UNIVERSIDADE CATÓLICA DE MOÇAMBIQUE

Laboratório de Referência de Tuberculose- Beira

Tema:Genexpert

Discente:
Tutores:
Celestino Paessa Dr. Zamite Chau
Dr. Pirângelo Reno

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 INTRODUÇÃO

É um sistema de instrumentos genexpert que realiza o ensaio

expert MTB/RIF ultra.

Consiste num teste de diagnóstico in vitro, qualitativo de PCR em

tempo real destinado a detecção do DNA do MTB, e da mutação
do gene rpob em amostras de expectoração.(Durovni et al,2014).

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 Objectivos:

Objectivo Geral:

 Descrever a técnica de genexpert para a detecção do MTB e

resistência a RIF

Objectivos Específicos:

 Conceito
 Descrever a constituição do genexpert

 Identificar amostras usadas

 Explicar o procedimento de uso e seu princípio

 Mencionar os resultados e sua interpretação

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CONCEITO:

O GeneXpert MTB/RIF é um equipamento fabricado pela

Cepheid, para realizar testes de diagnóstico in vitro qualitativo
usando o método de PCR em tempo real passando pela
(purificação, concentração, amplificação e detecção ao mesmo
tempo), faz a lise ultra-sónica integrada de células para a
libertação do ADN ( Misau ,2016)

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PRINCÍPIO DO PROCEDIMENTO GENEXPERT MTB/RIF:

Os sistemas do instrumento geneXpert consistem na amplificação dos ácidos

nucleícos e detencção de sequências-alvos em amostras simples ou
complexas utilizando o PCR em tempo real (manual de utilizador cepheid
2018).

Função:

O diagnóstico rápido da tuberculose através da detecção do ADN das

micobactérias do complexo Mycobacterium tuberculosis em amostras de
expectoração espontâneas/ induzidas e de outros fluídos corporais.

Detectar resistência a rifampicina através da identificação de mutações em 5

sondas sobrepostas através do gene rpoB (Misau, 2016 ).

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 UTILIDADE:

Profissionais de saúde;
 Pacientes com resultados de baciloscopia negativo e sinais
clínicos da doença a 6 meses;
 Pacientes coinfectados;
 Indicar a resitência a Rifampicina(Misau,2016).

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CONSTITUIÇÃO:
Um aparelho Genexpert
 Computador

 Leitor de código de barras

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AMOSTRAS:

Existem dois tipos de amostras: Pulmonares e

Extrapulmonares.

Pulmonares: Expectoração mucóide ou mucopurulenta são as

ideais para o GeneXpert.
Extrapulmonares: LCR, líquido pleural, ascítico, urina, biopsias
de nódulos linfáticos e outros tecidos.
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 AMOSTRAS INADEQUADAS:

As amostras que contem alimentos ou outras partículas não

são adequadas, pois o teste poderá não funcionar de forma
correcta.
As amostras com sangue podem causar resultados inválidos e
a realização do GeneXpert em amostras de fezes e sangue não
são recomendadas dada a falta de dados sobre sensibilidade da
técnica nesse material biológico (Misau 2016).

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 ESTABILIDADE E ARMAZENAMENTO DAS AMOSTRAS:

A expectoração directa ou processada : 2-8oC durante 10 dias no máximo, caso

não haja condições de refrigeração as amostras podem ser armazenadas no

máximo até 3 dias a 25oC e de seguida refrigerada de 2-8oC, por uma duração

máxima de 7 dias.

As amostras com reagente Xpert MTB/RIF: 2-8oC no máximo de 12 horas,

caso a refrigeração não seja possível, processe amostra dentro de 5 horas,

verificando no equipamento o registo de hora de processamento técnico.

Em caso de falha de corrente eléctrica, armazene dentro de 4 horas após

adicção da amostra no cartucho, caso tenham passado mais de 4 horas, descarte

o cartucho e inocule em um novo ( Misau,2016 ).

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 O PROCEDIMENTO PARA REALIZAÇÃO DO TESTE:

Dois volumes de reagente são adicionados a cada volume de

expectoração, a mistura é agitada e incubada à temperatura
ambiente, durante 15 minutos e depois agitada novamente.

Em seguida, essa mistura de 2ml é transferida para o cartucho de

teste, que é então carregado no instrumento. Todos os passos
subsequentes ocorrem automaticamente (Boehme, 2010).

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 FASES DA PCR:

Desnaturação do DNA (95°c)

Anelamento: Ligação filamento-primers (55°c)

Início de replicação, adicção das bases pela taq-polimerase

(72°c)

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 RESULTADOS:

Não detectado
MTB detectado e resistência a RIF detectado
MTB detectado e resistência a RIF não detectado
MTB detectado e resistência a RIF indeterminado
Resultado inválido

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CONCLUSÃO:

GeneXpert é um teste molecular que usa o PCR em tempo real

destinado ao diagnóstico da Mycobacteriu tuberculosis e testagem da
resistência a rifampicina através do seu gene mutante rpob.
Fases ou etapas da PCR:
Desnaturação do DNA (95°c)
Anelamento: Ligação filamento-primers (55°c)
Início de replicação, adicção das bases pela taq-polimerase (72°c)

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BIBLIOGRAFIA:
WHO/HTM/TB/2008.394. Anti-tuberculosis resistance in
the world: fourth global report
WHO report (2008).
http://www.who.int/tb/publications/global_report/2008.

Boehme, C. N. (2010). Rapid molecular detection of

tuberculosis and rifampicin resistance. New England Jornal
of Medicine, 363(11): 1005 -15.
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