UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA E ENGENHARIA DE ALIMENTOS

PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA DE ALIMENTOS
ESTGIO DOCNCIA NA DISCIPLINA DE ENGENHARIA BIOQUMICA











Transferncia de Oxignio






Francielo Vendruscolo












Florianpolis, junho de 2007.

2
1. Transferncia de Oxignio
1.1 Importncia da Transferncia de Oxignio
Do ponto de vista bioqumico, o oxignio o ltimo elemento a aceitar eltrons,
ao final da cadeia respiratria, sendo ento reduzido a gua, permitindo que ocorra a
reoxidao das coenzimas que participam das reaes de desidrogenao (ao longo
da gliclise e do ciclo de Krebs) e, ainda, permitindo o armazenamento de energia
atravs da passagem das molculas de ADP para ATP. Estas ltimas, por sua vez,
iro participar necessariamente nas reaes de sntese de molculas, para a
sobrevivncia das clulas e para o surgimento de novas clulas, no processo de
proliferao da biomassa microbiana, para as quais fundamental a introduo de
energia (Borzani Schmidell et al., 2001).
Um cultivo que seja eficiente, ocorrendo com elevadas velocidades de
crescimento celular, significa altas velocidades de consumo da fonte de carbono, a fim
de que haja abundncia de eltrons transportados na cadeia respiratria (gerao de
ATP), mas significa tambm, obrigatoriamente, a necessidade da existncia de
oxignio dissolvido, a fim de que eltrons sejam drenados ao final desta cadeia.
Atravs da equao estequiomtrica de oxidao completa da glicose, pode-se
perceber a magnitude do problema enfrentado quando se trata do fornecimento de
oxignio para a respirao do microrganismo.
O H 6 CO 6 O 6 O H C
2 2 2 6 12 6
+ + (eq. 1)
2 5 2 6 12 6
CO 2 OH H C 2 O H C + (eq. 2)
Verifica-se que para 180g (1 mol) de glicose oxidada, necessrio o consumo
de 192g (6 moles) de oxignio. A solubilidade da glicose em meios de cultivo alta,
centenas de gramas por litro, enquanto que a solubilidade do oxignio no meio de
cultivo e at mesmo na gua, muito baixa, estando na ordem de 7 a 8mgO
2
.L
-1
,
dependendo da presso atmosfrica e da temperatura.










3
1.2 Sistemas para transferncia de oxignio
Existem diferentes maneiras para se transferir oxignio do ar para um lquido.
Alguns possuem maiores poderes de transferncia, embora apresentam alto custo.
A seguir, alguns sistemas de transferncia so apresentados nas figuras.



Figura 1: Sistemas de transferncia utilizados em biorreatores. (a) lagoa de
estabilizao, (b) airlift de tubo concntrico, (c) airlift com circulao externa, (d) coluna
de bolhas, (e) tanque agitado e aerado.
O sistema apresentado na Figura a, apresenta um simples sistema de
transferncia. Neste sistema, a transferncia ocorre somente na superfcie do lquido.
So sistemas que no possuem alto custo relativo, pois no possui sistema de
aerao e agitao. A transferncia s afetada pela temperatura, rea superficial do
lquido e velocidade do ar na superfcie.
As Figuras b e c apresentam biorreatores do tipo airlift (tubos concntricos e
circulao externa). A transferncia de oxignio nestes biorreatores realizada
somente pela aerao. O gs injetado (ar) atravs de um dispersor, forma bolhas que
se deslocam do fundo ao topo do biorreator. Neste caminho, ocorre a transferncia de
4
massa. Estes biorreatores a agitao do meio de cultivo realizada pela prpria
aerao, resultando em baixas tenses de cisalhamento para o microrganismo que
est sendo cultivado. Pela ausncia de agitao, este sistema muito utilizado,
possibilitando transferncia de oxignio com um baixo custo relativo. A Figura d
apresenta um sistema denominado como coluna de bolhas. Este sistema funciona
como o airlift com tubo concntrico. Por outro lado, estes biorreatores necessitam de
maiores vazes de ar para manter nveis de oxignio dissolvido e intensa agitao, o
que significa maior gasto de energia para compresso do ar. Uma caracterstica que
pode ser verificada neste tipo de equipamento, est relacionado a altura do mesmo
que muitas vezes maior que o dimetro, o que comumente no visto nos tanques
agitados. Essa altura muito maior que o dimetro, possibilita maior tempo de contato
das bolhas de ar com o lquido.
A Figura e apresenta um sistema muito utilizado em sistemas que necessitam
de alta transferncia de oxignio. Estes biorreatores so aerados e agitados, possuem
em seu interior chicanas e impelidores que aumentam a turbulncia do meio lquido
com o gs, embora apresente custo relativamente alto devido aerao a agitao do
biorreator. Para o cultivo de microrganismos sensveis, estes equipamentos no so
indicados, pois existem altos gradientes de cisalhamento, podendo danificar o
microrganismo. Estes biorreatores apresentam a altura de lquido igual ao dimetro do
tanque sendo agitado por um impelidor do tipo turbina com 6 ps planas. Com a
finalidade de eliminar a formao do vrtice, utiliza-se a chicana diretamente oposta.

1.3 Concentrao de Oxignio Dissolvido em meios de cultivo
A equao que determina a concentrao de saturao de um gs em um
lquido a seguinte:
g s
p H C . = (eq. 3)
Onde: C
s
= concentrao de oxignio na saturao (gO
2
.m
-3
);
H = constante de Henry (gO
2
.m
-3
.atm
-1
);
p
g
= presso parcial de O
2
na fase gasosa (atm) = x
O2
.P;
x
O2
= frao molar ou volumtrica do O
2
no gs;
P = presso total do gs (atm).
Sendo assim, ao variar a composio do meio de cultivo e utilizando o mesmo
gs para a transferncia de oxignio (ar), pode-se obter diferentes concentraes de
saturao de oxignio. Esta variao devida a alterao da constante de Henry para
cada meio de cultivo. Pode-se concluir ento, que a constante de Henry varia de
acordo com a temperatura e concentrao de nutrientes do meio de cultivo.
5
A Tabela 1 apresenta alguns dados a respeito da solubilidade do oxignio, na
condio de saturao, para diferentes temperaturas, presso parcial de oxignio na
fase gasosa e presena de sais dissolvidos.
Tabela 1: Valores de concentrao de oxignio dissolvido na saturao, em
diferentes condies.
Temp.(C) Conc. NaCl
(M)
P. Parc. de O
2

(atm)
Conc. O
2
na sat.
(mg/L)
Cte Henry
(mg/L.atm)
25 - 0,209 8,10 38,8
35 - 0,209 6,99 33,4
25 - 1,0 40,30
25 0,5 1,0 34,20
25 1,0 1,0 28,50
25 2,0 1,0 22,70
Fonte: Borzani et al. (2001).
Pode-se observar que a concentrao de oxignio dissolvido diminui com o
aumento da temperatura, assim como diminui com o aumento da concentrao de um
sal dissolvido. Por outro lado, a concentrao de O
2
aumenta com o aumento da
presso parcial de oxignio na fase gasosa, como seria o caso de saturar gua com
oxignio puro (presso parcial de O
2
de 1atm), atingindo-se 40,3mg/L no equilbrio a
25.
Analisando a Tabela 4, poderamos concluir que quanto menor a temperatura,
maior a concentrao de saturao. Isto verdade, mas no serve para o cultivo de
microrganismos, pois na maioria dos processos fermentativos trabalha-se na faixa
mesoflica de temperaturas (35C). Pode-se perceber a importncia da temperatura na
solubilidade de um gs em um lquido.
A utilizao do enriquecimento do ar com oxignio, aumentando a presso
parcial de oxignio no gs, uma alternativa interessante e muito utilizada. Na Frana,
existe uma estao de tratamento de efluentes que utiliza ar enriquecido com oxignio
em sua planta, devido ao espao territorial ser limitado. A utilizao de oxignio puro,
no vivel ao microrganismo, pois eles possuem inibio ao oxignio.
Falando em concentrao de saturao de oxignio dissolvido, vlido lembrar
que sempre trabalhamos com lquidos que contem diversos componentes qumicos no
incio de um cultivo. Esta composio alterada de acordo com o incio do
crescimento dos microrganismos, pois nutrientes sero consumidos, produtos
liberados, compostos txicos produzidos, compostos intermedirios excretados. Toda
esta alterao no meio de cultivo reflete diretamente na concentrao de saturao de
oxignio em um dado meio de cultivo.
Para a leitura da concentrao de oxignio no meio de cultivo utilizam-se
eletrodos polarogrficos ou galvnicos. Citando como exemplo, os eletrodos
6
galvnicos, reduzem o oxignio na superfcie do ctodo atravs de uma soluo
colocada na extremidade do eletrodo. O oxignio permeia uma membrana que s
permite a passagem de oxignio e ento reduzido atravs do contato com o eletrlito
gerando um fluxo de eltrons.
Esses eletrodos devem ser calibrados para utilizao em um cultivo. A cada
utilizao do eletrodo, deve-se substituir o eletrlito, deixar de 6 a 12 horas ligado
polarizando o eletrlito, dependendo da especificao tcnica do fabricante. Tambm
necessrio, a cada cultivo, realizar a calibrao do eletrodo, antes de se iniciar a
inoculao do meio de cultivo. Neste procedimento, o objetivo indicar a constante de
Henry ao eletrodo, que ir informar valores entre zero e 100% em relao a
concentrao de saturao.
Calibrao do eletrodo: Aps as 6 ou 12 horas de polarizao, adiciona-se
nitrognio (gs inerte) no meio lquido mediante intensa agitao com o porpsito de
eliminar o oxignio dissolvido no meio de cultivo. Quando o eletrodo indicar valores
abaixo de 1% (especificao do fabricante), deve-se informar ao equipamento o valor
zero, setando atravs dos sistemas de calibrao presente no equipamento. A partir
deste instante, interrompe-se o fornecimento de nitrognio e d-se incio ao
fornecimento de oxignio (ar), novamente agitando o meio de cultivo at que o valor
lido pelo eletrodo permanea constante por um determinado perodo. Quando o valor
lido estiver constante, novamente deve-se informar ao equipamento o valor de 100%.
A partir deste momento, pode-se dar incio ao cultivo do microrganismo adicionando o
inculo ao biorreator. Assim, o eletrodo informar o valor proporcional a concentrao
de saturao, demonstrando a importncia da determinao da concentrao de
saturao de oxignio no meio de cultivo.
Devido a dificuldade de determinar a concentrao de saturao de oxignio no
meio de cultivo, muitos processos utilizam a concentrao de saturao da gua a
dada temperatura que pode ser obtida em referncias bibliogrficas, embora
apresentam um erro de aproximadamente 10 a 15%. A constante de Henry para a
gua em torno de 10 a 15% maior que a constante para o meio de cultivo.
Como estes eletrodos respondem a presso parcial de oxignio, para efetuar
medidas confiveis deve-se manter a presso constante dentro do biorreator, pois
caso exista variao na presso interna, oscilaes sero verificadas no descrevendo
o fenmeno que esteja ocorrendo. Outra considerao que deve ser realizada, diz
respeito a percentagem de saturao a concentrao de saturao inicial, pois o
eletrodo no percebe variaes na concentrao de nutrientes e compostos no meio
de cultivo, ou seja, a constante de Henry est sendo alterada.
7
Uma das grandes dificuldades enfrentadas quando se trabalha com oxignio
dissolvido referente a concentrao de saturao que ser utilizada para clculos e
quantificaes dos valores da concentrao de saturao de oxignio no lquido. Esta
dificuldade est relacionada ao fato da determinao da constante de Henry. Existem
duas metodologias que podem ser utilizadas. A primeira foi proposta por Wincler
(1888) que consiste na determinao da clorosidade (atravs de mtodos de titulao)
do lquido para poder estimar a constante de Henry. A segunda foi proposta por
Kppeli e Fiechter (1981) que consiste em adicionar uma quantidade de oxignio
atravs do perxido de hidrognio (H
2
O
2
) e realizar a liberao do oxignio atravs da
adio de uma enzima catalase, liberando oxignio gasoso e gua. Muitos autores
consideram a concentrao de saturao de oxignio no lquido como sendo gua,
atravs de valores existentes para este parmetro para diversos valores de
temperatura. Esta considerao leva, muitas vezes, a concluses errneas, pois em
alguns meios de cultivos, tanto sintticos como complexos, a concentrao de
saturao do meio de cultivo pode chegar a ser de 80 a 85% o valor da concentrao
de saturao da gua a mesma temperatura.
A reao que descreve a liberao de oxignio no meio de cultivo dada a
seguir:
O H O catalase O H
excesso 2 2 2 2
2
1
+ + (eq. 4)
Em um dado volume de perxido (1 molar) padronizado com permanganato de
potssio, sabe-se a massa de oxignio adicionada. A partir dos dados presentes na
Tabela 2, pode-se determinar a regresso linear da massa de O
2
(varivel
independente) versus percentagem de saturao (varivel dependente) e extrapolar a
mesma para a concentrao de saturao de 100%, determinando a massa
necessria de O
2
para a mesma. O volume deve estar em torno de 360mL para estas
condies.
Maior preciso pode-se ter ainda, se realizar a concentrao de saturao em
diferentes tempos de cultivo, obtendo-se uma relao da concentrao de saturao
em funo da concentrao da fonte de carbono, pois esta rege todo o consumo e
formao de nutrientes para um dado meio de cultivo com concentraes iniciais de
compostos idnticas.





8
1.4 Demanda e Transferncia de Oxignio
O objetivo central de um sistema de agitao o fornecimento de oxignio para
a manuteno de uma dada atividade respiratria de certo conjunto de clulas. Assim,
o que se visa transferir o oxignio da fase gasosa para o lquido e fazer com que
este oxignio dissolvido chegue s clulas suspensas penetre nestas clulas e
finalmente, seja consumido na reao.
Essa questo pode ser visualizada na Figura 2, sendo dividida em trs etapas.
A primeira, diz respeito dissoluo do oxignio do gs para o lquido, a segunda
eventual difuso do oxignio at a clula e a terceira o consumo do oxignio.

Figura 2: Transferncia de massa da fase gasosa para a fase lquida para um dado
microrganismo em biorreator (modificado de Blanch e Clark, 1997).
Na Figura 2, pode-se conceituar as resistncias existentes como sendo:
R
1
: Difuso pela pelcula estagnada da fase gasosa at a interface;
R
2
: Passagem pela interface gs-lquido;
R
3
: Difuso pela pelcula estagnada da fase lquida at o seio do caldo;
R
4
: Transporte convectivo atravs do caldo;
R
5
: Difuso pela pelcula estagnada externa ao agregado celular;
R
6
: Difuso no agregado celular e passagem pela membrana celular;
R
7
: Difuso no citoplasma e reao bioqumica.
No caso da transferncia de oxignio do gs para o lquido, pode-se imaginar
uma primeira resistncia (R1) devido a uma pelcula gasosa estagnada, atravs da
qual o oxignio deve difundir. A seguir, pode-se imaginar uma resistncia na interface
gs-lquido (R2), a resistncia associada a pelcula lquida estagnada ao redor da
bolha de gs (R3) e a resistncia associada ao transporte convectivo do oxignio
atravs do meio lquido (R4).
Com relao ao consumo de oxignio, pode-se imaginar uma resistncia
devido pelcula lquida em torno da clula (R5), outra devido resistncia imposta
pela membrana celular (R6), a resistncia devido difuso do oxignio no citoplasma
e a resistncia associada a velocidade de reao de consumo final deste oxignio
(R7).
9
No caso de clulas eucariticas, poderia existir uma dificuldade para o oxignio
atingir membranas internas das mitocndrias, onde esto localizados os sistemas
enzimticos e as protenas responsveis pela respirao. No caso de bactrias, a
localizao desses sistemas na membrana citoplasmtica, motivo pelo qual no h
realmente razo para considerar essa resistncia. No caso de fungos filamentosos
onde muitas vezes identificado um crescimento em forma de pellets, poderia existir
uma resistncia em termos da difuso do oxignio para as clulas mais internas do
aglomerado. Neste caso, ao mesmo tempo em que o oxignio esta sendo difundido ao
longo do raio do pellet, est sendo consumido pelos microrganismos, o que pode ser
verificado em muitas vezes pela morte de clulas no centro do pellet devido a
dificuldade de chegada de alguns nutrientes, inclusive o oxignio.

1.5 Transferncia de Oxignio
Dentre as vrias teorias que permitem o equacionamento da transferncia de
oxignio, a de maior utilidade para a presente questo exatamente aquela que
considera a existncia de duas pelculas estagnadas. Na Figura 3 busca-se ilustrar,
com maiores detalhes, a interface lquido-gs com as mencionadas pelculas.

Figura 3: Interface gs-lquido com as pelculas estagnadas.
Ao imaginar uma bolha de ar suspensa em um meio lquido, pode-se tambm
supor a existncia de uma pelcula gasosa estagnada, entre o seio gasoso
(homogneo com presso parcial de O
2
constante) e a interface gs-lquido, pelcula
na qual se localizaria a resistncia ao transporte do oxignio, caracterizada pelo
inverso do coeficiente de transferncia da pelcula gasosa (k
g
), coeficiente este
definido pela relao entre a difusividade do oxignio e a espessura da pelcula
estagnada. A transferncia ocorreria apenas por efeito difusional e, portanto, depende
da existncia de um gradiente entre a presso parcial de O
2
na interface (p
i
).
Igualmente na fase lquida pode-se supor a existncia de uma pelcula
estagnada ao redor da bolha, na qual se localizaria a resistncia ao transporte do
oxignio, caracterizada pelo inverso do coeficiente de transporte na pelcula lquida
(k
L
). Aqui tambm o fluxo de oxignio depende, alm do coeficiente de transferncia,
10
da existncia de um gradiente entre a concentrao de O
2
na interface (C
i
) e a
concentrao de O
2
no seio lquido (C).
Para solues diludas envolvendo espcies qumicas pouco solveis, como
o caso do oxignio em caldos fermentativos, a Lei de Henry define as seguintes
relaes:
i
O e i
p H C
, 2
. = (eq. 5)
i
O
e
p H C
, 2
*
. = (eq. 6)
2
.
*
O e
p H C = (eq. 7)
onde: C
i
: concentrao de oxignio dissolvido na interface gs-lquido;
C: concentrao de oxignio dissolvido na fase lquida;
C
*
: concentrao de oxignio dissolvido na fase lquida em equilbrio com a
presso parcial de oxignio da fase gasosa;
p
*
O2,i
: presso parcial de oxignio na interface gs-lquido;
p
*
O2
: presso parcial de oxignio na fase gasosa em equilbrio com a
concentrao de oxignio dissolvido da fase lquida (C);
p
O2
: presso parcial de oxignio dissolvido na fase gasosa;
H
e
: constante de Henry;

Admitindo que o sistema esteja em estado estacionrio, em termos da
transferncia de oxignio, assim como a existncia de um perfil linear da
concentrao de oxignio no interior das pelculas, pode-se escrever:
a resistnci
gradiente
a resistnci
massa sf toradatran forapromo
n
O
= =
.
2
(eq. 8)
gradiente
ilme espessuraf
de difusivida
gradiente
a resistnci
fluxo n
O
. *
1
2
= = =

onde : n
O2
= fluxo de oxignio por unidade de rea interfacial (gO
2
/m
2
.h)
resistncia = inverso do coeficiente de transferncia;

ou seja:
) ( ) ( ) ( ) (
1
2
C C k C C k p p H k p p H k n
i L i s g i L i g g O
= = = = (eq. 9)

onde: k
g
: coeficiente de transferncia de massa da pelcula gasosa (m/h);
k
L
: coeficiente de transferncia de massa da pelcula lquida (m/h);
p
g
: presso parcial de O
2
no seio gasoso (atm);
11
p
i
: presso parcial de O
2
na interface (atm);
p
1
: presso parcial de O
2
em um gs que estaria em equilbrio com a
concentrao de oxignio c no lquido, segundo a Lei de Henry (atm);
H: constante de Henry (gO
2
/m
3
.atm);
C
s
: concentrao de O
2
dissolvido no lquido em equilbrio com a p
g
, segundo a
Lei de Henry (gO
2
/m
3
);
C
i
: concentrao de O
2
dissolvido em equilbrio com p
i
(gO
2
/m
3
);
C: concentrao de oxignio no seio lquido (gO
2
/m
3
).

No entanto no h condies de se conhecer valores relativos interface gs-
lquido, podendo-se determinar valores de concentrao no seio do lquido,
trabalhando-se com um coeficiente global de transferncia de oxignio (soma de todas
as resistncias), ou ainda, tendo em vista a resistncia do filme lquido, pode-se
considerar p
g
=p
i
e, como decorrncia, C
i
=C
s
, a equao 30 pode ser representada pela
equao 31.
) ( ) (
1
2
C C k p p H k n
s L g L O
= = (eq. 10)

Em virtude da intensa movimentao das molculas de gs, a resistncia
transferncia de massa na fase gasosa (R1) pode ser considerada desprezvel e,
portanto, toda a resistncia transferncia de oxignio deve-se a pelcula estagnada
da fase lquida, onde K
g
>>K
L
e K
L
k
L
, logo, pode-se escrever que:
) (
2
C C k n
s L O
= (eq. 11)
Como esse fluxo de oxignio est expresso em termos de unidade de rea
interfacial de troca de massa (gO
2
/m
2
.h), pode-se definir um termo denominado a
como sendo:
|
|

\
|
= =
3
2
det int
m
m
ldelquido volumetota
iademassa ransfernc erfacial rea
a
Multiplicando-se o fluxo de oxignio (nO
2
) pela rea interfacial de troca de
massa (a), dada pela rea superficial das bolhas por unidade de volume de lquido,
define-se a velocidade de transferncia de oxignio (NO
2
). Assim, pode-se escrever:
) (
2 2
C C a k N a n
s L O O
= = (eq. 12)
onde n
O2
a = fluxo de oxignio por unidade de rea interfacial (gO
2
/m
3
.h);
k
L
a = coeficiente volumtrico de transferncia de O
2
(h
-1
)
12
Sendo assim, no estando em estado estacionrio em termos de fluxo de O2,
mas esteja ocorrendo uma variao da concentrao de O2 dissolvido (C) no tempo
(t), pode-se escrever que:
(

=
(

h m
gO
dt
dC
h m
gO
a n
O
3
2
3
2
.
2

substituindo-se, obtm:
) ( C C a k
dt
dC
s L
= (eq. 13)
Esta equao simples descreve todas as formas de que se dispe para o
controle da concentrao de oxignio dissolvido em um dado meio de cultivo.
( )
dt a k
C C
dC
t
L
s
C
C
s

=

0
. ou integrada
t a k
C
C
L
s
. 1 ln =
|
|

\
|
(eq. 14)
ou ainda
) 1 (
.t a k
s
L
e
C
C

= (eq. 15)
Graficando (1-C/C
s
) em um grfico monolog em funo do tempo, a declividade
obtida o valor de k
L
a. Se for log, dividir k
L
a por 2,3.

1.6 Tempo de resposta do eletrodo
Geralmente, no se costuma fazer a correo do tempo de resposta do
eletrodo. Isto se deve, ao fato do oxignio difundir no lquido, permear a membrana,
reagir com o eletrlito e gerar o fluxo de eltrons. Isso pode ser visualizado atravs de
um ensaio degrau. Coloca-se o eletrodo em um ambiente inerte, contendo somente
N2. Quando o eletrodo informar um valor abaixo de 1%, retira-se deste ambiente e
submete-se ao ar atmosfrico cujo valor deve ser 100%. Percebe-se o eletrodo
proporciona um aumento gradual e leve certo tempo para atingir o valor de 100%.
) (
p p
p
C C k
dt
dC
= (eq. 16)

t k
C
C
p
s
p
. 1 ln =
|
|

\
|
(eq. 17)


13
Para verificar a necessidade de correo do tempo de resposta:
t a k
L p
p t k
L p
L
s
p
L
p
e
a k k
k
e
a k k
a k
C
C
.
.
. . 1

+ = (eq. 18)

Se k
p
>>k
L
a no precisa realizar a correo, pois a equao acima retorna a
equao vista anteriormente:
) 1 (
.t a k
s
L
e
C
C

= (eq. 19)

Badino (1997) destaca que a agitao e a aerao em caldos fermentativos
influenciam o produto k
L
a de duas formas. Primeiramente, sabendo-se que o
coeficiente de transferncia de massa da fase lquida (k
L
), pode ser escrito como:

2
O
L
D
k (eq. 20)
onde D
O2
: difusividade do oxignio atravs da pelcula estagnada da fase lquida;
: espessura da pelcula estagnada da fase lquida.
Logo, a agitao e aerao atuam diminuindo a espessura da pelcula
estagnada da fase lquida () e, de acordo com a equao acima, aumentando o
coeficiente de transferncia de massa da fase lquida (k
L
). A segunda forma de ao
da agitao e da aerao a fragmentao das bolhas de gs em nmero maior de
bolhas de menor dimetro, aumentando consideravelmente a rea interfacial de
oxignio (a) e, por conseqncia, o produto k
L
a (Badino 1997).








Figura 4: Determinao da constante de atraso do eletrodo de oxignio dissolvido.





-5
-4
-3
-2
-1
0
0 20 40 60 80
Tempo (s)
l
n
(
1
-
(
C
p
/
C
s
)
)
Kp1=393,48h
-1

Kp2=401,40h
-1

Kp3=415,44h
-1

-5
-4
-3
-2
-1
0
0 20 40 60 80
Tempo (s)
l
n
(
1
-
(
C
p
/
C
s
)
)
Kp1=249,12h
-1

Kp2=248,04h
-1

Kp3=225,00h
-1

14
1.7 Respirao Microbiana
A Tabela 9 apresenta alguns valores da concentrao crtica de oxignio
dissolvido para diferentes microrganismos. Estes valores dizem respeito a quantidade
mnima de oxignio para que as clulas possam respirar sem sofrer danos, sem que
haja a limitao de oxignio disponvel.
A demanda de oxignio em cultivos aerbios pode ser quantificada pela
velocidade especfica de respirao (Q
O2
) definida pela equao Y.
dt
dC
X
1
Q
2 O
O
2
= (eq. 21)
Onde:
X: concentrao celular;
C: concentrao de oxignio dissolvido no meio de cultivo;
dC/dt: velocidade de consumo de oxignio.
A velocidade especfica de respirao determinada pelo tipo de
microrganismo, pela composio do meio de cultivo, assim como pelas condies de
cultivos impostas, como pH, temperatura, entre outros (Badino, 1997).
Tabela 2: Valores tpicos de concentrao crtica de oxignio dissolvido.
Microrganismo T (C) C
crit
(mMol O
2
/L) C crit. (mg.L-1)
Azotobacter vinelandi
30
37,8
0,018~0,049
0,0082
0,576-1,568
0,2624
Escherichia coli 15 0,0031 0,100
Serratia marcescens 31 ~0,015 0,48
Pseudomonas denitrificans 30 ~0,009 0,147
Levedura 20 0,0037 0,118
Penicillium chrysogenum
24
30
~0,022
~0,009
0,704
0,288
Aspergillus orizae 30 ~0,020 0,640
Fonte: Adaptado de Badino (1997).
Atravs da anlise da Tabela 2.3.1, pode-se verificar que uma populao ativa
de microrganismos, pode consumir todo o oxignio de um meio originalmente saturado
pelo ar em 100 segundos. Estes valores podem ser ainda menores, se a concentrao
crtica de oxignio dissolvido for maior, como no caso de microrganismos que apresentam
o crescimento em pellets. Supondo uma concentrao crtica de 2,5mgO
2
.L
-1
,
aproximadamente 30% da saturao, esse tempo diminuiria para 3 a 4 segundos. Rossi
(2006) destaca que esta alta velocidade de consumo de oxignio deve ser igualada por
uma velocidade de suprimento se o objetivo manter a produtividade constante.
15
A velocidade de respirao para um microrganismo qualquer, pode ser escrita
atravs da equao X.
C K
C
Q Q
0
mx
O O
2 2
+
= (eq. 22)
Onde:
Q
O2
mx
: velocidade especfica mxima de respirao;
K
0
: constante de saturao para o oxignio.
A concentrao crtica de oxignio dissolvido pode ser obtida atravs da Figura
5.

Figura 5: Determinao da concentrao crtica de oxignio dissolvido. (a) Ocorrncia
da limitao de oxignio dissolvido durante a execuo do mtodo dinmico (b) Efeito
da concentrao de oxignio dissolvido na velocidade especfica de respirao de um
microrganismo.
A figura X ilustra a variao de Q
O2
com a concentrao de oxignio dissolvido
(C), de acordo com a equao X (acima). Observa-se que a partir de uma dada
concentrao de oxignio dissolvido (C), tem-se a velocidade especfica de respirao
constante e mxima igual a Q
O2
max
. Essa concentrao de oxignio dissolvido
definida como concentrao crtica (C
crit
). Logo, se for desejado manter a mxima
velocidade de respirao durante um determinado cultivo, deve-se monitorar as
condies de agitao e aerao, a fim de manter a concentrao de oxignio
dissolvido acima do valor crtico (Badino, 1997).
Crueger e Crueger (1993) citam que a concentrao de oxignio dissolvido
crtica (C
crit
) situa-se na faixa entre 5 e 25% da concentrao de saturao, sendo este
valor dependente da forma de crescimento celular e da natureza do caldo de
fermentao (viscoso ou no viscoso). A Tabela 9 apresenta valores da concentrao
crtica de oxignio dissolvido para alguns microrganismos.
Equao de Pirtt, destaca o coeficiente de manuteno para =0, sendo:
(a)
(b)
QO
2
.X
16

O
2 O
Y
1
mo Q + = (eq. 23)

Onde: mo: coeficiente de manuteno para o O
2
(gO
2
/g
cel
.h);
Yo: fator de converso de O2 para clulas (g
cel
/gO
2
);
: velocidade especfica de crescimento (h
-1
);
X: concentrao celular (g
cel
.L
-1
)
1.8 Anlise conjunta da transferncia de oxignio
X Q ) C C ( a k
dt
dC
2 O S L
= (eq. 24)

consumido o transferid . conc Variaoda =
X Q ) C C ( a k
2 O critico S L
= (eq. 25)

) C C (
X Q
a k
critico S
2 O
L

= (eq. 26)


Aula 4
1.9 Fatores que Afetam Valores de k
L
a
Existem fatores que afetam a transferncia de oxignio em biorreatores. Dentre
eles, podem-se citar a aerao empregada, traduzida em termos de velocidade
superficial de gs; freqncia de agitao, propriedades reolgicas do meio de cultivo
sendo dependente da morfologia de crescimento do microrganismo, presena de
antiespumantes (Stanbury et al., 1995).
Osbek e Gayik (2001) realizaram um estudo da transferncia de oxignio em
bioreator na ausncia de microrganismos. Avaliaram a velocidade de agitao, vazo
de ar, adio de glicerol e suporte inerte em gua destilada e obtiveram correlaes de
valores de k
L
a utilizando a seguinte relao para a determinao do valor experimental
do k
L
a:
[ ]

S
L
L
V
V
P
A a K
(

= (eq. 27)
Onde: A: constante;
P: potncia requerida pela agitao mecnica (W);
V
L
: volume de lquido (m
3
);
V
S
: velocidade superficial do gs (m/s).
17
Devido a dificuldade para determinao do valor do consumo de potncia
requerido na agitao, os autores substituram o termo relativo potncia dividido pelo
volume de lquido (P/V
L
) pela relao entre a velocidade de agitao e o dimetro do
impelidor (N
3
.D
2
). A equao B1, com estas modificaes, torna-se equao B2.
[ ]

S L
V AND a K
2 , 1
= (eq. 28)
Onde: D: dimetro do impelidor (m)
N: Velocidade de agitao;
A: contante;
e : expoentes.
Esta considerao relatada por alguns autores como sendo o termo relativo
ao consumo de potncia requerido pela agitao.
1.10 Determinao do kLa sob Aerao em Profundidade
A Tabela 3 apresenta os resultados do k
L
a para diferentes valores de
freqncia de agitao e vazo superficial de aerao (Vs) com intuito de caracterizar
a hidrodinmica do biorreator Bioflo III. Estes resultados foram obtidos no meio de
cultivo sob ausncia de biomassa.
Tabela 3: Valores de k
L
a sob aerao em profundidade para diferentes freqncias de
agitao e vazo superficial de aerao.
k
L
a (h
-1
)
0,25VVM 0,5VVM 0,75VVM 1,00VVM
250rpm 5,18 23,64 28,22 32,76
500rpm 47,81 64,80 82,24 87,94
750rpm 39,86 71,44 75,46 83,64
1000rpm 46,72 62,64 91,45 98,50
Atravs da anlise da Tabela 3e da Figura 6 pode-se verificar os resultados
referentes ao coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio para as diferentes
freqncias de rotao e velocidade superficial de aerao.
0
20
40
60
80
100
0 0,25 0,5 0,75 1
Vazo Especfica de Aerao (VVM)
k
L
a

(
h
-
1
)
250rpm
500rpm
750rpm
1000rpm
18
Figura 6: Comportamento do k
L
a em para diferentes freqncias de agitao e vazo
especfica de aerao.
[ ]
49 , 0
S
56 , 0
L
V AN a K = (eq. 29)

[ ]
49 , 0
S
56 , 0
L
V N a K (eq. 30)

Atravs da Figura 6 pode-se verificar a dependncia do kLa com a vazo
especfica de aerao. Como esperado, maiores freqncias de agitao e vazo
especfica de aerao proporcionaram maiores valores de kLa. Atravs dos resultados
experimentais verifica-se a importncia das duas variveis de acordo com a geometria
do biorreator utilizada. Estes resultados so importantes para termos os valores
mximos e mnimos de kLa para cada ensaio realizado, demonstrando a dependncia
de cada varivel no comportamento do kLa.
A Figura 6 apresenta os resultados referentes a obteno da relao de
proporcionalidade entre o k
L
a em funo da freqncia de agitao e aerao
superficial de aerao atravs do software Statistic 6.0 pela estimativa no linear dos
parmetros (Alfa e beta).

1.11 Determinao do kLa sob Aerao Superficial
A Tabela4 apresenta os resultados obtidos para os valores de kLa para
diferentes valores de freqncia de agitao e vazo de aerao superficial com intuito
de caracterizar a hidrodinmica do biorreator Bioflo III, onde, atravs destes valores,
pode-se verificar a interferncia da transferncia de oxignio durante a determinao
do Q
O2
X.
Tabela 4: Valores de k
L
a sob aerao superficial para diferentes freqncias de
agitao e vazo de aerao.
k
L
a (h
-1
)
Freq. Agitao (rpm) 1NL.min
-1
2NL.min
-1
3NL.min
-1
4NL.min
-1

250rpm 1,08 1,08 1,08 1,08
500rpm 2,16 2,16 1,8 2,88
750rpm 1,44 2,60 5,04 7,56
1000rpm 1,44 2,16 1,44 2,88
Os autores buscaram verificar a relao existente entre o coeficiente
volumtrico de transferncia de oxignio (k
L
a) com o termo que substitui o consumo de
potncia requerido na agitao pela relao entre velocidade de agitao e dimetro
do impelidor.
19
Garcia-Ochoa et al. (2000) avaliaram a transferncia de oxignio durante a
produo de goma xantana por Xanthomonas compestris. Os autores estabeleceram
correlaes do coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio com a velocidade
superficial (V
S
), agitao (N) ou potncia de agitao por volume de lquido (P/V) e a
viscosidade () determinada pelo modelo da Lei da Potncia, obtendo-se as seguintes
correlaes:
5 , 0
ef
2 5 , 0
S L
. N . V . 63 , 2 a k

= e
5 , 0
ef
6 , 0
L
5 , 0
S L
.
V
P
. V . 14 , 6 a k

|
|

\
|
=
Falar sobre a coalescncia que pode ocorrer devido ao aumento da
viscosidade, diminuindo a rea de transferncia e ao mesmo tempo est sujando a
superfcie da camada limite do lquido. Geralmente caldos de fermentao possuem
comportamento no-Newtoniano do tipo pseudoplstico, n<1.

2 PRINCIPAIS REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
BADINO JR, A. C. Reologia, consumo de potncia e transferncia de oxignio em
cultivos descontnuos de Aspergillus awamori NRRL 3112. Tese de doutorado
em Engenharia Qumica. Universidade de So Paulo - USP, So Paulo. 1997.
BLANCH, H. W.; CLARK, D. S. Biochemical Engineering. Ed. Marcel Dekker, Inc.
New York. p.702. 1997.
KPPELI, O.; FIECHTER, A. A convenient method for the determination of oxigen
solubility in different solutions. Biotechnology and Bioengineering. v.23, p.1897-
1901. 1981.
OSBEK, B.; GAYIK, S. The studies on the oxygen mass transfer coefficient in a
bioreactor. Process Biochemistry. v.36, p.729-741. 2001.
SCHMIDELL, W; Transferncia de oxignio em biorreatores. In: SCHMIDELL, W.;
BORZANI, W; LIMA, U. A; AQUARONE, E. Biotecnologia industrial: volume 2. So
Paulo: Edgard Blcher, 2001. 541p.









20
Exerccios Resolvidos em Aula
Exerccio 1: Uma cervejaria estava com dificuldades na propagao das leveduras,
pois a quantidade de oxignio que estava sendo transferida no estava satisfazendo a
demanda do processo. A aerao do sistema foi realizada mediante aerao a partir
de um tubo com dimetro de 50mm e o biorreator utilizado foi um sistema de coluna
de bolhas. Qual seria a soluo para o problema desta empresa com respeito ao
oxignio no biorreator da cervejaria?

2 2 2
3 3 3
mm 7854 25 . . 4 R 4 A
mm 65449 25 . .
3
4
R
3
4
V
= = =
= = =



Diminuir o dimetro para 1mm atravs de dispersores ou pedra porosa.
2 2 2
3 3 3
mm 141 , 3 5 , 0 . . 4 R 4 A
mm 523 , 0 5 , 0 . .
3
4
R
3
4
V
= = =
= = =



vezes 50
7854
393069
Razorea
mm 393069 155141 . mm 141 , 3 A
bolhas 125141
523 , 0
65449
e Razovolum
2 2
= =
= =
= =


Exerccio 2: Deseja-se determinar a concentrao de saturao de oxignio
dissolvido utilizando o mtodo de Finkler (perxido de hidrognio) em um dado meio
de cultivo. Sabe-se que a reao da decomposio do perxido de hidrognio pela
catalase a seguinte: O H O catalase O H
excesso 2 2 2 2
2
1
+ + . A partir de uma soluo
1M de H
2
O
2
, determine a concentrao de saturao de oxignio e a constante de
Henry neste meio de cultivo.
Dados: Mol H
2
O
2
= 34g/mol;
H
2
O
2
: 1 molar = 34000mg de H
2
O
2
em 1000mL de gua;
Volume de gua ou meio de cultivo= 0,35L;
Cada mg de H
2
O
2
possui 0,4705 mg de O
2
;
1 litro----------- 34000mg H
2
O
2

Como perxido possui 47,05% de O
2
, tem-se 34000*0,4705=15997mgO2 em 1
litro
1Litro ---------- 15997mgO2
1*10
-6
L--------- 0,01599mgO2 (obs: cada microlitro... multiplicar pelo volume
adicionado).
Tabela 2: Variveis e repostas para determinar a concentrao de saturao.
21
H
2
O
2
(L) H
2
O
2
(mg) O
2
(mg em 0,35L) % saturao
0 0 0 1
10 0,34 0,457 8,2
30 1,02 1,371 24
60 2,04 2,742 44
90 3,06 4,113 64
120 4,08 5,484 83
150 5,10 6,855 98,5
y = 14,379x + 2,9122
R
2
= 0,9971
0
20
40
60
80
100
120
0 1 2 3 4 5 6 7 8
O2
S
a
t
u
r
a

o

(
%
)

X=(100-2,9122)/14,379------- X=6,75mgO
2
.L
-1
Uma vez determinada a Concentrao de saturao, pode-se determinar a
constante de Henry da soluo, sendo:
Cs=H.pg
H=Cs/pg
H=6,75/0,21=32,14 [mgO
2
.L
-1
.atm
-1
]

Exerccio 3: Em equilbrio, sob presso de 1 atm e temperatura ambiente, a gua
apresenta uma concentrao de saturao de oxignio de 8mg/L. Suponha um caldo
fermentativo com uma produo de levedura com concentrao de 20g/L de biomassa
com uma velocidade especfica de respirao de de 0,3gO
2
/gclulas.h. Qual a
demanda de oxignio? Quantas vezes a demanda maior que a solubilidade de
oxignio neste sistema?
X=20g/L;
QO2=0,3 gO
2
/gclulas.h
QO2.X=20*0,3= 6gO
2
/L.h
1
2
2
h 750
h . L . mgO
L . mgO
8
6000

=
(

=
Ou seja, a cada hora o meio de cultivo deve ser saturado 750 vezes se a
concentrao de oxignio dissolvido cair a zero. Caso a concentrao no ultrapasse
o limite de 1mgO
2
.L
-1
, deveramos saturar 857 vezes em uma hora.


22
Exerccio 5
Em um cultivo de levedura, deseja-se determinar o valor da velocidade de
respirao QO2, o valor da concentrao crtica de oxignio para este microrganismo
e o valor de k
L
a. As condies deste cultivo so as seguintes:
Temperatura de cultivo: 25C
Concentrao de saturao de oxignio: 7,0mgO
2
.L
-1

Concentrao de Biomassa: 5g.L
-1

Tempo
(s)
C (%)
0 90
10 89
20 80
30 70
40 60
50 50
60 40
70 30
80 20
90 17
100 15
110 14
120 16
130 18
140 30
150 40
160 50
170 60
180 70
190 80
200 85
210 87
220 88

0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 50 100 150 200 250

y = -0,0694x + 6,965
R
2
= 0,9999
0
1
2
3
4
5
6
7
0 20 40 60 80 100

y = -0,021x + 2,6239
R
2
= 0,9846
-1,4
-1,2
-1
-0,8
-0,6
-0,4
-0,2
0
0 50 100 150 200







23
LISTA DE EXERCCIOS
1- Explique a importncia da transferncia de oxignio em processos aerbios.

2- Qual a importncia do conhecimento da concentrao de saturao de
oxignio no meio de cultivo? Caso esta concentrao seja adotada como sendo em
gua destilada, quais so os possveis erros que sero cometidos? Justifique sua
resposta.

3- Descreva como se d a transferncia do oxignio presente na bolha de gs
at chegar ao microrganismo.

4- Um biorreator possui um k
L
a de 3s
-1
e a concentrao de saturao de
oxignio de 5 ppm. Qual o valor mximo de dC/dt?

5- Qual a etapa limitante na transferncia do oxignio da bolha de gs at o
microrganismo? Explique sua resposta.

6- Quais destes fatores causam aumento na transferncia de oxignio em um
sistema aerado? a) adio de antiespumantes; b) aumento na temperatura e c)
aumento na velocidade de agitao. Descreva o que acontece para cada fator citado.

7- O que a concentrao crtica de oxignio dissolvido, como pode ser
determinada em um cultivo e qual a finalidade do conhecimento dessa concentrao
crtica?

8- Sabe-se que a concentrao crtica de oxignio diferente para cada
microrganismo. Descreva porque existe diferena entre estes valores. Existe variao
deste C
critico
em um cultivo com o mesmo microrganismo? Justifique sua resposta.








24
9- Um cultivo de levedura apresenta a concentrao de biomassa de 5g.L
-1
.
Deseja-se determinar o valor da velocidade de respirao Q
O2
, o valor da
concentrao crtica de oxignio para este microrganismo e o valor de k
L
a. A
concentrao de saturao de oxignio de 6,5mgO
2
.L
-1
. Este cultivo est sendo
realizado a temperatura de 30C e presso constante de 1atm.
A Tabela a seguir apresenta os valores da concentrao de oxignio em
diferentes tempos.
Tempo
(s)
C (%)
0 90
10 89
20 80
30 70
40 60
50 50
60 40
70 30
80 20
90 17
100 15
110 14
120 16
130 18
140 30
150 40
160 50
170 60
180 70
190 80
200 85
210 87
220 88

10- Deseja-se cultivar um fungo filamentoso e uma bactria para a produo de
enzimas. O responsvel pelo processo est em dvida sobre a utilizao de um
biorreator airlift ou biorreator de tanque agitado. Sabe-se que a bactria consome 3
vezes mais oxignio que o fungo filamentoso. D sua sugesto sobre qual biorreator
ele deve utilizar para cada microrganismo e ainda, descreva as vantagens e
desvantagens referentes ao cultivo de microrganismos com relao a transferncia de
oxignio em cada biorreator.




25
11- A partir de uma soluo de perxido de hidrognio a 32% (p/p) foi
preparado 500mL de uma soluo 1M de perxido de hidrognio para determinar a
solubilidade de oxignio em um dado meio de cultivo e na gua destilada a
temperatura de 30C. Os resultados informados pelo eletrodo de oxignio dissolvido
esto apresentados na tabela abaixo. O volume do meio de cultivo e da gua destilada
no recipiente foi de 350mL. Determine a quantidade de oxignio adicionada (em mg)
em cada ponto do experimento. Determine tambm a concentrao de saturao do
meio de cultivo e da gua destilada em mgO
2
.L
-1
. Todas as etapas de clculo devem
ser bem detalhadas e discutidas.
Tabela 2: Variveis e repostas para determinar a concentrao de saturao.
H
2
O
2
(L) O
2
(mg) Saturao meio cultivo (%) Saturao gua (%)
10 8 6,5
30 23 18,8
60 48,6 40,1
90 71,1 58,0
120 94,2 76,8
150 98,2