ENSAIO DE FITOTOXICIDADE EM ALFACE (Lactuca sativa)

1. Introdução
As sementes de plantas são excelentes organismos para bioensaios de
toxicidade. Quando estocadas de forma adequada, livre de umidade, permanecem
dormentes por longos períodos sem perder a viabilidade. Por sua vez, quando
hidratadas o estado de dormência é rompido e inicia-se a fase de germinação, onde as
sementes passam por mudanças fisiológicas rápidas e se tornam muito sensíveis a
qualquer estresse ambiental. Desta forma, o desenvolvimento destas sementes pode
ser afetado por poluentes presentes no meio, e por sua vez, servirem como
organismos modelo para o monitoramento da presença de poluentes ambiental.
Para os ensaios utilizando a Lactuca sativa o efeito tóxico das amostras em
teste sobre a germinação e crescimento da raiz de sementes de alface é avaliado e
normalmente comparado com um controle negativo e positivo. A Figura 1 mostra as
sementes já germinadas acomodadas em uma placa de Petri após 7 dias de
incubação a 22 °C.

Figura 1. Sementes de alface (Lactuca sativa) após 7 dias de germinação.

Fonte: O autor.

A avaliação ecotoxicológica é um dos parâmetros mais importantes a ser

monitorado durante o tratamento de resíduos líquidos. Segundo a resolução n° 357 de
17 de março de 2005 do CONAMA, os efluentes antes de serem lançados nos rios
devem ser submetidos a testes ecotoxicológicos para a verificação dos parâmetros
estabelecidos na resolução.

2. Objetivos
 Avaliar a toxicidade de agrotóxicos pela resposta de crescimento de
sementes de alface.

3. Materiais
 Amostra investigada (agrotóxicos);
 Água mineral;
 Placas de petri;
 Pipeta volumétrica;
 Câmara de germinação a 22 °C;
 Papel filtro, algodão, tesoura, filme plástico.

4. Procedimento

Preparo da amostra
Primeiramente, cada amostra deverá ser diluída nas concentrações que se
deseja testar. Como controle negativo é utilizado água mineral.

Ensaio
 Será necessário 10 mL de amostra do agrotóxico para a realização deste teste;
 Para cada amostra serão testadas 2 concentrações (50 e 100 % do
agrotóxico), sendo a concentração “0 %” o controle negativo, apenas com água
mineral e o “100 %”, o agrotóxico puro;
 Desta forma, 3 concentrações em 1 repetição, logo, serão necessárias 03
placas de petri para cada uma das amostras (0%, 50% e 100%);
 Identifique as placas de Petri que serão utilizadas. Identifique com a
concentração e o número do grupo;
 Em cada uma das placas de Petri identificadas, corte um papel filtro do
tamanho da placa, a qual deverá conter algodão na sua base, e coloque dentro
da mesma;
 Em seguida, adicione 4 mL da solução sobre o papel filtro em cada uma das
placas identificadas com a concentração correspondente;
  Em cada uma das placas, coloque 10 sementes de alface (Lactuca sativa) de
forma que fiquem bem distribuídas sobre o papel filtro umedecido;
 Cubra cada uma das placas com filme de PVC para não perder umidade;
 Em seguida, incube as placas a 22 °C, sem luz, por 7 dias;
 A leitura será realizada ao final do tempo de incubação.

Obs.: É possível que as concentrações testadas não sejam adequadas, necessitando

preparo de outras concentrações mais diluídas.

Procedimento de leitura
Após o período de incubação, proceda a leitura.
- Faça a contagem de quantas sementes germinaram em cada placa e anote;
- Com o auxílio de uma régua meça o crescimento das raízes de cada uma das
sementes em cada placa e tome nota. A medida deve ser feita na área representada
na Figura 2;

Figura 2. Demonstração da região de medida do crescimento da raiz de alface

Fonte: Adaptado de Cunha, 2011.

Anote os resultados das medidas e o número de sementes germinadas, nas tabelas a

seguir.

Observação: Utilize os modelos a seguir para construir uma tabela idêntica no Excel.
Para amostra de agrotóxico:
Amostra:
Crescimento das sementes (mm)
Repetição 1
Concentração 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Média Germinadas
0

C. Negativo

50%

100%

Questões para estudo

a) Utilizando a médias das medidas realizadas e as concentrações das amostras,

construa um gráfico de dispersão para avaliar o crescimento das sementes.
b) Comente sobre os resultados obtidos para a amostra escolhida pelo grupo.

Referências
CUNHA, B. M. Avaliação Ecotoxicológica de Distintos Tipos de Efluentes
Mediante Ensaios de Toxicidade Aguda Utilizando Artemia Salina e Lactuca
Sativa. Porto Alegre, 2011. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharel em
Química). Universidade Federal do Rio Grande do Sul.