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Biotecnologia – 6ª

1. Uma peça importante em todo processo biotecnológico é o vetor plasmidial, mostrado

na figura abaixo. Analisando esse plasmídeo, assinale a alternativa incorreta sobre as
características de um plasmídeo de modo geral!

a) O vetor plasmidial é necessariamente um DNA circular, com capacidade de se

integrar ao genoma do hospedeiro
b) Plasmídeos conferem resistência a diferentes antibióticos ao seu receptor, como por
exemplo, resistência à Kanamicina no caso do vetor pET28a
c) O plasmídeo possui uma região chamada MCS, sítio múltiplo de clonagem, que
corresponde à origem de replicação bacteriana em seu hospedeiro
d) Os plasmídeos possuem diferentes sítios de restrição para diferentes enzimas, como
XhoI, EcorI entre outras
e) Plasmídeo pode conter regiões de Operon, como o LacI que permite a produção de
enzimas envolvidas no metabolismo de lactose.

2. Durante um protocolo de expressão gênica em procariotos, é essencial o

acompanhamento de alguns parâmetros no cultivo celular, como por exemplo massa
celular (x), pH e nível de glicose. Analisando o gráfico abaixo, assinale a alternativa
correta:

a) Durante todo o tempo de cultivo (10h) não é possível observar qualquer alteração nos
níveis de glicose e pH, mas observa-se um elevado aumento na massa celular.
b) Em 5 horas de cultivo, o nível de glicose é zero e a massa celular atinge a maior valor
do período total
c) A massa celular atinge o máximo de crescimento após 10 horas, mesmo com o
suprimento de glicose em zero e o pH estabilizado em 4, aproximadamente.
d) Não há relação entre a massa celular e o suprimento de glicose/pH visto que a célula
na presença de glicose não apresenta crescimento exponencial.
e) O pH é um fator pouco importante no controle do crescimento celular, pois ele
permanece praticamente constante ao longo de todo período.

3. O controle da expressão gênica em bactérias é realizado por sequências promotoras e

operadores que sofrem ação de uma proteína repressora. A figura representa o Open
LacZ, de produção de enzimas envolvidas no metabolismo da lactose. Analisando a
figura, responda a alternativa INCORRETA:
a) O OperonLac funciona em função da concentração de lactose no meio, de modo que
a depender da concentração de lactose, o operon está ativo ou inativo
b) Em alta concentração de lactose, a proteína repressora não é produzida, e com isso
não se liga no operador, permitindo a transcrição das enzimas necessárias ao
metabolismo da lactose.
c) Em baixa concentração de lactose, a proteína repressora é produzida e por não
interagir com lactose, se liga na região promotora, transcrevendo os genes das enzimas.
d) Em baixa concentração de lactose, a proteína repressora se liga diretamente ao
operon, ativando a transcrição da lactose diretamente.
e) Em altas concentrações de lactose, a proteína repressora é produzida e interage com a
lactose no meio, impedindo sua ligação ao operador. Logo, a transcrição ocorre
normalmente.

4. O genoma humano é constituído por 46 cromossomos, com potencialidade de

expressar todas as proteínas que foram um indivíduo. No entanto, cada célula
diferenciada produz apenas um conjunto de proteínas, específicas àquele tecido. Assim,
defina:

a) Splicing alternativo
 b) Região promotora e regiões upstream (enhancers ou inibidores)

c) Explique como uma célula regual sua expressão para conseguir expressar apenas
as proteínas de seu interesse.

5. Durante a produção de uma Vacina de DNA, diversas etapas precisam ser realizadas
em uma ordem definida, exemplificada no esquema abaixo. Pensando nas diferentes
etapas, explique :

a) Purificação por cromatografia por troca iônica. Para isso use as palavras : Ponto
isoelétrico, carga líquida positiva, carga líquida negativa.

b) Purificação por exclusão molecular ou gel filtração

c) IVT – transcrição in vitro

6. DESAFIO : A proteína Albumina foi clonada no vetor pET28 e utilizada para

expressão da albumina recombinante em bactéria E. coli. Depois da transformação, as
bactérias foram plaqueadas em meio de cultura contendo X-Gal com e sem antibiótico
(figura abaixo). Analisando a figura, desenhe o vetor com os elementos que julgar
importante e também explique os resultados observados : quanto à presença de
antibiótico, presença de colônicas brancas e azuis e por fim, qual cor de colônia você
utilizaria para expressar a sua proteína ?