Jornal iraniano de Investigação Veterinária, Universidade de Shiraz, 2013, Vol. 14, No.

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Sexo Identificação e estágios de maturação sexual em viveiro
grande esturjão, Huso huso L. através de biópsia
Falahatkar, B.1 *; Akhavan, S. R.1, 2; Tolouei Gilani, M. H.3
e Abbasalizadeh, A.4
Departamento 1Fisheries, Faculdade de Recursos Naturais, Universidade de Guilan, Sowmeh
Sara, Iran; 2Ph.D.
Estudante na Pesca, Departamento de Pesca, da Faculdade de Recursos Marinhos Naturais,
Khorramshahr
Universidade de Ciência Marinha e Tecnologia, Khorramshahr, Iran; Diretório Geral 3Fisheries
de Guilan,
Bandar Anzali, Iran; 4Shahid Dr. Beheshti Sturgeon Peixe Propagação e Elevando Complex,
Rasht, Irã
* Correspondência: B. Falahatkar, Departamento de Pesca, da Faculdade de Recursos Naturais
da Universidade de Guilan,
Sowmeh Sara, Iran. E-mail: falahatkar@guilan.ac.ir
(Recebido 16 de novembro de 2011; versão de 15 revisto dezembro 2012; aceito janeiro 2013
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Resumo
Desde esturjões não têm dimorfismo sexual externo e não há marcadores externo para
determinar o sexo,
exame interno das gónadas deve ser usado para identificação do sexo. O presente estudo
descreve a
método de biópsia e observações histológicas das gônadas de grande esturjão (Huso huso) em
ambos os sexos em
diferentes classes de idade. Sexo e maturidade estágios de 226 grandes esturjões foram
identificados através de biópsia gonadal
e observações histológicas. Uma incisão de 20-25 mm foi feita com um bisturi afiado pelo
ventral
linha média entre barbatanas peitorais e pélvicas, que permitiu gônadas para ser visto.
Determinação do sexo e
estágio de maturidade foi realizada com sucesso em todos os peixes. A proporção entre os sexos
nas condições de cultura foi de 1: 0,84
(Feminino: masculino). A maioria dos homens e mulheres estavam em estágios meados-
espermatogênese e pré-Vitelogênese,
respectivamente. Não foi observada mortalidade aparente e infecção após a cirurgia e biópsia
gonadal de peixe.
Os resultados deste estudo mostraram que o sexo pode ser identificado por este método quando
os peixes são três anos de idade ou mais.
Portanto, a técnica de biópsia é uma ferramenta simples e de baixo custo em esturjões e tem um
papel importante na
gestão de aquicultura e benefícios de conservação.
Palavras-chave: identificação Sex, Sturgeon, Biópsia
Introdução
espécies de esturjão são membros de uma
antiga família dos peixes, Acipenseridae.
A maior abundância de espécies Acipenser
são encontrados no Mar Cáspio (Birstein,
1993). A grande esturjão beluga ou, Huso
huso (L.) é o maior peixe Eurasian
águas doces e produz o mais lucrativo
caviar e carne no mundo. sob naturais
condições, é preciso um longo tempo para um grande
esturjão ser maduro, enquanto a maturidade sexual
ocorre em 10-16 anos de idade para homens e 14-
20-year-old para o sexo feminino; o tamanho médio
e do peso corporal no início da desova é de 2 m e
50 kg, respectivamente (Hol? IK, 1989).
Identificar o sexo de esturjões em idade precoce
é uma questão controversa, devido à sua longa vida,
maturidade tardia da primeira puberdade sexual, a longo
ciclos gonadal de tempo ou de desova não-anuais.
Além disso, os gametas esturjão diferem de outros
peixes no caso de óvulos e espermatozóides pela
presença de acrossomas nos espermatozóides
e vários micropyles nos ovos
(Keyvanshokooh e Vaziri, 2008; Psenicka
et al., 2010). identificação Sex and the
exame de maturidade gonadal em
esturjões são um operacional significativa
desafio e uma responsabilidade económica na
criação artificial. Assim, os machos são fornecidos a
mercado para a carne desossada e fêmeas são
mantidos para a produção de caviar ou como um futuro
reprodutores (Doroshov et al., 1997).
Em esturjões, secundário sexo externa
características não são distinguíveis.
Portanto, na fase de pré-desova, sexo
identificação com forma macroscópica é um
método impossível (fêmeas são reconhecidos
pelo abdómen dilatado e masculino pela
spermiation). O método mais comum é
realizada rotineiramente na fazenda através
atividades de campo para determinar o sexo e, em seguida, o
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condições reprodutivas são avaliados em
esturjões por uma incisão cirúrgica e visual
exame das gônadas e histológica
lâminas preparadas a partir de amostras de biópsia (Conte
et al., 1988).
Hoje em dia, existem várias técnicas
para identificar e caracterizar o sexo
maturação in esturjões. Essas opções podem
incluem análises de plasma sanguíneo de esteróide
níveis (Webb et al, 2002;.. Fiest et al, 2004),
imagens ultra-sonografia (Moghim et al.,
2002), boroscópio (Kynard e Kieffer,
2002), a biópsia (Hallajian et al., 2007) e
outras técnicas inovadoras, tais como a endoscopia
(Hurvitz et al., 2007) e laparoscopia
(Falahatkar et al, 2009;.. Falahatkar et al,
2011). Nenhum destes métodos é
recomendada, pois cada um tem a sua própria
desvantagens. procedimento de coleta de sangue é
consumir tempo e a análise do sexo
hormonal exige equipamentos de laboratório, de modo
este procedimento não dá imediata
resultados no campo. Embora a ultra-sonografia é
conhecido como um método não invasivo, isto
determina o sexo com precisão e rapidez, mas
os equipamentos utilizados nesta técnica é
caro. Além disso, um perito na arte é necessária
para determinar o sexo e estágio de gonadal
desenvolvimento (Moghim et al., 2002).
Apesar de um boroscópio é uma boa ferramenta na
estudos de campo da aquicultura, tem algumas
limitações, tais como a incapacidade de
distinguir um peixe macho de um imaturo
danos do sexo feminino e também do funnelshaped
válvula de oviduto durante o exame
(Kynard e Kieffer, 2002). endoscopia e
laparoscopia são métodos mais precisos, mas
requer ferramentas caras e de pessoas hábeis
com boa experiência e conhecimento sobre peixes
anatomia para usar esses métodos (Hurvitz et
al., 2007; Falahatkar et al., 2011).
Gónada biópsia é conhecido como um tradicional
técnica para determinar o sexo e sua
exames histológicos foram
vulgarmente aplicado em peixes. gônada não letal
técnica de biópsia foi realizada amplamente
de esturjão (Conte et ai, 1988;.. Amiri et ai,
1996; Hallajian et al., 2007) e particularmente
em instalações aquícolas para determinar o sexo
de outras espécies de peixe (Debas et al., 1990;
Lokman et al., 2001; Matsubara et al., 2003;
Ashraful Alam e Nakamura, 2008). este
procedimento é conhecido como um método invasivo
mas biópsia gonadal em esturjão causa menor
trauma e continua a ser o mais confiável
método para determinar o sexo e as fases
da maturidade sexual com a observação direta de
gônadas, especialmente no início da idade
(Chapman e Park, 2005). Portanto, o
objetivo do presente estudo foi determinar
sexo, a maturidade sexual estágios e razão sexual em
os grandes esturjões por uso de tecido gonadal
amostras através de técnica de biópsia e a
identificar se este método é preciso e
útil na identificação do sexo sob
condições de cultivo desta espécie.
Materiais e métodos
Peixe e manutenção
Os animais examinados no presente
estudo nasceram na Shahid Dr.
Beheshti Sturgeon Peixe de propagação e
Elevando Complex, Rasht, Guilan. Um dia
após a eclosão, as larvas foram transferidos para o
tanques de concreto circulares especiais (VNIRO
digite) e foram alimentados por solução salina recém eclodida
camarão e Daphnia após a absorção do vitelo.
Quando o peso das larvas atingiu a 150
mg, eles foram transferidos para enriquecido
tanques de terra (Yasemi et al., 2011). Peixe
foram criados nos tanques de terra e foram
alimentados por uma dieta artificial de acordo com a sua
necessidades nutricionais durante a cultura
período de poucos anos. Os peixes foram levantadas até
a idade de três ou mais para determinar o seu sexo
e estádios de maturação. cirurgia de biópsia gonadal
foi usado para separar o sexo e a avaliar
condições reprodutivos em peixes.
procedimento de biópsia gonadal e outros
medições
Este estudo foi realizado em duas fazendas, a
Peixe Shahid Beheshti Dr. Sturgeon
Propagação e Elevando Complex (Rasht,
Guilan) e Morvarid Ghorogh Sturgeon
Elevando Farm (Talesh, Guilan).
No primeiro incubatório, 138 peixes entre
as idades de 6 e 14 anos a partir de barro
lagoas foram considerados para biópsia. Antes
que os animais foram transferidos para um grande concreto
tanque com o volume de 36 m3. No segundo
fazenda, 88 peixes entre as idades de 3 e 6 anos
foram utilizados para a biópsia do concreto circular
tanques. Em ambas as fazendas de peixe foram privados de
alimentos um dia antes da biópsia. após a captura
com uma rede especial de colher, os peixes foram removidos
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a partir do tanque de criação com uma lona
maca, suportando todo o corpo de
prevenir lesões e transferido para trabalhar mesa.
Antes de iniciar o processo, alguns
parâmetros foram medidos como total de
comprimento e peso corporal. Além disso, a condição
fator (CF) foi calculada de acordo com a
fórmula abaixo:
F = W / L3 × 100
Onde,
W: peso fresco de peixe
L: Comprimento total
Uma incisão ântero-posterior 20-25 mm
foi feito com um bisturi afiado (No. 10
lâmina reta) através da área ventral
a parede do corpo. O local da incisão cirúrgica foi
localizada conforme descrito por Chapman (1989) para
esturjão branco Acipenser transmontanus.
Em seguida, o bisturi foi retirado para garantir
que a incisão não foi obstruído. para o sexo
identificação, exame visual do ovário
e testículos foram usadas e, em alguns casos, uma
amostra de biópsia (5-8 mm) foi coletado
por uma pinça fina. Neste caso, foram fórceps
cuidadosamente inserida na cavidade do corpo até
atingindo a gônada. amostra de tecido foi em seguida
cortado por uma tesoura afiada e fixados em Bouin
solução para o próximo ensaio histológico. Durante
a operação, brânquias foram mantidos molhados. o
incisão abdominal foi fechada com um ou
duas suturas simples, utilizando uma agulha e um
braçadeira. Os peixes foram injectados intramuscularmente 1
ml 5% oxitetraciclina (Razak, Teerão, Irão)
por peixe e depois local de incisão foi
desinfectados com solução de iodo-povidona
(Kishmedifarm, Kish, Irã) e
spray de cloranfenicol (Afagh, Teerã,
Irã). Sem anestesia profunda foi utilizado durante
o processo de biopsia.
gonadal histologia
Amostras de gónadas foram mantidos em Bouin
solução. Em seguida, após 48 h, as amostras foram
embebidos em parafina seguindo um esquema
para colocá-los em séries de álcool para
desidratação e de compensação. Os blocos foram
segmentado com a espessura de 6 micrómetros
e corados com hematoxilina e eosina para
exame histológico (Amiri et ai., 1996;
Van Eenennaam e Doroshov, 1998; Raji
e Norouzi, 2010). Sexo Identificação e
avaliações da maturidade sexual foram feitas por
observando-se as amostras preparadas sob uma luz
Microscio de acordo com a Amiri et ai. (1996).
Analise estatistica
Determinação de desvio a partir da
Espera 1: 1 proporção entre os sexos para cada esturjão
grupo foi feita por meio do teste do qui-quadrado
com nível de significância de 95%, com SPSS 13.0
software (Chicago, IL). One-way ANOVA
foi utilizado para verificar a diferença entre os
tratamentos. Quando as diferenças eram
observado, o teste de Tukey foi utilizado como post hoc
teste para encontrar diferenças entre cada
tratamento ao nível de 0,05. Independente
Amostras t-teste foi realizado para comparar
peso médio, comprimento e fator de condição de
feminino e masculino em cada grupo etário. Os dados são
apresentados como média ± DP.
Resultados
A partir de 226 peixes examinados, 123 peixes foram
peixes do sexo feminino e 103 do sexo masculino com global
proporção sexual de 1: 0,84. Sexo de 89,7% de 3-yearold
peixe, 95,4% dos peixe de 6 anos de idade, e 100%
de peixes de 14 anos de idade, foram com sucesso
identificados por meio de procedimento de biópsia. Não
espécime desconhecido foi encontrado aos 14 anos
(Figura 1). relações de sexo de peixes em idade diferente
as classes acima mencionadas eram de 1: 0,45, 1: 0,78
e 1: 1,23, respectivamente (Tabela 1). o
proporção de mulheres para homens era significativamente
diferente (P <0,05) a partir do esperado 1: 1,
de acordo com o teste do qui-quadrado para todas as idades
classes. Nenhuma diferença significativa foi
observada entre homens e mulheres em cada
classe de idade em termos de peso, comprimento total e
CF (P> 0,05), mas diferença significativa foi
observada entre as classes de peso
(P <0,05, Tabela 1). ensaio histológico
mostrou que a identificação do sexo em peixes com
menos de 1 ano de idade (peso médio 320 g)
é impossível (Fig. 2), mas pode ser sexo
identificada quando a idade e tamanho dos peixes
aumentar e ovários e testículos têm se tornado
diferenciado. De acordo com histológica
de ensaio, de 3 e 6 anos de idade, fêmeas foram em
fase pré-vitelogênica (Fig. 3a) e 14 yearold
fêmeas estavam em fase de pós-vitelogênica
(Fig. 3b), que é conhecido como migratória
fase de núcleo. espermatogénese no início 3-
masculino year-old (Fig. 4a), mid espermatogênese
no sexo masculino 6 anos de idade e tardio
espermatogénese (Fig. 4b) estavam presentes em
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Tabela 1: Características de grande esturjão em diferentes idades com a precisão da sexagem e
gonadal
etapa por procedimento de biópsia
Sex (n) Idade
Peso úmido
(kg)
Comprimento total
(cm)
fator de condição
Precisão
(%)
proporção entre os sexos
(F: H)
estágio gonadal
F (20) 3 7,6 ± 2b 117,7 ± 10.2b 0,46 ± 0.1b 90 1: 0,45 Pré-vitelogênese
M (9) 3 7,9 ± 2.1b 118,8 ± 11.1b 0,46 ± 0.0b 88,9 espermatogênese precoce
F (73) 6 16,3 ± 5.2a 141,7 ± 16.8a 0,56 ± 0.1A 94.5 1: 0,78 Pré-vitelogênese
M (57) 6 16 ± 4.2a 141,4 ± 17a 0,58 ± 0.2a 96,5 Mid-espermatogénese
F (30) 14 18,2 ± 4.3a 149 ± 9.4a 0,54 ± 0.1A 100 1: 1,23 Publicar vitelogênese
M (37) 14 18,5 ± 3.2a 148,2 ± 8.4a 0,57 ± 0.1A 100 Espermatogênese
F: Mulher, e M: Masculino
os testículos dos machos de 14 anos de idade.
Nenhuma infecção ou mortalidade foi visto
durante a experiência. Todas as feridas e manchas
criado por procedimentos de biópsia foram curados
após 3 semanas.
0
20
40
60
80
100
120
140
82-127 82-168 134-175
3 anos 6 anos 14 anos
Comprimento total (cm)
No. de grande esturjão
Feminino Masculino Não sexuado
FIG. 1: O número de peixes examinados a partir de
diferentes classes de idade e comprimento a ser sexados
através de biópsia
FIG. 2: Um esquema histológica do tecido gonadal
de sub-sobreano unsexed grande esturjão
(Peso = 320 g)
FIG. 3: Luz estádios de maturação visão microscópica
de grande fêmea do esturjão (parafina,
hematoxilina e eosina). UMA:
estágio oócito Previtellogenic (PVO) e tecido adiposo
tecidos (ad), e B: Ampliação do oócito
layer no final previtellogenic (zri: zona radiata
interna, ZRE: zona irradiar externa, gr:
células da granulosa, TL: camada da teca e YG: gema
glóbulos)
Discussão
Os resultados deste estudo mostraram que um
método de biópsia e exame histológico
são técnicas úteis e eficientes para
PVO
de Anúncios
1 mm
0,1 mm
zri
gr
yg
tl
ZRE
1 mm
UMA
B
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FIG. 4: Luz estádios de maturação visão microscópica
de grande macho esturjão (parafina,
hematoxilina e eosina). UMA:
Espermatogônias (espermatogênese cedo), e
B: Estágio espermiação
determinar o sexo e maturidade estágio de 3-yearold
grande esturjão. Usando o método de biópsia para
grande esturjão, identificou com precisão o
sexo de 96% em diferentes idades. Portanto, este achado
demonstraram que a capacidade de biópsia para
sexo distinguir geral foi maior quando
em comparação com outros estudos com base em
técnicas disponíveis como hormona sexual
critérios (Webb et al, 2002;.. Fiest et ai,
2004), boroscópio (Kynard e Kieffer,
2002), endoscopia (Hurvitz et al., 2007),
laparoscopia (Falahatkar et al., 2009;
Falahatkar et al., 2011) e uma combinação de
métodos (Petochi et al., 2011) por causa
observação direta da gônada.
Os resultados mostram que a biópsia é um não-letal
método de identificação do sexo de grande
esturjão e todos os peixes examinados voltou a
situação normal sem mostrar qualquer
infecção, morbidade ou mesmo adiada
mortalidade. taxa de crescimento também não foi afetada
(Observação pessoal) após 3 meses
de biópsia. Estes resultados foram provado por
estudos anteriores que mencionados gonad
biópsia como um método eficaz para determinar
do sexo em Anguilla spp. (Matsubara et al.,
2003) Acipencer nudiventris (Hallajian et
al., 2007) e Epinephelus merra (Ashraful
Alam e Nakamura, 2008). A precisão
de biópsia procedimento aumenta por aumento
a idade de peixes e tamanho. Além disso, tomar uma
amostra adequada pode ser um processo difícil, em
peixe que não é grande o suficiente, porque o
parte germinal da gônada ou gordura do tecido é
coberta pela parede do corpo, de modo que é o mais fácil
caminho para o operador para identificar o sexo de
estágios gonadais avançados ou peixe ainda maior.
O resultado deste estudo mostrou
desvio significativo do esperado 1: 1
proporção entre os sexos (1: 0,84). Doroshov et ai. (1997)
encontrada relação 1: 1 entre o branco cultivadas
esturjão. No entanto, Flynn et ai. (2006)
informou que criados Esturjão
Acipenser brevirostrum em cativeiro normalmente
tem uma proporção entre os sexos que é favorecida relativamente
para fêmeas (1: 0,79). Às vezes, o sexo
proporção é alterada com a condição de cultura
relacionada com a cultura intensiva e
condições ambientais. No presente
estudar em grande esturjão, as variações
condições de cultura e classes etárias
afetar essa proporção entre os sexos. No estudo actual sobre
226 peixes de viveiro apenas uma ligeira inclinação foi encontrado
na determinação da relação de sexo com alta
taxa de precisão. Diferentes classes de idade e
número adicional de necessidade peixes de viveiro a ser
sexuado cuidadosamente para provar uma mudança real a partir de
1: 1. Por conseguinte, o aumento do número de
peixes inspeccionados conduzirá provavelmente ao
proporção entre os sexos estimada de 1: 1. Mais pesquisa
é necessária para encontrar por que a proporção entre os sexos de
esturjão está mudando através da cultura
período de espera a 1: 1.
A análise histológica mostrou feminina
grande esturjão na idade de 3 e 6 estavam em
o palco previtellogenic e grande feminino
esturjão com a idade de 14 estavam em
estágio postvitellogenic. Previtellogenic
oócitos foram reconhecidos pelo crescimento de
oócito primário e diferenciação do
camada de células da granulosa e início de
secreção da irradiar zona. Além disso, a espessura
da camada de zona radiata e importante crescimento do
oócitos foi observada em postvitellogenic
etapa. espermatogênese precoce, médio
espermatogênese e espermatogênese tarde
foram apresentados nos testículos de 3-, 6- e 14-
year-old masculina grande esturjão, respectivamente.
Na maior parte do peixe, a precoce e tardia
espermatogênese e espermatogênese tarde,
50 μ
50 μ
UMA
B
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espermatócitos e espermátides foram
dominante, respectivamente. Células espermatogênicas
são vistas em torno do túbulo no início
espermatogênese e progressão desde o início
espermatócitos para espermátides poderia ser encontrado
através da espermatogénese (Chapman, 1989).
Como resultado, existem numerosos
vantagens de biopsia que incluem o
Segue:
1) A observação direta das gônadas
2) Rapidez de este método
3) sendo prático, preciso e eficiente para
operações de campo e
4) Não é caro
Obviamente, quando um folículo do ovário ou
amostra de testículo é necessária, a fim de verificar a
estado de maturação, a cirurgia é necessária.
Além disso, durante a gestão de aquicultura de
esturjão, é necessário separar os sexos
a fim de produzir carne ou de caviar.
Por isso, um dos mais precisos,
métodos econômicos e úteis é a biópsia de
peixe. No entanto, esta técnica é mais
estressante e invasivo para peixes quando
em comparação com técnicas minimamente invasivas
como endoscopia (Falahatkar et al., 2009;
Falahatkar e Poursaeid, 2013) ou
sonografia (Moghim et al., 2002). Então, nós
recomendo comparando várias técnicas
que são utilizados para a identificação de sexo para alcançar
um método com a maior precisão e a
menor stress.
Agradecimentos
Os autores sinceramente reconhecer a
Peixe Shahid Beheshti Dr. Sturgeon
Propagação e Elevando Complex e
Morvarid Ghorogh Sturgeon elevam a exploração agrícola
para o fornecimento de peixe e instalações. Além disso, grande
agradecimento ao Dr. B. M. Amiri para ajudar
-nos distinguir estádios de maturação de peixe.