Paula Loureno

Raissa Beltrane
Talita Cosmo

Aula Prtica 2
Contagem padro de UFC em leite
8 Semestre - Grupo A

UNIVERSIDADE METODISTA
SO PAULO 2014
 Sumrio

1. Introduo........................................................................03
2. Objetivos..........................................................................04
3. Materiais e Mtodos........................................................05
4. Resultados.......................................................................09
5. Concluso.......................................................................10
6. Bibliografia......................................................................11
 1. Introduo

A qualidade microbiolgica do leite ainda certamente uma

das principais limitaes para o processamento, rendimento e
aceitabilidade dos derivados lcteos. Indiscutivelmente, entre
as principais causas dessa situao esto as inadequadas
condies de higiene de ordenha, procedimentos de limpeza
deficiente de equipamentos e utenslios e problemas ligados ao
resfriamento do leite cru. Desse modo, pertinente lembrar
que depois que o leite deixa a fazenda no se pode melhorar a
sua qualidade, o que implica que todos os esforos para
melhoria devem ser empregados dentro da unidade produtora.
A alta disponibilidade de nutrientes, juntamente com todas as
demais condies requeridas pelas bactrias, faz do leite um
excelente meio para a multiplicao de microrganismos.
Neste relatrio exibiremos os resultados da contagem desses
microorganismos no leite tipo A e no leite UHT, atravs do
mtodo pour plate. Lembrando que os tipos contagem de UFC
atravs dos tipos de pasteurizao devero se apresentar da
seguinte forma:
-Rpida: Leite A: 500 UFC/ml; Leite B: 40000 UFC/ml; Leite C:
100000 UFC/ml.
-Ultra rpido: apenas em leite UHT, considerada uma
esterilizao, 0 UFC/ml
Para que enfim, possamos qualificar o leite e oferecer aos
consumidores finais uma segurana do produto.
 2. OBJETIVOS

O objetivo deste trabalho avaliar a qualidade do leite tipo A e

UHT quanto a quantidade de unidades formadoras de colnias
de microorganismos que so formados ou no nos mesmos,
utilizando as anlises laboratoriais e baseando se no mtodo
pourplate para se detectar os microrganismos aerbicos e os
anaerbicos facultativos e restritos. Desta forma possvel
estimar uma validade, com margem de segurana, destes
leites. Quanto mais unidades formadoras de colnia (UFC)
forem encontradas no leite, menor a data de validade do
produto.
 3. MATERIAIS E MTODOS

3.1 Materiais:
-Leite tipo A
-Leite UHT
-3 Pipetas
-1 Pera
-Tubos com gua peptonada
-12 Placas de Petri
-Meio de cultura Agar
-Bico de Bunsen aceso

Meio de cultura

Pipeta e Pra
 Tubos com gua peptonada

Placas de Petri e bico de Bunsen

Leite tipo A e UHT

3.2 Mtodos:
-Retira-se 1 ml de leite puro e transfere para um tubo de gua
peptonada (9 ml);
-Da amostra inicial transfere-se 1 ml para o primeiro tubo (vai
ser o tubo 10-1) aps a diluio necessrio homogeneizar
esta soluo de uma forma muito eficiente (batendo o tubo na
palma da mo sem chacoalhar), sem encostar-se tampa;
-Essa diluio vai ter 1 ml transferida para o prximo tubo (tubo
10-2) e assim sucessivamente at a diluio do tubo 10-4;
-Terminada as diluies todos os tubos tm que estar
devidamente identificados;
-No ltimo tubo ter que ser descartado 1 ml para seu volume
se igualar aos demais;
-Aps fazer as diluies sero feitos os repiques. Para cada
amostra, comeando com o leite puro, vai se trabalhar com
duas plaquinhas (amostra vai ser em duplicata pois se
ocorrer alguma alterao ter uma plaquinha de segurana);
Na plaquinha j com 1 ml da amostra adiciona-se o meio de
cultura de forma que ele complete todo o fundo a plaquinha e
devagar comea-se a homogeneizar com a placa fechada e
assim ela vai solidificar em poucos minutos;
O meio de cultura tem que estar em temperatura de
mamadeira, em mdia 38 a 40 C para facilitar no manuseio
do mesmo;
-A leitura deve ser feita 48 horas aps a semeao das placas,
pois neste perodo as placas vo ficar em uma estufa a 37C
para crescer a maioria dos microrganismos, os mesofilos, que
so os que contaminam o leite;
S se vai contar e representar o resultado das plaquinhas que
estiverem no intervalo de 25 UFC h 250 UFC (plaquinhas fora
desse intervalo so consideradas plaquinhas incontveis);
Na contagem devem-se contar os UFCs que esto na
superfcie, as colnias em formato de borra Bacilus sereus,
no meio da placa ou no fundo em formato de virgula vo estar
as UFC anaerbicas; todas devem ser contadas, no s as da
superfcie;
-Do leite UHT no se faz a diluio, faz apenas as 2
plaquinhas;
-A identificao das plaquinhas deve ficar na base delas;
-Como se pipeta Com a caneta ou a pera aps as diluies
transfere a amostragem para a plaquinha (1 ml em cada
plaquinha);
Aps este processo comea-se a trabalhar com o meio de
cultura;
Observaes: Todas as manobras devem ser realizadas
prximas ao bico de Bunsen (pois ele gera um campo estril);
Aps a diluio troca-se a pipeta, e com uma nica pipeta faz-
se a replicao nas plaquinhas, s que comeando da mais
diluda para a mais concentrada.
 4. Resultados

Aps 48 horas foram retiradas as placas da estufa para a

anlise e contagem de UFC das mesmas, lembrando que a
contagem das colnias feita apenas se esta dentro do limite
de 25 a 250 UFC/ml, ento a que mais se aproximou desta
escala foi:
- Placa 1A contendo diluio 10-1: 48 UFC/ml.
- Placa 1B contendo diluio 10-1: 49 UFC/ml.
Mdia: 48,5 UFC/ml
 5. Concluso

O grupo chegou a concluso de o mtodo pour plate tem suas

vantagens como permitir o isolamento das colnias que podem
ser sub-cultivadas em culturas puras, as quais podem ser
facilmente estudadas e identificadas,entretanto necessria a
incubao apropriada para permitir o desenvolvimento das
colnias,usa-se muita vidraria e relativamente trabalhoso
alem da necessidade de muita manipulao pode originar erros
nas contagens devido a erros de diluio e/ou
plaqueamento.De qualquer forma,no geral,os resultados foram
satisfatrios e o aprendizado de grande valia.
 6. Bibliografia

-ANVISA. Sub-rede de Analises da Qualidade do Leite.

Informaes ao Consumidor. Produtos Analisados. Disponvel
em:
<http://portal.anvisa.gov.br/wps/content/Anvisa+Portal/Anvisa/R
ede+Nacional+de+Laboratorios+de+Vigilancia+Sanitaria/Sub+r
ede+de+Analises+da+Qualidade+do+Leite>. Data de acesso:
Setembro 2014.

-MILK POINT. Disponvel em:

http://www.milkpoint.com.br/mypoint/clinicadoleite/p_conta
gem_bacteriana_total_entendendo_o_processo_de_analis
e_contagem_bacteriana_rbql_qualidade_do_leite_in62_in5
1_mapa_5260.aspx . Data de acesso: Setembro, 2014.

-MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E

ABASTECIMENTO.
SECRETARIA DE DEFESA AGROPECURIA. 2003.
Disponvel em http://www.hidrolabor.com.br/IN62.pdf. Data de
acesso: Setembro, 2014.

-RIBEIRO, LEANDRO. Aula prtica: Contagem Padro de UFC

do Leite. in: UNIVERSIDADE METODISTA, 10 de setembro de
2014, So Paulo.

- Site cincia do leite.

DOS SANTOS, M VEIGA.2006. Disponvel em:
http://www.milkpoint.com.br/?noticiaID=34084&actA=7&areaID
=61&secaoID=180 ,data de acesso: Setembro 2014.
-UFBA. Contagem em Placas Pour Plate. Disponvel em:
<www.microbiologia.ufba.br/aulas/Contagem%20em%20placas
%20pourplate.rtf >.Data de acesso: Setembro,2014