Universidade Federal do Rio Grande

Curso de Química Bacharelado

DETERMINAÇÃO DE AÇÚCARES REDUTORES PELO MÉTODO

ESPECTROFOTOMÉTRICO DO 3,5 DINITROSSALICÍLICO (DNS)

Rio Grande, 2017

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1. INTRODUÇÃO
Açúcares redutores são caracterizados por possuírem grupo carbonílico e
cetônico livres, que possibilitam sua oxidação na presença de agentes oxidantes em
soluções alcalinas. Os principais açúcares redutores são a frutose, a lactose, a
maltose e a glicose que tem como principal função gerar energia para as células do
corpo humano.[1]
Uma reação importante destes compostos é a reação de Maillard, que ocorre
entre um açúcar redutor e um aminoácido em temperaturas mais elevadas e é
responsável pelo sabor e coloração mais escura em determinados alimentos,
causada pela presença de melanoidina, que é o produto da reação. [2]

Diversas técnicas podem ser empregadas para determinação de açúcares

redutores, desde as titulométricas até as espectrofotométricas, sendo uma delas
através do método do DNS, que é amplamente aplicado na indústria por ser prático
e rápido.
Esta técnica baseia-se no princípio de que a reação, representada na Figura 1,
entre um açúcar redutor (glicose) e o ácido 3,5-dinitrossalicílico (DNS) forma um
produto cromóforo (ácido 3-amino-5-salicílico), que apresenta coloração
acastanhada e é capaz de ser quantificado através de análise no espectrofotômetro.
[3]

Figura 1 - Reação de redução do DNS

A determinação em espectrofotômetro é possível utilizando a Lei de Lambert-

Beer, representada na Equação 1, que estabelece uma relação linear da
absorbância com a concentração de determinado composto, possibilitando sua
quantificação. [4]
A= εcl (1)
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Onde:
A: absorbância
ε: absortividade molar
c: concentração
l: comprimento do caminho óptico

Através dessa análise é possível determinar a concentração de açúcares

redutores baseado no valor de absorbância obtido pelo espectrofotômetro.

2. OBJETIVO
Determinar açúcares redutores e redutores totais através do método
espectrofotométrico do 3,5 dinitrossalicílico (DNS).

3. MATERIAL E MÉTODOS

3.1. Material

3.1.1. Vidrarias, equipamentos e reagentes

- Tubos de ensaio;
- Copo de Becker;
- Vidro de relógio;
- Espátula;
- Pipetas;
- Balança;
- Espectrofotômetro;
- Solução padrão de glicose 1 mg/mL;
- Solução de sacarose 1 mg/mL;
- 3,5 dinitrossalicílico preparado conforme procedimento abaixo:
- Solução A - 13,5g de NaOH em 300ml de água destilada;
- Solução B – 8,8g de 3,5 DNS; 255g de tartarato de sódio e potássio em 800 mL de
água destilada;
- Solução C – misturas das soluções A e B;
- Solução D – 2,2g de NaOH; 10g de fenol em 100 mL de água destilada;
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- HCl 2 M;
- NaOH 2 M.

3.2 Métodos
3.2.1. Métodos para curva padrão de glicose
- Foi utilizado 7 tubos de ensaios em duplicata, para cada tubo 3 mL de uma mistura
de glicose (1 mg/mL);
- Após foi adicionado 1 mL do reagente 3,5 dinitrossalicílico (DNS) em cada um dos
tubos e levado a banho maria a 100°C por 5 minutos;
- Após os 5 minutos de banho maria foi feito o esfriamento dos tubos utilizando
se gelo;
- Foi adicionado 6 mL de água destilada em cada tubo e levado para leitura no
espectrofotômetro com leitura de 546 nm.

3.2.2. Método de determinação de açúcares redutores totais

- Foram utilizados 7 tubos de ensaio em duplicata (a,b,c,d,e,f,g), antes do banho
maria a 100° C foi colocado em cada tubo 2 mL:1 mL da solução de sacarose (1
mg/mL) e 1 mL de ácido clorídrico, sendo que o tubo a (branco) foi colocado 1 ml de
água em vez da solução da amostra;
- Os tubos (a), (b) não foram levados ao banho, o tubo (c) foi levado ao banho por 5
minutos, o (d) por 10 minutos, o (e) por 15 minutos, o (f) por 20 minutos e o (g) por
25 minutos;
- Após foi adicionado em cada tubo 1 mL de hidróxido de sódio e 1 mL do reagente
3,5 dinitrossalicílico (DNS) e levado ao banho novamente por cinco minutos;
- Foi feito o esfriamento dos tubos com banho de gelo por 5 minutos;
- Adicionou-se 6 mL de água destilada em cada tubo e foi levado ao
espectrofotômetro para realizar a leitura a 546 nm.
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4. RESULTADOS E DISCUSSÃO
4.1. Curva padrão de glicose

A determinação da curva padrão de glicose foi realizada e os resultados foram

dispostos na tabela 1:

Glicose H2O DNS Banho [Glicose] Absorbância

Tubos (mL) (mL) (mL) (100 °C) Gelo H2O (mg/mL) média

branco 0 3,0 1,0 5' - 6,0 0,0 0,007

1 0,2 2,8 1,0 5' - 6,0 0,02 0,0365

2 0,4 2,6 1,0 5' - 6,0 0,04 0,1425

3 0,6 2,4 1,0 5' - 6,0 0,06 0,247

4 0,8 2,2 1,0 5' - 6,0 0,08 0,3755

5 1,0 2,0 1,0 5' - 6,0 0,10 0,4365

6 1,5 1,5 1,0 5' - 6,0 0,15 0,6385

Tabela 1 – Determinação de açucares redutores.

Nesta tabela pode ser verificado que a concentração de glicose e a

absorbância média são diretamente proporcionais. Com os dados da tabela acima,
foi traçada uma curva de Absorbância x [Glicose], conforme o gráfico 1:

Absorbância x [Glicose]
0.700
y = 4.4718x - 0.0184
0.600 R² = 0.9882
0.500
0.400
0.300 Absorbância média
0.200
0.100
0.000
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2

Gráfico 1 – Representação gráfica da absorbância x [glicose].

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O gráfico 1 também apresenta a concentração de glicose e a absorbância média

que são diretamente proporcionais. Apesar de alguns pontos estarem fora da reta o
valor de R2 foi próximo de 1, indicando uma alta correlação dos pontos com a linha
de tendência.

Acredita-se que por causa da diluição que foi realizada com pipeta graduada,
que é menos exata que uma volumétrica e por conta da aferição do menisco, alguns
pontos ficaram fora da reta.

4.2. Determinação de açúcares redutores totais

A determinação de açucares redutores totais foi realizada e os resultados

determinados na tabela 2:

Solução da Banho Banho

H2O HCl NaOH DNS H2O [Glicose] Absorbância
Tubo amostra (100 (100 Gelo
(mL) (mL) (mL) (mL) (mL) (mg/mL) média
(mL) °C) °C)
a
0,0 1,0 1,0 0' 1,0 1,0 5' 5' 6,0 0,004 0,0
(branco)
b 1,0 0,0 1,0 0' 1,0 1,0 5' 5' 6,0 0,004 0,0005
c 1,0 0,0 1,0 5' 1,0 1,0 5' 5' 6,0 0,1691 0,7750
d 1,0 0,0 1,0 10' 1,0 1,0 5' 5' 6,0 0,1684 0,7715
e 1,0 0,0 1,0 15' 1,0 1,0 5' 5' 6,0 0,1705 0,7810
f 1,0 0,0 1,0 20' 1,0 1,0 5' 5' 6,0 0,1605 0,7365
g 1,0 0,0 1,0 25' 1,0 1,0 5' 5' 6,0 0,1571 0,7210
Tabela 2 – Determinação de açucares redutores totais.

Nesta tabela pode ser verificado que a concentração de glicose e o tempo são
inversamente proporcionais. Com os dados da tabela acima, foi traçada uma curva
de [glicose] x tempo, conforme o gráfico 2:
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Concentração x tempo
0.180
0.160
0.140
0.120
0.100
0.080 [Glicose] (mg/mL)
0.060
0.040
0.020
0.000
0 5 10 15 20 25 30

Gráfico 2 – Representação gráfica concentração x tempo.

No gráfico 2, pode-se verificar que a partir de 5 minutos já ocorreu a hidrólise e que

a partir dos 20 minutos houve uma leve queda na concentração de glicose, pois a
temperatura não estava à 100 °C.

5. CONCLUSÃO

Baseado nos resultados constatou-se que a partir do tempo de cinco minutos

em banho maria a concentração manteve-se praticamente constante, sendo
desnecessária a utilização de tempos maiores.

6. REFERÊNCIAS

[1] TUDO EM FOCO. Açúcares redutores. Disponível

em:<https://www.tudoemfoco.com.br/acucares-redutores.html>. Acesso em: 17 de
ago. 2017

[2] GAVA, A. J.; Princípios de tecnologia de alimentos. São Paulo: Nobel, 1984.

[3] ALEXANDRE G. GARCEZ. Dosagem pelo método DNS. Disponível

em:<http://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:http://www.ebah.com.
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br/content/ABAAAfhbMAF/relatorio-3-dosagem-pelo-metodo-
dns&gws_rd=cr&ei=YNGZWauXMcvqmAGn1bPgCg>. Acesso em: 17 de ago. 2017.

[4] SKOOG, D. A.; HOLLER, F. J.; CROUCH, S. R. Princípios de Análise

Instrumental. 6ª ed. Porto Alegre: Editora Bookman, 2009.