veja Cap-
Comprimento do dia (horas)
tulo 19). Isso impede que a larva sofra uma muda e se transforme em pupa. Em
muitas borboletas, a inibio de PTTH devida a um ttulo elevado contnuo do Figura 21.6
hormnio juvenil. Analogamente, a falta de secreo de PTTH e ecdisona uma A resposta fotoperidica de insetos de dia lon-
vez ocorrida a pupao, originar a diapausa nessa etapa do desenvolvimento. go, que so induzidos a entrar em diapausa
Pupas em diapausa podem ser reativadas pela adio de 20-hidroxiecdisona. quando as horas de luz natural caem abaixo de
certo nvel. Cada uma das quatro espcies
Entretanto, em condies normais, o crebro de uma pupa em diapausa (tal como
aqui mostradas, (Laspeyresia molesta, Pieris
a mariposa Hyalophora) ativado pela exposio ao clima frio durante certo brassicae, Acronycta rumicis e Leptinotarsa
tempo. Pupas de mariposas conservadas em condies aquecidas permanecero decemlineata) deixam a diapausa com luz
em diapausa at a morte (veja Nijhout, 1994). Os mecanismos pelo quais essas solar de 14-17 horas. (De acordo com
modificaes na temperatura e no comprimento do dia regulam a produo Danilevskii, 1965.)
hormonal devem ainda ser elucidados. [env2.html]
Plasticidade fenotpica: Polifenismo e regras de reao

A habilidade de um indivduo em expressar um fentipo sob um conjunto de circuns-
tncias e outro fentipo sob outro conjunto de condies ambientais chamada
plasticidade fenotpica. Existem dois tipos principais de plasticidade fenotpica:
polifenismo e regras de reao. Polifenismo se refere a fentipos descontnuos (um
ou outro) elicitados pelo ambiente. Gafanhotos migratrios, por exemplo, existem
em duas formas mutuamente exclusivas: a fase solitria de asas curtas e colorao
uniforme e a fase gregria de asas longas e cores brilhantes. O ambiente (principal-
mente a densidade populacional) determina qual morfologia assumir o jovem gafa-
nhoto (veja Pener, 1991). Analogamente, as ninfas de gafanhotos de plantas podem
se desenvolver de duas maneiras, dependendo do seu ambiente. Alta densidade
populacional e certas comunidades de plantas levam a produo de insetos migrat-
rios, onde o terceiro segmento torcico produz uma grande asa posterior. Densidade
populacional baixa e outras plantas alimentcias levam ao desenvolvimento de suga-
dores de plantas, no voadores, onde o terceiro segmento torcico se desenvolve em
uma asa vestigial semelhante a um haltere (Figura 21.7; Raatikainen, 1967; Denno et
al., 1985). A mudana sazonal da colorao do plo de animais rticos um outro
exemplo de polifenismo.*
Em certos casos, o genoma codifica uma variedade potencial de fentipos, e o
ambiente seleciona aquele fentipo que usualmente o mais adaptativo. Por exem-
plo, o trabalho intenso e constante pode fazer com que os msculos aumentem de
tamanho; mas existe um limite geneticamente definido que determina o quanto a
* Apesar do polifenismo sazonal ser geralmente considerado como adaptativo, existem certas
ocasies que no h aumento da aptido do organismo. Por exemplo, o fotoperodo pode fazer com
que o plo da lebre mude de marrom para branco, mas se no houver neve, a lebre ficara conspcua
em um segundo plano escuro.
Figura 21.7 Forma estacionria Forma migratria

Diagrama composto mostrando as formas de asa curta (esquerda)
e de asa longa (direita) do gafanhoto de plantas Prokelisia marginata.
A forma de asa longa um excelente voador; a forma de asa curta
no voadora. (De acordo com Denno et al., 1985.)
hipertrofia possvel. Analogamente, o micro-habitat de uma salamandra jovem

pode causar sua mudana de cor (novamente, dentro de limites geneticamente
definidos). Essa variao contnua de fentipos expressos por um nico gentipo
atravs de uma srie de condies ambientais chamada de regra de reao
(Woltereck, 1909; Schmalhausen, 1949; Stearns et al., 1991). A regra de reao ,
portanto, uma propriedade do genoma e pode tambm ser selecionada. de se
esperar que diferentes gentipos sejam diferentes na direo e quantidade de
plasticidade que sero capazes de expressar (Gotthard e Nylin, 1995; Via et al.,
1995). A extenso pela qual regras de reao podem ser herdadas fornece a base
para a evoluo da plasticidade fenotpica.
Polifenismo sazonal em borboletas
Um exemplo dramtico de polifenismo ocorre na mariposa Nemoria arizonaria. Essa

mariposa tem um ciclo vital bastante tpico. Os ovos eclodem na primavera, e as
lagartas se alimentam das flores jovens do carvalho (amentos). Essas larvas sofrem
metamorfose no final da primavera, se acasalam no vero, e produzem outra prole de
lagartas nos carvalhos. Essas lagartas comem as folhas do carvalho, sofrem meta-
morfose e se acasalam. Seus ovos hibernam para novamente comear o ciclo na
prxima primavera. O que surpreendente que as lagartas que eclodem na prima-
vera em nada se parecem com seus descendentes que eclodem no vero (Prancha18).
As lagartas que eclodem na primavera e se alimentam de amentos so castanho-
amareladas, rugosas e pontilhadas parecendo um amento. Elas esto magnificamente
camufladas contra predadores. E as lagartas que eclodem no vero, quando os amentos
j no existem? Elas tambm esto bem camufladas parecendo ramos de carvalhos
de um ano de idade. Como isso controlado? Fazendo experimentos de alimentao
recproca, Greene (1989) conseguiu transformar as formas de primavera em formas
de vero, alimentando-as com folhas de carvalho. O experimento recproco no trans-
formou as formas de vero em lagartas semelhantes aos amentos. Parece, portanto,
que a forma do amento o estado normal (default state) e alguma coisa induz a
morfologia semelhante aos ramos do carvalho. Essa substncia provavelmente um
tanino que concentrado nas folhas de carvalho durante sua maturao.
Outro exemplo de polifenismo sazonal a borboleta do mapa Europeu, Araschnia
levana, que tem dois fentipos to diferentes que foram classificados por Linnaeus
como duas espcies diferentes (Weele, 1995). A forma da primavera cor de laran-
ja brilhante com manchas pretas, enquanto a forma do vero quase toda preta
com uma banda branca (Figura 21.8; Prancha 29). A mudana das formas da pri-
mavera para as do vero controlada tanto por mudanas no comprimento do dia
como da temperatura durante o perodo larval. Esses fatores regulam a liberao de
ecdisona, que inicia as ltimas mudas metamrficas (Shapiro, 1976; Koch e
Buchmann, 1987). Quando pupas em diapausa so injetadas com 20-hidroxiecdi-
sona de modo a recomear o desenvolvimento dentro de 3 dias aps a pupao, a
forma que emerge a do vero. Se a injeo for feita 10 dias aps a pupao, so
produzidas as formas da primavera.
Figura 21.8
Polifenismo sazonal na borboleta Araschnia
laevana. (A) A forma do vero que emerge
da pupa em no diapausa. (B) A forma
alaranjada e marrom da primavera, que emer-
ge da pupa em diapausa. (Veja Prancha 29
para fotografias coloridas.) (Fotografias cor-
tesia de H. F. Nijhout.)
(A) (B)
Em quase toda a rea do Hemisfrio Norte, pode-se verificar o polifenismo nas

borboletas Colias e Pieris (repolhos brancos e sulfurosas) entre aquelas que eclodem
durante os longos dias do vero e aquelas que eclodem no fim da estao, nos dias
curtos do outono. O pigmento da asa posterior nas formas de dia curto mais escuro
do que nas borboletas de dia longo. Isso tem uma vantagem funcional durante os
meses mais frios do outono; as borboletas mais escuras de dia curto usam seus pig-
mentos para se aquecer entre os vos. Os pigmentos mais escuros absorvem a luz
mais eficientemente, aumentando a temperatura do corpo mais depressa do que os
pigmentos mais claros (Shapiro, 1968; 1978; Watt, 1968, 1969; Hoffmann, 1973;
veja Nijhout, 1991). [env3.html]
Nas zonas tropicais do mundo, freqentemente existem estaes secas e chuvo-
sas. Na frica, a borboleta do Malawi Bicyclus anynana tem um polifenismo que
adaptivo s mudanas sazonais. A forma da estao fria e seca crtica, parecendo as
folhas mortas de cor castanha do seu habitat. A forma da estao quente e chuvosa
mais ativa, e ela tem manchas em forma de olhos (ocelos) nas asas posteriores ven-
trais que desviam ataques de aves predadoras e lagartos (Figura 21.9). O fator deter-
minante parece ser a temperatura durante a pupao. Baixas temperaturas produzem
a forma da estao seca; altas temperaturas, a forma da estao chuvosa (Brakefield
e Reitsma, 1991). O desenvolvimento das manchas em forma de ocelos nas borbole-
tas comea nos estgios larvais tardios, quando a transcrio do gene Distal-less est
restrita a um pequeno foco que se tornar o centro de cada ocelo. Durante a fase
precoce do estgio pupal, a expresso de Distal-less vista em uma rea maior, e
considera-se que esse o sinal ativador que determina o tamanho da mancha. Final-
mente, as clulas recebendo o sinal determinam a cor que elas tero. As formas sazo-
nais de Bicyclus parecem divergir nos estgios mais adiantados da ativao de sinais
e diferenciao de cor (Figura 21.10; Brakefield et al., 1996).
(A) (B)
Figura 21.9
As duas formas sazonais da borboleta de Malawi, Bicyclus anynana. (A) A forma da estao
seca que se mistura a restos de folhas mortas, secas e escuras. (B) Forma da estao chuvosa com
visveis manchas em forma de ocelos das asas posteriores ventrais. A forma da estao chuvosa
pode ser mimetizada pelo cultivo da larva em temperaturas mais altas (23oC); larvas cultivadas em
temperaturas mais baixas (17oC, se aproximando das temperaturas na transio para a estao
seca) se desenvolvem na forma da estao seca. (De acordo com Brakefield et al., 1996; fotogra-
fias cortesia de S. Carroll e P. Brakefield.)
Figura 21.10 (A) (B) (C) (D)

Estgios do desenvolvimento levando for- Diviso Expresso de
mao das manchas em forma de ocelos. (A) A da asa Distal-less
expresso do gene Distal-less nas regies do
disco imaginal da asa onde h potencial para a T alta
formao das manchas em forma de ocelos.
(B) Focos de expresso de Distal-less so
estabilizados em regies especficas da asa. (C)
Na pupa, os focos de Distal-less se expandem.
(D) As clulas vizinhas respondem ao sinal T baixa
produzindo pigmentos especficos, dependen-
do de suas distncias do foco e de suas posi-
es na asa. No Bicyclus, as duas formas so Prepadronizao Determinao Sinalizao Diferenciao
indistinguveis at o estgio de sinalizao (C). Focal
(De acordo com Brakefield et al., 1996.)
Polifenismo nutricional
Nem todo polifenismo controlado pelas estaes. Nas abelhas, o tamanho da larva
fmea na muda pupal determina se o indivduo ser uma operria ou uma rainha. A
larva que alimentada com gelia real, rica em nutrientes, retm a atividade da sua
corpora allata durante o estgio do ltimo instar. O hormnio juvenil secretado por
esses rgos atrasa a pupao, fazendo com que a abelha emergente seja maior e (em
algumas espcies) mais especializada em sua anatomia (Figura 21.11A; Brian, 1974,
1980; Plowright e Pendrel, 1977). Os nveis de hormnio juvenil em larvas destina-
das a se tornar rainha 25 vezes maior que o ttulo das destinadas a serem operrias,
e a aplicao desse hormnio em larvas operrias pode transform-las em rainhas
(Wirtz, 1973; Rachinsky e Hartfelder, 1990).
Analogamente, colnias de formigas so predominantemente fmeas, e essas
podem ser extremamente polimrficas (Figura 21.11A). Os dois tipos principais de
fmeas so a operria e a gine. A gine uma rainha em potencial. Em espcies mais
especializadas, tambm se observa uma operria maior, o soldado. Na Pheidole
bicarinata, essas castas so determinadas pelos nveis de hormnio juvenil nas lar-
vas em desenvolvimento. Larvas recebendo alimento rico em protenas tm um ttulo
elevado de hormnio juvenil que causa uma abrupta mudana no desenvolvimento
(A) (B) (C)

Nascimento Nascimento
Operrios
secundrios
Operrios
Operrias principais
Gines Gines (soldados)
Figura 21.11
(A) Fotografia do notvel dimorfismo da formiga operria (esquerda) e a rainha (direita) na
espcie Pheidologeton diversus. As duas so irms, mas uma foi alimentada de tal maneira
que sua larva continua a crescer e finalmente se metamorfoseia em uma rainha frtil. (B,C)
Formao da gine (rainha) e da operria nas formigas. reas levemente coloridas representam
bipotencialidade para se tornarem operrias ou gines. O N no crculo representa uma troca
nutricional controlada pelo ambiente da larva. (B) Myrmica rubra, onde somente as larvas que
hibernam (OW) permanecem bipotenciais. No ltimo instar, a troca nutricional determina a casta.
(C) Pheidole pallidula, onde a rainha controla a determinao das gines, atravs dos hormnios
que agem durante a embriognese. (Fotografia com copirraite, cortesia de Mark W. Moffett na
National Geographic Society; B e C de acordo com Wheeler, 1986.)
que reprograma o tamanho no qual as larvas iniciaro a metamorfose. Isso causa

uma grande e descontnua diferena de tamanho entre as castas de soldados e oper-
rias, com a cabea e as mandbulas crescendo mais rapidamente do que o resto do
corpo. Essa reprogramao tambm envolve mudanas na atividade gnica, pois as
protenas cuticulares das operrias e dos soldados so diferentes (Passera, 1985;
Wheeler, 1991).
Em espcies diferentes, a determinao de casta pode ser ambiental, hormonal ou
a combinao de ambos. Os padres do desenvolvimento na determinao de castas
foram analisados por Diana Wheeler (1986, 1991) e esto resumidos na Figura
21.11B,C. Na maioria das espcies, larvas de formigas so bipotenciais at perto da
pupao. Na Myrmica rubra, somente larvas que hibernam permanecem bipotenciais.
Aps o inverno, a rainha estimula os operrios a subalimentar as larvas do ltimo
instar. Isso significa que enquanto houver uma rainha, no podero resultar outras.
Se as larvas so alimentadas, elas podem se tornar gines. Portanto, as larvas perma-
necem bipotenciais at bem tarde no seu ltimo instar. Em outras espcies como a
Pheidole pallidula, a rainha controla a formao de gines atravs de substncias qu-
micas que agem durante a embriognese, de modo a no se formarem novas rainhas.
Entretanto, as operrias permanecem bipotenciais e podem se tornar majoritrias ou
minoritrias, dependendo da nutrio.
Determinao sexual dependente do ambiente

sexual
Existem muitas espcies onde o ambiente determina se o indivduo ser macho ou

fmea. A determinao sexual em peixes e rpteis, dependente da temperatura, repre-
senta o caso melhor estudado. A Figura 21.12 demonstra os principais padres de
determinao sexual dependente da temperatura em rpteis. Esse tipo de determina-
o sexual ambiental tem vantagens e desvantagens. Uma das vantagens que d s
espcies o benefcio da reproduo sexual sem limit-las a uma relao de sexos 1:1.
Nos crocodilos, onde extremos de temperatura produzem fmeas e temperaturas
moderadas produzem machos, a relao de sexos pode ser de at 10 fmeas para um
macho (Woodward e Murray, 1993). A maior desvantagem na determinao sexual
dependente da temperatura pode estar no estreitamento dos limites de temperatura
dentro dos quais uma espcie pode existir. Isso significaria que poluio trmica (ou
localmente ou por aquecimento global) pode realmente eliminar uma espcie em
uma determinada rea (Janzen e Paukstis, 1991). Ferguson e Joanen (1982) especu-
laram que os dinossauros podem ter tido uma determinao sexual dependente da
temperatura e que seu sbito desaparecimento pode ter sido causado por uma peque-
na mudana da temperatura criando condies onde somente machos ou fmeas
eclodiam de seus ovos.
Charnov e Bull (1977) argumentaram que a determinao sexual ambiental seria Figura 21.12
adaptativa em certos habitats caracterizados por retalhamento, havendo certas regi- Padres da determinao sexual dependente da
es onde mais vantajoso ser macho e outras onde mais vantajoso ser fmea. temperatura. Nos primeiros trs painis, dife-
Conover e Heins (1987) forneceram evidncia que em certos peixes, as fmeas se rentes temperaturas do a predominncia de
machos ou fmeas. No ltimo painel, a tempera-
tura no tem efeito. De acordo com Bull, 1980.)
Tartarugas mordedoras Alguns lagartos,
Lagartos, crocodilos Muitas tartarugas (e outras), crocodilos cobras e tartarugas
Porcentagem de fmeas
Temperatura (oC)
Figura 21.13
Relacionamento entre temperatura e razo sexual F:(F+M)
durante o perodo da determinao sexual em Menidia
menidia. Nos peixes coletados na poro mais norte da rea
(Nova Scotia), a temperatura teve pouco efeito na determina-
o sexual. Quando foram coletados embries de peixes em
locais mais ao sul (especialmente da Virginia para a South
Carolina), o ambiente teve um grande efeito. (De acordo com
Razo sexual: F/(F+M)

Conover e Heins, 1987.)
Norte
Nova Scotia
Prince Edward Island
New York
Virginia
North Carolina
South Carolina
Sul
beneficiam por serem maiores, pois tamanho se traduz em maior fecundidade. uma
vantagem nascer cedo na poca da reproduo para uma fmea Menidia, que teria um
perodo mais longo de alimentao e um tamanho maior. Nos machos, o tamanho no
tem importncia. Conover e Heins mostraram que na parte sul da rea da Menidia, as
fmeas realmente nascem cedo na estao de reproduo. A temperatura parece ter um
papel importante. Entretanto, na parte norte de sua regio, a mesma espcie no mos-
tra determinao sexual ambiental. Na verdade, uma relao 1:1 gerada em todas as
temperaturas (Figura 21.13). Os autores especulam que as populaes mais ao norte
tm uma estao de alimentao muito curta, de modo que no h vantagem para uma
fmea nascer antes. Portanto, essa espcie de peixes tem uma determinao sexual
ambiental nas regies onde adaptiva e uma determinao sexual genotpica nas
regies onde no adaptiva. Aqui, novamente, observa-se que o ambiente pode
induzir um fentipo sexual, ou o fentipo sexual pode ser uma propriedade do genoma,
como o caso na maioria dos mamferos.
Fatores ambientais imprevisveis

controlando o desenvolvimento animal
A maioria dos estudos de adaptao se preocupa com o papel assumido pelas estrutu-
ras adultas, permitindo que o indivduo sobreviva em ambientes precrios e hostis.
Entretanto, o embrio tambm deve sobreviver no seu habitat, e ele tem que faz-lo
antes que essas adaptaes adultas sejam feitas. Como j mencionado, a colorao
protetora da larva um dos exemplos, e a habilidade da larva em ingerir alimentos
txicos para seus predadores outro exemplo. Essas duas estratgias so
exemplificadas pelas lagartas das borboletas viceroy e monarca, respectivamente (veja
pgina 733). A temperatura no o nico fator ambiental que pode efetuar a determi-
nao sexual no peixe. O sexo do peixe limpador (wrasse) de cabea azul, um
peixe Panamenho, depende da populao que ele encontra. Se o embrio atinge um
recife onde um macho vive com muitas fmeas, o peixe limpador cresce e se acasala
como fmea. Quando o macho morre, uma das fmeas (usualmente a maior) se torna
macho. Dentro de um dia, seus ovrios regridem e seus testculos crescem. Se o

mesmo embrio tivesse chegado a um recife que no tivesse machos ou a um territ-
rio no defendido por um macho, o embrio se desenvolveria como um peixe limpa-
dor macho (Warner, 1993).
Defesas induzveis contra a predao
Alguns embries so protegidos das condies ambientais por materiais secretados

dentro do ovo ou ao seu redor. Em outros casos, o ambiente induz uma via especfica
de desenvolvimento em lugar da via normal. Na lagarta Nemoria, a dieta altera o
fentipo e protege o indivduo da predao. Alguns animais levaram isso um passo a
frente: O desenvolvimento de um jovem modificado por substncias liberadas pelo
prprio predador, permitindo aos jovens escapar desses mesmos predadores. Isso
algumas vezes chamado de defesa induzida pelo predador (ou polifenismo indu-
zido pelo predador).
Para demonstrar defesa induzida pelo predador, deve-se demonstrar que a mu-
dana fenotpica causada pelo predador (geralmente por substncias solveis libe-
radas pelo predador) e que a modificao fenotpica aumenta a aptido de seus porta-
dores quando o predador est presente (Adler e Harvell, 1990).* Por exemplo, vrias
espcies de Daphnia e rotferos alteraro sua morfologia quando desenvolvidos em
guas onde seus predadores foram cultivados (Figura 21.14; Dodson, 1989; Adler e
Harvell, 1990). O rotfero predatrio Asplanchna libera na gua um composto sol-
vel que induz os ovos de uma espcie de presa, Keratella slacki, a se desenvolver em
indivduos com um corpo ligeiramente maior, mas com espinhas anteriores 130%
mais longas do que seria o normal. Essas modificaes as torna mais difceis de
serem devoradas. O caracol Thais lamellosa desenvolve uma concha mais grossa e
um dente na sua abertura quando exposto ao efluente das espcies de caranguejo
que so seus predadores. Em uma populao mista, os caranguejos no atacam os
caracis mais espessos at que mais de 50% dos normais tenham sido devorados
(Palmer, 1985). Figura 21.14
Polifenismo envolvendo predadores no se limita aos invertebrados. McCollum Polifenismo induzido por predadores. Formas
e Van Buskirk (1996) mostraram que na presena de seus predadores, a nadadeira da tpicas (linha superior) e induzidas por preda-
cauda da r de rvore Hyla chrysoscelis cresce mais e se torna vermelho brilhante. dores (linha inferior) em vrios organismos.
Os nmeros abaixo de cada coluna represen-
tam a porcentagem de organismos sobreviven-
*O fenmeno da ciclomorfose, no qual h uma variao cclica da morfologia em certas espcies de
do predao, quando indivduos induzidos e
Daphnia (Woltereck, 1909), no foi correlacionado com um predador especfico. O fenmeno pode ser
devido a outros fatores (Dodson, 1989).
no induzidos foram submetidos a predadores
(em vrios ensaios). (Dados de Adler e Harvell,
1980 e referncias neles citados.)
Forma
tpica
Abertura Inflado e
grossa com dente com corcova
Forma
induzida
por
predador
Cladocera Rotfero Cirrpede Bryozoa Molusco (Thais) Carpa (Carassius)

(Daphnia) (Keratella) (Chthalamus) (Membranipora)
Sem predao at que
50% das formas tpicas
Sobrevivncia (tpica/induzida) sejam devoradas
Isso permite que o girino se afaste nadando rapidamente e desvie golpes na regio da
cauda. A carpa Carassius carassius reponde presena do lcio (pike) predatrio
somente se esse j se alimentou com peixe. A carpa cresce adquirindo uma forma
entumecida e com uma corcova que no mais se ajusta s mandbulas do lcio. Como
na maioria das defesas induzidas pelo predador, existe uma contrapartida (ou ento
seria de se esperar que a forma induzida se tornasse o fentipo normal). Nesse caso, a
morfologia induzida produz um retardamento nas condies de natao, e o peixe mais
gordo no pode nadar to eficientemente (Brnmark e Pettersson, 1994). A Figura
21.14 mostra as formas tpicas e as induzidas pelo predador para vrias espcies. Em
cada caso, filtrados solveis da gua envolvendo o predador so capazes de induzir
essas modificaes. Como mostra a Figura 21.14, a forma induzida mais susceptvel
a sobreviver ao seu predador. [env4.html]
Plasticidade fenotpica e mudanas no ambiente
O sapo p de espada (spadefoot toad), Scaphiopus couchii, tem um ciclo de vida

extraordinrio. Os sapos terminam a hibernao com o barulho do trovo que acom-
panha as primeiras tempestades da primavera no deserto de Sonoran. (Infelizmente,
motocicletas produzem o mesmo som, fazendo com que esses sapos saiam da hiber-
nao e morram no escaldante sol do Arizona.) Os sapos se reproduzem nas lagoas
temporrias formadas pelas chuvas, e os embries se desenvolvem rapidamente em
larvas. Aps a metamorfose das larvas, os novos sapos retornam ao deserto, se afun-
dando na areia at que as tempestades do ano seguinte os tragam para fora.
As lagoas do deserto so poas efmeras e tanto podem secar rapidamente como
persistir por algum tempo, dependendo da profundidade inicial e a freqncia das
chuvas. Poderia se considerar que existem somente dois cenrios alternativos con-
frontando o embrio do sapo: ou (1) a lagoa persiste at que ele sofra a metamorfose
e ele vive, ou (2) a lagoa seca antes da metamorfose e ele morre. Esses sapos (e
numerosos outros anfbios), entretanto, desenvolveram uma terceira alternativa. A
poca da metamorfose controlada pela lagoa. Se essa no seca, o desenvolvimento
continua em uma velocidade normal, e os girinos se alimentando de algas finalmente
se transformam em sapos p de espada juvenis. Entretanto, se a lagoa est secando,
se cria uma superpopulao e alguns dos girinos embarcam em uma via alternativa
de desenvolvimento. Eles desenvolvem uma boca mais larga e necessitam de mscu-
los mais fortes nas mandbulas que os permita comer, entre outras coisas, outros
girinos de Scaphiopus. Esses girinos carnvoros sofrem uma rpida metamorfose,
ainda que em uma verso menor do sapo p de espada juvenil. Mas eles sobrevivem,
enquanto que os outros girinos Scaphiopus morrem ou por dessecao ou ingeridos
por seus companheiros de lagoa (Figura 21.15; Newman, 1989, 1992).
Grupo de msculo Grupo de msculo

hiideos da mandbula hiideos da mandbula
Figura 21.15
Polifenismo nos girinos do sapo p de espada, Msculo Musculo
interhiideo interhiideo
Scaphiopus couchii. A forma tpica a onvo-
ra, usualmente se alimentando de insetos e al-
gas. Quando as lagoas esto secando forma- Alas Alas
da a forma carnvora (canibalstica). A boca intestinais intestinais
mais larga, os msculos das mandbulas so
maiores, e o intestino modificado para uma di- CARNVORO
eta carnvora. (Fotografia e desenho cortesia (outros girinos) ONVORO (camaro do mar,
de R. Ruibel.) Superfcie ventral algas) Superfcie ventral
Essa plasticidade fenotpica vista tambm em larvas de equinodermos. Quando o

alimento est escasso, os membros ciliados da larva pluteus crescem mais longos e
aumenta a habilidade da larva em obter alimento. Mas isso feito com um custo para
o rudimento do adulto que cresce dentro da larva, e leva mais tempo para essas plutei
de membros longos (mesmo que elas possam adquirir alimento) sofrerem metamorfose
(Hart e Strathmann, 1994).
A plasticidade fenotpica d ao indivduo a habilidade para responder s diferen-
tes condies ambientais. Diferentes fentipos se adaptam melhor em diferentes
ambientes. No sapo p de espada, a forma de rpido desenvolvimento mais adequa-
da para lagoas que secam rapidamente, mas os sapos de desenvolvimento lento (os
quais se desenvolvem em sapos maiores, e mais robustos) so mais adequados para
condies com mais gua. Existe um custo nessa plasticidade fenotpica, mas asse-
gurado que sempre alguns animais sobrevivero em cada condio.
& Especulaes
Assimilao Gentica
a discusso sobre a relao custo/ Presumivelmente sua pele, como a de
N benefcio entre formas induzidas

e no induzidas, foi mencionado
que se a forma induzida no tivesse um cus-
to significativo, seria de se esperar que essa
outros animais, reagiria diretamente
presso externa e frico tornando-se
mais espessa... Essa capacidade para
reagir deve ser dependente de genes...
se tornasse a forma predominante da esp- No deve ser difcil que ocorra uma
cie. Isso foi previsto independentemente por mutao gnica que modificar alguma
C. H. Waddington e I. I. Schmalhausen para outra rea no embrio, de tal maneira
explicar como algumas espcies podiam que ela passa a assumir a funo da pres-
evoluir rapidamente em determinadas dire- so externa, interagindo com a pele, de
es (veja Gilbert, 1994). Ambos estavam modo a puxar o gatilho e desencade-
impressionados com os calos encontrados ar o desenvolvimento de calosidades.
nos ps de avestruzes. Na maioria dos ma-
mferos, a pele capaz de formar calos nas Por essa transferncia de induo, de um
reas que se desgastam em contacto com o indutor externo para um interno, um car-
solo ou outra superfcie.* ter induzido pelo ambiente se tornou parte
Aqui, as clulas da pele respondem do genoma do organismo e pode ser seleci-
frico proliferando-se. Apesar dos exem- onado. Waddington chamou esse fenme-
plos de calos induzidos pelo ambiente seno de assimilao gentica enquanto
rem muito difundidos, o avestruz nasce com Schmalhausen (1949) chamou-o de sele-
calos onde tocar o solo (Figura 21.16). o estabilizada. Ambos os cientistas usa-
Waddington e Schmalhausen propuseram ram a embriologia e a gentica ortodoxas
que as clulas da pele j so competentes para explicar exemplos que haviam sido
para serem induzidas pela frico, elas po- considerados casos Lamarckianos de he-
Figura 21.16
deriam ser induzidas por outras coisas tam- rana de caractersticas adquiridas.
Lado ventral de um avestruz; a flecha marca os
bm. Com a evoluo dos avestruzes, uma A transferncia de estmulos ambientais
calos. (de Waddington, 1942.)
mutao permitiu que as clulas da pele res- para estmulos genticos pode ser vista na
pondessem a uma substncia dentro do determinao sexual em Menidia e na de- truturas larval e juvenil paralela quela
embrio. Waddington (1942) escreveu: terminao de casta em formigas. Analo- vista onde as reservas de alimento so esto-
gamente, a plasticidade de desenvolvimen- cadas no ovo. Portanto, as trocas j presen-
to preexistindo nas larvas alimentares nos tes como adaptaes s fontes externas de
* E at este sculo, escritores eram reconheci-
equinodermos pode ter sido a ponte na tran- recursos alimentares poderiam ter se torna-
dos pelos calos em seus dedos. (Portanto, da obser-
vao dos seus dedos, Sherlock Holmes corretamen- sio da larva pluteus (alimentar) para a lar- do geneticamente fixas naquelas espcies
te deduziu que o homem ruivo havia sido contrata- va que no tem os membros ciliados. A tro- cujas larvas no precisam procurar seu ali-
do como um escriba.) ca na distribuio de recursos entre as es- mento (Strathmann et al., 1992).
Se a assimilao gentica indica a fixa- adaptivo ao dia curto (clima frio) de vrias A assimilao gentica pode ter um
o de um dos fentipos adaptivamente ex- borboletas o mesmo que o nico fentipo, papel importante fornecendo um vis
pressos, ento as borboletas seriam uma boa geneticamente produzido, de espcies re- para mudanas evolucionrias. Se um or-
fonte onde encontrar mais exemplos. Bra- lacionadas ou subespcies vivendo em al- ganismo herda uma norma de reao, as
kefield e colegas (1996) mostraram que po- tas altitudes ou latitudes. Pode-se tambm vias de desenvolvimento levando a um
diam fixar geneticamente as diferentes for- produzir o fentipo de clima frio incuban- fentipo particular j esto colocadas, e
mas do polifenismo adaptivo de Bicyclus, do no refrigerador as larvas ou pupas das tudo o que a evoluo deve fazer suprir
e Shapiro (1976) mostrou que o fentipo borboletas da estao quente. [env5.html] um iniciador constante dessas vias.
A contnua plasticidade do desenvolvimento

A habilidade de um organismo em monitorar e responder mudana ambiental
crtica para a sobrevivncia em habitats complexos. Nossos dois principais sistemas
sensoriais, os sistemas nervoso e imune, nos permite regular desenvolvimentalmente
nosso corpo em resposta aos estmulos ambientais.
O sistema imune: Desenvolvimento no adulto
Se o polifenismo induzido por predadores uma resposta adaptativa s ameaas

potenciais, o sistema imune dos mamferos seu maior feito. O sistema imune dos
mamferos um mecanismo incrivelmente elaborado para detectar e destruir materi-
ais estranhos ao corpo. Quando somos expostos a uma molcula estranha (chamada
antgeno), ns produzimos anticorpos e os secretamos no soro sangneo (veja Cap-
tulos 10 e 17 para detalhes). Os anticorpos combinam com os antgenos inativando-os
ou eliminando-os. A base da resposta imune resumida na hiptese da seleo clonal
(Burnett, 1959). Ela contm cinco postulados principais:
1. Cada linfcito B (clula B) pode produzir um e somente um tipo de anticorpo.

Ou seja, uma clula B pode estar produzindo um anticorpo que se liga ao
poliovrus, enquanto uma clula vizinha pode estar produzindo um anticorpo
que se liga toxina diftrica.
2. Cada clula B colocar o anticorpo que produz na sua membrana celular com
o lado portador da especificidade voltado para fora.
3. Os antgenos so apresentados s clulas B (geralmente na superfcie dos
macrfagos).
4. Somente aquelas clulas B que se ligam ao antgeno podem completar seu
desenvolvimento em clulas plasmticas secretoras de anticorpo. As clulas
B dividem-se repetidamente, produzem um extenso retculo endoplasmtico
rugoso, e sintetizam enormes quantidades de molculas de anticorpos. Esses
anticorpos so secretados no sangue.
5. A especificidade do anticorpo exatamente a mesma daquela na superfcie
celular das clulas B.
O tipo de molcula de anticorpo na superfcie celular da clula B determinado

por acaso. De dez milhes de tipos de anticorpos proticos que a clula pode sinteti-
zar, cada clula B produz somente um tipo. Essas clulas B so continuamente cria-
das e destrudas. Entretanto, quando um antgeno se liga a um conjunto de clulas B,
essas clulas so estimuladas a se dividir e se diferenciar em clulas plasmticas (que
secretam o anticorpo) e clulas de memria (que populam os ndulos linfticos e
respondem rapidamente quando expostas mais tarde ao mesmo antgeno) (Figura
21.17). Portanto, a constelao de clulas plasmticas e de memria de cada pessoa
difere dependendo de quais antgenos ela encontrou. Gmeos idnticos tm diferen-
tes populaes de descendentes de clulas B em seus baos e ndulos linfticos.
Anticorpo na superfcie Anticorpo na superfcie

Linfcito celular reconhecendo o celular reconhecendo o
Clula B em repouso antgeno A antgeno B
Dia 1 Ncleo
Citoplasma Antgeno A
Sem diviso ou diferenciao
Clones de dos linfcitos cujos anticorpos
linfcito da superfcie celular no
em repouso reconhecem o antgeno A
Ribossomos
Dia 2 Figura 21.17
Modelo de seleo clonal na formao de
Molculas de
anticorpo so
anticorpos. Cada clula B produz um tipo par-
sintetizadas no ticular de protena de anticorpo (imunoglobuli-
retculo na) e a expe na sua superfcie celular. Quando
endoplasmtico um antgeno (estranho ao corpo) se liga s pro-
tenas do anticorpo na membrana da clula B, a
Dia 3 clula B est apta a se dividir e se diferenciar
Proliferao em uma clula plasmtica secretora de
anticorpos. A clula plasmtica secreta somente
Retculo aquele tipo especfico de anticorpo que foi ori-
endoplasmtico
ginalmente produzido pela clula B.
Dia 4
Diferenciao
Clula de
Anticorpo anti-A secretado memria
Clula
plasmtica
Dia 5
Anticorpo secretado
Aprendizado: Um sistema nervoso adaptvel ao ambiente
No Captulo 8, discutimos como a atividade pode ser um fator crtico na deciso de

quais sinapses neuroniais so retidas pelo organismo adulto. Aqui, estenderemos
aquela discusso para realar aquelas situaes extraordinrias onde novas experin-
cias modificam o conjunto original de conexes neuroniais, causando a criao de
novos neurnios ou a formao de novas sinapses entre neurnios existentes. Como
neurnios aps formados no se dividem, o seu aniversrio pode ser identificado
tratando o organismo com timidina radioativa. Normalmente, muito pouca timidina
radioativa incorporada no DNA de um neurnio que j se formou. Entretanto, se um
novo neurnio se diferencia por diviso celular durante o tratamento, ele incorporar
a timidina radioativa no seu DNA. A produo de tais novos neurnios pode ser
observada em machos de aves canoras quando esses aprendem suas canes. Os
tentilhes-zebra juvenis memorizam uma msica modelo e em seguida aprendem o
padro de contraes musculares necessrias para cantar uma frase especfica. Nesse
processo de aprendizado e repetio, so gerados novos neurnios no corpo
hiperestriado do crebro do tentilho. Muitos desses novos neurnios enviam axnios
ao arquistriado que responsvel pelo controle da musculatura vocal (Nordeen e
Nordeen, 1988). Essas modificaes no so observadas em machos que so muito
velhos para aprender a msica, e nem em fmeas juvenis (que no cantam essas
frases); isso discutido mais completamente no Captulo 20.
Os crtices cerebrais de ratos jovens criados em ambiente estimulante tm mais

neurnios, sinapses e dendritos do que so encontrados em animais criados isolados
(Turner e Greenough, 1983). Mesmo o crebro adulto est se desenvolvendo em
resposta s novas experincias. Quando canrios adultos aprendem uma nova msi-
ca, eles geram novos neurnios cujos axnios se projetam de uma regio vocal do
crebro a outra (Alvarez-Buylla et al., 1990). Analogamente, quando ratos adultos
aprendem a se equilibrar sobre cilindros de madeira, seus neurnios das clulas de
Purkinje do cerebelo desenvolvem novas sinapses (Black et al., 1990). Portanto, o
sistema nervoso continua a se desenvolver na vida adulta, e o padro das conexes
neuroniais o produto do padro herdado e do padro produzido pelas experincias.
Essa interao entre o desenvolvimento inato e o experimental foi detalhada o mais
dramaticamente em estudos da viso em mamferos.
MUDANAS EXPERIMENTAIS NAS VIAS VISUAIS INERENTES NOS MAM-

FEROS. Algumas das pesquisas mais interessantes sobre padronizao neuronial
em mamferos se concentram nos efeitos da privao sensorial no desenvolvimen-
to do sistema visual em gatinhos e macacos. As vias pelas quais os impulsos
eltricos passam da retina ao crebro nos mamferos esto ilustradas na Figura
21.18. Os axnios das clulas ganglionares da retina formam os dois nervos pticos,
que se encontram no quiasma ptico. Como nos girinos de Xenopus, algumas
fibras vo para o lado oposto (contralateral) do crebro, mas diferentemente da
maioria dos outros vertebrados, as clulas retinianas dos mamferos tambm envi-
am sinais para o mesmo lado (ipsilateral) do crebro. Esses nervos terminam nos
dois ncleos geniculados laterais. Aqui, a entrada de cada olho mantida separa-
da, as camadas mais superiores e anteriores recebendo os axnios do olho contra-
lateral, e o meio dos corpos recebendo a entrada do olho ipsilateral. A situao se
torna mais complicada quando os neurnios do ncleo geniculado lateral se
conectam com os neurnios do crtex visual. Mais de 80% das clulas neurais no
crtex recebem entradas de ambos os olhos. O resultado viso binocular e per-
cepo de profundidade. Outro conhecimento importante que a projeo
retinocortical a mesma para os dois olhos. Se um neurnio cortical estimulado
por luz reluzindo atravs de uma regio do olho esquerdo, 5o acima e 1o esquerda
da fvea,* ele tambm ser estimulado por uma luz reluzindo atravs de uma re-
gio do olho direito, 5o acima e 1o esquerda da fvea. Alm disso, a resposta
evocada na clula cortical quando ambos os olhos so estimulados maior do que
a resposta quando cada retina estimulada sozinha.
Hubel, Wiesel e seus colaboradores (veja Hubel, 1967) demonstraram que o
desenvolvimento do sistema nervoso depende at certo ponto da experincia do
indivduo durante um perodo crtico do desenvolvimento. Em outras palavras, nem
todo o desenvolvimento neuronial est codificado no genoma: uma parte aprendi-
da. A experincia parece reforar ou estabilizar algumas conexes neuroniais que j
esto presentes no nascimento e enfraquecer ou eliminar outras conexes. Essas
concluses vm de estudos de privao sensorial parcial. Hubel e Wiesel (1962,
1963) fecharam com costura as plpebras direitas de gatos recmnascidos e as
deixaram fechadas durante trs meses. Aps esse tempo, eles descosturaram as
plpebras direitas. As clulas corticais desses gatos no puderam ser estimuladas
por luz brilhante no olho direito. Quase todas as entradas no crtex visual vinham
somente do olho esquerdo. O comportamento dos gatinhos revelava a ineficincia
do olho direito: quando o olho esquerdo desses animais foi vedado, eles se torna-
ram funcionalmente cegos. Como os neurnios geniculados laterais pareciam ser
estimulados pelos dois olhos, direito e esquerdo dos gatinhos, o defeito fisiolgico
parecia ser entre os ncleos geniculados laterais e o crtex visual. Nos macacos
*A fvea uma depresso no centro da retina onde somente os cones esto presentes e os bastonetes
e vasos sangneos esto ausentes. Aqui ela se torna um marco conveniente.
(A) Olho direito Olho esquerdo
Retina
Nervo
ptico
Quiasma
ptico
Ncleo
geniculado
lateral
Radiaes pticas
Crtex visual
Vias visuais do olho direito (vista da Vias visuais do olho esquerdo Vias visuais combinadas,
superfcie ventral do crebro) esquerda e direita
Figura 21.18
Vias principais do sistema visual de mamfe-
ros. (A) Em mamferos, o nervo ptico de cada
olho se ramifica, enviando fibras nervosas a
um ncleo geniculado lateral em cada lado do
crebro. No lado ipsilateral, uma parte espec-
fica da retina vai a uma parte especfica do n-
cleo geniculado lateral. No lado contralateral,
o ncleo geniculado lateral recebe entradas de
todas as partes da retina. Neurnios de cada
ncleo geniculado lateral inervam o crtex vi-
sual no mesmo lado. (B,C) Retinas isoladas (e
filetadas) mostrando projees ipsilaterais (B)
(B) (C)
e contralaterais (C), das clulas ganglionrias
da retina de um embrio de camundongo de 16
dias. O corante fluorescente carbocianina DiI
foi inserido atrs do quiasma ptico, e foi per-
mitido que o corante penetrasse nos axnios
rhesus, onde fenmenos semelhantes so observados, o defeito foi relacionado
retinianos. O corante se difunde ao longo dos
falta de sntese de protenas nos neurnios geniculados laterais inervados pelo axnios, assim demarcando a sua origem. Pro-
olho coberto (Kennedy et al., 1981). jees ipsilaterais na sua maioria vm de uma
Seria tentador concluir que a cegueira resultante foi devida no formao de nica parte da retina (neste caso, da regio
conexes visuais apropriadas, mas esse no o caso. Realmente, quando um gato ventro-temporal). Projees contralaterais para
nasce, axnios dos neurnios geniculados laterais recebendo entradas de cada olho o mesmo stio vm de toda a retina. (B e C de
se superpe extensivamente no crtex visual (Hubel e Wiesel, 1963). Entretanto, Colello e Guillery, 1990, cortesia dos autores.)
quando um olho coberto muito cedo na vida do filhote, suas conexes com o crtex
visual so assumidas por aquelas do outro olho (Figura 21.19). Existe competio, e
a experincia tem um papel na fortificao e estabilizao das conexes de cada
ncleo geniculado lateral ao crtex visual. Portanto, quando ambos os olhos do gati-
nho so costurados durante 3 meses, a maioria das clulas corticais pode ser estimu-
lada pela iluminao apropriada de um ou outro olho. O tempo crtico no desenvolvi-
mento do gato para essa validao das conexes neuroniais comea entre a quarta e a
sexta semana na vida do animal. A privao monocular at a quarta semana produz
pouca ou nenhuma deficincia fisiolgica, mas aps 6 semanas ela produz todas as
mudanas neuroniais caractersticas. Se um gatinho teve uma experincia visual du-
rante os primeiros 3 meses, qualquer privao monocular posterior (mesmo por um
ano ou mais) no tem efeito. As sinapses se estabilizaram.
(B)
(A)
(C) (D) Camada cortical 3
Camada cortical 4
Figura 21.19
Auto-radiografia de fundo escuro do crtex
estriado de macaco, 2 semanas aps injeo de
[3H]prolina no humor vtreo de um olho. Cada
neurnio retiniano absorve a marcao radioa-
tiva e a transfere para as clulas com as quais
forma sinapses. (A) Padro normal de marca-
o. As listas brancas indicam que cerca da
Portanto, dois princpios podem ser visualizados na padronizao do sistema
metade das colunas absorveram a marcao,
enquanto a outra metade no a obsorveu; esse visual nos mamferos. Primeiro, conexes neuroniais envolvidas na viso esto
padro indica que metade das clulas estavam presentes mesmo antes que o animal enxergue; e segundo, a experincia tem um
inervadas pelo olho marcado e metade pelo olho papel importante na determinao de quais conexes permanecem.* Da mesma
no marcado. (B) Padro de marcao quando maneira que a experincia refina as conexes neuromusculares originais, ela tam-
o olho no marcado permaneceu fechado por bm tem um papel no refinamento e melhora das conexes visuais. tambm
suturas durante 18 meses. As projees possvel, que funes adultas como aprendizado e memria se originam no esta-
axnicas do olho normal (marcado) assumem belecimento e/ou reforo de diferentes sinapses pela experincia. Purves e
as regies que normalmente seriam inervadas
Lichtman (1985) observaram:
pelo olho suturado. (C,D) Desenhos de axnios
dos ncleos geniculados de gatinhos que tive-
ram um olho ocludo por 33 dias. A ramifica- A interao entre animais individuais e seu mundo continua a moldar o sistema
o terminal dos axnios no olho ocludo (C) nervoso atravs da vida de uma maneira impossvel de ter sido programada.
foi muito menos extensa do que aquela do Modificao do sistema nervoso pela experincia , portanto, a ltima e mais
olho no ocludo (D). (A e B de Wiesel, 1982, sutil estratgia desenvolvimental.
cortesia de T. Wiesel; C e D de acordo com
Antonini e Stryker, 1993.)
*Estudos recentes (Colman et al., 1997) mostraram que a divergncia na liberao de
neurotransmissores resulta em modificao da adesividade sinptica e causa a remoo do axnio
fornecendo a estimulao mais fraca. Os que estudaram neurobiologia se lembraro (se potenciados
adequadamente) que o conceito da sinapse de Hebbian se baseia na premissa que a experincia
influencia vias neuroniais. Se um axnio do neurnio A ativa o neurnio B, de tal maneira que o
disparo de B est sempre associado ao de A, ento a sinapse entre os neurnios A e B reforada.
Existem vrias maneiras pelas quais esse reforo poderia ocorrer, mas a maioria das hipteses
focalizam as modificaes que permitiriam a entrada mais rpida de ons de clcio no neurnio B.
Esse tipo de sinapse poderia explicar o fenmeno de potenciao de longo prazo, a qual conside-
rada como a base da memria correlativa (onde uma sensao relembra outras). Tais mecanismos
Hebbianos podem mediar a competio entre os axnios dos ncleos geniculados laterais por clulas
no crtex visual (Stent, 1973; Reite e Stryker, 1988).
Q DISTRBIOS AMBIENTAIS DO
DESENVOLVIMENTO NORMAL
Malformaes e distrbios
Da primeira parte deste captulo, ficou claro que as instrues para o desenvolvimen-
to no residem completamente nos genes ou mesmo no zigoto. O organismo sens-
vel s sugestes do ambiente. Entretanto, isso torna o organismo vulnervel s mu-
danas ambientais que podem provocar distrbios no desenvolvimento.
Se parece surpreendente que qualquer um de ns sobrevive para nascer, isso
real; estima-se que da metade a dois teros de todas as concepes humanas no se
desenvolvem a termo com sucesso (Figura 21.20). Muitos desses embries expres-
sam sua anormalidade to cedo que no h implantao no tero. Outros se implan-
tam mas no conseguem estabelecer uma gravidez de sucesso. Portanto, a maioria
dos embries anormais so espontaneamente abortados antes mesmo que a mulher
saiba que est grvida (Bou et al., 1985). Edmonds e colaboradores (1982) usando
um teste imunolgico muito sensvel que pode detectar a presena de gonadotropina
corinica humana (hCG) 8 ou 9 dias aps a fertilizao, monitoraram 112 gestaes
em mulheres normais. Dessas gestaes determinadas por hCG, 67 no foram mantidas.
Parece, ento, que muitos embries humanos so prejudicados cedo no desenvol-
vimento e no sobrevivem por muito tempo no tero. Os defeitos nos pulmes, mem-
bros, face ou boca no seriam deletrios para o feto (que no depende desses rgos
enquanto dentro da me), mas podem ameaar seriamente a vida aps o nascimento.
Cerca de 5% de todos os nascimentos humanos tm uma malformao reconhecvel,
algumas leves, outras muito severas (McKeown, 1976).
Anormalidades congnitas (no nascimento) e a eliminao de embries e fetos
antes do nascimento so causadas tanto intrinsecamente como extrinsecamente. As
anormalidades causadas por eventos genticos (mutaes, aneuploidia, translocaes)
so chamadas malformaes. Por exemplo, aniridia (ausncia da ris) causada pela
Figura 21.20
mutao do gene PAX6, uma malformao. A sndrome de Down, causada pela Os destinos hipotticos de 20 ovos que so
trissomia do cromossomo 21, tambm uma malformao. A maior parte da elimina- fertilizados naturalmente nos Estados Unidos
o precoce de embries e fetos provavelmente devida s anormalidades e Europa ocidental. Em condies normais,
cromossmicas que interferem com o processo normal do desenvolvimento. somente 6.2 ovos dos 20 originais teriam
possibilidade de se desenvolver a termo com
sucesso. (De acordo com Volpe, 1987.)
vulos em contacto com

o espermatozide
Fertilizao bem sucedida
Implantao bem sucedida
Desenvolvimento bem
sucedido, 4 semanas
Desenvolvimento bem Nmero de

sucedido, 8 semanas sobreviventes
dos 20 originais
Fetos levados a termo
Porcento
Tabela 21.2 Alguns agentes conside- Anormalidades devidas a agentes exgenos (certos agentes qumicos ou vrus,
rados causadores de distrbios no de- radiao ou hipertermia) so chamados distrbios. Os agentes responsveis pelos
senvolvimento fetal humanoa distrbios so chamados teratognicos (do Grego, formadores de monstros), e o
DROGAS E SUBSTNCIAS QUMICAS estudo de como agentes ambientais rompem o desenvolvimento normal chamado
cido retinico (Isotretinoina, Accutane) teratologia.* Teratognicos funcionam durante certos perodos crticos no desenvol-
cido valprico vimento. O perodo mais crtico para qualquer rgo quando ele est crescendo e
Agentes antitirideos (PTU) formando suas estruturas. Diferentes rgos tm diferentes perodos crticos, apesar
lcool
Aminoglicosdeos (Gentamicina) do espao de tempo entre 15 e 60 dias ser crtico para muitos rgos. O corao se
Aminopterina forma primariamente durante as semanas 3 e 4, enquanto a genitlia externa mais
Bromo sensvel nas semanas 8 e 9. O crebro e o esqueleto so sempre sensveis, do comeo
Chumbo da semana 3 at o fim da gravidez e alm.
Cocana
Cortisona
Dietilestilbesterol (DES) Agentes teratognicos
Difenilhidantona
Estreptomicina Agentes diferentes so teratognicos em diferentes organismos. Uma lista parcial de
Fumaa de cigarro
Herona agentes teratognicos no homem est apresentada na Tabela 21.2.
Metilmercrio A principal classe de teratognicos inclui drogas e compostos qumicos
Penicilamina ambientais. Alguns compostos qumicos que so encontrados naturalmente no
Talidomida ambiente podem causar defeitos de nascimento. Mesmo nos puros campos alpi-
Tetraciclina
Trimetadiona nos intocados das Montanhas Rochosas so encontrados teratognicos. Aqui nasce
Warfarina o repolho de gamb Veratrum californicum, que algumas vezes serve de alimento
para os carneiros. Se ovelhas grvidas se alimentam dessa planta, seus fetos ten-
RADIAO IONIZANTE (RAIOS-X) dem a desenvolver graves danos neurolgicos, incluindo ciclopia, a fuso dos
HIPERTERMIA dois olhos no centro da face (Figura 21.21). Essa condio tambm ocorre no
homem, porco e muitos outros mamferos; o organismo afetado morre logo aps
MICROORGANISMOS INFECCIOSOS o nascimento (como resultado do grave defeito no crebro, incluindo a falta da
Cytomegalovrus glndula pituitria).
Herpes simplex
Parvovrus Quinina e lcool, duas substncias derivadas de plantas, podem tambm causar
Rubola (Sarampo Alemo) malformaes. A quinina pode causar surdez, e o lcool (quando mais de 60-90 g por
Toxoplasma gondii (toxoplasmose) dia so ingeridas pela me) pode causar retardamento fsico e mental na criana. No
Treponema pallidum (sfilis) foi provado que a nicotina e a cafena causam anomalias congnitas, mas mulheres
Vrus Coxsackie
que fumam muito (20 cigarros ou mais por dia) podem ter crianas menores que
CONDIOES METABLICAS NA ME aquelas nascidas de mes que no fumam. Fumar tambm diminui significativamente o
Doena auto-imune nmero e a motilidade de espermatozides em homens que fumam pelo menos quatro
(incluindo incompatibilidade de Rh) cigarros por dia (Kulikauskas et al., 1985).
Diabetes
Deficincias dietticas, malnutrio Alm disso, nossa sociedade industrial produz anualmente centenas de novos
Fenilcetonria compostos artificiais que passam para o uso geral. Pesticidas e compostos orgnicos
de mercrio tm causado anormalidades neurolgicas e de comportamento em bebs
Fonte: Adaptado de Opitz, 1991. cujas mes os ingeriram durante a gravidez. Uma trgica demonstrao disso ocorreu
a
Esta lista inclui agentes teratognicos conheci-
dos e possveis e no exaustiva.
em 1965, quando uma firma japonesa despejou mercrio em um lago, onde foi inge-
rido pelos peixes que foram comidos por mulheres grvidas da aldeia de Minamata.
O dano cerebral congnito e a cegueira nas crianas nascidas se tornou conhecido
como a doena de Minamata.
Em alguns casos, as mesmas condies podem ser causadas por um distrbio (causado por um agente
exgeno) ou uma malformao (do ncleo). Por exemplo, certas malformaes axiais em camundongos
podem ser produzidas pela administrao de cido retinico ou por mutaes em certos genes Hox. Consi-
dera-se que, em alguns casos, a mutao e o teratognico esto afetando a mesma enzima. A
condroplasia puntacta um defeito congnito do osso e da cartilagem, caracterizada por uma
mineralizao anormal do osso, subdesenvolvimento da cartilagem nasal e dedos encurtados; esse
defeito causado por um gene defeituoso no cromossomo X. Um fentipo idntico produzido pela
ingesto de warfarina, o composto que mata ratos. Parece que o gene defeituoso normalmente
responsvel pela produo de uma protena, a arilsulfatase, necessria para o crescimento da carti-
lagem. O composto warfarina inibe essa mesma enzima (Franco et al., 1995).
cido retinico como um teratgeno
Em alguns casos, um composto usado para o desenvolvimento no corpo pode ter

efeitos deletrios se fornecido em grandes quantidades em tempos determinados.
O cido retinico importante na formao do eixo ntero-posterior do embrio de
mamferos e tambm na formao de membros. Nesse caso, o cido retinico
produzido de clulas discretas e funciona em uma pequena rea. Entretanto, se
cido retinico fornecido pela me em grandes quantidades, as clulas respon-
dem a isso, pois normalmente no receberiam concentraes to altas dessa mol-
cula. No Captulo 16, discutimos o efeito do cido retinico no desenvolvimento
do camundongo. No corpo, vitamina A e cido 13-cis-retinico so isomerizados
s formas ativas de cido retinico no desenvolvimento, cido retinico todo- Figura 21.21
trans- e cido retinico 9-cis (Creech Kraft, 1992). O cido retinico no pode Cabea de carneiro ciclope nascido de uma ca-
bra que havia ingerido Veratrum californicum
ligar-se diretamente aos genes. Para a funo de regular os genes, o cido retini-
no incio da gestao. Os hemisfrios cere-
co deve se ligar a um grupo de fatores de transcrio chamado de receptores de brais se fundiram, formando um nico olho e
cido retinico (RARs). Essas protenas tm a mesma estrutura geral que os recep- sem glndula pituitria. (de Binns et al. 1964,
tores de esterides e de hormnios da tireide, e so ativos somente quando cortesia de J. F. James e o USDA-ARS
ligados ao cido retinico (Linney, 1992). Os receptores de cido retinico se Poisonous Plant Laboratories.)
ligam a elementos intensificadores especficos no DNA que so denominados
elementos de resposta ao cido retinico. Os elementos de resposta ao cido
retinico contm pelo menos duas cpias da seqncia GGTCA (Ruberte et al.,
1990, 1991a). Alguns genes Hox tm elementos de resposta a cido retinico nos
seus promotores (Yu et al., 1991; Ppperl e Featherstone, 1993; Studer et al., 1994).
Existem trs tipos principais de receptores de cido retinico: RAR-, RAR- e
RAR-. Cada um deles liga ambas as formas de cido retinico e cada um deles se
liga ao mesmo elemento de resposta a cido retinico.
O cido retinico tem sido til no tratamento da acne cstica grave e est dispo-
nvel (sob o nome de Accutane; no Brasil um dos produtos farmacuticos contendo
cido retinico Retin-A) desde 1982. Os efeitos deletrios resultantes da adminis-
trao de grandes doses de vitamina A ou seus anlogos para vrias espcies de
animais em gestao so conhecidos desde a dcada de 1950 (Cohlan, 1953; Giroud
e Martinet, 1959; Kochhar et al., 1984), e por essa razo a droga contm uma etiqueta
de alerta indicando que no pode ser usada por mulheres grvidas. Apesar disso,
cerca de 160.000 mulheres em idade frtil (15 a 45 anos) tomaram essa droga desde
que foi introduzida, e algumas a usaram durante a gravidez. Lammer e colaboradores
(1985) estudaram um grupo de mulheres que se expuseram inadvertidamente ao
cido retinico e que decidiram permanecer grvidas. Dos 59 fetos, 26 nasceram sem
anomalias observveis, 12 abortaram espontaneamente e 21 nasceram com anomali-
as bvias. Os bebs malformados tinham um padro caracterstico de anomalias,
incluindo orelhas ausentes ou defeituosas, queixos ausentes ou pequenos, lbio
leporino, anormalidades do arco artico, deficincias do timo e anormalidades do
sistema nervoso central.*
Esse padro de mltiplas anomalias congnitas semelhante aquele visto em
embries de rato e de camundongo cujas mes quando grvidas receberam essas
drogas. Goulding e Pratt (1986) colocaram embries de camundongo de 8 dias em uma
soluo contendo cido retinico 13-cis em concentraes muito baixas (2x10-6M).
Mesmo nessa concentrao, aproximadamente um tero dos embries desenvolveram
*Sade Pblica um fator crtico, pois existe uma significante sobreposio entre a populao
que usa medicamentos para a acne e a populao de mulheres em idade frtil. Alm disso, considera-
se que metade das gestaes na Amrica do Norte no so planejadas (Nulman et al., 1997). A
prpria vitamina A teratognica quando injetada em mega doses. Rothman e colegas (1995)
encontraram que mulheres grvidas que tomaram mais de 10.000 unidades internacionais de vitami-
na A pr-formada/dia (na forma de suplementos vitamnicos) tinham cerca de 2 por cento de chance
de terem uma criana nascida com distrbios semelhantes aqueles produzidos pelo cido retinico.
Figura 21.22
Embrio de camundongo normal com 17 dias
(A) e um embrio de camundongo de 17 dias
cuja me recebeu cido retinico no dia 8 da
gestao (B). Podem ser vistas malformaes
craniofaciais na cartilagem derivada da crista
neural dos embries tratados. A cartilagem de
Meckel est completamente deslocada da re-
gio mandibular (queixo inferior) para a regio
maxilar (parte superior da boca). As cartila-
gens do martelo e bigorna tambm no so for-
madas. (de Morriss-Kay, 1993; fotografia cor-
tesia de G. Morriss-Kay.)
(A) (B)
um padro de anomalias muito especfico, incluindo uma dramtica reduo no tama-

nho do primeiro e segundo arcos farngeos (Figura 21.22). Em camundongos normais,
o primeiro arco forma o maxilar e a mandbula do queixo e dois ossculos do ouvido
mdio, enquanto o segundo arco forma o terceiro ossculo do ouvido mdio como
tambm outros ossos faciais.
A base para esse distrbio do desenvolvimento parece residir na habilidade da
droga em alterar a expresso dos genes Hox e, portanto, reespecificar pores do
eixo ntero-posterior e inibir a migrao das clulas da crista neural da regio craniana
do tubo neural (Moroni et al., 1994; Studer et al., 1994). O cido retinico marcado
radioativamente se liga s clulas da crista neural craniana e impede no s sua
proliferao como sua migrao (Johnston et al., 1985; Goulding e Pratt, 1986). A
ligao parece ser especfica s clulas derivadas da crista neural craniana, e o
efeito teratognico da droga confinado a um perodo especfico do desenvolvi-
mento (dias 8-10 no camundongo; dias 20-35 em humanos). A teratognese do cido
retinico em modelos animais tem sido extremamente bem sucedida em elucidar seus
mecanismos a nvel celular. [env6.html]
Talidomida como um teratgeno
Antes de 1961, havia pouca evidncia sobre malformaes induzidas por drogas
em humanos. Mas, naquele ano, Lenz e McBride independentemente acumula-
ram evidncia de que um sedativo leve, talidomida, causava um enorme aumento
em uma sndrome previamente rara de anomalias congnitas. A mais evidente des-
sas anomalias era a focomelia, uma condio na qual os ossos longos dos mem-
bros esto ausentes (amelia) ou severamente deficientes (peromelia), fazendo com
que os apndices resultantes paream membros de foca (Figura 21.23). Mais de
7000 crianas afetadas nasceram de mes que haviam tomado a droga, e uma
mulher necessitava ingerir apenas um comprimido para produzir crianas com os
quatro membros deformados (Lenz, 1962, 1966; Toms,1962). Outras anormalidades
induzidas pela ingesto de talidomida incluem defeitos no corao, ausncia de
ouvidos externos e intestinos malformados. A droga foi retirada do mercado em
Novembro de 1961.
Nowack (1965) documentou o perodo de susceptibilidade durante o qual a
talidomida causava essas anormalidades. Foi encontrado que a droga era teratognica
somente durante os dias 34-50 aps a ltima menstruao (cerca de 20 a 36 dias
ps-concepo). A especificidade da ao da talidomida mostrada na Figura
21.23C. Do dia 34 ao dia 38, no se observa anormalidades nos membros. Durante
esse perodo, a talidomida pode causar a ausncia ou deficincia dos componentes
do ouvido. Malformaes dos membros superiores so vistas antes daquelas dos
membros inferiores, pois durante o desenvolvimento os braos se formam pouco
antes do que as pernas.
(A) (B) Figura 21.23

Estrutura e efeito da talidomida. (A) Estrutura qumica da
talidomida. (B) Focomelia em uma criana cuja me tomou
talidomida durante os primeiros dois meses de gestao. (C)
Perodo de suceptibilidade aos efeitos teratognicos da
talidomida. (De acordo com Nowack, 1965.)
(C)
Ausncia de ouvido
Dedos ausentes ou mal formados
Ausncia de braos
Severo encurtamento dos braos
Deslocamento da bacia
Malformao do ouvido
Ausncia de pernas
Severo encurtamento das pernas
Dedos malformados
Dias aps a ltima menstruao
A tragdia da talidomida mostrou os limites de modelos animais como testes do

potencial efeito teratognico de drogas. Diferentes espcies (e linhagens dentro das
espcies) metabolizam talidomida de maneira diferente. Ratas e camundongos fme-
as grvidas - os animais usados normalmente para testar tais compostos-no produ-
zem filhotes malformados quando recebem talidomida. O coelho produz alguns des-
cendentes malformados, mas os defeitos so diferentes daqueles vistos em crianas
humanas afetadas. Primatas, tais como o sagi parecem ter uma susceptibilidade
semelhante do homem, e fetos de sagi afetados tm sido estudados como uma
tentativa de descobrir como a talidomida causa esses distrbios. McCredie (1976a,b)
props que a talidomida pode afetar a diferenciao das clulas derivadas da crista
neural, e McBride e Vardy (1983) mostraram que a diferena mais notvel vista antes
das malformaes dos membros se referia ao tamanho da raiz dorsal dos gnglios e
seus neurnios. O nmero de neurnios nesses gnglios marcadamente reduzido
(Figura 21.24). Esses autores especulam que os neurnios desses gnglios so neces-
srios para a manuteno do desenvolvimento dos membros e que a talidomida inter-
fere com os neurnios ou os destroem.
Outra hiptese (Neubert et al., 1995; Geitz et al., 1996) prope que o alvo inicial da
talidomida so as molculas de adeso do broto do membro e seus capilares. A adio
de pequenas doses de talidomida a sagis ou a clulas endoteliais cultivadas resulta
em uma desacelerao de vrias molculas de adeso clula-clula ou clula-substrato.
Figura 21.24
Efeitos da talidomida no feto de sagi. As figuras superiores mostram fentipos de fetos de sagis tardiamen-
te na gestao. As figuras inferiores mostram sees da medula espinhal ao nvel dos membros anteriores.
(A) Feto de um sagi controle. (B) Feto de um sagi tratado com 25mg de talidomida por quilograma de peso
coporal entre os dias 38 e 46 da gestao. (de McBride e Vardy, 1983, cortesia de W. G. McBride.)
Um terceiro mecanismo para explicar a teratogenicidade da talidomida foi proposto

por Lash e Saxn (1972). Lash (1963) observou que o rim primitivo, o mesonefro,
induzia o crescimento da cartilagem em tecido de membro cultivado. Lash e Saxn
observaram que a talidomida inibia esse crescimento de cartilagem induzido por
mesonefros em culturas de rgos humanos obtidos de embries abortados
eletivamente. Alm disso, a talidomida radioativa parecia se ligar especificamente ao
mesonefro humano. O mecanismo molecular dessa teratogenicidade seletiva da
talidomida ainda no conhecido, e isso ser um problema difcil de ser estudado
enquanto nossos nicos modelos animais forem outros primatas.
A tragdia da talidomida acentua outro princpio importante: o metabolismo em
embries diferente do que nos adultos, e a construo de um rgo pode ser
afetado por substncias qumicas que no tm efeito deletrio sobre o funciona-
mento daquele rgo. Vrios medicamentos para adultos so teratognicos para
embries. Esses incluem metotrexato (uma droga usada para deter o crescimento de
clulas tumorais), anticonvulsivantes como trimetadiona e fenitona, e anticoagulantes

como warfarina. Fumar cigarros durante a gravidez foi associado com o retardamen-
to do crescimento fetal, mas nem a ingesto de caf ou de antidepressivos triocclicos
produziu anormalidades significativas de desenvolvimento (veja Friedman, 1992:
Nulman et al., 1997).
lcool como um teratognico
Em termos de freqncia e custo sociedade, o teratognico mais devastador indu-

bitavelmente o etanol. Em 1968, Lemoine e colegas verificaram uma sndrome
de defeitos de nascimento em crianas de mes alcolatras. Jones e Smith (1973)
tambm observaram a sndrome alcolica fetal (FAS). Bebs com FAS eram caracteri-
zados como tendo uma cabea pequena, um filtro indistinto (o par de cristas que
correm entre o nariz e a boca acima do centro do lbio superior), um lbio superior
estreito, e uma baixa fossa nasal. O crebro dessa criana pode ser dramaticamente
menor do que o normal e freqentemente mostra defeitos na migrao neuronial e glial
(Figura 21.25; Clarren, 1986). Existe tambm uma proeminente morte celular extra no
processo frontonasal e nos gnglios do nervo craniano (Sulik et al., 1988). A sndrome
alcolica fetal o terceiro tipo mais prevalente de retardamento mental (atrs da sn-
drome do X frgil e da sndrome de Down) e afeta uma entre 500 a 750 crianas
nascidas nos Estados Unidos (Abel e Sokol, 1987).
Crianas com sndrome alcolica fetal so retardadas no desenvolvimento e men-
talmente, com um QI mdio ao redor de 68 (Streissguth e LaDue, 1987). Foi determi-
nado que pacientes com uma idade cronolgica mdia de 16.5 anos tinham um voca-
bulrio funcional de crianas de 6.5 anos e habilidades matemticas de alunos da
quarta-srie. A maioria dos adultos e adolescentes com FAS no podem gerenciar
dinheiro ou suas prprias vidas, e eles tm dificuldades em aprender com experincias
passadas. Entretanto, em muitos exemplos de FAS, as anormalidades de comporta-
mento existem sem grandes mudanas fsicas no tamanho da cabea ou no QI (J.
Opitz, comunicao pessoal, 1996). Existe uma grande variao na habilidade de
mes e fetos para metabolizar o etanol, e se considera que 30-40% das crianas nas-
cidas de mes alcolicas que bebem durante a gravidez tero FAS. A ingesto de
menores quantidades de etanol pela me pode levar ao efeito alcolico fetal, uma
forma menos severa de FAS, mas uma condio que diminui as habilidades funcio-
nais e intelectuais do paciente.*
* Para uma notvel descrio da criao de uma criana com sndrome alcolica fetal bem como uma
anlise de FAS na cultura dos ndios Americanos nos Estados Unidos, veja Dorris (1989). Os efeitos
pessoais e sociolgicos de FAS esto bem integrados aos dados cientficos e econmicos.
Figura 21.25
Comparao de um crebro de uma criana com sndrome alcolica
fetal (esquerda) com o crebro de uma criana normal da mesma
idade (direita). O crebro de uma criana com FAS significativa-
mente menor, e o padro de convolues est obscurecido pelas
clulas gliais que migraram sobre o topo do crebro. (Fotografia
cortesia de S. Clarren.)
Figura 21.26
Possveis mecanismos que produzem a
sndrome alcolica fetal. (A-C) Morte celular
pelos radicais de superxido induzidos pelo
etanol. Colorao com sulfato de Azul do
Nilo revela reas de morte celular. (A) Regio
da cabea de um embrio controle de camun-
dongo de 9 dias. (B) Regio da cabea de um
embrio tratado com etanol, mostrando reas
de morte celular. (C) Regio da cabea de um
embrio de 9 dias tratado com etanol e
superxido dismutase, um inibidor de radicais
superxido. O inibidor do superxido impede
a morte celular induzida pelo lcool. (D) Grfi-
co representando a inibio da adeso celular
mediada por L1 pelo etanol. (A-C de Kotch et
al., 1995; fotografias cortesia de K. Sulik; D de
acordo com Ramanathan et al., 1996.)
Porcentagem de clulas aderentes
Clulas
aderindo
pelo L1
Clulas controle no
expressando L1
Concentrao de etanol, mM
Um sistema modelo no camundongo foi usado para explicar os efeitos do

lcool na face e no sistema nervoso. Quando camundongos recebem etanol na
poca da gastrulao, induzido o mesmo espectro de defeitos do desenvolvi-
mento como em humanos. Aps 12 horas da ingesto de lcool pela me, j so
observadas anormalidades do desenvolvimento. As estruturas da linha mediana
no se formam, permitindo a proximidade anormal dos processos medianos da
face. So vistas tambm anomalias no crebro anterior, e os fetos afetados mais
severamente no tm um crebro anterior completo (Sulik et al., 1988). Nos em-
bries tratados com etanol, a morte celular pode ser vista com proeminncia no
processo frontonasal (facial), como tambm nos gnglios do nervo craniano e
no mesoderma do arco visceral. Estudos recentes sugerem que etanol pode in-
duzir seus efeitos teratognicos por mais de um mecanismo. Primeiro, evidncia
anatmica sugere que a migrao da crista neural severamente prejudicada.
Segundo, a morte celular pode ser causada pela produo de radicais de
superxido que oxidam membranas celulares e levam citlise (Figura 21.26A-C;
Davis et al., 1990; Kotch et al., 1995). Terceiro, o lcool pode impedir diretamente
que a molcula L1 de adeso celular funcione mantendo as clulas agregadas.
Ramanathan e colegas (1996) mostraram que o etanol pode bloquear as funes
adesivas das protenas L1 in vitro a nveis to baixos como 7mM, uma concen-
trao de etanol produzida no sangue ou crebro com um nica dose (Figura
21.26D). Alm disso, mutaes nos genes L1 humanos causam uma sndrome de
retardamento mental e malformaes semelhantes quelas vistas em casos seve-
ros da sndrome alcolica fetal. [env7.html]
Outros agentes teratognicos
Drogas e substncias qumicas no so os nicos agentes capazes de causar distr-

bios no desenvolvimento. Outra classe de teratognicos inclui os vrus. Gregg (1941)
foi o primeiro a documentar o fato que mulheres com rubola (sarampo Alemo)
durante o primeiro tero da gravidez tinham uma chance em seis de dar luz uma
criana com catarata ocular, malformaes cardacas ou surdez. Essa foi a primeira
evidncia de que a me no podia proteger totalmente seu feto contra o meio ambi-
ente externo. Quanto mais cedo na gravidez ocorria a infeco por rubola, maior era
o risco de que o embrio seria malformado. As primeiras cinco semanas parecem ser
as mais crticas, porque nesse perodo que esto sendo formados o corao, os
olhos e os ouvidos. A epidemia de rubola entre 1963 e 1965 nos Estados Unidos
provavelmente resultou em 20.000 mortes fetais e 30.000 crianas com defeitos de
nascena. Dois outros vrus, Cytomegalovirus e Herpes simplex, so tambm
teratognicos. Infeco por Cytomegalovirus em embries precoces quase sem-
pre fatal, mas infeco mais tardia pode levar cegueira, surdez, paralisia cerebral e
retardamento mental.
Bactrias e protistas so raramente teratognicos, mas dois deles podem prejudi-
car embries humanos. Toxoplasma gondii, um protozorio carreado por coelhos e
gatos (e por suas fezes), pode atravessar a placenta e causar defeitos no crebro e
olhos do feto. Treponema pallidum, a causa da sfilis, pode matar fetos precoces e
produzir surdez em outros mais velhos.
A radiao ionizante pode quebrar cromossomos e alterar a estrutura do DNA.
Por essa razo, mulheres grvidas so alertadas para evitar RaiosX desnecess-
rios, mesmo que no exista evidncia para anomalias congnitas resultantes de
radiao diagnstica (Holmes, 1979). O calor em febres altas tambm um
teratognico possvel. [env8.html], [env11.html]
Apesar de conhecermos as causas de certas malformaes, a maioria das anorma-
lidades congnitas ainda no esto explicadas. Por exemplo, anomalias cardacas con-
gnitas ocorrem 1 em 200 nascimentos vivos. As causas genticas so responsveis
por cerca de 8% dessas anomalias cardacas, e cerca de 2% podem ser explicadas por
teratognicos conhecidos. Isso deixa 90% das anomalias sem explicao (ORahilly e
Mller, 1992). Ainda existe muita pesquisa a ser realizada e ainda no foram feitas
anlises da maioria das substncias qumicas para avaliar seus efeitos teratognicos.
Atualmente, existem mais de 50.000 substncias qumicas artificiais em uso na nossa
sociedade e entre 200 e 500 novos materiais sendo produzidos a cada ano (Johnson,
1980). O problema de analisar esses produtos qumicos de grande importncia, e
protocolos padro so caros, longos, e sujeitos a diferenas metablicas entre esp-
cies. Ainda no existe consenso em como testar a teratogenicidade de uma substncia
em embries humanos.
Na antiga Unio Sovitica, a prtica no regulada de uma produo industrial a
qualquer custo, deixa uma herana de defeitos de nascimentos em elevao. Em
algumas regies do Kazakhstan, teratognicos como o chumbo, o mercrio e o zinco
so encontrados em altas concentraes na gua potvel, nos vegetais e no ar. Nesses
lugares, quase metade das pessoas testadas apresentaram extensa quebra cromoss-
mica. Em algumas reas, a incidncia de defeitos de nascimento dobrou desde 1980
(Edwards, 1994). Apesar da constante presena de teratognicos entre ns, os fetos
esto expostos a riscos cada vez maiores com o aparecimento anual de muitos com-
postos no testados em nosso ambiente.
& Especulaes
Estrognos Ambientais
U ma das maiores controvrsias na

toxicologia ambiental , prova-
velmente, a questo se pestici-
das so os responsveis pelo cncer de
cos. Crticos de pesticidas, entretanto,
alegam que ainda que esses componen-
tes se liguem fracamente ao receptor de
estrgenos, eles esto presentes no soro
do plstico polistireno e os pesquisado-
res tiveram que faz-lo eles mesmo. Des-
cobriu-se que o composto era o p-
nonilfenol, usado para endurecer o pls-
mama, pelo declnio da contagem de es- sangneo 100 vezes mais do que a con- tico PVC dos encanamentos que trazem
permatozides no homem e por malfun- centrao dos estrgenos normais. Eles gua e para estabilizar o plstico polisti-
es congnitas em animais selvagens. Os tambm argumentam que pequenas quan- reno que contm gua, leite, suco de la-
Americanos usam quase 2 bilhes de li- tidades de outros compostos ativos po- ranja e outros lquidos (Soto et al., 1991;
bras de pesticidas cada ano. Alm disso, dem agir sinergisticamente para estimu- Colburn et al., 1996). Esse composto
alguns resduos de pesticidas permanecem lar a atividade estrognica normalmente tambm o produto de degradao de de-
na cadeia alimentar durante dcadas. O fraca dessas molculas (veja Hansen e tergentes e produtos de limpeza caseira.
DDT foi banido nos Estados Unidos em Jansen, 1994; Stone, 1994). Arnold e co- Um composto relacionado, 4-tert-pentil-
1972 mas sua meia-vida ambiental de legas (1996), por exemplo, mostraram que fenol, tem um potente efeito estrognico
100 anos (Nature, 1995). Evidncia recente a combinao de dois fracos estrgenos em clulas humanas cultivadas e pode
mostrou que o DDT [dicloro-difenil- ambientais produz um efeito 1000 vezes fazer com que carpas machos (Cyprinus
tricloroetano] e seu principal produto me- mais forte do que cada composto sozi- carpis) desenvolvam ovidutos, tecido
tablico, DDE (que no tem um dos to- nho. Um trabalho recente de Kelce e co- ovariano e ocitos (Gimeno et al., 1996).
mos de cloro), podem agir como compos- legas (1995) sugere que o modo de ope- Alguns outros estrgenos ambientais
tos estrognicos, mimetizando o horm- rao crtico pode no ser o efeito fraca- so os bifenis policlorinados (PCBs). Es-
nio sexual feminino estrogno, ou inibin- mente estrognico do DDT, mas o poten- ses compostos eram muito usados como
do a eficincia de andrognios (Davis et te efeito antitestosterona de seu metab- refrigeradores at serem banidos, na d-
al., 1993; Kelce et al., 1995). Esses com- lito, DDE. O DDE capaz de inibir a trans- cada de 1970, como causadores de cn-
postos foram associados a problemas am- crio responsiva a andrognios em do- cer em ratos. Entretanto, eles permane-
bientais como o decrscimo na popula- ses comparveis quelas encontradas em cem na cadeia alimentar e tm sido res-
o de crocodilos na Flrida, a feminiza- solos contaminados nos Estados Unidos ponsabilizados pelo declnio generali-
o de peixes no Lago Superior, o aumen- e outros pases. zado da capacidade reprodutiva de lon-
to de cncer de mama, e o declnio mundi- Alguns compostos estrognicos po- tras, focas, vises e peixes. Os PCBs se
al nas contagens de espermatozide hu- dem estar no nosso alimento ou na sua assemelham ao dietil-estilbesterol (DES)
mano (Carlsen et al., 1992; Keiding e embalagem, pois compostos qumicos na forma, e eles podem afetar o receptor
Skakkebaek, 1993; Stone, 1994). Guillette usados para estabilizar plsticos foram, de estrgenos como o faz o DES, talvez
e colaboradores (1994) associaram uma em alguns casos, demonstrados como esse ligando a outro stio do receptor es-
contaminao de DDT no lago Apopka na trognicos. A descoberta desse efeito dos trognico. A estrutura desses compos-
Flrida a um declnio em 90% no ndice de estabilizadores de plsticos foi feita de tos se parece com a estrutura dos horm-
nascimentos de crocodilos e ao tamanho maneira preocupante. Pesquisadores da nios da tireide (Figura 21.27). Horm-
reduzido do pnis em machos jovens. Tufts University Medical School estuda- nios da tireide so crticos para o cres-
Dioxina, outro ingrediente de pesticidas, vam clulas tumorais responsivas a cimento da cclea do ouvido interno, e
foi relacionado com cncer; e os descen- estrgenos. Essas clulas requerem o ratos cujas mes foram expostas a PCBs
dentes machos de ratas prenhes expostas estrgeno para proliferar. Os experimen- mostravam ccleas mal desenvolvidas e
dioxina tm contagem de espermatozide tos foram bem at 1987 quando algo defeitos de audio (Goldey e Crofton
mais baixa, testculos menores e menos aconteceu. As clulas controle estavam em Stone, 1995). [env9.html]
comportamentos especficos de machos. crescendo to bem como as tratadas com No norte dos Estados Unidos e sul do
Alguns cientistas, entretanto, consi- estrgenos. Parecia que o meio havia sido Canad est havendo um dramtico au-
deram exageradas essas afirmaes. Ape- contaminado por estrgenos. Qual seria mento no nmero de rs com deforma-
sar de pesticidas poderem mimetizar os a fonte de contaminao? Aps quatro es desenvolvimentais no que parecem
estrgenos, s o fazem em grandes quan- meses de testes com todos os componen- ser puras lagoas de florestas. As princi-
tidades e se ligam ao receptor de estrge- tes de seu sistema experimental, os pes- pais anormalidades so membros extras
no 1000 vezes mais fracamente do que quisadores descobriram que a fonte de e malformados. No se conhece a causa
os estrgenos normais. Outro argumento estrgeno era os tubos plsticos que con- desses distrbios, mas a especulao (veja
que alguns componentes de pesticidas tinham a gua e o soro. A companhia que Hilleman, 1996) que pesticidas (pulve-
tm fracos efeitos anti-estrognicos, que produziu os tubos se recusou a identifi- rizados para o controle de mosquitos e
cancelariam os fracos efeitos estrogni- car seu novo processo de estabilizao carrapatos) estejam ativando os recepto-
Estradiol-17 Dietilestilbesterol Figura 21.27

Estruturas de hormnios e compostos que pro-
vocam distrbios em hormnios.
res de cido retinico e reespecificando

tecidos como membros.
difcil documentar os efeitos dos
Bisfenol-A o,p-DDT
compostos ambientais no homem, e ain-
da mais difcil determinar os efeitos de
cocktails consistindo de diferentes
compostos ingeridos em tempos diferen-
tes. Ainda necessrio um grande volu-
me de pesquisa na bioqumica desses
compostos, seus efeitos no desenvolvi-
mento e a epidemiologia das anormali-
dades do desenvolvimento. No momen-
Tiroxina Estrutura PCB to, a evidncia proveniente de estudos
com animais sugere que o homem e as
populaes de animais silvestres esto
ameaados por esses moduladores hor-
monais, mas no esto disponveis todos
os dados necessrios. [env10.html]
Interaes gentica-ambiental
A observao de que uma substncia pode ser teratognica em uma espcie mas no
em outra, sugere fortemente que existe um componente gentico para que uma subs-
tncia possa ou no produzir modificaes no desenvolvimento normal. Evidncia
recente sugere que diferentes alelos na populao humana podem influenciar se uma
substncia benigna ou perigosa para o feto. Por exemplo, existe na populao em
geral, um pequeno risco de que o fumo intenso pela me cause malformaes faciais
no seu feto. Entretanto, se o feto possui um determinado alelo (A2) do gene para o
fator de crescimento TGF-, a fumaa absorvida atravs da placenta pode aumentar
de dez vezes o risco de lbio e plato fissurados (Shaw et al., 1996). Analogamente,
diferentes alelos codificando a enzima lcool desidrogenase-2 tm diferentes habilida-
des de degradar o etanol. Se o alto consumo de lcool pela me leva uma sndrome
alcolica fetal ou a um efeito alcolico fetal depender do tipo de isozimas de lcool
desidrogenase presentes na me e no feto (McCarver-May, 1996). Portanto, se um
composto teratognico depende de muitos fatores, incluindo os genes do indiv-
duo a ele exposto.
Resumo
Freqentemente, o desenvolvimento ocorre em um meio ambiente rico, e a maio-
ria dos animais sensvel s sugestes do ambiente. O ambiente pode determinar o
fentipo sexual, pode induzir incrveis adaptaes qumicas e estruturais de acordo
com a estao, pode induzir determinadas modificaes morfolgicas que permitem
que o indivduo escape predao e pode induzir a determinao de castas nos insetos.
O ambiente tambm pode alterar a estrutura de nossos neurnios e a especificidade de
nossas clulas imunocompetentes. Infelizmente, o ambiente tambm pode ser a fonte de
compostos qumicos que prejudicam processos normais de desenvolvimento.
Enquanto o desenvolvimento ocorre normalmente em um ambiente natural com-
plexo, ele pode ser facilmente estudado no laboratrio. Na verdade, nossos sistemas
modelo so animais facilmente domesticados, cujo desenvolvimento pouco afeta-
do por fatores ambientais (Bolker, 1995). Entretanto, ao conhecermos a complexida-
de do desenvolvimento, compreendemos que esse criticamente ligado ao ambiente.
necessria uma comunidade para desenvolver um embrio. A explorao de como
o ambiente regula o desenvolvimento est apenas comeando.
LITERATURA CITADA
Abel, E. L. and Sokol, R. J. 1987. Incidence of Bolker, J. A. 1995. Model systems in develop- Carlsen, E., Giwercman, A., Keiding, N. and
fetal alcohol syndrome and economic impact of mental biology. BioEssays 17: 451-455. Skakkeback, N. E. 1992. Evidence for decreasing
FAS-related anomalies. Drug AIcohol Depend. quality of semen during past 50 years. Brit. Med.
Born, C. 1881. Experimentelle Untersuchungen
19: 51-70. J. 305: 609-613.
ber die Entstehung der Geschlechtsunterschiede,
Adler, F. R. and HarvelI, C. D. 1990. Inclucible Jahres-Bericht d. SchIeischen Gesell f. vterlnd, Charnov, E. L. and Bull, J. J. 1977. When is sex
defenses, phenotypic variability, and biotic Culture 21 jan. pp. 2-23. environmentally determined? Nature 266: 828-830.
environments. Trends Ecol. Evol. 5: 407-410.
Born, G. 1884. ber die Einflussder Schwere uaf Clarren, S. K. 1986. Neuropathology in the fetal
Alvarez-Buylla, A., Kirn, J. R. and Nottebohm, die Froschie. Verh. Med Sect Schles. Gessell. . alcohol syndrome. In J. R. West (ed.), Alcohol
F. 1990. Birth of projection neurons in adult vterlnd. Culture 4 April 1884. and Brain Development. Oxford University
avian brain may be related to perceptual or Press, New York.
Borovsk, D., Carlson, D. A., Griffin, P. R.,
motor learning. Science 249: 1444-1446.
Shabanowitz, J. and Hunt, D. F. 1990. Mosquito Cohen, C. S. and Strathmann, R. R. 1996. Em-
Antonini, A. and Stryker, M. P. 1993. Rapid oostatic factor: A novel decapeptide modulating bryos at the edge of tolerance: Effects of envi-
remodeling of axonal arbors in the visual cortex. trypsin-like enzyme biosynthesis in the midgut. ronment and structure of egg masses on supply
Science 260: 1818-1821. FASEB J. 4: 3015-3020. of oxygen to embryos. Biol. Bull. 190: 8-15.
Arnold, S. F., Klotz, D. M. Collins, B. M., Vonier, Bou, A., Bou, J. and Cropp, A. 1985. Cohlan, S. Q. 1953. Excessive intake of vitamin
P. M., Guilllete, L. J. Jr. and McLachlan, J. A. Cytogenetics of pregnancy wastage. Adv. Hum. A as a cause of congenital anomalies in the rat.
1996. Synergistic activation of estrogen recep- Genet. 14:1-57. Science 117: 535-537.
tor with combinations of environmental
Brakefield, P. M. and Reitsma, N. 1991. Phenotypic Colburn, T., Dumanoski, D., and Myers, J. P.
chemicals. Science 272: 1489-1492.
plasticity, seasonal climate, and the population 1996. Our Stolen Future. Dutton, New York.
Bachmann, M. D., Carlton, R. G., Burkholder, J. biology of Bicyclus butterflies (Satyridae) in
Colello, R. J. and Guillery, R. W. 1990. The
M. and Wetzel, R. G. 1986. Symbiosis between Malawi. Ecol. Entomol. 16:291-303.
early development of retinal ganglion cells with
salamander eggs and green algae: Microelectrode
measurements inside eggs demonstrate effects Brakefield, P. M. and seven others. 1996. Deve- uncrossed axons in the mouse: retinal position
lopment, plasticity, and evolution of butterfly and axon course. Development 108: 515-523.
of photosynthesis on oxygen concentrations.
eyespot patterns. Nature 384: 236-242.
Can. Zool. 64: 1586-1588. Colman, H., Nabekura, J. and Lichtman, J. W.
Baxter, G. T. and Morse, D. E. 1992. Cilia from Brian, M. V. 1974. Caste differentiation in 1997. Alterations in synaptic strength preceding
Myrmica rubra: The role of hormones. J. Insect axon withdrawal. Science 275: 356-361
abalone larvae contain a receptor-dependent G-
Physiol. 20: 1351-1365.
protein transduction system similar to that in Conover, D. O. and Heins, S. W. 1987. Adaptive
mammals. Biol. Bull. 183: 147-154. Brian, M. V. 1980. Social control over sex and variation in environmental and genetic sex de-
caste in bees, wasps and ants. Biol. Rev. 55: termination in a fish. Nature 326: 496-498.
Beck, S. D. 1980. Insect Photoperiodism. 2nd
379-415.
ed. Academic Press, NY. Creech Kraft, J, 1992. Pharmacokinetics,
Brnmark, C. and Pettersson, L. 1994. Chemical placental transfer, and teratogencity of 13cis
Begon, M., Harper, J. L. and Townsend, C. R.
cues from piscivores induce a change in retinoic acid, its isomer and metabolites. In G.
1986. Ecology: Individuals, Populations, and
morphology in crucian carp. Oikos 70: 396-402. M. Morriss-Kay (ed.), Retinoids in Normal De-
Communities. Blackwell Scientific, Oxford.
velopment and Teratogenesis. Oxford Universi-
Bry, L., Falk, P. G., Midtvedt, T. and Gordon, J.
Binns, W., James, L. F. and Shupe, J. L. 1964. ty Press, Oxford, pp. 267-280.
I, 1996. A model of host-microbial interactions
Toxicosis of Veratrum californicum in ewes and
its relationship to a congenital deformity in in an open mammalian ecosystem. Science 273: Danilevskii, A. S. 1965. Photoperiodism and
1380-1383. Seasonal Development of Insects. Oliver and
lambs. Ann. N.Y. Acad. Sci. 111: 571-576.
Boyd, Edinburgh.
Bull, J. J. 1980. Sex determination in reptiles.
Black, J. E., Issacs, K. R. anderson, B. J. Alcantara,
A. A. and Greenough, W. T. 1990. Learning cau- Q. Rev. Biol. 55: 3-21. Davis, D. L., Bradlow, H. L., Wolff, M., Woodruff,
T., Hoel, D. G. and Anton-Culver, H. 1993.
ses synaptogenesis, whereas motor activity cau- Burnett, F. M. 1959. The Clonal Selection Theory
Xenoestrogens as preventable causes of breast
ses angiogenesis, in cerebellar cortex of adult rats. of Immunity. Vanderbilt University Press,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 5568-5572. cancer. Environ. Health Perspect. 101: 372-377.
Nashville.
Davis, W. L., Crawford, L. A., Cooper, O. J., Giroud, A. and Martinet, M. 1959. Teratogenese reference to the organs controlling determina-
Farmer, G. R., Thomas, D. and Freeman, B. L. pur hypervitaminose A chez le rat, la souris, le tion of voltinism. J. Fac. Agric. Tottori Univ. 1:
1990. Ethanol induces the generation of reactive cobaye, et le lapin. Arch. Fr. Pediatr. 16: 971-980. 83-124.
free radicaIs by neural crest celIs in culture. J.
Gotthard, K. and Nylin, S. 1995. Adaptive Herbst, C. 1893. Experimentelle Untersuchun-
Craniofac. Genet. Dev. Biol. 10: 277-293.
plasticity and plasticity as an adaptation: A gen ber den Einfluss der vernderten chemischen
Degnan, B. M. and Morse, D. E. 1995. Deve- selective review of plasticity in animal Zusammensetzung des umgebenden Mediums auf
lopmental and morphogenetic gene regulation morphology and life history. Oikos 74: 3-17. die Entwicklung der Thiere. II. Wierteres ber
in Haliotis rufescens larvae at metamorphosis. die morphologische Wirkung der Lithiumasalze
Goulding, E. H. and Pratt, R. M. 1986.
Amer. Zool. 35: 391-398. und ihre theoretische Bedeutung. Mitt. d. zool.
Isotretinoin teratogenicity in mouse whole
Station Neapel. 11: 136-220.
Denno, R. F., Douglass, L. W. and Jacobs, D. embryo culture. J. Craniofac. Genet. Dev. Biol.
1985. Crowding and host plant nutrition: envi- 6: 99-112. Hertwig, O. 1894. The Biological Problem of
ronmental determinants of wing form in To-day: Preformed or Epigenesis (P. C. Mitchell,
Greene, E. 1989. A diet-induced developmen-
Prokelisia marginata. Ecology 66: 1588-1596. translator). Macmillan, New York.
tal polymorphism in a caterpillar. Science 243:
Dodson, S. 1989. Predator-induced reaction 643-646. Hilleman, B. 1996. Frog deformities pose a
norms. BioScience 39: 447-452. mystery. Chem. Engin. News 74:24.
Gregg, N. M. 1941. Congenital cataract following
Dorris, M. 1989. The Broken Cord. Harper and German measles in the mother. Trans. Opthalmol. Hoffmann, R. J. 1973. Environmental control
Row, New York. Soc. Aust. 3: 35. of seasonal variation in the butterfly Colias
eurytheme I. Adaptive aspects of a photoperio-
Edmonds, D. K., Lindsay, K. S., Miller, J. F., Guillette, L. J., Gross, T. S., Masson, G. R.,
dic response. Evolution 27: 387-397.
Williamson, E. and Wood, P. J. 1982. Early Matter, J. M., Percival, H. F. and Woodward,
embryonic mortality in wornen. Fertil. Steril. A. R. 1994. Developrnental abnormalities of Holmes, L. B. 1979. Radiation. In V. C. Vaughan,
38: 447-453. the gonad and abnormal sex hormone concen- R. J. McKay and R. D. Behrman (eds.), Nelson
trations in juvenile alligators from contamina- Textbook of Pediatrics, 11th Ed. Saunders,
Edwards, M. 1994. Pollution in the former
ted and control lakes in Florida. Environ. Health Philadelphia.
Soviet Union: Lethal legacy. Natl. Geog. 186
Perspect. 102: 680-688.
(2): 70-115. Hubel, D. H. 1967. Effects of distortion of
Hadfield, M. G. 1977. Metamorphosis in marine sensory input on the visual system of kittens.
Fallon, A. M., Hagedorn, H. H., Wyatt, G. R. and
molluscan larvae: An analysis of stimulus and Physiologist 10: 17-45.
Laufer, H. 1974. Activation of vitellogenin
response. In R.-S. Chia and M. E. Rice (eds.),
synthesis in the mosquito Aedes aegypti by Hubel, D. H. and Wiesel, T. N. 1962. Receptive
Settlement and Metamorphosis of Marine
ecdysone. J. Insect Physiol. 26: 829-1823. fieIds, binocular interaction and functional
Invertebrate Larvae. Elsevier, New York, pp.
architecture in the cats visual cortex. J. Physiol.
Ferguson, M. W. J. and Joanen, T. 1982. 165-175.
160:106-154.
Temperature of egg incubation determines sex
Haeckel, E. 1891. Quoted in Nyhart, L., 1995.
in Alligator mississippiensis. Nature 296: Hubel, D. H. and Wiesel, T. N. 1963. Receptive
850-853 Hagedorn, H. H. 1983. The role of ecdysteroids fields of celIs in striate cortex of very young,
in the adult insect. In G. Downer and H. Laufer visually inexperienced kittens. J. Neurophysiol.
Franco, B. and twelve others, 1995. A cluster of
(eds.), Endocrinology of Insects. Alan R. Liss, 26: 944-1002.
sulfatase genes on Xp22.3 mutations in chon-
drodysplasia punctata (CDPX) and implications Jaffe, L. A. 1980. Electrical polyspermy block
for warfarin embryopathy. Cell 81: 15-21. Hansen, L. G. and Jansen, H. T. 1994. Environ- in sea urchins: Nicotine and low sodium
mental estrogens (Letter to editor in response experiments. Dev. Crowth Differ. 22: 503-507.
Friedman, J. M. 1992. Effects of drugs and other
to Stone, 1994). Science 266: 526.
chemicaIs on fetal growth. Crowth Genet. Horm. Janzen, F. J. and Paukstis, G. L. 1991. Environ-
8(4): 1-5. Hansen, R. A., Hart, D. D. and Merz, R. A. 1991. mental sex determination in reptiles: Ecology,
Flow mediates predator-prey interaction between evolution, and experimental design. Q. Rev. Biol.
Fukuda, S. 1952. Function of the pupal brain
triclad flatworms and larval blackflies. Oikos 60: 66:149-179.
and subesophageal ganglion in the production of
187-196.
non-diapause and diapause eggs in the silkworm. Johnson, E. M. 1980. Screening for teratogenic
Annot. Zool. Japan 25: 149-155. Hardie, J. 1981. Juvenile hormone and photo- potential: Are we asking the proper questions?
periodically controlled polymorphism in Aphis Teratology 21: 259.
Geitz, H., Handt, S. and Zwingenberger, K. 1996.
fabae: Postnatal effects on presumptive
Thalidornide selectively modulates Johnston, M. C., Sulik, K. K., Webster, W. S.
gynoparae. J. Insect Physiol. 27: 347-355.
and Jarvis, B. L. 1985. Isotretinoin embryopa-
the density of cell surface molecules involved in
Hardie, J. and Lees, A. D. 1985. Endocrine thy in a mouse model: Cranial neural crest in-
the adhesion cascade. Immunopharmacology
control of polymorphism and poly volvement. Teratology 31: 26A.
31: 213-221.
phenism. In G. A. Kerkut and L. I. Gilbert (eds.), Jones, K. L. and Smith, D. W. 1973. Recognition
Gilbert, S. F. 1994. Dobzhansky, Waddington
Comprehensive Insect Physiology, Biochemistry, of the fetal alcohol syndrome. Lancet 2:999-1001
and Schmalhausen: Embryology and the Modern
and Pharmacology. Vol. 8, pp. 441-490.
Synthesis. In M. B. Adams (ed.), The Evolution Keiding, N and Skakkebaek, N. E. 1993. Are
of Theodosius Dobzhansky: Essays on His Life Hart, M. W. and Strathmann, R. R. 1994. estrogens involved in falling sperm counts and
and Thought in Russia and America. Princeton Functional consequences of phenotypic disorders of the male reproductive tract? Lancet
University Press, Princeton, pp. 143-154. plasticity in echinoid larvae. Biol. Bull. 186: 341: 1392-1395.
291-299.
Gimeno, S., Gerritsen, A., Bowmer, T. and Kelce, W. R., Stone, C. R., Laws, S. C., Gray, L. E.,
Komen, H. 1996. Feminization of male carp. Hasegawa, K. 1952. Studies on voltinism of the Kemppainen, J. A. and Wilson, E. M. 1995. Persis-
Nature 384: 221-222. silkworm, Bombyx mori L., with special tent DDT metabolite p,p-DDE is a potent androgen
receptor antagonist. Nature 375: 581-585.
Kennedy, C., Suda, S., Smith, C. B., Miyaoka, Abstracts of the Ninth International Congress of born during song learning in zebra finches. Nature
M., Ito, M. and SokoIoff, L. 1981. Changes in Human Genetics Brazil J. Genet. 19: 73. 334: 149-151.
protein synthesis underlying functional plasticity
McCollum, S. A. and Van Buskirk, J. 1996. Costs Nowack, E. 1965. Die sensible Phase bei der
in immature monkey visual system. Proc. Natl.
and benefits of a predator induced polyphenism Thalidomide-Embryopathie. Humangenetik 1:
Acad. Sci USA 78: 3950-3953.
on the gray treefrog Hyla chrysoscelis. Evolution 516-536.
Kitazawa, T., Kanda, T. and Takami, T. 1963. 50: 583-593.
Nulman, I. and eight others. 1997. Neurodeve-
Changes of mitotic activity in the silkworm egg
McCredie, J. 1976a. Neural crest defects: A lopment of children exposed in utero to antide-
in relation to diapause. BuIl. Seric. Exp. Sta.
neuroanatomic basis for classification of multiple pressant drugs. N. Engl. J. Med. 336: 258-262.
18:283-295.
malformations related to phocomelia. J. Neurol.
Nyhart, L. K. 1995. Biology Takes Form: Animal
Koch, P. B. anel Buchmann, D. 1987. Hormonal Sci. 28: 373-387.
Morphology and the German Universities, 1800-
control of seasonal morphs by the timing of
McCredie, J. 1976b. The pathogenesis of 1900. University of Chicago Press, Chicago.
ecdysteroid release in Araschnia levana
congenital malformations. Australas. Radiol.
(Nymphalidae: Lepidoptera). J. Insect Physiol. ORahilly, R. and MIler, F. 1992. Human Em-
19:348-355.
36: 159-164. bryology and Teratology. Wiley-Liss, New York.
McKeown, T. 1976. Human malforrriations: An
Kochhar, D. M., Penner, J. D. and Tellone, C. I. Opitz, J. M. and Paul, N. W. (eds.) 1993. Blasto-
introduction. Br. Med. BuIl. 32:1-3.
1984. Comparative teratogenic activities of two genesis: Normal and Abnormal, March of Dimes
retinoids: Effects on palate and limb development. McFall-Ngai, M. J. and Ruby, E. G. 1991. Birth Defects Foundation Original Article Series.
Teratogen. Carcinogen. Mutagen. 4:377-387. Symbiont recognition anel subsequent morpho- Wiley-Liss, New York.
genesis as early events in an animalbacterial
Kotch, L. E., Chen, S-Y. and Sulik, K. K. 1995. Palmer, A. R. 1985. Adaptive value of shell
mutualism. Science 254: 1491-1494.
Ethanol-induced teratogenesis: free radical variation in Thais lamellosa: Effect of thick
damage as a possible mechanism. Teratology 52: Montgomery, M. K. and McFaIl-Ngai, M. J. shells on vulnerability to and preference by crabs.
128-136. 1995. The inductive role of bacterial symbionts Veliger 27: 349-356.
in the morphogenesis of a squid light organ. Amer.
Kulikauskas, V., Blaustein, A. B. anel Ablin, R. J. Passera, L. 1985. Soldier determination in ants of
Zool. 35: 372-380.
1985. Cigarette smoking and its possible effects the genus Pheidole. In J. A. L. Watson B. M Okot-
on sperm. Fertil. Steril. 44: 526-528. Morgan, T. H. 1909. Sex determination and Kotber and C. Noirot, (eds.) Caste Determination
parthenogenesis in phylloxerans and aphids. in Social Insects. Pergmon, Oxford, pp. 331-346.
Lammer, E. J. and eleven others. 1985. Retinoic
Science 29: 234-237,
acid embryopathy. N. Engl. J. Med. 313: 837- Pener, M. P. 1991. Locust phase polymorphism
841. Moroni, M. C., Vigano, M. A. and Mavilio, F. and its endocrine relations. Adv. Insect Physiol.
1994. Regulation of human Hoxd-4 gene by 3: 1-79.
Lash, J. W. 1963. Studies on the ability of
retinoids. Mech. Dev. 44: 139-154.
embryonic mesonephros explants to form Pflger, E. 1883. ber den Einfluss der
cartilage. Dev. Biol. 6: 219-232. Morriss-Kay, G. 1993. Retinoic acid and Schwerkraft auf die Theilung der Zellen. I, II III.
craniofacial development: Molecules and mor- Pflgers Arch. 32.
Lash, J. W. and Saxn, L. 1972. Human
phogenesis. BioEssays 15: 9-15.
teratogenesis: In vitro studies of thalidomidei- Pinder, A. W. and Friet, S. C. 1994. Oxygen
nhibited chondrogenesis. Dev. Biol. 28: 61-70. Morse, A. N. C., Froyd, C. A. and Morse, D. E. transport in egg masses of the amphibians Rana
1984. Molecules trem cyanobacteria and red sylvatica and Anibystoma maculatum: Convec-
Lemoine, E. M., Harousseau, J. P., Borteyru, J.
algae that induce larval settlement and meta- tion, diffusion, and oxygen production by algae.
P. and Menuet, J. C. 1968. Les enfants de parents
morphosis in the mollusc Haliotis rufescens. J. Exp. Biol. 197: 17-30.
alcoholiques: Anomalies observes Oest. Med.
Marine Biol. 81: 293-298.
21: 476-482. Plowright, R. C. and Pendrel, B. A. 1977. Larval
Nature Genetics (editorial). 1995. Risk assess- growth in bumble-bees. Can. Entomol. 109:
Lenz, W. 1962. Thalidomide and congenital
ment and religion. Nat. Genet. 11: 105-106. 967-973.
abnormalities. Lancet 1: 45. (First reported at a
1961 symposium.) Neubert, R., Hinz, N., Thiel, R. and Neubert, D. Purves, D. and Lichtman, J. W. 1985. Principles
1995. Down-regulation of adhesion receptors of Neural Development. Sinauer Associates,
Lenz, W. 1966. Malformations caused by drugs
on cells of primate embryos as a probable me- Sunderland, MA.
in pregnancy. Am. J. Dis. Child. 112: 99-106.
chanism of the teratogenic action of thalidomi-
Ppperl, H. and Featherstone, M. S. 1993.
Linney, E. 1992. Retinoic acid receptors: trans- de. Life Sci. 58: 295-316.
Identification of retinoic acid response element
cription factors modulating gene expression,
Newman, R. A. 1989. Developmental plasticity upstream from the mouse Hox-4.2 gene. Mol.
developrnent, and differentiation. Curr. Top. Dev.
of Scaphiopus couchii tadpoles in an unpredic- Cell. Biol. 13: 257-265.
Biol. 27:309-350.
table environment. Ecology 70: 1775-1787.
Raatikainen, M. 1967. Bionomics, enemies, and
McBride, W. G. 1961. Thalidomide and
Newman, R. A. 1992. Adaptive plasticity in am- population dynamics of Javesella pellucida (F.)
congenital abnormalities. Lancet 2: 1358.
phibian metamorphosis. BioScience 42: 671-678. (Homoptera, Delphaidae). Annales Agric.
McBride, W. G. and Vardy, P. H. 1983. Fenniae 6: 1-49.
Nijhout, H. F. 1991. The Development and
Pathogenesis of thalidomide teratogenesis in the
Evolution of Butterfly Wing Patterns. Smith Rachinsky, A. and Hartfelder, K. 1990. Corpora
marmot (Callithrix jacchus): Evidence sugges-
allata activity, a prime regulating element for
ting a possible trophic influence of cholinergic sonian Institution Press, Washington, D. C.
caste-specific juvenile hormone titre in honey
nerves in limb morphogenesis. Dev. Growth
Nijhout, H. F. 1994. Insect Hormones. Princeton bee larvae (Apis mellifera carnica). J. Insect
Differ. 25: 361-373.
University Press, Princeton. Physiol. 36: 329-349.
McCarver-May, D. G. 1996. Genetic differences
Nordeen, K. W. and Nordeen, E. J. 1988. Ramanathan, R., Wilkemeyer, M. F., Mittel, B.,
in alcohol dehydrogenase and fetal alcohol effects.
Projection neurons within a vocal pathway are Perides, G. and Charness, M. E. 1996. Alcohol
inhibits cell-cell adhesion mediated by human Stearns, S. C., de Jong, G. and Newman, R. A. 1991. Sherman and J. Alcock, (eds), Exploring Animal
L1. J. Cell Biol. 133: 381-390. The effects of phenotypic plasticity on genetic Behavior. Sinauer Associates, Sunderland, MA,
correlations. Trends Ecol. Evol. 6: 122-126. pp. 188-196.
Reiter, H. O. and Stryker, M. P. 1988. Neural
plasticity without postsynaptic action potentials: Stent, G. S, 1973. A physiologcal mechanism Watt, W. B. 1968. Adaptive significance of
Less-active inputs become dominant when kitten for Hebbs postulate of learning. Proc. Natl. pigment polymorphism in Colias butterflies, I.
visual cortical cells are phamacologically inhibited. Acad. Sci. USA 70: 997-1001. Variation of melanin in relation to thermoregu-
Proc. Natl. Acad, Sci. USA 85: 3623-3627. lation. Evolution 22: 437-458.
Stone, R. 1994. Environmenta1 estrogens stir
Rothman, K. J., Moore, L. L., Singer, M. R., debate. Scence 265: 308-310. Watt, W. B. 1969. Adaptive significance of
Nguyen, U. -S. D. T., Mannino, S. and Milunsky, pigment polymorphism in Colias butterflies, II.
Stone, R. 1995. Environmental toxicants under
A. 1995. Teratogenicity of high vitamin A Thermoregulation and periodically controlled
scrutiny at Baltimore meeting. Science 267:
intake. N. Engl. J. Med. 333: 1369-1373. melanin production in Colias eurytheme. Proc.
1770-1771.
Natl. Acad. Sci. LISA 63: 767-774.
Ruberte, E., Doll, P., Krust, A., Zalent, A.,
Strathmann, R. R. and Strathmann, M. F. 1995.
Morriss-Kay, G. and Chambon, P. 1990. Specific Weele, C. van der, 1995. Images of Develop-
Oxygen supply and limits on aggregation of
spatia1 and temporal distribution of retinoic acid ment: Environmental Causes in Outogeny.
embryos. J. Mar. Biol. Assoc. U. K. 75: 413-428.
receptor g transcripts during mouse embryoge- Elinkwijk, Utrecht.
nesis. Development 108:213-222. Strathmann, R. R., Fenaux, L. and Strathmann,
Weismann, A. 1875. ber den Saison-Dimor-
M. F. 1992. Heterochronic developmental
Ruberte, E. and seven others. 1991. Retinoic phismus der Schmetterlinge. In Studien zur
plasticity in larval sea urchins and its implication
acid receptors in the embryo. Semin. Dev. Biol. Descendenz-Theorie. Engelmann, Leipzig.
for evolution on nonfeeding larvae. Evolution
2:153-159.
46: 972-986. Wheeler, D. 1986. Developmental and physio-
Sander, K. 1968. Entwick1ungsphysiologische logical determinants of caste in social hyme-
Streissguth, A. P. and LaDue, R. A. 1987. Fetal
Untersuchungen am embryonalen Mycetom von noptera: Evolutionary implications. Am. Nat.
alcohol: Teratogenic causes of developmental
Euscelis plebejus F. (Hornoptera, Ciciadina). I. 128: 13-34.
disabilities. In S. R. Schroeder (ed.), Toxic
Dev. Biol. 17:16-38.
Substances and Mental Retardation, American Wheeler, D. 1991. The developmental basis of
Sapp, J. 1994. Evolution by Association: A History Association of Mental Deficiency, Washington, worker caste polymorphism in ants. Amer. Nat.
of Symbiosis. Oxford University PTess, NY. DC, pp. 1-32. 138: 1218-1238.
Schmalhausen, I. I. 1949. Factors of Evolution: Studer M., Popperl, H., Marshall, H., Kuroiwa, Wiesel, T. N. 1992. Postnatal developrnent of
The Theory of Stabilizing Selection. University A. and Krumlauf, R. 1994. Role of a conserved the visual cortex and the influence of environr-
of Chicago Press, Chicago. retinoic acid response element in rhombomere nent. Nature 299: 583-591.
restriction of Hoxb-1. Science 265: 1728-1732.
SchwernmIer, W. 1974. Endosymbionts: factors of Wirtz, P. 1973. Differentiation in the honeybee
egg patterning. J. Insect Physiol. 20: 1467-1474. Sulik, K, K., Cook, C. S. and Webster, W. S. larva. Meded. Landb. Hogesch. Wagningen. 73-
1988. Teratogens and craniofacial malformati- 75, 1-66.
Schwemmler, W. 1989. Insect symbiosis as a model
ons: relationships to cell death. Development
system for egg cell differentiation. In W. Wolpert, L. 1991. The Triuniph of the Embryo.
103 (Suppl.): 213-231.
Schwemmler and G. Gassner, eds. Insect Endosym- Oxford University Press. Oxford.
biosis, CRC Press, Boca Raton, pp. 37-53. Tauber, M. J., Tauber, C. A. and Masaki, S. 1986.
Woltereck, R. 1909. Weitere experimentelle
Seasonal Adaptations of Insects. Oxford Uni-
Selenka, E. 1876. Zur Entwick1ung der Untersuchungen ber Artvernderung, speziell
versity Press, Oxford.
Holothurien: Ein Beitrage zur Keimblttertheo- ber das Wesen quantitativer Artunderscheide bei
rie. Zeitschr. wissensch. Zool. 27: 155-178. Toms, D. A. 1962. Thalidomide and congenital Daphniden. Versuch. Deutsch. Zool. Ges. 1909:
abnormalities. Lancet 2: 400. 110-172.
Shapiro, A. M. 1968. Photoperiodic induetion
of vernal phenotype in Pieris protodice Boisdu- Turner, A. M. and Greenough, W. T. 1983. Woodward, D. E. and Murray, J. D. 1993. On the
val and Le Conta (Lepidoptera: Pieridae). Synapses per neuron and synaptic dimensions in effect of temperature-dependent sex determina-
Wasmann J. Biol. 26: 137-149. occipital cortex of rats reared in complex, soci- tion on sex ratio and survivorship in crocodilians.
al, or isolation housing. Acta Stereolegica 2 Proc. R. Soc. Loud. [B] 252: 149-155.
Shapiro, A. M. 1976. Seasonal polyphenism.
(Supp1. 1): 239-244.
Evol. Biol. 9: 259-333. Yu, V. C. and nine others. 1991. RXRb: A
Via, S., Comulkiewicz, R., De Jong, G., Scheiner, coregulator that enhances binding of retinoic
Shapiro, A. M. 1978. The evolutionary
S. M., Schlichting, C. D. and Van Tienderen, P. acid, thyroid hormone, and vitamin D receptors
significance of redundancy and variability in
H. 1995. Adaptive phenotypic plasticity: to their cognate response elements. Cell 67:
phenotypic induction mechanisms of pierid
Consensus and controversy. Trends Ecol. Evol. 1251-1266.
butterflies (Lepdoptera). Psyche 85: 275-283.
10: 212-217.
Shaw, G. M., Wasserman, C. R., Lammer, E. J.,
Voet, D. and Voet, J. G. 1995. Biochemistry I,
OMalley, C. D., Murray, J. C., Basart, A. M. and
2nd ed. John Wiley, NY.
Tolarova, M. M. 1996. Orofacial clefts, parental
cgarette smoking, and Volpe, E. P. 1987. Developmental biology and
human concerns. Am. Zool. 27: 697-714.
transforming growth factor-alpha gene variants.
Am. J. Hum. Genet. 58: 551-561. Waddington, C. H. 1942. Canalization of deve-
lopment and the inheritance of acquired
Soto, A., Justicia, H., Wray, J. and Sonnenschein,
characteristics. Nature 150: 563-565.
C. 1991. p-nony1phenol: an estrogenic xenobi-
otic released from modified polystyrene. Warner, R. R. 1993. Mating behavior and
Environ. Health Perspect. 92: 167-173. hermaphrodtism in coral reef fishes. In P. W.
A saga da linhagem germinativa
22
E o fim de todo nosso explorar
Ser o retorno para de onde partimos
E pela primeira vez o conhecimento do lugar.
T. S. ELIOT (1942)
C OMEAMOS NOSSA ANLISE do desenvolvimento animal discutindo a
fecundao, e iremos terminar nosso estudo sobre o desenvolvimento indi-
vidual investigando a gametognese, os processos pelos quais so forma-
dos o espermatozide e o vulo. Clulas germinativas proporcionam a continuidade
da vida entre as geraes, e os ancestrais mitticos de nossas prprias clulas
germinativas residiram uma vez nas gnadas de rpteis, anfbios, peixes e inverte-
brados. Em muitos animais, como insetos, nematelmintos e vertebrados existe uma
clara e precoce separao das clulas germinativas de tipos celulares somticos. Em
vrios filos animais (e no todo do reino vegetal), essa diviso no est to bem esta-
belecida. Nessas espcies (que incluem cnidrios, platelmintos e tunicados), as clu-
las somticas podem facilmente se tornarem clulas germinativas mesmo em orga-
nismos adultos. Os zoides, brotos e plipos de muitos filos de invertebrados atestam
a capacidade das clulas somticas dar origem a novos indivduos.
Naqueles organismos nos quais existe uma linhagem germinativa estabelecida, se-
parando-se precocemente no desenvolvimento, as clulas germinativas no se origi-
nam de dentro da gnada propriamente. Ao contrrio, seus precursores as clulas
germinativas primordiais (PGCs) migram para o interior das gnadas em desen-
volvimento. O primeiro passo na gametognese, portanto, envolve a formao das PGCs
e sua conduo para o sulco genital medida que a gnada est se formando. A inicia-
o da linhagem da clula germinativa (a linhagem germinativa) em anfbios, insetos e
nematelmintos foi discutida no Captulo 13. Reiniciamos nossa histria da linhagem
germinativa com a migrao das PGCs de seu local de origem para as gnadas.
Migrao das clulas germinativas

Migrao das Clulas Germinativas em Anfbios
Conforme discutido no Captulo 13, o plasma germinativo de anfbios anuros sapos

e rs se agrupa ao redor do plo vegetal do embrio de 1 clula. Durante a clivagem,
esse material levado para cima atravs do citoplasma vitelnico, e os grnulos ricos
em RNA se associam com as clulas endodrmicas revestindo o assoalho da blasto-
cele (Figura 22.1; Bounoure, 1934; Ressom e Dixon, 1988; Kloc et al., 1993). As
PGCs ficam concentradas na regio posterior do intestino larval, e medida que se
forma a cavidade abdominal, as PGCs do anuro emigram ao longo do lado dorsal do
843
Figura 22.1 Plo animal

Sulco de clivagem
Alteraes na posio do plasma germinativo (colorido) no
embrio precoce da r. Originalmente localizado perto do plo (A) (B) (C)
vegetal do ovo no-clivado (A), o plasma germinativo avana
ao longo dos sulcos de clivagem (B) at se localizar no assoalho
da blastocele (C). (Segundo Bounoure, 1934.)
Plasma
germinativo Blastocele
Plo vegetal
intestino, primeiramente ao longo do mesentrio dorsal (que conecta o intestino com

a regio onde os rgos mesodrmicos esto se formando) e em seguida ao longo da
parede abdominal e para dentro dos sulcos genitais. Elas migram para cima nesse
tecido at atingirem as gnadas em desenvolvimento (Figura 22.2). As PGCs de Xe-
nopus se movimentam extruindo um nico filopdio e em seguida escorrendo seu
citoplasma vitelnico para o filopdio enquanto retraem sua cauda. Conduo por
contato dessa migrao parece provvel pois ambas as clulas e a matriz extracelular
sobre a qual elas migram esto orientadas na direo dessa migrao (Wylie et al.,
1979). Alm disso, a adeso e a migrao de PGC pode ser inibida se o mesentrio
for tratado com anticorpos contra a fibronectina de Xenopus (Heasman et al., 1981).
Assim, o caminho para a migrao das clulas germinativas nessas rs parece ser
constitudo por uma matriz extracelular contendo fibronectina orientada. As fibrilas
sobre as quais as PGCs viajam perdem essa polaridade logo aps o trmino da migra-
o.* Enquanto elas migram, as PGCs de Xenopus se dividem cerca de trs vezes, e
aproximadamente 30 PGCs colonizam as gnadas (Whitngton e Dixon, 1975; Wylie
e Heasman, 1993). Essas iro se dividir para formar as clulas germinativas.
As clulas germinativas primordiais dos anfbios urodelos (salamandras) tm uma
origem aparentemente diferente, que foi tracejada por experimentos de transplantes
recprocos para as regies do mesoderma que involuem atravs dos lbios ventrolaterais
do blastporo. Alm disso, no parece existir qualquer plasma germinativo em ovos
de salamandra. Em vez disso, a interao das clulas endodrmicas dorsais e as clu-
las do hemisfrio animal cria as condies necessrias para formar clulas germinati-
vas nas reas particulares que involuem atravs dos lbios ventrolaterais (Sutasurya
e Nieuwkoop, 1974). Assim em salamandras, as PGCs so formadas por induo den-
tro da regio mesodrmica e presumivelmente seguem um caminho diferente para o
interior da gnada.
Migrao das Clulas Germinativas em Mamferos
No existe plasma germinativo bvio em mamferos, e as clulas germinativas de

mamferos no so morfologicamente distintas durante o desenvolvimento inicial.
Porm, usando anticorpos monoclonais que reconhecem diferenas na superfcie ce-
lular entre as PGCs e suas clulas circunjacentes, Hahnel e Eddy (1986) mostraram que
as PGCs de camundongos residem originalmente no epiblasto do embrio em gastru-
lao. Ginsburg e seus colegas (1990) localizaram essa regio no mesoderma extra-
embrionrio imediatamente posterior estria primitiva do embrio de camundongo de
Figura 22.2 sete dias. Aqui so vistas cerca de oito grandes clulas coradas pela fosfatase alcali-
Migrao das clulas germinativas primordiais na. Se essa rea for removida, o embrio remanescente torna-se livre de clulas
em uma r. Esta fotomicrografia de contraste germinativas, enquanto o segmento isolado desenvolve um grande nmero de clulas
de fase de uma seo atravs da parede corpo-
primordiais. Em embries de camundongos normais, os precursores das clulas
ral e mesentrio dorsal de um embrio de Xe-
nopus mostra a migrao de duas grandes c-
lulas germinativas primordiais (setas) ao longo *Isso no parece necessariamente ser verdade para todos os anuros. Na r Rana pipiens, as clulas
do mesentrio dorsal. (de Heasman et al., 1977, germinativas seguem um caminho semelhante mas podem ser viajantes passivos ao longo do mesentrio
cortesia dos autores.) em vez de clulas ativamente mveis (Subtelny e Penkala, 1984).
CAPTULO 22 A Saga da Linhagem Germinativa 845
Figura 22.3
Trajetria para a migrao de clulas germina-
tivas primordiais de mamfero. (A) clulas ger-
minativas primordiais vistas no saco vitelnico
Intestino
prximas da juno do intestino posterior e da
posterior Alantide alantide. (B) Migrao atravs do intestino e,
Intestino dorsalmente, acima do mesentrio dorsal para
anterior Sulcos
o interior do sulco genital. (C) Quatro grandes
genitais
PGCs no intestino posterior de um embrio de
camundongo (perto da alantide e do saco
vitelnico) se coram positivamente para altos
nveis de fosfatase alcalina. (D) Tais clulas
Corao podem ser vistas migrando subindo o mesen-
Clulas
trio dorsal e entrando nos sulcos genitais. (A
germinativas Mesonefros e B de Langman, 1981; C de Heath, 1879; D de
primordiais Mintz, 1957; fotografias cortesia dos autores.)
Mesentrio
dorsal
Saco vitelnico Intestino
(A) (B) Cloaca posterior
Clulas germinativas
primordiais
(C) Clulas germinativas primordiais (D) Mesentrio Sulcos

dorsal genitais
germinativas no mesoderma extra-embrionrio migram em seguida de volta para o

embrio, primeiramente para o mesoderma da linha primitiva e em seguida para o
endoderma atravs da alantide. O caminho dessa migrao (Figura 22.3) assemelha-
se migrao de PGCs em anuros. Aps juntarem-se na alantide no dia 7.5 (Chiquoine,
1954; Mintz, 1957), as PGCs de mamferos migram para o saco vitelnico adjacente
(Figura 22.3A,C). Nesse tempo, elas j se separaram em duas populaes que iro
migrar para o sulco genital direito ou esquerdo. Em seguida, as PGCs iro se mover
caudalmente no saco vitelnico atravs do intestino posterior recm-formado subindo
pelo mesentrio dorsal para dentro do sulco genital (Figura 22.3B,D.) A maioria das
PGCs alcanam a gnada em desenvolvimento no dcimo primeiro dia aps a fecunda-
o. Durante esse trajeto, elas tero se proliferado de uma populao inicial de 10 a 100
clulas para as 2500 a 5000 PGCs presentes nas gnadas no dia 12. Tal como as PGCs
de Xenopus, as PGCs de mamferos parecem estar estreitamente associadas com a
clulas sobre as quais elas migram, movimentando-se por extenso de filopdios
sobre as superfcies celulares subjacentes. Essas clulas tambm so capazes de
penetrar monocamadas celulares e migram atravs de camadas celulares (Stott e Wylie,

1986). O mecanismo pelo qual as clulas germinativas primordiais tm conhecimento
da rota dessa jornada permanece ainda desconhecido. A fibronectina provavelmente
um substrato importante sobre as quais as PGCs migram (ffrench-Constant et al.,
1991), e evidncia in vitro sugere que os sulcos genitais dos embries de camundon-
go de 10.5 dias secretam uma protena semelhante TGF-1 difusvel que capaz de
atrair as clulas germinativas primordiais do camundongo (Godin et al., 1990; Godin e
Wylie, 1991). Permanece por ser testado se o sulco genital pode prover tais sinais.
Embora nenhum plasma germinativo tenha sido encontrado, a reteno da potn-
cia total foi correlacionada com a expresso de um fator de transcrio nuclear, o Oct4.
Esse fator expresso em ncleos do blastmero de clivagem precoce sendo em segui-
da expresso na massa celular interna. Durante a gastrulao, ele expresso somente
naquelas clulas epiblsticas posteriores consideradas dar origem s clulas
germinativas primordiais. Depois, essa protena somente vista nas clulas
germinativas primordiais e em ocitos (Figura 22.4; Yeom et al., 1996; Prancha 30).
A proliferao das PGCs parece ser provida pelo fator da clula-tronco, o mes-
mo fator de crescimento necessrio para a proliferao dos melanoblastos derivados
da crista neural e de clulas-tronco hematopoiticas (veja Captulo 7). O fator da
clula-tronco produzido pelas clulas ao longo do seu trajeto de migrao e perma-
nece ligado s suas membranas celulares. Parece que a apresentao dessa protena
nas membranas importante para sua atividade. Camundongos homozigotos para a
mutao White (W) so deficientes em clulas germinativas (e em melancitos e
clulas sangneas), j que suas clulas-tronco carecem do receptor para o fator de
crescimento da clula-tronco. Camundongos homozigotos para a mutao Steel tm
um fentipo semelhante, pois tambm carecem da capacidade de produzir esse fator
de crescimento. Camundongos homozigotos para o alelo Steel-Dickie (Sld) tm um
nmero reduzido de clulas germinativas, pois embora esses camundongos possam
produzir o fator de crescimento da clula-tronco, esse no permanece ligado s suas
membranas (Dolci et al., 1991; Matsui et al., 1991). A adio do fator da clula-
tronco precursor s PGCs retiradas de camundongos de 11 dias ir estimular sua
proliferao por cerca de 24 horas e parece prevenir a morte programada de clulas
que de outra maneira iria ocorrer (Pesce et al., 1993).
(A) (B) (C)

Figura 22.4
Expresso de mRNA Oct4 se correlaciona com a totipotncia e a capacidade de formar clulas
germinativas. Um transgene Oct4/lacZ impulsionado pela regio promotora Oct4 mostra sua
expresso na (A) massa celular interna, (B) epiblasto posterior de um embrio de 8.5 dias, e (C)
em PGCs migrando em um embrio de 10.5 dias. (Segundo Yeom et al., 1996; permisso cortesia
de H. R. Schler.)
& Especulaes
Teratocarcinomas e Clulas-Tronco Embrionrias
O FATOR DA CLULA-TRONCO
aumenta a proliferao de clulas
germinativas primordiais de ca-
mundongo em cultura, e essa prolifera-
Epitlio
Eritrcitos
Clulas
queratinizadas
o pode ainda ser aumentada pela adio

de outro fator de crescimento, o fator de ini-
bio de leucemia (LIF). Porm, o tempo
de vida dessas clulas curto e elas mor-
rem logo. Se um regulador mittico adici-
onal- o fator de crescimento de fibrobalsto
bsico for adicionado, acontece uma mu-
dana notvel. As clulas continuam a pro-
liferar, produzindo uma clula-tronco em-
Matriz ssea Cartilagem Tecido Epitlio
brionria pluripotente com caractersti- conjuntivo queratinizante
cas semelhantes s das clulas da massa
celular interna (Matsui et al., 1992). Dis- Figura 22.5
cutimos essas clulas-tronco embrion- tumor, as clulas germinativas tornam-se c- Fotomicrografia de uma seo atravs de um
rias anteriormente, pois so as clulas que lulas-tronco embrionrias, tal como nos ex- teratocarcinoma mostrando numerosos tipos de
perimentos j referidos. Esse tipo de tumor clulas diferenciadas. (de Gardner, 1982, foto-
podem ser transfectadas com genes re-
grafia de C. Graham, cortesia de R. L. Gardner.)
combinantes e inseridas no blastocisto chamado teratocarcinoma. Seja espont-
para criar camundongos transgnicos. neo ou produzido experimentalmente, um
Tal clula germinativa ou clula-tronco teratocarcinoma contm uma populao de 1977). Alm disso, essas clulas-tronco no
de mamfero contm em seu interior toda a clulas-tronco no diferenciadas que tem somente se dividem, como tambm podem
informao necessria para o subseqente propriedades bioqumicas e desenvolvimen- se diferenciar em uma grande variedade de
desenvolvimento. O que aconteceria se tal tais notavelmente semelhantes quelas das tecidos, incluindo epitlios intestinal e res-
clula se tornasse maligna? Em um tipo de clulas da massa celular interna (Graham, piratrio, msculos, nervos, cartilagem e osso
Insero no
blastocisto
Incorporao
Transferncia cirrgica na massa
para a me de criao celular interna Isolamento da linhagem de Teratocarcinoma
clulas-tronco maligno
Figura 22.6
Protocolo para a criao de camundongos cujos genes so pre-
dominantemente derivados de clulas tumorais. Clulas-tronco
foram isoladas de um teratocarcinoma de camundongo e inseridas
em blastocistos de uma variedade diferente de camundongo. Os
Mosaico
Tipo selvagem blastocistos quimricos foram colocados em uma me de cria-
o. Se as clulas tumorais estiverem integradas no blastocisto,
o camundongo que se desenvolve ter muitas de suas clulas
derivadas do tumor. Se o tumor tiver dado origem s clulas
germinativas, os camundongos mosaicos podem ser cruzados
com camundongos normais para produzir uma gerao F1. Os
animais F1 devem ser heterozigotos para todos os cromossomos
das clulas tumorais. Cruzamentos entre animais F1 produzem
F1 onde as clulas germinativas Nova linhagem formada quando camundongos F2 tendo alguns genes homozigotos derivados
foram derivadas do tumor foram cruzados dois camundongos F1 das clulas tumorais. (Segundo Stewart e Mintz, 1981.)
(Figura 22.5). Uma vez diferenciadas, essas riedade agouti (ponta-amarela) de camun- portando um marcador apropriado, o ca-
clulas no podem mais se dividir e, portan- dongo foram cultivadas por vrias gera- mundongo quimrico foi capaz de gerar
to, no so malignas. Tais tumores podem es e foram vistas manter o complemen- camundongos tendo parte do fentipo do
dar origem maioria dos tipos de tecidos no to cromossmico caracterstico do ca- tumor paterno. A clula do carcinoma
organismo. Assim, as clulas-tronco do tera- mundongo ancestral. Clulas-tronco in- embrionrio maligno tinha produzido
tocarcinoma copiam o desenvolvimento ma- dividuais desse tipo foram injetadas em muitos, seno todos, tipos de clulas
mfero precoce, mas o tumor que formam blastocistos de camundongos negros. Os somticas normais, e tinham mesmo pro-
caracterizado por desenvolvimento rando- blastocistos foram em seguida transferi- duzido clulas germinativas normais,
mizado, descontrolado. dos para o tero de uma me de criao, funcionais! Quando camundongos ten-
Em 1981, Stewart e Mintz formaram nascendo camundongos vivos. Alguns do uma clula tumoral para um pai foram
um camundongo de clulas derivadas em desses tinham pelagem de duas cores, in- cruzados entre si, a prole resultante con-
parte de uma clula-tronco de teratocar- dicando que as clulas tumorais haviam tinha camundongos homozigotos para
cinoma. Clulas-tronco que haviam sur- se integrado no embrio. Alm disso, um grande nmero de genes da clula
gido em um teratocarcinoma de uma va- quando cruzado com um camundongo tumoral (Figura 22.6).
Migrao de Clulas Germinativas em Aves e Rpteis
Em aves e rpteis, as clulas germinativas primordiais so derivadas de clulas epi-

blsticas que migram da regio central da rea pelcida para uma zona em forma de
crescente no hipoblasto na borda anterior da rea pelcida (Figura 22.7; Eyal-Giladi et
al., 1981; Ginsburg e Eyal-Giladi, 1987). Essa regio extra-embrionria chamada de
crescente germinativo, e as clulas germinativas primordiais a se multiplicam. Ao
contrrio das PGCs em anfbios e mamferos, as clulas germinativas em aves e rpteis
migram primariamente por meio da corrente circulatria (Figura 22.8). Quando os va-
sos sangneos se formam no crescente germinativo, as PGCs penetram nos vasos e
so carreadas pela circulao para a regio onde est se formado o intestino posterior.
Aqui, elas saem da circulao, associam-se ao mesentrio, e migram para os sulcos
genitais (Swift, 1914; Kuwana, 1993). As PGCs do crescente germinativo parecem
entrar nos vasos sangneos por diapedese, um tipo de movimento em comum de
linfcitos e macrfagos que permite s clulas se espremerem entre as clulas
endoteliais dos vasos sangneos menores.
Crescente
germinativo
rea pelcida
rea opaca
Ndulo de Hensen
Figura 22.7
Vista dorsal de um embrio em estgio de linha primitiva, mostrando a regio, chamada crescente
germinativo, na qual se originam as clulas germinativas. (Segundo Swift, 1914.)
Vaso sangneo
Clulas sangneas
Epitlio gonadal
Clula
germinativa
primordial
(A) (B)
Figura 22.8
Clulas germinativas primordiais no embrio
Dessa forma, as PGCs entram no embrio sendo transportadas pelo sangue (Pasteels, do pinto. (A) Micrografia eletrnica de varre-
1953, Dubois, 1969). As PGCs tm tambm que saber como sair do sangue quando dura de PGC de pinto em um capilar de um
encontram a gnada em desenvolvimento (veja Figura 22.8B). Quando o crescente embrio em gastrulao. A PGC pode ser
germinativo de um embrio de pinto removido, e a circulao desse embrio junta- identificada pelo seu grande tamanho e as
da quela de um embrio normal, as clulas germinativas primordiais do embrio nor- microvilosidades em sua superfcie. (B) Se-
mal iro migrar para ambos conjuntos de gnadas (Simon, 1960). No conhecido o o transversal prxima prospectiva regio
que causa a atrao para os sulcos genitais. Uma possibilidade que a gnada em gonadal do embrio. Vrias PGCs dentro do
desenvolvimento produz uma substncia quimiottica que atrai as PGCs e as retm vaso sangneo se agregam prximo ao
epitlio. Uma PGC est atravessando o
nos capilares limitando a gnada (Regulska, 1969). (Tais substncias so conhecidas
endotlio da parede vascular, e outra j est
como secretadas pelos linfcitos nos locais de infeco para atrair os macrfagos localizada no interior do epitlio. (A de
permitindo que esses passem atravs da parede capilar por diapedese.) A evidncia Kuwana, 1993, cortesia de T. Kuwana; B se-
para essa quimiotaxia veio de estudos (Kuwana, et al., 1986) nos quais as PGCs gundo Romanoff, 1960.)
circulantes do pinto foram isoladas do sangue e cultivadas entre rudimentos gonadais
e outros tecidos embrionrios. As PGCs migraram para o interior dos rudimentos
gonadais durante 3 horas de incubao.
Outra possibilidade que as clulas endoteliais dos capilares gonadais tm um
composto na superfcie celular que promove as PGCs aderirem especificamente a esse
local. Usando anticorpos monoclonais que reconhecem diferentes molculas da su-
perfcie celular, Auerbach e Joseph (1984) mostraram que as clulas endoteliais de
vrias redes capilares tm diferentes componentes da membrana celular, e que as
clulas endoteliais de capilares ovarianos diferem de todas as outras testadas.* Tanto
a quimiotaxia como os mecanismos diferenciais de adeso celular podem estar atu-
ando. Seja como for, esses fatores no so espcie-especficos. A gnada do pinto
atrai as PGCs circulantes do peru e at mesmo do camundongo (Reynaud, 1969;
Regulska et al., 1971).
Migrao de Clulas Germinativas Primordiais em Drosophila

Primordiais
Durante a embriognese de Drosophila, as clulas germinativas passam do plo

posterior para as gnadas. O primeiro passo uma fase passiva, na qual as clulas
germinativas so deslocadas pelos movimentos das clulas embrionrias durante
a gastrulao. A diferenciao do endoderma aciona o movimento amebide ativo
*Uma situao semelhante parece ocorrer quando linfcitos migram atravs da corrente sangnea
e abandonam a circulao quando entram no leito capilar de um determinado rgo linfide. O mecanis-
mo para esse alojamento e especificidade para o rgo envolvem a capacidade do linfcito de
aderir especificamente s clulas endoteliais dos vasos sangneos nesses rgos. Clulas endoteliais
dos ndulos linfticos perifricos contm uma glicoprotena, uma selectina, em suas membranas
celulares que essencial para a ligao e sada daqueles linfcitos que podem reconhec-la. Para
cada selectina nessas clulas endoteliais, existe uma molcula complementar no linfcito que
pode reconhec-la (Gallatin et al., 1983, 1986).
(A) (B) (C)
Figura 22.9
Migrao de clulas germinativas em Droso-
phila. (A) Clulas germinativas coradas com
anticorpos contra a protena Vasa mostram c-
lulas germinativas originando do plo poste-
rior. (B) Durante a extenso da banda
germinativa, as clulas so movidas para o
intestino intermedirio posterior. (C) Clulas
germinativas migram atravs da parede do in- (D) (E)
testino (o embrio est contracorado para a Clulas germinativas
protena Engrailed) e (D) migram em duas
filas nicas atravs do mesoderma, onde (E)
elas se agregam nas gnadas em desenvolvi-
mento. (F) Processo de migrao atravs da
parede intestinal, iniciado pela diferenciao
endodrmica. (A-F de Warrior 1994, permis-
so cortesia de R. Warrior; F segundo Jaglarz
e Howard, 1995.)
(F)
nas clulas germinativas promordiais, e elas viajam atravs do endotlio intesti-

nal, migrando em direo ao mesoderma. A se dividem em dois grupos, cada qual
ficando associado com um primrdio da gnada em desenvolvimento (Figura 22.9;
Warrior et al., 1994).
O produto do gene wuwen parece ser responsvel pelo direcionamento da migrao
das PGCs do endoderma para dentro do mesoderma. Essa protena expressa no
endoderma imediatamente antes da migrao da PGC, e ele repele as PGCs. Nos mutan-
tes de perda de funo desse gene, as PGCs viajam ao acaso (Zhang et al., 1997).
Meiose
Uma vez na gnada, as clulas germinativas primordiais continuam a dividir-se mi-
toticamente, produzindo milhes de gametas potenciais. As PGCs de gnadas tanto
masculinas como femininas enfrentam ento a necessidade de reduzir seu nmero de
cromossomos da condio diplide para a haplide. Nessa ltima, cada cromossomo
est representado somente uma vez, enquanto as clulas diplides tm duas cpias de
cada cromossomo. Para conseguir essa reduo, as clulas germinativas masculina e
feminina passam por meiose.
Aps a ltima diviso meitica, ocorre um perodo de sntese de DNA, fazendo
com que as clulas iniciando a meiose tenham o dobro da quantidade normal de
DNA em seus ncleos. Nesse estado, cada cromossomo consiste de duas cromtides
irms fixadas a um centrmero comum. (Em outras palavras, o ncleo diplide
contm quatro cpias de cada cromossomo, mas os cromossomos so vistos como
duas cromtides ligadas.) A meiose (mostrada na Figura 1.13) envolve duas divises
celulares. Na primeira diviso, cromossomos homlogos (p.e., o par cromossmico 3
na clula diplide) se juntam e so ento separados em clulas diferentes. Assim,

a primeira diviso meitica separa cromossomos homlogos em duas clulas-fi-
lhas de modo que cada clula tenha somente uma cpia de cada cromossomo.
Porm, cada um dos cromossomos j se replicou. A segunda diviso meitica em
seguida separa as duas cromtides irms uma da outra. Em conseqncia, cada
uma das quatro clulas produzidas pela meiose tem uma nica cpia (haplide) de
cada cromossomo.
A primeira diviso meitica se inicia com uma longa prfase, que subdividida
em cinco partes. Durante o estgio leptteno (do grego, fio fino), a cromatina
das cromtides muito finamente esticada, e no possvel identificar os cro-
mossomos individuais. Porm, a replicao do DNA j ocorreu, e cada cromosso-
mo consiste de duas cromtides paralelas. No estgio zigoteno (do grego, fios
juntados), os cromossomos homlogos formam pares lado a lado. Esse empare-
lhamento chamado sinapse sendo caracterstico da meiose, e no ocorre durante
as divises mitticas. Embora o mecanismo pelo qual cada cromossomo reconhe-
ce seu homlogo no seja conhecido, o emparelhamento parece requerer a presen-
a da membrana nuclear e a formao de uma fita protica chamada complexo
sinptico. Esse complexo uma estrutura tipo escada com um elemento central e
duas barras laterais (von Wettstein, 1984; Schmekel e Daneholt, 1995). A cromati-
na est associada com as duas barras laterais e as cromtides esto assim ligadas
uma a outra (Figura 22.10). O exame do ncleo da clula meitica pelo microscpio
eletrnico (Moses, 1968; Moens, 1969) sugere que os pares de cromossomos
esto ligados membrana nuclear, e Comings (1968) sugeriu que o envoltrio
nuclear favorece o encontro dos cromossomos homlogos. A configurao forma-
da pelas quatro cromtides e do complexo sinptico referida como uma ttrade
ou uma bivalente.
Durante o prximo estgio da prfase meitica, as cromtides engrossam e se
encurtam. Esse estgio foi por isso chamado de paquiteno (do grego, fio gros-
so). As cromtides individuais podem agora ser distinguidas sob o microscpio
Cromatina
Elementos laterais
(A) (B)
Filamentos
transversos
Figura 22.10
O complexo sinptico. (A) cromossomos homlogos conserva- Elementos centrais
dos juntos na primeira prfase meitica no ocito de Neottiella. Pilar
(B) Diagrama interpretativo da estrutura do complexo sinptico.
Elementos laterais
(A de von Wettstein, 1971, cortesia de D. von Wettstein; B segun-
do Schmekel e Daneholt, 1995.) Cromatina
Figura 22.11
Quiasmas em cromossomos bivalentes dipltenos de ocitos de salamandra. Centrmeros so
visveis como crculos intensamente corados; as setas apontam para os dois quiasmas. (Corte-
sia de J. Kezer.)
de luz, e pode ocorrer crossing-over. Esse crossing-over representa trocas de

material gentico atravs do qual genes de uma cromtide so trocados por genes
homlogos de outra cromtide. Esse crossing-over continua no prximo estgio,
o diplteno (do grego, duplos fios). Aqui, o complexo sinptico se decompe, e
os dois cromossomos homlogos comeam a se separar. Em geral, porm, eles
ficam fixados em vrios lugares chamados quiasmas, os quais so considerados
representar regies onde ocorre o crossing-over (Figura 22.11). O estgio diplteno
se caracteriza por um alto nvel de transcrio gnica. Em algumas espcies, os
cromossomos tanto de clulas germinativas masculinas como femininas assu-
mem a aparncia de escova caracterstica de cromossomos que esto ativamen-
te fabricando RNA. Durante o prximo estgio, diacinese (do grego se afastan-
do), os centrmeros se afastam um do outro, e os cromossomos permanecem
ligados somente nas pontas das cromtides. Esse ltimo estgio da prfase meitica
termina com a desintegrao da membrana nuclear e a migrao dos cromosso-
mos para a placa da metfase.
Durante a anfase I, os cromossomos homlogos so separados um do outro de
uma maneira independente. Esse estgio conduz telfase I, durante a qual so for-
madas duas clulas-filhas, cada uma contendo um dos parceiros do par de cromosso-
mos homlogos. Aps uma breve intercinese, ocorre a segunda diviso da meiose,
durante a qual o centrmero de cada cromossomo se divide durante a anfase fazendo
com que cada uma das novas clulas obtenha uma das duas cromtides, o resultado
final sendo a criao de quatro clulas haplides. Notar que a meiose tambm reagrupou
os cromossomos em novos grupamentos. Cada uma das clulas haplides tem agora
um sortimento diferente de cromossomos. Em humanos, nos quais h 23 diferentes
pares de cromossomos, pode haver 223 (perto de 10 milhes) de diferentes tipos de
clulas haplides formados do genoma de uma nica pessoa. Alm disso, os cruza-
mentos (crossing-over) que ocorrem durante os estgios paquiteno e diplteno da
prfase I aumentam ainda mais a diversidade gentica tornando incalculvel o nmero
de gametas diferentes.
O mecanismo do emparelhamento homlogo desconhecido. Pensa-se que
os primeiros eventos envolvam a procura por regies homlogas de cromatina e
que esse processo possa utilizar enzimas reparadoras de DNA (Baker et al., 1996).
Mutantes de camundongo carentes de tais enzimas de reparo tm sinapses anor-
mais. Aps o alinhamento das regies homlogas, a sinapse iniciada em regies
localizadas. Em Drosophila, evidncia recente sugere que as sinapses so inicia-
das em regies de heterocromatina (Dernburg et al., 1996). Alm disso, intera-
es entre a protena Mei-S332 e a heterocromatina rodeando o cinetocentro so
crticas para manter as cromtides irms juntas (Karpen et al, 1995, 1996; Kerrebrock
et al. 1995). O gene para a protena Mei-S332 foi encontrado selecionando-se
mutaes para incapacidade de completar a meiose. Nesses mutantes, as
cromtides irms separam-se precocemente durante 90 porcento do tempo. Em
vertebrados, a protena Rad51 corresponde aos elementos laterais do complexo
sinptico e parece mediar o emparelhamento dos homlogos (Ashley et al., 1995).
Ao fim da meiose, essa protena est localizada somente em stios onde ainda
esto fixados os homlogos. Seria importante saber como essas e outras protenas
interagem durante a gametognese humana, j que a maioria dos eventos no
disjuncionais (como aqueles levando trissomias) so considerados defeitos do
pareamento meitico (veja Yoon et al., 1996).
& Especulaes
Grandes Decises: Mitose ou Meiose?

Espermatozide ou vulo?
E M MUITAS ESPCIES, as clulas (A) Gnada intacta
germinativas migrando para o in-
Regio de Zona de Regio de
terior das gnadas so bipotenci-
meiose transio mitose
ais e podem diferenciar-se em espermato-
zides ou vulos, conforme seu ambiente
gonadal. Quando ovrios de salamandras
so transformados experimentalmente em
testculos, as clulas germinativas residen-
Clula da
tes cessam sua diferenciao oognica e extremidade distal
comeam a desenvolver-se em espermato-
zide (Burns, 1930; Humphrey, 1931). Da (B) Clula da extremidade distal removida
mesma maneira, na mosca domstica e no
Todas clulas sofrem meiose
camundongo, a gnada pode direcionar a
diferenciao da clula germinativa
(McLaren, 1983; Inoue e Hiroyoshi,
1986). Assim, na maioria dos organismos,
o sexo das gnadas e de suas clulas ger-
minativas o mesmo.
Figura 22.12
Porm, o que se passa em animais her-
Regulao da deciso meiose-mitose pela clula
mafroditas, nos quais a mudana de produ- (C) MITOSE da extremidade distal do ovo-teste de C. elegans.
o de espermatozide para produo de (A) Gnada intacta no incio do desenvolvimen-
vulos um evento fisiolgico que ocorre to com regies de mitose (clulas sombreadas) e
naturalmente? Como pode o mesmo animal Regulador
terminal meiose. (B) Gnadas aps ablao por laser da
ser capaz de produzir espermatozide du- para mitose clula da extremidade distal. Todas as clulas
Trajetria da
rante parte de sua vida e ocitos durante determinao germinativas entram em meiose. (C) Modelo para
outra? Usando Caenorhabditis elegans, sexual as interaes pelas quais clulas germinativas
Kimble e seus colegas identificaram duas adotam um destino nico. O gene gld-1 est
decises que clulas germinativas presu- ativo (e ocorre oognese) a no ser que seja
mveis tm que fazer. A primeira envolve a inibido ou pelo sinal mittico (se a clula for
deciso de entrar em meiose ou permanecer ativada por GLP-1) ou pelo sinal espermatog-
uma clula-tronco dividindo-se mitotica- OOGNESE ESPERMATOGNESE nico (se os genes da determinao sexual como
mente. A segunda se a clula meitica ir tra-1 e fem-3 estiverem ativos). O sinal mittico
se converter em um vulo ou um espermato- tronco da linhagem germinativa sero pro- pode inibir tanto o sinal oognico (GLD-1) como
zide. Evidncia recente mostra que essas duzidas perto dessa nova posio (Figura o sinal espermatognico (FOG-1, FOG-3).
Ambos sinais inibem o sinal mittico, e o sinal
decises esto intimamente ligadas. A deci- 22.12; Kimble, 1981; Kimble e White,
espermatognico pode inibir o sinal oognico.
so mittica/meitica controlada por uma 1981). Parece que as clulas da extremidade
A mitose promovida pela ativao de GLP-1
nica clula que no se divide, no terminal distal secretam alguma substncia que man-
da clula germinativa, enquanto a trajetria da
de cada gnada, a clula da extremidade tm essas clulas em mitose e inibe sua dife- determinao sexual pode ativar os genes fog-1
distal. Os precursores das clulas germinati- renciao meitica. Austin e Kimble (1987) e fog-3. (C segundo Ellis e Kimble, 1995.)
vas prximos dessa clula dividem-se mito- isolaram uma mutao que mimetiza o
ticamente formando o reservatrio de clu- fentipo obtido quando as clulas da extre- produzem somente de 5 a 9 clulas esper-
las germinativas, mas medida que essas midade distal so removidas. Todos os pre- mticas. Quando so produzidas quimeras
clulas se afastam da clula da extremidade cursores das clulas germinativas de genticas nas quais so encontrados precur-
distal, elas entram em meiose. Se as clulas nematides homozigotos para a mutao sores de clulas germinativas do tipo selva-
da extremidade distal forem destrudas por recessiva glp-1 iniciam a meiose, no dei- gem em larvas mutantes, as clulas do tipo
um feixe focalizado de raio laser, todas as xando populao mittica. Em lugar das selvagem so capazes de responder s clu-
clulas germinativas entram em meiose, e se 1500 clulas germinativas geralmente en- las da extremidade distal e sofrer mitose.
a clula da extremidade distal for colocada contradas no quarto estgio larval do desen- Porm, quando precursores de clulas ger-
em um local diferente na gnada, clulas- volvimento hermafrodito, esses mutantes minativas mutantes so encontrados em
(A) Tipo selvagem: Espermatozides e ocitos de. Por exemplo, mutantes homozigotos
mog (masculinizao da linhagem germi-
nativa) se desenvolvem como machos pro-
dutores de espermatozide, e mutantes ho-
mozigotos fem-1 desenvolvem-se como f-
meas produtoras de vulos (Figura 22.13).
Os mutantes duplos homozigotos tanto
para tra-1 como para fem-1 tm um nico
fentipo. Eles so somaticamente machos,
Espermateca
(regio de mas so fmeas na linhagem germinativa
armazenagem de (Doniach e Hodgkin, 1984). Isso sugere que
Espermatozides Primeiro ocito
espermatozide)
maduros tra-1 o gene chave na determinao se-
Estgios precoces da espermatognese
xual dos tecidos somticos, mas que os
genes fem so responsveis pela deciso es-
permatozide/ocito (Figura 22.14).
(B) Feminilizado: Somente ocitos
Os laboratrios de Hodgkin (1985) e
Kimble (1986) isolaram vrios genes ne-
cessrios para a seleo do caminho da c-
lula germinativa. A Figura 22.14 apresenta
um esquema de como esses genes podiam
funcionar na mudana de formao de es-
permatozide para a formao de ocito.
Durante o desenvolvimento precoce, os
genes fem, em especial fem-3, so crticos
Espermateca (vazia) Primeiro ocito para a especificao das clulas espermti-
cas. Mutaes de perda-de-funo desses
(C) Masculinizado: Somente espermatozides genes convertem nematides XX em fme-
as (i.e., hermafroditas sem espermatozide).
Enquanto so produzidas protenas FEM
nas clulas germinativas, so produzidos
espermatozides. Os genes fem ativos so
considerados ativar os genes fog (cujas mu-
taes de perda-de-funo causam a femi-
nizao da linhagem germinativa e elimi-
nam a espermatognese). Os produtos do
gene fog ativam os genes envolvidos na
Espermatozide maduro Estgios precoces transformao da clula germinativa em es-
Espermateca
da espermatognese permatozide e tambm inibem aqueles
Figura 22.13 genes que iriam de outra maneira dirigir as
Gnadas de C. elegans tipo selvagem e mutante. (A) Hermafrodita tipo selvagem produzindo clulas germinativas para iniciar a oogne-
primeiro espermatozides e em seguida vulos. (B) Animal fmea produzido por mutao fem-
se. A oognese pode comear somente
1 produz somente vulos. (C) Hermafrodita masculinizado produzido por mutaes de perda-de-
quando a atividade fem suprimida. Essa
funo de genes mog (ou mutaes do 3UTR de fem-3) produz somente espermatozides.
(Fotografia cortesia de J. Kimble.)
supresso parece atuar ao nvel da tradu-
o do RNA. A regio 3 no-traduzida
larvas do tipo selvagem, essas entram em te, em cada ovrio/testculo, as clulas ger- (3UTR) do mRNA de fem-3 contm uma
meiose. Assim, o gene glp-1 parece ser res- minativas mais prximas produzem esper- seqncia que liga um repressor durante o
ponsvel pela capacitao de clulas ger- matozide, enquanto as mais distantes (per- desenvolvimento normal. Se essa regio
minativas responderem ao sinal das clulas to da extremidade) tornam-se vulos mudada de maneira que a protena repres-
da extremidade distal.* (Hirsch et al., 1976). A gentica dessa mu- sora no pode se ligar, o mRNA de fem-3
Aps as clulas comearem suas divi- dana est atualmente sendo analisada. permanece traduzvel, e a oognese nunca
ses meiticas, ainda precisam transformar- Conforme discutido no Captulo 20, os ocorre. O resultado um corpo de herma-
se em espermatozide ou vulo. Geralmen- genes para a determinao sexual geram frodita que somente produz espermatozi-
ou um corpo feminino funcionalmente her- de (Ahringer e Kimble, 1991; Ahringer et
* O gene glp-1 parece estar envolvido em vri- mafrodita ou um corpo masculino. Na lial., 1992). O fator de represso que age no
as interaes indutivas em C. elegans. Deve ser
nhagem germinativa, o caminho da deter- trans ainda no foi identificado, mas pro-
relembrado que glp-1 tambm necessitado pelo
blastmero AB para receber os sinais indutivos do minao sexual ativa ou reprime certos vavelmente o produto de um dos genes
blastmero EMS para formar os msculos farngeos genes que so crticos para as clulas se mog (Graham e Kimble, 1993). Pensa-se que
(veja Captulo 13). transformarem em vulo ou espermatozi- protenas ou mensagens estocadas no
(A) Determinao sexual somtica Figura 22.14

Modelo da determinao sexual na linhagem
germinativa de hermafroditas de C elegans,
baseado na anlise de mutaes. (A) Deter-
minao sexual em tecidos somticos, mos-
trando uma hierarquia de regulao negativa.
baixo ALTO baixo ALTO baixo ALTO (B) Controle da determinao sexual na linha-
gem germinativa. Os genes fog-2 e mog-1 re-
ALTO baixo ALTO baixo ALTO baixo gulam a determinao sexual na linhagem
germinativa. Os genes fog-1 e fog-3 agem a
jusante para iniciar a espermatognese. (Se-
(B) Determinao sexual da linhagem germinativa gundo Ellis e Kimble, 1995.)
Em mutantes de perda-de-funo para gld-

1, a oognese est ausente e as clulas da
linhagem germinativa continuam a proli-
ferar formando tumores (Francis et al., 1995;
Jones et al., 1996).
ESPERMA- Em Drosophila, as clulas germinati-
baixo ALTO ALTO baixo ALTO TOZIDES vas so instrudas pelas clulas gonadais,
precoce
para se diferenciarem em espermatozide
baixo ALTO baixo ALTO baixo OCITOS
tardio ou vulo. As clulas gonadais femininas
ALTO baixo ALTO baixo ALTO ESPERMA- produzem um produto que recebido pela
TOZIDES clula geminativa e que ativa uma srie
de protenas cuja atividade essencial para
ocito podem controlar o momento desse mudando a gametognese de espermato- a transcrio precoce do gene Sxl da clu-
processo, fazendo com que a espermatog- zide para vulos. Um outro gene gld-1 la germinativa. Uma razo apropriada X:
nese ocorra enquanto h repressores da ex- (defeituoso no desenvolvimento da linha- autossomo tambm necessria. Por esse
presso de mog. Quando esses inibidores gem germinativa) essencial para que a mecanismo, as moscas XX acabam produ-
maternos da expresso de mog decaem, as oognese ocorra. A entrada de ocitos zindo vulos, enquanto as moscas XY pro-
protenas MOG tornam-se capazes de ini- presuntivos na via meitica correlaciona- duzem espermatozide (Burtis, 1993,
bir a sntese das protenas FEM, com isso se com um dramtico aumento de GLD-1. Oliver et al., 1993).
Espermatognese
A espermatognese a produo de espermatozide pelas clulas germinativas pri-
mordiais. Uma vez que as clulas germinativas primordiais de mamferos chegam no
sulco genital dos embries masculinos, elas se incorporam s cordas sexuais. A per-
manecem at a maturidade quando as cordas sexuais tornam-se ocas para formar os
tbulos seminferos, e o epitlio dos tbulos se diferencia em clulas de Sertoli. Du-
rante sua vida, um homem pode produzir de 1012 a 1013 gametas (Reijo et al., 1995). As
clulas espermticas so ligadas s clulas de Sertoli por molculas de N-caderina em
suas respectivas superfcies celulares, e por molculas de galactosil-transferase nas
clulas espermatognicas que ligam um receptor nas clulas de Sertoli (Newton et al.,
1993; Pratt et al., 1993.) As clulas de Sertoli alimentam e protegem as clulas esperm-
ticas em desenvolvimento, e espermatognese - a via de desenvolvimento da clula-
tronco espermatognia at o espermatozide maduro ocorre nos recessos das clu-
las de Sertoli (Figura 22.15). Os processos pelos quais as PGCs produzem espermato-
zide foram estudados em detalhe em vrios organismos, mas enfocaremos aqui a
espermatognese em mamferos. Aps atingir a gnada, as PGCs se dividem para
formar espermatognias tipo A1. Essas clulas so menores que as PGCs e so carac-
terizadas por um ncleo ovide que contm cromatina associada com a membrana
nuclear. As espermatognias A1 so encontradas adjacentes membrana basal exter-
na das cordas sexuais. Na maturidade, essas espermatognias so consideradas divi-
dir-se para produzir uma outra espermatognia tipo A1, assim como um tipo de clula
mais plida, a espermatognia tipo A2. Assim, cada espermatognia tipo A1 uma
clula-tronco capaz de se regenerar assim como produzir um novo tipo de clula. A
espermatognia tipo A2 se divide para produzir a espermatognia tipo A3, que produz
Lmem do tbulo
Espermtides
Corpo residual
Espermatcito secundrio
Espermatcito primrio
Espermatognia Tipo A1
Clula de Espermatognia
Espermatognia
Sertoli Tipo B
Tipo A2
Figura 22.15
Desenho de uma seo do tbulo seminfero, a espermatognia tipo A4. possvel que cada tipo de espermatognia A seja uma
mostrando a relao entre clulas de Sertoli e o clula-tronco capaz de auto-renovao. A espermatognia A4 tem trs opes. Ela
espermatozide em desenvolvimento. medi-
pode formar outra A4 (auto-renovao); pode apresentar morte celular (apoptose), ou
da que as clulas amadurecem, elas progridem
em direo ao lmen do tbulo seminfero. (Se- pode diferenciar-se na primeira clula-tronco comprometida, a espermatognia inter-
gundo Dym, 1977.) mediria. Essas esto comprometidas a se tornarem espermatozide e se dividem uma
vez para formar as espermatognias tipo B. Essas clulas so os precursores dos
espermatcitos e so as ltimas clulas a sofrerem mitose. Essas clulas dividem uma
vez, gerando os espermatcitos primrios - as clulas que entram em meiose. No
conhecido o que faz com que as espermatognias tomem o caminho da diferenciao
em lugar da auto-renovao; tambm no conhecido o que estimula as clulas a
entrar em diviso meitica em vez de mittica (Dym, 1994).
Examinando a Figura 22.16, vemos que durante as divises espermatognicas, a
citocinese no completa. Antes, as clulas formam um sinccio pelo qual cada clula
se comunica com a outra atravs de pontes citoplamticas de cerca de 1 m de dime-
tro (Dym e Fawcett, 1971). As sucessivas divises produzem clones de clulas
interconectadas, e como ons e molculas passam facilmente por essas pontes interce-
lulares, cada grupo amadurece sincronicamente.
Cada espermatcito primrio sofre a primeira diviso meitica para fornecer um par
de espermatcitos secundrios, que completam a segunda diviso da meiose. As
clulas haplides formadas so chamadas espermtides e ainda esto conectadas
uma a outra por pontes citoplasmticas. Essas espermtides tm ncleos haplides
mas so funcionalmente diplides, j que o produto gnico formado em uma clula
pode facilmente se difundir para o citoplasma de suas vizinhas (Braun et al., 1989).
Durante as divises de espermatognias tipo A1 at a espermtide, as clulas se
distanciam mais e mais da membrana basal do tbulo seminfero e se aproximam de seu
lmen (veja Figura 22.15). Assim, cada tipo de clula pode ser encontrado em uma
camada particular do tbulo. As espermtides esto localizadas na margem do lmen,
Espermatognia tipo A1 Mais espermatognia tipo A1 Figura 22.16

ou Formao de clones sinciciais de clulas ger-
minativas masculinas humanas. (Segundo
Bloom e Fawcett, 1975.)
Espermatognias tipo A2
Espermatognias tipo A 3
Espermatognias tipo A 4
Espermatognias intermedirias
Espermatognias
tipo B
Pontes citoplasmticas
Espermatcitos primrios
(1a diviso meitica)
Espermatcitos secundrios
(2a diviso meitica)
Espermtides
Corpos residuais
Clulas espermticas
aqui perdendo duas conexes citoplasmticas e diferenciando-se em clulas esperm-

ticas. Em humanos, a progresso da clula-tronco espermatognica at o espermato-
zide maduro demora 65 dias (Dym, 1994).
Espermiognese
A espermtide haplide uma clula redonda no-flagelada que no se parece em

absoluto com o espermatozide maduro dos vertebrados. O prximo passo na
maturao do espermatozide, portanto, a espermiognese (ou espermateliose), a
diferenciao da clula espermtica. Para que a fecundao possa ocorrer, o esper-
matozide ter que encontrar e ligar-se ao vulo; a espermiognese diferencia o es-
permatozide para essas funes de motilidade e interao. Os processos da diferen-
ciao do espermatozide mamfero podem ser vistos na Figura 4.2. O primeiro pas-
so envolve a construo da vescula acrossmica a partir do aparelho de Golgi. O
acrossomo forma uma coroa que cobre o ncleo espermtico. medida que a coroa
formada, o ncleo gira fazendo com que a coroa acrossmica fique de frente para a
membrana basal do tbulo seminfero. Essa rotao necessria porque o flagelo est
comeando a se formar do centrolo do outro lado do ncleo, e esse flagelo ir se
estender para o interior do lmen. Durante o ltimo estgio da espermiognese, o
ncleo se achata e se condensa, o citoplasma remanescente (a gotcula citoplasmtica)
descartado, e as mitocndrias formam um anel em volta da base do flagelo. O
espermatozide resultante penetra em seguida no lmen do tbulo.
No camundongo, o integral desenvolvimento da clula-tronco at o espermato-
zide leva 34.5 dias. Os estgios espermatognicos duram 8 dias, a meiose 13 dias, e a
espermiognese gasta mais 13.5 dias. Em seres humanos, o desenvolvimento
espermtico perto de duas vezes mais longo. Como as espermatognias do tipo A1
so clulas-tronco, a espermatognese pode ocorrer continuamente. Cada dia, perto
de 100 milhes de espermatozides so produzidos em cada testculo humano, e
cada ejaculao liberta cerca de 200 milhes de espermatozides. Quando no usa-
do, esses so reabsorvidos ou eliminados do organismo pela urina.
& Especulaes
Expresso Gnica
Durante o Desenvolvimento do Espermatozide
Expresso Gnica Antes da nas ligantes de RNA so crticas na esper- dos genes especficos do espermatozide
Meiose Masculina matognese porque muitos dos genes ex- transcrito aquele para a 2-tubulina. Essa
A expresso gnica no espermatozide es- pressos no espermatozide so regulados no isoforma da tubulina vista somente du-
tgio-especfica, e mesmo as clulas hapli- nvel da traduo (Schfer et al., 1995). Re- rante a espermatognese, e responsvel
des so aptas a sintetizar certos produtos. A almente, em alguns animais, muito da es- pela formao de fusos meiticos, do
iniciao da espermatognese na puberda- permatognese ocorre na ausncia de trans- axonema e dos microtbulos associados
de provavelmente regulada pela sntese crio de novos genes. A sntese de com as mitocndrias em processo de ex-
de BMP8B pelas espermatognias. Quan- protamina, a protena bsica que substitui tenso.* Hoyle e Raff (1990) mostraram que
do BMP8B atinge uma concentrao crti- as histonas no ncleo espermtico haplide uma outra isoforma da tubulina, a 3-
ca, as espermatognias podem se diferenci- do espermatozide, regulada pela fosfori- tubulina (que normalmente expressa em
ar em espermtides redondas. Essas clulas lao de uma protena ligante de 18-kDa clulas mesodrmicas e na epiderme), no
produzem altos nveis de BMP8B, que po- que reconhece a regio 3 no-traduzida da pode substituir a 2-tubulina.. Quando os
dem estimular as espermatognias a se dife- mensagem protamina do camundongo autores fundiram a regio regulatria 5 do
renciarem. Camundongos carentes de (Kwon e Hecht, 1993). gene da 2-tubulina com a seqncia
BMP8B no iniciam a espermatognese na Em Drosophila, o gene roughex trans- codificadora do gene da 3-tubulina, esse
puberdade (Zhao et al., 1996). Em huma- crito por espermatognias de Drosophila gene pde ser expresso no espermatozide
nos, o gene DAZ localizado no brao longo pr-meitica controla o nmero de divi- em desenvolvimento. Quando esse gene foi
do cromossomo Y est deletado em muitos ses meiticas. Machos carentes de c- expresso na ausncia do gene da 2-
homens infrteis, muitos dos quais no pro- pias funcionais do gene roughex sofrem tubulina, as clulas germinativas resultan-
duzem espermatozide algum. O gene DAZ uma metfase meitica extra em adio s tes no sofreram meiose, reunio de
expresso exclusivamente em clulas ger- duas normais. O aumento da concentra- axonemas, ou conformao nuclear. So-
minativas masculinas, especialmente nas es- o de Roughex resulta na incapacidade mente ocorreu a extenso mitocondrial. Isso
permatognias, e parece codificar uma pro- de executar meiose II (Gnczy et al., 1994). indica que a formao dos fusos meiticos
tena ligante de RNA (Reijo et al., 1995; e do axonema de clulas espermticas no
Menke et al., 1997). DAZ homlogo de Expresso Gnica durante a
* A confeco do axonema espermtico em
dois genes da Drosophila, Rb97D e boule, Meiose Masculina
Drosophila uma tarefa de monta. A cauda do es-
os quais tambm codificam protenas Muito da transcrio gnica durante a espermatozide tem 2 mm de extenso to compri-
ligantes de RNA, e ambos so essenciais para permatognese ocorre durante o estgio da quanto a mosca masculina inteira. O espermato-
a espermatognese. Espermatognias se de- diplteno da prfase meitica. Os genes que zide da espcie relacionada D. bifurca, de 58.3 mm
generam em moscas masculinas deficientes so transcritos especificamente durante a de comprimento, aproximadamente 20 vezes
mais longo que as moscas que o produzem.
em Rb97D, enquanto as clulas germinati- espermatognese so freqentemente aque-
notvel que o ovo de D. melanogaster incorpo-
vas de moscas carentes do gene boule no les cujos produtos so necessrios para mo- ra todo o espermatozide (Karr, 1991). Somen-
entram em meiose (Karsch-Mizrachi e tilidade do espermatozide ou sua fixao te cerca de 3 mm do espermatozide de D. bifur-
Haynes, 1993; Eberhart et al., 1996). Prote- ao vulo. Em Drosophila melanogaster, um ca incorporado pelo ovo (Pitnick et al., 1995).
conseguida por qualquer tubulina e que para o alelo mutante, leva a embries nor-
a transcrio de suas isoformas especficas mais. Um desses genes de efeito paterno o
do espermatozide importante. spe-11 em C. elegans. Os espermatozides
Os genes cujos produtos so necess- contendo alelos mutantes nesse loco so in-
rios para ligao do espermatozide e das capazes de direcionar movimentos cromos-
matrizes extracelulares do vulo so tam- smicos que orientam o fuso mittico do em-
bm transcritos durante a espermatog- brio, sugerindo que a mutao afeta as regi-
nese. O gene da bindina do ourio-does organizadoras dos microtbulos, tais
mar transcrito relativamente tarde na como os centrolos (Figura 22.18; Hill et al.,
espermatognese e seu mRNA traduzi- 1989). Mutaes de efeito paterno foram
do em bindina logo aps ser produzido identificadas em Drosophila e essas podem
(Nishioka et al., 1990). A bindina se acu- tambm envolver a estrutura do fuso mittico
mula em vesculas que se fundem para do zigoto (Karr, 1996). [fert10.html]
formar a vescula acrossmica nica no
espermatozide maduro do ourio-do- Expresso Gnica Terminal
mar. A Figura 22.17 mostra a localizao Por fim, o genoma haplide condensado
da protena bindina na vescula across- medida que as histonas so substitudas
mica do espermatozide enquanto esse por protaminas ou histonas especificamen-
ainda est nos testculos. te modificadas. Muitas histonas do esper-
matozide so modificadas no estgio de
Expresso Gnica Haplide espermtide tardia da espermiognese. Es-
em Espermatcitos. sas modificaes (tal como a desfosforila-
Alm da transcrio de genes em clulas o das regies N-terminais de certas
diplides durante a prfase meitica, cer- histonas causam a condensao da cro-
tos genes so transcritos na espermtide matina), que resulta em severa reduo da
(revisado por Palmiter et al., 1984). Essa transcrio. Assim, a transcrio do geno-
evidncia para expresso gnica hapli- ma masculino no detectada novamente
de vem de estudos envolvendo camun- at ser reativada algum tempo durante o
Figura 22.17
dongos heterozogotos nos quais so vis- desenvolvimento (Poccia,1986; Green e
Localizao de bindina no acrossomo do es-
tas duas populaes diferentes de esper- permatozide, por meio de anticorpos antibin- Poccia, 1988).
matozide uma expressando o fentipo dina marcados com ouro. Os tomos de ouro
mutante, e outra expressando a caracters- permitem aos anticorpos aparecerem como
tica tipo selvagem. Se a sntese do RNA pontos negros na micrografia eletrnica. Es-
ou da protena ocorresse enquanto as c- ses espermatozides ainda esto no interior
dos testculos do ourio-do-mar. (Cortesia de
lulas ainda fossem diplides, todo o es- D. Nishioka.)
permatozide apresentaria o mesmo
fentipo. Transcries do gene para a Genes de Efeito Paterno
protamina so vistas nas clulas hapli- Em algumas espcies, o espermatozide for-
des precoces (espermtides redondas) em- nece importante informao desenvolvimen- (A)
bora sua traduo seja retardada por vri- tal que no pode ser compensada pelo vulo.
os dias (Peschon et al., 1987). O gene para J discutimos a impresso (imprinting) de
a 1, 4-galactosiltransferase que liga o es- cromossomos de mamferos no qual o DNA
permatozide zona pelcida somente do espermatozide e do vulo diferem nos
transcrito durante a fase haplide da ma- seus padres de metilao (veja Captulos 4 e
turao do espermatozide do camundon- 11). Existem tambm casos de genes de efei-
go (Hardvin-Lepers et al., 1993). Esses to paternos. Aqui, alelos homozigotos reces-
genes expressos no estgio haplide po- sivos no macho causam desenvolvimento
dem ser regulados pelo hormnio estimu- anormal no embrio, mesmo se a fmea for
lador de folculos da glndula pituitria homozigota para o alelo de tipo selvagem, (B)
(Foulkes et al. 1993; Blendy et al.,1996; enquanto o cruzamento recproco, no qual o Figura 22.18
Nantel et al., 1996).* pai do tipo selvagem e a me homozigota Fotomicrografias imunofluorescentes de fusos
mitticos no embrio de primeira clivagem de
* Esse mecanismo parece indevidamente complexo. Os genes ps-meiticos parecem ser regulados C. elegans quando o espermatozide (A) de
pelo fator de transcrio CREM. Esse gene para o fator de transcrio, o modulador do elemento responsivo um macho tipo selvagem e (B) de um macho
ao AMP-cclico transcrito durante a espermatognese precoce, mas a mensagem decai rapidamente. A homozigoto para o gene spe-11 de efeito pater-
protena que produz, inibe a transcrio de dois genes ps-meiticos. Porm, a recepo de FSH pelas clulas no. Em (B), trs centrolos organizadores de
meiticas causa a emenda alternativa do precursor do mRNA de CREM, fazendo com que ele se torne uma microtbulos podem ser vistos em lugar dos
mensagem estvel para uma isoforma ativadora da molcula. O direcionamento para o alvo do gene CREM dois plos mitticos usuais. (De Hill et al., 1989,
de camundongo resulta na ausncia da expresso gnica ps-meitica e na morte dos espermatcitos. cortesia de S. Strome.)
Oognese
Meiose oognica
Oognese - a diferenciao do vulo- difere de vrias maneiras da espermatognese.

Enquanto o gameta formado pela espermatognese essencialmente um ncleo mvel,
o gameta formado pela oognese contm todos os fatores necessrios para iniciar e
manter o metabolismo e o desenvolvimento. Portanto, alm de formar um ncleo
haplide, a oognese tambm constri um reservatrio de enzimas citoplasmticas,
mRNAs, organelas e substratos metablicos. Enquanto o espermatozide torna-se dife-
renciado para motilidade, o ocito desenvolve um citoplasma notavelmente complexo.
Os mecanismos da oognese variam mais que os da espermatognese. Essa dife-
rena no deve surpreender, j que os padres de reproduo variam extremamente
entre espcies. Em algumas espcies, tais como os ourios-do-mar e as rs, a fmea
rotineiramente produz centenas ou milhares de vulos de uma vez, enquanto em outras
espcies, como nos seres humanos e na maioria dos mamferos, somente so produzi-
dos alguns vulos durante a vida de um indivduo. Nas espcies que produzem milha-
res de vulos, as oognias so clulas-tronco auto-renovveis que perduram durante a
vida do organismo. Nas espcies que produzem menos vulos, as oognias se dividem
para formar um nmero limitado de clulas precursoras de vulos. Em humanos, as
mil, ou coisa assim, oognias dividem-se rapidamente do segundo ao stimo ms da
gestao para formar cerca de 7 milhes de clulas germinativas (Figura 22.19). Aps o
stimo ms do desenvolvimento, porm, o nmero de clulas germinativas decresce
abruptamente. A maioria das oognias morre durante esse perodo, enquanto as oognias
remanescentes entram na prfase da primeira diviso meitica (Pinkerton et al., 1961).
Essas clulas tardias, chamadas de ocitos primrios, progridem atravs da primeira
prfase meitica at o estgio diplteno, no qual so mantidas at a puberdade. Com o
advento da adolescncia, grupos de ocitos periodicamente reiniciam a meiose. Assim,
na fmea humana, a primeira parte da meiose iniciada no embrio, e o sinal para
reiniciar a meiose no dado antes de decorridos cerca de 12 anos. Na realidade, al-
guns ocitos so mantidos em prfase meitica por perto de 50 anos. Como indicado
na Figura 12.19, ocitos primrios continuam a morrer mesmo aps o nascimento. Dos
milhes de ocitos primrios presentes na ocasio do nascimento, somente cerca de
400 amadurecem durante a vida da mulher.
Nmero de clulas germinativas x 106
Nascimento
Meses antes Anos aps o nascimento

da concepo
Figura 22.19
Mudanas no nmero de clulas germinativas no ovrio humano. (Segundo Baker, 1970.)
Figura 22.20
Formao do corpo polar no ocito do peixe branco Coregonus. (A) Anfase da primeira diviso
meitica, mostrando o primeiro corpo polar comprimindo-se com seus cromossomos. (B) Metfase
(no interior do ocito, seta) da segunda diviso meitica, com o primeiro corpo polar ainda no seu
lugar. O primeiro corpo polar pode ou no dividir-se novamente. (de Swanson et al., 1981,
cortesia de C. P. Swanson.)
A meiose oognica tambm difere da espermatognese na sua colocao na placa

metafsica. Quando o ocito primrio se divide, o seu ncleo, chamado de vescula
germinativa, se desintegra e o fuso metafsico migra para a periferia da clula. Na
telfase, uma das duas clulas-filhas contm praticamente nada de citoplasma, en-
quanto a outra tem quase a totalidade do volume dos constituintes celulares (Figura
22.20). A clula menor chamada de primeiro corpo polar, e a clula maior referida
como o ocito secundrio. Durante a segunda diviso da meiose, ocorre uma citocinese (A)
semelhante. A maior parte do citoplasma retida pelo vulo maduro e o segundo
corpo polar recebe pouco mais que um ncleo haplide. Assim, a meiose oognica
serve para conservar o volume do citoplasma do ocito em uma nica clula em lugar
de dividi-lo igualmente entre quatro prognies.
Em algumas espcies de animais, a meiose severamente modificada fazendo
com que o gameta resultante seja diplide e no necessite ser fertilizado para se
desenvolver. Tais animais so ditos ser partenogenticos. Na mosca Drosophila
mangabeirai, um dos corpos polares atua como espermatozide e fecunda o ocito
aps a segunda diviso meitica. Em outros insetos (como a Moraba virgo) e o
lagarto Cnemidophorus uniparens, a oognia duplica seu nmero de cromossomos
antes da meiose, a fim de que a diviso dos cromossomos restaure o nmero diplide.
As clulas germinativas do gafanhoto Pycnoscelus surinamensis dispensam a meiose
por completo, formando vulos diplides atravs de duas divises mitticas (Swanson
et al., 1981). Nos exemplos precedentes, as espcies consistem inteiramente de fme- (B)
as. Em outras espcies, a partenognese haplide largamente empregada no so-
mente como um meio de reproduo, mas tambm como um meio de determinao
sexual. Nos Himenpteros (abelhas, vespas e formigas), ovos no-fertilizados desen-
volvem-se em machos, enquanto ovos fertilizados, sendo diplides, desenvolvem-se
em fmeas. Os machos haplides so capazes de produzir espermatozide abando-
nando a primeira diviso meitica, com isso formando duas clulas espermticas atra-
vs da segunda meiose.
Maturao do Ocito em Anfbios
O ovo responsvel pela iniciao e direcionamento do desenvolvimento, e em algu-

mas espcies (conforme visto anteriormente), a fecundao nem necessria. O
material acumulado no citoplasma do ocito inclui fontes de energia e organelas (o
vitelo e as mitocndrias); as enzimas e precursores para sntese de DNA, RNA e Tabela 22.1 Componentes celulares
armazenados no ocito maduro de
protenas; RNAs mensageiros armazenados; protenas estruturais; e fatores regula- Xenopus laevis
dores morfogenticos que controlam a embriognese precoce. Um catlogo parcial
Excesso aproximado em
dos materiais armazenados no citoplasma do ocito mostrado na Tabela 22.1. A relao quantidade
maior parte dessa acumulao ocorre durante a prfase meitica I, e esse estgio Componente existente em clulas larvais
freqentemente subdividido em fases pr-vitelognica (do grego, antes da formao
do vitelo) e vitelognica (formadora de vitelo). Mitocndria 100.000
RNA polimerases 60.000 100.000
Ovos de peixes e anfbios so derivados de uma populao de clulas-tronco DNA polimerases 100.000
oognias que pode gerar um novo grupo de ocitos cada ano. Na r Rana pipiens, a Ribossomos 200.000
oognese dura trs anos. Durante os dois primeiros anos, o ocito aumenta de tama- tRNA 10.000
nho gradualmente. Durante o terceiro ano, porm, o rpido acmulo de vitelo no Histonas 15.000
Deoxirribonucleosdeo 2.500
ocito faz com que o vulo inche, atingindo seu caracterstico tamanho grande (Fi- trifosfatos
gura 22.21). Os vulos amadurecem em grupos anualmente, o primeiro grupo ama-
durece pouco aps a metamorfose; o prximo grupo amadurece um ano depois. Fonte: Segundo Laskey, 1979.
Figura 22.21
Crescimento de ocitos na r. Durante os trs
primeiros anos de vida so produzidos trs gru-
pos de ocitos. Os desenhos seguem o cresci-
mento dos ocitos da primeira gerao. (Se-
gundo Grant, 1953.)
Primeiro grupo
Fase vitelognica
Dimetro (mm)
Fase pr-vitelognica
Segundo grupo
Terceiro grupo
Primavera
Primavera
Primavera
Inverno
Inverno
Inverno
Outono
Outono
Outono
Vero
Vero
Vero
Primeiro ano Segundo ano Terceiro ano
A vitelognese ocorre quando o ocito alcana o estgio diplotnico da prfase

meitica. O vitelo no uma substncia nica, mas uma mistura de materiais usados
para a nutrio do embrio. O principal componente do vitelo uma protena de 470-
kDa, chamada vitelogenina. Essa no produzida no ocito da r (como so as
principais protenas do vitelo de organismos tais como os aneldeos e o lagostim),
mas sintetizada no fgado e levada pela corrente sangnea at o ovrio (Flickinger
e Rounds, 1956). Essa grande protena passa entre as clulas foliculares do ovrio e
incorporada ao ocito por micropinocitose, o desligamento de vesculas envoltas
pela membrana na base das vilosidades (Dumont, 1978). No ocito maduro, a
vitelogenina cindida em duas protenas menores: a altamente fosforilada fosvitina
e lipoprotena lipovitelina. Essas duas protenas esto acondicionadas juntas em
plaquetas do vitelo envoltas pela membrana (Figura 22.22A). Grnulos de glicognio
e incluses lipocondriais armazenam o carboidrato e os componentes lipdicos do
vitelo, respectivamente.
A maioria dos vulos so altamente assimtricos, e durante a oognese que
o eixo animal-vegetal do vulo especificado. Danilchik e Gerhart (1987) mostra-
ram que embora a concentrao de vitelo em ocitos de Xenopus aumente cerca de
10 vezes medida que vai do plo animal para o plo vegetal do ovo maduro, a
captao de vitelogenina uniforme na superfcie do ocito. O que difere seu
movimento dentro do ocito, que depende do local onde se deu a entrada das
protenas vitelnicas. Quando as plaquetas do vitelo so formadas no futuro he-
misfrio animal, movimentam-se em direo ao centro da clula. As plaquetas do
vitelo vegetal, porm, no se movem ativamente, permanecendo na periferia por
muito tempo, a aumentando de tamanho. Elas so depois deslocadas lentamente
do crtex medida que novas plaquetas entram da superfcie. Como um resultado
desse transporte intracelular diferenciado, a quantidade de vitelo aumenta regu-
larmente no hemisfrio vegetal, at que a metade vegetal do ocito maduro de
Xenopus contenha perto de 75% do vitelo (Figura 22.22B-E). O mecanismo dessa
translocao permanece desconhecido.
(A) (B) (C) (D) (E)
Figura 22.22
Distribuio do vitelo em Xenopus. (A) Uma plaqueta de vitelo anfbio. (B-E) Estabelecimento
da polaridade animal-vegetal das plaquetas de vitelo em ocitos de Xenopus. (B) No ocito no
final do estgio III (600 m), plaquetas de vitelo penetram na clula igualmente por todos os
pontos da superfcie. (C,D) medida que o ocito cresce, as plaquetas do futuro plo animal
so deslocadas para o plo vegetal, enquanto aquelas no plo vegetal a permanecem. Continua
a entrada de vitelo por todos os lados. (E) Ao fim da vitelognese, as plaquetas mais precoces
(III) esto todas no hemisfrio vegetal, que concentrou agora 75% do vitelo do ocito. O
momento de entrada do vitelo nas plaquetas do ocito est indicado pelo grau de sombreamento
e nmeros romanos: III, plaquetas de estgio III; IV-e, plaquetas do estgio precoce IV; IV-
l:plaquetas de estgio tardio IV; V, plaquetas do estgio V; gv, vescula germinativa. (Segundo
Danilchik e Gerhart, 1987; fotografia cortesia de L. K. Opresko.)
medida que o vitelo est sendo depositado, as organelas tambm se arran-

jam assimetricamente. Os grnulos corticais comeam a se formar a partir do apa-
relho de Golgi, estando originalmente espalhados aleatoriamente atravs do cito-
plasma do ocito. Posteriormente, migram para a periferia da clula. As mitocndrias
se replicam nesse perodo, dividindo-se para formar milhes de organelas que
sero distribudas para as diferentes clulas durante a clivagem. (Em Xenopus no
so formadas novas mitocndrias antes do incio da gastrulao.) Quando a
vitelognese se aproxima de seu final, o citoplasma do ocito se estratifica. Os
grnulos corticais, mitocndrias e grnulos pigmentados so encontrados na pe-
riferia da clula, dentro do crtex do ocito rico em actina. No interior do citoplas-
ma interior, emergem gradientes distintos. Enquanto as plaquetas do vitelo se
concentram mais no plo vegetal, os grnulos de glicognio, ribossomos, vesculas
lipdicas e retculo endoplasmtico so encontrados mais em direo do plo ani-
mal. Mesmo os mRNAs especficos armazenados no citoplasma se localizam em
determinadas regies do ocito. [germ1.html]
Enquanto os mecanismos precisos para o estabelecimento desses gradientes
permanecem desconhecidos, estudos usando inibidores mostraram que o citoes-
queleto criticamente importante para a localizao de RNAs especficos e de
fatores morfogenticos. Parece haver dois caminhos para conseguir a localizao
no crtex vegetal (Foristall et al., 1995; Kloc e Etkin, 1995). Mensagens tais como
as que codificam a protena Vg1 esto inicialmente presentes em todo o ocito,
sendo trasladadas para o crtex vegetal em dois passos (Yisraeli et al., 1990). Na
primeira fase, so necessrios microtbulos para trazer o mRNA Vg1 para o hemis-
frio vegetal. Na segunda fase, os microfilamentos so responsveis pelo
ancoramento da mensagem de Vg1 no crtex. A poro do mRNA Vg1 que se liga
a esses elementos citoesquelticos reside na regio 3 no-traduzida. Quando uma
seqncia especfica de 340 bases colocada sobre uma mensagem de -globina, o
mRNA -globina colocado de maneira semelhante no crtex vegetal (veja Captu-
lo 12; Mowry e Melton, 1992). Outros mRNAs, como Xlsirt (uma famlia de RNAs
RNAs que no codificam protenas mas podem ser necessrios para a manuteno de Vg1
maternos
no crtex), Xwnt11 e Xcat2 (que codifica uma protena ligante de RNA relacionada
a Nanos), deixam a vescula germinativa para se localizarem na nuvem mitocondri-
al no plo vegetal do ncleo. Essas mensagens ficam compartimentalizadas em
agregados associados com o plasma germinativo e so transportadas para o crtex
vegetal de uma maneira que parece ser independente do citoesqueleto (Figura 22.23;
Estgio 1-2 Kloc et al., 1996).
Concluso da meiose: Progesterona e Fecundao

Progesterona
Estgio 2-3 Ocitos de anfbios podem permanecer anos no estgio diplteno da prfase meitica.
O recomeo da meiose no ocito primrio dos anfbios requer progesterona. Esse
hormnio secretado pelas clulas foliculares em resposta ao hormnio
gonadotrfico secretado pela hipfise. Seis horas aps a estimulao por
progesterona, ocorre a desintegrao da vescula germinativa (GVBD), as
microvilosidades se retraem, os nuclolos se desintegram e os cromossomos em
Estgio 4
forma de escova se contraem e migram para o plo animal para iniciar a diviso.
Pouco depois, ocorre a primeira diviso meitica, e o vulo maduro liberado pelo
ovrio pelo processo da ovulao. Quando liberado, esse vulo se encontra na
segunda metfase meitica.
Como pode a progesterona capacitar o vulo a interromper sua dormncia e reiniciar
a meiose? Para compreender esse mecanismo de ativao, necessrio revisar rapida-
mente o modelo para diviso precoce do blastmero apresentado no Captulo 5. O
Trajetria Vg1 Trajetria metro fator promotor da maturao (MPF) responsvel pelo reincio da meiose. Sua ativida-
(Xwnt11, Xcat2)
de cclica, sendo alta durante a diviso celular e indetectvel durante a interfase. O
Figura 22.23 MPF uma protena quinase que contm uma subunidade enzimtica (ciclina). Como
Representaes esquemticas de duas trajet- todos os componentes do MPF esto presentes no ocito do anfbio, considera-se
rias para a localizao de mRNAs na regio que a progesterona de alguma maneira converte um complexo pr-MPF em MPF ativo,
vegetal do ocito de Xenopus. A trajetria talvez pela ativao da fosfatase cdc25 (veja Captulo 5; Minishull, 1993).
METRO (organizadora do transporte de men- O mediador do sinal de progesterona provavelmente a protena c-mos. A
sagens message transport organizer) acumu-
progesterona reinicia a meiose, fazendo o ovo poliadenilar o mRNA c-mos mater-
la mensagens na nuvem mitocondrial, e suas
ilhas so transportadas para o crtex do plo nal que havia sido armazenado em seu citoplasma (Sagata et al., 1988, 1989; Sheets
vegetal. Na trajetria Vg1 so vistas mensa- et al., 1995). Essa mensagem traduzida em uma fosfoprotena de 39-kDa, pp39mos,
gens por todo o ovo, porm, essas so trasla- detectvel somente durante a maturao do ocito, sendo rapidamente destruda
dadas por um sistema movido pelos microt- aps a fecundao. No entanto, durante sua breve vida, essa protena exerce um
bulos para os microfilamentos do crtex vege- papel principal na liberao do vulo da sua dormncia. Se a traduo de pp39mos
tal. (Segundo Kloc e Etkin, 1995.) for inibida (injetando-se mRNA mos-antisenso no ocito), esse no aparece e a
desintegrao da vescula germinativa e a renovao da maturao do ocito no
acontecem. Aps ter estimulado o reincio da meiose, pp39mos capacita o ocito a
passar por uma diviso meitica, mas congela o segundo ciclo meitico na metfase.
Esse bloqueio causado pelas aes combinadas de pp39mos e outra protena, a
quinase 2 dependente de ciclina (cdk2; Gabrielli et al., 1993). Essas duas protenas
so consideradas constituir o fator citoesttico (CSF) encontrado nos ovos ma-
duros da r, que pode bloquear os ciclos celulares na metfase (Masui, 1974).
Acredita-se que o CSF previne a degradao da ciclina.
A prxima pergunta envolve os mecanismos pelos quais a fecundao capacita
o ocito que est na segunda metfase a completar a diviso para formar um gameta
haplide. Evidncia recente sugere que o fluxo de ons de clcio ocorrendo durante
a fecundao capacita a protena ligante de clcio calmodulina a tornar-se ativa. A
calmodulina, por sua vez, pode ativar a protena quinase II dependente de calmodulina.
Essa necessria e suficiente para inativar a quinase cdc2 e estimular a degradao
de c-mos (Lorca et al., 1993). A calpaina II, uma protease dependente de clcio,
degrada pp39mos (Watanabe et al., 1989). Assim, os dois componentes do CSF so
inativados ou destrudos. Sem CSF, a ciclina pode ser degradada, e a diviso meitica
pode ser completada (Figura 22.24).
Progesterona secretada Liberao da

pelas clulas foliculares parada da metfase
libera a parada da interfase pela fertilizao
Metfase: meiose II
Parada em Meiose I parada de metfase Mitose I
Estgio do
interfase em metfase mediada por CSF Primeira fase-S em metfase
ciclo celular
Alta
Atividade de MPF
Baixa
Sntese protica Calpaina II Ciclina B

Cam-PK II
Estgio
desenvolvimental Esperma-
tozide
Ocito Imaturo GVBD Ocito ou Fertilizao Primeira Primeira

(Parada G2) (primeira meiose) vulo maduro mitose clivagem
(segunda meiose)
Figura 22.24
Representao esquemtica da maturao do ocito de Xenopus, mostrando a regulao da divi-
so meitica da clula por pp39mos, cdk2 e calpaina II. A linha slida no grfico representa os
nveis relativos de MPF ativo. As barras sob o traado mostram os perodos quando as snteses
de determinadas protenas so necessrias para a entrada na prxima fase M. GVBD o ponto da
desintegrao da vescula germinativa. A morfologia do ocito est representada embaixo. (Se-
gundo Minishull, 1993.)
Transcrio Gnica em Ocitos
Na maioria dos animais (insetos sendo uma exceo importante), o ocito em cresci-
mento ativo na transcrio de genes onde os produtos so ou (1) necessrios para
o metabolismo celular, (2) necessrios para processos especficos do ocito, ou (3)
requeridos para o desenvolvimento precoce antes do ncleo comear a funcionar. Em
camundongos, por exemplo, o ocito diplteno em crescimento est ativamente trans-
crevendo os genes para as protenas da zona pelcida ZP1, ZP2 e ZP3. Esses genes
so transcritos somente no ocito e no em qualquer outra clula (Epifano et al., 1995;
veja Captulo 2).
O ocito anfbio tem certos perodos em que a sntese de RNA muito ativa.
Durante o estgio diplteno, certos cromossomos estendem grandes laos de DNA,
fazendo com que o cromossomo se assemelhe a uma escova (um til instrumento para
limpeza de tubos de ensaio em tempos anteriores ao uso de materiais descartveis).
Esses cromossomos em forma de escova (Prancha 2) podem ser vistos nos locais da
sntese de RNA por hibridizao in situ. Cromossomos de ocitos podem ser prepara-
dos, desnaturados e incubados com RNA radiativo que codifica uma protena espec-
fica. Aps o RNA no-ligado ter sido removido por lavagem, a auto-radiografia visualiza
a localizao precisa do gene. A Figura 22.25 mostra o cromossomo diplteno I da
salamandra Triturus cristatus aps incubao com mRNA da histona radiativo. Fica
Figura 22.25
bvio que o gene (ou conjunto de genes) da histona est localizado em uma das Localizao (ponta da seta) dos genes histona
dobras do cromossomo em forma de escova (Old et al., 1977). Micrografias eletrnicas em um cromossomo em forma de escova em um
de transcritos de genes dos cromossomos em forma de escova tambm permitem que ocito de anfbio. Os genes foram visualizados
se veja cadeias de mRNA destacando-se de cada gene medida que esse estiver por hibridizao in situ e auto-radiografia. (de
sendo transcrito (Hill e MacGregor, 1980). Old et al., 1977, cortesia de H. G. Callan.)
Figura 22.26 Alta RNAs ribossmicos

Produo de RNA ribossmico em ocitos de tRNA
Taxa relativa de sntese

Xenopus. (A) Taxas relativas da sntese de
DNA, tRNA e rRNA na oognese de anfbios
durante os ltimos trs meses antes da ovula- DNA
o. (B) A transcrio do precursor do RNA
dos RNAs ribossmicos 28S, 18S e 5.8S. Es-
sas unidades esto ligadas em srie, aproxima-
damente 450 por genoma haplide. (A de RNA 5S
Gurdon, 1976; B cortesia de O. L. Miller Jr.) Baixa
Amplificaes de rDNA
Hormnio
Ocito pituitrio
Comea o totalmente
acmulo de vitelo crescido Fertilizao
3 meses crescimento do ocito Maturao

16 horas
Transcrio por
gravidade do RNA Fim da
(B) Comea a transcrio ribossmico transcrio DNA de espaamento no-transcrito
Em adio sntese de mRNA, os padres de transcrio de rRNA e tRNA so

tambm regulados durante a oognese. A Figura 22.26 A mostra a sntese de
ribossomos e RNA de transferncia durante a oognese de Xenopus. A transcrio
parece comear em ocitos precoces (estgio I, 25-40 m), durante o estgio diplteno
da meiose. Nesse ponto, todos os RNAs ribossmico e de transferncia necessrios
para a sntese protica at o estgio de blstula intermediria so produzidos, e
todos os mRNAs maternos para o desenvolvimento precoce so transcritos. Esse
estgio dura meses em Xenopus. A taxa de produo de RNA ribossmico espan-
tosa. O genoma do ocito de Xenopus tem mais de 1800 genes codificando o rRNA
18S e 28S, e esses genes so amplificados seletivamente at que existam mais de
500.000 genes produzindo esses RNAs ribossmicos (Figura 22.26B; Brown e Dawid,
1968). Aps atingir certo tamanho, os cromossomos do ocito maduro (estgio VI)
se condensam, e os genes no esto transcrevendo ativamente. Essa condio de
ocito maduro tambm pode perdurar por meses. Aps estimulao hormonal, o
ocito completa sua primeira diviso meitica e ovulado. Os mRNAs armazenados
pelo ocito agora se juntam aos ribossomos para iniciar a sntese protica. Dentro
de horas, a segunda diviso meitica comeou, e o ocito secundrio foi fertilizado.
Os genes do embrio no comeam a transcrio ativa antes da transio da blstula
intermediria (Davidson, 1986). [germ2.html]
Conforme vimos no Captulo 12, os ocitos de vrias espcies produzem duas
classes de mRNAs aqueles de uso imediato no ocito e aqueles que so armazena-
dos para uso durante o desenvolvimento precoce. Em ourios-do-mar, a traduo
das mensagens maternas armazenadas iniciada pela fecundao, enquanto em rs o
sinal para tal traduo iniciado pela progesterona quando o ovo est prestes a ser
ovulado. Uma das aes da atividade da quinase MPF induzida pela progesterona pode
ser a fosforilao das protenas ligantes de CPE nos mRNAs do ocito armazenados.
A fosforilao desses fatores est associada com o prolongamento das caudas

poli(A) nas mensagens armazenadas e com a traduo dos mRNAs armazenados
(Paris et al., 1991).
Oognese Merostica em Insetos
Existem vrios tipos de oognese em insetos, mas a maioria dos estudos focalizaram
os insetos, tais como Drosophila e mariposas, que sofrem oognese merostica.
Nesse processo as conexes citoplasmticas permanecem entre as clulas produzidas
pelo oognio. Em Drosophila, cada oognio se divide quatro vezes para produzir um
clone de 16 clulas conectadas uma outra atravs de canais anelares. A produo
dessas clulas interconectadas (chamadas cistcitos) envolve uma seqncia alta-
mente organizada de divises celulares (Figura 22.27). Somente as duas clulas apre-
sentando quatro interconexes so capazes de se desenvolver em ocitos, e dessas
duas, somente uma torna-se um vulo. A outra inicia a meiose mas no a termina.
Figura 22.27
Assim, somente um de 16 cistcitos pode tornar-se um vulo. Todas as outras clulas A formao de 16 cistcitos interconectados
se tornam clulas nutrizes. Mostra-se que a clula destinada a ser o ocito aquela em Drosophila. (A) Diagrama de um ovarolo
residindo na extremidade mais posterior da cmara do ovo que contm o clone de 16 adulto mostrando a seqncia da oognese com
clulas. Porm, j que as clulas nutrizes esto conectadas ao ocito atravs de suas cistos germinativos mais jovens, amadurecen-
pontes citoplasmticas, o complexo inteiro pode ser visto como uma unidade produ- do dentro do ovarolo. (B) Diviso das clulas
tora de um vulo. formadoras de cistcitos (cistoblastos). As
O ovrio merostico nos confronta com alguns problemas interessantes. Se todas clulas esto representadas esquematicamente
as clulas esto conectadas de modo que as protenas e os RNAs podem transitar dividindo-se em um nico plano. Uma clula-
tronco se divide para produzir outra clula-tron-
livremente entre elas, porque teriam destinos desenvolvimentais diferentes? Porque
co mais uma clula comprometida a formar os
uma clula se torna o ocito enquanto as outras se tornam fbricas sintetizadoras de cistcitos. Somente um dos 16 cistcitos tor-
RNA, enviando mRNAs, ribossomos e mesmo centrolos para o interior do ocito? na-se um ocito; os outros tornam-se clulas
Porque o fluxo de protena e RNA vai somente em uma direo? medida que os nutrizes, conectadas ao ocito por canais ane-
cistcitos se dividem, se forma uma grande estrutura rica em espectrina chamada lares (pontes citoplasmticas). O centrolo do
fussomo, cobrindo as pontes citoplasmticas entre as clulas (Figura 22.27). Esse cistcito 1 retm o fussomo (em vermelho),
construdo assimetricamente, pois sempre cresce do plo do fuso que permaneceu que cresce atravs do canal anelar em direo
em uma das clulas (Lin e Spradling, 1995). A clula que reteve o fussomo durante a sua irm mittica. A seta mostra a polaridade,
primeira diviso se torna o ocito. No ainda conhecido se o fussomo contm de- apontando para a clula da qual cresceu o
fussomo. Aps mais trs divises mitticas
terminantes oognicos, ou se ele dirige o trfego de materiais para o interior dessa
formado o cisto de 16 clulas. Se o transporte
clula em particular. intracelular for coordenado pelo fussomo, o
Uma vez estabelecidos os padres de transporte, o citoesqueleto fica ativamente transporte de mRNAs e protenas iria para o
envolvido no transporte de mRNAs das clulas nutrizes para o citoplasma do ocito cistcito 1, que assim se tornaria o ocito. (A
(Cooley e Theurkauf, 1994). O arranjo microtubular crtico para a determinao do segundo Ruohola et al., 1991; B segundo Lin e
ocito. Se essa grade for rompida (quimicamente ou por mutaes tais como bicaudal-D Spradling, 1995.)
(A) Anterior Clula nutriz Ocito Posterior
Clulas
foliculares
posteriores
(B)
Mais 2
divises
Cistoblasto Cisto de 2 clulas
em diviso
Fussomo
ou egalitarian), os produtos dos genes so transmitidos em todas as direes e

todas as 16 clulas se diferenciam em clulas nutrizes (Gutzeit, 1986; Theurkauf et
al., 1992, 1993; Spradling, 1993). possvel que alguns compostos transportados
das clulas nutrizes para o ocito fiquem associados com protenas transportadoras
como a cinesina, o que poderia capacit-las a viajar na esteira de microtbulos
estendendo-se atravs do canal anelar (Theurkauf et al., 1992; Sun e Wyman, 1993).
A actina pode tornar-se importante na manuteno dessa distino durante os est-
gios mais tardios da oognese. Mutaes que impedem microfilamentos de actina
forrarem os canais anelares previnem o transporte de mRNAs da clula nutriz para o
ocito, e a ruptura dos filamentos de actina faz com que a distribuio de mRNA seja
ao acaso (Cooley et al., 1993; Watson et al., 1993). Assim, o citoesqueleto microtubular
e microfilamentoso parece controlar o movimento de organelas e RNAs entre clulas
nutrizes e ocito fazendo com que os sinais desenvolvimentais sejam trocados
Figura 22.28
somente na direo apropriada.
Transporte de mRNA de clulas nutrizes para
ocitos da mosca. (A,B) Auto-radiografias da
clula folicular da mosca domstica, Musca TRANSPORTE DE RNA DAS CLULAS NUTRIZES PARA O OCITO. Os ocitos
domestica, aps incubao com citidina [3H]. de insetos merosticos no passam pelo estgio transcricional ativo, nem apresentam
(A) Cmara do ovo fixada imediatamente aps cromossomos em forma de escova. Ao contrrio, evidncia auto-radiogrfica mostra
introduo da marca. Os ncleos das clulas que a sntese de RNA , em grande parte, confinada s clulas nutrizes e que o RNA
nutrizes esto fortemente marcados, indican- produzido por essas clulas ativamente transportado para o citoplasma do ocito.
do que esto sintetizando novo RNA. O ocito Isso pode ser visto na Figura 22.28. Quando as cmaras de ovo da mosca domstica
permanece no-marcado exceto onde algum so incubadas em citidina radioativa, os ncleos das clulas nutrizes mostram intensa
RNA esteja escapando para o ocito atravs
marcao. Quando a marcao interrompida, e as clulas so incubadas por mais 5
da conexo citplasmtica entre esse e a clula
nutriz (seta). (B) Uma cmara do ovo seme- horas em meios no-radioativos, o RNA marcado visto entrar no ocito a partir das
lhante fixada 5 horas mais tarde. A marca clulas nutrizes (Bier, 1963). A oognese ocorre em somente 12 dias, sendo as clu-
desapareceu dos ncleos da clula nutriz, las nutrizes metabolicamente muito ativas durante esse tempo. Elas so ajudadas na
movendo-se para o citoplasma. Alm disso, o sua eficincia transcricional tornando-se politnicas. Em lugar de ter duas cpias de
RNA radiativo pode ser visto passando para cada cromossomo, elas replicam seus cromossomos at terem produzido 512 cpias.
o citoplasma do ocito atravs dos dois canais As 15 clulas nutrizes so conhecidas por passar RNAs ribossmicos e mensageiros
entre as clulas nutrizes e o ocito. (C) Auto- assim como protenas para o citoplasma do ocito; e ribossomos inteiros podem ser
radiografia da cmara do ovo de Drosophila tambm transportados (Prancha 16). Os mRNAs no se associam com polissomos,
corada por uma sonda radioativa para o mRNA
sugerindo que eles no so imediatamente ativos na sntese protica (Paglia et al.,
bicoid. Essa mensagem transportada das c-
lulas nutrizes e permanece na poro mais an- 1976; Telfer et al., 1981).
terior do ocito. (A e B de Bier, 1963, corte-
sia de D. Ribbert; C de Stephanson et al.,
1988, cortesia de E. C. Stephanson.)
(A) (B) (C)
Ncleo da
clula nutriz
Citoplasma da
clula nutriz
Citoplasma
do ocito
Epitlio
folicular
& Especulaes
A Origem dos Eixos Embrionrios de

Drosophila Durante a Oognese
gurken
O S EIXOS NTERO-POSTERIOR e A reorientao dos microtbulos um (A)

dorsoventral so estabelecidos evento crtico. Os mRNAs nanos e oskar WT
Ncleo
durante a metade da oognese so sintetizados pelas clulas nutrizes e so oskar
(Gonzlez-Rayes et al., 1995; Roth et al., inicialmente vistos na futura zona anterior
1995). O mRNA para o determinante ante- do vulo. Esses mRNAs podem ser trans-
rior, bicoid, colocado na regio anterior portados para o plo posterior ao longo dos
do vulo; os mRNAs para os determinan- microtbulos para o teminal positivo (mas bicoid
tes posteriores, oskar e nanos, so envia- no para o terminal negativo). Assim, essas
dos para o plo posterior; a mensagem mensagens podem agora ser transportadas gurken
gurken fica concentrada em uma regio do para o plo posterior. A mensagem oskar
oskar
vulo, a iniciando as reaes que estabe- crtica para a organizao do plasma polar, (B)
lecem esse lado como a superfcie dorsal e se for traduzida antes de atingir o plo PKA - bicoid
do embrio. Os mecanismos para a cons- posterior, pode estabelecer abdomens e c-
truo desses eixos envolvem complexas lulas germinativas em outros lugares. Du-
interaes entre as clulas nutrizes, o ocito rante sua jornada para o posterior, a mensa-
e as clulas foliculares (veja Figura 14.13). gem oskar reprimida pela protena Bru-
Primeiro, a mensagem gurken produzida no (que se liga 3UTR da mensagem
pelas clulas nutrizes, e se aglutina ao re- oskar). Uma vez na posio posterior, essa
dor do ncleo do ocito, posicionando-se represso abolida e a protena Oskar pode Figura 22.29
ser produzida (Kim-Ha et al., 1995; Rongo Localizao do RNA nos ocitos de Drosophi-
entre o ncleo e a membrana plasmtica. O
la tipo selvagem e mutantes deficientes em PKA.
ncleo est na regio posterior do vulo, e et al., 1995). Reciprocamente, a mensagem
(A) No ocito do tipo selvagem (estgio 9), o
a protena Gurken recm-transcrita ativa seu bicoid conservada no anterior pelos ter-
mRNA oskar est no plo posterior, o mRNA
receptor nas clulas foliculares no plo pos- minais negativos dos microtbulos. Se es- bicoid est nas margens anteriores, e o mRNA
terior. (A protena Gurken se parece com o ses forem desagregados, a mensagem se gurken est localizado no canto anterior dorsal.
fator de crescimento epidrmico.) Essas c- difunde para o citoplasma, e se a polarida- (B) Nos ocitos deficientes em PKA, a distri-
lulas foliculares do plo posterior responde dos microtbulos for retida em sua con- buio da mensagem gurken no afetada, mas
dem enviando um sinal (talvez AMP formao original (como nas moscas caren- o mRNA oskar deixa de se localizar no plo
cclico) que ativa a protena quinase A tes em PKA), a mensagem bicoid ser trans- posterior e se acumula centralmente, enquanto o
(PKA) na membrana celular do ocito. portada para o plo posterior (Figura 22.29; mRNA bicoid transportado para o plo poste-
Como um resultado da ativao de PKA, Macdonald et al., 1991; Marcey et al., 1991; rior. (Segundo Lasko, 1995.)
os microtbulos do ocito so reorienta- Pokrywka e Stephenson, 1991.) Esse posi-
dos (Lane e Kalderon, 1994).* Em lugar cionamento do mRNA bicoid na futura as clulas foliculares adjacentes se conver-
de ter seus terminais positivos apontados posio anterior a das mensagens oskar e tam em clulas dorsais. (As clulas folicula-
para as clulas nutrizes (i.e., anteriormen- nanos na futura posio posterior estabele- res polares e laterais produzem protenas di-
te), elas revertem seus terminais positivos ce as condies para a organizao do eixo ferentes e respondem de maneira diferente
de modo que fiquem posteriores (onde ntero-posterior (veja Captulo 15). ao sinal Gurken. As clulas foliculares pola-
havia estado o ncleo). O realinhamento dos microtbulos faci- res ativam a PKA do ocito; as clulas foli-
lita o movimento do ncleo com seu sinal culares laterais se tornam dorsalizadas e re-
*PKA tambm conhecida por organizar mi- Gurken, ao longo da membrana plasmtica primem a sntese de protenas ventralizan-
crotbulos no crescimento axnico (Shea et al.,
1992), e como vimos no Captulo 1, isso pode do vulo em direo ao canto dorsal anteri- tes). Assim, os eixos ntero-posterior e dor-
mediar a diferenciao da clula peduncular em or (Roth et al., 1995; GonzlezReyes et al., soventral em Drosophila so iniciados an-
Dictyostelium (Williams et al., 1993). 1995). Aqui, a protena Gurken faz com que tes mesmo de ocorrer a fertilizao.
TRANSPORTE DAS PROTENAS DO VITELO PARA O OVO. As trs principais

protenas do vitelo em Drosophila so produzidas no corpo gorduroso e ovrio,
mas no no ocito propriamente dito (Bownes, 1982; Brennen et al., 1982). A sntese
do vitelo controlada por vrios agentes interativos, incluindo sexo, nveis de
Crebro hormnio juvenil, ecdisona e nutrio. Esses agentes fisiolgicos so integra-

dos pela regio intensificadora entre os dois genes da protena do vitelo de
Drosophila (veja Figura 10.13; Bownes et al, 1988). Esses genes so somente
Hormnio cerebral
ativos em moscas fmeas, e isso regulado pela ligao da protena Doublesex
especfica de fmea a essa regio do intensificador. Acredita-se que um hormnio
cerebral, respondendo a sinais ambientais*, estimule o corpora allata a secretar
Corpora allata hormnio juvenil (Figura 22.30). O hormnio juvenil (1) regula a captao de
peptdeos vitelnicos na superfcie do ocito, (2) estimula a sntese de protenas
vitelnicas do ovrio (que so idnticas quelas produzidas pelo corpo gorduro-
Hormnio juvenil so), e (3) faz com que os folculos ovarianos e outras clulas abdominais secretem
ecdisona. Essa metabolizada para sua forma ativa - 20-hidroxiecdisona - e esti-
Clulas Ovrio
mula o corpo gorduroso a produzir protenas do vitelo, tal como o estradiol esti-
abdominais
produtoras de mula o fgado anfbio a faz-lo. Da mesma maneira, a administrao de ecdisona a
ecdisona machos adultos faz com que seus corpos gordurosos secretem protenas vitelnicas
(Postlethwait et al., 1980) e que a protena vitelnica seja levada para os ocitos de
Protenas
Ecdisterides vitelnicas insetos atravs de endocitose mediada por receptores (Raikhel e Dhadialla, 1992).
Os receptores para a vitelogenina esto localizados em regies da membrana do
ocito na base das microvilosidades e entre as mesmas. Os complexos receptor-
Corpo Protenas
vitelnicas vitelogenina so internalizados e a vitelogenina liberada do receptor dentro do
gorduroso
vacolo endoctico. Esse se funde com outros endossomos para formar o grnulo
repleto de vitelogenina armazenado pelo vitelo.
Figura 22.30
Modelo para a regulao hormonal da sntese Oognese em Mamferos
de peptdio vitelnico em D. melanogaster. Em
resposta a um hormnio cerebral, o corpora A ovulao do vulo dos mamferos segue um de dois padres bsicos, dependendo
allata produz hormnio juvenil, que faz com da espcie. Um tipo de ovulao estimulado pelo ato fsico da copulao. A
que o ovrio produza protenas vitelnicas e estimulao fsica do crvix desencadeia a liberao de gonadotrofinas da hipfise.
ecdisterides. O hormnio juvenil tambm in- Essas gonadotrofinas sinalizam o ovo para recomear a meiose e iniciar os eventos
duz a sntese de ecdisterides nas clulas abdo-
que expelem o vulo do ovrio. Esse mtodo assegura que a maior parte das copulaes
minais. Esses ecdisterides motivam o corpo
gorduroso a produzir protenas vitelnicas que
conduz a vulos fertilizados; e animais que utilizam esse mtodo de ovulao coe-
so transportadas para o ovrio. (Segundo lhos e vises tm a reputao de procriaes bem sucedidas.
Bownes, 1982.) A maioria dos animais, porm, tem um tipo peridico de ovulao. A fmea
apenas ovula em pocas especficas do ano, chamadas de estro (ou seu equiva-
lente portugus cio). Nesses casos, sinais ambientais, mais notavelmente a
quantidade e o tipo de iluminao diurnos, estimulam o hipotlamo a liberar o fator
liberador de gonadotrofina. Esse estimula a hipfise para liberar suas
gonadotrofinas o hormnio estimulante de folculos (FSH) e o hormnio luteini-
zante (LH) que faz com que as clulas foliculares se proliferem e secretem
estrgeno. O estrgeno subseqentemente penetra em certos neurnios e evoca
o padro de comportamento copulatrio caracterstico da espcie. As
gonadotrofinas tambm estimulam o crescimento folicular e a iniciao da ovula-
o. Assim, estro e ovulao ocorrem em pocas prximas.
Os seres humanos apresentam variao sobre o tema da ovulao peridica.
Embora fmeas humanas tenham ovulao cclica (em mdia de cerca de 29.5
dias), sem estro anual definido, a maior parte da fisiologia reprodutiva humana
compartilhada com outros primatas. A caracterstica periodicidade dos primatas
na maturao e liberao de vulos chamada ciclo menstrual porque envolve o
* Em Drosophila, o sinal ambiental parece ser o fotoperodo. No mosquito comum, o sinal a refeio
sangnea. Somente mosquitos fmeas picam, e elas no produzem vitelogenina antes da refeio.
Algum fator sangneo estimula o crebro do mosquito para liberar o hormnio juvenil e o fator estimulador
do corpocardaco. Esse ltimo fator causa a liberao do hormnio neurosecretrio do desenvolvi-
mento do ovo (EDNH). Esse estimula o ovrio a secretar vitelogenina (Hagedorn, 1983; Borovsk
et al., 1990). (Veja Captulo 21.)
(A)
Clulas
Granulosas Clulas
Granulosas
Clulas
Clulas
tecais
tecais
FOLCULOS
PRIMORDIAIS
(B) Clulas tecais

Zona pelcida
Coroa radiata
Antro
Clulas granulosas
Membrana
granulosa Ocito
FOLCULO GRAAFIANO
Figura 22.31
O folculo ovariano dos mamferos. (A) Maturao do folculo ovariano. Quando maduro, ele
freqentemente chamado folculo Graafiano. (B) Microfotografia eletrnica de varredura de um
foliculo maduro no rato. O ocito (centro) est rodeado pelas menores clulas granulosas que iro
constituir a coroa. (A segundo Carlson, 1981; B cortesia de P. Bagavandoss.)
peridico sangramento e descarte de detritos celulares do tero em intervalos

mensais.* O ciclo menstrual representa a integrao de trs atividades muito dife-
rentes: (1) o ciclo ovariano, cuja funo amadurecer e liberar um ocito, (2) o
ciclo uterino, cuja funo prover o ambiente apropriado para o blastocisto de-
senvolvido se implantar, e (3) o ciclo cervical, cuja funo de somente permitir a
entrada do espermatozide no trato reprodutivo feminino no momento apropria-
do. Essas trs funes esto integradas atravs dos hormnios da hipfise,
hipotlamo e ovrio.
A maioria dos ocitos so mantidos no interior do ovrio humano adulto no est-
gio diplteno prolongado da primeira prfase meitica (freqentemente referida como
o estado dictado). Cada ocito est envolvido por um folculo primordial consistindo
de uma camada nica de clulas granulosas epiteliais e uma camada menos organizada
de clulas tecais mesenquimatosas (Figura 22.31). Periodicamente um grupo de folculos
primordiais entra em estgio de crescimento. Nesse perodo, o ocito sofre um aumen-
to de volume de 500 vezes (correspondendo a um aumento do dimetro de 10 m em
um folculo primordial, para 80 m em um folculo totalmente desenvolvido).
* O descarte peridico do revestimento uterino um processo ativo observado em todos os mamferos.

O tero tem intrincadas adaptaes circulatrias (como as artrias espirais) que permitem ao sangue fluir
livremente por algum tempo sem coagular e em seguida cessar seu fluxo (para evitar uma hemorragia).
Profet (1993) props que a menstruao trata-se de uma crucial funo imunolgica, protegendo o tero
contra infeces pelo smen ou outros agentes ambientais.
Concomitantemente com o crescimento do ocito ocorre um aumento no nmero de

clulas granulosas foliculares, que forma camadas concntricas ao redor do ocito.
Essa proliferao das granulosas mediada pelo fator parcrino, GDF-9, um membro
da famlia TGF- (Dong et al., 1996). Atravs de todo esse perodo de crescimento, o
ocito permanece no estgio dictaco. O folculo completamente crescido contm
um grande ocito rodeado por vrias camada de clulas granulosas. Muitas dessas
clulas permanecero com o vulo liberado, formando o cumulus, que envolve o
vulo no oviduto. Alm disso, durante o crescimento do folculo se forma um antro
(cavidade), que se enche com uma complexa mistura de protenas, hormnios, cAMP
e outras molculas. A qualquer momento, um pequeno grupo de folculos est
madurecendo. Porm, aps progredir para um estgio mais maduro, a maioria dos
ocitos e seus folculos morrem. Para sobreviver, um folculo tem que encontrar uma
fonte de hormnios gonadotrficos e pegando a onda no momento apropriado,
ele tem que cavalg-la at que atinja o cume. Assim, para que ocorra a maturao do
ocito, o folculo ter que estar em um certo estgio de desenvolvimento quando
nascem as ondas de gonadotrofina.
O dia 1 do ciclo menstrual considerado ser o primeiro dia do sangramento
(Figura 22.32). Esse sangramento da vagina representa o desbastamento de teci-
do extra-uterino e vasos sangneos que teriam ajudado na implantao do
blastocisto. Na primeira fase do ciclo (chamada fase proliferativa ou folicular),
a glndula pituitria comea a secretar quantidades cada vez maiores de FSH. O
grupo de folculos em maturao que j sofreram algum desenvolvimento, res-
pondem a esse hormnio com mais crescimento e proliferao celular. O FSH
induz tambm a formao de receptores de LH nas clulas granulosas. Pouco
aps esse perodo de crescimento folicular inicial, a pituitria comea a secretar
LH. Em resposta ao LH, o bloqueio meitico quebrado. A membrana nuclear de
ocitos competente se desintegra e os cromossomos se renem para sofrer a pri-
meira diviso meitica. Um conjunto de cromossomos conservado no interior do
ocito, e o outro fornecido ao pequeno corpo polar. Ambos esto revestidos
pela zona pelcida, que foi sintetizada pelo ocito em crescimento. nesse est-
gio que o ovo ser ovulado.
As duas gonadotrofinas, atuando em conjunto, fazem com que as clulas folicula-
res produzam quantidades crescentes de estrgeno, que tem ao menos cinco princi-
pais atividades na regulao do progresso do ciclo menstrual:
1. Faz com que a mucosa uterina inicie sua proliferao e se enriquea em vasos
sangneos.
2. Faz com que o muco cervical se afine, permitindo o espermatozide entrar nas
pores internas do trato reprodutivo.
3. Causa um aumento do nmero de receptores de FSH nas clulas granulosas
(Kammerman e Ross, 1975) e simultnea diminuio da produo de FSH
pela hipfise. Estimula tambm as clulas granulosas a secretarem o hormnio
peptdico inibina, que tambm suprime a secreo hipofisria de FSH (Rivier et
al., 1986; Woodruff et al., 1988).
4. Em baixas concentraes, inibe a produo de LH, mas em altas concentra-
es a estimula.
5. Em concentraes muito altas e longos perodos, o estrgeno interage com o
hipotlamo, fazendo com que ele secrete o fator liberador de gonadotrofina.
medida que os nveis de estrgeno aumentam como um resultado da produ-

o folicular, os nveis de FSH declinam. Todavia os nveis de LH continuam a
aumentar medida que mais estrgeno secretado. medida que o estrgeno
produzido (dias 7-10), as clulas granulosas continuam a crescer. Comeando no
dia 10, a secreo de estrgeno aumenta pronunciadamente. Esse aumento se-
guido no meio do ciclo por uma enorme onda de LH e uma menor exploso de FSH.
Figura 22.32
O ciclo menstrual humano. A coordenao de
ciclos (B) ovarianos e (D) uterinos contro-
Gonadotrofinas lada pelos (A) hormnios hipofisrio e (C)
Hormnio luteinizante (LH)
(da hipfise anterior) ovariano. Durante a fase folicular, o ovo ama-
durece dentro do folculo, e o revestimento
uterino preparado para receber o embrio.
(A) O ovo maduro liberado ao redor do dia 14.
Se um embrio no for implantado no tero, a
parede uterina comea a se desintegrar, levan-
do menstruao.
Hormnio estimulante de folculos (FSH)
Eventos no ovrio Ovulao Corpo lteo

(B) Folculo em desenvolvimento
Ovo
Hormnios ovarianos Progesterona

(C)
Estrgeno
Revestimento uterino
(D)
Menstruao Fase folicular Fase ltea
Dia do ciclo menstrual
Experimentos com macacas mostraram que a exposio do hipotlamo a mais de

200pg de estrgeno por ml de sangue por mais que 50 horas resulta na secreo
hipotalmica do fator libertador de gonadotrofina. Esse fator subseqentemente
causa a liberao de FSH e LH da hipfise. Dez a 12 horas aps o pico de
gonadotrofina, o vulo ovulado (Figura 22.33; Garcia et al., 1981). Embora o
mecanismo detalhado da ovulao no seja ainda conhecido, a expulso fsica do
ocito maduro do folculo parece ser devida a um aumento induzido de LH na
colagenase, ativador de plasminognio e prostaglandina no interior do folculo
(Lemaire et al., 1973). O mRNA para o ativador de plasminognio encontrava-se
dormente no citoplasma do ocito. O LH faz com que essa mensagem seja
poliadenilada e traduzida nessa poderosa protease (Huarte et al., 1987). As
prostaglandinas podem causar contraes localizadas nos msculos lisos do ov-
rio e pode tambm aumentar o fluxo de gua dos capilares ovarianos (Diaz-Infante
et al., 1974; Koos e Clark, 1982). Se a sntese de prostaglandina ovariana for inibi-
da, a ovulao no ocorre. Alm da presso induzida pela prostaglandina, as
colagenases e a protease ativadora de plasminognio se afrouxam e digerem a
matriz extracelular do folculo (Beers et al., 1975; Downs e Longo, 1983). O resulta-
do do efeito do LH seria, ento, um aumento da presso folicular acoplada com a
degradao da parede folicular. Um orifcio seria formado e digerido, atravs do
qual o vulo irromperia.
Figura 22.33
Ovulao no coelho. O ovrio de um coelho vivo anestesiado foi
exposto e observado. Quando o folculo comeou a ovular, o ovrio
Cumulus
foi removido, fixado e corado. (Cortersia de R. J. Blandau.)
Ocito
Ovrio
Folculo imaturo
Clulas foliculares
remanescentes
Aps a ovulao, comea a fase ltea do ciclo menstrual. As clulas restantes do

folculo rompido sob a influncia do LH tornam-se o corpo lteo. (Elas so capazes de
responder a esse LH porque o surto de FSH as estimula a desenvolver mais receptores
de LH.) O corpo lteo secreta algum estrgeno, mas a sua secreo predominante a
progesterona. Esse hormnio esteride circula at o tero, onde completa a tarefa de
preparar o tecido uterino para a implantao do blastocisto, estimulando o crescimen-
to da parede uterina e seus vasos sangneos. O bloqueio do receptor da progesterona
com o esteride sinttico mifepristona (RU486) impede a parede uterina de engrossar
e previne a implantao do blastocisto no tero (Couzinet et al., 1986).* A progesterona
tambm inibe a produo de FSH, com isso prevenindo a maturao de mais folculos
e vulos. (Por essa razo, tal combinao de estrgeno e progesterona tem sido usada
em plulas de controle da natalidade. O crescimento e a maturao de novos vulos
so prevenidos enquanto o FSH estiver inibido).
Se o vulo no for fecundado, o corpo lteo se degenera, a secreo de progesterona
cessa e a parede uterina descartada. Com o declnio dos nveis de progesterona
srica, a hipfise volta a secretar FSH e o ciclo recomeado. Porm, se ocorrer
fertilizao, o trofoblasto secreta um novo hormnio, luteotropina, que faz com que
o corpo lteo permanea ativo e os nveis de progesterona srica se mantenham altos.
Assim, o ciclo menstrual permite a maturao peridica e a ovulao dos vulos
humanos permitindo ao tero desenvolver-se periodicamente em um rgo capaz de
nutrir durante nove meses um organismo em desenvolvimento.
O vulo e o espermatozide iro ambos morrer se no se encontrarem. Voltamos
assim para onde comeamos. O palco est preparado para a fecundao. Como reco-
nhecido por F. R. Lillie em 1919, Os elementos que se unem so clulas nicas, cada
qual a ponto de morrer; mas pela sua unio formado um indivduo rejuvenescido,
que constitui um elo no eterno processo da Vida.
* RU486 considerado competir pelo receptor de progesterona no interior do ncleo. RU486
pode se ligar ao stio de progesterona no receptor, e o complexo receptor-RU486 parece formar
heterodmeros com o receptor normal de progesterona a essa ligado. Quando esse complexo RU486-
progesterona se liga aos elementos intensificadores responsivos progesterona no DNA, a transcri-
o desse stio inibida (Vegeto et al., 1992; Spitz e Bardin, 1993). Na Europa o RU486 tornou-se
uma alternativa largamente empregada ao aborto cirrgico (Palka, 1989; Maurice, 1991).
& Especulaes
O Reincio da Meiose nos Ocitos de Mamferos
S E NUMEROSOS FOLCULOS so
capazes de maturar quando
secretado o hormnio estimulan-
te de folculos, por que em geral somente
folculo produz, mais receptores de FSH
ele tem, e menos FSH permanece na circu-
lao. medida que a concentrao de
FSH diminui progressivamente, somente
um folculo e seu ocito prevalecem? Pa- um folculo pode ligar o FSH disponvel.
rece que o folculo capaz de produzir a Somente esse folculo pode crescer; os
maior quantidade de estrgeno em respos- outros folculos morrem.
ta ao FSH aquele que amadurece, en- O que faz o LH causar o reincio da
quanto todos os outros morrem. Aqueles meiose? Para responder a essa pergunta, a
conjuntos de folculos que inicialmente natureza do bloqueio meitico foi inten-
receberam FSH no somente comeam a samente estudada. Como em ocitos de
proliferar, mas tambm produzir novos re- anfbios, o estgio dictado extremamen-
ceptores de hormnio luteinizante nas suas te importante porque durante esse pero-
clulas tecais (Figura 22.34). A recepo do que os ocitos crescem, diferenciam as
de LH faz com que essas clulas iniciem a estruturas especficas para ocitos, e ad-
produo de estrgeno. Como vimos, o quirem a capacidade de recomear a
estrgeno tem dois efeitos diferentes en- meiose (Sorensen e Wassarman, 1976).
volvendo a futura recepo de FSH. Em Experimentos iniciais demonstraram que
um nvel, deprime a secreo hipofisria ocitos envoltos em folculos no sofrem (A)
de FSH, enquanto em outro nvel aumen- maturao in vivo ou in vitro a no ser
Processo da
ta os receptores de FSH nas clulas folicu- quando expostos a gonadotrofinas, en- clula folicular
lares. Assim, quanto mais estrgeno um quanto ocitos removidos dos folculos
reiniciam espontaneamente a meiose mes-
mo na ausncia de estimulao hormonal
Recepo de FSH (Pincus e Enzmann, 1935).
Parece, portanto, que a meiose normal-
Mais mente inibida pelas clulas foliculares e
receptores pode ser reiniciada pelas gonadotrofinas.
de LH
Essa hiptese que as clulas foliculares
Diminuio dos
nveis de FSH so importantes reguladores da meiose
LH (B) Ocito
fortalecida por observaes que clulas
granulares se comunicam com o ocito Figura 22.35
Mais estrgeno por processos que se estendem atravs da Comunicao entre ocito e clulas granulo-
Mais secretado zona. Esses processos tm junes de fen- sas. (A) Ocito de carneiro rodeado pela zona
receptores pelo folculo da que permitem pequenas molculas pas- pelcida e clulas foliculares. As clulas gra-
de FSH nulosas do folculo esto estendendo proces-
sarem entre o ocito e as clulas granulo-
sos atravs da zona pelcida, tocando o ocito.
sas do folculo (Figura 22.35; Anderson e
(B) Micrografia eletrnica de processos de c-
Albertini, 1976; Gilula et al., 1978).
lulas foliculares estabelecendo conexes de jun-
Figura 22.34 Porque a elevao dos nveis de cAMP o de fenda com um ocito de macaco rhesus.
Ciclo de retroalimentao positiva em clulas inibe a maturao do ocito (Cho et al., Junes de fenda (setas) esto coradas com
foliculares de mamferos. A recepo do hor- 1974), foi proposto que a parada meitica lantanio ionizado. (A de Moor e Cran, 1980,
mnio estimulante de folculos (FSH) leva mantida pela transferncia de cAMP atra- cortesia dos autores; B de Anderson e Albertini,
produo de mais receptores do hormnio lu- vs das junes de fenda da clulas granu-
teinizante (LH). As clulas foliculares secre- 1976, cortesia de D. Albertini.)
tam estrgeno quando estimuladas pelo LH; o losas foliculares para o ocito (Dekel e
estrgeno ocasiona tanto um aumento no n- Beers, 1978, 1980). O surto de hormnio ser crtico para o reincio da meiose. A de-
mero de receptores de FSH como um decrsci- luteinizante poderia desencadear a matu- sintegrao da vescula germinativa pode
mo na produo de FSH pela hipfise. Por rao terminando a comunicao pela jun- ser prevenida inibindo-se a degradao de
fim, muito poucos folculos permanecem ca- o de fenda, com isso inibindo a transfe- cAMP em ovos livres de folculos ou dire-
pazes de receber as pequenas quantidades de
FSH produzidas, com isso amplificando sua rncia da cAMP para o ocito. Vrias li- tamente provendo tais ovos com cAMP
capacidade de receber LH. Esses poucos nhas de evidncia apoiam essa hiptese. (Bornslaeger et al., 1986). O declnio da
folculos so capazes de amadurecer. Primeiramente, o declnio de cAMP parece concentrao de cAMP do ocito ocorre
imediatamente antes do reincio da meiose Baixa atividade de adenil ciclase Alta atividade de adenil ciclase ou
(Figura 22.36; Schultz et al., 1983). ou alta atividade da fosfodiesterase baixa atividade de fosfodiesterase
Em segundo lugar, as gonadotrofinas
podem causar a perda de comunicao entre
as clulas foliculares e o ocito. As clulas Alta concentrao de cAMP Baixa concentrao de cAMP
foliculares parecem ser fontes importantes
de cAMP do ocito, e mudanas da concen-
trao de cAMP nessas clulas se refletem
nos nveis de cAMP no ocito (Bornslaeger Alta atividade da quinase Baixa atividade da quinase
dependente de cAMP dependente de cAMP
e Schultz, 1985; Racowsky, 1985). Essa ob-
servao explica porque os ocitos perma-
necem em parada meitica quando rodea-
dos por clulas foliculares, mas reiniciam a Fosforilao de certas Certas protenas do
meiose quando essas so removidas. protenas do ocito ocito no so fosforiladas
O surto de gonadotrofinas pode elevar
a concentrao de cAMP da clula folicular
para novos nveis. Em resposta a essa ele- Desintegrao da vescula
Manuteno da
vao, as clulas foliculares maduras sinte- parada meitica germinativa; liberao
tizam cido hialurnico, que causa ruptura da parada meitica
fsica do contato entre os processos das c-
lulas foliculares e o ocito (Eppig, 1979; Figura 22.36
Larsen et al., 1986). As pontes pela quais o Sumrio do mecanismo proposto por meio do qual o nvel de cAMP do ocito regula o recomeo
cAMP flui da clula granulosa folicular da meiose pelo ocito. Os nveis de cAMP no ocito so providos, ao menos em parte, pelo
cAMP das clulas foliculares. O AMP cclico no pode atravessar membranas celulares, mas
para o ocito, com isso, foram removidas,
pode penetrar no ocito atravs das junes de fenda conectando o ocito com suas clulas
permitindo o ocito mamfero reiniciar a
foliculares. Quando as conexes so liberadas, os nveis de cAMP do ocito declinam, conduzin-
meiose (Dekel e Sherizly, 1985; Racowsky do liberao da parada meitica.
e Satterlie, 1985).
Tal como ocitos de anfbios, o ocito
ovulado do camundongo est suspenso o fator citosttico pp39mos responsvel pela volver-se partenogeneticamente (Colled-
na segunda metfase meitica e fecun- parada de meiose na metfase II. Camun- ge et al., 1994: Hashimoto et al., 1994).
dado nesse estado. Paules e colaborado- dongos fmeas deficientes no gene mos evidente que eventos semelhantes tm que
res (1989) mostraram que ocitos de cano param sua diviso na metfase II, e ocorrer para a maturao dos ocitos de
mundongo em maturao tambm contm seus ovos freqentemente tentam desen- anfbios e mamferos.
LITERATURA CITADA
Ahringer, J. and Kimble, J. 1991. Control of the Auerbach, R. and Joseph, J. 1984. Cell surface Beers, W. H., Strick1and, S. and Reich, E. 1975.
sperm-oocyte switch in Caenorhabditis elegans markers on endothelial cells: A developmen- Ovarian plasminogen activator: Relationship
hermaphrodites by the fem-3 3untranslated tal perspective. In E. A. Jaffe (ed.), The Bio- to ovulation and hormonal regulation. Cell 6:
region. Nature 349: 346-348. logy of Endothelial Cells. Nijhoff, The Hague, 387-394.
pp. 393-400.
Ahringer, J., Rosequist, T. A., Lawson, D. N. Bier, K. 1963. Autoradiographische Untersu-
and Kimble, J. 1992. The C. elegans sex Austin, J. and Kimble, J. 1987. glp-1 is required chungen ber die Leistungen des Follikelepithels
determining gene, fem-3, is regulated posttrans- in the germ line for regulation of the decision und der Nahrzellen bei der Dottbildung und
criptionally EMBO J. 11: 2303-2310. between mitosis and meiosis in C. elegans. Cell Eiweissynthese im Fliegenova. Wilhelm Roux
51: 589-599. Arch Entwick1ungsmech. Org. 154: 552-575.
Anderson, E. and Albertini, D. F. 1976. Gap
junctions between the oocyte and companion Baker, S. M. and eleven others. 1996. Involvement Blendy, J. A., Kaestner, K. H., Weinbauer, G. F.,
follicle cells in the mammalian ovary. J. Cell of the mouse Mlh1 in DNA mismatch repair and Nieschlag, E. and Schtz, G. 1996. Severe
Biol. 71: 680-686. meiotic crossing over. Nat. Genet. 13: 336-342. impairment of spermatogenesis in mice lacking
the CREM gene. Nature 380: 162-165.
Ashley, T., Plug, A. W., Xu, J. H., Solari, AJ., Baker, T. G. 1970. Primordial germ cells. In
Reddy, G., Golub, E. I. and Ward, D. C. 1995. C. R. Austin and R. V. Short (eds.), Repro- Bloom, W. and Fawcett, D. W. 1975. Textbook
Dynamic changes in Rad51 distribution on chro- duction in Mammals, Vol. 1: Germ Cells and of Histology, 10th Ed. Saunders, Philadelphia.
matin during meiosis in male and female Fertilization. Cambridge University Press,
Bornslaeger, E. A. and Schultz, R. M. 1985. Re-
vertebrates. Chromosoma 104: 19-28. Cambridge, pp. 1-13.
gulation of mouse oocyte maturation: Effect of
elevating cumulus cell cAMP on oocyte cAMP Cooley, L. and Theurkauf, W. E. 1994. Dumont, J. N. 1978. Oogenesis in Xenopus
levels. Biol. Reprod. 33: 698-704. Cytoskeletal functions during Drosophila laevis. VI. Route of injected tracer transport in
oogenesis. Science 266: 590-596. follicle and developing oocyte. J. Exp. Zool.
Bornslaeger, E. A., Mattei, P. and Schultz, R. M.
204:193-200.
1986. Involvement of cAMP-dependent protein Cooley, L., Verheyen, E. and Ayers, K. 1992.
kinase and protein phosphorylation in regulati- chickadee encodes a profilin required for Dym, M. 1977. The male reproductive system.
on of mouse oocyte maturation. Dev Biol. 114: intercellular cytoplasm transport during Droso- In L. Weiss and R. O. Greep (eds.), Histology,
453-462. phila oognesis. Cell 69: 173-184. 4th Ed. McGraw-Hill, New York, pp. 979-1038.
Borovsk, D., Carlson, D. A., Griffin, P. R., Couzinet, B., Le Strat, N., Ulmann, A., Baulieu, Dym, M. 1994. Spermatogonial stem celIs of
Shabanowitz, J. and Hunt, D. F. 1990. Mosquito E. E. and Schaison, G. 1986. Termination of the testis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 11287-
oostatic factor: A novel decapeptide modulating early pregnancy by the progesterone antagonist 11289.
trypsin-like enzyme biosythesis in the midgut. RU486 (Mifepristone). N. Engl. J. Med. 315:
Dym, M. and Fawcett, D. W. 1971. Further
FASEB J. 4: 3015-3020. 1565-1570.
observations on the number of spermatogonia,
Bounoure, L. 1934. Recherches sur ligne Danilchik, M. V. and Gerhart, J. C. 1987. Diffe- spermatocytes, and spermatids connected by
germinale chez la grenouille rousse aux premiers rentiation of the animal-vegetal axis in Xeno- intercellular bridges in the mammalian testis.
stades au dveloppement. Ann. Sci. Zool. Ser. pus laevis oocytes: Polarized intracellular Biol. Reprod. 4: 195-215.
17,10: 67-248. translocation of platelets establishes the yolk
Eberhart, C. G., Maines, J. Z. and Wasserman, S.
gradient. Dev. Biol. 122: 101-112.
Bownes, M. 1982. Hormonal and genetic regu- A. 1996. Meiotic cell cycle requirement for a
lation of vitellogenesis in Drosophila. Q. Rev. Davidson, E. 1986. Gene Activity in Early fly homologue of human Deleted in Azoosper-
Biol. 57:247-274. Development, 3rd Ed. Academic Press, mia. Nature 381: 783-785.
Orlando, FL.
Bownes, M., Scott, A. and Shirras, A. 1988. Ellis, R. E. and Kimble, J. 1995. The Jog-3 gene
Dietary components modulate yolk protein Dekel, N and Beers, W H. 1978. Rat oocyte and regulation of cell fate in the germ line of
transcription in Drosophila melanogaster. De- maturation in vitro: Relief of cyclic cAMP Caenorhabditis elegans. Genetics 139: 561-677.
velopment 103: 119-128. inhibition by gonadotropins. Proc. Natl. Acad.
Epifano, O., Liang, L-f., Familari, M., Moos,
Sci. USA 75: 4369-4373.
Braun, R. E., Behringer, R. R., Peschon, J. J., M. C. Jr. and Dean, J. 1995. Coordinate expres-
Brinster, R. L. and Palmiter, R. D. 1989. Dekel, N. and Beers, W H. 1980. Development sion of the three zona pellucida genes during
Genetically haploid spermatids are phenotypi- of the rat oocyte in vitro: Inhibition and mouse oogenesis. Development 121:1947-1956.
cally diploid. Nature 337: 373-376. induction of maturation in the presence or
Eppig, J. J. 1979. FSH stimulates hyaluronic acid
absence of the cumulus oophorus. Dev. Biol. 75:
Brennen, M. D., Weiner, A. J., Goralski, T. J. synthesis by oocyte-cumulus cell complexes
247-254.
and Mahowald, A. P. 1982. The follicle cells are from mouse preovulatory follicles. Nature 281:
a major site of vitellogenin synthesis in Droso- Dekel, N. and Sherizly, I. 1985. Epidermal 483-4,84.
phila melanogaster. Dev. Biol. 89: 225-236. growth factor induces maturation of rat follicle-
Eyal-Giladi, H., Ginsburg, M. and Farbarou, A.
enclosd oocytes. Endocrinology 116: 406-409.
Brown, D. D. and Dawid, I. B. 1968. Specific 1981. Avian primordial germ cells are of
gene amplification in oocytes. Science 160: Dernburg, A. F., Sedat, J. W and Hawley, R. S. epiblastic origin. J. Embryo1. Exp. Morphol.
272-280. 1996. Direct evidence of a role for heterochro- 65: 139-147.
matin in meiotic chromosome segregation. Cell
Burns, R. K., Jr. 1930. The process of sex- Ffrench-Constant, C., Hollingsworth, A.,
86:135-146.
transformation parabiotic Amb1ystoma. I. Heasman, J. and Wylie, C. 1991. Response to
Transformation from female to male. J. Exp. Diaz-Infante, A., Wright, K. H. and Wallach, E. fibronectin of mouse primordial germ cells
Zool. 55: 123-169. E. 1974. Effects of indomethacin and PGF2a before, during, and after migration. Develop-
on ovulation and ovarian contraction in the ment 113: 1365-1373.
Burtis, K. C. 1993. The regulation of sex deter-
rabbit. Prostaglandins 5: 567-581.
mination and sexually dimorphic differentiati- Flickinger, R. A. and Rounds, D. E. 1956. The
on in Drosophila. Curr. Opin. Cell Biol. 5:1006- Dolci, S. and eight others. 1991. Requirement maternal synthesis of egg yolk proteins as
1014. for mast cell growth factor for primordial germ demonstrated by isotopic and serological means.
cell survival in culture. Nature 352: 809-811. Biochem. Biophys. Acta 22: 38-72.
Carlson, B. M. 1981. Pattens Foundations of
Embryology. McGraw-Hill, New York. Dong, J., Albertini, D. F., Nishimori, K., Kumar, Forristall, C., Pondel, M., Chen, L. and King,
T. R., Lu, N., amd Matzuk, M. 1996. Growth M. L. 1995. Patterns of localization and
Chiquoine, A. D. 1954. The identification, origin,
differentiation factor-9 is required during early cytoskeletal association of two vegetally
and migration of the primordial germ celIs in
ovarian folliculogenesis. Nature 383: 531-534. localized RNAs, Vg1 and Xcat-2. Development
the mouse embryo. Anat. Rec. 118: 135-146.
121: 201-208. Foulkes, N., Schlotter, F., Pvet,
Cho, W K., Stern, S. and Biggers, J. D. 1974. Doniach, T. and Hodgkin, J. 1984. A sex-
P. and Sassone-Corsi, P. 1993. Pituitary FSH
Inhibitory effect of dibutyryl cAMP on mouse determining gene, fem-1, required for both male
directs the CREM functional switch during
oocyte maturation in vitro. J. Exp. Zool. 187: and hermaphroditic development in C. elcgans.
spermatogenesis. Natujre 362: 264-267.
383-386. Dev. Biol. 106:223-235.
Francis, R., Barton, M. K., Kimble, J. and Schedl,
Colledge, W H., Carleton, M. B. L., Udy, G. B. Downs, S. and Longo, F. J. 1983. Prostaglandins
T. 1995. gld-1, a tumor suppressor gene required
and Evans, M. J. 1994. Disruption of cmos cau- and preovulatory follicular maturation in mice.
for oocyte development in Caenorhabditis
ses parthenogenetic development of unfertilized J. Exp. Zool. 228: 99-108.
elegans. Genetics 139: 579-606.
mouse eggs. Nature 370: 65-68.
Dubois, R. 1969. Le mcanisme dentre des
Gabrielli, B., Roy, L. M. and Maller, J. L. 1993.
Comings, D. E. 1968. The rationale for an ordered cellules germinales primordiales dans le rseau
Requirement for cdk2 in cytostatic factor-
arrangement of chromatin in the interphase vasculaire, chez l embryon de poulet. J.
mediated metaphase II arrest. Science 259:
nucleus. Am. J. Hum. Genet. 20: 440-460. Embryol. Exp. Morphol. 21: 255-270.
1766-1769.
Gallatin, W. M., Weissman, I. L. and Butcher, E. Gurdon, J. B. 1976. The Control of Gene Ex- Humphrey, R. R. 1931. Studies of sex reversal in
C. 1983. A cell surface molecule involved in pression in Animal Development. Harvard Uni- Amblystoma. III. Transformation of the ovary
organ-specific homing of lymphocytes. Nature versity Press, Cambridge, MA. of A. tigrinum into a functional testis through
304: 30-35. the influence of a testis resident in the same
Gutzeit, H. O. 1986. The role of microfilaments
animal. J. Exp. Zool. 58: 333-365.
Gallatin, W. M., St. John, T. P., Siegelman, M., in cytoplasmic streaming in Drosophila follicles.
Reichert, R., Butcher, E. C. and Weissman, I. L. J. Cell Sci. 80: 159-169. lnoue, H. and Hiroyoshi, T. 1986. A maternal-
1986. Lymphocyte homing receptors. Cell 44: effect sex-transformation mutant of the housefly,
Hagedorn, H. H. 1983. The role of ecdysteroids
673-680. Musca domestica L. Genetics 112: 469-481.
in the adult insect. In G. Downer and H. Laufer
Garcia, J. E., Jones, G. S. and Wright, G. L. 1981. (eds.), Endocrinology of Insects. Alan R. Liss, Jaglarz, M. K. and Howard, K. R. 1995. The
Prediction of the time of ovulation. Fert. Steril. New York, pp. 241-304. active migration of Drosophila primordial germ
36: 308-315. cells. Development 121: 3495-3503.
Hahnel, A. C. and Eddy, E. M. 1986. Cell surface
Gardner, R. L. 1982. Manipulation of develop- markers of mouse primordial germ cells defined Jones, A. R., Francis, R. and Schedl, T 1996. GLD-
ment. In C. R. Austin and R. V. Short (eds.), by two monoclonal antibodies. Gamete Res. 1, a cytoplasmic protein essential for oocyte di-
Embryonic and Fetal Development, Cambridge 15: 25-34. fferentiation, shows stage- and sex-specific ex-
University Press, Cambridge, pp. 159-180. pression during Caenorhabditis elegans germlime
Hardvin-Lepers, A., Shaper, J. and Shaper, N. L.
developrnent. Dev. Biol. 180: 165-183.
Gilula, N. B., Epstein, M. L. and Beers, W. H. 1993. Characterization of two cis-regulatory
1978. CeIl-to-cell communication and ovulati- regions in the murine b1,4-galactosyltrarisferase Kammerman, S. and Ross, J. 1975. Increase in
on. A study of the cumulus-oocyte complex. J. gene. J. Biol. Chem. 268: 14348-14359. numbers of gonadotropin receptors on granulosa
Cell Biol. 78: 58-75. cells during follicle maturation. J. Clin. Endo-
Hashimoto, N. and ten others. 1994. Partheno-
crinol. 41: 546-550.
Ginsburg, M. and Eyal-Giladi, H. 1987. Primor- genetic activation of oocytes in cmos-deficient
dial germ cells of the young chick blastoderm mice. Nature 370: 68-71. Karpen, G. H., Le, M.-H. anel Le, H. 1996.
originate from the central zone of the area Centric heterochromatin and the efficieney of
Heasman, J., Mohun, T. and Wylie, C. C. 1977.
pellucida irrespective of the embryo-forming achiasmatic disjunction in Drosophila female
Studies on the locomotion of primordial germ
process. Development 101: 209-219. meiosis. Science 273: 118-121.
cells from Xenopus laevis in vitro. J. Embryol.
Ginsburg, M., Snow, M. H. L. and McLaren, A. Exp. Morphol. 42: 149-162. Karr, T. L. 1991. lntracellular sperm-egg
1990. Primordial germ cells in the mouse embryo interaction in Drosophila: A three-dimensional
Heasman, J., Hynes, R. D., Swan, A. P.,
during gastrulation. Development 110: 521-528. structural analysis of a paternal product in the
Thomas, V. and Wyle, C. C. 1981. Primordial
developing egg. Mech. Dev. 34: 101-111.
Godin, I. and Wylie, C. C. 1991. TGFb1 inhibits germ cells of Xenopus embryos: The role of
proliferation and has a chemotactic effect on fibronectin in their adhesion during migration. Karr, T. L. 1996. Paternal investment and
mouse primordial germ cells in culture. Deve- Cell 27: 437-447. intracellular sperm-egg interaction during and
lopment 113: 1451-1457. following fertilization in Drosophila. Curr. Top.
Heath, J. K. 1978. Mammalian primordial germ
Dev. Biol. 34: 89-115.
Godin, I., Wylie, C. and Heasman, J. 1990. Genital cells. Dev. Mammals 3: 272-298.
ridges exert long-range effects on primordial Karsch-Mizrachi, I. and Haynes, S. R. 1993. The
Hill, D. P., Shakes, D. C., Wards, S. and Strome, S.
germ cell numbers and direction of migration in Rb97D gene encodes a potential RNA-binding
1989. A sperm-supplied product essential for initiation
culture. Development 108: 357-363. protein required for spermatogenesis in Droso-
of normal embryogenesis in Caenorhabditis elegans
phila. Nucl. Acids Res. 21: 2229-2235.
Gnczy, P., Thomas, B. J. and DiNardo, S. 1994. is encoded by the paternal effect embryonic-lethal
roughex is a dose-dependent regulator of the gene, spe-11. Dev. Biol. 136: 154-166. Kerrebrock, A. W., Moore, D. P., Wu, J. S. and Orr-
second meiotic division during Drosophila Weaver, T. L. 1995. Mei-S332, a Drosophila protein
HilI, R. S. and MacGregor, H. C. 1980. The
spermatogenesis. Cell 77: 1015-1025. required for sister-chromatid cohesion, can localize
developrnent of lampbrush chromosometype
to meiotic centromere regions. Cell 83: 247-256.
Gonzlez-Reyes, A., Elliot, H. and St. Johnson, transcription in the early diplotene oocytes of
D. 1995. Polarization of both major body axes Xenopus laevis: An electron microscope Kim-Ha, J., Kerr, K. and Macdonald, P. M. 1995.
in Drosophila by gurken-torpedo signalling. analysis. J. Cell Sci. 44: 87-101. Translational regulation of oskar mRNA by bru-
Nature 375: 654-658. no, an ovarian RNA-binding protein, is essential.
Hirsh, D., Oppenheim, D. and Klass, M. 1976.
Cell 81: 403-412.
Graham, C. E. 1977. Teratocarcinoma cells and Development of the reproductive system of
normal mouse embryogenesis. In M. I. Sherman Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 49: 200-219. Kimble, J. E. 1981. Strategies for control of
(ed.), Concepts of Mammalian Embryogenesis. pattern formation in Caenorhabditis elegans.
Hodgkin, J., Doniach, T. and Shen, M. 1985.
M.I.T. Press, Cambridge, MA, pp. 315-394. Philos. Trans. R. Soc. Lond. [B] 295: 539-551.
The sex determination pathway in the nema-
Graham, P. L. and Kimble, J. 1993. The mog1 tode Caenorhabditis elegans: Variations on a Kimble, J. E. and White, J. G. 1981. Control of
gene is required for the switch from spermato- theme. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. germ cell development in Caenorhabditis
genesis to oogenesis in C. elegans. Genetics 50: 585-593. elegans. Dev. Biol. 81: 208-219.
133:919-931.
Hoyle, H. D. and Raff, E. C. 1990. Two Droso- Kimble, J., Barton, M. K., Schecil, T. B.,
Grant, P. 1953. Phosphate metabolism during phila b-tubulin isoforms are not functionally Rosenquist, T. A. and Austin, J. 1986. Controls
oogenesis in Rana temporaria. J. Exp. Zool. equivalent. J. Cell Biol. 111: 1009-1026. of postembryonic: germ line development in
124: 513-543. Caenorhabditis elegans. In J. Gall (ed.),
Huarte, J., Belin, D., Vassalli, A., Strickland, S.
Gametogenesis and the Early Embryo. Alan R.
Green, G. R. and Poccia, D. L. 1988. Interaction and Vassalli, J. -D. 1987. Meiotic maturation of
Liss, New York, pp. 97-110.
of sperm histone variants and linker DNA during mouse oocytes triggers the translatio and polya-
spermiogenesis in the sea urchin. Biochemistry denylation of dormant tissue-type plasminogen Kloc, M. and Etkin, L. 1995. Two distinct
27: 619-625. activator mRNA. Cenes Dev. 1: 1201-1211. pathways for the localization of RNAs at the
vegetal cortex in Xenopus oocytes. Develop- Manseau, L. J. and Schpbach, T. 1989. expression during sea urchin spermatogenesis.
ment 121: 287-297. cappuccino and spire: two unique maternal- Mol. Reprod. Dev. 27: 181-190.
effect loci required for both the anteroposterior
Kloc, M., Larabell, C. and Etkin, L. 1996. Old, R. W., Callan, H. G. and Gross, K. W. 1977.
and dorsoventral patterns of the Drosophila
Elaboration of the messenger transport Localization of histone gene transcripts in newt
embryo. Genes Dev. 3: 1437-1452.
organizer pathway for localization of RNA to lampbrush chromosomes by in situ hybridization.
the vegetal cortex of Xenopus oocytes. Dev. Marcey, D., Watkins, W. S. and Hazelrigg, T. 1991. J. Cell Sci. 27: 57-80.
Biol. 180: 119-130. The temporal and spatiaI distribution pattern of
Oliver, B., Kim, Y.-J. and Baker, B. S. 1993.
maternal exuparentia protein: Evidence for a role
Kloc, M., Spohr, G. and Etkin, L. 1993. Trans- Sex-1ethal, master and slave: A hierarchy of
in establishment but not maintainance of bicoid
location of repetitive RNA sequences with the germ-line sex determination in Drosophila.
mRNSA localization. EMBO J. 10: 4259-4266.
germ plasm in Xenopus oocytes. Science 262: Development 119: 897-908.
1712-1714. Masui, Y. 1974. A cytostatic factor in amphibi-
Paglia, L. M., Berry, J. and Kastern, W. H.
an: Its extraction and partial characterization.
Koos, R. D. and Clark, M. R. 1982. Production 1976. Messenger RNA synthesis, transport, and
J. Exp. Zool. 187: 141-147.
of 6-keto-prostaglandin F1a by rat granulosa cells storage in silkmoth ovarian follicles. Dev. Biol.
in vitro. Endocrinology 111: 1513-1518. Matsui, Y., Toksoz, D., Nishikawa, S., Nishikawa, 51: 173-181.
S.-I., Williams, D., Zsebo, K. and Hogan, B. L.
Kuwana, T. 1993. Migration of avian primordi- PaIka, J. 1989. The pill of choice? Science 245:
M. 1991. Effect of Steel factor and leukemia
al germ cells toward the gonadal anlage. Dev. 1319-1323.
inhibitory factor on murine primordial germ cells
Growth Differ. 35: 237-243.
in culture. Nature 353: 750-752. Palmiter, R. D., Wilkie, T. M., Chen, H. Y. and
Kuwana, T., Maeda-Suga, H. and Fujimoto T. 1986. Brinster, R. L. 1984. Transmission distortion
Matsui, Y., Zsebo, K. and Hogan, B. L. M. 1992.
Attraction of chick primordia germ cells; by and mosaicism in an unusual transgenic mouse
Derivation of pluripotential embryonic stem
gonadal anlage in vitro. Anat. Rec. 215: 403-406. pedigree. Cell 36: 869-877.
cells from murine primordial germ cells in culture.
Kwon, Y. K. and Hecht, N. B. 1993. Binding of Cell 70: 841-847. Paris, J., Swenson, K., Piwnice-Worms, H. and
a phosphoprotein to the 3 untranslated region Richter, J. D. 1991. Maturation-specifie polya-
Maurice, J. 1991. Improvements seen for RU-
of the mouse protamine 2 mRNA temporally denylation: In vitro activation by p34cdc2 and
486 abortions. Science 254: 198-200.
represses its translation. Mol. Cell Biol. 13: phosphorylation of a 58-kD CPE-binding
6547-6557. McLaren, A. 1983. Does the chromosomal sex protein. Genes Dev. 5: 1697-1708.
of a mouse cell affect its developrnent? Symp.
Lane, M. E. and Kalderon, D. 1994. RNA Pasteels, J. 1953. Contributions Itude du
Br. Soc. Dev. Biol. 7: 225-227.
localization along the anteroposterior axis of developpement des reptiles. I. Origine et
the Drosophila oocyte requires PKA-mediated Menke, D. B., Mutter, G. I. and Page, D. C. migration des gonocytes chez deux Lacertiens.
signal transduction to direct normal microtubule 1997. Expression of DAZ, an azoospermia Arch. Biol. 64: 227-245.
organization. Genes Dev. 8: 2986-2995. factor candidate, in human spermatogonia. Am.
Paules, R. S., Buccione, R., Moscel, R. C., Vande
J. Hum. Genet. 60:237-241.
Langman, J. 1981. Medical Embryology, 4th Woude, G. F. and Eppig, J. J. 1989. Mouse mos
Ed. Williams & Wilkins, Baltimore. Minishull, J. 1993. Cyclin synthesis: Who needs protoncogene product is present and functions
it? BioEssays 15: 149-155. during oogenesis. Proc. Nafl. Acad. Sci. USA
Larsen, W J., Wert, S. E. and Brurmer, G. D.
86: 5395-5399.
1986. A dramatic loss of cumulus cell gap junctions Mintz, B. 1957. Embryological development of
is correlated with germinal vesicle breakdown in primordial germ cells in the mouse: Influence of Pesce, M., Farrace, M. G., Piacentini, M., Dolci, S.
rat oocytes. Dev. Biol. 113: 517-521. a new mutation. J. Embryol. Exp. Morphol. 5: and De Felici, M. 1993. Stem cell factor and
396-403. leukemia inhibitory factor promote primordial
Laskey, R. A. 1979. Biochemical processes in
germ cell survival by suppressing programmed cell
early development. In A. T. Bull, J. R. Lagnado, Moens, P. B. 1969. The fine structure of rneiotic
death (apoptosis). Development 118: 1089-1094.
J. O. Thomsen and K. F. Tipton, (eds.), chromosome polarization and pairing in Locusta
Companion to Biochemistry, Vol. 2. Longman, migratoria. Chromosoma 28: 1-25. Peschon, J. J., Behringer, R. R., Brinster, R. L.
London, pp. 137-160. and Palmiter, R. D. 1987. Spermatid-specific
Moor, R. M. and Cran, D. G. 1980. Intercellular
expression of protamine-1 in transgenic mice.
Lasko, P. 1995. Cell-cell signalling, microtubule coupling of mammalian oocytes. Dev. Mammals
organization and RNA localization: Is PKA a 4:3-38.
link? BioEssays 17: 105-107. Pincus, G. and Enzmann, E.V. 1935. The
Moses, M. J. 1968. Synaptonemal complex.
comparative behavior of mammalian eggs in
Lin, H. and Spradling, A. C. 1995. Fusosome Annu. Rev. Genet. 2: 363-412
vivo and in vitro. I. The activation of ovarian
asymmetry and oocyte determination in Dro-
Mowry, K. L. and Melton, D. A. 1992. Vegetal eggs. J. Exp. Med. 62: 665-675.
sophila. Dev. Genet. 16: 6-12.
messenger RNA localization directed by a 340-
Pinkerton, J. H. M., McKay, D. G., Adams, E. C.
Lemaire, W. J., Yang, N. S. T., Behram, H. H. nt RNA sequence element in Xeiiopus oocytes.
and Hertig, A. T. 1961. Development of the
and Marsh, J. M. 1973. Preovulatory changes in Science 255: 991-994.
human ovary: A study using histochemical
concentration of prostaglandin in rabbit graafian
Nantel, F. and eight others. 1996. Spermio-enesis techniques. Obstet. Gynecol. 18: 152-181.
follicles. Prostaglandins 3: 367-376.
deficiency and germ-cell apoptosis in CREM-
Pitnick, S., Spicer, G. S. and Markow, T. A. 1995.
Lillie, F. R. 1919. Problems of Fertilization. mutant mice. Nature 380: 159-162
How long is a giant sperm? Nature 375: 109
University of Chicago Press, Chicago.
Newton, S. C., Blaschuk, O. W. and Millette, C. F.
Poccia, D. 1986. Remodeling of nueleoproteins
Lorca, T., Cruzalegui, F. H., Fesquet, D., Cavadore, 1993. N-cadherin mediates Sertoli cell-spermato-
during gametogenesis, fertilization, and early
J.-C., Mry, J., Means, A. and Dore, M. 1993. genic cell adhesion. Dev. Dyn. 197:1-13.
development. Int. Rev. Cytol. 105: 1-65.
Calmodulin-depcndent protein kinase II mediates
Nishioka, D., Ward, D., Poccia, D., Costacos, C.
inactivation of MPF and CSF upon fertilization Pokrywka, N. J and Stephenson, E. C. 1991,
and Minor, J. E. 1990. Localization of bindin
of Xenopus eggs. Nature 366: 270-273. Microtubules mediate the localization of bicoid
RNA during Drosophila oogenesis. Development receptor signalling process are necessary for both Stewart, T. A. and Mintz, B. 1981. Successful
113: 55-66. anterior-posterior and dorsal-ventral pattern generations of mice produced from an established
formation in Drosophila. Cell 81: 967-978. culture line of euploid teratocarcinoma cells.
Postlethwait, J. H., Brownes, M. and Jowett, T.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:6314-6318.
1980. Sexual phenotype and vitellogenin Ruohola, H., Bremer, K. A., Baker, D., Swedlow,
synthesis in Drosophila melanogaster. Dev. Biol. J. R., Jan, L. Y. and Jan, Y. N. 1991. Role of Stott, D. and Wylie, C. C. 1986. Invasive
79: 379-387. neurogenic genes in establishment of follicle cell behaviour of mouse primordial germ cells in
fate and oocyte polarity during oogenesis in vitro. J. Cell Sci. 86: 133-144.
Pratt, S. A., Scully, N. F. and Shur, B. D 1993.
Drosophila. Cell 66: 433-449.
Cell surface b1,4-galactosyltransferase on SubteIny, S. and Penkala, J. E. 1984. Experimen-
primary spermatocytes facilitates their initial Sagata, N., Watanabe, N., Vande Woude, G. F. tal evidence for a morphogenetic role in the emer-
adhesion to Sertoli celIs in vitro. Biol. Reprod. and lkawa, Y. 1989. The c-mos proto-oncogene gence of primordial germ celIs from the endoderm
49: 470-482. product is a cytostatic factor responsible for of Rana pipiens. Differentiation 26: 211-219.
meiotic arrest in vertebrate eggs. Nature 342:
Profet, M. 1993. Menstruation as a defense Sun, Y.-A. and Wyman, R. J. 1993. Reevaluation
512-518.
against pathogens transported by sperm. Q, Rev. of electrophoresis in the Drosophila egg
Biol. 68: 335-385. Sagata, N., Oskarsson, M., Copeland, T., chamber. Dev. Biol. 155: 206-215.
Brumbaugh, J. and Vande Woude, G. F. 1988.
Racowsky, C. 1985. Effect of forskolin on the Sutasurya, L. A. and Nieuwkoop, P. D. 1974.
Function of c-mos proto-oncogene product in
spontaneous maturation and cyclic AMP content The induction of primordial germ celIs in the
meiotic maturation in Xenopus oocytes. Nature
of hamster and oocyte-cumulus complexes. J. urodeles. Wilhelm Roux Arch. Entwicklungsmech.
335: 519-525.
Exp. Zool. 234: 87-96. Org. 175:199-220.
Schfer, M., Nayernia, K., Engel, W. and Schfer,
Racowsky, C. and Satterlie, R. A. 1985. Swanson, C. P., Merz, T. and Young, W. J. 1981.
U. 1995. Translational control of spermatoge-
Metabolic, fluorescent dye and electrical coupling Cytogenetics: The Chromosome in Division,
nesis. Dev. Biol. 172: 344-352.
between hamster oocytes and cumulus cells Inheritance and Evolution. Prentice-Hall,
during meiotic maturation in vivo and in vitro. Schmekel, K. and Daneholt, B. 1995. The cen- Englewood Cliffs, NJ.
Dev. Biol. 108: 191-202. tral region of the synaptonemal complex
Swift, C. H. 1914. Origin and early history of
revealed in three dimensions. Trends Cell Biol.
Raikhel, A. S. and Dhadialia, T. S. 1992. the primordial germ-celIs iri the chick. Am. J.
5: 239-242.
Accumulation of yolk proteiris in insect oocytes. Anat. 15: 483-516.
Annu. Rev. Entomol. 37: 217-251. Schultz, R. M., Montgomery, R. R. and Belanoff,
Telfer, W. H., Woodruff, R. I. and Huebner, E.
J. R. 1983. Regulation of mouse oocyte
Reijo, R. and twelve others. 1995 Diverse sper- 1981. Electrical polarity and cellular differentiati-
maturation: Implications of a decrease in oocyte
matogenic defects in hurnas caused by Y chro- on in meroistic ovaries. Am. Zool. 21: 675-686.
cAMP and protein dephosphorylation in
mosome deletions encompassing a novel RNA-
commitment to resume meiosis. Dev. Biol. 97: Theurkauf, W. E., Smiley, S., Wong, M. L. and
binding protein gene. Nat. Genet. 10: 383-393.
264-273. Alberts, B. M. 1992. Reorganization of the
Reynaud, G. 1969. Transfert de cellules cytoskeleton during Drosophila oogenesis: Im-
Sheets, M. D., Wu, M. and Wickens, M. 1995.
germinales primordiales de dindon lembryon plications for axis specification and intercellular
Polyadenylation of c-mos mRNA as a control
de poulet par injection intravasculaire. J. transport. Development 115: 923-936.
point in Xenopus meiotic maturation. Nature
Embryol. Exp. Morphol. 21: 485-507.
374: 511-516. Theurkauf, W. E., Alberts, B. M., Jan, Y. N. and
Ressom, R. E. and Dixon, K. E. 1988. Relocation Jongens, T. A. 1993. A control code for
Shea, T. B., Beermann, M. L., Leli, U. and Nixon,
and reorganization of germ plasm in Xenopus microtubules in the differentiation of Droso-
R. A. 1992. Opposing influences of protein
embryos after fertilization. Development 103: phila oocytes. Development 118: 1169-1180.
kinase activities on neurite out-growth in human
507-518.
neuroblastoma cells: Initiation by kinase A and Vegeto, E., Allan, G. F., Schrader, W. T., Tsai,
Rivier, C., Rivier, J. and Vale, W. 1986. Inhibin- restriction by kinase C. J. Neurosci. Res. 33: M.-J., McDonnell, D. P. and OMalley, B. W.
mediated feedback control of follicle-stimulating 398-407. 1992. The mechanism of RU486 antagonism is
hormone secetion in the female rat. Science dependent on the conformation of the carboxy-
Simon, D. 1960. Contribution ltude de la
234: 205-208. terminal tail of the human progesterone recep-
circulation et du transport des gonocytes
tor. Cell 69: 703-713.
Rogulska, T. 1969. Migration of chick primor- primaires dans les blastodermes doiseau cultiv
dial germ cells from the intracoelomically in vitro. Arch. Anat. Microsc. Morphol. Exp. von Wettstein, D. 1971. The synaptonemal
transplanted germinal crescent into the genital 49: 93-176. complex and four-strand crossing over. Proc.
ridge. Experientia 25: 631-632. Natl. Acad. Sci. USA 68: 851-855.
Sorensen, R. and Wassarman, P. M. 1976.
Rogulska, T. Ozdzenski, W. and Komer, A. 1971. Relationship between growth and meiotic von Wettstein, D. 1984. The synaptonemal
Behavior of mouse primordial germ cells in chick maturation of the mouse oocyte. Dev. Biol. 50: complex and genetic segregation. In C. W. Evans
embryo. J. Embryol. Exp. Morphol, 25: 155-164. 531-536. and H. G. Dickinson (eds.), Controlling Events
in Meiosis. Cambridge University Press, Cam-
Romanoff, A. L. 1960. The Avian Embryo. Spitz, I. M. and Bardin, C. W. 1993. Mifeprisone
bridge, pp. 195-231.
Macmillan, New York. (RU486): A modulator of progestin and gluco-
corticoid action. N. Engl. J. Med.329: 404-412. Warrior, R. 1994. Primordial germ cell migration
Rongo, C., Gavis, E. R. and Lehmann, R. 1995.
and the assembly of the Drosophila embryonic
Localization of oskar RNA regulates oskar trans- Spradling, A. C. 1993. Germine cysts: Communes
gonad. Dev. Biol. 166: 180-194.
lation and requires Oskar protein. Development that work. Cell 72: 649-651.
121: 2737-2746. Watanabe, N., Vande Woude, G. F., Ikawa, Y. and
Stephanson, E. C., Chao, Y.-C. and Fackenthal,
Sagata, N. 1989. Specific proteolysis of the c-mos
Roth, S., Neuman-Silbergerg, F. S., Barcelo, G. J. D. 1988. Molecular analysis of the swallow
proto-oncogene product by calpain on fertilization
and Schpbach, T. 1995. cornichon and the EGF- gene of Drosophila melanogaster. Gmes Dev. 2:
of Xenopus eggs. Nature 342: 505-517.
1655-1665.
Watson, C. A., Sauman, I. and Berry, S. J. 1993. Wylie, C. C. and Heasman, J. 1993. Migration, Yoon, P. W. and eight others. 1996. Advanced
Actin is a major structural and functional element proliferation, and potency of primordial germ maternal age and risk of Down syndrome
of the egg cortex of giant silkmoths during cells. Semin. Dev. Biol. 4: 161-170. characterized by the meiotic stage of the
oogenesis. Dev. Biol. 155: 315-323. chromosomal error: A population-based study.
Wylie, C. C., Heasman, J, Swan, A. P. and
Amer. J. Hum. Genet. 58: 628-633.
Whitington, P. M. and Dixon, K. E. 1975. Anderton, B. H. 1979. Evidence for substrate
Quantitative stuidies of germ plasm and germ guidance of primordial germ cells. Exp. Cell Res. Zhang, N., Zhang, J, Purcell, K. J, Cheng, Y. and
cells during early embryogenesis of Xenopus 121: 315-324. Howard, K. 1997. The Drosophila protein
laevis. J. Embryol. Exp. Morphol. 33: 57-74. Wuwen repels migratory germ cells. Nature 385:
Yeom Y. I. and seven others. 1996. Germline
64-67.
Williams, J. and seven others. 1993. Interacting regulatory element of Oct-4 specific for the
signalling pathways regulating prestalk cell di- totipotent cycle of embryonal cells. Develop- Zhao, G.-Q., Deng, K, Labosky, P. A., Liaw, L.
fferentiation and movement during the ment 122: 881-894. and Hogan, B. L. M. 1996. The gene encoding
rnorphogenesis of Dictyostelium. Development bone morphogenetic protein 8B is required for
Yisraeli, J. K, Sokol, S. and Melton, D. A. 1990.
Suppl.: 1-7. the initiation and maintenance of spermatoge-
A two-step model for the localization of a ma-
nesis in the mouse. Genes Dev. 10: 1657-1669.
Woodruff, T. K, DAgostino, J, Schwartz, N. ternal mRNA in Xenopus oocytes: Involvement
B. and Mayo, K. E. 1988. Dynamic changes in of microtubules and microfilaments in translo-
inhibin messenger RNAs in rat ovarian follicles cation and anchoring of Vg1 mRNA. Develop-
during the reproductive cycle. Science 239: ment 108: 289-298.
1296-1299.
Mecanismos desenvolvimentais
da mudana evolucionria 23
Como a acontece a novidade no mundo?
Como nasce? De que fuses, tradues,
junes, realizada? Como ela sobrevive
extrema e perigosa como ?
Que compromissos, que acordos, que
C harles Darwin foi herdeiro de sculos de especulao relacionada com as
origens da diversidade da vida animal. A prpria educao de Darwin foi
baseada na tradio Britnica da teologia natural que sustentava que a oni-
potncia e benevolncia de Deus podiam ser observadas nos trabalhos de Sua cria-
o. A parte dominante dessa tradio foi o relato da Criao proclamando que as
traies de sua natureza secreta dever espcies foram trabalhos planejados intrincadamente do Criador. Os dedos da mo
fazer para afastar os tripulantes humana eram encarados como um requinte (alguns diziam ser perfeito) de inventos
destruidores, o anjo exterminador, a
planejados que permitiu aos humanos dominarem o seu meio ambiente. As garras em
guilhotina?
forma de p da toupeira estavam, novamente, perfeitamente adaptadas no seu traba-
SALMAN RUSHDIE (1988)
lho de existncia, tal como as asas de um pssaro ou as barbatanas de um peixe.
O primeiro Pssaro nasceu do ovo
Uma forma mais sofisticada da teologia natural, definida na Gr Bretanha pelo
de um Rptil. anatomista e embriologista Richard Owen, que afirmou que as adaptaes eram ape-
WALTER GARSTANG (1922) nas de importncia secundria. Pelo contrrio, as homologias eram crticas. Estrutu-
ras homlogas eram aqueles rgos que tinham as mesmas partes bsicas arranjadas
da mesma forma, fazendo das diferenas a sua modificao secundria. O que era
realmente importante era que a mo humana, as garras da toupeira, as asas do pssaro
e as barbatanas do peixe foram cada uma baseada no mesmo plano. Resumindo o
plano dos membros, ns podiamos determinar o grandioso desenho pelo qual Deus
construiu todos os apndices dos vertebrados. Para Owen (1848), as homologias
baseadas na diversidade animal eram o que contava, e no as adaptaes secundrias
dessas unidades bsicas.
Unidade de Tipo e Condies de Existncia

A Sntese de Charles Darwin
Darwin reconheceu sua dvida com esses debates primrios quando escreveu em
(1859), amplamente reconhecido que todos os seres orgnicos foram formados
segundo duas grandes leis - Unidade de Tipo e Condies de Existncia. Darwin
continuou a explicar que sua teoria poderia explicar a unidade de tipo atravs da
descendncia. As mudanas criando esses tipos e causando adaptaes maravilhosas
para as condies de existncia, alm disso, eram explicadas atravs da seleo natural.
Darwin chamou isso de Linhagem com modificao. Aps a leitura do sumrio de
Johannes Mller sobre a lei de von Baer em 1842, Darwin acreditou que semelhanas
883
embrionrias seriam um argumento muito forte em favor da conexo gentica em gru-

pos de animais diferentes. Uma comunidade de estruturas embrionrias revela uma
comunidade de linhagem, ele concluiria na Origens das espcies.
Formas larvais foram usadas para a classificao taxonmica mesmo antes de
Darwin. J. V. Thompson, por exemplo, demonstrou que a larva da craca (cirrpede) era
quase idntica s larvas do caranguejo e portanto contou as cracas como artrpodes
e no como moluscos (Figura 23.1; Winsor, 1969). Darwin, um perito em taxinomia da
craca comemorou esse achado: Mesmo o ilustre Cuvier no se apercebeu de que a
craca tratava-se de um crustceo, mas num relance a larva mostra isso de maneira
indubitvel. A interpretao evolucionria de Darwin sobre a lei de von Baer criou
um paradigma que foi seguido por muitas dcadas, especificamente, que relaes
entre grupos podem ser descobertas observando-se formas larvais em comum.
Kowalevsky (1871) faria em breve uma descoberta similar (publicada em Descent of
Man por Darwin) que a larva tunicada tem notocordas e forma o seu tubo neural e
outros rgos de uma maneira muito similar ao cordado anfioxo primitivo. Os
(A) Tetraclita tunicados, outro enigma dos esquemas de classificao (normalmente colocados,
juntamente com as cracas, como um molusco), desse modo encontraram um lar entre
os cordados. Darwin tambm notou que organismos embrionrios, s vezes, produ-
zem estruturas que so inapropriadas para sua forma adulta, mas que mostram sua
relao com outros animais. Ele mostrou a existncia de olhos em toupeiras embrio-
nrias, rudimentos plvicos em cobras embrionrias, e dentes nas barbatanas em
embries de baleia. Neste livro, notamos que os embries mamferos formam um
saco vitelnico rudimentar, enviam vasos sangneos para esse saco, e sofrem gas-
trulao de uma maneira semelhante s aves e rpteis, cujo desenvolvimento
confinado pelo vitelo.
Darwin tambm argumentou que as adaptaes que partem do tipo e permitem
que o organismo sobreviva em ambiente prprio, se desenvolvem mais tarde no
embrio. Ele notou que diferenas entre espcie e gneros so, como as previstas
pela lei de von Baer, somente produzidas mais tarde no desenvolvimento; ele at
mesmo colocou pombos em clorofrmio (com grande relutncia) para provar a si
prprio de que esse era realmente o caso. Dessa maneira, Darwin reconheceu duas
maneiras de encarar a linhagem com modificao. Poderamos enfatizar a linha-
gem comum, assinalando homologias embrionrias entre dois ou mais grupos de
(B) Penaeus animais, ou poderamos enfatizar as modificaes mostrando como o desenvolvi-
mento foi alterado para produzir estruturas que permitem aos animais se adaptarem
Figura 23.1 s condies particulares.
Larvas nauplius de (A) crustceo (Tetraclita, Darwin no procurou construir filogenias completas a partir de dados embriolgi-
vista pela face ventral) e (B) um camaro cos, mas o seu trabalho influenciou muitos dos seus contemporneos a faz-lo. Um dos
(Penaeus, vista pela face dorsal). O camaro e primeiros cientistas a perceber a importncia evolucionria dos estudos de von Baer foi
a craca tm um estgio larval similar apesar da Elie Metchnikoff. Metchnikoff reconheceu que a evoluo consiste na modificao de
radical divergncia no desenvolvimento poste- organismos embrionrios, e no de adultos. Assim ele escreveu (1891):
rior. (De acordo com F. Mller, 1864.)
O homem parece ser um resultado unilateral, mas no total, de um organismo

melhorado, no s pela juno de macacos adultos, mas preferivelmente por ter
seus fetos desenvolvidos desigualmente. Do ponto de vista puramente histrico
natural, seria possvel reconhecer o homem como um monstro de macaco, com
um crebro, face e mos enormemente desenvolvidos.
Dessa maneira, os organismos eram vistos atravs das mudanas no seu desenvolvi-
mento embrionrio. No incio do sculo 20, essa fuso de evoluo e embriologia foi
mal interpretada apoiando o modelo linear de evoluo (oposto ao ramificado). A
interpretao de Ernst Haeckel foi de que muitos organismos evoluram pela adio
terminal de um estgio novo ao fim do anterior. Dessa maneira, ele interpretou todo
o reino animal como representaes de etapas encurtadas do desenvolvimento huma-
no (veja Gasman,1971; Gould, 1977). [evo1.html]
CAPTULO 23 Mecanismos Desenvolvimentais da Mudana Evolucionria 885
E. B. Wilson e F R.. Lillie

F.. R
Se mudanas no desenvolvimento embrionrio afetaram mudanas evolucionrias,

como acontecem essas mudanas de desenvolvimento? No final do sculo 19, mui-
tos investigadores tentaram ligar o desenvolvimento filogenia atravs de anlises
das linhagens celulares. Eles observaram meticulosamente cada clula nos embries
em desenvolvimento e compararam os caminhos pelos quais organismos diferentes
formaram seus tecidos. Em 1898, dois embriologistas eminentes realizaram palestras
sobre linhagem celular no Marine Biology Laboratories em Woods Hole,
Massachusetts, e suas palestras serviram para enfatizar os dois caminhos da embrio-
logia que estavam sendo usados para apoiar a biologia evolucionria. A primeira
palestra, apresentada por E. B. Wilson, foi um marco no uso de homologias embrio-
nrias para estabelecer relaes filogenticas. Wilson havia observado que os pa-
dres de clivagem espiral de platelmintos, moluscos e aneldeos e ele havia desco-
berto que em cada caso, os mesmos rgos provinham do mesmo grupo de clulas.
Para ele, isso significou que esses filos tinham um antepassado comum. Os vrios
grupos de clulas em estgio de clivagem em platelmintos, moluscos e aneldeos
Mostram uma correspondncia to prxima tanto em relao origem como ao

destino, que parece impossvel explicar a similaridade obtida a no ser como um
resultado da comunidade de linhagem. As muitas diferenas, como veremos, do
algumas das mais interessantes e convincentes evidncias da afinidade gentica;
para processos nos quais nas formas inferiores desempenham um papel impor-
tante no desenvolvimento esto nas formas superiores to reduzidos a ponto de
no ser mais que vestgios ou reminiscncias do que eram, e em alguns casos
parecem ter desaparecidos to completamente como os dentes de pssaros ou os
membros de serpentes.
O prximo palestrante foi F. R. Lillie, que tambm havia realizado pesquisas

sobre o desenvolvimento de embries de moluscos e em modificaes de linhagens
celulares. Ele enfatizou as modificaes, no as similaridades, da clivagem. Suas
pesquisas no Unio, um mexilho cuja clivagem foi alterada para produzir uma larva
com forma de armadilha de urso permitindo-lhe sobreviver em gua corrente, fo-
ram descritas no Captulo 5. Lillie argumentou que os estudos evolucionrios mo-
dernos estavam melhor concentrados nas mudanas do desenvolvimento embrion-
rio que permitiram a sobrevivncia em ambientes particulares em vez de enfocar
homologias ancestrais que uniam os animais em linhas de descendncia.
Em 1898, portanto, as duas principais vias de aproximao para a evoluo e o desen-
volvimento estavam claramente definidas: encontrar unidades bsicas que unem grupos
de animais distintos, e detectar diferenas no desenvolvimento que permitem espcies se
adaptarem a ambientes particulares. (Certamente, essas mesmas linhas de pensamento
caracterizaram os dois tipos de teologia natural antes de Darwin.) Darwin pensou serem
apenas distines temporrias, isto , seriam encontradas unidades bsicas nos primeiros
estgios, enquanto os ltimos estgios se divergiriam para permitir adaptaes especfi-
cas (veja Ospovat, 1981). No entanto, Wilson e Lillie estavam ambos discutindo o est-
gio da clivagem da embriognese. Essas duas maneiras de caracterizar o desenvolvimen-
to e a evoluo ainda so as principais correntes de pensamento hoje.
A evoluo do desenvolvimento precoce: E. Pluribis Unum

A emergncia dos embries
Na evoluo e desenvolvimento de organismos vivos, podemos observar a emergncia

de multicelularidade a partir de organismos unicelulares. Uma nova totalidade forma-
da de componentes celulares. Isso um passo fundamental na emergncia de um novo
patamar de complexidade. As volvocaceas e os dictiosteldeos mencionados no Captu-

lo 1 representam somente 2 de 17 tipos de protistas nos quais a multicelularidade foi
conseguida (Buss, 1987). No entanto, somente trs grupos (aqueles que geraram fun-
gos, plantas e animais) desenvolveram a capacidade de formar agregados multicelulares
que poderiam se diferenciar em tipos de clulas particulares, i. e., um embrio.
Os primeiros embries tiveram que resolver um problema fundamental. Uma vez
que cada um dos componentes celulares tinha o aparelho gentico e a arquitetura
citoplasmtica necessria para a diviso, porque cada clula no haveria de continuar
a sua prpria proliferao? O que causaria essas clulas sacrificarem sua capacidade
proliferativa para formar um indivduo coletivo? Pode ter havido mais de uma solu-
o. Buss sugere que nesses embries precoces houve uma dicotomia abrupta entre a
proliferao e a diferenciao e que nosso ancestral protista nunca aprendeu o truque
da diviso aps a diferenciao dos clios. Enquanto outros grupos de protistas (es-
pecialmente os ciliados) podiam produzir mais centros organizadores de microtbu-
los, nossos ancestrais no o podiam. At os dias atuais, nenhuma clula metazoria
ciliada se divide (embora clulas metazorias ciliadas podem perder os seus clios e
depois se dividir). Buss especula que os ancestrais dos metazorios de hoje pararam
sua proliferao celular se diferenciando em uma blstula de clulas ciliadas. (Os
embries precoces dos primeiros filos metazorios- esponjas e cnidrios- so carac-
terizados como bolas de clulas ciliadas, como os embries de ourio-do-mar discu-
tidos no Captulo 5.) Essas blstulas ciliadas podiam se mover, mas parecia que todo
o seu desenvolvimento havia parado, para as clulas ciliadas no se dividirem, nem
se tornarem outro tipo diferenciado de clula. Para se desenvolver em um organismo,
esse dilema tinha que ser resolvido.
Esse problema foi resolvido pela reteno ou produo de uma populao de clu-
las no-ciliadas. Essas clulas podiam se proliferar em novas clulas, enquanto as clu-
las ciliadas permitiam ao embrio se mover. Mas essas clulas divididas no podiam
simplesmente ir para qualquer lugar. No podiam crescer em cima das clulas ciliadas ou
seu movimento cessaria. Elas no podiam crescer na gua ou seriam sugadas pelos
movimentos do embrio. Ao contrrio, teriam que migrar para dentro da blastocele (Figu-
ra 23.2). Acredita-se que esse movimento e proliferao de clulas seja a origem da
gastrulao. Dessa maneira, a blstula surge como uma maneira de juntar clulas aut-
nomas em uma federao. A gstrula surgiu como um acordo com essa federao permi-
tindo ao embrio se desenvolver enquanto se move (Buss, 1987).*
Os primeiros embries provavelmente se desenvolveram sob essa forma de mo-
saico. No entanto, a induo proporcionou um segundo mecanismo para assegurar
que blastmeros totipotentes permanecessem juntos para formar um nico indiv-
duo. Aqui, cada clula sacrificou sua autonomia para criar uma comunidade coeren-
te. Henry e seus colaboradores (1989) descobriram que enquanto os blastmeros
individuais do ourio-do-mar podem ser totipotentes, os agregados produzidos des-
sas mesmas clulas no o so. Ao contrrio, cada clula restringe a potncia da sua
vizinha (veja Captulo 15). Essa regulao restritiva tambm vista em camundongos
quimricos (veja Captulo 5), onde blastmeros de mamferos se combinam para formar
um nico camundongo quimrico ao invs de dois camundongos individuais. Parece
haver restries muito importantes na potncia celular, uma vez que as clulas se
juntam. Ademais, uma vez que a populao interna pode interagir com a populao
*Essa uma modificao da teoria originalmente proposta por Metchnikoff (1886) para explicar a
origem dos organismos multicelulares. Usando embries de hidrides e de esponjas, Metchnikoff assina-
lou que certas clulas da parede da blstula arrastadas por seu flagelo, se tornam amebides e mveis, se
multiplicam por diviso, preenchem a cavidade da blstula, e se tornam capazes de fazer digesto. Esse
estado embrionrio, ele sentiu, como com o direito de ser considerado o prottipo dos seres multicelulares.
Metchnikoff tentou fazer uma filogenia de todos os organismos baseada nas suas camadas germinativas,
e ele acreditava que todas as clulas mesodrmicas poderiam ser caracterizadas por sua habilidade de
fagocitar substncias estranhas. As suas descobertas em embriologia comparativa finalmente lhe permitiu
formular fundaes conceituais de uma nova cincia, a imunologia. (Para maiores detalhes sobre a teoria
de origens multicelulares de Metchnikoff, veja Chernyak e Tauber, 1988, 1991.)
Figura 23.2
Gastrulao em dois cnidrios hidrides. (A-
E) Gastrulao em Aequoria foskalea, onde
formada uma blstula ciliada. As clulas do
plo vegetal perdem seus clios e migram para
dentro da blastocele para formar uma popula-
o em diviso mittica. (F-I) Gastrulao em
Clava squamata, onde uma estereoblstula re-
pleta de clulas formada e em seguida a ca-
mada externa se torna ciliada. Ambos os pla-
nos convergem para a larva plnula ciliada
(A) (B) (C) (D) (E) caracterstica dos cnidrios. (A epbole de um
Aequoria foskalea ectoderma no-ciliado no est presente em
embries livres para nadar.) (De acordo com
Buss, 1987.)
(F) (G) (H) (I)

Clava squamata
celular externa e com outras partes da populao interna, eventos indutivos podem
dar origem ao surgimento de novos rgos.
Independentemente da maneira pela qual essa comunidade de clulas foi forma-
da, a integrao delas em um embrio unificado realizada pela contribuio mater-
na ao citoplasma do ovo. esse conjunto de instrues que causa a clivagem das
clulas de um modo especfico, aderir uma a outra, e se diferenciar em perodos
particulares. Como foi observado no Captulo 12, o embrio do ourio-do-mar se torna
uma blstula ciliada mesmo na ausncia de transcrio nuclear. Somente na gastrula-
o o ncleo comea a regular o desenvolvimento. Dessa maneira, seleo a nvel de
propagao celular (que tem sido a regra da sobrevivncia entre os protistas) foi
suplantada pela seleo ao nvel de organismos multicelulares individuais.
Formao de um Novo F ilo: Modificando os

Filo:
(A)
Caminhos do Desenvolvimento
Somente trs dzias de modelos de corpos animais esto sendo usados atualmente
neste planeta (Margulis e Schwartz, 1988; Brusca e Brusca, 1990). Esses constituem
o filos animais. Isso no quer dizer que esses modelos so os nicos possveis. O
Burgess Shale, um depsito de fsseis de corpos moles do perodo Cambriano inici-
al, conhecido por conter representantes de 20 filos ou mais que nunca desenvolve-
ram descendentes nas camadas superiores (Figura 23.3). Alm disso, essa pequena
banda de sedimento, aproximadamente do tamanho de um quarteiro, contm cerca (B)
de uma dzia de classe de artrpodes previamente desconhecida. Esses animais no
so membros primitivos de uma classe ou filo existente, mas so exemplos Figura 23.3
especializados do seus prprios grupos. (Whittington, 1985; Gould, 1989). Existem Dois organismos fsseis do Burgess Shale da
tambm duas espcies no Burgess Shale que podem estar relacionadas s formas metade do perodo Cambriano. (A) Opabina,
um organismo com cinco olhos na cabea, um
ancestrais do filo existente. Uma um animal parecido com um peripato, que deve
apndice frontal com uma garra terminal, seg-
ser prximo uma forma ancestral de inseto; e outro aparenta ser um cordado bem mentos corpreos com guelras dorsais e um
preservado chamado Pikaia gracilens que pode estar relacionado aos cordados an- pedao de cauda de trs segmentos. (B) Pikaia
cestrais (veja Figura 23.3B). Esse ltimo fssil apresenta muitos traos que recomen- gracilens, possivelmente um cordato. (de
dam que seja classificado em nosso filo: ele parece ter uma notocorda, e as bandas Gould, 1989.)
Boca Medusas reprodutivas

sexualmente com
Tentculo Colnias jovens
clulas mutantes
compostas de
Plipo clulas mutantes
reprodutivo
Plipos de Ovo Zigoto Larva

Broto de
nutrio medusa
Espermatozide
Brotamento
Mutao somtica
d origem a uma
nova linhagem
Figura 23.4
Aparecimento rpido de novas variantes em invertebrados com alternao de geraes. Aqui,
uma mutao somtica ocorre nas clulas de uma colnia hidride. Algumas dessas clulas
Colnia madura
mutantes se tornam parte do plipo reprodutivo, dando origem s medusas (gua-viva) que
contm os alelos mutantes. Essas medusas se reproduzem para formar uma nova colnia que
pode ser produzida de clulas mutantes.
em zigue-zague ao longo de sua lateral se parecem muito com a musculatura derivada

de somito encontrada nos Amphioxus (Conway Morris e Whittington, 1979).* Dessa
maneira, todos os filos metazorios conhecidos (e muitos at agora desconhecidos)
parecem ter se formado pela radiao Cambriana h cerca de 540 milhes de anos atrs
(Bowring et al., 1993; Wray et al., 1996).
Como que nenhum filo novo surgiu nos ltimos 500 milhes de anos? Kauffman
(1993) prope um modelo matemtico que prev que qualquer sistema evolutivo
(sendo ele filo, espcie, automvel ou religio) mostra esse padro de divergncia
seguido pela clausura dentro de um subconjunto particular da diversidade original.
Kauffman usa uma metfora de um terreno acidentado onde existem picos e vales de
aptido, e todos os organismos comeam com o mesmo valor de aptido mdio igual
(na metade do pico). Se eles do saltos grandes, eles tm uma chance de 50% de se
tornarem organismos fisicamente aptos. Por fim, a chance de encontrar um plano
corporal fisicamente apto diminui se um organismo d um salto para longe de onde
est situado. Saltos longos se tornam arriscados, e as chances desses picos mais
altos j estarem ocupados aumenta. Ao invs disso, saltos pequenos (sobre o mes-
mo pico) podem tornar um organismo fisicamente mais apto do que a populao ao
seu redor. Portanto, o que vemos uma diversificao em torno de poucos modelos
de sucesso. Geralmente, o intervalo entre saltos longos com sucesso duplica a cada
tentativa. No comeo do perodo Cambriano, possvel que o genoma no tivesse
se estabilizado nos conjuntos de interaes que vemos hoje. Alm do mais, em
muitos grupos invertebrados existe uma alternao de geraes onde uma forma
sexuada gera uma forma assexuada (zoide, plipo, broto) que ento d origem
novamente uma forma sexuada. Em tais casos, mutaes somticas na forma
assexuada podem entrar no corpo da forma sexuada e serem propagadas de uma
forma muito rpida (Figura 23.4; Buss, 1987).
*Um fssil ainda mais antigo, Yunnanazoon lividum, do comeo do perodo Cambriano, em torno de
525 milhes de anos atrs, foi primeiramente reportado como sendo um cordado (Chen et al., 1995). No
entanto, a interpretao da notocorda fssil foi questionada por Shu e colegas (1996), que interpretaram o
Yunnanazoon como sendo o hemicordado mais antigo conhecido.
Como, ento, podemos modificar um Bauplan para criar um outro Bauplan? O

primeiro passo seria modificar os primeiros estgios do desenvolvimento. De acordo
com von Baer (veja Captulo 7), animais de diferentes espcies mas do mesmo gnero,
divergem muito tardiamente no desenvolvimento. Quanto mais divergente for uma
espcie da outra, mais cedo poderemos distinguir os seus embries. Dessa maneira,
embries de gansos da neve so indistinguveis dos gansos azuis at quase os lti-
mos estgios. No entanto, o desenvolvimento do ganso da neve diverge do desenvol-
vimento do pinto um pouco antes, e os embries do ganso podem tambm serem
distinguidos de embries de lagarto em estgios ainda mais precoces. Parece ento
que mutaes que criaram Bauplne novos poderiam faz-lo alterando os primeiros
estgios do seu desenvolvimento. Figura 23.5
Essas mudanas precoces do desenvolvimento podem ser afetadas pela mudana Comparao do desenvolvimento de duas clas-
de localizao dos determinantes citoplasmticos, mudando a razo da diviso celu- ses de vermes aneldeos, (A) o poliqueto
lar de uma clula ou grupo de clulas relativa a outras, ou mudando as posies das Podarke e (B) o oligoqueto Tubifex. Esto mos-
trados seus embries em clivagem, mapas de
clulas enquanto elas se dividem. No Captulo 5, vimos que a modificao da clivagem
destino da blstula e produtos da gastrulao.
do molusco pode dar a massa de citoplasma para as clulas ectodrmicas que for- No Podarke, a gastrulao leva formao de
mam a concha larval. Isso devido mudana na maneira pelo qual os blastmeros uma larva trocfora. No Tubifex, no h um
dividem e partilham o citoplasma. Nos vermes aneldeos, as diferenas entre poliquetas estgio larval, e o embrio se desenvolve dire-
e oligoquetas, derivam de diferenas na localizao citoplasmtica de morfgenos tamente em um corpo segmentado. (De acordo
dentro do ovo (Figura 23.5). Embora ambos sofram clivagem espiral, eles partilham com Anderson, 1973.)
(A) Podarke Mapa de destino Larva trocfora
Tufo apical
Tufo apical presuntivo Prototroco

Ectoderma
anterior presuntivo Estomodeu
Prototroco
presuntivo
Ectoderma
presuntivo
posterior
Intestino
Estomodeu Banda mdio
Mesoderma mesodrmica
presuntivo presuntivo
Embrio de 40 clulas
Intestino
mdio
Ectomesoderma Ectoderma dorsal
presuntivo
presuntivo temporrio do
saco vitelnico
Ectoderma do Somitos
(B) Tubifex Estomodeu
saco vitelnico mesodrmicos
presuntivo Banda
presuntivo ectoteloblstica Ectoteloblasto
Ectoderma do
ectoteloblasto
presuntivo
Intestino Mesoderma Ectoteloblasto

mdio presuntivo Ectoderma ventral Intestino
presuntivo temporrio do mdio
saco vitelnico
Embrio em clivagem Mapa de destino Gastrulao

Vestimentiferano
Polygordius
Patella
(A) (B) (C) (D) (E) (F)
Figura 23.6
Divergncia no desenvolvimento aps o est- seus morfgenos em clulas diferentes. Poliquetas sofrem uma clivagem espiral relati-
gio larval de trocfora. (A-C) A metamorfose vamente padronizada, dando origem larva trocfora. Oligoquetas, no entanto, colo-
do aneldeo poliqueto Polygordius a partir de cam a maior parte de seu citoplasma nas clulas destinadas formao de estruturas
sua forma larval trocfera de nado livre mostra adultas, ao invs de larvais. Esse grupo passa depois para o estgio larval. Se uma
a formao de um tronco segmentado. Por fim, mutao colocasse um certo morfgeno citoplasmtico em uma nica regio do ovo
as estruturas larvais se encurtam na extremida- ao invs de uma outra, ou se a mutao originasse uma mudana no eixo da diviso
de anterior medida que a cabea se forma. (D- celular para que conjuntos diferentes de clulas adquirissem esses determinantes,
E) Metamorfose do molusco prosobrnquio ento um fentipo radicalmente diferente poderia ser produzido. Como E. G. Conklin
(mexilho) Patella. Aps o estgio trocforo,
escreveu em 1915, Ns somos vertebrados porque nossas mes eram vertebrados e
ele desenvolve um p de molusco, uma gln-
dula da concha e uma corcova visceral. (F) produziram ovos de padro vertebrado.
Micrografia eletrnica de varredura de uma lar- Uma outra maneira de evoluo de um novo filo pode envolver uma modifica-
va trocfora de um vestimentiferano. (A-E de o da larva. Darwin e outros pensavam que similaridades na forma larval signifi-
acordo com Grant, 1978; F de Jones e Gardiner, cavam origem em comum. No entanto, isso pode ser reinterpretado para significar
1989; cortesia dos autores.) que as mudanas que originam filos diferentes podem ocorrer na larva. Caramujos,
equiurides e poliquetos tm padres de diviso muito semelhantes e formam lar-
vas trocforas (Figura 23.6). De fato a colocao do filo recm-descoberto
Vestimentfera (invertebrados vermelho brilhante, sem tubo digestivo, encontra-
dos nas valas profundas do oceano) prximo aos aneldeos foi feita em parte base-
ada nas larvas trocforas das vestimentferas (Jones e Gardiner, 1989; Young et al.,
1996). Assim, um dos principais mecanismos para estabelecer novos filos e classes
pode ser a relocao do desenvolvimento durante o estgio larval para que a meta-
morfose surja com novos tipos de organizao. Garstang (1928) mostrou como a
larva vliger de alguns caramujos pode ter surgido atravs de mutao e depois ter
sido selecionada porque a nova disposio da cabea e concha permitiam que a
cabea se retrasse, por segurana, abaixo da concha. Ele tambm inventou a hip-
tese de que cordados se desenvolveram das larvas tunicadas ancestrais que se
tornaram neotnicas. Infelizmente, larvas de corpo mole raramente se fossilizam,
portanto sabemos muito pouco dos mecanismos pelos quais cordados e outros filos
surgiram de larvas* Cambrianas precoces.
* Formas larvais freqentemente preenchem a lacuna entre as diferentes formas adultas. A forma
larval vista ou como sendo ancestral a dois grupos ou como um separador por neotenia e formando um
diferente tipo de organismo. Isso vem freqentemente sendo hipotetizado como um mecanismo pelo qual
os cordados emergiram de invertebrados e vertebrados surgiram de cordados. A larva tornaria dos
hemicordados formada de uma maneira deuterstoma, similar s larvas equinodermos e se mostra muito
parecida com uma larva equinodermo tendo sido originalmente confundida com elas. Isso ligaria os
equinodermos e cordados. Garstang (1928) e Berril (1955) hipotetizaram que as larvas de certos tunicados
podiam ter evoludo em cordados tais como os anfioxos pelo desenvolvimento neotnico. Desse modo, os
tunicados manteriam a notocorda, musculatura larval e o aparelho alimentar da larva tunicada enquanto se
tornam sexualmente maduras. Existem, na verdade, tunicados nadadores neotnicos (como as Larvacea).
Modificaes dessa interpretao (usando linhagens de protocordados diferentes) foram sugeridas por
Jefferies (1986). A origem dos cordados permanece um problema difcil.
Modularidade: O pr-requisito para mudana

evolutiva atravs do desenvolvimento
Existem somente cerca de 35 Bauplne, mas existem milhes de diferentes espcies,
cada uma com o seu padro de desenvolvimento. Portanto, a maior parte da evoluo
ocorreu nos moldes de um Bauplan existente. Como isso feito? Como o desenvolvi-
mento de um embrio pode ser modificado j que um processo to precisamente
afinado e complexo? Costumava-se pensar que o nico caminho para promover a
evoluo era adicionar um degrau no fim do desenvolvimento embrionrio, mas ago-
ra sabemos que mesmo os estgios mais iniciais podem ser alterados para produzir
novidades evolucionrias. A razo pela qual mudanas podem ser produzidas duran-
te o desenvolvimento que o embrio, como o organismo adulto, composto por
uma srie de mdulos que se interagem (Riedl, 1978; Bonner, 1988).
Modularidade
O desenvolvimento ocorre atravs de mdulos discretos e interativos (Riedl, 1978;
Gilbert et al., 1996; Raff, 1996; Wagner, 1996). Os organismos so construdos de
unidades que so coerentes em si e ainda parte de uma unidade maior. Dessa manei-
ra, clulas fazem parte dos tecidos, que fazem parte dos rgos, que fazem parte de
um sistema, e assim por diante. Tal sistema to hierarquicamente entrelaado foi
chamado de arranjo modular interagindo em nveis (Dyke, 1988). No desenvolvi-
mento, esses mdulos incluem campos morfogenticos (por exemplo, aqueles des-
critos para o membro ou o olho) discos imaginais, linhagens celulares (tais como a
massa celular interna ou trofoblasto), parasegmentos de insetos e rudimentos de
rgos de vertebrados. Unidades modulares permitem que diferentes partes do corpo
mudem sem a interferncia de outras funes.
O princpio fundamental da modularidade permite trs processos de alterao do de-
senvolvimento: dissociao, duplicao e divergncia, e co-opo (Raff, 1996). Uma vez
que os mdulos esto em todos os nveis, do molecular ao orgnico, no surpreendente
que esses princpios sejam vistos operando em todos os nveis do desenvolvimento.
Dissociao: Heterocronia e Alometria
Nem todas as partes do embrio so conectadas umas s outras. Podemos dissecar

um campo do membro de uma nurula de salamandra sem afetar os olhos. Por mutao
ou perturbao ambiental, uma parte do embrio pode mudar sem a outra parte. Essa
modularidade do desenvolvimento pode permitir mudanas que so tanto espaciais
quanto temporais. Heterocronia uma mudana no ajustamento relativo de dois pro-
cessos do desenvolvimento durante a embriognese, de uma gerao para outra. Em
outras palavras, um mdulo pode mudar sua expresso temporal relativa para outros
mdulos do embrio. Chegamos a esse conceito em nossas discusses de neotenia e
prognese em salamandras (veja Captulo 19). A heterocronia pode ser causada de
diferentes maneiras. Em heterocronias de salamandra onde o estgio larval retido, a
heterocronia causada por mutaes gnicas no sistema de competncia da induo.
Outros fentipos heterocrnicos, entretanto, so causados pela expresso
heterocrnica de certos genes. O desenvolvimento direto do rudimento do ourio-do-
mar adulto (veja Captulo 19) envolve a ativao precoce de genes adultos e a supres-
so da expresso do gene larval (Raff e Wray, 1989). A heterocronia pode retornar
um organismo para o seu estado larval, livre das adaptaes especializadas do adulto.
A heterocronia tambm pode dar caractersticas larvais a um organismo adulto, como
nos pequenos e enredados ps da salamandra arbrea ou na taxa de crescimento fetal
do tecido cerebral do recm nascido humano. [evo2.html]
Outra conseqncia da modularidade a alometria. Alometria ocorre quando dife-
rentes partes do organismo crescem com taxas diferentes. Alometria pode ser muito
Figura 23.7 Nasal

Crescimento alomtrico na cabea da baleia. A mandbula se estendeu Parietal
Pr-maxilar
para frente, fazendo com que o nariz se deslocasse para o topo do crnio.
(O pr-maxilar est presente no feto humano precoce, mas ele se funde ao Occipital
maxilar j no fim do terceiro ms de gestao. O pr-maxilar humano foi
descoberto por Wolfgang Goethe, entre outros, em 1786.) (De acordo Maxilar
Frontal
com Slijper, 1962.)
Parietal
Nasal
Zigomtico Occipital
Maxila
Mandbula Escamoso (temporal)
importante na formao de variantes de planos corporais dentro do Bauplan. Tais

mudanas no crescimento diferencial podem envolver uma alterao da sensibilidade
das clulas alvo a fatores de crescimento ou alterao da quantidade de fatores de
crescimento produzidos. Novamente, o membro vertebrado pode fornecer uma ilustra-
o til. Diferenas locais nos condrcitos fazem com que o crescimento do dgito
central do cavalo seja 1.4 vezes maior se comparado aos dgitos laterais (Wolpert,
1983). Isso significa que medida que o cavalo aumentava de tamanho durante a
evoluo, essa diferena regional transformou o cavalo de 5 dgitos em um cavalo de
um s dgito. Um exemplo particularmente dramtico de alometria na evoluo vem do
desenvolvimento do crnio. No embrio muito jovem da baleia (4-5 mm), o nariz se
encontra na posio usual dos mamferos. No entanto, o enorme crescimento do
maxilar e do pr-maxilar (parte superior da mandbula) empurra o osso frontal e fora o
nariz para o topo do crnio (Figura 23.7). Essa nova posio do nariz (orifcio do sopro)
permite que a baleia tenha uma mandbula grande e altamente especializada que permi-
te a respirao enquanto paralela superfcie da gua (Slijper,1962).
Alometria pode tambm gerar novidades evolucionrias atravs de pequenas
mudanas incrementais que finalmente cruzam algum limite do desenvolvimento
(algumas vezes chamado de ponto de bifurcao). Finalmente, uma mudana na
quantidade se torna uma mudana na qualidade quando esses limites so ultrapas-
sados. Foi postulado que esse tipo de mecanismo produziu as bolsas externas,
revestidas de plos, do pescoo das toupeiras com bolso e dos ratos cangurus
que moram no deserto. As bolsas externas diferem das internas (1) por apresentar
plos e (2) no apresentar conexo interna com a boca. Elas so muito teis pois
permitem a esses animais armazenarem sementes sem correrem o risco de desidrata-
o. Brylski e Hall (1988) dissecaram a cabea de embries de toupeiras com bolso e
ratos cangurus com bolsa, e observaram como a bolsa bucal externa construda.
Quando os dados desses animais foram comparados com dados de animais que
formam bolsas bucais internas (como os hamsters), os investigadores descobriram
que as bolsas so formadas de maneiras muito semelhantes. Em ambos os casos, as
Figura 23.8 bolsas so formadas dentro das bochechas embrionrias atravs de uma
Seco transversal atravs da regio anterior protuberncia em forma de bolsa no epitlio da bochecha (bucal) para dentro do
do embrio da toupeira com bolso (Tho- mesnquima facial (Figura 23.8). Em animais com bolsa bucal interna, essas
momys) mostrando a abertura anterior da bol- evaginaes ficam dentro da bochecha. No entanto, nos animais que formam bolsas
sa (AP) e a continuidade entre a bolsa neste
externas, o alongamento do focinho leva essas bolsas a se elevarem para a regio do
estgio e a cavidade bucal (BC) atravs da
rea de desenvolvimento do lbio. (EP, clu- lbio. medida que o epitlio labial rola para fora da cavidade oral, tambm o fazem
las epiteliais; MC, cartilagem de Meckel; T, as bolsas externas. O que antes era interno agora externo. O revestimento de pele
lngua.) (De acordo com Brylski e Hall, 1988, provavelmente derivado de bolsas externas que entram em contato com o mesn-
cortesia dos autores.) quima dermal, que pode induzir o epitlio formao de cabelo (veja Captulo 17).
Essa bolsa no possui abertura interna para a boca. Certamente, a transio de bolsa
interna para externa uma questo de limiares. A localizao das evaginaes, ante-
rior ou posteriormente, determina se a bolsa interna ou no. No existe estgio de
transio com duas aberturas, uma interna e outra externa. Poderia-se imaginar
essa externalizao como uma ocorrncia de mutao por acaso deslocando a posi-
o da bolsa externa para uma posio um pouco mais anterior. Esse trao seria
selecionado no deserto. Como Van Valen refletiu em 1976, a evoluo pode ser
definida como o controle do desenvolvimento pela ecologia.
Duplicao e Divergncia
Modularidade tambm permite a ocorrncia de duplicao e divergncia. A parte da

duplicao nesse processo permite a formao de estruturas redundantes, e a parte
divergente do processo permite que essas estruturas assumam novos papis. Uma
das cpias pode manter o papel original enquanto as outras esto livres para mutar e
divergir funcionalmente. Isso pode acontecer em vrios nveis. A famlia TGF-, a
famlia MyoD e as globinas, cada uma provavelmente comeou como um nico gene
que se duplicou diversas vezes. Aps a duplicao, mutaes causaram as divergn- Figura 23.9
cias que deram aos membros de cada famlia novas funes. Em nvel de tecido, As inter-relaes nas indues epidrmicas-
mesenquimatosas. Durante a morfognese, o
podemos observar duplicao e divergncia nos somitos que do origem aos esque-
mesnquima pode causar a invaginao (A-C)
letos cervicais, lombares e torcicos. ou a evaginao (D-H) da epiderme adjacente.
Tambm existem duplicaes e divergncias de padres particulares do desenvolvi- Em alguns casos, como na formao dos mem-
mento. Interaes epitlio-mesnquima parecem ser variaes de um nico tema (Figura bros ou da carapaa da tartaruga, o mesnqui-
23.9; Maderson, 1975; Burke, 1989a). As glndulas de secreo da epiderme so modifi- ma causa a formao de uma crista ectodrmica
caes do mesmo tipo de induo - glndulas mamrias so glndulas sudorparas apical (G,H). (De acordo com Burke, 1989a.)
INDUO INDUES
INICIAL SECUNDRIAS (A) Cabelo (na pele)
(B) Glndula sudorpora ou

mamria (na pele)
Epitlio (C) Dente (na gengiva)

ectodrmico
Morfognese
(D) Pena (na pele de aves)
Mesnquima (E) Escama (na pele do rptil)
(F) Escama (na pele do peixe)
(G) Membro (em vertebrados)
(H) Carapaa (em tartaruga)

Figura 23.10
Seco atravs do meio do tronco do embrio
da tartaruga Chelydra serpentina. (A) A crista
da carapaa (seta) se forma no limite entre o
mesoderma da placa somtica e o mesoderma
da placa lateral e agora representa o limite dor-
soventral. As bandas mesodrmicas engrossa-
das se estendendo do centro para a rea da ca-
rapaa so as condensaes da costela. (B)
Aumento maior da crista da carapaa. (De acor-
do com Burke, 1989b, cortesia do autor.)
(A) (B)
modificadas embriologicamente. Da mesma maneira, a temida fileira de dentes do tuba-
ro so modificaes das escamas do corpo. Mudanas na induo podem transformar
escamas em penas (como no caso das galinhas garniz) e so responsveis por adapta-
es to extraordinrias quanto o pulmo das aves, o estmago dos ruminantes, as
presas dos elefantes (incisivos modificados), e as presas das morsas (dentes caninos
superiores modificados). A carapaa (casco) da tartaruga uma novidade evolucionria
que parece se formar de maneira reminiscente aos membros. Existe at mesmo uma crista
da carapaa que organiza o mesnquima de maneira semelhante crista ectodrmica
apical do broto do membro (Figura 23.10; Burke, 1989b).
Co
Co--opo
Nenhuma estrutura destinada a um propsito particular. Um lpis pode ser usado para
escrita, mas ele tambm pode ser usado como um palito, uma adaga, um instrumento
perfurante ou uma baqueta. Ao nvel molecular, sabemos que o gene engrailed, usado
para segmentao nos embries de Drosophila, usado posteriormente tambm para
especificar seus neurnios e usado nos estgios larvais para fornecer um eixo ntero-
posterior aos discos imaginais. Similarmente, uma protena que funciona como uma
enzima no fgado pode funcionar como uma protena cristalina estrutural no cristalino
(Piatigorsky and Wistow, 1991). Em outras palavras, unidades prexistentes podem ser
recrutadas para novas funes. Essa co-opo tambm vista a nvel morfolgico. As
asas evoluram trs vezes durante a evoluo dos vertebrados, e em cada caso, diferen-
tes estruturas de antebraos foram modificados para uma funo inteiramente nova.
Um dos casos mais celebrados de co-opo o uso de partes da mandbula embri-
onria para a criao do ouvido mdio dos mamferos (revisado por Gould, 1990).
Clulas da crista neural distinguem vertebrados dos protocordados e invertebrados.
Os protocordados tm um tubo neural dorsal e notocorda, mas no uma cabea
verdadeira. As clulas da crista neural craniana so as grandes responsveis pela
criao da face, crnio e arcos branquiais. Considera-se que o desenvolvimento da
cabea originalmente permitia uma predao mais eficiente, pela colocao das es-
truturas sensoriais adjacentes s mandbulas que capturam as presas (Gans e Northcutt,
1983; Langille e Hall, 1989; Hall, 1992). Duas transies notveis ocorreram na
evoluo da mandbula do vertebrado. A primeira a criao de mandbulas a partir
dos arcos das guelras de peixes sem mandbulas. A segunda o uso de ossos que (A)
articulavam as mandbulas superiores e inferiores nos rpteis para a formao dos Suportes
Mandbula Caixa das guelras
ossos martelo e bigorna do ouvido mdio. Nos primeiros vertebrados, uma srie de superior craniana
guelras se abriu atrs de uma boca sem mandbula. Quando as fendas das guelras
foram sustentadas por elementos cartilaginosos, o primeiro conjunto desses suportes
de guelras circundou a boca para formar a mandbula. Existem amplas evidncias de
que as mandbulas so suportes de guelras modificadas. Primeiro, esses dois conjun-
tos de ossos so produzidos de clulas da crista neural. (A maioria dos outros ossos
procedem de tecidos mesodrmicos.) Segundo, ambas estruturas se formam de bar-
ras superiores e inferiores que se curvam para a frente e so dobradas no meio. Ter- Mandbula Hiomandibular
ceiro, a musculatura da mandbula parece ser homloga musculatura dos suportes inferior
de guelras originais. Dessa maneira, a primeira transformao da cartilagem do pri-
meiro arco branquial foi aquela do aparelho da guelra para o aparelho da mandbula.
Escamoso
Mas a histria no termina aqui. (B)
A parte superior do segundo arco branquial que suporta a guelra se transforma Quadrado
no osso hiomandibular de peixes com mandbula. Esse elemento segura o crnio e Pr-maxilar Maxilar
junta a mandbula ao crnio (Figura 23.11A). Como vimos no Captulo 7, essa funo
Nasal
do osso hiomandibular nos mamferos realizada pelo estribo, um dos ossos do
ouvido mdio. Mas os peixes no usam esse osso para escutar; ento, como um
osso usado para suporte de guelras e depois como suporte para o crnio se torna
parte do aparelho auditivo dos mamferos? Quando o peixe chegou terra depa-
rou-se com um novo problema: como conseguir escutar em um meio to pouco Articular
denso como o ar? Acontece que o osso hiomandibular est prximo da cpsula Dentrio
auditiva, e a matria ssea um excelente transmissor do som. Dessa maneira,
enquanto ainda funcionava como um suporte para o crnio, o osso hiomandibular
dos primeiros anfbios tambm comeou a funcionar como um transdutor de som (C) Escamoso
(Clark, 1989). medida que os vertebrados terrestres alteraram sua locomoo, (temporal)
estrutura mandibular e postura, o crnio prendeu-se firmemente em seu lugar sem
necessitar de apoios hiomandibulares. Parece ter se especializado em seguida como
o osso estribo do ouvido mdio. O que havia sido a segunda funo desse osso Nasal
acabou se tornando sua funo primria.
Os ossos originais da mandbula tambm mudaram. O primeiro arco branquial
gera o aparelho da mandbula. Nos anfbios, rpteis e pssaros, a poro posterior
dessa cartilagem forma o osso quadrado da mandbula superior e o osso articular da
mandbula inferior. Esses ossos se conectam e so responsveis pela articulao na
mandbula superior e inferior. No entanto, nos mamferos, essa articulao ocorre em Auditivo
outra regio (os ossos dentrios e escamosos), com isso liberando esses elementos Zigomtico
sseos para adquirirem novas funes. Os osso quadrado da mandbula superior dos
Maxila Mandbula
rpteis evoluiu nos mamferos transformando-se no osso bigorna e o osso articular
da mandbula inferior dos rpteis se tornou nosso osso martelo. Esse segundo pro-
cesso foi primeiramente descrito por Reichert em 1837, que observou no embrio do
Figura 23.11
porco que a mandbula se ossifica pelo lado da cartilagem de Meckel, enquanto a Evoluo da mandbula no peixe (A), no rptil
regio posterior dessa cartilagem se ossifica, se destaca do resto da cartilagem, e (B) e no mamfero (C). (A) Homologias da
entra na regio do ouvido mdio para se tornar o osso martelo (Figura 23.11B,C)* mandbula e dos arcos das guelras como vistas
no crnio do tubaro paleozico Cobeledus
* A falta de formas de transio freqentemente citada pelos Criacionistas como uma crtica aculentes. (B) Vista lateral do crnio de um
da evoluo. Por exemplo, na transio de rpteis para mamferos, trs ossos da mandbula dos crocodilo. A poro articular da mandbula in-
rpteis se tornaram martelo e bigorna, deixando somente um osso (dentrio) na mandbula inferior. ferior se articula com o osso quadrado do cr-
Gish (1973), um Criacionista, disse que isso uma situao impossvel, pois nenhum fssil com dois nio. Nos mamferos, o quadrado se internaliza
ou mais ossos da mandbula e dois ou trs ossculos do ouvido fora encontrado. Ele considerou que tal para formar a bigorna do ouvido mdio. O osso
animal teria arrastado suas mandbulas pelo cho. Entretanto, tal forma de transio especfica no articular mantm seu contato com o quadrado,
precisaria ter existido (h mais de dzia de formas de transio documentadas entre crnios de
tornando-se o martelo do ouvido mdio. Vista
rpteis e mamferos). Hopson (1966) mostrou com bases embriolgicas como os ossos da mandbula
poderiam ter se dividido e usados para diversas funes, e Romer (1970) encontrou fsseis de rpteis lateral do crnio humano, mostrando a juno
onde as novas articulaes da mandbula j eram funcionais enquanto ossos mais antigos se tornada mandbula inferior com a regio escamosa
vam inteis. Existem vrias espcies de rpteis terapsdeos com duas articulaes de mandbula, com (temporal) do crnio. (De acordo com Zangerl
a bigorna junto a parte superior do osso quadrado (que vir se tornar o osso bigorna). [evo3.html] e Williams, 1975.)
A existncia de discretos mdulos de desenvolvimento permitiu que os princpi-

os de dissociao, duplicao e divergncia e co-opo formassem novos tipos de
organismos.
Progresso correlacionada
Uma conseqncia evolucionria da natureza modular do desenvolvimento a pro-

gresso correlacionada. Aqui, mudanas em uma parte do embrio induzem mu-
danas em outras. A cartilagem esqueltica informa a colocao dos msculos, e os
msculos induzem a colocao dos axnios dos nervos. Nesses casos, se uma estru-
tura muda, isso ir induzir que outras estruturas tambm o faam (Thomson, 1988).
As mudanas dramticas na organizao dos ossos, desde os gnatos at os peixes
(A) Crebro mdio com mandbulas, dos peixes com mandbulas at os anfbios, e dos rpteis at os
Crebro mamferos foram todas coordenadas atravs de mudanas nas estruturas da mand-
posterior bula, musculatura da mandbula, deposio e formato dos dentes e modificaes da
abboda cranial e ouvido (Kemp, 1982; Thomson, 1988). Em 1995, Rowe formulou
a tese de que a migrao da cartilagem da mandbula dos rpteis para formar a carti-
lagem do ouvido mdio por si s um caso de progresso correlacionada, ou seja, uma
conseqncia do aumento da caixa craniana pelo qual os precursores da cartilagem
foram liberados para migrar caudalmente.
Podemos observar tambm a progresso correlacionada ao longo de um curto
perodo em animais domsticos. Humanos tm um grande talento para selecionar
variantes hereditrias em animais domsticos que envolvem aquelas clulas da crista
(B) Estribo neural formadoras dos processos mandibular e frontonasal. Em tais casos, como o do
bulldog, a raa selecionada para se obter uma face larga com um ngulo muito
pequeno entre a mandbula e a cabea. Outras raas como o collie so selecionadas
visando obter um focinho estreito com uma mandbula alongada distanciando-se da
cabea. Todas as raas podem mover suas mandbulas, sacudir suas cabeas e latir,
apesar das diferenas na via que seus ossos so formados ou posicionados. Cada
variao geneticamente determinada; e importante notar que cada uma representa
uma reordenao harmoniosa dos diferentes ossos que interagem entre si e com suas
ligaes musculares. Com a seleo dos elementos esquelticos, tambm foram sele-
cionados os msculos que os movem, os nervos que controlam os movimentos, e os
Parte da
vasos sangneos que os alimentam.*
caixa craniana
O mecanismo pelo qual o aparelho da mandbula manteve sua integridade desde
Esqueleto Processo
da lngua retroarticular
as lamprias at os amniotas um extraordinrio exemplo de mdulos embrionrios.
As estruturas da cabea de vertebrados derivadas da crista neural, incluem os arcos
Figura 23.12 farngeos (os precursores da mandbula, ouvido mdio, esqueleto da lngua, etc.) to
Clulas da crista neural de rombmeros do bem quanto os ossos drmicos da face e a musculatura facial (veja Captulo 7). A
embrio de pinto e seus pacotes msculo- caixa craniana um produto de tecidos mesodrmicos. Substituindo rombmeros
esquelticos. (A) Embrio de pinto de dois dias individuais de pinto pelos de codornas, Kntges e Lumsden (1996) foram capazes de
mostrando a contribuio das clulas da crista
mapear os destinos das clulas da crista neural associadas com os rombmeros da
rombomrica aos arcos farngeos. (A maioria
das clulas da crista neural de r3 e r5 sofrem
codorna (Figura 23.12). Os anticorpos marcando as clulas da crista neural das co-
apoptose, enquanto que o resto dessas clulas dornas mostraram que cada rombmero d origem a um elemento esqueltico em
contribuem para a populao maior de clulas particular e aos msculos a eles atados. Ademais, se descobriu que os mdulos ms-
da crista neural de r4.) (B) Embrio de 10 dias culo-e-esqueleto de cada rombmero foram enervados por um nervo cranial espec-
mostrando os ossos das mandbulas superior e fico. Por exemplo, as clulas da crista neural do rombmero 4 geraram quatro tecidos
inferior, o esqueleto da lngua e o ouvido m- esquelticos - o processo retroarticular da mandbula inferior (encontrado nas aves
dio derivados das clulas da crista rombomrica. mas no nos mamferos), uma poro do esqueleto da lngua, o osso bigorna do
Os msculos derivados de r4 so ligados aos ouvido mdio, e supreendentemente, a pequena poro da caixa craniana onde os
ossos do mesmo rombmero, e a parte da caixa
msculos de abertura da mandbula se ligam ao crnio, principalmente derivado do
craniana ligada ao msculo da abertura da man-
dbula derivado de r4 tambm derivada do
mesoderma. Os msculos que conectam esses quatro elementos esquelticos tambm
mesmo rombmero. (Para maior clareza ou- *Entretanto essa coordenao no totalmente universal. Em ces com faces muito acentuadas (como
tros msculos foram omitidos.) (De acordo com os bulldogs), a pele no coordenou o seu desenvolvimento com os ossos e, portanto, fica pendente em
Ahlberg, 1997.) dobras desde a cabea (Stockard, 1941).
(A) Padres esquelticos embrionrios (B) Padres esquelticos finais (C) Padres musculares finais
Archaeopteryx
Ave moderna Msculo

poplteo
Ave
experimental
Rptil
(Crocodylus)
(D) Figura 23.13

Atavismos experimentais produzidos pela
alterao de campos embrionrios no membro.
(A-C) Resultados dos experimentos de Mller
onde lminas folheadas de ouro dividem o cam-
po do membro posterior do pinto. (A,B) O
padro embrionrio e final do osso, indicando
que a estrutura fibular foi retida pelo membro
experimental do pinto, como o em rpteis
existentes e como se considera que foi no
Archaeopteryx. (C) Algumas das mudanas
musculares correlacionadas nos embries ex-
perimentais de pinto. O msculo poplteo est
presente no pinto, mas ausente nos membros
de rpteis e nos membros experimentais. O
msculo fibular brevis, que normalmente se
vieram das clulas da crista neural do rombmero 4. Todos esses msculos so origina da tbia e da fbula no pinto, assume o
inervados pelo nervo cranial VII. Os rombmeros formam uma unidade modular, cons- padro reptiliano originando somente da fbula
tituindo dos elementos esquelticos do arco farngeo, os msculos que os movem, o nos membros operados. (D) Archaeopteryx
local de ligao dos msculos caixa craniana, e os nervos que inervam os msculos. fssil em calcrio. A impresso das penas pode
ser vista claramente. Se no fossem as penas,
Como esses msculos e ossos so formados das mesmas clulas, suas relaes po-
esse organismo dentado seria provavelmente
dem ser mantidas apesar das mudanas dramticas nas posies e funes que esses classificado como um rptil. (A-C de acordo
elementos poderiam sofrer ao longo do tempo. com Mller, 1989; fotografia cortesia de B. A.
A progresso correlacionada tambm foi mostrada experimentalmente. Repetin- Mller/Biological Photo Service.)
do experimentos anteriores de Hamp (1959), Gerd Muller (1989) inseriu barreiras
folheadas de ouro dentro de brotos precondrognicos de membros posteriores de um
embrio de pinto de trs dias e meio. A barreira separava as regies da formao da
tbia e da formao fbula. Os resultados desse experimento so duplos. Primeiro, a
tbia encurtada e a fbula se dobra e retm sua conexo ao fibular. Tais relacionamen-
tos entre a tbia e a fbula no so muito comuns em pssaros, mas so caractersticos
de rpteis (Figura 23.13). Segundo, a musculatura do membro posterior sofre mudan-
as paralelas com os ossos. Trs dos msculos que se ligam a esses ossos agora
mostram padres de insero caractersticos de rpteis. Nos parece, portanto, que
manipulaes experimentais que alteram o desenvolvimento de uma parte do campo
mesodrmico formador de membros tambm altera o desenvolvimento de outros com-
ponentes mesodrmicos. Como na progresso correlacionada observada no desen-
volvimento da face, essas mudanas parecem ser todas devidas s interaes dentro
de um campo, nesse caso, o campo dos membros posteriores do pinto. Esses no so
efeitos globais e podem ocorrer independente de outras partes do corpo.
Restries ao desenvolvimento
Embora discretamente, os mdulos de desenvolvimento podem interagir uns com os
outros. Essas interaes limitam os fentipos possveis que podem ser criados, e
tambm permitem a ocorrncia de mudanas em certas direes com maior eficin-
cia do que em outras.* Coletivamente, essas restries na produo de fentipos so
chamadas de restries do desenvolvimento.
Restries Fsicas
Fizemos aluso ao fato de que existem relativamente poucos Bauplne, e podemos

facilmente imaginar tipos de animais que no existem dentro de um filo existente. Por
que no existem mais tipos principais de corpos entre os animais? Para responder a
isso, temos que considerar as restries impostas na evoluo. Existem trs classes
principais de restries na evoluo morfogentica. Primeiro, existem as restries
fsicas na construo de um organismo. Essas restries de difuso, hidrulica e
sustentao fsica permitem que somente certos mecanismos do desenvolvimento
ocorram. Podemos observar que no existe um vertebrado com apndices virados
(parecido com que Dorothy viu em o Mgico de Oz) porque o sangue no circula em
rgos que giram; toda essa possibilidade da evoluo foi abandonada. Similarmente,
parmetros estruturais e a dinmica de fluidos impossibilitam a existncia de um
pernilongo de um metro e meio de altura. [evo4.html]
Restries Morfogenticas
Existem tambm restries envolvendo regras de construo morfogentica (Oster et al.,

1988). Bateson (1894) ressaltou que quando organismos se afastam do seu desenvolvi-
mento normal, eles o fazem em somente um nmero limitado de maneiras. Pesquisas nessa
rea tentam encontrar parmetros arquitetnicos pelos quais os organismos so construdos
e procuram mostrar como esses parmetros podem ser modificados durante a evoluo.
Alguns dos melhores exemplos desses tipos de restries vm da anlise da formao de
membros em vertebrados. Holder (1983) afirma que embora possam ter havido muitas
modificaes do membro vertebrado nestes 300 milhes de anos, algumas modificaes
(tais como o dedo indicador ser mais curto que os dedos vizinhos) no foram encontradas.
Alm do mais, anlises de populaes naturais sugerem que existe um nmero relativa-
mente pequeno de caminhos pelos quais a mudana nos membros pode ocorrer (Wake e
Larson, 1987). Se um membro mais longo favorvel em determinado ambiente, o mero
pode se tornar alongado. Jamais veremos dois meros pequenos unidos juntos em dois
lugares, embora possamos imaginar as vantagens seletivas que essa distribuio poderia
ter. Isso indica um esquema de construo que tem certas regras.
As regras principais para a formao de um membro vertebrado foi resumida por
Oster e seus colegas (1988). Eles descobriram que o mecanismo de reao-difuso
pode explicar as morfologias conhecidas do membro e tambm pode explicar porque
outras morfologias so proibidas. Esse modelo postula que as agregaes da cartila-
gem recrutam ativamente mais clulas da rea em volta e inibem lateralmente a forma-
o de outros focos de condensao. O nmero de focos depende da geometria do
tecido e a fora da inibio lateral. Se a inibio permanece a mesma, o tamanho do
volume do tecido deve aumentar para permitir a formao de dois focos onde inicial-
mente s havia um. Num dado limite (chamado de limite de bifurcao), esse tamanho
alcanado, e o membro pode se ramificar em dois focos.
*Leibniz, provavelmente o filsofo que mais influenciou Darwin, notou que a existncia deve ser limitada
no somente pelo possvel, mas tambm pelo mutuamente compatvel. Isto , enquanto diversas coisas podem
vir a existir, somente aquelas que so mutualmente compatveis iro realmente existir (veja Lovejoy, 1964).
Assim, embora muitas mudanas do desenvolvimento sejam possveis, somente aquelas que podem se integrar
ao resto do organismo (ou que podem causar mudanas compensatrias no resto do organismo) sero vistas.
Prognese natural
(D) Hemidactylium scutatum (E) Proteus anguinus
Tbia Tbia
VARIAO
(A) Ambystoma mexicanum NATURAL
Fbula
Fbula
Tbia
Fbula Tbia
Tbia
VARIAO
EXPERIMENTAL
Fbula Fbula
Decrscimo experimental no nmero de clulas

Figura 23.14
Relao entre o nmero de clulas e o nmero
de dgitos na salamandra. (A) O membro pos-
Evidncias para esse modelo matemtico vm de manipulaes experimentais e da terior de um axolotle (Ambystoma mexicanum)
anatomia comparativa. Quando um broto do membro de axolotle tratado com a droga com seus cinco dgitos simtricos. (B,C) Dgi-
antimittica colchicina, as dimenses dos membros so reduzidas. Nesses membros tos no membro posterior do axolotle aps in-
no ocorre somente a reduo dos dedos, mas a reduo de certos dedos em uma certa cubao do broto do membro posterior em col-
ordem, como esperado pelo modelo matemtico e pelas morfologias proibidas. Ade- chicina para reduzir o nmero de clulas. (D,E)
mais, essas redues de dedos especficos so muito similares aqueles membros de Duas salamandras selvagens formadas por
salamandras progenticas, aquelas espcies que alcanam a maturidade em um est- prognese, cada uma possuindo um broto de
gio menor do que seus ancestrais e cujos membros se desenvolvem a partir de brotos membro menor. (D) Hemidactylium scutatum.
(E) Proteus anguinus. Os paralelos entre as
de membros menores (Figura 23.14; Alberch e Gale, 1983, 1985). Dessa maneira, o uso
variaes experimental e natural podem ser vis-
de mecanismos de reao-difuso para construir membros pode restringir as possibi- tos, e o denominador comum o nmero redu-
lidades que podem ser geradas durante o desenvolvimento, porque somente certos zido de clulas nos brotos do membro. (De
tipos de membros so possveis usando essas regras. acordo com Oster et al., 1988.)
Restries Filticas
Filticas
Restries filticas compreendem o terceiro conjunto de restries na evoluo de

novos tipos de estruturas (Gould e Lewontin, 1979). Essas so as restries histri-
cas baseadas na gentica do desenvolvimento do organismo. Por exemplo, uma vez
gerada uma estrutura por interaes indutivas, difcil recomear novamente. A
notocorda, que ainda funcional em protocordados adultos (Berril, 1987), consi-
derada vestigial em mamferos e aves adultos. No entanto, ela pode ser momentane-
amente necessria no embrio para especificar o tubo neural. Similarmente,
Waddington (1938) notou que embora o rim pronfrico do embrio de pinto seja
considerado vestigial (uma vez que no tem habilidade para concentrar urina), ele
a fonte do broto uretrico que induz a formao de um rim funcional durante o
desenvolvimento do pinto.
Esse tipo de restrio filtica foi recentemente revisto por Raff e colegas (1991).
At recentemente, acreditava-se que os primeiros estgios do desenvolvimento seri-
am os mais difceis para mudar, porque a sua alterao iria destruir o embrio ou gerar
um fentipo radicalmente novo. Mas trabalho recente (e reavaliao do antigo) mos-
trou que alteraes podem ser feitas nas primeiras clivagens sem alteraes no resul-
tado final. Modificaes de morfgenos em embries de moluscos podem dar origem
a novos tipos de larvas que ainda sofrem metamorfose em moluscos, e mudanas nos
morfgenos citoplasmticos do ourio-do-mar podem gerar ourios-do-mar que se
desenvolvem sem larvas mas ainda so ourios-do-mar. Na realidade, ao olharmos
para os vertebrados, podemos observar que existe uma histria completa que nos leva
at o famoso diagrama da lei de von Baer mostrado no Captulo 7. Todos os vertebra-
dos chegam a esse estgio particular do desenvolvimento (chamado de farngula),
mas o fazem por meios diferentes (Figura 23.15). Aves, rpteis e peixes chegam a esse
ponto aps clivagens meroblsticas de tipos diversos; os anfbios chegam a esse
estgio por meio de clivagem holoblstica radial; e os mamferos alcanam o mesmo
ponto aps construrem um blastocisto, crion e mnio. Portanto, os primeiros estgi-
os do desenvolvimento parecem ser extremamente plsticos. Similarmente, os ltimos
SALAMANDRA PINTO HOMEM
Ovo
(em escala)
Blstula
(seco)
Gstrula
Figura 23.15
O gargalo no estgio faringular do desenvolvimento dos verte-
brados. A parte inferior deste esquema a ilustrao padro da lei
de von Baer (como mostrado no Captulo 7), demonstrando a di-
vergncia das classes de vertebrados aps um estgio embrionrio
comum. A parte superior deste esquema representa os incios di-
vergentes do desenvolvimento. O prprio von Baer (1886) estava
consciente desse gargalo. (De acordo com Elinson, 1987.)
estgios so muito diferentes, como as diferenas nos fentipos de camundongos, (A)

peixes-lua, cobras e salamandras demonstram amplamente. Existe algo no meio do
desenvolvimento que aparenta ser invariante.
Raff argumenta que a formao de novos Bauplne inibida pela necessidade de
seqncias globais de induo durante o estgio de nurula (Figura 23.16). Antes
desse estgio, existem poucos eventos indutivos. Aps aquele perodo, existem mui-
tos efeitos indutivos, mas quase todos eles feitos em mdulos discretos. Durante a
(B)
organognese precoce, no entanto, existem diversos eventos indutivos ocorrendo
simultaneamente que so globais na natureza. Nesse estgio, os mdulos se sobre-
pem e interagem uns com os outros. Nos vertebrados, usando o exemplo de von
Baer, nos primeiros estgios se d a especificao dos eixos e a gastrulao. A induo
no aconteceu em larga escala. Ademais, como Raff e seus colegas mostraram (Henry
et al.,1989), existe aqui uma grande habilidade regulativa, assim, pequenas mudan-
as na distribuio dos morfgenos, ou na posio das clivagens planas podem ser (C)
acomodadas. Aps a fixao do principal plano corporal, ocorrem indues por todo
o corpo, mas essas so compartimentalizadas em discretos sistemas de formao de
rgos. O cristalino induz a formao da crnea, e se essa falhar, somente o olho
afetado. Similarmente, existem indues na pele que formam penas, escamas ou plo.
Se essas no ocorrerem, a pele ou parte dela pode no ter essas estruturas. Mas du-
rante a organognese precoce, as interaes so mais globais (Slack, 1983). Uma
falha na colocao do corao em determinado lugar pode afetar a induo dos olhos
(veja Captulo 17). Uma falha na induo do mesoderma em uma certa regio leva a
m formao dos rins, membros e cauda. esse estgio que restringe a evoluo e
que tipifica o filo vertebrado. Dessa maneira, uma vez vertebrado, muito difcil se
desenvolver em outra coisa.
Figura 23.16
Evoluo Conjunta do Ligante e Receptor: Isolamento Reprodutivo Mecanismo do gargalo no estgio faringular
do desenvolvimento em vertebrados. (A) No
Outra restrio do desenvolvimento envolve a habilidade de um tecido de interagir embrio em clivagem existem interaes glo-
com outro. No desenvolvimento, as coisas tm de se ajustar perfeitamente se o bais, mas elas so muito poucas (principalmente
organismo ir sobreviver. Os ligantes tm que se ajustar aos receptores, e devem ser para especificar os eixos do organismo). (B)
expressos no lugar certo e na hora certa. Mudanas no ligante tm que ser acomoda- Entre os estgios de nurula e farngula exis-
tem muitas interaes globais. (C) Aps o es-
das por mudanas complementares no receptor para que esse possa funcionar. No
tgio faringular existem ainda mais intera-
entanto, se a mudana na estrutura do ligante (ou receptor) produzir uma mudana es indutivas, mas essas so principalmente
muito grande, esse no se ligar ao seu receptor (ou ligante), e o desenvolvimento de efeito local, confinadas aos seus prprios
ir cessar. Essas mudanas complementares podem levar a uma separao de fun- campos. (De acordo com Raff, 1994.)
es, como pode ser observada na evoluo das famlias de hormnios e seus
receptores (Moyle et al.,1994).
Tal separao de funes pode causar isolamento reprodutivo e a separao
de espcies quando o receptor e o ligante so protenas no espermatozide e no
vulo. Enquanto a maioria das protenas de espcies marinhas relacionadas so
muito similares, as protenas responsveis pela fertilizao so muitas vezes extre-
mamente diferentes (Metz et al., 1994). Nos ourios-do-mar, a bindina do esperma-
tozide e os receptores complementares do vulo co-evoluram em conjunto de
modo que a bindina de uma espcie freqentemente no reconhece os receptores
bindina no ocito de outra. Hofmann e Glabe (1994) propuseram um modelo onde
existiriam diversos stios de reconhecimento distintos entre a bindina e seus re-
ceptores. As mutaes poderiam causar alguma alterao nesses stios e, dessa
forma, selecionando alteraes complementares no gameta oposto. Existiria um
estgio no qual alguns espermatozides poderiam se unir, embora precariamente
aos vulos, mas finalmente, esse processo de alterao e acomodao produziria
dois grupos reprodutivos isolados dentro das espcies (Figura 23.17). Nos haliotes,
as mutaes de uma pequena regio da protena lisina e seus receptores corres-
pondentes parecem ser as responsveis pela especificidade de fertilizao da es-
pcie. Ademais, a evoluo dessas mudanas nas protenas lisina e bindina parece
Figura 23.17 Protena bindina do

Modelo hipottico para o sistema de reconhecimento entre o esper- Cruzamento espermatozide
matozide e o vulo em duas espcies relacionadas de ourio-do- homlogo Bindina S.p. Bindina S.f.
mar. O espermatozide de Strongylocentrotus purpuratus pode
ligar o receptor no vulo. Analogamente, o espermatozide de S. Receptor S.p. Receptor S.f.
franciscanus pode se ligar com seu receptor do vulo. O
espematozide de S. purpuratus no se ligar a vulos de S. Protena do
franciscanus, mas o espermatozide desse se ligar fracamente a receptor no vulo
vulos de S. purpuratus. Postula-se que cada um dos elementos Cruzamento
repetidos na protena bindina interage com stios complementares heterlogo Bindina S.p. Bindina S.f.
nos seus respectivos receptores de bindina. A co-evoluo entre a
bindina e seu receptor pode ter separado as duas espcies. (De Receptor S.p.
acordo com Shaw et al., 1994.) Receptor S.f.
Sem ligao Ligao fraca
ser rpida e se correlaciona com a especiao (Shaw et al.,1994; Lee et al., 1995;
Metz e Palumbi, 1996).*
O mecanismo gentico do desenvolvimento da mudana

evolucionria: Genes reguladores homlogos
Descendncia com modificao pode ser demonstrada agora a nvel molecular.
Ademais, pode se mostrar que as modificaes envolvem genes reguladores. Roth
(1984) definiu homologia como o compartilhamento de vias do desenvolvimento,
as quais so controladas por genes relacionados genealogicamente. Mas quando
Roth fez essa definio influente, os caminhos do desenvolvimento ainda no havi-
am sido elucidados. Podemos dizer agora muito mais sobre evoluo e desenvolvi-
mento e podemos dar sustentao ao conceito de que herdamos vias de desenvolvi-
mento e que a evoluo pode ocorrer quando os elementos dessas vias so mudados.
Pax6 e o desenvolvimento do olho
Na gentica populacional, a principal suposio relacionada evoluo foi que a

busca de genes homlogos completamente intil a no ser em parentes muito pr-
ximos (Dobzhansky, 1955; Mayr, 1966). No entanto, a biologia molecular e a gen-
tica do desenvolvimento mostraram que essa suposio totalmente invlida. A ex-
traordinria concluso que os genes responsveis por determinadas funes no
desenvolvimento foram conservados por mais de 100 milhes de anos. Ademais, mo-
dificaes nesses genes e seus alvos podem causar a maior parte da diversidade dos
organismos vivos. Uma das descobertas mais eletrizantes foi que o gene Pax6 rege o
desenvolvimento do olho em espcies to distantes quanto moscas e humanos.
O desenvolvimento do olho do mamfero, do inseto e do molusco, so muito
diferentes um do outro. O olho das moscas contm numerosos omatdios e se de-
senvolvem a partir de um sulco morfogentico que se estende ao longo de um disco
imaginal. O olho do cefalpode se desenvolve atravs da separao das regies
formadoras do cristalino e da retina a partir de um placdio comum. O olho de
*Um outro exemplo de mutao do desenvolvimento que causa isolamento reprodutivo envolve uma
funo mais mecnica. As mutaes no espiralamento da concha do caramujo discutidas no Captulo 5 so
mutaes que agem durante o desenvolvimento precoce para mudar a posio dos rgos mesodrmicos. O
acasalamento entre caramujos de conchas com espiralamento para a esquerda e com caramujos de conchas
com espiralamento direita mecanicamente muito difcil, para no dizer impossvel, em algumas espcies.
(Clark e Murray, 1969). Como essa mutao herdada como um gene de efeito materno, seria produzido
um grupo de caramujos relacionados podendo se acasalar um com o outro, mas no com outros membros
da populao original. Esses caramujos reprodutivamente isolados poderiam expandir seu alcance, e por
acumulao de novas mutaes, formar uma nova espcie (Alexandrov Sergievski, 1984).
mamfero se desenvolve atravs de uma srie de interaes indutivas envolvendo

uma protuberncia do diencfalo em contato com o ectoderma da superfcie (veja
Captulo 17). Considerava-se que os trs tipos de olhos mostravam evoluo con-
vergente e que o olho tinha evoludo independentemente em cada um desses trs
grupos. Porm, pesquisas recentes mostram que os olhos de insetos e de vertebra-
dos no tm origens distintas, mas se originaram em um passado distante de um
antepassado em comum.
Alelos mutantes do gene humano PAX6 so responsveis por malformaes do
olho (Hanson et al., 1994). Heterozigotos so notveis pois carecem de ris. Um feto
humano que se acreditava ter mutaes homozigotas do PAX6 foi descrito como
no tendo olhos e com vrias anormalidades craniofaciais (Hodgson e Saunders,
1980). No camundongo e no rato, esse gene chamado Small eyes, devido ao fentipo
do heterozigoto. Fetos homozigotos de camundongo e rato morrem logo aps o
nascimento e no tm nariz nem olhos (Hogan et al., 1986; Grindley et al., 1995). A
grande semelhana entre a estrutura e funo dos genes Pax6 em camundongos e
humanos era esperada. Porm, em 1994, a pesquisadora Quiring e seus colegas no
laboratrio de Walter Gehring mostraram que o genoma da Drosophila continha um
homlogo de Pax6 que codificava uma protena cuja seqncia mostrava 94% de
identidade com a protena Pax6 humana. Mutaes de perda-de-funo no Pax6 da
Drosophila apontam para o gene eyless, um gene caracterizado por olhos pequenos
em heterozigotos e falta de olhos em homozigotos. Parece, portanto, que existe um
gene em comum - Pax6 - que necessrio para o desenvolvimento dos olhos tanto
em insetos como vertebrados.*
Como evidncia positiva mais forte do que evidncia negativa, o laboratrio de
Gehring expressou o Pax6 de Drosophila (i.e., o gene eyeless tipo selvagem) em
discos imaginais que normalmente no o expressam. Halder e seus colegas (1995)
colocaram genes codificando a protena ativadora de transcrio, GAL4, do levedo
a jusante de um intensificador que iria funcionar em uma poro no-neural da
mosca, tal como um disco imaginal de uma perna ou asa. Em seguida, eles constru-
ram um transposon, colocando o cDNA para o gene eyless a jusante de uma seqn-
cia composta de cinco stios de ligao de GAL4. A protena GAL4 s podia ser
produzida em um determinado disco imaginal, e quando essa protena fosse produ-
zida, causaria a transcrio do cDNA de eyeless nessas clulas em particular (Figura
23.18A). Em moscas nas quais o cDNA eyeless era expresso nos discos antenais, as
antenas tornaram-se os omatdios pigmentados e com cerdas, caractersticas dos
olhos de Drosophila (Prancha 28). Quando o cDNA de eyeless foi expresso no disco
alar, parte da cutcula alar deu origem a olhos (Figura 23.18B). Mais notvel ainda,
quando o cDNA do eyeless de Drosophila foi substitudo por cDNA de Pax6 de
camundongo e colocado sob controle do sistema de expresso GAL4, a protena
Pax6 murina causou a formao de olhos ectpicos de Drosophila (Figura 23.18C)!
O gene Pax6 parece ser um regulador da via formadora do olho tanto de vertebrados
como de insetos. Mas os olhos no so os mesmos. Permanece para ser entendido
como esses caminhos divergiram durante a evoluo para produzir os diferentes
tipos de olhos atualmente vistos.
Parece que o gene Pax6 conservado em todo o do reino animal e que codifica um
fator de transcrio que se liga a genes formadores de olhos em todo esse reino. O
gene Pax6 no o nico regulador do desenvolvimento que parece ser homlogo em
insetos e mamferos. Outro tal gene o tinman que contm a seqncia homebox. Esse
gene expresso no mesoderma esplncnico de Drosophila, finalizando por residir na
*O modelo antes dessa pesquisa era que os olhos haviam se desenvolvido independentemente
pelo menos 40 vezes. O laboratrio de Gehring mencionou a clonagem de homlogos de Pax6 de
platelmintos e cefalpodes. Um segundo gene de Drosophila, dachshund (dac), tambm pode dar
origem a olhos ectpicos quando expresso no disco imaginal errado. Como parece que eyeless pode
ativar a expresso de dachshund, e vice-versa, os dois genes podem ter desenvolvido uma ala de
retroalimentao (feedback) positiva autoreforante (Shen e Mardon, 1997).
Figura 23.18
Pax-6 como um gene homlogo para o desen- Protena
volvimento do olho em insetos e vertebrados. ativadora
(A) A expresso dirigida do cDNA de Pax6 GAL4 de GAL4 Stios ligantes cDNA
Seqncia
em um disco imaginal no de olho em Droso- intensificadora de GAL4 de Pax6
phila. Uma espcie de Drosophila construda especfica do
onde o gene para a protena GAL4 do levedo disco imaginal
colocado a jusante de uma seqncia intensifi-
cadora que estimula a expresso no disco Expresso GAL4 especfica de tecido Expresso do cDNA de Pax6
especfica de tecido
imaginal da asa, perna ou antena. Normalmen-
te, a protena do levedo no encontra uma se-
qncia para ativar. Entretanto, se adicionado
ao embrio um transposon que leva um cDNA
para Pax6 a jusante dos stios de ligao de
GAL 4, aquele cDNA ser expresso em quais-
quer dos discos imaginais onde produzida a
protena GAL4. (B) Omatdios de Drosophila
emergindo da asa de uma mosca da fruta quan-
do o cDNA de eyeless foi expresso no disco da
asa de Drosophila. (C) Omatdios de Droso-
phila emergindo na perna de uma mosca da
fruta quando o cDNA de Pax6 de camundongo
foi expresso no disco da perna de Drosophila.
(de Halder et al., 1995; fotografias cortesia de
W. J. Gehring.)
regio do mesoderma cardaco. Mutantes de perda-de-funo de tinman no tm o

corao (da seu nome segundo o personagem do Mgico de Oz) (Bodmer, 1993). Em
camundongos, o gene homlogo chamado Cardiac-specific homebox (Csx), e
tambm expresso originalmente no mesoderma esplncnico e em seguida continua a
ser expresso nas clulas que iro formar os tubos cardacos (Manak e Scott, 1994).
Assim, embora o corao dos vertebrados e o corao dos insetos praticamente nada
tm em comum, exceto sua capacidade de bombear fluidos, ambos parecem ser predi-
tos pela expresso do mesmo gene Csx/tinman. A diferena entre os coraes deve
residir nos genes regulados pela protena CSX/Tinman.
BMP4 e a Morfognese dos Membros
Em alguns casos, um gene homlogo pode assumir uma nova funo quando expres-
so em um novo local. A expresso de Bmp4 no membro do pinto um bom exemplo de
como uma pequena mudana desenvolvimental pode criar uma importante alterao
morfolgica, do ponto de vista evolucionrio. A maioria das pessoas concordaria que
o pato e o pinto no so iguais, embora sua embriognese seja extremamente seme-
lhante at os ltimos dias. Nesse momento, o bico do pato torna-se distinguvel do
bico do pinto, e os ps interdigitados do pato so retidos, mas a interdigitao
perdida nos ps posteriores do pinto.
BMP4 conhecida como indutora de apoptose em clulas na crista neural craniana,
no mesnquima pulmonar e nos brotos dentais. Ela tambm causa apoptose no tecido
interdigital frouxo do membro do pinto. No s o Bmp4 expresso no tecido interdigital,
mas se os membros do pinto forem infectados com um vrus expressando uma forma
negativa dominante do receptor de BMP, o tecido interdigital no sofrer apoptose
quando receber o sinal BMP4 (Figura 23.19; Yokouchi et al., 1996; Zou e Niswander,
1996). O pinto e o pato mostram padres muito similares na expresso de BMP. Porm,
embries de pato no expressam Bmp4 (ou BMP2 ou 7, relacionados) em seus tecidos
(B)
(A)
Figura 23.19
Expresso de BMP necessria para a induo
de apoptose no enredamento interdigital em
embries de pinto. (A) A BMP4 vista no
interdigitais. Portanto, mudando ligeiramente a regulao de Bmp4 produzida uma enredamento interdigital do membro posteri-
nova morfologia que pode ser selecionada ou rejeitada pela seleo natural. Altera- or do pinto (esquerda) mas no no do pato
es no desenvolvimento podem produzir a chegada do mais apto. Sua sobrevivn- (direita) no mesmo estgio do desenvolvimen-
cia depende do seu ambiente. to. (B) Quando o sinal de BMP bloqueado
por um receptor negativo dominante infectado
no membro posterior, a apoptose interdigital
Genes Hox e a Evoluo dos V
Hox ertebrados
Vertebrados no ocorre e os dgitos so mais curtos. (de
Zou e Niswander, 1996; fotografias cortesia
Uma das mais notveis peas de evidncia da profunda homologia entre todos ani- de L. Niswander.)
mais do mundo fornecida pelos genes Hox. Conforme mencionado no Captulo 16,
os genes Hom-C da mosca da fruta so homlogos aos do mamfero. No somente
so os genes homlogos, como tambm esto na mesma ordem em seus respectivos
cromossomos. Os padres de expresso so tambm notavelmente semelhantes; a
expresso dos genes do terminal 3 ocorre anteriormente, enquanto aqueles do termi-
nal 5 so expressos mais posteriormente. Como se essa evidncia de homologia no
fosse o suficiente, Malicki e colegas (1992) demonstraram que o gene humano HOX4B
podia imitar a funo de seu homlogo na Drosophila, Deformed, quando introduzi-
do em embries de Drosophila deficientes em Dfd. Slack e colegas (1993) postula-
ram que o padro de expresso do gene Hox define o desenvolvimento de todos os
animais e que constante para todos os filos, o gene Hox tipo labial sendo expresso
anteriormente, o gene Hox tipo Ubx no centro, e o gene Hox tipo AbdB posteriormen-
te. A regulao global desses genes Hox tambm semelhante de espcies para esp-
cies. A protena Caudal usada para induzir os domnios posteriores da Drosophila, e
parece fazer o mesmo em camundongos e nematides (Subramanian et al., 1995). Se a
expresso subjacente do gene Hox for uniforme, considera-se que diferenas nos filos
emergem de diferenas em como esses genes so regulados e quais genes so regula-
dos pelas protenas derivadas de Hox.*
Em vertebrados, existem quatro complexos Hox. Em anfioxus, um cordado no-
vertebrado que carece de uma cabea verdadeira, crebro, tecidos da crista neural, e
medula espinhal, h somente um complexo Hox muito parecido com aquele dos inse-
tos (Figura 23.20; Holland e Garcia-Fernndez, 1996). Quando da evoluo dos peixes,
haviam quatro complexos Hox. Os genes Hox parecem interpretar a informao
posicional ao longo do eixo ntero-posterior do corpo, e a importncia desses genes
relacionando evoluo e desenvolvimento foi sugerida por certas estruturas
atavisticas que resultaram da perda de determinados genes Hox. A ruptura de genes
* Considera-se que a razo dessa notvel conservao de estrutura do complexo do gene Hox o
compartilhamento de regimes cis-reguladores pelos genes vizinhos. Se um gene Hox movido para uma
regio diferente dentro do complexo, sua regulao alterada. Os regimes reguladores crticos podem ser os
stios ligantes para as protenas Polycomb. Essas protenas so tambm conservadas atravs da evoluo,
e silenciam os genes Hox em determinados momentos e locais. Aqui, portanto, vemos uma restrio
filtica a nvel molecular (Chiang et al., 1995; Mller et al., 1995; van der Hoeven et al., 1996).
Figura 23.20
Ascendncia postulada de genes hometicos a
partir de um ancestral hipottico tanto de HOM-C de
deuterostomatas como protostomatas. Anfio- Drosophila
xos tm somente um aglomerado, semelhante
aos insetos. Vertebrados tm quatro aglomera- HOM-C de
dos, nenhum dos quais completo. (De acordo inseto em geral
com Holland e Garcia-Fernndez, 1996.)
Ancestral
comum
hipottico
Aglomerado
Hox de
Anfioxo
Hox- de
Camundongo
Hox- de
Camundongo
Hox-C de
Camundongo
Hox-D de
Camundongo
Hoxa-2 resulta numa transformao parcial do segundo arco farngeo em uma cpia
do primeiro arco. Os fetos mutantes carecem dos ossos estribo e estilide formados
do segundo arco, mas tm extra os ossos martelo, bigorna, timpnico e escamoso. Eles
tm tambm uma cartilagem filamentosa que est fundida ao elemento alisfenide e
cujo terminal caudal est em contato com a bigorna supranumerria. Essa cartilagem
no tem contrapartida em camundongos normais, mas suas relaes anatmicas suge-
rem que seja homloga com a cartilagem pterigoquadrtica vista em rpteis. O comple-
xo formado por essa cartilagem e a bigorna considerado ter estado presente em
terapsdeos, o grupo de rpteis que deu origem aos mamferos (Rijli et al., 1993; Mark
et al., 1995). Quando o gene Hoxa-2 desregulado pela eliminao de receptores de
cido retinico, uma distinta cartilagem pteroquadrada se desenvolve ligando os os-
sos bigorna e alisfenide (Figura 23.21; Lohnes et al., 1994).
Porm, permanecia a pergunta se os genes Hox especificam o eixo de acordo
com um sistema de contagem ou por um cdigo pelo qual diferentes genes Hox
especificam vrtebras diferentes. Essa uma pergunta importante porque d a
viso de como os mesmos genes Hox podem especificar corpos diferentes. Com-
parando os padres de expresso do gene Hox com o tipo de vrtebras mostrou-
se que esse era especificado pela constelao de genes Hox expressos nos somitos
(Gaunt, 1994; Burke et al., 1995). Por exemplo, o camundongo tem 5 vrtebras
occipitais, 7 cervicais, 13 torcicas, 6 lombares e 4 sacrais. O pinto, por outro lado,
tem 5 vrtebras occipitais, 14 cervicais, 7 torcicas, 9 lombares e 4 sacrais. Embora
o nmero total de vrtebras pr-sacrais difira somente por uma (34 versus 35),
existem bvias transposies entre as espcies (Goodrich, 1930). Em ambos os
animais, Hoxc-5 expresso no fim das vrtebras cervicais, enquanto Hoxc-6 apa-
rece no comeo da srie torcica. No camundongo isso ocorre no limiar entre a
dcima segunda e dcima terceira vrtebra e em pintos entre a dcima nona e a
vigsima. Assim em vertebrados, alteraes da morfologia podem se concretizar
mudando-se os domnios da expresso gnica de Hox.
Figura 23. 21
Representao de elementos do esqueleto derivados do primeiro arco farngeo (em cinzento) e do
segundo arco farngeo (em preto). (AS, alisfenide; I, bigorna; I2 bigorna duplicado; P e P2,
cartilagem pteride normal e duplicada; PQ, cartilagem pterigoquadrada; SQ, escamoso; SQ2
escamoso duplicado.) (De acordo com Mark et al., 1995.)
Camundongo selvagem/mamfero
Genes Hox e a Evoluo dos Artrpodes
A mesma pergunta produziu uma resposta diferente quando feita a respeito dos
artrpodes. Borboletas (Lepidpteros) diferem de Drosophila (Dpteros) de duas
bvias maneiras. Primeiro, borboletas tm quatro asas, ao passo que os dpteros
tm duas. Segundo, larvas de borboletas tm membros abdominais chamados pr-
pernas que no existem em larvas de moscas. A maneira mais provvel de criar
essas diferenas seria alterar o padro da expresso do gene hometico (Lewis, Rptil
1978). Em Drosophila, o Ultrabithorax (Ubx) expresso nos halteres, mas no nas
asas. Mutaes de perda-de-funo de Ubx convertem os halteres em asas
mesotorcicas, enquanto que a expresso ectpica de Ubx nos discos alares faz
com que eles formem halteres (veja Captulo 14). Poder-se-ia esperar, por isso, que
o Ubx seria inativo nos discos das asas posteriores da borboleta. Esse no o caso.
Warren e colaboradores (1994) mostraram nveis altos de expresso de Ubx nos
discos das asas posteriores da borboleta buckeye, Precis coenia. Na realidade, o
padro de expresso do gene Hom-C em Precis foi essencialmente o mesmo que o
padro em Drosophila. Na borboleta, o Ubx modifica a morfologia alar para pro-
duzir uma asa posterior (em lugar de uma anterior). Na mosca, ele modifica a asa
em um haltere. A hiptese atual que os genes alvo de Ubx podem ter mudado, Mutante com Hoxa-2 anulado
mas no o padro da expresso de Ubx.
A EVOLUO DO NMERO DE ASAS. As asas dos insetos so consideradas ter

evoludo de apndices multiramificados de guelras de crustceos ancestrais. Especi-
ficamente, o padro de expresso ptero das abas osmorreguladoras dorsais (eppodos)
dos crustceos se parece com sua expresso em asas de insetos em desenvolvimento
(Kukalova-Peck, 1978; Averof e Cohen, 1997). Carroll e seus colegas (1995) suge-
rem que o inseto original tinha asas saindo de todos os segmentos (como as guelras
dos crustceos). Em insetos modernos, diferentes genes hometicos suprimem esse
potencial na maioria dos segmentos. Em outras palavras, a formao das asas origi-
nou-se independentemente dos genes hometicos em um organismo que estava usando
os genes hometicos para identidade segmentar ou padronizao neural. Somente
mais tarde o programa formador de asas ficou sob o controle dos genes hometicos.
H vrias observaes apontando para essa concluso. Primeiro, embora o Antenna-
pedia seja expresso em dois segmentos (segundo e terceiro torcico), capazes de
produzir asas, ele no necessrio para formao das asas. O segmento mesotorci-
co alar (T2) pode, portanto, representar o estado fundamental presente em todos os
segmentos antes dos genes hometicos comearem a regular a formao das asas.
Segundo, em vez do Antennaedia estar regulando positivamente o desenvolvimento
alar em T2 e T3 parece que outros genes Hom-C reprimem o desenvolvimento alar
em outros primrdios. Mutaes de perda-de-funo dos genes Hom-C causam a
formao de primrdios alares ectpicos nos segmentos em que so expressos (veja
Figura 14.29 mostrando uma mosca cujo Ubx foi removido). Portanto, com a poss-
vel exceo dos segmentos abdominais inferiores controlados por Abd-b, o potencial
para o desenvolvimento de asas existe em todos os segmentos e reprimido pelos
genes hometicos. Terceiro, se a expresso de Scr induzida em discos alares (usan-
do o sistema GAL4 mencionado anteriormente), o desenvolvimento alar abortado
em seus estgios precoces.
(A) Apterigoto Figura 23.22

Esquema evolucionrio do desenvolvimento da asa. Apterigotos (A) j tinha o esquema
padro Hom-C dos insetos. Quando emergiram as asas (B,C), todos os segmentos as possu-
am, independente dos genes Hom-C neles expressos. (D,E) Na maioria dos insetos, AbdB,
Scr e abdA impediram a formao da asa. (F) Em dpteros tais como a Drosophila, Ubx
tambm adquiriu a habilidade para reprimir o desenvolvimento da asa. (De acordo com
Carroll et al., 1995.)
(B) Ninfa Paleodictiptera
Combinando gentica do desenvolvimento e registro fssil (Kukalova-Peck, 1978),

Carroll e colegas propuseram o seguinte cenrio (Figura 23.22): quando as asas se
originaram, elas foram encontradas em todos os segmentos, e no havia regulao
hometica de seu nmero ou carter. Admitindo que o padro de expresso gnica de
Hom-C tenha permanecido o mesmo, as protenas HOM-C adquiriram a capacidade de
regular a formao de asas atravs da evoluo de stios sensveis a Scr, AbdA e Ubx
nas regies reguladoras dos genes formadores de asas. A evoluo de elementos
(C) Ninfa de efemrida paleozica
responsivos a Scr levaria modificao ou reduo das asas protorcicas (T1), en-
quanto os elementos responsivos a AbdA levariam reduo das asas abdominais.
Em insetos de quatro asas, o Ubx reprime a formao de asas no primeiro segmento
abdominal (A1) e, em insetos de duas asas, ele controla o desenvolvimento de asas em
ambos, A1 e T3. Assim, diferentemente da situao em mamferos, a evoluo da
identidade de segmentos de insetos no parece corresponder com mudanas nos
genes Hom-C. Ao contrrio, as protenas codificadas por esses genes hometicos
adquiriram novos alvos reguladores.
EVOLUO DO NMERO DE PATAS DE INSETOS. Outra importante lio

evolucionria que os genes Hom-C no so reguladores todo-poderosos. Ao con-
(D) Adulto neptero primitivo trrio, eles podem ser regulados localmente pelos produtos de outros genes. Em
artrpodes, muitos grupos so distinguidos pelo nmero de membros. Os insetos tm
seis patas quando adultos, trs pares se originando de cada um dos trs segmentos
torcicos. Em Drosophila, o gene Distal-less (Dll) crtico para prover o eixo prxi-
mo-distal dos apndices (veja Figuras 14.33 e 19.21). A expresso de Distal-less ocorre
nos discos formadores de membros ceflicos e torcicos (tanto para patas, mandbu-
las e asas), mas excluda no abdmen pelas protenas AbdA e Ubx. Assim, os apn-
dices crescem como patas e asas no trax e como mandbulas na cabea. A larva de
Drosophila nunca desenvolve membros no seu abdmen.
No obstante, larvas de borboletas e mariposas so caracterizadas por patas ab-
(E) Endopterigoto moderno (Lepidptero) dominais rudimentares chamadas pr-patas. A pesquisadora Panganiban e seus cole-
gas (1994) clonaram o homlogo do Distal-less da borboleta buckeye e mapearam
sua expresso durante o desenvolvimento da borboleta. Durante a poro precoce da
embriognese de Precis a expresso de Dll a mesma que em Drosophila. Primeiro
vista nas regies da cabea durante a gastrulao (segmentos antenais, maxilares, e
labiais) e nas regies torcicas que iro dar origem aos discos imaginais das patas
(Figura 23.23A). No entanto, com o progresso do desenvolvimento, o gene Dll de
Precis torna-se expresso do terceiro at o sexto segmento abdominal (Figura 23.22B).
Enquanto a expresso de Dll vista tanto no anel proximal como em soquetes das
(F) Endopterigoto moderno (Dptero) patas torcicas verdadeiras, a expresso de Distal less no abdmen est restrita ao
anel proximal.
Assim, as pr-pernas dos lepidpteros parecem ser homlogas poro proximal
das patas torcicas. A expresso nos segmentos maxilar e labial tanto em Drosophila
como em Precis interessante por ser consistente com recente evidncia paleontolgica
(Kukalova-Peck et al., 1992) de que embora essas estruturas da mandbula se origina-
ram de primrdios de membros, elementos de membros distais esto perdidos de todas
as mandbulas de artrpodes.
Figura 23.23
Expresso do gene Distal-less em Precis. (A)
Aos 12% da embriognese, transcritos de Dll
aparecem em trs segmentos torcicos (T1,
T2, T3) como tambm nos segmentos antenal
(an), maxilar (mx),o embrionrio, a expres-
so de Dll em Precis divergiu significativa-
mente daquela da Drosophila mostrando tam-
bm expresso Dll nos segmentos abdomi-
nais 3-6. (A e B de acordo com Panganiban et
al., 1994, cortesia dos autores.)
(A)
(B)
A presena de pr-pernas larvais e a expresso de Distal-less nos segmentos

abdominais de Precis sugere que Distal-less regulado de maneira diferentemente em
dpteros e lepidpteros. Duas possibilidades chegam frente. (1) Os genes Distal-less
de Precis no so reprimidos pelas protenas AbdA e Ubx do homeodomnio, ou (2) a
expresso dos genes repressores do homeodomnio de alguma maneira abolida nas
regies abdominais de Precis. Warren e colaboradores. (1994), mostraram que os
embries de Drosophila e Precis tm o mesmo padro inicial da expresso gnica de
Hom-C. Porm, a cerca de 20% do caminho da embriognese de Precis, a expresso
do gene Hom-C perdida em pequenos pedaos dos segmentos A3-A6. Nem Ubx
nem AbdA so expressos na regio dos segmentos abdominais que do origem s
pr-pernas (Prancha 26). Pouco tempo depois, os genes Distal-less e Antennapedia
so expressos nesses furos. No conhecido quais molculas so empregadas para
reprimir a expresso dos genes abdA e Ubx nas regies de expresso do Distal-less.
Os genes do grupo Polycomb so os suspeitos mais provveis por serem capazes de
reprimir ambos genes em Drosophila.
Caminhos homlogos do desenvolvimento

Uma das descobertas mais emocionantes da dcada passada no foi somente os
genes reguladores homlogos, mas tambm as vias homlogas do desenvolvimento
(Zuckerkandl, 1994; Gilbert, 1996; Gilbert et al., 1996). Duas dessas vias j foram
discutidas em captulos anteriores. Primeiro, como foi visto no Captulo 15, a via
chordin/BMP4 demonstra que em ambos, vertebrados e invertebrados, a chordin/
short-gastrulation inibe os efeitos de lateralizao de BMP4/decapentaplegic, portan-
to, permitindo ao ectoderma protegido por chordin/short-gastrulation se tornar ecto-
derma neurognico. As reaes so to parecidas que a protena decapentaplegic da
Drosphila pode induzir destinos ventrais em Xenopus e pode substituir para a prote-
na short-gastrulation (Holley et al., 1995). Em segundo lugar, vimos no Captulo 18,
que as interaes entre Hedgehog e Wingless foram conservadas entre insetos e
Figura 23.24 Drosophila melanogaster (corpo gorduroso)

Regulao semelhante do gene da lcool desidrogenase em Droso-
phila e humanos. CREB/ATF e C/EBP so reguladores positivos do
gene da lcool desidrogenase. AEF um regulador negativo. (De
acordo com Abel et al., 1992; Zuckerkandl, 1994.)
Seqncia reguladora
a montante
Homo sapiens (fgado)
Seqncia reguladora
Figura 23.25 a montante
A via RTK-RAS amplamente usada. O esque-
ma da via est mostrado no lado esquerdo jun-
to com os nomes em diferentes espcies. O
ligante, que pode ser solvel (como no EGF) vertebrados na formao dos membros. Na verdade, as mesmas interaes so usadas
ou uma protena ligada membrana em outra
para estabelecer o padro de segmentao em embries precoces de Drosophila (veja
clula (como na protena Boss [Bride of
sevenless] associada ao sevenless do RTK).
Captulo 14) e para estabelecer compartimentos no crebro dos mamferos (veja Cap-
Os domnios citoplasmticos das RTKs so tulo 7). Tambm foi mostrado que numerosas interaes DNA-protena regulando
autofosforilados ao se dimerizarem, e isso lhes genes especficos so conservadas atravs de espcies divergentes. Dessa maneira,
permite se ligar protena adaptadora e estimu- o gene da lcool desidrogenase controlado no corpo gorduroso da Drosophila pelo
lar a protena Ras G. A protena Ras G transloca mesmo conjunto de protenas que governa sua expresso no fgado humano (Figura
a protena Raf para a membrana celular, dessa 23.24; Abel et al.,1992).
maneira ativando-a. Isso pode ser inibido pelas Entre as primeiras vias homlogas conhecidas est a via de transduo do sinal
protenas gap, as quais podem inativar Ras. A RTK-Ras que foi recentemente identificada em todo o reino animal, embora usada
protena Raf ativada inicia a cascata de fosfori-
estritamente em diferentes funes (veja Captulo 3; Figura 23.25). Na Drosophi-
lao que termina em um fator de transcrio
fosforilado (ativado) que entrando no ncleo
la, a determinao do fotorreceptor sete cumprida quando a protena Sevenless
efetua a transcrio do RNA.
Ligante Receptor
Protena G Fora da clula
Membrana plasmtica
Citoplasma
Domnio
da tirosina
quinase
Organismo e tecido Ligante Tirosina Protena Protena G Ativador de GTPase Efeito
quinase do SH2-SH3 e protenas
receptor de troca GDP/GTP
Vulva de C. elegans Protena Protena SEM-5 Protena ?/LET-341 (?) Diferenciao e diviso
LIN-3 LET-23 LET-60 da clula vulvar
Pele de mamfero EGF Receptor GRB2 Protena Ras GAP/GNRP Diviso da clula epidrmica
de EGF
Olho de Drosophila Bride of Sevenless Drk Ras1 Gap1/ Son of sevenless Diferenciao do fotorreceptor
sevenless sete em cada omatdio
(no suposto fotorreceptor 7) se junta protena Bride Sevenless (Boss) no fotorre-

ceptor 8. Essa interao ativa a tirosina quinase da protena Sevenless a se
autofosforilar. A protena DRK se liga ento a essas novas tirosinas fosforiladas
atravs da sua regio de homologia-2 de Src (SH2) e ativa a protena Son of Sevenless
(SOS). Essa protena uma trocadora de nucleotdeos de guanosina e troca GDP por
GTP na protena Ras1 G. Isso ativa a protena G, permitindo que ela transmita seu
sinal ao ncleo atravs da cascata da quinase MAP. Esse mesmo sistema foi encon-
trado na determinao da vulva do nematide, da epiderme do mamfero, e dos
segmentos terminais da Drosophila. A similaridade nesses sistemas to impressi-
onante que muito dos componentes so intercambiveis entre as espcies. O gene
para o GRB2 humano pode corrigir os defeitos fenotpicos dos nematides deficien-
tes em Sem-5 e a protena do nematide SEM-5 pode se juntar forma fosforilada do
receptor EGF humano (Stern et al.,1993).
Caminhos homlogos formam a infra-estrutura bsica do desenvolvimento. Os
alvos desse caminho podem mudar, dependendo do organismo. No ectoderma de um
organismo, o caminho RTK-Ras pode ativar os genes responsveis pela proliferao.
Em outro organismo, o mesmo caminho pode ativar os genes responsveis pela pro-
duo de um fotorreceptor. E num terceiro organismo, o caminho ativa os genes ne-
cessrios para a construo de uma vulva.
Criando novos tipos de clulas:

O mistrio evolucionrio bsico
Uma das principais questes no resolvidas na biologia evolucionria e do desenvol-
vimento , Como os organismos desenvolvem um novo tipo de clula? Essa uma
questo importante, uma vez que mudanas no filo esto associadas com a evoluo
de novos tipos de clulas. Hipoteticamente, novas combinaes de genes tambm
podem criar novos tipos de clulas. No entanto, isso permanece uma hiptese ainda
no provada. Kauffman (1993) modelou matematicamente a gerao de novos tipos
de clulas a partir de um genoma aleatrio consistindo de 10.000 genes, cada um
regulado por 2 outros genes. Em tais casos, ele encontra somente 100 estados est-
veis de interao (de aproximadamente 210.000 estados possveis). Cada um desses
estados possveis representa um tipo celular diferenciado. Em alguns casos, a muta-
o de um gene regulador suficiente para a restruturao das interaes, e quando
uma nova clula criada. A maioria dos genes, no entanto, permanecem inalterados
por esse novo arranjo.
A criao de novos tipos de clula um evento raro na natureza, e freqentemen-
te pode mudar a natureza do animal. Como mostra a Figura 23.26, os vertebrados so
conhecidos por terem surgido de invertebrados nas diversas etapas que envolveram a
formao e modificao de novos tipos de clulas.
Como mencionado anteriormente neste captulo, as clulas da crista neural fo-
ram importantes na origem dos cordados. Enquanto no sabemos como surgiram
as clulas da crista neural, Holland e colegas (1996) forneceram uma fascinante
especulao que envolve dissociao, duplicao e divergncia, e co-opo. Tam-
bm envolve os homlogos vertebrados do gene da Drosophila discutidos anteri-
ormente, Distal-less. Anfioxo um protocordado que tem notocorda, somitos, e um
tubo neural oco. Falta-lhe um crebro e estruturas faciais e, o mais importante, no
possui clulas da crista neural. Como a Drosophila, o anfioxo tem somente uma
cpia do gene Distal-less por genoma haplide, e como na Drosophila, esse gene
expresso na epiderme e no sistema nervoso central. No entanto, enquanto o anfioxo
tem somente uma cpia desse gene, os vertebrados tm de quatro a seis cpias bem
parecidas do Distal-less, cada uma provavelmente originria de um nico gene an-
cestral que se assemelha ao do anfioxo (Price, 1993; Boncinelli, 1994). Esses
homlogos Distal-less encontraram novas funes. Algumas esto no mesoderma,
CORDADOS
VERTEBRADOS
Cefalocordados
Gnatostomatas
Hemicordados
Equinodermos
Calcicordados
Urocordados
(Amphioxus)
(ascidianos)
Conodontes
Agnatos
Modificao do
arco mandibular
em mandbulas
Crista neural, placdios
epidrmicos (formao da cabea)
Podcitos renais
Simetria radial Mesoderma forma a notocorda

Sistema vascular aquoso Cordo nervoso dorsal oco
Fendas farngeas pareadas

Arcos articos
Simetria bilateral em adultos

Sistema circulatrio fechado
Larva ciliada bilateralmente simtrica

Formao de deutorostomatas
Mesoderma enteroclico
Figura 23.26
Mudanas de desenvolvimento na evoluo de invertebrados para vertebrados. Os invertebrados
deuterostomatas originais foram capazes de formar os equinodermos e outros organismos que
finalmente deram origem linhagem vertebrada. A habilidade do mesoderma para formar a
notocorda e seu ectoderma sobrejacente para se tornar um tubo neural, separou os cordatos dos
invertebrados remanescentes. O desenvolvimento das clulas da crista neural e os placdios
epidrmicos que do origem aos nervos sensoriais da face distinguem os vertebrados dos
protocordatos. (De acordo com Gans, 1989; Langille e Hall, 1989.)
um lugar onde o Distal-less no expresso em anfioxos. Outros homlogos verte-

brados de Distal-less so expressos no crebro anterior, imitando um padro de
expresso visto no anterior do tubo neural do anfioxo. Isso sugere que o crebro
anterior vertebrado homlogo ao tubo neural anterior do anfioxo. Um outro
homlogo vertebrado de Distal-less expresso nas clulas da crista neural. Embora
no esteja comprovado, possvel que um novo tipo do gene Distal-less possa
fazer com que as clulas ectodrmicas migratrias dos anfioxos evoluam em clu-
las da crista neural.
Uma nova sntese evolucionria

Em 1922, Walter Garstang declarou que a ontogenia (desenvolvimento individu-
al) no recapitula a filogenia (evoluo); ela cria a filogenia. Os animais que surgi-
ram mais tarde na histria evolucionria, no surgiram atravs de uma adio termi-
nal em um embrio existente. Ao contrrio, surgiram atravs de mutaes que afeta-
ram a interao de mdulos j existentes no Bauplan do organismo:
Uma casa no um chal com um andar extra em cima. Uma casa representa um
grau maior na evoluo de uma residncia, mas o prdio todo alterado- funda-
es, madeiramento e telhado- mesmo que os tijolos permaneam os mesmos.
Dessa maneira, quando dizemos que o cavalo moderno de um s dedo evoluiu

de um ancestral com cinco dedos, ns queremos dizer que ocorreram mudanas
hereditrias na diferenciao do mesoderma do membro para condrcitos du-
rante a embriognese na linhagem do cavalo. Nessa perspectiva, a evoluo o
resultado de mudanas hereditrias afetando o desenvolvimento.* Esse o caso
se a mutao muda o embrio do rptil em um pssaro ou muda a cor dos olhos
da Drosophila.
Essa perspectiva do desenvolvimento, no entanto, esteve perdida durante a d-
cada de 1940. Um dos maiores eventos na teoria evolucionria foi a sntese mo-
derna da biologia evolucionria e gentica Mendeliana (Mayr e Provine, 1980).
Um resultado dessa fuso duramente obtida que a evoluo foi redefinida para
significar mudanas nas freqncias gnicas de uma populao atravs do tempo.
Uma vez que a evoluo uma mudana na composio gentica das popula-
es, escreveu Dobzhansky (1937), os mecanismos da evoluo constituem pro-
blemas da gentica de populaes. A abordagem desenvolvimental da evoluo foi
excluda da sntese (Hamburger, 1980; Gottlieb, 1992; Dietrich, 1995; Gilbert et
al., 1996). Pensava-se que a gentica de populaes poderia explicar a
macroevoluo, de modo que a morfologia e o desenvolvimento foram considera-
dos como tendo papis de menor importncia na teoria evolucionria moderna
(Adams, 1991). Em outras palavras, a macroevoluo (as grandes mudanas
morfolgicas vistas entre espcies, classes e filos) poderia ser explicada pelos me-
canismos da microevoluo, os valores adaptativos diferenciais de gentipos ou
desvios no acasalamento aleatrio ou ambos fatores agindo juntos (Torrey e
Feduccia, 1979).
No entanto, essa viso tinha seus crticos (seus hereges, alguns diriam). Tal-
vez o mais importante desses tenha sido Richard Goldschmidt. Goldschmidt co-
meou o seu livro The Material Basis of Evolution (1940) com um desafio snte-
se moderna.
Eu podia desafiar os devotos da viso estritamente Darwiniana, a qual estamos

discutindo aqui, para tentar explicar a evoluo das seguintes caractersticas
pela acumulao e seleo de pequenos mutantes: plo nos mamferos, penas
nos pssaros, segmentao nos artrpodes e vertebrados, a transformao dos
arcos de guelras em filogenia incluindo os arcos articos, msculos, nervos,
etc.; mais adiante, dentes, conchas dos moluscos, ectoesqueletos, olhos compos-
tos, circulao sangnea, alternao de geraes, estatocistos, sistemas
ambulacrrios de equinodermos, pedicelria dos mesmos, cnidocistos, aparelho
de veneno das cobras, osso da baleia, e finalmente, diferenas qumicas como
hemoglobina versus hemocianina.
Goldschimidt afirmou que as novas espcies no surgiram do mecanismo da

microevoluo e que a gentica de populaes era incapaz de explicar novos tipos de
estrutura que envolvem diversos componentes mudando simultaneamente. Tais mu-
danas macroevolucionrias requerem outros mtodos evolucionrios do que sim-
plesmente acumulao de micromutaes. Goldschmidt viu mutantes hometicos
como macromutaes que poderiam mudar uma estrutura em outra e possivelmente
criar novas estruturas ou novas combinaes de estruturas. Essas mutaes no
seriam nos genes estruturais, mas nos genes reguladores. Uma nova espcie, afirma
ele, comearia como um esperanoso monstro (uma frase um tanto infeliz tendo
como antecedentes a prosa de Metchnikoff).
*Uma maneira de visualizar isso usar uma analogia matemtica (Gilbert et al., 1996):
Biologia funcional = anatomia, fisiologia, biologia celular, expresso gnica
Biologia do desenvolvimento = [biologia funcional]/ t
Biologia evolucionria = [biologia do desenvolvimento]/ t
Ao mesmo tempo, Conrad H. Waddington estava tentando descobrir mecanis-

mos de desenvolvimento para a produo dessas novas espcies. Ele tambm con-
siderou mutaes hometicas em moscas como modelos de fentipos drasticamen-
te novos, formulando a noo de transferncia de competncia (assimilao gen-
tica, veja Captulo 21) para explicar certos aspectos da evoluo morfolgica. Pou-
cos cientistas prestavam ateno a Goldschmidt ou Waddington porque eles no
estavam escrevendo no paradigma da gentica de populaes da sntese moderna e
seus programas cientficos eram suspeitos. (Goldschmidt no acreditava na opinio
de Morgan sobre o gene como uma entidade particular, e o trabalho de Waddington
foi mal interpretado como apoiando a herana de traos adquiridos.) No entanto, na
dcada de 1970, eventos na paleontologia (teoria do equilbrio pontuado), eventos
na sociedade (os Criacionistas dando a disputa microevolucionria para os biolo-
gistas mas contestando a macroevoluo), e eventos em biologia molecular
(Notadamente o trabalho de King e Wilson em 1975 mostrando que os DNAs, huma-
no e do chimpanz, eram mais do que 99% idnticos) levaram os cientistas a consi-
derar seriamente que mutaes em genes reguladores podem criar grandes mudan-
as na morfologia.
Na dcada de 1990, as tcnicas de biologia molecular permitiram aos biologistas
descobrirem (1) genes reguladores homlogos como o Pax6, que controlam o de-
senvolvimento dos mesmos rgos em todo reino animal, (2) caminhos homlogos
para o desenvolvimento, cujas funes podem mudar entre organismos ou entre
clulas do mesmo organismo, e (3) os padres de mudana da expresso dos genes
hometicos, permitindo que diversas partes do corpo tenham estruturas e funes
diferentes. Tais descobertas convergiram para a formao de uma sntese evolucio-
nria do desenvolvimento que incorpora a abordagem da gentica de populaes
mas que expande a teoria evolucionria para explicar tambm o fenmeno
macroevolucionrio. A sntese evolucionria do desenvolvimento tambm retm
uma multiplicidade de paradigmas. Em alguns momentos (tais como a criao das
clulas da crista neural), uma mudana qualitativa ocorre, enquanto em outros ca-
sos (como a formao da bolsa do toupeira com bolso), quantidade se torna qualida-
de quando um limite ultrapassado. Sinalizando a unio dessa sntese, Biologia
Evolucionria do Desenvolvimento se tornou um tpico separado em uma enciclo-
pdia da cincia (Hall, 1996), e o Rouxs Archives of Developmental Biology, uma
das mais antigas publicaes da embriologia experimental, mudou o nome para De-
velopment, Genes, and Evolution.
Ns estamos em um extraordinrio momento de nosso entendimento da nature-
za, pois a sntese da gentica do desenvolvimento com a biologia evolucionria
pode transformar nossa apreciao dos mecanismos fundamentais da mudana
evolucionria e diversidade animal. Tal sntese na realidade um retorno a uma
teoria evolucionria mais ampla que se fragmentou na virada do ltimo sculo (Figu-
ra 23.27). Nos ltimos anos do sculo 19, a biologia evolucionria continha as cin-
cias que ns chamamos hoje de biologia evolucionria, sistemtica, ecologia, gen-
tica e desenvolvimento. Quando Wilhelm Roux (1894) anunciou a criao da mec-
nica do desenvolvimento, ele no rompeu totalmente com a biologia evolucionria.
Ao contrrio, ele afirmou que uma mecnica do desenvolvimento ontogentico e
filogentico deve ser aperfeioada. Ele citou que a mecnica do desenvolvimento
dos embries (o ramo ontogentico) iria crescer mais rpido do que os estudos em
filogentica, mas afirmou que em conseqncia das conexes causais ntimas entre
os dois, muitas das concluses surgidas da investigao sobre ontogenia [iriam]
esclarece os processos filogenticos.
Cem anos mais tarde, estamos em um ponto onde podemos nos ater segunda
mecnica do desenvolvimento de Roux e criar uma teoria unificada da evoluo.
Figura 23.27
EVOLUO Roteiro disciplinar do lado evolucionrio da
biologia, desde 1880 at o presente. Para maior
Roux, Wilson, clareza, outras vias (tais como a da gentica
outros geral gentica humana ou da evoluo
imunologia) no foram mostradas.
Questo geracional
Mecnica desenvolvimental
Biologia evolucionria Morgan

Sistemtica
Ecologia
Anatomia comparada Gentica
Gentica de
populaes
Embriologia experimental
Regenerao
Fertilizao
Sntese moderna Grupo
Imunologia
NeoDarwinismo do fago
Biologia celular
Biologia do
desenvolvimento
Gentica molecular
Gentica do
desenvolvimento
Sob Construo
SNTESE
DESENVOLVIMENTAL
LITERATURA CITADA
Abel, T., Bhatt, R, and Maniatis, T. 1992. A Alberch, P. and Gale, E. 1983. Size dependency Averoff, M. and Cohen, S. M. 1997. Evolutio-
Drosophila CREB/ATF transcriptional activator during the development of the amphibian foot. nary origin of insect wings from ancestral gills.
binds to both fat body- and liver-specific Colchicine induced digital loss and reduction. J. Nature 385: 627-630.
regulatory elements. Genes Dev. 6: 466-480. Embyol. Exp. Morphol. 76:177-197.
Bateson, W. 1894. Materials for the Study of
Adams, M. 1991. Soviet perspectives on Alberch, P. and Gale, E. 1985. A developmental Variation. Cambridge University Press, Cambridge.
evolutionary theory. In L. Warren and M. analysis of an evolutionary trend. Digit reduction
Berrill, N. J. 1955. The Origins of the Vertebrates.
Meselson (eds.), New Perspectives iri Evolution. in amphibians. Evolution 39: 8-23.
Oxford University Press, New York.
Liss/Wiley, New York.
Alexandrov, D. A. and Sergievsky, S. O. 1984. A
Berrill, N. J. 1987. Early chordate evolution. I.
Averoff, M. and Cohen, S. M. 1997. Evolutio- variant of sympatric speciation in snails.
Amphioxus, the riddle of the sands. Int. J. Invert.
nary origin of insect wings from ancestral gills. Malacol. Rev. 17: 147.
Repr. Dev. 11: 1-27.
Nature 385: 627-630.
Anderson, D. T. 1973. Embryology and Phylo-
Bodmer, R. The gene tinman is required for
AhIberg, P. E. 1997. How to keep a head in geny of Annelids and Arthropods. Pergamon
specification of the heart and visceral muscles
order. Nature 385: 489-490. Press, Oxford.
in Drosophila. Development 118: 719-729.
Boncinelli, E. 1994. Early CNS development: Conway Morris, S. and Whittington, H. B. 1979. Cottlieb, G. 1992. Individual Development and
Distal-less related genes and forebrain developr- The animals of the Burgess Shale. Sci. Am. Evolution: The Genesis of Novel Behavior.
nent. Curr. Opin. Neurobiol. 4: 29-36. 240(1): 122-133. Oxford University Press, New York.
Bonner, J. T. 1988. The Evolution of Complexity. Darwin, C. 1859. The Origin of Species. John Gould, S. J. 1977. Ever Since Darwin. Norton,
Princeton University Press, Princeton. Murray, London. New York.
Bowring, S. A., Grotzinger, J. P. Isachsen, C. E., Dietrich, M. (1995). Richard Goldschmidts Gould S. J. 1989. Wonderful Life. Norton,
Knoll, A. H., Pelechaty, S. M. and Kolosov, P. heresies and the evolutionary synthesis. J. Hist. New York.
1993. Calibrating rates of early Cambrian Biol. 28: 431-461.
Gould, S. J. 1990. An earful of jaw. Natural
evolution. Science 261: 1293-1298.
Dobzhansky, T. G. 1937. Genetics and the Origin History 1990(3): 12-23.
Brusca, R. C. and Brusca, G. J. 1990. Invertebrates. of Species. Columbia University Press, New York.

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