Fundamentos Prticos

Para Biologia Celular

2 edio

Nome do Aluno:_______________________________________________ Turma:______

Email:___________________________________________________________________

3
 Fundamentos prticos para biologia celular / Flavio Henrique
Caetano ... [et al.]. - 2. ed. - Rio Claro: Topzio, 2013
108 p. : il., figs.

ISBN: 9788591131518

1. Citologia. 2. Histologia. 3. Clulas. I. Caetano, Flvio

Henrique. II. Zara, Fernando Jos. III. Cella, Doralice Maria. IV.
Pereira, Bruno Fiorelini. V. Ttulo.

CDD 574.87

Ficha Catalogrfica elaborada pela STATI Biblioteca da UNESP

Campus de Rio Claro/SP

Editorao e Projeto Grfico: Flvio Henrique Caetano

Capa: Cristiane Mileu e Flvio Henrique Caetano
* Figura da Capa: Clula da glndula ps-faringe de formiga Dinoponera australis. Aumento (3000X)
Microscpio Eletrnico de Transmisso. Tc. Rotina.

4
 Fundamentos Prticos
Para Biologia Celular

Bruno Fiorelini Pereira Bacharel em Cincias Biolgicas pela UNESP Campus de Rio Claro.
Atualmente aluno de doutorado do programa de ps-graduao em Biologia Celular e Molecular.

Doralice Maria Cella Bacharel em Cincias Biolgicas pela UNESP Campus de Rio Claro, com
doutorado em Zoologia pela UNESP Campus de Rio Claro. Atualmente docente no departamento
de Biologia do Instituto de Biocincias da UNESP Campus de Rio Claro.

Fernando Jos Zara Bacharel em Cincias Biolgicas pela UNESP Campus de Rio Claro, com
mestrado e doutorado em Zoologia pela UNESP Campus de Rio Claro. Atualmente docente no
departamento de Biologia Aplicada Agropecuria da Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinria
da UNESP Campus de Jaboticabal.

Flavio Henrique Caetano Bacharel em Cincias Naturais pela UNESP Campus de Rio Claro,
com mestrado e doutorado em Zoologia pela USP. Atualmente professor titular do departamento
de Biologia do Instituto de Biocincias da UNESP Campus de Rio Claro.

5
6
 SUMRIO

I. Apresentao ..............................................................................................................................09

II. Tcnicas Bsicas para o Estudo de Biologia Celular .................................................................10

Laboratrio .............................................................................................................................65

III. Primeiro Contato com as Clulas: Procariontes e Eucariontes

Atlas .......................................................................................................................................22
Laboratrio .............................................................................................................................67

IV. Membrana Plasmtica: Especializaes

Atlas .......................................................................................................................................24
Laboratrio .............................................................................................................................73

V. Citoesqueleto
Atlas .......................................................................................................................................28
Laboratrio .............................................................................................................................77

VI. Junes
Atlas .......................................................................................................................................32
Laboratrio .............................................................................................................................73

VII. Ncleo Interfsico

Atlas .......................................................................................................................................34
Laboratrio .............................................................................................................................81

VIII. Retculo Endoplasmtico

Atlas .......................................................................................................................................42
Laboratrio .............................................................................................................................87

IX. Complexo de Golgi e Lisossomos: destinao, exportao e importao de macromolculas

Atlas .......................................................................................................................................46
Laboratrio .............................................................................................................................91

X. Peroxissomos
Atlas .......................................................................................................................................52
Laboratrio .............................................................................................................................97

XI. Mitocndrias
Atlas .......................................................................................................................................54
Laboratrio .............................................................................................................................99

XII. Material armazenado pela clula

Atlas .......................................................................................................................................58
Laboratrio ........................................................................................................................... 103

XIII. Matriz Extracelular

Atlas .......................................................................................................................................60
Laboratrio ........................................................................................................................... 107

Bibliografia ..................................................................................................................................... 108

7
8
 I Apresentao

Os conhecimentos na rea de BIOLOGIA CELULAR tm

avanado a passos extremamente rpidos, fazendo com que haja
necessidade de processos de aprendizagem mais efetivos e mais geis.
Os conhecimentos ampliaram-se muito graas aos avanos dos
mtodos bioqumicos e, tambm, dos equipamentos de estudo da
morfologia celular; neste sentido falamos da melhoria dos microscpios
de luz e dos eletrnicos.
No obstante isto, o conhecimento sobre a CLULA mais que
tudo baseado na morfologia das mesmas.
Portanto o estudo acurado da morfologia celular imprescindvel para o
bom professor e pesquisador na rea das CIENCIAS BIOLGICAS.
Assim sendo esta publicao nasceu de uma necessidade inerente ao
curso de CINCIAS BIOLOGICAS onde as aulas prticas so voltadas
para a formao do profissional desta rea do conhecimento, sem
desprezar as diversas modalidades de estudo da MORFOLOGIA
CELULAR.
Deste modo o que se pretende com esta publicao dar ao
aluno a oportunidade de possuir um livro onde ele tem parte com a autoria
do mesmo, pois afinal de contas uma grande parcela deste volume ser
a demonstrao de sua capacidade de interpretar os dados e de suas
observaes durante as aulas praticas.

9
II Tcnicas Bsicas para o Estudo de
Biologia Celular
Antes de apresentar as caractersticas
peculiares de cada uma das organelas celulares, faz-
se necessrio conhecer os recursos bsicos para a
visualizao, identificao de compartimentos e
reaes qumicas celulares. O primeiro passo para o
estudo da clula de maneira prtica est associada a
sua ampliao. Em resumo, o equipamento bsico para
o estudo inicial de uma celular o microscpio.
Microscpio A curiosidade na ampliao
de objetos faz parte do comportamento humano desde
tempos remotos. As primeiras lentes com poder de
ampliao datam de 721 A.C. e so conhecidas por
Lentes de Lanyard, confeccionadas em cristal de rocha.
Apesar da grande controvrsia sobre a autoria da sua
inveno, creditado ao Holands Zaccharias Janssen
(1595) o primeiro microscpio. Tal equipamento
consistia na sobreposio de duas lentes e era utilizado
como brinquedo pela aristocracia da poca. Os
pioneiros na utilizao do microscpio em materiais
biolgicos foi Antonie van Leeuweenhoek (1632-1723),
o qual ficou famoso pela teoria do homnculo
associado ao espermatozoide e Robert Hooke (1635-
1703) o qual cunhou o termo clula ao observar
fragmentos de cortia em 1665. Os primeiros
microscpios utilizavam como fonte luminosa a luz do
sol e com o incremento tecnolgico esta foi substituda
por um filamento incandescente, a lmpada eltrica.
Vrios tipos de microscpios foram desenvolvidos para
diferentes pesquisas, mas todos tem por base os
mesmos princpios aplicados ao microscpio de luz.
I Microscpio de luz Ao observarmos um
microscpio de luz, pode-se identificar duas partes
distintas, uma constituda pelo conjunto de lentes
(sistema ptico), suportado pela parte mecnica.
Basicamente o sistema ptico constitudo por trs
conjuntos de lentes: condensador, as objetivas e a ocular.
A lente condensadora tem por funo formar
um cone de luz sobre as clulas apoiadas sobre o
suporte mecnico chamado de platina. Este cone de
luz incide sobre um nico ponto para que atravesse a
clula. O feixe luminoso aps atravessar a clula
ampliado na lente objetiva a qual projeta esta ampliao
por meio de prismas no plano focal da lente ocular. A
ocular promove uma nova ampliao a qual ser
percebida retina, cmera fotogrfica ou digital. De
maneira geral, no microscpio de luz, as lentes
objetivas so trocadas com a funo de ampliar a
imagem ao girar a parte mecnica conhecida como
revlver. Assim temos a seguinte frmula para o clculo
da ampliao total (Atotal):
Atotal=Aobj x Aoc
Onde: Aobj a ampliao da objetiva (5X, 10X, 20X, 40X
e 100X) e Aoc constitui a ampliao da ocular (10X).
Porm, a ampliao por si s no tem significado prtico
se a riqueza de detalhes no for preservada. A riqueza
dos detalhes na produo de uma imagem est
relacionada ao conceito de Limite de Resoluo ou
Resoluo (R) distncia mnima entre dois elementos
a fim que estes possam ser observados
individualmente. Como a lente ocular amplia a imagem
produzida pelas lentes objetivas, o Limite de Resoluo
est diretamente associado s lentes objetivas. Assim,
a qualidade das lentes objetivas (ndice de refrao do
cristal utilizado = n), associado abertura caracterstica
de cada lente para receber metade do cone de luz
(ngulo ) constituem a Abertura Numrica (AN),
calculada por meio da frmula:
AN = n. sen
O valor da Abertura Numrica geralmente
encontrado junto ao aumento da objetiva, como no
exemplo 5X/0.12, ou seja, aumento de 5 vezes e
Abertura Numrica de 0,12. Assim o Limite de
Resoluo ou Resoluo de um sistema ptico limitado
pela difrao pode ser obtido pela frmula de Abb:
R = K x /AN
Onde: K uma constante 0,61 e o comprimento de
onda, em geral da luz branca (para fins de clculo
comprimento da luz verde = 550nm) A partir das bases
do microscpio de luz foram desenvolvidos vrios outros
tipos de microscpios especficos para diferentes
pesquisas em biologia celular. Dentre eles podemos
destacar o microscpio de polarizao, o qual utiliza o
plano da luz polarizada, o microscpio de fluorescncia
o qual trabalha com diferentes comprimentos de onda
luminosa atuando sobre substncias naturais ou
corantes fluorescentes (fluorescenas, fluorocromos ou
fluorforos) e o microscpio confocal o qual utiliza o
laser como fonte luminosa, combinada a microscopia
de fluorescncia. Neste tipo de microscpio so
captados vrios planos focais (cortes pticos) os quais
so somados digitalmente formando a imagem
tridimensional final.
II - Microscpio Eletrnico As bases tericas
para a fundamentao da microscopia eletrnica foram
idealizadas durante a dcada de 1920. Fsicos como
De Broglie (Nobel de 1929) e Busch mostraram que os
eltrons tinham caracterstica de onda e partcula no
vcuo, assim como os ftons, e que bobinas
magnticas podem interferir na conduo dos eltrons
atuando como lentes. Com base nestes
conhecimentos, na Alemanha do incio da dcada de
1930 Knoll e Ruska desenvolveram o primeiro
microscpio eletrnico. A utilizao deste equipamento
em amostras biolgicas foi somente idealizada no final
dos anos 40 e durante a dcada de 1950 por
pesquisadores como Claude, Palade (descobridor do
ribossomo) e Pearse, pela introduo do tetrxido de
smio e avanos obteno de cortes ultrafinos. Tendo
em vista a similaridade comportamental do fton e do
eltron no vcuo, o microscpio eletrnico funciona
basicamente com os mesmos princpios do
microscpio de luz. Ao invs de um filamento
produzindo luz, teremos um filamento especial
produzindo eltrons, os quais so acelerados por
diferena de potencial. Tais eltrons passam por lentes
as quais no so de vidro como no microscpio de luz,
mas sim lentes ou bobinas eletromagnticas. Assim,
temos a bobina condensadora, objetiva e projetora (ou
de varredura), ao contrrio da lente ocular do
10
Figura 1: Fgado de Prochilodus lieatus (corimbat) submetido a tcnica de H-E Pereira, B.F. & Caetano, F.H.;
Figura 2: Fgado de Prochilodus lineatus submetido a tcnica de Azul de Bromofenol, Pereira, B.F. & Caetano,
F.H.. Figura 3: Fgado de Prochilodus lineatus submetido a tcnica de Feulgen, Pereira, B.F. & Caetano, F.H..
Figura 4: Fgado de Prochilodus lineatus submetido a tcnica de PAS. Pereira, B.F. & Caetano, F.H.. Figura 5:
Escama de Prochilodus lineatus submetido a tcnica de Picrosirius Red. Figura 6: Mesmo material da figura
anterior, observado ao microscpio de polarisaol. Pitol, D. & Caetano, F.H.

11
microscpio de luz, uma vez que a retina humana no
tem capacidade de formao de imagem por meio de
eltrons. Desta maneira, a formao da imagem ao
microscpio eletrnico poder ser feita sobre uma tela
fluorescente (Ecran) ou tubo de raios catdico (TV),
dependendo do tipo de microscpio eletrnico. Desta
maneira no observamos imagens coloridas ao
microscpio eletrnico, mas sim diferentes tons desde
o negro at o branco ou diferena de contrastao.
Basicamente existem dois tipos de microscpios
eletrnicos: transmisso e varredura.
Microscpio Eletrnico de Transmisso
(MET ou TEM)
O feixe de eltrons acelerado e desprendem-
se do filamento de tungstnio devido a uma diferena
de potencial entre 20 e 120 KV submetidos a um
sistema de ultravcuo na casa de 108 Torr. Como os
eltrons saem de maneira desordenada pelo ctodo
para o nodo, na bobina condensadora estes so
concentrados e conduzidos a um s ponto sobre a
amostra. A amostra muito fina, chamadas de cortes
ultrafinos (20 a 400nm de espessura) e os eltrons
tero maior facilidade de atravessar em certos pontos
e aparecero em branco na imagem final
(eletronlcido). Aqueles que foram totalmente refletidos
formaro as reas negras (eletrondenso) na imagem
final, sendo os parcialmente refletidos responsveis
pelos diferentes tons de cinza (diferenas de
eletrondensidades). Aps a amostra, os eltrons so
ampliados pela bobina objetiva e so novamente
ampliados pela bobina projetora, a qual faz com que
estes incidam sobre o Ecran geralmente revestido com
sulfeto de zinco. Assim, o MET produz uma imagem
bidimencional do interior das clulas.
Microscpio Eletrnico de Varredura (MEV
ou SEM)
O microscpio de varredura funciona de
maneira similar ao de trasmisso. A principal diferena
consiste na presena de bobinas de varredura
(defletoras) a qual faz o feixe de eltrons varrer a
superfcie da amostra ponto por ponto em linhas
paralelas. Destra maneira os eltrons no atravessam
a amostra e ao incidir sobre esta, so produzidos
eltrons secundrios, os quais so colhidos pelo coletor,
amplificados e convertidos em pontos de maior ou
menor intensidade luminosa em um tubo de raios
catdicos (TV). Em geral as amostras so recobertas
com uma delgada camada de ouro ou platina para a
produo de eltrons secundrios. Assim o MEV produz
uma imagem tridimensional da superfcie celular. Apesar
das clulas poderem ser observadas vivas ao
microscpio, na maioria dos estudos de microscopia,
as clulas devem passar por diferentes preparaes
para garantir sua preservao e identificao de
organelas e reaes qumicas de interesse.
Fixao Biolgica A fixao consiste na
preservao definitiva das clulas, devido a
estabilizao e insolubilizao dos componentes
macromoleculares (protenas, cidos nucleicos,
lipdeos), paralisando o metabolismo celular,
preservando a morfologia. Desta maneira, constitui uma
das etapas mais importantes para estudo da clula.
Assim a fixao tende a evitar a autlise e a ao de
microorganismos. Os agentes promotores da
estabilizao macromolecular ou fixao so
denominados Fixadores. Os fixadores podem ser
divididos didticamente em duas categorias: agentes
fsicos (congelamento, calor mido e seco, micro-
ondas, dessecao) e qumicos. A fixao qumica
ocorre pelo emprego de substncias que reagem com
determinados stios biomacromoleculares estabilizando
as mesmas. Esta estabilizao pode levar a
desnaturao das protenas e se esta for aguda e
irreversvel, a molcula sofrer o efeito de coagulao,
com profundas modificaes nas suas cadeias. Quando
este evento ocorre, existe distoro das
macromolculas, o que modifica profundamente toda
a morfologia celular in vivo. Este evento o que
acontece quando usamos o etanol como agente de
fixao. O etanol afeta as protenas expondo seus
grupos hidrofbicos, o que a torna solvel em gua,
distorcendo a morfologia celular, sem promover
amarraes macromoleculares (no so adicionados)
entre as protenas. Assim, o etanol considerado
Fixador No Aditivo e no deve ser utilizado nesta etapa
para da preparao citolgica. Os Fixadores Aditivos
estabilizam as macromolculas pela formao de
ligaes cruzadas entre as macromolculas estruturais,
preservando a configurao terciria e quaternria das
protenas, por exemplo. Para que esta amarrao
macromolecular ocorra, molculas dos fixadores so
gastas para a formao das pontes cruzadas e por
tanto, so adicionados s protenas, lipdeos, cidos
nucleicos etc. Como exemplos de fixadores aditivos
temos o paraformaldedo, glutaraldedo, tetrxido de
smio, acrolena, os quais so os mais comumente
utilizados para as tcnicas de microscopia de luz e
eletrnica.
Preparaes Celulares Existem diferentes
tipos de preparao citolgica de acordo com o material
de estudo. Em geral clulas livres como sangue,
espermatozides e bactrias so preparados segundo
a tcnica do esfregao. Nesta tcnica coloca-se uma
gota de fludo sobre a extremidade de uma lmina e
com outra se escorrega o fludo em direo
extremidade oposta formando um filme delgado de
clulas. A Raspagem ou espalhamento consiste na
retirada de clulas de um epitlio, como a mucosa oral
ou vaginal por meio de raspagem com esptula. Neste
tipo de preparao a forma original da clula epitelial
no preservada. Outras preparaes devem ser
consultadas como a Montagem Total, Esmagamento
e Decalque. A preparao citolgica mais comumente
utilizada , sem dvida, o Corte Histolgico. Esta
preparao pode ser empregada tanto para a
microscopia de luz, como para a microscopia eletrnica
de transmisso, sendo que na ltima tcnica, vrias
etapas e reagentes so modificados. O corte histolgico
permite no somente a clula, como tambm conjuntos
de clulas no mesmo tecido e tecidos diferentes. Logo
aps a fixao, o material celular deve passar pelo
processo de desidratao em gradiente de etanol (70
12
Figura 7: Clula digestiva de Pachycondyla (Neoponera) villosa, tcnica de PAS, Caetano, F.H.. Figura 8: Brnquia
de corimbat, Prochilodus lineatus, tcnica de Picrosirius Red, Pereira, B.F. & Caetano, F.H.. Figura 9: Brnquia
de corimbat, Prochilodus lineatus, tcnica de Prata Amoniacal, Pereira, B.F. & Caetano, F.H.. Figura 10: Ventrculo
de vespa Mischocyttarus cerberus stix, tcnica de ATPase, indicada pela seta, Caetano, F.H.. Figura 11: Escama
de dourado, Brachyplatystoma flavicans, tcnica de Feulgen, Pereira, B.F. & Caetano, F.H.. Figura 12: Escama
de dourado, Brachyplatystoma flavicans, tcnica de Azul de toluidina, Pereira, B.F. & Caetano, F.H.. Figura 13:
Mitocndrias na musculatura visceral da cabea de Dinoponera australi, tcnica de Succinato Desidrogenase
(SDH), Caetano, F.H.

13
de varredura), ao contrrio da lente ocular do
microscpio de luz, uma vez que a retina humana no
tem capacidade de formao de imagem por meio de
eltrons. Desta maneira, a formao da imagem ao
microscpio eletrnico poder ser feita sobre uma tela
fluorescente (Ecran) ou tubo de raios catdico (TV),
dependendo do tipo de microscpio eletrnico. Desta
maneira no observamos imagens coloridas ao
microscpio eletrnico, mas sim diferentes tons desde
o negro at o branco ou diferena de contrastao.
Basicamente existem dois tipos de microscpios
eletrnicos: transmisso e varredura.
Microscpio Eletrnico de Transmisso
(MET ou TEM)
O feixe de eltrons acelerado e desprendem-
se do filamento de tungstnio devido a uma diferena
de potencial entre 20 e 120 KV submetidos a um
sistema de ultravcuo na casa de 108 Torr. Como os
eltrons saem de maneira desordenada pelo ctodo
para o nodo, na bobina condensadora estes so
concentrados e conduzidos a um s ponto sobre a
amostra. A amostra muito fina, chamadas de cortes
ultrafinos (20 a 400nm de espessura) e os eltrons
tero maior facilidade de atravessar em certos pontos
e aparecero em branco na imagem final
(eletronlcido). Aqueles que foram totalmente refletidos
formaro as reas negras (eletrondenso) na imagem
final, sendo os parcialmente refletidos responsveis
pelos diferentes tons de cinza (diferenas de
eletrondensidades). Aps a amostra, os eltrons so
ampliados pela bobina objetiva e so novamente
ampliados pela bobina projetora, a qual faz com que
estes incidam sobre o Ecran geralmente revestido com
sulfeto de zinco. Assim, o MET produz uma imagem
bidimencional do interior das clulas.
Microscpio Eletrnico de Varredura (MEV
ou SEM)
O microscpio de varredura funciona de
maneira similar ao de trasmisso. A principal diferena
consiste na presena de bobinas de varredura
(defletoras) a qual faz o feixe de eltrons varrer a
superfcie da amostra ponto por ponto em linhas
paralelas. Destra maneira os eltrons no atravessam
a amostra e ao incidir sobre esta, so produzidos
eltrons secundrios, os quais so colhidos pelo coletor,
amplificados e convertidos em pontos de maior ou
menor intensidade luminosa em um tubo de raios
catdicos (TV). Em geral as amostras so recobertas
com uma delgada camada de ouro ou platina para a
produo de eltrons secundrios. Assim o MEV produz
uma imagem tridimensional da superfcie celular. Apesar
das clulas poderem ser observadas vivas ao
microscpio, na maioria dos estudos de microscopia,
as clulas devem passar por diferentes preparaes
para garantir sua preservao e identificao de
organelas e reaes qumicas de interesse.
Fixao Biolgica A fixao consiste na
preservao definitiva das clulas, devido a
estabilizao e insolubilizao dos componentes
macromoleculares (protenas, cidos nucleicos,
lipdeos), paralisando o metabolismo celular,
preservando a morfologia. Desta maneira, constitui uma
das etapas mais importantes para estudo da clula.
Assim a fixao tende a evitar a autlise e a ao de
microorganismos. Os agentes promotores da
estabilizao macromolecular ou fixao so
denominados Fixadores. Os fixadores podem ser
divididos didticamente em duas categorias: agentes
fsicos (congelamento, calor mido e seco, micro-
ondas, dessecao) e qumicos. A fixao qumica
ocorre pelo emprego de substncias que reagem com
determinados stios biomacromoleculares estabilizando
as mesmas. Esta estabilizao pode levar a
desnaturao das protenas e se esta for aguda e
irreversvel, a molcula sofrer o efeito de coagulao,
com profundas modificaes nas suas cadeias. Quando
este evento ocorre, existe distoro das
macromolculas, o que modifica profundamente toda
a morfologia celular in vivo. Este evento o que
acontece quando usamos o etanol como agente de
fixao. O etanol afeta as protenas expondo seus
grupos hidrofbicos, o que a torna solvel em gua,
distorcendo a morfologia celular, sem promover
amarraes macromoleculares (no so adicionados)
entre as protenas. Assim, o etanol considerado
Fixador No Aditivo e no deve ser utilizado nesta etapa
para da preparao citolgica. Os Fixadores Aditivos
estabilizam as macromolculas pela formao de
ligaes cruzadas entre as macromolculas estruturais,
preservando a configurao terciria e quaternria das
protenas, por exemplo. Para que esta amarrao
macromolecular ocorra, molculas dos fixadores so
gastas para a formao das pontes cruzadas e por
tanto, so adicionados s protenas, lipdeos, cidos
nucleicos etc. Como exemplos de fixadores aditivos
temos o paraformaldedo, glutaraldedo, tetrxido de
smio, acrolena, os quais so os mais comumente
utilizados para as tcnicas de microscopia de luz e
eletrnica.
Preparaes Celulares Existem diferentes
tipos de preparao citolgica de acordo com o material
de estudo. Em geral clulas livres como sangue,
espermatozides e bactrias so preparados segundo
a tcnica do esfregao. Nesta tcnica coloca-se uma
gota de fludo sobre a extremidade de uma lmina e
com outra se escorrega o fludo em direo
extremidade oposta formando um filme delgado de
clulas. A Raspagem ou espalhamento consiste na
retirada de clulas de um epitlio, como a mucosa oral
ou vaginal por meio de raspagem com esptula. Neste
tipo de preparao a forma original da clula epitelial
no preservada. Outras preparaes devem ser
consultadas como a Montagem Total, Esmagamento
e Decalque. A preparao citolgica mais comumente
utilizada , sem dvida, o Corte Histolgico. Esta
preparao pode ser empregada tanto para a
microscopia de luz, como para a microscopia eletrnica
de transmisso, sendo que na ltima tcnica, vrias
etapas e reagentes so modificados. O corte histolgico
permite no somente a clula, como tambm conjuntos
de clulas no mesmo tecido e tecidos diferentes. Logo
aps a fixao, o material celular deve passar pelo
14
Figura 1: Glndula ps farngea de Dinoponera australis. MEV. Caetano, F.H..

Figura 2: Glndula ps farngea de Dinoponera australis. MET. Caetano, F.H..

15
a 100%) dependendo da tcnica. Neste caso o etanol
no influncia mais macromolculas, uma vez que as
ligaes cruzadas j foram estabelecidas. Aps a
desidratao, o material ento embebido em resina
plstica (glicol metacrilato) A obteno dos blocos
histolgicos conseguida pela mistura de catalizador
resina contendo tecido, a qual depositada em molde
plstico. A variante mais antiga e, e no menos
eficiente utiliza a embebio em parafina e xilol aps a
desidratao. Os blocos histolgicos so
encaminhados ao micrtomo, o qual ir produzir
seces delgadas (4-8m) as quais sero recolhidas
em lminas de vidro e submetidas s tcnicas de
citoqumica para a microscopia de luz.
Citoqumica Tendo em vista o baixo peso
molecular dos componentes celulares, a visualizao
dos compostos orgnicos dificultada devido ao
pequeno contraste. Desta maneira, os cortes
histolgicos aps a microtomia so incolores e a rea
da biologia a qual estuda os mtodos de produzir
colorao especfica em tecidos celulares e
subcelulares conhecida como citoqumica. Muitos
corantes funcionam de acordo com sua caracterstica
cida ou bsica. Na verdade os corantes cidos so
aqueles que carregam carga negativa, por tanto
aninicos. Como exemplo de corantes aninicos temos
a eosina, Sirius Red (Direct Red 80), azul de bromofenol
e o xylidine de ponceau. Os corantes bsicos por sua
vez apresentam cargas positivas, sendo por tanto
catinicos. Dentre os corantes catinicos vale ressaltar
a hematoxilina, azul de toluidina e o azul de Alcian. A
colorao citoqumica mais usual, geralmente aplicada
a clulas e tecidos a hematoxilina e eosina. Assim,
para tornar claro o conceito de basofilia e acidofilia este
corante ser empregado no exemplo a seguir:
- basofilia: o substrato encontra-se carregado
negativamente (aninico, cido) e reage intensamente
com o corante carregado positivamente (catinico,
bsico). Portanto, o ncleo carregado negativamente
devido aos fosfatos (PO42-) dos cidos nucleicos (cido,
aninico) corado pela hematoxilina (catinica) gerando
basofilia nuclear, com tonalidade roxa.
- acidofilia: o substrato encontra-se carregado
positivamente (catinico, bsico) e reage com o corante
carregado negativamente (cido, aninico). Assim, em
16
determinados caso o citoplasma rico em aminocidos
ionizados (NH3+) corado pela eosina (aninica),
produzindo acidofilia citoplasmtica, com tonalidade
rseo-alaranjada. Utilizando este principio alguns
corantes reagem especificamente a certos substratos,
como o xylidine de ponceau e azul de bromofenol, os
quais demonstram a presena de protenas totais
(grupos NH3+) em meio cido (pH 2,5) ou Azul de
Toluidina e o Azul de Alcian os quais podem demonstrar
glicosaminoglicanos sulfatados (SO 4 -2 /SO 3 - ) e
carboxililados (COO) dependendo do pH em que a
soluo for preparada. Outros tipos de tcnicas
citoqumicas empregam a hidrolise cida para a ruptura
de ligaes covalentes. Dentre elas cabe mencionar
as tcnicas do cido peridico de Schiff (PAS) e
Feulgen. No PAS, utiliza-se o cido peridico (HIO4)
para promover a ruptura das ligaes 1-2glicol em
polissacardeos neutros (glicognio, amido,
glicoprotenas). Com a quebra destas ligaes produz-
se radicais aldedos na molcula do polissacardeo.
Estes radicais so ento evidenciados pela adio do
reativo de Schiff, o qual um on metlico, havido por
grupos aldedo o qual se precipita com a tonalidade
magenta. Seguindo o mesmo principio, na reao de
Feulgen, utiliza-se o cido clordrico, porm para a
remoo de bases pricas (adenosina e guanina) do
DNA. Com a depurinao do DNA, formam-se grupos
aldedos no local e com a conseguinte utilizao do
reativo de Schiff, este evidenciar DNA tambm pela
formao de precipitado magenta. Como as tcnicas
citoqumicas podem atuar com diferentes em
grupamentos diferentes na clula e tecido, algumas
combinaes podem ser obtidas para identificao de
compostos. Este o caso da combinao da tcnica do
Azul de Alcian (corante catinico) e o do PAS, onde os
polissacardeos cidos apresentaram colorao azul e
os neutros magenta. Como ltimo exemplo de princpios
citoqumicos bsicos, existem coloraes as quais
utilizam elementos altamente hidrofbicos (apolares) para
evidenciar componentes lipdicos como os triglicerdeos.
Neste caso, os corantes como o Sundan Black B ou
Sudan III so diludos em etanol e ao entrar em contado
com as substncias lipdicas no tecido, este
imediatamente interagem hidrofobicamente formando,
respectivamente, precipitado negro ou alaranjado.
Figura 1: Ovrios de corimbat, Prochilodus lineatus. MEV. Caetano, F.H.

Figura 2: Ovrio de peixe. ML. Caetano, F.H..

17
18
I. INSTRUMENTOS DE ESTUDO DAS CLULAS

1. Microscpio de luz

Legendas:

A- E- I-
B- F- J-
C- G- K-
D- H-

19
20
2. Microscpios de luz e eletrnicos

1) Microscpio de luz(ML) 2) Microscpio Eletrnico de 3) Microscpio Eletrnico de

Transmisso(MET) Varredura(MEV)

1._____________________________________________________________________________________

2._____________________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________________

7._____________________________________________________________________________________

8._____________________________________________________________________________________

9._____________________________________________________________________________________

21
III Primeiro Contato com as Clulas:
Procariontes e Eucariontes
Segundo as hipteses mais atuais sobre a teoria
celular, a clula ancestral a todos os organismos vivos
era extremamente simples, as protoclulas. Tais
protoclulas inicialmente seriam envoltrios de cidos
graxos simples (parte integrante dos fosfolipdeos)
contendo no seu interior gua e uma fita simples de RNA.
Tais protoclulas, quando maduras teriam nucleotdeos
incorporados a fita simples de RNA, tornando esta
molcula uma fita dupla e estvel. Como a terra primitiva
era fria a 3,7 bilhes de anos (70% da intensidade luminosa
atual) e com intensa atividade vulcnica, os processos
geofsicos podem ter auxiliado nos mecanismos de
reproduo. Assim, as clulas teriam seu RNA duplo
quando junto dos corpos de gua fria, porm prximos a
regies vulcnicas, com gua quente, o RNA duplo a fita
dupla se separava. Com a adio de molculas lipdicas
livre no meio e o retorno as regies mais frias, acredita-
se que estas protoclulas se dividiriam e incorporariam
novos nucleotdeos tornando-se assim as fitas de RNA
duplas novamente. Deste modo ssim, o processo de
diviso se repetia na dependncia dos ciclos de calor e
frio. Com a descoberta de fragmentos de RNA com
capacidade sinttica, as ribozimas, tais fragmentos
atuariam como catalisadores (enzimas), substituindo os
ciclos de calor e frio. As ribozimas duplicariam as
molculas de RNA o que permitia as protoclulas
dividirem-se sozinhas. Outras ribozimas catalisam
reaes qumicas a partir de nutrientes do meio e,
portanto, tem incio o metabolismo. Como o ambiente
encontrava-se rico em aminocidos, como demonstrado
pelo experimento de Miller e Urey na dcada de 50,
complexos de ribozimas iniciaram a leitura das
sequencias de nucleotdeos do RNA em cadeias
polipeptdicas. Tais cadeias polipeptdicas ou protenas
toram-se catalisadores mais eficientes, potencializando
as tarefas metablicas. Como previsto pelo modelo da
seleo natural de Charles Darwin, estas protoclulas
vo sendo selecionadas devido a sua eficincia na
substituio de ribozimas por protenas (enzimas), as
quais assumem praticamente todas as tarefas
celulares, includo sua associao com a membrana
lipdicas, tornando ainda mais eficiente a aquisio
seletiva de substncias do ambiente. Complexos
enzimticos iniciam a substituio da ribose por
desoxirribose e da base uracila por timina, tornando a
molcula hereditria mais estvel, nascendo assim o
DNA. O RNA, ainda imprescindvel e torna-se o elo
entre a informao gentica armazenada no DNA e as
protenas. Tais clulas bastante semelhantes aos
procariontes atuais conquistam praticamente todos os
nichos disponveis e reinaram absolutas por bilhes de
anos at evolurem em clulas mais complexas, com
compartimentos metablicos distintos (organelas) e a
informao gentica protegida por envoltrios
membranoso, constituindo os eucariontes.
Clulas Procariontes No grupo dos
procariontes (pro= primeiro; cario= ncleo), encontramos
as bactrias e cianofceas. Tais clulas so pobres em
membranas, com pouqussimas endomembranas. A
principal membrana a membrana plasmtica, a qual
22
semelhante a dos eucariotos, apesar de apresentar certos
fosfolipdeos exclusivos como cardiolipina e protenas
(enzimas) associadas a cadeia respiratria (respirao
bacteriana) nos aerbios, alm de lipopolissacardeos.
Tais enzimas esto particularmente concentradas em
pequenas e irregulares invaginaes (endomembranas),
o mesossomo, o qual participa da formao dos septos
durante a diviso por bipartio. Externo a membrana
plasmtica, encontra-se a parede bacteriana (20nm
espessura), composta principalmente por proteoglicanos
e glicosaminoglicanos com funo de proteo mecnica
e morfolgica. Os procariotos no apresentam
citoesqueleto. Algumas bactrias so dotadas de
capacidade de movimentao com estruturas
denominadas de flagelo, o qual distinto do encontrado
em eucariotos, composto pela protena flagelina. Alm
do flagelo, podem-se observar filamentos rgidos e
proteicos, as fimbrias ou pilli, sendo o pilus sexual
importante para reproduo sexuada. O citoplasma no
apresenta endomembranas organizadas em
compartimentos (organelas), excetos as lamelas
paralelas com pigmento fotossinttico, nos
fotossintetizantes. No citoplasma encontram-se os
ribossomos associados ao RNAm formando polissomos
livres. Desprotegido no citoplasma encontra-se o DNA
bacteriano, formando o nucleide. Este DNA circular
e constitui o nico cromossomo bacteriano, desprovido
de protenas empacotadoras (histonas). Existem
pequenos fragmentos de DNA extracromosso, os
plasmdeos, os quais tem duplicao independente e
so trocados durante a reproduo sexuada.
Clulas Eucariontes Os eucariontes (eu=
verdadeiro; cario= ncleo) apresentam dois
compartimentos distintos: um delimitado pela membrana
plasmtica, o citoplasma e outro pelo envoltrio nuclear,
o ncleo. A clula eucarionte rica em endomembranas,
formando compartimentos metabolicamente distintos
otimizando as atividades metablicas. Cada
compartimento distinto (organelas). Contudo, algumas
diferenas entre procariotos e eucariotos, principalmente
no tocante ao ncleo, devem ser inicialmente destacadas
e outras se tornaro mais pronunciadas ao longo do
curso de biologia celular.
1 O DNA eucaritico geralmente apresenta vrios
cromossomos e o eucarioto mais simples tem cerca de
dez vezes mais DNA que o procarioto mais complexo.
2 O DNA eucarioto est organizado e compactado por
protenas (histonas).
3 A estrutura de um gene eucarioto mais complexa e
uma protena derivada de sequencias descontinuas de
DNA. Nos procariotos a sequencia de aminocidos de
uma protena reflexo direto da sequencia de DNA.
4 As clulas eucariticas sofrem mitose e os
cromossomos duplicados (replicados) so igualmente
passados para clulas filhas com auxlio do citoesqueleto.
Nos procariotos a diviso no mittica e sem
participao do citoesqueleto. Nos procariotos a diviso
fisso binria ou bipartio. Nos eucariotos, alm da
mitose,temos brotamento (leveduras) e fisso binria
(protozorios).
5 os procariotos so unicelulares, por sua vez
os eucariotos podem ser unicelulares, coloniais e
multicelulares.
Figura 1: Bactrias no estmago de formiga. Caetano, F.H.. Figura 2: Bactrias no estmago de Cephalotes
pusilus. Caetano, F.H..

Figura 3: Bactrias no lmen do estmago de Cephalotes pusilus. Caetano, F.H..

Legendas:
A: B:
C: D:
E:

23
IV - Membrana Plasmtica: Especializaes
As biomembranas tem funo de promover
uma barreira seletiva entre o meio intra e extracelular,
regulando molecular e ionicamente o interior da clula.
Lipdeos de Membrana Os mais abundantes
lipdeos de membrana so os fosfolipdeos. Estes so
compostos anfipticos, ou seja, com uma poro
hidroflica (polar) e outra hidrofbica (apolar)
representada pelas cadeias de cidos graxos. Uma
das cadeias insaturada (uma dupla ligao) o que
causa uma pequena flexo e influencia na capacidade
de agrupamento e interao. Se os cidos graxos
fossem todos saturados (ligaes simples), ocorreria
a reduo na fluidez. Devido a natureza anfiptica das
molculas lipdicas, estas tm capacidade de formar
espontaneamente bicamadas em soluo aquosa.
Como demonstrado em biomembranas artificiais, a
bicamada lipdica uma mosaico bidimensional e os
fosfolipdeos so capazes de se difundir livremente,
flexionar 180f, girar 360f ou migrar de uma monocamada
para outra, no raro movimento de flip-flop. Alm dos
fosfolipdeos, a bicamada lipdica apresenta colesterol,
esfingolipdeos e glicolipdeos. O colesterol torna a
bicamada menos deformvel e permevel a molculas
hidrossolveis. Os fosfolipidios da monocamada interna
diferem daqueles da monocamada externa Portanto a
bicamada lipdica assimtrica, apresentando carga
negativa na sua face interna (citoslica).
Protenas de Membrana As protenas
constituem o principal componente da atividade
metablica das biomembranas. A quantidade bastante
varivel dependendo do tecido, mas em mdia, 50%
em massa de uma biomembrana composta por
protenas. Da mesma forma que os fosfolipdeos, as
protenas tambm podem estar complexadas com
polissacardeos, sendo que a cobertura glicdica nas
glicoprotenas est sempre voltada para o meio externo.
As protenas de membrana so classificadas
em dois grandes grupos: I- protenas perifricas ou
extrnsecas podem ser removidas quando da utilizao
de tratamentos brandos, como modificao de pH e
concentrao inica. II- protenas integrais ou
intrnsecas, geralmente so removidas por tratamentos
drsticos que levam a degradao da membrana
(detergente). As protenas perifricas esto sempre em
associao a uma protena integral da membrana. As
protenas integrais esto em ntimo contato com a
bicamada lipdica e podem ser divididas em: protenas
transmembrana atravessam completamente a
bicamada lipdica apresentando pores hidroflicas em
ambos os lados da membrana plasmtica. So
molculas anfipticas, apresentando dois domnios
hidroflicos (face citoslica e extena) e um hidrofbico
(interior da membrana). No domnio hidrofbico, os
aminocidos esto organizados na configurao
secundria (-hlice hidrofbica) deixando as cadeias
laterais hidrofbicas livres em contato com os cidos
graxos dos fosfolipdeos. Estas podem atravessar uma
nica vez a membrana (unipasso) ou atravessar a
membrana vrias vezes (multipasso), sendo estas
24
responsveis por canais ou poros hidroflicos para a
passagem de molculas (protenas carreadoras e
canal). Protenas associadas membrana so
encontradas na superfcie citoslica associadas a
metade interna (monocamada) da bicamada lipdica.
Estas apresentam a -hlice anfiptica, intercalando
aminocidos com cadeias laterais hidroflicas (voltada
para o citosol) e hidrofficas (voltada para o interior da
bicamada). Protenas ligadas atravs de lipdeos
so encontradas sobre a superfcie citoslica ou
extracelular ancoradas na monocamada lipdica por
meio de ligaes entre o aminocido terminal com um
cido graxo (ligao amida) ou um grupo prenila
(ligao tioster entre a cistena e o grupo prenila).
As protenas de membrana atuam como
transportadoras (bomba de Na+/K+), ncoras da celula
e citoesqueleto (integrinas e caderinas), receptores
(receptor de fator de crescimento, neurotrasmissores
e hormnios), enzimas (adenilato ciclase). A membrana
plamtica forma uma estrutura trilaminar com duas
camadas eletrondensas separadas por uma
eletronlucida, a qual foi denomina em 1961 por
Robertson de Unidade de Membrana ou Membrana
Unitria. Esta estrutura trilaminar decorrente da
deposio diferenciada do tetroxido de smio sobre as
regies hidroflicas da bicamada lipdica.
Glicoclice O glicoclice ou glicoclix representa a
cobertura de hidratos de carbono sobre a superfcie da
monocamada externa da membrana plasmtica. Ela
no uma camada separada, mas sim uma extenso
da monocamada externa contendo os acares dos
glicolipdeos, glicoprotenas, alm de diversos
proteoglicanos. O glicoclice atua como proteo
mecnica, qumica, alm de prevenir o contato de
bactrias diretamente sobre a membrana plasmtica,
ao redor de toda a clula. Desta maneira, o glicoclice
atua no reconhecimento celular, na inibio por contato,
na adeso clula-clula e clula matriz.
Especializaes de Membrana A membrana
plasmtica apresenta algumas especializaes
morfolgicas para aumento da superfcie de contato,
aumentando assim sua capacidade absortiva ou
secretora. Para exemplificar algumas destas
especializaes, ser utilizada a clulas epitelial de
revestimento, ou seja clulas associadas com tudo que
entre e sai do organismo como modelo.
I Microvilosidades So especializaes
morfolgicas digitiformes, normalmente observadas no
polo apical das clulas dos metazorios. So
responsveis pelo aumento da superfcie de troca entre
a clula e a luz. Esta sustentada por citoesqueleto
central, formado por filamentos de actina. Tais
filamentos, quando externos microvilosidade ficam
entrelaados ao cinturo de actina da trama terminal
apical. Ao microscpio de luz a microvilosidades
formam uma camada contnua e estriada, chamada de
bordo em escova. So bastante abundantes no
intestino, tbulos renais, glndulas de insetos e
hepatopncreas de crustceos.
II Estereoclios Semelhantes as
microvilosidades, estes tambm so apicais e
Figura 1: Junes do tipo gap em glndula ps-faringe de O. bauri. Caetano, F.H..

Legendas:
A: B: C:
D: E:
Figura 2: Membrana plasmtica em hepatopncreas de Callinectes danae. Zara, F.J. & Caetano, F.H..

Legendas:
A: B: C:
D: E:

25
aumentam a superfcie celular. A principal diferena
que estes no apresentam citoesqueleto no seu interior
e estes podem ser ramificados, o que no acontece
com as expanses digitiformes microvilares. So
comumente observados no epiddimo.
III Invaginaes da Membrana
Plasmtica Basal Formam um labirinto basal
extremamente irregular associada ao aumento de
trocas entre a clula e o meio externo. Sua profundidade
e dilataes podem ser modificadas de acordo com o
estado fisolgico celular. Associado as invaginaes
da membrana plasmtica basal, encontra-se a lmina
basal. Esta lmina produzida pela prpria clula
epitelial e funciona como um filtro macromolecular,
selecionando as molculas que entraro em contato
com as invaginaes, alm de formar o elo entre o
tecido epitelial e o tecido conjuntivo adjacente. A lmina
basal constituda pela matriz extracelular rica em
colgeno (tipo IV), glicosaminoglicanos, proteoglicanos
e glicoprotenas.

26
Figura 1: Interdigitaes do epitlio de escama de corimbat, Prochilodus lineatus. Caetano, F.H.. Figura 2:
Labirinto basal em tbulo de Malpighi de Atta. Arab, A.J.. Figura 3: Contato focal (seta) em glndula ps-farngea
de D. australis. Caetano,F.H..

Figura 4: Estmago de formiga,Cephalodes. Caetano F.H. Figura 5: Intestino grosso de rato wistar. Remdio,
R.N. & Caetano, F.H.

Legendas:
A: B:
D: D:
E:

27
V Citoesqueleto
O citoesqueleto composto por protenas
polimerizveis ou no e que executam diferentes
funes na clula. A mais bvia a manuteno da
forma da clula, mas alm disso, o citoesqueleto
responsvel pelo posicionamento das organelas
citoplasmticas, movimentao das vesculas entre os
diferentes compartimentos e a movimentao da clula
como um todo. Presentes no ncleo e citoplasma, o
citoesqueleto tem como elementos principais os
microtbulos, filamentos de actina, as miosinas e os
filamentos intermedirios. Tanto os microtbulos, como
os filamentos de actina apresentam capacidade de
polimerizao e despolimerizao e, portanto,
envolvidos primariamente na movimentao celular e
intracelular. Por sua vez, filamentos intermedirios so
mais estveis relacionados com funo de sustentao.
Microtbulos Ao MET, os microtbulos so
estruturas filamentosas, cilndricas e longas com 25nm
de dimetro. Estes so formados por dmeros de -
tubulina as quais esto arranjadas formando um
filamento longo o protofilamento. Em corte transversal,
um microtbulo formado por 13 protofilamentos. Em
constante reorganizao, o microtbulos nasce a partir
de uma regio citoplasmtica rica em dmeros de
tubulina conhecida como Centrossomo. O centrossomo
funciona como um ponto de partida para a nucleao e
direcionamento do microtbulo para a periferia ou
correta direo, sendo que para isso, existe um
complexo de protenas em anel a -tubulina. A
extremidade que cresce pela adio dos dmeros
denominada de extremidade positiva ou mais (+), em
oposio aquela onde ocorre a despolimerizao, a
extremidade negativa ou menos (-). Segundo alguns
autores, a estabilidade de um microtbulo pode ser
mantida por ons clcio (microtbulos de curta durao
como os fusos mitticos) ou protenas MAP protena
associada a microtbulo (microtbulos mais estveis,
como clio e flagelos). Nos centros de polimerizao
das tubulinas, em geral nas clulas animais ocorre
presena de corpos pares contendo arranjos especficos
de microtbulos, os centrolos.
Centrolos Encontrado prximo ao complexo
de Golgi e do ncleo, os centrolos marcam a regio
do centrossomo onde ocorre a polimerizao dos
microtbulos. Nem sempre esto presentes nas
clulas, porm os centrossomos sim, sendo uma regio
amorfa tambm denominada de centro de organizao
microtubular. Em geral os 2 centrolos esto dispostos
em ngulo reto entre si e so constitudos por nove
feixes em trincas ou tripletes de microtbulos paralelos
totalizando 27 microtbulos. Em cada triplete encontra-
se um microtbulo completo (microtbulo A) com 13
protofilamentos e dois incompletos: o B com 10 e o C
com 11 protofilamentos. Estes ltimos compartilham
dois ou trs protofilamentos, sendo o B com o A e o C
com o B. Cada trinca ou triplete est ligada uma a
outra por pontes proteicas entre o microtbulo A e o C
de outro triplete. Estruturas similares a centrolos so
encontradas na base dos clios e flagelos e so
denominadas de corpsculos basais. Tais corpsculos
funcionam como ncoras e comum a presena de
radcula ou rootlet para ampliar o sistema de
ancoragem. Os centrolos duplicam-se antes da diviso
celular, portanto sua origem sempre a partir de um
par pr-existente.
Filamentos de Actina Distribuem-se como
uma trama ou rede ao redor das clulas eucariontes
atuando nos processos de migrao celular, fagocitose
e diviso celular. A actina apresenta a capacidade de
polimerizao e despolimerizao das suas molculas,
atuando como musculos intracelulares. Contudo, a
actina tambm pode permanecer polimerizada, quando
da associao com protenas de estabilizao ou
protenas de ligao actina. Quando associadas a
essas protenas, os filamentos de actina formam um
esqueleto estvel e permanente, (encontrado no interior
das microvilosidades, no pice das clulas formando a
trama terminal associada a zona de ocluso) Diversas
protenas esto associadas a actina. A associao da
actina com protenas motoras a associao mais
comum, sendo a principal aquela com a protena a
miosina (clula muscular).
Miosinas As miosinas formam uma famlia de
protenas motoras dependentes da actina, as quais
promovem deslizamentos macromoleculares levando
a modificao da forma da clula ou transporte
intracelular de vesculas. Esta famlia de protenas tem
como caracterstica principal a capacidade de atividade
hidrlise do ATP quando em interao com a actina.
As miosinas esto divididas em duas subfamlias:
miosinas I e II. A miosina I ocorre em todas as clulas
eucariontes e sua molcula apresenta uma cadeia leve
globular ou cabea e uma cadeia pesada em basto
ou cauda.
Outros Movimentos Celulares As
clulas podem produzir movimento sem a ao da
actina e miosina. Tais movimentos so conseguidos
por meio de microtbulos organizados em clios e
flagelos.
Clios e Flagelos Tanto os clios como os
flagelos utilizam a energia do ATP para seus
movimentos e apresentam na sua estrutura um
complexo proteico envolto por membrana, o axonema.
O axonema composto por nove pares de microtbulos
perifricos e dois microtbulos centrais (9+2). Os
microtbulos perifricos, as dades ou dupletes,
apresentam um microtbulo A completo (13
protofilamentos) e outro, B, incompleto (10 ou 11
protofilamentos). A ligao entre as dades ocorre por
meio de pontes proteicas de nexina, entre o microtbulo
A e o B de outra dade. Os 9 pares de microtbulos
perifricos esto em contato com uma bainha interna
associada ao par central, formado por microtbulos
completos (13 protofilamentos), via projees radiais
que partem do microtbulo A. Ainda associado a este
microtbulo, existem dois braos da protena dinena,
os quais hidrolisam o ATP, produzindo o deslizamento
dos microtbulos B adjacentes, produzindo a curvatura
do clio ou flagelo. As principais diferenas entre os
clios e os flagelos so:
28
Figura 1: Espermatognese de Odonata. Landim,C.C.. Figura 2: Flagelo de espermatozide de sava, Atta.
Caetano, F.H.. Figura 3: Corpsculo basal e radcula em clulas digestivas de anmona do mar Bunadossoma
caissarum. Zara, F.J..

Figura 4: Espermatognese de Odonata. Landim, C.C..

Legendas:
A: B:
C:

29
- clios so mltiplos e apicais nos epitlio, curtos e
realizam movimento em chicote.
- flagelos so nicos (salvo alguns protozorios), longos
e realizam movimento de onda quase sinuside.
Movimentos Intracitoplasmticos Os
deslocamentos de vesculas entre organelas, diferentes
compartimentos celulares (endossomos) ou mesmo a
exocitose, so garantidos graas a protenas motoras
associadas aos microtbulos e filamentos de actina.
Alm das vesculas, partculas, mitocndria e organelas
menores tambm so transportadas por protenas
motoras. Essas protenas so organizadas em duas
pores: o componente motor (cadeia pesada) o qual
se prende ao microtbulos e o componente adaptador
(cadeia leve) o qual extremamente diversificado e
especfico a carga da vescula a ser transportada. As
protenas motoras utilizam a hidrlise do ATP (no
componente motor) para realizar o transporte.
Associadas aos microtbulos, existem duas famlias
e protenas motoras: as dinenas e as cinesnas
(quinesinas). Ambas utilizam o processo de
polimerizao dos microtbulos para deslocar sua
carga.
Filamentos Intermedirios Este elemento
apresenta capacidade de polimerizao e
despolimerizao. Uma vez polimerizados,
permanecem por longo tempo no citoplasma, sendo
mais resistentes e durveis que os outros elementos.
30
Recebeu o nome de filamentos intermedirios devido
ao dimetro de 10nm, ou seja, intermedirio entre os
microtbulos (25nm) e a actina (7nm). Os filamentos
intermedirios so caractersticos das clulas animais,
formando uma rede intrincada do centro a periferia,
sendo nesta ltima ancorados a membrana plasmtica
nas especializaes de adeso clula-clula,
desmossomos e clula-matriz, hemidesmossomos.
Como so estveis, so especializados na dissipao
das foras de tenso, sendo por isso, particularmente
abundantes em clulas localizadas em regies de atrito.
Sem este elemento, tais clulas sofreriam ruptura,
desorganizando o epitlio. Os filamentos intermedirios
tm o aspecto de corda de sisal. Cada fita de proteina
fica enrolada sobre a outra, o que aumenta a capacidade
de tenso, Os monmeros dos filamentos
intermedirios pertencem a quatro famlias de protenas
distintas: (1) queratinas, comum nos tecidos epiteliais;
(2) Protenas relacionadas com a vimentina, comuns
no tecido conjuntivo, muscular e clulas nervosas que
constituem a glia; (3) neurofilamentos, comuns nos
neurnios e (4) lminas nucleares, presentes em todas
as clulas animais. Os filamentos intermedirios so
bastante estveis, contudo a lmina nuclear composta
por protenas conhecidas como laminas A, B e C esto
sujeitas a despolimerizao quando fosforiladas e
polimerizao quando desfosforiladas durante a diviso
celular.
Figura 1: Desmossomos em epitlio de escama de corimbat, Prochilodus lineatus. Caetano, F.H.. Figura 2:
Musculatura de perna de G. destructor. Caetano,F.C.. Figura 3: Musculatura da perna de G. destructor. Caetano,
F.H..

Figura 4: Musculatura cardaca de ratos Wistar Castellar, A. & Caetano, F.H..

Legendas:
A: D:
B: Chave:
C:

31
VI - Junes
Adeso Clula a Clula Nos tecidos as
clulas devem ancorar-se umas as outras e a matriz
extracelular. Os elementos que promovem a adeso
fazem parte do glicoclice e so conhecidas como
molculas de adeso celular (CAMs). Dois tipos de
classes de molculas podem ser identificadas: as
independentes e dependentes de clcio. As
independentes de clcio participam do reconhecimento
celular e as dependentes da adeso propriamente e
constituem a especializao de membrana das junes
celulares.
Junes celulares As junes so divididas
didaticamente em trs grupos: bloqueadoras,
ancoradoras e comunicantes
I Junes Bloqueadoras Conhecidas como
juno compacta, oclusiva, tight, zonula ocludens,
constituem uma banda contnua no pice da clula,
cuja funo vedar total ou parcialmente o transito da
rota paracelular a ons e outras molculas. Esta juno
composta por vrias protenas (ocludinas e
claudinas), as quais aproximam a unidade de
membrana de clulas justapostas de maneira
semelhante a um zper ou botes moleculares.
II Junes Ancoradoras So classificadas
em trs: a) juno de aderncia, b) desmossomos,
junes septadas e hemidesmossomos e c)
interdigitaes. A juno aderncia ou zonula (macula)
aderens constitui um cinto de filamentos de actina logo
abaixo da zona de ocluso, denominado trama ou rede
terminal. Este cinto ligado ao cinto de outra clula
por meio de glicoprotenas transmembrana da famlia
das caderinas, em especial a E-caderina, dispostas
no espao intercelular. Alm da funo aderente, nesta
trama terminal que so ancorados os filamentos de
actina do citoesqueleto das microvilosidades. Os
desmossomos formo botes ou rebites moleculares
espalhados ao longo das membranas laterais, na
mesma altura, em clulas vizinhas. Esta juno tem a
funo de distribuir as foras de tenso e so
abundantes em epitlios submetidos a atrito constante
(pele). O elemento do citoesqueleto associado aos
desmossomos so filamentos intermedirios, como a
queratina (pele) e desmina (msculo cardaco). A
queratina, na altura do desmossomo interage com uma
placa proteica, eletrondensa, composta por vrias
protenas dentre elas desmoplaquinas e placoglobinas.
Voltadas para o espao intercelular e ligadas a placa
proteica, existem protenas transmembrana da famlia
das caderinas, sendo as principais as desmoglenas e
desmoglobinas. As junes septadas so pouco
conhecidas e exclusivas de invertebrados. Estas
ocorrem desde Cnidaria at Arthropoda.
Ultraestruturalmente, esta juno composta por
protenas integrais transmembrana as quais unem
sequencialmente as unidades de membrana em clulas
vizinhas, produzindo o aspecto de trilho de trem. Os
hemidesmossomos relembram, na ultraestrutura, o
desmossomo, porm sua composio molecular e
funcional distinta. O hemidemossomo atua na adeso
da clula a lmina basal. O elemento do citoesqueleto
associado a queratina, a qual interage com uma placa
proteica que possui protenas de uma famla distinta a
das caderinas: a integrina. A integrina uma
glicoproteina transmembrana com stios para colgeno,
glicoprotenas e proteoglicanos da lmina basal. As
interdigitaes so sinuosidades encontradas mais
frequentemente no pice celular, justaposta a zona de
aderncia. Tais dobras no apresentam especializao
molecular.
III Junes Comunicantes Conhecidas como
junes gap, tipo fenda, nexons ou em hiato, so muito
frequentes em todos os tipos de epitlios. Estas
junes atuam na comunicao entre clulas vizinhas
permitindo a passagem de molculas como hormnio,
sinalizadores celulares (AMPc) com peso molecular
entre 1000-1500D (1 Dalton = 1/12 da massa do carbono
12 = 1,6605402(10)X10-27). Estas junes podem ser
abertas ou fechadas dependendo da concentrao de
clcio intracelular ou sinalizadores celulares. A juno
gap tem como caracterstica a aproximao das
unidades de membrana de clulas vizinhas. Em cada
nexon existem seis unidades da protena conexina
formando um poro de 7nm, o conexon. O conexon de
uma clula est ligado ao conexon de outra clula e
quando unidos formam um poro hidroflico comum e a
estrutura chamada de nexon.
32
Figura 1: Juno de ocluso (seta) no intestino grosso de rato wistar. Remdio, R.N. & Caetano, F. H..Figura 2:
Desmossomos no epitlio de escama de corimbat, Prochilodus lineatus. Caetano, F.H.. Figura 3: Juno septante
em glndula ps farngea de D. australis. Caetano, F.H.. Figura 4: Juno septante em glndula ps farngea de
D. australis. Caetano, F.H..
Figura 5: Hemidesmossomo em intestino grosso de rato wistar. Remdio, R.N. & Caetano, F. H..

Legendas:
A: B:
C: D:

33
VII Ncleo Interfsico
Nos eucariotos a maior parte do material
gentico armazenador da hereditariedade encontra-se
no ncleo sob a forma de cido desoxirribonucleico ou
DNA. Contudo pequena quantidade desta molcula
encontrada no citoplasma no interior das mitocndrias
e cloroplastos, as quais reproduzem-se
independentemente. O DNA pode ser duplicado
(replicao) em cpias perfeitas para que a clula
possa produzir clulas filhas idntica. O DNA pode ser
tambm convertido em RNA pelo processo conhecido
como transcrio produzindo trs formas bsicas de
RNA: RNAm (mensageiro) RNAt (transportador ou
transferncia) e RNAr (ribossomal). O ncleo
encontrado entre duas mitoses (diviso celular)
denominado ncleo interfsico. durante a interfase
que o DNA transcrito nos diferentes tipos de RNA e
traduzido em protenas. Ainda na interfase, se a clula
necessitar inicia-se a replicao para a entrada na
mitose e, por conseguinte, a produo de duas clulas
filhas. O ncleo interfsico em geral esfrico, porm
de acordo com a morfologia do tecido, este pode ser
achatado, lobulado e estrelado. Alguns podem
apresentar forma das letras C ou S. Em geral as
clulas apresentam um nico ncleo, porm em
hepatcitos podemos ter dois, no msculo estriado
esqueltico, vrios ncleos por clula e nas clulas
gigantes pode ter centenas deles. A estrutura do ncleo
interfsico composta por: envoltrio nuclear ou
envelope, nucleoplasma, cromatina e nuclolo.
Envoltrio Nuclear Assim como a membrana
plasmtica, o envoltrio nuclear somente observado
com o auxlio do microscpio eletrnico de trasmisso
(MET). Este composto por duas unidades de
membrana. Assim errneo a utilizao do termo
membrana nuclear. A unidade de membrana externa
do ncleo normalmente contnua ao retculo
endoplasmtico (RE) e nela normalmente so
observados ribossomos aderidos. Entre a membrana
externa do ncleo e a interna, encontra-se o espao
perinuclear como 10-70nm. Em geral neste espao so
observadas as mesmas protenas observadas no RE.
Quando realizamos ensaios imunocitoqumicos para
protenas, por exemplo, as primeiras marcaes so
observadas no espao perinuclear. A membrana nuclear
interna, na sua face nucleoplasmtica apresenta
protenas que atuam como stios de ligao para a
lmina nuclear. A lmina nuclear parte da matriz
nuclear e composta por uma trama de protenas, as
lminas nucleares A, B e C. A Lmina B est em
contato direto com as protenas do envoltrio interno,
a lmina A faz a ligao entre a cromatina e a Lmina
A. A lmina C no tem sua funo totalmente
esclarecida. O envoltrio interrompido em certos
pontos, promovendo o contado entre as duas unidades
de membrana. Neste local encontramos os poros
nucleares ou complexo poro. O complexo poro mantm
a comunicao entre o ncleo e o citoplasma, fazendo
a seleo do que entra e sai do ncleo. Por estes
canais ocorrem o trfego de RNA e subunidades
ribossomais nuclear ou envelope, nucleoplasma,
exportadas para o citoplasma e a importao de
protenas recm-sintetizadas para o ncleo. Os RNAm
imaturos, trasncritos primrios, no conseguem ser
exportados, o que indica que somente aps
processados (splicing) que conseguem vencer a
barreira nuclear. Desta maneira, os poros so um
importante agente regulador no controle da sntese de
RNAm. O poro nuclear grande, contendo mais de
100 protenas, formando uma estrutura com dimetro
de 100nm. Sua estrutura arredondada composta
por 8 unidades repetitivas. Cada unidade apresenta
duas subunidades em anel (uma citoslica e outra
nucleoplasmtica), uma subunidade colunar ligando as
subunidades em anel, uma subunidade anelar presa
subunidade colunar na poro central do poro e a
subunidade luminal a qual transmembrana e prende
a subunidade colunar ao envoltrio nuclear. Ligadas as
subunidades em anel, existem protenas fiblilares, as
fiblrilas. As fibrilas voltadas para o lado nucleoplasmtico
esto presas unidas a uma protena formando a gaiola
nuclear. Por sua vez, as fiblilas citoplasmticas
apresentam a extremidade livre e atuaro no
direcionamento dos componentes importado para o
ncleo. Pequenas molculas podem passar livremente
o complexo poro. Porm, molculas maiores com
RNAs, protenas e complexos moleculares necessitam
de um sinal apropriado. Para as protenas, o sinal
contm amincidos bsicos (catinicos) na sequncia
-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-. Estas protenas interagem com
fatores citosslicos ou receptores de importao
nuclear outra protenas do citoplasma. A protena a ser
destinada ao ncleo mais receptor de importao
nuclear so conduzidos ao poro com auxilio das
fibrilas. Pela hidrlise de uma molcula de GTP
(guanina trifosfato), o complexo ento ativamente
transportado para o interior do ncleo, sendo o receptor
de importao enviado novamente ao citoplasma. Cabe
ressaltar que diferente de outras organelas, o ncleo
incorpora protenas totalmente dobradas, na sua
configurao nativa.
Cromatina Consiste basicamente de DNA em
diferentes graus de compactao devido a sua
associao com nucleoprotenas. Assim, em eritrcitos
de peixes temos a cromatina extremamente
compactada (ncleos compactos) enquanto que
clulas nos neurnios estas se encontram
extremamente difusa, pouco compactada. A cromatina
compactada no transcrita em RNAs e, portanto, se
tratam de pores inativas do cdigo gentico naquela
clula. Estas pores de cromatina compactada,
eletrondensa ao microscpio eletrnico de trasmisso,
recebem o nome de heterocromatina. O restante da
cromatina difusa, em diferentes formas de relaxamento
e pouco eletrondensa ao microscpio eletrnico de
transmisso, recebe o nome de eucromatina. Neste
tipo de cromatina encontramos as regies do cdigo
gentico que esto sendo lidas nas clulas e,
portanto, transcrevendo RNAs. A heterocromatina pode
ser classificada em dois tipos: constitutiva e facultativa.
A heterocromatina constitutiva encontra-se condensada
34
Figura 1: Epitlio de escama de corimbat, Prochilodus lineatus. Caetano, F.H..

Figura 2: Glndula ps-faringea de D. australis. Cortesia de Caetano, F.H..

Legendas:
A: B:
C: D:

35
em todas as clulas do organismo. Tratam-se de
sequencias altamente repetitivas encontradas nas
extremidades dos cromossomos, prximo aos
centrmeros e ao redor dos nuclolos (heterocromatina
perinucleolar). A heterocromatina facultativa aquela
que se encontra condensada em um tipo celular do
indivduo (heterocromatina) e descondensada em outro
tipo celular. Assim, em termos didticos, sequencias
genticas que so transcritas e traduzidas em enzimas
no pncreas so heterocromatina nos neurnios. Outro
exemplo de heterocromatina facultativa o
cromossomo sexual feminino. As fmeas de mamferos
dois cromossomos X, um deles permanece inativado
nas clulas somticas e em geral associado ao
envoltrio nuclear. Este cromossomo chamado de
cromatina sexual ou corpsculo de Barr.
Organizao da Cromatina no Ncleo
Interfsico Como j mencionado, a cromatina
composta por DNA associado a protenas. No ncleo
interfsico as principais protenas responsveis pela
compactao do DNA apresentam carter bsico (ricas
em arginina e lisina) e so denominadas histonas. As
histonas interagem seu grupo amina (catinico) aos
grupos fosfatos (aninicos) da DNA. Como nem todos
os grupos fosfatos esto em interao com as histonas,
o ncleo mantm seu carter cido, permitindo a
atuao da hematoxilina. Existem cinco diferentes
tipos de histonas: H2A, H2B, H3, H4 e H1. Tais
protenas so extremamente conservativas,
diferenciando-se muito pouco entre os grupos de
eucarioto, sendo a menos conservativa a histona H1.
Tais protenas esto divididas em dois grupos: as
nucleossmicas (H2A, H2B, H3 e H4) e a histona H1.
A dupla hlice do DNA (2nm de espessura)
periodicamente enrola-se em um complexo proteico
composto por oito polipeptdeos. Este complexo
proteico recebe o nome de octmero de histonas e
nele encontram-se duas molculas das histonas H2A,
H2B, H3 e H4. O DNA fica fortemente preso fazendo
1,65 volta (146pb) ao redor do octmero de histonas
e a esta estrutura dado o nome de nucleossomo. O
DNA entre os nucleossomos denominado de DNA de
ligao ou filamento internucleossmico (15 a 100pb).
Neste nvel de organizao, o DNA torna-se mais
compactado (10-11nm de espessura) assumindo a
forma de um colar de contas, constituindo o nvel
fundamental de compactao da cromatina, o filamento
nucleossmico. O filamento nucleossmico enrola-se
novamente devido a presena das histonas H1 as quais
se encaixam no seguimento internucleossmico. As
histonas H1 aproximam os nucleossomos em
ziguezague formando a figura de solenide, tornando a
fibra mais compacta com cerca de 30nm de espessura,
a fibra cromatnica. Esta fibra pode ser ainda mais
compactada durante a mitose. Nesta etapa da diviso
36
a fibra se enrola em espiral sobre um eixo proteico
chegando compactao mxima de 1400nm de
espessura no cromossomo metafsico.
Nuclolo Os nuclolos so estruturas
fortemente coradas pela hematoxilina ao microscpio
de luz. Eles so a representao tpica do ncleo
interfsico. Quanto ao nmero, podem existir um ou
vrios nuclolos, dependendo do estado fisiolgico em
que a clula se encontra. Ovcitos so exemplos de
clulas com vrios nuclolos, antigamente
denominados nuclolos satlites. A principal funo do
nuclolo produzir as subunidades ribossomais.
Assim, o nuclolo quimicamente composto por DNA,
RNAr e protenas as quais se complexam para formar
as subunidade da organela central da sntese protica.
Por meio da ultraestrutura podem-se detectar duas
pores na sua organizao: a fibrilar e a granular. Na
poro fibrilar fica disposto o DNA ribossomal ou DNAr.
O DNAr formado por vrias sequencias repetitivas de
genes, conhecidos por tandem. Assim, o DNAr
transcrito em RNAr, porm este conhecido como
transcrito primrio e ser cortado molecularmente
(Splicing) em molculas menores que faro parte da
subunidade ribossomal. O transcrito primrio o 45S,
o qual complexado com protenas. O valor S o
coeficiente de sedimentao de Svedberg para
partculas ultracentrfuga, sendo a unidade igual a 1X10-
13
cm/s. Na poro granular as subunidades ribossomais
so complexadas com protenas dando o aspecto tpico
da poro externa do nuclolo. No transito desde a
poro fibrilar at a granular, o transcrito primrio vai
sofrendo o splicing por ao de pequenas molculas
de RNA (snoRNA) complexadas com protenas. Assim
o transcrito clivado em duas molculas de RNA 32S
e 20S. O RNAr 20S clivado em RNAr 18S e associado
com 33protenas formando a subunidade menor do
ribossomo. Por sua vez o RNAr 32S clivado em RNAr
28S e 5,8S. Em outras regies extranucleolares
produzido o RNAr 5,0S. Estas trs molculas de RNA
so complexadas com 49 protenas e culminam com
a formao da subunidade maior do ribossomo, sendo
ento enviado para o citoplasma atravs dos poros
nucleares. Desta maneira, quando as subunidades
ribossomais eucariticas so centrifugadas, elas vo
apresentar o coeficiente de sedimentao de 40S e
60S.
Nucleoplasma Constitui a matriz aquosa que
prrenche os espaos entre a cromatina e o nuclolo
limitado pela membrana nuclear interna. Na sua
composio encontram-se protenas responsveis pela
gliclise, polimerases do DNA e RNA, topoisomerases,
protenas SSB (single strand bindings). Alm das
protenas encontramos intermedirios da gliclise,
desoxirribonucletdeos trifosfatados, nucleosdeos, ons
e coenzimas.
Figura 1: Diferentes aspectos de ncleos de clulas germinativas de Callinectes danae. Zara, F.J..

Figura 2: Criofratura de ncleo de ventrculo de D. australis. Caetano, F.H..

Legendas:
A: B:
C: D:

37
38
Figura 1: Macrfago de rato Wistar. Caetano, F.H.. Figura 2: Leuccito de rato Wistar. Caetano,F.H.. Figura 3:
Vaso sanguneo de rato Wistar. Caetano, F.H..

Figura 4: Fibroblasto de rato Wistar. Caetano, F.H..

Legendas:
A: B:
C: D:

39
40
Figura 1: Nuclolo da clula digestiva do estmago de D. australis. Caetano, F.H. Figura 2: Diferentes aspectos
de nuclolos em clulas digestivas do estmago de D. australis. Caetano, F.H.

Figura 3: Nuclolo da clula digestiva do estmago de D. australis. Caetano, F.H.

Legendas:
A: B:
C:

41
VIII Retculo Endoplasmtico
Todas as clulas eucariontes apresentam
conjuntos de endomembranas (tbulos) as quais sero
responsveis pela produo de protenas de
membrana, exportao, alm da sntese dos lipdeos
que compes as membranas. A este conjunto de
tbulos internos nominado de retculo endoplasmtico
(RE). Esta organela extremamente ativa. A rede de
tbulos e lamelas est em constante expanso e
retrao associado ao citoesqueleto. Com isso, as
molculas sintetizadas podem ser enviadas para a
organela responsvel pelo empacotamento e posterior
envio at a membrana plasmtica (via complexo de
Golgi) ou permanncia no interior da clula. O e sntese de hormnios. So importantes tambm na
RE pode ser encontrado sob duas formas bsicas: O
RE rugoso ou granular, o qual caracterizado pela
presena de polirribossomos aderidos a face citoslica
da membrana e o RE liso ou agranular, o qual no
apresenta associao com ribossomos. Tais partculas
podem estar aderidas ao RE ou dispersas no
citoplasma. Os polissomos (polirribossomos) so
sequncias de ribossomos associados ao RNAm
produzindo protenas. Podem assumir a forma de
bculo e esto livres no citoplasma. So responsveis
pela produo de protenas do citoesqueleto, protenas
a serem enviados para o ncleo, peroxissomos,
mitocndrias e cloroplastos.
Retculo Endoplasmtico Rugoso (RER) Seu
aspecto citoplasmtico mais comum sob a forma de
lamelas paralelas. Porm em clulas produtoras de
protenas de insetos, o RER pode ser observado como
vrias vesculas. Apesar de ser somente identificado
ao microscpio eletrnico de transmisso, o RER j
tinha sido localizado ao microscpio de luz, quando
da utilizao de corantes bsicos como a hematoxilina.
Assim, o RER recebeu o nome de ergastoplasma e
em neurnios corpsculo de Nissl, devido basofilia
citoplasmtica produzida por esta organela. A principal
funo desta organela a sntese proteica e em clulas
altamente especializadas nesta funo, o RER
normalmente est posicionado no polo basal celular,
ao redor do ncleo enquanto que outras organelas como
os complexos de Golgi e vesculas de secreo esto
no polo apical constitudo assim as chamadas clulas
polarizadas. Como exemplo de clulas polarizadas
temos o pncreas excrino.
Reticulo Endoplasmtico Liso (REL) Alm
da ausncia de ribossomos aderidos as suas
membranas, o REL apresenta-se sob a forma de
vesculas de diferentes tamanhos, geralmente menor
em dimetro que aquelas observadas no RER, ou como
tbulos anastomosados. A principal funo do REL a
sntese de lipdeos as quais so utilizados na produo
dos fosfolipdeos de membrana, produo de colesterol
mobilizao de glicognio, armazenamento de clcio,
como nos ovcitos de deuterostomios e nas clulas
musculares, alm de atuar na desintoxicao do
organismo. Durante o processo de desintoxicao
bastante comum a transformao do RER em REL,
para otimizar a eliminao de compostos txicos, nas
clulas do fgado. Durante este processo, o citocromo
P450 bem como suas redutases tem papel central na
eliminao de inseticidas, herbicidas, drogas etc. Uma
das funes principais do REL a sntese dos lipdeos
de membrana. Porm alguns destes lipdeos so
completados no complexo de Golgi, como a
esfingomielina e os glicolipdeos. Todos os fosfolipdeos
so incorporados a monocamada citoslica da
membrana do REL e so posteriormente transferido a
monocamada luminal graas a ao das protenas
flipases (movimento de flip-flop). Porm estas flipases
tem predileo pelas molculas contendo colina o que
promover a assimetria da membrana plasmtica. O
colesterol tambm sintetizado no REL, a partir do
acetato com auxilio do citocromo P450. Nas clulas
produtoras de hormnios, o colesterol pode ser
convertido em testosterona, progesterona entre outros
via reaes bioqumicas ligadas ao REL e as
mitocndrias, sendo ambas as organelas abundantes
neste tipo celular, alm de gotas lipdicas.
42
Figura 1: Retculo liso em glndulas ps faringeas de D. autralis. Caetano, F.H.. Figura 2: Retculo endoplasmtico
liso em larva de Nanotrigona sp. Caetano, F.H..

Figura 3: Retculo endoplasmtico em ovrio, Atta. Caetano,F.H..

Legendas:
A:
B:

43
44
Figura 1: Ribossomos livres e poliribossomos em epitlio e escama de corimbat, Prochilodus lineatus. Caetano,
F.H.. Figura 2: Poliribossomo em glndula hipofarngea de vespas Polistes versicolor. Britto, F.B. & Caetano,
F.H..

Figuras 3 e 4: Retcu lo endoplasmtico rugoso de clulas digestivas de O. bauri. Caetano, F.H..

Legendas:
A: B:
C: D:

45
IX Complexo de Golgi e Lisossomos:
destinao, exportao e importao de
macromolculas.
As protenas recm-sintetizadas no RE so
transferidas do elemento transicional, para o complexo
de Golgi (via antergrada). Nesta organela, tais protenas
sero compactadas e podero ser secretadas e
adicionadas a membrana plasmtica ou permanecer
no citoplasma sob a forma de lisossomos.
Complexo de Golgi Geralmente prximo ao
ncleo com uma das suas faces voltada para a
membrana plasmtica, o complexo de Golgi
extremamente importante para a produo de
glicosaminoglicanos e proteoglicanos da matriz
extracelular (lmina basal) e modificao dos
oligossacardeos das glicoprotenas. Como
caracterstica marcante, o complexo de Golgi
apresenta-se em geral como sculos, lamelas ou
cisternas achatadas, lembrado pilhas de pratos, sem
ribossomos aderidos as membranas. O nmero de
lamelas varivel sendo mais de 20 em clulas
vegetais. Geralmente detecta-se uma face cncava e
outra convexa, porm em certos tecidos de insetos,
como glndulas de seda, o complexo de Golgi
apresenta-se como vesculas dilatadas. A face convexa
de cada lamela denominada de entrada ou formao
- face Cis -, geralmente voltada para o elemento
transicional do RE. A face cncava denominada de
maturao face Trans geralmente voltada para a
membrana plasmtica. Da face trans brotam as
vesculas de secreo destinadas a superfcie celular
ou para o compartimento endossomal. No complexo
de Golgi existem protenas de membrana que detectam
as protenas residentes do RE. Assim, chaperonas,
protenas dobradas erroneamente associadas as
chaperonas ou qualquer protena residente ao RE (com
sequncia de aminocidos KDEL) so seletivamente
recuperadas no Complexo de Golgi e retornam ao RE
no interior de vesculas (via retrgrada). Esta
recuperao acontece com o auxilio de protenas de
membrana encontradas espalhadas pelas pilhas do
Complexo de Golgi, sendo particularmente abundantes
na face Cis.
Exocitose As vesculas que brotam da face
Trans do complexo de Golgi apresentam dois destinos:
permanecer na clula ou fundir-se com a membrana
plasmtica. Para este ltimo destino, elementos como
protenas, glicoproteinas, glicosaminoglicanos e
lipdeos so adicionados a membrana. Este mecanismo
de fuso de vesculas com a membrana plasmtica
denominado de exocitose. A Rota Constitutiva
de Exocitose, Via Secretora No Regulada, Via
Constitutiva ou de Via de Fluxo Contnuo so sinnimos
para o mecanismo pelo qual as clulas produzem e
levam continuamente macromolculas elaboradas no
RE e complexo de Golgi para a membrana plasmtica
e/ou meio extracelular. Por esta via que so
secretadas as molculas de colgeno,
glicosaminoglicanos e proteoglicanos da matriz
extracelular e lmina basal. A rota constitutiva est
presente em todas as clulas dos eucariontes e no
necessita de sinal especfico perfazendo a Secreo
Constitutiva. A Rota Regulada de Exocitose ou Via
Secretora Regulada o mecanismo pelo qual a clula
libera secrees tpicas e especficas do tipo celular
em questo. Para esta rota, sempre necessrio
sinais tpicos a serem detectado por receptores na
membrana plasmtica, para que ocorra a exocitose
das vesculas de secreo acumuladas no citoplasma.
Estas clulas so coletivamente chamadas de Clula
Secretora e como exemplos de Secreo Regulada
podem-se citar os neurnios que liberam como
secreo especfica, os neurotransmissores, glndulas
endcrinas, as quais liberam hormnios especficos,
clulas acinosas do pncreas excrino, as quais
liberam as enzimas pancreticas. As vesculas
originadas da face Trans do complexo de Golgi e
armazenadas nestas clulas recebem o nome de
Vesculas de Secreo.
Endocitose Da mesma forma que a exocitose,
a Endocitose tambm exclusiva das clulas
eucariontes. Tal mecanismo define a capacidade da
clula em adquirir molculas de diferentes tamanhos a
partir do meio. A aquisio destas molculas est
relacionada formao expanses e fossas ou
depresses na superfcie celular as quais so
internalizadas formando as Vesculas Endocticas. Uma
vez internalizadas, o contedo destas vesculas ser
digerido intracelularmente, por fuso com vesculas de
transporte, ricas em enzimas originadas do complexo
de Golgi, formando os lisossomos (ver mais a diante).
Duas formas de endocitose podem ser reconhecidas:
a Fagocitose e a Pinocitose. A fagocitose est
relacionada a organismos unicelulares como os
protozorios ou clulas do sistema imune como os
macrfagos e neutrfilos. Estas clulas englobam
partculas grandes como microrganismos e outros
corpos estranhos pela emisso de prolongamentos
celulares conhecidos como pseudpodos. Aps a
fagocitose, o corpo endocitado permanece envolto por
vesculas constitudo o Fagossomo, o qual receber
vesculas de transporte contendo enzimas digestivas.
Na pinocitose no ocorre a formao de pseudpodos.
Ao invs disso, a membrana plasmtica produz
depresses ou fossas, e progressivamente o material
afunda no citoplasma formando a vescula endoctica.
Porm, para que tal evento ocorra, existem receptores
de carga especficos para a molcula a ser endocitada
na superfcie da membrana. Quando os receptores
esto ligados a carga a ser transportada, na superfcie
citoplasmtica existem protenas adaptinas as quais
seguram um segundo tipo de protena, as clatrinas.
As clatrinas formam ento uma rede ou malha ao redor
da vescula em formao, interiorizando-a. Para que a
vescula se destaque da membrana plasmtica, outra
protena a dinamina associa-se ao pescoo da vescula
e a desprende. Esta vescula recebe o nome de
Vescula Recoberta de Clatrina. Rapidamente, a capa
de clatrina perdida e a vescula contendo o material
endocitado transferida ao compartimento
endossomal.
46
Figura 1: RER em hepatopncreas de Callinectes danae. Zara, F.J.. Figura 2: Complexo de Golgi em glndula
salivar de larva de Pachycondila villosa. Zara, F.J. & Caetano, F.H.

Figura 3: Complexo de Golgi em tbulos de Malpighi, Atta sexdens. Caetano, F.H. & Martinelli, A..

Legendas:
A: B:
C: D:

47
 Compartimento endossomal Trata-se de um
conjunto de tbulos irregulares e grandes vesculas.
Tal compartimento foi experimentalmente dividido em
dois: Endossomo Primrio ou Precoce e Endossomo
Secundrio ou Tardio. O endossomo primrio ocorre
logo abaixo da membrana plasmtica com pH menos
cido que os endossomos secundrios. No endossomo
primrio geralmente ocorre a reciclagem dos receptores
de membrana. Estes podem retornar a membrana
plasmtica de origem, em vesculas de reciclagem, ou
ser conduzidos aos endossomos secundrios, onde
sero degradados quando da formao dos lisossomos.
Alguns autores sugerem uma terceira rota, a
Transcitose. Nela os receptores liberariam a carga
transportada no espao intercelular (rota paracelular).
O endossomo secundrio ocorre prximo ao ncleo e
complexo de Golgi, com pH na faixa entre 5 e 6.
Lisossomos Os lisossomos so organelas
envoltas por uma s unidade de membrana. Variam
muito em tamanho, forma e composio bioqumica.
Esta organela est relacionada digesto intracelular
de molculas, as quais so adquiridas por diferentes
vias. Sua composio qumica composta
basicamente por hidrolases cidas ou alcalinas. A
diferena de pH entre o lisossomo e o citosol (pH 7,2)
acaba por atuar como proteo contra vazamentos das
enzimas, as quais poderiam danificar as organelas
circunvizinhas. Alm das bombas de prtons, protenas
transportadoras de metablitos tambm esto
presentes na membrana, e por elas aminocidos,
48
acares, cidos graxos e nucleotdeos so
transferidos ao citosol. O material no digerido pode
ser exocitado ou acumulado na clula em corpos
residuais como os pigmentos de lipofucsina. Na face
Cis do complexo de Golgi duas enzimas (fosfotrasferase
e fosfoglicosidase) atuam sequencialmente adicionando
um fosfato na posio 6 da manose de oligossacardeos-
N-ligados, criando a marca tradicional das hidrolases
lisossomais a manose-6-fosfato (M6P). Na face Trans
existem protenas receptoras de M6P, as quais auxiliam
no empacotamento das vesculas contendo as enzimas
lisossomais. Tais vesculas brotam recobertas por
clatrina e so denominadas de Vesculas de Transporte,
que perdem a capa de clatrina e fundem-se, por
exemplo, ao endossomo secundrio. O endossomo
secundrio, carregado de enzimas lisossomais
digerindo materiais exgenos ento denominado
lisossomo. Os lisossomos podem receber
macromolculas a serem digeridas por quatro vias
principais: (1) apartir da pinocitose via compartimento
endossomal produzindo os endossomos secundrios;
(2) via fagossomo em clulas especializadas em
fagocitose; (3) via autofagia pela produo de
autofagossomo, onde organelas obsoletas so
circundadas por membranas derivadas do RE as quais
acidificam seu interior como em endossomos
secundrios e (4) a partir de protenas citoplasmticas
as quais so reconhecidas por receptores na membrana
lisossomal, desde que marcadas com uma frequncia
sinal KFERQ (-Lys-Phe-Glu-Arg-Gln-).
Figura 1: Glndula ps- farngea de formiga D. australis Caetano, F.H.. Figura 2: Endossomo secundrio e lisossomo
em glndula ps-farngea de formiga D. australis. Caetano, F.H..

Figura 3: Autofagossomo em glndula ps-farngea de D. australis. Caetano, F.H..

Legendas:
A:
B:
C:

49
50
Figura 1: Glndula protorcica de diptera B. hygida. Monesi, N. & Caetano, F.H. Figura 2: Vescula revestida com
clatrina em ovrio de Callinectes dana. Zara, F.J. & Caetano, F.H. Figura 3: Pinocitose em clulas de capilar
sanguneo de rato. Caetano, F.H.

Figura 4: Pinocitose em vaso sanguneo de fgado de rato wistar. Remdio, R.N. & Caetano, F.H..

Legendas:
A: B:
C: D:

51
X Peroxissomos
O surgimento do O2 atmosfrico causou um dos
maiores eventos de extino em massa no planeta. Este
O2, produzido por procariontes fotossintticos acumulou
na atmosfera. Procariontes e eucariontes primitivos
anaerbios foram intoxicados com a reatividade do O2
atmosfrico. Acredita-se que a principal linhagem
eucarionte selecionou uma organela para utilizar a
reatividade do O2 em reaes metablicas teis, reduzindo
sua concentrao txica intracelular. O sucesso destas
reaes fez com que esta organela fosse selecionada
e, ela pode ocorrer em todas as clulas eucarionte
atuais. Esta organela o Peroxissomos. Segundo
alguns autores, com a associao simbitica entre a
clula eucarionte e a mitocndrias esta organela
passou a executar somente as reaes de oxidao
no realizadas nas mitocndrias. Ao MET esta organela
est envolta por uma unidade de membrana e no seu
interior comum a presena de enzimas cristalizadas,
sendo a principal delas a urato oxidase e a estrutura
por ela produzida denominada de cristaloide O restante
das enzimas compem a matriz do peroxissomo (dentre
as enzimas presentes no peroxissomo; merecem
destaque as catalases, peroxidases, alm de enzima da
52
-oxidao dos cidos graxos). O glioxissomo
(peroxissomo dos vegetais) possui enzimas do ciclo do
glioxalato, as quais convertem cidos graxos em
carboidratos. Os peroxissomos apresentam enzimas
responsveis pela oxidao de diferentes substratos
orgnicos. Esta ocorre pela retirada de tomos de H+ os
quais so transferidos ao O2 produzindo perxido de
hidrognio (H2O2) pela ao da enzima peroxidase. Como
o H2O2 reativo para a clula, outra enzima, a catalase o
converte em H2O e O2. Por meio destas reaes, os
peroxissomos detoxicam as clulas convertendo
substncias insolveis (etanol, aldedos, fenis) em
substratos solveis e excretveis. Os peroxissomos,
assim como as mitocndria, apresentam reproduo
independente da clula. Estas organelas no
apresentam DNA ou RNA, sua origem dependente
de um peroxissomo pr-existente. Os peroxissomos
importam suas protenas do citoplasma da clula,
produzidas em polissomos ao invs do RE. Estas
protenas apresentam um sinal especfico de trs
aminocidos (Ser-Lys-Leu) que so reconhecidos por
protenas na superfcie da organela. Assim, quando o
peroxissomo atinge o tamanho limite, este sofre fisso,
diferente do que ocorre com as mitocndrias e
cloroplastos os quais apresentam DNA prprio.
Figuras 1 e 2: Peroxissomos em glndula ps-faringea de D. australis. Caetano,F.H..

Figura 3: Peroxissomo em diviso em glndula ps-faringea de D. australis. Caetano,F.H..

Legendas:
A: B:
C: D:

53
XI Mitocndrias
So organelas membranosas responsveis pela
produo da maior parte da molcula energtica
utilizada pelas clulas, o ATP (adenosina trifosfato).
Alm de serem o principal stio de produo de radicais
livres.
Estrutura Como os cloroplastos, as
mitocndrias apresentam duas unidades de membrana.
A Unidade de Membrana Externa apresenta muitas
protenas canal e porinas, o que a torna extremamente
permevel, rica em colesterol. A maior parte dos lipdeos
de membrana tem origem do REL, e so transportadas
para as mitocndrias por meio de protenas
carreadoras. A Unidade de Membrana Interna rica
no fosfolipdeo de membrana a cardiolipina o qual
exclusivo desta e extremamente importante devido ao
fato deste ser impermevel a ons, assim os prtons
no conseguem retornar a matriz mitocondrial, a no
ser que passem pela ATP sintetase. A unidade de
membrana interna tambm apresenta muitas enzimas,
as quais so responsveis pela cadeia respiratria.
Dentre estas, destacam-se o complexo NADH-
desidrogenase, citocromo q, complexo b-c1, citocromo
c e o complexo aa3 ou citocromo oxidase. Todas estas
protenas so responsveis pela transferncia de
eltrons e bombeamento de prton para o espao
intermembranoso. Outro complexo proteico muito
importante o Corpsculo Elementar ou Subunidade
Mitocondrial, o qual ser responsvel pelo retorno dos
prtons sintetizando as molculas de ATP. A unidade
de membrana interna profundamente invaginada, para
aumentar a superfcie de produo de ATP, formando
as Cristas Mitocondriais. O nmero de cristas varivel
(quanto maior o numero de cristas, maior a
quantidade de energia produzida) as clulas musculares
tem mitocndrias com maior nmero de cristas. Tais
cristas ocorrem de forma variada (maioria das clulas)
ou vesculas e tbulos, como nas clulas produtoras
de hormnios, (cristas em dedo de luva). O espao
intermembranoso apresenta diferena de pH e de
potencial eltrico em relao ao restante da
mitocndria. Nele so encontradas algumas enzimas
importantes para a fosforilao de nuclesdeos em
nucleotdeos. A matriz mitocondrial todo o espao
delimitado pela membrana interna da mitocndria. Nela
nos vamos encontrar muitas enzimas responsveis pelo
ciclo do cido ctrico (ciclo de Krebs), oxidao do
piruvato e -oxidao de cidos graxos. No espao
matriz, ainda encontramos polissomos, RNAm, RNAt
e o DNA mitocondrial. O DNA mitocondrial constitui
uma molcula pequena e forma um s cromossomo
circular com 16569 nucleotdeos. Assim a grande
maioria das protenas mitocondriais tem origem
citosslica, a partir do DNA nuclear. As mitocndrias
tem capacidade de diviso independente da clula e
como peculiaridade, as mitocndrias tem sempre
origem materna, de mitocndrias encontradas nos
ovcitos. Esta peculiaridade foi muito importante para
a utilizao do DNA mitocondrial em estudos
filogenticos e filogeogrficos. As protenas destinadas
a matriz mitocondrial apresentam um sinal especfico
e esto complexadas com chaperonas Hsp70 as quais
conduzem a protena para o receptor na membrana
plasmtica da mitocndria. Na matriz, outras
chaperonas, como as Hsp60 dobram corretamente as
protenas e hidrolases clivam a sequencia sinal, tornado
a protena ativa.
Metabolismo Mitocondrial Aqui ser
somente abordada uma sinopse do assunto. A
sobrevivncia dos organismos est associada a um
suprimento contnuo de energia o qual obtido de duas
maneiras: do sol (cloroplastos) e dos alimentos. Para
este ltimo, o sistema digestrio quebra os alimentos
em macromolculas (lipdeos, protenas e
carboidratos). Nesta sinopse vamos utilizar os
carboidratos como modelo para produo de ATP. O
carboidrato mais comum a glicose e durante a
respirao celular a quebra desta molcula fornecera
a energia para as reaes celulares. Porm a glicose
apresenta cerca de 160KJ/mol e para a sntese de duas
molculas so necessrios 1,2KJ/mol de energia.
Desta maneira a utilizao direta da energia da glicose
seria fatal para a clula. Por sua vez, uma molcula de
ATP produz 1,8KJ/mol quando da quebra da ultima
ligao fosfato. Assim, o ATP corresponde a 1% da
energia da glicose. Quando a energia do ATP requerida
para uma sntese ou degradao de uma nova, a energia
do fosfato passada ao substrato, deixando-o
carregado energeticamente (substrato fosforilado) +
ADP. Com o substrato fosforilado, as enzimas atuam
e utilizam a energia da fosforilao para produzir um
novo produto, liberando o fosfato.
Gliclise Esta etapa ocorre fora da
mitocndria, no citoplasma. Assim que a clula
necessita de energia esta capta glicose a qual
imediatamente fosforilada. Aps isso seguem varias
reaes acopladas, produzindo vrios produtos
intermedirios at o produto final, o piruvato. O piruvato
ser a molcula encaminhada para a matriz
mitocondrial. Para cada molcula de glicose que entra
na gliclise, tem-se no final a produo de 4 ATP, sendo
gastos 2 ATP durante o processo. Alm do ATP e do
piruvato outra molcula importante tambm produzida,
o mediador de energia, NADH-H+.. Assim o saldo da
gliclise 2ATP + 2NADH-H+ + 2 Piruvatos.
Ciclo do cido Ctrico Na matriz mitocondrial
os piruvatos so convertidos na importante molcula
do ciclo do cido ctrico a acetilcoenzima A (AcetilCoA)
alm de uma molcula de NADH-H+. Como entram dois
piruvados, ns temos antes de iniciar o ciclo do cido
ctrico 2 AcetilCoA e 2 NADH-H+.
Fosforilao Oxidativa A fosforilao
oxidativa, tambm conhecida como cadeia respiratria
ou cadeia transportadora de eltrons est associada a
membrana interna da mitocndria. Nesta etapa os
mediadores de energia NADH-H+ (nicotina adenina
dinucleotdeo) e FADH2 (flavina adenina dinucleotdeo)
vo transferir seus eltrons para as protenas que
compem a cadeia.
54
Figura 1: Mitocndrias na musculatura de D. australis. Caetano, F.H. Figura 2: Mitocntria vesicular de D. australis.
Caetano, F.H.

Figura 3: Mitocndria em clulas de lio de Cephalotes atratus. Caetano, F.H.

Legendas:
A: B:
C: D:
E:

55
56
Figura 1: Mitocndria em clula digestiva de Zacryptocerus pusillus. Zara, F.J. & Caetano, F.H.. Figura 2: Mitocndria
na musculatura da perna de G. destructor. Caetano, F.H..

Figura 3: Mitocndria em diviso em glndula ps-faringea de D. australis. Caetano, F.H..

Legendas:
A: B:
C: D:

57
XII Material armazenado pela clula
As clulas podem apresentar a formao de
grnulos ou de vesculas de diversas substncias
dependendo de sua funo ou da necessidade do
tecido em que se encontram. Em geral as clulas
armazenam substncias que podem ser metabolizadas
para a gerao de energia. Para se otimizar a absoro
e a disponibilizao de tais substncias, existem
clulas especializadas em manter reservas de
substncias especficas, como no caso dos adipcitos,
os quais possuem o maior depsito de energia
encontrado em um organismo na forma de triglicerdeos.
Outra forma de armazenamento de energia muito
importante dentre os organismos a formao de
grnulos citoplasmticos de glicognio. Os acmulos
desta substncia no so to elevados quanto os
observados para lipdios, devido principalmente a
inexistncia de clulas que possuam apenas a funo
de estoc-la. Como exemplo de clulas que possuem
uma reserva de glicognio que pode ser utilizada e
mobilizada para outros tecidos, temos os hepatcitos,
clulas que formam o tecido do fgado.
A clulas tambm podem produzir depsitos
ligados diretamente a sua funo no tecido ou
organismo, como as clulas de muco ou as clulas
caliciformes, que produzem substncias que so
armazenadas e liberadas visando a proteo de clulas
mais superficiais. As clulas digestivas possuem em
58
geral acmulos de enzimas digestivas que so
liberadas para o meio na presena de alimento. Os
cromatforos possuem pigmentos armazenados em
seu citoplasma que permitem ao organismo exibir
padres de colorao diferenciados, dependendo dos
estmulos enviados pelo seu sistema nervoso.
As clulas tambm podem acumular
substncias txicas ao organismo. Neste caso a clula
recolhe as substncias txicas do meio e as isolam no
interior de vesculas ou grnulos visando limitar sua ao
destrutiva.
Lipofuscina
Um exemplo de material que pode ser
armazenado pela clula a lipofuscina, que acumulada
no decorrer do envelhecimento celular. Este grupo de
substncias formado por protenas ou at mesmo
vestgios de mitocndrias que ao foram corretamente
digeridos e eliminados, que acabam por se ligar a
molculas de lipdios e formam grnulos de forma
irregular observados no citoplasma dos tecidos em geral.
Esta substncia no s importante no processo de
envelhecimento, mas tambm no aparecimento de
algumas doenas como o diabete.
A lipofuscina aparentemente no metabolizada
e provavelmente no interfere no funcionamento
adequado da clula no nvel qumico; no entanto, a
obstruo mecnica e/ou a interferncia com outros
processos celulares certamente uma possibilidade.
Figura 1: Cromatforo do epitlio de escama de corimbat, Prochilodus lineatus. Caetano, F.H.. Figura 2: Gotas de
lipdeo em glndula ps-faringea de D. australis. Caetano, F.H.. Figura 3: Depsito de glicognio em corpo gorduroso
de Cephalotes pusillus. Caetano, F.H..

Figura 4: Depsito de protenas em clulas digestivas maduras de anmona do mar Bunadossoma caissarum . Zara,
F.J..

Legendas:
A:
B:

59
XIII Matriz Extracelular
Por entre as clulas dos organismos
pluricelulares, existem elementos fibrosos e elementos
amorfos aninicos os quais conectam um tecido ao
outro, a matriz extracelular. Tais elementos so
produzidos por clulas especiais, os fibroblastos.
Assim, dependendo do tipo e quantidade do elemento
fibroso, da substncia amorfa e dos tipos celulares nela
encontrados, ns temos os vrios tipos de tecido
conjuntivo. A matriz extracelular no tecido
conjuntivo animal pode funcionar como reserva
energtica (adipcitos), armazena grande parte do
plasma sanguneo e clcio, prove a nutrio do tecido
epitelial, mas a sustentao uma das funes
principais. A matriz pode ser rgida como nos tendes
ou flexvel como na derme, absorver choques com nas
cartilagens, elstica como na aorta ou dura no osso.
Toda esta gama de funes est relacionada s seus
componente: clulas, elementos fibrosos e substncia
amorfa.
Clulas O fibroblasto um modelo de
produo da matriz extracelular. Quando inativos, so
conhecidos como fibrcitos. Quando ativos, os
fibroblastos so clulas fusiformes, porm ramificadas,
as quais apresentam o RER e complexo de Golgi
bastante desenvolvido. Estas clulas produzem
constantemente, pela rota constitutiva os elementos
fibrosos e amorfos da matriz extracelular. Alm dos
fibroblastos algumas clulas epiteliais tambm
produzem matriz, produzem uma forma reduzida da
matriz extracelular e a lmina basal. A lmina basal
funciona como filtro macromolecular e elo de ligao
do tecido epitelial ao tecido conjuntivo (ver a frente).
Elementos Fibrosos Os elementos fibrosos
esto divididos em dois sistemas, o sistema colgeno
e o elstico. O sistema colgeno composto por uma
famlia de protenas alongadas, o colgeno com mais
de 20 tipos (cerca de 20 genes) descritos, sendo quatro
tipos os mais estudados. O colgeno a protena mais
abundante no corpo dos vertebrados e nos seres
humanos chega a 25-30% das protenas corporais.
Esta molcula extremamente conservativa. As
molculas de colgeno esto agrupadas em unidades
de tropocolgeno, o qual apresenta trs cadeias
polipeptdicas em tripla hlice. Estas molculas de
tropocolgeno podem se associar formando fibrilas,
fibras ou estrutura em forma de rede. De acordo com a
sua polimerizao temos - Colgenos formadores de
fibrilas e fibras: neste grupo encontram-se os colgenos
I, II e III, os quais formam fibrilas visveis ao microscpio
eletrnico de transmisso. O colgeno II caracterstico
do pavilho auditivo somente encontrado sobre a
forma de fibrilas. Este tem grande afinidade pelas
substncias amorfas (glicosaminoglicanos,
proteoglicanos e glicoprotenas) formando uma trama
em esponja altamente hidratada a qual fornece alta
capacidade de compresso. O colgeno I e III tem a
capacidade de agregao mais acentuada formando
fibras. O colgeno III formam fibras mais delgadas,
denominadas de fibras reticulares e apresentam maior
quantidade de polissacardeos associados (6-12%) em
relao ao colgeno I (1% de polissacardeos). Este
colgeno encontrado em tecidos sujeito a aumento
fisiolgico de tamanho, como glndulas, tero, trato
digestrio e artrias. O colgeno I tem capacidade de
se polimerizar suas fibras formando feixes de fibras ou
fibras colgenas do conjuntivo. Estes so muito
abundantes no organismo e formam os tendes,
encontrados na derme, esqueleto para deposio do
tecido sseo, pericndrio, peristeo, cpsula dos
rgos etc. O colgeno IV no apresenta fibrilas ou
fibras. Neste, os elementos de tropocolgenos se
organizam em uma estrutura semelhante a tela de
galinheiro permanecendo os elementos amorfos
associados entre os espaos da tela. Este o colgeno
encontrado na lmina basal das clulas. Contudo,
apesar da sua associao com os elementos amorfos,
o sistema colgeno tem capacidade elstica limitada.]
O sistema elstico rico em elementos que so
distendidos sobre trao e retornam a morfologia
normal sem gasto de energia. Segundo alguns autores,
sua capacidade elstica chega a ser cinco vezes
superior a da borracha para uma fibra de mesmo
dimetro. As fibras elsticas so abundantes nas
artrias, principalmente a aorta, na derme e nos
ligamentos elsticos da coluna vertebral.
Substncia Amorfa So compostos por
glicosaminoglicanos, proteoglicanos e glicoprotenas
encontrados por entre os outros elementos da matriz
e associado membrana plasmtica das clulas.
Constituem um gel altamente hidratado o qual tem
aspecto floculado ao MET devido ao dos veculos
fixadores. Os glicosaminosglicanos so sulfatados e
carboxilados, portanto acares aninicos. Com
exceo do cido hialurnico, todos os outros [acido
D-glicurnico (Hexuronico) e D-glicosamina
(Hexoamina), dermatan sulfato, haparan sulfato e
condoitin sulfato] podem se unir via ligao covalente
com um basto central proteico, constitudo os
proteoglicanos. Os proteoglicanos relembram uma
escova de cabelo com o basto central proteico e
inmeras molculas lineares de glicosaminoglicanos
associadas ao basto proteico. Dependendo do
glicosaminoglicano ligado ao cerne proteico, o
proteoglicano recebe nome especial, como o agrecan,
composto por vrias molculas de coidroitin-6-sulfato
ligados a protena. As glicoprotenas tem como funo
prender os glicosaminoglicanos, proteoglicanos e os
elementos fibrosos da matriz extracelular a clula. As
fibronectinas formam uma famlia de glicoprotenas
multiadesivas com stios de adeso para a clula, outras
fibronectinas e para os componentes fibrosos. As
lamininas esto ligadas com colgeno IV, heparan-sulfato
e receptores na membrana plasmtica da clula fazendo
uma ponte de ligao entre ela e a lmina basal. As
integrinas so as principias glicoprotenas encontradas
na membrana plasmtica, e apresentam stios de ligao
para colgeno, laminina e fibronectina. As integrinas tem
como funo principal prender a lmina basal clula,
fazendo a ponte com o citoesqueleto celular. Quando
associados aos filamentos intermedirio, os
emidesmossomas, sua funo estrutural.
60
Figura 1: Colgeno formado no entorno de um implante de pvc em rato wistar. Caetano, F.H. Figura 2: Colgeno
de tecido conjuntivo de ratos Wistar. Caetano, F.H.. Figura 3: Colgeno de tecido conjuntivo de ratos Wistar.
Caetano, F.H..

Figura 4: Matriz extracelular de tecido conjuntivo de ratos Wistar. Caetano, F,H.

Legendas:
A:
B:

61
Lmina Basal o componente existente em todos
os tecidos epiteliais e constitui uma matriz extracelular
reduzida produzida continuamente pela prpria clula,
pela via constitutiva. Est presente em todas as clulas,
menos naquelas do prprio tecido conjuntivo, como os
fibroblastos. Constitui uma trelia de colgeno tipo IV
embebida em diversas protenas, sendo as mais
importantes as lamininas, integrinas e fibronectinas.
A lmina basal aninica, rica em heparan-sulfato,
com funo macromolecular e prottiva.

62
PRTICAS DE LABORATRIO

63
64
II. Tcnicas Bsicas para o Estudo de Biologia Celular
Questes:
Quais os principais aspectos observados em cada micrografia das pginas 15 e 17?

65
66
III. Primeiro Contato com as Clulas: Procariontes e Eucariontes

A finalidade dessa prtica mostrar tipos diferentes de clulas em preparaes a fresco e

permanentes.

1. Clulas Procariticas
a. Estudo de bactrias vivas: colocar sobre uma lmina uma gota de cultura lquida de
bactrias no patognica ou uma pequena poro de uma cultura em meio slido sobre uma gota
de gua. Cobrir com uma lamnula e examinar ao microscpio.

b. Exame de bactrias fixadas e coradas: Retirar a lamnula da preparao anterior, fixar

passando a lmina pela chama de uma lamparina de lcool e corar 5 minutos com violeta de genciana.
Lavar rapidamente em gua corrente. Cobrir com uma lamnula, examinar ao microscpio e desenhar.

Sugesto para obteno de cultura de bactria: Dissolver um tablete de caldo de carne em

gua e deixar, pelo menos um dia, exposto ao ar. Colocar uma gota do sobrenadante sobre lmina,
cobrir com lamnula e examinar ao microscpio.

67
68
2. Clulas Eucariticas
a. Clulas de levedo - tome uma pitada de fermento para po, dissolva em um pouco de gua
morna, junte acar comum e deixe descansar de 15 a 20 minutos. Pingue uma gota de suspenso
sobre a lmina, cubra com lamnula. Examine ao microscpio e desenhe.

b. Com o bordo de uma lamnula limpa, ou com um palito de dente, raspe a mucosa bucal e
lingual. Coloque o material obtido sobre uma gotinha de gua entre lmina e lamnula. Examine ao
microscpio e desenhe.

69
70
 c. Examine uma lmina permanente de fgado e desenhe.

Questes:
1. Voc notou diferenas entre as clulas pr e eucariontes? Se sim, elenque-as.
2. Por que a preparao permanente oferece melhor condies de anlise?
3. Se voc observou diferenas entre as clulas eucariontes estudadas nesta aula, comente-as.

71
72
IV e VI. Membrana Plasmtica: Especializaes e Junes Celulares

1.Especializaes:
a. Bordo em escova e glicoclix: examine uma preparao permanente de duodeno, atentando
para a parte apical (poro livre) das clulas do epitlio.

2.Junes:
a. Examine uma preparao permanente de pele, atentando para as estruturas de adeso
da camada espinhosa.

73
74
Questes:
1. Explique o aspecto trilaminar demonstrado pela membrana plasmtica quando submetido
a tcnica de impregnao pelo tetrxido de smio OsO4 .
2. O duodeno apresenta vilosidades e microvilosidades. Qual a funo de cada uma?
Como voc as distingue?
3. As regies que possuem um maior nmero de desmossomos so aquelas que sofrem
mais atrito. Por que?
4. Qual o envoltrio rico em hidratos de carbono complexados com protenas presentes
nas clulas animais?

75
76
V. Citoesqueleto
a. Esquematize a arquitetura molecular de microfilamentos de actina, filamentos intermedirios
e microtbulos.

b. Examine lmina permanente de corte de traquia e desenhe, evidenciando o epitlio

pseudoestratificado ciliado

77
78
 c. Examine espermatozides humanos.

Questes:
1. Onde esto localizados os clios no epitlio da traquia?
2. Como so diferenciados entre si clios e flagelos?

79
80
VII. Ncleo Interfsico
1. Variao da forma
a. Microscpio de luz:
Espalhamento de sangue humano - picar o dedo anular da mo esquerda com o estilete apropriado,
retirar uma gotcula de sangue e coloc-la na extremidade de uma lmina. Fazer o esfregao bem
fino. Secar a lmina e fixar em lcool metlico durante 3 a 5 minutos. Corar com uma soluo de
Giemsa 3%, durante 15 minutos. Lavar rapidamente em gua corrente, secar ao ar e montar em
blsamo. Desenhe cada tipo diferente de clula.

NOTA: O corante Giemsa encontrado no comrcio em soluo j preparada.

81
82
2. Citoqumica: Demonstrao de DNA
Examine uma lmina permanente de raiz de cebola, corada pela reao de Feulgen-
Rossenbeck. Desenhe, anotando na legenda a colorao da cromatina e cromossomos.

Questes:
1. Quais os aspectos morfolgicos do ncleo que indicam alta atividade metablica?
2. Os poros nucleares tem nmero e posio fixa? Por que?

83
84
Nuclolo
a. Tome preparaes permanentes de ovrios de sapo ou de peixe, examine e desenhe
os ovcitos.

Questes:
1.Qual o significado funcional dos micronuclolos nos ovcitos analisados?
2. Por que os nuclolos no so visveis em clulas coradas pela reao de Feulgen?
3. Por que cromatina e nuclolos no so diferenciados entre si pela colorao com
hematoxilina-eosina?

85
86
VIII. Retculo Endoplasmtico
a. Exame de ovcitos jovens e maduros de sapo, corados pela hematoxilina-eosina

b. Exame de preparaes permanentes de glndulas salivares de rato.

87
88
Questes:
1. Por que a colorao com H-E cora diferencialmente o citoplasma de ovcitos jovens e
maduros, enquanto que nos nuclolos a colorao no se modifica?
2. O que so clulas polarizadas? Exemplifique com o material observado em aula.
3. Qual a explicao para a colorao diferencial do citoplasma das clulas das glndulas
salivares?
4. Como o retculo endoplasmtico liso pode ser identificado com segurana, em nvel ultra-
estrutural?

89
90
IX. Complexo de Golgi e Lisossomos: destinao, exportao e importao de
macromolculas .
GOLGI
a. Examine o aparelho de Golgi em epdidimo de rato.

Questes:
1. Qual a localizao caracterstica do Golgi nas clulas? Por que?
2. Qual a origem das vesculas que chegam ao Complexo de Golgi? Todas possuem o
mesmo destino?
3. Qual o principal marcador das enzimas do Complexo de Golgi?

91
92
LISOSSOMAS
a. Examinar preparaes permanentes de fgado, tratadas pela reao de Gomori.

Questes:
1. Qual a relao entre lisossomas e vesculas endossmicas (ou fagossomo)?
2. Como as fosfatases cidas so selecionadas para os lisossomas?

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94
TRANSPORTE DE GRUPOS DE MOLCULAS ATRAVS DA MEMBRANA PLASMTICA

Questes:
1. Cite, pelo menos, dois exemplos de clulas com via secretora regulada e diga em que
tipos celulares aparece a via secretora constitutiva.
2. Qual a contribuio de cada uma das vias secretoras?
3. Explique o processo de pinocitose.

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96
X. Peroxissomos
Questes:
1. Qual a origem das enzimas dos peroxissomas?
2. Como certas enzimas so destinadas aos peroxissomas?
3. O que voc conclui do exame da micrografia?

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98
XI. Mitocndrias
a. Com auxlio de tesoura e pina, retire uma fibrila de um dos msculos do vo do inseto
escolhido. Coloque sobre a lmina uma gota de verde janus a 1/1000. Com as agulhas de disseco,
dissocie delicadamente a fibrila. Cubra com a lamnula e exera uma leve presso com o dedo afim
de amassar um pouquinho o material. Examine e desenhe.

b. Examine e desenhe preparaes permanentes de fgado impregnado pela hematoxilina-

frrica.

NOTA: Fixador de Meves

cido smio a 2% - 4 ml
cido crmico a 1% - 15 ml
misturar e fixar durante o tempo apropriado
Fucsina de Altamnn
Soluo saturada de fucsina cida em gua de anilina.
gua de Anilina
5 ml de leo de anilina em 100 ml de gua destilada.
misturar bem, deixar descansar e filtrar antes de usar.

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100
Questes:
1. Por que nas clulas musculares as mitocndrias se dispem ao redor das miofibrilas?
2. Por que as mitocndrias so organelas semi autnomas?
3. Quais os aspectos das mitocndrias que apoiam a teoria da simbiose?
4. Por que as mitocndrias aparecem associadas a gotas lipdicas no citoplasma?
5. Como as mitocndrias so repostas nas clulas que se dividem?
6. Como se pode distinguir a mitocndria do peroxissomo?

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102
XII. Material armazenado pela clula
a. Exame de clulas do fgado submetidos ao PAS para revelar seus depsitos de glicognio.

b. Exame de intestino delgado submetido ao PAS para verificar a presena de muco nas
clulas secretoras.

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104
Questes:
1. Que so grnulos de zimognio?
2. Como as clulas caliciformes eliminam sua secreo?
3. Os grnulos de secreo das clulas caliciformes so grnulos de zimognio? Por que?
4. Para que serve a secreo das clulas caliciformes?

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XIII. Matriz Extracelular

Questes:
1. Qual a principal funo dos elementos amorfos do tecido conjuntivo?
2. Por que estes elementos amorfos se apresentam com o aspecto floculado?

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Bibliografia:

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the Cell. 5th. ed. New York: Garland Science, 2008.

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Wanderley de Souza Rio de Janeiro: Sociedade Brasileira de Microscopia, 1998.

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