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Testes utilizados em

Diagnstico:
Tcnicas Imunolgicas
e Mtodos de Biologia
Molecular
Profa Alessandra XavierPardini
Disciplina: Imunologia Clnica

Introduo:
Resposta Imunolgica Especfica
- mais elaborada
reconhecimento clonagem (multiplicao de
clulas defesa) ativao celular - processo
complexo
- clulas: ly T e B
atacam especificamente o antgeno- resposta
imunolgica de memria

Sistema imune:
- para a proteo e defesa
- problemas podem ocorrer
Problemas/Disfunes
- AUTOIMUNIDADE
- IMUNODEFICINCIAS
- HIPERSENSIBILIDADE

Hipersensibilidade:
- Reao exagerada, alergia = envolve as IgE, histamina, mastcitos
- Diferentes tipos de alergenos
- Cuidados com o paciente, acompanhamento, afastar o alergeno (no
contato)
-

Testes: RAST (radioimuno) ELISA (enzimtico/dosagem de IgE),

testes cutneos
Autoimunidade:
- A reao ocorre contra o prprio organismo, uma auto agresso,
- Diferentes fatores envolvidos (pr-disposio gentica, reao cruzada
contra o self (prprio), modificao do antgeno; falha na deleo de
antgenos
- Testes: imunofluorescncia indireta (fluorocromos), ELISA (enzimtico)
- Tratamento: imunossupressor, diferentes drogas, exames peridicos

Imunodeficincias:
- Falha da resposta imune, ly T e B (so as mais graves), resposta
inata (menos frequente)
- Diagnstico laboratorial com aplicao de diferentes tcnicas
imunofluorescncia (fluorocromos), ELISA (enzimticos)
- Tratamento: deve-se fazer o acompanhamento do paciente por
exames peridicos, transplante de medula = acompanhamento,
rejeio
- Avaliao constante do paciente para determinao do tratamento
Exemplos: HIV, resposta B, resposta T, resposta B e T (combinada)
Tolerncia Imunolgica:
- Sistema imune torna-se tolerante, independente do estmulo
- Tolerante a um determinado antgeno

Antgenos
- Definio
- Imunogenicidade
- Antigenicidade
- Eptopo
Considerar: reao cruzada, reao inespecfica = aps
ativao Ac de baixa e de alta avidez
Antgenos Naturais
- herdados: eritrocitrios e de Transplante
- Realizar a investigao a fim de se evitar problemas
transfusionais e diminuir a chance de rejeio

Antgenos Naturais
-

ERITROCITRIOS: tipagem de ABO-Rh, pela tcnica de


aglutinao direta

TRANSPLANTE: pela tcnica de ELISA pesquisa do


anticorpo, pela tcnica de PCR pesquisa do DNA
(atravs de bandas) (deve-se observar a
compatibilidade)

Cuidados: controle da de reao, preparo da amostra,


da tcnica = qualidade na manipulao e coleta
Compatibilidade (chega a 30%) em relao ao
transplante considerar o rgo

ANTICORPOS
Stio de
ligao
do Ag

Ca

de
i

Stio de ligao do Ag antgeno


Ca
de
ia

le

pe
sa
d

Fab

Determinante
antignico
(eptopo)

ve

Fc

Molcula de Ac

Regio de
dobradia

Stio de ligao do Ag

smbolo

Anticorpos:
Classe, istipo:
Linfcito B ativado plasmcitos Ig

IgA pesquisada nas secrees (IgA secretora)


IgE aumento em alergias, infeces parasitrias
IgM aumento em fase aguda
IgG memria imunolgica, passa pela placenta
IgD indica a maturao dos ly B

ANTICORPOS MONOCLONAIS

ANTICORPOS MONOCLONAIS

Soro possui um grande nmero de anticorpos capazes de


se ligarem a um antgeno especfico = soro imune
So mensurveis (diferentes diluies, de acordo com a
tcnica)
Tentativa de se produzir um anticorpo especfico
para um determinado eptopo = tecnologia dos
anticorpos monoclonais
Anticorpos monoclonais: os anticorpos do preparado
contm apenas anticorpos vindos de um mesmo clone de
linfcito B, isto , vindos de linfcitos com a mesma
especificidade
Aumento da especificidade
Grande aplicao prtica
Exemplos: pesquisa de antgenos hepatite B (AgHBs,
AgHBe, AgHBc) (HIV) (antgenos em tecidos VHC),
antgenos tumorais, antgenos de HLA (transplantes),
linhagem linfocitria (CD4+, CD8+ = acompanhamento
paciente HIV+ tcnica de Citometria de Fluxo ou FACS)

APLICAO PRTICA DO ESTUDO DE


ANTICORPOS E ANTGENOS
Imunizao Passiva (Soros)

Imunizao Ativa

So anticorpos pr-formados

(Antgenos preparados)

Soroterapia

- O paciente recebe o antgeno


que estimula a produo
da resposta imune
(mediada por anticorpos
ou por clulas) pelo
prprio paciente

- Ac heterlogos cavalos e
coelhos, Ac homlogos seres humanos, Ac
monoclonais
- Primeira forma de terapia
utilizada
Imunidade temporria
NO gera memria
imunolgica

Imunidade duradoura
GERA memria imunolgica
(verificar para cada
vacina/varivel)

APLICAO DA IMUNOLOGIA CLNICA


Consideraes:
- Conhecer o Ag e o Ac = caracterizao
- Aplicao do teste sorolgico limiar de reatividade
(cut-of)
- Parmetro sorolgico banco de sangue, laboratrio
de anlises clnicas
- Sensibilidade
- Especificidade
- Falso-positivo / reao cruzada
- Falso-negativo /janela sorolgica

DETERMINO DO LIMIAR DE
REATIVIDADE

A Limiar de mxima sensibilidade - triagem


B Limiar com mximas sensibilidade e especificidade
estudos epidemiolgicos
C Limiar de mxima especificidade diagnstico

Introduo
- Os testes sorolgicos ou imunoensaios so tcnicas
para a deteco de antgenos, anticorpos ou
substncias que desempenhem papel de antgenos
- drogas, hormnios, cidos nuclicos
-

Utilizam reagentes no marcados (precipitao,


aglutinao, floculao e complemento)
ou
reagentes
marcados
(fluorescncia,
radioimunoensaio, imunoenzimticos)

- Cada tcnica apresenta vantagens, desvantagens,


aplicao especfica
- Podem ser manuais ou semi ou totalmente
automatizadas

Anticorpos monoclonais

Antgenos recombinantes = maior desenvolvimento

Mtodos:
- aperfeioamento, consolidao do que j existe,
tecnologias emergentes, melhora da sensibilidade,
confiabilidade no resultado, execuo mais simples e
adaptveis a automao
- mtodos multiparamtricos: desafio de deteco de
substncias diferentes simunltneamente

- Os testes sorolgicos tm se tornado cada vez mais


refinados e de execuo simples, porm, para se
garantir a qualidade dos resultados necessrio
controle rigoroso
-

Tcnicas cuidadosamente padronizadas (estudo de


populao, limiar de reatividade) = temperatura,
pH, tempo de incubao, ttulos, conjugados

As metas para o laboratrio clnico devem


melhorar a disponibilidade, exatido e preciso
dos testes clnicos, garantir a interpretao correta
dos resultados

Controle de Qualidade testes de mxima


sensibilidade, mxima especificidade

TCNICAS COM
REAGENTES MARCADOS

Tcnicas de Reagentes Marcados


Alta sensibilidade
Boa especificidade
Direta deteco de Ag
Indireta deteco de Ac
Competio amostra compete com reagente marcado
Custo mais alto produo dos reagentes
Permitem automao completa ou no
Permite detectar Ac de uma classe especfica que sejam
especficos para um determinado Ag
Reagente marcado - Ag ou Ac
Sistema heterogneo lavagem retira reagente no
ligado

Reagente Marcado
Marcao no modifica interao Ag-Ac
Alto custo
Permite deteco de classes especficas de Ac para um
determinado Ag
Tipo de marcador determina nome do teste
MARCADOR
Radioistopo - RADIOIMUNOENSAIO
Fluorocromo - IMUNOFLUORESCNCIA
Enzima - ELISA, IMUNO-DOT, WESTERN BLOT

Radioimunoensaio
- Primeira tcnica com reagente marcado
- desenvolvido em 1956 deteco de Ac antiinsulina em pacientes tratados com o hormnio
- radioistopos - I125 ou I131 ligao a resduos de
tirosina em protenas
- vantagens: quantitativo, rapidez, preciso, limiar
de deteco em nano ou picogramas
- desvantagens: alto custo do teste, vida mdia
dos reagentes e risco operacional radiostopos
- Uso: Ag e Ac, marcadores tumorais, hormnios

Princpio
quantidade de reagente marcado (radioativo) quantifica o
Ag ou Ac no marcado presente na amostra atravs de
ligao especfica
medida da resposta - contagem radioativa - tipo de
radiao emitida
- radiaes e - contador de cintilao
- radiao - contador gama de cristal slido
Realizado em 3 estgios
Estgio 1 construo da curva de calibrao diluio seriada
do padro
Estgio 2 interpolao dos resultados
Estgio 3 controle de qualidade (amostras com [ ] conhecida)

interferente: frao no ligada


Deve-se realizar a remoo da frao no ligada ou
adotar sistema com fase slida
- Fase slida matrizes particuladas (celulose e
agarose) ou superfcie contnua (tubos, discos e
placas)
Ac +
traador +
Ag da
amostra

PEG

carbono

Tipos de Radioimunoensaio

Contador de radiao gama

cintiladores

Imunofluorescncia
- Ac + fluorocromos - reatividade especfica com o
Ag
Excitao (nm)
Fluorescena FTIC
495
Texas Red
595
R-ficoeritrina
565

Emisso (nm)
524
620
574

desvantagens: custo do equipamento,


sensibilidade limitada, dificuldade de automao
vantagens: especfica e reprodutvel
tipos direta, indireta e citometria de fluxo

REAGENTES NECESSRIOS

Ac marcados alta especificidade poli ou monoclonais

Ag ou amostras fixas em lmina de vidro

Glicerina alcalina pH 8,5 montagem da com lamnulas


melhoram a intensidade da emisso de fluorescncia

Azul de Evans ou vermelho Congo corantes de fundo


melhoram a visualizao da fluorescncia

Lmina de slica no fluorescente e de espessura mnima

Microscpio de imunofluorescncia
com epiluminao
cmera
Fonte de luz
branca
Fluorescncia
emitida

Filtro de
emisso
Filtro de excitao

Fibra ptica
lmina

Fibra
ptica

IMUNOFLUORESCNCIA
DIRETA

Conjugado - Ac marcado com fluorocromo

Vantagens: alta sensibilidade e especificidade, possibilidade


de localizar componentes intracelulares com fluorocromos
contrastantes

Desvantagens: um conjugado para cada Ag

Uso: imunohistoqumica doenas renais e de pele


Conjugado
fluorescente

clula

IMUNOFLUORESCNCIA INDIRETA
Conjugado Ac antiimunoglobulina especfico classes
Diluies seriadas ttulo de Ac mxima diluio
onde h fluorescncia
Vantagens: sensvel, especfica, reprodutvel , fcil,
padronizada, mesmo conjugado determina Ac
produzidos em diferentes doenas
Desvantagens: custo do microscpio, subjetividade na
leitura e dificuldade de automao
Uso: deteco de Ac para Treponema pallidum (FTAABS), Toxoplasma gondii, vrus da rubola,
citomegalovrus, vrus herpes simples, Trypanosoma
cruzi, Plasmodium falciparum, auto-Ac.

IFI PESQUISA DE ANTICORPO


Anticorp
o

Antgen
o

Reao
primria

lavage
m
Conjugado Anticorpo
FITC

Reao
secundria

lavage
m

Microscpio de
fluorescncia

CITOMETRIA DE FLUXO
PRINCPIO: anlise individual e simultnea de componentes
celulares atravs da medio do desvio de luz incidente sobre
uma clula e de sinais fluorescentes emitidos pela mesma
Vantagens: permite deteco do tamanho relativo da clula, sua
granulao e de 2 a 7 emisses fluorescentes diferentes em
milhares de clulas por segundo
Desvantagens: alto custo, necessidade de treinamento
Vrios fluorocromos
Uso: imunofenotipagem de linfcitos do sangue perifrico de
pacientes infectados pelo HIV, diagnstico e prognstico de
leucemias, tamanho celular, granulosidade
Tambm chamada de FACS (fluoresecent-activated cell sorter)

Suspenso
de mistura
de clulas

Conjugado
fluorescente

Feixe de laser

Detector

Defletor

Clulas nofluorescentes

Clulas
fluorescentes

CITOMETRIA (FACS) PARA HIV

Tcnicas imunoenzimticas
- Ac ou Ag marcados com enzimas conjugado ENZIMA
- elevada especificidade
- fcil de ser obtida na forma purificada
- conjugao a Ag e Ac sem interferncias
- produto de reao com substrato fcil de ser
quantificado, mesmo com pequenas quantidades de
enzima
- estvel
- custo acessvel
- vrios tipos fosfatase alcalina, peroxidase
- determina o tipo de substrato

SUBSTRATO CROMOGNICO
- ao serem consumidos por enzimas geram produtos
coloridos solveis (ELISA) ou insolveis (Western
blotting)
- Quantificao do produto espectrofotmetro, cor
visual
ou comparao com padro
- depende do tipo da enzima utilizada
Substrato

Produto
colorido
solvel ou
insolvel

PEROXIDASE
- substrato H2O2 ligado a um cromgeno
- cromgeno com produto solvel - OPD ou TMB
- cromgeno com produto insolvel - DAB ou 4-cloro-1-naftol
FOSFATASE ALCALINA
- cromgeno com produto solvel - NPP
- cromgeno com produto insolvel BCIP ou NBT

enzima

substrato

cromgeno

cor

nm

Peroxidase

H2O2

OPD, TMB
DAB, 4CN

laranja, azul
marrom, violeta

492

P-NFF
5-B-4-C-3-IF

amarelo
lils

450

Fosfatase
alcalina

Ensaio heterogneo
- etapa de lavagem retira reagente marcado no
ligado a fase slida

FASE SLIDA
- conhecido como suporte
- tubos, microplacas, micropartculas ou tiras
- partculas de agarose, poliacrilamida, dextran,
poliestireno
- micropartculas lavagem decantao,
centrifugao, adsoro em fibra de vidro ou captura
- tipos: ELISA, dot ELISA, IMUNNOBLOT

ELISA
- capaz de detectar pequenas concentraes de
Ag e Ac
- reagente ligado a uma enzima
- imobilizao
ploiestireno

em

fase

slida

placa

de

Vantagens:
maior
sensibilidade
e
especificidade, rapidez, baixo custo e adaptao
a diferentes graus de automao
- tipos: direta,
competio

indireta,

de

captura

de

- Uso: deteco de Ac para diversas doenas e


Ag como partculas virais, hormnios, protenas

Resultado
visual (qualitativo)
densidade ptica (DO)
(quantificao / espectrofotmetro)
Limiar de reatividade (cut-off)
Titulao (diluio em srie)
Absorbncia
Unidade padro (absorbncia transformada em
unidade)

ELISA indireto
Vantagens: nico conjugado para vrios sistemas
Uso: deteco de Ac de classes determinadas de acordo
com Ag que sensibilizou a placa

Lavadora de
microplacas

Leitora de
microplacas
acoplada a
computador

Western Blotting
identificao de protenas reconhecidas por Ac
separao das protenas - PM - eletroforese em gel
de poliacrilamida
transferncia eletrofortica - nitrocelulose
incubao com amostras - presena
especficos - complexo formado conjugado

de

Visualizao - cromgeno - precipitado colorido


- teste confirmatrio

Ac

Western blotting
preparao do gel (concentrao poliacrilamida/gradiente)
SDS (detergente aninico/confere carga negativa)
migrao: plo - plo +
preparo da amostra (solubilizao das protenas)
tampo corrida
voltagem/amperagem
transferncia (semi-seco; over-night)
membrana (nitrocelulose; PVDF)

Mtodos de Biologia Molecular


Considerar:
Avanos na rea de Biologia Molecular
Identificao de uma seqencia especfica de DNA ou
RNA para diagnstico
Mtodo rpido e eficiente para amplificao de
seqencias especficas a partir de uma mistura
complexa de seqencias genmicas ou cDNA

Nos ltimos 30 anos o mundo vem


testemunhando uma revoluo biolgica
de dimenses nunca antes vista.
Processos em que a natureza poderia
levar centenas de milhares de anos so
agora realizados rapidamente com o
auxilio da engenharia gentica e da
biologia
molecular.
Essas transformaes induzem
reestruturaes
importantes nas reas da agricultura, medicina,
farmcia, produo animal, meio ambiente, entre outras.
Dentro deste contexto, a biotecnologia se destaca como
uma das atividades cientficas, econmicas e
tecnolgicas mais promissoras do prximo sculo.

Estrutura do DNA
- O material gentico de toda a vida neste planeta formado por apenas
seis componentes.
Acido Desoxirribonucleico (ADN, DNA):
- Contm as instrues genticas
-

Construo de protenas e RNA

Componentes so: uma molcula de acar (desoxirribose), um grupamento no


fosfato e quatro bases nitrogenadas diferentes: adenina (A), guanina (G),
citosina (C) e timina (T).
Adenina e Guanina so purinas / Citosina e Timina so pirimidinas

Adenina liga-se com Timina (A com T) e Guanina liga-se com Citosina (G com C)

A unidade essencial que forma a molcula do DNA chamada nucleotdeo que


mais precisamente, desoxinucleotdeo.
Transmisso de caractersticas hereditrias

No RNA h uma substituio de Timina por Uracila (U)

Importante:
-

As instrues codificadas nas sequncias de bases nitrogenadas do DNA constituinte dos genes
so transcritas para molculas de RNA, e destas, traduzidas em sequncias de aminocidos das
protenas.

RNA ribossmico, que constitue, juntamente com certas protenas, minsculos grnulos
citoplasmaticos denominados ribossomos, capazes de unir os aminocidos entre si e formar as
cadeias polipeptdicas que constituem as protenas.

RNA transportador, tm por funo capturar aminocidos livres nas clula, levando-os
at os ribossomos, onde eles se unem para formar a molcula polipeptdica. Cada RNAt
apresenta, em uma determinada regio de sua molcula, uma trinca de bases denominada
anticdon. O aminocido transportado por um RNAt depende do seu anticdon. Por exemplo,
molculas de RNAt com anticdon AAA ou AAG transportam sempre o aminocido fenilalanina;
os RNAt com anticdons CCA, CCG, CCU ou CCC transportam somente glicina.
RNA mensageiro, so cpias dos genes codificadores de protenas e contm, em sua
sequncia de bases nitrogenadas, as instrues sobre a ordem em que os aminocidos devem
ser unidos para produzir determinado polipeptdeo.

CONCLUSO,O QUE O DNA?


O DNA carrega todas as informaes de suas caractersticas
fsicas que, essencialmente, so determinadas pelas protenas.
Dessa forma, o DNA contm as instrues para fazer uma
protena.
No DNA, cada protena codificada por um gene (uma seqncia
especfica de nucleotdeos do DNA que especificam como uma
nica protena ser feita).
Especificamente, a ordem dos nucleotdeos dentro de um gene
determina a ordem e os tipos dos aminocidos que devem ser
colocados juntos para formar uma protena.
A seqncia especfica dos aminocidos na cadeia o que
diferencia uma protena de outra. Essa seqncia codificada
no DNA, onde um gene se codifica para uma protena.

Histrico
- 1983- Kary Mullis- Prmio Nobel de Qumica em 1993.
- DNA polimerase - ocorre naturalmente em
organismos
vivos, onde tem a funo de duplicar o DNA durante a
diviso celular. A polimerase se liga a um DNA fita
simples
riando uma fita de DNA complementar.
- Na poca ainda no havia sido descoberta uma DNA
polimerase termoestvel. Processo inicial de Mullis era
ineficiente, necessitava de muito tempo, ateno
constante e grandes quantidades de DNA polimerase.
- O processo foi melhorado

PCR (Reao em
Cadeia da
Polimerase)
uma tcnica que
amplifica uma
sequncia especfica
de DNA, como
objetivo de torn-la
abundante e
disponvel para
diversas tcnicas de
biologia molecular.
tcnica in vitro
replicao do DNA

Qualquer seqncia alvo de DNA


pode ser amplificada por PCR
A localizao da seqncia alvo
feita pelos primers
Oligonucleotdeos com 20-24 bases
so usualmente seletivos o suficiente
para localizar um stio nico em um
genoma de alta complexidade
O pareamento dos primers com a
seqncia alvo se faz pelo
estabelecimento de pontes de
hidrognio, obedecendo o
pareamento convencional descrito
por Watson e Crick

Alternncia de temperatura
Tcnica
1. Desnaturao:
94C 96C
Separa a dupla fita do template
em duas fitas simples
2. Pareamento:
37C 65C
Primers ligam-se em locais
especficos do DNA molde
3. Extenso:
72C
DNA polimerase usa os dNTPs
adicionando-os a nova fita de
acordo com a regra de
pareamento polimerizao.

LEITURA EM GEL DE AGAROSE


ANLISE DE BANDAS ANLISE
DOS PRODUTOS DE PCR

LEITURA EM GEL DE AGAROSE


ANLISE DE BANDAS ANLISE
DOS PRODUTOS DE PCR

Aplicaes da Biologia Molecular:


Diagnstico de doenas congnitas
Deteco de infeces
Monitorizao de terapia contra o cncer
Sequencia de DNA
Forense
Transplante resposta de HLA (antgenos naturais)
triagem de doadores, verificar padro de bandas

Atualmente,
NAT Tcnica de cido Nuclico
- Bio-Manguinhos: para a rede pblica de sade como tambm
o prprio Ministrio da Sade (MS)
-KIT NAT HIV/HCV
-Nome

Comercial : Kit NAT HIV/HCV Bio-Manguinhos


-Apresentao : Material fornecido para 96 reaes.
-Descrio da finalidade ou uso do produto: Teste para
deteco de cido Nuclico de HIV (Vrus da Imunodeficincia
Adquirida) e HCV (Vrus da hepatite C) em servios de
hemoterapia, visando diminuir o risco transfusional causado
por esses agentes.
(fonte: relatrio 26 MS) (material j copiado aulas HIV/AIDS e Hepatites)

CLONAGEM
A clonagem a imitao perfeita de um mecanismo de
reproduo assexuada ato multiplicador realizado por
organismos unicelulares ou portadores de poucas
clulas, sensveis a qualquer mudana no meio
ambiente.
Este mtodo reprodutor gera seres geneticamente
idnticos matriz utilizada.

Um clone uma
cpia exata de uma
planta ou animal,
com todas as
caractersticas do
original, inclusive os
defeitos.

CLONAGEM
1. DNA molde

para amplificao

tamanho da molcula

2. Escolha da vetor

replicao
transcrio
expresso

Plasmdeo, fago

3. Escolha da clula hospedeira

Bactria; Levedura; Inseto; Plantas; Animal

Teste de Paternidade - DNA


Aplicao: Investigar vnculo gentico envolvendo filho,
suposto pai e/ou suposta me de um indivduo. O DNA
(cido desoxirribonuclico) uma substncia que
transmite as caractersticas hereditrias dos pais para
os filhos. A maioria das informaes genticas
idntica em todos os indivduos da mesma espcie.
Existem, entretanto, regies repetitivas polimrficas, as
STRs (short tandem repeat), que se constituem em
marcadores genticos utilizados no teste de
paternidade. Entre pais e filhos h semelhanas nas
regies polimrficas. Atravs da anlise comparativa
destas regies do DNA de um indivduo com o do
suposto pai ou me possvel estabelecer o vnculo.

PROTENAS E PEPTDEOS
RECOMBINANTES
O processo de obteno destas substncias to rgido
quanto qualquer outra molcula medicamentosa. Alm
dos bioensaios para verificar sua atividade biolgica, so
tambm verificados seus padres de qualidade fsicoqumicos e microbiolgicos garantindo segurana,
eficcia e estabilidade.
Em relao aos efeitos txicos, h uma grande
preocupao em averiguar se estas biomolculas
possuem aes imunotxicas, j que podem ser
reconhecidas pelo sistema imunolgico como invasores.

Terapia Gnica
A possibilidade de substituir genes ausentes
ou defeituosos, por outra cpia normal dentro
de uma clula somtica do organismo,
demonstra uma manobra fantstica no
sentido de eliminar as doenas humanas.
Porm a maior limitao desta tcnica ainda est vinculada
ao vetor que entrega o gene teraputico.
O atual objetivo das indstrias farmacuticas a procura
por novos vetores, principalmente no virais.
Alguns aspectos do ponto de vista farmacutico como:
biodisponibilidade, formas e formulaes farmacuticas
ideais, classificao teraputica, farmacocintica e
farmacodinmica, ainda so questes que nem sequer
foram mencionadas de forma concreta.

Agradecimentos
Profa Adelaide Vaz pelo material gentilmente cedido
Bibliografia
Pesquisa na internet (maio 2011)
ABBAS A. K et all., Imunologia Bsica Funes e
Distrbios do Sistema Imune, ed revinter, 2003.
CALICH V & VAZ C., Imunologia, ed Revinter, 2001.
Pesquisa na internet em novembro 2012
Pesquisa na internet em novembro 2013