Mica Livro Fundamentos de Bioquimica Ricardo Vieira

Ricardo Vieira
Fundamentos de Bioqumica
Textos didticos Textos didticos
Belm-Par 2003
Apresentao
A bioqumica , sem dvida, uma das cincias mais fascinantes porque desmonta o ser vivo em seus componentes bsicos e tenta explicar o funcionamento ordenado das reaes qumicas que tornam possvel a vida, freqentemente adjetivada como milagre ou fenmeno. Entretanto, o processo qumico muito bem organizado que estabelece toda a existncia da vida em nosso planeta, tem sido desvendado, continuamente, por cientistas do mundo inteiro. Muito j se sabe, porm o desconhecido a essncia do conhecimento humano e a luta para desvend-lo advm da natureza desbravadora da humanidade, que no se furta com explicaes empricas e procura a razo dos fatos ao invs de eterniz-los mitos. Os captulos que se seguem representam a organizao de informaes bsicas para o aprendizado de Bioqumica Humana, resultado do contedo das aulas que ministro h pouco mais de uma dcada. Como tal, possuem um carter estritamente didtico, no dispensando, de forma alguma, a consulta s referncias bibliogrficas sugeridas ao final de cada captulo e outras, existentes na literatura especializada. Entretanto, no se tratam de apostilas repletas de dicas e macetes que tornam o ensino estereotipado. Pelo contrrio, um trabalho realizado com carinho e ateno para facilitar o aprendizado em bioqumica nos cursos de Farmcia, Medicina, Biologia, Biomedicina, Nutrio, Enfermagem, Odontologia e reas afins. O formato eletrnico em arquivos PDF uma alternativa econmica e prtica de acesso aos meus textos originais, contornando dificuldades editoriais prprias de nossa regio. Acima de tudo, este E-book (livro eletrnico) corresponde a um prottipo para uma futura publicao em formato tradicional e, como todo material didtico, estes textos esto em constante atualizao, sendo a sua opinio (informando falhas, sugerindo mudanas etc.) de extrema valia para a realizao de um trabalho cada vez mais completo, possibilitando um retorno positivo para o processo ensinoaprendizagem.
Prof. Ricardo Vieira Universidade Federal do Par Centro de Cincias Biolgicas Laboratrio de Gentica Humana e Mdica Av. Augusto Corra no 1 Guam Belm - Par - CEP: 66.075-900 Fone/Fax: (091) 211-1929 E-mail: jrvieira@ufpa.br HomePage: http://www.fundamentosdebioquimica.hpg.com.br
Belm-Par 2003
Georgete, minha companheira e cmplice. A meus pais, Benedito e Scila Vieira, meus mestres. A meus alunos, meus inspiradores.
Captulo 1 O que estuda a Bioqumica?

estudo da Bioqumica infere um conceito nato de que existe uma qumica da vida, ou ento que h vida pela qumica. Antes que um conceito filosfico ou religioso, a vida, aqui, deve ser tratada como o resultado da maximizao de fatores fsicos e qumicos presentes em um sistema aberto extremamente frgil: a clula. Neste microscpico tubo de ensaio esto os componentes necessrios para que o ser vivo complete o clssico ciclo da vida, ou seja, nascer, crescer, reproduzir e morrer, tudo resultado de um processo natural de desenvolvimento de reaes qumicas tpicas com reagentes, produtos e catalisadores que, quanto melhor as condies timas de reao, melhor a eficcia com que sero executadas. Do ponto de vista qumico, os seres vivos so constitudos de elementos bastante simples e comuns em todo o universo: carbono, hidrognio, nitrognio e oxignio (bases dos compostos orgnicos), alm de uma infinidade de outros elementos presentes em quantidades relativamente menores, mas de funes imprescindveis ao funcionamento celular (p.ex.: ferro, enxofre, clcio, sdio, potssio, cloro, cobalto, magnsio etc.) O agrupamento desses elementos, em molculas com funes distintas, foi um passo longo e decisivo para a afirmao do processo de vida em nosso planeta. O processo de obteno de energia atravs da glicose na ausncia de oxignio, por exemplo, um processo to organizado que ele exatamente o mesmo em todos os seres vivos, diferindo somente na forma como o produto final processado, sendo que a maioria dos seres vivos prossegue com o metabolismo aerbio, porm todos os seres vivos, sem exceo, realizam o metabolismo anaerbio de degradao da glicose. Existe uma relao direta entre a produo de oxignio pelas cianofceas e o surgimento dos seres multicelulares levando a incrvel diversidade de espcies dos dias atu-
ais. Sobre este aspecto, veja o que dizem Alberts, B. et al. (1997).
"Evidncias geolgicas sugerem que houve mais de um bilho de anos de intervalo entre o aparecimento das cianobatrias (primeiros organismos a liberar oxignio como parte do seu metabolismo) e o perodo em que grandes concentraes de oxignio comearam a se acumular na atmosfera. Esse intervalo to grande deveu-se, sobretudo, grande quantidade de ferro solvel existente nos oceanos, que reagia com o oxignio do ar para formar enormes depsitos de xido de ferro."
Certamente, este processo lento de liberao de oxignio como um dejeto indesejvel dos primeiros habitantes de nosso planeta, foi responsvel pelo surgimento de um outro organismo adaptado em consumir este oxignio como comburente de molculas orgnicas liberando, assim, a energia trmica to necessria para a manuteno da vida. Mas, descrever o processo complexo que a vida no tarefa to simples quanto possa parecer. Na verdade desde que o universo surgiu h cerca de 20 bilhes de anos, a vida na Terra tem apresentado mecanismos mpares de reproduo e desenvolvimento que muitas vezes so nicos na natureza e desafiam os conceitos bioqumicos como por exemplo os seres que habitam as fossas abissais vulcnicas do Pacfico, que sobrevivem temperaturas superiores a 120oC; ou os vrus, que no possuem estrutura celular sendo formados, basicamente, apenas por protenas e cidos nuclicos. Um fato comum a todos os seres vivos, porm, a presena de macromolculas exclusivas dos seres vivos (carboidratos, lipdios, protenas, vitaminas e cidos nuclicos) denominadas de biomolculas. Desta forma, a qumica da vida est atrelada a composio bsica de todo ser vivo, uma vez que todos possuem pelo menos dois tipos de biomolculas, como no caso dos vrus. Lavosier e Priestly (final do sculo XVIII), Pasteur, Liebig, Berzelius e Bernard (sculo XIX) foram pioneiros na pesquisa de qual seria a composio dos seres vivos, sendo
Fundamentos de Bioqumica - Captulo 1 - O que Estuda a Bioqumica?
o termo bioqumica introduzido em 1903 pelo qumico alemo Carl Neuberg. Inicialmente, esta nova cincia era denominada qumica fisiolgica ou ento qumica biolgica, tendo a Alemanha, em 1877, publicado a primeira revista oficial desta nova disciplina (Zeitschrift fr Physiologisce Chemile) e, em 1906, a revista norte-americana Journal of Biological Chemistry consagrou-se como importante divulgadora das novas descobertas no campo da bioqumica, sendo editada at hoje. Aps 1920, os Estados Unidos tiveram uma participao decisiva para o crescimento desta nova cincia com a descoberta, isolamento, sntese e descrio do mecanismo de regulao biolgica de incontveis compostos bioqumicos com a utilizao de istopos radiativos como marcadores. Desde 1950, a bioqumica tm-se tornado, cada vez mais, uma das cincias que mais crescem no campo do conhecimento humano tendo papel decisivo na elucidao do mecanismo fisiolgico e patolgico de regulao de vrios compostos bioqumicos de fundamental importncia para a sade do ser humano. Atualmente, os mtodos de diagnstico e tratamento da maioria das doenas, so estudados a partir de uma base bioqumica, revelando as causas, as conseqncias e maneiras de se evitar o incio ou a propagao das mais diversas patologias. Neste captulo, sero apresentadas as principais molculas envolvidas no processo da vida, introduzindo o estudo dos fundamentos de bioqumicas que ser efetuado nos captulos posteriores.
Monera e Protista) possuem mecanismos prprios de organizao celular, de acordo com sua relao com o meio ambiente (as plantas so auttrofas, por exemplo) ou entre si (os Moneras e Protistas so unicelulares), ainda havendo distino quanto organizao das organelas celulares (os moneras so procariotas, e portanto, ao contrrio dos demais, no possuem nenhuma estrutura intracelular de membrana). Apesar das diferenas, contudo, todos os seres vivos apresentam uma dinmica bioqumica celular muitssimo parecida, evidenciando o sucesso evolutivo dos processos experimentados nos bilhes de anos de aperfeioamento. As vias metablicas celulares constituem um emaranhado de reaes qumicas que se superpem, mas, maravilhosamente, no se atropelam e sim se completam formando um complexo e preciso ciclo qumico de consumo de reagentes (em bioqumica denominado de substratos) e formao de produtos, como em uma reao qumica qualquer. A forma de regulao destas reaes levam a uma intricada mecnica metablica tendo ao centro a degradao (catabolismo) e sntese (anabolismo) de biomolculas, Os vrus traduzem um captulo parte no estudo da bioqumica por apresentarem mecanismos nicos de reproduo e desenvolvimento. Possuem apenas dois tipos de biomolculas, protenas e cido nuclico (DNA ou RNA), necessitando do ambiente celular para seu desenvolvimento, podendo permanecer cristalizados por milhares de anos em estado de inrcia quando fora do meio biolgico. Alguns vrus mais complexos, possuem carboidratos e lipdios em sua composio oriundos da membrana do hospedeiro durante o processo ltico.
A Natureza das Biomolculas

As biomolculas possuem caractersticas qumicas comuns s demais molculas da natureza. Porm, quando associadas em um sistema biolgico, possuem uma dinmica prpria de regulao e sntese, que proporcionam as caractersticas de cada ser vivo. O ambiente ideal para que ocorram estas reaes a clula, com uma srie de organelas especializadas nas mais variadas funes bioqumicas. A princpio, os seres vivos dos cinco reinos da natureza (Animalia, Plantae, Fungi,
gua
o composto qumico mais abundante (de 60 a 85% do peso total da maioria dos tecidos) sendo o solvente adequado para os compostos minerais e bioqumicos (Figura 1-1). Apesar de no ser uma biomolcula verdadeira (existe em grande quantidade livre na natureza, independente, at, da existncia organismos vivos - existe gua na lua e livre no vcuo do espao), graas sua polaridade, a gua consegue dissolver a maioria das biomolculas (exceo s gorduras) criando uma capa de solvaRicardo Vieira
tao ao redor delas, induzida por pontes de hidrognio. Entretanto, a gua tambm participa ativamente em reaes bioqumicas (p. ex.: hidrlise, condensao) o que a torna um dos componentes qumicos mais importantes para a vida. De fato, o simples achado de gua na forma lquida permite a inferncia de existncia de formas de vida (pelo menos como ns a concebemos) seja no mais rido e quente deserto, nos glidos e secos plos da Terra ou nas mais profundas, escuras e ferventes fossas abissais do Pacfico (e, quem sabe, em outros planetas do nosso sistema solar).
Figura 1-1: A molcula da gua possui polaridade devido diferena de carga entre os tomos de hidrognio e o de oxignio que, por ser mais eletronegativo, favorece a criao de uma nuvem eletrnica em torno de seu ncleo, induzindo a uma carga formal positiva para os tomos de hidrognio. Esta polaridade permite o surgimento de pontes de hidrognio o que torna a gua um soluto perfeito para a maioria das biomolculas. (Adaptado de Lehninger, A.L et al., 1995).
Em organismos multicelulares, a gua distribui-se em dois ambientes: lquido intracelular (LIC) e lquido extracelular (LEC) que, por sua vez, compe-se do lquido intravascular (plasma sangneo) e lquido intersticial nos seres mais complexos, como o caso do ser humano, objeto central de nosso estudo. O sangue o mais importante compartimento lquido do organismo e serve de base para o estudo do metabolismo de vrios compostos bioqumicos. Freqentemente, os valores mdios da concentrao das biomolculas em um indivduo, para efeito de estudos
metablicos, baseiam-se na composio plasmtica (a parte lquida do sangue). O sangue exerce um importante papel no estudo da bioqumica, uma vez que possui funes chaves na manuteno dos processos fisiolgicos. indispensvel pelo transporte de nutrientes, metablitos, produtos de excreo, gases respiratrios, hormnios e de clulas e molculas de defesa. Em animais de grande porte, indispensvel como dissipador do calor produzido pela alta taxa metablica celular, impedindo que as clulas entrem em colapso qumico em virtude do aumento da temperatura ambiente. A capacidade de coagulao uma importante propriedade sangnea que garante o fluxo constante do sangue nos vasos, evitando perdas por hemorragia. A maioria dos seres multicelulares possui sangue ou algum tipo de lquido com funo correlata (p.ex.: a hemolinfa de insetos), sendo que mamferos e aves possuem um sistema de manuteno da temperatura corprea extremamente eficaz ("sangue quente"), o que no permite modificaes bruscas na temperatura de reao bioqumica. Os demais animais de "sangue frio" no conseguem evitar as trocas de temperatura com o meio ambiente e a temperatura interna varia consideralvelmente, levando a um metabolismo energtico diversificado dos de "sangue quente". Entretanto, vrios peixes velozes (p.ex.: tubaro, salmo) possuem mecanismos particulares de aquecimento constante do sangue para manter uma temperatura constante para suas as altas atividades metablicas de predadores, o que os torna verdadeiros peixes de "sangue quente". A gua, ainda, importante na manuteno do equilbrio qumico celular mantendo as concentraes de H+ e demais eletrlitos dentro de faixas estreitas evitando variaes letais de pH e osmolaridade. claro que esta manuteno s possvel graas a um complexo processo bioqumico e fisiolgico envolvendo hormnios (p.ex.: aldosterona, cortisol), rgos especializados (p.ex.: rins, pulmes, adrenais) e um sistema fisiolgico de tampes bioqumicos (p.ex.: Hb/HbO2; H2CO3/HCO3-). Em organismos marinhos, a gua a responsvel pelo fornecimento do oxignio e disperso de excrementos, como o CO2 e compostos nitrogenados, que favorecem a matria
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prima para o fitoplncton produz carboidratos, aminocidos (e outros nutrientes) e o O2, essenciais para a manuteno do equilbrio ecolgico da Terra.
Protenas
So as biomolculas mais abundantes, possuindo inmeras funes, dentre elas a indispensvel funo catalisadora exercida pelas enzimas, sem a qual no seria possvel a maioria das reaes celulares (apesar de algumas molculas de RNA possurem ao cataltica idntica a enzimas). So formadas por aminocidos ligados por ligaes qumicas extremamente fortes entre seus grupamentos funcionais amino (NH2) e cido carboxlico (COOH), as ligaes peptdicas (Figura 1-2).
Figura 1-3: A estrutura tridimensional da mioglobina, protena especializada em liberar o O2 que transporta, somente em baixa pO2 o que traduz sua importncia no metabolismo muscular. (Adaptado de Campbel, M.K., 1995)
NH2
-aminocidos
H - C - CO O H R
Extremidade amino-terminal
H -N - C - H CO O H
Ligaes peptdicas
NH2
H - C - CO N - C - H R H CO O H
Extremidade carboxila-terminal
Figura 1-2: A ligao peptdica entre dois aminocidos extremamente rgida e no gira, porm pode doar ou receber prtons quando em meio bsico ou cido.
Outras ligaes ocorrem entre o restante da cadeia carbonada dos aminocidos, como ligaes covalentes entre os grupamentos -SH de dois aminocidos cistena, formando uma ponte dissulfeto, pontes de hidrognio entre grupamentos polares da cadeia carbonada, ou at ligaes fracas do tipo de van der Waals, mas que garantem uma incrvel estabilidade e conformao tridimensional nica s protenas, relacionada diretamente com sua funo (Figura 1-3).
De fato, essa propriedade de assumir formas variadas proporciona um papel importante na estereoqumica celular, onde as reaes so quase todas enzimticas e ocorrem com uma especificidade da enzima ao substrato garantida pela forma tridimensional final das protenas. Quaisquer modificaes nesta estrutura modificar a afinidade da enzima pelo substrato e isso ser utilizado pela clula para regular a ao enzimtica. As protenas normalmente abastecem e suprem as necessidades corpreas de aminocidos e do nitrognio neles contido. Toda protena presente na dieta de seres humanos digerida e entra na circulao como aminocidos individualizados ou mesmo como dipeptdeos (compostos por dois aminocidos), indo ao fgado que inicia seu processo metablico. Os animais so capazes de sintetizar somente 10 dos 20 aminocidos necessrios para a sntese protica (os aminocidos denominados no-essenciais: glicina, alanina, serina, prolina, cistena, cido asprtico, cido glutmico, asparagina, glutamina e tirosina), e os outros 10 so incapazes de serem sintetizados e devem estar presente na alimentao (os aminocidos essenciais: treonina. lisina, metionina, arginina, valina, fenilalanina, leucina, triptofano, isoleucina e histidina).
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Alguns aminocidos podem ser sintetizados no organismo mas a uma taxa que o torna essencial na alimentao, como o caso da arginina que utilizada quase que integralmente na sntese da uria e da histidina que produzida em quantidade insuficiente para a sntese protica, porm tornam-se quase que desnecessrios na dieta de adultos, quando o crescimento (e, portanto, a fase de maior sntese de protenas estruturais) chega ao fim. Em contrapartida, os aminocidos ditos no-essenciais cistena e tirosina so sintetizados a partir dos aminocidos essenciais metionina e fenilalanina, o que os torna, de cera maneira, dependentes da presena desses aminocidos essenciais. No fgado, os aminocidos absorvidos no processo digestivo so convertidos nas protenas plamticas: 1) albumina (funo de transporte); 2) 1-globulina (glicoprotenas e lipoprotenas de alta densidade); 3) 2globulinas (haptoglobinas, transportadoras de hemoglobina que saem das hemcias); 4) globulinas (transferrina, lipoprotenas de baixa densidade) e 5) fatores da coagulao sangnea (fibrinognio e protrombina). No plasma sangneo encontra-se, ainda, uma infinidade de protenas produzidas em outros locais do organismo, como o caso das globulinas (os anticorpos) que so sintetizadas por linfcitos e outras protenas teciduais. Alguns aminocidos so convertidos, no fgado, em bases nitrogenadas (para a sntese de cidos nuclicos) e outros produtos nitrogenados. Em vrios tecidos, possuem funes das mais diversas, como base de sntese de hormnios e neurotransmissores. A parte nitrogenada dos aminocidos metabolizada no fgado de mamferos, anfbios adultos, e tartarugas convertida em uria e excretada pelos rins. Aves, rpteis, insetos e invertebrados terrestres excretam o nitrognio protico como cido rico, enquanto que peixes, invertebrados aquticos, anfbios na forma larvria excretam na forma de amnia (crocodilos sintetizam, tambm, amnia e tartarugas uria a partir do nitrognio protico). A cadeia carbonada dos aminocidos convertida em intermedirios do metabolismo energtico celular, porm esta funo corres-
ponde a uma pequena frao do poderio biolgico das protenas que so, sem dvida nenhuma, as biomolculas de maior nmero de funes em um organismo vivo. A funo energtica prioridade de duas outras molculas: os carboidratos e os lipdios.
Carboidratos
So os principais substratos energticos da clula, atravs da degradao da glicose por via anaerbia e aerbia (Figura 1-4). Popularmente so chamados de acares em virtude do seu mais conhecido representante, a sacarose, formada por um molcula de glicose e outra de frutose com sabor doce caracterstico. O amido (um polmero linear ou ramificado de glicose), entretanto, a forma de carboidrato mais comum na alimentao, representando cerca de 90% dos carboidratos da dieta. Em mamferos, a lactose (formada por glicose e galactose) importante fonte energtica presente no leite, apesar da maioria dos mamferos utilizarem o leite como nica fonte de alimento somente em seus primeiros perodos de vida (em ratos alguns dias, em humanos cerca de um ano).
Figura 1-4: A molcula de glicose (uma hexose - carboidrato de seis carbonos) em sua forma cclica.
De qualquer forma, os carboidratos so as principais biomolculas energticas, uma vez o metabolismo glicoltico anaerbio via comum de todos os seres vivos ( exceo dos vrus por no terem estrutura celular, sendo considerados por muitos autores como formas intermedirias entre seres vivos e partculas qumicas de transmisso de infeces, assim como os prons, estes compostos apenas de protenas).
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H a necessidade de ingesto mnima de cerca de 50 - 100 g de carboidratos por dia para garantir o suprimento de glicose sangnea (glicemia) que, por sua vez, nutrir os tecidos, permanecendo a glicemia normal em torno de 70 - 110 mg/dl. A hipoglicemia caracteriza-se por vrios sinais e sintomas como tonturas, fraqueza muscular, suor firo, irritabilidade, fome, palpitao, dor de cabea, sonolncia, convulso, podendo atingir o coma e a morte. A hiperglicemia quase sempre um achado patolgico laboratorial, sendo difcil a percepo de sinais e sintomas clnico diretos, sendo observada, principalmente, em patologias especficas como o diabetes mellitus, caracterizada pela ausncia ou produo insuficiente de insulina (ou de seus receptores celulares). As principais fontes de carboidratos so os vegetais produtores de amido como reserva energtica (p.ex.: milho, mandioca, beterraba, arroz e todos os cereais), seguido dos produtores de sacarose (cana-de-acar, beterraba). As frutas contm grande quantidade de frutose, alm de outros carboidratos; o leite e seus derivados, contm a lactose. Os alimentos de origem animal (fora o leite e seus derivados) contm muito pouco teor de carboidratos, reservando-se ao fgado e aos msculos as principais fontes em virtude de serem sede da sntese de glicognio (polmero de glicose bem mais ramificado que o amido, sintetizado, tambm por fungos e alguns protozorios). Entretanto, aps o abate do animal, as reservas de glicognio rapidamente se esgotam em virtude da continuidade do metabolismo celular mesmo aps a morte fisiolgica. Assim sendo, a quantidade de glicognio presente na alimentao humana quase inexistente, estando presente, portanto, somente na dieta de animais carnvoros que devoram suas presas imediatamente aps o abate. Os carboidratos podem ser convertidos em gorduras quando h a ingesto de quantidades excessivas s necessidades energticas podendo levar a patologias associadas ao excesso de alimentao (obesidade, aterosclerose coronria etc.). Uma m-higiene dentria proporciona a utilizao dos carboidratos pelos microorganismos presentes na boca o que
aumenta a incidncia de cries dentrias em virtude da destruio da dentina pelo cido lctico ou etanol (produto final do metabolismo anaerbio de bactrias e fungos). Da mesma forma, uma ingesto aumentada de carboidratos pode proporcionar distrbios intestinais com as bactrias produzindo grande quantidade de gases, com comprometimentos patolgicos diversos. A carncia de carboidratos na alimentao, por sua vez induz ao consumo aumentado das gorduras e protenas musculares para a produo de energia, caractersticas o que comumente utilizado em dietas de programas de reduo de peso corpreo. Deve-se levar em considerao, entretanto, que a utilizao em excesso de lipdios (principalmente) e protenas para a produo de energia, poder trazer inconvenientes fisiolgicos, com a produo de dejetos metablicos danosos ao organismo quando em grande quantidade, como o caso dos corpos cetnicos que induzem a queda do pH e da destruio da camada mielnica dos neurnios.
Lipdios
A gorduras, como so conhecidas popularmente, so a principal fonte de armazenamento energtico, podendo manter alguns tipos de clulas vivas por vrios anos (p.ex.: sementes oleaginosas). Os lipdios fornecem significativa quantidade de energia (quase o dobro dos carboidratos), porm no esta a sua funo primria na alimentao, uma vez que a absoro intestinal dos lipdios se d pela linfa e no pela corrente sangnea como os demais nutrientes. Desta forma, os lipdios energticos (cidos graxos na forma de triglicerdeos - Figura 1-5) so captados pelos tecido adiposo l ficando armazenado at que haja necessidade energtica (como no caso de dietas hipoglicdicas ou no paciente diabtico o qual no consegue produzir energia atravs da glicose, uma vez que ela no penetra na clula). Por esta razo, os cidos graxos no so to bem aproveitados para o metabolismo energtico como a glicose que, apesar de menos calrica, bem mais rapidamente degradada pelas clulas.
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cido esterico (18:0)
o que corresponde a uma redundncia, uma vez que nenhum leo de origem vegetal contm colesterol, mas leva as pessoas a relacionarem a ausncia colesterol com uma melhor qualidade do leo, o que no verdade (a qualidade de um leo vegetal est em uma maior quantidade de cidos graxos poli-insaturados, menos calricos).
Figura 1-5: Os lipdios energticos. O cido esterico possui 18 carbonos sem nenhuma dupla ligao (saturado); o carbono 1 denominado alfa () e contm o grupamento funcional (COOH); o segundo denominase e o ltimo carbono (18) denominado mega-1 (), sendo o carbono 17 denominado -2, o 16 de -3 e assim sucessivamente.
Alm de conferir um sabor caracterstico aos alimentos e de proporcionar uma sensao de saciedade, a dieta lipdica veicula as vitaminas lipossolveis e supre o organismo dos cidos graxos essenciais poli-insaturados que o ser humano incapaz de sintetizar, como o cido linolico (-6); linolico (-6 e 9); aracdnico (20:4). Os cidos graxos saturados (presente nas molculas de triglicerdeos) fornecem energia quando as fontes de carboidratos se esgotam, sendo bem mais calricos que os insaturados. O excesso da utilizao dos lipdios para o metabolismo energtico fornece uma quantidade de um composto energtico alternativo, os corpos cetnicos, que suprem msculos e neurnios na falta de glicose (neurnios s consomem glicose e corpos cetnicos como combustvel energtico), porm trazem complicaes clnicas quando produzidas em excesso (como a degenerao da bainha mielnica de proteo dos neurnios e a queda do pH plasmtico). O colesterol (Figura 1-6) encontrado exclusivamente em gorduras animais, sendo a gema do ovo a principal fonte, mas no possui funo energtica e acumula-se nos vasos sangneos quando a ingesto diria supera a quantidade de 1g. Atualmente, o Ministrio de Sade tem proibido a divulgao do rtulo no contm colesterol que comumente eram colocados em frascos de leos vegetais,
Figura 1-6: A molcula de colesterol est presente exclusivamente em gorduras animais. Quimicamente, um lcool de cadeia longa, mas que classificado como lipdio em virtude de sua insolubilidade na gua.
O excesso de lipdios da alimentao induz a uma rpida deposio dos triglicerdeos nos adipcitos e a saturao do fgado na degradao do colesterol. A no realizao de exerccios fsicos para compensar uma ingesto aumentada de lipdios, pode refletir-se em sobrepeso e at a obesidade, principalmente quando a alimentao ocorre em perodos de baixa atividade fsica (como noite, antes do sono).
cidos Nuclicos
Os cidos desoxirribunuclico (DNA) (Figura 1-7) e ribonuclico (RNA) so as molculas informacionais, atravs das quais so sintetizadas todas as protenas do organismo. O processo de replicao (sntese do DNA) realizado de forma extremamente cuidadosa para que no resulte em erros na seqncia de DNA do genoma das clulas filhas e, consequentemente, erros na produo de protenas, uma vez que durante o ciclo de vida de uma clula, h a sntese de RNAm (mensageiro) a partir de um molde da molcula de DNA. Este processo (transcrio) est intimamente atrelado sntese de protenas (traduo), onde o RNAm processado de maneira tal a se encaixar nos RNA dos ribossomos (RNAr) e favorecer a adio de aminocidos que chegam transportados pelos RNA transportadores (RNAt).
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Figura 1-7: A descoberta da estrutura de dupla hlice em espiral da molcula de DNA em 1953 por Watson e Crick, trouxe informaes importantssimas para desvendar o papel dos cidos nuclicos para o metabolismo de todos os seres vivos.
Tanto o RNAr quanto o RNAt (assim como os RNAm), so sintetizados a partir de uma ou mais seqncias de nucleotdeos de DNA (unidade de polimerizao dos cidos nuclicos, formados por uma pentose, uma base nitrogenada e um grupamento fosfato). Estas seqncias que codificam uma informao (protenas ou molculas de RNA) so demoninadas de genes, as unidades bsicas das caracterstas genticas. O cromossomo formado por uma nica molcula de DNA superenovelada e que possui um tamanho enorme, perto das propores microscpicas da clula. Se unssemos todos os 23 pares de cromossomos do ser humano, por exemplo, teramos uma molcula de cerca de 1,5m (imagine tudo isso enovelado dentro do ncleo celular!). Entretanto, apenas cerca de 95% de todo esse DNA correspondes a genes (regies codificadoras de informao). A grande maioria do DNA constitui-se de regies que no codificam nenhuma informao (sntese de protenas ou RNA), mas possui funo de espaamento entre os genes (possibilitando um enovelamento ordenado do cromossomo) alm de conter regies de controle da expresso gnica e zonas de DNA repetitivo (utilizadas na
identificao individual tal como uma "impresso digital de DNA"). Dentro das seqncias codificadoras dos genes (os xons) existem outras que no codificam absolutamente nada (os ntrons), mas que podem possuir funes de regulao da expresso do gene bem como informaes que so utilizadas no estudo da evoluo molecular que permite relacionar a caracterizao de espcies, gneros e grupos filogenticos bem definidos, estabelecendo os caminhos evolutivos que as espcies atuais devem ter percorrido, o que faz de seu estudo uma poderosa ferramenta da paleontologia, antropologia ou qualquer ramo da biologia evolutiva. A tecnologia da manipulao da molcula de DNA (p.ex.: sntese in vitro , reaes de hibridizao) tem sido utilizada com grandes vantagens no diagnstico de doenas metablicas de cunho gentico e doenas infecciosas (pela identificao de DNA de microorganismos em amostras biolgicas). Entretanto, os custos e da mo-de-obra altamente qualificada para sua execuo, ainda restringem a maioria das tcnicas laboratrios de pesquisa. Contudo, h um futuro bastante promissor para esta prxima dcada na popularizao dos mtodos diagnsticos por biologia molecular.
Vitaminas
Fazem parte de um grupo de biomolculas no sintetizadas pelo ser humano e que precisam estar presentes em pequenssimas concentraes na clula para que ocorram vrias reaes celulares indispensveis para a vida, (a maioria funcionando como co-fatores enzimticos), o que garante o elo indispensvel entre os animais e vegetais na cadeia alimentar, uma vez que so produzidas por vegetais, bactrias, fungos e animais, tornando-se indispensveis na alimentao. Quimicamente, as vitaminas so difceis de serem classificadas, uma vez que pertencem s mais variadas classes qumicas (p.ex.: a vitamina A um terpeno, a B1 uma amina, a C um cido carboxlico). De uma maneira geral, classificamos as vitaminas, quanto s caractersticas de solubilidade, como hidrossolveis (B1, B2, B6, B12, C, biotina, cido flico, cido pantotnico) e lipossolveis (A, D, E, e K).
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So requeridas na dieta em quantidades mnimas, sendo chamadas de oligoelementos (do grego oligos= pouco) juntamente com alguns minerais. A maioria delas possui baixa resistncia ao calor o que faz com seja necessrio ingerir os alimentos que as contm crus, pois a coco destruiria as vitaminas (as vitaminas lipossolveis so as menos termolbeis). Entretanto, apesar do conceito geral de que vitaminas so indispensveis na dieta, nem sempre isso verdade. Algumas no so necessrias na dieta de todos os animais, em virtude de serem sintetizadas no organismo (p.ex.: somente os primatas, alguns roedores e pssaros no sintetizam a vitamina C). Outras so sintetizadas por microrganismos da flora intestinal normal, sendo absorvidas independente da ingesto de fontes alimentcias (Vitamina B12 e K). A vitamina K pode ser obtida pela converso de um derivado do colesterol aps a ao da radiao ultravioleta solar e considerada por alguns autores mais um hormnio do que uma vitamina. Outra caracterstica marcante das vitaminas o fato de que a sua ausncia especfica na alimentao causa uma doena carencial prpria (p.ex.: o escorbuto na carncia de vitamina C; o bri-bri na carncia de B1). Contudo, esta propriedade no evidenciada muito facilmente, pois em um estado de desnutrio, h a culminncia de vrias carncias vitamnicas levando a um quadro sintomatolgico complexo e no apenas o aparecimento de uma doena carencial especfica. A maioria das vitaminas so cofatores de reaes enzimticas (o que justifica em si sua necessidade em pequena quantidade, j que as reaes enzimticas so reciclveis) e a sua inexistncia na clula torna invivel o processo de vida. Interessantemente, a administrao de vitaminas em dosagens acima das necessidades dirias so utilizadas na teraputica para corrigir sintomas que nem sempre tem correlao direta com sua ao biolgica (p. ex.: a vitamina B6 utilizada no tratamento de enjos). Esta conduta teraputica s pode ser realizada sob prescrio mdica, uma vez que altas dosagens de vitaminas podem ser txicas e s so possveis com a administrao de vitaminas na forma de medicamen-
tos (somente a vitamina C pode atingir nveis de hipervitaminose por ingesto das fontes alimentares). O uso indiscriminado de vitaminas como medicamento por pessoas leigas que acreditam serem "elementos milagrosos e energticas" uma preocupao constante dos profissionais de sade, atualmente, uma vez que trata-se de molculas altamente especializadas e sua ao txica pode trazer a leses graves para o sistema biolgico se no for administrada com percia e precauo.
Minerais
So compostos de origem inorgnica necessrios para uma srie de funes bioqumicas importantes como, por exemplo, cofatores de reaes enzimticas (Mg++, K+), fatores da coagulao (Ca++), regulao do equilbrio hidro-eletroltico e cido bsico (Na+, K+, Cl-), elementos estruturais (Ca++, P-3, F-), transporte (Fe++) e muitas outras funes. As necessidades de minerais para as funes fisiolgicas podem ser divididas, arbitrariamente, em dois grupos: os macrominerais necessrios em quantidades acima de 100 mg/dia (clcio, fsforo, sdio, potssio, cloretos, magnsio) e microminerais necessrios em quantidades abaixo de 100 mg/dia (cobalto, iodo, ferro, flor, crmio). De maneira diferente aos demais nutrientes, os minerais possuem um processo de absoro intestinal incompleto, ou seja enquanto todos os carboidratos, lipdios e protenas ingeridos devem ser absorvidos (seno haver proliferao bacteriana e, consequentemente, distrbios digestivos) os minerais possuem um limiar prprio para cada um deles (p.ex.: o Na+ de cerca de 180 mEq/l) acima do qual no h a passagem do mineral para a veia portaheptica (que comunica o intestino e o fgado) e o excesso excretado pelas fezes. Desta maneira, h um controle digestivo importante da concetrao plasmtica dos minerais. Contudo, quaisquer distrbios digestivos (p.ex.: parasitrios, inflamatrios, medicamentos) podem alterar a absoro dos minerais levando a sua depleo e tambm de gua, uma vez que haver distrbio no balana hidroRicardo Vieira
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eletroltico, levando a diarrias e a conseqente desidratao, que muitas vezes fatal.
A clula: o tubo de ensaio da vida

a unidade morfo-fisiolgica dos seres vivos, possuindo estruturas como as mitocndrias (em todos os seres vivos, com exceo dos procariotas) e glioxiomas (vegetais e uns poucos protistas) que so a sede da produo de energia da clula (Figura 1-8). Nas clulas das folhas dos vegetais existem os cloroplastos, estruturas semelhantes s mitocndrias responsveis pela fotossntese (Figura 1-9). Existe uma semelhana estrutural muito grande entre mitocdrias e cloroplastos, apesar das funes diametralmente opostas (produo de energia a partir de biomolculas e captao de energia para a produo de biomolculas, respectivamente). Acredita-se que tais organelas eram organismos independentes, em um passado evolutivo muito distante, mas que criaram uma relao simbitica com algumas clulas primitivas gerando as atuais clulas vegetais e animais atuais. De fato, a existncia de DNA completamente diferente do ncleo, qualifica essas organelas como candidatas s primeiras estruturas vivas auto-suficientes, no sentido energtico, a surgirem na histria da vida na Terra.
Figura 1-8: A mitocndria a sede das reaes energticas em eucariotas.
Os ribossomos so formados por RNAr e so a sede da sntese protica, liberando-as para o retculo endoplasmtico e, posteriormente, aparelho de Golgi onde as protenas podero ser liberadas para o uso
celular ou extracelular. Os peroxiomas so importantes para desdobrar os radicais livres formados pelo oxignio evitando assim o envelhecimento e a morte celular. Os lisossomas, por sua vez, contm enzimas hidrolticas que degradam alimentos ou a prpria clula (apoptose = morte celular programada) sendo importante para determinar o tempo de vida til de uma clula. As clulas eucariotas possuem um ncleo organizado que regula as atividades de reproduo e sntese proticas (atravs do DNA). A maioria das reaes bioqumicas ocorrem no citosol, que mantm relao com o meio externo e com as organelas atravs de um sistema de membranas lipdico-protico, idntico membrana plasmtica. Os procariotas no possuem sistema de membrana intracelular organizado, no possuindo as organelas que apresentam esta estrutura (p.ex.: ncleo, mitocndrias). Possuem (assim como os vegetais) uma parede celular extremamente resistente formada de polissacrides. Compreender os mecanismos que levam interao das biomolculas com o sistema celular, seja na sntese, metabolismo ou degradao, funo da Bioqumica. Utilizando-se de conceitos interdisciplinares (Biologia, Histologia, Fisiologia etc.), a Bioqumica procura explicar o funcionamento da clula a partir de um ngulo molecular, possibilitando, inclusive, a manipulao in vitro de condies exclusivas das clulas vivas, podendo recriar o processo da qumica da vida com o advento da engenharia gentica. Estamos vivendo tempos de mudanas extremamente importantes no pensar cientfico acerca de questes vitais para a perpetuao de nossa espcie - ameaada de extino pela superpopulao e destruio desgovernada do ecossistema. A compreenso dos mecanismos bsicos de manuteno da vida no ambiente celular, indispensvel para o profissional da rea de sade e cincias biolgicas para que possa se posicionar em assuntos vitais e, inclusive, ticos dentro do exerccio de sua profisso. Na Figura 1-9 representa as principais organelas de uma clula eucariota.
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Figura 1-9 - Representao esquemtica de uma clula eucariota.
Curiosidades
O estudo da bioqumica j rendeu 63 ganhadores do Prmio Nobel de Qumica e Medicina, a mais importante premiao cientfica, instituda desde 1901. Dentre eles, est um dos nicos cientistas que ganhou duas vezes o prmio Nobel: Frederick Sanger que em 1958 descobriu a estrutura da insulina e em 1980 desenvolveu tcnicas de seqenciamento de DNA. Linus Pauling tambm ganhou dois prmios: em 1954 por seus estudos com ligaes qumicas de biomolculas e em 1962 o prmio Nobel da Paz. Neste seleto clube de ganhadores de mais de um prmio Nobel consta, ainda, Marie S. Curie em 1911 ganhou o Nobel de Qumica e em 1903 o de Fsica. A seguir, a listagem completa dos ganhadores do Prmio Nobel de Qumica e Medicina com estudos bioqumicos.
2000 - MEDICINA: Arvid Carlsson, Paul Greengard e Eric R Kandel pelos estudos na transduo de sinais no sistema nervoso. 1999 - MEDICINA: Gnter Blobel por descobrir que protenas possuem sinais que regem sua localizao e transporte celular. 1998 - MEDICINA: Robert F. Furchgott, Louis J. Ignarro e Ferid Umrad pela descoberta da sntese de cido ntrico no organismo e sua funo no sistema cardiovascular. 1997 - MEDICINA: Stanley B. Prusiner pela descoberta dos prons, novo modelo biolgico de infeco de origem protica. 1997 - QUMICA: Paul B. Boyer e Jonh E. Walker pela elucidao do mecanismo enzimtico da sntese do ATP e Jens C. Skou pela descoberta da enzima responsvel pela sntese do ATP. 1994 - MEDICINA: Alfred G. Gilman e Martin Rodbell pela descoberta das protenas-G.
1993 - Richard J. Roberts e Phylip A. Sharp pela descoberta de split-genes. 1993 - QUMICA: Kary B. Mullins pela inveno do mtodo da PCR (Polymerase Chain Reaction - Reao em Cadeia da Polimerase) para a sntese in vitro de DNA e Michael Smith pelo estudo em protenas mutagnicas. 1992 - MEDICINA: Edmond H. Fisher e Edwin G. Krebs pela descoberta da fosforilao reversvel de protenas. 1991 - MEDICINA: Erwin Neher e Bert Sakmann pela descoberta das protenas canais de ons celulares. 1989 - QUMICA: Sidney Altman e Thomas Cech pela descoberta de RNA com propriedade cataltica. 1988 - QUMICA: Johann Deisenhofer, Robert Huber e Harmut Chel pela determinao da estrutura tri-dimensional do centro da reao fotossinttica. 1985- MEDICINA: Michael S. Brown e Joseph L. Goldstein pela descoberta da regulao do metabolismo do colesterol. 1984 - MEDICINA: Niels K. Jerne, Georges J. F. Khler e Csar Milstein pela descoberta do controle do sistema imune. 1982 - MEDICINA: Sune K. Bergstrm, Bengt I. Samueksson e Jonh R. Vane pela descoberta das prostaglandinas. 1982 - QUMICA: Aaron Klug pelo dewsenvolvimento de tcnicas de microscopia eletrnica por cristalografia para elucidar interaes protenas/cidos nuclicos. 1980 - QUMICA: Paul Berg pelos estudos de DNA recombinate e Walter Gilbert e Frederik Sanger por seus estudos de sequenciamento de DNA. 1978 - MEDICINA: Werner Arber, Daniel Nathans e Hamilton O. Smith pela descoberta das enzimas de restrio. 1978 - QUMICA: Peter D. Mitchel pela formulao da teoria quimiosmtica para a sntese do ATP. 1977 - Roger Guillemin, Andrew V. Schally e Rosalyn Yalow pela descoberta da produo de hormnios peptdeos cerebrais. 1975 - QUMICA: Jonh Warcup Conforth e Vladimir Prelog pelo estudo da estereoqumica de reaes enzimticas. 1972 - MEDICINA: Gerald M. Edelman e Rodney R. Porter pela descoberta da estrutura protica dos anticorpos. 1972 - QUMICA: Christian B. Anfinsen, Stanford Moore e William H. Stein pelos estudos na enzima ribonuclease. 1971 - MEDICINA: Earl W. Jr. Sutherland pela descorberta do mecanismo de ao dos hormnios. 1971 - QUMICA: Gerhard Herzberg pelo estudo da estrutura eletrnica e geomtrica dos radicais livres. 1970 - QUMICA: Luis F. Leloir por estudos na biossntese de carboidratos 1968 - MEDICINA: Robert W. Holley, Har Gobind Khorana e Marshall W. Nirenberg pela interpretao do cdigo gentico e a sntese protica. 1964 - QUMICA: Dorothy Crowfoot Hodgkin pela criao de tcnicas de Raios-X para estabelecer a estrutura de compostos bioqumicos. 1964 - MEDICINA: Konrad Bloch e Feodor Lynen pela descoberta do mecanismo e regulao do metabolismo do colesterol e cidos graxos. 1962 - MEDICINA: Francis Harry Compton Crick, James Dewey Watson e Maurice Hugh Frederick Wilks pela descoberta da estrutura do DNA. 1962 - QUMICA: Max Ferdinand Perutz e John Cowdery Kendrew pelo estudo da estrutura de protenas globulares. 1961 - QUMICA: Melvin Calvin pelo esclarecimento da fotossntese. 1958 - QUMICA: Frederick Sanger pela determinao da estrutura da insulina 1959 - MEDICINA: Severo Ochoa e Arthur Kornberg pela descoberta da biosntese de DNA e RNA. 1957 - QUMICA: Alexander R. Todd pelo trabalho com nucleotdeos e co-enzimas. 1955 - MEDICINA: Axel Hugo Theodor Theorell pela descoberta da natureza oxidativa de enzimas. 1955 - QUMICA: Vincent Du Vigneaud pela sntese de hormnios polipetdeos. 1953 - MEDICINA: Hans Adolf Krebs e Fritz Albert Lipmann pela descoberta do ciclo do cido ctico e do papel da coenzimaA.
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1954 - QUMICA: Linus Carl Pauling pelo estudo nas ligaes qumicas de biomolculas. 1950 - MEDICINA: Edward Calvin Kendal, Tadeus Reichstein e Philip Showalter pela descoberta dos hormnios da crtex adrenal. 1943 - MEDICINA: Henrik Carl Dam e Edward Adelbert Doisy pela descoberta da Vitamina K. 1948 - QUMICA: Arne Wilhelm Kaurin Tiselius pela pesquisa em eletroforese de protenas plasmticas. 1947 - QUMICA: Robert Robinson pelo estudo de bioqumica vegetal. 1947 - MEDICINA: Carls Ferdinand Cori, Gerty Theresa Cori e Bernardo Alberto Houssay pela pesquisa no metabolismo do glicognio e da glicose. 1946 - QUMICA: James Batcheller Sumner, Jonh Howard Northrop e Wendell Meredith Stanley pelos estudos em enzimas. 1939 - QUMICA: Adolf Friedrich Johann Buternandt pelo estudo dos hormnios sexuais e Leopold Ruzicka pelo estudo de terpenos e polimetilenos. 1938 - QUMICA: Richard Khun pela pesquisa com carotenides e vitaminas. 1937 - MEDICINA: Albert Szent-Gyrgyi Von Nagyrapolt pela descoberta do metabolismo energtico celular. 1936 - MEDICINA: Hallert Dale e Otto Loewi pela descoberta da trasnmisso qumica do impulso nervoso. 1937 - QUMICA: Walter Norman Haworth e Paul Karrern pelo trabalho com carboidratos, carotenides, vitaminas A, B2 e C. 1931 - MEDICINA: Otto Heinrich Warburg pela descoberta da natureza da ao das enzimas respiratrias. 1930 - QUMICA: Hans Fisher pela pesquisa dos grupamentos metlicos da hemoglobina e clorofila. 1929 - QUMICA: Arthur Harden, Hans Karl August Von Euler-Chelpin pelo estudo das enzimas fermentadoras de acar. 1929 - MEDICINA: Christiaan Eijkman e Frederick Gowlans Hopkins pelo estudo com vitaminas. 1928 - QUMICA: Adolf Otto Reinhold Windaus pelo estudo de vitaminas. 1927 QUMICA: Heinrich Otto Wieland pelo estudo da constituio dos cidos biliares. 1923 - MEDICINA: Frederick Grant e John James Richard Macleod pela descoberta da insulina. 1922 - MEDICINA: Archibald Vivian Hilll e Otto Fritz Meyerhof por estudos do metabolismo muscular 1915 - QUMICA: Richard Martin Willsttter pela pesquisa com clorofila. 1910 - MEDICINA: Albrecht Kossel por seu trabalho em bioqumica celular com protenas e substncias nuclicas. 1907 QUMICA: Eduard Buchner pela descoberta da fermentao celular. 1902 - QUMICA: Hermann Emil Fisher pela pesquisa em sntese de carboidratos e purinas. 1901 - QUMICA: Jacobus Henricus Van't Hoff pela lei de presso osmtica.
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Para testar seus conhecimentos

1. 2. O que estuda a Bioqumica? Qual a composio qumica dos seres vivos? Que so biomolculas? 3. Quais as funes das biomolculas? 4. Quantos aminocidos so verdadeiramente essenciais e no-essenciais? Justifique sua resposta. 5. Qual o destino dos aminocidos no metabolismo heptico? 6. Organize um quadro com as formas de excreo do nitrognio protico nas diversas classes de animais. 7. Comente sobre a importncia da lactose como fonte de energia em mamferos? 8. O que hiper e hipoglicemia? 9. Porque h reduo do peso corpreo quando restringe-se o consumo de carboidrato? 10. Porque um paciente diabtico assemelha-se a um paciente em jejum prolongado, no que diz respeito ao metabolismo energtico? 11. Quais dos ganhadores (ou seus trabalhos) do Prmio Nobel de Qumica e Medicina que trabalharam com modelos bioqumicos, voc j tinha ouvido falar? Qual a molcula que mais prmios deu a seus pesquisadores?
Para navegar na Internet

HomePage do Prof. Ricardo Vieira: http://www.fundamentosdebioquimica.hpg.com.br The World Wide Web Virtual Library: Biosciences: http://golgi.harvard.edu/biopages/all.html Revista Brasileira de Anlises Clnicas: http://www.terravista.pt/aguaalto/1207/boyle.html AllChemy Web- Qumica e Cincias afins: http://allchemy.iq.usp.br/ The Nobel Prize Oficial Site: http://www.nobel.se/ A Brief History of Biochemistry:
http://www.wwc.edu/academics/departments/chemistry/courses /chem431/lectures/introlect.html
Biomania: http://www.biomania.com.br/mapasite/map.htm Biochemistry On-Line: http://www.biochemist.com/home.htm Bioqumica y Biologa Molecular en la Red:

http://www.yi.com/home/PerdigueroEusebio/bioquimica.html
Science: http://intl.sciencemag.org/ Nature: http://www.nature.com/
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Captulo 2 Bioqumica dos Alimentos

A evoluo das espcies sempre se apoiou em novas maneiras de se obter energia das mais variadas fontes para assim melhor aproveitar as matrias primas que a natureza oferece aos seres vivos. Seres mais sofisticados na forma de obter energia, tm-se mostrado superiores nesta escala evolutiva e seus descendentes impem-se na pirmide evolutiva. Um grupo numeroso de seres vivos especializou-se em captar a energia luminosa e convert-la em energia qumica para sintetizar algumas molculas energticas: so os auttrofos. As matrias-primas bases para essa sntese de alimentos eram compostos abundantes na atmosfera primitiva, como o gs carbnico (CO2), amnia (NH3), gua (H2O). Com a ajuda de energia proveniente das radiaes luminosas do sol, por fotossntese, comeouse a acumular um composto at ento escasso na atmosfera: o oxignio (O2) que era expelido pelos organismos fotossintticos como dejeto metablico. Acontece que os compostos alimentares so sintetizados em tamanha quantidade que esses seres se viram obrigados a armazenar parte de dele e excretar o excesso junto com oxignio (sem dvida, um lixo de luxo deste processo metablico). Entretanto, o aparecimento de oxignio livre na atmosfera demorou cerca de um bilho de anos desde o aparecimento dos primeiros organismos fotossintticos, as cianobactrias, como pode observar nos registros geolgicos. Somente aps esse longo perodo outro grupo de seres vivos, especializou-se em obter a energia necessria para suas reaes orgnicas alimentando-se dos nutrientes produzidos pelos organismos auttrofos e o O2 da atmosfera: so os hetertrofos. As formas primitivas eram, entretanto, unicelulares, sendo necessrio mais um bilho de anos para a organizao em seres multicelulares mais complexos (Figura 2-1).
Figura 2-1 - A idade da terra estimada em cerca de 4,5 bilhes de anos, sendo proposto que por volta do primeiro bilho tenha surgido as primeiras clulas fotossintticas auttrofas. No entanto, o O2 atmosfrico necessrio para o surgimento dos auttrofos s torna-se disponvel cerca de 2 bilhes de anos depois, devido absoro do oxignio produzido pelo ferro da superfcie da terra, fato comprovado pela existncia de enormes depsitos de xido de ferro nos sedimentos mais antigos do planeta. Os seres muticelulares demoraram cerca de 3 bilhes para surgirem, o que mostra a dificuldade da organizao celular parcialmente possibilitada pelo metabolismo aerbio. (Adaptado de Biologia Molecular da Clula - Albert B. et al., p.16, 1997.)
Fundamentos de Bioqumica - Captulo 2 - Alimentos
14 Forma-se, ento, um elo importante entre os seres vivos, construindo a complexa teia alimentar que faz com que a Terra funcione como um gigantesco ser vivo e prossiga, lentamente, seus passos evolutivos. O relacionamento entre consumidores e produtores est ligado disponibilizao de carbono o oxignio para os processos metablicos, enquanto que os decompositores fornecem, principalmente, o nitrognio reciclado dos tecidos mortos e dejetos, apesar de o ciclo dos nitrognio, carbono e oxignio ser comum para todos os seres vivos, de certa forma (Figura 2-2).
Desta forma, comea-se a desenhar a complexa rede de relacionamento ecolgico entre produtores e consumidores, havendo total harmonia entre eles, uma vez que os compostos nitrogenados produtos da degradao dos hetertrofos eliminados para o meio (amnia, uria, nitritos, nitratos) juntamente com o CO2 produto das oxidaes biolgicas, passam a ser a principal fonte de matriaprima para a fotossntese. Uma srie de organismos especializouse em reciclar os dejetos metablicos desses organismos (p.ex.: fezes e urina), assim como os seus corpos aps a sua morte: os decompositores)
Figura 2-2: O ciclo do carbono entre produtores (vegetal), consumidores (animal) e decompositores (fungos e bactrias). Consumidores e produtores trocam entre si, principalmente, carbono e oxignio enquanto que os decompositores reciclam o nitrognio. Ricardo Vieira
15 (Vioult & Juliet); Substncias, em geral naturais e complexas, que associadas s de outros alimentos em propores convenientes, so capazes de assegurar o ciclo regular da vida de um indivduo e persistncia da espcie a qual ele pertence (Randon & Simonnet); As matrias, qualquer que seja a natureza, que servem habitualmente ou podem servir nutrio (Littr); Substncias necessrias manuteno dos fenmenos do organismo sadio e reparao de partes que se faz constantemente (Claude Bernard); Substncia que, incorporada ou no ao organismo, nele exerce funo de nutrio (Escudero). Entretanto, o termo alimento possui significado bastante complexo que ultrapassa os limites da bioqumica devendo ser estudado com um carter multidisciplinar, uma vez que envolve a qumica, biologia, agronomia, veterinria, nutrio, alm das cincias da sade. Desta forma, a abordagem a ser realizada neste captulo, diz respeito ao estudo da composio qumica dos alimentos e da forma como apresentado para o metabolismo humano. Dentro deste ponto de vista, a digesto dos alimentos ser abordada neste captulo por se tratar de uma fase fisiolgica adaptada s propriedades dos alimentos. Nos captulos correspondentes aos estudos de cada biomolcula, sero abordadas peculiaridades de cada processo digestivo de interesse para o metabolismo da biomolcula em questo.
O ser humano, objeto de nosso estudo, posiciona-se no topo desta teia alimentar, chegando a mudar o ecossistema em prol de sua sobrevivncia, na procura da matria-prima para suas reaes metablicas. A despeito da discusso ecolgica, o conhecimento da estrutura e funcionamento do corpo humano necessrio para poder adaptar-se melhor s adversidades impostas pela evoluo e, como tem feito, impor sua soberania entre as espcies, sob o preo, infelizmente, da devastao do ambiente e a extino de vrias espcies. Desta forma, o ato de obter substratos para as reaes orgnicas bsicas que ocorrem no interior das clulas do organismo, em suma, constitui o ato da alimentao. Basicamente, os nutrientes de origem alimentar so fornecidos pelos carboidratos (acares), lipdios (gorduras) e protenas e possuem funo primordial a produo de energia celular. Entretanto, essa concepo, puramente energtica, pode cometer alguns equvocos uma vez que muitas outras molculas so requeridas para o funcionamento celular ou mesmo para proporcionar a absoro adequada dos nutrientes e no esto envolvidas diretamente no processo de produo de energia. Assim sendo gua, eletrlitos e vitaminas, que no possuem uma funo energtica direta, so alimentos indispensveis para o ser humano; precisam estar presentes na dieta para suprir as necessidades dirias do organismo nas reaes orgnicas uma vez que no so sintetizados pelo organismo (a gua produzida nas reaes orgnicas supre apenas cerca de 5% das necessidades dirias do ser humano). De maneira semelhante, as fibras vegetais, que no possuem digesto intestinal no sendo absorvidas, so indispensveis na alimentao por manter a forma do bolo fecal, facilitando a absoro dos demais alimentos. Somente algumas bactrias e protozorios, presentes no sistema digestivo de ruminantes e cupins, conseguem digerir as fibras vegetais (feitas, principalmente, de celulose) sendo, nestes animais, a principal fonte energtica. O conceito clssico de alimento varia de acordo com o ponto de vista, como, por exemplo: A matria prima para a fabricao dos materiais de renovao do organismo
Classificao dos alimentos

Do ponto de vista biolgico, os alimentos se agrupam em trs classes: a) Energticos: so os que fornecem substratos para a manuteno da temperatura corprea, liberando energia trmica necessria para as reaes bioqumicas. So os carboidratos, lipdios e protenas. Os carboidratos so os alimentos energticos por excelncia, pois so diretamente produzidos na fotossntese dos auttrofos e degradados em todos os organismos vivos, sem exceo, a partir de enzimas especficas. Os lipdios e as protenas, apesar de possurem poder energtico superior ou igual aos carboidratos (Tabela 2-1), tm funes outras no organismo, possuindo digesto e absoro lenRicardo Vieira
16 cionando a concentrao exata dos substratos (gua), bem como agentes estabilizadores de vrias enzimas ou mesmo regulando a quantidade de gua intracelular ou a excitabilidade da membrana (minerais). Apesar de no serem digeridas ou absorvidas, as fibras vegetais desempenham funo importante no processo digestivo, como ser visto ainda neste captulo.
tas, sendo utilizados secundariamente como produtores de energia.

Tabela 2-1: Calor de combusto e energia disponveis nas fontes de alimentos mais importantes. Calor de CombusOxidao to in vitro humana (in (bomba calorimvivo) em trica) em kcal/g kcal/g Protenas 5,4 4,1 (*) Lipdios 9,3 9,3 Carboidratos 4,1 4,1 Etanol 7,1 7,1 ( ) * Oxidao das protenas corrigidas pela perda dos aminocidos excretados na urina. Fonte: Harper, 1994, p. 608.
Necessidade de alimentos
O organismo requer nutrientes suficientes para proporcionar energia livre correspondente s necessidades dirias. A manuteno do peso corporal constante o melhor indicador de que existe energia suficiente na dieta e cada grupo alimentar fornece energia prpria sua composio qumica, com as necessidades individuais de energia dependendo de vrios fatores prprios do alimento e outros fatores inerentes de quem se alimenta. A ingesto dos nutrientes deve ser feita de forma balanceada de modo a permitir a absoro sem carncias ou excessos, pois caso isso no seja observado, sobrevm a desnutrio e a obesidade, respectivamente, que so distrbios patolgicos oriundos da alimentao inadequada seja qualitativa ou quantitativamente. A desnutrio constitui-se um grave distrbio alimentcio inerente a ingesto de quantidades insuficientes para manter o metabolismo basal. As substncias de reserva so rapidamente esgotadas e os subprodutos metablicos acarretam vrios distrbios que podem deixar seqelas graves, apesar de, na maioria dos casos, o restabelecimento da dieta normal, promove a volta s condies de normalidade metablica do indivduo. So comuns doenas nutricionais em crianas (principalmente por um fator social, tpico de pases do terceiro mundo) e em adultos em processo de emagrecimento espontneo realizado por meio de dietas que levam em considerao simplesmente a privao da alimentao calrica. Na ocorrncia de desnutrio calrica associada a carncia de protenas, estabelecem-se as sndromes de m-nutrio conhecidas como kwashiakor e marasmo.
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A capacidade energtica dos alimentos dse devido ao alto calor de combusto das ligaes C-C (cerca de 54 kcal). No captulo 3 sobre Bioenergtica, sero abordados temas relativos ao poder calrico das biomolculas. b) Plsticos ou estruturais: atuam no crescimento, desenvolvimento e reparao de tecidos lesados, mantendo a forma ou protegendo o corpo. Novamente, protenas, lipdios e carboidratos so os principais representantes, estando presentes na membrana celular e regio intersticial. Em vegetais, o carboidrato celulose (um polmero de glicose) representa o principal composto da parede celular que garante a forma da clula vegetal, mesmo em perodos de excesso ou escassez de gua. O depsito cumulativo de celulose em algumas rvores apresenta resistncia comparada aos metais resistentes como o ferro. A quitina um polmero muitssimo parecido com a celulose (a exceo de um grupamento -OH substitudo por um NH2 no C2) e que confere extrema resistncia ao exoesqueleto dos artrpodes. A gua e os sais minerais representam os componentes da alimentao que no so exclusivos de organismos vivos, mais possuem funes estruturais importantssimas. c) Reguladores: aceleram os processos orgnicos, sendo indispensveis ao ser humano. So as vitaminas, gua, sais minerais e fibras vegetais. Favorecem a dinmica celular como catalisadores (vitaminas) ou propor-
17 massa corporal mais rapidamente do que o tempo que levou para perd-la, e em quantidade, freqentemente, superior quela observada antes da dieta. Em adultos, o aumento da massa gordurosa se d pelo aumento do volume dos adipcitos, o que torna o esvaziamento brusco, no caso das dietas exageradas, um fator de flacidez para o tecido adiposo que fica propcio a ser reposto em seu volume quando termina a dieta. Desta forma, para o controle da obesidade (exceto para as formas geneticamente determinadas) o controle da massa corporal s possvel por um programa de reeducao alimentar aliado a incorporao de hbitos de atividades fsicas para queimar o excesso de alimentos calricos ingeridos diariamente. Na figura 3-1 est apresentada a frmula de clculo do ndice de massa corporal (IMC) e as faixas de limite inferior e superior do peso ideal para um indivduo, levando em considerao sua altura e peso. peso (kg) [altura (m)]2
O kwashiakor caracterizado por edema (devido a baixa quantidade de protenas no sangue o que leva reteno de gua nos tecidos), leses na pele, despigmentao do cabelo, anorexia, hepatomegalia. conseqncia ingesto inadequada de protenas, mesmo com quantidade suficiente de calorias. O marasmo caracteriza-se pela ausncia de edema, para no crescimento e perda muscular extrema e resultante de uma deficincia calrica prolongada com uma alimentao protica adequada. Freqentemente, uma sndrome desnutricional resultante da combinao dessas duas doenas leva o indivduo morte. A obesidade, por outro lado, corresponde a uma doena dos maus hbitos alimentares, onde o excesso de lipdios e carboidratos (que se convertem em lipdios no fgado, como veremos em captulos posteriores) leva a um acmulo de lipdios nos adipcitos acima dos nveis normais de massa corprea para o indivduo. Este acmulo promove a duplicao do nmero de adipcitos favorecendo o aumento da massa corprea alm nos limites normais para o indivduo. Isso se d devido ao tipo de tecido adiposo existente nas primeiras fases da vida, o tecido adiposo multilocular ou vermelho, que desaparece rapidamente podendo permanecer, entretanto, at a adolescncia. J no incio da maturao sexual, entretanto, h somente o tecido adiposo do tipo unilocular ou amarelo, que no mais se duplica, mas aumenta de tamanho at 100 vezes levando a um aumento no volume do tecido adiposo sem, no entanto, o aumento no nmero de clulas. Um fato interessante observado quando um pr-adolescente obeso submetido a dieta hipocalrica e perde uma quantidade significativa de massa corporal em um curto perodo. Nestes casos, observado o esvaziamento progressivo das reservas de lipdios dos adipcitos, sendo este estmulo desencadeante do processo de diviso celular o que faz com que haja um nmero maior de adipcitos aps o trmino da dieta, apesar de conterem menos lipdios do que anteriormente. Entretanto, esse nmero duplicado de adipcitos permite uma maior absoro de lipdios quando o indivduo retorna s condies alimentcias normais anterior dieta, fazendo com que aumente a
IMC =
18,5 = subpeso 18,5 24,9 = normal 25 29,9 = sobrepeso >30,0 39,9 = obeso 40 = obeso grave (obesidade mrbida) Limite inferior de peso: 20 x [altura (m)]2 Limite superior de peso: 25 x [altura (m)]2 Figura 2-3 - Frmula de clculo de ndice de massa corprea (IMC) e limites de peso a partir do peso e altura de um indivduo. (Fonte: software Biobrs para consultas mdicas http://www.biobras.com.br)
Alguns tipos de cncer esto intimamente relacionados com o tipo de dieta, como o cncer de esfago, estmago, intestino grosso, mama, pulmo e prstata. Aparecem, geralmente, entre os 70 e 80 anos sendo que 15% tm sobrevida de 5 anos. Outros fatores ambientais e genticos influenciam na gnese desses tipos de cncer, porm observado que em pases onde a incidncia de um tipo de cncer baixa observa-se que os imigrantes para pases onde a incidncia do cncer alta, passam a ter um aumento na incidncia da doena, o que sugere a relaRicardo Vieira
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o do surgimento da doena com fatores culturais do pas, como o caso dos tipos de alimentao. A crie dentria um exemplo tpico de doena causada pelo acmulo de alimentos na cavidade bucal, nos espaos interdentrios, que possibilita s bactrias e fungos da flora oral e quelas presente na alimentao, proliferem e produzir produtos abrasivos (p.ex.: cido lctico, etanol, aminas) que destroem progressivamente a dentina dando origem crie. As protenas so utilizadas pelas bactrias para produzir uma matriz viscosa que se fixa aos dentes (placa bacteriana) que permite a proliferao de microorganismos para a produo dos produtos abrasivos. Muitas outras doenas esto relacionadas a distrbios alimentares, dentre elas destacam-se: lceras: relacionada com fatores alimentares, genticos e psicolgicos. Obstruo pilrica: por contrao de uma lcera, processo tumoral ou anomalia congnita e caracterizada por vmitos, distenso abdominal e acidose metablica por perda de cido clordrico; Sndrome de Zollinger-Ellison: lcera pptica causada por um tumor pancretico; Anorexia: distrbio nervoso que induz a fobia de ganhar peso. Bulimia: relacionada com compulso para comer forando o paciente a estimular o vmito para poder comer mais. Anemia perniciosa: acloridria e atrofia gstrica promovem a incapacidade de secretar o fator intrnseco de absoro da vitamina B12, fato comum em indivduos anorexgenos. Sndromes de m-absoro: devido a leses na mucosa gastrointestinal que pode ser causada por microorganismos presentes nos alimentos; Esteatorria: falha na digesto ou absoro dos lipdios; Diarria: produo excessiva de matria fecal por excesso de gua nas fezes.
Balanceamento de alimentos
Para manter o equilbrio do peso corpreo, uma dieta balanceada deve conter alimentos de origem animal e vegetal composta dos vrios tipos de biomolculas, disposto de forma balanceada para suprir as necessidades energticas do indivduo. Os carboidratos e lipdios so primariamente calricos, devendo ser distribudo com parcimnia na alimentao. As protenas possuem alto valor biolgico quando possuem grande variedade de aminocidos. As vitaminas e minerais so requisitadas em pequenas quantidades dirias. A gua tem um volume dirio de acordo com a perda por evaporao, urina e fezes. Os alimentos disponveis para o ser humano so agrupados, de forma didtica, em cinco grupos: Grupo I - Leite e derivados: ricos em protenas de alto valor biolgico, grande quantidade de clcio, vitaminas A, D, E e do complexo B. Grupo II - Carnes, ovos, peixes e mariscos - ricos em protenas de alto valor biolgico, ferro, vitamina A e do complexo B. Grupo III- Gorduras e leos. Grupo IV - Cereais e derivados, legumes secos e produtos aucarados : ricos em carboidratos de carbono, protenas de origem vegetal (baixo valor biolgico), ferro, vitamina B1 e fibras. Grupo V - Hortalias e frutos: ricos em vitaminas, minerais e fibras, com quantidades variveis de carboidratos. Para distribuir os vrios grupos de alimentos dentre as refeies dirias, pode-se estabelecer pores correspondentes a uma xcara de ch (cerca de 200 ml). Grupo I: 2 a 3 pores Grupo II: 1 a 2 pores Grupo III: 2 a 3 pores Grupo IV: 5 a 7 pores Grupo V: 5 a 7 pores A orientao nutricional, entretanto, depende de avaliao clnica de doenas que podem ter complicaes com a alimentao de certos grupos de alimentos (p.ex.: hipercolesterolemia, diabetes mellitus).
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19 aumenta-se o gasto energtico para que o organismo mantenha-se em temperatura estvel (35 - 37oC) o mesmo acontecendo quando a temperatura ambiente est acima da temperatura corporal, sendo que o ser humano resiste bem mais a variaes de temperatura para menos do que para mais, uma vez que o calor passa a ser quase insuportvel a partir de 35oC em virtude de as trocas calricas com o meio ambiente se tornarem mais difceis. Entretanto, h registro de seres humanos que resistem a invernos com temperaturas de at 50oC, o que compreensvel pela existncia de molculas energticas disponveis para mant-lo aquecido, alm de aparatos de proteo, claro. As atividades metablicas dirias variam de acordo com a atividade fsica exercida pelo indivduo e seu IMC, tendo, portanto, cada indivduo uma necessidade calrica diferente. Na Tabela 2-2 podem ser observados valores gerais propostos pela Sociedade Europia de Cardiologia de acordo com o tipo de atividade fsica diria.
Tabela 2-2: Necessidades calricas dirias, de acordo com o tipo de atividade fsica. ATIVIDADE NECESSIDADES FSICA CALRICAS DIRIAS Sedentria/Repouso 30 kcal /Kg de peso desejvel (*) Ligeira/moderada 35 kcal /Kg de peso desejvel Intensa 45-55 kcal /Kg de peso desejvel ( ) * Peso desejvel de acordo com o ndice de massa corprea (IMC). Fonte: Sociedade Europia de Cardiologia.
Necessidades calricas
A energia gasta por um indivduo depende, principalmente dos seguintes fatores: a) Taxa basal metablica: a quantidade de energia necessria para a manuteno das funes fisiolgicas bsicas sob condies padronizadas. Para se estabelecer os valores basais, o indivduo deve estar em repouso, acordado, num ambiente de temperatura adequada e as medidas devem ser feitas pelo menos 12 horas aps a ltima refeio. Esta taxa proporcional ao peso corpreo e rea corporal (quanto maior a rea corporal, maior a perda de calor); nos homens e nos jovens maior que nas mulheres e idosos em virtude de suas atividades metablicas serem diferentes (h uma diminuio mdia de 2% na taxa basal metablica por cada 10 anos de vida, com o tecido muscular substitudo por gordura e gua). Outras atividades metablicas indicam gasto de energia aumentado, como o caso de atividade mental e doenas (principalmente com febre). b) Efeito termognico: os alimentos possuem uma taxa de, aproximadamente, 5 a 10% de energia total fornecida que gasta para ser digerida, o que vai variar de alimento para alimento, dependendo de sua digestibilidade. Desta forma, uma determinada quantidade de um alimento pode ter um rendimento energtico final menor do que a mesma quantidade de um outro alimento que possua uma digestibilidade melhor. Outro fator que influencia neste poder termognico o metabolismo da biomolcula, o que faz com que uma alimentao supercalrica seja convertida em massa gordurosa que se deposita nos adipcitos e no , verdadeiramente, convertida em energia, a menos que o indivduo realize exerccios fsicos alm de sua quantidade normal. c) Atividade fsica: a maior varivel, quanto maior a atividade fsica, maior ser a energia gasta pelo indivduo. d) Temperatura ambiente: quanto a temperatura est abaixo da temperatura corporal,
As necessidades de atletas ou de pessoas que praticam atividade fsica intensa variam grandemente de acordo com o tipo de atividade fsica (Tabela 2-3). Caso no se observe o nvel de energia gasta, o indivduo corre o risco de perder peso ou ter hipotrofia muscular. Tais atividades fsicas, contudo, so amplamente utilizadas em programa de perda de peso associados dieta correspondente ao peso ideal do indivduo. Deve-se ter o cuidado de observar o progresso da perda de peso e dosar os exerccios e dieta quando atingido o peso ideal.
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Fundamentos de Bioqumica - Captulo 2 - Alimentos Tabela 2-3: Consumo aproximado de energia (em kilocalorias) em cerca de uma hora de atividade esportiva. Atividade Esportiva Energia Gasta (kcal/hora) Bicicleta ergomtrica 250 Passeio de bicicleta 290 Caminhada 300 Tnis de mesa 300 Ginstica aerbica 350 Ciclismo 490 Tnis 500 Voleibol 500 Halterofilismo 500 Handebol 520 Bal 550 Basquetebol 600 Remo 600 Futebol 650 Natao 650 Jud 800 Boxe 800 Corrida de 12 km 900 Fonte: Sociedade Europia de Cardiologia.
20 fsicas de deslocamento. Para maiores consideraes acerca do poder energtico dos alimentos, veja o captulo 9 sobre Bionergtica.
Necessidades de fibras
Um dado importante na alimentao a presena de fibras vegetais mesmo que, classicamente, no sejam consideradas alimento, j que no so absorvidas no trato gastrintestinal no possuindo, portanto, funo na bioqumica intracelular. Entende-se por fibras todos os constituintes das paredes celulares dos vegetais que no podem ser digeridos pelas enzimas animais (p.ex.: celulose, hemicelulose, lignina, gomas, pectinas e pentosanos). Nos herbvoros, tais como os ruminantes, as fibras (significativamente a celulose) so as principais fontes de energia, aps serem digeridas por microrganismos (bactrias e protozorios) existentes no trato digestivo desses animais. No homem, dietas com alto contedo de fibras exercem efeitos benficos por auxiliar na reteno de gua durante a passagem do alimento atravs do intestino e ainda produzindo maiores quantidades de fezes macias, facilitando o trnsito intestinal e o processo digestivo como um todo. Uma alta quantidade de fibras na dieta est associada com incidncias reduzidas de diverticuloses, cncer de clon, doenas cardiovasculares e diabetes mellitus. As fibras mais insolveis, tais como a celulose e a lignina, encontradas no gro de trigo, so benficas com respeito funo do clon, enquanto as fibras mais solveis encontradas nos legumes e frutas (p.ex.: gomas e pectinas) diminuem o colesterol plasmtico, possivelmente pela ligao com o colesterol e sais biliares da dieta. As fibras solveis tambm esvaziam o estmago lentamente e deste modo atenuam o aumento da glicose e, consequentemente, a secreo de insulina, sendo este esse efeito benfico aos diabticos e s pessoas que esto de regime alimentar porque diminui o efeito da queda brusca no nvel de glicose sangnea, que estimula o apetite. as principais fontes de fibras so os cereais (principalmente o trigo, a aveia e o arroz integral), amndoa, coco, castanha-do-par, feijo, espiRicardo Vieira
Na Tabela 2-4, pode-se observar que as necessidades energticas variam dentre os sexos. Assim como as mulheres grvidas, as crianas lactentes possuem uma necessidade calrica maiores que os adultos levando-se em considerao as relaes de IMC, bem como as necessidades dirias de protenas variam de cerca de 0,8g/kg de peso corporal/dia em adultos e 2,0g em crianas.
Tabela 2-4: Necessidades calricas dirias recomendadas para homens e mulheres. Categoria Idade Peso Energia neces(anos) (Kg) sria (kcal) Homens 23 - 50 70 2.300 - 3.100 Mulheres 23 - 50 55 1.600 - 2.400 Grvidas + 300 Lactentes + 500 Fonte: Harper, 1994, p.608
Observe que a quantidade de energia de um homem adulto de peso e alturas mdias, pode atingir cerca de 3.100 kcal, o que corresponde a um aporte energtico enorme. Para efeito de comparao, a queima de um grama de gasolina produz 11,5 kcal, o que significa que teramos que gastar cerca de 269g (cerca de 300 ml) de gasolina diariamente para gerar este calor, o que mostra a "economia" de nossa alimentao diria e quo caro manter um automvel para substituir nossas atividades
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Tabela 2-5: Relao dos aditivos alimentares e seus respectivos conceitos. Funo Aditivo Conceito Agentes de mantm firmes ou crofirmeza cantes frutas e hortalias ou fortalecem gis. Agentes de aumentam do volume corpo sem modificar o valor energtico. Antiespuman- evitam a formao de tes espuma. Antiumectan- diminuem as propriedates des de absoro de gua. Tecnologia Emulsifican- permitem a mistura de de tes fases insolveis entre si. fabricao Espessantes aumentam a viscosidade. Espumantes favorecem a formao ou manuteno de fase gasosa. Estabilizantes mantm estveis emulses. Gelificantes conferem a textura de gel. Seqestrantes formam complexos qumicos com ons metlicos, inativando-os. Fermentos aumentam o volume com qumicos a liberam gs. Glaceantes do aparncia brilhante. Melhoradores melhoram o processo de farinha tcnico de produo de farinhas. Antioxidantes retardam a oxidao dos alimentos. Conservado- retardam a ao de miConservante res croorganismos Umectantes protegem contra a desidratao. Reguladores controlam a variao de de acidez pH. Acidulantes aumentam a acidez e/ou Modificao conferem sabor cido. das caracte- Edulcorantes conferem sabor adocicarsticas sendo. soriais Estabilizantes mantm a colorao. de cor Corantes conferem, intensificam ou restauram a colorao natural. Aromatizan- conferem ou reforam tes aromas e/ou sabor. Realadores ressaltam o sabor e/ou de aroma aroma. Fonte: Resolues do MERCOSUL.
nafre, amora, uva, banana, bagao de laranja etc. Um excesso de fibras, entretanto, deve ser evitado pois se ligam com micronutrientes (Zn++ e vitaminas lipossolveis, por exemplo) evitando sua absoro. Desta forma, a ingesta diria est restrita a cerca de 25 30g, modificando-se para mais, de acordo com a sua utilizao como terapia, devendo-se, sempre, ser observado a reposio vitamnica necessria para evitar doenas carenciais.
Alimentos industrializados
Uma caracterstica da alimentao humana que h imensa manipulao antes do consumo, com o uso de agrotxicos, conservantes qumicos, extrao de gorduras, adio de nutrientes etc. O processo de industrializao visa, basicamente, conservar as propriedades nutricionais e organolpticas dos alimentos por um perodo bastante prolongado, o que, freqentemente, promove a perda de vrios nutrientes. As vitaminas, por exemplo, so quase que totalmente destrudas pelo calor, outras so fotolbeis e muitas no resistem ao congelamento, o que faz com que seja necessrio adicion-las aps durante a industrializao dos alimentos. Os aditivos alimentares so, portanto, substncias naturais ou sintticas, adicionadas aos alimentos com o fim de os conservar, processar, intensificar o sabor ou melhorar o aspecto, largamente utilizado pela indstria alimentar e uma constante na dieta humana. Os principais so os conservantes, antioxidantes, corantes, intensificadores de sabor, edulcorantes, reguladores de acidez, emulsionantes, estabilizadores e espessantes. Na Tabela 2-5 encontram-se relacionados as classes de aditivos e seus respectivos conceitos e na Tabela 26 os principais aditivos alimentares. Durante o processo tecnolgico, so utilizados compostos qumicos que devem ser totalmente eliminados do produto final, ou permanecer como traos. So denominados de coadjuvantes de tecnologia de fabricao e correspondem a clarificantes, coagulantes, antimicrobianos, floculantes, inibidores enzimticos, catalisadores, detergentes, resinas etc.
Em todos os pases, existe uma legislao extremamente exigente que limita a quantidade de aditivos no alimento industrializado
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devido existncia de efeitos txicos severos devido ao consumo exagerado. Os edulcorantes sacarina (400x mais doce que a sacarose) e o ciclamato (30x mais doce que a sacarose) chegaram a ser proibidos em 1970 nos EUA devido a estudos que indicavam propriedades carcinognicas, sendo readmitidos na dcada seguinte em nveis seguros de ingesto diria aceitvel (IDA). O aspartame (180x mais doce que a sacarose), apesar de no apresentar efeitos txicos ou mutagnicos, seus metablitos (cido asprtico, fenilalanina e metanol) podem apresentar efeitos colaterais quando consumido em excesso. A fenilalanina produzida contra-indica o uso desse adoante em pacientes com o erro inato do metabolismo conhecido como fenilcetonria, uma vez que no podem metabolizar esse aminocido tendo complicaes neurolgicas severas. Em indivduos normais, entretanto, a observao da IDA DE 40mg/kg no possui quaisquer efeitos colaterais. Os antioxidantes, em particular, possuem uma funo intracelular importante devido a muitos compostos que possuem poder oxidante podem promover alteraes irreversveis em biomolculas (p.ex.: cidos graxos, DNA, enzimas) de funo essencial vida o que possibilita o aparecimento de doenas como o cncer, aterosclerose etc. Para tal, as clulas tm a capacidade de produzir compostos antioxidantes que neutralizam a ao danosa desses produtos txicos Freqentemente, entretanto, h a necessidade obt-los de fontes alimentcias para garantir um estado de saturao plasmtica que impea ou retarde o desenvolvimento de certas doenas (no confundir este alimentos, com os antioxidantes utilizados como conservantes de alimentos). As principais biomolculas presentes nos alimentos com esta propriedade so: Vitamina C: frutas e legumes (citrinos, morangos, pimentos etc.). Beta-caroteno (precursor da Vitamina A): frutas e vegetais de cores fortes (cenouras, abbora, alperces, legumes de folha verde etc.). Vitamina E: leos vegetais, oleaginosas, grmen de trigo, sementes. Selnio: peixe e mariscos.
Bioflavonides: frutas, vinho tinto, ch, caf.
Alguns antioxidantes sintticos como o BHA (OH-anisol-butilado), o BHT (OHtolueno butilado), o TBHQ (OH-quinona butilada) e os derivados do cido glico apresentam efeitos txicos e mutagnicos quando em doses altas em estudos em in vivo, sendo recomendado baixos valores para a IDA. Conservantes como o cido benzico e sulfitos possuem largo uso na industrializao de alimentos e somente em altas concentraes podem induzir a reaes alrgicas ou destruio celular da mucosa intestinal. Da mesma forma, os aromatizantes naturais so preferveis aos sintticos. O benefcio trazido para a sociedade com o advento da industrializao dos alimentos inegvel, porm o cuidado com o uso indiscriminado de produtos txicos, mesmo em baixas quantidades, pode trazer problemas em longo prazo por efeito cumulativo, o que favorece a idia de manter-se na dieta diria uma grande quantidade de produtos frescos ou de confeco caseira.
Tabela 2-6: Principais funes de aditivos em alimentos Funo Aditivos Alimentos Conservao cido propinico, po, queijos, marbenzoatos, BHA, garinas, leos, geBHT, nitrito de lias, picles, carnes sdio, cido ctri- processadas. co. Tecnologia alginatos, lecitina, misturas para bolo, de fabricao pectina, metilbalas, molhos para celulose, gomasaladas, maionese, guar, citrato de leite de coco, sorvesdio, polissorba- tes, queijos procestos, polifosfatos. sados. Modificao aspartame, sacari- sorvetes, iogurtes, balas, ps para das caractena, baunilha, gelatinas, refrigersticas senso- caroteno, rantes, sopas. riais glutamato de sdio, eritrosina. Fonte: Toledo, MCF., 1999 In: Fundamentos de Toxicologia, pg.409.
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23 meio de comunicao celular, h problemas graves para a manuteno da vida, podendo levar leses irreversveis ou at a morte (p.ex.: a produo de corpos cetnicos em excesso pelas clulas de pacientes diabticos; a excreo de hidrognios em demasia durante a fadiga muscular). O alimento contm os mais variados tipos de compostos macromoleculares que precisam ser processados at um tamanho adequado para a sua absoro e aproveitamento pelo organismo. A maioria dos alimentos sofre um processo enzimtico no trato digestivo, sendo que a sede de maior ao digestiva e absoro ocorre no intestino delgado. Aliado a essa ao enzimtica, a ao mecnica exercida pelos msculos lisos do estmago e intestino, promove a homogeneizao do bolo alimentar, facilitando a ao enzimtica. Em captulos posteriores, sero abordados os aspectos mais especficos deste processo, cabendo, agora, apenas uma abordagem introdutria do assunto. Na boca ocorre o incio do processo digestivo com a amilase salivar (ptialina ou (1 4) glicosidase) degradando o amido e o glicognio, quando presente (uma vez que desaparece rapidamente dos alimentos aps o abate dos animais). Este processo incompleto devido o pouco tempo que o alimento passa na boca e a amilase ser incapaz de quebrar as ligaes (1 6) existentes entre as molculas de glicose. No estmago, a ao do HCl inativa a amilase salivar, havendo o trmino da digesto no intestino delgado, sob a ao das enzimas do suco pancretico, pela ao da amilase pancretica. Os demais carboidratos sero degradados por enzimas especficas (as dissacaridases e oligossacaridases) presentes no suco entrico liberado pelas clulas de Brunner e Liberkhn, no intestino delgado. Na verdade, devemos considerar a digesto na boca apenas como uma possibilidade e no como um fato pois seriam necessrios cerca de seis minutos para digerir um grama de amido na boca, o que tornaria a alimentao um processo extremamente lento. As protenas comeam a ser digeridas no estmago atravs de um processo qumicocorrosivo no estmago pela ao do HCl gstrico e tambm enzimtico pela pepsina gstriRicardo Vieira
Digesto e absoro
A forma de introduzir o alimento no organismo por via oral, sendo admitido, em determinadas situaes patolgicas, a alimentao parenteral, por via endovenosa. Este padro reservado aos animais de organizao celular complexa onde a existncia de um tubo digestivo com entrada (boca) e sada (nus) bastante freqente tanto em invertebrados quanto nos vertebrados. Bactrias, fungos e protozorios obtm os alimentos do meio por difuso direta atravs de processo seletivo exercido pela membrana celular que possui papel decisivo tambm na excreo dos produtos inservveis clula (p.ex.: CO2, NH3 etc.). No obstante, os seres unicelulares tambm possuem certa semelhana a este modelo, uma vez que vrios protozorios possuem uma entrada diferenciada. Os processos de fagocitose e pinocitose e os vaclos digestivos so formas primitivas desses organismos unicelulares realizarem a degradao de alimentos em molculas mais simples adequadas ao metabolismo intracelular. O fato de os organismos unicelulares liberarem seus catablitos diretamente para o meio extracelular leva a uma saturao do meio ambiente em que crescem modificando as propriedades qumicas do meio podendo torn-lo insuportvel para a manuteno da vida. o que acontece em um meio de cultura de bactrias in vivo onde a produo de cidos (principalmente o lctico) leva morte das bactrias, caso no haja a renovao do meio de cultura. Os organismos multicelulares no podem livrar-se de seus catablitos da mesma maneira, uma vez que a morte das clulas vizinhas compromete a vida o organismo como um todo. Desta forma, surge a organizao de um complexo sistema de digesto, transporte de nutrientes e excreo realizados em tubos celulares (veias, artrias, vasos linfticos, vias respiratrias, tubo digestivo) e rgos anexos especializados (estmago, fgado, rins, corao, pulmes) trabalhando integrados de maneira a preservar o equilbrio da composio do meio extracelular dos tecidos (lquido intersticial) e, por conseguinte, do meio intracelular, evitando a morte celular. Em certas condies patolgicas onde se perde este eficaz
24 Um resumo das aes digestivas pode ser observado na Tabela 2-5. Para ter uma viso geral do processo de absoro dos nutrientes, observe os itens abaixo: Carboidratos: so absorvidos somente na forma de monossacardeos; glicose, galactose e frutose so absorvidos mediante mecanismos especficos de transporte ativo (contra gradiente de concentrao, com gasto de ATP); h absoro preferencial de glicose pelas clulas intestinais; so drenados pelo sistema porta heptico; aps a absoro, o fgado libera parte da glicose para a corrente sangnea e promove a converso da glicose em excesso em glicognio; a glicose sangnea corresponde ao principal carboidrato circulante. Alguns outros monossacardeos so identificado em quantidades muito pequenas, sendo resultantes de reaes tautomricas espontneas da molcula da glicose.

ca e da renina (importantes em lactentes por promover a coagulao das protenas do leite na presena de Ca++). No Intestino delgado, as enzimas proteolticas do suco pancretico continuam a digesto atravs de endopeptidases (quebram as ligaes peptdicas do meio da molcula em ligaes especficas: tripsina, quimotripsina e elastase) e exopeptidades (quebram as extremidades das molculas: carboxipeptidases). No suco entrico, h o trmino da digesto das protenas com a ao de uma exopeptidase que quebra a partir da extremidade aminoterninal, a aminopeptidase. Os lipdios so digeridos enzimaticamente no intestino pela lipase pancretica, aps um processo de emulsificao pela bile. Uma lipase lingual secretada pelas clulas da base da lngua porm no faz parte da saliva, sendo deglutida para o estmago onde inativada, no possuindo, portanto, funo digestiva importante. Desta forma, a lipase gstrica descrita por alguns autores tambm no possui ao digestiva significativa (provavelmente corresponde prpria lipase lingual e no uma enzima produzida pelo estmago). Assim sendo, a ao digestiva do estmago sobre os lipdios resume-se ao peristltica sobre o bolo alimentar, formando uma mistura homognea rica em gorduras. O colesterol no sofre degradao em sua estrutura bsica, sendo apenas separado das lipoprotenas que os transportam ou de outros cidos graxos ao qual estejam esterificados. Somente os tri-acil-gliceris e os demais lipdios esterificados, sofrero ao da lipase pancretica, com a liberao dos cidos graxos constituintes, glicerol e outros compostos que faam parte da composio lipdica. Os cidos nuclicos no possuem grande importncia na alimentao, uma vez que so bio-sintetizados. No estmago h a separao das nucleoprotenas, havendo a digesto por ribonucleases e desoxirribonucleases do suco pancretica e de nucleosidases e fosfatases do suco entrico. O interessante que h um processo de excreo, como cido rico, de parte das bases nitrogenadas adenina e guanina presentes na alimentao, ainda na mucosa intestinal. As demais bases so absorvidas na forma de nucleotdeos e so degradados no fgado em suas formas catablicas.
Protenas: so absorvidos na forma de dipeptdeos e de aminocidos; os dipeptdeos so absorvidos mais rapidamente que os aminocidos, devido existncia de mecanismos especiais de transporte; na superfcie da mucosa intestinal se localiza um grande nmero de mecanismos especficos de absoro para vinte diferentes aminocidos; so drenados pelo sistema porta heptico; fgado procede a sntese das inmeras protenas plasmticas a partir dos aminocidos absorvidos na alimentao. Os aminocidos no-essenciais so sintetizados pelo fgado, o que faz com que o excesso da alimentao seja convertido a uria (pela retirada do grupamento amino) e haja o aproveitamento da cadeia carbonada em processos metablicos como a neoglicognese ou o metabolismo energtico.
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Fundamentos de Bioqumica - Captulo 2 - Alimentos Tabela 2-5: Resumo das aes digestivas dos principais materiais alimentcios. Material Ao digestiva Produto final alimentcio Amido e gliamilase salivar e maltose + glicognio pancretica cose Dissacardeos dissacaridases ent- monossacarricas deos Monossacarnenhuma deos Protenas 1. cido clordrico e 1. polipeptpepsina gstrica deos grandes 2. tripsina, quimo2. polipepttripsina e carboxideos, dipeptpeptidades pancre- deos e ticas aminocidos. 3. aminopeptidase 3. aminocidos. entrica Tri-acilemulso com bile, cidos graxos e gliceris hidrlise pela lipase glicerol (triglicerdeos) lingual (gstrica) e pancretica (*) Colesterol separao das lipoprotenas de transporte. Sua molcula, porm, no sofre processo digestivo cidos nunucleases pancrenucleosdeos clicos ticas e entricas (*) A ao da lipase pancretica a mais importante, com a lipase lingual exercendo sua funo apenas no estmago (= lipase gstrica) e com baixa atividade devido ao pH extremamente cido (<2,0) do suco gstrico.
25 os cidos graxos de cadeia curta no so reesterificados, ingressando rapidamente na circulao porta, fixando-se albumina; as vitaminas lipossolveis (A, D, E e K) so absorvidas juntamente com os lipdios, sendo que sua absoro depende de uma absoro lipdica normal. A absoro da vitamina K modificada pela ingesto e metabolismo do clcio. gua e eletrlitos: a gua tem absoro maior na mucosa do intestino grosso; sdio absorvido por mecanismo de transporte ativo ligado a absoro de aminocidos, bicarbonato e glicose; transporte do clcio est relacionado com a vitamina D e o hormnio paratireide, sendo regulado por uma protena fixadora de clcio nas clulas intestinais; ferro absorvido aps ser reduzido pelo cido clordrico gstrico sendo transportado pelas clulas da mucosa intestinal antes de se ligarem s protenas transportadoras plasmticas. H um limiar para o transporte na mucosa, sendo que h um limite de saturao pela mucosa intestinal. cidos nuclicos: so absorvidos na forma de nucleotdeos a nvel intestinal, sendo que grande parte das purinas (adenina e guanina) convertida em cido rico ainda na mucosa intestinal e excretado pelas fezes; cido rico presente no sangue corresponde ao decorrente da degradao das purinas no fgado. Quando h um defeito hereditrio com hiperatividade da sntese de cido rico, caracteriza-se uma doena gentica muito comum conhecida como gota.
cidos graxos: aps a digesto, as micelas so absorvidas pela mucosa intestinal indo a parte correspondente aos cidos biliares para a circulao porta heptica; os cidos graxos e os monoglicerdeos so absorvidos pela clula intestinal por difuso; os cidos graxos de cadeia longa (acima de 16 carbonos) so reesterificados (num processo denominado sntese "de novo") para formar novos tri-acil-gliceris, que se fixam a apoliprotenas dando origem aos quilomcrons; essas lipoprotenas (quilomcrons) so drenados para o sistema linftico e transportadas para o duto torcico; uma vez que no vo ao fgado, h a deposio dos tri-acil-gliceris reesterificados nos adipcitos s sendo degradados no processo metablico energtico quando houver a carncia de carboidratos ou o aumento da necessidade energtica;
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Gastro-Intestinal Research FoundationGIRF): http://homepage.interaccess.com/~ring/girf/girf.html Vitaminas e Minerais: http://www.cyber-north.com/vitamins/
EXERCCIOS 1. Qual a relao ecolgica entre produtores, consumidores e decompositores? O que isso diz respeito ao estudo dos alimentos? 2. Comente sobre a classificao dos alimentos do ponto de vista biolgico. 3. Discuta a necessidade diria de alimentos em relao aparecimento de doenas nutricionais. 4. Qual a importncia do ndice de Massa Corprea (IMC) no estudo de patologias nutricionais? 5. Comente sobre doenas alm da desnutrio e obesidade que podem estar relacionadas com os alimentos. 6. Conceitue taxa basal metablica e efeito termognico dos alimentos. 7. Faa um levantamento de sua alimentao diria mdia e relacione com sua atividade fsica e IMC. 8. Qual a importncia das fibras na alimentao? 9. Qual a importncia do estudo da composio dos alimentos industrializados para a manuteno da sade humana? 10. Faa um resumo das principais aes de digesto e absoro dos alimentos. Para navegar na Internet
Fundamentos de Bioqumica: http://www.fundamentosdebioquimica.hpg.com.br Tecnologia de Alimentos: http://www.cetec.rmg.br/cetec/alimento/alimento.html UNICAMP - Sade e Vida On Line http://www.nib.unicamp.br/svol Sociedade Portuguesa de Cardiologia http://www.spc.pt/publico/principal.htm Biobrs: http://www.biobras.com.br Digestive Desease Center: http://www.niddk.nih.gov/DigestiveDocs.html Dispepsia: http://www.geocities.com/HotSprings/5591/ Am I the Only One Left? (about vitamins): http://www.suite29.com/combs Diarrhea: http://regina.ism.ca/trakker/Medical/TravDiar.htm
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Captulo 3 cidos Nuclicos

o auge dos estudos citolgico, em 1889, Johann Frederick Miesher isolou do ncleo celular uma substncia de carter cido noprotica e apresentando fsforo em sua composio, ao qual denominou nuclena. Este cido do ncleo (cido nuclico) que garantia a propriedade de colorao por corantes bsicos ao ncleo e que hoje se sabe tratar do cido desoxirribonuclico (DNA) e do cido ribonuclico (RNA), apesar deste ltimo ter sido isolado, primariamente, no citoplasma nas formas de RNA mensageiro (RNAm), transportador (RNAt) e ribossmico (RNAr). Com a inveno de um corante especfico para DNA, Robert Feugen, em 1920, proporcionou a descoberta que o DNA localiza-se nos cromossomos durante a diviso celular. Os cromossomos j haviam sido descritos como fundamentais para o processo de reproduo celular desde 1879 por Fleming, entretanto nunca relacionados como portadores dos elementos responsveis pelos caracteres hereditrios, os genes. Na verdade Mendel, em 1865, estabelecera os princpios universais da hereditariedade, porm seu trabalho permaneceu obscuro at de Vries, Correns & Tschermnan em 1900 redescobrirem o trabalho de Mendel e relacion-lo com os achados mais recentes da ento recm-criada cincia, a gentica. O curioso que em 1859, Charles Darwin (seis anos antes de Mendel) j havia revolucionado o pensamento ocidental com a formulao de seus princpios sobre a evoluo, mas provavelmente no deve ter reconhecido nos trabalhos de Mendel o componente essencial para a transmisso dos caracteres selecionados pela natureza e que garantiam a perpetuao da espcie. De uma maneira geral, at 1952 no havia consenso entre os cientistas sobre a verdadeira natureza qumica dos genes, com muitos acreditando tratar-se de protenas altamente especializadas. Isto comeou a ser esclarecido aps os estudos de Griffth em 1928 que
demonstrou a existncia de um "princpio transformante" em cepas de Dipoplococcus pneumoniae responsvel pela pneumonia experimental em camundongos (Figura 3-1) e de Avery, MacLeod e McCarty em 1944, que demonstraram que o DNA era este princpio, atravs de experimentos onde o princpio transformante era destrudo pela ao enzimas que destroem o DNA.
Figura 3-1 - Experimento de Griffth (1928). Colnias lisas (S) de D. pneumoniae induzem a morte de um camundongo por pneumonia, enquanto que colnias rugosas (R) no o fazem . Quando submetido ao calor, colnias R tornam-se inertes , porm quando misturas a colnias S mortas pelo calor, transformamse em letais .
Entretanto, foi somente em 1952 que os experimentos de Alfred Hershey e Martha Chase identificaram o DNA como o responsvel pelas caractersticas genticas de bacterifagos (Figura 3-2), sendo este conceito hoje tido como quase que universal para todos os seres vivos, j que H. FraenkelConrat & R. Williams em 1955 identificaram os vrus do tabaco como possuidor somente de RNA (os retrovrus), achado fundamental para impedir que o dogma cientfico de que o DNA a nico molcula guardi dos caracteres genticos dos seres vivos. Isto torna-se bem mais evidente com os estudos de Stanley Prusiner e colaboradores sobre os PRIONS (Proteinaceous Infecti-
Fundamentos de Bioqumica - Captulo 3: cidos Nuclicos
28 sultados de trabalhos de Edwin Chargaff (composio percentual idntica de Adenina e Timina, Citosina e Guanina no DNA e diferente no RNA), Linus Carl Pauling (estrutura molecular e comprimento de ligao de bases nitrogenadas) e de Rosalind Franklin e Maurice Wilkins (difrao de raios-X mostrando a natureza de dupla fita do DNA). O modelo favorece concluses sobre o mecanismo como o DNA se duplica e, ainda mais, como coordena a sntese protica a partir da sntese de RNA a partir de um molde de DNA e a combinao de trs nucleotdeos (cdon) para a decodificao deste cdigo gentico nos ribossomos.
ous Particle) que so molculas proticas que se multiplicam independente de controle gentico do DNA ou RNA como os vrus, mas so responsveis por doenas infecciosas graves, como a observada entre tribos africanas praticantes do canibalismo e da encefalite espongiforme bovina que acometeu o gado europeu do fim deste sculo conhecido como a doena da "vaca louca".
Figura 3-2 - No experimento de Hershey e Chase (1952), vrus bacterifagos foram cultivados em meio contendo enxofre e fsforo radioativos (35S e 32P), marcando-se as protenas e o DNA, respectivamente. Aps a infeco desses bacterifagos em bactrias Escherichia. coli observou-se que o 35S (portanto, as protenas) no penetrava nas bactrias e somente o 32P (o DNA) penetrava e induzia a replicao do vrus.
As protenas prinicas so pelo produzidas pelo prprio organismo, mas em uma configurao espacial inerte e que se modificam quando em contato com protenas idnticas quanto composio, mas de configurao espacial diferente e que so ingeridas na alimentao principalmente de alimentos oriundos de tecidos da mesma espcie (p.ex.: em rituais canibalescos ou em animais alimentados com rao feita com restos de animais da prpria espcie). A interao entre essas protenas permite a formao de novas protenas independente de um distrbio gentico, gerando alteraes celulares graves, principalmente no tecido nervoso (Figura 33). Em 1953, o mundo cientfico teve seus horizontes redirecionados com a publicao do trabalho de Watson & Crick sobre a estrutura do DNA. Neste artigo extremamente simples, os dois jovens cientistas, ainda estudantes de ps-graduao da Universidade de Cambridge na Inglaterra, propuseram a famosa estrutura de cadeia em dupla hlice para a molcula de DNA, a partir da anlise dos re-
Figura 3-3 Os PRIONS possuem estrutura primria idntica, mas terciria diferente em relaes s protenas prinicas celulares. Mecanismos de interao protena-protena ainda no totalmente esclarecidos promovem a replicao de novas protenas com a configurao espacial causadora de danos celulares.
Desde ento, um ramo novo do estudo gentico deve incio, com a era da biologia molecular inaugurando tcnicas sofisticadas do estudo do DNA que favorecem desde a descoberta da base gentica de vrias doenas, bem como o seu diagnstico e o tratamento, como essa terapia gnica e uma cincia nova, a farmacogentica, sendo o caminho mais espetacular vislumbrado para a medicina no sculo XXI. A despeito dos aspectos ticos que envolvem a pesquisa com o DNA, experimentos com a clonagem de seres vivos j permitem a manipulao dos genes para o melhoramento da agricultura e rebanho, sendo que apenas uma questo de tempo a manipulao de genes humanos com fins de tratamento das mais variadas doenas.
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Nucleotdeos
Todas as clulas dos seres vivos possuem DNA e RNA, com exceo dos vrus que no so organismos celulares e possuem DNA ou RNA em sua composio, nunca os dois ao mesmo tempo (os PRIONS ainda precisam ter melhor caracterizada sua relao com os seres vivos, mas no possuem cidos nuclicos em sua composio, sendo somente protenas) O DNA difere do RNA em vrios aspectos que vo desde a composio molecular, forma estrutural, at a funo e mecanismo de sntese, possuindo, entretanto, vrias semelhanas que os torna molculas irms e de extrema importncia para o estudo da bioqumica celular, por serem responsveis por todas as caractersticas da clula e as molculas alvo da evoluo. Quimicamente, os cidos nuclicos so polmeros de nucleotdeos unidos por ligaes do tipo fosfo-di-ster, formando uma molcula polimrica. Nucleotdeos so as unidades bsicas dos cidos nuclicos e so formados, sempre, por uma molcula de pentose a qual se liga a uma molcula de base nitrogenada e uma molcula de fosfato em pontos especficos e de maneira covalente, adquirindo forma estrutural helicoidal prpria e caracterstica do tipo de molcula. Embora faam parte da composio dos cidos nuclicos, os nucleotdeos so encontrados na forma livre dentro da clula, sendo responsveis por funes no relacionadas diretamente com a reproduo celular, como o caso do ATP (Figura 3-4). A unio das bases nitrogenadas pentose, somente, forma um nucleosdeo, ou seja, um nucleotdeo desprovido e fosfato. A pentose (monossacardeo de 5 carbonos) pode ser a ribose (no RNA) ou a desoxirribose (no DNA) ambas em sua forma cclica pentagonal de furanose. Em um nucleotdeo, convenciona-se identificar os carbonos da pentose acrescentando o apstrofo para diferencia-lo dos carbonos da base nitrogenada, desta forma o C1', C2', C3' e C5' esto aptos realizar ligaes qumicas atravs das hidroxilas (-OH) livres nestes carbonos, com exceo da desoxirribose que no possui hidroxila no C2' (Figura 3-5).
Figura 3-4: Estrutura molecular da adenosina-trifosfato (ATP), um nucleotdeo. A base nitrogenada liga-se ao C1' e o fosfato no C5' da pentose.
Figura 3-5 - As pentoses presentes nos cidos nuclicos so a ribose (no RNA) e a desoxirribose (no DNA) que possui uma -OH a menos no C2'.
As bases nitrogenadas presentes nos cidos nuclicos so de dois tipos: as bases pricas, purnicas ou, simplesmente, purinas e as bases pirimdicas, pirimidinicas ou pirimidinas (Figura 3-6), com todas elas ligando-se molcula de pentose no C1', sendo que nas purinas o ponto de ligao o nitrognio na posio 9 (N9) e nas pirimidinas o N1. Presentes tanto no DNA quanto no RNA, encontram-se a adenina, citosina e a guanina, com a timina sendo prpria do DNA e a uracila do RNA. Esta excluso de bases nitrogenadas d-se devido impossibilidade da timina no RNA e uracila no DNA parearem formando uma perfeita hlice.
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30 tura final do DNA e RNA ocorre entre a hidroxila do C3' de um nucleotdeo com o fosfato hidroxila do C5' do outro nucleotdeo, de forma que sempre o C5' do primeiro nucleotdeo ter um fosfato livre, enquanto que o ltimo nucleotdeo adicionado ter sempre -OH livre no C3'. Esta uniformidade na configurao da cadeia polimrica de nucleotdeos, tanto de DNA quanto de RNA, confere uma direo molcula onde convencionado que o primeiro nucleotdeo de uma determinada seqncia o que tem a extremidade 5' livre, enquanto que o ltimo ter a extremidade 3' livre. Como todas as molculas de cidos nuclicos so formadas por nucleotdeos polimerizados e como somente a base nitrogenada podem variar, o fosfato e a pentose no so descritos em representaes simplificadas das seqncias de RNA e DNA (Figura 3-8). A molcula de DNA, por ser em dupla fita, possui as duas cadeias orientadas em sentido antiparalelo, ou seja, uma cadeia est no sentido 5' 3', enquanto que a outra est no sentido 3' 5'. A molcula de RNA, em fita simples, possui somente orientao 5' 3'. Detalhes da estrutura de DNA e RNA sero abordados a seguir.
Figura 3-6 - As bases nitrogenadas que fazem parte da composio dos cidos nuclicos. As bases purnicas ligam-se ao C1' da pentose atravs do N na posio 9, enquanto que as bases pirimidnicas ligam-se em C1 pelo N1.
Entretanto, comum observar modificaes na estrutura molecular das bases nitrogenadas aps o processo de sntese do DNA ou do RNA j haverem sido concludo, o que pode levar, ocasionalmente, presena de uma pseudotimina no RNA quando h a metilao no C5 da uracila e de pseudo-uracila no DNA por demetilao da timina (compare as diferenas da estrutura dessas bases nitrogenadas na Figura 3-6). Essas modificaes podem ter funo na estrutura da molcula (como o caso da pseudotimina que caracteriza uma das regies do RNAt) ou ter reflexos negativos para a vida da clula (como no caso da metilao de timina em regies codificadoras de protenas na molcula de DNA). A ligao entre os nucleotdeos ocorre, portanto, atravs de ligaes covalentes extremamente fortes tendo um grupamento fosfato como ligante, as ligaes fosfo-di-ster (Figura 3-7). Essas ligaes garantem um "esqueleto" covalente rgido para a molcula de cido nuclico e que s clivado sob ao de enzimas hidrolticas digestivas denominadas de nucleases (DNase e RNase). A ligao entre as molculas de nucleotdeos que permite a polimerizao e a estru-
Estrutura molecular do DNA

Quando Watson & Crick formularam sa teoria sobre a estrutura do DNA, confeccionaram modelos em madeira das molculas, obedecendo a proporo entre o comprimento de ligao das bases nitrogenadas e da desoxirribose. Em uma espcie de jogo de tentativa e erro, observaram que a nica combinao possvel para garantir a estabilidade de um modelo em dupla hlice revelava duas caractersticas que viriam a ser fundamentais para a compreenso da qumica e biologia do DNA: as duas cadeias so antiparalelas (opostas entre si) e esto unidas por pontes de hidrognio. Estas observaes permitem algumas concluses importantes, como o fato que as pontes de hidrognio so bem mais fracas do que a ligao covalente do esqueleto pentosefosfato, fazendo delas o alvo do processo de diviso celular, uma vez que a molcula de DNA pode ser quebrada em dois moldes (uma
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31 atravs de duas pontes de hidrognio, enquanto que citosina lia-se somente com guanina atravs de trs pontes de hidrognio. Qualquer outro tipo de ligao entre bases nitrogenadas impossvel e traria instabilidade estrutural molcula (Figuras 3-9 e 3-10).
paralela a outra) e depois ser reconstrudo em duas novas molculas idnticas. Este processo de duplicao do DNA a chave da compreenso dos processos de diviso celular vitais para a cincia, que at ento no podiam ser compreendidos. A construo de uma cadeia polimrica de DNA requer que as duas cadeias alinhem-se de forma que as bases nitrogenadas adenina s podem ligar-se timina,
Figura 3-7 - Direo da polimerizao orientada no sentido 5' 3'' de um dmero de RNA. Observe como o primeiro nucleotdeo sempre ter a extremidade 5' livre e o ltimo extremidade 3'. A ligao do tipo fosfo-di-ster extremamente rgida e confere alta estabilidade cadeia polimerizada de cidos nuclicos.
Seqncia de DNA 5-AAGTCCGTGCTGCGTGCGTGATGAATG-3 3-TTCAGGCACGACGCACGCACTACTTAC-5 Seqncia de RNA 5-UUAGGGCAUUGUACAUCCCUUAAACCU-3

Figura 3-8 - Representao simplificada de uma seqncia de DNA e de RNA (oligonucleotdeo). Observe que a orientao das duas cadeias de nucleotdeos do DNA oposta entre si.
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32 (Figuras 3-11). As seqncias de DNA onde h muitas ligaes entre guanina e citosina (GC) so mais resistentes, devido ao maior nmero de pontes de hidrognio formadas. A direo do eixo da dupla hlice para a direita e em cada volta h cerca de 10pb (pb). Em conseqncia a esta conformao, h uma cavidade maior e uma outra menor na forma de um sulco na superfcie da molcula, locais importantes de ligao com protenas estabilizadoras ou de outras envolvidas na regulao da replicao do DNA.
Figura 3-9 - O pareamento das bases nitrogenadas ocorre com duas pontes de hidrognio entre a adenina e timina, e com trs pontes de hidrognio entre guanina e citosina, o que faz com que os pontos contendo ligaes GC representem mais resistncia para a seqncia de DNA.
Com essa caracterstica qumica, responde-se a extrema fidelidade na duplicao da molcula de DNA durante a diviso celular, o que garante seu papel como controlador da expresso gnica. Os genes, portanto, so compostos de DNA e mantm-se estveis durante o processo de duplicao do DNA, um processo denominado de replicao. A mutao em qualquer um desses nucleotdeos, leva desordem na traduo do cdigo gentico, permitindo modificaes celulares que sero mantidas ou excludas por seleo natural. Todas essas consideraes so possveis a partir do momento que se conclui a estrutura helicoidal do DNA A forma estrutural final da molcula de DNA representada por uma dupla hlice em espiral comparada a uma escada em espiral, onde o corrimo da escada representa a pentose unida pela ligao fosfo-di-ster, enquanto que os degraus correspondem s bases nitrogenadas unidas por pontes de hidrognio
Figura 3-10 - Organizao da cadeia de DNA em fita dupla, mostrando o sentido antiparalelo 5' 3' e 3' 5'. As pontes de hidrognio ocorrem entre adenina e timina ou entre guanina e citosina (sempre uma purina e uma pirimidina) garantindo o tamanho constante da cadeia.
O modelo molecular descrito por Watson & Crick corresponde ao mais abundante tipo de DNA encontrado nas clulas, j=hoje denominado de B-DNA. A forma A-DNA mais condensada, observada em meio extremamente hipertnico e possui mais de 10pb por volta completa da dupla hlice. A forma Z-DNA est relacionada, com a regulao da expresso gnica e que apresenta a configurao em zig-zag com giro da hlice para esquerda, ao contrrio das demais formas de DNA que apresenta o giro para a direita.
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33 dupla hlice em cadeia circular. Os parvovrus (p.ex.: da parvovirose canina) possuem seu genoma na forma de uma cadeia simples monofilamentar de DNA, enquanto que alguns vrus podem apresentar cadeia hbridas DNA/RNA (p.ex.: o vrus da hepatite B). Os retrovrus (p.ex.: o vrus do HIV) possuem em seu genoma somente o RNA. Quanto maior o nmero de genes, maior o tamanho da cadeia de DNA, o que faz com que o DNA dos eucariotas possuam uma estrutura molecular complexa que permita a compresso dos genes dentro do ncleo celular de forma organizada. A organizao do DNA em procariotas e em mitocndrias e cloroplastos possuem uma organizao mais simples.
O genoma eucarioto
Figura 3-11- Estrutura do DNA, segundo Watson & Crick (1953). Uma volta completa possui cerca de 3,4nm e 10 pb; distncia entre as fitas de cerca de 2,0nm. A cavidade maior e menor so stios de ligao a protenas estabilizadoras e da replicao.
Uma forma de DNA obtido por sntese in vitro a C-DNA, na qual todas as seqncias so codificadoras, ao contrrio das demais formas que h regies no codificadoras mesmo dentro das seqncias gnicas. Em virtude das molculas de DNA serem extremamente grandes, a unidade de medida o kb (kilobase, ou seja, 1000 pb) que corresponde a 6,6 x 105 de peso molecular e 340 nm de comprimento. Algumas espcies contm molculas simples de DNA, de tamanho diminuto, como a bactria E.coli (4 x 106 pb e 1,4 mm de comprimento). Supe-se que o genoma (conjunto de genes) humano possua cerca de 4,5 x 106 kb e 1,5m de comprimento distribudos em 23 pares de cromossomos. Apesar de a grande maioria dos seres vivos possurem a molcula de DNA em dupla fita e linear, o genoma dos seres vivos pode apresentar-se na forma de monofilamento e em cadeia circular. Os plasmdeos e cromossomos bacterianos, o DNA de cloroplastos e mitocndrias e o DNA dos papovarrus (p.ex.: vrus do herpes), possuem forma de
A molcula de DNA contm as seqncias responsveis pela sntese das protenas e dos RNA ribossmico e transportador que, junto com o RNA mensageiro (tambm sintetizado a partir do DNA) so essenciais para a sntese protica. Quanto mais complexo o organismo, mais adaptaes bioqumicas ele possui o que corresponde a necessidade de mais genes para expressar as caractersticas genticas. A molcula de DNA torna-se cada vez maior e tende a se enovelar para ser contida dentro do ncleo celular. Na forma linear as duas fitas so livres para rotao sobre seu prprio eixo o que favorece a um emaranhado de DNA que visvel ao microscpio ptico como a cromatina nuclear. Quando mais condensada a colorao da cromatina, mais compactado o DNA, quanto mais frouxa a colorao, menos denso o emaranhado molecular. Protenas da classe das histonas desempenham papel fundamental na organizao dos cromossomos, promovendo o enovelamento da molcula de DNA em torno de quatro tipos de histonas (H2A, H2B, H3 e H4) repetidas duas vezes, formando um octmero onde a molcula de DNA se enrola cerca de duas vezes e meia (146pb) por sobre o octmero de histonas, formando uma estrutura na dimenso de 6 x 11nm denominada nucleosomo. Cada nucleossomo afastado de outro atravs de um dmero de histonas H1 os quais
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34 antes da migrao para as clulas filhas), gerando o aspecto caracterstico em forma de X. Esses cromossomos metafsicos so fotografados e, a partir do padro de bandas que apresentam, so agrupados, par a par, formando uma espcie de mapa cromossmico, denominado de caritipo (Figura 3-14). Desta forma, os estudo do nmero de cromossomos e as regies onde esto localizados os genes, permite a deteco de inmeras doenas de origem gentica, como a trisomia do cromossomo 23 (sndrome de Down) ou a presena de translocaes de regies de um cromossomo para outro (p.ex.: a transferncia de parte do cromossomo 9 para o 22 na leucemia linfide aguda o cromossomo Filadlfia).
vo se agrupando formando um bloco compacto de cerca de 30 nucleossomos, afastados entre si por protenas estabilizadoras que se ligam em seqncias especficas da cadeia do DNA formando uma estrutura solenide e estas organizam-se nos filamentos de cromatina (Figura 3-12). As histonas so protenas existentes em todos os eucariotas e o gene que as codifica possui uma seqncia muito semelhante em todos os seres vivos, o que demonstra que ela uma das protenas mais conservadas durante a evoluo, dada sua importncia para a estabilizao do DNA. Os blocos de nucleossomos compactam-se nos cromossomos, que no podem ser vistos em uma observao microscpica de uma clula que no esteja em diviso celular, por um motivo bem simples: durante o perodo de atividade da clula, os genes devem estar desenrolados ao mximo para facilitar a sntese de RNAm para a iniciar a sntese protica, o que necessita que os cromossomos estejam na forma desespiralizada. No entanto, quando se inicia o processo de diviso celular, aps a duplicao da molcula de DNA, necessrio que cada nova molcula migre para as clulas filhas, o que permitido graas compactao mxima dos cromossomos, uma vez que somente as enzimas da diviso celular esto ativas e no h a necessidade da sntese de todas as protenas que normalmente existem na clula. Na observao dos cromossomos durante a diviso celular, atravs de tcnicas de colorao especiais (mtodos citogenticos), pode-se observar que h reas mais densas e outras mais frouxas de cromatina, denominadas de heterocromatina e eucromatina, respectivamente (Figura 3-13). Cada regio de heterocromatina corresponde a uma rea de menor atividade gnica e as de eucromatina a de maior concentrao de genes ativos. O mtodo de colorao de cromossomos mais antigo e ainda usualmente utilizado basea-se no corante de Giemsa que, aps tcnica de colorao e descolorao seletiva, pode-se estabelecer um padro de bandas coradas (heterocromatina) e descoradas (eucromatina) dos cromossomos estudados em clulas cujo processo de diviso celular foi interrompido na metfase (aps a duplicao do DNA e
Figura 3-12 Enovelamento da molcula de DNA sobre as molculas de histona, formando os nucleossomos e, posteriormente, os cromossomos.
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Anatomia do gene
O gene uma seqncia de DNA que contm o cdigo gentico para a sntese de protenas (a partir do RNAm), RNAt e RNAr. Entretanto, como pudemos estudar anteriormente, o estudo citogentico evidencia reas no cromossomo onde no h atividade gnica, o que significa dizer que nem todas as regies da molcula do DNA contm informaes que codificam a sntese protica. Isto tpico do genoma eucaritico, que, devido a enorme quantidade de gene, tem que enovelar tremendamente impossibilitando que todas as regies do DNA estejam disponveis para a funo codificadora. Realmente, as regies no codificadoras foram denominadas, primariamente, de espaos intergnicos, DNA espaador e at o absurdo nome de DNA-lixo evidenciando a idia de que havia regies entre os genes que seriam simples espaos destinados a ficar enovelado sem conter genes. Entretanto, com o advento de tcnicas de anlise da composio molecular do DNA foi descoberto que os genes no so compostos de seqncias codificadoras contnuas, mas que havia regies no codificadoras dentro do prprio gene. E ainda mais, tanto as regies no codificadoras entre os genes quanto s de dentro do gene possuam funo na regulao da expresso do gene, funcionando no como uma regio simplesmente espaadora, mas tambm reguladora. Dentro do gene, a regio que contm as seqncias codificadoras, so denominadas xons e as no codificadoras so denominadas ntrons (Figura 3-15). Como a fita de DNA dupla, apenas uma delas responsvel pelo cdigo gentico, que lido no sentido 5 3, a direo em que a enzima DNA polimerase, responsvel pela sntese do DNA. Desta forma, a fita complementar pode codificar uma outra protena, pois possui direcionamento contrrio e seqncia nucleotdica diferente. As clulas procariticas possuem genoma mais compacto, sem regies no codificadoras, e a leitura se faz em ambas as fitas como uma maneira de melhorar a economia da clula, o que faz com o genoma seja mais prtico e funcional. Os DNA mitocondrial e
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Figura 3-13 Representao de cromossomo metafsico corado pelo Giemsa revelando um padro de bandas (bandas G) que individualizam cada cromossomo e permite uma anlise do papel dos cromossomos na biologia celular.
Figura 3-14 O caritipo humano revela 23 pares de cromossomos agrupados de acordo com os padres de bandas apresentados nas coloraes citogenticas.
36 Cerca de 35pb antes do incio do gene h uma seqncia do tipo TTGACA e na posio de 10pb antes do gene h a seqncia TATAAT que so o ponto de acoplamento da RNA polimerase para o incio da sntese do RNAm que dar origem, futuramente, protena, como ser descrito posteriormente. Essas seqncias so as mesmas para todos os tipos de genes. Na regio flanqueadora 3 (ou downstream rio abaixo), logo aps o trmino do gene, existe uma regio rica em GC, seguida de outra rica em AT, que vo possuir papel fundamental para que a RNA polimerase encerre a sntese do RNAm correspondente quele gene, conforme ser mostrado posteriormente, ainda neste captulo. Fazendo parte, ainda, do complexo de regulao da expresso do gene, encontramos regies muito afastadas do incio do gene que exercem ao reguladora de sua expresso, denominadas de enhancers (estimuladores).
dos plasmdeos tambm so organizados sem ntrons ou regies no codificadoras. Esta caracterstica, de no haver regies codificadoras, entretanto, implica em dizer que qualquer mutao que ocorra em um genoma procarioto j provoca uma mudana na seqncia de leitura de um gene, o que pode configurar-se como alterao gentica importante. Em contrapartida, a existncia de extensas reas no codificadoras no genoma humano (cerca de 90% do DNA total), favorece uma certa proteo contra essas mutaes, o que, de fato, observado na alta taxa de variabilidade dessas reas no codificadoras em relao s regies dos xons. Essa grande variabilidade existente nas regies no codificadoras so, em sua maioria, repeties de seqncias de DNA que so denominadas de DNA satlite. Essas regies apresentam uma seqncia de DNA de mais de 100pb que se repetem em tandem (uma atrs da outra). Outras regies com cerca de 3 a 5pb so denominadas de minissatlites e aquelas com apenas 2pb repetidos so denominadas de microssatlites. O nmero de repeties de certas regies satlite varia tanto de indivduo para indivduo que constituem uma impresso digital molecular e so utilizadas para caracterizar o DNA de vtimas de crimes, na investigao de paternidade e em outros casos de medicina forense. Os genes so flanqueados por regies que sinalizam para a enzima RNA polimerase onde deve iniciar a sua expresso, na extremidade 5 (freqentemente denominada regio upstream, em referncia expresso inglesa rio acima).
A molcula de RNA
Existem trs tipos bsicos de RNA: mensageiro (RNAm), transportador (RNAt) e ribossmico (RNAr). A forma estrutural do RNA de uma fita simples em espiral que se arranja, na maioria das vezes, formando pregas entre si, em virtude de pontes de hidrognio ocorridas entre as bases nitrogenadas dos nucleotdeos da prpria cadeia. Estas pregas do a conformao e um grampo de cabelo (hairpins) s regies onde elas ocorrem e so estruturas caractersticas das molculas de RNAt e RNAr (Figura 3-16).
Figura 3-15 Esquema de um gene eucariota. As zonas amarelas correspondem s regies flanqueadoras que contm as regies promotoras -35 e 10 (na extremidade 5) e a regio de terminao com os stios GC e AT (na extremidade 3). As regies codificadoras (xons) e as no codificadoras esto representadas em verde e vermelho, respectivamente.
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37 O RNAt (transportador) realiza o transporte dos aminocidos para a sntese protica mediada pelo RNAm. Existem 20 tipos de RNAt (um para cada aminocido), possuindo quatro domnios comuns: 1) o ponto de ligao com o aminocido que transporta, sempre a seqncia ACC na extremidade 3; 2) a ala D, com a presena do nucleotdeo diidrouridina (formado por hidroxilao da uracila); 3) a ala T com a presena de timina formada por metilao da uracila (chmada de ribotimidina); e 4) a ala do anticdon, que possui a seqncia que se ligar ao RNAm no ribossomo durante a sntese protica (Figura 3-17). Na molcula de RNAt observada a presena de outras bases modificadas como a pseudouridina () e, algumas vezes, um mesmo tipo de RNAt pode apresentar ou C ou G em reas em que no h formao de pregas, representado na estrutura simplesmente como uma pirimidina (Y). O RNAr (ribossmico) faz parte da composio molecular dos ribossomos, local da sntese protica, aonde se acopla o RNAm e, posteriormente, os aminocidos. Possui uma estrutura extremamente pregueada onde se revelam domnios responsveis pela estrutura tridimensional final dos ribossomos (Figura 3-18).
A molcula de RNAm no possui tais grampos, devido a necessidade estar linear para ser lida pelos ribossomos durante a sntese protica. Na verdade, a formao de tais grampos na molcula de RNAm ocorre como mecanismo favorecedor da edio da molcula aps a transcrio direta do gene.
Figura 3-16 Modelo de formao das pregas entre os nucleotdeos de uma molcula de RNA, assumindo conformao que lembra um grampo de cabelo.
O RNAm responsvel pelo cdigo gentico para a sntese protica, estabelecido entre ele e o DNA, sendo que a seqncia de 3 nucleotdeos do DNA corresponde a seqncia de 3 nucleotdeos do RNAm (cdon) que, por sua vez, corresponde a um aminocido especfico no processo de sntese protica. O seu processo de sntese denominado transcrio e um dos processos mais importantes para a manuteno das caractersticas celulares, uma vez que qualquer erro que haja pode ocorrer em erro na traduo do codigo gentico e o conseqente erro na sntese protica. A molcula de RNAm a forma citoplasmtica, porm imediatamente aps a transcrio, o RNA que foi copiado diretamente do DNA possui ainda as informaes dos ntrons, que no correspondem nenhuma informao gentica. Este RNA denominado RNA heterogneo nuclear (RNAhn) e submetido a um processo de retirada da seqncia correspondente aos ntrons denominado splicing (juno), alm da adio de uma seqncia de cerca de 100 a 200 nucleotdeos de adenina, denominado de cauda poli-A, que ser um importante regulador do processo de controle da traduo protica, como ser abordado posteriormente.
Figura 3-17 Modelo esquemtico de uma molcula do RNAt para o aminocido fenilalanina. A extremidade 3' (ACC) responsvel pelo transporte do aminocido. A ala do anticdon contm a seqncia complementar ao RNAm (cdon) durante a sntese protica. Em algumas regies da molcula, h o pareamento intramolecular das bases, formando as pregas de filamento em dupla hlice. Ricardo Vieira
38 metilguanosina, N-isopenteniladenina, drouridina e ribotimidina. dii-
Figura 3-18 Representao esquemtica de uma molcula de RNAr 16s de E. coli e seus quatro domnios. Notar os hairpins freqentes em toda a molcula.
Os ribossomos so compostos por duas subunidades de RNAr que diferem de acordo com o coeficiente de sedimentao obtido por ultracentrifugao (S). Em ribossomos eucariotas, uma organela de 80S, composto pelas subunidades 40S e 60S ligados 33 e 49 protenas, respectivamente. O cromossomo procariota menos complexo, possuindo duas subunidades de 30S e 50S ligados a 21 e 31 protenas, respectivamente, constituindo uma unidade de 70S (Figura 319). No RNAr de procariotas existem seqncias especficas onde o RNAm se fixa (seqncias de Shine-Dalgarno) e a partir da qual so adicionados os aminocidos oriundos dos RNAt. Entretanto, os eucariotas no possuem tais seqncias, devendo haver um mecanismo de leitura apropriado para identificar o ponto de incio da sntese protica. comum vrios ribossomos organizarem-se em fileira (polissomos) sintetizando vrias molculas de protena a partir de uma nica molcula de RNAm, sendo que os polissomos de eucariotas so bemmenores que os procariotas. H a existncia, tambm, de vrias bases nitrogenadas modificadas, como a pseudourindina, 4-tiourinina, inosina, 1-
Figura 3-19 Representao esquemtica da conformao tridimensional de um ribossomo eucariota.
Uma classe de RNA existente somente em eucariotas o pequeno RNA nuclear ou snRNA (small nuclear RNA). Possui em torno de 200 nucleotdeos (10S) e esto ligados a protenas, formando as pequenas partculas de ribonucleoprotenas nucleares ou snRNP (small nuclear ribonuceloprotein particles) que possuem a funo na liberao do RNAm do ncleo para o citoplasma.
DNA extra genmico

A principal forma de DNA que no faz parte da composio normal do genoma de um ser vivo, corresponde ao DNA mitocondrial e DNA dos cloroplastos em eucariotas e o DNA de plasmdios em bactrias. Uma espcie peculiar de DNA o DNA viral, que possui caractersticas prprias, podendo ser em fita simples dupla ou ainda hbrida com RNA. As molculas de DNA mitocondrial e dos cloroplastos so fechadas, circulares, em cadeia super-helicoidal em sua maioria. Em algumas plantas, fungos e protozorios o DNA mitocondrial linear. So to semelhanRicardo Vieira
39 tem a resistncia a antibiticos. So passados de uma bactria a outra atravs do processo de conjugao bacteriana, onde uma bacteriana emite uma espcie de tubo para a outra bactria, transferindo seu plasmdio. Os plasmdios so utilizados largamente em experimentos laboratoriais, como vetores de pesquisas que manipulam o DNA do plasmdio para aceitarem seqncias de DNA de outros organismos. Desta forma, as bactrias que aceitam esse plasmdio modificado podem duplicar o fragmento de DNA inserido artificialmente o duplica-lo muitas vezes fazendo com que um organismo que antes no possua determinada seqncia de DNA (a bactria) passe a expressar um novo gentipo. Esses experimentos so denominados de clonagem bacteriana e foram desenvolvidos na dcada de 80, junto com a manipulao do genoma viral, sendo os primeiros e bem sucedidos experimentos de engenharia gentica que deram incio a uma era de grandes avanos na cincia, mas tambm de grandes preocupaes ticas que vo desde patente de seqncias de DNA at a clonagem de seres humanos.
tes em forma e funo, que se acredita que so evolucionariamente relacionados. O DNA mitocondrial varia enormemente de tamanho: em animais so relativamente pequenos (menos que 20kb), em leveduras so um pouco maiores (cerca de 80kb) e em plantas superiores so muito grandes (centenas a milhares de kb). Apesar de haver poucas regies no codificadoras, quanto maior a molcula de DNA mitocondrial, maior a presena de zonas no codificadoras. Intrigantemente, DNA mitocondrial mais semelhante ao DNA de bactrias, do que com o DNA do ncleo da prpria clula, o que leva especulao que os eucariotas originariamente no possuam mitocndrias e, portanto, no sintetizavam ATP em larga escala. Em determinado momento da evoluo celular, houve uma relao simbitica com bactrias que possuam as enzimas necessrias para esta funo, convertendo-se nas mitocndrias, hoje uma organela essencial para os eucariotas, fazendo parte da bagagem gentica da clula. A estrutura das mitocndrias oferecem srios problemas para a traduo do DNA mitocondrial, havendo ribossomos mitocondriais que se ligam ao RNAm de maneira no usual, possuindo um cdigo gentico prprio, diferente do genoma nuclear. Um fato importante par o estudo do DNA mitocondrial, que durante a penetrao do espermatozide no vulo, para a formao do zigoto, a regio da cauda perdida e, com ela, a poro que contm as mitocndrias, responsveis pela gerao da energia necessria para a movimentao dos espermatozides, desta forma, a herana mitocondrial , predominantemente, materna. Possuindo uma taxa evolutiva cerca de 10 vezes maior que o genoma nuclear, o DNA mitocondrial (assim com os ntrons) possui alta variabilidade entre as espcies, fazendo com seja alvo de estudos que estabelecem a distncia evolutiva entre as espcies, ajustando uma espcie de relgio molecular e esclarecendo relacionamentos filogenticos que os mtodos tradicionais de observao morfolgica ou de divergncia bioqumica no so capazes de diferenciar. O DNA de plasmdios de bactrias circular e pequeno e codifica genes que garan-
EXERCCIOS 1. O que so PRIONS? 2. Descreva a anatomia do gene eucarioto. 3. Quais as principais caractersticas estruturais das molculas de DNA e RNA? 4. No que consiste o DNA extra-genmico e qual a sua importncia para os estudos de biologia molecular? REFERNCIAS DA INTERNET
Departamento de Bioqumica Mdica da UFRJ http://www.bioqmed.ufrj.br/sonda/ Index of Genes on Human Chromossomes http://wehih.wehi.edu.au/gdbreports/ Laboratrio Genomic de Anlise de DNA http://www.genomic.com.br/ DNA na investigao criminal http://www.laboratoriopasteur.com.br/
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Captulo 4 Aminocidos e Protenas

s protenas so as molculas orgnicas mais abundantes nas clulas e correspondem a cerca de 50% ou mais de seu peso seco. So encontradas em todas as partes de todas as clulas, tendo funes fundamentais na lgica celular. Em virtude desta importncia qualitativa e quantitativa, as protenas tm sido largamente estudadas e seus segredos desvendados, no que diz respeito sua sntese ou aproveitamento metablico. As protenas so macromolculas de alto peso molecular, polmeros de compostos orgnicos simples, os -aminocidos. Nas molculas proticas os aminocidos se ligam covalentemente, formando longas cadeias no ramificadas, atravs de ligaes peptdicas envolvendo o radical amino (-NH2) de um aminocido e o radical cido (-COOH) de um outro, havendo a liberao de uma molcula de gua durante a reao (Figura 4-1).
Figura 7-1: A ligao peptdica ocorre entre o grupamento -COOH de um aminocido com o grupamento -NH2 de outro. O primeiro aminocido da cadeia peptdica aquele que possui o grupamento amino-terminal e o ltimo, o que possui o livre o grupamento carboxila-terminal. O grupamento R sempre ocupa posio oposta ao prximo, devido ao C ser assimtrico, o que vai contribuir para a forma tridimensional da protena.
A unio entre dois aminocidos, forma um dipeptdeo, assim como trs unem-se formando um tripeptdeo e assim sucessivamente, sendo que a unio de vrios aminocidos ir dar origem a uma cadeia polipeptdica. Algumas protenas so formadas de apenas uma cadeia polipeptdica, enquanto outras so formadas por trs, quatro ou mais. O que as diferencia umas das outras a seqncia em que estaro dispostos os aminocidos, aliados a estrutura tridimensional assumida pela molcula. So conhecidos 20 aminocidos (Alanina, Arginina, Aspartato, Asparagina, Cistena, Fenilalanina, Glicina, Glutamato, Glutamina, Histidina, Isoleucina, Leucina, Lisina, Metinonina, Prolina, Serina, Tirosina, Treonina, Triptofano e Valina) encontrados nas molculas de protenas, com sua sntese controlada por mecanismos genticos, envolvendo a replicao do DNA e transcrio do RNA. A metade dos aminocidos sintetizada pelo organismo e vai suprir as necessidades celulares; aqueles que no so sintetizados precisam estar presentes na dieta e so chamados de aminocidos essenciais e os aminocidos no-essenciais aqueles que so sintetizados no organismo. A funo energtica dos aminocidos no , certamente a sua principal funo, uma vez que carboidratos e lipdios so melhores aproveitados no metabolismo energtico. Entretanto, os aminocidos so importantes fontes de energia durante o exerccio fsico intenso e de longa durao fornecendo substrato para a neoglicognese (aminocidos glicognicos). Alguns aminocidos, fornecem substratos para a sntese de acetil-CoA que aproveitada no ciclo de Krebs, mas no podem ser convertidos em glicose (aminocidos cetognicos). Outros conseguem fornecer substratos para ambas as vias (aminocidos ceto-glicognicos). Em estados carenciais
Fundamentos de Bioqumica Captulo 4: Aminocidos e Protenas
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nutricionais, muitas vezes so os aminocidos dos msculos de das protenas plasmticas que fornecem a energia necessria para a manuteno da vida. Na Tabela 4-1 pode-se observar vrios exemplos desta multifuncionalidade.
Tabela 4-1: Exemplos das principais funes proticas. Protena Funo Hemoglobina, mioglobina Transporte de gases respiratrios Imunoglobulinas Defesa orgnica (anticorpos) Insulina, Glucagon, AHormnios CHT, GH Angiotensina Polipeptdio responsvel pela regulao do metabolismo hdrico Receptores celulares Comunicao celular Miosina, Actina Contrao muscular Tubulina Citoesqueleto (diviso clula) Ovoalbunina (do ovo), zena (do milho), casena Reserva energtica (do leite) Albumina Humana Transporte plasmtico de compostos endgenos e exgenos Queratina (unhas), colgeno (tecido conjuntivo), Estrutural elastina (tendes), fibrona (teia de aranha) Hexoquinase, DNApolimerase, tripsina, lpase, Enzimas amilase
O grupamento funcional (amino e cido) constante em todos os aminocidos, variando a composio da cadeia carbonada, denominada de grupamento R (Figura 7-1). Esta grande variabilidade proporciona arranjos incontveis entre as cadeias peptdicas em sua estrutura tridimensional bem como na funo da protena, uma vez que os diferentes aminocidos possuem diferentes propriedades qumicas que, em conjunto, sero responsveis pela funo da protena. O estudo da composio e polaridade do grupamento R permite agrupar os aminocidos em quatro classes distintas: a) Aminocidos com grupamento R apolar ou hidrofbico: so os menos solveis, devido ausncia de grupamentos hidroflicos no grupamento R. So eles:
Cadeia aliftica hidrocarbonada: alanina, leucina, isoleucina, valina e prolina; Anel aromtico: fenilalanina e triptofano; Enxofre: metionina. Hidrognio: glicina. A alanina representa o aminocido mais solvel deste grupo e a prolina , na realidade, um iminocido onde o grupamento R um substituinte do aminogrupo. A glicina o aminocido mais simples em virtude de possuir como R apenas um tomo de hidrognio (apolar). Algumas vezes classificado como polar, pois o grupamento funcional lhe confere certa solubilidade. b) Aminocidos com grupamento R polar no-carregado: possuem grupamentos hidroflicos na cadeia carbonada que no se ionizam, porm conferem maior solubilidade ao aminocido. So eles: Hidroxila: serina, treonina e tirosina; Grupo Amida: asparagina e glutamina; Sulfidrila: cistena; A cistena e a tirosina tem os grupamentos R mais polares, sendo portanto os mais solveis desta classe. A cistena, freqentemente, ocorre nas protenas em sua forma oxidada, a cistina, na qual a sulfidrila (-SH) esto unidas formando pontes dissulfeto (S-S) que so ligaes covalentes importantes na estabilizao da molcula protica. A asparagina e a glutamina so amidas do cido asprtico e do cido glutmico, respectivamente. c) Aminocidos com grupamento R polar carregado positivamente (bsicos): lisina, arginina e histidina; todos possuem grupamento R de 6 carbonos e a carga positiva localiza-se em um tomo de nitrognio do R. d) Aminocidos com grupamento R polar carregado negativamente (cidos): cido asprtico e cido glutmico. So citados como aspartato e glutamato em virtude de se ionizarem em pH fisiolgico adquirindo carga negativa no grupamento carboxila (-COO-). Na Figura 4-2 esto representados todos os aminocidos e na Tabela 4-2 esto agrupadas as principais caractersticas dos aminocidos utilizadas em sua classificao.
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Figura 4-2 - Os aminocidos presentes nas protenas agrupados de acordo com a polaridade do grupamento R. A) apolares com R = cadeia hidrocarbonada; B) apolares com R = anel aromtico; C) apolar com R contendo S; D) apolar com R = H; E) polar no carregado com R contendo OH; F) polar no carregado com R = amida; G) polar no carregado com SH; H) polar carregado positivamente (bases); I) polares carregados negativamente (cidos).
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Fundamentos de Bioqumica Captulo 4: Aminocidos e Protenas Tabela 4-2 - Principais caractersticas dos aminocidos relacionadas com suas funes. Grupamento R Aminocidos Smbolo Ceto- Glico- EssenNoPolar gnico gnico cial essenCarregado Apolar Nocial carregado (-) (+) X X X Alanina Ala (A) X X X Arginina (1) Arg (R) X X X Aspartato Asp (B) X X X Asparagina Asn (N) X X X Cistena Cys (C) X X X Fenilalanina Phe (F) X X X Glicina (2) Gly (G) X X X Glutamato Glu (Z) X X X Glutamina Gln (Q) X X X Histidina His (H) (3) X X X X Isoleucina Ile (I) X X X Leucina Leu (L) X X X Lisina Lys (K) X X X Metionina Met (M) X X X Prolina Pro (P) X X X Serina Ser (S) X X X Tirosina (4) Tyr (Y) X X X X Treonina (3) Thr (T) X X X X Triptofano (3) Trp (W) X X X Valina Val (V) (1) A arginina produzida no hepatcito, porm consumida em grande escala na sntese da uria, o que faz com que seja classificada como essencial (pelo menos em crianas). (2 ) O R um hidrognio, o que faz com que o aminocido, como um todo, possua certa polaridade devido ao grupamento funcional, uma vez que o grupamento R muito pequeno. (3) Aminocido glicocetognicos. (4) A tirosina sintetizada no ser humano a partir da fenilalanina, um aminocido essencial
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Aminocidos raros e nocodificados

Alm de serem os blocos constituintes das protenas, existem vrios aminocidos que no esto presentes em nenhuma molcula de protenas (aminocidos no-codificados), como, por exemplo: citrulina e ornitina (intermedirios do ciclo da uria); homocistena e homosserina (intermedirios do metabolismo dos aminocidos); cido -aminobutrico (GABA, um neurotransmissor); canavanina, cido djenkiko e cianoalanina (aminocidos txicos existentes em alguns fungos); -carboxi-glutamato (formado por carboxilao do glutamato); fosfo-aminocidos (formados por fosforilao da hidroxila da serina e treonina ou no grupo fenlico da tirosina).
Outros aminocidos tm ocorrncia relativamente rara e so isolados em alguns tipos de protenas. Esses aminocidos raros so derivados de outros aminocidos que se modificaram, quimicamente, para favorecer uma determinada funo bioqumica da protena. Por exemplo: 4-hidroxi-prolina (derivado da prolina, encontrado em abundancia na protena estrutural colgeno), 5-hidroxilisina (derivado da lisina, presente, tambm, no colgeno), desmosina e iso-desmosina (na protena estrutural elastina, resultantes da unio de quatro molculas de lisina com os grupamentos R formando um anel que permite a elasticidade caracterstica da protena). Os aminocidos no se armazenam, ou pelo menos no possuem tecido destinado somente para esse fim. Desta forma, a maioria deles destinada para a sntese de protenas e o excesso proveniente da alimentao, se no degradado no metabolismo energtico, destinado para a sntese de vrias molculas
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importantes para o organismo como as purinas e pirimidinas (aspartato e glutamina); esfingolipdios (serina); histamina (histidina); tiroxina, melanina, dopamina e epinefrina (tirosina); serotonina, melatonina e NAD+ (triptofano); purinas e porfirinas (glicina).
Erros inatos do metabolismo

Na ausncia das enzimas responsveis pela degradao de aminocidos, h o seu acmulo no sangue com a excreo urinria e, conjuntamente, o aparecimento de sintomatologia caractersticas de diversas sndromes genticas conhecidas como erros inatos do metabolismo. Essas alteraes so devidas a erros genticos na expresso ou controle das enzimas envolvidas no metabolismo de aminocidos e so potencializadas quando h aumento da ingesto de aminocidos.
o caso da fenilcetonria onde a deficincia da enzima fenilalanina-hidroxilase (ou de co-fatores) induz a um aumento da fenilalanina no sangue e o aumento de sua excreo urinria, levando a distrbios neurolgicos severos. Esta doena metablica identificada ainda em crianas recm-nascidas pela dosagem da fenilalanina no sangue (teste do pezinho). A fenilalanina o percussor da sntese de tirosina e outras doenas esto envolvidas em decorrncia de deficincia no metabolismo da tirosina, como o albinismo decorrente de falha na sntese de melanina (pigmento escuro da pele e plos), a tirosinose, o cretinisno e a alcaptonria. Na Figura 4-3 esto esquematizados os passos metablicos envolvidos nessas doenas e que sero melhores definidos em captulos posteriores, durante o estudo do metabolismo das protenas.
Figura 4-3 - Defeito na sntese ou controle das enzimas das vias metablicas de aminocidos podem levar a doenas conhecidas como erros inatos do metabolismo. As setas pontilhadas indicam a existncia de mais de um passo metablico. As enzimas deficientes so: 1) fenilalanina-hidroxilase (ou co-fatores como a 5,6,7,8-tetraidropterina); 2) via de sntese do hormnio tiroidiano tiroxina ; 3) tirosinase; 4) homogentisato-dioxigenase; 5) via de sntese da melanina nos melancitos.
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Propriedades cido-bsicas dos aminocidos

Os grupamentos amino e cido, encontram-se na forma ionizada quando em soluo. Dependendo do pH, o grupamento amino com carga positiva (forma catinica) ou o grupamento cido com carga negativa (forma aninica), podem predominar. Porm, em determinado pH (pH isoeltrico), haver somente uma forma dipolar (ou seja, positiva e negativa ao mesmo tempo), onde ser observada uma neutralidade eltrica na molcula. Estes ons dipolares, so tambm chamados de zwitterions (expresso alem que ao p da letra significaria algo como "ons hermafroditas"), predominam no pH isoeltrico (pHi). A forma catinica predominar em pH abaixo do pHi, enquanto que a forma aninica predominar em pH acima do pHi, uma vez que abaixo ou acima do pHi haver deficincia ou excesso de H+ na soluo, respectivamente, o que varia a carga eltrica pois o grupamento COO- receber H+ e o NH3+ doar ser H+. O valor do pHi varia de acordo com o aminocido e corresponde a um valor que serve como identificador e classificador dos aminocidos de acordo com a variao do pH (Tabela 4-3). um valor experimental determinado, conhecendo-se a constante de dissociao das reaes qumicas de igualdade de concentrao entre as formas catinicas com a forma dipolar (pK1) que ocorre em pH cido e entre a forma aninica com a forma dipolar (pK2) que ocorre em pH bsico. O valor mdio entre essas duas constantes, corresponde ao pHi, que um dado especfico para cada aminocido, quando submetido a uma titulao: pHi = pK1 + pK2 2
Para melhor entender esses conceitos, considere que se realizssemos uma titulao de um cido por uma base, teramos, inicialmente, um pH cido que iria aumentando proporcionalmente ao acrscimo de base (Figura 4-4).
Figura 4-4 - Em uma titulao convencional de um cido por uma base, a adio de base modifica o pH cido original para bsico passando pelo pH neutro 7,0.
Os valores de pK1 e pK2 correspondem aos valores de pH onde o aminocido funciona como um tampo durante uma curva de titulao.
Esse aumento proporcional no valor o pH se d porque cada molcula de base adicionada neutraliza uma de cido (formando gua e o sal correspondente) at o valor de equivalncia entre a quantidade de bases e cidos, onde o pH neutro (pH=7,0). um valor tnue, pois qualquer quantidade de base adicionada a mais eleva o pH para a faixa alcalina. No entanto, se esta mesma titulao fosse realizada com a adio de um aminocido no meio a ser titulado, um grfico representando a elevao do pH demonstraria duas zonas de estabilizao (uma em pH cido e outra em pH bsico) indicando que h duas zonas de equilbrio qumico, onde no h a variao do pH mesmo com a adio da base no meio cido (Figura 4-5). Essas regies demonstram que os aminocidos so responRicardo Vieira
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sveis por uma funo tamponante (evitam variaes bruscas de pH). Uma soluo tampo corresponde a uma soluo em equilbrio entre um cido fraco e sua base conjugada. No caso do aminocido a forma cida corresponde quela que doa H+ (forma catinica) e a base quela que recebe o H+ (forma aninica). Como dentro de uma molcula de aminocido a perda e ganho de H+ um fenmeno interno, a forma dipolar corresponde base conjugada ou ao cido fraco, dependendo do pH. Como a forma dipolar a que ocorre no pHi, toda vez que o pH cai abaixo do valor do pHi (acidificao do meio), o aminocido recebe o H+ adicionado atravs da extremidade COO- tornando-se um ction. Quando o pH eleva-se acima do valor do pHi (alcalinizao do meio), o aminocido torna-se um nion devido doao do H+ pelo grupamento NH3+ (Figura 4-5).
Se relacionarmos em um grfico o pH em funo dos equivalentes de uma base adicionada a uma soluo cida de um aminocido, observaremos os pontos fundamentais no comportamento cido-bsico dos aminocidos (Figura 4-6).
Figura 4-6 - A curva de titulao da glicina. O pHi (somente formas dipolar isoeltricas) corresponde mdia entre os valores de pK1 ([dipolar] = [catinica]) e pK2 ([dipolar] = [aninica]).
Figura 4-5 - As trs formas carregadas dos aminocidos. A forma dipolar corresponde quela que contm um plo positivo em NH3+ e outro negativo em COO- (a carga final neutra) e corresponde nica forma existente no pHi. A forma catinica est presente em qualquer valor de pH abaixo do pHi, enquanto que a aninica tpica do aumento do valor do pH acima do valor do pHi.
No incio da titulao, teoricamente, s existe a forma catinica em virtude de o aminocido funcionar como um receptor de prtons, ou seja, como uma base. Ao adicionar uma base (OH-) ao sistema, comea a haver a neutralizao com o aparecimento da forma dipolar at um determinado ponto em haver igualdade de concentrao entre as duas formas, entrando o sistema em equilbrio, correspondente ao pK1. Prosseguindo a titulao, com o aumento do pH em virtude do aumento gradual da concentrao de base, comear a predominar a forma dipolar com a queda proporcional da forma catinica at um ponto onde s haver a forma dipolar. Neste ponto, o pH corresponder ao pH isoeltrico (pHi) onde o sistema se apresentar eletricamente neutro. Ao se adicionar mais base, h o aparecimento da forma aninica at um determinado ponto em que haver igualdade na concentrao entre a forma dipolar e a aninica, entrando o sistema, novamente, em equilbrio agora entre a forma dipolar e a forma aninica, correspondente ao pK2. Adicionando mais base, haver a predominncia da forma aninica at o pH 14 onde, teoricamente, s haver a forma catinica.
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Na Tabela 4-3, podemos observar os valores do pHi dos 20 aminocidos codificados e os valores de pK1 e pK2. Alguns aminocidos apresentam um terceiro plat de estabilidade em sua curva de titulao (pK3) que correspondente a um terceiro momento de equilbrio durante a titulao, induzido pelo grupamento R (o pK3 freqentemente denominado de pKR). Observa-se, porm, que somente nos aminocidos de grupamento R carregado positivamente (arginina, histidina e lisina) possuem o pHi resultante entre a mdia do pK2 e o pK3, sendo o valor do pK1 sem valor para a determinao do pHi. Especialmente nesses aminocidos, o valor do pHi estar sempre na faixa bsica o que no acontece com os demais aminocidos de R polar.
Tabela 4-2: Valores de pK e pHi de aminocidos a 25oC. Aminocido pK1 pK2 pK3 pHi (pKR) Alanina 2,34 9,69 6,00 ( ) Arginina * 2,17 9,04 12,48 10,76 Asparagina 2,02 8,80 5,41 Aspartato 1,88 3,65 9,60 2,77 Cistena 1,96 8,18 10,28 5,07 Fenilalanina 1,83 9,13 5,48 Glicina 2,34 9,60 5,97 Glutamato 2,19 4,25 9,67 3,22 Glutamina 2,17 9,13 5,65 Histidina (*) 1,82 6,0 9,17 7,59 Isoleucina 2,36 9,68 6,02 Leucina 2,36 9,60 5,98 Lisina (*) 2,18 8,95 10,53 9.74 Metionina 2,28 9,21 5,74 Prolina 1,99 10,60 6,30 Serina 2,21 9,15 5,68 Tirosina 2,20 9,11 10,07 5,66 Treonina 2,63 10,43 6,53 Triptofano 2,38 9,39 5,89 Valina 2,32 9,62 5,96 ( ) * Os aminocidos bsicos possuem valor de pHi correspondente mdia entre o pK1 e o pK3 (pKR) sendo os nicos com pHi na faixa bsica de pH. (Adaptado de VIEIRA, 1991, p.47).
pHi =
pKn + pK(n + 1) 2
Onde n o nmero de grupos bsicos (+) existentes na molcula. Assim, todos os aminocidos possuem n = 1 devido ao grupamento NH3+, com exceo dos aminocidos bsicos arginina, histidina e lisina que possuem n = 2, pois o R possui um N+ (ver frmula estrutural na Figura 4-2). Essas informaes acerca da propriedade cido-bsica dos aminocidos so fundamentais para a compreenso da funo das protenas como um tampo intracelular e, tambm, dos mtodos de identificao dos aminocidos e de separao das protenas que se baseiam na capacidade de aminocidos e protenas mudarem de carga eltrica de acordo com o pH do meio. Desta forma, se tivermos uma soluo contendo uma mistura de trs aminocidos como a alanina, arginina e aspartato, basta variar o pH do meio nos valores de seu pHi (ver Tabela 4-2) que obteramos a mudana de carga de forma diferente. Ajustando-se o pH desta mistura primeiramente para 2,77 somente o aspartato assumiria 100% de forma dipolar e no seria atrado, portanto pelo campo eletromagntico, enquanto que os demais aminocidos assumiriam carga eltrica positiva pois o pH 2,77 est abaixo do valor de seus pHi. Da mesma forma pode-se identificar os demais aminocidos sabendo-se o seu pHi. Vrios mtodos de purificao, separao, identificao e dosagem de aminocidos e protenas utilizam essa propriedade cido-bsica como fundamento do mtodo (como ser abordado no captulo sobre instrumentao laboratorial).
Estrutura das protenas

Devido caracterstica anftera dos aminocidos (podem ser ctions ou nions) e a capacidade de modificao da carga eltrica do grupamento R observada em vrios aminocidos (Tabela 4-2) as protenas tero conformao estrutural bastante diversificada
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Levando em considerao que o PK3 influencia somente na determinao do pHi de aminocidos bsicos, a frmula que define com mais preciso o valor do pHi :
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uma vez que os aminocidos se relacionaro entre si de maneira variada. Entretanto, quando h a ligao peptdica, os grupamentos amino e cido fundemse formando uma ligao covalente extremamente rgida devido a um rearranjo entre os eltrons da ligao peptdica, formando uma dupla ligao e polarizando a ligao peptdica (Figura 4-6).
Figura 4-6 - Propriedades das ligaes peptdicas em um tetrapeptdio. A) Esquema didtico das ligaes peptdicas; as setas indicam que os eltrons da dupla ligao so atrados pelo oxignio da carboxila. B) Ligaes peptdicas em equilbrio de ressonncia; a ligao dupla agora formada entre C e N do rigidez ligao e as setas indicam o ponto flexvel (C). C) Representao do plano tridimensional das ligaes peptdicas; as setas indicam as pontes de hidrognio que estabilizam a estrutura.
Esta flexibilidade da molcula protica dada pelo C, confere uma grande versatilidade protena, o que faz de sua estrutura tridimensional o ponto chave para sua funo. Desta forma, a perda da configurao espacial modifica completamente sua funo, podendo at significar a destruio da protena. Entretanto, esta flexibilidade limitada pela existncia de interaes qumicas entre as cadeias peptdicas e entre os grupamentos R dos resduos de aminocidos, seja intermolecular ou com outros compostos qumicos alheios composio original da protena. Cada tipo de protena possui uma configurao tridimensional peculiar que determinada pela seqncia de aminocidos e pelo grau de inclinao entre as ligaes qumicas (proporcionada pelos arranjos intermoleculares), que proporcionar pelo menos trs nveis distintos de conformao estrutural: 1) Estrutura primria: diz respeito seqncia de aminocidos, dada pela seqncia de nucleotdeos da molcula de DNA responsvel por sua sntese. Esta seqncia deve ser fundamentalmente mantida, sob o peso de a protena perder sua funo, como o caso da presena de valina ao invs de glutamato no sexto aminocido da cadeia polipeptdica da hemoglobina, que causa a doena gentica denominada de anemia falciforme. A ausncia ou acrscimo de aminocidos estrutura primria das protenas, tambm pode ser responsvel por modificao em sua eficcia funcional. 2) Estrutura secundria: relaciona a forma que a cadeia polipeptdica assume no espao, que pode ser de -hlice ou -folha pregueada. A conformao em -hlice conferida atravs do ngulo de toro que os resduos de aminocidos apresentam na ligao peptdica, estabilizada por pontes de hidrognio entre o oxignio do grupamento carboxila de um C e o H do grupamento amino do outro aminocido (Figura 4-7).
A flexibilidade dada pelo C devido ao fato de ele ser assimtrico (ligado a quatro grupos diferentes: NH3+, COO-, H e R) o que lhe garante livre rotao em seu eixo, formando ismeros pticos (ver Figura 7-1). Os aminocidos levgiros (L-aminocidos) so os nicos ismeros presentes nas protenas dos seres vivos o que faz com que os dextrgiros (D-aminocidos) no sejam aproveitados durante o processo metablico. Esta preferncia no tem uma explicao qumica evidente, o que pode ser explicado, dentro de um contexto evolucionrio, como uma seleo ao acaso de um aminocido em detrimento ao outro durante o processo de evoluo das espcies.
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Figura 4-7 - A forma de -hlice possvel graas formao de pontes de hidrognio entre os grupamentos funcionais dos aminocidos da ligao peptdica e ao posicionamento contrrio dos grupamentos R.
Figura 4-8 A forma de -folha pregueada ocorre entre duas cadeias peptdicas dentro da molcula protica, resultante entre pontes de hidrognio entre elas, resultando em um dobramento entre os aminocidos sobre si formando um ngulo caracterstico que lembra as folhas pregueadas dos formulrios contnuos para computadores.
A forma de -folha pregueada possvel graas a pontes de hidrognio que ocorrem entre duas partes da cadeias polipeptdicas (Figura 4-8) dentro da molcula protica. Uma protena pode apresentar os dois tipos de organizao secundria dentro de sua molcula (Figura 4-9). 3) Estrutura terciria: corresponde s relaes da cadeia polipeptdica no sentido de estabilizar a conformao tridimensional. Muitos tipos de interaes qumicas podem ocorrer dentro de uma molcula protica para garantir a estabilidade das cadeias polipeptdicas. As mais fortes so as ligaes covalentes, como a que ocorre entre dois aminocidos cistena que se unem atravs de pontes dissulfetos entre seus grupamentos SH formando o complexo cistina (Figura 4-10).
H, ainda a formao de pontes de hidrognio, interaes eletrostticas e interaes fracas de van der Waals entre os grupamentos R
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Figura 4-9 Estrutura molecular da enzima da gliclise triose fosfato isomerase que apresenta regies em -hlice (espirais em azul) e em -folha pregueada (setas vermelhas) (Adaptado de Devlin, T.M., 1999).
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Figura 4-10 A unio covalente entre dois aminocidos cistena entre seus grupamentos SH, gera uma ponte dissulfeto formando um grupo cistina extremamente rgido que mantm a estrutura terciria das protenas.
Figura 4-11 - Estrutura terciria final da mioglobina, uma protena formada por apenas uma cadeia peptdica. (Adaptado de Devlin, T.M., 1999).
Esta estrutura terciria comum a todas protenas e polipeptdios (cerca de 50 aminocidos). Algumas protenas contm apenas uma cadeia polipeptdica (p.ex.: mioglobina, Figura 4-11) enquanto outras so composta por mais de um tipo iguais ou diferentes entre si (protenas oligomricas), como o caso da hemoglobina (Figura 4-12) e das -globulinas com 2 pares de cadeias idnticas; e da glutamina-sintetase bacteriana com 12 cadeias idnticas. 4) Estrutura quaternria: o arranjo espacial entre cadeias peptdicas das protenas oligomricas, definida por interaes nocovalentes entre as cadeias peptdicas e outros compostos de origem no protica que, freqentemente, fazem parte da protena. Algumas protenas so formadas por vrias cadeias peptdicas unidas por ligao covalente e, portanto, no apresentam estrutura quaternria (p.ex.: a enzima digestiva quimotripsina possui trs cadeias peptdicas ligadas covalentemente por pontes dissulfeto). A estrutura quaternria, portanto diz respeito ao arranjo no covalente formado por vrias cadeias polipeptdicas como o caso da hemoglobina, da enzima aspartato transcarbamilase com 12 cadeias e da protena do vrus do tabaco com 2.120 cadeias polipeptdicas unidas no covalentemente.
Figura 4-12 Estrutura quaternria da hemoglobina, uma protena oligomrica formada por quatro cadeias peptdicas unidas por grupamentos prostticos heme. (Adaptado de Devlin, T.M., 1999).
A configurao espacial final das protenas (estrutura terciria ou quaternria) constante e determinante das funes biolgicas por elas exercidas. As protenas globulares so esferas compactas e irregulares resultantes do enovelamento da cadeia polipeptdica. So bastante solveis em gua corresponde principal forma das enzimas. As protenas fibrosas tm suas cadeias polipeptdicas arranjadas de forma paralela e dispostas em feixes (Figura 4-13), possuindo grande resistncia fsica distenso da
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molcula (p.ex.: colgeno e queratina). Algumas protenas tm os dois tipos de conformao, como o caso da miosina muscular e do fibrinognio.
Protenas conjugadas
Muitas protenas apresentam em sua composio, molculas no proticas ligadas de forma covalente ou no aos aminocidos das protenas, denominados, genericamente, de grupo prosttico. A hemoglobina (Figura 4-12) uma protena conjugada cujo grupamento prosttico so quatro grupamentos hemes (Figura 4-14) que se ligam de forma no covalente s cadeias peptdicas.
Figura 4-13 - Representao esquemtica da estrutura de protenas fibrosas e globulares. A) estrutura do colgeno evidenciando as cadeias peptdicas unidas em feixes e estabilizadas por pontes de hidrognio. B) a enzima fosfoglicerato mutase e seus dois domnios globulares. (Adaptado de Devlin, T.M., 1999)
A exposio de protenas a pH extremos ou temperaturas elevadas, mesmo por perodos curtos, faz com que a maioria delas apresentem modificaes fsicas em sua conformao tridimensional e em sua funo fisiolgica, processo conhecido como desnaturao. A visualizao geralmente pela formao de precipitado esbranquiado e a mudana tridimensional configurada no desenovelamento das cadeias polipeptdicas. Fisiologicamente, condies extremas de desnaturao protica so obtidas com variao brusca acima de 50oC e pH abaixo de 5,0, ambas condies incompatveis com a vida. Desta forma, o desenovelamento protico em hipertermia ou acidoses leva a diminuio ou at perda da funo protica, mas que se mostra reversvel quando cessa a causa da variao de temperatura e/ou pH. Este processo de renaturao, entretanto no visualizado em condies experimentais extremas onde a desnaturao protica irreversvel.
Figura 4-14 - O grupamento heme e seu anel tetrapirrlico ligado ao ferro reduzido.
Um grupo importante de protenas conjugadas so as glicoprotenas que esto presentes na superfcie celular (p.ex.: mucina), fazem parte de protenas estruturais (p. ex.: o colgeno), so hormnios (p.ex.: glucagon) ou receptores de membrana. A glicose liga-se de maneira irreversvel a uma frao da hemoglobina (hemoglobina glicada) e permite a monitorao da concentrao de glicose plasmtica (glicemia) at 120 dias (vida mdia da hemoglobina) antes da coleta de sangue. Outra frao de glicose fixa-se albumina formando as frutosaminas que, maneira da hemoglobina glicada, monitora a glicemia anterior da coleta em at 30 dias (vida mdia das albuminas). As lipoprotenas so importantes transportadoras dos lipdios plasmticos, principalmente os triglicerdeos e o colesterol. De acordo com a variao das lipoprotenas pode-se avaliar o risco para doenas cardacas coronarianas.
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EXERCCIOS 1. Comente a classificao dos aminocidos quanto a composio da cadeia R. 2. Conceitue aminocidos essenciais, noessenciais, glicognicos, cetognicos e glicocetognicos. 3. O que so aminiocidos raros e nocodificados? 4. Qual a importncia dos aminocidos no estudo dos erros inatos do metabolismo? 5. Comente sobre a propriedade cido-bsica dos aminocidos. 6. Conceitue os vrios nveis de organizao estrutural das protenas.
REFERNCIAS DA INTERNET Fundamentos de Bioqumica:

www.fundamentosdebioquimica.hpg.com.br
Webioqumica
www.pucpr.br/disciplinas/bioquimica/Webio1.html
3D Images of proteins
www.imb-jena.de/IMAGE.html
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Captulo 5 Enzimas
s enzimas so protenas especializadas na catlise de reaes biolgicas, ou seja, elas proporcionam que as reaes qumicas tornem-se muito mais rpidas que a reao no catilada (a enzima nuclease estafiloccia acelera a reao em 5,6x1014 vezes!),o que as coloca entre as biomolculas mais importantes para o ser vivo havendo situaes onde uma pequena queda ou aumento na atividade enzimtica acarreta problemas fisiolgicos srios. A prpria evoluo do conhecimento bioqumico tem nas enzimas sua gnese, com a descoberta do poder cataltico do suco gstrico sobre as protenas e da saliva sobre o amido no incio do sculo XIX. Louis Pasteur, em 1850, postulou que as reaes fermentativas do levedo, convertendo acar em lcool, eram devidas a substncias existentes dentro do levedo, as quais foram posteriormente denominadas de enzimas (derivado do latim en = dentro + zima = levedo). Com o isolamento das enzimas fermentativas do levedo em 1897, teve incio a era mais produtiva da pesquisa em bioqumica surgindo as principais hipteses do funcionamento das enzimas dentro da clula. Em 1926, o isolamento da enzima urease, estabeleceu a natureza protica das enzimas, criando-se o conceito de que todas as enzimas so protenas, mas nem todas as protenas so enzimas. Na dcada de 80, entretanto, foram identificadas molculas de RNA que possuem atividade cataltica, as ribozimas, o que ps abaixo aquele conceito quase que dogmtico. As enzimas, entretanto, so um captulo parte no estudo das protenas e, sem dvida nenhuma, possuem suas bases de conhecimento voltadas para a compreenso da estrutura tridimensional protica. Como uma protena, uma enzima depende da estrutura terciria (ou quaternria) para exercer sua funo catalisadora, uma vez que tem que interagir com as molculas dos
reagentes (aqui denominados de substrato) para convert-las nos produtos, de uma maneira a diminuir a energia necessria para levar estes substratos ao estado de ativao energtica caracterizado por uma molcula em transio entre o substrato e o produto. Freqentemente, utiliza-se a analogia da chave-e-fechadura para designar a especificidade de uma enzima para seu substrato. Porm esta comparao perde fora quando se conhece enzimas que possuem mais de um tipo de substrato ou substratos que sofrem ao enzimtica por mais de uma enzima. Alm disso, o prprio espao existente para a realizao da ao enzimtica no to apertado quanto pode sugerir uma chave-efechadura. Entretanto o encaixe espacial entre a molcula do substrato com a enzima demonstra um preciosismo prprio das melhores chaves-e-fechaduras, abrindo as portas para as reaes bioqumicas. A ligao entre uma enzima a outra molcula se d de maneira complexa, uma vez que h a formao de muitas ligaes fracas entre os tomos componentes das molculas. As nicas ligaes fortes que ocorrem nesta interao enzimtica so as que ocorrem entre partes das molculas que se encaixam perfeitamente no plano tridimensional. A regio da enzima onde ocorre este encaixe denominada de stio de ligao ou stio cataltico e corresponde, geralmente, a um entalhe na estrutura da molcula da enzima formado por uma seqncia de aminocidos que garante a forma de uma cavidade (Figura 5-1). Os demais aminocidos da enzima so responsveis por manter a forma deste stio de ligao, havendo um ou mais stios de posicionamento que facilitam a ligao com a molcula de substrato formando um complexo reversvel enzima-substrato. No substrato, h sempre um grupamento que favorece uma ligao suscetvel com o stio cataltico da enzima.
Fundamentos de Bioqumica Captulo 5: Enzimas
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A ligao do substrato com a enzima forma um complexo enzima-substrato que logo se dissocia liberando a enzima intacta e o substrato, agora convertido no produto. Dependendo do tipo de enzima, esta reao pode ocorrer entre mais de uma molcula e liberar uma ou mais molculas de produto.
Existem vrias enzimas que so produzidas em tecidos diferentes e catalisam a mesma reao, porm apresentam caractersticas qumicas ou fsicas diferentes. Elas so chamadas de isoenzimas e, freqentemente, podem apresentar afinidade diferente pelo substrato.
Figura 5-1 A ligao entre a enzima (estrutura maior, em vermelho) e o substrato (estrutura menor, em amarelo): A) o encaixe se d pelo stio cataltico da enzima.; B) h a formao de um complexo enzima-substrato; C) o substrato convertido no produto (a estrutura em azul); D) o produto liberado, regenerando a molcula de enzima.
Algumas enzimas so formadas exclusivamente por aminocidos (p.ex.: a ribonuclease pancretica), porm, a maioria precisa de um co-fator que funciona como uma espcie de calo molecular permitindo o encaixe perfeito da enzima com o substrato e proporcionando a quebra da estrutura original da molcula do substrato, iniciando a formao do produto final da reao enzimtica (Figura 5-2). Esses co-fatores podem ser ons metlicos (Fe++, Mn++, Zn++) ou compostos orgnicos denominados coenzimas (p.ex.: vitaminas hidrossolveis como a B6, B12, biotina0 etc.). Algumas enzimas utilizam um ou outro tipo de co-fator ou ainda ambos, com a parte protica denominada apoenzima e o complexo enzima/co-fator denominado holoenzima. Em alguns casos, a ligao da enzima com o co-fator no se faz de maneira permanente, porm quando esta ligao estvel, o co-fator faz parte da enzima e denominada de grupo prosttico.
Figura 5-2 A ligao da enzima com um co-fator o permite a ao enzimtica sob um substrato. Neste caso, a enzima sem o co-fator (apoenzima) no possui ao cataltica, ma somente o complexo enzima/co-fator (holoenzima).
As isoenzimas possuem importncia em interpretaes clnicas por interferir no diagnstico laboratorial de certas doenas. o cso da fosfatase alcalina, uma enzima heptica que tem a concentrao plasmtica aumentada na obstruo heptica, e que possui uma isoenzima produzida pela placenta em mulheres grvidas. Neste caso, mulheres grvidas podem ter um diagnstico errneo de obstruo heptica se o clnico no avaliar a possibilidade de um aumento da fosfatase alcalina ser em virtude da gravidez e no de um problema heptico.
Classificao das enzimas

Primariamente, as enzimas foram denominadas pela adio do sufixo ase ao noRicardo Vieira
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me do substrato (p.ex.: amilase, urease, arginase) ou por nomes empricos (p.ex.: pepsina, tripsina). Normalmente, ao invs das denominaes empricas, as enzimas so denominadas pela reao que executam sobre determiando substrato, podendo, entretanto, ser denominada pelo nome comum quando o nome se mostrar extenso ou complexo de ser denominado. Assim sendo, a enzima hexoquinase, que catalisa a transferncia de um grupamento fosfato do ATP para a glicose, denominada de ATP-glicose transferase, porm mais conhecida pelo primeiro nome. Atualmente, existe uma classificao de uso internacional para as enzimas, onde so agrupadas em seis classes de acordo com a reao que catalisa e cada classe subdividida em vrias subclasses. As classes e subclasses recebem nmeros que as identificam e, desta maneira, permitem a classificao das enzimas em grupos de ao enzimtica. Por exemplo, a amilase, enzima que degrada o amido, identificada pelo nmero 3.2.1 (classe 3 = grupo das hidrolases; primeira subclasse de nmero 2 = grupos das hidrolases que quebram de carboidratos; segunda subclasse de nmero 1 = as glicosidases). Esta forma de classificao enzimtica no tem grande popularidade em virtude da dificuldade de fixao de todas as subclasses existentes, porm a forma internacionalmente aceita e obrigatoriamente uma enzima emzima estudada em trabalhos cientficos deve ser devidamente identificada por esta nomenclatura. Entretanto, acima de forma complicada de identificao das enzimas, esta classificao internacional possui o metido de agrupar as enzimas em seus principais grupos e facilitar o estudo dos diversos tipos de ao enzimtica. Na tabela 5-1 esto citadas as principais classes e subclasses das enzimas. A seguir, esto descritas as classes de enzimas e suas principais subclasses, especificando-se a reao a qual catalisa. CLASSE 1 - Oxirredutases: catalisam reaes onde h troca de eltrons (oxi-reduo). Desidrogenases: facilita a transferncia de hidrognio. De uma maneira geral, desi-
drogenases OH =O e C-NH2 NH possuem o NAD(P) como coenzima, enquanto que as C-C C=C so ligadas ao FAD. Desaturases: formao de ligao dupla em cido graxo. Hidroxilases: facilita a oxidao de dois doadores com a incorporao de oxignio em um dos doadores. O outro substrato oxidado, sendo formado gua. O produto final identificado pela incorporao de uma OH em sua molcula. Oxidases: h a reduo do oxignio molecular Oxigenases: h a adio de oxignio em uma molcula Redutase: uma hidrogenase que reduz o substrato.
Tabela 5-1: Classificao das enzimas Classes Reao catalisada Subclasses Oxirreduta- Transferncia de Desidrogenases ses eltrons Desaturases Hidroxilases Oxidases Oxigenases Redutases Transferases Transferncia de Quinases grupos algumas Mutases Fosforilases Polimerases Transaldolases Transcetolases Transaminases Hidrolases Transferncia de Esterases grupos funcionais Lpases para a gua Nucleosidases Nucleotidases Peptidases Fosdatases Sulfatases Liases Adio de grupos a Aldolases duplas ligaes ou Descarboxilases o inverso Hidratases Sintases Isomerases Transferncia de Epimerases grupos dentro da algumas Mutases molcula produRacemases zindo ismeros Ligases Formao de liga- Carboxilases es CC, CS, Sintetases CO e CN por condensao com gasto de energia do ATP
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CLASSE 2 - Transferases: transferncia de grupos de uma molcula para outra. Quinases: transfere grupos de alta energia. Mutases: move grupo de um ponto para o outro da molcula Fosforilases: quebra de uma ligao CO pela adio de Pi. Polimerases: reaes de adio de uma unidade de polimerizao. Transaldolases: transfere um grupamento aldedo de um substrato para outro. Transcetolases: o grupamento cetona movido de uma molcula para outra. Transaminases (aminotrasnferase): transfere um grupamento amino de um aminocido para um cetocido. CLASSE 3 - Hidrolases: quebra molculas por hidrlise. Esterases: hidrolisa um ster em lcool e cido. Lipases: promovem a quebra de ligaes steres entre um cido graxo e o glicerol. Nucleosidases: degrada nucleosdeos em base nitrogenada + ribose. Nucleotidases: degrada nucleotdeos em nucleosdeos + Pi. Peptidases: quebra de ligaes peptdicas. Fosfatases: hidrlise de steres, liberando Pi. Sulfatases: hidrlise liberando sulfato. CLASSE 4 - Liases: corta ou sintetiza ligaes CC, CO e outras, por reaes que no oxidao ou hidrlise e sem envolvimento de reaes de transferncia de grupamentos de uma molcula para outra. Aldolases: forma ligao CC aps a ligao de um aldedo ou cetona com outro composto bioqumico. Descarboxilases: catalisa a remoo de CO2. Hidratases: liberao de gua durante a formao do produto. Sintases: catalisa uma sntese onde no h gasto de ATP. CLASSE 5 Isomerases: formao de ismeros.
Epimerases: promove a interconverso de epmeros (carboidratos que diferem pela posio de apenas uma hidroxila). Mutases: transferncia de grupamentos em uma mesma molcula formando ismeros. Racemases: formao de ismeros especulares inversos. CLASSE 6 - Ligases: unio de duas molculas acopladas quebra de ATP. Carboxilases: adio de CO2. Sintetases: ligao de duas molculas com quebra de pirofosfato (PP).
Por que as enzimas so catalisadores to eficazes?

As enzimas so essenciais para o metabolismo celular devido a vrios fatores que envolvem seu papel que vo desde uma economia energtica celular at a extrema adaptao s condies biolgicas intracelulares. a) Aes na economia energtica celular: As enzimas so excelentes catalisadores biolgicos por diminuir a necessidade energtica para que as reaes bioqumicas aconteam, o que, por si s, j torna a reao mais rpida e eficiente. Outros efeitos levam a aumentar a eficcia da reao enzimtica, mas sem dvida essa economia celular fundamental para a compreenso da importncia das enzimas para a biologia celular. Entretanto, as enzimas no alteram a energia livre (G) da reao, em vez disso, exercem sua funo catalisadora reduzindo a energia de ativao (GAt) das reaes qumicas, promovendo uma via de reao onde os produtos so formados de maneira mais rpida, com menos gasto de energia (Figura 5- 3). Um aumento na energia livre em um sistema reacional corresponde liberao da energia existente dentro das molculas e que liberada quando os substratos so convertidos em produtos. Assim, as reaes exotrmicas (aquelas que provocam um aumento da temperatura do meio) possuem valores negativos para a variao da energia livre (G) uma vez que os produtos situam-se em patamares de
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energia livre menores do que quando eram substratos, pois liberaram energia para o meio (e por isso o meio aquece). Pelo raciocnio inverso, as reaes endotrmicas (aquelas que consumem calor do meio) possuem valores de G positivos, pois os substratos acumularam energia alm daquela que tinham inicialmente. Nesta situao, evidencia-se uma queda da energia livre no sistema reacional, com os produtos roubando calor do meio para poderem ser formados.
Figura 5-3 As enzimas diminuem a energia de ativao necessria para converter os substratos em produtos. A variao da energia livre, entretanto, no alterada em relao reao no catalisada.
A energia de ativao corresponde a uma determinada quantidade de energia que os substratos necessitam receber para atingir um nvel energtico de instabilidade que desencadeie sua converso em produto. De uma forma geral, esta energia advm do meio reacional e est relacionada afinidade existente entre os substratos, alm da direo energtica da reao. Logo, para que uma reao ocorra, necessrio que o substrato receba energia elevando seu estado de excitao molecular at um ponto em que possibilite sua converso em produto. Todas as reaes qumicas ocorrem desta maneira, tanto as exotrmicas quanto s exotrmicas. Nas reaes exotrmicas a energia de ativao recebida devolvida completamente para o meio, acrescida de mais energia decorrente do processo exotrmico. Nas reaes endotrmicas, a energia de ativao recebida no liberada totalmente para o
meio deixando um dficit energtico aps a converso dos substratos em produtos. Na natureza, as reaes qumicas tendem a ocorrer espontaneamente na direo onde h a dissipao da energia, ou seja, no sentido em que a entropia (grau de desorganizao) aumenta. Isto significa dizer que em reaes espontneas, o produto final possui uma variao de energia livre com valores negativos, indicando a natureza exotrmica das reaes. Em bioqumica, tal calor de reao utilizado para a realizao de trabalho celular e o termo mais adequado para esse tipo de reao exergnica. Ento, h uma tendncia natural de ser mantida os nveis energticos antes e depois da formao dos produtos, havendo apenas a redistribuio da energia entre os produtos e o meio reacional. Esses conceitos dizem respeitos aos princpios gerais da termodinmica, onde a conservao da energia (primeira lei) e a mudana para nveis de maior entropia (segunda lei) so leis universais para as reaes envolvendo a produo e consumo de energia (para maiores informaes, ver Captulo sobre Bioenergtica). As enzimas no modificam o processo de produo ou consumo energtico de uma reao qumica, no alteram o equilbrio da reao, mas aumentam a velocidade da reao por diminuir a energia de ativao dos substratos. Isto acontece devido converso dos substratos em produtos ocorrer pela facilitao do alinhamento tridimensional entre os substratos, exigindo uma energia bem menor para a quebra do limiar energtico para a formao dos produtos. Esta poderosa ao cataltica possvel graas forma tridimensional do stio de cataltico da enzima (e o co-fator, na maioria das vezes) com o substrato que permite uma rpida reao, ao invs da reao no catalisada que necessitaria de um movimento e alinhamento aleatrios. Poderamos, portanto, generalizar uma reao enzimtica como: S+E ES EP P+E Onde S = substrato(s); E = enzima (mais cofator, quando for o caso); ES = complexo enzima substrato, EP = estgio que antecede a liberao de P = produto(s).
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Nota-se que a formao de ES limitante para a reao e ocorre em um tempo mais rpido do que ocorreria se no houvesse a catlise enzimtica. Apesar de, teoricamente, as reaes catalisadas por enzimas poderem ocorrer na sua ausncia, em termos fisiolgicos isto, na maioria das vezes, impossvel. Por exemplo, um mol de glicose (180g) quando convertida totalmente em energia em equipamentos de laboratrio, libera cerca de 680 kcal aps gastar quase 200 kcal como energia de ativao para convert-la em H2O e CO2. Entretanto a mesma reao realizada nas clulas gasta somente cerca de 20 kcal (10 vezes menos energia) a ttulo de energia de ativao, liberando os mesmos 680 kcal, isso graas incrvel economia proporcionada pelas enzimas do metabolismo energtico. Portanto, estas reaes realizadas sem enzimas na clula exigiriam uma temperatura corprea 10 vezes maior (algo como 370oC) para poderem ocorrer, fato impossvel para os seres vivos (pelo menos por aqueles que conhecemos neste planeta). b) A ao na ordem das reaes celulares: Apesar da pouca energia necessria ser um motivo muito forte para a eficcia das reaes enzimticas, muitas vezes, a reao no-catalisada impossvel em termos fisiolgicos devido rapidez que se espera na formao dos produtos para a continuidade do ciclo biolgico, ou mesmo pela necessidade de nveis energticos de ativao superior ao suportado pela clula. Ou seja, mesmo que a diferena energtica entre a reao catalisada e a no catalisada no se constitua em impedimento para que a reao ocorra, a lentido na formao dos produtos simplesmente emperraria a maquinaria bioqumica celular, levando a um colapso qumico, modificando a ordem de reaes devido ao acmulo do substrato (por ser lentamente degradado) e pela deficincia do produto (j que lentamente formado). Isto , na maioria das vezes, simplesmente impossvel em termos biolgicos ou traz efeitos secundrios graves para o organismo. Por exemplo, a enzima glicose-6fosfatase permite a liberao de glicose do
fgado para o sangue. Quando o indivduo no consegue sintetiz-la em concentraes adequadas (em virtude de uma doena gentica denominada de Doena de von Gierke) a glicose tende a se acumular nas clulas hepticas e acaba sendo degradada por uma outra enzima que, naturalmente, a degradaria em menor velocidade. Esta nova enzima que passa a trabalhar mais, a glicose-6-desidrogenase, leva sntese de pentoses em grande quantidade e esta, por sua vez, acaba sendo convertida em bases nitrogenadas de onde a adenina e a guanina em excesso iro ser convertidas em cido rico que, finalmente, acaba se depositando nas articulaes e causando uma doena extremamente dolorosa denominada gota. Esta apenas uma das muitas rotas metablicas em que o cido rico pode ser sintetizado devido a uma modificao na eficcia de enzimas do metabolismo heptico (maiores detalhes sero abordados no Captulo sobre metabolismo de bases nitrogenadas). c) Alta eficincia mesmo em baixas concentraes: Um outro fator importante na consagrao das reaes enzimticas como esteio qumico do ciclo da vida celular est no fato das enzimas serem regeneradas ao final do processo, podendo reagir com novas molculas do substrato sendo necessrias, portanto em quantidades bastante inferiores das do substrato, situao ideal para o meio extremamente diludo do citoplasma exigindo um gasto menor na sntese da enzima pelo mecanismo gentico celular. d) Especificidade enzima substrato como fator acelerador da reao: fundamental para o sucesso da reao enzimtica o fato que os substratos permanecem "presos" no stio cataltico, reduzindo os movimentos aleatrios da molcula (reduo da entropia) permitindo a catlise mais rpida. Alm disso, quando se forma o complexo enzima-substrato, as pontes de hidrognio que venham a se formar fixando o substrato na enzima, ocorrem entre o substrato os grupamentos dos aminocidos do stio cataltico (e na molcula do co-fator) e quase nunca
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com a gua do meio reacional. Esta ao denominada retirada da capa de solvatao e diminui a resistncia fsica das molculas dos substratos em reagirem. Tambm fundamental para a eficcia da reao enzimtica, a modificao tridimensional que a molcula da enzima sofre no momento que se liga com o substrato, favorecendo a formao das ligaes necessrias para que os produtos sejam liberados, com o alinhamento das partes afins das molculas com o gasto mnimo de energia. A falta de especificidade entre o stio cataltico da enzima com o produto formado fundamental para a liberao da enzima para nova reao (Figura 5-4).
Figura 5-4 Representao da complementaridade espacial e qumica entre enzima e substrato. A) regies do substrato possuem regies complementares no stio cataltico da enzima (aqui representado uma ponte de hidrognio, atrao inica e interaes fracas apolares); B) o complexo enzima-substrato se forma com a retirada da capa de solvatao, o que diminui a resistncia da molcula; C) o produto formado no tem especificidade com a enzima; D) as regies que antes se atraiam, agora se repelem, regenerando a enzima.
Quando h a formao do complexo enzima-substrato o cenrio molecular est armado para que haja a formao dos produtos. Note que estes fatos ocorrem de uma maneira muito rpida e dentro no stio cataltico e a especificidade das ligaes fracas que ocorrem entre os grupamentos da enzima (e cofator) com o(s) substrato(s) proporcionam um aumento da velocidade da reao. e) A ao das enzimas regulvel: Uma vez so produzidas, as enzimas iniciam sua ao cataltica at que a ltima molcula de substrato seja convertida em produtos. Esta fato pode ser fatal para a clula
por retirar um composto (o substrato) que pode ter outras vias metablicas importante e produzir uma quantidade exagerada de um composto (os produtos) que podem ser indesejveis clula. Logo, no basta que uma enzima deixe de ser sintetizada para que ela pare de fazer efeito, uma vez que continuamente regenerada. Portanto, um mecanismo de regulao da ao enzimtica torna-se indispensvel para o sucesso da ao cataltica. Em outras palavras, a enzima tem se saber quando parar e quando comear a trabalhar. Isto ocorre graas a vrios mecanismos de controle onde o principal uma diminuio (ou aumento) de sua atividade de acordo com o aumento (ou diminuio) de compostos relacionados com o produto da reao, o que estabelece um mecanismo de feedback (retroalimentao, ou seja, informao a algo de trs por algo da frente) que pode ser negativo ou positivo, de acordo com a natureza da reao. Por exemplo, o aumento da concentrao de ATP celular favorece a inibio da atividade da maioria das enzimas do metabolismo energtico atravs de um mecanismo de feedback negativo o que impede que as molculas energticas produzam indefinidamente ATP o que levaria destruio da clula pelo excesso de calor liberado no processo. No entanto, no h a necessidade do longo processo de sntese de mais enzimas para reiniciar o processo em virtude de a queda de ATP ativar as enzimas do metabolismo energtico induzindo a produo de mais ATP (esse processo denominado de regulao alostrica e ser melhor detalhado ainda neste captulo).
Mecanismos de ao enzimtica
Vrios mecanismos para a reao enzimtica so propostos a partir da natureza qumica dos substratos e cada reao enzimtica possui uma peculiaridade que a torna nica. Entretanto, podemos agrupar os mecanismos de reao enzimtica em trs mecanismos principais que abrangem a maioria das reaes enzimticas. So eles:
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Catlise cido-bsica: Utiliza os ons H+ (catlise cida) ou OH (catlise bsica) da gua, ou a propriedade cido-bsica de alguns aminocidos, para promover a formao de um intermedirio entre os substratos e os produtos que se quebra rapidamente impedindo o retorno forma de substrato (Figura 5-5).
a)
uma reao dependente do pH uma vez que o grupamento R de vrios aminocidos varia sua carga eltrica com o pH o que interfere neste tipo de catlise. Os aminocidos Aspartato, Glutamato, Histidina, Lisina, Cistena e Tirosina so os que, freqentemente, esto presentes no stio cataltico de enzimas que funcionam atravs deste mecanismo de ao.
Figura 5-5 Modelo de catlise cido-bsica de converso de uma cetona em um enol. A) a reao no catalisada ocorre espontaneamente somente com alta energia de ativao; B) modelo de catlise cida com o grupamento cido representado por A-H ligado ao stio ativo da enzima (curvas sinuosas em cinza); C) modelo de catlise bsica onde :B o grupamento bsico ligado enzima. Tanto em B quanto em C, h o envolvimento do H+ da gua que esteqiometricamente regenerada ao final (OH- + H+) assim como a enzima em sua configurao original cida ou bsica. Observe que H a formao de um composto traasnitrio onde o substrato est ligado por ponte de hidrognio enzima. (Adaptado de Voet & Voet, 2000). Ricardo Vieira
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Este tipo de reao enzimtica bastante comum e o grupamento cido da enzima representado A-H e o grupamento bsico por :B, representando o H+ da enzima que se ligar com o substrato e o ponto de ligao da enzima com um H+ do substrato, respectivamente. Os demais mecanismos de ao enzimticos tm sempre alguma semelhana catlise cido-bsica. Uma reao que exemplifica bem este tipo de catlise a converso espontnea de cetonas a enol, cuja energia de ativao muito alta sem a catlise enzimtica. Na presena de enzimas, a reao ocorre com menor gasto energtico para a formao do complexo de transio. Catlise Covalente: H a formao de uma ligao covalente entre a enzima (ou o co-fator) e o substrato impedindo que haja a regenerao do substrato e a rpida formao dos produtos. Portanto, h sempre a necessidade de uma reao adicional que permita a regenerao da enzima. A catlise covalente ocorre sempre entre um agente nucleoflico (afinidade por prtons) da enzima e um agente eletroflico (afinidade por eltrons) do substrato. Os principais nuclefilos so a hidroxila (-OH), sulfidrila (-SH), amino (-NH3+) e o imidazol (da histidina). Esses nuclefilos esto presentes em aminocidos polares, conforme pode ser observado na figura ver figura 4.2 do Captulo sobre Aminocidos e Protenas. Os eletrfilos mais comuns nos substratos so o on hidrognio (H+), ctions metlicos, o carbono da carbonila (COO-) e iminas (R2C=NH+, tambm denominada de Base de Schiff). Normalmente, este tipo de reao ocorre em trs etapas: 1) o nuclefilo (enzima) se liga com o eletrfilo (substrato), formando a ligao covalente; 2) retirada de eltrons pelo eletrfilo; e 3) reverso da primeira etapa com a sada do catalisador. Este tipo de reao semelhante catlise bsica, envolvendo a adio de H+ ao substrato, havendo a retirada e posterior (e posterior adio) de OH. A diferena deste mecanismo de ao para a catlise bsica b)
formada uma ligao covalente entre a enzima e o substrato no composto intermedirio. Na Figura 5-6, est exemplificada uma reao enzimtica por catlise covalente na converso de oxalacetato (cido carboxlico) em acetona pela perda de CO2, reao extremamente lenta sem a ao enzimtica. c) Catlise por on metlico: Os ons presentes na molcula da enzima (ou do co-fator, principalmente Fe+2, Fe+3, Cu+2, Zn+2, Mn+2 e Co+2) ou captados do meio no momento da formao do complexo enzima-substrato (Na+, K+, Mg+2 ou Ca+2), favorecem o alinhamento tridimensional do substrato, estabilizao do complexo transitrio ou mediar reaes de oxi-reduo.
Figura 5-6 Catlise covalente. A) reao de descarboxilao espontnea no catalisada de oxalacetato em acetona; B) pormenorizao dos passos da reao catalisada enzimaticamente, onde os diversos hbridos de ressonncia formados permitem a ligao covalente do substrato com a enzima (3) e a total regenerao da enzima, quebrando a ligao covalente e liberando o produto (8). Note que h sada e entrada de ons H+ e OH- (1, 3, 5 e 7) resultantes da ao enzimtica. Ricardo Vieira
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Esta interao favorece uma maior estabilidade eletrosttica, o que permite que a reao ocorra com menor necessidade energtica para atingir o estado de transio. O papel desses ons metlicos semelhante ao on hidrognio nas reaes enzimticas, ligando-se a grupos carregados negativamente (p.ex.: a OH da H2O) e transferindo-os para o substrato (mecanismo que lembra a catlise cida). Porm, os ons metlicos so mais eficazes por que podem estar presentes em concentrao maior que os H+ sem modificar o pH, alm do que podem possuir carga positiva maior que +1, favorecendo uma reao mais eficaz. Um mecanismo clssico por catlise por on metlico a hidratao de CO2 em bicarbonato (HCO3-) mediada pela anidrase carbnica (Figura 5-7). A reao no catalisada forma cido carbnico somente em altas concentraes de CO2 o que acarreta a necessidade de altas condies de presso, incompatvel com o ambiente celular. Entretanto, a anidrase carbnica possui um on Zn+2 em seu stio ativo que permite a transferncia de OH para o substrato (CO2) favorecendo a formao do bicarbonato e liberando o H+ para o meio.
cado em vrias enzimas, apesar de no ter seu mecanismo totalmente elucidado atravs de experimentos laboratoriais.
Mecanismos que aceleram a reao enzimtica

Os mecanismos de ao enzimtica baseados na catlise cido-bsica, catlise covalente e catlise por ons metlicos explanam a grande maioria das reaes enzimticas. Porm, algumas condies adicionais favorecem um aumento considervel na velocidade da reao enzimtica, quando presentes na molcula de enzima. o caso da existncia de pontos de atrao eletrosttica entre a enzima e o substrato que excluem totalmente a gua no stio de ligao favorecendo uma reao em condies de extrema rapidez devido aproximao mxima entre enzima e substrato. A ausncia de gua no stio ativo leva a reao condio de reao orgnicas em meio apolar que so mais rpidas que as que ocorrem em meio aquoso. Este tipo de mecanismo denominado de catlise eletrosttica e verifi-
Figura 5-7 Catlise por on metlico. A) a hidratao de dixido de carbono (CO2 )em bicarbonato (HCO3-) no catalisada; B) a catlise da reao pela enzima anidrase carbnica. O Zn+2 no stio ativo (1) absorve -OH da gua o que permite a atrao do CO2 (2). A absoro de nova -OH pelo Zn+2 (4) favorece a liberao do HCO3- e a regenerao da enzima (5). Observe que somente uma molcula de H2O degradada por mol de bicarbonato formado.
Um outro tipo de mecanismo de reao que incrementa a velocidade da reao observado quando esto envolvidos mais de um substrato e as enzimas favorecem um alinhamento tridimensional entre as molculas estabelecendo um grau de toro ideal para que os substratos reajam entre si de maneira mais rpida e com menor necessidade de energia para atingir o estado de transio. Este tipo de mecanismo denominado de catlise por efeitos de proximidade e orientao e uma maneira eficaz de acelerar a velocidade da reao enzimtica. Por fim, um efeito fundamental para a garantia de uma alta eficcia cataltica est atrelado ao fato de a enzima possuir maior afinidade pela molcula do estado de transio do que pelo substrato. Este mecanismo de
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ao de catlise por ligao preferencial molcula do estado de transio facilita a formao rpida do estado de transio para diminuir a tenso energtica causada pela ligao com o substrato. Observe que as enzimas que possuem tal propriedade possuem alta afinidade pelo substrato, mas afinidade ainda maior pela molcula do estado de transio, porm promovem sua liberao, uma vez que o estado de transio um estgio rpido onde logo se forma o produto, com a enzima liberando-o e se regenerando rapidamente.
Cintica enzimtica
Como j percebemos, a velocidade da reao no proporcional a existncia de um equilbrio de reao favorvel, ou seja, a formao de produtos em nveis de energia livre (G) mais baixos que os substratos. A diminuio da energia de ativao (GAt) o principal efeito da ao enzimtica. A velocidade da reao est atrelada, portanto, no a um valor negativo alto de G, mas uma menor variao de GAt, como observado na reao enzimtica. Qualquer reao qumica tem sua velocidade aumentada pelo aumento da concentrao dos reagentes. Nas reaes catalisadas por enzimas, um aumento da concentrao do substrato tambm aumenta a velocidade de reao, mas somente at um determinado ponto que corresponde a um valor da concentrao do substrato em que a capacidade cataltica da enzima est no mximo e a reao atinge, portanto, sua velocidade mxima, no aumentando mesmo que se aumente a concentrao do substrato (Figura 5-8). Na prtica, isto acontece quando existe mais enzima disponvel que substrato, ou seja, quando a concentrao da enzima est saturada em relao ao substrato. Quando os substratos esto em concentrao bastante inferior a da enzima, h a predominncia da forma livre da enzima uma vez que poucas molculas de enzimas so necessrias para as poucas molculas de substrato.
Figura 5-8 - A velocidade da reao enzimtica aumenta com o aumento da concentrao do substrato at o ponto em que atinge sua velocidade mxima. A partir deste ponto, a velocidade torna-se constante, independente do aumento da concentrao do substrato. KM (constante de MichaelisMenten) corresponde concentrao de substrato suficiente para atingir a metade da velocidade mxima. O valor de KM igual a [S] quando a enzima encontra-se na metade de sua velocidade mxima.
H a um aumento da velocidade da reao com o aumento da concentrao do substrato devido ainda haver enzima disponvel para a catlise. Isto, entretanto, ocorre at um determinado ponto onde h a equivalncia entre a concentrao da enzima e do substrato, o ponto de saturao da enzima. Na verdade, a saturao da enzima no ocorre quando h partes equivalentes entre o substrato e a enzima, uma vez que h uma relao distinta entre as concentraes necessrias de enzima para degradar o substrato em uma unidade de tempo, usualmente, um minuto. Assim, algumas enzimas esto funcionando a pleno vapor quando existem, por exemplo, 3 moles de enzima para cada trs moles de substratos ou, ainda, 5 moles de substratos para cada mol de enzima. Na Figura 5-9 est representada a variao da velocidade da reao enzimtica em funo da concentrao do substrato, para uma enzima hipottica que trabalhe em concentraes fictcias de 1 mol de enzima degradando 1 mol de substrato em um minuto. Como pode ser observado, quando h a saturao da enzima, a adio de mais substrato no promove o aumento da reao, no entanto, a enzima poder degradar todo o substrato adicionado, desde que tenha tempo disponvel para isso. Esta observao acresRicardo Vieira
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centa um fator fundamental para o estudo da cintica enzimtica: o tempo.
Km = constante do equilbrio estacionrio de Michaelis-Menten [S] = concentrao do substrato Uma correlao matemtica importante observada no caso especial em que a velocidade inicial da reao exatamente a metade da velocidade mxima, isto , quando Vo = Vmx, ento teremos: Vmx Vmx [S] = 2 KM + [S] Deduzindo esta frmula, teremos que Km=[S], conforme demonstrado na anlise grfica da Figura 5-8. Podemos afirmar, ento, que a constante de Michaelis-Menten igual concentrao de substrato na qual a velocidade inicial da reao metade da velocidade mxima. Esta constante um valor importante na caracterizao da cintica enzimtica, pois uma enzima pode ter a mesmo valor de velocidade mxima que outra enzima, porm dificilmente ter o mesmo valor de KM, que ir indicar que a concentrao de substrato necessria para saturar a enzima diferente. Desta forma, reaes enzimticas que possua baixo KM iro atingir a velocidade mxima em valores de [S] bem menor, o que indica que a enzima ser bem mais rapidamente saturada com o substrato do que uma enzima que tenha o KM maior, indicando que quanto maior o KM mais lenta a reao enzimtica. Esta e outras observaes so melhores visualizadas atravs de uma modificao do grfico da Figura 5-7 atravs do grfico do duplo-recproco de Linewaver-Burk descrito na Figura 5-10. Este tipo de grfico resultante da relao dos valores inversos dos dois eixos cartesianos, no caso a velocidade inicial (Vo) e a concentrao do substrato [S]. Esta correlao permite que seja visualizado ponto importante no estudo da cintica enzimtica atravs da simples inverso dos termos na equao geral e MichaelisMenten: KM + [S] 1 = Vo Vmx [S]
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Figura 5-9 Representao esquemtica da velocidade de reao enzimtica. As figuras de A a E representam a adio crescente de substrato (crculo) em relao a uma concentrao constante de enzima (meia lua) formando um complexo enzima substrato e liberao do produto (cruz). A partir de C, a enzima encontra-se saturada e a velocidade mxima de 3 moles/mim no se altera.
Na Figura 5-8, note que existe um valor de concentrao de substrato [S] em que atingida a velocidade mxima (Vmx). Obviamente a concentrao da enzima [E] permanece constante durante a anlise, pois se aumentar [E], a tal ponto de ela no se encontrar saturada, a velocidade da reao tambm aumentar atingindo a velocidade mxima em outro patamar de [S]. Ainda no grfico da figura 5-8, observa-se que existe um determinado valor da concentrao do substrato que necessrio para se atingir a metade da velocidade mxima (1/2Vmx). Este valor de [S] denominado de Km, a constante de Michaelis-Menten, casal de pesquisadores que determinou a expresso quantitativa da relao de [S] e a velocidade da reao enzimtica, atravs da equao geral: Vo = Vmx [S] KM + [S]
Onde: Vo = velocidade inicial de uma reao enzimtica Vmx = velocidade mxima da reao
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Ou, deduzindo a expresso: KM 1 1 1 x + = Vo Vmx [S] Vmx Este tipo de anlise grfica permite determinar com mais preciso a Vmx, o que se torna difcil pela anlise dos valores verdadeiros da equao de Michaelis-Menten.
A anlise do grfico duplo-recproco de Linewaver-Burk ser melhor esplanada durante o estudo dos inibidores enzimticos, ainda neste captulo.
Regulao enzimtica
Como na clula existe um verdadeiro emaranhado de reaes qumicas onde os produtos de uma reao so os substratos de outras, muito comum que uma das enzimas de uma via metablica determine a velocidade de todo o processo diminuindo a velocidade da reao, limitando a velocidade para o conjunto de reaes seguidas. Este fator provoca o cmulo do substrato e o seu deslocamento para outras vias metablicas acessrias. A atividade enzimtica tambm pode sofrer alteraes com a variao do pH intracelular. Todas as enzimas possuem um pH timo de atuao onde qualquer variao para mais ou menos, modifica a eficcia da reao enzimtica. Isto se deve pelo fato de haver aminocidos cujo radicais R funcionam como cidos ou bases, doando ou cedendo prtons para o meio. Em vista disso, h a alterao da carga no stio cataltico ou na conformao tridimensional da protena de maneira que impea a ligao de forma eficaz com o substrato. Variaes na temperatura tambm diminuem a eficcia da reao enzimtica por modificar o equilbrio qumico. Variaes extremas de pH (geralmente abaixo de 4,0 e acima de 8,0) e temperatura (acima de 56oC) in vitro terminam por desnaturar de maneira irreversvel as enzimas Existem vrios tipos de enzimas de regulao, dos quais enfatizaremos trs: a) Enzimas alostricas: Neste importante tipo de regulao, h a formao de uma ligao no-covalente e reversvel da enzima com o seu produto ou (mais freqentemente) com um dos produtos das reaes seguintes, levando a desestabilizao da sua forma tridimensional o que impede a regenerao para consumir nova molcula do substrato. Na molcula da enzima h um ponto especial para o encaixe com esse metablito regulador, denominado stio de regulao ou
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Figura 5-10 O grfico do duplo-recproco de Linewaver-Burk onde so determinados pontos importantes no estudo da cintica enzimtica. Os valores de 1/VMx so visualizados na interseo no eixo da 1/Vo, enquanto que o valor de -1/KM corresponde interseo com o eixo de 1/[S]. Como correspondem a valores inversos, quanto maior o KM, mais para a esquerda o ponto de interseo e quanto menor a velocidade mxima, mais abaixo o ponto de interseo, e viveversa.
Por essa anlise, o grfico adota uma configurao linear onde a inclinao corresponde a relao KM/Vmx. Note que como os valores plotados so os inversos dos reais, quanto maior a inclinao para cima, maiores sero os maiores os valores do eixo 1/Vo, ou seja, menor a velocidade e, portanto, mais lenta ser a reao enzimtica. Logo, quanto maior a inclinao para baixo, mais veloz a reao. Da mesma forma, quanto mais para a direita, menor o valor de KM. Portanto, como a inclinao est diretamente relacionada com o KM uma queda em seu valor leva a uma queda na inclinao do grfico o que revela que quanto maior for o KM, mais lenta ser a velocidade reao. Esta queda na velocidade pode ocorrer, ainda, sem a modificao do valor do KM, bastando para isso que diminua somente o valor da velocidade mxima, mantendo-se o KM inalterado, como o caso de certos inibidores que se ligam ao stio ativo da enzima e a impedem de catalisar a reao.
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alostrico (do latim alos = outros e estereo = espao, lugar). Ocorre um feedback negativo entre o produto e a enzima, impedindo que nova lomlcula de produto seja produzida. Esse regulador pode ser um ativador da atividade enzimtica aumentando a velocidade da reao por aumentar a especificidade com o substrato (feedback positvo). O prprio substrato pode desempenhar o papel de regulador (nas enzimas ditas homotrpicas). Quando o regulador diferente do substrato, a enzima denominada de heterotrpica. O trmino da regulao ocorre com a retirada do regulador da molcula da enzima, uma vez que a ligao que os une no covalente irreversvel. Esta sada est condicionada ao requerimento da molcula reguladora para a via metablica e se d quando sua concentrao cai o que vai estimular a enzima (que estava inibida) a produzir mais produto. Esta regulao paradoxal onde o produto inibe sua prpria sntese extremamente eficaz e controla a velocidade de formao do produto e degradao do substrato. Um exemplo clssico deste tipo de regulao observado durante o metabolismo energtico, onde o ATP promove a inibio alostrica na maioria das enzimas na via metablica do ciclo de Krebs (ver Captulo sobre Bioenergtica). Enzimas reguladoras por ligaes covalentes reversveis: H a formao de uma enzima inativa pela adio de grupamentos fosfato inorgnico (Pi = PO3-), AMP (adenosina mononucleotdeo fosfato), UMP (uridina mononucleotdeo), ADPribose (adenosina difosfato + ribose) ou metil (CH3), atravs de ligao covalentes por intermdio de outras enzimas. Este tipo de regulao gera enzimas inativas quando ligadas ao grupamento, havendo sua ativao com a retirada do grupamento. um mtodo, tambm, bastante eficaz uma vez o grupamento adicionado pode ser o produto de sua prpria via metablica (uma regulao alostrica) ou, mais freqentemente, o produto de uma via metablica paralela sujeita regulao prpria. b)
A ativao e inativao das enzimas da glicogenlise (degradao do glicognio) atravs de enzimas fosforilases oriundas de via metablica regulatria do metabolismo de hormnios como o glucagon um bom exemplo deste tipo de regulao (ver o Captulo sobre metabolismo de carboidratos). c) Enzimas reguladas por clivagem proteoltica: Neste tipo de regulao, h a participao de um precursor inativo da enzima, denominado zimognio que corresponde a uma enzima com aminocidos a mais dos que os necessrios para a funo cataltica. Na forma de zimognio, esses aminocidos adicionais impedem a ao cataltica da enzima. Esse tipo de enzimas regulador retira peptdeos ou aminocidos do zimognio proporcionando a sua ativao. Note que a retirada dos aminocidos mediada por enzima que possuem mecanismos prprios de regulao, na maioria das vezes alostricos. Uma bom exemplo deste tipo de regulao o mediado pela enzima renina, produzida pelas clulas justaglomelurares renais, que retira aminocidos da molcula de angiotensinognio (o zimognio) e a converte em angiotensina I. Ainda nesta mesma via metablica, a angiotensina II tem aminocidos retirados por outra enzima, a ECA (enzima conversora de angiotensina) gerando a angiotensina II, potente vasoconstritor e ativador de outras reaes biolgicas. Alm desses trs mecanismos bsicos, a atividade enzimtica tambm pode sofrer alteraes com a variao do pH intracelular. Todas as enzimas possuem um pH timo de atuao onde qualquer variao para mais ou menos, modifica a eficcia da reao enzimtica. Isto se deve pelo fato do grupamento funcional estar ionizado nas ligaes peptdicas (ver Captulo 4 sobre protenas) e de haverem aminocidos cujo radical R funcionam como cidos ou bases, doando ou cedendo prtons para o meio. Em vista disso, h a alterao da carga no stio cataltico ou na conformao tridimensional da protena de maneira que impea a ligao de forma eficaz com o substrato.
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Variaes na temperatura tambm diminuem a eficcia da reao enzimtica por modificar o equilbrio qumico. Variaes extremas de pH (geralmente abaixo de 4,0 e acima de 8,0) e temperatura (acima de 56oC) in vitro terminam por desnaturar de maneira irreversvel as enzimas. Entretanto, a variao de pH e temperatura no podem ser encarados como um mecanismo regulador, uma vez que h o decrsmo generalizado de todas as enzimas dentro de uma mesma via metablica. Tais fatores so, portanto, acessrios no estudo da regulao enzimtica.
Mecanismos de inibio enzimtica

A reao enzimtica pode, ainda, sofrer ao de agentes inibidores que diminuem a velocidade da reao, agindo por mecanismos diversos que podem ser produtos do prprio metabolismo celulares ou externas ao organismo, como o caso de vrios tipos de medicamentos. Essa ao inibidora, longe de ser um empecilho reao, mostra um eficaz mecanismo de regulao quando associado a uma via metablica onde o inibidor um dentre os muitos produtos da via. Os mecanismos de inibio so, em sua maioria, reversveis, havendo a regenerao da ao enzimtica quando cessa ao do inibidor. Entretanto, alguns inibidores agem de forma mais drstica ligando-se irreversivelmente enzima, destruindo sua ao cataltica. Neste caso, somente a sntese de nova molcula de enzima restaura sua ao, o que nem sempre possvel, pois a inibio pode levar morte da clula como o caso de vrios antibiticos desenhados para destruir enzimas chaves do metabolismo bacteriano. Os principais tipos de inibio podem ser agrupados em trs grupos distintos: a) Inibidores enzimticos competitivos: Reagem reversivelmente com a enzima livre no stio cataltico em competio com o substrato, para formar um complexo enzima-inibidor. A inibio ocorre em virtude de uma extrema similarida tridimensional do inibidor
com o substrato, entretanto a enzima no promove sua quebra, ao invs disso fica impedia de ligar-se com o substrato, que passa a se acumular. Com o aumento da concentrao do substrato, aumenta a probabilidade da enzima ligar-se ao substrato e no ao inibidor o que leva ao fim da inibio. Desta forma, o efeito inibidor se d de maneira mais eficaz em concentraes baixas do substrato e revertido por grandes concentraes de substrato. Esses efeitos podem ser observados no grfico de velocidade de reao (Figura 5-11) onde o ponto chave da anlise fica por conta da no mudana da velocidade mxima da reao, que se torna, entretanto, mais lenta devido diminuio do valor do KM, conforme discutido anteriormente. b) Inibidores no-competitivos: Reagem com a enzima livre, mas no no stio cataltico. o tipo clssico de regulao alostrica. Como a ligao do inibidor no se faz no stio cataltico, no h diminuio da inibio com o aumento da concentrao de substrato como na inibio competitiva. Logo, a nica maneira de reverter a inibio a retirada do inibidor da molcula da enzima, o que feito, geralmente, por ao de outra enzima. Como a queda na velocidade da reao ocorre independentemente da concentrao do substrato, o KM sofre mnima ou nenhuma variao, o que indica que o aumento da inclinao do grfico de Linewaver-Burk (queda na velocidade) induzido pela queda da Vmx, Na Figura 5-12 esto descritas as implicaes de uma inibio no competitiva na anlise grfica da cintica enzimtica. Alguns tipos de inibidores no competitivos podem combinar-se reversivelmente com o complexo enzima-substrato ao invs do substrato, evitando a formao de produtos. Este tipo de inibio freqentemente denominada de incompetitiva e obedece aos mesmos princpios cinticos da inibio nocompetitiva. c) Inibidores irreversveis: Promovem uma alterao permanente, qumica, de algum grupo funcional essencial na molcula da enzima. Muitos medicamentos modernos so inibidores irreversveis de uma
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reao enzimtica especfica o que confere uma alta especificidade e poucos efeitos colaterais. A destruio do stio cataltico promove a queda sumria da velocidade da reao enzimtica, com a observao do aumento do valor de KM e a queda da Vmx. Este efeito o mesmo observado quando se analisa uma mesma reao enzimtica frente a concentraes diferentes de enzima, devido ao efeito inibitrio ser definitivo e retirar as enzimas do meio.
Figura 5-12 O efeito de inibidores nocompetitivos na anlise grfica da cintica enzimtica. A) devido ao impedimento no stio cataltico, a enzima inibida no pode atingir a velocidade mxima e um aumento de substrato no reverte a inibio. B) a queda da Vmx a causa do aumento da inclinao do grfico enquanto que o valor de KM apresenta pouco ou nenhum aumento.
Figura 5-11 Anlise grfica da ao de inibidores enzimticos competitivos. A) o efeito do inibidor leva a uma queda na curva, com aumento do KM e manuteno dos valores de Vmx; B) grfico de LinewaverBurk onde os valores inversos da velocidade e de [S] revelam que a inibio competitiva ocorre com o aumento do KM (aumento da inclinao).
EXERCCIOS 1. Descreva a estrutura molecular bsica das protenas. 2. Conceitue isoenzimas, co-enzimas e holoenzimas. 3. No que se baseia a classificao das enzimas? 4. Quais as principais classes enzimticas? 5. Por que as enzimas so catalizadores to eficazes? 6. Descreva os mecanismos de ao enzimtica. 7. Comente sobre alguns fatores que aceleram a ao enzimtica. 8. Quais as caractersticas bsicas da cintica enzimtica? 9. Quais os mecanismos de regulao enzimtica?
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Captulo 6 Carboidratos
s carboidratos (tambm chamados sacardeos, glicdios, oses, hidratos de carbono ou acares), so definidos, quimicamente, como poli-hidrxi-cetonas (cetoses) ou poli-hidrxialdedos (aldoses), ou seja, compostos orgnicos com, pelo menos trs carbonos onde todos os carbonos possuem uma hidroxila, com exceo de um, que possui a carbonila primria (grupamento aldedico) ou a carbonila secundria (grupamento cetnico) (Figura 6-1).
Figura 6-1 - Os monossacardeos mais simples. Como os demais monossacardeos, aqueles que possuem o grupamento funcional aldedo so denominados aldoses e os que contm o grupamento cetona so as cetoses. O gliceraldedo j demonstra uma importante propriedade dos carboidratos, a isomeria ptica graas ao seu carbono 2 assimtrico.
Os carboidratos mais simples possuem de trs a oito carbonos, os monossacardeos, e possuem a frmula emprica Cn(H2O)n. A grande informao embutida por detrs desta frmula geral, na verdade, a origem dos carboidratos nos fenmenos fotossintticos dos vegetais (Figura 6-2). Devido esta origem, os carboidratos contm na intimidade de sua molcula a gua, o CO2 e a energia luminosa do sol utilizados em sua sntese. A organizao mais complexa entre mais de uma molcula de carboidrato, gerar polmeros formado pela perda de uma molcula de gua o que confere a frmula geral Cn(H2O)n-1 prpria para esses carboidratos. Alguns carboidratos, porm, possuem em sua estrutura nitrognio, fsforo ou enxofre no se adequando, portanto, frmula geral. A converso da energia luminosa em energia qumica faz com que esses compostos fotossintticos funcionem como um verdadeiro combustvel celular, liberando uma grande quantidade de energia trmica quando quebrado as ligaes dos carbonos de sua molcula, liberando, tambm, a gua e o CO2 que l se encontravam ligados.
Figura 6-2 - Os carboidratos so as biomolculas energticas que garantem a reciclagem do carbono na biosfera. Na figura est representada a participao de mitocndrias e cloroplastos na reciclagem do carbono.
Fundamentos de Bioqumica - Captulo 6: Carboidratos
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De fato, desde a bactria mais simples e antiga at os animais mais jovens na escala evolutiva (entre eles, certamente, o homem) contm as enzimas necessrias para a quebra da molcula da glicose, uma hexose, o principal representante dos carboidratos. Todo o metabolismo energtico celular gira em torno dos processos metablicos da glicose e vrios distrbios patolgicos so evidenciados quando h uma deficincia nas vias metablicas da glicose, como o caso da diabetes mellitus doena de alta incidncia mundial caracterizada pela deficincia na funo do hormnio pancretico insulina, responsvel pela regulao da glicose sangnea. Os animais no so capazes de sintetizar carboidratos a partir de substratos simples no energticos, como os vegetais. Desta forma, precisam obt-los atravs da alimentao, produzindo CO2 (excretado para a atmosfera), gua e energia (utilizados nas reaes intracelulares). Os lipdios so sintetizados nos vegetais e animais a partir da acetil-CoA, o produto principal do metabolismo aerbico da glicose, sendo utilizados como fonte de energia quando h escassez de carboidratos. Da mesma forma, as protenas so utilizadas como fonte energtica alternativa. Desta forma, principalmente os animais, lipdios constituem reserva energtica sintetizada diretamente a partir do metabolismo da glicose. Nos animais, h um processo de produo de intermedirios metablicos da glicose que simulam uma sntese, chamado neoglicognese que fornece carboidratos a partir de percursores no glicdicos. Porm tal processo s possvel a partir de substratos provenientes de um prvio metabolismo glicdico, lipdico ou, principalmente, protico, o que no supre a necessidade de obteno de carboidratos pela alimentao, o que torna os animais dependentes dos vegetais em termos de obteno de energia. De fato, os vegetais so privilegiados no sentido que garantem seu combustvel celular atravs da fotossntese. A clorofila presente nas clulas vegetais a nica molcula da natureza que no emite energia em forma de calor imediatamente aps ter tido seus eltrons excitados pela luz: ela utiliza esta energia para movimentar eltrons
gia para movimentar eltrons em uma rede de enzimas trasnportadoras de eltrons que garantem ATP suficiente para unir tomos de carbono do CO2 absorvido, armazenando a energia solar nas molculas de glicose sintetizadas neste processo fotossinttico. O sistema metablico celular tem como base a utilizao da energia contida nas molculas de carboidratos e nas biomolculas a eles relacionados, no intuito de liberar energia trmica para as reaes bioqumicas da clula. Esta energia trmica, por fim, convertida em ligaes altamente energticas de fosfato na molcula de ATP durante o processo de respirao celular (fosforilao oxidativa) tornando o ATP um verdadeiro armazm da energia solar que se conservou atravs de todo esse fantstico processo biolgico.
Os monossacardeos
So os carboidratos mais simples. Possuem de 3 a 8 carbonos, sendo denominado, respectivamente, trioses, tetroses, pentoses, hexoses, heptoses e octoses. Tm uma nica unidade cetnica ou aldedica, possuindo pelo menos um tomo de carbono assimtrico (C*) existindo, portanto, formas estereoisomricas, com exceo da dihidrxi-cetona, que no possui C* (ver Figura 6-1). Os C* possibilitam a existncia de ismeros pticos e caracterizam a regio da molcula denominada centro quiral, do latim quiros = mo, em referncia a conformao isomrica semelhante a duas mos que no se superpe mas so idnticas (Figura 6-3). Os monossacardeos possuem, portanto, inmeros ismeros estruturais e pticos, com os quais compartilham a prioridade nos processos bioenergticos. Como todo composto orgnico que possui carbono assimtrico, o nmero de ismeros pticos determinado por 2n (n= nmero de C* da molcula). A glicose (como todas as hexoses) possui 16 ismeros pticos devido possuir 4 carbonos assimtricos, logo 24 = 16. Este grande nmero de ismeros leva a ocorrncia de uma mistura racmica quando os carboidratos encontram-se dissolvidos em
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gua. Entretanto, o equilbrio tende para a forma mais estvel que obtida por uma reao intramolecular que ocorre entre a carbonila do grupamento funcional com uma das muitas hidroxilas da molcula, formando um composto cclico denominado hemiacetal.
mentos, mais estvel). Esta denominao est relacionada com a semelhana com o furano e o pirano, poderosos solventes orgnicos mas que no tem nenhuma relao com os monossacardeos, a no ser a semelhana estrutural (Figura 6-5).
Figura 6-3 - A glicose, como todos os monossacardeos, possui ismeros pticos devido a presena carbonos assimtricos.
Esta forma cclica dos monossacaredeos possvel graas grande diferena de eletronegatividade do oxignio e os tomos de carbono e hidrognio da molcula, que d aos carbonos e hidrognio uma carga eltrica parcialmente positiva e aos oxignios uma carga parcialmente negativa (Figura 6-4). Entretanto, devido configurao espacial final da molcula de hexoses e pentoses, h a possibilidade de reao intramolecular entre o grupamento funcional e um dos carbonos mais distantes, formando um composto cclico (hemiacetal) que se mostra mais estvel que a forma aberta, no cclica. Este forma de hemiacetal mais estvel e a formao de ismeros deve ser antecedida da quebra do anel o que diminui a probabilidade de encontra-se os demais ismeros pticos em uma soluo de monossacardeos devido a maior estabilidade do hemiacetal. Os monossacardeos de ocorrncia natural mais comum, como a ribose (5C), glicose (6C), frutose (6C) e manose (6C), existem na forma de hemiacetais quer na formas de furanose (um anel de 5 elementos, menos estvel) ou de piranose (um anel de 6 ele-
Figura 6-4 - A formao da forma hemiacetal de e glicopiranose. A) representao do arranjo eletrnico na molcula de glicose. Note que o C1 apresenta-se com maior diferena de carga eltrica que os demais carbonos. B) a unio entre o C1 e o oxignio e C5 forma uma ponte etr entre eles. O C1 passa a ter uma hidroxila que antes no possui, gerando dois ismeros: o e o , CIS e TRANS em relao ao C2, respectivamente.
Esta forma estrutural cclica de hemiacetal, resulta da reao intramolecular entre o grupamento funcional (C1 nas aldoses e C2 nas cetoses) e um dos carbonos hidroxilados do restante da molcula (C4 na furanose e C5 na piranose). Furanoses e piranoses ocorrem nas formas isomricas e (cis ou trans), conforme a posio da hidroxila do C2 em relao hidroxila do C1.
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Fundamentos de Bioqumica - Captulo 6: Carboidratos Figura 6-6 - A forma cclica de hemiacetal adquire semelhana estrutural aos solventes orgnicos furano e ao pirano, de onde sua nomenclatura derivada. A forma de glicopiranose menos estvel que a de glicofuranose devido ser um anel de cinco elementos.
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(Figura 6-8). De fato, uma soluo de glicose contm na verdade uma mistura em equilbrio de glicose e frutose.
Uma propriedade qumica importante de monossacardeos livres ou ligados a outros elementos (inclusive a outros monossacardeos), o poder redutor (so oxidados) se o o C1, na forma de hemiacetal, apresentar hidroxila livre, ou seja no esteja ligado a nenhum composto. Este poder redutor pode ser comprovado ao reagir um carboidrato (p.ex.: a glicose) com um reagente suscetvel a reduo (um oxidante), como o Cu+2, que se reduz a Cu+1. Essas reaes clssicas re oxi-reduo foram um dos primeiros mtodos de identificar glicose em lquidos orgnicos. O poder redutor da glicose revela, tambm, a sua capacidade de se oxidar durante o processo metablico. a oxidao qumica da glicose no C1 fornece o cido glicnico (Figura 6-7), enquanto o produto final da oxidao enzimtica completa no metabolismo celular CO2 e H2O. Uma implicao importante deste poder redutor comprovada na caracterizao do poder redutor em cetoses (normalmente, cetonas no so redutores, aldedos sim). Isto pode ser explicado pelo fato de cetoses e aldoses se interconverterem atravs de um fenmeno qumico chamado tautomeria, devida a um rearranjo molecular entre o C2 e o C1 das cetoses, formando seu ismero aldose. Assim a frutose, por exemplo, converte-se em glicose e, como tal, apresenta poder redutor
Figura 6-7 - Poder redutor da glicose. H a perda de prtons e eltrons que so captados pelos agentes reduzidos durante a oxidao da glicose.
Figura 6-8 - A frutose em glicose convertida por tautomeria entre o C1 e o C2. A reao reversvel e justifica o poder redutor das cetoses. Ricardo Vieira
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Todos os monossacardeos possuem inmeros ismeros pticos, estruturais e de funo, mas apenas a -D-glicopiranose possui uma via metablica comum a todos os seres vivos. Este fato faz deste monossacardeo o mais importante para o metabolismo energtico, com os demais tendo que ser convertido em glicose ou em intermedirios de seu metabolismo. O fato de a glicose ser o carboidrato de eleio para o metabolismo energtico celular tem uma justificativa evolucionria, onde se atribui o sucesso de sua utilizao pelas clulas primordiais tendo favorecido as geraes que apresentaram enzimas adaptadas forma tridimensional da -D-glicopiranose ao invs dos demais ismeros. Na Figura 6-9 esto representados alguns monossacardeos de importncia biolgica, dentre os inmeros existentes.
Dissacardeos
So formados por dois monossacardeos unidos por ligao covalente (ligao glicosdica). A ligao glicosdica ocorre entre as hidroxilas do C1 de um monossacardo com qualquer um outro carbono do outro monossacardeo.
Esta ligao pode ocorrer entre carbonos que estejam no mesmo plano espacial (cis ou ) ou entre carbonos em diferentes planos (trans ou ). Existem vrios dissacardeos presentes na alimentao, como, por exemplo: Trealose = glicose + glicose (1 1); Celobiose = -glicose + -glicose (1 4); Maltose = glicose + glicose (1 4) presente no malte. Iso-maltose = ismero (1 6) da maltose (subproduto da digesto do amido e glicognio); Lactose = glicose + galactose (1 4) o principal carboidrato do leite; Sacarose = glicose + frutose ( 1 2), a forma mais comum de acar, obtida da cana-de-acar, beterraba etc. Os dissacardeos so importantes fontes de carboidratos na alimentao, como o caso da lactose que o principal carboidrato da dieta dos mamferos na fase de amamentao. Posteriormente, a maioria dos animais perde a capacidade de degradar a lactose devido queda na produo intestinal da enzima que a degrada, a lactase (em humanos, isto ocorre, freqentemente, na velhice).
Figura 6-9 - Os monossacardeos apresentam vrios ismeros pticos devido a presena de centros quirais devido a seus carbonos assimtricos (marcados em vermelho).
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A sacarose o dissacardeo mais consumido o principal composto de sabor adocicado adicionado alimentao humana. A maltose o principal substrato para a produo de cervejas fermentadas, como a cerveja e destilados como o usque. Na Figura 6-10 esto representadas as estruturas das molculas dos principais dissacardeos.
Figura 6-10 - Os principais dissacardeos da dieta humana.
Polissacardeos
Os polissacardeos ou glicanas so polmeros de monossacardeos (hexoses) unidos por ligao glicosdicas na forma ou . Alguns funcionam como reserva de carboidratos, outros atuam na morfologia celular.
Os polissacardeos de reserva mais importantes so o amido e o glicognio (Figura 6-11), ambos de alto peso molecular e polmeros da glicose em ligaes (1 4) nas cadeias principais e ligaes (1 6) nos pontos de ramificao, sendo o glicognio mais compacto por apresentar mais ramificaes em sua molcula. Apenas a forma de amilose do amido no ramificada, pois possui somente ligaes do tipo (1 4); a forma amilopectina do amido semelhante molcula de glicognio (ramificada). Outros polissacardeos possuem papel estrutural nas paredes celulares. A celulose (Figura 6-12) formada por molculas de glicose unidas por ligaes (1 4) e o principal constituinte estrutural da parede celular dos vegetais, responsvel por extrema resistncia. Graas natureza da ligao (1 4) entre as unidades de glicose, h a formao de pontes de hidrognio dentro da molcula, o que torna a molcula de celulose bastante rgida e plana, permitindo o empilhamento de vrias cadeias formando uma estrutura polimrica extremamente resistente. impregnada por outras substncias polimricas, no sendo digerida pelos animais, que no apresentam enzimas para quebrar este tipo de ligao, a exceo de animais herbvoros e cupins, que possuem bactrias e protozorios que digerem a celulose no aparelho digestivo desses animais (para maiores detalhes, ver Captulo sobre metabolismo de carboidratos). A celulose, como fibras vegetais, importante na composio dos alimentos por manterem o trnsito intestinal e melhorar o metabolismo de protenas, carboidratos e lipdios (ver Captulo 2 sobre Alimentos). As paredes porosas e rgidas das bactrias possuem peptidoglicanas, que so polissacardeos lineares formados por unidades alternadas de cido N-acetil-murmico e Nacetil-glicosamina (derivados de carboidratos) interligados por cadeias polipeptdicas curtas. O tecido conjuntivo dos animais possui vrios mucopolissacrides (um tipo de glicoprotensa) cidos (p.ex.: o cido hialurRicardo Vieira
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nico), formados por unidades de acar alternadas, uma das quais contm o grupamento cido. Estas estruturas, nas quais a poro polissacardica predomina, so chamadas proteoglicanas. A carapaa dos insetos contm quitina, um polmero de N-acetilglicosamina) que d resistncia extrema ao exo-esqueleto (Figura 6-13).
grande a semelhana entre a estrutura molecular da quitina e da celulose, ambas ismeros (1 4), o que as coloca como os polissacardeos mais resistentes da Terra e, sem dvida, os mais abundantes, haja vista o grande nmero de insetos e vegetais.
Figura 6-11 - A molcula de amido na forma de amilopectina formada por unidades de glicose unidas por ligaes (1 4) na estrutura principal e (1 6) nos pontos de ramificao. A forma linear (amilose) apresenta somente ligaes (1 4) e menos solvel que a amilopectina.
Figura 6-12 - A estrutura molecular da celulose. As ligaes (1 4) no so quebradas pelas enzimas digestivas dos animais e a disposio das unidades de glicose na molcula permite a formao de pontes de hidrognio e o empilhamento de cadeias, o que torna a celulose extremamente resistente.
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As clulas animais tm um revestimento externo (glicoclix) macio e flexvel formado por cadeias de oligossacardeos (pequenos polissacardeos) ligadas a lipdeos e protenas.
deo formado pela galactose (ver Figura 6-9) ligada por ligao (1 3) com a N-acetil glicosamina (a mesma unidademonomrica da quitina, ver Figura 6-13). Este dissacardeo liga-se ao aminocido serina ou treonina das protenas. Outros carboidratos, como a galactose, a manose e a xilose, podem estar Oligados a protenas, porm so mais raros. Os glicolipdios correspondem a compostos existentes na superfcie celular que possuem funo de marcador imunoqumico, como o caso dos antgenos do sistema sangneo ABO que possuem a galactose, a Nacetilglicosamina e a fucose os carboidratos ligados aos lipdios da membrana. Outro polissacardeo importante a heparina, que possui funo anticoagulante nos vasos sangneos dos animais; formada por glicosamina + cido urnico + os aminocidos serina ou glicina.
Figura 6-13 - A extrema semelhana entre a estrutura molecular da celulose e da quitina justifica sua larga distribuio como polissacardeo estrutural em vegetais e insetos. A celulose um polmero (1 4) de glicose e a quitina um polmero (1 4) da N-acetilglicosamina).
EXERCCIOS 1. Qual a importncia metablica das formas isomricas alfa e beta-glicopiranose? 2. Descreva a estrutura molecular do amido e da celulose. 3. Qual a importncia dos dissacardeos para o metabolismo de mamferos? 4. Comente sobre a funo dos principais polissacardeos. 5. Qual a origem do poder redutor dos carboidratos e por que alguns no possuem tal caracterstica qumica? 6. Descreva o processo de formao das formas cclicas da glicose.
As glicoprotenas possuem um ou mais carboidrato em sua composio molecular sendo que a maioria das protenas da superfcie celular so glicoprotenas. O ponto de ligao destas glicoprotenas pode ser o nitrognio ou o oxignio (N ou O-ligadas). Nas glicoprotenas N-ligadas, h uma conformao estrutural nica, onde o monossacardeo liga-se com a protena em sua forma para C1 e o aminocido de ligao sempre a asparagina, seguida de um aminocido qualquer (exceto prolina e aspartato) e, em seguida, serina ou treonina. Esta ligao de carboidratos e protenas to especfica ocorre durante a sntese da protena, sendo que quando termina a sntese protica, o carboidrato j est ligado. As glicoprotenas O-ligadas so, quase em sua totalidade, formadas por um dissacar-
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Para navegar na internet Fundamentos de Bioqumica:

Glycoscience network page:

www.vei.co.uk/TGN/tgn_main.htm
Gastroinfo:
www.gastroinfo.com.br/01_pancr.htm
Diabetes:
www.diabetic.com/education/pubs/dcctslid/sld048.htm
Estrutura molecular 3D:

www.udel.edu/Biology/Wags/histopage/modelspage/m odelspage.htm
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Captulo 7 Lipdios
ipdios so biomolculas caracterizadas pela baixa solubilidade em gua e outros solvente polares e alta solubilidade em solventes apolares. So vulgarmente conhecidos como gorduras e suas propriedades fsicas esto relacionadas com esta natureza hidrfoba. So molculas que possuem uma grande variedade de formas estruturais, tendo em comum somente o fato de serem hidrofbicas e serem biosintetizadas a partir da acetil-CoA. Este fato coloca os lipdios como uma importante molcula dentro do metabolismo energtico, uma vez que a acetil-CoA a molcula que inicia os principais processos bioenergticos. De certa forma, os lipdios possuem uma funo energtica mais reservada ao armazenamento do que o aproveitamento puro e simples de seu poder energtico, uma vez que, justamente pelo fato de serem muito calricos, possuem vias metablicas alternativas ao metabolismo energtico que, muitas vezes, levam a danos ao organismo gerando doenas graves, denominadas dislipidemias (ver Captulo sobre metabolismo Lipdico).
Os lipdios no so biomolculas polimricas como os cidos nuclicos, protenas e os principais carboidratos, mas possuem uma capacidade de agrupar-se em molculas complexas e possuem, muitas vezes, longas cadeias carbonadas responsveis pelas suas propriedades hidrofbicas. Na verdade, todas as consideraes acerca do metabolismo lipdio advm da caracterstica hidrfoba das molculas. Esta propriedade no uma desvantagem biolgica, mesmo o corpo possuindo cerca de 60% de gua. Justamente por serem insolveis, os lipdios so fundamentais para estabelecer uma interface entre o meio intracelular e o extracelular, francamente hidrfilos. A membrana celular corresponde a esta barreira lipdica onde o impedimento de fluxo livre de compostos hidrossolveis, coloca as protenas de membrana como os portais de controle da composio celular. Possuem funes importantssimas para o metabolismo celular tanto de eucariotas como procariotas (Figura 7-1), podendo-se relacionar como principais as seguintes:
Figura 7-1 Os lipdios exercem as mais variadas e importantes funes no metabolismo dos seres vivos.
Fundamentos de Bioqumica Captulo 7: Lipdios
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Composto bioqumico mais calrico em animais e sementes oleaginosas sendo a principal forma de armazenamento (triglicerdeos) e gerao de energia metablica atravs de via metablica especfica (oxidao de cidos graxos); Componentes das membranas celulares, juntamente com as protenas (fosfolipdios, esfingolipdios e colesterol); Componentes de sistema de transporte de eltrons no interior da membrana mitocondrial (umbiquinona); Formam uma pelcula protetora (isolante trmico) sobre a epiderme de muitos animais (tecido adiposo); Funes especializadas como hormnios, sinalizadores celulares, antioxidantes.
formando uma molcula globosa denominada micela que ser tanto mais solvel, quanto maior for a polaridade da cabea polar.
So vrios os usos dos lipdios, seja na alimentao (leos de gros, margarina, manteiga, maionese), seja como produtos manufaturados (sabes, resinas, cosmticos, lubrificantes). Vrias pesquisas nacionais recentes indicam os lipdios como importantes combustveis alternativos, como o caso do leo vegetal transestereficado que corresponde a uma mistura de cidos graxos vegetais tratados com etanol e cido sulfrico que substitui o leo diesel, no sendo preciso nenhuma modificao do motor, alm de ser muito menos poluente e isento de enxofre. A nica propriedade qumica comum aos lipdios seu carter hidrofbico e a presena de uma extremidade na molcula que possui certa polaridade e que possibilita sua ligao com compostos polares, que vo tornar possvel seu transporte em meio solveis. Caracteriza-se na molcula dos lipdios, assim, uma cabea polar e uma cauda apolar, terminologia utilizada aqui exclusivamente com objetivo didtico (Figura 7-2). A cabea polar , geralmente, a carboxila (p.ex.: nos cidos graxos), a hidroxila (p.ex.: no colesterol) ou outro composto polar (p.ex.: o grupamento fosfato nos fosfolipdios). A cauda apolar todo o restante da molcula, formada, predominantemente de carbono e hidrognio, podendo haver ou no duplas ligaes (cadeia insaturada). Os lipdios em soluo aquosa tendem a agregar-se pela cauda apolar deixando a cabea polar em contato com o meio aquoso,
Figura 7-2 Representao didtica de uma molcula de lipdio evidenciando a parte polar e a apolar de sua molcula.
Vrios arranjos micelares so possveis, sendo a prpria camada bi-lipdica das membranas celulares um produto deste arranjo (Figura 7-3). Os lipdios com a cabea polar com pouqussima capacidade de solubilizao (p.ex.: os triglicerdeos, os steres do colesterol), necessitam, freqentemente da adio de compostos emulsificantes (solubilizantes de gorduras) para incrementar a formao das micelas. Esses emulsificadores podem ser protenas (lipoprotenas), carboidratos (glicoprotenas) ou emulsificantes digestivos (sais biliares).
Figura 7-3 Arranjo estrutural micelar dos lipdios em soluo aquosa. A) micela globosa; B) bicamada lipdica; C) bicamada lipdica em forma de membrana separando dois ambientes lquidos distintos. Ricardo Vieira
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Classificao
Devido a grande variabilidade estrutural dos lipdios, muitos tipos de classificaes so propostas dependendo do ponto de vista, se qumico ou biolgico. Adotaremos uma classificao didtica que atende a ambos ponto de vistas, que agrupa os lipdios de acordo com a presena ou no de cidos graxos em sua molcula. Os lipdios que possuem cidos graxos (cidos carboxlicos com grande cadeia carbonada) so saponificveis, uma vez que reagem com bases fortes formando sabes. So lineares em sua maioria, podendo ser saturados ou insaturados. Possuem funo energtica e estrutural. So os acilgliceris, fosfolipdios, esfingolipdios e ceras. Os lipdios que no possuem cidos graxos em sua molcula, no so saponificveis e no so energticos. A maioria possui funo estrutural ou especializada (hormnios, vitaminas, anti-oxidantes), desempenhando papel chave em vrias vias metablicas. So os terpenos, esterides e Eixosanides. A seguir, passaremos a apresentar as principais caractersticas de cada tipo de lipdios, a comear por aqueles que os caracterizam, os cidos graxos.
caso do cido isovalrico que est presente no aparelho auditivo de mamferos marinhos Os cidos carboxlicos j apresentam severa diminuio em sua solubilidade acima de oito carbonos, apesar de serem mais freqentes na natureza os com mais de 14C e menos de 20C. Apesar de a maioria dos cidos graxos possurem nomes vulgares de largo uso na prtica diria, a nomenclatura oficial obedece s regras para cidos carboxlicos, com a terminao ico adicionada o nmero de carbonos. A existncia de dupla ligao indicada entre parnteses aps o nmero de carbonos do cido graxo indicada pela letra grega delta () adicionada ao nmero do carbono onde est a dupla ligao. Desta forma, o cido lurico (nome vulgar) denominado cido duodecanico (12:0), ou seja, um cido graxo saturado de 12 carbonos. O cido linolico o cido octadienodecanico (18: 29,12), ou seja, um cido graxo insaturado de 18 carbonos e com as duplas ligaes nos carbonos 9 e 12. Na tabela 7-1 esto citados os principais cidos graxos e suas nomenclaturas vulgar e oficial.
Tabela 7-1 Relao importncia biolgica. Nomenclatura Vulgar Lurico Mirstico Palmtico Palmitolico Esterico Olico Linolico -Linolnico -Linolnico Araqudico Araquidnico Benico Lignocrico Nevrnico dos principais cidos graxos de Nomenclatura Oficial Dodecanico (12:0) Tetradecanico (14:0) Hexadecanico (16:0) 9 Hexadecanico (16:1 ) Octadecanico (18:0) 9 Octadecanico (18:1 ) 9, 12 Octadecanico (18:2 ) 9, 12, 15 ) Octadecanico (18:3 6, 9, 12 ) Octadecanico (18:3 Eicosanico (20:0) 5, 8, 11, 14 Eicosanico (20:4 ) Docosanico (22:0) Tetracosanico (24:0) 15 Tetracosanico (24:1 )
cidos Graxos
Os cidos graxos so cidos carboxlicos de cadeia longa que pode ser saturada ou insaturada e quase sempre de nmero par de carbonos e de cadeia no linear. A grande freqncia de cido graxos de nmero par de carbonos d-se ao fato da sntese ocorrer por adio de acetil-CoA, que possui dois carbonos (ver Captulo sobre metabolismo lipdico). A maioria dos cidos graxos so lineares, porm existem alguns, (principalmente de origem vegetal) que so ramificados, geralmente com grupamentos metil como ramificao (p.ex.: o fitol, componente da clorofila), mas so agrupados dentro de um grupo a parte denominados terpenos, que sero estudados ainda neste captulo. Outros cidos graxos ramificados mais simples so sintetizados em animais, como o
Os cidos graxos saturados podem ser denominados acrescentando-se enico depois da indicao do nmero de duplas ligaes e em quais carbonos esto localizadas. Assim, o cido araquidnico o cido 5,8,11,14-eicosatetraenico.
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Uma maneira muito freqente de se denominar os cidos graxos insaturados a contagem dos carbonos por letras gregas, sendo o carbono (alfa) o da carbonila, o (beta) o segundo na seqncia e (mega) o ltimo da cadeia. As duplas ligaes costumam a ser indicadas a partir do carbono mega, o que faz com que o cido olico seja tambm denominado de cido octadecanico mega-9. Os cidos graxos saturados so sintetizados tanto por vegetais quanto por animais, o que lhes d larga distribuio na natureza. Possuem uma boa estabilidade estrutural devido organizarem-se em camadas de grande adesividade devido a forma linear das cadeias hidrocarbonadas. Esta alta estabilidade lhes confere altas temperaturas de fuso, ou seja, em temperatura ambiente, eles esto no estado slido (o cido lurico possui a mais baixa temperatura de fuso: 44oC enquanto que o cido lignocrico liquefaz-se somente em 84,2oC). Esta propriedade permite que os lipdios ricos em cidos graxos saturados tenham o aspecto de gordura slida (sebo), o que comum nas gorduras animais. A Figura 7-4 representa o arranjo estrutural entre os cidos graxos que lhes confere o estado fsico de gordura slida ou de leo. Os cidos graxos insaturados possuem um arranjo estrutural menos estvel, devido dupla ligao que desestabiliza as camadas de lipdios, conferindo uma temperatura de fuso bastante baixa (no cido nevrnico a temperatura de fuso de 39oC enquanto que no cido araquidnico de -49,5oC). Desta forma, os lipdios ricos em cidos insaturados possuem o estado lquido (leos) em temperatura ambiente, o que prprio das gorduras vegetais. Os mamferos no possuem enzimas que sintetizam cidos graxos insaturados (dessaturases) cuja dupla ligao esteja abaixo do C16, o que torna os cidos graxos insaturados com dupla ligao abaixo do C16, impossveis de serem sintetizados pelos mamferos, tornando-se essenciais na dieta. Os cidos araquidnico, linolico, linolnico e olico so considerados cidos graxos essenciais justamente por esse motivo e assiociado
ao fato de possurem funes especialssimas na biologia celular. Uma alimentao isenta de gorduras levar carncia desses cidos graxos com conseqncias patolgicas severas, como dermatite, desidratao, m cicatrizao e at a morte (para maiores detalhes ver Captulo sobre metabolismo dos cidos graxos). Os cidos graxos sofrem vrios tipos de reaes qumicas, dentre as quais podemos citar: Esterificao: cidos graxos ligam-se a lcoois formando steres:
R-COOH + HO-R R-COO-R + H2O
Saponificao: cidos graxos reagem com bases fortes gerando um sal (sabo) que possui propriedades emulsificantes (solubilizantes de gorduras).
R-COONa + H2O
R-COOH + NaOH
Hidrogenao: cidos graxos insaturado (com duplas ligaes) recebem H2 e convertem-se a cidos graxo saturado. A hidrogenao severa pode converter cidos graxos em lcoois graxos.
R-CH2-CH2-COOH
R-CH=CH-COOH + H2
Figura 7-4 Representao esquemtica do arranjo das cadeias saturadas e insaturadas em lipdios. A) cido graxo saturado; B) cido graxo insaturado; C) arranjo mais estvel entre as molculas de cido graxo saturado, tornando mais difcil a desordenao das molculas, o que lhes confere necessidade de maior energia para quebr-la; D) os cidos graxos insaturados esto no estado lquido em temperatura ambiente devido maior instabilidade dos arranjos entre suas molculas, sendo necessrio menor energia para quebrar o arranjo estrutural. Ricardo Vieira
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Acil-gliceris
So assim denominados por se tratarem de molculas compostas por grupamentos acil (R-COO-) ligado ao glicerol. So formados pela esterificao de um, dois ou trs cidos graxos (saturados ou insaturados, iguais ou no) com uma molcula de glicerol, formando mono, di ou tri-acilglicerol, comumente denominados de mono, di ou triglicerdeos, denominao vulgar e quimicamente incorreta, mas de grande uso na prtica clnica e laboratorial sendo a denominao utilizada neste captulo (Figura 7-5).
entes da alimentao, alm de sintetizar novas molculas a partir de outros substratos (ver Captulo sobre Metabolismo Lipdico). A deposio do tecido adiposo promove, ainda a formao de uma camada protetora contra a perda de calor, indispensvel para animais que vivem em clima frio. Os triglicerdeos so encontrados tanto em gorduras animais quanto em leos vegetais, havendo apenas uma predominncia de cidos graxos insaturados nos triglicerdeos de origem vegetal, devido a incapacidade dos animais em sintetizar a maioria dos cidos graxos insaturados necessrios para o metabolismo. Os cidos graxos insaturados presentes nos triglicerdeos de origem animal geralmente so derivados da alimentao e no da sntese endgena. Os mono-acil-gliceris e os di-acilgliceris esto presentes em concentraes muito baixas no organismo, sendo resultantes de processos intermedirios do metabolismo de triglicerdeos ou de outros lipdios, como o caso do di-acil-glicerol que um segundo mensageiro de algumas reaes celulares, liberado aps a degradao de fosfolipdios, como ser visto a seguir.
Fosfolipdios
So derivados dos triglicerdeos, onde o terceiro cido graxo substitudo por uma cabea extremamente polar contendo fosfato (PO3-2) ligado a um composto X que pode ser de vrias origens (Figura 7-6). Geralmente o segundo carbono um cido graxo insaturado (freqentemente o cido araquidnico).
Figura 7-5 - Os triglicerdeos so os principais acilgliceris. A) uma molcula de glicerol une-se a trs molculas de cidos graxos atravs ligaes ster. B) O triglicerdeo formado possui o primeiro e terceiro cido graxo no mesmo plano, opostos ao segundo cido graxo.
Os triglicerdeos so os principais lipdios de reserva tantos de animais quanto de vegetais, o que os coloca como uma das molculas mais calricas utilizadas no metabolismo celular. So uma espcie de reserva molecular de cidos graxos, sendo necessria a quebra da ligao ster por enzimas hidrolticas denominadas, genericamente, lipases liberando os cidos graxos de sua molcula. Em animais, so armazenados no tecido adiposo, que tem a capacidade de absorver grande quantidade dos triglicerdeos proveni-
Figura 7-6 Os fosfolipdios possuem estrutura semelhante aos triglicerdeos. O grupo X pode ser o H (cido fosfatdico, o mais simples), etanolamina, colina, serina, inositol, glicerol ou fosfatidilglicerol. A nomencaltura ser fosfatidil + nome do X (p.ex.: fosfatidiletanolamina). A lectina e a cardiolipina so denominaes vulgares da fosfatidilcolina e do difosfatidilglicerol, respectivamente. Ricardo Vieira
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A denominao correta desses compostos a de glicerofosfolipdeos (ou, ainda, fosfoglicerdeos), entretanto neste texto ser utilizada a denominao vulgar de fosfolipdios em virtude do largo uso na prtica clnica e laboratorial. Graas grande cabea polar, os fosfolipdios so importantes constituintes da membrana celular, onde o contato com o lquido intracelular e o extracelular viabilizado pela formao a bicamada lipdica. As protenas da membrana celular tambm associam-se fortemente s fraes polares e apolares dos fosfolipdios. Apesar da grande importncia com lipdios estruturais da membrana, os fosfolipdios possuem papel fundamental em outros processos biolgicos. o caso do dipalmitoilfosfatidilcolina (a fosfatidilcolina cujos cidos graxos so o cido palmtico) que o principal componente da substncia surfactante pulmonar que impede o colabamento (unio das superfcies internas) dos alvolos pulmonares. Esta substncia ajuda a diminuir, tambm, o efeito fsico da presso dos gases respiratrios sobre o alvolo. A produo desta substncia surfactante, entretanto encontrase em plena produo somente aps o nascimento, o que leva a crianas que nascem prematuramente, portanto com pouco surfactante pulmonar, a desenvolverem um quadro srio de insuficincia respiratria devido a dificuldade de encher os alvolos colabados. Esta condio patolgica (conhecida como sndrome da angstia respiratria) tambm pode se estabelecer em adultos sempre que diminui a produo desse fosfolipdio. Quando h a retirada de um dos cidos graxos da molcula de um fosfolipdio, a molcula resultante (fosfolisolipdio) possui potente ao detergente e, realmente, destri a membrana, provocando, obviamente, a morte celular. Enzimas que possuem essa funo (fosfolipase A2) esto presentes em venenos de cobra e de abelhas, justificando a potente ao ltica tecidual. Outras enzimas que retiram a cabea polar (fosfolipase C) geram diacil-gliceris que agem como segundo mensageiros de alguns hormnios. A ao dessas enzimas ser melhor estudada no Captulo sobre metabolismo lipdico.
Esfingolipdios
So formados por um cido graxo ligado a uma molcula de esfingosina (um aminolcool) e uma cabea polar X (Figura 77).
Figura 7-7 A molcula de esfingolipdio constituda pela esfingosina ligada a somente um cido graxo e uma cabea polar X. O mais simples possui X = H (ceramida) e a base dos demais esfingolipdios.
Dependendo da natureza de X, tm-se diversos tipos de esfingolipdios. A ceramida possui o H como cabea polar, enquanto que os demais possuem grupamentos bem definidos, agrupando-se em trs classes distintas: esfingomielinas, cerebrosdeos e gangliosdeos. Os esfingomielinas (ou esfingofosfolipdios) possuem como X, grupamentos fosfatados como a fosfoetanolamina e a fosfocolina. Esses esfingolipdios possuem funo de proteo e revestimento eltrico dos axnios neuronais, sendo os principais constituintes da bainha de mielina dos neurnios. Nos cerebrosdeos (ou esfingoglicolipdios) o X um carboidrato. So importantes constituintes da bainha mielinca cerebral. Os gangliosdeos possuem estrutura molecular complexa, devido o X ser um polmero de carboidratos (ou derivados) unidos ao cido silico (um derivado da glicose). Possuem funo estrutural importante da superfcie das membranas celulares, com a cabea polar de carboidratos projetando-se para o meio extracelular funcionando como receptores celulares. Uma doena gentica grave conhecida como doena de Tay-Sachs decorrente do acmulo excessivo de gangliosdeos no tecido nervoso, levando ao retardo mental e graves distrbios neurolgicos.
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Ceras
So misturas lcoois graxos (com cadeia longa de 16 a 20C) e cidos graxos (com cadeia de 16 a 30C). Possuem funo estrutura bem definida na formao de favos em colmias de insetos sociais. As baleias do tipo cachalote possuem grande quantidade de ceras e outros lipdios em uma enorme cavidade nasal especializada que funciona como rgo flutuador, de acordo com o fluxo sanguneo. Essa mistura de lipdios foi utilizada durante quase todo o sculo XVII como produto de beleza capilar pela sociedade europia e americana, conhecido como espermacete de baleia, alm, claro, da utilizao como combustvel juntamente com a gordura do tecido adiposo da baleia. Este fato levou quase extino esses animais e ao conseqente declnio da economia (na sociedade norte-americana, a indstria baleeira foi a principal base da economia durante vrios anos) fato superado graas inveno de mquinas movidas combustvel fssil.
Figura 7-8 Os principais esterides.
Terpenos
So lipdios no saponificveis que possuem como estrutura base a unidade isoprenide (Figura 7-9). So, geralmente, de origem vegetal e muitos possuem propriedades organolpticas (sabor e odor agradvel) sendo utilizadas como especiarias na culinria mundial. Nos vegetais, esses terpenos possuem funo protetora contra microorganismos, uma vez que no possuem sistema imunolgico. As vitaminas E e K so terpenos de funo bioqumica especializada (ver Capitulo 8 sobre Vitaminas).
Lipdios esterides
Tambm chamados de esteris, este grupo de lipdio no saponificvel possui possuem como estrutura molecular bsica o ncleo-pentano-per-hidro-fenantreno (Figura 7-8). Possuem funo diversificada que vai desde estrutural at a especializados hormnios e vitamina (Vitamina D). O colesterol o principal representante deste grupo e sintetizado exclusivamente em animais, possuindo funo importante na formao da membrana celular e na sntese de cidos biliares e hormnios esterides (p.ex.: os hormnios sexuais). Um similar vegetal do colesterol, o fitosterol, no absorvido durante a digesto no possuindo, portanto funo metablica ou patolgica em seres humanos. O conhecimento do metabolismo das lipoprotenas que transportam o colesterol plasmtico corresponde em importante passo no estudo da bioqumica aplicada a clinica de pacientes com hipercolesterolemia, como ser abordado com maiores detalhes no Captulo sobre metabolismo lipdico.
Figura 7-9 Os terpenos constituem-se lipdios cujos principais representantes so de origem vegetal e possuem caractersticas organolpticas. O mirceno (folha de louro), limoneno (limo) e zingibereno (gengibre), o ltex da borracha natural (sis-poli-terpeno), cinamaldedo (canela), eugenol (cravo) e elemicina (noz-moscada) so exemplos de terpenos ou derivados. Ricardo Vieira
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Eicosanides
So lipdios no saponificveis derivados do cido araquidnico de 20C (eicos = vinte em grego) (Figura 7-10). So importantes hormnios locais, produzidos no local de uma reao inflamatria e responsveis pela potencializao do sinal qumico da inflamao, no sendo disseminado pela corrente sangunea como os hormnios clssicos. Outras funes primordiais so desempenhadas pelos diferentes tipos de eicosanides. As prostaglandinas so produzidas em quase todos os tecidos e esto envolvidas nos processos de sono e viglia, resposta inflamatria e contrao dos msculos lisos do tero. As tromboxanas so produzidas pelas plaquetas e atuam na diminuio do fluxo sangneo e na formao de trombos (tampes celulares que impedem a hemorragia de pequenos vasos).
Os leuciotrienos so produzidos pelos leuccitos atuando na contrao da musculatura lisa dos pulmes. A maioria dos medicamentos que atuam inibindo o processo de dor (analgsicos no derivados de esterides) inibidor da via de sntese das prostaglandinas. Os medicamentos que inibem a sntese de leucotrienos so excelentes anti-asmticos e os que inibem a sntese de tromboxanas acarretam uma diminuio da formao de trombos, til para quem tem problemas de coagulao intravascular disseminada (uma doena que possibilita o despreendimento de trombos e a bostruo de vasos sanguneos). A biossntese dos eicosanides constitui-se importante captulo na compreenso da farmacologia desses medicamentos e ser abordado no Captulo sobre metabolismo lipdico.
Figura 7-10 Os eicosanides so derivados do cido araquidnico (20:45,8,11,14).
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EXERCCIOS 1. Que relevncia tem para o metabolismo celular o fato de os lipdios serem insolveis em gua? 2. Quais as principais funes dos lipdios? 3. Comente sobre a classificao dos lipdios e as principais caractersticas estruturais de cada classe. 4. No que consiste a organizao micelar dos lipdios e qual a importncia desta propriedade para o metabolismo celular?
Para navegar na internet Fundamentos de Bioqumica:

Estrutura molecular 3D:

www.udel.edu/Biology/Wags/histopage/modelspage/m odelspage.htm
Sociedade Portuguesa de Cardiologia

http://www.spc.pt/publico/principal.htm
Biobrs:
http://www.biobras.com.br
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Captulo 8 Vitaminas
m 1911, Casimir Funk isolou um composto cristalino do material extrado da casca do arroz, utilizado para curar uma doena de pombos denominada polineurite. A este composto deu o nome de vitamina em virtude de ser considerada uma substncia vital e possuir a caracterstica qumica de amina. Esta vitamina, hoje em dia denominada vitamina B1, foi apenas a primeira de uma srie de 13 compostos que se descobriu que os seres humanos (e muitos animais) no so capazes de sintetizar, sendo indispensveis na alimentao, mesmo que em doses diminutas, para garantir a realizao de vrias reaes bioqumicas, alm de serem agentes de patologias diversas quando h uma carncia nutricional. Apesar de somente no incio do sculo XX ter sido isolado a primeira vitamina, o conhecimento da existncia de fatores nutricionais causadores de doenas quando ausentes na alimentao remonta de muitos sculos atrs. Hipcrates (300 a.C) j havia descrito um tipo de cegueira que era revertida com a alimentao de fgado de animais, numa clara aluso a deficincia de vitamina A. No sculo XVI, as longas navegaes transocenicas dos exploradores, revelaram que os marinheiros sofriam de uma doena descrita como escorbuto, caracterizada por sangramento gengival, hoje conhecida como conseqncia da hipovitaminose C. O interessante que os oficiais destes navios, muitas vezes no apresentavam esses sintomas, fato que levou, em 1729, o mdico ingls Jackson Smith determinar a obrigatoriedade da ingesto de suco de limo durante as viagens, como medida preventiva contra o escorbuto, pois ele observou que a alimentao da tripulao era diferenciada no que diz respeito a sucos ctricos. Esta medida foi suficiente para erradicar o escorbuto. Da mesma forma, o bri-bri, doena carencial da vitamina B1, era freqentemente relatada entre marinheiros japoneses cuja ali-
mentao bsica era de arroz sem casca e cozido excessivamente que destrua, por aquecimento, os resqucios de vitamina B1 do arroz sem casca, alm do peixe cru que comiam em excesso e que possui enzimas que destroem a vitamina B1. Atualmente, entretanto, as doenas carenciais vitamnicas so, na maioria das vezes, observaes raras visto que s se observam os sintomas caractersticos quando h a hipovitaminose exclusiva da vitamina em questo, como descrito acima. O mais comum a verificao de sndrome de desnutrio com sintomatologia complexa, resultante da combinao de hipovitaminoses e carncia de nutrientes como os carboidratos, lipdios e protenas. As vitaminas so encontradas na maioria dos vegetais (principalmente cereais, folhas verdes e legumes) e produtos animais (principalmente leite, ovos e fgado), com exceo da vitamina B12 que produzida somente por microorganismos mas que armazenada em tecidos animais (especialmente no fgado), encontrada, portanto, nesses alimentos alm de produtos da fermentao por microorganismos (como o iogurte, por exemplo). So classificadas em hidro e lipossolveis, de acordo com sua caracterstica qumica de solubilidade. Exercem vrias funes nos organismo, com uma alimentao contendo cereais, vegetais verdes, legumes, carne e suco de fruta suficiente para suprir as necessidades dirias. Muitas das vitaminas so termolbeis, (sensveis ao calor) e fotolbeis (sensveis a luz), o que torna necessrio que o alimento que as contm seja ingerido cru (o cozimento destri essas vitaminas) e deva ser armazenado ao abrigo da luz. Os alimentos industrializados que devem ser esterilizados pelo calor precisam ser adicionados de quantidades significativas dessas vitaminas para garantir sua qualidade nutricional.
Fundamentos de Bioqumica - Captulo 8: Vitaminas
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2-cetoglutarato piruvato
TPP + complexo multienzimtico
Algumas possuem a capacidade de serem produzidas no prprio organismo a partir de precursores, como o caso da vitamina D a partir da pr-vitamina D (um derivado do colesterol) ativada pela radiao ultravioleta e a vitamina B3 que sintetizada a partir do triptofano, um aminocido essencial. Outras possuem uma grande reserva heptica o que as torna disponvel por muito tempo depois de suspendida a ingesto (como o caso da vitamina B12 suficiente por at 3 anos e as lipossolveis). Popularmente, as vitaminas so conhecidas como compostos energticos e sinnimo de sade e vigor fsico. Independente de seu carter obrigatrio na alimentao, devese esclarecer que as vitaminas atuam principalmente como cofatores de reaes bioqumicas e no como substrato das reaes. Apesar algumas possurem papel fundamental no processo de estabilizao de radicais livres (vitaminas C, E e A), logo importantes como atenuantes do processo de envelhecimento celular e os processos relacionados aos radicais livres, a maioria das vitaminas possui ao teraputica inespecfica a sua ao biolgica (a vitamina B6, por exemplo, cofator de reaes de transaminao de aminocidos e utilizada teraputicamente em vertigens e dores musculares). O uso teraputico realizado em altas doses aicma das necessidades dirias e s podem ser adquiridos atravs de medicamentos uma vez que seria necessria uma quantidade enorme das fontes naturais para atingir a concentrao teraputica (com exceo da vitamina C), o que pode levar ao aparecimento de efeitos adversos tpicos da hipervitaminose.
succinil-CoA acetil-CoA gliceraldedo 3-P + sedoheptulose 7-P
TPP + complexo multienzimtico TPP + transcetolase
xilulose 5-P + ribose 5-P
uma vitamina termolbil e sensvel a variao de pH, sendo inativa em solues alcalinas. A sua deficincia resulta em bribri, uma doena de sintomas cardioneurolgicos e motores. Em alcolatras a carncia de tiamina expressa-se na sndrome de Wernik-Korsakoff, cujas causas est atrelada insuficincia heptica que dificulta o armazenamento e absoro no s da tiamina mais de quase todas as vitaminas do complexo B. Uma ingesto acentuada de peixe cru pode levar a uma maior destruio de tiamina devido a presena de enzimas tiaminases que hidrolizam a enzima no trato digestivo, inativando-a. Seu uso teraputico especfico est associado a reverso da sintomatologia neuromuscular de algumas doenas genticas onde h a diminuio da atividade das enzimas onde ela co-fator. Freqentemente, utilizada em associao com as demais vitaminas do complexo B para a melhoria de sintomas de fraqueza muscular de causas variadas. A Figura 9-1 representa a forma alimentar da tiamina.
Vitaminas Hidrossolveis
1. Vitamina B1 (tiamina): Durante a absoro intestinal, fosforilada a tiamina pirofosfato (TPP), sua forma ativa, que vai ser grupamento prosttico das enzimas 2-cetoglutarato desidrogenase e transcetolase.
Figura 9-1 - Estrutura molecular da tiamina. A forma ativa de tiamina pirofosfato (TPP) obtida pela adio de dois fosfato na OH terminal.
2.
Vitamina B2 (riboflavina): A forma ativa o FAD (flavina adenina nucleotdeo) e o FMN (flavina adenina mononucleotdeo), que recebem e prtons e eltrons, convertendo-se de formas oxidadas (FAD+ e FMN+) para reduzida (FADH2 e
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88 com a pelagra. o caso do erro inato do metabolismo conhecido como doena de Hartnup onde o triptofano (e outros aminocidos) possem a absoro diminuda. Em algumas tipos de cncer desenvolve-se a sndrome carcinide onde h o aumento do catabolismo do triptofano, o que leva a pelagra. Seu uso teraputico est associado ao combate dos sintomas causados pela sua deficincia, sendo que o uso teraputico em outras manifestaes clnicas desaconselhado, no devendo estar presente em doses acima de 200mg/dia nos "coquetis" de vitamina do complexo B, pois a hipervitaminose est relacionada leso heptica e hiperpigmentao da pele, alm de vasodilatao (que induz a queda da presso arterial e faces rubras) e distrbios no metabolismo da glicose e cido rico, levando a hiperglicemia e hiperuricemia.
FMNH2). O FAD um importante transportador de eltrons e prtons na cadeia respiratria mitocondrial. uma vitamina de cor amarelada, termoestvel, porm fotolbil, que perde essa cor quando exposta a luz ou submetida a radiao (um procedimento industrial comum para aumentar a quantidade de vitamina D no leite). Nenhuma doena especfica est associada sua carncia, mas so observadas rachaduras no canto da boca, seborria e anemia. Seu uso teraputico em associao com as demais vitaminas do complexo B. Na Figura 9-2 pode ser observada a forma alimentar da riboflavina.
Figura 9-2 - A estrutura molecular da riboflavina. A forma ativa e o FAD onde a ltima hidroxila adicionada ao fosfato (formando o FMN) ou ao ADP (formando o FAD).
Figura 9-3 - Estrutura molecular da vitamina B3 na forma de cido nicotnico ou niacina. A niacinamida possui a funo amida (substituio do -OH por -NH2).
4.
3.
Vitamina B3: Presente nos alimentos na forma de niacinamida (uma amida) e cido nicotnico (ou niacina, um cido carboxlico), esta vitamina, que pode ser sintetizada a partir do aminocido triptofano, participa da molcula de NAD (nicotinamida adenina dinucleotdeo), importantssimo transportador de prtons e eltrons no metabolismo energtico mitocondrial (Figura 9-3). foto e termoestvel e tem na pelagra a forma clssica de carncia alimentar cuja expresso sintomatolgica de fcil reconhecimento pela presena de dermatite, denmcia e diarria. Pode ocorrer quando o alimento est contaminado com fungos produtores de micotoxinas que destroem a vitamina B3. Outras doenas onde o metabolismo do triptofano comprometido se expressam
cido pantotnico: J foi denominada de vitamina B5, esta vitamina faz parte da molcula de coenzima A (CoA) e responsvel por reaes de acetilao (advindo da o termo A da coenzima A) (Figura 9-4). Outra enzima que possui o cido pantotnico a protena transportadora de grupamentos acil na sntese de cidos graxos. Entretanto, a CoA a forma mais abundante e importante de ao dessa vitamina, sendo responsvel pelo transporte de gripos carbonados (como o acetil e o acil) para o metabolismo energtico. Nenhuma doena carencial descrita, porm foi relatada uma sndrome do p ardente descrita em pelotes da segunda grande guerra cuja rao apresentava uma deficincia em cido pantotnico. Uma forma sinttica da vitamina, o mega-pantotenato, possui ao antagonista diminuindo a ao do cido panRicardo Vieira
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totnico ingerido naturalmente na alimentao. Essa vitamina possui uma certa termolabilidade, com cerca de 1/3 sendo perdido com o cozimento dos alimentos.
Figura 9-5 - Estrutura molecular da vitamina B6 em sua forma de piridoxina. Na forma de piridoxal o CH2OH substitudo por -CHO e na forma de piridoxamina por -CH2NH2.
Figura 9-4 - Estrutura molecular da coenzima A. A regio em destaque corresponde ao cido pantotnico.
5.
Vitamina B6: encontrada nos alimentos em trs formas: piridoxina (um lcool), piridoxal (um aldedo) e piridoxamina (uma amina) (Figura 9-4). coenzima em reaes do metabolismo dos aminocidos, como por exemplo as transaminaes. uma vitamina foto e termolbil (principalmente a forma de piridoxal) o que faz com que haja perda considervel com o cozimento dos alimentos. estvel em meio cido, sendo inativada em pH alcalino. rara a deficincia de vitamina B6, no havendo uma doena carencial especfica. Entretanto, so descritos sintomas de dermatite, glossite e neuropatias relacionadas a sua deficincia em pacientes que fazendo uso de certos quimioterpicos (ciclosserina, isoniazida e penicilamina). Seu uso teraputico como antineurtico e na preveno de enjos. Existe a probabilidade de reaes alrgicas quando se faz uso de altas dosagens.
Vitamina B12 (cobalamina): Possui on cobalto ligado a um anel tetrapirrlico no centro da molcula, muito semelhante ligao do ferro da hemoglobina e do Mn na clorofila (Figura 9-5). A forma mais comum a de cianocobalamina onde o -CN liga-se ao cobalto, existindo ainda as formas de hidroxicobalamina, aquocobalamina e metilcobalamina com o -OH, H2O e -CH3 ligados ao cobalto, respectivamente. cofator de reaes de reorganizao estrutural (converso de metil-malonil-CoA em succinil-CoA) e reaes de metilao (converso de homocistena em metionina). A succinil-CoA fundamental para a sntese de cidos graxos e de aminocidos e a metionina indispensvel para a sntese das purinas (adenina e guanina) e, por sua vez, para a sntese de cidos nuclicos. A carncia de vitamina B12 promove alteraes no metabolismo lipdico e de aminocidos, alm de diminuir a sntese de DNA na medula ssea, o que leva a diminuio no metabolismo dos eritrcitos, levando anemia peniciosa ou megaloblstica. Necessita de uma protena sintetizada no estmago denominada fator intrnseco (FI) para ser absorvida e transportada. A ligao com o FI, entretanto, dificultada no meio cido gstrico, o que torna necessrio a presena de uma protena presente na saliva e no estmago (a protena R) que se liga com a vitamina B12 no estmago, digerida no intestino e, somente assim, o FI liga-se vitamina B12 e pode ser absorvido. A vitamina B12 sintetizada somente por microorganismos, principalmente os presentes no sistema digestivo de herbvoros. a vitamina que requerida em menor quantidade diria, fato que, associado ao acmulo no
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90 termo e fotolbil, sendo destruda gradataivamente caso o alimento que a contenha fique exposto a ao do sol ou se cozido. O escorbuto a manifestao patolgica clssica da carncia de vitamina C e caracteriza-se por sintomatologia relacioanda dimunio da sntese de colgeno (de hemorragias a queda de cabelos e dentes). usada, terapeuticamente, em altas doses para prevenir a formao de radicais livres, combatendo o envelhecimento celular. O uso como antigripal no possui fundamento cientfico, at o momento. Normalmente, as doses acima de 400mg/dia j so compatveis com a excreo urinria, porm doses de at 12 mg/dia so prescritas em pacientes que deseja-se diminuir a ao do estresse oxidativo dos radicais livres, como no caso de pacientes idosos. No h evidncias acerca de sua toxicidade, porm o risco de clculos renais no deve ser desprezado em virtude do oxalato ser o produto final de seu metabolismo, quando em excesso.
fgado e msculos em grandes reservas, torna o animal independente de grandes fontes alimentares. Os vegetais no sintetizam vitamina B12, e por isso, os pacientes vegetarianos restritos possuam o risco maior para a anemia perniciosa. Os vegetarianos que comem ovos e/ou leite (chamados ovo, lacto ou ovo-lacto vegetarianos) possuem menor risco. A vitamina B12 uma vitamina termoestvel, porm fotolbil.
Figura 9-6 - A estrutura molecular da vitamina B12 em sua forma de cianocobalamina.
Figura 9-7 - A estrutura molecular da vitamina C.
7.
Vitamina C (cido ascrbico): Essa a vitamina que possui a estrutura molecular mais simples (Figura 9-7), derivada da glicose e presente na mioria de animais e vegetais. Na verdade, somente poucos animais (homem, porquinho-da-ndia, morcego das frutas e certas aves e peixes) no a sintetizam, isso devido ausncia da enzima Lgulono-lactona, responsvel pela sua sntese a partir de derivados da glicose. Sua principal funo bioqumica converter o aminocido prolina em hidroxiprolina na formaa do colgeno. No entanto, potente anti-oxidante, agindo como protetora da morte celular por ao de radicais livres.
8.
cido Flico (folacina): Sua forma ativa como tetra-hidrofolato (THF) contm um carbono extra que doa em reaes enzimticas (Figura 9-8). O THF produzido a partir da ao da enzima tetra-hidro-folato redutase. Existem seis formas de THF, dependendo da forma como o carbono extra que doado durante a reao por ela catalizada: -CH3 (metil), -CH2- (metileno), -CH=O (formil no N5 ou no N10 da molcula), -CH=NH (formimino) e -CH= (metenil). importante na sntese de DNA por participar na sntese de purinas e timina. Quando ausente na alimentao, resulta, assim com a vitamina B12, em anemia perniciosa. Porm, enquanto a vitamina B12 possui
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reservas que duram anos, o folato pode levar a doena carencial em poucos meses, em virtude de sua baixa quantidade armazenada (5mg). A carncia de vitamina B12 leva a um "aprisionamento" do folato pois a ativao pela tetra-hidro-folato redutase depende de etapas do metabolismo da vitamina B12, o que potencia os efeitos da anemia perniciosa. O cido flico encontra-se presente principalmente em vegetais folhosos (da seu nome); uma vitamina termo e fotoestvel. 1.
Figura 9-9 - Estrutura Molecular da biotina.
Vitaminas Lipossolveis
Vitamina A: Na retina, faz parte dos pigmentos fotorreceptores rodopsina e iodopsina, que modifica sua conformao espacial (de cis para trans) que desencadeia o processo de transmisso do impulso nervoso da viso. encontrada na forma de retinol (um lcool) e de retinal (um aldedo), tambm chamadas de vitamina A1 (Figura 9-10). Existe, ianda, a forma de 3-desidro-retinol, denominada vitamina A2. uma vitamina termoestvel, porm fotolbil a luz UV e a exposio ao oxignio atmosfrico. obtida, principalmente, na forma de beta-carotenos, pigmentos amarelados de vegetais.
Figura 9-8 - Estrutura molecular do cido flico.
9.
Biotina: Tambm conhecida como vitamina H, coenzima de enzimas carboxilases, descarboxilases e transcarboxilases transportando o CO2 para os substratos (Figura 9-9). produzida em grande quantidade pela flora bacteriana intestinal normal do ser humano, o que torna sua carncia muito rara.
Piruvato
Biotina + CO2 + piruvato carboxilase Biotina + CO2 + acetil-CoA carboxilase
oxalacetato malonil-CoA
Acetil-CoA
A deficincia de bioina muito rara, porm na clara do ovo existe a protena avidina que impede a absoro intestinal da biotina o que faz com pessoas que se alimentam de maneira exagerada com ovos crus (o cozimento destri a avidina) desenvolvam alguns sintomas inespecficos como anorexia, nusea, vmito, palidez, depresso, dermatite e glossite. uma vitamina termo e fotoestvel.
Figura 9-10 - Estrutura molecular do retinol (Vitamina A1). O retinal um tipo de vitamina A1 onde a OH terminal substituda por um grupamento aldedo (CHO).A forma de 3-desidro- retinol, o C3 apresenta dupla ligao.
A xerolftlmi e a cegueira noturna so processos patolgicos resultantes da sua carncia alimentar. um potente antioxidante, sendo receitado para este fim, inclusive para fins cosmticos melhorando a consistncia de cabelos e pele. Em aplicaes subcutneas, retarda o envelhecimento da pele e melhora a regenerao tecidual.
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92 3. Vitamina E (tocoferol): Possui importante funo antioxidante protegendo os lipidios de membranas (Figura 9-12). termo e fotoestvel. Em altas doses, utilizada terapeuticamente no tratamento da infertilidade agindo como estimulante da espermatognese, apesar de poder apresentar alguns efeitos colaterias severos na coagulao sangnea ou na regulao hormonal. Um efeito interessante do uso excessivo da vitamina E est relacionado com uma parente competio na absoro das demais vitaminas lipossolveis, o que pode induzir a carncia delas.
Excesso de ingesto alimentar de carotenides leva a deposio desses pigmentos na pele dando-lhe um tom amarelado. Em, altas doses, apresenta efeitos colaterais neurolgicos severos, alm de manifestaes sistmicas como nuseas, dores abdominais, vmito, cefalia intensa. So necessrias em doses dirias muito pequenas na ordem de 1,5 mg/dia, expressas em 5.000 unidades internacionais (1 UI = 0,3 g). 2. Vitamina D: produzida no organismo a partir da ativao pela UV do 7-desidrocolesterol formando o colecalciferol (vitamina D3) que convertido em 1,25-di-hidrxi-colecalciferol por enzimas hepticas e renais. Existe, ainda, a forma de ergocalciferol (vitamina D2) que formada aps a ativao ergosterol presente em leveduras (Figura 9-11). necessria em dosagens dirias de 400UI (1 UI = 0,025g) o que obtido facilmente por sntese endgena. No uma vitamina verdadeira, e sim funciona mais como um hormnio. Regula a absoro do clcio intestinal e o equilbrio na liberao de clcio e fsforo nos ossos. termo e fotoestvel. Altas dosagens induzem a uma hipercalcemia que pode ser fatal ou favorecer processo de calcificao em alguns rgos. O raquitismo a principal consequncia de uma carncia nutricional de vitamina D (nos adultos, osteomalcia).
Figura 9- 12 - Estrutura molecular da Vitamina E.
Vitamina K: cofator necessrio para o processo de coagulao sangnea como no processo de carboxilao. produzida pelas bactrias intestinais, sendo sua carncia muito rara eocasiona distrbios hemorrgicos, apesar de altas doses no prevenir hemorragias e poder induzir anemias hemolticas e kernicterus (deposito de bilirrubina indireta no tecido nervoso). Na tabela 8-1, encontra-se um resumo das principais informaes sobre as vitaminas.
4.
Figura 9-11 - Estrutura molecular da vitamina D2.
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Fundamentos de Bioqumica - Captulo 8: Vitaminas Tabela 8-1 - Resumo das caractersticas principais das vitaminas.
Vitaminas B1 (Tiamina) Forma ativa TiaminaPirofosfato (TPP) Componente de FAD e FMN Componente do NAD e NADP Componente da Co-A Funo bioqumica Coenzima na descarboxilao oxidativa de cetocidos Coenzima de transferncia de hidrognio Coenzima de transferncia de hidrognio Transferncia de grupos acil e acetil Transaminao e descarboxilao de aminocidos Cofator de reaes de metilao Transporte de grupos CO2 em processos carboxilantes Transferncia de grupos formil (sntese de nucleotdeos) Cofator em reaes de hidroxilao Regula o ciclo visual atravs da formao de Rodopsina a partir da opsina Regula a concentrao de clcio plasmtico Necessidades dirias 2 mg Fontes Sementes e gros de cerais, vsceras, carne magra e leite Germe de cerais, vsceras, carne magra e leite Carne, fgado e gros de cerais Levedura, fgado, ovos, carnes e leite Sementes e gros de cereais, carne, viscera, ovos e leite Vsceras e carnes Sementes e gros de cereais, carne, vscera, ovos e leite Levedura e vegetais verdes SIM 60 mg Frutas ctricas Leite, manteiga, queijo, leo de fgado de bacalhau, frutas e vegetais ricos em carotenos Exposio da pele a luz solar, leite, queijo, manteiga, leo de fgado de bacalhau, leos vegetais leos vegetais NO SIM (luz UV) Cegueira noturna, xeroftalmia. SIM NO NO Termolbil SIM Fotolbil NO Doena carencial Bri-bri; Sndrome de WernikKorsakoff Rachaduras na boca, seborria. Pelagra; sndrome da lngua negra em ces Sndrome do p ardente Dermatite, glossite e neuropatias Anemia perniciosa Uso teraputico Melhoria do estado metablico geral Melhoria do estado metablico geral Melhoria do estado metablico geral Melhoria do estado metablico geral Antineurtico; anti-enjos. Associada ao tratamento da doena carencial Associada ao tratamento da doena carencial Associada ao tratamento da doena carencial Antioxidante; antigripal. Antioxidante;
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Toxicidade No relatada
B2 (Riboflavina) B3 (Nicotinamida) B5 (cido pantotnico) B6 (Piridoxina) B12 (Cobalamina)
NO
SIM
3 mg
No relatada Leso heptica; hiperpigmentao No relatada Reaes alrgicas
NO
NO
20 mg
SIM
NO
10 mg
SIM
SIM
Piridoxal Fosfato (PALP) Coenzima B12 (desoxiadenosilcobalamida) Biocitina ou Biotinilisina
2 mg
NO 5 g
SIM
No relatada
BIOTINA
0,25mg
cido flico
cido tetrahidroflico (THF) No precisa ser ativado para exercer sua funo 11-cis-retinal
NO 0,4 mg
NO
Anorexia, nusea, vmito, palidez, depresso, dermatite e glossite Anemia perniciosa
No relatada
No relatada
Vitamina C (cido ascrbico) A (Retinol)
Escorbuto
5.000 UI
Aumenta o risco de clculos renais Reaes neurolgicas e sistmics severas Hipercalcemia, calcificao de rgos moles, clculos renais Distrbios hormonais e na coagulao Anemia hemoltica, kernixterus
NO
NO
D (Colecalciferol)
1,25 diidroxicolecalciferol
Raquitismo osteomalcia.
400 UI
Associada ao tratamento da doena carencial
E (tocoferol)
No precisa ser ativado para exercer sua funo
Antioxidante protetor dos lipdios insaturados Sntese heptica da protombina e fatores VII, IX e X da coagulao sangunea
NO 30 UI
NO
Desestabilizao da membrana celular Distrbios da coagulao
Antioxidante; estimula a espermatognese Associada ao tratamento da doena carencial
K (2-metil1,4naftoquinoina)
No precisa ser ativado para exercer sua funo
1 mg
Vegetais folhosos, flora bacteriana intestinal
NO
NO
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EXERCCIOS 1. Comente sobre a importncia das vitaminas para o metabolismo celular. 2. Comente sobre as vitaminas que possuem uma doena carencial bem caractersticas. 3. Quais as aes farmacolgicas das vitaminas? Comente sobre o seu efeito txico. Para navegar na Internet Fundamentos de Bioqumica:
Vitaminas e Minerais:
www.cyber-north.com/vitamins
Webioqumica
3D Images of proteins
www.imb-jena.de/IMAGE.html
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Captulo 9 Fundamentos de Bioenergtica

s clulas possuem a capacidade espetacular de sobreviverem de maneira independente desde que lhes sejam fornecidos os substratos bsicos para as reaes qumicas intracelulares. Dispondo de alguns compostos carbonados (aminocidos, carboidratos, lipdios), vitaminas, gua e minerais, a clula pode operar o processo de sntese da maioria dos elementos necessrios para seu funcionamento, sendo que em organismos complexos, grupos celulares especficos agrupam-se formando os rgos com as mais diversas funes fisiolgicas. Um grupo de substratos possui uma funo primordial para estas funes que a de fornecer a energia trmica necessria para que essas reaes ocorram. So os compostos energticos (carboidratos, lipdios e protenas) que so degradados convertendo a energia qumica que une seus tomos em energia trmica. Entretanto, esta liberao trmica no acontece de forma indiscriminada, pois haveria a incinerao do meio celular se cada molcula energtica liberasse todo seu potencial trmico para o meio. Neste momento entra em ao molculas especializadas em captar esta energia trmica liberada e liber-la mais facilmente em etapas posteriores, fazendo com que as molculas energticas transfiram a energia armazenada na intimidade de suas ligaes qumicas, para uma nica molcula, que passa a funcionar como uma moeda energtica: a adenosina-tri-fosfato, o ATP (Figura 9-1). O ATP formado a partir da adio de uma molcula de fosfato inorgnico (Pi = HPO4-) a uma molcula de ADP (adenosinadi-fosfato) em um processo endergnico, ou seja com a formao de uma molcula que retirou calor do sistema reacional para poder ser sintetizada. Eligao de alta energia formada (7,3 kcal/mol), facilmente quebrada na presena
de enzimas especializadas (ATPases), liberando a energia para o sistema reacional, em um processo exergnico.
ADP + Pi + 7,3 kcal ATP + H2O ATP + H2O ADP + Pi + 7,3 kcal
Go= + 7,3 kcal/mol Go= - 7,3 kcal/mol
Figura 9-1 - A moeda energtica dos negcios intracelulares: o ATP.
No s o ATP exerce essa funo (Tabela 1), mas h uma prevalncia de reaes intracelulares que o utilizam como a molcula fornecedora de calor para as reaes endotrmicas, talvez por um preciosismo evolucionrio que preferiu utilizar uma moeda nica para as transaes energticas celulares. A molcula de ATP no , entretanto, uma molcula de reserva energtica por excelncia, uma vez que perde muito rapidamente seu Pi, sendo, por isso, utilizada mais em reaes que necessitem da liberao rpida de calor. As melhores molculas de armazenamento real de energia so o amido, glicognio e triglicerdeos que podem liberar a principal molcula precursora da sntese do ATP, a acetil-CoA (Figura 9-2). Esta molcula responsvel por iniciar o principal grupo de reaes bioqumicas que desencadearo a sntese de ATP: o Ciclo de Krebs, com a cadeia respiratria acoplada. Muitas so as formas de se produzir acetil-coA na clula, mas o metabolismo dos carboidratos constitui a principal via, quando a gliclise prossegue em aerobiose (em anae-
Fundamentos de Bioqumica - Captulo 9: Fundamentos de Bioenergtica
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robiose, h a sntese se cido lctico e uma baixa produo energtica). A -oxidao de cidos graxos tambm libera significativa quantidade de molculas de acetil-CoA para o Ciclo de Krebs, existindo, ainda, uma srie de aminocidos que fornecem seu esqueleto carbonado para a sntese de ATP (o nitrognio do grupamento amino converte-se em, NH3 e depois em uria e excretado). Como produto final da degradao do carbono, oxignio e hidrognio dessas molculas energticas, h a liberao de CO2, H2O e energia trmica, que armazenada no ATP para ser liberada rapidamente, quando necessria.
Figura 9-2 - A molcula de acetil-CoA iniciadora do ciclo de Krebs, a gasolina do motor metablico celular.
Poder calrico dos alimentos

Em condies normais, a energia absorvida por via alimentar deve ser igual a energia gasta, diariamente, por um indivduo, o que confere um equilbrio energtico relacionado a um balano calrico alimentar, ou seja, uma quantidade tal de alimentos das trs classes (energticos, plsticos e reguladores) que proporcionem quantidades suficientes para as atividades metablicas bsicas do organismo sem deficincias ou excessos de energia significativos. O gasto de energia varia amplamente em diferentes condies e pode ser medida
colocando-se o indivduo em uma cmara isolada onde seja medida perdas de calor e produtos excretados em relao alimentao e o consumo de oxignio, onde um litro de O2 consumido equivale a, aproximadamente, 4,83 kcal de energia gasta. comum expressar o poder calrico em calorias. Porm, a unidade correta de medir o calor liberado pelos alimentos a kilocaloria (kcal). No jargo nutricional, costuma-se referir-se kilocaloria como grande caloria (Cal) para diferenciar da unidade caloria (cal). Um kcal energia necessria para elevar um litro de gua em um grau centgrado, de 17 para 18oC. Em artigos cientficos, freqentemente, os valores de kcal so convertidos em unidades de trabalho kilojoule (kj) multiplicando-se pelo fator 4,14. Isto reflete o fato que o calor liberado nas reaes celulares so convertidos em trabalho celular. Neste texto, porm, iremos utilizar valores em kcal por ser um valor de uso mais geral e expressa valores verdadeiros de calor. Desta forma, para efeito de raciocnio, imagine que a temperatura de um ser humano normal, que varia entre muito pouco (35 36oC) e precisa de uma certa quantidade de calor constantemente produzida para manter esta temperatura. Como cerca de 60% do peso corpreo corresponde a gua, um homem de 70kg possui cerca de 42 litros de gua. Assim, para manter a temperatura corprea neste nvel, so necessrios 42 kcal. Aps a morte, quando tem incio a parada total dos processos metablicos, o corpo humano leva cerca de uma hora para entrar em hipotermia definitiva (na primeira hora, ainda h atividade metablica em vrios tecidos). Assim sendo, pode-se pressupor o tempo de uma hora para as 42 kcal serem consumidas puramente para manter a temperatura corprea, o que sugere que necessrio cerca de 1.008 kcal por dia (42kcal x 24 horas) somente para manter a temperatura corprea. Levando-se em considerao a realizao de atividades fsicas, mentais e demais atividades metablicas que requerem energia, pode-se compreender a intensa quantidade de energia liberada pelos alimentos em uma alimentao. Cada grupo de alimentos deve estar
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presente na alimentao diria de forma a atender as necessidades individuais, tendo como parmetro, a produo de energia, levando-se em considerao as necessidades individuais de acordo com o biotipo, estado fisiopatolgico, idade, sexo, estilo de vida e, inclusive, caractersticas scio-culturais. Para mais detalhes, ver Captulo 2 sobre Bioqumica dos Alimentos. evidente que toda essa quantidade de energia (ainda mais quando em excesso) no liberada de uma s vez no organismo, pois isso incompatvel com a vida por gerar calor insuportvel pelas clulas. Desta forma, um emaranhado de reaes qumicas desenvolveram-se nos organismos vivos como uma forma de desviar a energia livre dos alimentos para molculas especializadas em armazenar esta energia e liber-las gradativamente durante o tempo de vida (ATP, liberao mais imediata; glicognio e cidos graxos, liberao mais gradativa). Os carboidratos so os alimentos energticos por excelncia, apesar de os lipdios serem mais calricos. Isto se d, provavelmente por terem sido os primeiros compostos fotossintetizados, armazenadores da energia solar na intimidade de suas molculas. lipdios so compostos primrios Os de reserva energtica na maioria dos animais justamente pelo fato de serem primeiro armazenados como indicativo de excesso de calorias na alimentao. Em vegetais, o consumo de lipdios geralmente est atrelado aos processos de manuteno de clulas germinativas em sementes que ficam longo tempo sem o fornecimento de carboidratos pela fotossntese, uma vez que so separados do organismo gerador. Mesmo nessas sementes, os carboidratos (na forma de amido) esto presentes como combustvel energtico. Os nutrientes energticos ingeridos diariamente, rapidamente so consumidos. As reservas de glicognio sintetizado a partir de excesso de glicose duram, no mximo, 24 horas, enquanto que as reservas de lipdios armazenadas nos adipocitos pode fornecer, em tese, energia para cerca de um ms sem a ingesto de alimentos. Entretanto, a produo de compostos secundrios a degradao dos lipdios (os corpos cetnicos) possuem ao
danosa ao organismo, o que faz que um animal que no se alimente por mais de duas semanas morra por inanio. Os animais hibernantes so exceo a essa regra, pois os lipdios armazenados durante as estaes quentes, garantem a energia e gua necessrias durante o inverno, sem haver a ao danosa dos corpos cetnicos, mas sim seu aproveitamento total no metabolismo energtico. O camelo que contm em suas corcovas grandes depsitos de gordura que garante gua e energia para as longas travessias do deserto. Os carboidratos (glicose) so a fonte primria de energia dos neurnios. Em sua ausncia, somente h a utilizao dos corpos cetnicos, no havendo o metabolismo energtico de cidos graxos. As protenas so utilizadas somente de forma terciria para a produo de energia, porm possuem inmeras funes biolgicas que as fazem essenciais na alimentao, apesar de serem desmontadas em aminocidos na digesto e sintetizadas, no fgado, em todas as protenas plasmticas. A utilizao de protenas no metabolismo energtico indica um certo desperdcio de um substrato to diferenciado em uma funo bsica como a produo de energia. Isto s se observa quando h extrema carncia energtica na ausncia de glicose ou lipdios disponveis para o metabolismo energtico ou quando h intensa atividade fsica.
As molculas "altamente" energticas

O ATP no a nica molcula capaz de receber e liberar energia trmica para as reaes bioqumicas. A condio primordial para uma molcula ser considerada "altamente" energtica ter a capacidade de transferir grupamentos qumicos durante reaes bioqumica, liberando a energia para o meio (reao exergnica) possibilitando que os substratos da reao absorva esta energia para ser produzido os produtos (reao endergnica) num acoplamento entre esses dois tipos de reao.
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Na tabela 9-1 esto apresentadas as principais molculas energticas e os grupos qumicos transferidos durante o processo exergnico. Nas Figura de 9-3 a 9-5 esto apresentadas duas importantes molculas transportadoras de eltrons. Muitas vezes, uma reao qumica no utiliza totalmente a energia liberada pela molcula energtica, havendo o aumento da temperatura no momento da reao. Este efeito pode ser benfico para a clula, como no processo de manuteno da temperatura corporal nos mamferos, mas, na maioria das vezes, precisa ser impedido, havendo um processo de regulao onde no h perda da energia em excesso. Isto quase sempre observado quando h a liberao de muitas molculas de acetilCoA no excesso alimentcio de carboidratos, havendo o desvio da acetil-CoA para a sntese de colesterol, triglicerdeos e corpos cetnicos. Este efeito metablico tambm observado na carncia de glicose onde os cidos graxos passam a liberar grandes quantidades de acetil-CoA para o processo energtico, havendo o natural acmulo de colesterol e corpos cetnicos que trazem problemas fisiolgicos importantes para o ser humano como a aterosclerose e a cetoacidose, podendo, inclusive, levar a morte. A acetil-CoA utilizada, tambm, na sntese de alguns aminocidos, porm como os aminocidos no se armazenam no organismo, a sntese de lipdios fica privilegiada.
MOLCULA ENERGTICA ATP (adenosina tri--fosfato) UTP (uridina-tri-fosfato) GTP (guanosina-tri-fosfato) Creatinina-fosfato NADH (nicotinamida-adenina-dinucleotdeo) NADPH (NAD-fosfato) FADH2 (flavina-adnina-dinucleotdeo) Acetil-Coenzima A (acetil-CoA)
Portanto, um excesso de produo de acetil-CoA no um processo desejvel, havendo um deslocamento constante para a sntese de aminocidos e outros processos que consumam a acetil-CoA impedindo seu acmulo, at um limite tolervel pela clula que, geralmente, corresponde a queda do pH devido ao acmulo dos corpos cetnicos.
As reaes enzimticas
As reaes que acontecem no meio intracelular possuem o auxlio indispensveis de enzimas que no interferem na estrutura molecular dos produtos, mas possibilitam sua rpida formao. Apesar de algumas molculas de RNA possurem propriedades enzimticas (ribozimas), as enzimas clssicas so, quimicamente, protenas que possuem uma estrutura tridimensional complementar a um substrato especfico ajustando-se a ele em um modelo chave-fechadura, permitindo a formao dos produtos com um gasto mnimo de energia. Este processo acontece pela formao de um complexo enzima-substrato que permite que os substratos se encontrem de maneira muito mais rpida e ordenada, diminuindo a energia necessria para que ocorra a reao (energia de ativao), liberando a enzima intacta ao final da reao (para maiores detalhes ver Captulo 5 sobre enzimas).
GRUPO DE TRANSFERNCIA fosforil (Pi = fosfato inorgnico)
EXEMPLO DE REAES QUE PARTICIPAM gliclise, cadeia respiratria, ciclo de Krebs, sntese da creatina sntese do cido lctico, cadeia respiratria, ciclo de Krebs
eltrons, hidrognio
grupo acil (cadeia ciclo de Krebs, -oxidao, sntese de carbonada) aminocidos e lipdios Biotina CO2 ciclo de Krebs Tetra-hidro-folato (THC) carbono simples sntese de aminocidos Tiamina-prirofosfato (TPP) aldedo ciclo de Krebs, sntese de acetil-CoA S-adenosilmetionina (adoMET) metil sntese e degradao de aminocidos Uridina-bi-fosfato-glicose glicose sntese do amido e glicognio Tabela 9-1 - Exemplo de molculas "altamente energticas" que participam de processos bioqumicos essenciais. Ricardo Vieira
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necessrias em pequenas quantidades uma vez que so reaproveitadas ao final da reao. De fato, a maioria das reaes biolgicas so enzimticas e no ocorrem na ausncia ou inibio da enzima.
Figura 9-3 - A molcula de NAD+ responsvel pela captao de um par de eltrons e um H+ durante reaes de desidrogenaes, poderosas reaes exergnicas. Fazem parte de um complexo transportador de eltrons mitcondrial. Figura 9-5 - A molcula de NADP+ no um bom transportador de eltrons para o metabolismo energtico, porm garante o transporte dos eltrons para sistemas que necessitem de potencial redutor (p.ex.: sntese de lipdios, reduo do ferro da hemoglobina).
As principais reaes bioenergticas

Os carboidratos constituem os principais compostos energticos, com a glicose possuindo um mecanismo de degradao presente em todos os seres vivos. De fato, a semelhana entre o processo de degradao da glicose nos seres vivos, indica sua importncia no processo metablico. As principais reaes bioenergticas, portanto, esto relacionadas com o metabolismo da glicose, onde o passo primordial a quebra da molcula da glicose, de seis carbonos, em duas molculas de cido lctico, de trs carbonos. Este processo citoplasmtico, a gliclise, ocorre em todas os seres vivos, sejam anaerbios ou aerbios. Em aerobiose, particularmente, no h a formao de cido lctico mas sim de cido pirvico, que devidamente convertido em acetil-coA, iniciando, nas mitocndrias, o
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Figura 9-4 - A molcula de FAD+ recebe um par de eltrons e dois H+ durante desidrogenaes. Junto com o FAD+ uma das principais molculas da cadeia respiratria mitocondrial.
Desta forma, as enzimas tornam-se indispensveis para os processos biolgicos pois poupam um gasto desnecessrio de energia, alm de permitir a rpida formao dos produtos em um tempo muito menor do que seria se a reao no fosse enzimtica e serem
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ciclo de Krebs (ou do cido tricarboxlico, o cido ctrico). Aqui, h a liberao de eltrons que so transportados por compostos especializados gerando energia capaz de unir molculas de ADP com Pi formando ATP, na chamada fosforilao oxidativa ou cadeia respiratria. Quando h um excesso de glicose alimentar, h o estmulo da sntese de glicognio heptico e muscular (glicognese), alm da converso da acetil-CoA em excesso em triglicerdeos e seu posterior depsito nos adipcitos (ver Captulo 10 sobre Metabolismo). Os cidos graxos correspondem s molculas de maior poder calrico no metabolismo celular, mas so utilizados secundariamente glicose. O processo enzimtico mitocondrial da -oxidao dos cidos graxos, produz molculas de acetilCoA para o Ciclo de Krebs, alm de NADH e FADH2 para a cadeia respiratria. O excesso de acetil-CoA destinado sntese de corpos cetnicos, outras molculas energticas. Os aminocidos tambm so utilizados para a produo de energia fornecendo acetil-CoA ou intermedirios para a gliconeognese ou o Ciclo de Krebs. Outras reaes bioqumicas importantes utilizando as molculas energticas ocorrem em vrios locais da clula de maneira contnua, havendo a regulao da degradao dos substratos atravs de processos de regulao da atividade enzimtica. Na tabela 9-2 esto relacionadas as principais localizaes de reaes bioqumicas importantes. Neste captulo, trataremos das reaes do Ciclo de Krebs e Cadeia Respiratria e dos principais processos que antecedem a formao de acetil-CoA (Gliclise e -oxidao de cidos graxos).
essencialmente anaerbico, com o metabolismo aerbico produzindo quase vinte vezes mais energia para os processos metablicos intracelulares. Desta forma, o ciclo de Krebs e a Cadeia respiratria correspondem seqncia natural do metabolismo da glicose e dos demais compostos energticos (cidos graxos e aminocidos).
Tabela 9-2 - Os principais stios das reaes bioqumicas intracelulares. REAO BIOQUMICA LOCAL Gliclise Sntese de cidos graxos Sntese de corpos cetnicos citoplasma Sntese do Colesterol Parte do ciclo da uria Parte da gliconeognese Ciclo de Krebs mitocndrias Cadeia respiratria -oxidao dos cidos graxos Formao da acetil-CoA Parte do Ciclo da uria Parte da gliconeognese Sntese e empacotamento de mol- retculo enculas complexas (glicolipdios, doplasmtico glicoprotenas, lipoprotenas, hor- e aparelho de Golgi mnios proticos) Sntese de protinas ribossomos Degradao de molculas comple- lisossomos xas Sntese de DNA e RNA ncleo
Gliclise
A glicose o principal substrato para as reaes energticas, sendo a gliclise o principal processo de utilizao energtica da glicose, presente em todos os seres vivos, desde a mais antiga e simples bactria at o mais recente e complexo organismo multicelular. A gliclise, entretanto, um processo
A gliclise, tambm conhecida como via de Ebden-Meyerhof, a primeira via metablica da molcula de glicose e outras hexoses. Todos os seres vivos (a exceo dos vrus) realizam, invariavelmente, a gliclise seja em condies de aerobiose ou de anaerobiose, com as enzimas glicolticas presentes no citoplasma. Primariamente, a gliclise um processo anaerbio onde se observa a formao de um produto final estvel (lactato) e em condies de aerobiose, o metabolismo da glicose prossegue com as demais vias produtoras de energia (ciclo de Krebs e cadeia respiratria) mas somente se a clula possuir mitocndrias funcionais, uma vez que esses processos so todos intramitocondriais. A gliclise ocorre em uma seqncia enzimtica de 11 reaes, divididas em duas fases: a primeira at a formao de duas molculas de gliceraldedo-3-fosfato caracteriza-se como uma fase de gasto energtico de 2
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ATPs nas duas fosforilaes que ocorrem nesta fase (Figura 9-6); a segunda fase caracteriza-se pela produo energtica de 4 ATPs em reaes oxidativas enzimticas independentes de oxignio, utilizando o NADH como transportador de hidrognios da reao de desidrogenao que ocorre (Figura 9-7). O rendimento energtico final do metabolismo anaerbio da glicose, portanto : 1a. FASE: - 2 ATPs 2a. FASE: +4 ATPS (= saldo bruto: 2 por cada lactato formado) SALDO: + 2 ATPs (saldo lquido) Em condies de aerobiose, porm, o piruvato no reduzido e sim oxidado nas mitocndrias pelo complexo enzimtico piruvato-desidrogenase (tambm chamado piruvato-descarboxilase) havendo a formao de acetil-CoA e a liberao de uma molcula de CO2 por cada piruvato oxidado. formado, tambm, um NADH na reao de desidrogenao, indo para a cadeia respiratria, uma vez que j est dentro das mitocndrias.
importante observar que, sendo oxidado o piruvato, o NADH (produzido na gliclise) que seria utilizado para sua reduo, poupado o que possibilita que os eltrons por ele transportado, possam penetrar na mitocndrias e convertidos em ATP, em ltima anlise, na cadeia respiratria. A primeira fase da gliclise uma fase de gasto energtico onde os produtos formados so mais energticos que a glicose. A segunda fase, resgata a energia investida e libera parte da energia contida na molcula de glicose. As reaes irreversveis impedem a reverso do processo e a liberao de glicose para o meio extra-celular. A neoglicognese precisar "driblar" essas reaes irreversveis para gerar glicose. As enzimas desta via metablica permitiro justamente nessa reversibilidade (ver captulo 10 sobre metabolismo).
Figura 9-6 - Na primeira fase da gliclise h o gasto da energia da ligao fosfato de duas molculas de ATP. uma fase de investimento energtico para a produo posterior maior da energia com a quebra da molcula. Duas reaes de fosforilaes so irreversveis o que obriga a no formao de glicose a partir do aumento da concetrao do produto. Essas reaes irreversveis sero alvo de enzimas da neoglicognese. Ricardo Vieira
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Figura 9-7 -A segunda fase da gliclise responsvel pela produo energtica equivalente a quatro ligaes de alta energia do ATP mais a formao de dois NADH. Parte do BPG formado usado como sinalizador para a liberao de O2 nos tecidos pela hemoglobina.
Alguns fungos possuem um tipo especial de gliclise, denominada fermentao alcolica, pelo fato de degradar a glicose at piruvato (3C) e este at etanol (2C) com a liberao de CO2. Este o principal motivo de se utilizar fungos (p.ex.: Sacharomices cerevisae) para obter a base para as bebidas alcolicas e tambm como fermento de po (a massa aumenta de volume graas ao CO2 liberado). A maioria das bactrias realiza o metabolismo anaerbico da glicose, mesmo sendo aerbias, pelo simples fato de no possuirem mitocndrias. Algumas bactrias, entretanto, possuem na membrana citoplasmtica enzimas transportadoras de eltrons que permite o metabolismo aerbico semelhante ao observado no Ciclo de Krebs e Cadeia Respiratria.
As hemcias realizam, tambm, somente o metabolismo anaerbico pelo fato de suas mitocndrias serem afuncionais. Nas hemcias, durante a segunda fase da gliclise, o 1,3-bis-fosfo-glicerato pode ser isomerizado em 2,3-bis-fosfo-glicerato (BPG) e se ligar com a hemoglobina induzindo a liberao de O2 nos tecidos (ver captulo 20).
Ciclo de Krebs
O Ciclo de Krebs (assim denominado em homenagem ao bioqumico alemo Hans Krebs que estabeleceu, em 1937, as seqncias de reaes a partir de estudos preliminares), tambm chamado Ciclo do cido Tricarboxlico ou Ciclo do cido Ctrico, a mais importante via metablica celular. Ocorre sob a regncia de enzimas mitocondriais, em condies de aerobiose, aps a descarboRicardo Vieira
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xilao oxidativa do piruvato a acetil-CoA, aps o final da gliclise. A acetil-CoA tambm originria da degradao de cidos graxos (-oxidao) a partir da mobilizao dos triglicerdeos armazenados nos adipcitos e tambm dos aminocidos originrios da degradao das protenas (alanina, treonina, glicina, serina, cistena, fenilalanina, tirosina, leucina, lisina e triptofano). Corpos cetnicos tambm podem ser degradados em acetil-CoA e aproveitados pelos msculos e neurnios. Todos esses compostos so sintetizados a partir da acetil-CoA e por isso podem ser convertidos nela quando h necessidade energtica. Entretanto, isto no verdade para todas as molculas originrias da acetil-CoA, como o caso do colesterol que no possui funo energtica, correspondendo, portanto a um beco sem sada do metabolismo energtico a partir da acetil-CoA. O Ciclo de Krebs est associado a uma cadeia respiratria, ou seja, um complexo de compostos transportadores de prtons (H+) e eltrons que consumem o oxignio (O2) absorvido por mecanismos respiratrios, sintetizando gua e gerando ATPs atravs de um processo de fosforilao oxidativa. Esses processos ocorrem dentro das mitocndrias, com as enzimas do Ciclo de Krebs dispersas na matriz e os transportadores de eltrons esto fixos na cristas mitocondriais (Figura 9-8).
As mitocndrias possuem uma estrutura de membrana peculiar que a assemelha a um organismo particular vivendo dentro de uma clula estranha. De fato, o DNA mitocondrial apresenta diferenas notveis em relao ao DNA nuclear, assemelhando-se mais com bactrias do que com o prprio organismo na qual esto inseridas, sugerindo que a sua origem resultante de um processo de endosimbiose ocorrido nos primrdios da evoluo. A membrana externa das mitocndrias bastante permevel s molculas que servem de substratos para as reaes energticas (piruvato, acetil-CoA, cidos graxos ativados), porm a membrana interna corresponde a uma barreira para a entrada dessas molculas para o interior da mitocondria. na membrana interna que esto localizadas protenas especializadas em introduzir os substratos citoplasmticos para o interior, denominadas, genericamente, como lanadeiras de substratos que proporcionam a seleo das molculas a serem degradadas pelas enzimas mitrocondriais. Dependendo do tipo de lanadeira, tem-se processos distintos de captao de molculas do citoplasma, ou de sada de compostos da matriz mitocondrial para o citoplasma. O Ciclo de Krebs inicia-se com a unio de uma molcula de acetil-CoA (2C) com uma de oxalacetato (4C) gerando o citrato (6C) que possui trs carboxilas. O Ciclo de Krebs pode ser dividido em oito etapas conseqcutivas: 1. INCIO: condensao da acetil-CoA com o oxalacetato, gerando citrato: esta reao catalisada pela enzima citrato-sintase e gera um composto de seis carbonos, uma vez que o oxalacetato possui 4C e a acetilCoA, possui 2C que correspondem aos dois ltimos carbonos da glicose que ainda esto unidos depois da oxidao do piruvato. 2. Isomerizao do citrato em isocitrato: esta reao catalisada pela enzima aconitase. H a formao de cis-aconitato como um intermedirio ligado enzima, porm pode ser que ele constitua uma ramificao do ciclo.
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Figura 9-8 A mitocndria, sede do metabolismo energtico. As enzimas do Ciclo de Krebs esto presentes na matriz mitocondrial, enquanto que os transportadores de eltrons encontram-se nas cristas mitocondriais (invaginaes da membrana interna). O fluxo de prtons ocorre da matriz para o espao intermembrana e da de volta para a matriz, gerando um potencial protnico necessrio para a sntese de ATP.
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3. Oxidao do citrato a -cetoglutarato: catalisada pela enzima isocitratodesidrogenase, utiliza o NADH como transportador de 2 hidrognios liberados na reao, havendo o desprendimento de uma molcula de CO2, a primeira da acetilCoA. H a formao de oxalo-succinato como intermedirio ligado enzima. 4. Descarboxilao oxidativa do cetoglutarato a succinil-CoA: catalisada pelo complexo enzimtico cetoglutarato-desidrogenase e utiliza o NADH como transportador de 2 hidrognios liberados na reao, havendo o desprendimento de mais uma molcula de CO2 que corresponde ao ltimo carbono remanescente da acetil-CoA, com as reaes seguintes reorganizando o estado energtico dos compostos com a finalidade de regenerar o oxalacetato, molcula iniciadora do ciclo, permitindo o prosseguimento do metabolismo da acetil5. CoA. Desacilao do succinil-CoA at succinato: a enzima succinil-CoA sintase catalisa esta reao de alto poder termognico, gerando um GTP (guanosina-tri-fosfato) que convertido em ATP (o nico produzido no nvel dos substrato do Ciclo de Krebs). 6. Oxidao do succinato a fumarato: catalisada pela enzima succinato-desidrogenase, utiliza o FADH2 como transportador de 2 hidrognios liberados na reao. 7. Hidratao do fumarato a malato: catalisada pela enzima fumarase (ou fumaratohidratase) corresponde a uma desidratao com posterior hidratao, gerando um ismero. 8. TRMINO: desidrogenao do malato com a regenerao do oxalacetato: catalisada pela enzima malato-desidrogenase, utiliza o NADH como transportador de 2 hidrognios liberados na reao. Na verdade, o Ciclo de Krebs no termina, verdadeiramente, com esta reao, pois outra molcula de acetil-CoA condensa-se com o oxalacetato, reiniciando um novo ciclo. De uma forma resumida, pode-se dizer que o Ciclo de Krebs um processo metab-
lico que inicia-se com a captao de uma molcula de 2C (acetil-CoA) por um composto de 4C (oxalacetato), gerando uma molcula de 6C (citrato) que trabalhado enzimaticamente para liberar os 2C iniciais como CO2, regenerando a molcula original de oxalacetato, reiniciando o ciclo. Durante esta regenerao, so produzidos 4 substratos altamente energtico derivados das reaes de desidrogenao: 3 NADH e 1 FADH2, alm de um ATP no nvel dos substratos. Na verdade, os carbonos da acetilCoA incorporados molcula de citrato s so liberados como CO2, na segunda volta do Ciclo de Krebs e no imediatamente aps a formao do citrato. Entretanto, este detalhe no diminui o fato que cada duas molculas de CO2 liberado, corresponde a molcula de acetil-CoA que entrou no Ciclo. Na Figura 9-9 est representado esta importante via metablica celular. Na sua essncia, o Ciclo de Krebs representa a forma como a mitocndria, utilizando poucas molculas do substrato oxlacetato pode converter uma quantidade enorme de acetil-CoA j que no final do ciclo, o oxalacetato se regenera e possibilita o a captao de nova molcula de acetil-CoA. Sendo assim, a acetil-CoA a molcula iniciadora do Ciclo de Krebs, uma vez que o oxalacetato funciona como uma espcie de substrato temporrio do ciclo. Desta forma qualquer biomolcula que ao ser degradada fornea acetil-CoA (p.ex.: glicose, cidos graxos, certos aminocidos, etanol, cido actico) potencial combustvel mitocondrial para a formao de ATP pelo Ciclo de Krebs. Entretanto, molculas que forneam o oxalacetato ao serem degradadas (p.ex.: alguns aminocidos), ou qualquer substrato do ciclo de Krebs que converta-se em oxalacetato aumenta apenas a velocidade de formao de ATP, mas no a sua quantidade j que o oxalacetato no um combustvel propriamente dito do ciclo de Krebs, mas o substrato para que ele acontea.
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Figura 9-9 - O Ciclo de Krebs. produzido somente um ATP no nvel dos substratos, sendo necessrio que os hidrognios e os eltrons retirados durante o ciclo sejam transportados para a cadeia respiratria para a produo de ATP (3 ATPs por cada par de hidrognios transportado pelo NADH e 2 por cada FADH2). Ao centro, a foto do cientista alemo que d nome a esta importante via metablica.
A acetil-CoA disponvel na mitocndria possui vrios destinos metablicos, alm do Ciclo de Krebs. Dentre eles os principais so: 1) dar incio sntese de cidos graxos pela ao da enzima cido graxo-sintase (estimulada pela insulina); 2) duas molculas podem condensar-se originando os corpos cetnicos; 3) pode ser incorporada, atravs de uma srie de reaes enzimticas, em um ncleo ciclo-pentano-perhidro-fenantreno, indo sintetizar o colesterol. 4) pode ser requerida para a sntese dos aminocidos cetognicos. As vias de sntese de colesterol e corpos cetnicos compartilham algumas enzimas e a deciso que qual via prosseguir dependendo da presena ou no de insulina, visto que a sntese de colesterol estimulada por esse hormnio.
Todas essas vias alternativas da acetilCoA, no entanto, no fazem parte da via glicoltica, mas uma espcie de desvio do ciclo de Krebs (ver captulo 10 sobre metabolismo).
Cadeia Respiratria
Os 4 pares de hidrognios (e seus eltrons) liberados no ciclo de Krebs so imediatamente transportado para a cadeia respiratria que um processo gerador de ATPs onde o O2 serve de aceptor final dos hidrognios (e eltrons) gerando uma molcula de H2O por cada par de eltrons que so transportados pelo NADH e FADH2, gerados no s do ciclo de Krebs, mas de qualquer outra reao metablica celular. A sntese de ATP resultante do transporte de eltrons, ocorre em virtude da energia livre liberada durante o fluxo de prtons que ocorre entre os complexos transportadoRicardo Vieira
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res de eltrons e prtons que comunicam a matriz mitocondrial e o espao intermembrana. Quando o NAD+ se reduz, formando NADH, nas reaes de desidrogenao nas quais participa como co-fator enzimtico dentro da matriz mitocondrial, h a passagem imediata dos eltrons, que retirou do substrato, para o complexo protico denominado Complexo da NADH-desidrogenase ou Complexo I, que composto por mais de 25 flavoprotenas fixas na matriz mitocondrial que comunicam a matriz com o espao intermembrana. Este complexo possui um NAD+ e sete stios contendo ferro e enxofre que funcionam como receptores de eltrons, reduzindose e oxidando-se quando h o fluxo eletrnico. O receptor final de eltrons, deste complexo, a ubiquinona que converte-se em ubiquinol quando recebe os eltrons (se reduz). Quando os eltrons atravessam o complexo I e so transferidos at a ubiquinona, h a um fluxo de um prton que atravessa a matriz em direo ao espao intermembrana. Com esta passagem do prton, os eltrons so transportados para o complexo III, denominado, tambm de Complexo dos Citocromos bc1 ou Ubiquinonacitocromo c oxidorredutase. A ubiquinona desloca-se do complexo I em direo ao complexo III, correspondendo a um transportador mvel. Este complexo contm os citocromos b562, b566, c1 e c, ligados a uma protena ferro-enxofre e cerca de outras seis protenas. Todo este complexo III est fixado na crista mitocondrial e transmembrana, conectando a matriz e o espao intermembrana (com exceo do citocromo c que conecta-se apenas com o espao intermembrana). O receptor final de eltrons deste complexo o citocromo c que se reduz e transfere os eltrons para o complexo IV, denominado de Citocromo oxidase. Nesta trasnferncia, gera-se um fluxo de um prton da matriz para o espao transmembrana (o segundo fluxo protnico). O citocromo c, do complexo III, um transportador mvel que leva os eltrons para o complexo IV.
O complexo IV contm os citocromos a e a3 que possuem um grupamento heme (com um tomo de ferro) e esto ligados a uma protena transmembrana que conecta a matriz com o espao intermembrana e possui dois tomos de cobre que possibilita o transporte de eltrons para o aceptor final, o oxignio (O2). Quando os eltrons atravessam este complexo IV, gera-se um terceiro fluxo de um prton da matriz para o espao intermembrana, com os eltrons sendo transferidos para o oxignio, que se reduz formando gua. Os dois prtons necessrios para formar a gua so retirados da matriz mitocondrial, ficando a gua na mitocndia podendo atravessar para o citoplasma. Observe que um nico par de eltrons transportado seqencialmente pelos complexos I, III e IV, geram o fluxo de trs prtons para o espao intermembrana, com a formao de uma molcula de gua. O complexo II ou Complexo Succinato-ubiquinona, uma nica enzima fixa na crista mitocondrial mas que no comunica a matriz com o espao intermembrana. Esta enzima a succinato-desidrogenase que participa da 6a reao do Ciclo de Krebs. Este complexo formado um FAD+ ligado a centros Ferro-enxofre. Ela transfere os eltrons provenientes do FADH2 para a o complexo III, mas de maneira diferente como os eltrons do NADH so transportados para o complexo III. Em virtude de no ser uma protena transmembrana, no gera o fluxo de prtons que o complexo I gera, fornecendo um stio de fluxo de prtons a menos que os eltrons transportados pelo NADH. Na Figura 9-10, observa-se a representao esquemtica dos complexos I,II, III e IV e a relao dos prtons lanados para fora da mitocndria e os pares de eltrons transportados.O fluxo de prtons gerado pela passagem dos eltrons pelos complexos I, III e IV (conhecidos, por isso, como bomba de prtons), fornece energia suficiente para a sntese de trs ATPs, o que corresponde a uma relao de uma molcula de ATP para cada prton bombeado ou 3 molculas de ATP para cada par de eltrons que passe pelos trs complexos.
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Figura 9-10 A cadeia respiratria. Os eltrons transportados pelo NADH mitocondrial so doados para o complexo I que favorece a formao de trs fluxos de prtons no sentido matriz espao intermembrana capazes de gerar, cada fluxo, um ATP com o bombeamento do prton no sentido inverso (espao intermembrana matriz). Os eltrons transportados pelo FADH2 s geram dois fluxos de eltrons. A ubiquinona um transportador mvel entre os complexos I e II para o complexo III, assim como o citocromo c entre o complexo III e o IV.
Observe a equao exergnica que demonstra a reduo do O2 a partir dos eltrons transportados pelo NADH, liberando 53,14 kcal de energia.
NADH + H+ + O2 H2O + NAD+ G = - 53,14 kcal
Da mesma forma, a reduo do O2, a partir do par de eltrons transportados pelo FADH2, libera energia livre na ordem de 36,71 kcal:
FADH2 H2O + FAD+ + O2 G = - 36,71 kcal
A energia necessria para a sntese de uma molcula de ATP, in vivo, corresponde a 12,51kcal, muito maior que a energia livre padro de 7,3 kcal necessrias para a sntese de ATP a partir de ADP e Pi. Isto se d porque as concentraes dos substratos na clula so diferentes do valor de 1M que so utilizados no clculo, alm do que a temperatura intracelular diferente de 25oC, o pH nem sempre 7,0 nem a presso 1 ATM constantemente (condies padres de temperatura, presso e pH). Desta forma a energia liberada suficiente para a sntese de at quatro ATPs (53,14 12,51 = 4,25) por par de eltrons transportados pelo NADH.
O que corresponde a energia suficiente para a sntese de quase trs ATPs (36,712,51 = 2,93). Como visto pela estequeometria das reaes exergnicas acima descritas, energia livre no problema para a sntese de ATP na mitocndria. Entretanto, em estudos experimentais observou-se que h uma proporo de 3 moles de ATPs formados por cada mol de NADH oxidado (e mol de O2 reduzido em H2O, por conseguinte), da mesma forma que 2 moles de ATPs so formados para cada mol de FADH2 oxidado. A teoria quimiosmtica que justifica esta proporo, postulada por Peter Mitchell, ainda na dcada de 60) admite que os prtons bombeados para o espao intermembrana,
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durante o fluxo de eltrons na cadeia respiratria, criam um gradiente de baixo pH (devido alta concentrao de H+) e carga eltrica positiva no espao intermembrana. A partir dessas diferenas de gradientes h movimentao de uma outra bomba de prtons, agora no sentido do espao intermembrana para a matriz mitocondrial, atravs de um complexo protico denominado complexo V que corresponde enzima ATP sintase. Esta enzima possui semelhante a uma maaneta tanto na forma quanto no movimento rotatrio que realiza quando h o fluxo de prton do espao intermembrana para a matriz mitocondrial. A poro correspondente cabea da maaneta est voltada para a matriz mitocondrial e corresponde subunidade F1 que contm os stios de ligao do ADP e Pi para a formao do ATP. Quando os prtons so jogados para o lado de fora da matriz mitocondrial, h a formao de um potencial eletroqumico positivo externo que favorece a passagem dos prtons de volta para a matriz por dentro do complexo V. Nesta passagem h a liberao de calor suficiente para a unio do Pi com o ADP para formar o ATP. Assim sendo, como cada par de eltron transportado pelo NADH produz um fluxo de 3 prtons para fora da mitocndria, a entrada desses prton pelo complexo IV favorece a sntese de 3 ATPs, bem como os eltrons transportados pelo FADH2 produzem apenas 2 fluxos de prtons para fora da mitocndria e, portanto, somente 2 ATPs so produzidos. Desta forma, a cadeia respiratria corresponde a um passo fundamental e decisivo no processo de formao de energia qumica armazenada no ATP, uma vez que h uma grande produo de NADH e FADH2 nos processos exergnicos da clula. Um fato importante, entretanto, que essa relao de 3 ATPs produzidos por cada NADH s 100% verdadeira quando se trata de NADH produzido dentro da mitocndria e que trasnfere seus eltrons para o complexo I. Alguns NADH produzidos no citoplasma no entram na mitocndria e tem que entregar seus eltrons para uma lanadeira
na membrana interna para poder entrar na cadeia respitarria. Quando a lanadeira o glicerol-3-Pidesidrogenase, uma protena superficial da membrana interna em contato somente com o espao intermembrana, h a transferncia dos eltrons direto par complexo III, via ubiquinona, de forma semelhante aos eltrons transportados pelo FADH2. Desta maneira, quando h o transporte de eltrons do NADH citoplasmtico via esta lanadeira, cada NADH produz somente 2 ATPs. Porm, a maioria das vezes, o NADH citoplasmtico transfere seus eltrons diretamente para o complexo I e a produo energtica idntica ao NADH mitocondrial.
-Oxidao dos cidos graxos

Os triglicerdeos so a principal forma de obteno dos lipdios na alimentao, tanto de origem animal quanto vegetal. Os trs cidos graxos presentes na molcula so os substratos para uma via metablica de extrema importncia quando a glicose no consegue satisfazer as necessidades energticas ou quando o organismo est sobre intensa carncia energtica por exerccio fsico intenso. A degradao de cidos graxos estimulada pelo glucagon, epinefrina e cortisol que promovem a mobilizao dos triglerdeos do tecido adiposo, ativando uma lipase intracelular sensvel a esses hormnios que libera os cidos graxos para o sangue onde so transportados para todas as clulas ligados albumina. Uma vez na clula, os cidos graxos vo ser oxidados na mitocndria liberando tantas molculas de acetil-CoA quanto forem o nmero de carbonos na ordem de uma molcula de acetil-CoA para cada dois carbonos do cido graxo. Como o cido graxo mais simples sintetizado pelos animais contm 16 carbonos, 8 molculas de acetil-CoA no mnimo so liberadas por cada molcula de cido graxo oxidada. Portanto, oxidar cido graxo sempre vai levar a um excesso de acetil-CoA que no pode ser convertida novamente em cidos graxos nem colesterol, uma vez que no moRicardo Vieira
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mento metablico no existe insulina para estimular essa via. A via restante a da sntese de corpos cetnicos que, apesar de possurem funo energtica, podem trazer efeitos indesejveis para o organismo (ver Captulo 10 sobre Metabolismo). A -oxidao ocorre em cinco reaes prprias, sendo uma primeira citoplasmtica e as demais intramitocondriais. 1. INCIO: ativao do cido graxo: a CoA adicionada molcula do cido graxo formando o cido graxo ativado ou acil-CoA (p.ex.: o cido palmtico forma o palmitoli-CoA). Esta reao catalizada pela enzima acil-CoA sintase que utiliza duas ligaes fosfato de uma nica molcula de ATP, gerando AMP + PPi. Na mitocndria, a acil-CoA penetra com o auxlio de um composto transportador chamado carnitina. 2. Desidrogenao da Acil-CoA: catalisada pela enzima acil-CoA desidrogenase, utiliza o FADH2 como transportador dos dois eltrons e dois H+ liberados, formando o enoil-CoA. 3. Hidratao do enoil-CoA: sob a ao da enzima enoil-CoA hidratase, forma o 3OH-acil-CoA. 4. Desidrogenao do 3-OH-acil-CoA: a enzima 3-OH-acil-CoA desidrogenase utiliza o NADH como transportador de dois eltrons e um H+ retirados do substrato, formando o 3-ceto-acil-CoA. 5. TRMINO: clivagem (quebra) do 3ceto-acil-CoA: h a quebra da molcula gerando uma molcula de acetil-CoA e o restante do cido graxo original, agora com dois carbonos a menos, que novamente liga-se a outra molcula de CoA gerando um novo acil-CoA. O ciclo recomea at a formao da ltima molcula d acetil-CoA. A -oxidao uma via extremamente eficaz na produo de energia, j que as molculas de acetil-CoA, NADH e FADH2 for-
madas j se encontram na mitocndria e podem seguir para o ciclo de Krebs e cadeia respiratria, rapidamente. Porm, o excesso da acetil-CoA formado vai obrigar sua sada para o citoplasma para iniciar a sntese de cidos corpos cetnicos (ver captulo 9 sobre Metabolismo). Os cidos graxos podem, ainda, ser metabolizados atravs da -oxidao, um processo que produz menos enrgia que a oxidao pois fornece apenas 1 NADH por cada carbono oxidado , no produzindo nenhuma acetil-CoA. S so -oxidados cidos graxos de 13 a 18 carbonos. Geralmente este processo no completo e gera cidos graxos de nmero mpar. A maioria dos cidos graxos possuem nmero par de carbonos. Entretanto os cidos graxos de nmero mpar quando -oxidados e formam uma molcula de propioil-CoA (3C). Os cidos graxos insaturados produzem um FADH2 a menos por cada dupla ligao, em relao ao cido graxo saturado de mesmo nmero de carbonos. A mega-oxidao uma via muito menos freqente realizada por hidroxilases envolvendo o citocromo P450 do retculo endoplasmtico das clulas animais, no sendo um processo formador de energia, pois gera metablitos excretados pela urina (cido adpico e subrico).
Balano energtico do metabolismo da acetil-CoA

Cada reao metablica de desidrogenao cujos transportadores de eltrons forem o NADH e o FADH2, correspondem a processos extremamente exergnicos e que favorecem a sntese de ATP na cadeia respiratria. Dentro deste quadro, o Ciclo de Krebs, que fornece 3 NADH e 1 FADH2 para a cadeia respiratria produz, indiretamente, 11 ATPs. Como gera, tambm, 1 ATP no nvel dos substratos (5a reao), h a formao de 12 ATPs por cada molcula de acetil-CoA que entra no ciclo (Tabela 9-3).
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Fundamentos de Bioqumica - Captulo 9: Fundamentos de Bioenergtica 112 Tabela 9-3 - Saldo energtico do ciclo de Krebs e Desta forma, um cido graxo de 20 cadeia respiratria a partir de um acetil-CoA. carbonos possui o balano energtico bruto de Ciclo de Krebs Cadeia ResTOTAL 165 ATPs, devendo-se descontar desse total a piratria energia correspondente a 2 ATPs gasta no 3 NADH x 3 ATPs 9 ATPs incio do processo (Tabela 9-5).Tabela 9-5 1 FADH2 x 2 ATPs 2 ATPs Balano energtico bruto da -oxidao de um cido 1 ATP (no nvel 1 ATP graxo saturado de 20C. dos substratos) 12 ATPs TOTAL ATPs cido graxo Ciclo Cadeia TOTAL de 20C de RespiComo cada molcula de glicose, Krebs ratria quando degradada na via glicoltica aerbica, No de molcufornece 2 acetil-CoA e NADH, alm de prolas de acetil10 12 120 duzir 4 ATPs no citoplasma (gastando 2 no CoA incio do processo - ver captulo 5: CarboidraNo de NADH 9 3 27 tos), pode-se concluir que o saldo energtico No de FADH2 9 2 18 165 total do metabolismo aerbico de uma molTOTAL
cula de glicose de 38 ATPs (Tabela 9-4). Este valor pode descer a 36 ATPs se considerarmos que o NADH citoplasmtico produzido na gliclise pode utilizar a lanadeira glicerol-3-Pi-desidrogenase, como visto anteriormente. Na -oxidao dos cidos graxos, h a produo de tantas acetil-CoA quantos forem o nmero de carbonos, alm de 1 FADH2 e 1NADH para cada vez que as enzimas mitocondriais agem sobre o cido graxo (o nmero de NADH e FADH2 sempre um a menos que o nmero total de acetil-CoA ver captulo 6: Lipdios).
Nos vegetais e algumas bactrias, a acetil-CoA pode ser metabolizada por uma via alternativa do Ciclo de Krebs chamada Via do glioxalato que consume 2 molculas de acetil-CoA formando uma molcula de succinato que convertido em fosfoenolpiruvato, que pode ser, finalmente, metabolizada pelas enzimas da gliclise. O ciclo do Glioxalato muito ativo nas sementes em germinao onde a acetilCoA fornecida na -oxidao dos cidos graxos so convertidos em molculas de glicose. Os animais no realizam este ciclo, pois no possuem as enzimas isocitrato-liase e malato-sintase que so fundamentais para esta via metablica.
Tabela 9-4 - Saldo energtico total (gliclise + Ciclo de Krebs + cadeia respiratria) do metabolismo aerbico da glicose. ATPs gerados na Quantidade total de ATP no nvel NADH FADH2 cadeia respiratria ATPs dos substratos Gliclise (1a. fase) -2 -2 Gliclise (2a. fase) +4 2 6 10 Oxidao de Piruvato 2 6 6 Ciclo de Krebs +2 6 2 22 24 +4 102 TOTAL 34 38
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Captulo 10 Metabolismo
ma das principais funes da bioqumica estudar o metabolismo celular, ou seja, a maneira como a clula sintetiza e degrada biomolculas dentro de um processo coordenado para garantir sua sobrevivncia com o mximo de economia energtica. O anabolismo (sntese das biomolculas) sempre um processo que necessita de energia para que ocorra. Isto tpico de situaes onde o estado energtico celular est com excesso de substratos para a sntese e, portanto, h bastante energia disponvel no meio celular. De maneira inversa, o catabolismo ir liberar energia quando as biomolculas forem degradadas. Isto acontecer sempre quando houver necessidade energtica e as molculas degradadas funcionaro como os substratos para a liberao de energia que o meio celular necessita. As leis da termodinmica esto intimamente relacionadas com este processo biolgico, pois os princpios universais de manuteno das massas e da energia durante as reaes bioqumicas so mantidos e garantem que a clula seja um perfeito tubo de ensaio para as reaes bioenergticas. Anabolismo e catabolismo correspondem a processos antagnicos, mas que ocorrem de maneira articulada permitindo a maximizao da energia disponvel dentro da clula. Dentro desse ponto de vista, cada molcula degradada libera energia para o meio que ser utilizada por alguma reao de sntese num acoplamento perfeito das reaes endergnicas e exergnicas. As biomolculas energticas so os carboidratos, lipdios e protenas que so obtidas em grandes quantidades durante a alimentao ou so mobilizadas das reservas orgnicas quando so ingeridas em quantidade insuficiente na alimentao ou quando o consumo energtico aumenta grandemente (p.ex.: durante a realizao de exerccios fsi-
cos). A forma final de absoro da energia contida nessas molculas se d na forma de ligaes de alta energia do ATP o qual sintetizado nas mitocndrias por processos oxidativos que utilizam diretamente o O2. Desta forma, essencial a presena de mitocndrias e de oxignio celular para o aproveitamento energtico completo das biomolculas. no h mitocndrias (p.ex.: Quando nas hemcias) ou quando a quantidade de O2 disponvel insuficiente (p.ex.: em clulas musculares submetidas a extremo esforo fsico), o metabolismo anaerbico ocorre. Entretanto, enquanto o metabolismo aerbico comum a todas as biomolculas energticas, o metabolismo anaerbico exclusividade dos carboidratos, onde o produto final lactato pode ser reciclado e gerar novas molculas de glicose (atravs da neoglicognese), num processo que necessita de mitocndrias. No s o lactato convertido em glicose por esta via, mas vrias outras molculas como aminocidos e o glicerol. Algumas vias metablicas so exclusivas de algumas biomolculas, como o caso da sntese de glicognio a partir de glicose e da sntese de uria no fgado, a partir do grupamento amino dos aminocidos. Alguns processos, entretanto so comuns a todas as biomolculas, como o caso da neoglicognese que utiliza como substrato o lactato proveniente do metabolismo da glicose, o glicerol proveniente dos cidos graxos e vrios aminocidos. Nas hemcias, em particular, uma via metablica no mitocondrial (a via da pentose-fosfato) produz grandes quantidades de NADPH que possui funo antioxidante e constitui importante rota metablica nesta clula, apesar de tambm ocorrer em tecidos onde a sntese biolgica alta (p.ex.: nos hepatcitos). O metabolismo dividido, didaticamente, em trs estgios distintos onde a produo de energia ser disponibilizada a partir
Fundamentos de Bioqumica Captulo 10 - Metabolismo
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de substratos especficos (Figura 10-1). Num primeiro estgio, as biomolculas grandes so degradadas em suas molculas constituintes em um processo que corresponde digesto, quando h alimentos disponveis. Dentro de um ponto de vista de necessidade energtica, esses substratos sero mobilizados das reservas biolgicas. Esta primeira fase promove a formao de 20 aminocidos a partir da degradao protica, cidos graxos e glicerol a partir dos triglicerdeos e glicose a partir do amido alimentar ou do glicognio muscular e heptico.
Numa segunda fase, essas molculas simples so degradadas em vias metablicas especficas onde o produto final principal a molcula de acetil-CoA que formada dentro das mitocndrias. As maneiras como a acetil-CoA formada so muito variadas. De uma forma geral, a gliclise forma piruvato a partir da glicose no citoplasma que convertido em acetil-CoA na mitocndria (ver captulo 9 sobre Bioenergtica).
Figura 10-1 As trs fases do metabolismo.
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Somente sete aminocidos geram direto acetil-CoA com os demais gerando intermedirios da neoglicognese. Os cidos graxos geram acetil-CoA atravs da betaoxidao, um processo intramitocondrial, mas que se inicia no citoplasma com a ativao dos cidos graxos. Esta segunda fase do metabolismo possui uma diversidade muito grande de vias metablicas prprias de cada biomolculas, porm o produto final comum, a acetil-CoA, faz com que seja necessrio perfeita integrao para o incio da prxima fase mitocondrial. A terceira e ltima fase do metabolismo ocorre somente em condies de aerobiose e no interior das mitocndrias. A acetilCoA a molcula que inicia esta fase com o ciclo de Krebs a etapa crucial onde a formao de citrato desencadeia o processo que levar a formao de alto potencial redutor verificado na formao de molculas de NADH e FADH2, alm de ATP formados na matriz mitocondrial. Associado a este ciclo, uma cadeia de transporte dos eltrons retirados dos substratos pelos NADH e FADH2, presente na crista da mitocndria, permite a sntese de ATP em grande escala a partir da oxidao do O2 proveniente da respirao que se combina com os H+ mitocondrial e os eltrons liberados, formando H2O. Este processo extremamente eficaz e a concentrao de acetil-CoA mitocondrial fundamental para o sucesso deste processo. Um excesso de acetil-CoA leva ao desvio da sntese de ATP e sntese de cidos graxos, colesterol e corpos cetnicos. Este desvio do metabolismo energtico muito comum e um a forma eficaz de impedir o excesso do metabolismo oxidativo mitocondrial com a superproduo de ATP. Apesar da sntese desses compostos ser citoplasmtica, o excesso de acetil-CoA mitocondrial que inicia esta sntese, em um processo ordenado e extremamente eficaz, tpico de quando h excesso de substratos energticos provenientes da alimentao ou da degradao dos cidos graxos provenientes dos adipcitos. Como vemos, so dois processos de origem diferente, mas fornecem excesso de acetil-CoA.
Muitas doenas metablicas instalamse netas vias, principalmente quando h excesso ou falta dos percussores metablicos o que torna fundamental a compreenso do funcionamento dessas vias metablicas para poder entender a gnese dessas doenas (p.ex.: diabetes mellitus, aterosclerose coronria, gota etc.). A seguir, sero detalhadas as principais vias metablicas envolvidas no metabolismo energtico celular, que, apesar de serem apresentadas isoladamente, devem ser estudadas de maneira integrada, pois ocorrem dentro de uma entidade dinmica e programada para sobreviver, a clula. No captulo 9 sobre bioenergtica, foram apresentados os principais processos energticos celulares comum a todas as clulas enquanto que neste captulo sero apresentados as vias metablicas prprias de cada biomolcula.
Metabolismo dos Carboidratos

Aps a absoro dos carboidratos nos intestinos, a veia porta heptica fornece ao fgado uma quantidade enorme de glicose que impossvel ser totalmente degradada no metabolismo energtico por extrapolar a capacidade de suporte calrico da hepatcito. J no fgado, o excesso de glicose tem vrios destinos metablicos, que sero os mesmos na maioria das clulas extrahepticas, porm possuem, sem dvida nenhuma, maior importncia para o hepatcito em virtude de receber o primeiro suprimento de glicose. As rotas metablicas da glicose, alm da produo de ATP, so: 1) sntese de glicognio; 2) sntese de pentoses e redutores citoplasmticos (NADPH); 3) sntese de cidos graxos (e em seguida triglicerdeos), que so enviados para os adipcitos atravs de lipoprotenas sintetizadas no fgado; 4) sntese de colesterol (que pode ser excretado na bile como sais biliares ou transportado para as clulas extrahepticas atravs das mesmas lipoprotenas que os triglicerdeos);
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5) sntese de corpos cetnicos (que possuem funo energtica para os tecidos extra-hepticos, principalmente os neurnios e msculos). O fgado a nica clula que pode liberar glicose da clula para o sangue, fato indispensvel para suprir as necessidades energticas de todas as clulas do organismo. Essa liberao s possvel graas enzima glicose-6fosfatase, que reverte a primeira reao da gliclise (a formao de glicose-6-fosfato, ver captulo 9). As demais clulas, por no possurem esta enzima, consomem integralmente a glicose baixando a glicemia, j que absorvem glicose do sangue mas no so capazes de libera-la para o meio extracelular. Alm dos hepatcitos, algumas clulas justaglomerulares (renais) possuem pequena atividade de glicose-6-fosfatase, mas no exercem papel significativo na manuteno da glicemia. Apesar da grande quantidade de glicose liberada para o sangue pelo hepatcito, as concentraes normais de glicose plasmtica (glicemia) no sofrem grande variao alm de 70 - 110 mg/dl, devido regulao hormonal pelos hormnios pancreticos insulina e glucagon. importantssima a manuteno dos nveis de glicemia dentro dessa faixa estreita, pois uma hiperglicemia contnua torna o sangue muito concentrado alterando os mecanismos osmticos de reabsoro de gua nos tbulos renais, induzindo a uma diurese excessiva que pode levar desidratao e uma srie de alteraes patolgicas especficas tpicas de uma doena metablica muito comum, a diabetes mellitus onde a falha no mecanismo de absoro celular leva a uma hiperglicemia crnica (ver captulo 15 sobre Diabetes Mellitus). A insulina e o glucagon no so os nicos hormnios que possuem ao regulatria sobre a glicemia plasmtica. Vrios outros hormnios (p.ex.: hormnios sexuais, glicocorticides, tireoidianos, GH etc.) tambm tm ao metablica, porm possuem uma funo energtica secundria, sendo produzidos a partir de estmulos outros que no a hiperglicemia ou hipoglicemia, como o caso da insulina e do glucagon. Outros hormnios
dois pancreticos, a somatostatina pancretica e a amilina, tambm so identificados como possuidores de funo reguladora da glicemia.
1.
Insulina
A insulina um polipeptdeo (PM = 5.700d) formado por duas cadeias de aminocidos (a cadeia A com 21 e a cadeia B com 31), unidas entre si por duas pontes dissulfeto de cistina e uma ponte dissulfeto interna na cadeia A (Figura 10-2). Promovendo a unio entre as duas cadeias, existe o peptdeo de ligao com 36 aminocidos (peptdeo C) que responsvel pelo alinhamento da molcula favorecendo a formao das pontes dissulfeto fundamentais pela estabilidade da molcula. As cadeias A e B da insulina, quando ligadas ao peptdeo C, no conjunto, so denominados de pr-insulina que possui baixa atividade metablica (cerca de 5 a 10% da atividade da insulina).
Figura 10-2 - A estrutura secundria da pr-insulina. Na forma de pr-hormnio, composto por trs cadeias polipeptdicas distintas (A, B e C) onde o peptdeo C o conector entre as demais cadeias e separado da molcula por hidrlise durante a secreo pancretica. (Adaptado de DEVLIN, 2000)
A insulina produzida nas clulas das ilhotas de Langerhans e armazenada em vesculas do Aparelho e Golgi. Quando a concentrao de glicose sangunea atinge nRicardo Vieira
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veis acima de 110 mg/dl, h um excesso do metabolismo oxidativo mitocondrial nas clulas beta o que determina a liberao de insulina para a circulao sangunea a partir de um mecanismo complexo (Figura 10-3). Sabe-se que esse excesso do metabolismo mitocondrial nas clulas beta devido a pouca atividade das vias de desvio do metabolismo energtico comuns nas demais clulas (sntese de glicognio, lipdios e corpos cetnicos) o que acarreta uma grande produo de ATP mitocondrial, fato que desencadeia a liberao de insulina para o sangue.
o da insulina para a corrente sangnea, ela liga-se a um receptor especfico nas membranas celulares das clulas alvo. O receptor para insulina uma glicoprotena com duas subunidades e (Figura 10-4). Aps a ligao da insulina com a subunidade , o complexo insulina-receptor estimula um sistema especfico envolvendo a fosforilao de tirosina na subunidade , o que ativa o sistema de segundo mensageiro responsvel pelas aes fisiolgicas celulares.
Figura 10-3 - A regulao da sntese e secreo de insulina est relacionada ao aumento da atividade oxidativa mitocondrial devido hiperglicemia, uma vez que as vias naturais de desvios do metabolismo energtico possuem baixa atividade nas clulas beta do pncreas. O ATP gerado abre abre canais de K+ que despolariza a membrana levando entrada de Ca++ que, juntamente com o Ca++ disponvel nas reservas intracelulares estimula a secreeo da insulina produzida no retculo endoplasmtico
Figura 10-4 - O receptor de insulina possui duas subunidades que fica no domnio extracelular e liga-s com a insulina. As duas subunidades situam-se na poro citoplasmtica e possuem atividade cataltica citoplasmtica. Para a entrada de glicose na clula, h a necessidade da integrao de um transportador de glicose (GLUT), especfico para cada tipo de tecido.
O estresse oxidativo indicado pelo aumento da produo de ATP pode levar a produo de produtos indesejados para a clula (p.ex.: radicais livre), que pode destruir a clulas beta. Uma vez na corrente sangnea, a insulina possui trs efeitos principais: 1) estimula as clulas a captar a glicose; 2) estimula os msculos e fgado a armazenar glicose na forma de glicognio; e 3) estimula a sntese de cidos graxos e aminocidos. A forma como a insulina exerce essas funes na clula depende da interao com receptores especficos que desencadeiam reaes intracelulares especficas. Aps a libera-
O GLUT4 est presente na maioria das clulas do organismo, o que torna a presena de insulina indispensvel para a entrada de glicose na clula. Entretanto, clulas importantes como as clulas beta-pancreticas, os entercitos, as hemcias, o hepatcito e os neurnios possuem outros tipos de GLUT que no dependem de insulina, o que significa que, para essas clulas, no necessitam da ativao inicial de um receptor para insulina para que a glicose penetre na clula. O GLUT4 modifica sua conformao espacial quando h a ligao da insulina com o receptor, permitindo a entrada de glicose na clula. Entretanto, esta entrada no contnua, devido a um processo de endocitose do GLUT4 que torna indisponvel a entrada de novas molculas de glicose at que haja a
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regenerao do GLUT4. Este processo regula a entrada de glicose na clula, possibilitando que todas as clulas tenham um aporte de glicose suficiente, no havendo um consumo exagerado por parte de nenhum tecido (Figura 10-5).
Tabela 10-1 - Transportadores de glicose (GLUT). Tipo Localizao Insulinodependente NO GLUT1 hemcias GLUT2 GLUT3 GLUT4 hepatcito clulas beta neurnios hemcias msculos adipcitos a maioria das clulas entercito retculo endoplasmtico dos hepatcitos NO NO
vinda da digesto independente da existncia de insulina plasmtica.
SIM NO NO
GLUT5 GLUT7
Figura 10-5 - A entrada de glicose na maioria das clulas mediada pela interao da insulina, seu receptor e o GLUT4. A) o GLUT4 permanece em vesculas citoplasmticas enquanto a insulina no se liga ao receptor. B) a interao insulina/receptor promove a exocitose do GLUT4 e sua ligao com a glicose extracelular. C) a retirada de insulina induz a endocitose do complexo GLUT4/glicose.
A insulina s liberada pelo pncreas quando h hiperglicemia, o que faz com que as clulas tenham uma quantidade garantida de glicose suficiente para o metabolismo energtico. Para a entrada de glicose nas clulas, h a necessidade de um transportador de glicose (GLUT, do ingls Glucose Transporter) que est acoplado ao receptor de insulina e modifica sua conformao espacial permitindo a entrada de glicose na clula. H vrios tipos de GLUT denominados GLUT1, 2, 3, 4, 5 e 7, sendo que somente o GLUT4 so insulinodependentes (Tabela 10-1). Os demais tipos de GLUT permitem a entrada de glicose na clula independente da existncia de receptor para insulina. As clulas que alm do GLUT4 possuem os demais tipos de GLUT, entretanto, no dependem da hiperglicemia para que absorvam glicose uma vez que esses transportadores no dependem da insulina. o caso do entercito que possui o GLUT5 e consegue absorver ativamente a glicose liberada na digesto e transport-la para a veia porta heptica. Os hepatcitos, que alm do GLUT4 possui os GLUT 2 e 7, absorvem toda a glicose
As hemcias possuem os GLUT1 e 3, o que permite a absoro direta de glicose. Os neurnios tambm so insulino-independentes uma vez que possuem no GLUT3 um importante transportador de glicose. As prprias clulas beta-pancreticas possuem o GLUT2 como transportador de glicose o que as torna independente da insulina, fato que crucial para que esta clula absorva glicose e possa liberar a insulina que ser utilizada nas demais clulas.
2.
Glucagon
um polipeptdio formado por uma cadeia nica de 29 aminocidos (PM = 3.500d), sintetizado pelas clulas alfa das ilhotas pancreticas (Figura 10-6). Um peptdeo similar produzido pelas clulas do trato gastrointestinal (principalmente pelo estmago), o que pode interferir nas dosagens deste hormnio. O principal estmulo para sua secreo a hipoglicemia e o aumento de cidos graxos e aminocidos livres no plasma (especialmente a alanina). O glucagon possui aes contrrias s da insulina, principalmente no que diz respeito ao armazenamento energtico, promovendo a degradao das reservas energticas, aumentando a glicogenlise e a mobilizao dos
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cidos graxos dos adipcitos. um potente estimulador da neoglicognese.
3.
Somatostatina
A somatostatina pancretica produzida pelas clulas delta das ilhotas, possuindo forte ao parcrina (em clulas adjacentes), inibindo a secreo de insulina e glucagon. Apresenta-se sob duas formas: uma cadeia peptdica nica de 14 aminocidos e outra com o dobro, possuindo vida mdia de cerca de 2 minutos (Figura 10-7). A somatostatina atua, ainda, inibindo a secreo dos hormnios gastro-intestinais gastrina e secretina, diminui a motilidade gastro-intestinal, da vescula biliar e do pncreas excrino.
em pessoas normais, age como um regulador da glicemia. Sua secreo estimulada pela hiperglicemia (de maneira idntica insulina), desconhecendo-se, porm, o significado fisiolgico de tais aes, supondo-se tratar de um resqucio evolucionrio. Existem evidncias que a deposio de amilina nas clulas beta pancreticas leva a sua destruio progressiva, estando este fato associado a gnese da diabetes mellitus (ver captulo 15 sobre Diabetes Mellitus).
Figura 10-6 - Estrutura secundria do glucagon.
Figura 10-8 - Estrutura secundria da amilina.
5.
Sntese do glicognio
Figura 10-7 - Estrutura secundria da somatostatina pancretica de 14 aminocidos.
4.
Amilina
Este polipeptdeo pancretico foi identificado em clulas beta das ilhotas, possuindo 37 aminocidos (Figura 10-8). Entre as funes observadas, destaca-se a estimulao do secreo do suco gstrico e pancretico, diminuindo, entretanto, a motilidade intestinal e da vescula biliar, diminuindo o metabolismo absortivo ps-prandial e, conseqentemente, atrasando a absoro de carboidratos o que,
Ocorre, principalmente no fgado e nos msculos, apesar de a maioria das clulas possurem as enzimas necessrias para esta sntese. Os msculos, em razo de sua grande massa, apresentam cerca de 4 vezes mais glicognio do que o fgado (Tabela 10-2). O glicognio uma fonte imediata de glicose para as clulas (principalmente os msculos) quando h a diminuio da glicose sangnea. A sntese de glicognio ocorre sempre em condies de excesso de glicose e corresponde a importante rota de desvio do metabolismo energtico. Como toda reao anablica, extremamente endergnica e produz uma macromolcula solvel que se deposita em grnulos solveis no citoplasma. Esta propriedade do glicognio torna o excesso de sua sntese um perigo para a cluRicardo Vieira
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la, j que por ser solvel e depositar-se no citoplasma, leva ao aumento da concentrao do citoplasma, tornando-o muito viscoso e diminuindo a atividade enzimtica celular, o que pode levar, inclusive, morte celular. Por isso, fundamental que a clula possua um mecanismo de regulao da sntese de glicognio bem coordenado para impedir os efeitos nocivos de um acmulo de glicognio. A sntese de glicognio estimulada pela insulina, o que permite a rpida retirada de glicose plasmtica e seu depsito quase que imediato como glicognio. obvio que a glicose que penetra na clula ter que seguir outras vias metablicas, alm da sntese de glicognio, uma vez que no possumos um rgo especializado para esse armazenamento, como o caso dos vegetais que armazenam o amido nas razes e sementes.
Tabela 10-2: Armazenamento de carboidratos em adultos normais (peso mdio de 70 kg). Carboidrato Peso Relativo Massa Total Glicognio 4,0% 72g (1) Heptico Glicognio 0,7% 245g (2) Muscular Glicose extrace0,1% 10g (3) lular 4,8% 327g TOTAL (1) Peso do fgado: 1.800g; (2) Massa muscular: 35kg: (3) Volume total: 10 litros. (Adaptado de MURRAY et al., 2000, p.181).
Como visto anteriormente, a primeira reao do processo glicoltico a formao de glicose-6-fosfato a partir da fosforilao da glicose. A sntese de glicognio se inicia pela ao da enzima fosfoglicomutase que forma glicose-1-fosfato a partir da glicose-6-fosfato. Esta enzima ativada pela insulina e a glicose-1-fosfato no pode seguir para as vias glicolticas, o que faz desta via um importante desvio do metabolismo energtico e freqente, portanto, quando h um excesso de glicose como substrato energtico. A partir da, h a incorporao de uma molcula de uridina-tri-fosfato (UTP) que proporciona a ligao entre o C1 de uma molcula com o C4 de outra (reao catalisada pela enzima glicognio sintase), formando uma maltose inicial que logo ser acrescida de
outras, formando um polmero (1 4). A unio inicial da molcula de UDP com a glicose-1-fosfato forma a UDP-glicose (uridinadifosfato-glicose) pela retirada do Pi do C1 da glicose-1-fosfato e do UTP. Uma primeira molcula de UDPglicose captada por uma protena denominada glicogenina que se liga covalentemente glicose e libera o UDP. Esta unio glicoseglicogenina indispensvel para a ao da enzima glicognio sintase que promove a adio de pelo menos mais sete molculas de glicose, em ligaes (1 4) sempre liberando o UDP. A partir da, h o crescimento da cadeia at cerca de 15 molculas de glicose, a partir do qual, a enzima ramificadora (amido-1 4,1 6-transglucosidase) promove a retirada de uma fragmento contendo cerca de 7 molculas de glicose e o adiciona molcula em uma cadeia paralela na oitava molcula de glicose em ligaes do tipo (1 6). A glicognio sintase volta a atuar acrescentando mais um fragmento de cerca de 15 molculas de glicose para uma nova retirada de um fragmento de 7 molculas pela enzima ramificadora. Desta forma, estas duas enzimas trabalham coordenadamente possibilitando a formao de uma molcula de amido extremamente ramificada, o que garante sua alta solubilidade devido a estrutura tridimensional. A molcula de glicogenina permanece ligada covalentemente molcula de glicognio durante todo o processo. O glicognio fica disponvel no fgado e msculos, sendo consumido totalmente dentro de um intervalo que varia de 12 a 24 horas aps a ltima refeio, dependendo das necessidades energticas. A enzima glicognio sintase regulada por vrios mecanismos, sendo que a ativao pela glicose-6-fosfato um dos mecanismos mais eficazes. Esta enzima existe em duas formas diferentes: forma inativa D (Dependente de glicose-6-fosfato, no fosforilada) e forma ativa I (Independente de glicose6-fosfato, fosforilada). A forma inativa ativada por fosforilao, em mecanismos envolvendo os segundos mensageiros AMPc, Ca++ e diacilgligerol, estimulados por vrios horRicardo Vieira
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mnios. Um aumento da concentrao de glicose-6-fosfato na clula leva a uma aumento da forma D ativa da glicognio sintase, o que estimula a sntese de glicognio. Para que haja uma grande quantidade de glicose-6-fosfato preciso um alto grau de fosforilao mediado pela grande quantidade de glicose intracelular. A fosforilao um fato celular importante para a ativao de vrias vias metablicas, alm desta, e revela um estado de alta atividade metablica e, portanto, uma situao de excesso de substratos energticos. Um alto estgio de fosforilao pode ser obtido pela ao de hormnios, conforme discutido no captulo 9 sobre bioenergtica. Um grupo especial de enzimas denominadas fosfoprotenas fosfatases so identificadas como enzimas reguladoras da sntese de glicognio e atuam inativando a atividade a glicognio sintase. Naturalmente, as fosfoprotenas fosfatases ligam-se ao glicognio e promovem a inativao da glicognio sintase retirando seu fosfato e incorporando sua molcula. Esta ligao das fosfoprotenas fosfatases com o glicognio no permite a sntese de mais glicognio e ocorre quando alguns hormnios, como o glucagon, promovem sua fosforilao. Note que, neste estado metablico, a fosforilao das fosfoprotenas fosfatases oposta a defosforilao da glicognio sintase, logo promove sua inativao. Entretanto, quando h hiperglicemia, uma grande quantidade de glicose est disponvel para o metabolismo celular e h o aumento da quantidade de insulina plasmtica. A fosfoprotena fosfatase ligada ao glicognio fosforilada por protenas ativadas pela insulina, o que leva a retirada da fosfoprotenas fosfatase da molcula de glicognio. Esta retirada permite que a glicognio sintase permanea fosforilada e, portanto, ativa induzindo a sntesede glicognio. Nas Figura 10-9 e 10-10 esto resumidos os principais passos na regulao da sntese de glicognio.
mobilizado a partir de uma seqncia de reaes que no so o inverso da sua sntese, por uma via metablica complexa que se inicia a partir de estmulos hormonais reflexos hipoglicemia (glucagon) ou estmulos externos (adrenalina, glicocorticides). Esses estmulos possuem como segundo mensageiro o AMP cclico (AMPc), que formado a partir do ATP sob ao da enzima adenilato-ciclase. O AMPc converte a enzima fosforilase-quinase-b (inativa) em fosforilasequinase-a (ativa), que por sua vez retira uma molcula de glicose do glicognio, na forma de glicose-1-fosfato, liberando-a para o metabolismo em uma reao que utiliza a mesma enzima que inicia a sntese de glicognio, a fosfoglicomutase, formando glicose-6-fosfato.
Figura 10-9 A sntese do glicognio. 1) a enzima fosfoglicomutase converte glicose-6-fosfato em glicose-1-fosfato; 2) a formao de UDP-glicose inicia a sntese de glicognio; 3) a enzima glicognio sintase torna-se ativa por estmulo da insulina iniciando a extenso da cadeia de glicognio a partir da ligao covalente de uma molcula de glicose com a protena glicogenina; 4) a molcula de glicognio cresce at cerca de 15 fragmentos de glicose em ligaes do tipo (1 4); 5) a enzima ramificadora promove a quebra de um fragmento com cerca de 7 molculas de glicose e a acrescenta em uma cadeia paralela em ligaes do tipo (1 6); 6) a molcula final de glicognio contm cerca de 40.000 molculas de glicose .
6.
Glicogenlise
Quando h a necessidade de glicose para o metabolismo energtico, o glicognio
A ativao desta enzima, que tem como co-fator a vitamina B6, gera glicose-1fosfato atravs da quebra das ligaes (1 4). As ligaes (1 6) dos pontos de
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ramificao so quebradas pela enzima de desramificao, denominada (1 6)(1 4) glicanotransferase. No fgado, a existncia da enzima glicose-6-fosfatase permite a converso da glicose-6-fosfato em glicose livre que sai para o sangue e eleva a glicemia. Nas demais clulas, principalmente nos msculos, a glicose-6fosfato no pode ser convertida em glicose livre e, portanto, segue para o metabolismo energtico. O aumento da glicemia faz com que cesse os estmulos do glucagon inibindo a glicogenlise. O AMPc que produzido pela ao do glucagon, epinefrina e cortisol (estimulantes da glicogenlise) degradado pela enzima fosfodiesterase. A insulina aumenta a atividade desta enzima, levando, portanto, ao bloqueio da glicogenlise. A seqncia de reaes da glicogenlise, mediada pela inibio da glicognio sintase e ativao da glicognio fosforilase encontra-se resumida nas figuras 10-11.
[A]
[B]
Figura 10-10 A ativao da glicognio sintase. 1) a insulina liga-se ao receptor inativo; 2) a ativao do receptor de insulina promove 3) a fosforilao de protenas sinalizadoras que promovem a ativao de protenas cinases que funcionam como fatores de crescimento e 4) protenas fosfatases que atuam no metabolismo ativando a glicognio sintase que, por sua vez induz 5) a sntese do glicognio.
Figura 10-11 Esquema geral da glicogenlise no jejum [A] e no exerccio fsico [B]. Ver o texto para detalhes.
Na figura 10-11 [A] representa a regulao da glicogenlise no jejum onde o glucagon conecta-se ao seu receptor e 2) ativa a protena G que, por sua vez, 3) ativa a adenilato ciclase que possui funo de converter ATP em AMPc que, na seqncia, 4) liga-se a forma inativa da protena cinase A 5) ativando-a e, por fosforilao, 6) inativa a glicognio sintase e, finalmente, 7) pra a sntese de glicognio. A forma inativa da fosforilase cinase A pode 8) por fosforilao induzida pela msma forma ativa da protena cinase A
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ser ativada 9) e degradar o glicognio formando 10) a glicose-1-fosfato que 11) pela ao da fosfoglicomutase gera glicose-6fosfato que retorna ao sangue como glicose 12) pela ao da glicose-6-fosfatase heptica. A Figura 10-11 B representa o mesmo mecanismo mediado pela epinefrina onde 1) a ligao com os receptores alfa ativa a enzima fosfolipase C que leva a formao dos segundo mensageiros 3) di-acil-glicerol (DAG) e inosina-3-fosfato (IP3). O DAG possui mecanimso idntico de inibio da glicognio sintase mediado pelo glucagon. O IP3, aps 4) abrir canais de clcio (da mesma forma que impulsos nervosos), promove 5) a ativao da calmodulina e a ativao da fosforilase cinase da mesma forma que o glucagon.
A neoglicognese corresponde, portanto, no contorno dessas trs reaes em vias especficas da neoglicognese, descritas a seguir e a pesentadas de maneira esquemtica na Figura 10-12. 1. Converso de piruvato em fosfoenol-piruvato: ocorre em uma seqncia de reaes citoplasmticas e mitocondriais. O piruvato citoplasmtico convertido a oxalacetato na mitocndria, que reduzido pelo NADH em malato e liberado para o citoplasma. No citoplasma, o malato oxidado a malato pelo NAD+ gerando, novamente, o oxalacetato que convertido em fosfoenolpiruvato pela fosfoenol-piruvatocarboxiquinase, cujo doador de Pi GTP. Na carncia de NAD+ citoplasmtico (tpico da glicose anaerbica) o oxalacetato mitocondrial convertido diretamente a fosfoenol-piruvato pela ao da enzima fosfoenol-piruvato-carboxiquinase mitocondrial. 2. Converso de frutose-1,6-bi-fosfato em frutose-6-fosfato: catalisada pela enzima frutose-1,6-bifosfatase que promove a retirada do Pi do C1 por hidrlise. 3. Converso de glicose-6-P em glicose livre: ocorre no fgado, pois somente no RE dos hepatcitos encontra-se a enzima glicose6-fosfatase. Esta reao comum tambm a glicogenlise e permite que o fgado regule a concentrao de glicose plasmtica. Atravs dessas trs reaes, todos os intermedirios do ciclo de Krebs que so produzidos pelo catabolismo dos aminocidos (citrato, isocitrato, -cetoglutarato, succinato, fumarato e malato), assim como os que fornecem piruvato, podem produzir oxalacetato e fornecer glicose atravs da gliconeognese. O oxalacetato no consegue sair da mitocndria, mas o malato sim. Desta forma, o acmulo de oxalacetato leva a reverso para malato e a sada para o citoplasma onde ocorrem as demais reaes da neoglicognese.
7.
Neoglicognese
Quando h uma queda na concentrao de glicose plasmtica so ativadas rotas metablicas que proporciona uma liberao de glicose para o plasma e o retorno dos nveis normais de glicemia. A glicogenlise heptica um processo muito eficaz, entretanto as reservas logo so exauridas e o fgado lana mo de uma nova via de sntese de glicose que utiliza substratos no glicdicos. Esta nova via metablica heptica, a neoglicognese ou gliconeognese, fornece glicose para o plasma. Porm quando ocorre em tecidos extra-hepticos, principalmente no msculo, a glicose formada utilizada somente no metabolismo energtico devido a ausncia da enzima glicose-6-fosfatase, exclusiva do hepatcito. Esta sntese de novas molculas de glicose ocorre a partir de precursores mais simples como o glicerol, lactato, piruvato e aminocidos glicognicos. No um processo reverso da gliclise, porm utiliza os substratos comuns da via glicoltica para produzir glicose. A razo de a neoglicognese no poder utilizar a via reversa da gliclise, que as fosforilaes da primeira fase (converso de glicose em glicose-6-fosfato e a converso de frutose-1,6-fosfato em frutose-1,6-bi-fosfato) e a formao de piruvato a partir do fosfoenol-piruvato, so reaes irreversveis.
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Figura 10-11 - A neoglicognese um processo mitocondrial e citoplasmtico que ocorre como a reverso da gliclise onde as reaes irreversveis so substitudas por reaes especficas da neoglicognese, estimuladas pelo glucagon, epinefrina e cortisol.
As reaes enzimticas da neoglicognese so estimuladas pelo glucagon, epinefrina e cortisol e imprescindvel que no haja acetil-CoA disponvel na mitocndria para que o oxalacetato formado no seja convertido em citrato e inicie o ciclo de Krebs. A ausncia de acetil-CoA compatvel com o momento metablico da clula onde h uma queda na degradao de glicose. O glucagon um potente estimulador dessa via uma vez que liberado pelo pncreas aps a hipoglicemia. A neoglicognese estimulada pelo cortisol e epinefrina corresponde a uma ao metablica derivada no a um estmulo hipoglicmico mas por uma necessidade metablica derivada a um estresse energtico. Os aminocidos so importantes fornecedores de substratos da neoglicognese, porm aqueles que fornecem acetil-CoA diretamente (cetognicos) no fornecem substratos para esta via metablica e sim estimulam a produo de energia para o ciclo de Krebs.
Os aminocidos glicognicos permitem a formao de glicose que ser utilizada como energia por todas as clulas pela neoglicognese heptica, evitando os efeitos da hipoglicemia. Os cidos graxos no fornecem substratos para a neoglicognese devido ao fato que a acetil-CoA utilizada direta para a produo de energia ou deslocada para o citoplasma para a produo de colesterol ou corpos cetnicos. Entretanto, quando os triglicerdeos so degradados, h a liberao de glicerol que pode ser utilizado como substrato para a neoglicognese, porm convm lembrar que neste estado metablico (de consumo de cidos graxos) a grande quantidade de acetil-CoA no permite um acmulo de oxalacetato devido a grande quantidade de acetilCoA que estimula o Ciclo de Krebs.
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8.
Via das pentoses ou via do fosfogliconato
Esta rota metablica (Figura 10-12) produz NADPH e ribose-5-fosfato a partir da desidrogenao da glicose-6-fosfato pela enzima glicose-6-fosfato-desidrogenase (G6PD) formando a 6-fosfo-glicoconolactona que convertido em 6-fosfogliconato pela ao da lactonase. Este composto convertido a ribulose-5-fosfato pela retirada de CO2 e por desidrogenao pelo NAD+, catalisada pela enzima 6-fosfogliconatodesidrogenase. A ribulose-5-fosfato formada isomerisada a ribose-5-fosfato pela enzima fosfopentose-isomerase e utilizada na sntese de cidos nuclicos. A formao da pentose, entretanto, no o principal produto desta via, mas sim a formao de NADPH em tecidos que necessitam de seu poder redutor em reaes biolgicas (p.ex.: sntese de cidos graxos, reduo do ferro nas hemcias). As hemcias realizam este desvio metablico de maneira exclusiva (no realiza a sntese de glicognio, colesterol nem corpos cetnicos). A G6PD est associada ao GLUT1 o que estimula a via das pentoses em grande escala permitindo que o NADPH formado mantenha a enzima glutationa redutase ativa e, em conseqncia, o ferro do grupamento heme reduzido. Este fato permite que a hemoglobina transporte o oxignio de maneira reversvel onde o ferro liga-se ao O2 por atrao eletrosttica e no por ligao covalente, que aconteceria na ausncia da glutationaredutase. Mutaes no gene da G6PD favorecem a destruio da capacidade da hemoglobina em transportar o oxignio de maneira reversvel e a destruio da hemcia precocemente levando a anemias hemolticas graves. Em casos de extrema carncia energtica, a ribose formada pode ser requisitada pelo metabolismo celular. Neste caso, a ribose-5-fosfato regenera a glicose-6-fosfato por uma via diferente de sua sntese (no gastando os NADPH produzidos) sob a ao seqencial de enzimas denominadas transaldolases e
transcetolases que proporcionam a formao de trioses, tetroses e heptoses intermedirias. Esses carboidratos se combinam entre si, atravs da ao dessas enzimas, e geram a glicose de vrias maneiras diferentes, sempre reordenando os carbonos disponveis nas reaes. Duas riboses (5C) formam uma heptose (7C) e uma triose (3C). Esses carboidratos formam a glicose (6C) e uma tetrose (4C). A tetrose (4C) liga-se com outra pentose (5C) gerando uma outra glicose (6C) e uma triose (3C). Esta triose liga-se a outra triose formando uma terceira glicose.
9.
Metabolismo de outros carboidratos
A frutose convertida em frutose-6fosfato pela hexocinase no fgado, e a enzima frutoquinase promove a formao de frutose1-fosfato que quebrada em gliceraldedo e di-OH-cetona-fosfato pela enzima frutose-1fosfato aldolase. Esses compostos so comuns a via glicoltica e prosseguem o metabolismo energtico normal.A galactose convertida em galactose-1-fosfato pela enzima galactoquinase. A enzima UDP-glicose-galactose1-P-uridiltransferase a responsvel pela converso da galactose-1-fosfato em glicose6-fosfato e a continuidade do metabolismo celular. A deficincia dessas enzimas proporciona o acmulo de galactose plasmtica (galactosemia) que pode acarretar em danos neurolgicos graves. A manose convertida em manose-6fosfato pela hexocinase que isomerizada pela enzima fosfomanose isomerase formando a frutose-6-fosfato que prossegue no metabolismo glicoltico. A sacarose sintetizada nos vegetais a partir da UDP-glicose sendo a frutose-6fostato unida UDP-glicose pela ao da enzima sacarose-6-fosfato-sintase, formando a sacarose-6-fosfato que tem seu Pi removido pela enzima sacarose-6-fosfatase disponibilizando a sacarose no citoplasma dos vegetais. Nos animais, entretanto, h a ao da a enzima sacarase intestinal liberando glicose e frutose para a captao heptica, no havendo sacarose disponvel para o metabolismo celular.
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Figura 10-12- Na via das pentoses para cada seis molculas de glicose degradas, uma convertida, novamente, a glicose-6-fosfato o eu gera um ciclo sem fim. As cinco molculas restantes so convertidas em ribose-5-fostato que requisitada para a sntese de nucleotdeos. Nas hemcias, no entanto, no h a formao de riboses e, portanto, a via das pentoses passa a ter no NADPH formado o produto principal, j que ele utilizado no processo de manutenol da hemoglobina no estado reduzido, o que possibilita a ligao reversvel com o oxignio. A deficincia gentica da G6PD leva a formao de uma hemcia frgil pelo depsito de metahemoglobina (hemoglobina oxidada irreversivelmente) que sofre hemlise mais rapidamente que uma hemcia normal.
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A lactose sintetizada na glndula mamria de maneira similar ao glicognio, ou seja, h a ligao da galactose da UDPgalactose com a glicose, e a respectiva liberao de UDP, a partir da ao da enzima lactose sintase. Entretanto, esta enzima em outros tecidos promove a ligao da galactose com a N-acetil-glicosamina formando a poro carboidrato das glicoprotenas, sendo denominada nesses tecidos de galactosil transferase. A diferena da atividade dessas enzimas a presena de protena -lactoalbumina na galactosil-transferase, que sintetizada a partir do estmulo hormonal da prolactina. A lactose alimentar degrada em glicose e galactose no intestino sob a ao da enzima intestinal lactase. Na maioria dos animais ocorre a sntese de cido ascrbico a partir da UDP-glicose que desidrogenada em UDP-glicuronato atravs da enzima UDP-glicosedesidrogenase. O UDP-glicuronato importante grupamento da detoxificao heptica existindo em todos os animais. Na seqncia de reaes que levam a sntese de cido ascrbico, o UDP-glicuronato convertido em gulonato pela enzima glicuronato-redutase (NAPH dependente) que convertido em gulonolactona pela aldonolactonase. A sntese de cido ascrbico d-se pela converso da gulonolactona pela ao da enzima gulono-oxidase, o que no ocorre em alguns poucos animais (alguns primatas, inclusive o homem, pssaros peixes e roedores).
Metabolismo dos lipdios

Os lipdios possuem caractersticas especiais no que diz respeito ao seu metabolismo em virtude ao processo absoro intestinal diferenciada que favorece a sua captao pelo sistema linftico o que faz com que no seja captado pelo fgado, logo aps a digesto (ver captulo 2 sobre Alimentos). O duto linftico abdominal, que capta os lipdios da alimentao, transfere os lipdios para o duto linftico torcico que se conecta com o sistema circulatrio na altura do encontro das vei-
as subclvia e jugular que se conectam com a veia cava e o corao. Os lipdios da dieta so, portanto, absorvidos no sistema circulatrio sem passar pelo fgado o que permite que os triglicerdeos sejam captados pelos adipcitos (ou pelos msculos, caso haja necessidade energtica) antes de serem submetidos ao poderoso metabolismo heptico, como acontece com os demais nutrientes. A razo desta absoro diferenciada est nas propriedades lipossolveis dos lipdios, o que faz toda a diferena no estudo do metabolismo lipdico. Uma vez que os triglicerdeos so primeiramente captados nos tecidos, resta somente o colesterol e os demais lipdios da dieta (sem funo energtica) a serem metabolizados pelo hepatcito quando o sangue retorna ao corao e, obrigatoriamente, tem que passar pelo fgado. O colesterol diettico que chega para o metabolismo heptico adicionado ao colesterol e triglicerdeos produzidos endogenamente como resultado dos desvios metablicos resultantes de um excesso de acetil-CoA, principalmente originrio de uma hiperglicemia. O colesterol pode ser degradado at sais biliares e so excretados pela bile (Figura 10-12). Entretanto existe uma efetiva reabsoro dos sais biliares (at 99,5%) para o fgado aps a digesto o que torna a necessidade de colesterol para sua sntese bem pequena. Desta forma os triglicerdeos e o colesterol, sintetizados no fgado, devem ser encaminhados para os tecidos extra-hepticos para serem metabolizados. O transporte dos lipdios na linfa e no sangue feito por lipoprotenas que possuem funo importantssima na gnese de doenas relacionadas aos lipdios, as dislipidemias.
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Figura 10-12 - Sntese dos cidos biliares. A partir do colesterol h a sntese dos cidos biliares primrios no fgado que so excretados na bile. Uma vez no duodeno, sofrem a ao de bactrias intestinais produzindo os cidos biliares primrios. Devido ao pH alcalino da bile e do contedo duodenal, os cidos biliares apresentam-se na forma de sais biliares.
1.
Metabolismo das lipoprotenas
Lipoprotenas so protenas sintetizadas na mucosa intestinal e no fgado durante o processo metablico dos lipdios, sendo a estrutura bsica mostrada nas Figura 10-13 e 10-14. As protenas das lipoprotenas So denominadas de apoprotenas e possuem a funo de solubilizar os lipdios e possibilitar o seu transporte plasmtico, alm de corresponder a elementos identificadores de cada tipo de lipoprotena. As apoprotenas podem ser integrais que penetram na matriz lipdica (apo A e apoB) ou perifricas que so superficiais molcula (apoC, apoD e apoE). De uma maneira geral, a relao entre as apoprotenas com os lipdios semelhante s membranas celulares que so, tambm, lipoproticas.
Os lipdios da alimentao so transportados pelos quilomcrons e os provenientes da sntese heptica so transportados pelas demais lipoprotenas. A diferena bsica entre cada lipoprotena diz respeito quantidade de lipdios e protenas na molcula, aumentando a densidade quanto maior a quantidade de protenas presente em sua composio. Desta forma existem lipoprotenas de baixa densidade (LDL = low density lipoprotein), muito baixa densidade (VLDL = very low density lipoprotein) e de alta densidade (HDL = high density lipoprotein). Os quilomcrons (do latim quilo = gordura e micro = pequena) so as de menor densidade enquanto que as de maior densidade so as albuminas ligadas aos cidos graxos. Nas Tabelas 10-3 e 10-4 podem ser observadas as composies relativas de lipdios e protenas transportadas pelas lipoproteRicardo Vieira
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nas plasmticas, assim como suas principais funes. Os quilomcrons so as primeiras lipoprotenas do metabolismo lipdico. So sintetizadas na mucosa intestinal transportando os lipdios oriundos da dieta, principalmente os triglicerdeos devido a grande quantidade existente na alimentao. So captados primeiro pelo duto linftico e depois pela circulao sangunea indo, primeiro aos tecidos e somente depois para o fgado.
Nos adipcitos, os quilomcrons deixam grande quantidade de seu contedo de triglicerdeos, convertendo-se em quilomcrons remanescentes que so absorvidos pelos hepatcitos para a degradao do colesterol restante. O colesterol excretado na bile como cido biliar ou como colesterol livre at a saturao do sistema enzimtico de sntese de cidos biliares, levando a necessidade da exportao do colesterol em excesso para os tecidos extra-hepticos.
Tabela 10-3 - Composio lipoprotica relativa das lipoprotenas plasmticas. Lipoprotena Quilomcrons VLDL IDL LDL HDL2 HDL3 Alb-FFA (*) Densidade Protenas (%) Lipdios (%) TG FL Col (ster) 3 15 34 48 31 29 0 Col (livre) 1 8 9 10 10 6 0 FFA
1-2 98-99 88 8 0,95 0,95 - 1,006 7-10 90-93 56 20 1 1,006 - 1,019 11 89 29 26 1 10,10 - 1,063 21 79 13 28 1 1,063 - 1,125 33 67 16 43 1,125 - 1,210 47 43 13 46 6 99 1 0 0 100 1,210 TG = triglicerdeos Col = colesterol FL = fosfolipdio FFA = free fat acid (cidos graxos livres) VLDL = very low density lipoprotein IDL = intermediate density lipoprotein LDL = low density lipoprotein HDL = high density lipoprotein ( ) * Alb-FFA = albumina ligada a cidos graxos livres. Forma de transporte dos FFA aps a mobilizao dos adipcitos. (Adaptado de MURRAY et al., 2000, p. 269) Tabela 10-4 - Principais lipoprotenas plasmticas e suas apoprotenas. Lipoprotena Funes Quilomcron Quilomcron remanescente VLDL VLDL remanescente ou IDL LDL HDL Transportar os triglicerdeos da dieta e apresent-los, aos adipcitos e tecidos perifricos cuja captao mediada pela enzima lipase-lipoprotena, ativada pela apo-C2. Apresentar os triglicerdeos e o colesterol remanescentes para a degradao heptica, mediada por endocitose mediada pelo receptor heptico que reconhece a apo-B48 e apo-E Transportar os triglicerdeos endgeno para os depsitos no tecido adiposo, com captao e hidrlise mediada pela enzima lipase-lipoprotena Endocitose mediada por receptor heptico e converso a LDL atravs remoo de apo-C2 e apo-E pela HDL plasmtica
Apoprotenas A1, A2, A4, B48, C1, C2, C3, E B48, E B100, C1, C2, C3, E, B100, E
Transportar o colesterol endgeno para a degradao heptica B100 e de outros tecidos atravs de endocitose mediada por receptores para apo-B100. Retirada do colesterol livre da corrente sangnea esterefican- A1, A2, A4, C1, C2, C3, do-o e transferindo-os VLDL remanescente. Retirada do D, E LDL da parede dos vasos. (Adaptado de MURRAY et al., 2000, p. 269)
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ficao e captao pelo hepatcito para o processo de degradao. A apoE tambm tem esta funo e tambm adicionada molcula do quilomcrons pelo contato com a HDL da mesma forma que a apoC2. Outras apoprotenas esto presentes na composio dos quilomicrons com a funo de torna-lo solvel (ver tabela 10-4). No fgado, h a sntese constante de colesterol e triglicerdeos a partir do excesso de acetil-CoA produzida durante o metabolismo energtico. Esses lipdios endgenos Figura 10-13 - Representao esquemtica de uma so transportados pela lipoprotena VLDL lipoprotena. As apoprotenas integrais (apo A e apo B) esto inseridas firmemente na matriz lipdica, enquanto que possui a apoB100 como principal apoproque as protenas perifricas (apo C, apo D e apoE) litena. gam-se por foras fracas aos lipdios da periferia da Aps ser liberada para a corrente sanmolcula. Observe a semelhana com a estrutura lipognea, a HDL transfere a apoC2 e apoE para protica da membrana celular. a molcula de VLDL, da mesma maneira como faz com os quilomcrons. Desta forma, a VLDL pode ser reconhecida pelos adipcitos e ter o seu contedo de triglicerdeos retirado para o armazenamento no tecido adiposo. Aps a retirada dos triglicerdeos, a VLDL torna-se mais densa e de menor tamanho, sendo denominada de VLDL remanescente (ou IDL). Esta lipoprotena remanescente pode ser captada pelo fgado e o seu contedo de colesterol degradado. Porm isso raramene acontece uma vez que a VLDL que lhe deu origem foi sintetizada em uma situao de excesso de lipdios hepticos e, portanto, no de se esperar que o fgado proceda a sua degradao, mesmo depois do depsito de triglicerdeos nos adipcitos. Observe que o colesterol que est na VLDL remanescente corresponde ao excesso Figura 10-14 - Representao esquemtica das lipoprotenas da sntese e da alimentao, logo de se espeplasmticas. (Adaptado de DEVLIN, 2000). rar que no haja uma degradao heptica a amenos que aumente a necessidade de sntese de sais biliares. Isto pode ser conseguido caso A apoC2 responsvel pela identifidiminua a absoro dos sais biliares no intescao dos quilomcrons pelos adipcitos, intino o que leva a uma maior necessidade de duzindo a ao da enzima lipase-lipoproteca colesterol para a sntese. As fibras alimentares do adipcito para favorecer a captao dos e medicamentos da classe dos fibratos prodos triglicerdeos. Os quilomcrons no posmovem esta diminuio da absoro intestinal suem esta importante apoprotena quando so de sais biliares e levam a queda do colesterol sintetizados na mucosa intestinal. AapoC2 plasmtico em conseqncia. Em pacientes adicionada pela lipoprotena HDL durante o com altas concentraes de colesterol plasmtransporte plasmtico. tico por causas genticas (ver captulo 16 soA apoB-48 uma protena integral bre Dislipidemias) a retirada cirrgica da ldos quilomcrons responsvel pela sua identiRicardo Vieira
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tima poro do intestino delgado, onde ocorre a reabsoro em massa dos sais biliares, promove uma queda na concentrao de colesterol sangneo devido o aumento da necessidade heptica de colesterol para a sntese de sais biliares. Desta forma, a VLDL remanescente corresponde a uma lipoprotena com alto teor de colesterol cujas apoC2 e apoE tendem a sair da molcula, j que perderam sua funo, sendo transferidas de volta para a HDL. A HDL, por sua vez, possui a capacidade de transferir colesterol livre e steres de colesterol do plasma para a molcula de VLDL. Ao final deste processo de recombinao molecular entre as molculas de HDL e VLDL, h a formao de uma nova lipoprotena, a LDL. A LDL possui em sua composio quase que exclusivamente a apoB100 e uma grande quantidade de colesterol que no captado pelo hepatcito. O destino desse colesterol, entretanto, est assegurado em todas as clulas do organismo, devido existncia de receptores para LDL. A captao de colesterol, entretanto, ocorre, preferencialmente, nas clulas de tecidos que possuam grande necessidade de colesterol para a sntese de membrana celular devido a grande produo de clulas (medula ssea, testculos, tecido epitelial) ou para a produo de hormnios esterides derivados do colesterol (gnadas e supra-renais). O prprio fgado capta colesterol da LDL quando os nveis de sais biliares reabsorvidos diminuirem e houver necessidade de mais colesterol para a sntese de novos sais biliares. A captao da LDL se d pela presena de receptor celular para a apoB100 que promove a internalizao do complexo receptor/lipoprotena, possibilitando um controle da entrada de LDL na clula, uma vez que todas estas clulas so capazes de sintetizar colesterol (Figura 10-15). O receptor para LDL uma protena transmembrana com at 822 aminocidos distribudos em cinco domnios diferentes (um citoplasmtico, um transmembrana e trs extra-celulares). Os 18 xons do gene do receptor para o LDL so alvos de mais de 600 mutaes diferentes responsveis pela falha
na captao do colesterol plasmtico, levando a uma hiperolesterolemia de difcil tratamento denominada hipercolesterolemia familiar. Na figura 10-16 est representado a estrutura do receptor para LDL. Para maiores detalhes sobre essa doena, ver captulo 16 sobre Dislipidemias.
Figura 10-15 - A captao do colesterol da LDL mediada por receptores celulares (LDL-R) que reconhecem a apoB100 da LDL. A regenerao do LDL-R um importante mecanismo regulador da concentrao de colesterol plasmtico.
Figura 10-16 - A estrutura do receptor celular para LDL (LDL-R) revela cinco domnios distintos. Centenas de mutaes no gene do LDL-R so responsveis pelo acmulo de LDL colesterol no plasma. (Adaptado de Stryer, 1992).
Com a endocitose do receptor celular de LDL, h uma regulao da entrada de colesterol na clula que dependente da quantidade de colesterol necessria para a clula. As clulas com alta atividade biosinttica de hormnios esterides sero as que mais captaro o colesterol da LDL, porm todas as clulas tendem a captar o colesterol.
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Entretanto quanto mais colesterol entra na clula, menos receptores se regeneram e, portanto, h um acmulo fisiolgico de LDL plasmtica. Desta forma, uma grande quantidade de colesterol da alimentao e/ou da sntese heptica, leva a saturao do sistema de captao celular do colesterol e o conseqente acmulo de colesterol no sangue, uma vez que no pode ser excretado na urina por ser insolvel e nem pelo fgado, j que o sistema de captao est saturado. O ltimo destino desse excesso de LDL a deposio nos vasos sangneos uma vez que por ser um lipdio de baixa densidade a LDL flutua no sangue e deposita-se naturalmente nas paredes dos vasos. A fixao da LDL se d em todos os vasos do organismo, havendo um tropismo especial para as artrias coronrias devido sua localizao aps a aorta, o que faz com que o sangue saia com alta presso e em turbilhonamento graas curva que a aorta faz ao sair do corao. Isto faz com que os componentes de baixa densidade percorram o vaso prximo parede, o que favorece seu depsito quando esto em excesso (Figura 10-17). O acmulo de lipdios nos vasos pode levar a obstruo e nas artrias isto pode levar necrose do tecido irrigado por ela. As artrias coronrias irrigam o miocrdio e o efeito principal de uma obstruo ser o infarto do miocrdio. A obstruo da artria coronria por LDL denominada de aterosclerose coronria e uma doena metablica muito freqente e de grande importncia na clnica mdica (ver Captulo 16 sobre Dislipidemias).
Figura 10-17 - Um excesso de LDL tende a se depositar naturalmente na parede das artrias coronrias vasos devido baixa densidade dos lipdios e ao movimento em turbilho do sangue nas artrias prximas aorta.
O colesterol da LDL depositada na parede dos vasos pode ser retirado pelas molculas de HDL pela ao da enzima lecitina colesterol acil transferase (LCAT) que esterifica o colesterol com triglicerdeos e o transporta para novas molculas de VLDL ou LDL para que possam novamente ser metabolizadas nas clulas. Porm, quanto maior a concentrao de LDL (e menor a de HDL) o colesterol tende a se oxidar ao passar atravs do endotlio. Essa oxidao impede que os macrfagos (clulas de defesa) reconheam este LDL oxidado como estruturas prprias do organismo. Ento, os macrfagos endocitam a LDL. Esta endocitose, entretanto, ao invs de se constituir um importante processo para a retirada do colesterol da parede dos vasos, torna-se um desencadeador do enrijecimento da artria coronria. Isto acontece porque aps a endocitose os macrfagos no conseguem digerir o LDL e se tornam clulas grandes (clulas espumosas) sem funo de fagocitose e se acumulam nas paredes dos vasos liberando fatores qumicos que levaro proliferao do msculo liso, a leso do vaso e a calcificao do local, criando a placa ateromatosa que diminui a circulao sangnea na rea afetada, induzindo necrose do tecido irrigado pelo msculo. Na Figura 10-18 esto representados os eventos responsveis pela formao da placa ateromatosa. Para maiores detalhes, ver o captulo 16 sobre Dislipidemias. Como foi descrito, a molcula de HDL possui importante funo na manuteno dos nveis plasmticos de colesterol dentro de valores compatveis com a ausncia de risco para aterosclerose coronria, pois possibilita a retirada do colesterol livre do plasma esterificando-o com o triglicerdeos atravs da LCAT, transferindo este colesterol molcula de VLDL e LDL favorecendo o consumo do colesterol pelas clulas perifricas e pelo prprio fgado. Uma outra funo atribuda HDL a retirada fsica da molcula de LDL da parede dos vasos, por um processo no bem conhecido, ajudando na preveno da placa ateromatosa. A HDL, ainda, captada pelos hepatcitos onde tem o seu colesterol
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degradado em cidos biliares ou excretados como colesterol livre na bile.
lhado deste metabolismo para a compreenso da fisiopatologia de doenas metablicas de grande importncia na prtica mdica. Nas figuras 18-19 e 18-20 esto representados os passos do metabolismo lipdico.
Figura 10-18 - Formao da placa ateromatosa. A) o LDL em excesso deposita-se na parede dos vasos formando a estria gordurosa; B) a HDL pode retirar o colesterol pela ao da LCAT; C) o LDL em excesso se oxida e endocitado por macrfagos; D) os macrfagos tornam-se clulas espumosas, incapazes em digerir a LDL oxidada; E) as clulas espumosas acumulam-se na camada ntima das artrias levando a sua destruio; F) a leso contnua leva a fibrose e calcificao da placa ateromatosa, impedindo a passagem de oxignio para o miocrdio, levando ao infarto.
Por todos esses fatores, a HDL considerada uma lipoprotena de proteo contra a aterosclerose coronariana, sendo denominado vulgarmente, como o bom colesterol. Em contrapartida, a LDL ganhou a fama de mau-colesterol por ser a partcula aterogncia. Entretanto, o LDL que possibilita a captao do colesterol pelas clulas perifricas e fgado. O mau-colesterol na verdade aquele ingerido na dieta alm da capacidade de excreo heptica diria do indivduo (at 1g/dia). Estudos recentes demonstram que uma lipoprotena sintetizada no fgado denominada de lipoprotena (a) muito parecida com a LDL, possuindo uma apo(a) ligada atravs de ligao covalente com a apo-B100, o que lhe confere um poder extremamente aterognico uma vez que possui uma funo de retardo na degradao dos cogulos sangneos. Por isto, esta nova lipoprotena j vem sendo denominada como o colesterol muito ruim. O metabolismo dos lipdios endgenos e exgenos muito semelhante, variando no tipo de lipoprotena envolvida. Porm, as conseqncias de um aumento da LDL plasmtico pode ter conseqncias desastrosas para o organismo, da a importncia do estudo deta-
Figura 10-19 - O metabolismo dos lipdios exgenos. 1) Os lipdios da alimentao so digeridos no intestino delgado e absorvido para o sistema linftico; 2) o duto linftico conecta-se com a circulao sangnea e transporta os lipdios em quilomcrons; 3) a HDL cede apoC2 e E que favorecem a captao de triglicerdeos pelo adipcito e pelos msculos; 4) o colesterol que restou e captado pelo fgado; 5) o fgado converte o colesterol em sais biliares ou o excreta livre na bile.
Figura 10-20 - O metabolismo dos lipdios endgenos. 1) o colesterol e triglicerdeos produzidos no fgado por um excesso de acetil-CoA so transportados para o sangue ligados VLDL; 2) a HDL cede apoC2 e apoE para a VLDL facilitando a captao dos triglicerdeos pelos adipcitos e msculos; 3) o colesterol restante pode ser captado pelo fgado e 4) ser convertido em sais biliares ou excretado livre na bile. 5) a VLDL remanescente converte-se em LDL devido impossibilidade da degradao heptica por saturao no processo de degradao do colesterol. A LDL plasmtica pode ser captada pelas demais clulas do organismo. Ricardo Vieira
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2.
Sntese do colesterol
O excesso de acetil-CoA o sinal para o incio da sntese heptica dos lipdios (colesterol e cidos graxos) e corpos cetnicos. Esta sntese citoplasmtica o que significa que a acetil-CoA deve sair da mitocndria para que as enzimas citoplasmticas possam convert-la nesses compostos. Entretanto a acetil-CoA impermevel membrana mitocondrial, o que obriga um processo metablico especial para sua sada. Isso ocorre com a formao de citrato aps a condensao com oxalacetato (primeira reao do Ciclo de Krebs) porm no h o prosseguimento das reaes para formar ATP, devido inibio alostrica das enzimas do Ciclo pelo ATP. Isso leva a um acmulo de citrato e a sua sada para o citoplasma, uma vez que permevel membrana mitocondrial. Uma vez fora da mitocndria, o citrato desdobrado pela enzima citrato liase liberando acetil-CoA e o oxalacetato que retorna mitocndria. O colesterol existente no organismo pode ser de origem exgena (alimentao) ou endgena. Todas as clulas possuem o aparato enzimtico para a sntese do colesterol a partir da acetil-CoA, porm grande quantidade de colesterol sintetizada no fgado a partir do excesso de acetil-CoA proveniente do metabolismo dos carboidratos estimulado pela insulina. A acetil-CoA proveniente da betaoxidao no comumente destinada para a sntese de colesterol devido a baixa de concentrao de insulina tpica deste estado metablico. Pelo contrrio, a acetil-CoA destinada desse processo ser aproveitada mais para a sntese de corpos cetnicos, como ser vista adiante. A sntese de colesterol compreende uma via metablica de cinco fases. Nesta via metablica necessria a presena do redutor NADPH. Como este processo ocorre em um excesso de acetil-CoA tpico de excesso de glicose, de se esperar que a via das pentoses esteja ativa fornecendo este potencial redutor na forma de NADPH. 1) Sntese do mevalonato: 2 molculas de acetil-CoA, formam acetoacetil-CoA que se converte em hidrxi-metil-glutaril-
CoA (HMG-CoA) pela adio de uma terceira acetil-CoA. A formao de HMGCoA etapa comum para asntese de corpos cetnicos. A enzima HMG-CoAredutase a responsvel pela converso de HMG-CoA em mevalonato (6C), sendo, portanto, uma enzima regulaora da sntese de colesterol. 2) Formao de unidades isoprenides: forma-se o isopentenil-pirofosfato (5C) por fosforilao do ATP e perda de CO2. 3) Formao de esqualeno: seis molculas da unidade isoprenide (5C), formadas na etapa anterior, condensam-se formando o esqualeno (30C), sendo necessrio a presena de NADPH. 4) Converso do esqualeno em lanosterol: o lanosterol um composto cclico que contm o ncleo ciclo-pentano-per-hidrofenantreno. Esta fase necessita de NADPH e FAD+. 5) Converso do lanosterol em colesterol: ocorre no retculo endoplasmtico, sendo necessrios 4 NADPH e 1 NAD+. O colesterol possui 27 carbonos pois nesta fase h a perda de 2 CO2 e um radical livre HCOOH. O colesterol no possui funo energtica, mas possui importante funo na formao da membrana celular, na sntese de hormnios esterides e na sntese dos cidos biliares. Nas figuras 10-21 e 10-22 esto apresentadas as etapas na sntese de colesterol. A enzima HMG-CoA redutase responsvel paela regulao da sntese do colesterol, que acontece em de trs nveis diferentes: 1) Feedback negativo da HMG-CoA redutase pelo prprio colesterol sintetizado. Esta inibio alostrica extremamente eficaz e impede uma superproduo de colesterol citoplasmtico. 2) Ativao da HMG-CoA-redutase pela insulina e inativao pelo glucagon, o que faz da concentrao de glicose plasmtica um importante regulador da sntese de colesterol. 3) Reduo na transcrio do gene da HGMCoA-redutase atravs do colesterol captado pela clula atravs da LDL. Alguns medicamentos (p. ex.: levatastina e mevaRicardo Vieira
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tastina) so utilizados para diminuir os nveis plasmticos de colesterol por inibir a ao enzimtica da HMG-CoA-redutase
o citrato mitocondrial a forma de sada da acetil-CoA em excesso.
Figura 10-21 - A sntese do mevalonato uma etapa inicial importante que diferencia a sntese de colesterol da sntese de corpos cetnicos. A enzima HMGCoA redutase a responsvel por essa diferenciao.
Figura 10-22 - A sntese do colesterol a partir do mevalonato ocorre em oito etapas distintas. 1) A ao de cinases acrescenta um grupamento pirofosfato (PPi) importante para a solubilizao dos compostos a serem formados a partir daqui. A entrada e sada de PPi indica, tambm, reaes irreversveis o que impede o retorno do colesterol para formar acetil-CoA; 2) Descarboxilases so responsveis pela retirada de CO2 da molcula e a formao de uma unidade isoprenide, o sio-pentenilpirofosfato (IPP); 3) O IPP se isomeriza em 3,3-di-metilpirofosfato (DPP); 4) IPP e DPP se unem para formar um composto de 10C; 5) Mais um IPP adicionado para formar um composto de 15C. 6) Esses dois compostos de 15C se fundem formando o esqualeno de 30C; 7) O lanosterol formado como produto da ciclizao do lanosterol; 8) dezenas de reaes enzimticas adicionais encurtam a cadeia de lanosterol e formam o colesterol (27C).
3.
Sntese dos cidos Graxos e Triglicerdeos
estimulada pela insulina, onde a acetil-CoA oriunda, principalmente do excesso de glicose plasmtico. A forma de obteno da acetil-CoA citoplasmtica a mesma que a discutida para a sntese de colesterol, ou seja,
A acetil-CoA no citoplasma convertida em malonil-CoA (3C) pela adio de um CO2 sob a ao da enzima acetil-CoA carboxilase (uma enzima dependente da vitamina biotina). A partir da, inicia-se a seqncia de reaes coordenadas por um complexo multienzimtico de seis enzimas (complexo enzimtico cido graxo sintetase) que promove a
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adio de uma nova molcula de acetil-CoA (2C) ao malonil-coA (3C), formando um produto de 5C. Em seguida, h a perda de uma molcula de CO2 gerando o cido butanico (4C). A este cido carboxilco de 4C adicionado uma nova molcula de malonil-coA (3C) formando um composto de 7C. Uma nova retirada de CO2 leva formao do cido hexanico (6C). Assim, sucessivamente, h a adio de molculas de malonil-CoA e retirada imediata de CO2 promovendo o crescimento da molcula de cido graxo at a formao do cido palmtico de 16C. Estas reaes utilizam o NADPH formado na via das pentoses como composto redutor nas reaes de sntese de cidos graxos. Em animais, o alongamento da molcula de cido graxo pode ocorrer na presena de um excesso de acetil-CoA sob a ao de enzimas especficas para esse fim (elongases) a partir do cido palmtico. Os cidos graxos insaturados so formados a partir da ao de enzinas denominadas dessaturases que tambm utilizam o cido palmtico como substrato, o que faz com os cidos graxos insaturados produzidos em animais nunca tenha a dupla ligao antes do 16o carbono. Os cidos graxos que possuem dupla ligao em carbonos de numerao inferior a 16 (p.ex.: cido aracdnico, cido linolco) s so produzidos em vegetais e so, por isso, denominados de cios graxos essenciais (ver Captulo 7 sobre estrutura dos lipdios). Os hepatcitos e os adipcitos so as principais clulas produtoras de cidos graxos e triglicerdeos, apesar de a maioria das clulas possurem o aparato enzimtico para a sua sntese. A sntese de cidos graxos regulada por modulao da atividade da enzima acetilCoA carboxilase, a primeira enzima dessa via metablica. A insulina promove sua ativao, enquanto que o glucagon e a epinefrina a tornam inativa. Essa enzima tambm inibida alostericamente pelo malonil-CoA e pelo cido palmtico, produto final da sntese, o que constitui em um importante mecanismo regulador. Uma alimentao rica em cido palm-
tico (presente em quase todo tipo de gorduras animais e vegetais) e ausente de carboidratos, portanto, promove a inibio da sntese de cidos graxos. Pelo contrrio, alimentao rica em carboidratos leva a um aumento da sntese de cidos graxos. A enzima cido graxo sintase tambm possui esse tipo de regulao. A cada trs cidos graxos formados so combinados com uma molcula de glicerol (derivado do gliceraldedo-3-P do metabolismo da glicose) formando o triglicerdeo que embalado em uma VLDL para ser armazenado no adipcito (como visto anteriormente). Os triglicerdeos so sintetizados no fgado sob ao estimulante da insulina, portanto, quando h uma condio metablica de excesso de acetil-CoA, como no caso de um excesso de ingesto de carboidratos. Na Figura 10-23, est representado o processo de sntese dos cidos graxos.
Figura 10-23 - A sntese dos cidos graxos. A) O processo inicia-se com a formao de malonil-CoA (3C) a partir de acetil-CoA (2C) e a adio de outra acetil-CoA para a formao de cido butanico, com perda de CO2. A partir da, h o aumento da cadeia pela adio de malonil-CoA e retirada de CO2 at a formao de cido palmtico (16C). B) A enzima cido graxo sintase possui dois domnios: um de ligao ao malonil e outro de alongamento da cadeia. Ricardo Vieira
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4. Sntese de Corpos Cetnicos

O acmulo de acetil-CoA devido ao excesso da -oxidao, leva sntese heptica dos corpos cetnicos (cido ceto-actico, cido -hidrxi-butrico e acetona). A reao inicial da sntese dos corpos cetnicos semelhante da sntese do colesterol, com a condensao de duas molculas de acetil-CoA atravs da enzima tiolase formando cetoacetil-CoA, que se condensa com outra molcula de ceto-acetil-CoA formando o HMGCoA (semelhante ao processo inicial de sntese do colesterol). Na presena de glucagon, epinefrina ou altas quantidades de colesterol citoplasmtico ou na ausncia de insulina (quando h hipoglicemia ou em pacientes diabticos) a enzima HMG-CoA redutase (que levaria a sntese de colesterol) est inibida o que promove um acmulo de HMG-CoA e a ativao da enzima HMG-CoA liase que retira uma molcula de acetil-CoA e gera o primeiro corpo cetnico, o cido cetoactico. Parte do cido cetoactico convertido, espontaneamente, em acetona pela perda de CO2, porm a maior parte convertida em cido -hidrxibutrico, atravs da enzima 3-OH-butiratodesidrogenase. Os corpos cetnicos (com exceo da acetona) possuem funo energtica como substrato da neoglicognese ou por oxidao direta gerando acetil-CoA a travs da ao da enzima tioforase que gera acetoacetil-CoA e, posteriormente, a acetil-CoA. Os neurnios utilizam os corpos cetnicos como fonte imediata na ausncia de glicose, no utilizando nenhum outro substrato energtico. No jejum prolongado, os corpos cetnicos constituem-se importante fonte energtica, entretanto, um excesso sangneo leva a uma queda acentuada do pH (cetoacidose) que pode levar ao coma e ao bito. A acetona, entretanto, no tem funo energtica e tende a destruir a bainha mielnica dos neurnios devido seu alto poder solvente de lipdios A acetona formada pode ser excretada na urina ou pelos pulmes por ser
voltil, o que leva a um hlito cetnico caracterstico. Em pacientes diabticos, a ausncia de insulina e a alta quantidade de acetil-CoA pela beta-oxuidao estimulam intensamente a sntese de corpos cetnicos o que leva a srias complicaes patolgicas (ver Capitulo 15 sobre Diabetes Mellitus). O fgado um grande produtor de corpos cetnicos, embora no tenha a capacidade de grada-los uma vez que no possui a enzima tioforase. Desta forma, os hepatcitos liberam para o sangue quase todo os corpos cetnicos circulantes. Quando se realiza uma dieta isenta de carboidratos e rica em lipdios, h uma inibio da sntese de cidos graxos e a queda de insulina e aumento de glucagon observado, promove o desvio da grande quantidade de acetil-CoA resultante da beta-oxidao dos cidos graxos para a nica via metablica disponvel para o metabolismo energtico que a sntese de corpos cetnicos. Na figura 10-24 est resumido o processo de sntese de corpos cetnicos.
Figura 10-24 - A sntese dos corpos cetnicos. A) As reaes iniciais so idnticas s da sntese de colesterol, com exceo da ativao da enzima HMG-CoA liase ao invs da HMG-CoA sintase. B) Os corpos cetnicos fazem parte de uma trade de desvios metablicos do excesso de acetil-CoA na mitocndria e possuem importante funo energtica sendo, entretanto, danosos ao organismo quando em excesso. Ricardo Vieira
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Metabolismo das protenas

Os aminocidos so importantes fontes de energia para o metabolismo celular, porm s so utilizados quando h uma extrema carncia energtica ou durante a prtica de exerccios fsicos intensos. importante frisar que os carboidratos e lipdios so melhores produtores de energia e a mobilizao de aminocidos pode estar relacionada a uma degradao de protenas musculares ou plasmticas levando o organismo a uma depleo dessas protenas, o que pode trazer conseqncias desastrosas como a atrofia muscular e a hipoalbuminemia. De fato, um dos maiores cuidados entre atletas o balanceamento nutricional fornecendo fontes de carboidratos e lipdios compatveis com suas atividades energticas, alm de protenas suficientes para o gasto energtico extra causado pelos exerccios fsicos intensos ao qual so submetidos. Esta complementao alimentar de protenas fundamental para que haja aminocidos suficientes para a sntese de novas protenas musculares, aumentando a massa muscular ao invs de atrofiar os msculos. O fgado, entretanto, utiliza freqentemente aminocidos como fonte energtica aps a alimentao, uma vez que a glicose absorvida grandemente desviada para a sntese de glicognio devido presena de insulina assim como a sntese dos lipdios e no sua degradao. Nos msculos tambm, a degradao protica freqente e o metabolismo energtico a custas de aminocidos faz parte da rotina metablica diria. Aps a absoro dos nutrientes da alimentao, o fgado recebe uma grande quantidade de aminocidos constituem uma quantidade enorme de substratos que devem ser metabolizados ao invs de serem simplesmente repassados para o sangue. De fato, a concentrao de aminocidos no plasma sanguneo infinitamente menor do que a quantidade de aminocidos ingeridos e presentes na veia porta-heptica. O fgado mobiliza esses aminocidos da alimentao (alm dos que sintetiza, os no essenciais) principalmente par a sntese de
protenas especializadas a serem enviadas para o sangue. A protena plasmtica presente em maior quantidade a albumina e possui a importante funo de trasnportar nutrientes, cidos graxos, medicamentos, hormnios e vrios compostos de importncia para o metabolismo celular. As albuminas so protenas de baixo peso molecular que podem ser captadas pelas clulas (principalmente pelos msculos) para fornecerem aminocidos para o metabolismo energtico. Uma outra importante funo das albuminas a manuteno do equilbrio hdrico do sangue induzindo a passagem da gua do lquido interstical evitando edema (acmulo de gua nos tecidos). Outras protenas plasmticas so sintetizadas no fgado e possuem improtante funo para a coagulao sangnea. o caso da protrombina, fibrinognio, globulina aceleradora da coagulao e fator VII da coagulao. Esta propriedade faz com que o fgado seja um rgo fundamental na manuteno da homeostase sangnea e uma insuficincia heptica traz conseqncias graves no metabolismo protico (ver Captulo 12 sobre Bioqumica da Funo Heptica). A sntese da uria, um dos processos metablicos mais importantes pois impede a formao de amnia txica ao organismo a partir do nitrognio protico, exclusiva do fgado o que o torna o centro da degradao de aminocidos. Os msculos precisam ajustar o consumo de aminocidos com a exportao da amnia para o fgado na forma dos aminocidos glutamina ou alanina, em uma via metablica extremamente importante e que permite o equilbrio fisiolgico, principalmente durante a realizao de exerccios fsicos, como ser discutido adiante. A seguir, sero apresentadas as principais vias envolvendo os aminocidos dentro do metabolismo energtico.
1.
Transaminao e Desaminao
A maior parte do nitrognio protico no utilizada em vias metablicas nos seres humanos. Sendo assim, a retirada do grupamento amino (-NH3+) dos aminocidos o
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primeiro passo metablico, com a formao de amnia (NH3), um composto altamente txico que excretada, na forma de uria pelos rins. A uria a principal forma de excreo do nitrognio protico nos vertebrados terrestres. Em aves e rpteis, o cido rico a principal forma de excreo do nitrognio protico; em peixes e larvas de anfbios a amnia excretada intacta, permanecendo em alta concentrao plasmtica em peixes de gua salgada para manter o equilbrio osmtico. O processo de sntese da uria envolve enzimas tanto citoplasmticas quanto mitocondriais. A retirada do grupamento amino a reao preparatria para essa sntese e comum em todos os tecidos podendo ocorre por dois processos diferentes: a transaminao e a desaminao. A transaminao ou aminotranferncia catalisada por enzimas chamadas transaminases ou aminotransferases, que possuem como co-fator o piridoxal-fosfato, a forma ativa da vitamina B6 (Figura 10-25). Esse processo metablico consiste na transferncia do grupamento amino para o cetoglutarato (um cetocido) formando um outro cetocido e o aminocido glutamato. Dependendo do aminocido transaminado, haver um tipo diferente de cetocido formado (p.e.x.: a alanina forma o piruvato; o aspartato forma o oxalacetato) porm sempre o mesmo aminocido glutamato formado. Isso faz com que aps essa reao, uma grande quantidade de glutamato seja produzida no fgado.
As principais transaminases do hepatcito so a transaminase-glutmicopirvica (TGP) ou alanina aminotransferase (ALT) e a transaminase-glutmicooxalactica (TGO) ou aspartato aminotransferase (AST). Essas enzimas transaminamna a alanina e o aspartato, respectivamente, possuindo tambem ao sobre os demais aminocidos, apesar de haver uma transaminase para cada tipo de aminocido. Apenas doze dos vinte aminocidos tm seu grupamento amino retirado por transaminao (alanina, arginina, asparagina, aspartato, cistena, isoleucina, leucina, lisina, fenilalanina, triptofano, tirosina e valina). O processo metablico dos demais aminocidos (inclusive o glutamato produzido na transaminao) denomina-se desaminao oxidativa. Por essa via podem ser degradados inclusive os doze aminocidos que so transaminados. Nessa desaminao h a retirada do grupamento amino por enzimas denominadas aminocido-oxidases, que convertem o grupamento amino em amnia livre (NH3), liberando o cetocido correspondente (Figura 1026). Em virtude da grande quantidade de glutamato produzido por transaminao, a via glutamato-desidrogenase a mais freqente. O acoplamento de transaminao e desaminao por essa via denominado de transdesaminao. A vantagem da transaminao justamente a formao de glutamato e a necessidade de uma nica via metablica posterior para a degradao dos doze aminocidos.
Figura 10-25 - A transaminao dos aminocidos ocorre com a formao de um nico aminocido, o glutamato, e um cetocido para cada tipo de aminocido metabolizado. O aceptor de amino o cetocido -cetoglutarato. Ricardo Vieira
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Figura 10-26 - A desaminao oxidativa um processo intramitocndrial que gera amnia par a sntese de uria. estimulada pelo ATP e inibida pelo GTP. O -cetoglutarato regenerado para o citoplasma.
A toxidade da amnia formada impede que esta reao seja citoplasmtica pois poderia levar a sua sada para o sangue, o que acarretaria danos srios, principalmente ao sistema nervoso central. A desaminao oxidativa uma reao intramitocondrial e est acoplada a um processo eficaz de degradao da amnia formada, a sntese da uria. Essa desaminao mitocondrial, requer NAD+ ou NADP+ como receptor dos eltrons da reao. Com a retirada do grupamento amino do aminocido, h a formao de um cetocido. No caso do glutamato (principal aminocido dessa via) o cetocido formado o cetoglutarato que sai da mitocndria e retorna ao citoplasma para servir de substrato para outra reao de transaminao. O -cetoglutarato um intermedirio do Ciclo de Krebs e a sua sada da mitocndria s pode ocorrer quando o Ciclo de Krebs no est ativo, caso contrrio ele ser utilizado como substrato das enzimas. Como j vimos anteriormente (Captulo 9 sobre bioenergtica) o ATP um inibidor alostrico do Ciclo de Krebs. Dessa forma quanto maior a produo de ATP, menos o Ciclo de Krebs "funcionar" e mais a via de regenerao do -cetoglutarato para o citoplasma estar ativa.
A degradao de aminocidos por essa via acontece aps a alimentao quando a quantidade de glicose suficiente para gerar o ATP necessrio para o hepatcito e, logo, o excesso de ATP produzido estar contribuindo para a degradao dos aminocidos. De fato, as enzimas da desaminao mitocondrial so estimuladas pelo ATP. Outro regulador o GTP, porm atua inibindo as enzimas da desaminao mitocondrial. Como uma molcula de GTP produzida diretamente no Ciclo de Krebs sem necessitar da cadeia respiratria, a desaminao inibida quando o Ciclo de Krebs est em atividade. Este fato garante que quando a atividade do Ciclo de Krebs est alta, a via de desaminao dos aminocidos tambm tende a diminuir, tornando o -cetoglutarato disponvel para o Ciclo de Krebs garantindo sua comtinuidade. Esses dois efeitos, embora antagnicos, so responsveis por uma perfeita interao entre o metabolismo energtico mitocondrial no que diz respeito degradao de aminocidos e o Ciclo de Krebs. Os aminocidos podem, ainda, serem desaminados espontaneamente no citoplasma sem o auxlio de enzimas. Porm essa desaminao lenta e s ocorre quando h leso heptica severa e a diminuio da atividade enzimtica nos hepatcitos. Neste caso, a conseqncia imediata ser um aumento da concentrao de amnia plasmtica, uma vez
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que o fgado tornou-se incompetente em sua funo de degradar a amnia. Isto ser responsvel pela principal causa do coma observado em pacientes portadores de insuficincia heptica crnica (ver captulo 12 sobre Bioqumica da Funo Heptica).
Krebs, ativando-o, o que faz com que a sntese de uria e o Ciclo de Krebs "rodem" juntos, via metablica denominada por muitos de "Bicicleta de Krebs"; e) Sntese da Uria: a arginina formada sofre ao da enzima arginase, que catalisa a sntese da uria e a liberao de uma molcula de ornitina que retorna a mitocndria, dando incio um novo ciclo. O Ciclo da Uria pode ser resumido como um processo metablico heptico que degrada amnia com a participao da ornitina e cirtulina como transportadores dessa amnia mitocondrial, favorecendo a liberao da uria formada no citoplasma. A "Bicicleta de Krebs" uma expresso que lembra a integrao existente entre o ciclo da uria e o metabolismo energtico, pois no se pode esquecer que a cada amnia liberada significa que um aminocido foi desaminado e o cetocido formado est apto para o metabolismo celular. Por essas razes, pode-se perceber a importncia dos aminocidos para o metabolismo energtico heptico, alm de que a sntese de glicognio e de cidos graxos impedem uma maior utilizao de carboidratos e lipdios exclusivamente para produzir energia para o hepatcito. Um problema adicional enfrenta os msculos quando degradam aminocidos para o metabolsimo energtico: a amnia formada e necessita ser convertida em uria mas o msculo no possui as enzimas para essa sntese, somente o fgado. Logo, h a necessidade da formao de um produto no txico para transportar a amnia dos tecidos extrahepticos para serem metabolizadas at uria no fgado. O aminocido glutamina o principal transportador de amnia plasmtica aps ser sintetizado a partir da unio de glutamato com amnia pela ao da enzima glutaminasintetase existente no msculo (Figura 1028). O glutamato no atravessa a membrana celular devido sua carga eltrica o que induz. uma reao que gasta ATP e produz a glutamina que ser degradada at glutamato e amnia no fgado
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2.
Sntese da uria
No fgado, ir haver a produo de grande quantidade de um composto nitrogenado atxico formado por duas molculas de amnia, conjugadas com CO2 - a uria. Esta reao se processa parte no citoplasma e parte na mitocndria do hepatcito. Na seqncia de reaes envolvendo a sntese da uria (Figura 10-27), h a sntese do aminocido arginina e a participao dos aminocidos nocodificados ornitina e citrulina. A arginina consumida em grande quantidade na produo de uria o que faz com que seja necessria na alimentao de animais jovens, em fase de crescimento. Portanto, esse aminocido apesar de ser sintetizado torna-se essencial na alimentao. As reaes do ciclo da uria podem ser agrupadas em cinco fases: a) Formao da carbamoil-fosfato: na mitocndria, h a hidratao de um CO2 e uma NH3 (proveniente da desaminao do glutamato), com o gasto de 2 ATP's; b) Formao da citrulina: o carbomoilfosfato doa seu grupamento carbomoil para a ornitina, que penetrou na mitocndria atravs de um transportador especfico, formando a citrulina. A citrulina sai da mitocndria pelo mesmo transportador de ornitina; c) Formao do arginino-succinato: atravs da incorporao de aspartato na molcula de citrulina, com gasto de 1 ATP, no citoplasma. Esse aspartato mobilizado da mitocndria atravs do mesmo transportador que promove a entrada de glutamato na mitocndria; d) Sntese da Arginina: o arginino-succinato sofre quebra, liberando uma molcula de fumarato e uma molcula de arginina. Esse fumarato requerido para o Ciclo de
142 Figura 10-27 - O Ciclo de Uria uma via metablica que se inicia no citoplasma e concluda no citoplasma. A uria produzida quase que totalmente excretada nos rins e serve de bom parmetro e avaliao da funo renal.
A glutamina corresponde a um substrato importante para outros processos de sntese que requerem amnia como a sntese de aminocidos e o metabolismo do nitrognio em bactrias. Em seres humanos, ela possui uma funo adicional ao funcionar como reguladora do pH em casos de acidoses. Nesta situao patolgica, a concentrao de H+ est perigosamente aumentada e os rins atuam de vrias maneiras para inverter essa situao (ver captulo 17 sobre Equilbrio cido-Bsico). Uma das formas de controle do pH a ativao da enzima glutaminase das clulas justaglomerulares renais que converte a glutamina e glutamato e amnia.
A amnia formada se combina com os ons H+ formando o on amnio (NH4+) que excretado na urina conjugado ao cloreto plasmtico. Esse processo de excreo de amnia na urina (amoniria) ocorre para diminuir a concentrao de H+ plasmtico em casos de acidose. Em pacientes diabticos existe uma acidose metablica devido ao excesso de corpos cetnicos produzidos e a amoniria vai estar particularmente acentuada devido ao aumento da degradao de protenas musculares, uma vez que o metabolismo dos carboidratos no est ativo devido a falha na ao da insulina.
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plasmtica para o metabolismo energtico. Esta via metablica denominada de Ciclo da glicose-alanina um importante meio de economia energtica do organismo.
Figura 10-28 - A glutamina sintetizada nos msculos a partir do glutamato como forma de absorver amnia e transport-la at o fgado.
Figura 10-29 - A sntese muscular de alanania. 1) No exerccio fsico intenso h o consumo aumentado de protenas para o metabolismo energtico; 2) a amnia muscular tende aumentar em resposta ao aumento do metabolismo energtico dos aminocidos; 3) o metabolismo anaerbico da glicose tambm gera altas concentraes de lactato e H+ para o sangue. 4) a sntese de alanina conjuga a amnia com o piruvato resolvendo os dois problemas metablicos. 5) a alanina metabolizada no fgado e gera mais glicose para o metabolismo energtico atravs da neoglicognese.
O aminocido alanina tambm um importante transportador de amnia dos tecidos extra-hepticos. Entretanto, a sua sntese atende a algumas necessidades musculares especficas e s observada quando h um intenso trabalho muscular. Nessa situao metablica, o msculo tende a produzir muito lactato resultante da gliclise anaerbica, a partir do piruvato (ver Captulo 9 sobre bioenergtica). O lactato Pode ser reciclado no fgado gerando nova molcula de glicose na neoglicognese. Porm, o H+ liberado para o sangue tende a levar a uma acidose que uma das causas da fadiga muscular. Da mesma forma, o msculo est degradando muitos aminocidos e aumentando perigosamente a amnia celular. Assim sendo, a sntese da alanina resolve estes dois problemas de uma s vez, j que so necessrios piruvato e amnia para sintetizar uma molcula de alanina (Figura 10-29). A alanina captada pelo fgado e degradada gerando novamente o piruvato, que reciclado na neoglicognese fornecendo novas molculas de glicose, garantindo um "segundo flego" para o praticante de exerccio fsico intenso com uma nova carga de glicose
3.
Catabolismo da cadeia carbonada dos aminocidos
Diariamente, h um renovao de cerca de 400g de protenas o que significa que, durante o dia, cerca de 400g de protenas so degradadas porm a mesma quantidade est sendo produzida o que garante uma certa estabilidade na quantidade total de protenas no organismo. Esta taxa de renovao, denominada de taxa de turnover, implica na necessidade da obteno de aminocidos essenciais na dieta alm da sntese dos no-essenciais. Apenas 11 aminocidos so sintetizados no organismo, porm a arginina sintetizada, mas totalmente consumida no ciclo da uria o que a torna indispensvel na dieta e a cistena e a tirosina so sintetizadas a partir da metionina e fenilalanina (aminocidos essenciais) o que faz com somente nove aminocidos sejam verdadeiramente independentes da alimentao. Entretanto, uma alimentao completa apresenta uma grande quantidade de aminocidos, sejam essenciais ou no ou que favoreRicardo Vieira
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ce a uma absoro de aminocidos sempre acima das necessidades dirias. Desta forma, o catabolismo dos aminocidos intenso aps uma refeio protica, permitindo a formao de grande quantidade de uria, resultado da degradao do grupamento amino, como visto anteriormente. O cetocido resultado das reaes de transaminao e desaminao., entretanto, possuem diversos destinos metablicos que podem ser reunidos em dois grandes grupos: 1) os cetognicos; e 2) os glicognicos. O primeiro grupo (os cetognicos) corresponde aos que so degradados em acetil-CoA (de forma direta ou indireta, na forma de acetoacetil-CoA) e fornecem energia de forma imediata no ciclo de Krebs. So fenilalanina, tirosina, triptofano, lisina, isoleucina, treonina e leucina. A acetil-CoA produzida pelos aminocidos cetognicos no pode ser convertida em glicose, o que vai induzir entrada obrigatria no Ciclo de Krebs para a produo de energia. Desta forma, um excesso de catabolismo destes aminocidos levarao desvio para a produo de cidos graxos, colesterol e corpos cetnicos de maneira idntica a um excesso de acetil-CoA oriundo do catabolismo de carboidratose lipdios. demais fornecem intermedirios do Os ciclo de Krebs (oxalacetato, fumarato, succcinil-CoA e -cetoglutarato) bem como o piruvato. Esses produtos podem ser convertidos em glicose atravs da neoglicognese e, assim, produzirem energia para as reaes metablicas celulares, sendo os aminocidos que os produzem chamados de glicognicos por este motivo. Alguns aminocidos cetognicos (fenilalanina, tirosina, triptofano, isoleucina e teronina) podem ser utilizados como substratos para a neoglicognese alm de produzir acetil-CoA, sendo chamados, portanto, de glicocetognicos. A Figura 10-30 demonstra a entrada esquemtica dos aminocidos no metabolismo energtico.
4.
Sntese dos aminocidos
Os aminocidos essenciais so sintetizados nos vegetais atravs do aproveitamento do nitrognio na forma de NH4+, nitritos e nitratos presentes no solo e que so produzidos por bactrias capazes de fixar o N2 atmosfrico convertendo-os nos produtos nitrogenados absorvidos pelos vegetais (p.ex.: Azobacter sp.e Rhizobium sp. fixam o N2; Nitrossomonas sp. e Nitrobacter sp. convertem amnia em nitritos e nitratos). A decomposio bacteriana de animais mortos gera NH4+, nitritos e nitratos, diretamente da degradao dos aminocidos, independente da captao do N2 atmosfrico. Os aminocidos no-essenciais so sintetizados nos animais a partir de molculas precussoras que fazem parte do ciclo de Krebs e do grupamento amino proveniente da degradao de aminocidos. Como vrios aminocidos fornecem intermedirios do ciclo de Krebs, h uma interdependncia entre os aminocidos no seu processo de degradao e sntese. O glutamato, glutamina e prolina so sitentizados a partir do -cetoglutarato. O aspartato sintetizado a partir do oxalacetato (recebendo o grupo amino do glutamato). A asparagina sintetizada a partir do aspartato e o grupo amino provm da glutamina. A alanina uriunda da transaminao do piruvato e glutamato. A serina sintetiosada a partir do gliceraldedo-3-fosfato, sendo que a glicina e a cistena derivam da serina. A arginina utilizada durante o ciclo da uria. A tirosina origina-se a partir da hidroxilao da fenilalanina. A Figura 10-31 representa a esquematizao das rotas de sntese dos aminocidos.
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Figura 10-30 - Viso geral do metabolismo dos aminocidos.
Figura 10-31 - Viso geral da sntese dos aminocidos no-essenciais.
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Metabolismo das Bases Nitrogenadas 1. Metabolismo das purinas
As bases nitrogenadas derivadas da purina (adenina e guanina) so sintetizadas a partir de um composto denominado 5fosforribosil-1-pirofosfato (PRPP) que corresponde a uma molcula de ribose-5-fosato (formada no atalho das pentoses, durante o metabolismo da glicose) adicionada de dois fosfatos inorgnicos (pirofosfato) no carbono 1 da ribose pela ao da enzima PRPPsintetase. O produto final desta via glicoltica, gera um nucleotdio denomininado inosinamonofosfato (IMP) que a base para a sntese de adeninosina-monofosfato (AMP) e guanosina-monofosfato (GMP). Esses nucleotdeos vo ser convertidos em ATP e GTP que so utilizados na sntese de DNA ou em funes energticas celulares. Participam desta sntese a vitamina cido flico, que fornece dois carbono para fechar a molcula de inosina que montada na ribose-5-fosfato a partir dos aminocidos no-essenciais glicina, glutamina e aspartato e CO2. As enzimas que catalizam estas reaes esto presentes no citoplasma da maioria das clulas, permitindo uma independncia celular quanto necessidade da ingesto de cidos nuclicos na dieta. Uma exceo importante est na incapacidade da hemcia de sintetizar purinas devido no possuir as enzimas necessrias, apesar da grande quantidade de ribose-5-fosfato produzida no desvio das pentoses da via glicoltica. Devido a esta independncia celular na sntese de purinas, a adenina e a guanina proveninente da alimentao so transformadas, ainda na mucosa intestinal, em cido rico que excretado nas fezes sem que haja a sua absoro intestinal. Porm, esta no a via principal de excreo, uma vez que grande parte das purinas absorvida para o fgado e, este sim, encarrega-se de convert-las em cido rico e excret-lo por via urinria. Des-
ta forma, um excesso de adenina e guanina na alimentao resultar em uma excreo aumentada de cidos nuclicos, da mesma forma que uma alimentao em excesso dos aminocidos envolvido na sntese de purinas. As purinas so convertidas em xantina (a adenina, primeiramente em hipoxantina) que convertida em cido rico pela enzima xantina-oxidase. Uma enzima reguladora, a hipoxantina-guanina-fosforribosiltransferase (HGPRTase) catalisa a recuperao de adenina e hipoxantina (derivada da guanina) para uma sntese de novo de IMP, GMP ou AMP, conforme haja a necessidade celular para a sntese de cidos nuclicos ou outras funes dos nucleotdeos. O acmulo de cido rico no organismo (hiperuricemia) observado quando h uma hiperatividade enzimtica da enzima PRPP-sintetase ou por diminuio da atividade da HGPRTase, levando, em ambos os casos, a uma superproduo de cido rico. Uma outra condio patolgica de hiperuricemia observada quando h a diminuio da atividade da enzima glicose-6fosfatase que possibilita a liberao de glicose do fgado para o sangue, fazendo com que, desta forma, haja um excesso de glicose heptica aumentando a sntese de pentoses e, consequentemente, a de cido rico. Todas essas alteraes enzimticas so hereditrias e caracterizam uma doena metablica denominada gota, que caracterizase por acmulo de cido rico nas articulaes levando a um processo inflamatrio doloroso que reversvel mediante a diminuio de alimentao rica em material celular (carnes vermelhas, principalmente) e uso de medicamentos bloqueadores da sntese de cido rico.
2.
Metabolismo das pirimidinas
A partir dos aminocidos noessenciais glutamina e aspartato, h a sntese de cido ortico, que combina-se com o PRPP fornecendo a uridina-monofosfato (UMP) formando, posteriormente, UTP que pode ser convertido em citidina-monofostato
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(CTP) pela adio de glutamina. O UMP pode ser convertido em timidina-monofosfato (TMP) e este em TTP. Esses nucleotdeos so utilizados para a sntese das bases nitrogenadas uracila, citosina e timina, que fazem parte das molculas de DNA e RNA, ou so utilizadas no metabolismo energtico celular. Da mesma forma que as purinas, essas bases nitrogenadas possuem uma independncia celular de substratos alimentares (a exceo da ribose, claro, considerando-se sua origem a partir da glicose).
Assim sendo, a ingesto de pirimidinas na alimentao leva converso heptica de citosina e uracila no aminocido nocodificado -alanina, um importante precussor da coenzima-A junto com a vitamina cido pantotnico, enquanto que a timina convertida em -amino-iso-butirato, um precussor da neoglicognese e que pode ser excretada na urina. Na Figura 10- 32 est representado um esquema relatando as principais vias do metabolismo das bases nitrogenadas.
Figura 10-32 - O Metabolismo das bases nitrogenadas est relacionado com a formao de produtos de excreo (cido rico) ou de intermedirios metablicos (-alanina e cido -NH2-isobutrico).
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O que vida?
Ricardo Vieira Professor de Bioqumica - Universidade Federal do Par E-mail: jrvieira@ufpa.br O conceito de vida no privativo da cincia, da mesma forma que no pode a religio ou a filosofia requerer a propriedade deste conceito. Em cincia, instrumento de estudo dos fenmenos naturais abordados neste Curso, no importa saber o que a vida como um conceito pronto, mas sim estudar e discutir o que a vida, baseado em evidncias comprovadas e reproduzveis pelos cientistas. Muitos cientistas pensaram nisto antes de se chegar ao estgio atual do conhecimento cientfico, por isso indispensvel saber o papel desempenhado por esses grandes nomes dentro desse contexto em que a vida tambm est inserida, a cincia.
A evoluo cientfica do conceito de vida Idade Mdia (Sculo V a XV)

Poder religioso-medieval estabelece uma limitao criativa de ordem poltica e cultural (1000 anos de escurido). O imaginrio popular adota conceitos excntricos para a origem da vida. A abiognese torna-se a nica forma no-bblica de se explicar a origem da vida a ser disseminada na antiguidade clssica. A igreja catlica impe fora seus conceitos, porm ignora a abiognese, talvez por ach-la inofensiva ou por considerar que o poder divino criativo possa continuar se manifestando. Cavaleiro Medieval
A exploso de idias do Sculo XVI a XVIII

Experimento de Redi A teoria da gerao espontnea ganha grande divulgao dentre os meios cientficos. Francesco Redi (1621 - 1697) combate a teoria da gerao espontnea provando que as moscas precisam que outras moscas para que surjam novas moscas. Lazaro Spalanzani (1729 - 1799) demonstra que necessrio contato com o ar para que se apodrea material orgnico fervido previamente sugerindo a natureza biolgica da putrefao dependente de fatores no visveis presentes no ar.
Em 1543, Nicolau Coprnico contradiz a Igreja e demonstra que a Terra no o centro do Universo. Isaac Newton, em 1665, estabelece a lei da gravitao universal, (fundamento das modernas teorias da origem do universo). Lineu cria o sistema de classificao das espcies em 1735. Lavosier (1743-1794) cria a qumica moderna (da bioqumica atual). Em 1618, os alemes dominam a tecnologia de aparelhos pticos e inventam o primeiro microscpio. Robert Hooke visualiza a clula em 1665. Leeuwenhoek, em 1674, descobre a existncia dos espermatozides e em 1683 demonstra a existncia de vida microscpica. Isaac Newton
O que vida?
Em 1637 e 1641, Ren Decartes publica o trabalho que fundamenta o pensamento cientfico atual, criando o mtodo cientfico que se baseia na observao e comprovao seguindo rgida interpretao e teorizao do fenmeno observado. Durante esse perodo, muitos cientistas tiveram que abdicar de seus pensamentos para no serem condenados em tribunais da inquisio. Ren Decartes
Antoine-Laurent Lavosier
Sculo XIX: a cincia emite conceitos de vida
Theodore Schwan & Matthias Schleiden, em 1839, estabelecem os fundamentos da Teoria Celular: todos organismos so feitos de clulas; as clulas so as unidades bsicas da organizao dos seres vivos; cada clula desenvolve-se e funciona de maneira independente. Robert Virchow, em 1850, consolida a teoria celular: omnis celluae e celluae: toda clula provm de uma clula prexistente. Schwan & Chleiden
Em 1858 o monge austraco Gregor Mendel publica seus experimentos de hibridizao com ervilhas realizados no jardim de seu mosteiro e conclui existirem fatores hereditrios que segregam independentemente nas geraes. Seu trabalho no compreendido pela comunidade cientfica devido ao complicado fundamento matemtico e a no existncia de evidncias de quais seriam esses fatores hereditrios. Gregor Mendel
Robert Virchow
Charles Darwin e Alfred Wallace, em 1858, elaboram, independentemente, a teoria da Evoluo por Seleo Natural. Darwin publica o livro A origem das espcies aps 30 anos de estudos e reflexes. Em 1866, Ernest Heinrich Haeckel publica seus trabalhos estabelecendo o Reino Monera para as bactrias e afirmando que as clulas primordiais no incio dos tempos eram agrupamentos protoplasmticos (a quem denomina Protamoeba primitiva) e que sua formao ainda ocorre em locais onde no h competio entre os seres primitivos e os mais avanados. Era o ressurgimento da abiognese em formado cientfico adequado s modernas teorias da evoluo.
Charles Darwin & Alfred Wallace
Thomas Henry Huxley (apelidado de o bulldog de Darwin devido a sua rgida defesa s teorias da evoluo) descreve uma forma protoplasmtica primitiva encontrada no lodo de fossas abissais
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O que vida? conservado em lcool e a denomina Bathybius haeckleli em homenagem a Haeckel.
Tem incio a onda Bathybius que trs tona a discusso da possibilidade da vida poder surgir espontaneamente a partir de reaes qumicas. Em 1873 tem incio a Expedio Challenger que viaja pelo mundo colhendo e analisando amostras do lodo de fossas abissais ainda frescas e comprova que Bathybius no passa de um artefato produzido pelo lcool utilizado como conservante por Huxley.
Thomas Henry Huxley A expedio Challenger (1873 - 1875)
O Sculo XX: abiognese, de novo
Uma nova abordagem para a abiognese surgiu da demonstrao que a vida fruto espontneo de reaes qumicas a partir de elementos qumicos fundamentais existentes em todo o universo conhecido. Em 1929, John Haldane e Aleksander Oparin comprovaram que a atmosfera primitiva no continha O2 mas elementos que hoje no mais existem na atmosfera atual. Harold C. Urey, em 1952, sugeriu que a atmosfera primitiva tinha a mesma composio da poeira estelar (H2, NH3, CH4, H2O). Em 1953, Stanley Miller, estudante de Urey, criou um aparato para sntese de compostos orgnicos a partir de elementos da atmosfera primitiva.
Aparato de Miller Stanley Miller
Esta teoria de que a vida surgiu de uma sopa csmica nica, radicalmente diferente da teoria de Hackel, pois necessrio que haja condies atmosfricas prprias (que no mais existem) e um tempo de bilhes de anos at um estgio de organizao molecular que suporte a vida. Somente com a utilizao do Carbono14 como mtodo de datao que se pde estabelecer a idade tempo provvel da Terra (cerca de 4,5 bilhes de anos) e esta teoria ganhou fora dentro do meio cientfico.
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O que vida?
O Sculo XX: o sculo da gentica
Thomas Morgan Rosalind Franklin
Maurice Wilkens Linus Pauling
O sculo XX trs como sua marca registrada o surgimento e incrvel expanso de uma cincia revolucionria que ousa entender e at recriar a vida: a gentica. Em 1900, de Vries, Correns e Tchermann redescobrem o trabalho de Mendel. Alfred Stustevant e Thomas Morgan iniciam os mesmos estudos de Mendel utilizando com Drosophila melanogaster como modelo e chegam s mesmas concluses mas sugerem a existncia de ligao gnica. O mapeamento gnico torna-se possvel atravs de estudos de ligao, antes mesmo de ser decifrado o cdigo gentico. Aps a comprovao de que o DNA o material gentico em 1944 por Avory, vrios cientistas iniciam uma corrida para a descoberta da estrutura de sua molcula. Linus Pauling estuda a composio qumica. Rosalind Franklin e Maurice Wilkens descrevem a forma em dupla hlice. Mas o trabalho terico de Watson e Crick que em 1953 estabelece a estrutura da molcula de DNA e abre caminho para a moderna gentica molecular que revoluciona a cincia criando novos paradigmas e levantando questes ticas. A vida passa a ser estudada em experimentos que vo do seqenciamento do genoma de vrios seres vivos, inclusive o homem at a clonagem de organismos complexos, inclusive o homem.
Watson & Crick
E o Sculo XXI?: uma opinio pessoal

As tcnicas de biologia molecular prometem ser a ferramenta ideal para desvendar o funcionamento dos organismos vivos. Bem distante de se estabelecer novos conceitos para a vida, a cincia deve dissecar as molculas e encontrar as respostas para descrever como a vida funciona. A molcula alvo o DNA de onde se pode tirar concluses baseadas na simples decodificao de sua seqncia e o estudo de como o gene se expressa e regula. O estudo do genoma favorecer a compreenso de vrios mecanismos biolgicos e os mtodos de clonagem e de DNA recombinante traro a comprovao das novas teorias formuladas. A cincia deve superar os problemas ticos para se estabelecer como testemunha de como a vida gerada. A busca incessante por vida extraterrestre em planetas vizinhos, como Marte, deve prosseguir por todo este sculo. Os resultados so imprevisveis, podendo modificar drasticamente os conceitos atuais de vida, ou, simplesmente, mant-los. Entretanto, independente do progresso cientfico, a resposta para a pergunta o que vida? continuar com suas mltiplas respostas. A diferena que a resposta da cincia dever estar bem mais fundamentada. E voc? J pensou sobre o assunto?
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A origem das biomolculas

Ricardo Vieira Professor de Bioqumica - Universidade Federal do Par E-mail: jrvieira@ufpa.br
pesar de frgil as evidncias em virtude do insignificante nmero de planetas estudados (somente a Terra!), a vida terrestre se apia na existncia de gua disponvel em estado lquido, alm de temperatura compatvel com o estgio de vida e de elementos qumicos essenciais como hidrognio, carbono, nitrognio oxignio, sdio, magnsio, fsforo, enxofre, potssio, clcio, mangans, ferro e zinco (Tabela 1). O clssico experimento de Miller (Figura 1), em 1953, demonstrou a possibilidade da formao de aminocidos, carboidratos e nucleotdeos a partir de uma mistura de gs hidrognio (H2), gs nitrognio (N2), dixido de carbono (CO2), gua (H2O), amnia (NH3) e metano (CH4) submetido a descargas eltricas e radiao ultravioleta em temperatura compatvel provvel atmosfera primitiva terrestre. Esta suposta composio qumica mnima perfeitamente plausvel uma vez que tais componentes encontram-se disponvel em todo o universo e, certamente, deveriam estar presentes em uma Terra recm-nascida (h torno de 4,6 bilhes de idade), conforme sugerido por John Haldane e Aleksander Oparin em 1929 e por Harold C. Urey em 1953. claro que qualquer outro composto qumico presente poderia favorecer combinaes diferentes gerando produtos ainda mais complexos. O tempo de cerca de um bilho de anos disponvel desde a origem da Terra at o surgimento da vida, h 3,4 bilhes de anos, permitiram que, aleatoriamente, tais compostos complexos fossem formados. Desta forma, vivel a teoria que se uma molcula orgnica formada espontaneamente tivesse a propriedade de catalisar a sntese de outras molculas idnticas, em algum momento o agrupamento de tais molculas poderia levar reproduo de um conjunto de molculas com caractersticas qumicas semelhantes, onde o equilbrio qumico formado entre seu processo de sntese e degradao favoreceria a multiplicao de tais conjuntos de molculas.
Tabela 1 Abundncia relativa de elementos importantes para a vida em nmero de tomos por cada 1.000 tomos de carbono. Elemento Hidrognio Carbono Nitrognio Oxignio Sdio Magnsio Fsforo Enxofre Potssio Clcio Mangans Ferro Zinco Abundncia em organismos 80 250 1.000 60 300 500 800 10 20 2- 8 8 50 4 20 6 40 24 50 0,25 0,8 0,25 0,8 0,1 0,4 Abundncia no universo 10.000.000 1.000 1.600 5.000 12 200 3 80 0,6 10 1,6 100 0,12
(Fonte: CAMPBEL, 1995 p.13) O experimento de Miller no se resume em demonstrar a formao de compostos orgnicos apenas de maneira aleatria, pois, se assim fosse, a probabilidade de as reaes qumicas se repetissem de maneira ordenada (como ocorre nos seres vivos) seria quase zero tendo em vista as inmeras combinaes possveis entre os tomos e molculas. Mas, diferente de uma reao apenas aleatria, as molculas primordiais tm que adquirir propriedades de autocatlise para poder justificar o prosseguimento das reaes qumicas em um sentido: o da vida. Parece difcil acreditar que algo to simples advindo de um evento aleatrio poderia gerar a diversidade de vida de nosso planeta. De fato, os nucleotdeos podem se polimerizar de maneira espontnea em reaes qumicas em condies semelhantes atmosfera primitiva, porm os aminocidos no tm essa capacidade nem os carboidratos.
Figura 1
O aparato de Miller: vapor dgua misturado a componentes elementares no universo sob a ao de descargas eltricas permite a sntese de molculas orgnicas. Acima, o Dr. Stanley Miller Fonte: http://www.accessexcellence.com/WN/NM/miller.html Com os trabalhos de Sidney Altman, Thomas Cech, Francis Crik e Leslie Orgel (todos ganhadores de Prmio Nobel), tornou-se plausvel a teoria de que uma molcula formada espontaneamente em condies primitivas pudesse autocatalisar a sntese de outras molculas, agora no mais randomicamente, mas organizadamente e de maneira idntica (CECH, 1986; LEWIN, 1986). Este mundo pr-bitico onde uma espcie de sopa orgnica fervilhava ao calor e descargas eltricas e novas macromolculas complexas que se multiplicavam, agora poderia abrigar um sistema qumico estvel, assim que as condies de reao qumica da Terra permitissem (Figura 2). Provavelmente, vrios milhes de anos se passaram at a organizao de um sistema micelar onde partculas lipdicas pudessem proporcionar um microambiente aquoso diferente do meio externo e as reaes qumicas pudessem ocorrer de maneira organizada. De fato, a propriedade apolar dos lipdios um trunfo especial neste perodo pr-bitico, onde as molculas podem experimentar uma sorte de combinaes que se adaptam ou no s condies ambientais. Assim, as molculas de RNA que conseguem catalisar sua prpria sntese podem ser selecionadas nessas microesferas lipdicas e se multiplicar em bloco, uma protoclula.
Hoje, sabe-se que as protenas com funo enzimtica so os catalisadores biolgicos por excelncia e a impossibilidade de serem sintetizadas em condies primitivas um empecilho para a elaborao de uma teoria que abrangesse a origem de um sistema biolgico na ausncia de tais enzimas. Somente com a descoberta, em 1982, de que a enzima peptidiltransferase (que catalisa a ligao peptdica que ocorre nos ribossomos durante a sntese protica) uma molcula de RNA, pde-se formular teorias mais consistentes. Vrios estudos demonstram a presena dessas molculas de RNA em outros sistemas biolgicos (p.ex.: em retrovrus), como reguladores do processo de splicing da molcula de RNAm ou at mesmo sintetizadas em laboratrio com propriedades catalticas, sendo denominadas de ribozimas (Tabela 2). Tabela 2 Reaes catalisadas por ribozimas Reao Formao de ligaes peptdicas Clivagem de RNA, ligao de RNA Clivagem de DNA Splicing de RNA Ligao de DNA Polimerizao, fosforilao, aminoacilao e alquilao de RNA Isomerizao (ligao C-C) Ribozima RNA ribossomal
Auto splicing de RNA
RNA sintetizado in vitro
(Adaptado de ALBERTS et al., 1999, p. 241) Ricardo Vieira
Sidney Altman
Thomas Cech
Francis Crick
Leslie Orgel
Figura 2
A molcula de RNA com poder cataltico deve ter sido a primeira biomolcula a ter sido sintetizada de maneira no randmica, o que garantiu a perpetuao das molculas mais estveis durante milhes de anos de experimentao aleatria. Acima, os autores desta teoria que supe um mundo de RNA pr-bitico. (Fotos: www.nobel.se)
Esses microambientes ricos em macromolculas favoreceram a ao cataltica dessas ribozimas sobre aminocidos (gerados por sntese randmica), gerando polipetdeos especficos que, em virtude de suas propriedades qumicas naturais, passam a exercer uma ao cataltica mais complexa e, em um frentico processo de sntese orgnica, chegam a formar um agrupamento de biomolculas que reagem entre si reguladas por um equilbrio qumico especfico que, quando no adaptado s condies qumicas do ambiente, levam ao decaimento das concentraes dos substratos e aquele ambiente reacional deixava de existir.
Este processo primitivo de morte selecionou os grupos de molculas mais adaptados quimicamente s condies ambientais e a seleo natural passa a exercer sua ao evolutiva permitindo a sobrevivncia dos mais adaptados. A seleo natural no a essncia da evoluo, mas o principal mecanismo pelo qual as espcies hoje adquirem sua adaptabilidade e diversidade gentica. Mesmo as biomolculas primordiais estavam sujeitas s leis da evoluo e, mesmo sem haver um objetivo especfico a ser atingido, as biomolculas foram diversificando-se em protoclulas e criando massa crtica para o Ricardo Vieira
A origem das biomolculas surgimento da primeira clula primitiva inaugurando a vida em nosso planeta. Um momento crtico para o surgimento da primeira clula era a existncia de estruturas qumicas que possibilitassem reaes em ambientes aquosos diferentes ao do meio externo. Em 1972, o cientista americano Sidney Fox demonstrou a formao de microesferas aps o aquecimento contnuo dos compostos orgnicos do experimento de Miller (Figura 3).
Figura 3 As microesferas de Sidney Fox e seu descobridor, indicado para o Prmio Nobel por seu trabalho. (Fonte: http://www.siu.edu/~protocell Tais teorias so fortemente apoiadas por experimentos cientficos rigidamente controlados, realizados por renomados cientistas e publicadas em revistas cientficas especializadas com rgido corpo editorial. Todavia no so isentas de crticas, pois apenas pintam um cenrio qumico provvel para o surgimento da vida em tempos imemoriais. A comprovao poder ser feita caso seja encontrado outros sistemas biolgicos primitivos em outros planetas com condies afins s propostas pela cincia atual. Ainda assim, restar a dvida: no poderia a vida ter sido originada aqui na Terra e enviada para esses ambientes extraterrestres atravs de meteoritos, por exemplo. Ou ento o contrrio: a vida teria surgido em outro lugar, que no a Terra e para c migrado em cometas ou meteoros?
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ALBERTS B, BRAY D, ALEXANDER J, LEWIS J, RAFF M, ROBERTS K & WALTER P. Fundamentos da Biologia Celular: uma introduo biologia molecular da clula. Artmed, Porto Alegre, 1999. nd CAMPBELL MK. Biochemistry. 2 ed., Saunders College Publishing. Philadelphia, 1995. CECH TR. RNA as an enzyme. Sci. Amer. 255 (5), 64-75, 1986. LEWIN R. RNA Catalysis Gives Fresh perspective on the origin of life. Science 231, 545-546, 1986. LITERATURA RECOMENDADA ARTHUR W. The emerging conceptual framework of evolutionary developmental biology. Nature, 415(14):757764, 2002 CAIRNS-SMITH AG. The first organisms, Sci. Amer. 252 (6), 90-100, 1985. FUTUYMA DJ. Biologia Evolutiva. Sociedade Brasileira de Gentica/CNPq. So Paulo, 1993. GODFREY J. The Wonderland of primordial life: Book review. Nature, 405, 619 - 620 (08 Jun 2000) LENTON TM. Gaia and natural selection. Nature, 394, 439 447, 1998. VIDEIRA AAP & EL-HANI CN. (Eds.) O que vida? Para entender a biologia do sculo XXI. Faperj/Editora ) Relume Dumar. Rio de Janeiro, 2000. REFERNCIAS DA INTERNET A Brief History of Biochemistry: http://www.wwc.edu Biologia Evolutiva http://www.nceas.ucbs.edu/lroy/lefa/lophodon.html Entrevista com Dr. Stanley Miller: http://www.accessexcellence.com/WN/NM/miller.html Microesferas de Sidney Fox: http://www.siu.edu/~protocell/ O que vida? http://www.nbi.dk/~emmeche The Nobel Prize Oficial Site: http://www.nobel.se
Ricardo Vieira
O que vida?
LITERATURA RECOMENDADA VIDEIRA, A.A.P & EL-HANI, C.N. O que vida? Para entender a biologia do sculo XXI. Faperj - Editora Relume Dumar. Rio de Janeiro, 2000. INTERNET O que vida? http://www.nbi.dk/~emmeche Biologia Evolutiva: http://www.nceas.ucbs.edu/lroy/lefa/lophodon.html Carta de Thomas Huxley sobre a inexistncia de Bathybius - Nature (August 1879): http://aleph0.clarku.edu/huxley/UnColl/Nature/Rep-BAAS.html The Challenger Expedition: http://www.oceansonline.com/challenger_ex.htm Entrevista com Dr. Stanley Miller: http://www.accessexcellence.com/WN/NM/miller.html Microesferas de Sidney Fox: http://www.siu.edu/~protocell/
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Para testar seus conhecimentos

Para navegar na Internet

Biomania: http://www.biomania.com.br/mapasite/map.htm Biochemistry On-Line: http://www.biochemist.com/home.htm Bioqumica y Biologa Molecular en la Red:

Science: http://intl.sciencemag.org/ Nature: http://www.nature.com/

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