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Controle do ciclo celular Diviso celular Apoptose Proliferao e crescimento celular

Molecular Biology of the Cell Alberts et al., 2002 quarta edio

Ciclo celular -fases e componentes Controle do ciclo celular -entrada em S -entrada em M -complexo APC -sada de G1 -bloqueio por p53 Diviso celular -mitose e citocinese Apoptose Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

Ciclo celular

Ciclo celular
-mecanismo que permite a reproduo dos organismos vivos -unicelulares, resulta na gerao de um novo organismo -multicelulares sequncias longas e complexas de ciclos celulares levam gerao de um novo organismo -Reposio de clulas mortas -Um conjunto mnimo de processos comum a todos os ciclos celulares -Este conjunto permite a passagem da informao gentica prxima gerao de clulas -duplicao completa do DNA -segregao do DNA as duas clulas filhas -Eucariotos: sistema do controle do ciclo celular

fases e componentes

Fases S e M do ciclo celular


-Intrfase, duplicao do DNA e dos centrolos -Fase M, segregao dos cromossomos e diviso celular

fases e componentes

Fases G1 e G2 do ciclo celular

-Fases Gap, G1 e G2 -G1, S e G2 constituem a intrfase (23/24 clula humana tpica) -nas fases gap ocorre o monitoramento das condies intra e extra celulares

fases e componentes

Componentes do sistema de controle do ciclo celular

-o sistema de controle do ciclo celular compreende um conjunto distinto de protenas -checkpoints, pontos de parada no qual o ciclo celular pode ser interrompido -participao de sinais extra e intracelulares

fases e componentes

Quinases dependentes de ciclinas (Cdks)

-a atividade das Cdks oscila durante o ciclo celular -Cdks fosforilam protenas intracelulares que por sua vez iniciam ou regulam eventos do ciclo celular -ciclinas controlam a atividade das Cdks e oscilam durante o ciclo celular

fases e componentes

Existem quatro classes de ciclinas


-classificao definida pelo estgio do ciclo celular em que a ciclina atua -G1/S, compromete a clula em replicar o DNA -S incio da replicao -M promoo dos eventos mitticos -G1, passagem atravs do start

-A atividade das Cdks controlada tambm por protenas ativadoras e inibidoras de sua atividade, pela protelise das ciclinas e pelos nveis de transcrio e sntese de ciclinas

Ciclo celular -fases e componentes Controle do ciclo celular -entrada em S -entrada em M -complexo APC -sada de G1 -bloqueio por p53 Diviso celular -mitose e citocinese Apoptose Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

entrada em S

Fatores presentes em ncleos na fase S

- (1970 / clulas de mamfero em cultura) fator presente em ncleos em S que era capaz de disparar a replicao em ncleos G1 mas no em G2 -G1 apresentava competncia -G2 deveria passar pela mitose para ser replicada novamente -atividade de S-Cdk

entrada em S

Origens de repicao so ativadas uma nica vez por ciclo celular


-Ativao de S-Cdk leva fosforilao de ORC (junto com outra quinase) e dispara replicao do DNA -alm disso fosforila cdc6, que degradada (proteossomo) e fosforila Mcm que exportada -efeito: evita re-replicao -M-Cdks mantm cdc6 e Mcms intativas -ao final da mitose a atividade de Cdk vai a zero e ocorre a defosforilao de cdc6 e Mcm que ligam-se novamente s ORCs

entrada em M

A ativao de complexos ciclinas M-Cdk disparam a entrada em mitose


-aumento dos nveis de ciclina M em G2/M = acmulo de M-Cdk -Wee 1 quinase mantm o M-Cdk inativo, como resultado no final de G2 h altos nveis de M-Cdk fosforilados e inativos -ativao via cdc25 (fosfatase), que ativada pela Polo quinase e pelo prprio MCdk -M-Cdk fosforila e inibe Wee1

complexo APC

O complexo APC controla a separao das cromtides irms


-M-Cdk prepara as clulas para mitose, a separao das cromtides irms via APC (anaphase promoting complex) inibida at que todos os cromossomos estejam ligados ao fuso mittico -APC promove a ubiquitilao de M-Cdk, o que leva a sada de mitose (defosforilao) -cdc20, nveis maiores de transcrio prximo mitose e fosforilao do APC (maior afinidade cdc20-APC)

sada de G1

Efeitos do complexo G1-Cdk


-A atividade de Cdk baixa em G1 (estgio de crescimento celular e resposta a sinais extracelulares) -Em resposta a sinais extracelulares ocorre o acmulo de G1-Cdk -fosforilao de Rb, E2F ativado -resultados: ativao da transcrio de E2F / transcrio de ciclinas G1/S e S (que por sua vez fosforilam Rb e liberam mais E2F) -E2F um fator de transcrio que regula uma srie de genes que participam da entrada em S

bloqueio por p53

Bloqueio da progresso do ciclo celular por p53

-pontos de verificao da integridade do DNA no ciclo celular: em G1 tardio e em G2 -o bloqueio em G1 evita a entrada em S atravs da inibio da atividade de G1/S-Cdk e de S-Cdk -o bloqueio em G2 evita a fofsforilao da fosfatase cdc25, que resulta em no ativao da M-Cdk -mutaes em p53 resultam em cncer (50%)

Controle do ciclo celular

Esquema do sistema de controle do ciclo celular

Ciclo celular -fases e componentes Controle do ciclo celular -entrada em S -entrada em M -complexo APC -sada de G1 -bloqueio por p53 Diviso celular -mitose e citocinese Apoptose Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

Diviso celular

Diviso celular

-Fase M: mitose e citocinese -M-Cdks promovem condensao dos cromossomos, quebra do envelope nuclear, reorganizao do RE e Golgi, perda de adeso e reorganizao do citoesqueleto

Diviso celular

Coesinas e condensinas
-cromtides irms mantidas associadas por coesinas (fase S), depositadas a medida que o cromossomo replicado -degradao das coesinas por separase (ativao via APC) -condensao dos cromossomos depende das condensinas (ativadas por M-Cdk)
Cromossomo humano / anti protena do complexo condensina a) Esqueleto de condensina em cromossomo mittico tpico b) cromossomos em metfase, esqueleto ainda mais condensado

Diviso celular

O citoesqueleto efetua a mitose e a citocinese


-fuso mittico bipolar (microtbulos e protenas associadas, incluindo protenas motoras associadas a microtbulos), promove a separao dos cromossomos replicados e os posiciona nas clulas filhas -anel contrtil (clulas animal), anel contrtil de actina e miosina formado no equador da clula

Diviso celular

O ciclo de duplicao do centrossomo


-na intrfase (clulas animal) tanto o DNA como o centrossomos so replicados (os centrossomos permanecem associados em complexo nico) -na mitose o complexo divide-se e cada centrossomo origina um ster, que migram para polos opostos -na prometfase, aps a quebra do envelope nuclear, o fuso captura os cromossomos e no final da mitose os separa -cada clula filha recebe um centrossomo com os cromossomos associados

clula de mamfero em cultura

-mitose e citocinese

A intrfase e os principais estgios da fase M

-mitose e citocinese

A mitose em clula animal

linhagem de clulas de pulmo de lagarto

-mitose e citocinese

Prfase e prometfase
-DNA replicado e cromtides irms associadas, cromossomos condensados -no citoplasma os centrossomos j replicados e separados dando incio montagem do fuso

-quebra do envelope nuclear -cinetcoros dos cromossomos podem associar-se aos microtbulos do fuso

-mitose e citocinese

Metfase e anfase
-alinhamento dos cromossomos no equador do fuso -as cromtides irms ficam associadas plos opostos do fuso via cinetcoros

-separao sincrnica dos cromossomos filhos, cada um dos cromossomos levado para um dos plos -microtbulos associados aos cinetcoros encurtam e os plos do fuso afastam-se, ambos mecanismos contribuem para a separao dos cromossomos

-mitose e citocinese

Telfase e citocinese
-os cromossomos filhos chegam aos plos e descondensam -novo envelope nuclear montado -incio da diviso do citoplasma (anel contrtil)

-anel contrtil de actina e miosina divide o citoplasma em dois, originando duas clulas filhas, cada uma com um ncleo

-mitose e citocinese

Vdeo 18.2 Diviso celular em clula animal em cultura

-mitose e citocinese

Vdeo 18.4 Reconstruo 3-D de fuso mittico em clula humana

Ciclo celular -fases e componentes Controle do ciclo celular -entrada em S -entrada em M -complexo APC -sada de G1 -bloqueio por p53 Diviso celular -mitose e citocinese Apoptose Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

Apoptose

Apoptose
-o nmero de clulas de um organismo multicelular deve ser controlado -diviso celular X morte celular -clulas que no so mais necessrias cometem suicdio, morte celular programada ou apoptose -a quantidade de apoptose muito grande, no SN em formao cerca de metade das clulas morrem, no adulto bilhes de clulas na medula e no intestino morrem a cada hora -no indivduo adulto a morte celular programada est em equilbrio com a diviso celular -fgado de rato, remoo e tratamento com fenobarbital
pata de embrio de camundongo

Apoptose

Necrose X Apoptose
-necrose, causa reposta inflamatria -apoptose, morte limpa, a clula encolhe e condensa, o citoesquleto colapsa, o envelope nuclear desmontado e o DNA desfragmentado, a superfcie celular alterada (macrfago) e os componentes celulares so reciclados

necrose

apoptose

apoptose

Apoptose

Caspases

-caspases, sintetizadas na forma de pr-caspases -protelise necessria para a ativao -a ativao sequencial -alvos finais (ex. laminas, DNAse) -todas as clulas esto prontas para morrer -a ativao irreversvel

Apoptose

Via extrnseca de ativao da apoptose

-linfcitos produzem Fas -a clula alvo produz o receptor de Fas (receptor da morte) -protenas adaptadoras promovem a agregao e ativao das procaspases

Apoptose

Via intrnseca de ativao da apoptose

-liberao de citocromo c -citocromo c liga e ativa a protena adaptadora Apaf-1 -ativao de caspase 9

Apoptose

Vdeo 17.1 Apoptose

Ciclo celular -fases e componentes Controle do ciclo celular -entrada em S -entrada em M -complexo APC -sada de G1 -bloqueio por p53 Diviso celular -mitose e citocinese Apoptose Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose


O tamanho de um organismo ou de um rgo determinado por trs processos fundamentais: -crescimento celular Regulados por programas intracelulares -diviso celular e por molculas sinalizadoras extracelulares -morte celular

Molculas extracelulares: -protenas secretadas -protenas ligadas superfcie celular -componentes da matriz extracelular

3 classes de molculas: -mitgenos (estimulam diviso celular) -fatores de crescimento (estimulam crescimento celular) -fatores de sobrevivncia (supressores de apoptose)

Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

Mitgenos

Organismos unicelulares -diviso celular depende da presena de nutrientes no meio Organismos multicelulares -diviso celular depende da presena de nutrientes no meio e de sinais extracelulares estimulatrios, mitgenos (removem o bloqueio do ciclo celular) PGDF (platelet-derived growth factor, fator de crescimento derivado de plaquetas) -extratos de plaquetas estimulam a proliferao de fibroblastos -PDGF -mais de 50 mitgenos identificados (exs. PDGF, EGF, eritropoietina) -mitgenos estimulam (dependendo das circunstncias e do tipo celular): -diviso celular -crescimento celular -sobrevivncia celular -diferenciao -migrao

Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

Mitgenos estimulam a diviso celular

-mitgenos controlam a entrada no ciclo celular atuando em G1 -ligao com receptores de superfcie -sinalizao intracelular -ativao de Ras-MAP quinase, aumentos de myc -mutaes em Ras, Myc (oncogenes) que levam a maior atividade, resultam em cncer (excesso de crescimento celular e proliferao)

Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

Mecanismos intracelulares de controle da proliferao celular


-fibroblastos humanos normais aps 25-50 ciclos de diviso celular entram em senescncia -encurtamento dos telmeros e perda de protenas associadas aos telmeros - extremidades expostas, dano no DNA, ativao de parada no ciclo celular via p53

Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

Fatores de crescimento

-fatores de crescimento ligam receptores e ativam vias de sinalizao intracelulares -estas vias estimulam o acmulo de protenas e outras macromolculas -Myc (protena regulatria) tambm estimulado nesta via e neste caso aumenta a transcrio de genes que participam do metabolismo e da sntese de macromolcuals -PGDF atua como mitgeno e como fator de crescimento (h sobreposio de parte das vias)

Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

Fatores de sobrevivncia inibem apoptose I


-na ausncia de fatores de sobrevivncia as clulas entram em apoptose -desenvolvimento do sistema nervoso, clulas alvo secretam fatores de sobrevivncia

Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

Fatores de sobrevivncia inibem apoptose I

-inibio de fatores que promovem a apoptose -PKB ativada fosforila Bad e fator de transcrio que promove apoptose -liberao de Bcl-2 e inativao do fator de transcrio -inibio de apoptose

Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

Fatores de sobrevivncia inibem apoptose II

-fosforilao de Hid promove sua inativao -Hid no interage com IAP, que inibe apoptose

Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

Inibio de diviso celular dependente de densidade

-clulas cultivadas in vitro na presena de soro crescem at formarem monocamada -parada no crescimento -adio de meio fresco promove novaonda de proliferao celular -reduo dos nveis locais de mitgenos -no tecido as quantidades de mitgenos, fatores de crescimento e fatores de sobrevivncia so limitadas -as concentraes destes fatores nestes tecidos tm papis importantes na determinao do tamanho e do nmero de clulas

Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

O crescimento e a proliferao celular dependem do ancoramento ao substrato


-fibroblastos em cultura, se em suspenso a taxa de diviso celular baixa

Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

O ancoramento ao substrato gera sinais de crescimento e proliferao celular


-adeses focais -matriz extracelularintegrinas-citoesqueleto de actina -adeses focais, atividade localizada de FAK (focal adhesion kinase) -FAK ativada via integrinas -Fak ativa vias de sinalizao intracelulares que promovem crescimento, sobrevivncia e diviso celular

-fibroblastos em cultura, actina em verde, fosfotirosina em vermelho

Controle da diviso celular, crescimento celular e apoptose

Sinais extracelulares que inibem o crescimento celular, a diviso celular e a sobrevivncia


-membros da famlia TGF-b -bloqueiam o ciclo celular em G1 ou estimulam apoptose -ligao com receptores de superfcie -miostatina (membro da famlia TGF-b) inibe a proliferao de mioblastos (msculo esqueltico) -mutaes na miostatina levam ao aumento do nmero e do tamanho das clulas musculares
Belgian Blue bull