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BIOTRATAMENTO DE EFLUENTE DE INDÚSTRIA DE SORVETE POR

BACILLUS SP
Alan Luiz Pires Santana (PIBIT/ CNPq-UNIT), email: alan.luiz2008@hotmail.com);
Rita de Cássia M. de Miranda (ITP/Unit), email ritamend3gmaill.com;
Cleide Mara F. Soares (ITP/UNIT), email: cleide18@yahoo.com.br
Álvaro Lima Silva (orientador), email: aslima2001@yahoo.com.br.

Universidade Tiradentes/Engenharia Ambiental/Aracaju, SE.

Área: 30000009 – Engenharias; subárea: 30601002 – Processos industriais de enge-

nharias.
Pesquisa executada com recursos do Instituto de Tecnologia e Pesquisa

RESUMO: Este trabalho propôs a estabelecer um INTRODUÇÃO

pré-tratamento de efluente de indústria de sorvete,
por Bacillus sp. livre e imobilizado. Inicialmente, o
resíduo foi caracterizado quanto aos parâmetros
físico-químicos e composição de ácidos graxos.
Posteriormente foi utilizado resíduo de crustáceo
para obtenção da quitosana e posterior imobilização
da bactéria pelo método de adsorção física. O ren-
dimento de quitosana foi calculado a partir da quan-
tidade de quitina extraída. O efluente obteve um
valor de pH de 4,45 demonstrando o caráter ácido.
Em relação a Demanda Química de Oxigênio, De-
manda Bioquímica de Oxigênio e Carbono Orgânico
Total, foram encontrados valores de 363.872,6,
191.555,5 e 28,0 respectivamente. Quanto aos áci-
dos graxos o mais abundante foi o ácido palmítico
C16:0 (38,91%). O rendimento foi 70% de quitina e
45% de quitosana e o Bacillus sp. ITP 001 não pro-
duz quitosanase. Quanto a capacidade do Ba-
cillus sp. de produzir lipase observou-se um melhor
desempenho dos microrganismos imobilizado sob
agitação. Após realização dos dois planejamentos
experimentais observou-se que as variáveis que
mais influenciaram no processo foram a concentra-
ção de KH2PO4 e glicose em condição agitada. Na
cinética verificou-se um aumento na atividade lipolí-
tica atingindo o ápice no quinto dia com atividade
em torno de 1789,34U/mL. Com tudo, pode-se con-
cluir que o Bacillus sp. ITP 001 pode ser utilizado
em processo de pré-tratamento de efluente rico em
gordura.
Palavras-chaves: Imobilização, Quitosana, Lipase.
O desenvolvimento de tecnologias para o trata-
mento adequado de efluentes proveniente de indús-
tria de alimentos e bebidas, tem sido objeto de
grande interesse nos últimos anos, devido ao au-
mento das exigências, e rigidez da legislação ambi-
ental. Esses efluentes são ricos em matéria orgâni-
ca e inorgânica, mesmo em concentrações baixas,
sendo capazes de gerar além da poluição visual,
alterações nos ciclos biológicos dos recursos hídri-
cos em que são lançados. É de vital importância a
utilização de processos que permitam a remoção
desses poluentes nesses diversos efluentes indus-
triais descartados no meio ambiente (CHAVES et
al., 2007; LEIFELD et al., 2009).
A utilização de enzimas no tratamento de despe-
jos industriais foi proposta em 1930 e vêm sendo
usadas pela espécie humana, apresentando grande
importância na pesquisa científica, nos diagnósticos
clínicos e nas indústrias química e farmacêutica.
Estima-se que das 25.000 enzimas presentes na
natureza, cerca de 2.800 foram classificadas e perto
de 400 são comercializadas de forma pura
(MENDES et al., 2005).
Lipases apresentam uma importância particular
pelo fato de hidrolisarem especificamente óleos e
gorduras, o que pode ser de grande interesse para
o tratamento de efluentes com alto teor de gordura
(MENDES et al., 2005).
Uma forma de aumentar ainda mais a eficiência
do microrganismo produtor da enzima e consequen-
temente a ação da mesma no sistema, é a imple-
mentação do processo de imobilização.
A imobilização se justifica, pelo o estado morfo-
lógico do microrganismo durante o processo fer-
mentativo influenciar diretamente na obtenção dos
produtos microbianos de interesse, consequente-

Anais 2016: 18ª Semana de Pesquisa da Universidade Tiradentes. “A prática interdisciplinar alimenta-
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mente diminuindo o tempo de cultivo e aumentando RESULTADOS E DISCUSSÃO

o rendimento do processo (FENG et al., 2003).
Por tudo aqui relatado esse trabalho objetiva o Tabela 1 – Resultados da caracterização do resí-
tratamento de efluente rico em gordura por Bacillus duo do efluente de sorvete.
sp. livre e imobilizado. Parâmetros Resultados Unidade Método
SMEWW 4500
pH 4,45 -
MATERIAL E MÉTODOS –H +B
Demanda
Química de SMEWW 5220
Todo efluente utilizada neste trabalho foi forneci- Oxigênio
363.872,6 mg O2 / L
C
do pela Indústria Fantasia Zeca’s. A matéria-prima (DQO)
utilizada, resíduo de caranguejo (Ucides cordatus), Demanda
foi obtida em restaurantes. As carapaças dos ca- Bioquímica SMEWW 5210
191.555,5 mg O2 / L
de Oxigê- B
ranguejos (10kgs) foram moídas para obtenção e nio (DBO)
controle de granulometria, com objetivo de obter a Carbono
quitina e a produção de quitosana. Foi utilizada a Orgânico
28,0 g / Kg EMBRAPA
linhagem bacteriana Bacillus sp. ITP – 001, isolado Total
(COT)
de solo com histórico de contaminação por petróleo Nitrogênio
pelo Laboratório de Engenharia de Bioprocessos do Total SMEWW 4500
126,4 g / Kg
Instituto de Tecnologia e Pesquisa da cidade de Kjeldahl N
Aracaju-Sergipe. Essa bacteriana Bacillus sp. ITP (NTK)
001 foi utilizada no processo de imobilização. Óleos e
SMEWW 5520
Graxas 658,45 mg / Kg
Com o objetivo de caracterizar o efluente quanto D
Total
à sua composição e propriedades, foram realizadas Potássio SMEWW 3120
340,0 mg / Kg
as seguintes análises químicas e físico-químicas: Total (K) B
potencial hidrogeniônico (pH), demanda química de Fósforo
SMEWW 3120
Total 1.580,0 mg / Kg
oxigênio (DQO), demanda bioquímica de oxigênio (P)
B
(DBO), Carbono Orgânico Total (COT), Nitrogênio
Total Kjeldahl (NTK), Óleos e Graxas Total, Potás- Esta característica do resíduo aponta para a im-
sio Total (K) e Fósforo Total (P). portância de um tratamento eficiente, seja com or-
Os métodos utilizados para as análises foram
ganismos produtores de lipase ou com a própria
APHA – Standard Methods for the Examination of
enzima livre ou imobilizada.
Water and Wastewater, 21st edition, 2005;
No resíduo de sorvete foi observado uma quanti-
EMBRAPA – Empresa Brasileira de Pesquisa Agro-
pecuária, Manual e Métodos de Análises de Solo, 2ª dade maior do Ácido palmítico C16;0, (42,92%). O
edição, 1997 e o método de determinação de NKT, segundo ácido graxo mais abundante encontrado no
desenvolvido por Johan Kjeldahl (1883). Também resíduo foi o ácido graxo monoinsaturado Ácido
foi determinado o perfil de ácidos graxos do efluente Oleico C18:1 cujo valor encontrado foi de 34,41%.
de sorvete por Cromatografia Gasosa acoplada a Todos os outros ácidos graxos detectados foram
Detector de Ionização de Chamas (CG/FID). encontrados em bem menor quantidade. O Ácido
A fim de otimizar as condições do processo utili- esteárico C18:0 (7,60%), o Ácido linoleico C18:2
zando Bacillus sp. ITP 001 livre e imobilizado foram (7,57%) e liofilizado de 6,48, o Ácido láurico C12:0
realizados dois planejamentos experimentais. Um (5,25%), o Ácido mirístico C14:0 (3,35%) e por fim o
Fatorial Fracionado 26-2 totalizando 16 corridas Ácido γ-linoleico C18:3 (2,88%).
mais três pontos centrais e um Planejamento Expe- Após estas etapas de obtenção da quitina e da
rimental do tipo Central Composto Rotacional quitosana foi observado que de cada 10g de cara-
(DCCR) 22, totalizando 11 corridas com o objetivo paça utilizada obteve-se 7g de quitina demonstran-
de conhecer os valores ótimos das variáveis que do um rendimento de 70%. Já a quitosana, obtida a
mais influenciaram no processo. partir da quitina extraída da carapaça do caranguejo
mostrou um rendimento final de 45%.
Quando analisado se o Bacillus sp. ITP 001 é
produtor de quitosanase pode-se afirmar que o mi-

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crorganismo não produz a enzima houve formação
de um halo de inibição ao redor da colônia.
A atividade lipolítica do Bacillus sp. ITP 001 livre
e imobilizado nas condições testadas podem ser
visualizadas na figura 1.
Figura 1 – Atividade do Bacillus sp. ITP 001
livre e imobilizado nas duas condições testadas.
Após avaliação da atividade lipolítica observou-
se que os microrganismos imobilizados apresenta-
ram uma maior atividade nas duas condições testa-
das. Observou-se valores de atividade de
1882,76U/mL sob agitação e de 345,67U/mL em
condição estática para microrganismos na forma
imobilizada, enquanto que na forma livre foi
123,98U/mL na condição estática e 679,87U/mL na
condição agitada.
Na figura 2 observou-se a atividade lipolítica do
Bacillus sp. livre e imobilizado nas 16 corridas do
planejamento experimental.
Após a execução do planejamento experimental
observou-se que quando o microrganismo está na
sua forma livre apresenta uma atividade de
1236,19U/mL na corrida 8 (Figura 2). Esse experi-
mento apresentou a seguinte composição 0,2g/L de
gordura, 0,2g/L NaNO3, 0,2g/L de KH2PO4, 0,025
MgSO4, 130rpm. Pelas condições preconizadas
pelo planejamento não haveria adição de glicose no
meio reacional para fazer um co-metabolismo com a
gordura, reforçando a capacidade do microrganismo
de utilizar a gordura como principal fonte de carbo-
no.
Já quando o microrganismo estava imobilizado
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observou-se duas condições experimentais com
atividade próximas como visualizado na figura 2. A
corrida 4 e 10. Na acorrida 4 a atividade apresenta-
da foi de 2341U/mL, enquanto que na 10 foi de
2289,56U/mL. No experimento 4 o meio apresentou
a seguinte composição 0,2g/L de gordura, 0,2g/L
NaNO3, 0,05g/L de KH2PO4, 0,025 MgSO4 e
0,1g/L de glicose em condição estática. Já no expe-
rimento 10 as condições foram as seguintes: 0,2g/L
de gordura, 0,05g/L NaNO3, 0,05g/L de KH2PO4,
0,1 MgSO4, 0,1g/L de glicose e 130rpm.
Figura 2 – Atividade lipolítica do Bacillus sp. ITP
001 livre sob as condições do planejamento experi-
mental fatorial fracionado.
Após realização dos dois planejamentos experi-
mentais pode-se observar no gráfico de Pareto do
planejamento com microrganismo imobilizado que
as variáveis que mais influenciaram no processo
foram a concentração de KH2PO4 e a concentração
de glicose considerando um nível de significância
maior que p=0,05.
Com o resultado dos dois planejamentos pode-se
observar que a variável mais influente no processo
FOI A CONCENTRAÇÃO DE KH2PO4. Após esses resul-
tados foram selecionadas essas duas variáveis para
continuação do trabalho, as outras foram mantidas
nos valores dos pontos centrais. Como o microrga-
nismo imobilizado apresentou uma atividade muito
superior ao microrganismo em sua forma livre, a
continuidade dos trabalhos foi dada com o micror-
ganismo na sua forma imobilizada. Após a execu-
ção do planejamento experimental do tipo DCCR
pode-se observar o experimento 3 foi a que apre-
sentou uma melhor atividade lipolítica em relação as
outras (figura 4). Esse experimento tem como con-
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dições concentração de glicose 0,85g/L, concentra-
ção de KH2PO4 0,08g/L, concentração de NaNO3
0,1g/L, concentração de MgSO3 0,05g/L, concen-
tração de gordura 0,1g/L e agitação de 130rpm.
FENG, K-C.; ROU, T-M.; LIU, B-L.; TZENG, Y-M.;
CHANG, Y-N. Effect of fungal pellet size on the high yield
production of destruxin B by Metarhizium anisopliae.
Enzyme and Microbial Technology, New York, v. 34, n. 1,
p. 22-25, 2003

MENDES, A.A.; CASTRO, H.F.; PEREIRA, E.B.;

FURIGO JR., A. Aplicação de lipases no tratamento de
águas residuárias com elevados teores de lipídios. Quí-
mica Nova, v. 28, n. 2, São Paulo, mar/apr 2005.

Figura 3 – Atividade lipolítica do Bacillus sp. ITP 001 imobilizado

sob as condições do DCCR.

CONCLUSÕES

Com resultados apresentados, podemos concluir

que a quitosana extraída da casca do caranguejo
trouxe resultados positivos para o tratamento de
efluentes de indústrias laticínios onde foi desenvol-
vido um biotratamento com célula microbiana imobi-
lizada com vantajosas propriedades catalíticas e
estabilidade para serem aplicados no processo de
tratamento de efluente para ser utilizado pelas in-
dústrias que gerem efluentes com alto teor de áci-
dos graxos.

AGRADECIMENTOS

Agradecer a Álvaro Lima Silva orientador do

projeto pela oportunidade de estagiar na área de
pesquisa cientifica e pelos ensinamentos. Quero a
agradecer também a Rita de Cássia M. de Miranda
pela paciência ao longo do projeto, pelos ensina-
mentos e estudos que me proporcionou.

REFERÊNCIAS

LEIFELD, V.; RIVAS, L. M. C. G.; BARANA, A. C. Com-

paração Entre Filtros Biológicos Anaeróbios para o Tra-
tamento de Efluente de Abatedouro com Diferentes Sis-
temas de Alimentação. Revista de Engenharia e Tecno-
logia, Ponta Grossa, v. 1, n. 1, p. 96 -102,2009

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