Coleta e processamento de

amostras para micoses em

tecidos

Rubens de Oliveira Santos – agosto/2010

 Recomendações gerais - coleta
• Assepsia
• Preferência superior a 2 mL ou no mínimo 0,5 mL
• Recipiente estéril e vedado
• Caso use “swabs”  colocar em salina para
transporte – ressecamento. Material proveniente
dos sítios:
– Ouvido – Secreção vaginal
– Nasofaringe – Lesões abertas
– Orofaringe
.
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 Recomendações gerais - coleta
• Coleta antes de iniciar a terapia específica
• Identificação:
– Nome do paciente – Tipo de amostra
– Número de – Data da coleta
registro hospitalar

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 Recomendações gerais - coleta
• Hipóteses diagnósticas (requisição uo
conversa com o médico):
– Orienta a coloração e seleção de meios de cultura
• Imunodeprimidos ou muito debilitados:
– Amostras em 2 ou 3 dias consecutivos para
considerar
– Interpretar os fungos que apresente crescimento e
classificados como contaminantes
– Potencial patogênico nesses pacientes

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 Recomendações gerais - coleta
• Os materiais contaminados:
– Urina – Secreções de
– Fezes feridas
– Pus – Secreções do trato
respiratório

• Transporte em gelo em até 2 horas

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 Recomendações gerais - coleta
• Liquor e líquidos cavitários:
– Temperatura ambiente, transporte urgente e
processamento imediato
• Sangue e material de punção de medula óssea
– Inoculação direta em líquidos ou bifásicos
– Evita a coagulação do material

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 Processamento de amostras
• Líquor, secreções e fluídos corporais
– Líquido pleural – Aspirado transtraqueal
– Líquido ascítico – Lavado gástrico
– Líquido sinovial – Lavado broncoalveolar
– Líquido pericárdico (BAL)

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 Processamento de amostras
• Líquor, secreções e fluídos corporais (cont.)
– Centrifugação de 1500 a 2000 rpm por 10 minutos
– Materiais em“swabs” devem ser eluidos em
– Eluir em solução salina centrifugados como acima
– Usar o sedimento concentrado para o exame
microscópico e semeadura em meios

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 Processamento de amostras
• Urina
– Semeadura direta com alça calibrada –
quantitativo
– Proceder como os líquidos supracitados

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 Processamento de amostras
• Escarro
– Escolher áreas purulentas em detrimento de áreas
liquefeitas
– Digestão com solução de N-acetil-L-cisteina
– 250 mg dissolvidas em 1 L de solução-tampão citrato
ou solução fisiológica
– 1 parte de amostra para 1 parte de NAC
– Agente fluidificante
• Facilita a manipulação da amostra e formação de sedimento
pós –centrifugação
– Centrifugar e proceder com microscopia e semeadura
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 Processamento de amostras
• Material de biópsia
– Fragmentar o material com:
• Bisturi
• Pistilo e almofariz
– A fragmentação aumenta a superfície de contato
do material com o meio de cultura

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 Processamento de amostras
• Sangue e aspirado de medula óssea
– Processamento prévio desnecessário
– Microscopia ineficaz
– Cultura é eficaz
– Recomenda meio bifásico: BHI/DAS
– Frascos de hemocultura
– 1 parte da amostra para 10 partes de meio
– Incubação

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 Cultura
• SDA
• Semear na superfície do meio
• Pipeta de Pasteur ou alça
• Usar movimentos em zig-zag – permite o
crescimento separado de colônias
• Não inocular material no meio – fungos são
aeróbios
• Incubação a 30 oC – possibilidade de oportunistas
como agente causal
• Incubação paralela a 37 oC - eventuais leveduras

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 Cultura
• Para frascos de hemocultura homogeneizar
diariamente – oxigenar
• Observação diária de todas as placas
• Tempo médio de crescimento:
– Candida sp, Cryptococcus sp e outros (24 h-7 dias)
– Fungos filamentosos e Sporothrix schenckii (2 a 15 d)
– Fungos dimórficos: Paracoccidioides brasiliensis,
Histoplasma capsulatum (15 a 30d)
• Repicar qualquer colônia em SDA
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 Cultura
• Crescimento de fungos não provoca turvação
do meio
• Necessidade de Gram de duas gotas do meio
líquido periodicamente
• Repiques de 1 mL em SAD no 2º, 10º e 30º
dias

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 Referências
• BRASIL, Ministério da Saúde. Manual de
Microbiologia Clínica para o Controle de
Infecção em Serviços de Saúde. Módulo VII:
Detecção e Identificação dos Fungos de
Importância Médica. Salvador, 2004.

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