UNESP FEIS

UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA

“JÚLIO DE MESQUITA FILHO”
CÂMPUS DE ILHA SOLTEIRA

Departamento de Fitotecnia, Tecnologia de Alimentos e Sócio-Economia

TESTE DE TETRAZÓLIO

PRODUÇÃO E TECNOLOGIA DE SEMENTES

Prof. Dr. Marco Eustáquio de Sá

PRINCÍPIO
(Incolor, difusível
2, 3, 5 Trifenil cloreto de tetrazólio Fotodecomponível)
+
(água + semente)

H++OH- desidrogenases

Formazan + HCl (rosa, não difusível)

Estimativa da
viabilidade e vigor
de sementes
OBJETIVO
 Determinar rapidamente a viabilidade de sementes,
particularmente, daquelas que apresentam dormência, das
espécies recalcitrantes e as que germinam lentamente em
testes de rotina;

 Determinar a viabilidade das sementes em amostras ou

individualmente, quando no final do teste de germinação
ocorrer uma alta porcentagem de sementes não
germinadas.
 OUTRAS APLICAÇÕES DO TESTE

 Pode ser usado quando:

 as sementes necessitam ser semeadas logo após a colheita;

 apresentam dormência ou para resolver problemas

encontrados no teste de germinação. Ex: presença de um
grande número de plântulas anormais.
 OUTRAS APLICAÇÕES DO TESTE

 Também pode ser usado para avaliar:

 o vigor,

 determinar a viabilidade das sementes após tratamentos pré-

germinativos,

 danos por secagem, por insetos e por umidade,

 detectar danos mecânicos de colheita e/ou beneficiamento.

UTILIDADE DO TESTE
 Principal vantagem: possibilitar a avaliação da viabilidade
das sementes em poucas horas;

 Dados obtidos são empregados no:

 estabelecimento de bases para a comercialização,

 determinação do ponto de colheita e avaliação da viabilidade

das sementes quando atingem a maturidade,

 controle de qualidade durante o processamento e período de

armazenamento e a identificação de problemas,

 Estimativa do vigor das sementes.

VANTAGENS
a) Não afetado por condições que afetam o teste de germinação;

b) Foca atenção às condições físicas e fisiológicas do embrião de

cada semente individualizado;

c) Rápida avaliação da viabilidade e do vigor;

d) Identificação de diferentes níveis de viabilidade das sementes;

e) Diagnóstico da causa da queda da viabilidade das sementes;

f) Equipamento necessário é simples e barato; e

g) Analista experiente tem rendimento de 4 a 5 amostras (2 x 50

sementes) por hora de trabalho.
 LIMITAÇÕES
a) Requer treinamento especial sobre estrutura embrionária
da semente e técnicas de interpretação;

b) Tedioso, pois sementes são avaliadas uma a uma, requer,

experiência e paciência;

c) Embora rápido, consome maior número de homem-hora

que o teste de germinação padrão;

d) Não mostra eficácia de tratamentos químicos, nem injúrias

que estes possam causar; e

e) Requer do analista capacidade de decisão pelas

características do teste.
Reagentes
 Solução aquosa de 0,1 a 1,0% (pH 6,5 a 7,5) de trifenil cloreto ou
brometo de tetrazólio, de acordo com espécies de sementes.

 Solução tampão:
 Solução 1- Dissolver 9,978g de fosfato de potássio monobásico
(KH2PO4) em 1000 ml de água destilada.
 Solução 2 - Dissolver 11,876g de fosfato de sódio bihidratado
(Na2HPO42H2O) em 1000 ml de água destilada.

 400 ml da solução 1 + 600 ml da solução 2 + 10g de sal de

tetrazólio, pH 7,0 (concentração de 1,0%).

 Concentrações menores, coloca-se o sal na solução tampão de

acordo com concentração desejada.
Procedimento
a) Tamanho da amostra - 2 subamostras de 100 ou 4
subamostras de 50, retiradas ao acaso da porção “semente
pura”.

b) Preparo da semente

 Pré-condicionamento
 Umedecimento lento
 Embebição direta em água
Procedimento
Exposição dos tecidos para coloração

 Perfuração da semente

 Corte longitudinal - seccionamento

 Corte transversal

 Incisão transversal

 Extração do embrião

 Remoção do tegumento
COLORAÇÃO
 Sementes completamente cobertas pela solução de tetrazólio e
não seja exposta à luz direta para redução da solução.

 Sementes com coloração incompleta, o período de embebição na

solução de tetrazólio poderá ser aumentado.

 Coloração excessiva evitar, causa confusão com padrões de

coloração semelhantes aos danos por geada, sementes fracas e
outros.

 Sementes pequenas, de difícil manuseio, pré-umedecidas e

preparadas sobre uma fita de papel, dobrada ou enrolada e
imersa na solução de tetrazólio.
AVALIAÇÃO
 Distinguir as sementes viáveis das não viáveis;

 Sementes viáveis - embriões colorem completamente, e

se parcialmente coloridos, os padrões de coloração
apresentados ainda indicam se a semente é viável.

 Sementes não viáveis – embriões não colorem.

AVALIAÇÃO

Feijão

Milho Soja
CÁLCULO E INFORMAÇÃO DOS RESULTADOS

 “TESTE DE TETRAZÓLIO: ........% de sementes

viáveis”.

 Frutos com sementes viáveis: “TESTE DE

TETRAZÓLIO .....%” de frutos contendo sementes
viáveis “.

 Com sementes individuais no final do teste de

germinação: “......% de sementes vazias....% de
sementes quebradas ou apodrecidas”
TOLERÂNCIAS
 Resultado válido se a diferença entre a repetição
mais alta e a mais baixa estiver dentro da
tolerância aceitável.

 Para verificar a confiabilidade do resultado do

teste, a % média das repetições é calculada e
comparada com a Tabela 18.15 do Capítulo 18 –
Tolerâncias das RAS (2009)