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Rani Ralph Profa Snia.

Famlia: Enterobacteriaceae Gneros: Salmonella e Yersinia

Microbiologia

Salmonella e Yersinia so gneros patognicos da famlia Enterobacteriacea. O gnero Salmonella o mais importante e predomina nos casos de infeco comparativamente Yersinia. Entretanto, em alguns pases a Yersinia pode causar inmeros processos infecciosos. Salmonella O gnero vem sofrendo mudanas constantes na taxonomia. A ltima modificao passou a classificar as antigas espcies como sorotipos. Esta classificao mais atual, baseada em estudos de homologia de DNA, verificou que existem apenas duas espcies de Salmonella. 2 espcies: Salmonella entrica: o Com 2480 sorotipos. o Dividida em seis subespcies (I-VI): a subspcie I possui 1478 sorotipos de acordo com caractersticas bioqumicas, tipos de hospedeiros, etc. A subspcie I mais importante porque engloba a maioria dos sorotipos e porque tem animais de sangue quente como hospedeiro. As outras subspcies so encontradas em animais de sangue quente e frio e so menos comuns nas causas de infeces. Salmonella bongori: o Com 21 sorotipos. o No apresenta nenhum destaque clnico.

Sorotipos de Salmonella entrica pertencentes Subspcie I Classificao como sorotipos: Antgeno O: trata-se do antgeno somtico e corresponde parte mais externa do LPS dos gramnegativos. Os glicdios que compe esse LPS so variveis de um sorotipo para outro. Antgeno K: corresponde cpsula. Esse antgeno capsular no muito freqente: poucas espcies o portam. Entretanto, a presena dele importante visto que encontrado em 3 sorotipos causadores de doenas graves: S. dublin, S. tiphy e S. paratiphy. Esse antgeno capsular tem sido conhecido como Vi (virulncia) uma vez que tem sido encontrado nas amostras mais virulentas. Antgeno H: corresponde ao flagelo. As salmonelas apresentam uma complicao quanto determinao do antgeno flagelar porque um mesmo sorotipo no expressa determinado antgeno com uma constncia. Assim, h uma variao de fase: existem dois antgenos (H1 e H2) no mesmo sorotipo e estes podem estar presentes um a um ou ao mesmo tempo. A maioria das salmonelas flagelada, entretanto existem espcies imveis. Os sorotipos so classificados de acordo com os Antgenos O e H. Laboratrios clnicos s tipam o antgeno O (o antgeno somtico que corresponde ao polissacardeo O do LPS). Mas, como visto, o sorotipo determinado pelos Ag O e H. Sorotipos adaptados a hospedeiros especficos

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S. typhi e S. paratyphi altamente adaptados ao homem e no infectam animais. Sorotipos que infectam animais tambm podem infectar o homem por meio de material fecal (principalmente), pelo contato direto de mos que podem contaminar os alimentos ou o animal pode ser a fonte de alimentao/infeco (ex. leite). S. Pullorum adaptado a Aves. S. Dublin adaptado a Gado. S. Cholerasuis adaptado a Sunos. Como visto, a maioria dos sorotipos causa infeco em animais, mas muitos infectam tambm o homem. Como tambm foi observado, a maior parte das infeces causada por sorotipos que parasitam animais de sangue quente e que pertencem subspcie I. Entretanto, podemos adquirir infeces a partir de sorotipos que parasitam animais de sangue frio. Fatores de Virulncia Adesinas: fazem ligao especfica com o alvo na clula humana. Fmbrias diversas (tipo I, agregativa, tipo IV, etc). Protenas de superfcie (codificadas por genes cromossomiais): ligam-se fibronectina. De outro modo, a fibronectina em tecidos humanos o receptor para esse tipo de protena. Antgeno Vi (antgeno capsular encontrado em sorotipos de S. entrica como S. typhi, S. paratyphi e S. Dublin): impede a fagocitose. Flagelina (dentro clula epitelial IL-8): o prprio antgeno flagelar foi reconhecido em alguns sorotipos como um fator de virulncia. Essa flagelina seria internalizada no citosol da clula hospedeira e l induziria a produo de IL-8, importante fator para inflamao. Ag O (LPS): resiste Sistema Complemento (MAC). De outro modo, esse Ag O um fator de resistncia ao complemento, pois impede a formao do MAC. Protena de membrana externa (interfere com MAC): interfere tambm com a ao do MAC. Genes de resistncia acidez e pH lisossomal: so mais freqentemente encontrados nos sorotipos que causam infeces disseminadas. Esses sorotipos saem do intestino e dirigem-se para outros stios. So genes que codificam resistncia acidez intracelular de fagcitos, acidez do suco gstrico, etc. Superxido dismutase (gene bacterifago): impedem a destruio intracelular pelos radicais livres. Invasinas (invaso sistema de secreo tipo III) Genes plasmidiais (inv/spa) e cromossmicos codificam invasinas que facilitam a invaso da clula hospedeira. So protenas que fazem parte do sistema de secreo do tipo III. Ilhas de patogenicidade: em geral, o genoma das salmonelas apresenta tipos diferentes de ilhas de patogenicidade. Protenas do sistema de secreo tipo III: essas protenas facilitam a invaso da bactria dentro das clulas. Na clula epitelial a invaso facilitada porque protenas de membrana externa participam juntamente com protenas do sistema de secreo tipo III que migram para a clula epitelial e alteram o citosqueleto da clula hospedeira. As salmonelas so mais freqentemente encontradas no leo Terminal e I. Grosso. Infectam mais facilmente a clula M, entretanto podem infectar outros tipos celulares. A bactria adere ao epitlio e penetra na clula pelo sistema de secreo. A seguir ela envolvida por uma vescula fagoctica e, dentro dessa vescula, multiplica-se. A vescula cheia de bactrias no se rompe, como acontece na infeco por Shigella, e pode passar para a lmina prpria ou de uma clula para outra. Por fim, acaba levando a um processo lesivo que culmina com a morte da clula. Sabe-se que a bactria antes de se internalizar numa vescula pode tambm ir rapidamente para a clula vizinha ou para a lmina prpria. Uma vez atingindo a lmina prpria, o destino das bactrias determinado pela virulncia das cepas: algumas ativam o sistema de fagocitose e so eliminadas; algumas so fagocitadas e no morrem dentro do fagcito: correspondem aos sorotipos que possuem as ditas protenas que resistem ao pH cido, sistemas que impedem a fuso de fagossoma com lisossoma e superxido dismutase. Essas bactrias podem aumentar em nmero dentro dos macrfagos e alcanar o

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sistema linftico e circulatrio por meio desse processo. Podem causar infeces focais, febre entrica e bacteremia. Induo do ruffling pela Salmonella Como exposto, o sistema de secreo tipo III funciona a favor da internalizao da bactria. Ele possui vrios tipos de protenas (12 ao que parece) que participam em vrias etapas da invaso. Esse sistema produzido pela bactria e permite s protenas atravessar a membrana da clula epitelial, e uma vez dentro dessas clulas hospedeiras, as protenas alteram seus citoesqueletos. Estas protenas agem sobre fosfolipases, tirosinas quinases e durante esse desarranjo do citoesqueleto a clula emite evaginaes de membrana que envolvem a Salmonella. Posteriormente essa alterao morfolgica com formao de pseudpodes, a Salmonella entra dentro da clula. Esse fenmeno possui durao de alguns minutos a uma hora. Decorrido esse perodo, o citoesqueleto se reorganiza novamente. Existem cepas que vo para a lmina prpria e de acordo com o sorotipo e com os mecanismos de defesa podem ser eliminadas. Entretanto, se for um sorotipo virulento ou se o hospedeiro estiver imunodeficiente a bactria pode alcanar a circulao. Transmisso da Salmonella Mos contaminadas com fezes de animais e do homem. Ingesto de alimentos contaminados com fezes: carnes, leite, ovos (mal cozidos ou crus). Os ovos contaminam-se durante a postura quando so infectados pelas fezes das aves. Se houver rachaduras na casca de ovo h aumento da possibilidade de contaminao. No bom lavar o ovo porque facilita a entrada do microrganismo. O que mais correto colocar um desinfetante (ex. gua sanitria). Sabe-se hoje que existe a transmisso transovariana: a ave contamina a gema do ovo. Desse modo, o mais indicado cozinhar bem os ovos, legumes e verduras (locais onde os animais defecam e que podem ser contaminados). Existe uma facilidade para transmisso. Dose infectante ou infecciosa: as salmonelas e o vibrio colrico possuem doses infecciosas elevadas (10 a 8 ou 10 a 9 bactrias para alcanar o intestino e causar a doena). Muitas bactrias morrem ao passar pelo suco gstrico e outras, quando ingeridas com alimentos, so protegidas pelo bolo alimentar. A dose elevada permite que sobreviva um nmero suficiente para causar infeco. A Shigella precisa de uma dose muito baixa porque produze uma protena que a protege do suco gstrico (dose = 10 a 2). A Salmonella no produz toxinas e por isso no muito correto utilizar a expresso Food Poisoning (envenenamento alimentar). Formas clnicas da salmonelose Gastrenterite: acompanhada de uma diarria de moderada a fulminante, febre baixa, nusea e vmito. Pode levar a uma desidratao rpida dependendo do sorotipo e da condio do hospedeiro. So sorotipos freqentemente limitados ao intestino. Entretanto, dependendo do sorotipo e do grau de virulncia, alguns podem alcanar os ndulos linfticos e a corrente sangunea. Ocorre at mesmo nos pases desenvolvidos e geralmente no tratada uma vez que autolimitante. Pode haver presena de muco e sangue nas fezes. Bacteremia (septicemia): sem sintomas gastrintestinais importantes e acompanhada de febre. Febre entrica: os bacilos tifide e paratifide so os principais agentes. A bactria penetra no organismo, alcana o intestino e, inicialmente, no causa diarria. Na realidade, a princpio, pode gerar uma constipao. A seguir, dirige-se para os linfonodos mesentricos e posteriormente para a corrente sangunea. Todavia, alguns sorotipos so to virulentos ou o hospedeiro encontra-se to frgil que permite que a bactria alcance diretamente a corrente sangunea. Duas semanas aps a infeco retorna para o intestino e pode ser letal. So manifestaes da febre entrica: febre prolongada, bacteremia contnua, envolvimento do Sistema Fagocitrio Mononuclear (linfonodos mesentricos, fgado e bao) e diarria. Estado de carreador aps infeco prvia (1-5%): assintomtico, mas com infeco anterior. O indivduo no est doente, mas continua eliminando salmonelas pelas fezes. Nesse carreador assintomtico so mais freqentes os sorotipos de febre entrica (S. typhi e S. para typhi), numa percentagem varivel. A bactria sobrevive especialmente bem na vescula biliar e, desse modo, mais dificilmente eliminada se houver clculos biliares. Esse carreador uma fonte de infeco para outras pessoas, principalmente se manuseia alimentos.

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Diagnstico laboratorial de Salmonella Cultura e identificao Local da infeco Secrees (fezes e outras) e sangue. Meios seletivos (se for a partir do intestino) e Agar sangue (se for no for do intestino). Provas bioqumicas. Sorotipagem (sorotipos). Hemocultura (infeces sistmicas). Provas sorolgicas (para febre tifide, paratifide e portador/carreador): utiliza a reao de Widal que pesquisa anticorpos no soro do paciente. Na realidade, a reao de Widal era utilizada, mas vem sendo substituda por outras tcnicas que indicam a presena de anticorpos j formados no sangue do paciente. As provas devem ser feitas a partir da terceira semana de infeco quando os anticorpos comeam a surgir. Testes moleculares: existem sondas de DNA para alguns tipos de salmonella. Eletroforese em campo pulsado (PFGE): um teste molecular tambm importante Os laboratrios clnicos utilizam a cultura e identificam a aglutinao com anticorpos especficos. Diagnstico 1. Identificao bioqumica: lactose positiva e Mckoney. 2. Soroaglutinao. 3. Sonda. Cultura em meios seletivos que permitem a produo de cido sulfdrico. Identificao bioqumica da enterobactria: citrato positivo. A S. typhi citrato negativo e produz pouco gs sulfdrico. Outros testes diagnsticos Sorologia Salmonella Antisoros O polivalentes, Grupos A-E (Kauffman-White). Antisoros H: fase 1 e fase 2 (em tubos). Febre tifide e portadores: Acs no soro do paciente (reao de Widal). Yersinia: anti-soros O (em lmina). Tratamento Gastrenterite: no so tratadas com antibiticos. Infeces sistmicas e febres entricas: cefalosporinas de terceira gerao e fluorquinolonas. Entretanto, existem cepas de S. typhi, por exemplo, que so resistentes. Controle Cuidado no preparo e conservao dos alimentos. Medidas higinicas. Preveno de febre entrica: medidas de sade pblica, tratamento de carreadores e vacinao. Vacinao para febre tifide: Ty21 vacina viva atenuada (oral): inadequada para crianas menores de 2 anos. Polissacardeo capsular Vi conjugado com exotoxina A encontrada em Pseudomonas aeruginosa: proteo para crianas de 1 a 5 anos.

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Yersinia 3 espcies so patognicas para o homem: 2 causam doenas intestinais e uma causa a peste negra/bulbnica. Causam infeces intestinais Y. enterocolitica e Y. pseudotuberculosis. Causa peste bulbnica (pneumoccica e peste septicmica) Y. pestis. Yersiniose: zoonose. Y. enterocolitica: possui destaque devido alta incidncia em pases de clima frio (Canad e nrdicos). Em certos locais uma causa importante de doena de origem alimentar. O homem infectado pela Y. enterocolitica e pela Y. pseudotuberculosis por meio de alimentos de origem animal contaminados. Reservatrios: Y. enterocolitica: porcos, roedores, coelhos. Y. pseudotuberculosis: roedores, animais selvagens, aves de caa. Contaminao atravs da ingesto de gua e alimentos contaminados. Y. pestis: causa 2 tipos de pestes. Peste urbana: roedores (?). Peste silvestre: roedores (?). A peste ocorria entre animais e era transmitida entre eles. Quando alcanou roedores urbanos passou a causar processos epidmicos nas pessoas. A pulga do rato o vetor para o ser humano: ela transmite entre os ratos e tambm do rato para o ser humano. Y. pestis: antignicamente homognea. S existe um sorotipo. Y. pseudotuberculosis: 6 sorotipos (I-VI de acordo com O). 80% das em infeces humanos pelo sorotipo O:I. Y. enterocolitica: 5 biotipos e 50 sorotipos. Por causa da homologia, acredita-se que a Y. pseudotuberculosis um ancestral da Y. pestis. Cepas patognicas predominantes em seres humanos O:3, O:8, O:9 e O:5,27. Isso varia de acordo com as reas geogrficas: alguns sorotipos predominam em algumas regies e outros no. Por exemplo, no Brasil no se encontraram O:8 e O:9. A Y. pestis transmitida pela pulga do rato. Esta bactria dirige-se aos linfonodos regionais prximos do local da picada e desenvolve uma resposta local, inflamatria e agressiva (forma uma bulbo). A seguir, alcana a corrente sangunea e pode dar uma sepse. A partir da corrente sangunea atinge outros rgos e um dos mais importantes o pulmo. Desse modo, as pessoas que esto na fase pulmonar (excreo da bactria pela respirao) podem transmitir para outras pessoas. A peste uma doena endmica. Pode acontecer em qualquer lugar. Acontece no Brasil, principalmente em regies do Nordeste (local onde existem focos endmicos). A Y. tuberculosis e a Y. enterocolitica so transmitidas por meio de gua e alimentos contaminados. A seguir, alcanam o leo e, posteriormente, os linfonodos regionais. Assim, podem provocar uma inflamao dos linfonodos mesentricos e uma ilete, simulando uma apendicite aguda. De outro modo, podem induzir uma apendicectomia quando na realidade no se trata de uma apendicite, e sim de uma mesenterite ou de uma ilete. Essas bactrias podem ou no causar diarria. Elas entram na clula intestinal por meio da clula M e podem alcanar a lmina prpria. Y. enterocolitica e Y. pseudotuberculosis Principais reservatrios: roedores, gado, aves. Porco principal reservatrio para enterocolitica. A transmisso tambm ocorre pelo contato com animais domsticos como ces e gatos. Transmisso Por meio de fezes de animais (inclusive ces, gatos) e de pessoas infectadas que podem contaminar alimentos e fontes de gua. Transmisso inter-pessoal: em condies de aglomerao e sanitrias inadequadas.

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Y. enterocolitica sobrevive bem em alimentos congelados e se multiplica em temperatura de geladeira. Ela aumenta na geladeira e pode sobreviver congelada (neste caso no cresce/aumenta). Trata-se de uma bactria psicrfila. Y. enterocolitica Fatores virulncia Protenas de membrana externa (adeso e invaso): plasmdeo. Inv = invasina (cromossoma). Ail = invasina e proteo lise do soro (cromossoma). yadA = adesina (plasmdeo). Sistema de secreo tipo III (aproximadamente 29 protenas secretadas). Yop: Yersinia outer membrane proteins (plasmdio) inibio pelo Clcio em meio de cultivo. Grupos de Yop tambm formam poros na membrana da clula alvo. Grupos injetados no citosol da clula funes diversas. Enterotoxina termoestvel (Yst como a Sta de ETEC) Siderforo: Yersinabactina Sintomas de infeco Menor de 2 anos: febre, dor abdominal e diarria (s vezes sanguinolenta) 4 a 7 dias aps a exposio e durao de 1 a 3 semanas ou mais. Crianas mais velhas e adultos: febre e uma dor no lado direito do abdome. Simula apendicite aguda. Na realidade ilete terminal e linfadenite mesentrica. Em pequena proporo de casos h complicaes como artrite e septicemia. Diagnstico Existem antisoros no comrcio.