Biologia Celular e Molecular

Aula 4
Biologia molecular
e suas aplicações
 Resumo
Unidade de Ensino: 4
Competência da Ser capaz de correlacionar os conhecimentos sobre biologia celular na
Unidade de Ensino: aplicação de técnicas de biologia molecular.
Bases da diversidade genética; sequenciamento e mapeamento
genético; aplicações de marcadores moleculares e da genômica;
principais conceitos de OGM e clonagem; etapas de um protocolo de
Resumo: extração de DNA; normas aplicadas aos OGM no Brasil; biologia molecular
e suas aplicações; princípios e exemplos da biossegurança; bioética em
pesquisa e realização de procedimentos biomoleculares; boas práticas
de laboratório no seu dia a dia.
OGM; marcadores moleculares; diversidade genética; PCR;
sequenciamento genético; mapeamento genético; genômica;
bioinformática; clonagem; isolamento
Palavras-chave:
de DNA; engenharia genética;
fertilização in vitro; transgênicos;
células-tronco; ética em pesquisa.
Título da teleaula: Biologia molecular e suas aplicações

Teleaula nº: 4
 Convite ao estudo
Sequenciamento de DNA (etapas).
Reação em cadeia da polimerase (PCR).
Marcadores moleculares.
Clonagem.
Organismo geneticamente modificado.
Extração de DNA (etapas)
 Célula vegetal e animal.
Legislação aplicada
à biossegurança.
Boas práticas de laboratório.
VA Caminho de Aprendizagem
 Conhecimentos prévios

Ácidos nucleicos: função e estrutura.

Replicação, transcrição e tradução.
Regulação da expressão gênica.
Conceito de biossegurança.
 Pensando a aula:
situação geradora de aprendizagem
1 2 Você recebeu um pedido da
Secretaria Estadual do Meio Ambiente
Você é um pesquisador e desenvolve
para analisar a diversidade genética de
uma pesquisa envolvendo
populações de cervídeos do bioma do
mapeamento genético de uma
cerrado. Como eles não poderão ser
planta, que uma proteína causa
deslocados ou mantidos em cativeiro
doenças em insetos-praga quando
para análises, será preciso ir a campo
ingerida. Você precisa escrever um
para coleta de amostras. Você deverá
projeto para concorrer à verba para
fazer um relatório informando sobre os
que essa pesquisa seja desenvolvida.
Fonte: Avatar Maker. procedimentos, protocolo e cuidados
com o material genético dos animais.

Para iniciar uma nova linha de pesquisa com células-tronco 3

embrionárias humanas, visando fertilização in vitro, no seu
laboratório, será necessário um capital proveniente de
investidores internacionais. Porém, eles querem saber os
trâmites legais para essa atividade no país antes do
investimento. Você deverá elaborar um documento para
sanar as dúvidas dos investidores.
Cápsula 1 “Iniciando o estudo”
 Situação-Problema 1
Você é um pesquisador do Instituto de Genética Molecular, e desenvolve uma pesquisa
envolvendo mapeamento genético de uma planta, na qual determinada proteína causa
doenças em insetos-praga quando ingerida. Contudo, não é uma planta de interesse
comercial. Você precisa escrever um projeto para concorrer à verba para que essa
pesquisa seja desenvolvida.

Justificativa para
Utilidadde prática da planta
para auxiliar em outras
o estudo da
culturas; planta
Utilidade do mapeamento
Fonte: Avatar Maker. genético e aplicação em
outros organismos;
Utilidade de PCR nesse
contexto e que genes seriam
encontrados em cada parte
da célula;

Fonte: Modificado de Pixabay.

 Problematizando a Situação-Problema 1
Genômica: é a ciência que estuda o genoma
dos indivíduos em sua totalidade, sequenciando
e mapeando os nucleotídeos que compõem
os cromossomos dos seres vivos.
Indivíduos possuem diferenças no seu DNA (genótipo)
e na expressão dos seus genes.
Possibilita o estudo das funções
e variações genotípicas do DNA,
das expressões de determinados
genes e do fluxo dos mesmos
entre as populações.
 Problematizando a Situação-Problema 1
Sequenciamento do DNA
 Etapas:

 Técnicas de sequenciamento:
• Shotgun;
• Clone Ordenado.
 Problematizando a Situação-Problema 1
Reação em cadeia da polimerase (PCR)
 Termociclador: ciclos de temperatura, repetindo a
reação de síntese de novas fitas de DNA por meio da
Taq Polimerase e como uso de primers de DNA que
se ligam à região de interesse da sequência genética.

Fonte: Ca.garcia.s/Wikimedia Commons.

 Problematizando a Situação-Problema 1

Ciclos repetidos de temperatura

 Problematizando a Situação-Problema 1
Marcadores moleculares
 Sequências específicas de DNA que
codificam determinados fenótipos e
são herdados geneticamente;
 Utilização: estudos de diversidade, mapeamentos de
genes em espécies cultivadas, sistemática,
sinalização de genes de resistência a
pragas e doenças, avaliação e
caracterização de germoplasma;
 Melhoramento e seleção
genética, testes de pureza
genética, etc.
 Problematizando a Situação-Problema 1
Clonagem
 Produção de indivíduos geneticamente idênticos;

Fonte: Squidonius/Wikimedia Commons.

 Problematizando a Situação-Problema 1
Clonagem terapêutica Proibida por lei no Brasil.
Inserção do núcleo
Remoção do da célula somática
núcleo

Embrião Neurônio
Neurônio
Células sanguíneas
Células
Músculo
somáticas
Remoção do núcleo de
um óvulo não fertilizado
Fonte: Trunity.net.
 Problematizando a Situação-Problema 1
Organismos geneticamente modificados
 Organismo recebe modificações em seu genoma, sem
receber material genético de organismos exógenos.
Indivíduo recebe material
Transgênico genético proveniente de um ser
vivo de outra espécie.

Vegetais transgênicos:
organismos que recebem genes
de resistência à insetos (gebe
Bt) e herbicidas (gene RR).
 Resolvendo a Situação-Problema 1
Você é um pesquisador do Instituto de Genética Molecular, e
desenvolve uma pesquisa envolvendo mapeamento genético de uma
Justificativa
planta, na qual determinada proteína causa doenças em insetos-praga
para o estudo
quando ingerida. Contudo, não é uma planta de interesse comercial. da planta
Você precisa escrever um projeto para concorrer à verba para que
essa pesquisa seja desenvolvida.

DNA dos eucariotos: no núcleo,

mitocôndrias e cloroplastos.
Objetivo do estudo: encontrar os
genes responsáveis pela produção
da proteína que causa doenças em
insetos que predam essa planta.
 Resolvendo a Situação-Problema 1
Aplicação:
 Os genes podem ser
inseridos em plantas de
interesse comercial,
diminuindo a necessidade de
aplicação de inseticidas para Fonte: Ca.garcia.s/Wikimedia Commons.
controle de pragas.
Ferramenta para a pesquisa:
 PCR (termociclador).
Cápsula 2 “Participando da aula”
 Situação-Problema 2
Seu laboratório recebeu um pedido da Secretaria Estadual do Meio Ambiente para analisar a
diversidade genética de populações de cervídeos do bioma do cerrado. Esses animais não poderão
ser deslocados ou mantidos em cativeiro para análises. Será preciso ir a campo para coleta de
amostras. Você deverá fazer um relatório informando a Secretaria sobre os procedimentos,
protocolo e cuidados com o material genético dos animais.

Que tipo de amostragem será

utilizada para a análise;
Quais serão os cuidados com
as amostras de tecidos e
Fonte: Avatar Maker. como devem ser
acondicionadas;
Quais serão as etapas
do processo de
extração e purificação
das amostras obtidas.

Fonte: Modificado de Pixabay.

 Problematizando a Situação-Problema 2
Extração do DNA
 Lise das membranas e exteriorização da molécula;
 Purificação (separação do DNA de outros
componentes celulares).
Protocolos de extração são adaptáveis a cada
tipo de organismo ou espécie a ser estudado.
 Problematizando a Situação-Problema 2

Etapas do isolamento do DNA:

1. As células são cultivadas in vitro ou
obtidas de uma amostra do indivíduo;
2. As membranas celulares sofrem lise,
liberando o conteúdo interno;
 Problematizando a Situação-Problema 2

Etapas do isolamento do DNA:

3. O conteúdo celular é tratado com reagentes/
enzimas e seus componentes são desnaturados,
digeridos e removidos, restando somente o DNA;
4. O DNA é precipitado por componentes químicos
e centrifugações, e mantido em solução aquosa.
 Problematizando a Situação-Problema 2
Extração de DNA de células vegetais – Protocolo
proposto por Doyle & Doyle (1987)
1. Tecido vegetal desidratado Adição de nitrogênio líquido
2. Ao macerado acrescentar: tampão de extração
EDTA, TRIS HCl manter o pH
CTAB lise das membranas da célula
NaCl precipitação do DNA
PVP e Evitam ligação de
β-mercaptoetanol polifenóis ao DNA
3. Homogeneizar e transferir
para tubos eppendorf
 Problematizando a Situação-Problema 2
Extração de DNA de células vegetais – Protocolo
proposto por Doyle & Doyle (1987)
4. Manter em banho-maria 65°C (1h);
5. Esperar esfriar e acrescentar solução de CIA
(solvente orgânico);
6. Homogeneizar e centrifugar as amostras;
7. Visualização de duas fases na amostra;
8. Recolher sobrenadante
com pipeta.
9. Acondicionar amostra em -20 °C.
10. Centrifugar e
descartar sobrenadante;
 Problematizando a Situação-Problema 2
Extração de DNA de células vegetais – Protocolo
proposto por Doyle & Doyle (1987)
11. Aguardar o pellet secar e ressuspender com
solução de TE RNAse, mantendo em banho-maria
(37 °C), por 1 h;
12. Aguardar a amostra esfriar e acondicionar em -20 °C;
13. Quantificar por espectrofotometria ou eletroforese
em gel de agarose;
14. Realizar a PCR.
 Problematizando a Situação-Problema 2
Extração de DNA de células animais
 Protocolo de Olerup & Zetterquist (1992)
• Detergentes para lise das membranas;
• Soluções tampão para manter o pH da solução;
• Sucessivos tratamentos com enzimas,
centrifugações e lavagens com etanol
(separação e purificação do DNA da amostra).
 Resolvendo a Situação-Problema 2
Seu laboratório recebeu um pedido da Secretaria Estadual do Meio Ambiente para analisar a
diversidade genética de populações de cervídeos do bioma do cerrado. Esses animais não poderão
ser deslocados ou mantidos em cativeiro para análises. Será preciso ir a campo para coleta de
amostras. Você deverá fazer um relatório informando a Secretaria sobre os procedimentos,
protocolo e cuidados com o material genético dos animais.

Amostragem adequada: retirada de amostras de sangue.

Acondicionar as amostras em refrigeração.
Um protocolo utilizado para
extração e purificação
de amostras de sangue.
Cápsula 3 “Participando da aula”
 Situação-Problema 3
O seu laboratório deseja iniciar uma nova linha de pesquisa com células-tronco
embrionárias humanas, visando fertilização in vitro. Para tal, será necessário um capital
que deverá vir de investidores internacionais. Contudo, esses investidores querem saber
os trâmites legais para essa atividade no país antes de investirem o dinheiro no Instituto.
Você deverá elaborar um documento para sanar as dúvidas dos investidores.

Fonte: Avatar Maker.

Fonte: Avatar Maker.

 Problematizando a Situação-Problema 3
Legislação aplicada à Biossegurança
 Lei nº 11.105 de 24 de março de 2005
(Lei de Biossegurança)
Estabelece importantes normas relacionadas à construção, cultivo,
produção, manipulação, transporte, transferência, importação,
exportação, armazenamento, pesquisa, comercialização, consumo,
liberação no meio ambiente, e descarte de OGM.

 Criação do Conselho Nacional

de Biossegurança (CNBS)
e reestruturação da
Comissão Técnica Nacional
de Biossegurança (CTNBio).
 Problematizando a Situação-Problema 3

CTNBio
 Instituição de caráter consultivo e deliberativo,
vinculado ao Ministério da Ciência, Tecnologia,
Inovações e Comunicações;
 Função de instância decisória a respeito
de organismos transgênicos;
 Delibera sobre assuntos a
respeito de biotecnologia,
bioética, etc.
 Problematizando a Situação-Problema 3

A Lei nº 11.105/2005 também regulamenta

algumas práticas ligadas à engenharia genética
(art. 6º), baseada no princípio da precaução
 Proíbe as seguintes atividades:
 Problematizando a Situação-Problema 3

• Algumas técnicas da biologia molecular, como

a clonagem humana; a engenharia genética em
células germinativas, zigotos e embriões
humanos; a implementação de projetos com
OGM sem registro e acompanhamento; o uso,
comércio, registro, patenteamento e
licenciamento de tecnologias genéticas de
restrição do uso, entre outras.
 Problematizando a Situação-Problema 3
A Lei nº 11.105/2005 permite o uso de células-tronco
embrionárias para fins de pesquisa e terapia (art. 5º),
desde que sejam oriundas de processos de fertilização
in vitro de embriões não utilizados no processo,
atendendo às condições de serem obtidas de embriões
inviáveis ou de embriões congelados há 3 anos ou mais
 Também é necessário o consentimento dos doadores
e fica proibida a comercialização
das células-tronco.
 Problematizando a Situação-Problema 3
Art. 40:
 Os alimentos que contenham
ou sejam produzidos a partir
de OGM devem possuir a
informação contida em
seus rótulos. Fonte: Embalagem sustentável.

Decreto n° 4.680/2003:
 Obriga empresas que
comercializam produtos com
mais de 1% da matéria prima
oriunda de transgênicos
a identificá-los.
 Problematizando a Situação-Problema 3

Projeto de lei avança no senado para desobrigar

os fabricantes de informar a existência de OGM
nos produtos
 Concentração de OGM nos produtos menor
que 1%: não haverá a obrigação da rotulagem;
 Concentração maior que 1%: a informação deve
estar contida no rótulo, mas
sem o tradicional símbolo
com a letra “T”.
 Problematizando a Situação-Problema 3

Aplicação da biologia molecular:

 Detecção de diversas doenças;
 Na agropecuária, a técnica de clonagem é usada
para produção de animais e plantas, gerando
cópias exatas de organismos com características
desejáveis, como maior produção de sementes
ou o maior ganho de
peso por um animal.
 Problematizando a Situação-Problema 3
Boas práticas de laboratório
 Incluem:
• Uso de equipamentos de proteção individual (EPIs)
e equipamentos de proteção coletiva (EPCs);
• Organização e higienização adequada do ambiente
de trabalho, higiene pessoal, entre outras.
Norma Regulamentadora nº 32
do Ministério do Trabalho (NR 32
- Segurança e Saúde No Trabalho
em Serviços De Saúde)
 Problematizando a Situação-Problema 3
Boas práticas de laboratório

Fonte: SIMI, LUCAS DETOGNI. Bioética e biossegurança.

In: Biologia celular e molecular. Londrina: Editora
e Distribuidora Educacional, 2018.
 Resolvendo a Situação-Problema 3
O seu laboratório deseja iniciar uma nova linha de pesquisa com células-tronco
embrionárias humanas, visando fertilização in vitro. Para tal, será necessário um capital
que deverá vir de investidores internacionais. Contudo, esses investidores querem saber
os trâmites legais para essa atividade no país antes de investirem o dinheiro no Instituto.
Você deverá elaborar um documento para sanar as dúvidas dos investidores.

Lei de Biossegurança (Lei nº 11.105/2005) – Art. 6

 Determina proibição da clonagem e engenharia
genética em células germinativas,
zigotos e embriões humanos.
A lei não determina a proibição
em células de animais e
vegetais. Portanto, a transgenia
e engenharia genética é
permitida nesses casos.
Fonte: Celos.
 Resolvendo a Situação-Problema 3
Pesquisa com células-tronco, permitida quando:
 Embriões obtidos de procedimentos de
fertilização in vitro;
 Consentimento dos doadores;
 Obtidas de embriões inviáveis;
 Obtidas de embriões congelados há 3 anos ou mais.
Apesar de rígidas, a legislação
permite a pesquisa, sendo viável
o investimento no país.
Cápsula 4 “Participando da aula”
 Provocando novas situações
Suponha que você é o pesquisador responsável por
um laboratório de melhoramento genético. Você
irá receber novos alunos para estágio durante um
curso de verão. No primeiro encontro, você deverá
falar sobre as boas práticas de laboratório, visando
auxiliar na organização do ambiente e na
prevenção de acidentes.

Quais ações deverão ser

recomendadas aos alunos?
 Diálogo do professor com alunos
Recomendações baseadas na Norma Regulamentadora
n° 32, que trata sobre “Segurança e Saúde No Trabalho
Em Serviços De Saúde”.

Fonte: SIMI, LUCAS DETOGNI. Bioética e

biossegurança. In: Biologia celular e molecular.
Londrina: Editora e Distribuidora Educacional, 2018.
VE Caminho de Aprendizagem