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Biologia Do Desenvolvimento - 5 Edição - Gilbert PDF
Biologia Do Desenvolvimento - 5 Edição - Gilbert PDF
Desenvolvimento
QUINTA EDIO
Biologia do
Desenvolvimento
QUINTA EDIO
Scott F. Gilbert
Swarthmore College
Traduo e Reviso
Encontrando mensagens raras pela reao da polimerase Identificando molculas de adeso celular e seu
em cadeia 66 papel no desenvolvimento 92
Determinando a funo do gene: clulas e organismos Caderinas 92
transgnicos 69 CAMs da superfamlia de imunoglobulinas 95
Tcnicas de insero de DNA novo em uma clula 69 Molculas da juno celular: protenas da juno em
Camundongos quimricos 70 fenda 97
Experimentos com genes com endereamento A base molecular da afinidade clula-substrato 99
(Gene targeting ou Knockout) 70 Afinidade diferencial a substrato 99
Determinando a funo de uma mensagem: RNA antisense 73 A matriz extracelular 99
Reinvestigao de velhos problemas com novos mtodos 73 Receptores celulares para molculas da matriz
Uma concluso e um alerta 75 extracelular 104
Adeso diferencial resultante de sistemas de
Base celular da morfognese: adeso mltipla 106
Q
Induo Vulvar no Nematide Caenorhabditis
elegans 690
Informaes adicionais & Especulaes
desenvolvimento 733 19
Interaes Clula-Clula e Possibilidade na Metamorfose: o direcionamento hormonal do
Determinao de Tipos Celulares 692 desenvolvimento 733
Metamorfose anfbia 734
Controle hormonal da metamorfose de anfbios 735
Desenvolvimento do membro
de tetrpode 701 18 Q
Respostas Moleculares aos Hormnios da Tireide
Durante a Metamorfose 740
Informaes adicionais & Especulaes
Padronizao no membro 701 Heterocronia 743
Formao do broto do membro 702 Metamorfose em insetos 746
O campo do membro 702 Everso e Diferenciao dos Discos Imaginais 746
Especificao dos campos do membro: Genes Q Informaes adicionais & Especulaes
Hox e cido retinico 703 A determinao dos discos imaginais da perna
Crescimento do broto de membro precoce: fatores e da asa 750
Remodelao do sistema nervoso 753
xiv Tabela dos Contedos
da Quinta Edio inicia com uma viso geral das famlias do fator de cres-
cimento fibroblstico, TGF-, Wnt e Hedgehog dos fatores de crescimento
e diferenciao.
Quarto, este livro est conectado a um website onde estudantes e pro-
fessores podem encontrar mais material em muitos tpicos selecionados.
Tal material inclui (1) detalhes de experimentos que so extremamente
especializados para serem colocados no texto, (2) informao histrica so-
bre reas particulares da biologia do desenvolvimento e personalidades
envolvidas, (3) implicaes mdicas de fenmenos particulares do desen-
volvimento, (4) debates ou comentrios em questes relevantes para o cam-
po, e (5) atualizaes do material do texto nessa rea da biologia de cresci-
mento cada vez mais rpido. Filmes e entrevistas gravadas esto includas
e esses artigos de destaque podero ser expandidos medida que a tecnologia
os tornar mais fceis para serem usados. Esse website est conectado tam-
bm a outros websites e podem ser usados para enriquecer a perspectiva de
algum sobre o que est acontecendo no desenvolvimento animal. A presen-
a de um website nos permite manter o direcionamento deste livro s pesso-
as para as quais isso foi originalmente pretendido: estudantes dos ltimos
anos da graduao e do incio da ps-graduao. Ele tambm me ajudou a
no deixar o livro tornar-se um substituto para peso de papel.
A viso de Roux foi que a biologia do desenvolvimento algum dia cons-
tituiria a base de todas as outras disciplinas biolgicas e, em continuada
simbiose com essas disciplinas, desempenharia uma parte proeminente nas
solues dos problemas da vida. Essas foram palavras audaciosas, at mes-
mo arrogantes h cem anos atrs; hoje, elas expressam uma aceitao ampla-
mente sustentada. O desenvolvimento integra todas as reas da biologia e
desempenha um papel crucial em relacionar o gentipo ao fentipo. O desen-
volvimento pode ser estudado usando qualquer organismo e em qualquer
nvel de organizao, de molculas a filos.
medida que o campo continuar a se expandir e se aprofundar , uma
palavra de advertncia requerida: a biologia do desenvolvimento no pode
ser aprendida ou ensinada em um nico semestre. Este texto uma tentati-
va para prover cada pessoa com material suficiente para seu curso, mas um
instrutor no necessita se sentir culpado por no determinar todos os cap-
tulos, e os estudantes no necessitam se sentir privados se eles no lerem
todos os captulos. Isto o comeo do caminho, no sua concluso.
http://zygote.swarthmore.edu/intro2.html
Agradecimentos
Esta edio, como suas precursoras, deve muito s sugestes e crticas dos
estudantes em minhas classes de biologia do desenvolvimento e gentica
do desenvolvimento. O grupo de funcionrios e docentes extremamente
corporativo da Universidade Swarthmore tambm desempenharam pa-
pis importantes na produo deste livro, e os bibliotecrios da rea de
cincia E. Horikawa e M. Spencer merecem agradecimentos especiais por
terem segurado volumes recentes na biblioteca enquanto eu estava escre-
vendo o livro. Os cientistas que revisaram estes captulos forneceram enor-
me ajuda tanto na preciso tcnica dos captulos quanto nas sugestes
para trabalho futuro. Esses investigadores incluem: S. Carroll, J. Cebra-
Thomas, E. M. De Robertis, S. DiNardo, E. Eicher, C. Emerson, G. Grunwald,
D. J. Grunwald, M. Hollyday, L. A. Jaffe, W. Katz, R. Keller, K. Kemphues, D.
Kirk, G. Martin, H. F. Nijhout, D. Page, R. Raff, R. Schultz, C. Stern, S.
Tilghman, R. Tuan e M. Wickens. Eu tambm quero agradecer aos muitos
cientistas que desviaram do seu caminho para ajudar a tornar esta edio
melhor lendo pores especficas dos captulos. Eles incluem: M. Bronner-
Fraser, J. Fallon, N. M. Le Douarin, E. McCloud, J. Opitz, K. Sainio, H. Sariola,
I. Thesleff e T. Valente. Se eu deixei algum fora, por favor me desculpem.
desnecessrio dizer que os julgamentos editoriais finais foram de minha
responsabilidade. Meus agradecimentos especiais a Judy Cebra-Thomas
que no somente me aconselhou em certos captulos mas quem deu exce-
lente ajuda durante meu perodo sabtico permitindo-me terminar este
livro. Agradecimentos tambm aos cientistas e filsofos, especialmente: C.
van der Weele, R. Amundson, L. Nyhart, R. Burian, H. F. Nijhout, A. F.
Sterling, K. Smith e A. I. Tauber, que participaram nos workshops de biolo-
gia do desenvolvimento da Sociedade Internacional para a Histria, Filo-
sofia e Estudos Sociais da Biologia. Algumas das melhores crticas cons-
trutivas deste livro-texto vieram dessas pessoas.
Andy Sinauer uma vez mais conseguiu reunir as mesmas e extraor-
dinrias pessoas neste projeto, e foi um privilgio trabalhar com eles. Meus
agradecimentos a ele e aos editores Nan Sinauer e Carol Wigg, coordenador
de produo Chris Small, artistas John Woolsey e Gary Welch, designer
Susan Schmidler, editor de texto Janet Greenblatt, e artista de layout Janice
Holabird. As habilidades editoriais de Tinsley Davis so extremamente re-
conhecidas. Devido ao fato de que os prazos finais devem ser cumpridos e
outro trabalho posto de lado, eu tenho que agradecer minha famlia por
mais uma vez me permitir prosseguir com isso. Em particular, este livro
nunca poderia ter sido completado se no fosse pelo encorajamento de mi-
nha esposa, Anne Raunio, que, como uma obstetra, gosta do lado mais pr-
tico da biologia do desenvolvimento. Meus agradecimentos a todos vocs.
SCOTT F. GILBERT
1 DE MARO DE 1997
Introduo Biologia
do Desenvolvimento
1 Introduo ao desenvolvimento animal 1
2 Genes e desenvolvimento: Introduo e tcnicas 35
3 Base celular da morfognese: Afinidade celular diferencial 79
I
CAPTULO 1 Introduo ao Desenvolvimento Animal 1
1
2 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
nveis molecular e qumico (p. ex., Como os genes globina so transcritos, e como os
fatores que ativam sua transcrio interagem uns com os outros e com o DNA?), a nveis
celular e tissular (p. ex., Quais so as clulas capazes de produzir globina, e como o
mRNA da globina deixa o ncleo?), a nvel de rgos ou sistema de rgos (p. ex., Como
vasos capilares so formados em cada tecido, e como so instrudos a se conectarem e
ramificarem?) e, at mesmo, a nveis ecolgicos e evolucionrios (p. ex., Como diferenas
na ativao do gene globina permitem o fluxo de oxignio da me para o feto, e como
fatores ambientais acionam a diferenciao de mais hemcias?). Biologistas do desen-
volvimento podem estudar qualquer organismo e todo tipo de clula.
Biologia do desenvolvimento um dos campos que mais tem crescido e tambm
um dos mais emocionantes da biologia. Parte dessa emoo vem dos assuntos estu-
dados, porque estamos apenas comeando a entender o mecanismo molecular do
desenvolvimento animal. Outra parte da emoo vem do papel unificador que a biolo-
gia do desenvolvimento assume nas cincias biolgicas. A biologia do desenvolvi-
mento est criando uma estrutura que integra a biologia molecular, fisiologia, biologia
celular, anatomia, pesquisa do cncer, neurobiologia, imunologia, ecologia, e biologia
evolucionria. O estudo do desenvolvimento tornou-se essencial para a compreenso
de qualquer rea da biologia.
Esperma-
tozide
Mrula
Blstula
Ocito Local das clulas
embrionrias
Clula germinativa
(Germ plasm)
Esperma- Blastocele
tozide
(gameta Ocito
masculino) (gameta
feminino)
GAMETOGNESE
Adulto
sexualmente maduro
Blastporo
Ectoderma
Gnada
Mesoderma
Estgios
Endoderma
larvais
imaturos
INCUBAO (NASCIMENTO)
Figura 1.1
Histrico do desenvolvimento de um repre-
sentante animal, um sapo. Estgios que vo
da fertilizao at o nascimento so coletiva-
mente conhecidos como embriognese. As
regies responsveis por produzir clulas em-
brionrias so mostradas em cores. Gameto-
gnese, que completa no adulto sexualmen-
te maduro, comea em pocas diferentes, de-
pendendo da espcie. revestimento do tubo digestivo e rgos associados (pncreas, fgado, pul-
mes, etc.); e o mesoderma, camada do meio, d origem a diversos rgos
(corao, rins, gnadas), tecidos conjuntivos (ossos, msculos, tendes, va-
sos sangneos) e clulas sangneas.
3. Uma vez que as trs camadas embrionrias esto estabelecidas, as clulas
interagem umas com as outras e se reorganizam para produzir tecidos e rgos.
Esse processo chamado organognese. (Nos vertebrados, a organognese
iniciada quando uma srie de interaes celulares induzem as clulas ectodr-
micas da poro mediana do dorso a formar o tubo neural. Esse tubo originar
o crebro e a coluna vertebral). Muitos rgos contm clulas de mais de uma
camada embrionria, e no incomum o exterior de um rgo ser derivado de
uma determinada camada e o interior de outra. Tambm durante a organognese,
CAPTULO 1 Introduo ao Desenvolvimento Animal 5
algumas clulas sofrem longas migraes do seu lugar de origem at sua loca-
lizao final. Essas clulas migrantes incluem os precursores das clulas san-
gneas, clulas linfticas, clulas pigmentadas e gametas. A maior parte dos
ossos de nossa face so provenientes de clulas que migraram ventralmente
da regio dorsal da nossa cabea.
4. Como observado na Figura 1.1, em muitas espcies, uma parte especializada
do citoplasma do ovo d origem s clulas que so precursoras dos gametas.
Essas clulas so chamadas de clulas germinativas, sendo destinadas
funo reprodutiva. Todas as outras clulas do corpo so chamadas clulas
somticas. Essa separao entre clulas somticas (que do origem a um
corpo individual) e clulas germinativas (que contribuem para a formao de
uma nova gerao) freqentemente uma das primeiras diferenciaes que
ocorrem durante o desenvolvimento animal. As clulas germinativas final-
mente migram para as gnadas, onde se diferenciam em gametas. O desen-
volvimento de gametas, chamado de gametognese, normalmente no com-
pletado at que o organismo tenha se tornado fisicamente maduro. Na matu-
ridade, os gametas podem ser liberados e participar de uma fertilizao dando
incio a um novo embrio. O organismo adulto finalmente sofre envelheci-
mento e morre.
Processamento de RNA
mRNA mRNA
Traduo
Citoplasma Traduo
mRNA mRNA
Protena Protena
Prfase:
O envoltrio nuclear
quebra e um fuso se forma
entre dois centrolos.
Prometfase:
Interfase: DNA duplicado em Os cromossomos se
preparao para a diviso celular. ligam s fibras dos fusos.
Cromatdeos do
cromossomo
Ncleo Cromatina Nuclolo
Regio do centrmero
Fuso em
desenvolvimento
Centrolos
ster
Envoltrio Envoltrio
nuclear nuclear
Nuclolo rompe
Cromossomos filhos
Metfase:
Os cromossomos se
alinham no equador da clula.
Telfase:
Os cromossomos atingem
os plos mitticos e a clula
comea a invaginar.
Figura 1.3
Diagrama de mitose em clulas animais. Du-
Anfase:
Os cromossomos duplicados
rante a interfase o DNA duplicado em pre-
(chamados cromatdeos) so parao para a diviso celular. Durante a
separados. prfase, o envoltrio nuclear quebra e for-
ma-se um fuso entre os dois centrolos. Na
nucleados e anucleados (reviso por Wilson, 1986). Quando vrios protistas foram metfase, os cromosssomos se alinham no
equador da clula e se inicia a anfase, os
fragmentados, quase todas as partes morreram. No entanto, os fragmentos que conti-
cromossomos duplicados (cada duplicata de
nham ncleo foram capazes de sobreviver, regenerando todo a complexa estrutura cromossomo um cromatdeo) so separa-
celular (Figura 1.5) dos. Na telfase os cromossomos atingem
O controle nuclear da morfognese celular e a interao do ncleo e citoplasma os plos mitticos e a clula comea a
esto muito bem demonstrados nos estudos da Acetabulria. Essa enorme clula invaginar. Cada plo contm o mesmo nme-
individual (2 a 4 cm de comprimento) consiste de trs partes: o disco reprodutivo, o ro e tipos de cromossomos que continha a
pednculo e o rizide (Figura 1.6A). O rizide est localizado na base da clula onde clula antes da diviso.
essa presa ao substrato. O ncleo individual da clula se localiza dentro do rizide. O
tamanho da Acetabulria e a localizao do seu ncleo permitiram que pesquisadores
8 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
Figura 1.4
Transcrio e traduo simultnea em procariotos. Uma poro de DNA de Escherichia coli se
estende horizontalmente por essa microfotografia eletrnica. Transcries de RNA mensageiro
podem ser vistas dos dois lados. Ribossomos se juntaram ao mRNA e esto sintetizando
protenas (que no podem ser vistas). O mRNA pode ser visto aumentando de tamanho, da
esquerda para a direita, indicando a direo da transcrio. (Cortesia de O. L. Miller, Jr.)
removessem o ncleo de uma clula e o substitusse por outro, de outra clula. Nos
anos 30, J. Hmmerling tirou proveito dessa singular caracterstica e trocou ncleos
entre duas espcies morfologicamente distintas, A. mediterranea e A. crenulata. Como
mostrado na fotografia, essas duas espcies tm discos reprodutivos muito diferen-
tes. Hmmerling descobriu que quando um ncleo de uma determinada espcie era
transplantado para o pednculo de outra, o novo disco em formao finalmente assu-
mia a forma associada com o ncleo do doador (Figura 1.6B). Assim, foi considerado
que o ncleo era o controlador do desenvolvimento da Acetabulria.
A formao de um disco reprodutivo um evento morfognico complexo, envol-
vendo a sntese de um grande nmero de protenas, que devem ser acumuladas em
certa poro da clula e ento organizadas em estruturas complexas especficas da
espcie. O ncleo transplantado da clula realmente direciona a sntese de seu disco
reprodutivo espcie-especfico, mas uma tarefa que pode levar semanas para ser
realizada. Alm disso, se o ncleo for removido da clula de Acetabulria em estgio
inicial do desenvolvimento, antes de formar o disco reprodutivo, um disco normal se
formar semanas depois, ainda que o organismo ir morrer. Esses estudos sugerem
que (1) o ncleo contm informao especfica sobre o tipo de disco reprodutivo
produzido (isto , contm informao gentica que especifica as protenas necessri-
as para a produo de um certo tipo de disco reprodutivo), e (2) o material contendo
essa informao entra no citoplasma muito antes dessa produo ocorrer. A informa-
o no citoplasma no ser usada por vrias semanas.
Fragmento
anucleado morre
Corte
Fragmento
Ncleo nucleado
se regenera
Corte
Figura 1.5
Regenerao do fragmento nucleado do protista unicelular
Stylonychia. Os fragmentos anucleados sobrevivem por al- Fragmento
gum tempo, mas finalmente morrem. anucleado morre
CAPTULO 1 Introduo ao Desenvolvimento Animal 9
(B)
Disco
reprodutivo
(A)
Disco
reprodutivo
Pednculo
A. crenulata A. mediterranea
Pednculo Ncleos transplantados
Ncleo Ncleo
Rizide
Rizide Rizide
1 cm 1 cm A estrutura do disco
reprodutivo a do
ncleo doador
Figura 1.6
(A) Acetabulria mediterranea (esquerda) e A.
crenulata (direita). Cada unidade uma clula singu-
lar. O rizide contm o ncleo. (B) Efeitos da troca de
ncleos entre duas espcies de Acetabulria. Ncleos
foram transplantados para fragmentos de rizides
anucleados. Estruturas de A. crenulata esto sombre-
adas; estruturas de A. mediterranea no esto som-
breadas. (Fotografias cortesia de H. Harris.)
Uma hiptese atual, proposta para explicar essas observaes, que o ncleo sintetiza
um mRNA estvel, posicionado em estado dormente no citoplasma at a formao do
disco reprodutivo. Essa hiptese amparada por uma observao publicada por Hmmerling
em 1934. Hmmerling fracionou uma Acetabulria jovem em diversas partes (Figura 1.7). A
poro com o ncleo finalmente formou um novo disco, conforme esperado; da mesma
forma o fez a extremidade apical do pednculo. No entanto, a parte intermediria do pedn-
culo no formou o disco reprodutivo. Por isso, Hmmerling postulou (aproximadamente 30
anos antes de sabermos da existncia do mRNA), que as instrues para a formao do
disco reprodutivo se originavam no ncleo, sendo de alguma forma guardadas dormen-
tes prximo extremidade do pednculo. Muitos anos mais tarde, Kloppstech e
Schweiger (1975) estabeleceram que o mRNA derivado do ncleo se acumula nessa
regio. Ribonuclease, uma enzima que cliva RNA, inibe completamente a formao do
disco reprodutivo quando adicionada gua marinha na qual cresce a Acetabulria. Em
clulas anucleadas, esse efeito permanente; uma vez que o RNA destrudo, no pode
mais haver a formao do disco reprodutivo. Em clulas nucleadas, no entanto, um novo
disco pode ser formado aps a eliminao da ribonuclease, presumivelmente porque um
novo mRNA ento produzido pelo ncleo. Garcia e Dazy (1986) tambm demonstraram
que a sntese da protena especialmente ativa no pice da Acetabulria.
Fica claro pela discusso anterior, que a transcrio nuclear tem um papel impor-
tante na formao do disco reprodutivo da Acetabulria. Mas deve ser notado que o
10 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
Disco reprodutivo e
pednculo regenerados
Extremidade
apical do
pednculo
Poro central
do pednculo Sem regenerao
Rizide
e ncleo
Regenerao total
Figura 1.7
Habilidade regenerativa de diferentes fragmentos da A. mediterranea
citoplasma tambm cumpre uma parte essencial na formao desse disco. O mRNA
no traduzido durante semanas, mesmo estando no citoplasma. Algo no citoplasma
controla quando as mensagens devem ou no ser utilizadas. Portanto, a expresso do
disco reprodutivo controlada no somente pela transcrio nuclear como tambm
pelo controle de traduo do RNA citoplasmtico. Nesse organismo unicelular, o
desenvolvimento controlado em ambos estgios de transcrio e de traduo.
Figura 1.8
Transformao de Naegleria gruberi da forma
em seu estgio de ameba. produzida de novo (desde o comeo), comeando com amebide ao estado flagelado. Linha superior
uma nova transcrio no ncleo. Para mostrar isso, os pesquisadores manipularam corada com Iodo/Lugol; linha inferior corada
com um anticorpo fluorescente protena tu-
transcries em vrios estgios com actinomicina D, uma droga antibitica que seleti-
bulina dos microtbulos. A transformao
vamente inibe a sntese do RNA. Quando adicionada anteriormente diluio do iniciada pela eliminao do alimento (bactri-
alimento, esse antibitico previne a sntese da tubulina. No entanto, se a actinomicina as) da colnia de Naegleria. (A) 0 minutos;
D adicionada 20 minutos aps a diluio, a tubulina ainda produzida em tempo (B) 25 minutos, mostrando sntese de nova
normal (aproximadamente 30 minutos mais tarde). Portanto, parece que o mRNA para tubulina; (C) 70 minutos, emergncia de
a tubulina foi produzido durante os primeiros vinte minutos aps a diluio e usado flagelos visveis (D) 120 minutos, mostrando
logo em seguida. Essa interpretao foi confirmada quando foi demonstrado que o flagelos maduros e forma aerodinmica do cor-
mRNA extrado da ameba no continha mensagem alguma, detectvel para tubulina po (de Walsh, 1984, cortesia de C. Walsh.)
flagelar, ao passo que mRNA extrado de clulas diferenciadas continha muitas mensa-
gens desse tipo (Walsh, 1984).
Ento, temos aqui um excelente exemplo de controle transcricional de um proces-
so de desenvolvimento: O ncleo da Naegleria responde a mudanas ambientais
sintetizando o mRNA para tubulina flagelar. Notamos tambm um outro processo que
permanece extremamente importante no desenvolvimento de todos os outros animais
e plantas, que o agrupamento de molculas de tubulina para a produo do flagelo.
Esse arranjo, pelo qual a tubulina polimerizada em microtbulos, e esses por sua vez
agrupados de forma ordenada, visto em toda a natureza. Em mamferos, est evidente
no flagelo do espermatozide e nos clios da medula espinhal e do trato respiratrio.
Mais ainda, no somente a tubulina que produz o flagelo. Existem em torno de 300
outras protenas em cada flagelo, e o movimento flagelar depende da orientao ade-
quada dessas protenas uma em relao a outra. At mesmo processos celulares tm a
sua prpria morfognese baseada em interaes moleculares entre os fragmentos
de protena. Tal controle ps-traduo, onde uma protena no funcional at que
esteja ligada a outras molculas, ser discutido melhor mais tarde. Vimos ento, que o
desenvolvimento em eucariotos unicelulares pode ser controlado nos estgios de
transcrio, traduo e ps-traduo.
12 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
Figura 1.9 os
Diferenciao do fentipo flagelado em rp
co m
Naegleria. Amebas que vinham crescendo a de po a
in o or lar an
em um meio enriquecido com bactria so ul t
en las
c c
b
tu e a ei
s
de ag
e al n t o
lavadas afim de se eliminar as bactrias no da o m p am lu dam s v o a fl l os m e
u c n v i e i
e c
es r gr s, o a rm ag r
tempo 0. Aos 80 minutos, praticamente toda
nt e l a A asai rred e lo
s
rm fo Fl o m p l
o
a populao desenvolveu flagelo. (Segundo S ag b a ag F m c ta
fl se Fl co to
Fulton, 1977.)
100
40
20
0
0 20 40 60 80 100
Tempo aps suspenso (minutos)
Microncleo Fuso
meitico
Macroncleo
Ponte
citoplasmtica
Dois paramcios Microncleos passam Todos menos um
formam por meiose, formando 8 dos microncleos de
ponte citoplasmtica ncleos haplides por clula; cada parceiro degeneram
macroncleos degeneram
Microncleo
estacionrio
Microncleo
migratrio
Figura 1.11
Unio de paramcios atravs da ponte citoplasmtica, onde dois paramcios podem trocar
material gentico, deixando cada um com genes que diferem daqueles com os quais iniciaram o
processo. (Strickberger, 1985.)
Acasalamento
Fuso citoplasmtica
Zigoto (diplide)
Maturao (meiose)
Germinao
Figura 1.13
Sumrio da meiose. O DNA e as protenas associadas replicam durante a interfase. Durante a
prfase, o envoltrio nuclear se rompe e os cromossomos homlogos (cada cromossomo
duplicado, com os cromatdeos juntos no centrmero) se alinham em pares. Reagrupamentos
cromossmicos podem ocorrer entre quatro cromatdeos homlogos nesse estgio. Aps a
primeira metfase, os dois cromossomos homlogos originais so segregados em clulas dife-
rentes. Durante a segunda diviso, o centrmero se divide, deixando cada nova clula com uma
cpia de cada cromossomo.
MEIOSE I
Esse tubo conecta e se funde com um local especfico no indivduo menos. interes-
sante que o mecanismo usado para estender esse tubo - polimerizao da protena
actina - tambm usado para estender processos do espermatozide e vulo do
ourio-do-mar. No Captulo 4, veremos que o reconhecimento e fuso de espermato-
zide e vulo ocorrem de uma maneira espantosamente semelhante a desses protistas.
Eucariotos unicelulares parecem ter os elementos bsicos do processo de desen-
volvimento que caracterizam os organismos mais complexos: a sntese celular con-
trolada pela regulao transcricional, por traduo e ps-traduo; existe um mecanis-
mo para processar o RNA atravs da membrana nuclear; as estruturas de genes indi-
viduais e cromossomos so como sero atravs da evoluo eucaritica; mitose e
meiose so aperfeioadas; e a reproduo sexual existe, envolvendo a cooperao
entre clulas individuais.Tal cooperao intercelular se torna ainda mais importante
com a evoluo de organismos multicelulares.
MEIOSE II
As Volvocaceanas
Os organismos mais simples entre as volvocaceanas so reunies ordenadas de nu-
merosas clulas, cada uma parecida ao protista unicelular Chlamydomonas. Um nico
organismo de volvocacea do gnero Gonium (Figura 1.15), por exemplo, consiste de
uma placa plana contendo de 4 a 16 clulas, cada uma com seu prprio flagelo. Em um
gnero relacionado, Pandorina, 16 clulas formam uma esfera; e no Eudorina, a esfe-
ra contm 32 ou 64 clulas organizadas em um padro regular. Nesses organismos, um
princpio muito importante tem-se desenvolvido: a diviso ordenada de uma clula
para gerar um nmero de clulas que so organizadas de uma maneira previsvel.
Como ocorre na maioria dos embries animais, as divises celulares pelo qual uma
nica clula de volvocacea produz um organismo de 4 a 64 clulas ocorrem em uma
seqncia muito rpida e com ausncia de crescimento celular.
Os dois prximos gneros da srie volvocacea exibem um outro princpio impor-
tante do desenvolvimento: a diferenciao de tipos celulares em organismo indivi-
dual. As clulas reprodutivas se diferenciam das clulas somticas. Em todos os
gneros j mencionados, toda a clula pode, e normalmente o faz, produzir um organis-
mo novo completo por mitose (Figura 1.16 A,B). Nos gneros Pleodorina e Volvox,
porm, relativamente poucas clulas podem se reproduzir. Na Pleodorina californica,
as clulas da regio anterior so restritas uma funo somtica; somente aquelas
Figura 1.15
Representante da ordem dos Volvocales. (A)
o protista unicelular Chlamydomonas rei-
nhardtii. (B) Gonium pectorale com oito c-
lulas Chlamydomonas-smiles em um disco
convexo. (C) Pandorina morum. (D) Eudo-
rina elegans. (E) Pleodorina californica. Aqui
todas as 64 clulas so originalmente simila-
res, mas as posteriores desdiferenciam e redi- (A) (B) (C)
ferenciam como clulas assexuadas reprodu-
tivas chamadas gondios, enquanto as clulas
anteriores permanecem pequenas e biflagela-
das, como o Chlamydomonas. (F) Volvox
carteri. Aqui, clulas destinadas a se torna-
rem gondios so separadas no comeo do
desenvolvimento e nunca desenvolvem carac-
tersticas somticas. As clulas menores,
somticas, lembram Chlamydomonas. Todas,
menos o Chlamydomonas, so membros da
famlia das Volvocaceas. A complexidade au-
menta do Chlamydomonas unicelular ao
Volvox pluricelular. Barra em A de 5m; B-
D, 25m; E, F, 50m (Cortesia de D. Kirk.) (D) (E) (F)
CAPTULO 1 Introduo ao Desenvolvimento Animal 17
Figura 1.16
Reproduo assexuada nas volvocaceanas. (A)
Colnia madura de Eudorina elegans. (B) Cada
uma das clulas de E. elegans se divide e pro-
duz uma nova colnia. (C) Volvox carteri ma-
duro. A maioria das clulas so incapazes de se
reproduzir. Clulas germinativas (gondia) co-
mearam a se dividir em novos organismos. (A
e B segundo Hartmann,1921; C de Kirk et al.,
(A) (B) (C)
1982, cortesia de D. Kirk.)
Informaes adicionais
& Especulaes
Adulto com
juvenis
Adulto com
gondios maduros
Maturao
dos gondios Expanso continuada
da matriz extracelular
(E) (J)
Indutor
sexual
Espermatozide
Indutor
Zigotos
sexual
vulo
sexual indutiva de 30-kDa. Essa protena tando placas com V. carteri temperaturas de aparecer, multiplicar-se, realizando uma
to poderosa que concentraes meno- que poderiam ser encontradas em um reser- orgia sexual reprodutiva em poas de gua
res que 6x10-17 fazem com que os gondios vatrio raso durante o fim do vero. Quan- da chuva de apenas duas semanas
sofram um padro modificado de desen- do isso era feito, as clulas somticas dos (Powers, 1908). Ainda que reservatrios tem-
volvimento embrionrio que resulta na volvox assexuados produziam a protena porrios formados pela gua das chuvas se-
produo de vulos ou espermatozides, sexual indutora. Sendo a quantidade da pro- quem sob o calor do vero, Volvox encon-
dependendo do sexo gentico do indiv- tena secretada por um indivduo suficiente trou um meio de sobrevivncia: usa o calor
duo (Sumper et al.,1993). Os espermato- para iniciar o desenvolvimento sexual em para induzir a formao de indivduos sexu-
zides so liberados para nadar para a f- mais de 500 milhes de volvox assexuados, ados cujo acasalamento produz zigotos ca-
mea onde fertilizam os vulos para pro- um nico volvox indutor pode converter um pazes de sobreviver sob condies que ma-
duzir zigotos dormentes (Figura 1.21). reservatrio inteiro para a sexualidade. Essa tam o organismo adulto. Observamos, tam-
Qual a fonte dessa protena indutora descoberta explica uma observao feita h bm, que o desenvolvimento est critica-
sexual? Kirk e Kirk (1986), descobriram que quase 90 anos, de que na intensa radiao mente ligado ao ecossistema ao qual o or-
o ciclo sexual poderia ser iniciado esquen- solar do vero de Nebraska, Volvox capaz ganismo se adaptou para sobreviver.
Lesma
(Pseudoplasmdio; grex)
15 h
16 h
14 h
17 h
CULMINAO 20 h
MIGRAO
12 h
Esporos
23 h
10 h
AGREGAO
Mixamebas Fluxos
9 h celulares
Corpo de frutificao maduro
6 h
24h
Figura 1.22
Ciclo vital de Dictyostelium discoideum. Esporos haplides originam mixamebas, que podem
reproduzir-se assexualmente para formar mais mixamebas haplides. A medida que diminui o
suprimento alimentar, ocorre agregao em pontos centrais, e forma-se um agregado de
pseudoplasmdio. Finalmente, esse pra de se movimentar e forma um corpo de frutificao
que libera mais esporos. Os nmeros referem-se s horas decorridas desde que a diluio
nutricional iniciou a seqncia desenvolvimental.
(C)
(D)
Figura 1.23
Quimiotaxia de amebas de Dictyostelium de-
vida ondas espirais de cAMP. (A) estrutura
resultado uma onda giratria em espiral de cAMP, que se propaga atravs da qumica do cAMP. (B) Visualizao de vrias
populao de clulas (Figura 1.23B-D). medida que chega cada onda, as clulas do ondas de cAMP no meio. Clulas centrais
secretam cAMP em intervalos regulares, e
mais um passo para o centro.*
cada secreo difunde para fora como um onda
A diferenciao de amebas individuais em clulas pedunculares (somticas) ou concntrica. As ondas so mapeadas saturan-
esporos (reprodutivas) uma questo complexa. Raper (1940) e Bonner (1957) de- do-se papel de filtro com cAMP radioativo e
monstraram que as clulas anteriores normalmente formam pednculo, enquanto as colocando-o sobre uma colnia em agregao.
clulas remanescentes, posteriores, em geral esto destinadas a formar esporos. No O cAMP das clulas secretoras dilui o cAMP
entanto, a remoo cirrgica da parte anterior da lesma no elimina a capacidade do radiativo. Quando a radioatividade no papel
grex formar um pednculo. Em vez disso, as clulas que agora se encontram no final registada (colocando-o sobre filme de raios-
anterior aps a cirurgia (e que originalmente estavam destinadas a formar esporos), X), as regies de alta concentrao de cAMP
agora formam o pednculo (Raper, 1940). De alguma maneira, tomada uma deciso de na cultura aparecem mais claras que aquelas
de baixa concentrao de cAMP. (C,D) On-
modo tal, que clulas anteriores virem clulas pedunculares e clulas posteriores
das espirais de amebas movendo-se em dire-
virem esporos. Essa habilidade de clulas mudarem seus destinos desenvolvimentais, o fonte inicial de cAMP. (C) Essa
microfotografia em campo escuro processa-
da digitalmente mostra cerca de 107 clulas.
* A bioqumica dessa reao envolve um receptor que liga o cAMP. Quando essa ligao Como clulas mveis e imveis dispersam a
ocorre, realiza-se transcrio especfica de genes, iniciada movimentao em direo fonte de luz diferentemente, a fotografia reflete movi-
cAMP, e enzimas adenilciclases (que sintetizam cAMP a partir de ATP) so ativadas. O cAMP mento celular. As bandas claras so compos-
recm-formado ativa seus receptores prprios, assim como aqueles de seus vizinhos. As clulas tas de clulas migratrias alongadas; as ban-
na rea permanecem insensveis s novas ondas de cAMP at que o cAMP ligado seja removido das escuras so clulas que pararam de se
dos receptores por outra enzima da superfcie celular, a fosfodiesterase (Johnson et al., 1989). mover e se arredondaram. (D) As clulas for-
A matemtica de tais reaes de oscilao prev que a difuso de cAMP seria inicialmente mam correntes, a espiral de movimento ainda
circular. Porm, medida que o cAMP interage com as clulas que recebem e propagam o sinal, pode ser vista movendo-se em direo ao cen-
as clulas que recebem a parte frontal da onda comeam a migrar com uma velocidade diferente
daquela das clulas atrs delas. O resultado a espiral rotatria de cAMP e a migrao vistas na tro. (B de Tomchick e Devreotes, 1981, cor-
Figura 1.23. interessante que as mesmas frmulas matemticas predizem o comportamento de tesia de P. Devreotes; C e D de Siegert e Weijer,
certas reaes qumicas e a formao de novas estrelas em galxias espirais rotatrias (Tyson e 1989, cortesia de F. Siegert.)
Murray, 1989).
24 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
Figura 1.24
Clulas de Dictyostelium sintetizam um adesivo, glicoprotena 24-kDa, pouco aps a inanio
nutricional. Clulas de Dictyostelium foram coradas com um anticorpo fluorescente que se liga
glicoprotena 24-kDa e foram em seguida observada sob luz ultravioleta. Essa protena no foi
vista em amebas que tinham apenas parado de se dividir. No entanto, como mostrado aqui 10
horas aps o fim da diviso celular amebas individuais so vistas apresentando essa protena
em suas membranas celulares e so capazes de aderir umas s outras.
de acordo com sua localizao dentro do organismo inteiro, e assim compensar por
partes faltantes, chamada regulao. Veremos esse fenmeno em muitos embries,
inclusive naqueles dos mamiferos.
Informaes adicionais
& Especulaes
Evidncia e Anticorpos
A Biologia, tal como qualquer outra Como ento ir para alm da mera cor- tenas de membrana em geral). Nesse
cincia, no trata de fatos; antes, relao? No estudo da adeso celular em caso, bloquear a glicoprotena tambm
trata de evidncias. Vrios tipos Dictyostelium, o prximo passo foi usar causaria a inibio da agregao celu-
de evidncia sero apresentados neste li- aqueles mesmos anticorpos para bloque- lar. Assim, a evidncia perda-defuno
vro; no so todos de equivalente vigor. ar a adeso de mixamebas. Usando uma precisa ser amparada por muitos con-
Como exemplo, vamos usar a anlise da tcnica introduzida pelo laboratrio de troles demonstrando que agentes cau-
adeso celular em Dictyostelium. O primei- Gerisch (Beug et al., 1970), Knecht e cola- sadores de perda de funo derrubam
ro e mais fraco tipo de evidncia a evi- boradores (1987) tomaram os anticorpos especificamente aquela funo em par-
dncia correlativa. Aqui, so feitas corre- que ligam essa glicoprotena 24-kDa e iso- ticular, e nada mais.
laes entre dois ou mais eventos, e infe- laram seus stios ligantes de antgeno (as O tipo mais forte de evidncia evi-
re-se que um evento estimule o outro. partes da molcula do anticorpo que re- dncia-de-ganho-de-funo. Aqui, o in-
Como vimos, anticorpos marcados com flu- conhecem o antgeno). Isso foi necess- cio do primeiro evento estimula um segun-
orescncia para uma certa glicoprotena de rio porque o todo da molcula de anticor- do e mesmo em situaes onde nenhum
24 kDa, no marcam clulas vegetativas em po contm dois stios ligantes de antgeno desses eventos ocorre usualmente. Recen-
diviso; porm, esses mesmos anticorpos que iriam ligar-se artificialmente de manei- temente, da Silva e Klein (1990) e Faix e
acham a protena em membranas celulares ra cruzada e aglutinar as mixamebas. Quan- colaboradores (1990) obtiveram tal evidn-
de mixameba logo que as clulas param de do esses fragmentos ligantes de antgeno cia para mostrar que a glicoprotena 80-kDa
se dividir e tornam-se competentes para (chamados Fragmentos Fab) foram adici- uma molcula adesiva. Isolaram o gene
agregar (veja Figura 1.24). Assim, existe uma onados s clulas competentes para agre- para essa protena e o modificaram de uma
correlao entre a presena dessa glico- gao, as clulas no puderam se agre- maneira a motiv-lo ser expresso continu-
protena da membrana celular e a capaci- gar. Os fragmentos de anticorpo impedi- amente. Em seguida, recolocaram-no em
dade de agregao. ram as clulas de aderir entre si, presu mixameba bem-alimentada, crescendo ve-
Evidncia correlativa d um ponto de mivelmente por ligarse a glicoprotena getativamente, que usualmente no expres-
partida para investigaes, mas no se 24-kDa, bloqueando sua funo. Esse tipo sa essa protena e no tem capacidade de
pode afirmar com certeza que um evento de evidncia chamado evidncia-de- adeso. A presena dessa protena na mem-
estimula outro somente baseado em cor- perda-de-funo. Se bem que mais forte brana celular dessas clulas em diviso foi
relaes. Embora se possa inferir que a que a evidncia correlativa, ela ainda no confirmada por marcao com anticorpos.
sntese dessa protena causa a adeso das exclui outras inferncias. Por exemplo, Tais clulas agora aderiram umas s outras
clulas, tambm possvel que adeso ce- possvel que os anticorpos tenham mata- mesmo nos estados vegetativos, o que nor-
lular leve as clulas a sintetizar essa nova do a clula (o que poderia acontecer se a malmente no fazem. Assim, elas tinham
glicoprotena, ou que a adeso celular e a glicoprotena 24-kDa for um crtico canal ganho uma funo adesiva somente por
sntese da glicoprotena 24-kDa sejam de transporte). Isso tambm impediria a expressar essa glicoprotena em particular
eventos separados, iniciados pela mesma adeso celular. Ou talvez, a glicoprotena nas suas superfcies celulares. Essa evi-
causa subjacente. A ocorrncia simult- 24-kDa nada tinha a ver com a adeso pro- dncia de ganho-de-funo mais convin-
nea dos dois eventos pode mesmo ser co- priamente, mas necessria para o funci- cente que outros tipos de anlise. Experi-
incidncia e os eventos no terem relao onamento da verdadeira molcula adesi- mentos semelhantes foram recentemente
um com o outro.* va (como atravs da estabilizao de pro- realizados em clulas de mamferos (veja
captulo 3), para demonstrar a presena de
* Em uma carta irnica, caoando de tais inferncias correlativas, Sies (1988) demonstrou uma determinadas molculas adesivas celula-
notvel boa correlao entre o nmero de cegonhas vistas na Alemanha Ocidental de 1965 at 1980 res no embrio em desenvolvimento.
e o nmero de bebs nascidos durante esses mesmos anos.
26 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
(A)
(B)
Figura 1.25
Substncias qumicas que controlam a diferenciao em Dictyostelium. (A) e (C)
(B) mostram os efeitos de se colocar lesmas Dictyostelium em um meio
contendo enzimas que destroem cAMP extracelular. (A) Grex (pseudoplas-
mdio) corado para presena de uma protena pr-esporo especfica (regies
claras). (B) Grex semelhante corado aps tratamento com enzimas que de-
gradam cAMP. No visto produto pr-esporo especfico. (C) Amplifica-
o maior de uma lesma tratada com DIF (na ausncia de amnia). O corante
usado liga-se parede de celulose das clulas pedunculares. Todas as clulas
do grex tornaram-se clulas pedunculares. (A e B de Wang et al., 1988a; C de
Wang e Schaap, 1989; cortesia dos autores.)
CAPTULO 1 Introduo ao Desenvolvimento Animal 27
Informaes adicionais
& Especulaes
Pr-pednculo B Pr-pednculo B
grex migram para as bordas da regio pr- (Gross et al., 1983; Wang et al., 1990). passa a fosforilar um repressor que esta-
esporo e diferenciam-se no invlucro dos Bonner e colaboradores (1985), sugeriram va inibindo a expresso dos genes de di-
esporos e disco basal (Williams e Jermyn, que como a luz causa difuso mais rpida ferenciao do pednculo. No estado fos-
1991; Harwood et al., 1992). Finalmente, da amnia, remove o inibidor permitindo forilado, o inibidor inativo. Portanto, uma
os esporos so levantados 2 mm acima assim, o progresso da culminao. vez que os nveis de cAMP se elevam (pela
do solo, de onde podem ser dispersos A amnia parece inibir a produo do remoo da amnia), a PKA pode inativar
pelo vento ou um animal que passa. pednculo pelos menos de duas manei- o inibidor dos genes formadores do pe-
O gatilho para a culminao parece ser ras. Inibe a ao de DIF (Wang e Schaap, dnculo (Figura 1.27). [intro.4html]
a luz solar ou a baixa umidade. Experimen- 1989), e inibe a produo de cAMP nas
tos recentes sugerem que esses dois fa- clulas pr-pednculo (Schindler e Sus- Figura 1.27
tores causam a difuso de amnia da les- sman, 1977; Harwood et al., 1992). Esse Uma hiptese para a iniciao coordenada da
ma. A amnia produzida copiosamente cAMP necessrio para ativar a protena culminao e diferenciao de clulas
por lesmas migratrias e reprime a culmi- quinase cAMP-dependente (PKA). Clu- pedunculares em Dictyostelium. A luz solar
dissipa a amnia na parte anterior do grex,
nao. Sempre que a amnia estiver exau- las pr-pednculo contendo PKA no- permitindo maior produo de cAMP nas c-
rida (quer naturalmente ou experimental- funcional, no fosforilam certas protenas. lulas pr-pednculo. A concentrao mais alta
mente), a culminao comea (Schindler e Essas clulas no migram para a regio de cAMP ativa a PKA, que fosforila um
Sussman, 1977; Newell e Ross, 1982; central anterior, nem se diferenciam em inibidor da expresso gnica do pednculo. O
Bonner et al., 1985). A amnia inibe a con- clulas do pednculo (Firtel e Chapman, inibidor fosforilado no pode mais inibir os
verso de clulas pstA em pstB e probe a 1990; Harwood et al., 1992). Os dados genes pednculo-especficos. A seqncia pela
qual a formao de esporos inibida, no est
continuao da formao do pednculo sugerem que quando PKA ativada, clara. (Baseado em modelos de Bonner et al.,
1985, e Harwood et al., 1992)
cAMP
Amnia
Repressor ativo da
diferenciao e de Migrao
genes de migrao continuada
peduncular do grex
PKA
ativa
Transcrio
do gene da protena B
da matriz extracelular;
Repressor inativo
migrao de clulas
(fosforilado)
pr-pednculo;
diferenciao e
culminao peduncular
DEUTEROSTOMATAS PROTOSTOMATAS
Segmentados No-segmentados
Larva
trocfora
Clivagem em
a
ad
espiral gastrulao
m
lo
protostosomal da
ce
ma
do
lo
eu
ce
Larva dipleura
ps
a
izo
ad
em
(tornria)
m
qu
elo
ag
es
ac
nh
em
Li
em
ag
ag
nh
Clivagem radial
nh
Li
gastrulao Li
deuterostomal
L
DIA
RA
SIMETRIA Platelmintos primitivos RIA
ET
BILATERAL (acelomados) SIM
Larvas planulides
Protozorios coloniais
primitivos
Protistas flagelados
Figura 1.28
Principiais divergncias evolucionrias em animais existentes. (Outros modelos so possveis,
porm, os esquemas em geral so todos semelhantes ao mostrado aqui.)
Os Porferos
Considera-se que os protistas coloniais deram origem, ao menos, a dois grupos de
metazorios, ambos passando por estgios embrionrios. Um desses grupos o Porfero
(esponjas). Esses animais desenvolvem-se de um modo to diferente daquele de qual-
quer outro grupo de animais, que alguns taxonomistas sequer consideram-nos
metazorios (chamando-os, parazorios). Uma esponja tem trs tipos principais de
clulas somticas, mas um deles, o arquecito, pode se diferenciar em todos os outros
30 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
tipos. As clulas de uma esponja quando passadas por uma peneira, podem regenerar
novas esponjas a partir de clulas individuais. Ainda mais, em alguns casos, tal re-
agregao espcie-especfica: se clulas individuais de esponja de duas espcies
diferentes forem misturadas, cada uma que se re-forma contm somente clulas de
uma espcie (Wilson, 1907). Nesses casos, admite-se que os arquecitos mveis cole-
cionam clulas de sua espcie, mas no das outras (Turner, 1978). Esponjas no con-
tm mesoderma, no havendo portanto verdadeiros sistemas de rgos em Porfero;
esses seres no tm tubo digestivo, sistema circulatrio, nervos ou msculos. Assim,
apesar de passarem por estgios embrionrios e larvais, esponjas so muito pouco
parecidos com a maioria dos metazorios (veja Fell, 1997).
Protostomatas e Deuterostomatas
O outro grupo de metazorios emergindo dos protistas coloniais caracterizado pela
presena de trs camadas germinativas durante o desenvolvimento. Alguns membros
do grupo constituem os Radiatas, assim chamados porque tm simetria radial tal como
um tubo ou uma roda. Os Radiatas incluem os cnidrios (medusas, corais e hidras) e
ctenforos (medusas de crista). Nesses animais, o mesoderma rudimentar, consistin-
do de clulas escassamente disseminadas em uma matriz gelatinosa. Porm, a maioria
dos metazorios tem simetria bilateral, constituindo assim, os Bilaterias. Esses filos
bilaterais so classificados como platelmintos, protostomatas ou deuterostomatas.
Pensa-se que todos os Bilateria descendam de um tipo primitivo de platelminto. Esses
platelmintos foram os primeiros a ter mesoderma verdadeiro (embora no tivessem
ficado ocos para formar uma cavidade corprea), e foram considerados parecidos com
as larvas de certos celenterados contemporneos. Enquanto os platelmintos so des-
providos de celoma (cavidade corprea), os nematelmintos (e rotiferas) tm uma cavi-
dade corprea diferente daquela de todos os outros animais, por ser desprovida de
revestimento mesodrmico. A maioria dos filos so celomados, isto , possuem uma
cavidade corporal revestida por mesoderma.
As diferenas entre as duas divises de Bilateria esto ilustradas na Figura 1.29.
Protostomatas (do Grego, boca primeiro), incluem os filos dos moluscos, artrpodos
e vermes; so assim chamados porque a boca formada em primeiro lugar, junto ou
prximo da abertura intestinal, produzida durante a gastrulao. O nus se forma mais
tarde em outro local.
A cavidade corprea desses animais se forma a partir de uma previamente slida
corda de clulas mesodrmicas, tornadas ocas. A outra grande diviso dos Bilateria
a linhagem dos deuterostomatas. Os filos nessa diviso incluem os chordatas e os
equinodermos. Embora possa parecer estranho classificar seres humanos e cavalos
no mesmo grupo que estrelas-do-mar e ourios-do-mar, alguns traos embriolgicos
acentuam esse parentesco. Em primeiro lugar, nos deuterostomatas (do Grego signifi-
cando boca depois), a abertura bucal formada depois da abertura anal. Tambm,
enquanto prostostomatas em geral formam suas cavidades corpreas tornando oco
um bloco slido de mesoderma (formao esquizelide), a maioria dos deuterostomatas
formam suas cavidades corpreas a partir de bolsas mesodrmicas estendendo-se do
intestino (formao enteroclica). Porm, deve-se mencionar que h muitas excees
a essas generalizaes.
Protostomatas e deuterostomatas diferem na maneira pela qual so clivados. Na
maioria dos deuterostomatas, os blastmeros so perpendiculares ou paralelos uns aos
outros. Isso chamado clivagem radial. Protostomatas ao contrrio, tm uma extensa
variedade de tipos de clivagem. Muitas espcies formam blstulas compostas por clu-
las que esto em ngulos agudos relativamente ao eixo polar do embrio. So por isso
considerados sofrer clivagem espiral. Alm disso, os blastmeros em estgio de clivagem,
na maioria dos deuterostomatas, tm maior capacidade de regular seu desenvolvimento
do que os prostostomatas. Se um nico blastmero removido de um embrio
quadricelular de ourio-do-mar ou camundongo, tal blastmero ir desenvolver-se em
um organismo inteiro, e os trs-quartos restantes do embrio tambm iro se desenvolver
CAPTULO 1 Introduo ao Desenvolvimento Animal 31
Celoma Celoma
Bolsa
Blastocele Blastocele
Intestinal
Mesoderma Bolsas se
se divide destacam
Mesoderma Mesoderma
Figura 1.29
Tendncias principais dos prostostomatas e
normalmente. Porm, se a mesma operao fosse realizada em um embrio de lesma ou de deuterostomatas. Excees todas essas ten-
verme, tanto o blastmero isolado como os restantes se desenvolveriam em embries dncias gerais evoluram secundariamente em
certos membros de cada grupo. (A maioria dos
parciais cada um carente daquilo que foi formado a partir dos outros.
vertebrados por exemplo, no tem uma forma-
A evoluo dos organismos depende de alteraes herdadas em seu desenvolvi- o estritamente enteroclica da cavidade cor-
mento. Um dos maiores avanos evolucionrios o ovo amnitico ocorreu entre os poral; e os embries de certos deuterostomatas,
deuterostomatas. Esse tipo de ovo, exemplificado pelo da galinha (Figura 1.30), como os tunicados, no sofrem regulao se os
considerado ter-se originado dos ancestrais anfbios dos rpteis, h cerca de 255 blastmeros so deles removidos.)
milhes de anos. O ovo amnitico permitiu aos vertebrados vagar pela terra longe de
suprimentos de gua existentes. Ao passo que a maioria dos anfbios obrigada a
voltar para a gua para procriar e permitir o desenvolvimento de seus ovos, o ovo
amnitico carrega seu prprio suprimento de gua e nutrientes. O ovo fertilizado
internamente e contm a gema para nutrir o embrio em desenvolvimento. Ainda,
contm quatro bolsas: o saco vitelnico, que armazena protenas nutrientes, o mnio,
que contm fluido banhando o embrio, a alantide, na qual restos do metabolismo
embrionrio so coletados, e o crio, que interage com o ambiente externo, seletiva-
mente permitindo materiais chegar ao embrio. O todo dessa estrutura est contido em
uma casca que permite a difuso de oxignio, ao mesmo tempo sendo suficientemente
dura para proteger o embrio de agresses ambientais. Desenvolvimento semelhante
de protees do ovo permitiram aos artrpodes serem os primeiros invertebrados
sobre a terra. Assim, a travessia final dos limites entre gua e terra ocorreu com a
modificao do estgio mais precoce do desenvolvimento o ovo.
32 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
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34 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
discoideum is correlated with the expression of Williams, J. G. and Jermyn, K. A. 1991. Cell Williams, J. G., Duffy, K. T., Lane, D. P.,
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sorting on cell cycle phase in Dictyostelium dis-
coideum. Exp. Cell Res. 70: 133-145.
Genes e desenvolvimento:
Introduo e tcnicas 2
O que gostaramos de saber se a estrutura
determinada diretamente pela informao
codificada no DNA, gravada no ovo... na
extenso em que estrutura pode ser ex-
pressa por informao. JONATHAN
E NTRE OS CARACTERES que fornecem os dados para a teoria, e os
genes postulados, aos quais os caracteres se referem, est todo o cam-
po do desenvolvimento embrionrio. Aqui Thomas Hunt Morgan (1926)
estava verificando que o nico caminho de gentipo para fentipo, passava atravs
de processos desenvolvimentais. No comeo do sculo vinte, embriologia e gentica
BARD (1990) no eram consideradas cincias separadas. Divergiram na dcada de 1920, quando
Morgan redefiniu a gentica como a cincia que estuda a transmisso dos traos em
Os segredos que me enlaam e cativam so oposio embriologia, a cincia que estuda a expresso desses traos. Durante a
em geral segredos da hereditariedade: como ltima dcada, porm, as tcnicas da biologia molecular realizaram uma reaproximao
uma semente de pra vira uma pereira em entre embriologia e gentica. Na realidade, os dois campos se ligaram novamente a tal
vez de um urso polar. CYNTHIA
ponto que se torna necessrio uma discusso prvia da gentica molecular neste
OZICK (1989)
texto. Questes do desenvolvimento animal que no poderiam ser consideradas h
uma dcada, esto sendo agora resolvidas por um conjunto de tcnicas envolvendo
sntese de cidos nuclico e hibridizao. Este captulo procura situar essas novas
tcnicas dentro do contexto do dilogo, ora em curso, entre gentica e embriologia.
35
36 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
(B)
Figura 2.1
(A) E. B. Wilson (1856-1939; mostrado aqui em
aproximadamente 1899), um embriologista cujo
trabalho, na fase precoce da embriologia e da de-
terminao sexual, muito avanou as hipteses
cromossmicas do desenvolvimento. (Wilson era
tambm reconhecido como um dos melhores vio-
loncelistas amadores do pas.) (B) Thomas Hunt
Morgan (1866-1945), que desenvolveu a teoria
dos genes a partir da embriologia. Essa fotografia
- tomada em 1915, quando os elementos bsicos
da teoria dos genes estavam se encontrando
mostra Morgan usando uma lente manual para
identificar moscas. (A) cortesia de W. N. Timmins;
(B) cortesia de G. Allen.)
(A)
Quando Morgan e Wilson entraram nesse debate, a disputa j estava bem ativa.
Uma escola associada a Oskar Hertwig, Wilhelm Roux e Theodor Boveri, propunha
que os cromossomos do ncleo continham os elementos construtores de formas.
Esse grupo era desafiado por Eduard Pflger, T. L. W. Bischoff, Wilhelm His e seus
colegas, que acreditavam que estruturas pr-formadas no poderiam causar to enor-
mes mudanas durante o desenvolvimento; ao contrrio, eles acreditavam que os
padres herdados de desenvolvimento eram causados pela criao de novas molcu-
las do gameta interativo, citoplasmas. Morgan aliou-se a esse ltimo grupo e obteve
dados que interpretou com sendo consistentes com o modelo citoplasmtico da he-
rana. Em seu experimento mais crucial, ele removeu citoplasma do rcem-fertilizado
ovo ctenforo (gelia de crista). Em 1897 Morgan relatou:
Wilson pensou que o material formador de rgos que Morgan havia removido do
citoplasma de ovos de ctenforo, j havia sido para ali secretado pelos cromossomos
nucleares (Wilson, 1894, 1904). Para Wilson (1905) Os materiais citoplasmticos pare-
cem ser apenas o meio imediato ou a causa eficiente da diferenciao, e ainda procu-
ramos sua determinao primria nas causas que residem mais profundamente.
Parte do maior apoio para a hiptese cromossmica da herana estava vindo dos
estudos embriolgicos de Theodor Boveri (Figura 2.2 A), um pesquisador na Estao
Biolgica de Npoles. Boveri fertilizou vulos de ourio-do-mar com altas concentra-
es de seu espermatozide e obteve ovos que haviam sido fertilizados por dois
espermatozides. Na primeira clivagem, esses ovos formaram quatro plos mitticos e
dividiram o ovo em quatro, em vez de duas clulas (veja captulo 4). Boveri ento
separou os blastmeros e demonstrou que cada clula se desenvolvia anormalmente
e de maneiras diferentes por ter cada clula diferentes tipos de cromossomos. Assim,
Boveri declarou que cada cromossomo tinha uma natureza individual e o controle de (B)
diferentes processos vitais.
Figura 2.2
O Cromossomo X como uma Ponte Entre Genes e Desenvolvimento O carter singular do cromossomo foi mostra-
do por Boveri e Stevens. (A) Theodor Boveri
Em adio evidncia de Boveri, E. B. Wilson (1905) e Nettie Stevens (1905a,b) de- (1862-1915) cujo trabalho Wilson (1918) co-
monstraram uma correlao crtica entre cromossomos nucleares e o desenvolvimento mentou: conseguiu a verdadeira fuso de
organizacional. Stevens (Figura 2.2B), uma ex- estudante de Morgan, mostrou que em citologia, embriologia e gentica um feito bi-
92 espcies de insetos (e um cordato primitivo), as fmeas tinham dois cromossomos olgico que... no fica atrs de qualquer outro
sexo-especficos em cada ncleo (XX), enquanto machos tinham somente um cromos- de nosso tempo. Fotografia tirada em 1908,
somo X (XY ou XO). Parecia que uma estrutura nuclear, o cromossomo X, estava quando os estudos cromossmicos e embrio-
controlando o desenvolvimento sexual** . Morgan discordou da interpretao de que lgicos de Boveri estavam no seu apogeu. (B)
Nettie M. Stevens (1861-1912), que treinou
tanto com Boveri como com Morgan, vista
*Note-se que Wilson est escrevendo sobre unidades construtoras de forma na cromatina aqui em 1904 quando era estudante de ps-
em 1896 antes da redescoberta do trabalhos de Mendel ou do estabelecimento da teoria dos doutorado, realizando a pesquisa que correla-
genes. Para uma anlise mais detalhada das interaes entre Morgan e Wilson que levaram cionou o nmero de cromossomos X com o
teoria dos genes, veja Gilbert (1978, 1987) e Allen (1986). desenvolvimento sexual. [(A) cortesia de
**
Baltzer, 1967; (B) cortesia do Instituto
Wilson era um dos amigos mais ntimos de Morgan, que considerava Stevens sua melhor
estudante de ps-graduao. Ambos estavam contra Morgan nessa questo. Mesmo assim,
Carnegie de Washington.]
Morgan apoiou inteiramente o pedido de Stevens para fundos de pesquisa, confirmando suas
qualidades como as melhores possveis. Wilson escreveu uma elogiosa carta de recomendao,
apesar de saber que ela seria uma rival na pesquisa (veja Brush, 1978).
38 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
(A) (B)
Ao mesmo tempo, Waddington (1939) isolava diversos genes que causavam mal-
formaes alares na mosca das frutas, Drosophila. Tambm analisava como esses
genes podiam afetar os primrdios que do origem a essas estruturas. A asa da Droso-
phila, conforme proclamou corretamente, parecia favorvel para pesquisas sobre a
ao desenvolvimental dos genes. Assim, uma das principais objees ao modelo
gentico do desenvolvimento levantadas pelos embriologistas - que os genes atuam
somente sobre a modelagem final do embrio e no sobre seus principais esquemas de
construo foi contrariada. [gene3.html]
Metaplasia
A primeira evidncia para equivalncia genmica veio aps a 2a Guerra Mundial, por
parte de embriologistas que estavam estudando a regenerao de tecidos excisados.
O estudo da regenerao do olho da salamandra demonstrou que mesmo clulas
adultas diferenciadas podem reter o seu potencial de produzir outros tipos celulares.
Portanto, os genes para os produtos desses outros tipos de clulas devem ainda estar
presentes, embora normalmente no expressos. Na salamandra, a remoo da retina
neural promove sua regenerao a partir da retina pigmentada, e uma nova lente pode
ser formada a partir das clulas da ris dorsal. A regenerao do tecido lenticular da ris
(a assim chamada regenerao Wolffiana a partir da pessoa que primeiro a observou
em 1894) foi intensamente estudada. Yamada e seus colegas (Yamada, 1966, Dumont e
Yamada, 1972) acharam que aps a remoo de uma lente, uma srie de acontecimentos
leva produo de uma nova lente a partir da ris (Figura 2.4). Os ncleos do lado
dorsal da ris comeam a sintetizar quantidades enormes de ribossomos, seu DNA se
replica, e divises mitticas se sucedem. As clulas da ris pigmentada comeam, em
seguida, a se desdiferenciar expelindo seus melanossomos (os grnulos pigmentados
que do ao olho a sua cor; esses melanossomos so ingeridos por macrfagos que
entram no local da ferida). A ris dorsal continua a se dividir, formando um globo de
tecido desdiferenciado na regio da lente removida. Essas clulas comeam ento a
sintetizar os produtos diferenciados de clulas lenticulares, as protenas do cristali-
no. Essas protenas so fabricadas na mesma ordem que no desenvolvimento normal
da lente. Uma vez formada uma nova lente, as clulas do lado dorsal da ris cessam sua
atividade mittica.
Esses eventos no so a via normal pela qual a lente dos vertebrados formada.
Como ser visto em detalhe mais tarde, a lente normalmente se desenvolve a partir de
uma camada de clulas epiteliais da cabea, induzida pelas clulas retinais precursoras
subjacentes. A formao da lente por clulas diferenciadas da ris representa metaplasia
(ou transdiferenciao), a transformao de um tipo celular diferenciado em outro
(Okada, 1991). A ris da salamandra, portanto, no havia perdido gene algum daqueles
usados na diferenciao das clulas da lente.
Retina Retina
pigmentada neural
ris dorsal
Figura 2.4
Lente Regenerao Wolffiana da lente da salamandra
a partir da margem dorsal da ris. (A) Olho
normal, no-operado no estgio larval da sala-
ris mandra Notophtalmus viridiscens. (B-G) Re-
ventral generao da lente, vista respectivamente nos
dias 5, 7, 9, 16, 18 e 30. A nova lente estar
completa no dia 30. (de Reyer, 1954, cortesia
de R. W. Reyer.)
(A) (B) (C)
Fuso Grnulos Remoo dos cromossomos Ovo ativado Extrao e lise da Ncleo doador
meitico pigmentados e do fuso da clula enucleado clula doadora inserido na clula
enucleada
Figura 2.5
Procedimento para o transplante de ncleos da Membrana
blstula para ovos ativados enucleados de Rana cicatriza
pipiens. As dimenses relativas do fuso meitico
foram exageradas para demonstrar a tcnica. A
bela R. pipiens na fotografia foi derivada dessa
maneira. (Segundo King, 1966; fotografia corte-
sia de M. DiBerardino e N. Hoffner.)
CAPTULO 2 Genes e Desenvolvimento 43
r di ec r di m co o c
pr
Porcentagem de embries de transplantes
Horas a 18oC
RESULTADOS
Girino Girino
(morre)
Embrio
anormal
R adulta
(Cepa 1 nu)
de gerar girinos natatrios (Orr et al., 1986; DiBerardino, 1989). Embora DiBerardino
(1987) tenha observado que at o presente, ncleo algum de uma clula
documentadamente especializada, nem de uma clula adulta tenha mostrado ser
totipotente, tal ncleo pode no entanto instruir a formao de todos os rgos do
girino natatrio.
Algumas das diferenas entre os resultados dos laboratrios de Briggs e de Gurdon,
podem envolver diferenas na fisiologia do desenvolvimento das rs Rana e Xenopus.
Quando se transfere um ncleo de uma clula diferenciada para o citoplasma do ocito,
se est pedindo ao ncleo para reverter para condies fisiolgicas s quais ele no
est acostumado. Os ncleos da clivagem das rs dividem-se rapidamente, enquanto
alguns ncleos de clulas diferenciadas dividem-se raramente, se tanto. Falhas em
replicar DNA rapidamente podem levar a quebras cromossmicas: tais anormalidades
foram vistas em muitas clulas de girinos clonados. Sally Hennen (1970) mostrou que
o sucesso desenvolvimental de ncleos doadores pode ser ampliado tratando-se
esses ncleos com espermina e resfriando os ovos para dar tempo ao ncleo de se
adaptar ao citoplasma do ovo. Acredita-se que a espermina remova histonas da
cromatina podendo re-acertar a atividade dos ncleos. Quando ncleos do endoderma
de girinos de Rana pipiens, no estgio de broto caudal, foram tratados dessa maneira,
62 porcento daqueles ncleos que iniciaram desenvolvimento normal, prosseguiram
at a gerao de girinos normais. Em animais controle, nenhum dos ncleos conse-
guiu gerar tais girinos. Assim, os genes para o desenvolvimento do girino completo
no pareceram ter sido perdidos pelas clulas do endoderma.
Podemos olhar para esses experimentos de clonagem de anfbios de duas manei-
ras. Primeiro, reconhecer uma restrio geral de potncia concomitante ao desenvolvi-
mento. Segundo, facilmente ver que o genoma da clula diferenciada notavelmente
potente em sua habilidade de produzir todos os tipos celulares do girino anfbio. Em
outras palavras, mesmo existindo um debate sobre a totipotncia de tais ncleos,
existe pouca dvida de que eles so extremamente pluripotentes. Certamente, muitos
genes no usados na pele ou em clulas sangneas, podem ser reativados para
produzir os nervos, o estmago, ou o corao de um girino natatrio. Assim, cada
ncleo no corpo contm a maioria (se no todos) dos mesmos genes.
Informaes adicionais
& Especulaes
Figura 2.9
Experimento de Steward demonstrando a
totipotncia de clulas do floema da cenoura.
Corte Planta
Planta de Proliferao de
transversal jovem
cenoura massa celular
da raiz
madura (calo) em meio Planta embrionria
de cultura de transferida para meio Planta de cenoura
leite de coco de cultura de agar madura no agar
CAPTULO 2 Genes e Desenvolvimento 47
desorganizada chamada calo. A continu- de cenoura completa e frtil (Steward et so destacadas como uma linhagem dis-
ao da rotao leva ao desbastamento al., 1964; Steward, 1970). tinta de clulas no incio do desenvol-
de clulas individuais do calo para o meio Porm, plantas e animais se desen- vimento), as plantas normalmente deri-
de suspenso. Essas clulas do origem volvem de maneira diferente; a propa- vam seus gametas de clulas somticas.
a ndulos celulares semelhantes a razes gao vegetativa de plantas por corte Portanto, no to surpreendente que
que continuam a crescer enquanto per- (i.e, pores de plantas que quando nu- uma nica clula de uma planta possa
manecem em suspenso. A partir desses tridas, regeneram as partes faltantes) se diferenciar em outros tipos de clu-
ndulos, colocados em um meio solidifi- uma prtica agrcola comum. Alm dis- las e formar um clone geneticamente
cado com agar, o resto da planta capaz so, em contraste com anfbios e mamfe- idntico (clone, do grego klon, signifi-
de se desenvolver, formando uma planta ros (nos quais as clulas germinativas cando ramo).
a maior lacuna, ainda para ser preenchida, entre dois campos da pesquisa em
biologia provavelmente aquela entre a gentica e a embriologia. o problema
repetidas vezes declarado, porm, at agora no resolvido, de como clulas com
genomas idnticos podem se tornar diferenciadas, adquirir a propriedade de
confeccionar molculas com novos, ou no mnimo, diferentes padres ou confi-
guraes especficos.
*A grande exceo a essa regra da constncia dos genes os genes das imunoglobulinas
discutida no Captulo 10. Cada clula tem todas as subunidades gnicas das imunoglobulinas, mas em
linfcitos, algumas dessas subunidades esto rearranjadas ou mesmo suprimidas do genoma. O
terceiro desafio - a explicao de como o ambiente pode direcionar o desenvolvimento foi
prontamente compreendida, uma vez que a explicao geral para a expresso diferencial da expres-
so gnica foi estabelecida. Conforme veremos, o modelo do operon demonstrou como uma
substncia do ambiente podia efetuar a expreso gnica diferenciada.
48 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
Lactose
RNA
mRNA polimerase
-galactosidase
mRNA transcrito
Lactose combinando
com o repressor,
previne ligao a o
Genes estruturais
Genes estruturais
Figura 2.11
Cromossomos politnicos. (A) Cromossomos politnicos de clulas da glndula salivar de
Drosophila melanogaster. Os quatro cromossomos esto conectados em seus centrmeros,
formando um denso cromocentro. Os genes estruturais para a lcool desidrogenase (ADH),
aldedo oxidase (Aldox) e octanol desidrogenase (ODH) foram mapeados nas posies designa-
das nesses cromossomos. (B) Fotografia ao microscpio eletrnico de uma pequena regio de
um cromossomo politnico de Drosophila. As bandas escuras esto altamente condensadas
comparadas com as regies interbandas. (A de Ursprung et al., 1968, cortesia de H. Ursprung;
B de Burkholder, 1976, cortesia de G. D. Burkholder.)
Aldox
CAPTULO 2 Genes e Desenvolvimento 51
estimulados ou inibidos por certas mudanas fisiolgicas causadas pelo calor ou por
hormnios (Clever, 1966; Ashburner, 1972; Ashburner e Berondes, 1978).
Beermann (1961) apresentou evidncias que esses tufos representam um afrouxa-
mento localizado de cromossomos politnicos (Figura 2.14) e que so stios de sntese
ativa de RNA. Duas espcies intercruzadas diferentes de Chiromonus foram encon-
tradas: uma produzindo grande quantidade de protena salivar e a outra no (Figura
2.15). Os produtores tinham uma tufo grande (anel de Balbiani) em determinada banda;
esse tufo no existia nos no-produtores. O cruzamento de produtor com no-produ-
tor resultou em larvas produzindo quantias intermedirias de protena salivar. Cruzan-
do duas moscas hbridas, a capacidade de produzir protena salivar segregou-se de
forma Mendeliana: 1 alto produtor: 2 intermedirios:1 no-produtor. Altos produtores
tinham dois tufos (um em cada cromossomo homlogo), produtores intermedirios
tinham apenas um, e no-produtores nenhum tufo. Beermann concluiu que a informa-
o gentica necessria para a sntese dessa protena salivar est presente nessa
banda distal do cromossomo e que sua produo dependia de transformao em uma
regio estufada.
(A)
(B)
Figura 2.12
Identidade genmica em cromossomos politnicos. (A) Uma regio do
conjunto cromossmico da mosca Chiromonus tentans. Notar a constn-
cia do nmero de bandas nos diferentes tecidos. (B) Hibridizao do RNA
de uma protena da gema com um cromossomo da glndula salivar larval
de Drosophila. Os gros escuros (flexa) mostram onde a mensagem da
protena radioativa da gema se ligou aos cromossomos. Notar que o gene
para a protena est presente no cromossomo da glndula salivar, apesar
da protena no ser a sintetizada. (A) Segundo Beermann, 1952; (B) De
Barnett et al., 1980; fotografia cortesia de P. C. Wensink.
52 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
Figura 2.13
Seqncia de estufamentos de uma poro do cro-
mossomo 3 da glndula salivar de Drosophila mela-
nogaster. (A,B) larva de 110 horas; (C) larva de 115
horas; (D,E) estgio pr-pupa (aps 4 horas). Notar
o estufamento e a regresso das bandas 74EF e 75B.
Outras bandas (71DE, 78D) estufam mais tarde, po-
rm, a maioria no estufa de modo algum durante o
perodo. (Cortesia de M. Ashburner.)
(A)
(B)
Figura 2.14
Terminao proximal do cromossomo 4 da glndula sali-
var de Chiromonus pallidivitatus, mostrando o enorme
tufo BR2. (A) Fotomicrografia em contraste de fase, de
preparaes coradas, mostrando o extenso tufo no cro-
mossomo politnico. (B) Diagrama da regio passando
por estufamento. (A de Grossbach, 1973, cortesia de U.
Grossbach; B segundo Beermann, 1963)
CAPTULO 2 Genes e Desenvolvimento 53
BR4(SZ)
Alto No-produtor
produtor
BR2
Todos produtos
intermedirios
BR1
BR3
Figura 2.15
Correlao de padres de estufamento com fun-
es especializadas nas clulas das glndulas
salivares de Chironomus pallidivitatus. (A)
radioativos. O RNA radioativo pde, em seguida, ser extrado da poro BR2 do Cromossomo de uma clula produzindo uma
cromossomo dissecado (Lambert, 1972). Esse RNA era excepcionalmente grande secreo granular e mostrando um anel de
cerca de 50.000 bases. O grande segmento de RNA radioativo, especificamente Balbiani adicional [BR4(SZ)]. (B) Cromosso-
hibridizado para a regio BR2 do cromossomo, mostrou que o DNA estufado (Puff mo 4 de uma clula salivar, mostrando somen-
de DNA) - e nenhum outro local - tinha-o transcrito ativamente (Figura 2.16C). Esse te anis de Balbiani 1, 2 e 3 (BR1, BR2, BR3).
mesmo RNA pde ser isolado de polissomos sintetizadores de protenas, indicando (C) Evidncia gentica que a sntese de uma
importante protena salivar depende da for-
que ativo na sntese protica (Wieslander e Daneholt, 1977). Assim, um RNA
mao de tufos BR4(SZ). Larvas com altos
transcrito de uma banda especfica de DNA, que estufa na glndula salivar larval, nveis de secrees granulares tm clulas sali-
pode posteriormente ser visto produzindo protenas em ribossomos citoplasmticos. vares glandulares com tufos BR4(SZ) em am-
bos cromossomos 4 (coloridos), enquanto lar-
vas sem essas secrees no tm tais tufos.
Produtores intermedirios tm somente um
cromossomo 4 com uma regio estufada
BR4(SZ) em cada clula salivar realizando a
secreo. (A e B segundo Beermann, 1961, cor-
tesia de W. Beermann.)
(A)
(A)
Condies de Condies de
desnaturao re-anelamento
(calor, lcali)
Figura 2.17
Hibridizao de cidos nuclicos. (A) Se a h- RNA
(B)
lice de DNA for separada em duas fitas, essas
devem se re-anelar sob condies adequadas
de fora inica e tempo. De maneira semelhan-
te, se o DNA for separado em suas duas fitas,
o RNA deve ficar capacitado a se ligar a genes
que o codificam. Se presente em quantidades Desnaturar; adicionar RNA hibridiza
RNA (em grande com uma
suficientemente grandes em comparao com
quantidade em fita de DNA
o DNA, o RNA ir substituir uma das fitas de comparao com DNA)
DNA nessa regio.
CAPTULO 2 Genes e Desenvolvimento 55
dos precursores radiativos. Alm disso, o DNA pode hibridizar tanto com o gene que
produziu o RNA (embora a outra fita) e com o prprio RNA, tornando-o extremamente
mRNA
til para a deteco de pequenas quantidades de RNAs especficos.[other.html#gene6]
Anelar iniciador
Clonagem de DNA genmico
mRNA
J em 1904 Theodor Boveri desesperava-se, considerando que as tcnicas de sua
poca nunca seriam suficientes para permitir-lhe estudar como os genes criam embri- Transcriptase
es. Havia necessidade de uma tcnica especial de amplificao gnica: reversa
Porque no somente o ncleo, nem mesmo cromossomos individuais, mas cer- mRNA
tas partes de certos cromossomos de certas clulas que precisam ser isolados e
coletados em quantidades enormes para anlise; essa seria uma pr-condio cDNA
para colocar o qumico em uma posio a qual lhe permitiria analisar (o mate- lcali
rial hereditrio) com mais mincias que o morfologista.
cDNA
Entretanto, desde a dcada de 1970 a hibridizao de cido nuclico permitiu aos
biologistas do desenvolvimento realizar o que Boveri aspirava: isolar e amplificar Figura 2.18
regies especficas do cromossomo. A tcnica principal para isolar e amplificar genes Mtodo para preparar DNA complementar
individuais chamada clonagem de genes. A primeira fase desse processo consiste no (cDNA). A maioria dos mRNA possui uma
corte de DNA nuclear em pedaos distintos, por incubao de DNA com uma longa cadeia de resduos de adenosina (AAAn)
endonuclease de restrio (geralmente chamada de enzima de restrio). De modo no terminal 3 da mensagem (a ser discutida no
geral, essas endonucleases so enzimas bacterianas que reconhecem seqncias es- Captulo 12); por isso, o pesquisador anela
pecficas do DNA e o clivam nesses stios (Tabela 2.1; Nathans e Smith, 1975). Por um iniciador consistindo de 15 resduos de de-
soxitimidina (dT15) ao final 3' da mensagem.
exemplo, quando DNA humano incubado com a enzima BamHI (de Bacillus
Transcriptase reversa em seguida, transcreve
amyloliquifaciens, cepa H), o DNA clivado em cada stio onde aparece a seqncia uma fita de DNA complementar, comeando
GGATCC. Os produtos so fragmentos de DNA de vrios tamanhos, todos terminan- no iniciador dT15. O cDNA pode ser separado
do com G em um dos lados e GATCC no outro (Figura 2.19). Esses pedaos so aumentando o pH da soluo, dessa maneira,
freqentemente chamados de fragmentos de restrio. desnaturando o hbrido de dupla fita e clivan-
do o RNA.
Plasmdeo cortado
no gene lacZ
Quebra
endonucleoltica
por BamHI
Fragmentos
de gene Plasmdeo
humano recombinante
incubados e com gene lacZ
ligados em um interrompido
plasmdeo
DNA humano
Figura 2.19
Um protocolo geral para clonar DNA, usando como exemplo a insero de uma se-
Colnias
qncia de DNA humano em um plasmdeo com um stio sensvel BamHI.
incolores
quer clonar. Em alguns casos, a seqncia do mRNA ou gene no conhecida, Meio contendo
ampicilina
devendo-se ento estimar a seqncia a partir da seqncia de aminocidos da
protena). Se o plasmdeo contm aquele gene, seu DNA deve estar no filtro, e
Colnias azuis
somente aquele DNA dever ser capaz de ligar o RNA radioativo ou a sonda de
cDNA. Portanto, somente aquelas reas sero radioativas. A radioatividade nessas
regies determinada por auto-radiografia. Filme sensvel a raios-X colocado Aplicao das colnias
incolores nos crculos do
sobre o papel tratado. Os eltrons de alta energia, emitidos pelo RNA radioativo, papel de filtro; lisar para
sensibilizam os gros de prata no filme, tornando-os escuros quando o filme reve- expor o DNA
lado. Finalmente, uma mancha escura produzida sobre cada colnia contendo o
plasmdeo recombinante que carrega o gene especfico (veja Figura 2.19). Essa col-
nia ento isolada e cultivada, produzindo bilhes de bactrias, cada uma contendo
centenas de plasmdeos recombinantes idnticos.
Os plasmdeos recombinantes podem ser separados do cromossomo da E. coli por
centrifugao, e incubando o DNA do plasmdeo com BamHI libera-se o fragmento de
DNA extranho que contm o gene. Esse fragmento pode ser separado do DNA
plasmdico, permitindo ao pesquisador possuir microgramas de seqncias de DNA mRNA
radioativo
purificado contendo o gene especfico. Apesar desse procedimento parecer muito
lgico e fcil, freqentemente o nmero de colnias a serem selecionadas astronmi- Papel de filtro incubado com mRNA
co. O nmero de fragmentos aleatrios que devem ser clonados para a obteno do radioativo do gene a ser clonado
gene desejado, aumenta com a crescente complexidade do genoma do organismo*.
Para detectar um gene especfico de um genoma de mamfero, milhes de clones indi-
viduais devem ser selecionados.
Contatos de
Desnaturar fragmentos de papel de filtro
DNA fitas simples em lcali
Suporte
Cuba com
Gel
Digesto com restrio soluo tampo Colocar filtro de nitrocelulose
e eletroforese Colocar gel no papel de filtro ou membrana de nylon sobre gel:
em gel de agarose mido entre 2 espaadores colocar papel-toalha e peso
CAPTULO 2 Genes e Desenvolvimento 59
Seqenciamento de DNA
Dados de seqncia podem dar informaes sobre a estrutura da protena codifi-
cada e podem identificar seqncias regulatrias de DNA que certos genes tm em
comum. A simplicidade da tcnica de seqenciamento didesoxi de Sanger (Sanger
et al.,1977) tornou-a um procedimento padro em muitos laboratrios de biologia
molecular. No incio, usa-se um vetor contendo o gene clonado e se isola uma fita
nica do DNA circular (Figura 2.22). Funde-se (anela-se) ento um iniciador (primer)
radioativo de DNA (aproximadamente 20 pares de bases) complementar ao DNA
do vetor imediatamente 3' ao gene clonado. (Porque essas seqncias dos vetores
so conhecidas, iniciadores oligonucleotdicos podem ser facilmente sintetizados
ou adquiridos comercialmente). O iniciador tem uma ponta 3' livre qual mais
nucleotdeos podem ser adicionados. Coloca-se o DNA alvo e o iniciador junta-
mente com todos os quatro desoxirribonucleosdeos trifosfatos em quatro tubos
de ensaio. Cada um dos tubos contm a subunidade polimerizante da DNA polime-
rase e um diferente didesoxinucleosdeo trifosfato: um tubo contm didesoxi-G,
outro didesoxi-A e assim por diante. As estruturas dos desoxinucleotdeos e dos
didesoxinucleotdeos esto representadas na Figura 2.23. Enquanto o
desoxirribonucleotdeo no tem um grupo hidroxila (OH) no carbono 2' do seu
acar, o didesoxirribonucleotdeo no tem grupos hidroxila em ambos os carbo-
nos, 2' e 3'. Assim, mesmo que um didesoxirribonucleotdeo possa ser ligado a uma
crescente cadeia de DNA pela DNA polimerase, ele interrompe o crescimento da
cadeia por no ter um grupamento 3' ao qual se ligaria um novo nucleotdeo.
Assim, quando a DNA polimerase est sintetizando DNA do iniciador, o novo
DNA ser complementar ao gene clonado. No tubo com didesoxi-A, entretanto,
sempre que a polimerase coloca um A na cadeia crescente, existe a possibilidade
de que um didesoxi-A seja colocado em lugar do desoxi-A. Se isso acontecer, a
cadeia pra. Similarmente, no tubo com didesoxi-G, a cadeia tem o potencial de
parar toda vez que um G inserido. (O processo foi comparado uma dana
folclrica grega na qual uma pequena porcentagem dos danarinos em potencial
tem um brao em uma tipia).
60 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
Iniciador
Seqncia da fita
do iniciador
Seqncia
complementar
Fragmentos
maiores
Fragmentos
menores
Figura 2.22
O mtodo didesoxi de seqenciar DNA. A fotografia contm a regio da auto-radiografia que
mostra essa seqncia (Cortesia de G. Guild).
Base 1
Adenina Adenina
Base 2
Adenina Desoxiadenosina Didesoxiadenosina
trifosfato (acar desoxirribose) trifosfato (acar
(A) didesoxirribose) (B)
Figura 2.23
Comparao entre desoxinucleotdeos e didesoxinucleotdeos. (A) Estruturas dos dois tipos de
nucleotdeos. A diferena evidenciada em cores. (B) O terminal 3' de uma cadeia que terminou
pela incorporao de um didesoxinucleotdeo no tem um grupo hidroxila 3' terminal para
continuar a polimerizao do DNA.
CAPTULO 2 Genes e Desenvolvimento 61
Em cada tubo esto sendo feitas milhes de cadeias e por essa razo eles contero
uma populao de cadeias, algumas interrompidas no primeiro stio possvel, outras
no ltimo e algumas em stios intermedirios. O tubo com didesoxi-A, por exemplo,
conter cadeias com diferentes e distintos comprimentos, cada uma terminando com o
resduo A. Os fragmentos de DNA radioativo resultantes sero separados por eletro-
forese. O resultado uma escada de fragmentos onde cada degrau uma seqn-
cia de nucleotdeos de comprimento diferente. Lendo escada acima, obtem-se a se-
qncia do DNA complementar quela do gene clonado.
(A)Preparao de cDNA (B) Insero de cDNA de dupla fita no vetor viral (bacterifago )
clonvel
Regio codificadora
mRNA DNA de fago
BamHI
Regio codificadora
mRNA
cDNA
No necessrio para
mRNA a replicao do fago
Regio codificadora
cDNA
S1 nuclease
Regio codificadora
Fita cDNA do
dupla mRNA, agora
cDNA clonado em
vetores virais
Adicionar finais Bam HI
(C) Preparao da biblioteca de clones do fago (D) Seleo da biblioteca de fagos clonados
Transferir alguns
Fago fagos para filtros
hbrido de nitrocelulose
Adicionar camada de
clulas de E. coli Filtros de nitrocelulose
Transferncias Northern
Podemos tambm determinar a expresso temporal e espacial de RNAs executando
uma transferncia de RNA (freqentemente chamada transferncia Northern). En-
quanto transferncias Southern transferem fragmentos de DNA do gel para o papel,
transferncias Northern (nome no se relaciona com o inventor) transferem RNA
entre os mesmos suportes e da mesma maneira. O pesquisador pode extrair RNAs
mensageiros do embrio em vrios estgios de desenvolvimento e submet-los
eletroforese lado a lado, em um gel. Aps transferncia dos RNAs separados para o
papel de nitrocelulose ou membrana de nylon, o conjunto incubado em uma solu-
o contendo um fragmento radioativo, mono-fita, de DNA de um determinado gene.
Esse DNA adere somente s regies onde est localizado o RNA complementar.
Assim, se o mRNA para aquele gene est presente em um determinado estgio
embrionrio, o DNA radioativo se liga a ele e pode ser detectado por auto-radiogra-
fia. Autoradiogramas desse tipo, onde vrios estgios so comparados simultanea-
mente, so denominados transferncias Northern de desenvolvimento. A Figura
2.26A mostra uma transferncia Northern de desenvolvimento para a expresso de
um gene endoderma-especfico durante o desenvolvimento do ourio-do-mar. Po-
demos ver que o mRNA para essa protena endodrmica inicialmente sintetizado
durante o estgio de blstula mesenquimatosa e continuamente durante todo o
resto do desenvolvimento. A transferncia Northern na Figura 2.26B mostra que a
acumulao desse mRNA no estgio de prisma restrita ao endoderma (Wessel et
al.,1989). Hibridizao in situ e transferncias Northern fornecem as melhores evi-
dncias em favor da transcrio diferencial de RNA, no espao e no tempo. A trans-
crio de certos genes pode ser especfica para tecidos ou tempo.
A distribuio temporal na transcrio de vrios genes pode ser visualizada por
transferncia de mancha. Por exemplo, Sargent e Dawid (1983) isolaram da gstrula de
Xenopus um mRNA que no estava presente no ovo. Para isso eles extraram o mRNA
da gstrula e fizeram cpias cDNA dessas mensagens. Os cDNAs da gstrula foram
misturados com grandes quantidades de mRNA de ocitos. Se houvesse hibridizao
entre o mRNA dos ocitos e o cDNA da gstrula, significaria que o cDNA era derivado
CAPTULO 2 Genes e Desenvolvimento 65
(B)
(A)
(C)
Figura 2.25
Hibridao in situ. (A,B) Fotomicrografias,
em fundo escuro, de hibridao in situ, mos-
trando a localizao de mRNA endoderma-
especfico em embrio de ourio-do-mar. O
cDNA radioativo usado como sonda foi pre-
parado do gene clonado, feito a partir de
mRNA endoderma-especfico (veja Figura
2.24). Esse cDNA radioativo se liga ao mRNA
do endoderma da gstrula precoce do ourio-
do-mar (A) e ao endoderma do intestino m-
dio e posterior da gstrula tardia do ourio-
do-mar (B). (C) Hibridizao in situ, em mon-
tagem integral, de um embrio de camundon-
go de 9.5-10.5 dias corado para mRNA de
Brachyury. Essa mensagem transcrita em
clulas formando novo mesoderma, e nesse
estgio encontrada na poro posterior do
embrio. Embries fixados foram incubados
Enzima em uma sonda para mRNA de Brachyury (a
fosfatase Corante fita antisense complementar ao mRNA) que
alcalina (precipitado azul escuro) foi sintetizada usando uridina biotinilada.
Ncleo Aps eliminar a parte da sonda que no se
Corante ligou ao mRNA de Brachyury (e inativar qual-
Anticorpo (incolor) quer atividade endgena de fosfatase alcalina
para biotina do embrio), o embrio foi tratado com anti-
Sonda complementar a mRNA de Brachyury corpos para biotina. Esses anticorpos foram
Biotina ligados s enzimas do tipo fosfatase alcalina.
tendo resduos de biotina em suas uridinas
Colorir para a presena de fosfatase alcalina
permite que se determine a localizao de um
mRNA especfico. Fotografias coloridas da
mRNA de Brachyury hibridizao in situ, em montagem integral,
esto nas Pranchas 22, 23 e 25. (A e B de
Wessel et al.,1989, cortesia de G. Wessel; C
do laboratrio do autor.)
66 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
(A) Ovo de um mRNA presente em ambos os estgios, ocito e gstrula. Essas molculas
Clivagem hbridas com dupla fita foram removidas por filtrao, deixando uma populao de
cDNAs gstrula-especfico. Os cDNAs foram transformados na forma de dupla fita
Blstula
(pela DNA polimerase) e inseridos em veculos de clonagem. Essa tcnica denomina-
Blstula da de clonagem de subtrao. Como a seleo dupla de bibliotecas de cDNA, a
Mesenquimatosa clonagem de subtrao gera um conjunto de clones estgio-especficos cujo mRNA
Blstula precoce
encontrado em alguns estgios, mas no em outros, ou em alguns tecidos mas no em
Blstula tardia outros (Figura 2.27).
Sargent e Dawid usaram embries, dos estgios de zigoto a broto caudal do
Prisma
girino e, separadamente, isolaram seus RNAs. Os RNAs foram aplicados direta-
Plteo mente (sem prvia eletroforese em gel) a filtros de nitrocelulose de modo que cada
filtro tinha RNAs de todos os estgios. Aps a fixao (calor) dos RNAs no filtro,
(B) Ectoderma / mesoderma
DNA de fita nica derivado de um especfico clone gastrular, foi marcado radi-
oativamente e incubado com os filtros. Se um gene estava sendo transcrito em um
Endoderma determinado estgio, o cDNA radioativo daquele gene encontraria seu comple-
mento nos mRNAs daquele estgio, no filtro. Aps eliminaco do cDNA no liga-
Figura 2.26 do, a ligao do cDNA radioativo foi observado por auto-radiografia. A transfe-
Transferncia Northern para um gene espec- rncia de manchas na Figura 2.28 mostra o esquema temporal de expresso para 17
fico no endoderma do ourio-do-mar, Lytechi-
genes que so ativos em vrios estgios da gastrulao. Nenhum deles expresso
nus variegatus. (A) Transferncia Northern
de desenvolvimento, mostrando acumulao antes da transio da blstula mediana em 7 horas. Alguns genes (DG64, DG39)
de mRNA de acordo com o estgio especfico so expressos imediatamente depois, enquanto outros (DG72, DG81) comeam a
desse gene. mRNA total (10 g por estgio) ser transcritos na gstrula mediana, aps aproximadamente 7 horas. Alguns genes
foi submetido eletroforese em gel de agarose. (DG76, DG81) so mantidos aps a ativao, enquanto a atividade de outros (DG56,
O gel foi transferido para papel tratado e os DG21) muito mais transitria.
mRNAs aderidos ao papel, que foi em seguida
incubado com cDNA radioativo de um clone
endoderma-especfico. Mostrou-se que esse
Encontrando mensagens raras pela
mRNA sintetizado durante o estgio de bls-
reao da polimerase em cadeia
tula do mesnquima e aumentado ao longo do
desenvolvimento. (B) Transferncia Northern A reao da polimerase em cadeia (PCR) um mtodo de clonagem in vitro que pode
no estgio de prisma, mostrando que o mRNA produzir enormes quantidades de um fragmento especfico de DNA a partir de uma
est presente no endoderma (com algum me- pequena quantidade de material de partida (Saiki et al.,1985). Esse mtodo pode ser
soderma aderido) mas no no ectoderma. RNA usado para clonar um gene especfico ou para determinar se um gene especfico est
total do endoderma foi eletroforisado (pista 2) ativamente transcrevendo RNA em um determinado rgo ou tipo de clula. O mtodo
prximo ao mRNA do resto do ourio-do-mar padro de clonagem usa microorganismos vivos para amplificar o DNA recombinante.
(pista1). Ligao com cDNA radioativo detec-
PCR, no entanto, pode amplificar uma nica molcula de DNA por um fator de vrios
tou mRNA somente no endoderma. (de Wessel
et al., 1989, cortesia de G. Wessel.) milhes em poucas horas e o faz em um tubo de ensaio. Essa tcnica tem sido extrema-
mente til em casos onde a quantidade de cido nuclico para estudo muito peque-
na. Embries de camundongos, por exemplo, na fase de pr-implantao tm muito
pouco mRNA e no se pode obter milhes desses embries para estudo. Se fosse
necessrio saber se o embrio de camundongo na fase de pr-implantao contm o
mRNA para uma protena determinada, seria muito difcil descobrir usando os mto-
dos padro de clonagem. Entretanto, a tcnica do PCR permite encontrar essa mensa-
gem com poucos embries, por amplificar especificamente somente aquela mensagem,
um milho de vezes (Rappolee et al., 1988).
O uso de PCR para encontrar mRNAs raros est ilustrado na Figura 2.29. Os
mRNAs de um grupo de clulas so purificados e convertidos a cDNA por transcriptase
reversa. Usando DNA polimerase e S1 nuclease, a populao de DNAs de fita nica
transformada em uma populao de fita dupla. Em seguida, escolhe-se um DNA para
ser amplificado. Para isso, separam-se as duplas hlices do DNA, s quais so adici-
onados dois pequenos oligonucleotdeos iniciadores que so complementares a
uma poro da mensagem procurada. Se os oligonucleotdeos reconhecem seqn-
cias no DNA, ento o mRNA estava presente originalmente. Os oligonucleotdeos
foram preparados de forma a permitir uma hibridizao com fitas opostas e lados
opostos da seqncia alvo. (Se a tentativa isolar o gene ou mRNA para uma protena
especfica de seqncia conhecida, essas regies laterais podem ser preparadas,
CAPTULO 2 Genes e Desenvolvimento 67
Estgio
Clone
RNA
1 cpia iniciador 1 DNA alvo
Aquecer a 95oC para
desnaturar DNA.
Esfriar a 37oC para RNA
permitir hibridizao iniciador 2
dos iniciadores a DNA
Primeiro ciclo
Desnatura DNA
Hibridiza
Segundo ciclo
iniciadores
Estende novas
fitas de DNA
Segundo ciclo de
snteses resulta em
4 cpias quatro cpias da
seqncia alvo de DNA
Figura 2.29
Protocolo para a reao de polimerase em cadeia (PCR). Para determinar se um tipo particular
de mRNA est presente, todo mRNA convertido a DNA de dupla fita pela transcriptase
reversa e DNA polimerase. Esse DNA desnaturado e dois conjuntos de iniciadores so
adicionados. Se a seqncia especfica estiver presente, os iniciadores se hibridizaro aos seus
terminais opostos. (Iniciadores especficos so produzidos com base na seqncia que se pro-
cura. Se conhecida apenas a seqncia da protena codificada pela mensagem, prepara-se um
conjunto de diferentes iniciadores, cada um possivelmente complementar ao DNA.) Usando
DNA polimerase termoestvel de T. aquaticus, cada fita de DNA sintetiza seu complemento.
Essas fitas so, por sua vez, desnaturadas e os iniciadores so hibridizados a elas, iniciando o
ciclo novamente. Dessa maneira, o nmero de fitas novas com a sequncia entre os dois
iniciadores aumenta exponencialmente.
Adulto
em fontes de gua quente (como aquelas do Yellowstone National Park) ou nos respi- Ovrio de camundongo
radouros trmicos de submarinos, onde a temperatura atinge valores prximos de
900C. Essas DNA polimerases podem suportar temperaturas prximas ebulio e o Rim de camundongo
PCR se utiliza dessa adaptao evolucionria. Uma vez sintetizada a segunda fita, ela
Rim de camundongo
Embrio de 14 dias
separada de seu complemento por desnaturao em alta temperatura. O segundo
iniciador adicionado e agora ambas as fitas podem sintetizar novo DNA. Sucessivos Salivares de camundongo
ciclos de desnaturao e sntese amplificaro essa regio do DNA de forma geomtri-
ca. Aps vinte turnos, aquela regio especfica estar amplificada 220 vezes (um pouco Pncreas de camundongo
mais de um milho). Quando submetido eletroforese esse fragmento amplificado Pulmo de camundongo
facilmente detectado. Isso mostra que o mRNA original com essa seqncia estava
presente na amostra. (A confirmao poderia ser feita por transferncia Southern,
como na Figura 2.30). Alm disso, pode-se usar essas cpias amplificadas para clona- Sem adio de DNA
gem, colocando-as em vetores de clonagem.
Figura 2.30
Determinando a funo do gene: Evidncia fornecida por PCR, para a sntese
de um fator de crescimento, activina, de r-
clulas e organismos transgnicos gos embrionrios de camundongo. O mRNA
desses rgos foi convertido em DNA e am-
Tcnicas de insero de DNA novo em uma clula plificado atravs de 20 ciclos de replicao.
Apesar de ser importante conhecer a seqncia de um gene e seu esquema temporo- O DNA foi submetido sucessivamente ele-
espacial de expresso, o que realmente crucial conhecer a funo daquele gene troforese e transferncia Southern usando uma
no desenvolvimento. Tcnicas recentes permitem estudar a funo do gene, tirando sonda radioativa para uma parte do gene de
e repondo certos genes de clulas embrionrias. Pedaos de DNA clonados podem activina. mRNA de activina foi encontrado
ser modificados (se desejado), e colocados em clulas por vrios meios. Uma tcni- no ovrio do camundongo adulto (como es-
ca muito direta a microinjeo, na qual uma soluo contendo o gene clonado perado) e tambm em vrios rgos embrio-
nrios. A possvel funo de activina nesses
cuidadosamente injetada no ncleo da clula (Capecchi, 1980). Essa uma tcnica
orgos ser discutida no Captulo 17. (Corte-
especialmente til para injetar genes em ovos recentemente fertilizados, pois os sia de O. Ritvos.)
ncleo haplides do espermatozide e do vulo so relativamente grandes (Figura
2.31). Em transfeco, o DNA incorporado diretamente na clula por incubao em
uma soluo determinada onde a clula o incorpora. A probabilidade de incorpora-
o de tal fragmento de DNA no cromossomo relativamente pequena, sendo ne-
cessrio misturar o DNA com outro gene que permite a sobrevivncia das raras
clulas que o incorporaram, em condies de cultura onde as outras clulas so
destrudas (Perucho et al.,1980; Robins et al.,1981).
Outra tcnica a eletroporao, onde pulsos de alta voltagem empurram o DNA
para dentro da clula. Um mtodo mais natural para introduzir genes na clula
colocar o gene clonado em um elemento transponvel ou vetor retroviral. Esses so
regies mveis de DNA, de ocorrncia natural, que podem ser integrados no genoma.
Retrovrus so vrus contendo RNA. Dentro da clula hospedeira eles produzem uma
cpia de seu DNA (usando sua prpria transcriptase reversa); a cpia se transforma
em dupla fita e se integra em um cromossomo do hospedeiro. A integrao consuma-
da devido s duas seqncias idnticas (longas repeties terminais) nos terminais
do DNA retroviral. Vetores retrovirais so produzidos removendo os genes do
empacotamento viral (necessrios para a sada dos vrus da clula) do centro de um
retrovrus de camundongo. Essa extrao cria um stio vazio onde outros genes po-
dem ser colocados. Usando enzimas de restrio apropriadas, o pesquisador pode
remover genes de um fago ou plasmdeo clonado e reinserir o gene em vetores retrovirais.
Retrovetores virais infectam clulas de camundongo com eficincia prxima de 100%.
Em Drosophila, novos genes podem ser introduzidos na mosca, via elementos P.
Essas seqncias de DNA, so elementos transponveis de ocorrncia natural que
podem ser integrados como vrus em qualquer regio do genoma da Drosophila.
Ainda mais, eles podem ser isolados, e genes clonados inseridos no centro do elemen-
to P. Quando o elemento P recombinado injetado em um ocito de Drosophila, ele
pode se integrar ao DNA e prover o embrio de um novo gene (Spradling e Rubin, 1982).
70 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
Camundongos quimricos
As tcnicas descritas tm sido usadas recentemente para transferir genes para to-
das as clulas do embrio de camundongo (Figura 2.32). Durante o desenvolvimen-
to do camundongo existe um estgio onde somente esto presentes dois tipos de
clulas: as clulas externas, que formaro a poro fetal da placenta, e as clulas
internas, que daro origem ao prprio embrio. Essas clulas internas so chamadas
clulas embrionrias precursoras (clulas tronco), porque cada uma delas pode,
se isolada, gerar todas as clulas do embrio (Gardner, 1968; Moustafa e Brinster,
1972). Essas clulas podem ser isoladas do embrio de um camundongo e cultiva-
das. Uma vez em cultura, elas podem ser tratadas como descrito, de modo a incorpo-
rar novo DNA. A nova clula embrionria precursora (no somente o DNA, mas a
clula inteira) pode ser injetada em outro embrio de camundongo em fase precoce.
Assim, a clula precursora tratada estar integrada no embrio do hospedeiro. O
resultado um camundongo quimrico*. Algumas de suas clulas so derivadas
das clulas embrionrias precursoras do hospedeiro, mas outra poro de clulas
derivada tambm das clulas precursoras tratadas. Se as clulas tratadas se torna-
ram parte da linha germinal do camundongo, alguns dos seus gametas sero deriva-
dos da clula doadora. Quando cruzado com um camundongo do tipo selvagem,
alguns de seus descendentes levaro, portanto, uma cpia do gene inserido. Os
descendentes heterozigotos, no acasalamento produziro 25% de embries carre-
Figura 2.31 gando duas cpias do gene inserido em cada clula de seu corpo (Gossler et al.,1986).
Injeo de DNA (de genes clonados) em um
Assim, em trs geraes o camundongo quimrico, o camundongo heterozigoto
ncleo (neste caso, um proncleo de um ovo
de camundongo). (de Wagner et al.,1981, cor- e o camundongo homozigoto um gene que foi clonado de um outro indivduo,
tesia de T. E. Wagner.) est agora presente em ambas as cpias dos cromossomos dentro do genoma do
camundongo. Camundongos com genes estveis de outros indivduos so chama-
dos camundongos transgnicos. Essas linhagens tm sido particularmente teis na
determinao das funes de regies reguladoras que ladeiam os genes.
* crtico notar a diferena entre uma quimera e um hbrido. Um hbrido resulta da unio de dois
genomas diferentes dentro da mesma clula: o descendente de um genitor de gentipo AA e outro de
gentipo aa um hbrido Aa. Uma quimera resulta quando clulas de constituio gentica diferente
aparecem no mesmo organismo. O termo apto: refere-se a um monstro mitolgico com cabea de
leo, corpo de bode e cauda de serpente.
CAPTULO 2 Genes e Desenvolvimento 71
Clulas embrionrias
precursoras
Gene clonado
no vetor
Cultura de clulas
Trofoblasto embrionrias precursoras
Mistura de clulas Seleo de clulas
embrionrias precursoras embrionrias precursoras
com o gene clonado que incorporaram o transgene
Figura 2.32
Produo de camundongos transgnicos. C-
lulas embrionrias precursoras de um camun-
dongo so cultivadas e o genoma alterado pela
adio de um gene clonado. As clulas
transgnicas so selecionadas e injetadas em
um embrio hospedeiro de camundongo na sua
fase precoce. Aqui, as clulas embrionrias
Camundongos precursoras transgnicas se integram s celulas
transgnicos precursoras do hospedeiro. Esse embrio
homozigotos colocado no tero de um camundongo fmea
Camundongos
grvida e se desenvolve em um camundongo
transgnicos
heterozigotos quimrico. Se as clulas precursoras doadoras
contriburam para a linha germinativa, e o ca-
mundongo quimrico cruzado com um do
tipo selvagem, parte dos descendentes sero
Uma vez dentro do ncleo dessas clulas, o gene Hoxa-3 mutado substituiu um heterozigotos ao alelo adicionado. Cruzando
alelo normal desse gene por um processo chamado recombinao homloga. Aqui, heterozigotos, pode ser gerada uma linhagem
de camundongos que homozigota ao alelo
as enzimas envolvidas no reparo de DNA e replicao incorporam o gene mutante
adicionado. Essa seria uma linhagem transg-
em lugar da cpia normal. Esse um evento raro, mas tais clulas podem ser nica. O gene adicionado (o transgene) pode
selecionadas cultivando as clulas precursoras em neomicina. A maioria das clulas ser de qualquer fonte eucaritica.
morre com a droga, mas aquelas que adquiriram resistncia pelo gene incorporado
sobrevivem. As clulas resultantes tm um gene Hoxa-3 normal e um Hoxa-3 mutado.
As clulas precursoras heterozigotas so microinjetadas em um blastcito de ca-
mundongo e se integram nas clulas do embrio. O camundongo resultante uma
quimera composta de clulas do tipo selvagem do embrio hospedeiro e de clulas
heterozigotas Hoxa-3, das clulas precursoras. As quimeras so acasaladas com
camundongos do tipo selvagem e se algumas das clulas doadoras se integraram
linhagem das clulas germinativas, alguns dos descendentes sero heterozigotos
72 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
(A)
Massa
celular neo r
interna
Cultura de clulas
Blastcito embrionrias
precursoras (ES) Recombinao
Eletroporao homloga
(B) Clula
gene Hoxa-3 precursora
embrionria
Hoxa-3
Endonucleases gene Hoxa-3 mutado
de restrio com o gene neor inserido
gene neor
Figura 2.33
Seleo de clulas ES
Tcnica de endereamento de genes (gene targeting). Nesse caso o gene alvo o heterozigotas por sua
Hoxa-3. (A) Clulas embrionrias precursoras (ES) so cultivadas a partir de uma resistncia neomicna
massa celular interna. (B) Os genes Hoxa-3 clonados so cortados com uma enzima
de restrio, e um gene neomicina-resistente inserido na regio que codifica o stio
de ligao da protena ao DNA. Esses genes Hoxa-3 mutantes so eletroporados em
clulas ES, onde recombinao homloga troca o gene do tipo selvagem pela cpia Injeo de clulas ES
mutada. As clulas so selecionadas pela sua resistncia neomicina. (C) As clulas heterozigotas no
(C)
blastcito
ES heterozigotas selecionadas so inseridas na massa interna de clulas de um em-
brio do tipo selvagem, e o blastcito retornado ao tero. O camundongo resultante
uma quimera composta de tecidos Hoxa-3 heterozigotos e tecidos Hoxa-3 do tipo
selvagem. Cruzando os animais quimricos com camundongos do tipo selvagem
produz-se descendentes Hoxa-3 heterozigotos se as clulas ES contriburam na
linhagem germinativa. Os animais heterozigotos podem ser cruzados entre si, e Injeo dos
aproximadamente 25% de sua cria deve ser de homozigotos mutantes de Hoxa-3. blastcitos no tero
Produo de
camundongos quimricos
Cruzamento de
quimricos com
tipo selvagem
Cruzamento de
camundongos
heterozigotos
Hoxa-3/ Hoxa-3+
Heterozigotos Heterozigotos
Hoxa-3/ Hoxa-3
Homozigoto
para o gene Hoxa-3. Os animais heterozigotos podem ser cruzados entre si, e apro-
ximadamente 25% de seus descendentes devem levar duas cpias do gene mutado
Hoxa-3. Esses camundongos mutantes homozigotos no possuem as glndulas
tireide, paratireide e timo! Dessa maneira, endereando genes pode-se analisar as
funes de determinados genes durante o desenvolvimento de mamferos.
[gene7.html]
CAPTULO 2 Genes e Desenvolvimento 73
promotor
T7
mRNA
antisense Embrio normal
Krppel
T3 RNA
T3 polimerase polimerase
promotor T7 RNA Embrio normal
infectado com RNA
antisense Krppel
74 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
o stio onde se liga a RNA polimerase. Localizada em algum lugar dentro do gene (a
jusante ou a montante, ou ainda em um ntron dentro do gene), est uma segunda
regio chamada intensificadora. Fatores proticos que se ligam ao intensificador per-
mitem sua interao com o promotor e, conseqentemente, com a transcrio do gene
pela RNA polimerase. Alguns promotores (como aqueles usados por produtos relaci-
onados ao metabolismo geral da clula) no precisam ser ativados por intensificado-
res, mas a maioria dos genes ligados ao desenvolvimento so ativados em tempos e
clulas especficos. Esses genes precisam ser ativados por fatores que se ligam ao
intensificador e ao promotor. Como veremos no Captulo 10, a ligao de diferentes
fatores de transcrio aos promotores e intensificadores de genes especficos um
dos mecanismos que controlam a produo de protenas diferentes a partir de genomas
idnticos. Um exemplo a ativao do gene para ZP3.
Como detalharemos no Captulo 4, ZP3 a principal protena ligante de espermato-
zide na superfcie do vulo de camundongo. uma glicoprotena sintetisada pelo
ocito durante sua maturao em vulo (Roller et al.,1989). Uma transferncia Northern
mostra que o mRNA para essa protena sintetizado somente em ocitos em cresci-
mento e no pode ser detectado em nenhum outro tipo de clula (Figura 2.36). O que
permite a esse gene ser ativado somente nos ocitos? Lira e colaboradores (1990)
isolaram o gene para ZP3, determinaram sua seqncia e encontraram um stio promo-
tor, 28 pares de bases a montante do stio onde a transcrio do gene iniciada. Como
hiptese, consideraram que seqncias responsveis por ativao ocito-especfica
podem existir at mais longe, a montante do gene. Eles usaram enzimas de restrio
para isolar o DNA da regio 5', a montante, (com 150 pares de bases) e o fundiram ao
gene para a luciferinase de vaga-lume. (No necessrio dizer que essa enzima produ-
tora de luz no encontrada em camundongos. Est sendo usada aqui como um gene
reprter para monitorar onde o DNA a montante pode causar sua expresso.) O gene
recm-construdo, contendo a regio a montante do gene ZP3 ligada ao gene estrutu-
ral para luciferinase, foi injetado em zigotos de camundongo para criar animais
transgnicos, levando em cada ncleo o gene luciferinase com a regio regulatria
ZP3. Em camundongos transgnicos fmeas, a hibridizao in situ localizou mRNA de
luciferinase em um nico tipo de clula, o ocito (Figura 2.37). Assim, a seqncia de
DNA com 150 pares de bases foi necessria e suficiente para ativar o gene (qualquer
gene!) no ocito. Dentro dessa regio de 150 pares de bases (de 99 a 86 pares de bases
a montante do gene estrutural ZP3) existe a seqncia 5-GATAA-3' que liga uma
protena chamada OSP-1. OSP-1 encontrada somente em ocitos em maturao; ela
ativa o gene ZP3 ligando-se a essa sequncia de DNA no promotor. Parece, ento, que
ZP3 sintetizado em ocitos porque eles tm a protena OSP-1 que se liga a certas
seqncias de DNA que so parte de seu promotor (Schickler et al.,1992). No momen-
to, est sendo investigado como regulado o gene codificador de OSP-1.
Figura 2.35
Estrutura bsica de um gene regulado pelo de-
senvolvimento. O promotor da maioria dos
genes codificadores de protenas encontrado
no terminal 5' (a montante) do gene. O intensi-
ficador freqentemente est mais acima, a mon-
tante, mas pode ser encontrado dentro de um Intensificador
ntron ou no terminal 3'. Protenas que se li- Promotor xon ntron xon ntron xon
gam ao promotor e aos intensificadores
interagem para regular a transcrio do gene.
(No exemplo ZP3, o stio OSP-1, GATAA,
est localizado no promotor, aproximadamen-
te 95 pares de bases a montante do stio de Intensificador Intensificador
incio da transcrio. Um stio intensificador
sensvel a estrognios encontrado no primei- a montante a jusante
ro ntron do gene ZP3.) do gene do gene
CAPTULO 2 Genes e Desenvolvimento 75
Depois de quase um sculo, estamos comeando a entender como as clulas regulam Msculo
a expresso diferenciada de seus genes, permitindo que genes diferentes possam se Testculos
tornar ativos em diferentes clulas. Esse conhecimento est ajudando a explicar como tero
a informao herdada utilizada para construir os planos bsicos do corpo e os tipos
especficos de clulas do organismo em desenvolvimento.
Entretanto, uma palavra de alerta. Caso o tom celebratrio deste captulo deixou a
impresso de que desenvolvimento somente uma funo da atividade gnica
necessrio relembrar do Captulo 1, que a distino entre talo e esporo (Dictyoste-
lium), estado amebide e flagelado (Naegleria) e gondios sexual e assexual (Volvox)
determinada pelo ambiente. Em captulos posteriores (especialmente Captulo 21),
veremos outros exemplos do controle ambiental do desenvolvimento: determinao
de sexo temperatura-dependente em rpteis, desenvolvimento em insetos dependente
da dieta, e a diferenciao, dependente de experincia, dos neurnios e linfcitos em
mamferos. Nesses casos o organismo herda a habilidade para responder aos sinais
do ambiente, mas no possvel predizer o fentipo a partir do gentipo.
(A) (B)
Figura 2.37
Hibridizao in situ da expresso do gene reprter luciferinase, quando luciferinase foi
ligado ao promotor do gene ZP3. A sonda radioativa era dirigida mensagem luciferinase,
a qual apareceu onde foi expressa sob a direo do promotor de ZP3. (A) Viso do
ovrio inteiro (60x). (B) Magnificao (160x) de dois folculos ovarianos contendo
ocitos em maturao. (de Lira et al., 1990, cortesia de P. Wassarman.)
76 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
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A base celular da morfognese:
Afinidade celular diferencial
3
Mas a natureza no atomizada. Sua pa-
dronizao inerente e primria, e a ordem
subjacente beleza nela demonstrada; mais
ainda, a natureza s pode ser percebida pela
mente humana, porque ela mesmo parte
U m corpo no meramente uma coleo de tipos de clulas distribudas ao
acaso. Desenvolvimento envolve no s a diferenciao celular, mas tam-
bm sua morfognese em arranjos multicelulares tais como tecidos e rgos.
Quando observamos a anatomia detalhada de um tecido como a retina neural, vemos
um arranjo preciso e intrincado de muitos tipos diferentes de clulas. Neste Captulo,
integrante e majoritria daquela ordem. introduziremos as vias de mudana pelas quais as clulas do embrio em desenvolvi-
Paul Weiss (1960) mento criam rgos funcionais do corpo. Existem quatro questes majoritrias partici-
pando do arcabouo de discusses sobre morfognese:
Eu fui criado terrivelmente e maravilhosa-
Como se formam tecidos a partir de clulas? De que modo clulas da retina
mente. Salmo 139 (ca. 500 a.c).
neural aderem a outras clulas da retina neural e no se associam s celulas da
retina pigmentada ou da ris que esto prximas a elas? De que modo, os vrios
tipos de clulas presentes na retina neural (as trs camadas distintas de fotore-
ceptores, neurnios bipolares e clulas ganglionares) esto organizados para
permitir que a retina seja funcional?
Como so os rgos construdos a partir de tecidos? As clulas retinais do
olho esto situadas atrs da crnea e da lente a uma distncia exata. A retina
seria intil se estivesse situada atrs de um osso ou outro lugar qualquer, onde
a lente no pudesse nela focalizar os raios de luz. Alm disso, os neurnios da
retina devem penetrar no crebro para inervar as regies do crtex cerebral que
analisam a informao visual. Todas essas conexes devem estar precisamente
ordenadas.
Como clulas migrantes atingem seu destino, e como se formam rgos em
determinados locais? Olhos se desenvolvem na cabea, mas em nenhum ou-
tro lugar. O que impede a formao de um olho em outras partes do corpo, se
todas as clulas tm o mesmo potencial gentico? Em alguns casos, como o de
precursores de nossas clulas pigmentadas, clulas germinativas e glndula
supra-renal, as clulas devem percorrer longas distncias para alcanar seu
destino final. Como as clulas so instrudas para percorrer certas rotas e parar
quando atingem uma regio especfica do corpo?
Como crescem rgos e suas clulas, e como esse crescimento coordenado
ao longo do desenvolvimento? As clulas do olho devem crescer juntas, e as
clulas da retina raramente dividem-se aps o nascimento. Nosso intestino,
entretanto, est constantemente descartando clulas e regenerando outras, e
79
80 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
Figura 3.1
Sumrio dos principais processos morfogenticos em clulas mesenquimatosas e epiteliais
PROCESSO AO MORFOLOGIA EXEMPLO
CLULAS MESENQUIMATOSAS
CLULAS EPITELIAIS
Clulas epidrmicas
presuntivas
Segregao de
tipos de clulas
Reagregao
espontnea
Dissociao
de clulas
Figura 3.2
Reagregao de clulas da nurula de anfbi-
os. Clulas epidrmicas presuntivas de em- Os resultados de seus experimentos foram surpreendentes. Em primeiro lugar,
bries pigmentados e clulas da placa neural verificaram que clulas reagregadas se tornavam espacialmente segregadas. Ou seja,
de embries no pigmentados so dissociadas em lugar de permanecerem misturadas, cada tipo de clula se posicionava em sua
e misturadas entre si. As clulas reagrupam- prpria regio. Assim, quando clulas epidrmicas (ectodrmicas) e mesodrmicas
se de tal forma que um tipo (aqui, a epiderme foram ajuntadas para formar um agregado misto, as clulas epidrmicas foram encon-
presuntiva) cobre o outro. (Modificado de tradas na periferia do agregado e as clulas mesodrmicas no seu interior. Em nenhum
Townes e Holtfreter, 1955.) caso as clulas permaneceram misturadas ao acaso, e na maioria dos casos, um tipo de
tecido envolvia o outro completamente.
Em segundo lugar, os pesquisadores observaram que as posies finais das clu-
las reagregadas refletiam suas posies embrinicas. O mesoderma migra centralmen-
te epiderme, aderindo sua superfcie interna (Figura 3.3A). O mesoderma tambm
migra centralmente em relao ao intestino ou endoderma (Figura 3.3B). Entretanto,
quando as trs camadas germinativas so misturadas entre si, o endoderma se separa
do ectoderma e mesoderma e ento envolvido por eles (Figura 3.3C). Na sua configu-
rao final, o ectoderma est na periferia, o endoderma interno e o mesoderma se
situa na regio entre eles. Holtfreter interpretou esse fato em termos de afinidade
seletiva. A superfcie interna do ectoderma tem uma afinidade positiva pelas clulas
mesodrmicas e uma afinidade negativa para o endoderma, enquanto o mesoderma
tem afinidades positivas para ambas as clulas, ectodrmicas e endodrmicas. A
mimetizao da estrutura embrionria normal por agregados celulares tambm pode
ser vista na recombinao de clulas da epiderme e da placa neural (Figura 3.3D). As
clulas epidrmicas presuntivas migram para a periferia, como antes; as clulas da
placa neural migram para o centro, formando uma estrutura reminescente do tubo
neural. Quando clulas axiais mesodrmicas (notocorda) so adicionadas suspen-
so de clulas presuntivas, epidrmicas e neurais, a segregao celular resulta em uma
camada epidrmica externa, um tecido neural localizado centralmente, e uma camada
de tecido mesodrmico entre eles (Figura 3.3E). De alguma maneira, as clulas tm a
capacidade de distribuirem-se em suas prprias posies embriolgicas.
Tais afinidades preferenciais foram tambm observadas por Boucaut (1974),
que injetou clulas individuais de especficas camadas germinativas de volta na
cavidade gastrular de anfbio. Ele verificou que essas clulas migram para sua
camada germinativa apropriada. Clulas endodrmicas encontram posies no
endoderma do hospedeiro, enquanto que clulas ectodrmicas se localizam em seu
CAPTULO 3 A base celular da morfognese 83
Figura 3.3
ectoderma. Assim, afinidade seletiva parece ser importante para fornecer informao Distribuio e reorganizao de relacionamen-
posicional s clulas embrionrias. tos embrionrios espaciais em agregados de
A terceira concluso de Holtfreter e seus colegas foi que afinidades seletivas clulas embrionrias de anfbios. (Modificado
mudam durante o desenvolvimento. Isso deveria ser esperado, pois clulas embrion- de Townes e Holtfreter, 1955.)
rias no mantm uma nica relao estvel com outras clulas. Para que ocorra o
desenvolvimento, clulas precisam interagir de forma diferente com outras popula-
es celulares em tempos especficos. Essas mudanas na afinidade celular foram
dramaticamente confirmadas por Trinkaus (1963), que mostrou uma clara correlao
entre mudanas de adeso in vitro e o comportamento da clula embrionria. Mais
recentemente, os experimentos de Fink e McClay (1985) demonstraram esse comporta-
mento no ourio-do-mar, durante seu desenvolvimento. Na blstula, todas as clulas
parecem ter a mesma afinidade umas pelas outras. Cada clula tem tambm uma alta
afinidade para a matriz extracelular (camada hialina) que cobre o embrio, e uma baixa
afinidade para as protenas dentro da cavidade embrionria (blastocele). Entretanto,
ao iniciar-se a gastrulao, um grupo especfico de clulas, no plo vegetal da blstu-
la, perde sua afinidade pelas clulas vizinhas e pela matriz extracelular externa, en-
quanto adquire simultaneamente afinidade pelas fibrilas proticas que forram a blasto-
cele (Figura 3.4). Essas mudanas de afinidade causam a perda de contato das clulas
84 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
Fibrilas
da
blastocele
com suas vizinhas e a migrao para dentro da blastocele, onde elas formaro o
esqueleto da larva. Quando elas comeam a formar esse esqueleto, suas proprieda-
des adesivas tero que mudar novamente. Essas clulas, que tinham sido anti-
sociais entre si desde seu ingresso na blastocele, devem agora aderir para formar
os rudimentos do anel esqueltico. Essas mudanas na adeso so especficas
temporalmente e tambm especficas para as clulas precursoras esquelticas
(McClay e Ettensohn, 1987). Tais mudanas na afinidade celular so extremamente
importantes nos processos da morfognese.
A reconstruo de agregados de embries tardios de aves e mamferos foi
obtida pelo uso da protease tripsina para dissociar as clulas entre si (Moscona,
1952). Quando as clulas isoladas resultantes foram misturadas em um frasco e
agitadas de modo que a fora de cisalhamento destrusse adeses no especfi-
cas, as clulas se distriburam de acordo com seu tipo celular. Dessa maneira, elas
reconstruram a organizao do tecido original (Moscona, 1961; Giudice, 1962). A
Figura 3.5 mostra a reconstruo do tecido da pele de um embrio de camundon-
go de 15 dias. As clulas da pele so separadas por enzimas proteolticas e depois
agregadas em uma cultura rotatria. As clulas epidrmicas migram para a perife-
ria, e as drmicas migram para o centro. Em 72 horas, a epiderme foi reconstituda,
formou-se uma camada de queratina e folculos de plo so vistos na regio dermal.
Essa reconstruo de tecidos complexos a partir de clulas nicas chamada de
agregao histotpica.
(D) Derme
Figura 3.6
Agregados formados pela mistura de clulas da retina neural (no pigmentada) de um embrio de (E)
galinha de 7 dias com clulas pigmentadas da retina (escuras). (A) Cinco horas aps a mistura Folculos de plo
das suspenses de clulas isoladas, so vistos agregados de clulas distribudas ao acaso. (B) Em
19 horas, as clulas pigmentadas da retina no so mais vistas na periferia. (C) Aps dois dias,
a maioria das clulas pigmentadas da retina esto localizadas em uma massa central interna
rodeadas pelas clulas da retina neural. (As clulas pigmentadas espalhadas so provavelmente
clulas mortas). (de Armstrong, 1989, cortesia de P. B. Armstrong.)
86 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
Figura 3.7
Espalhamento de um tipo de clula sobre outro tipo. A posio final de agregados compostos de
dois tipos de tecidos independente de sua posio inicial. Uma condio final idntica
Tecido Tecido obtida, se os tecidos so transformados em suspenses de clulas isoladas e, ento, reagregadas
A B ou os tecidos so mantidos intactos e colocados em contato. (De acordo com Armstrong, 1989.)
Clulas A localizadas
centralmente s clulas B
(A) DISTRIBUIO
(B) AO ACASO
(C) SEPARAO
Figura 3.8
Distribuio como um processo tendendo estabilidade termodinmica mxima. (A) Distribui-
o ocorre quando a fora adesiva mdia entre diferentes tipos de clulas (ab) menor que a
fora adesiva mdia homotpica (A-A ou B-B) (aa, bb). As clulas mais adesivas se localizam
centralmente. (B) Se a fora das adeses A-B maior ou igual mdia das adeses homotpicas,
no vai haver distribuio, porque o sistema j atingiu o equilbrio termodinmico, e a mistura
dos tipos de clulas ser ao acaso. (C) Se as ligaes A-B so muito mais fracas que a mdia das
adeses homotpicas, haver uma completa separao, como caracterstico para leo e gua.
CAPTULO 3 A base celular da morfognese 87
Informaes adicionais
& Especulaes
Figura 3.9
Distribuio quando blastemas de nveis iguais
ou diferentes, de membros anteriores, so co-
locados juntos em cultura. (Um membro de
cada par foi marcado com tritio para distingu-
lo do outro). Depois de trs dias em cultura,
os agregados foram fixados e secionados.
Antebrao
Permitir crescimento
externo dos enxertos
Informaes adicionais
& Especulaes
TCC ATG T T C GAT CGC GAG ATG GAG GAG ACG CAT TAC CCG CCC TGC ACC TAC AAC GTG ATG TGC
Ser Met Phe Asp Arg Glu Met Glu Glu T h r His Ty r P r o P r o Cys T h r Ty r Asn Val Met Cys
Seqncia esperada
Caderinas
ons de clcio so freqentemente necessrios para a adeso celular. Os ons esta-
bilizam as conformaes adesivas de certas protenas da superfcie celular chama-
das caderinas. Caderinas tm um papel crtico no estabelecimento e manuteno de
conexes intercelulares, e parecem ser cruciais para a segregao espacial de clu-
las e para a organizao da forma animal (Takeichi, 1987). Caderinas interagem com
outras caderinas de clulas adjacentes e so ancoradas na clula por complexos de
protenas chamados cateninas (Figura 3.16). O complexo caderina-catenina forma a
clssica juno aderente que liga as clulas epiteliais entre si. Mais ainda, como as
cateninas se ligam ao citoesqueleto de actina, elas integram as clulas epiteliais em
uma unidade mecnica. Em embries de vertebrados, quatro classes principais de
caderinas foram identificadas:
Tipo de agregado Cartilagem Fgado Msculo peitoral Rotao por seis horas
Cartilagem 100 6 48
Fgado 10 100 0
Msculo peitoral 38 49 100 Contar clulas
radioativas que
* Porcentagem do nmero mdio de clulas coletadas pelos agregados isotpicos. aderiram ao agregado
CAPTULO 3 A base celular da morfognese 93
Tabela 3.1 Classificao geral das principais molculas de adeso celular (CAMs)
Caderina
Ligao
caderina-caderina
Caderina
94 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
(A)
(B)
Figura 3.18
Importncia de caderinas em manter a coeso entre clulas em desenvolvimento. (A) Quando
ocitos so injetados com oligonucleotdeos antisense contra uma mensagem de caderina herda-
da maternalmente, as clulas centrais dispersam quando o hemisfrio animal removido. Em
embries controle (direita), as clulas internas permanecem juntas. (B) No estgio de quatro
clulas, os blastmeros que formam o lado esquerdo do sapo so injetados com um mRNA para
N-caderina que no tem a regio extracelular da caderina. Durante a neurulao as clulas com a
protena mutante no formam uma camada coerente. (de Heasman et al., 1994; B de acordo com
Kintner et al, 1992; fotografias cortesia de J. Heasman e C. Kintner.)
et al., 1990; Fujimori et al., 1990). Assim, as caderinas esto, provavelmente, tendo um
papel principal na organizao das clulas em tecidos. [cell2.html]
N N N
N N
Domnios semelhantes
imunoglobulina
Domnios semelhantes N
fibronectina
Extracelular
ou ou
Citoplasma CC
C C C
IgM N-CAM ou fasciclina II L1 ou neurogliana Interaes de N-CAM clula-clula
Figura 3.21
Distribuio de diferentes CAMs em bordas tissulares. Enquanto as clulas mesodrmicas se
renem para induzir o broto das penas no ectoderma, as clulas mesenquimatosas recm-
agregadas expressam N-CAM (A) e as clulas ectodrmicas expressam E-caderinas (B) nas
suas respectivas membranas celulares. (de Chuong e Edelman, 1985a, cortesia de G. Edelman).
(B) (D)
Figura 3.22
Protenas das junes em fenda. (A) Micro-
grafia eletrnica de uma fileira de junes em
Espao intracelular
(15-40 nm) fenda ligando duas clulas justapostas. (B) Mi-
crografia fluorescente de junes em fenda em
tbulo renal de embrio de camundongo de 17
dias. (C) Compartimento formado por prote-
Canais de nas da juno de fenda entre clulas que se
comunicao comunicam umas com as outras. Esse com-
partimento na gstrula de camundongo pode
ser visto injetando o corante Lucifer Yellow
em um clula e observando sua transferncia a
um pequeno grupo de clulas. (D) Estrutura
da subunidade da juno em fenda. (A de
Membranas Peracchia e Dulhunty, 1976, cortesia de C.
celulares
Peracchia; B de Sainio et al., 1992, cortesia de
Conexes K. Sainio; C de Kalimi e Lo, 1988, cortesia de
(A) (D) C. Lo; D conforme Darnell et al., 1986.)
98 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
dos blastmeros precoces esto ligados por junes em fenda, dessa forma permi-
tindo que ons e pequenas molculas solveis passem livremente entre eles. A habi-
lidade de clulas em formar junes em fenda com algumas clulas, e no com
outras, cria compartimentos fisiolgicos dentro do embrio em desenvolvimento
(Figura 3.22 C).
A importncia de junes em fenda no desenvolvimento foi demonstrada em
embries de anfbios e mamferos (Warner et al., 1984). Quando anticorpos contra
protenas da juno em fenda foram microinjetados em uma clula especfica de uma
blstula de Xenopus de oito clulas, a prognie daquela clula que usualmente est
ligada por junes de fenda, agora no podia permitir a passagem de ons ou mol-
culas pequenas de uma clula outra. Ainda mais, os girinos que resultaram das
blstulas tratadas mostraram defeitos especificamente relacionados ao destino de-
senvolvimental da clula injetada (Figura 3.23). A prognie de tal clula no morreu,
mas foi incapaz de se desenvolver de maneira normal (Warner et al., 1984). No em-
brio de camundongo, os oito primeiros blastmeros so conectados entre si por
junes em fenda. Apesar de frouxamente associadas entre si, essas oito clulas se
movem juntas para formar um embrio compacto. Se a compactao for inibida por
anticorpos contra protenas da juno em fenda, o desenvolvimento posterior ces-
sa. Os blastmeros tratados continuam a dividir-se, mas a compactao no ocorre
(Lo e Gilula, 1979; Lee et al., 1987). Se RNA antisense contra as mensagens da juno
em fenda injetado em um dos blastmeros de um embrio normal de camundongo,
aquela clula no formar junes em fenda e no ser includa no embrio (Bevilacqua
et al., 1989).
Os canais da juno em fenda so feitos de protenas chamadas conexinas. Em
cada clula, seis conexinas idnticas da membrana se agrupam para formar um canal
transmembrana contendo um poro central. O complexo de juno em fenda de uma
clula se conecta ao complexo de juno em fenda de outra clula, permitindo que se
juntem os citoplasmas de ambas as clulas (Figura 3.22D). Existem aproximadamente
doze tipos de conexinas, e algumas podem ser reguladas por caderinas. Jongen e
colaboradores (1991) observaram que em clulas acopladas por E-caderina, a comu-
nicao entre clulas, mediada por junes em fenda, depende da funo de caderinas.
Evidncias sugerem que caderinas permitem no s o contato entre as clulas como
tambm modificam as protenas tipo conexina. Os diferentes tipos de protena
conexina tm papis separados, mas parcialmente sobrepostos, no desenvolvimen-
to normal. Por exemplo, a protena de juno em fenda conexina-43 encontrada em
quase todos os tecidos do embrio do camundongo em desenvolvimento. Entretan-
to, se os genes da conexina-43 forem derrubados por endereamento de genes, o
embrio ainda se desenvolver. Parece que a funo da protena conexina-43 pode
ser assumida por outras conexinas. Mas, logo aps o nascimento, esses camundon-
gos tm respirao convulsiva, se tornam cianticos e morrem. Autpsia desses
animais mostra que o ventrculo direito a cmara que bombeia sangue aos pulmes
atravs da artria pulmonar est cheio de tecido que fecha a cmara e impede o
fluxo de sangue (Reaume et al.,1995). Mesmo que a perda da protena conexina-43
(A) possa ser compensada em muitos tecidos, parece que ela crtica para o desenvol-
vimento normal do corao. [cell4.html]
A membrana celular tem, ento, vrios mecanismos pelos quais pode fazer liga-
es com membranas de outras clulas. Podem ser usadas CAMs da superfamlia de
Figura 3.23
Efeitos da juno em fenda no desenvolvimento. Seo de um girino de Xenopus no qual um dos
blastmeros, no estgio de oito clulas, foi injetado com (A) um anticorpo controle ou (B) um
anticorpo contra a protena da juno em fenda. O lado formado pelo blastmero injetado no tem
(B) o olho e tem uma morfologia cerebral anormal. (de Warner et al., 1984, cortesia de A. E. Warner.)
CAPTULO 3 A base celular da morfognese 99
A matriz extracelular
A matriz extracelular consiste de macromolculas secretadas pelas clulas no seu
ambiente imediato. Essas molculas interagem de modo a formar uma estrutura insol-
vel que pode ter vrias funes no desenvolvimento. Em algumas situaes, ela pode
separar dois grupos adjacentes de clulas e prevenir qualquer interao. Em outros
casos, a matriz extracelular pode servir como o substrato no qual as clulas migram, ou
pode at induzir diferenciao em certos tipos celulares. Um tipo de matriz mostrado
na Figura 3.24. Aqui, uma lmina de clulas epiteliais est adjacente a uma camada de
tecido mesenquimatoso frouxo. As clulas epiteliais formaram uma apertada camada
extracelular chamada lmina basal; as clulas mesenquimatosas secretam uma frouxa
lmina reticular. Juntas, essas camadas constituem a membrana basal da lmina de
clulas epiteliais. Existem trs componentes principais na maioria de matrizes
extracelulares: colgeno, proteoglicanos e glicoprotenas grandes que so chamadas
molculas de adeso a substrato (Tabela 3.2).
COLGENOS COLGENO IV
Molculas longas e delgadas (Tipo I o mais comum; Tipos II, Os componentes estruturais majoritrios da lmina basal. Ao contr-
III, e V-XIII so tambm encontradas) que se organizam para rio de outros colgenos, suas fibrilas so como um fino arame de
formar fibrilas, usualmente com 60-70 nm de dimetro. galinheiro e se organizam em um substrato semelhante a feltro.
Colgenos proporcionam fora e estabilidade aos tecidos.
PROTEOGLICANOS DA MATRIZ
PROTEOGLICANOS DA MATRIZ
cido hialurnico e proteoglicanos sulfatados so freqentes na lmi-
Compostos de protenas e dissacardeos repetitivos (glicosaminogli- na basal. Sua presena pode facilitar a passagem de produtos
canos). Glicosaminoglicanos incluem cido hialurnico, uma enorme secretados pela lmina.
molcula (108 Da) que liga grandes quantidades de gua. Proteoglica-
nos sulfatados compreendem uma protena linear interna qual esto MOLCULAS DE ADESO DE SUBSTRATO
ligadas cadeias de um ou mais glicosaminoglicanos sulfatados
(condroitina, heparan, queratan e dermatan sulfato). Laminina, o componente funcional majoritrio da lmina basal. Um
Proteoglicanos estimulam e modulam movimentos celulares; sua trmero de glicoprotena com stios de adeso para a membrana celu-
disponibilidade sugere que podem ter outras propriedades no lar, colgeno IV e glicosaminoglicanos.
conhecidas. Lmina basal pode conter fibronectina, tenascina, nidogen e outras
glicoprotenas adesivas.
MOLCULAS DE ADESO DE SUBSTRATO
Monmeros de proteoglicanos
Pequenos glicosaminoglicanos
(tal como condroitina sulfato)
Protena
esqueleto
cido
hialurnico
cido hialurnico
a
Essas so unidades repetitivas tpicas desses glicosaminoglicanos. Entretanto, algumas regies de cada GAG podem ter
sacardeos ligeiramente modificados.
102 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
(A)
(B)
(D)
(C)
Proteoglicanos tambm so importantes como mediadores de conexes entre
Figura 3.26 tecidos adjacentes em um rgo. No rgo, eles renem clulas soltas para formar
Capa de proteoglicanos envolvendo clulas m-
uma lmina epitelial* (San Antonio et al.,1987; Thesleff et al., 1989; Vainio et al.,
veis. (A) Capa de hialuronidato envolve
mioblastos de galinha. Mioblastos em cultura
1989; Bernfield e Sanderson, 1990). Em alguns casos, proteoglicanos secretados por
excluem pequenas partculas (nesse caso, um tipo de clula so essenciais para o crescimento de clulas vizinhas. Axnios
hemcias fixadas) em distncia significante da dos gnglios da raiz dorsal tm proteoglicanos de heparan sulfato entre suas prote-
borda celular. (B) quando os mioblastos so nas da superfcie celular; a remoo desses proteoglicanos impede a proliferao
tratados com hialuronidase (a qual dissolve ci- ao seu redor, das clulas de Schwann associadas (Ratner et al.,1985). Uma maneira
do hialurnico), essa capa extracelular desapa- pela qual cadeias de glicosaminoglicanos, de proteoglicanos, podem funcionar
rece. (C) A capa tambm desaparece quando reter e apresentar fatores de crescimento para receptores celulares. Fatores de cres-
os mioblastos cessam a diviso e se juntam cimento so protenas semelhantes a hormnios que regulam mitose ou diferencia-
enquanto se diferenciam. (D) Micrografia ele-
o quando se ligam a determinadas clulas. Entretanto, o receptor celular para o
trnica de hialuronidato em soluo aquosa
mostra uma rede fibrilar ramificada. (A-C de
fator de crescimento freqentemente no liga o fator com grande afinidade. Na
Orkin et al., 1985, cortesia de B. Toole; D de verdade, o fator inicialmente ligado pelos carboidratos do proteoglicano, e isso
Hadler et al., 1982, cortesia de N. M. Hadler.) concentra o fator de crescimento localmente, de modo a ser possvel a ligao com
o receptor (Massagu, 1991; Yayon et al.,1991).
(A) RGD
Fibronectina
Stios de
ligao
Stio de ligao de RGD de clcio
Subunidade
Subunidade Subunidade
de integrina
de integrina de
integrina
Extracelular
Citoplasma
Actinina Vinculina
Talina
Glicosil transferase
(A) NDP-acar + aceptor NDP + acar-aceptor
Doador de acar
(B) ativado (NDP-acar)
(C)
Enzima
glicosil- Aceptor
transferase insolvel
Procolagenase Colagenase
Plasminognio
Ativao Colagenase
Uroquinase Plasmina Ativa
transcricional muito ativa
Prostromelisina Estromelisina
Figura 3.31
Cascata de ativao de metaloproteinases de membrana. Uroquinase um ativador de
plasminognio, que cliva o plasminognio dando plasmina. Plasmina ativa as formas precurso-
ras de estromelisinas e colagenases produzindo uma mistura de enzimas muito ativa capaz de
digerir matrizes extracelulares. (Conforme Matrisian, 1992.)
JAK--ST
A via JAK STAAT
No Captulo 2 discutimos um conjunto de fatores de transcrio inativos at que
um sinal de outra clula produz sua fosforilao. Esses fatores de transcrio so
as protenas STAT (transdutores de sinais e ativadores de transcrio) (Ihle,1995,
1996). As STATs so fosforiladas pela forma ativa da uma famlia de quinases, a
JAK. A via JAK-STAT muito importante na diferenciao de clulas sangneas
e na ativao do gene de casena na produo de leite (Briscoe et al., 1994; Groner
e Gouilleux, 1995). Nesses casos, um certo fator de diferenciao se liga a seus
receptores membrana-abrangente, fazendo com que esse se dimerize (que forme
dmeros) (Figura 3.32). Protenas JAK esto ligadas a cada um dos receptores (em
suas respectivas regies citoplasmticas), e agora ao serem aproximadas fosforilam
o receptor em vrios stios. Os receptores ativados tm agora sua prpria ativida-
de quinsica e podem fosforilar certos STATs inativos, induzindo sua dimerizao.
Os dmeros so a forma ativa dos STAT que so translocados para o ncleo onde
se ligam s regies especficas do DNA.
108 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
A via RTK
RTK-R-R as
-Ras
A via de transduo de sinais RTK-Ras foi uma das primeiras vias a unir as vrias reas
da biologia do desenvolvimento. Pesquisadores estudando olhos de Drosophila,
vulvas de nematdeos e cnceres humanos chegaram concluso que estudavam o
mesmo gene. A via RTK-Ras comea na superfcie celular, onde o receptor tirosina
quinase liga seu ligante especfico. Ligantes que se ligam a RTKs incluem fatores de
crescimento fibroblsticos, fatores de crescimento epidrmico e fatores de crescimen-
to derivados de plaquetas. O receptor tirosina quinase abrange a membrana e, quando
conectado com seu ligante, sofre uma mudana conformacional que permite sua
dimerizao. Esses dmeros tm uma atividade quinsica latente, ativada por mudana
conformacional fazendo com que os receptores se fosforilem um ao outro em resduos
particulares de tirosina. Assim, a introduo de um ligante no receptor causa uma
autofosforilao no domnio citoplasmtico do receptor.
A tirosina fosforilada no receptor reconhecida por uma protena adaptiva (Figura
3.33)especificamente, as tirosinas fosforiladas so reconhecidas por uma poro da
protena adaptativa chamada domnio SH2. As protenas adptativas servem como uma
ponte que liga a quinase fosforilada do receptor a um poderoso sistema intracelular de
sinalizao. Enquanto ligada ao receptor fosforilado pelo seu domnio SH2, a protena
adaptativa usa seu domnio SH3 para regular o ativador de uma protena Ras G. Normal-
mente, a protena de tipo selvagem Ras est na sua forma inativa e ligante de GDP.
Quando ativada pelo receptor ligante-acoplado, ela troca um fosfato de outro GTP
para transformar o GDP ligado em GTP. Essa catlise ajudada pelo fator de troca
guanina nucleotdeo. A Ras ligada a GTP a forma ativa da protena que transmite o
sinal. Aps a transmisso, o GTP hidrolizado a GDP. Essa catlise muito estimulada
CAPTULO 3 A base celular da morfognese 109
Ncleo Modulao da
transcrio
* Nomes podem ser perigosamente ilusivos. Muitos compostos tm mais de uma funo na
clula, e o que fazem depende do contexto da clula. Certos fatores de crescimento podem inibir
o crescimento, e alguns fatores de transcrio podem ser utilizados para inibir a transcrio.
Realmente, alguns fatores de transcrio podem ser usados para regular a traduo. Aqui vemos que
molculas de adeso celular podem ser usadas para transduo de sinais. Protenas celulares no
respeitam nossas fronteiras disciplinares.
Informaes adicionais
& Especulaes
FGF
FGFR normal:
FGF se liga causando dimerizao
do receptor de FGF
(B) FGFR dominante negativo
FGFR FGFR
taes dominantes negativas de recep- Receptor de FGF normal mutante
tores. Esse tipo de experimento ser bem
sucedido se a dimerizao for crtica para
a funo do receptor. Os receptores FGF
ativos, em um caso, so dmeros de duas
molculas idnticas embebidas na mem-
brana celular. O mutante dominante ne-
gativo no formar um dmero ativo, mes-
mo com um parceiro do tipo selvagem.
Portanto, quando presente em concen- Receptores
traes suficientemente altas, o receptor sem domnios Excesso do receptor
Domnio
intracelulares mutante pode
mutante compete com receptores FGF da tirosina Sinal
so inativos seqestrar o receptor
normais impedindo que suas protenas quinase
normal do fator de
sejam ativadas. Isso pode ocorrer em Sem sinal
crescimento. Esse
mutaes naturais ou provocadas. heterodmero inativo.
Amaya e colaboradores (1991) injetaram
Sem sinal
mRNA de uma forma mutante de um re-
Figura 3.34
ceptor FGF em embries de duas clulas
Ensaio para receptor dominante negativo para a importncia de um determinado receptor. O
de Xenopus. Essas blstulas no conse-
receptor de FGF (FGFR) uma RTK transmembrana. (A) Quando dmeros de FGF se ligam
guem responder ao FGF (Figura 3.34).
poro extracelular desses receptores, esses se dimerizam e seus dois domnios de protena
Nesse experimento, embries que no ti- quinase se fosforilam mutuamente. Quando fosforilados, acionam um sinal atravs do citoplas-
nham receptores FGF funcionais tinham ma. (B) O receptor dominante negativo no tem o domnio da protena quinase. Quando liga
mesoderma posterior e lateral dramatica- FGF, produz um dmero inativo, mesmo se o outro parceiro do tipo selvagem. Assim, o efeito
mente reduzido (Prancha 3). de FGF no transmitido clula.
CAPTULO 3 A base celular da morfognese 111
Figura 3.35
A via do inositol fosfato. (A) A reao de
(A) fosfolipase C, transformando PIP2 em DAG e
IP3. (B) Essa reao pode ser iniciada em dois
Extracelular pontos principais na membrana celular. Pri-
meiro, a via iniciada quando o receptor trans-
Fosfolipase C membrana ligado protena G ativado pela
introduo do ligante. Essa ativao resulta na
ligao de GTP protena heteromrica G e
Citoplasma sua dissociao em subunidades ativas. Essas
subunidades ativam enzimas fosfolipase C
(PLC) que podem catalizar a formao de DAG
e IP3. Em segundo lugar, a via pode ser ativada
pela via RTK. IP3 pode se ligar a um receptor
para liberar ons clcio do retculo endoplas-
mtico. Neste nterim, DAG (em presena dos
ons clcio liberados) ativa a protena quinase
C. A protena quinase estimula o transporta-
dor sdio/hidrognio a trocar ons hidrognio
celulares por ons sdio extracelulares, assim
levando a um aumento do pH.
(B)
RECEPTORES LIGADOS PROTENA G RECEPTORES LIGADOS TIROSINA QUINASE (PDGF, EGF, etc).
Ligante
Ligante
Extracelular
Citoplasma
Protena G
Via IP 3 PATHWAY
PKC MAP quinase
Atividade
Receptor celular e
IP 3 mitognese
Retculo
endoplasmtico
112 PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento
A via pode ter dois pontos iniciais (Figura 3.35; Berridge, 1993; Shilling et al.,
1994). Um ponto de iniciao o receptor tirosina quinase, mencionado anterior-
mente. Alm de ativar a protena Ras G, as tirosina quinases ativadas podem
interagir com um tipo de enzima, fosfolipase C (PLC1-y1, que tambm tem um
domnio SH2 que reconhece as tirosinas autofosforiladas). Fosfolipase C pode
catalisar a hidrlise de fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PIP2) em dois segundos
mensageiros: inositol 1,4,5-trifosfato (IP3) e diacilglicerol (DAG). IP3 capaz de
abrir canais de clcio do retculo endoplasmtico, liberando uma grande quantida-
de de ons clcio no citoplasma. DAG ativa a protena quinase C, que por sua vez
ativa a bomba de protena que troca ons sdio por ons hidrognio (Swann e
Whitaker, 1986; Nishizuka, 1986). O resultado a elevao de ons intracelulares
de clcio e um aumento no pH intracelular.
Um segundo ponto de iniciao outra classe de receptores, algumas vezes cha-
mado de receptores serpentina, porque tm sete domnios transmembrana e serpen-
teiam atravs da membrana. Esses receptores esto relacionados com outro tipo de
protena G, a protena G heteromrica. Quando o ligante liga-se ao seu receptor, esse
ativa a protena G. Essa ativao dissocia a protena G em suas subunidades, as quais
ativam outro conjunto de fosfolipase C, ou seja, PLC-1 e PLC-2. Esses dois tipos de
fosfolipase C podem clivar PIP2 em inositol 1,4,5-trifosfato e diacilglicerol. Como vere-
mos em captulos posteriores, as mudanas nos ons hidrognio e clcio, efetuadas
por essa via, alteram no somente a transcrio de genes, mas tambm a traduo de
mRNA e a replicao de DNA.
SINAL 1 SINAL 2
Citoplasma
MHC II
Antgeno Receptor B7
da clula T CD28
Extracelular
Citoplasma
RAF
T-LINFCITO
ELK-1 ativa
transcrio de c-fos
Ncleo
Transcrio de IL-2
Figura 3.36
Dois sinais so necessrios para efetuar a diferenciao de linfcitos T. O primeiro sinal vem de
receptores que ligam o antgeno apresentado na superfcie das clulas B ou macrfagos. O
segundo sinal vem da ligao da protena CD28 protena B7 que est na superfcie da clula
apresentante do antgeno. O primeiro sinal dirige a sntese de uma subunidade do fator de
transcrio AP-1. A outra subunidade sintetizada sob direo do segundo sinal. As duas
subunidades, c-fos e c-jun, formam o fator de transcrio AP-1 que pode ativar intensificadores
especficos para a clula T como os que regulam a produo de interleucina 2.
pode estimular a via RTK-Ras, como tambm pode estimular a interao da clula
com o L1, N-CAM e caderinas de uma clula vizinha (Bixby et al., 1994; Williams et
al., 1994a; Clark e Brugge, 1995). Caderinas (mesmo as solveis) podem dimerizar
receptores FGF exatamente como os ligantes normais de FGF, causando a liberao
de ons clcio, ativao transcricional e fenmenos de desenvolvimento caracters-
ticos das respostas do FGF celular (Figura 3.37; Williams et al., 1994b; Doherty et al.,
1995). Comunicao cruzada quase certa acontecer quando as molculas de ade-
so celular so tambm transdutores de sinais.
Citoplasma
Molcula de
adeso celular Receptor FGF
Extracelular
Citoplasma
Sinal
Figura 3.37
Possveis interaes de molculas de adeso celular com receptores de FGF. Os receptores FGF
podem ser seqestrados pelas molculas de adeso e colocados juntos. Isso pode ser feito
pela interao de molculas de adeso opostas, ou ligaes cruzadas de receptores de FGF das
membranas celulares opostas podem ativar seus domnios quinase.
Receptor
Patched
Protena
Hedgehog
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Padres de Desenvolvimento
4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo
167
Fertilizao:
Iniciando um novo organismo
4
Desejo e desejo e desejo
Sempre o desejo procriativo do mundo.
Saindo da obscuridade iguais opostos
avanam,
Sempre substncia e aumento, sempre sexo,
F ERTILIZAO (FECUNDAO) o processo pelo qual duas clulas sexuais
(gametas) se fundem para criar um novo indivduo com potenciais genticos
derivados dos dois genitores. A fecundao, portanto, realiza duas atividades
separadas: sexo (a combinao de genes derivados dos dois pais) e a reproduo
(criao de novos organismos). Assim, a primeira funo da fecundao a de trans-
Sempre uma tessitura de identidade, sempre mitir genes dos pais para a prole, e a segunda a de iniciar no citoplasma do ovo
distino, aquelas reaes que permitem o desenvolvimento.
Sempre uma criao de vida.
WALT WHITMAN (1855)
Embora os detalhes da fecundao variem de espcie para espcie, os eventos da
concepo consistem, em geral, de quatro atividades principais:
O objetivo final de todas as intrigas amoro- Contato e reconhecimento entre espermatozide e vulo. Na maioria dos
sas, sejam elas cmicas ou trgicas, na casos, isso assegura que o espermatozide e o vulo sejam da mesma espcie.
realidade mais importante que todas as ou- Regulao da entrada do espermatozide para o interior do vulo. Somente
tras finalidades na vida humana. um espermatozide pode, em ltima anlise, fecundar um vulo. Isso geral-
Ele se volta para nada menos que a compo- mente conseguido com a permisso de somente um espermatozide entrar no
sio da prxima gerao. vulo e a inibio da entrada de qualquer outro.
A SCHOPENHAUER Fuso do material gentico do espermatozide e do vulo.
(CITADO POR C. DARWIN, 1871)
Ativao do metabolismo do ovo para comear o desenvolvimento.
Espermatozide
Foi somente no sculo XIX que o papel do espermatozide na fertilizao tornou-se
conhecido. Anton van Leeuwenhoek, o microbiologista holands que co-descobriu o
espermatozide em 1678, acreditou inicialmente que ele continha animais parasitas vi-
vendo em seu interior (da o termo espermatozides, significando animais do esper-
ma). Assumiu originalmente que esses nada tinham a haver com a reproduo do
organismo onde se encontravam, porm, posteriormente chegou a acreditar que cada
espermatozide continha um embrio pr-formado. Leeuwenhoek (1685) escreveu que
121
122 PARTE II Padres de Desenvolvimento
ser considerado como uma vescula secretria modificada. Essas enzimas armazena-
das so usadas para lisar os invlucros externos do vulo. Em muitas espcies, tais
como os ourios-do-mar, existe uma regio de molculas globulares de actina entre o
ncleo e a vescula acrossmica. Essas protenas so usadas para estender um pro-
cesso de forma semelhante a um dedo durante os estgios precoces da fertilizao. Em
ourios-do-mar e vrias outras espcies, o reconhecimento mtuo entre espermatozi-
de e vulo envolve molculas desse processo acrossmico. Juntos, o acrossomo e o
ncleo constituem a cabea do espermatozide.
Os meios pelos quais o espermatozide impulsionado variam de acordo com o
modo pelo qual a espcie se adaptou s condies ambientais. Em algumas espcies
(como o nematelminto parasitrio Ascaris), o espermatozide viaja por movimentao
amebide de extenses lamelipodiais da membrana celular. Na maioria das espcies,
porm, um espermatozide capaz de viajar por longas distncias agitando o seu
flagelo. Os flagelos so estruturas complexas. A sua principal poro motora chama-
da axonema. Um axonema formado pelos microtbulos que emanam do centrolo na
base do ncleo do espermatozide (Figuras 4.2 e 4.3). O centro do axonema consiste
de dois tbulos centrais rodeados por uma fileira de nove duplas de microtbulos.
Realmente, s um microtbulo est completo, contendo 13 protofilamentos; o outro
tem forma de C e tem apenas 11 protofilamentos (Figura 4.3B). Um modelo tridimensi-
onal de um microtbulo completo est apresentado na Figura 4.3C. Aqui vemos os 13
protofilamentos interligados; os quais consistem exclusivamente da protena dimrica,
a tubulina.
Embora a tubulina seja a base da estrutura do flagelo, outras protenas tambm
so crticas para a funo do flagelo. A fora para a propulso do espermatozide
proporcionada pela dinena, uma protena apensa aos microtbulos (Figura 4.3B). A
dinena hidrolisa molculas de ATP e pode converter a energia qumica liberada em
Golgi
remanescente
Centrolo
Flagelo
Microtbulos
Centrolo
Flagelo
Vescula Poro
acrossmica final
e grnulo
Ncleo
Aparelho Mitocndrias
de Golgi Cauda
Mitocndrias
Figura 4.2
Axonema A modificao de uma clula germinativa para formar um espermatozide de ma-
Mitocndrias mfero. O centrolo produz um longo flagelo na parte que vir a ser a extremidade
Poro mediana
Centrolo posterior do espermatozide, e o aparelho de Golgi forma a vescula acrossmica
Pescoo na futura extremidade anterior. As mitocndrias (pontos abertos) agrupam-se ao
Ncleo Cabea do redor do flagelo perto da base do ncleo haplide e so incorporadas na parte
espermatozide mediana do espermatozide. O citoplasma remanescente descartado e o ncleo
Membrana plasmtica
se condensa. O tamanho do espermatozide maduro foi aumentado em relao s
Vescula acrossmica outras figuras. (Segundo Clermont e Leblond, 1955.)
124 PARTE II Padres de Desenvolvimento
O vulo
Todo o material necessrio para o comeo do crescimento e desenvolvimento tem
que estar armazenado no vulo maduro. Enquanto o espermatozide eliminou a
maior parte do seu citoplasma, o vulo em desenvolvimento (chamado de ocito
antes de tornar-se haplide) no somente conserva seu material, mas continua a
acumul-lo ativamente. Sintetiza ou absorve protenas, como a gema, que atuam
como reservatrios de alimento para o embrio em desenvolvimento. Assim, game-
tas femininos das aves so enormes clulas singulares que se tornaram entumecidas
pela acumulao de gema. Mesmo vulos com gema relativamente esparsa so com-
parativamente grandes. O volume do vulo do ourio-do-mar de aproximadamente
2 x 10-4 m3, mais de 10.000 vezes aquele do espermatozide. A representao do
vulo do ourio-do-mar e do espermatozide na Figura 4.4 mostra seus tamanhos
relativos, assim como os vrios componentes do vulo maduro. Assim, enquanto o
espermatozide e o vulo tm componentes nucleares haplides iguais, o vulo tem
ainda um notvel reservatrio citoplasmtico acumulado durante seu amadureci-
mento. Esse armazm citoplasmtico inclui protenas, RNAs, substncias qumicas
protetoras e fatores morfogenticos:*
Protenas. Ser longo o perodo a transcorrer antes do embrio ser capaz de se
alimentar ou obter alimento de sua me. As clulas embrionrias precoces
precisam de um certo suprimento armazenvel de energia e aminocidos. Em
muitas espcies isso conseguido pelo acmulo de protenas na gema do ovo.
Muitas protenas da gema so sintetizadas em outros rgos (fgado, corpo
gorduroso) e viajam atravs do sangue materno para o ovo.
Ribossomos e tRNA. O embrio precoce precisa produzir muitas de suas prpri-
as protenas; em algumas espcies, ocorre um surto de sntese protica pouco
aps a fecundao. A sntese protica conseguida pelos ribossomos e tRNA,
preexistentes no vulo. O vulo em desenvolvimento tem mecanismos especi-
ais para sintetizar ribossomos, e certos ocitos de anfbios produzem at 1012
ribossomos durante a prfase meitica.
RNA mensageiro. Na maioria dos organismos, as mensagens para protenas
sintetizadas durante o desenvolvimento inicial j esto acondicionadas no
ocito. Estima-se que os vulos do ourio-do-mar contm de 25.000 a 50.000
tipos diferentes de mRNA. Porm, esse mRNA permanece dormente at aps a
fertilizao (veja Captulo 12).
Fatores morfogenticos. Essas molculas dirigem a diferenciao celular
em certos tipos de clulas. Parecem estar localizadas em diferentes regies
do vulo e se segregam em clulas diferentes durante a clivagem (veja
Captulo 13).
* Os contedos do vulo variam muito de espcie para espcie. A sntese e a colocao desses
materiais ser tratada no Captulo 22, quando discutirmos a diferenciao das clulas germinativas.
126 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Grnulo cortical
Espermatozide
Mitocndria
Ncleo
*Em mamferos, as coberturas extracelulares do vulo esto divididas em duas regies: A zona
pelcida e o cumulus. O termo corona radiata refere-se quelas clulas foliculares imediatamente
adjacentes zona pelcida; so as clulas mais internas do cumulus.
CAPTULO 4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo 127
Corpos
polares Proncleo
Vescula
germinal feminino
Figura 4.5
para formar longos fios de actina conhecidos como microfilamentos. Microfilamentos Estgios de maturao do vulo no momento
so necessrios para a diviso celular, e so tambm usados para estender a superfcie da entrada do espermatozide em diferentes
do vulo para o interior das microvilosidades, que ajudam a entrada do espermatozi- animais. (Segundo Austin, 1965.)
de para dentro da clula (veja Figura 4.6; veja tambm a Figura 4.19). Ainda, dentro
desse crtex esto os grnulos corticais (veja Figuras 4.4 e 4.6). Essas estruturas
Cumulus
vulo
Zona
pelcida
(A) (B)
Figura 4.7
vulos de hamster imediatamente antes da fecundao. (A) O ovo do hamster, ou vulo, est
encaixado na zona pelcida. Essa, por sua vez, est envolvida por clulas do cumulus. Uma clula
do corpo polar, produzida durante a meiose, tambm est dentro da zona pelcida. (B) Em menor
aumento, um ocito de camundongo mostrado em relao ao cumulus. Partculas de carbono
coloidal (tinta Nanquim) so excludas pela matriz de hialuronidase. (Cortesia de R. Yanagimachi.)
Atrao do Espermatozide
A atrao espcie-especfica do espermatozide (um tipo de quimiotaxia) foi docu-
mentada em numerosas espcies, incluindo cnidrios, moluscos, equinodermos e
urocordados (Miller, 1985; Yoshida et al., 1993). Em 1978, Miller demonstrou que os
vulos do cnidrio Orthopyxis caliculata no somente secretam um fator quimiotti-
co mas tambm regulam o perodo de sua liberao. Ocitos em desenvolvimento, em
CAPTULO 4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo 129
Figura 4.8
vrios estgios de amadurecimento, foram fixados sobre lminas microscpicas, e Quimiotaxia do espermatozide em Arbacia.
espermatozides foram adicionados a uma certa distncia dos vulos. Miller encon- Um nanolitro de uma soluo 10-nM de
trou que quando o espermatozide era adicionado a ocitos que ainda no haviam resact injetado em uma gota de 20ml de
suspenso de espermatozide. A posio da
completado sua segunda diviso meitica, no havia atrao de espermatozide pelos
micropipeta est indicada em (A). (A) Uma
vulos. Porm, aps o trmino da segunda diviso meitica e os vulos estarem fotografia de 1 segundo, mostrando esper-
prontos para ser fertilizados, o espermatozide migrava em sua direo. Assim, esses matozide nadando em crculos estreitos an-
ocitos no controlam somente o tipo de espermatozide que atraem, mas tambm o tes da adio de resact. (B-D) Exposies
momento em que o atraem. semelhantes de 1 segundo mostrando a mi-
Os mecanismos de quimiotaxia so diferentes em outras espcies (veja Metz, 1978; grao do espermatozide para o centro do
Ward e Kopf, 1993). Uma dessas molculas quimiotticas, um peptdio de 14 aminocidos gradiente de resact 20, 40 e 90 segundos aps
chamado resact foi isolado da gelia do vulo do ourio-do-mar Arbacia punctulata a injeo. (de Ward et al., 1985, cortesia de
(Ward et al., 1985). Resact difunde facilmente na gua do mar e tem um profundo efeito V. D. Vacquier.)
quando adicionado a uma suspenso de espermatozide de Arbacia, mesmo em con-
centrao muito baixa (Figura 4.8). Quando uma gota de gua do mar, contendo esper-
matozide de Arbacia, colocada em uma lmina de microscpio, o espermatozide
geralmente nada em crculos de aproximadamente 50 m de dimetro. Se uma quantida-
de mnima de resact for introduzida na gota, em segundos o esperma migra para a
regio da injeo e ali se congrega. medida que o resact continua a difundir-se, mais
espermatozide recrutado para dentro do crescente agrupamento. Resact especfi-
co para A. punctulata e no atrai espermatozide de outras espcies. Espermatozide
de A. punctulata liga resact a receptores na sua membrana celular (Ramarao e Garbers,
1985; Bentley et al., 1986) e pode nadar atravs de um gradiente crescente de concen-
trao desse composto at alcanar o vulo.
Resact tambm age como um peptdio ativador de espermatozide. Esses peptdios
(mais de 70 foram isolados de diferentes espcies de ourios-do-mar) causam au-
mentos dramticos e imediatos da motilidade espermtica e do consumo de oxignio
(Hardy et al., 1994). O receptor para resact uma protena transmembrana. Quando
ela liga o resact ao lado externo da clula, resact causa uma mudana conformacional
que ativa a atividade de guanidil ciclase no lado citoplasmtico. Isso aumenta a
concentrao de GMP cclico do vulo (Shimomura et al., 1986), que parece ativar a
ATPase da dinena estimulando a agitao da cauda no espermatozide (Cook e
Babcock, 1993).
Membrana
acrossmica
Enzimas
acrossmicas
Bindina
Membrana do
espermatozide
Actina
globular Microfilamentos
de actina
Ncleos
Figura 4.9
Reao acrossmica em espermatozide de Em ourios-do-mar, o contato com a gelia do vulo causa a exocitose da vescula
equinoderma. (A-C) A poro da membrana acrossmica e a liberao de enzimas digestoras de protenas que podem digerir um
acrossmica diretamente abaixo da membra- caminho atravs da gelia de revestimento at a superfcie do vulo (Dan, 1967; Franklin,
na do espermatozide funde-se com essa li- 1970; Levine et al., 1978). A seqncia desses eventos est esquematizada na Figura
berando o contedo da vescula acrossmica. 4.9. A reao acrossmica considerada ser iniciada por um oligossacardeo ligado a
(D) Enquanto as molculas de actina se agre-
uma protena na gelia do vulo que permite a entrada de clcio na cabea do esperma-
gam para produzir microfilamentos, o pro-
cesso acrossmico se estende para fora. Fo-
tozide (SeGall e Lennarz, 1979; Schackmann e Shapiro, 1981; Keller e Vacquier, 1994
tografias reais da reao acrossmica no es- a,b). A exocitose da vescula acrossmica causada por uma fuso, mediada pelo
permatozide do ourio-do-mar so mostra- clcio, da membrana acrossmica com a membrana plasmtica adjacente do esperma-
das em seguida. (Segundo Summers e Hylan- tozide (Figuras 4.9 e 4.10). Essa exocitose permite que a vescula acrossmica libere
der, 1974; fotografias por cortesia de G. L. seu contedo na cabea do espermatozide*.
Decker e W. J. Lennarz.) A segunda parte da reao acrossmica envolve a extenso do processo
acrossmico (veja Figura 4.9). Essa protruso se origina da polimerizao de molcu-
las globulares de actina em filamentos de actina (Tilney et al., 1978). A exposio do
espermatozide do ourio-do-mar gelia do vulo tambm ocasiona a rpida utiliza-
o de ATP e um aumento de 50% da respirao mitocondrial. A energia gerada
usada primordialmente para motilidade flagelar (Tombes e Shapiro, 1985).
Os fatores da gelia do vulo que iniciam a reao acrossmica em ourios-do-mar
so muitas vezes muito especficos. Os espermatozides dos ourios-do-mar Arbacia
punctulata e Strongylocentrotus drobachiensis reagem somente com a gelia de
seus prprios vulos. No entanto, o espermatozide de S. purpuratus tambm pode
ser ativado pela gelia de Lytechinus variegatus (mas no de A. punctulata) (Summers
e Hylander, 1975). Portanto, a gelia do vulo pode prover reconhecimento espcie-
especfico em algumas espcies, mas no em outras.
* Tais reaes exocitticas podem ser vistas na liberao de insulina das clulas pancreticas e
na liberao de neurotransmissores de terminais sinpticos. Em todos os casos, h uma fuso
mediada pelo clcio entre a vescula secretria e a membrana celular. Realmente, a semelhana entre
a exocitose da vescula acrossmica e a exocitose da vescula sinptica pode ser bastante profunda.
Estudos recentes de reaes acrossmicas em ourios-do-mar e mamferos (Florman et al., 1992;
Gonzlez-Martnez et al., 1992) sugerem que quando os receptores para os ligantes ativadores do
espermatozide ligam essas molculas, causam a despolarizao da membrana que poderia abrir
canais de clcio voltagem-dependentes de maneira reminescente transmisso sinptica. As prote-
nas que atracam os grnulos corticais membrana celular tambm parecem ser homlogas quelas
usadas na ponta do axnio (Bi et al., 1995).
CAPTULO 4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo 131
Membrana celular do
espermatozide
Fuso entre a
membrana celular
Membrana
do espermatozide
acrossmica
e a membrana
acrossmica adjacente
Ncleo
Centrolo
Figura 4.10
Reao acrossmica em espermatozide de hamster. (A) Micrografia de transmisso eletrnica
de um espermatozide de hamster passando pela reao acrossmica. A membrana acrossmica
pode ser vista formando vesculas. (B) Diagrama interpretativo de micrografias eletrnicas
mostrando a fuso de membranas acrossmica e celular na cabea do espermatozide. (A de
Meizel, 1948, cortesia de S. Meizel; B, segundo Yanagimachi e Noda, 1970.)
Informaes adicionais
& Especulaes
pode se alterar, mudando sua composi- Hiperativao e Quimiotaxia possibilidade de que o efeito fosse devido
o de lipdios. A concentrao de As diferentes regies do trato reproduti- a uma estimulao geral do movimento ou
colesterol no espermatozide diminuda vo feminino podem secretar fatores dife- do metabolismo do espermatozide. No en-
durante a capacitao do espermatozide rentes, regionalmente especficos. Esses tanto, essas investigaes revelaram uma
em vrias espcies (Davis, 1981), e duas fatores podem influenciar a motilidade correlao fascinante: o fluido de somente
protenas encontradas tanto no soro como espermtica assim como a capacitao. Por a metade dos folculos testados mostrou
no trato reprodutivo feminino (albumina exemplo, quando os espermatozides de um efeito quimiottico, e em quase todos
e protena 1 de transferncia lipdica), fo- certos mamferos (especialmente hams- os casos, o vulo s era fertilizvel se, e
ram verificadas remover colesterol do es- ters, cobaias e algumas variedades de ca- somente se, o fluido demonstrasse habili-
permatozide humano (Langlais et al., mundongos) passam do tero para os dade quimiottica (P < 0,0001). possvel,
1988; Ravnik et al., 1992). Em segundo lu- ovidutos, ficam hiperativados, passan- portanto, que tal como certos vulos de
gar, certas protenas ou carboidratos na do a nadar com maior velocidade e geran- invertebrados, o vulo humano secrete um
superfcie do espermaozide so perdidos do maior fora. Suarez e colaboradores fator quimiottico somente quando estiver
durante a capacitao (Poirier e Jackson, (1991) mostraram que enquanto essas re- capacitado para a fertilizao.
1981; Lopez et al., 1985; Wilson e Oliphant, aes no so conducentes a viagens em Deve-se notar que o prmio da corri-
1987). possvel que essas entidades per- fluidos de baixa viscosidade, parecem ser da no vai sempre para o mais rpido. Em-
didas durante a capacitao estivessem muito adequadas para o movimento line- bora algum espermatozide possa alcan-
bloqueando locais de reconhecimento ar do espermatozide no fluido viscoso ar a regio ampolar do oviduto (onde ocor-
para as protenas que se ligam zona que poder encontrar no oviduto. re a fertilizao) dentro de meia hora aps a
pelcida. Em terceiro lugar, certas prote- Alm de aumentar a atividade do es- relao sexual, aquele espermatozide pode
nas so fosforiladas por um caminho permatozide, fatores solveis no oviduto ter poucas chances de fertilizar o vulo.
cAMP-dependente. O AMP cclico pode tambm podem prover o componente dire- Wilcox e colaboradores (1995) acharam que
induzir artificialmente a competncia atra- cional do movimento do espermatozide. quase todas os engravidamentos humanos
vs da protena quinase cAMP-depen- Especulou-se que o vulo (ou, mais pro- resultam de relacionamento sexual duran-
dente (PKA), que necessria tanto para vavelmente, o folculo ovariano no qual o te um perodo de seis dias, terminando no
a aquisio de competncia como para a vulo se desenvolve) pode estar secretan- dia da ovulao. Isso significa que o es-
fosforilao de tirosino-quinases. pos- do substncias quimiotticas que poderi- permatozide fertilizador poderia demorar
svel que o trato reprodutivo feminino es- am atrair o espermatozide em direo ao at seis dias para fazer a jornada. Eisenbach
timule a adenilciclase do espermatozide vulo durante os ltimos estgios da mi- (1995) props a hiptese pela qual a
a produzir mais cAMP e que esse ative a grao (veja Hunter, 1989). Ralt e colabora- capacitao um acontecimento transit-
protena quinase que inicia a cascata de dores (1991) testaram essa hiptese usan- rio, e que dada ao espermatozide uma
fosforilao, terminando na fosforilao do fluido de folculos humanos cujos vu- janela de competncia relativamente bre-
e ativao das protenas envolvidas na los estavam sendo usados para fertiliza- ve, durante a qual pode ter sucesso na fer-
ligao do espermatozide zona pelcida o in vitro. Realizando um experimento tilizao do vulo. Quando os espermato-
e mediando a exocitose da vescula acros- semelhante aquele descrito anteriormente zides atingem a ampola, adquirem com-
smica (Leyton e Saling, 1989a; Visconti com ourios-do-mar, os autores microinje- petncia, mas se a ficam por um perodo
et al., 1995a,b). Em quarto lugar, o poten- taram uma gota do fluido folicular em uma demasiadamente longo, perdem-na. O es-
cial da membrana do espermatozide gota maior da suspenso de espermato- permatozide pode tambm ter diferentes
dramaticamente reduzido (de cerca de zides. Feito isso, observaram que parte prazos de sobrevivncia, dependendo da
30 para 50 mV; Zeng et al., 1995). Porm, do espermatozide mudou sua direo de sua localizao dentro do trato reproduti-
ainda incerto se esses eventos so in- movimentao, passando a migrar ao en- vo; isso pode permitir que algum esperma-
dependentes um do outro e at que pon- contro da fonte de fluido folicular. A tozide chegue mais tarde, porm com uma
to cada um deles produz capacitao do microinjeo de outras solues no teve melhor probabilidade de sucesso do que
espermatozide. esse efeito. Esses estudos no eliminam a aquele que chegou dias antes.
Figura 4.11
Contato do processo acrossmico do espermatozide do ourio-do-mar com uma Figura 4.12
microvilosidade do vulo. (de Epel, 1977, cortesia de F. D. Collins e D. Epel.) Aglutinao espcie-especfica por bindi-
na de vulos desgeleificados . (A) aglutina-
o promovida pela adio de 212 g de
bindina em um recipiente plstico conten-
ligar a vulos desgeleificados de S. purpuratus (Figura 4.12; Vacquier e Moy, 1977).
do 0.25 ml de suspenso a 2% (volume/
Ainda mais, sua interao com vulos relativamente espcie-especfica (Glabe e volume) de vulos. Aps 2-5 min de agita-
Vacquier, 1977; Glabe e Lennarz, 1979); a bindina isolada dos acrossomos de S. o branda, os recipientes foram fotografa-
Purpurata aglutina seus prprios vulos desgeleificados, mas no aqueles de Arbacia dos. Cada bindina somente se ligou a seus
puctulata. Usando tcnicas imunolgicas, Moy e Vacquier (1979) demonstraram que prprios vulos. (B) Fotomicrografia de
a bindina est especificamente localizada no processo acrossmico, exatamente onde fluorescncia de vulos de S. purpuratus
deve estar para o reconhecimento espermatozide-vulo (Figura 4.13). ligados entre si por partculas de bindina
Estudos bioqumicos mostraram que as bindinas de espcies proximamente relaci- de S. purpuratus marcadas por fluorescn-
onadas de ourio-do-mar so mesmo diferentes. Esse achado implica na existncia de cia. As partculas de bindina estavam inva-
riavelmente nos lugares onde dois vulos
se encontravam. (A baseado em fotografias
de Glabe e Vacquier, 1977; B de Glabe e
(A) BINDINA DO ESPERMATOZIDE (B) Lennarz, 1979, cortesia dos autores.)
S. purpuratus S. fransciscanus
S. purpuratus
Partculas
de bindina
OVOS DESGELEIFICADOS
Bindina
Espermatozide
Figura 4.13
Localizao de bindina no processo acrossmico. (A) a tcnica de localizao
imunoqumica coloca um anticorpo de coelho nos lugares onde a bindina est exposta.
Os anticorpos do coelho foram produzidos contra a protena bindina, e esses anticorpos
foram incubados com espermatozide que tinha sofrido a reao acrossmica. Quando a
bindina estava presente, os anticorpos do coelho permaneciam ligados ao espermato-
zide. Depois de todo anticorpo no-ligado ser removido por lavagem, o espermatozi-
de foi tratado com anticorpos de porco capazes de ligar-se a anticorpos de coelho.
Esses anticorpos de porco haviam sido ligados covalentemente enzima peroxidase.
Dessa maneira, molculas de peroxidase foram colocadas em todos os lugares onde havia
bindina. Peroxidase catalisa a formao de um precipitado escuro de diaminobenzidina
(DAB) e gua oxigenada. O precipitado s se forma onde h bindina. (B) Localizao de
bindina no processo acrossmico aps a reao acrossmica (33.200x). (C) Localizao
de bindina no processo acrossmico na juno do espermatozide com o vulo. (B e C de
Moy e Vacquier, 1979, cortesia de V. D. Vacquier.)
(A)
Figur
Figuraa 4.14
Receptores de bindina no vulo. (A) Mi-
crografia eletrnica de varredura do esper-
matozide do ourio-do-mar ligado ao
envoltrio vitelnico de um vulo. (B) liga-
o do espermatozide de S. purpuratus a
partculas de polistireno que foram cober-
tas com a protena purificada do receptor de
bindina. (A cortesia de C. Glabe, L. Perez e
W. J. Lennarz; B de Foltz et al., 1993.)
(B)
CAPTULO 4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo 135
ZP3 sem
carboidratos
ZP3
GALACTOSILTRANSFERASE SP 56 P95
(protena
Ligao perifrica da Ativao
cruzada ativa membrana) de
protenas G tirosinoquinase Figura 4.16
Ligao de espermatozide zona pelcida do
Ativao de sntese Regulao de camundongo: alguns possveis participantes.
de IP3 na canais inicos A protena ZP3 da zona pelcida liga esper-
membrana ou sntese matozide. H evidncia da ligao de trs pro-
acrossmica de IP3 tenas espermticas a galactosiltransferase
da superfcie, sp56 e P95 ZP3. Essa liga-
Liberao de Ca++ o induz a reao acrossmica atravs da ati-
vao do fluxo de clcio. Os detalhes ainda
tero que ser elucidados. (Segundo Snell e
Reao acrossmica White, 1996.)
CAPTULO 4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo 137
Figura 4.17
Sp56 purificada liga-se zona pelcida e ini-
be a ligao de espermatozide a vulos de
camundongo. (A) Ligao de sp56 zona
pelcida de ovos no-fertilizados. A pista 1
o resultado da lise de ovos no-fertilizados,
fazendo migrar as protenas extradas em um
gel, transferindo o gel, e sondando para a pre-
sena de sp56 com anticorpo marcado. No
se v sp56. A pista 2 mostra o resultado po-
sitivo obtido quando o ovo no-fertilizado
pr-incubado com sp56, indicando que sp56
se liga aos vulos. A pista 3 mostra os resul-
tados negativos obtidos quando sp56 foi adi-
cionada a embries bicelulares. A pista 4 mos-
tra o controle quando sp56 purificada feita
migrar no gel. (O anticorpo reconhece a for-
ma no-reduzida de sp56, que migra em 40
ZP3 uma coluna de afinidade, passando em seguida, por essa coluna, as protenas kDa). (B) Espermatozide ligando-se normal-
isoladas da membrana de espermatozides de camundongo (Bleil e Wassarman, mente a ovos no-fertilizados de camundon-
1990). A maioria das protenas passou pela coluna; porm um peptdio de 56- go (aproximadamente 76 espermatozides
kDa, ligou-se s partculas recobertas com ZP3, mas no se ligou a partculas por vulo). Os embries bicelulares (aqui
recobertas com ZP2 em experimento semelhante. Essa protena foi encontrada marcados por asteriscos) so controles inter-
nos mostrando no ocorrer ligao. (C ) Na
exposta na membrana espermtica; ligava-se a resduos de galactose, sugerin-
presena de sp56, o espermatozide foi im-
do fortemente ser um receptor de espermatozide ligante entidade terminal de pedido de se ligar zona. (de Bookbinder et
galactose na glicoprotena ZP3. A protena sp56 liga-se zona pelcida de al., 1995; cortesia de J.D. Bleil.)
ovos no-fertilizados (porm no dos fertilizados), bloqueando a ligao es-
permatozide-vulo (Figura 4.17; Bookbinder et al., 1995).
contraceptivo perdurou por vrios meses, aps os quais a fertilidade foi restabelecida.
Os animais foram temporariamente esterilizados por esses anticorpos. O anlogo
humano da protena PH-20 no ainda conhecido, porm, certos antgenos do es-
permatozide apresentam um padro semelhante de localizao no espermatozide.
As protenas da zona pelcida humana e suas funes ainda no foram estabeleci-
das to claramente como no camundongo. Ainda assim, esses experimentos mos-
tram que o princpio da contracepo imunolgica est bem fundamentado.
(A) (B)
Figura 4.19
Varredura ao microscpio eletrnico da entrada
do espermatozide em vulo de ourio-do-mar.
(A) Contato da cabea do espermatozide com
microvilosidades do vulo atravs do processo
acrossmico. (B) Formao do cone de fertili-
zao. (C) Internalizao do espermatozide no
vulo. (D) Micrografia de transmisso ao mi-
croscpio eletrnico da internalizao do es-
permatozide atravs do cone de fertilizao.
(A-C de Schatten e Mazia, 1976, cortesia de G.
Schatten; D cortesia de F. J. Longo.)
(C) (D)
140 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Preveno da Polispermia
Assim que um espermatozide tiver penetrado o vulo, a capacidade de fuso da
membrana do vulo, que fora to necessria para conseguir a penetrao, torna-se
um risco. No ourio-do-mar, como na maioria dos animais estudados, qualquer es-
permatozide que penetra o vulo, pode prover um ncleo haplide e um centrolo
para o vulo. Na monospermia normal, na qual somente um espermatozide penetra
o vulo, um ncleo haplide do espermatozide e um do vulo se combinam para
formar o ncleo diplide do ovo fertilizado (zigoto), restaurando o nmero de cro-
mossomos apropriado para a espcie. O centrolo, provindo do espermatozide, se
dividir para formar os dois plos do fuso mittico durante a clivagem.
A entrada de mltiplos espermatozides polispermia conduz conse-
qncias desastrosas na maioria dos organismos. No ourio-do-mar, a fertiliza-
o por dois espermatozides resulta em um ncleo triplide, no qual cada
cromossomo est representado no duas, mas trs vezes. Pior ainda, como o
centrolo se divide para formar os dois plos do aparelho mittico, aqui, em
vez de um fuso mittico bipolar separar os cromossomos em duas clulas, os
cromossomos triplides se dividiriam em quatro clulas. Como no h meca-
nismos para assegurar que cada uma das quatro clulas receba o nmero e o
tipo apropriado de cromossomos, esses sero distribudos de maneira desigual.
Algumas clulas receberiam cpias extra de certos cromossomos e outras c-
lulas no os teriam. Theodor Boveri demonstrou em 1902 que tais clulas ou
morreriam ou se desenvolveriam anormalmente (Figura 4.21). [fert6.html]
As espcies desenvolveram maneiras de prevenir a unio de mais de dois
ncleos haplides. A mais comum a de impedir a entrada de mais de um
espermatozide no vulo. O vulo do ourio-do-mar tem dois mecanismos que
evitam a polispermia: uma reao rpida, efetivada por uma mudana eltrica
na membrana plasmtica do vulo, e uma reao mais lenta, causada pela
exocitose dos grnulos corticais.
CAPTULO 4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo 141
Zona
Segmento
(E) Ncleo equatorial do
Membrana
acrossomo
acrossmica
interna
Figura 4.20
Entrada de espermatozide no vulo do hamster dourado. (A) Micrografia eletrnica de
varredura do ato da fuso. O ponto calvo (sem microvilosidades) o local abandona-
do pelo corpo polar. (B) Vista prxima da ligao espermatozide-zona. (C ) Microgra-
fia eletrnica de transmisso mostrando a cabea do espermatozide atravessando a
zona. (D) Micrografia eletrnica de transmisso, do espermatozide fundindo em para-
lelo a membrana do plasma do vulo. (E) Diagrama da fuso do acrossomo do esper-
matozide e membranas plasmticas com as microvilosidades do vulo. (Segundo
Yanagimachi e Noda, 1970; Yanagimachi, 1994; fotografias cortesia de R. Yanagimachi.)
Fuso pronuclear
(B)
Figura 4.22
Potencial de membrana de vulos de ourio-do-mar antes
e aps a fertilizao. (A) antes da adio do espermato-
zide, a diferena de potencial atravs da membrana celu-
lar do vulo de aproximadamente 70 mV. De 1 a 3 se-
gundos aps o espermatozide fertilizante ter entrado em
Adio de contato com o vulo, o potencial se desloca na direo
espermatozide positiva. (B) Ovos controle desenvolvendo-se em Na+
490 mM. (C) Polispermia em ovos fertilizados em Na+
(A) 120 mM (colina foi substituda por sdio). Os ovos de
Segundos Lytechinus foram fotografados durante a primeira
clivagem. (D) Tabela mostrando a elevao da polispermia
com o decrscimo da concentrao do on sdio. (de Jaffe,
1980, fotografias cortesia de L. A. Jaffe.)
Porcentagem de
[Na+] (mM) ovos polisprmicos
zona pelcida de maneira que esses no mais podem ligar-se a espermatozide (Bleil
e Wassarman, 1980). Essa modificao chamada reao da zona. Durante essa
reao, tanto ZP3 como ZP2 so modificadas. Florman e Wassarman (1985), propu-
seram que os grnulos corticais do vulo do camundongo contm uma enzima que
corta os resduos terminais de acares de ZP3, com isso liberando espermatozide
ligado zona e evitando a fixao de mais espermatozide. Esses grnulos corticais
contm N-acetilglicosaminidases capazes de clivar N-acetilglicosamina de cadeias
de carboidrato de ZP3. Miller e colaboradores (1992, 1993) demonstraram que aps
a fertilizao, o resduo de N-acetilglicosamina removido, ZP3 no serve como
substrato para a ligao de galactosiltransferase. ZP2 cortada pelas proteases
granulares perdendo tambm sua habilidade de ligar espermatozide (Moller e Was-
sarman, 1989). Assim, o espermatozide no pode mais iniciar ou manter sua ligao
zona pelcida e rapidamente descartado.
Microfilamentos
Hialina
(iv) Envoltrio de (D)
fertilizao
Espermatozide liberado
Membrana
Camada hialina celular
(A) (E)
espermatozide um feixe de luz atravessa a clula (Steinhardt et al., 1977; Gilkey et al.,
1978; Hafner et al., 1988). Como documentado pelas fotografias, os ons de clcio no
se difundem simplesmente atravs do vulo a partir do ponto da entrada do esperma-
tozide. Ao contrrio, a liberao de clcio inicia-se de um lado da clula e termina do
outro. O mecanismo dessa onda ser discutido logo adiante (veja Informaes adici-
onais & Especulaes, pgina 147). A total liberao de ons de clcio completada, a
grosso modo, em 30 segundos no ovo do ourio-do-mar; os ons livres de clcio so
re-seqestrados pouco aps sua liberao. Quando dois espermatozides entram no
citoplasma do vulo, a liberao de clcio pode ser vista comeando em dois pontos
separados da superfcie celular (Hafner et al., 1988).
Vrios experimentos demonstraram que ons de clcio so responsveis diretos
pela propagao da reao cortical e que so armazenados dentro do prprio vulo.
A droga A23187 um ionforo que transporta ons de clcio atravs de membranas,
permitindo a esses ctions atravessar barreiras antes impermeveis. A colocao de
146 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Figura 4.25
Retculo endoplasmtico rodeando grnu-
lo cortical no vulo de ourio-do-mar. (A)
O retculo foi corado com smio-iodeto de
zinco para permitir a visualizao por mi-
crografia de transmisso eletrnica. O gr-
nulo visto rodeado pelo retculo. (B) Re-
trato de um vulo inteiro corado por anti-
corpos fluorescentes para os canais de li-
berao de clcio. Os anticorpos mostram
esses canais no retculo endoplasmtico
cortical. (A de Luttmer e Longo, 1985, cor-
tesia de S. Luttmer; B de McPherson et
al., 1992, cortesia de F. J. Longo.) (A) (B)
CAPTULO 4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo 147
Informaes adicionais
& Especulaes
celular foram sintetizados e foram de- Entretanto, a cascata ligada prote- PDGF) foi injetado em ocitos de estre-
tectados na membrana celular do vu- na-G no o nico caminho capaz de ge- la-do-mar, o receptor PDGF foi sintetiza-
lo. Os vulos puderam ser fertilizados rar IP3 (veja Captulo 3). Evidncias re- do e incorporado nas membranas celula-
por serotonina e acetilcolina e foi ob- centes (Moore et al., 1994; Shilling et al., res desse organismo. Quando, aps a
servado a reao cortical. Experimentos 1994; Yim et al., 1994) demonstram que a maturao dos ocitos, PDGF foi adicio-
semelhantes mostraram que quando ativao do receptor da tirosinoquinase nado gua banhando os vulos, esses
neurotransmissores ativam o caminho tambm produz IP3 e ativa a onda de cl- apresentaram aumento de clcio intrace-
da protena GIP3 em ocitos de camun- cio e a reao granular cortical (Figura lular livre, exocitose de grnulos corticais
dongo, so induzidos os eventos da fer- 4.26b). Quando o mRNA para o receptor e sntese de DNA. Alguns se desenvol-
tilizao (Williams et al., 1992; Moore et dessa quinase (o receptor para o fator de veram em larvas. Quando o mRNA con-
al., 1993). crescimento derivado das plaquetas, tinha um ponto de mutao que impedia
Figura 4.26
Mecanismos possveis da ativao do vulo. (A) Trajetria do fosfatidilinositol medi-
ado pela G-protena. (B) Trajetria do receptor da tirosinoquinase (RTK). (C) Trajet-
ria da tirosinoquinase citoplasmtica. (D) Trajetria na qual a G protena ou
tirosinoquinase ativadas na membrana espermtica ativam trajetrias no vulo. (E)
Trajetrias de ativadores solveis.
Fosfolipase C (PLC)
Receptor
G-protena
Receptor de Tirosinoquinase
Tirosinoquinase
Receptor de IP3
Retculo endoplasmtico
G-protena
Receptor de IP3
Retculo endoplasmtico
CAPTULO 4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo 149
o receptor interagir com a fosfolipase C, Outra possibilidade que a ativa- gura 4.26 D, a bindina meramente liga o
nenhuma dessas reaes ocorreu (Shilling o do caminho do IP3 no devida vulo ou, talvez, motive a fosforilao
et al., 1994). Assim, tanto o caminho liga- ligao do espermatozide e vulo, mas de protenas necessrias em fases mais
do ao receptor protena-G como aquele fuso das membranas do vulo e do avanadas do desenvolvimento.)
do receptor da tirosinoquinase, parecem espermatozide. Mc Culloch e Chambers Ainda outra possibilidade que o
ser capazes de ativar essa fosfolipase, (1992) obtiveram evidncia eletrofisio- agente ativo na liberao de clcio ligado
criar IP3 e induzir o fluxo de clcio no lgica que a ativao dos vulos do venha do citosol do espermatozide.
vulo. O receptor da bindina no ofere- ourio-do-mar no ocorre at depois da Parrington e colaboradores (1996) isola-
ce pistas para explicar como ocorre essa juno do espermatozide com o vulo. ram uma protena de 33-kDA, chamada
ativao, por no ter semelhante em ou- Eles sugerem que os componentes oscilina, localizada no escasso citoplas-
tras protenas transmembrana. No entan- ativadores do vulo se localizam na ma da cabea do espermatozide (Figura
to, 5 segundos aps ligar a bindina, fica membrana ou no citoplasma do esper- 4.26 E). A microinjeo dessa protena em
fosforilado em um dos seus resduos matozide. at mesmo possvel que vulos de camundongo pode iniciar libe-
tirosina citoplasmticos (Abassi e Foltz, por ocasio da fuso das membranas, rao de clcio, porm, os outros parme-
1994). Isso sugere que o receptor de as protenas G da membrana espermti- tros da ativao do vulo (exocitose dos
bindina ligado, pode interagir com a ca ou as tirosinoquinases (ativadas pela grnulos, recrutamento de mRNA e reto-
tirosinoquinase plasmtica tal como gelia do vulo para iniciar a reao a- mada do ciclo celular) no so observa-
aqueles que medeiam a liberao de cl- crossmica) ativem a cascata polifosfo- dos. No conhecido qual o papel que
cio durante a ativao de clulas T (Fi- inositdica para liberao de clcio do essa protena pode ter na fisiologia da ati-
gura 4.26 C; Hall et al., 1993). vulo. (No cenrio apresentado na Fi- vao do vulo.
Respostas precoces
O contato entre o espermatozide do ourio-do-mar ativa dois principais bloqueios
polispermia: o bloqueio rpido, iniciado pelo influxo de sdio na clula, e o bloqueio
lento, iniciado pela liberao intracelular de ons de clcio. A ativao de todos os
vulos parece depender do aumento da concentrao de ons livres de clcio dentro
do vulo. Em protostomatas, como lesmas e vermes, ao menos parte do clcio geral-
mente entra no vulo vindo de fora. Em deuterostomatas, tais como: peixes, rs,
ourios-do-mar e mamferos, a ativao acompanhada pela liberao de ons de
clcio do retculo endoplasmtico, resultando na onda de clcio varrendo o vulo
(Jaffe, 1983; Terasaki e Sardet, 1991).
*Em certas salamandras, essa funo desenvolvimental da fertilizao est totalmente divor-
ciada da funo gentica. A salamandra prateada (Ambystoma platineum) uma espcie hbrida
que consiste somente de fmeas. Cada uma produz um ovo com um nmero no-reduzido de
cromossomos. Esse ovo, porm, no pode se desenvolver sozinho; assim, a salamandra prateada
copula com o macho da salamandra Jefferson (A. jeffersonianum). O espermatozide desse macho
somente estimula o desenvolvimento do ovo; no contribui com material gentico (Uzzell,
1964). Para detalhes desse complexo mecanismo de procriao veja Bogart et al., 1989.
150 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Ativao da Converso de
NAD+ quinase NAD+ em NADP+
Respostas tardias
Pouco tempo aps o aumento dos nveis de ons clcio, o pH intracelular tambm
aumenta. Acredita-se que essas duas condies inicas (> [Ca2+], < [H+] ajam em
conjunto para fornecer o espectro completo dos eventos da fertilizao, incluindo a
sntese de protenas e de DNA (Winkler et al., 1980; Whitaker e Steinhardt, 1982). O
aumento do pH intracelular comea com o segundo influxo de ons de sdio, causan-
do uma troca 1:1 entre ons de sdio da gua do mar e os ons hidrognio do vulo*.
Essa perda de hidrognio faz o pH elevar-se de 6.8 a 7.2, ocasionando enormes mudan-
as na fisiologia do ovo (Shen e Steinhardt, 1978).
As respostas tardias da fertilizao produzidas por essas alteraes inicas, inclu-
em a ativao da sntese de DNA e da protena. O surto de sntese de protena ocorre
vrios minutos aps a entrada do espermatozide e no depende da sntese de novo
RNA mensageiro (Figura 4.28). Em seu lugar, a sntese de protena nova utiliza mRNAs
j presentes no citoplasma do ocito (muito mais sobre isso ser mencionado no
Captulo 12). Esses RNAs incluem aqueles que codificam protenas como histonas,
tubulinas, actinas e fatores morfogenticos que so utilizados durante o desenvolvi-
mento precoce. Tal surto de sntese protica pode ser induzido pelo aumento artificial
do pH citoplasmtico por ons amnio (Winkler et al., 1980). Reciprocamente, agentes
que bloqueiam o aumento do pH inibem eventos da fertilizao tardia como a sntese
de DNA e protena. Quando ovos recm-fertilizados so colocados em solues con-
tendo baixas concentraes de ons de sdio e amiloride (uma droga que inibe a troca
Na+/H+), a sntese protica falha, os movimentos dos proncleos do vulo e do esper-
matozide so prevenidos, e a diviso celular no ocorre (Dube et al., 1985).
Figura 4.28
Incorporao de valina[14C] na
do no citoplasma do ocito. (A) Sntese protica em vulos do ouri- gua do mar
normal
o-do-mar Arbacia punctulata fertilizada na presena ou ausncia
de actinomicina D, um inibidor da transcrio. Durante as primeiras
horas, a sntese protica ocorre sem nova transcrio dos ncleos
do zigoto ou embrio. Um segundo surto de sntese protica ocorre
durante os estgios medianos de blstula, e isso representa tradu-
o de mensagens recm-transcritas (e, portanto, no visto em
embries crescendo em actinomicina). (B) Aumento na porcenta- gua do mar tratada
gem de ribossomos recrutados para polissomos durante as primei- por actinomicina
ras horas do desenvolvimento do ourio-do-mar, especialmente du-
rante o primeiro ciclo celular. (A segundo Gross et al., 1964; B
segundo Humphreys, 1971.)
Horas aps a fertilizao
Porcentagem de ribossomos
em polissomos
(A) (B)
Proncleo do vulo
Ponte internuclear
Figura 4.29
histonas espermatozide-especficas, que se ligam fortemente ao DNA. Esse pro- Eventos nucleares na fertilizao do ourio-
do-mar. (A) Migrao dos proncleos do
cesso comea quando o espermatozide entra em contato com uma glicoprotena na
vulo e do espermatozide em um ovo de
gelia do vulo que eleva o nvel da atividade proteinoquinase cAMP-dependente. Clypeaster japonicus. O proncleo do es-
(Tais proteino-quinases cAMP-dependentes foram mencionadas no Captulo 1.) permatozide est rodeado por microtbu-
Essas quinases fosforilam vrios resduos bsicos das histonas espermatozide- los do seu ster. (B) Fuso de proncleos no
especficas interferindo, desse modo, com sua ligao ao DNA (Garbers et al., 1980, ovo do ourio-do-mar. (A de Hamaguchi e
1983; Porter e Vacquier, 1986). Esse afrouxamento considerado facilitar a substitui- Hiramoto, 1980, cortesia dos autores; B cor-
o das histonas espermatozide-especficas por outras histonas que haviam sido tesia de F. J. Longo.)
estocadas no citoplasma do ocito (Poccia et al., 1981; Green e Poccia, 1985). Uma
vez descondensado, o DNA pode iniciar a transcrio e a replicao. [fert9.html]
Depois que o espermatozide do ourio-do-mar entra no citoplasma do vulo, o
proncleo masculino gira 180o fazendo com que o centrolo fique entre o proncleo do
espermatozide e o proncleo do vulo. Em seguida, o centrolo espermtico age
como um centro organizador de microtbulos, estendendo seus prprios microtbu-
los e integrando-os com os microtbulos do vulo formando um ster*. Esses
microtbulos se estendem atravs de todo o vulo, contatam o proncleo feminino, e
trazem os dois proncleos um para perto do outro (Hamaguchi e Hiramoto, 1980;
Bestor e Schatten, 1981). A fuso forma o ncleo zigtico diplide (Figura 4.19). A
iniciao da sntese de DNA pode ocorrer no estgio pronuclear (durante a migrao)
ou depois da formao do ncleo zigtico.
Em mamferos, o processo da migrao pronuclear dura aproximadamente 12
horas, comparado com menos de uma hora no ourio-do-mar. O espermatozide do
mamfero entra quase tangencialmente superfcie do vulo em vez de aproxim-la
perpendicularmente, e funde com numerosas microvilosidades (veja Figura 4.20). O
ncleo do espermatozide mamfero tambm se parte quando sua cromatina
descondensa, sendo depois reconstrudo por vesculas coalescentes. O DNA do
ncleo espermtico ligado por protenas bsicas chamadas protaminas; essas
protenas nucleares esto firmemente compactadas atravs de ligaes dissulfeto.
Uma vez no vulo, a glutationa reduz essas ligaes de dissulfeto, permitindo o
desdobramento da cromatina do espermatozide (Calvin e Bedford, 1971; Kvist et
*Quando Oskar Hertwig observou esse arranjo radial de steres de espermatozide no seu
recm-fertilizado ovo de ourio-do-mar, chamou-o de sol dentro do ovo, e considerou-o feliz
indicao de uma fertilizao bem-sucedida (Hertwig, 1877). Mais recentemente, Simerly e
colaboradores (1994) descobriram que certos tipos de infertilidade em homens eram devidos a
defeitos na capacidade do centrossoma formar esses steres microtubulares. Essa deficincia
causa a falncia da migrao pronuclear e a interrupo do desenvolvimento.
154 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Figura 4.30
Movimento pronuclear em hamster. (A)
Entrada de espermatozide na clula e al., 1980). O proncleo masculino dos mamferos aumenta enquanto o ncleo do
tumefao do proncleo do espermatozi- ocito completa sua segunda diviso meitica (Figura 4.30 A).
de. (B) Aposio dos proncleos do es- O centrossomo que acompanha o proncleo masculino produz seus steres
permatozide e do vulo. (C ) Estgio
(principalmente a partir de protenas armazenadas no ocito) e contata o pron-
bicelular mostrando duas clulas de tama-
nhos iguais com ncleos bem definidos.
cleo feminino. Ento, cada proncleo migra ao encontro do outro, replicando seu
Entulho no espao perivitelnico so os cor- DNA ao longo do trajeto. No encontro, os dois envoltrios nucleares se desinte-
pos polares em degenerao. (de Bavister, gram (Figura 4.30B). No entanto, em lugar de produzir um ncleo zigtico comum
1980, cortesia de B. D. Bavister.) (como acontece na fertilizao do ourio-do-mar), a cromatina condensa-se para
formar cromossomos que se orientam num fuso mittico comum. Assim, um ncleo
zigtico verdadeiro em mamferos visto primeiro no no zigoto, mas no estgio
bicelular (Figura 4.30 C). [fert10.html]
Informaes adicionais
& Especulaes
G
ERALMENTE ASSUME-SE que lizando um vulo no qual o proncleo vulos se desenvolvam na ausncia de
machos e fmeas portam geno- feminino est ausente. Aps penetrar no espermatozide. A habilidade de desen-
mas haplides equivalentes. vulo, os cromossomos do espermato- volver um embrio sem contribuio es-
Um dos princpios fundamentais da ge- zide se duplicam restaurando seu n- permtica chamada partenognese (do
ntica Mendeliana que os genes deri- mero diplide. Assim, todo o genoma grego, significando nascimento vir-
vados do espermatozide so funcional- derivado do espermatozide (Jacobs et gem). Os vulos de muitos invertebra-
mente equivalentes aqueles derivados al., 1980; Ohama et al., 1981). Aqui ve- dos e de alguns vertebrados so capa-
do vulo. No entanto, estudos recentes mos uma situao em que as clulas so- zes de se desenvolver normalmente na
mostram que em mamferos o genoma de- brevivem, se dividem e tm um nmero ausncia do espermatozide se o vulo
rivado do vulo pode ser funcionalmen- normal de cromossomos, porm, apre- for ativado artificialmente. Nessas situa-
te diferente e ter papel complementar du- sentam um desenvolvimento anormal. Em es, a contribuio do espermatozide
rante certos estgios do desenvolvimen- vez de formar um embrio, o ovo se trans- para o desenvolvimento parece dispen-
to. A primeira evidncia dessa no-equi- forma numa massa de clulas placento- svel. Os mamferos, no entanto, no a-
valncia veio de estudos de um tumor smiles. No h desenvolvimento normal presentam a partenognese. A colocao
humano chamado mola hidatidiforme. quando o genoma inteiro vem do paren- de ocitos de camundongo em um meio
Esses tumores parecem tecido placent- te masculino. Evidncia para a no-equi- de cultura que artificialmente ativa o
rio. A maioria dessas molas se desenvol- valncia dos proncleos mamferos vem ocito, ao mesmo tempo suprimindo a for-
ve de um espermatozide haplide ferti- tambm de tentativas de conseguir que mao do segundo corpo polar, produz
CAPTULO 4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo 155
Plo animal
Citoplasma Ncleo do Material do
Cortical ocito ncleo do ocito
Citoplasma
amarelo claro
Gema cinzenta
(A) (B)
Ponto de
entrada do
espermatozide Crescente
cinzento
Crtex
Citoplasma
interno Zona de
deslizamento
Figura 4.33
Reorganizao do citoplasma no ovo recm-fertilizado da r. (A) Corte transversal
esquemtico de um ovo na metade do primeiro ciclo de clivagem. O ovo tem simetria
radial em torno do seu eixo animal-vegetal. O espermatozide entrou por um lado e
seu ncleo est migrando para o interior. O crtex est representado como o de Rana,
com um hemisfrio animal altamente pigmentado e um hemisfrio vegetal transparen-
te. (B) Quando est aproximadamente em 80% de seu caminho na primeira clivagem,
o citoplasma cortical gira cerca de 30 o em relao ao citoplasma interno. Essa rotao
importante porque a gastrulao ir comear na regio oposta ao ponto de entrada do
espermatozide onde ocorre o maior deslocamento do citoplasma. (Segundo Gerhart
et al., 1989.)
(A) (B)
(C) (D)
Figura 4.34
Rotao do citoplasma subcortical relativa ao citoplasma de superfcie da clula. (A)
Um ovo recentemente fertilizado foi marcado com uma grade hexagonal de corante
Azul Nilo (que cora os lpidios nas plaquetas de gema). O ovo foi embebido em
gelatina, e as posies originais de alguns dos pontos marcados na superfcie celular
com fluorescena (crculos em A). O ponto de entrada do espermatozide est marcado
com um S. (B,C) Com o progredir do primeiro ciclo, os pontos do citoplasma
subcortical mudaram de aproximadamente 30 o em relao superfcie externa imobili-
zada do ovo. O local no ovo designando a futura superfcie dorsal do embrio est
marcado com um D. (D) Sumrio desses movimentos na regio vegetal (inferior) do
ovo. (de Vincent et al., 1986, fotografias cortesia de J. C. Gerhart.)
com Azul Nilo e observaram seu movimento por microscopia fluorescente (o corante
ligado emite fluorescncia vermelha). Durante a parte intermediria do primeiro ciclo
celular, a massa do citoplasma central do ovo flui do presumvel lado ventral (abdome),
para o futuro lado dorsal (posterior) do embrio (Prancha 7). Ao fim da primeira divi-
so, o citoplasma presumivelmente do lado dorsal do embrio, distintamente diferen-
te daquele do provvel lado ventral. O que havia sido um embrio radialmente simtri-
co, agora um embrio bilateralmente simtrico.
Como veremos nos Captulos 6 e 15, esses movimentos citoplasmticos iniciam
uma cascata de eventos que determina o eixo dorso-ventral da r. Realmente, os
microtbulos paralelos que permitem esses rearranjos parecem estender-se ao longo
do futuro eixo dorso-ventral (Klag e Ubbels, 1975; Gerhart et al., 1983).
Figura 4.35
Arranjo paralelo de microtbulos se esten-
dem ao longo do hemisfrio vegetal, ao longo
do futuro eixo dorso-ventral. (A) Arranjo pa-
ralelo de microtbulos vistos na segunda par-
te do primeiro ciclo celular por anticorpos
fluorescente tubulina. (B) Antes da rotao
citoplasmtica (cerca de metade do ciclo) ne-
nhum arranjo pode ser visto. (C) No trmino
da rotao do citoplasma, os microtbulos
despolimerizam. (de Elinson e Rowning,
(B) 1988, cortesia de R. Elinson.)
(A) (C)
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CAPTULO 5 Clivagem: Criando multicelularidade 167
167
168 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Figura 5.1
Formao de novas clulas du- Clivagem Gastrulao
rante o desenvolvimento preco-
Horas a 150C
Simetria
Padro de clivagem Posio do vitelo de clivagem Animais representativos
A holotria, Synapta
A clivagem padro da holotria, Synapta digita, ilustrada na Figura 5.2. Aps a
unio dos proncleos, o eixo da primeira haste mittica formado perpendicularmen-
te ao eixo animal-vegetal do ovo. Para esse fim, o primeiro sulco da clivagem passa
diretamente atravs dos plos animal e vegetal, criando duas clulas filhas do mesmo
tamanho. Essa clivagem conhecida como meridional porque passa pelos dois plos
como um meridiano no globo. Os sulcos da segunda clivagem esto no ngulo reto
dos sulcos da primeira clivagem, mas continuam perpendiculares ao eixo animal-ve-
getal do ovo. Os dois sulcos da clivagem aparecem simultaneamente em ambos
blastmeros e tambm passam pelos dois plos. Dessa maneira, as primeiras duas
divises so, ao mesmo tempo, meridional e perpendicular uma com a outra. A terceira
diviso equatorial: as hastes mitticas de cada blastmero esto agora em posio
170 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Plo vegetal
Blstula oca
Metade Vegetal (aberta por corte) Plo vegetal
Ourio--do
Ourio -Mar
do-Mar
O ourio-do-mar tambm apresenta clivagem holoblstica radial, mas com algumas
importantes modificaes. A primeira e a segunda clivagem so similares as da
Synapta; ambas so meridionais e perpendiculares em relao a outra. Similarmen-
te, a terceira clivagem equatorial, separando os dois plos um do outro (Figura
5.3). Na quarta clivagem, no entanto, os eventos so bem diferentes. As quatro
clulas da camada animal se dividem meridionalmente em oito blastmeros, cada
qual com o mesmo volume. Essas clulas so chamadas mesmeros. A camada
vegetal, no entanto, sofre uma clivagem equatorial desigual para produzir no plo
vegetal quatro clulas grandes, os macrmeros, e quatro pequenas, os micrmeros
(Figura 5.4; Summers et al., 1993). Assim que a clula com 16 embries clivar, os
oito mesmeros se dividem para formar duas camadas animais, an1 e an2, uma se
equilibrando em cima da outra. Os macrmeros se dividem meridionalmente, for-
mando uma camada de oito clulas abaixo de an2. Os micrmeros tambm se divi-
dem, produzindo um pequeno grupo abaixo da camada maior. Todos os sulcos de
clivagem da sexta diviso so equatoriais; a stima clivagem meridional, produzin-
do uma blstula com 128 clulas.
CAPTULO 5 Clivagem: Criando multicelularidade 171
veg1
veg2
Metade vegetal
Micrmeros Macrmeros
Figura 5.4
Formao de micrmeros durante a quarta di-
viso de embries de ourios-do-mar. Os p-
los vegetais dos embries so visualizados por
baixo. (A) A localizao e orientao do fuso
mittico na parte baixa das clulas vegetais
so visualizadas com luz polarizada no em-
brio vivo. (B) A clivagem atravs desses fu-
sos, colocados assimetricamente, produziu mi-
crmeros e macrmeros. (de Inou, 1982, cor-
(A) (B) tesia de S. Inou.)
172 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Clio
Blastocele
Figura 5.5
Blstulas de ourio-do-mar. (A) Esquema de um corte controle atravs de uma blstula precoce
de ourio-do-mar, mostrando uma camada nica de clulas arredondadas rodeando uma grande
blastocele. (B) Com a contnua diviso, as clulas da blstula tardia mostram diferenas de forma
medida que as clulas da placa vegetal se alongam, (C) Junes apertadas (flecha) formando
se entre clulas de uma blstula de equinodermo com 1024 clulas. (A e B segundo Giudice,
1973; C de Dan-Sohkawa e Fujisawa, 1980, cortesia dos autores.)
algum tempo aps a fertilizao, que direcionam os fusos formados para uma certa
direo; (2) deve haver material formador de micrmero no citoplasma vegetal; e (3)
deve haver algum mecanismo pelo qual o material formador de micrmeros seja ativa-
do no tempo correto (Hrstadius,1973).
No desenvolvimento do ourio-do-mar, o estgio de blstula comea na fase de
128 clulas. Nesse estgio, as clulas formam uma esfera oca circundando a blastocele
central (Figura 5.5A,B). Nessa altura, todas as clulas so do mesmo tamanho, os
micrmeros tendo diminuda sua diviso celular e clivando menos freqentemente.
Toda a clula est em contato com o fluido proteinceo da blastocele e com a camada
hialina dentro do envoltrio de fertilizao. Durante esse tempo, os contatos entre as
clulas so estreitados. Dan-Sohkawa a Fujisawa (1980) analisaram esse mtodo em
embries de estrela-do-mar e mostraram que o fechamento da cavidade esfrica
contempornea com a formao de junes apertadas entre os blastmeros. Essas
junes unem as clulas frouxamente conectadas num tecido epitelial onde a blastocele
isolada do ambiente externo (Figura 5.5C). Dando prosseguimento a sua diviso, a
camada celular expandida e se afina. Durante esse perodo, a blstula permanece
como uma camada unicelular grossa.
Duas teorias surgiram para explicar a concomitante proliferao de clulas e
formao da blastocele. Dan (1960) conjeturou que o motivo maior dessa expan-
so o influxo de gua na cavidade da blastocele. J que o blastmero secreta
protena na blastocele, seu fluido torna-se espesso. Esse fluido absorve grandes
quantidades de gua por osmose, exercendo presso nos blastmeros para se ex-
pandirem. Essa presso tambm alinha o longo eixo de cada clula para que a
diviso nunca seja para dentro da blastocele. Isso criaria uma expanso adicional
fazendo com que a populao fosse orientada somente para um plano. Wolpert e
Gustafson (1961) e Wolpert e Mercer (1963) propuseram que a presso da
blastocele no necessria para se conseguir esse efeito. Eles enfatizaram o papel
de adesividade das clulas entre si e a camada hialina. Eles mostraram que en-
quanto permanecessem fortemente atracadas na camada hialina, as clulas no
tm alternativa a no ser a de se expandir. Essa expanso cria a blstula ao invs
do contrrio. Certamente, a camada hialina vital para expanso da blastocele, e
se a adeso de clulas da camada hialina inibida por anticorpos para a hialina,
ento a expanso da blastocele cessa (Adelson e Humphreys, 1988). Em um tra-
balho recente (Ettensohn e Ingersoll, 1992) concluram que provvel que ambos
CAPTULO 5 Clivagem: Criando multicelularidade 173
Anfbios
Clivagem na maioria dos embries de rs e salamandras radialmente simtrica e
holoblstica, como na clivagem do equinodermo. O ovo do anfbio, no entanto, con-
tm muito mais vitelo. Esse vitelo, que concentrado no hemisfrio vegetal, um
impedimento clivagem. Sendo assim, a primeira diviso comea no plo animal e
vagarosamente se estende at a regio vegetal (Figura 5.7). Na salamandra axolotle, o
sulco da clivagem se estende atravs do hemisfrio animal a uma velocidade prxima
de 1mm/min. O sulco da clivagem seciona o crescente cinzento e depois diminui para
menos de 0.02-0.03mm/min ao se aproximar do plo vegetal (Hara, 1977).
A Figura 5.8A uma varredura no microscpio eletrnico, mostrando a primeira
clivagem em um ovo de r. Podemos notar as dobras nos sulcos da clivagem e a
diferena entre os sulcos nos hemisfrios animal e vegetal. A Figura 5.8B mostra que
enquanto o sulco da primeira clivagem ainda est tentando clivar o vitelo
citoplasmtico do hemisfrio vegetal, a segunda clivagem j comeou prxima ao
plo animal. Essa clivagem est em ngulos retos em relao primeira, e tambm
meridional. A terceira clivagem, como era de se esperar, equatorial. No entanto,
por causa do vitelo vegetalmente colocado, esse sulco da clivagem em ovos anfbios
muito mais prximo do plo animal. Ele divide o embrio de r em quatro
blastmeros animais pequenos (micrmeros) e quatro grandes blastmeros
(macrmeros) na regio vegetal. Essa clivagem holoblstica desigual estabelece duas Figura 5.6
regies embrionrias principais: uma de diviso rpida de micrmeros, prxima ao Clulas ciliadas da blstula. Cada clula desen-
volve um nico clio. (Cortesia de W. J.
plo animal, e outra de macrmeros, mais lenta (Figura 5.8C). Assim que a clivagem
Humphreys.)
progride, a regio animal se torna abarrotada com numerosas clulas pequenas,
enquanto a regio vegetal contm uma pequena quantidade de grandes macrmeros
carregados de vitelo (ver Figura 5.7).
Embries anfbios contendo de 16 a 64 clulas so freqentemente chamados
mrulas (do Latim amora, da qual sua forma vagamente reminiscente). No estgio
de 128 clulas a blastocele se torna aparente e o embrio considerado uma blstula.
Figura 5.7
Clivagem de um ovo de r. Sulcos de clivagem,
designados por nmeros romanos, esto enu-
Crescente merados por ordem de aparecimento. (A, B)
Cinzento O vitelo vegetal impede a clivagem fazendo
(E) (F) (G) (H) com que a segunda diviso comece na regio
Blastocele animal do ovo, antes da primeira diviso ter
dividido o citoplasma vegetal. (C) A terceira
diviso deslocada em direo ao plo animal.
(D-H) No final, o hemisfrio vegetal contm
blastmeros mais longos e mais escassos que
os da metade animal. (Segundo Carlson, 1981.)
174 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Figura 5.9
Formao da blastocele num ovo de r. (A)
Primeiro plano de clivagem mostrando uma
pequena fenda, que posteriormente se desen-
volve na blastocele. (B) embrio de oito clu-
las mostrando uma pequena blastocele (fle-
cha) na juno de trs planos de clivagem. (de
Kalt, 1971, cortesia de M. R. Kalt.) (A) (B)
CAPTULO 5 Clivagem: Criando multicelularidade 175
(A) (B)
Figura 5.10
Depleo de EP-caderina mRNA no ocito de Xenopus, resultando na perda de adeso entre os
blastmeros e na obliterao da blastocele. Oligonucleotdeos antisense complementares men-
sagem da EP-caderina foram injetados no embrio unicelular, prevenindo a expresso da EP-
caderina. A blastocele obliterada em embries depletados de EP-caderina, mas (B) no pelos
controles. (de Heasman et al., 1994; fotografia, cortesia de J. Heasman.)
Figura 5.12
Clivagem em espiral do molusco Trochus vista
do plo animal (A) e de um lado (B). Em B,
as clulas derivadas do blastmero A esto
coloridas. Os fusos mitticos, esquematizados o macrmero 1A se divide para formar o macrmero 2A e o micrmero 2a; e o micrmero
nos estgios precoces, dividem as clulas de- 1a se divide para formar mais dois micrmeros, 1a1 e 1a2. Mais clivagens iro produzir
sigualmente e em ngulo aos eixos vertical e
blastmeros 3A e 3a a partir do macrmero 2A; e micrmeros, como por exemplo o 1a2,
horizontal.
se dividem para produzir clulas tais como as 1a21 e 1a22.
A orientao da clivagem plana para a esquerda ou para a direita controlada por
fatores citoplasmticos dentro do ocito. Isso foi descoberto analisando mutaes da
espiral do caracol. Alguns caracis tm sua espiral aberta direita da concha, enquan-
to outros tm sua abertura para esquerda. Normalmente, a rotao da espiral a
mesma para todos os membros de uma determinada espcie. Todavia, ocasionalmen-
te, ainda so encontrados mutantes. Exemplificando, em espcies em que a espiral
abre para a direita, sero encontrados alguns indivduos com a abertura espiral para a
esquerda. Crampton (1984) analisou os embries desses caracis aberrantes e obser-
vou que sua clivagem precoce difere da normal.
Figura 5.13
Clivagem espiral do caracol Ilyanassa. O blas-
tmero D maior que os outros, permitindo a
identificao de cada clula. A clivagem dextra.
(A) estgio de 8 clulas. PB o corpo polar.
(B) Metade da quarta clivagem; os macrmeros
j se dividiram em clulas grandes e pequenas
orientadas espiralmente. (de Craig e Morrill,
1986, cortesia dos autores.)
CAPTULO 5 Clivagem: Criando multicelularidade 177
Figura 5.14
Olhando do plo animal de caracis enrolados para a direita e para a esquerda. A origem do
enrolamento para direita e para a esquerda do caracol pode ser reconhecida pela orientao do
fuso mittico na segunda clivagem. Os caracis sinistrogiros e dextrogiros se desenvolvem como
imagens espelhares uma da outra. (Segundo Morgan, 1927.)
A orientao das clulas aps a segunda clivagem estava diferente (Figura 5.14),
graas a uma orientao diferente do aparelho mittico nos caracis com enrolamento
sinistrogiro. Todas as subseqentes divises em embries de espiral para a esquerda
so imagens espelhares daqueles embries com espirais dextras. Na Figura 5.14, pode-
mos notar que a posio do blastmero 4d (o qual muito importante, j que sua
prognie ir formar os rgos mesodrmicos) diferente nos dois tipos de espirais
dos embries. Geralmente, os dois caracis so formados com seus corpos em lados
diferentes da abertura da espiral.
A direo da abertura na espiral da concha do caracol controlada por um nico
par de genes (Sturtevant, 1923; Boycott et al., 1930). No caracol Limnaea peregra a
maioria dos indivduos so espiralados para a direita. Raros mutantes, exibindo aber-
tura esquerda, foram encontrados e acasalados com caracis tipo-selvagem. Esses
acasalamentos mostraram que existe um alelo D dextrogiro que dominante em
relao ao alelo d sinistrogiro. No entanto, a direo da clivagem no determinada
pelo gentipo do caracol em desenvolvimento, mas pelo gentipo da me do caramujo.
Caramujo fmea do tipo dd pode produzir somente herdeiros de espiral sinistra, mes-
mo quando o gentipo dos herdeiros Dd. Um indivduo Dd ir se espiralar tanto
para a direita quanto para a esquerda dependendo do genoma de sua me. Esses cru-
zamentos produzem o seguinte quadro:
178 PARTE II Padres de Desenvolvimento
*No se preocupe, daremos no Captulo 16 mais informaes sobre embries de moluscos com
blastmeros de tamanhos desiguais.
Informaes adicionais
& Especulaes
ras ou barbatanas dos peixes que por ali Figura 5.16 Peixe falso sobre o molusco
estiverem passando. Elas pegam uma ca- uniondeo lampsilis ventricosa. O peixe ,
rona com o peixe at estarem prontas para na verdade, a bolsa da cria e o manto do
cair e, atravs de metamorfose, transformar- molusco. (Fotografia, cortesia de J. H. Welsh.)
se em moluscos adultos. Dessa maneira,
podem se espalhar correnteza acima. imitam o comportamento e a forma de pe-
Em algumas espcies, as gloqudias so quenos peixes nadando. Para tornar a ilu-
liberadas da bolsa de criao da fmea e so mais completa, desenvolveram uma
meramente aguardam um peixe passar. Ou- mancha preta em forma de olho (ocelo) de
tras espcies, tal como a Lampsilis ventri- um lado e uma nadadeira do outro. O pei-
cosa, aumentaram as chances de suas lar- xe visto na Figura 5.16 no um peixe real,
vas encontrarem um peixe realizando outra mas sim a bolsa de criao e o manto abaixo
modificao no seu desenvolvimento dela. Quando o peixe que estiver ao alcance
(Welsh, 1969). Muitos moluscos desenvol- for atrado, o molusco despeja as gloqudias
vem um manto fino e saliente em volta da da bolsa de criao. Dessa maneira, a modi-
concha circundando a bolsa de criao. Em ficao de padres de comportamentos j
alguns uniondeos, a forma da bolsa de cri- existentes permitiram moluscos uniondeos
ao (marspio) e as ondulaes do manto sobreviver em ambientes hostis.
Ectoderma
Ectoderma
neural
Msculo
Notocorda
Mesnquima
Endoderma
Estgio de 2 clulas
Zona pelcida
tero
Primeira clivagem
Figura 5.18 Oviduto
Desenvolvimento de um embrio humano des-
de a fertilizao at a implantao. A compac- Mrula
tao em embries humanos ocorre no dia 4,
quando ele est no estgio de 10 clulas. O ovo Blastocisto
eclode da zona quando alcana o tero, e Ovrio
provvel que a zona evite a adeso das clulas Estgio precoce Fertilizao
em clivagem de se colarem ao oviduto, em lu- da implantao
Ovulao
gar de viajar para o tero. (Segundo Tuchmann-
Duplessis et al., 1972.)
CAPTULO 5 Clivagem: Criando multicelularidade 181
Compactao
Talvez a diferena mais crucial entre a clivagem de mamfero e todos os outros tipos
envolva o fenmeno da compactao. Como mostra a Figura 5.20, blastmeros mam-
feros, atravessando o estgio de 8 clulas, formam um arranjo solto com espao sufi-
ciente entre eles. Seguindo a terceira clivagem, no entanto, os blastmeros passam
(A) (B) (C )
Figura 5.20
Clivagem de um nico embrio de camundon-
go in vitro. (A) estgio de 2 clulas. (B) estgio
de 4 clulas. (C) incio do estgio de 8 clulas.
(D) Estgio de 8 clulas compactado. (E)
Mrula. (F) Blastocisto. (de Mulnard, 1967,
(D) (E) (F) cortesia de J. G. Mulnard.)
182 PARTE II Padres de Desenvolvimento
(A) (B)
Figura 5.21
Micrografia ao microscpio eletrnico de embries de camundongos de 8 clulas. (A) no-
compactados e (B) compactados. (Cortesia de C. Ziomek.)
(A) Estgio precoce de 8 clulas: no-polar, porm com efeitos de contato local Figura 5.22
Compactao e formao do blastocisto de
camundongo. (A,B) embrio de 8 clulas, (C)
mrula de 16 clulas, (D) blastocisto de 32
clulas. O lado esquerdo representa o organis-
mo inteiro ou sua viso em corte. O lado direi-
to detalha as mudanas associadas com o ama-
durecimento do trofoblasto. (Figuras direita
segundo Fleming, 1992.)
Apical
Junes apertadas
Lateral
Basal
(C) 16 clulas:
Adeso basolateral intensificada, laminina, cingulina, mitocndria, vesculas lipdicas.
Basal: lisossomos, Golgi
Junes apertadas
entre clulas exteriores
Junes de fendas
entre clulas interiores
Microvilosidades
Massa celular
interna (ICM)
Blastocele
Trofoblasto
Figura 5.23
Implantao de blastocistos de mamferos
no tero. (A) Blastocistos de camundongo
entrando no tero. (B) Implantao inicial
do blastocisto no tero de um macaco
Rhesus. (A de Rugh, 1967; B cortesia da
Carnegie Institution of Washington, Chester
Reather, fotgrafo.)
(A) (B)
Informaes adicionais
& Especulaes
* As clulas internas mostraram virem mais freqentemente da primeira clula a se dividir no estgio
de 2 clulas. Essa clula normalmente produz o primeiro par de blastmeros a alcanar o estgio de 8
clulas, e essas clulas se dividem de tal modo que elas esto soltas dentro dos blastmeros agregados
(Graham e Kelly, 1977).
186 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Informaes adicionais
& Especulaes
mnio
(A)
2 mnios
Massa celular interna
1 Crio
(B)
2 mnios
Embrio
bicelular
Blastocele
1 Crio
(C)
1 mnio
Crio
Figura 5.27
Diagrama mostrando a relao entre a formao de gmeos monozigticos humanos e as mem-
branas extra-embrionrias. (A) A ciso ocorre antes da formao da trofectoderma, de modo que
cada gmeo tem o seu prprio crio e mnio. (B) A ciso ocorre aps a formao da trofectoderma,
porm, antes da formao do mnio, resultando em gmeos que tm sacos amniticos individu-
ais, porm, compartilhando um crio. (C) Ciso aps a formao do mnio conduz a gmeos em
um saco amnitico, e um nico crio. (Segundo Langman, 1981.)
dongos quimricos so o resultado de duas humanos podem formar quimeras (de la Alm disso, eles mostraram que cada um
ou mais clivagens precoces (normalmente Chappelle et al.,1974; Mayr et al.,1979). Es- dos trs embries deram origem a precur-
4- ou 8-clulas) de embries que foram agre- ses indivduos tm dois tipos de clulas di- sores dos gametas. Quando um quimri-
gados artificialmente para formar um embrio ferentes (XX e XY) dentro do mesmo cor- co (preto/marrom/branco) fmea de ca-
composto. Como mostrado na Figura po, cada uma com o seu conjunto de carac- mundongo acasalava com um macho de
5.28A, as zonas pelcidas de dois embries tersticas genticas. A explicao mais sim- pelugem de cor branca (recessivo), a ni-
geneticamente diferentes so removidas e ples para tal fenmeno que esses indiv- nhada era um de cada cor.
os embries so unidos para formar um duos resultaram da agregao de dois em- De acordo com nossas observaes
blastocisto em comum. Esses blastocistos bries, um macho e outro fmea, que esta- sobre formao de gmeos e camundon-
preparados so implantados no tero da me vam se desenvolvendo ao mesmo tempo. gos quimricos, cada blastmero da mas-
adotiva. Quando nascem, os descendentes Se essa explicao estiver correta, ento dois sa celular interna deve ser capaz de pro-
quimricos tm algumas clulas de cada em- gmeos fraternos se fundem para criar um duzir qualquer clula do corpo. Essa hi-
brio. Isso prontamente observado quan- nico indivduo composto. ptese tem sido confirmada, e ter impor-
do os blastmeros agregados vm de uma Markert e Petters (1978) mostraram que tantes conseqncias no estudo do de-
linhagem que difere na cor da pelugem. embries precoces de 8-clulas podem se senvolvimento dos mamferos.
Quando blastmeros de linhagem preta e unir para formar uma mrula compactada Quando as massas celulares internas
branca so agregados o resultado normal- comum (Figura 5.29) e que o camundon- so isoladas e crescem sob certas condi-
mente um camundongo malhado (Figura go resultante pode ter a cor da pelugem es, permanecem indiferentes e continu-
5.28B). Existe at evidncia que embries de trs linhagens diferentes (prancha 21). am a se dividir em cultura (Evans e Kaufman,
188 PARTE II Padres de Desenvolvimento
(B)
(C )
Figura 5.29
Agregao e compactao de trs embries de ca-
mundongo, no estgio de 8 clulas, para formar um
nica mrula compactada. Clulas de trs diferen-
tes embries (A) so agregadas para formar uma
mrula (B) que sofre compactao para formar um
blastocisto nico (C). O camundongo quimrico re-
sultante mostrado na Prancha 21. (de Markert e
Petters, 1978, cortesia de C. Markert.)
Clivagem Meroblstica
Como j foi mencionado anteriormente, concentraes de vitelo cumprem um papel
importante na clivagem celular. Em parte alguma isso est to aparente como nos tipos
de clivagem meroblstica. Aqui, as grandes concentraes de vitelo probem a clivagem
no seu todo, exceto em uma pequena poro do citoplasma do ovo. Na clivagem
CAPTULO 5 Clivagem: Criando multicelularidade 189
Clivagem discoidal
Clivagem discoidal uma caracterstica de aves, peixes e rpteis.
AVES. A Figura 5.30 mostra a clivagem de um ovo de ave. A massa do ocito Sulcos de clivagem
tomada pelo vitelo, permitindo que a clivagem ocorra somente no blastodisco, uma
regio de citoplasma ativo de aproximadamente 2-3mm de dimetro no plo animal
do ovo. Porque essas clivagens no se estendem para o vitelo citoplasmtico, as
clulas da clivagem precoce so, na realidade, contnuas nas suas bases. O primeiro
sulco de clivagem aparece centralizado no blastodisco, e outras clivagens se seguem
para criar um blastoderma de camada nica. Num primeiro instante, essa camada
celular est incompleta, j que as clulas permanecem contnuas ao vitelo subjacente.
Da por diante, clivagens equatoriais e verticais dividem o blastoderma em um teci-
do de cinco a seis camadas celulares. Essas clulas permanecem ligadas com jun-
es apertadas (Bellairs et al.,1975; Eyal-Giladi, 1991). Entre o blastoderma e o
vitelo existe um espao chamado cavidade subgerminal, criado quando uma clula
blastodrmica absorve fluido da albumina (branco do ovo) e secreta-o entre si e o
vitelo (New, 1956). Nesse estgio, as clulas mais profundas do centro do blastoderma
so descartadas para criar uma zona pelcida unicelular (as clulas descartadas
Blastoderma
parecem morrer). O anel perifrico das clulas blastodrmicas que no so descarta-
das constituem a zona opaca.
Quando uma galinha se considera pronta para botar um ovo, o blastoderma j
contm 60.000 clulas. Algumas dessas clulas so delaminadas em cavidades
subgerminais para formar uma segunda camada (Figura 5.31). Dessa maneira, logo
aps a galinha ter botado o ovo, esse contm duas camadas de clulas: a superior
epiblasto e a inferior hipoblasto. Entre elas est a blastocele. Detalharemos a forma- Figura 5.30
o do hipoblasto no prximo captulo. Clivagem discoidal em um ovo de galinha,
vista do plo animal. Os sulcos de clivagem
PEIXES. Nos ltimos anos, o peixe zebra, Danio rerio, se tornou o organismo favo- no penetram no vitelo, e produzido um
rito para quem deseja estudar o desenvolvimento dos vertebrados. Esses peixes tm blastoderma formado por uma nica camada
grandes crias, procriam o ano inteiro, so facilmente mantidos, tm embrio transpa- de clulas.
rente que se desenvolve fora da me (uma caracterstica importante para a microscopia),
e pode ser criado para que mutantes possam ser protegidos e propagados. Ademais,
eles se desenvolvem rapidamente, para que 24 horas aps a fertilizao, o embrio j
tenha formado a maior parte de seus tecidos e rgos primordiais, apresentando como
caracterstica a forma semelhante ao girino (veja Granato e Nsslein-Volhard, 1996;
Langeland e Kimmel, 1997).
Os ovos de peixes com muito vitelo desenvolvem-se similarmente aos das aves,
Figura 5.31
com a diviso celular ocorrendo somente no blastodisco do plo animal. Observa-
Formao de um embrio do pinto com duas
es da clivagem de ovos de peixe atravs de micrografia ao microscpio eletrnico camadas. Essa seo sagital prxima margem
posterior, mostra uma camada superior con-
sistindo de um epiblasto central que ir entrar
nas clulas da foice de Koller (ks) e na zona
marginal posterior (mz). Certas clulas do epi-
blasto caem (delaminam) da camada superior
para formar ilhas de polinvaginao (pi) com 5
a 20 clulas cada. Essas clulas sero acresci-
das por aquelas clulas hipoblsticas (hyp)
que migraram anteriormente da foice de Koller
para formar a camada inferior (hipoblstica).
(Sc a cavidade subgerminal; gwm a margem
da parede germinal). (de Eyal-Giladi et al.,
1992, cortesia de H. Eyal-Giladi.)
190 PARTE II Padres de Desenvolvimento
(D)
Figura 5.32
Clivagem discoidal em um peixe-zebra, cri-
ando uma regio celular acima do vitelo den- (E) (F)
so. Em (A), BD significa a regio do
blastodisco. (de Beams e Kessel, 1976, cor-
tesia dos autores.)
de varredura mostram, de uma bela maneira, a natureza incompleta da clivagem
discoidal (Figura 5.32). Como nos embries de anfbios e de ourios-do-mar, divi-
ses com clivagens precoce seguem um padro altamente reprodutvel de clivagem
meridional e equatorial. Essas divises so rpidas, com periodicidade de aproxima-
damente 15 minutos cada. As primeiras 12 divises ocorrem sincronicamente, for-
mando um monte celular situado no plo animal de uma grande clula de vitelo.
Inicialmente, todas as clulas mantm conexes abertas umas com as outras e com a
clula de vitelo subjacente para que clulas de tamanho moderado (17-kDa) passem
livremente de um blastmero ao outro (Kimmel e Law, 1985). Comeando por vol-
ta da dcima diviso, pode ser detectado o incio da transio da blstula intermedi-
ria: comea a transcrio do gene zigtico, desacelerao das divises celulares e o
movimento celular evidente (Kane e Kimmel, 1993).
Neste ponto, duas populaes de clulas podem ser distinguidas. A primeira a
camada de vitelo sincicial (YSL). A YSL formada no nono ou dcimo ciclo, quan-
do as clulas da parte vegetal do blastoderma se fundem com a clula do vitelo adja-
cente. Isso produz um anel de ncleos com essa parte do citoplasma da clula do
vitelo localizado bem embaixo do blastoderma. Expandindo vegetalmente, o
blastoderma envolve a clula do vitelo, parte do vitelo sincicial se mover para baixo
do blastoderma, para formar a YSL interna e parte dos ncleos se mover vegetalmente,
ficando frente da margem do blastoderma, para formar a YSL externa (Figura 5.33A,B).
A funo da YSL ainda no foi esclarecida.
A segunda populao celular distinguida na transio da blstula intermediria a
camada envolvente (EVL; veja Figura 5.33A). Essas so as clulas mais superficiais do
CAPTULO 5 Clivagem: Criando multicelularidade 191
(A) (B)
Camada
envolvente (EVL)
Blastoderma
Clulas
profundas
YSL interna
Ncleos
sinciciais
do vitelo
YSL externa
Microtbulos
Clula do vitelo
Figura 5.33
(C) Plo animal A blstula do peixezebra. (A) antes da gastrulao, clulas profun-
Nariz, das esto rodeadas pelo EVL. A superfcie animal do vitelo achatada
olho e contm os ncleos do YSL. Microtbulos se estendem atravs do
citoplasma vitelnico e da regio externa do YSL. (B) Estgio tardio de
Epiderme Crebro
Ectoderma blstula, mostrando a YSL. Os ncleos dessas clulas so derivados
Crista neural Medula espinhal de clulas da margem do blastoderma, que liberou seus ncleos para o
Mesoderma citoplasma vitelnico. (C) Mapa do destino das clulas profundas
Somito do msculo Cabea depois que a mistura de clulas cessou. A vista lateral mostrada, e
Ventral Prnefron Dorsal
Sangue Nadadeiras Corao Msculo Notocorda no todos os destinos dos rgos esto identificados (para clareza). O
Intestino Faringe Endoderma mapa gerado injetando clulas com corante de alto peso molecular,
Fgado
Margem do blastoderma
determinando em seguida, quais rgos as clulas carregadas de corante
geraram. (A e C segundo Langeland e Kimmel, 1996; B de Trinkaus,
1993, cortesia do autor.)
Clula do vitelo
Plo vegetal
blastoderma, e a EVL uma cobertura epitelial fina composta apenas de uma camada
de clulas. A EVL finalmente forma a periderme, uma proteo extra-embrionria co-
brindo o que se pensa ser descartado mais tarde durante o desenvolvimento.
Entre a EVL externa e a YSL interna esto as clulas profundas, das quais surgir
o embrio propriamente dito. Os destinos das clulas blastodrmicas precoces no
esto determinados, e os estudos de linhagem celular (onde um corante fluorescente
no difusvel injetado em uma das clulas e os descendentes daquela clula podem
ser seguidos) mostram que existe muita mistura de clulas durante a clivagem. Alm
do mais, qualquer clula pode dar origem a uma variedade imprevisvel de descenden-
tes de tecido (Kimmel e Warga, 1987; Helde et al., 1994). O destino da clula
blastodrmica parece ser fixado pouco antes do comeo da gastrulao. Nesse pero-
do, clulas em regies especficas do embrio originam certos tecidos de uma maneira
altamente previsvel, permitindo que um mapa do destino possa ser traado (Figura
5.33C; Kimmel et al., 1990).
O processo pelo qual a clula contribui para o tecido envolve uma narrativa progressi-
va de possveis destinos para o desenvolvimento de uma determinada clula. Esse com-
portamento pode ser observado em algumas das primeiras clulas a terem seu destino
estabelecido - as clulas precursoras do corao (Stainer et al., 1993; Lee et al., 1994).
192 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Ncleos
(enrgides)
Superfcie do ovo
Fuso mittico
Sulco de clivagem
ster
Ncleo
Canal do sulco
Microtbulos
Figura 5.36
Alongamento nuclear e celularizao do blas-
toderma de Drosophila. (Segundo Fullilove e
Membrana vitelnica Jacobson, 1971.)
194 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Figura 5.37
Localizao do citoesqueleto em volta de ncleos no blastoderma sincicial de Drosophila. Um
embrio de Drosophila entrando na prfase da dcima-segunda diviso mittica, foi secionado
e corado triplamente. (A) Os ncleos foram localizados por um corante que se liga ao DNA. (B)
Microfilamentos foram identificados usando anticorpo fluorescente para actina. (C) Microt-
bulos foram reconhecidos por um anticorpo fluorescente para tubulina. Domnios do citoesque-
leto podem ser vistos em volta de cada ncleo. (de Karr e Alberts, 1986, cortesias de T. L. Karr.)
Informaes adicionais
& Especulaes
Excees, Generalizaes,
e Clivagem Parastica da Vespa
O QUE CONSIDERAMOS nor-
mal e o que marginalizamos
como excees, freqentemen-
te reflete quais animais so mais acess-
volvimento conhecem apenas o desenvol-
vimento de uma espcie: Drosophila me-
lanogaster. A Drosophila ganhou proe-
minncia somente depois que se fez ne-
tro do ovo de uma outra espcie. Com o
desenvolvimento do ovo hospedeiro (nor-
malmente de uma mariposa), o mesmo acon-
tece com o ovo do parasita. No entanto,
veis para o estudo e mais facilmente do- cessrio relacionar fenmenos embriol- enquanto o ovo do hospedeiro comea o
mesticados para o laboratrio. No ne- gicos com genes particulares. Em 1941, o seu desenvolvimento no padro superfici-
cessrio dizer, que isso no reflete neces- maior compndio do desenvolvimento de al usual, o ovo da vespa divide holoblas-
sariamente as condies do mundo natu- insetos (Embriologia dos insetos e ticamente. Ademais, ao invs de diferenci-
ral. Pelo contrrio, nossas discusses de Miripodes, Johannsen e Butt) sequer ar o eixo do corpo, as clulas do embrio
desenvolvimento animal so freqente- mencionava essa espcie em seu ndice. parasita dividem-se repetidamente para se
mente dificultadas por certos organismos Insetos so um excepcionalmente bem- tornar uma massa de clulas no diferenci-
em particular. O desenvolvimento de anf- sucedido e espalhado subfilo, no sendo adas chamadas poligerme. Em duas sema-
bios geralmente representado pelo Xe- surpreendente encontrar uma grande vari- nas, a poligerme em crescimento fica
nopus laevis, e o camundongo e o ho- abilidade no seu desenvolvimento. O de- suspensa no hospedeiro, permanecendo
mem so os nicos mamferos cujos de- senvolvimento da vespa parasita Copido- frouxamente atada ao crebro e traquia
senvolvimentos so usualmente estuda- somopsis tanytmemus difere marcadamente larvais (Figura 5.38A; Cruz, 1986a).
dos. Similarmente, embora haja mais de daquele da Drosophila cannica. Como Figura 5.38 Desenvolvimento de vespas
800.000 espcies de insetos conhecidas, muitas outras espcies parasitrias, a f- parasitrias (Encyrtidae). (A) Clivagem
a maior parte dos biologistas do desen- mea C. tanytmemus deposita seu ovo den- holoblstica do ovo de Copidosomopsis
tanytmenus produz uma poligerme de clulas
no-diferenciadas. (B) Larvas precoces de um
Olho/cabea da gnero relacionado, Pentalitomastix, atacam a
lagarta hospedeira larva de Trathala dentro do mesmo hospedei-
ro. A fotografia de um hospedeiro recm-
aberto. (A segundo Cruz, 1986a; B de Cruz,
1981, cortesia de Y. Cruz.)
Mrula de Esfago
4 dias
Corpo gorduroso
do hospedeiro
Ovo
(A)
Poligerme
Poligerme
precoce
(B)
Poligerme em expanso
196 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Com o crescimento, a poligerme se divi- reproduzem, morrendo assim que as larvas pulam (a maioria das vezes sobre o corpo
de em dzias (s vezes milhares, dependen- normais se formam. Enquanto elas vivem, no do hospedeiro morto), acham um novo
do da espcie) de discretos grupos de clu- entanto, vo at o embrio hospedeiro ma- hospedeiro para depositar os seus ovos
las. Cada um desses grupos se torna um tando as larvas parasitas de outros indivdu- e morrem logo em seguida.
embrio! A vespa poliembrionria Copido- os (de espcies diferentes e de outros clones Tal ciclo de vida incomodava Charles
soma floridanum produz at 2000 indivdu- da mesma espcie). Em outras palavras, as Darwin, fazendo-o questionar o conceito de
os de um nico ovo fertilizado (Grbic et al., larvas precoces so formas predatrias que uma divindade benigna conhecida por to-
1996). Essa habilidade que um ovo tem para eliminam possveis competidores (Cruz, 1981, dos. Em 1860 ele escreveu ao biologista
se transformar em uma massa de clulas, 1986b; Grbic and Strand, 1992). americano Asa Gray: Eu no consigo me
que rotineiramente forma numerosos embri- Com a morte das larvas precoces (e convencer de que o benevolente e onipo-
es, chamada de poliembrionia. (Poliem- suas presas), a larva normal emerge da tente Deus tenha planejado e criado a
brionia caracterstica de certos grupos de sua primeira mudana de pele, comea a Ichneumonidae com a expressa inteno
insetos e certas espcies de mamferos, tais se alimentar vorazmente dos rgos da delas se alimentarem dentro dos corpos vi-
como o tatu de nove bandas, cujos ovos larva hospedeira. Em 40 dias, a criao vos de lagartas. No entanto, alm de sua
formam qudruplos idnticos.) A maior par- parasita j se alimentou dos msculos do utilidade de provocar noes de descon-
te desses embries de vespa parasita se de- hospedeiro, gordura corporal, gnadas, forto no que se refere a ordem natural e na-
senvolvem em larvas normais que levam glndulas de seda, intestinos, cordes tureza da individualidade, as vespas pa-
aproximadamente 30 dias para se desenvol- nervoso e hemolinfa, e o hospedeiro um rasitas podem ter conseqncias econmi-
ver. Um grupo menor, de cerca de 10 pouco mais do que um saco de pele segu- cas importantes. Macrocentrus grandii
porcento do nmero total de embries, se rando cerca de 70 larvas pupantes de ves- uma vespa poliembrionria que parasita a
tornam larvas precoces (Figura 5.38B), que pa. Aps outros 5 ou 6 dias, os novos broca Europia do milho. A habilidade de
se desenvolvem em uma semana. Elas no adultos perfuram o tegumento do hospe- um inseto se formar de um embrio por cli-
s se desenvolvem precocemente, como tm deiro e, em uma cena recordando o filme vagem holoblstica, deve tambm nos en-
muito pouca estrutura e no sofrem meta- Alien, provocam a abertura e a sada do corajar a apreciar a plasticidade da natureza,
morfose. So essencialmente um conjunto hospedeiro, literalmente por comer o seu desencorajando generalizaes precipitadas
de mandbulas mveis. Essas larvas no se corpo. Esses adultos freqentemente co- sobre um completo subfilo de organismos.
MECANISMO DE CLIVAGEM
Regulando o ciclo da clivagem
O ciclo celular das clulas somticas funcionalmente dividido em quatro estgios
(Figura 5.39A). Aps a mitose (M), temos o intervalo da pr-replicao (G1), em
seguida acontecendo a sntese do DNA (S). Aps o perodo da sntese, temos o inter-
valo pr-mittico (G2), seguido pela mitose. A progresso dessas fases regulada por
fatores de crescimento. Em blastmeros de clivagem precoce, no entanto, a diviso
celular pode ser muito simples. Blastmeros precoces de ourio-do-mar no tm G1
replicando o seu DNA durante a ltima parte (telfase) da mitose prvia (Hinegardner
et al., 1964). Os ncleos de Xenopus e Drosophila eliminaram as fases G1 e G2 duran-
te a clivagem precoce. (Embries de Xenopus adicionam essas fases ao ciclo celular,
algum tempo aps a dcima segunda clivagem. Drosophila adiciona G2 durante o ciclo
14 e G1 durante o ciclo 17.) Nas primeiras 12 divises, Xenopus divide-se sincronica-
mente em um ciclo celular bifsico: S para M e M para S (Figura 5.39B; Laskey et al.,
1977; Newport e Kirschner, 1982a).
Os fatores que regulam esse ciclo bifsico esto localizados no citoplasma. Ocitos
normais de Xenopus, quando aumentam, so detidos na primeira prfase meitica. So
incapazes de se dividirem. Se os ncleos de clulas divididas forem transplantados
para esses ocitos, tambm param a diviso. Quando ocitos normais so estimulados
por progesterona, retomam sua diviso meitica e param na metfase da segunda
meiose. Se o ncleo de clulas no divididas (como neurnios) so colocados no
citoplasma de ocitos tratados com progesterona, tambm iniciam a diviso e param
CAPTULO 5 Clivagem: Criando multicelularidade 197
(A) (B)
Ciclina B
Ciclina D
Ciclina A
Ciclina E
Ciclina A
Figura 5.39
Ciclos celulares de clulas somticas e blastmeros precoces. (A) Ciclo celular de uma clula
somtica tpica. A Mitose (M) seguida por uma condio de interfase. Esse ltimo perodo
subdividido em fases G1, S (sntese) e G2. Clulas que esto se diferenciando so geralmente
removidas do ciclo celular e esto numa fase G1 estendida chamada G0. As ciclinas e suas
respectivas quinases, responsveis para progresso atravs do ciclo celular, so mostradas no
seu ponto de regulao do ciclo celular. (B) Ciclo celular bifsico mais simples dos blastmeros
precoces de anfbios, tendo somente dois estados, S e M. (A segundo Nigg, 1995.)
Informaes adicionais
& Especulaes
Degradao da ciclina
Mitose Mitose Mitose Mitose
Quinase ativa de Ciclo dirigido pela traduo de Ciclo dirigido pela cdc25/fosfatase de cordo
protenas maternas nova ciclina de mRNA materno
(limita substrato)
Ciclo
Divises nucleares
CAPTULO 5 Clivagem: Criando multicelularidade 199
em treonina-161 (T-161) e desfosforilada em xo MPF. A ciclina permite a subunidade ximo ciclo, o cordo mRNA materno de-
tirosina-15 (Y-15). Ambas condies so quinase cdc2 tornar-se fosforilada nos re- gradado; se o ncleo no transcrever seu
importantes para a atividade da quinase sduos treonina-14 (T14), tirosina-15 (Y15) prprio cordo mRNA, as clulas no se
(Gould e Nurse, 1989; Solomon, 1993). e treonina-161 (Figura 5.40). A fosforilao dividiro. Edgard e OFarrel (1989) mos-
no T-161 necessria para a atividade do traram que aquelas clulas que se divi-
A maior subunidade do MPF: MPF, mas fosforilaes nos T-14 e Y-15 a dem esto sintetizando a sua prpria
Ciclina inibem. Dessa forma, quando fosforilada fosfatase cdc25, enquanto aquelas que
Ento, como regulado o MPF? Desde que nessas posies a quinase permanece ina- no so capazes de se juntar a esse ciclo,
a clivagem de Xenopus parecia ser regulada tiva, porm, potencialmente funcional. O no realizaro a diviso (Figura 5.41). Essa
por uma protena similar quela que regula a suprimento de molculas MPF potencial- degradao e a necessidade de re-sinteti-
diviso celular da levedura, pensou-se que mente funcionais (pr-MPF) acumula du- zar essa protena explicariam a mudana
qualquer regulador da protena da levedura rante o perodo tardio de S. de controle citoplasmtico para controle
teria contrapartida no embrio animal. Um nuclear da diviso como visto no ciclo 14.
dos principais reguladores da protena MPF A Fosfatase cdc25: Em Drosophila, existe uma maturao
de levedura o produto do gene cdc13, uma Iniciadora de Mitose desenvolvimental da regulao da quinase
protena 56-kDa chamada p56cdc13. Esse gene A mitose se inicia com uma abrupta MPF ativa (veja Figura 5.40; Edgard et al.,
foi clonado, e a seqncia de sua protena co- desfosforilao de todas essas subunidades 1994). Na ovulao, o complexo pr-MPF
dificada foi considerada muito semelhante s MPF quinase na posio 15. Isso conse- armazenado no ovo desfosforilado em T-
protenas ciclina B encontradas em numero- guido pelo aparecimento da fosfatase cdc25 14 e Y-15 pelo recm-traduzido cordo
sos animais (Goebl e Byers, 1988; Solomon (Edgar e OFarrell, 1989; Gautier et al., (cdc25) da protena. Durante os primeiros
et al., 1988). As protenas ciclina B em clu- 1991; Jessus e Beach, 1992; Lee et al., sete ciclos nucleares, o MPF ativo perma-
las em estgio de clivagem mostram um com- 1992). Dessa maneira, a acumulao gra- nece em nveis altos, e o ncleo divide-se
portamento peridico, acumulando duran- dual do MPF convertida em uma breve to rapidamente quanto as enzimas sinte-
te a fase S e sendo degradada durante a exploso de atividade quinase que inicia tizadoras de DNA permitem. Durante os
mitose (Evans et al., 1983; Swenson et al., a mitose. Essa fosfatase (que tem sido en- ciclos 8-13, a ciclina comea a ser degrada-
1986). Ciclinas so freqentemente codifi- contrada em inmeros organismos) ela da na metfase, levando a flutuaes peri-
cadas pelo mRNA armazenado no citoplas- prpria regulada pelo desenvolvimento. dicas de atividade MPF-quinase. A snte-
ma do ocito, e se sua transformao em Na Drosophila, a fosfatase cdc25 (pro- se da ciclina do mRNA armazenado no
protenas seletivamente inibida, a clula duto do gene string, de cordo) inicial- ocito armazenado se torna o passo
no entrar em mitose (Minshull et al., mente sintetizada pelo mRNA armazena- limitante para a mitose. A degradao do
1989). A protena ciclina B combina com a do no ocito durante os 13 primeiros ci- cordo da ocito-protena leva parada
quinase cdc2 do MPF para criar o comple- clos celulares. No entanto, durante o pr- do ciclo celular na interfase do ciclo 14.
(B) (C)
200 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Grandes concentraes de pr-MPF se replicao do DNA (Duronio e OFarrell, comeo da mitose; mas a prpria monta-
acumulam. As mitoses para as divises 14, 1994). Certamente, quando as clulas saem gem do fuso necessria para o funciona-
15 e 16 so iniciadas somente quando essa normalmente do ciclo para comear a se di- mento apropriado da ciclina B (Minshull et
pr-MPF desfosforilada nas posies T- ferenciarem, expressam a protena Dacapo, al., 1994). Se os fusos so formados incor-
14 e Y-15 pela protena cordo. Essa prote- um inibidor de ciclina E/cdk2 (Lane et al., retamente, a ciclina B cessa seu funciona-
na derivada de transcrio nuclear ao 1996; de Nooij et al., 1996). mento, e a mitose pra. Tambm parece ha-
final de cada perodo G2. A mitose passou A regulao das ciclinas uma funo ver retroalimentao entre a cromatina re-
do controle citoplasmtico para o nuclear. crtica no desenvolvimento. Primeiro, ima- plicante e as quinases ciclina-dependen-
gine as clulas da cartilagem de nossas per- tes, fazendo com que a mitose no comece
Outras ciclinas e quinases ciclina- nas sofrendo mais uma diviso celular; ser- at que o DNA tenha comeado a replicar-
dependentes amos muito maiores do que agora. Pior, ima- se, e somente uma rodada de replicao
MPF o primeiro membro descoberto de gine que essa desregulao ocorresse em normalmente permitida durante a diviso
uma famlia de protenas dimricas que tm somente uma de nossas pernas. Ainda pior, celular (Chong et al., 1995; Madine et al.,
estruturas muito similares. Cada uma des- imagine se a diviso da cartilagem no fos- 1995). As molculas que mediam essas tro-
sas protenas contm uma ciclina e uma se coordenada com a diviso da pele e dos cas esto agora sendo estudadas.
quinase ciclina-dependente, que quando de- vasos sangneos. A regulao desses
pendente do MPF chamada cdk1. Pelo eventos coordenada atravs de hormni- Fator Citosttico
menos outras sete quinases ciclina-depen- os e fatores de crescimento que, por fim, A sntese e a degradao do MPF leva a
dentes esto envolvidas em clulas madu- regulam as ciclinas que controlam a passa- ciclagem das clulas. No entanto, se a de-
ras de vertebrados, e mais de uma dzia de gem atravs dos ciclos das clulas. Segun- gradao da ciclina for prevenida, o MPF
ciclinas foram identificadas. Os papis de do, quando a ciclina se torna ativa sem re- permanece ativo e a clula travada na
algumas dessas quinases foram determina- gulao externa ou quando ciclinas se tor- metfase (Murray et al., 1989). Isso o que
dos (como mostra a Figura 5.39). Entre es- nam estimuladas por protenas mutantes, o acontece, aparentemente, durante o desen-
sas enzimas, uma das mais crticas a ciclina crescimento das clulas continua sem con- volvimento do ocito da r. O ocito ma-
E/cdk2. Enquanto MPF (ciclina B/cdk1) trole externo, e se desenvolve um tumor. Em duro da r cessa a diviso celular produ-
crtica para a entrada na mitose (M), ciclina clulas maduras de vertebrados, as ciclino- zindo uma protena chamada fator citost-
E/cdk2 crtica para a habilidade da clula enzimas D/cdk4,6 cumprem um papel crucial tico (CSF), que mantm o ocito preso na
entrar na fase S, permitindo a ocorrncia de no desenvolvimento. Em diversos tipos de metfase da segunda diviso meitica (Fi-
sntese do DNA. A regulamentao do de- clulas, controlam a dicotomia entre a divi- gura 5.42). Essa protena contm os pro-
senvolvimento dessa protena uma fase so e a diferenciao celular. [cleave6.html] dutos dos genes c-mos e cdk-2, e parece
crtica no desenvolvimento da Drosophila. agir bloqueando a degradao da ciclina
Embries de Drosophila adicionam um Pontos de Controle para Diviso Ce- (veja o Captulo 22). Uma vez que a ciclina
estgio G2 antes da mitose, quando a prote- lular: DNA e Fusos no degradada, MPF permanece ativo, e
na de cordo se torna limitante no ciclo 14. O ciclo celular exige uma excepcional intri-
A fase G1 adicionada ao ciclo 17 quando cada coreografia da citocinese, replicao
ciclina E se torna o fator limitante para a de DNA, montagem de fusos e metabolis-
replicao do DNA. Em embries precoces, mo celular. Nesse conjunto, ciclinas e Figura 5.42
ciclina E e cdk2 esto sempre presentes, quinases ciclina-dependentes so alvos e Nveis do fator promotor de amadurecimento
seus mRNA sendo fornecidos pelo ocito e causadores da regulao. O sistema ciclina- (MPF) durante o desenvolvimento precoce da
traduzidos atravs de todos os primeiros 15 quinase parece coordenar esses eventos. r Xenopus laevis. O sinal normal de matura-
ciclos de diviso. A mensagem para ciclina Por exemplo, a fibra do fuso mittico no o o hormnio progesterona, que estimula a
degradada durante o ciclo 16, levando pode formar at a ciclina B/cdk1 sinalizar o ovulao dos ocitos e o incio da meiose. (Se-
deficincia dessa protena no ciclo 17. Des- gundo Murray e Kirschner, 1989.)
sa forma, a maioria das clulas param no G1
desse ciclo, no entrando no perodo de sn- Entrada de espermatozide, aumento
Estmulo para amadurecimento de Ca2+ livre, inativao de CSF
tese do DNA. A comeam a diferenciar-se. (progesterona ou MPF)
(As excees so as clulas precursoras CSF estabiliza MPF
dos nervos que continuam a proliferar, e as Alta
clulas do intestino, que continuam a pro-
duzir DNA na ausncia de diviso celular. Atividade
Nesses casos, a ciclina E derivada dos de MPF
genes zigticos.) Se ciclina E induzida
ectopicamente, as clulas retidas sofrem uma Baixa
nova rodada de sntese de DNA (Knoblich
et al., 1994). Pensa-se que a ciclina E contro-
la a sntese do DNA, fosforilando certos
fatores de transcrio que regulam as trans- Ocito Meiose Meiose Ocito Primeira Segunda
cries das protenas necessrias para a Imaturo I II maduro clivagem clivagem
CAPTULO 5 Clivagem: Criando multicelularidade 201
o ocito permanece na metfase. A libera- liberao de ons de clcio na fertilizao Enquanto os ons de clcio esto ocupa-
o de ons de clcio durante a fertilizao de iniciar a degradao da ciclina e permitir dos desligando a mitose, os sinais da fer-
ativa a protease que especificamente inati- que a clula comece a replicao do DNA. tilizao que ativam a protena quinase C
va o CSF (Watanabe et al., 1991). Quando Em seguida, os ritmos da diviso celular esto estabelecendo condies de inter-
o CSF degradado, a ciclina pode ento so controlados pela atividade do MPF, fase: descondensao da cromatina e re-
ser degradada, e a clula pode retornar que por sua vez baseada nos ritmos forma do envoltrio nuclear (Bement e
fase S. Dessa maneira, um dos efeitos da cclicos da sntese e degradao da ciclina. Capco, 1991).
a
Como foi verificado que a colchicina inibe independentemente vrias funes da membrana, incluindo a osmorregulao e o transporte de ons e
nucleosdeos, nocodazol tornou-se a principal droga usada para inibir processos mediados por microtbulos (veja Hardin, 1987).
202 PARTE II Padres de Desenvolvimento
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Gastrulao:
Reorganizando as clulas embrionrias
6
Meu querido amigo..... a vida infinitamen-
te mais complexa do que qualquer coisa que
a mente humana possa imaginar. No ou-
saramos sequer conceber as coisas que so
meros detalhes da existncia.
G ASTRULAO o processo pelo qual movimentos altamente integrados
de clulas e tecidos, dramaticamente, reorganizam as clulas da blstula. A
blstula consiste de numerosas clulas, cujas posies foram estabelecidas
durante a clivagem. Durante a gastrulao, essas clulas recebem novas posies e
novos vizinhos, e estabelecido o multifacetado plano do corpo do organismo. As
A. CONAN DOYLE (1891) clulas que formaro os rgos endodrmicos e mesodrmicos so trazidas para den-
tro do embrio, ao passo que as precursoras da pele e do sistema nervoso so distri-
No o nascimento, o casamento ou a mor- budas na superfcie externa. Assim, as trs camadas germinativas ectoderma exter-
te, mas a gastrulao que verdadeira- no, endoderma interno e mesoderma intersticial so produzidas inicialmente durante
mente a parte mais importante de nossa vida. a gastrulao. Ainda, o palco est montado para as interaes desses tecidos recm-
LEWIS WOLPERT (1986)
posicionados.
Os movimentos da gastrulao envolvem o embrio inteiro, e migraes celula-
res em uma parte do organismo gastrulante devem estar intimamente coordenadas
com outros movimentos ocorrendo simultaneamente. Mesmo que o padro de
gastrulao seja extremamente variado em todo o reino animal, relativamente pou-
cos mecanismos esto envolvidos. A gastrulao, geralmente, envolve os seguintes
tipos de movimentos:
Epibolia. O movimento de camadas epiteliais (usualmente de clulas ectodr-
micas) que se espalham como uma unidade e no individualmente, para envol-
ver as camadas mais profundas do embrio.
Invaginao. O dobrar para dentro de uma regio de clulas, de maneira seme-
lhante cavidade formada quando se empurra com o dedo a superfcie de uma
bola de borracha macia.
Involuo. A internao ou movimento de interiorizaro de uma camada exter-
na em expanso, de modo a se espalhar na superfcie interna das clulas exter-
nas remanescentes.
Ingresso de clulas. A migrao de clulas individuais da camada superficial
para o interior do embrio.
Delaminao. A separao de uma camada celular em duas ou mais camadas
mais ou menos paralelas.
Ao considerarmos gastrulao em diferentes tipos de embrio, devemos levar em
conta as seguintes questes (Trinkaus, 1984a):
Qual a unidade da atividade migratria? a migrao dependente do
movimento de clulas individuais, ou so as clulas parte de uma camada
migrante? Por mais extraordinrio que possa parecer, propriedades migratrias
regionais podem ser totalmente controladas por fatores citoplasmticos que
209
210 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Gastrulao em ourio-do-mar
A blstula do ourio-do-mar consiste de uma nica camada de mais ou menos 1000
clulas. Essas clulas derivadas de diferentes regies do zigoto tm tamanhos e pro-
priedades diferentes. As Figuras 6.1 e 6.2 mostram o destino das vrias regies do
zigoto enquanto ele se desenvolve atravs da clivagem e da gastrulao na larva
pluteus, caracterstica dos ourios-do-mar. O destino de cada camada pode ser visto
atravs de seus movimentos durante a gastrulao.
*A discusso da gastrulao de Drosophila ser transferida para o Captulo 14, quando ela ocorre
no contexto da formao do eixo. Lembre-se do alerta feito pelo pesquisador de gastrulao, Ray
Keller (comunicao pessoal) Estudantes NO deveriam ler esse material apressadamente, ao
contrrio uma cena tpica aquela em que um pobre coitado est debruado sobre este texto s 2.30
horas da madrugada com uma xcara de caf, examinando desesperadamente as figuras para ver se ele
ou ela podem entender o que est se passando. Gastrulao (como diz Wolpert na citao no
comeo deste captulo) a poca mais importante da sua vida. Vale a pena examin-la criticamente
e apreci-la vagarosamente.
CAPTULO 6 Gastrulao: Reorganizando as clulas embrionrias 211
Animal
(A) (B) (C) (D) (E) (F) (G)
Mesmeros
Macrmeros
veg1
Vegetal Micrmetros veg2
Tufo ciliar
(H) (I) (J) (K) (L)
Mesnquima (Vista lateral)
secundrio Estomodeu
Mesnquima (boca)
primrio
Envoltrio
Endoderma (M) ectodrmico
invaginante
Bastonetes
Figura 6.1 esquelticos
Desenvolvimento normal do ourio-do-mar, seguindo o destino das camadas celulares da bls- (mesoderma)
tula. (A-F) Clivagem at o estgio de 60 clulas (omitindo o estgio de 2-clulas). (G) Blstula Intestino
precoce com clios. (H) Blstula tardia com tufo ciliar e placa vegetal achatada. (I) Blstula com (endoderma)
mesnquima primrio. (J) Gstrula com mesnquima secundrio. (K) Larva em estgio prismtico.
(L,M) Larva pluteus. Os destinos do citoplasma zigtico podem ser seguidos pelas variaes
no sombreamento. (N) Fotomicrografia de uma larva pluteus viva de ourio-do-mar. (A-M (Vista ventral)
segundo Hrstadius, 1939; N cortesia de G. Watchmaker.) (N)
Boca
nus
Bastonetes
esquelticos
Figura 6.2
Seqncia completa da gastrulao em
Lytechinus variegatus. O tempo mostra
15 hs. 17 hs. 18 hs.
a durao do desenvolvimento a 25oC.
13.5 hs. (Cortesia de J. Morrill.)
212 PARTE II Padres de Desenvolvimento
(A)
(B)
Figura 6.3
Formao dos cordes sinciciais por clulas mesenquimatosas do ourio-do-mar. (A) Clulas
mesenquimatosas primrias da gstrula precoce se alinham e se fundem para depositar a matriz
da espcula de carbonato de clcio. (B) microfotografia eletrnica de varredura de espculas
formadas pela fuso das clulas mesenquimatosas primrias para formar os cordes sinciciais.
(C) Anel de clulas mesenquimatosas em volta do arquntero (intestino primitivo). A metade
animal e todo o arquntero foram removidos. (D) Colocao das clulas mesenquimatosas
primrias na larva precoce de Lytechinus variegatus. (A e D de Ettensohn, 1990; B e C de
Morrill e Santos, 1985; todas as fotografias, cortesia dos autores.)
(A)
(B)
Figure 6.4 (C)
Fotografias ao estreo-microscpio eletrnico de varredura de clulas mesenquimatosas prim-
rias dentro da matriz extracelular de fibrilas da blastocele. (A) Clulas mesenquimatosas prim-
rias enredadas na matriz extracelular da gstrula precoce de Strongylus centrotus. (B,C) migra-
o de clulas mesenquimatosas em estgio de gstrula. As fibrilas da matriz extracelular da
blastocele ficaram paralelas ao eixo animal-vegetal e esto intimamente associadas com as clu-
las mesenquimatosas primrias. (de Cherr et al., 1992; cortesia de G. Cherr.)
Enquanto outras clulas mantm sua forte ligao camada hialina e s clulas vizi-
nhas, as precursoras do mesnquima primrio perdem sua afinidade a essas estruturas
(para aproximadamente 2% do valor original), enquanto que sua afinidade aos compo-
nentes da lmina basal e matriz extracelular aumenta 100 vezes. Essa mudana na
afinidade faz com que os micrmeros percam suas ligaes com a camada hialina
externa e com as clulas circundantes e, atrados pela lmina basal, migram para o
interior da blastocele (Figura 6.5). As modificaes na afinidade celular foram
Micrmeros em
estgio de 16 clulas 5.8 x 10-5 6.8 x 10-5 4.8 x 10-7
Clulas mesenquimatosas
em estgio migratrio 1.2 x 10-7 1.2 x 10-7 1.5 x 10-5
Ectoderma e
endoderma gastrular 5.0 x 10-5 5.0 x 10-5 5.0 x 10-7
Fonte: Segundo Fink e McClay, 1985.
a
Clulas testadas foram colocadas em placas contendo hialino, lmina basal extracelular, ou
monocamadas celulares. As placas foram invertidas e centrifugadas a vrias foras para deslocar
as clulas. A fora de deslocamento calculada pela fora centrfuga necessria para remover as
clulas teste do substrato.
214 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Matriz Clulas
extracelular fibrilar Mesenquimatosas primrias
Blastocele
Lmina basal
e contribui para a formao das espculas embrionrias (Prancha 35). Se clulas mesen-
quimatosas primrias de embries mais velhos so injetadas em gstrulas mais jovens,
elas atrasaro sua diferenciao, migraro como as clulas mais jovens e sero incorpo-
radas normalmente no mesnquima do hospedeiro. Alm disso, se todas as clulas
mesenquimatosas do hospedeiro so removidas antes da injeo de clulas mesenqui-
matosas mais velhas, essas repetiro os estgios iniciais de sua migrao, formando um
anel mesenquimatoso e o esqueleto, normalmente (Ettensohn, 1990). Considera-se que
essa informao posicional fornecida pelas futuras clulas ectodrmicas e suas lmi-
nas basais (von bisch, 1939; Harkey e Whiteley, 1980). Somente clulas mesenquima-
tosas primrias (e no outros tipos de clulas ou partculas de ltex) so capazes de
responder a esses sinais modeladores (Ettensohn e McClay, 1986). Miller e colegas
(1995) observaram a existncia de filopdios extremamente delgados (0.3 m de dime-
tro) no mesnquima esqueletognico (skeletonogenic); esses parecem explorar e sentir
a parede da blastocele (Figura 6.7). Esses filopdios contm actina e no so considera-
dos como locomotores. Em lugar disso, so considerados como sensores do ambiente,
da mesma maneira que os filopdios nas pontas dos cones de crescimento axonal. Essas
extenses delgadas podem ser responsveis pela captao de sinais modeladores
dorsoventral e animal-vegetal, a partir do ectoderma (Malinda et al., 1995).
Figura 6.7
Videomicrografia de Nomarski mostrando um filopdio longo e fino estendendo-se
de uma clula mesenquimatosa primria at a parede ectodrmica da gstrula,
assim como um filopdio mais curto estendendo-se para dentro do ectoderma. Os
filopdios mesenquimatosos estendem-se atravs da matriz extracelular e contatam
diretamente a membrana celular das clulas ectodrmicas. (de Miller et al., 1995;
fotografia cortesia de D. McClay.)
216 PARTE II Padres de Desenvolvimento
placa vegetativa. Essas clulas permanecem ligadas umas s outras e camada hialina
do ovo, e se movem para ocupar os vazios deixados pelo ingresso do mesnquima;
portanto, a placa vegetal se achata ainda mais. Verifica-se, tambm, que a placa vegetal
se dobra para dentro e se estende por um quarto ou at a metade do seu caminho para
a blastocele (veja Figura 6.2, 10.5-11.5 horas; Figura 6.8A). Ento, repentinamente, a
invaginao cessa. A regio invaginada chamada de arquntero (intestino primitivo)
e sua abertura no plo vegetal chamada de blastporo.
Quais foras atuam para invaginar essas clulas? Lane e colaboradores (1993)
mostraram que o envergamento semelhante aquele produzido pelo aquecimento de
uma faixa bimetlica. A camada hialina , na verdade, formada de duas lminas: uma
externa, formada primariamente de protena hialina, e uma interna, composta de prote-
nas fibropelinas* (Hall e Vacquier. 1982; Bisgrove et al., 1991). As clulas da placa
vegetal (e somente essas clulas) secretam um proteoglicano de condroitina sulfato
na lmina interna da camada hialina, diretamente abaixo delas. Essa molcula
higroscpica (absorvente de gua) incha a lmina interna mas no a externa. Isso
causa o envergamento da camada hialina (Figura 6.8B,C). Um pouco mais tarde, uma
(A)
Figura 6.8
Invaginao da placa vegetal. (A) Invaginao da placa vegetal de Lytechinus variegatus vista
por micrografia eletrnica de varredura da superfcie externa da gstrula precoce. O blastporo
est claramente visvel. (B) a camada hialina consiste de lminas internas e externas. Microvi-
losidades da placa vegetal estendem-se atravs da camada hialina e seu citoplasma contm
vesculas secretoras que armazenam um proteoglicano de sulfato de condroitina (CSPG). (C)
Os grnulos de armazenamento secretam o proteoglicano para dentro da lmina interna da
camada hialina. O proteoglicano absorve gua e entumece a lmina interna, enquanto a lmina
externa, ao qual est fixado, no entumece. Isso ocasiona a curvatura para dentro do envoltrio
hialino e do epitlio a ele ligado. (A de Morrill e Santos, 1985, cortesia de J. B. Morrill e C
segundo Lane et al., 1993.)
Blastocele interior
segunda fora resultante dos movimentos das clulas epiteliais adjacentes placa
vegetal, pode facilitar essa invaginao puxando para dentro a camada envergada
(Burke et al., 1991).
Figura 6.10
Estgio de gstrula intermediria do ourio-
do-mar Lytechinus pictus, mostrando exten-
ses de filopdios do mesnquima secund-
rio estendendo-se da ponta do arquntero at
a parede da blastocele. (A) Clulas mesen-
quimatosas estendendo filopdios da ponta
do arquntero. (B) Cabos de filopdios
conectando a parede da blastocele ponta do
arquntero. A tenso nos cabos pode ser ava-
liada pela trao exercida sobre a parede da
blastocele no ponto de fixao. (Fotografias
(A) (B) cortesia de C. Ettensohn.)
218 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Gastrulao em peixes
A transio da blstula intermediria
e a aquisio de motilidade celular
Clula do vitelo
Ncleo do vitelo
Plo vegetal
(B) (C)
ESCUDO (6.0 HS.) Plo animal Ingresso celular
Epiblasto
Hipoblasto
Camada Camada
envolvente envolvente
Somito #1
Ventral Dorsal
Ventral Dorsal
Mesoderma
Ectoderma,
neuroectoderma Coto caudal Regio do
Plo vegetal Mesendoderma: precursores tronco
para mesoderma e endoderma Posterior
fortemente ligada YSL e arrastada junto com ela. As clulas mais profundas do
blastoderma enchem o espao entre a YSL e a EVL enquanto a epibolia se desenvolve.
Isso pode ser demonstrado cortando a ligao entre YSL e EVL. Quando isso feito,
as clulas blastodrmicas retornam ao topo do vitelo enquanto YSL continua sua
expanso ao redor da clula do vitelo (Trinkaus, 1984b, 1992). A expanso de YSL tem
como base uma rede de microtbulos em sua estrutura, e radiao ou drogas que
220 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Figura 6.12
(A) Plo animal
Convergncia e extenso no peixe-zebra. (A) Vista dorsal de movimentos de
Extenso convergncia e extenso durante a gastrulao do peixe-zebra. A epibolia es-
tende o blastoderma sobre o vitelo; a involuo ou o ingresso geram o hipoblasto;
Escudo convergncia e extenso trazem clulas do hipoblasto e epiblasto para o lado
embrionrio dorsal para formar o escudo embrionrio. Dentro do escudo, a intercalao
estende o cordomesoderma em direo ao plo animal. (B,C) Extenso con-
vergente do cordomesoderma mostrada por aquelas clulas exprimindo o
Convergncia
gene no tail (sem cauda), um gene que expresso pelas clulas da notocorda.
(D,E) Extenso convergente de clulas mesodrmicais adaxiais (marcadas pela
Involuo
sua expresso de gene snail para flanquear a notocorda. (de Langeland e
Epibolia Kimmel, 1997.)
Clula do
vitelo
Embrio
Gastrulao de anfbios
O estudo da gastrulao em anfbios ao mesmo tempo uma das mais antigas e uma
das mais novas reas da embriologia experimental; mesmo considerando que gastru-
lao de anfbios foi estudada extensamente no sculo passado, a maior parte de
nossas teorias relacionadas aos mecanismos do movimento no desenvolvimento,
foram revisadas na dcada passada. O estudo da gastrulao em anfbios foi compli-
cado pelo fato de existir mais de um tipo de gastrulao nos anfbios. Espcies diferen-
tes empregam diferentes maneiras para atingir o mesmo objetivo (Smith e Malacinski,
1983; Lundmark, 1986). Nos ltimos anos, a pesquisa mais intensa se concentrou em
Xenopus, portanto, daremos nfase ao seu processo de gastrulao.
Figura 6.15
Movimentos celulares durante a gastrulao da r. As sees so cortadas atravs da
metade do embrio, e so posicionadas de modo que o plo vegetal seja inclinado na
direo do observador e ligeiramente para a esquerda. Os principais movimentos celula-
res esto indicados por flechas, e as clulas superficiais do hemisfrio animal esto
coloridas para permitir o seguimento de sua movimentao. (A,B) Gastrulao precoce.
Clulas de garrafa da margem movem-se para o interior para formar o lbio do blastporo,
e precursores mesodrmicos involuem sob o teto da blastocele. AP marca a posio do
Figura 6.16
plo animal, que ir mudar medida que a gastrulao prossegue. (C,D) Gastrulao
Estrutura do lbio do blastporo. (A) Dia-
intermediria. O arquntero se forma e desloca a blastocele, e as clulas migram dos
grama de clulas de uma seo da gastrula-
lbios lateral e ventral do blastporo para dentro do embrio. As clulas do hemisfrio
o do embrio da salamandra, mostrando a
animal migram em direo da regio vegetal, movendo o blastporo para regio prxima
extenso das clulas-garrafa do blastporo.
do plo vegetal. (E,F) Perto do fim da gastrulao, a blastocele obliterada, o embrio
(B) Viso de superfcie de um lbio dorsal
fica envolvido pelo ectoderma, o endoderma foi internalizado, e as clulas mesodrmicas
precoce do blastporo de Xenopus. A dife-
se posicionaram entre o ectoderma e o endoderma. (Segundo Keller, 1986.)
rena de tamanho entre os blastmeros ani-
mais e vegetais est claramente aparente. (C)
Detalhe da regio onde as clulas do hemis-
frio animal esto involuindo atravs do l-
bio do blastporo. (A segundo Holtfreter,
1943; B e C, micrografias de varredura ele-
(A) (B)
trnica cortesia de C. Phillips.)
(C)
Clulas-
garrafa
Blastporo
224 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Lbio do
blastporo iv v
Figura 6.17
Epibolia do ectoderma. (A) Movimentos morfogenticos de clulas migrando para o interior do
blastporo e em seguida sob a superfcie. (B) Mudanas na regio ao redor do blastporo
quando se formam sucessivamente os lbios dorsal, lateral e ventral. Quando o lbio ventral
completa o crculo, o endoderma torna-se progressivamente internalizado. Nmeros ii-v corres-
pondem s Figuras 6.15B-E, respectivamente. (B de Balinsky, 1975, cortesia de B. I. Balinsky.)
Posicionando o blastporo
Tendo visto os aspectos gerais da gastrulao em anfbios, podemos agora nos ocu-
par de cada passo em detalhe. A gastrulao no existe como um processo indepen-
dente na vida do animal. Na verdade, a preparao para a gastrulao j pode ser
visualizada no preciso momento da fuso vulo-espermatozide. O vulo tem uma
polaridade ao longo do eixo animal-vegetal. O destino geral dessas regies pode ser
previsto antes da fecundao. A superfcie do hemisfrio animal se transformar nas
clulas do ectoderma (pele e nervos), o hemisfrio vegetal formar as clulas do intes-
tino e rgos associados (endoderma), e as clulas mesodrmicas sero formadas a
partir do citoplasma interno, ao redor do equador. Assim, as camadas germinativas
podem ser mapeadas no vulo; porm, isso nada diz sobre qual parte do ovo formar
a frente e qual as costas. Os eixos dorsoventral (dorso-frente), ntero-posterior e
direito-esquerdo ainda no foram determinados.
Os eixos dorsoventral e ntero-posterior so especificados pelo deslocamento
do citoplasma do zigoto durante a fecundao. No Captulo 4 discutimos a rotao
do citoplasma cortical relativo ao citoplasma interno no ovo da r. O citoplasma
interno permanece orientado em relao gravidade devido a sua densa acumula-
o de vitelo, enquanto o citoplasma cortical gira 30o na direo do hemisfrio ani-
mal (para cima) em direo ao ponto de entrada do espermatozide (veja Figura 4.34).
CAPTULO 6 Gastrulao: Reorganizando as clulas embrionrias 225
Essa rotao faz com que o eixo animal-vegetal da superfcie do ovo se desloque 30o Normal Girada
relativo ao eixo animal-vegetal do citoplasma interno. Dessa maneira, um novo esta-
Porcentagem de embries
do de simetria adquirido. Enquanto que o vulo era radialmente simtrico em
relao ao eixo animal-vegetal, o ovo fecundado agora tem um eixo dorsoventral e
bilateralmente simtrico (tem lados direito e esquerdo). O citoplasma interno tam-
bm se move, e microscopia de fluorescncia de embries precoces mostrou que os
padres citoplasmticos das clulas presuntivas dorsais so diferentes daqueles
das clulas presuntivas ventrais (Prancha 7).
Esses movimentos citoplasmticos ativam o citoplasma oposto ao ponto de
entrada do espermatozide, a iniciar a gastrulao (Figura 6.18). O lado pelo qual
entra o espermatozide marca a futura superfcie ventral do embrio; o lado oposto,
onde se inicia a gastrulao, marca o futuro dorso (costas) do embrio (Gerhart et al., ngulo do lbio do blastporo
1981; Vincent et al., 1986). Mesmo que o espermatozide no seja necessrio para do ponto de entrada de espermatozide
induzir esses movimentos no citoplasma do ovo, ele importante na determinao
da direo dessa rotao. Se um ovo artificialmente estimulado anucleado, a rota- Figura 6.18
o cortical ainda se d no tempo correto. Entretanto, a direo desse movimento Relao entre o ponto da entrada do esper-
imprevisvel. (De fato, em ovos disprmicos existe uma nica direo de rotao.) O matozide e o lbio dorsal do blastporo em
espermatozide parece fornecer um sinal espacial que orienta a rotao autnoma ovos de r normais e naqueles que sofreram
do citoplasma, mas a rotao citoplasmtica que essencial para o futuro desen- rotao. Ovos de Xenopus foram fertilizados,
volvimento. Alm disso, se essa rotao cortical bloqueada, no h o desenvolvi- desgeleificados e colocados em Ficoll para de-
sidratar o espao perivitelino. A entrada do
mento dorsal, e o embrio morre como uma massa de clulas ventrais (primariamente
espermatozide foi marcada com corante. Os
intestinais) (Vincent e Gerhart, 1987). A direo do movimento citoplasmtico deter- ovos sofreram rotao, foram inclinados em
mina qual lado ser o dorsal e qual ser o ventral. 900, com o ponto de entrada do espermato-
A direo preferencial fornecida pelo ponto de entrada do espermatozide pode zide virado para cima, 50-80 minutos aps
ser sobrepujada por um redirecionamento mecnico da relao espacial entre os a fertilizao. (Segundo Gerhart et al., 1981.)
citoplasmas cortical e subcortical. Quando se impede a rotao do ovo (por imerso
em um polissacardeo que provoca o colapso do espao perivitelino entre o ovo e o
envoltrio de fertilizao) ele pode sofrer uma rotao de 90o de modo que o eixo
animal-vegetal fique horizontal e no vertical e o ponto de entrada do espermatozi-
de voltado para cima (Gerhart et al., 1981; Kirschner e Gerhart, 1981; Cooke, 1986).
Quando ovos fecundados so inclinados dessa maneira por trinta minutos, partindo
da metade do primeiro ciclo de clivagem, o citoplasma gira de tal maneira que quase
todos os embries iniciam a gastrulao no mesmo lado da entrada do espermatozi-
de (veja Figura 6.18).
A discusso precedente sugere que deve ser possvel ter dois stios de iniciao
de gastrulao se houver a combinao de rotao orientada pelo espermatozide
com uma rotao do ovo artificialmente induzida. Black e Gerhart (1985) permitiram a
rotao inicial orientada pelo espermatozide, mas em seguida imobilizaram os ovos
em gelatina e os centrifugaram levemente, de modo que o citoplasma interno se mo-
vesse para o ponto de entrada do espermatozide. Quando foi permitido que os ovos
centrifugados se desenvolvessem em gua normal, apareceram dois stios de gastru-
lao, levando ao aparecimento de larvas gmeas ligadas (Figura 6.19). A hiptese de
Black e Gerhart (1986) que tal produo de gmeos causada pela formao de duas
reas de interao: um eixo se forma onde a rotao cortical normal deu origem s
interaes citoplasmticas no plo vegetal da clula; o outro eixo se forma onde o
citoplasma dirigido pela centrifugao interage com os componentes do plo vegetal.
Gmeos tambm podem ser produzidos em gravidade normal, colocando o lado do
ovo onde penetra o espermatozide voltado para cima, aps remover o envoltrio de
fertilizao (Gerhart et al., 1981).
A possibilidade de se obter dois lbios funcionais dos blastporos tambm sugere
que no h nada especial a respeito do crescente cinzento, onde se observa pela
primeira vez o incio da gastrulao. Na verdade, os fatores indutores da gastrulao
parecem ser criados pelas interaes dos citoplasmas animal e vegetal, interaes
essas que, provavelmente, ativam algum componente do citoplasma vegetal. Gimlich
e Gerhart (1984) realizaram uma srie de experimentos de transplante que confirmaram
226 PARTE II Padres de Desenvolvimento
(A) (B)
Figura 6.19
Blastporos gmeos produzidos pela rotao
de ovos desgeleificados de Xenopus com o lado
ventral para cima (ponto de entrada do esper-
matozide), no momento da primeira cliva-
gem. (A) Dois blastporos so instrudos para
formar: o original (oposto ao ponto de entrada
do espermatozide) e o novo, criado pelo des-
locamento de material citoplasmtico. (B) Es-
ses ovos desenvolvem dois eixos completos, a hiptese de que os fatores que iniciam a gastrulao originalmente esto no cito-
que formam girinos gmeos, ligados ventral- plasma profundo das clulas vegetativas dorsais, e no no crescente cinzento. Eles
mente. (Cortesia de J. Gerhart.) demonstraram que em um embrio de Xenopus, no estgio de 64 clulas, os trs
blastmeros vegetais mais dorsais so capazes de induzir a formao do lbio dorsal
do blastporo e de um eixo dorsal completo em embries hospedeiros irradiados com
luz ultravioleta (que, de outra maneira, no seriam capazes de iniciar a gastrulao;
Figura 6.20A). Alm disso, esses trs blastmeros, situados abaixo da regio do
prospectivo lbio dorsal, podem tambm induzir uma invaginao secundria e um
eixo quando transplantados para o lado ventral de um embrio normal, no estgio de
64 clulas, no irradiado (Figura 6.20B). Esse pequeno grupo de blastmeros vegetais
permite a invaginao de clulas marginais adjacentes e a formao do eixo mesodr-
mico dorsal do embrio. Holowacz e Elinson (1993) observaram que o citoplasma
cortical, das clulas vegetativas dorsais do embrio de Xenopus, no estgio de 64
clulas, era capaz de induzir a formao de eixos secundrios quando injetado em
clulas vegetativas ventrais. Nem o citoplasma cortical de clulas animais e nem o
citoplasma profundo das clulas ventrais puderam induzir esses eixos.
Parece, ento, que os rearranjos internos do citoplasma, provavelmente orienta-
dos pela entrada do espermatozide, so responsveis pela distribuio assimtrica
de fatores subcelulares. Essa assimetria cria uma distino dorsoventral no ovo que,
em ltima instncia, dirige o posicionamento do blastporo acima de um conjunto de
blastmeros vegetais e oposto ao ponto de entrada do espermatozide. As molculas
que podem estar envolvidas na formao do stio vegetal de iniciao da gastrulao
(o centro de Nieuwkoop) sero discutidas no Captulo 15.
(A) (B)
UV
Sem transplante
Transplante
Figura 6.20
Experimentos de transplante demonstrando
que as clulas vegetativas, abaixo das regies
de recombinao de Holtfreter, nos quais clulas da zona marginal dorsal (que dariam do futuro lbio dorsal do blastporo, so res-
origem ao lbio dorsal do blastporo) foram combinadas com o tecido endodrmico ponsveis pelo incio da gastrulao. (A) Sal-
interno. Quando as clulas da zona marginal dorsal foram removidas e colocadas no vamento de embries irradiados pelo trans-
plante de blastmeros do segmento mais dor-
prospectivo tecido endodrmico interno, as clulas precursoras do blastporo forma-
sal (cor) de um embrio, no estgio de 64 clu-
ram clulas garrafas e se aprofundaram abaixo da superfcie do endoderma interno las, para uma cavidade criada pela remoo de
(Figura 6.21). Mais ainda, ao se aprofundarem, criaram uma depresso reminiscente do um nmero semelhante de clulas vegetais. Um
blastporo precoce. Sendo assim, Holtfreter sugeriu que a habilidade de invaginar zigoto irradiado sem tal transplante no sofre
com profundidade para dentro do endoderma uma propriedade inata das clulas da gastrulao normal. (B) Formao de um novo
zona marginal dorsal. local para gastrulao e eixo corporal pelo trans-
plante das clulas vegetativas, mais dorsais,
de um embrio de 64 clulas, para regio vege-
tal mais ventral, de outro embrio de 64 clu-
las. (Segundo Gimlich e Gerhart, 1984.)
Clulas
Implante endodrmicas Sulco no blastporo
Figura 6.21
Um implante de clulas de anfbios da regio do lbio dorsal do blastporo submerge para
dentro de uma camada de clulas endodrmicas e forma um sulco do blastporo. (Segundo
Holtfreter, 1944.)
228 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Clulas
(A) (B) (C) (D)
marginais
profundas
Endoderma
Intercalao Clulas
radial de clulas garrafa
profundas
Clulas
Futuro marginais
mesoderma superficiais
posterior Clulas- Lbio dorsal
garrafa do blastporo
Morfologia de O lbio se
Futuro Blastporo mudanas das extende lateral
IMZ mesoderma anterior clulas profundas e vegetalmente
profunda
Clulas garrafa
(E) Precursores do (F) Ectoderma Precursores do
mesoderma ceflico do mesoderma ceflico do
endoderma da faringe endoderma da faringe
Figure 6.22
Modelo integrativo dos movimentos celulares durante a gastrulao precoce de Xenopus.
(A) Estrutura da zona marginal involutiva (IMZ) antes da gastrulao. A IMZ profunda
consiste do futuro mesoderma anterior e do futuro mesoderma posterior. (B) Constrio
das clulas garrafa arrasta o futuro mesoderma anterior para cima e gira a IMZ para fora. (C)
Os precursores do mesoderma anterior conduzem o movimento do mesoderma para dentro
da blastocele. (D) Ocorre intercalao radial (interdigitao) das clulas profundas da IMZ.
O mesoderma move-se na direo ao plo animal, arrastando as clulas superficiais e as
clulas garrafa por involuo. (E) medida que continua a gastrulao, as clulas marginais
profundas se achatam, e as clulas previamente superficiais formam a parede do arquntero.
(F) Intercalao como em (D), olhando da superfcie dorsal para baixo em direo do lbio
dorsal do blastporo. Na NIMZ (zona marginal no involutiva) e parte superior da IMZ,
clulas profundas (mesodrmicas) esto se intercalando radialmente, configurando uma fita
estreita de clulas achatadas. Esse estreitamento de vrias camadas em poucas outras causa
extenso na direo lbio do blastporo. Imediatamente acima do lbio, intercalao
medianolateral das clulas produz tenses que arrastam a IMZ por cima do lbio, a interca-
lao medianolateral continua, alongando e estreitando o mesoderma axial. (Segundo Hardin
e Keller, 1988; Wilson e Keller, 1991.)
CAPTULO 6 Gastrulao: Reorganizando as clulas embrionrias 229
Informaes adicionais
& Especulaes
(A)
(B) (C)
(D) (E)
CAPTULO 6 Gastrulao: Reorganizando as clulas embrionrias 231
tina (Figura 6.23A; Boucaut et al., 1984; cele de gstrulas precoces de salamandra reconhea a fibronectina. Alm disso, as
Nakatsuji et al., 1985). O mesoderma e os depositaram em recipientes de plsti- clulas das DMZ no migraram ao acaso,
involutivo parece migrar nessas fibras de co com suas matrizes extracelulares tocan- mas migraram em direo ao plo animal
fibronectina. Isso foi confirmado pela sn- do o plstico (Figura 6.24A). O eixo do da matriz extracelular que havia sido ab-
tese qumica de uma falsa fibronectina blastporo ao plo animal foi marcado e, sorvida no plstico (Figura 6.24B).
que pode competir com a genuna da ma- aps 2 horas, o explante foi removido, dei- Em Xenopus, a extenso convergente
triz extracelular. Clulas se ligam a uma xando sua matriz extracelular. Um explante empurra as clulas migratrias para cima,
certa regio da protena fibronectina que menor da zona marginal dorsal foi removi- em direo ao plo animal. Entretanto, a
contm uma seqncia de trs aminoci- do de outra gstrula precoce e colocado fibronectina parece delinear os limites
dos (Arg-Gly-Asp; RGD). Boucaut e co- sobre a matriz com seu prprio eixo dentro dos quais esses movimentos po-
laboradores injetaram grandes quantida- blastporo-plo animal, perpendicular dem ocorrer. A fibronectina das gstrulas
des de um pequeno peptdio contendo quele da matriz. Seria possvel s clulas de Xenopus no forma grades complexas,
essa seqncia na blastocele de embri- desse explante migrarem na matriz, e se mas se organiza em pequenos aglomera-
es de salamandra, pouco antes do incio migrassem o fariam em uma direo parti- dos fibrilares. Se a fibronectina for sinte-
da gastrulao. Se a fibronectina fosse es- cular? Foi verificado que as clulas mi- tizada mas no organizada nessas fibrilas,
sencial para a migrao celular, ento as graram, e que a migrao podia ser inibida as clulas mesodrmicas dorsais vo ade-
clulas ligadas a esse fragmento solvel por anticorpos que impedem que a clula rir superfcie basal do ectoderma
de peptdio, em lugar da fibronectina real presuntivo, mas no migraro (Winklbau-
ligante de clulas, deveriam parar. Impos- er e Nagel, 1991). As fibrilas de fibronecti-
sibilitadas de encontrar sua estrada, as na so necessrias para que as clulas
clulas mesodrmicas deveriam cessar sua mesodrmicas da cabea se achatem e es-
involuo. Isso precisamente o que tendam largos processos (lameliformes)
ocorreu (Figura 6.23B-E). No foram vis- (A) na direo da migrao (Winklbauer et al.,
tas clulas migratrias ao longo do lado 1991; Winklbauer e Keller, 1996). A impor-
de baixo do ectoderma. Em vez disso, os Plo animal tncia dessas fibrilas de fibronectina
precursores mesodrmicos permaneceram tambm vista em hbridos interespecficos
fora do embrio, formando uma massa ce- que se detm na gastrulao. Delarue e
lular convoluta. Outros pequenos pept- colegas (1985) mostraram que certos h-
dios sintticos (incluindo outros fragmen- bridos inviveis, entre duas espcies de
tos da molcula de fibronectina) no im- sapos, morrem durante a gastrulao por-
pediram a migrao. que no secretam essas fibrilas de fibro-
Considera-se que as clulas mesodr- nectina. Parece ento, que a matriz extra-
micas aderem fibronectina atravs da celular do teto da blastocele, e particular-
v1 protena integrina (Alfandari et al., mente seu componente fibronectina, im-
1995). A migrao mesodrmica pode ser portante na migrao das clulas mesodr-
tambm interrompida pela microinjeo de micas durante a gastrulao em anfbios.
anticorpos contra fibronectina ou contra
a subunidade 1 de integrina que funcio-
na como parte do receptor de fibronecti-
na (DArribre et al., 1988, 1990). Alfandari Figura 6.24
e colegas (1995) mostraram que logo aps A direo da migrao das clulas da zona mar-
a fecundao, a subunidade v da integri- ginal dorsal (DMZ) depende da orientao da
na progressivamente perdida das mem- matriz extracelular do teto da blastocele. (A)
branas das clulas do blastmero. Entre- (B) Explantes do teto da blastocele do blastforo
tanto, pouco antes e durante a gastrula- (BP) para o plo animal (AP) foram disseca-
o, a subunidade v expressa na su- dos de embries de salamandra em estgio pre-
perfcie das clulas mesodrmicas migra- coce de gastrulao e colocados em placas pls-
ticas. A matriz extracelular aderiu placa, e o
trias. Parece ento, que a sntese desse
tecido foi ento removido. Um explante me-
receptor de fibronectina pode sinalizar o
nor de uma gstrula precoce, contendo clulas
tempo para o mesoderma comear e con-
da DMZ, foi ento colocado sobre essa ma-
tinuar a migrao. triz, com o seu prprio eixo perpendicular
A matriz extracelular contendo fibro- aquele da matriz. (B) Clulas da DMZ do
nectina, permite a ligao das clulas AP
explante migraram para o plo animal da ma-
mesodrmicas rede de fibronectina e, triz. A linha pontilhada indica a borda original
alm disso, parece fornecer sinais para a do explante, e a flecha branca representa seu
direo da migrao celular. Shi e cole- eixo blastporo-plo animal. (de Shi et al.,
gas (1989) removeram os tetos da blasto- 1989, fotografia cortesia dos autores.)
232 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Epibolia do ectoderma
Enquanto a involuo est ocorrendo no lbios do blastporo, os precursores
ectodrmicos esto se expandindo sobre todo o embrio. Keller (1980) e Keller e
Schoenwolf (1977) usaram microscopia eletrnica de varredura para observar as mo-
dificaes tanto nas clulas superficiais como nas clulas profundas das regies
animal e marginal. O mecanismo principal de epibolia na gastrulao do Xenopus
parece ser um aumento no nmero de clulas (atravs de diviso), acoplado a uma
concomitante integrao de vrias camadas profundas em uma s (Figura 6.25). Du-
rante a gastrulao precoce, trs rodadas de diviso celular aumentam o nmero de
camadas de clulas profundas no hemisfrio animal. Ao mesmo tempo, completa
integrao de numerosas clulas profundas em uma camada tambm ocorre. A camada
mais superficial se expande por diviso e achatamento celular. O espalhamento de
clulas nas zonas marginais dorsal e ventral, se d provavelmente pelo mesmo meca-
nismo, ainda que mudanas na forma celular parecem ter um papel mais importante do
que no hemisfrio animal. O resultado dessas expanses a epibolia das clulas
superficiais e profundas do plo animal e regies marginais no involutivas sobre a
superfcie do embrio (Keller e Danilchik, 1988). A maior parte das clulas da regio
marginal, como mencionado anteriormente, involuem para se juntar corrente de clu-
las mesodrmicas dentro do embrio.
Gastrulao no Xenopus uma orquestrao de vrios eventos distintos. A primei-
ra indicao de gastrulao envolve a invaginao local das clulas garrafa do
endoderma na zona marginal, em tempo e lugar precisamente definidos. Em seguida, a
involuo das clulas marginais atravs do lbio do blastporo, comea a formao
do arquntero. Essas clulas involutivas, na margem anterior do manto mesodrmico,
migram ao longo da superfcie interna do teto do blastporo, e o prospectivo cordo-
mesoderma atrs delas, se estreita e se alonga posteriormente, por extenso conver-
gente, na poro dorsal do embrio. Ao mesmo tempo, as clulas precursoras ectodr-
micas epibolizam vegetalmente por diviso celular e pela integrao de camadas celu-
lares previamente independentes. O resultado desses movimentos celulares o posi-
cionamento adequado das trs camadas germinativas em preparao para sua diferen-
ciao em rgos do corpo. Estudos moleculares (a serem discutidos no Captulo 15)
esto comeando a nos dar pistas relacionadas a mecanismos pelos quais as clulas
so informadas de como comear e finalizar essas migraes
Estgio
Figura 6.25
Micrografias eletrnicas de varredura do teto da blastocele de Xenopus, mostrando as mudanas
na forma e arranjo das clulas. Os estgios 8 e 9 so de blstula; estgios 10-11.5 representam
gstrulas progressivamente mais avanadas. (de Keller, 1980, cortesias de R. E. Keller.)
CAPTULO 6 Gastrulao: Reorganizando as clulas embrionrias 233
Gastrulao em aves
Generalidades sobre gastrulao em aves
Blastoderma
Anterior Epiblasto
Zona marginal
posterior
rea opaca
Clulas do hipoblasto
delaminando-se do epiblasto
rea pelcida
Figura 6.26
Formao do blastoderma de duas camadas
do embrio da galinha. As primeiras clulas
hipoblsticas delaminam individualmente,
para formar ilhas de clulas sob o epiblasto.
rea opaca rea opaca
Clulas da margem posterior (clulas de foice
de Koller e clulas marginais posteriores) pro-
duzem uma populao de clulas que migra
Epiblasto
Blastocele abaixo do blastodisco e incorpora as ilhas
poli-invaginadas. Essa camada inferior torna-
se o hipoblasto. A camada superior o
epiblasto. medida que o hipoblasto se move
no sentido anterior, clulas do epiblasto se
Clulas do hipoblasto migrando de agregam na regio anterior foice de Koller
clulas profundas da regio posterior para formar a linha primitiva.
234 PARTE II Padres de Desenvolvimento
rea
pelcida
Figura 6.27
Linha primitiva
Movimentos celulares da linha primitiva do
tomando forma
embrio de galinha. (A-E) Viso dorsal da for-
(E) Anterior (F) (K) mao e alongamento da linha primitiva. O blas-
toderma visto em (A) 3-4 horas, (B) 5-6
Ndulo Processo
horas, (C) 7-8 horas, (D) 10-12 horas e (E) 15-
de Hensen ceflico
16 horas. O movimento precoce das clulas
rea epiblsticas HNK-1+ mostrado por flechas.
pelcida (F-H) A formao da notocorda e somitos
mesodrmicos medida que a linha primitiva
rea regride mostrada em (F) 19-22 horas, (G)
opaca Ndulo 23-24 horas e (H) no estgio de quatro somitos.
de Hensen (I-K) Mapas do destino do epiblasto em dois
estgios da gastrulao. Extenso convergente
Sulco primitivo mostrada na linha mediana, e as clulas pre-
Ectoderma da cursoras endodrmicas ingressam mais rapi-
(G) Borda anterior
do mesoderma dobra ceflica (H) damente que as clulas precursoras mesodr-
Dobra ceflica
micas. (Adaptado de vrias fontes, especial-
Intestino mente Spratt, 1946, e Balinsky, 1975; I-K se-
Dobra neural anterior gundo Vakaet, 1985.)
Somito
Notocorda
Ndulo Placa
de Hensen segmental
Linha primitiva
da linha primitiva parece ser coincidente com a migrao em direo anterior dessas
clulas do hipoblasto secundrio.
Ndulo de Hensen
(B) Linha primitiva
Epiblasto
Blastocele
Hipoblasto
Endoderma
Clulas migratrias
(mesnquima)
embrionrias, mas contm os precursores das clulas germinativas, que mais tarde
migram atravs dos vasos sangneos at as gnadas. As prximas clulas que en-
tram na blastocele atravs do ndulo de Hensen (e o primeiro quarto anterior da linha
primitiva) tambm se movem anteriormente, mas no se movem to ventralmente como
as clulas presuntivas endodrmicas do intestino anterior. Essas clulas permanecem
entre o endoderma e o epiblasto para formar as clulas do mesoderma da cabea e do
cordomesoderma (notocorda) (veja Psychoyos e Stern, 1996). Essas clulas de ingres-
so precoce se moveram todas anteriormente, empurrando para cima a regio mediano-
anterior do hipoblasto, a fim de formar o processo ceflico (Figura 6.29). Enquanto
isso, as clulas continuam a migrar para dentro, atravs da poro lateral da linha
primitiva. Quando entram na blastocele, essas clulas se separam em duas correntes.
Uma corrente se move mais profundamente e encontra o hipoblasto em sua regio
mediana, deslocando as clulas hipoblsticas para os lados. Essas clulas de movi-
mento profundo do origem a todos os rgos endodrmicos do embrio, assim como
a maioria das membranas extra-embrionrias (o hipoblasto forma o restante). A segun-
da corrente migratria se espalha atravs da blastocele como uma camada frouxa, mais
ou menos a meio caminho entre o hipoblasto e o epiblasto. Essa camada origina as
pores mesodrmicas do embrio e das membranas extra-embrionrias. Aps 22 ho-
ras de incubao, a maior parte das clulas presuntivas endodrmicas esto no interi-
or do embrio, apesar das clulas presuntivas mesodrmicas continuarem a migrar
para o interior por um tempo mais longo.
CAPTULO 6 Gastrulao: Reorganizando as clulas embrionrias 237
Endoderma Ilhas
farngeo de sangue Dobra
ceflica
Processo ceflico Intestino anterior
(notocorda anterior)
Sulco neural
Ndulo de Somito
Hensen
Linha primitiva
rea
pelcida
Linha primitiva
rea opaca
Alongamento da notocorda
Linha de
referncia
Regr
es
da li s o
p r i m nha
itiva
Borda posterior da rea pelcida
Horas
(D) (E) Figura 6.29
Gastrulao do embrio de galinha de aproxi-
madamente 24 at perto de 28 horas. (A) A
Agora comea uma nova fase da gastrulao. Enquanto continua o ingresso do linha primitiva totalmente estendida (24 ho-
mesoderma, a linha primitiva comea a regredir, movendo o ndulo de Hensen de uma ras). O processo ceflico (notocorda anterior)
posio prxima do centro da rea pelcida, para uma posio mais posterior (veja pode ser visto estendendo-se a partir do n-
Figura 6.29). Ela deixa em seu lugar o eixo dorsal do embrio e o processo ceflico. Ao dulo de Hensen. (B) Estgio de dois somitos
mesmo tempo que o ndulo avana posteriormente, a poro remanescente (posteri- (25 horas). Anteriormente v-se o endoderma
or) da notocorda estabelecida. Finalmente, o ndulo regride para sua posio mais farngeo, enquanto a notocorda anterior em-
posterior, formando a regio anal. Nesse ponto, o epiblasto composto inteiramente purra para cima o processo ceflico que estava
de clulas ectodrmicas presuntivas. embaixo. A linha primitiva est regredindo. (C)
Estgio de quatro somitos (27 horas). (D) Aps
Como uma conseqncia desse processo de gastrulao em duas etapas, os em-
28 horas, a linha primitiva regrediu at a por-
bries de aves (e mamferos) exibem um distinto gradiente de maturidade de desenvol- o caudal do embrio. (E) Regresso da linha
vimento ntero-posterior. Enquanto clulas das pores posteriores do embrio esto primitiva, deixando a notocorda em seu rastro.
gastrulando, clulas da poro anterior j esto comeando a formar rgos. Pelos Vrios pontos da linha foram acompanhados
prximos dias, a ponta anterior estar mais avanada no seu desenvolvimento (pode- aps atingir seu comprimento mximo. O tem-
se dizer que teve uma vantagem inicial) do que a poro posterior. po representa as horas decorridas aps atingir
Enquanto as clulas presuntivas do mesoderma e do endoderma se moviam para o comprimento mximo em aproximadamente
dentro, os precursores ectodrmicos proliferavam para se tornar a nica populao de 18 horas. (Fotografias cortesia de K. Linask; E
clulas remanescente na camada superior. Ainda mais, clulas ectodrmicas migraram segundo Spratt, 1947.)
para fora do blastodisco para envolver o vitelo por epibolia. O enclausuramento do
vitelo (novamente reminiscente da epibolia do ectoderma de anfbios) uma tarefa de
Hrcules, que dura 4 dias para ser completada e envolve a produo contnua de novo
238 PARTE II Padres de Desenvolvimento
(A)
Anterior
Zona marginal
rea
opaca
Epiblasto
Cicatriz
Posterior Linhas primitivas
(B)
(C)
Figura 6.30
Experimentos de Khaner e Eyal-Giladi de-
monstrando que a poro posterior da zona
ACUMULAO CELULAR NA LINHA PRIMITIVA. Evidncias dos estudos de marginal (PMZ) contribui para as clulas
Stern e Canning (1990) sugerem que o epiblasto no um tecido homogneo, no- indutoras da linha primitiva do hipoblasto e
diferenciado, como foi assumido por muito tempo. Pelo contrrio, parece haver dife- impedem outras regies marginais de criarem
renciao nas clulas epiblsticas mesmo antes que a formao da linha primitiva se seus prprios hipoblastos. (Segundo Khaner
inicie. Esses estudos mostram que certas clulas, dispersas ao acaso no epiblasto, e Eyal-Giladi, 1989.)
podem ser distinguidas por uma molcula especfica na superfcie celular (HNK-1,
uma forma sulfatada do cido glucurnico). As clulas expressando HNK-1 ingres-
sam individualmente na blastocele e migram para a regio posterior. provvel que
o tecido marginal posterior secrete uma substncia que atrai as clulas que expres-
sam HNK-1, enquanto o tecido marginal anterior secreta uma molcula repelente
(Jephcott e Stern, citado em Stern, 1991). As clulas expressando HNK-1, que se
juntam na margem posterior, produziro o endoderma e o mesoderma, e nenhuma
clula expressando HNK-1 formar derivados ectodrmicos. Se as clulas HNK-1
so seletivamente destrudas (por anticorpos), enquanto ainda esto no epiblasto,
o embrio no formar mesoderma nem endoderma. Essas clulas HNK-1 positivas
interagem com as clulas do epiblasto acima delas, para formar o rudimento inicial da
linha primitiva. Esse rudimento de linha sofre um processo de extenso convergente
que o estreita e alonga. Quando a linha chega ao seu comprimento quase total, as
240 PARTE II Padres de Desenvolvimento
clulas HNK-1 positivas dissolvem a lmina basal do epiblasto central para formar
uma canal atravs da linha primitiva. Isso permite que clulas do epiblasto (que
nunca expressaram HNK-1) sejam recrutadas para a linha que est se estendendo
anteriomente e, assim, contribuir (junto com as clulas HNK-1 positivas) para os
mesoderma e endoderma embrionrios.
Movimento dentro da blastocele amniota feito por clulas individuais, e no por
uma camada epitelial. Mas, como na gastrulao de anfbios, clulas de aves passan-
do pelo blastporo sofrem uma constrio no seu terminal apical e se tornam clulas
garrafa (Figura 6.28). Na ponta anterior do canal, ndulo de Hensen, a destruio da
lmina basal e a liberao dessas clulas do epiblasto pode ser realizada por uma
protena de 190-kDa chamada fator de espalhamento (Stern et al., 1990). O fator de
espalhamento secretado somente no ndulo de Hensen, e tem sido implicado na
dissociao de clulas nessa regio e na induo do tecido neural a partir do epiblas-
to, na vizinhana do ndulo (Streit et al., 1995). Quando se implantam resinas conten-
do o fator de espalhamento abaixo do epiblasto de embries de galinha, em gastrula-
o precoce, novas regies da linha primitiva podem ser induzidas. O fator de
espalhamento se liga a receptores tirosina quinase em clulas adjacentes, e agindo
atravs da cascata da protena G, fosforila as -cateninas que ancoram as E-caderinas
membrana celular (Hartmann et al., 1994). Na ausncia de E-caderina funcional, a
lmina epitelial se desmonta naquela regio e as clulas se tornam mesnquima. As
clulas, uma vez liberadas da linha primitiva, entram na blastocele, so achatadas e
passam a fazer parte de uma corrente de clulas migratrias independentes.
Polissacardeos extracelulares podem tambm ter um papel importante nessa migra-
o. Um desses complexos polissacardeos o cido hialurnico, um polmero linear
de cido glucurnico e N-acetilglicosamina (veja Figura 3.35). Esse composto produ-
zido pelas clulas ectodrmicas e se acumula na blastocele, onde reveste a superfcie
das clulas que esto chegando. Fisher e Solursh (1977) mostraram que quando esse
material digerido (injetando a enzima hialuronidase na blastocele), as clulas mesen-
quimatosas se aglomeram e no conseguem migrar adequadamente. Muito estudos
tm mostrado que o cido hialurnico importante para manter as clulas mesenqui-
matosas migratrias separadas umas das outras. Alm disso, o cido hialurnico co-
mea a se acumular precisamente no momento em que as primeiras clulas entram na
blastocele. O cido hialurnico capaz de manter as clulas separadas, provavelmen-
te devido a sua capacidade de se expandir em gua. Em ambiente aquoso, esse polmero
pode expandir em at 1000 vezes o seu volume original. Portanto, o cido hialurnico
pode ser um fator importante para manter as clulas mesenquimatosas dispersas du-
rante sua migrao, assegurando que a migrao continue.
cido hialurnico e outros polissacardeos facilitam a migrao de clulas indivi-
duais (veja Captulo 3), mas no parecem dirigir o movimento dessas clulas (Fisher e
Solursh, 1979). Na verdade, o movimento dessas clulas est ligado, mais uma vez,
presena de uma rede de fibronectina na lmina basal extracelular das clulas do
epiblasto. Essa camada rica em fibronectina aparece na superfcie inferior das clulas
da camada de cima, pouco antes da formao da linha primitiva e desaparece na regio
da linha. Dentro da linha, as clulas se separam e migram lateralmente ao longo da
membrana basal do epiblasto, rica em fibronectina (Duband e Thiery, 1982). No existe
evidncia clara de que essa fibronectina essencial para o direcionamento do movi-
mento celular que afasta as clulas lateralmente da linha primitiva.
Schoenwolf (1991) comentou: A despeito de tudo que foi escrito, certo dizer que o
que sabemos sobre gastrulao e neurulao em aves consideravelmente menos do
que ainda resta conhecer.
Gastrulao em mamferos
Aves e mamferos so descendentes de espcies de rpteis. Portanto, no sur-
preendente que o desenvolvimento de mamferos se d paralelamente ao dos rp-
teis e aves. O que surpreendente que os movimentos de gastrulao de embri-
es de rpteis e aves, que evoluram como uma adaptao a ovos com vitelo, so
mantidos mesmo na ausncia de grandes quantidades de vitelo no embrio mam-
fero. A massa celular interna nos mamferos pode ser visualizada como assentada
sobre uma bola imaginria de vitelo, seguindo instrues que parecem mais apro-
priadas a seus ancestrais.
TECIDOS
EMBRIONRIOS
Ectoderma
embrionrio
Epiblasto Mesoderma
embrionrio embrionrio
TECIDOS
EXTRA-EMBRIONRIOS
Trofoblasto Citrofoblasto Sinciciotrofoblasto
Figura 6.32
Diagrama esquemtico mostrando a derivao de tecidos de embries humanos e do macaco
rhesus. (Segundo Luckett, 1978, e Bianchi et al., 1993.)
CAPTULO 6 Gastrulao: Reorganizando as clulas embrionrias 243
Capilar maternal
Epitlio uterino
(endomtrio) Sinciciotrofoblasto
proliferando no
tecido uterino
Massa celular interna
Blastocele
Trofoblasto
Epiblasto
Cavidade
amnitica
Lacunas
trofoblsticas
(suprimento de
sangue materno)
Hipoblasto Endoderma
16 dias
Saco
vitelnico
Mesoderma Endoderma
Mesoderma
extra-embrionrio
vez completado o revestimento do mnio, ele se enche com uma secreo chamada
fluido amnitico, que serve como absorvente de choques para o embrio em desen-
volvimento, enquanto impede a sua dessecao.
O epiblasto embrionrio parece conter todas as clulas que vo dar origem ao
prprio embrio e , de muitas maneiras, semelhante ao epiblasto de ave. Kirstie Lawson
e seus colegas (1991) marcaram clulas individuais do epiblasto com peroxidase de
rabanete (horseradish) o que lhes permitiu construir um detalhado mapa de destino do
epiblasto de camundongo (Figura 6.35). Como as clulas do epiblasto de galinha, o
mesoderma e o endoderma de mamfero migram atravs da linha primitiva. Enquanto
penetram a linha, as clulas do epiblasto deixam de expressar E-caderina, que mantm
as clulas unidas, e elas migram como clulas individuais (Burdsal et al., 1993). As
clulas migrando atravs do ndulo de Hensen do origem notocorda. Na formao
da notocorda do camundongo, as clulas devem se integrar no endoderma do intesti-
no primitivo, portanto, de maneira diferente da formao da notocorda da galinha
(Jurand, 1974; Sulik et al., 1994). Essas clulas podem ser vistas como uma banda de
clulas pequenas e ciliadas se estendendo para cima do ndulo de Hensen (Figura
6.36). Elas formam a notocorda convergindo mediamente e se dobrando em uma dire-
o dorsal com afastamento do teto do intestino.
CAPTULO 6 Gastrulao: Reorganizando as clulas embrionrias 245
Tubo neural
presuntivo
Mesnquima
Endoderma
Notocorda
presuntiva
Figura 6.36
Formao da notocorda no camundongo. (A)
A superfcie ventral do embrio de 7.5 dias
vista pelo microscpio eletrnico de varredu-
Tubo neural ra. As clulas presuntivas da notocorda so
pequenas clulas ciliadas na linha mediana,
flanqueadas pelas clulas endodrmicas maio-
Notocorda res do intestino primitivo. (B) Formao da
notocorda pela dobra dorsal das pequenas c-
lulas ciliadas. (de Sulik et al., 1994, cortesia de
(A) (B) K. Sulik e G. C. Schoewolf.)
246 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Figura 6.37
Embrio humano e placenta aps 40 dias de gestao. O embrio est deitado
dentro do mnio, e seus vasos sangneos podem ser vistos estendendo-se para
dentro das vilosidades corinicas. A esfera direita do embrio o saco vitelnico.
(Instituto Carnegie de Washington, cortesia de C. F. Reather.)
CAPTULO 6 Gastrulao: Reorganizando as clulas embrionrias 247
Artrias umbilicais
Veia umbilical
mnio
Vilosidades
corinicas
Clulas trofoblsticas
Endomtrio Endomtrio
Espao entre
Casca
vilosidades
citotrofoblstica
Sinciciotrofoblasto
Sinciciotrofoblasto
Citotrofoblasto
Espao entre
Mesoderma extra- vilosidades
embrionrio Citotrofoblasto
Capilares das
vilosidades
LITERATURA CITADA
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254 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Figura 7.1
Ilustrao das leis de von Baer. Embries pre-
coces de vertebrados mostram aspectos co-
I
muns ao subfilo inteiro. Com o progresso do
desenvolvimento, os embries se tornam re-
conhecveis como membros de sua classe, sua
ordem, sua famlia e, finalmente, sua espcie.
(de acordo com Romanes, 1901).
II
III
Von Baer tambm reconheceu que existe um modelo comum para todo o desenvol-
vimento de vertebrados: as trs camadas germinativas originam diferentes rgos, e
essa derivao dos rgos constante se o organismo um peixe, uma r ou uma
galinha. O ectoderma forma a pele e os nervos; o endoderma forma os sistemas respi-
ratrios e digestivos; e o mesoderma forma o tecido conjuntivo, as clulas do sangue,
o corao, o sistema urogenital e partes da maioria dos rgos internos. Neste captu-
lo acompanharemos o desenvolvimento precoce do ectoderma; este, e o captulo
seguinte enfocam a formao do sistema nervoso nos vertebrados. O Captulo 9 acom-
panhar o desenvolvimento precoce dos rgos endodrmicos e mesodrmicos.
(B)
Figura 7.3 diagrama da Figura 7.2. Durante a neurulao primria, o ectoderma original dividido
Quatro vistas da neurulao em um embrio em trs conjuntos de clulas: (1) o tubo neural posicionado internamente, que formar
de anfbio, mostrando em cada caso nurulas o crebro e a medula espinhal, (2) a epiderme da pele posicionada externamente, e (3)
precoce (esquerda), mdia (centro) e tardia
as clulas da crista neural, as quais migram da regio de conexo entre o tubo neural e
(direita). (A) Seo transversal no centro do
embrio. (B) A mesma seqncia olhando a
a epiderme, e iro gerar os neurnios perifricos e a glia, as clulas pigmentadas da
superfcie dorsal do embrio inteiro, de cima pele e vrios outros tipos de clulas. O fenmeno de induo embrionria, que inicia a
para baixo. (C) Seo sagital pelo plano medi- neurulao na regio dorsal do embrio, ser detalhada no Captulo 15. Neste captulo
ano do embrio. (D) Simulao computadori- estamos considerando a resposta dos variados tecidos ectodrmicos.
zada em trs dimenses da constrio, exten-
so e levantamento da placa neural. (A-C de
acordo com Balinsky, 1975; D de acordo com
Jacobson e Gordon, 1976.)
Notocorda Notocorda
Tubo neural
Placa neural Placa neural
Prega neural Prega neural
Prega neural
Epiderme Blastporo
Blastporo
(B)
SEO
SAGITAL Cavidade do Cavidade do
Arquntero intestino intestino
Mesoderma Mesoderma
Mesoderma Epiderme
Resto da Endoderma Epiderme Endoderma
blastocele Endoderma Divertculo
do fgado
Tubo neural
Placa neural Prega neural Placa neural Prega neural
Pregas
neurais
(C) fundidas
VISTA DA
SUPERFCIE
DORSAL
Blastporo Blastporo
(D)
SIMULAO
COMPUTADORIZADA
DA DEFORMAO
DA LMINA DE
ECTODERMA (LINHA C)
CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma 257
(A) Formao das pregas neurais (B) Elevao das pregas neurais (C)
Epiderme
presuntiva Notocorda
Placa neural
presuntiva Formao
de cunha
Zona de
transio Formao
de sulco
Placa neural
Epiderme Ancoragem
Notocorda
Figura 7.4
Representao esquemtica do dobramento do
epitlio durante a neurulao na galinha. (A)
Formao das pregas neurais ocorre quando as
O processo de neurulao primria em embries de r est descrito na Figura 7.3 e clulas epidrmicas presuntivas se movem para
parece ser similar em anfbios, rpteis, aves e mamferos (Galera, 1971). A primeira dentro, na direo da linha mdia do embrio.
indicao que uma regio do ectoderma est destinada a se tornar tecido neural uma Essa epiderme presuntiva empurra a placa
mudana na forma celular (Figura 7.4). As clulas ectodrmicas da linha mdia tornam- neural abaixo dela, enquanto se move. (B) En-
se alongadas, enquanto as clulas destinadas a formar a epiderme se tornam mais quanto as clulas da linha mdia da placa neural
(clulas da placa do assoalho) so ancoradas
achatadas. O alongamento das clulas ectodrmicas dorsais causa a elevao dessas
notocorda, as pregas neurais so elevadas. Es-
regies neurais presuntivas acima do ectoderma circundante, criando assim, a placa ses movimentos parecem continuar enquanto
neural. At 50% do ectoderma est includo nessa placa. Logo aps, as bordas da a epiderme, se movendo para o meio, puxa
placa neural se engrossam e se movem para cima formando as pregas neurais, en- com ela a placa neural, resultando na justapo-
quanto um sulco neural, em forma de -U- aparece no centro da placa, dividindo os sio das pregas neurais. (C) Nas trs regies
futuros lados direito e esquerdo do embrio (veja Figuras 7.3 e 7.4). As pregas neurais de articulao (no ponto de articulao media-
migram em direo linha mdia do embrio, finalmente se fundindo para formar o no MHP e nos dois pontos de articulao
tubo neural abaixo do ectoderma sobreposto. As clulas da poro mais dorsal do dorsolateral a -DLHP), as clulas da placa
tubo neural se tornam as clulas da crista neural. neural mudam seu comprimento e sofrem uma
constrio nos seus pices. (De acordo com
Moury e Schoenwolf, 1995.)
A mecnica da neurulao primria
A neurulao ocorre com algumas variaes em diferentes regies do corpo. A cabea,
o tronco e a cauda formam, cada um, sua regio do tubo neural de maneira a refletir a
relao da notocorda com o ectoderma que a ela se sobrepe. Tanto as regies da
cabea como as do tronco, sofrem variantes da neurulao primria, e esse processo
pode ser dividido em cinco estgios distintos, mas espacialmente e temporalmente se
superpondo estgios (Schoenwolf, 1991a; Catala et al., 1996): (1) a formao da placa
neural, (2) a formao do assoalho da placa neural, (3) a modelagem da placa neural, (4)
o dobramento da placa neural para formar o sulco neural, e (5) o fechamento do sulco
neural para formar o tubo neural.
as clulas se movem em direo ao centro (ou seja, em direo rea onde estava a
placa neural). Se a placa neural isolada, suas clulas convergem e se estendem para
formar uma placa mais delgada, mas no se fundem para formar um tubo neural. Esses
movimentos da placa neural e da epiderme originam as pregas neurais. Inicialmente, o
ectoderma torcido e logo a epiderme presuntiva comea a recobrir a placa neural.
(Realmente, se a regio de transio contendo os dois tecidos isolada, ela formar
pequenas pregas neurais em cultura). Esses movimentos coordenados finalmente
causaro a elevao e o dobramento do tubo neural (veja Figura 7.4; Jacobson e
Moury, 1995; Moury e Schoenwolf, 1995).
(A)
Figura 7.5
Uma quimera galinha-codorna. (A) Duas quimeras galinha-codorna
e uma galinha controle 4 dias aps a ecloso. Nas quimeras, o tubo
neural dorsal anterior da codorna substituiu uma regio equivalente
da galinha no embrio de 12-somitos. Melancitos de codorna,
originrios da crista neural, migram para as penas da cabea, ao
nvel do enxerto. (B) Uma regio do embrio contendo tanto clulas
de codorna (com sua cromatina altamente condensada) como clu-
las de galinha (com sua cromatina mais difusa). (de Le Douarin et
al., 1996; fotografias, cortesia de N. M. Le Douarin.)
(B)
Clula de
galinha
Clula
de codorna
CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma 259
Tubo
neural
Somito
Ndulo
de
Hensen
Codorna Galinha
Placa neural
Poo do ndulo de
Hensen
Articulao cordoneural
Figura 7.7
O ndulo de Hensen contribui tanto para a notocorda como para a placa do assoalho neural.
Seo atravs do ndulo de Hensen no estgio do somito-6, mostrando que esse contribui
para a camada superior das clulas embrionrias. (de Catala et al., 1996; fotografia, cortesia
de N. M. Le Douarin.)
originando uma articulao em forma de sulco na linha mdia dorsal. Essas clulas so
induzidas pela notocorda a diminuir sua altura e adquirir a forma de cunha (van Straaten
et al., 1988; Smith e Schoenwolf, 1989). As clulas laterais MHP no sofrem essas
mudanas (Figuras 7.4 e 7.8). Logo aps, duas outras regies de articulaes formam
sulcos prximos conexo da placa neural ao restante do ectoderma. Essas regies
so chamadas pontos de articulao dorsolateral (DLHPs), e esto ancoradas ao
ectoderma da superfcie da prega neural. Essas clulas aumentam sua altura e adqui-
rem a forma de cunha. Essa transformao (modelagem como cunha) est intimamente
ligada s modificaes da forma celular. Nos pontos de articulao dorsolateral, tanto
microtbulos como microfilamentos esto envolvidos nessas transformaes. A
colchicina, um inibidor de polimerizao de microtbulos, inibe o alongamento dessas
clulas, enquanto citocalasina B, um inibidor da formao de microfilamentos, impede
a constrio apical dessas clulas impedindo, assim, a formao de cunha (Burnside,
1971, 1973; Karfunkel, 1972; Nagele e Lee, 1980, 1987). Depois da formao inicial de
sulcos, a placa neural se dobra ao redor dessas regies com articulaes. Cada uma
delas age como um eixo que dirige a rotao das clulas ao seu redor (Smith e
Schoenwolf, 1991).
Enquanto isso, foras extrnsecas tambm esto em ao. O ectoderma superfcial
do embrio de galinha empurra na direo central do embrio, fornecendo mais uma
fora motora para o dobramento da placa neural (veja Figura 7.4 B,C; Alvarez e
Schoenwolf, 1992). Esse movimento da epiderme presuntiva e a ancoragem da placa
neural ao mesoderma subjacente deve ser tambm importante para assegurar que o
tubo neural se dobre para dentro do embrio e no para fora. Se pequenos pedaos da
placa neural so isolados do resto do embrio (incluindo o mesoderma) eles tendem a
se enrolar para fora (Schoenwolf, 1991a).
(A)
(B)
(C)
Figura 7.8
Micrografia eletrnica de varredura da formao do tubo neural no embrio de galinha. (A) Sulco
neural rodeado por clulas mesenquimatosas. (B) Clulas neuroepiteliais alongadas formam um
tubo, enquanto as clulas epidrmicas achatadas so trazidas linha mdia do embrio. As
clulas MHP formam uma articulao no fundo do tubo, enquanto as clulas da placa neural,
ligadas rea basal do ectoderma da superfcie formam as regies de articulaes dorsolaterais.
Essas trs articulaes podem ser vistas como sulcos. (C) A formao do tubo neural comple-
tada. As clulas que eram a placa neural esto agora dentro do embrio. A epiderme presuntiva
se localiza acima do tubo, e o tubo neural ladeado pelos somitos mesodrmicos e no fundo
limitado pela notocorda. (Fotografias, cortesia de K. W. Tosney.)
Ilhota Mesoderma
sagnea
Sulco
Linha primitivo
primitiva
Margem
primitiva
Posterior
Borda
cortada do Sulco
mnio neural Neurporo
posterior
22 dias 23 dias Normal Anencefalia Espinha bfida
Figura 7.10
Neurulao em embries humanos. (A) Sees dorsal e transversal de um embrio humano de 22
dias, iniciando a neurulao. Ambos neurporos, anterior e posterior, esto abertos ao lquido
amnitico. (B) Vista dorsal de um embrio humano em neurulao, um dia depois. A regio do
neurporo anterior est se fechando, enquanto o neurporo posterior permanece aberto. (C)
Regies de fechamento do tubo neural postulado por evidncia gentica (superimposta ao corpo
do recm-nascido). (D) Anencefalia devido a falta de fuso da placa neural na regio 2. (E)
Espinha bfida devida a falta de fuso na regio 5 (ou pela falta de fechamento do neurporo mais
posterior). (C-E de acordo com Van Allen et al., 1993.)
tubo neural anterior resulta em uma condio letal, anencefalia. Aqui, o crebro
anterior permanece em contato com o lquido amnitico e em seguida degenera. O
desenvolvimento do crebro anterior fetal cessa, e a abboda do crnio no se
forma. Essas anormalidades no so raras em humanos, pois esto presentes em
aproximadamente um em cada quinhentos nascimentos viveis. Defeitos de fecha-
mento do tubo neural podem freqentemente ser identificados durante a gravidez
por vrios testes fsicos e qumicos.
O fechamento do tubo neural humano envolve uma complexa interao entre fato-
res genticos e ambientais. Certos genes, Pax3, sonic hedgehog e openbrain, so
essenciais para a formao do tubo neural de mamferos, mas fatores da dieta como
colesterol e cido flico parecem ser crticos.* Foi estimado que aproximadamente
50% dos defeitos do tubo neural poderiam ser evitados se as mulheres grvidas
tomassem suplementos de cido flico (vitamina B12), e o Servio de Sade Pblica
dos Estados Unidos da Amrica recomendam que todas as mulheres em idade frtil
tomem 0.4mg dirios de folato para reduzir o risco de defeitos do tubo neural durante
a gravidez (Milunsky et al., 1989; Czeizel e Dudas, 1992; CDC, 1992). [ecto1.html]
O tubo neural finalmente forma um cilindro fechado que se separa do ectoderma da
superfcie. Considera-se que essa separao mediada pela expresso de diferentes
molculas de adeso celular. As clulas que se tornaro o tubo neural, originalmente
expressam E-caderina, mas elas param de expressar essa protena ao se formar o tubo
e, em vez disso, sintetizam N-caderina e N-CAM (veja Figura 3.17). Como resultado,
os dois tecidos no aderem mais um ao outro. Se o ectoderma da superfcie passar a
expressar N-caderina (injetando mRNA de N-caderina em uma das clulas do embrio
de Xenopus de duas cabeas), a separao do tubo neural da epiderme presuntiva
dramaticamente impedida (Detrick et al., 1990; Fujimori et al., 1990).
*Colesterol parece ser necessrio para a autoclivagem da protena Sonic hedgehog. Mutaes da
Sonic hedgehog podem impedir o fechamento do tubo neural em camundongos e no homem (Chiang
et al., 1996; Roessler et al., 1996); a poro ativa da Sonic hedgehog sua regio N-terminal. Essa
regio clivada da molcula precursora em uma reao que requer colesterol como um cofator
(Porter et al., 1996). No homem, certas sndromes envolvendo falhas no fechamento do tubo
neural foram relacionadas s mutaes na sntese de colesterol (Kelley et al., 1996).
264 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Informaes adicionais
& Especulaes
Neurnios
motores
Induo de neurnios
motores ventrolaterais
Placa do assoalho ventral
Neurulao secundria
A neurulao secundria envolve a formao do cordo medular e seu subseqente
esvaziamento interno formando o tubo neural. Na r e na galinha, esse tipo de neuru-
lao geralmente identificado na formao das vrtebras lombar e da cauda. Em
ambos os casos, a neurulao secundria pode ser vista como continuao da gastru-
lao. Entretanto, as clulas do lbio dorsal do blastporo continuam a crescer
CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma 265
Parede
posterior
Ectoderma Lbio dorsal tardio
(A) (B) (articulao cordoneural) (C)
nus Canal neurentrico
Figura 7.12
Movimentos celulares durante a neurulao secundria em Xenopus. (A) Involuo da mesoder-
ma no estgio de gstrula mdia.(B) Movimentos do lbio dorsal do blastporo nos estgios de
gstrula tardia/ gstrula precoce. A involuo cessou e ambos, o ectoderma e o mesoderma do
lbio tardio do blastporo se movem posteriormente. (C) Estgio de girino precoce, onde as
clulas revestindo o blastporo formam o canal neurentrico, parte do qual se torna o lmen do
tubo neural secundrio. (de Gont et al., 1993.)
O tubo neural precoce de mamferos uma estrutura reta. Entretanto, mesmo antes
(B) que a poro posterior do tubo se forme, a poro mais anterior est sofrendo mudan-
as drsticas. Nessa regio anterior, o tubo neural se expande em trs vesculas prim-
rias (Figura 7.14): crebro anterior (prosencfalo), crebro mdio (mesencfalo) e cre-
bro posterior (rombencfalo). Quando se fecha a ponta posterior do tubo neural,
dilataes secundrias -as vesculas pticas- se estendem lateralmente de cada lado
do crebro anterior em desenvolvimento.
O crebro anterior se subdivide no telencfalo anterior e o diencfalo mais cau-
dal. O telencfalo formar os hemisfrios cerebrais, e o diencfalo formar o tlamo
e o hipotlamo e tambm a regio que recebe os impulsos neurais da retina. Na
(C) verdade, a prpria retina uma derivao do diencfalo. O mesencfalo no se
subdivide e seu lmen se tornar o aqueduto cerebral. O rombencfalo se subdividi-
r em um mielencfalo posterior e um metencfalo mais anterior. O mielencfalo vai
dar origem medula oblongata (Bulbo), cujos neurnios do origem aos nervos que
regulam os movimentos respiratrios, gastrointestinais e cardiovasculares. O
metencfalo d origem ao cerebelo, a parte do crebro responsvel pela coordena-
Notocorda o dos movimentos, postura e equilbrio. O crebro posterior (rombencfalo) de-
senvolve um modelo segmentado que especifica os lugares de onde se originam
certos nervos. Alargamentos peridicos chamados rombmeros dividem o
(D)
Figura 7.14
Desenvolvimento precoce do crebro humano. As trs vesculas cerebrais primrias so subdi-
vididas enquanto o desenvolvimento continua. A direita esto os derivados em adultos, forma-
dos pelas paredes e cavidades do crebro. (De acordo com Moore e Persaud, 1993.)
Derivados Adultos
Figura 7.16
Ocluso do tubo neural para permitir a expan-
so da futura regio do crebro. (A) Corante
injetado na poro anterior do tubo neural de
galinha de 3 dias, enche a regio do crebro
mas no passa para a regio espinhal. (B,C)
Seo do tubo neural da galinha na base do
crebro (B) antes da ocluso e (C) durante a
ocluso. (D) A reabertura da ocluso, aps au-
mento inicial do crebro, permite a passagem
do corante da regio do crebro para a da me-
dula espinhal. (Cortesia de M. Desmond.)
268 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Informaes adicionais
& Especulaes
Determinando as regies
do crebro anterior e crebro mdio
A
identidade ntero-posterior de pode ser crtica na modelagem da regio Prosencfalo Mesencfalo
cada vescula do crebro de ma- do crebro anterior. Essa interface Mes/Met
mferos especificada durante a corresponde a uma zona limitans e tam- limite
gastrulao pelo mesoderma precordal e bm a fonte de Sonic hedgehog, uma pro-
pela notocorda. Essa especificao pare- tena difusvel considerada indutora de
ce ser estabilizada no estgio de placa modelagem durante a gastrulao e for-
neural, por interaes a nvel do ectoder- mao de membros (Figura 7.18; Rubens-
Meten-
ma. Somente as molculas principais en- tein e Puelles, 1994).
cfalo
volvidas na especificao dos crebros Uma das regies crticas para o de-
anterior e mdio sero aqui discutidas; os senvolvimento do crebro mdio a bor-
detalhes da especificao do crebro pos- da entre o metencfalo/mesencfalo que Rombencfalo
terior e da medula espinhal pelo gene Hox normalmente dar origem aos tecidos do
sero discutidos no Captulo 16. istmo. Aqui no se verifica uma fronteira
As regies dos crebros anterior e morfolgica, mas ela marcada pela por-
mdio so definidas pelo mesoderma o mais posterior, onde se expressa o
subjacente e pela notocorda anterior. Os gene Otx2. Quando tecido da juno Medula espinhal
genes Lim1 e Otx2 so expressos por mesencfalo mdio e anterior transplan-
esses tecidos mesodrmicos anteriores. tado ao diencfalo ou rombencfalo, ele En (Engrailed) Fgf8 (Fator de
Se um deles no est presente, o embrio induz as clulas que o rodeiam a desen- Wnt1 crescimento do fibroblasto)
no forma o crebro anterior ou o mdio. volver destinos mesenceflicos (no shh (Sonic
Na parte caudal, em relao ao romb- diencfalo) ou cerebelares (no rombenc- hedgehog)
mero 2, os embries parecem normais (Fi- falo) (Figura 7.19A; Bally-Cuif e Wassef, Figura 7.18
gura 7.17; Acampora et al., 1995; Shawlot Estrutura neuromrica do crebro com super-
e Behringer, 1995). posio dos hipotticos eventos indutivos. A
Rubenstein e Puelles (1994) propu- rea limite mesencfalo/metencfalo positi-
seram que o crebro anterior composto va para a expresso dos genes Fgf8 e Wnt1. A
por seis regies neuromricas chamadas borda p2/p3 considerada a fonte da protena
prosmeros. Os prosmeros p1-p3 cor- Sonic hedgehog. (de acordo com Bally-Cuif e
respondem ao diencfalo e os prosme- Wassef, 1995.)
ros p4-p6 ao hipotlamo (ventralmente)
e ao telencfalo (dorsalmente). Os limi-
tes prosomricos coincidem com os limi-
tes de expresso de vrios genes que so
considerados importantes na especifica-
o neural. Eles tambm so considera- 1994; Marin e Puelles, 1994). Se a juno
dos como limitantes de respostas a cer- for girada pode se dar uma triplicao,
tos estmulos externos. A interface p2/p3 pois tecidos em ambos os lados do enxer-
to so induzidos (Figura 7.19B).
Essa regio indutora mes/met parece
ser controlada pelo fator de crescimento
Figura 7.17
de fibroblasto 8 (FGF8). Crossley e cole-
Fentipo sem cabea de camundongo defici-
ente em Lim1. Dois camundongos com
gas (1996) verificaram que esse tecido for-
knockout de Lim1 esto na parte de baixo mador de istmo secreta FGF8. Mais ainda,
da figura; um filhote do tipo selvagem est na quando transplantaram partculas conten-
parte de cima. A maioria dos mutantes Lim1 do FGF8 para o diencfalo ou o romben-
morrem antes do nascimento. As pinas do ou- cfalo, eles obtiveram duplicadas as mes-
vido (flechas) so as estruturas mais anterio- mas estruturas do crebro mdio. Partcu-
res nesses mutantes. (de Shawlot e Behringer, las controle embebidas em salina no
1995; cortesia dos autores.) mostraram essa duplicao. As partculas
CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma 269
com FGF8 tambm induziram a expresso deficientes em Wnt1 no possuem a re- Figura 7.19
de trs genes nos tecidos circundantes - gio do crebro mdio e nem o cerebelo A regio da juno mesencfalo/metencfalo
(mes/met) pode agir como um indutor do
Wnt1, Engrailed-2 e o prprio Fgf8. Es- (McMahon e Bradley, 1990; Thomas e
desenvolvimento do crebro mdio e da ex-
ses trs genes so normalmente expres- Cappecchi, 1990). Wnt1 parece manter a presso engrailed quando rodada ou trans-
sos na regio do istmo. Wnt1 e Engrailed expresso do gene Engrailed nas clulas plantada a outras regies do crebro. (A) O
so considerados importantes na forma- precursoras cerebelares, permitindo a sua transplante da juno mes/met induz a expres-
o do cerebelo. Mesmo que o cerebelo proliferao (Dickinson et al., 1994; so do gene engrailed e das estruturas do cre-
no expresse genes Wnt1, camundongos Danielian e McMahon, 1996). [ecto3.html] bro mdio e cerebelo em posies ectpicas.
(B) Rotao da juno mes/met causa tripli-
cao de certas estruturas, como o tectum
ptico. Abreviaes: gt, griseum tectale; TS,
torus semicircularis: P1, segmento pre-tectal;
(A) P2, segmento talmico dorsal; cb, cerebelo; ot,
Mesencfalo Crebro mdio e cerebelo tectum ptico; ist, istmo; III, terceiro nervo
Tectum
cranial ou oculomotor; IV, quarto nervo cranial
Diencfalo Mes/Met ou troclear. A polaridade postulada repre-
limite sentada por flechas. (B de acordo com Ru-
benstein e Puelles, 1994.)
Regio expressando En
Telencfalo Metencfalo
(B)
Pea
invertida
Diencfalo
Mesencfalo
ist/cb
istmo/
cerebelo Induo Duplicao e polarizao
da estrutura relativa ao tecido cerebelar
mesenceflica En mais prximo
Rombencfalo
Mesencfalo Mesencfalo
Diencfalo
Diencfalo
Eixo longo
Rombencfalo Rombencfalo
270 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Os neurnios do crtex cerebral esto organizados em camadas, cada uma tendo dife-
rentes funes e conexes. O tubo neural original composto de um neuroepitlio
embrionrio, formado por uma nica camada de clulas. Essa populao de clulas
divide-se rapidamente. Sauer (1935) e outros mostraram que essas clulas esto presen-
tes na parede do tubo neural continuamente, da borda luminal at a borda externa, mas
como seus ncleos esto em diferentes alturas, tem-se a impresso que a parede do tubo
neural composta por diversas camadas de clulas. A sntese de DNA (fase S) ocorre
quando o ncleo est na borda externa do tubo, e o ncleo migra luminalmente enquanto
a mitose continua (Figura 7.20). A mitose ocorre no lado luminal da camada celular.
Durante o desenvolvimento precoce de mamferos, 100% das clulas do tubo neural
incorporam timidina radioativa ao DNA (Fujita, 1964). Logo em seguida, certas clulas
no mais incorporam esses precursores de DNA, indicando que no esto mais partici-
pando da sntese de DNA e da mitose. Essas clulas neurnicas e da glia podem, agora,
se diferenciar na periferia do tubo neural (Fujita, 1966; Jacobson, 1968).
Se clulas em diviso so marcadas com timidina radioativa em um nico estgio
de seu desenvolvimento e seus descendentes so identificados no crtex externo
do crebro adulto, isso significa que os neurnios tiveram que migrar para sua
posio cortical a partir do neuroepitlio embrionrio. Isso acontece quando a clu-
la se divide verticalmente em lugar de horizontalmente. Nesses casos, a clula
adjacente ao lmen fica ligada superfcie ventricular, enquanto a outra clula filha
se afasta (Chenn McConnell, 1995). Essa diviso a ultima do neurnio e chamada
de aniversrio do neurnio. Diferentes neurnios e clulas gliais tm seus aniver-
srios em tempos diferentes. Marcao em diferentes pontos do desenvolvimento
mostra que clulas com aniversrios mais precoces migram distncias mais curtas.
Clulas com aniversrios mais tardios, migram atravs dessas camadas para formar
as regies superficiais do crtex. A diferenciao que se segue depende da posio
que esses neurnios ocupam uma vez fora da regio de clulas em diviso
(Letourneau, 1977; Jacbson, 1991).
Figura 7.20
Seo esquemtica do tubo neural de um embrio de galinha, mostrando a posio do ncleo de
uma clula neuroepitelial como funo do ciclo celular. Clulas mitticas so encontradas prxi-
mo ao centro do tubo neural, adjacente ao lmen. (B) Micrografia eletrnica de varredura de um
tubo neural de galinha, recm-formado, mostrando clulas em diferentes estgios do ciclo celular. (B)
(A de acordo com Sauer, 1935; B, cortesia de K. Tosney.)
Camada molecular
de axnios das
clulas granulares
Cerebelo
Tubo neural
Camada molecular
Neocrtex
Crtex cerebral
Massa branca
Sulcus
Regio Regio
limitans
presuntiva basal presuntiva alar
Organizao do cerebelo
No encfalo, a migrao celular, o crescimento diferencial e a morte celular seletiva
produzem modificaes no modelo de trs camadas, especialmente no cerebelo e no
crebro. Alguns neurnios penetram a massa branca para diferenciarem-se em aglo-
merados de neurnios chamados ncleos. Cada ncleo desempenha o papel de uma
unidade funcional, servindo como uma estao de retransmisso entre as camadas
externas do cerebelo e outras partes do encfalo. Alm disso, as clulas neurnicas
precursoras, em diviso, neuroblastos, migram para a superfcie externa do cerebelo
em desenvolvimento, formando uma nova zona embrionria, camada embrionria
externa, prxima ao limite externo do tubo neural. No limite externo da camada embri-
onria externa (na espessura de uma ou duas clulas), os neuroblastos proliferam. Na
parte interna da camada esto os neuroblastos ps-mitticos que so os precursores
dos neurnios mais importantes do crtex do cerebelo, as clulas granulares. Essas
clulas neuronais pr-granulares migram de volta para a massa branca do cerebelo em
desenvolvimento para produzir clulas neurnicas granulares em uma regio chamada
camada granular interna. Enquanto isso, a camada ependimria original do cerebelo
origina uma grande variedade de neurnios e clulas gliais, incluindo os notveis e
grandes neurnios de Purkinje. Cada um deles tem um enorme aparelho dendrtico,
que se espalha como um leque sobre o corpo celular em forma de bulbo. Uma clula
de Purkinje tpica pode formar at 100.000 sinapses com outros neurnios, mais do que
qualquer outro neurnio estudado. Cada neurnio de Purkinje tambm emite um axnio
delgado que se comunica com outras clulas nos ncleos cerebelares profundos.
O desenvolvimento de uma organizao espacial crtico para o funcionamento
correto do cerebelo. Todos os impulsos regularo a atividade da clulas de Purkinje,
que so os nicos neurnios que liberam impulsos para fora do crtex cerebelar. Para
CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma 273
que isso acontea, as clulas adequadas devem se diferenciar no tempo e local ade-
quados. Como isso acontece?
Um mecanismo considerado importante para posicionar neurnios jovens dentro
de encfalo de mamferos em desenvolvimento o direcionamento glial (Rakic, 1972;
Hatten, 1990). Atravs do crtex, os neurnios parecem caminhar no monotrilho da
glia para seu respectivo destino. No cerebelo, os precursores das clulas granulares
caminham nos longos prolongamentos da glia de Bergmann (Figura 7.23; Rakic e
Sidman, 1973; Rakic, 1975). A interao neuroglial consiste em uma complexa e fasci-
nante srie de eventos, envolvendo reconhecimento recproco entre a glia e o
neuroblasto (Hatten, 1990; Komuro e Rakic, 1992). O neurnio mantm sua adeso
clula da glia atravs de vrias protenas, a mais importante sendo uma protena de
adeso chamada astrotactina. Se a astrotactina na clula nervosa mascarada pelo
seu respectivo anticorpo, a clula nervosa no adere ao prolongamento da glia
(Edmondson et al., 1988; Fishell e Hatten, 1991).
A anlise de mutaes neurolgicas no camundongo poder, em breve, fornecer Figura 7.23
conhecimentos novos sobre os mecanismos de ordenao espacial. Mais de 30 muta- Migrao neurnica em prolongamentos gliais.
es conhecidas afetam o arranjo de neurnios cerebelares. Muitos dos mutantes (A) Diagrama com um neurnio cortical mi-
cerebelares foram encontrados porque o fentipo de tais mutantes - principalmente a grando em um prolongamento da clula glial.
(B) Micrografia eletrnica da regio onde a
inabilidade de manter o equilbrio ao andar - pode ser facilmente reconhecido. Por
soma do neurnio adere ao prolongamento glial.
razes bvias essas mutaes so identificadas na lngua inglesa com nomes como (C) Fotografias seqenciais de um neurnio
weaver, reeler, staggerer e waltzer. [ecto4.html], [ecto5.html] migrando em um prolongamento de glia
cerebelar. A extremidade anterior do neurnio
apresenta vrias extenses filopdicas. Ela
atinge velocidades de 60 m/hora em sua mi-
grao nos prolongamentos gliais. (A de acor-
do com Rakic, 1975; B de Gregory et al., 1988;
C de Hatten, 1990, cortesia de M. Hatten.)
(B)
(A)
Processo condutor
do neurnio
(C)
Neurnio em
migrao
Processo da
clula glial
274 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Organizao cerebral
Camadas
corticais
Massa
branca
Camada
ventricular
Migrao neural
do hospedeiro
Migrao
neural do
Porcentagem de neurnios marcados com [3H]-timidina
hospedeiro
Camadas corticais
Camada
intermediria
Massa
branca
Camadas corticais
Figura 7.25
Determinao de identidade laminar em crebro de doninha. (A) Precursores neuronais pre-
coces (aniversrios no dia embrionrio 29) migram para a camada 6. (B) Precursores neuronais
tardios (aniversrios no dia ps-natal 1) migram mais adiante para as camadas 2 e 3. (C)
Quando os precursores precoces (vermelho) so transplantados em zonas ventriculares mais
velhas, aps sua ltima fase S mittica, os neurnios que eles formam migram para a camada
Massa 6. (D) Se esses precursores so transplantados antes ou durante sua ltima fase S, seus
branca neurnios migram (com os neurnios do hospedeiro) para a camada 2. (De acordo com
Camadas corticais McConnell e Kaznowski,1991.)
em qualquer das camadas corticais (Walsh e Cepko, 1988). Mas, como que a clula
reconhece a camada na qual deve entrar? McConnell e Kaznowski (1991) mostraram
que a determinao da identidade laminar (isto , para qual camada a clula migrar)
feita durante a diviso celular final. Clulas transplantadas de crebros jovens (onde
elas formariam a camada 6) para crebros mais velhos, cujos neurnios migratrios
esto formando a camada 2 aps sua ltima diviso, mantm seu destino e migram
somente para a camada 6. Entretanto, se as clulas so transplantadas antes de sua
diviso final (na metade da fase S), elas no tm destino fixo e podem migrar para a
camada 2 (Figura 7.25). Os destinos de clulas progenitoras mais velhas so mais
determinados. As clulas cerebrais corticais progenitoras precoces tm o potencial
para transformarem-se em qualquer neurnio (nas camada 2 ou 6, por exemplo), mas as
clulas corticais progenitoras tardias do origem somente a neurnios da camada
superior (camada 2) (Frantz e McConnell, 1996). Ainda no conhecemos a natureza da
informao transmitida clula ao ser fixado o seu destino.
Nem todos os neurnios migram radialmente. ORourke e seus colegas (1992)
marcaram neurnios jovens com corante fluorescente e seguiram sua migrao atra-
vs do crebro. Enquanto mais ou menos 80% dos jovens neurnios migraram radial-
mente em processos gliais, da zona ventricular para a placa cortical, aproximadamente
12% deles migraram lateralmente de uma regio funcional do crtex para outra. Essas
observaes esto de acordo com aquelas de Walsh e Cepko (1992), que infectaram
clulas ventriculares com um retrovrus e conseguiram corar essas clulas e seus
descendentes aps o nascimento. Eles descobriram que os descendentes neurais de
276 PARTE II Padres de Desenvolvimento
uma nica clula ventricular estavam dispersos atravs das regies funcionais do
crtex. Quando neurnios do crtex do crebro anterior foram transplantados para a
regio que formaria o corpo estriado, essas clulas adquiriram a morfologia do estriado
(Fishell, 1995). Portanto, a especificao de funes determinadas pelas reas corticais
ocorre aps a neurognese. Considera-se que chegando a seu destino final, as clulas
produzem molculas adesivas especficas que as organizam e as agrupam como ncle-
os cerebrais (Matsunami e Takeichi, 1995).
O crebro bastante plstico e o desenvolvimento do crtex neopleo humano
particularmente notvel a esse respeito. O crebro humano continua a se desenvolver
na velocidade do desenvolvimento fetal, mesmo aps o nascimento (Holt et al., 1975).
Baseado em critrios morfolgicos e de comportamento, Portmann (1941, 1945) suge-
riu que, comparada com outros primatas, a gestao humana deveria durar 21 meses
em lugar de 9. Entretanto, nenhuma mulher poderia dar luz um feto de 21 meses, pois
sua cabea no passaria pelo canal do parto; assim a espcie humana d luz aps 9
meses. Montagu (1962) e Gould (1977) sugeriram que durante o primeiro ano de vida,
somos essencialmente fetos extra-uterinos, e eles especulam que a inteligncia huma-
na vem da estimulao do sistema nervoso que est se formando durante aquele
primeiro ano.*
Tipos de neurnios
O crebro humano consiste de mais de 1011 clulas nervosas (neurnios) associadas
com mais de 1012 clulas gliais. Aquelas clulas que permanecem como componentes
integrais do revestimento do tubo neural se transformam em clulas ependimrias.
Essas clulas podem dar origem a precursores de neurnios e clulas gliais. Conside-
ra-se que a diferenciao dessas clulas precursoras principalmente determinada
pelo ambiente no qual elas entram (Rakic e Goldman, 1982) e que, em pelo menos
alguns casos, uma determinada clula precursora pode formar ambos, neurnios e
clulas gliais (Turner e Cepko, 1987). Existe uma grande variedade de tipos de neur-
nios e clulas gliais (como fica evidente pela comparao entre uma clula granular
relativamente pequena e o enorme neurnio de Purkinje). As delgadas extenses das
clulas, usadas para captar impulsos eltricos so chamadas dendritos (Figura 7.26).
Alguns neurnios desenvolvem somente alguns dendritos, enquanto outras clulas
(como os neurnios de Purkinje) desenvolvem extensas reas para interaes celula-
res. Muito poucos dendritos so encontrados em neurnios corticais no nascimento,
mas uma das coisas maravilhosas, a respeito do primeiro ano de vida do ser humano,
o aumento do nmero dessas regies receptivas nos neurnios corticais. Durante
esse ano, cada neurnio cortical desenvolve um nmero suficiente de dendritos (ou
superfcie dendrtica) para acomodar at 100.000 conexes com outros neurnios. O
neurnio cortical, em mdia, se conecta com 10.000 outros neurnios. Esse padro de
conexes neurais (sinapses) permite ao crtex humano funcionar como o centro para
o aprendizado, raciocnio e memria, e a desenvolver a capacidade de expresso sim-
blica, bem como a produo de respostas a estmulos interpretados.
Outra caracterstica importante de um neurnio em desenvolvimento seu axnio
(s vezes chamado um neurito). Enquanto os dendritos so freqentemente numero-
sos e no se extendem muito alm do corpo da clula nervosa, ou soma, os axnios
podem se alongar por vrios centmetros. Os receptores da dor no dedo grande (hlux)
do p, por exemplo, precisam transmitir suas mensagens por um longo caminho at a
Cone do
axnio
Segmento
inicial
do axnio Chegada de impulsos
via axnios de outros
neurnios
CONDUTOR N de
Ranvier
Impulso
nervoso
Clula de
Schwann
Bainha de mielina
EFETOR
Msculo esqueltico
Microespculas
Cone de crescimento
Figura 7.27
Microespculas de actina em cones de crescimento de axnios como vistos por (A) microscopia
eletrnica de transmisso, (B) microscopia de contraste da interface diferencial e (C) microscopia
de fluorescncia com anticorpos fluorescentes actina. (A de Letourneau,1979; B e C de
Forscher e Smith, 1988. Todas fotografias, cortesia dos autores.)
Figura 7.28
Mielinao nos sistemas nervosos central e perifrico. (A) No
Clula oligodendroglial sistema nervoso perifrico, as clulas de Schwann se enrolam ao
redor do axnio; no sistema nervoso central, a mielinao reali-
zada por prolongamentos de oligodendrcitos. (B) O mecanismo
desse enrolamento leva produo de um enorme complexo de
membrana. (C) Micrografia de um axnio envolvido pela mem-
Axnio MIELINIZAO brana de mielina de uma clula de Schwann. (Fotografia cortesia
NO SISTEMA
de C. S. Raine.)
NERVOSO CENTRAL
N de Ranvier
Axnio MIELINIZAO NO
SISTEMA NERVOSO PERIFRICO
Axnio (C)
Ectoderma Parede do
Camada
da cabea crebro anterior
pigmentada
Vescula Camada
ptica neural
primria Vescula
ptica Cristalino
Vescula
do
Placdio cristalino
do
cristalino
(A) Embrio de 4-mm (B) Embrio de 4.5-mm (C) Embrio de 5-mm (D) Embrio de 7-mm
Figura 7.29
Desenvolvimento do olho de vertebrado. (A)
A vescula ptica evagina do crebro e contata latente na formao do cristalino e o posicionamento do cristalino em relao retina
o ectoderma sobreposto. (B,C) O ectoderma realizado pela vescula ptica. No homem, as vesculas pticas tm incio como duas
sobreposto diferencia-se em clulas do crista- protuberncias nas paredes laterais do diencfalo em embries de 22 dias (Figura
lino enquanto as vesculas pticas se dobram 7.29). Essas protuberncias continuam a crescer lateralmente ao tubo neural e esto
sobre si mesmas e os placdios do cristalino ligadas ao diencfalo por pednculos pticos. Subseqentemente, quando essas
se tornam vesculas do cristalino. (C) A vescula vesculas atingem o ectoderma da cabea, essa se espessa formando o placdio do
ptica se torna a retina neural e pigmentada,
cristalino. A necessidade de um contato ntimo entre as vesculas pticas e o ectoder-
enquanto o cristalino internalizado. (D) A
vescula do cristalino induz o ectoderma so-
ma superficial comprovada experimentalmente e em certos mutantes. Por exemplo, no
breposto a se tornar crnea. (Ilustraes su- mutante de camundongo, eyeless, as vesculas pticas no fazem contato com a su-
periores de acordo com Mann, 1964; micro- perfcie e a formao do olho cessa (Webster et al., 1984).
grafias A-C de Hilfer e Yang, 1980, cortesia de Uma vez formado, o placdio do cristalino causa, de maneira recproca, modifica-
S. R. Hilfer; D, cortesia de K. Tosney.) es na vescula ptica que sofre uma invaginao formando um clice ptico de
parede dupla (veja Figura 7.29C). medida que a invaginao continua, a conexo
entre o clice ptico e o crebro reduzida, tornando-se alongada e estreita. Ao
mesmo tempo, as duas camadas do clice ptico comeam a se diferenciar em direes
diferentes. As clulas da camada externa produzem pigmentos e finalmente se trans-
formam na retina pigmentada (um dos poucos tecidos, alm das clulas da crista
neural, que podem sintetizar sua prpria melanina). As clulas da camada interna
proliferam rapidamente e do origem a uma variedade de glia, neurnios ganglionrios,
interneurnios e neurnios fotorreceptores sensveis luz. Coletivamente, essas cons-
tituem a retina neural. Os axnios das clulas ganglionares da retina neural se encon-
tram na base do olho e se dirigem para baixo, pelo pednculo ptico. O pednculo
ento chamado nervo ptico.
Bastonetes e cones
dos fotorreceptores
Corpos celulares
Camada dos fotorreceptores
neuroblstica
externa Camada
plexiforme externa
Camada dos
nervos bipolares
Camada
neuroblstica Camada
interna plexiforme interna
Camada de clulas ganglionares
Fibras do nervo ptico
Clulas ganglionares Luz
(A) (B) (C) (D)
estmulo eltrico dos bastonetes e cones s clulas ganglionrias. Alm disso, existem Figura 7.30
numerosas clulas gliais de Mller que mantm a integridade da retina, bem como Desenvolvimento da retina humana. Neur-
neurnios amcrinos (sem grandes axnios) e neurnios horizontais que transmitem nios da retina se distribuem em camadas fun-
impulsos eltricos no plano da retina. cionais durante o desenvolvimento. (A,B)
Separao inicial de neuroblastos dentro da
Nos estgios iniciais do desenvolvimento da retina, a diviso celular de uma cama-
retina. (C) As trs camadas de neurnios na
da embrionria e a migrao e morte diferencial das clulas resultantes formam o retina adulta e as camadas sinpticas entre
padro laminar, estriado, da retina neural. A formao desse tecido altamente estruturado elas. (D) Uma apresentao funcional dos
um dos problemas mais intensamente estudado em neurobiologia do desenvolvi- principais caminhos dos neurnios na retina.
mento. Mostrou-se que (Turner e Cepko, 1987) uma nica clula precursora do A luz atravessa as camadas at ser recebida
neuroblasto retinal pode dar origem a pelo menos trs tipos de neurnios ou dois pelos fotorreceptores. Os axnios dos fotorre-
tipos de neurnios e uma clula glia. Essa anlise foi feita usando uma tcnica enge- ceptores fazem sinapse com neurnios bipo-
nhosa para marcar as clulas geradas por uma clula precursora especfica. Ratos lares que transmitem a despolarizao para
recm-nascidos (cujas retinas ainda esto se desenvolvendo) foram injetados, no os neurnios ganglionares. Os axnios das
clulas ganglionares se renem para formar o
fundo do olho, com um vrus que se integra ao seu DNA. Esse vrus continha um gene
nervo ptico que entra no crebro. (A e B
da -galactosidase (no presente na retina do rato) que seria expresso somente nas segundo Mann, 1964; fotografia cortesia de
clulas infectadas. Um ms aps a infeco dos ratos, as retinas foram removidas e G. Grunwald.)
coradas para detectar a presena de -galactosidase. Somente os descendentes das
clulas infectadas deveriam ser coradas de azul. A Figura 7.31 mostra uma fita de
clulas derivadas de uma clula precursora infectada. A colorao pode ser vista em
cinco bastonetes, um neurnio bipolar e uma clula glia (Mller).
Informaes adicionais
& Especulaes
R ecm-nascidos humanos no
tm boa viso. Devem existir v-
rias razes para isso, mas a que
mais chama a ateno a imaturidade dos
basais. A Figura 7.32 destaca as diferen-
as entre os fotorreceptores em retinas
neonatal e adulta. A retina neonatal tem
receptores fracamente diferenciados, e
mero de fotorreceptores por rea da reti-
na tambm impede bebs de discriminar
dois pontos distncia. Essa pode ser a
razo pela qual os bebs apenas respon-
fotorreceptores da retina. Estudos anat- aqueles que existem so to largos que dem a estmulos visuais quando esses so
micos realizados por Yuodelis e Hendrick- poucos cabem em uma dada rea. Banks e trazidos prximo s suas faces. O desen-
son (1986) e estudos fsicos por Banks e Bennett calcularam que isso causa um volvimento dos fotorreceptores da retina
Bennett (1988) mostraram que os cones decrscimo de absoro de luz na regio no homem um excelente exemplo de di-
fotorreceptores da retina central do recm- central da retina do recm-nascido que ferenciao que comea cedo no desen-
nascido tm mais de 7.5m de dimetro, 350 vezes pior do que a absoro de uma volvimento, mas que no se completa at
que diminui at o valor adulto normal de mesma rea no adulto. Esse pequeno n- anos aps o nascimento.
2m em cerca de 3 anos. Durante esse tem-
po, a densidade em cones nessa regio
aumenta de 18 fotorreceptores para 42 por
100 m, e os fotorreceptores desenvol-
vem tanto seus segmentos externos (que
captam a luz) quanto os seus axonais
Figura 7.32
Desenvolvimento de cones fotorreceptores na
regio central da retina humana. Sees de
microscopia de luz foram fotografadas e um
cone em cada retina delineado para clareza. O
epitlio pigmentado (PE), a camada plexiforme (A)
externa (OPL), a glia de Mller (M), e os seg-
mentos externos do fotorreceptor (OS) foram
(B)
marcados. (A) Feto de gestao de 22 semanas.
(B) Neonato 5 dias aps o nascimento. (C) Pes-
soa de 72 anos. A flecha aponta para a membra-
na limitante externa, que originalmente serviu
como borda para os axnios da retina. O axnio
delineado em (C) na realidade mais curto que
o normal, permitindo que a sinapse com o
neurnio bipolar possa ser mostrada na figura.
(C)
A sinapse formada no pedculo sinptico do
cone (CP). (de Yuodelis e Hendrickson, 1986,
cortesia de A. Hendrickson.)
CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma 283
Epitlio
anterior
do cristalino
Regio
equatorial
Fibras secundrias
Fibras
do cristalino
primrias
(C) (D) (E)
do cristalino Fibras Cpsula Fibras primrias
secundrias do cristalino posterior do cristalino do cristalino
284 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Q A CRISTA NEURAL
A crista neural e seus derivados
Embora derivada do ectoderma, a crista neural algumas vezes considerada a quarta
camada germinativa devido sua importncia. Tem sido dito, talvez hiperbolicamente,
que a nica coisa interessante a respeito dos vertebrados a crista neural (citado
em Thorogood, 1989). As clulas da crista neural se originam na regio mais dorsal do
tubo neural. Experimentos com transplantes, onde uma placa neural de codorna
enxertada no ectoderma no-neural de galinha, mostram que justapondo esses teci-
dos se induz a formao de clulas da crista neural e que ambas, as prospectivas placa
neural e a epiderme, contribuem para a crista neural (Selleck e Bronner-Fraser, 1995;
Mancilla e Mayor, 1996). As clulas da crista migram extensivamente dando origem a
um incrvel nmero de tipos de clulas diferenciadas. Esses incluem (1) os neurnios
e clulas gliais dos sistemas nervosos sensorial, simptico e parassimptico, (2) as
clulas produtoras de epinefrina (medula) da glndula supra-renal, (3) as clulas
pigmentares da epiderme, e (4) muitos dos componentes dos tecidos esquelticos e
conjuntivos da cabea. O destino das clulas da crista neural depende, na sua maioria,
do lugar para onde elas migram e onde se instalam. A crista neural pode ser dividida em
quatro principais (mas parcialmente sobrepostos) domnios:
A crista neural ceflica (cabea), cujas clulas migram dorsolateralmente para
produzir o mesnquima craniofacial que se diferencia em cartilagem, osso, neu-
rnios cranianos, glia e tecidos conjuntivos da face. Essas clulas tambm
entram nas bolsas farngeas para originar as clulas do timo, odontoblastos
dos primrdios dos dentes e a cartilagem do ouvido interno e o queixo.
A crista neural do tronco, cujas clulas tomam um de dois caminhos princi-
pais. Clulas da crista neural, que se tornam os melancitos sintetizadores de
pigmentos, migram dorsolateralmente para o ectoderma, e continuam em seu
caminho em direo linha mdia ventral do abdmen. Entretanto, a maioria da
clulas da crista neural do tronco passa ventrolateralmente atravs da metade
anterior de cada esclertomo. (Esclertomos so blocos de clulas mesodrmi-
cas que cercam o tubo neural e diferenciam-se na cartilagem vertebral da espi-
nha.) Essas clulas da crista neural do tronco que permanecem nos esclertomos
formam os gnglios dorsais da raiz. As clulas que continuam mais ventral-
mente formam os gnglios simpticos, a medula da supra-renal e o agrupa-
mento de nervos circundando a aorta.
A crista neural cervical e sacral, cujas clulas do origem aos gnglios
parassimpticos (entricos) do intestino (Le Douarin e Teillet, 1973; Pomeranz
et al., 1991). A crista cervical tem posio oposta aos somitos 1-7 da galinha,
enquanto que a crista neural sacral posterior ao somito 28. A ausncia de
migrao da clula da crista neural para o clon resulta na falta de gnglios
entricos e, portanto, a ausncia de movimento peristltico nessa regio.
Isso resulta na obstruo funcional, dilatao e aumento da regio acima do
clon (megaclon).
CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma 285
Como mostra a Figura 7.2, a crista neural do tronco uma estrutura transitria, pois
suas clulas se dispersam logo aps o fechamento do tubo neural. Existem duas vias
principais seguidas pelas clulas migratrias da crista neural (Figura 7.34).
A VIA DORSOLATERAL. Uma via possvel para migrao das clulas da crista neural
do tronco a via dorsolateral, pela qual os precursores dos melancitos se movem
pela periferia do embrio atravs do mesoderma subjacente derme. Elas penetram no
ectoderma atravs de minsculos orifcios na membrana basal (as quais elas podem
produzir) e colonizam a pele e os folculos, onde elas se diferenciam em melancitos
286 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Epiderme
Dermomitomo
Esclertomo
Notocorda
Clulas da Via 2 tomam um
rota dorsolateral entre a epiderme
Aorta Post.
e o dermomitomo
Ant.
Somito
Rostral
Clulas da Via 1
viajam ventralmente atravs
Figura 7.34 do mitomo anterior
Migrao das clulas da crista neural no tron-
co do embrio do pinto. Via 1: As clulas via-
jam ventralmente atravs do esclertomo an-
terior (aquela poro do somito que gera a car-
tilagem vertebral). Aquelas clulas inicialmen-
te opostas s pores posteriores dos
esclertomos migram ao longo do tubo neural
at alcanar uma regio anterior. Essas clulas
contribuem para os gnglios simpticos e
parassimpticos assim como para as clulas
da medula supra-renal e os gnglios da raiz (Mayer, 1973; Erickson et al., 1992). Essa via foi demonstrada em uma srie de experi-
dorsal. Via 2: Algum tempo depois, clulas pe- mentos clssicos por Mary Rawles e outros (1948), que transplantaram o tubo neural
netram na rota dorsolateral abaixo do ectoder- e a crista de uma linhagem pigmentada de galinha para o tubo neural de um embrio de
ma. Essas clulas se tornam melancitos pro- galinha albina. O resultado foi uma galinha branca com penas coloridas em uma regio
dutores de pigmento. especfica (Figura 7.35A). A crista neural responsvel pela produo de todas as
clulas contendo melanina no organismo (com exceo de certos derivados neurais
como a retina pigmentada).
A VIA VENTRAL. Enxertando uma parte do tubo neural e a crista associada de embri-
es de galinha, radioativos ou geneticamente marcados, em outros embries, foi pos-
svel identificar outra rota principal de migrao das clulas da crista neural do tronco
(Weston, 1963; Le Douarin e Teillet, 1974), investigadores foram capazes de traar uma
outra rota maior de migrao das clulas da crista neural (Figura 7.35B,C). Estudos
mais recentes estenderam essas pesquisas usando anticorpos fluorescentes, corantes
vitais, ou clulas transformadas por vrus para marcar e seguir clulas individuais da
crista neural at seu destino. As clulas saindo pela via ventral se tornam neurnios
sensoriais (raiz dorsal) e simpticos, clulas adrenomedulares e clulas de Schwann.
Como pode ser visto na Figura 7.36 e Prancha 19, essas clulas da crista neural do
tronco migram ventralmente atravs da poro anterior, mas no da poro posterior
dos esclertomos (Rickmann et al., 1985; Bronner-Fraser, 1986; Loring e Erickson,
1987; Teillet et al. 1987). Teillet e colaboradores associaram o procedimento com
anticorpos a um transplante de clulas da crista neural de codornas geneticamente
marcadas, a embries de galinha. O anticorpo marcador reconhece e marca as clulas
da crista neural de ambas espcies; o marcador gentico permite aos pesquisadores
CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma 287
(A) (B)
Hospedeiro
Doador marcado
radioativamente
distinguir entre clulas de codorna e galinha. Esses estudos mostram que clulas da
crista neural, antes opostas regio posterior dos somitos, migram anteriormente ou
posteriormente ao longo do tubo neural penetrando, assim, na regio anterior de seus
somitos ou de outros adjacentes. Essas clulas da crista neural se juntam com outras
que inicialmente estavam opostas poro anterior dos somitos, e formam a mesma
estrutura. Dessa maneira, cada gnglio da raiz dorsal composto de trs populaes
de crista neural: uma da crista neural oposta poro anterior do somito e uma de cada
lado das regies de crista neural adjacentes, opostas s pores posteriores dos
somitos. Em regies especficas do tronco, clulas da crista migrando pela mesma via,
se agregam para formar gnglios simpticos e as clulas secretoras de epinefrina da
medula da supra-renal. A diviso parassimptica do sistema nervoso perifrico tam-
bm formada pelas clulas da crista neural migrando por essa via, mas somente nas
regies sacral e cervical do embrio.
Esclertomo Tubo Slug deve ser necessria para que a clula epitelial imvel se torne um migrante (Nieto
do somito neural et al., 1994). Outro fator em potencial na iniciao da migrao da clula da crista neural
a molcula de adeso N-caderina. Originalmente na superfcie da clula da crista
neural, ela regulada para decrescer na poca da migrao celular. Clulas da crista em
Anterior migrao no tm N-caderina em sua superfcie, mas comeam a express-la nova-
mente enquanto se agregam para formar a raiz dorsal e os gnglios simpticos (Takeichi,
1988; Akitaya e Bronner-Fraser, 1992). Ao mesmo tempo que as clulas da crista neural
Posterior perdem sua N-caderina e se tornam aptas a migrar como clulas individuais, a superf-
cie extracelular que as rodeia se torna mais adesiva (Perris et al., 1990). Parece haver
vias especficas que devem ser seguidas pelas clulas da crista neural e quando as
Anterior clulas, ou seus derivados, so colocadas (por transplante ou por injeo) em sua via
normal de migrao em um embrio hospedeiro, elas migram ao longo dessa (Bronner-
Fraser e Cohen, 1980; Erickson et al., 1980).
O caminho das clulas da crista neural controlado pela matriz extracelular do
Posterior
embrio (Newgreen e Gooday, 1985; Newgreen et al., 1986). Pesquisas sobre o desen-
volvimento de salamandra indicaram que a direo de migrao das clulas da crista
neural determinada pela matriz extracelular sobre a qual elas migram. Em salamandras
Anterior axolotle existe uma mutao onde h formao da crista neural mas suas clulas no
migram pela via dorsolateral. Isso pode ser visto facilmente pela falta de clulas
pigmentadas em todos os lugares, com exceo do topo do tubo neural desses ani-
Posterior mais (Figura 7.37), e essas clulas finalmente degeneram. Quando cristas neurais do
tipo selvagem so transplantadas para embries mutantes, as clulas da crista so
incapazes de migrar. Entretanto, quando cristas de embries mutantes so transplan-
tadas em embries selvagens, suas clulas migram normalmente (Spieth e keller, 1984).
Figura 7.36 Assim, o defeito nesse mutante est no ambiente em que as clulas encontram e no
Migrao de clulas da crista neural. Fotomi- nas prprias clulas. (A estrada deficiente mas no o veculo.) Lfberg e colaborado-
crografias de fluorescncia de sees longitu- res (1989) usaram essa informao para mostrar que a matriz extracelular contm com-
dinais de um embrio de pinto de dois dias, postos que so crticos na regulao da migrao das clulas da crista neural. Eles
marcadas com anticorpo HNK-1, que reco- adsorveram, em microtransportadores da membrana, a matriz extracelular da regio
nhece seletivamente as clulas da crista neural. subepidrmica da pele (atravs da qual migrariam as clulas da crista neural formado-
Extensa marcao vista na metade anterior,
ras de pigmentos). Os microtransportadores foram ento colocados junto s cristas
porm, no na posterior do esclertomo. (de
neurais de embries mutantes e do tipo selvagem, pouco antes do momento quando
Bronner-Fraser, 1986, cortesia de M.
Bronner-Fraser.) ocorreria a migrao. Os microtransportadores sozinhos no estimularam a migrao
em nenhum dos dois embries. Os microtransportadores contendo matriz extracelular
de mutantes tambm no estimularam migrao primativa de clulas da crista neural
em nenhum dos embries. Entretanto, aqueles transportadores contendo a matriz
extracelular do tipo selvagem estimularam a migrao de clulas da crista neural tanto
no embrio mutante como no selvagem, demonstrando assim a importncia da matriz
extracelular na migrao de clulas da crista neural.
Uma situao semelhante se d em embries de galinha, pois o transplante de
diferentes regies do mesoderma para a rea adjacente crista neural pode produzir
diferentes modelos de migrao (Goldstein et al., 1990; Bronner-Fraser e Stern, 1991).
As regies que permitem migrao de clulas da crista neural so determinadas no
mesoderma antes que ocorra a migrao.
Mas quais so as molculas que permitem ou impedem a migrao de clulas da
crista neural? A matriz extracelular que suporta essa migrao uma mistura rica em
molculas como fibronectina, laminina, tenascina, vrias molculas de colgeno e
proteoglicanos. Experimentos programados para estudar esse aspecto devem ser
cuidadosamente planejados, pois as clulas da crista neural podem ter necessidades
de migrao diferentes em diferentes espcies e mesmo em diferentes partes do mes-
mo embrio. Uma soluo preparar anticorpos contra molculas das regies da
matriz extracelular s quais as clulas se ligam. Quando esses anticorpos so injetados
no embrio, bloqueando as regies da matriz, verifica-se alguma perturbao na migra-
o das clulas da crista neural? A migrao das clulas da crista neural craniana de
galinha pode ser severamente alterada quando so injetados, no embrio em desen-
CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma 289
(A) (B)
(C) (D)
Figura 7.37
Deficincia na migrao das clulas da crista neural no mutante d/d do axolotle. (A) As
larvas de axolotles do tipo selvagem so caracterizadas por clulas pigmentadas por todo o
corpo exceto nas pores mais ventrais. (B) No mutante d/d, as clulas pigmentadas deri-
vadas da crista neural formam uma estria ao longo da linha mediana dorsal da larva. (C,D)
Micrografias eletrnicas de varredura da crista neural embrionria mostram que (C) as
clulas da crista dos embries de tipo selvagem migram sobre o tubo neural para o interior
dos somitos, enquanto (D) aquelas do mutante permanecem sobre o tubo neural. (de Lfberg
et al., 1989, cortesia dos autores.)
Informaes adicionais
& Especulaes
A S PROPRIEDADES MIGRAT-
RIAS e a diferenciao das clu-
las da crista neural tambm esto
sendo estudadas levando em considera-
o mutaes que prejudicam uma ou mais
Lethal-spotting e Piebald-lethal.
Nessas mutaes, a deficincia de
endotelina-3 e seu receptor, o receptor de
endotelina-B. Endotelina-3 um fator de
crescimento que estimula a proliferao
homem, essa condio chamada doen-
a de Hirschsprung. A ausncia de
endotelina-3 d origem ao padro de man-
chas dos melancitos e, tambm, a falta
de gnglios no intestino (Baynish et al.,
linhagens de clulas da crista neural. As de clulas como as da crista neural, e 1994; Hosoda et al., 1994; Puffenberger et
mutaes incluem as seguintes: critico para o desenvolvimento de mela- al., 1994; Lahav et al., 1996).
ncitos e neurnios entricos que cau-
White-spotting. As clulas da crista sam o peristaltismo no trato digestivo. A Ret e GDNF. Como o receptor de
neural desses camundongos no tm c- ausncia homozigtica de genes para o endotelina-B, o receptor tirosina quinase Ret
kit tirosina quinase receptor funcional. A receptor de endotelina-B produz o mega- necessrio para a diferenciao dos neu-
condico homozigtica geralmente letal clon, a distenso do intestino grosso rnios entricos. Os camundongos que no
mas os heterozigotos sobrevivem e po- devido a impossibilidade de evacuar. No apresentam o receptor no tm neurnios
dem ser reconhecidos pelas manchas sem entricos nem rins (a importncia de Ret para
pigmentos em seu plo. No homem, os o desenvolvimento do rim ser discutida no
heterozigotos tm um fentipo com man- Captulo 17). No homem, a perda de um dos
chas brancas e escuras. onde regies do genes ret pode produzir outra forma de do-
cabelo e da pele so brancas, por no te- ena de Hirschsprung- um megaclon
rem melancitos (Spritz et al., 1992). ganglinico (Edery, 1994; Romeo et al., 1994).
O ligante para a protena Ret parece ser o
Steel. Esses camundongos no tm o fator de crescimento derivado da glia, GDNF
fator da clula germinativa, o ligante para (Pichel et al., 1996). Camundongos sem as
a protena quinase c-kit. Esse fator protenas GDNF tambm no tm rins nem
secretado por tecidos ao longo da rota de neurnios entricos.
migrao e usado pelas clulas migrat-
rias da crista neural, alm de estimular a Microphthalmia. Esses camundongos
diviso celular. A condio do homozigo- no tm um fator de transcrio determina-
to letal na maioria dos casos, e o hetero- do, levando surdez e deficincias melano-
zigoto tem uma pelagem de cor cinza cticas. A condio heterozigtica humana
esmaecida (veja White, 1990). induz a sndrome de Waardenburg (tipo II)
(Hemesath et al., 1994; Steingrimsson et al.,
Splotch. Os camundongos no tm o 1994; Tassbehji et al., 1994).
fator de transcrio Pax3. Como j men-
cionado, essa protena expressa na re- Silky. Essa mutao na galinha envol-
gio dorsal do tubo neural. Camundon- ve a via da pigmentao. Em adio a um
gos homozigotos para esse gene tm de- fentipo onde o adulto retm as penas
feitos no fechamento do tubo neural e macias de sua juventude, os rgos inter-
Figura 7.38
nas estruturas derivadas das clulas da Superfcie ventral de um camundongo heterozi- nos so pigmentados pela migrao e pro-
crista neural, especialmente gnglios gtico para a mutao White. O camundongo liferao de melancitos. Em contraste, as
cranianos e nervos (Figura 7.38). O tem nmeros reduzidos de clulas sangneas, penas permanecem brancas. Estudos com
heterozigoto tem regies de pigmenta- clulas germinativas e melancitos. A mancha transplantes (Hallet e Ferrand, 1984) mos-
o e outras sem pigmento. No homem, a branca no ventre caracterstica de heterozigo- traram que esse defeito no devido aos
condio heterozigtica conhecida tos, pois esses no tm melancitos suficientes precursores dos melancitos, mas sim de-
como sndrome de Waardenburg (tipo I) para circundar o camundongo. Animais White vido ao ambiente para onde migram as
(Tremblay et al., 1995). viveis no tm pigmento no tronco. clulas da crista neural. [ecto6.html]
CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma 291
Figura 7.40
Diferenciao final de uma clula da crista
neural destinada a ser uma clula adrenome-
NGF
dular (cromafim) ou um neurnio simptico.
Incapacidade de Neurnio Glicocorticides parecem agir em dois luga-
Clula NGF responder a
GF simptico res. Primeiro, inibindo as aes daqueles fa-
bF competente glicocorticides
tores que promovem a diferenciao neural;
segundo, induzindo as enzimas caractersti-
cas das clulas adrenais. As clulas expostas
Gl seqencialmente ao fator de crescimento fi-
ico
Clula co broblstico bsico (bFGF) e ao fator de cres-
Clula rtic
pluripotente id cimento nervoso (NGF) se diferenciam em
precursora es
da crista bipotente neurnios simpticos.
neural Glicocorticides
Inibio da
diferenciao
neural Promoo
Clula de enzimas Clula cromafim
precursora cromafim (adrenomedular)
cromafim especificas
Tubo
neural
Gnglios IX, X
Clulas migratrias
da crista neural
(C) (D)
Clulas migratrias
Bolsa farngea
da crista neural
Cartilagem
facial
e
Tubo neural
Figura 7.41
Migrao de clulas da crista neural na cabea de mamferos. (A) Micrografia de varredura
eletrnica de um embrio de rato com parte de seu ectoderma lateral removido da superfcie.
A migrao da crista neural pode ser vista sobre o mesencfalo, e a migrao da coluna de
clulas da crista neural migrando para o futuro arco farngeo evidente. (B) A anlise da
migrao de clulas cranianas da crista neural de rombmeros 4-6 no camundongo sugere que
h uma migrao maior para os arcos farngeos e uma migrao menor para formao de
gnglios dos nervos cranianos. (C) Estruturas formadoras na face humana pelas clulas ecto-
mesenquimatosas da crista neural. Os elementos cartilaginosos das bolsas farngeas esto
indicados por cores, e a regio pontilhada indica o esqueleto facial produzido pelas regies
anteriores da crista ceflica. (D) Formao do septo tronco-conal (entre a aorta e a veia
pulmonar) das clulas da crista neural cardaca. Clulas da crista do crebro posterior humano
migram para os arcos farngeos 4 e 6 durante a quinta semana da gestao e entram no tronco
arterial para gerar os septos. (A de Tan e Morriss-Kay, 1985, cortesia de S.-S. Tan; B, segundo
Sechrist et al. 1993; D segundo Kirby e Waldo, 1990.)
CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma 295
Pela discusso anterior, pode parecer que todas as clulas da crista neural so
idnticas na sua potncia original. Entretanto, este no o caso. Aqui, novamente
as clulas da crista neural cranial so diferentes das clulas do tronco porque so-
mente as primeiras so capazes de formar a cartilagem da cabea. Quando a crista
neural craniana transplantada para a regio do tronco, ela participa da formao da
cartilagem do tronco, que normalmente no produzida a partir de componentes da
crista neural. Em alguns casos, essas clulas da crista neural craniana so instrudas
precocemente a respeito de quais tecidos estaro aptas a formar. Noden (1983)
removeu regies da crista neural da galinha, que normalmente deveria gerar o se-
gundo arco farngeo, e as substituiu por clulas que migrariam para o primeiro arco
farngeo. Os embries hospedeiros desenvolveram dois conjuntos de estruturas
Progenitores
unipotentes
Tipos celulares
derivados da
Cartilagem Neurnios Clulas gliais Clulas Melancitos
crista neural
colinrgicos adrenrgicas
pela crista neural do tronco ou pela crista ceflica anterior, ocorrem anormalidades
cardacas (especialmente a falta da separao artica-pulmonar). Fica evidente, que a
crista cardaca j est determinada para gerar clulas cardacas, e outras regies da
crista neural no podem substitu-la (Kirby, 1989; Kuratani e Kirby, 1991). Defeitos
cardacos congnitos no homem com freqncia ocorrem com defeitos nas glndulas
paratireide, tireide e timo. No seria surpresa se esses estivessem ligados a defeitos
na migrao de clulas da crista neural. [ecto7.html]
Camada
espinhosa
Camada
de Malpighi
Camada
basal
Lmina basal
Melancito
* A maior parte dessa pele se transforma em poeira de casa em cima de mveis e no assoalho.
Se voc tem alguma dvida, queime uma poro dessa poeira; o cheiro ser de pele chamuscada.
CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma 299
alcanar o estrato crneo e permanece na camada crnea mais ou menos duas sema-
nas. Em indivduos com psorase, uma doena caracterizada por esfoliao de uma
enorme quantidade de clulas epidrmicas, o tempo de permanncia na camada crnea
de somente dois dias (Weinstein e van Scott, 1965; Halprin, 1972). Essa condio
est ligada a uma super expresso de TGF- (a qual ocorre secundariamente a uma
inflamao imune) (Elder et al., 1989). Analogamente, se o gene TGF- for ligado a um
promotor para queratina 14 (uma das principais protenas da pele), e inserido no pro-
ncleo do camundongo, os animais transgnicos ativam o gene TGF- em suas clu-
las da pele e no podem suprimi-lo. O resultado um camundongo com pele escamosa,
pouco plo e um enorme excesso de epiderme queratinizada sobre uma nica camada
de clulas basais (Figura 7.44C; Vassar e Fuchs, 1991).
O outro fator de crescimento necessrio para a produo de epiderme o fator de
crescimento do querancito (KGF; tambm chamado fator de crescimento fibroblsti-
co 7) um fator parcrino que produzido pelos fibroblastos da derme subjacente
(derivada do mesoderma). O KGF recebido pelas clulas basais que esto acima dos
fibroblastos da derme e se considera que ele regula a proliferao dessas clulas
basais. Se o gene KGF fundido com o promotor de queratina 14 e so produzidos
camundongos transgnicos, o KGF se torna autcrino. Os animais resultantes (Figura
7.44A) tm uma epiderme espessada, pele solta, muitas clulas basais e no tm folculos
de plo, nem mesmo folculos do bigode (Guo et al., 1993). Essas clulas basais so
foradas a entrar na via de diferenciao da epiderme. A alternativa para a clula
basal ajudar a gerar o folculo do plo.
Apndices cutneos
A epiderme e a derme tambm interagem em stios especficos para criar as glndulas
sudorparas e os apndices cutneos: plos, escamas ou penas (dependendo da esp-
cie). A primeira indicao de que um folculo do plo se formar em um local especfico
uma agregao de clulas na camada basal da epiderme. Essa agregao dirigida
pelas clulas dermais subjacentes e ocorre em diferentes tempos e locais no embrio.
As clulas basais se alongam, se dividem e penetram na derme. As clulas dermais
(B) (C)
(A)
Figura 7.44
Fatores de crescimento e proliferao epidr-
mica. (A) Um camundongo transgnico ex-
pressando baixos nveis de KGF em seus que-
ratincitos. Notar a rarefao do plo ao re-
dor das patas, olhos e focinho. (B) Um ca-
mundongo de tipo selvagem. (C) Um compa-
nheiro de ninhada de (B) que est expressan-
do altos nveis de TGF- em seus queratin-
citos. Tem pele descamada e muito pouco
plo. Abaixo de cada camundongo est um
corte atravs de sua pele. O animal expres-
sando KGF em excesso no tem folculos
pilosos e um nmero aumentado de clulas
epidrmicas basais. O camundongo expres-
sando TGF- tem camadas muito extensas
de epitlio queratinizado, o qual ele descarta.
(de Vassar e Fuchs, 1991, e Guo et al., 1993.
KGF Tipo selvagem TGF- Fotografias cortesia de E. Fuchs.)
300 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Bulbo contendo
clulas germinativas
pluripotentes do
Figura 7.45 folculo piloso
Desenvolvimento de folculos pilosos na pele
fetal humana. (A) Clulas epidrmicas basais
tornam-se colunares e se abaulam ligeiramente
para dentro da derme. (B) Clulas epidrmicas
respondem a esse ingresso de clulas epidrmicas basais formando um pequeno n-
continuam a proliferar, e clulas mesenquima-
dulo (a papila dermal) abaixo do tampo epidrmico. A papila drmica, em um movi-
tosas da derme se agregam na base do germe
primrio do plo. (C) Comea a diferenciao mento ascendente, estimula as clulas basais germinativas a dividirem-se mais rapida-
da haste do plo no germe piloso alongado. mente e produzir clulas ps-mitticas que se diferenciaro na haste queratinizada do
(D) A haste pilosa queratinizada se estende da plo (veja Hardy, 1992; Miller et al., 1993). Melanoblastos, que estavam presentes
raiz do plo, o broto secundrio forma a gln- entre as clulas epidrmicas enquanto ingressavam, diferenciam-se em melancitos e
dula sebcea, e por baixo existe uma regio que transferiam seu pigmento haste (Figura 7.45). Enquanto isso ocorre, duas intumes-
pode conter as clulas germinativas pilosas cncias epiteliais comeam a crescer nos lados do folculo. As clulas da intumescn-
para o prximo ciclo produtor de plo. (E) cia inferior podem reter uma populao de clulas germinativas que regeneraro a
Fotografia de um germe piloso alongado. (Se-
haste do plo periodicamente, quando ela for descartada (Pinkus e Mehregan, 1981;
gundo Hardy, 1992, e Miller et al., 1993. Fo-
Cotsarelis et al., 1990). As clulas da intumescncia superior formaro as glndulas
tografia cortesia de W. Montagna.)
sebceas que produzem uma secreo oleosa, o sebo. Em muitos mamferos, incluindo
o homem, o sebo se mistura com clulas peridrmicas escamadas para formar a vernix
caseosa, esbranquiada, que envolve o feto no nascimento. [ecto8.html]
Os primeiros plos do embrio humano so finos, localizados muito prximos, e
formam o chamado lanugo. Esse tipo de plo geralmente descartado antes do nasci-
mento e substitudo (pelo menos em parte, por novos folculos) por plos curtos e
sedosos, o velo. Velo permanece em muitas partes do corpo humano, usualmente
consideradas sem plos como a testa e as plpebras. Em outras partes do corpo, o velo
d lugar para o plo definitivo. Durante a vida de uma pessoa, alguns dos folculos
que produziram velo podem, mais tarde, formar plos definitivos, depois reverter para
a produo de velo. As axilas das crianas, por exemplo, tm folculos que produzem
velo at a adolescncia. Nessa fase, as hastes definitivas so produzidas. Inversa-
mente, em calvcie normal masculina, os folculos do couro cabeludo voltam a produzir
plos velos muito finos e no pigmentados (Montagna e Parakkal, 1974). A localizao
e o padro de plos, penas, escamas e glndulas sudorparas envolve interaes da
epiderme e da derme, e essas sero discutidas em detalhe no Captulo 17. Da mesma
forma que existe uma clula germinativa neural, cuja descendncia se torna clulas
neurais e clulas gliais, tambm parece existir uma clula germinativa epidrmica
pluripotente, cujos descendentes podem se tornar epiderme, glndulas sebceas e
hastes de plo.
Concluses
Neste captulo acompanhamos a diferenciao do ectoderma embrionrio em uma
ampla variedade de tecidos. Vimos que o ectoderma produz trs conjuntos de clulas
durante a neurulao: (1) O tubo neural que d origem aos neurnios, s clulas gliais
CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma 301
LITERATURA CITADA
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Especificidade axnica
8
Assim, para alm de questes de quantida-
de, existem questes de padres que so es-
senciais para a compreenso da Natureza.
ALFRED NORTH WHITEHEAD (1934)
N O SOMENTE AS CLULAS PRECURSORAS NEURONIAIS MIGRAM
para os seus locais de atuao, como tambm o fazem os seus axnios.
Diferentemente da maioria das clulas cujas partes permanecem no mesmo
lugar, a clula nervosa capaz de alongar axnios que podem se estender por metros.
O axnio tem seu prprio aparelho locomotor residindo no cone de crescimento, que
Tal como o entomologista procura de bor- pode responder aos mesmos tipos de sinais que as clulas migratrias podem perce-
boletas brilhantes coloridas, minha ateno ber. Assim, o movimento axnico pode ser direcionado pela quimiotaxia, galvanotaxia,
perseguiu no jardim da matria cinzenta, e conduo por contato, tal como as clulas migratrias. Os sinais para a migrao
clulas de formas delicadas e elegantes, as axnica podem, alm disso, ser ainda mais especficos que aqueles empregados para
misteriosas borboletas da alma.
conduzir certos tipos de clulas para determinadas reas. O crebro humano, por
S. RAMN Y CAJAL (1937)
exemplo, a matria mais organizada conhecida. Cada um dos seus 1011 neurnios
tem o potencial de interagir especificamente com milhares de outras clulas, e um
neurnio grande (tal como uma clula de Purkinje ou um neurnio motor) pode
receber informaes de mais de 105 outras clulas (Figura 8.1; Gershon et al., 1985).
O entendimento da gerao dessa complexidade organizada um dos maiores desa-
fios para a cincia moderna.
Goodman e Doe (1993) enumeram oito estgios de neurognese: (1) induo e
padronizao de uma regio formadora de neurnios (neurognica); (2) nascimento e
migrao de neurnios e glia; (3) gerao de destinos celulares especficos; (4) condu-
o de cones de crescimento para alvos especficos; (5) formao de conexes sinp-
ticas; (6) ligao de fatores trficos para a sobrevivncia e diferenciao; (7) rearranjo
competitivo de sinapses funcionais; e (8) continuada plasticidade sinptica durante a
vida do organismo. Os dois primeiros processos foram tpicos do captulo anterior.
Aqui, continuamos a investigar o processo do desenvolvimento neural. [axon1.html]
307
308 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Figura 8.1
Conexes de axnios a um neurnio do
hipocampo cultivado. O neurnio foi delinea-
do pela protena sinptica sinaptotagmina, que
est presente nos terminais dos axnios que
contatam o neurnio. (Cortesia de M. Matteoli
e P. De Camilli.)
Plexo Plexo
crural crural
Axial
Axial
Sartrio Sartrio
Figura 8.3
Compensao por pequenos deslocamentos da posio de iniciao axnica no embrio do pinto.
(A) Um pedao da medula espinhal compreendendo vrios segmentos T7-S3 (stimo torcico ao
terceiro lombo-sacral) revertido no embrio de 2.5 dias. (B) Padro normal de projeo axnica
para diferentes msculos aos 6 dias. (C) Projees axnicas no segmento revertido. Os neurni-
os localizados ectopicamente finalmente acharam seus caminhos neurais apropriados e inervaram
os msculos apropriados. (de Lance-Jones e Landmesser, 1980.)
Figura 8.4
Desenvolvimento da regio neurognica de in-
setos. No blastoderma, o neuroectoderma
Embrio de Drosophila presuntivo est localizado em um outro lado
dos precursores mesodrmicos. Durante a gas-
trulao e extenso da banda germinativa, o
mesoderma se invagina da superfcie para o
interior do embrio. As clulas precursoras da
linha neural mediana so agora as clulas mais
ventrais do embrio. O ectoderma delamina
neuroblastos para dentro do embrio (junta-
Alongamento da Delaminao
mente com clulas da linha mediana ventral)
Blastoderma
Gastrulao para formar o sistema nervoso central. Os neu-
celular banda geminativa do neuroblasto
roblastos geram uma srie de clulas-me gan-
Ectoderma glionares, cada uma das quais gera dois neur-
superficial
nios. No caso, mostrado o neuroblasto 1-1.
Neuroectoderma (Segundo Goodman e Doe, 1993.)
presuntivo
Clulas presuntivas
da linha mediana Neuroblastos
Precursores
Mesoderma Ectoderma ventral (do da linha
ectoderma neurognico) mediana
Neurnios
Clula-me do Crescimento
gnglio axnico
Neuroblasto
NB 1-1
Interno
Externo
Figura 8.5
Especificao seqencial da linhagem de neuroblastos. (A) O ectoderma neurognico especi-
ficado por sinais posicionais ao longo dos eixos dorsoventral e ntero-posterior. (B,C) Agrega-
dos de neuroblastos potencias esto especificados por genes proneurais como o achaete (mostra-
do em F). (D) Interao entre neuroblastos potenciais seleciona uma clula do agregado para ser
neuroblasto, e essa clula inibe as outras clulas do agregado de se tornarem neuroblastos. (E) Os
neuroblastos brotam das clulas-me ganglionares (da maneira que ser discutida no Captulo
Ectoderma 13), cada uma indo formar dois neurnios. (F) Embrio de Drosophila corado para o transcrito
superficial
de achaete. Os agregados neurognicos expressam esse gene. Os parnteses indica um domnio
de atividade neurognica. (Segundo Goodman e Doe, 1993; fotografia de Skeath e Carrol, 1922;
cortesia de J. Skeath.)
Ectoderma
neurognico Formao de padres no sistema nervoso
O funcionamento do crebro vertebrado no depende somente da diferenciao e do
(A) Sinais posicionais:
posicionamento das clulas neurais, mas tambm das conexes especficas dessas
genes de segmentao (A/P),
genes dorso/ventrais
clulas entre si e seus alvos perifricos. De alguma maneira, os nervos de um rgo
sensorial como o olho devem se conectar a neurnios especficos no crebro, que
podem interpretar estmulos visuais, e os axnios do sistema nervoso tm que atra-
(B) Especificao neuroblstica
vessar grandes extenses de tecidos antes de inervar o tecido alvo apropriado. Como
genes de identidade neuroblstica
sabe o axnio nervoso atravessar numerosas outras clulas alvos em potencial para
fazer sua conexo especifica? Harrison (1910) sugeriu que a especificidade do cresci-
mento axnico devida s fibras nervosas pioneiras, que avanam na frente de outros
axnios e servem como guias para elas.* Essa observao simplifica, mas no resolve,
(C) Formao neuroblstica
o problema de como os neurnios formam padres apropriados de interconexes.
genes proneurais
Harrison tambm observou que os axnios devem crescer em um substrato slido, e
especulou que diferenas nas superfcies embrionrias podem permitir aos axnios
viajar em certas regies especficas. As conexes finais ocorreriam por interaes
complementares na superfcie celular:
(D) Inibio lateral
Que deve haver uma espcie de reao na superfcie entre cada tipo de fibra
genes neurognicos
nervosa e a estrutura particular a ser inervada parece claro a partir do fato de
que fibras sensoriais e motoras, embora correndo prximas no mesmo feixe,
ainda assim formem conexes perifricas apropriadas, umas com a epiderme e as
outras com o msculo... Esses Fatos sugerem que pode haver aqui certa analo-
(E) Linhagem celular neuroblstica gia com a unio do vulo com o espermatozide.
clulas-me ganglionares e genes
de identidade neural
Pesquisa sobre a especificidade de conexes neuroniais tem enfocado dois tipos
Neurnios principais de sistemas: neurnios motores, cujos axnios viajam de um nervo para um
Clulas-me
ganglionares msculo especfico, e o sistema ptico, cujos axnios originando na retina encontram
Neuroblastos
seu caminho de retorno ao crebro. Em ambos, a especificidade das conexes axnicas
desenrola-se em trs etapas (Goodman e Shatz, 1993):
(F)
Seleo de trajetria, onde os axnios viajam por uma rota que os conduz a
uma regio particular do embrio.
*Os cones de crescimento dos neurnios pioneiros migram para seus tecidos alvos enquanto as
distncias embrionrias ainda so curtas e o tecido embrionrio interveniente ainda relativamente
no-complicado. Mais tardiamente no desenvolvimento, os outros neurnios que inervam o tecido
alvo se ligam (fasciculam) ao neurnio pioneiro e assim penetram no tecido alvo. Klose e Bentley
(1989) mostraram que em alguns casos, os neurnios pioneiros morrem aps outros neurnios
terem atingido sua destinao. No entanto, tivesse esse neurnio pioneiro sido impedido de se
diferenciar, os outros axnios no teriam atingido seu tecido alvo.
CAPTULO 8 Especificidade Axnica 313
Seleo de alvo, onde os axnios, uma vez atingido a rea correta, reconhecem
e ligam-se a um conjunto de clulas com as quais podem formar conexes
estveis.
Seleo de endereo, onde os padres iniciais so refinados fazendo cada
axnio se ligar a um pequeno subconjunto (s vezes de somente um) de seus
possveis alvos.
consideraram a hiptese de que esses canais proviam sinais para guiar os axnios
em direo s regies apropriadas do crebro. Canais celulares foram tambm detec-
tados na retina do camundongo (Silver e Sidman, 1980), e parecem guiar os cones de
crescimento das clulas ganglionares da retina para o caule ptico durante seu
desenvolvimento.
A presena de canais preexistentes provavelmente no crtica para o crescimento
da maioria dos axnios. O cone de crescimento parece capaz de digerir seus prprios
canais atravs de uma matriz extracelular secretando enzimas proteolticas para sua
vizinhana imediata (Pittman, 1985).
A B
C
Figura 8.6
Efeitos dos fatores do substrato no crescimento
neural. (A,B) Efeitos de fibronectina no cres-
cimento neural de agregados da retina neural.
O agregado em (A) foi cultivado por 36 horas
em plstico de cultura de tecidos no-tratado.
O agregado em (B) foi cultivado em plstico
tratado com 50g de fibronectina por milili-
tro. (C) Crescimento de neurnios sensoriais
colocados em substrato padronizado consis-
tindo de faixas paralelas de laminina aplica-
das sobre um fundo de colgeno de tipo IV.
(A e B de Akers et al., 1981, cortesia de J.
Lilien; C de Gundersen, 1987, cortesia de R.
W. Gundersen.)
CAPTULO 8 Especificidade Axnica 315
axnios para a placa de plstico. Porm, se a placa for recoberta com fibronectina ou Cadeia A
laminina, crescimento de longos axnios so observados (Figura 8.6). Reciprocamente,
glicosaminoglicanos, outro conjunto de protenas associadas com matrizes extracelulares,
Regio de ligao Local de fixao
parecem impedir esses crescimentos neurais (Tosney e Landmesser, 1985). de clulas epiteliais de clulas RDG
A presena de tais molculas delineia as trajetrias atravs do embrio (Akers et
al., 1981; Gundersen, 1987), e muitos dos caminhos percorridos pelos axnios parecem Cadeia B1 Cadeia B2
ser pavimentados por laminina. Letourneau e colaboradores (1988) mostraram que os
axnios de certos neurnios espinhais migram atravs do neuroepitlio por uma su-
perfcie transitoriamente recoberta por laminina que indica precisamente o caminho
desses axnios. De maneira semelhante, existe muito boa correlao entre o alonga- Domnio de
Local YIGSR ligao de
mento dos axnios da retina e a presena de laminina nas clulas neuroepiteliais e colgeno
de fixao celular
astrcitos no crebro do embrio do camundongo (Cohen et al., 1986, 1987; Liesi e e migrao tipo IV
Silver, 1988). Depsitos puntiformes de laminina so vistos nas superfcies das clulas
gliais ao longo do caminho levando da retina para o tectum ptico, ao passo que reas
adjacentes onde o nervo tico deixa de crescer no h tais depsitos de laminina.
Aps os axnios da retina terem alcanado o tectum, as clulas gliais se diferenciam e
perdem sua laminina. Nesse ponto, os neurnios ganglionares da retina que formaram o Regio de
nervo tico perdem seu receptor integrina para a laminina. Depsitos de laminina podem crescimento
de neuritos
tambm ser necessrios para a regenerao do tecido neural. Clulas astrogliais conten-
do laminina puntiforme em suas superfcies podem induzir a regenerao quando colo-
cadas em embries nos quais os caminhos neuroniais do corpo caloso foram rompidos.
Existem ao menos quatro regies da glicoprotena laminina que podem sustentar
a migrao e o crescimento axnico (Figura 8.7). Primeiro, as integrinas do cone de
crescimento podem se ligar seqncia RGD da protena laminina. Segundo, outro Regio ligante de
receptor do cone de crescimento pode reconhecer a seqncia de aminocidos YIGSR heparina e axnio
na laminina, enquanto a regio de 10 aminocidos rica em isoleucina do peptdeo B2
crtica para o crescimento neurtico de certos neurnios (Matsuzawa et al., 1996). O Figura 8.7
quarto receptor para laminina do cone de crescimento a glicosiltransferase que Estrutura de laminina e propostas para regies
ligantes.
reconhece certas cadeias laterais de carboidrato da molcula de laminina (Begovac e
Shur, 1990; Thomas et al., 1990). Esses carboidratos podem residir no domnio de
crescimentos neurticos da cadeia A da laminina.
Neuroblasto lateral
Neuroblasto 7-4
Neuroblasto mediano
Neuroblasto 7-4
Clulas-me ganglionares
Prognie:
Neurnios irmos
Axnios
Cones de
crescimento
Fascculos axnicos
Figura 8.8
Cada um dos 17 segmentos do embrio preco-
ce do gafanhoto tem o mesmo padro de neu-
roblastos. Existem 30 neuroblastos laterais de O cone de crescimento G ter encontrado mais de 100 superfcies diferentes s quais
cada lado, um neuroblasto mediano e 7 precur- poderia aderir, mas ele especfico para os neurnios P. Se os neurnios P so destrudos
sores na linha mediana. Os neuroblastos da por laser, os cones de crescimento G agem anormalmente, seus filopdios procurando
linha mediana se dividem uma vez, enquanto
aleatoriamente pela superfcie migratria apropriada. Se qualquer dos outros cento e
os neuroblastos so clulas-tronco que divi-
dem-se repetidamente para formar as clulas- tantos neurnios forem destrudos, o cone de crescimento G comporta-se normalmente.
me ganglionares. Cada uma das clulas se Essa formulao de encontro de trajetrias axnicas em insetos foi chamada de
divide uma vez para fornecer dois neurnios hiptese de trajetrias marcadas porque significa que um dado neurnio pode reco-
irmos. O neuroblasto 7-4 tem uma prognie nhecer especificamente a superfcie de outro neurnio que se desenvolveu anterior-
de quase 100 neurnios, dos quais os primei- mente. A evidncia para essa especificidade vem de estudos usando anticorpos
ros 6 so aqui mostrados. (Segundo Goodman monoclonais (Bastiani et al., 1987). Neurnios aCC e pCC so neurnios irmos no
e Bastiani, 1984.) gafanhoto (ambos so derivados do neuroblastos 1-1) que tm destinos muito dife-
rentes. Alm disso, conjuntos diferentes de axnios aderem a cada um deles, criando
feixes independentes de axnio, chamados fascculos. A especificidade dessa
fasciculao depende da presena da protena fasciclina I. Essa protena encontra-
da nos dois neurnios aCC de cada segmento do embrio de 10 horas, mas no est
presente nos neurnios pCC. Perto da hora 11, porm, outros neurnios (mas no
pCC) so vistos expressar essa molcula da superfcie celular. Esses neurnios so
precisamente aqueles (RP1, RP2, U1, U2 ) cujos axnios fasciculam com aCC. Existem
pelo menos quatro molculas de fasciclina expressas em diferentes subconjuntos de
neurnios, e cada uma dessas molculas permite aos cones de crescimento de certos
neurnios reconhecer especificamente aqueles axnios com os quais iro fascicular
(Harrelson e Goodman, 1988; Zinn et al., 1988).
Em outros animais com sistemas nervosos relativamente simples, tal como a san-
guessuga, existe evidncia de que cada neurnio teria molculas de superfcie celular
qualitativamente diferentes e que essas molculas poderiam ser importantes na espe-
cificidade sinptica. O sistema nervoso da sanguessuga consiste de 34 gnglios
CAPTULO 8 Especificidade Axnica 317
(A) (B)
Figura 8.9
Neurnios funcionais especficos corados por
pareados contendo cerca de 400 neurnios cada. Foram identificados neurnios indi- anticorpos monoclonais para componentes da
viduais, e as funes de muitos desses neurnios so conhecidas. Zipser e Mckay superfcie celular. (A) Anticorpos Lan 3-1 re-
(1981) injetaram o sistema nervoso da sanguessuga em camundongos e obtiveram conhecem um nico par de neurnios em um
determinado gnglio. Esses neurnios funcio-
centenas de anticorpos monoclonais que se ligaram a vrias regies do sistema nervo-
nam na everso peniana. (B) Um conjunto de
so. Em alguns casos, essas diferenas puderam ser correlacionadas com funo. O neurnios reconhecidos pelos anticorpos Lan
anticorpo monoclonal Lan 3-1 se ligou especificamente a um nico par de neurnios 3-2; esses neurnios respondem estimulao
em cada um dos gnglios do corpo mediano (Figura 8.9). Esses pares de neurnios so nociva da pele da sanguessuga. (de Zipser e
conhecidos por controlar o processo da everso peniana nas sanguessugas em Mckay, 1981, cortesia de B. Zipser.)
copulao. Outro anticorpo monoclonal, Lan 3-2, reconheceu todos os quatro neur-
nios em cada gnglio, que respondem a estmulos mecnicos nocivos. A situao,
de acordo com Zipser e Mckay parece bastante anloga a cabos eltricos codifica-
dos por cores contendo muitos fios, onde cada fio tem sua prpria molcula (corante)
para facilitar o reconhecimento apropriado e conexo terminais.
Estudos sobre trajetrias marcadas especificamente em vertebrados esto muito
atrasados em comparao com aqueles em invertebrados, mas estudos recentes nos
neurnios motores do peixe-zebra indicam que as trajetrias marcadas tambm funci-
onam aqui. O peixe-zebra poder tornar-se o organismo de escolha em neurobiologia
desenvolvimental em vertebrados, porque tem desenvolvimento muito rpido, muitos
indivduos podem ser comparados, e os embries so transparentes, permitindo aos
neurobiologistas observar o crescimento dos axnios em embries vivos. Neurnios
podem ser identificados pela injeo de substncias marcadas por fluorescncia em
percursores neuroniais (Kimmel e Law, 1985), e o crescimento axnico pode ser segui-
do visualmente ou por registro em vdeo. Eisen e colegas (1986) observaram o alonga-
mento axnico de trs neurnios motores pioneiros nesses embries. Aps deixar a
medula espinhal, todos os trs seguiram o mesmo caminho ao longo de um msculo
at alcanarem um determinado local no embrio. Nesse ponto, eles divergiram em trs
trajetrias especficas levando aos msculos apropriados. A hiptese das trajetrias
marcadas tem sido extremamente importante tanto como modelo para a gerao de
pesquisas, como em um contexto no qual podem ser inseridos dados existentes sobre
a especificidade neuronial.
(A)
Esclertomo
(B) (C)
Figura 8.10
Repulso de cones de crescimento de gnglios da raiz dorsal. (A)
Padro segmentado do crescimento axnico atravs do mesoderma
somtico. Axnios (corados de negro com tetrxido de zinco) movem-
se atravs da poro anterior de cada somito, mas no da posterior. O
limite entre anterior e posterior est assinalado com uma estrela. (B)
Cone de crescimento de um axnio do neurnio ganglionar da raiz
dorsal crescendo sobre laminina. Seus lamelipdios e filipdios po-
dem ser facilmente visualizados. (C) Cone de crescimento colapsado
de um neurnio ganglionar da raiz dorsal quando a protena inibitria
foi adicionada cultura. (A segundo Keynes e Stern, 1984; B e C
segundo Raper e Kapfhammer, 1990. Todas as fotografias cortesia
dos autores.)
(Figura 8.10A). A superfcie celular da poro posterior do somito pode estar inibin-
do essa migrao. Davies e colegas (1990) mostraram que membranas isoladas da
poro posterior do somito causam o colapso dos cones de crescimento dos neur-
nios dos gnglios da raiz dorsal (Figura 8.10B,C). Alm disso, eles isolaram uma
frao de glicoprotena da soma de pinto, que causa o colapso desses cones; e os
componentes dessa frao so especificamente encontrados na poro posterior
dos somitos. Em insetos, a semaforina I (tambm conhecida como fasciculina IV)
uma protena transmembrana que expressa em uma banda de clulas epiteliais no
membro em desenvolvimento. Essa protena parece inibir os cones de crescimento
dos neurnios sensoriais Ti1 moverem-se para frente, levando-os a se virarem (Fi-
gura 8.11; Kolodkin et al., 1992, 1993).
G-Sema I
Figura 8.11
A ao da semaforina I no membro em desenvolvimento
do gafanhoto. Axnios de neurnios sensoriais Ti1 se
projetam para o sistema nervoso central (CNS). (As lon-
gas flechas escuras representam etapas seqenciais do ca- Ti1
minho.) Quando encontram a banda de clulas epiteliais Membro em
expressando semaforina-I, eles reorientam seus cones de Desenvolvimento
crescimento e se extendem ventralmente ao longo da borda
distal das clulas expressando a semaforina I. Quando CNS
seus filipdios se conectam ao par de clulas Cx1, eles
atravessam a borda e se projetam para o CNS. Quando a
semaforina bloqueada por anticorpos, os cones de cres-
cimento procuram aleatoriamente as clulas Cx1. (Segun-
do Kolodkin et al., 1993.) Cordo nervoso ventral
CAPTULO 8 Especificidade Axnica 319
Informaes adicionais
& Especulaes
Epitlio Olfativo
Lngua
Figura 8.15
Expresso de UNC e funo na conduo axnica. (A) No corpo
do embrio do tipo selvagem de C.elegans, neurnios sensoriais
projetam-se ventralmente e neurnios motores projetam-se dor- C. elegans
salmente. Os epidermoblastos da parede ventral do corpo expres-
sando unc-6 so preenchidos. (B) Nos embries mutantes unc-6 (A) (B)
no ocorre migrao alguma. (C) As mutaes de perda-de-
funo unc-5 somente afetam os movimentos dorsais dos neur-
nios motores. (D) As mutaes de perda-de-funo unc-40 so- neurnios Tipo
mente afetam a migrao ventral dos cones de crescimento senso- sensoriais selvagem
de unc 40+
riais. (Segundo Goodman, 1994.)
Epidermoblastos Neurnios
da parede ventral motores unc5+
do corpo
(C) (D)
Figura 8.16
Netrina inibe o crescimento de axnios trocleares da medula espinhal dorsal. Axnios trocleares,
corados para antgeno especfico do axnio troclear, emergem dorsalmente e no so inibidos
pelo explante de medula espinhal dorsal (A) ou pelas clulas COS (B). Eles so inibidos pelas
clulas COS secretando netrina-1 (C) ou pela placa do assoalho da medula espinhal (D). (Segun-
do Colamarino e Tessier-Lavigne, 1995; fotografias cortesia de M. Tessier-Lavigne).
CAPTULO 8 Especificidade Axnica 323
Neurnios aferentes Ia
(responsivos NT-3)
Aferente para mecanorreceptores
de baixo limiar
(B)
Figura 8.17
Semaforina III como inibidor seletivo de projees axnicas para a medula espinhal
ventral. (A) Trajetria de axnios em relao expresso de semaforina III na medula
espinhal do embrio de rato de 14 dias. Os neurnios responsivos neurotrofina-3
podem viajar para a regio ventral da medula espinhal, mas os neuritos aferentes para os
mecanorreceptores e neurnios receptores de temperatura e dor terminam dorsalmente.
(B) Clulas COS secretoras de semaforina III inibem o crescimento de axnios
mecanorrecepores (aqui mostrados crescendo num meio tratado com NGF, mas inibi-
dos de crescer em direo fonte de semaforina III). (C) Os neurnios que so
responsivos NT-3 para crescimento no so inibidos de se estenderem em direo
fonte de semaforina III. (A segundo Marx, 1995; B e C segundo Messersmith et al.,
1995; fotografias cortesia de A. Kolodkin.)
Tubo neural
(medula
espinhal)
Nervos
espinhais
Rudimento
renal
Intestino
Broto de
membro Figura 8.18
Micrografia eletrnica de varredura de um corte
de um embrio de pinto de 4-dias, mostrando a
Sulco emergncia de nervos espinhais para dentro do
ectodrmico broto do membro em desenvolvimento. (de
apical
Tosney e Landmesser, 1985, cortesia de
K.Tosney.)
324 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Plexo
Barreira
Nervo espinhal precursor do
Trajetria cinturo plvico
Tronco nervoso Mesnquima
dorso-anterior Barreira
Tronco Nervo do Mesnquima do plexo
nervoso ventro- msculo perinotocordal
anterior
Figura 8.19
Trajetrias de axnios motores na regio do
membro posterior do embrio do pinto. (A)
Padro neural do membro posterior. Axnios membros, o axnio se estende sobre centenas de clulas em um ambiente complexo
do neurnio motor unem-se no plexo e em se- e cambiante. Pesquisa recente descobriu vrias trajetrias e vrias barreiras que
guida se separam em troncos nervosos dorsal e ajudam a conduo dos axnios para seus destinos apropriados. Conforme mencio-
ventral. Um plexo anterior; o outro, posterior. nado acima, em cada lado da medula espinhal h blocos de tecido mesodrmico
(B) Os componentes ambientais que criam o
chamados somitos. Pouco antes dos axnios iniciarem seu alongamento, o somito
padro neural. A segmentao dos nervos es-
pinhais criada pelo esclortomo. O esclerto-
se cinde em dois tipos de tecido. A poro dorsal torna-se o dermomitomo (que
mo dorsal anterior permite a migrao, enquanto produz a derme e a musculatura do dorso), enquanto a poro ventral do somito
o esclertomo dorsal posterior e todo o ventral passa a ser o esclertomo (que produz a cartilagem vertebral). Lateralmente aos
(o mesnquima perinotocordal) uma barreira somitos, na base do broto do membro, est o mesnquima do plexo e as
para os axnios do nervo motor. O plexo prospectivas clulas do cinturo escapular. Os corpos celulares dos neurnios
mesenquimatoso permissivo, mas o cinturo motores esto nas regies ventrolaterais do tubo neural (Figura 8.19). Axnios
plvico forma uma barreira. Os dois orifcios dos neurnios motores que iro inervar os msculos dos membros esto mistura-
nessa barreira permitem a passagem e extenso dos quando emergem da medula espinhal. Populaes de axnios de vrios nveis
dos troncos nervosos. (Segundo Tosney, 1991.)
segmentais da medula espinhal podem formar um nervo espinhal comum. Esses
nervos espinhais se renem em um plexo. Nesses plexos, porm, os axnios de
diferentes regies percorrem trajetrias diferentes. Por exemplo, na Figura 8.19,
neurnios motores para msculos diferentes divergem para apropriados troncos
nervosos e finalmente se projetam para msculos singulares.
Por meio de vrias manipulaes cirrgicas foram descobertas, no embrio pre-
coce do pinto, alguns dos sinais ambientais que direcionam essa migrao. A parte
ventral do esclertomo que circunda a notocorda forma uma barreira contra o alon-
gamento do axnio motor. Apesar das clulas nessa regio parecerem soltas e facil-
mente evitadas, elas repelem os axnios em sua vizinhana. Quando o tubo neural
girado para fazer com que os neurnios motores emerjam ventralmente para essa
regio, eles imediatamente giram para evit-la, migrando somente atravs do escle-
rtomo dorsal anterior (Figura 8.19B). Assim, o esclertomo perinotocordal uma
barreira para o crescimento do axnio motor, enquanto o esclertomo anterior dorsal
uma trajetria (Tosney e Oakley, 1990; Tosney, 1991). Os axnios que progredirem
atravs do esclertomo dorsal anterior (juntamente com as clulas da crista neural
que seguem pela mesma rota) chegam ao plexo mesenquimatoso na base do broto do
membro, tambm um ambiente favorvel para o crescimento axnico. Porm, pouco
alm do mesnquima do plexo ficam as clulas precursoras do cinturo plvico.
Essas clulas inibem o crescimento axnico e os axnios se afastam delas. H dois
orifcios no tecido precursor do cinturo plvico cheios de plexo mesenquimatoso;
axnios se estendem por esses orifcios para formar os troncos nervosos anterior e
CAPTULO 8 Especificidade Axnica 325
Axnios da Retina
Tambm se postularam sinais de orientao mltipla para explicar como neurnios
retinianos individuais so capazes de enviar axnios para a rea apropriada do cre-
bro, mesmo quando transplantados para longe do nervo ptico (Harris, 1986). Essa
capacidade indica que os sinais de orientao no esto distribudos somente ao
longo da trajetria normal, mas existem atravs de todo o crebro embrionrio. Orien-
tar um axnio de um corpo celular nervoso para seu destino atravs do embrio um
fenmeno complexo, e vrios tipos de sinais diferentes podem ser usados simultane-
amente para assegurar que sejam estabelecidas as conexes corretas.
Os primeiros passos para levar os axnios retinianos para suas regies especfi-
cas no tectum ptico se realizam no interior da retina (Figura 8.20A). medida que
as clulas ganglionares retinianas se diferenciam, sua posio na margem interna da
retina determinada pelas molculas de caderina (N-caderina assim como a R-caderina
especfica da retina) das suas membranas celulares (Matsunaga et al., 1988; Inuzuka
et al, 1991). Os axnios dessas clulas crescem ao longo da superfcie interna da
retina em direo cabea do nervo ptico (Figura 8.20B). A adeso e o crescimento
dos axnios das clulas da retina podem ser controlados pela lmina basal contendo
laminina. Porm, a fixao laminina no pode explicar o direcionamento do cresci-
mento. possvel que um gradiente da molcula inibidora do proteoglicano de sulfa-
to de condroitina da matriz extracelular tenha um papel na especificao da direo
do crescimento (Hynes e Lander, 1992).
Quando os axnios penetram no nervo ptico, eles crescem sobre as clulas gliais
em direo ao crebro. Estudos in vitro sugerem que numerosas molculas de adeso
celular N-CAM, caderinas e integrinas tm funes na orientao do axnio para
o tectum ptico (Neugebauer et al., 1988). N-CAM parece ser especialmente importan-
te aqui, pois a migrao direcionada dos cones de crescimento ganglionares retinianos
326 PARTE II Padres de Desenvolvimento
(B)
Crescimento axnico direcionado
Retina Anti-N-CAM interfere
Forte crescimento neurtico em laminina in vitro
(F)
Chegada ao alvo
Perda de laminina in vivo
Perda de resposta laminina in vitro
Te c t (G)
um ptic Estabelecimento de um mapa topogrfico
o Inibidores especficos para posio. Possibilidade
de outros sinais graduados
Figura 8.20
Sinais para a orientao mltipla direcionam o movimento dos axnios dos gnglios retinianos
para o tectum ptico. (Segundo Hynes e Lander, 1992.)
Seleo de alvos
Quando os axnios chegam ao fim desse trajeto forrado de laminina, eles se espa-
lham e acham seus alvos especficos. Estudos em rs e peixes (onde os neurnios
retinianos de cada olho se projetam para o lado oposto do crebro) indicaram que
cada axnio retiniano envia seu impulso para um local especfico (uma clula ou
CAPTULO 8 Especificidade Axnica 327
Caudal
Rostral
Dorsal Dorsal
Posterior
Posterior
Anterior
Campo Campo
visual direito visual esquerdo
Ventral Ventral
OLHO ESQUERDO OLHO DIREITO
Figura 8.21
Mapa da projeo retinotectal normal no Xenopus adulto. O olho direito inerva o tectum esquer-
do, e o olho esquerdo inerva o tectum direito. Os nmeros nos campos visuais (retina) e os tecta
mostram regies de correspondncia; isto , estimulao do ponto 15 na retina direita envia
impulsos eltricos para a regio tectal esquerda 15. As flechas negras e coloridas sumariam o
padro das conexes retinotectais. (de Jacobson, 1967.)
pequeno grupo de clulas) dentro do tectum (Sperry, 1951). Como mostra a Figura
8.21, existem dois tecta ptico no crebro da r. Os axnios do olho direito entram no
tectum ptico esquerdo, enquanto aqueles do olho esquerdo formam sinapses com
as clulas do tectum ptico direito. O crescimento de neurnios no trato ptico de
Xenopus parece ser mediado por fatores de crescimento fibroblstico secretados
pelas clulas forrando o trato. Os axnios ganglionares retinianos expressam recep-
tores FGF nos seus cones de crescimento. Porm, medida que as clulas ganglio-
nares atingem o tectum, a quantidade de FGF diminui, talvez retardando os axnios
e permitindo-lhes achar seus alvos (McFarlane et al., 1995).
O mapa das conexes retinianas at o tectum ptico da r (a projeo retinotectal)
foi detalhada por Marcus Jacobson (1967). Jacobson definiu esse mapa lanando um
estreito feixe de luz numa regio pequena e limitada da retina e anotou, por meio de um
eletrodo registrador no tectum, quais clulas tectais estavam sendo estimuladas. A
projeo retinotectal de Xenopus laevis mostrada na Figura 8.21. A luz iluminando a
parte ventral da retina estimula clulas na superfcie lateral do tectum. Da mesma
maneira, luz focalizada na parte posterior da retina estimula clulas na poro caudal
do tectum. Esses estudos demonstraram uma correspondncia ponto-por-ponto entre
as clulas da retina e do tectum. Quando um grupo de clulas da retina ativado, um
grupo muito pequeno e especfico de clulas tectais estimulado. Podemos tambm
observar que os pontos formam um contnuo; em outras palavras, pontos adjacentes
na retina se projetam sobre pontos adjacentes no tectum. Esse arranjo permite r ver
uma imagem inteira. Essa intrincada especificidade levou Sperry (1965) a lanar a
hiptese da quimioafinidade:
Posterior
Anterior
Nasal
Olho
Crebro
Temporal Temporal
Tectum
Receptor Eph da
tirosina quinase
(A) (Mek-4) Ligantes (RAGS, ELF-1)
Retina
Anterior Posterior
Nasal Temporal
Tectum
Figura 8.24
(B) Gradiente da protena ligante Adeso retinotectal diferencial por gradientes
nas membranas tectais receptoras Eph da tirosina quinase e seus
ligantes. (A) Representao dos dois gradien-
tes duplos receptor Eph da tirosina quinase
(Mek-4) na retina, e seu ligante (RAGS, ELF-
1) no tectum. (B) Experimento mostrando que
axnios temporais, mas no nasais, da retina
respondem a um gradiente das membranas
tectais posteriores, se afastando ou se retardan-
Retina temporal Retina nasal do. (Segundo Barinaga, 1995.)
330 PARTE II Padres de Desenvolvimento
aqueles da regio nasal) da retina evitaram as regies expressando ELF-1. Assim, ELF-
1 pode prover sinais negativos para as regies temporais da retina.
O aparecimento de RAGS e ELF-1 regulado pela expresso da protena Engrailed.
A protena Engrailed expressa no dia 2 do desenvolvimento do pinto em uma banda
que inclui a poro caudal (posterior) do futuro tectum ptico (veja Figura 7.18). Se a
protena Engrailed for induzida experimentalmente na poro rostral do tectum, tam-
bm essa adota um fentio caudal. Quando isso ocorre, RAGS e ELF-1 so expressos
atravs de todo o tectum, e os axnios temporais so repelidos das duas metades
(Logan et al., 1996). Assim, a expresso precoce de Engrailed parece induzir a expres-
Axnios
Miotbulo
Receptores de ACh
Miotbulo
2
laminina
Figura 8.25
Diferenciao da sinapse do neurnio motor com o msculo. Partes (E) e (G) esto represen-
tadas em menor aumento que outras para dar uma viso panormica da regio onde o axnio (G) Na maturidade
encontra o msculo. (A) Um cone de crescimento se aproxima de uma clula muscular em
desenvolvimento. (B) O axnio pra e forma um contato no-especializado na superfcie do
miotbulo. A agrina, liberada pelo tubo neural, causa a agregao de receptores de aceticolina.
(C) Vesculas neurotransmissoras penetram no axnio terminal, e uma matriz extracelular
conecta o axnio terminal com a clula muscular medida que a sinapse se alarga. Essa matriz
contm uma laminina especfica do nervo. (D) Outros axnios convergem para o mesmo local
sinptico. (E) Viso geral da inervao muscular por vrios axnios (vista em mamferos no
nascimento). (F) Todos os axnios menos um so eliminados. O axnio remanescente pode se
ramificar para formar uma juno complexa com o msculo. Cada terminal do axnio est
recoberto por um processo de uma clula de Schwann e dobras se formam na membrana da
clula muscular. (G) Viso panormica da inervao muscular vrias semanas aps o nasci-
mento. (Segundo Hall e Sanes, 1993; Purves, 1994; Hall, 1995.)
CAPTULO 8 Especificidade Axnica 331
so de RAGS e ELF-1, e essas duas protenas mediam a excluso dos axnios retinianos
temporais da poro caudal (posterior) do tectum.
Seleo de endereo:
Desenvolvimento dependente de atividade
Quando um axnio contata seu alvo (em geral um msculo ou outro neurnio)
forma uma juno especializada chamada sinapse. Neurotransmissores do terminal
do axnio so liberados nessas sinapses para despolarizar ou hiperpolarizar a mem-
brana da clula do outro lado da fenda sinptica. A construo de uma sinapse
envolve vrios passos (Figura 8.25). Quando neurnios motores na medula espinhal
estendem axnios para os msculos, os cones de crescimento que contatam as
recm-formadas clulas musculares migram sobre suas superfcies. Quando o cone
de crescimento adere primeiro membrana da clula muscular, a especializao no
pode ser vista em membrana alguma. Porm, logo os terminais axnicos comeam a
acumular vesculas sinpticas contendo neurotransmissores, as membranas de ambas
as clulas se engrossam na regio de contato, e a fenda entre as clulas se enche
com matriz extracelular que inclui uma forma especfica de laminina. Essa laminina
derivada do msculo, especificamente liga os cones de crescimento dos neurnios
motores e pode agir como um sinal de parada para o crescimento axnico (Martin
et al., 1995; Noakes et al., 1995). Aps esse primeiro contato, os cones de crescimen-
to de outros axnios convergem para esse local para formar sinapses adicionais.
Durante o desenvolvimento, todos os msculos de mamferos estudados parecem
ser inervados por, ao menos, dois axnios. No entanto, essa inervao polineuronial
transitria. Durante a fase precoce da vida ps-natal, todos esses ramos axnicos,
menos um, so recolhidos. Esse rearranjo est baseado na competio entre os
axnios (Purves e Lichtman, 1980; Thompson, 1983). Quando um dos neurnios
motores est ativo, ele suprime as sinapses dos outros neurnios, possivelmente
atravs de um mecanismo dependente de xido ntrico (Dan e Poo, 1992; Wang et al.,
1995). Finalmente, as sinapses menos ativas so eliminadas. O terminal axnico
remanescente se expande e revestido pela clula de Schwann.
A formao de sinapse dependente de atividade tambm parece estar envolvida
nos estgios finais da projeo da retina para o crebro. Em embries de r, ave e
roedor tratados com tetrodotoxina, os axnios iro crescer normalmente para seus
respectivos territrios e iro estabelecer sinapses com os neurnios tectais. Porm,
o mapa retinotectal grosseiro, carente de resoluo fina. Tal como na especificao
final da sinapse do neurnio motor, a atividade neuronial necessria para a proje-
o retiniana ponto-por-ponto at os neurnios tectais (Harris, 1984; Fawcett e
OLeary, 1985; Kobayashi et al., 1990). Essa eliminao de contatos retinianos tran-
sitrios pelo tectum tambm pode envolver a expresso do xido ntrico pelas clu-
las tectais alvo (Wu et al., 1994).
Informaes adicionais
& Especulaes
O desenvolvimento de comportamentos:
Constncia e plasticidade
Um dos aspectos mais fascinantes da neurobiologia do desenvolvimento a correla-
o de certas conexes neuroniais com certos comportamentos. Existem dois aspec-
tos notveis desse fenmeno. Primeiro h aqueles casos nos quais os padres com-
plexos do comportamento esto inerentemente presentes no circuito do crebro no
nascimento. O ritmo cardaco de um embrio de pinto de 19 dias se acelera quando ele
escuta o chamado de aflio, e nenhum outro chamado provocar essa resposta
(Gottlieb, 1965). Alm disso, um pinto recm-eclodido imediatamente ir buscar abrigo
se apresentado sombra de um gavio. O gavio verdadeiro no necessrio a
sombra pela sua silhueta em papel ser suficiente, mas sombra de nenhuma outra ave
causar essa resposta (Tinbergen, 1951). Parece, portanto, que so certas conexes
neuroniais que levam a comportamentos inerentes em vertebrados.
So igualmente notveis os exemplos em que o sistema nervoso to plstico que
novas experincias podem modificar o conjunto original de conexes neuroniais,
CAPTULO 8 Especificidade Axnica 335
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CAPTULO 9 Mesoderma e Endoderma 341
Uma das principais tarefas da gastrulao criar uma camada mesodrmica entre o
endoderma e o ectoderma. Como mostra a Figura 9.2, a formao de rgos mesodrmicos
341
342 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Zigoto
Clulas
Gametas germinativas
primordiais Clivagem
Ectoderma embr. ext. Glndulas
do mnio e crio sudorparas*
Bexiga urinria
Gastrulao Unhas
Glndulas mamrias*
Alantide* ENDODERMA Cabelo
Fgado Traquia* INTESTINO
brnquios* ECTODERMA EPITLIO EXTERNO
Pncreas* PRIMITIVO
Pulmes DO CORPO
NOTOCORDA
Tubo digestivo* (CORDOME-
Cristalino do olho Glndulas
SODERMA)
sebceas*
Vescula
Tireide FARINGE MESODERMA auditiva* Epitlio
estomodeal
Bolsas farngeas*
Mecanismo do
ouvido interno Epitlio oral
Ouvido mdio* Recessos MESODERMA
tubo de eustquio tonsilares* PARAXIAL Epitlio nasal e olfativo Esmalte dentrio
DORSAL e nervo olfativo
Timo primitivo*, Lbulo anterior da hipfise
Paratireides*
paratireides* Epitlio
Corpos proctodeal
ps-branquiais* Pars neuralis
Esqueleto Razes dos nervos
Esclertomos motores espinhais da hipfise
axial Canal
Medula espinhal
Esqueleto Brotos dos anal*
Mitomos
apendicular apndices
TUBO NEURAL
Msculos dos Msculos
apndices esquelticos do tronco Retina* e
Vesculas pticas Crebro
Camadas de tecido Dermtomos nervo ptico
conjuntivo da pele Nervos motores cranianos
Epiddimo CRISTA NEURAL
vasos deferentes
Divertculo metanfrico, Nervos e gnglios Razes dos nervos
ureteres pelve renal, cranianos sensoriais sensoriais espinhais
Dutos mesonfricos
tbulos coletores
Gnglios da raiz Medula da
Mesonefro, dutos MESODERMA dorsal espinhal supra-renal
eferentes INTERMEDIRIO
Dentina
Metanefro, Dutos mulerianos Pronefro Gnglios
dentria Crnio e
tbulos renais* simpticos
MESODERMA cartilagens
Vagina* Ovidutos* tero* MESNQUIMA branquiais
LATERAL Camadas externas
DA CABEA
Mes. embr. ext. do da cabea
Ms.emb. ext. Tecido conectivo
mnio e crio ceflico
do saco vitelnico
Mesoderma somtico e alantide
Msculos
Pleura, Mesoderma Crtex da
Mesentrios Peritnio visceral
pericrdio, esplncnico supra-renal
peritnio Epimiocrdio
Estroma epicrdio Corao
Mesnquima
das gnadas Pleura visceral miocrdio
Tecido hemangioblstico
* O esquema indica somente a origem
da parte epitelial do rgo. Todos esses Tecido conjuntivo e Corpsculos Endotlio dos Endocrdio
rgos tm investimentos de sustenta- msculo liso das vsceras e sangneos vasos sangneos
o secundria de origem mesodrmica. vasos sangneos
CAPTULO 9 Mesoderma e Endoderma 343
Figura 9.1
O esquema ilustra a linhagem das partes especializadas do corpo, derivadas das trs camadas
germinativas embrionrias. As clulas germinativas esto representadas como uma linhagem
de clulas separada das trs camadas germinativas somticas pois, apesar dos precursores das
clulas germinativas se localizarem no endoderma ou mesoderrma presuntivos, elas so pro-
vavelmente um nico tipo celular. (Segundo Carlson, 1981.)
Somito
(C) Mesoderma intermedirio Celoma
(A)
Figura 9.4
Transio de um somitmero para um somito. (A) A expres- Concentrao de
so da N-caderina se correlaciona com a converso de clulas protena Notch
( C ) Notch1
mesenquimatosas soltas em um somito epitelial. (B) Nos em- ausente
bries de tipo selvagem, expresso de Notch1 vista na re- Somitos Transio Mesoderma paraxial
gio mais anterior do mesoderma paraxial no segmentado
(i.e., a poro que est sendo organizada em um somito). (C)
Em embries deficientes em Notch1, a organizao dos
somitos perturbada. (A de Hatta et al., 1987; cortesia de M.
Takeichi; B e C segundo Conlon et al., 1995.) Anterior Posterior
CAPTULO 9 Mesoderma e Endoderma 345
Clulas migratrias
(Musculatura dos membros
e ventrolateral)
Notocorda Esclertomo
(A)
Ectoderma dorsal Musculatura apaxial Ectoderma dorsal
BMP4 Msculos
?FGF5 dos
Shh membros
Figura 9.6
Modelo das principais interaes postuladas
para a modelagem do somito. (A) Sonic hed- circundam as vrtebras permitindo que as costas se curvem (Chevallier et al., 1977;
gehog da notocorda e placa do assoalho induz Christ et al., 1977). Dessa maneira, os somitos so essenciais para a formao das
formao do esclertomo; Wnt do tubo neural costas de nosso corpo: as vrtebras que circundam a espinha dorsal, os msculos e
induz a regio do mitomo que forma muscu- o tecido conectivo que seguram as junes vertebrais, a subcamada drmica da pele
latura apaxial, e a combinao da protena Wnt
das costas, e a musculatura das costas. E o que acontece com a notocorda, aquela
da epiderme e BMP4 (e talvez FGF5) do me-
soderma da placa lateral induz a poro do
estrutura mesodrmica central? Aps ter fornecido a integridade axial do embrio
mitomo que d origem aos msculos da pare- precoce, e induzido a formao do tubo neural dorsal, a maior parte degenera. Em
de corporal. Neurotrofina 3 do tubo neural pode qualquer lugar onde as clulas do esclertomo formaram o corpo vertebral, as clu-
causar a diferenciao das clulas do derma- las da notocorda morrem. No entanto, entre as vrtebras, as clulas da notocorda
mitomo. (B) diferentes fatores de transcrio formam o tecido dos discos intervertebrais, chamados ncleos pulposos. Esses so
nas diferentes regies do somito anunciam o os discos que se deslocam em certos tipos de leses nas costas.
destino celular. As clulas do esclertomo ex- A especificao do somito completada pela interao de diversos tecidos que
pressam Pax1, enquanto as clulas medianas formam o seu ambiente. A poro mediana-ventral do somito induzida a se tornar
do dermamitomo expressam a protena
esclertomo por fatores, especialmente pela protena Sonic hedgehog, secretada
miognica Myf5. As clulas laterais do derma-
mitomo expressam o fator de transcrio
pela notocorda e pela placa do assoalho do tubo neural (Fan e Tessier-Lavigne,
miognico o MyoD assim como o receptor c- 1994; Johnson et al., 1994). Se pores da notocorda (ou outra fonte de Sonic
met para o fator de espalhamento. A poro hedgehog) forem transplantadas prximas a outras regies do somito, essas regi-
central do dermamitomo torna-se a derme e es, tambm, se tornaro clulas do esclertomo. Essas clulas expressam um novo
expressa Pax3. (Segundo Cossu et al., 1996b.) fator de transcrio, Pax1, que ativa genes especficos da cartilagem e cuja presena
necessria para a formao das vrtebras (Figura 9.6; Smith e Tuan, 1996). Elas
tambm expressam I-mf, um inibidor da famlia de fatores de transcrio MyoD que
d incio formao muscular (Chen et al., 1996). Por caminhos similares, o mitomo
induzido por dois sinais distintos. As clulas musculares epaxiais (que circundam
o eixo do corpo) vm da poro medial do somito e so induzidas por fatores do tubo
neural dorsal, provavelmente membros da famlia Wnt (Mnsterberg et al., 1995;
Stern et al., 1995). Os msculos hipaxiais (que so formados pela poro medial do
somito e formam a musculatura dos membros e parede do corpo) so provavelmente
induzidos atravs da combinao de protenas Wnt procedentes da epiderme e da
protena-4 morfogentica do osso, (BMP4) da placa lateral do mesoderma (Cossu et
al., 1996a; Pourqui et al., 1996). Esses fatores levam as clulas do mitomo a expres-
sarem fatores de transcrio particulares (MyoD e Myf5) que ativam os genes espe-
cficos do msculo. O dermtomo se diferencia em resposta a outro fator secretado
pelo tubo neural, neurotrofina 3 (NT-3). Anticorpos que bloqueiam as atividades da
CAPTULO 9 Mesoderma e Endoderma 347
Mioblastos
Msculo
Homogenize e coloque
Msculo na origem de uma
placa de eletroforese
Miotubos
Enzimas de isocitrato
desidrogenase vistas
por eletroforese Enzima hbrida
formada
Origem Origem
AA AA
AB
BB BB
Informaes adicionais
& Especulaes
(A)
Myf5
ou
MyoD Miogenina MRF4
vimento muscular normal. Quando os ca- tos na formao de suas clulas muscula- al., 1995). O segundo mecanismo envolve
mundongos carecem de seus genes myf5, res (Hasty et al., 1993; Nabeshima et al., a sub-regulao de seus receptores para
eles tambm tm desenvolvimento mus- 1993). Os somitos se formaram normal- o fator de crescimento. Um dos principais
cular normal. Porm, a ausncia da prote- mente e foram compartimentalizados em fatores de crescimento que promove a di-
na Myf5 atrasa em vrios dias a formao mitomo, esclertomo e dermtomo, mas viso das clulas mioblastos o fator de
do mitomo, causando falha no desen- os mioblastos deixaram de se diferenciar crescimento fibroblstico bsico. O FGF2
volvimento adequado da poro lateral do em miofibras (Venuti et al, 1995). promove diviso da clula mioblasto, ao
esclertomo. Embora esses camundongos MyoD e seus parentes parecem ser cr- mesmo tempo que inibe a diferenciao
tenham msculos normais, suas caixas ticos para a remoo de mioblastos do ci- do mioblasto suprimindo a transcrio de
torcicas esto distorcidas e eles so in- clo celular. Conforme j mencionado, MyoD e myogenina (Vaidya et al., 1989;
capazes de respirar (Braun et al., 1992). mioblastos em diviso no se diferenciam. Brunetti e Goldfine, 1990). Os receptores
Experimentos recentes no laboratrio de Essa distino entre diviso e diferencia- FGF so perdidos quando o mioblasto se
Rudolf Jaenisch (Rudnicki et al., 1993) o caracterstica de vrios tipos celula- diferencia em uma clula muscular (Olwin
mostram que quando os genes myf5 e res derivados de populaes de clulas e Hauschka, 1988; Moore et al., 1990).
MyoD esto ambos ausentes do embrio, germinativas (Bischoff e Holtzer, 1969; Como so ativadas as protenas da fa-
no se formam msculos e costelas.* En- Holtzer et al., 1975). Parece haver duas mlia MyoD? Novos experimentos forne-
quanto MyoD e Myf5 podem substituir maneiras pelas quais o mioblasto se retira ceram as bases para algumas fascinantes
uma a outra, no parece haver redundn- do ciclo celular. O primeiro mecanismo especulaes. George-Weinstein e seus
cia nas funes da miogenina. Camun- inibir o caminho da diviso celular. Para colegas (1996) demonstraram que quan-
dongos homozigotos para uma mutao isso, a protena MyoD induz a expresso do epiblastos de galinha so isolados do
alvejada no gene myogenina morrem logo de p21, um inibidor de quinases depen- resto da gstrula e separados em clulas
aps o nascimento por causa dos defei- dentes de ciclina (Figura 9.11; Halevy et individuais, essas clulas epiblastos se
tornam msculo. Alm disso, os pesqui-
*Isso significa que existe alguma redundncia no desenvolvimento dos msculos esquelticos. sadores acharam que o mRNA de MyoD
Tal redundncia j do conhecimento dos embriologistas h longa data (Spemann, 1938), mas os
(e talvez a protena) est presente nessas
geneticistas a esto redescobrindo (para sua consternao, j que confunde a interpretao de tais
experimentos). Gould (1990) considera a redundncia desenvolvimental essencial para evoluo clulas. Parece que clulas epiblastos tm
ocorrer, j que um dos scios redundantes fica livre para conseguir uma nova funo enquanto o a capacidade preferencial de ficarem
outro scio mantm a funo original. comprometidas com os mioblastos, e que
CAPTULO 9 Mesoderma e Endoderma 351
Figura 9.13
Localizao da mensagem da scleraxis nos
locais de formao dos condrcitos. (A) Ex-
presso de scleraxis em somitos de um em-
brio de camundongo de 12,5 dias. Essa seo
foi cortada tangencialmente, e o tubo neural
corre ao longo do eixo ntero-posterior. (B)
Seo atravs de um embrio de camundongo
de 11,5 dias onde transcries de scleraxis so
vistas na cartilagem condensada do nariz e face
e nos precursores dos membros e costelas. (Se-
gundo Cserjesi et al., 1995; fotografias corte-
sia do Dr. E. Olson.)
(A) (B)
* Mutaes que afetam a formao de ndulos freqentemente causam anomalias nos membros.
Nas galinhas, as mutaes talpid so caracterizadas pela duplicao e fuso dos membros. Isso, por
sua vez, descobriu-se, ter sido causado por condensaes pr-condrognicas anormalmente grandes.
Esses grandes ndulos so causados pelo excesso de adesividade das clulas mesenquimatosas nessas
condensaes, e foi diretamente ligado a uma super expresso de N-CAM (Ede 1983; Chuong et al.,
1993). Em humanos, o gene SOX9 expresso por condensaes pr-cartilaginosas, e isso codifica
uma protena ligante de DNA. As mutaes do gene SOX9 causa displasia camptomelica, uma
doena rara do desenvolvimento esqueltico, causando uma srie de deformidades nos ossos do
corpo. A maioria dos bebs afetados morrem de parada respiratria devido a m-formao das
cartilagens traqueobronquiais e das costelas. (Wright et al., 1995).
354 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Cartilagem epifisria
Osteoblastos
Mesnquima Cartilagem Condrcitos (osso) Vasos Condrcitos
hipertrficos sangneos proliferando
Placa de
cresci-
mento
Medula
ssea
Osso
Placa de
cresci-
(A) (B) (C) (D) (E) (F) mento
(B) (C)
Cartilagem
de reserva
Clulas
cartilaginosas
em proliferao
Zona de
(A)
condrcitos
maduros
Hipertrofia e
calcificao das
clulas
cartilaginosas
Zona de
degenerao
e ossificao de
cartilagem
Osso calcificado
Figura 9.15
Proliferao de clulas na placa epifisria em
resposta ao hormnio de crescimento. (A) Re-
depositada. Enquanto as placas de crescimento epifisrio forem capazes de produzir gio cartilaginosa em um rato jovem tornado
condrcitos o osso continua a crescer. deficiente em hormnio de crescimento pela
As placas de clulas de crescimento epifisrio so muito sensveis a hormnios, e remoo de sua hipfise. (B) A mesma regio
sua proliferao estimulada pelo hormnio de crescimento e fatores de crescimento no rato aps injeo de hormnio de cresci-
semelhantes insulina. Nilsson e colegas (1986) mostraram recentemente que mento. (C) Cartilagem corada em regies parti-
hormnios de crescimento estimulam a produo do fator I de crescimento semelhan- culares da placa de crescimento. (Fotografias
te insulina (IGF-I) nesses condrcitos e que esses condrcitos respondem a isso de I. Gersh, de Bloom e Fawcett, 1975: C de
Chen et al., 1995; cortesia de P. Goetinck.)
proliferando-se. Quando eles adicionaram hormnio de crescimento placa de cresci-
mento da tbia de um camundongo jovem (que no conseguia fabricar o seu prprio
hormnio de crescimento porque suas hipfises haviam sido removidas), os hormnios
de crescimento estimularam a formao de IGF-I dos condrcitos na zona proliferativa
(veja Figura 9.15). A combinao de hormnios de crescimento e IGF-I parece fornecer
um sinal mittico extremamente forte. Os pigmeus da floresta Ituri, no Zaire, tm nveis
normais de hormnios de crescimento e IGF-I at a puberdade. No entanto, na puber-
dade, os nveis de IGF-I nos pigmeus caem para aproximadamente um tero em compa-
rao com os de outros adolescentes. Parece que IGF-I essencial para uma arrancada
normal no crescimento durante a puberdade (Merimee et al., 1987). Hormnios tambm
so responsveis pela interrupo no crescimento. No final da puberdade, nveis eleva-
dos de estrgeno e testosterona fazem com que a cartilagem remanescente da placa
epifisria sofra hipertrofia. Essas clulas cartilaginosas crescem, morrem e so substitu-
das por ossos. Sem alguma cartilagem adicional, o crescimento desses ossos cessa.
A reposio de condrcitos por osteoblastos parece depender da mineralizao
da matriz extracelular. Em embries de galinha, a fonte de clcio o carbonato de
clcio da casca do ovo, e durante o seu desenvolvimento, o sistema circulatrio da
galinha transloca aproximadamente 120 mg de clcio da casca do ovo para o esque-
leto (Tuan, 1987). Quando embries de galinha so removidos de suas cascas no
terceiro dia e crescem em cultura sem a casca (em envelopes plsticos) durante o
restante do seu desenvolvimento, muito do esqueleto cartilaginoso deficiente em
clcio no se desenvolve em tecido sseo (Figura 9.16; Tuan e Lynch, 1983). Nos
mamferos, o clcio transferido atravs da placenta e depositado na matriz pelos
356 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Figura 9.16
Mineralizao esqueltica em um embrio de
pinto de 17 dias que se desenvolve (A) em
uma cultura sem casca e (B) dentro da casca
durante a incubao normal. Os embries fo-
ram fixados e corados com vermelho de
Alizarina par mostrar a matriz calcificada. (de
Tuan e Lynch, 1983, cortesia de R. Tuan.)
(A) (B)
Clcio na matriz
Condrcitos extracelular
Figura 9.17
Deposio de clcio pelos condrcitos na regio distal da zona hipertrfica. Clcio (corado em
escuro nesta montagem de micrografia eletrnica) colocado na matriz pelas clulas em cresci-
mento. (de Brighton e Hunt, 1974; cortesia de C. T. Brighton.)
CAPTULO 9 Mesoderma e Endoderma 357
[3H] Prolina
Figura 9.18
Atividade osteoclstica na matriz ssea. (A) Micrografia eletrnica da membrana franzida de um
osteoclasto de pinto cultivado em uma matriz ssea reconstituda. (B) Seo da membrana
franzida corada para detectar presena de uma ATPase capaz de transportar ons de hidrognio da
clula. A ATPase est restrita membrana do processo celular. (C) Solubilizao de componentes
inorgnicos e colagenosos da matriz (conforme medido pela liberao de [45Ca] e prolina [3H],
respectivamente) pelos 10.000 osteoclastos incubados sobre fragmentos sseos marcados. (A e
C de Blair et al., 1986; B de Baron et al., 1986, cortesia dos autores.)
Informaes adicionais
& Especulaes
Figura 9.19
Displasia ssea humana causada por mutaes (i.e., a converso de clulas em prolifera- ainda possua proliferao de condrcitos
dominantes ativadoras do receptor 3 do fator o para cartilagem madura e osso) so aos 28 anos de idade. Sua idade ssea - a
de crescimento fibroblstico. (A) Displasia induzidas por hormnios sexuais (Kaplan quantidade de cartilagem epifisria que ha-
tanatofrica, uma condio fatal caracterizada e Grumbach, 1990). Em condies de pu- via retido - era aproximadamente a metade
por severo encurtamento das costelas e mem- berdade precoce, existe uma arrancada no de sua idade cronolgica. Descobriu-se que
bros devido cobertura das epfises por tecido crescimento inicial (tornando o indivduo nessa pessoa no estava presente qualquer
sseo. A morte devido a problemas respira- mais alto do que o seu par), seguido pela receptor de estrgeno funcional. Portanto,
trios. (B) Fotografia por raios-X de um infan- interrupo da diviso celular epifisria o estrgeno cumpre um papel na maturao
te nascido com displasia tanatofrica. (C) Se- (permitindo que seu par alcance e ultra- epifisria no sexo masculino tanto quanto
o microscpica mostrando a desorganizao passe o seu peso). No se pensava que, no feminino. Hormnios da tireide e
de uma epfise na displasia tanatofrica. Notar
no sexo masculino, o estrgeno tivesse al- hormnios relacionados paratireide tam-
a ausncia de condrcitos em diviso. (de
guma participao nesses eventos. No en- bm so importantes na regulao da matu-
Gilbert-Barness e Opitz, 1996.)
tanto, em 1994 Smith e colegas relataram o rao e no programa de hipertrofia da placa
caso verdico de um homem cujo cresci- de crescimento epifisrio (Ballock e Reddi,
mento ainda era linear apesar de ter passa- 1994). Dessa forma, crianas com hipotireoi-
do por uma puberdade normal. Suas pla- dismo so susceptveis a desenvolver do-
cas epifisrias no haviam maturado, e ele enas da placa de crescimento.[limb3.html]
(A) EMBRIO DE R
Placa neural Crista neural
Tubo neural
Somito
Notocorda Celoma
Mesoderma
somtico
Endoderma
Mesoderma
Esplncnico
Intestino Mesoderma
mdio da placa
lateral
Intestino
primitivo
Vitelo
O desenvolvimento embrionrio nos rpteis, aves e mamferos tomou uma nova dire-
o. Os rpteis desenvolveram um mecanismo para depositar ovos na terra seca,
dessa forma liberando-os para explorar nichos que no estavam to perto das guas.
Para conseguir isso, o embrio produziu quatro conjuntos de membranas extra-em-
brionrias para medi-lo com o ambiente, e mesmo que a maior parte dos mamferos
tenha desenvolvido placentas ao invs de cascas, o padro bsico das membranas
extra-embrionrias permaneceu o mesmo. Em rpteis, aves e mamferos em desenvolvi-
mento, inicialmente no existe distino entre domnios embrionrios e extra-embrio-
nrios. No entanto, como o corpo do embrio toma forma, o epitlio lateral se divide
desigualmente para criar dobras corporais, isolando o embrio do vitelo e delineando
quais reas devero ser embrionrias e quais extra-embrionrias (Miller et al., 1994).
360 PARTE II Padres de Desenvolvimento
(A) (B)
Dobra da
Cabea do embrio Celoma Celoma
Dobra da cabea do mnio cabea do mnio Embrio
extra-embrionrio extra-embrionrio
Ectoderma Ectoderma Dobra caudal
do mnio
Mesoderma somtico Mesoderma somtico
Endoderma Endoderma
Vitelo Vitelo
(C)
Crio Cavidade amnitica
Ectoderma
mnio
Tubo neural Cavidade crio-amnitica
Notocorda
Aorta
Intestino mdio
Mesnquima Intestino posterior
Endoderma
Mesoderma
Esplncnopleura
do saco vitelnico Proctdeo
Alantide adentrando o
Invaginao Alantica celoma extra-embrionrio
(D) (E)
Embrio Membrana
alantica Embrio
mnio Intestino
Alantide
Intestino mnio
Cavidade Cavidade
amnitica amnitica
Crio
Crio
Vitelo Vitelo
Saco vitelnico
Membrana
Figura 9.21 alantica
Desenho esquemtico das membranas extra-
embrionrias do pinto. O embrio est corta-
do longitudinalmente e os revestimentos de
albumina e da casca no so mostrados. (A)
embrio de 2 dias. (B) Embrio de 3 dias. (C)
Diagrama esquemtico detalhado da regio As dobras membranosas so formadas pela extenso do epitlio ectodrmico e
caudal (posterior) do embrio do pinto, mos- endodrmico escorado pelo mesoderma. A combinao de ectoderma e mesoderma,
trando a formao da alantide. (D) Embrio freqentemente referida como somatopleura, forma as membranas do mnio e crio e
de 5 dias. (E) Um embrio de 9 dias. (Segun- a combinao de endoderma e mesoderma - a esplancnopleura - forma o saco vitelnico
do Carlson, 1981.) e a alantide. Os tecidos endodrmicos e ectodrmicos agem como clulas epiteliais
funcionais; e o mesoderma gera o suprimento de sangue essencial para l e para c do
epitlio. A formao dessas dobras pode ser observada na Figura 9.21.
CAPTULO 9 Mesoderma e Endoderma 361
O Corao
Clulas se
tornam
Anterior (rostral) notocorda
m distante do ndulo de Hensen
Clulas se
tornam
Ndulo de Hensen corao
Tronco
arterioso
Ventrculo
Bulbus cordis
Seio venoso
Figura 9.22
Ectoderma Clulas formadoras do corao no embrio do pinto. (A) Origem de clulas cardacas no embrio
precoce do pinto (estgio 3b). O padro ntero-posterior geral do sulco primitivo visto no
endocrdio e miocrdio do corao. (B) Modelo para a especificaco do mesoderma cardaco.
Os caminhos da migrao mesodrmica nas vrias regies do sulco primitivo esto representados
por setas. Sinais que induzem miognese cardaca esto representados por + , e inibidores da
Mesoderma
induo cardaca esto representados como - . O mesoderma migratrio na regio 1 no encontra
indutores ou repressores. Clulas migrando da regio 3 encontram ambos. Somente clulas
migrando da regio 2 encontram o indutor sem o inibidor. (C) Micrografia eletrnica de varredura
do mesoderma formador do corao no embrio de pinto de 24 horas. O mesoderma facilmente
separado do ectoderma, mas permanece em ntima associao com o endoderma. (A segundo
Garcia-Martinez e Schoenwolf, 1993; B segundo Schultheiss et al., 1995; C de Linask e Lash,
1986, cortesia de K. Linask.)
Endoderma
(C)
fuso de primrdios pareados, mas a fuso desses dois rudimentos ocorre muito
mais tardiamente no desenvolvimento. Nesses vertebrados amniticos, o embrio
um disco achatado, e o mesoderma da placa lateral no circunda completamente
o saco vitelnico. As provveis clulas do corao se originam no sulco primitivo
precoce, um pouco posterior ao ndulo de Hensen e se estendem at cerca da
metade do seu comprimento (Figura 9.22A). Essas clulas migram atravs do sulco
e formam dois grupos de clulas mesodrmicas laterais ao (e no mesmo nvel do)
ndulo de Hensen (Figura 9.22B; Garcia-Martinez e Schoenwolf, 1993). Quando o
embrio do pinto tiver somente 18 a 20 horas de idade, essas provveis clulas do
corao se movem anteriormente entre o ectoderma e o endoderma em direo ao
meio do embrio, permanecendo em estreito contato com a superfcie endodrmica
(Figura 9.22C; Linask e Lash, 1986). Quando as clulas alcanam a rea onde o
intestino se estendeu at a regio anterior do embrio, a migrao cessa. O
direcionamento para essa migrao parece ser fornecido pelo endoderma. Se o
endoderma da regio cardaca girado com respeito ao resto do embrio, a migra-
o das clulas mesodrmicas pr-cardacas invertida. Pensa-se que o compo-
nente endodrmico responsvel por esse movimento um gradiente ntero-pos-
terior de concentrao da fibronectina. Anticorpos contra a fibronectina interrom-
pem a migrao, enquanto anticorpos contra outros componentes da matriz extra-
celular no o fazem (Linask e Lash, 1988a,b).
CAPTULO 9 Mesoderma e Endoderma 363
O endoderma tambm faz com que as clulas pr-cardacas comecem seu desen-
volvimento como msculos do corao. O endoderma anterior pode fazer com que as
clulas mesodrmicas no cardacas expressem protenas especficas do corao tan-
to em aves como em anfbios (Jacobson, 1961; Sugi e Lough, 1994; Nascone e Mercola,
1995; Schultheiss et al., 1995). Essa diferenciao ocorre independentemente nos dois
primrdios formadores do corao, um migrando ao encontro do outro. As presuntivas
clulas do corao de aves e mamferos formam um tubo de parede dupla consistindo
de um endocrdio interior e um epimiocrdio exterior. O endocrdio formar o revesti-
mento interno do corao, e o revestimento externo formar a camada dos msculos
do corao que iro bombear por toda a vida do organismo.
Com a continuao da neurulao, o intestino anterior fechado pelo dobramento
interno do mesoderma esplncnico (Figura 9.23). Esse movimento junta os dois tubos,
finalmente unindo o epimiocrdio em um tubo nico. Os dois endocrdios ficam em
uma cmara comum por um curto perodo, mas tambm iro se fundir. Nessa altura, a
dupla cmara celmica original se une para formar a cavidade do corpo que aloja o
corao. A origem bilateral do corao pode ser demonstrada atravs de interveno
cirrgica, prevenindo a fuso do mesoderma da placa lateral (Grper, 1907; DeHaan,
1959). Isso resulta em uma condio chamada crdia bfida, na qual um corao em
separado se forma em cada lado do corpo (Figura 9.24). A prxima etapa na formao
do corao a fuso dos tubos endocrdicos para formao de uma nica cmara de
bombeamento (veja Figura 9.23C,D). Essa fuso ocorre aproximadamente s 29 horas
do desenvolvimento das aves e na terceira semana da gestao humana. As partes
posteriores no fundidas do endocrdio se tornam as aberturas das veias vitelnicas
para o corao (Figura 9.25). Essas veias vo carregar nutrientes do saco vitelnico
para o seio venoso. O sangue ento passa atravs de uma lmina semelhante vlvula
de forma achatada, para a regio atrial do corao. Contraes do tronco arterioso
aceleram o sangue para a aorta.
As pulsaes do corao comeam enquanto os primrdios pareados ainda esto
se fundindo. O marcapasso dessa contrao o seio venoso. Contraes comeam
aqui e uma onda de contrao muscular ento propagada at o corao tubular.
Desse modo, o corao pode bombear sangue mesmo antes do seu intricado sistema
de vlvulas ter sido completado. As clulas musculares do corao tm na sua prpria
herana a habilidade de contrair, e clulas do corao isoladas de um rato com 7 dias
ou de embries de pintos, vo continuar a bater em placas de Petri (Harary e Farley,
1963; DeHaan, 1967). No embrio, essas contraes se tornam reguladas por estmu-
los eltricos procedentes da medula oblongata via nervo vago, e em 4 dias, o
eletrocardiograma de um embrio de pinto se aproxima daquele de um animal adulto.
Somatopleura
Cavidade
Intestino pericardial Esplncnopleura
(B)
Sulco neural (fechando) Mesnquima ceflico
Somatopleura
Cavidade
pericardial Esplancnopleura
Primrdio do Primrdio
epicrdio endocrdio
(C)
Canal neural Intestino anterior
Somatopleura
Cavidade Pericrdica
Esplancnopleura
Tubo endocrdico
Mesocrdio ventral
Epimiocrdio
(D)
Tubo neural Intestino anterior
Somatopleura
Cavidade Pericrdica
Esplancnopleura
Tubo endocrdico
Figura 9.24
Fuso dos rudimentos cardacos esquerdos e
direitos para formar um tubo cardaco nico.
(A) Embrio de pinto ( 30 horas) mostrando
os primrdios do corao pareados, encon-
trando-se nas linhas medianas ventrais. (B)
Crdia bfida no embrio do pinto causado pelo
impedimento da fuso de dois primrdios car-
dacos. (A cortesia de K. Linask; B cortesia de
R. L. DeHaan.)
(A) (B)
Razes articas
Bulbus Bulbus
cordis cordis Sulco
bulboventricular trio
esquerdo
Ventrculo Ventrculo
trio trio
Seio Venoso
Veias Seio venoso
vitelnicas
21 dias 22 dias 24 dias
Vlvula
Colches do seio
endocrdicos coronrio
fundidos
Figura 9.26
Formao das cmaras do corao. (A) Corte
diagramtico transversal do corao humano
de 4,5 semanas. Os septos do rtrio e do ven-
trculo esto crescendo em direo ao colcho
endocrdico. (B) Seo transversal do cora- bao tanto do lado esquerdo como direito do corpo) est associada a coraes com
o humano antes do nascimento. O sangue dois lados esquerdos, enquanto asplenia (ausncia do bao) est associada a cora-
pode passar do lado direito do corao para o es com dois lados direitos (Anderson et al., 1990; Ho et al., 1991). O mecanismo
esquerdo, atravs das aberturas nos septos para a assimetria esquerda-direita no entendido, mas Tsuda e colegas (1996)
primrios e secundrios do trio. (Segundo mostraram uma deposio assimtrica precoce da protena flectina, da matriz extra
Larsen, 1993.) celular, a qual pode predispor um lado do corao a se desenvolver diferentemente
do outro (Prancha 33)*.
Somitos
Estgio
Artria Subclvia Veia marginal
Figura 9.30 posterior
Vascularizao do membro anterior do pinto. (A) Desenvolvimento do sistema vascular durante
o desenvolvimento precoce do broto alar do pinto. A periferia do broto avascular; e mais
regies avasculares se formaro nas regies onde os condrcitos iro se condensar para formar
os precursores cartilaginosos para o osso. (B) Vista dorsal do broto alar injetado com tinta da
China no estgio 22. (A segundo Feinberg, 1991; B de Feinberg e Cafasso, 1995; fotografia
cortesia do Dr. R. N. Feinberg.)
crescimento vascular endotelial (VEGF), que parece ser especfica para permitir a
diferenciao dos angioblastos e sua multiplicao para formar os tubos endoteliais.
Alm disso, os receptores para VEGF so encontrados nas ilhas de sangue e em
outros lugares onde VEGF pode estar ativo (Millauer et al., 1993). Se embries de
camundongos no possuem os genes codificando o principal receptor para VEGF
(FlK1 tirosina quinase) as ilhas de sangue do saco vitelnico no aparecem, e a vascu-
(B)
lognese no ocorre. Camundongos carentes de genes para o segundo receptor para
VEGF (Flt1 tirosinoquinase), tm as clulas endoteliais e ilhas de sangue diferencia-
das, mas essas clulas no so organizadas em vasos sangneos (Fong et al.,1995;
Shalaby et al., 1995). Um terceiro fator, angiopoietina-1, intermedia a interao entre as
clulas endoteliais e os msculos lisos recrutados para cobri-las. Mutaes de cada
uma dessas angiopoietinas ou seus receptores levam a vasos sangneos mal-forma-
dos, deficientes em msculos lisos que normalmente os envolvem (Davis et al.,1996;
Suri et al., 1996; Vikkula et al., 1996).
Figura 9.31
Produo do fator da angiognese pelo tecido
fetal de camundongo. Hibridizao in situ mos-
tra que mRNA para VEGF secretado sinteti-
zado pelos glomrulos do rim fetal do camun-
dongo de 15 dias. A fotografia em campo ilu-
minado esquerda corresponde a auto-radio-
grafia em campo escuro direita. (de Breier et
al., 1992, cortesia de W. Risau.)
Arcos articos
Corao
Aorta Veia
dorsal vitelnica
Artria
vitelnica
Capilares
Seio terminal
Figura 9.32
Sistema circulatrio do embrio de ave pre-
coce. (A) Construo da vasculatura em um
formam dentro do tronco arterioso para criar dois vasos diferentes. Somente quan- somito 7 de embrio de codorna corado com
do a primeira respirao do animal recm-nascido indica que os pulmes esto pre- um anticorpo fluorescente que reconhece c-
parados para a oxigenao do sangue, o corao se modifica para bombear sangue lulas endoteliais. A ilhas de sangue podem
ser vistas nas margens. (B) Sistema circulat-
separadamente para a artria pulmonar.
rio de um embrio de pinto de 44 horas. Esta
viso mostra artrias em cor; as veias esto
pontilhadas. O seio terminal o limite externo
do sistema circulatrio e o local da gerao
das clulas do sangue. (Montagem fotogrfi-
Veia cardinal ca de Pardanaud et al., 1987; cortesia do Dr.
posterior
Vilosidades F. Dieterlen-Livre; B segundo Carlson, 1981.)
Artria Veia cardinal comum
corinicas
e veia Aorta dorsal
vitelnica
Broto pulmonar
Bolsa farngea IV
Arco artico III
Raiz artica ventral
Placenta Veia
umbilical Artria
cartida Figura 9.33
Artria Interna Sistema circulatrio de um embrio humano de
Umbilical
4 semanas. Embora nesse estgio todos os
vasos sangneos principais estejam pareados
esquerda e direita, somente so mostrados
os vasos direita. As artrias esto coloridas.
Saco vitelnico
(de Carlson, 1981.)
372 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Informaes adicionais
& Especulaes
H
em
c
ia
s
fe
ia
ta
s
is
m
at
e rn
ai
s
Forame oval
Forame oval
est aberto
Veia cava
inferior
Ducto venoso Pulmo
Parede
corporal
Rim
Fgado
Veia
umbilical De e para o NEONATO
Intestino
Artrias
umbilicais Ducto arterioso
se fecha
De e para as pernas
Forame oval
se fecha
Placenta
Figura 9.35
Redirecionamento do fluxo sangneo no nascimento. A expanso de ar para os pulmes causa
alteraes de presso que redirecionam o fluxo de sangue para o neonato. O ducto arterioso se
comprime e se fecha, rompendo a conexo entre a aorta e a artria pulmonar, e o forame oval, uma
passagem entre os trios esquerdo e direito, tambm se fecha. Dessa maneira, a circulao
pulmonar fica separada da circulao sistmica.
Enquanto muitas das clulas que possumos hoje so as mesmas clulas que adquiri-
mos quando ramos embries, existem diversas populaes de clulas que esto
constantemente se regenerando. Perdemos e repomos aproximadamente 1011 hemcias
e pequenas clulas intestinais cada dia. De onde vm essas clulas de reposio? Elas
so procedentes de populaes de clulas-tronco. Uma clula-tronco capaz de
374 PARTE II Padres de Desenvolvimento
diferenciao
Maturao e
para baixo, para tipos mais diferenciados de clulas. As clulas-tronco iniciais (S) podem
permanecer quiescentes (na fase G0 ) ou entrar no ciclo celular. Clulas-tronco que produzem
mais clulas-tronco permanecem em um nvel, mas podem se dividir para produzir um tipo de
clula de transio que cai para o prximo nvel. Em cada nvel mais baixo, a probabilidade de
cair ainda mais na prxima diviso aumenta. Finalmente, uma clula madura diferenciada
gerada. (Segundo Potten e Loeffer, 1990).
Clula-tronco
Fase S extensa proliferao, criando mais clulas-tronco (auto-renovao) assim como uma
prognie celular mais diferenciada. Clulas-tronco so, na realidade, uma populao
embrionria de clulas, que sofrem um desenvolvimento posterior dentro de um orga-
Ciclo
celular
nismo adulto. Nossas clulas sangneas, clulas das criptas intestinais, epiderme e
espermatcitos (em homens) so populaes em estado estvel de equilbrio no qual
a produo de clulas equilibra-se com a perda de clulas (Hay, 1966). Na maioria dos
casos, as clulas-tronco podem regular a produo de mais clulas-tronco ou mais
Mitose (M) Reabastecendo nicho clulas diferenciadas, quando o equilbrio estressado por leso ou pelo meio ambi-
do tronco (renovao
Diferenciao
/regenerao) ente. (Isso percebido pelo aumento da produo de uma grande quantidade de
hemcias quando o organismo sofre anoxia.) As clulas-tronco foram identificadas em
Clula-tronco intermediria
todos os tecidos mencionados anteriormente, mas elas so mais estudadas no desen-
tipo 1 volvimento das hemcias.
Potten e Loeffler (1990) apresentaram uma viso na qual algumas clulas-tronco
so potencialmente clulas-tronco no-cclicas presas em Go, enquanto outras clu-
las-tronco esto ativamente no ciclo celular. Uma clula-tronco em ciclo, normalmente
se divide para criar mais clulas-tronco, mas tambm pode gerar um tipo de clula-
tronco transitrio intermedirio (T1). Uma clula T1 pode regenerar-se, mas normal-
Clula-tronco mente prossegue para produzir um segundo tipo de clula transitria, T2. (Sob certas
intermediria tipo 2
condies, uma clula T1 pode regenerar a clula-tronco original se a populao de
clulas-tronco original estiver muito esgotada.) A clula T2 pode se manter, mas nor-
malmente se divide para criar clulas T3. Finalmente, um tipo de clula transitria
produzida, que sempre amadurece para um tipo de clula diferenciada (Figura 9.36).
Assim, o corpo vertebrado retm populaes de clulas-tronco, e essas clulas-tron-
Clula-tronco co podem produzir tanto populaes de clulas-tronco como de clulas que passaro
intermediria tipo 3 por um desenvolvimento futuro.
O caminho do desenvolvimento pelo qual uma clula-tronco passa depende do
meio molecular no qual ela reside. Isso se tornou aparente quando evidncias experi-
mentais mostrou que hemcias (eritrcitos), clulas brancas (granulcitos, neutrfilos
Blastoclula comprometida e plaquetas), e linfcitos compartilham de um precursor comum, a clula-tronco
com a diferenciao
hematopoitica pluripotencial (por vezes chamada de clula-tronco hematopotica
repopuladora a longo prazo).
Clulas--Tronco Pluripotenciais e
Clulas
Microambientes Hematopoticos
Clula madura
totalmente diferenciada
O CFU-S. A clula-tronco hematopotica pluripotencial uma das clulas mais im-
pressionantes do nosso corpo. A partir dela iro surgir eritrcitos, neutrfilos,
M Reproduo (diviso / mitose) basfilos, eosinfilos, plaquetas, mastcitos, moncitos, macrfagos dos tecidos,
Auto-reproduo / replicao osteoclastos, e os linfcitos T e B. A existncia de uma clula-tronco hematopotica
Reproduo / Replicao pluripotencial foi mostrada por Till and McCulloch (1961), que injetaram clulas da
medula ssea em camundongos fatalmente irradiados, procedentes da mesma linha-
gem gentica que os doadores da medula. (A irradiao mata as clulas
hematopoiticas do hospedeiro, permitindo que se veja as novas colnias do ca-
mundongo doador.) Algumas dessas clulas doadoras produzem ndulos discretos
no bao do animal hospedeiro (Figura 9.37). Estudos microscpicos mostraram que
esses ndulos so compostos de precursores de eritrcitos, granulcitos e plaquetas.
Assim, uma nica clula oriunda da medula ssea foi capaz de formar muitos dos
CAPTULO 9 Mesoderma e Endoderma 375
CLULAS-
TRONCO RESTRI-
CLULAS-TRONCO CLULAS EM CLULAS
TIVAS DE LINHA-
PLURIPOTENTES DIFERENCIAO DIFERENCIADAS
GEM (COMPRO-
METIDAS)
Clula-tronco
linfide Clula plasma
Clula pr-B Clula-B
e
F ent
SC mbi
oa
i cr Basfilos
M
Clula-tronco
de granulcitos Eosinfilos
Mic
roa
SCF i e n t e
mb
Neutrfilos
Clula-tronco
totipotente auto- Moncito
renovadora
Clula-tronco
mielide
Macrfagos
CFC-Meg
Megacaricito
Plaquetas
Eriotroblasto
Clulas sangneas
Proeritroblasto Reticulcito
vermelhas (hemcias)
(Eritrcitos)
Figura 9.38
Um modelo para a origem de clulas linfides e de sangue de mamferos. (Outros modelos so
consistentes com os dados e este sumariza aspectos de diversos modelos). EPO, eritropoietina;
G-CSF, fator estimulador de colnias de granulcitos; GM-CSF, fator estimulador de colnias
de granulcitos-macrfagos; IL, interleucina; LIF, fator inibidor de leucemia; M-CSF, fator
estimulador de colnias de macrfagos; SCF, fator de clulas-tronco. (Segundo Nakauchi e
Gachelin, 1993.)
CAPTULO 9 Mesoderma e Endoderma 377
Desenvolvimento Osteoclstico
pelo fornecimento de estrgeno ao indivduo, e essa perda ssea foi associada com
o aumento da produo de osteoclastos. Acredita-se que o osteoclasto (clula res-
ponsvel para formar buracos nos ossos, como descrito anteriormente) proceden-
te da mesma clula-tronco que os macrfagos e granulcitos, o CFU-GM (Kurihara
et al., 1990; Hattersley et al., 1991). O fator de crescimento interleucina 6 (IL-6)
estimula a produo de osteoclastos. No entanto, a produo de IL-6 inibida pelo
estrgeno que, quando adicionado s clulas de medula de camundongo em cul-
tura, tanto a produo de IL-6 como a de osteoclastos so inibidas (Girasole et al,
1992). Jilka e colegas (1992) mostraram que a remoo dos ovrios do camundongo
causa um aumento no nmero de CFU-GMs, acentuando o desenvolvimento do
osteoclasto, e um aumento no nmero de osteoclastos encontrados no osso. Essas
mudanas podem ser prevenidas injetando nesses camundongos estrgeno ou IL-
6. Isso sugere que o estrgeno normalmente suprime a produo de IL-6 e a forma-
o de osteoclastos em fmeas de mamferos, e que a perda ssea ps-menopausa
pode ser devida produo de novos osteoclastos pela IL-6.* [mesend4.html]
Locais de Hematopoiese
(B)
Clula
de pinto
Clula
Figura 9.39
de codorna
Mapeamento de clulas sangneas por quime-
ras pinto-codorna. (A) Fotografia de uma qui-
mera de saco vitelnico onde o blastoderma de
uma codorna foi transplantado para o saco
vitelnico de um pinto. (B) Fotografia de clu-
las de pinto e de codorna no timo de um animal
quimrico, mostrando a diferena na colorao
nuclear. As clulas linfides so todas de pin-
to, enquanto as clulas estruturais do timo so
originrias da codorna. (C) Seo atravs da
aorta de um embrio de pinto de trs dias, mos-
trando as clulas (setas) que do origem s c-
lulas-tronco hematopoiticas. Se clulas dessa
regio forem retiradas de embries de codorna
e colocadas em embries de pinto, os embries
de pinto tero sangue de codorna. (de Martin
et al., 1978, e Dieterlen-Livre e Martin, 1981,
fotografias cortesia de F. Dieterlen-Livre.) (A) (C)
CAPTULO 9 Mesoderma e Endoderma 379
(A) (B)
AGM
Saco vitelnico
Aorta dorsal
Prnefro
Mesonefro
Sulco genital
AGM CFU-C no
rudimento heptico
CFU-C
CFU-S
Figura 9.40 Clula-tronco
hematopoiticas no fgado
que duas ondas de clulas colonizam o fgado fetal. A populao menor dessas
clulas viriam do saco vitelnico e seriam predominantemente clulas CFU-C. A mai-
or parte da populao viria de stios AGM e constituiriam tanto CFU-S como clulas-
tronco hematopoiticas pluripotentes (Figura 9.40). Essa proposta foi fortalecida
com a descoberta de que camundongos com deficincia no fator de transcrio
AML1 possuem hematopoiese normal dos sacos vitelnicos, mas no tem
hematopoiese (AGM) definitiva (Okuda et al., 1996). Esses camundongos mutantes,
morrem no dia embrionrio 12,5. O seu fgado contm um pequeno nmero de hemcias
nucleadas primitivas, enquanto os fgados controles esto repletos de clulas
sangneas derivadas da AGM. A protena AML essencial para a ativao dos
genes envolvidos na hematopoiese difinitiva. Ao redor da poca do nascimento, as
clulas-tronco do fgado povoam a medula ssea, que assim se torna o principal
local formador de sangue por toda a vida adulta.
QENDODERMA
Faringe
A funo do endoderma embrionrio construir o revestimento de dois tubos den-
tro do organismo. O primeiro se estende atravs do comprimento do corpo; o tubo
digestivo. Brotos desse tubo formam o fgado, vescula biliar e o pncreas. O segun-
do, o tubo respiratrio, que cresce a partir do tubo digestivo, finalmente se bifur-
cando e se transformando nos dois pulmes. Os tubos digestivo e respiratrio
dividem uma cmara comum na regio anterior do embrio; essa regio chamada de
faringe. Bolses epiteliais exteriores da faringe do origem as amgdalas, as glndu-
las tireide, timo e paratireide.
Os tubos digestivo e respiratrio so ambos derivados do intestino primitivo
(Figura 9.41). Com o avano do endoderma em direo ao centro do embrio, so
formados o intestino anterior e posterior. Antes, a parte terminal oral bloqueada por
uma regio do ectoderma chamada placa oral, ou estomodeu. Finalmente (aproximada-
mente aps 22 dias nos embries humanos), o estomodeu se rompe, criando a abertura
oral do tubo digestivo. Essa abertura revestida por clulas ectodrmicas. Esse arran-
jo cria uma situao interessante, porque o ectoderma da placa oral est em contato
com o ectoderma do crebro, qual se curvou ao redor da poro ventral do embrio. As
duas regies ectodrmicas interagem mutualmente uma com a outra. A cobertura da
regio oral forma a bolsa de Rathke e se torna a parte glandular da glndula pituitria.
O tecido neural no assoalho do diencfalo d origem ao processo infundibular, que se
torna a poro neural da pituitria. Assim, a glndula pituitria tem um dupla origem:
essa natureza dupla se reflete em suas funes no adulto.
A poro endodrmica dos tubos digestivo e respiratrio, se inicia na faringe.
Aqui, o embrio de mamfero produz quatro pares de bolsas farngeas (Figura 9.42).
Em vertebrados aquticos, essas estruturas produzem as guelras, porm, as bolsas
farngeas humanas foram modificadas para o ambiente terrestre. Como discutido no
Captulo 7, clulas da crista neural craniana migram para essas bolsas para formar o
componente mesenquimatoso ou cartilaginoso dessas estruturas revestidas de
endoderma. Entre essas estruturas esto os arcos farngeos. O primeiro par das
bolsas farngeas se torna as cavidades auditivas do ouvido mdio e os tubos de
eustquio associados. O segundo par d origem s paredes das amgdalas. O timo
derivado do terceiro par de bolsas farngeas; ele ir direcionar a diferenciao dos
linfcitos T durante os estgios tardios do desenvolvimento. Um par das glndulas
paratireides tambm deriva do terceiro par das bolsas farngeas; o outro par deriva
do quarto. Alm dessas bolsas pareadas, um pequeno divertculo central formado
entre as segundas bolsas farngeas no assoalho da faringe. Essa bolsa de endoderma
e mesnquima brotar da faringe e migrar descendo pelo pescoo para se tornar a
glndula tireide.
CAPTULO 9 Mesoderma e Endoderma 381
(A) (B)
Ndulo de Hensen
Notocorda Vilosidade corinica
Sulco neural
mnio
Somito
Cavidade
amnitica Mesoderma somtico
Mesoderma esplncnico
Saco vitelnico
Intestino mdio
Mesentrio
Dorsal Tubo Neural
Mesentrio Tubo
Mesoderma dorsal
Somtico neural
Pncreas
Intestino Cavidade dorsal
Mdio abdominal
Peritnio
visceral
Saco vitelnico Peritnio
Duodeno
parietal
Mesentrio
Dorsal
Figura 9.41
Formao do sistema digestivo humano, apresentado aps aproximadamente (A) 16 dias, (B) 18
dias, (C) 22 dias e (D) 28 dias. (Segundo Crelin, 1961.)
382 PARTE II Padres de Desenvolvimento
Pncreas Duto
dorsal Duto biliar
pancretico Duto
Vescula Vescula biliar Vescula biliar Dorsal Duodeno pancretico
biliar Broto Broto ventral
Pncreas Duodeno Duto
pancretico pancretico ventral pancretico ventral Duto
ventral dorsal pancretico principal
(A) (B) (C) (D)
Figura 9.43
Desenvolvimento pancretico em humanos. (A)
Aps 30 dias, o broto pancretico ventral est
prximo aos primrdios hepticos. (B) Aos 35
desenvolve atravs de interaes entre o epitlio e seu mesnquima associado. dias comea a migrar posteriormente e (C) en-
Ambos tecidos tm especificidades proporcionadas por sua posio ao longo do tra em contato com o broto pancretico dorsal
eixo ntero-posterior (a ser discutido nos Captulos 16 e 17). Se o epitlio pancreti- durante a sexta semana do desenvolvimento.
co cultivado num ambiente permissivo na ausncia de mesnquima, ele se diferen- (D) Na maioria dos indivduos, o broto pan-
cretico dorsal perde o seu duto para o duodeno;
cia quase inteiramente em clulas de llhotas, secretoras de insulina e glucagon. No
porm, em cerca de 10 porcento da populao,
so produzidas estruturas acinares (secretoras de quimotripsina ou amilase) nem o sistema duplo de dutos persiste. (Segundo
dutos (Gittes et al., 1996). Isso sugere que a condio de ausncia de comando do Langman, 1981.)
epitlio pancretico a de produzir hormnios endcrinos e que as clulas secretoras
e os dutos caractersticos de sua funo digestiva (excrina) so resultado de suas
interaes com o mesnquima. O gene pdx-1 parece fornecer ao epitlio pancretico
a capacidade de responder a seu mesnquima. Camundongos carentes desse gene
no apresentam pncreas, embora seu epitlio seja capaz de se diferenciar em
clulas pr-ilhotas que sintetizam pequenas quantidades de glucagon e insulina
(Johnson et al., 1994; Ahlgren et al., 1996; Offield et al., 1996). O epitlio pancre-
tico, portanto, pode ter capacidade endcrina autnoma, mas necessita interagir
com o mesnquima para formar clulas excrinas e os dutos que transportam suas
secrees para o duodeno.
OTubo R
Tubo espiratrio
Respiratrio
Brotos dos
Divertculo respiratrio membros
(Sulco laringotraqueal)
Esfago
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Mecanismo da
Diferenciao Celular
10 Regulao transcricional da expresso gnica: Fatores de transcrio
e a ativao de promotores especficos 391
III
11 Regulao transcricional da expresso gnica: A ativao da cromatina 431
391
392 PARTE III Mecanismo da Diferenciao Celular
xons e ntrons
Quando genes so observados, a primeira coisa que se torna aparente que a maioria
dos genes de eucariotos no se parecem maioria dos genes procariotos. Genes
eucariotos no so colineares com seus produtos peptdicos. Ao contrrio, os termi-
nais 3' e 5' do mRNA eucarioto se originam de regies no-contguas no cromossomo.
Entre as regies de codificao de protenas no DNA-xons- esto seqncias inter-
caladas-ntrons- que no tm relao com a seqncia de aminocidos da protena.*
A estrutura do gene da -globina humana est ilustrada na Figura 10.1. Esse gene
consiste dos seguintes elementos:
Elementos
promotores a
montante Lder (Regio no traduzida 5) Regio no traduzida 3
TATA
Box
Figura 10.1
(B) Seqncia nucleotdica do gene da -globina
humana. (A) Representao esquemtica da
localizao da regio do promotor, stio de
iniciao da transcrio (capeamento), se-
qncia lder, xons e ntrons do gene da -
globina. xons esto coloridos; os nmeros
que os ladeiam, indicam a posio dos ami-
nocidos que codificam na -globina. (B) A
seqncia nucleotdica do gene da -globina,
mostrada do terminal 5 ao terminal 3 do
RNA. As seqncias promotoras esto en-
quadradas, como tambm esto os cdigos de
incio de traduo e terminao, ATG e TAA.
As letras maisculas grandes enquadradas em
cores correspondem a xons, e os aminoci-
dos para os quais codificam esto abreviadas
acima dos quadros. As letras maisculas pe-
quenas so as bases das seqncias interpos-
tas. Os cdons representados por letras mai-
sculas aps o trmino da traduo esto no
mRNA da globina mas no so traduzidas em
protenas. Dentro desse grupo est a seqn-
cia considerada necessria para a poliadenila-
o. Um G no primeiro ntron (seta) mutado
para um A em uma forma de +-talassemia.
(Seqncia de Lawn et al., 1980.)
O RNA nuclear original transcrito para tal gene contm a seqncia do capeamento, a
seqncia lder, os xons, os ntrons e a regio 3' no traduzida (Figura 10.2). Em
adio, ambos terminais se modificam. Um capeamento consistindo de guanosina
metilada colocado no terminal 5' do RNA em polaridade oposta ao prprio RNA.
Assim, enquanto todas as bases no precursor da mensagem esto ligadas 5a 3', a
394 PARTE III Mecanismo da Diferenciao Celular
ATG: AATAAA:
Iniciao da cdon iniciador seqncia de
Regio promotora transcrio da traduo TAA: cdon adio de poli(A)
terminador da Seqncia
(ligao da RNA
traduo terminadora da
polimerase)
transcrio
RNA NUCLEAR
(capeamento) Cauda
Processamento
RNA MENSAGEIRO
Lder Cauda
Traduo
PROTENA -GLOBINA
Modificao ps-traduo
Figura 10.2
Sumrio das etapas envolvidas na produo
da -globina e hemoglobina.
HEMOGLOBINA
estrutura do capeamento est ligada 5' a 5'. Isso significa que no h grupo fosfato 5'
livre no RNA nuclear (Figura 10.3). Molculas de RNA mensageiro esto igualmente
capeadas, apesar de no se ter certeza se o capeamento do mRNA o original
recebido no ncleo. O capeamento 5' necessrio para a ligao do mRNA ao ribossomo
e para a subseqente traduo (Shatkin, 1976).
O terminal 3' usualmente modificado no ncleo pela adio de uma cauda de
cerca de 200 resduos adenilados. Esses resduos de cido adenlico so ligados
enzimaticamente e adicionados ao transcrito. Eles no so parte da seqncia do
gene. Ambas as modificaes 3' e 5' podem proteger o RNA das exonucleases
(Sheiness e Darnell, 1973; Gedamu e Dixon, 1978), assim estabilizando a mensa-
gem e seu precursor.
ANTES DO CAPEAMENTO
Terminal 5 da molcula
APS O CAPEAMENTO
7-metil guanosina
Direo da traduo
Direo da
traduo
Estrutura do promotor
Figura 10.5
Nvel relativo de transcrio
Funo do promotor
Gene GH do rato
398 PARTE III Mecanismo da Diferenciao Celular
Implante na me adotiva
Pipeta
suporte
Informaes adicionais
& Especulaes
Linhagem de clulas de
mieloma produzindo IgG
Gillies et al., 1983). Alm disso, quando a regio do intensificador da cadeia pesada da
imunoglobulina inserida em um gene clonado de -globina, ele estimula a transcrio
daquele gene da hemoglobina somente se o gene inserido em uma clula B. Ambos,
os elementos reguladores cis e os fatores reguladores trans so necessrios para a
transcrio de gene especfico da clula.
Funo do intensificador:
Modelos temporais e espaciais de transcrio
(A) Linhagem de clulas ovarianas (B) Linhagem de clulas pancreticas (C) Linhagem de clulas pancreticas
secretando insulina excrinas (secretando quimotripsina)
Cloranfenicol
monoacetato (produto)
Cloranfenicol
(substrato)
Intensificador
viral
Intensificador de
quimotripsina
Intensificador
de insulina
Stio de ligao de Regio do o permitiu. Os intensificadores para 10 protenas excrinas compartilham uma seqn-
protena especfica intensificador
cia de consenso de 20 pares de bases, sugerindo que essas seqncias similares
do sexo yp2
tenham um papel na ativao desses genes nas clulas excrinas do pncreas (Boulet
et al., 1986). Assim, parece que a expresso dos genes em clulas endcrinas e excrinas
do pncreas controlada por intensificadores diferentes.
yp1
Intensificadores so crticos para a regulao do desenvolvimento normal, durante
Intensificador a ltima dcada foram feitas cinco generalizaes que enfatizam sua importncia para
do ovrio
a expresso gnica diferencial:
Intensificador
dos corpos 1. A maioria dos genes requer intensificadores para sua transcrio.
gorduros
2. Intensificadores so os principais determinantes do tempo e do espao (tipo
celular) na transcrio diferencial.
3. Estando o intensificador a uma distncia relativamente grande do promotor
Figura 10.13 isso significa que pode haver mltiplos sinais para determinar se um dado gene
Estrutura modular da regio do intensificador transcrito. Um gene pode ter vrios stios de intensificadores a ele ligados, e
da protena do vitelo de Drosophila. Os dois cada intensificador pode se ligar a mais de um fator (que pode regular, seja
genes da protena do vitelo ( yp1, yp2) so
inibindo ou estimulando, a transcrio).
regulados por um intensificador entre eles.
Uma regio do intensificador liga fatores de 4. A interao entre as protenas ligadas aos stios intensificadores com o sistema
transcrio nos ncleos ovarianos e permite a de transcrio agrupado no promotor considerada como regulador da trans-
expresso desses genes no ovrio. Outra re- crio. O mecanismo dessa associao no inteiramente conhecido, e nem
gio do intensificador permite a expresso do entendemos como o promotor integra todos esses sinais.
gene nos corpos gordurosos. Dentro da regio 5. Intensificadores so modulares. Existem elementos de DNA que conferem ex-
controlando a expresso dos genes das prote- presso gnica temporal e espacial, e esses podem ser misturados e pareados.
nas do vitelo nos corpos gordurosos existem Por exemplo, o intensificador da protena do vitelo da Drosophila melanogaster
seqncias de DNA que ligam fatores de trans- construdo de tal forma que um dos elementos do DNA permite a expresso
crio especficos do sexo.
do gene nos corpos gordurosos, outro elemento de DNA permite a expresso
nos ovrios e o terceiro elemento liga protenas especficas do sexo (as prote-
nas Doublesex). A protena Doublesex especfica da fmea estimula a transcri-
o; a protena especfica do macho inibe a transcrio. Assim, o gene da
protena do vitelo ativado somente nos corpos gordurosos e ovrios da
mosca fmea (Figura 10.13; Garabedian et al., 1985; An e Wensink, 1995). O
elemento de DNA para expresso nos corpos gordurosos compartilhado com
outros genes que so expressos nesse rgo, e o elemento de DNA ligado s
protenas Doublesex tambm compartilhado pelos genes cuja expresso
especfica para o sexo.
Fatores de transcrio:
Os trans-reguladores dos promotores e dos intensificadores
Fatores de transcrio so protenas que se ligam s regies intensificadoras ou pro-
motoras e que interagem de tal maneira que a transcrio ocorre somente a partir de um
pequeno grupo de promotores numa dada clula. A maioria dos fatores de transcrio
pode se ligar s seqncias especficas de DNA, e essas protenas trans-reguladoras
podem ser agrupadas em famlias baseadas em similaridades de estrutura. Dentro de
cada famlia, as protenas compartilham uma armao estrutural comum nos seus res-
pectivos stios de ligao ao DNA, e pequenas diferenas de aminocidos no stio de
ligao podem alterar a seqncia do DNA ao qual elas se ligam. Alm de terem o
domnio ligante de DNA que especfico para uma seqncia, os fatores de transcri-
o contm um domnio envolvido na ativao da transcrio do gene cujo promotor
ou intensificador ele ligou. Freqentemente, esse domnio trans-ativador permite ao
fator de transcrio interagir com protenas envolvidas na ligao da RNA polimerase.
Essa interao com freqncia aumenta a eficincia com a qual o complexo transcricio-
nal bsico pode ser construdo e ligar a RNA polimerase II. Existem vrias famlias de
fatores de transcrio; as aqui discutidas so de alguns tipos principais.
CAPTULO 10 Fatores de transcrio e promotores especficos 405
Figura 10.14
O homeodomnio da protena Engrailed se liga em um stio espec-
fico do DNA. A hlice 3 contata os pares de bases no sulco princi-
pal, enquanto a poro amino-terminal do homeodomnio entra no
sulco menor. (Segundo Pabo e Sauer, 1992.)
Protenas de homeodomnio
Abdominal B TAATTTGCAT
TCAATTAAAT
Antennapedia TAATAATAATAATAA
Bicoid TCCTAATCCC
Engrailed TCAATTAAAT
Even-skipped TCAATTAAAT
TAATAATAATAATAA
TCAGCACCG
Fushi tarazu TCAATTAAAT
TAATAATAATAATAA
Paired TCAATTAAAT
Ultrabithorax TAATAATAATAATAA
Zerknlt TCAATTAAAT
Domnio POU
Figura 10.15
Os domnios dos fatores de transcrio da famlia POU
CAPTULO 10 Fatores de transcrio e promotores especficos 407
et al., 1989). Esse sinergismo entre os stios promotor e intensificador parece ser
causado pela formao de alas no DNA entre os dois stios. No gene da prolactina do
rato, o intensificador est localizado a mais de 1300 pares de bases a montante do seu
promotor. Usando um ensaio que funde DNA aproximado por interaes protena-
protena, Cullen e colegas (1993) mostraram que as regies do promotor e do intensi-
ficador so reunidas somente quando Pit-1 e estrgeno esto presentes. Parece que
o receptor do estrgeno ligado ao hormnio no intensificador capaz de estabilizar a
interao entre essa regio e a do promotor, assim permitindo a interao entre as
protenas ligadas ao intensificador (Pit-1 e receptor do estrgeno) com o sistema de
transcrio do promotor.
Terceiro, a protena Pit-1 regula positivamente sua prpria sntese. Um dos al-
vos da protena Pit-1 o intensificador do prprio gene Pit-1 (Rhodes et al., 1993).
Uma vez que o gene Pit-1 foi ativado (por outros fatores de transcrio), a protena
Pit-1 se liga ao seu prprio intensificador e mantm a transcrio do gene Pit-1.
Esse tipo de auto-regulao positiva importante como um mecanismo que compro-
mete a clula a um determinado caminho de desenvolvimento. Assim o gene Pit-1,
uma vez ativo, mantm o fentipo da pituitria. Tal auto-regulao tambm se d para
a protena MyoD (que envolve a clula na via do desenvolvimento da clula muscu-
lar) e para vrias protenas de Drosophila que mantm os limites especficos dos
segmentos e individuais do sexo.
Informaes adicionais
& Especulaes
cpm no hbrido
PM 3.9x106 PM 6x106
Stio Bam HI
DNA embrionrio
(A)
Formao da regio varivel
(B)
Figura 10.22
Troca de classe
Formao da regio varivel do gene e troca de classe na produo de cadeias pesadas da
imunoglobulina. (A) uma cadeia pesada contm trs segmentos (V, D e J) que se juntam
para formar a regio varivel (V) e a regio constante (C). As quatro principais classes
de anticorpos so classificadas com base na regio constante (IgA contm C: IgM, C;
(C) IgG, C). (B) Antes da apresentao do antgeno, a regio varivel se forma pela unio
dos segmentos V, D e J. Esse segmento VDJ do gene est adjacente regio C e o
anticorpo resultante est localizado na membrana celular. (C) Aps a apresentao do
antgeno, pode ser feita uma ala na regio do DNA, de tal maneira que o segmento VDJ
fique adjacente a uma outra regio C (nesse caso, a regio C, que permite a anticorpos
penetrar em secrees mucosas). (D) Essa troca de classes mediada por uma srie de
seqncias (S) de trocas, adjacentes a cada uma das regies constantes. (De acordo com
Davis et al., 1980a,b.)
* At recentemente, considerava-se que as pro-
tenas recombinase eram encontradas somente em
linfcitos, mas evidncia recente (Chun et al., 1991;
Matsuoka et al., 1991) mostrou que eventos de
recombinao e recombinases existem tambm no
tecido cerebral. No se conhece a funo nas clu-
las neurais, mas fascinante especular que alguns
dos receptores que ligam o axnio da clula nervo-
sa ao seu alvo especfico podem ser feitos pela
recombinao de vrias regies do gene.
CAPTULO 10 Fatores de transcrio e promotores especficos 413
Figura 10.23
Modelo para a atividade do intensificador da
(B) Gene rearranjado: transcrio da imunoglobu- imunoglobulina. (A) A regio do intensifica-
lina dor do gene de cadeia pesada da imunoglobu-
lina parece envolver seqncias entre o seg-
mento J do gene e as seqncias de troca (S)
Intensificador precedendo C. Se o intensificador removi-
DNA do, a transcrio muito diminuda. O promo-
tor 5 precede cada um dos segmentos da re-
gio V do gene e est originalmente muito dis-
tante do intensificador. (B) O rearranjo VDJ
RNA nuclear do gene trs um promotor para perto do inten-
sificador e permite que a transcrio se con-
cretize. (C) Durante a troca de classe, o inten-
mRNA sificador permanece com os segmentos VDJ
enquanto eles so colocados perto de uma nova
regio constante (C).
(C) Gene trocado de classe: Transcrio de nova classe de imunoglobulina
Intensificador O rearranjo no gene coloca um deter-
DNA minado promotor na proximidade de um in-
tensificador. Um evento semelhante ocor-
re com o gene de cadeia pesada, e durante
RNA nuclear a troca de classe (quando uma regio do
DNA transformada em ala e deletada), a
regio do intensificador permanece prxi-
mRNA ma ao pedao VDJ (Figura 10.23).
vertida: ATGCAAAT. Quando a seqn- cia translocada para genes de globina trans-Regulao da sntese
cia octa colocada a montante de um gene clonados, a transcrio desses genes tam- de imunoglobulinas
da globina em um linfcito B cultivado, a bm pode ocorrer especificamente em linf- O rearranjo de genes em si, no sufici-
transcrio do gene de globina aumenta citos (Picard e Schaffner, 1984). Para que a ente para sua ativao, pois um gene de
de 11 a 18 vezes. Esse aumento visto so- transcrio ocorra no linfcito, o promotor imunoglobulina rearranjado no transcre-
mente em clulas linfides e no foi obser- deve ser trazido para a proximidade do in- ver ativamente quando colocado em um
vado em fibroblastos (Wirth et al., 1987). tensificador. Todos os segmentos V levam fibroblasto ou clula do fgado. Devem
A seqncia do intensificador do gene um promotor, mas somente o segmento V estar presentes fatores trans-reguladores
de cadeia leve da imunoglobulina est loca- trazido prximo regio constante (com seu especficos para a clula em questo.
lizada no primeiro ntron entre a seqncia intensificador) ser ativado (Mather e Perry, Staudt e colaboradores, em 1986, identifi-
VJ e a regio C (Queen e Baltimore, 1983; 1982). Essa localizao ocorre durante a caram dois fatores que se ligam a promo-
Bergman et al.,1984). Quando essa seqn- construo do gene da imunoglobulina. tores. Para isso, eles incubaram um pe-
queno pedao de DNA contendo uma
Pre-B B PC Non-B seqncia octa com extratos nucleares de
vrias clulas. Os produtos resultantes fo-
ram analizados em um gel. Se o extrato
Figura 10.24
Ligao no Ensaio de troca de mobilidade em gel. Extratos nucleares de clulas
especfica da linhagem B [pr-B, B e clulas de plasma (PC)] e clulas no-B
(linhagens de clulas cervicais, de fibroblastos, de clulas precur-
soras dos glbulos vermelhos do sangue) foram misturadas com
um pequeno segmento de DNA contendo o octmero. Aps incuba-
Ligao especfica o, as misturas foram separadas eletroforeticamente em um gel,
da linhagem B transferidas para papel de nitrocelulose, e hibridizadas com DNA
radioativo complementar seqncia do octmero. Na ausncia de
uma ligao, fragmento contendo o octmero migra rapidamente
para o fundo do gel. Todos os ncleos contm uma protena que se
liga no-especificamente ao octmero e impede fortemente a mi-
Fragmento de DNA grao. Os ncleos da linhagem de clulas B, entretanto, tambm
somente contm outra protena que inibe a migrao ligando-se seqncia
do octmero. (de Staudt et al., 1986, cortesia de D. Baltimore.)
414 PARTE III Mecanismo da Diferenciao Celular
(Calame, 1989). Protenas capazes de se ras, dependendo do histrico do desen- final na diferenciao de uma clula. Sa-
ligar a essas regies silenciadoras dos volvimento da clula. bemos que a transcrio desse gene da
genes da imunoglobulina tambm foram A anlise da transcrio especfica da imunoglobulina depende da atividade an-
identificadas em clulas no-B. Conclui- clula dos genes de cadeia leve da imu- terior de duas protenas nucleares, Oct2 e
se que a transcrio pode ser estimulada noglobulina progrediu, ento, para um NF-B, cuja atividade vista somente em
ou inibida por protenas trans-regulado- nvel onde se considera mais o produto linhagens de clulas B.
Hlice Hlice
Outro arranjo proeminente, identificado em protenas que se ligam aos promotores e
intensificadores do DNA, o motivo (motif) bsico hlice-ala-hlice (bHLH). Os
fatores de transcrio especficos do msculo, MyoD e miogenina (discutidos no
Captulo 9) contm esse motivo, tal como vrias outras protenas da Drosophila que Ala Ala
determinam as clulas do seu sistema nervoso perifrico: os produtos dos genes
daughterless, achaete-scute e extramacrochaetae. Como veremos no Captulo 20, os Hlice Hlice
genes que determinam o sexo na Drosophila tambm contm o modelo bHLH. As
protenas bHLH se ligam ao DNA atravs de uma regio de aminocidos bsicos Domnio de Domnio de
(tipicamente resduos 10 a 13) que precede a primeira -hlice (Figura 10.26). A hlice ligao do ligao do
contm aminocidos hidrofbicos em cada terceira ou quarta posio, fazendo com DNA DNA
que a hlice apresente uma superfcie de resduos hidrofbicos ao ambiente. Isso
permite protena um pareamento, por interaes hidrofbicas, com a mesma protena
ou outra relacionada, que apresenta tal superfcie (Jones, 1990).
Estudos recentes mostraram que homodmeros (entre duas protenas bHLH idn- Figura 10.26
ticas) no se ligam adequadamente ao DNA. Na realidade, as protenas bHLH reco- Domnios dos fatores de transcrio bsicos
nhecem suas seqncias promotoras de acordo com o seguinte paradigma (Tabela hlice-ala-hlice.
10.2). Existe uma protena bHLH ubqua, sintetizada pela maioria das clulas que
pode formar um dmero com qualquer um de dois parceiros em potencial. Um deles
um regulador positivo (que estimula a transcrio); o outro parceiro um regulador
negativo. Quando o regulador positivo se dimeriza com a protena bHLH ubqua,
forma-se um complexo ativador que estimula a transcrio dos genes que ele reconhe-
ce. Quando a dimerizao da protena com o regulador negativo, o produto resul-
tante reprime a transcrio desses mesmos genes. Por exemplo, a famlia de protenas
MyoD ativa na promoo da miognese quando complexada com as protenas E12
ou E 47- duas protenas bHLH ubquas (French et al., 1991; Lassar et al., 1991). O
desenvolvimento do msculo inibido quando as protenas MyoD, E12 ou E47 esto
ligadas protena Id (inibidor da diferenciao). A protenas Id contm o motivo
HLH, mas no a regio bsica que se liga ao DNA. Dimerizao de Id com MyoD, E12
ou E47 interfere com a habilidade dessas protenas se ligarem ao DNA, e a expresso
de Id na clula impede a atividade das protenas MyoD (Benezra et al., 1990). A prote-
na Id produzida enquanto os precursores da clula muscular ainda esto se dividin-
do, e desaparecem quando os mioblastos deixam o ciclo celular para comear a se
diferenciarem em miotubos. Se Id for super expressa em mioblastos cultivados, eles
no se diferenciaro em miotubos (Jen et al., 1992).
Informaes adicionais
& Especulaes
Figura 10.27
Representao estereoscpica da regio ligante de DNA da prote-
na bZip, C/EBP, interagindo com 20 pares de bases contendo a
seqncia CCAAT. (Topo) Vista dorsal olhando para baixo,
para uma dupla hlice do DNA e paralelamente ao zper de leucina.
(Embaixo) Vista lateral em ngulo reto ao diagrama acima e per-
pendicularmente ao eixo do DNA. Resduos de leucina conectando
as duas subunidades podem ser vistas embaixo, como tambm as
alas da tesoura no DNA. (Se voc no est acostumado a cru-
zar seus olhos para ver a estreo imagem composta, use um
estereptico.) (de Pathak e Sigler, 1992.)
na Figura 10.27 (Vinson et al., 1989; Pu e Struhl, 1991). Na figura, as duas hlices
contendo a regio ligante de DNA esto inseridas no sulco maior desse DNA, cada
hlice encontrando uma idntica seqncia de DNA. A ligao resultante assume a
aparncia de uma tesoura ou hemostato.
Sabe-se que existem vrias protenas bZIP que podem se ligar seqncia CCAAT;
uma das mais importantes chamada protena ligante do intensificador CCAAT
(C/EBP). C/EBP tem um papel na adipognese semelhante ao das protenas
miognicas bHLH na miognese. Expresso precoce de C/EBP em clulas pr-
adiposas em diviso causa a cessao da diviso celular e a iniciao do fentipo
adiposo (Umek et al., 1991). (Ao contrrio das protenas bHLH miognicas, as quais
podem converter clulas nervosas e fibroblastos em msculos, C/EBP no parece
converter outros tipos de clulas na linhagem de adipcitos). A protena bZIP C/EBP
se liga aos intensificadores de numerosos genes especficos de adipose quando a
adipognese iniciada em cultura (Figura 10.28; Christy et al., 1989; Kaestner et al.,
1990). mRNA antisenso contra C/EBP suprime a expresso coordenada de mensa-
gens especficas de adipcitos e a diferenciao de pr-adipcitos em adipcitos.
(Samuelsson et al., 1991; Lin e Lane, 1992).
C/EBP tambm enriquecido nas clulas hepticas, e um dos mais importantes
reguladores da expresso gnica especfica do fgado. Em hepatcitos de camundongo,
418 PARTE III Mecanismo da Diferenciao Celular
Figura 10.28
Adipognese (formao de clulas gordurosas) mediada pelo fator de transcrio C/EBP.
Colorao de lipdios mostrada no quadro da direita. A coluna da esquerda mostra os
mRNAs para as protenas SCD1 e GLUT4 que esto envolvidas na diferenciao de adipcitos.
(A) Adipognese normal na linhagem de clulas pr-adipcitos 3T3-L1 em cultura. Os genes
SCD1 e GLUT4 so ativados, e as clulas sintetizam e acumulam grandes quantidades de
triglicerdeos. (B,C) Duas linhagens de clulas 3T3-L1 transfectadas com RNA antisenso
contra a mensagem C/EBP. Nenhum dos genes est bem expresso, e os nveis de triglicerdeos
so 15 e 5 % do normal (de Lin e Lane, 1992.)
Informaes adicionais
& Especulaes
Outro tipo de domnio ligante a DNA o motivo dedo de zinco. Protenas dedo de zinco
incluem: WT-1 (um fator de transcrio importante, crtico na formao dos rins e das
gnadas); o fator de transcrio de ampla distribuio, Sp1; o fator de transcrio de
5S rRNA, TFIIIA de Xenopus; Krox 20 (uma protena que regula a expresso gnica no
desenvolvimento do crebro posterior); Egr-1 (que compromete o desenvolvimento
dos leuccitos para a linhagem dos macrfagos); Krppel (uma protena que especifi-
ca as clulas abdominais na Drosophila); e numerosos fatores de transcrio ligantes
de esterides. Cada uma dessas protenas tem dois ou mais dedos ligantes de DNA,
domnios em hlice, cujos aminocidos centrais tendem a ser bsicos. Esses domni-
os esto ligados em fila e so estabilizados por um on de zinco localizado centralmen-
te e coordenado por duas cistenas (na base da hlice) e duas histidinas internas
(Figura 10.30). A estrutura cristalina mostra que os dedos de zinco se ligam no sulco
principal do DNA.
A protena WT-1 contm quatro regies dedos de zinco, e usualmente expressa
nos rins e gnadas fetais. Pessoas com um alelo mutante WT1 (geralmente uma deleo
do gene ou da regio de dedo de zinco) apresentam malformaes urogenitais e de-
senvolvem o tumor de Wilm nos rins (Haber et al., 1990; Bruening et al., 1992; veja
Captulo 17). Em camundongos, ambos os genes WT1 podem ser deletados por
endereamento de genes (gene targeting), e os camundongos resultantes morrem
no tero, no tendo nem rins nem gnadas (Kriedberg et al., 1993). O fator WT1 se liga
s regies reguladoras de vrios genes que so ativos durante o desenvolvimento dos
rins e tambm se considera que ele inibe a expresso de certos fatores de crescimento
(especialmente o fator de crescimento II semelhante insulina) no rim em desenvolvi-
mento (Drummond et al., 1992).
(B)
Dedos de zinco
Cadeia principal
da protena
Mdulo 1 Mdulo 2
(C) DNA
Figura 10.31
Elemento responsivo a estrgeno
Organizao estrutural do receptor de hor-
mnios de protenas ligantes de DNA. (A)
Elemento responsivo tiroxina
e ao cido retinico Estrutura geral de uma protena ligante de
hormnio esterides. As funes de cada fra-
o foram determinadas analisando os efeitos
de mutaes em cada uma dessas regies e
esterides inclui os hormnios glicocorticides (cortisona, hidrocortisona e o horm- produzindo molculas de protenas quimri-
cas tendo regies derivadas de diferentes pro-
nio sinttico dexametasona). Esses se ligam aos receptores de hormnios glicocorti-
tenas receptoras. Uma estrutura similar
cides e lhes permitem se ligar aos elementos responsivos aos glicocorticides nos vista no receptor do cido retinico e no re-
cromossomos (Figura 10.31). ceptor do hormnio tireoideano. (B) Regio
Os elementos responsivos aos hormnios esterides so muito semelhantes entre dedo de zinco, ligante de DNA do receptor de
si e so reconhecidos pelas protenas muito relacionadas. As protenas receptoras de glicocorticides. Resduos enquadrados no
esterides contm, cada uma, trs domnios funcionais: (1) um domnio ligante de mdulo 1 discriminam entre elementos
hormnio, (2) um domnio ligante de DNA que reconhece o elemento responsivo ao responsivos a estrgenos ou glicocorticides.
hormnio, e (3) um domnio de trans-ativao que est envolvido na mediao do sinal Resduos nos crculos esto envolvidos na
para o incio da transcrio. Essas funes podem sobrepor-se parcialmente, e todos dimerizao. (C) A regio dedo de zinco do
receptor de glicocorticide ligada a seu ele-
os domnios parecem ter algum papel na ativao da transcrio (Beato, 1989). Para
mento responsivo. As seqncias de DNA
ocorrer a ativao transcricional, o receptor deve penetrar no ncleo e dimerizar com para os elementos responsivos esto mostra-
uma protena similar ligante de hormnio. A ligao do hormnio ao seu domnio das esquerda. Note que elas so palndro-
ligante de hormnio pode ser necessria para a dimerizao, translocao para o n- mos invertidos, de modo que cada dmero
cleo, e habilidade da regio ligante de DNA em reconhecer o elemento responsivo a exposto ao mesmo stio. N, qualquer base;
hormnio. (Kumar et al., 1987) GRE, elemento responsivo a glicocorticide
Os elementos responsivos aos hormnios dentro do DNA foram inicialmente (e progesterona); ERE, elemento responsivo
identificados por ensaios de ligao competitiva (Pfahl, 1982; Karin, 1984), onde a estrgeno; TRE, elemento responsivo
fragmentos de restrio especficos do DNA foram testados para verificar sua habi- tiroxina e cido retinico. A distino entre
receptores ligando glicocorticides ou
lidade de ligao a receptores de hormnios carregando hormnios radioativos.
progesterona versus receptores ligando
Usando vrios fragmentos derivados de enzimas de restrio do DNA e comparan- tiroxina ou cido retinico determinada pelo
do as seqncias de vrios elementos responsivos a glicocorticides, foi determi- espaamento dos elementos responsivos, por
nado que a seqncia de consenso do elemento responsivo ao glicocorticide quantidades limitantes de receptores, e por
AGAACANNNT-GTTCT (onde N pode ser qualquer base). Mostrou-se que essas outras interaes de elementos cis. (De acor-
seqncias ligantes de glicocorticides agem como intensificadores: quando o do com Kaptein, 1992.)
422 PARTE III Mecanismo da Diferenciao Celular
Estimular com
glicocorticide
1987; Martinez et al., 1987). Dadas as similaridades entre protenas receptoras de (A)
Enhanceosome
hormnios e as similaridades entre os elementos responsivos a hormnios, prov-
vel que cada hormnio esteride o mediador de sua ativao transcricional usan-
do o mesmo mecanismo geral.
c-Jun:c-Jun
c-Jun: c-Jun
Pouca transcrio Muita transcrio
c-Jun: c-Fos
c-Jun: c-Fos
Muita transcrio Pouca transcrio
no stio, ele poderia dirigir uma transcrio extremamente eficiente do gene Proliferin.
Essa transcrio inibida pela presena de glicocorticides. Assim, se o
glicocorticide tem um efeito estimulador ou inibidor na transcrio do gene
Proliferin depende do estado fisiolgico anterior da clula. Uma nica seqncia de
DNA ligando um determinado receptor de hormnio pode ser tanto um intensifica-
dor como um silenciador para a mesma protena.
Existem outras maneiras para um elemento cis-regulador ser ativador em algumas
situaes e repressor em outras. Por exemplo, o fator de transcrio Krppel da
Drosophila (uma protena cuja atividade veremos no Captulo 14, responsvel
pela formao do trax e abdmen superior da mosca) um ativador em baixas
concentraes e um repressor em altas concentraes. Em baixas concentraes, ele
se liga a seu elemento cis-regulador no DNA, e interage com TFIIB para facilitar a
construo do complexo de iniciao da transcrio. Em altas concentraes, ele se
liga a si mesmo, e os dmeros resultantes no complexam com TFIIB (Sauer et al.,
1995). Em lugar disso, os dmeros interagem com TFIIE e podem bloquear sua fun-
o. Se a protena p53 supressora de tumor um ativador ou repressor depende da
estrutura do promotor do gene especfico. Se existe no promotor um elemento ligante
de p53, a protena p53 age como um ativador. Se no existe um elemento p53 no
promotor, p53 pode se ligar a TAF em TFIID e impedir a transcrio. Ela pode tam-
bm interagir com o fator de transcrio WT1. Esse fator usualmente um ativador
de transcrio, mas se est ligado p53, se torna um repressor* (Figura 10.35; Seto
et al., 1992; Maheswaran et al., 1993).
*Temos boa e m novidades. A boa novidade que at o fim desta dcada, conheceremos a maioria,
seno todos os fatores de transcrio ativos em muitos tipos de clulas, e como eles interagem para iniciar
ou reprimir a transcrio. A m notcia que muitos de ns teremos que aprender fsico-qumica para
entender esses dados.
CAPTULO 10 Fatores de transcrio e promotores especficos 425
Elemento Elemento
ligante de WT1 ligante de WT1
Figura 10.36
A expresso de Myogenin no embrio de camundongo de 10.5 dias. Um gene reprter da -
galactosidase foi ligado s seqncias reguladoras a montante do gene Myogenin, e isso foi usado
para produzir camundongos transgnicos. Os embries transgnicos com 10.5 dias foram cora-
dos para identificar a presena da -galactosidade bacteriana. (A) Regio promotora de Myogenin
selvagem, mostrando todos os lugares onde o gene Myogenin usualmente expresso. (B) Ex-
presso de um promotor de Myogenin com uma mutao em um stio prximo ao gene Myogenin.
No h transcrio desse gene nos brotos dos membros. (C) Expresso de um promotor de
Myogenin com uma mutao em um stio mais a montante do gene. No vista transcrio do
promotor nos arcos farngeos, membros ou clulas centrais posteriores do mitomo. (de Cheng
et al., 1993.)
Uma srie de novas descobertas sugere que o DNA mais parecido a um certo
tipo de poltico, rodeado por um rebanho de manipuladores e consultores de
protenas que devem massage-lo vigorosamente, torc-lo e, ocasionalmente,
reinvent-lo antes que o grande plano do corpo possa fazer algum sentido.
LITERATURA CITADA
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Regulao transcricional da
expresso gnica: A ativao da cromatina
11
Enquanto meu companheiro contemplava
com seriedade e satisfao a magnfica apa-
rncia das coisas, eu me deleitava em investi-
gar suas causas.... Curiosidade, pesquisa sin-
cera para conhecer as leis misteriosas da na-
A T AGORA, limitamos nossa discusso sobre a transcrio de RNA mensa-
geiro estrutura do prprio gene. Mas genes no existem em uma forma
isolada dentro do ncleo, facilmente acessvel RNA polimerase ou s pro-
tenas ligantes de intensificador ou promotor. Ao contrrio, cromossomos eucariticos
contm tanta protena (por peso) quanto cido nucleico, e esse complexo DNA-prote-
tureza, satisfao perto do xtase enquanto na chamado cromatina. As protenas mais abundantes da cromatina so polipeptdeos
elas a mim se revelavam, esto entre as sen- bsicos chamados histonas, que so organizados em nucleossomos.
saes mais antigas que posso lembrar.
MARY WOLLSTONECRAFT SHELLEY (1817)
Alm dos nucleossomos, que so inibidores gerais da transcrio, outros elemen-
tos prioritrios na cromatina tambm podem ser importantes na regulao da expres-
Ento, no podemos negar categoricamen- so gnica. Assim, existem regies controladoras de loco (LCRs) regulando a expres-
te que em ltima anlise poderemos tritu- so de uma regio do cromossomo; existem regies associadas matriz (MARs)
rar genes em um almofariz e em seguida onde o DNA est ancorado matriz nuclear e onde podem estar ativas protenas que
cozinh-los em um bquer. desenrolam o DNA; e existem insulantes, seqncias que separam domnios regu-
H. J. MULLER (1922) ladores e assim impedem que elementos reguladores, positivos e negativos, em um
domnio possam agir em genes no domnio adjacente.
431
432 PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
DNA ligante
(A) (B)
Figura 11.2
O papel da H1 na compactao da cromatina.
(A) Cromatina de fgado de galinha observada
no microscpio eletrnico. As contas repre-
especficos de tecidos so ativados pela interrupo local de fatores repressivos sentam os nucleossomos. (B) A mesma cro-
matina aps a remoo da histona H1 por
(Weintraub, 1985). Como j mencionado, o principal mecanismo de represso geral do
eluio salina. A cromatina se tornou muito
gene provavelmente a compactao do DNA em aglomerados de nucleossomos, e a menos compacta (de Oudet et al., 1975; foto-
iniciao da transcrio depende da remoo dos nucleossomos da regio promotora grafias cortesia de P. Chambon.)
do gene. Existem duas maneiras pelas quais isso pode ser feito. Primeiro, durante a
sntese de DNA (fase S no ciclo celular), nucleossomos so removidos de uma fita de
DNA e so repostos pouco tempo depois. Nesse tempo de substituio, poderia
haver competio pelos stios promotores entre histonas e fatores de transcrio tais
como o TFIID ligante de TATA. Segundo, parece haver ativadores transcricionais
(tais como o receptor de glicocorticide) que podem se ligar aos nucleossomos exis-
tentes e desorganiz-los (Rigaud et al., 1991; Adams e Workman, 1993). Uma vez que
os nucleossomos esto dissociados na regio promotora, outros fatores de transcri-
o podem se ligar (Figura 11.3).
A habilidade dos fatores de transcrio em remover nucleossomos de genes ati-
vos e seus promotores pode ser vista em experimentos com nucleases. A acessibilida-
de de um gene s protenas nucleares pode ser detectada tratando a cromatina de um
tecido com pequenas quantidades de DNase I. Essa DNase pancretica digere regies
acessveis do DNA, mas o DNA coberto pelos nucleossomos protegido. Aps a
digesto, o DNA da cromatina tratada extrado e misturado com cDNA radioativo de
um determinado gene (Figura 11.4). Se o cDNA encontra seqncias as quais pode se
ligar, ento o gene foi protegido da digesto pelas protenas da cromatina- ou seja, ele
no estava acessvel DNase, e provavelmente no estaria acessvel tambm aos
fatores de transcrio ou RNA polimerase. Entretanto, se a sonda de cDNA no
encontra seqncias as quais possa se ligar, ento o gene foi exposto DNase e
provavelmente seria acessvel RNA polimerase e a fatores trans-reguladores.
Foi determinado que a susceptibilidade de um determinado gene ao da DNase I
dependente do tipo de clula na qual ele reside (Tabela 11.1; Weintraub e Groudine,
1976). Tratando cromatina de clulas vermelhas do sangue de pinto em desenvolvimen-
to com DNase I, e misturando o DNA extrado com cDNA radioativo de globina, esse
encontrou muito poucas possibilidades de ligao. Os genes da globina na cromatina
foram digeridos por uma pequena quantidade de DNase I. Entretanto, tratando cromati-
na de clulas de crebro com as mesmas quantidades de DNase I, essa no destruiu os
genes da globina. Portanto, o gene da globina estava acessvel s enzimas externas na
cromatina de clulas vermelhas do sangue em desenvolvimento mas no na cromatina
de clulas do crebro. De modo semelhante, o gene da ovalbumina (clara de ovo)
suscetvel digesto pela DNase I em cromatina do oviduto mas no na cromatina das
434 PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
TF se ligando ao
Um TF (fator de transcrio) nucleossomo
inicial se liga a um nucleossomo
central, deslocando parte do
ncleo da histona
Quando as histonas so
deslocadas, outros TFs
podem se ligar
Outros TFs
Histona ou
protenas carreadoras
Regies sensveis
DNase I
Fibra, 30-nm
Medida de nucleotdeos
radioativos ligados
TAF (250-kDa) de TFIID capaz de acetilar histonas H3 e H4 (Mizzen et al., 1996). Essa
atividade enzimtica pode ter um papel importante permitindo que TFIID substitua os Histona
nucleossomos. acetiltransferase
Fetal
Genes da globina
Genes da globina
Adulto
minoritrio
Adulto
majoritrio
Protenas
globina
Saco vitelnico
Porcentagem da sntese
total de globina
Figura 11.8
Porcentagens de cadeias polipeptdicas de
hemoglobina em funo do desenvolvimento
humano. A importncia fisiolgica da cadeia
de globina na hemoglobina fetal foi exami-
nada no Captulo 9. (De acordo com Karlsson Idade ps-concepo Nascimento Idade ps-natal
e Nienhaus, 1985.) (semanas) (semanas)
CAPTULO 11 A Regulao Transcricional da Expresso Gnica 439
LCR
Protenas ligantes
do promotor
(iii)
LCR
Promotor ou
intensificador
hipersensveis
Informaes adicionais
& Especulaes
Intensificador intragnico
12 semanas
Inativo Ativo
globina
clonados foram transcritos. Se certas regies dos genes de globina clonados forem
protegidos da metilao, antes de adicion-los s clulas, ser possvel criar clones
nos quais os genes da globina tm seqncias idnticas mas diferentes padres de
metilao. Um gene completamente no metilado transcrito, enquanto que um gene
completamente metilado (grupo metila em cada apropriado resduo C) no transcrito.
Usando clones parcialmente metilados, Busslinger e colaboradores mostraram que a
metilao na regio 5 do gene da globina (nucleotdeos 760 a +100) previne a
transcrio. Parece, portanto, que a metilao no terminal 5 de um gene tem um
papel direto na regulao da expresso gnica. De modo geral, a metilao da regio
promotora inibe a transcrio de genes.
Figura 11.13
Modelo para a propagao de padres de metilao. Quando o DNA se replica, somente uma
das duas fitas (a fita velha) retm o padro original de metilao. A outra fita (a fita nova)
no metilada. Uma enzima metilante especfica para CpG seria capaz de se ligar aos pares de
CpG onde um resduo C estava metilado, e ento metilaria o resduo C na fita complementar.
(De acordo com Browder, 1984.)
444 PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
outros tipos de clulas, esse gene especfico para o msculo permaneceu metilado.
A desmetilao especfica para o msculo no necessitou de sntese de novo
DNA mas certas seqncias cis-DNA foram necessrias (Yisraeli et al., 1986;
Paroush et al., 1990). Uma situao semelhante foi vista na desmetilao de genes
da imunoglobulina e vitelogenina (protena do vitelo) (Frank et al., 1990; Jost,
1993). Portanto, a metilao pode ser necessria para estabilizar o padro de trans-
crio do gene, mas a ativao inicial do gene provavelmente realizada por
fatores de transcrio especficos para tecidos.
Como que a metilao impede a transcrio? Uma possibilidade que os fatores
de transcrio no podem se ligar s suas seqncias intensificadoras ou promoto-
ras se o DNA estiver metilado (Iguchi-Ariga e Schaffner, 1989). Outra possibilidade
que o DNA metilado seja especificamente reconhecido por certas protenas que
competem contra os fatores de transcrio por esses stios. Boyse e Bird (1991,
1992) forneceram evidncias para esse segundo modelo mostrando que seqncias
promotoras metiladas esto ligadas por uma protena ligante de metil-CpG. Essa
protena parece competir com a ligao de fatores de transcrio, desse modo redu-
zindo a transcrio desses stios.
A metilao do DNA pode tambm influenciar a formao de nucleossomos. Keshet
e colaboradores (1986) demonstraram que a metilao afeta a estrutura da cromatina e
sugerem que a desmetilao cria stios hipersensveis DNase I. Quando eles
transfectaram genes da globina desmetilados em ncleos de fibroblastos de camun-
dongo, os genes foram empacotados em cromatina sensvel DNase (independente
da habilidade transcricional do gene). Quando os mesmos genes foram metilados em
todos os stios CpG, as regies sensveis DNase no se formaram, possivelmente
porque sua metilao os levou a um empacotamento de forma inacessvel. possvel
que quando os fatores trans-reguladores removem os nucleossomos do DNA, essas
regies se tornam desmetiladas. Essa desmetilao pode ser necessria para estabili-
zar essas regies de atividade. Os grupos metila interagiriam com as histonas para
permitir que os nucleossomos se formem somente no DNA metilado e no no DNA
desmetilado, deixando as regies ativas livres de nucleossomos no DNA (Keshet et
al., 1986). Uma vez estabelecidas essas regies, seria mais fcil para outros elementos
trans-reguladores encontrar essas regies livres de nucleossomos.
Informaes adicionais
& Especulaes
Tabela 11.2 Evidncia que a impresso gnica afeta o fentipo em temporal e espacialmente a atividade gnica
distrbios do gene humano no cromossomo 15 (loco 11q13) e o comportamento cromossmico.
Swain e colaboradores (1987) acompa-
Origem genitora nharam esses eventos seguindo um gene
especfico que sofre metilao diferencial no
Me Pai Fentipo espermatozide e no vulo. Eles produzi-
ram uma linhagem de camundongos trans-
Alelo normal Alelo mutante Sndrome de Prader-Willi
gnicos nos quais um gene particular, c-myc,
Alelo mutante Alelo normal Sndrome de Angelman foi inserido em uma regio particular do ge-
noma do camundongo. Quando esse gene
Duas cpias do alelo Alelo ausente Sndrome de Prader-Willi foi herdado do genitor macho, ele foi trans-
crito especificamente no corao e em ne-
Alelo ausente Duas cpias do alelo Sndrome de Angelman
nhum outro tecido. Quando esse gene foi
Fonte: De acordo com Nicholls et al., 1993. herdado do genitor fmea, ele no se ex-
pressou. O padro de expresso foi
correlacionado com o grau de metilao;
esse gene metilado durante a maturao
fentipos, dependendo se a perda no cro- A Figura 11.14 mostra o resultado de do vulo mas permanece hipometilado du-
mossomo derivado do homem ou da mulher um experimento onde DNA de espermato- rante a formao do espermatozide. Em
(Tabela 11.2). Se o cromossomo com o seg- zide foi isolado e tratado com HpaII ou animais que herdam o transgene do macho,
mento defeituoso ou ausente vem do pai, a MspI. A sonda foi um DNA radioativo do o gene no est metilado e expresso no
criana nasce com a sndrome de Prader- segundo xon do gene da globina. A corao. Em animais que adquirem o
Willi, uma doena associada a um ligeiro auto-radiografia de fragmentos da diges- transgene de suas mes, o gene metilado
retardamento mental, obesidade, gnadas to com MspI mostra que essa sonda se e silencioso. Em ambos, macho e fmea, o
pequenas e baixa estatura. Se o gene defei- liga a fragmentos de DNA com 1400 pares padro de metilao eliminado nas clulas
tuoso ou ausente vem da me, a criana tem de bases entre os stios CCGG. A auto- germinativas (Chaillet et al., 1991; Kafri et
a sndrome de Angelman, caracterizada por radiografia da digesto de HpaII mostra al., 1992). No camundongo, diferenas de
severo retardamento mental, convulses, que no espermatozide esses stios (e pro- metilao dos gametas tambm so vistas
falta de fala e riso inapropriado (Knoll et al., vavelmente numerosos outros) so meti- na impresso dos genes para Igf-2r e H19
1989; Nicholls et al., 1989). [chrom3.html] lados e que essa seqncia de DNA agora (Ferguson-Smith et el., 1993; Stger et al.,
Atualmente, considera-se que a maio- reside em um pedao de 25000 pares de 1993). Alm disso, se esses genes so colo-
ria, seno todas, as diferenas entre genes bases do DNA onde todos os stios CCGG cados em uma linhagem de camundongos
pronucleares de machos e de fmeas em so metilados (Groudine e Conklin, 1985).
mamferos, envolvem diferenas em seus Essa tcnica mostrou que os ncleos Msp I Hpa II
padres de metilao do DNA. A distribui- das clulas germinativas primordiais nos
o dos CG metilados ou no pode ser ana- mamferos, macho e fmea, so surpreen-
=25
lisada cortando o DNA com duas enzimas dentemente hipometilados (Monk et al.,
de restrio, HpaII e MspI (McGhee e 1987; Driscoll e Migeon, 1980), mas ambos
Pares de bases (x103)
mutantes que no possui a enzima capaz de negativo ou positivo para a transcrio. macho e fmea, no zigoto. Elas fornecem
metilar os stios CpG, a transcrio do gene Essas diferenas de metilao especfica tambm um lembrete de que o organismo
H19 ocorre a partir do alelo previamente si- para gametas fornecem uma explicao plau- no pode ser explicado somente na base de
lencioso, enquanto que a transcrio de Igf- svel para a falta de desenvolvimento nos seus genes. So necessrios conhecimen-
2r perdida (Li et al., 1993). Assim, em genes mamferos partenogenticos e para a neces- tos tanto de parmetros desenvolvimentais
impressos, a metilao pode ser um sinal sidade da presena de ambos os proncleos, como genticos.
Figura 11.15
Ncleos de clulas do epitlio oral humano coloridos com Cresil violeta. (A) Clula de um
homem normal XY, mostrando ausncia do corpo de Barr. (B) Clula de uma mulher normal XX,
mostrando um nico corpo de Barr (seta). (C) Clula de uma mulher com trs cromossomos X.
Dois corpos de Barr podem ser vistos, e somente um cromossomo por clula ativo. (De acordo
com Moore, 1977.)
CAPTULO 11 A Regulao Transcricional da Expresso Gnica 447
CLIVAGEM IMPLANTAO
PRECOCE
NA FERTILIZAO
Corpos de Barr
Cromossomo X
materno
Cromossomo
X paterno
Zigoto feminino Os dois cromossomos X Inativao ao acaso de
com dois so ativos em todas um cromossomo X
(A)
cromossomos X as clulas em todas as
clulas do embrio
(B)
Figura 11.16
Inativao do cromossomo X em mamferos. (A) Diagrama esquemtico ilus-
trando inativao ao acaso do cromossomo X. Considera-se que a inativao
ocorra aproximadamente na poca da implantao. (B) Um camundongo fmea
heterozigoto para o gene dappled, da colorao da pelagem, ligado ao X. Po-
dem ser observadas regies distintamente pigmentadas. (Fotografia cortesia
de M. F. Lyon.)
Informaes adicionais
& Especulaes
Trancamento dos padres de transcrio: *Como mencionado em captulos anteriores, difcil extrapolar de um grupo de mamferos para
metilao do DNA outro. Certamente o caso da inativao do cromossomo X. Somente porque a inativao do
cromossomo X acontece dessa maneira na placenta do camundongo, no significa que acontece da
O trancamento do estgio transcricional mesma maneira na placenta de todos os mamferos. Nas vilosidades corinicas humanas, algumas
clulas contm dois cromossomos X ativos, e os cromossomos X inativados podem ser reativados
inativo feito pela metilao. A primeira
(Migeon et al., 1985, 1986). Tambm a inativao do cromossomo X na placenta humana parece ser
evidncia indicando tais cis diferenas ao acaso; qualquer um dos dois cromossomos derivados do pai ou da me podem ser extintos. Nos
entre o estado ativo e o inativo do DNA marsupiais, o cromossomo X derivado do pai preferencialmente inativado em todo o embrio
do cromossomo X foi obtida quando (Cooper et al., 1971; Sharman, 1971; Samollow et al., 1987). No homem, existem regies bvias do
Liskay e Evans (1980) transfectaram o cromossomo X que escapam inativao. As diferenas somticas entre humanos com os caritipos
gene ligado ao X para HPRT para clulas XX e XO tambm predizem que devem existir genes ligados ao X que seriam necessrios em duas doses
para o desenvolvimento normal de mulheres. No camundongo, a inativao do cromossomo X parece
de camundongo deficientes em HPRT em se estender ao cromossomo todo (Ashworth et al., 1991). Na determinao do sexo (Captulo 20),
cultura. Quando o DNA vinha de um crucial que os genes para a compensao de dosagem do X sejam ligados aos genes responsveis pelo
clone de clulas nas quais o gene para fentipo sexual. Se a dosagem no equalizada, o embrio geralmente morre.
CAPTULO 11 A Regulao Transcricional da Expresso Gnica 451
Canal da
matriz
Figura 11.21 nuclear
Presena de cromatina ativa ao longo da periferia e canais nucleares. mRNA coberto
(A) Ncleos de eritrcitos tratados com DNase I, que parecem cortar com protenas
regies de cromatina transcrevendo ativamente. Esse corte foi cura-
do por traduo de corte dentro do ncleo em presena de nucleot-
deos, cuja presena pode ser detectada por fluorescncia. Os nucleo- DNA
tdeos marcados foram encontrados na periferia do ncleo e ao longo
de estruturas levando para dentro a partir do envoltrio nuclear. (B)
Modelo especulativo da organizao da cromatina na interfase, ima-
RNA sendo Matriz nuclear
ginando a matriz nuclear como uma srie de canais internos. (A de transportado
Hutchinson e Weintraub, 1985, cortesia de N. Hutchinson; B de para o citoplasma
acordo com Razin e Gromova, 1995.)
van Eekelen e van Venrooij, 1981; Mariman et al., 1982). Essa ligao parece ser
mediada por um conjunto de protenas da matriz nuclear. Essas protenas incluem
laminina B1, um componente principal do envoltrio nuclear (Ludrus et al., 1992),
uma protena ligante de DNA especfica do timo que desenrola o DNA adjacente ao
seu stio de ligao (Dickinson et al., 1992), e o fator de transcrio YY1/NF-E1 que
foi considerado idntico protena 1 da matriz nuclear (NMP-1) (Guo et al., 1995).
Considerando que genes ativos, RNA polimerase, e transcritos nascentes parecem
estar ligados a uma matriz nuclear, Jackson e Cook (1985) propuseram que a transcri-
o no ocorre pela migrao de uma polimerase ao longo do gene. Ao contrrio,
eles imaginaram uma RNA polimerase acorrentada matriz nuclear, com o DNA
migrando atravs dela.
Existe tambm alguma evidncia de que o DNA ativo possa estar ligado matriz
nuclear atravs de seqncias de DNA ricas em AT e denominadas regies associa-
das matriz (MARs), ou regies associadas a andaimes (Gasser e Laemmli, 1986). A
maior parte dessas MARs se localizam perto ou dentro de intensificadores ou promo-
tores. A importncia dessas regies foi mostrada por Stief e colaboradores (1989), que
identificaram duas MARs no gene da lisozima do pinto. Nesse caso, as MARs no
estavam no intensificador e por essa razo puderam ser separadas. Quando eles fun-
diram o intensificador e o promotor da lisozima do pinto ao gene CAT reprter e
transfectaram o clone em clulas produtoras de lisozima, isso no produziu muita
protena CAT. Ento eles produziram um gene similar que continha o promotor, o
intensificador e seqncias CAT e o conjunto foi flanqueado por duas MARs. Quando
CAPTULO 11 A Regulao Transcricional da Expresso Gnica 453
Figura 11.22
Importncia das regies associadas matriz na
Intensificador transcrio. Na transfeco de clones consistin-
Promotor
do de promotor da lisozima, intensificador e o
gene CAT, para uma linhagem celular secretora
de lisozima, muito pouca protena CAT pro-
duzida, como determinado pela atividade
enzimtica de CAT. Entretanto, se as duas MARs
Gene CAT so includas no gene clonado, muito mais pro-
tena CAT pode ser encontrada nessas clulas.
(De acordo com Stief et al., 1989.)
Topoisomerase II
Produtos
Substrato
Stios de ligao para
topoisomerase II
Resultados da transfeco
esse clone foi transfectado em clulas produtoras de lisozima, a sntese de CAT foi
enormemente aumentada (Figura 11.22). Da mesma forma, duas MARs flanqueiam um
intensificador do loco da cadeia pesada da imunoglobulina de camundongo, e a
transcrio desse gene requer a presena tanto do intensificador como das duas
MARs. As MARs parecem cooperar com o intensificador para estender uma regio de
cromatina acessvel a fatores, ao promotor do gene da imunoglobulina (Forrester et al.,
1994; Jenuwein et al., 1997).
Figura 11.23
Superespiralamento do DNA durante a transcrio. Topoisomerase II junta duas regies do
DNA e introduz o superespiralamento quebrando transitoriamente e recombinando as fitas de
DNA. Como resultante da distoro, uma poro da dupla hlice se separa em duas fitas,
permitindo RNA polimerase (e presumivelmente a outros fatores trans-reguladores) iniciar a
transcrio. Os stios de ligao da topoisomerase foram encontrados no DNA ligado matriz
(Cockerill e Garrard, 1986). (De acordo com Darnell et al., 1986.)
454 PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
Figura 11.24
Uma das quatro regies do intensificador do
gene de cadeia pesada da imunoglobulina pro-
tegida pela protena NF-NR. NF-NR foi
adicionada ao DNA da regio do intensificador Stio de ligao da Seqncia de Protegida por
e o DNA foi digerido com DNase. Somente as topoisomerase ligao matriz NF-NR
seqncias cobertas pela NF-NR seriam pre-
servadas. A regio protegida (cinza) inclui uma
seqncia associada matriz e um stio de liga-
o da topoisomerase II (colorido). (De acor-
do com Scheuermann e Chen, 1989.)
Isoladores e domnios
O genoma eucarioto no meramente parcelado em determinados genes. Na verda-
de, ele parece estar dividido em regies de desenvolvimento relativamente indepen-
dentes freqentemente denominadas domnios. Evidncia para os domnios veio de
estudos onde blocos de DNA foram colocados prximos a genes reprteres que podi-
am ser normalmente ativados por um intensificador. Certas seqncias impediram o
intensificador de ativar o gene reprter, enquanto que outras seqncias no o fizeram
(Geyer e Corces, 1992). Foi proposto que essas seqncias isoladoras ligam protenas
que impedem a interao de intensificadores e promotores no seu outro lado. Desse
modo, elas poderiam estabelecer fronteiras: a ativao poderia ocorrer em um de seus
lados, mas no cruzar para o outro lado. Algumas dessas seqncias fronteirias
foram isoladas de DNA de Drosophila, como tambm algumas das protenas ligantes.
Kellum e Schedl (1991) mostraram que o gene hsp70 (para a protena do choque
trmico em Drosophila) estava confinado por duas seqncias, scs e scs, que impedi-
am os efeitos da cromatina adjacente de influenciar sua transcrio. Zhao e colegas
(1995) identificaram uma protena de 32-kDa que se liga ao elemento de fronteira scs e
est localizada entre as bandas de numerosos genes na Drosophila (veja Prancha 31;
Zhao et al., 1995). Isso pode ser visto quando os genes formam tufos e a colorao
dessas protenas as mostram nas bordas dos tufos. O stio scs no complexo Bithorax
parece estar localizado aps o ltimo gene (AbdB), de modo que a unidade inteira
possa ser regulada como um nico loco gentico.
CAPTULO 11 A Regulao Transcricional da Expresso Gnica 455
Resumo
A transcrio gnica diferencial uma via majoritria na regulao do desenvolvi-
mento. As regies cis-reguladoras no DNA e as protenas trans-reguladoras que
ativam e reprimem a transcrio esto sendo identificadas e seus mecanismos de
ao delineados. Parece que certos fatores de transcrio rompem ou previnem a
formao de nucleossomos nos intensificadores e regies promotoras, assim permi-
tindo a ligao da RNA polimerase II ao promotor e a transcrio do gene. Certos
fatores de transcrio estimulam o processo interagindo com o complexo transcrici-
onal e acelerando sua formao. A desmetilao e o desenrolamento de regies
genticas na matriz nuclear provavelmente tambm esto envolvidas na regulao
da expresso gnica. Como disse Albert Claude, ns apenas comeamos a apreciar
nossa riqueza adquirida.
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Controle do desenvolvimento
pelo processamento e traduo
diferencial do RNA
12
Entre a concepo
E a criao...
Entre a potncia
E a existncia
Entre a essncia
A REGULAO DA EXPRESSO GNICA no est restrita transcrio dife-
rencial do DNA. Mesmo que um determinado transcrito de RNA seja sinte-
tizado, no h garantia que ele ir criar uma protena funcional na clula. Para
se formar uma protena ativa, o RNA tem que ser: (1) processado em um RNA mensa-
geiro pela remoo de ntrons, (2) trasladado do ncleo para o citoplasma, e (3) tradu-
E a origem zido pelo aparelho sintetizador de protenas. Em alguns casos, a protena sintetizada
Cai a Sombra. no est em sua forma madura e (4) tem que ser modificada, aps a traduo, para
T. S. ELIOT (1936)
tornar-se ativa. A regulao pode ocorrer em qualquer um desses passos durante o
desenvolvimento.
No h descanso para o mensageiro at
a mensagem ser entregue.
JOSEPH CONRAD (1920) Q CONTROLE DO DESENVOLVIMENTO
PELO PROCESSAMENTO DIFERENCIAL DE RNA
461
462 PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
Figura 12.1
Hibridizao de RNA nuclear de embries de
ourio-do-mar com [3H]DNA de cpia nica.
RNA de
DNA de cpia nica radioativo foi misturado blstula + plteo
com RNA de blstula, RNA de plteo ou RNA
da mistura de blstula e plteo. As misturas RNA de blstula
foram incubadas para permitir o pareamento de
todas as seqncias complementares. (O eixo
RNA Cot a concentrao do RNA vezes o RNA de plteo
tempo deixado para incubar). Nos trs casos,
cerca de 15 porcento do DNA hibridizou com
o RNA. (Segundo Kleene e Humphreys, 1977.)
CAPTULO 12 Processamento diferencial do RNA e Traduo 463
Tabela 12.1 Comparaes entre tecidos das seqncias de genes estruturais em RNA mensageiros e RNA nucleares
Pista referencial
complementar a mRNA % mRNA % nRNA %
OURIO-DO-MAR
mRNA de blstula (DNA de cpia nica) Blstula 100 Intestino 12 Intestino 97
Celomcito 13 Celomcito 101
CAMUNDONGO
mRNA cerebral (cDNA total) Crebro 100 Rim 78 Rim 102
mRNA cerebral (cDNA Crebro 100 Rim 56 Rim 100
representando mensagens raras)
(A)
Complexidade do RNA (106 nucleotdeos)
Figura 12.2
Seqncias encontradas no RNA nuclear de
(B) (C) vrios tipos de clulas mas no no mRNA. (A)
Clula tipo 1 Especificidade do cDNA mensageiro da
blstula do ourio-do-mar. Hibridizao do
cDNA mensageiro da blstula (cDNA ao
mRNA da blstula) com mRNA de blstula e
RNA do citoplasma intestinal mostra que os
mRNAs so muito diferentes. (B) A hibridiza-
o do cDNA mensageiro da blstula com
RNAs nucleares (nRNAs) de gstrulas e
celomcitos adultos e clulas intestinais suge-
re a identidade de todos os RNAs nucleares.
Clula tipo 2 (C) Modelo especulativo baseado no proces-
samento diferencial do RNA. Em ambos tipos
celulares, os mesmos RNAs (a, b, c, d, e) so
nRNA do celomcito transcritos, mas em um tipo celular, as seqn-
nRNA da gstrula cias c, d e e so processadas para mRNA
nRNA do intestino citoplasmtico, enquanto em outro tipo de c-
lula, seqncias a, b e c so processadas e envi-
adas para o citoplasma. (A e B segundo Wold
et al., 1978.)
464 PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
Figura 12.3
Ensaios para deteco do acmulo de uma
mensagem no citoplasma. (A) Ensaio de pro- Dividir o tecido
teo de ribonuclease. RNA isolado e puri- em duas amostras
ficado de tecido embrionrio. Uma sonda de
RNA radioativo sintetizada, complementar
(A) (B)
a um pequeno trecho do RNA que est sendo Ensaio de proteo de RNase Ensaio run-on nuclear
analisado. Se o RNA especfico estiver pre-
sente, a sonda radioativa se ligar a ele. RNase
adicionada em seguida, destruindo todo o
RNA exceto aquele da regio de dupla fita
que contm o oligonucleotdeo radioativo.
Esse pode ser submetido eletroforese em gel Isolar RNA Isolar ncleos
e auto-radiografado. (B) Ensaio nuclear run-
on (isola o ncleo e usa marcador radioativo Ncleo
para marcar o transcrito). Ncleos so isola-
dos de tecido embrionrio. UTP radioativa
adicionada aos ncleos. O mRNA que est
sendo sintetizado incorpora a marca radioati-
va enquanto continua sendo transcrito. O
mRNA pode ser isolado e hibridizado com
seqncias complementares de DNA imobi-
lizadas em papel. Se o transcrito radioativo
ligar, ser detectado por auto-radiografia. RNA polimerase
Adicionar
oligonucleotdeo Transcrito nascente
radioativo de RNA
Poro radioativa
de RNA
COMPLEXO DE COMPROMETIMENTO O pr-mRNA vertebrado mdio consiste de xons relativamente curtos (em mdia
cerca de 140 bases), separados por ntrons que so usualmente muito mais compridos.
ntron
Qualquer mecanismo coordenador das emendas em um RNA multi-xon tem que pro-
ver uma explicao de como xons pequenos so conservados e separados dos ntrons
grandes. Berget (1995) props a noo que a emenda feita de um terminal do xon
para o outro, em vez de atravs do ntron. Essa hiptese da definio do xon sustenta
que o tamanho reduzido dos xons permite ao snRNA U2 (no terminal 5 do xon)
conectar-se com o snRNA U1 no outro terminal. Seguindo essa definio dos limi-
tes do xon, os vrios xons so ajuntados.
O processamento de mRNA maduro tambm requer a adio de uma cauda poli
(A) ao mRNA nuclear. O terminal 3 da maioria dos mRNA eucariticos (mensagens
xon de histonas sendo as nicas excees conhecidas) formado pela clivagem do
xon
transcrito original e adio de segmentos de resduos de adenilato. A regio 3
no-traduzida da maioria dos precursores do mRNA contm a seqncia AAUAAA,
que essencial para a clivagem do RNA, 10 a 30 bases a jusante desse stio
(Proudfoot e Brownlee, 1976). Mutaes nessa seqncia previnem a formao do
SPLICEOSOME
terminal 3 do mRNA (Wickens e Stephenson, 1984; Orkin et al., 1985). Outro ele-
xon
mento de atuao cis uma seqncia rica em GU ou U, usualmente localizada
mais a jusante (3) da clivagem. Essa seqncia parece ser crtica para a clivagem
eficiente do RNA nuclear no stio de processamento 3 (McDevitt et al., 1984;
Christofori e Keller, 1988). [RNA3.html]
EMENDA CONSTITUTIVA
Figura 12.6
Diagrama esquemtico da emenda alternativa do pr-mRNA. xons esto representados
como caixas sombreadas, xons emendados alternativamente esto representados por caixas
hachuradas, e ntrons esto representados por linhas grossas. Por conveno, a trajetria da
emenda mostrada por linhas finas em forma de V. (A) As bordas xon-ntron, mostrando
as seqncias consensuais nos terminais 3 e 5 do ntron. R representa qualquer purina, Y
qualquer pirimidina, e N qualquer nucleotdeo. (B) a emenda de um pr-mRNA com 5
xons. (C-F) Emenda alternativa por (C) stios de emenda 5 alternativa, (D) stio de emenda
3 alternativa (em alguns casos isso iria prover terminais diferentes ao mRNA, e ambos
stios necessitariam de uma seqncia de poliadenilao, aqui mostrada como An), (E) uma
deciso emenda/no emenda, e (F) incluso de xon/ excluso de xon. (Segundo Horowitz
e Krainer, 1994.)
mRNA de tropomiosina de
fibroblasto e msculo liso
*A protena Sxl ela prpria um produtor de um complexo tipo de emenda alternativa do RNA.
Mais ser dito sobre isso no Captulo 20.
470 PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
FMEA MACHO
pr- pr-
mRNA mRNA
tra1 tra1
Sx1 bloqueia ligao de U2AF se liga s regies
U2AF (e spliceosome) ao ricas em polipirimidina
stio mais eficiente; assim, para stios de emenda 3
stio de emenda 3 menos
eficiente usado
mRNA transformer
RNA Transformer (macho e fmea)
feminino constitutivo produz
protena truncada,
no-funcional
Gene
doublesex
Stio de emenda 3 ineficiente
Pr-mRNA Pr-mRNA
doublesex doublesex
Protena
Doublesex (DSX) Protena
especfica de fmea Doublesex (DSX)
especfica de macho
Figura 12.9
h vrias maneiras para realizar o controle da traduo e que clulas diferentes desen-
volveram diferentes meios de o fazerem.
Polipeptdeo Polipeptdeo
nascente completado
tRNA
iniciador Ligao
peptdica
Ribossomo
Fator de
Subunidades
liberao
ribossmicas
Subunidades
ribossmicas
recicladas
CAPTULO 12 Processamento diferencial do RNA e Traduo 473
Escaneamento
Reciclagem
de eIF2
Subunidade 60S
Figura 12.12
Polissomo individual transcrevendo o mRNA
gigante do puff BR2 de Chironomus tentans.
(A) Microscopia eletrnica de um polissomo
contendo 24 ribossomos. As protenas nas-
centes podem ser vistas se estendendo dos
ribossomos e crescendo medida que os
ribossomos se movimentam do terminal 5 da
mensagem para o terminal 3. Prximo do ter-
minal 3 esto ribossomos dos quais a prote-
na se destacou. (B) Um tal polissomo sob
maior aumento; o polissomo foi esticado du-
rante a preparao do espcime. A relao entre
o mRNA e as subunidades ribossmicas e o
polipeptdeo nascente pode ser vista. (de
Francke et al., 1982; fotografias cortesia de J.
E. Edstrom.)
(A) (B)
tRNA iniciador sobre o cdon AUG. Somente aps o mRNA ter sido posicionado
apropriadamente na subunidade ribossmica pequena, pode a unidade ribossmica
60S (grande) se ligar. Isso completa a reao de iniciao. Durante esse proces-
so, o GTP no eIF2 hidrolisado em GDP. Para o eIF2 captar um novo tRNA inicia-
dor, esse tem que ser regenerado para eIF-GTP pelo eIF2B.
O alongamento envolve a ligao seqencial de tRNAs do aminoacil ao
ribossomo e a formao de ligaes peptdicas entre os aminocidos medida que
eles abandonam seqencialmente seus tRNAs transportadores (veja Figura 12.10).
medida que aminocidos so ajuntados, o ribossomo viaja ao longo da mensa-
gem, expondo novos cdons para a ligao de tRNA. Isso permite a um outro
ribossomo iniciar sua viajem no terminal 5 da mensagem. Assim, em geral, qual-
quer mRNA ter vrios ribossomos ligados a ele. Essa estrutura ento chamada
poliribossomo- ou mais comumente, polissomo (Figura 12.12). A terminao da
sntese protica ocorre quando um dos cdons mRNA UAG, UAA ou UGA ex-
posto no ribossomo. Esses tripletes de nucleotdeos (chamados cdons de termi-
nao) no so reconhecidos pelos tRNAs e portanto no codificam para quais-
quer aminocidos. Ao contrrio, eles so reconhecidos pelos fatores de liberao,
que hidrolizam o peptdeo do ltimo tRNA, destacando-o do ribossomo. O
ribossomo se separa em duas unidades, e o ciclo da traduo recomea.
estabilizada em certas clulas em certos momentos, ento ele poderia produzir grandes
quantidades de uma protena particular em certos momentos e em certos locais.
RNA de controle
2-microglobulina
CAP ntron ntron
(A) (B)
476 PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
Porcentagem da marcao
Com prolactina
(pulso) inicial
Sem prolactina
Figura 12.14
Degradao de mRNA da casena na presena e ausncia de prolactina. Clulas mamrias em
cultura foram tratadas com precursores radiativos de RNA (pulso) e aps um dado perodo foram
lavadas e alimentadas com precursores no-radiativos (rastreamento). O mRNA da casena
sintetizado durante o tempo de pulsao foi em seguida isolado e contado. Na ausncia de
prolactina, o mRNA da casena recm-sintetizado decaiu rapidamente, com uma meia-vida de 1.1
horas. Quando o mesmo experimento foi feito em um meio contendo prolactina, a meia-vida
estendeu-se para 28.5 horas. (Segundo Guyette et al., 1979.)
mento (grex). Ao mesmo tempo, as caudas poli(A) dos mRNAs existentes no estgio
vegetativo so dramaticamente encurtadas. Como resultado, as mensagens recm-
transcritas so traduzidas, enquanto as mensagens pr-existentes no o so (Palatnik
et al., 1984). Esse mecanismo tambm foi observado em glndulas salivares na larva de
Drosophila (Restifo e Guild, 1986).
Fontes: Compilado de numerosas fontes, incluindo Raff, 1980; Shiokawa et al., 1983; Rappollee
et al., 1988; Brenner et al., 1989; Standart, 1992.
Informaes adicionais
& Especulaes
(A) (B)
Extrato RNA KCI
RNA
antisenso (ug/ml)
Figura 12.19
Desmascarando a pequena subunidade da ribonucleo-
Peso molecular (KDa)
Audet et al., 1987; Swiderski e Richter, 1988), mas no sabido se essas protenas
mascaram funcionalmente RNAs endgenos. possvel que essas protenas facili-
tem a ligao de uma protena mascaradora de RNA geral que se associaria com o
mRNA fazendo com que ele fique intraduzvel. A protena FGRY2 ativa em ocitos de
Xenopus poderia ser uma tal protena mascaradora geral (Bouvet e Wolffe, 1994).
Essa protena se complexa com certos transcritos de ocitos que esto sendo trans-
critos no ncleo e capaz de silenciar tais mensagens. O desempacotamento
global de tais mensagens na fecundao pode envolver alteraes inicas, a fosfo-
rilao de certas protenas, ou mudanas na composio do RNP.
Ncleo
Ocito
Remoo da
cauda poli(A)
Mensagem Mensagem Cauda poli(A)
Ocito primrio
imaturo e em
crescimento
Dormente Ativamente traduzido
Recomeo da
meiose Adenilao Desadenilao
Cauda poli(A)
Ocito em
maturao
Ativamente traduzido Dormente
Figura 12.20
Modelo para a regulao da traduo dos mRNAs do ocito do camundongo. Os mRNAs a
serem usados no metabolismo do ocito tm seqncias de poliadenilao em suas 3UTRs e
retm suas caudas poli(A). Esses mRNAs so traduzidos at a maturao meitica (logo antes da
ovulao), quando perdem suas caudas poli(A). Aqueles mRNAs que permanecem
traducionalmente dormentes at a maturao meitica tm elementos de poliadenilao citoplas-
mtica (CPEs), assim como suas seqncias de poliadenilao, e eles perdem suas caudas
poli(A) no citoplasma do ocito imaturo. Quando a maturao meitica comea, as caudas so
restauradas e a traduo dessas mensagens iniciada.
*As funes das seqncias poli(A) e CPEs diferem entre ocitos de camundongo e de r. Nos
ocitos de r, a desadenilao que ocorre na maturao o estado de ausncia, e desadenilao
e inativao para traduo ocorrem, a no ser que CPE esteja presente. A poliadenilao ir ativar
a mensagem mascarada e manter a traduo dos mRNAs associados aos polissomos. Em ocitos
de camundongo, o CPE controla tanto a poliadenilao como a desadenilao. Em ocitos
imaturos, mensagens sem CPE so imediatamente traduzidas, enquanto mRNAs contendo CPE
so desadenilados e inativados para a traduo. Na maturao, o sistema do camundongo torna-se
semelhante ao de Xenopus, e os RNAs contendo CPE so agora poliadenilados e ativados para
traduo (Huarte et al., 1992).
486 PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
Figura 12.21
Evidncia da ineficincia da sntese protica em nveis de pH pr-fecundao. O sistema de
[3H] Valina incorporada na protena (cpm x 103)
traduo in vitro feito de ovos no-fecundados mantido a pH 6.9 ou dializado para pH 7.4.
Mensagens endgenas so traduzidas muito mais eficientemente no pH ps-fecundao. (Se-
gundo Winkler e Steinhardt, 1981.)
70 minutos 80 minutos
80 minutos 90 minutos
Figura 12.22
Seqestro das mensagens de histona do ocito do ourio-do-mar. A sonda de cDNA que reco-
nhece a mensagem da histona hibridizada para ovos de ourio-do-mar fixados em vrios
perodos ps-fecundao. A auto-radiografia mostra a mensagem a ser seqestrada no proncleo
materno at sua degradao 80-90 minutos aps a entrada do espermatozide. (Segundo DeLeon
et al., 1983, cortesia de L. e R. Angerer.)
488 PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
Informaes adicionais
& Especulaes
Mamfero Estgio tardio de 1-clula (11-17 h) Mrula precoce de 8-16 clulas Estgio de clivagem
(Mus musculus) (dia 3) de 4 clulas (dia 2-4)
Anfbio Clivagem precoce ( 32 clulas) da 12a clivagem (4000 clulas) Estgio de nurula
v
outros ourios-
do-mar)
Inseto Blastoderma sincicial aps a Blastoderma celular aps a Organognese intermediria
(Drosophila 10a diviso nuclear (2.5 h) 14a diviso nuclear (3.5 h) (~15 h)
melanogaster)
Fonte: Adaptado de Wilt, 1964; Woodland e Ballantine, 1980; Clegg e Piko, 1983; Gilbert e Solter, 1985; Poccia et al., 1985; Weir e Kornberg,
1985; Davidson, 1986; Edgar e Schubiger, 1986; Shiokawa et al., 1989.
a Perodos indicam incubao nas temperaturas apropriadas.
CAPTULO 12 Processamento diferencial do RNA e Traduo 489
ourio-do-mar em que o ncleo embrio- te o estgio de 2 clulas. Entre os estgi- toplasma de embries tardios de 1 clula
nrio no esteja funcionando. Baixos n- os de 1 e 2 clulas do embrio, mais de o suporta. Como inibidores da protena-
veis de transcrio (incluindo novas men- dois teros das protenas sofrem uma al- quinase (PKA) dependente de cAMP ini-
sagens de histonas) podem ser vistos em terao de cinco vezes em sua sntese bem a competncia do citoplasma para
proncleos mesmo antes de sua fuso (Latham et al., 1991, 1992). Quando culti- suportar a transcrio, possvel que a
(Poccia et al., 1985). Essas mensagens re- vadas com o inibidor da transcrio a- ativao de PKA seja essencial para a
cm-transcritas entram no pool maior aminitina (que bloqueia a RNA polimera- aquisio pelo citoplasma de seu estado
do mRNA materno. A cromatina das qua- se II), ovos de camundongo so bloquea- transcricionalmente permissivo. Outros
tro primeiras clivagens feita primaria- dos no estgio bicelular (Flach et al., 1982). mamferos no seguem necessariamente
mente com histonas estocadas no cito- Em camundongos, os mRNAs maternos o mesmo programa. A sntese do mRNA
plasma do ocito e histonas sintetizadas persistem por cerca de dois dias- a gros- humano primeiro vista no estgio de 4
de mensagens maternas. Do estgio de so modo, o mesmo tempo que em outros clulas, e inibidores da transcrio blo-
16 clulas em diante, porm, a maioria das filos- e em seguida, durante o segundo queiam o desenvolvimento no estgio de
histonas sintetizada de mensagens dia, os mensageiros maternos so rapida- 4- a 8-clulas. Em vacas e ovelhas, a ati-
transcritas de ncleos de clulas embrio- mente degradados (Clegg e Piko, 1983; vidade transcricional vista nos estgi-
nrias (Goustin e Wilt, 1981). Esse padro Paynton et al., 1988). medida que os os de 8- a 16-clulas (Braude et al., 1988;
est em contraste marcado com aquele de produtos gnicos codificados pelas men- Telford et al., 1990).
embries de Xenopus, nos quais um gran- sagens maternas decaem, eles so subs- Em todas as espcies animais obser-
de pool de protena histona estocada titudos por novas protenas produzidas vadas, h um perodo de tempo em que
pela me, e um grande suprimento de men- de mRNA que est sendo recm-transcri- os fenmenos do desenvolvimento pre-
sagem histona estocada no ocito so uti- to do ncleo. Na maioria dos casos, os coce so controlados pelas mensagens
lizados por milhares de clulas. cromossomos derivados do espermatozi- e protenas estocadas no citoplasma do
Embries de mamferos, ascdios, de so provavelmente ativados simulta- ocito. Na maioria das espcies (os ma-
nematides e moluscos tambm parecem neamente com cromossomos derivados do mferos sendo a exceo), o genoma nu-
iniciar a transcrio dentro do primeiro ovo (Gilbert e Solter, 1985). Latham e cole- clear ativado muito antes das mensa-
ciclo celular (Schauer e Wood, 1990). Po- gas (1992) transplantaram ncleos para di- gens maternas serem degradadas, fazen-
rm, tal como em muitos eventos do de- ferentes citoplasmas e demonstraram que do com que ambos conjuntos de mRNAs
senvolvimento, no se pode dizer que os o citoplasma muda durante a parte tardia sejam traduzidos simultaneamente. Final-
mamferos tenham aperfeioado uma es- do estgio de 1 clula. O citoplasma da mente, quando as mensagens maternas
tratgia uniforme. No grupo mamfero mais clula precoce do embrio de 1 clula no tiverem sido degradadas nos dias 1 e 2,
estudado, os camundongos, o genoma suporta a transcrio de genes de ncle- os transcritos do genoma embrionrio se
embrionrio extremamente ativo duran- os de embries mais tardios. Porm, o ci- tornaro mais importantes.
Parece que tudo que as protenas podem fazer, os RNAs tambm podem. Se protenas
podem regular a traduo ligando-se a stios especficos na 3UTR de RNAs mensa-
geiros, assim tambm o podem fazer RNAs pequenos. O RNA de controle da tradu-
o foi originalmente proposto por Bester e colaboradores, em 1975. Desde ento, foi
encontrado em C. elegans e pintos.
Caenorhabditis elegans faz jus a seu nome, tendo desenvolvido uma soluo par-
ticularmente elegante para o problema do controle da expresso gnica larval (Lee et al.,
1993; Wightman et al., 1993). Altos nveis do fator de transcrio LIN-14 especificam a Figura 12.27
sntese protica em rgos larvais precoces. Depois disso, a protena LIN-4 no mais Modelo hipottico para a regulao do mRNA
vista, embora mensagens lin-4 sejam detectadas atravs de todo o desenvolvimento. C. lin-14 pelos mRNAs lin-4. (Isso no foi con-
firmado experimentalmente.) O gene lin-4 no
elegans capaz de inibir a sntese de LIN-14 de seu mRNA, ativando o gene lin-4. Em
produz um mRNA. Em lugar disso, ele produz
mutaes de perda-de-funo de lin-4, a protena LIN-14 sintetizada continuamente, e RNAs pequenos que no produzem protenas.
o desenvolvimento precoce do nematide interrompido. O gene lin-4 no codifica Esses RNAs so complementares a uma se-
protena alguma. Em vez disso, ele codifica dois pequenos mRNAs (o mais abundante qncia repetida na 3UTR do mRNA lin-14.
tendo 25 nucleotdeos de comprimento, o outro continuando por mais 40 nucleotdeos) (Segundo Wickens e Takayama, 1994.)
Seqncia de codificao
Poli(A)
492 PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
mRNA da FERRITINA
IRE-BP ausente IRE-BP presente
Editorao do RNA
Enzima editora
Figura 12.29
Modelo de um mecanismo enzimtico que
poderia permitir a desaminao de uma
citosina especfica do mRNA apo-B. Duas
mRNA Apo-B 5 3 regies so necessrias para a editorao do
RNA: uma regio que conservada em vri-
No espcie- Espcie-especfico os mamferos e um elemento espcie-espe-
NH 3 U cfico que tem uma estrutura tipo grampo de
especfico
cabelo que poderia ser reconhecida pela
Stio cataltico Stio de reconhecimento enzima. (Segundo Chan, 1993.)
494 PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
Subunidades
Heme
Heme
Heme
Heme
Subunidades
Figura 12.30
A estrutura da hemoglobina do humano adulto, com quatro cadeias polipeptdicas (duas , duas
) e quatro molculas de heme. (Segundo Dickerson e Geis, 1983.)
Porfobilingeno 1965; Zucker e Schulman, 1968). Quando heme (ou sua forma oxidada, hemina)
adicionado a um sistema de traduo isento de clulas mas que inclui todos os fatores
necessrios para traduzir mRNAs (Tabela 12.5), a sntese da globina muito estimula-
Protoporfirina IX da (Figura 12.32A). Portanto, se no h globina para ligar o heme, o excesso de heme
desliga sua prpria sntese e estimula a produo de mais globina.
Heme Vrios laboratrios investigaram como uma molcula to pequena como o heme
pode regular a sntese protica. Em 1972, Adamson e colegas demonstraram que o
Figura 12.31 efeito estimulador do heme na sntese da globina podia ser imitado pela adio ao
Regulao por retroalimentao (feedback) da sistema de traduo daquelas protenas que esto frouxamente associadas aos
sntese do heme. (Segundo Harris, 1975.) ribossomos. Como tais solues so ricas em fatores de iniciao da traduo, cada
CAPTULO 12 Processamento diferencial do RNA e Traduo 495
Tabela 12.5 Componentes do sistema de traduo in vitro contendo lisato de reticulcitos de coelho
Concentrao Concentrao
Componente (em 100 l) Componente (em 100 l)
fator foi testado separadamente. Achou-se que o fator 2 de iniciao eucaritica (eIF2)
restaurava a sntese protica para lisatos deficientes de heme no sistema de traduo
(Figura 12.32B). Esse fator de iniciao responsvel pela combinao com o tRNA
iniciador e complex-lo subunidade ribossmica 40S.
Qual, ento, a relao entre heme e eIF2? Para responder a isso, London e cola-
boradores (Levin et al., 1976; Ranu et al., 1976; Ramaiah et al., 1992) adicionaram
lisatos deficientes de heme a sistemas de traduo suplementados com heme. Eles
acharam que uma poro do lisato deficiente de heme podia realmente deprimir a
sntese da globina no sistema de traduo ao qual ele fora adicionado. Esse achado
indicou que um inibidor estava presente. Essa protena inibidora responsiva ao heme,
HRI, foi isolada e verificou-se que era uma quinase capaz de fosforilar eIF2. A hemina
liga-se a essa quinase, inativando-a (veja Chen e London, 1995).
O eIF2 finalmente ir parar a traduo. Normalmente, uma vez que as subunida-
des ribossmicas se juntam, o eIF2 liberado como um complexo com GDP
(Raychaudhury et al., 1985). Para o eIF2 ser novamente usado na iniciao, ele
+Hemina
[14C]Leucina incorporada (cpm x 10-4)
+Hemina
Figura 12.32
Sem adies
Regulao da traduo por hemina e pelo fa-
tor 2 de iniciao eucaritica. (A) Traduo do
mRNA da globina no sistema de sntese
protica in vitro do reticulcito de coelho. A
incluso de hemina ocasiona uma dramtica
elevao da sntese protica. (B) Efeito da adi-
-Hemina o do fator 2 de iniciao eucaritica no siste-
ma de traduo in vitro do reticulcito de coe-
lho. O eIF2 elevou o nvel da sntese protica
para perto daquele do sistema estimulado pela
hemina. (A segundo London et al., 1976; B
(A) Tempo (minutos) (B) Tempo (minutos) segundo Clemens et al., 1974.)
496 PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
Figura 12.33
Subunidade ribossmica 40S Traduo
Esquema para o controle da traduo da sntese
Complexo de iniciao
da globina. Como um resultado da inativao
pela protena quinase, o eIF2 depletado a no
ser que o heme inative a protena quinase.
Protena Heme Protena quinase
quinase ativa inativa
eIF2 - P (Seqestra o
fator de reciclagem)
dever complexar-se com o eIF2B (fator de reciclagem). Esse eIF2B troca GTP por
GDP (veja Figura 12.11), e o complexo eIF2-GTP resultante capaz de entrar num
outro ciclo de iniciao. Porm, se a subunidade do eIF2 for fosforilada, o fator de
reciclagem eIF2B se liga mas no consegue se despregar (Gross et al., 1985; Thomas
et al., 1985). Por fim, todo eIF2B (cuja concentrao 10- a 20-vezes mais baixa que
aquela do eIF2) ligado a esses complexos, e a traduo cessa. A adio de eIF2B a
lisatos deficientes em heme restitui a sntese protica aos nveis dos sistemas
suplementados com heme (Grace et al., 1984). Heme em excesso capaz de se ligar
protena quinase, inativando-a (Fagard e London, 1981). Quinase inativada no ir
fosforilar eIF2, fazendo com que a traduo prossiga. Assim, enquanto heme esti-
ver presente, a sntese da globina continuar (Figura 12.33).
A histria do controle da traduo da sntese da globina no termina aqui. Confor-
me discutimos no Captulo 11, h quatro genes globina ativos por clula diplide e
somente dois genes globina ativos. Se cada gene fosse transcrito e traduzido com
a mesma velocidade, esperar-se-ia duas vezes mais molculas globina que globina.
Isso claramente no o caso. Encontra-se uma relao 1.4:1 de mRNA :, mas uma
relao 1:1 de protenas (Lodish, 1971). A igualizao das protenas parece envolver
regulao da traduo.
Kabat e Chappell (1977) sugeriram que a igualizao feita no estgio de inicia-
o da traduo. Eles mostraram que o mRNA da globina compete com a mensa-
gem da globina para fatores de iniciao e que a mensagem da globina parece
ser o melhor competidor. A mensagem da globina reconhecida mais eficiente-
mente pelos fatores de iniciao sendo por isso traduzida mais freqentemente.
Quando os dois mRNAs esto presentes em quantidades iguais, mas com um supri-
mento de fatores de iniciao severamente limitante, somente 3% da protena resul-
tante era globina. Porm, quando o mRNA no-fracionado (mensagens e
globinas de clulas lisadas) foi adicionado a um excesso de tais fatores de iniciao,
todos os mRNAs foram traduzidos com igual eficincia e a relao : resultante foi
de 1.4:1. A protena cap ligante foi implicada como sendo o fator responsvel pela
discriminao entre os dois tipos de mensagem da globina (Ray et al., 1983; Sarkar et
al., 1984). Enquanto ainda no conhecido como se d a discriminao, conhecido
que a estrutura secundria da seqncia lder 5 afeta a eficincia da traduo (Pelletier
e Sonenberg, 1985). Como pode ser visto na Figura 12.34, os terminais 5 das mensa-
gens e globina diferem significativamente. Assim, as razes apropriadas de
globina e globina, e heme so estabelecidas no passo de iniciao da traduo.
Embora a sntese da hemoglobina envolva regulao nos nveis de transcrio e
processamento de RNA, a molcula final construda atravs da coordenao fina
ao nvel da traduo.
CAPTULO 12 Processamento diferencial do RNA e Traduo 497
mRNA da globina
mRNA da globina
Fator 12.34
Ao mesmo tempo, outro notvel exemplo da regulao da traduo est ocorrendo Provveis estruturas secundrias para os ter-
minais 5 das cadeias de -globina e de -
dentro da clula vermelha do sangue. O mRNA codificando a enzima 15-lipoxigenase
globina do camundongo. Os cdons AUG ini-
(15-LOX) transcrito durante os estgios precoces do desenvolvimento da clula ciadores da traduo esto coloridos. (Segun-
vermelha do sangue na medula ssea, mas ele somente traduzido quando a clula do Pavlakis et al., 1980.)
vermelha do sangue est a ponto de entrar na circulao perifrica. Essa enzima
responsvel pela digesto das mitocndrias durante os ltimos estgios da formao
da clula vermelha sangnea. A 3 UTR do mRNA 15-lox tem 10 repeties acopladas
de uma seqncia rica em pirimidina que liga uma protena de 48-kDA especfica para
eritrcitos. Essa protena reprime a traduo da mensagem 15-lox at o eritrcito estar
pronto para entrar na circulao (Ostarek-Lederer et al., 1994). No ainda conhecido
como essa protena repressora regulada durante o desenvolvimento da clula ver-
melha sangnea.
merosas outras protenas. Assim, ainda podem ocorrer vrias mudanas que deter-
minam se uma protena est ou no ativa. Em primeiro lugar, algumas protenas
recmsintetizadas so inativas sem ulteriores modificaes que podem envolver a
remoo por clivagem de certos setores inibitrios da protena, ou a ligao de um
pequeno composto para intensificar sua atividade. Segundo, algumas protenas
podem ser inativadas seletivamente. Em alguns casos, a inativao envolve a degra-
dao da prpria protena; em outros, a inativao pode ser causada pela ligao de
um ligante inibidor. Terceiro, algumas protenas tm que ser endereadas a seus
destinos intracelulares especficos. A clula no simplesmente um saco de enzimas:
protenas so muitas vezes seqestradas em certas regies, tais como membranas,
lisossomos, ncleos ou mitocndrias. Em quarto lugar, algumas protenas tm que
se juntar a outras protenas para formar uma unidade funcional. A protena hemoglo-
bina, o microtbulo e o ribossomo so todos exemplos de numerosas protenas
juntadas para formar uma unidade funcional. Portanto, a expresso da informao
gentica ainda pode ser influenciada no nvel ps-traduo. Alguns desses casos
(como a fosforilao do fator promotor da mitose) j foram discutidos, enquanto
outros sero discutidos medida que aparecerem. Neste ponto, abandonaremos
nossa discusso dos aspetos moleculares da expresso gnica e voltaremos para a
dinmica do embrio em desenvolvimento. Podemos agora olhar para processos
desenvolvimentais precoces para estudar mecanismos moleculares para a determi-
nao do destino celular e da estrutura tissular.
LITERATURA CITADA
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Especificao do Destino
Celular e os Eixos Embrionrios
505
506 PARTE III Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
I. Especificao autnoma
Caracterstica da maioria dos invertebrados.
Especificao pela aquisio de certas molculas citoplasmticas presentes no ovo.
Clivagens invariantes produzem as mesmas linhagens em cada embrio da espcie.
Destinos dos blastmeros so geralmente invariantes.
Linhagens de Clulas ncoras so usualmente especificadas de maneira autnoma
nos plos dos eixos embrionrio.
Especificao do tipo celular precede qualquer migrao celular embrionria em larga escala.
Produz desenvolvimento em mosaico (determinativo): clulas no podem
modificar o destino se um blastmero perdido.
Pr-formao e epignese
Qualquer explicao sobre a diferenciao das diversas clulas corporais, a partir do
ovo fertilizado tem que explicar (1) a constante morfologia de cada espcie (i.e., que
galinhas somente geram galinhas, e no crocodilos) e (2) a diversidade entre as partes
corporais de cada organismo. Na verdade, uma das principais caractersticas do de-
senvolvimento que cada espcie reproduz seu padro de desenvolvimento. O de-
senvolvimento envolve a expresso das propriedades herdadas pelas espcies.
No sculo dezessete, a unio de herana e desenvolvimento foi obtida com a
hiptese do pr-formacionismo. De acordo com essa viso, todos os rgos do adul-
to estariam prefigurados em miniatura dentro do espermatozide ou (mais usualmente)
no vulo. Os organismos no eram considerados como desenvolvidos, mais sim
desenrolados. Essa hiptese encontrava apoio na cincia e na filosofia (Gould,
508 PARTE III Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
1977; Roe, 1981). Primeiro, porque todos os rgos eram prefigurados, o desenvolvi-
mento embrionrio meramente requeria o crescimento de estruturas existentes, e no a
formao de novas. Nenhuma fora misteriosa extra era necessria para o desenvolvi-
mento embrionrio. Segundo, assim como o organismo adulto era prefigurado em
clulas germinativas, a outra gerao j existia em estado prefigurado dentro das
clulas germinativas da primeira gerao prefigurada. Esse corolrio, chamado de
embitment (encapsulao), assegurava que as espcies sempre permaneceriam cons-
tantes. Embora alguns microscopistas alegassem enxergar miniaturas humanas total-
mente desenvolvidas dentro do espermatozide ou do vulo, os maiores proponentes
dessa hiptese - Albrecht von Haller e Charles Bonnet- sabiam que o desenvolvimen-
to dos sistemas orgnicos se dava em velocidades diferentes e que as estruturas
embrionrias no precisavam estar no mesmo lugar daquelas do recm-nascido.
Os pr-formacionistas no tinham uma teoria celular para fornecer um limite inferi-
or para o tamanho dos seus organismos pr-formados, e nem tinham uma viso do
domnio do ser humano sobre a Terra como sendo infinito. Pelo contrrio, como disse
Bonet (1764) O trabalho da natureza to pequeno quanto ela deseja, e a espcie
humana existia no finito espao compreendendo a criao e a ressurreio. Isso esta-
va de acordo com a melhor cincia da poca, e de acordo com o princpio do matem-
tico e filsofo francs Ren Descartes sobre a divisibilidade infinita de uma natureza
mecnica iniciada, mas no interferida por Deus.
A pr-formao era uma teoria conservadora, enfatizando a falta de mudanas
entre geraes. Sua principal falha era a inabilidade em explicar as variaes j conhe-
cidas pela limitada evidncia gentica da poca. Sabia-se, por exemplo, que a unio
entre uma pessoa branca e outra negra gerava filhos de uma cor intermediria entre as
duas, uma impossibilidade se a herana e o desenvolvimento ocorressem somente
atravs do vulo ou do espermatozide. Em experimentos com um controle maior, o
botnico alemo, Joseph Klreuter (1766) produziu plantas hbridas de tabaco conten-
do caractersticas de ambas as espcies. Ademais, cruzando o hbrido tanto com o
ascendente masculino ou o feminino, Klreuter foi capaz de reverter as caractersti-
cas do hbrido de volta quelas de um ou outro ascendente, aps vrias geraes.
Dessa maneira, a herana parecia depender de uma mistura de componentes dos pais.
E mais, a pr-formao no podia explicar a gerao de monstruosidades e determi-
nados desvios, tal como o hexadactilismo (seis dedos em cada mo), quando ambos
os pais eram normais.
Desenvolveu-se, ento, uma hiptese alternativa: epignese. De acordo com essa
hiptese, cada organismo adulto se desenvolveria novamente a partir de uma condi-
o no diferenciada. Essa viso do desenvolvimento, tendo razes filosficas remon-
tando a Aristteles, foi revivida por Kaspar Friedrich Wolff, um embriologista alemo
que trabalhava em St. Petersburg. Observando cuidadosamente embries de pinto,
Wolff demonstrou que as partes embrionrias se desenvolvem de tecidos que no tm
contrapartida no organismo adulto. O corao e os vasos sangneos (que de acordo
com os pr-formacionistas, tinham que estar presentes desde o comeo para assegu-
rar o crescimento embrionrio) podiam ser vistos se desenvolvendo de novo em cada
embrio. Similarmente, foi visto que o tubo intestinal se originava das dobras de um
tecido originalmente plano. Essa ltima observao foi explicitamente detalhada por
Wolff (1767) que declarou: Quando a formao do intestino por essa maneira for
adequadamente avaliada no existir nenhuma dvida, eu acredito, sobre a verdade
da epignese. No entanto, para explicar como o organismo criado novamente a cada
gerao, Wolff teve que postular uma fora desconhecida, a vis essentialis (fora
essencial), a qual agindo como a gravidade ou o magnetismo organizaria o desenvol-
vimento embrionrio.
O pr-formacionismo explica melhor a continuidade das geraes, enquanto que a
epignese explica melhor a variao e as observaes diretas na formao dos rgos.
Uma certa reconciliao entre as partes foi tentada pelo filsofo alemo Immanuel
Kant (1724-1804) e seu colega, o biologista Friedrich Blumenbach (1752-1840). Na
CAPTULO 13 Especificao celular autnoma por determinantes citoplasmticos 509
Os Teratologistas F
Teratologistas ranceses
Franceses
eram isoladas do resto do embrio, elas formavam sua estrutura caracterstica inde-
pendentemente do contexto das outras clulas. Dessa maneira, cada uma das clulas
tunicadas aparentavam estar se desenvolvendo de maneira autnoma.* Como discu-
timos anteriormente, essa habilidade de cada clula desenvolver-se independente-
mente de outras clulas embrionrias freqentemente chamada de desenvolvimento
autnomo ou em mosaico, porque o embrio aparenta ser um mosaico de partes
autodiferenciadas.
VISTA VEGETAL
Clulas laterais
Msculo do tronco
Endoderma (B) Manto
Notocorda
Notocorda (Ectoderma)
Mesnquima
Mancha ocelar Crebro
Msculo Cordo nervoso Notocorda
Boca
Tronco
cerebral Clulas
filamentosas Palpo
endodrmicas
Estmago Clula
muscular
Medula espinhal
Msculo Mesnquima Faringe Corao
(endoderma) Endstilo
Clulas
Notocorda (endoderma)
laterais do tronco
CAPTULO 13 Especificao celular autnoma por determinantes citoplasmticos 511
PLO ANIMAL
Ectoderma
ANTERIOR
POSTERIOR
Sistema nervoso
Mesnquima
Notocorda
Msculo
Endoderma PLO VEGETAL
Ectoderma Ectoderma
Estgio celular
Horas a 100 C
A6.1 endoderma
A7.3 notocorda
Tronco cerebral
Vegetal A7.5 endoderma Medula espinhal
A7.6 clulas laterais do tronco
A7.7 notocorda
medula espinhal
msculo
Animal
crebro Crebro
palpos
Faringe primordial
Anterior
epiderme palpos
Clula pigmentada
epiderme Crebro
epiderme
epiderme
endoderma Endoderma
Filamento
mesnquima
Esquerda
endodrmico
notocorda
Posterior
msculo
Msculo
Vegetal
Endoderma
filamento endodrmico
mesnquima Msculo
Medula espinhal
Direita
msculo Filamento
endodrmico
Animal
epiderme
Tronco cerebral
epiderme Medula espinhal
Msculo
epiderme
b5.4 epiderme
Figura 13.3
Linhagem determinativa de blastmeros
tunicados. (A) Mapa de destino de linhagem
determinados como os dos tunicados, algumas interaes indutivas acontecem entre
no desenvolvimento embrionrio do tunicado os blastmeros. De fato, Ortolani (1959) mostrou que essa regio do ectoderma no
H. roretzi. Como as metades direita e esquerda est determinada para originar tecido nervoso at o estgio de 64 clulas, pouco antes
se desenvolvem da mesma maneira, somente da gastrulao. Dessa maneira, embora a maioria dos tecidos sejam determinados
metade do embrio aqui representado. (B) imediatamente aps a segregao do citoplasma do ovo, certos tecidos nesses em-
Linhagens das clulas musculares. (A de acor- bries tm uma determinao condicional por interao clula a clula.
do com Nishida, 1987; B de acordo com Pelos estudos de linhagem celular de Conklin e outros (Figuras 13.2 e 13.3), j era
Nishida, 1992a.) conhecido que somente um par de blastmeros (vegetativo posterior; B4.1) no em-
brio de oito clulas capaz de produzir o tecido muscular da cauda. Quando o
citoplasma transferido do blastmero B4.1 (formador de msculo) para o blastmero
b4.2 (formador do ectoderma) de um embrio tunicado de 8 clulas, o blastmero
Figura 13.4
Localizao do citoplasma formador de msculos durante o desenvolvimento precoce de ascdios.
Regies do citoplasma foram transferidas para o blastmero a4.2 (epiderme presuntiva) e inves-
tigadas para detectar protenas especficas do msculo produzidas por clulas derivadas de a4.2.
A regio colorida representa o crescente amarelo, que deve conter os determinantes da forma-
o muscular. Porcentagens indicam a frao do espcimen mostrando expresso do gene
muscular. (A) embrio de oito clulas; (B) ovo no fertilizado; (C) ovo fertilizado na primeira fase
dos movimentos citoplasmticos. (D) ovo fertilizado na segunda fase dos movimentos citoplas-
mticos. (De acordo com Nishida, 1992b.)
CAPTULO 13 Especificao celular autnoma por determinantes citoplasmticos 513
(B)
Estgio de
64 clulas
Estgio de
32 clulas
Estgio de
16 clulas
Estgio de 8 clulas
Especificao muscular
Especificao muscular autnoma condicionada
formador do ectoderma gera clulas musculares como tambm sua prognie ectodrmica
normal (Whittaker, 1982). Alm disso, o citoplasma da rea de plasma amarelo do ovo
fertilizado pode tambm fazer com que o blastmero 4.2a expresse protenas especfi-
cas do msculo (Figura 13.4; Nishida, 1992a). Tung e colegas (1977) mostraram o
inverso, que quando os ncleos larvais so transplantados a fragmentos enucleados
de ovos de tunicados, as clulas recm-formadas mostram uma estrutura tpica daque-
las clulas que fornecem o citoplasma, e no daquelas clulas que fornecem o ncleo.
Crescente
amarelo
Lateral
514 PARTE III Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Podemos concluir, ento, que certos determinantes que existem no citoplasma causam
a formao de certos tecidos. Esses determinantes morfogenticos parecem agir ati-
vando (ou inativando) seletivamente genes especficos. A determinao dos
blastmeros e a ativao de certos genes so controlados pela localizao espacial de
determinantes morfogenticos dentro do citoplasma do ovo. [cyto1.html]
Existe a hiptese de que o determinante miognico do crescente amarelo regula a
transcrio de genes especficos para o msculo. Imaginava-se que os tunicados
poderiam segregar uma protena semelhante MyoD dentro do crescente amarelo. No
entanto, embora essa protena seja vista nas clulas musculares do embrio tunicado,
ela s comea a funcionar no estgio de 32 clulas no sendo ento o fator do crescen-
te amarelo (Satoh et al.,1995). Um melhor candidato a determinante miognico do
crescente amarelo o RNA materno que parece estar ligado ao citoesqueleto do
ocito e que segregado junto com o citoplasma formador de msculos. Esse RNA
encontrado no crtex de ocitos maduros, segregado juntamente com o citoplasma
amarelo formador de msculos para a coroa do plo vegetal na primeira fase dos
movimentos citoplasmticos durante a fertilizao, e a partir da muda para a regio
vegetativa posterior do zigoto enquanto se forma o crescente amarelo definitivo (Fi-
gura 13.5; Swalla e Jeffery, 1995). Esse RNA provavelmente no codifica uma protena,
e no se sabe se pode direcionar o desenvolvimento muscular quando inserido em
uma clula no muscular.
Endoderma
Epiderme
Figura 13.7
Comparao de embries normais de tunicados e embries cujo citoplasma vegetativo posterior
(PVC) foi removido. (A) Larva do tipo selvagem. (B) Larva radialmente simtrica de ovo cujo
PVC foi removido. A larva no tem o eixo ntero-posterior. Essas larvas consistem de uma
camada epidrmica externa, uma massa notocordal central e uma camada endodrmica intermedi-
ria. (C) Vista vegetal de um embrio normal com 76 clulas. (D) Vista vegetal de um embrio
radialmente simtrico cujo PVC foi removido. (De acordo com Nishida, 1994b.)
Trocoblasto
Figura 13.8 presuntivo
(A-C) Diferenciao de clulas trocoblsticas
no embrio normal do molusco Patella. (A)
Estgio de 16 clulas visto de lado; as clulas
trocoblsticas presuntivas esto sombreadas.
(B) Estgio de 48 clulas. (C) Estgio de larva
ciliada, visto do plo animal. So observados
clios nas clulas trocoblsticas. (D-G) Dife- (A) (B) (C)
renciao de clulas trocoblsticas isoladas e
cultivadas in vitro. (D) Clula trocoblstica iso- Desenvolvimento do trocoblasto isolado
lada. (E,F) Resultados da primeira e segunda
divises em cultura. (G) Produto ciliado de (F).
Mesmo em cultura isolada as clulas se tornam
ciliadas no momento correto. (De acordo com
Wilson, 1904.) (D) (E) (F) (G)
CAPTULO 13 Especificao celular autnoma por determinantes citoplasmticos 517
Citoplasma
vegetal claro Lbulo
polar
O lbulo polar
Em seu experimento seguinte, Wilson pde demonstrar que tal desenvolvimento era
assegurado pela segregao de determinantes morfogenticos especficos em
blastmeros especficos. Certos embries clivando espiralmente (principalmente nos
(A)
filos molusco e aneldeo) expelem um bulbo de citoplasma imediatamente antes da
primeira clivagem (veja Figura 13.9). Essa protruso chamada lbulo polar. Em certas
espcies de caracis, a regio unindo o lbulo polar ao resto do ovo se torna um tubo
delgado. A primeira clivagem divide o zigoto assimetricamente, de tal forma que o
lbulo polar est ligado somente ao blastmero CD. Em vrias espcies, quase um
tero do volume citoplasmtico total est presente nesses lbulos anucleados dando-
lhes a aparncia de outra clula. Essa estrutura trilobulada freqentemente referida
como o embrio no estgio triflio (Figura 13.10). O blastmero CD absorve ento o
material do lbulo polar, mas o extruda novamente antes da segunda clivagem (Figura
13.9). Aps essa diviso, o lbulo polar est ligado somente ao blastmero D, que (B)
absorve seu material. A partir da, no mais se forma o lbulo polar.
Wilson mostrou que se o lbulo polar for removido no estgio triflio, as clulas Figura 13.10
Lbulos polares de moluscos. (A) Micro-
remanescentes dividem-se normalmente. Entretanto, em lugar de produzir uma larva
grafia eletrnica de varredura do lbulo po-
trocfora normal (caracol), elas produzem uma larva incompleta, sem seus rgos
lar em extenso no ovo no clivado de
mesodrmicos - msculos, boca, glndula da concha e p.* Ainda mais, Wilson de- Buccinum undatum. As cristas superficiais
monstrou que o mesmo tipo de embrio anormal pode ser produzido removendo o so restritas regio do lbulo polar. (B)
Seo atravs da primeira clivagem ou est-
A glndula da concha um rgo formado por induo pelas clulas mesodrmicas. Sem o gio triflio do embrio de Dentalium. A seta
mesoderma, no existem clulas presentes para induzir o ectoderma competente. Mais uma vez aponta o grande lbulo polar grande. (Cor-
vemos alguma induo limitada em um embrio em mosaico. tesia de M. R. Dohmen.)
518 PARTE III Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
(A)
Figura 13.11
Desenvolvimento do blastmero D. (A) Dia-
gramas esquemticos da linhagem do blast-
mero D em embries de Ilyanassa. (i) Embrio
de 4 clulas. (ii) Blastmeros 1D e 1d no est-
gio de 8 clulas. (iii) Estgio de 16 clulas con-
tendo blastmeros 2D e 2d (derivados de 1D).
As clulas derivadas do D (coloridas) freqen-
temente se dividem mais tarde do que as ou-
tras. (iv) Diviso do macrmero 2D para gerar
clulas 3D e 3d, enquanto a clula 2d se divide
em 2d1 e 2d2. (v) Estgio de 64 clulas. O
blastmero 3D produz as clulas 4D e 4d. (vi)
O blastmero 4d divide-se simetricamente para
produzir os dois mesentoblastos ME1 e ME2.
(B) Embrio de 8 clulas. A pequena clula
PB o lbulo polar e no parte do embrio.
(C) Embrio de 12 clulas (1a-1d ainda no blastmero D do embrio de 4 clulas. O pesquisador concluiu que o citoplasma do
dividiram). (D) Embrio de 32 clulas. (A de lbulo polar contm os determinantes mesodrmicos e que esses do ao blastmero
acordo com Clement, 1962; fotografias de Craig sua capacidade formadora do mesoderma. Wilson mostrou tambm que a localizao
e Morrill, 1986, cortesia dos autores.) dos determinantes mesodrmicos estabelecida logo aps a fertilizao, demonstran-
do assim que uma regio citoplasmtica especfica do ovo, destinada a ser inclusa no
blastmero D, contm os fatores (quaisquer que sejam) necessrios para os ritmos de
clivagem especiais desse blastmero e para a diferenciao do mesoderma.
Os determinantes morfogenticos seqestrados dentro do lbulo polar esto pro-
vavelmente localizados no citoesqueleto ou no crtex e no no citoplasma difusvel
do embrio. Isso foi evidenciado a partir de estudos de A. C. Clement (1968). Quando
o hemisfrio animal separado do vegetal no caracol Ilyanassa obsoleta, o hemisfrio
animal forma rgos ectodrmicos que se assemelham a embries formados de ovos
sem lbulos. Clement usou aqueles embries que haviam iniciado a reabsoro do seu
segundo lbulo polar e os colocou em placas de gelatina. Em seguida, ele centrifugou
os embries embebidos, forando o fluido citoplasmtico do vitelo da parte vegetativa
da clula para dentro do hemisfrio animal. Centrifugando esses embries em um
segundo meio viscoso, ele causou a separao dos hemisfrios animal e vegetal. As
metades animais desses embries centrifugados no desenvolveram mais estruturas
mesodrmicas e endodrmicas do que aquelas de ovos no centrifugados. Portanto,
os determinantes do lbulo polar no foram transferidos ao hemisfrio animal pelo
contedo fludico do hemisfrio vegetal. Van den Biggelaar obteve resultados seme-
lhantes quando removeu o citoplasma do lbulo polar com uma micropipeta. O cito-
plasma de outras regies da clula fluram para o lbulo polar, repondo a poro que
havia sido removida O desenvolvimento subseqente desses embries foi normal.
Alm disso, quando o citoplasma solvel do lbulo polar foi adicionado ao blastmero
B, no houve duplicaes de estruturas (Verdonk e Cather, 1983). Portanto, a parte
difusvel do citoplasma no contm esses determinantes morfogenticos. Eles prova-
velmente se localizam no citoplasma cortical, no fluido, ou no citoesqueleto.
CAPTULO 13 Especificao celular autnoma por determinantes citoplasmticos 519
Figura 13.12
Importncia do lbulo polar no desenvolvimen-
to de Ilyanassa. (A) Larva vliger normal. (B)
Larva anormal, tpica para os casos onde o l-
bulo polar do blastmero D removido. (E,
olho; F, p; S, concha; ST, estatocisto, rgo de
equilbrio; V, velum; VC, clios velares; Y, vitelo
residual; ES, estomodeu evertido; DV, velum
desorganizado.) (de Newrock e Raff, 1975,
cortesia de K. Newrock.)
520 PARTE III Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Figura 13.13
Formao de embries gmeos suprimindo a formao do lbulo polar em Dentalium. (A)
Embrio normal no estgio da sexta clivagem. (B) Embries gmeos formados quando
baixas concentraes de citocalasina inibem a formao do lbulo polar e o material do
lbulo polar distribudo para ambos os blastmeros, AB e CD. (De acordo com Guerrier
et al., 1978.)
(A)
Intestino Gnada Faringe
Sistema
nervoso
nus
vulo Vulva
Reto
Espermatozide
vulo
(B)
Celulas
Clulas produtoras germinativas
de cutcula Vulva
Sistema nervoso Gnada
Faringe Intestino
522 PARTE III Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Ovo fertilizado
PO (zigoto)
Hipoderme
Neurnios
Msculos farngeos
Um msculo do corpo
Glndulas Msculos do corpo
(389 clulas) Msculos farngeos Intestino
Neurnios (20 clulas)
Glndulas Hipoderme
(80 clulas) Msculos do corpo Msculos do corpo
Dois neurnios (20 clulas)
(47 clulas)
Linhagem germinativa
Figura 13.15
Mapa resumido da linhagem celular de C.
elegans, enfatizando os precursores da linha-
gem germinativa (clulas P, P0-P4) que rece-
bem os grnulos P. O nmero de clulas (em
parnteses) se refere s clulas presentes na a linhagem de clulas do C. elegans quase inteiramente invarivel de um indivduo
larva recm-eclodida. Algumas dessas conti-
para o outro. Existem poucas possibilidades para o acaso (Sulston et al., 1983). (Essa
nuam a se dividir para produzir as 959 clulas
somticas do adulto. (de Strome e Wood, 1983, uma conseqncia da organizao espacial da segregao citoplasmtica.)
cortesia de W. Wood.) Caenorhabditis tambm tem um pequeno nmero de genes para um organismo
multicelular- aproximadamente 15.000 (Sulston et al., 1992).
A polaridade inicial parece residir no ovo alongado, o eixo ntero-posterior sendo
o eixo longo do ovo. Entretanto, a deciso sobre qual ponta se tornar a anterior e qual
ser a posterior parece depender do espermatozide. A posio de entrada do esper-
matozide no ncleo define o plo posterior (Goldstein e Hird, 1996).
O esquema de diviso de C. elegans (Figura 13.15) semelhante ao da linhagem
de clulas precursoras, pois durante a clivagem precoce, divises assimtricas pro-
duzem uma clula-filha diferenciada (coletivamente chamadas de clulas ncoras
e denominadas como AB, MS, E, C e D) e outra clula precursora (a linhagem P1-P4).
A localizao das substncias citoplasmticas em blastmeros especficos foi ele-
gantemente demonstrada nessas divises assimtricas. Dentro do ovo est um con-
junto de grnulos da linhagem germinativa, ou grnulos P, que so redistribudos
no zigoto, pouco depois da fertilizao e so restritos s clulas capazes de formar
gametas. Usando anticorpos fluorescentes contra um dos componentes dos grnu-
los P, Strome e Wood (1983) descobriram que durante a migrao pronuclear no
zigoto, os grnulos P aleatoriamente espalhados passam a se localizar na ponta
posterior do zigoto (em direo ao stio de entrada do espermatozide), de modo que
somente entram no blastmero (P1) formado do citoplasma posterior (Figura 13.16;
Prancha 10). Aps a clivagem, os grnulos P se dispersam atravs do blastmero P1
at o incio da mitose, quando eles novamente migram para a ponta posterior da
clula. Aqui eles ficam reservados para o blastmero P2. Finalmente, os grnulos P
se localizaro na clula P4, cuja descendncia se torna os espermatozides e os
vulos do adulto. A localizao dos grnulos P requer microfilamentos mas pode
ocorrer na ausncia de microtbulos. Tratando os zigotos com citocalasina D (um
inibidor de microfilamentos), se impede a segregao desses grnulos na poro
posterior da clula, enquanto que demicolcina (um inibidor microtubular semelhante
colchicina) no impede esse movimento (Strome e Wood,1983). Uma vez dentro da
regio posterior do zigoto, os grnulos P l permanecem, mesmo que os
microfilamentos sejam destrudos (Hill e Strome, 1987, 1990). [other.html#cyto4]
CAPTULO 13 Especificao celular autnoma por determinantes citoplasmticos 523
Figura 13.16
Localizao assimtrica dos grnulos P durante a fertilizao e a primeira
clivagem. As figuras esquerda esto coradas para mostrar o DNA; as
figuras direita mostram as mesmas clulas marcadas com anticorpos
fluorescentes contra a protena do grnulo P. (A) Um zigoto antes da migra-
o pronuclear mostra uma disperso aleatria dos grnulos P. (B) Com a
aproximao dos proncleos, os grnulos se localizam na periferia posteri-
(A) or do zigoto. (C) Um embrio de duas clulas no qual P1 est entrando na
prfase mittica; Os grnulos P esto agora posicionados na periferia
posterior para serem transportados para a clula P2. (de Strome e Wood,
1983, cortesia de S. Strome.)
(B)
(C)
Figura 13.17
Actina anormal e distribuio de grnulos P
no mutante par-3. Distribuio da actina ci-
toplasmtica no embrio do tipo selvagem
(A) e no embrio de uma fmea deficiente
em par-3 (B). A distribuio dos grnulos P
assimtrica no embrio do tipo selvagem
(C), mas simtrica no embrio deficiente em
par-3 (D). No embrio mutante de 4 clulas
(E), os grnulos P podem ser vistos em to-
das as quatro clulas. (de Kirby, 1992, corte-
(A) (B) sia de C. M. Kirby.)
(C) (D)
Figura 13.19
Localizao citoplasmtica da protena SKN-
1. Anticorpos protena SKN-1 mostram que
ela est presente predominantemente no n-
cleo da clula P1, aps a primeira diviso.
Aps a segunda diviso, essa protena se acu-
mula nas duas clulas derivadas de P1, mas
no nas clulas derivadas de AB (compare as
intensidades dos ncleos indicados pelas se-
tas). Em mutantes mex-1 a protena SKN-1
est distribuda igualmente em todos os
blastmeros. (de Bowerman et al., 1993, cor-
tesia de B. Bowerman.)
526 PARTE III Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
A protena SKN-1
normalmente P2 precisa contactar
encontrada nos EMS para haver
ncleos de EMS e P2 diferenciao do intestino
Regulao em C. elegans
(A)
Figura 13.21
(B) Intestino se diferencia
Resultados de experimentos de isolamento e
Intestino no se diferencia
recombinao mostrando que so necessrias
interaes celulares para que a clula EMS
forme determinantes da linhagem intestinal.
(A) Quando o blastmero EMS separado
logo aps a sua formao, ele no pode pro-
duzir grnulos especficos para o intestino.
(C) Se ele deixado por perodos mais longos,
ento, ele pode produzir. (B) Se a clula EMS
recombinada com cada um ou ambos deri-
vados do blastmero AB, no formar grnu-
los especficos para o intestino. (C) Se re-
combinado com o blastmero P2, a clula
Tempo de separao EMS dar origem a estruturas especficas do
(minutos antes da clivagem de EMS) intestino.(de Goldstein, 1992.)
528 PARTE III Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
ABa se diferenciam nessas clulas musculares farngeas devido sua interao com o
blastmero EMS ou seus descendentes (os quais produzem 18 clulas musculares da
faringe de maneira autnoma).
Estudos genticos mostraram que ABp se torna diferente de ABa pela interao
com a clula P2. Alm disso, esses estudos mostraram que essa interao mediada
pela protina GLP-1 na clula ABp e a protena APX-1 (anterior pharynx excess) no
blastmero P2. Em um embrio no manipulado, tanto ABa como ABp contactam o
blastmero EMS, mas somente ABp contacta a clula P2. Se a clula P2 destruda na
fase precoce do estgio de 4 clulas, a clula ABp no gera as clulas da vlvula
intestinal, o que normalmente faria (Bowerman et al., 1992). O contato entre ABp e P2
essencial para a especificao do destino das clulas ABp, e a clula ABa pode ser
mudada em um tipo de clula ABp se for forado seu contacto com P2 (Hutter e
Schnabel, 1994; Mello et al., 1994). O produto materno do gene glp-1 parece ser crtico
na distino entre ABa e ABp. Nos embries de mes com glp-1 mutante, o ABp
transformado em uma clula ABa (Hutter e Schnabel, 1994; Mello et al., 1994). Usando
alelos de glp-1 sensveis temperatura, foi mostrado que o momento para a interao
dependente de GLP-1 entre os estgios de 4 a 12 clulas, quando P2 necessrio
para o estabelecimento dos destinos de ABp (Figura 13.22). A protena um membro
de uma famlia amplamente conservada chamada de protenas Notch, que servem
como receptores de membranas celulares em muitas interaes clula-clula e tambm
detectada nas clulas ABa e ABp (Evans et al 1994).*
Um dos ligantes mais importantes para protenas Notch como GLP-1 uma outra
protena de superfcie chamada Delta. No C. elegans uma protena semelhante Delta
a APX-1 encontrada na clula P2 (Mango et al., 1994; Mello et al., 1994). Esse sinal
APX-1 parece quebrar a simetria entre ABa e ABp, pois estimula a protena GLP-1
somente no descendente AB que toca, ou seja, o blastmero ABp. Fazendo assim, a
clula P2 inicia o eixo dorsoventral de C. elegans.
* Como discutido no captulo anterior, a protena GLP1 est localizada nos blastmeros ABa e
ABp mas o mRNA do glp-1, maternalmente codificado, encontrado em todo o embrio. Evans e
colegas (1994) postularam que deve haver algum determinante de traduo no blastmero AB que
permite que a mensagem glp-1 seja traduzida nos seus descendentes. O gene glp-1 tambm ativo
na regulao das interaes clula-clula ps-embrionrias. Ele usado mais tarde pela clula da
extremidade distal da gnada para controlar o nmero de clulas germinativas entrando em meiose;
da o nome proliferao da linhagem germinativa (em ingls: germinal line proliferation) (veja
Captulos 17 e 22; Austin e Kimble, 1987).
farngea derivada do blastmero AB (%)
Larvas com musculatura
Figura 13.22
Experimento com deslocamento de temperatura para determinar em qual
estgio o produto do gene glp-1 materno est ativo. Neste mutante a
protena GLP-1 funciona a 15o C, mas no a 25o C. Variando a temperatura
em diferentes estgios embrionrios foi determinado que a protena GLP-
1 era necessria entre os estgios de 4 a 28 clulas. (De acordo com Priess Nmero total de clulas no embrio
et al., 1987.) quando a temperatura variou.
Prancha 2
Unidades de transcrio ativa em
um cromossomo de trito
Ocitos de anfbios como Notophtalmus viridescens tm
cromossomos tipo escova-de-lmpada nos quais os genes
sintetizadores de RNA ativos se projetam para fora. O eixo
do DNA dessas projees est corado com um corante bran-
co. A mancha vermelha de um anticorpo que se liga s
protenas ligantes de RNA. Captulo 22. (Fotografia cortesia
de M. B. Roth e J. Gall.)
Prancha 1
Um clone de rs Xenopus
Os ncleos de todos os membros desse clone vieram de um nico indivduo um
girino fmea do estgio de broto de membro, cujos antecessores (painel superior
direita) foram ambos marcados com genes albinos. Os ncleos foram transferi- Prancha 3
dos para ovos no-fecundados, enucleados e ativados de uma fmea do tipo O fator de crescimento do fibroblasto
selvagem. As rs resultantes eram todas fmeas e albinas (painel inferior). Cap- essencial para produo dos mesodermas
tulo 2. (Fotografia cortesia de J. Gurdon.) lateral e ventral em Xenopus
Quando ovos de Xenopus so injetados com um re-
ceptor mutante negativo e dominante para o fator de
crescimento de fibroblasto (FGF), o embrio inca-
paz de responder ao FGF. Na ausncia do sinal do
FGF, os mesodermas lateral e ventral no se formam,
e o embrio carece de tronco e cauda. Captulos 3 e
15. (Fotografia cortesia de M. Kirschner.)
Prancha 4
Capacidade do lbio
dorsal do blastporo
gerar o eixo neural
secundrio em anfbios
O lbio dorsal do blastporo
de embries de anfbios pode
organizar um segundo eixo
embrionrio quando trans-
plantado para o lado ventral
de outra gstrula. Esta foto-
grafia foi tirada de uma l-
mina real preparada por
Hilde Mangold e mostra que
as estruturas dorsais secun-
drias contm tanto tecidos
do hospedeiro (no pigmen- (A)
tados) quanto do doador
(pigmentados). Captulo 15.
(Fotografia cortesia de P.
Fssler e K. Sander.)
Prancha 5
Salvamento de
estruturas dorsais pela
protena Noggin
A protena Noggin pode ser
crtica para a induo do
mesoderma dorsal e do tubo
neural. Quando ovos de Xe- (B)
nopus so expostos irradia-
o UV antes da primeira
clivagem, no se formam es-
truturas dorsais (painel supe-
rior). Se uma clula precoce
de tal embrio for injetada com
RNA de noggin, os embries
formam estruturas dorsais. Se
a mensagem noggin for inje-
tada em demasia, os embries
produzem muito mais tecido
anterior dorsal (painel inferi-
or). Captulo 15. (Fotografias
cortesia de R. M. Harland.)
(C)
Prancha 6 ( direita)
O gene noggin transcrito no mesoderma dorsal e tecido mesodrmico
O RNA de noggin se acumula na regio da zona marginal dorsal (A) e visto no lbio dorsal
do blastporo (B). Quando essas clulas involuem, a expresso de noggin vista na notocorda
e endoderma farngeo (C), que se estende anteriormente, no centro do embrio (D). Captulo
15. (Fotografias cortesia de R. M. Harland.) (D)
(A) (B) (C)
Prancha 7
Rearranjos do citoplasma em Xenopus laevis
O ovo no-fertilizado de Xenopus laevis tem simetria radial. (B) Movimentos citoplasmticos
so vistos medida que o ovo comea a clivar, 90 minutos aps a fecundao. O citoplasma
do futuro lado dorsal ( direita) difere daquele do futuro lado ventral ( esquerda). Essas
diferenas podem ser vistas durante toda a clivagem embrionria (C,D) e resultam no
posicionamento dos determinantes morfogenticos dorsais, no lado do embrio oposto ao
ponto de entrada do espermatozide. (E) Os movimentos citoplasmticos se correlacionam
com o deslocamento da -catenina. No estgio bicelular precoce, a -catenina (cor laranja)
est localizada predominantemente na futura superfcie dorsal do embrio. Esse padro
persiste no estgio de blstula (F). Captulos 4, 6 e 15. (A-D cortesia de M. V. Danilchik; E
e F cortesia de R. T. Moon.)
Prancha 8 Prancha 9
Localizao de um RNA Efeito do cido retinico na
especfico numa regio do ovo regenerao de membros
O RNA de vg1 que codifica um fator O cido retinico (RA) faz com que as clulas
de crescimento da famlia TGF-, aps em regenerao esqueam sua posio ori-
hibridizao in situ, encontrado resi- ginal. Tecido do pulso da salamandra em re-
dindo exclusivamente na regio vege- generao, usualmente formar somente um
tal do ovo de Xenopus. O crescente pulso. Aps tratamento com RA, porm, o
branco no fundo do ovo devido tecido em regenerao (aqui de uma salaman-
radioatividade da sonda que reconhe- dra pigmentada escura) regenera todo o ante-
ce o RNA; o resto do ovo verde brao (membro inferior direito) quando en-
devido colorao com o corante xertado em um membro posterior cortado de
Giemsa. Captulos 12, 15 e 22. (Foto- um animal com pigmentao diferente. Cap-
grafia cortesia de D. A. Melton.) tulo 18. (Cortesia de K. Crawford.)
Prancha 10
Localizao progressiva no citoplasma Prancha 11
A segregao de certos grnulos citoplasmticos (grnulos P) vista progredin- Localizao citoplasmtica em
do para dentro das clulas mais posteriores do embrio de Caenorhabditis elegans. embries de tunicados
Essas clulas geram o espermatozide e o vulo do nematide. Quando os A clivagem separa regies do citoplasma em clulas
proncleos se encontram durante a fecundao, os grnulos P se movem para a particulares. O crescente amarelo do embrio de Styela
poro posterior da clula. Esse movimento prossegue at os grnulos serem fica localizado em um pequeno grupo de clulas que
encontrados somente na clula P que d origem aos gametas. A coluna esquerda iro gerar a musculatura larval. Esta figura mostra os
est corada para mostrar a posio dos ncleos, enquanto a coluna direita est estgios de 2-, 4-, 16- e 64-clulas. Captulo 13. (Foto-
corada para mostrar os grnulos P. Captulo 13. (Fotografias cortesia de S. Strome.) grafias cortesia de J. R. Whittaker.)
Prancha 12
Onda de ons de clcio atravs de ovos do
ourio-do-mar durante a fertilizao
Quando o espermatozide se funde com o vulo, uma onda de clcio se
inicia no local da entrada do espermatozide e se propaga atravs do vulo.
Isso pode ser monitorado pr-carregando o ovo com um corante que fluoresce
quando liga o clcio. A onda leva 30 segundos para atravessar o ovo.
Captulo 4. (Fotografia cortesia de G. Schatten.)
(A)
Prancha 13
Regies responsivas ao cido
retinico do embrio de camundongo
Um transgene consistindo de um elemento
responsivo ao cido retinico fundido a um
gene da -galactosidase foi inserido em um
embrio de camundongo. Colorao para -
galactosidase deve revelar as clulas que res-
pondem s concentraes endgenas de cido
retinico. (A) O estgio de 3-somitos mos-
trando responsividade ao cido retinico na
regio mediana do embrio; (B) Embries de
11,5 dias mostrando colorao regio fronto-
nasal e crebro anterior; (C) Embrio de 14,5
dias mostrando colorao no maxilar, regio
ptica, coxim do bigode e regies interdigitais
(B) (C) do membro. Captulos 11, 18 e 21. (Fotogra-
fias cortesia de J. Rossant.)
Prancha 14
Formao de padres em Drosophila
(A) O eixo ntero-posterior especificado por mRNAs e protenas
citoplasmticas. O gradiente da protena Bicoid especialmente im-
portante. Altas concentraes dessa protena (amarelo a vermelho)
causam formao da cabea e do trax ativando o gene hunchback.
(B) Os gradientes de protenas no embrio precoce ativam os genes
gap. Os produtos proticos dos genes gap (tais como hunchback e
Krppel) definem grandes domnios no corpo do inseto. Essas pro-
tenas interagem para formar limites especficos no embrio. Aqui,
as protenas Hunchback (laranja) e Krppel (verde) se sobrepem
para formar um limite (amarelo). (C) Os nveis das protenas gap
promovem a ativao de genes pair-rule especficos (aqui visveis
pelas bandas escuras) que dividem o embrio em segmentos ao longo
do eixo ntero-posterior. (D) No estgio da banda germinativa esten-
dida, as 14 bandas do gene da polaridade segmentar engrailed podem
ser vistas. Captulo 14. (Fotografias cortesia de (A) W. Driever e C.
Nsslein-Volhard; (B) C. Rushlow e M. Levine; (C) T. Karr e (D) S.
Carroll e S. Padock.)
Prancha 15
Compartimentao do disco imaginal da asa de Drosophila
O corante imunofluorescente vermelho marca as clulas onde a pro-
tena Vestigial produzida (a futura asa ventral); o corante verde
marca as clulas que expressam a protena Apterous (necessria para
a formao da asa dorsal). A rea sobreposta amarela. Captulo 19.
(Fotografia cortesia de S. Carroll.)
Prancha 16
Localizao da RNA polimerase II nos
ocitos do bicho-da-seda gigante
Fotomicrografia de fluorescncia (usando lentes
confocais) da cmara do ovo de Hyalophora cecropia.
Fluorescncia laranja indica a presena da RNA polimerase
II (corada com amanitina marcada). Fundo verde indica a
localizao da actina. (B) Maior aumento da regio cortical
do ocito de Antherea polyphemus e clulas foliculares.
Laranja indica RNA polimerase II. As outras cores so
colorao de fundo de grnulos do vitelo e clulas
foliculares. Captulo 22. (Fotografias cortesia de S. Berry.)
Prancha 17 ( acima )
Mariposa ginandromorfa
Um mosaico sexual (ginandromorfo) de uma mariposa lo, dividido bilateralmente
em uma metade feminina rosa-pardacenta e uma metade masculina amarela, de
asa menor. Tais mosaicos sexuais so causados quando um cromossomo X
perdido de um ncleo durante a diviso mittica precoce. Captulo 20. (Fotogra-
fia de T. R. Manley; cortesia do The Journal of Heredity.)
Prancha 18 (esquerda)
Controle do desenvolvimento pelo ambiente
Lagartas de Nemoria arizonaria que eclodem na primavera ingerem flores do
carvalho e desenvolvem uma cutcula que mimetiza as flores. Lagartas da mesma
espcie que eclodem no vero (aps o desaparecimento das flores) ingerem fo-
lhas de carvalho; essas lagartas desenvolvem cutculas que se parecem com as
folhas do carvalho. Substncias qumicas nas folhas parecem modificar o desen-
volvimento da cutcula. Captulo 21. (Fotografias cortesia de E. Greene.)
Prancha 19
Migrao das clulas da crista neural do pinto
Clulas da crista neural do pinto podem ser seguidas em sua migrao corando-as com
um anticorpo monoclonal marcado, fluorescente. As clulas da crista neural (coradas de
verde) so consideradas migrar atravs das regies anteriores (A) mas no das regies
posteriores (B) do tecido somtico. Esse padro especfico de migrao das clulas da
crista neural tem um papel na determinao da colocao dos neurnios perifricos.
Captulo 7. (Fotografias cortesia de M. Bronner-Fraser.)
Prancha 20
Vias de migrao neural em insetos
Axnios neurais em embries de insetos migram de acordo
com padres muito especficos. Neurnios derivados de
um precursor comum (aqui mostrados com a mesma colo-
rao) produzem axnios que migram seletivamente com
outros axnios. O axnio Q1, por exemplo, viaja at en-
contrar o axnio dMP2 e em seguida viaja com esse, en-
quanto o axnio do neurnio G continua a mover-se em
uma linha reta at encontrar o axnio P1. Captulo 8. (Foto-
grafia cortesia de C. Goodman.)
Prancha 21
Um camundongo com seis pais
O camundongo multicolorido foi formado misturando clu-
las de trs embries do estgio de 4 clulas: Um embrio
oriundo de dois camundongos pretos; um embrio oriundo
de dois camundongos brancos; e um embrio oriundo de
dois camundongos castanhos. Em lugar de formar um mons-
tro de trs cabeas, o embrio regulou-se para formar um
camundongo de tamanho normal com contribuies de cada
um dos trs embries. Cada um dos trs embries tambm
proveu clulas da linhagem germinativa, o que foi mostrado
acasalando esse camundongo com um camundongo recessivo
(branco); esse acasalamento produziu descendncia de todas
as trs cores. Captulo 5. (Fotografia cortesia de C. Markert
eThe Journal of Heredity.)
CAPTULO 13 Especificao celular autnoma por determinantes citoplasmticos 529
Informaes adicionais
& Especulaes
(B) Metfase
Protena Prospero se acumula
na membrana polar
Anfase
(A)
Clula-me
ganglionar
Clula-tronco do (C)
neuroblasto
(D)
Telfase
Interfase
Figura 13 24
Distribuio assimtrica da protena Prospero durante o desenvolvimento da clula-me
ganglionar. (A) Clula-tronco do neuroblasto sintetiza a protena Prospero, a qual permanece
difusamente distribuda no citoplasma. (B) Na metfase, toda a protena Prospero est acumu-
lada em um dos plos do neuroblasto em diviso. (C) Na anfase e telfase, a protena Prospe-
ro entra na clula-me ganglionar e excluda do neuroblasto. (D) A protena Prospero, sendo
um fator de transcrio, entra no ncleo da clula-me ganglionar. A protena Numb se junta
Prospero ao deixarem o neuroblasto, mas no entra no ncleo do neuroblasto. (De acordo
com Hirata et al., 1995.)
CAPTULO 13 Especificao celular autnoma por determinantes citoplasmticos 531
Localizao citoplasmtica de
determinantes de clulas germinativas
Determinantes localizados no citoplasma so encontrados em todo o reino animal. Os
determinantes observados mais freqentemente so os responsveis pela determina-
o de precursores de clulas germinativas, ou seja, as clulas que do origem aos
gametas. Mesmo em embries onde outros aspectos do desenvolvimento precoce
so reguladores, aquelas clulas contendo determinadas regies do citoplasma do
ovo so destinadas a se tornarem precursoras de clulas germinativas.
Sem diminuio
Plasma germinativo de cromossomos Clulas-tronco
(B)
Sem diminuio
Plasma germinativo de cromossomos Clulas-tronco
532 PARTE III Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
CAPTULO 13 Especificao celular autnoma por determinantes citoplasmticos 533
(A)
Agulha
Agulha
(B)
Blastoderma
Blastoderma Blastoderma
Clulas Clulas
polares polares
Figura 13.26
Habilidade do plasma polar para corrigir a esterilidade induzida por radiao. (A) Tcnica de
transplante de plasma polar de um doador no irradiado a um hospedeiro irradiado. (B) Sees
longitudinais da poro posterior do embrio de Drosophila fixado ao se completar a clivagem.
(i) Embrio normal com o blastoderma completo e clulas polares. (ii) Embrio irradiado durante
a clivagem precoce. O blastoderma se formou, mas as clulas polares esto ausentes. (iii)
Embrio irradiado durante a clivagem precoce, mas subseqentemente injetado com plasma polar
de embries normais. O blastoderma e clulas polares esto presentes. (De acordo com Okada
et al., 1974, cortesia de M. Okada.)
Mahowald e colegas (1979) mostraram que essas fmeas cruzadas com machos nor-
mais produzem embries cujos ncleos nunca migram para o plasma polar no ovo. No
se formam clulas polares, e os adultos resultantes no tm clulas germinativas
primordiais para a produo de gametas. Outra mutao de efeito materno agametic-
causa a ausncia de clulas germinativas em cerca de metade das gnadas dos des-
cendentes de moscas fmeas homozigotas. Nesse caso, so formadas clulas polares
em nmero normal, mas os grnulos polares degeneram logo aps a fertilizao
(Engstrom et al., 1982). Experimentos com transplantes demonstram que o defeito est
no citoplasma polar e no no ambiente ovariano. Dessa maneira, temos agora evidn- (A)
cia bastante segura que o plasma polar est diretamente envolvido na determinao
da clula germinativa.
Figura 13. 27
O plasma polar de Drosophila. (A) Micrografia eletrnica de grnulos polares de uma frao
particulada de clulas polares de Drosophila. (B) Micrografia eletrnica de varredura de clulas
polares de um embrio de Drosophila pouco antes do trmino da clivagem. As clulas polares
podem ser vistas direita da fotografia. (Fotografias, cortesia de A. P. Mahowald.) (B)
534 PARTE III Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
(E) (F)
formam.* Embries derivados de fmeas com somente uma cpia do gene oskar pro-
duzem de 10 a 15 clulas polares no estgio de blastoderma celular, enquanto aquelas
que contm duas cpias do gene produzem aproximadamente 35 clulas polares. Au-
mentando-se o nmero de cpias do gene oskar para quatro, sero formadas cerca de
50 clulas polares. Alm disso, Ephrussi e Lehmann (1992) demonstraram que clulas
germinativas sero formadas onde estiver localizada a mensagem oskar e os estgios
que a precedem so cruciais somente na colocao do mRNA de oskar no plo poste-
rior do ovo. Se a mensagem oskar se localiza na parte anterior do embrio (o que pode
ser feito experimentalmente), o plasma e as clulas germinativas se formaro no ante-
rior. A protena Oskar provavelmente constri a primeira parte estrutural dos grnulos
polares. As protenas Vasa e Tudor se ligam Oskar tornando a estrutura mais comple-
xa e apta a ligar os determinantes da clula germinativa (Breitwieser et al., 1996). A
localizao do mRNA de gcl e do mtlrRNA no plo posterior do ovo frustrada por
qualquer uma das mutaes precedentes. Em mutantes valois e tudor, pequenas quan-
tidades da mensagem de glc podem ser vistas no plasma posterior em embries em
clivagem precoce, mas essa localizao perdida na clivagem tardia (Jongens et al.,
1992). Assim, os grnulos polares incluem os determinantes das clulas germinativas
e a estrutura que os mantm no posterior do ovo e do embrio. A estrutura ligar o
mRNA do germ cell-less (e provavelmente produtos gnicos para outros determinantes
de clulas germinativas). Essas mensagens so traduzidas em protenas durante a
clivagem precoce, entram no ncleo das clulas polares, e (de uma forma ainda no
conhecida) determinam que essas clulas devam ser germinativas.
*O nome oskar no vm de Grouch nem do rei da Noruega, mas do anti-heri ano do romance
de Gnter Grass, The Tin Drum. A traduo especfica de regio do mRNA do oskar em isoformas
especficas um processo complexo. A mensagem oskar translocada atravs do ovo ao plo
posterior por uma estrutura contendo tropomiosina que ligada pela protena repressora Bruno,
para prevenir sua traduo prematura (Erdyli et al., 1995; Kim-Ha et al., 1995). Com a localizao
do mRNA no plo posterior, a protena Staufen permite sua traduo. A protena Oskar necessria
para reter o mRNA de oskar (e a protena Oskar) no plo posterior (Markussen et al., 1995; Rongo
et al., 1995; Captulo 22).
CAPTULO 13 Especificao celular autnoma por determinantes citoplasmticos 537
Figura 13.31
Plasma germinativo de embries de r. (A) Plasma germinativo (reas escuras) perto do plo Clula Plaquetas
vegetativo de um zigoto recentemente fertilizado. (B) Clula contendo plasma germinativo na somtica de vitelo
regio endodrmica da blstula na anfase mittica. Note o plasma germinativo penetrando em
somente uma das clulas-filha carregadas com vitelo. (C) Clula germinativa primordial e clulas
somticas perto do assoalho da blastocele na gstrula precoce. (Cortesia de A. Blackler.)
Resumo
Temos evidncia que em certos organismos a determinao do destino de uma clula
devida poro do citoplasma do ovo que ela adquire durante a clivagem. Tal clula
diferencia-se independentemente das outras clulas, e os organismos que utilizam o
mecanismo tendem a um tipo de desenvolvimento em mosaico ou determinado. Essa
forma de desenvolvimento exibida por moluscos, tunicados e nematdeos. A localiza-
o dos determinantes morfogenticos dentro do citoplasma do ovo, sua redistribuio
durante o desenvolvimento do ovo e a fertilizao e os padres de clivagem celular so
importantes para determinar o destino de cada clula. Cada um desses fenmenos uma
funo do ovo. Apesar da maior parte do desenvolvimento desses organismos seguir o
padro de mosaico, alguma determinao interativa tambm existe. Em tunicados, o
sistema nervoso e alguns msculos so formados por interaes indutivas entre
blastmeros, e os caracis e nematdeos tambm tm certos rgos formados de manei-
ra interativa. No prximo captulo nos ocuparemos de certos organismos nos quais as
interaes entre molculas no blastoderma sincicial de ovos de insetos constituem o
mecanismo primrio da determinao do destino celular.
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A gentica da especificao axial
em Drosophila 14
Quando um espermatozide penetra no vu-
lo, entra em um sistema celular que j al-
canou um certo grau de organizao.
ERNST HADORN (1955)
N O LTIMO CAPTULO, discutimos as especificaes de clulas embrionri-
as precoces, quando adquirem diferentes determinantes citoplasmticos que
estavam armazenados no ocito. As membranas celulares estabelecem a re-
gio do citoplasma incorporado em cada clula, e acredita-se que determinantes
morfogenticos direcionam, em seguida, a expresso gnica nesses blastmeros. Du-
Aqueles de ns que esto trabalhando com rante o desenvolvimento de Drosophila, as membranas celulares no se formam antes
Drosophila encontram um aspecto da ques- da dcima terceira diviso nuclear. Antes disso, todos os ncleos dividem entre si um
to. Pois o material disponvel tudo que se citoplasma comum, e o material pode difundir atravs do embrio. Nesses embries, a
pode desejar, e mesmo experimentos embrio-
especificao de clulas ao longo dos eixos ntero-posterior e dorsoventral
lgicos podem ser realizados... Depende de
conseguida pelas interaes de materiais citoplasmticos dentro de uma nica clula
ns utilizarmos essas oportunidades. Temos
multinucleada. Alm disso, o incio das diferenas entre os eixos controlada pela
uma histria completa a desemaranhar, pois
podemos trabalhar as coisas por ambos tr- posio do vulo dentro do ovrio materno. Embora o local da entrada do espermato-
minos aos mesmo tempo. zide possa fixar os eixos em ascdios e nematides, os eixos ntero-posterior e dorso-
JACK SCHULTZ (1935) ventral da mosca so especificados por interaes entre o vulo e suas clulas folicu-
lares que o circunda.
543
544 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Invaginao
do intestino
anterior
Sulco ceflico
Clulas polares
na invaginao
do intestino
mdio
(D) (E)
Clipeolabro
Regio proceflica
Crista
(F) Segmento anterior
ptica
Crista
dorsal
Figura 14.1
Gastrulao em Drosohila. (A) Sulco ventral comeando a formar medida que as clulas
flanqueando a linha mediana ventral se invaginam. (B) O sulco se fecha, com clulas mesodrmi-
cas colocadas internamente e ectoderma superficial flanqueando a linha mediana ventral. (C)
Vista dorsal de um embrio um pouco mais velho mostrando as clulas polares e o endoderma
posterior mergulhando no embrio. (D) Vista lateral mostrando migrao completa da banda
germinativa. Sutis reentrncias marcam o comeo da segmentao ao longo da banda germinati-
va: Ma, Mx e Lb correspondem aos segmentos mandibular, maxilar e labial da cabea. T1-T3,
segmentos torcicos; A1-A8, segmentos abdominais. (E) Banda germinativa revertendo sua
direo. Os segmentos reais so agora visveis, assim como os outros territrios da cabea dorsal,
tal como o clipeolabro, a regio proceflica, a crista ptica e a crista dorsal. (F) Larva recm-
eclodida do primeiro instar. (Cortesia de F. R. Turner.)
CAPTULO 14 Especificao axial em Drosophila 545
interior do embrio. Em seguida, se achata para formar uma camada de tecido mesodr-
mico sob o ectoderma ventral. O endoderma prospectivo invagina em duas bolsas nos
terminais anterior e posterior do sulco ventral. As clulas polares so internalizadas
juntamente com o endoderma. Nesse momento, o embrio se curva para formar o sulco
ceflico e as dobras transversais anterior e posterior. [other.html#droso1]
As clulas que permanecem na superfcie (o ectoderma) sofrem convergncia e
extenso, migrando para a linha ventral mediana para formar a banda germinativa. Essa
se estende posteriormente e talvez devido ao invlucro do ovo, se enrola em volta da
superfcie superior (dorsal) do embrio. Assim, ao final da formao da banda
germinativa, as clulas destinadas a formar as estruturas larvais mais posteriores
esto localizadas logo aps a futura regio da cabea. Nesse momento, comeam a
aparecer os segmentos corporais, dividindo o ectoderma e o mesoderma. A banda
germinativa se retrai em seguida, colocando os presuntivos segmentos posteriores na
extremidade posterior do embrio.
Enquanto a banda germinativa estiver em sua posio estendida, vrios proces-
sos chaves morfogenticos ocorrem: organognese, segmentao e segregao dos
discos imaginais.* Alm disso, o sistema nervoso forma-se a partir de duas regies de
clulas ectodrmicas localizadas ventralmente. Conforme descrito no Captulo 8, os
neuroblastos se diferenciam desse ectoderma neurognico dentro de cada segmento
(e tambm da regio no-segmentada do ectoderma da cabea). Portanto, em insetos
como a Drosophila, o sistema nervoso est localizado ventralmente, em vez de ser
derivado do tubo neural dorsal, como nos vertebrados.
*Os detalhes da diferenciao do disco imaginal sero discutidos no Captulo 19. Para maiores
informaes sobre a anatomia do desenvolvimento de Drosophila veja Bate e Martinez-Arias,
1993; Tyler e Schetzer, 1996; e Schwalm, 1997.
Cabea
Protrax
Mesotrax
Metatrax
Figura 14.2
Comparao entre segmentao larval e adulta
Segmentos em Drosophila. Os trs segmentos torcicos
abdominais podem ser distinguidos por seus apndices: T1
(protorcico) somente tem patas; T2 (mesoto-
rcico) tem asas e patas; T3 (metatorcico) tem
halteres e patas.
546 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Polaridade adulta tem a sua prpria identidade. O primeiro segmento torcico por exemplo, somente
citoplasmtica
tem patas; o segundo segmento torcico contm patas e asas. O terceiro segmento
(efeito
materno) torcico tem patas e halteres (equilibradores). Os segmentos torcicos e abdominais
tambm podem ser diferenciados por suas cutculas. Como aparece esse padro? Duran-
te a ltima dcada, a combinao de mtodos da biologia molecular, gentica e embriologia,
levou a um modelo detalhado descrevendo como gerado o padro peridico ao longo
Gradiente de do eixo ntero-posterior, e como cada segmento diferenciado dos outros.
protena
Hunchback
A polaridade ntero-posterior no embrio, na larva e no adulto tem sua origem na
polaridade ntero-posterior do ovo(Figura 14.3). Os genes de efeito materno nos
ovrios da mosca produzem RNAs mensageiros que so colocados em diferentes
regies do ovo. Esse codifica protenas regulatrias transcricional e de traduo que
Genes
gap se difundem atravs do blastoderma sincicial, e ativam ou reprimem a expresso de
certos genes zigticos. Um par dessas protenas, Bicoid e Hunchback, regula a produ-
o de estruturas anteriores, enquanto outro par de protenas especificado maternal-
mente, Nanos e Caudal, regulam a formao da parte posterior do embrio. Em segui-
Genes
pair-rule
da, os genes zigticos regulados por esses fatores maternos so expressos em certos
domnios largos (cerca de trs segmentos de largura), parcialmente sobrepostos. Es-
ses genes so chamados genes gap (genes de fenda-porque suas mutaes causam
fendas no padro de segmentao) e esto entre os primeiros genes transcritos no
embrio. As diferentes concentraes das protenas dos genes gap causam a transcri-
o dos genes pair-rule que dividem o embrio em unidades peridicas. O padro de
transcrio desses genes pair-rule fornece um padro de listas de sete bandas verti-
Genes de Genes cais perpendiculares ao eixo ntero-posterior. As listas das protenas dos genes pair-
polaridade hometicos rule ativam a transcrio dos genes de polaridade segmentar (segment polarity genes).
segmentar Seus mRNAs e produtos proticos dividem o embrio em 14 unidades de largura
segmentar. Isso estabelece a periodicidade do embrio. Ao mesmo tempo, protenas
Figura 14.3
Modelo generalizado da formao do padro dos genes gap, pair-rule e de polaridade segmentar interagem para regular outra
de Drosophila. O padro estabelecido por classe de genes, os genes hometicos, cuja transcrio determina o destino desenvol-
genes de efeito materno que formam gradien- vimental de cada um desses segmentos.
tes e regies de protenas morfognicas. Es-
ses determinantes morfognicos criam um gra- Os genes de efeito materno
diente da protena Hunchback que ativa dife-
rencialmente os genes gap que definem terri- Evidncia Embriolgica da Regulao da Polaridade
trios amplos do embrio. Os genes gap per-
pelo Citoplasma do Ocito
mitem a expresso de genes pair-rule cada qual
dividindo o embrio em regies de largura
aproximada equivalente a dois segmentos pri- Experimentos embriolgicos clssicos demonstraram que existem pelo menos dois
mordiais. Os genes da polaridade segmentar centros de organizao no ovo do inseto. Um o centro de organizao anterior, o
dividem o embrio em unidades de tamanho outro o centro de organizao posterior. Klaus Sander (1975) postulou que essas duas
segmentar ao longo do eixo ntero-posterior. reas de organizao formam dois gradientes, um iniciado no terminal anterior, e o
A combinao desses genes define os dom- outro no terminal posterior. Cada um desses gradientes forma as suas estruturas
nios espaciais dos genes hometicos que de- prprias nos plos e interage com o outro gradiente para formar a estrutura central do
finem as identidades de cada segmento. Des- embrio. Sander baseou esse modelo em experimentos envolvendo a ligao do em-
sa maneira, periodicidade gerada a partir de
brio em vrios tempos durante o desenvolvimento, e transplantando regies do
no-periodicidade, e cada segmento recebe
uma nica identidade. citoplasma polar de uma regio do ovo para outra (Figura 14.4). Primeiro, quando ele
moveu o citoplasma do plo posterior para mais anteriormente, obteve um pequeno
embrio anterior ao plasma do plo posterior, enquanto segmentos extras, no organi-
zados em um embrio, formavam-se atrs dele (veja Figura 14.4D). Em segundo lugar,
ele quando ligava o ovo precocemente durante o desenvolvimento, separando a re-
gio anterior da posterior, metade se desenvolveu em um embrio anterior, enquanto a
outra metade se desenvolveu em um embrio posterior, porm, nenhuma das metades
continha os segmentos medianos do embrio. Quanto mais tardiamente no desenvol-
vimento era feita a ligadura, menos segmentos medianos estavam faltando. Assim,
pareceu que realmente havia gradientes emanando dos dois plos durante a clivagem
e que esses gradientes interagiam para produzir a informao posicional determinante
da identidade de cada segmento.
CAPTULO 14 Especificao axial em Drosophila 547
Anterior
Prosencfalo
Segmentos
da cabea
Segmentos
torcicos
Segmentos
abdominais
Posterior
Figura 14.4
Experimento de ligadura de Sander no embrio do inseto saltador de folhas Euscelis. (A) Em-
brio normal em viso ventral. A bola preta na base representa um agregado de bactrias simbiticas
que marca o plo posterior. (B) Aps ligadura do embrio precoce, forma-se um embrio parcial,
mas a cabea e os segmentos torcicos esto ausentes em ambos embries. (C) Quando ligados
mais tarde (no estgio de blastoderma) so formados mais dos segmentos faltantes, mas a maioria
dos embries ainda no tem os segmentos mais centrais. (D) Quando o citoplasma do plo
posterior transplantado para um embrio ligado no estgio de blastoderma, um embrio peque-
no, porm completo, forma-se na metade anterior, enquanto a metade posterior forma um embrio
parcial invertido. Esses resultados podem ser explicados em termos de gradientes nos plos do
embrio que ativam um conjunto de estruturas e reprimem a formao de outras. (Segundo
Sander, 1960, e French, 1988.)
Tabela 14.1 Genes de efeito materno que afetam a polaridade ntero-posterior do embrio de Drosophila
GRUPO ANTERIOR
bicoid (bcd) Cabea e trax deletados, substitudos Morfgeno anterior graduado contm
por telso invertido homeodomnio, reprime caudal
exuperantia (exu) Estruturas anteriores da cabea deletadas ncora mRNA bicoid
swallow (swa) Estruturas anteriores da cabea deletadas ncora mRNA bicoid
GRUPO POSTERIOR
nanos (nos) Sem abdome Morfgeno posterior; reprime huchback
tudor (tud) Sem abdome, sem clulas polares Localizao de Nanos
oskar (osk) Sem abdome, sem clulas polares Localizao de Nanos
vasa (vas) Sem abdome, sem clulas polares; Localizao de Nanos
oognese defeituosa
valois (val) Sem abdome, sem clulas polares; Estabilizao da localizao do
celularizao defeituosa complexo Nanos
pumilio (pum) Sem abdome Ajuda protena Nanos ligar mensagem
hunchback
caudal (cad) Sem abdome Ativa genes do terminal posterior
GRUPO TERMINAL
torso (tor) Sem terminais Possvel morfgeno para terminais
trunk (trk) Sem terminais Transmite sinal torsolike para torso
fs(1)Nasrat[fs(1)N] Sem terminais; ovos em colapso Transmite sinal torsolike para torso
fs(1)polehole[fs(1)ph] Sem terminais; ovos em colapso Transmite sinal torsolike para torso
Figura 14.6
Trs vias genticas independentes interagem para formar o eixo ntero-posterior do embrio de
Drosophila. Em cada caso, a assimetria inicial estabelecida durante a oognese, e o padro
organizado pelos produtos maternos logo aps a fertilizao. A realizao do padro ocorre
quando os produtos maternos localizados ativam ou reprimem genes zigticos especficos em
diferentes regies do embrio. (Segundo St. Johnston e Nsslein-Volhard, 1992.)
Meia- Concluso da Blastoderma Blastoderma Expresso Fentipo
oognese oognese sincicial celular gnica
Abdome
Telso
Deficiente em bicoid
Telso
Protena Clulas Clulas
Ocito
Caudal embrionrias polares
Clulas nutrizes ovarianas mRNA bicoid mRNA bicoid Protena Bicoid ativa Abdome
secretam mRNA bicoid localizado no anterior traduzido forma os genes gap anterior,
para o ocito, cujo ncleo por produtos de gradiente protico; orthodentical
interage com clulas exuparantia e reprime traduo de buttonhead,
foliculares posteriores swallow mRNA caudal e o gene hunchback
Anterior Bicoid: Telso
Protena
RNA Hunchback
hunchback
Materno
RNA nanos Deficiente em nanos
cron
Cabea
Trax
Protena
Nanos RNA giant Telso
Protena RNA RNA
Staufen oskar RNA nanos Knirps
Clulas nutrizes mRNA nanos mRNA nanos traduzido nanos ativa genes
ovarianas secretam secretado por clulas bloqueia traduo gap posteriores
forma posterior para nutrizes ovarianas da mensagem (tais como
ligar mRNA nanos localizadas no hunchback no knirps e giant)
plo posterior posterior do embrio
Posterior: Nanos
Protena Protena mRNA
Protena Torsolike Torso ativada tailess e
Protena
Torsolike huckebein
Torso
Deficiente em torso
Cabea
Trax
Protena
Torsolike Abdome
Clulas
Clulas foliculares
foliculares
ovarianas produzem mRNA tailess
protena Torsolike Torsolike ativa e huckebein Torso ativa
nas extremidades Torso nas genes gap
anterior e posterior extremidades terminais
Terminal: Torso
550 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
A) Ocito (C)
ANTERIOR
Concentrao
mRNA bicoid
Cortex,
Bicoid Hunchback Nanos Grauzone,
caudal
Staufen
mRNA caudal
Anterior Posterior Protena Bicoid
(B) Embrio de clivagem precoce
Protena Caudal
PROTENA
POSTERIOR
Hunchback
Concentrao
Protena
Nanos Pumilio p55
Anterior Embrio de Posterior
Protena
clivagem precoce
Hunchback
Figura 14.7
Um modelo da gerao do padro ntero-posterior por genes de efeito materno. (A) Os RNA
mensageiros bicoid, nanos, hunchback e caudal so colocados no ocito pelas clulas nutrizes
ovarianas. A mensagem bicoid seqestrada anteriormente. A mensagem nanos enviada para
o plo posterior. (B) Na traduo, o gradiente da protena Bicoid enviado para o plo posterior,
e o gradiente da protena Nanos se estende do posterior para o anterior. Nanos inibe traduo da
mensagem hunchback (no posterior), enquanto Bicoid previne a traduo da mensagem caudal
(no anterior). Isso resulta na oposio dos gradientes Caudal e Hunchback. O gradiente Hunchback
reforado secundariamente pela transcrio do gene hunchback dos ncleos anteriores (j que
Bicoid age como um fator de transcrio ativando a transcrio do gene hunchback). (C) Intera-
es paralelas pelas quais a regulao da traduo gnica estabelece o padro ntero-posterior do
embrio de Drosophila. No anterior do embrio, o mRNA bicoid ligado ao citoesqueleto
anterior e impedido de ser traduzido por ter uma pequena cauda poliadenilada. Na fecundao, a
cauda estendida de maneira dependente das protenas Cortex, Grauzone e Staufen, e o mRNA
bicoid traduzido. A protena Bicoid suprime a traduo do mRNA caudal. Na regio posterior
do embrio, o mRNA nanos suprimido no ocito pela protena Smaug (que se liga sua
3UTR). Na fertilizao, Oskar ajuda em sua traduo e a protena Nanos age como um supressor
da traduo de mRNA hunchback. (C segundo Macdonald e Smibert, 1996.)
posterior. A protena Bicoid inibe a traduo do RNA caudal, permitindo com isso que
a protena Caudal seja somente sintetizada na parte posterior da clula. Reciprocamen-
te, a protena Nanos, em conjunto com a protena Pumilio, liga-se ao RNA hunchback,
impedindo sua traduo na parte posterior do embrio. Bicoid tambm eleva o nvel da
protena Hunchback no anterior do embrio ligando-se aos intensificadores do gene
hunchback e estimulando sua transcrio (Figura 12.18). O resultado dessas intera-
es a criao de quatro gradientes proticos no embrio precoce:
Um gradiente anterior-para-posterior da protena Bicoid
Um gradiente anterior-para-posterior da protena Hunchback
Um gradiente posterior-para-anterior da protena Nanos
Um gradiente posterior-para-anterior da protena Caudal
O palco est agora preparado para a ativao dos genes zigticos naqueles ncleos que
tinham sido ocupados dividindo-se enquanto esse gradiente estava sendo estabelecido.
CAPTULO 14 Especificao axial em Drosophila 551
Informaes adicionais
& Especulaes
C OMO PODEM CLULAS ser in- sificador que liga o morfgeno fracamen- (A) (C)
formadas de sua posio no te. Somente quando houver uma grande
embrio e em seguida usar tal concentrao do morfgeno esse gene
informao para diferenciar-se no tipo estaria ativo. O(s) gene(s) responsveis
apropriado de clula? Uma explicao pro- pela formao do trax, por outro lado,
pe gradientes de substncias morfoge- poderiam apresentar um intensificador que
(B) (D)
nticas (Boveri, 1901; Child, 1941; Wol- ligasse o morfgeno mais eficazmente, o Gradiente Q
Concentrao Q
pert, 1971). Nesses modelos, uma subs- que o habilitaria a responder a nveis rela- Gradiente P
tncia solvel (morfgeno) posicionada tivamente baixos daquele morfgeno. As
de forma a se difundir de uma fonte (onde clulas da cabea expressariam ambos os
produzida) para um ralo (onde degra- genes, enquanto os genes do trax ex-
dada), estabelecendo um intervalo cont- pressariam somente aquele gene cujo in-
nuo de concentraes dentro dessa re- tensificador puder ligar baixas quantida- Centro da
Veias alares
pinta ocular
gio. Consideraes tericas (veja Crick, des do morfgeno. As clulas das por-
1970) sugerem que cada um desses gradi- es posteriores do corpo no veriam Figura 14.9
entes somente pode atuar ao longo de dis- quantidade alguma desse morfgeno, e Modelo de um gradiente de informao
posicional proposto para explicar pintas em asas
tncias curtas, menos que 100 clulas de nenhum desses genes seria ativado. Des- de borboleta. (A) Fotografia de uma pinta ocu-
dimetros. Em modelos de gradientes, a sa maneira, as clulas poderiam sentir a lar na asa de Morpho peleides. (B) Diagrama
concentrao de morfgenos muda com presena de um morfgeno e responder de um modelo de dois gradientes que pode ex-
a distncia, as concentraes mais altas diferentemente. O sensor no precisaria plicar a maneira pela qual a pinta foi gerada. A
esto prximas da fonte do morfgeno. ser um intensificador; poderia bem ser origem do morfgeno est no centro da pinta e
As clulas teriam que ter sensores que um receptor para um fator de crescimen- corresponde ao pice de um cone, cuja altura
reflete sua concentrao. A concentrao Q re-
responderiam diferentemente a concentra- to especfico na superfcie celular (veja presenta o nvel de morfgeno necessrio para
es diferentes do gradiente. Se o Captulo 17). alcanar o limiar de sensibilidade para forma-
morfgeno for um fator de transcrio, A maioria dos modelos de gradiente o de cor naquelas clulas alares. (C) Foto-
elementos intensificadores ou promoto- assume que todas as clulas que podem grafia da asa de Smyrna blomfildia, na qual as
res poderiam ligar o morfgeno com for- responder a um gradiente so equivalen- pintas oculares so elpticas. (D) Orientaes
diferentes do gradiente de sensibilidade Q po-
as diferentes (Figura 14.8). Por exemplo, tes. Todas essas clulas interpretam o si- dem resultar em tais pintas elpticas. (Segundo
se um morfgeno estiver sendo produzi- nal do morfgeno da mesma maneira e a Nijhout, 1981, cortesia de H. F. Nijhout.)
do no anterior do corpo, os genes res- concentrao de morfgeno que recebem
ponsveis pela organizao do desenvol- determina sua identidade. Porm, a inter-
amente linear. Considere por exemplo, uma
vimento da cabea poderiam ter um inten- pretao dos gradientes no necessari-
srie de notas de um exame que se esten-
de uniformemente de 100 a 60. Em um es-
Ambos Gene A inativo Ambos genes
genes Gene B ativo inativos
quema (uma leitura linear), uma nota
ativos Figura 14.8 entre 100 e 90 A, 89-80 B, 79-70 C e
Gene A Modelo hipottico para gradientes estabelecen- 69-60 D. Em uma outra classe (usando
do informao posicional. A concentrao do leitura curva), 100-95 A, 94-85 B, 84-
Gene B morfgeno diminui a partir da origem. Neste 70 C e 69-60 D. Nijhout (1981) usou um
diagrama, os receptores para o morfgeno so modelo de dois gradientes para explicar o
elementos intensificadores para dois genes que desenvolvimento dos padres marcas de
Concentrao do morfgeno
controlam o destino celular, porm, os recepto- olhos das asas de borboleta. Um gradi-
res tambm poderiam ser citoplasmticos ou ente consiste de uma difuso linear de
de membrana. Um dos receptores (neste caso, morfgeno. O segundo envolve a inter-
Limiar A
Limiar B
(A)
(B)
(C)
Concentrao da protena Bicoid
Figura 14.11
Gradiente da protena Bicoid no embrio precoce de Drosophila.
(intensidade da mancha)
Figura 14.13 (A) Estgio 1-6 (?) (B) Estgio 6-7 (C) Estgio 7-8
A importncia das interaes ocito-folculo
Clulas Ncleo do
na formao dos eixos dorsoventral e ntero-
nutrizes Ocito gurken ocito
posterior de Drosophila. (A) O ncleo do
ocito fica localizado no lado posterior do ovo.
Ele localiza um fator (a protena Gurken) que
recebido pelas clulas no terminal posterior da
cmara do ovo. (B,C) Isso faz com que as clu-
las foliculares se diferenciem em clulas foli-
culares posteriores e secretem algum fator que Clulas Ncleo do Clulas Clulas
motiva o ocito a realinhar seus microtbulos. foliculares ocito com foliculares foliculares
possvel que esse fator atue ativando a prote- polares no- mRNA gurken anteriores posteriores
na quinase A (PKA) na membrana celular do comprometidas
ocito (veja Captulo 22). (D) Essa reorganiza- Mensagem gurken
o permite o transporte da protena Oskar e mRNA bcd
(D) Estgio 9 sobre o ncleo
mRNA nanos para o plo posterior do ovo e Clulas foliculares dorsais
retm a mensagem bicoid no plo anterior do
Microtbulos
ovo. Ao mesmo tempo, o ncleo do ocito vi-
aja ao longo dos microtbulos repolarizados Clulas foliculares
em direo regio dorso-anterior do ovo. Aqui, posteriores
o mesmo sinal (a protena Gurken) inicia o eixo
dorsoventral sinalizando essas clulas para tor- mRNA osk
narem-se clulas foliculares dorsais. (Segundo
Gonzles-Reyes et al., 1995.) Clulas foliculares ventrais
Figura 14.14
Influncia da protena Bicoid na ativao do gene hunchback. Dife-
rentes regies do promotor hunchback foram fundidas com o gene
reprter CAT e injetadas em outros embries tipo selvagem, ou
embries de mes deficientes em bicoid. Quanto mais stios ligantes
de Bicoid havia na regio promotora, tanto mais eficaz era sua
expresso nos embries de tipo selvagem. Em embries sem prote-
na Bicoid, nenhuma transcrio resultou de qualquer dos genes
Gene movimentados pelo promotor hunchback. (Segundo Driever e
CAT Atividade CAT Nsslein-Volhard, 1989.)
556 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
regies anteriores da cabea. Em adio sua necessidade por nveis altos de Bicoid
para ativao, esses genes tambm requerem a presena da protena Hunchback para
serem transcritos (Simpson-Brose et al., 1994; Reinitz et al., 1995). As protenas Bicoid
e Hunchback atuam sinergicamente como intensificadores desses genes da cabea
promovendo suas transcries.
ZIGTICOS
Fator de transcrio
Os genes da segmentao
Uma Viso Panormica
Segmentos
Comportamentos
Parasegmento
Figura 14.17
Segmentos e parasegmentos. A e P representam os compartimentos anterior e posterior
dos segmentos. Os parasegmentos so mudados para um compartimento frente. Ma, Mx
e Lb representam trs dos segmentos da cabea (mandibular, maxilar e labial), os segmen-
tos T so torcicos, e os segmentos A so abdominais. Os parasegmentos esto numerados
de 1 at 14. Abaixo do mapa esto os limites da expresso gnica observada pela hibridi-
Embrio zao in situ do cDNA radioativo do gene pair-rule fushi tarazu (ftz). (Segundo Martinez-
Embrio mais Larva Arias e Lawrence, 1985.)
precoce tardio Larva (mutante
(normal) (normal) (normal) letal)
rea da rea da Existem trs classes de genes de segmentao, cada classe expressa aps outra
ao gnica ao gnica Bandas de
dentcula (Figura 14.3). A transio de um embrio caracterizado por gradientes de morfgenos
para um embrio tendo unidades distintas realizada por produtos dos genes gap. Os
genes gap so ativados ou reprimidos pelos genes de efeito materno, e dividem o
embrio em largas regies contendo vrios primrdios parasegmentares. O gene
krppel, por exemplo, expresso primeiramente nos parasegmentos 4-6 no centro do
embrio de Drosophila (Figuras 14.18A e 14.19; Prancha 14A); a ausncia de krppel
faz com que o embrio no apresente essas regies. Os produtos proticos dos genes
(A) Gap: Krppel gap interagem com as suas protenas vizinhas codificadas por genes gap e ativam a
transcrio de genes pair-rule. A transcrio desses genes subdivide os largos dom-
nios do gene gap em parasegmentos. Mutaes dos genes pair-rule (como em fushi
tarazu; Prancha 14C) usualmente deleta pores de cada segmento alternante. As
Figuras 14.18 e 14.20 comparam o morfologia do embrio de tipo selvagem com aquela
do mutante fushi tarazu. Finalmente, os genes de polaridade segmentar so respons-
veis pela manuteno de certas estruturas repetitivas dentro de cada segmento. Mu-
taes nesse grupo de genes faz com que uma poro de cada segmento seja deletada
e substituda por uma estrutura em imagem espelhar de outra poro do segmento. Por
exemplo, em mutantes engrailed, as pores posteriores de cada segmento so subs-
(B) pair-rule: fushi tarazu titudas por duplicatas da regio anterior do segmento subseqente (Figura 14.18C;
Prancha 14D). Assim, os genes de segmentao so fatores de transcrio que tomam
os gradientes do embrio de clivagem precoce e transformam o embrio em uma peri-
dica estrutura parasegmentar.
Figura 14.18
Trs tipos mutantes de padres de segmentao. O painel esquerda mostra o embrio em estgio
de clivagem, com a regio onde um determinado gene normalmente transcrito no embrio tipo
selvagem mostrado em cores. Nos trs painis direita, as reas coloridas foram deletadas
(C) Polaridade segmentar: engrailed medida que esses mutantes se desenvolvem. (Segundo Mange e Mange, 1990.)
CAPTULO 14 Especificao axial em Drosophila 561
(A)
(B)
Pr-ceflico
Maxilar
Figura 14.20
Defeitos constatados no embrio ftz-. (A) Micrografia eletrnica
de varredura de um embrio do tipo selvagem, visto lateralmente.
(B) O mesmo estgio em um embrio ftz-. As linhas brancas
conectam as pores homlogas de uma banda germinativa seg-
mentada. (C) Diagrama da segmentao embrionria do tipo selva-
Clipeolabro
gem. As regies sombreadas mostram os parasegmentos da banda
Labial
germinativa que esto faltando no embrio ftz-. (Segundo Kaufman
(C) Mandbula et al., 1990, fotografias cortesia de T. Kaufman.)
562 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
hunchback
krppel
Knirps
tailless
giant
Figura 14.21
Delees segmentares em mutantes de genes gap. A tabela sob as fotografias indica por
barras brancas regies segmentares faltantes. Em mutantes hunchback, a regio estendida
(sobreamento mais claro) quando tanto a me como o zigoto no tm atividade do gene
hunchback. Os reais domnios da expresso hunchback no foram completamente expres-
sos. (Segundo Gaul e Jckle, 1990; expresso huckebein segundo Weigel et al., 1990;
fotografias cortesia de E. Wieschaus.)
seja responsvel pela ativao dos genes gap abdominais knirps e giant. O gene
giant tem dois modos de ativao um para sua banda de expresso anterior, e um
para a banda de expresso posterior (veja Figura 14.15; Rivera-Pomar, 1995; Schultz
e Tautz, 1995).
Aps a colocao inicial dessas protenas pelos genes de efeito materno e
Hunchback, elas se estabilizam e so mantidas por interaes entre os diferentes
genes gap*. Por exemplo, a expresso do gene Krppel regulada negativamente
no seu limiar anterior pela protena Hunchback, e no seu limiar posterior pelas
protenas Knirps e Tailless (Jckle et al., 1986; Harding e Levine, 1988; Hoch et al.,
1992). Se a atividade de Hunchback est faltando, o domnio da expresso de
Krppel estende-se anteriormente. Se a atividade Knirps estiver faltando, a ex-
presso gnica Krppel estende-se mais posteriormente. Os limites entre as regi-
es de transcrio dos genes gap so provavelmente criados por represso m-
tua. Tal como as protenas Giant e Hunchback podem controlar o limite anterior da
transcrio de Krppel, assim tambm Krppel pode determinar os limites poste-
riores da transcrio de giant e hunchback. Se um embrio no tiver o gene Krppel,
a transcrio de hunchback continua para dentro da rea usualmente reservada
para Krppel (Jckel et al., 1986; Kraut e Levine, 1991). Essas inibies formado-
ras de limites so consideradas ser mediadas diretamente pelos produtos dos
genes gap, porque todos os principais genes gap (hb, gt, Kr e kni) codificam
protenas ligantes de DNA que podem ativar ou reprimir a transcrio (Kniple et
al., 1985; Gaul e Jckle, 1990; Capovilla et al., 1992).
Alm do mais, essas interaes so altamente especficas e o produto de um
gene gap pode se ligar aos promotores de outros genes gap. A determinao da
pegada (footprinting) de DNase I mostra que a protena codificada pelo gene
Krppel tipo selvagem liga-se regio promotora do gene hunchback (que ele
inibe) e regio promotora do gene knirps (que ele estimula). A regio promotora de
knirps tambm reconhecida pelo produto protico do gene tailless, que inibe a
transcrio de knirps. A protena Hunchback (alm de reconhecer o promotor de
Krppel) tambm reconhece seu prprio promotor, sugerindo que hunchback est
envolvido na regulao de sua prpria expresso (Pankratz et al., 1990; Stanojevc et
al., 1989; Treisman e Desplan, 1989).
Os Genes pair-rule
*As interaes entre genes e produtos de genes so facilitadas pelo fato de que essas reaes
ocorrem dentro de um sinccio. As membranas celulares ainda no se formaram.
564 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
(B)
(C)
Repressores
Giant Krppel
Figura 14.24
Transcrio do gene ftz. (A-D) No comeo do ciclo 14, h baixa transcrio em cada ncleo da
regio segmentada do embrio de Drosophila. Dentro dos prximos 30 minutos, o padro da
expresso se altera enquanto a transcrio de ftz intensificada em certas regies (que formam as
faixas) e reprimida nas regies entre as faixas. (E) Dupla marcao dos transcritos even-skipped
(bandas mais escuras) e fushi tarazu (bandas mais claras), mostrando que ftz expresso entre a
bandas. (A-D segundo Karr e Kornberg, 1989; E cortesia de M. Levine.)
566 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Figura 14.25
Modelo para a transcrio dos genes de po-
laridade segmentar engrailed (en) e wingless
(wg). (A) A expresso de wg e en iniciada
por genes pair-rule. O gene engrailed ex-
presso quando as clulas contm altas con-
centraes das protenas Even-skipped ou
Fushi tarazu. O gene wingless transcrito
Segmento Segmento Segmento Segmento quando nem o gene eve nem ftz esto ativos,
Parasegmento Parasegmento Parasegmento Parasegmento mas um terceiro gene (provavelmente odd-
paired) expresso. (B) A expresso cont-
(A) Iniciao por produtos de genes pair-rule nua de wg e en mantida pela interao entre
clulas expressando engrailed e wingless. A
produtos dos genes
Concentrao de
Difuso da protena
Receptores Patched Hedgehog
Protena Wingless
Frizzled
Transcrio
de wingless
Armadillo
Transcrio
Cubitus interruptus Receptores de engrailed,
Patched hedgehog
Hedgehog
Protena smoothened
568 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Gradiente Gradiente
Hedgehog Wingless
Figura 14.26
Especificao celular pelo centro sinalizador Wingless/Hedgehog. (A) Fotografia em campo
iluminado de embrio tipo selvagem de Drosophila, mostrando a posio do terceiro segmento
abdominal. (B) Aproximao da rea dorsal do segmento A3, mostrando as diferentes estrutu-
ras cuticulares produzidas pelas 1a, 2 a, 3a e 4a filas de clulas. (C) Modelo para o papel de
Wingless e Hedgehog. Cada sinal responsvel por aproximadamente metade do padro. Cada
sinal, ou age de uma maneira gradual (aqui mostrada como gradientes diminuindo a partir de
suas respectivas fontes) para especificar os destinos de clulas distantes dessas fontes, ou cada
sinal pode agir localmente sobre clulas vizinhas para iniciar uma cascata de indues (aqui
mostrada como setas em seqncia). (Segundo Heemskerk e DiNardo, 1994; fotografias
cortesia dos autores).
usa um ligante e um receptor diferentes (Figura 14.26). O padro dos destinos celula-
res tambm muda o foco da padronizao de parasegmento em segmento. Tem-se
agora marcadores externos, as clulas expressando engrailed tornando-se as clulas
mais posteriores de cada segmento.
(A)
Figura 14.27
Os domnios funcionais dos genes dos complexos bithorax e Antenna-
Complexo Antennapedia Complexo Bithorax pedia em Drosophila. (A) O complexo bithorax foi dividido em trs
grupos complementares letais identificados por E. B. Lewis. Os genes
(B) do complexo Antennapedia so labial (lab), Deformed (Dfd), Sex comb
reduced (Scr) e Antennapedia (Antp). (B) Sumrio do controle dos
genes AbdA e AbdB em Drosophila. Os limites so controlados pelos
genes gap. As sries de mutaes infra-abdominal controlam os ele-
mentos reguladores desses genes. (A segundo Dessain et al., 1992; B
segundo Casares e Snchez-Herrero, 1995.)
570 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Figura 14.29
A mosca das frutas de quatro asas foi construda juntando-se
trs mutaes em reguladores cis do gene Ultrabithorax.
Essas mutaes transformam eficazmente o terceiro segmen-
to torcico em outro segundo segmento torcico (i.e., halteres
em asas). (Cortesia de E. B. Lewis.)
CAPTULO 14 Especificao axial em Drosophila 571
Segmentos:
gene en:
Parasegmentos:
gene ftz:
Complexo Antennapedia
labial Epiderme
(lab)
Sistema
nervoso
central (CNS)
Deformed
(Dfd) Epi
CNS
Antennapedia
(Antp)
Epi
CNS
Complexo bithorax
Ultrabithorax
(Ubx)
Epi
CNS
abdominal A
(abdA)
Epi
CNS
Abdominal B
(AbdB)
Epi
CNS
caudal
(cad)
Epi
Figura 14.30
Regies de expresso gnica hometica (tanto
mRNA como protena) no blastoderma e (al-
Esses principais genes seletores hometicos foram clonados e sua expresso ana- gumas horas mais tarde) no sistema nervoso
lisada por hibridizao in situ (Harding et al., 1985; Akam, 1987). Os resultados desses central do embrio de Drosophila. As reas
experimentos esto sumariados na Figura 14.30. Transcritos de cada loco so detecta- escurecidas so segmentos ou parasegmentos
dos em regies especficas do embrio sendo especialmente proeminentes no sistema com mais produto. As barras adjacentes ilus-
nervoso central. Em mutantes hometicos, essa expresso normal fica alterada. Por trao representam a expresso gnica dentro
exemplo, em alelos dominantes de Antennapedia, o gene Antennapedia foi invertido dos limites parasegmentares. (Segundo
no cromossomo, fazendo com que perdesse seu prprio promotor ficando sob o con- Kaufman et al., 1990.)
trole de um promotor diferente, ativo na cabea. Isso causa a expresso ectpica de
Antp na cabea. De maneira semelhante, se o gene Ultrabithorax for colocado em um
novo promotor e expresso na regio da cabea, as antenas comeam a produzir estru-
turas especficas de patas e protenas (Mann e Hogness, 1990).
572 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
A iniciao dos domnios dos genes hometicos influenciada pelos genes gap e
genes pair-rule. Por exemplo, a expresso dos genes abdA e AbdB reprimida
pelas protenas Gap Hunchback e Krppel. Essa inibio impede esses genes que
(A) especificam para o abdome, serem ativos na cabea e no trax (Casares e Snchez-
Herrero, 1995). Reciprocamente, o gene Ultrabithorax ativado por certos nveis
da protena Hunchback, fazendo com que seja originalmente transcrito em uma
larga banda no meio do embrio, e a protena Gap Krppel ative a transcrio de
Antennapedia (Figura 14.31; Harding e Levine, 1988; Struhl et al., 1992). Os limites
de expresso dos genes hometicos so logo confinados a parasegmentos defini-
dos pela protenas Fushi tarazu e Even-skipped (Ingham e Martinez-Arias, 1986;
(B) Mller e Bienz, 1992).
Disco antenal
Figura 14.32
A armadilha de intensificador do transpson transporta um gene -galactosidase, ativado
quando colocado perto de um intensificador. Em uma linhagem, o transpson ficou incorporado
perto de um gene regulado diferencialmente na cabea e no trax. (A) Discos imaginais da pata de
larvas do tipo selvagem (no terceiro instar logo antes da transformao em crislida) no expres-
sam um gene particular salm. (B) Os discos antenais da mesma larva expressam salm. (C) Discos
antenais de um mutante de Antennapedia mostram que esse gene est reprimido nesse mutante.
(Segundo Wagner-Bernholz et al., 1991, cortesia de W. J. Gehring.)
mas expresso no disco imaginal da antena (Figura 14.32). Assim, salm parece ser
um gene que reprimido pela protena Antennapedia. A represso do gene salm
pode ser crtica para a formao de tecido das patas, em lugar de tecido antenal,
dos discos imaginais torcicos.
Outro mtodo empregado para achar tais genes tem sido o seqenciamento. O
seqenciamento de genes mostrou que alguns genes tm elementos intensificadores
que ligam os genes hometicos, com isso, fazendo com que eles sejam regulados por
padres de expresso dos genes hometicos. Um gene alvo, decapentaplegic, tem
um stio de ligao em seu intensificador para a protena Ultrabithorax. Isso permite
protena Decapentaplegic ser expressa no mesoderma visceral do parasegmento 7,
onde necessria para o desenvolvimento do intestino mdio (Immergluck et al., 1990;
Panganiban et al., 1990).
Outro alvo das protenas hometicas, o gene Distal-less (ele prprio um gene
contendo um homeobox) necessrio para o desenvolvimento dos membros e
ativo somente no trax. A expresso Distal-less reprimida no abdome, provavel-
mente por uma combinao de protenas Ubx e AbdA que podem-se ligar a seu
intensificador e bloquear a transcrio (Vachon et al., 1992; Castelli-Gair e Akam,
1995). Isso apresenta um paradoxo, j que ambos, o parasegmento 5 (inteiramente
torcico e produtor de patas) e o parasegmento 6 (que inclui a maior parte do
primeiro segmento abdominal livre de patas) expressam Ultrabithorax. Como po-
dem dois segmentos to diferentes ser especificados pelo mesmo gene? Castelli-
Gair e Akam (1995) mostraram que a mera presena da protena Ubx em um grupo
de clulas no suficiente para a especificao. Em vez disso, o momento e o local
de sua expresso dentro do parasegmento podem ser crticos. Antes da expresso
Ubx, os parasegmentos 4-6 tm potenciais semelhantes. No estgio 10, a expres-
so de Ubx nas partes anteriores dos parasegmentos 5 e 6 impede-os de formarem
estruturas (como a espiral anterior), caractersticas do parasegmento 4. Alm dis-
so, no compartimento posterior do parasegmento 6 (mas no do parasegmento 5),
a protena Ultrabithorax bloqueia a formao do primrdio dos membros reprimin-
do os genes Distal-less. No estgio 11, quando Ubx tiver alcanado todo
parasegmento 6, o gene Distal-less tornou-se auto-regulatrio e no pode ser
reprimido por Ultrabithorax (Figura 14.33).
574 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Protena AbdA
(C)
Segmentos
Compartimentos
Parasegmentos
Mutaes
Ultrabithorax
Mutaes
reguladoras
Seqncias reguladoras
Genes estruturais
Unidades de transcrio
Figura 14.34
Mutaes reguladores no complexo bithorax. A mosca adulta esquematizada dividida em
segmentos e compartimentos anterior e posterior. As regies reguladoras do gene Ultrabithorax
esto mostradas abaixo da mosca. As reas sombreadas representam a regio especificada pelo
domnio regulador particular. A linha contnua abaixo desse representa a regio de 300.00 pares
de bases do complexo. As trs unidades de transcrio que codificam as trs protenas hometi-
cas do complexo bithorax esto mostradas em relao aos locais reguladores. Cada um desses
genes transcrito da direita para a esquerda. Os xons so mostrados como caixas escuras, os
ntrons por linhas interrompidas. Acima da linha esto as seqncias reguladoras definidas por
mutaes genticas, e a cor das linhas corresponde ao gene que a seqncia regula positivamente.
(Segundo Peifer et al., 1897; Beachy, 1990; Casares e Snchez-Herrero, 1995.)
Informaes adicionais
& Especulaes
Hlice III
CAPTULO 14 Especificao axial em Drosophila 577
Co-fatores para os Genes Hom-C Extradenticle, ela ir transformar esse fator de transcrio dedo de zinco ne-
Os genes hoemticos do complexo ho- segmento em A3. Alm disso, as prote- cessrio para o funcionamento do pro-
metico da Drosophila especificam o des- nas Exd e Ubx so necessrias para a re- duto Scr distinguindo entre os segmen-
tino segmentar, mas podem requerer al- gulao de decapentaplegic, e a estru- tos labial e primeiro torcico. Ele crti-
guma ajuda para isso. Os stios ligantes tura do promotor decapentaplegic su- co para a especificao da identidade
de DNA reconhecveis pelos homeodo- gere que a protena Extradenticle pode do protorcico anterior (parasegmento
mnios das protenas Hom-C so muito dimerizar com a protena Ubx no intensi- 3), e pode ser o gene que especifica a
semelhantes, e h alguma superposio ficador desse gene de alvo (Raskolb e condio basal do complexo home-
em suas especificidades de ligao. Em Wieschaus, 1994; van Dyke e Murre, tico. Se o complexo bithorax e o gene
1990, Peifer e Wieschaus descobriram 1994). A protena Extradenticle inclui um Antennapedia forem removidos, todos
que o produto do gene Extradenticle homeodomnio, e a protena humana os segmentos se tornam protrax ante-
(Exd) interage com vrias protenas PBX1 se parece com a protena Extraden- rior. A funo do gene teashirt parece
Hom-C e pode ajudar na especificao ticle e pode ter um papel semelhante ser crtica para o trabalho com a prote-
de identidades segmentais. Por exemplo, como um co-fator para genes hometi- na Scr, distinguindo o trax da cabea e
a protena Ubx responsvel pela espe- cos humanos. trabalhando atravs do tronco para im-
cificao da identidade do primeiro seg- O produto do gene teashirt tambm pedir a formao de estruturas da cabe-
mento abdominal (A1); sem a protena pode ser um co-fator importante. Esse a (Roder et al., 1992). [droso2.html]
A protena Dorsal:
Morfgeno para a polaridade dorsoventral
A polaridade dorsoventral estabelecida pelo gradiente de um outro fator protico de
transcrio, Dorsal. Em contraste com Bicoid, cujo gradiente estabelecido dentro de
um sinccio, o gradiente Dorsal forma-se sobre um campo de clulas estabelecido
como uma conseqncia de eventos celulares sinalizadores.
A especificao do eixo dorsoventral pode ser dividida em vrias etapas. A etapa
crtica a translocao da protena Dorsal do citoplasma para os ncleos das clulas
ventrais durante o ciclo da dcima quarta diviso. Anderson e Nsslein-Volhard (1984)
isolaram 11 genes de efeito materno, cuja ausncia de cada um est associada com a
falta de estruturas ventrais (Figura 14.36). Alm disso, a ausncia de outro gene de
efeito materno, cactus, causa a ventralizao de todas as clulas. As protenas codifi-
cadas por esses genes maternos so crticas para certificar que a protena Dorsal entre
somente em ncleos da superfcie ventral do embrio. As etapas posteriores
translocao da protena Dorsal afetam aquilo que essa protena faz para especificar
as diferentes regies do embrio. Aqui, diferentes concentraes da protena Dorsal
parecem especificar os diferentes destinos dessas clulas.
*De uma maneira que no poderia ter sido predita por Just, revela-se que alguns dos genes (como
o decapentaplegic) envolvidos na regulao do nmero de cerdas ou forma das asas tambm tm
funes anteriores na regulao da polaridade dorsoventral.
578 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Figura 14.36
Salvamento da larva por injeo de mRNA do Provendo o sinal assimtrico para a
tipo selvagem em ovos destinados a ter o translocao da protena Dorsal
fentipo snake. (A) Larva deformada consis-
tindo inteiramente de clulas dorsais. Larvas
como essas se desenvolvem de ovos de uma
Sinal do Ncleo do Ocito para as Clulas Foliculares
fmea homozigota para o alelo snake. (B) Apa-
rncia tipo selvagem de larvas desenvolvendo- Se a protena Dorsal for encontrada no todo do embrio, mas se for transladada so-
se de ovos snake que haviam recebido injees mente para os ncleos das clulas ventrais, algo mais deve estar provendo os sinais
de mRNA de ovos tipo selvagem. (de Anderson assimtricos (Figura 14.38). Parece que tal sinal mediado atravs de uma complexa
e Nsslein-Volhard, 1984. Cortesia de C. interao entre o ocito e suas clulas foliculares adjacentes. O epitlio folicular ao
Nsslein-Volhard.) redor do ocito em desenvolvimento inicialmente simtrico, mas essa simetria
Figura 14.37
Incluso da protena Dorsal em ncleos ventrais, mas no laterais ou dorsais. (A) Mapa de
destinos atravs do centro do embrio de Drosophila. A parte mais ventral vira o mesoderma, a
parte superior seguinte vira o ectoderma neurognico (ventral). O ectoderma lateral e epidrmico
pode ser distinguido na cutcula, e a regio mais dorsal torna-se a amnioserosa, a camada extra-
embrionria que envolve o embrio. (B-D) Seo transversal de embries corados com anticorpo
para mostrar a presena da protena Dorsal. Em todos os casos, a mancha escura representa a
protena Dorsal. (B) Um embrio tipo selvagem, mostrando a protena Dorsal nos ncleos mais
ventrais. (C) Um mutante dorsalizado, mostrando ausncia de protena Dorsal em todos os
ncleos. (D) Um mutante ventralizado; a protena Dorsal penetrou no ncleo de cada clula. (A
de Rushlow et al., 1989; B-D de Roth et al., 1989, cortesia dos autores.)
Amnioserosa
Ectoderma dorsal
Ectoderma lateral
Ectoderma
neurognico
Mesoderma
Ventral
Viso lateral Seo transversal
CAPTULO 14 Especificao axial em Drosophila 579
Clulas
Inibio da
foliculares
sntese das Membrana
protenas celular
Windbeutel,
Ncleo Nudel, Pipe Sptzle
Sptzle
mRNA ativado
gurken
Nenhum
sinal para o Protease
Easter Easter
lado ventral
ativada
Sntese de Windbeutel,
Nudel, Pipe Snake
Gastrulation
defective
Envoltrio
las ventrais Windbeutel Nudel Pipe vitelnico
das clu
Destino
Ventral
1. Ncleo do ocito viaja para o lado dorsal 5. Clulas foliculares ventrais sintetizam pro-
anterior do ocito. Ele coleta mRNA tenas Windbeutel, Nudel e Pipe
cornichon e gurken
Figura 14.38 6. Protenas foliculares ventrais absorvem
Representao esquemtica de um modelo para 2. Mensagens cornichon e gurken traduzidas. protenas Snake e Gastrulation-defective
a gerao da polaridade dorsoventral em Dro- A protena Gurken recebida pelas prote- para realizar ciso do zimgeno Easter, pro-
sophila. (A) O ocito desenvolve um folculo nas Torpedo durante a meia oognese duzindo protease Easter ativa, somente no
ovariano consistindo de 15 clulas nutrizes (que lado ventral
3 a. O sinal Torpedo faz com que as clulas fo-
suprem protenas maternas e mensagens ao ovo
liculares se diferenciem para uma morfolo- 7. Easter cinde Sptzle, que se liga protena
em desenvolvimento) e clulas foliculares. (B) gia dorsal receptora Toll
O ncleo do ocito reside no local que ir tor-
nar-se o lado dorsal. Os genes cornichon e 3 b. Sntese de protenas Windbeutel, Nudel e 8. Sinal Toll causa fosforilao e degradao
gurken do ocito sintetizam um sinal que re- Pipe inibida nas clulas foliculares dorsais da protena Cactus, liberando-a de Dorsal.
cebido pelo receptor produzido pelo gene tor-
pedo das clulas foliculares. Dada a curta 4. Protenas Cornichon e Gurken no se di- 9. A protena Dorsal entra no ncleo e
difusibilidade do sinal, somente as clulas foli- fundem para o lado ventral ventraliza a clula
culares mais prximas do ncleo do ocito (i.e.,
as clulas foliculares dorsais) recebem esse si- uma enzima ativa que ir cindir a forma
nal. O sinal do receptor Torpedo faz com que zimognica da protena Easter numa protease
as clulas foliculares se diferenciarem para uma Easter ativa. Essa ltima, cinde a protena
morfologia dorsal caracterstica e (de alguma Sptzle para uma forma que pode se ligar ao
maneira) inibir a sntese das protenas receptor Toll (que encontrado em toda a mem-
Windbeutel, Nudel e Pipe. Portanto, essas pro- brana celular). Assim, somente o lado ventral
tenas somente so produzidas pelas clulas recebe o sinal Toll. Esse sinal separa a protena
foliculares ventrais. (C) As trs protenas foli- Cactus da protena Dorsal, permitindo essa l-
culares ventrais so consideradas ser incorpo- tima ser translocada para o ncleo. A protena
radas na membrana vitelnica, porm, somente Dorsal entra no ncleo e ventraliza as clulas.
no lado ventral. Elas cindem os produtos dos (Segundo Schpbach et al., 1991; Roth, 1994;
genes snake e gastrulation defective para criar Hong e Hashimoto, 1995.)
580 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Clulas germinativas
Embrio de me deficientes em torpedo em
tipo selvagem uma fmea tipo selvagem
Eixo
dorsoventral
Ocito deficiente
Clulas polares
Troca entre em torpedo no
(precursoras das
clulas polares folculo tipo selvagem
clulas germinativas)
Sptzle IL-1
Citoplasma Citoplasma do
quinase pelle
do ocito Quinase linfcito
Cactus
Dorsal
Regulao de genes
ventralmente especficos Regulao de genes das imunoglobulinas
Figura 14.40
Modelo de uma trajetria conservada para re-
gular o transporte nuclear de fatores de trans-
crio em Drosophila e mamferos. (A) Em
Drosophila, a protena Toll liga o sinal da pro- transcrio NF-B para o ncleo de linfcitos de mamferos. De fato, existe uma subs-
tena Sptzle e ativa a regio da quinase da tancial homologia entre NF-B e Dorsal, entre IB e Cactus, entre a protena Toll e o
protena Pelle. A protena Pelle fosforila receptor da interleucina 1 (IL-1), entre a protena Pelle e uma protena quinase associ-
Cactus e Dorsal, fazendo com que as duas ada a IL-1, e entre as seqncias de DNA reconhecidas por Dorsal e NF-B (Gonzles-
protenas se separem uma da outra. A prote- Crespo e Levine, 1944; Cao et al., 1996). Assim, a via bioqumica usada para especificar
na Dorsal pode ento entrar no ncleo e regu- a polaridade dorsoventral em Drosophila parece ser a mesma que aquela usada para
lar a transcrio de genes ventralmente espe- diferenciar linfcitos em mamferos (Figura 14.40).*
cficos. (B) Em linfcito de mamferos, o re-
ceptor IL-1 pode causar a fosforilao de IB
LEITURA DO GRADIENTE DA PROTENA DORSAL. O que faz a protena Dorsal
(atravs de uma protena quinase ainda no
identificada). Isso permite protena NF-B uma vez localizada nos ncleos das clulas ventrais? Olhando o mapa de destino do
penetrar no ncleo e efetuar a transcrio de corte transversal pelo meio do embrio de Drosophila no dcimo quarto ciclo da
vrios genes especficos do linfcito. (Segun- diviso (veja Figura 14.37), torna-se bvio que as 16 clulas com a mais alta concentra-
do Shelton e Wasserman, 1993.) o da protena Dorsal so as que geram o mesoderma. A prxima clula acima dessa
regio gera as clulas especializadas da glia e as clulas neurais da linha mediana. As
prximas duas clulas so aquelas que do origem epiderme ventral e cordo nervoso
*Lemaitre e colegas (1996) mostraram que Toll e seu ligante (Sptzle) tambm esto envolvi-
dos na resposta imune da Drosophila s infeces fngicas.
CAPTULO 14 Especificao axial em Drosophila 583
Figura 14.41
Gastrulao em Drosophila. Nesta seo trans-
versal, as clulas mesodrmicas na poro ven-
tral do embrio se dobram para o interior, for-
mando um tubo que em seguida se achata e
forma os rgos mesodrmicos. Os ncleos
esto corados por anticorpos contra a protena
Twist. (de Leptin, 1991b, cortesia de M. Leptin.)
ventral, enquanto as nove clulas acima dessas produzem a epiderme dorsal. O grupo
mais dorsal de seis clulas no se divide; ele gera a cobertura amnioserosa do embrio
(Ferguson e Anderson, 1991).
Esse mapa de destinos gerado pelo gradiente da protena Dorsal nos ncleos.
Grandes quantidades especificam que as clulas sejam mesoderma, enquanto quanti- Figura 14.42
as menores especificam-nas para ser tecido glial ou ectodrmico (Jiang e Levine, Subdiviso do eixo dorsoventral pelo gradi-
1993). O primeiro evento morfogentico da gastrulao de Drosophila a invaginao ente de protena Dorsal nos ncleos. A pro-
das 16 clulas mais ventrais do embrio (Figura 14.41). Todos os derivados mesodr- tena Dorsal ativa os genes zigticos
micos dos msculos, corpos gordurosos e gnadas originam-se dessas clulas (Foe, rhomboid, twist e snail de acordo com sua
1989). A protena Dorsal especifica essas clulas para tornarem-se mesoderma de duas concentrao nuclear. A protena Snail, for-
maneiras. Primeiro, a protena pode ativar genes especficos que criam o fentipo mada mais ventralmente, inibe a transcrio
da protena Rhomboid. A protena Dorsal
mesodrmico. Trs dos genes alvo de Dorsal so twist, snail e rhomboid (Figura
inibe a expresso de tolloid, decapentaple-
14.42). Esses genes so transcritos somente nos ncleos da clulas ventrais que gic e zerknllt na regio ventral. Diferentes
receberam altas concentraes da protena Dorsal, pois esses intensificadores no se concentraes da protena Zerknllt determi-
nam os destinos das clulas dorsais. (Segun-
do Steward e Govind, 1993.)
dorsal dorsal
Ectoderma dorsal
Ativao Inibio
tolloid
decapentaplegic rhomboid twist snail tolloid dpp zerknllt
Inibio
Ectoderma lateral
rhomboid
Ectoderma neurognico
twist Mesectoderma
snail
Ventral
Mesoderma
584 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
ligam protena Dorsal com alta afinidade (Thisse et al., 1988; Jiang et al., 1991; Pan et
al., 1991). A protena Twist ativa genes mesodrmicos, enquanto a protena Snail
reprime genes no-mesodrmicos em particular que poderiam, de outro modo, ser
ativos. O gene rhomboid interessante porque ativado por Dorsal mas reprimido
por Snail. Assim, a expresso de rhomboid no encontrada nas clulas mais ventrais
(i.e., as precursoras do mesoderma), mas expressa nas clulas adjacentes ao
mesoderma que formam o neuroectoderma presuntivo (veja Figura 14.42; Jiang e Levine,
1993). Tanto snail como twist so necessrios para produzir o fentipo mesodrmico
e gastrulao apropriada (Leptin et al., 1991a). A borda aguda entre as clulas
mesodrmicas e as clulas elas adjacentes que geram as clulas gliais produzida
pela presena de produtos dos genes snail e twist nas clulas mais ventrais (Kosman
et al., 1990). Em mutantes de snail, as clulas mais ventrais ainda tm o gene twist
ativado, e parecem-se com as clulas mais laterais (Nambu et al., 1990).
A protena dorsal tambm determina o mesoderma diretamente. Alm de ativar
genes estimuladores do mesoderma (twist e snail), ela inibe diretamente os genes
dorsalizantes zerknllt (zen) e decapentaplegic (dpp). Assim, nas mesmas clulas, a
protena Dorsal pode agir como um ativador de certos genes e um repressor de outros.
A opo se funciona como um ativador ou um repressor, depende da estrutura dos
Figura 14.43
Ativao e represso pela protena Dorsal. Um intensificador em um gene ativado pela protena
Dorsal (como twist ou snail) tem mltiplos stios de ligao de baixa afinidade para a protena
Dorsal e nenhum stio ligante de DSP1. Intensificadores naqueles genes que so reprimidos por
Dorsal contm tanto stios ligantes de Dorsal, como um stio ligante de DSP1. (A) Na ausncia
da protena Dorsal (i.e., naquelas futuras clulas ectodrmicas nas quais a protena Dorsal no
penetrou no ncleo) os genes twist e snail no so ativados e genes como zerknllt no so
reprimidos. (B) Reciprocamente, na presena da protena Dorsal no ncleo, os genes twist e snail
tornam-se ativos e o gene zerknllt desligado. (Segundo Ip, 1995.)
Embrio de Drosophila
Dorsal Inibio
Neuroectoderma (B)
Mesoderma Ativao
twist,
Gradiente de Snail
Dorsal nuclear Stios de ligao de Dorsal
Ventral
CAPTULO 14 Especificao axial em Drosophila 585
intensificadores dos genes. O intensificador zen contm um stio de ligao para uma
protena chamada DSP1 (protena de comutao dorsal 1). Essa protena encontra-
da em todo o embrio. Quando a protena Dorsal est ausente, no parece ter efeito
algum sobre a transcrio. Porm, quando Dorsal tambm est presente no stio do
intensificador, ela converte a funo ativadora de Dorsal em funo repressora (Figura
14.43; Lehming et al., 1994; Ip, 1995). Mutantes de dorsal expressam genes dpp e zen
atravs do embrio (Rushlow et al., 1987), e embries deficientes em dpp e zen deixam
de formar estruturas dorsais (Irish e Gelbart, 1987). Assim, em embries tipo selvagem,
os precursores mesodrmicos expressam twist e snail (mas no zen e dpp); precurso-
res da epiderme dorsal e da amnioserosa expressam zen e dpp, mas no twist ou snail;
precursores da glia (mesectoderma) expressam somente snail; enquanto os precurso-
res neuroectodrmicos laterais no expressam qualquer um desses quatro genes
(Kosman et al., 1991; Ray et al., 1991). Assim, em conseqncia das respostas ao
gradiente da protena Dorsal, o eixo fica subdividido em mesoderma, mesectoderma,
ectoderma neurognico, epiderme e amnioserosa. [droso3.html]
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Especificao do destino celular por
interaes clula-clula progressivas 15
O estudo da funo dos genes na ontogenia
um campo da fisiologia do desenvolvimen-
to. Isso no quer dizer que o geneticista ser
excludo na resoluo desse problema - ele
se tornar um embriologista gentico expe-
N O LTIMO CAPTULO, observamos que a determinao celular e a especi-
ficao do eixo podem ser causadas por interaes de substncias plasmticas
especficas dentro de uma clula sincicial. Somente mais tarde ocorrem inte-
raes clula-clula que fixam o destino celular. Mas, a maioria dos tipos de organis-
mos no possui o estgio sincicial na embriognese precoce. Em muitas espcies,
rimental. Aps uma longa jornada onde al- incluindo a maioria dos vertebrados, as clulas so especificadas pelas suas intera-
gumas vezes ele se distanciou de seus cole- es com clulas vizinhas.
gas biologistas, ele volta para casa com al-
guns novos conceitos e instrumentos.
CURT STERN (1936)
Desenvolvimento regulativo
Nos mantemos eretos e andamos com partes Em deuterostomatas, tais como ourio-do-mar e vertebrados, o destino da clula de-
de nosso corpo que poderiam ser usadas para pende de sua posio no embrio e no da parte do citoplasma que ela adquiriu.
raciocinar se elas tivessem se desenvolvido Sidney Brenner (Citado em Wilkins, 1993) observou que o desenvolvimento animal
em outras partes do embrio. pode se dar de duas maneiras. Alguns organismos so especificados predominante-
HANS SPEMANN (1943) mente no estilo Europeu; ou seja, cada clula determinada por quem eram seus
ancestrais. A linhagem o fator importante. Inversamente, os blastmeros da maioria
dos vertebrados so especificados predominantemente no estilo Americano; existe
uma grande mistura de clulas e cada clula determinada pela natureza de suas
vizinhas. Toda clula se inicia com um potencial similar e se desenvolve de acordo com
o que encontra. Nesses embries, em pelo menos parte da clivagem, cada clula
capaz de se desenvolver no embrio todo se ela for separada das outras, e as clulas
remanescentes so capazes de alterar seu destino para produzir o embrio completo
(como na formao de gmeos). Esse tipo de comprometimento chamado especificao
condicional (ou dependente), e d origem ao desenvolvimento regulativo.
Durante o desenvolvimento autnomo, o eixo do embrio determinado pela dis-
tribuio de materiais em cada um dos blastmeros. Entretanto, no desenvolvimento
regulativo, os eixos se formam a partir de interaes das clulas constituintes. Neste
captulo acompanharemos os experimentos que se iniciaram h mais de um sculo para
entender como se d a especificao do sistema nervoso nos anfbios.
591
592 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Diferenciao das
Clulas clulas somticas
somticas
Figura 15.1
A teoria da herana de Weismann. A clula germinativa d origem s clulas somticas diferenciveis
do corpo (indicadas em cor), como tambm s novas clulas germinativas. (de Wilson, 1986.)
Figura 15.2
O desenvolvimento em mosaico, como Roux
tentou mostrar. A destruio de uma clula
de um embrio de r com 2 clulas resulta
no desenvolvimento de somente uma meta-
de do embrio.
Tecido Tecido
Agulha quente morto vivo Meio embrio
Clivagem
Metade destruda
(tecido morto)
Ovo fertilizado de r Estgio de 2 clulas Estgio de blstula Estgio de nurula
594 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
(A) Larva pluteus normal (B) Plutei desenvolvidas de clulas isoladas de embrio de 4 clulas
Figura 15.3
Demonstrao do desenvolvimento regulativo por Driesch. (A) Uma larva pluteus normal. (B)
Plutei menores, mas normais, cada uma delas se desenvolveu a partir de um blastmero de um
embrio dissecado de 4 clulas. (Todas as larvas esto desenhadas na mesma escala.) (De acordo
com Hrstadius e Wolsky, 1936.) Note que as larvas derivadas dessa maneira no so idnticas,
apesar de sua capacidade de gerar todos os tipos celulares necessrios. Essas variaes tambm
esto presentes nos ourios-do-mar adultos formados dessa maneira (Marcus, 1979).
Vista lateral
Placa de vidro
Vista lateral
Figura 15.4
Experimento de Driesch com placas de presso para alterar a distribuio dos ncleos. (A)
Clivagem normal de embries de ourio-do-mar com 8 a 16 clulas, com vistas do plo animal
(seqncia superior) e lateral (seqncia inferior). (B) Planos de clivagem anormal formados
sob presso, como observados do plo animal e lateralmente. (De acordo com Huxley e
deBeer, 1934.)
Tabela 12.2
151 Procedimentos
Estabilizao de
experimentais
RNAs mensageiros
e resultados
especficos
de Roux
por e
hormnios
Driesch
Interpretao em relao
Pesquisador Organismo Tipo de experimento Concluso potncia e destino
a invocar uma fora vital, entelechy (fora dirigida por uma meta interna), para explicar
como prosseguia o desenvolvimento. Essencialmente, ele acreditava que o embrio
era imbudo de uma psique interna e sabedoria para conseguir suas metas, apesar dos
obstculos colocados no seu caminho por embriologistas. Incapaz de explicar seus
resultados pela Fsica de sua poca, Driesch renunciou ao estudo da fisiologia do
desenvolvimento e se tornou um professor de filosofia, proclamando o vitalismo at
sua morte em 1941. Outros, especialmente Oscar Hertwig (1894), puderam incorporar
os experimentos de Driesch em uma embriologia experimental mais sofisticada.*
As diferenas entre os experimentos de Roux e os de Driesch esto resumidas na
Tabela 15.1. A diferena entre experimentos de isolamento e de defeitos e a importncia
das interaes fornecidas pelos blastmeros destrudos foi enfatizada em 1910, quan-
do J. F. McClendon mostrou que blastmeros isolados de r se comportam exatamente
como clulas isoladas de ourio-do-mar. Portanto, o desenvolvimento em mosaico
dos primeiros dois blastmeros da r no estudo de Roux foi um artefato do experimen-
to de defeito. Alguma coisa dentro do blastmero morto ou sobre ele ainda informava
s clulas vivas que ele existia. Ns j vimos que blastmeros precoces de mamferos
tm um desenvolvimento do tipo regulativo. Como discutimos no Captulo 5, cada
blastmero isolado de uma massa de clulas internas do camundongo capaz de gerar
um animal inteiro e frtil. A habilidade de dois ou mais embries precoces de camun-
dongo se fundirem em um embrio normal (veja Figura 5.28) e o fenmeno de gmeos
idnticos (veja Figura 5.27) tambm atestam a habilidade regulativa dos blastmeros
de mamferos. Portanto, mesmo que Weismann e Roux tenham sido pioneiros no estu-
do da fisiologia do desenvolvimento, sua proposio que a diferenciao causada
pela segregao de determinantes nucleares logo se mostrou incorreta.
Mas Driesch tambm no estava totalmente correto. Como vimos no captulo anterior,
existem numerosos animais que desenvolvem-se principalmente como um mosaico de
partes autodiferenciadas. Mais importante, no entanto, que mesmo o embrio do
ourio-do-mar no uma coleo de clulas completamente eqipotenciais. Em uma
srie de experimentos realizados entre 1928 e 1935 o biologista sueco Sven Hrstadius
separou, com finas agulhas de vidro, vrias camadas de embries precoces de ourio-
do-mar, e observou seu desenvolvimento subseqente (Hrstadius, 1928, 1939). Quan-
do o embrio de 8 clulas foi dividido meridionalmente atravs do plo animal ao
vegetal, as duas metades produziram larvas plutei, exatamente como Driesch havia
previsto. Mas quando embries no mesmo estgio foram divididos equatorialmente
(separando os plos animal e vegetal), nenhuma das partes se desenvolveu em uma
larva completa (Figura 15.5). Em lugar disso, a metade animal se tornou uma bola vazia
de clulas epidrmicas ciliadas (chamada uma dauerblstula), e a metade vegetal se
desenvolveu em um embrio ligeiramente anormal com um intestino expandido.
Hrstadius conseguiu duplicar esses resultados cortando pela metade vulos no
fertilizados de ourio-do-mar e fertilizando as metades separadamente. No ourio-do-
mar, os fragmentos dos ovos (merognias) podem se dividir e se desenvolver mesmo
tendo somente um ncleo haplide. Se o espermatozide penetrar na metade que no
tem o ncleo haplide do vulo, a merognia ainda se desenvolver (Figura 15.6).
Quando o vulo foi partido meridionalmente, embries normais se formaram das duas
metades do vulo. Entretanto, quando o ocito foi cortado equatorialmente, a fertiliza-
o produziu uma bola animal ciliada ou um embrio com um intestino expandido a
partir do plo vegetal. Portanto, mesmo em embries do ourio-do-mar parece haver
certo grau de mosaicismo, pelo menos ao longo do eixo animal-vegetal. Isso foi confir-
mado por Maruyama e colaboradores (1985) que, analogamente, dividiram
meridionalmente ou equatorialmente vulos no fertilizados de ourio-do-mar. Eles
observaram que ao separar a metade animal da metade vegetal, somente a metade
vegetal fertilizada era capaz de formar micrmeros e gastrular. Portanto, os determinan-
tes que permitem a formao de micrmeros e a gastrulao parecem estar localizados
na poro vegetal do vulo. [regul1.html]
(A) (B)
Plo animal Plo animal
Agulha
de vidro
Figura 15.5
Assimetria precoce no embrio de ourio-do-
mar. (A) Quando os 4 blastmeros do plo
animal so separados dos quatro blastmeros
Clios do plo vegetal e permitido que cada metade
se desenvolva, as clulas animais formam uma
dauerblstula ciliada e as clulas vegetativas
formam uma larva com o intestino expandido.
(B) Quando o embrio de 8 clulas dividido
de modo que cada metade contenha clulas ani-
Dauerblstula Larva Larva Larva (pequena, mais e vegetativas, desenvolvem-se larvas pe-
(blstula permanente) (levemente anormal) (pequena, mas normal) mas normal) quenas com aparncia normal.
598 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Fertilizao Fertilizao
Animalizao
completa
Animalizao
(incompleta)
(D) Metade animal e veg2
Larva reconhecvel;
mesoderma da
camada veg2
Larva reconhecvel;
endoderma das
camadas animais
Mesmeros nhas. Jon Henry e colegas no laboratrio de Rudolf Raff (1989) mostraram que se
forem isolados pares de clulas do hemisfrio animal pigmentado de um embrio de
ourio-do-mar com 16 clulas, essas clulas podem originar componentes tanto
ectodrmicos como mesodrmicos. Entretanto, sua capacidade de formar mesoderma
severamente restringida se elas so agregadas a outros pares do hemisfrio animal
Macrmeros pigmentado. Assim, a presena de clulas vizinhas, mesmo sendo do mesmo tipo,
restringe a potncia de ambos os parceiros. Ettensohn e McClay (1988) mostraram que
a potncia tambm restringida quando uma clula combinada com suas vizinhas ao
longo do eixo animal-vegetal. Primeiro, eles demonstraram que o nmero de clulas
mesenquimatosas primrias parece ser fixo e pode ser regulado por variaes nos
macrmeros. Se todas as 60 clulas mesenquimatosas primrias de Lytechinus
variegatus so removidas da gstrula precoce, um nmero igual de clulas
mesenquimatosas secundrias (do arquntero que havia sido macrmeros do plo
vegetal) se convertem em mesnquima primrio e comeam a formar espculas. Se so
Micrmeros
removidas 20 clulas mesenquimatosas primrias, cerca de 20 clulas mesenquimatosas
secundrias se tornam clulas mesenquimatosas primrias formadoras de espculas. E
Figura 15.8 assim por diante. Portanto, as clulas mesenquimatosas primrias tm uma influncia
Sumrio das indues inibitrias na blstula
restritiva, impedindo a formao de novas clulas mesenquimatosas primrias a partir
do ourio-do-mar. Setas duplas ilustram as in-
teraes mutuamente restritivas entre clulas
do arquntero, havendo ento a ocorrncia de uma induo negativa. No conhece-
adjacentes. (De acordo com Henry et al., 1989.) mos o mecanismo pelo qual as clulas mesenquimatosas primrias impedem que o
arquntero forme o mesnquima primrio e estabelecem um limite para o nmero de
tais clulas na blastocele.
Recombinando clulas de vrias camadas, Khaner e Wilt (1990, 1991) observaram
que na maioria dos casos, a clula de uma camada restringe a habilidade de uma clula
de outra camada em expressar seus destinos potenciais (Figura 15.8). A exceo mais
importante - como mencionado acima- a recombinao das clulas mesomricas do
plo animal com certos micrmeros do plo vegetal para formar tecido intestinal dos
mesmeros. Entretanto, no desenvolvimento normal de ourio-do-mar, essas clulas
nunca se associam entre si.
Ligadura
(A) (B)
Primeira clivagem
Crescente
Cinzento
Separao dos
blastmeros e
desenvolvimento
Figura 15.10
Assimetria no ovo de anfbio. (A) Quando o plano da primeira clivagem divide o
ovo em dois blastmeros, de modo que cada um receba uma metade do crescente
cinzento, cada clula separada experimentalmente se desenvolve em um embrio
Poro
normal. (B) Quando somente um dos dois blastmeros recebe todo o crescente
ventral
cinzento, ele sozinho forma um embrio normal. O outro pedao no tem estru-
Desenvolvimento Desenvolvimento Desenvolvimento turas dorsais e permanece como uma massa desorganizada de tecidos. (De
Normal Normal Normal acordo com Spemann, 1938.)
602 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
metades? Felizmente, o ovo da salamandra era um bom lugar para procurar respos-
tas. Como foi visto nos Captulos 4 e 6, existem movimentos dramticos do citoplas-
ma cortical aps a fertilizao de ovos de anfbios, e em alguns deles esses movi-
mentos expem uma rea cinzenta do citoplasma em forma de um crescente na regio
diretamente oposta ao ponto de entrada do espermatozide. Alm disso, o primeiro
plano de clivagem normalmente divide essa regio em partes iguais, dando origem a
dois blastmeros. Se essas clulas forem separadas, duas larvas completas se de-
senvolvem. Entretanto, se esse plano de clivagem for anormal (em um raro evento
natural ou em um experimento onde o investigador faz uma constrio com um fio de
cabelo, perpendicularmente ao plano normal de clivagem) o material do crescente
cinzento passa para somente um dos dois blastmeros. Spemann observou que
quando esses dois blastmeros so separados, somente aquele contendo o cres-
cente cinzento se desenvolve normalmente.
Parece, ento, que algo contido na regio do crescente cinzento essencial para o
desenvolvimento embrionrio adequado. Mas como isso funciona? Qual o seu papel
no desenvolvimento normal? A pista mais importante veio do mapa de destino dessa
rea do ovo, ao mostrar que a regio do crescente cinzento origina as clulas que
iniciam a gastrulao. Essas clulas formam o lbio dorsal do blastporo. Como visto
no Captulo 6, as clulas do lbio dorsal do blastporo so de certa maneira compro-
metidas a invaginar para dentro da blstula, iniciando assim a gastrulao e a forma-
o do arquntero. Porque o desenvolvimento futuro do anfbio depende da interao
das clulas rearranjadas durante a gastrulao, Spemann especulou que a importncia
do crescente cinzento era devida sua habilidade em iniciar a gastrulao, onde
ocorriam mudanas cruciais para o desenvolvimento.
Em 1918, Spemann demonstrou que enormes modificaes na potncia celular de
fato ocorriam durante a gastrulao. Ele verificou que as clulas da gstrula precoce
no estavam comprometidas com respeito diferenciao final, mas que o destino das
clulas da gstrula tardia eram fixos. Spemann trocou os tecidos de gstrulas preco-
ces de duas espcies pigmentadas de salamandra aqutica (Figura 15.11). Quando a
regio das clulas epidrmicas prospectivas foi transplantada para uma rea de forma-
o da placa neural, as clulas transplantadas deram origem ao tecido neural. Quando
clulas da prospectiva placa neural foram transplantadas regio destinada a se
tornar pele do ventre, as clulas se tornaram epidrmicas (Tabela 15.2). Portanto, essas
clulas da gstrula precoce ainda no estavam comprometidas a um tipo especfico de
diferenciao. Suas potncias prospectivas eram ainda maiores que seus destinos
prospectivos. Essas clulas exibem desenvolvimento condicional (regulativo ou
Diferenciao do
Regio doadora Regio hospedeira tecido doador Concluso
GSTRULA PRECOCE
Neurnios prospectivos Epiderme Epiderme Desenvolvimento
prospectiva dependente (condicional)
GSTRULA TARDIA
Neurnios prospectivos Epiderme Neurnios Desenvolvimento
prospectiva (determinado)
independente (autnomo)
TRANSPLANTE EM
GSTRULA TARDIA
Forma-se a placa
neural secundria
dependente) porque seu destino final depende da sua localizao no embrio. Entre-
tanto, quando os mesmos experimentos de transplantes heteroplsticos (entre espci-
es) foram feitos entre gstrulas tardias, Spemann obteve resultados completamente
diferentes. Em lugar de regular sua diferenciao de acordo com sua nova localizao
as clulas transplantadas exibiram desenvolvimento autnomo (ou independente, ou
em mosaico). Seus destinos prospectivos estavam determinados e as clulas se de-
senvolveram independentemente de sua nova localizao embrionria. Especifica-
mente, clulas neurais prospectivas agora se desenvolviam em tecido cerebral mesmo
quando localizadas na regio prospectiva da epiderme, e epiderme prospectiva forma-
va epiderme mesmo na regio do prospectivo tubo neural. Durante o intervalo de
tempo entre a gastrulao precoce e a tardia, as clulas ficavam restritas s suas vias
de diferenciao. Essas clulas so consideradas como determinadas: elas no podem
mais regular sua diferenciao em outros tipos de clulas. Deve ser notado que os
critrios para a determinao so puramente operacionais. No ocorrem modificaes
bvias nas clulas e no se detecta qualquer diferenciao. A base molecular da
determinao permanece como uma das principais incgnitas do desenvolvimento.
* Hilde Proescholdt Mangold morreu em um trgico acidente quando seu aquecedor a gasolina
explodiu. Na poca, ela tinha 26 anos e seu trabalho estava sendo publicado. Sua tese de doutoramento
foi uma das poucas teses em biologia que resultaram diretamente na concesso do Prmio Nobel.
Para maiores informaes sobre Hilde Mangold e sua poca veja Hamburger (1984) e Fssler e
Sander (1996).
604 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
(A) Blastocele
Notocorda
presuntiva
Somitos presuntivos
Estruturas
(B) secundrias induzidas Estruturas primrias
Lmen do Endoderma
intestino
Tubo neural
Invaginao Invaginao
secundria primria
(C)
Figura 15.12
Autodiferenciao do tecido do lbio dorsal do blastporo. (A) O lbio dorsal do blastporo da
gstrula precoce transplantado em outra gstrula precoce na regio que normalmente se torna
epiderme ventral. (B) O tecido se invagina e forma um segundo arquntero e depois um segundo
eixo embrionrio. Tanto o tecido do doador como o do hospedeiro visto no tubo neural,
notocorda e somitos. (C) Finalmente, se forma um segundo embrio ligado ao hospedeiro. Esta
ilustrao e a Prancha 4 mostram o experimento onde o lbio dorsal do blastporo pigmentado de
T. taeniatus foi implantado em uma gstrula precoce de um T. cristatus hospedeiro.
Figura 15.13
Induo de um novo eixo embrionrio pelo ndulo de Hensen. (A) O tecido do ndulo de Hensen
removido de um embrio de pato e implantado em um embrio de pinto hospedeiro. (B) Um
tubo neural accessrio induzido no local do enxerto. (De acordo com Waddington, 1933.)
ainda, era que as clulas do lbio dorsal do blastporo podiam interagir com os teci-
dos do hospedeiro para formar uma placa neural completa a partir do ectoderma do
hospedeiro. Por fim, formou-se um embrio secundrio, face a face com o seu hospe-
deiro (veja Figura 15.12; Prancha 4). Essas experincias, tecnicamente difceis, foram
repetidas recentemente com marcadores nucleares e os resultados de Spemann e
Mangold foram confirmados (Gimlich e Cook, 1983; Smith e Slack, 1983; Jacobson,
1984; Recanzone e Harris, 1985).* [regul2.html]
Spemann (1938) se referiu s clulas do lbio dorsal do blastporo como o
organizador porque (1) elas induziam os tecidos ventrais do hospedeiro a mudar seus
destinos para formar um tubo neural e tecido mesodrmico dorsal e (2) elas organiza-
vam esses tecidos do doador e do hospedeiro em um embrio secundrio com ntidos
eixos ntero-posterior e dorsoventral. Ele props que durante o desenvolvimento
normal, essas clulas organizariam o ectoderma dorsal em um tubo neural e transfor-
mariam o mesoderma dos flancos no eixo do corpo. Sabe-se agora (graas principal-
mente a Spemann e seus alunos) que a interao entre o cordomesoderma e o ectoder-
ma no suficiente para organizar o embrio completo. Em lugar disso, essa intera-
o inicia uma srie de eventos indutivos seqenciais. O processo pelo qual uma
regio embrionria interage com uma segunda regio para influenciar a sua diferenci-
ao ou comportamento (da segunda regio) chamado de induo. Como existem
numerosas indues durante o desenvolvimento embrionrio, essa induo principal
onde as clulas do lbio do blastporo induzem o eixo dorsal e o tubo neural tradici-
onalmente chamada de induo embrionria primria.**
Sabemos tambm que o lbio dorsal do blastporo ativo na organizao de
embries secundrios em Amphioxus, ciclstomos e em uma variedade de anfbios.
Em aves e mamferos, o organizador se origina na foice de Koller (margem posterior do
embrio), e o ndulo de Hensen age como o lbio dorsal do blastporo. Clulas
migrando atravs do ndulo de Hensen se tornam o endoderma e o cordomesoderma
da cabea, enquanto que clulas migrando atravs de outras partes da linha primitiva
se tornam clulas mesodrmicas laterais e ventrais. Quando o ndulo de Hensen de
uma gstrula jovem transplantado em um epiblasto de outra gstrula jovem ele induz
a formao de outro eixo secundrio completo (Figura 15.13; Waddington, 1933; Storey
et al., 1992; Khaner, 1995).
O centro de Nieuwkoop
Apesar do considervel volume de pesquisa realizada com embries de anfbios,
estamos apenas comeando a conhecer os mecanismos bsicos da induo embrion-
ria primria. Na ltima dcada, numerosos laboratrios focalizaram seus esforos para
explicar a induo embrionria em um anfbio Xenopus laevis e existe um consenso
em relao s linhas gerais da induo embrionria primria nesse organismo.
Os dados indicam uma orquestrao da induo que tem pelo menos quatro
estgios. O primeiro estgio da induo se d na fertilizao. O vulo no fertiliza-
do radialmente simtrico ao redor do eixo animal-vegetal. A entrada do esperma-
tozide quebra essa simetria causando a rotao do citoplasma interno do ovo em
relao ao crtex (veja Captulo 4). Essa assimetria especifica o eixo dorsoventral
pela mistura dos citoplasmas animal e vegetal nas clulas vegetativas que se
formam em oposio ao ponto de entrada do espermatozide. Parece que a mistura
dos citoplasmas ativa determinantes da dorsalizao nessas clulas vegetativas.
Essas clulas vegetativas dorsalizadas so chamadas centro de Nieuwkoop. No
segundo estgio, os descendentes dessas clulas vegetativas induzem as clulas
acima delas a se tornarem o organizador de Spemann-Mangold. As outras clulas
vegetativas induzem as clulas marginais acima delas a se tornarem os mesodermas
lateral e ventral. Portanto, existe uma induo antes da induo primria. No
terceiro estgio, o organizador converte o mesoderma vizinho em mesoderma dor-
sal, e instrui o ectoderma dorsal a se tornar tecido neural. O quarto estgio envol-
ve a caracterizao regional do tecido neural induzido (crebro anterior, crebro
posterior, medula espinhal, etc.).
ope aos sinais do organizador. Assim, existe evidncia para uma especificao
do mesoderma em trs etapas (Figura 15.17): (1) a induo da atividade do
organizador pelas clulas vegetativas mais dorsais (o centro de Nieuwkoop), (2) a Organizador
induo do mesoderma ventral pelas outras clulas vegetativas e (3) a dorsalizao
das clulas marginais laterais adjacentes s clulas marginais dorsais para produ-
zir o mesoderma intermedirio enquanto que outras clulas marginais seguem des-
tinos ventrais. Na dcada passada foram feitas tentativas para identificar as
interaes moleculares que originam essa modelagem mesodrmica.
Sinais dorsais
A especificao da polaridade dorsoventral na fertilizao (Vg1, Noggin,
activina, Wnt)
Sinais ventrais
Como vimos nos Captulos 4 e 6, a especificao dorsoventral consumada pela (FGF, BMP-4) Centro de
Nieuwkoop
rotao do citoplasma interno do ovo em relao ao crtex. Se essa rotao inibida
por luz ultravioleta, o embrio no formar estruturas dorso-anteriores (Vincent e
Gerhart, 1987). Render e Elinson (1986) e Wakahara (1989) cortaram ovos em frag- Figura 15.15
Modelo para induo do mesoderma em Xeno-
mentos antes e depois dessa rotao. Se o ovo fosse cortado antes da rotao,
pus. Um sinal ventral (provavelmente FGF2
ambos os lados desenvolviam estruturas dorso-anteriores: cabea, notocorda e ou BMP4) liberado em toda a regio vegetal
tubo neural. Se o corte era feito aps a rotao, um fragmento desenvolvia a cabea, do embrio. Isso induz as clulas marginais a
corao, e algumas estruturas mesodrmicas dorsais, enquanto o outro fragmento se tornarem mesoderma. BMP4 pode especifi-
se desenvolvia essencialmente em um Bauchstck, consistindo quase unicamente car as clulas marginais a se tornarem meso-
de clulas ventrais, tendo pouco ou nada de mesoderma dorsal e sem sistema nervo- derma posterior. No lado dorsal (fora do local
so. Sakai (1996) mostrou que se o citoplasma vegetativo do ovo fosse deletado de entrada do espermatozide), um sinal (pro-
antes da rotao, no se formaria o eixo dorsal, e certos determinantes dorsais se vavelmente iniciado por Vg1 e propagado pe-
movem do crtex vegetativo para a zona marginal no futuro lado dorsal. Parece las protenas activina, Noggin e Wnt) libera-
do pelas clulas vegetativas do centro de
ento, que essa rotao citoplasmtica movimenta os determinantes que so
Nieuwkoop. Esse sinal dorsal induz a forma-
ativadores dorsais em direo ao futuro lado dorsal do ovo. o do organizador de Spemann nas clulas da
zona marginal sobreposta ao centro. (De acor-
do com De Robertis et al., 1992.)
Plo
animal
Plo
vegetal
Figura 15.16
Plo Especificidade regional na induo do meso-
animal derma pela recombinao de clulas do em-
brio de Xenopus com 32 clulas. As clulas
do plo animal de embries de 32 clulas fo-
ram combinadas com blastmeros vegetativos
individuais. As clulas do plo animal foram
Camada D marcadas com polmeros fluorescentes para
identificao de seus descendentes. As
indues resultantes dessas recombinaes es-
Plo to resumidas direita. (De acordo com Dale e
vegetal Slack, 1987.)
608 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Mesoderma Mesoderma
ventral dorsal
Animal
Figura 15.17
Mesoderma
intermediria
Interaes indutivas durante o desenvolvimento precoce de Xenopus. Durante a oognese, o eixo
animal-vegetal se eleva. A fertilizao causa rearranjos citoplasmticos que subdividem a regio
vegetal nas reas dorso-vegetal (DV) e ventro-vegetal (VV). Durante a clivagem, a induo
mesodrmica ocorre de tal modo que a regio DV induz a atividade do organizador (O) nas
clulas marginais dorsais acima dela, enquanto a VV induz as clulas acima para se tornarem
mesoderma ventral (M). Um sinal do organizador converte o mesoderma ventral prximo em
mesoderma lateral (M2, M3, M4). Durante a gastrulao, os mesodermas ventral e lateral vo
para os lados da gstrula (no mostrado), enquanto o mesoderma dorsal se expande e induz a
Gastrulao
polaridade nas clulas ectodrmicas. Isso faz com que as clulas ectodrmicas se tornem diferen-
tes regies do tubo neural (N1, N2, N3, N4). C representa a glndula do cimento, a estrutura mais
anterior do girino. A polaridade do endoderma assim transferida ao tecido neural. O ectoderma
no induzido se torna epiderme. (De acordo com Smith et al., 1985; Slack e Tannahill, 1992.)
Animal
Mesoderma
ventral
Dorsalizao do
mesoderma ventral
Mesoderma Espermatozide
dorsal (organizador)
Animal Animal
Mesoderma
ventral
Clivagem
Vegetal
Centro de Nieuwkoop
A catenina uma protena multifuncional que pode funcionar como uma ncora
para as caderinas da membrana celular (Captulo 3) ou como um fator de transcrio
nuclear. Em embries de Xenopus, a rotao cortical da fertilizao remove as
cateninas para a futura parte dorsal do ovo. A catenina continua a se acumular
preferencialmente no lado dorsal durante a clivagem precoce, e essa acumulao
observada nos ncleos das clulas dorsais (Figura 15.18 A,B; Prancha 7E,F; Schneider
et al., 1996; Larabell et al., 1997). Essa regio de acumulao de catenina original-
mente parece conter tanto o centro de Nieuwkoop como as regies do organizador.
Durante as clivagens posteriores, as clulas com catenina podem se localizar espe-
cificamente no centro de Nieuwkoop (Heasman et al., 1994; Guger e Gumbiner, 1995).
A catenina necessria para a formao do eixo dorsal, pois a depleo de
transcritos de catenina com oligonucleotdeos antisenso resulta na falta de estrutu-
ras dorsais (Heasman et al., 1994). Alm disso, a injeo de catenina exgena no
lado ventral do embrio produz um eixo secundrio (Funayama et al., 1995; Guger e
Gumbiner, 1995). A catenina parte da via Wnt de transduo sinalizadora e
negativamente regulada pela quinase 3 da sntese glicognio (GSK-3; Captulo 3).
GSK-3 tambm crtica para a formao de eixo e GSK-3 ativada bloqueia a formao
de eixo quando adicionada ao ovo (Pierce e Kimelman, 1995; He et al., 1995; Yost et al.,
1996). Se o GSK-3 endgeno eliminado por uma mutao negativa dominante nas
clulas ventrais do embrio precoce, um segundo eixo se forma (Figura 15.18C). Expe-
rimentos com marcao (Yost et al., 1996; Larabell et al., 1997) sugerem que a
catenina inicialmente sintetizada (a partir de mensagens maternas) em todo o em-
brio, mas que degradada pela fosforilao de GSK-3 especificamente nas clulas
ventrais. No se conhece a causa dessas variaes regionais na atividade de GSK-3.
Experimentalmente a GSK-3 endgena pode ser inibida pela adio de protenas Wnt
ao ovo, e foi observado que essas Wnts induzem eixos secundrios (McMahon e
Moon, 1989; Sokol et al., 1991). Mas Wnts podem no ser as reguladoras naturais de
GSK-3 no lado dorsal do embrio; mutaes dominantes negativas de protenas Wnt
e seus receptores no conseguem bloquear a formao do eixo normal (Hoppler et al.,
1996; Sokol, 1996). Atualmente esto sendo realizados estudos para verificar se a
rotao cortical em ovos de Xenopus de certa maneira regula a atividade de GSK-3 e se
existe um outro agente (alm das protenas Wnt) capaz de inativar GSK-3.
610 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
-catenina ativada
Figura 15.18
(D) Papel da via das protenas Wnt na especificao do eixo dorsoventral. (A,B) Translocao
dorsalmente por
rotao cortical diferencial da protena -catenina para os ncleos de blastmeros de Xenopus. (A) Lado dorsal
presuntivo de uma blstula de Xenopus corado para -catenina mostra a localizao do ncleo.
(B) Tal localizao nuclear no vista no lado ventral do mesmo embrio. (C) Formao do
eixo dorsal causado pela injeo de ambos os blastmeros de um embrio de Xenopus de 2
clulas com GSK-3 inativa dominante. O destino dorsal ativamente suprimido pela GSK-
3 tipo selvagem. (D) Modelo irnico pelo qual o centro de Nieuwkoop (caracterizado pela
expresso do gene Siamois e a habilidade para induzir o mesoderma dorsal) criado pelo
sinergismo da ativao dorsal da -catenina e a ativao vegetal de Vg1. (A e B de Schneider
et al., 1996, fotografias cortesia de P. Hausen; C de Pierce e Kimelman, 1995, fotografia
cortesia de D. Kimelman.)
Controle
Vg madura
EF1 (controle)
Actina cardaca
(mesoderma dorsolateral)
Xbra
(A) (mesoderma geral)
Gsc (mesoderma
dorsal anterior)
Noggin (mesoderma
dorsal anterior)
Xwnt8 (mesoderma
ventrolateral)
NCAM (neural)
(B) (C)
Figura 15.19
Protena Vg1 madura induz movimentos
morfogenticos e expresso gnica mesodr-
mica dorsal em explantes ectodrmicos.
blstula, mas est na forma de um precursor inativo que precisa ser cindido para ser Explantes de hemisfrio animal pigmentado no
ativo. A protena Vg1 ativada capaz de (1) induzir o mesoderma dorsal nas clulas do estgio de blstula foram cultivados (A) em
hemisfrio animal; (2) induzir um eixo embrionrio completo quando microinjetada em meio no tratado ou (B) em meio contendo a
protena Vg1 madura (clivada). A protena Vg1
clulas vegetativas ventrais; e (3) recuperar o eixo dorsal em ovos irradiados com luz
induziu movimentos de extenso convergente
UV quando microinjetada nas clulas vegetativas dorsais (Dale et al., 1993; Thomsen no hemisfrio animal pigmentado. Quando
e Melton, 1993; Kessler e Melton, 1995). deixados no meio tratado por um tempo maior
Kessler e Melton (1995) mostraram que a protena Vg1 ativada causava a (C) os explantes do hemisfrio animal
elongao ativa do mesoderma da notocorda como tambm a ativao dose-depen- pigmentado formaram estruturas semelhantes
dente dos marcadores mesodrmicos. Quando coroas do plo animal, no estgio de larva, incluindo a notocorda, msculos, olhos,
blstula so colocadas em baixa concentrao de Vg1 processada, a protena Vg1 glndula do cimento e eixo ntero-posterior.
induz a expresso de genes como Brachyury, que caracteriza o mesoderma geral. (D) Com o aumento de sua concentrao, a
Doses ligeiramente maiores de Vg1 induz a expresso de marcadores mesodrmicos protena Vg1 induz um conjunto mais dorsal
de marcadores mesodrmicos. A concentra-
laterais (Xwnt8 e actina), e em altas concentraes, a Vg1 induz essas clulas a
o mais baixa 0 (controle), seguida por 1, 3,
expressar os marcadores mesodrmicos dorsais goosecoid e noggin (Figura 15.19). 10 e 30% em sobrenadante de Vg1. (De acor-
Entretanto, Cui e colaboradores (1996) encontraram que a Vg1, sozinha, no capaz do com Kessler e Melton, 1995; fotografias
de causar diferenciao da notocorda in vivo. Para que isso ocorra, as clulas ne- cortesia de D. A. Melton.)
cessitam dos produtos de Vg1 e Wnt. (A via Wnt no foi suficiente para induzir
sozinha o mesoderma dorsal.) possvel que a combinao de Vg1 com algum
produto especificado pelo gene Siamois seja capaz de induzir a especificao do
mesoderma dorsal e sua diferenciao na notocorda*.
A protena Vg1 madura (processada) parece ser crtica para o funcionamento (se
no o estabelecimento) do centro de Nieuwkoop nos anfbios. Vg1 tambm
identificada na regio homloga do embrio de galinha - a zona marginal posterior.
Alm disso, quando a protena Vg1 introduzida experimentalmente em reas laterais
* Alternativamente, isso pode ser outro exemplo do conceito de Spemann (1938) chamado de
dupla certeza. O embrio poderia especificar o mesoderma dorsal pelo sinergismo de Vg1 e -
catenina (sem um centro de Nieuwkoop). O mesmo resultado poderia ser obtido a partir de um sinal
iniciado pelo gene Siamois do centro de Nieuwkoop abaixo dele. Spemann considerava dupla
certeza em analogia a usar tanto um cinto como suspensrios.
612 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Lim1 Chordin
XANF1 Noggin
Goosecoid Follistatin
Protenas relacionadas Sonic hedgehog
A HNF3 (p.ex., Forkhead, Pintallavis) Cerberus
Protenas relacionadas Nodal (vrias)
Filandeses (Saxn, 1961; Toivonen et al., 1975; Toivonen e Wartiovaara, 1976). O lbio
dorsal da salamandra aqutica foi colocado em um lado de um filtro suficientemente
fino, de modo que nenhum processo pudesse atravessar os poros, e o ectoderma
competente de gstrula foi colocado no outro lado do filtro. Aps vrias horas, estru-
turas neurais foram observadas no tecido ectodrmico (Figura 15.21). As identidades
desses fatores difundindo do organizador levaram um quarto de sculo para serem
definidas. Atualmente, vrias dessas molculas esto sendo estudadas: Chordin,
Noggin, Follistatin, Sonic hedgehog e Cerberus.
(A)
CHORDIN. Um dos papis iniciais do organizador se proteger contra a
ventralizao. A BMP4 produzida em toda a blstula de Xenopus e ativamente
produz mesoderma ventral (Graff et al., 1994). Em outras palavras, a produo do
mesoderma ventral no meramente devida ausncia de sinais dorsais; ela
ativamente construda. Alm do mais, como j descrito, a BMP4 pode bloquear os
sinais dorsais. O mesoderma dorsalizado bloqueia o sinal de BMP4 secretando
Chordin e Noggin (Sasai et al., 1994; Holley et al., 1995). Chordin uma protena
secretada que ativada pelos fatores de transcrio Goosecoid e Xnot2 contendo
o homeodomnio. A protena originalmente detectada na zona marginal dorsal
cerca de uma hora antes da gastrulao; ao se iniciar a gastrulao, a mensagem
chordin vista somente no lbio dorsal do blastporo (Figura 15.22). Daqui em
diante, chordin expressa na placa precordal (o mesoderma da cabea que prece-
de anteriormente a notocorda) e na notocorda. Quando esto ocorrendo as lti-
mas indues na cauda, Chordin encontrada na dobradia cordoneural, o ltimo
vestgio do organizador. Chordin pode induzir um eixo secundrio quando
microinjetada nos lados ventrais da blstula de Xenopus, possivelmente por inter-
(B) ferir com a ao de BMP4.
Figura 15.21 BMP4 inicialmente expressa nas regies ectodrmicas e mesodrmicas da
Fatores indutivos solveis e sua identificao. blstula tardia. Entretanto, durante a gastrulao, transcritos de bmp4 esto res-
(A) Estruturas neurais induzidas no ectoderma tritos zona marginal ventrolateral (Hemmati-Brivanlou e Thomsen, 1995; Northrop
presuntivo pelo lbio dorsal da salamandra aqu- et al., 1995). A protena BMP4 induz a expresso de vrios fatores de transcrio
tica, separado do ectoderma por um filtro (Xvent-1, Vox, Mix.1, Xom) que so reguladores-chaves no desenvolvimento do
Nucleopore com poros de dimetro mdio de mesoderma ventral. Portanto, a BMP4 ativa a expresso gnica ventral. Os fatores
0.05 m. Clulas neurais do tipo anterior so de transcrio induzidos por BMP4 reprimem goosecoid e outros genes dorsais,
evidentes, incluindo alguns olhos induzidos.
enquanto ao mesmo tempo ativam protenas mesodrmicas ventrolaterais (Gawantka
(B) Tipo similar de induo visto quando o
hemisfrio animal pigmentado de Xenopus (ec-
et al., 1995; Hawley et al., 1995; Mead et al., 1996; Schmidt et al., 1996). Dessa
toderma presuntivo) injetado com mRNA de maneira, a BMP4 ativa o desenvolvimento mesodrmico e suprime o desenvolvi-
chordin e tratado com FGF2 solvel. (A de mento dorsal. Em Xenopus, chordin e noggin se ligam diretamente e inativam a
Toivonen, 1979; B de Sasai et al., 1996; foto- BMP4, impedindo assim que a protena aja em clulas prximas ao organizador
grafias cortesia de L. Saxn e E. De Robertis, (Figura 15.23; De Robertis e Sasai, 1996; Piccolo et al., 1996; Sasai et al., 1996;
respectivamente.) Zimmerman et al., 1996).
CAPTULO 15 Especificao Condicional 615
Figura 15.22
Localizao do mRNA de chordin. (A) Montagem total da hibridizao in situ mostra que
imediatamente antes da gastrulao, a mensagem chordin expressa na regio que se tornar o
lbio dorsal do blastporo. (B) Quando a gastrulao comea, chordin expresso no lbio dorsal
do blastporo, e (C) visto nos tecidos do organizador. (de Sasai et al., 1994; fotografias cortesia
de E. De Robertis.)
(A)
Animal
Ectoderma
Ectoderma neural
epidrmico
Ventral Dorsal
MOLCULAS DO ORGANIZADOR:
Chordin, Noggin, Follistatin, Xnr3
Mesoderma
Endoderma dorsal
Vegetal
(B)
Screw
Genes homeobox
Tolloid Decapentaplegic no neurais
Chordin
Short gastrulation
Cordados
Drosophila
Figura 15.23
Modelo para a ao do organizador. (A) BMP4 (e outras certas molculas) so poderosos fatores
ventralizantes. Protenas do organizador como Chordin e Noggin podem bloquear a ao de
BMP4. (Follistatin pode inibir a ao de BMP7, que combina com BMP4 para ativ-lo.) Os
efeitos antagnicos dessas protenas podem ser vistos em todas as trs camadas germinativas. (B)
Vias do desenvolvimento homlogo na formao do sistema nervoso central de um vertebrado
(Xenopus) e de um invertebrado (Drosophila). O fator vertebrado est em preto, a protena
homloga da Drosophila em cor. (De acordo com De Robertis e Sasai, 1996; Sasai et al., 1996.)
616 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Informaes adicionais
& Especulaes
R ECENTEMENTE, os laboratri-
os de De Robertis e Kimelman
mostraram que a reao que
leva formao do tubo neural dorsal no
Xenopus so as mesmas reaes que le-
do short-gastrulation injetado nas re-
gies ventrais de embries de Xenopus,
ele induz a notocorda e o tubo neural do
embrio. A injeo do mRNA de chordin
em Drosophila origina tecido nervoso
um dos mais calorosos e crticos con-
frontos em biologia quando ele props
que a lagosta era um vertebrado de ca-
bea para baixo. Ele acreditava que o
lado ventral da lagosta (com seu cor-
vam formao do cordo nervoso ven- ventral. Apesar da Chordin de Xenopus do nervoso) era homlogo ao lado dor-
tral nos insetos (veja Figura 15.23B; funcionar como um dorsalizador do em- sal dos vertebrados (Appel, 1987). Pa-
Holley et al., 1995; Schmidt et al., 1995). brio, ela ventraliza o embrio de Droso- rece que ele tinha razo ao nvel mole-
Em Drosophila, o homlogo do gene phila. Isso porque na mosca a Dpp cular, mas no no anatmico. De Robertis
bmp4 o decapentaplegic (dpp). Como produzida dorsalmente. Em Xenopus, e Sasai (1996) propuseram que todos os
discutido no captulo anterior, a protena BMP4 produzida ventralmente. Em am- filos bilatrios tinham uma origem co-
Dpp responsvel pela modelagem do bos os casos, Sog/Chordin produz teci- mum- uma criatura hipottica (denomi-
eixo dorsoventral na Drosophila, e est do neural bloqueando os efeitos de Dpp/ nada Urbilateria) de cerca de 600 mi-
presente na poro dorsal do embrio e BMP4. Em Drosophila, a Dpp interage lhes de anos atrs que era o ancestral
difunde-se ventralmente. Aqui, ela sofre com o produto do gene screw para seu de ambos os subreinos, protostomatas
a oposio de uma protena chamada funcionamento. Em Xenopus, o homlogo e deuterostomatas. A interao BMP4
Short-gastrulation (Sog). A Short-gastru- de screw, Bmp7, parece ser essencial para (Dpp)/Chordin(Sog) um exemplo de
lation a homloga de Chordin na Dro- o efeito ventralizante de BMP4 (Hawley processos homlogos, sugerindo uma
sophila. Esses homlogos no s se et al., 1995). unidade de princpios de desenvolvi-
parecem como tambm podem ser subs- Em 1822, o anatomista francs mento em todos os animais (Gilbert et
titudos um pelo outro. Quando o mRNA Etienne Geoffroy Saint-Hilaire provocou al., 1996).
NOGGIN. Um dos outros agentes do organizador deve ser o produto do gene noggin.
Smith e Harland (1991, 1992) isolaram esse gene construindo uma biblioteca de cDNAs
de gstrulas dorsalizadas (tratadas com ltio). RNAs sintetizados de conjuntos desses
plasmdeos foram injetados em embries ventralizados produzidos por irradiao com
luz UV. Os conjuntos de plasmdeos cujos RNAs recuperavam o eixo dorsal foram
divididos em conjuntos menores, e assim por diante, at o isolamento de clones ni-
cos cujos mRNAs eram capazes de restaurar o eixo dorsal nesses embries. Um des-
ses clones continha noggin. Smith e Harland (1992) mostraram que mRNA do noggin,
recentemente transcrito, est localizado inicialmente na regio do lbio dorsal do
blastporo e depois expresso na notocorda (Prancha 6). Ainda mais, se o embrio
precoce tratado com cloreto de ltio (LiCl) de modo que o manto mesodrmico inteiro
se torne um tecido organizador semelhante notocorda, ento o mRNA de noggin
encontrado no manto mesodrmico inteiro. Tratamento do embrio precoce com luz
ultravioleta (que impede a formao do lbio dorsal do blastporo) inibe a sntese do
mRNA de noggin. Injeo de mRNA de noggin em embries de uma clula, irradiados
com luz ultravioleta, restaura completamente o eixo dorsal e permite a formao do
embrio completo (Prancha 5). Se muita protena Noggin sintetizada nessa ocasio,
o embrio se torna hiperdorsal, formando somente a regio da cabea (da o nome
noggin). O mRNA para a protena Noggin j est presente no ovo fertilizado, e a
seqncia da protena (como deduzida pelo gene) sugere fortemente que Noggin
uma protena secretada. Parece ento, que Noggin um excelente candidato para
mediar algumas das funes do organizador.
CAPTULO 15 Especificao Condicional 617
Evidncia recente sugere que a protena Noggin pode realizar duas funes impor-
tantes do organizador de Spemann-Mangold: ela induz o tecido neural do ectoderma
dorsal, e dorsaliza as clulas mesodrmicas que, de outra maneira, contribuem para o
mesoderma ventral. Smith e colaboradores (1993) mostraram que a protena Noggin
pode dorsalizar as clulas da zona marginal ventral na gastrulao e reespecificar seu
destino a partir do mesoderma ventral (mesnquima e clulas do sangue) a destinos
mais intermedirios (msculo, corao e rim pronfrico). Quando Smith e colaborado-
res removeram as zonas marginais ventrais (o mesoderma ventral presuntivo) da gstrula
de Xenopus e as colocaram em um meio contendo a protena Noggin solvel, esses
explantes produziram um mRNA especfico para msculo que normalmente reserva-
do para explantes marginais dorsais. Esses explantes tambm se tornaram alongados
(outra caracterstica do desenvolvimento dorsal). Entretanto, os explantes alongados
no coravam como tecido notocordal. Esses experimentos mostram que a protena
solvel Noggin pode induzir clulas mesodrmicas ventrais da gstrula a se tornarem
msculo (mas no notocorda) e, portanto, ela se assemelha ao sinal do organizador
que dorsaliza o tecido mesodrmico lateral (veja Figura 15.17).
A protena Noggin tambm pode induzir tecido neural no ectoderma da gstrula
sem a presena de qualquer mesoderma dorsal (Lamb et al.,1993). Quando Noggin
adicionada ao ectoderma da gstrula (ou hemisfrio animal pigmentado), as clulas
ectodrmicas so induzidas a expressar marcadores neurais especficos para o crebro
anterior. Alm disso, os produtos gnicos para as clulas do msculo ou da notocorda
no so induzidos pela protena Noggin. Como Noggin uma protena secretada
sintetizada pelos derivados do organizador (o mesoderma da cabea e o
cordomesoderma) durante a gastrulao (quando se d a induo), e desde que ela
inativa a BMP4 (a qual ventraliza o embrio), considera-se que Noggin tem um papel
na dorsalizao do mesoderma e na dorsalizao do ectoderma dorsal.*
*Noggin pode tambm estar funcionando como parte do centro de Nieuwkoop. Um material do
mRNA de noggin traduzido na blstula precoce (Smith e Harland, 1992) e uma investigao
recente (Lustig et al., 1996) mostra que Noggin funciona com um co-fator, Xenopus nodal related-
1(Xnr-1), para induzir a gstrula precoce. Xnr-1 pode tambm estar envolvido na formao do eixo
esquerdo-direito em Xenopus. Durante a neurulao, ele expresso assimetricamente no mesoderma
da placa lateral, estando presente somente no lado esquerdo do embrio. Esse modelo de expresso
se assemelha aquele dos genes nodal em pintos e camundongos, onde a expresso de nodal crtica
para o estabelecimento do eixo esquerdo-direito (Captulo 16).
618 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Regio do
neurnio
Motor Notocorda
doadora
Placa do
assoalho ventral
Notocorda
(A) (B) (C) (D)
Figura 15.24
Cascasta de indues iniciada pela notocorda
no tubo neural recm-formado. (A) Dois tipos SONIC HEDGEHOG. Sonic hedgehog utilizada aps a concretizao da maioria
de clulas no tubo neural recm-formado. As dos eventos indutivos da neurulao. Ela usada para padronizar o tubo neural
clulas mais perto da notocorda se tornam as recm-formado. Sonic hedgehog expressa na notocorda e a poro aminoterminal
clulas da placa do assoalho ventral. Os neur- dessa protena secretada (veja Figura 7.11). Se fragmentos da notocorda de um
nios motores emergem nos lados ventrolaterais. embrio so transplantados para as laterais de um tubo neural hospedeiro, esse
(B) Se uma segunda notocorda transplantada formar, nas suas laterais, outro conjunto de clulas da placa do assoalho. Se um
adjacente ao tubo neural, ela induz um novo pedao da notocorda removido de um embrio, o tubo neural adjacente regio
conjunto de clulas da placa do assoalho e dois deletada no tem clulas da placa do assoalho (Figura 15.24; Placzek et al., 1990;
novos conjuntos de neurnios motores. (C) Se
Yamada et al.,1991). Essas clulas da placa do assoalho, uma vez induzidas, induzem
as clulas da placa do assoalho ventral so trans-
plantadas adjacentes ao tubo neural, novos con- a formao dos neurnios motores em um de seus lados. O mesmo resultado pode
juntos de neurnios motores se diferenciam. ser obtido se os fragmentos de notocorda so substitudos por aglomerados de
(D) As interaes indutivas entre essas clu- clulas secretando Sonic hedgehog (Echelard et al., 1993; Roelink et al., 1994). A
las. As setas vermelhas representam a secreo Sonic hedgehog das clulas da placa do assoalho capaz, em seguida, de polarizar
da protena Sonic hedgehog. (De acordo com o tubo neural. Ela induz os neurnios motores nas regies ventrolaterais, e impede
Placzek, et al., 1990.) a dorsalizao do tubo neural ventral antagonizando os efeitos de BMP4 originada
na epiderme dorsal* (veja Captulo 7).
*BMP4 age como um agente ventralizador na formao do tubo neural (impedindo ativamente
sua formao na parte ventral do embrio), mas uma vez que o tubo neural est produzido, a
protena pode agir como um agente dorsalizante, sendo secretada da epiderme superior para dorsalizar
o tubo neural (veja Captulo 7). Um parceiro verstil, ela estimular o desenvolvimento do msculo
no mitomo, padroniza o desenvolvimento do dente, e at destri a rede formada entre nossos
dedos da mo e do p. A BMP4 freqentemente pareada com a Sonic hedgehog na formao dos
primrdios dos rgos.
CAPTULO 15 Especificao Condicional 619
Figura 15.25
O mRNA de Cerberus injetado em um nico blastmero D4 (vegetativo
ventral) de um embrio de Xenopus de 32 clulas induz estruturas da
cabea como tambm um corao e um fgado duplicados. Um olho
secundrio (um nico olho ciclpico) e um placdio olfatrio podem ser
vistos facilmente. (de Bouwmeester et al., 1996; fotografia cortesia de E.
M. De Robertis.)
Figura 15.26
Habilidade do mRNA de goosecoid para induzir um novo eixo. (A) Na gstrula, o embrio
controle (no injetado ou injetado com mRNA semelhante a goosecoid mas sem o homeobox)
tem um lbio dorsal do blastporo. (B) Um embrio no estgio de 16 clulas cujos blastmeros
vegetativos ventrais foram injetados com a mensagem goosecoid. Note o lbio dorsal do blastporo
secundrio. (C) Superior, duas nurulas injetadas com mRNA de goosecoid, mostrando dois
eixos; inferior, duas nurulas controle. (D) Embrio duplicado produzido pela injeo de goosecoid.
Foram induzidas estruturas completas da cabea. (De acordo com Cho et al., 1991a; Niehrs et al.,
1993; cortesia de E. De Robertis.)
clulas faz com que a prognie desses blastmeros involuam, sofram extenso con-
vergente e formem o mesoderma dorsal e o endoderma da cabea do eixo secundrio
(Figura 15.26; Niehrs et al., 1993). Alm disso, experimentos com marcao (Niehrs et
(A) al., 1993) mostram que clulas injetadas com goosecoid so tambm capazes de
recrutar para o eixo dorsal clulas vizinhas do hospedeiro. Resumindo, o centro de
Nieuwkoop ativa o gene goosecoid codificando uma protena ligante de DNA que
(1) ativa as propriedades de migrao (involuo e extenso convergente) das clu-
las do lbio dorsal do blastporo, (2) de forma autnoma, determina os destinos
endodrmico da cabea e mesodrmico dorsal das clulas que o expressam, e (3)
permite s clulas que expressam goosecoid recrutarem clulas vizinhas para dentro
Xbra do eixo dorsal. Foi observado que Goosecoid ativa o gene Xotx2 no mesoderma
Noggin anterior e no ectoderma presuntivo do crebro (Blitz e Cho, 1995). Xotx2 o homlogo
Goosecoid do gene orthodenticle em Xenopus que essencial para o desenvolvimento do
Xnr3
crebro em moscas e camundongos.
(B) A expresso gnica especfica para o organizador pode ser usada para subdi-
vidir o organizador precoce em regies tendo diferentes combinaes dessas men-
sagens (Figura 15.27; Vodicka e Gerhart, 1995). No comeo da gastrulao, enquanto
as clulas do organizador involuem para o embrio, essas configuraes mudam.
Dentro das clulas profundas, o goosecoid agora visto nas pores mais anterio-
res (na maior parte construda de clulas C1), especialmente o mesoderma da placa
precordal da cabea. A sobreposio parcial dos genes noggin e Xbra define a
notocorda, e a regio tendo Xbra sem noggin define o domnio destinado a se
tornar o endoderma posterior. Um segundo domnio de expresso de noggin visto
na placa neural anterior. [regul6.html]
Figura 15.27
Estrutura fina do organizador. (A) No comeo da gastrulao, o Xbra est nas clulas mais
animais do organizador, enquanto o noggin est mais vegetal. As clulas vegetativas involuem
primeiro e se localizam mais anteriormente. (B) Os mesmos fatores vistos perto do fim da
gastrulao. As zonas de expresso so mais discretas e menos superpostas, e no h correlao
entre a localizao original das clulas e seu padro de expresso gnica posterior. (De acordo
com Vodicka e Gerhart, 1995.)
CAPTULO 15 Especificao Condicional 621
Informaes adicionais
& Especulaes
M
ESMO QUE a identidade das da Protena Quinase C (PKC) nas suas natural foi novamente confirmada quan-
molculas sinalizadoras este- membranas celulares. Vrios estudos do Otte e colaboradores (1991; Otte e
ja sendo estabelecida, o me- (Davids et al., 1987; Davids, 1988; Otte Moon, 1992) demonstraram que a PKC
canismo de suas aes ainda um enig- et al., 1988, 1989) mostraram que se so- do ectoderma dorsal difere do PKC do
ma. provvel que alm de bloquear o mente um desses eventos ocorre, no ectoderma ventral, tanto na sua estru-
sinal ventralizante (BMP4), o organiza- h formao do tecido neural. Entretan- tura como na sua habilidade de ser ati-
dor deve tambm ativar as clulas ecto- to, se a Protena Quinase C e a adenil vada por compostos externos. Somente
drmicas para se tornarem a placa ciclase forem ativadas artificialmente a PKC encontrada no ectoderma dorsal
neural. Apesar de no se conhecer a(s) nas membranas das clulas ectodrmi- pode ser correlacionada com a habilida-
molcula(s) responsvel(s), possvel cas, o tecido neural gerado. Nesse de de responder a indutores naturais.
que a neuralizao possa se dar pela modelo, a induo neural realizada por possvel que ningum ainda tenha con-
combinao de duas reaes separadas: duas reaes, e cada reao pode ser seguido isolar o fator indutor neural
o aumento do AMP cclico intracelular iniciada por uma molcula diferente. A natural porque vrios fatores esto agin-
nas clulas ectodrmicas e a ativao participao de PKC na induo neural do simultaneamente.
(C)
(D)
Figura 15.29
Ao indutora especfica regionalmente do lbio dorsal do blastporo. (A) Labios dorsais de
blastporos jovens (que formaro a poro anterior do mesoderma dorsal) induzem estruturas
anteriores quando colocadas em gstrulas jovens da salamandra aqutica. (B) Lbios dorsais de
blastporos mais velhos colocados em gstrulas de salamandra similares produzem estruturas
mais posteriores. (de Saxn e Toivonen, 1962, fotografias cortesia de L. Saxn.)
CAPTULO 15 Especificao Condicional 623
Nos anos de 1950, P. Nieuwkoop (1952) e Toivonen e Saxn (1955) propuseram mode- Anterior Posterior
los para a especificidade regional que envolviam duas etapas. Na primeira delas, o
tecido neural era induzido pelo organizador. Esse tecido neural era o tecido Figura 15.30
arquenceflico do crebro anterior. A segunda etapa consistia em um sinal de Evidncia para um modelo de induo neural
posteriorizao distribudo como um gradiente, com maior concentrao caudal. O em dois estgios: ativao e transformao.
sinal de posteriorizao agia no ectoderma anterior transformando-o em crebro pos- Uma dobra do ectoderma de gstrula foi im-
terior e tecido da medula espinhal. A evidncia de Nieuwkoop veio de transplantes de plantada em uma regio da placa neural. As
estruturas mais anteriores esto no lado esquer-
dobras do ectoderma competente em vrias posies ao longo do eixo ntero-poste-
do e 1-4 representam diferentes estruturas
rior da gstrula hospedeira. As pores proximais dessas dobras produziram estrutu-
neurais. Dobras do ectoderma de gstrula no
ras tpicas da regio de insero do hospedeiro, enquanto que a parte mais distal da especfica tendiam a se diferenciar em estrutu-
dobra se desenvolveu em estruturas neurais de natureza mais anterior do que da ras neurais anteriores, mas eram posteriorizadas
insero (Figura 15.30). A evidncia de Toivonen e Saxn veio de estudos com indutores por material oriundo do posterior do embrio.
artificiais especficos de tecidos. Foi observado que a medula ssea de cobaia, por (De acordo com Doniach, 1993.)
exemplo, induz somente estruturas mesodrmicas. Fragmentos de fgado de cobaia,
entretanto, podiam induzir estruturas do crebro anterior. Eles implantaram os dois
indutores juntamente dentro da blastocele da mesma gstrula precoce. Enquanto o
fgado induziria somente o crebro anterior e a medula ssea induziria somente o
mesoderma, os dois juntos induziram tudo normal; o crebro anterior, o crebro poste-
rior, a medula espinhal e o mesoderma do tronco (Toivonen e Saxn, 1955). Portanto, a
especificidade regional da induo neural pode ser devida a gradientes opostos de
substncias indutoras do crebro anterior e da medula espinhal (Figura 15.31). Resul-
tados semelhantes vieram de estudos onde o ectoderma neural anterior foi misturado
(A)
Medula Fgado
ssea
Figura 15.31
Evidncia para o modelo de induo em
(B) Fgado Fgado + medula Medula ssea gradiente duplo. (A) Implantao simult-
113 casos ssea 66 casos 34 casos nea de um indutor neuralizante (fgado de
Crebro anterior cobaia) e um indutor de mesoderma (me-
Olho dula ssea de cobaia) na blastocele de uma
Nariz gstrula precoce da salamandra aqutica.
Equilibrador (B) Resultados dessa implantao. Estru-
Crebro posterior
turas do crebro posterior e da medula es-
Vescula do ouvido pinhal que eram intermedirias entre o c-
Medula espinhal rebro anterior e o mesoderma no mapa de
destino da placa neural, no foram bem in-
Notocorda duzidas por cada um dos indutores. Quan-
Somitos
do os dois indutores foram implantados
Prnefros
Nadadeira
em conjunto, essas estruturas foram pro-
duzidas. (De acordo com Toivonen e
Saxn, 1955.)
624 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Crebro anterior
Crebro posterior
Medula espinhal
Porcentagem
Figura 15.32
Evidncia para a induo em gradiente duplo e
dois estgios no embrio de anfbios. A regio com diferentes quantidades de mesoderma dorsal posterior (Figura 15.32; Toivonen e
anterior da placa neural (ou seja, clulas j in- Saxn, 1968). Assim, o tecido neural foi determinado a ser inicialmente crebro anterior,
duzidas naturalmente por um indutor do cre- mas em seguida foi posteriorizado de maneira gradativa por substncias caudais. A
bro anterior, aqui vistas em cor) e clulas da maioria dos modelos de induo neural convergiram a um esquema que inclui (1) uma
notocorda posterior foram removidas e mistu-
etapa de ativao inicial que determina que as clulas tm capacidade de se conver-
radas em diferentes propores. A freqncia
de estruturas intermedirias (crebro posteri- terem em clulas neurais do crebro anterior e (2) uma etapa de transformao na
or) aumenta medida que a propores de c- qual um gradiente de material do mesoderma posterior causa a posteriorizao da
lulas da placa neural anterior e clulas especificao neural (Figura 15.33). [regul4.html]
mesodrmicas se aproxima de 1:1. Isso sugere
que a especificao regional ocorre aps a de- Correlatos moleculares da caudalizao neural
terminao das clulas da placa neural como
neurais. (de Gilbert e Saxn, 1993.) Cada um dos indutores neurais: Chordin, Noggin e Follistatin induz exclusivamente
tecidos neurais anteriores (tipo de crebro anterior). Ento, quais podem ser o(s)
fator(es) que posteriorizam o tubo neural? Vrios estudos recentes apontam para o
FGF como sendo o fator que especifica que o ectoderma neural se torne mais caudal
(Cox e Hemmati-Brivanlou, 1995; Lamb e Harland, 1995). Quando o ectoderma de
gstrula precoce (ainda sem a subcamada de mesoderma dorsal) foi isolado e
Concentrao de RA cido
em contato com a retinico
nurula tardia
No tratada Controle
rRNA
Glndula do cimento
XCG-1
Glndula do
cimento XAG-1
XA-1 Cabea
XIF-1 Cabea
XIHbox6 Tronco
Xhox36 Cauda
Figura 15.34
cido retinico (RA) causa a posteriorizao de estruturas neurais. (A) Embries em nurula
tardia foram expostos continuamente a diferentes concentraes de cido retinico e seu
crescimento foi permitido at que os controles atingissem o estgio de girinos. (B) Efeito na
expresso do mRNA do marcador neural quando as blstulas so tratadas com 10-6 M de cido
retinico por 2 horas (suficiente para produzir girinos aceflicos). Efeito inibitrio pode ser visto
nos genes expressos mais anteriormente. (A de acordo com Ruiz i Altaba e Jessell, 1991; B de
acordo com Sive et al., 1990.)
o
jetad
Figura 15.35
o
Xwnt3a pode caudalizar o tecido neural anteri-
Embri
a
No in
Xwnt3
or. Explantes de ectoderma competente liga-
dos ao lbio dorsal do blastporo foram isola-
dos como na Figura 15.30. Os mRNAs espe-
cficos expressos foram identificados por PCR XAG1 Glndula do cimento
de transcriptase reversa. Nesta figura, os
marcadores neurais expressos mais anterior-
XANF2 Glndula pituitria
mente esto localizados mais ao alto. A
superexpresso de Wnt3a no embrio com
Xwnt3a anulou os marcadores neurais mais OtxA Crebro anterior
anteriores. As regies ectodrmicas de em-
bries no injetados ou aquelas superexpres-
sando uma protena controle (prolactina) no En2 Crebro intermedirio
foram afetadas. (de McGrew et al., 1995; foto-
grafia cortesia de R. T. Moon.) Krox20 Crebro posterior
Informaes adicionais
& Especulaes
Uma das mais espetaculares descobertas desta dcada foi que moscas e camundon-
gos usam os mesmos genes homeobox para especificar regies ao longo do eixo
ntero-posterior. Entretanto, a anlise dos genes homeobox em Xenopus no pro-
grediu tanto devido a impossibilidade de se fazer anulao (knock out) de genes
nessas rs. Como veremos no Captulo 16, o cido retinico capaz de converter
uma parte do corpo do camundongo em uma parte mais posterior, causando a ex-
presso de genes homeobox que so caractersticos da regio mais posterior. Isso
tambm se d em Xenopus. Tanto o cido retinico como o eFGF se mostraram
capazes de alterar a expresso de genes Hox. Pownall e colegas (1996) mostraram
que o eFGF promove a expresso de genes Hox posteriores no ectoderma de Xeno-
pus, e tanto Cho e colegas (1991b) como Sive e Cheng (1991) mostraram que o cido
retinico altera a expresso de genes homeobox em uma direo posterior tanto no
ectoderma como no mesoderma. Assim, em uma variao do modelo de dois estgi-
os antes proposto, agora prope-se que a induo neural leva criao de uma
determinao neural anterior (do tipo crebro anterior) que influenciada por um
gradiente posterior de cido retinico, eFGF ou Wnt3a para a criao de
especificidades regionais (Otte et al., 1991; Sharpe, 1991). Tal gradiente de cido
retinico (dez vezes maior no posterior do que no anterior) foi detectado no meso-
derma dorsal de nurulas precoces de Xenopus (Chen et al., 1994).
*Apesar das indues que se seguem s indues embrionrias primrias terem, freqente-
mente, sido chamadas de secundrias, no existe diferena conceitual entre elas. Retornaremos s
indues secundrias no Captulo 17.
CAPTULO 15 Especificao Condicional 629
Mais ainda, uma vez que um tecido foi induzido, ele pode induzir outros tecidos.
Os blastmeros D1 do centro de Nieuwkoop induzem as clulas acima dele a se torna-
rem o organizador. O organizador ento induz o ectoderma acima dele a se tornar o
tubo neural. O tubo neural pode induzir o ectoderma da cabea a formar o cristalino. E
as indues continuam. Mais ainda, um tecido pode induzir vrios outros. O organiza-
dor induz tanto o mesoderma como o ectoderma. A Sonic hedgehog da notocorda no
induz somente a placa do assoalho no tubo neural; originando-se tanto da placa do
assoalho como da notocorda, A Sonic hedgehog induz o somito ventral mediano a se
tornar o esclertomo formador de cartilagem (veja Figura 9.6; Fan e Tessier-Lavigne,
1994; Johnson et al., 1994). Continuaremos nossa discusso de indues secundrias
no Captulo 17.
Estamos finalmente dando nomes aos agentes e fatores solveis dos embrio-
logistas experimentais. Estamos finalmente delineando as vias intercelulares dos fato-
res parcrinos e fatores de transcrio que constituem os primeiros passos nos pro-
cessos da organognese. O programa internacional de pesquisa iniciado pelo labora-
trio de Spemann na dcada de 1920 est chegando a sua concluso. Mas essa pes-
quisa encontrou nveis de complexidade muito mais profundos que Spemann teria
concebido, e da mesma forma que seus experimentos nos mostraram o quanto no
sabamos, assim hoje, enfrentamos um novo conjunto de problemas gerados pelas
nossas solues aos problemas mais velhos: Como iniciado o centro de Nieuwkoop?
Qual a atividade de Siamois? Como o mesoderma se torna padronizado? Como so
limitados os sinais da notocorda? Como a notocorda se diferencia? Como o ectoderma
adquire sua competncia?
Analisando o campo em 1927, Spemann observou:
Ns ainda estamos em presena de enigmas, mas no sem a esperana de os
resolver. E enigmas com esperana de soluo - o que mais um cientista poderia
desejar?
LITERATURA CITADA
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CAPTULO 16 Estabelecimento dos eixos corporais em mamferos e aves 635
635
636 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Ave
Vitelo
(Openheimer, 1936; Tung et al., 1945; Grunwald e Wilson, 1996) que o futuro lado
dorsal da clula vitelnica age como um centro de Nieuwkoop, transferindo fatores
maternos para o blastoderma (Figura 16.1). Nos embries de aves (e presumivelmente
tambm em mamferos) a zona marginal posterior (PMZ) pode ser equivalente ao cen-
tro de Nieuwkoop (Eyal-Giladi e Khaner, 1989; Khaner e Eyal-Giladi, 1989). Experimen-
tos de transplante demonstraram que esse o local onde as clulas se renem para
formar a linha primitiva. Pensou-se que o hipoblasto tinha habilidade indutora de
eixos, mas estudos recentes (Khaner, 1995) sugerem que essa capacidade reside so-
mente na PMZ. O hipoblasto parece apenas dirigir os movimentos subseqentes da
linha. A identificao da zona marginal posterior do pinto com o centro de Nieuwkoop
reforada pela descoberta de que o homlogo Vg1 do pinto transcrito nessa
regio. Alm disso, quando clulas cultivadas secretando a protena Vg1 madura
(processada) do pinto so colocadas ao longo das bordas laterais do blastoderma,
elas induzem a formao de novas linhas primitivas (Seleiro et al., 1996). Tal como o
centro Nieuwkoop de anfbios, a futura posio da PMZ fixada pouco depois da
fecundao e depende da gravidade e rotao.
A expresso do gene Hox pode ser vista ao longo do eixo dorsal (tubo neural,
crista neural, mesoderma paraxial e mesoderma superficial) do limiar anterior do
crebro posterior at a cauda. Tambm vista nos derivados desses tecidos,
especialmente os derivados das clulas da crista neural. Por exemplo, a regio do
crebro anterior da cabea d origem no s ao crebro anterior e seus gnglios
cranianos, mas tambm cartilagem das orelhas, mandbula e pescoo, arcos
articos, e rgos como as glndulas tireide, paratireide e timo. Conforme dis-
cutido no Captulo 7, o tubo neural do crebro posterior divide-se em unidades
segmentais chamadas rombmeros. A migrao das clulas da crista neural craniana
tambm parece estar organizada no padro rombomrico fazendo com que um
gnglio craniano especfico e o arco branquial por ele inervado se originem da
crista do mesmo rombmero (Lumsden et al., 1991). Essas clulas da crista neural
tambm parecem reter informao posicional de seu lugar original ao longo do eixo
ntero-posterior. Quando clulas pr-migratrias da crista neural de aves que nor-
malmente migrariam para o primeiro arco branquial (para formar a cartilagem da
mandbula) so colocadas na regio da crista cujas clulas normalmente migram
para o segundo arco branquial (para formar a cartilagem hiide), as clulas enxer-
tadas da crista neural migram para o segundo arco branquial, mas elas formam as
estruturas (cartilagem da mandbula) caractersticas do primeiro arco. Alm disso,
elas iro interagir com o ectoderma superficial e o mesoderma paraxial para formar
a musculatura do primeiro arco (bico e msculos da mandbula). Isso sugere
marcadamente que antes de migrar, as clulas da crista neural j esto comprome-
tidas a formar ao menos algumas das estruturas apropriadas para seu nvel no eixo
ntero-posterior (Noden, 1988).
Esse compromisso posicional pode ser o resultado dessas clulas expressarem
combinaes particulares de genes Hox. Por exemplo, os genes Hox-B so expres-
sos no presuntivo tubo neural do camundongo antes da formao da crista neural,
e quando as clulas da crista neural migrarem, iro reter o padro de expresso do
gene Hox-B caracterstico do seu lugar de origem (Hunt et al., 1991a). Com uma
nica exceo conhecida (Hoxb-1), o limite anterior de cada gene Hox pra no
rombmero mais prximo, dois rombmeros frente do mais anterior do prximo
gene Hox (Wilkinson et al., 1989; Keynes e Lumsden, 1990). Conforme representa-
do na Figura 16.4, os genes homeobox Hoxb-2, -3, e 4 so encontrados atravs
de toda a medula espinhal, mas o Hoxb-2 pra no limiar dos rombmeros 2 e 3; o
Hoxb-3 pra no limiar 4/5, e o Hoxb-4 pra na fronteira entre o sexto e stimo
CAPTULO 16 Estabelecimento dos eixos corporais em mamferos e aves 639
Camundongo
Medula
espinhal
Cervical
Tor
cica
ar
mb
Crebro
Lo
intermedirio
Crebro Crebro
anterior posterior
640 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
(A) (B)
Arcos viscerais Sistema nervoso
Arco 4 3 2
Branquial 2
Figura 16.4
Arco Transcrio do gene Hox. (A) Diagrama do padro de transcrio
Branquial 3 do gene Hox no camundongo. Notar que o padro est distribudo
entre o tubo neural e o mesoderma (de modo que as clulas da crista
do terceiro rombmero entrem no segundo arco branquial) e os
Medula limites da expresso do gene Hox coincide com os limites
Arco espinhal
rombmeros. (B) Padres de transcrio de genes hometicos Hox-
Branquial 4
B no crebro posterior do camundongo de 9,5 dias. (A de McGinnis
e Krumlauf, 1992; B de Hunt et al., 1991a.)
Os padres de expresso dos genes Hox murinos sugerem um cdigo pelo qual certas
combinaes de genes Hox especificam uma determinada regio do eixo ntero-poste-
rior (Hunt e Krumlauf, 1991). Conjuntos particulares de genes parlogos fornecem
identidade segmentria ao longo do eixo ntero-posterior do corpo. A evidncia para
tal cdigo vem de trs fontes:
CAPTULO 16 Estabelecimento dos eixos corporais em mamferos e aves 641
Figura 16.5
O cdigo do somito Hox no tronco e no pes-
coo do embrio do camundongo. As reas
principais de expresso esto indicadas em
cor mais escura, enquanto as regies poste-
riores da expresso no so to definidas como
Experimentos de eliminao (knock-out) ou de gene alvo (gene targeting) sugere a cor mais clara. O efeito do cido
(veja Captulo 2) nos quais so construdos camundongos carentes de ambas retinico o de empurrar a expresso gnica
cpias de um ou mais genes Hox particulares. anterior mais posteriormente e a expresso
Homeose induzida por cido retinico, na qual embries de camundongo gnica posterior mais anteriormente. (Segun-
do Kessel, 1992.)
tratados com o cido retinico tm um padro de expresso diferente do gene
Hox ao longo do eixo ntero-posterior e diferenciao anormal de suas estru-
turas axiais.
Anatomia comparada, pela qual tipos de vertebrados em diferentes espcies
so correlacionados com a constelao de genes Hox nesses vertebrados.
Quando Chisaka e Capecchi (1991) expulsaram o gene Hox-3 de camundongos
endgamos, os mutantes homozigotos Hoxa-3 morreram logo aps o nascimento. Na
autpsia mostrou-se que esses animais tinham a cartilagem do pescoo anormalmente
curta e grossa e as glndulas tireides, paratiredes e timos severamente deficientes
ou ausentes. Seus coraes e vasos sangneos estavam tambm malformados (Figu-
ra 16.6). Esse conjunto de malformaes muito semelhante desordem congnita
humana, a sndrome de DiGeorge, na qual so encontradas essas mesmas deficincias
em estruturas derivadas da crista neural. Anlises ulteriores mostraram que o nmero
e a migrao de clulas da crista neural que formam essas estruturas so normais.
Assim, parece que os genes Hoxa-3 so responsveis pela especificao do destino
das clulas da crista neural craniana e pela permisso para que essas clulas se dife-
renciem e se proliferem formando a cartilagem do pescoo e os derivados do quarto e
sexto arcos farngeos (Manley e Capecchi, 1995).
642 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Figura 16.6
Desenvolvimento deficiente de estrutura de arcos farngeos derivados
da crista neural em camundongos deficientes em Hox-3. direita, um
embrio de 10,5 dias de um camundongo Hox-3 heterozigoto mostrando
desenvolvimento normal do timo (bolsa 3), paratireide (bolsa 4) e ou-
tras estruturas. esquerda, um mutante homozigoto deficiente em Hox-
3 no apresenta desenvolvimento apropriado dessas estruturas. (de
Chisaka e Capecchi, 1991.)
Outro experimento de alvejar genes eliminou o gene Hoxa-1 (Lufkin et al., 1991). A
expresso de Hoxa-1 se sobrepe ao gene Hoxa3, mas tambm expressa mais
anteriormente que Hoxa-3. Esses embries sem genes Hoxa-1 funcionais mostram
uma constelao de anormalidades que indicam especificao deficiente dos
rombmeros 4-7. Esses mutantes freqentemente deixam de fechar seus tubos neurais,
no tm estruturas do ouvido interno, e no tm os gnglios do crebro posterior (que
formam os nervos acstico, glossofarngeo e vago), derivados desses rombmeros.
No entanto, no foram encontradas malformaes dos arcos farngeos, glndulas
tireide, paratireide e timo, ou cartilagem do pescoo. Assim, defeitos dos mutantes
Hoxa-1 somente so vistos na regio anterior da rea de expresso desse gene. (
possvel que suas funes no sejam requeridas ou sejam redundantes na poro
posterior a seu alcance.) Ao contrrio dos defeitos (que se limitam crista neural) de
camundongos Hox3 deficientes, os defeitos de Hox-1 so notados no sistema nervo-
so central e no tecido derivado do placdio, assim como no mesoderma paraxial. A
eliminao de Hoxa-2 tambm produz camundongos cujas clulas da crista neural
foram re-especificadas. Elementos cranianos normalmente formados pelas clulas da
crista neural do segundo arco branquial (estribo, ossos estilides) esto faltando e
so substitudos pela duplicao de estruturas do primeiro arco branquial (bigorna,
martelo, etc.) (Gendron-Maguire et al., 1993; Rijli et al., 1993). Assim, sem certos genes
Hox, alguns rgos regionalmente especficos ao longo do eixo ntero-posterior dei-
xam de se formar ou so re-especificados para outras regies. A evidncia inicial apia
a noo que diferentes conjuntos de genes Hox so necessrios para a especificao
completa de toda regio do eixo e que um conjunto de genes parlogos pode ser
responsvel por diferentes subconjuntos de rgos nessas regies.
Figura 16.7.
uma cpia da primeira vrtebra cervical (o atlas), e a deleo do gene Hoxa-5 causa a Transformaes hometicas no camundongo
transformao posterior da stima vrtebra cervical (pescoo) em uma vrtebra torcica induzidas por eliminao de genes expressos
formadora de costela (Jeannotte et al., 1993; Ramirez-Solis et al., 1993). no tronco. (A) Transformao parcial da pri-
Pode-se conseguir severas transformaes axiais eliminando dois ou mais genes do meira vrtebra lombar em uma vrtebra torcica
conjunto parlogo. Camundongos homozigotos para a deleo de Hoxd-3 tm anorma- pela eliminao de um gene Hox-8. Vrtebras
lidades moderadas da juno crnio-cervical (o atlas est reduzido em tamanho), en- torcicas, mas no lombares, apresentam asso-
quanto camundongos homozigotos para a deleo de Hoxa-3 no tm anormalidades ciao com as costelas. (B,C) Transformao
parcial da segunda vrtebra cervical em uma
nessa juno (veja a discusso anterior sobre esse mutante). Quando os dois mutantes
segunda cpia da primeira vrtebra cervical pela
so criados juntos, ambos conjuntos de problemas ficam mais severos. Os camundon- eliminao do gene Hoxb-4. (B) O camundon-
gos sem conjuntos de genes Hoxa-3 nem Hoxd-3 no tm osso atlas algum, e as cartila- go tipo selvagem tem a primeira vrtebra carac-
gens hiide e tireide so de tamanho to reduzido que h buracos no esqueleto (Condie terizada por um tubrculo ventral. (C) No ca-
e Capecchi, 1994). Parece que ocorrem interaes sinrgicas entre os produtos dos mundongo mutante, a segunda vrtebra cervical
genes Hox e que para algumas funes, um dos parlogos pode substituir ao outro. tambm tem esse tubrculo (seta). (A de Le
A regulao dos genes Hox de vertebrados parece ser controlada por fatores Mouellic et al., 1992; B e C de Ramirez-Solis
semelhantes aqueles que regulam os genes HOM-C em moscas. Em Drosophila, h et al., 1993; Fotografias cortesia dos autores.)
um gene homeobox, caudal, que reside externamente ao complexo HOM-C. Esse gene
de efeito materno em Drosophila funciona para co-direcionar a expresso dos genes
HOM-C mais posteriores (AbdB). Um homlogo mamfero desse gene, Cdx1, tem um
papel semelhante no mesoderma paraxial. Ele torna-se expresso na linha primitiva
durante a gastrulao, quando a especificao do eixo ntero-posterior est sendo
feita; e desligado pouco depois. Se esse gene for deletado do embrio do camundon-
go, os padres de expresso dos genes Hox mudam posteriormente para um somito, e
estruturas esquelticas anteriores so encontradas mais posteriormente (Subramanian
et al., 1995). De maneira semelhante, a represso de genes Hom-C de Drosophila
mediada por um conjunto de genes que inclui extra sex combs (esc). Se o homlogo
murino desse gene (embryonic ectoderm development; eed) desempenhar o mesmo
papel, poder-se-ia esperar que mutaes em eed resultassem na anti-depresso de
genes Hox e na transformao hometica de estruturas anteriores em posteriores.
Isso realmente acontece. Genes eed mutantes causam a transformao de estruturas
esquelticas anteriores em posteriores (Schumacher et al., 1996).
Tais alteraes hometicas tambm podem ser vistas quando a embries de camun-
dongos so administradas doses teratognicas de cido retinico. O cido retinico
exgeno dado a embries in utero pode fazer com que certos genes Hox sejam expres-
644 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Figura 16.8
Embries de camundongos cultivados sob con-
dies controle no dia 8 (A,C), ou em um meio sos em grupos de clulas que usualmente no os expressam (Conlon e Rossant, 1992;
contendo retinides teratognicos (B,D). No Kessel, 1992). Alm disso, as anormalidades crnio-faciais de embries murinos de
dia 2 (A,B), o primeiro arco farngeo dos em- mes tratadas com doses teratognicas de cido retinico (Figura 16.8) podem ser
bries tratados tem uma aparncia encurtada e mimetizadas quando se faz com que o Hoxa-7 se expresse atravs do embrio (Balling
achatada e aparentemente se fundiu com o se-
et al., 1989). Se doses altas de cido retinico podem ativar genes Hox em clulas
gundo arco farngeo. No dia 17 (C,D) podem
ser vistas malformaes crnio-faciais na carti-
inapropriadas ao longo do eixo ntero-posterior, e se essa constelao de genes hox
lagem derivada da crista neural dos embries ativos especifica a regio do eixo ntero-posterior, ento camundongos tratados com
tratados. A cartilagem de Meckel est comple- cido retinico no tero devem mostrar transformaes hometicas manifestadas por
tamente deslocada da regio mandibular (ma- malformaes ocorrendo ao longo desse eixo. Kessel e Gruss (1991) acharam que esse
xilar inferior) para a regio maxilar (boca supe- era o caso. Camundongos tipo selvagem tm 7 vrtebras cervicais (pescoo), 13 vr-
rior). As cartilagens do martelo e da bigorna tebras torcicas, e 6 vrtebras lombares (em adio s vrtebras sacrais e caudais).
tambm no se formaram. (A e B de Goulding Quando expostos ao cido retinico no dia 8 da gestao, a primeira ou as duas
e Pratt, 1986; C e D de Morriss-Kay, 1993; primeiras vrtebras lombares foram transformadas em vrtebras torcicas, enquanto a
Fotografias cortesia dos autores.)
primeira vrtebra sacral freqentemente se tornou uma vrtebra lombar (Figura 16.9).
Em alguns casos, a regio posterior inteira do embrio de rato deixou de se formar.
Essas alteraes estruturais eram correlacionadas com alteraes na constelao dos
genes Hox expressos nesses tecidos. Por exemplo, quando o cido retinico foi dado
a embries no dia 8 (durante a gastrulao), a expresso de Hoxa-10 foi deslocada
posteriormente, e um conjunto adicional de costelas se formou onde havia a primeira
Figura 16.9
cido retinico administrado a ratas grvidas
altera a expresso do gene Hox e o fentipo
em fetos. A figura mostra mudanas no es-
queleto axial (vrtebras e costelas) causadas
por exposio ao cido retinico no tero no
dia 8. (A) O tipo selvagem tem 7 vrtebras
cervicais, 13 torcicas, 6 lombares, 4 vrte-
bras sacrais fundidas e vrtebras caudais.
Esse arranjo alterado pelo cido retinico
dado s mes. Em alguns casos (B,C) o cido
retinico causou a perda de vrtebras lomba-
res, sacrais e caudais. (A e B segundo Kessel
e Gruss, 1991; C de Kessel, 1992; Fotografi-
as cortesia dos autores.)
CAPTULO 16 Estabelecimento dos eixos corporais em mamferos e aves 645
vrtebra lombar. Quando genes Hox posteriores no foram expressos, a parte caudal
do embrio deixou de se formar. *
No sistema nervoso central, o cido retinico induz a expresso anterior dos genes
hox que usualmente so somente expressos mais posteriormente, e fazem com que os Medula
rombmeros 2 e 3 assumam a identidade dos rombmeros 4 e 5 (Figura 16.10; Marshall Espinhal
et al., 1992; Kessel, 1993). Nessa situao, o nervo trigmeo (que se origina do
rombmero 2) transformado em outro nervo facial (caracterstico do rombmero 4), e Dia 10.5
anormalidades do primeiro arco branquial indicam que as clulas da crista neural do
segundo e terceiro rombmeros foram transformadas em fentipos mais posteriores.
O cido retinico provavelmente desempenha um papel na especificao axial
durante o desenvolvimento normal, e a fonte desse cido provavelmente o ndulo
de Hensen (Hogan, 1992; Maden et al., 1996). Desde que o ndulo precoce parece
conter os precursores tanto de estruturas anteriores como posteriores, possvel
que a especificao dessas clulas dependa da quantidade de tempo despendido no
meio de alta concentrao de cido retinico no ndulo. Quanto mais tempo for
despendido no ndulo, mais posterior ser a especificao. Isso visto ocorrer em
cultura, quando clulas embrionrias de carcinoma expressam mais genes Hox pos-
teriores quanto maior for o tempo de sua exposio ao cido retinico (Simeone et
al., 1990). Alm disso, Hoxa-1, Hoxb-1 e Hoxd-4 tem, cada um, elementos sensveis
Vescula
ao cido retinico nas regies reguladoras a montante (veja Captulo 21). A adminis- tica
trao de cido retinico exgeno iria mimetizar a situao normalmente encontrada
somente pelas clulas posteriores. Avantaggiato e colegas (1996) mostraram que
quando o cido retinico dado a embries durante os estgios de meia-linha, as
regies mais anteriores do tubo neural no se formam e so substitudas por tecido Expresso de hoxb-1
parecendo o crebro anterior. Isso se correlaciona com uma perda de expresso Expresso de Krox-20
gnica (Emx1, Emx2) do crebro anterior e mdio nessa regio, e sua substituio Expresso hoxb-2
por genes Hox especficos para o crebro posterior como Hoxb-1. A evidncia aponta da crista neural
para um cdigo Hox enquanto constelaes diferentes de genes Hox especificam as
caractersticas regionais ao longo do eixo ntero-posterior. Alm disso, como esses
padres de expresso so semelhantes para mamferos e insetos, parece que existe
um plano de desenvolvimento comum sobre o qual construdo o eixo ntero-
posterior da maioria dos animais.
*Hoxa-10 tambm importante para a especificao do padro axial dos dutos genitais.
Eliminaes de Hoxa-10 criam camundongos cuja regio uterina superior transformada em tecido
parecendo o oviduto. Essa regio coincide com o limite anterior da expresso de Hoxa-10 no duto
Mlleriano tipo selvagem (Benson et al., 1996).
646 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Figura 16.11
Representao esquemtica do padro verte-
bral do camundongo e do pinto ao longo do Cervical Torcico Lombar Sacral Coccgeas
eixo ntero-posterior. Os limites de certos genes
Hox foram colocados nestes domnios. Pinto
Vrtebras
Somitos
Vrtebras
Camundongo
Informaes adicionais
& Especulaes
U
M DOS MAIS CELEBRADOS (e nica coisa ligando uma pata de inseto, um de uma natureza composta de espcies
custicos) debates em biologia foi p de molusco e uma perna de vertebrado intrinsecamente diferentes, todos os ani-
realizado no apogeu da Revolu- era a sua funo locomotora. Anatmica e mais estavam unidos em uma espcie de
o Francesa em Paris. A, na Academie des embriologicamente, elas eram entidades dis- irmandade, reminescente da egalit et
Sciences, E. Geoffroy Saint-Hilaire contes- tintas, no-comparveis. fraternit revolucionrias (Appe, 1987).
tou Georges Cuvier sobre a natureza do rei- Geoffroy Saint-Hilaire enfatizou as se- Desde aquele tempo, diferentes tradi-
no animal. Cuvier, o eminente anatomista melhanas entre todos os filos. Ele argu- es biolgicas enfatizaram as diferenas,
comparativo que tinha tornado a zoologia mentou que todos os animais estavam or- ou as semelhanas entre os organismos. A
uma cincia francesa enfatizou as diferen- ganizados de acordo com os mesmos prin- anatomia comparada (seguindo Cuvier)
as que separam os filos entre si. No pode- cpios bsicos, e que um inseto no era enfatiza as diferenas, enquanto a morfolo-
ria haver uma Corrente de Existncia li- mais que um vertebrado virado de cabea gia (seguindo Geoffroy Saint-Hilaire) cele-
gando todos os organismos, nem poderia para baixo. Uma cabea era formada em bra as unidades subjacentes. A Gentica
haver qualquer maneira que partes de um uma extremidade, uma cauda na outra, e e a Biologia celular olham para todos os
inseto poderiam ser vistas como homlogas todos os animais tinham tubos neurais, animais (e plantas) como compostos basi-
daquelas de um molusco ou vertebrado. A fossem eles dorsais ou ventrais. Em lugar camente da mesma maneira, seguindo as
CAPTULO 16 Estabelecimento dos eixos corporais em mamferos e aves 647
mesmas leis, enquanto a embriologia tradi- Recebendo uma Cabea: Mais Drosophila Camundongo
cionalmente via cada espcie se desenvol- Homologias Vertebradas e Invertebradas
vendo de uma maneira diferente. Em Drosophila, o crebro composto de Crebro
anterior
Recentemente, porm, a embriologia trs neurmeros. Esses so especificados
est fornecendo evidncia para a unidade por dois genes contendo homeobox que Crebro
subjacente da natureza animal. Jonathan no esto ligados regio HOM-C; esses interme-
dirio
Slack e seus colegas (1993) definiram um genes so orthodenticle (old), que ex-
animal como um organismo que exibe um presso predominantemente no neurmero
particular padro espacial de expresso do mais anterior, e empty spiracle (ems), ex- Crebro
gene Hox. eles propem que o plano cor- presso nos dois neurmeros cerebrais posterior
poral de cada filo tipificado em um parti- posteriores. Mutaes de perda-de-fun- r1-r8
cular estgio filotpico durante seu de- o de old eliminam o neurmero mais
senvolvimento. Para vertebrados, isso se- anterior do embrio de Drosophila em
ria o estgio do broto caudal (onde, apesar desenvolvimento, e mutaes de perda-
de suas diferentes clivagens e gastrulaes, de-funo de ems eliminam o segundo e
os embries de vertebrados convergem e terceiro neurmeros (Hirth et al., 1995). Em
tm brotos caudais e bolsas farngeas); para rs e camundongos, os homlogos des-
insetos, a banda germinativa completamen- ses genes (Otx-1, Otx-2, Emx-1, Emx-2)
Medula
te segmentada o local onde os embries tambm so expressos no crebro (Simeo- espinhal
convergem. Nesse estgio, o padro de ne et al, 1992), embora os padres exatos
expresso gnica hometica dos genes de transcrio no sejam idnticos (Figu-
Hox/HOM-C visto mais claramente, sen- ra 16.12). O gene Otx-2 foi eliminado como
do notavelmente semelhante em todos ani- gene alvo (Acampora et al., 1995; Matsuo
mais. Os genes parecendo com Deformed et al., 1995; Ang et al., 1996), e os camun-
e labial so expressos no anterior do em- dongos resultantes tinham deficincias
brio; aqueles parecendo com Abdominal neurais e mesodrmicas da cabea anteri-
B so expressos no posterior. Mesmo ores para o rombmero r3. Em seres hu-
nematides e hidras tm agregados de manos, mutaes de EMX-2 levam uma
genes hometicos que parecem ser expres- condio rara conhecida como esquizo-
sos da mesma maneira ntero-posterior encefalia, na qual h sulcos atravessan-
(Schummer et al., 1992; Wang et al., 1993). do todo o crtex cerebral (Brunelli et al., Figura 16.12
Embora fungos e plantas tenham genes 1996). Apesar dos genes old e ems de Expresso dos genes reguladores em Droso-
homeobox, esses no so homlogos com Drosophila serem especificados pelos phila e no camundongo enfatizando os genes
aqueles dos animais, nem esto arranjados gradientes Bicoid e Hunchback, e os trans- expressos na cabea. A1-9 so segmentos ab-
na mesma ordem cromossmica, nem es- critos Otx e Emx serem induzidos pelo dominais; b1-3 so segmentos neurmeros
to expressos pelo mesmo padro ntero- mesoderma dorsal anterior, parece que (cerebrais); 1b, md e mx so os segmentos
posterior. Assim, o padro espacial da ex- esses mesmos genes so usados para es- labial, mandibular e maxilar, respectivamente;
presso do gene Hox est sendo usado pecificar as regies cerebrais. r, rombmero; T1-3, segmentos torcicos. (Se-
como a caracterstica subjacente primria gundo Thor, 1995.)
definindo a existncia animal. Essa obser-
*Alm de expressar os homlogos dos genes contendo homeobox ems e otd, o crebro de
vao ainda no foi testada em vrios filos, mamfero tambm expressa o homlogo do gene tailess. Esse gene expresso nas pores mais
e ser muito interessante ver se esse pa- anteriores e posteriores do embrio de Drosophila, e um membro da famlia dos receptores
dro geral visto em todo o reino animal. esterides (Monaghan et al., 1995).
sonic hedgehog
cNR-1 Notocorda
(nodal)
Receptor IIa
da activina
Ndulo de
Hensen
Linha primitiva
sonic hedgehog
isso iria bloquear a transcrio no lado direito do ndulo. Sonic hedgehog seria
assim somente expresso no lado esquerdo do ndulo. A protena Sonic hedgehog
seria ento secretada no lado esquerdo do embrio ativando o gene nodal no Sonic
mesoderma da placa lateral que contm os precursores do corao. A, poderiam hedgehog Activina
causar acmulo da protena flectina no lado esquerdo da matriz extracelular. Expe-
rimentos sugerem que esse caminho uma boa aproximao. A activina realmen- cNR-1 no Receptor
te sintetizada no momento apropriado e somente do lado direito do ndulo de mesoderma IIa da
da placa lateral activina
Hensen. Se bloqueada pela adio experimental de Follistatin, a assimetria da
expresso de sonic hedgehog desaparece, e o corao tem uma chance igual de
voltar-se para qualquer dos lados (Levin et al., 1997). Quando gotas impregnadas
com activina foram colocadas no lado esquerdo do ndulo de Hensen, induziram
a sntese de cActRIIa nesse lado, e o gene shh (usualmente expresso somente do Tubo cardaco
lado esquerdo) foi reprimido. Isso, por sua vez, suprimiu a transcrio de nodal.
Nessa situao, o tubo cardaco se formou aleatoriamente, tendo uma probabilida-
de igual de ir para a esquerda ou para a direita. Uma condio semelhante foi
produzida quando clulas secretando Sonic hedgehog foram implantadas no lado
direito do ndulo. Nesse caso, Nodal foi induzida simetricamente no mesoderma
da placa lateral, e o corao teve 50 porcento de chance de ter um tubo esquerda
(Figura 16.15). A formao do eixo esquerdo-direito no camundongo tambm pare-
ce usar receptores de activina e protena nodal, porm no parece ligar os dois
atravs de Sonic hedgehog (Collignon et al., 1996). O pinto e o camundongo
parecem ter variaes sutis sobre como construir seus eixos. [mamaxis2.html] 40-45 horas
Vrios caminhos diferentes teratognese, eliminao de genes, estudos de genes
organizadores especficos, gentica clnica, at mesmo gentica da mosca das frutas
esto nos conduzindo compreenso de um mistrio fundamental: como o embrio
vertebrado comea a saber distinguir o lado de cima do lado de baixo, a boca do nus,
e a esquerda da direita. Aprendemos mais sobre isso nos ltimos cinco anos do que
em todos os anos que os precederam.
650 PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
(A)
Notocorda
Ndulo de Hensen
(B)
Pastilha de
Sonic hedgehog
Figura 16.15
Expresso ectpica de sonic hedgehog leva expresso simtrica de cNR-1 (nodal) e aleatorizao
do volteamento cardaco. (A) Expresso tipo selvagem de cNR-1, mostrando expresso no lado
esquerdo. Quase todos os coraes desenvolvem voltas do lado direito. Esse padro tambm
visto quando pastilhas contendo substncias controles so implantadas no lado direito do ndulo
ou quando uma pastilha contendo Sonic-hedgehog implantada no lado esquerdo (onde shh em
geral expresso). (B) Quando pastilhas de Sonic hedgehog so implantadas no lado direito do
ndulo, a expresso de cNR-1 se torna bilateralmente simtrica. (de Levin et al., 1995; fotografias
cortesia dos autores.)
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Interaes Celulares
Durante a Formao do rgo
655
656 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Competncia e receptores
Deve-se notar que nos princpios acima, o tecido responsivo deve ser competente
para responder. Competncia a capacidade de responder a um sinal indutivo
(Waddington, 1940). Isso no um estado passivo, mas uma condio adquirida.
Quando detalhamos a induo do tubo neural, observamos que o ectoderma da
gstrula capaz de ser induzido pelo lbio dorsal do blastporo ou seus derivados
mesodrmicos. Assim, o ectoderma da gstrula dito ser competente para respon-
der a estmulos indutivos. Essa competncia para a induo neural adquirida du-
rante a clivagem tardia e perdida durante os estgios tardios da gstrula. medida
que essa competncia para responder induo pelo lbio dorsal diminui, algumas
regies do ectoderma adquirem competncia para responder a indutores do cristali-
no. Mais tarde ainda, a competncia dos indutores do cristalino perdida, mas o
ectoderma pode responder a indutores do placdio do ouvido (Serventnick e
Grainger, 1991). Portanto, a prpria competncia um fentipo diferenciado que
distingue clulas tanto espacial como temporalmente.
Considera-se, em geral, que a competncia pode ser adquirida de vrias maneiras.
Primeiro, uma clula pode tornar-se competente sintetizando um receptor para a mol-
cula indutora. Como veremos mais adiante neste captulo, uma clula B no compe-
tente para responder induo por clulas T at que tenha ligado antgenos. Quando
os antgenos so ligados, eles criam um conjunto de receptores que os capacitam a
responder s molculas indutoras secretadas pelas clulas T. Esse mecanismo de
competncia tambm visto na induo da diferenciao de neurnios simpticos
(Birren e Anderson, 1990; Cattanco e McKay, 1990). Desde o incio da dcada de 1960,
era conhecido que a diferenciao dos neurnios simpticos depende do fator de
crescimento nervoso (NGF); porm, quando as clulas progenitoras desses neurnios
foram isoladas, elas no responderam ao NGF. Alm disso, no tinham receptores
capazes de ligar NGF. Em vez disso, para se diferenciarem, essas clulas tinham que ser
primeiro expostas ao fator de crescimento de fibroblasto (FGF). Essa exposio resul-
tava na expresso de NGF nas suas membranas celulares. Tais clulas tratadas por
FGF podiam responder ao NGF (Figura 17.1). A clula progenitora original no era
competente para ser induzida pelo NGF porque no tinha o receptor NGF. Quando
esse foi induzido pelo FGF, tornou-se competente para responder ao NGF.
* fcil distinguir as relaes permissivas e instrutivas por uma analogia com uma situao mais
familiar. Este livro foi possvel ser feito pelas interaes permissivas e instrutivas. Os revisores
podem convencer-me a alterar o material no captulo. Isso uma interao instrutiva, j que a
informao passar a ser diferente daquela que teria sido. Porm, a informao no livro no poderia
ter sido expressa sem as interaes permissivas com o editor e o impressor.
CAPTULO 17 Interaes Proximais de Tecidos 657
Receptor NGF
Neurnio
simptico maduro
Figura 17.1
Induo e competncia de uma linhagem precursora de neurnio simptico. A clula germinativa
original uma clula mitoticamente ativa que no tem receptores NGF, mas que pode responder
a FGF. Isso d origem a uma clula neural primitiva que tem processos, mas ainda se divide. Esse
neurnio primitivo tem receptores para NGF. A clula responsiva ao NGF pode se diferenciar em
um neurnio simptico maduro que no se divide (caracterizado pelo seu grande soma, nuclolos
proeminentes, extensos processos e dependncia de NGF para a sobrevivncia). (Segundo Birren
e Anderson, 1990.)
Em segundo lugar, uma clula pode alcanar a competncia sintetizando uma mo-
lcula que permite o funcionamento do receptor. Receptores podem ligar o indutor,
mas isso no significa que os receptores sejam funcionais. Freqentemente, um recep-
tor atua enviando um sinal para o ncleo. Como vimos no Captulo 3, uma vez que o
receptor tenha fixado um ligante, ele ativa enzimas que fabricam o sinal para diviso ou
diferenciao. Se alguma dessas enzimas no estiver presente, o sinal no transmiti-
do. Assim, uma clula pode alcanar competncia sintetizando um elo faltante na
trajetria da sinalizao.
Em terceiro lugar, a competncia pode ser adquirida pela represso de um inibidor.
Se o inibidor estiver presente, uma clula poder ligar o indutor, enviar o sinal para o
ncleo e, apesar disso, no ser capaz de ser induzida. Por exemplo, os indutores
freqentemente causam alteraes da forma celular (como na induo do tubo neural).
Se a clula estiver inibida de mudar sua forma, ela no ser capaz de responder.
Fatores parcrinos
Interaes proximais so em geral mediadas por protenas que podem difundir-se ao
longo de curtas distncias para induzir mudanas em suas clulas vizinhas. Essas
protenas so muitas vezes chamadas de fatores parcrinos ou fatores de diferenciao
658 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
*Os fisiologistas descreveram trs maneiras principais pelas quais molculas solveis efetuam
mudanas em clulas. Os fatores parcrinos so molculas solveis que efetuam mudanas nas
clulas adjacentes, ou prximas, clula secretora. Em embriologia, tais fatores tm tambm sido
chamados de morfgenos. Os fatores endcrinos (hormnios) so molculas solveis que viajam
pelo sangue para realizar mudanas em clulas distantes da clula secretora. Os fatores autcrinos
so molculas que efetuam mudanas nas clulas que os secretaram. Para que os efeitos autcrinos
ocorram, a clula sintetiza uma molcula para qual ela tenha seu receptor prprio. Embora a
estimulao autcrina no seja comum, ela vista em clulas citotrofoblsticas placentrias que
sintetizam e secretam o fator de crescimento derivado das plaquetas, cujo receptor est na membra-
na celular daquelas clulas (Goustin et al., 1985). O resultado a proliferao explosiva daquele
tecido. Existe aprecivel debate sobre at que ponto fatores parcrinos podem operar. A activina,
por exemplo, pode difundir-se por muitos dimetros celulares e pode induzir diferentes conjuntos de
genes em diferentes concentraes (Gurdon et al., 1994, 1995). As protenas Vg1, BMP4 e Nodal,
porm, provavelmente somente trabalham sobre seus vizinhos adjacentes (Jones et al., 1996; Reilly
e Melton, 1996). Esses fatores podem induzir a expresso de outros fatores de curto alcance desses
vizinhos, e uma cascata de indues parcrinas pode ser iniciada.
CAPTULO 17 Interaes Proximais de Tecidos 659
(B)
A famlia hedgehog
Bucal
(bochecha)
Mesial N de esmalte
(interno)
N de esmalte
Figura 17.3
Concentrao do fator parcrino de crescimen-
to e fatores de diferenciao na regio onde a
A famlia Wnt
morfognese e a diferenciao esto ocorrendo
no molar inferior do embrio do camundongo
de 14 dias. (O limite do epitlio dental mos- Esta famlia compreende uma famlia de glicoprotenas ricas em cistena; existem pelo
trado em branco.) Os fatores parcrinos esto menos 15 membros dessa famlia em vertebrados. Seu nome advm da fuso do nome
sendo secretados pela clulas epiteliais no se do gene da polaridade segmentria de Drosophila, wingless, com o nome de um dos
dividindo, o n de esmalte. (O painel esquer- seus homlogos vertebrados, integrated. Como vimos no Captulo 7, a Wnt1 parece
da mostra que as clulas do n de esmalte no ser ativa na induo do mitomo nos somitos e no estabelecimento dos limites do
esto replicando DNA.) Acima de cada hibri- crebro intermedirio (McMahon e Bradley, 1990; Ku e Melton, 1993; Stern et al.,
dizao in situ est a reconstruo seriada da 1995). Conforme veremos em captulos subseqentes, os genes Wnt tambm so im-
rea de expresso. Veja pgina 682 para deta-
portantes no estabelecimento da polaridade dos membros vertebrados, tal como o
lhes. (de Jernvall, 1995; fotografias cortesia de
A. Vaahtokari, J. Jernvall e I. Thesleff.) wingless estabelece a polaridade durante o desenvolvimento dos membros dos inse-
tos. interessante que em ambos os casos ocorrem interaes com membros da
famlia hedgehog. Durante a gastrulao do camundongo Wnt3a, Wnt5a e Wnt5b so
todos expressos em regies sobrepostas mas distintas na linha primitiva. A Wnt3a a
nica protena Wnt vista nessa regio da linha que ir gerar o mesoderma dorsal
(somito), e camundongos homozigotos para o alelo zero do gene Wnt3a no tm
somitos caudais aos membros anteriores (Figura 17.4; Takada et al., 1994).
A trajetria sinalizando Wnt est intimamente conectada trajetria hedgehog.
Como mostrado na Figura 3.38, hedgehog estimula a expresso de wg e a protena
Wingless estimula a expresso de hedgehog. Em Drosophila, uma das coisas
feitas por Hedgehog para ativar a expresso gnica de wingless de contrapor a
represso da protena Patched. Uma vez eliminada a represso do gene patched, o
wingless pode ser expresso. A expresso ectpica do gene patched inibe o cresci-
mento celular. Pensa-se existir uma trajetria semelhante em humanos, e cada uma
das molculas na trajetria de Drosophila tem um homlogo humano. Em huma-
nos, mutaes espordicas de perda-defuno do gene patched em tecidos
somticos causam carcinomas de clulas basais, o tipo mais comum do cncer
CAPTULO 17 Interaes Proximais de Tecidos 661
(C) (D)
A superfamlia TGF
* Carcinomas de clulas basais, tumores da camada de clulas basais da epiderme, afligem cerca
de 750.000 pessoas cada ano nos Estados Unidos, a maioria desses cnceres se originando aps
exposio luz solar de pessoas de origem norte-europia. Por outro lado, a sndrome nevus de
clulas basais (s vezes chamada de sndrome de Gorlin) extremamente rara.
662 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Famlia BMP
TGF, eles ativam (provavelmente por fosforilao) um desses polipeptdeos de
50-kDa. Isso converte a protena smad em um fator de transcrio que pode pene-
trar no ncleo e ativar genes especficos (Graff et al., 1996; Hoodless et al., 1996;
osteogenina Liu et al., 1996).
Dorsalina 1 (pinto)
A FAMLIA TGF . Essa famlia inclui TGF1, 2, 3 e 5. TGF1 parece ser impor-
tante para a formao de rgo ramificados. TGF1 exgeno foi achado inibir o
crescimento de duetos em glndulas mamrias do camundongo (Daniel, 1989;
(braquipodismo) Silberstein et al., 1992), causar malformaes de glndulas salivares embrionrias
murinas (Hardman et al, 1994), e prevenir a ramificao dos rins embrionrios (Ritvos
(orelha curta) et al.,1995). Assim, TGF1 pode ser crtico no processo normal de ramificao,
talvez mediando esse e outros processos, intensificando a produo de componen-
tes da matriz extracelular como a fibronectina, colgenos I e IV (Ignotz e Massagu,
1968; Penttinen et al, 1988), osteonectina (Wrana e al., 1991) e proteoglicanos (Bassols
(camundongo)
e Massagu, 1988; Morales e Roberts, 1988), enquanto inibe a protelise da matriz
celular (Edwards et al, 1987; Saksela et al., 1987). Isso poderia ter um efeito lquido de
estabilizao da estrutura tissular. Os efeitos exatos das protenas TGF depen-
dem, muitas vezes, do tipo celular que encontram, e a mesma TGF pode ter efeitos
(Xenopus)
(ourio-do-mar) opostos (tal como interrompendo ou acelerando a diviso celular) em diferentes
tipos de clulas.
Screw (Drosophila) Os efeitos de TGF so de difcil separao porque componentes da famlia
Nodal
parecem funcionar de maneira semelhante e podem compensar por perdas dos outros
activina quando expressos conjuntamente. Alm disso, delees apontadas para o gene Tgfb1
activina so difceis de interpretar, pois a me pode suprir esse fator atravs da placenta e do
leite (Letterio et al., 1994).
Suppressor
of Hairless Suppressor of Hairless
Ncleo Hairless
Interaes epitlio-mesnquima
Alguns dos casos melhor estudados de induo secundria so aqueles envolvendo as
interaes de lminas epiteliais com clulas mesenquimatosas adjacentes. So chama-
das interaes epitelio-mesnquima. O epitlio pode originar-se de qualquer camada
germinativa, enquanto o mesnquima geralmente derivado de tecido mesodrmico
frouxo ou da crista neural. Exemplos dessas interaes esto listados na Tabela 17.1.
Asa Pena
da asa
Coxa Pena
Figura 17.7 da coxa
Especificidade regional da induo. Quan-
do clulas da derme (mesoderma) so re-
combinadas com a epiderme (ectoderma) no
pinto, o tipo de estrutura cutnea produzida P Escamas,
pelo ectoderma determinado pela localiza- garra
o original do mesoderma. (Adaptado de
Saunders, 1980.)
CAPTULO 17 Interaes Proximais de Tecidos 665
Grupo
paralogo
Hox Intestino delgado
Ceco mediano
Ceco
Neurulao
precoce Intestino
grosso Figura 17.9
Especificao regional do mesoderma visceral
atravs de interaes com o endoderma do in-
testino posterior. A expresso e secreo de
Sonic hedgehog no endoderma gera um con-
junto aninhado de expresso do gene Hox no
mesoderma adjacente. Aps o mesoderma ter
Cloaca sido especificado, ele pode atuar sobre o tubo
endodrmico para induzir regies morfolgicas
Estgio do broto mediano especficas. (Segundo Roberts et al., 1995.)
666 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
*Spemann reportado como tendo descrito dessa maneira: O ectoderma diz ao indutor, voc
me diz como produzir uma boca; est bem, assim o farei, porm, no posso produzir o seu tipo de
boca; s posso produzir a minha e isso farei. (Citado por Harrison, 1933.)
rea do
presuntivo ectoderma oral
Gstrula Gstrula de
de r salamandra Sugador
Salamandra com
sugadores de
girino de r
Figura 17.10
Especificidade gentica da induo. O trans-
plante recproco entre as presuntivas regies Gstrula Gstrula de R
ectodrmicas orais das gstrulas da salaman- de salamandra
dra e da r conduz a larvas de salamandra com
Equilibradore
sugadores de girino e girino de r com Girino de r com
equilibradores de salamandra. (Segundo equilibradores de
Hamburgh, 1970.) salamandra
CAPTULO 17 Interaes Proximais de Tecidos 667
Figura 17.11
Especificidade gentica da induo cutnea. (A)
Seo da regio corneana de um embrio de
pinto de 17 dias. Aos 5 dias de incubao, o
cristalino deste olho foi substitudo pela derme
do flanco de um embrio precoce de camun-
dongo. Uma condensao de clulas embrio-
nrias murinas est localizada diretamente sob
o epitlio do pinto. (B) Formao de penas a
partir do epitlio corneano de tal espcimen.
(A) (B) Clulas de camundongo esto presentes no ru-
dimento das penas. (de Coulombre e Coulom-
bre, 1971, cortesia de A. J. Coulombre.)
cristalino, e concluiu que a vescula ptica era suficiente para induzir a formao
de tecido do cristalino em ectoderma, que de outra maneira no o teria formado.
Pareceu que o contato com a vescula ptica era tudo o que era necessrio para
induzir cristalino no ectoderma sobrejacente.
Crebro em
desenvolvimento
(E) Girino jovem
(diferenciao do cristalino) Clice ptico
Cristalino
Tabela 17.2 Aumento com a idade da capacidade responsiva do ectoderma prospectivo do cristalino
Operao
Estgio do Doador Nurula Nmero Cristalinos Corpo Espessamento Corpo sem Sem Total
Doador hospedeira examinados induzidos semelhante ectodrmico cristalino resposta positivo
(%) ao cristalino (%) (%) (%)
%
Gstrula
intermediria 24 0 4 38 8 50 1 (4%)
Gstrula tardia 21 10 14 42 10 24 5 (24%)
Cultura
Gstrula
precoce
Gstrula
intermediria
Gstrula
tardia
crebro anterior ir dar origem pequenos cristalinos, mesmo sob essas condies. O
clice ptico no contatou ainda esse tecido, mostrando que no crtico para a
induo do cristalino em Xenopus. Porm, ele exerce uma funo em capacitar o fentipo
completo do cristalino para ser expresso. Os cristalinos que se formam na ausncia da
vescula ptica so em geral muito rudimentares. No conhecido se a influncia da
vescula ptica diretamente positiva, promovendo a diferenciao do placdio do
cristalino para um cristalino totalmente diferenciado, ou se tal influncia se d remo-
vendo um inibidor da diferenciao do cristalino. Foi proposto (von Woellwarth, 1961;
Henry e Grainger, 1987) que as clulas da crista neural impedem a diferenciao do
cristalino e que o contato com a vescula ptica serve como escudo do placdio do
cristalino, frente a esses sinais inibidores.
672 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Formao da Crnea
Aps ter invaginado, o placdio do cristalino fica coberto por duas camadas
de clulas do ectoderma adjacente. Agora, o cristalino em desenvolvimento pode
atuar como um indutor. O ectoderma destinado a se tornar crnea, provavelmente
j havia sido determinado durante um estgio anterior do desenvolvimento (Meier,
1977). Agora, a diferenciao da crnea ocorre sob influncia do cristalino. O
ectoderma sobrejacente torna-se colunar e se enche de grnulos secretores. Es-
ses grnulos migram para a base das clulas e secretam um estroma primrio con-
tendo cerca de 20 camadas de colgeno dos tipos I e II (veja Figura 17.14). As
clulas endoteliais vizinhas migram para essa regio (no estroma primrio) e
secretam cido hialurnico para essa matriz. O cido hialurnico faz com que a
matriz se expanda e se torne um bom substrato para a migrao de duas ondas de
clulas mesenquimatosas derivadas da crista neural. Ao penetrar a matriz, a se-
gunda onda dessas clulas a permanece, secretando colgeno do tipo I e
hialuronidase. Essa causa o encolhimento do estroma. Sob a influncia da tiroxina
da glndula tireide em desenvolvimento, esse estroma secundrio desidratado,
e a matriz rica em colgeno dos tecidos epitelial e mesnquima, transforma-se na
crnea transparente (veja Hay, 1980; Bard, 1990).
Podemos ver, assim, que simples interaes indutivas so na realidade dramas
bem coordenados, nos quais os atores tm que vir ao palco e falar seus trechos no
momento e posio corretos. Por adquirir nova informao, elas podem tambm trans-
mitir informaes para outros usarem. Tendo isso em mente, ns podemos agora
passar a estudar alguns dos princpios sobre a induo secundria, obtidos de outros
rgos em desenvolvimento.
Mesnquima
Epitlio
Tbulos
mesonfricos
Prnefros
Duto nfrico
Gnada
Cordo Gnada
nefrognico
Mesonefros
Mesonefros
Duto nfrico
(Wolffiano)
Mesnquima
Cordo nefrognico Mesnquima
metanefrognico
metanefrognico
Ureter
Cloaca Broto uretrico
Duto nfrico
Figura 17.15
Esquema geral do desenvolvimento do rim ver-
tebrado. (A) Os tbulos originais, constituin-
do o rim pronfrico, so induzidos a partir do componente central do sistema excretor atravs de todo seu desenvolvimento
mesnquima nefrognico pelo duto pronfrico (Toivonen, 1945; Saxn, 1987). Esse duto remanescente freqentemente referido
migrando caudalmente. (B) medida que o como duto nfrico ou Wolffiano.
prnefro de degenera, formam-se os tbulos
medida que os tbulos pronfricos degeneram, a poro mediana do duto
mesonfricos. (C) O rim mamfero final, o
metanefro, induzido pelo broto uretrico. (D) nfrico inicia um novo conjunto de tbulos renais no mesnquima adjacente.
Seo de um rim de camundongo mostrando a Esse conjunto de tbulos constitui o mesonefro, ou rim mesonfrico. No ser
iniciao do rim mesonfrico (abaixo) enquan- humano, comeando ao redor do dia 25, formam-se cerca de 30 tbulos
to o mesonefro ainda est aparente. O tecido do mesonfricos. Porm, medida que mais tbulos so induzidos caudalmente, os
duto est corado com um anticorpo fluorescen- tbulos mesonfricos anteriores comeam a regredir (embora em camundongos,
te para citoqueratina encontrada no duto meso- os tbulos anteriores permanecem, ao passo que os posteriores regridem; Figu-
nfrico e seus derivados. ( A-C segundo Saxn, ra 17.15B). Em fmeas de mamferos essa regresso completa. Porm, como
1987; D cortesia de S. Vainio.) discutiremos no Captulo 20, alguns desses tbulos mesonfricos persistem em
machos para se transformar em tubos carreadores de espermatozide (vasos
deferentes e dutos deferentes) dos testculos.
O rim permanente dos aminotas, o metanefro, gerado por alguns dos mesmos
componentes dos tipos anteriores transitrios do rim, e acredita-se ser originado
atravs de uma complexa interao entre componentes mesenquimatosos e epiteliais
do mesoderma intermedirio. Nos dois primeiros passos, o mesnquima
metanefrognico se forma em regies localizadas posteriormente do mesoderma
intermedirio, e induz a formao de um ramo de cada um dos dutos nfricos
pareados. Esses tubos epiteliais so chamados de brotos uretricos. Esses brotos
finalmente se separam do duto nfrico para tornarem-se os ureteres que levam a
urina para a bexiga. Quando os brotos uretricos emergem do duto nfrico, entram
no mesnquima metanefrognico. No terceiro e quarto passos, os brotos uretricos
induzem esse tecido mesenquimatoso a se condensar ao redor dos brotos e se
diferenciar nos nefros do rim dos mamferos. O quinto passo da iniciao renal
ocorre quando esse tecido formador do nefro induz a ramificao adicional do
broto uretrico (Figura 15C,D).
CAPTULO 17 Interaes Proximais de Tecidos 675
Dutos
coletores
Mesnquima
Metanefrognico
Ureter Ureter
Broto
uretrico
Tbulos
Renais
Tbulo distal
Mesnquima Tbulo
Proximal
Figura 17.16
Induo recproca no desenvolvimento do rim
dos mamferos. medida que o broto
uretrico penetra no mesnquima metanefro-
INDUO RECPROCA DURANTE O DESENVOLVIMENTO RENAL. Esses dois
gnico, esse o induz a se ramificar. Nas extre-
tecidos mesodrmicos, o broto uretrico e o mesnquima metanefrognico interagem midades dos ramos, o epitlio induz o mesn-
e induzem um ao outro reciprocamente (Figura 17.16). O mesnquima metanefrognico quima a se agregar e cavitar para formar os
leva o broto uretrico a se alongar e se ramificar. Na ponta dessas ramificaes, o broto tbulos renais. A formao de nefro a partir
uretrico induz as clulas mesenquimatosas frouxas a formarem um agregado epitelial. das clulas mesenquimatosas mostrada na
Cada agregado de cerca de 20 clulas prolifera-se e se diferencia na intrincada estrutu- insero. Aps se agregar nos ramos, as clu-
ra do nefro renal. Primeiro, cada ndulo se alonga tomando a forma de uma vrgula, las mesenquimatosas formam um ndulo
formando em seguida o caracterstico tubo em forma de S. Logo em seguida forma- epitelial que se estende em um tubo em forma
o do tubo em forma de S, as clulas desse epitlio comeam a se diferenciar em tipos de S, e se funde com o epitlio do broto
uretrico. (Insero segundo Romanoff, 1960.)
regionais de clulas especficas, como as clulas da cpsula, os podcitos e as clulas
dos tubos renais distal e proximal. Nesse perodo, desenvolve-se uma conexo entre o
broto uretrico e o tubo recm-formado que permite a passagem de material de um para
o outro. Os tubos recm-formados derivados do mesnquima formam os nefros
secretores do rim funcional, e o broto uretrico ramificado d origem aos dutos coleto-
res renais e ao ureter, que drena a urina do rim.
Clifford Grobstein (1955, 1956) documentou essa induo recproca, in vitro. Ele
separou o broto uretrico do mesnquima e cultivou-os individualmente ou em con-
junto. Na ausncia do mesnquima, os brotos uretricos no se ramificam. Na ausn-
cia do broto uretrico, o mesnquima logo morre. Quando eles so colocados juntos,
porm, o broto uretrico cresce e se ramifica, e tbulos se formam atravs do
mesnquima (Figura 17.17). Embora certos outros tecidos (em especial o tubo neural)
permitam ao mesnquima metanefrognico formar tbulos renais, o broto uretrico
somente se ramifica sob instrues do mesnquima metanefrognico. Mesnquimas
que induzem ramificao em outros epitlios (tais como a glndula salivar) no induzi-
ro a ramificao do broto uretrico (Bishop-Calame, 1996).
676 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
(A) (B)
Figura 17.17
Induo de rim estudada in vitro. (A) Um rudimento metanfrico do
camundongo de 11 dias inclui tanto o broto uretrico como o me-
snquima metanefrognico. (B) Aps o primeiro dia em cultura,
podem ser vistos tbulos nas extremidades dos ureteres em ramifi-
cao. (C) Os dutos coletores ramificados formados pelo broto
uretrico e os tbulos renais formados pelas condensaes mesen- (C)
quimatosas nas extremidades desses brotos podem ser claramente
vistos aps 8 dias de cultura. (A e B de Saxn e Sariola, 1987; C de
Grobstein, 1955; todas fotografias cortesia dos autores.)
Broto uretrico
(A)
Mesnquima
condensando Glomrulo
(B)
Ureter
(C)
mesoderma como algumas clulas originrias da crista neural (Le Douarin e Tiellet,
1974; Sariola, 1989; Sainio et al., 1994).
Duto
Duto Wolffiano Wolffiano
Broto
uretrico
Broto
Duto uretrico
Wolffiano
Receptor
Ret Duto
Wolffiano
Broto
Mesnquima Receptor uretrico
metanefrognico Ret
(D)
Figura 17.19
O crescimento do broto uretrico depende de mesenquimatosas so salvas do precipcio da morte e so convertidas em clulas
GDNF (fator neurotrfico derivado da glia) e germinativas em proliferao (Bard e Ross, 1991; Bard et al., 1996). Os fatores
seu receptor. (A) O broto uretrico do rim de secretados do broto uretrico incluem o fator 2 de crescimento fibroblstico (FGF2)
um embrio murino do tipo selvagem de 11,5 e a protena morfogentica 7 do osso (BMP7). O FGF2 tem trs modos de ao,
dias cultivado durante 72 horas tem padro de inibindo a apoptose, promovendo a condensao de clulas mesenquimatosas e
ramificao caracterstico. (B) Em camundon- mantendo a sntese de WT1 (Perantoni et al., 1995). O BMP7 tem efeitos semelhan-
gos embrionrios heterozigotos para os genes
tes, e na ausncia de BMP7, o mesnquima do rim sofre apoptose (Figura 17.20;
codificando GNDF, o tamanho do broto
uretrico e o nmero e comprimento de seus
ramos est reduzido. (C) Em camundongos sem
ambas cpias dos genes gdnf, o broto uretrico
no se forma a partir do duto Wolffiano. (D) Rim
Os receptores para GDNF esto concentrados Glndula
na poro posterior do duto Wolffiano. O Supra-renal
GDNF secretado pelo mesnquima metanefro- Rim
gnico estimula o crescimento do broto uretrico
desse duto. Em estgios posteriores, o recep-
tor de GDNF somente encontrado nas extre-
midades dos brotos uretricos. Barras de esca-
la iguais a 100m. (A-C de Pichel et al., 1996;
fotografias cortesia de J. G. Pichel e H. Sariola;
D segundo Schuchardt et al., 1995.)
Figura 17.20
Malformao renal em um embrio de camundongo deficiente em BMP7. No dia embrionrio 19,
os rins mutantes so significativamente menores que aqueles dos embries tipo selvagem. (de
Dudley et al., 1995; fotografia cortesia de E. J. Robinson.)
CAPTULO 17 Interaes Proximais de Tecidos 679
Figura 17.21
O proteoglicano syndecan da matriz extrace-
lular no sintetizado ou secretado por clu-
las do mesnquima at aps a induo. Essa
molcula provavelmente est envolvida na
estruturao do novo epitlio tubular, e dis-
tingue as clulas do tbulo, do mesnquima
remanescente. (A) Colorao imunolgica de
syndecan mostra sua presena nas clulas
mesenquimatosas recm-induzidas (T) que es-
to se tornando epiteliais. Alguma colorao
(U) tambm vista no epitlio do broto
epitelial. (B) Colorao intensa de syndecan
vista na regio tubular em desenvolvimento
que ir se tornar o glomrulo renal (G). (de
Vainio et al., 1989, cortesia de L. Saxn.)
(A) (B)
Dudley et al., 1995; Luo et al., 1995). As clulas mesenquimatoses induzidas tambm
sintetizam receptores para o fator de crescimento epidrmico e o fator de crescimen-
to neural, e podem responder essas protenas com a proliferao.
Figura 17.22
Expresso de syndecan em mesnqui-
mas renais induzidos e no-induzidos.
(A) Hibridizao in situ localizando
mRNA de syndecan nos agregados
mesenquimatosas de um rim embrion-
rio de camundongo de 15 dias. A vi-
sualizao da auto-radiografia feita por
iluminao de campo escuro. (B) Me-
snquima renal isolado (M) induzido por
medula espinhal (SPC) mostra expres-
so intensa de syndecan aps colorao
com anticorpos ao syndecan, fluores-
centes. O mesnquima no-induzido no
(A)
o faz. (C) A quantidade de syndecan
(marcado com enxofre radioativo) iso-
lada de um mesnquima induzido de rim
dez vezes maior que aquela isolada de
um quantidade semelhante de mesnqui- Induzido
No-induzido
(B) (C)
Figura 17.23
Papel do receptor NGF de baixa afinidade na morfognese do rim. (A) Hibridizao in situ mostra a localizao de
mRNA de NGFR nos mesnquimas condensados de um rim embrionrio de rato de 18 dias. (B) Maior aumento do
padro de ramificao do broto uretrico (corado com anticorpos para uma citoqueratina epitelial especfica) em rim de
13 dias cultivado durante 5 dias, in vitro. (C) Broto uretrico de um rim igual aquele em (B) mas cultivado em presena
de oligonucletidos antisenso ao mRNA de NGFR . (de Sariola et al., 1991, cortesia de H. Sariola.)
682 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Informaes adicionais
& Especulaes
D URANTE A MORFOGNESE de
qualquer rgo ocorrem numero-
sos dilogos entre os tecido em
interao. Nas interaes epitlio-mesn-
fatores de transcrio, incluindo protenas
contendo os homeodomnios Msx1 e Msx2.
A induo da diferenciao do mesnqui-
ma pode ser mimetizada colocando-se BMP4
das a sintetizar a protena de membrana
syndecan e a protena da matriz extracelu-
lar tenascina. Essas protenas (que podem
se ligar uma outra) aparecem na ocasio
quima, o mesnquima influencia o epitlio; em partculas de agarose e aplicando-as em que o epitlio induz a agregao do
o tecido epitelial, uma vez modificado pelo massa mesenquimatosa (Vainio et al., 1993). mesnquima; Thesleff e colegas (1990)
mesquima, pode secretar fatores que al- Assim, a BMP4 parece ser um sinal morfog- propuseram que essas duas molculas
teram o mesnquima. Tais interaes con- nico crtico do epitlio para o mesnquima. podem interagir para efetivar essa con-
tinuam at que seja formado um rgo com Um evento crtico na anlise do de- densao. Como no rim, a expresso de
clulas mesenquimatosas especficas do senvolvimento dental foi a descoberta que syndecan tambm se correlaciona com a
orgo e epitlio especfico. A identificao o centro de sinalizao para o desenvol- proliferao das clulas mesenquimatosas
das substncias envolvidas nessas con- vimento dental um obscuro grupo de agregadas, sugerindo que ela est regu-
versas inter-tissulares est sendo estuda- clulas epiteliais referidas como o n do lando a diviso celular assim como a agre-
da em diversos laboratrios. Algumas das esmalte (Jernvall et al., 1994). Esse grupo gao (Vainio et al., 1991).
interaes mais investigadas so aquelas de clulas, primeiro visto no comeo do Depois de se agregarem, as clulas
que formam os dentes dos mamferos. Aqui, estgio de hemisfrio pigmentado, apare- mesenquimatosas comeam a secretar
o epitlio da mandbula se diferencia em ce como uma populao de clulas em no FGF3, BMP3, BMP4, HGH e activina
ameloblastos, enquanto as clulas mesen- diviso, no centro das cspides em cres- (Wilkinson et al., 1989, Thesleff e Sahlberg,
quimatosas derivadas da crista neural se tor- cimento (veja Figura 17.3). Alm disso, a 1996). Esses sinais, presumivelmente, in-
nam os odontoblastos secretores da dentina. hibridizao in situ mostrou que esse n duzem a formao do n de esmalte no
Em primeiro lugar, o epitlio faz com de esmalte a fonte da secreo de Sonic epitlio. O n em seguida secreta seu po-
que o mesnquima se agregue em locais hedgehog, FGF4, BMP7, BMP4 e de tente coquetel de fatores de crescimento
especficos. Nesse momento, o epitlio BMP2 (Koyoma et al., 1996; Vaahtokari et e diferenciao, os quais promovem o
possui o potencial de gerar estruturas al., 1996a). Sendo uma populao que no crescimento e a diferenciao tanto do me-
dentais a partir de vrios tipos de clulas se divide, secretando fatores de cresci- soderma como do epitlio. As clulas
mesenquimatosas (Mina e Kollar, 1987; mento capazes de serem recebidos tanto mesenquimatosas comeam a se diferen-
Lumsden, 1988). Porm, esse potencial pelo epitlio como pelo mesnquima, o n ciarem em odontoblastos, e a tenascina
de formao do dente logo transferido de esmalte considerado dirigir a morfo- induzida para ser expressa em nveis mui-
para o mesnquima que se agrega abaixo gnese das cspides do dente e ser crti- to mais elevados e nos mesmos locais que
dele. Essas clulas mesenquimatosas co no direcionamento das mudanas a fosfatase alcalina. Essas protenas fo-
formam a papila dental e so agora capa- evolutivas na estrutura dentria nos ma- ram associadas com a diferenciao do
zes de induzir a morfognese dental em mferos (Jernvall, 1995). osso e da cartilagem, e podem promover a
outros epitlios (Kollar e Baird, 1970). Um resumo de pesquisas recentes mineralizao da matriz extracelular
Nesse estgio, o epitlio maxilar perdeu correlacionando induo e diferenciao (Mackie et al., 1987).
sua capacidade de instruir a formao do do mesnquima mostrado na Figura Por ltimo, medida que emerge o
dente em outros mesnquimas. Assim, o 17.24. Como se pode ver, o mesnquima fentipo do odontoblasto, so secreta-
potencial odontognico passou do em um estgio diferente daquele em ou- dos osteonectina e colgeno de tipo I
epitlio para o mesnquima. Na membra- tros. As clulas mesenquimatosas so pri- como componentes da matriz extracelu-
na basal que separa o epitlio do mesn- meiro induzidas (pela expresso epitelial lar. O n de esmalte desaparece por
quima, o epitlio induz o mesnquima a de BMP4, BMP2, BMP7 e provavelmente apoptose (Vaahtokari et al., 1996b). Por
se transformar em odontoblastos, en- FGF8) a expressar um conjunto de fatores esse processo em etapas, as clulas da
quanto o mesnquima induz o epitlio a de transcrio que incluem Msx1 e Lef1. crista neural craniana da mandbula po-
se transfornar em clulas ameloblsticas Se os genes para cada uma dessas prote- dem ser transformadas em odontoblastos
(Figura 17.24; Thesleff et al., 1989). nas so eliminados, o camundongo em secretores de dentina. Essas interaes
Esse deslocamento do potencial odon- desenvolvimento no tem dentes. No ser ocorrem durante perodos especficos do
tognico coincide com o deslocamento da humano, numa condio causada por uma desenvolvimento e so correlacionadas
sntese da protena morfogentica 4 do osso mutao de MSX1, os pacientes tm fa- com a maturao do epitlio. Em condi-
(BMP4). Durante as fases mais precoces do lhas dentrias (Satokata e Maas, 1994; es normais, dois fenmenos indepen-
desenvolvimento do dente, a BMP4 sin- Kratochwil et al., 1996; Vastardis et al., dentes morfognese e diferenciao
tetizada no epitlio; e induz a diferenciao 1996). medida que as clulas mesenqui- celular - so coordenados na formao
do mesnquima e estimula-o a expressar trs matosas condensam-se, elas so induzi- dos rgos.
CAPTULO 17 Interaes Proximais de Tecidos 683
Epitlio
Colgeno tipo I
Idade desenvolvimental
Figura 17.24
Diferenciao coordenada e morfognese no dente do mamfero. medida que progride o desen-
volvimento, o mesnquima da mandbula derivado da crista neural sofre diferenciao gradual
interagindo com o epitlio mandibular (Segundo Thesleff et al., 1990; Thesleff e Sahlberg, 1996.)
Os mecanismos para essa ramificao podem ter tanto os componentes gerais como
os especficos (Grobstein, 1967), e podem depender da interao entre as foras que
esto promovendo o crescimento celular e as foras que esto promovendo a coeso
intercelular. Os componente gerais so considerados envolver a degradao seletiva
da membrana epitelial basal nos locais da ramificao (Bernfield et al., 1984; Mizuno e
Yasugi, 1990).
Conforme visto no rim e em muitos outros rgos, o mesnquima pode interagir
com um tubo epitelial levando-o a se ramificar. Isso ocorre quando os crescimentos
epiteliais so divididos por fendas, apresentando lbulos de cada lado da fenda.
Esses lbulos crescem criando ramos. A ramificao dos brotos epiteliais depende da
presena do mesnquima. Em alguns casos, tal como na interao do epitlio respira-
trio com mesnquimas diferentes, a interao instrutiva. Na maioria dos casos,
porm, a interao meramente permissiva. Os brotos so preparados para ramificar e
formar cinos, mas necessitam do apoio do mesnquima. hoje admitido que o
mesnquima promova a formao de fendas e ramificaes cindindo o lbulo e dige-
rindo seletivamente parte da lmina basal do tecido epitelial.
O controle da formao de fendas parece ser, em parte, uma funo das molculas
de colgeno. Fibras de colgeno III so produzidas por clulas mesenquimatosas, mas
se acumulam somente dentro das fendas lobulares (Figura 17.25; Grobstein e Cohen,
1965; Nakanishi et al., 1988a). Alm disso, a extenso da ramificao pode ser regulada
artificialmente pela preservao ou remoo das molculas de colgeno (Nakanishi et
al., 1986a). A Figura 17.26 mostra a ramificao de um rudimento de 12 dias de uma
glndula submandibular sob condies que impedem a degradao das fibras de
colgeno (um inibidor de colagenase foi adicionado ao meio). Sem o colgeno, no se
vem fendas, mas quando a colagenase endgena incapaz de remover o colgeno
em excesso, aparecem fendas extranumerrias.
Clulas
mesenquimatosas
Clula
epitelial
Colgeno na
fenda entre
clulas epiteliais
Figura 17.25
Micrografia eletrnica de varredura da acu-
mulao de fibras de colgeno dentro da fen-
da precoce da glndula salivar de um em-
brio de camundongo de 12 dias. (de Naka-
nishi et al., 1986b, cortesia de Y. Nakanishi.)
CAPTULO 17 Interaes Proximais de Tecidos 685
1 hr 18 hr 25 hr Figura 17.26
Controle da formao da fenda epitelial pelo
colgeno do mesnquima. Rudimentos da gln-
dula salivar de um rato de 12 dias foram culti-
vados e observados em 1, 18 e 25 horas. (Li-
nha A) Desenvolvimento normal, mostrando
trs principais lbulos. (Linha B) Crescimento
do lbulo mas sem ramificao quando a
colagenase exgena (5g/ml) foi adicionada ao
meio. (Linha C) Ramos supranumerrios quan-
do o inibidor de colagenase (5g/ml) foi adici-
(A) Controle onado ao meio para suprimir a atividade da
colagenase endgena. (Segundo Nakanishi et
al., 1986a; cortesia de Y. Nakanishi.)
Fibras de
colgeno
Mais
mitose
GAG
Clulas Clulas
mesenquimais epiteliais Clulas Clulas Colgeno
mesenquimais epiteliais
Figura 17.27
Um modelo para a formao e ramificao em
um rudimento de glndula salivar de camun-
O colgeno tambm importante para a estabilizao das ramificaes formadas.
dongo. (A) Um sulco produzido no lbulo Quando se adiciona colagenase a rudimentos de glndula salivar aps a ramificao,
pela contrao de um feixe de fibras de colge- o colgeno removido e os ramos coalescem em um globo (Grobstein e Cohen, 1965;
no (mostrado aqui como uma estrutura torcida, Wessels e Cohen, 1968).
como corda) pela trao das clulas mesenqui-
matosas. Como mostrado na Figura 17.25, as Fatores Parcrinos Efetuando Padres de Ramificao
fibras se estendem entre dois grupos de clulas
mesenquimatosas. (B) Alongamento dos dois Ainda no temos certeza sobre as identidades das molculas secretadas pelo
lbulos separados em ramos pode ocorrer, j
mesnquima que so responsveis pela induo desses padres de ramificao
que as GAGs nas extremidades dos lbulos
so mais sensveis hialuronidase, pois eles
epitelial. Evidncia recente implicou vrios fatores parcrinos nesses eventos. O
no tm a proteo das fibras de colgeno. O primeiro candidato o fator 1 de crescimento transformado (TGF1). Essa mol-
talo do lbulo estvel, enquanto o aumento da cula abundante em rgos embrionrios. Quando o TGF1 exgeno adicionado
diviso nas extremidades (estimulado pelo a culturas de glndulas mamrias, ou de glndulas salivares embrionrias, pulmo,
mesnquima) empurra o lbulo para a frente. ou rudimentos de rim, o fator previne o epitlio de se ramificar (Figura 17.28; Silberstein
(A de Nakanishi et al., 1986b; B segundo et al., 1990; Hardman et al., 1994; Serra et al., 1994; Ritvos et al., 1995). O TGF1
Wessells, 1977.) sabido promover a sntese de protenas da matriz extracelular e de inibir as
metaloproteinases que podem digerir essas matrizes (Penttinen et al., 1988; Nakamura
et al., 1990). possvel que esse fator tenha um papel na estabilizao dos ramos
aps seus surgimentos.
Uma segunda molcula que pode ter importncia na ramificao epitelial a activina.
A activina conhecida por sua importncia na especificao do eixo esquerdo/direito
em pintos, e foi detectada em glndulas salivares, pncreas e rins de embries de
camundongos. Quando a activina adicionada exogenamente ao rim, ou rudimentos
salivar ou pancretico do embrio de rato, a activina distorce severamente o padro de
ramificao normal (Figura 17.29; Ritvos et al., 1995). As clulas epiteliais no esto
mortas e ainda so capazes de induzir as clulas mesenquimatosas a formarem nefros,
mas os ramos esto muito desorganizados. As semelhanas entre os rudimento da
glndula salivar tratada com colagenase e aqueles tratados com activina sugerem que
essa ltima possa desencadear a digesto de matriz extracelular no local de um novo
ramo, e que a sua adio exgena promove a destruio da matriz extracelular atravs
de todo o epitlio.
Vrios fatores parcrinos adicionais parecem ser responsveis pela induo da
ramificao do epitlio pulmonar. Uma forma de fator de crescimento derivado das
plaquetas pode induzir a ramificao pulmonar, e o RNA antisenso contra sua men-
sagem o inibe (Souza et al., 1995). Epitlio pulmonar em cultura tambm pode ser
CAPTULO 17 Interaes Proximais de Tecidos 687
Figura 17.28
O efeito do TGF-1 na morfognese do epitlio
renal. (A) Um rim de camundongo de 11 dias
cultivado por 4 dias no meio controle tem rami-
ficao normal. (B) Um rim de um camundon-
go de 11 dias cultivado em TGF-1 s apre-
senta ramificao na periferia do mesnquima,
e os ramos formados so alongados. (Segundo
Ritvos et al., 1995.)
(A) (B)
Figura 17.29
Os efeitos da activina na morfognese do epitlio
da glndula salivar. Rudimentos da glndula
salivar embrionria foram cultivados por 4 dias
em meio controle (A), e em meio contendo
activina 7.5 nM (B). Aps 4 dias, os rgos
foram fixados e corados para citoqueratina
(A) (B) epitelial. (de Ritvos et al., 1995.)
688 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
clula; com a induo, torna-se um outro. Nossas discusses sobre induo usual-
mente ocuparam-se de tecidos e no de clulas. Porm, a induo tambm pode
ocorrer ao nvel da nica clula. Os primeiros exemplos desse fenmeno vieram de
estudos com o sistema imune. Aqui, a recepo de antgeno (substncias estranhas)
pela clula B deu-lhe a competncia de responder a fatores parcrinos e justcrinos
sintetizados pelas clulas T auxiliares. H um dilogo recproco entre as clulas B e
as clulas T pelo qual ambas se diferenciam e se proliferam na presena de antgeno
estranho (Clark e Ledbetter, 1994; Essen et al., 1995). Na verdade, a AIDS uma
doena de induo, na qual a clula T auxiliar foi destruda e no pode induzir a
diferenciao de clulas B e macrfagos.* [prox4.html]
Pesquisas recentes sobre o desenvolvimento de Drosophila e Caenorhabditis
mostraram que a induo realmente ocorre no nvel clula-para-clula. Alguns dos
exemplos melhor estudados envolvem a formao dos fotorreceptores da retina do
olho da Drosophila. A retina consiste de cerca de 800 unidades chamadas omatdios
(Figura 17.30). Cada omatdio composto de 20 clulas organizadas em um padro
preciso. O olho desenvolve-se na camada epitelial plana do disco imaginal do olho
da larva. No h clulas diretamente acima ou abaixo dessa camada, de modo que as
interaes so limitadas s clulas vizinhas em duas dimenses. A diferenciao das
clulas epiteliais arranjadas de maneira aleatria nos fotorreceptores da retina e seu
tecido do cristalino ao redor ocorre durante o ltimo (terceiro) estgio larval. Uma
Figura 17.30
Microfotografia eletrnica de varredura de um reentrncia se forma na margem posterior do disco imaginal, e esse sulco
olho composto de Drosophila. Cada faceta morfogentico comea a trafegar para frente em direo ao anterior do epitlio (Fi-
um nico omatdio. Uma cerda sensorial se gura 17.31). O movimento do sulco depende das protenas do conjunto marcador,
projeta de cada omatdio. (Cortesia de T. Hedgehog e Decapentaplegic. Hedgehog expresso por clulas imediatamente pos-
Venkatesh.) teriores ao sulco (i.e., aquelas que acabaram de se diferenciar) e induz a expresso da
protena decapentaplegic dentro do sulco (Heberlein et al., 1993; Ma et al., 1993).
medida que as clulas da retina comeam a se diferenciar atrs do sulco, elas secretam
a protena Hedgehog, que empurra o sulco anteriormente (Brown et al., 1995). Quan-
do o sulco passa atravs de uma regio de clulas, essas comeam a se diferenciar
em uma ordem especfica. A primeira clula a se desenvolver o fotorreceptor cen-
tral (R8). (Ainda no sabido como o sulco instru certas clulas a se tornarem
fotorreceptores R8, mas possvel que as protenas DPP e Hedgehog na regio do
sulco induzam a determinao de R8). A clula R8 considerada induzir a clula
anterior e a clula posterior a ela (em relao ao sulco), para se tornarem os fotorre-
ceptores R2 e R5, respectivamente. Os fotorreceptores R2 e R5 so funcionalmente
equivalentes, sendo o sinal de R8 provavelmente o mesmo para ambas (Tomlinson e
Ready, 1987). Sinais dessas clulas induzem mais quatro clulas adjacentes a torna-
rem-se os fotorreceptores R3, R4, e depois R1 e R6. Em ltimo lugar aparece o
fotorreceptor R7. As outras clulas ao redor desses fotorreceptores tornam-se clu-
las do cristalino. A determinao do cristalino a condio de revelia (default) se
as clulas no forem induzidas. [prox5.html]
Uma srie de mutaes foram encontradas bloquear alguns dos passos dessa
cascata indutora. A mutao rough (ro), por exemplo, bloqueia a induo dos fotorre-
ceptores R3 e R4. A mutao sevenless (sev) e a mutao bride of sevenless (boss)
pode, cada uma, prevenir as clulas R7 de se diferenciarem. (Essas clulas tornam-se
ento clulas do cristalino). A anlise dessas mutaes mostrou que elas esto envol-
vidas no processo indutivo. O gene sevenless requerido na prpria clula R7. Se
embries mosaico so produzidos de modo que algumas das clulas do disco ocular
sejam heterozigotas (normais) e algumas homozigotas para a mutao sevenless, o
fotorreceptor R7 visto desenvolver-se somente se o precursor R7 tem o alelo sevenless
* Em seres humanos, essas clulas T so chamadas clulas T auxiliares / indutoras, um nome que
reconhece seu papel no desenvolvimento. A glicoprotena CD4 normalmente est envolvida na
mediao celular da adeso no-especfica entre a clula T auxiliar/indutora e os linfcitos B (Doyle
e Strominger, 1987).
CAPTULO 17 Interaes Proximais de Tecidos 689
Figura 17.31
Diferenciao de fotorreceptores no disco
imaginal do olho da larva tardia. O sulco
morfogentico (seta) atravessa o disco do
posterior (esquerda) ao anterior (direita).
Atrs do sulco, as clulas fotorreceptoras se
diferenciam em uma seqncia definida (mos-
trada abaixo). A primeira clula fotorreceptora
a se diferenciar a R8, que parece induzir a
diferenciao de R2 e R5; a cascata de induo
continua at que o fotorreceptor R7 tenha se
diferenciado. (Segundo Tomlinson, 1988,
fotografia cortesia de T. Venkatesh.)
Poro antenal
do disco
tipo selvagem (Basler e Hafen, 1989; Bowtell et al., 1989). Anticorpos para essa prote-
na encontram-na na membrana celular, e a seqncia do gene sevenless sugere que ela
uma protena transmembrana com um stio tirosina quinase em seu domnio
citoplasmtico (Banerjee et al., 1987; Hafen et al., 1987). Isso consistente com a
suposio da protena ser um receptor para algum sinal.
Esse sinal para o precursor R7 diferenciar-se no fotorreceptor R7, provavelmente
vem diretamente de uma protena codificada pelo alelo tipo selvagem de bride of
sevenless (boss). Moscas homozigotas para a mutao boss no tm os fotorrecep-
tores R7. Estudos com genes de mosaico onde algumas das clulas do disco imaginal
so normais e algumas das clulas so homozigotas para mutao boss mostram que
o gene boss tipo selvagem no necessrio na clula precursora R7. Ao contrrio, o
fotorreceptor R7 somente se diferencia se o gene boss tipo selvagem expresso na
clula R8. Assim, o gene bride of sevenless est codificando alguma protena cuja
existncia na clula R8 necessria para a diferenciao da clula R7.* O sinal
produzido pela protena Boss provavelmente trabalha por contato celular. Genes
* Todos os precursores de fotorreceptores sintetizam a protena Sev, e o sinal Boss dado pelo
fotorreceptor R8 provavelmente dado e recebido por todas as clulas circunjacentes. O que,
ento, impede as clulas R1-R6 de tambm se tornarem clulas R7? O agente restritivo prova-
velmente o produto do gene seven-up (sup). Em mutante deficientes em sup, os precursores R1,
R3, R4 e R6 todos desenvolvem o fentipo R7. O gene sup codifica um fator de transcrio da
famlia receptora de esterides (Mlodzik et al., 1990). Isso, porm, no toda a histria. Prova-
velmente existe um caminho paralelo, pelo qual o receptor Sevenless tambm ativa a protena
Corkscrew. Corkscrew ativa a protena Daughter-of-sevenless (dos). A protena Dos facilita a
ativao de Ras (Herbst et al., 1996).
690 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Gnada
Cutcula
Figura 17.33
As VPCs e seus descendentes. (A) Localizao da gnada, clula
ncora, e VPCs no segundo instar da larva de um C. elegans herma- (C)
frodita. (B,C) Relao da clula ncora com as seis VPCs e suas
linhagens subseqentes. As primeiras linhagens resultam em clulas
vulvares centrais; as segundas constituem as clulas vulvares laterais;
as terceiras geram as clulas hipodrmicas. O esquema da vulva
mostrado no quarto instar da larva, os crculos representando as posi-
es do ncleo. (Segundo Katz e Sternberg, 1996.)
CAPTULO 17 Interaes Proximais de Tecidos 691
H trs mecanismos pelos quais tais indues podem ocorrer (Katz e Stern-
berg, 1996):
LET-3
Sinal ativa genes Vulval
Sinal Sinal
ativa ativa
lin-12 lin-12
Informaes adicionais
& Especulaes
Figura 17.36
Representao do efeito da mutao Notch. Em embries tipo selvagem, as
clulas ectodrmicas neurognicas geram tanto neuroblastos como clulas de
pele (hipodrmicas). Em embries deficientes em Notch, porm, todo o ecto-
derma neurognico gera neuroblastos. A proporo de neuroblastos para
clulas hipodrmicas difere entre as regies do embrio.
Neuro-
Tipo selvagem
blasto
Dorsal
Hipo-
derme
Clulas
ectodrmicas
neurognicas
Ventral
Mutante
notch
deficincias Notch) o ligante de Notch.
Mosaicos genticos mostram que enquan-
to Notch requerido por clulas que de-
vem se tornar epiderme, o gene delta ne-
cessrio nas clulas que induzem o
fentipo epidrmico.
Greenwald e Rubin (1992) propuseram
principalmente pelo nmero aleatrio de bm determinada pela posio aleat-
um modelo baseado na hiptese LIN-12
receptores hormonais nas clulas folicu- ria da clula durante a compactao. Tais
para explicar o espaamento dos neuroblas-
lares. De maneira semelhante, a deciso fatores aleatrios podem ocasionar inte-
tos nos agregados pr-neurais de precur-
sobre se uma clula tornar-se- ou no raes que so amplificadas, distinguin-
sores epidrmicos e neurais (Figura 17.37).
parte do embrio ou parte do trofoblasto do, finalmente, entre dois tipos celulares
Inicialmente, todas as clulas tm potenci- certamente uma deciso fundamental naquilo que havia sido uma populao
ais e sinalizaes iguais. Porm, quando
no desenvolvimento do mamfero tam- celular homognea.
uma das clulas, por acaso, produz mais
sinal (como o produto delta), ela ativa os
receptores em clulas adjacentes, reduzin- Figura 17.37
do o nvel de sinalizao. Como os nveis Modelo para explicar os padres de espaamento de neuroblastos entre as clulas ectodrmicas
de sinalizao em clulas adjacentes so neurognicas inicialmente equivalentes. Baseando-se no modelo para duas clulas mostrado na
Figura 17.36, cada clula tanto d como recebe o mesmo sinal. (A) Um campo de clulas equivalen-
baixos, as vizinhas das clulas de baixa si-
tes, todas sinalizando e recebendo igualmente. (B) Um evento aleatrio causa uma das clulas
nalizao tendero ser sinalizadores de alto (sombreamento mais intenso) a produzir mais sinalizao. Suas clulas circunjacentes recebem essa
nvel. Dessa maneira, um espaamento de quantidade aumentada de sinal e reduzem seu prprio nvel de sinalizao (sombreado mais leve).
neuroblastos produzido. (C) O restante do padro est agora constrangido. Aquelas clulas que reprimiram sua prpria
O papel do acaso na determinao sinalizao (em resposta aos eventos em B), provavelmente no expressaro mais sinalizao que
celular no to incomum como se pode suas clulas vizinhas. As clulas rodeadas por sinalizadores mais reprimidos tero maior probabi-
lidade de se tornar sinalizadoras. (D,E) Os destinos das clulas atravs do campo ficam especificadas
supor. Conforme discutiremos no Captu- medida que a amplificao dos sinais cria populaes de sinalizadores rodeados por populaes de
lo 22, o amadurecimento de somente um receptores. No caso dos genes neurognicos, o sinal considerado emanar da protena Delta, o
vulo por ms em humanos determinado receptor sendo a protena Notch. (Segundo Greenwald e Rubin, 1992.)
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CAPTULO 18 Desenvolvimento do Membro de Tetrpode 701
Desenvolvimento do
membro de tetrpode 18
Meus braos so mais longos do que mi- Padronizao no membro
nhas pernas.... Eu sou meu prprio escultor:
estou partindo do meu interior e me mode- PADRONIZAO um processo pelo qual as clulas embrionrias formam arranjos de
lando com materiais vivos, molhados e tecidos diferenciados, espacialmente ordenados. A possibilidade de realizao des-
maleveis: qual outro artista teve sua dis- se processo uma das propriedades mais dramticas do organismo em desenvolvi-
posio um desenho to perfeito como esse mento, provocando um senso de estupefao em cientistas e leigos. Como que o
disposio de meus martelos e cinzis: as embrio capaz no s de produzir os diferentes tipos de clulas do corpo, mas
clulas migram para o local exato para cons-
tambm produzi-las de maneira a formar tecidos e rgos funcionais? Uma coisa
truir um brao: a primeira vez que elas o
diferenciar os condrcitos e ostecitos que sintetizam a cartilagem e as matrizes dos
fizeram, nunca antes e nunca mais, enten-
ossos, respectivamente; outra coisa produzir essas clulas em uma orientao
dem vocs mercies benz o que eu estou
dizendo? Eu nunca serei repetido. temporal e espacial gerando um osso funcional. E ainda outra coisa produzir um
CARLOS FUENTES (1989) osso que um mero e no uma pelve ou um fmur. A habilidade das clulas dos
membros em pressentir suas posies relativas e diferenciar-se de acordo com essas
O que pode ser mais curioso do que a mo de posies tem sido o tema de intensos debate e experimentao. Como que as
um homem, formada para pegar, a de uma clulas que se diferenciam em cartilagem do osso embrionrio so especificadas de
toupeira para cavar, a perna de um cavalo, a modo a formar dedos em uma ponta e o ombro na outra? (Seria um apndice quase
nadadeira de um boto e a asa de um morce- desnecessrio se a ordem fosse inversa.) Aqui, os tipos de clulas so os mesmos,
go, todos devem ser construdos no mesmo mas os padres que os originam so diferentes.
modelo e devem incluir ossos similares na O membro dos vertebrados um rgo muito complexo com uma distribuio
mesma posio relativa? assimtrica de partes. Os ossos do membro anterior, seja uma asa, uma mo, uma
CHARLES DARWIN (1859) nadadeira ou uma barbatana, consistem de um mero proximal (adjacente parede do
corpo), um rdio e um cbito na regio mediana, e os ossos distais do pulso e dos
dedos (Figura 18.1). Originalmente, essas estruturas so cartilaginosas, mas final-
mente a maioria delas substituda por ossos. A posio de cada um dos ossos e dos
msculos no membro precisamente determinada. A polaridade tambm existe em
outras dimenses. No homem, bvio que cada mo se desenvolve como a imagem
espelhar da outra. possvel tambm a existncia de outros arranjos- como o polegar
se desenvolver no lado esquerdo de ambas as mos- mas isso no comum. Analo-
gamente, a palma (ventral) facilmente distinta do pulso (dorsal). De alguma manei-
ra, a estrutura tridimensional do membro anterior produzida rotineiramente. O pro-
blema fundamental da morfognese- como estruturas especficas se situam em luga-
res determinados- exemplificado no desenvolvimento dos membros. Como que o
mesoderma da placa lateral desenvolve capacidades formadoras de membros? Como
que dedos se formam em uma das extremidades do membro e em nenhum outro
lugar? Como que o dedo mnimo se desenvolve em uma margem do membro e o
polegar em outra?
701
702 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Figura 18.1
Padro esqueltico da asa de pinto. De acordo com a conveno, os Rdio
dgitos so numerados II,III, IV. Dgitos I e V no so encontrados mero
em asas de pinto. (De acordo com Saunders, 1982.)
Dgitos
Metacarpos
Cbito Anterior
Proximal Distal
Posterior
Um campo morfogentico pode ser descrito como um grupo de clulas cuja posio e
destino so especificados em relao ao mesmo conjunto de limites (Weiss, 1939;
Wolpert, 1977). Um campo especfico de clulas dar origem a seu rgo particular
(membro anterior, olho, cauda, etc.) quando transplantado a uma parte diferente do
embrio, e as clulas do campo podem regular seus destinos, contornando a falta de
clulas no campo (Huxley e De Beer, 1934; Opitz, 1985; De Robertis et al., 1991). Um
dos primeiros campos a serem identificados foi o campo do membro.
As clulas mesodrmicas que originam o membro de vertebrados podem ser
identificadas por (1) remoo de certos grupos de clulas e observando se um membro
se desenvolve em sua ausncia (Detwiler, 1918; Harrison, 1918), (2) transplantando
certos grupos de clulas a novos locais e observando se elas formam um membro
(Hertwig, 1925), e (3) marcando grupos de clulas com corantes ou precursores radio-
ativos e observando quais descendentes das clulas marcadas participam no de-
senvolvimento dos membros (Rosenquist, 1971). Com esses procedimentos, a rea
prospectiva dos membros foi precisamente localizada em muitos embries de verte-
brados. A Figura 18.2 mostra a rea prospectiva do membro anterior no estgio de Somitos Rim
pronfrico
broto caudal da salamandra Ambystoma maculatum. O centro desse disco normal-
mente destinado a originar o prprio membro. Adjacente a ele esto as clulas que Guelras
formaro o tecido do flanco peribraquial e a cinta do ombro. Essas duas regies
compreendem o clssico disco do membro usado em experimentos citados neste
captulo. Entretanto, se todas essas clulas so extirpadas do embrio, ainda se forma-
r um membro, ainda que mais tarde, a partir de um anel adicional de clulas que
envolve essa rea. Se esse anel de clulas for includo no tecido extirpado, no haver
desenvolvimento do membro. Essa regio maior, representando todas as clulas na Tecido do Membro Cinta do
rea capazes de formar um membro, chamada campo do membro. flanco livre ombro
O campo do membro originalmente tem a habilidade de regular a perda ou a peribraquial
adio de partes. No estgio de broto da cauda em Ambystoma, qualquer das meta- Figura 18.2
des do disco do membro capaz de regenerar o membro completo quando enxertado Campo prospectivo do membro anterior da sa-
em um novo stio (Harrison, 1918). Esse potencial tambm pode ser evidenciado lamandra Ambystoma maculatum. A rea cen-
dividindo verticalmente o disco do membro em dois ou mais segmentos e colocando tral contm aquelas clulas destinadas a formar
delgadas barreiras entre os segmentos para impedir sua reunio. Quando isso o membro propriamente dito; as clulas rode-
feito, cada parte se desenvolve em um membro completo. A habilidade reguladora do ando o membro livre so aquelas que do ori-
broto do membro foi realada recentemente em um admirvel experimento da nature- gem ao tecido do flanco peribraquial e a cinta
do ombro. As clulas fora dessas regies ge-
za. Em um pequeno lago em Santa Cruz, Califrnia, foram encontrados numerosas
ralmente no so includas nos membros, mas
salamandras e rs com vrias pernas (Figura 18.3). A presena desses apndices
podem formar um membro se os tecidos mais
extras foi relacionada infestao do abdmen das larvas por vermes trematides centrais so extirpados. (De acordo com Stocum
parasticos. Os ovos desses vermes provavelmente dividiram o broto do membro em e Fallon, 1982.)
vrios locais enquanto o girino estava iniciando a formao dessas estruturas
(Sessions e Ruth, 1990). Assim, como um embrio precoce de ourio-do-mar, o cam-
po do membro representa um sistema eqipotencial harmonioso onde a clula
pode ser instruda a formar qualquer parte do membro.
cauda (Figura 18.4). possvel que o cido retinico tenha causado uma transforma-
o hometica na cauda em regenerao, reespecificando o tecido da cauda em cam-
pos de membros (Mller et al., 1996).
Mitomo
do somito
Precursor do
Medula msculo
espinhal do membro
Clulas
Notocorda mesodrmicas Broto do
membro
Prnefro
Figura 18.5
Formao do broto do membro. A proliferao Precursor
das clulas mesodrmicas da regio somtica esqueltico
do mesoderma da placa lateral causa uma pro- do membro
jeo externa do broto do membro no embrio Endoderma
de anfbio. Essas clulas do origem aos ele-
mentos esquelticos do membro. (Migrao de Mesoderma Mesoderma
clulas somticas para o broto do membro gera da placa lateral da placa lateral
a musculatura do membro.)
CAPTULO 18 Desenvolvimento do Membro de Tetrpode 705
Enquanto o broto do membro se forma, as clulas mesodrmicas induzem o ecto- Estgios embrionrios
derma sobrejacente a formar uma estrutura chamada crista ectodrmica apical (AER;
Figura 18.8; Kieny, 1960; Saunders e Reuss, 1974). Essa crista corre ao longo da Somitos
margem distal do broto do membro e se tornar o principal centro sinalizador para o
Mesoderma
membro em desenvolvimento. Suas funes incluem (1) manter o mesoderma abaixo
intermedirio
Membro anterior
dela em uma fase plstica e proliferativa permitindo o crescimento linear (prximo-
distal) do membro; (2) manter a expresso daquelas molculas que geram o eixo ntero-
posterior (polegar-dedo mnimo); e (3) interagir com as protenas especificando os
eixos ntero-posterior e dorsoventral permitindo a cada clula receber instrues de
como se diferenciar.
A AER est localizada na juno entre o ectoderma dorsal e o ventral. No broto
do membro precoce, s o ectoderma nessa juno tem a habilidade de formar uma
AER (Goetinck, 1964; Fraser e Abbott, 1971). Nos mutantes onde o ectoderma do
Membro posterior
Expresso
broto do membro est dorsalizado (como o mutante limbless de pinto), a AER no se de FGF8
forma e o desenvolvimento do membro cessa (Carrington e Fallon, 1988). Ainda
mais, partculas embebidas com FGF no induziro uma AER quando colocadas Mesoderma
abaixo do ectoderma puramente dorsal ou ventral das costas ou do ventre. A juno segmentrio
dorsoventral parece ser crtica. Experimentos recentes (Laufer et al., 1997; Rodriguez
e Izpisa-Belmonte, 1997; Tanaka et al., 1997) demonstraram que a aposio do Figura 18.6
ectoderma dorsal e ventral do broto do membro do pinto necessria para causar a Expresso de FGF8 no mesoderma intermedi-
formao de uma AER. Quando o ectoderma dorsal do broto do membro foi enxerta- rio do embrio de pinto nos estgios 13-15.
do no ectoderma ventral de outro broto do membro, uma nova AER se formou em Diagrama esquemtico representando a meta-
adio original (Figura 18.9). Parece que no estgio 15 (justamente antes da forma- de lateral do embrio durante a induo do bro-
o do broto do membro), o ectoderma dorsal est sintetizando uma protena secretora to do membro. Os nmeros esquerda indi-
chamada Radical fringe.* Ao emergir, o broto do membro (no estgio 17) se produz cam nveis de somitos. (Os somitos so repre-
sentados como crculos se desprendendo do
*Assim chamada devido ao gene fringe de Drosophila. A procura dos homlogos do gene fringe mesoderma segmentrio, que est representa-
nos vertebrados foi motivada por estudos (a serem discutidos no prximo captulo) mostrando que do por uma barra colorida). A faixa sombreada
a formao da margem da asa na Drosophila depende da expresso marginal desse gene. Como os
indica a posio do mesoderma intermedirio;
genes hedgehog e wingless parecem ter funes na formao de membros tanto nos vertebrados
como nos insetos, vrios laboratrios procuraram os genes fringe em vertebrados para verificar se
a expresso de FGF8 nesse mesoderma inter-
haveria a criao do equivalente margem da asa, ou seja, a AER. Foi previsto que expresses medirio mostrada pelas regies mais escu-
limtrofes entre as regies dorsal e ventral seriam crticas na formao de membros vertebrados e ras na faixa. As posies dos membros
invertebrados (Bryant et al., 1981; Meinhardt, 1984; Javois e Iten, 1986), mas as molculas prospectivos, anterior e posterior foram
envolvidas s agora esto sendo identificadas. marcadas em cinza. (De acordo com Crossley
et al., 1996.)
Figura 18.7
Membro ectpico formado pela implantao de uma partcula embebida em FGF
no mesoderma entre-membros no estgio 15. Embrio tardio mostrando mem-
bro anterior, membro posterior e membro intermedirio induzido pela partcula
embebida em FGF. (Fotografia cortesia de G.R. Martin.)
706 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
uma forte demarcao entre as clulas dorsais que expressam o gene radical fringe
e as clulas do ectoderma ventral que no o expressam. Durante o crescimento do
broto, a expresso do radical fringe se restringe quase exclusivamente quelas
clulas do ectoderma dorsal na margem dorsal/ventral do broto do membro. Essas
clulas comeam a expressar Fgf8 e se tornam a AER. (Como veremos, a FGF8
secretada da AER considerada crtica por sua capacidade em manter a proliferao
do mesoderma abaixo dela e manter a expresso do gene sonic hedgehog para a
organizao do eixo ntero-posterior; veja Figura 18.10.)
A importncia da margem expressando ou no o radical fringe confirmada em
estudos onde esse gene expresso ectopicamente em retrovrus. Se as clulas ven-
trais do broto do membro so infectadas com um retrovrus expressando radical
fringe, um novo limite criado entre as clulas que expressam o gene e aquelas que
no o expressam, e uma nova AER nela originada. Inversamente, se a expresso
ectpica de radical fringe destri a fronteira entre as clulas que o expressam e as que
no o expressam, aquela regio da AER original no se forma.
A formao da AER pode envolver uma interao entre a secreo de FGFs (tal
Crista ectodrmica apical
como FGF8) pelo mesoderma e o limite de expresso de radical fringe ao longo da
Figura 18.8 borda dorsoventral do ectoderma. A secreo limitada de FGFs pode ser crtica na
Micrografia eletrnica de varredura de um bro- identificao de quais clulas, ao longo do flanco dorsoventral do embrio produzem
to de membro precoce de pinto, com sua crista os brotos do membro. Ainda no se conhece como a borda entre expresso e no
ectodrmica apical em primeiro plano. (Corte- expresso de radical fringe e os FGFs induzem a formao da AER.
sia de K. W. Tosney.)
Produo do eixo prximo-distal dos membros
Figura 18.9
Formao de uma AER ectpica quando tecido A crista ectodrmica apical: O componente ectodrmico
ventral transplantado para o tecido dorsal do
broto do membro. (A) Procedimento onde ec- O crescimento prximo-distal e a diferenciao do broto do membro possibilitado
toderma ventral de um broto do membro poste-
por uma srie de interaes entre o mesnquima do broto do membro e a AER (Figura
rior de pinto transplantado para a superfcie
dorsal de um broto do membro posterior hos- 18.11; Harrison, 1918; Saunders, 1948):
pedeiro, no mesmo estgio. (B) Aps 26 horas
de incubao se forma uma AER ectpica (a 1. Quando a AER removida em qualquer tempo durante o desenvolvimento do
AER original est indicada por uma flecha e a membro, cessa o desenvolvimento posterior de elementos esquelticos do
AER ectpica por uma cabea de flecha). (C) membro distal.
Enquanto a AER se forma, a expresso de ra-
dical fringe (cabea de flecha) no broto do
membro se torna confinada s clulas dorsais
na juno D/V que formar a AER. (de Laufer
et al., 1997; fotografias cortesia de E. Laufer.) (B) (C)
Enxerto
ectodrmico AER
Somitos
CAPTULO 18 Desenvolvimento do Membro de Tetrpode 707
AER
removida
Cessa
desenvolvimento
do membro
AER
extra
Asa
Mesoderma
do membro
anterior Perna
Asa
Mesoderma
da Perna
Figura 18.12
Corte transversal atravs da regio distal de
um membro de pinto, 3 dias aps a retirada de
uma fatia de AER de uma rea que formaria
tecido interdigital. Em lugar de degenerar, o
tecido interdigital remanescente formou um
dgito extra. (de Hurle et al., 1989, cortesia
dos autores.)
(D) (E)
Figura 18.13
Vista dorsal do padro esqueltico do pinto aps remoo total da AER do broto da asa direita de
embries em vrios estgios. A ltima foto (E) do esqueleto de uma asa normal. (de Iten, 1982,
cortesia de L. Iten.)
(A) (B)
710 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
(A) (C)
(B) (D)
Figura 18.15
Deleo de elementos sseos do membro por deleo dos genes Hox parlogos. (A) Membro
anterior de camundongo tipo selvagem. (B) Membro anterior de camundongo produzido dupla-
mente mutante, com a falta funcional dos genes Hoxa-11 e Hoxd-11. O cbito e o rdio esto
ausentes. (C) Sinpolidactilia resultante de homozigosidade nos locos HOXD-13. (D) Hiptese
considerando que os parlogos 5 dos genes Hox poderiam especificar determinadas regies do
membro anterior. (A, B e D de acordo com Davis et al., 1995; fotografia cortesia de M. Capecchi.
C de Muragaki et al., 1996, cortesia de B. Olsen.)
podem especificar o eixo prximo-distal ainda no est esclarecido, mas uma pista
vem da anlise do Hoxa-13 de galinha. A expresso ectpica desse gene (que
usualmente expresso nas extremidades distais dos membros em desenvolvimento
do pinto) parece tornar mais pegajosas as clulas que o expressam. Isso, por sua
vez, causaria condensao de ndulos cartilaginosos em formas especficas
(Yokouchi et al., 1995; Newman, 1996).
A relao entre a AER e o mesnquima do broto do membro pode ser melhor apreciada
em mutaes no desenvolvimento de membros do pinto. A mutao polydactylous,
como o nome sugere, adiciona dgitos extras em cada membro. Recombinando tecidos
Figura 18.16
FGF8 e morfognese de membros. (A) Hibridizao in situ mostrando expresso da mensagem
de Fgf8 no ectoderma enquanto o broto do membro comea a se formar. (B) Expresso do RNA
Fgf8 na crista ectodrmica apical, a fonte de sinais mitticos para o mesoderma subjacente. (C)
Em embries normais de pinto (estgio 17; cerca de 24 horas), FGF8 expresso na crista
ectodrmica apical de ambos os brotos do membro, anteriores e posteriores. tambm expresso
em vrios outros lugares no embrio. (D) No mutante limbless de galinha, FGF8 no expresso
nos brotos do membro, apesar de no estar perdido em outras regies do embrio. Aqui, os
brotos do membro se formam mas no se desenvolvem em membros (A e B cortezia de J. C.
Izpisa Belmonte; C e D cortesia de A. Lpez-Martnez e J. F. Fallon.)
712 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
(A)
Remover 20 horas
AER
Forma o mero
Sem
AER
(B)
Adicionar
Remover partcula com
AER soluo salina 20 horas
Forma o
mero
Partcula
(C)
Cbito
Partcula
Dgitos
(D)
mero
Rdio
Cbito
Remover Adicionar partcula 24 horas 20 horas
AER contendo FGF2
Implantar
segunda
partcula
contendo
FGF2 Carpos
Segunda
partcula
Figura 18.17
Habilidade de FGF2 para substituir a crista ectodrmica apical no broto do membro anterior em
desenvolvimento do pinto. (A) Quando a AER removida dos brotos da asa do pinto no estgio
20, somente se forma o mero. (B) Se uma partcula gelatinosa de lenta liberao embebida em
soluo salina colocada no mesnquima da zona progressiva, o membro ainda fica truncado e
forma somente o mero. (C) Quando um broto embebido em FGF2 colocado na zona progres-
siva o crescimento do broto do membro continua, e o cbito e o rdio so formados. (D) Se uma
segunda partcula contendo FGF2 colocada na zona progressiva aps a dissipao da maioria
do FGF2 da primeira partcula, o broto do membro continua a crescer e a produzir metacarpos e
dgitos. (De acordo com Fallon et al., 1994.)
CAPTULO 18 Desenvolvimento do Membro de Tetrpode 713
Tabela 18.1 Mutaes que afetam as interaes recprocas entre a AER e seu
mesnquima subjacentea
POLIDCTILO
Polidctilo Tipo selvagem Polidctilo Mesoderma afetado
Tipo selvagem Polidctilo Tipo selvagem pela mutao
EUDIPLOPODIA
Eudiplopodia Tipo selvagem Tipo selvagem Ectoderma afetado
Tipo selvagem Eudiplopodia Eudiplopodia pela mutao
LIMBLESS
Limbless Tipo selvagem Tipo selvagem Ectoderma
Tipo selvagem Limbless Limbless afetado pela mutao
aPor transplante recproco entre o tipo selvagem e AER mutante e mesnquima, o comparti-
mutantes e do tipo selvagem (Tabela 18.1), os defeitos podem ser traados para as
clulas mesodrmicas que induzem amplamente uma AER. No mutante eudiplopodia
(Grego, dois bons ps), alm dos dgitos extras aparecem duas seqncias comple-
tas de dedos em cada membro posterior (Figura 18.18). Experimentos semelhantes com
reconstituio mostram que aqui o defeito est no tecido ectodrmico. Embries de
pintos homozigotos para a mutao limbless iniciam a formao do broto do membro,
mas a AER no se forma. Experimentos de recombinao mostram que o ectoderma de
limbless incapaz de formar uma AER, mesmo quando colocado no mesoderma de
membro do tipo selvagem; uma crista normal pode ser formada quando ectoderma
normal enxertado no campo do membro em lugar do ectoderma mutante (Figura
18.19; Carrington e Fallon, 1988).
Alm disso, existem vertebrados naturalmente sem membros, cuja falta de mem-
bros pode ser relacionada s deficincias na interao AER-mesnquima. A praga
contra cobras no Livro do Gnesis parece ter sido dirigida extremidade distal do
broto do membro, pois a AER desses rpteis degenera-se prematuramente e ao mesmo
tempo em que ocorre a morte celular no mesnquima adjacente (Lande, 1978). No se
sabe se o defeito inicial est no mesnquima ou na AER. [limb3.html]
(A) (B)
Figura 18.18
Seces transversais dos brotos dos mem-
bros posteriores em eudiplopodia de em-
bries de pinto. (A) Duas AERs no broto do
membro posterior; crescimento extra no lado
dorsal formar um conjunto extra de dedos.
(B) Ambas as regies de crescimento esto
cobertas por uma AER. Recentemente foi
demonstrado (Laufer et al., 1997) que duas
reas de radical fringe aparecem no broto do
membro desse mutante, e cada uma se asso-
cia com a nova AER. (De Goetinck,1964,
cortesia de P. Goetinck.)
714 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Figura 18.19
O embrio limbless no forma AER, e o defeito parece residir no ectoder-
ma. Se o ectoderma de codorna do tipo selvagem substitui o ectoderma
mutante do pinto na regio que forma o membro anterior, a asa se desen-
volver naquele lado do embrio. No se forma outro membro. (De acordo
com Carrington e Fallon, 1988; fotografia cortesia de J. Fallon.)
Informaes adicionais
& Especulaes
Assim, estamos frente a uma situao contendo um mero, que no deve pro-
onde as clulas adultas de um organismo duzir outro mero e nem comear imedia-
podem retornar a uma condio embrio- tamente a produzir dgitos. No somente
nria e comeam novamente a formao o blastema regenera essas estruturas co-
de um membro. Exatamente como no de- meando no nvel prximo-distal apropri-
senvolvimento embrionrio, o blastema ado no membro, como tambm as polari-
forma sucessivamente estruturas mais dades dos eixos ntero-posterior (pole-
distais (Rose, 1962). Portanto, o blastema gar-dedo mnimo) e dorsoventral (punho-
deve conter alguma informao posicio- palma da mo) tambm correspondem
nal que informa ao blastema de um coto quelas do coto.
Posterior
Brotos enxertados
diferem do hospedeiro
no eixo dorsoventral
Relacionamento
de eixos entre Brotos enxertados
enxerto diferem do
(sombreado) hospedeiro no eixo
e hospedeiro ntero-posterior
Figura 18.23
Especificao dos eixos ntero-posterior e
dorsoventral na asa do pinto. O broto do mem-
bro enxertado se desenvolve de acordo com
sua prpria polaridade e no adota a polarida-
de do seu hospedeiro. As asas que se desen- Brotos enxertados
volvem dos brotos do membro enxertados diferem do
esto coloridas. Para maior clareza, as asas hospedeiro nos
que o hospedeiro normalmente desenvolve eixos ntero-posterior
e dorsoventral
no esto apresentadas. (De acordo com
Hamburger, 1938.)
CAPTULO 18 Desenvolvimento do Membro de Tetrpode 717
Estgio 17
Figura 18.24
Dgitos duplicados aparecem como imagem espelhar de dgitos normais quando Estgio 19
ZPA enxertada no mesoderma do broto do membro anterior. (de Honig e
Smmerbell, 1985, fotografia cortesia de D. Summerbell.)
Figura 18.25
Mapa da atividade sinalizadora de posio enquanto o membro se desenvolve. As cores represen-
tam a intensidade de expresso de sonic hedgehog. Os nmeros representam a porcentagem de
enxertos mostrando duplicaes completas quando essas regies foram transplantadas para a
margem anterior do broto do membro precoce. (Desenhos de acordo com Honig e Summerbell,
1985, dados de expresso de Riddle et al., 1993.) Estgio 29
718 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Clulas compactadas
por centrifugao
funes desenvolvimentais crticas. E como foi mencionado no Captulo 14, o gene
hedgehog responsvel pela polaridade de segmentos parece codificar uma protena
difusvel que interage com as clulas vizinhas. Seria muito perguntar se existe um
homlogo nos vertebrados que realiza uma funo semelhante?
Usando a seqncia conhecida do gene hedgehog em Drosophila, Riddle e
seus colaboradores (1993), usaram a reao da cadeia de polimerase para identifi-
car uma mensagem semelhante a hedgehog em brotos de membros de pinto. Eles
nomearam o gene como sonic hedgehog*. Hibridizao in situ mostrou que a
expresso de sonic hedgehog no se d no broto do membro inteiro, mas locali-
Implante na poro anterior do broto do zada exatamente na regio que, segundo Honig e Summerbell, contm a maior
membro (Embrio no estgio 19-23)
atividade de ZPA (Figura 18.25).
Riddle e colaboradores mostraram que a secreo da protena Sonic hedgehog
Anterior poderia ser suficiente para a atividade de ZPA. Eles transfectaram fibroblastos embri-
Plete de onrios de pinto (que normalmente nunca sintetizariam essa protena) com um vetor
Cepa resistente clulas viral contendo o gene sonic hedgehog (Figura 18.26). O gene foi expresso e traduzido
do embrio secretando nesses fibroblastos, os quais foram inseridos em uma crista anterior de um broto de
hospedeiro Shh membro precoce do pinto. Foi demonstrada tambm a reverso de polaridade dos
dgitos, de maneira semelhante ZPA. Mais recentemente, partculas contendo a
Posterior protena Sonic hedgehog provocaram as mesmas duplicaes (Lpez-Martinez et al.,
1995). Portanto, a Sonic hedgehog parece ser o agente ativo da ZPA.
(A) Sinalizao de curto alcance e deslocamento (B) Sinalizao seqncial de curto alcance
Difuso de
curto alcance
Difuso de alcance
mais longo com o
passar do tempo
Figura 18.27
Modelos de atividade da ZPA. (A) Modelo de funo da ZPA por sinalizao de curto alcance e
subseqente deslocamento do tecido especificado. (B) Modelo de funo da ZPA por sinais
seqenciais de curto alcance. (C) Modelo de funo de ZPA por espalhamento progressivo de um
sinal graduado, onde o tecido responsivo responde a gradiente de concentrao. (De acordo com
Tickle, 1995.)
FGF4
cido
retinico Manter proliferao na
zona progressiva; Desenvolvimento
ativar a expresso do esqueltico posterior
gene HoxD
Wnt7a
Sonic
hedgehog
Figura 18.28
Algumas interaes moleculares pelas quais
o broto do membro iniciado e mantido. Pa-
dro de expresso dinmica do gene HoxD difunde, parece ativar protenas morfogenticas do osso, especialmente a BMP2 (Francis
durante uma parte da morfognese da asa do et al., 1994; Laufer et al., 1994). Essas protenas tambm no se difundem para muito
pinto. Algumas das principais ligaes inclu- longe, e pesquisadores esto a procura de outras molculas que podem ser ativadas
em (1) a manuteno de Sonic hedgehog (Shh) pelas protenas morfogenticas do osso.
pela combinao de Wnt7a e FGF4; (2) a
manuteno de Shh pela combinao de cido SONIC HEDGEHOG COMO CO-ATIVADOR DE GENES HOX E PROLIFERAO
retinico e FGF4; (3) a induo recproca de CELULAR. Alm da ativao dos genes para as protenas morfogenticas do osso
FGF4 e Shh para a manuteno de cada um;
(especialmente a BMP2), existem outros dois importantes alvos para Sonic hedgehog.
(4) a interao entre FGF4 e Shh para ativar a
expresso dos genes HoxD e para manter a O primeiro conjunto de alvos podem ser os genes Hoxd 5 (Figura 18.28; Hoxd-9 a
diviso celular no mesnquima da zona pro- Hoxd-13). Durante o desenvolvimento normal dos membros de pinto ou camundon-
gressiva. (De acordo com Nelson et al., 1996; go, desenvolve-se um padro caracterstico de expresso de genes Hoxd concentri-
Niswander et al., 1994.) camente aninhados e centrados na margem posterior que tinha sido definida como a
ZPA (Doll et al., 1989; Nelson et al., 1996). A regio mais prxima do centro tem todos
esses genes Hoxd 5 expressos, mas a expresso desses genes cai seqencialmente
medida que as clulas esto progressivamente mais afastadas da ZPA. Alm disso, o
transplante de ZPA ou de clulas secretoras de Sonic hedgehog para a margem ante-
rior leva formao de padres de imagens espelhares na expresso dos genes Hoxd
e padres de imagens espelhares de dgitos (Izpisa-Belmonte et al., 1991; Nohno et
al., 1991; Riddle et al., 1993).
Originalmente parecia haver um cdigo pelo qual a expresso dos diferentes genes
HoxD especificaria o padro ntero-posterior dos dgitos, mas estudos recentes mos-
tram que o problema mais complexo. Sonic hedgehog pode estar agindo em conjun-
o com sinais da AER na especificao de padres. Primeiro, a expresso de genes
Hoxd controlada pela cooperao de AER e ZPA. Na ausncia de uma AER, a Sonic
hedgehog incapaz de induzir a expresso de genes Hoxd (Laufer et al., 1994). Entre-
tanto, a adio de cido retinico pode substituir a falta de AER (Helms et al., 1996;
Ogura et al., 1996).* H muito tempo se sabe que o cido retinico induz polarizao de
membros. Partculas embebidas em cido retinico podem mimetizar o tecido ZPA, e
induzir uma reverso da imagem espelhar na polaridade ntero-posterior (Tickle et al.,
1982, 1985), e uma nica partcula embebida com cido retinico pode substituir uma
ZPA quando o tecido ZPA normal foi removido (Eichele, 1989). Entretanto, o contedo
de cido retinico na ZPA no parece suficientemente alto para ativar genes
responsivos ao cido (Prancha 13; Noji et al., 1991; Rossant et al., 1991), e considera-
es tericas (veja Wanek et al., 1991) indicam que pouco provvel que o cido
retinico seja o agente ativo da ZPA. De outro lado, estudos recentes sugerem que o
O cido retinico morfogeneticamente ativo no broto do membro pode diferir de acordo com
a espcie. No membro do pinto, o cido retinico ativo parece ser o cido didehidroretinico.
Entretanto, essa forma no encontrada no broto do membro de camundongo (Stratford et al.,
1996).
CAPTULO 18 Desenvolvimento do Membro de Tetrpode 721
Especificando a ZPA
ZPA
Ainda no sabemos o que causa a ativao dos genes sonic hedgehog, especifica-
mente nas clulas do broto do membro posterior e no nas clulas mais anteriores.
possvel que o gene sonic hedgehog esteja sendo ativado por uma protena FGF
oriunda da crista ectodrmica apical, recentemente formada, e FGF8 estando presente
na AER capaz de ativar sonic hedgehog. Mas por que no h ativao de todas as
clulas mesenquimatosas abaixo da crista? A resposta pode estar na diferente compe-
tncia de certas clulas mesenquimatosas em responder ao sinal de FGF. Charit e
colegas (1994) sugeriram que a protena Hoxb-8 pode ser crtica no fornecimento
dessa competncia restrita. Eles observaram que o gene Hoxb-8 era geralmente ex-
presso na metade posterior do broto do membro anterior do camundongo. Ento, eles
produziram camundongos transgnicos nos quais o gene Hoxb-8 estava sob o con-
trole de um novo promotor que causava sua expresso em todos os brotos de mem-
bros anteriores. Isso resultou na expresso de sonic hedgehog na poro anterior dos
brotos dos membros, a criao de uma nova ZPA, uma nova regio de expresso de
genes HoxD e duplicaes de membros anteriores como imagens espelhares. Essa
evidncia sugere que a protena Hoxb-8 est envolvida na especificao da expresso
de sonic hedgehog e portanto no estabelecimento da ZPA.
(A) (B)
Figura 18.29
Transformaes dorsal-para-ventral de regies do membro em camundongos deficientes de
ambos os genes Wnt7a. (A) Seco histolgica (corada com hematoxilina e eosina) da pata do
membro anterior em embrio de camundongo de 15.5 dias. Os tendes ventrais e as almofadas
ventrais dos ps so facilmente vistas. (B) A mesma seo atravs de um embrio mutante
deficiente em Wnt7a. Tendes e almofadas dos ps esto agora duplicados no que seria a face
dorsal da pata. dt, tendes dorsais; dp almofada dorsal do p; vp, almofada ventral do p; vt,
tendo ventral. Os nmeros indicam identidade dos dgitos. (de Parr e McMahon, 1995;
fotografias cortesia dos autores.)
solas em ambas as superfcies de suas patas, mostrando que a Wnt7a era necessria
para a padronizao dorsal do membro (Figura 18.29). A Wnt7a induz o gene Lmx1 no
mesnquima dorsal, e esse gene codifica um fator de transcrio que parece ser essen-
cial para a especificao do destino das clulas dorsais no membro (Riddle et al., 1995;
Vogel et al., 1995). Se esse fator expresso nas clulas do mesnquima ventral, elas
desenvolvem um fentipo dorsal.
Os camundongos deficientes em Wnt7a tambm no tinham dgitos posteriores,
sugerindo que o Wnt7a tambm era necessrio para o eixo ntero-posterior. Yang e
Niswander (1995) fizeram observaes similares no embrio de pinto. Esses pesqui-
sadores removeram o ectoderma dorsal do membro em desenvolvimento e observa-
ram que esse procedimento resultou na perda dos elementos esquelticos posterio-
res dos membros. Esses membros no tinham dgitos posteriores porque a expres-
so de sonic hedgehog e Fgf4 estavam faltando. A expresso de Wnt7a induzida por
vrus podia substituir o ectoderma dorsal e restaurar a expresso de sonic hedgehog
e o padro posterior. A sntese de Sonic hedgehog estimulada pela combinao
das protenas Wnt7a e FGF4. Os trs eixos do embrio de pinto so todos inter-
relacionados e coordenados.
Asa
Perna
Figura 18.30
Resposta diferencial de clulas da precartilagem da asa e da perna (estgio24) a fatores
morfogenticos especficos. Fotografias das clulas em soro, TGF- e cido retinico so
fotografias macroscpicas de colnias de clulas. As fotografias das redes de fibronectina
depositadas pelas clulas so fotomicrografias fluorescentes em aumento de 40x. (de Downie
e Newman, 1994.)
*Quando se refere mo tem-se um conjunto ordenado de nomes para especificar cada dgito
(Digitus pollicis, d. indicis, d. medius, d. annularis e d. minimus, respectivamente do polegar ao
dedo mnimo). No existe tal nomenclatura para os dgitos do p, mas o plano proposto por Phillips
(1991) tem muito mrito. Os dgitos do p, desde o hlux at o dedinho, seriam chamados porcellus
fori, p. domi, p. carnivorus, p. non voratus e p. plorans domi, respectivamente.
724 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Informaes adicionais
& Especulaes
Lies de limbless
Zona
necrtica
interior
Zona Zona
necrtica necrtica
anterior posterior
Zona
necrtica
interior
Figura 18.31
Padres de morte celular em primrdios de pernas de embries de (A) pato e (B,C) de pinto.
Sombreamento indica reas de morte celular. No pato, a morte celular mnima, enquanto que
existem regies de extensa morte celular no tecido interdigital da perna do pinto (De acordo com
Saunders e Fallon, 1966.)
Informaes adicionais
& Especulaes
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Interaes celulares distncia:
Hormnios como mediadores
do desenvolvimento
19
Mudou a velha ordem cedendo seu espao
para a nova.
ALFRED LORD TENNYSON (1886)
Metamorfose anfbia
Em anfbios, a metamorfose geralmente associada com as mudanas que preparam
um organismo aqutico para uma existncia terrestre. Em urodelos (salamandras), as
modificaes incluem a reabsoro das nadadeiras da cauda, a destruio das guel-
ras externas e a mudana da estrutura da pele. Nos anuros (rs e sapos), as mudan-
as metamrficas so mais surpreendentes, e quase todos os rgos so modifica-
dos (Tabela 19.1). As modificaes na forma so muito bvias (Figura 19.1). Mudan-
as regressivas incluem a perda dos dentes crneos e das guelras internas do girino,
como tambm a destruio de sua cauda. Ao mesmo tempo, so evidentes os pro-
Argininosuccinato
Uria sintetase
Arginase Argininosuccinato
Arginina
Argininosuccinato
liase
Fumarato
(B)
Carbamoilfosfato sintase
Porcentagem de nveis de enzimas
Ornitina carbamoiltransferase
Argininosuccinato sintetase
ps-metamrficas
Argininosuccinato liase
Excreo de uria
Estgio do desenvolvimento
Tiroxina (T 4 )
Triiodotironina (T 3 )
Figura 19.3
Frmulas da tiroxina (T4) e da triiodotironina (T3).
torna uma grande sacola de enzimas proteolticas (Figura 19.4). As principais enzimas
proteolticas parecem ser as colagenases e outras metaloprotenases cuja sntese de-
pende dos hormnios da tireide. Se um inibidor de metaloprotenases (TIMP) adi-
cionado s caudas, ele impede a regresso da cauda induzida pelo hormnio da tireide
(Oofusa e Yoshizato, 1991; Patterson et al., 1995).
A resposta aos hormnios da tireide intrnseca ao prprio rgo e no depen-
de dos tecidos vizinhos. Na epiderme, a resposta aos hormnios tireoidianos de-
pende de qual parte do corpo a epiderme est cobrindo. As clulas epidrmicas da
cabea e do corpo do girino sofrem uma lenta renovao (como esperado na pele), e
T3 no modifica essa velocidade. Na cauda, entretanto, T3 causa um rpido aumento
na queratinizao e morte dessas clulas. Tambm se d uma supresso, especfica
para a cauda, das divises das clulas precursoras que poderiam originar mais clu-
las epidrmicas. O resultado a morte das clulas epidrmicas da cauda enquanto
Concentrao da protease catepsina lisossmica
(unidades/g nitrognio)
Figura 19.4
Aumento da atividade protesica lisossmica
durante a regresso da cauda em Xenopus
laevis. As enzimas lisossmicas so conside-
radas responsveis pela digesto das clulas da
Comprimento relativo da cauda (%) cauda. (De acordo com Karp e Berrill, 1981.)
738 PARTE V Interaes Durante a Formao do rgo
(A) (B)
Extremidade da
cauda transplantada
no tronco
Figura 19.5
Especificidade de rgos durante a metamor-
fose da r. (A) Extremidades da cauda regridem Cauda
mesmo quando transplantadas no tronco, en-
quanto (B) os clices oculares permanecem
intactos mesmo quando transplantados para a
cauda em regresso. (De acordo com Schwind,
1933; fotografias de Geigy, 1941, cortesia do
Journal of Experimental Zoology.)
*Um dos movimentos mais espetaculares de olhos durante a metamorfose ocorre nos peixes
chatos como o linguado. Originalmente, os olhos esto em lados opostos da face. Todavia, durante
a metamorfose, um dos olhos migra dorsalmente para encontrar o outro no topo da cabea,
permitindo ao peixe permanecer no fundo, olhando para cima (Martin e Drewry, 1978).
Figura 19.6
A migrao do olho e mudanas neuroniais
associadas durante a metamorfose do girino de
Xenopus laevis. Os olhos do girino so locali-
zados lateralmente, por isso, existe um plano
binocular relativamente pequeno. Os olhos
migram dorsalmente e rostralmente durante a
metamorfose, criando um amplo campo
binocular para a r adulta. Abaixo do girino em
metamorfose est uma representao da regio
ptica de seu crebro. Quando se injeta
peroxidase de rabanete (horseradish) na retina,
os neurnios pticos a transportam para o lado
contralateral (oposto) do crebro (flecha pe-
quena), mas no para o lado ipsilateral. Com a
continuao da metamorfose, as projees
ipsilaterais (envolvidas na viso binocular) co-
meam a ser vistas (flecha grande). (de Hoskins
e Grobstein, 1984, cortesia de P. Grobstein.)
740 PARTE V Interaes Durante a Formao do rgo
ao seu estilo predatrio de vida. Para alcanar sua presa, a r deve enxergar em trs
dimenses. Ou seja, ela deve adquirir um campo de viso binocular onde os sinais
de ambos os olhos convergem no crebro. No girino, o olho direito inerva o lado
esquerdo do crebro e vice-versa. No existem projees ipsilaterais (do mesmo
lado) dos neurnios da retina. Entretanto, durante a metamorfose essas vias
ipsilaterais adicionais emergem, permitindo que sinais de ambos os olhos atinjam a
mesma rea do crebro (Currie e Cowan, 1974; Hoskins e Grobstein, 1985a). Em
Xenopus, essas novas vias neuroniais no resultam da remodelao de neurnios
existentes, mas da formao de novos neurnios que se diferenciam em resposta
aos hormnios da tireide (Hoskins e Grobstein, 1985a,b). Tanto o movimento dos
olhos para sua nova posio como a diferenciao de novos neurnios que esten-
dem processos ipsilaterais para o crebro so modificaes dependentes de horm-
nios da tireide.
Outros neurnios tambm sofrem mudanas profundas. Algumas clulas nervo-
sas morrem, como aquelas que inervam os msculos da cauda de girinos (Forehand e
Farel, 1982). Essa morte neuronial parece ser uma outra resposta ao hormnio da
tireide, e no causada pela morte do tecido alvo. Outros neurnios, como certos
neurnios motores na mandbula do girino trocam sua fidelidade do msculo larval
para o msculo adulto recm-formado (Alley e Barnes, 1983). E ainda outros neurni-
os, como aqueles inervando a lngua (um msculo recm-formado, no presente na
larva) estiveram dormentes durante o estgio de girino e s iniciam a formao de
conexes durante a metamorfose (Grobstein, 1987). O crebro tambm sofre mudanas
em sua estrutura durante a metamorfose. Portanto, o sistema nervoso dos anuros
sofre enorme reestruturao durante a metamorfose. Alguns neurnios morrem, ou-
tros nascem, e outros mudam sua especificidade.
Unidades relativas
Tratamento
TR
TR
Nenhum 505 24
T3 1290 368
Prolactina + T3 799 <10
Prolactina 405 43
Alta Alta
Concentrao de Concentrao concentrao do
Concentrao Concentrao baixa concentrao
T 3 e T4 aumenta do receptor receptor de T3
baixa de T3 e T4 do receptor de T3 de T3 e T4
de T3 aumenta
Gene do receptor de T3
Transcrio Transcrio
Transcrio
Transcrio Transcrio
Figura 19.7
Modelo hipottico para a acelerao da metamorfose em Xenopus pela auto-induo de receptores
de T3 por T3. (A) No girino, a premetamorfose caracterizada por baixos nveis de tirotropina
(fator de liberao do hormnio da tireide), hormnios da tireide e receptores de T3. (B) No
incio da metamorfose, os nveis de tirotropina aumentam (provavelmente devido maturao
desenvolvimental da glndula pituitria). Isso aumenta a quantidade de T3 que se liga pequena
quantidade de seu receptor estimulando a transcrio de mais mRNA do receptor de T3. Algumas
outras protenas induzidas por T3 tambm so necessrias para a transcrio de mais mensagem
de T3. (C) No clmax metamrfico, as grandes concentraes de T3 induzem, ainda mais, a sntese
de seus receptores, o que causa uma resposta mais rpida ao T3.
Informaes adicionais
& Especulaes
Heterocronia
Estmulos externos mento direto, tpico em espcies de rs emerge do ovo gelatinoso, trs semanas
que no tm girinos e ourios-do-mar que aps a fertilizao, no um girino, mas
no tm larvas pluteus. Elinson e seus uma pequena r (Figura 19.10D). A peque-
Hipotlamo colegas (del Pino e Elinson, 1983; Elinson, na r tem uma cauda durante a primeira
1987) estudaram uma pequena r, Eleu- parte de sua vida, mas ela usada para
Ambystoma tigrinum therodactylus coqui, que um dos ani- respirao e no para a locomoo. Tais
Ambystoma gracilus mais mais abundantes na ilha de Porto rs com desenvolvimento direto no ne-
Rico. Diversamente dos ovos de Rana e cessitam de gua para seus estgios
Hormnio liberador de Xenopus, os ovos de E. coqui so fertili- larvais e podem, portanto, colonizar no-
tirotropina (TSH-RF) zados enquanto esto no corpo da fmea. vas regies inacessveis a outras rs.
Cada ovo tem 3.5mm de dimetro (cerca Raff (1987) estudou o desenvolvimen-
Pituitria
de 20 vezes o volume dos ovos de Xeno- to direto em ourios-do-mar. Em ourios-
pus). Aps a postura, o macho permane- do-mar tpicos, as clulas mesenquima-
ce levemente apoiado sobre os embries, tosas primrias invaginam e secretam o
Ambystoma mexicanum
protegendo-os de predadores e da des- esqueleto de carbonato de clcio da larva
secao (Taigen et al., 1984). O desenvol- pluteus. Essas larvas se alimentam e cres-
Hormnio
vimento precoce semelhante maioria cem at que se formem as vesculas
estimulante da tireide
das rs. A clivagem holoblstica, a gas- celmicas (tambm derivadas dos micr-
trulao iniciada na posio subequa- meros) nos lados do intestino (Pehrson e
torial (Figura 19.10A), e as dobras neurais Cohen, 1986). O celoma esquerdo conti-
Tireide
se elevam a partir da superfcie (Figura nua a crescer produzindo uma hidrocele
19.10B). Entretanto, logo aps o fecha- que induz o ectoderma sobrejacente a
Tiroxina,
Triiodotironina
mento do tubo neural, os brotos dos mem- invaginar formando um vestbulo. A
bros aparecem na superfcie (Figura hidrocele e o vestbulo formam um rudi-
Eurycea neotenes
19.10C). Essa emergncia precoce de bro- mento que cresce dentro da larva at ser
Espcies de Necturus tos de membros a primeira indicao de liberado na metamorfose para se tornar
e Siren
que o desenvolvimento direto e que no um ourio-do-mar juvenil (Figura 19.11).
passar pelo estgio de girino sem mem- Vrias espcies de ourio-do-mar tm
Tecidos alvo capazes
bros. Mais ainda, a emergncia dos mem- estgios suprimidos da larva pluteus en-
de sofrer metamorfose bros no depende de hormnios da quanto aceleram o desenvolvimento do ru-
tireide (Lynn e Peadon, 1955). O que dimento adulto. Como no desenvolvimento
Figura 19.9
Estgios ao longo do eixo hipotlamo-pituitria- (A) (B)
tireide da salamandra onde se considera que
vrias espcies tm bloqueio da metamorfose.
Eurycea, Necturus e Siren parecem ter um de-
feito no receptor dos tecidos responsivos.
Eurycea ter metamorfose ao ser exposta con-
centraes extremamente altas de tiroxina, en-
quanto que Necturus e Siren no respondem a
qualquer dose. (De acordo com Frieden, 1981.)
Sem alongamento do
arquntero, iniciao
do esqueleto larval,
formao do intestino
larval ou seqestro
Destinos em
do primrdio embrionrio
32 clulas
Metamorfose em insetos
Everso e Diferenciao dos Discos Imaginais
Muda Muda
Muda Muda
Muda
Muda
Muda
Adulto Adulto
Figura 19.13
(A) Metamorfose hemimetablica (incompleta). (B) Metamorfose holometablica (completa).
Olho
Trax
Perna
Haltere
Asa Abdmen
Genitlia
(A) (B)
Figura 19.15
Alongamento do disco imaginal. Eletromicrografia de varredura do disco da perna de Drosophila
no terceiro instar antes (A) e aps (B) o alongamento. (De Fristrom et al., 1977, cortesia de D.
Fristrom.)
Coxa
Trocanter Membrana
peripodial T2-5
Trax Fmur
Fmur T1 T1 Trocanter
presuntivo Tbia Tbia Tbia Fmur Tbia T1 T2-5 Fmur
Coxa
Garra
Trocanter Fmur Coxa Tbia
Trax Fmur Trax Trax
Coxa presuntivo Trocanter presuntivo (D)
Trocanter presuntivo
T2-5 T1
(A) Garras (B) (C)
Tarso
Figura 19.16
Seqncia de alongamento do disco da perna de Drosophila. (A) Vista da superfcie do disco no Garras
invertido. (B,C) Seco longitudinal atravs do disco da perna em alongamento e completamente
invertido. t1, basitarso; t2-5, segmentos tarsais 2-5. (D) Perna adulta. (de Fristrom e Fristrom,
1975, cortesia de D. Fristrom.)
750 PARTE V Interaes Durante a Formao do rgo
Informaes adicionais
& Especulaes
Alcance do sinal Wg
Clula expressando wg
Primeiro instar Figura 19.20 membro (ou seja, a garra). Essa regio
Anterior
Compartimentao e expresso gnica no dis- comea a expressar os genes Distal-less
Posterior
co da asa. (A) No primeiro instar da larva foi e arista-less que caracterizam a regio da
formado o eixo ntero-posterior e manifesta-
extremidade distal e estimulam o cresci-
do pela expresso do gene engrailed no com-
partimento posterior. No segundo instar, for- mento e a diferenciao das clulas (Fi-
Segundo instar gura 19.21A; Campbell et al., 1993; Basler
Ventral
ma-se o eixo dorsoventral, e visto pela ex-
Dorsal A presso do gene apterous na futura superfcie e Struhl, 1994; Diaz-Nenjumea et al., 1994).
dorsal. No terceiro instar da larva, as bordas da Se a protena Dpp produzida por um
expresso de engrailed se estendem ligeiramen- aglomerado de clulas no compartimento
te alm do limite de A/P. Onde h interao das anterior ventral ou se a protena Wingless
protenas secretadas e da membrana na juno
expressa por um pequeno grupo de c-
dos eixos D/V e A/P, as clulas so determina-
das a se tornar a extremidade distal da asa (X). lulas no compartimento anterior dorsal
Fim do terceiro instar Margem (ativando genes), um eixo prximo-distal
(De acordo com Blair, 1995.)
Ventral inteiramente novo ser formado no local
perna realizada por interaes nos limi- da expresso (Figura 19.21B; Prancha 27).
Dorsal tes entre os eixos D/V e A/P. A situao na asa um pouco mais dif-
Na perna, a protena Hedgehog do cil de compreender. A protena Hedgehog
compartimento posterior induz as clulas do compartimento posterior induz as clu-
mais prximas do compartimento anterior las adjacentes dos compartimentos anterior
Lmina da asa dorsal, a secretar a protena Decapenta- dorsal e anterior ventral a secretar Dpp. Isso
Adulto plegic e induz a protena Wingless das estabelece as condies de crescimento
clulas mais prximas do compartimento celular e padronizao ao longo do eixo A/
Dorsal Ventral anterior ventral. Ambas as protenas, De- P. Nas clulas que do origem margem, as
Margem capentaplegic e Wingless ativam o gene clulas da superfcie dorsal que expressam
optomotorblind, cujo produto protico
promove o crescimento dos apndices do
(A)
membro (Wilder e Perrimon, 1995; Grimm
e Pflugfelder, 1996). Ainda mais, onde es-
sas trs protenas difusveis se encontram Distalless
se define a extremidade mais distal do
engrailed
apterous
ambos
(B) Anterior Posterior
Prancha 24
A protena Myf-5 expressa em precursores da clula muscular
expressa muscular..
Os elementos genticos regulando a expresso temporal e espacial do gene Myf-5
podem ser discernidos fundindo-se o gene da -galactosidase com as seqncias
envolvendo o loco Myf-5. Aqui, uma seqncia particular a montante do gene Myf-
5 causa a expresso do gene (cor preta) nos msculos do pescoo, arcos farngeos,
msculos oculares, msculos dos membros anteriores, e mitomos segmentados do
embrio de camundongo de 13.5 dias. Captulos 2 e 9. (Fotografia cortesia de A.
Patapoutian, G. Lyons, J. Miner e B. Wold.)
Prancha 25
Expresso assimtrica do gene nodal no
embrio do pinto de 24 horas.
Hibridizao in situ da montagem total usando sondas para o gene nodal do
pinto encontra-o expresso no mesoderma da placa lateral somente do lado
esquerdo. Pode aqui ser visto como a regio de cor prpura. Esse gene
importante para o estabelecimento do eixo esquerdo-direito do pinto. Cap-
tulo 16. (Cortesia de C. Stern.)
Prancha 26
Regulao da expresso
hometica dos genes na
formao das patas dos insetos.
Ao contrrio das lagartas das borboletas, as
larvas das moscas no tm pr-pernas. Aqui,
os produtos dos genes hometicos Ultrabi-
thorax e abdominal-A esto corados de ver-
de e a protena Distal-less (necessria para o
desenvolvimento dos membros) est cora-
da de laranja. Na larva precoce da borboleta
do castanheiro Precis, os membros torcicos
(de T1-3) so facilmente vistos. Alguns seg-
mentos abdominais (A3-6) comeam a pro-
duzir buracos em seu domnio de expres-
so das protenas hometicas. Abaixo, quan-
do a lagarta cresceu, a expresso de Distal-
less pode ser vista nessas regies. (O ama-
relo indica sobreposio de domnios de
expresso.) Captulos 14, 19 e 23. (Foto-
grafias cortesia de B. Warren, S. Paddock e
S. Carroll.)
Prancha 27
A protena Wingless tem um papel crtico na orga-
nizao do disco alar imaginal de Drosophila
Drosophila..
Clulas na juno entre os compartimentos dorsal e ven- Prancha 28
tral do disco alar induzem a expresso da protena Wingless Expresso ectpica do gene eyeless de Drosophila causa a
em uma estreita faixa de clulas abarcando esse limite. A formao de novos olhos em outras regies do adulto.
protena Wingless induz ento a expresso de outras pro- Aqui, o gene eyeless foi ativado experimentalmente nas regies da larva
tenas tal como a Vestigial (aqui corada de vermelho) a da mosca que formam a cutcula da cabea. Na metamorfose, olhos
vrios dimetros de distncia. Captulo 19. (Fotografia compostos pigmentados emergiram desse tecido. Captulo 23. (Foto-
cortesia de K. Basler.) grafia cortesia de W. Gehring e Science.)
Prancha 30
Expresso do fator de transcrio Oct4
no blastocisto do camundongo.
O fator de transcrio Oct4 encontrado nas clulas que
iro formar o embrio, ao passo que est ausente naquelas
clulas que iro formar a placenta. A cromatina est corada
com iodeto de propdio (vermelho) enquanto a protena
Prancha 29 Oct4 est corada de verde. A sobreposio indicada pela
Polifenismo sazonal de Araschina levana
levana,, cor amarela que mostra a presena de Oct4 somente nas
a borboleta mapeada europia. clulas da massa celular interna. Captulos 5 e 22. (Foto-
Vrias espcies de borboletas desenvolvem-se de maneira diferente nas dife- grafia cortesia de H. R. Schler.)
rentes estaes do ano. Em A. levana, a forma de vero representada no alto;
a forma de primavera representada abaixo. Neste caso, as diferenas
desenvolvimentais so produzidas pelo ambiente, especificamente as diferen-
as na durao do dia. Captulo 21. (Fotografia cortesia de H. F. Nijhout.)
Prancha 31
Isoladores da expresso gnica.
A protena BEAF-32 liga-se a centenas de stios nos
cromossomos politnicos de Drosophila, dividindo
os cromossomos em domnios funcionais. Suspeita-
se que sinais regulatrios de um domnio no atra-
vessem o limite para o prximo. O DNA foi corado
de vermelho com iodeto de propdio. O anticorpo da
protena BEAF-32 est corado de verde e a
sobreposio aparece em amarelo. Captulo 11. (Fo-
tografia cortesa de U. K Laemmli.)
Prancha 33
Expresso assimtrica da protena Flectina no
corao em desenvolvimento do pinto.
Essa protena da matriz extracelular (corada de ama-
Prancha 32 relo) acumula-se predominantemente no lado esquer-
Polaridade dorsoventral do tubo neural do pinto. do do embrio do pinto no estgio 10. Captulos 9 e
Sinais difusveis da notocorda (tubo verde em baixo) induzem a forma- 16. (Fotografia confocal laser de varredura cortesia
o da placa do assoalho no lado ventral do tubo neural (verde). As de K. Linask.)
clulas da placa do assoalho induzem a formao de duas regies de
neurnios motor (dourado) nos lados ventrolaterais. A notocorda tam-
bm restringe a expresso da protena Dorsalin (necessria para o de-
senvolvimento das clulas da crista neural) para a regio mais dorsal do
tubo neural (azul). Captulos 7 e 17. (Fotografia cortesia de T. M. Jessell.)
Prancha 35
Localizao das clulas mesenquimatosas
ourio--do
primrias no embrio do ourio -mar
-mar..
do-mar
Prancha 34 Nesta micrografia confocal imunofluorescente somente mos-
Cuidado parental de girinos de r. trada parte da blstula mesenquimatosa. As clulas mesenqui-
Girinos da r de jato-venenoso reticulada (poison-dart frog) so matosas primrias esto coradas de verde e a -catenina est
carregados no dorso de seus pais para pequenas poas de gua na base corada de vermelho. -catenina vista nas junes aderentes das
de folhas de bromlia no dossel da floresta tropical. A fmea das membranas celulares embrionrias, e tambm encontrada no
espcies amaznicas do Peru, em seguida, supre ovos no-fertilizados citoplasma e ncleos das clulas que servem de alvos para a
como alimento aos girinos em desenvolvimento. Captulo 9. (Foto- migrao das clulas mesenquimatosas primrias. Captulo 6.
grafia por M. Fogden/DRK Foto.) (Fotografia cortesia de J. R. Miller e D. McClay.)
CAPTULO 19 Hormnios e metamorfose 753
motor inervando o segundo msculo oblquo da larva sobrevive a morte de seu alvo,
para inervar um msculo adulto recm-formado (o quarto msculo externo dorsal) que
se diferencia durante a metamorfose (Truman et al., 1985).
Em alguns casos, as funes larvais so assumidas por diferentes regies no
adulto. O vaga-lume larval tem suas lanternas pareadas no oitavo (ltimo) segmento
abdominal; os neurnios desse segmento controlam a luminescncia da larva. Duran-
te a pupao, o sexto e o stimo segmentos tambm desenvolvem os fotocitos produ-
tores de luz e os nervos para controlar a regulagem do flash. No fim da pupao,
somente o sexto e o stimo segmentos tm lanternas funcionais. Ainda mais, se as
lanternas larvais forem removidas, as lanternas adultas ainda se formaro (Strause et
al., 1979). Portanto, o que havia sido uma funo neural dos gnglios do oitavo seg-
mento se tornou uma funo dos gnglios do sexto e stimo segmentos.
Desde sua descoberta em 1954, quando Butenandt e Karlson isolaram 25mg de ecdisona a partir
de 500kg de pupas da mariposa do bicho-da-seda, a 20-hidroxiecdisona teve vrios nomes, incluindo
-ecdisona, ecdisterona e crustecdisona.
CAPTULO 19 Hormnios e metamorfose 755
Clulas
neurossecretoras Corpus
Crebro cardiacum Hidroxiecdisona
20-hidroxiecdisona
Regulao
Corpus
allatum Epiderme L/P L/P Epiderme
Disco
imaginal
P,L/A
Protena ligante Hormnio juvenil P/A Epiderme
(JHBP) discos P/A
imaginais
Hormnio
juvenil (JH)
JH-JHBP
os discos imaginais se invertem para formar o esquema bsico do corpo adulto, mas
ainda com a cabea presa dentro da cavidade do corpo. Aps 12 horas (a 25C), um
breve pulso de ecdisona desencadeia a emergncia da cabea a partir do trax e a
transio de prepupa pupa. A cabea empurrada para fora pela contrao de
msculos abdominais, que empurram uma bolha de ar para o interior, produzindo um
espao para a cabea everter (Fristrom e Fristrom, 1993). Um surto subseqente de
ecdisona completa a diferenciao final da pupa de Drosophila para a forma adulta,
imediatamente antes da ecloso, a produo do adulto a partir do casulo pupal.
Como em outros insetos, a Drosophila tem um hormnio de ecloso que inicia os
movimentos e comportamentos que permitem ao adulto se desvencilhar de seu ca-
sulo pupal para um mundo maior.
Figura 19.26
Tufos induzidos por ecdisona em clulas cultivadas da glndula salivar de
D. melanogaster. Aqui, a regio do cromossomo a mesma da Figura
2.13. A formao de tufos induzida pela ecdisona. (i) Controle no
induzido. (ii-v) Cromossomos estimulados por hidroxiecdisona aps 25
minutos, 1, 2 e 4 horas. (Cortesia de M. Ashburner.)
758 PARTE V Interaes Durante a Formao do rgo
outros regridem (Figura 19.26). A formao de tufos mediada pela ligao de hidro-
xiecdisona a locais especficos nos cromossomos; anticorpos fluorescentes contra
a hidroxiecdisona encontram esse hormnio localizado nas regies sensveis a ele
(Gronemeyer e Pongs, 1980).
A1 A2 A3
Seqncias lider ou
seguidora (no traduzidas)
xons traduzidos
ntrons
mRNA precoce-tardio
mRNA prepupal intermedirio
(B) Larva
precoce do Larva tardia Prepupa Prepupa
terceiro do terceiro intermediria tardia
instar instar
Baixa Alta Baixa Alta
concentra- concentra- concentra- concentra-
o de o de o de o de
ecdisona ecdisona ecdisona ecdisona
* As protenas E74A e E74B se originam do mesmo gene pela ativao de diferentes promoto-
res. Ambas partilham a mesma ponta carboxi-terminal com sua regio de ligao a DNA. Entretan-
to, a protena E74A tem um amino terminal mais longo. Os mRNAs de E74B so transcritos em
concentraes de ecdisona dez vezes menores do que aquelas necessrias para ativar a transcrio
das mensagens de E74A (Karim e Thummel, 1991).
Informaes adicionais
& Especulaes
Adulto
Segundo Terceiro Quarto Quinto
estgio estgio estgio estgio
Primeiro da ninfa da ninfa da ninfa da ninfa
estgio
da ninfa
Precoceno 1
Aps tratamento
com precocenos
no estgio 2 Figura 19.31
Metamorfose precoce no inseto Dysdercus causada por precocenos. (A) Es-
trutura de dois precocenos ativos encontrados em plantas. (B) Desenvolvi-
Adulto precoce mento inibido no Dysdercus. Quando ninfas no segundo estgio so tratadas
Precoceno 2
com precocenos, elas se metamorfoseiam em adultos precoces estreis em
lugar de continuar sua seqncia de mudas do desenvolvimento normal. (De
(A) (B) acordo com Bowers et al., 1976.)
(Bowers et al., 1966; Slma e Williams, cenos e suas estruturas qumicas esto hormnio juvenil tambm responsvel
1966; Williams, 1970), e provavelmente usa representadas na Figura 19.31A. Quando pela maturao do ovo do inseto (Captu-
esse anlogo do hormnio juvenil para se as larvas ou ninfas desses insetos so lo 21). Sem esse hormnio, as fmeas so
livrar de certos predadores de insetos. pulverizadas com qualquer um dos com- estreis. Assim, os precocenos podem
Outras plantas tm compostos que postos, elas sofrem mais uma muda e se proteger as plantas causando uma meta-
produzem o mesmo efeito- a morte de pre- metamorfoseia forma adulta (Figura morfose prematura de certas larvas de in-
dadores de insetos- mas o fazem induzin- 19.31B). Precocenos causam a morte sele- setos a adultos estreis.*
do a metamorfose muito cedo. Dois com- tiva das clulas do corpus allatum no in-
postos que foram isolados de ervas com- seto imaturo (Schooneveld, 1979; Pratt et
postas causam metamorfose precoce em al., 1980). Essas clulas so responsveis
larvas de certos insetos transformando- pela sntese do hormnio juvenil. Sem esse Muitas mais dessas mudanas induzidas pelo
os em adultos estreis (Bowers et al., 1976). hormnio, a larva comea suas mudas ambiente no desenvolvimento das larvas sero
Esses compostos so chamados preco- metamrficas e imaginais. Mais ainda, o discutidas no Captulo 21.
Estgio embrionrio
(B) (C)
corda mamria. Essa corda abre na pele, em uma extremidade, formando um mamilo
enquanto a outra extremidade comea a se ramificar em dutos. Aqui o desenvolvi-
mento cessa at a puberdade.
O desenvolvimento do tecido mamrio no camundongo macho idntico ao da
fmea at 13-15 dias de gestao. Nessa poca, o mesnquima se condensa ao redor
do centro do broto mamrio, e as clulas da corda morrem. Portanto, uma pequena
corda de clulas epiteliais destacada da pele (Figura 19.33), e a glndula mamria no
se estende at a superfcie. No ocorre desenvolvimento adicional.
Essa morte celular na corda mamria dos machos tem sido estudada cultivando
os brotos mamrios in vitro. Tais brotos de camundongos fmeas normalmente
desenvolvem lbulos conectados superfcie (Figura 19.34). Entretanto, se testos-
terona adicionada ao meio de cultura, os brotos se degeneram. Os brotos mamrios
de camundongos machos tambm desenvolvem lbulos quando cultivados em au-
sncia de testosterona; portanto, o hormnio testosterona impede o desenvolvi-
mento mamrio no macho. A testosterona motiva essa morte celular especfica ins-
truindo as clulas mesenquimatosas a destruir a corda epitelial. Isso foi mostrado
por uma srie de experimentos de recombinao. Existe em camundongos (e tambm
em humanos) uma mutao chamada sndrome de insensibilidade andrognica, na
qual indivduos cromossomicamente machos (XY) no produzem um receptor funci-
onal de testosterona. Assim, apesar desses indivduos possurem testculos que
esto secretando testosterona ativamente, eles so incapazes de responder a ela.
Um dos resultados que esses indivduos tm um desenvolvimento mamrio do
tipo feminino (veja Figura 19.9). Kratochwil e Schwartz (1976) isolaram clulas epiteliais
e mesenquimatosas a partir de brotos mamrios normais e mutantes e os cultivaram Figura 19.33
em vrias combinaes. Algumas culturas tiveram a adio de testoterona e outras Rudimento mamrio em um feto de camun-
no. Os resultados esto mostrados na Figura 19.35. Quando ambos, o mesnquima dongo macho. O rudimento (flecha) se sepa-
e o epitlio, eram do tipo selvagem, o rudimento se desenvolvia em tecido mamrio. rou da epiderme. (de Raynaud, 1961.)
764 PARTE V Interaes Durante a Formao do rgo
Haste
Lbulos
(A) TECIDO NORMAL (B) TECIDO DE FMEA (C) TECIDO DE MACHO
DE FMEA MAIS TESTOSTERONA SEM TESTOSTERONA
Figuras 19.35
Evidncia de que a clula mesenquimatosa o
alvo da testosterona na interrupo do desen-
volvimento mamrio. (A) Cultivo de um rudi- (A) (B)
mento mamrio de um embrio de fmea de 14
dias. (B) Rudimento mamrio de um embrio
de macho de 14 dias comeando sua resposta
testosterona. (C) Broto mamrio recombinado
contendo clulas epiteliais do tipo selvagem e
mesnquima insensvel a andrgenos, cultiva-
do com testosterona. No se verifica resposta a
andrgenos. (D) Broto mamrio recombinado
contendo clulas epiteliais insensveis a
andrgenos e mesnquima do tipo selvagem,
cultivado com testosterona. As clulas mesen-
quimatosas esto condensando na constrio
do broto. (de Kratochwil e Schwartz, 1976,
cortesia de K. Kratochwil.) (C) (D)
CAPTULO 19 Hormnios e metamorfose 765
Adolescncia
Insulina e hidrocortisona
(diviso celular e Prolactina
diferenciao) (sem diviso celular)
Retculo
endoplasmtico
rugoso
(A)
(B)
Figura 19.37
Diferenciao da glndula mamria dependen-
te de hormnios. (A) Diagrama esquemtico
do desenvolvimento dependente de hormnio
da glndula mamria in vitro. (B) Auto-radio-
grafia da glndula mamria de um camundon-
go virgem com uma sonda de cDNA radioati-
vo para o mRNA da casena. (C) Auto-radio-
grafia da glndula mamria de um camundon-
go em lactao, com uma sonda de cDNA re-
conhecendo a mensagem da casena. (D) Auto-
radiografia da glndula mamria de um camun-
dongo virgem incubada com insulina, hidro-
cortisona e prolactina, 72 horas antes de ser
submetida a uma sonda de cDNA para a men-
sagem da casena. (A de acordo com Turkington,
1968; B-D de Liscia et al., 1988; fotografias
cortesia de G. Smith.)
(C) (D)
Insulina + hidrocortisona
Figura 19.38 (A)
Insulina, hidrocortisona
Nveis de mRNA de -casina em culturas de clulas da glndula mamria de camundongo em
Insulina + prolactina
diferentes condies de cultura. (A) mRNA endgeno de -casena quando as clulas foram
Somente Insulina
cultivadas durante 6 dias em matriz extracelular ou plstico em meio contendo hormnios como
insulina, hidrocortisona ou prolactina. A matriz extracelular e a prolactina foram essenciais. (B)
+ prolactina
Expresso do gene reprter CAT quando fundido a uma construo contendo o intensificador e Hormnios
o promotor de -casena. O gene fundido foi transfectado para clulas mamrias do camundongo
cultivadas durante 6 dias sob vrias condies de substrato e hormnios. O gene fundido foi
expresso somente em presena de prolactina e matriz extracelular. Sem o intensificador (tendo
somente o promotor), no houve transcrio em nenhuma das condies. (De acordo com
Matriz extracelular
Matriz extracelular
Matriz extracelular
Matriz extracelular
Schmidhauser et al., 1992.)
Substratos
Plstico
Plstico
Plstico
Plstico
especfica na molcula de MGF. O MGF fosforilado pode entrar no ncleo e se ligar
regio do promotor nos genes das protenas do leite (Groner e Gouilleux, 1995). A Auto-radiograma
separao dos filhotes da me durante a lactao resulta em um rpido decrscimo da
atividade de MGF. A volta amamentao dos filhotes faz com que a atividade volte ao -casena
seu mximo dentro de 4 horas. O efeito pode ser mediado pelos hormnios pituitrios
ou hipotalmicos que so responsivos suco (Schmitt-Ney et al., 1992).
A casena sintetizada nas clulas mamrias competentes em resposta prolactina
somente quando as clulas esto ancoradas a uma matriz extracelular (Figura 19.38). O (B)
intensificador de -casena responsivo a ambos, a prolactina e a matriz extracelular.
Usando um gene reprter (CAT) ligado a diferentes regies da seqncia flanqueando
Sntese de CAT
a ponta 5, Schmidhauser e colegas (1992) encontraram uma seqncia com 160 pares
de bases, a 1517 pares de bases do stio de incio da transcrio (Figura 19.39). Esse
stio intensificador s funciona em clulas mamrias, e responsivo prolactina e
matriz extracelular (veja Figura 19.38B).
Portanto, o desenvolvimento da glndula mamria envolve uma complexa interao
de vrios hormnios, protenas parcrinas e fatores ambientais em quatro diferentes
estgios da vida: embrionrio, adolescncia, gravidez e lactao. A glndula mamria
nunca se desenvolve em machos normais e no se torna um rgo completamente Intensificador Promotor Gene
de -casena de -casena CAT
diferenciado nas fmeas at a metade da gravidez no organismo adulto. Estudos desse
rgo nos deu uma viso da complexidade do controle local e hormonal no desenvol-
vimento de mamferos.
Atividade de CAT
CAT (cpm convertidas/min/g)
Delees no 5 da -casena
Figura 19.39
Construes importantes na identificao do intensificador do gene da -casena no camundon-
go. O gene CAT foi usado como um reprter e foi fundido ponta 5 do gene da -casena no
camundongo. A exonuclease removeu pedaos sucessivamente maiores da regio do gene
flanqueando a ponta 5. Enquanto o gene contendo 1677 pares de bases na seqncia flanqueando
a ponta 5 foi totalmente ativo, a seqncia contendo somente 1517 pares de bases apresentou
pouca atividade. Portanto, foi postulado que o intensificador estava dentro dos 160 pares de
bases. (De acordo com Schmidhauser et al., 1992.)
768 PARTE V Interaes Durante a Formao do rgo
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Determinao do sexo
20
A reproduo sexual ... a obra-prima da
Natureza.
ERASMUS DARWIN (1791)
O ponto de vista que as mulheres eram apenas homens subdesenvolvidos e que seus
rgos genitais eram iguais aos dos homens, somente virados de dentro para fora, foi
muito popular durante mais de mil anos. Mesmo em 1543, Andreas Vesalius, o anatomista
paduano que derrubou muito da anatomia de Galeno (e que se arriscou censura pela
igreja por reiterar que homens e mulheres tm o mesmo nmero de costelas), manteve
esse conceito. As ilustraes de seus dois principais trabalhos, De Humanis Corporis
Fabrica e Tabulae Sex, mostram que ele via a genitlia feminina como uma represen-
tao interna da genitlia masculina (Figura 20.1). Apesar disso, o livro de Vesalius
iniciou uma revoluo na anatomia, e ao fim do sculo XVI, os anatomistas descarta-
ram as representaes galnicas da anatomia feminina. Durante os sculos XVII e
XVIII, seres femininos foram reconhecidos como produtores de ovos que podiam
773
774 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
(A) transmitir traos parentais, e a fisiologia dos rgos sexuais comeou a ser estudada.
Ainda assim, no havia consenso sobre como os sexos eram determinados (veja
Horowitz, 1976; Tuana, 1988; Schiebinger, 1989).
Naquele tempo o ambiente em especial, calor e nutrio - eram acreditados ser
de importncia para a determinao do sexo. Em 1890, Geddes e Thomson resumiram
todos os dados disponveis sobre a determinao sexual, e chegaram concluso que
constituio, idade, nutrio e ambiente dos pais deveriam ser especialmente consi-
derados em qualquer dessas anlises. Eles argumentavam que fatores favorecendo a
armazenagem de energia e nutrientes influenciavam a favor de prognie feminina,
enquanto que fatores favorecendo a utilizao da energia e nutrientes influenciavam
a favor de prognie masculina.
Essa viso ambiental da determinao sexual permaneceu a nica teoria cientfica
importante at a descoberta do trabalho de Mendel em 1900 e da redescoberta do
cromossomo sexual por McClung em 1902. Baseado em seu conhecimento do
Mendelismo, Correns especulou que a relao sexual 1:1 da maioria das espcies,
podia ser conseguida se o macho fosse heterozigoto e a fmea homozigota para algum
fator determinante do sexo. Porm, somente em 1905 a correlao (em insetos) do sexo
(B) feminino com os cromossomos sexuais XX e do sexo masculino com os cromossomos
XY ou XO foi estabelecida (Stevens, 1905; Wilson, 1905). Isso sugeriu fortemente que
um componente nuclear especfico era responsvel pelo direcionamento do desenvol-
vimento do fentipo sexual. Assim, acumulou-se evidncia que a determinao sexual
ocorria por herana nuclear em vez de por circunstncias ambientais.
Hoje, achamos que tanto os mecanismos ambientais como os internos da determi-
nao sexual podem atuar em diferentes espcies. Iremos primeiro discutir os mecanis-
mos cromossmicos da determinao do sexo, e em seguida considerar os meios pelos
quais o ambiente regula o fentipo sexual.
Pnis,
prstata
Duto
Genitlia interna
Wolffiano
masculina
(epiddimo, vasos
deferentes, vescula
seminal)
Figura 20.2
do sexo. As caractersticas sexuais secundrias so geralmente determinadas pelos Cascatas postuladas levar formao de
hormnios secretados pelas gnadas. Porm, na ausncia das gnadas, gerado o fentipos sexuais em mamferos. A converso
fentipo feminino. Quando Jost (1953) removeu as gnadas de fetos de coelhos antes do sulco genital na gnada bipotencial necessi-
da sua diferenciao, os coelhos resultantes eram fmeas, independentemente de ta dos genes SF1 e WT1, pois camundongos
serem XX ou XY. Cada um tinha ovidutos, um tero e uma vagina, mas no tinha um carentes de um ou de outro desses genes no
pnis ou estruturas acessrias masculinas. tm gnadas. A gnada bipotencial parece ser
O esquema da determinao do sexo de mamferos est mostrado na Figura 20.2. Se conduzida para a via feminina pelos genes
WNT4 e DAX1, e para a via masculina pelo
o cromossomo Y estiver ausente, os primrdios gonadais desenvolvem-se em ovri-
gene SRY (do cromossomo Y), em conjunto
os. Os hormnios estrognicos produzidos pelo ovrio permitem o desenvolvimento com genes autossmicos como SOX9. O ov-
do duto Mlleriano em tero, ovidutos e terminal superior da vagina. Se o cromosso- rio produz clulas tecais e clulas granulosas,
mo Y estiver presente, formam-se testculos que secretam dois hormnios principais. que juntas so capazes de sintetizar estrgeno.
O primeiro -hormnio anti-duto Mlleriano (AMH; tambm chamado de substncia Sob estrgeno (primeiro provindo da me, em
inibidora Mlleriano, (MIS) -destri o duto Mlleriano. O segundo hormnio -testos- seguida das gnadas), o duto Mlleriano se
terona- masculiniza o feto estimulando a formao do pnis, escroto e outras pores diferencia em genitlia feminina e a prole de-
da anatomia masculina, inibindo tambm o desenvolvimento dos primrdios do seio. senvolve caractersticas sexuais secundrias
Assim, o corpo tem o fentipo feminino a no ser que seja mudado pelos dois horm- femininas. Os testculos produzem dois hor-
mnios principais, o fator anti-duto Mlleriano
nios elaborados pelos testculos fetais. Olharemos agora mais detalhadamente para
(AMH), que causa regresso do duto, e a tes-
esses eventos. tosterona, que causa a diferenciao do duto
Wolffiano em genitlia interna masculina. Na
As Gnadas em Desenvolvimento regio urogenital, a testosterona convertida
em diidrotestosterona (DHT) que causa a mor-
O desenvolvimento das gnadas uma situao embriolgica nica. Todos os outros fognese do pnis e da prstata. (Segundo
rudimentos de rgos normalmente se diferenciam em um nico tipo de rgo. Um Marx, 1995).
rudimento de pulmo somente pode tornar-se pulmo e um rudimento de fgado so-
mente se desenvolve em fgado. O rudimento da gnada, porm, tem duas opes
normais. Quando se diferencia, pode desenvolver-se em um ovrio ou em um testcu-
lo. O tipo de diferenciao seguido por esse rudimento determina o desenvolvimento
sexual futuro do organismo. Porm, antes dessa deciso ser tomada, a gnada do
mamfero se desenvolve primeiro atravs de um estgio indiferente (bipotencial) du-
rante o qual no tem caractersticas femininas nem masculinas. Em humanos, o rudi-
mento da gnada aparece no mesoderma intermedirio durante a quarta semana e
permanece sexualmente indiferente at a stima semana. Durante esse estgio, o epitlio
do sulco genital se prolifera para dentro do tecido mesenquimatoso conjuntivo frouxo
acima dele (Figura 20.3A,B). Essas camadas epiteliais formam as cordas sexuais, que
iro envolver as clulas germinativas que migram para a gnada humana durante a
776 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
GNADAS INDIFERENTES
Duto Duto
Wolffiano Glomrulo Aorta Wolffiano
Duto
Sulco Tbulo Epitlio Cordas sexuais
Sulco Mesentrio Mlleriano
mesonfrico mesonfrico celmico em primitivas
Genital Dorsal
excretrio proliferao
(A) 4 SEMANAS (B) 6 SEMANAS
Cordas
testiculares
Duto Mlleriano
Epitlio
Tnica albugnea
Duto Mlleriano superficial
Cordas da
rede testicular Cordas sexuais
em degenerao
Dutos eferentes Epitlio
(vasos eferentes) Tnica
Superficial
albugnea
Figura 20.3
Diferenciao das gnadas humanas mostrada em seo transversal. (A) Sulco genital de um embrio de
4 semanas. (B) Sulco genital de uma gnada indiferente de 6 semanas mostrando cordas sexuais primiti-
vas. (C) Desenvolvimento testicular na oitava semana. As cordas sexuais perdem contato com o epitlio
cortical e desenvolvem a rede testicular. (D) Na dcima-sexta semana de desenvolvimento, as cordas
testiculares so contnuas com a rede testicular e se conectam com o duto Woffiano. (E) O desenvolvimen-
to ovariano em um embrio humano de 8 semanas, quando as cordas sexuais primitivas degeneram. (F)
O ovrio humano de 20 semanas no se conecta ao duto Wolffiano, e novas cordas sexuais corticais
rodeiam as clulas germinativas que migaram para o sulco genital. (Segundo Langman, 1981.)
CAPTULO 20 Determinao do Sexo 777
Epiddimo Rins
Testculos metanfricos Ovrios Oviduto
Ureteres
Vagina
GNADAS
Tipo gonadal Testculos Ovrio
Cordas sexuais Medular (interno) Cortical (externo)
DUTOS
Dutos remanescentes para Wolffiano Mlleriano
clulas germinativas
Diferenciao do duto Vasos deferentes Oviduto, tero, crvix,
Epiddimo, vescula seminal parte superior da vagina
SRY:: O Determinante Se
SRY xual do Cromossomo Y
Sexual
Em seres humanos, o principal gene para o fator determinante dos testculos reside no
brao curto do cromossomo Y. Indivduos que nascem com o brao curto, porm, sem
o brao longo do cromossomo Y so machos enquanto que indivduos que nascem
com o brao longo do cromossomo Y, mas no o brao curto, so fmeas. Analisando
o DNA de homens XX e fmeas XY, a posio do gene determinador dos testculos foi
restringida uma regio de 35.000 pares de bases do cromossomo Y, localizada perto
da extremidade do brao curto [sex2.html]. Nessa regio, Sinclair e colaboradores
(1990) encontraram uma seqncia de DNA especfica de macho que podia codifi-
car um peptdio de 223 aminocidos. Tal peptdio provavelmente seria um fator de
CAPTULO 20 Determinao do Sexo 779
Controle
(A) (B)
Figura 20.6
Um camundongo XX transgnico para Sry macho. (A) A reao da cadeia de polimerase
seguida por eletroforese mostra a presena do gene Sry em machos XX normais, e em um
camundongo Sry XX transgnico. O gene est ausente na fmea XX da ninhada. (B) A genitlia
externa do camundongo transgnico masculina (direita) e essencialmente a mesma como a de
um macho XY (esquerda). (Segundo Koopman et al., 1991; fotografia cortesia dos autores.)
780 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Masculinass
SF1: A Ligao Entre SRY e as Trajetrias Desenvolvimentais Masculina
Uma outra protena que poderia ser ativada por SRY e ser um cofator com SRY o fator
de transcrio SF1. O SF1(fator 1 esteroidognico) uma protena que ativa vrios
genes envolvidos na sntese de esterides. Na verdade, ele atua nas clulas de Leydig
dos testculos, ativando genes que codificam as enzimas da via da testosterona. Toda-
via, o SF1 foi recentemente mostrado ter duas outras funes crticas (Figura 20.7).
Primeiro, deletando os genes Sf1 dos camundongos, esses se desenvolvem sem as
glndulas supra-renais ou as gnadas (Luo et al., 1994). (As gnadas se desenvolvem
mas degeneram em seguida, e os camundongos morrem por falta de corticosterona.)
Segundo, o SF1 parece estar relacionado ao desenvolvimento dos testculos. medi-
da que os nveis de SF1 declinam no sulco genital dos embries XX, o SF1 permanece
nos testculos em desenvolvimento. Acredita-se que a SRY ative o gene Sf1, e que a
protena SF1, em seguida, ative ambos componentes da diferenciao sexual masculi-
na (o AMH de Sertoli e a via Leydig da testosterona) (Shen et al., 1994). Tanto SRY
como SF1 podem ser necessrias para ativar o gene AMH, sugerindo que interaes
entre essas protenas sejam importantes (Haqq et al. 1994, Shen et al., 1994).
A pesquisa de reverso de sexo em camundongos mostrou que o cromossomo Y
de um tipo no necessariamente produz testculos em outra linhagem de camundon-
gos. Parece que as protenas SRY divergiram tanto que elas podem, no muito dis-
tante, interagir com outra protenas do aparelho de transcrio (Coward et al., 1994;
Eicher, 1994).
CAPTULO 20 Determinao do Sexo 781
Rim
Rim
Epiddimo
Testculo
Oviduto
(A) (B) (C)
Figura 20.7
Funes de SF1 durante a gonadognese. (A). Eliminao do gene SF1 do embrio do camun-
dongo leva perda tanto das supra-renais como dos testculos. (O duto Mlleriano persiste e
torna-se o oviduto.) (B) Um controle mostrando epiddimo e testculos. (C) Hibridizao in situ
mostrando a ativao do gene Sf1 atravs do desenvolvimento testicular de um embrio de
camundongo de 12.5 dias. (A de Luo et al., 1994; C de Shen et al., 1994.)
O gene WNT4a outro gene que pode ser crtico para a determinao ovariana. Esse
gene expresso no sulco genital do camundongo quando ele ainda est no seu
estgio indiferenciado. Depois, se torna indetectvel nas gnadas XY (que se tornam
782 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Gentipo
DAX1
inativo
2 cpias
de DAX1
*Os mecanismos pelos quais o estrgeno poderia promover a diferenciao dos dutos Mllerianos
no so bem compreendidos. Durante o desenvolvimento embrionrio, o duto extremamente
sensvel a compostos estrognicos, conforme conhecido pelos efeitos teratognicos da
dietilstilbesterol (DES). Esse composto um estrgeno sinttico que foi dado s mulheres nas
dcadas de 1940 at 1960 para manuteno da gravidez. As filhas nascidas dessas mulheres que
usaram essa droga apresentaram alta incidncia de anomalias do duto Mlleriano, incluindo malfor-
maes dos epitlios vaginal e cervical, anomalias estruturais dos ovidutos e tero, e uma incidncia
acima do normal de cncer vaginal (Robboy et al., 1982; Bell, 1986).
**A sndrome da insensibilidade andrgena uma de vrias condies chamadas pseudo-
hermafroditismo. Os hermafroditas verdadeiros (raros em humanos e na maioria dos mamferos,
mas normal em certos invertebrados) contm tecidos gonadais tanto masculino como feminino.
Hermafroditas mamferos verdadeiros tm anormalidades na determinao sexual primria e po-
dem ocorrer quando o cromossomo Y translocado para o cromossomo X. Se o X translocado for
inativado, o Y ser desligado. Algumas das clulas gonadais sero XX e outras XY (Berkovitz et al.,
1992). Na condio pseudo-hermafrodita, existe somente um tipo de gnada, mas as caractersticas
sexuais secundrias diferem daquilo que esperado do sexo gonadal. Em humanos, pseudo-herma-
froditas masculinos podem resultar da sndrome da insensibilidade andrgena, ou da incapacidade de
produzir testosterona devido a um defeito gnico em uma das enzimas levando sua sntese (Geissler
et al., 1994). Pseudo-hermafroditas femininos ocorrem quando o organismo tem uma superprodu-
o de testosterona.
784 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Bexiga urinria
Reto
Pbis Vescula
seminal
Prstata
Pnis
Uretra
Vaso deferente
Epiddimo
Testculo
Dependente de diidrotestosterona
Dependente de testosterona
Figura 20.10
Regies dependentes de testosterona e diidrotestosterona no sistema genital do feto humano
masculino. (Segundo Imperato-McGinley et al., 1974.)
duos afetados no tinham um gene funcional para essa enzima (Andersson et al.,
1991; Thigpen et al, 1992). Embora esses indivduos XY tenham testculos funcionantes,
eles tm uma bolsa vaginal cega e um clitris aumentado. Pareciam meninas e so
criadas como tais. Suas anatomia interna, porm, masculina: testculos, desenvolvi-
mento de duto Wolffiano e degenerao do duto Mlleriano. Assim, parece que a
formao da genitlia externa est sob o controle da diidrotestosterona, enquanto que
a diferenciao do duto Wolffiano controlada pela prpria testosterona (Figura
20.10). interessante que a genitlia externa torna-se responsiva testosterona na
puberdade, causando bvia masculinizao em uma pessoa originalmente considera-
da como sendo uma menina.
Hormnio Anti-Mlleriano
Figura 20.11
Exame da atividade do hormnio anti-duto
Mlleriano no segmento anterior do trato
reprodutivo de um feto de rato de 15.5 dias,
aps 3 dias em cultura. (A) Tanto o duto
Mlleriano (seta esquerda) quanto o duto
Wolffiano (seta direita) esto abertos. (B) O
duto Wolffiano (seta) est aberto, mas o duto
Mlleriano se degenerou e se fechou. (Corte-
sia de N. Josso.)
(A) (B)
Uma das reas mais controversas da determinao sexual secundria envolve o de-
senvolvimento de comportamentos especficos do sexo. Em aves canoras, a testoste-
rona vista regular o crescimento de agregados neuroniais especficos do macho no
crebro. Machos de canrios e tentilhes-zebra cantam eloqentemente, enquanto as
fmeas cantam pouco ou nunca. Esses cantos servem para marcar territrios e atrair
consortes. A habilidade de cantar controlada por seis diferentes agregados de neu-
rnios (ncleos) no crebro da ave (Figura 20.12). Neurnios conectam cada uma
dessas regies entre si. Em canrios machos, esses ncleos so vrias vezes maiores
que agregados correspondentes de neurnios em canrios-fmea; em fmeas de
tentilhes-zebra, uma dessas regies pode at estar inteiramente ausente (Arnold,
1980; Konishi e Akutagawa, 1985).
A testosterona tem um papel importante na produo do canto. Em machos adul-
tos de tentilhes-zebra, Prve (1978) demonstrou uma correlao linear entre a quan-
tidade de canto e a concentrao de testosterona srica. Foi mostrado que mudanas
sazonais nos nveis de testosterona esto correlacionadas com os padres canoros
desses pssaros. Quando os nveis de testosterona esto baixos, no somente ocorre
um decrscimo de canto do pssaro mas tambm uma diminuio do tamanho dos
ncleos cerebrais especficos de machos (Nottebohm, 1981). Em tentilhes adultos, a
castrao elimina o canto, mas a injeo de testosterona induz tais pssaros a cantar
mesmo em Novembro, o que normalmente no fazem (Thorpe, 1958). Em vrias espci-
es de pssaros, as fmeas podem ser induzidas a cantar pela injeo de testosterona
(Nottebohm, 1980). Quatro regies controladoras do canto no crebro dessas aves
crescem 50-69 porcento em tais pssaros, enquanto outras regies cerebrais no o Tentilho-zebra macho
fazem. Estudos auto-radiogrficos (Arnold et al., 1976) mostraram que os neurnios
dos ncleos controladores do canto incorporam testosterona radioativa, enquanto
outras regies do crebro no o fazem. Parece, portanto, que os hormnios das gna-
das tm um papel importante no desenvolvimento das regies do sistema nervoso que
geram comportamentos especficos do sexo.
Syrinx
Figura 20.12
Dimorfismo sexual no crebro avicular. O diagrama esquemtico indica as principiais rea neurais Tentilho-zebra fmea
acreditadas estar envolvidas na produo do canto no tentilho-zebra. Os crculos representam
reas cerebrais especficas; o tamanho de cada crculo proporcional ao volume ocupado por
essa regio. Crculos com linhas hachuriadas so volumes estimados. Os nmeros dentro de
cada crculo representam a porcentagem de clulas que incorporam testosterona radioativa. As
diferenas de volume entre trs dessas regies (HVc, RA e NXIIts) so significantes entre os
sexos, e a rea X no foi observada nos crebros de tentilhes fmeas. As diferenas na ligao
de testosterona nas regies HVc e MAN so significativas, e no foram observadas diferenas
sexuais relativas ligao de hormnio esteride em outras regies do crebro. As setas indicam
as vias axnicas conectando as regies no tentilho macho. (Segundo Arnold, 1980.)
786 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Cerebelo
Te t o
Crtex ptico
Bulbo
olfativo
Figura 20.13
Representao das regies ligantes de estrge-
Septo rea Hipotlamo Hipfise
no no crebro de uma rata. (Segundo Kandel e Medula
pre-ptica
Schwartz, 1985.) espinhal
CAPTULO 20 Determinao do Sexo 787
Informaes adicionais
& Especulaes
Figura 20.15
eosin eye
Ginandromorfo de D. melanogaster no qual o
Tipo eosin eye
selvagem lado esquerdo feminino (XX) e o lado direito
miniature wing miniature wing masculino (XO). O lado masculino perdeu
um cromossomo portando os alelos tipo selva-
gem da cor dos olhos e forma das asas, permi-
tindo com isso a expresso dos alelos recessi-
vos eosin eye e miniature wing no cromosso-
mo X remanescente. (Segundo Morgan, 1919.)
790 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Razo X:A
No-ativado (sem
protena funcional)
No-ativado (sem
protena tra funcional)
Reprime
genes Protenas Dsx Protenas Dsx Genes
msl especficas especficas msl
da fmea da macho
ix Reprime Reprime
Genes de Genes de Genes de Genes de
Genes Genes
diferenciao diferenciao diferenciao diferenciao
ligados ao X ligados ao X
feminina masculina masculina feminina
Figura 20.16
Cascata da regulao proposta para a deter-
minao sexual somtica em Drosophila. XX em machos. Tais mutaes no tm efeito sobre a determinao sexual em machos
Setas representam ativao, enquanto um blo- XY. A homozigozidade do gene intersex (ix) leva moscas XX a desenvolver um fentipo
co no fim de uma linha indica supresso. Os intersexual que tem pores de tecido masculino e feminino no mesmo rgo. O gene
locos msl, sob o controle do gene Sxl, regu- doublesex (dsx) importante para a diferenciao sexual dos dois sexos. Se dsx esti-
lam a transcrio compensatria de dosagem ver ausente, tanto moscas XX como XY se transformam em intersexuais (Baker e
do cromossomo X masculino. (Segundo
Ridge, 1980; Belote et al., 1985a).
Baker et al., 1987.)
A posio desses genes numa trajetria desenvolvimental est baseada (1) nas
interpretaes de cruzamentos genticos resultando em moscas tendo duas ou mais
dessas mutaes e (2) na determinao do que acontece quando ocorre ausncia total
dos produtos de um desses genes. Tais estudos geraram o modelo da cascata regulatria
visto na Figura 20.16.
Fatores de transcrio
dos promotores precoces
Transcrio
No h transcrio de Sxl,
traduo ou subseqente atividade
Protena Sxl do fator de emenda da protena Sxl
Cdon Emenda e
Iniciador traduo
Transcrio Transcrio
Sem
M Protena
Cdon Cdon
Protena Sxl age como fator iniciador Terminao
de emenda para remover
o xon do transcrito Emenda masculina revelia inclui
cdon de parada no transcrito de
RNA; protena no traduzida
Figura 20.17
Ativao diferencial do gene Slx em machos e fmeas. (A) em Drosophila tipo selvagem com
dois cromossomos X e dois conjuntos de autossomos (XX; AA), as subunidades do fator
de transcrio numerador (sis-a, sis-b, etc.) no esto totalmente complexadas pelas
subunidades inibidoras derivadas dos genes (como deadpan) nos autossomos. Esses fatores
numeradores ativam o promotor precoce do gene Sxl, que produz um transcrito que auto-
maticamente emendado no mRNA especfico de fmea que codifica a protena Sxl funcional.
Por fim, a transcrio constitutiva de Sxl comea a partir do promotor tardio. Se Sxl j estiver
disponvel (i.e., de uma transcrio precoce), o mRNA de Sxl ser emendado para formar a
mensagem funcional especfica de fmea. (B) Em Drosophila de tipo selvagem com um
cromossomo X e dois conjuntos de autossomos (XO; AA), os fatores de transcrio nume-
radores so ligados pelas subunidades denominadoras e no podem ativar o promotor preco-
ce. Quando o gene Sxl for transcrito do promotor tardio, a emenda de RNA no ir excluir
o xon especfico de macho no mRNA. A mensagem resultante codifica um peptdio trunca-
do e no-funcional, visto que o xon especfico de macho contm um cdon de terminao
da traduo. (Segundo Keyes et al. 1992.)
RNA tais como quelas em snRNPs. Bell e colegas (1988) propuseram que existem dois
alvos para a protena ligante de RNA codificada pelo Sxl. Um desses alvos o pr-
mRNA do prprio Sxl. Isso seria o mecanismo que manteria o estado feminino da
trajetria aps a ocorrncia do evento ativador inicial. O segundo alvo seria o pr-
mRNA do prximo gene da trajetria, transformer.
CAPTULO 20 Determinao do Sexo 793
Os Genes transformer
Cdon de parada
Transformer
AAA
Cdon de parada
Doublesex
AAA
794 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Hermafroditismo
Hermafroditismo no Nematide C. elegans
Hermafrodita: XX
Espermatozide Ovrio
Ovrio na espermateca
vulos no
tero
Boca nus
Ocitos
rgo
copulatrio
Macho: XO Vulva
Figura 20.19
Esperma- Cloaca Diagramas esquemticos do macho e do her-
tozide Vasos mafrodita de Caenorhabditis elegans, enfati-
deferentes zando seus sistemas reprodutivos. (de
Testculos Hodgkin, 1985.)
796 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Hermafrodita
Ratio
X:A
Macho
Figura 20.20
Modelo esquemtico da determinao sexual
somtica em C. elegans. O gene sdc-1 postu-
lado estar envolvido na transmisso da razo
X/A. Ele controla compensao de dosagem em fmeas frteis. Em colnias com tal alelo, trs sexos so possveis e funcionais
do cromossomo X assim como a supresso do (Hodgkin, 1980).
gene her-1 se a razo for 1. A designao alto/ Como em Drosophila, a determinao do sexo em C. elegans envolve vrios genes
baixo reflete a atividade funcional do gene. A autossmicos que lem e respondem razo X:A. O gene que integra os numeradores
atividade dos genes sdc, ao final, leva ativi- e denominadores do desenvolvimento de C. elegans o xol-1 (XO-lethal). Nveis
dade do gene tra-1, cuja atividade promove o
altos de XOL-1 durante a gastrulao desligam a trajetria para o desenvolvimento
fentipo hermafrodita. Os genes scd podem
ser inibidos pelo gene xol, que somente ativo hermafrodtico, transformando com isso o animal em um macho (Rhind et al., 1995).
em XO (machos). (Segundo Hodgkin, 1985; XOL-1 parece conseguir isso reprimindo os genes sdc (controle da determinao do
Miller et al., 1988.) sexo), cujas atividade tornam o animal hermafrodita (Miller et al., 1988).
A trajetria para determinao do sexo em C. elegans foi decifrada encontrando-se
mutaes em genes necessrios para o desenvolvimento hermafrodita (os genes tra),
bem como outros necessrios para a expresso do fentipo masculino (os genes her
e fem). Criando gentipos carreando diferentes combinaes dessas mutaes Hodgkin
(1980) e outros foram capazes de construir um modelo para essa via desenvolvimental
(Figura 20.20). Por exemplo, mutaes tra-2 suprimiram a mutao her-1, indicando
que her-1 mais tardio na trajetria.
O gene crucial na trajetria para a determinao sexual parece ser o tra-1. Se o
tipo selvagem tra-1 for ativo, o indivduo um hermafrodita. Se esse gene no for
funcional, o indivduo um macho. Os outros genes parecem regular esse gene
singular de troca.
Porm, o que tem essa via gentica linear a ver com os reais eventos celulares
levando determinao sexual? Estudos recentes indicam que alguns desses genes
codificam protenas de uma via sinalizadora entre clulas. A anlise de mosaicos
genticos sugere que sdc-1 e her-1 no so necessariamente ativos nas clulas
que os produzem. Ao contrrio, esses genes parecem produzir produtos secreta-
dos. Em contraste, tra-1 age de um modo celular autnomo e, portanto, provavel-
mente parte de um aparelho receptor de sinais. A seqncia do gene tra-1 sugere
que esse codifica um fator de transcrio dedo de zinco (Hunter e Wood, 1990;
Zarkower e Hodgkin, 1992; Perry et al., 1993). Kuwabara e Kimble (1992) propuse-
ram recentemente um modelo que integra essa via gentica com a biologia celular
da determinao do sexo. A protena HER-1 considerada promover o desenvolvi-
mento masculino em nematides XO inibindo a TRA-2. A protena codificada por
tra-2, porm, no um fator de transcrio ou um fator de emenda, mas sim uma
protena integral de membrana com mltiplos domnios transmembrana. Alm dis-
so, seu mRNA encontrado (em quantidade diferentes) tanto em machos como em
fmeas. De acordo com esse modelo especulativo (Figura 20.21), as protenas
FEM se combinam para criar um grande complexo de protena FEM, e esse comple-
xo est ligado pela protena TRA-2 da membrana. Em indivduos XX, esse comple-
xo ligado membrana, e a protena TRA-1 pode entrar no ncleo. Em nematides
XO, porm, a protena HER-1 se liga regio extracelular da protena TRA-2,
causando a liberao do complexo FEM. Esse complexo, uma vez livre no citoplas-
ma, pode ligar a protena TRA-1 e impedir sua entrada no ncleo. Desde que a
CAPTULO 20 Determinao do Sexo 797
Ncleo
protena TRA-1 (um fator de transcrio putativo) no pode entrar no ncleo, ela
no poder ativar os genes especficos do hermafrodita. Mais estudos tero que
ser realizados para confirmar ou desaprovar esse modelo que, no entanto, til
por sugerir novas pesquisas e por visualizar como os genes poderiam gerar vias
para a determinao sexual em C. elegans.
Um dos problemas mais interessantes desse nematide seu hermafroditismo.
Como se originou essa condio em um organismo que provavelmente tinha um siste-
ma sexual macho/fmea? Quais mudanas genticas apareceram, e haveria outras
solues que poderiam ter prevalecido? Os genes determinantes do sexo de uma
espcie estreitamente relacionada, a C. ramanei (com indivduos macho e fmea)
esto sendo agora identificados para se poder responder a essas perguntas. [sex7.html]
Hermafroditismo em Peixes
Figura 20.22 (A) FASE MASCULINA (B) FASE TRANSITRIA (C) FASE FEMININA
Alteraes nas gnadas no peixe hermafrodita
Sparus auratus, mostradas em seo atravs Ovrio
da gnada de (A) a fase masculina, (B) a fase
transitria e (C) a fase feminina final. (Cortesia Ovrio
da famlia de T. Yamamoto.) Ovrio
Testculo
Testculo
Testculo
Caretta
caretta
Figura 20.23
Relao entre a razo sexual e a temperatura de incubao em rpteis. (A) Duas espcies de
lagartos nas quais temperaturas mais altas resultam na gerao de prole masculina. (B) Sete
espcies de tartarugas nas quais temperaturas mais altas resultam em prole feminina. (Segundo
Bull, 1980.)
do sexo normalmente ocorre (Bull et al., 1988; Gutzke e Chymiy, 1988). Parece que a
enzima aromatase (que pode converter testosterona em estrgeno) importante. A
atividade da aromatase de Emys muito baixa temperatura masculina de 25oC.
temperatura feminina de 30oC, a atividade da aromatase aumenta dramaticamente
durante o perodo crtico para a determinao do sexo (Desvages et al., 1993; Pieau et
al., 1994). Atividade dependente de temperatura de aromatase tambm vista em
terrapneos (tartarugas-diamondback terrapins), e sua inibio masculiniza suas
gnadas (Jeyasuria et al., 1994). possvel que o regulador da atividade da aromatase
seja o hormnio anti-Mlleriano. AMH conhecido por diminuir a atividade da aroma-
tase em gnadas de Emys (Desvages e Pieau, 1992).
Ferguson e Joanen (1982) estudaram a determinao sexual no jacar do Mississipi, Probscide
tanto no laboratrio como no campo; eles concluram que o sexo determinado entre
7 e 21 dias de incubao. Ovos criados a 30oC ou abaixo produzem fmeas, enquanto
aqueles incubados a 34oC ou acima produzem somente machos. Alm disso, ninhos
construdos sobre barragens (perto de 34oC) produzem machos, enquanto aqueles
construdos em pntanos midos (perto de 300C) produzem fmeas. As vantagens e
desvantagens da determinao sexual dependente de temperatura so discutidas no
Captulo 21.
Porcentagem
Indiferentes
Figura 20.25
Anlise in vitro da diferenciao de Bonellia. Larvas foram colocadas em gua do mar normal ou
em gua do mar contendo fragmentos de probscide feminina. A maioria dos animais cultivados
na presena dos fragmentos de probscide tornaram-se machos, enquanto normalmente se torna-
riam fmeas. (Segundo Leutert, 1974.)
Resumo
A Natureza forneceu muitas variaes em sua obra prima. Em algumas espcies, o sexo
determinado somente por cromossomos, enquanto em outras, sexo uma questo
de condies ambientais. Entre essas grandes categorias, existem numerosas varia-
es. Um catlogo completo dos mecanismos de determinao sexual conhecidos iria
requerer um volume em separado (e muito interessante).
Figura 20.26
Agregados de lesmas Crepidula. Dois indivduos esto mudando de machos para fmeas.
Morto
Aps esses moluscos se tornarem fmeas, sero fecundados pelo macho acima deles. (Segun-
do Coe, 1936.)
CAPTULO 20 Determinao do Sexo 801
LITERATURA CITADA
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Regulao ambiental do
desenvolvimento animal 21
Podemos agora passar a considerar adapta-
es para o ambiente externo; e inicialmente
as adaptaes diretas.... nas quais um ani-
mal, durante seu desenvolvimento, modi-
ficado por fatores externos de tal maneira
N A PRIMEIRA METADE do sculo 19, biologia era o estudo do organis-
mo em relao s suas condies de existncia, e a investigao do orga-
nismo vivo era geralmente realizada em seu habitat original. Somente ao
redor de 1850, que a fisiologia emergiu como uma tentativa de quantificar o fen-
meno biolgico no laboratrio. A embriologia permaneceu dentro do reino da biologia,
que h um aumento da eficincia com que enquanto a fisiologia investigava as estruturas e funes dos organismos adultos
esses fatores so tratados. independentemente dos seus ambientes originais (Nyhart, 1995).
C. H. WADDINGTON (1957)
Dentro desse contexto biolgico, a embriologia foi vista como o motor da mu-
dana evolucionria, e o desenvolvimento como sendo condicionado pelo ambiente.
Por exemplo, Augusto Weismann (1875) verificou que borboletas da mesma espcie
eclodindo em estaes diferentes podiam apresentar cores diferentes, e ele podia
transformar a forma do vero na forma da primavera, resfriando as pupas. Carl Siebold
mostrou que alguns afdios partenogenticos podiam dar origem a machos e fmeas
sexuadas tardiamente na poca de reproduo para produzir um ovo que hibernava (e
que invariavelmente eclodia como uma fmea partenogentica), e vrios pesquisado-
res estudaram a determinao sexual pelo ambiente na Bonellia e em colmias de
insetos (veja Hertwig, 1894). A primeira gerao de embriologistas experimentais
estudou os efeitos do ambiente sobre o desenvolvimento, incluindo o efeito de falta
de ons ou de nutrientes na determinao do sexo e na morfognese (Selenka 1876;
Born, 1881; Herbst, 1893). (Os estudos de Born mostrando que o sexo de embries de
rs podia ser alterado por fatores ambientais foi mostrado com proeminncia no filme
Jurassic Park.)
Mas a mar estava mudando. Nas dcadas de 1870 e de 1880, jovens zoologistas
se afastavam dessas questes biolgicas em direo s questes de fisiologia
interna e anatomia. Embriologistas mais velhos, como Carl Siebold e Ernst Haecke,
que desenvolveram seus trabalhos em um contexto evolucionrio ou ambiental, se
desesperavam porque a prxima gerao de zoologistas cientficos somente co-
nheceria cortes seccionais e tecidos corados, mas nem o animal inteiro e nem seu
modo de vida (Haeckel, 1881). Eles estavam atnitos pela falta de interesse dos
805
806 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Q REGULAO AMBIENTAL DO
DESENVOLVIMENTO NORMAL
A colonizao larval
AMPHINEURA (CHITONS)
Tonicella lineata Lithophyllum sp. e Lithothamnion sp. (algas vermelhas)
LAMELLIBRANCHIA (Bivalvos)
Teredo sp. Madeira
Bankia gouldi Madeira
Mercenaria mercenaria Lquidos de moluscos; areia
Placopecten magellanicus Concha adulta; areia; etc.
Mytilus edulis Algas filamentosas; outro material no biolgico de seda
Crassostrea virginica Lquido da concha; extrato do corpo; glicognio de crustceo
sugestes para iniciar sua colonizao. Nos moluscos, freqentemente existem su-
gestes muito especficas para a colonizao (Tabela 21.1). A maioria das larvas dos
nudibrnquios (lesma do mar) sofrem metamorfose somente se induzida por uma
presa adulta viva (que diferente de espcie a espcie). Em alguns casos, foi identi-
ficado o produto solvel da presa que dispara a metamorfose (Hadfield, 1977). A
larva do teredo (shipworm) Teredo navalis induzida a se estabelecer por compostos
liberados pela madeira, e material solvel eludo de conchas de ostras induzem a
colonizao das larvas de ostras.*
O haliote vermelho (abalone) Haliotis rufescens tem larvas que somente coloni-
zam quando entram em contacto fsico com algas vermelhas coralinas. Somente um
contacto breve necessrio para que a larva competente pare de nadar e comece a
metamorfose. Ainda no foi isolado o agente qumico responsvel por essa modifica-
o, mas o reconhecimento de um peptdeo de algas induz a metamorfose em larvas
competentes. As larvas que no so competentes para a induo da metamorfose
parecem no ter esse receptor. Considera-se que esse receptor esteja ligado a uma
Refeies de sangue
Simbiose no desenvolvimento
Corpora allata
EDNH
Acasalamento e
JH comportamento alimentar
Corpo
gorduroso Vitelogenina Ovrio vitelognico Ovos e ovrio
ps-vitelognico
Figura 21.2
Micrografia eletrnica de varredura do primrdio do rgo
de luz de uma lula juvenil E. scolopes de 3 dias. (A) rgo
de luz em um juvenil no infectado. (B) rgo de luz de um
juvenil infectado com a bactria simbitica V. fischeri. Re-
gresso do epitlio bvia em (B). (De acordo com
Montgomery e McFall-Ngai, 1995; fotografias cortesia de
(A) (B) M. McFall-Ngai.)
810 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Figura 21.3
Simbiontes microbianos so necessrios para Trax
a formao do intestino da cigarrinha Euscelis Cabea Abdmen
incisus. (A) Embrio controle com simbion-
tes tem formao normal do intestino. (B)
Embrio anormal com formao deficiente
do intestino quando antibiticos eliminaram
a maioria das bactrias do ovo. (De acordo
com Schwemmler, 1974; fotografias corte-
sia de W. Schwemmler.)
0.1 mm
(A)
0.1 mm
(B)
Nmero de
cromossomos Oognese completa
Figura 21.4
Mudanas cromossmicas durante o ciclo vital do afdio da famlia Phylloxeridal. O clima
do outono induz a produo de machos e fmeas, que se cruzam para produzir o ovo
hibernal.
Thomas Hunt Morgan (antes dele comear a trabalhar com a mosca da fruta). Morgan
analisou os cromossomos do afdio da nogueira (hickory) durante vrias geraes
(Figura 21.4). Ele encontrou que o nmero diplide das fmeas de afdios 12.
Durante a oognese, somente um corpo polar expelido do vulo em desenvolvi-
mento, de modo que o nmero diplide de 12 retido. Esse ovo desenvolve-se
partenogeneticamente sem ser fertilizado. Nas fmeas que podem dar origem a ovos
que se tornam macho ou fmea, ocorre uma modificao dessa oognese. Nos ovos
produtores de fmeas, seis pares de cromossomos penetram no nico corpo polar.
Portanto, o nmero diplide de 12 retido. Nos ovos produtores de machos, entre-
tanto, um par extra de cromossomos entra no corpo polar. O nmero diplide do
macho 10. Esses machos e fmeas so sexuados e tm divises meiticas comple-
tas. A fmea produz ocitos com um conjunto haplide de 6 cromossomos. Os
machos, entretanto, dividem os seus 10 cromossomos para produzir uma parte do
espermatozide com o nmero haplide de 4 cromossomos e a outra parte com o
nmero haplide de 6 cromossomos. O espermatozide com 4 cromossomos se
degenera. O espermatozide com 6 cromossomos fertiliza o ovo com esses para
restaurar o nmero diplide de cromossomos a 12. Quando o ovo eclode, aps o
inverno, uma fmea.
Isso resolveu uma charada. A outra, de como o clima do outono regula se a
fmea sexuada ou partenognica ou se o organismo alado ou ptero permanece
sem soluo. Da mesma maneira, no sabemos o que regula o ocito diplide a
produzir ovos dando machos ou fmeas. Alm disso, fatores ambientais so usa-
dos de maneiras diferentes pelas vrias espcies. A Figura 21.5 mostra um tipo de
ciclo vital encontrado em afdios. Nos afdios da nogueira e na Megoura viciae,
existe uma alternncia de geraes sexuadas e assexuadas. Em Megoura, a tempe-
ratura determina o sexo precocemente no desenvolvimento (temperaturas extre-
mas favorecendo a produo de fmeas). No desenvolvimento da fmea, o
fotoperodo e a temperatura determinam se a fmea se reproduzir sexualmente ou
partenogeneticamente, e uma combinao de temperatura e densidade populacional
determinar se a fmea alada ou sem asas (Beck, 1980). possvel que o horm-
nio juvenil controle a troca partenogentica/sexual (adio de hormnio juvenil a
adultos produzindo descendentes sexuados os leva a ter descendentes parteno-
genticos) e inibe a formao de asas (Hardie, 1981; Hardie e Lees, 1985). Mas no
se sabe como as mudanas ambientais se transformam em ttulos de hormnio
juvenil ou como o clima de outono ou a luz solar causam o movimento diferencial
dos cromossomos para o corpo polar.
812 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Inverno Outono
Fmea sexual
Fmeas
(B) assexuadas
aladas
Aglomerao,
baixa temperatura
Diapausa
* Apesar do polifenismo sazonal ser geralmente considerado como adaptativo, existem certas
ocasies que no h aumento da aptido do organismo. Por exemplo, o fotoperodo pode fazer com
que o plo da lebre mude de marrom para branco, mas se no houver neve, a lebre ficara conspcua
em um segundo plano escuro.
814 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Figura 21.8
Polifenismo sazonal na borboleta Araschnia
laevana. (A) A forma do vero que emerge
da pupa em no diapausa. (B) A forma
alaranjada e marrom da primavera, que emer-
ge da pupa em diapausa. (Veja Prancha 29
para fotografias coloridas.) (Fotografias cor-
tesia de H. F. Nijhout.)
(A) (B)
(A) (B)
Figura 21.9
As duas formas sazonais da borboleta de Malawi, Bicyclus anynana. (A) A forma da estao
seca que se mistura a restos de folhas mortas, secas e escuras. (B) Forma da estao chuvosa com
visveis manchas em forma de ocelos das asas posteriores ventrais. A forma da estao chuvosa
pode ser mimetizada pelo cultivo da larva em temperaturas mais altas (23oC); larvas cultivadas em
temperaturas mais baixas (17oC, se aproximando das temperaturas na transio para a estao
seca) se desenvolvem na forma da estao seca. (De acordo com Brakefield et al., 1996; fotogra-
fias cortesia de S. Carroll e P. Brakefield.)
816 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Nem todo polifenismo controlado pelas estaes. Nas abelhas, o tamanho da larva
fmea na muda pupal determina se o indivduo ser uma operria ou uma rainha. A
larva que alimentada com gelia real, rica em nutrientes, retm a atividade da sua
corpora allata durante o estgio do ltimo instar. O hormnio juvenil secretado por
esses rgos atrasa a pupao, fazendo com que a abelha emergente seja maior e (em
algumas espcies) mais especializada em sua anatomia (Figura 21.11A; Brian, 1974,
1980; Plowright e Pendrel, 1977). Os nveis de hormnio juvenil em larvas destina-
das a se tornar rainha 25 vezes maior que o ttulo das destinadas a serem operrias,
e a aplicao desse hormnio em larvas operrias pode transform-las em rainhas
(Wirtz, 1973; Rachinsky e Hartfelder, 1990).
Analogamente, colnias de formigas so predominantemente fmeas, e essas
podem ser extremamente polimrficas (Figura 21.11A). Os dois tipos principais de
fmeas so a operria e a gine. A gine uma rainha em potencial. Em espcies mais
especializadas, tambm se observa uma operria maior, o soldado. Na Pheidole
bicarinata, essas castas so determinadas pelos nveis de hormnio juvenil nas lar-
vas em desenvolvimento. Larvas recebendo alimento rico em protenas tm um ttulo
elevado de hormnio juvenil que causa uma abrupta mudana no desenvolvimento
Operrios
secundrios
Operrios
Operrias principais
Gines Gines (soldados)
Figura 21.11
(A) Fotografia do notvel dimorfismo da formiga operria (esquerda) e a rainha (direita) na
espcie Pheidologeton diversus. As duas so irms, mas uma foi alimentada de tal maneira
que sua larva continua a crescer e finalmente se metamorfoseia em uma rainha frtil. (B,C)
Formao da gine (rainha) e da operria nas formigas. reas levemente coloridas representam
bipotencialidade para se tornarem operrias ou gines. O N no crculo representa uma troca
nutricional controlada pelo ambiente da larva. (B) Myrmica rubra, onde somente as larvas que
hibernam (OW) permanecem bipotenciais. No ltimo instar, a troca nutricional determina a casta.
(C) Pheidole pallidula, onde a rainha controla a determinao das gines, atravs dos hormnios
que agem durante a embriognese. (Fotografia com copirraite, cortesia de Mark W. Moffett na
National Geographic Society; B e C de acordo com Wheeler, 1986.)
CAPTULO 21 Regulao Ambiental do Desenvolvimento Animal 817
Temperatura (oC)
818 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Figura 21.13
Relacionamento entre temperatura e razo sexual F:(F+M)
durante o perodo da determinao sexual em Menidia
menidia. Nos peixes coletados na poro mais norte da rea
(Nova Scotia), a temperatura teve pouco efeito na determina-
o sexual. Quando foram coletados embries de peixes em
locais mais ao sul (especialmente da Virginia para a South
Carolina), o ambiente teve um grande efeito. (De acordo com
Norte
Nova Scotia
Prince Edward Island
New York
Virginia
North Carolina
South Carolina
Sul
beneficiam por serem maiores, pois tamanho se traduz em maior fecundidade. uma
vantagem nascer cedo na poca da reproduo para uma fmea Menidia, que teria um
perodo mais longo de alimentao e um tamanho maior. Nos machos, o tamanho no
tem importncia. Conover e Heins mostraram que na parte sul da rea da Menidia, as
fmeas realmente nascem cedo na estao de reproduo. A temperatura parece ter um
papel importante. Entretanto, na parte norte de sua regio, a mesma espcie no mos-
tra determinao sexual ambiental. Na verdade, uma relao 1:1 gerada em todas as
temperaturas (Figura 21.13). Os autores especulam que as populaes mais ao norte
tm uma estao de alimentao muito curta, de modo que no h vantagem para uma
fmea nascer antes. Portanto, essa espcie de peixes tem uma determinao sexual
ambiental nas regies onde adaptiva e uma determinao sexual genotpica nas
regies onde no adaptiva. Aqui, novamente, observa-se que o ambiente pode
induzir um fentipo sexual, ou o fentipo sexual pode ser uma propriedade do genoma,
como o caso na maioria dos mamferos.
Forma
tpica
Abertura Inflado e
grossa com dente com corcova
Forma
induzida
por
predador
Isso permite que o girino se afaste nadando rapidamente e desvie golpes na regio da
cauda. A carpa Carassius carassius reponde presena do lcio (pike) predatrio
somente se esse j se alimentou com peixe. A carpa cresce adquirindo uma forma
entumecida e com uma corcova que no mais se ajusta s mandbulas do lcio. Como
na maioria das defesas induzidas pelo predador, existe uma contrapartida (ou ento
seria de se esperar que a forma induzida se tornasse o fentipo normal). Nesse caso, a
morfologia induzida produz um retardamento nas condies de natao, e o peixe mais
gordo no pode nadar to eficientemente (Brnmark e Pettersson, 1994). A Figura
21.14 mostra as formas tpicas e as induzidas pelo predador para vrias espcies. Em
cada caso, filtrados solveis da gua envolvendo o predador so capazes de induzir
essas modificaes. Como mostra a Figura 21.14, a forma induzida mais susceptvel
a sobreviver ao seu predador. [env4.html]
Figura 21.15
Polifenismo nos girinos do sapo p de espada, Msculo Musculo
interhiideo interhiideo
Scaphiopus couchii. A forma tpica a onvo-
ra, usualmente se alimentando de insetos e al-
gas. Quando as lagoas esto secando forma- Alas Alas
da a forma carnvora (canibalstica). A boca intestinais intestinais
mais larga, os msculos das mandbulas so
maiores, e o intestino modificado para uma di- CARNVORO
eta carnvora. (Fotografia e desenho cortesia (outros girinos) ONVORO (camaro do mar,
de R. Ruibel.) Superfcie ventral algas) Superfcie ventral
CAPTULO 21 Regulao Ambiental do Desenvolvimento Animal 821
Informaes adicionais
& Especulaes
Assimilao Gentica
a discusso sobre a relao custo/ Presumivelmente sua pele, como a de
Se a assimilao gentica indica a fixa- adaptivo ao dia curto (clima frio) de vrias A assimilao gentica pode ter um
o de um dos fentipos adaptivamente ex- borboletas o mesmo que o nico fentipo, papel importante fornecendo um vis
pressos, ento as borboletas seriam uma boa geneticamente produzido, de espcies re- para mudanas evolucionrias. Se um or-
fonte onde encontrar mais exemplos. Bra- lacionadas ou subespcies vivendo em al- ganismo herda uma norma de reao, as
kefield e colegas (1996) mostraram que po- tas altitudes ou latitudes. Pode-se tambm vias de desenvolvimento levando a um
diam fixar geneticamente as diferentes for- produzir o fentipo de clima frio incuban- fentipo particular j esto colocadas, e
mas do polifenismo adaptivo de Bicyclus, do no refrigerador as larvas ou pupas das tudo o que a evoluo deve fazer suprir
e Shapiro (1976) mostrou que o fentipo borboletas da estao quente. [env5.html] um iniciador constante dessas vias.
Dia 1 Ncleo
Citoplasma Antgeno A
Sem diviso ou diferenciao
Clones de dos linfcitos cujos anticorpos
linfcito da superfcie celular no
em repouso reconhecem o antgeno A
Ribossomos
Dia 2 Figura 21.17
Modelo de seleo clonal na formao de
Molculas de
anticorpo so
anticorpos. Cada clula B produz um tipo par-
sintetizadas no ticular de protena de anticorpo (imunoglobuli-
retculo na) e a expe na sua superfcie celular. Quando
endoplasmtico um antgeno (estranho ao corpo) se liga s pro-
tenas do anticorpo na membrana da clula B, a
Dia 3 clula B est apta a se dividir e se diferenciar
Proliferao em uma clula plasmtica secretora de
anticorpos. A clula plasmtica secreta somente
Retculo aquele tipo especfico de anticorpo que foi ori-
endoplasmtico
ginalmente produzido pela clula B.
Dia 4
Diferenciao
Clula de
Anticorpo anti-A secretado memria
Clula
plasmtica
Dia 5
Anticorpo secretado
*A fvea uma depresso no centro da retina onde somente os cones esto presentes e os bastonetes
e vasos sangneos esto ausentes. Aqui ela se torna um marco conveniente.
CAPTULO 21 Regulao Ambiental do Desenvolvimento Animal 825
Retina
Nervo
ptico
Quiasma
ptico
Ncleo
geniculado
lateral
Radiaes pticas
Crtex visual
Vias visuais do olho direito (vista da Vias visuais do olho esquerdo Vias visuais combinadas,
superfcie ventral do crebro) esquerda e direita
Figura 21.18
Vias principais do sistema visual de mamfe-
ros. (A) Em mamferos, o nervo ptico de cada
olho se ramifica, enviando fibras nervosas a
um ncleo geniculado lateral em cada lado do
crebro. No lado ipsilateral, uma parte espec-
fica da retina vai a uma parte especfica do n-
cleo geniculado lateral. No lado contralateral,
o ncleo geniculado lateral recebe entradas de
todas as partes da retina. Neurnios de cada
ncleo geniculado lateral inervam o crtex vi-
sual no mesmo lado. (B,C) Retinas isoladas (e
filetadas) mostrando projees ipsilaterais (B)
(B) (C)
e contralaterais (C), das clulas ganglionrias
da retina de um embrio de camundongo de 16
dias. O corante fluorescente carbocianina DiI
foi inserido atrs do quiasma ptico, e foi per-
mitido que o corante penetrasse nos axnios
rhesus, onde fenmenos semelhantes so observados, o defeito foi relacionado
retinianos. O corante se difunde ao longo dos
falta de sntese de protenas nos neurnios geniculados laterais inervados pelo axnios, assim demarcando a sua origem. Pro-
olho coberto (Kennedy et al., 1981). jees ipsilaterais na sua maioria vm de uma
Seria tentador concluir que a cegueira resultante foi devida no formao de nica parte da retina (neste caso, da regio
conexes visuais apropriadas, mas esse no o caso. Realmente, quando um gato ventro-temporal). Projees contralaterais para
nasce, axnios dos neurnios geniculados laterais recebendo entradas de cada olho o mesmo stio vm de toda a retina. (B e C de
se superpe extensivamente no crtex visual (Hubel e Wiesel, 1963). Entretanto, Colello e Guillery, 1990, cortesia dos autores.)
quando um olho coberto muito cedo na vida do filhote, suas conexes com o crtex
visual so assumidas por aquelas do outro olho (Figura 21.19). Existe competio, e
a experincia tem um papel na fortificao e estabilizao das conexes de cada
ncleo geniculado lateral ao crtex visual. Portanto, quando ambos os olhos do gati-
nho so costurados durante 3 meses, a maioria das clulas corticais pode ser estimu-
lada pela iluminao apropriada de um ou outro olho. O tempo crtico no desenvolvi-
mento do gato para essa validao das conexes neuroniais comea entre a quarta e a
sexta semana na vida do animal. A privao monocular at a quarta semana produz
pouca ou nenhuma deficincia fisiolgica, mas aps 6 semanas ela produz todas as
mudanas neuroniais caractersticas. Se um gatinho teve uma experincia visual du-
rante os primeiros 3 meses, qualquer privao monocular posterior (mesmo por um
ano ou mais) no tem efeito. As sinapses se estabilizaram.
826 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
(B)
(A)
Camada cortical 4
Figura 21.19
Auto-radiografia de fundo escuro do crtex
estriado de macaco, 2 semanas aps injeo de
[3H]prolina no humor vtreo de um olho. Cada
neurnio retiniano absorve a marcao radioa-
tiva e a transfere para as clulas com as quais
forma sinapses. (A) Padro normal de marca-
o. As listas brancas indicam que cerca da
Portanto, dois princpios podem ser visualizados na padronizao do sistema
metade das colunas absorveram a marcao,
enquanto a outra metade no a obsorveu; esse visual nos mamferos. Primeiro, conexes neuroniais envolvidas na viso esto
padro indica que metade das clulas estavam presentes mesmo antes que o animal enxergue; e segundo, a experincia tem um
inervadas pelo olho marcado e metade pelo olho papel importante na determinao de quais conexes permanecem.* Da mesma
no marcado. (B) Padro de marcao quando maneira que a experincia refina as conexes neuromusculares originais, ela tam-
o olho no marcado permaneceu fechado por bm tem um papel no refinamento e melhora das conexes visuais. tambm
suturas durante 18 meses. As projees possvel, que funes adultas como aprendizado e memria se originam no esta-
axnicas do olho normal (marcado) assumem belecimento e/ou reforo de diferentes sinapses pela experincia. Purves e
as regies que normalmente seriam inervadas
Lichtman (1985) observaram:
pelo olho suturado. (C,D) Desenhos de axnios
dos ncleos geniculados de gatinhos que tive-
ram um olho ocludo por 33 dias. A ramifica- A interao entre animais individuais e seu mundo continua a moldar o sistema
o terminal dos axnios no olho ocludo (C) nervoso atravs da vida de uma maneira impossvel de ter sido programada.
foi muito menos extensa do que aquela do Modificao do sistema nervoso pela experincia , portanto, a ltima e mais
olho no ocludo (D). (A e B de Wiesel, 1982, sutil estratgia desenvolvimental.
cortesia de T. Wiesel; C e D de acordo com
Antonini e Stryker, 1993.)
*Estudos recentes (Colman et al., 1997) mostraram que a divergncia na liberao de
neurotransmissores resulta em modificao da adesividade sinptica e causa a remoo do axnio
fornecendo a estimulao mais fraca. Os que estudaram neurobiologia se lembraro (se potenciados
adequadamente) que o conceito da sinapse de Hebbian se baseia na premissa que a experincia
influencia vias neuroniais. Se um axnio do neurnio A ativa o neurnio B, de tal maneira que o
disparo de B est sempre associado ao de A, ento a sinapse entre os neurnios A e B reforada.
Existem vrias maneiras pelas quais esse reforo poderia ocorrer, mas a maioria das hipteses
focalizam as modificaes que permitiriam a entrada mais rpida de ons de clcio no neurnio B.
Esse tipo de sinapse poderia explicar o fenmeno de potenciao de longo prazo, a qual conside-
rada como a base da memria correlativa (onde uma sensao relembra outras). Tais mecanismos
Hebbianos podem mediar a competio entre os axnios dos ncleos geniculados laterais por clulas
no crtex visual (Stent, 1973; Reite e Stryker, 1988).
CAPTULO 21 Regulao Ambiental do Desenvolvimento Animal 827
Q DISTRBIOS AMBIENTAIS DO
DESENVOLVIMENTO NORMAL
Malformaes e distrbios
Da primeira parte deste captulo, ficou claro que as instrues para o desenvolvimen-
to no residem completamente nos genes ou mesmo no zigoto. O organismo sens-
vel s sugestes do ambiente. Entretanto, isso torna o organismo vulnervel s mu-
danas ambientais que podem provocar distrbios no desenvolvimento.
Se parece surpreendente que qualquer um de ns sobrevive para nascer, isso
real; estima-se que da metade a dois teros de todas as concepes humanas no se
desenvolvem a termo com sucesso (Figura 21.20). Muitos desses embries expres-
sam sua anormalidade to cedo que no h implantao no tero. Outros se implan-
tam mas no conseguem estabelecer uma gravidez de sucesso. Portanto, a maioria
dos embries anormais so espontaneamente abortados antes mesmo que a mulher
saiba que est grvida (Bou et al., 1985). Edmonds e colaboradores (1982) usando
um teste imunolgico muito sensvel que pode detectar a presena de gonadotropina
corinica humana (hCG) 8 ou 9 dias aps a fertilizao, monitoraram 112 gestaes
em mulheres normais. Dessas gestaes determinadas por hCG, 67 no foram mantidas.
Parece, ento, que muitos embries humanos so prejudicados cedo no desenvol-
vimento e no sobrevivem por muito tempo no tero. Os defeitos nos pulmes, mem-
bros, face ou boca no seriam deletrios para o feto (que no depende desses rgos
enquanto dentro da me), mas podem ameaar seriamente a vida aps o nascimento.
Cerca de 5% de todos os nascimentos humanos tm uma malformao reconhecvel,
algumas leves, outras muito severas (McKeown, 1976).
Anormalidades congnitas (no nascimento) e a eliminao de embries e fetos
antes do nascimento so causadas tanto intrinsecamente como extrinsecamente. As
anormalidades causadas por eventos genticos (mutaes, aneuploidia, translocaes)
so chamadas malformaes. Por exemplo, aniridia (ausncia da ris) causada pela
Figura 21.20
mutao do gene PAX6, uma malformao. A sndrome de Down, causada pela Os destinos hipotticos de 20 ovos que so
trissomia do cromossomo 21, tambm uma malformao. A maior parte da elimina- fertilizados naturalmente nos Estados Unidos
o precoce de embries e fetos provavelmente devida s anormalidades e Europa ocidental. Em condies normais,
cromossmicas que interferem com o processo normal do desenvolvimento. somente 6.2 ovos dos 20 originais teriam
possibilidade de se desenvolver a termo com
sucesso. (De acordo com Volpe, 1987.)
Desenvolvimento bem
sucedido, 4 semanas
Porcento
828 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Tabela 21.2 Alguns agentes conside- Anormalidades devidas a agentes exgenos (certos agentes qumicos ou vrus,
rados causadores de distrbios no de- radiao ou hipertermia) so chamados distrbios. Os agentes responsveis pelos
senvolvimento fetal humanoa distrbios so chamados teratognicos (do Grego, formadores de monstros), e o
DROGAS E SUBSTNCIAS QUMICAS estudo de como agentes ambientais rompem o desenvolvimento normal chamado
cido retinico (Isotretinoina, Accutane) teratologia.* Teratognicos funcionam durante certos perodos crticos no desenvol-
cido valprico vimento. O perodo mais crtico para qualquer rgo quando ele est crescendo e
Agentes antitirideos (PTU) formando suas estruturas. Diferentes rgos tm diferentes perodos crticos, apesar
lcool
Aminoglicosdeos (Gentamicina) do espao de tempo entre 15 e 60 dias ser crtico para muitos rgos. O corao se
Aminopterina forma primariamente durante as semanas 3 e 4, enquanto a genitlia externa mais
Bromo sensvel nas semanas 8 e 9. O crebro e o esqueleto so sempre sensveis, do comeo
Chumbo da semana 3 at o fim da gravidez e alm.
Cocana
Cortisona
Dietilestilbesterol (DES) Agentes teratognicos
Difenilhidantona
Estreptomicina Agentes diferentes so teratognicos em diferentes organismos. Uma lista parcial de
Fumaa de cigarro
Herona agentes teratognicos no homem est apresentada na Tabela 21.2.
Metilmercrio A principal classe de teratognicos inclui drogas e compostos qumicos
Penicilamina ambientais. Alguns compostos qumicos que so encontrados naturalmente no
Talidomida ambiente podem causar defeitos de nascimento. Mesmo nos puros campos alpi-
Tetraciclina
Trimetadiona nos intocados das Montanhas Rochosas so encontrados teratognicos. Aqui nasce
Warfarina o repolho de gamb Veratrum californicum, que algumas vezes serve de alimento
para os carneiros. Se ovelhas grvidas se alimentam dessa planta, seus fetos ten-
RADIAO IONIZANTE (RAIOS-X) dem a desenvolver graves danos neurolgicos, incluindo ciclopia, a fuso dos
HIPERTERMIA dois olhos no centro da face (Figura 21.21). Essa condio tambm ocorre no
homem, porco e muitos outros mamferos; o organismo afetado morre logo aps
MICROORGANISMOS INFECCIOSOS o nascimento (como resultado do grave defeito no crebro, incluindo a falta da
Cytomegalovrus glndula pituitria).
Herpes simplex
Parvovrus Quinina e lcool, duas substncias derivadas de plantas, podem tambm causar
Rubola (Sarampo Alemo) malformaes. A quinina pode causar surdez, e o lcool (quando mais de 60-90 g por
Toxoplasma gondii (toxoplasmose) dia so ingeridas pela me) pode causar retardamento fsico e mental na criana. No
Treponema pallidum (sfilis) foi provado que a nicotina e a cafena causam anomalias congnitas, mas mulheres
Vrus Coxsackie
que fumam muito (20 cigarros ou mais por dia) podem ter crianas menores que
CONDIOES METABLICAS NA ME aquelas nascidas de mes que no fumam. Fumar tambm diminui significativamente o
Doena auto-imune nmero e a motilidade de espermatozides em homens que fumam pelo menos quatro
(incluindo incompatibilidade de Rh) cigarros por dia (Kulikauskas et al., 1985).
Diabetes
Deficincias dietticas, malnutrio Alm disso, nossa sociedade industrial produz anualmente centenas de novos
Fenilcetonria compostos artificiais que passam para o uso geral. Pesticidas e compostos orgnicos
de mercrio tm causado anormalidades neurolgicas e de comportamento em bebs
Fonte: Adaptado de Opitz, 1991. cujas mes os ingeriram durante a gravidez. Uma trgica demonstrao disso ocorreu
a
Esta lista inclui agentes teratognicos conheci-
dos e possveis e no exaustiva.
em 1965, quando uma firma japonesa despejou mercrio em um lago, onde foi inge-
rido pelos peixes que foram comidos por mulheres grvidas da aldeia de Minamata.
O dano cerebral congnito e a cegueira nas crianas nascidas se tornou conhecido
como a doena de Minamata.
Em alguns casos, as mesmas condies podem ser causadas por um distrbio (causado por um agente
exgeno) ou uma malformao (do ncleo). Por exemplo, certas malformaes axiais em camundongos
podem ser produzidas pela administrao de cido retinico ou por mutaes em certos genes Hox. Consi-
dera-se que, em alguns casos, a mutao e o teratognico esto afetando a mesma enzima. A
condroplasia puntacta um defeito congnito do osso e da cartilagem, caracterizada por uma
mineralizao anormal do osso, subdesenvolvimento da cartilagem nasal e dedos encurtados; esse
defeito causado por um gene defeituoso no cromossomo X. Um fentipo idntico produzido pela
ingesto de warfarina, o composto que mata ratos. Parece que o gene defeituoso normalmente
responsvel pela produo de uma protena, a arilsulfatase, necessria para o crescimento da carti-
lagem. O composto warfarina inibe essa mesma enzima (Franco et al., 1995).
CAPTULO 21 Regulao Ambiental do Desenvolvimento Animal 829
*Sade Pblica um fator crtico, pois existe uma significante sobreposio entre a populao
que usa medicamentos para a acne e a populao de mulheres em idade frtil. Alm disso, considera-
se que metade das gestaes na Amrica do Norte no so planejadas (Nulman et al., 1997). A
prpria vitamina A teratognica quando injetada em mega doses. Rothman e colegas (1995)
encontraram que mulheres grvidas que tomaram mais de 10.000 unidades internacionais de vitami-
na A pr-formada/dia (na forma de suplementos vitamnicos) tinham cerca de 2 por cento de chance
de terem uma criana nascida com distrbios semelhantes aqueles produzidos pelo cido retinico.
830 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Figura 21.22
Embrio de camundongo normal com 17 dias
(A) e um embrio de camundongo de 17 dias
cuja me recebeu cido retinico no dia 8 da
gestao (B). Podem ser vistas malformaes
craniofaciais na cartilagem derivada da crista
neural dos embries tratados. A cartilagem de
Meckel est completamente deslocada da re-
gio mandibular (queixo inferior) para a regio
maxilar (parte superior da boca). As cartila-
gens do martelo e bigorna tambm no so for-
madas. (de Morriss-Kay, 1993; fotografia cor-
tesia de G. Morriss-Kay.)
(A) (B)
Antes de 1961, havia pouca evidncia sobre malformaes induzidas por drogas
em humanos. Mas, naquele ano, Lenz e McBride independentemente acumula-
ram evidncia de que um sedativo leve, talidomida, causava um enorme aumento
em uma sndrome previamente rara de anomalias congnitas. A mais evidente des-
sas anomalias era a focomelia, uma condio na qual os ossos longos dos mem-
bros esto ausentes (amelia) ou severamente deficientes (peromelia), fazendo com
que os apndices resultantes paream membros de foca (Figura 21.23). Mais de
7000 crianas afetadas nasceram de mes que haviam tomado a droga, e uma
mulher necessitava ingerir apenas um comprimido para produzir crianas com os
quatro membros deformados (Lenz, 1962, 1966; Toms,1962). Outras anormalidades
induzidas pela ingesto de talidomida incluem defeitos no corao, ausncia de
ouvidos externos e intestinos malformados. A droga foi retirada do mercado em
Novembro de 1961.
Nowack (1965) documentou o perodo de susceptibilidade durante o qual a
talidomida causava essas anormalidades. Foi encontrado que a droga era teratognica
somente durante os dias 34-50 aps a ltima menstruao (cerca de 20 a 36 dias
ps-concepo). A especificidade da ao da talidomida mostrada na Figura
21.23C. Do dia 34 ao dia 38, no se observa anormalidades nos membros. Durante
esse perodo, a talidomida pode causar a ausncia ou deficincia dos componentes
do ouvido. Malformaes dos membros superiores so vistas antes daquelas dos
membros inferiores, pois durante o desenvolvimento os braos se formam pouco
antes do que as pernas.
CAPTULO 21 Regulao Ambiental do Desenvolvimento Animal 831
(C)
Ausncia de ouvido
Ausncia de braos
Deslocamento da bacia
Malformao do ouvido
Ausncia de pernas
Dedos malformados
Figura 21.24
Efeitos da talidomida no feto de sagi. As figuras superiores mostram fentipos de fetos de sagis tardiamen-
te na gestao. As figuras inferiores mostram sees da medula espinhal ao nvel dos membros anteriores.
(A) Feto de um sagi controle. (B) Feto de um sagi tratado com 25mg de talidomida por quilograma de peso
coporal entre os dias 38 e 46 da gestao. (de McBride e Vardy, 1983, cortesia de W. G. McBride.)
* Para uma notvel descrio da criao de uma criana com sndrome alcolica fetal bem como uma
anlise de FAS na cultura dos ndios Americanos nos Estados Unidos, veja Dorris (1989). Os efeitos
pessoais e sociolgicos de FAS esto bem integrados aos dados cientficos e econmicos.
Figura 21.25
Comparao de um crebro de uma criana com sndrome alcolica
fetal (esquerda) com o crebro de uma criana normal da mesma
idade (direita). O crebro de uma criana com FAS significativa-
mente menor, e o padro de convolues est obscurecido pelas
clulas gliais que migraram sobre o topo do crebro. (Fotografia
cortesia de S. Clarren.)
834 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Figura 21.26
Possveis mecanismos que produzem a
sndrome alcolica fetal. (A-C) Morte celular
pelos radicais de superxido induzidos pelo
etanol. Colorao com sulfato de Azul do
Nilo revela reas de morte celular. (A) Regio
da cabea de um embrio controle de camun-
dongo de 9 dias. (B) Regio da cabea de um
embrio tratado com etanol, mostrando reas
de morte celular. (C) Regio da cabea de um
embrio de 9 dias tratado com etanol e
superxido dismutase, um inibidor de radicais
superxido. O inibidor do superxido impede
a morte celular induzida pelo lcool. (D) Grfi-
co representando a inibio da adeso celular
mediada por L1 pelo etanol. (A-C de Kotch et
al., 1995; fotografias cortesia de K. Sulik; D de
acordo com Ramanathan et al., 1996.)
Clulas
aderindo
pelo L1
Clulas controle no
expressando L1
Concentrao de etanol, mM
adesivas das protenas L1 in vitro a nveis to baixos como 7mM, uma concen-
trao de etanol produzida no sangue ou crebro com um nica dose (Figura
21.26D). Alm disso, mutaes nos genes L1 humanos causam uma sndrome de
retardamento mental e malformaes semelhantes quelas vistas em casos seve-
ros da sndrome alcolica fetal. [env7.html]
Informaes adicionais
& Especulaes
Estrognos Ambientais
Interaes gentica-ambiental
A observao de que uma substncia pode ser teratognica em uma espcie mas no
em outra, sugere fortemente que existe um componente gentico para que uma subs-
tncia possa ou no produzir modificaes no desenvolvimento normal. Evidncia
recente sugere que diferentes alelos na populao humana podem influenciar se uma
substncia benigna ou perigosa para o feto. Por exemplo, existe na populao em
geral, um pequeno risco de que o fumo intenso pela me cause malformaes faciais
no seu feto. Entretanto, se o feto possui um determinado alelo (A2) do gene para o
fator de crescimento TGF-, a fumaa absorvida atravs da placenta pode aumentar
de dez vezes o risco de lbio e plato fissurados (Shaw et al., 1996). Analogamente,
diferentes alelos codificando a enzima lcool desidrogenase-2 tm diferentes habilida-
des de degradar o etanol. Se o alto consumo de lcool pela me leva uma sndrome
alcolica fetal ou a um efeito alcolico fetal depender do tipo de isozimas de lcool
desidrogenase presentes na me e no feto (McCarver-May, 1996). Portanto, se um
composto teratognico depende de muitos fatores, incluindo os genes do indiv-
duo a ele exposto.
Resumo
Freqentemente, o desenvolvimento ocorre em um meio ambiente rico, e a maio-
ria dos animais sensvel s sugestes do ambiente. O ambiente pode determinar o
fentipo sexual, pode induzir incrveis adaptaes qumicas e estruturais de acordo
com a estao, pode induzir determinadas modificaes morfolgicas que permitem
838 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
que o indivduo escape predao e pode induzir a determinao de castas nos insetos.
O ambiente tambm pode alterar a estrutura de nossos neurnios e a especificidade de
nossas clulas imunocompetentes. Infelizmente, o ambiente tambm pode ser a fonte de
compostos qumicos que prejudicam processos normais de desenvolvimento.
Enquanto o desenvolvimento ocorre normalmente em um ambiente natural com-
plexo, ele pode ser facilmente estudado no laboratrio. Na verdade, nossos sistemas
modelo so animais facilmente domesticados, cujo desenvolvimento pouco afeta-
do por fatores ambientais (Bolker, 1995). Entretanto, ao conhecermos a complexida-
de do desenvolvimento, compreendemos que esse criticamente ligado ao ambiente.
necessria uma comunidade para desenvolver um embrio. A explorao de como
o ambiente regula o desenvolvimento est apenas comeando.
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A saga da linhagem germinativa
22
E o fim de todo nosso explorar
Ser o retorno para de onde partimos
E pela primeira vez o conhecimento do lugar.
T. S. ELIOT (1942)
C OMEAMOS NOSSA ANLISE do desenvolvimento animal discutindo a
fecundao, e iremos terminar nosso estudo sobre o desenvolvimento indi-
vidual investigando a gametognese, os processos pelos quais so forma-
dos o espermatozide e o vulo. Clulas germinativas proporcionam a continuidade
da vida entre as geraes, e os ancestrais mitticos de nossas prprias clulas
germinativas residiram uma vez nas gnadas de rpteis, anfbios, peixes e inverte-
brados. Em muitos animais, como insetos, nematelmintos e vertebrados existe uma
clara e precoce separao das clulas germinativas de tipos celulares somticos. Em
vrios filos animais (e no todo do reino vegetal), essa diviso no est to bem esta-
belecida. Nessas espcies (que incluem cnidrios, platelmintos e tunicados), as clu-
las somticas podem facilmente se tornarem clulas germinativas mesmo em orga-
nismos adultos. Os zoides, brotos e plipos de muitos filos de invertebrados atestam
a capacidade das clulas somticas dar origem a novos indivduos.
Naqueles organismos nos quais existe uma linhagem germinativa estabelecida, se-
parando-se precocemente no desenvolvimento, as clulas germinativas no se origi-
nam de dentro da gnada propriamente. Ao contrrio, seus precursores as clulas
germinativas primordiais (PGCs) migram para o interior das gnadas em desen-
volvimento. O primeiro passo na gametognese, portanto, envolve a formao das PGCs
e sua conduo para o sulco genital medida que a gnada est se formando. A inicia-
o da linhagem da clula germinativa (a linhagem germinativa) em anfbios, insetos e
nematelmintos foi discutida no Captulo 13. Reiniciamos nossa histria da linhagem
germinativa com a migrao das PGCs de seu local de origem para as gnadas.
843
844 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Plasma
germinativo Blastocele
Plo vegetal
Figura 22.3
Trajetria para a migrao de clulas germina-
tivas primordiais de mamfero. (A) clulas ger-
minativas primordiais vistas no saco vitelnico
Intestino
prximas da juno do intestino posterior e da
posterior Alantide alantide. (B) Migrao atravs do intestino e,
Intestino dorsalmente, acima do mesentrio dorsal para
anterior Sulcos
o interior do sulco genital. (C) Quatro grandes
genitais
PGCs no intestino posterior de um embrio de
camundongo (perto da alantide e do saco
vitelnico) se coram positivamente para altos
nveis de fosfatase alcalina. (D) Tais clulas
Corao podem ser vistas migrando subindo o mesen-
Clulas
trio dorsal e entrando nos sulcos genitais. (A
germinativas Mesonefros e B de Langman, 1981; C de Heath, 1879; D de
primordiais Mintz, 1957; fotografias cortesia dos autores.)
Mesentrio
dorsal
Saco vitelnico Intestino
(A) (B) Cloaca posterior
Clulas germinativas
primordiais
Informaes adicionais
& Especulaes
O FATOR DA CLULA-TRONCO
aumenta a proliferao de clulas
germinativas primordiais de ca-
mundongo em cultura, e essa prolifera-
Epitlio
Eritrcitos
Clulas
queratinizadas
Insero no
blastocisto
Incorporao
Transferncia cirrgica na massa
para a me de criao celular interna Isolamento da linhagem de Teratocarcinoma
clulas-tronco maligno
Figura 22.6
Protocolo para a criao de camundongos cujos genes so pre-
dominantemente derivados de clulas tumorais. Clulas-tronco
foram isoladas de um teratocarcinoma de camundongo e inseridas
em blastocistos de uma variedade diferente de camundongo. Os
Mosaico
Tipo selvagem blastocistos quimricos foram colocados em uma me de cria-
o. Se as clulas tumorais estiverem integradas no blastocisto,
o camundongo que se desenvolve ter muitas de suas clulas
derivadas do tumor. Se o tumor tiver dado origem s clulas
germinativas, os camundongos mosaicos podem ser cruzados
com camundongos normais para produzir uma gerao F1. Os
animais F1 devem ser heterozigotos para todos os cromossomos
das clulas tumorais. Cruzamentos entre animais F1 produzem
F1 onde as clulas germinativas Nova linhagem formada quando camundongos F2 tendo alguns genes homozigotos derivados
foram derivadas do tumor foram cruzados dois camundongos F1 das clulas tumorais. (Segundo Stewart e Mintz, 1981.)
848 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
(Figura 22.5). Uma vez diferenciadas, essas riedade agouti (ponta-amarela) de camun- portando um marcador apropriado, o ca-
clulas no podem mais se dividir e, portan- dongo foram cultivadas por vrias gera- mundongo quimrico foi capaz de gerar
to, no so malignas. Tais tumores podem es e foram vistas manter o complemen- camundongos tendo parte do fentipo do
dar origem maioria dos tipos de tecidos no to cromossmico caracterstico do ca- tumor paterno. A clula do carcinoma
organismo. Assim, as clulas-tronco do tera- mundongo ancestral. Clulas-tronco in- embrionrio maligno tinha produzido
tocarcinoma copiam o desenvolvimento ma- dividuais desse tipo foram injetadas em muitos, seno todos, tipos de clulas
mfero precoce, mas o tumor que formam blastocistos de camundongos negros. Os somticas normais, e tinham mesmo pro-
caracterizado por desenvolvimento rando- blastocistos foram em seguida transferi- duzido clulas germinativas normais,
mizado, descontrolado. dos para o tero de uma me de criao, funcionais! Quando camundongos ten-
Em 1981, Stewart e Mintz formaram nascendo camundongos vivos. Alguns do uma clula tumoral para um pai foram
um camundongo de clulas derivadas em desses tinham pelagem de duas cores, in- cruzados entre si, a prole resultante con-
parte de uma clula-tronco de teratocar- dicando que as clulas tumorais haviam tinha camundongos homozigotos para
cinoma. Clulas-tronco que haviam sur- se integrado no embrio. Alm disso, um grande nmero de genes da clula
gido em um teratocarcinoma de uma va- quando cruzado com um camundongo tumoral (Figura 22.6).
Crescente
germinativo
rea pelcida
rea opaca
Ndulo de Hensen
Figura 22.7
Vista dorsal de um embrio em estgio de linha primitiva, mostrando a regio, chamada crescente
germinativo, na qual se originam as clulas germinativas. (Segundo Swift, 1914.)
CAPTULO 22 A Saga da Linhagem Germinativa 849
Vaso sangneo
Clulas sangneas
Epitlio gonadal
Clula
germinativa
primordial
(A) (B)
Figura 22.8
Clulas germinativas primordiais no embrio
Dessa forma, as PGCs entram no embrio sendo transportadas pelo sangue (Pasteels, do pinto. (A) Micrografia eletrnica de varre-
1953, Dubois, 1969). As PGCs tm tambm que saber como sair do sangue quando dura de PGC de pinto em um capilar de um
encontram a gnada em desenvolvimento (veja Figura 22.8B). Quando o crescente embrio em gastrulao. A PGC pode ser
germinativo de um embrio de pinto removido, e a circulao desse embrio junta- identificada pelo seu grande tamanho e as
da quela de um embrio normal, as clulas germinativas primordiais do embrio nor- microvilosidades em sua superfcie. (B) Se-
mal iro migrar para ambos conjuntos de gnadas (Simon, 1960). No conhecido o o transversal prxima prospectiva regio
que causa a atrao para os sulcos genitais. Uma possibilidade que a gnada em gonadal do embrio. Vrias PGCs dentro do
desenvolvimento produz uma substncia quimiottica que atrai as PGCs e as retm vaso sangneo se agregam prximo ao
epitlio. Uma PGC est atravessando o
nos capilares limitando a gnada (Regulska, 1969). (Tais substncias so conhecidas
endotlio da parede vascular, e outra j est
como secretadas pelos linfcitos nos locais de infeco para atrair os macrfagos localizada no interior do epitlio. (A de
permitindo que esses passem atravs da parede capilar por diapedese.) A evidncia Kuwana, 1993, cortesia de T. Kuwana; B se-
para essa quimiotaxia veio de estudos (Kuwana, et al., 1986) nos quais as PGCs gundo Romanoff, 1960.)
circulantes do pinto foram isoladas do sangue e cultivadas entre rudimentos gonadais
e outros tecidos embrionrios. As PGCs migraram para o interior dos rudimentos
gonadais durante 3 horas de incubao.
Outra possibilidade que as clulas endoteliais dos capilares gonadais tm um
composto na superfcie celular que promove as PGCs aderirem especificamente a esse
local. Usando anticorpos monoclonais que reconhecem diferentes molculas da su-
perfcie celular, Auerbach e Joseph (1984) mostraram que as clulas endoteliais de
vrias redes capilares tm diferentes componentes da membrana celular, e que as
clulas endoteliais de capilares ovarianos diferem de todas as outras testadas.* Tanto
a quimiotaxia como os mecanismos diferenciais de adeso celular podem estar atu-
ando. Seja como for, esses fatores no so espcie-especficos. A gnada do pinto
atrai as PGCs circulantes do peru e at mesmo do camundongo (Reynaud, 1969;
Regulska et al., 1971).
*Uma situao semelhante parece ocorrer quando linfcitos migram atravs da corrente sangnea
e abandonam a circulao quando entram no leito capilar de um determinado rgo linfide. O mecanis-
mo para esse alojamento e especificidade para o rgo envolvem a capacidade do linfcito de
aderir especificamente s clulas endoteliais dos vasos sangneos nesses rgos. Clulas endoteliais
dos ndulos linfticos perifricos contm uma glicoprotena, uma selectina, em suas membranas
celulares que essencial para a ligao e sada daqueles linfcitos que podem reconhec-la. Para
cada selectina nessas clulas endoteliais, existe uma molcula complementar no linfcito que
pode reconhec-la (Gallatin et al., 1983, 1986).
850 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Figura 22.9
Migrao de clulas germinativas em Droso-
phila. (A) Clulas germinativas coradas com
anticorpos contra a protena Vasa mostram c-
lulas germinativas originando do plo poste-
rior. (B) Durante a extenso da banda
germinativa, as clulas so movidas para o
intestino intermedirio posterior. (C) Clulas
germinativas migram atravs da parede do in- (D) (E)
testino (o embrio est contracorado para a Clulas germinativas
protena Engrailed) e (D) migram em duas
filas nicas atravs do mesoderma, onde (E)
elas se agregam nas gnadas em desenvolvi-
mento. (F) Processo de migrao atravs da
parede intestinal, iniciado pela diferenciao
endodrmica. (A-F de Warrior 1994, permis-
so cortesia de R. Warrior; F segundo Jaglarz
e Howard, 1995.)
(F)
Meiose
Uma vez na gnada, as clulas germinativas primordiais continuam a dividir-se mi-
toticamente, produzindo milhes de gametas potenciais. As PGCs de gnadas tanto
masculinas como femininas enfrentam ento a necessidade de reduzir seu nmero de
cromossomos da condio diplide para a haplide. Nessa ltima, cada cromossomo
est representado somente uma vez, enquanto as clulas diplides tm duas cpias de
cada cromossomo. Para conseguir essa reduo, as clulas germinativas masculina e
feminina passam por meiose.
Aps a ltima diviso meitica, ocorre um perodo de sntese de DNA, fazendo
com que as clulas iniciando a meiose tenham o dobro da quantidade normal de
DNA em seus ncleos. Nesse estado, cada cromossomo consiste de duas cromtides
irms fixadas a um centrmero comum. (Em outras palavras, o ncleo diplide
contm quatro cpias de cada cromossomo, mas os cromossomos so vistos como
duas cromtides ligadas.) A meiose (mostrada na Figura 1.13) envolve duas divises
celulares. Na primeira diviso, cromossomos homlogos (p.e., o par cromossmico 3
CAPTULO 22 A Saga da Linhagem Germinativa 851
Cromatina
Elementos laterais
(A) (B)
Filamentos
transversos
Figura 22.10
O complexo sinptico. (A) cromossomos homlogos conserva- Elementos centrais
dos juntos na primeira prfase meitica no ocito de Neottiella. Pilar
(B) Diagrama interpretativo da estrutura do complexo sinptico.
Elementos laterais
(A de von Wettstein, 1971, cortesia de D. von Wettstein; B segun-
do Schmekel e Daneholt, 1995.) Cromatina
852 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Figura 22.11
Quiasmas em cromossomos bivalentes dipltenos de ocitos de salamandra. Centrmeros so
visveis como crculos intensamente corados; as setas apontam para os dois quiasmas. (Corte-
sia de J. Kezer.)
Informaes adicionais
& Especulaes
(A) Tipo selvagem: Espermatozides e ocitos de. Por exemplo, mutantes homozigotos
mog (masculinizao da linhagem germi-
nativa) se desenvolvem como machos pro-
dutores de espermatozide, e mutantes ho-
mozigotos fem-1 desenvolvem-se como f-
meas produtoras de vulos (Figura 22.13).
Os mutantes duplos homozigotos tanto
para tra-1 como para fem-1 tm um nico
fentipo. Eles so somaticamente machos,
Espermateca
(regio de mas so fmeas na linhagem germinativa
armazenagem de (Doniach e Hodgkin, 1984). Isso sugere que
Espermatozides Primeiro ocito
espermatozide)
maduros tra-1 o gene chave na determinao se-
Estgios precoces da espermatognese
xual dos tecidos somticos, mas que os
genes fem so responsveis pela deciso es-
permatozide/ocito (Figura 22.14).
(B) Feminilizado: Somente ocitos
Os laboratrios de Hodgkin (1985) e
Kimble (1986) isolaram vrios genes ne-
cessrios para a seleo do caminho da c-
lula germinativa. A Figura 22.14 apresenta
um esquema de como esses genes podiam
funcionar na mudana de formao de es-
permatozide para a formao de ocito.
Durante o desenvolvimento precoce, os
genes fem, em especial fem-3, so crticos
Espermateca (vazia) Primeiro ocito para a especificao das clulas espermti-
cas. Mutaes de perda-de-funo desses
(C) Masculinizado: Somente espermatozides genes convertem nematides XX em fme-
as (i.e., hermafroditas sem espermatozide).
Enquanto so produzidas protenas FEM
nas clulas germinativas, so produzidos
espermatozides. Os genes fem ativos so
considerados ativar os genes fog (cujas mu-
taes de perda-de-funo causam a femi-
nizao da linhagem germinativa e elimi-
nam a espermatognese). Os produtos do
gene fog ativam os genes envolvidos na
Espermatozide maduro Estgios precoces transformao da clula germinativa em es-
Espermateca
da espermatognese permatozide e tambm inibem aqueles
Figura 22.13 genes que iriam de outra maneira dirigir as
Gnadas de C. elegans tipo selvagem e mutante. (A) Hermafrodita tipo selvagem produzindo clulas germinativas para iniciar a oogne-
primeiro espermatozides e em seguida vulos. (B) Animal fmea produzido por mutao fem-
se. A oognese pode comear somente
1 produz somente vulos. (C) Hermafrodita masculinizado produzido por mutaes de perda-de-
quando a atividade fem suprimida. Essa
funo de genes mog (ou mutaes do 3UTR de fem-3) produz somente espermatozides.
(Fotografia cortesia de J. Kimble.)
supresso parece atuar ao nvel da tradu-
o do RNA. A regio 3 no-traduzida
larvas do tipo selvagem, essas entram em te, em cada ovrio/testculo, as clulas ger- (3UTR) do mRNA de fem-3 contm uma
meiose. Assim, o gene glp-1 parece ser res- minativas mais prximas produzem esper- seqncia que liga um repressor durante o
ponsvel pela capacitao de clulas ger- matozide, enquanto as mais distantes (per- desenvolvimento normal. Se essa regio
minativas responderem ao sinal das clulas to da extremidade) tornam-se vulos mudada de maneira que a protena repres-
da extremidade distal.* (Hirsch et al., 1976). A gentica dessa mu- sora no pode se ligar, o mRNA de fem-3
Aps as clulas comearem suas divi- dana est atualmente sendo analisada. permanece traduzvel, e a oognese nunca
ses meiticas, ainda precisam transformar- Conforme discutido no Captulo 20, os ocorre. O resultado um corpo de herma-
se em espermatozide ou vulo. Geralmen- genes para a determinao sexual geram frodita que somente produz espermatozi-
ou um corpo feminino funcionalmente her- de (Ahringer e Kimble, 1991; Ahringer et
* O gene glp-1 parece estar envolvido em vri- mafrodita ou um corpo masculino. Na li- al., 1992). O fator de represso que age no
as interaes indutivas em C. elegans. Deve ser
nhagem germinativa, o caminho da deter- trans ainda no foi identificado, mas pro-
relembrado que glp-1 tambm necessitado pelo
blastmero AB para receber os sinais indutivos do minao sexual ativa ou reprime certos vavelmente o produto de um dos genes
blastmero EMS para formar os msculos farngeos genes que so crticos para as clulas se mog (Graham e Kimble, 1993). Pensa-se que
(veja Captulo 13). transformarem em vulo ou espermatozi- protenas ou mensagens estocadas no
CAPTULO 22 A Saga da Linhagem Germinativa 855
Espermatognese
A espermatognese a produo de espermatozide pelas clulas germinativas pri-
mordiais. Uma vez que as clulas germinativas primordiais de mamferos chegam no
sulco genital dos embries masculinos, elas se incorporam s cordas sexuais. A per-
manecem at a maturidade quando as cordas sexuais tornam-se ocas para formar os
tbulos seminferos, e o epitlio dos tbulos se diferencia em clulas de Sertoli. Du-
rante sua vida, um homem pode produzir de 1012 a 1013 gametas (Reijo et al., 1995). As
clulas espermticas so ligadas s clulas de Sertoli por molculas de N-caderina em
suas respectivas superfcies celulares, e por molculas de galactosil-transferase nas
clulas espermatognicas que ligam um receptor nas clulas de Sertoli (Newton et al.,
1993; Pratt et al., 1993.) As clulas de Sertoli alimentam e protegem as clulas esperm-
ticas em desenvolvimento, e espermatognese - a via de desenvolvimento da clula-
tronco espermatognia at o espermatozide maduro ocorre nos recessos das clu-
las de Sertoli (Figura 22.15). Os processos pelos quais as PGCs produzem espermato-
zide foram estudados em detalhe em vrios organismos, mas enfocaremos aqui a
espermatognese em mamferos. Aps atingir a gnada, as PGCs se dividem para
formar espermatognias tipo A1. Essas clulas so menores que as PGCs e so carac-
terizadas por um ncleo ovide que contm cromatina associada com a membrana
nuclear. As espermatognias A1 so encontradas adjacentes membrana basal exter-
na das cordas sexuais. Na maturidade, essas espermatognias so consideradas divi-
dir-se para produzir uma outra espermatognia tipo A1, assim como um tipo de clula
mais plida, a espermatognia tipo A2. Assim, cada espermatognia tipo A1 uma
clula-tronco capaz de se regenerar assim como produzir um novo tipo de clula. A
espermatognia tipo A2 se divide para produzir a espermatognia tipo A3, que produz
856 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Lmem do tbulo
Espermtides
Corpo residual
Espermatcito secundrio
Espermatcito primrio
Espermatognia Tipo A1
Clula de Espermatognia
Espermatognia
Sertoli Tipo B
Tipo A2
Figura 22.15
Desenho de uma seo do tbulo seminfero, a espermatognia tipo A4. possvel que cada tipo de espermatognia A seja uma
mostrando a relao entre clulas de Sertoli e o clula-tronco capaz de auto-renovao. A espermatognia A4 tem trs opes. Ela
espermatozide em desenvolvimento. medi-
pode formar outra A4 (auto-renovao); pode apresentar morte celular (apoptose), ou
da que as clulas amadurecem, elas progridem
em direo ao lmen do tbulo seminfero. (Se- pode diferenciar-se na primeira clula-tronco comprometida, a espermatognia inter-
gundo Dym, 1977.) mediria. Essas esto comprometidas a se tornarem espermatozide e se dividem uma
vez para formar as espermatognias tipo B. Essas clulas so os precursores dos
espermatcitos e so as ltimas clulas a sofrerem mitose. Essas clulas dividem uma
vez, gerando os espermatcitos primrios - as clulas que entram em meiose. No
conhecido o que faz com que as espermatognias tomem o caminho da diferenciao
em lugar da auto-renovao; tambm no conhecido o que estimula as clulas a
entrar em diviso meitica em vez de mittica (Dym, 1994).
Examinando a Figura 22.16, vemos que durante as divises espermatognicas, a
citocinese no completa. Antes, as clulas formam um sinccio pelo qual cada clula
se comunica com a outra atravs de pontes citoplamticas de cerca de 1 m de dime-
tro (Dym e Fawcett, 1971). As sucessivas divises produzem clones de clulas
interconectadas, e como ons e molculas passam facilmente por essas pontes interce-
lulares, cada grupo amadurece sincronicamente.
Cada espermatcito primrio sofre a primeira diviso meitica para fornecer um par
de espermatcitos secundrios, que completam a segunda diviso da meiose. As
clulas haplides formadas so chamadas espermtides e ainda esto conectadas
uma a outra por pontes citoplasmticas. Essas espermtides tm ncleos haplides
mas so funcionalmente diplides, j que o produto gnico formado em uma clula
pode facilmente se difundir para o citoplasma de suas vizinhas (Braun et al., 1989).
Durante as divises de espermatognias tipo A1 at a espermtide, as clulas se
distanciam mais e mais da membrana basal do tbulo seminfero e se aproximam de seu
lmen (veja Figura 22.15). Assim, cada tipo de clula pode ser encontrado em uma
camada particular do tbulo. As espermtides esto localizadas na margem do lmen,
CAPTULO 22 A Saga da Linhagem Germinativa 857
Espermatognias tipo A 3
Espermatognias tipo A 4
Espermatognias intermedirias
Espermatognias
tipo B
Pontes citoplasmticas
Espermatcitos primrios
(1a diviso meitica)
Espermatcitos secundrios
(2a diviso meitica)
Espermtides
Corpos residuais
Clulas espermticas
Espermiognese
membrana basal do tbulo seminfero. Essa rotao necessria porque o flagelo est
comeando a se formar do centrolo do outro lado do ncleo, e esse flagelo ir se
estender para o interior do lmen. Durante o ltimo estgio da espermiognese, o
ncleo se achata e se condensa, o citoplasma remanescente (a gotcula citoplasmtica)
descartado, e as mitocndrias formam um anel em volta da base do flagelo. O
espermatozide resultante penetra em seguida no lmen do tbulo.
No camundongo, o integral desenvolvimento da clula-tronco at o espermato-
zide leva 34.5 dias. Os estgios espermatognicos duram 8 dias, a meiose 13 dias, e a
espermiognese gasta mais 13.5 dias. Em seres humanos, o desenvolvimento
espermtico perto de duas vezes mais longo. Como as espermatognias do tipo A1
so clulas-tronco, a espermatognese pode ocorrer continuamente. Cada dia, perto
de 100 milhes de espermatozides so produzidos em cada testculo humano, e
cada ejaculao liberta cerca de 200 milhes de espermatozides. Quando no usa-
do, esses so reabsorvidos ou eliminados do organismo pela urina.
Informaes adicionais
& Especulaes
Expresso Gnica
Durante o Desenvolvimento do Espermatozide
Expresso Gnica Antes da nas ligantes de RNA so crticas na esper- dos genes especficos do espermatozide
Meiose Masculina matognese porque muitos dos genes ex- transcrito aquele para a 2-tubulina. Essa
A expresso gnica no espermatozide es- pressos no espermatozide so regulados no isoforma da tubulina vista somente du-
tgio-especfica, e mesmo as clulas hapli- nvel da traduo (Schfer et al., 1995). Re- rante a espermatognese, e responsvel
des so aptas a sintetizar certos produtos. A almente, em alguns animais, muito da es- pela formao de fusos meiticos, do
iniciao da espermatognese na puberda- permatognese ocorre na ausncia de trans- axonema e dos microtbulos associados
de provavelmente regulada pela sntese crio de novos genes. A sntese de com as mitocndrias em processo de ex-
de BMP8B pelas espermatognias. Quan- protamina, a protena bsica que substitui tenso.* Hoyle e Raff (1990) mostraram que
do BMP8B atinge uma concentrao crti- as histonas no ncleo espermtico haplide uma outra isoforma da tubulina, a 3-
ca, as espermatognias podem se diferenci- do espermatozide, regulada pela fosfori- tubulina (que normalmente expressa em
ar em espermtides redondas. Essas clulas lao de uma protena ligante de 18-kDa clulas mesodrmicas e na epiderme), no
produzem altos nveis de BMP8B, que po- que reconhece a regio 3 no-traduzida da pode substituir a 2-tubulina.. Quando os
dem estimular as espermatognias a se dife- mensagem protamina do camundongo autores fundiram a regio regulatria 5 do
renciarem. Camundongos carentes de (Kwon e Hecht, 1993). gene da 2-tubulina com a seqncia
BMP8B no iniciam a espermatognese na Em Drosophila, o gene roughex trans- codificadora do gene da 3-tubulina, esse
puberdade (Zhao et al., 1996). Em huma- crito por espermatognias de Drosophila gene pde ser expresso no espermatozide
nos, o gene DAZ localizado no brao longo pr-meitica controla o nmero de divi- em desenvolvimento. Quando esse gene foi
do cromossomo Y est deletado em muitos ses meiticas. Machos carentes de c- expresso na ausncia do gene da 2-
homens infrteis, muitos dos quais no pro- pias funcionais do gene roughex sofrem tubulina, as clulas germinativas resultan-
duzem espermatozide algum. O gene DAZ uma metfase meitica extra em adio s tes no sofreram meiose, reunio de
expresso exclusivamente em clulas ger- duas normais. O aumento da concentra- axonemas, ou conformao nuclear. So-
minativas masculinas, especialmente nas es- o de Roughex resulta na incapacidade mente ocorreu a extenso mitocondrial. Isso
permatognias, e parece codificar uma pro- de executar meiose II (Gnczy et al., 1994). indica que a formao dos fusos meiticos
tena ligante de RNA (Reijo et al., 1995; e do axonema de clulas espermticas no
Menke et al., 1997). DAZ homlogo de Expresso Gnica durante a
* A confeco do axonema espermtico em
dois genes da Drosophila, Rb97D e boule, Meiose Masculina
Drosophila uma tarefa de monta. A cauda do es-
os quais tambm codificam protenas Muito da transcrio gnica durante a es- permatozide tem 2 mm de extenso to compri-
ligantes de RNA, e ambos so essenciais para permatognese ocorre durante o estgio da quanto a mosca masculina inteira. O espermato-
a espermatognese. Espermatognias se de- diplteno da prfase meitica. Os genes que zide da espcie relacionada D. bifurca, de 58.3 mm
generam em moscas masculinas deficientes so transcritos especificamente durante a de comprimento, aproximadamente 20 vezes
mais longo que as moscas que o produzem.
em Rb97D, enquanto as clulas germinati- espermatognese so freqentemente aque-
notvel que o ovo de D. melanogaster incorpo-
vas de moscas carentes do gene boule no les cujos produtos so necessrios para mo- ra todo o espermatozide (Karr, 1991). Somen-
entram em meiose (Karsch-Mizrachi e tilidade do espermatozide ou sua fixao te cerca de 3 mm do espermatozide de D. bifur-
Haynes, 1993; Eberhart et al., 1996). Prote- ao vulo. Em Drosophila melanogaster, um ca incorporado pelo ovo (Pitnick et al., 1995).
CAPTULO 22 A Saga da Linhagem Germinativa 859
conseguida por qualquer tubulina e que para o alelo mutante, leva a embries nor-
a transcrio de suas isoformas especficas mais. Um desses genes de efeito paterno o
do espermatozide importante. spe-11 em C. elegans. Os espermatozides
Os genes cujos produtos so necess- contendo alelos mutantes nesse loco so in-
rios para ligao do espermatozide e das capazes de direcionar movimentos cromos-
matrizes extracelulares do vulo so tam- smicos que orientam o fuso mittico do em-
bm transcritos durante a espermatog- brio, sugerindo que a mutao afeta as regi-
nese. O gene da bindina do ourio-do- es organizadoras dos microtbulos, tais
mar transcrito relativamente tarde na como os centrolos (Figura 22.18; Hill et al.,
espermatognese e seu mRNA traduzi- 1989). Mutaes de efeito paterno foram
do em bindina logo aps ser produzido identificadas em Drosophila e essas podem
(Nishioka et al., 1990). A bindina se acu- tambm envolver a estrutura do fuso mittico
mula em vesculas que se fundem para do zigoto (Karr, 1996). [fert10.html]
formar a vescula acrossmica nica no
espermatozide maduro do ourio-do- Expresso Gnica Terminal
mar. A Figura 22.17 mostra a localizao Por fim, o genoma haplide condensado
da protena bindina na vescula across- medida que as histonas so substitudas
mica do espermatozide enquanto esse por protaminas ou histonas especificamen-
ainda est nos testculos. te modificadas. Muitas histonas do esper-
matozide so modificadas no estgio de
Expresso Gnica Haplide espermtide tardia da espermiognese. Es-
em Espermatcitos. sas modificaes (tal como a desfosforila-
Alm da transcrio de genes em clulas o das regies N-terminais de certas
diplides durante a prfase meitica, cer- histonas causam a condensao da cro-
tos genes so transcritos na espermtide matina), que resulta em severa reduo da
(revisado por Palmiter et al., 1984). Essa transcrio. Assim, a transcrio do geno-
evidncia para expresso gnica hapli- ma masculino no detectada novamente
de vem de estudos envolvendo camun- at ser reativada algum tempo durante o
Figura 22.17
dongos heterozogotos nos quais so vis- desenvolvimento (Poccia,1986; Green e
Localizao de bindina no acrossomo do es-
tas duas populaes diferentes de esper- permatozide, por meio de anticorpos antibin- Poccia, 1988).
matozide uma expressando o fentipo dina marcados com ouro. Os tomos de ouro
mutante, e outra expressando a caracters- permitem aos anticorpos aparecerem como
tica tipo selvagem. Se a sntese do RNA pontos negros na micrografia eletrnica. Es-
ou da protena ocorresse enquanto as c- ses espermatozides ainda esto no interior
dos testculos do ourio-do-mar. (Cortesia de
lulas ainda fossem diplides, todo o es- D. Nishioka.)
permatozide apresentaria o mesmo
fentipo. Transcries do gene para a Genes de Efeito Paterno
protamina so vistas nas clulas hapli- Em algumas espcies, o espermatozide for-
des precoces (espermtides redondas) em- nece importante informao desenvolvimen- (A)
bora sua traduo seja retardada por vri- tal que no pode ser compensada pelo vulo.
os dias (Peschon et al., 1987). O gene para J discutimos a impresso (imprinting) de
a 1, 4-galactosiltransferase que liga o es- cromossomos de mamferos no qual o DNA
permatozide zona pelcida somente do espermatozide e do vulo diferem nos
transcrito durante a fase haplide da ma- seus padres de metilao (veja Captulos 4 e
turao do espermatozide do camundon- 11). Existem tambm casos de genes de efei-
go (Hardvin-Lepers et al., 1993). Esses to paternos. Aqui, alelos homozigotos reces-
genes expressos no estgio haplide po- sivos no macho causam desenvolvimento
dem ser regulados pelo hormnio estimu- anormal no embrio, mesmo se a fmea for
lador de folculos da glndula pituitria homozigota para o alelo de tipo selvagem, (B)
(Foulkes et al. 1993; Blendy et al.,1996; enquanto o cruzamento recproco, no qual o Figura 22.18
Nantel et al., 1996).* pai do tipo selvagem e a me homozigota Fotomicrografias imunofluorescentes de fusos
mitticos no embrio de primeira clivagem de
* Esse mecanismo parece indevidamente complexo. Os genes ps-meiticos parecem ser regulados C. elegans quando o espermatozide (A) de
pelo fator de transcrio CREM. Esse gene para o fator de transcrio, o modulador do elemento responsivo um macho tipo selvagem e (B) de um macho
ao AMP-cclico transcrito durante a espermatognese precoce, mas a mensagem decai rapidamente. A homozigoto para o gene spe-11 de efeito pater-
protena que produz, inibe a transcrio de dois genes ps-meiticos. Porm, a recepo de FSH pelas clulas no. Em (B), trs centrolos organizadores de
meiticas causa a emenda alternativa do precursor do mRNA de CREM, fazendo com que ele se torne uma microtbulos podem ser vistos em lugar dos
mensagem estvel para uma isoforma ativadora da molcula. O direcionamento para o alvo do gene CREM dois plos mitticos usuais. (De Hill et al., 1989,
de camundongo resulta na ausncia da expresso gnica ps-meitica e na morte dos espermatcitos. cortesia de S. Strome.)
860 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Oognese
Meiose oognica
Nascimento
Figura 22.20
Formao do corpo polar no ocito do peixe branco Coregonus. (A) Anfase da primeira diviso
meitica, mostrando o primeiro corpo polar comprimindo-se com seus cromossomos. (B) Metfase
(no interior do ocito, seta) da segunda diviso meitica, com o primeiro corpo polar ainda no seu
lugar. O primeiro corpo polar pode ou no dividir-se novamente. (de Swanson et al., 1981,
cortesia de C. P. Swanson.)
Figura 22.21
Crescimento de ocitos na r. Durante os trs
primeiros anos de vida so produzidos trs gru-
pos de ocitos. Os desenhos seguem o cresci-
mento dos ocitos da primeira gerao. (Se-
gundo Grant, 1953.)
Primeiro grupo
Fase vitelognica
Dimetro (mm)
Fase pr-vitelognica
Segundo grupo
Terceiro grupo
Primavera
Primavera
Primavera
Inverno
Inverno
Inverno
Outono
Outono
Outono
Vero
Vero
Vero
Primeiro ano Segundo ano Terceiro ano
Figura 22.22
Distribuio do vitelo em Xenopus. (A) Uma plaqueta de vitelo anfbio. (B-E) Estabelecimento
da polaridade animal-vegetal das plaquetas de vitelo em ocitos de Xenopus. (B) No ocito no
final do estgio III (600 m), plaquetas de vitelo penetram na clula igualmente por todos os
pontos da superfcie. (C,D) medida que o ocito cresce, as plaquetas do futuro plo animal
so deslocadas para o plo vegetal, enquanto aquelas no plo vegetal a permanecem. Continua
a entrada de vitelo por todos os lados. (E) Ao fim da vitelognese, as plaquetas mais precoces
(III) esto todas no hemisfrio vegetal, que concentrou agora 75% do vitelo do ocito. O
momento de entrada do vitelo nas plaquetas do ocito est indicado pelo grau de sombreamento
e nmeros romanos: III, plaquetas de estgio III; IV-e, plaquetas do estgio precoce IV; IV-
l:plaquetas de estgio tardio IV; V, plaquetas do estgio V; gv, vescula germinativa. (Segundo
Danilchik e Gerhart, 1987; fotografia cortesia de L. K. Opresko.)
RNAs que no codificam protenas mas podem ser necessrios para a manuteno de Vg1
maternos
no crtex), Xwnt11 e Xcat2 (que codifica uma protena ligante de RNA relacionada
a Nanos), deixam a vescula germinativa para se localizarem na nuvem mitocondri-
al no plo vegetal do ncleo. Essas mensagens ficam compartimentalizadas em
agregados associados com o plasma germinativo e so transportadas para o crtex
vegetal de uma maneira que parece ser independente do citoesqueleto (Figura 22.23;
Estgio 1-2 Kloc et al., 1996).
Estgio 2-3 Ocitos de anfbios podem permanecer anos no estgio diplteno da prfase meitica.
O recomeo da meiose no ocito primrio dos anfbios requer progesterona. Esse
hormnio secretado pelas clulas foliculares em resposta ao hormnio
gonadotrfico secretado pela hipfise. Seis horas aps a estimulao por
progesterona, ocorre a desintegrao da vescula germinativa (GVBD), as
microvilosidades se retraem, os nuclolos se desintegram e os cromossomos em
Estgio 4
forma de escova se contraem e migram para o plo animal para iniciar a diviso.
Pouco depois, ocorre a primeira diviso meitica, e o vulo maduro liberado pelo
ovrio pelo processo da ovulao. Quando liberado, esse vulo se encontra na
segunda metfase meitica.
Como pode a progesterona capacitar o vulo a interromper sua dormncia e reiniciar
a meiose? Para compreender esse mecanismo de ativao, necessrio revisar rapida-
mente o modelo para diviso precoce do blastmero apresentado no Captulo 5. O
Trajetria Vg1 Trajetria metro fator promotor da maturao (MPF) responsvel pelo reincio da meiose. Sua ativida-
(Xwnt11, Xcat2)
de cclica, sendo alta durante a diviso celular e indetectvel durante a interfase. O
Figura 22.23 MPF uma protena quinase que contm uma subunidade enzimtica (ciclina). Como
Representaes esquemticas de duas trajet- todos os componentes do MPF esto presentes no ocito do anfbio, considera-se
rias para a localizao de mRNAs na regio que a progesterona de alguma maneira converte um complexo pr-MPF em MPF ativo,
vegetal do ocito de Xenopus. A trajetria talvez pela ativao da fosfatase cdc25 (veja Captulo 5; Minishull, 1993).
METRO (organizadora do transporte de men- O mediador do sinal de progesterona provavelmente a protena c-mos. A
sagens message transport organizer) acumu-
progesterona reinicia a meiose, fazendo o ovo poliadenilar o mRNA c-mos mater-
la mensagens na nuvem mitocondrial, e suas
ilhas so transportadas para o crtex do plo nal que havia sido armazenado em seu citoplasma (Sagata et al., 1988, 1989; Sheets
vegetal. Na trajetria Vg1 so vistas mensa- et al., 1995). Essa mensagem traduzida em uma fosfoprotena de 39-kDa, pp39mos,
gens por todo o ovo, porm, essas so trasla- detectvel somente durante a maturao do ocito, sendo rapidamente destruda
dadas por um sistema movido pelos microt- aps a fecundao. No entanto, durante sua breve vida, essa protena exerce um
bulos para os microfilamentos do crtex vege- papel principal na liberao do vulo da sua dormncia. Se a traduo de pp39mos
tal. (Segundo Kloc e Etkin, 1995.) for inibida (injetando-se mRNA mos-antisenso no ocito), esse no aparece e a
desintegrao da vescula germinativa e a renovao da maturao do ocito no
acontecem. Aps ter estimulado o reincio da meiose, pp39mos capacita o ocito a
passar por uma diviso meitica, mas congela o segundo ciclo meitico na metfase.
Esse bloqueio causado pelas aes combinadas de pp39mos e outra protena, a
quinase 2 dependente de ciclina (cdk2; Gabrielli et al., 1993). Essas duas protenas
so consideradas constituir o fator citoesttico (CSF) encontrado nos ovos ma-
duros da r, que pode bloquear os ciclos celulares na metfase (Masui, 1974).
Acredita-se que o CSF previne a degradao da ciclina.
A prxima pergunta envolve os mecanismos pelos quais a fecundao capacita
o ocito que est na segunda metfase a completar a diviso para formar um gameta
haplide. Evidncia recente sugere que o fluxo de ons de clcio ocorrendo durante
a fecundao capacita a protena ligante de clcio calmodulina a tornar-se ativa. A
calmodulina, por sua vez, pode ativar a protena quinase II dependente de calmodulina.
Essa necessria e suficiente para inativar a quinase cdc2 e estimular a degradao
de c-mos (Lorca et al., 1993). A calpaina II, uma protease dependente de clcio,
degrada pp39mos (Watanabe et al., 1989). Assim, os dois componentes do CSF so
inativados ou destrudos. Sem CSF, a ciclina pode ser degradada, e a diviso meitica
pode ser completada (Figura 22.24).
CAPTULO 22 A Saga da Linhagem Germinativa 865
Baixa
Estgio
desenvolvimental Esperma-
tozide
Na maioria dos animais (insetos sendo uma exceo importante), o ocito em cresci-
mento ativo na transcrio de genes onde os produtos so ou (1) necessrios para
o metabolismo celular, (2) necessrios para processos especficos do ocito, ou (3)
requeridos para o desenvolvimento precoce antes do ncleo comear a funcionar. Em
camundongos, por exemplo, o ocito diplteno em crescimento est ativamente trans-
crevendo os genes para as protenas da zona pelcida ZP1, ZP2 e ZP3. Esses genes
so transcritos somente no ocito e no em qualquer outra clula (Epifano et al., 1995;
veja Captulo 2).
O ocito anfbio tem certos perodos em que a sntese de RNA muito ativa.
Durante o estgio diplteno, certos cromossomos estendem grandes laos de DNA,
fazendo com que o cromossomo se assemelhe a uma escova (um til instrumento para
limpeza de tubos de ensaio em tempos anteriores ao uso de materiais descartveis).
Esses cromossomos em forma de escova (Prancha 2) podem ser vistos nos locais da
sntese de RNA por hibridizao in situ. Cromossomos de ocitos podem ser prepara-
dos, desnaturados e incubados com RNA radiativo que codifica uma protena espec-
fica. Aps o RNA no-ligado ter sido removido por lavagem, a auto-radiografia visualiza
a localizao precisa do gene. A Figura 22.25 mostra o cromossomo diplteno I da
salamandra Triturus cristatus aps incubao com mRNA da histona radiativo. Fica
Figura 22.25
bvio que o gene (ou conjunto de genes) da histona est localizado em uma das Localizao (ponta da seta) dos genes histona
dobras do cromossomo em forma de escova (Old et al., 1977). Micrografias eletrnicas em um cromossomo em forma de escova em um
de transcritos de genes dos cromossomos em forma de escova tambm permitem que ocito de anfbio. Os genes foram visualizados
se veja cadeias de mRNA destacando-se de cada gene medida que esse estiver por hibridizao in situ e auto-radiografia. (de
sendo transcrito (Hill e MacGregor, 1980). Old et al., 1977, cortesia de H. G. Callan.)
866 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Amplificaes de rDNA
Hormnio
Ocito pituitrio
Comea o totalmente
acmulo de vitelo crescido Fertilizao
Existem vrios tipos de oognese em insetos, mas a maioria dos estudos focalizaram
os insetos, tais como Drosophila e mariposas, que sofrem oognese merostica.
Nesse processo as conexes citoplasmticas permanecem entre as clulas produzidas
pelo oognio. Em Drosophila, cada oognio se divide quatro vezes para produzir um
clone de 16 clulas conectadas uma outra atravs de canais anelares. A produo
dessas clulas interconectadas (chamadas cistcitos) envolve uma seqncia alta-
mente organizada de divises celulares (Figura 22.27). Somente as duas clulas apre-
sentando quatro interconexes so capazes de se desenvolver em ocitos, e dessas
duas, somente uma torna-se um vulo. A outra inicia a meiose mas no a termina.
Figura 22.27
Assim, somente um de 16 cistcitos pode tornar-se um vulo. Todas as outras clulas A formao de 16 cistcitos interconectados
se tornam clulas nutrizes. Mostra-se que a clula destinada a ser o ocito aquela em Drosophila. (A) Diagrama de um ovarolo
residindo na extremidade mais posterior da cmara do ovo que contm o clone de 16 adulto mostrando a seqncia da oognese com
clulas. Porm, j que as clulas nutrizes esto conectadas ao ocito atravs de suas cistos germinativos mais jovens, amadurecen-
pontes citoplasmticas, o complexo inteiro pode ser visto como uma unidade produ- do dentro do ovarolo. (B) Diviso das clulas
tora de um vulo. formadoras de cistcitos (cistoblastos). As
O ovrio merostico nos confronta com alguns problemas interessantes. Se todas clulas esto representadas esquematicamente
as clulas esto conectadas de modo que as protenas e os RNAs podem transitar dividindo-se em um nico plano. Uma clula-
tronco se divide para produzir outra clula-tron-
livremente entre elas, porque teriam destinos desenvolvimentais diferentes? Porque
co mais uma clula comprometida a formar os
uma clula se torna o ocito enquanto as outras se tornam fbricas sintetizadoras de cistcitos. Somente um dos 16 cistcitos tor-
RNA, enviando mRNAs, ribossomos e mesmo centrolos para o interior do ocito? na-se um ocito; os outros tornam-se clulas
Porque o fluxo de protena e RNA vai somente em uma direo? medida que os nutrizes, conectadas ao ocito por canais ane-
cistcitos se dividem, se forma uma grande estrutura rica em espectrina chamada lares (pontes citoplasmticas). O centrolo do
fussomo, cobrindo as pontes citoplasmticas entre as clulas (Figura 22.27). Esse cistcito 1 retm o fussomo (em vermelho),
construdo assimetricamente, pois sempre cresce do plo do fuso que permaneceu que cresce atravs do canal anelar em direo
em uma das clulas (Lin e Spradling, 1995). A clula que reteve o fussomo durante a sua irm mittica. A seta mostra a polaridade,
primeira diviso se torna o ocito. No ainda conhecido se o fussomo contm de- apontando para a clula da qual cresceu o
fussomo. Aps mais trs divises mitticas
terminantes oognicos, ou se ele dirige o trfego de materiais para o interior dessa
formado o cisto de 16 clulas. Se o transporte
clula em particular. intracelular for coordenado pelo fussomo, o
Uma vez estabelecidos os padres de transporte, o citoesqueleto fica ativamente transporte de mRNAs e protenas iria para o
envolvido no transporte de mRNAs das clulas nutrizes para o citoplasma do ocito cistcito 1, que assim se tornaria o ocito. (A
(Cooley e Theurkauf, 1994). O arranjo microtubular crtico para a determinao do segundo Ruohola et al., 1991; B segundo Lin e
ocito. Se essa grade for rompida (quimicamente ou por mutaes tais como bicaudal-D Spradling, 1995.)
Clulas
foliculares
posteriores
(B)
Mais 2
divises
Cistoblasto Cisto de 2 clulas
em diviso
Fussomo
868 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Ncleo da
clula nutriz
Citoplasma da
clula nutriz
Citoplasma
do ocito
Epitlio
folicular
CAPTULO 22 A Saga da Linhagem Germinativa 869
Informaes adicionais
& Especulaes
* Em Drosophila, o sinal ambiental parece ser o fotoperodo. No mosquito comum, o sinal a refeio
sangnea. Somente mosquitos fmeas picam, e elas no produzem vitelogenina antes da refeio.
Algum fator sangneo estimula o crebro do mosquito para liberar o hormnio juvenil e o fator estimulador
do corpocardaco. Esse ltimo fator causa a liberao do hormnio neurosecretrio do desenvolvi-
mento do ovo (EDNH). Esse estimula o ovrio a secretar vitelogenina (Hagedorn, 1983; Borovsk
et al., 1990). (Veja Captulo 21.)
CAPTULO 22 A Saga da Linhagem Germinativa 871
(A)
Clulas
Granulosas Clulas
Granulosas
Clulas
Clulas
tecais
tecais
FOLCULOS
PRIMORDIAIS
Coroa radiata
Antro
Clulas granulosas
Membrana
granulosa Ocito
FOLCULO GRAAFIANO
Figura 22.31
O folculo ovariano dos mamferos. (A) Maturao do folculo ovariano. Quando maduro, ele
freqentemente chamado folculo Graafiano. (B) Microfotografia eletrnica de varredura de um
foliculo maduro no rato. O ocito (centro) est rodeado pelas menores clulas granulosas que iro
constituir a coroa. (A segundo Carlson, 1981; B cortesia de P. Bagavandoss.)
1. Faz com que a mucosa uterina inicie sua proliferao e se enriquea em vasos
sangneos.
2. Faz com que o muco cervical se afine, permitindo o espermatozide entrar nas
pores internas do trato reprodutivo.
3. Causa um aumento do nmero de receptores de FSH nas clulas granulosas
(Kammerman e Ross, 1975) e simultnea diminuio da produo de FSH
pela hipfise. Estimula tambm as clulas granulosas a secretarem o hormnio
peptdico inibina, que tambm suprime a secreo hipofisria de FSH (Rivier et
al., 1986; Woodruff et al., 1988).
4. Em baixas concentraes, inibe a produo de LH, mas em altas concentra-
es a estimula.
5. Em concentraes muito altas e longos perodos, o estrgeno interage com o
hipotlamo, fazendo com que ele secrete o fator liberador de gonadotrofina.
Figura 22.32
O ciclo menstrual humano. A coordenao de
ciclos (B) ovarianos e (D) uterinos contro-
Gonadotrofinas lada pelos (A) hormnios hipofisrio e (C)
Hormnio luteinizante (LH)
(da hipfise anterior) ovariano. Durante a fase folicular, o ovo ama-
durece dentro do folculo, e o revestimento
uterino preparado para receber o embrio.
(A) O ovo maduro liberado ao redor do dia 14.
Se um embrio no for implantado no tero, a
parede uterina comea a se desintegrar, levan-
do menstruao.
Hormnio estimulante de folculos (FSH)
Revestimento uterino
(D)
Figura 22.33
Ovulao no coelho. O ovrio de um coelho vivo anestesiado foi
exposto e observado. Quando o folculo comeou a ovular, o ovrio
Cumulus
foi removido, fixado e corado. (Cortersia de R. J. Blandau.)
Ocito
Ovrio
Folculo imaturo
Clulas foliculares
remanescentes
Informaes adicionais
& Especulaes
S E NUMEROSOS FOLCULOS so
capazes de maturar quando
secretado o hormnio estimulan-
te de folculos, por que em geral somente
folculo produz, mais receptores de FSH
ele tem, e menos FSH permanece na circu-
lao. medida que a concentrao de
FSH diminui progressivamente, somente
um folculo e seu ocito prevalecem? Pa- um folculo pode ligar o FSH disponvel.
rece que o folculo capaz de produzir a Somente esse folculo pode crescer; os
maior quantidade de estrgeno em respos- outros folculos morrem.
ta ao FSH aquele que amadurece, en- O que faz o LH causar o reincio da
quanto todos os outros morrem. Aqueles meiose? Para responder a essa pergunta, a
conjuntos de folculos que inicialmente natureza do bloqueio meitico foi inten-
receberam FSH no somente comeam a samente estudada. Como em ocitos de
proliferar, mas tambm produzir novos re- anfbios, o estgio dictado extremamen-
ceptores de hormnio luteinizante nas suas te importante porque durante esse pero-
clulas tecais (Figura 22.34). A recepo do que os ocitos crescem, diferenciam as
de LH faz com que essas clulas iniciem a estruturas especficas para ocitos, e ad-
produo de estrgeno. Como vimos, o quirem a capacidade de recomear a
estrgeno tem dois efeitos diferentes en- meiose (Sorensen e Wassarman, 1976).
volvendo a futura recepo de FSH. Em Experimentos iniciais demonstraram que
um nvel, deprime a secreo hipofisria ocitos envoltos em folculos no sofrem (A)
de FSH, enquanto em outro nvel aumen- maturao in vivo ou in vitro a no ser
Processo da
ta os receptores de FSH nas clulas folicu- quando expostos a gonadotrofinas, en- clula folicular
lares. Assim, quanto mais estrgeno um quanto ocitos removidos dos folculos
reiniciam espontaneamente a meiose mes-
mo na ausncia de estimulao hormonal
Recepo de FSH (Pincus e Enzmann, 1935).
Parece, portanto, que a meiose normal-
Mais mente inibida pelas clulas foliculares e
receptores pode ser reiniciada pelas gonadotrofinas.
de LH
Essa hiptese que as clulas foliculares
Diminuio dos
nveis de FSH so importantes reguladores da meiose
LH (B) Ocito
fortalecida por observaes que clulas
granulares se comunicam com o ocito Figura 22.35
Mais estrgeno por processos que se estendem atravs da Comunicao entre ocito e clulas granulo-
Mais secretado zona. Esses processos tm junes de fen- sas. (A) Ocito de carneiro rodeado pela zona
receptores pelo folculo da que permitem pequenas molculas pas- pelcida e clulas foliculares. As clulas gra-
de FSH nulosas do folculo esto estendendo proces-
sarem entre o ocito e as clulas granulo-
sos atravs da zona pelcida, tocando o ocito.
sas do folculo (Figura 22.35; Anderson e
(B) Micrografia eletrnica de processos de c-
Albertini, 1976; Gilula et al., 1978).
lulas foliculares estabelecendo conexes de jun-
Figura 22.34 Porque a elevao dos nveis de cAMP o de fenda com um ocito de macaco rhesus.
Ciclo de retroalimentao positiva em clulas inibe a maturao do ocito (Cho et al., Junes de fenda (setas) esto coradas com
foliculares de mamferos. A recepo do hor- 1974), foi proposto que a parada meitica lantanio ionizado. (A de Moor e Cran, 1980,
mnio estimulante de folculos (FSH) leva mantida pela transferncia de cAMP atra- cortesia dos autores; B de Anderson e Albertini,
produo de mais receptores do hormnio lu- vs das junes de fenda da clulas granu-
teinizante (LH). As clulas foliculares secre- 1976, cortesia de D. Albertini.)
tam estrgeno quando estimuladas pelo LH; o losas foliculares para o ocito (Dekel e
estrgeno ocasiona tanto um aumento no n- Beers, 1978, 1980). O surto de hormnio ser crtico para o reincio da meiose. A de-
mero de receptores de FSH como um decrsci- luteinizante poderia desencadear a matu- sintegrao da vescula germinativa pode
mo na produo de FSH pela hipfise. Por rao terminando a comunicao pela jun- ser prevenida inibindo-se a degradao de
fim, muito poucos folculos permanecem ca- o de fenda, com isso inibindo a transfe- cAMP em ovos livres de folculos ou dire-
pazes de receber as pequenas quantidades de
FSH produzidas, com isso amplificando sua rncia da cAMP para o ocito. Vrias li- tamente provendo tais ovos com cAMP
capacidade de receber LH. Esses poucos nhas de evidncia apoiam essa hiptese. (Bornslaeger et al., 1986). O declnio da
folculos so capazes de amadurecer. Primeiramente, o declnio de cAMP parece concentrao de cAMP do ocito ocorre
876 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
imediatamente antes do reincio da meiose Baixa atividade de adenil ciclase Alta atividade de adenil ciclase ou
(Figura 22.36; Schultz et al., 1983). ou alta atividade da fosfodiesterase baixa atividade de fosfodiesterase
Em segundo lugar, as gonadotrofinas
podem causar a perda de comunicao entre
as clulas foliculares e o ocito. As clulas Alta concentrao de cAMP Baixa concentrao de cAMP
foliculares parecem ser fontes importantes
de cAMP do ocito, e mudanas da concen-
trao de cAMP nessas clulas se refletem
nos nveis de cAMP no ocito (Bornslaeger Alta atividade da quinase Baixa atividade da quinase
dependente de cAMP dependente de cAMP
e Schultz, 1985; Racowsky, 1985). Essa ob-
servao explica porque os ocitos perma-
necem em parada meitica quando rodea-
dos por clulas foliculares, mas reiniciam a Fosforilao de certas Certas protenas do
meiose quando essas so removidas. protenas do ocito ocito no so fosforiladas
O surto de gonadotrofinas pode elevar
a concentrao de cAMP da clula folicular
para novos nveis. Em resposta a essa ele- Desintegrao da vescula
Manuteno da
vao, as clulas foliculares maduras sinte- parada meitica germinativa; liberao
tizam cido hialurnico, que causa ruptura da parada meitica
fsica do contato entre os processos das c-
lulas foliculares e o ocito (Eppig, 1979; Figura 22.36
Larsen et al., 1986). As pontes pela quais o Sumrio do mecanismo proposto por meio do qual o nvel de cAMP do ocito regula o recomeo
cAMP flui da clula granulosa folicular da meiose pelo ocito. Os nveis de cAMP no ocito so providos, ao menos em parte, pelo
cAMP das clulas foliculares. O AMP cclico no pode atravessar membranas celulares, mas
para o ocito, com isso, foram removidas,
pode penetrar no ocito atravs das junes de fenda conectando o ocito com suas clulas
permitindo o ocito mamfero reiniciar a
foliculares. Quando as conexes so liberadas, os nveis de cAMP do ocito declinam, conduzin-
meiose (Dekel e Sherizly, 1985; Racowsky do liberao da parada meitica.
e Satterlie, 1985).
Tal como ocitos de anfbios, o ocito
ovulado do camundongo est suspenso o fator citosttico pp39mos responsvel pela volver-se partenogeneticamente (Colled-
na segunda metfase meitica e fecun- parada de meiose na metfase II. Camun- ge et al., 1994: Hashimoto et al., 1994).
dado nesse estado. Paules e colaborado- dongos fmeas deficientes no gene mos evidente que eventos semelhantes tm que
res (1989) mostraram que ocitos de ca- no param sua diviso na metfase II, e ocorrer para a maturao dos ocitos de
mundongo em maturao tambm contm seus ovos freqentemente tentam desen- anfbios e mamferos.
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Mecanismos desenvolvimentais
da mudana evolucionria 23
Como a acontece a novidade no mundo?
Como nasce? De que fuses, tradues,
junes, realizada? Como ela sobrevive
extrema e perigosa como ?
Que compromissos, que acordos, que
C harles Darwin foi herdeiro de sculos de especulao relacionada com as
origens da diversidade da vida animal. A prpria educao de Darwin foi
baseada na tradio Britnica da teologia natural que sustentava que a oni-
potncia e benevolncia de Deus podiam ser observadas nos trabalhos de Sua cria-
o. A parte dominante dessa tradio foi o relato da Criao proclamando que as
traies de sua natureza secreta dever espcies foram trabalhos planejados intrincadamente do Criador. Os dedos da mo
fazer para afastar os tripulantes humana eram encarados como um requinte (alguns diziam ser perfeito) de inventos
destruidores, o anjo exterminador, a
planejados que permitiu aos humanos dominarem o seu meio ambiente. As garras em
guilhotina?
forma de p da toupeira estavam, novamente, perfeitamente adaptadas no seu traba-
SALMAN RUSHDIE (1988)
lho de existncia, tal como as asas de um pssaro ou as barbatanas de um peixe.
O primeiro Pssaro nasceu do ovo
Uma forma mais sofisticada da teologia natural, definida na Gr Bretanha pelo
de um Rptil. anatomista e embriologista Richard Owen, que afirmou que as adaptaes eram ape-
WALTER GARSTANG (1922) nas de importncia secundria. Pelo contrrio, as homologias eram crticas. Estrutu-
ras homlogas eram aqueles rgos que tinham as mesmas partes bsicas arranjadas
da mesma forma, fazendo das diferenas a sua modificao secundria. O que era
realmente importante era que a mo humana, as garras da toupeira, as asas do pssaro
e as barbatanas do peixe foram cada uma baseada no mesmo plano. Resumindo o
plano dos membros, ns podiamos determinar o grandioso desenho pelo qual Deus
construiu todos os apndices dos vertebrados. Para Owen (1848), as homologias
baseadas na diversidade animal eram o que contava, e no as adaptaes secundrias
dessas unidades bsicas.
Darwin reconheceu sua dvida com esses debates primrios quando escreveu em
(1859), amplamente reconhecido que todos os seres orgnicos foram formados
segundo duas grandes leis - Unidade de Tipo e Condies de Existncia. Darwin
continuou a explicar que sua teoria poderia explicar a unidade de tipo atravs da
descendncia. As mudanas criando esses tipos e causando adaptaes maravilhosas
para as condies de existncia, alm disso, eram explicadas atravs da seleo natural.
Darwin chamou isso de Linhagem com modificao. Aps a leitura do sumrio de
Johannes Mller sobre a lei de von Baer em 1842, Darwin acreditou que semelhanas
883
884 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Dessa maneira, os organismos eram vistos atravs das mudanas no seu desenvolvi-
mento embrionrio. No incio do sculo 20, essa fuso de evoluo e embriologia foi
mal interpretada apoiando o modelo linear de evoluo (oposto ao ramificado). A
interpretao de Ernst Haeckel foi de que muitos organismos evoluram pela adio
terminal de um estgio novo ao fim do anterior. Dessa maneira, ele interpretou todo
o reino animal como representaes de etapas encurtadas do desenvolvimento huma-
no (veja Gasman,1971; Gould, 1977). [evo1.html]
CAPTULO 23 Mecanismos Desenvolvimentais da Mudana Evolucionria 885
*Essa uma modificao da teoria originalmente proposta por Metchnikoff (1886) para explicar a
origem dos organismos multicelulares. Usando embries de hidrides e de esponjas, Metchnikoff assina-
lou que certas clulas da parede da blstula arrastadas por seu flagelo, se tornam amebides e mveis, se
multiplicam por diviso, preenchem a cavidade da blstula, e se tornam capazes de fazer digesto. Esse
estado embrionrio, ele sentiu, como com o direito de ser considerado o prottipo dos seres multicelulares.
Metchnikoff tentou fazer uma filogenia de todos os organismos baseada nas suas camadas germinativas,
e ele acreditava que todas as clulas mesodrmicas poderiam ser caracterizadas por sua habilidade de
fagocitar substncias estranhas. As suas descobertas em embriologia comparativa finalmente lhe permitiu
formular fundaes conceituais de uma nova cincia, a imunologia. (Para maiores detalhes sobre a teoria
de origens multicelulares de Metchnikoff, veja Chernyak e Tauber, 1988, 1991.)
CAPTULO 23 Mecanismos Desenvolvimentais da Mudana Evolucionria 887
Figura 23.2
Gastrulao em dois cnidrios hidrides. (A-
E) Gastrulao em Aequoria foskalea, onde
formada uma blstula ciliada. As clulas do
plo vegetal perdem seus clios e migram para
dentro da blastocele para formar uma popula-
o em diviso mittica. (F-I) Gastrulao em
Clava squamata, onde uma estereoblstula re-
pleta de clulas formada e em seguida a ca-
mada externa se torna ciliada. Ambos os pla-
nos convergem para a larva plnula ciliada
(A) (B) (C) (D) (E) caracterstica dos cnidrios. (A epbole de um
Aequoria foskalea ectoderma no-ciliado no est presente em
embries livres para nadar.) (De acordo com
Buss, 1987.)
celular externa e com outras partes da populao interna, eventos indutivos podem
dar origem ao surgimento de novos rgos.
Independentemente da maneira pela qual essa comunidade de clulas foi forma-
da, a integrao delas em um embrio unificado realizada pela contribuio mater-
na ao citoplasma do ovo. esse conjunto de instrues que causa a clivagem das
clulas de um modo especfico, aderir uma a outra, e se diferenciar em perodos
particulares. Como foi observado no Captulo 12, o embrio do ourio-do-mar se torna
uma blstula ciliada mesmo na ausncia de transcrio nuclear. Somente na gastrula-
o o ncleo comea a regular o desenvolvimento. Dessa maneira, seleo a nvel de
propagao celular (que tem sido a regra da sobrevivncia entre os protistas) foi
suplantada pela seleo ao nvel de organismos multicelulares individuais.
Somente trs dzias de modelos de corpos animais esto sendo usados atualmente
neste planeta (Margulis e Schwartz, 1988; Brusca e Brusca, 1990). Esses constituem
o filos animais. Isso no quer dizer que esses modelos so os nicos possveis. O
Burgess Shale, um depsito de fsseis de corpos moles do perodo Cambriano inici-
al, conhecido por conter representantes de 20 filos ou mais que nunca desenvolve-
ram descendentes nas camadas superiores (Figura 23.3). Alm disso, essa pequena
banda de sedimento, aproximadamente do tamanho de um quarteiro, contm cerca (B)
de uma dzia de classe de artrpodes previamente desconhecida. Esses animais no
so membros primitivos de uma classe ou filo existente, mas so exemplos Figura 23.3
especializados do seus prprios grupos. (Whittington, 1985; Gould, 1989). Existem Dois organismos fsseis do Burgess Shale da
tambm duas espcies no Burgess Shale que podem estar relacionadas s formas metade do perodo Cambriano. (A) Opabina,
um organismo com cinco olhos na cabea, um
ancestrais do filo existente. Uma um animal parecido com um peripato, que deve
apndice frontal com uma garra terminal, seg-
ser prximo uma forma ancestral de inseto; e outro aparenta ser um cordado bem mentos corpreos com guelras dorsais e um
preservado chamado Pikaia gracilens que pode estar relacionado aos cordados an- pedao de cauda de trs segmentos. (B) Pikaia
cestrais (veja Figura 23.3B). Esse ltimo fssil apresenta muitos traos que recomen- gracilens, possivelmente um cordato. (de
dam que seja classificado em nosso filo: ele parece ter uma notocorda, e as bandas Gould, 1989.)
888 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Mutao somtica
d origem a uma
nova linhagem
Figura 23.4
Aparecimento rpido de novas variantes em invertebrados com alternao de geraes. Aqui,
uma mutao somtica ocorre nas clulas de uma colnia hidride. Algumas dessas clulas
Colnia madura
mutantes se tornam parte do plipo reprodutivo, dando origem s medusas (gua-viva) que
contm os alelos mutantes. Essas medusas se reproduzem para formar uma nova colnia que
pode ser produzida de clulas mutantes.
*Um fssil ainda mais antigo, Yunnanazoon lividum, do comeo do perodo Cambriano, em torno de
525 milhes de anos atrs, foi primeiramente reportado como sendo um cordado (Chen et al., 1995). No
entanto, a interpretao da notocorda fssil foi questionada por Shu e colegas (1996), que interpretaram o
Yunnanazoon como sendo o hemicordado mais antigo conhecido.
CAPTULO 23 Mecanismos Desenvolvimentais da Mudana Evolucionria 889
Tufo apical
Intestino
Estomodeu Banda mdio
Mesoderma mesodrmica
presuntivo presuntivo
Embrio de 40 clulas
Intestino
mdio
Ectomesoderma Ectoderma dorsal
presuntivo
presuntivo temporrio do
saco vitelnico
Ectoderma do Somitos
(B) Tubifex Estomodeu
saco vitelnico mesodrmicos
presuntivo Banda
presuntivo ectoteloblstica Ectoteloblasto
Ectoderma do
ectoteloblasto
presuntivo
Vestimentiferano
Polygordius
Patella
Figura 23.6
Divergncia no desenvolvimento aps o est- seus morfgenos em clulas diferentes. Poliquetas sofrem uma clivagem espiral relati-
gio larval de trocfora. (A-C) A metamorfose vamente padronizada, dando origem larva trocfora. Oligoquetas, no entanto, colo-
do aneldeo poliqueto Polygordius a partir de cam a maior parte de seu citoplasma nas clulas destinadas formao de estruturas
sua forma larval trocfera de nado livre mostra adultas, ao invs de larvais. Esse grupo passa depois para o estgio larval. Se uma
a formao de um tronco segmentado. Por fim, mutao colocasse um certo morfgeno citoplasmtico em uma nica regio do ovo
as estruturas larvais se encurtam na extremida- ao invs de uma outra, ou se a mutao originasse uma mudana no eixo da diviso
de anterior medida que a cabea se forma. (D- celular para que conjuntos diferentes de clulas adquirissem esses determinantes,
E) Metamorfose do molusco prosobrnquio ento um fentipo radicalmente diferente poderia ser produzido. Como E. G. Conklin
(mexilho) Patella. Aps o estgio trocforo,
escreveu em 1915, Ns somos vertebrados porque nossas mes eram vertebrados e
ele desenvolve um p de molusco, uma gln-
dula da concha e uma corcova visceral. (F) produziram ovos de padro vertebrado.
Micrografia eletrnica de varredura de uma lar- Uma outra maneira de evoluo de um novo filo pode envolver uma modifica-
va trocfora de um vestimentiferano. (A-E de o da larva. Darwin e outros pensavam que similaridades na forma larval signifi-
acordo com Grant, 1978; F de Jones e Gardiner, cavam origem em comum. No entanto, isso pode ser reinterpretado para significar
1989; cortesia dos autores.) que as mudanas que originam filos diferentes podem ocorrer na larva. Caramujos,
equiurides e poliquetos tm padres de diviso muito semelhantes e formam lar-
vas trocforas (Figura 23.6). De fato a colocao do filo recm-descoberto
Vestimentfera (invertebrados vermelho brilhante, sem tubo digestivo, encontra-
dos nas valas profundas do oceano) prximo aos aneldeos foi feita em parte base-
ada nas larvas trocforas das vestimentferas (Jones e Gardiner, 1989; Young et al.,
1996). Assim, um dos principais mecanismos para estabelecer novos filos e classes
pode ser a relocao do desenvolvimento durante o estgio larval para que a meta-
morfose surja com novos tipos de organizao. Garstang (1928) mostrou como a
larva vliger de alguns caramujos pode ter surgido atravs de mutao e depois ter
sido selecionada porque a nova disposio da cabea e concha permitiam que a
cabea se retrasse, por segurana, abaixo da concha. Ele tambm inventou a hip-
tese de que cordados se desenvolveram das larvas tunicadas ancestrais que se
tornaram neotnicas. Infelizmente, larvas de corpo mole raramente se fossilizam,
portanto sabemos muito pouco dos mecanismos pelos quais cordados e outros filos
surgiram de larvas* Cambrianas precoces.
* Formas larvais freqentemente preenchem a lacuna entre as diferentes formas adultas. A forma
larval vista ou como sendo ancestral a dois grupos ou como um separador por neotenia e formando um
diferente tipo de organismo. Isso vem freqentemente sendo hipotetizado como um mecanismo pelo qual
os cordados emergiram de invertebrados e vertebrados surgiram de cordados. A larva tornaria dos
hemicordados formada de uma maneira deuterstoma, similar s larvas equinodermos e se mostra muito
parecida com uma larva equinodermo tendo sido originalmente confundida com elas. Isso ligaria os
equinodermos e cordados. Garstang (1928) e Berril (1955) hipotetizaram que as larvas de certos tunicados
podiam ter evoludo em cordados tais como os anfioxos pelo desenvolvimento neotnico. Desse modo, os
tunicados manteriam a notocorda, musculatura larval e o aparelho alimentar da larva tunicada enquanto se
tornam sexualmente maduras. Existem, na verdade, tunicados nadadores neotnicos (como as Larvacea).
Modificaes dessa interpretao (usando linhagens de protocordados diferentes) foram sugeridas por
Jefferies (1986). A origem dos cordados permanece um problema difcil.
CAPTULO 23 Mecanismos Desenvolvimentais da Mudana Evolucionria 891
Modularidade
O desenvolvimento ocorre atravs de mdulos discretos e interativos (Riedl, 1978;
Gilbert et al., 1996; Raff, 1996; Wagner, 1996). Os organismos so construdos de
unidades que so coerentes em si e ainda parte de uma unidade maior. Dessa manei-
ra, clulas fazem parte dos tecidos, que fazem parte dos rgos, que fazem parte de
um sistema, e assim por diante. Tal sistema to hierarquicamente entrelaado foi
chamado de arranjo modular interagindo em nveis (Dyke, 1988). No desenvolvi-
mento, esses mdulos incluem campos morfogenticos (por exemplo, aqueles des-
critos para o membro ou o olho) discos imaginais, linhagens celulares (tais como a
massa celular interna ou trofoblasto), parasegmentos de insetos e rudimentos de
rgos de vertebrados. Unidades modulares permitem que diferentes partes do corpo
mudem sem a interferncia de outras funes.
O princpio fundamental da modularidade permite trs processos de alterao do de-
senvolvimento: dissociao, duplicao e divergncia, e co-opo (Raff, 1996). Uma vez
que os mdulos esto em todos os nveis, do molecular ao orgnico, no surpreendente
que esses princpios sejam vistos operando em todos os nveis do desenvolvimento.
Parietal
Nasal
Zigomtico Occipital
Maxila
Essa bolsa no possui abertura interna para a boca. Certamente, a transio de bolsa
interna para externa uma questo de limiares. A localizao das evaginaes, ante-
rior ou posteriormente, determina se a bolsa interna ou no. No existe estgio de
transio com duas aberturas, uma interna e outra externa. Poderia-se imaginar
essa externalizao como uma ocorrncia de mutao por acaso deslocando a posi-
o da bolsa externa para uma posio um pouco mais anterior. Esse trao seria
selecionado no deserto. Como Van Valen refletiu em 1976, a evoluo pode ser
definida como o controle do desenvolvimento pela ecologia.
Duplicao e Divergncia
INDUO INDUES
INICIAL SECUNDRIAS (A) Cabelo (na pele)
Morfognese
(D) Pena (na pele de aves)
Figura 23.10
Seco atravs do meio do tronco do embrio
da tartaruga Chelydra serpentina. (A) A crista
da carapaa (seta) se forma no limite entre o
mesoderma da placa somtica e o mesoderma
da placa lateral e agora representa o limite dor-
soventral. As bandas mesodrmicas engrossa-
das se estendendo do centro para a rea da ca-
rapaa so as condensaes da costela. (B)
Aumento maior da crista da carapaa. (De acor-
do com Burke, 1989b, cortesia do autor.)
(A) (B)
modificadas embriologicamente. Da mesma maneira, a temida fileira de dentes do tuba-
ro so modificaes das escamas do corpo. Mudanas na induo podem transformar
escamas em penas (como no caso das galinhas garniz) e so responsveis por adapta-
es to extraordinrias quanto o pulmo das aves, o estmago dos ruminantes, as
presas dos elefantes (incisivos modificados), e as presas das morsas (dentes caninos
superiores modificados). A carapaa (casco) da tartaruga uma novidade evolucionria
que parece se formar de maneira reminiscente aos membros. Existe at mesmo uma crista
da carapaa que organiza o mesnquima de maneira semelhante crista ectodrmica
apical do broto do membro (Figura 23.10; Burke, 1989b).
Co
Co--opo
Nenhuma estrutura destinada a um propsito particular. Um lpis pode ser usado para
escrita, mas ele tambm pode ser usado como um palito, uma adaga, um instrumento
perfurante ou uma baqueta. Ao nvel molecular, sabemos que o gene engrailed, usado
para segmentao nos embries de Drosophila, usado posteriormente tambm para
especificar seus neurnios e usado nos estgios larvais para fornecer um eixo ntero-
posterior aos discos imaginais. Similarmente, uma protena que funciona como uma
enzima no fgado pode funcionar como uma protena cristalina estrutural no cristalino
(Piatigorsky and Wistow, 1991). Em outras palavras, unidades prexistentes podem ser
recrutadas para novas funes. Essa co-opo tambm vista a nvel morfolgico. As
asas evoluram trs vezes durante a evoluo dos vertebrados, e em cada caso, diferen-
tes estruturas de antebraos foram modificados para uma funo inteiramente nova.
Um dos casos mais celebrados de co-opo o uso de partes da mandbula embri-
onria para a criao do ouvido mdio dos mamferos (revisado por Gould, 1990).
Clulas da crista neural distinguem vertebrados dos protocordados e invertebrados.
Os protocordados tm um tubo neural dorsal e notocorda, mas no uma cabea
verdadeira. As clulas da crista neural craniana so as grandes responsveis pela
criao da face, crnio e arcos branquiais. Considera-se que o desenvolvimento da
cabea originalmente permitia uma predao mais eficiente, pela colocao das es-
truturas sensoriais adjacentes s mandbulas que capturam as presas (Gans e Northcutt,
1983; Langille e Hall, 1989; Hall, 1992). Duas transies notveis ocorreram na
evoluo da mandbula do vertebrado. A primeira a criao de mandbulas a partir
CAPTULO 23 Mecanismos Desenvolvimentais da Mudana Evolucionria 895
dos arcos das guelras de peixes sem mandbulas. A segunda o uso de ossos que (A)
articulavam as mandbulas superiores e inferiores nos rpteis para a formao dos Suportes
Mandbula Caixa das guelras
ossos martelo e bigorna do ouvido mdio. Nos primeiros vertebrados, uma srie de superior craniana
guelras se abriu atrs de uma boca sem mandbula. Quando as fendas das guelras
foram sustentadas por elementos cartilaginosos, o primeiro conjunto desses suportes
de guelras circundou a boca para formar a mandbula. Existem amplas evidncias de
que as mandbulas so suportes de guelras modificadas. Primeiro, esses dois conjun-
tos de ossos so produzidos de clulas da crista neural. (A maioria dos outros ossos
procedem de tecidos mesodrmicos.) Segundo, ambas estruturas se formam de bar-
ras superiores e inferiores que se curvam para a frente e so dobradas no meio. Ter- Mandbula Hiomandibular
ceiro, a musculatura da mandbula parece ser homloga musculatura dos suportes inferior
de guelras originais. Dessa maneira, a primeira transformao da cartilagem do pri-
meiro arco branquial foi aquela do aparelho da guelra para o aparelho da mandbula.
Escamoso
Mas a histria no termina aqui. (B)
A parte superior do segundo arco branquial que suporta a guelra se transforma Quadrado
no osso hiomandibular de peixes com mandbula. Esse elemento segura o crnio e Pr-maxilar Maxilar
junta a mandbula ao crnio (Figura 23.11A). Como vimos no Captulo 7, essa funo
Nasal
do osso hiomandibular nos mamferos realizada pelo estribo, um dos ossos do
ouvido mdio. Mas os peixes no usam esse osso para escutar; ento, como um
osso usado para suporte de guelras e depois como suporte para o crnio se torna
parte do aparelho auditivo dos mamferos? Quando o peixe chegou terra depa-
rou-se com um novo problema: como conseguir escutar em um meio to pouco Articular
denso como o ar? Acontece que o osso hiomandibular est prximo da cpsula Dentrio
auditiva, e a matria ssea um excelente transmissor do som. Dessa maneira,
enquanto ainda funcionava como um suporte para o crnio, o osso hiomandibular
dos primeiros anfbios tambm comeou a funcionar como um transdutor de som (C) Escamoso
(Clark, 1989). medida que os vertebrados terrestres alteraram sua locomoo, (temporal)
estrutura mandibular e postura, o crnio prendeu-se firmemente em seu lugar sem
necessitar de apoios hiomandibulares. Parece ter se especializado em seguida como
o osso estribo do ouvido mdio. O que havia sido a segunda funo desse osso Nasal
acabou se tornando sua funo primria.
Os ossos originais da mandbula tambm mudaram. O primeiro arco branquial
gera o aparelho da mandbula. Nos anfbios, rpteis e pssaros, a poro posterior
dessa cartilagem forma o osso quadrado da mandbula superior e o osso articular da
mandbula inferior. Esses ossos se conectam e so responsveis pela articulao na
mandbula superior e inferior. No entanto, nos mamferos, essa articulao ocorre em Auditivo
outra regio (os ossos dentrios e escamosos), com isso liberando esses elementos Zigomtico
sseos para adquirirem novas funes. Os osso quadrado da mandbula superior dos
Maxila Mandbula
rpteis evoluiu nos mamferos transformando-se no osso bigorna e o osso articular
da mandbula inferior dos rpteis se tornou nosso osso martelo. Esse segundo pro-
cesso foi primeiramente descrito por Reichert em 1837, que observou no embrio do
Figura 23.11
porco que a mandbula se ossifica pelo lado da cartilagem de Meckel, enquanto a Evoluo da mandbula no peixe (A), no rptil
regio posterior dessa cartilagem se ossifica, se destaca do resto da cartilagem, e (B) e no mamfero (C). (A) Homologias da
entra na regio do ouvido mdio para se tornar o osso martelo (Figura 23.11B,C)* mandbula e dos arcos das guelras como vistas
no crnio do tubaro paleozico Cobeledus
* A falta de formas de transio freqentemente citada pelos Criacionistas como uma crtica aculentes. (B) Vista lateral do crnio de um
da evoluo. Por exemplo, na transio de rpteis para mamferos, trs ossos da mandbula dos crocodilo. A poro articular da mandbula in-
rpteis se tornaram martelo e bigorna, deixando somente um osso (dentrio) na mandbula inferior. ferior se articula com o osso quadrado do cr-
Gish (1973), um Criacionista, disse que isso uma situao impossvel, pois nenhum fssil com dois nio. Nos mamferos, o quadrado se internaliza
ou mais ossos da mandbula e dois ou trs ossculos do ouvido fora encontrado. Ele considerou que tal para formar a bigorna do ouvido mdio. O osso
animal teria arrastado suas mandbulas pelo cho. Entretanto, tal forma de transio especfica no articular mantm seu contato com o quadrado,
precisaria ter existido (h mais de dzia de formas de transio documentadas entre crnios de
tornando-se o martelo do ouvido mdio. Vista
rpteis e mamferos). Hopson (1966) mostrou com bases embriolgicas como os ossos da mandbula
poderiam ter se dividido e usados para diversas funes, e Romer (1970) encontrou fsseis de rpteis lateral do crnio humano, mostrando a juno
onde as novas articulaes da mandbula j eram funcionais enquanto ossos mais antigos se torna- da mandbula inferior com a regio escamosa
vam inteis. Existem vrias espcies de rpteis terapsdeos com duas articulaes de mandbula, com (temporal) do crnio. (De acordo com Zangerl
a bigorna junto a parte superior do osso quadrado (que vir se tornar o osso bigorna). [evo3.html] e Williams, 1975.)
896 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Progresso correlacionada
(A) Padres esquelticos embrionrios (B) Padres esquelticos finais (C) Padres musculares finais
Archaeopteryx
Ave
experimental
Rptil
(Crocodylus)
Restries ao desenvolvimento
Embora discretamente, os mdulos de desenvolvimento podem interagir uns com os
outros. Essas interaes limitam os fentipos possveis que podem ser criados, e
tambm permitem a ocorrncia de mudanas em certas direes com maior eficin-
cia do que em outras.* Coletivamente, essas restries na produo de fentipos so
chamadas de restries do desenvolvimento.
Restries Fsicas
Restries Morfogenticas
*Leibniz, provavelmente o filsofo que mais influenciou Darwin, notou que a existncia deve ser limitada
no somente pelo possvel, mas tambm pelo mutuamente compatvel. Isto , enquanto diversas coisas podem
vir a existir, somente aquelas que so mutualmente compatveis iro realmente existir (veja Lovejoy, 1964).
Assim, embora muitas mudanas do desenvolvimento sejam possveis, somente aquelas que podem se integrar
ao resto do organismo (ou que podem causar mudanas compensatrias no resto do organismo) sero vistas.
CAPTULO 23 Mecanismos Desenvolvimentais da Mudana Evolucionria 899
Prognese natural
Tbia Tbia
VARIAO
(A) Ambystoma mexicanum NATURAL
Fbula
Fbula
Tbia
Fbula Tbia
Tbia
VARIAO
EXPERIMENTAL
Fbula Fbula
Restries Filticas
Filticas
a novos tipos de larvas que ainda sofrem metamorfose em moluscos, e mudanas nos
morfgenos citoplasmticos do ourio-do-mar podem gerar ourios-do-mar que se
desenvolvem sem larvas mas ainda so ourios-do-mar. Na realidade, ao olharmos
para os vertebrados, podemos observar que existe uma histria completa que nos leva
at o famoso diagrama da lei de von Baer mostrado no Captulo 7. Todos os vertebra-
dos chegam a esse estgio particular do desenvolvimento (chamado de farngula),
mas o fazem por meios diferentes (Figura 23.15). Aves, rpteis e peixes chegam a esse
ponto aps clivagens meroblsticas de tipos diversos; os anfbios chegam a esse
estgio por meio de clivagem holoblstica radial; e os mamferos alcanam o mesmo
ponto aps construrem um blastocisto, crion e mnio. Portanto, os primeiros estgi-
os do desenvolvimento parecem ser extremamente plsticos. Similarmente, os ltimos
Ovo
(em escala)
Blstula
(seco)
Gstrula
Figura 23.15
O gargalo no estgio faringular do desenvolvimento dos verte-
brados. A parte inferior deste esquema a ilustrao padro da lei
de von Baer (como mostrado no Captulo 7), demonstrando a di-
vergncia das classes de vertebrados aps um estgio embrionrio
comum. A parte superior deste esquema representa os incios di-
vergentes do desenvolvimento. O prprio von Baer (1886) estava
consciente desse gargalo. (De acordo com Elinson, 1987.)
CAPTULO 23 Mecanismos Desenvolvimentais da Mudana Evolucionria 901
ser rpida e se correlaciona com a especiao (Shaw et al.,1994; Lee et al., 1995;
Metz e Palumbi, 1996).*
*Um outro exemplo de mutao do desenvolvimento que causa isolamento reprodutivo envolve uma
funo mais mecnica. As mutaes no espiralamento da concha do caramujo discutidas no Captulo 5 so
mutaes que agem durante o desenvolvimento precoce para mudar a posio dos rgos mesodrmicos. O
acasalamento entre caramujos de conchas com espiralamento para a esquerda e com caramujos de conchas
com espiralamento direita mecanicamente muito difcil, para no dizer impossvel, em algumas espcies.
(Clark e Murray, 1969). Como essa mutao herdada como um gene de efeito materno, seria produzido
um grupo de caramujos relacionados podendo se acasalar um com o outro, mas no com outros membros
da populao original. Esses caramujos reprodutivamente isolados poderiam expandir seu alcance, e por
acumulao de novas mutaes, formar uma nova espcie (Alexandrov Sergievski, 1984).
CAPTULO 23 Mecanismos Desenvolvimentais da Mudana Evolucionria 903
*O modelo antes dessa pesquisa era que os olhos haviam se desenvolvido independentemente
pelo menos 40 vezes. O laboratrio de Gehring mencionou a clonagem de homlogos de Pax6 de
platelmintos e cefalpodes. Um segundo gene de Drosophila, dachshund (dac), tambm pode dar
origem a olhos ectpicos quando expresso no disco imaginal errado. Como parece que eyeless pode
ativar a expresso de dachshund, e vice-versa, os dois genes podem ter desenvolvido uma ala de
retroalimentao (feedback) positiva autoreforante (Shen e Mardon, 1997).
904 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Figura 23.18
Pax-6 como um gene homlogo para o desen- Protena
volvimento do olho em insetos e vertebrados. ativadora
(A) A expresso dirigida do cDNA de Pax6 GAL4 de GAL4 Stios ligantes cDNA
Seqncia
em um disco imaginal no de olho em Droso- intensificadora de GAL4 de Pax6
phila. Uma espcie de Drosophila construda especfica do
onde o gene para a protena GAL4 do levedo disco imaginal
colocado a jusante de uma seqncia intensifi-
cadora que estimula a expresso no disco Expresso GAL4 especfica de tecido Expresso do cDNA de Pax6
especfica de tecido
imaginal da asa, perna ou antena. Normalmen-
te, a protena do levedo no encontra uma se-
qncia para ativar. Entretanto, se adicionado
ao embrio um transposon que leva um cDNA
para Pax6 a jusante dos stios de ligao de
GAL 4, aquele cDNA ser expresso em quais-
quer dos discos imaginais onde produzida a
protena GAL4. (B) Omatdios de Drosophila
emergindo da asa de uma mosca da fruta quan-
do o cDNA de eyeless foi expresso no disco da
asa de Drosophila. (C) Omatdios de Droso-
phila emergindo na perna de uma mosca da
fruta quando o cDNA de Pax6 de camundongo
foi expresso no disco da perna de Drosophila.
(de Halder et al., 1995; fotografias cortesia de
W. J. Gehring.)
Em alguns casos, um gene homlogo pode assumir uma nova funo quando expres-
so em um novo local. A expresso de Bmp4 no membro do pinto um bom exemplo de
como uma pequena mudana desenvolvimental pode criar uma importante alterao
morfolgica, do ponto de vista evolucionrio. A maioria das pessoas concordaria que
o pato e o pinto no so iguais, embora sua embriognese seja extremamente seme-
lhante at os ltimos dias. Nesse momento, o bico do pato torna-se distinguvel do
bico do pinto, e os ps interdigitados do pato so retidos, mas a interdigitao
perdida nos ps posteriores do pinto.
BMP4 conhecida como indutora de apoptose em clulas na crista neural craniana,
no mesnquima pulmonar e nos brotos dentais. Ela tambm causa apoptose no tecido
interdigital frouxo do membro do pinto. No s o Bmp4 expresso no tecido interdigital,
mas se os membros do pinto forem infectados com um vrus expressando uma forma
negativa dominante do receptor de BMP, o tecido interdigital no sofrer apoptose
quando receber o sinal BMP4 (Figura 23.19; Yokouchi et al., 1996; Zou e Niswander,
1996). O pinto e o pato mostram padres muito similares na expresso de BMP. Porm,
embries de pato no expressam Bmp4 (ou BMP2 ou 7, relacionados) em seus tecidos
CAPTULO 23 Mecanismos Desenvolvimentais da Mudana Evolucionria 905
(B)
(A)
Figura 23.19
Expresso de BMP necessria para a induo
de apoptose no enredamento interdigital em
embries de pinto. (A) A BMP4 vista no
interdigitais. Portanto, mudando ligeiramente a regulao de Bmp4 produzida uma enredamento interdigital do membro posteri-
nova morfologia que pode ser selecionada ou rejeitada pela seleo natural. Altera- or do pinto (esquerda) mas no no do pato
es no desenvolvimento podem produzir a chegada do mais apto. Sua sobrevivn- (direita) no mesmo estgio do desenvolvimen-
cia depende do seu ambiente. to. (B) Quando o sinal de BMP bloqueado
por um receptor negativo dominante infectado
no membro posterior, a apoptose interdigital
Genes Hox e a Evoluo dos V
Hox ertebrados
Vertebrados no ocorre e os dgitos so mais curtos. (de
Zou e Niswander, 1996; fotografias cortesia
Uma das mais notveis peas de evidncia da profunda homologia entre todos ani- de L. Niswander.)
mais do mundo fornecida pelos genes Hox. Conforme mencionado no Captulo 16,
os genes Hom-C da mosca da fruta so homlogos aos do mamfero. No somente
so os genes homlogos, como tambm esto na mesma ordem em seus respectivos
cromossomos. Os padres de expresso so tambm notavelmente semelhantes; a
expresso dos genes do terminal 3 ocorre anteriormente, enquanto aqueles do termi-
nal 5 so expressos mais posteriormente. Como se essa evidncia de homologia no
fosse o suficiente, Malicki e colegas (1992) demonstraram que o gene humano HOX4B
podia imitar a funo de seu homlogo na Drosophila, Deformed, quando introduzi-
do em embries de Drosophila deficientes em Dfd. Slack e colegas (1993) postula-
ram que o padro de expresso do gene Hox define o desenvolvimento de todos os
animais e que constante para todos os filos, o gene Hox tipo labial sendo expresso
anteriormente, o gene Hox tipo Ubx no centro, e o gene Hox tipo AbdB posteriormen-
te. A regulao global desses genes Hox tambm semelhante de espcies para esp-
cies. A protena Caudal usada para induzir os domnios posteriores da Drosophila, e
parece fazer o mesmo em camundongos e nematides (Subramanian et al., 1995). Se a
expresso subjacente do gene Hox for uniforme, considera-se que diferenas nos filos
emergem de diferenas em como esses genes so regulados e quais genes so regula-
dos pelas protenas derivadas de Hox.*
Em vertebrados, existem quatro complexos Hox. Em anfioxus, um cordado no-
vertebrado que carece de uma cabea verdadeira, crebro, tecidos da crista neural, e
medula espinhal, h somente um complexo Hox muito parecido com aquele dos inse-
tos (Figura 23.20; Holland e Garcia-Fernndez, 1996). Quando da evoluo dos peixes,
haviam quatro complexos Hox. Os genes Hox parecem interpretar a informao
posicional ao longo do eixo ntero-posterior do corpo, e a importncia desses genes
relacionando evoluo e desenvolvimento foi sugerida por certas estruturas
atavisticas que resultaram da perda de determinados genes Hox. A ruptura de genes
* Considera-se que a razo dessa notvel conservao de estrutura do complexo do gene Hox o
compartilhamento de regimes cis-reguladores pelos genes vizinhos. Se um gene Hox movido para uma
regio diferente dentro do complexo, sua regulao alterada. Os regimes reguladores crticos podem ser os
stios ligantes para as protenas Polycomb. Essas protenas so tambm conservadas atravs da evoluo,
e silenciam os genes Hox em determinados momentos e locais. Aqui, portanto, vemos uma restrio
filtica a nvel molecular (Chiang et al., 1995; Mller et al., 1995; van der Hoeven et al., 1996).
906 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Figura 23.20
Ascendncia postulada de genes hometicos a
partir de um ancestral hipottico tanto de HOM-C de
deuterostomatas como protostomatas. Anfio- Drosophila
xos tm somente um aglomerado, semelhante
aos insetos. Vertebrados tm quatro aglomera- HOM-C de
dos, nenhum dos quais completo. (De acordo inseto em geral
com Holland e Garcia-Fernndez, 1996.)
Ancestral
comum
hipottico
Aglomerado
Hox de
Anfioxo
Hox- de
Camundongo
Hox- de
Camundongo
Hox-C de
Camundongo
Hox-D de
Camundongo
Hoxa-2 resulta numa transformao parcial do segundo arco farngeo em uma cpia
do primeiro arco. Os fetos mutantes carecem dos ossos estribo e estilide formados
do segundo arco, mas tm extra os ossos martelo, bigorna, timpnico e escamoso. Eles
tm tambm uma cartilagem filamentosa que est fundida ao elemento alisfenide e
cujo terminal caudal est em contato com a bigorna supranumerria. Essa cartilagem
no tem contrapartida em camundongos normais, mas suas relaes anatmicas suge-
rem que seja homloga com a cartilagem pterigoquadrtica vista em rpteis. O comple-
xo formado por essa cartilagem e a bigorna considerado ter estado presente em
terapsdeos, o grupo de rpteis que deu origem aos mamferos (Rijli et al., 1993; Mark
et al., 1995). Quando o gene Hoxa-2 desregulado pela eliminao de receptores de
cido retinico, uma distinta cartilagem pteroquadrada se desenvolve ligando os os-
sos bigorna e alisfenide (Figura 23.21; Lohnes et al., 1994).
Porm, permanecia a pergunta se os genes Hox especificam o eixo de acordo
com um sistema de contagem ou por um cdigo pelo qual diferentes genes Hox
especificam vrtebras diferentes. Essa uma pergunta importante porque d a
viso de como os mesmos genes Hox podem especificar corpos diferentes. Com-
parando os padres de expresso do gene Hox com o tipo de vrtebras mostrou-
se que esse era especificado pela constelao de genes Hox expressos nos somitos
(Gaunt, 1994; Burke et al., 1995). Por exemplo, o camundongo tem 5 vrtebras
occipitais, 7 cervicais, 13 torcicas, 6 lombares e 4 sacrais. O pinto, por outro lado,
tem 5 vrtebras occipitais, 14 cervicais, 7 torcicas, 9 lombares e 4 sacrais. Embora
o nmero total de vrtebras pr-sacrais difira somente por uma (34 versus 35),
existem bvias transposies entre as espcies (Goodrich, 1930). Em ambos os
animais, Hoxc-5 expresso no fim das vrtebras cervicais, enquanto Hoxc-6 apa-
rece no comeo da srie torcica. No camundongo isso ocorre no limiar entre a
dcima segunda e dcima terceira vrtebra e em pintos entre a dcima nona e a
vigsima. Assim em vertebrados, alteraes da morfologia podem se concretizar
mudando-se os domnios da expresso gnica de Hox.
CAPTULO 23 Mecanismos Desenvolvimentais da Mudana Evolucionria 907
Figura 23. 21
Representao de elementos do esqueleto derivados do primeiro arco farngeo (em cinzento) e do
segundo arco farngeo (em preto). (AS, alisfenide; I, bigorna; I2 bigorna duplicado; P e P2,
cartilagem pteride normal e duplicada; PQ, cartilagem pterigoquadrada; SQ, escamoso; SQ2
escamoso duplicado.) (De acordo com Mark et al., 1995.)
Camundongo selvagem/mamfero
Genes Hox e a Evoluo dos Artrpodes
A mesma pergunta produziu uma resposta diferente quando feita a respeito dos
artrpodes. Borboletas (Lepidpteros) diferem de Drosophila (Dpteros) de duas
bvias maneiras. Primeiro, borboletas tm quatro asas, ao passo que os dpteros
tm duas. Segundo, larvas de borboletas tm membros abdominais chamados pr-
pernas que no existem em larvas de moscas. A maneira mais provvel de criar
essas diferenas seria alterar o padro da expresso do gene hometico (Lewis, Rptil
1978). Em Drosophila, o Ultrabithorax (Ubx) expresso nos halteres, mas no nas
asas. Mutaes de perda-de-funo de Ubx convertem os halteres em asas
mesotorcicas, enquanto que a expresso ectpica de Ubx nos discos alares faz
com que eles formem halteres (veja Captulo 14). Poder-se-ia esperar, por isso, que
o Ubx seria inativo nos discos das asas posteriores da borboleta. Esse no o caso.
Warren e colaboradores (1994) mostraram nveis altos de expresso de Ubx nos
discos das asas posteriores da borboleta buckeye, Precis coenia. Na realidade, o
padro de expresso do gene Hom-C em Precis foi essencialmente o mesmo que o
padro em Drosophila. Na borboleta, o Ubx modifica a morfologia alar para pro-
duzir uma asa posterior (em lugar de uma anterior). Na mosca, ele modifica a asa
em um haltere. A hiptese atual que os genes alvo de Ubx podem ter mudado, Mutante com Hoxa-2 anulado
mas no o padro da expresso de Ubx.
Figura 23.23
Expresso do gene Distal-less em Precis. (A)
Aos 12% da embriognese, transcritos de Dll
aparecem em trs segmentos torcicos (T1,
T2, T3) como tambm nos segmentos antenal
(an), maxilar (mx),o embrionrio, a expres-
so de Dll em Precis divergiu significativa-
mente daquela da Drosophila mostrando tam-
bm expresso Dll nos segmentos abdomi-
nais 3-6. (A e B de acordo com Panganiban et
al., 1994, cortesia dos autores.)
(A)
(B)
Seqncia reguladora
a montante
Seqncia reguladora
Figura 23.25 a montante
A via RTK-RAS amplamente usada. O esque-
ma da via est mostrado no lado esquerdo jun-
to com os nomes em diferentes espcies. O
ligante, que pode ser solvel (como no EGF) vertebrados na formao dos membros. Na verdade, as mesmas interaes so usadas
ou uma protena ligada membrana em outra
para estabelecer o padro de segmentao em embries precoces de Drosophila (veja
clula (como na protena Boss [Bride of
sevenless] associada ao sevenless do RTK).
Captulo 14) e para estabelecer compartimentos no crebro dos mamferos (veja Cap-
Os domnios citoplasmticos das RTKs so tulo 7). Tambm foi mostrado que numerosas interaes DNA-protena regulando
autofosforilados ao se dimerizarem, e isso lhes genes especficos so conservadas atravs de espcies divergentes. Dessa maneira,
permite se ligar protena adaptadora e estimu- o gene da lcool desidrogenase controlado no corpo gorduroso da Drosophila pelo
lar a protena Ras G. A protena Ras G transloca mesmo conjunto de protenas que governa sua expresso no fgado humano (Figura
a protena Raf para a membrana celular, dessa 23.24; Abel et al.,1992).
maneira ativando-a. Isso pode ser inibido pelas Entre as primeiras vias homlogas conhecidas est a via de transduo do sinal
protenas gap, as quais podem inativar Ras. A RTK-Ras que foi recentemente identificada em todo o reino animal, embora usada
protena Raf ativada inicia a cascata de fosfori-
estritamente em diferentes funes (veja Captulo 3; Figura 23.25). Na Drosophi-
lao que termina em um fator de transcrio
fosforilado (ativado) que entrando no ncleo
la, a determinao do fotorreceptor sete cumprida quando a protena Sevenless
efetua a transcrio do RNA.
Ligante Receptor
Membrana plasmtica
Citoplasma
Domnio
da tirosina
quinase
Organismo e tecido Ligante Tirosina Protena Protena G Ativador de GTPase Efeito
quinase do SH2-SH3 e protenas
receptor de troca GDP/GTP
Vulva de C. elegans Protena Protena SEM-5 Protena ?/LET-341 (?) Diferenciao e diviso
LIN-3 LET-23 LET-60 da clula vulvar
Pele de mamfero EGF Receptor GRB2 Protena Ras GAP/GNRP Diviso da clula epidrmica
de EGF
Olho de Drosophila Bride of Sevenless Drk Ras1 Gap1/ Son of sevenless Diferenciao do fotorreceptor
sevenless sete em cada omatdio
CAPTULO 23 Mecanismos Desenvolvimentais da Mudana Evolucionria 911
CORDADOS
VERTEBRADOS
Cefalocordados
Gnatostomatas
Hemicordados
Equinodermos
Calcicordados
Urocordados
(Amphioxus)
(ascidianos)
Conodontes
Agnatos
Modificao do
arco mandibular
em mandbulas
Crista neural, placdios
epidrmicos (formao da cabea)
Podcitos renais
Figura 23.26
Mudanas de desenvolvimento na evoluo de invertebrados para vertebrados. Os invertebrados
deuterostomatas originais foram capazes de formar os equinodermos e outros organismos que
finalmente deram origem linhagem vertebrada. A habilidade do mesoderma para formar a
notocorda e seu ectoderma sobrejacente para se tornar um tubo neural, separou os cordatos dos
invertebrados remanescentes. O desenvolvimento das clulas da crista neural e os placdios
epidrmicos que do origem aos nervos sensoriais da face distinguem os vertebrados dos
protocordatos. (De acordo com Gans, 1989; Langille e Hall, 1989.)
Uma casa no um chal com um andar extra em cima. Uma casa representa um
grau maior na evoluo de uma residncia, mas o prdio todo alterado- funda-
es, madeiramento e telhado- mesmo que os tijolos permaneam os mesmos.
CAPTULO 23 Mecanismos Desenvolvimentais da Mudana Evolucionria 913
*Uma maneira de visualizar isso usar uma analogia matemtica (Gilbert et al., 1996):
Biologia funcional = anatomia, fisiologia, biologia celular, expresso gnica
Biologia do desenvolvimento = [biologia funcional]/ t
Biologia evolucionria = [biologia do desenvolvimento]/ t
914 PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
Figura 23.27
EVOLUO Roteiro disciplinar do lado evolucionrio da
biologia, desde 1880 at o presente. Para maior
Roux, Wilson, clareza, outras vias (tais como a da gentica
outros geral gentica humana ou da evoluo
imunologia) no foram mostradas.
Questo geracional
Mecnica desenvolvimental
Gentica de
populaes
Embriologia experimental
Regenerao
Fertilizao
Sntese moderna Grupo
Imunologia
NeoDarwinismo do fago
Biologia celular
Biologia do
desenvolvimento
Gentica molecular
Gentica do
desenvolvimento
Sob Construo
SNTESE
DESENVOLVIMENTAL
LITERATURA CITADA
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