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Aula1 EmpacotamentoDoDNA
Aula1 EmpacotamentoDoDNA
cromatina
O dogma central
• Mas como o DNA
está compactado no
núcleo?
• Como acontecem os
processos de transcrição
e tradução?
• Como a estrutura física dos
processos funciona, minuciosamente?
Descoberta do DNA
• Surdo, não conseguia clinicar bem,
passou a estudar química fisiológica
Telômeros
Braço curto
Centrômero
Braço longo
Cromátides
Cromatina
• Cooper, 1959 Linfócito humano Linfócito de rato
• Heterocromatina e
cromatina são
diferentes
biofisicamente, mas
tem um mesmo
arranjo básico
estrutural como DNA
Cromatina
Regiões mais coradas – heterocromatina
Regiões menos coradas - eucromatina
Inativação do cromossomo X
• ~1960: Uma das duas cópias do cromossomo X de fêmeas de
mamíferos é inativada
• O cromossomo X extra fica em estado de heterocromatina
• Compensação de dose
• Escolha aleatória mas continua por toda a vida
(em marsupiais é sempre o X paterno inativado)
• Alguns genes podem fugir à inativação
Empacotamento do DNA
eucariotos
HU proteins
Histonas
Mecanismo molecular para
formar a eucromatina X
heterocromatina
• Histonas
• Descobertas por Kossel ainda no século XIX (1884)
• Proteínas mais conservadas entre os organismos
• Carregadas positivamente (Lys + Arg)
• DNA dá 1,7 voltas no
octâmero
Descoberta do Nucleossomo
• Kornberg, R.D. (1974) Chromatin
structure: a repeating unit of
histones and DNA. Science 184,
868-871.
• Descoberta dos nucleossomos
• Produziu estruturas
cristalográficas relacionadas ao
mecanismos de transcrição Roger David Kornberg
(produção do RNA) Bioquímico americano
(1947-)
2X H2A H3
H2B H4
H1
Modificações pós-
traducionais
• Uma vez que as proteínas são
traduzidas nos ribossomos,
muitas delas podem ser
modificadas para ajustar suas
funções “em tempo real”
• Fosforilação de proteínas
• Proteínas quinases e fosfatases
• Ligação de fatores
de transcrição
e acetilação de
histonas
– desempacotamento
da cromatina
– ativação da
expressão gênica
Modificações que diminuem a carga
positiva das proteínas abrem a
cromatina
Ativação do gene
Modificações pós-traducionais nas
histonas influenciam a expressão
gênica
Compactação do DNA
• É compreendida hoje a relação das histonas com o DNA
• Entretanto há uma série de proteínas que formam as fibras da
cromatina cuja ação não é bem compreendida
Remodelamento da
cromatina
• Vários estudos modernos são feitos
com relação ao remodelamento
dinâmico da cromatina em células
interfásicas
• Estudos recentes (2007) parecem
mostrar não haver estrutura de
nucleossomos em regiões de
promotores e origens de replicação
• Este empacotamento se dá
através da associação do
DNA (-) com proteínas
chamadas histonas (+)
• As histonas permitem a
regulação da expressão
gênica ao abrirem ou
fecharem a cromatina,
permitindo o acesso ao
DNA por outras proteínas
(fatores de transcrição)
Adendo: Epigenômica
Epigenética
• Mudanças no fenótipo ou na
expressão gênica causadas por
mudanças não-mutacionais
• Holliday, 1990
• The study of the mechanisms of
temporal and spatial control of
gene activity during the
development of complex
organisms
• O epigenoma...
• Metilação do DNA
• Remodelamento de cromatina
• O código das histonas
Modificações epigenéticas
• Permitem uma regulação fina da
transcrição em determinados
locos
• Determina quais regiões da
cromatina estão mais ou menos
abertas para o acesso da
maquinaria de transcrição
• Acredita-se hoje que os
mecanismos epigenéticos sejam
responsáveis pela diferença de
expressão gênica entre tecidos
• 1 genoma X 250 epigenomas
Metilação do DNA
• Ilhas CpG
• C’s antes de G no genoma são
muitas vezes mutados para T
• A quantidade de CpG no
genoma é menor do que seria
de se esperar pelo acaso
• Código selecionado
evolutivamente
• Presentes em regiões
promotoras de organismos
eucarióticos!
• Mecanismo herdável
Tratamento com bissulfito
• Permite a identificação em larga-
escala das citosinas metiladas
• É importante que o DNA esteja
em fita simples para que não haja
modificação parcial das citosinas
• Tratamento bioinformático
posterior para identificação das
regiões metiladas
• Acesso diferenciado pela
maquinaria de transcrição
Imunoprecipitação da cromatina
• ChIP
• Chromatin Immunoprecipitation
• Liga-se o nucleossomo a
anticorpos específicos para
histonas modificadas
• Libera-se o DNA e sequencia-se
• Permite reconhecer as regiões do
DNA ligadas em histonas com
determinadas modificações pós-
traducionais
Conclusão: epigenômica
• Os mecanismos de modificações
pós-traducionais em histonas e
de metilação do DNA interferem
na expressão gênica e podem ser
quantificados