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RELAES
HDRICAS
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A gua o principal constituinte das clulas vegetais, podendo chegar at 97%, como o caso das
folhas de alface. Ela possui uma srie de caractersticas que a tornam meio fundamental para a manifestao
de todos os fenmenos fsicos, qumicos e biolgicos essenciais para o desenvolvimento das plantas. Nos
tecidos lenhosos e nos rgos dormentes o contedo de gua cai abaixo de 80%. Em algumas sementes secas
o contedo de gua pode ser de apenas 5%. As sementes maduras de algumas plantas (ex. Amaryllis e Crinum
spp.) tem alto teor de gua (normalmente acima de 70%), o que lhes possibilita germinarem sem suprimento
de gua.
O mtodo usual para a determinar o contedo de gua consiste em secar o material em estufa at
peso constante. Deve-se tomar cuidado para evitar carbonizao, o que acarretar perda de matria seca, razo
pela qual em geral se usam temperaturas relativamente baixas (inferiores a 85%). Uma pequena quantidade de
gua, associadas a substncias orgnicas (gua de ligao), no e removida por esse processo. O contedo de
gua pode ser expresso em porcentagem de peso fresco ou de peso seco. Geralmente se usa porcentagem de
peso fresco, mas algumas vezes prefervel usar porcentagem de peso seco, especialmente quando o contedo
de gua elevado, uma vez que em tais casos, grandes variaes de quantidade de gua presente podem
causar pequenas alteraes no teor expresso como porcentagem de peso fresco. Por outro lado, o contedo de
gua representado como porcentagem de peso seco pode algumas vezes ser mal interpretado, porque se a
matria seca alterada, por exemplo, como o resultado de acumulo ou consumo de produo de reserva, o
contedo de gua por unidade matria seca se alterar se a quantidade real de gua presente permanecer
constante.
O contedo de gua de uma planta bastante varivel e muda muito com as flutuaes de umidade
do solo e do ar. Em muitos casos a transpirao excede a absoro de gua durante a maior parte do dia e o
teor de gua diminui. A noite a situao se inverte. Desse modo uma planta reabastece durante a noite, os
tecidos que perderam gua durante o dia anterior. Em cactus, como por exemplo, em Opuntia cujos estmatos
se fecham durante o dia ocorre o contrario.
De modo anlogo, o contedo de gua do tronco de uma rvore decdua em regies temperadas se
eleva durante o inverno, quando a transpirao baixa, e diminui no vero, quando a transpirao alta. Isto
tem conseqncias importantes na industria da silvicultura, quando os troncos de madeira so transportados
flutuando rio abaixo; os que tm gua so mais densos do que os que tiver sua gua parcialmente substituda
por ar.
O contedo relativo de gua (CRA), a quantidade de gua de um tecido comparada com a
quantidade que ele poder reter sem infiltrao nos espaos areos. A (CRA) de uma folha medido
tomando-se seu peso da matria fresca (PMF1) e a seguir colocando-a para flutuar na gua, preferivelmente
luz, e depois, pesando-a novamente (PMF2) depois de enxugar a gua superficial. O peso da matria seca
(PMS) ento determinado conforme descrito acima e o seu CRA calculado a partir da frmula:
PMF2 PMS
dficit de saturao de gua (DSA) o termo algumas vezes aplicado diferena entre CRA, expresso como
porcentagem e 100, isto :
2. OBJETIVO
Determinar o contedo relativo de gua (CRA) e o dficit de saturao de gua (DSA) de discos de
folhas de vrias espcies vegetais.
3. MATERIAL NECESSRIO
Placas de petri
Furador de rolhas
Estufa de ventilao forada de ar
Balana
Cmara iluminada (bancada iluminada)
Folhas de espcies vegetais sugeridas pelo instrutor.
4. PROCEDIMENTO
Retire (corte) 50 discos (2 cm de dimetro) de uma folha de cada uma das espcies sugerida pelo
instrutor e pese-a imediatamente, anotando o peso da matria fresca inicial (PMF1). Coloque-as em uma placa
de petri com gua e leve-as para baixo da bancada iluminada, deixando-as ai por um perodo de 10 horas.
Aps esse perodo, pese-os novamente (PMF2) depois de enxugar a gua superficial. Determine o peso da
matria seca (PMS) aps coloc-los por 24 horas em estufa de ventilao forada com temperatura de 80 0C
+/- 5C.
Com os resultados das pesagens, calcule o contedo relativo de gua (CRA) e o dficit de saturao
de gua (DSA) de cada folha e construa uma tabela mostrando as espcies utilizadas e os respectivos
resultados.
5. QUESTIONRIO
Quando se coloca uma clula vegetal numa soluo, ela ganhar ou perder gua, conforme seu
potencial hdrico seja menor ou maior do que o potencial hdrico da soluo externa. Se o potencial da clula
for maior do que o da soluo externa, ela perder gua, e o protoplasma, com o vacolo iro contrair-se, at
separar-se da parede celular. Esse fenmeno denomina-se plasmlise. O fenmeno inverso chama-se
Deplasmlise. Eles s ocorrem por existir uma permeabilidade diferencial (Permeabilidade seletiva ou
semipermeabilidade) que mantm as duas fases - SOLUO EXTERNA e SOLUO INTERNA -
separadas. A membrana celular deixa a gua passar livremente, mais impede em maior ou menor grau a
passagem dos solutos, e isso faz com que as fases, externas e interna se conservem individualizadas. certo
que o vacolo funcionam como um todo, em suas relaes hdricas.
Se as membranas plasmticas, cuja integridade fsica essencial para a manuteno da
permeabilidade, forem danificadas por agentes qumicos e fsicos, os solutos tero livre trnsito e se
distribuiro no meio aquoso (EXTERNO e INTERNO) por difuso. As clulas e organelas perdero, portanto
a capacidade de reter solutos contra o gradiente de concentrao (Potencial eletroqumico, mais
precisamente). A parede clulas das clulas vegetais, por outro lado no oferecem restries passagem de
gua e solutos (exceto molculas muito grandes). Como os microsporos e microcapilares de sua estrutura
esto cheios de gua, retida com grandes foras mtricas, molculas gasosas no a atravessam. No tecido que
perde gua por evaporao (TRANSPIRAO), as paredes celulares estaro hidratadas, j que o fluxo de
gua se d do vacolo para a parede celular. Grandes tenses desenvolvem-se assim nas clulas, podendo
levar ruptura e desorganizao da estrutura protoplasmtica e consequentemente morte.
2- OBJETIVOS
3. MATERIAL NECESSRIO
4. PROCEDIMENTOS
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Com o auxilio de uma lmina de barbear e uma pina remova alguns fragmentos
da epiderme inferior de urna folha de Zebrina (de preferncia sobre a nervura principal). Coloque-os em uma
lmina com uma gota de gua destilada, cobrindo com a lamnula, e observe ao microscpio. Substitua a gua
secando com papel de filtro, por uma soluo de sacarose 0,25M. Observe como o protoplasma se desloca da
parede celular em conseqncia da sua diminuio de volume. Este fenmeno chama-se PLASMLISE.
Substitua novamente a soluo de acar por gua destilada, se no houver mudana alguma, repita o
procedimento com clulas plasmolisadas recentemente.
Depois de provocar plasmlise num fragmento de epiderme de Zebrina segundo a tcnica usada
anteriormente, trate-o com uma ou duas gotas de lcool. Observe o que acontece com o pigmento vermelho
do vacolo (ANTOCIANINA).
5. QUESTIONRIO
os) DE TECIDOS
DETERMINAO DO POTENCIAL OSMTICO (
VEGETAIS PELO MTODO PLASMOLTICO
1. INTRODUO
Este mtodo baseia-se no fato de que, numa clula em condio de plasmlise incipiente
soluo plasmolisante externa e o suco celular tm a mesma presso osmtica (). Sendo a presso de parede,
neste ponto igual a zero (e desprezando o valor da presso mtrica), tem-se que os valores de dos potenciais
hdricos da soluo externa e do suco celular so tambm iguais.
O problema, para ocaso de uma nica clula, resume-se ento em encontrar uma soluo que cause
a plasmlise incipiente (estado fisiolgico no qual a presso da parede comea a eqivaler a zero). Para o caso
de tecidos, considera-se que a plasmlise incipiente se manifesta quando 50% das clulas esto plasmolisadas.
2. OBJETIVO
3. MATERIAL NECESSRIO
4. PROCEDIMENTOS
Coloque algumas gotas de cada uma das solues de sacarose separadamente em cada lmina.
Tome, em cada uma 2 ou 3 fragmentos de epiderme de Zebrina. Aps 20 a 30 minutos examinar no
microscpio os pedaos correspondentes a cada soluo, contando o nmero de clulas vermelhas trgidas e
clulas vermelhas plasmolisadas. Determine a porcentagem de clulas plasmolisada para cada soluo.
Construa um grfico em que na abcissa esto as concentraes das solues e nas ordenadas, a porcentagem
de clulas plasmolisadas. Identifique a soluo equivalente plasmlise incipiente.
5. QUESTIONRIO
6. A presso osmtica da clula em plasmlise incipiente tem o mesmo valor que a presso osmtica da
clula em sua condio inicial? Explique. O que seria necessrio para corrigir o valor da primeira
para que ela eqivalesse ao valor da segunda?
7. Quais so as principais vantagens e desvantagens deste mtodo para determinar a presso osmtica
do tecido?
1. INTRODUO
O mtodo tem como princpio, a medio da transferncia de gua lquida entre amostras de tecido
vegetal e solues testes de presso osmtica conhecidas. No mtodo de Schardakow, a transferncia
determinada pela mudana de densidade das solues testes. A densidade das solues aumentar, diminuir
ou permanecer invarivel, conforme o tecido tenha potencial hdrico maior, menor ou igual ao da soluo.
2. OBJETIVO
3. MATERIAL NECESSRIO
Tome 2ml de cada uma das solues de sacarose 0,05 0,10 0,15 0,20 - .......0,50M, em tubos
de ensaio grandes. Tome tambm a mesma srie paralela de solues em tubos de ensaio pequenos. Do
material indicado pelo Instrutor, tome pequenos fragmentos (cortados com lmina de barbear ou tesoura) e
coloque-os em cada um dos tubos de ensaio grande at nivelar os 2ml das solues de sacarose. Aps 1 hora,
coloque um pequeno cristal de azul de metileno em cada tubo grande, a fim de colorir as solues que
estiverem em contato com os fragmentos.
Com uma pipeta de ponta capilar, tome um pouco de cada soluo colorida e solte lentamente uma
gota no meio da soluo de igual concentrao que permaneceu sem fragmentos nos tubos de ensaio
pequenos, observe, contra uma fonte de iluminao, se a gota se desloca para cima, para baixo, ou permanece
mais ou menos estacionria (segundo seja o potencial hdrico do material estudado, superior, inferior, ou igual
da soluo em que est submerso). Caso a gota colorida no estacione em qualquer das solues, pode-se
repetir o ensaio, utilizando-se uma srie de solues cujas concentraes sejam intermedirias entre as
concentraes em que a gota desceu e subiu, respectivamente. Determine o potencial hdrico do tecido, em
MPa, consultando a tabela apropriada que relaciona as molaridades das solues de sacarose e suas presses
osmticas.
5. QUESTIONRIO
0,0 0,00 0,26 0,54 0,80 1,07 1,34 1,61 1,87 2,14 2,41
0,1 2,67 2,95 3,21 3,47 3,75 4,01 4,27 4,54 4,81 5,08
0,2 5,36 5,64 5,94 6,22 6,50 6,79 7,07 7,36 7,65 7,94
0,3 8,23 8,52 8,82 9,12 9,41 9,70 10,00 10,33 10,64 10,94
0,4 11,24 11,55 11,85 12,26 12,56 12,87 13,17 13,47 13,88 14,18
0,5 14,49 14,79 15,20 15,50 15,80 16,21 16,61 16,92 17,32 17,63
0,6 18,03 18,34 18,74 19,15 19,45 19,85 20,26 20,67 20,97 21,37
0,7 21,78 22,18 22,59 23,00 23,40 23,70 24,11 24,62 25,02 25,43
0,8 25,83 26,34 26,74 27,15 27,55 27,96 28,36 28,77 29,17 29,68
0,9 30,09 30,59 31,10 31,50 32,01 32,52 33,02 33,53 34,04 34,54
1,0 35,05 35,56 36,16 36,67 37,18 37,68 38,19 38,70 39,30 39,81
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2. OBJETIVOS
3. MATERIAL NECESSRIO
Soluo de CuSO4 a 2%
Cristal de K4Fe (CN)6
Tubo de ensaio (1)
4. PROCEDIMENTOS
5. QUESTIONRIO
1. Escreva a reao qumica que esta envolvida na formao da clula artificial de Traube. Qual a
constituio qumica da membrana?
2. Que substncia existe dentro e fora da clula de Traube?
3. Qual a substncia que atravessa a membrana? Qual a evidncia de sua resposta?
4. Que aconteceria se a membrana de Traube fosse permevel aos ons cobre?
5. Durante a formao da clula de Traube, as membranas se rompem e se refazem continuamente at
que o processo se detm. Qual a causa da paralisao do processo?
6. Por que a clula artificial de Traube se presta para demonstrar o fenmeno osmose?
7. Por que as clulas vegetais no se rompem quando colocadas em gua destiladas, mesmo sabendo-se
que a sua concentrao de soluto (meio interno) maior que o lado de fora (meio externo)?
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SUDAO OU GUTAO
1. INTRODUO
Alm da perda dgua em forma de vapor (transpirao), as plantas herbceas, em certas situaes,
podem perder gua na forma lquida (sudao ou gutao). Ao longo das margens das folhas dessas plantas
existem poros de abertura fixa, associados com um tecido parenquimatoso modificado (epitema) - os
hidatdios. Quando sobre presso no xilema, a chamada presso radicular, a gua forada a sair atravs
dos hidatdios na forma de gotas (GUTAO).
2. OBJETIVOS
3. MATERIAL NECESSRIO
2 vasos (de plstico ou papel parafinado, pequenos) com 2 ou 3 plantinhas de milho em cada um
Soluo de sal de cozinha (NaCl) a 5%
Campnula ou cuba de vidro
4. PROCEDIMENTO
Obtenha dois vasos pequenos com 2 ou 3 plantinhas de milho de 5cm ou mais. Regue um dos vasos
com soluo de sal de cozinha a 5% e outro com gua. Cubra ambos com uma campnula ou cuba de vidro.
Observe as margens das folhas durante duas ou trs horas.
5. QUESTIONRIO
2. OBJETIVOS
3. MATERIAL NECESSRIO
4. PROCEDIMENTO
Coloque uma fita de dilise de 15 cm em um recipiente com gua destilada por aproximadamente 1
hora. Aps esse perodo, arrume a fita de dilise em forma de saco, vendando completamente um dos seus
lados. Em seguida, adiciona uma soluo de sacarose 25 % juntamente com 3 gotas de azul de metileno no
saco de dilise e posteriormente coloque a ponta da pipeta graduada na abertura do saco e vede (amarre) com
elstico ou liga de borracha. Prenda a pipeta no suporte e mergulhe o saco de dilise com a soluo de
sacarose em um Becker contendo gua destilada. Marque o nvel inicial na pipeta e observe o resultado depois
de aproximadamente 1 hora. Faa um desenho esquemtico do resultado encontrado e discuta-o.
5. QUESTIONRIO
1. O que osmose?
2. Qual a finalidade de se colocar o corante azul de metileno nessa experincia?
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TRANSLOCAO
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2. OBJETIVO
3. MATERIAL NECESSRIO
Trompa de vcuo (ou bomba de vcuo) lmina de barbear
Frasco de qutazato (Becker de 600ml) ramos de plantas adequadas
Massa plstica moldvel
4. PROCEDIMENTO
Obtenha quatro ramos ou menos iguais de tomateiro, feijoeiro, caruru de porco, quebra pedra ou
outra planta qualquer sugerida pelo instrutor. Deixe-os murchar durante uma ou duas horas sobre mesa do
laboratrio. Quando os ramos estiverem tombando por falta de turgescncia, submeta-os aos seguintes
tratamentos.
5. QUESTIONRIO
1. Dentro dos tratamentos aplicados, quais os ramos que recuperaram a turgescncia mais rapidamente?
2. Como voc explica as diferenas na velocidade de recuperao da turgescncia?
3. Como voc poder correlacionar esse fenmeno com a teoria coeso-tenso-transpiratria de Dixon?
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4. Tendo em vista suas observaes, que recomendao voc faria a um floricultor quando ao perodo
do dia mais indicado para cortar ramos de flores? Que explicao voc daria para justificar sua
recomendao?
5. Como voc trataria um ramo de flores para conserv-lo trgido por mais tempo?
Durante o dia, a absoro de gua pelo sistema radicular no compensa a perda de gua pela
transpirao nas folhas, o que provoca diminuio do potencial hdrico nestas. Uma vez que nos elementos
dos vasos do xilema a gua deve manter-se coesa (Teoria de Dixon), a queda do potencial hdrico nas folhas
transmitida para os elementos dos vasos (xilema), originando tenses internas. A contrao dos troncos de
muitas espcies florestais, durante o dia, uma prova de que se encontram sob tenso. Qualquer fator que
promova mais rpida perda de gua do que absoro, ou que reduza a absoro (falta de gua no solo, por
exemplo) leva ao desenvolvimento de tenses internas de diferentes magnitudes. Essas tenses podem
alcanar magnitudes bastante baixas (valor negativo), o que pressupe uma alta resistncia mecnica dos
vasos, impedindo o seu colapso.
2. OBJETIVO
3. MATERIAL NECESSRIO
Vasos com plantas de girassol ou outra planta sugerida pelo instrutor (6), com comprimento de
aproximadamente 30 cm.
Soluo de azul de metileno a 1%.
Placas de Petri (6).
4. PROCEDIMENTO
Tome 6 (seis) vasos com plantinhas de girassol, com 30 cm de comprimento, trs dos quais tenha sido
submetidos a dficit hdrico ( 2 tratamentos, sendo 1 com gua e outro sem gua com trs repeties).
Coloque as plantas com dficit de gua em posio horizontal, imergindo a poro mediana na soluo de
azul de metileno a 1% contida na placa de Petri. Com uma lmina de barbear, corte a haste (caule) da planta,
mantendo, as seces cortadas submersas na soluo de azul de metileno a 1% por um minuto. Retire as
partes seccionadas e lave-as rapidamente em gua de torneira, enxugando-as com papel absorvente. Remova
as folhas da parte terminal e seccione ao nvel do solo a parte inferior. Tome a parte apical e faa cortes
transversais de 0,5 cm de comprimento. Examine cuidadosamente as superfcies seccionadas (de preferncia
com o auxlio de uma lupa) e determine a presena do azul de metileno nos feixes vasculares. Registre a
distncia mxima, a partir do seccionamento original, em que o mais leve indcio do corante observado em
qualquer feixe, em direo ao pice (movimento acrpeto). Proceda da mesma forma para determinar a
distncia do movimento do corante na parte inferior (movimento baspeto).
Repita o processo para a planta com suprimento abundante de gua e em todas as repeties.
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Apresente seus resultados na forma de desenho esquemtico uma seco transversal da haste (caule),
indicando principalmente os tecidos em que o corante observado e/ou como tabela e discuta-os.
5. QUESTIONRIO.
1. INTRODUO
A intensidade na troca de gases varia na diferentes formas de vida. Nos vegetais, o intercmbio de
gs carbnico e de oxignio diretamente proporcional ao vapor de gua. Logo, as plantas com altas taxas de
absoro de CO2 apresentam altas perdas por transpirao, o que torna implcito que elevados consumos de
gua aumentam a produtividade das culturas.
A fotossntese e a respirao envolvem processos qumicos complexos, sensveis e muitas variaes,
diferentemente da transpirao, que mais simples, controlada principalmente por variveis fsicas ligadas
difuso dos gases. Pode-se considerar a transpirao como fluxo de gua proveniente de um reservatrio de
capacidade limitada, o solo, a outro de capacidade ilimitada, a atmosfera, sendo a fora impulsora o
gradiente de potencial de gua. Se o solo estiver mido, este gradiente pode cair a zero durante a noite, mas
com a chegada do dia e a gua evaporando das plantas ao ar, haver decrscimo nos potenciais e o
conseqente aumento no gradiente de potencial e no fluxo, desde as razes at o caule, as folhas e a atmosfera.
Apenas uma pequena frao, geralmente menos de 1% da gua absorvida, usa-se nas reaes
metablicas e, portanto, responsvel pelo aumento da biomassa. As perdas de gua por transpirao ocorrem
em qualquer parte da planta exposta atmosfera externa, ressaltando-se os estmatos, seguidos, em pequena
escala, da cutcula das folhas. O conjunto solo-planta-atmosfera, em termos prticos, uma srie de
condutores por onde flui a gua com resistncias variveis.
Tm-se empregado diversos mtodos para a avaliao da transpirao, dentre eles tm o do
POTMETRO DE GANONG, onde uma bolha de ar introduzida no tubo capilar e o movimento dessa
bolha, registrado em escala, usado como indicao da taxa de transpirao. Se o dimetro do tubo capilar for
conhecido, pode ser calculada a quantidade de gua absorvida em um dado tempo (Q = vazo).
Os potmetros de um modo geral, so usados tanto para plantas inteiras como para ramos cortados.
Quando no se tem o controle da temperatura onde se realizar o experimento, existe a necessidade de um
potmetro controle, sem plantas, que indicar possveis mudanas no volume da gua devidas s variaes da
temperatura ambiente (gradiente de temperatura). importante que a gua esteja temperatura ambiente
antes de se iniciar as medidas.
As velocidades de absoro de gua de um ramo cortado, no potmetro, no so necessariamente
iguais s que estariam ocorrendo se o ramo estivesse preso planta, porque as tenses no xilema e a
resistncia do sistema radicular aos movimentos de gua so eliminadas pelo corte. Pode entrar ar em alguns
vasos do xilema durante o corte, tornando-os no funcionais, aumentando desse modo resistncia global do
caule. Por essa razo, desejvel, quando possvel, usar plantas intactas. Esses experimentos no podem ser
prolongados, devido dificuldade de se arejar as razes convenientemente.
Com base no princpio de conservao da massa, onde a massa (ou peso) de um fluido que atravessa
uma seo qualquer da corrente sempre a mesma, podemos inferir, tambm, que o volume de lquido por
unidade de tempo, que atravessa todas as sees de um fluxo de corrente, tem sempre o mesmo volume.
A1V1 = Q1
A2V2 = Q2
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Quantidades Q1 = Q2
A1V1 = A2V2
Q = A . V (rea x volume)
Ao se iniciar o experimento, como o mesmo no se prolongar por um intervalo de tempo muito
grande, podemos inferir que a taxa de absoro igual a taxa de transpirao, e ainda:
Q=A.V
. D2
A=
4
. D2
Q= x V
4
. D2 . V
Q=
4
. D2 . Vm
Q= x 10-6 dm3/seg
4
. D2 . Vm
Q= x 10-6 L / seg
4
. D2 . Vm
Q= x L / seg
4
= 3,1416 ....
D = Dimetro do tubo capilar (mm)
Vm = velocidade mdia da bolha de ar (mm/seg)
Q = taxa de transpirao = taxa de absoro de gua
1. OBJETIVO
2. MATERIAL NECESSRIO
Potmetro de GANONG.
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Coloque o ramo de uma planta no potmetro de GANONG, preencha o mesmo com gua de torneira
e vede, hermeticamente, o potmetro com as rolhas de borracha. Introduza uma pequena bolha de ar no tubo
capilar, suspendendo-o temporariamente do Becker com gua, de modo a posicion-la na origem (se
necessrio, afaste a bolha para a extremidade direita do tubo capilar, abrindo, vagarosamente a torneira do
funil de separao). Anote o deslocamento (em milmetro) da bolha e o tempo (em segundos) gasto nesse
deslocamento. Repita o experimento, quantas vezes for necessrio, deslocando a bolha para a origem e anote
novamente a distncia percorrida (em mm) e o tempo gasto (em segundos), por cada repetio.
Calcule, a velocidade mdia ( Vm ), sabendo-se que a velocidade o espao dividido pelo tempo e
aps, a transpirao do ramo utilizado no experimento.
V1 + V2 + ... + Vn
Vm =
n
5. QUESTIONRIO
1. O que transpirao e absoro de gua pela planta e qual a relao existente entre esses dois
processos?
2. Por que se torna difcil fazer a correlao transpirao/absoro de gua pela planta, utilizando-se
esse mtodo?
3. Por que as velocidades de absoro de gua de um ramo cortado, no potmetro, no so
necessariamente iguais s que estariam ocorrendo se o ramo estivesse preso a planta?
4. Explique o mecanismo de transpirao em plantas de grande porte, como por exemplo, as sequias
gigantes
5. Construa e analise um grfico, mostrando o andamento dirio da transpirao, absoro e resistncia
estomtica, em um dia tpico de vero.
6. Qual a transpirao de um ramo de uma planta herbcea, sabendo-se que o mesmo quando submetido
ao potmetro de GANONG, foi observado que a bolha de ar do aparelho, levou 5 minutos para deslocar-se
em 15 cm no tubo capilar de 2 mm de dimetro?
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Quando se corta um caule sadio de abbora, o floema exsuda rapidamente. A exsudao comea
com velocidade acima de 1000cm/hora, mas dentro de 2 minutos diminui e pra. Cortando-se uma fatia de um
milmetro da base do caule da base do caule, o processo se renova. Pode-se repetir a operao por horas, e o
volume total do exsudado coletado e muitas vezes maior do que o volume do floema do caule que foi
removido nos cortes sucessivos.
O fato descrito comprova a existncia de presso (positiva) no contedo do floema, e constitui uma
evidncia a favor da hiptese do fluxo de massa. A existncia da presso na seiva do floema um requisito
fundamental para a hiptese de Mnch (fluxo por presso).
2. OBJETIVO
3. MATERIAL NECESSRIO
4. PROCEDIMENTO
Tome um tubo de ensaio contendo lcool comum at cerca da metade da altura. Corte a base do pecolo
de uma folha de abbora usando uma lmina de barbear, e introduza rapidamente o pecolo no tubo com
lcool. Observe, quando a exsudao parar, remova o pecolo do lcool, corte uma pequena fatia de sua base
e introduza novamente no lcool. A observao mais fcil colocando-se o tubo contra a luz.
5. QUESTIONRIO
7. De que modo os afdeos (pulges) se alimentam das plantas e que relao tem isso com o estado da
seiva no floema?
8. Os vasos Laticferos da seringueira esto sob presso ou sob tenso? Justifique.
9. Voc poderia correlacionar a sada do exsudado com o modelo da teoria do fluxo em massa por
presso de Mnch?
A hiptese do fluxo por presso, levantada por E. Mnch em 1926 a mais difundida para explicar
a translocao no floema. Ela implica um mecanismo passivo de transporte no floema e baseia-se num
modelo real de fcil construo, ou seja, dois osmmetros interligados por um tubo.
2. OBJETIVO
Construir e observar o funcionamento do modelo fsico da hiptese do fluxo em massa por presso
(hiptese de Mnch)
3. MATERIAL NECESSRIO
Sacos de dilise (2), dimetro 2-3cm, comprimento 15cm (outro tipo sugerido pelo instrutor, por
exemplo: tripa artificial)
Soluo de sacarose (25%)
Soluo de bicromato de potssio (colorao levemente alaranjada)
copo (2)
Tubo em U 2-3mm
4. PROCEDIMENTO
Coloque em gua por uma hora duas tiras de tubos de membrana de dilise (ou outro tipo de
membrana sugerido pelo instrutor) de 15cm de comprimento. Amarre cuidadosamente uma extremidade de
tiras de maneira a no deixar qualquer vazamento. Encha um dos sacos com soluo de sacarose concentrada
e amarre vigorosamente a outra extremidade na parte terminal de uma vara de vidro em forma de U. Encha
o outro saco de dilise com gua de torneira e amarre sua extremidade no outro terminal do tubo em U.
Faa a imerso do saco com sacarose em um copo com gua contendo a soluo de bicromato de potssio. O
saco, contendo gua, deve estar imerso em um copo com gua. Disponha os copos de tal maneira que o que
receber o saco com gua fique num nvel superior a 10-15cm do copo com soluo de sacarose. Observe o
sistema em operao durante duas horas.
5. QUESTIONRIO
1. Como as trs partes desse modelo podem ser correlacionados com as partes de uma planta viva?
2. Qual o papel do bicromato de potssio colocado em gua no copo o com saco de sacarose?
21
3. Na hiptese do fluxo em massa de Mnch, qual a fora matriz do movimento? Qual razo existe
para que seja denominada Fluxo em massa.
4. Qual a evidncia de que no modelo artificial de Mnch, a translocao de solutos orgnicos se d sob
presso e no sob tenso?
5. No modelo artificial de Mnch o transporte de soluo de sacarose de uma clula para a outra
paralisa aps algum tempo. Como se explica que, numa planta viva, o fluxo se mantenha sustentado, sempre
da fonte (folha) para o dreno (razes, por exemplo)?
METABOLISMO
22
2. OBJETIVO
Separar e identificar alguns pigmentos existentes nos cloroplastdeos, por meio de cromografia de
papel.
3. MATERIAL NECESSRIO
4. PROCEDIMENTO
Tome 3 folhas de plantas sugeridas pelo Instrutor. Pique as folhas com uma tesoura e junte os
pedaos com um pouco de areia num almofariz. Coloque um pouco de acetona e homogenize. Filtre o
homogenado em algodo com funil de vidro e receba o filtrado num tubo de ensaio.
23
Corte uma tira de papel de filtro de aproximadamente 20 por 4cm, tomando o cuidado de manuse-
lo o mnimo possvel (a gordura da mo atrapalha). Com uma pipeta Pasteur, faa umas 5 a 10 camadas de
extrato dos pigmentos foliares sobre a origem do cromatograma. As camadas de pigmentos devero ser
estreitas e concentradas, devendo-se, portanto ventilar levemente o papel, aps espalhar cada camada. Tome 5
a 10ml de tetracloreto de carbono (solvente) no fundo de cuba. Fixe a tira de papel de filtro numa placa de
petri e introduza-o no interior da cuba at que a sua extremidade encoste, no solvente, mas sem mergulhar a
origem. Aps 1 a 2 horas identifique os pigmentos, tendo em vista que a clorofila a verde-azulada, a
clorofila b verde-amarelada, o caroteno laranja e a xantofila amarela.
5. QUESTIONRIO
Alm das clorofilas e carotenides, as plantas contm outros pigmentos tais como, os flavonides,
que constituem uma srie de compostos relacionados, solveis em gua, tendo como estrutura bsica um
esqueleto C15 de flavona. Os flavonides ocorrem universalmente nas plantas superiores, mas so incomuns
nos Criptgamos. Encontram-se dissolvidos em gua no suco celular, tanto de folhas, como frutos, razes e
especialmente flores, dando a estas as cores, caractersticas. Destes pigmentos, os mais conhecidos so as
Antocianinas, cada uma delas com uma cor distinta que varia desde o azul ao vermelho, embora alguns
sejam incolores. Sua colorao sensvel ao pH. Em geral a planta contm vrios destes pigmentos. Sua
presena importante no s para beleza de flores. Mas, tambm, como atrativo para insetos polinizadores.
Alm disto, parecem ter funo como inibidores de bactrias e recentemente tm sido usadas como
marcadores por taxonomistas, na classificao das plantas. As Antocianinas ocorrem como glicosdeos,
formados comumente com uma ou duas unidades de glicose ou galactose. A parte molecular sem o acar
ainda mantm a colorao e se denomina antocianidina. O acmulo de antocianinas em caules, folhas e frutos
so estimulados por altos nveis de luz, por deficincias de certos nutrientes (nitrognio, fsforo, enxofre
e outros) e por temperaturas baixas. O acmulo depende de uma certa predisposio de fundo gentico.
2. OBJETIVO
3. MATERIAL UTILIZADO
Homogeinizador (liquidificador)
Tubos de ensaio (2)
Proveta de 50 ou 100ml (1)
Funil separador(1)
Funil de vidro(1)
Folhas coloridas
Acetona a 80%
ter etlico
Papel de filtro
Musselina (tecido leve e transparente)
Pipetas de 5 ou 10ml (2)
4. PROCEDIMENTOS
25
5. QUESTIONRIO
Na fotossntese, a luz (Radiao eletromagntica) utilizada para transferir eltrons para a reduo
de NADP+ a NADPH2, com a oxidao da gua e gerar energia para a formao de ATP, a partir da ADP e
H2PO4-. Esse poder assimilador (eltrons e energia) usado para reduzir CO2 a carboidratos, com um ganho
lquido de energia (energia qumica). O processo como um todo pode ser representado pela equao geral:
luz
CO2 +2 H2O (CH2O)n + H2O + O2
cloroplasto
Observa-se que o processo fotossinttico compreende (3) trs passos principais, a saber:
1. Processo fotoqumico, que resulta na converso da energia luminosa em energia qumica pela
formao NADPH2 e ATP. O processo envolve pigmentos para a absoro da luz (reao biofsica),
cofatores e enzimas diversas (reaes qumicas e bioqumicas); os principais pigmentos
responsveis, pela absoro de luz so as clorofilas e posteriormente os carotenides.
2. Processo fsico de transporte, por difuso do CO2 do ar externo at o centro de reao nos
cloroplastdeos.
3. Processo bioqumico: relacionados com a reduo do CO2 e consta de vrias reaes enzimticas.
Os fatores externos que afetam diretamente a fotossntese, como a luz, concentrao de CO2 e
temperatura tem efeito seletivo sobre cada um desses processos parciais. O processo fotoqumico afetado
apenas por luz. O processo difusivo funo da diferena de concentrao de CO2 no ar externo (ou
turbulento) e no centro de reao dos cloroplastdeos, sendo levemente afetado pela temperatura. J os
processos bioqumicos so afetados principalmente pela temperatura.
O estado hdrico da folha (medido pelo seu potencial hdrico) tem um efeito indireto no processo de
transporte de CO2 atravs da abertura dos estmatos, que ope uma maior ou menor resistncia ao fluxo de
gases e de vapor de gua, do interior da folha para o meio externo. Os estmatos so, portanto reguladores
tanto da fotossntese quanto da transpirao. Um mtodo simples para determinar o consumo de CO2 em
plantas terrestres utiliza-se uma soluo de vermelho de cresol, que indicadora do pH. Essa soluo tem cor
prpura e serve para indicar o teor de CO2 no ar. Quando o CO2 aumenta, a soluo torna-se mais cida e a
sua cor passa para amarelo (fotossntese menor que a respirao); quando o CO2 diminui, torna-se mais
alcalina e sua cor passa para prpura mais intensa (fotossntese maior que a respirao).
2. OBJETIVO
3. MATERIAL UTILIZADO
27
4. PROCEDIMENTO
Tome 4 tubos de ensaio, munidos de rolha e coloque em cada um 3mL do reagente de cresol.
Mantenha os tubos abertos durante duas horas para que haja equilbrio entre o teor de CO2 do meio e da
soluo. Em dois tubos coloque uma ou mais folhas de plantas suspensas com um fixador, tomando cuidado
para que no entre em contato com a soluo. Feche os 4 tubos, enrole completamente, um tubo com folha e
outro sem folha de papel alumnio (tratamento escuro) e os outros dois devem ficar expostos luz. Observe o
que acontece com a soluo aps duas horas.
5. QUESTIONRIO
Sabe-se hoje que, na presena de luz, os cloroplastdeos na planta formam um poder redutor o
NADPH, pela reduo do NADP+ e oxidao da gua, com liberao de O2. Essa reduo envolve a
transferncia de 4 eltrons por molcula de O2 liberada. Esta reao com liberao de O2, que ocorre na
primeira fase da fotossntese d-se o nome da fotlise da gua ou reao de Hill. Como a solubilidade do O2
na gua pequena, a medio da qualidade deste gs desprendido pelas plantas aquticas d uma boa
indicao da intensidade de fotossntese.
2. OBJETIVOS
3. MATERIAL NECESSRIO
Eldea sp. ou cabomba ou outra planta aqutica sugerida pelo Instrutor, recentemente colhida.
Becker de 600 mL, tubo de vidro de forma alta.
Lmina de barbear.
Tubo de ensaio grande.
Bicarbonato de sdio 2% (NaHCO3)
Funil de vidro.
Refletor com lmpada de 200W.
4. PROCEDIMENTO
Tome um Becker ou tubo de vidro e encha-o com gua da torneira e soluo de Bicarbonato de
sdio 2%, na proporo de 1:1. Tome alguns ramos recm-cortados de Eldea sp ou outra planta sugerida
pelo Instrutor, coloque-os sob um funil de vidro invertido e mergulhe o conjunto no Becker ou tubo de vidro.
A haste do funil deve ficar totalmente imersa. Encha com gua um tubo de ensaio, tape sua abertura com o
dedo, inverta-o sobre a haste do funil, retirando o dedo lentamente depois de mergulhado, de modo a ficar
totalmente cheio de gua. Coloque o conjunto ao redor da lmpada e observe o que acontece com a planta e a
gua do tubo.
Determine o nmero de bolhas produzidas por minuto, durante trs minutos consecutivos, com a
planta situada a 90cm da fonte de luz, 30cm e 10cm. Cada vez que a lmpada for mudada de posio, esperar
cinco minutos (5) antes de iniciar nova contagem. Faa um grfico e uma tabela mostrando os resultados de
seu experimento, colocando na ordenada o nmero mdio de bolhas por minuto e na abscissa a distncia em
cm.
5. QUESTIONRIO
29
As folhas absorvem quase que totalmente as radiaes das faixas do azul-violeta e do amarelo-
vermelho, mas transmitem ou refletem quase que toda a radiao da faixa do verde. nos cloroplastos;
estruturas anatmicas encontradas nas folhas; que encontramos os pigmentos responsveis por essa absoro:
caroteno, xantofila, clorofila a e clorofila b. Cada fton da radiao absorvida ir excitar uma molcula da
clorofila ou carotenide nos tilacides dos cloroplastos.
Pode-se purificar um pigmento e medir, com auxlio de um espectrofotmetro, a sua absorbncia
relativa nos diferentes comprimentos de onda, e assim construir um espectro de absoro. Quando se estuda
o efeito da luz de diferentes comprimentos de onda (usando quantidades no saturantes) num processo, por
exemplo, fotossntese, obtem-se o espectro de ao. O espectro de ao comparado com o espectro de
absoro do pigmento, ajuda a elucidar a possvel participao do pigmento no processo.
Os pigmentos dos cloroplastos localizam-se nos tilacides, associados s pores lipoproticas das
membranas cloroplastidiais. Suas principais funes so a absoro da energia luminosa e a transferncia
desta energia a uma srie de compostos oxirredutveis, os quais do origem ao O2, ATP e NADPH2. Dos
pigmentos das plantas superiores existentes nos cloroplastos, o nico que participa diretamente da
fotossntese, a clorofila a, enquanto a clorofila b e os carotenides (caroteno e xantofila) participam
indiretamente, transferindo energia luminosa clorofila a.
2. OBJETIVOS
3. MATERIAL NECESSRIO
Acetona P.A.
Espectrofotmetro (visvel)
Almofariz com pistilo
Bomba de vcuo
Papel alumnio
Isopor
Gelo
Balana semi-analtica
Balo volumtrico de 25 mL
30
4. PROCEDIMENTO
Coletar algumas folhas (3 amostragens de cada planta = repeties), enrolar em papel alumnio,
identificar e colocar sobre o gelo, dentro de um isopor e levar ao laboratrio de Fisiologia Vegetal. A extrao
e o teor dos pigmentos sero feitos pelo mtodo descrito por ARNON, 1949. Pesar 100 mg de cada amostra,
colocar em um almofariz, contendo acetona 80%, macerar e posteriormente, filtrar a vcuo (repetir essa
filtrao at que o precipitado fique bege) (TODA A EXTRAO DEVE SER FEITA SOBRE O GELO E
NO ESCURO). Transfira o sobrenadante para um balo volumtrico de 25 mL e aferir o volume. Utilizando
esse extrato; denominado extrato cetnico de pigmentos foliares; mea a absorbncia nos comprimentos de
onda na faixa de 390 a 700 nm, leituras a cada 20 nm de intervalo, com o auxlio de um espectrofotmetro.
Utilize acetona 80% para ajustar o zero de absorbncia. Nos pontos de maior absoro, faa leitura a cada 5
nm. Construa um grfico com os seus dados, colocando nas abscissas os comprimentos de onda () e nas
ordenadas, as respectivas absorbncias (A). Posteriormente, com uma outra alquota do extrato cetnico, ler
em absorbncia a 644 nm e 662 nm e o branco para zerar o aparelho acetona 80%. As concentraes de
clorofila a, clorofila b clorofilas (a + b) e razo Cl a/ Cl b sero determinadas conforme as relaes a seguir
(ARNON 1949) e expressas em mg de Clorofila / g MF:
5. QUESTIONRIO
1. Quais so as faixas de comprimento de onda que os extratos de pigmentos dos cloroplastdeos mais
absorvem?
2. Por que a absorbncia na regio do verde menor?
3. Os carotenides apresentam um espectro de absoro semelhante ao das clorofilas?
4. Quais so os comprimentos de onda mais absorvidos pelos carotenides (carotenos e xantofilas)?
5. Se quisermos quantificar as clorofilas a e b de um extrato cetnico de pigmentos por meio de um
espectrofotmetro, pode-se utilizar comprimentos de onda na faixa da luz azul? E vermelho?
Justifique sua resposta.
6. Qual o princpio bsico do funcionamento de um espectrofotmetro?
7. Transcreva a estrutura molecular dos pigmentos dos cloroplastos.
8. Os carotenides podem ser considerados hidrocarbonetos? Por que?
9. Em que parte dos cloroplastos se localizam os pigmentos fotossintticos? Mostre atravs de uma
figura esquemtica essa localizao.
10. Faa um desenho esquemtico de um cloroplastdeo (cloroplasto), mostrando seus principais
constituintes.
31
A taxa fotossinttica de folhas isoladas pode variar de acordo com a intensidade luminosa, se expostas ao
ar atmosfrico normal (320 ppm de CO2) com exceo das Crassulceas, que fixam o CO2 mesmo em total
obscuridade. A intensidade luminosa na qual a fotossntese igual a respirao (troca de CO2 entre a folha e o
meio ambiente zero) chamado de ponto de compensao luminoso. Este ponto varia com as espcies, com
a intensidade luminosa durante o crescimento, com a temperatura e com a concentrao de CO2 . Somente
acima deste ponto pode ocorrer aumento no peso da matria seca das plantas.
Um mtodo simples para determinar o ponto de compensao luminoso utiliza-se uma soluo de
vermelho de cresol, que indicadora de pH. Essa soluo tem cor prpura e serve para indicar o teor de CO2
no ar. Quando o CO2 aumenta, a soluo torna-se mais cida e sua cor passa para amarelo (fotossntese menor
do que a respirao); quando o CO2 diminui, torna-se mais alcalina, e a sua cor passa a prpura mais intensa
(fotossntese maior do que a respirao). Se no ocorrer variao em sua cor, significa que o CO2 do ar
permaneceu constante (fotossntese igual respirao).
2. OBJETIVO
Determinar o ponto de compensao luminoso e verificar o efeito do dficit hdrico sobre a fotossntese
de folhas isoladas.
3. MATERIAL NECESSRIO
4. PROCEDIMENTO
mas enrole-o completamente em papel alumnio (tratamento escuro), colocando-o a 100 cm da fonte. Tome
num outro tubo um segmento de folha murcha e coloque-o frente luz forte. Tome um tubo de ensaio que
contenha apenas a soluo indicadora, e sopre-o seguidamente observando a mudana de colorao.
Aps 2 horas ou mais um pouco, observe a colorao da soluo indicadora nos diversos tratamentos e
determine o ponto de compensao luminoso da(s) espcie(s) em estudo.
5. QUESTIONRIO
Capim Colonio
Samambaia
Cacau
Caf
Acssia
Obs: verificar com o auxlio de um luxmetro quando vale em lux cada distncia.
33
B H2 + A+ B+ + AH2
(substrato reduzido) (aceptor oxidado) (produto oxidado) (aceptor reduzido)
Durante a respirao, pode haver formao de perxido de hidrognio (H2O2), que txico para as
clulas. Sabe-se que esta substncia um potente inibidor de muitas enzimas, devendo existirportanto um
mecanismo enzimtico nos tecidos que promova sua destruio. H evidncias de que as clulas geralmente;
contm enzimas chamadas catalases, que utilizam H2O2 como substrato:
Outras funes de catalases nas plantas superiores ainda no esto bem definidas ou determinadas.
2. OBJETIVOS
3. MATERIAL NECESSRIO
4. PROCEDIMENTO
Tome 10 sementes de milho embebidas de vspera e ponha em gua fervente (100C), deixando a
por 5 minutos. Com uma lmina de barbear, corte cada semente longitudinalmente, num plano perpendicular
s faces chatas, expondo o eixo maior do embrio. Faa o mesmo com outro lote de sementes embebidas, mas
que no sofreram fervura. Conserve os lotes separados. Emirja as sementes cortadas em soluo de TTC.
Utilize soluo bastante para cobrir as sementes. Observe as mudanas de cor que ocorrem com tempo. Faa
um esquema da distribuio da colorao vermelha nas sementes vivas (tome casos tpicos se por ventura
houver diferenas entre as sementes).
Usando uma placa de Petri, cubra uma fatia fina de tubrculo de batatinha com uma soluo diluda
(30:1) de perxido de hidrognio 20 V. A evoluo de bolhas de oxignio denota a presena da catalase.
Repita a operao com uma fatia de batatinha que tenha sido anteriormente fervida por 5 minutos. Interprete
os resultados. Faa um desenho esquemtico dos seus resultados.
5. QUESTIONRIO
1. O teste do TTC especfico para determinar a atividade de que tipo de enzima? Por que?
2. Por que o teste do TTC pode ser usado para indicar a vitalidade de sementes?
3. Quando sementes de milho divididas ao meio so colocadas em soluo de TTC (incolor), apareceu
colorao vermelha em certas regies das sementes. Que tipo de reao essa? Em que regies da
semente apareceu a colorao?
4. Zonas meristemticas de razes vivas apresentam reao positiva ao teste do TTC. Partes suberosas
de razes velhas do resultado negativo ao mesmo tipo de teste. Explique esses resultados.
5. D o nome de pelo menos trs (3) deshidrogenases que voc conhece e por que o teste do TTC se
presta muito bem para determinar a atividade dessas enzimas?
6. Escreva a equao geral para a ao de uma deshidrogenase.
7. D a reao da catalase, indicando o substrato e o produto dessa reao.
8. Cobrindo-se fatias de batatinha com gua oxigenada, observa-se maior evoluo de bolhas de
oxignio nos tecidos da periferia do que nos tecidos internos. Por que?
9. Que diferenas existem entre catalase e deshidrogenase quanto s reaes que catalisam?
10. Explique a principal diferena entre enzimas pr-existentes e sintetizadas de novo.
35
O nitrognio inorgnico normalmente absorvido pelas plantas na forma de nitrato (NO3-), embora
sob certas circunstncias, ons amnio(NH4+) possam ser assimilados. A seqncia global da absoro do
nitrognio inorgnico no material orgnico pode ser resumida nas seguintes seqncias de reaes:
a) Reduo do nitrato, via nitrito amnio
b) Assimilao de amnia no glutamato
c) Transaminao do glutamato para aminocidos
d) Sntese de outros aminocidos.
Alm disto, um nmero de bactrias e microorganismos simbiticos so capazes de reduzir o N2
atmosfrico a amnio. No caso das leguminosas, e outras plantas superiores o microorganismo fixador de
nitrognio encontrado nos ndulos das razes.
Para a maioria das plantas no seu meio ambiente natural, o nitrato a fonte usual de nitrognio. O
nitrato tem que ser transformado em amnio antes que possa se combinar com os compostos de carbono, de
modo a formar os vrios componentes nitrogenados da clula. O processo conhecido como reduo
assimilatria do nitrato para diferencia-lo da reduo do nitrato (tipo respiratrio) feito por vrios tipos de
bactrias, as quais, sob micro-aerofilia ou condio anaerbias, usa nitrato como um aceptor de eltrons no
lugar do oxignio molecular. Pode-se estimar que as plantas assimilam 1010 toneladas de nitrato por ano.
A reduo assimilatria do nitrato ocorre nas plantas superiores, algas e vrias bactrias, fungos e
leveduras. O processo pode ser resumido do seguinte modo:
(+5) (+3) (-3)
NO3 2e- NO2 6e NH4+
RN RNi
Isto envolve a participao seqencial de duas metaloprotinas redutase do nitrato e redutase
do nitrito. A fonte fisiolgica de eltrons a piridina nucleotdeo reduzido ou ferredoxina reduzida, isto vria
de acordo com o tipo de enzima. O ATP no necessrio para a redutase do nitrito ou nitrato. Ambas as
reaes ocorrem com decrscimo de energia livre.
Em eucariticos, a redutase do nitrato um complexo enzimtico (PM ~ 200 300.000 D),
possuindo flavina (FAD), grupo heme (citocromo b557) e molibdnio. Eltrons provenientes do NAD(P)H (da
fotossntese ou oxidao dos carboidratos) so transferidos para o nitrato atravs da cadeia enzimtica de
transporte de eltrons:
NAD(P)H NO3
[FAD cit. b Mo]
A enzima apresenta uma alta taxa de regenerao protica e esta presente em altos nveis quando as
clulas so alimentadas com nitrato, porm esta enzima encontra-se reprimida quando a mesma encontra-se
em meio contendo ons amnia.
A atividade da redutase do nitrato estimada medindo a quantidade de nitrito produzido a partir do
nitrato, e a redutase do nitrito pelo desaparecimento do nitrito na mistura de reao. O metro in vivo
utilizado para a determinao do nitrito (SNELL & SNELL, 1949), baseado na formao de um sal de
diaznio durante a reao em meio cido com a sulfanilamida. Este complexo reage com o N-(1-Naftil)
etilenodiamina (NNEDA), formando um complexo colorido, o qual vermelho, e possui mximo de
absoro em 540nm.
2. OBJETIVOS
3. MATERIAIS E REAGENTES
Tampo fosfato (KH2PO4) 0,1 M pH 7,5 contendo isopropanol 1% (V/V), KNO3 (50mM) e
cloranfenicol (15mg/L).
Sufanilamida 1% em HCl 2,4 N.
NNEDA 0,02%.
Tubos de ensaio.
Tubos de ensaio para bombas de vcuo, com rolha de borracha.
Bomba de vcuo.
Banho-maria.
Termmetro (0 1000C).
Espectrofotmetro (visvel).
Estantes para tubos de ensaio.
Agulhas e mangueiras de borracha.
Papel alumnio.
Agitador de tubos
Espcie sugerida pelo Instrutor. (6)
Vasos plsticos de 1 Kg (6)
Terra preta devidamente adubada.
4. PROCEDIMENTO
Plante, em casa-de-vegetao, seis (6) unidades da espcie sugerida pelo Instrutor. Aps um ms de
crescimento e desenvolvimento das plantas, aplique aproximadamente quatro (4) dias consecutivos de estresse
de gua na metade dos vasos plantados trs (3) e em seguida, leve-as (trs controles e trs estressadas) ao
laboratrio de Fisiologia Vegetal para anlise. Pesar aproximadamente 200 mg de discos foliares(=1cm2)
recm-colhidos da espcie sugerida pelo instrutor com e sem estresse hdrico. Transferir para tubos de ensaio
para vcuo contendo 5,0mL do tampo fosfato (meio de reao) e em seguida fazer vcuo por 2 minutos aps,
colocar os tubos de ensaio um banho-maria 300C por 30 minutos e ao abrigo da luz (escuro). Em tubo de
ensaio comum, adicionar 1 mL de tampo + 2 mL do extrato de reao + 1 mL de sulfanilamida 1% + 1 mL
de NNEDA 0,02%. Deixar em repouso por 15 minutos. Fazer a leitura no espectrofotmetro 540nm contra o
branco (3 mL de tampo fosfato + 1 mL de sulfanilamida + 1 mL de NNEDA). Comparar absorbncia com o
curto padro de NO2 (nitrito) e expressar a atividade da enzima em moles de NO2. h1 gMF-1 . Apresentar
os resultados em um grfico e discute-o.
37
OBS. Aps a realizao da curva-padro do nitrito chega-se a uma formulao que transforma absorbncia
em concentrao conforme descrita abaixo:
5. QUESTIONRIO
1. Mostre a reao qumica de reduo do nitrato a amnia e indique as enzimas envolvidas nesses
passos metablicos.
2. Mostre a estrutura qumica da redutase do nitrato, indicando a cadeia transportadora de eltrons.
3. Qual o efeito do estresse hdrico na atividade da redutase do nitrato? Justifique sua resposta.
4. De que maneira estimada a atividade da redutase do nitrato em plantas pelo mtodo in vivo e
mostre os principais passos metablicos que ocorrem at a formao do complexo colorido o qual
vermelho, e possui mximo de absoro em 540nm?
5. Explique qual a finalidade de se cobrir os tubos de ensaio com pepel alumnio nessa
determinao?Na formulao do tampo fosfato voc coloca um lcool (isopropanol).
6. Qual a finalidade de se usar este lcool? Justifique sua resposta.
7. Em que parte da clula vegetal ocorre reduo do nitrato a nitrito e a desse composto a amnia?
8. Em quais regies da planta ocorre a atividade de redutase do nitrato? Mostre um esquema de uma
planta indicando no mesmo cada um dos passos de reduo de nitrato amnia.
38
CRESCIMENTO
E
DESENVOLVIMENTO
39
Nos caules das plantas, a maior taxa de crescimento acorre nos tecidos logo abaixo do meristema
apical. Estudos feitos com caules de plntulas (ervilha) mostraram que naquela regio h uma forte correlao
entre a taxa de crescimento e as quantidades de auxinas difusveis. Foi tambm encontrado que a auxina
extrada do coleptilo de aveia estava intimamente relacionada com a taxa de crescimento deste rgo. Estas
observaes indicam que a concentrao de auxina no tecido pode regular sua taxa de crescimento.
A distribuio desigual de auxinas no caule um dos fatores que podem ocasionar um crescimento
diferencial (curvatura) de plantas.
2. OBJETIVO
3. MATERIAL NECESSRIO
4. PROCEDIMENTO
Aplique pasta de lanolina contendo auxina (AIA) lateralmente no caule de plantas de feijo, no
entren situado logo abaixo do trifololo mais novo. Trate a outra planta de maneira idntica primeira, mas
utilize apenas lanolina pura.
Observe os resultados aps uma semana.
5. QUESTIONRIO
As razes so extremamente sensveis a auxinas, quando comparadas aos caleptilos e aos caules
(cerca de 2000 vezes para AIA exgeno). Desde que as auxinas aparentemente no so sintetizadas na ponta
da raiz, mas vem da parte area por transporte polar acrpeto (nas razes), o seu papel regulador no
alongamento duvidoso.
As razes sintetizam etileno e sabe-se que o etileno exgeno inibe o alongamento radicular com a
mesma eficincia com que inibe alongamento de caule (exceto em plantas aquticas como arroz). possvel
que a inibio do alongamento das razes por concentraes supra-timas de auxina seja assim devida ao
aumento na produo de etileno pelo tecido radicular.
2. OBJETIVO
Avaliar o efeito de concentrao crescente de auxina sinttica 2,4-D no alongamento de razes.
3. MATERIAL NECESSRIO
5. QUESTIONRIO
1. Por que, no correr desse exerccio, utilizaram-se solues de 2,4-D em meio tamponado (tampo
fosfato)?
2. Que conclui voc sobre o efeito da auxina sinttica 2,4-D no alongamento das razes?
3. Como voc poderia explicar, pelo menos uma parte, que altas concentraes de 2,4-D provocam um
engrossamento das razes?
4. Pelas suas observaes as razes e caules apresentaram a mesma resposta as aplicaes exgenas de
2,4-D? Como voc explica as diferenas encontradas?
5. Altas concentraes de 2,4-D podem ser consideradas inibidoras da germinao. Por que?
6. Por que a aplicao de 2,4-D em solos, onde haja sementes em germinao, geralmente acarreta a
morte de todas as plntulas, sejam mono ou dicotilednea?
Prof. Dr. Roberto Cezar Lobo da Costa
A propagao vegetativa por estacas de caule uma prtica comum em muitas plantas de interesse
econmico. Dependendo do grau de lignificao, as estacas podem ser herbceas ou lenhosas. Algumas
espcies possuem iniciais radiculares pr-formados no periciclo e suas estacas enrazam facilmente. Na
maioria das espcies, todavia o enraizamento pode ser estimulado pela aplicao de auxina. Algumas s
enrazam com aplicao de auxina, havendo outras que no enrazam mesmo com a aplicao de auxina.
As auxinas comumente usadas para induzir o enraizamento, so o cido indolil-butrico (AIB) e o a
cido -naftaleno-actico (-ANA), ambas sintticas, e por isso tendo a vantagem de serem mais estveis na
planta. Sua aplicao faz-se de trs maneiras:
a) Mtodo de imerso lenta: as estacas so fixadas durante longo tempo (geralmente 24h) com suas bases
numa soluo aquosa diluda (20-200mg/L).
b) Mtodo de imerso rpida: as bases das estacas so imersas brevemente numa soluo mais concentrada
(1500 2000 mg/L) de auxina em lcool 50%.
c) Mtodo de p: as bases das estacas so umedecidas e introduzidas num p inerte, comumente talco,
contendo a auxina, em geral na concentrao de 1%.
O bom processo do enraizamento no depende apenas de auxina, devem ser levados em conta
outros fatores, como tipo de estaca (juvenil, madura), poca do ano, composio do meio de enraizamento,
grau de umidade, bem como a concentrao de auxina pode induzir uma formao abundante de razes, mas
pode inibir o crescimento posterior tanto das razes como do prprio caule.
2. OBJETIVO
4. PROCEDIMENTO
Tome copos contendo solues de AIB nas concentraes de 100, 50, 20, 10 e 0mg/L e, em cada
copo mergulhe 3cm da base de 4 estacas com folhas, de coleus ou feijo. Depois de 24horas substitua as
solues do regulador por gua pura. Deixe as estacas luz difusa do laboratrio. Aps duas semanas, conte o
nmero de primrdios radiculares por tratamento e verifique comparativamente o comprimento das razes. Se
o intervalo de duas semanas for insuficiente, aguarde mais tempo.
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5. QUETIONRIO
1. Em que tratamento ocorreu maior enraizamento das estacas? Houve diferenas entre tratamentos
quando ao tamanho das razes?
2. Qual a origem anatmica das razes adventcias em estacas?
3. Por que estacas de determinadas espcies s enrazam se estiverem enfolhadas, enquanto estacas de
outras espcies enrazam mesmo desfolhadas?
4. Explique qual seriam os possveis modos de ao de auxina sobre o enraizamento de estacas.
5. Por que no se empregam solues de auxina de concentrao elevada no enraizamento de estacas?
6. Poderia um outro tipo de hormnio, que no auxina, provocar o enraizamento de estacas?
DOMINNCIA APICAL
1. INTRODUO
Ao fenmeno pelo qual, na grande maioria das espcies vegetais, a gema apical inibe o
desenvolvimento das gemas laterais, denomina-se DOMINNCIA APICAL. A remoo da gema apical
provoca o arrebentamento das gemas laterais, o que prova este tipo de inibio correlativa. Adicionando-se
auxina na superfcie decapitada de uma planta cuja gema apical foi removida, a dominncia mantida, o que
leva a concluir que as auxinas esto envolvidas no controle desse fenmeno. Parece que as folhas novas da
gema apical produzem grande quantidade de auxinas que seriam o sinal correlativo da dominncia apical.
Desde de que, uma baixa relao auxina / citocinina na gema lateral promove o seu desenvolvimento,
pode-se supor que o suprimento de citocininas para as gemas laterais seja regulado pelas auxinas presentes na
gema apical, atravs de um mecanismo de transporte dirigido por hormnios (altas concentraes de auxinas
na gema apicais orientariam o transporte de citocininas ou de seus precursores para si ao invs de para as
gemas laterais). Outros reguladores de crescimento como as giberelinas e o cido abscsico parecem estar
envolvidos no fenmeno da dominncia apical.
2. OBJETIVOS
Observar o efeito da remoo da gema apical sobre o crescimento das gemas laterais, bem como o
efeito da aplicao exgena do cido 3-indoil-actico (AIA) no controle da dominncia apical.
2. MATERIAL NECESSRIO
Plantas de feijo ou caupi apresentando o primeiro par de folhas trifoliadas.
Lanolina ou vaselina pura.
Pasta de lanolina ou vaselina contendo 0,1 % de AIA.
Cotonetes.
3. PROCEDIMENTO
Tome trs vasos plantados com trs feijoeiros ou plantas de caupi que apresentam a primeira folha
trifoliada completamente expandida. Um vaso servir de controle, enquanto que os outros dois sero
decapitados na base da primeira folha. Aplique com o auxlio de um cotonete, lanolina ou vaselina pura na
superfcie decapitada das plantas de um dos vasos. No outro vaso cujas plantas foram decapitadas aplique
com o auxlio de um cotonete, a pasta de lanolina ou vaselina contendo o AIA.
Ao final de uma a duas semanas, mea (em mm) o comprimento das gemas axilares surgidas. Mea
tambm, em mm, o dimetro dos caules ao nvel da superfcie seccionada nas plantas decapitadas e intactas.
Faa uma TABELA com os resultados encontrados e discute-os.
5. QUESTIONRIO
1. Como se explica o desenvolvimento das gemas laterais aps a retirada da gema apical?
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2. De que modo estaria agindo a auxina aplicada na parte decapitada do caule para inibir o crescimento
das gemas laterais?
3. Como se explicam s variaes no dimetro do caule ao nvel das superfcies seccionadas?
4. Cite tratamentos que poderiam induzir o crescimento das gemas laterais.
5. Somente as auxinas esto envolvidas na dominncia apical, ou outros fitohormnios podem estar
envolvidos nesse fenmeno fisiolgico?
6. Pelo fato de que o AIA pode substituir a gema terminal na manuteno da dominncia apical, voc
poderia dizer que esse hormnio inibe o crescimento das gemas laterais? Que outra explicao
mais plausvel voc poderia dar?
7. Um tcnico agrcola obteve duas amostras, sendo uma de citocinina e outra de cido 3 ildolil-
actico, mas esqueceu-se de rotul-las, no sabendo, portanto, identific-las. Como voc poderia
ajudar o tcnico na identificao, utilizando-se do fenmeno fisiolgico da dominncia apical como
teste?
Prof. Dr. Roberto Cezar Lobo da Costa
O 2.4.-D (cido 2,4 diclorofenoxiactico) possui atividade auxnica considervel, em alguns casos
superando o efeito do cido indol-actico (AIA), provavelmente por no ser to facilmente inativado, na
planta, como a auxina natural. Em muitas espcies, o 2.4.-D estimula a produo de etileno, e os efeitos que
aparecem na planta so assim devidos a esse hormnio gasoso. Parece que o 2.4.-D promove a ativao de
genes no funcionais, alterando os tipos de RNAs sintetizados, aumentando a atividade das polimerases de
RNA e DNA, e afetando a atividade de vrias enzimas respiratrias. O 2.4.-D um potente herbicida,
injuriando ou matando muitas DICOTILEDNEAS; seus efeitos sobre o crescimento das
MONOCOTILEDNEAS no so acentuados. Por isso empregado como herbicida seletivo de plantas de
folhas largas em campos de cereais, nas formulaes de amina e ster. prejudicial a peixes e pode levar
poluio (ilegal) de cursos de gua.
2. OBJETIVO
3. MATERIAL NECESSRIO
4. PROCEDIMENTO
Tome 6 vasos contendo, em cada um, uma planta de milho e outra de feijo. Com o atomizador,
pulverize as plantas de 3 vasos com a soluo de 2.4.-D, tomando o cuidado para no contaminar o ambiente
de trabalho. Pulverize os outros 3 vasos apenas com a soluo do agente espalhante. Deixe secar e transfira os
vasos para local convenientemente iluminado. Observe as plantas durante UMA SEMANA, registre as
diferenas encontradas.
5. QUESTIONRIO.
Muitas sementes, quando recm colhidas, esto dormentes e germinam apenas em presena da luz.
A medida que envelhecem, o requerimento da luz para germinao vai desaparecendo. Determinadas faixas
do aspecto da radiao visvel so mais eficientes do que outras na induo da germinao e devem,
naturalmente, ser captadas por um pigmento foto-receptor. Este pigmento, denominado de Fitocromo,
constitudo de um grupo cromforo tetrapirrlico de cadeia aberta associado a uma protena, e apresenta-se
sob duas formas fotoconversiveis: FV (fitocromo que absorve no vermelho-660nm) e FVE (fitocromo que
absorve no vermelho extremo 730nm). Quando o FV absorve luz vermelha (660nm) transforma-se em FVE.
Quando o FVE absorve luz vermelho-extremo(730nm), transforma-se em FV. As interconverses so
produtos de reaes luminosas de baixa energia, diferentemente de outros fenmenos fisiolgicos, que
requerem alta energia. Tendo em vista que uma pequena variao na relao FVE/FV afeta consideravelmente
mais a forma FVE, esta forma considerada a forma fisiologicamente ativa. Aps a percepo e a absoro
da radiao pelo fitocromo, uma srie de reaes desencadeada, e que leva a afetar o crescimento.
Alm da germinao de sementes, vrios outros fenmenos fotomorfognicos so controlados pelo
sistema de FITOCROMO, tais como: florao, crescimento de entrens, desenvolvimento normal da
plntula, sntese de pigmentos, atividade da redutase do nitrato, etc.
2. OBJETIVO
3. MATERIAL NECESSRIO
Sementes sugeridas pelo Instrutor, preferencialmente sementes de alface variedade Grand rapids.
Placa de Petri (6)
Papel de filtro
Banco de luz incandescente e fluorescente
Papel celofane nas cores vermelhas, verdes e azuis intensas ou placas de acrlico ou mesmo vidro dessas
cores.
4. PROCEDIMENTO
Tome seis placas de Petri, forrando o seu fundo com uma folha de papel de filtro. Em cada placa,
coloque no papel de filtro 100 sementes da espcie sugerida pelo Instrutor. Adicione ento 10mL de gua
destilada a cada placa.
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Cuidadosamente, para no entonar a gua, embrulhe uma placa com trs camadas de papel celofane
azul (que transmite entre 390 a 590nm violeta e azul), outra placa com trs camadas de papel celofane verde
(que transmite entre 480 a 630nm, pico no verde), ainda outra com trs camadas de papel celofane azul e duas
camadas de celofane vermelho (que transmite luz acima de 670nm vermelho extremo) e, outra, com duas
camadas de papel celofane vermelho (que transmite entre 580 a 680nm com pico no vermelho). Embrulhe
uma placa de Petri em papel alumnio ou coloque-a numa caixa escura (tratamento escuro). Deixe uma placa
sem cobertura (luz branca). Alternativamente, as placas podem ser colocadas em caixas com tampas de vidro
ou acrlico, nas cores mencionadas.
Exponha as seis placas a um banco de luz fluorescente incandescente. Ao cabo de uma a duas
semanas, examine a protuso das radculas nos diversos tratamentos, e determine a porcentagem de
germinao.
5. QUESTIONRIO
O crescimento de uma planta pode ser medido de medido de vrias maneiras. Em alguns casos, a
determinao da altura suficiente mas, s vezes, maiores informaes so necessrias, como por exemplo, o
tamanho das folhas (comprimento, largura e rea), o peso da matria seca total ou de rgos individuais,
como razes, caules, folhas e frutos.
O fundamento da anlise do crescimento a medida seqencial da acumulao de matria orgnica e
a sua determinao feita, normalmente, considerando o peso da matria seca da planta. Devido ao fato deste
procedimento ser destrutivo, as plantas tomadas como amostra, a cada tempo, devem representar a populao
em estudo, a fim de que tcnicas estatsticas apropriadas possam ser utilizadas. Via de regra, alm das
determinaes de peso da matria seca, as reas foliares so tambm calculadas.
A medida do peso a matria seca das diferentes partes da planta simples e exige apenas uma estufa
para aquecimento at 100C, com circulao de ar forada, e uma balana apropriada para pesar a quantidade
de material em estudo. Os tecidos so submetidos temperatura de aproximadamente 70C, at atingirem
peso constante, de modo a segurar que o peso da matria seca real foi obtido.
A fim de que o crescimento total da planta possa ser estimado, as razes devem ser consideradas
como importantes componentes do vegetal. Em geral, a recuperao do sistema radicular requer um trabalho
adicional bastante significativo, o que faz com que aquela parte da planta seja, freqentemente,
desconsiderada nos clculos de anlise do crescimento.
A determinao da superfcie foliar pode ser feita por diferentes mtodos, alguns utilizando clulas
fotoeltricas, componentes de instrumentos eletrnicos, outros empregando o planmetro e ainda outros
baseados na comparao do peso de uma rea conhecida de papel com o peso dos recortes dos permetros das
folhas, traados sobre o mesmo papel.
A determinao da rea foliar importante porque as folhas so as principais responsveis pela
captao da energia solar e pela produo de matria orgnica atravs da fotossntese. Se a superfcie foliar
conhecida e a alterao do peso da planta, durante um certo perodo de tempo, calculada, torna-se possvel
avaliar a eficincia das folhas e sua contribuio para o crescimento da planta como um todo.
2. BASE
O aumento em rea foliar (AF) e no peso da matria seca (PMS) ou (W) num perodo determinado de
tempo, permite a obteno da TAXA ASSIMILATRIA LQUIDA (TAL ou EA) e da TAXA DE
CRESCIMENTO RELATIVO (TCR ou RA), sendo que se pode efetuar a determinao instantnea da
RAZO DE REA FOLIAR (RAF ou FA).
3. OBJETIVO
4. PROCEDIMENTO
Cultive, aproximadamente, 100 plantas de caupi [Vgna unguiculata (L.) Walp]. Retire ao acaso vinte
(20) plantas com 15 dias aps a emergncia tomando o cuidado para no danificar o sistema radicular das
mesmas. Determine a rea foliar (AF) e o peso da matria seca total das plantas (WT) aps a secagem em
estufa de ventilao de ar forada a 70C durante dois dias. Deixe 20 plantas sob estresse hdrico,
suspendendo a irrigao. Uma semana (7 dias) depois faa uma nova amostragem de 20 plantas (20 controles
e 20 estressadas), realizando as mesmas determinaes. Com os resultados determine a taxa assimilatria
lquida (EA) , a taxa de crescimento relativo (RA) e a razo de rea foliar (FA) tanto das planta controle quanto
das plantas estressadas, com o auxlio das seguintes frmulas:
b) RA = lnW2 lnW1
g/g/dia
T2 T1
c) FA = AF
wT dm2/g
onde:
ln = logaritmo neperiano
5. QUESTIONRIO
1. Conceitue:
2. Dois sistemas de semeaduras de feijo manipulados por duas densidades de plantio (Alta densidade e
Baixa densidade) apresentaram um crecimento exponencial da forma WT = W0 . eR t , onde: WT =
peso da matria seca total; W0 = peso da matria seca inicial; R = taxa de crescimento relativo e t =
tempo. Quanto tempo (dias) ser gasto para que cada um dos sistemas dobre a matria seca inicial ?
WT
Tempo (t)
3. Num experimento com milho, plantado na densidade de 60.000 plantas/ha, foram obtidos os
seguintes dados mdios:
14 2,1 0,04
28 23,2 0,37
42 150,9 1,84
56 169,8 4,80
70 1066,2 5,78
Calcular a taxa assimilatria lquida mdia (EA) entre a 6 e a 8 semana aps a emergncia das plantas.
4. Aplicou-se uma regresso polinomial aos dados primrios, foi encontrada uma significncia de 3
grau e foram obtidas as seguintes equaes ajustadas:
As unidades empregadas foram: grama, metro e dia. Calcular a taxa de produo de matria seca
instantnea: Ct = dw/dt ; a taxa de crescimento relativo instantneo: RW = 1/w . dw/dt e a taxa assimilatria
lquida instantnea : EA = 1/AF . dw/dt ; respectivamente no 20 e 80 dia aps a emergncia da cultura,
sabendo que o valor calorfico da cultura de 4000 cal/g e a radiao solar mdia foi de 400 cal/cm2/dia.
Calcular a eficincia da converso da energia solar no 80 dia aps a emergncia.
E% = (100 x C x ) / RA
Onde:
E% = eficincia da converso.
C= taxa de produo de matria seca.
= valor calorfico.
RA = valor mdio dirio da radiao total incidente (Cal/m2/dia)
5. Dar a equao definidora dos valores instantneos e mdios dos seguintes parmetros de
crescimento:
a. Taxa de crescimento da rea foliar.
b. Taxa de crescimento relativo.
c. Taxa assimilatria lquida.
d. Taxa de crescimento.
e. Razo de rea foliar.
f. rea foliar especfica.
g. Razo de peso foliar.
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