CURSO DE BIOMEDICINA

PEDRO AMAURI MELA

Coloração de Gram, Urocultura e

Coprocultura

Relatório apresentado à Disciplina de

Microbiologia, da Faculdade de
Americana, para o Curso de
Biomedicina. Professora: Elaine
Cristina Berro

AMERICANA
2021
INTRODUÇÃO
No laboratório de microbiologia são analisados diversos tipos de amostras, a coloração
de Gram é o método mais utilizado para a identificação de patógenos e o antibiograma para a
determinação de quais antibióticos eles são sensíveis ou resistentes. Alguns exemplos são
infecções do trato urinário, gastrointestinais, de líquidos biológicos, sanguíneas, genitais, e
dos tratos respiratórios (VALLE, 2013).

PRINCÍPIO
O objetivo desse trabalho é realizar a identificação de agentes infecciosos responsável
por alterações gastrointestinais e do trato urinário, por meio da coloração de Gram e outros
testes específicos.

TIPO DE AMOSTRA
A amostra de urina é colhida por micção (jato intermediário), punção supra-púbica e
sonda uretral.
A amostra de fezes é preferencialmente colhida na fase aguda da diarreia,
correspondendo aos primeiros cinco dias.

MATERIAIS
Placa de ágar cled
Laminocultivo
Alça bacteriolpogica
Bico de bunsem

PROCEDIMENTOS
PROCEDIMENTO SEMEADURA: Urocultura
Para a cultura quantitativa de urina utilizou-se uma alça calibrada de 0,001 mL
(1:1000) ou alça 0,01 (1:100)
Após a homogeneização da amostra, semeou com alça apropriada, em uma placa Ágar
Cled.
 A semeadura foi realizada inicialmente por uma estria central na superfície do Agar,
seguido de um estriamento perpendicular à estria inicial, possibilitando assim, a obtenção de
colônias isoladas.
Incubou as placas semeadas por 18 a 24 horas a 35ºC ±2.
Em seguida analisou-se as características das colônias no meio de cultura e procedeu a
identificação.

PROCEDIMENTO SEMEADURA: Coprocultura

Após a homogeneização da amostra, semeou pelo método de esgotamento, em uma
placa Ágar sague.
Semeou o material com auxílio de uma alça de níquel cromo, fazendo sequências de
estrias do bordo para o centro da placa na superfície do meio, realizou a flambagem da alça
entre cada sequência de estrias. E obteve assim colônias isoladas.

PROCEDIMENTO BACTERIOSCOPIA
Preparou o esfregaço, flambando a alça bacteriológica deixou esfriar e colocou na
lâmina uma gota de solução salina fisiológica e a colônia.
Cobriu toda a lâmina com solução cristal violeta, aguardou-se um minuto. Lavou-se
rapidamente em água destilada.
Cobriu a lâmina com solução de Iugol deixando por um minuto. Lavou em água
destilada.
Inclinou a lâmina e gotejou álcool-acetona por no máximo 15 segundos. Lavou a
lâmina rapidamente em água corrente.
Cobriu com fucsina de gram e aguardou 30 segundos. Lavou a lâmina em água
destilada e aguardou a secagem.

PROCEDIMENTO IDENTIFICAÇÃO BIOQUÍMICA: Urocultura

Após a identificação da bactéria foi realizado o teste no Enterokit B para nomeá-la.

Tocou a colônia com agulha de platina e semeou os 3 meios na seguinte ordem:
Citrato, EPM e MlLi.
No meio de Citrato deslizou a agulha pelo centro estriando toda a superfície inclinada.
No meio EPM introduziu a agulha até o fundo do tubo e a retirou semeando a
superfície do meio enquanto o MILi deve ser semeado por picada central que deve atingir o
fundo do tubo.
 Incubou-se o Enterokit a 35°C ± 2°C com as tampas semirosqueadas e fez
interpretação após 18 horas a 24 horas.

PROCEDIMENTO IDENTIFICAÇÃO BIOQUÍMICA: Coprocultura

Após a bacterioscopia foi efetuado o teste no meio Rugai para a identificação.
Usando a agulha bacteriológica estéril, encostou a superfície de uma colônia.
Inoculou através de uma picada central, passando pela fase intermediária, atingindo o
meio LMI, sem tocar o fundo do tubo de vidro.
Retornou a agulha em direção à superfície, percorrendo o mesmo caminho e ao atingir
a superfície fez o estriamento em todo o ápice do meio.
Incubou na estufa bacteriológica a 35 ± 2°C por 18 a 24 horas.
Realizou-se leitura das provas nos meios.

PROCEDIMENTO ANTIBIOGRAMA
Umedeceu o swab na cultura, semeou sobre toda a placa uniformemente.
Colocou-se os discos de antibóticos com o auxílio da pinça em pontos equidistantes
Incubou por 24 a 48 horas a 35°C ± 2°C em aerobiose e realizou as leituras.

RESULTADOS
BACTERIOSCOPIA
Em ambo os exames foram observados Bacilos Gram-negativo fermentador, com
catalase positiva e oxidase negativa.

CONTAGEM DE COLÔNIAS
A contagem realizada obteve um resultado superior a 100.000 UFC/ML em ambos os
exames indicando presença de infecção.

MICRORGANISMO: Urocultura
A seguir os resultados observados no teste do Enterokit B.
LACTOSE + UREASE - INDOL +
GÁS - LTD - LISINA +
H2S - MOTILIDADE + CITRATO -
4 1 6
 A bactéria que corresponde a esse resultado é a Escherichia coli.

MICRORGANISMO: Coprocultura
O teste no meio Rugai apresentou os seguintes resultados.
Glicose +, H2S+, Sacarose-, Indol-, Urease+, Lisina+, Motilidade+.
Obtendo assim uma Salmonella sp.

ANTIBIOGRAMA
Tabela correspondente aos discos aplicados na placa com E. coli:
Sensível Intermediário Resistente Resultado
CAZ 22≥ 19-21 <19 25
CTX 20≥ 17-19 <17 30
MER 22≥ 16-21 <16 28

Os valores observados para os discos utilizados na placa com Salmonella são:

Sensível Intermediário Resistente Resultado
CAZ 22≥ 19-21 <19 25
CTX 20≥ 17-19 <17 30
MER 22≥ 16-21 <16 28
IPM 22≥ 19-21 <19 25

Dessa forma, comparando os valores de referência, ambas bactérias são sensíveis a

todos os antibióticos testados.

REFERÊNCIA BIBLIOGRÁFICA

VALLE, M. T. C. Análises microbiológicas em laboratório de análises clínicas na Santa Casa

de Misericórdia de Pelotas. Universidade Federal de Pelotas. Instituto de Biologia. Centro de
Desenvolvimento Tecnológico. Pelotas, 2013. Disponível em:
http://www2.ufpel.edu.br/prg/sisbi/bibct/acervo/biotecnologia/2012/marina_valle_2012.pdf
Acessado em: 26 de maio de 2021.