Micropropagao

Prof. Edison B. Cantarelli

UFSM campus Frederico Westphalen

O que micropropagao ?
Cultivo assptico in vitro de qualquer parte de uma planta em um meio nutritivo.

Explante Clula,rgo, tecido que ser utilizado para iniciar a cultura de tecido.

Histrico: A 1 cultura de tecidos foi obtida em 1934 com White; A primeira aplicao comercial da micropropagao foi realizada por Moreal (1960), multiplicando orqudeas mediante cultura de pices caulinares. Em mbito comercial utilizada em diversos pases do mundo, destacando-se a Europa Ocidental e os EUA.

Quais as vantagens da micropropagao ?

Propagao massal geneticamente idnticas;

de

plantas

Produo de mudas durante todo o ano; Obteno de plantas livres de patgenos; Ferramenta importante para a conservao e melhoramentos gentico de plantas. Mantm a rvore matriz sem precisar abat-la.

Outras vantagens da micropropagao

Rpida multiplicao de plantas para lanamento no mercado. Obteno de grande nmero de plantas por m com economia de espao. Engenharia gentica com fuso de clulas de plantas diferentes, originando uma planta que rene caractersticas de interesse.

E quais as Desvantagens ?
Reduo da florestais; base gentica dos plantios

Dificuldade de encontrar o meio adequado para a espcie desejada; Exige habilidade e formao de pessoal; Laboratrio especializado com custo alto; Plantas lenhosas, em geral, apresentam certas dificuldades para regenerao in vitro.

Mtodos de cultura de tecidos

Cultura meristemtica Microenxertia Cultura de embries Cultura de calos Suspenso celular Polinizao e fertilizao in vitro Cultura de ovrios Cultura de protoplastos Embriognese somtica

MEIO DE CULTURA

um meio nutritivo utilizado para a cultura de clulas, tecidos e rgos de plantas, que fornece as substncias essenciais para o crescimento e controlam, em grande parte, o padro de desevolvimento in vitro.

MEIO DE CULTURA
Normalmente h necessidade de trs meios de cultura diferentes, em sequncia: Meio inicial caracteriza-se pela estimulao e transformao do explante em tecido caloso. Meio de manuteno favorece a proliferao do calo (massas esfricas individuais de clulas). Meio de transformao aps se transformar em embries completos nesse meio ocorre a diferenciao dos rgos.

MEIO DE CULTURA
Varia no s de espcie para espcie, mas tambm de clone para clone e dentro de um mesmo clone, com idade dos indivduos; Explantes de rvores adultas necessita remover fatores inibitrios, bem como aumentar a concentrao de hormnios com consecutivas repicagens, para que ocorra a induo de razes; Pode ser slido ou lquido, depende da origem do explante (gema apical, meristema, extremidade ou base de folha, etc..)

COMPOSIO DO MEIO DE CULTURA

gua, macronutrientes (N, P, Ca, K, Mg, Fe), micronutrientes (Mn, Zn, B, Cu, Cl e Mb), carboidrato e vitaminas (Caldas et al, 1999).

gar Fitorreguladores

Auxinas - razes Citocininas- brotaes

As citocininas so indispensveis para a quebra de dominncia apical e induo de proliferao de gemas axilares (Grattapaglia e Machado, 1999). O BAP por excelncia de maior poder multiplicativo, alm de ser a mais barata de todas (Hasegawa, 1980; Hu e Wang, 1983). As auxinas responsveis pelos processos de formao de razes, sendo o AIB um dos hormnios mais eficazes na fase de enraizamento.

Skoog e Miller (1955) inocularam medula de tabaco em meio de cultura de diferentes concentraes e balanos de uma auxina e de uma citocinina.

Skoog e Miller (1955) inocularam medula de tabaco em meio de cultura (A) e balanos de uma auxina(cido indolcontendo diferentes concentraes auxina = citocinina actico-AIA) e de uma citocinina (Cinetina-Kin). Em concentraes Formao de calos equimolares destes dois fitorreguladores a resposta foi a induo de calos. Quando as concentraes de AIA eram superiores s de Kin, as culturas formavam razes (B) e quando as concentraes de Kin eram superiores s de AIA a (B) auxina > citocininaestava associada auxina < citocinina resposta morfogentica (C) formao de meristemides que originavam gemas e eixos caulinares. Esta descoberta permitiu o desenvolvimento dos protocolos regenerativos in vitro baseados na organognese nos laboratrios de cultura de tecidos vegetais permitindo assim Formao de razes Formao de brotaes a aplicao tcnicas que viabilizassem os laboratrios de micropropagao.

A inoculao dos explantes ser realizada em cmara de fluxo laminar.

O material permanecer em sala de cultura a 25 2 C com 16 horas de fotoperodo sob intensidade luminosa de aproximadamente 2000 lux, fornecidas por lmpadas fluorescentes branca-frias.

Laboratrio
Sala ou rea de limpeza depsitos de frascos e
desinfestao dos explantes;

Sala de preparo dos meios de cultivo; Sala de transferncia cmara de fluxo laminar; e Sala de cultura local onde os frascos ficam em estantes com iluminao artificial e temperatura controlada. Aps ir para a casa de vegetao.

CULTURA DE TECIDOS
CULTURA DE TECIDOS OU CLULAS EM MEIO NUTRITIVO E ASSPTICO

AGAR MEIO DE CULTURA FITORREGULADORES SOLUES NUTRITIVAS

CULTURA DE CALOS MTODOS DE CULTURA DE TECIDOS CULTURA DE OVRIOS CULTURA DE MERISTEMAS

Estgios vegetativos
Fase 1: colocao do explante no tubo de ensaio; Fase 2: Multiplicao rpida dos explantes; Fase 3: Preparo das plantas a serem levadas ao solo (enraizamento 15 a 30 dias) cmara de nevoeiro (15 dias) viveiro (at completar o
desenvolvimento).

CULTURA DE TECIDOS

Acacia mearnsii (A) Plntula germinada in vitro, aos 30 dias, e (B) explante com cotildones e uma gema apical

CULTURA DE TECIDOS

Explantes de Acacia mearnsii. Meio MS com 1,0 mg l-1 de BA. (A) formao de calo, aos 25 dias de cultivo in vitro e (B) clorose foliar, aos 42 dias

Desafios para Micropropagao

Pesquisa com espcies nativas; Desenvolvimento de novos protocolos; Formao de novos profissionais que dominem a tcnica; Produo de transgnicos; Atingir um nvel de comercializao.