Embriologia

Biologia do
Desenvolvimento
QUINTA EDIO
Biologia do
Desenvolvimento
QUINTA EDIO
Scott F. Gilbert
Swarthmore College
Traduo e Reviso
Adolfo Max Rothschild
Zuleika Rothschild
Francisco A. de Moura Duarte
Maria Helena Corra Marques
A capa
FOTOGRAFIA DA CAPA: O mRNA para o Fator 8 de Crescimento
Fibroblstico pode ser detectado pela hibridizao in situ da montagem

total usando RNA marcado quimicamente que complementar a
essa mensagem. No embrio de pinto de 3 dias, a mensagem do Fgf8
encontrada no ectoderma mais distal dos brotos dos membros, no
limite entre o crebro posterior e o crebro intermedirio, nos somitos,
nos arcos branquiais do pescoo e na cauda em desenvolvimento. O
FGF8 importante para diversos processos desenvolvimentais e
desempenha papis crticos no crescimento dos membros e na
padronizao do desenvolvimento do crebro. Captulos 3, 7 e 18.
(Fotografia cortesia de E. Laufer, C.-Y. Yeo e C. Tabin.)
FOTOGRAFIA DA CONTRACAPA: Fotografia de um embrio de pinto
Do original: Developmental biology,
Fifth Edition
Copyrigth 1997 by Sinauer Associates,
Inc.
Dados Internacionais de Catalogao na
Publicao (CIP)
(Cmara Brasileira do livro, SP, Brasil)
_____________________________________
Gilbert, Scott F., 1949Biologia do desenvolvimento /
Scott F. Gilbert. -5. ed. -- Ribeiro Preto, SP :
FUNPEC Editora, 2003.
de 20-21 dias nos estgios de pipping (bicando a casca internamente)

e pr-ecloso. Note o revestimento peridrmico proeminente na
extremidade do bico (dente do ovo), usado pelo pinto para fazer
buracos na casca do ovo, a qual se tornou mais fina e mais quebradia,
como uma conseqncia da utilizao de minerais pelo embrio para
seu crescimento esqueltico. Esse estgio desenvolvimental marca a
transio do embrio em um pinto que respira ar. Captulos 1 e 5.
(Fotografia do International Poultry Journal, cortesia de R. Tuan.)
As pginas de ttulo
PGINA ESQUERDA: A expresso gnica gera limites nos discos imagi-
ndices para catlogo sitemtico:
nais da Drosophila. Os discos grandes e pequenos dentro da larva da

mosca formam as asas e os halteres, respectivamente, no adulto. Nesse estgio, a protena Apterous (vermelho) expressa somente nos
compartimentos dorsais; a protena Cubitus interruptus (azul) marca os compartimentos anteriores (mas no os posteriores) (uma linha
formando esse limite pode ser observada). A colorao verde (originria da protena Vestigial) no interior demarca o limite entre o membro livre e a articulao ligando-o parede torcica. Captulo 19. (Fotografia cortesia de J. Williams, S. Paddock e S. Carroll.)
1. Bilogia do Desenvolvimento: Cincias

da vida 571.8
PGINA DIREITA: Expresso do gene paraxis no embrio de pinto no
Ttulo original : Developmental biology

Vrios tradutores e revisores.
Bibliografia.
ISBN 85-87528-61-0
1. Biologia do desenvolvimento I. Ttulo.
03-4459
CDD-571.8
_____________________________________
Direitos para a lngua portuguesa cedidos

pela Sinauer Associates, Inc. para a
Fundao de Pesquisas Cientficas de
Ribeiro Preto que se reserva a
propriedade desta traduo.
Proibida a reproduo dos textos
originais, mesmo parcial e por
qualquer processo, sem autorizao
da editora.
estgio de 6 somitos. Hibridizao in situ da montagem total usando

RNA marcado com digoxygenin complementar a uma poro da
mensagem paraxis do pinto mostra a expresso desse gene durante a
formao do somito. A protena Paraxis importante no estabelecimento da estrutura desses grupos mesodrmicos. Captulos 2 e 9.
(Montagem fotogrfica cortesia de R. Tuan.)
Para Daniel, Sarah, e David
Tabela de Contedos
PARTE I Introduo Biologia do Desenvolvimento

Introduo ao desenvolvimento
animal 1
Informaes adicionais & Especulaes

21

Como o Grex Sabe Qual Lado Est Para Cima
Os Porferos 29
Protostomatas e Deuterostomatas
30
Sobre E.coli e elefantes: O modelo operon

Sntese diferencial de RNA 49
25
Padres desenvolvimentais entre metazorios
Clonando Mamferos por Prazer e Lucro
28
27
39
Metaplasia 40
Clonagem de Anfibios: A Restrio da Potncia
Nuclear 42
Clonagem de Anfbios: A Pluripotncia de Clulas
Somticas 43
16
Evidncia e Anticorpos
Q
A ciso entre a embriologia e a gentica 38

Primeiras tentativas da gentica do desenvolvimento
Evidncia para a equivalncia genmica 40
16
Sexo e Individualidade em Volvox

18
Diferenciao e Morfognese em Dictyostelium
Q
35
Ncleo ou Citoplasma: Qual Controla a

Hereditariedade? 35
O Cromossomo X como uma Ponte Entre Genes e
Desenvolvimento
37
Controle da Morfognese no Desenvolvimento em

Acetabulria 6
Diferenciao em Ameboflagelados Naegleria 10
As Origens da Reproduo Sexual 12
As Volvocaceanas
As origens embriolgicas da teoria dos genes
O objetivo da biologia do desenvolvimento 1

Os problemas da biologia do desenvolvimento 2
Os estgios do desenvolvimento animal 3
Nossa herana eucaritica 5
Desenvolvimento entre eucariotos unicelulares 6
Eucariotos coloniais: A evoluo da diferenciao
Genes e desenvolvimento:
Introduo e tcnicas 35
Hibridizao de cido nuclico
47
54
Clonagem de DNA genmico 55

Hibridizao de DNA: entre e intra espcies
Seqenciamento de DNA
45
58
59
Anlise de mRNA atravs de bibliotecas de cDNA 61

Tcnicas de localizao de RNA 63
Hibridizao In Situ 63
Transferncias Northern 64
vii
Tabela dos Contedos
Encontrando mensagens raras pela reao da polimerase

em cadeia 66
Determinando a funo do gene: clulas e organismos
transgnicos 69
Tcnicas de insero de DNA novo em uma clula 69
Camundongos quimricos 70
Experimentos com genes com endereamento
(Gene targeting ou Knockout) 70
Identificando molculas de adeso celular e seu

papel no desenvolvimento 92
Caderinas 92
CAMs da superfamlia de imunoglobulinas 95
Molculas da juno celular: protenas da juno em

fenda 97
A base molecular da afinidade clula-substrato 99
Afinidade diferencial a substrato 99
A matriz extracelular 99
Receptores celulares para molculas da matriz
extracelular 104
Adeso diferencial resultante de sistemas de
adeso mltipla 106
Determinando a funo de uma mensagem: RNA antisense 73

Reinvestigao de velhos problemas com novos mtodos 73
Uma concluso e um alerta 75
Base celular da morfognese:

Afinidade celular diferencial 79
Afinidade celular diferencial
A via JAK-STAT
107
A via RTK-Ras 108
80
O modelo termodinmico de interaes celulares

Q
84
A base molecular das adeses clula-clula
87
88

Anticorpos monoclonais e gentica reversa
110
A via do inositol fosfato 111

Cruzamentos entre vias 112
A matriz extracelular e a superfcie da clula como
fontes de sinais crticos para o
desenvolvimento
112
Interaes recprocas na superfcie celular
113
88
As classes de molculas de adeso celular
Molculas de adeso celular

Mutaes negativas dominantes em receptores
Evidncia para o modelo termodinmico
Molculas de receptores e vias de transduo

de sinais 107
89
92
PARTE II Padres de Desenvolvimento

Fertilizao: Iniciando um
novo organismo 121
Estrutura dos gametas
Espermatozide
O vulo 125
121
Atrao do Espermatozide 128

Ativao Espermtica: A Reao Acrossmica no
Ourio-do-Mar 129

131
Reconhecimento do vulo e espermatozide:

Contato de gametas 132
Reconhecimento Espcie-Especfico em Ouriosdo-Mar 132
Ligao de Gametas e Reconhecimento em
Mamferos 135
Fuso de gametas e a preveno da polispermia

Fuso entre as membranas do vulo e do
espermatozide 139

A Ativao do Metabolismo dos Gametas
Respostas precoces
149
Respostas tardias 151
Fuso do material gentico
121
Ao Distncia: Gametas de Mamferos
140
Ativao do metabolismo do vulo
Reconhecimento do vulo e do espermatozide: Ao

distncia 128
Preveno da Polispermia
139
147
149
152

A No-Equivalncia dos Proncleos de
Mamferos 154
Rearranjo do citoplasma do vulo
156
Preparao para a Clivagem
158
Clivagem: Criando
multicelularidade 167
PADRES DE CLIVAGEM EMBRIONRIA 168
Clivagem holoblstica radial 169
A holotria, Synapta
Ourio-do-Mar 170
Anfbios 173
169
Clivagem holoblstica espiral
175
viii
Tabela dos Contedos
Mecanismos de gastrulao em aves
Gastrulao em mamferos
Adaptao pela modificao da clivagem

embrionria 178
Clivagem Holoblstica Bilateral
179
Clivagem holoblstica rotacional

Compactao
Q
Modificaes para desenvolvimento dentro de

outro organismo 242
Formao de membranas extra-embrionrias 245
180
181
Incio do desenvolvimento vertebrado:

Neurulao e ectoderma 253
A Superfcie da Clula e o Mecanismo de

Compactao 184
Formao da massa celular interna 185
Fuga da Zona Pelcida 185
Q
FORMAO DO SISTEMA NERVOSO CENTRAL

Neurulao: aspectos gerais 254

Gmeos e clulas embrionrias precursoras
Clivagem Meroblstica
188

Excees, Generalizaes, e Clivagem
Parastica da Vespa 195
MECANISMO DE CLIVAGEM 196

Regulando o ciclo da clivagem
Q
A modelagem dorsoventral do sistema nervoso 264
197
Q
198
Gastrulao em ourio-do-mar
Gastrulao em peixes
218
A transio da blstula intermediria e a aquisio

de motilidade celular 218
Formao das camadas germinais 220
Gastrulao de anfbios

Reguladores moleculares do desenvolvimento:
Fibronectinas e as vias da migrao
mesodrmica 230
Epibolia do ectoderma 232
Gastrulao em aves
233
Generalidades sobre gastrulao em aves
233
279
Dinmica do desenvolvimento tico

279
Diferenciao da retina neural 280
Q

Porque os bebs no enxergam bem
Diferenciao do cristalino e da crnea
A CRISTA NEURAL 284

A crista neural e seus derivados
A crista neural do tronco 285
282
283
284
Vias de migrao das clulas da crista neural do

tronco 285
A matriz extracelular e a migrao da crista neural
do tronco 287
221
Movimentos celulares durante a gastrulao de

anfbios 221
Posicionando o blastporo 224
Movimentos celulares e a construo do arquntero 226
Migrao do mesoderma involutivo 229
Q
Tipos de neurnios 276

Desenvolvimento do olho em vertebrados
210
Ingresso do Mesnquima Primrio 210

Primeiro estgio da invaginao do arquntero 215
Segundo e terceiro estgios da invaginao do
arquntero 217
265

Determinando as regies do crebro anterior e
crebro mdio 268
Arquitetura de Tecido no Sistema Nervoso Central 270
Organizao do cerebelo 272
Organizao cerebral 274
O mecanismo citoesqueltico da mitose 201

A formao de novas membranas 203
Gastrulao: Reorganizando as
clulas embrionrias 209
265
Formao das regies do crebro

MPF e Seus Reguladores
254
Neurulao secundria 264

Diferenciao do tubo neural
196
Fator promotor de maturao
Neurulao primria 255

A mecnica da neurulao primria 257
A formao da placa neural 257
Formao do assoalho da placa neural 258
A modelagem e dobramento da placa neural 259
Fechamento do tubo neural 260
186
Clivagem discoidal 189

Clivagem Superficial 192
Q
238
242

Anlise das mutaes que afetam o desenvolvimento das clulas da crista neural 290
A potncia do desenvolvimento das clulas da crista

neural do tronco 291
Diferenciao final das clulas da crista neural
A crista neural ceflica
292
293
Vias migratrias das clulas da crista neural

ceflica 293
Potncia de desenvolvimento das clulas da crista
neural ceflica 295
ix
Tabela dos Contedos
A crista neural cardaca 296

A EPIDERME E A ORIGEM DAS ESTRUTURAS CUTNEAS
A origem das clulas epidrmicas
Apndices cutneos 299
Concluses
297
297
300
Especificidade axnica 307

A gerao da diversidade neuronial
Mesoderma Paraxial 341

Somitmeros e a Iniciao da Formao do
Somito 343
Gerao de Tipos de Clulas Somticas 344
Miognese: Diferenciao do Msculo
Esqueltico 347
308
Formao de padres no sistema nervoso 312

Seleo de trajetrias: Orientao pela matriz
extracelular 313
Orientao pelo Terreno Fsico: Orientao por

Contato 313
Orientao para Gradientes de Adeso:
Haptotaxia 314
Conduo por Sinais Migratrios especficos
do Axnio: A Hiptese das Trajetrias
Marcadas 315
Orientao pela Repulso Especfica de Cones de
Crescimento 317
Sexo,Odor e Adeso Especfica
Neurnios Motores Vertebrados

Axnios da Retina 325
Selees de alvos
Mesoderma da Placa Lateral
358
Formao das Membranas

Extra-Embrionrias 359
O Corao 361
Formao dos vasos sangneos
Q
366

Redirecionando o Fluxo Sangneo no
Mamfero Recm-nascido 372
323
O Desenvolvimento de clulas sangneas
326
Especificidades Adesivas em Diferentes Regies

do Tectum 328
Seleo de endereo: Desenvolvimento dependente de

atividade 331
Sobrevivncia diferencial aps a inervao: Fatores
neurotrficos 331
Q Informaes adicionais & Especulaes
O desenvolvimento de comportamentos: constncia e
plasticidade 334

Controle da Condrognese na Placa de
Crescimento 357
319
Neurnios Fetais em Hospedeiros Adultos

Construo Muscular e a Famlia MyoD de
Reguladores Transcricionais
349
Osteognese: O Desenvolvimento
dos Ossos 351
Seleo de trajetria: Orientao por molculas

difusveis 320
Sinais para conduo mltipla 323
MESODERMA 341
Mesoderma dorsal: A notocorda e a diferenciao dos
somitos 341
307
Especificao do Neurnio Motor de Vertebrado

Especificao dos Neurnios Motores em
Drosophila 310
Incio do desenvolvimento
vertebrado: Mesoderma e
endoderma 341
ENDODERMA 380
Faringe 380
O tubo digestivo e seus derivados
334
373
O Conceito de Clula-tronco 373

Clulas-tronco Pluripotenciais e Microambientes
Hematopoticos 374
Desenvolvimento Osteoclstico
377
Locais de Hematopoiese 378
382
Fgado, Pncreas e Vescula Biliar

O Tubo Respiratrio 383
382
Tabela dos Contedos
PARTE III Mecanismo da Diferenciao Celular

Regulao transcricional da expresso
gnica: Fatores de transcrio
e a ativao de promotores
especficos 391
10
xons e ntrons 392

Estrutura e funo do promotor
Ruptura e reorganizao de nucleossomos: o papel

dos complexos de ruptura 436
Ruptura e reorganizao de nucleossomos: o papel
da competio de histonas 437
Regies de controle de loco: transcrio do gene da

globina 437
Trocas no gene de globina
394
Estrutura do promotor 396

Funo do promotor 397
Q
RNA polimerase e os fatores trans-reguladores

no promotor 399
402
O mecanismo de inativao do cromossomo X

Regulao da transcrio dos genes de cadeia
leve das imunoglobulinas 409
Fatores de transcrio bsicos do tipo hlice-alahlice 415

Regulando as protenas bHLH miognicas:
Governando a troca entre proliferao e
diferenciao de clulas musculares 416
Fatores de transcrio do zper bsico da leucina 416

Armadilhas do intensificador: natural e
experimental 418
Fatores de Transcrio Dedo de Zinco 420
Receptores Nucleares de Hormnios e Seus
Elementos Responsivos a Hormnios
420
Protenas que dobram o DNA 423

Ativao dependente de contexto ou silenciamento 423
Regulao da atividade do fator de transcrio 425
Regulao transcricional da
expresso gnica: A ativao da
cromatina 431
11
Nucleossomos e a ativao da cromatina reprimida

Acessibilidade a fatores trans-reguladores
Stios hipersensveis DNAase I
434
444
Associao do DNA ativo com a matriz nuclear
Protenas de homeodomnio 405

Os fatores de transcrio POU 406
Compensao de dosagem do cromossomo X de

mamferos 446
Fatores de transcrio: Os trans-reguladores dos

promotores e dos intensificadores 404
Metilao e impresso gnica
Necessidade de intensificadores
402
Funo do intensificador: Modelos temporais e
espaciais de transcrio 403
442
Correlaes entre metilao do promotor e

inatividade gnica 442
Metilao e a manuteno dos padres de
transcrio 443
Estrutura e funo dos intensificadores
440
Metilao de DNA e atividade gnica
431
432
449
451
Ligao da cromatina ativa a uma matriz nuclear 451

Topoisomerases e a transcrio gnica 453
Isoladores e domnios 454
Resumo 455
Controle do desenvolvimento pelo

processamento e traduo
diferencial do RNA 461
12
CONTROLE DO DESENVOLVIMENTO PELO PROCESSAMENTO

DIFERENCIAL DE RNA 461
Controle do desenvolvimento precoce pela seleo de
RNA nuclear 462
Os mecanismos de emenda de RNA: Spliceosomes 465
Emenda alternativa do RNA: Criando protenas
alternativas a partir do mesmo gene 466
Um gene, Muitas Protenas Relacionadas 466
Processamento Alternativo de RNA e
Determinao Sexual em Drosophila 468
Uso Disseminado do Processamento de RNA para
o Controle da Expresso Gnica 471
REGULAO DA TRADUO DOS PROCESSOS

DESENVOLVIMENTAIS 471
Mecanismos da traduo eucaritica 472
Controle da sntese protica pela longevidade diferencial
do mRNA 474
Degradao Seletiva de mRNAs
475
Controle da traduo de mensagens do ocito
476
Tabela dos Contedos
Caracterizao de RNAs Mensageiros

Armazenados em Ocitos 477
Q

A Ativao do Genoma Embrionrio

Determinando o Destino Celular por Meio do
mRNA Localizado do Ocito 480
488
Regulao dos genes da traduo em larvas e

adultos 490
Determinao de Gametas em C. elegans 490
RNA Antisenso Natural 491
Disjuntores do Controle da Traduo 492
Editorao do RNA 493
Mecanismos para a regulao da traduo das

mensagens dos ocitos 481
A Hiptese da Mensagem Materna Mascarada 482
A Hiptese da Cauda Poli(A) 483
A Hiptese da Eficincia da Traduo 486
Outros sistemas de ativao do mRNA: Mensagens
sem Cap e Mensagens Seqestradas 486
xi
Controle da traduo e sntese protica coordenada:

Produo de Hemoglobina 494
Eplogo: Regulao Ps-traduo 497
PARTE IV Especificao do Destino Celular e os

Eixos Embrionrios
Especificao celular autnoma
por determinantes
citoplasmticos 505
Comprometimento celular e diferenciao
Pr-formao e epignese 507
Os Teratologistas Franceses
13
505
509
Especificaes autnomas em embries de tunicados
510
O determinante formador de msculos do

crescente amarelo 511
Especificao citoplasmtica das linhagens
endodrmicas e epidrmicas e o eixo nteroposterior 514
Localizao citoplasmtica em embries de moluscos 515

O lbulo polar
517
Especificao celular no nematdeo Caenorhabditis

elegans 521
Controle maternal da identidade do blastmero: O
controle gentico das clulas progenitoras
farngeas de C. elegans 524
Regulao em C. elegans 527
Q

Ser ou No Ser: Esse o Fentipo
529
Divises celulares assimtricas no desenvolvimento

tardio 530
Localizao citoplasmtica de determinantes de clulas
germinativas 531
Determinao de clulas germinativas em
nematdeos 531
Determinao da clula germinativa em insetos
Componentes do plasma polar da Drosophila
Determinao de clulas germinativas em
anfbios 536
Resumo
538
532
534
A gentica da
especificao axial em
Drosophila 543
14
Resumo do desenvolvimento de Drosophila 543

AS ORIGENS DA POLARIDADE NTERO-POSTERIOR 545
Viso Panormica 545
Os genes de efeito materno 546
Evidncia Embriolgica da Regulao da
Polaridade pelo Citoplasma do Ocito 546
O Modelo Molecular: Gradientes Proticos no
Embrio Precoce 547
Q

Modelos de Gradientes da Informao
Posicional 551
Evidncia que o Gradiente da Protena Bicoid
Constitui o Centro de Organizao Anterior 552
O Centro de Organizao Posterior: Localizando e
Ativando o Produto de nanos 556
O Grupo Gene Terminal 557
Os genes da segmentao
559
Uma Viso Panormica 559

Os Genes de gap 561
Os Genes pair-rule 563
Os Genes de Polaridade Segmentar
Os genes de Seleo hometica
565
569
Padres de Expresso dos Genes Hometicos 569

Iniciando os Padres da Expresso dos genes
Hometicos 572
Mantendo os Padres de Expresso dos genes
Hometicos 572
Os Elementos Cis-Reguladores e o Complexo
Bithorax 574
xii
Tabela dos Contedos

Regulao Molecular do Desenvolvimento: As
Protenas do Homeodomnio
576
A GERAO DA POLARIDADE DORSOVENTRAL EM

DROSOPHILA 577
A protena Dorsal: Morfgeno para a polaridade
dorsoventral 577
Translocao da Protena Dorsal
Induo de especificidade mesodrmica ventral e

lateral 612
A criao da atividade do organizador
Protenas secretadas do organizador

Q
577
Q

Como o Organizador Neuraliza o
Ectoderma? 621
Sinal do Ncleo do Ocito para as Clulas

Foliculares 578
Sinalizao das Clulas Foliculares para o
Citoplasma do Ocito 580
O Estabelecimento do Gradiente da Protena
Dorsal 581
A especificidade regional de induo
Competncia e cascatas indutivas 628
Especificao do destino celular

por interaes clula-clula
progressivas 591
Estabelecimento dos eixos

corporais em mamferos
e aves 635
15
Homologia dos Complexos de Genes Hometicos

entre Drosophila e Mamferos 637
Expresso de Genes Hox no Sistema Nervoso
Central e seus Derivados 638
Anlise Experimental de um Cdigo Hox: Gene
Alvo 640
Transformao Parcial de Segmentos por
Eliminao de Genes Hox Expressos no
Tronco 642
Anlise Experimental do Cdigo Hox: Teratognese
do cido Retinico 643
Evidncia para um Cdigo Hox da Anatomia
Comparada 645
606
Estabelecendo a regionalizao dorsal: o possvel

papel da -catenina 609
O funcionamento do centro de Nieuwkoop: funes
para Vg1 e Noggin 610
635
Especificando o eixo ntero-posterior de mamfero: A

hiptese do cdigo Hox 637
600
609
16
Estabelecendo um Centro de Nieuwkoop 635

Expresso Gnica em Tecidos Organizadores 636
Hans Spemann: Determinao progressiva das

clulas embrionrias 600
Hans Spemann e Hilde Mangold: Induo
embrionria primria 603
A base molecular da induo mesodrmica
Iniciando o eixo ntero-posterior
A formao do centro de Nieuwkoop e a polaridade

mesodrmica 606
A especificao da polaridade dorsoventral na
fertilizao
607
621
Sinais verticais e horizontais do

organizador 626
Genes homeobox na especificao neural 628
592
August Weismann: A teoria do plasma

germinativo 592
Wilhelm Roux: Desenvolvimento em mosaico 593
Hans Driesch: Desenvolvimento Regulativo
594
Sven Hrstadius: Potncia e gradientes em ocitos 597
Formao de um organismo integrado: Restringindo
a potncia das clulas vizinhas 598
O centro de Nieuwkoop
621
A determinao das diferenas regionais

O modelo do duplo gradiente 623
Correlatos moleculares da caudalizao
neural 624
PRIMRDIOS DE RGOS E EIXOS 585

O modelo de coordenadas cartesianas e a especificao
dos primrdios dos rgos 585
Resumo: Alguns princpios do desenvolvimento da
Drosophila 586
Regulao durante o desenvolvimento de anfbios
613

BMP4 e a lagosta de Geoffroy 616
Fatores de transcrio induzidos no
organizador 619
Provendo o sinal assimtrico para a translocao da

protena Dorsal 578
Desenvolvimento regulativo 591

Testando a teoria do plasma germinativo
613

Animais como Variaes sobre o Mesmo Tema
Desenvolvimental 646
Eixos dorsoventral e esquerdo-direito em mamferos e

aves 647
Tabela dos Contedos
xiii
PARTE V Interaes Celulares Durante a

Formao do rgo
Interaes proximais de tecidos:
Induo secundria 655
Interaes instrutivas e permissivas
Competncia e receptores 656
Fatores parcrinos 657
17
Produo do eixo prximo-distal dos membros
655
Os Fatores de Crescimento Fibroblstico

A famlia hedgehog 659
A famlia Wnt 660
A superfamlia TGF- 661
Sinalizao Justcrina
662
Interaes epitlio-mesnquima
de crescimento dos fibroblastos como

indutores do broto do membro 704
Induo da crista ectodrmica apical 704
658
663
Especificidade Regional da Induo

Especificidade Gentica da Induo
663
666
Especificao do eixo ntero-posterior dos membros 716
667
668
A zona de atividade polarizante 716

Sonic hedgehog como definidor da ZPA 717
Interaes entre a AER e a ZPA para integrar
crescimento e padro 718
Especificando a ZPA 721
Formao de rgos parenquimatosos 672

Morfognese do Rim de Mamfero 673
Os Mecanismos da Organognese Renal
Q
676

Diferenciao Coordenada e Morfognese no
Dente 682
Mecanismos de ramificao na formao de rgos

parenquimatosos 683
A Matriz Extracelular como um Elemento Crtico
na Ramificao 684
Fatores Parcrinos Efetuando Padres de
Ramificao 686
Induo ao nvel de uma nica clula
687
Induo Vulvar no Nematide Caenorhabditis

elegans 690
Q

Interaes Clula-Clula e Possibilidade na
Determinao de Tipos Celulares 692
Desenvolvimento do membro
de tetrpode 701

A regenerao dos membros da salamandra e a
reteno do eixo prximo-distal 714
Cascatas de induo embrionria: Induo do cristalino 667

Os Fenmenos da Induo do Cristalino
A Base Celular da Induo do Cristalino
Formao da Crnea 672
706
A crista ectodrmica apical: O componente

ectodrmico 706
A zona progressiva: O componente mesodrmico 708
Genes Hox e a especificao do eixo prximodistal do membro 709
Interaes entre a AER e a zona progressiva 711
Mutaes nas interaes entre a zona progressiva
e a AER 711
A produo do eixo dorsoventral 721

Distinguindo o membro anterior do membro posterior 722
Lies de limbless
Evoluo do membro tetrpode
O campo do membro 702

Especificao dos campos do membro: Genes
Hox e cido retinico 703
Crescimento do broto de membro precoce: fatores
726
Interaes celulares distncia:

Hormnios como mediadores do
desenvolvimento 733
19
Metamorfose: o direcionamento hormonal do

desenvolvimento 733
Metamorfose anfbia 734
Controle hormonal da metamorfose de anfbios 735
Respostas Moleculares aos Hormnios da Tireide
Durante a Metamorfose 740
18
Padronizao no membro 701

Formao do broto do membro 702
724
Morte celular e a formao de dgitos 724


Heterocronia
743
Metamorfose em insetos
746
Everso e Diferenciao dos Discos Imaginais

Q
746

A determinao dos discos imaginais da perna
e da asa 750
Remodelao do sistema nervoso 753
xiv
Tabela dos Contedos
Controle Hormonal da Metamorfose de Insetos
754
Hermafroditismo
Determinao ambiental do sexo

Controle ambiental sobre a forma e a funo da
larva 761
Resumo
765
Regulao ambiental do
desenvolvimento animal 805
20
Determinao cromossmica do sexo em mamferos 774

Determinao Sexual Primria 774
Determinao Secundria do Sexo 774
As Gnadas em Desenvolvimento
775
SRY: O Determinante Sexual do Cromossomo Y
800
778
Determinao sexual primria em mamferos: Genes

autossmicos na determinao de testculos 780
SOX9: Reverso Autossmica na Displasia
Campomlica 780
SF1: A Ligao Entre SRY e as Trajetrias
Desenvolvimentais Masculinas
780
21
REGULAO AMBIENTAL DO DESENVOLVIMENTO NORMAL

Sugestes ambientais usadas pelos organismos para
completar seus desenvolvimentos 806
A colonizao larval 806
Refeies de sangue 808
Simbiose no desenvolvimento
Determinao sexual primria dos mamferos: Genes

cromossmicos Y para a determinao dos
testculos 777
DAX1: Um Potencial Gene Determinante de Ovrio

no Cromossomo X 781
Wnt4a: Um Potencial Gene Determinante de
Ovrio em um Autossomo 781
Determinao sexual secundria em mamferos
782
Regulao Hormonal do Fentipo Sexual

Testosterona e Diidrotestosterona 783
Hormnio Anti-Mlleriano 784
O Sistema Nervoso Central 785
782

O Desenvolvimento de Comportamentos
Sexuais 787
Diferenas ambientais previsveis como sugestes para o

desenvolvimento 810
Sazonalidade e sexo: Afdios e Volvox
Diapausa 812
810
Plasticidade fenotpica: Polifenismo e regras de

reao 813
817
Fatores ambientais imprevisveis controlando o

desenvolvimento animal 818
Defesas induzveis contra a predao 819
Plasticidade fenotpica e mudanas no ambiente
Q
820

Assimilao Gentica
821
A contnua plasticidade do desenvolvimento
822
O sistema imune: Desenvolvimento no adulto 822

Aprendizado: Um sistema nervoso adaptvel ao
ambiente 823
DISTRBIOS AMBIENTAIS DO DESENVOLVIMENTO NORMAL

Malformaes e distrbios 827
Agentes teratognicos 828
cido retinico como um teratognico 829
Talidomida como um teratognico 830
lcool como um teratognico 833
Outros agentes teratognicos 835
Determinao sexual cromossmica em Drosophila 788

A Via do Desenvolvimento Sexual
788
O Gene Sex-lethal como o Piv para a
Determinao do Sexo 790
Os Genes transformer
793
doublesex: O Gene Comutador da Determinao
Sexual 793
Genes-alvo para a Cascata de Determinao
Sexual 794
806
808
Polifenismo sazonal em borboletas

814
Polifenismo nutricional 816
Determinao sexual dependente do ambiente
Determinao sexual primria em mamferos:

Desenvolvimento ovariano 781
798
762
Determinao do sexo 773
795
Determinao Sexual Dependente de Temperatura

em Reptis 798
Determinao Sexual Dependente da Localizao
em Bonellia viridis e Crepidula fornicata 799
Interaes hormonais mltiplas no desenvolvimento da

glndula mamria 762
Estgio embrionrio
Adolescncia 765
Gravidez e lactao
795
Hermafroditismo no Nematide C. elegans

Hermafroditismo em Peixes 797
A biologia Molecular da Atividade da

Hidroxiecdisona 757

Estrgenos Ambientais
Interaes gentica-ambiental
Resumo 837
836
837
827
Tabela dos Contedos
A saga da linhagem
germinativa 843
Migrao das clulas germinativas
22
843
Migrao das Clulas Germinativas em

Anfbios 843
Migrao das Clulas Germinativas em
Mamferos 844
Q

Teratocarcinomas e Clulas-Tronco
Embrionrias 847
Migrao de Clulas Germinativas em Aves e
Rpteis 848
Migrao de Clulas Germinativas Primordiais em
Drosophila 849
Meiose 850
Grandes Decises: Mitose ou Meiose?
Espermatozide ou vulo? 853
Espermatognese
855
Espermiognese
Q
857

Expresso Gnica Durante o Desenvolvimento
do Espermatozide 858
Oognese
860
Meiose oognica 860

Maturao do Ocito em Anfibios 861
Concluso da meiose: Progesterona e
Fecundao 864
Transcrio Gnica em Ocitos
865
Oognese Merostica em Insetos
867
Q

A Origem dos Eixos Embrionrios de
Drosophila Durante a Oognese 869
Oognese em Mamferos 870
Mecanismos desenvolvimentais
da mudana evolucionria 883
xv
23
Unidade de Tipo e Condies de Existncia
883
A Sntese de Charles Darwin 883

E. B.Wilson e F. R. Lillie 885
A evoluo do desenvolvimento precoce: E. Pluribis

Unum 885
A emergncia dos embries 885
Formao de um Novo Filo: Modificando os
Caminhos do Desenvolvimento 887
Modularidade: O pr-requisito para mudana evolutiva

atravs do desenvolvimento 891
Modularidade 891
Dissociao: Heterocronia e Alometria
Duplicao e Divergncia 893
Co-opo 894
Progresso correlacionada 896
Restries ao desenvolvimento
891
898
Restries Fsicas
898
Restries Morfogenticas
898
Restries Filticas
899
Evoluo Conjunta do Ligante e Receptor:
Isolamento Reprodutivo 901
O mecanismo gentico do desenvolvimento da

mudana evolucionria: Genes reguladores
homlogos 902
Pax6 e o desenvolvimento do olho 902
BMP4 e a Morfognese dos Membros 904
Genes Hox e a Evoluo dos Vertebrados 905
Genes Hox e a Evoluo dos Artrpodes 907
Caminhos homlogos do desenvolvimento 909
Criando novos tipos de clulas: O mistrio evolucionrio

bsico 911
Uma nova sntese evolucionria 912

O Reincio da Meiose nos Ocitos de
Mamferos 875
Fontes Para as Citaes das Aberturas

dos Captulos C-1
ndice de Autores IA-1
ndice de Assuntos IA-2
ndice de Abreviaturas IA-3
Prefcio
s ltimos anos do sculo 20 encontram a biologia do desenvolvimento retornando posio que ela ocupou no incio do sculo: a
disciplina que unifica os estudos da hereditariedade, evoluo e
fisiologia. Em 1896, a primeira edio de B. Wilson do The Cell in Development
and Inheritance anunciou a verdade maravilhosa que uma nica clula pode
conter em seu interior sua extenso microscpica da soma-total da herana
das espcies. Hoje, a biologia do desenvolvimento est na vanguarda desse
estudo de nossa herana natural. Nos seus aspectos moleculares, ela toca a
qumica fsica na sua investigao dos mecanismos bioqumicos pelos quais
protenas diferentes so produzidas em clulas diferentes do mesmo genoma. Ela tambm est na liderana dos estudos evolucionrios que procuram
entender como mudanas macroevolucionrias ocorreram. Ela abriu recentemente uma rea nova da biologia do desenvolvimento ecolgico, onde mudanas ambientais so vistas criando alteraes no desenvolvimento do
organismo. Durante os ltimos 3 anos, a biologia do desenvolvimento tambm expandiu para a medicina, fundindo-se com a gentica clnica para criar
uma cincia revitalizada da embriologia humana, uma cincia que j se
tornou importante na explanao das malformaes congnitas.
A quinta edio do Biologia do Desenvolvimento foi revisada e reescrita
para refletir essas revolues que esto acontecendo. Aconteceram quatro
mudanas importantes na estrutura do livro desde sua ltima edio. Primeiro, tornou-se impossvel discutir os princpios fundamentais da embriologia sem o conhecimento da atividade gnica ou vias da transduo de sinais.
Portanto, essa informao foi trazida dentro da seo introdutria do livro
de modo que interaes celulares, tais como fertilizao e induo, podem
ser apreciadas tanto no mbito molecular quanto no morfolgico.
Segundo, novo interesse nos efeitos do ambiente no desenvolvimento
normal e anormal conduziu a um novo captulo. O Captulo 21, Regulao
Ambiental do Desenvolvimento Animal, diz respeito s vias pelas quais o
meio ambiente afeta o fentipo do organismo. Interesse na proteo ambiental
e em controvrsias envolvendo a possibilidade de poluentes teratognicos
foraram uma nova percepo das influncias que o meio ambiente representa no desenvolvimento normal e anormal. Na verdade, os biologistas do
desenvolvimento podem rapidamente encontrar-se frente dos movimentos da conservao ecolgica. As primeiras quatro edies deste livro buscaram integrar abordagens molecular, celular e orgnica biologia do desenvolvimento; esta edio adiciona a dimenso ecolgica.
Terceiro, esta edio introduz novas nfases nos papis dos fatores
parcrinos no desenvolvimento. No somente os estudos da transduo
de sinais esto colocados na seo introdutria deste livro, como a Parte V
Prefcio
da Quinta Edio inicia com uma viso geral das famlias do fator de crescimento fibroblstico, TGF-, Wnt e Hedgehog dos fatores de crescimento
e diferenciao.
Quarto, este livro est conectado a um website onde estudantes e professores podem encontrar mais material em muitos tpicos selecionados.
Tal material inclui (1) detalhes de experimentos que so extremamente
especializados para serem colocados no texto, (2) informao histrica sobre reas particulares da biologia do desenvolvimento e personalidades
envolvidas, (3) implicaes mdicas de fenmenos particulares do desenvolvimento, (4) debates ou comentrios em questes relevantes para o campo, e (5) atualizaes do material do texto nessa rea da biologia de crescimento cada vez mais rpido. Filmes e entrevistas gravadas esto includas
e esses artigos de destaque podero ser expandidos medida que a tecnologia
os tornar mais fceis para serem usados. Esse website est conectado tambm a outros websites e podem ser usados para enriquecer a perspectiva de
algum sobre o que est acontecendo no desenvolvimento animal. A presena de um website nos permite manter o direcionamento deste livro s pessoas para as quais isso foi originalmente pretendido: estudantes dos ltimos
anos da graduao e do incio da ps-graduao. Ele tambm me ajudou a
no deixar o livro tornar-se um substituto para peso de papel.
A viso de Roux foi que a biologia do desenvolvimento algum dia constituiria a base de todas as outras disciplinas biolgicas e, em continuada
simbiose com essas disciplinas, desempenharia uma parte proeminente nas
solues dos problemas da vida. Essas foram palavras audaciosas, at mesmo arrogantes h cem anos atrs; hoje, elas expressam uma aceitao amplamente sustentada. O desenvolvimento integra todas as reas da biologia e
desempenha um papel crucial em relacionar o gentipo ao fentipo. O desenvolvimento pode ser estudado usando qualquer organismo e em qualquer
nvel de organizao, de molculas a filos.
medida que o campo continuar a se expandir e se aprofundar , uma
palavra de advertncia requerida: a biologia do desenvolvimento no pode
ser aprendida ou ensinada em um nico semestre. Este texto uma tentativa para prover cada pessoa com material suficiente para seu curso, mas um
instrutor no necessita se sentir culpado por no determinar todos os captulos, e os estudantes no necessitam se sentir privados se eles no lerem
todos os captulos. Isto o comeo do caminho, no sua concluso.
Como usar o website

Qualquer pessoa pode entrar no website atravs de sua homepage
[http://zygote.swarthmore.edu/index.html] ou atravs da sua lista de arquivos de captulos localizada no [http://zygote.swarthmore.edu/info.html].
Alternativamente, ns colocamos acessos especficos endereados em todo
o livro onde quer que exista uma entrada relevante no momento da publicao. Todos esses endereos comeam com [http://zygote.swarthmore.edu/]
e so seguidos por um cdigo dado no livro texto. Assim, a localizao
especificada na pgina 20 do livro :
http://zygote.swarthmore.edu/intro2.html
Mais localizaes esto sendo adicionadas no website, e essas podem
ser acessadas entrando nos arquivos do captulo. Em adio, clicando no
boto Outros Arquivos abaixo de cada captulo, as conexes para outros
websites sero facilitadas. Divirta-se.
xvii
xviii
Prefcio
Agradecimentos
Esta edio, como suas precursoras, deve muito s sugestes e crticas dos
estudantes em minhas classes de biologia do desenvolvimento e gentica
do desenvolvimento. O grupo de funcionrios e docentes extremamente
corporativo da Universidade Swarthmore tambm desempenharam papis importantes na produo deste livro, e os bibliotecrios da rea de
cincia E. Horikawa e M. Spencer merecem agradecimentos especiais por
terem segurado volumes recentes na biblioteca enquanto eu estava escrevendo o livro. Os cientistas que revisaram estes captulos forneceram enorme ajuda tanto na preciso tcnica dos captulos quanto nas sugestes
para trabalho futuro. Esses investigadores incluem: S. Carroll, J. CebraThomas, E. M. De Robertis, S. DiNardo, E. Eicher, C. Emerson, G. Grunwald,
D. J. Grunwald, M. Hollyday, L. A. Jaffe, W. Katz, R. Keller, K. Kemphues, D.
Kirk, G. Martin, H. F. Nijhout, D. Page, R. Raff, R. Schultz, C. Stern, S.
Tilghman, R. Tuan e M. Wickens. Eu tambm quero agradecer aos muitos
cientistas que desviaram do seu caminho para ajudar a tornar esta edio
melhor lendo pores especficas dos captulos. Eles incluem: M. BronnerFraser, J. Fallon, N. M. Le Douarin, E. McCloud, J. Opitz, K. Sainio, H. Sariola,
I. Thesleff e T. Valente. Se eu deixei algum fora, por favor me desculpem.
desnecessrio dizer que os julgamentos editoriais finais foram de minha
responsabilidade. Meus agradecimentos especiais a Judy Cebra-Thomas
que no somente me aconselhou em certos captulos mas quem deu excelente ajuda durante meu perodo sabtico permitindo-me terminar este
livro. Agradecimentos tambm aos cientistas e filsofos, especialmente: C.
van der Weele, R. Amundson, L. Nyhart, R. Burian, H. F. Nijhout, A. F.
Sterling, K. Smith e A. I. Tauber, que participaram nos workshops de biologia do desenvolvimento da Sociedade Internacional para a Histria, Filosofia e Estudos Sociais da Biologia. Algumas das melhores crticas construtivas deste livro-texto vieram dessas pessoas.
Andy Sinauer uma vez mais conseguiu reunir as mesmas e extraordinrias pessoas neste projeto, e foi um privilgio trabalhar com eles. Meus
agradecimentos a ele e aos editores Nan Sinauer e Carol Wigg, coordenador
de produo Chris Small, artistas John Woolsey e Gary Welch, designer
Susan Schmidler, editor de texto Janet Greenblatt, e artista de layout Janice
Holabird. As habilidades editoriais de Tinsley Davis so extremamente reconhecidas. Devido ao fato de que os prazos finais devem ser cumpridos e
outro trabalho posto de lado, eu tenho que agradecer minha famlia por
mais uma vez me permitir prosseguir com isso. Em particular, este livro
nunca poderia ter sido completado se no fosse pelo encorajamento de minha esposa, Anne Raunio, que, como uma obstetra, gosta do lado mais prtico da biologia do desenvolvimento. Meus agradecimentos a todos vocs.
SCOTT F. GILBERT
1 DE MARO DE 1997
Introduo Biologia
do Desenvolvimento
1 Introduo ao desenvolvimento animal
2 Genes e desenvolvimento: Introduo e tcnicas
35
3 Base celular da morfognese: Afinidade celular diferencial
79
CAPTULO 1 Introduo ao Desenvolvimento Animal
Introduo ao desenvolvimento animal
A natureza parece nunca mudar, ainda que

sua aparncia esteja sempre mudando.
nosso dever como artistas transmitir juntamente com todos os seus elementos a emoo dessa permanente transformao.
Paul Cezanne (ca. 1900)
Feliz a pessoa que consegue discernir as
causas das coisas.
Virglio (37 A.C.)
CONCEITO DE EMBRIO assombroso, e a formao de um embrio a
tarefa mais rdua que algum haver de realizar. Para se tornar um embrio,
voc teve que construir a si mesmo a partir de uma nica clula. Teve que
respirar antes que tivesse pulmes, digerir alimentos antes que seus rgos estivessem formados, construir ossos a partir de uma massa e ordenar os neurnios antes
mesmo de adquirir a capacidade de pensar. Uma diferena marcante entre voc e a
mquina que a mquina nunca requisitada para uma funo antes que esteja
terminada. Todo animal tem que estar em funcionamento enquanto se auto-constri.
O objetivo da biologia do desenvolvimento

Para plantas e animais, o nico caminho para o desenvolvimento a partir de uma clula,
desenvolvendo um embrio. O embrio o intermedirio entre o gentipo e o fentipo,
ou seja, entre os genes herdados e o organismo adulto. Enquanto a maior parte da
biologia estuda a estrutura adulta e funo, a biologia do desenvolvimento encontra
maior interesse nos estgios mais transitrios. Biologia do desenvolvimento a cincia do vir a ser, a cincia do processo. Dizer que um inseto efmero vive apenas um dia
no significa nada para um biologista do desenvolvimento, porque o inseto pode ser
adulto apenas por um dia, mas passou outros 364 dias como um embrio e larva.
As questes levantadas por um biologista do desenvolvimento so freqentemente questes mais ligadas ao vir a ser do que ao ser propriamente dito. Dizer que
mamferos XX so geralmente fmeas e mamferos XY so geralmente machos, no
explica a determinao sexual para um biologista do desenvolvimento. Esse quer saber como o gentipo XX produz um ser feminino e como o gentipo XY produz um ser
masculino. Da mesma maneira, um geneticista gostaria de saber como os genes globina
so transmitidos de uma gerao outra, e um fisiologista pode fazer perguntas sobre
a funo da globina no corpo. Porm, o biologista do desenvolvimento pergunta
porque os genes globina se expressam somente nas hemcias e como essas se tornam
ativas apenas em certas fases do desenvolvimento (ainda no sabemos as respostas).
Biologia do desenvolvimento uma cincia excelente para pessoas que querem
integrar diferentes nveis da biologia. Diante de um problema, podemos estud-lo a
1
nveis molecular e qumico (p. ex., Como os genes globina so transcritos, e como os
fatores que ativam sua transcrio interagem uns com os outros e com o DNA?), a nveis
celular e tissular (p. ex., Quais so as clulas capazes de produzir globina, e como o
mRNA da globina deixa o ncleo?), a nvel de rgos ou sistema de rgos (p. ex., Como
vasos capilares so formados em cada tecido, e como so instrudos a se conectarem e
ramificarem?) e, at mesmo, a nveis ecolgicos e evolucionrios (p. ex., Como diferenas
na ativao do gene globina permitem o fluxo de oxignio da me para o feto, e como
fatores ambientais acionam a diferenciao de mais hemcias?). Biologistas do desenvolvimento podem estudar qualquer organismo e todo tipo de clula.
Biologia do desenvolvimento um dos campos que mais tem crescido e tambm
um dos mais emocionantes da biologia. Parte dessa emoo vem dos assuntos estudados, porque estamos apenas comeando a entender o mecanismo molecular do
desenvolvimento animal. Outra parte da emoo vem do papel unificador que a biologia do desenvolvimento assume nas cincias biolgicas. A biologia do desenvolvimento est criando uma estrutura que integra a biologia molecular, fisiologia, biologia
celular, anatomia, pesquisa do cncer, neurobiologia, imunologia, ecologia, e biologia
evolucionria. O estudo do desenvolvimento tornou-se essencial para a compreenso
de qualquer rea da biologia.
Os problemas da biologia do desenvolvimento

O desenvolvimento realizado por duas funes principais: gera diversidade e ordem
celular dentro de cada gerao, o que assegura a continuidade da vida que passa de
uma gerao outra. Assim, existem duas questes fundamentais para a biologia do
desenvolvimento: Como um ovo fertilizado origina um ser adulto, e como esse ser
adulto produz um outro ser? Cada espcie tem suas prprias respostas, mas algumas
generalizaes podem ser feitas. Tradicionalmente, essas questes tm sido subdivididas em quatro problemas gerais da biologia do desenvolvimento:
O problema da diferenciao. Uma nica clula, o ovo fertilizado, se desenvolve e gera centenas de clulas de diferentes tipos - clulas musculares,
clulas epidrmicas, neurnios, linfcitos, clulas do sangue, clulas gordurosas, e assim por diante. Essa gerao de diversidade celular chamada diferenciao. Desde que cada clula do corpo contm o mesmo conjunto de genes,
precisamos entender como esse mesmo conjunto de instrues genticas pode
produzir diferentes tipos de clulas.
O problema da morfognese. Nossas clulas diferenciadas no so distribudas aleatoriamente; pelo contrrio, so organizadas em intrincados tecidos e
rgos. Esses rgos esto dispostos de tal maneira que: dedos esto nas
pontas e no no meio de nossas mos, os olhos esto na nossa cabea e no
nos ps ou intestinos. Essa criao de forma ordenada, chamada morfognese. Como as clulas se auto-organizam e formam um arranjo correto?
O problema do crescimento. Somos maiores do que um ovo, mas como as
clulas sabem quando devem parar de se dividir? Se cada clula de nossa face
realizasse mais uma diviso celular, seramos considerados horrivelmente mal
formados. Se cada clula de nossos braos tivesse realizado apenas mais uma
srie de divises, poderamos amarrar nossos sapatos sem nos abaixar.
O problema da reproduo. O espermatozide e o vulo so clulas muito
especializadas. Somente eles podem transmitir instrues para produzir um
organismo de uma gerao para outra. Como essas clulas so separadas para
formar a prxima gerao, e quais as informaes no ncleo e no citoplasma
que permitem tal funcionamento?
Recentemente, tem-se dado grande nfase a um quinto problema:
O problema da evoluo. A evoluo envolve mudanas herdadas durante o
desenvolvimento. Quando dizemos que o cavalo de um dedo s de hoje, teve
um ancestral de cinco dedos, estamos dizendo que mudanas no desenvolvi-
mento da cartilagem e dos msculos ocorreram ao longo de muitas geraes de

embries nos ancestrais do cavalo. Como mudanas no desenvolvimento criam novas formas de corpo? Quais modificaes hereditrias so possveis,
dadas as restries impostas pela necessidade do organismo sobreviver enquanto se desenvolve?
Os estgios do desenvolvimento animal

De acordo com Aristteles, o primeiro grande embriologista da histria, a cincia
comea com a curiosidade: graas a curiosidade que as pessoas comearam a
filosofar, e a curiosidade permanece desde o incio do conhecimento. O desenvolvimento de um ser a partir do ovo tem sido motivo de admirao atravs da histria da
humanidade. O simples procedimento de se abrir um ovo de galinha a cada dia do seu
perodo de incubao de trs semanas proporciona uma notvel experincia quando
se observa desde uma fina camada de clulas at o total desenvolvimento da ave.
Aristteles realizou esse procedimento e observou a formao dos principais rgos.
Qualquer um pode se admirar com esse fenmeno, ainda que ordinrio, mas cientistas
so os que procuram descobrir como o desenvolvimento realmente ocorre. E ainda
mais do que dissipar essa admirao, novo conhecimento s faz aument-la.
Organismos pluricelulares no se formam de imediato, ao contrrio, so formados
por um processo relativamente lento de mudana progressiva, o qual chamamos de
desenvolvimento. Em quase todos os casos, o desenvolvimento de um organismo
pluricelular comea com uma nica clula - ovo fertilizado ou zigoto, que dividido
atravs da mitose, produz todas as clulas do corpo. O estudo do desenvolvimento
animal tem sido tradicionalmente chamado de embriologia, se referindo ao fato de que
entre a fertilizao e o nascimento, o organismo em desenvolvimento conhecido
como embrio. Mas o desenvolvimento no cessa no nascimento, ou mesmo na vida
adulta, porque a maioria dos organismos nunca pra de se desenvolver. A cada dia ns
repomos mais de um grama de clulas de pele (fazendo com que as clulas mais velhas
se desprendam assim que nos movemos), e nossa medula ssea sustenta o desenvolvimento de milhes de novos eritrcitos a cada minuto de nossas vidas. Portanto, nos
ltimos anos tem sido comum se falar em biologia do desenvolvimento, como a disciplina que estuda processos embrionrios e outros do desenvolvimento.
As principais caractersticas do desenvolvimento animal esto ilustrados na Figura 1.1. A vida de um novo indivduo iniciada pela fuso do material gentico de dois
gametas, o espermatozide e o vulo. Essa fuso, chamada fertilizao, estimula o
ovo a iniciar o desenvolvimento. Os estgios subseqentes do desenvolvimento so
coletivamente chamados de embriognese. Por todo reino animal existe uma incrvel
variedade de tipos embrionrios, mas a maioria dos padres de embriognese compreende variaes em quatro temas:
1. Ocorrncia de clivagem imediatamente aps a fertilizao. Clivagem uma
srie de divises mitticas extremamente rpidas, onde o enorme volume citoplasmtico do zigoto dividido em numerosas clulas menores. Essas clulas
so chamadas blastmeros e, ao fim da clivagem, eles geralmente formam uma
esfera conhecida como blstula.
2. Aps a reduo na taxa de diviso mittica, os blastmeros passam por
mudanas dramticas quanto s suas posies, um em relao ao outro. Essa
srie de redistribuio de clulas chamada de gastrulao. Como resultado
da gastrulao, o embrio tpico contm trs regies celulares chamadas
camadas germinativas*. O ectoderma, a camada exterior, produz as clulas
da epiderme e do sistema nervoso; o endoderma, camada interior, produz o
*Do Latim germen, significa broto ou rebento (a mesma raiz da palavra germinao). Os
nomes das trs camadas germinativas so do Grego: ectoderma de ektos (fora) mais derma
(pele); mesoderma de mesos (meio) e endoderma de endon (dentro).
Espermatozide
Mrula
Blstula
Ocito
Clula germinativa
(Germ plasm)
Espermatozide
(gameta
masculino)
Local das clulas

embrionrias
Blastocele
Ocito
(gameta
feminino)
GAMETOGNESE
Adulto
sexualmente maduro
Blastporo
Ectoderma
Gnada
Mesoderma
Estgios
larvais
imaturos
Endoderma
INCUBAO (NASCIMENTO)
Figura 1.1
Histrico do desenvolvimento de um representante animal, um sapo. Estgios que vo

da fertilizao at o nascimento so coletivamente conhecidos como embriognese. As
regies responsveis por produzir clulas embrionrias so mostradas em cores. Gametognese, que completa no adulto sexualmente maduro, comea em pocas diferentes, dependendo da espcie.
revestimento do tubo digestivo e rgos associados (pncreas, fgado, pulmes, etc.); e o mesoderma, camada do meio, d origem a diversos rgos
(corao, rins, gnadas), tecidos conjuntivos (ossos, msculos, tendes, vasos sangneos) e clulas sangneas.
3. Uma vez que as trs camadas embrionrias esto estabelecidas, as clulas
interagem umas com as outras e se reorganizam para produzir tecidos e rgos.
Esse processo chamado organognese. (Nos vertebrados, a organognese
iniciada quando uma srie de interaes celulares induzem as clulas ectodrmicas da poro mediana do dorso a formar o tubo neural. Esse tubo originar
o crebro e a coluna vertebral). Muitos rgos contm clulas de mais de uma
camada embrionria, e no incomum o exterior de um rgo ser derivado de
uma determinada camada e o interior de outra. Tambm durante a organognese,
algumas clulas sofrem longas migraes do seu lugar de origem at sua localizao final. Essas clulas migrantes incluem os precursores das clulas sangneas, clulas linfticas, clulas pigmentadas e gametas. A maior parte dos
ossos de nossa face so provenientes de clulas que migraram ventralmente
da regio dorsal da nossa cabea.
4. Como observado na Figura 1.1, em muitas espcies, uma parte especializada
do citoplasma do ovo d origem s clulas que so precursoras dos gametas.
Essas clulas so chamadas de clulas germinativas, sendo destinadas
funo reprodutiva. Todas as outras clulas do corpo so chamadas clulas
somticas. Essa separao entre clulas somticas (que do origem a um
corpo individual) e clulas germinativas (que contribuem para a formao de
uma nova gerao) freqentemente uma das primeiras diferenciaes que
ocorrem durante o desenvolvimento animal. As clulas germinativas finalmente migram para as gnadas, onde se diferenciam em gametas. O desenvolvimento de gametas, chamado de gametognese, normalmente no completado at que o organismo tenha se tornado fisicamente maduro. Na maturidade, os gametas podem ser liberados e participar de uma fertilizao dando
incio a um novo embrio. O organismo adulto finalmente sofre envelhecimento e morre.
Nossa herana eucaritica

Os organismos esto divididos em dois grupos principais, dependendo apenas se
as clulas possuem um envoltrio nuclear ou no. Os procariotos (do grego karion,
significa ncleo), onde esto includas as arqueobactrias e as eubactrias, no
possuem um ncleo verdadeiro. Os eucariotos que incluem os protistas, animais,
plantas e fungos, possuem um tegumento nuclear bem formado circundando os
seus cromossomos. Essa diferena fundamental entre os eucariotos e procariotos
influencia a maneira como esses grupos organizam e utilizam seu material gentico.
Em ambos os grupos, a informao herdada necessria para o seu desenvolvimento
e metabolismo se encontra codificada nas sequncias de cido desoxirribonuclico
(DNA) dos cromossomos. Os cromossomos procariticos normalmente so hlices
duplas de DNA, pequenas e circulares consistindo de aproximadamente 1 milho de
pares de bases. As clulas eucariticas geralmente possuem diversos cromossomos, e um simples protista eucaritico possui 10 vezes, ou mais, a quantidade de
DNA encontrada na maioria dos procariotos complexos. Alm disso, a estrutura de
um gene eucaritico mais complexa do que a de um gene procaritico. A seqncia
de aminocidos de uma protena procaritica a reflexo direta da seqncia de
DNA do cromossomo. O DNA de um gene eucaritico que codifica uma protena,
geralmente, dividido de tal forma que a seqncia completa de aminocidos da
protena derivada de segmentos descontnuos de DNA (Figura 1.2). O DNA entre
os segmentos freqentemente contm seqncias que esto envolvidas na regulao
do momento e lugar em que o gene ativado.
Cromossomos eucariticos tambm so muito diferentes dos cromossomos
procariticos. O DNA eucaritico reveste complexos proticos especficos, chamados
nucleossomos, compostos por protenas histonas. Os nucleossomos organizam o
DNA em estruturas compactas e so importantes na designao de qual gene ir se
expressar em qual clula. Nas bactrias no existem histonas. Mais ainda, clulas
eucariticas sofrem mitose, na qual o tegumento nuclear se parte e os cromossomos
replicados so igualmente divididos entre as clulas filhas (Figura 1.3). Nos procariotos,
a diviso celular no mittica; no se desenvolve o fuso mittico e, tambm, no
existe tegumento celular para se partir. Ao invs disso, os cromossomos filhos permanecem ligados a pontos adjacentes na membrana celular. Esses pontos de ligao so
separados entre si pelo crescimento da membrana celular, e finalmente colocam os
cromossomos em diferentes clulas filhas.
Figura 1.2
Resumo dos passos pelos quais as protenas

so sintetizadas a partir do DNA. (A) Expresso procaritica (bacteriana) do gene.
Regies codificadoras do DNA so colineares
com o produto protico. (B) Expresso de
genes eucariticos. Os genes so descontnuos
e um envoltrio nuclear separa o DNA do
citoplasma.
(A) CLULA PROCARITICA
(B) CLULA EUCARITICA

Envoltrio nuclear
ntron
2
ntron
1
Gene
DNA
xon
1
xon
2
xon
3
Transcrio
Transcrio
Ncleo
RNA nuclear
Processamento de RNA
mRNA
mRNA
Traduo
Citoplasma
Traduo
mRNA
Protena
mRNA
Protena
Procariotos e eucariotos tm mecanismos diferentes de regulao do gene. Em

ambos, o DNA transcrito por enzimas chamadas RNA polimerases para produzir
RNA. Quando o RNA mensageiro (mRNA) produzido nos procariotos, ele imediatamente traduzido em uma protena enquanto o seu outro terminal est sendo transcrito do DNA (Figura 1.4). Sendo assim, nos procariotos, transcrio e traduo so
eventos simultneos e coordenados. Mas a existncia de envoltrio nuclear em
eucariotos proporciona a oportunidade de se obter um tipo de regulao celular totalmente novo. Os ribossomos, que so responsveis pela traduo, esto de um lado do
envoltrio nuclear, e o DNA e a RNA polimerase necessria para a transcrio esto do
outro. Entre a transcrio e a traduo, o RNA transcrito deve ser processado para que
possa passar atravs do envoltrio nuclear. A regulao pela qual o mRNA pode
passar para o citoplasma, torna a clula capaz de selecionar quais das mensagens
recm-sintetizadas sero traduzidas. Assim, um novo nvel de complexidade foi adicionado, que extremamente importante para o organismo em desenvolvimento.
Desenvolvimento entre eucariotos unicelulares

Todos os organismos eucariticos pluricelulares se desenvolveram de protistas unicelulares. nesses protistas que as caractersticas bsicas do desenvolvimento apareceram primeiro. Eucariotos simples nos deram os primeiros exemplos da morfognese
direcionada pelo ncleo, o uso da superfcie da clula para mediar cooperao entre
clulas individuais e as primeiras ocorrncias de reproduo sexual.
Controle da Morfognese no Desenvolvimento em Acetabulria
H um sculo, ainda no havia sido provado se o ncleo continha alguma informao
hereditria ou de desenvolvimento. Algumas das melhores evidncias para essa teoria
vieram de estudos onde organismos unicelulares foram fragmentados em pedaos
Prfase:
O envoltrio nuclear
quebra e um fuso se forma
entre dois centrolos.
Prometfase:
Os cromossomos se
ligam s fibras dos fusos.
Interfase: DNA duplicado em

preparao para a diviso celular.
Ncleo
Cromatdeos do
cromossomo
Cromatina
Nuclolo
Regio do centrmero
Fuso em
desenvolvimento
Centrolos
ster
Envoltrio
nuclear
Envoltrio
nuclear
rompe
Nuclolo
Cromossomos filhos
Metfase:
Os cromossomos se
alinham no equador da clula.
Telfase:
Os cromossomos atingem
os plos mitticos e a clula
comea a invaginar.
Figura 1.3
Anfase:
Os cromossomos duplicados
(chamados cromatdeos) so
separados.
nucleados e anucleados (reviso por Wilson, 1986). Quando vrios protistas foram
fragmentados, quase todas as partes morreram. No entanto, os fragmentos que continham ncleo foram capazes de sobreviver, regenerando todo a complexa estrutura
celular (Figura 1.5)
O controle nuclear da morfognese celular e a interao do ncleo e citoplasma
esto muito bem demonstrados nos estudos da Acetabulria. Essa enorme clula
individual (2 a 4 cm de comprimento) consiste de trs partes: o disco reprodutivo, o
pednculo e o rizide (Figura 1.6A). O rizide est localizado na base da clula onde
essa presa ao substrato. O ncleo individual da clula se localiza dentro do rizide. O
tamanho da Acetabulria e a localizao do seu ncleo permitiram que pesquisadores
Diagrama de mitose em clulas animais. Durante a interfase o DNA duplicado em preparao para a diviso celular. Durante a
prfase, o envoltrio nuclear quebra e forma-se um fuso entre os dois centrolos. Na
metfase, os cromosssomos se alinham no
equador da clula e se inicia a anfase, os
cromossomos duplicados (cada duplicata de
cromossomo um cromatdeo) so separados. Na telfase os cromossomos atingem
os plos mitticos e a clula comea a
invaginar. Cada plo contm o mesmo nmero e tipos de cromossomos que continha a
clula antes da diviso.
Ribossomos
DNA
RNA
Figura 1.4
Transcrio e traduo simultnea em procariotos. Uma poro de DNA de Escherichia coli se

estende horizontalmente por essa microfotografia eletrnica. Transcries de RNA mensageiro
podem ser vistas dos dois lados. Ribossomos se juntaram ao mRNA e esto sintetizando
protenas (que no podem ser vistas). O mRNA pode ser visto aumentando de tamanho, da
esquerda para a direita, indicando a direo da transcrio. (Cortesia de O. L. Miller, Jr.)
removessem o ncleo de uma clula e o substitusse por outro, de outra clula. Nos
anos 30, J. Hmmerling tirou proveito dessa singular caracterstica e trocou ncleos
entre duas espcies morfologicamente distintas, A. mediterranea e A. crenulata. Como
mostrado na fotografia, essas duas espcies tm discos reprodutivos muito diferentes. Hmmerling descobriu que quando um ncleo de uma determinada espcie era
transplantado para o pednculo de outra, o novo disco em formao finalmente assumia a forma associada com o ncleo do doador (Figura 1.6B). Assim, foi considerado
que o ncleo era o controlador do desenvolvimento da Acetabulria.
A formao de um disco reprodutivo um evento morfognico complexo, envolvendo a sntese de um grande nmero de protenas, que devem ser acumuladas em
certa poro da clula e ento organizadas em estruturas complexas especficas da
espcie. O ncleo transplantado da clula realmente direciona a sntese de seu disco
reprodutivo espcie-especfico, mas uma tarefa que pode levar semanas para ser
realizada. Alm disso, se o ncleo for removido da clula de Acetabulria em estgio
inicial do desenvolvimento, antes de formar o disco reprodutivo, um disco normal se
formar semanas depois, ainda que o organismo ir morrer. Esses estudos sugerem
que (1) o ncleo contm informao especfica sobre o tipo de disco reprodutivo
produzido (isto , contm informao gentica que especifica as protenas necessrias para a produo de um certo tipo de disco reprodutivo), e (2) o material contendo
essa informao entra no citoplasma muito antes dessa produo ocorrer. A informao no citoplasma no ser usada por vrias semanas.
Fragmento
anucleado morre
Corte
Ncleo
Fragmento
nucleado
se regenera
Corte
Figura 1.5
Regenerao do fragmento nucleado do protista unicelular

Stylonychia. Os fragmentos anucleados sobrevivem por algum tempo, mas finalmente morrem.
Fragmento
anucleado morre
(B)
Disco
reprodutivo
(A)
Disco
reprodutivo
Pednculo
A. crenulata
Pednculo
A. mediterranea
Ncleos transplantados
Ncleo
Ncleo
Rizide
Rizide
1 cm
Rizide
1 cm
A estrutura do disco
reprodutivo a do
ncleo doador
Figura 1.6
(A) Acetabulria mediterranea (esquerda) e A.

crenulata (direita). Cada unidade uma clula singular. O rizide contm o ncleo. (B) Efeitos da troca de
ncleos entre duas espcies de Acetabulria. Ncleos
foram transplantados para fragmentos de rizides
anucleados. Estruturas de A. crenulata esto sombreadas; estruturas de A. mediterranea no esto sombreadas. (Fotografias cortesia de H. Harris.)
Uma hiptese atual, proposta para explicar essas observaes, que o ncleo sintetiza
um mRNA estvel, posicionado em estado dormente no citoplasma at a formao do
disco reprodutivo. Essa hiptese amparada por uma observao publicada por Hmmerling
em 1934. Hmmerling fracionou uma Acetabulria jovem em diversas partes (Figura 1.7). A
poro com o ncleo finalmente formou um novo disco, conforme esperado; da mesma
forma o fez a extremidade apical do pednculo. No entanto, a parte intermediria do pednculo no formou o disco reprodutivo. Por isso, Hmmerling postulou (aproximadamente 30
anos antes de sabermos da existncia do mRNA), que as instrues para a formao do
disco reprodutivo se originavam no ncleo, sendo de alguma forma guardadas dormentes prximo extremidade do pednculo. Muitos anos mais tarde, Kloppstech e
Schweiger (1975) estabeleceram que o mRNA derivado do ncleo se acumula nessa
regio. Ribonuclease, uma enzima que cliva RNA, inibe completamente a formao do
disco reprodutivo quando adicionada gua marinha na qual cresce a Acetabulria. Em
clulas anucleadas, esse efeito permanente; uma vez que o RNA destrudo, no pode
mais haver a formao do disco reprodutivo. Em clulas nucleadas, no entanto, um novo
disco pode ser formado aps a eliminao da ribonuclease, presumivelmente porque um
novo mRNA ento produzido pelo ncleo. Garcia e Dazy (1986) tambm demonstraram
que a sntese da protena especialmente ativa no pice da Acetabulria.
Fica claro pela discusso anterior, que a transcrio nuclear tem um papel importante na formao do disco reprodutivo da Acetabulria. Mas deve ser notado que o
10
Disco reprodutivo e
pednculo regenerados
Extremidade
apical do
pednculo
Poro central
do pednculo
Sem regenerao
Rizide
e ncleo
Regenerao total
Figura 1.7
Habilidade regenerativa de diferentes fragmentos da A. mediterranea
citoplasma tambm cumpre uma parte essencial na formao desse disco. O mRNA
no traduzido durante semanas, mesmo estando no citoplasma. Algo no citoplasma
controla quando as mensagens devem ou no ser utilizadas. Portanto, a expresso do
disco reprodutivo controlada no somente pela transcrio nuclear como tambm
pelo controle de traduo do RNA citoplasmtico. Nesse organismo unicelular, o
desenvolvimento controlado em ambos estgios de transcrio e de traduo.
Diferenciao em Ameboflagelados Naegleria
Um dos casos mais marcantes de diferenciao em protistas, aquele de Naegleria
gruberi. Esse organismo ocupa um lugar especial na taxonomia protista porque pode
mudar sua forma, de uma ameba para a de um flagelado (Figura 1.8). Durante a maior
parte do seu ciclo de vida, a N. gruberi uma ameba tpica, alimentando-se de bactrias do solo e dividindo-se por ciso. No entanto, quando as bactrias so diludas
(tanto pela gua da chuva quanto pela gua nos experimentos), cada N. gruberi
desenvolve rapidamente uma forma aerodinmica e dois longos flagelos anteriores,
que so usados para encontrar regies mais abundantes em bactrias. Nessas condies, ao invs de existirem diversos tipos de clulas diferenciadas em um nico organismo, essa clula nica tem estruturas celular e bioqumica diferentes nos diferentes
estgios de sua vida.
Diferenciao para a forma de flagelado ocorre aproximadamente em uma hora
(Figura 1.9). Durante esse perodo, a ameba tem que criar centrolos para servir como
corpos basais do flagelo (centros organizadores de microtbulos), assim como criar o
prprio flagelo. Os corpos basais e os flagelos so compostos de diversas protenas,
das quais a mais abundante a tubulina. As molculas de tubulina so organizadas em
microtbulos; esses so posteriormente arranjados para permitir o movimento flagelar.
Fulton e Walsh (1980) mostraram que a tubulina dos flagelos de Naegleria no existe
(A)
(B)
(C)
11
(D)
Figura 1.8
em seu estgio de ameba. produzida de novo (desde o comeo), comeando com

uma nova transcrio no ncleo. Para mostrar isso, os pesquisadores manipularam
transcries em vrios estgios com actinomicina D, uma droga antibitica que seletivamente inibe a sntese do RNA. Quando adicionada anteriormente diluio do
alimento, esse antibitico previne a sntese da tubulina. No entanto, se a actinomicina
D adicionada 20 minutos aps a diluio, a tubulina ainda produzida em tempo
normal (aproximadamente 30 minutos mais tarde). Portanto, parece que o mRNA para
a tubulina foi produzido durante os primeiros vinte minutos aps a diluio e usado
logo em seguida. Essa interpretao foi confirmada quando foi demonstrado que o
mRNA extrado da ameba no continha mensagem alguma, detectvel para tubulina
flagelar, ao passo que mRNA extrado de clulas diferenciadas continha muitas mensagens desse tipo (Walsh, 1984).
Ento, temos aqui um excelente exemplo de controle transcricional de um processo de desenvolvimento: O ncleo da Naegleria responde a mudanas ambientais
sintetizando o mRNA para tubulina flagelar. Notamos tambm um outro processo que
permanece extremamente importante no desenvolvimento de todos os outros animais
e plantas, que o agrupamento de molculas de tubulina para a produo do flagelo.
Esse arranjo, pelo qual a tubulina polimerizada em microtbulos, e esses por sua vez
agrupados de forma ordenada, visto em toda a natureza. Em mamferos, est evidente
no flagelo do espermatozide e nos clios da medula espinhal e do trato respiratrio.
Mais ainda, no somente a tubulina que produz o flagelo. Existem em torno de 300
outras protenas em cada flagelo, e o movimento flagelar depende da orientao adequada dessas protenas uma em relao a outra. At mesmo processos celulares tm a
sua prpria morfognese baseada em interaes moleculares entre os fragmentos
de protena. Tal controle ps-traduo, onde uma protena no funcional at que
esteja ligada a outras molculas, ser discutido melhor mais tarde. Vimos ento, que o
desenvolvimento em eucariotos unicelulares pode ser controlado nos estgios de
transcrio, traduo e ps-traduo.
Transformao de Naegleria gruberi da forma

amebide ao estado flagelado. Linha superior
corada com Iodo/Lugol; linha inferior corada
com um anticorpo fluorescente protena tubulina dos microtbulos. A transformao
iniciada pela eliminao do alimento (bactrias) da colnia de Naegleria. (A) 0 minutos;
(B) 25 minutos, mostrando sntese de nova
tubulina; (C) 70 minutos, emergncia de
flagelos visveis (D) 120 minutos, mostrando
flagelos maduros e forma aerodinmica do corpo (de Walsh, 1984, cortesia de C. Walsh.)
12
Figura 1.9
co
a
in
ul
b
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A asai rred
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o
c ta
b a
F m
ag
se
to
Fl
co
100
Porcentagem da populao com flagelo
Diferenciao do fentipo flagelado em

Naegleria. Amebas que vinham crescendo
em um meio enriquecido com bactria so
lavadas afim de se eliminar as bactrias no
tempo 0. Aos 80 minutos, praticamente toda
a populao desenvolveu flagelo. (Segundo
Fulton, 1977.)
80
Clulas de corpo com
forma flagelar
60
40
20
0
0
Figura 1.10
Sexo em bactrias. Algumas clulas de bactrias esto cobertas de numerosos apndices

(pilos) sendo capazes de transmitir genes para
uma clula recipiente (sem pilos) atravs de
um pilus sexual. Nessa figura, o pilus sexual
est realado por partculas virais que se ligam
especificamente quele estrutura. (Cortesia de
C. C. Brinton, Jr. e J. Carnahan.)
20
40
60
Tempo aps suspenso (minutos)
80
100
As Origens da Reproduo Sexual

A reproduo sexual outra inveno dos protistas que teve um profundo efeito em
organismos mais complexos. Deve-se notar que sexo e reproduo so dois processos separveis e distintos. A reproduo envolve a criao de novos indivduos.
Sexo envolve a combinao de genes de dois indivduos distintos em um novo
arranjo. Reproduo na ausncia de sexo uma caracterstica de organismos que se
reproduzem por ciso; no h discriminao nos genes quando uma ameba se divide
ou quando uma hidra brota clulas para formar uma nova colnia. Sexo sem reproduo tambm comum entre os organismos unicelulares. As bactrias so capazes de
transmitir genes de um indivduo para o outro por meio dos pilos sexuais (Figura
1.10). Essa transmisso independente da reproduo. Protistas so tambm capazes de reorganizar genes sem reproduo. Os paramcios, por exemplo, se reproduzem por ciso, mas o sexo realizado atravs de conjugao. Quando dois paramcios
se juntam, eles se unem atravs de seus aparelhos orais formando uma conexo
citoplasmtica atravs da qual podem trocar material gentico (Figura 1.11). Cada
macroncleo (que controla o metabolismo do organismo) degenera enquanto o
microncleo passa por meiose para produzir oito microncleos haplides, dos quais
todos, exceto um, degeneram. O microncleo remanescente divide-se mais uma vez
para formar um microncleo estacionrio e um microncleo migratrio. Cada
microncleo migratrio atravessa a ponte citoplasmtica e se funde com o microncleo
estacionrio (fertilizante), criando um novo ncleo diplide em cada clula. Esse
ncleo diplide se divide mitoticamente fazendo surgir um novo microncleo e um
novo macroncleo quando os dois parceiros se separam. Ainda que no tenha
ocorrido reproduo, houve sexo.
Microncleo
Fuso
meitico
Macroncleo
Ponte
citoplasmtica
Dois paramcios
formam
ponte citoplasmtica
Microncleos passam
por meiose, formando 8
ncleos haplides por clula;
macroncleos degeneram
Todos menos um
dos microncleos de
cada parceiro degeneram
Microncleo
estacionrio
Microncleo
migratrio
Microncleo restante se
divide para formar um microncleo
estacionrio e um migratrio
Microncleos migratrios
atravessam a ponte citoplasmtica
e fertilizam os microncleos
estacionrios do parceiro
Figura 1.11
Unio de paramcios atravs da ponte citoplasmtica, onde dois paramcios podem trocar
material gentico, deixando cada um com genes que diferem daqueles com os quais iniciaram o
processo. (Strickberger, 1985.)
A unio desses dois processos distintos, sexo e reproduo, em reproduo

sexual, visto em eucariotos unicelulares. A Figura 1.12 mostra o ciclo de vida da
Chlamydomonas. Esse organismo geralmente haplide, portando apenas uma
cpia de cada cromossomo (como os gametas dos mamferos). Os indivduos de
cada espcie, no entanto, esto divididos em dois grupos de parceiros: mais e
menos. Quando se encontram, juntam-se os citoplasmas e seus ncleos se fundem
para formar um zigoto diplide. Esse zigoto a nica clula diplide do ciclo de vida
e passar por meiose para formar quatro novas clulas de Chlamydomonas. Aqui
est uma reproduo sexual, pois cromossomos so realinhados durante as divises meiticas onde mais indivduos so formados. Note que nesse tipo de reproduo sexual protista, os gametas so morfologicamente idnticos e a distino entre
espermatozide e vulo ainda no aconteceu.
Com a evoluo da reproduo sexual, dois importantes avanos foram alcanados. O primeiro o mecanismo da meiose (Figura 1.13), pelo qual o complemento
diplide dos cromossomos reduzido ao estado haplide (discutido em detalhe no
Captulo 22). O outro avano o mecanismo pelo qual os parceiros reprodutivos
diferentes se reconhecem um ao outro. Em Chlamydomonas, o reconhecimento ocorre
primeiro nas membranas flagelares (Figura 1.14; Bergman et al., 1975; Goodenough e
Weiss, 1975). A aglutinao dos flagelos permite que regies especficas das membranas celulares se juntem. Esses setores especializados contm componentes
reprodutivos especficos que permitem a fuso dos citoplasmas. Seguindo-se
aglutinao, os indivduos mais iniciam a fuso estendendo um tubo de fertilizao.
Ncleo diplide se forma e

sofre divises mitticas para
gerar um novo macroncleo e
dois microncleos quando os
paramcios se separam
13
14
Figura 1.12
Reproduo assexual (mittica)
Reproduo sexual em Chlamydomonas. Duas

linhagens, ambas haplides, podem se reproduzir assexuadamente quando separadas. Respeitando certas condies, os dois cordes
podem se unir para produzir uma clula
diplide que pode sofrer meiose para formar
quatro novos organismos haplides. (Segundo
Strickberger, 1985.)
Parceiro tipo mais

(haplide)
Parceiro tipo menos

(haplide)
Reproduo
sexual
Acasalamento
Fuso citoplasmtica
Zigoto (diplide)
Maturao (meiose)
Germinao
Dois parceiros tipo mais e tipo menos
Figura 1.13
Sumrio da meiose. O DNA e as protenas associadas replicam durante a interfase. Durante a

prfase, o envoltrio nuclear se rompe e os cromossomos homlogos (cada cromossomo
duplicado, com os cromatdeos juntos no centrmero) se alinham em pares. Reagrupamentos
cromossmicos podem ocorrer entre quatro cromatdeos homlogos nesse estgio. Aps a
primeira metfase, os dois cromossomos homlogos originais so segregados em clulas diferentes. Durante a segunda diviso, o centrmero se divide, deixando cada nova clula com uma
cpia de cada cromossomo.
MEIOSE I
Envoltrio
nuclear
Cromatina
Cromossomos
homlogos
Cromatdeos
homlogos
Ncleo
Interfase
Prfase I precoce
Meia prfase I
Prfase I tardia
O envoltrio nuclear se rompe e cromossomos homlogos (cada cromossomo

sendo duplo, com os cromatdeos ligados no centrmero) se alinham aos pares.
Rearranjos cromossmicos podem ocorrer entre os quatro cromatdeos homlogos neste momento.
Metfase I
(A)
15
Figura 1.14
(B)
Duas etapas do reconhecimento no acasalamento de Chlamydomonas. (A) Varredura por

micrografia eletrnica (7000x) de par em acasalamento. Os flagelos que interagem, torcemse um em torno do outro, aderindo nas pontas
(flexas). (B) Microfotografia eletrnica de
transmisso (20.000x) de uma ponte citoplasmtica conectando os dois organismos. Os
microfilamentos se estendem da clula doadora (abaixo) para a clula recipiente (acima). (de
Goodenough e Weiss, 1975 e Bergman et al.,
1975; com permisso de U. Goodenough.)
Microfilamentos
Esse tubo conecta e se funde com um local especfico no indivduo menos. interessante que o mecanismo usado para estender esse tubo - polimerizao da protena
actina - tambm usado para estender processos do espermatozide e vulo do
ourio-do-mar. No Captulo 4, veremos que o reconhecimento e fuso de espermatozide e vulo ocorrem de uma maneira espantosamente semelhante a desses protistas.
Eucariotos unicelulares parecem ter os elementos bsicos do processo de desenvolvimento que caracterizam os organismos mais complexos: a sntese celular controlada pela regulao transcricional, por traduo e ps-traduo; existe um mecanismo para processar o RNA atravs da membrana nuclear; as estruturas de genes individuais e cromossomos so como sero atravs da evoluo eucaritica; mitose e
meiose so aperfeioadas; e a reproduo sexual existe, envolvendo a cooperao
entre clulas individuais.Tal cooperao intercelular se torna ainda mais importante
com a evoluo de organismos multicelulares.
MEIOSE II
Anfase I
Telfase I
Os dois cromossomos
homlogos originais so
segregados em clulas
diferentes
Metfase II
Anfase II
Telfase II
O centrmero se divide
Cada nova clula tem

uma cpia de cada
cromossomo
16
Eucariotos coloniais: A evoluo da diferenciao

Um dos mais importantes experimentos da evoluo foi a criao de organismos
pluricelulares. Parece ter havido diversos caminhos pelo qual uma nica clula evoluiu para uma disposio pluricelular; discutiremos apenas dois deles (veja o Captulo
23 para uma discusso mais completa). O primeiro caminho envolve a diviso ordenada da clula reprodutiva e a subseqente diferenciao da sua prognie em diferentes
tipos de clulas. Esse caminho para a multicelularidade pode ser visto em uma notvel
srie de organismos pluricelulares, coletivamente referidos como a famlia das
Volvocaceas ou volvocaceanas.
As Volvocaceanas
Os organismos mais simples entre as volvocaceanas so reunies ordenadas de numerosas clulas, cada uma parecida ao protista unicelular Chlamydomonas. Um nico
organismo de volvocacea do gnero Gonium (Figura 1.15), por exemplo, consiste de
uma placa plana contendo de 4 a 16 clulas, cada uma com seu prprio flagelo. Em um
gnero relacionado, Pandorina, 16 clulas formam uma esfera; e no Eudorina, a esfera contm 32 ou 64 clulas organizadas em um padro regular. Nesses organismos, um
princpio muito importante tem-se desenvolvido: a diviso ordenada de uma clula
para gerar um nmero de clulas que so organizadas de uma maneira previsvel.
Como ocorre na maioria dos embries animais, as divises celulares pelo qual uma
nica clula de volvocacea produz um organismo de 4 a 64 clulas ocorrem em uma
seqncia muito rpida e com ausncia de crescimento celular.
Os dois prximos gneros da srie volvocacea exibem um outro princpio importante do desenvolvimento: a diferenciao de tipos celulares em organismo individual. As clulas reprodutivas se diferenciam das clulas somticas. Em todos os
gneros j mencionados, toda a clula pode, e normalmente o faz, produzir um organismo novo completo por mitose (Figura 1.16 A,B). Nos gneros Pleodorina e Volvox,
porm, relativamente poucas clulas podem se reproduzir. Na Pleodorina californica,
as clulas da regio anterior so restritas uma funo somtica; somente aquelas
Figura 1.15
Representante da ordem dos Volvocales. (A)

o protista unicelular Chlamydomonas reinhardtii. (B) Gonium pectorale com oito clulas Chlamydomonas-smiles em um disco
convexo. (C) Pandorina morum. (D) Eudorina elegans. (E) Pleodorina californica. Aqui
todas as 64 clulas so originalmente similares, mas as posteriores desdiferenciam e rediferenciam como clulas assexuadas reprodutivas chamadas gondios, enquanto as clulas
anteriores permanecem pequenas e biflageladas, como o Chlamydomonas. (F) Volvox
carteri. Aqui, clulas destinadas a se tornarem gondios so separadas no comeo do
desenvolvimento e nunca desenvolvem caractersticas somticas. As clulas menores,
somticas, lembram Chlamydomonas. Todas,
menos o Chlamydomonas, so membros da
famlia das Volvocaceas. A complexidade aumenta do Chlamydomonas unicelular ao
Volvox pluricelular. Barra em A de 5m; BD, 25m; E, F, 50m (Cortesia de D. Kirk.)
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
(F)
17
Figura 1.16
(A)
(B)
(C)
clulas do lado posterior podem se reproduzir. Em P. californica, a colnia normalmente tem 128 ou 64 clulas, e a relao do nmero de clulas somticas para o nmero de
clulas reprodutivas normalmente 3:5. Dessa maneira, uma tpica colnia de 128
clulas tem 48 clulas somticas e uma colnia de 64 clulas tem 24 clulas somticas.
Nos Volvox, quase todas clulas so somticas, e muito poucas clulas so capazes de produzir novos indivduos. Em algumas espcies de Volvox, clulas reprodutivas como as da Pleodorina, so derivadas de clulas que originalmente parecem e
funcionam como clulas somticas antes de crescer e se dividir para formarem uma
nova prognie. No entanto, em outros membros do gnero, como o V. carteri, existe
uma diviso do trabalho completa: as clulas reprodutivas que vo criar a nova gerao so colocadas de lado durante a diviso das clulas reprodutivas que esto
formando um novo indivduo. As clulas reprodutivas nunca desenvolvem um flagelo
funcional e nunca contribuem para motilidade e outras funes somticas do indivduo; so inteiramente especializadas para reproduo. Ainda que as volvocaceas
mais simples sejam consideradas organismos coloniais (porque cada clula capaz de
existncia independente e perpetuao da espcie), no V. carteri temos um organismo
verdadeiramente celular com dois tipos de clulas independentes e distintos (somtico
e reprodutivo), ambos requeridos para a perpetuao da espcie (Figura 1.16C). Embora nem todos os animais separem suas clulas reprodutivas das clulas somticas (e
as plantas raramente o fazem), essa separao de clulas germinativas das clulas
somticas no incio do desenvolvimento caracterstica de muitos filos animais e ser
discutida em maior detalhe no Captulo 13.
Embora todas as volvocaceas, incluindo seu parente unicelular Chlamydomonas, se reproduzam predominantemente por meios assexuados, tambm so capazes
de reproduo sexual. Isso envolve a produo e fuso de gametas haplides. Em
muitas espcies de Chlamydomonas, incluindo a ilustrada na Figura 1.12, a reproduo sexual isogmica, j que os gametas haplides que se encontram so similares
em tamanho, estrutura e motilidade. No entanto, em outras espcies de Chlamydomonas - assim como as vrias espcies de volvocaceas coloniais - gametas nadadores de diversos tamanhos so produzidos por parceiros de acasalamentos diferentes. Isso chamado heterogamia. Mas as volvocaceas maiores desenvolveram uma
forma especializada de heterogamia, chamada oogamia, que envolve a produo de
vulos grandes e relativamente imveis por um parceiro do acasalamento e espermatozides pequenos e mveis pelo outro parceiro (veja Vises Colaterais & Especulaes). Aqui vemos um gameta especializado para reteno de recursos nutricionais
e de desenvolvimento e outro gameta especializado para transporte de ncleos.
Assim, as volvocaceas incluem os organismos mais simples que tm macho e fmea
distinguveis, e possuem caminhos diferentes para desenvolver o vulo ou o espermatozide. Em todas as volvocaceas, a reao da fertilizao se assemelha do
Chlamydomonas porque resulta na produo de um zigoto diplide dormente, inativo, capaz de sobreviver a condies ambientais severas. Quando as condies
permitem aos zigotos germinar, eles primeiro sofrem meiose para produzir herdeiros
haplides dos dois parceiros em nmeros iguais. [other.html#intro1]
Reproduo assexuada nas volvocaceanas. (A)

Colnia madura de Eudorina elegans. (B) Cada
uma das clulas de E. elegans se divide e produz uma nova colnia. (C) Volvox carteri maduro. A maioria das clulas so incapazes de se
reproduzir. Clulas germinativas (gondia) comearam a se dividir em novos organismos. (A
e B segundo Hartmann,1921; C de Kirk et al.,
1982, cortesia de D. Kirk.)
18
Informaes adicionais
&
Especulaes
Sexo e Individulidade em Volvox
imples como , o Volvox compartilha muitos traos que caracterizam o

ciclo de vida e histrico de desenvolvimento de organismos muito mais complexos, incluindo ns mesmos. Como j foi
mencionado, o Volvox est entre os organismos mais simples a exibir a diviso de
trabalho entre dois tipos de clulas diferentes. Como conseqncia disso, est entre os organismos mais simples a incluir a
morte como uma parte regular, geneticamente programada, da sua histria de vida.
Morte e Diferenciao
Organismos unicelulares que se reproduzem atravs de uma simples diviso celular, tais como as amebas, so potencialmente imortais. A ameba que vemos sob
um microscpio no tem ancestrais mortos! Quando uma ameba se divide, nenhuma das duas clulas resultantes pode ser
considerada ancestral ou prognie; elas
so parentes. A morte chega para uma

ameba apenas se ela ingerida ou sofre
um acidente fatal; quando isso acontece,
a clula morta no deixa prole.
Porm, a morte se torna uma parte essencial da vida para qualquer organismo
pluricelular que estabelece diviso de trabalho entre clulas somticas e clulas
germinativas (reprodutivas). Considere o
histrico de vida do Volvox carteri quando se reproduz assexuadamente (Figura
1.17). Cada adulto assexuado um
esferide contendo aproximadamente
2000 pequenas clulas somticas biflageladas ao longo de sua periferia e por volta
de 16 grandes clulas reprodutivas
assexuadas, chamadas gondios, dispostas em umas das extremidades do interior.
Quando maduro, cada gondio divide-se
rapidamente 11 ou 12 vezes. Parte dessa
diviso assimtrica e produz as 16 clulas grandes que iro se tornar um novo
Expanso
de adultos
e juvenis
Embriognese
conjunto de gondios. No fim da clivagem,

todas as clulas que estaro presentes no
adulto, foram produzidas de cada um dos
gondios. Mas o embrio est virado de
dentro para fora: seus gondios esto do
lado de fora e os flagelos de suas clulas
somticas esto apontando para o interior da esfera oca de clulas. Essa condio
adversa corrigida por um processo chamado inverso, pelo qual o embrio se vira
com o lado certo para fora atravs de
movimentos celulares que fazem lembrar
movimentos de gastrulao no embrio
animal (Figura 1.18). Um agrupamento de
Figura 1.17
Reproduo assexual em V. carteri. Quando as

clulas reprodutivas (gondios) esto maduras,
entram em um estado semelhante clivagem do
desenvolvimento embrionrio para produzir seres juvenis dentro do adulto. Atravs de uma
srie de movimentos celulares semelhantes
gastrulao, o volvox embrionrio se inverte e
finalmente liberado do progenitor. As clulas
somticas do progenitor, sem gondios, passam
por senescncia e morrem, enquanto a colnia
juvenil amadurece. O ciclo sexual total dura dois
dias. (Segundo Kirk, 1988.)
Adulto com
juvenis
Adulto com
gondios maduros
Maturao
dos gondios
Expanso continuada
da matriz extracelular
Morte de clulas
somticas - progenitores
Expanso
continuada
de juvenis
Liberao
de juvenis
(A)
(B)
(F)
Figura 1.18
(G)
Inverso dos embries V. carteri produzidos

assexuadamente. A-E so micrografias eletrnicas de varredura de embries completos. FJ so cortes sagitais atravs do centro do embrio, visualizado por microscopia diferencial
de interferncia. Antes da inverso, o embrio
uma esfera cncava de clulas conectadas.
Quando as clulas mudam a sua forma, um
buraco (o fialoporo) abre-se no topo do embrio (A,B,F,G). As clulas se curvam e se
renem em um dos plos (C-E, H-J). (Kirk et
al., 1982, cortesia de D. Kirk.)
(C)
(H)
(D)
(I)
(E)
(J)
clulas em forma de garrafa abre um buraco em um dos lados do embrio produzindo tenso sobre a camada de clulas interconectadas (Figura 1.19). O embrio se
utiliza desse buraco para fazer a inverso
e depois o fecha. Posteriormente, as colnias juvenis so enzimaticamente soltas
do progenitor e nadam livres.
19
O que acontece s clulas somticas

do progenitor Volvox agora que as jovens deixaram o lar? Tendo produzido
uma cria e sendo incapazes de uma nova
reproduo, essas clulas somticas morrem. Para ser mais exato, elas cometem
suicdio, sintetizando um conjunto de protenas que causam a morte e a dissoluo
das clulas que as produzem (Pommerville

e Kochert, 1982). Alm do mais, nessa morte, as clulas liberam para o uso de outras, incluindo sua prpria cria, todo o nutriente acumulado durante toda a vida.
Dessa maneira emerge, como assinala
David Kirk, um dos grandes temas da
vida no planeta Terra: Alguns morrem para
que outros possam viver.
Em V. carteri, foi identificado um gene*
especfico que tem um papel importante regulando a morte das clulas (Kirk, 1988).
Em linhagens laboratoriais possuindo mutaes desse gene, as clulas somticas
abandonam suas tendncias suicidas,
ganham a habilidade de se reproduzirem
* Esse gene (regA) foi clonado e mostrou
codificar uma protena que age para reprimir
(direta ou indiretamente) todos os genes cujos
produtos so requeridos pela clula para se desenvolver como gondio. Mutaes de perda da
funo impediro a protena de agir, e as clulas
sero capazes de se tornarem gondios (D. Kirk,
comunicao pessoal).
Figura 1.19
Clulas garrafas prximas abertura do fialoporo. Essas clulas

permanecem estreitamente conectadas atravs de pontes citoplasmticas prximas a
seus pices alongados, desse modo criando
a tenso que causa a curvatura da lmina celular interconectada. ( Kirk et al., 1982, cortesia de D. Kirk.)
20
(A)
assexuadamente e se tornam potencialmente imortais (Figura 1.20). O fato desses mutantes nunca terem sido encontrados na
natureza, indica que a morte das clulas
tem um papel importante na sobrevivncia
do V. carteri sob condies naturais.
[intro2.html]
Entra o sexo
Mesmo o V. carteri se reproduzindo assexuadamente a maior parte do tempo, na
natureza se reproduzem sexualmente uma
vez por ano. Quando o faz, uma gerao
de indivduos morre, e uma nova gerao
geneticamente diferente produzida. O
naturalista Joseph Wood Krutch (1956)
colocou isso de uma forma mais potica:
(B)
Figura 1.20
Mutao de um nico gene (chamado regenerador somtico A) elimina a programao de

morte em clulas V. carteri. Volvox recmeclodido carregando essa mutao (A)
indistinguvel do esferide tipo-selvagem. No
entanto, momentos antes das clulas somticas do esferide tipo-selvagem comearem a
morrer, as clulas somticas desse mutante se
rediferenciam como gondios (B). Finalmente,
cada clula do mutante ir se dividir para formar ( regenerar) um novo esferide que ir repetir esse ciclo do desenvolvimento potencialmente imortal.
A ameba e o paramcio so potencialmente imortais...Mas para o Volvox a

morte parece inevitvel, assim como o
para um camundongo ou o homem.
Volvox deve morrer, como Leeuwenkoek observou, porque teve filhos e no
mais necessrio. Quando sua hora
chegar, tomba em silncio, vai para
o fundo juntar-se a seus ancestrais.
Como Hegner, o zoologista de Johns
Hopkins, escreveu, Esse o primeiro
advento da inevitvel morte natural

no reino animal, e tudo em nome do
sexo. E pergunta: Vale a pena?
Para Volvox carteri, certamente que sim.
V. carteri vive em pequenas poas rasas
que temporariamente se enchem com as
guas das chuvas da primavera e secam no
calor do vero. Durante a maior parte desse
tempo, V. carteri nada livremente, reproduzindo-se assexuadamente. Esses volvox
morreriam em minutos se a poa secasse,
mas o V. carteri capaz de sobreviver se
tornando sexual pouco antes da secagem
das poas, produzindo zigotos inativos que
sobrevivem ao calor e seca do alto vero e
ao frio do inverno. Quando a chuva enche
esses pequenos reservatrios na primavera, os zigotos interrompem a sua dormncia
e criam uma nova gerao para reproduzirem-se assexuadamente at que as guas
ameacem secar novamente. Como esses organismos to simples prevem a chegada
de condies adversas com acuidade suficiente para produzir uma gerao sexual no
tempo certo, ano aps ano?
O estmulo para mudana do modo
assexual para o modo sexual de reproduo em V. carteri devido a uma protena
Figura 1.21
Reproduo sexual em V. carteri. Machos e fmeas so indistiguveis na sua fase assexuada.

Quando a protena indutora sexual est presente, os gondios de ambos parceiros passam por
uma embriognese modificada que leva formao de vulos nas fmeas e espermatozides nos
machos. Quando os gametas esto maduros, pacotes de espermatozide (contendo 64 ou 128
espermatozides cada), so liberados e nadam para as fmeas. Ao alcanar a fmea o pacote se
rompe em espermatozides individuais, que podem fertilizar os vulos. O zigoto resultante tem
paredes duras que podem resistir seca, calor e frio. Quando as chuvas da primavera fazem o
zigoto germinar, sofrendo meiose para produzir machos e fmeas haplides que se reproduzem
assexuadamente at o calor induzir novamente o ciclo sexual.
Pacotes de espermatozide
Desenvolvimento
sexual de gondios
Indutor
sexual
Espermatozide
Macho assexuado
Gondio
Desenvolvimento embrionrio
modificado dos gondios resultando
em produo de gametas
Macho sexuado
vulos
Indutor
sexual
Zigotos
vulo
Fmea sexuada
Fmea assexuada
Meiose e germinao
sexual indutiva de 30-kDa. Essa protena

to poderosa que concentraes menores que 6x10-17 fazem com que os gondios
sofram um padro modificado de desenvolvimento embrionrio que resulta na
produo de vulos ou espermatozides,
dependendo do sexo gentico do indivduo (Sumper et al.,1993). Os espermatozides so liberados para nadar para a fmea onde fertilizam os vulos para produzir zigotos dormentes (Figura 1.21).
Qual a fonte dessa protena indutora
sexual? Kirk e Kirk (1986), descobriram que
o ciclo sexual poderia ser iniciado esquen-
tando placas com V. carteri temperaturas

que poderiam ser encontradas em um reservatrio raso durante o fim do vero. Quando isso era feito, as clulas somticas dos
volvox assexuados produziam a protena
sexual indutora. Sendo a quantidade da protena secretada por um indivduo suficiente
para iniciar o desenvolvimento sexual em
mais de 500 milhes de volvox assexuados,
um nico volvox indutor pode converter um
reservatrio inteiro para a sexualidade. Essa
descoberta explica uma observao feita h
quase 90 anos, de que na intensa radiao
solar do vero de Nebraska, Volvox capaz
Diferenciao e Morfognese em Dictyostelium

O CICLO DE VIDA DO DICTYOSTELIUM. Um outro tipo de organizao multicelular
derivada de organismos unicelulares encontrada no Dictyostelium discoideum.* O

ciclo de vida desse organismo fascinante ilustrado na Figura 1.22. Em seu ciclo
vegetativo, uma solitria ameba haplide (chamada myxamoebae ou ameba social
para distingui-las de espcies de amebas que sempre permanecem solitrias) vive em
troncos cados, se alimentando de bactrias e se reproduz por ciso binria. Quando
tiver esgotado seu suprimento de comida, dezenas de milhares dessas amebas se juntam
para formar um fluxo corrente de clulas que convergem em um ponto central. Aqui se
amontoam uma sobre a outra sob forma de um cone chamado de agregado apertado ou
justo. Subseqentemente, uma ponta surge no topo desse monte, que se dobra formando uma lesma migratria (com a ponta na frente). A lesma (geralmente lhe dado um
ttulo mais dignificado de pseudoplasmdio ou grex) mede normalmente de 2 a 4 mm de
comprimento e envolvida por uma bainha viscosa. O grex comea a migrar (se o
ambiente est escuro e mido) com sua ponta anterior um pouco levantada; quando
atinge uma rea iluminada, a migrao cessa, e o grex se diferencia em um corpo de
frutificao composto de clulas esporos e pednculo. As clulas anteriores, representando 15 a 20 porcento de toda populao celular, formam o pednculo tubular. O
pednculo comea na parte centro-anterior da clula, enquanto as clulas prpedunculares comeam a secretar um revestimento extracelular estendendo um tubo
atravs do grex. medida que as clulas pr-pedunculares se diferenciam, formam
vacolos e aumentam de tamanho levando a massa de clulas pr-pednculo que
havia ficado nos quatro-quintos posteriores do grex (Jermyn e Williams, 1991). As
clulas do pednculo morrem, mas as clulas posteriores, elevadas acima do pednculo, transformam-se em clulas-esporo. Essas se dispersam, cada uma tornando-se
uma nova mixameba.
Em adio a esse ciclo sexual, existe a possibilidade para sexo em Dictyostelium.
Duas amebas podem fundir-se para criar uma clula gigante, que digere todas as
outra clulas do agregado. Quando tiver ingerido todos seus vizinhos, se enquista
em uma parede grossa e sofre divises meitica e mittica; e por fim, novas mixamebas
so liberadas.
Dictyostelium tem sido um maravilhoso organismo experimental para biologistas do desenvolvimento, porque clulas inicialmente iguais so diferenciadas em
dois tipos alternativos de clulas, esporo e pednculo. tambm um organismo
onde clulas individuais se juntam para formar uma estrutura coesa composta por
tipos de clulas diferenciadas, parecido com a formao de tecidos em organismos
* Embora chamado coloquialmente um fungo celular pegajoso, Dictyostelium no um fungo
(como Neurospora), nem consistentemente pegajoso. melhor consider-lo como uma ameba social.
21
de aparecer, multiplicar-se, realizando uma

orgia sexual reprodutiva em poas de gua
da chuva de apenas duas semanas
(Powers, 1908). Ainda que reservatrios temporrios formados pela gua das chuvas sequem sob o calor do vero, Volvox encontrou um meio de sobrevivncia: usa o calor
para induzir a formao de indivduos sexuados cujo acasalamento produz zigotos capazes de sobreviver sob condies que matam o organismo adulto. Observamos, tambm, que o desenvolvimento est criticamente ligado ao ecossistema ao qual o organismo se adaptou para sobreviver.
22
Lesma
(Pseudoplasmdio; grex)
15 h
16 h
14 h
17 h
CULMINAO
MIGRAO
20 h
12 h
Esporos
23 h
10 h
AGREGAO
Mixamebas
9 h
Corpo de frutificao
6 h
Fluxos
celulares
maduro
24h
Figura 1.22
Ciclo vital de Dictyostelium discoideum. Esporos haplides originam mixamebas, que podem
reproduzir-se assexualmente para formar mais mixamebas haplides. A medida que diminui o
suprimento alimentar, ocorre agregao em pontos centrais, e forma-se um agregado de
pseudoplasmdio. Finalmente, esse pra de se movimentar e forma um corpo de frutificao
que libera mais esporos. Os nmeros referem-se s horas decorridas desde que a diluio
nutricional iniciou a seqncia desenvolvimental.
mais complexos. A agregao de milhares de amebas em um nico organismo um

feito incrvel de organizao e convida experimentao para resolver perguntas
sobre os mecanismos envolvidos.
AGREGAO DE CLULAS DE DICTYOSTELIUM. A primeira pergunta : O que
induz a ameba a se agregar? Microcinematografia de espaamento temporal mostrou
que no ocorre movimento direcionado durante as primeiras 4-5 horas aps carncia
nutricional. Durante as 5 horas seguintes, porm, as clulas so vistas mover-se por
aproximadamente 20m / min durante 100 segundos. Esse movimento cessa aps
aproximadamente 4 minutos, e em seguida recomea. Embora o movimento seja
direcionado para um ponto central, no um simples movimento radial. Antes, as
clulas se juntam umas s outras para formar correntes; essas convergem em correntes maiores, e finalmente todas se juntam no centro. Bonner (1947) e Shaffer (1953)
mostraram que esse movimento devido quimiotaxia: as clulas so guiadas para os
centros de agregao por uma substncia solvel. Essa substncia foi posteriormente
identificada como adenosina 3,5 monofosfato cclico (cAMP) (Konijn et al., 1967;
Bonner et al., 1969), cuja estrutura qumica est mostrada na Figura 1.23A.
A agregao iniciada medida que cada clula comea a sintetizar o cAMP. No
h clulas dominantes que comeam a secreo ou controlam as outras. Antes, os
locais de agregao so determinados pela distribuio das amebas (Keller e Segal,
1970; Tyson e Murray, 1989). Clulas vizinhas respondem ao cAMP de duas maneiras:
ou iniciando sua movimentao de acordo com as pulsaes de cAMP, ou acompanhando a liberao de seu cAMP prprio (Robertson et al., 1972; Shaffer, 1975). Em
seguida, a clulas no respondem mais aos pulsos de cAMP por vrios minutos. O
(A)
Adenina
23
(B)
(C)
(D)
Figura 1.23
resultado uma onda giratria em espiral de cAMP, que se propaga atravs da

populao de clulas (Figura 1.23B-D). medida que chega cada onda, as clulas do
mais um passo para o centro.*
A diferenciao de amebas individuais em clulas pedunculares (somticas) ou
esporos (reprodutivas) uma questo complexa. Raper (1940) e Bonner (1957) demonstraram que as clulas anteriores normalmente formam pednculo, enquanto as
clulas remanescentes, posteriores, em geral esto destinadas a formar esporos. No
entanto, a remoo cirrgica da parte anterior da lesma no elimina a capacidade do
grex formar um pednculo. Em vez disso, as clulas que agora se encontram no final
anterior aps a cirurgia (e que originalmente estavam destinadas a formar esporos),
agora formam o pednculo (Raper, 1940). De alguma maneira, tomada uma deciso de
modo tal, que clulas anteriores virem clulas pedunculares e clulas posteriores
virem esporos. Essa habilidade de clulas mudarem seus destinos desenvolvimentais,
* A bioqumica dessa reao envolve um receptor que liga o cAMP. Quando essa ligao
ocorre, realiza-se transcrio especfica de genes, iniciada movimentao em direo fonte de
cAMP, e enzimas adenilciclases (que sintetizam cAMP a partir de ATP) so ativadas. O cAMP
recm-formado ativa seus receptores prprios, assim como aqueles de seus vizinhos. As clulas
na rea permanecem insensveis s novas ondas de cAMP at que o cAMP ligado seja removido
dos receptores por outra enzima da superfcie celular, a fosfodiesterase (Johnson et al., 1989).
A matemtica de tais reaes de oscilao prev que a difuso de cAMP seria inicialmente
circular. Porm, medida que o cAMP interage com as clulas que recebem e propagam o sinal,
as clulas que recebem a parte frontal da onda comeam a migrar com uma velocidade diferente
daquela das clulas atrs delas. O resultado a espiral rotatria de cAMP e a migrao vistas na
Figura 1.23. interessante que as mesmas frmulas matemticas predizem o comportamento de
certas reaes qumicas e a formao de novas estrelas em galxias espirais rotatrias (Tyson e
Murray, 1989).
Quimiotaxia de amebas de Dictyostelium devida ondas espirais de cAMP. (A) estrutura

qumica do cAMP. (B) Visualizao de vrias
ondas de cAMP no meio. Clulas centrais
secretam cAMP em intervalos regulares, e
cada secreo difunde para fora como um onda
concntrica. As ondas so mapeadas saturando-se papel de filtro com cAMP radioativo e
colocando-o sobre uma colnia em agregao.
O cAMP das clulas secretoras dilui o cAMP
radiativo. Quando a radioatividade no papel
registada (colocando-o sobre filme de raiosX), as regies de alta concentrao de cAMP
na cultura aparecem mais claras que aquelas
de baixa concentrao de cAMP. (C,D) Ondas espirais de amebas movendo-se em direo fonte inicial de cAMP. (C) Essa
microfotografia em campo escuro processada digitalmente mostra cerca de 107 clulas.
Como clulas mveis e imveis dispersam a
luz diferentemente, a fotografia reflete movimento celular. As bandas claras so compostas de clulas migratrias alongadas; as bandas escuras so clulas que pararam de se
mover e se arredondaram. (D) As clulas formam correntes, a espiral de movimento ainda
pode ser vista movendo-se em direo ao centro. (B de Tomchick e Devreotes, 1981, cortesia de P. Devreotes; C e D de Siegert e Weijer,
1989, cortesia de F. Siegert.)
24
Figura 1.24
Clulas de Dictyostelium sintetizam um adesivo, glicoprotena 24-kDa, pouco aps a inanio

nutricional. Clulas de Dictyostelium foram coradas com um anticorpo fluorescente que se liga
glicoprotena 24-kDa e foram em seguida observada sob luz ultravioleta. Essa protena no foi
vista em amebas que tinham apenas parado de se dividir. No entanto, como mostrado aqui 10
horas aps o fim da diviso celular amebas individuais so vistas apresentando essa protena
em suas membranas celulares e so capazes de aderir umas s outras.
de acordo com sua localizao dentro do organismo inteiro, e assim compensar por
partes faltantes, chamada regulao. Veremos esse fenmeno em muitos embries,
inclusive naqueles dos mamiferos.
MOLCULAS DE ADESO CELULAR EM DICTYOSTELIUM. Como essas clulas
individuais aderem entre si para formar um organismo coeso? Este o mesmo problema que enfrentam as clulas embrionrias, e a soluo que evoluiu para os protistas
a mesma que aquela usada pelos embries: molculas de adeso celular reguladas
pelo desenvolvimento.
Enquanto esto crescendo mitoticamente em bactrias, clulas de Dictyostelium
no aderem umas s outras. Porm, uma vez que a diviso celular cessa, as clulas se
tornam progressivamente mais adesivas, alcanando um patamar de coesividade mxima aproximadamente aps 8 horas de inanio. A adeso clula-clula mediada por
uma glicoprotena de 24.0000 Da (24-kDa) que est ausente em clulas em crescimento
mas pode ser vista pouco depois dessa fase (Figura 1.24; Knecht et al., 1987; Loomis,
1988). Essa protena sintetizada a partir de mRNA recm-transcrito e fica localizada
nas membranas celulares das mixamebas. Se essas clulas so tratadas com anticorpos que se ligam a essa protena e a mascaram, as clulas no iro aderir umas s
outras e todo desenvolvimento subseqente cessa.
Uma vez que essa agregao inicial tiver ocorrido, estabilizada por uma segunda
molcula de adeso celular. Essa glicoprotena de 80-kDa tambm sintetizada durante a fase de agregao. Se apresentar defeitos ou estiver ausente nas clulas, lesmas
pequenas se formaro, e seus corpos de frutificao s atingiro aproximadamente um
tero de seu tamanho normal. Assim, o segundo sistema de adeso celular, parece ser
necessrio para a reteno de um nmero de clulas suficientemente grande para a
formao de grandes corpos de frutificao (Mller e Gerisch, 1978; Loomis, 1988). Um
terceiro sistema de adeso ativado tardiamente no desenvolvimento, quando a lesma estiver migrando. A protena ou grupo de protenas que intervem no terceiro sistema pode existir somente em clulas pr-esporo e pode ser responsvel pela separao
de clulas pr-esporo de clulas pr-pednculo (Loomis, comunicao pessoal). Assim, Dictyostelium evoluiu para trs sistemas de adeso clula-clula regulados pelo
desenvolvimento, e que so necessrios para a morfognese de clulas individuais
para formar um organismo coerente. Como veremos em captulos subseqentes, clulas de metazorios tambm usam molculas de adeso celular para formar os tecidos e
rgos do embrio.
Dictyostelium um organismo multicelular em tempo parcial que no forma
muitos tipos de clulas (Kay et al., 1989), e os organismos multicelulares mais complexos no se formam pela agregao de clulas anteriormente independentes. No entanto, muitos dos princpios do desenvolvimento demonstrados por esse simples or-
25
ganismo tambm aparecem em embries de filos mais complexos. A habilidade de

clulas individuais sentir um gradiente qumico (como a resposta da ameba ao cAMP)
muito importante para a migrao celular e morfognese durante o desenvolvimento
animal. Ainda mais, o papel das protenas da superfcie celular para a coesividade
celular pode ser visto atravs do reino animal, e molculas indutoras da diferenciao
esto agora comeando a ser isoladas de organismos metazorios.
&
Especulaes
Evidncia e Anticorpos
Biologia, tal como qualquer outra

cincia, no trata de fatos; antes,
trata de evidncias. Vrios tipos
de evidncia sero apresentados neste livro; no so todos de equivalente vigor.
Como exemplo, vamos usar a anlise da
adeso celular em Dictyostelium. O primeiro e mais fraco tipo de evidncia a evidncia correlativa. Aqui, so feitas correlaes entre dois ou mais eventos, e infere-se que um evento estimule o outro.
Como vimos, anticorpos marcados com fluorescncia para uma certa glicoprotena de
24 kDa, no marcam clulas vegetativas em
diviso; porm, esses mesmos anticorpos
acham a protena em membranas celulares
de mixameba logo que as clulas param de
se dividir e tornam-se competentes para
agregar (veja Figura 1.24). Assim, existe uma
correlao entre a presena dessa glicoprotena da membrana celular e a capacidade de agregao.
Evidncia correlativa d um ponto de
partida para investigaes, mas no se
pode afirmar com certeza que um evento
estimula outro somente baseado em correlaes. Embora se possa inferir que a
sntese dessa protena causa a adeso das
clulas, tambm possvel que adeso celular leve as clulas a sintetizar essa nova
glicoprotena, ou que a adeso celular e a
sntese da glicoprotena 24-kDa sejam
eventos separados, iniciados pela mesma
causa subjacente. A ocorrncia simultnea dos dois eventos pode mesmo ser coincidncia e os eventos no terem relao
um com o outro.*
Como ento ir para alm da mera correlao? No estudo da adeso celular em

Dictyostelium, o prximo passo foi usar
aqueles mesmos anticorpos para bloquear a adeso de mixamebas. Usando uma
tcnica introduzida pelo laboratrio de
Gerisch (Beug et al., 1970), Knecht e colaboradores (1987) tomaram os anticorpos
que ligam essa glicoprotena 24-kDa e isolaram seus stios ligantes de antgeno (as
partes da molcula do anticorpo que reconhecem o antgeno). Isso foi necessrio porque o todo da molcula de anticorpo contm dois stios ligantes de antgeno
que iriam ligar-se artificialmente de maneira cruzada e aglutinar as mixamebas. Quando esses fragmentos ligantes de antgeno
(chamados Fragmentos Fab) foram adicionados s clulas competentes para agregao, as clulas no puderam se agregar. Os fragmentos de anticorpo impediram as clulas de aderir entre si, presu
mivelmente por ligarse a glicoprotena
24-kDa, bloqueando sua funo. Esse tipo
de evidncia chamado evidncia-deperda-de-funo. Se bem que mais forte
que a evidncia correlativa, ela ainda no
exclui outras inferncias. Por exemplo,
possvel que os anticorpos tenham matado a clula (o que poderia acontecer se a
glicoprotena 24-kDa for um crtico canal
de transporte). Isso tambm impediria a
adeso celular. Ou talvez, a glicoprotena
24-kDa nada tinha a ver com a adeso propriamente, mas necessria para o funcionamento da verdadeira molcula adesiva (como atravs da estabilizao de pro-
* Em uma carta irnica, caoando de tais inferncias correlativas, Sies (1988) demonstrou uma
notvel boa correlao entre o nmero de cegonhas vistas na Alemanha Ocidental de 1965 at 1980
e o nmero de bebs nascidos durante esses mesmos anos.
tenas de membrana em geral). Nesse

caso, bloquear a glicoprotena tambm
causaria a inibio da agregao celular. Assim, a evidncia perda-defuno
precisa ser amparada por muitos controles demonstrando que agentes causadores de perda de funo derrubam
especificamente aquela funo em particular, e nada mais.
O tipo mais forte de evidncia evidncia-de-ganho-de-funo. Aqui, o incio do primeiro evento estimula um segundo e mesmo em situaes onde nenhum
desses eventos ocorre usualmente. Recentemente, da Silva e Klein (1990) e Faix e
colaboradores (1990) obtiveram tal evidncia para mostrar que a glicoprotena 80-kDa
uma molcula adesiva. Isolaram o gene
para essa protena e o modificaram de uma
maneira a motiv-lo ser expresso continuamente. Em seguida, recolocaram-no em
mixameba bem-alimentada, crescendo vegetativamente, que usualmente no expressa essa protena e no tem capacidade de
adeso. A presena dessa protena na membrana celular dessas clulas em diviso foi
confirmada por marcao com anticorpos.
Tais clulas agora aderiram umas s outras
mesmo nos estados vegetativos, o que normalmente no fazem. Assim, elas tinham
ganho uma funo adesiva somente por
expressar essa glicoprotena em particular
nas suas superfcies celulares. Essa evidncia de ganho-de-funo mais convincente que outros tipos de anlise. Experimentos semelhantes foram recentemente
realizados em clulas de mamferos (veja
captulo 3), para demonstrar a presena de
determinadas molculas adesivas celulares no embrio em desenvolvimento.
26
DIFERENCIAO EM DICTYOSTELIUM. A diferenciao em uma clula-pedncu-
lo ou em uma clula-esporo reflete um dos principais fenmenos da embriognese: a

seleo pela clula de uma trajetria desenvolvimental. As clulas freqentemente
selecionam um determinado destino desenvolvimental quando alternativas esto disponveis. Uma determinada clula num embrio de vertebrado por exemplo, pode tornar-se uma clula da epiderme ou um neurnio. Em Dictyostelium, vemos uma deciso
dicotmica simples, porque somente dois tipos celulares so possveis. Como uma
clula torna-se uma clula de pednculo ou uma clula de esporo? Embora os detalhes
no sejam totalmente conhecidos o destino de uma clula parece ser regulado por
certas molculas difusivas. Os dois principais candidatos so o fator indutor de diferenciao (DIF) e o cAMP. DIF parece ser necessrio para a diferenciao da clula
peduncular. Esse fator, tal como o fator indutor de sexo em Volvox, eficaz em concentraes muito baixas (10-10M); e, como a protena de Volvox, parece induzir a diferenciao de um determinado tipo de clula. Quando adicionado s amebas isoladas ou
mesmo s clulas pr-esporo (posteriores), induz a formao de clulas pedunculares.
A sntese desse lipdeo de baixo peso molecular regulada geneticamente, pois h
cepas mutantes de Dictyostelium que formam somente o precursor de clulas-esporo
e no de clulas pedunculares. Quando DIF adicionado a essas culturas de mutantes,
clulas penduculares conseguem se diferenciar (Kay e Jermyn, 1983; Morris et al.,
1987), e novos mRNAs especficos pr-pednculo so encontrados no citoplasma
celular (Williams et al., 1987). O mecanismo pelo qual DIF induz 20 porcento das
clulas do plasmdio (grex) a tornar-se tecido peduncular ainda controverso (veja
Early et al., 1995). DIF pode agir atravs da liberao de ons de clcio de compartimentos intracelulares no interior da clula (Schaulsky e Loomis, 1995). [other.html#intro3]
Embora DIF estimule amebas a tornarem-se clulas pr-pednculo, a diferenciao de clulas pr-esporo mais provavelmente controlada por pulsos contnuos
de cAMP. Altas concentraes de cAMP iniciam a expresso de mRNA pr-esporo
especfico, em amebas agregadas. Alm disso, quando lesmas so colocadas em um
meio contendo uma enzima que destri cAMP extracelular, as clulas pr-esporo
perdem suas caractersticas de diferenciao (Figura 1.25; Schaap e van Driel, 1985;
Wang et al., 1988a,b).
(A)
(B)
Figura 1.25
Substncias qumicas que controlam a diferenciao em Dictyostelium. (A) e (C)

(B) mostram os efeitos de se colocar lesmas Dictyostelium em um meio
contendo enzimas que destroem cAMP extracelular. (A) Grex (pseudoplasmdio) corado para presena de uma protena pr-esporo especfica (regies
claras). (B) Grex semelhante corado aps tratamento com enzimas que degradam cAMP. No visto produto pr-esporo especfico. (C) Amplificao maior de uma lesma tratada com DIF (na ausncia de amnia). O corante
usado liga-se parede de celulose das clulas pedunculares. Todas as clulas
do grex tornaram-se clulas pedunculares. (A e B de Wang et al., 1988a; C de
Wang e Schaap, 1989; cortesia dos autores.)
27
&
Especulaes
Como o Grex Sabe Qual Lado Est Para Cima
E TODAS AS AMEBAS do grex

comearem no mesmo nvel, como
podem clulas nos quatro-quintos
posteriores da lesma se diferenciar em clulas-esporo, enquanto clulas equivalentes do quinto anterior se tornam clulas
pedunculares? A resposta pode estar na
observao de que as clulas originais no
so todas iguais. Amebas sujeitas inanio durante a parte precoce de seu ciclo celular tendem a se mover para a poro anterior do pseudoplasmdio, enquanto amebas expostas inanio durante o fim do ciclo, tendem a permanecer
na poro posterior (McDonald e Durston, 1984; Weijer et al., 1984). Esse trabalho foi confirmado e ampliado por Ohmori
e Maeda (1987), que mostraram que clulas no-alimentadas durante a parte tardia do ciclo celular, respondem de maneira diferente ao cAMP e mostram adesividade muito mais alta que clulas jejuadas
imediatamente aps a mitose. Williams e
colaboradores (1989) acharam que clulas pr-esporo e pr-pednculo podem ser
diferenciadas em agregados precoces e
que esto distribudas de modo aleatrio
atravs desses montes hemisfricos. Assim, as tendncias para certos destinos
foram estabelecidas at mesmo antes do
grex comear a migrar. Dentro de cada agregado, a maioria das clulas pr-pednculo, migram ativamente para o anterior, enquanto clulas pr-esporo permanecem
no que se tornar a regio posterior do
grex. Essa migrao provavelmente devida a repetidos pulsos de cAMP que ain-
da esto emanando da ponta apical do

agregado. Esses pulsos so quimiotcticos para clulas pr-pednculo, mas no
para clulas pr-esporo, de modo que atraem as clulas pr-pednculo para a ponta
da agregado (Matsukuma e Durston, 1979;
Mee et al., 1986; Siegert e Weijer, 1991;
Takeuchi, 1991).Portanto, o AMP cclico
parece ter vrias funes no desenvolvimento de Dictyostelium. Agrega as clulas umas s outras, induz diferenciao de
clulas pr-esporo e dirige a migrao de
clulas pr-pednculo para a parte anterior do agregado.
Uma vez completo, o agregado tomba
sobre um dos lados e forma o grex migratrio. A maioria das clulas pr-pednculo esto nos 20 porcento anteriores do
grex, porm, h tambm algumas clulas
pr-pednculo espalhadas atravs da parte posterior. Clulas pr-pednculo podem
ser distinguidas pela sua secreo de protena A da matriz extracelular para espaos intercelulares. No centro da poro
anterior do grex, um outro grupo de clulas pr-pednculo comea a secretar uma
segunda nova protena (protena B), para
sua matriz extracelular. Essas clulas so
chamadas clulas pr-pednculo B (pstB),
enquanto a maioria das clulas pr-pednculo so conhecidas como clulas prpednculo A (pstA) (Figura 1.26). Outro
grupo de clulas pr-pednculo, as clulas pstO, esto espalhadas de maneira
esparsa atravs das clulas pr-esporo, e
migram mais lentamente em direo ao
anterior. Quando o grex se encontra na
Clulas pr-pednculo A
Clulas pr-pednculo B
Clulas pr-pednculo AB
Direo do movimento celular
Clulas pr-esporo
Pr-pednculo AB
Guarda da
retaguarda
Pr-pednculo A
luz solar, cessa de migrar e sofre a diferenciao final em esporos e pednculo. Durante esse processo (chamado culminao), o grex se apia em um dos terminais
fazendo com que as clulas traseiras se
tornem sua base. Algumas clulas pstA
migram para o tubo central de clulas pstB,
e quando entram em contato com o tubo
central, diferenciam-se em clulas pstB, sintetizando componentes de uma nova matriz
extracelular. As clulas novas so adicionadas regio anterior do tubo, forando-o
mais para dentro da estrutura culminativa.
Esse tubo se diferencia para tornar-se o pednculo. Ao mesmo tempo, as clulas pstA
que tinham ficado na regio posterior do
Figura 1.26
Regulao da diferenciao de clulas pedunculares durante a fase de culminao do crescimento de Dictyostelium. Representao
esquemtica mostrando que clulas pr-esporo
e pr-pednculo esto em geral misturadas no
estgio precoce da agregao, mas se separam
de modo que a maioria das clulas prpednculo se encontrem na parte anterior do
grex. As clulas pr-pednculo A constituem
a maior parte do anterior do grex, com alguma
clulas similares no posterior. Clulas prpednculo B so vistas na parte central da
poro anterior do grex. Nos estgios precoces da culminao, as clulas pr-pednculo
do posterior migram para formar o disco basal
e os clices do saco de esporos; as clulas prpednculo A do anterior migram para o centro
e se tornam clulas pr-pednculo B. Isso estende o pednculo at que esse eleve a caixa de
esporos acima da superfcie. (Segundo
Harwood et al., 1992).
Clice superior
Clulas
pr-esporo
Pr-pednculo AB
Clice
Inferior
Pr-pednculo AB
Pr-pednculo B
Disco basal interior
Disco basal exterior
Pr-pednculo B
Pr-pednculo B
Agregado
Grex
Culminante precoce
Culminante mdio
Culminante tardio
28
grex migram para as bordas da regio presporo e diferenciam-se no invlucro dos

esporos e disco basal (Williams e Jermyn,
1991; Harwood et al., 1992). Finalmente,
os esporos so levantados 2 mm acima
do solo, de onde podem ser dispersos
pelo vento ou um animal que passa.
O gatilho para a culminao parece ser
a luz solar ou a baixa umidade. Experimentos recentes sugerem que esses dois fatores causam a difuso de amnia da lesma. A amnia produzida copiosamente
por lesmas migratrias e reprime a culminao. Sempre que a amnia estiver exaurida (quer naturalmente ou experimentalmente), a culminao comea (Schindler e
Sussman, 1977; Newell e Ross, 1982;
Bonner et al., 1985). A amnia inibe a converso de clulas pstA em pstB e probe a
continuao da formao do pednculo
Amnia
(Gross et al., 1983; Wang et al., 1990).

Bonner e colaboradores (1985), sugeriram
que como a luz causa difuso mais rpida
da amnia, remove o inibidor permitindo
assim, o progresso da culminao.
A amnia parece inibir a produo do
pednculo pelos menos de duas maneiras. Inibe a ao de DIF (Wang e Schaap,
1989), e inibe a produo de cAMP nas
clulas pr-pednculo (Schindler e Sussman, 1977; Harwood et al., 1992). Esse
cAMP necessrio para ativar a protena
quinase cAMP-dependente (PKA). Clulas pr-pednculo contendo PKA nofuncional, no fosforilam certas protenas.
Essas clulas no migram para a regio
central anterior, nem se diferenciam em
clulas do pednculo (Firtel e Chapman,
1990; Harwood et al., 1992). Os dados
sugerem que quando PKA ativada,
passa a fosforilar um repressor que estava inibindo a expresso dos genes de diferenciao do pednculo. No estado fosforilado, o inibidor inativo. Portanto, uma
vez que os nveis de cAMP se elevam (pela
remoo da amnia), a PKA pode inativar
o inibidor dos genes formadores do pednculo (Figura 1.27). [intro.4html]
Figura 1.27
Uma hiptese para a iniciao coordenada da

culminao e diferenciao de clulas
pedunculares em Dictyostelium. A luz solar
dissipa a amnia na parte anterior do grex,
permitindo maior produo de cAMP nas clulas pr-pednculo. A concentrao mais alta
de cAMP ativa a PKA, que fosforila um
inibidor da expresso gnica do pednculo. O
inibidor fosforilado no pode mais inibir os
genes pednculo-especficos. A seqncia pela
qual a formao de esporos inibida, no est
clara. (Baseado em modelos de Bonner et al.,
1985, e Harwood et al., 1992)
cAMP
Repressor ativo da
diferenciao e de
genes de migrao
peduncular
Migrao
continuada
do grex
PKA
inativa
Luz solar
cAMP
PKA
ativa
Repressor inativo
(fosforilado)
Transcrio
do gene da protena B
da matriz extracelular;
migrao de clulas
pr-pednculo;
diferenciao e
culminao peduncular
Padres desenvolvimentais entre metazorios

Como o restante deste livro se ocupa do desenvolvimento de metazorios - animais
multicelulares que atravessam estgios embrionrios de desenvolvimento - apresentaremos um viso panormica dos seus padres desenvolvimentais.* A Figura
1.28 ilustra os principais rumos evolutivos do desenvolvimento metazorio. A observao mais impressionante que a vida no evoluiu segundo uma linha reta;
apresenta diversos caminhos evolutivos ramificados. Podemos ver que a maioria
das espcies de metazorios pertence a um de dois principais ramos de animais:
protostomatas e deuterostomatas.
*Plantas passam por padres igualmente complexos e fascinantes de desenvolvimento embrionrio e ps-embrionrio. No entanto, o desenvolvimento das plantas difere significativamente
daquele dos animais; a incluso de um tratamento abrangente do seu desenvolvimento teria dobrado
a extenso deste livro. Por isso, foi tomada a deciso de enfocar neste texto, o desenvolvimento dos
animais. Para uma reviso, veja Singer, 1997.
BILATERIA
DEUTEROSTOMATAS
Artrpodos
Aneldeos
No-segmentados
Nematelmintos
Larva
trocfora
da
lo
ad
Clivagem em
espiral gastrulao
protostosomal
ma
ce
eu
lo
Platelmintos primitivos
(acelomados)
ad
em
nh
ac
ag
qu
es
nh
nh
ag
em
Li
em
ag
SIMETRIA
BILATERAL
Li
Li
Clivagem radial
gastrulao
deuterostomal
ps
ce
izo
Larva dipleura
(tornria)
Segmentados
Moluscos
Equinodermos
elo
Ascdios
(Tunicados)
RADIATA
PARAZOA
Cnidrios
(Celenterados)
Porferos
(Esponjas)
PROTOSTOMATAS
do
Vertebrados
29
SIM
ET
RA
RIA
DIA
Larvas planulides
Protozorios coloniais
primitivos
Protistas flagelados
Figura 1.28
Principiais divergncias evolucionrias em animais existentes. (Outros modelos so possveis,

porm, os esquemas em geral so todos semelhantes ao mostrado aqui.)
Os Porferos
Considera-se que os protistas coloniais deram origem, ao menos, a dois grupos de
metazorios, ambos passando por estgios embrionrios. Um desses grupos o Porfero
(esponjas). Esses animais desenvolvem-se de um modo to diferente daquele de qualquer outro grupo de animais, que alguns taxonomistas sequer consideram-nos
metazorios (chamando-os, parazorios). Uma esponja tem trs tipos principais de
clulas somticas, mas um deles, o arquecito, pode se diferenciar em todos os outros
Platelmintos
30
tipos. As clulas de uma esponja quando passadas por uma peneira, podem regenerar
novas esponjas a partir de clulas individuais. Ainda mais, em alguns casos, tal reagregao espcie-especfica: se clulas individuais de esponja de duas espcies
diferentes forem misturadas, cada uma que se re-forma contm somente clulas de
uma espcie (Wilson, 1907). Nesses casos, admite-se que os arquecitos mveis colecionam clulas de sua espcie, mas no das outras (Turner, 1978). Esponjas no contm mesoderma, no havendo portanto verdadeiros sistemas de rgos em Porfero;
esses seres no tm tubo digestivo, sistema circulatrio, nervos ou msculos. Assim,
apesar de passarem por estgios embrionrios e larvais, esponjas so muito pouco
parecidos com a maioria dos metazorios (veja Fell, 1997).
Protostomatas e Deuterostomatas
O outro grupo de metazorios emergindo dos protistas coloniais caracterizado pela
presena de trs camadas germinativas durante o desenvolvimento. Alguns membros
do grupo constituem os Radiatas, assim chamados porque tm simetria radial tal como
um tubo ou uma roda. Os Radiatas incluem os cnidrios (medusas, corais e hidras) e
ctenforos (medusas de crista). Nesses animais, o mesoderma rudimentar, consistindo de clulas escassamente disseminadas em uma matriz gelatinosa. Porm, a maioria
dos metazorios tem simetria bilateral, constituindo assim, os Bilaterias. Esses filos
bilaterais so classificados como platelmintos, protostomatas ou deuterostomatas.
Pensa-se que todos os Bilateria descendam de um tipo primitivo de platelminto. Esses
platelmintos foram os primeiros a ter mesoderma verdadeiro (embora no tivessem
ficado ocos para formar uma cavidade corprea), e foram considerados parecidos com
as larvas de certos celenterados contemporneos. Enquanto os platelmintos so desprovidos de celoma (cavidade corprea), os nematelmintos (e rotiferas) tm uma cavidade corprea diferente daquela de todos os outros animais, por ser desprovida de
revestimento mesodrmico. A maioria dos filos so celomados, isto , possuem uma
cavidade corporal revestida por mesoderma.
As diferenas entre as duas divises de Bilateria esto ilustradas na Figura 1.29.
Protostomatas (do Grego, boca primeiro), incluem os filos dos moluscos, artrpodos
e vermes; so assim chamados porque a boca formada em primeiro lugar, junto ou
prximo da abertura intestinal, produzida durante a gastrulao. O nus se forma mais
tarde em outro local.
A cavidade corprea desses animais se forma a partir de uma previamente slida
corda de clulas mesodrmicas, tornadas ocas. A outra grande diviso dos Bilateria
a linhagem dos deuterostomatas. Os filos nessa diviso incluem os chordatas e os
equinodermos. Embora possa parecer estranho classificar seres humanos e cavalos
no mesmo grupo que estrelas-do-mar e ourios-do-mar, alguns traos embriolgicos
acentuam esse parentesco. Em primeiro lugar, nos deuterostomatas (do Grego significando boca depois), a abertura bucal formada depois da abertura anal. Tambm,
enquanto prostostomatas em geral formam suas cavidades corpreas tornando oco
um bloco slido de mesoderma (formao esquizelide), a maioria dos deuterostomatas
formam suas cavidades corpreas a partir de bolsas mesodrmicas estendendo-se do
intestino (formao enteroclica). Porm, deve-se mencionar que h muitas excees
a essas generalizaes.
Protostomatas e deuterostomatas diferem na maneira pela qual so clivados. Na
maioria dos deuterostomatas, os blastmeros so perpendiculares ou paralelos uns aos
outros. Isso chamado clivagem radial. Protostomatas ao contrrio, tm uma extensa
variedade de tipos de clivagem. Muitas espcies formam blstulas compostas por clulas que esto em ngulos agudos relativamente ao eixo polar do embrio. So por isso
considerados sofrer clivagem espiral. Alm disso, os blastmeros em estgio de clivagem,
na maioria dos deuterostomatas, tm maior capacidade de regular seu desenvolvimento
do que os prostostomatas. Se um nico blastmero removido de um embrio
quadricelular de ourio-do-mar ou camundongo, tal blastmero ir desenvolver-se em
um organismo inteiro, e os trs-quartos restantes do embrio tambm iro se desenvolver
(A) PROTOSTOMATAS
(B) DEUTEROSTOMATAS
1. Clivagem espiral
1. Clivagem radial
2. Desenvolvimento esquizoclico
2. Desenvolvimento enteroclico
Celoma
Bolsa
Intestinal
Blastocele
Blastocele
Mesoderma
se divide
Mesoderma
Intestino
3. Tendncia a no regulao
Embrio de
de 4 clulas
Celoma
Bolsas se
destacam
Mesoderma
Intestino
31
Intestino
Intestino
3. Tendncia regulao
Um blastmero
excludo
Desenvolvimento
interrompido
Embrio de
de 4 clulas
Um blastmero
excludo
Duas larvas normais

se desenvolvem
Figura 1.29
normalmente. Porm, se a mesma operao fosse realizada em um embrio de lesma ou de

verme, tanto o blastmero isolado como os restantes se desenvolveriam em embries
parciais cada um carente daquilo que foi formado a partir dos outros.
A evoluo dos organismos depende de alteraes herdadas em seu desenvolvimento. Um dos maiores avanos evolucionrios o ovo amnitico ocorreu entre os
deuterostomatas. Esse tipo de ovo, exemplificado pelo da galinha (Figura 1.30),
considerado ter-se originado dos ancestrais anfbios dos rpteis, h cerca de 255
milhes de anos. O ovo amnitico permitiu aos vertebrados vagar pela terra longe de
suprimentos de gua existentes. Ao passo que a maioria dos anfbios obrigada a
voltar para a gua para procriar e permitir o desenvolvimento de seus ovos, o ovo
amnitico carrega seu prprio suprimento de gua e nutrientes. O ovo fertilizado
internamente e contm a gema para nutrir o embrio em desenvolvimento. Ainda,
contm quatro bolsas: o saco vitelnico, que armazena protenas nutrientes, o mnio,
que contm fluido banhando o embrio, a alantide, na qual restos do metabolismo
embrionrio so coletados, e o crio, que interage com o ambiente externo, seletivamente permitindo materiais chegar ao embrio. O todo dessa estrutura est contido em
uma casca que permite a difuso de oxignio, ao mesmo tempo sendo suficientemente
dura para proteger o embrio de agresses ambientais. Desenvolvimento semelhante
de protees do ovo permitiram aos artrpodes serem os primeiros invertebrados
sobre a terra. Assim, a travessia final dos limites entre gua e terra ocorreu com a
modificao do estgio mais precoce do desenvolvimento o ovo.
Tendncias principais dos prostostomatas e

deuterostomatas. Excees todas essas tendncias gerais evoluram secundariamente em
certos membros de cada grupo. (A maioria dos
vertebrados por exemplo, no tem uma formao estritamente enteroclica da cavidade corporal; e os embries de certos deuterostomatas,
como os tunicados, no sofrem regulao se os
blastmeros so deles removidos.)
32
Figura 1.30
Diagrama do ovo amnitico do pinto, mostrando o desenvolvimento das membranas envolvendo o embrio. (A) Incubao de trs dias.
O mesoderma extra-embrionrio se estende do
embrio para prover vasos sangneos para e
de vrias regies fora do embrio. (B) Incubao de sete dias. A origem das membranas ser
detalhada no captulo 9. A gema ser finalmente rodeada pelo saco vitelnico que permite a
entrada de nutrientes nos vasos sangneos. O
crio derivado em parte do ectoderma e estende-se do embrio at a casca (onde ir trocar oxignio e gs carbnico e obter clcio da
casca). O mnio prove o meio fluido no qual
cresce o embrio, e a alantide coleta resduos
nitrogenados que seriam perigosos para o embrio. Finalmente, o endoderma se transforma
no intestino e envolve a gema. A evoluo do
mnio e das outras membranas extra-embrionrias constituiu uma grande linha divisria
entre aqueles vertebrados cuja reproduo est
ligada gua (anamniotas) e aqueles que podem se reproduzir em reas secas (amniotas).
Embrio
Intestino
mnio
Cavidade
amnitica
Alantide
Crio
Gema
Saco vitelino
(A)
Alantide
(B)
A biologia do desenvolvimento proporciona um sortimento infinito de fascinantes

problemas e animais. No presente livro, encontraremos apenas uma pequenssima
amostra deles, servindo para ilustrar os princpios mais importantes do desenvolvimento animal (para uma cobertura mais completa da diversidade do desenvolvimento
animal atravs dos filos, veja Gilbert e Raunio,1997). Estamos apenas observando o
conjunto das mars ao nosso alcance, enquanto todo o oceano do desenvolvimento
se estende nossa frente. Aps uma breve viso dos princpios genticos e celulares
relevantes para a biologia do desenvolvimento, investigaremos os estgios precoces
da embriognese animal: fertilizao, clivagem, gastrulao e construo do plano do
corpo vertebrado. Captulos posteriores se concentraro nos mecanismos genticos e
celulares pelos quais ele elaborado. Embora uma tentativa de cobrir as variaes
importantes que ocorreram no reino animal tivesse sido feita, um certo chauvinismo
deuterostossmico pode ter ficado aparente.
LITERATURA CITADA
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Genes e desenvolvimento:
Introduo e tcnicas
O que gostaramos de saber se a estrutura

determinada diretamente pela informao
codificada no DNA, gravada no ovo... na
extenso em que estrutura pode ser expressa por informao. JONATHAN
BARD (1990)
Os segredos que me enlaam e cativam so
em geral segredos da hereditariedade: como
uma semente de pra vira uma pereira em
vez de um urso polar. CYNTHIA
OZICK (1989)
NTRE OS CARACTERES que fornecem os dados para a teoria, e os

genes postulados, aos quais os caracteres se referem, est todo o campo do desenvolvimento embrionrio. Aqui Thomas Hunt Morgan (1926)
estava verificando que o nico caminho de gentipo para fentipo, passava atravs
de processos desenvolvimentais. No comeo do sculo vinte, embriologia e gentica
no eram consideradas cincias separadas. Divergiram na dcada de 1920, quando
Morgan redefiniu a gentica como a cincia que estuda a transmisso dos traos em
oposio embriologia, a cincia que estuda a expresso desses traos. Durante a
ltima dcada, porm, as tcnicas da biologia molecular realizaram uma reaproximao
entre embriologia e gentica. Na realidade, os dois campos se ligaram novamente a tal
ponto que se torna necessrio uma discusso prvia da gentica molecular neste
texto. Questes do desenvolvimento animal que no poderiam ser consideradas h
uma dcada, esto sendo agora resolvidas por um conjunto de tcnicas envolvendo
sntese de cidos nuclico e hibridizao. Este captulo procura situar essas novas
tcnicas dentro do contexto do dilogo, ora em curso, entre gentica e embriologia.
As origens embriolgicas da teoria dos genes

Ncleo ou Citoplasma: Qual Controla a Hereditariedade?
Mendel chamou-os Formbildungelementen, elementos construtores de formas; ns os
chamamos de genes. Porm, na terminologia de Mendel que vemos como no sculo
dezenove os conceitos de herana e desenvolvimento estavam intimamente entrelaados. Entretanto, as observaes de Mendel no indicaram onde na clula ficavam esses
elementos hereditrios, nem como eram levados a se expressarem. A teoria dos genes,
que viria a ser a pedra angular da gentica moderna, teve origem em uma controvrsia no
campo da embriologia. Em fins sculo XIX, um grupo de cientistas comeou a estudar,
por seu valor intrnseco, como ovos fertilizados davam origem a organismos adultos.
Dois jovens embriologistas americanos, Edmund Beecher Wilson e Thomas Hunt Morgan
(Figura 2.1), tornaram-se parte desse grupo de embriologistas fisiolgicos, cada um
tornando-se partidrio na controvrsia sobre qual dos dois compartimentos do ovo
fertilizado - o ncleo ou o citoplasma - controla a herana.
35
36
(B)
Figura 2.1
(A)
(A) E. B. Wilson (1856-1939; mostrado aqui em

aproximadamente 1899), um embriologista cujo
trabalho, na fase precoce da embriologia e da determinao sexual, muito avanou as hipteses
cromossmicas do desenvolvimento. (Wilson era
tambm reconhecido como um dos melhores violoncelistas amadores do pas.) (B) Thomas Hunt
Morgan (1866-1945), que desenvolveu a teoria
dos genes a partir da embriologia. Essa fotografia
- tomada em 1915, quando os elementos bsicos
da teoria dos genes estavam se encontrando
mostra Morgan usando uma lente manual para
identificar moscas. (A) cortesia de W. N. Timmins;
(B) cortesia de G. Allen.)
Quando Morgan e Wilson entraram nesse debate, a disputa j estava bem ativa.
Uma escola associada a Oskar Hertwig, Wilhelm Roux e Theodor Boveri, propunha
que os cromossomos do ncleo continham os elementos construtores de formas.
Esse grupo era desafiado por Eduard Pflger, T. L. W. Bischoff, Wilhelm His e seus
colegas, que acreditavam que estruturas pr-formadas no poderiam causar to enormes mudanas durante o desenvolvimento; ao contrrio, eles acreditavam que os
padres herdados de desenvolvimento eram causados pela criao de novas molculas do gameta interativo, citoplasmas. Morgan aliou-se a esse ltimo grupo e obteve
dados que interpretou com sendo consistentes com o modelo citoplasmtico da herana. Em seu experimento mais crucial, ele removeu citoplasma do rcem-fertilizado
ovo ctenforo (gelia de crista). Em 1897 Morgan relatou:
Aqui, embora todo o ncleo de segmentao esteja presente, devido perda de
parte do citoplasma, produz-se embries com defeito... Parece no haver escape
da concluso que no citoplasma, e no no ncleo, est o poder de diferenciao
dos estgios precoces do desenvolvimento.
CAPTULO 2 Genes e Desenvolvimento
37
Wilson, nesse nterim, tornou-se o maior proponente do ponto de vista de que os

elementos formadores se encontravam nos cromossomos nucleares. Defendeu
vigorosamente essa idia em seu livro A Clula no Desenvolvimento e na Herana
(1896), salientando a necessidade da presena do ncleo para regenerao dos
protozorios (veja captulo 1):
Esse fato presume que o ncleo , se no o local da formao de energia, ao menos,
o fator controlador dessa energia e, por isso, o fator controlador da herana. Essa
conjectura transforma-se em certeza quando nos voltamos para os fatos da maturao (meiose), fertilizao e diviso celular. Todos convergem em direo da
concluso de que a cromatina o elemento essencial para o desenvolvimento.
Wilson (1895) no se esquivou das conseqncias dessa concluso*
Agora, a cromatina sabida ser intimamente semelhante, se no idntica,
substncia conhecida como nuclena...que a anlise demonstra ser um composto qumico toleravelmente bem definido, composto de cido nuclico (um complexo cido orgnico rico em fsforo) e albumina. E assim, chegamos notvel
concluso que a herana pode, talvez, ser efetuada pela transmisso fsica de um
dado composto qumico do progenitor para a descendncia.
Wilson pensou que o material formador de rgos que Morgan havia removido do
citoplasma de ovos de ctenforo, j havia sido para ali secretado pelos cromossomos
nucleares (Wilson, 1894, 1904). Para Wilson (1905) Os materiais citoplasmticos parecem ser apenas o meio imediato ou a causa eficiente da diferenciao, e ainda procuramos sua determinao primria nas causas que residem mais profundamente.
Parte do maior apoio para a hiptese cromossmica da herana estava vindo dos
estudos embriolgicos de Theodor Boveri (Figura 2.2 A), um pesquisador na Estao
Biolgica de Npoles. Boveri fertilizou vulos de ourio-do-mar com altas concentraes de seu espermatozide e obteve ovos que haviam sido fertilizados por dois
espermatozides. Na primeira clivagem, esses ovos formaram quatro plos mitticos e
dividiram o ovo em quatro, em vez de duas clulas (veja captulo 4). Boveri ento
separou os blastmeros e demonstrou que cada clula se desenvolvia anormalmente
e de maneiras diferentes por ter cada clula diferentes tipos de cromossomos. Assim,
Boveri declarou que cada cromossomo tinha uma natureza individual e o controle de
diferentes processos vitais.
(A)
(B)
Figura 2.2
O Cromossomo X como uma Ponte Entre Genes e Desenvolvimento

Em adio evidncia de Boveri, E. B. Wilson (1905) e Nettie Stevens (1905a,b) demonstraram uma correlao crtica entre cromossomos nucleares e o desenvolvimento
organizacional. Stevens (Figura 2.2B), uma ex- estudante de Morgan, mostrou que em
92 espcies de insetos (e um cordato primitivo), as fmeas tinham dois cromossomos
sexo-especficos em cada ncleo (XX), enquanto machos tinham somente um cromossomo X (XY ou XO). Parecia que uma estrutura nuclear, o cromossomo X, estava
controlando o desenvolvimento sexual** . Morgan discordou da interpretao de que
*Note-se que Wilson est escrevendo sobre unidades construtoras de forma na cromatina
em 1896 antes da redescoberta do trabalhos de Mendel ou do estabelecimento da teoria dos
genes. Para uma anlise mais detalhada das interaes entre Morgan e Wilson que levaram
teoria dos genes, veja Gilbert (1978, 1987) e Allen (1986).
**
Wilson era um dos amigos mais ntimos de Morgan, que considerava Stevens sua melhor
estudante de ps-graduao. Ambos estavam contra Morgan nessa questo. Mesmo assim,
Morgan apoiou inteiramente o pedido de Stevens para fundos de pesquisa, confirmando suas
qualidades como as melhores possveis. Wilson escreveu uma elogiosa carta de recomendao,
apesar de saber que ela seria uma rival na pesquisa (veja Brush, 1978).
O carter singular do cromossomo foi mostrado por Boveri e Stevens. (A) Theodor Boveri
(1862-1915) cujo trabalho Wilson (1918) comentou: conseguiu a verdadeira fuso de
citologia, embriologia e gentica um feito biolgico que... no fica atrs de qualquer outro
de nosso tempo. Fotografia tirada em 1908,
quando os estudos cromossmicos e embriolgicos de Boveri estavam no seu apogeu. (B)
Nettie M. Stevens (1861-1912), que treinou
tanto com Boveri como com Morgan, vista
aqui em 1904 quando era estudante de psdoutorado, realizando a pesquisa que correlacionou o nmero de cromossomos X com o
desenvolvimento sexual. [(A) cortesia de
Baltzer, 1967; (B) cortesia do Instituto
Carnegie de Washington.]
38
os cromossomos determinavam o sexo. Ao contrrio, ele considerou o conjunto de

cromossomos como uma caracterstica sexual secundria, controlada por alguma substncia citoplasmtica determinadora do sexo.
A converso de Morgan para a hiptese cromossmica ocorreu depois de
obter dados contrrios s suas teorias (veja Allen, 1978; Gilbert, 1978; Lederman,
1989). Enquanto criava Drosophila para uma srie de experimentos sobre evoluo, Morgan comeou a obter vrias mutaes correlacionadas com o sexo. (Como
ele logo iria mostrar, mutaes ligadas ao X apareciam antes de mutaes em
outros cromossomos, porque defeitos no cromossomo X no so mascarados
pelo cromossomo homlogo no macho.) Em 1910, Morgan mostrou que os traos
para ambos sexos e cor branca dos olhos esto correlacionados de alguma maneira com a presena de um dado cromossomo X; entretanto, evitou consider-los
ligados fisicamente. Porm, em 1911mostrou que fatores reguladores da cor dos
olhos, cor do corpo, forma das asas e sexo segregavam-se juntos com o cromossomo X, o que o levou a comear a visualizar os genes como fisicamente
ligados um ao outro no cromossomo. O embriologista Morgan tinha demonstrado que cromossomos nucleares eram responsveis pelo desenvolvimento de
caracteres herdados. [gene1.html]
A ciso entre a embriologia e a gentica

A evidncia de Morgan proporcionou uma base material para o conceito do gene. A
gentica havia sido, em geral, uma cincia emprica sobre procriao de animais e
plantas; Morgan deu-lhe um fundamento cientfico. Movida pelo desejo de progredir no conhecimento da reproduo de animais e plantas (e seres humanos), e na
capacidade dos geneticistas de obter rapidamente resultados concretos e matematicamente verificveis, a gentica logo se tornou a cincia biolgica predominante
nos Estados Unidos (veja Allen, 1986; Sapp, 1987; Paul e Kimmelman, 1988). Na
dcada de 1930, tornou-se disciplina autnoma, desenvolvendo seu vocabulrio
prprio, revistas, sociedades, organismos favorecidos, professorados e regras de
evidncia. Hostilidade entre embriologia e gentica tambm emergiu. Os geneticistas acreditavam que os embriologistas eram antiquados e que o desenvolvimento
viria a ser inteiramente explicado como o resultado da expresso gnica. Conforme
proclamado por Richard Goldschmidt (1938), O desenvolvimento, obviamente, a
produo ordenada de um padro e assim, em ltima anlise, os genes controlam o
padro. Se os embriologistas no olharem para a embriognese em termos da atividade dos genes, os geneticistas o faro.
Reciprocamente, os embriologistas consideraram os geneticistas como irrelevantes
e mal-informados. Embriologistas como Frank Lillie (1927), Ross Granville Harrison
(1937), Hans Spemann (1938) e Ernest E. Just (1939) (Figura 2.3), argumentaram que
no poderia haver uma teoria gentica do desenvolvimento at que ao menos trs
principais desafios fossem resolvidos:
1. Os geneticistas teriam que explicar como cromossomos que eram considerados idnticos em cada clula do organismo direcionam tipos diferentes e
variveis de citoplasmas celulares.
2. Quase todos genes conhecidos na poca afetavam a modelagem das etapas
finais (cor dos olhos, forma das cerdas, vascularizao alar). Os geneticistas
teriam que produzir evidncia que os genes controlam os estgios precoces da
embriognese. Conforme enunciado por Just (citado por Harrison, 1937), os
embriologistas estavam interessados em saber como uma mosca forma o seu
dorso e no no nmero de cerdas no seu dorso.
3. Os geneticistas teriam que explicar fenmenos como a determinao do sexo
em certos invertebrados (e vertebrados, como rpteis), nos quais o ambiente
determina o fentipo sexual.
(A)
(B)
Figura 2.3
Embriologistas tentaram impedir a gentica de conquistar seu territrio na dcada de 1930.

(A) Frank Lillie encabeou o Laboratrio de Biologia Marinha em Woods Hole e foi um lder na
pesquisa sobre fertilizao e endocrinologia reprodutiva. (B) Hans Spemann ( esquerda) e
Ross Harrison ( direita) aperfeioaram operaes de transplante para descobrir quando eram
determinados os eixos do corpo e dos membros. Argumentaram que os geneticistas no possuam um mecanismo para explicar como os mesmos genes nucleares podiam criar tipos celulares
diferentes durante o desenvolvimento. (C) Ernest E. Just fez descobertas cruciais sobre fertilizao. Rejeitou a gentica e enfatizou o papel da membrana celular na determinao dos destinos
das clulas. (A cortesia de V. Hamburger; B cortesia de T. Horder; C cortesia do Laboratrio de
Biologia Marinha, Woods Hole.)
O debate tornou-se deveras veemente. Numa retrica, refletindo as ansiedades

polticas do fim da dcada de 1930, Harrison (1937) alertou:
Agora que a necessidade de relacionar os dados da gentica com a embriologia
est sendo usualmente reconhecida e a sede de conhecimento dos geneticistas
comea a impeli-los em nossa direo, no pareceria imprprio apontar para
um perigo dessa ameaada invaso. O prestgio do sucesso desfrutado pela
teoria dos genes poderia facilmente tornar-se um obstculo para a compreenso
do desenvolvimento, por dirigir nossa ateno exclusivamente para o genoma,
enquanto movimentos celulares, diferenciao e todos os processos desenvolvimentais so de fato realizados pelo citoplasma. J temos teorias que referem os
processos do desenvolvimento ao dos genes e consideram toda performance
como nada mais que a consecuo dos potenciais dos genes. Tais teorias so
totais e demasiadamente unilaterais.
At que os geneticistas puderam demonstrar a existncia de variantes herdadas durante a fase precoce do desenvolvimento e at que os geneticistas tiveram uma bemdocumentada teoria sobre como os mesmos cromossomos podiam produzir diferentes
tipos de clulas, os embriologistas em geral no sentiram a necessidade de basear sua
embriologia na ao dos genes. [gene2.html]
Primeiras tentativas da gentica do desenvolvimento

Porm, alguns cientistas acharam que nem a embriologia nem a gentica estavam
completas uma sem a outra. Vrias tentativas foram feitas para sintetizar as duas
disciplinas, mas sua primeira integrao bem-sucedida veio no fim da dcada de
(C)
39
40
1930, por parte de dois embriologistas, Salome Gluecksohn-Schoenheimer (agora

S. Gluecksohn Waelsch) e Conrad Hal Waddington. Ambos haviam sido treinados
em embriologia na Europa e tinham aprendido gentica nos Estados Unidos com
estudantes de Morgan. Gluecksohn-Schoenheimer e Waddington, tentaram achar
mutaes que afetassem o desenvolvimento precoce e processos afetados por esses genes. Gluecksohn-Schoenheimer (1938, 1940) mostrou que mutaes nos genes
de Brachyury do camundongo, causavam desenvolvimento aberrante da poro
posterior do embrio, e atribuiu os efeitos desses genes mutantes a defeitos no
mesoderma axial que normalmente teriam ajudado a induzir o eixo dorsal.* Alm
disso, Gluecksohn-Schoenheimer (1938) considerou que no trabalho com camundongos no era possvel fazer o que os embriologistas experimentais deveriam estar
fazendo - alterando a estrutura durante seu desenvolvimento e observando quais
eram as conseqncias dessa operao. Em vez disso, um novo tipo de cientista era
necessrio, o geneticista do desenvolvimento:
Enquanto o embriologista experimental desenvolve um dado experimento e em
seguida estuda seus resultados, o geneticista do desenvolvimento tem que estudar primeiro o desenrolar do desenvolvimento (isto , os resultados da perturbao do desenvolvimento) para depois, s vezes, chegar a concluses sobre a
natureza do experimento realizado pelo gene.
Ao mesmo tempo, Waddington (1939) isolava diversos genes que causavam malformaes alares na mosca das frutas, Drosophila. Tambm analisava como esses
genes podiam afetar os primrdios que do origem a essas estruturas. A asa da Drosophila, conforme proclamou corretamente, parecia favorvel para pesquisas sobre a
ao desenvolvimental dos genes. Assim, uma das principais objees ao modelo
gentico do desenvolvimento levantadas pelos embriologistas - que os genes atuam
somente sobre a modelagem final do embrio e no sobre seus principais esquemas de
construo foi contrariada. [gene3.html]
Evidncia para a equivalncia genmica

Ainda permanecia uma outra grande objeo para uma embriologia baseada na gentica: Como poderiam genes nucleares dirigir o desenvolvimento se os genes eram os
mesmos em cada tipo celular? Essa equivalncia genmica no estava provada mas
era assumida (porque cada clula o descendente mittico do ovo fertilizado) e um
dos primeiros problemas da gentica do desenvolvimento era o de determinar se cada
clula de um organismo tinha o mesmo genoma que outra.
Metaplasia
A primeira evidncia para equivalncia genmica veio aps a 2a Guerra Mundial, por
parte de embriologistas que estavam estudando a regenerao de tecidos excisados.
O estudo da regenerao do olho da salamandra demonstrou que mesmo clulas
adultas diferenciadas podem reter o seu potencial de produzir outros tipos celulares.
Portanto, os genes para os produtos desses outros tipos de clulas devem ainda estar
presentes, embora normalmente no expressos. Na salamandra, a remoo da retina
*As observaes de Gluecksohn-Schoenheimer levaram 60 anos para ser confirmadas atravs

da hibridizao do DNA. No entanto, quando o gene do T-locus foi clonado e sua expresso
detectada pela tcnica da hibridizao in situ (discutida mais adiante neste captulo), Wilkinson e
colaboradores (1990) acharam que a expresso do gene T tem um papel direto nos eventos
precoces da formao do mesoderma e na morfognese da notocorda. Embora uma histria
completa do desenvolvimento precoce da gentica do desenvolvimento ainda permanea por ser
escrita, mais informaes sobre suas turbulentas origens podem ser encontradas em Oppenheimer,
1981; Sander, 1986; Gilbert, 1988, 1991, 1996; Burian et al., 1991; Harwood, 1993; Keller, 1995;
e Morange, 1996.
41
neural promove sua regenerao a partir da retina pigmentada, e uma nova lente pode
ser formada a partir das clulas da ris dorsal. A regenerao do tecido lenticular da ris
(a assim chamada regenerao Wolffiana a partir da pessoa que primeiro a observou
em 1894) foi intensamente estudada. Yamada e seus colegas (Yamada, 1966, Dumont e
Yamada, 1972) acharam que aps a remoo de uma lente, uma srie de acontecimentos
leva produo de uma nova lente a partir da ris (Figura 2.4). Os ncleos do lado
dorsal da ris comeam a sintetizar quantidades enormes de ribossomos, seu DNA se
replica, e divises mitticas se sucedem. As clulas da ris pigmentada comeam, em
seguida, a se desdiferenciar expelindo seus melanossomos (os grnulos pigmentados
que do ao olho a sua cor; esses melanossomos so ingeridos por macrfagos que
entram no local da ferida). A ris dorsal continua a se dividir, formando um globo de
tecido desdiferenciado na regio da lente removida. Essas clulas comeam ento a
sintetizar os produtos diferenciados de clulas lenticulares, as protenas do cristalino. Essas protenas so fabricadas na mesma ordem que no desenvolvimento normal
da lente. Uma vez formada uma nova lente, as clulas do lado dorsal da ris cessam sua
atividade mittica.
Esses eventos no so a via normal pela qual a lente dos vertebrados formada.
Como ser visto em detalhe mais tarde, a lente normalmente se desenvolve a partir de
uma camada de clulas epiteliais da cabea, induzida pelas clulas retinais precursoras
subjacentes. A formao da lente por clulas diferenciadas da ris representa metaplasia
(ou transdiferenciao), a transformao de um tipo celular diferenciado em outro
(Okada, 1991). A ris da salamandra, portanto, no havia perdido gene algum daqueles
usados na diferenciao das clulas da lente.
Retina
pigmentada
Retina
neural
ris dorsal
Figura 2.4
Lente
Regenerao Wolffiana da lente da salamandra

a partir da margem dorsal da ris. (A) Olho
normal, no-operado no estgio larval da salamandra Notophtalmus viridiscens. (B-G) Regenerao da lente, vista respectivamente nos
dias 5, 7, 9, 16, 18 e 30. A nova lente estar
completa no dia 30. (de Reyer, 1954, cortesia
de R. W. Reyer.)
ris
ventral
(A)
(D)
(B)
(E)
(C)
(F)
(G)
42
Clonagem de Anfbios: A Restrio da Potncia Nuclear

O teste definitivo sobre se, ou no, o ncleo de uma clula diferenciada sofreu qualquer restrio funcional irreversvel, seria o de conseguir que esse ncleo gerasse
todo outro tipo de clula diferenciada no organismo. Se cada ncleo fosse idntico ao
ncleo do zigoto, o ncleo de cada clula deveria ser capaz de direcionar todo o
desenvolvimento do organismo, quando transplantado para um ovo ativado enucleado.
Porm, antes que tal experimento pudesse ser feito, trs tcnicas tiveram que ser
aperfeioadas: (1) um mtodo para enuclear ovos do hospedeiro sem destru-los; (2)
um mtodo para isolar ncleos doadores intactos; (3) um mtodo para transferir tais
ncleos para dentro do ovo sem danificar o ncleo ou o ocito.
Essas tcnicas foram desenvolvidas na dcada de 1950, em primeiro lugar por
Robert Briggs e Thomas King que combinaram a enucleao com a ativao do ovo.
Quando um ocito de r-leopardo (Rana pipiens) perfurado com uma agulha limpa
de vidro, o ovo sofre todas as mudanas citolgicas e bioqumicas associadas
fertilizao. Ocorre rearranjo citoplasmtico interno e a finalizao da meiose perto
do plo animal da clula. Esse fuso meitico pode ser facilmente localizado quando
empurra os grnulos pigmentados do plo animal; a puno do ocito nesse local
induz o fuso e seus cromossomos a fluir para fora do ovo (Figura 2.5). O ovo hospedeiro agora considerado estar ativado (as reaes de fertilizao necessrias para
iniciar o desenvolvimento foram completadas) e enucleado. A passagem de um ncleo para o ovo conseguida pela ruptura de uma clula doadora e transferncia do
ncleo liberado para o ocito por meio de uma micropipeta. Algum citoplasma acompanha o ncleo para seu novo lar, mas a razo do citoplasma doador para o receptor
somente de 1:105, e o citoplasma do doador no parece afetar o resultado dos
experimentos. Em 1952, Briggs e King demonstraram que ncleos da clula da blstula podiam direcionar o desenvolvimento de girinos completos quando transferidos para o citoplasma do ocito.
O que acontece quando ncleos de estgios mais avanados so transferidos
para ocitos ativados e enucleados? Os resultados de King e Briggs (1956) esto
delineados na Figura 2.6. Enquanto a maioria dos ncleos da blstula podiam produzir
girinos completos, houve um dramtico decrscimo da capacidade dos ncleos derivados de estgios mais tardios direcionar o desenvolvimento direto at o estgio de
Plo animal
Agulha de vidro
Fuso
meitico
Grnulos
pigmentados
Remoo dos cromossomos

e do fuso da clula
Fuso
meitico isolado
Ovo ativado
enucleado
Micropipeta
Extrao e lise da
clula doadora
Ncleo doador
inserido na clula
enucleada
Figura 2.5
Procedimento para o transplante de ncleos da

blstula para ovos ativados enucleados de Rana
pipiens. As dimenses relativas do fuso meitico
foram exageradas para demonstrar a tcnica. A
bela R. pipiens na fotografia foi derivada dessa
maneira. (Segundo King, 1966; fotografia cortesia de M. DiBerardino e N. Hoffner.)
Membrana
cicatriza
Figura 2.6
Porcentagem de embries de transplantes

nucleares que se desenvolvem normalmente
Estgio desenvolvimental dos embries e girinos

dos quais foram retirados os ncleos
Bl
st
a
ul
ta
a
di
tr
a
ul
pr
G
ec
e
oc
tr
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n
i
G
ir
ba
G
co
Grfico de transplantes nucleares bem sucedidos, em funo da idade do desenvolvimento nuclear. A abscissa representa o estgio no qual o ncleo doador (de R. pipiens) foi
isolado e inserido no ocito ativado e enucleado. A ordenada mostra a porcentagem desses transplantes capazes de
produzir blstulas que podiam em seguida direcionar o desenvolvimento para o estgio do girino nadador (Segundo
McKinnell, 1978.)
Girinos (Rana pipiens)

nadando normalmente
Horas a 18oC
girino. Quando ncleos de clulas somticas de girinos no estgio de broto caudal

foram usados como doadores, no ocorreu desenvolvimento normal. Porm, ncleos de clulas germinativas de girinos do estgio de broto caudal (que iro finalmente dar origem a um organismo completo aps a fertilizao), foram capazes de
direcionar desenvolvimento completo em 40 porcento das blstulas que se desenvolveram (Smith, 1956). Assim, clulas somticas parecem perder sua capacidade de
direcionar desenvolvimento completo medida que se tornam definidas e diferenciadas, e a progressiva restrio da potncia nuclear durante o desenvolvimento
parece ser uma regra geral. Porm, possvel que alguns ncleos celulares diferenciados sejam diferentes de outros.
Clonagem de Anfbios: A Pluripotncia de Clulas Somticas
John Gurdon e seus colegas, usando mtodos ligeiramente diferentes de transplante
nuclear na r Xenopus, obtiveram resultados sugerindo que os ncleos de algumas
clulas diferenciadas podem permanecer totipotentes. Gurdon tambm achou uma
progressiva perda de potncia no decorrer do desenvolvimento, embora clulas de
Xenopus tenham retido suas potncias por um perodo de desenvolvimento mais
longo (Prancha 1). As excees a essa regra mostraram ser muito interessantes. Gurdon
havia transferido ncleos do endoderma intestinal de girinos Xenopus que se alimentavam, para ovos ativados enucleados. Esses ncleos doadores continham um
marcador gentico (um nuclolo por clula, em lugar dos dois usuais), que os distinguia dos ncleos do hospedeiro. Entre 276 ncleos transferidos, somente 10 (1.4
porcento) promoveram o desenvolvimento at o estgio do girino que se alimentava.
Transplantes seriados (que requeriam colocar um ncleo intestinal em um ovo e quando o ovo tinha se transformado em blstula, transferia-se o ncleo da blstula para
vrios outros ovos), aumentavam o rendimento para 7 porcento (Gurdon, 1962). Em
alguns casos, ncleos das clulas intestinais dos girinos foram capazes de gerar todas
linhagens de clulas neurnios, clulas do sangue, nervos e assim por diante de
um girino vivente. Alm disso, sete desses girinos (de dois ncleos originais) se
metamorfosearam em rs adultas frteis (Gurdon e Uehlinger, 1966); esses ncleos
eram totipotentes (Figura 2.7).
King e seus colegas criticaram esses experimentos assinalando que: (1) no haviam sido tomadas suficientes precaues para ter certeza que clulas germinativas
primordiais, que podem migrar at o intestino, no foram usadas como fontes de
ncleos, e (2) as clulas intestinais de um girino to jovem poderiam no se qualificarem
44
Figura 2.7
Procedimento empregado para obter rs maduras de ncleos intestinais de girinos de Xenopus. O ovo de tipo selvagem (2 nuclolos
por ncleo; 2-nu) irradiado para destruir os
cromossomos maternos, e um ncleo intestinal de um girino marcado (1-nu) inserido. Em
alguns casos no ocorre diviso; em alguns casos o desenvolvimento do embrio sustado;
porm, em outros casos, uma r inteiramente
nova formada tendo um gentipo 1-nu. (Segundo Gurdon, 1968, 1977.)
EXPERIMENTO
Ovo no-fertilizado
(cepa 2 nu)
Girino
(cepa 1 nu)
Ncleo intestinal
epitelial inserido
no ovo irradiado
Irradiao UV destri
comossomos do ovo
Micropipeta
Ovo receptor
irradiado
Ncleo intestinal
RESULTADOS
Blstula
Girino
Blstula
Girino
(morre)
Blstula
Sem diviso
Embrio
anormal
R adulta
(Cepa 1 nu)
como um tipo de clula verdadeiramente diferenciada porque clulas de girinos que se

alimentam ainda contm plaquetas de gema (DiBerardino e King, 1967; McKinnell,
1978; Briggs, 1979). Para responder a essas crticas, Gurdon e seus colegas cultivaram
clulas epiteliais da membrana natatria de rs adultas. Essas clulas mostraram estar
diferenciadas; cada uma continha queratina, a protena caracterstica de clulas adultas da pele. Quando ncleos dessas clulas foram transferidos para ocitos ativados
e enucleados de Xenopus, nenhum dos transferidos de primeira gerao progrediu
alm da formao do tubo neural, pouco aps a gastrulao. Por transplantes seriados, porm, numerosos girinos foram gerados (Gurdon et al., 1975). Embora esses
girinos tivessem morrido antes de atingir o estado alimentar, um nico ncleo celular
diferenciado ainda retinha potncias incrveis. Um nico ncleo derivado de uma
hemcia de uma r adulta (que nem se replica e nem sintetiza RNA) pode sofrer mais de
100 divises aps ser transplantado para um ocito ativado e, ainda, reter a habilidade
45
de gerar girinos natatrios (Orr et al., 1986; DiBerardino, 1989). Embora DiBerardino
(1987) tenha observado que at o presente, ncleo algum de uma clula
documentadamente especializada, nem de uma clula adulta tenha mostrado ser
totipotente, tal ncleo pode no entanto instruir a formao de todos os rgos do
girino natatrio.
Algumas das diferenas entre os resultados dos laboratrios de Briggs e de Gurdon,
podem envolver diferenas na fisiologia do desenvolvimento das rs Rana e Xenopus.
Quando se transfere um ncleo de uma clula diferenciada para o citoplasma do ocito,
se est pedindo ao ncleo para reverter para condies fisiolgicas s quais ele no
est acostumado. Os ncleos da clivagem das rs dividem-se rapidamente, enquanto
alguns ncleos de clulas diferenciadas dividem-se raramente, se tanto. Falhas em
replicar DNA rapidamente podem levar a quebras cromossmicas: tais anormalidades
foram vistas em muitas clulas de girinos clonados. Sally Hennen (1970) mostrou que
o sucesso desenvolvimental de ncleos doadores pode ser ampliado tratando-se
esses ncleos com espermina e resfriando os ovos para dar tempo ao ncleo de se
adaptar ao citoplasma do ovo. Acredita-se que a espermina remova histonas da
cromatina podendo re-acertar a atividade dos ncleos. Quando ncleos do endoderma
de girinos de Rana pipiens, no estgio de broto caudal, foram tratados dessa maneira,
62 porcento daqueles ncleos que iniciaram desenvolvimento normal, prosseguiram
at a gerao de girinos normais. Em animais controle, nenhum dos ncleos conseguiu gerar tais girinos. Assim, os genes para o desenvolvimento do girino completo
no pareceram ter sido perdidos pelas clulas do endoderma.
Podemos olhar para esses experimentos de clonagem de anfbios de duas maneiras. Primeiro, reconhecer uma restrio geral de potncia concomitante ao desenvolvimento. Segundo, facilmente ver que o genoma da clula diferenciada notavelmente
potente em sua habilidade de produzir todos os tipos celulares do girino anfbio. Em
outras palavras, mesmo existindo um debate sobre a totipotncia de tais ncleos,
existe pouca dvida de que eles so extremamente pluripotentes. Certamente, muitos
genes no usados na pele ou em clulas sangneas, podem ser reativados para
produzir os nervos, o estmago, ou o corao de um girino natatrio. Assim, cada
ncleo no corpo contm a maioria (se no todos) dos mesmos genes.
&
Especulaes
Clonando Mamferos por Prazer e Lucro
LONAR SERES HUMANOS a

partir de clulas previamente diferenciadas parece ser o objetivo de editores de jornais e novelistas.
Deve ter ficado bvio da discusso precedente que clonar um indivduo totalmente desenvolvido, a partir de clulas
diferenciadas, uma formidvel tarefa.
Mesmo em anfbios, os ncleos das clulas diferenciadas no foram capazes de
gerar animais adultos quando colocados
em clulas ativadas e enucleadas.
Alm disso, mesmo se rs adultas pu-
dessem ser geradas de ncleos diferenciados, essa habilidade no poderia ser

extrapolada para clulas humanas. Alm
das dificuldades ticas e tcnicas do trabalho com o organismo humano, o citoplasma do ocito humano pode no responder a sinais emitidos por um ncleo de
uma clula em estgio avanado. Transplante nuclear foi conseguido em camundongos, pela remoo de proncleos
(haplides) de espermatozide e vulo de
um zigoto, e substituio por proncleos
de outro (Figura 2.8; McGrath e Solter,
1983). Esses zigotos reconstrudos comeam a se dividir e so ento implantados

no tero. Os camundongos resultantes exibem o fentipo do ncleo doador. Enquanto mais de 90 porcento dos zigotos enucleados do camundongo, recebendo proncleos de outros zigotos, se desenvolvem
at o blastcito (blstula), nem um nico
embrio (de 81), desenvolveu-se at esse
estgio quando ncleos de embries de 4
clulas foram transferidos para zigotos
enucleados (McGrath e Solter, 1984). Similarmente, ncleos de embries de 8 clulas
46
(A)
(C)
(B)
(D)
Figura 2.8
Procedimento para transferir ncleos para o ovo ativado enucleado de mamifero.

Um embrio de clula nica, incubado em colcemida e citocalasina para relaxar o citoesqueleto, seguro com uma pipeta de suco. Os ncleos haplides derivados do espermatozide e
do vulo, no se juntaram ainda. A pipeta de enucleao perfura a zona pelcida (a protena
que envolve o ovo) e aspira a membrana celular adjacente e a rea da clula contendo os
proncleos. (A) A pipeta de enucleao retirada e o citoplasma contendo os proncleos
removido do ovo. A membrana celular no est rompida; a continuidade do citoplasma limitado pela membrana est indicada pela flexa. (B) A membrana celular forma uma vescula ao
redor dos proncleos no interior da pipeta de enucleao. (C) Essa vescula misturada com
vrus Sendai (que induz a fuso de membranas nucleares) e inserida no espao entre a zona
pelcida e o outro ovo enucleado. (D) O vrus Sendai proporciona a fuso do ovo enucleado
e os proncleos envoltos pela membrana, permitindo que os proncleos (flexa) penetrem na
clula. (Segundo McGrath e Solter, 1983; cortesia dos autores.)
e massa celular interna (os blastmeros que

formam o embrio, mas no a placenta*)
tambm no puderam apoiar o desenvolvimento. Em contraste com ncleos de ourios-do-mar ou anfbios, os ncleos dos
blastmeros precoces do camundongo
*Cada blastmero da massa celular interna
totipotente no sentido de reter sua capacidade de formar clulas de qualquer tipo no organismo. Essa capacidade permite o aparecimento de gmeos.
(cujas clulas so totipotentes) no do

suporte para o desenvolvimento total. Tais
experimentos provavelmente fracassam
porque ncleos de blastmeros no funcionam de maneira normal no citoplasma
zigtico. Por isso, a clonagem de Elvis
Presley a partir de clulas diferenciadas no
algo com que possamos contar.
Nem todos blastmeros mamferos
so os mesmos, todavia, as espcies
mamferas diferem muito em termos de tem-
po de ativao e implantao uterina. Usando modificaes tcnicas, Willadsen (1986)

produziu carneiros de termo completo a
partir de ncleos transplantados de blastmeros do estgio de 8 clulas; ncleos
de embries pr-implantados de gado, porcos e coelhos foram capazes de direcionar
o desenvolvimento completo quando
transplantados para ocitos ativados e
enucleados (Prather et al., 1987; Stice e
Robl, 1988; Prather et al., 1989; Willadsen,
1989). Porm, em todos esses casos, os ncleos vieram de embries pr-implantados.
Recentemente, Wilmut e colaboradores
(1997) mostraram que possvel clonar um
carneiro a partir de um ncleo de clula de
glndula mamria adulta. Esse resultado
poder ter importantes conseqncias agrcolas e legais (Prather, 1991). [gene4.html]
Clonagem de Plantas
Somente nas plantas os ncleos de clulas diferenciadas de organismos adultos
podem ser facilmente vistos como capazes de direcionar o desenvolvimento de
outro organismo adulto. Essa habilidade
foi dramaticamente demonstrada em clulas de cenouras ou tabaco. Em 1958, F. C.
Steward e seus colegas estabeleceram um
processo pelo qual os tecidos diferenciados de razes de cenouras podiam dar origem a toda uma nova planta (Figura 2.9).
Pequenos pedaos de floema so isolados da cenoura e rodados em grandes
frascos contendo leite de coco. Esse fluido ( realmente o endosperma da semente do coco) contm os fatores e nutrientes necessrios para o crescimento da
planta e os hormnios exigidos para a
diferenciao. Sob essas condies, os
tecidos proliferam e formam uma massa
Figura 2.9
Experimento de Steward demonstrando a

totipotncia de clulas do floema da cenoura.
Clulas livre do calo
continuam a se desenvolver
em suspenso
Floema
de raiz
Planta de
cenoura
madura
Corte
transversal
da raiz
Proliferao de
massa celular
(calo) em meio
de cultura de
leite de coco
Planta
jovem
Planta embrionria
transferida para meio
de cultura de agar
Planta de cenoura
madura no agar
desorganizada chamada calo. A continuao da rotao leva ao desbastamento

de clulas individuais do calo para o meio
de suspenso. Essas clulas do origem
a ndulos celulares semelhantes a razes
que continuam a crescer enquanto permanecem em suspenso. A partir desses
ndulos, colocados em um meio solidificado com agar, o resto da planta capaz
de se desenvolver, formando uma planta
de cenoura completa e frtil (Steward et

al., 1964; Steward, 1970).
Porm, plantas e animais se desenvolvem de maneira diferente; a propagao vegetativa de plantas por corte
(i.e, pores de plantas que quando nutridas, regeneram as partes faltantes)
uma prtica agrcola comum. Alm disso, em contraste com anfbios e mamferos (nos quais as clulas germinativas
Sobre E. coli e elefantes: O modelo operon

Na maioria dos casos estudados, o genoma o mesmo de clula para clula no organismo. Os genes para a protena globina podem ser encontrados em clulas da pele, e
os genes para as queratinas da pele podem ser encontrados em neurnios cerebrais.
Porm, isso ainda deixa sem resposta outra grande questo levantada pelos
embriologistas: Se o ncleo de cada clula no organismo tem os mesmos genes, como
podem esses genes fazer com que essas clulas se tornem diferentes? *Pouco tempo
aps a 2a Guerra Mundial, muitos biologistas concordaram que:
a maior lacuna, ainda para ser preenchida, entre dois campos da pesquisa em
biologia provavelmente aquela entre a gentica e a embriologia. o problema
repetidas vezes declarado, porm, at agora no resolvido, de como clulas com
genomas idnticos podem se tornar diferenciadas, adquirir a propriedade de
confeccionar molculas com novos, ou no mnimo, diferentes padres ou configuraes especficos.
Curiosamente, essa citao vem de Jacques Monod (1947), um geneticista
microbiano trabalhando na sntese de enzimas adaptativas, que so protenas que
embora no sejam usualmente sintetizadas por bactrias ou levedos, sero sintetizadas se os microorganismos encontrarem um novo substrato. Por exemplo, a
bactria Escherichia coli s sintetiza -galactosidase e outras enzimas digestoras
de lactose, quando encontram a lactose. Se a lactose est ausente do citoplasma,
essas enzimas no so sintetizadas. Mas, com a introduo de lactose no citoplasma,
esse grupo de novas enzimas aparecem. Em micrbios, ao menos, o mesmo genoma
pode produzir dois estados citoplasmticos funcionalmente diferentes, dependendo da presena ou no de determinado composto (no caso, a lactose). Monod
lanou a hiptese que o fenmeno da adaptao enzimtica podia oferecer a soluo para o problema de como genomas idnticos podem sintetizar diferentes molculas especficas.
*A grande exceo a essa regra da constncia dos genes os genes das imunoglobulinas
discutida no Captulo 10. Cada clula tem todas as subunidades gnicas das imunoglobulinas, mas em
linfcitos, algumas dessas subunidades esto rearranjadas ou mesmo suprimidas do genoma. O
terceiro desafio - a explicao de como o ambiente pode direcionar o desenvolvimento foi
prontamente compreendida, uma vez que a explicao geral para a expresso diferencial da expresso gnica foi estabelecida. Conforme veremos, o modelo do operon demonstrou como uma
substncia do ambiente podia efetuar a expreso gnica diferenciada.
47
so destacadas como uma linhagem distinta de clulas no incio do desenvolvimento), as plantas normalmente derivam seus gametas de clulas somticas.
Portanto, no to surpreendente que
uma nica clula de uma planta possa
se diferenciar em outros tipos de clulas e formar um clone geneticamente
idntico (clone, do grego klon, significando ramo).
48
Monod no foi o nico cientista a achar que micrbios unicelulares poderiam

explicar a diferenciao multicelular. O microbiologista Sol Spiegelman (1947) declarou
que a embriologia estava sendo prejudicada por sua prpria terminologia. O problema
da diferenciao no podia mais ser visto como uma propriedade estrutural dos tecidos, mas passar a ser considerado uma propriedade bioqumica de clulas individuais.
A diferenciao deveria ser vista no em termos anatmicos, mas como produo
controlada de padres enzimticos nicos. Essa redefinio focaliza a ateno para a
relao entre os genes do ncleo e as propriedades do citoplasma. Alm disso, a
sntese de uma enzima adaptativa em presena do seu substrato deveria ser discutida
como uma induo. Esse o termo tcnico usado em embriologia para descrever a
habilidade de uma clula produzir uma substncia capaz de influenciar a diferenciao
de outra. O agente molecular responsvel deveria ser chamado o indutor. Spiegelman
via uma semelhana fundamental entre a induo de novos tipos celulares no embrio
e a induo de novas enzimas em microorganismos. [gene5.html]
No fim da dcada de 1950, um grupo de pesquisadores acreditava que micrbios
eram um excelente (e facilmente estudado) modelo para diferenciao embrionria.
Muitos geneticistas microbianos explicitamente ligaram enzimas indutivas a conceitos embriolgicos. Julgavam ser vlida a extrapolao, e apelaram para a unidade da
natureza e, em ltima anlise, as regras simples que esperavam encontrar. Como sugerido por Monod (veja Judson, 1979), se algum entender a bactria, entender o elefante. Muitos embriologistas, porm, permaneceram cpticos a respeito da extrapolao
de bactrias a embries, enfatizando a complexidade do desenvolvimento e a diversidade da performance embriolgica.
Em 1961, Jacob e Monod sintetizaram dados sobre a induo da -galactosidase
levando construo do modelo do operon. Esse modelo postula que a pequena
molcula do indutor causava a transcrio de diferentes genes em E. coli (Figura 2.10).
Em sistemas indutivos, uma protena repressora codificada por genes liga-se ao stio
operador adjacente aos genes estruturais, impedindo a ligao da RNA polimerase ao
stio promotor que inciaria a transcrio. Estando presente, o indutor liga-se protena
repressora alterando sua conformao de forma a impedir a ligao ao operador. Com
isso, o gene torna-se capaz de transcrever mRNA, que pode ser traduzido formando
protena. Dessa maneira, o mesmo genoma pode sintetizar diferentes enzimas, dependendo da presena ou no do respectivo indutor. Em um importante trabalho de 1961,
Jacob e Monod enfatizaram que o mecanismo de controle do operon-smile pode ser
parte da regulao gnica universal. Eles conectaram seus resultados ao problema
fundamental da embriologia qumica que a compreenso do porqu clulas dos
tecidos no expressam constantemente todos os potenciais contidos em seu genoma.
O modelo do operon foi imediatamente introduzido nos textos de embriologia por
cientistas que procuravam a sntese da gentica com a embriologia. O livro de
Waddington (1962), Novos Padres na Gentica e no Desenvolvimento, comea com
um captulo relacionando o modelo do operon de Jacob e Monod com o controle da
expresso gnica no desenvovimento dos anfbios. Waddington aprovou especialmente esse modelo porque significava que os genes no so apenas ativos, mas
reativos, respondendo s mudanas no citoplasma. Waddington considerou genes e
citoplasma como mutuamente interativos. Essa perspectiva foi tambm salientada em
Hereditariedade e Desenvolvimento (1963), sntese de embriologia com gentica por
John Moore, que conclui:
Na gerao anterior, poucos embriologistas ou geneticistas teriam previsto
que a sntese dos seus campos de trabalho teria se tornado possvel por estudos com a bactria Escherichia coli. No entanto, essa criatura microscpica,
sem embrio prprio, mostrou um caminho. Na prxima dcada, poder ser
difcil perceber a diferena entre um geneticista e um embriologista, medida
que eles avanam em sua cincia para alm daquilo que cada um poderia ter
conseguido isoladamente.
49
Figura 2.10
(A) O operon lac
Gene indutor
Promotor
Operador
Genes estruturais
para utilizao
da lactose
(B) Quando no h lactose disponvel

Genes estruturais
No h transcrio
de genes estruturais
Protena repressora
produzidas por
i liga-se a o
Regulao diferencial de genes em E. coli. (A-C) No estado induzvel de

tipo-selvagem, no h transcrio de RNA de -galactosidase a no ser
que a lactose esteja presente. (B) Quando a lactose no est disponvel,
uma protena repressora produzida pelo gene i liga-se ao stio repressor
(o), inibindo a transcrio pela RNA polimerase do promotor (p). (C)
Quando o indutor lactose est presente, combina com a protena repressora, alterando sua forma, o que faz com que a protena no possa mais
se ligar ao DNA operador , fazendo comear a transcrio. (D) A solubilidade dessa protena demonstrada em estudos com o mutante de E.
coli. Quando clulas bacterianas haplides com um gene indutor nofuncional (i-) so tornadas parcialmente diplides com o gene tiposelvagem (i+), forma-se repressor tipo-selvagem capaz de tornar indutvel
o gene original da -galactosidase.
(C ) Quando a lactose est disponvel

Genes estruturais
Lactose
RNA
polimerase
mRNA
-galactosidase
mRNA transcrito
Lactose combinando
com o repressor,
previne ligao a o
(D) O repressor da lactose solvel

Genes estruturais
O gene i do tipo selvagem pode produzir

repressor para ambos cromossomos que se
ligam a o na ausncia de lactose
Genes estruturais
Sntese diferencial de RNA

A desejada unificao no ocorreu to rapidamente como esperado por Moore. Porm, baseado na evidncia embriolgica a favor da equivalncia genmica e do modelo do operon de E. coli, emergiu na dcada de 1960 um consenso de que as clulas
regulam seu desenvolvimento atravs da expresso gnica diferencial. Como bactrias eram os modelos para tal atividade, expresso em geral significava transcrio de
mRNA. Os trs postulados da expresso gnica diferencial eram os seguintes:
50
1. Cada ncleo celular contm o genoma completo estabelecido no ovo fertilizado. Em termos moleculares, os DNAs de todas as clulas diferenciadas so
idnticos.
2. Os genes no-usados das clulas diferenciadas no so destrudos ou mutados,
retendo o potencial de serem expressos.
3. S uma pequena porcentagem do genoma est sendo expressa em cada clula,
e uma poro do RNA sintetizado especfica para aquele tipo de clula.
Os dois primeiros postulados j foram discutidos. O terceiro que s uma pequena
parte do genoma est ativo produzindo produtos especficos dos tecidos foi primeiro testado em larvas de insetos. Aps a ecloso, uma larva de inseto tem duas populaes celulares diferentes, formadas por cerca de 10.000 clulas. A maior parte tem
cromossomos politnicos. Tais cromossomos sofrem replicao de DNA na ausncia
de mitose, contendo portanto 512 (29), 1024 (210), ou mesmo mais hlices duplas paralelas de DNA em lugar de somente uma (Figura 2.11; Prancha 31). Essas clulas no
sofrem mitose, e crescem expandindo seu volume at 150 vezes. Durante a metamorfose, tais clulas morrem sendo substitudas por clulas diplides no politnicas agrupadas em certas regies da larva (veja Captulo 19). Beermann (1952) mostrou que o
padro de distribuio das bandas de cromossomos politnicos era idntico ao longo
da larva e que no se notavam perdas ou adies de qualquer regio cromossmica
quando diferentes tipos de clulas eram comparados (Figura 2.12). Porm, Beermann
estudando o mosquito Chironomus e Becker (1959) estudando Drosophila, acharam
regies cromossmicas que estavam estufadas. Esses tufos apareciam em lugares
diferentes nos cromossomos em cada tecido; seu aparecimento mudava com o desenvolvimento dessas clulas (Figura 2.13). Ainda mais, alguns tufos podiam ser
Figura 2.11
Cromossomos politnicos. (A) Cromossomos politnicos de clulas da glndula salivar de

Drosophila melanogaster. Os quatro cromossomos esto conectados em seus centrmeros,
formando um denso cromocentro. Os genes estruturais para a lcool desidrogenase (ADH),
aldedo oxidase (Aldox) e octanol desidrogenase (ODH) foram mapeados nas posies designadas nesses cromossomos. (B) Fotografia ao microscpio eletrnico de uma pequena regio de
um cromossomo politnico de Drosophila. As bandas escuras esto altamente condensadas
comparadas com as regies interbandas. (A de Ursprung et al., 1968, cortesia de H. Ursprung;
B de Burkholder, 1976, cortesia de G. D. Burkholder.)
Aldox
51
estimulados ou inibidos por certas mudanas fisiolgicas causadas pelo calor ou por
hormnios (Clever, 1966; Ashburner, 1972; Ashburner e Berondes, 1978).
Beermann (1961) apresentou evidncias que esses tufos representam um afrouxamento localizado de cromossomos politnicos (Figura 2.14) e que so stios de sntese
ativa de RNA. Duas espcies intercruzadas diferentes de Chiromonus foram encontradas: uma produzindo grande quantidade de protena salivar e a outra no (Figura
2.15). Os produtores tinham uma tufo grande (anel de Balbiani) em determinada banda;
esse tufo no existia nos no-produtores. O cruzamento de produtor com no-produtor resultou em larvas produzindo quantias intermedirias de protena salivar. Cruzando duas moscas hbridas, a capacidade de produzir protena salivar segregou-se de
forma Mendeliana: 1 alto produtor: 2 intermedirios:1 no-produtor. Altos produtores
tinham dois tufos (um em cada cromossomo homlogo), produtores intermedirios
tinham apenas um, e no-produtores nenhum tufo. Beermann concluiu que a informao gentica necessria para a sntese dessa protena salivar est presente nessa
banda distal do cromossomo e que sua produo dependia de transformao em uma
regio estufada.
(A)
Glndula
salivar
Tbulos de
Malpighi
Tecido
retal
Intestino
(B)
Figura 2.12
Identidade genmica em cromossomos politnicos. (A) Uma regio do

conjunto cromossmico da mosca Chiromonus tentans. Notar a constncia do nmero de bandas nos diferentes tecidos. (B) Hibridizao do RNA
de uma protena da gema com um cromossomo da glndula salivar larval
de Drosophila. Os gros escuros (flexa) mostram onde a mensagem da
protena radioativa da gema se ligou aos cromossomos. Notar que o gene
para a protena est presente no cromossomo da glndula salivar, apesar
da protena no ser a sintetizada. (A) Segundo Beermann, 1952; (B) De
Barnett et al., 1980; fotografia cortesia de P. C. Wensink.
52
Figura 2.13
Seqncia de estufamentos de uma poro do cromossomo 3 da glndula salivar de Drosophila melanogaster. (A,B) larva de 110 horas; (C) larva de 115
horas; (D,E) estgio pr-pupa (aps 4 horas). Notar
o estufamento e a regresso das bandas 74EF e 75B.
Outras bandas (71DE, 78D) estufam mais tarde, porm, a maioria no estufa de modo algum durante o
perodo. (Cortesia de M. Ashburner.)
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
Prova adicional de que tufos cromossmicos produzem mRNA vem de estudos

sobre tufos do anel de Balbiani (BR2) em Chironomus tentans. O BR2 pode ser
isolado por microdisseco devido seu tamanho excepcional, e seus produtos podem ser analisados por autoradiografia (Lambert e Daneholt, 1975). A Figura 2.16 A,
B mostra o isolamento de BR2 do cromossomo 4 de C. tentans. Transcrio de BR2
foi demonstrada incubando glndulas salivares isoladas com precursores de RNA
(A)
(B)
Figura 2.14
Terminao proximal do cromossomo 4 da glndula salivar de Chiromonus pallidivitatus, mostrando o enorme

tufo BR2. (A) Fotomicrografia em contraste de fase, de
preparaes coradas, mostrando o extenso tufo no cromossomo politnico. (B) Diagrama da regio passando
por estufamento. (A de Grossbach, 1973, cortesia de U.
Grossbach; B segundo Beermann, 1963)
53
BR4(SZ)
Alto
produtor
No-produtor
BR2
Todos produtos
intermedirios
BR1
BR3
Alto produtor
(A)
(B)
(C)
No-produtor
Produtores
Intermedirios
Figura 2.15
radioativos. O RNA radioativo pde, em seguida, ser extrado da poro BR2 do

cromossomo dissecado (Lambert, 1972). Esse RNA era excepcionalmente grande
cerca de 50.000 bases. O grande segmento de RNA radioativo, especificamente
hibridizado para a regio BR2 do cromossomo, mostrou que o DNA estufado (Puff
de DNA) - e nenhum outro local - tinha-o transcrito ativamente (Figura 2.16C). Esse
mesmo RNA pde ser isolado de polissomos sintetizadores de protenas, indicando
que ativo na sntese protica (Wieslander e Daneholt, 1977). Assim, um RNA
transcrito de uma banda especfica de DNA, que estufa na glndula salivar larval,
pode posteriormente ser visto produzindo protenas em ribossomos citoplasmticos.
Correlao de padres de estufamento com funes especializadas nas clulas das glndulas
salivares de Chironomus pallidivitatus. (A)
Cromossomo de uma clula produzindo uma
secreo granular e mostrando um anel de
Balbiani adicional [BR4(SZ)]. (B) Cromossomo 4 de uma clula salivar, mostrando somente anis de Balbiani 1, 2 e 3 (BR1, BR2, BR3).
(C) Evidncia gentica que a sntese de uma
importante protena salivar depende da formao de tufos BR4(SZ). Larvas com altos
nveis de secrees granulares tm clulas salivares glandulares com tufos BR4(SZ) em ambos cromossomos 4 (coloridos), enquanto larvas sem essas secrees no tm tais tufos.
Produtores intermedirios tm somente um
cromossomo 4 com uma regio estufada
BR4(SZ) em cada clula salivar realizando a
secreo. (A e B segundo Beermann, 1961, cortesia de W. Beermann.)
(A)
Figura 2.16
(B)
BR 2
(C)
(A,B) Isolamento da regio BR2 de Chironomus tentans por micromanipulao. O cromossomo intacto 4 pode ser dividido em trs regies, uma contendo BR2. (C) Transcrio da
regio BR2 mostrado por uma auto-radiografia in situ aps hibridizao do BR2 RNA com
a preparao cromossmica. (A e B de Lambert
e Daneholt, 1975; C de Lambert, 1972; fotografias cortesia de B. Lambert.)
54
Portanto, os tufos nos cromossomos salivares esto produzindo mRNA ativamente. Em clulas que sintetizam essa protena, o gene est ativado; em clulas que no
usam essa protena, o gene permanece reprimido.
Hibridizao de cido nuclico

Poucos genes puderam ser analisados como aqueles nos tufos politnicos de
Chiromonus. E embora esses genes dos tufos eram ativos em clulas que j se
haviam diferenciado (como aquelas da glndula salivar), no eram os genes causadores da diferenciao celular. Para encontrar e analisar os genes que so responsveis pelo desenvolvimento embrionrio, novas tcnicas tiveram que ser
aperfeioadas.
A maioria das tcnicas para anlise de genes eucariotos baseia-se na hibridizao
de cidos nuclicos. Essa tcnica envolve fortalecimento de pedaos de fitas simples
de RNA e DNA, para permitir a formao de hbridos de fitas duplas. Por exemplo, se
o DNA cortado em pequenos pedaos e cada pedao dissociado em duas fitas
simples desnaturado cada fita na soluo dever achar e reunir-se com seu parceiro complementar, quando lhe dado tempo suficiente para isso. As condies de
renaturao devem ser tais que ligao especfica entre fitas complementares seja
mantida e combinaes no especficas sejam dissociadas. Isso , em geral, conseguido variando a temperatura ou as condies inicas da soluo em que ocorre a
renaturao (Wetmur e Davidson, 1968). De maneira semelhante, RNA sintetizado a
partir de uma regio particular do DNA poderia ser esperado ligar-se fita do qual foi
transcrito (Figura 2.17). Assim, RNA pode ser esperado hibridizar especificamente
com o gene que o codifica. Para medir essa hibridizao, uma das fitas de cido nuclico
(a sonda) em geral marcada pela incorporao de nucleotdeos radioativos. Um
problema tcnico que inicialmente atormentou os estudos de hibridizao de cidos
nuclicos foi a dificuldade em conseguir colocar quantidades suficientes de radioatividade na molcula de RNA. Esse problema foi superado isolando o RNA e fazendo
uma cpia complementar de DNA (cDNA) na presena de precursores radiativos. Isso
pode ser feito em tubo de ensaio contendo o RNA, uma extenso curta de DNA
(chamado de iniciador ou primer), precursores radioativos de DNA e a enzima viral
transcriptase reversa. Essa enzima pode produzir DNA de um molde de RNA (Figura
2.18). O DNA sintetizado in vitro, no sendo necessrio preocupar-se com a diluio
(A)
Condies de
desnaturao
(calor, lcali)
Condies de
re-anelamento
Figura 2.17
Hibridizao de cidos nuclicos. (A) Se a hlice de DNA for separada em duas fitas, essas
devem se re-anelar sob condies adequadas
de fora inica e tempo. De maneira semelhante, se o DNA for separado em suas duas fitas,
o RNA deve ficar capacitado a se ligar a genes
que o codificam. Se presente em quantidades
suficientemente grandes em comparao com
o DNA, o RNA ir substituir uma das fitas de
DNA nessa regio.
RNA
(B)
Desnaturar; adicionar
RNA (em grande
quantidade em
comparao com DNA)
RNA hibridiza
com uma
fita de DNA
dos precursores radiativos. Alm disso, o DNA pode hibridizar tanto com o gene que
produziu o RNA (embora a outra fita) e com o prprio RNA, tornando-o extremamente
til para a deteco de pequenas quantidades de RNAs especficos.[other.html#gene6]
55
mRNA
Anelar iniciador
Clonagem de DNA genmico
mRNA
J em 1904 Theodor Boveri desesperava-se, considerando que as tcnicas de sua

poca nunca seriam suficientes para permitir-lhe estudar como os genes criam embries. Havia necessidade de uma tcnica especial de amplificao gnica:
Porque no somente o ncleo, nem mesmo cromossomos individuais, mas certas partes de certos cromossomos de certas clulas que precisam ser isolados e
coletados em quantidades enormes para anlise; essa seria uma pr-condio
para colocar o qumico em uma posio a qual lhe permitiria analisar (o material hereditrio) com mais mincias que o morfologista.
Entretanto, desde a dcada de 1970 a hibridizao de cido nuclico permitiu aos
biologistas do desenvolvimento realizar o que Boveri aspirava: isolar e amplificar
regies especficas do cromossomo. A tcnica principal para isolar e amplificar genes
individuais chamada clonagem de genes. A primeira fase desse processo consiste no
corte de DNA nuclear em pedaos distintos, por incubao de DNA com uma
endonuclease de restrio (geralmente chamada de enzima de restrio). De modo
geral, essas endonucleases so enzimas bacterianas que reconhecem seqncias especficas do DNA e o clivam nesses stios (Tabela 2.1; Nathans e Smith, 1975). Por
exemplo, quando DNA humano incubado com a enzima BamHI (de Bacillus
amyloliquifaciens, cepa H), o DNA clivado em cada stio onde aparece a seqncia
GGATCC. Os produtos so fragmentos de DNA de vrios tamanhos, todos terminando com G em um dos lados e GATCC no outro (Figura 2.19). Esses pedaos so
freqentemente chamados de fragmentos de restrio.
Tabela 2.1
Enzimas de restrio comumente usadas
Stio
enzimtico*
Derivao
Reconhecimento e clivagem
EcoRI
Escherichia coli
BamHi
Bacillus amyloliquifaciens
HindIII
Haemophilus influenzae
SalI
Streptomyces albus
SmaI
Serratia marcescens
HhaI
Haemophilus haemolyticus
HaeIII
Haemophilus aegyptius
AluI
Arthrobacter luteus
G AA T T C
C T TAA G
G G AT C C
C C TAG G
A AG CTT
TTC GA A
G TC GAC
CAG C T G
CCC GGG
GGG CCC
GCG C
C GCG
GG CC
CC GG
AGCT
T C GA
* Todos os stios de reconhecimento de enzimas de restrio tm um centro de simetria. A seqncia

de dupla fita lida em uma direo idntica seqncia lida da frente para trs na outra direo.
Transcriptase
reversa
mRNA
cDNA
lcali
cDNA
Figura 2.18
Mtodo para preparar DNA complementar

(cDNA). A maioria dos mRNA possui uma
longa cadeia de resduos de adenosina (AAAn)
no terminal 3 da mensagem (a ser discutida no
Captulo 12); por isso, o pesquisador anela
um iniciador consistindo de 15 resduos de desoxitimidina (dT15) ao final 3' da mensagem.
Transcriptase reversa em seguida, transcreve
uma fita de DNA complementar, comeando
no iniciador dT15. O cDNA pode ser separado
aumentando o pH da soluo, dessa maneira,
desnaturando o hbrido de dupla fita e clivando o RNA.
56
O prximo procedimento na clonagem do gene incorporar esses fragmentos de

restrio em vetores de clonagem. Usualmente esses vetores so molculas circulares
de DNA, replicadas em clulas bacterianas, independentemente do cromossomo
bacteriano. So usados plasmdeos resistentes a drogas ou vrus especialmente modificados (que so muito teis na clonagem de grandes fragmentos de DNA). Por exemplo, um vetor pode ser construdo contendo apenas um stio sensvel BamHI. Esse
vetor pode ser aberto por incubao com essa enzima de restrio. Aps a abertura,
ele pode ser misturado com os fragmentos de DNA humano, produzidos tambm por
BamHI. Em muitos casos, os pedaos do DNA cortado sero incorporados a esses
vetores (porque seus terminais so complementares aos terminais abertos do vetor) e
ligados covalentemente, colocando-os em uma soluo contendo a enzima DNA ligase.
O processo total fornece plasmdeos bacterianos, cada um contendo um nico pedao
de DNA humano. Esses so chamados plasmdeos recombinantes ou, geralmente,
DNA recombinante (Cohen et al.,1973; Blattner et al., 1978).
O plasmdeo ilustrado na Figura 2.19 pUC18, um vetor freqentemente usado por
biologistas moleculares (Vierra e Messing,1982). Ele contm (1) um gene resistente a
drogas, AmpR, que torna a bactria imune ampicilina e permite ao pesquisador selecionar aquelas bactrias que incorporaram um plasmdeo; (2) uma origem para a
replicao de DNA, permitindo ao plasmdeo replicar centenas de vezes em cada
bactria; e (3) um poli-ligante, um pedao curto de DNA artificial que contm os stios
enzimticos de restrio para vrias dessas endonucleases. O poli-ligante se situa
dentro de um gene lacZ que codifica a -galactosidase de E. coli. O poli-ligante
suficientemente curto (e tem o nmero correto de pares de bases) de modo a no
interferir com a atividade enzimtica da -galactosidase. O processo de clonagem
comea quando os fragmentos de restrio do DNA nuclear so misturados aos
plasmdeos abertos pUC18 e a eles so ligados, ocasionando o fechamento do
plasmdeo. Os plasmdeos recombinantes putativos assim formados so ento incubados com clulas de E. coli sensveis ampicilina e sem o gene da -galactosidase.
Mesmo que as bactrias e os plasmdeos sejam misturados em condies que encorajam as bactrias a incorporar os plasmdeos, nem todas as bactrias incorporam um
plasmdeo. Para evidenciar aquelas bactrias que incorporaram plasmdeos, as clulas
tratadas de E. coli so cultivadas em gar contendo ampicilina. Somente aquelas
bactrias que incorporaram um plasmdeo (com seu gene dominante, ampicilina-resistente) sobrevivem.
Mas nem todos plasmdeos incorporaram um gene estranho, porque possvel
que os terminais adesivos do stio da enzima de restrio sofram uma renaturao
entre si mesmos. Para distinguir entre colnias bacterianas que incorporaram DNA
estranho e aquelas que no o fizeram, o gar tambm contm um corante chamado Xgal. Esse composto incolor, mas quando transformado pela -galactosidase forma
um precipitado azul *.Assim, se um plasmdeo no incorporou um fragmento de restrio ao stio de enzima de restrio no poli-ligante, o gene da -galactosidase (lacZ)
est funcional e a -galactosidase resultante torna o corante azul. O resultado o
aparecimento de colnias azuis. Entretanto, se o plasmdeo incorporou um fragmento de DNA, o gene da -galactosidase destrudo pela insero. Essas bactrias no
vo produzir a cor azul do corante; produzem colnias incolores no gar.
Colnias incolores so ento selecionadas quanto a presena de um gene especfico. Clulas de cada uma dessas colnias so colocadas em um finssimo filtro de
nitrocelulose ou nylon. Quando essas clulas so lisadas, seu DNA adere aos filtros.
Em seguida, as fitas de DNA so separadas por aquecimento, e os filtros incubados
em uma soluo contendo o RNA radioativo (ou sua cpia de cDNA) do gene que se
*O corante 5-bromo-4-cloroindol, e azul a no ser quando est complexado com uma

molcula como galactose. A -galactosidase codificada pelo gene do plasmdeo cliva a galactose do
corante permitindo que adquira a conformao azul.
Stio
Hind III
Stio BamHI
57
Stio Eco RI
Poli-ligante
Plasmdeo cortado
no gene lacZ
Quebra
endonucleoltica
por BamHI
Fragmentos
de gene
humano
incubados e
ligados em um
plasmdeo
Plasmdeo
recombinante
com gene lacZ
interrompido
DNA humano
Quebra endonucleoltica
por BamHI
Mistura com bactrias

(lacZ, sensvel amp.)
Figura 2.19
Um protocolo geral para clonar DNA, usando como exemplo a insero de uma seqncia de DNA humano em um plasmdeo com um stio sensvel BamHI.
quer clonar. Em alguns casos, a seqncia do mRNA ou gene no conhecida,

devendo-se ento estimar a seqncia a partir da seqncia de aminocidos da
protena). Se o plasmdeo contm aquele gene, seu DNA deve estar no filtro, e
somente aquele DNA dever ser capaz de ligar o RNA radioativo ou a sonda de
cDNA. Portanto, somente aquelas reas sero radioativas. A radioatividade nessas
regies determinada por auto-radiografia. Filme sensvel a raios-X colocado
sobre o papel tratado. Os eltrons de alta energia, emitidos pelo RNA radioativo,
sensibilizam os gros de prata no filme, tornando-os escuros quando o filme revelado. Finalmente, uma mancha escura produzida sobre cada colnia contendo o
plasmdeo recombinante que carrega o gene especfico (veja Figura 2.19). Essa colnia ento isolada e cultivada, produzindo bilhes de bactrias, cada uma contendo
centenas de plasmdeos recombinantes idnticos.
Os plasmdeos recombinantes podem ser separados do cromossomo da E. coli por
centrifugao, e incubando o DNA do plasmdeo com BamHI libera-se o fragmento de
DNA extranho que contm o gene. Esse fragmento pode ser separado do DNA
plasmdico, permitindo ao pesquisador possuir microgramas de seqncias de DNA
purificado contendo o gene especfico. Apesar desse procedimento parecer muito
lgico e fcil, freqentemente o nmero de colnias a serem selecionadas astronmico. O nmero de fragmentos aleatrios que devem ser clonados para a obteno do
gene desejado, aumenta com a crescente complexidade do genoma do organismo*.
Para detectar um gene especfico de um genoma de mamfero, milhes de clones individuais devem ser selecionados.
*Complexidade se refere ao nmero de diferentes tipos de genes no ncleo. Apesar que
milhes de clones precisam ser selecionados, aproximadamente 100.000 colnias podem, agora,
ser selecionadas em uma nica placa. Outra maneira comum de selecionar os clones usar um
plasmdeo que tem seu stio da enzima de restrio prximo a um vigoroso promotor bacteriano
(tal como aquele para -galactosidase). As bactrias transcrevero o cDNA e o traduziro em
protena. Aps a lise das colnias bacterianas no papel de filtro, as protenas aderem ao papel e
podem ser identificadas por anticorpos dirigidos contra quela protena. Isso chamado clonagem
de expresso, e os plasmdeos referidos como vetores de expresso.
Colnias
incolores
Meio contendo
ampicilina
Colnias azuis
Aplicao das colnias
incolores nos crculos do
papel de filtro; lisar para
expor o DNA
mRNA
radioativo
Papel de filtro incubado com mRNA
radioativo do gene a ser clonado
Preparao de auto-radiografia para indicar os

clones bacterianos com fragmento de DNA
que formou um hbrido com o DNA radioativo
58
Hibridizao de DNA: entre e intra espcies
Figura 2.20
Transferncia Southern. DNA tratado com

enzimas de restrio e os fragmentos resultantes so colocados em um gel e separados
por eletroforese. Aps a separao, o DNA
desnaturado em fitas nicas. O gel , em seguida, colocado sobre um papel de filtro
saturado com tampo de alta fora inica. Papel de nitrocelulose ou um filtro de nylon
colocado sobre o gel e o conjunto coberto
com toalhas de papel. O tampo de transferncia atravessa o gel, o papel de nitrocelulose e as toalhas por ao capilar, levando junto o DNA. O DNA de fita nica retido pelo
papel de nitrocelulose. As posies do DNA
no papel diretamente refletem a posio dos
fragmentos de DNA no gel.
Clones podem ser selecionados por qualquer segmento de nucleotdeos radioativos.

Portanto, os genes clonados de um organismo podem ser sondados com cDNAs
radioativos derivados do mRNA de outras espcies. Uma das descobertas mais excitantes da moderna biologia do desenvolvimento foi verificar que genes usados para
processos especficos de desenvolvimento em um organismo, podem ser usados para
processos similares em outro organismo. Drosophila teve uma importncia crtica na
descoberta desses genes. Iniciando com Morgan, esses genes foram mapeados e, nos
anos 60, E. B. Lewis confirmou que alguns desses genes so responsveis pela formao de partes bsicas do corpo (veja Captulo 14). Um deles, Antennapedia, um gene
cujo produto protico essencial para inibir a formao de estruturas da cabea no
trax. Se o gene no est presente, antenas crescem onde deveriam estar as pernas. Se
o gene expresso na cabea (como sucede em um mutante especfico), a mosca
desenvolve um conjunto extra de pernas saindo das cavidades orbitais (veja Figura
14.28). Poderia tal gene existir em vertebrados?
Evidncias desses genes em vertebrados apareceram em transferncias de DNA,
algumas vezes chamadas de transferncias Southern devido a seu inventor, E. M.
Southern (1975). DNA de numerosos organismos vertebrados e invertebrados, foram
tratados com uma enzima de restrio, e os fragmentos de DNA resultantes foram
separados em uma eletroforese em gel. As misturas de fragmentos foram colocadas em
fendas em um dos lados do gel, que foi em seguida submetido uma corrente eltrica.
Os fragmentos de DNA carregados negativamente migraram em direo ao plo positivo, os fragmentos menores movendo-se mais rapidamente do que os maiores. *
Como a hibridizao no pode ser feita dentro do gel; o DNA deve ser colocado em
uma superfcie plana, e isso feito por transferncia. Aps a desnaturao das fitas de
DNA em lcali, os pesquisadores retornaram o gel a um pH neutro e em seguida o
colocaram sobre um papel de filtro mido suportado por uma estrutura de plstico
(Figura 2.20; Mc Ginnis et al., 1984; Holland e Hogan, 1986). Papel de nitrocelulose
(capaz de ligar DNA de fita nica) foi colocado diretamente sobre o gel e coberto com
mltiplas camadas de papel-toalha secas. O papel de filtro abaixo do gel estava em
comunicao com o interior de uma cuba contendo tampo de alta fora inica. O
tampo caminhou para cima atravs do gel e do filtro de nitrocelulose para as toalhas
de papel. O DNA tambm foi levado por esse fluxo de tampo, mas foi detido pelo filtro
de nitrocelulose; assim, o DNA foi transferido do gel ao papel de nitrocelulose. Aps
fixar pelo calor os fragmentos de DNA no papel de nitrocelulose (de outra forma eles
*Considerando a mesma relao carga/massa, fragmentos menores adquirem uma maior velocidade que os maiores quando impulsionados pela mesma energia. Isso uma funo da equao de
energia cintica, E=1/2 mv2. Resolvendo para velocidade, encontramos que ela inversamente
proporcional raiz quadrada da massa.
Filtro de
nitrocelulose
ou nylon
Espaadores
Peso
Papel-toalha
Contatos de
papel de filtro
Desnaturar fragmentos de
DNA fitas simples em lcali
Suporte
Digesto com restrio

e eletroforese
em gel de agarose
Cuba com
soluo tampo
Gel
Colocar gel no papel de filtro

mido entre 2 espaadores
Colocar filtro de nitrocelulose

ou membrana de nylon sobre gel:
colocar papel-toalha e peso
Figura 2.21
Transferncia Southern do DNA de vrios organismos usando uma sonda radioativa do

gene Antennapedia de Drosophila melanogaster. No se espera que as seqncias de
espcies to diversas sejam perfeitamente idnticas e por essa razo o rigor da hibridizao
diminudo trocando as solues salinas. (Coloquialmente esse baixo rigor das transferncias ao longo dos filos chamado transferncias de zoolgico, por razes bvias). Autoradiografia mostra que os genes de Drosophila contm vrias pores que so como as do
gene Antennapedia em termos de estrutura; tambm, muitos organismos contm vrios
genes que formaro hbridos com esse fragmento gnico radioativo, sugerindo que genes
similares a Antennapedia existem nesses organismos. Os nmeros ao lado das transferncias indicam os tamanhos das bandas, em quilobases. (de McGinnis et al.,1984, cortesia de
W. McGinnis.)
Drosophila Besouro
melanogaster
Ubx
ftz
59
Galinha Camundongo
10
10
10
10
3
Antp
1
1
1
1
se desprenderiam), o conjunto foi incubado com cDNA radioativo de uma poro do

gene Antennapedia de Drosophila. Um autoradiograma do papel de nitrocelulose
mostrou onde o DNA radioativo encontrou seu semelhante. Os resultados desses
experimentos (Figura 2.21) mostraram que mesmo vertebrados (camundongos, humanos e pintos) tm genes que hibridizam com essas seqncias. Essa seco radioativa
do gene Antennapedia foi usada para selecionar uma biblioteca genmica de clones
de DNA derivados do genoma dessas diferentes espcies. Como veremos no Captulo
16, pesquisadores encontraram clones contendo genes que se parecem com o
Antennapedia; esses genes se mostraram extremamente importantes na formao do
eixo do corpo dos vertebrados.
Seqenciamento de DNA
Dados de seqncia podem dar informaes sobre a estrutura da protena codificada e podem identificar seqncias regulatrias de DNA que certos genes tm em
comum. A simplicidade da tcnica de seqenciamento didesoxi de Sanger (Sanger
et al.,1977) tornou-a um procedimento padro em muitos laboratrios de biologia
molecular. No incio, usa-se um vetor contendo o gene clonado e se isola uma fita
nica do DNA circular (Figura 2.22). Funde-se (anela-se) ento um iniciador (primer)
radioativo de DNA (aproximadamente 20 pares de bases) complementar ao DNA
do vetor imediatamente 3' ao gene clonado. (Porque essas seqncias dos vetores
so conhecidas, iniciadores oligonucleotdicos podem ser facilmente sintetizados
ou adquiridos comercialmente). O iniciador tem uma ponta 3' livre qual mais
nucleotdeos podem ser adicionados. Coloca-se o DNA alvo e o iniciador juntamente com todos os quatro desoxirribonucleosdeos trifosfatos em quatro tubos
de ensaio. Cada um dos tubos contm a subunidade polimerizante da DNA polimerase e um diferente didesoxinucleosdeo trifosfato: um tubo contm didesoxi-G,
outro didesoxi-A e assim por diante. As estruturas dos desoxinucleotdeos e dos
didesoxinucleotdeos esto representadas na Figura 2.23. Enquanto o
desoxirribonucleotdeo no tem um grupo hidroxila (OH) no carbono 2' do seu
acar, o didesoxirribonucleotdeo no tem grupos hidroxila em ambos os carbonos, 2' e 3'. Assim, mesmo que um didesoxirribonucleotdeo possa ser ligado a uma
crescente cadeia de DNA pela DNA polimerase, ele interrompe o crescimento da
cadeia por no ter um grupamento 3' ao qual se ligaria um novo nucleotdeo.
Assim, quando a DNA polimerase est sintetizando DNA do iniciador, o novo
DNA ser complementar ao gene clonado. No tubo com didesoxi-A, entretanto,
sempre que a polimerase coloca um A na cadeia crescente, existe a possibilidade
de que um didesoxi-A seja colocado em lugar do desoxi-A. Se isso acontecer, a
cadeia pra. Similarmente, no tubo com didesoxi-G, a cadeia tem o potencial de
parar toda vez que um G inserido. (O processo foi comparado uma dana
folclrica grega na qual uma pequena porcentagem dos danarinos em potencial
tem um brao em uma tipia).
60
Fita nica desnaturada de DNA de plasmdeo recombinante
Iniciador
Subunidade polimerizante de DNA polimerase I

de E. coli + dATP, dGTP, dCTP e dTTP
Seqncia da fita
do iniciador
Seqncia
complementar
Fragmentos
maiores
Fragmentos
menores
Figura 2.22
O mtodo didesoxi de seqenciar DNA. A fotografia contm a regio da auto-radiografia que

mostra essa seqncia (Cortesia de G. Guild).
Adenina
Base 1
Adenina
Base 2
Adenina Desoxiadenosina
trifosfato (acar desoxirribose)
(A)
Didesoxiadenosina
trifosfato (acar
didesoxirribose)
(B)
Figura 2.23
Comparao entre desoxinucleotdeos e didesoxinucleotdeos. (A) Estruturas dos dois tipos de

nucleotdeos. A diferena evidenciada em cores. (B) O terminal 3' de uma cadeia que terminou
pela incorporao de um didesoxinucleotdeo no tem um grupo hidroxila 3' terminal para
continuar a polimerizao do DNA.
Em cada tubo esto sendo feitas milhes de cadeias e por essa razo eles contero
uma populao de cadeias, algumas interrompidas no primeiro stio possvel, outras
no ltimo e algumas em stios intermedirios. O tubo com didesoxi-A, por exemplo,
conter cadeias com diferentes e distintos comprimentos, cada uma terminando com o
resduo A. Os fragmentos de DNA radioativo resultantes sero separados por eletroforese. O resultado uma escada de fragmentos onde cada degrau uma seqncia de nucleotdeos de comprimento diferente. Lendo escada acima, obtem-se a seqncia do DNA complementar quela do gene clonado.
Anlise de mRNA atravs de bibliotecas de cDNA

Agora podemos retornar especificidade da transcrio de mRNA: possvel
isolar populaes de mRNA que caracterizam certos tipos de clulas e esto ausentes em todas as outras? Para encontrar esses RNAs, podemos clonar os
mRNA de diferentes tipos de clulas e compar-los. Como mostra a Figura 2.24A,
isso feito tomando os RNAs mensageiros de uma clula ou tecido e convertendo-os em fitas de DNA complementar. Levando esse procedimento um passo
frente (com o auxlio de DNA polimerase e S1 nuclease), podemos transformar
essa populao de cDNA de fita nica em outra contendo pedaos de cDNA com
fitas duplas. Essas fitas de DNA podem ser inseridas em plasmdeos, adicionando-lhes finais apropriados com DNA ligase. Acoplando um fragmento GATCC/
G aos terminais rombudos desse pedao de DNA cria-se um corte artificial de
restrio BamHI, o que permite a insero em um vrus ou plasmdeo clivado por
essa enzima (Figura 2.24B).
Tais colees de clones derivados de mRNAs so freqentemente chamadas de
bibliotecas. Assim, podemos ter uma biblioteca de fgado de embrio de camundongo
de 16 dias, representando todos os genes ativos produzindo protenas hepticas
embrionrias. Podemos ter tambm uma biblioteca de ocitos vegetais de Xenopus,
representando mensagens presentes somente em uma parte especfica daquela clula.
Genes clonados dessa maneira so muito importantes porque eles no tm ntrons.
Quando adicionados s clulas bacterianas, esses genes podem ser transcritos e em
seguida traduzidos nas protenas que codificam.
Bibliotecas tm sido extremamente teis no estudo de desenvolvimento como
demonstram os esforos de Wessel e colaboradores (1989) em verificar diferenas nos
RNAs de diferentes partes do embrio, em gastrulao, do ourio-do-mar. Para encontrar mRNAs especficos do endoderma em ourio-do-mar, Wessel e colaboradores
prepararam uma biblioteca de cDNA de embries gastrulantes. O mRNA dessas amostras (a maior parte do RNA de clulas eucariticas ribossmico) foi isolado por
passagem em esferas com oligo-dT, as quais capturam as caudas de poli(A) das mensagens (veja legenda da Figura 2.19). A populao de mRNA foi, ento, convertida em
uma de cDNA pelo uso da transcriptase reversa (veja Figura 2.24A). Usando polimerase
I de E. coli o cDNA de fita nica foi transformado em fita dupla. No prximo passo, os
cDNAs de fita dupla foram ligados a finais de EcoRI que esto disponveis no comrcio. Isso os tornou clonveis em vetores que foram abertos com a enzima de restrio
EcoRI. O DNA foi misturado com os braos de um fago geneticamente modificado
(veja Figura 2.24B). Esse fago construdo de tal maneira que ao ser cultivado em uma
placa de Petri, os fagos que incorporaram o DNA (e assim destruram o gene da galactosidase) produzem placas incolores (Figura 2.24C). Dessa forma, foram gerados
aproximadamente 4 milhes de fagos recombinantes, cada um contendo um cDNA representando uma molcula de mRNA.
O prximo passo envolvia selecionar os fagos recombinantes. Quais deles representariam mRNAs encontrados no endoderma e no em outras camadas celulares?
Wessel e seus colegas isolaram populaes de mRNAs do mesoderma, ectoderma e
endoderma. Depois prepararam cDNAs marcados de cada uma das populaes de
mRNA, usando precursores radioativos. Agora, possuam trs colees de molculas
61
62
(A)
Preparao de cDNA
clonvel
Regio codificadora
mRNA
(B)
Insero de cDNA de dupla fita no vetor viral (bacterifago )
DNA de fago
Anela iniciador oligo (dT)

BamHI
Regio codificadora
mRNA
Transcriptase reversa
Brao esquerdo
Brao direito
cDNA
No necessrio para
a replicao do fago
mRNA
Hidrlise alcalina
cDNA de dupla fita
preparado como
descrito em (A)
cDNA
DNA polimerase I
Inserir cDNA nos

terminais do DNA do
fago ; ligar
Braos contm todos os

genes necessrios para a
replicao, mas muito
pequeno para o
empacotamento
Regio codificadora
cDNA
S1 nuclease
Regio codificadora
Fita
dupla
cDNA
Adicionar finais Bam HI
cDNA do
mRNA, agora
clonado em
vetores virais
de cDNA radioativos, cada uma representando a populao de mRNA de uma das

trs camadas germinativas.
Os fagos recombinantes representando os mRNAs do embrio, em gastrulao,
do ourio-do-mar foram cultivados e amostras de numerosas colnias cada uma
contendo milhares de fagos colocadas em dois filtros de nitrocelulose (Figura 2.24D).
O conjunto foi colocado em soluo de lcali para a lise dos fagos e obteno de DNA
de fita nica. Um desses papis de filtro foi incubado com cDNA radioativo feito a
partir do mRNA total do endoderma; o outro papel incubado com sondas radioativas
para ambos, mesoderma e ectoderma. Os filtros foram lavados para a remoo de
cDNA radioativo no hibridizado, secos e expostos em filmes para raios-X. Se um
mRNA estivesse presente no endoderma, mas no no ectoderma ou mesoderma, o
DNA recombinante produzido daquela mensagem deveria ligar cDNA radioativo do
endoderma e no deveria encontrar um mRNA em qualquer outro lugar. Como resultado, aquela mancha de DNA recombinante do endoderma deveria ser radioativa (pois
foi ligado ao cDNA radioativo do endoderma), mas o mesmo clone no deveria ser
radioativo quando exposto a mRNA ectodrmico ou mesodrmico; isso foi confirmado. Um fago recombinante, em particular, ligou somente cDNA radioativo produzido
(D) Seleo da biblioteca de fagos clonados
(C) Preparao da biblioteca de clones do fago
Transferir alguns
fagos para filtros
de nitrocelulose
Fago
hbrido
Adicionar camada de
clulas de E. coli
Infeco de E. coli pelo fago
Filtros de nitrocelulose
Lise
Tratar filtros com

soluo alcalina para
lisar os fagos e
desnaturar o DNA
liberado
Placa
Camada de
bactrias
E. coli
Zona de lise
indicando clones
do fago
Figura 2.24
Protocolo usado para organizar bibliotecas de cDNA. (A)

RNA mensageiro isolado e feito seu cDNA, que em seguida transformado em dupla fita e adicionado de fragmentos
finais de restrio. (B) Os genes cDNA so inseridos em
vetores especialmente modificados, nesse caso, bacterifagos.
(C) Os fagos contendo o DNA recombinante lisaro E. coli
formando placas. Tcnicas bioqumicas podem distinguir placas de fagos recombinantes daquelas que no tm o gene inserido. (D) As placas so transferidas para papel de nitrocelulose e tratadas com lcali para lisar os fagos e desnaturar
DNA localmente. Esses filtros so ento incubados com sondas radioativas (usualmente cDNA) de um tecido. Para a
seleo da biblioteca diferencial de cDNA, discutida no texto,
a mesma biblioteca de fagos foi selecionada com sondas radioativas de dois tecidos diferentes, permitindo ao pesquisador
procurar por um mRNA encontrado em um tipo de tecido
mas no em outro.
Incubar com sonda radioativa

para endoderma
Incubar com sonda radioativa

para mesoderma e ectoderma
Sonda
radioativa
DNA de
fago de fita
nica ligado
ao filtro
Preparao dos
autoradiogramas
Clone de DNA representando o mRNA

encontrado no endoderma mas no no
mesoderma ou ectoderma
de mRNA do endoderma; portanto, representava um mRNA encontrado no endoderma

e no no mesoderma ou ectoderma. O fago contendo esse gene pode agora ser cultivado em grandes quantidades e caracterizado.
Tcnicas de localizao de RNA

Hibridizao In Situ
O processo de hibridizao in situ, desenvolvido por Mary Lou Pardue e Joseph
Gall (1970), permite ao pesquisador visualizar as posies de cidos nuclicos especficos dentro de clulas e tecidos. Se um clone especfico considerado interessante (por exemplo, o clone endoderma-especfico que foi mencionado) ele cultivado em
63
64
grandes quantidades, e o gene clonado isolado tratando o vetor recombinante com

enzimas de restrio. Esse transformado em fita nica e tornado radioativo. Quando o cDNA radioativo adicionado s clulas fixadas apropriadamente em lminas
de microscpio, o cDNA radioativo se liga unicamente onde est presente o mRNA
complementar. Aps eliminao do cDNA no fixado, a lmina coberta com uma
emulso fotogrfica transparente para auto-radiografia. As manchas resultantes,
diretamente acima de onde o cDNA radioativo foi ligado, parecem escuras quando
visualizadas diretamente, ou brancas quando vistas com iluminao em campo
escuro. Assim, pode-se visualizar aquelas clulas (ou mesmo regies dentro das
clulas) que acumularam um tipo especfico de mRNA. A Figura 2.25A,B mostra
hibridizao in situ usando o cDNA especfico para clulas endodrmicas. O cDNA
encontra mRNAs somente no endoderma da gstrula precoce do ourio-do-mar.
Continuando a gastrulao, o cDNA (e portanto o mRNA) se localiza de forma
ainda mais precisa entre a regio do intestino posterior e o intestino mdio no
tubo endodrmico.
Trabalhando com sondas radioativas e emulses, torna-se necessrio o uso de
seces microscpicas extremamente finas. Uma tcnica mais recente para hibridizao in situ utiliza sondas que ligam reagentes coloridos. Dessa maneira, cientistas
podem observar rgos inteiros (e organismos) sem seccion-los, e com uma viso de
amplas regies de expresso gnica. A Figura 2.25C mostra uma hibridizao in situ,
realizada em montagem integral, em um embrio de camundongo com 10.5 dias. A
sonda reconhece o mRNA codificado pelo gene Brachyury (discutido na pgina 40),
que sintetiza uma protena necessria para a produo de clulas mesodrmicas na
parte posterior do embrio de camundongo.
Transferncias Northern
Podemos tambm determinar a expresso temporal e espacial de RNAs executando
uma transferncia de RNA (freqentemente chamada transferncia Northern). Enquanto transferncias Southern transferem fragmentos de DNA do gel para o papel,
transferncias Northern (nome no se relaciona com o inventor) transferem RNA
entre os mesmos suportes e da mesma maneira. O pesquisador pode extrair RNAs
mensageiros do embrio em vrios estgios de desenvolvimento e submet-los
eletroforese lado a lado, em um gel. Aps transferncia dos RNAs separados para o
papel de nitrocelulose ou membrana de nylon, o conjunto incubado em uma soluo contendo um fragmento radioativo, mono-fita, de DNA de um determinado gene.
Esse DNA adere somente s regies onde est localizado o RNA complementar.
Assim, se o mRNA para aquele gene est presente em um determinado estgio
embrionrio, o DNA radioativo se liga a ele e pode ser detectado por auto-radiografia. Autoradiogramas desse tipo, onde vrios estgios so comparados simultaneamente, so denominados transferncias Northern de desenvolvimento. A Figura
2.26A mostra uma transferncia Northern de desenvolvimento para a expresso de
um gene endoderma-especfico durante o desenvolvimento do ourio-do-mar. Podemos ver que o mRNA para essa protena endodrmica inicialmente sintetizado
durante o estgio de blstula mesenquimatosa e continuamente durante todo o
resto do desenvolvimento. A transferncia Northern na Figura 2.26B mostra que a
acumulao desse mRNA no estgio de prisma restrita ao endoderma (Wessel et
al.,1989). Hibridizao in situ e transferncias Northern fornecem as melhores evidncias em favor da transcrio diferencial de RNA, no espao e no tempo. A transcrio de certos genes pode ser especfica para tecidos ou tempo.
A distribuio temporal na transcrio de vrios genes pode ser visualizada por
transferncia de mancha. Por exemplo, Sargent e Dawid (1983) isolaram da gstrula de
Xenopus um mRNA que no estava presente no ovo. Para isso eles extraram o mRNA
da gstrula e fizeram cpias cDNA dessas mensagens. Os cDNAs da gstrula foram
misturados com grandes quantidades de mRNA de ocitos. Se houvesse hibridizao
entre o mRNA dos ocitos e o cDNA da gstrula, significaria que o cDNA era derivado
65
(B)
(A)
(C)
Figura 2.25
Enzima
fosfatase
alcalina
Corante
(precipitado azul escuro)
Ncleo
Corante
Anticorpo
para biotina
Biotina
(incolor)
Sonda complementar a mRNA de Brachyury
tendo resduos de biotina em suas uridinas
mRNA de Brachyury
Hibridao in situ. (A,B) Fotomicrografias,

em fundo escuro, de hibridao in situ, mostrando a localizao de mRNA endodermaespecfico em embrio de ourio-do-mar. O
cDNA radioativo usado como sonda foi preparado do gene clonado, feito a partir de
mRNA endoderma-especfico (veja Figura
2.24). Esse cDNA radioativo se liga ao mRNA
do endoderma da gstrula precoce do ouriodo-mar (A) e ao endoderma do intestino mdio e posterior da gstrula tardia do ouriodo-mar (B). (C) Hibridizao in situ, em montagem integral, de um embrio de camundongo de 9.5-10.5 dias corado para mRNA de
Brachyury. Essa mensagem transcrita em
clulas formando novo mesoderma, e nesse
estgio encontrada na poro posterior do
embrio. Embries fixados foram incubados
em uma sonda para mRNA de Brachyury (a
fita antisense complementar ao mRNA) que
foi sintetizada usando uridina biotinilada.
Aps eliminar a parte da sonda que no se
ligou ao mRNA de Brachyury (e inativar qualquer atividade endgena de fosfatase alcalina
do embrio), o embrio foi tratado com anticorpos para biotina. Esses anticorpos foram
ligados s enzimas do tipo fosfatase alcalina.
Colorir para a presena de fosfatase alcalina
permite que se determine a localizao de um
mRNA especfico. Fotografias coloridas da
hibridizao in situ, em montagem integral,
esto nas Pranchas 22, 23 e 25. (A e B de
Wessel et al.,1989, cortesia de G. Wessel; C
do laboratrio do autor.)
66
(A)
Ovo
Clivagem
Blstula
Blstula
Mesenquimatosa
Blstula precoce
Blstula tardia
Prisma
Plteo
(B)
Ectoderma / mesoderma
Endoderma
Figura 2.26
Transferncia Northern para um gene especfico no endoderma do ourio-do-mar, Lytechinus variegatus. (A) Transferncia Northern
de desenvolvimento, mostrando acumulao
de mRNA de acordo com o estgio especfico
desse gene. mRNA total (10 g por estgio)
foi submetido eletroforese em gel de agarose.
O gel foi transferido para papel tratado e os
mRNAs aderidos ao papel, que foi em seguida
incubado com cDNA radioativo de um clone
endoderma-especfico. Mostrou-se que esse
mRNA sintetizado durante o estgio de blstula do mesnquima e aumentado ao longo do
desenvolvimento. (B) Transferncia Northern
no estgio de prisma, mostrando que o mRNA
est presente no endoderma (com algum mesoderma aderido) mas no no ectoderma. RNA
total do endoderma foi eletroforisado (pista 2)
prximo ao mRNA do resto do ourio-do-mar
(pista1). Ligao com cDNA radioativo detectou mRNA somente no endoderma. (de Wessel
et al., 1989, cortesia de G. Wessel.)
de um mRNA presente em ambos os estgios, ocito e gstrula. Essas molculas

hbridas com dupla fita foram removidas por filtrao, deixando uma populao de
cDNAs gstrula-especfico. Os cDNAs foram transformados na forma de dupla fita
(pela DNA polimerase) e inseridos em veculos de clonagem. Essa tcnica denominada de clonagem de subtrao. Como a seleo dupla de bibliotecas de cDNA, a
clonagem de subtrao gera um conjunto de clones estgio-especficos cujo mRNA
encontrado em alguns estgios, mas no em outros, ou em alguns tecidos mas no em
outros (Figura 2.27).
Sargent e Dawid usaram embries, dos estgios de zigoto a broto caudal do
girino e, separadamente, isolaram seus RNAs. Os RNAs foram aplicados diretamente (sem prvia eletroforese em gel) a filtros de nitrocelulose de modo que cada
filtro tinha RNAs de todos os estgios. Aps a fixao (calor) dos RNAs no filtro,
DNA de fita nica derivado de um especfico clone gastrular, foi marcado radioativamente e incubado com os filtros. Se um gene estava sendo transcrito em um
determinado estgio, o cDNA radioativo daquele gene encontraria seu complemento nos mRNAs daquele estgio, no filtro. Aps eliminaco do cDNA no ligado, a ligao do cDNA radioativo foi observado por auto-radiografia. A transferncia de manchas na Figura 2.28 mostra o esquema temporal de expresso para 17
genes que so ativos em vrios estgios da gastrulao. Nenhum deles expresso
antes da transio da blstula mediana em 7 horas. Alguns genes (DG64, DG39)
so expressos imediatamente depois, enquanto outros (DG72, DG81) comeam a
ser transcritos na gstrula mediana, aps aproximadamente 7 horas. Alguns genes
(DG76, DG81) so mantidos aps a ativao, enquanto a atividade de outros (DG56,
DG21) muito mais transitria.
Encontrando mensagens raras pela

reao da polimerase em cadeia
A reao da polimerase em cadeia (PCR) um mtodo de clonagem in vitro que pode
produzir enormes quantidades de um fragmento especfico de DNA a partir de uma
pequena quantidade de material de partida (Saiki et al.,1985). Esse mtodo pode ser
usado para clonar um gene especfico ou para determinar se um gene especfico est
ativamente transcrevendo RNA em um determinado rgo ou tipo de clula. O mtodo
padro de clonagem usa microorganismos vivos para amplificar o DNA recombinante.
PCR, no entanto, pode amplificar uma nica molcula de DNA por um fator de vrios
milhes em poucas horas e o faz em um tubo de ensaio. Essa tcnica tem sido extremamente til em casos onde a quantidade de cido nuclico para estudo muito pequena. Embries de camundongos, por exemplo, na fase de pr-implantao tm muito
pouco mRNA e no se pode obter milhes desses embries para estudo. Se fosse
necessrio saber se o embrio de camundongo na fase de pr-implantao contm o
mRNA para uma protena determinada, seria muito difcil descobrir usando os mtodos padro de clonagem. Entretanto, a tcnica do PCR permite encontrar essa mensagem com poucos embries, por amplificar especificamente somente aquela mensagem,
um milho de vezes (Rappolee et al., 1988).
O uso de PCR para encontrar mRNAs raros est ilustrado na Figura 2.29. Os
mRNAs de um grupo de clulas so purificados e convertidos a cDNA por transcriptase
reversa. Usando DNA polimerase e S1 nuclease, a populao de DNAs de fita nica
transformada em uma populao de fita dupla. Em seguida, escolhe-se um DNA para
ser amplificado. Para isso, separam-se as duplas hlices do DNA, s quais so adicionados dois pequenos oligonucleotdeos iniciadores que so complementares a
uma poro da mensagem procurada. Se os oligonucleotdeos reconhecem seqncias no DNA, ento o mRNA estava presente originalmente. Os oligonucleotdeos
foram preparados de forma a permitir uma hibridizao com fitas opostas e lados
opostos da seqncia alvo. (Se a tentativa isolar o gene ou mRNA para uma protena
especfica de seqncia conhecida, essas regies laterais podem ser preparadas,
cDNA de gstrula que

encontra mensagem
complementar em
mRNA de ocito
Extrair
mRNA
mRNA total
de ocito
Ocito
mRNA total
de gstrula
Gstrula
cDNA de gstrula sem

seqncia complementar
a mRNA de ocitos
Hibridizar
Fazer cDNA
de mRNA
Extrair
mRNA
DNA polimerase
S1 nuclease
cDNA de
gstrula
cDNA de dupla
fita especfico de gstrula
Figura 2.27
Clonagem de subtrao de genes de gstrula expressos diferencialmente em Xenopus laevis.

cDNA foi produzido para mensagens isoladas de gstrula e hibridizado com mRNA de ocitos.
Os cDNA de gstrula que no encontraram seqncias complementares nos mRNAs de
ocitos, eram produtos de genes ativos na gstrula mas no nos ocitos. Esses genes foram
clonados fazendo o cDNA de fita dupla e adicionando ligantes para permitir sua insero em
veculos de clonagem.
Adicionar ligantes
Colocar em veculo
de clonagem
Figura 2.28
Transferncias de mancha no desenvolvimento mostram os tempos em que 17 genes de Xenopus

esto transcrevendo ativamente. Acumulao especfica de mRNA no citoplasma registrada
embebendo mRNA total, de genes em estgios embrionrios, em papel de nitrocelulose e incubando a tira de papel com DNA radioativo derivado de um clone de cDNA especfico de
gstrula. Justapondo essas tiras, obtem-se um esquema temporal para a atividade de genes
especficos. A linha r5 representa um controle de RNA ribossmico que deve estar sempre
presente. (de Jamrich et al., 1985, cortesia de I. Dawid e M. Sargent.)
Blstula
Estgio
Clone
Horas aps a fertilizao
Gstrula
Nurula
67
Plasmdeo recombinante contendo DNA

para mRNA especfico
para gstrula
Broto de cauda
68
Finais da seqncia do polipeptdeo
RNAs que codificam

o amino terminal
(iniciador 1)
Primeiro ciclo
1 cpia
RNAs que codificam

o carboxi terminal
(iniciador 2)
RNA
iniciador 1
Aquecer a 95oC para

desnaturar DNA.
Esfriar a 37oC para
permitir hibridizao
dos iniciadores a DNA
DNA alvo
RNA
iniciador 2
Quando aquecido a 72o C, taq

polimerase estende fitas
complementares a partir dos
iniciadores
2 cpias
Primeiro ciclo de snteses

resulta em duas cpias da seqncia
alvo de DNA
Desnatura DNA
Segundo ciclo
Hibridiza
iniciadores
Estende novas
fitas de DNA
Segundo ciclo de
snteses resulta em
quatro cpias da
seqncia alvo de DNA
4 cpias
Figura 2.29
Protocolo para a reao de polimerase em cadeia (PCR). Para determinar se um tipo particular
de mRNA est presente, todo mRNA convertido a DNA de dupla fita pela transcriptase
reversa e DNA polimerase. Esse DNA desnaturado e dois conjuntos de iniciadores so
adicionados. Se a seqncia especfica estiver presente, os iniciadores se hibridizaro aos seus
terminais opostos. (Iniciadores especficos so produzidos com base na seqncia que se procura. Se conhecida apenas a seqncia da protena codificada pela mensagem, prepara-se um
conjunto de diferentes iniciadores, cada um possivelmente complementar ao DNA.) Usando
DNA polimerase termoestvel de T. aquaticus, cada fita de DNA sintetiza seu complemento.
Essas fitas so, por sua vez, desnaturadas e os iniciadores so hibridizados a elas, iniciando o
ciclo novamente. Dessa maneira, o nmero de fitas novas com a sequncia entre os dois
iniciadores aumenta exponencialmente.
sintetizando oligonucleotdeos que codificam o amino terminal da protena e

oligonucleotdeos complementares aqueles que codificam o carboxi terminal da protena). Os finais 3' desses iniciadores esto face a face de modo que a replicao
atravs do DNA alvo. Uma vez hibridizado o primeiro iniciador, a DNA polimerase
pode sintetizar uma nova fita.
Essa enzima no a DNA polimerase normal de E. coli; uma polimerase de

bactrias como Thermus aquaticus ou Thermococcus litoralis. Essas bactrias vivem
em fontes de gua quente (como aquelas do Yellowstone National Park) ou nos respiradouros trmicos de submarinos, onde a temperatura atinge valores prximos de
900C. Essas DNA polimerases podem suportar temperaturas prximas ebulio e o
PCR se utiliza dessa adaptao evolucionria. Uma vez sintetizada a segunda fita, ela
separada de seu complemento por desnaturao em alta temperatura. O segundo
iniciador adicionado e agora ambas as fitas podem sintetizar novo DNA. Sucessivos
ciclos de desnaturao e sntese amplificaro essa regio do DNA de forma geomtrica. Aps vinte turnos, aquela regio especfica estar amplificada 220 vezes (um pouco
mais de um milho). Quando submetido eletroforese esse fragmento amplificado
facilmente detectado. Isso mostra que o mRNA original com essa seqncia estava
presente na amostra. (A confirmao poderia ser feita por transferncia Southern,
como na Figura 2.30). Alm disso, pode-se usar essas cpias amplificadas para clonagem, colocando-as em vetores de clonagem.
69
Ovrio de rato
Rim de camundongo
Salivares de camundongo
Pncreas de camundongo
Pulmo de camundongo
Sem adio de DNA
Tcnicas de insero de DNA novo em uma clula

Apesar de ser importante conhecer a seqncia de um gene e seu esquema temporoespacial de expresso, o que realmente crucial conhecer a funo daquele gene
no desenvolvimento. Tcnicas recentes permitem estudar a funo do gene, tirando
e repondo certos genes de clulas embrionrias. Pedaos de DNA clonados podem
ser modificados (se desejado), e colocados em clulas por vrios meios. Uma tcnica muito direta a microinjeo, na qual uma soluo contendo o gene clonado
cuidadosamente injetada no ncleo da clula (Capecchi, 1980). Essa uma tcnica
especialmente til para injetar genes em ovos recentemente fertilizados, pois os
ncleo haplides do espermatozide e do vulo so relativamente grandes (Figura
2.31). Em transfeco, o DNA incorporado diretamente na clula por incubao em
uma soluo determinada onde a clula o incorpora. A probabilidade de incorporao de tal fragmento de DNA no cromossomo relativamente pequena, sendo necessrio misturar o DNA com outro gene que permite a sobrevivncia das raras
clulas que o incorporaram, em condies de cultura onde as outras clulas so
destrudas (Perucho et al.,1980; Robins et al.,1981).
Outra tcnica a eletroporao, onde pulsos de alta voltagem empurram o DNA
para dentro da clula. Um mtodo mais natural para introduzir genes na clula
colocar o gene clonado em um elemento transponvel ou vetor retroviral. Esses so
regies mveis de DNA, de ocorrncia natural, que podem ser integrados no genoma.
Retrovrus so vrus contendo RNA. Dentro da clula hospedeira eles produzem uma
cpia de seu DNA (usando sua prpria transcriptase reversa); a cpia se transforma
em dupla fita e se integra em um cromossomo do hospedeiro. A integrao consumada devido s duas seqncias idnticas (longas repeties terminais) nos terminais
do DNA retroviral. Vetores retrovirais so produzidos removendo os genes do
empacotamento viral (necessrios para a sada dos vrus da clula) do centro de um
retrovrus de camundongo. Essa extrao cria um stio vazio onde outros genes podem ser colocados. Usando enzimas de restrio apropriadas, o pesquisador pode
remover genes de um fago ou plasmdeo clonado e reinserir o gene em vetores retrovirais.
Retrovetores virais infectam clulas de camundongo com eficincia prxima de 100%.
Em Drosophila, novos genes podem ser introduzidos na mosca, via elementos P.
Essas seqncias de DNA, so elementos transponveis de ocorrncia natural que
podem ser integrados como vrus em qualquer regio do genoma da Drosophila.
Ainda mais, eles podem ser isolados, e genes clonados inseridos no centro do elemento P. Quando o elemento P recombinado injetado em um ocito de Drosophila, ele
pode se integrar ao DNA e prover o embrio de um novo gene (Spradling e Rubin, 1982).
Evidncia fornecida por PCR, para a sntese

de um fator de crescimento, activina, de rgos embrionrios de camundongo. O mRNA
desses rgos foi convertido em DNA e amplificado atravs de 20 ciclos de replicao.
O DNA foi submetido sucessivamente eletroforese e transferncia Southern usando uma
sonda radioativa para uma parte do gene de
activina. mRNA de activina foi encontrado
no ovrio do camundongo adulto (como esperado) e tambm em vrios rgos embrionrios. A possvel funo de activina nesses
orgos ser discutida no Captulo 17. (Cortesia de O. Ritvos.)
Embrio de 14 dias
Rim de camundongo
Figura 2.30
Determinando a funo do gene:

clulas e organismos transgnicos
Adulto
Ovrio de camundongo
70
Figura 2.31
Injeo de DNA (de genes clonados) em um

ncleo (neste caso, um proncleo de um ovo
de camundongo). (de Wagner et al.,1981, cortesia de T. E. Wagner.)
Camundongos quimricos
As tcnicas descritas tm sido usadas recentemente para transferir genes para todas as clulas do embrio de camundongo (Figura 2.32). Durante o desenvolvimento do camundongo existe um estgio onde somente esto presentes dois tipos de
clulas: as clulas externas, que formaro a poro fetal da placenta, e as clulas
internas, que daro origem ao prprio embrio. Essas clulas internas so chamadas
clulas embrionrias precursoras (clulas tronco), porque cada uma delas pode,
se isolada, gerar todas as clulas do embrio (Gardner, 1968; Moustafa e Brinster,
1972). Essas clulas podem ser isoladas do embrio de um camundongo e cultivadas. Uma vez em cultura, elas podem ser tratadas como descrito, de modo a incorporar novo DNA. A nova clula embrionria precursora (no somente o DNA, mas a
clula inteira) pode ser injetada em outro embrio de camundongo em fase precoce.
Assim, a clula precursora tratada estar integrada no embrio do hospedeiro. O
resultado um camundongo quimrico*. Algumas de suas clulas so derivadas
das clulas embrionrias precursoras do hospedeiro, mas outra poro de clulas
derivada tambm das clulas precursoras tratadas. Se as clulas tratadas se tornaram parte da linha germinal do camundongo, alguns dos seus gametas sero derivados da clula doadora. Quando cruzado com um camundongo do tipo selvagem,
alguns de seus descendentes levaro, portanto, uma cpia do gene inserido. Os
descendentes heterozigotos, no acasalamento produziro 25% de embries carregando duas cpias do gene inserido em cada clula de seu corpo (Gossler et al.,1986).
Assim, em trs geraes o camundongo quimrico, o camundongo heterozigoto
e o camundongo homozigoto um gene que foi clonado de um outro indivduo,
est agora presente em ambas as cpias dos cromossomos dentro do genoma do
camundongo. Camundongos com genes estveis de outros indivduos so chamados camundongos transgnicos. Essas linhagens tm sido particularmente teis na
determinao das funes de regies reguladoras que ladeiam os genes.
Experimentos com genes com endereamento
(Gene targeting ou Knockout)
A anlise de embries precoces de mamferos foi durante muito tempo prejudicada
pela dificuldade em criar e selecionar mutaes que afetam a fase inicial do desenvolvimento embrionrio. Esse problema foi superado pela tcnica chamada de
endereamento de genes (s vezes, chamada de Knockout). As tcnicas so similares quelas que produzem camundongos transgnicos, mas em lugar de adicionar
genes, enderear genes significa trocar alelos do tipo selvagem por outros mutados.
Chisaka e Capecchi (1991) usaram essa tcnica para estudar a funo do gene Hoxa3 no desenvolvimento do camundongo. Hoxa-3 semelhante a vrios genes de
Drosophila que so conhecidos como controladores da expresso gnica de segmentos especficos no embrio precoce; a protena codificada por Hoxa-3 liga-se ao
DNA, exatamente como sua correspondente na Drosophila. Seria possvel que Hoxa3 de maneira similar estaria regulando a expresso gnica espao-especfica nos
mamferos? Chisaka e Capecchi isolaram o gene Hoxa-3, cortaram-no com uma enzima
de restrio e inseriram nesse stio um gene para resistncia neomicina (Figura
2.33). Em outras palavras, eles mutaram o gene Hoxa-3 pela insero de um grande
pedao de DNA que continha um gene resistente neomicina, destruindo a habilidade da protena Hoxa-3 em se ligar a DNA. Esses genes mutantes Hoxa-3 foram
eletroporados em clulas embrionrias precursoras que eram sensveis neomicina.
* crtico notar a diferena entre uma quimera e um hbrido. Um hbrido resulta da unio de dois
genomas diferentes dentro da mesma clula: o descendente de um genitor de gentipo AA e outro de
gentipo aa um hbrido Aa. Uma quimera resulta quando clulas de constituio gentica diferente
aparecem no mesmo organismo. O termo apto: refere-se a um monstro mitolgico com cabea de
leo, corpo de bode e cauda de serpente.
71
Clulas embrionrias
precursoras
Trofoblasto
Microinjetar
clulas precursoras
transgnicas no
embrio hospedeiro
Cultura de clulas
embrionrias precursoras
Gene clonado
no vetor
Mistura de clulas
com o gene clonado
Integrao das clulas

no hospedeiro
Seleo de clulas
que incorporaram o transgene
Injetar no
tero
Camundongos
quimricos
Figura 2.32
Camundongos
transgnicos
heterozigotos
Camundongos
transgnicos
homozigotos
Uma vez dentro do ncleo dessas clulas, o gene Hoxa-3 mutado substituiu um
alelo normal desse gene por um processo chamado recombinao homloga. Aqui,
as enzimas envolvidas no reparo de DNA e replicao incorporam o gene mutante
em lugar da cpia normal. Esse um evento raro, mas tais clulas podem ser
selecionadas cultivando as clulas precursoras em neomicina. A maioria das clulas
morre com a droga, mas aquelas que adquiriram resistncia pelo gene incorporado
sobrevivem. As clulas resultantes tm um gene Hoxa-3 normal e um Hoxa-3 mutado.
As clulas precursoras heterozigotas so microinjetadas em um blastcito de camundongo e se integram nas clulas do embrio. O camundongo resultante uma
quimera composta de clulas do tipo selvagem do embrio hospedeiro e de clulas
heterozigotas Hoxa-3, das clulas precursoras. As quimeras so acasaladas com
camundongos do tipo selvagem e se algumas das clulas doadoras se integraram
linhagem das clulas germinativas, alguns dos descendentes sero heterozigotos
Produo de camundongos transgnicos. Clulas embrionrias precursoras de um camundongo so cultivadas e o genoma alterado pela
adio de um gene clonado. As clulas
transgnicas so selecionadas e injetadas em
um embrio hospedeiro de camundongo na sua
fase precoce. Aqui, as clulas embrionrias
precursoras transgnicas se integram s celulas
precursoras do hospedeiro. Esse embrio
colocado no tero de um camundongo fmea
grvida e se desenvolve em um camundongo
quimrico. Se as clulas precursoras doadoras
contriburam para a linha germinativa, e o camundongo quimrico cruzado com um do
tipo selvagem, parte dos descendentes sero
heterozigotos ao alelo adicionado. Cruzando
heterozigotos, pode ser gerada uma linhagem
de camundongos que homozigota ao alelo
adicionado. Essa seria uma linhagem transgnica. O gene adicionado (o transgene) pode
ser de qualquer fonte eucaritica.
72
(A)
Massa
celular
interna
neo r
Blastcito
Cultura de clulas
embrionrias
precursoras (ES)
Recombinao
homloga
Eletroporao
Clula
precursora
embrionria
(B)
gene Hoxa-3
Endonucleases
de restrio
Hoxa-3
gene Hoxa-3 mutado

com o gene neor inserido
gene neor
Figura 2.33
Tcnica de endereamento de genes (gene targeting). Nesse caso o gene alvo o

Hoxa-3. (A) Clulas embrionrias precursoras (ES) so cultivadas a partir de uma
massa celular interna. (B) Os genes Hoxa-3 clonados so cortados com uma enzima
de restrio, e um gene neomicina-resistente inserido na regio que codifica o stio
de ligao da protena ao DNA. Esses genes Hoxa-3 mutantes so eletroporados em
clulas ES, onde recombinao homloga troca o gene do tipo selvagem pela cpia
mutada. As clulas so selecionadas pela sua resistncia neomicina. (C) As clulas
ES heterozigotas selecionadas so inseridas na massa interna de clulas de um embrio do tipo selvagem, e o blastcito retornado ao tero. O camundongo resultante
uma quimera composta de tecidos Hoxa-3 heterozigotos e tecidos Hoxa-3 do tipo
selvagem. Cruzando os animais quimricos com camundongos do tipo selvagem
produz-se descendentes Hoxa-3 heterozigotos se as clulas ES contriburam na
linhagem germinativa. Os animais heterozigotos podem ser cruzados entre si, e
aproximadamente 25% de sua cria deve ser de homozigotos mutantes de Hoxa-3.
Seleo de clulas ES
heterozigotas por sua
resistncia neomicna
Injeo de clulas ES
heterozigotas no
blastcito
(C)
Injeo dos
blastcitos no tero
Produo de
camundongos quimricos
Heterozigotos
Cruzamento de
quimricos com
tipo selvagem
Cruzamento de
camundongos
heterozigotos
Hoxa-3/ Hoxa-3+
Heterozigotos
Hoxa-3/ Hoxa-3
Homozigoto
para o gene Hoxa-3. Os animais heterozigotos podem ser cruzados entre si, e aproximadamente 25% de seus descendentes devem levar duas cpias do gene mutado
Hoxa-3. Esses camundongos mutantes homozigotos no possuem as glndulas
tireide, paratireide e timo! Dessa maneira, endereando genes pode-se analisar as
funes de determinados genes durante o desenvolvimento de mamferos.
[gene7.html]
73
Determinando a funo de uma mensagem:

RNA antisense
Outro mtodo para determinar a funo de um gene fazer cpias antisense de sua
mensagem. Mensagens antisense podem ser produzidas usando cDNA clonado e
fazendo sua reclonagem em reverso, prximo a um vigoroso promotor bacteriano, em
outro vetor. O promotor bacteriano iniciar a transcrio da mensagem na direo
errada quando for incubado com RNA polimerase e nucleosdeos trifosfato. Dessa
maneira, sintetizado um transcrito que complementar aquele natural (Figura 2.34A).
O transcrito complementar chamado RNA antisense porque o reverso da mensagem original. Quando grandes quantidades de RNA antisense so injetadas ou
transfectadas em clulas contendo o mRNA normal desse gene, o RNA antisense se
liga mensagem normal; o cido nuclico dupla-fita resultante degradado (enzimas
do citoplasma das clulas digerem cidos nuclicos de fita dupla). Isso causa uma
depleo funcional da mensagem, como se houvesse uma mutao eliminatria para
aquele gene.
Esses resultados foram confirmados quando RNA antisense foi produzido a partir
do gene Krppel de Drosophila. Krppel crtico para a formao do trax e do
abdmen da mosca. Se esse gene est ausente, as larvas da mosca morrem pela falta
dos segmentos torcico e abdominal anterior (Figura 2.34B); uma situao semelhante
criada quando grandes quantidades de RNA antisense contra a mensagem Krppel
so injetados em embries precoces da mosca (Rosenberg et al.,1985). RNA antisense
permite ao biologista do desenvolvimento determinar a funo dos genes durante o
desenvolvimento e analisar a ao dos genes em animais; de outra forma isso seria
inacessvel anlise gentica.
Reinvestigao de velhos problemas com novos mtodos

A unio da embriologia com a biologia molecular est permitindo ao biologista do
desenvolvimento uma nova apreciao de como trabalham os genes na construo de
um organismo. Estamos em meio uma revoluo nos nossos conhecimentos sobre
desenvolvimento, e um dos maiores sucessos resultantes de clonagens e
seqenciamentos a nova anatomia do gene eucarioto. Descreveremos a estrutura
do gene com mais detalhe no Captulo 10, mas importante ressaltar que os genes
eucariotos que codificam protenas tm vrios stios regulatrios (Figura 2.35). Um
stio, o promotor, est localizado diretamente a montante do gene (antes do incio) e
(A)
(B)
T3
promotor
T3 RNA
polimerase
Embrio normal
T7 RNA
polimerase
mRNA
antisense
Krppel
Embrio mutante Krppel
T7
promotor
mRNA de consenso
(sense) Krppel
Embrio normal
infectado com RNA
antisense Krppel
Figura 2.34
Produco de RNA antisense para examinar a

funo dos genes no desenvolvimento. (A)
Produo da mensagem antisense (neste caso,
ao gene Krppel da Drosophila) colocando o
fragmento de cDNA clonado para a mensagem
Krppel entre dois vigorosos promotores. Os
promotores esto em orientao oposta com
respeito ao cDNA do Krppel. Nesse caso, o
promotor T3 est em orientao normal e o
promotor T7 est revertido. Os promotores
reconhecem RNA polimerases diferentes (dos
bacterifagos T3 e T7, respectivamente). T3
polimerase permite a transcrio de mRNA de
consenso, ao passo que T7 polimerase produz transcritos antisense. (B) Resultado da
injeo da mensagem Krppel antisense em um
embrio precoce (estgio blastodrmico
sincicial) de Drosophila antes que a mensagem Krppel seja produzida. A figura central
um embrio do tipo selvagem pouco antes de
eclodir. Acima est o mutante causado pela
falta do genes Krppel. Abaixo est o embrio
do tipo selvagem, injetado com a mensagem
Krppel antisense no estgio embrionrio precoce. Ambos os embries, mutante e o tratado
com antisense, no possuem os segmentos
torcico e abdominal anterior. (B, de acordo
com Rosenberg et al., 1985.)
74
o stio onde se liga a RNA polimerase. Localizada em algum lugar dentro do gene (a
jusante ou a montante, ou ainda em um ntron dentro do gene), est uma segunda
regio chamada intensificadora. Fatores proticos que se ligam ao intensificador permitem sua interao com o promotor e, conseqentemente, com a transcrio do gene
pela RNA polimerase. Alguns promotores (como aqueles usados por produtos relacionados ao metabolismo geral da clula) no precisam ser ativados por intensificadores, mas a maioria dos genes ligados ao desenvolvimento so ativados em tempos e
clulas especficos. Esses genes precisam ser ativados por fatores que se ligam ao
intensificador e ao promotor. Como veremos no Captulo 10, a ligao de diferentes
fatores de transcrio aos promotores e intensificadores de genes especficos um
dos mecanismos que controlam a produo de protenas diferentes a partir de genomas
idnticos. Um exemplo a ativao do gene para ZP3.
Como detalharemos no Captulo 4, ZP3 a principal protena ligante de espermatozide na superfcie do vulo de camundongo. uma glicoprotena sintetisada pelo
ocito durante sua maturao em vulo (Roller et al.,1989). Uma transferncia Northern
mostra que o mRNA para essa protena sintetizado somente em ocitos em crescimento e no pode ser detectado em nenhum outro tipo de clula (Figura 2.36). O que
permite a esse gene ser ativado somente nos ocitos? Lira e colaboradores (1990)
isolaram o gene para ZP3, determinaram sua seqncia e encontraram um stio promotor, 28 pares de bases a montante do stio onde a transcrio do gene iniciada. Como
hiptese, consideraram que seqncias responsveis por ativao ocito-especfica
podem existir at mais longe, a montante do gene. Eles usaram enzimas de restrio
para isolar o DNA da regio 5', a montante, (com 150 pares de bases) e o fundiram ao
gene para a luciferinase de vaga-lume. (No necessrio dizer que essa enzima produtora de luz no encontrada em camundongos. Est sendo usada aqui como um gene
reprter para monitorar onde o DNA a montante pode causar sua expresso.) O gene
recm-construdo, contendo a regio a montante do gene ZP3 ligada ao gene estrutural para luciferinase, foi injetado em zigotos de camundongo para criar animais
transgnicos, levando em cada ncleo o gene luciferinase com a regio regulatria
ZP3. Em camundongos transgnicos fmeas, a hibridizao in situ localizou mRNA de
luciferinase em um nico tipo de clula, o ocito (Figura 2.37). Assim, a seqncia de
DNA com 150 pares de bases foi necessria e suficiente para ativar o gene (qualquer
gene!) no ocito. Dentro dessa regio de 150 pares de bases (de 99 a 86 pares de bases
a montante do gene estrutural ZP3) existe a seqncia 5-GATAA-3' que liga uma
protena chamada OSP-1. OSP-1 encontrada somente em ocitos em maturao; ela
ativa o gene ZP3 ligando-se a essa sequncia de DNA no promotor. Parece, ento, que
ZP3 sintetizado em ocitos porque eles tm a protena OSP-1 que se liga a certas
seqncias de DNA que so parte de seu promotor (Schickler et al.,1992). No momento, est sendo investigado como regulado o gene codificador de OSP-1.
Figura 2.35
Estrutura bsica de um gene regulado pelo desenvolvimento. O promotor da maioria dos

genes codificadores de protenas encontrado
no terminal 5' (a montante) do gene. O intensificador freqentemente est mais acima, a montante, mas pode ser encontrado dentro de um
ntron ou no terminal 3'. Protenas que se ligam ao promotor e aos intensificadores
interagem para regular a transcrio do gene.
(No exemplo ZP3, o stio OSP-1, GATAA,
est localizado no promotor, aproximadamente 95 pares de bases a montante do stio de
incio da transcrio. Um stio intensificador
sensvel a estrognios encontrado no primeiro ntron do gene ZP3.)
Intensificador
Promotor
xon
ntron
Intensificador
a montante
do gene
xon ntron xon
Intensificador
a jusante
do gene
Figura 2.36
Transferncia Northern de RNA de ZP3 acumulado no camundongo. RNA de vrios tecidos

(10g por pista) e ocitos (125ng) foram submetidos eletroforese e transferidos para papel de
nitrocelulose. Um fragmento radioativamente marcado do gene ZP3 foi usado como sonda do
mRNA. A mensagem ZP3 foi encontrada somente no ovrio, especialmente dentro dos ocitos.
(de Roller et al.,1989, cortesia de P. Wassarman).
Ocito
Ovrio
Crebro
Embrio de 13 dias
Corao
Intestino
Uma concluso e um alerta
Rim
Depois de quase um sculo, estamos comeando a entender como as clulas regulam

a expresso diferenciada de seus genes, permitindo que genes diferentes possam se
tornar ativos em diferentes clulas. Esse conhecimento est ajudando a explicar como
a informao herdada utilizada para construir os planos bsicos do corpo e os tipos
especficos de clulas do organismo em desenvolvimento.
Entretanto, uma palavra de alerta. Caso o tom celebratrio deste captulo deixou a
impresso de que desenvolvimento somente uma funo da atividade gnica
necessrio relembrar do Captulo 1, que a distino entre talo e esporo (Dictyostelium), estado amebide e flagelado (Naegleria) e gondios sexual e assexual (Volvox)
determinada pelo ambiente. Em captulos posteriores (especialmente Captulo 21),
veremos outros exemplos do controle ambiental do desenvolvimento: determinao
de sexo temperatura-dependente em rpteis, desenvolvimento em insetos dependente
da dieta, e a diferenciao, dependente de experincia, dos neurnios e linfcitos em
mamferos. Nesses casos o organismo herda a habilidade para responder aos sinais
do ambiente, mas no possvel predizer o fentipo a partir do gentipo.
Msculo
(A)
Fgado
(B)
Figura 2.37
Hibridizao in situ da expresso do gene reprter luciferinase, quando luciferinase foi

ligado ao promotor do gene ZP3. A sonda radioativa era dirigida mensagem luciferinase,
a qual apareceu onde foi expressa sob a direo do promotor de ZP3. (A) Viso do
ovrio inteiro (60x). (B) Magnificao (160x) de dois folculos ovarianos contendo
ocitos em maturao. (de Lira et al., 1990, cortesia de P. Wassarman.)
Testculos
tero
75
76
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A base celular da morfognese:

Mas a natureza no atomizada. Sua padronizao inerente e primria, e a ordem

subjacente beleza nela demonstrada; mais
ainda, a natureza s pode ser percebida pela
mente humana, porque ela mesmo parte
integrante e majoritria daquela ordem.
Paul Weiss (1960)
Eu fui criado terrivelmente e maravilhosamente. Salmo 139 (ca. 500 a.c).
m corpo no meramente uma coleo de tipos de clulas distribudas ao

acaso. Desenvolvimento envolve no s a diferenciao celular, mas tambm sua morfognese em arranjos multicelulares tais como tecidos e rgos.
Quando observamos a anatomia detalhada de um tecido como a retina neural, vemos
um arranjo preciso e intrincado de muitos tipos diferentes de clulas. Neste Captulo,
introduziremos as vias de mudana pelas quais as clulas do embrio em desenvolvimento criam rgos funcionais do corpo. Existem quatro questes majoritrias participando do arcabouo de discusses sobre morfognese:
Como se formam tecidos a partir de clulas? De que modo clulas da retina
neural aderem a outras clulas da retina neural e no se associam s celulas da
retina pigmentada ou da ris que esto prximas a elas? De que modo, os vrios
tipos de clulas presentes na retina neural (as trs camadas distintas de fotoreceptores, neurnios bipolares e clulas ganglionares) esto organizados para
permitir que a retina seja funcional?
Como so os rgos construdos a partir de tecidos? As clulas retinais do
olho esto situadas atrs da crnea e da lente a uma distncia exata. A retina
seria intil se estivesse situada atrs de um osso ou outro lugar qualquer, onde
a lente no pudesse nela focalizar os raios de luz. Alm disso, os neurnios da
retina devem penetrar no crebro para inervar as regies do crtex cerebral que
analisam a informao visual. Todas essas conexes devem estar precisamente
ordenadas.
Como clulas migrantes atingem seu destino, e como se formam rgos em
determinados locais? Olhos se desenvolvem na cabea, mas em nenhum outro lugar. O que impede a formao de um olho em outras partes do corpo, se
todas as clulas tm o mesmo potencial gentico? Em alguns casos, como o de
precursores de nossas clulas pigmentadas, clulas germinativas e glndula
supra-renal, as clulas devem percorrer longas distncias para alcanar seu
destino final. Como as clulas so instrudas para percorrer certas rotas e parar
quando atingem uma regio especfica do corpo?
Como crescem rgos e suas clulas, e como esse crescimento coordenado
ao longo do desenvolvimento? As clulas do olho devem crescer juntas, e as
clulas da retina raramente dividem-se aps o nascimento. Nosso intestino,
entretanto, est constantemente descartando clulas e regenerando outras, e
79
80
ainda assim, sua velocidade mittica cuidadosamente controlada. Se mais

clulas fossem regeneradas do que aquelas descartadas, seriam produzidos
crescimentos cancerosos. Se o nmero de clulas regeneradas fosse menor, o
intestino no poderia digerir o alimento. O que controla essas diferenas na
velocidade de crescimento?
Todas essas perguntas se referem a aspectos do comportamento celular. Existem
dois grupos principais de clulas no embrio: clulas epiteliais, fortemente ligadas
umas s outras em camadas ou tubos, e as clulas mesenquimatosas, isoladas e
funcionando como unidades individuais. A morfognese nessas duas classes de clulas se d atravs de um limitado repertrio de processos celulares: (1) direo e nmero de divises celulares; (2) mudanas na forma das clulas; (3) movimento celular; (4)
crescimento celular; (5) morte celular; e (6) mudanas na composio da membrana
celular e da matriz extracelular. A maneira pela qual esses processos se completam
pode diferenciar entre clulas epiteliais e mesenquimatosas (Figura 3.1).
Parecem existir duas vias principais pelas quais clulas se comunicam umas com as
outras para que se efetue a morfognese. A primeira atravs de substncias difusveis
que so sintetizadas por um tipo de clula e que mudam o comportamento de outros
tipos celulares. Essas substncias incluem hormnios, fatores de crescimento e
morfgenos; cada um ser detalhado em captulos subseqentes. O segundo mtodo
involve contato entre superfcies de clulas adjacentes. Clulas podem seletivamente
reconhecer outras, aderindo a algumas clulas ou migrando sobre outras. Os eventos
moleculares que intermediam o reconhecimento seletivo de clulas e sua transformao em tecidos e rgos, ocorrem na superfcie celular. Enquanto o paradigma dominante na gentica do desenvolvimento a expresso diferencial do gene, o paradigma
dominante na morfognese envolve afinidade celular diferencial. Essas afinidades
podem ser para superfcies de outras clulas ou para molculas da matriz extracelular
secretadas pelas clulas. Neste captulo veremos como superfcies de clulas adjacentes interagem durante o desenvolvimento, visando localizar as clulas em stios apropriados dentro de tecidos e rgos.

Assim como a demonstrao da importncia dos genes no desenvolvimento gerou
desentendimentos entre pesquisadores, tambm se desenvolveu um debate sobre o
papel da superfcie celular na formao do embrio. A superfcie celular parece a mesma em todos tipos de clulas, e muitos pesquisadores mais antigos pensavam at que
a superfcie celular no era uma parte vital da clula. Observaes sobre fecundao e
desenvolvimento embrionrio precoce feitas por E. E. Just (1939) sugeriam que a
superfcie celular diferia em tipos diferentes de clulas, mas a anlise moderna da
morfognese se inicia com os experimentos de Townes e Holtfreter em 1955. Considerando a descoberta de que tecidos de anfbios se dissociavam em clulas isoladas
quando colocados em solues alcalinas, eles prepararam suspenses de clulas
isoladas provenientes de cada uma das trs camadas germinativas dos anfbios, logo
aps a formao do tubo neural. Duas ou mais dessas suspenses de clulas isoladas
poderiam ser combinadas de vrias maneiras, e quando o pH era normalizado, as
clulas aderiam umas s outras, formando agregados em placas de Petri cobertas com
agr. Usando embries de espcies que tinham clulas de diferentes tamanhos e cores, Townes e Holtfreter conseguiram observar o comportamento das clulas
recombinadas (Figura 3.2).
Figura 3.1
Sumrio dos principais processos morfogenticos em clulas mesenquimatosas e epiteliais
PROCESSO
AO
MORFOLOGIA
EXEMPLO
CLULAS MESENQUIMATOSAS
Condensao
cartilagem
Mesnquima se
torna epitlio
Mesquina da
cartilagem
Diviso
celular
Mitose para produzir

mais clulas (hiperplasia)
Mesnquima
dos membros
Morte
celular
Clula morre
Mesnquima
interdigital
Migrao
Clula se move em tempos

e lugares determinados
Mesnquima
do corao
Secreo de
matriz e degradao
Sntese ou remoo da
camada extracelular
Mesnquima
da cartilagem
Crescimento
Clulas ficam
maiores (hipertrofia)
Clulas
gordurosas
CLULAS EPITELIAIS
Disperso
Epitlio
mesnquima
(estrutura inteira)
Degenerao do
ducto Mlleriano
Delaminao
Epitlio
mesnquima
(parte da estrutura)
Hipoblastos de
de galinha
Mudana de
forma ou crescimento
Clulas permanecem ligadas

com alterao da morfologia
Neurulao
Migrao celular
(intercalao)
Linhas do epitlio se fundem

para formar menos linhas
Gastrulao
de vertebrados
Diviso celular
Mitose dentro da linha ou

outra direo
Gastrulao de
vertebrados
Secreo de matriz
e degradao
Sntese ou remoo da
camada extracelular
Formao de
rgos vertebrados
Migrao
Formao de bordas
livres
Ectoderma de
galinha
82
Clulas epidrmicas
presuntivas
Dissociao
de clulas
Reagregao
espontnea
Segregao de
tipos de clulas
Clulas da placa neural

Seo atravs da bola de
clulas segregadas
Figura 3.2
Reagregao de clulas da nurula de anfbios. Clulas epidrmicas presuntivas de embries pigmentados e clulas da placa neural
de embries no pigmentados so dissociadas
e misturadas entre si. As clulas reagrupamse de tal forma que um tipo (aqui, a epiderme
presuntiva) cobre o outro. (Modificado de
Townes e Holtfreter, 1955.)
Os resultados de seus experimentos foram surpreendentes. Em primeiro lugar,

verificaram que clulas reagregadas se tornavam espacialmente segregadas. Ou seja,
em lugar de permanecerem misturadas, cada tipo de clula se posicionava em sua
prpria regio. Assim, quando clulas epidrmicas (ectodrmicas) e mesodrmicas
foram ajuntadas para formar um agregado misto, as clulas epidrmicas foram encontradas na periferia do agregado e as clulas mesodrmicas no seu interior. Em nenhum
caso as clulas permaneceram misturadas ao acaso, e na maioria dos casos, um tipo de
tecido envolvia o outro completamente.
Em segundo lugar, os pesquisadores observaram que as posies finais das clulas reagregadas refletiam suas posies embrinicas. O mesoderma migra centralmente epiderme, aderindo sua superfcie interna (Figura 3.3A). O mesoderma tambm
migra centralmente em relao ao intestino ou endoderma (Figura 3.3B). Entretanto,
quando as trs camadas germinativas so misturadas entre si, o endoderma se separa
do ectoderma e mesoderma e ento envolvido por eles (Figura 3.3C). Na sua configurao final, o ectoderma est na periferia, o endoderma interno e o mesoderma se
situa na regio entre eles. Holtfreter interpretou esse fato em termos de afinidade
seletiva. A superfcie interna do ectoderma tem uma afinidade positiva pelas clulas
mesodrmicas e uma afinidade negativa para o endoderma, enquanto o mesoderma
tem afinidades positivas para ambas as clulas, ectodrmicas e endodrmicas. A
mimetizao da estrutura embrionria normal por agregados celulares tambm pode
ser vista na recombinao de clulas da epiderme e da placa neural (Figura 3.3D). As
clulas epidrmicas presuntivas migram para a periferia, como antes; as clulas da
placa neural migram para o centro, formando uma estrutura reminescente do tubo
neural. Quando clulas axiais mesodrmicas (notocorda) so adicionadas suspenso de clulas presuntivas, epidrmicas e neurais, a segregao celular resulta em uma
camada epidrmica externa, um tecido neural localizado centralmente, e uma camada
de tecido mesodrmico entre eles (Figura 3.3E). De alguma maneira, as clulas tm a
capacidade de distribuirem-se em suas prprias posies embriolgicas.
Tais afinidades preferenciais foram tambm observadas por Boucaut (1974),
que injetou clulas individuais de especficas camadas germinativas de volta na
cavidade gastrular de anfbio. Ele verificou que essas clulas migram para sua
camada germinativa apropriada. Clulas endodrmicas encontram posies no
endoderma do hospedeiro, enquanto que clulas ectodrmicas se localizam em seu
83
CAPTULO 3 A base celular da morfognese
Epiderme
+
mesoderma
Epiderme
Mesoderma
+
endoderma
Endoderma
Mesoderma
Mesoderma
Mesoderma
(A)
Epiderme
+
Mesoderma
+
endoderma
Epiderme
Endoderma
(B)
Placa neural
+
epiderme
Epiderme
Placa
neural
(C)
Placa neural
+
Mesoderma axial
+
epiderme
Mesoderma
Epiderme
(D)
Placa
neural
(E)
Figura 3.3
ectoderma. Assim, afinidade seletiva parece ser importante para fornecer informao
posicional s clulas embrionrias.
A terceira concluso de Holtfreter e seus colegas foi que afinidades seletivas
mudam durante o desenvolvimento. Isso deveria ser esperado, pois clulas embrionrias no mantm uma nica relao estvel com outras clulas. Para que ocorra o
desenvolvimento, clulas precisam interagir de forma diferente com outras populaes celulares em tempos especficos. Essas mudanas na afinidade celular foram
dramaticamente confirmadas por Trinkaus (1963), que mostrou uma clara correlao
entre mudanas de adeso in vitro e o comportamento da clula embrionria. Mais
recentemente, os experimentos de Fink e McClay (1985) demonstraram esse comportamento no ourio-do-mar, durante seu desenvolvimento. Na blstula, todas as clulas
parecem ter a mesma afinidade umas pelas outras. Cada clula tem tambm uma alta
afinidade para a matriz extracelular (camada hialina) que cobre o embrio, e uma baixa
afinidade para as protenas dentro da cavidade embrionria (blastocele). Entretanto,
ao iniciar-se a gastrulao, um grupo especfico de clulas, no plo vegetal da blstula, perde sua afinidade pelas clulas vizinhas e pela matriz extracelular externa, enquanto adquire simultaneamente afinidade pelas fibrilas proticas que forram a blastocele (Figura 3.4). Essas mudanas de afinidade causam a perda de contato das clulas
Distribuio e reorganizao de relacionamentos embrionrios espaciais em agregados de

clulas embrionrias de anfbios. (Modificado
de Townes e Holtfreter, 1955.)
84
Figura 3.4
(A)
Sumrio das modificaes na adeso celular de clulas precursoras

do esqueleto (encaixadas). (A) Na blstula do ourio-do-mar, cada
clula tem alta afinidade por suas vizinhas e por seu substrato, a
camada hialina. (B) Enquanto progride o desenvolvimento, mudanas na superfcie celular produzem um enfraquecimento das
afinidades pelas clulas vizinhas e camada hialina e um aumento de
afinidade pelas protenas da cavidade interna da blastocele. O
resultado que essas clulas migram para a blastocele (flechas) e
formaro o esqueleto.
(B)
Camada hialina
Clulas da
blstula
Fibrilas
da
blastocele
Alta afinidade por clulas

vizinhas e camada hialina
Decrscimo de afinidade por

clulas vizinhas e camada
hialina. Aumento de afinidade
por fibrilas da bastocele.
com suas vizinhas e a migrao para dentro da blastocele, onde elas formaro o
esqueleto da larva. Quando elas comeam a formar esse esqueleto, suas propriedades adesivas tero que mudar novamente. Essas clulas, que tinham sido antisociais entre si desde seu ingresso na blastocele, devem agora aderir para formar
os rudimentos do anel esqueltico. Essas mudanas na adeso so especficas
temporalmente e tambm especficas para as clulas precursoras esquelticas
(McClay e Ettensohn, 1987). Tais mudanas na afinidade celular so extremamente
importantes nos processos da morfognese.
A reconstruo de agregados de embries tardios de aves e mamferos foi
obtida pelo uso da protease tripsina para dissociar as clulas entre si (Moscona,
1952). Quando as clulas isoladas resultantes foram misturadas em um frasco e
agitadas de modo que a fora de cisalhamento destrusse adeses no especficas, as clulas se distriburam de acordo com seu tipo celular. Dessa maneira, elas
reconstruram a organizao do tecido original (Moscona, 1961; Giudice, 1962). A
Figura 3.5 mostra a reconstruo do tecido da pele de um embrio de camundongo de 15 dias. As clulas da pele so separadas por enzimas proteolticas e depois
agregadas em uma cultura rotatria. As clulas epidrmicas migram para a periferia, e as drmicas migram para o centro. Em 72 horas, a epiderme foi reconstituda,
formou-se uma camada de queratina e folculos de plo so vistos na regio dermal.
Essa reconstruo de tecidos complexos a partir de clulas nicas chamada de
agregao histotpica.
O modelo termodinmico de interaes celulares
A clulas, ento, no se distribuem ao acaso, mas se movem ativamente para criar
organizao tissular. Quais foras dirigem o movimento celular durante a morfognese? Em 1964, Malcolm Steinberg props um modelo que explicava o direcionamento da
Figura 3.5
Epiderme
Reconstruo da pele a partir de uma suspenso de clulas de pele de um embrio de camundongo de 15 dias. (A) Seo atravs da pele embrionria, mostrando a epiderme, derme e folculos
pilosos primrios. (B) Suspenso de clulas isoladas de pele tanto da derme como da epiderme.
(C) Agregados aps 24 horas. (D) Seo atravs de um agregado mostrando migrao de clulas
epidrmicas para a periferia. (E) Nova diferenciao dos agregados (72 horas), mostrando
epiderme e derme reconstitudas, completa com folculos de plo e camada queratinizada. (de
Monroy e Moscona, 1979, cortesia de A. Moscona.)
distribuio celular baseado em princpios termodinmicos. Usando clulas derivadas

de tecidos embrionrios tripsinisados, Steinberg mostrou que certos tipos de clulas
sempre migram para o centro quando combinadas com determinados tipos de clulas,
mas migram perifericamente quando combinadas com outras. A Figura 3.6 ilustra as
interaes entre culturas de clulas pigmentadas e clulas neurais da retina. Quando
suspenses de clulas isoladas desses dois tipos so misturadas, elas formam agregados de clulas organizadas ao acaso. Entretanto, aps algumas horas, j no se
observa clulas pigmentadas da retina na periferia dos agregados; em dois dias, duas
distintas camadas so vistas, com as clulas pigmentadas localizadas internamente s
clulas neurais da retina. Os mesmos tipos de interaes podem ser observados quando agregados esfricos de tecidos so colocados em contato, uns com os outros. Um
dos tecidos finalmente envolve o outro, e a topografia final independente das posies de partida (Figura 3.7).
Alm disso, tais interaes obedecem a uma hierarquia (Steinberg, 1970). Se a
posio final de um tipo de clula, A, interna em relao a um segundo tipo, B, e a
posio final de B interna a um terceiro tipo, C, ento a posio final de A ser sempre
interna a C. Por exemplo, clulas pigmentadas da retina migram internamente s clulas
neurais da retina, e clulas do corao migram centralmente em relao retina
pigmentada. Portanto, clulas do corao migram internamente s clulas neurais da
retina. Essa observao levou Steinberg a propor que as clulas misturadas, interagem
para formar um agregado com a menor energia livre interfacial (Figura 3.8). Em outras
(B)
(C)
Derme
(B)
Folculo piloso
primrio
(A)
(D)
(A)
Derme
Derme
Epiderme Camada queratinizada
(C)
Figura 3.6
Agregados formados pela mistura de clulas da retina neural (no pigmentada) de um embrio de
galinha de 7 dias com clulas pigmentadas da retina (escuras). (A) Cinco horas aps a mistura
das suspenses de clulas isoladas, so vistos agregados de clulas distribudas ao acaso. (B) Em
19 horas, as clulas pigmentadas da retina no so mais vistas na periferia. (C) Aps dois dias,
a maioria das clulas pigmentadas da retina esto localizadas em uma massa central interna
rodeadas pelas clulas da retina neural. (As clulas pigmentadas espalhadas so provavelmente
clulas mortas). (de Armstrong, 1989, cortesia de P. B. Armstrong.)
85
(E)
Folculos de plo
86
Figura 3.7
Tecido
A
Tecido
B
Colocar tecidos
juntos, bem
encaixados
Dissociar os
tecidos
e reagregar
Movimento do
tecido B para
envolver o tecido A
Movimento das
clulas A para dentro,
distante da periferia
Espalhamento de um tipo de clula sobre outro tipo. A posio final de agregados compostos de
dois tipos de tecidos independente de sua posio inicial. Uma condio final idntica
obtida, se os tecidos so transformados em suspenses de clulas isoladas e, ento, reagregadas
ou os tecidos so mantidos intactos e colocados em contato. (De acordo com Armstrong, 1989.)
palavras, as clulas se rearranjam na forma termodinamicamente mais estvel. Se as

clulas dos tipos A e B tm diferentes foras de adeso, e se a fora da conexo A-A
maior do que aquela entre A-B ou B-B, vai haver distribuio com centralizao das
clulas do tipo A. Se a fora da conexo A-A menor ou igual a da conexo A-B, o
agregado permanecer com uma mistura de clulas ao acaso. Finalmente, se a conexo
A-A tiver uma fora muito maior do que a conexo A-B em outras palavras, as clulas
A e B no mostram basicamente nenhuma adesividade entre si ento as clulas A e B
formaro agregados separados.
Para que as clulas sejam distribudas, o essencial que tenham diferenas em
suas foras de adeso. Na forma mais simples desse modelo, todas as clulas
poderiam ter o mesmo tipo de cola distribuda na sua superfcie. A quantidade
desse produto da superfcie celular, ou a arquitetura celular que permite substncia ser concentrada diferencialmente, originar diferentes nmeros de contatos estveis entre tipos de clulas. Alternativamente, as diferenas termodinmicas
poderiam ser causadas por vrios tipos de molculas de adeso. Esse modelo
termodinmico chamado hiptese da adeso diferencial. Nessa hiptese, o embrio precoce pode ser considerado como existindo em um estado de equilbrio at
que alguma mudana na atividade gnica altere as molculas na superfcie celular.
Os movimentos que ocorrem visam restaurar uma nova configurao de equilbrio
para as clulas.
Clulas A localizadas
centralmente s clulas B
(A) DISTRIBUIO
(B) AO ACASO
(C) SEPARAO
Figura 3.8
Distribuio como um processo tendendo estabilidade termodinmica mxima. (A) Distribuio ocorre quando a fora adesiva mdia entre diferentes tipos de clulas (ab) menor que a
fora adesiva mdia homotpica (A-A ou B-B) (aa, bb). As clulas mais adesivas se localizam
centralmente. (B) Se a fora das adeses A-B maior ou igual mdia das adeses homotpicas,
no vai haver distribuio, porque o sistema j atingiu o equilbrio termodinmico, e a mistura
dos tipos de clulas ser ao acaso. (C) Se as ligaes A-B so muito mais fracas que a mdia das
adeses homotpicas, haver uma completa separao, como caracterstico para leo e gua.
&
87
Especulaes
Evidncia para o modelo termodinmico
Distribuio quando blastemas de nveis iguais

ou diferentes, de membros anteriores, so colocados juntos em cultura. (Um membro de
cada par foi marcado com tritio para distingulo do outro). Depois de trs dias em cultura,
os agregados foram fixados e secionados.
Blastemas do mesmo nvel fundiram em uma
linha reta. Quando os blastemas eram de diferentes nveis, o blastema proximal parecia tentar envolver as clulas mais distais. (de Nardi e
Stocum, 1983, cortesia de D. Stocum.)
sas clulas formam um gradiente ao longo do eixo proximodistal; essas propriedades so maiores no pulso e menores no
antebrao.
Crawford e Stocum (1988) conseguiram
relacionar essa distribuio de clulas in
vitro ao processo de regenerao de membro ao vivo. Blastemas do pulso, cotovelo
ou antebrao foram enxertados na juno
blastema-toco de um membro posterior regenerando a partir da meia coxa. Os
blastemas de membro anterior migraram
distalmente at o nivel correspondente do
membro posterior do hospedeiro e regeneraram uma nova estrutura (Figura 3.10). O
blastema do antebrao imediatamente regenerou um membro completo a partir do
nvel da meia coxa; o blastema do cotovelo
se moveu ao nvel do joelho e formou o
resto do brao a partir desse ponto; o
blastema do pulso foi deslocado at o fim
do membro posterior em regenerao, onde
formou um pulso ao nvel do tarso do p.
Esses dados sugerem que as hierarquias
da distribuio celular, vistas in vitro, refletem diferenas que so usadas pelo corpo, in vivo, na construo de novos rgos.
Blastema marcado
Cotovelo
Pulso
Pulso
Blastema no marcado
Figura 3.9
Membros de salamandra tm alguns

atributos surpreendentes. Quando um
membro anterior amputado no antebrao, o toco remanescente forma na sua
ponta, uma massa de clulas desdiferenciadas (blastema regenerativo), que se
divide e diferencia formando um novo
membro. O novo tecido do membro se inicia no local da amputao, nesse caso,
formando o resto do membro, do antebrao para baixo. Quando o membro amputado no pulso, forma-se um blastema regenerativo parecido. Entretanto, no reformado o tecido do antebrao, cotovelo
e cbito; em lugar disso, o local sendo
conhecido regenera somente o pulso e
os dgitos.
Como armazenada essa memria
posicional? Nardi e Stocum (1983) demonstraram que colocando junto dois
blastemas de membros de salamandra com
o mesmo nvel de origem eles se fundem,
mas nenhum envolve o outro (Figura 3.9).
Entretanto, quando os blastemas so de
nveis diferentes, o mais proximal (perto
do corpo) envolve o mais distal. Parece,
ento, que as propriedades adesivas des-
Antebrao
vidncias recentes para a hiptese da adeso diferencial surgiram

em pesquisa com o objetivo de
responder duas questes: (1) pode o fenmeno da distribuio ser explicado pela
tenso superficial gerada pela adeso celular?, e (2) essa distribuio realmente
ocorre durante o desenvolvimento?
Foty e colegas no laboratrio de
Steinberg (1994) analisaram a tenso superficial interfacial em vrios tecidos embrionrios. Eles comprimiram amostras de
tecido entre as placas de vidro de um
tensimetro, e mediram a tenso superficial dos tecidos em termos da habilidade
desses em retornar forma esferide original. Dessa maneira, a tenso superficial
de cada tecido poderia ser calculada em
dines por centmetro. Foty e seus colaboradores encontraram uma completa correlao entre a tenso superficial do tecido
e sua tendncia de distribuir-se no centro
ou na periferia de um agregado misto. Tecidos com uma maior tenso superficial
sempre se localizavam internamente quando misturados com outros de menor tenso superficial. Parece que a distribuio
pode ser explicada unicamente pelas tenses superficiais das clulas justapostas.
[cell1.html]
At recentemente, era muito difcil planejar experimentos para testar, in vivo, esse
modelo de distribuio celular; entretanto,
esto surgindo evidncias para essa hiptese em estudos de regenerao de membros na salamandra. Aqui, o tecido mais
proximal (perto do corpo) envolver o mais
distal (Nardi e Stocum, 1983).
Cotovelo
Antebrao
88
Figura 3.10
Distribuio in vivo, onde blastemas de membros anteriores em regenerao (em cores) enxertados em blastemas da coxa mediana (cinza) so deslocados para a regio correspondente do membro posterior em regenerao
(pulso ao tarso; cotovelo ao joelho; antebrao
coxa mediana) onde iniciam a formao do
membro anterior, distalmente daquele ponto.
(de Crawford e Stocum, 1988.)
Blastema
de pulso
Blastema
de cotovelo
Blastema de
coxa mediana
Blastema
de antebrao
Enxertar blastema no
blastema em regenerao
da coxa mediana
Permitir crescimento
externo dos enxertos
A base molecular das adeses clula-clula

As classes de molculas de adeso celular
A formao de tecidos e rgos mediada por eventos que ocorrem na superfcie de
clulas adjacentes. A superfcie celular inclui a membrana plasmtica, as molculas
diretamente abaixo dela e a ela associadas, e as molculas encontradas no espaos
extracelulares. Clulas eucariticas so envolvidas por uma complexa borda molecular
chamada membrana plasmtica (ou celular). A membrana plasmtica uma bicamada
fluida lipdica que contm protenas capazes de interagir com o ambiente externo.
Certas protenas tm seus stios ativos apontando para fora, em direo a outras
clulas; existem trs classes de molculas da membrana celular (principalmente protenas) que esto particularmente envolvidas no controle de interaes especficas com
outras clulas (Edelman e Thiery, 1985):
Molculas de adeso celular. Essas protenas participam da adeso clulaclula. Elas podem unir clulas em lminas epiteliais e condensar clulas mesenquimatosas em agregados coesos. Elas tm um papel crtico na separao
de diferentes tecidos entre si.
Molculas da juno celular. Essas molculas fornecem vias de comunicao
entre o citoplasma de clulas adjacentes e fornecem barreiras de permeabilidade
e fora mecnica s lminas epiteliais.
Molculas de adeso a substrato. Essas molculas permitem ligao das clulas s suas matrizes extracelulares. Elas incluem componentes da matriz extracelular e seus receptores situados na superfcie da clula. Molculas de adeso a substrato permitem o movimento de clulas do mesnquima e neurnios,
e permitem a separao espacial das lminas epiteliais.
Os padres locais de expresso dessas molculas da superfcie celular, propiciam uma
conexo importante entre o cdigo gentico unidimensional e o organismo tridimensional. Modulando o aparecimento dessas molculas, o potencial gentico pode
se manifestar no processo mecnico da morfognese.
&
89
Especulaes
Anticorpos monoclonais e gentica reversa

Monitoramento de modificaes da membrana celular atravs de anticorpos monoclonais.
A expresso de componentes da membrana muda no espao e no tempo. Diferentes tipos de clulas possuem componentes da superfcie celular que so diversos, e que mudam enquanto a clula se
desenvolve. Esses componentes da membrana, tecido-especficos, so freqentemente reconhecidos por antisoros e, por
essa razo, denominados antgenos de
diferenciao (Boyse e Old, 1969).
Antgenos de diferenciao especficos
podem atualmente ser identificados por
anticorpos monoclonais (Figura 3.11). Geralmente, esses anticorpos so produzidos injetando celulas estranhas em camundongos (ou clulas de camundongos
de uma linhagem em animais de outra linhagem). Os linfcitos B do camundongo comearo a produzir anticorpos contra cada um dos componentes estranhos
dessas clulas, sendo que cada linfcito
B produz um nico tipo de anticorpo. Esses linfcitos so tornados imortais pela
fuso com clulas cultivadas de linfcito
B de tumores (mielomas), que foram
mutados de modo a: (1) no sintetizar seus
prprios anticorpos e (2) no ter a enzima
de recuperao de purinas, hipoxantina
fosforribosiltransferase (HPRT). Devido a
essa ltima alterao, as clulas do
mieloma s podem produzir nucleotdeos
de purina de novo, no podendo usar as
purinas do meio de cultura. Aps a fuso,
as clulas so cultivadas em um meio contendo aminopterina, uma droga que inibe
a via de sntese de novo da purina. Assim,
clulas do mieloma no fundidas morrem
por fome de purinas. Elas no podem produzir nucleotdeos de purina usando a via
de recuperao mediada por HPRT e a
aminopterina bloqueia tambm a via de
novo. Linfcitos B normais tambm no
dividem-se em cultura, de modo que eles
morrem igualmente. O produto da fuso
do linfcito B e da clula do mieloma o
hibridoma prolifera, porque possui a
enzima de recuperao de purina do
linfcito B e as propriedades de crescimento do tumor. Mais ainda, cada um
Imunizao
Clulas de bao
de camundongo
Clulas mutantes de mieloma,

sem enzima HPRT
Clulas de mieloma
Fuso
Seleo em meio HAT;

selecionar anticorpos
Cultivar clones de hibridomas

individuais de poos positivos
Secionar e cultivar clones

cujos sobrenadantes testam
positivo
Figura 3.11
Protocolo para preparar anticorpos monoclonais. Clulas do bao de um camundongo imunizado so fundidas com clulas mutadas de mieloma, sem a enzima HPRT. Clulas so cultivadas
em um meio contendo hipoxantina, aminopterina e timidina (HAT). Clulas de mieloma no
fundidas no podem crescer nesse meio porque a aminopterina bloqueia a nica via para sintetizar nucleotdeos purnicos. Clulas B morrem nesse meio, mesmo contendo a enzima (HPRT)
que lhes permitiria utilizar a hipoxantina do meio. As clulas fundidas (hibridomas) crescem e se
dividem. Os poos nos quais crescem os hibridomas so selecionados quanto presena do
anticorpo efetivo, e as clulas de poos positivos so semeadas em densidade suficientemente
baixa para permitir que clulas individuais originem clones discretos. Esses clones so isolados
e selecionados para o anticorpo efetivo. Tal anticorpo monoclonal. Os hibridomas produzindo
esse anticorpo podem ser cultivados e congelados. (de Yelton e Scharff, 1980.)
90
Segmentos externos de
fotorreceptores
Somas de fotorreceptores
(camada nuclear externa)
Mas logo em seguida, a clula comea a

expressar outra molcula da membrana, o
antgeno 24B10. Essa molcula encontrada somente nos neurnios que se transformaro em fotorreceptores. Nos estgios seguintes (aproximadamente 80 horas
mais tarde), o antgeno 21A6 expresso
em certas regies de fotorreceptores em
maturao, e outro antgeno, 28H9, caracterstico de fotorreceptores retinais terminalmente diferenciados (Zipursky et
al.,1984). Assim, membranas celulares de
diferentes tipos de clulas contm molculas diferentes, e essas podem mudar durante a maturao da clula.
Camada sinptica externa

Camada nuclear interna
(soma interneuronal)
Camada sinptica interna
Soma das clulas

ganglionrias
Axnios das clulas
ganglionrias
(A)
(B)
(C)
(D)
Da protena ao gene
Figura 3.12
Especificidade da superficie celular da retina neural de galinha. (A) Fotografia de contraste de

fase de uma seo da retina neural de um pinto recm-eclodido. (B) Seo de retina marcada com
um anticorpo monoclonal fluorescente que reconhece clulas retinais (mas no outras neuronais).
(C) Seo retinal marcada com anticorpo monoclonal fluorescente que reconhece processos
neuronais mas no corpos celulares na retina. (D) Seo retinal marcada com anticorpo monoclonal fluorescente que reconhece antgeno em um subconjunto de processos em clulas nervosas nas camadas sinpticas externas e internas. (Cortesia de G. Grunwald.)
desses hibridomas secreta o anticorpo especfico do linfcito B. O meio no qual

esto crescendo os hibridomas testado
quanto presena de anticorpos que se
ligam populao original das clulas estranhas. Tais anticorpos, tendo um nico
linfcito B como sua fonte original, denominado anticorpo monoclonal. Anticorpos monoclonais podem ser produzidos
em grandes quantidades e podem reconhecer antgenos (protenas, lipdeos e
carboidratos) que so fracamente expressos (Khler e Milstein, 1975).
Anticorpos monoclonais dirigidos
contra tipos especficos de clulas, demonstraram numerosos antgenos de diferenciao aparecendo em diferentes
tempos e lugares durante o desenvolvimento. A Figura 3.12 mostra diferentes
molculas da superfcie celular, em diferentes camadas espaciais da retina neural
de um pinto recm-eclodido. Cada um dos
anticorpos monoclonais reconhece uma
molcula diferente na membrana celular.
Como est evidente nesta fotografia composta, as membranas de todas as clulas
da retina neural no so iguais. Na verdade, regies da mesma membrana celular
podem ser diferentes; as membranas dos
axnios e da soma do nervo, por exemplo,
contm molculas diferentes. A Figura 3.13
mostra mudanas temporais na membrana
celular de uma nica clula epitelial de

Drosophila enquanto ela se desenvolve
em um fotorreceptor retinal. Anticorpos
monoclonais foram obtidos aps injetar
camundongos com homogenatos de tecido da cabea de Drosophila, e um painel
de anticorpos foi testado em clulas do
disco imaginal do olho larval que se diferenciavam em estruturas do olho. Assim
que as clulas epiteliais, no diferenciadas, do disco mostram propriedades
neuronais, elas expressam o antgeno
22C10. Esse antgeno tambm encontrado em outros tipos de clulas neuronais.
Clula epitelial
no diferenciada
Fotorreceptor
Neurnio
Vrios antgenos
no especficos
Como antgenos de diferenciao so protenas cuja expresso regulada no tempo e no espao, e como essas mudanas
so freqentemente correlacionadas com
mudanas morfolgicas especficas (como
mostra a Figura 3.13), seria interessante
saber como seus genes so regulados. Por
exemplo, o conhecimento de como a protena 24B10 se expressa poderia dar
indicaces sobre os mecanismos genticos da diversidade neuronal. Como podemos realizar essa gentica reversa
indo da protena para o gene?
Em primeiro lugar, ligamos anticorpos
monoclonais s particulas de resinas e
passamos homogenatos de retina em
colunas contendo esse material (Figura
3.14). (Essa uma coluna de imunoafinidade.) O anticorpo se liga somente ao
antgeno reconhecido originalmente, e a
protena ligada resina eluda (por solues salinas) e submetida eletroforese em gel para separ-la de um possvel
Fotorreceptor
maduro
Neurnio sensorial
fotorreceptor
22C10
antgeno
24B10
antgeno
21A6
antgeno
28H9
antgeno
Figura 3.13
Mudanas temporais na membrana celular correlacionadas com a morfognese de uma clula

retinal fotorreceptora da Drosophila. Enquanto se procede a diferenciao, diferentes antgenos
se expressam na membrana celular. (de Venkatesh et al., 1885.)
Anticorpo
monoclonal ao
antgeno 24B10
91
Juntar anticorpo marcado

ao antgeno 24B10, na
seo retinal
1 Cobrir partculas de resina

com anticorpo monoclonal
Localizao de 24B10 por

anticorpo monoclonal
marcado com fluorescena
2 Preparar coluna de
imunoafinidade com
partculas cobertas
Figura 3.14
3 Adicionar homogenato
de retina contendo
antgeno 24B10 ( ) e
outros antgenos ( )
Homogenato
retinal
4 Depois que outros antgenos

( ) passam atravs da coluna,
eluir material ( ) remanescente nas partculas, separar por
eletroforese em gel e corar gel
para protena
Protena purificada,
antgeno 24B10
5 Eluir protena purificada

24B10 do gel e seqenciar
o amino terminal
Met-Glu-Glu-Thr-His-Tyr-Pro
6 Gerar uma seqncia
mensageira possvel e
sintetizar uma seqncia
complementar radioativa
AUG - GAA - GAA - AGG - CAG - AAC - CC

TAC - C T T - C T T - TCC - GTC - T T G - GG
Protocolo para encontrar o gene que codifica a protena identificada por um anticorpo
monoclonal. O oligonucleotdeo decodificado
pela estrutura da protena no precisa ser
um par perfeito com a verdadeira seqncia.
(de Venkatesh et al., 1985; fotografia cortesia de S. Benzer.)
contaminante. A regio do gel contendo

a protena separada, a protena eluda
da matriz do gel parcialmente seqenciada. necessrio sintetizar oligonucleotdeos radioativos que se ligariam a uma
seqncia de DNA capaz de codificar tal
protena. No caso da 24B10, essas sondas radioativas foram usadas para selecionar uma biblioteca de clones de DNA
recombinante contendo regies do genoma de Drosophila. O DNA de Drosophila de cada clone positivo foi seqenciado para verificar se esse complementava a seqncia da protena original isolada pelo anticorpo monoclonal. Por essa
via, podemos ir de uma rara protena
identificada por um anticorpo monoclonal a um pedao especfico do DNA
genmico. (Zipursky et al.,1984; Venkatesh et al., 1985.)
7 Usar essa sonda para selecionar a

biblioteca de fago do genoma da Drosophila; seqenciar o clone positivo
TCC ATG T T C GAT CGC GAG ATG GAG GAG ACG CAT TAC CCG CCC TGC ACC TAC AAC GTG ATG TGC
Ser Met Phe Asp Arg Glu Met Glu Glu T h r His Ty r P r o P r o Cys T h r Ty r Asn Val Met Cys
Seqncia esperada
8 Isolar e caracterizar gene
92
Molculas de adeso celular

Identificando molculas de adeso celular e seu papel no
desenvolvimento
Os estudos de distribuio de Holtfreter e Steinberg no identificaram as molculas
envolvidas na adeso celular diferenciada. Roth (1968; Roth et al., 1971) demonstrou
que diferentes tipos de clulas mostram uma adeso celular seletiva independente da
distribuio das clulas. Ele modificou o ensaio de agregao rotatrio, incubando
clulas de cartilagem marcadas com 3H e hepatcitos marcados com 14C em uma soluo em rotao, contendo pequenos agregados de clulas de cartilagem no marcadas.
Medindo as clulas marcadas com 14C e 3H nesses agregados, ele demonstrou que os
agregados de cartilagem escolheram especificamente clulas de cartilagem. Experimentos similares estenderam essas concluses s clulas do msculo e do fgado
(Figura 3.15). Esses estudos indicaram que tipos diferentes de clulas podiam usar
diferentes molculas de adeso.
A tarefa seguinte identificar as molculas mediadoras da adeso celular e descobrir como conseguem realizar esse feito. Vrias molculas de adeso celular (CAMs),
foram identificadas e agrupadas em duas categorias gerais: as caderinas, cujas propriedades de adeso celular dependem de ons clcio e as CAMs da superfamlia de
imunoglobulinas, cujos domnios de ligao s clulas se parecem aqueles de molculas de anticorpos. A Tabela 3.1 lista algumas CAMs recentemente descobertas.
Caderinas
ons de clcio so freqentemente necessrios para a adeso celular. Os ons estabilizam as conformaes adesivas de certas protenas da superfcie celular chamadas caderinas. Caderinas tm um papel crtico no estabelecimento e manuteno de
conexes intercelulares, e parecem ser cruciais para a segregao espacial de clulas e para a organizao da forma animal (Takeichi, 1987). Caderinas interagem com
outras caderinas de clulas adjacentes e so ancoradas na clula por complexos de
protenas chamados cateninas (Figura 3.16). O complexo caderina-catenina forma a
clssica juno aderente que liga as clulas epiteliais entre si. Mais ainda, como as
cateninas se ligam ao citoesqueleto de actina, elas integram as clulas epiteliais em
uma unidade mecnica. Em embries de vertebrados, quatro classes principais de
caderinas foram identificadas:
Figura 3.15
Especificidade da associao clula-clula. Agregados coletores, cada um consistindo de um tipo

de clula, so colocados em um frasco de cultura giratrio contendo clulas isoladas do mesmo
tipo (isotpico) e de tipos diferentes (heterotpico). As clulas isoladas, isotpicas e heterotpicas,
foram previamente marcadas com diferentes radioistopos. Aps seis horas, os agregados
foram colhidos, lavados e determinados os nmeros de clulas isotpicas e heterotpicas que
aderiram ao agregado, como mostra a tabela abaixo. (Dados de Roth, 1968.)
Clula isotpica
marcada com
3
H (cartilagem)
Clula
heterotpica
marcada com
14
C (fgado)
Contagem das clulas radioativas que aderiram ao agregado
Agregado
(cartilagem)
Clulas isoladas marcadas em suspenso*

Tipo de agregado
Cartilagem
Fgado
Msculo peitoral
Cartilagem
Fgado
Msculo peitoral
100
10
38
6
100
49
48
0
100
* Porcentagem do nmero mdio de clulas coletadas pelos agregados isotpicos.
Rotao por seis horas
Contar clulas
radioativas que
aderiram ao agregado
93
Tabela 3.1 Classificao geral das principais molculas de adeso celular (CAMs)
Classe
CAM
Tipo celular
Caderinas
(clcio-dependente)
N-caderina (a.k.a. A-CAM)

P-caderina
E-caderina (a.k.a. L-CAM,
uvomorulina)
Nervos, rins, lentes, corao

Placenta, epitlio
Epitlio, blstula de camundongo
CAMs da super
famlia de imunoglobulinas
(clcio-independente)
N-CAM
Ng-CAM (a.k.a. L1, NILE)
Neurofascina
CAM-celular
LFA-1
CD4 glicoprotena (HIV receptor)
Msculos, nervos, rins

Glia, neurnios
Neurnios de Drosophila
Hepatcitos
Linfcitos
Indutor de clulas T
E-caderina (caderina epitelial, tambm chamada uvomorulina e L-CAM) expressa em todas as clulas embrionrias precoces de mamferos, mesmo no
estgio de uma clula. Mais tarde, essa molcula restrita a tecidos epiteliais
de embries e adultos.
P-caderina (caderina de placenta) parece ser expressa primariamente em clulas placentrias do embrio de mamfero, que fazem contato com a parede
uterina (as clulas trofoblsticas) e o prprio epitlio da parede uterina (Nose
e Takeichi, 1986). possvel que a P-caderina facilita a conexo do trofoblasto
com o tero, pois a P-caderina nas clulas uterinas visualizada em contato
com a P-caderina das clulas trofoblsticas de embries de camundongos
(Kadokawa et al., 1989).
Stios de fosforilao
Reconhecimento
do stio de adeso
Stio de
ligao
de clcio
Membrana
celular
Cateninas
Actina
Figura 3.16
Representao esquemtica da adeso celular

mediada por caderina. Caderinas esto associadas com trs tipos de cateninas. As cateninas
podem se associar com o sistema de microfilamentos de actina. A importncia dessas interaes para o desenvolvimento normal vista na
Figura 3.18; caderinas que no tm o domnio
extracelular podem interferir com o desenvolvimento. Presumivelmente, elas competem
com as caderinas normais, ligando as cateninas
disponveis com seus domnios citoplasmticos. (de Takeichi, 1991).
Caderina
Ligao
caderina-caderina
Caderina
94
N-caderina (caderina neural) vista inicialmente nas clulas mesodrmicas no

embrio em gastrulao enquanto elas perdem sua expresso de E-caderina.
intensamente expressa nas clulas do sistema nervoso central em desenvolvimento (Figura 3.17; Hatta e Takeichi, 1986).
EP-caderina (C-caderina) crtica na manuteno da adeso celular entre
os blastmeros da blstula de Xenopus e necessria para os movimentos normais de gastrulao (Figura 3.18; Heasman et al., 1994; Lee e
Gumbiner, 1995).
Caderinas promovem a aderncia celular, ligando-se ao mesmo tipo de caderina em
outra clula. Assim, clulas com E-caderina grudam em outras clulas que tm Ecaderina, e se separaro de outras clulas contendo N-caderinas em suas membranas.
Essa ligao chamada ligao homoflica. Clulas expressando N-caderinas rapidamente se isolam de clulas N-caderina-negativas in vitro, e anticorpos univalentes
contra caderinas convertero um agregado de clulas tridimensional histotpico, em
uma camada nica (Takeichi et al., 1979). Mais ainda, quando genes ativados de Ecaderina so transfectados em fibroblastos de camundongo cultivados e neles expressos (usualmente eles no expressam essa protena), E-caderina vista em suas
superfcies celulares, e os fibroblastos tratados passam a se ligar fortemente uns aos
outros (Nagafuchi et al.,1987). Na verdade essas clulas comeam a se portar como
clulas epiteliais.
Expresso de caderinas freqentemente correlacionada com agregao e disperso. Clulas da crista neural (que esto na poro mais dorsal do tubo neural), inicialmente expressam N-caderina. Em seguida, enquanto deixam o tubo neural, migrando
como clulas individuais (para formar clulas pigmentadas, neurnios sensoriais e
outros tipos de clulas), elas perdem a expresso de N-caderina (veja Figura 3.17; veja
tambm Captulo 7). Entretanto, quando as clulas migrantes chegam ao seu destino e
comeam a se agregar entre si para formar gnglios nervosos, elas tornam a expressar
N-caderina (Hatta et al.,1987).
Expresso diferencial de caderina pode tambm explicar os dados de distribuio
homotpica discutida anteriormente. Como foi discutido, Roth e colaboradores demonstraram que clulas de fgado tendem a coletar clulas de fgado e que clulas
retinais coletam outras clulas retinais. Takeichi (1987) demonstrou que clulas retinais
expressam N-caderina e clulas hepticas expressam E-caderina, e que a distribuio
seria a esperada devido a essa diferena na expresso de caderinas. Ele tambm sugeriu que as observaes de Townes e Holtfreter poderiam ser, da mesma forma, explicadas
por expresso diferencial de caderinas. Suporte para essa idia veio de estudos nos
quais diferentes genes de caderina foram transfectados em fibroblastos de camundongo, que no expressam habitualmente qualquer tipo de caderina. Fibroblastos
expressando E-caderina aderiram a outros contendo E-caderina, enquanto fibroblastos
de P-caderina se ligavam a outros que expressavam P-caderina. Tambm, quando
tecido pulmonar embrionrio foi dissociado e sua recombinao permitida na presena de fibroblastos levando E-caderina ou de fibroblastos sem tratamento, os
fibroblastos expressando E-caderina foram integrados nos tbulos epiteliais pulmonares (que expressam E-caderina), enquanto que os fibroblastos no tratados se associaram s clulas mesenquimatosas (que no expressam caderinas) (Nose et al.,1988).
Todos esses experimentos foram realizados com clulas cultivadas. Recentemente, estudos in vivo mostraram que caderinas podem ter um papel crtico nos fenmenos de distribuio ocorrendo dentro do embrio. Quando o mRNA para N-caderina
de galinha injetado em um dos dois blastmeros da primeira clivagem em embrio da
r Xenopus, N-caderina freqentemente expressa em clulas que normalmente no a
possuem. Os embries que expressam N-caderina extra so muitas vezes caracterizados por amontoados de clulas e camadas tissulares engrossadas. Normalmente, o
tubo neural (que expressa N-caderina) se separa das clulas que se transformaro em
epiderme (a qual expressa E-caderina). Em embries nos quais a epiderme e o tubo
neural expressam a N-caderina extra, o tubo neural no se separa da epiderme (Detrick
(A)
(B)
Ectoderma
Crista Neural
Clulas
migratrias
Tubo neural
(C)
E-caderina
N-caderina
Figura 3.17
Localizao de duas diferentes caderinas durante a formao do tubo neural no camundongo. Foi usada marcao imunofluorescente dupla para localizar E-caderina (A) e Ncaderina (B) na mesma seo transversal do
crebro posterior de um embrio de camundongo de 8.5 dias. Anticorpos para E-caderina foram marcados com um tipo de corante
fluorescente (o qual fluoresce em um intervalo de comprimento de onda), enquanto anticorpos para N-caderina foram marcados com
um segundo tipo de corante (que emite sua
cor em outros comprimentos de onda). Fotografias obtidas em diferentes comprimentos
de onda. mostram que o ectoderma externo
expressa E-caderina predominantemente, ao
passo que a invaginante placa neural cessa a
expresso de E-caderina, mas passa a expressar N-caderina. (C) quando se forma o tubo
neural, ele expressa N-caderina, a epiderme
expressa E-caderina e as clulas da crista
neural nenhuma das duas. (Fotografias de K.
Shimamura e H. Matsunami, cortesia de M.
Takeichi; C de Rutishauser, 1988.)
(A)
(B)
Figura 3.18
Importncia de caderinas em manter a coeso entre clulas em desenvolvimento. (A) Quando

ocitos so injetados com oligonucleotdeos antisense contra uma mensagem de caderina herdada maternalmente, as clulas centrais dispersam quando o hemisfrio animal removido. Em
embries controle (direita), as clulas internas permanecem juntas. (B) No estgio de quatro
clulas, os blastmeros que formam o lado esquerdo do sapo so injetados com um mRNA para
N-caderina que no tem a regio extracelular da caderina. Durante a neurulao as clulas com a
protena mutante no formam uma camada coerente. (de Heasman et al., 1994; B de acordo com
Kintner et al, 1992; fotografias cortesia de J. Heasman e C. Kintner.)
et al., 1990; Fujimori et al., 1990). Assim, as caderinas esto, provavelmente, tendo um
papel principal na organizao das clulas em tecidos. [cell2.html]
CAMs da superfamlia de imunoglobulinas
Como discutimos no Captulo 1, anticorpos foram usados inicialmente para identificar
molculas de adeso celular em Dictyostelium. Gerisch e colegas (Beug et al.,1970),
prepararam anticorpos contra Dictyostelium e os quebraram quimicamente de modo
que somente suas regies monovalentes ligantes de antgeno permanecessem os
fragmentos Fab. (Os anticorpos bivalentes tiveram que ser quebrados, porque de
outra maneira eles poderiam artificialmente agrupar clulas e o efeito no poderia ser
medido). Isso levou descoberta de uma glicoprotena de 80-kDa que mediadora da
adeso clula-clula durante a agregao no fungo pegajoso. A mesma estratgia foi
usada por Edelman e seus colaboradores (Brackenbury et al., 1977) que levou ao
isolamento de uma molcula de adeso de clulas neurais (N-CAM). [cell3.html]
N-CAM um membro de uma classe de CAMs que no necessitam ons de clcio
e que tm uma estrutura semelhante (Figura 3.19). Essa estrutura extracelular com seus
domnios globulares imobilizados por pontes dissulfeto, se assemelha molcula de
imunoglobulina, e mesmo possvel que as imunoglobulinas sejam derivadas desse
grupo de CAMs (Williams e Barclay, 1988; Lander, 1989). Assim, essas glicoprotenas
so chamadas CAMs da superfamlia de imunoglobulinas*.
As CAMs da superfamlia de imunoglobulinas podem ter um papel importante
no desenvolvimento do sistema nervoso. N-CAM necessria para uma ligao
adequada de axnios s clulas musculares alvos (Covault e Sanes, 1986; Tosney et
al.,1986). Alm disso, N-CAM parece ser crtica para o empacotamento (fasciculao)
de axnios para que se movimentem como uma unidade. Anticorpos N-CAM podem quebrar essas ligaes, permitindo que os axnios se dispersem (Fraser et al.,
1988; Landmesser et al.,1988). Uma situao similar parece ocorrer em insetos, onde
* A designao superfamlia freqentemente usada porque as diferentes classes de molculas de imunoglobulinas tambm constituem, elas mesmas, uma famlia. Esses outros
membros da superfamlia tm estruturas semelhantes s imunoglobulinas, mas no so exatamente famlia prxima.
95
96
Figura 3.19
(B)
Molculas de adeso da superfamlia de imunoglobulinas. (A) Trs membros da superfamlia de

imunoglobulinas. A forma da molcula de IgM ligada membrana tem duas cadeias pesadas,
cada uma com cinco domnios, e duas cadeias leves, cada uma com dois domnios. N-CAM um
polipeptdeo com cinco domnios. Sua ncora na membrana pode ser a seqncia de aminocidos de uma protena transmembrana ou um lipdeo. L1 uma protena transmembrana com seis
domnios globulares. Fasciclina II, a molcula de adeso celular de insetos, e neurogliana se
assemelham a N-CAM e L1, respectivamente. (B) Modelo para a adeso das CAMs da superfamlia de imunoglobulinas.
ou
(A)
N
N
N
Domnios semelhantes
imunoglobulina
Domnios semelhantes
fibronectina
Extracelular
ou
Citoplasma
CC
IgM
ou
C
N-CAM ou fasciclina II
C
L1 ou neurogliana
Interaes de N-CAM clula-clula
Figura 3.20
as CAMs da superfamlia de imunoglobulinas, chamadas fasciclinas (Figura 3.20)

ajudam a migrao de axnios (Harrelson e Goodman, 1988). L1 necessria para
a produo de certos axnios (Lemmon et al., 1989), e mutaes de L1 no homem
causam um espectro de anomalias caracterizada por hidrocefalia, retardamento
mental e inabilidade em controlar movimentos dos membros (Vits et al., 1994).
Expresso diferencial de CAM crtica nos limites entre dois grupos de clulas.
Nesses lugares, o corpo segrega diferentes clulas em diferentes regies. Clulas da
notocorda no entram no tubo neural e nem clulas dermais trespassam para a epiderme.
Expresso de fasciclina no sistema nervoso do

gafanhoto em desenvolvimento. (A) Estrutura
em andaime dos axnios fasciculados em um
embrio de gafanhoto como visto em um
microscpio de Nomarski. A com e P com so
as comissuras anterior e posterior cujos axnios
atravessam o segmento; ISN um neurnio
intersegmental e con um neurnio conectivo.
(B,C) Sistema nervoso embrinico como em
(A), mas marcado com anticorpos monoclonais
feitos para as glicoprotenas fasciclinas da
superfcie celular. O anticorpo em (B)
reconhece um subconjunto de axnios nas
comissuras anterior e posterior, enquanto o
anticorpo em (C) se liga a uma glicoprotena
de membrana dos mais longitudinais fascculos
de axnios. As flechas mostram os mesmos
locais em (B) e (C). Note que o anticorpo marca
somente uma poro de cada axnio. (de
Bastiani et al., 1987, cortesia de C. Goodman.)
(A)
(B)
(C)
97
Figura 3.21
Distribuio de diferentes CAMs em bordas tissulares. Enquanto as clulas mesodrmicas se

renem para induzir o broto das penas no ectoderma, as clulas mesenquimatosas recmagregadas expressam N-CAM (A) e as clulas ectodrmicas expressam E-caderinas (B) nas
suas respectivas membranas celulares. (de Chuong e Edelman, 1985a, cortesia de G. Edelman).
Essa segregagao pode ser conseqncia da diferena de CAMs nas populaes

adjacentes. Por exemplo, penas so induzidas quando clulas mesenquimatosas derivadas do mesoderma se agrupam para formar uma bola de clulas imediatamente
abaixo da epiderme da pele da galinha. As clulas ectodrmicas esto ligadas entre si
por E-caderina, enquanto as clulas mesenquimatosas, CAM-negativas anteriormente, comeam a expressar N-CAM e se juntam para formar um agregado (Figura 3.21).
Atravs do desenvolvimento da pena, diferentes grupos de clulas se separam umas
das outras, como resultado de sua habilidade para expressar N-CAM, E-caderina, ou
ambas as protenas (Chuong e Edelman, 1985a,b).
(A)
Molculas da juno celular:

protenas da juno em fenda
Junes em fenda so regies intercelulares especializadas onde clulas adjacentes
se encontram entre 15-40 nm de distncia. Finas conexes servem como canais de
comunicao entre clulas adjacentes (Figura 3.22A,B). Clulas assim ligadas so
chamadas acopladas, e pequenas molculas (MW<1500) e ons podem passar
livremente de uma clula para outra. Na maioria dos embries, pelo menos alguns
(B)
(B)
(D)
Figura 3.22
Espao intracelular
(15-40 nm)
Canais de
comunicao
Membranas
celulares
Conexes
(A)
(D)
Protenas das junes em fenda. (A) Micrografia eletrnica de uma fileira de junes em
fenda ligando duas clulas justapostas. (B) Micrografia fluorescente de junes em fenda em
tbulo renal de embrio de camundongo de 17
dias. (C) Compartimento formado por protenas da juno de fenda entre clulas que se
comunicam umas com as outras. Esse compartimento na gstrula de camundongo pode
ser visto injetando o corante Lucifer Yellow
em um clula e observando sua transferncia a
um pequeno grupo de clulas. (D) Estrutura
da subunidade da juno em fenda. (A de
Peracchia e Dulhunty, 1976, cortesia de C.
Peracchia; B de Sainio et al., 1992, cortesia de
K. Sainio; C de Kalimi e Lo, 1988, cortesia de
C. Lo; D conforme Darnell et al., 1986.)
98
(A)
dos blastmeros precoces esto ligados por junes em fenda, dessa forma permitindo que ons e pequenas molculas solveis passem livremente entre eles. A habilidade de clulas em formar junes em fenda com algumas clulas, e no com
outras, cria compartimentos fisiolgicos dentro do embrio em desenvolvimento
(Figura 3.22 C).
A importncia de junes em fenda no desenvolvimento foi demonstrada em
embries de anfbios e mamferos (Warner et al., 1984). Quando anticorpos contra
protenas da juno em fenda foram microinjetados em uma clula especfica de uma
blstula de Xenopus de oito clulas, a prognie daquela clula que usualmente est
ligada por junes de fenda, agora no podia permitir a passagem de ons ou molculas pequenas de uma clula outra. Ainda mais, os girinos que resultaram das
blstulas tratadas mostraram defeitos especificamente relacionados ao destino desenvolvimental da clula injetada (Figura 3.23). A prognie de tal clula no morreu,
mas foi incapaz de se desenvolver de maneira normal (Warner et al., 1984). No embrio de camundongo, os oito primeiros blastmeros so conectados entre si por
junes em fenda. Apesar de frouxamente associadas entre si, essas oito clulas se
movem juntas para formar um embrio compacto. Se a compactao for inibida por
anticorpos contra protenas da juno em fenda, o desenvolvimento posterior cessa. Os blastmeros tratados continuam a dividir-se, mas a compactao no ocorre
(Lo e Gilula, 1979; Lee et al., 1987). Se RNA antisense contra as mensagens da juno
em fenda injetado em um dos blastmeros de um embrio normal de camundongo,
aquela clula no formar junes em fenda e no ser includa no embrio (Bevilacqua
et al., 1989).
Os canais da juno em fenda so feitos de protenas chamadas conexinas. Em
cada clula, seis conexinas idnticas da membrana se agrupam para formar um canal
transmembrana contendo um poro central. O complexo de juno em fenda de uma
clula se conecta ao complexo de juno em fenda de outra clula, permitindo que se
juntem os citoplasmas de ambas as clulas (Figura 3.22D). Existem aproximadamente
doze tipos de conexinas, e algumas podem ser reguladas por caderinas. Jongen e
colaboradores (1991) observaram que em clulas acopladas por E-caderina, a comunicao entre clulas, mediada por junes em fenda, depende da funo de caderinas.
Evidncias sugerem que caderinas permitem no s o contato entre as clulas como
tambm modificam as protenas tipo conexina. Os diferentes tipos de protena
conexina tm papis separados, mas parcialmente sobrepostos, no desenvolvimento normal. Por exemplo, a protena de juno em fenda conexina-43 encontrada em
quase todos os tecidos do embrio do camundongo em desenvolvimento. Entretanto, se os genes da conexina-43 forem derrubados por endereamento de genes, o
embrio ainda se desenvolver. Parece que a funo da protena conexina-43 pode
ser assumida por outras conexinas. Mas, logo aps o nascimento, esses camundongos tm respirao convulsiva, se tornam cianticos e morrem. Autpsia desses
animais mostra que o ventrculo direito a cmara que bombeia sangue aos pulmes
atravs da artria pulmonar est cheio de tecido que fecha a cmara e impede o
fluxo de sangue (Reaume et al.,1995). Mesmo que a perda da protena conexina-43
possa ser compensada em muitos tecidos, parece que ela crtica para o desenvolvimento normal do corao. [cell4.html]
A membrana celular tem, ento, vrios mecanismos pelos quais pode fazer ligaes com membranas de outras clulas. Podem ser usadas CAMs da superfamlia de
Figura 3.23
(B)
Efeitos da juno em fenda no desenvolvimento. Seo de um girino de Xenopus no qual um dos

blastmeros, no estgio de oito clulas, foi injetado com (A) um anticorpo controle ou (B) um
anticorpo contra a protena da juno em fenda. O lado formado pelo blastmero injetado no tem
o olho e tem uma morfologia cerebral anormal. (de Warner et al., 1984, cortesia de A. E. Warner.)
imunoglobulinas, CAMs dependentes de clcio e protenas de juno. Mas isso

no esgota seu repertrio. Como j mencionado, a clula tambm pode se ligar a
componentes especficos da matriz extracelular. Agora voltamos nossa ateno para
esses componentes.
A base molecular da afinidade clula-substrato

Afinidade diferencial a substrato
A migrao de clulas, como a migrao de pssaros e borboletas monarca, depende
da percepo de quando comear a migrao, quando cessar a migrao e qual rota
tomar. Existem muitos sinais que o ambiente pode dar s clulas, mas os principais
parecem envolver substncias na matriz extracelular. A hiptese da afinidade diferencial a substrato postula que diferentes clulas reconhecem diferentes molculas em
vrias matrizes extracelulares. Cada tipo de clula migratria prefere certas combinaes de molculas da matriz a outras combinaes, e essas molculas orientam a clula
para quando e onde migrar. Weiss (1945) e Tyler (1946) sugeriram que a clula, por
vezes, pode interagir com seus substratos atravs do sistema chave-fechadura, ou
seja, entre a membrana celular e a matriz extracelular. O relacionamento entre a protena
da membrana celular e a molcula da matriz seria semelhante aquele entre enzima e
substrato ou anticorpo e antgeno. Durante a ltima dcada foi demonstrado que esse
tipo de interao muito importante para a migrao celular. [cell5.html]
A matriz extracelular
A matriz extracelular consiste de macromolculas secretadas pelas clulas no seu
ambiente imediato. Essas molculas interagem de modo a formar uma estrutura insolvel que pode ter vrias funes no desenvolvimento. Em algumas situaes, ela pode
separar dois grupos adjacentes de clulas e prevenir qualquer interao. Em outros
casos, a matriz extracelular pode servir como o substrato no qual as clulas migram, ou
pode at induzir diferenciao em certos tipos celulares. Um tipo de matriz mostrado
na Figura 3.24. Aqui, uma lmina de clulas epiteliais est adjacente a uma camada de
tecido mesenquimatoso frouxo. As clulas epiteliais formaram uma apertada camada
extracelular chamada lmina basal; as clulas mesenquimatosas secretam uma frouxa
lmina reticular. Juntas, essas camadas constituem a membrana basal da lmina de
clulas epiteliais. Existem trs componentes principais na maioria de matrizes
extracelulares: colgeno, proteoglicanos e glicoprotenas grandes que so chamadas
molculas de adeso a substrato (Tabela 3.2).
Epitlio
Lmina basal
Colgeno
Figura 3.24
Localizao e formao da matriz extracelular no embrio de

galinha. A micrografia eletrnica
de varredura mostra a matriz extracelular na juno das clulas
epiteliais (acima) e mesenquimatosas (abaixo). As clulas epiteliais sintetizam uma lmina densa com base de glicoprotena,
enquanto as clulas mesenquimatosas secretam a lmina reticular
feita primariamente de colgeno.
(Cortesia de R. L. Trelsted.)
99
100
Tabela 3.2 Principais constituintes da matriz extracelular

Matriz extracelular mesenquimatosa
Lmina basal das clulas epiteliais
COLGENOS
COLGENO IV
Molculas longas e delgadas (Tipo I o mais comum; Tipos II,

III, e V-XIII so tambm encontradas) que se organizam para
formar fibrilas, usualmente com 60-70 nm de dimetro.
Colgenos proporcionam fora e estabilidade aos tecidos.
Os componentes estruturais majoritrios da lmina basal. Ao contrrio de outros colgenos, suas fibrilas so como um fino arame de
galinheiro e se organizam em um substrato semelhante a feltro.
PROTEOGLICANOS DA MATRIZ
PROTEOGLICANOS DA MATRIZ
Compostos de protenas e dissacardeos repetitivos (glicosaminoglicanos). Glicosaminoglicanos incluem cido hialurnico, uma enorme
molcula (108 Da) que liga grandes quantidades de gua. Proteoglicanos sulfatados compreendem uma protena linear interna qual esto
ligadas cadeias de um ou mais glicosaminoglicanos sulfatados
(condroitina, heparan, queratan e dermatan sulfato).
Proteoglicanos estimulam e modulam movimentos celulares; sua
disponibilidade sugere que podem ter outras propriedades no
conhecidas.
cido hialurnico e proteoglicanos sulfatados so freqentes na lmina basal. Sua presena pode facilitar a passagem de produtos
secretados pela lmina.
MOLCULAS DE ADESO DE SUBSTRATO
Laminina, o componente funcional majoritrio da lmina basal. Um
trmero de glicoprotena com stios de adeso para a membrana celular, colgeno IV e glicosaminoglicanos.
Lmina basal pode conter fibronectina, tenascina, nidogen e outras
glicoprotenas adesivas.
MOLCULAS DE ADESO DE SUBSTRATO

Molculas s quais clulas aderem permitindo-lhes que se movam.
Elas incluem fibronectina, condronectina e tenascina.
Fonte: Adaptado de Bard, 1990.
COLGENO. Colgeno uma famlia de glicoprotenas contendo altas porcenta-
gens de resduos de glicina e prolina. Quase metade das protenas do corpo so

constitudas de colgeno, que o principal suporte estrutural de quase todos os
rgos dos animais. Existem numerosos tipos de colgeno servindo funes especiais. Colgeno Tipo I, encontrado nas matrizes extracelulares da pele, tendes e
ossos, perfaz quase 90 porcento do colgeno do corpo. Colgeno Tipo II mais
evidente como secreo das clulas cartilaginosas, mas tambm encontrado na
notocorda e no corpo vtreo do olho. Vasos sangneos apresentam colgeno Tipo
III, e o Tipo IV encontrado na lmina basal produzida por clulas epiteliais (Vuorio,
1986). Outros tipos de colgeno so encontrados ao longo do corpo, especialmente
em cartilagem. Colgeno importante para a formao da lmina basal, e tambm
est implicado na ramificao dos tbulos epiteliais nas glndulas salivares, pulmes e outros rgos. [cell6.html]
PROTEOGLICANOS. So tipos especficos de glicoprotenas nas quais: (1) o peso
dos resduos de carboidratos muito maior do que o da protena; (2) os carboidratos
so cadeias lineares compostas de dissacardeos repetitivos. Usualmente, um dos
acares do dissacardeo tem um grupo amino e a unidade repetitiva chamada glicosaminoglicano (GAG). A Tabela 3.3 lista os glicosaminoglicanos mais comuns; a estrutura bsica dos proteoglicanos mostrada na Figura 3.25. A interconexo de protena e carboidrato forma uma matriz semelhante a uma rede, e em muitos tipos de clulas
mveis, o proteoglicano envolve as clulas impedindo que elas se juntem (Figura
3.26). A consistncia da matriz extracelular depende da relao entre colgeno e proteoglicanos. Cartilagem, que tem uma alta porcentagem de proteoglicanos, macia,
enquanto tendes, que contm predominantemente fibras de colgeno, so rgidos.
Na lmina basal predominam os proteoglicanos que formam uma peneira molecular
alm de propiciar suporte estrutural.
101
Monmeros de proteoglicanos
Pequenos glicosaminoglicanos
(tal como condroitina sulfato)
Protena
esqueleto
cido D-glucurnico
N-acetil-D-glucosamina
cido
hialurnico
cido hialurnico
Figura 3.25
Glicosaminoglicano
Glicoprotenas
ligantes
Agregados de
proteoglicanos
Tabela 3.3
A estrutura da subunidade e a montagem de

um proteoglicano complexo. O dissacardeo
repetitivo do glicosaminoglicano (tal como
condroitina sulfato; veja Tabela 3.3) se liga a
um esqueleto protico relativamente pequeno (colorido), para produzir as cadeias de proteoglicanos. Essas cadeias podem ser conectadas por glicosamino-glicanos mais longos
(mostrado aqui como cido hialurnico) para
produzir redes complexas. Glicoprotenas
ligantes estabilizam essas ltimas associaes.
(Modificado de Cheney e Lash, 1981.)
Unidades dissacardicas repetitivas de glicosaminoglicanos mais comuns

encontradas em proteoglicanos da matriz
Glicosaminoglicano
Unidade dissacardica repetitivaa
Distribuio
cido hialurnico
cido glucurnico-Nacetilglucosamina
cido glucurnico-Nacetigalactosamina sulfato
[cido glucurnico ou idurnico]
N-acetilgalactosamina sulfato
Galactose-N-acetilglucosamina
sulfato
[cido glucurnico ou idurnico]
N-acetilglucosamina sulfato
Tecidos conjuntivos, osso,

corpo vtreo
Cartilagem, crnea, artrias
Condroitina sulfato
Dermatan sulfato
Queratan sulfato
Heparan sulfato
Pele, corao, vasos sangneos

Cartilagem, crnea
Pulmo, artrias, superfcie celular
a
Essas so unidades repetitivas tpicas desses glicosaminoglicanos. Entretanto, algumas regies de cada GAG podem ter
sacardeos ligeiramente modificados.
102
(A)
(B)
(D)
(C)
Figura 3.26
Capa de proteoglicanos envolvendo clulas mveis. (A) Capa de hialuronidato envolve

mioblastos de galinha. Mioblastos em cultura
excluem pequenas partculas (nesse caso,
hemcias fixadas) em distncia significante da
borda celular. (B) quando os mioblastos so
tratados com hialuronidase (a qual dissolve cido hialurnico), essa capa extracelular desaparece. (C) A capa tambm desaparece quando
os mioblastos cessam a diviso e se juntam
enquanto se diferenciam. (D) Micrografia eletrnica de hialuronidato em soluo aquosa
mostra uma rede fibrilar ramificada. (A-C de
Orkin et al., 1985, cortesia de B. Toole; D de
Hadler et al., 1982, cortesia de N. M. Hadler.)
Proteoglicanos tambm so importantes como mediadores de conexes entre

tecidos adjacentes em um rgo. No rgo, eles renem clulas soltas para formar
uma lmina epitelial* (San Antonio et al.,1987; Thesleff et al., 1989; Vainio et al.,
1989; Bernfield e Sanderson, 1990). Em alguns casos, proteoglicanos secretados por
um tipo de clula so essenciais para o crescimento de clulas vizinhas. Axnios
dos gnglios da raiz dorsal tm proteoglicanos de heparan sulfato entre suas protenas da superfcie celular; a remoo desses proteoglicanos impede a proliferao
ao seu redor, das clulas de Schwann associadas (Ratner et al.,1985). Uma maneira
pela qual cadeias de glicosaminoglicanos, de proteoglicanos, podem funcionar
reter e apresentar fatores de crescimento para receptores celulares. Fatores de crescimento so protenas semelhantes a hormnios que regulam mitose ou diferenciao quando se ligam a determinadas clulas. Entretanto, o receptor celular para o
fator de crescimento freqentemente no liga o fator com grande afinidade. Na
verdade, o fator inicialmente ligado pelos carboidratos do proteoglicano, e isso
concentra o fator de crescimento localmente, de modo a ser possvel a ligao com
o receptor (Massagu, 1991; Yayon et al.,1991).
GLICOPROTENAS EXTRACELULARES. Matrizes extracelulares contm uma va-
riedade de outras molculas especializadas, tais como: fibronectina, laminina e tenascina. Essas glicoprotenas grandes provavelmente so responsveis pela organizao de colgeno, proteoglicanos e clulas em uma estrutura ordenada. Fibronectina um dmero de glicoprotena, muito grande (460-kDa), sintetizada por
fibroblastos, condrcitos, clulas endoteliais, macrfagos e certas clulas epiteliais
(como hepatcitos e amnicitos). Uma funo da fibronectina servir como adesivo
*Proteoglicanos de heparan sulfato so considerados como agregadores de condrcitos, as

clulas produtoras de cartilagem. Nveis excessivos de glicose inibem a sntese do esqueleto de
protena do proteoglicano, inibindo a formao da cartilagem. Leonard e colaboradores (1989)
propuseram esse como um possvel mecanismo para explicar problemas esquelticos em crianas
nascidas de mes severamente diabticas.
103
molecular em geral, ligando clulas a substratos, tais como: colgeno e proteoglicanos. Fibronectina tambm organiza a matriz extracelular por ter vrios pontos de
ligao distintos, que interagindo com as molculas apropriadas produz um alinhamento adequado de clulas e sua matriz extracelular (Figura 3.27).
Como ser visto em captulos posteriores, fibronectina tem tambm um papel importante na migrao celular. As rodovias pelas quais se movem certas clulas
migratrias so pavimentadas com essa protena. A migrao de clulas mesodrmicas
na gastrulao vista na superfcie de fibronectina em muitas espcies, e o movimento
dessas clulas cessa quando a fibronectina localmente removida. Em embries de
galinha, os precursores do corao, as clulas precardacas, migram na fibronectina
para se mover das laterais do embrio para a linha mediana. Se embries de galinhas
so injetados com anticorpos fibronectina, as clulas precardacas no migram para
a linha mediana e desenvolvem dois coraes separados. Anticorpos fluorescentes
fibronectina demonstraram um gradiente da protena no caminho de migrao entre o
endoderma e o mesoderma. Se essa regio for cortada e sofrer uma rotao, as clulas
do corao seguem o gradiente para novas posies se afastando da linha mediana
(Linask e Lash, 1988a,b). Assim, a fibronectina parece ter um papel principal na migrao das clulas precardacas para a linha mediana do embrio. Outros tipos de clulas,
como as clulas germinativas, precursoras de embries do sapo, tambm migram sobre clulas que secretam fibronectina em suas superfcies (Heasman et al.,1981).
Laminina um componente principal da lmina basal. composta de trs cadeias
peptdicas, e, como fibronectina, pode se ligar ao colgeno, glicosaminoglicanos e clulas. O colgeno ligado por laminina do Tipo IV (especfico para lmina basal), e a regio
ligante de clulas da laminina reconhece principalmente clulas epiteliais e neurnios. A
adeso de clulas epiteliais laminina (na qual elas se assentam e usam) muito maior do
que a afinidade de clulas mesenquimatosas pela fibronectina ( qual elas devem se ligar
e liberar se dever haver migrao). Como a fibronectina, a laminina tem um papel na
montagem da matriz extracelular, promovendo adeso celular e crescimento, mudando a
forma da clula e permitindo a migrao celular (Hakomori et al.,1984).
Nem todas grandes glicoprotenas celulares promovem adeso celular. Tenascina
(tambm chamada citotactina) se assemelha a fibronectina em mais ou menos metade
Figura 3.27
Fibronectina no embrio de galinha em desenvolvimento. (A) Anticorpos fluorescentes para

fibronectina mostram que a deposio de protena no embrio de 24 horas se situa ao longo
da lmina basal de muitos rgos. (B) Estrutura e domnios de ligao na fibronectina. Os
retngulos representam domnios resistentes
a proteases. O domnio para a ligao de fibroblastos compreende duas unidades, o stio
RGD e o stio de alta afinidade; ambos so
essenciais para ligao da clula. Clulas da
crista neural de aves tm outro stio necessrio
para sua mobilidade em um substrato de fibronectina. Outras regies na fibronectina permitem ligaes com colgeno, heparina* e outras
molculas da matriz extracelular. (A cortesia
de J. Lash; B conforme Dufour et al., 1988.)
(A)
Stio de alta
afinidade
(B)
Domnios para ligao

de clulas da crista
neural de aves
CS1
RGDS
COOH
H 2N
Domnio
ligante
de fibrina e
heparina
Domnio
ligante
de colgeno
Domnios ligantes
de clulas para
fibroblastos
Stio II
ligante de
heparina
Stio II
ligante de
fibrina
*Heparina uma poro de um proteoglicano de heparina secretada por mastcitos e

basfilos. Heparan e heparan sulfato so nomes
dados a glicosaminoglicanos similares encontrados na matriz extracelular ou na superfcie da
clula. Presume-se que os stios de ligao para
heparina sejam os mesmos que os para heparan
sulfato (Bernfield e Sanderson, 1990).
104
do comprimento da molcula, e encontrada transitoriamente em vrias matrizes

extracelulares durante o desenvolvimento embrionrio. Entretanto, diferentes clulas
reagem de maneira diferente tenascina. Algumas clulas aderem a ela, outras so
arrebanhadas e se desligam da tenascina (Figura 3.28; Spring et al., 1989). Diferentes
quantidades relativas de fibronectina e tenascina podem gerar substratos de vrios
graus de adesividade. Alm disso, tenascinas parecem aumentar a sntese e secreo
de proteases das clulas que nela se localizam (Werb et al., 1990). Ambas as caractersticas podem ser importantes na gerao de vias para a migrao celular, e na remodelao da matriz extracelular durante o desenvolvimento (Tan et al., 1987; BronnerFraser, 1988; Wehrle e Chiquet, 1990).
Figura 3.28
Inibio de adeso celular por tenascina.

Fibronectina e tenascina foram colocadas em
placas de cultura de tecidos, dispostas em forma
de letras. Fibroblastos foram adicionados s
placas podendo aderir e migrar. O resultado
mostra que fibronectina foi o substrato preferido
no plstico da cultura de tecidos, enquanto que
as clulas no aderiram ou migraram bem sobre
a tenascina. (Cortesia de M. Chiquet.)
Receptores celulares para molculas da matriz extracelular

INTEGRINAS. A habilidade de uma clula em ligar essas glicoprotenas adesivas
depende da sua capacidade em expressar um receptor da membrana, que se torna o
lugar de ligao na clula para essas grandes molculas. Os principais receptores de
fibronectina foram purificados usando anticorpos monoclonais que bloqueiam a
ligao das clulas fibronectina (Chen et al.,1985; Knudsen et al., 1985). Foi observado que o complexo receptor de fibronectina capaz no s de ligar fibronectina
no exterior da clula, como tambm protenas do citoesqueleto dentro da clula.
Ento, parece que o complexo receptor de fibronectina atravessa a membrana celular
e une dois tipos de matrizes. Dentro da clula, serve como um stio de ancoragem
para os microfilamentos de actina que movimentam a clula; fora da clula, se liga
fibronectina da matriz extracelular (Figura 3.29). Horwitz e colaboradores (1986;
Tamkun et al., 1986) denominaram essa famlia de receptores proticos como
integrinas porque elas integram as plataformas intra e extracelulares permitindo que
funcionem conjuntamente. Protenas integrinas foram encontradas atravessando a
membrana de numerosos tipos de clulas. No lado extracelular, integrina se liga
seqncia arginina-glicina-aspartato (RGD) de vrias protenas adesivas em matrizes extracelulares, inclundo vitronectina (encontrada na lmina basal do olho), fibronectina e laminina (Ruoslahti e Pierschbacher, 1987). No lado citoplasmtico, a
integrina se liga talina e -actinina, duas protenas que se ligam aos microfilamentos de actina. Essa ligao dupla permite o movimento da clula pela contrao dos
microfilamentos de actina contra a matriz extracelular fixa (veja Wang et al., 1993).
Tipos diferentes de clulas podem ter diferentes molculas de integrinas com diferentes afinidades por molculas da matriz extracelular (Hemler et al., 1987; Hemler,1990).
Cada molcula de integrina tem duas subunidades distintas, e , e diferentes
combinaes binrias das subunidades e permitem que a integrina se ligue a
determinadas molculas extracelulares. Por exemplo, 21 se liga ao colgeno e
laminina, enquanto 41 se liga somente fibronectina.
Ambas as unidades e so necessrias para a ligao com fibronectina ou
laminina, mas somente a unidade conecta com o citoesqueleto interno. Durante a
migrao, as ligaes unindo a unidade da integrina ao citoesqueleto, podem ser
continuamente quebradas e refeitas por uma protease que cliva talina e est especificamente localizada em stios da membrana celular onde a integrina se liga ao substrato.
possvel que essa protease quebre a ponte entre o receptor de fibronectina e o
citoesqueleto (Beckerle et al., 1987).
A importncia de integrinas dramaticamente ilustrada durante a embriognese
de Drosophila. Como as integrinas de vertebrados, as integrinas de Drosophila so
compostas de subunidades e que atravessam a membrana celular. Nas duas
integrinas de Drosophila que so conhecidas, as subunidades so idnticas, mas
as subunidades so diferentes. Essas duas integrinas freqentemente funcionam
em conjunto efetuando adeso tissular e celular durante o desenvolvimento. No
desenvolvimento da asa da Drosophila, duas lminas epiteliais so aproximadas. A
integrina PS1 est situada na superfcie basal do epitlio na asa presuntiva dorsal,
enquanto a integrina PS2 est na superfcie superior do epitlio na asa presuntiva
105
RGD
(A)
Fibronectina
Stio de ligao de RGD

Subunidade
de integrina
Subunidade
de integrina
Extracelular
Citoplasma
Actinina
Stios de
ligao
de clcio
Subunidade
de
integrina
Vinculina
Talina
ventral. Durante a metamorfose, esses dois epitlios se encontram e aderem para

formar a lmina de duas camadas da asa. Mutaes nas integrinas produzem asas
com regies onde os dois epitlios se separam, como evidenciado por bolhas
entre as duas lminas (Brower e Jaffe, 1989; Wilcox et al.,1989). Algumas mutaes
de integrinas em Drosophila so letais, porque integrina necessria para anexar
msculos epiderme e parede do intestino. Na mutao letal (1) myospheroid,
existe uma deficincia nos genes codificando a subunidade das integrinas de
Drosophila. Na ausncia dessa subunidade, nenhuma integrina se forma, e os
msculos somticos se contraem em esferas sem ligantes para a parede do corpo
e do intestino (Leptin et al.,1989).
Integrinas no so as nicas molculas capazes de se ligar laminina e fibronectina. Enquanto o receptor integrina se liga a uma seqncia RGD na cadeia A de
laminina, outro receptor protico de laminina na membrana celular se liga a uma seqncia diferente (Y1GSR) na cadeia B1 (Graf et al.,1987; Yow et al., 1988). Os receptores tm afinidade diferente por laminina, e essas podem ser importantes para sua
funo (Horwitz et al., 1985). A integrina a31 de fibroblastos, por exemplo, tem uma
afinidade relativamente baixa por laminina (Kd = 10-6 M), enquanto a afinidade por
laminina de seu receptor epitelial muito mais alta (Kd=2 x10-9 M). O receptor usado
pode ser importante em permitir que as clulas usem laminina ou como membrana
basal (nesse caso a afinidade do receptor seria alta) ou como um substrato para a
migrao (na qual receptores de afinidade menor seriam usados).
GLICOSILTRANSFERASES. Outro grupo de protenas que pode aderir clulas a
protenas da matriz extracelular so as glicosiltransferases da superfcie celular.
Essas enzimas ligadas membrana so rotineiramente encontradas no retculo endoplasmtico e nas vesculas de Golgi, onde elas so responsveis por adicionar
resduos de acar a peptdeos para produzir glicoprotenas. Existem numerosas
glicosiltransferases, cada uma especfica para um dado acar e algumas mostrando
tambm especificidade de substrato. Assim, galactosiltransferase uma enzima
capaz de transferir galactose de um molcula doadora ativada (UDP-galactose) a
uma unidade aceptora. Devem existir muitas galactosiltransferases com afinidades
para diferentes molculas aceptoras.
Galactosiltransferases so enzimas funcionais da membrana celular, e sua adeso
matriz extracelular representa uma catlise frustrada (Figura 3.30). A enzima necessita de dois substratos para completar a catlise, o carboidrato aceptor e o acar
ativado. As glicosiltransferases de membrana reconhecem o carboidrato receptor nas
Actinina
Microfilamento de actina
Figura 3.29
Dupla funo de integrinas ao se ligar com

matrizes extracelulares e com o citoesqueleto
interno. (A) Imunofluorescncia indireta corando os microfilamentos de actina de uma
clula extendendo um lamelapdio. As fibras
de actina irradiam da grade ordenada do citoesqueleto para o lamelapdio. (B) Diagrama
especulativo relacionando a ligao do citoesqueleto matriz extracelular atravs da molcula de integrina. (A de Lazarides, 1976,
cortesia de E. Lazarides; B conforme Luna e
Hitt, 1992.)
106
(A)
NDP-acar + aceptor
(B)
Enzima
glicosiltransferase
Glicosil transferase
NDP + acar-aceptor
Doador de acar
ativado (NDP-acar)
(C)
Aceptor
insolvel
Ligao
Figura 3.30
Interaes da superfcie celular atravs de glicosiltransferases. (A) A reao padro de glicosiltransferase, na qual um acar transferido de um carregador nucleosdeo difosfato a
um receptor. (B) Interao entre glicosiltransferases e o grupo carboidrato (aceptor) na glicoprotena da matriz extracelular. Se o acar
ativado est ausente, ocorre a adeso (considera-se que isso ocorra durante a fertilizao).
Se o acar ativado est presente em pequenas
quantidades, a migrao permitida. (C) Marcao da glicosiltransferase da superfcie celular, incubando sees microscpicas de um embrio de galinha de 10-somitos, com UDP-[3H]
galactose. Radioatividade insolvel vista por
radioautografia mostra que esse acar radioativo foi transferido s superfcies celulares, especialmente das clulas mesodrmicas migratrias. (A e B modificado de Pierce et al., 1980;
C de Shur, 1977a, cortesia de B. Shur.)
Ligao de
NDP-acar
glicosiltransferase
Catlise cliva
acar de NDP e
o adiciona ao
aceptor
protenas da matriz extracelular tal como a laminina. Isso causa adeso. Quando o
segundo substrato aparece, essas adeses podem ser quebradas pela catlise. Em
algumas instncias (como fertilizao no camundongo, onde a galactosiltransferase
na membrana celular do espermatozide interage com componentes carboidrato da
matriz extracelular secretada pelo vulo), a adeso crtica e a catlise no ocorre. Em
clulas migratrias, tanto adeso como catlise so observadas (Toole, 1976; Shur,
1977a,b; Turley e Roth, 1979; Eckstein e Shur, 1989).
Adeso diferencial resultante de sistemas de adeso mltipla
Apesar de estarmos discutindo sistemas de adeso como unidades separadas, os
processos morfogenticos de interao clula-clula so provavelmente realizados
por combinaes de molculas de adeso celular. Por exemplo, a fixao inicial do
embrio de camundongo parede uterina parece ser mediada por vrios sistemas de
adeso. Primeiro, as clulas de fora do embrio (as clulas trofoblsticas) tm receptores para o colgeno e os proteoglicanos de heparan sulfato do endomtrio uterino, e
interferncia com essa ligao pode impedir a implantao (Farach et al.,1987; Carson
et al., 1988, 1993). Segundo, Dutt e colaboradores (1987) mostraram que as clulas
trofoblsticas podem tambm aderir s clulas uterinas atravs das glicosiltransferases da superfcie celular. Terceiro, Kadokawa e colaboradores (1989) mostraram que Pe E-caderinas esto presentes tanto no tecido uterino como no trofoblstico no local
da implantao. Assim, clulas podem ter muitos sistemas adesivos que lhes permitem
ligar e/ou migrar em substratos especficos.
As clulas tambm usam sistemas mltiplos para remodelar tecidos por digesto. Por
exemplo, quando embries de mamferos se embebem no tero, eles digerem seu caminho atravs do epitlio do tero e atravs de sua membrana basal de laminina, fibronectina
e colgeno Tipo IV (Behrendtsen et al., 1992). Crescimento do osso, regresso da cauda do
girino e formao de rgos ramificados (tais como: glndulas salivares, rins e pulmes)
tambm requerem quebra da membrana basal. Essa degradao controlada de molculas
da matriz extracelular completada por um conjunto de enzimas coletivamente chamadas
de Metaloproteinases degradativas de matrizes (Matrisian, 1992; Sato et al., 1994). Algumas dessas enzimas esto ligadas membrana celular, enquanto outras so secretadas
diretamente pelas clulas para dentro da matriz que ser dissolvida. Essas metaloproteinases
incluem: (1) colagenases que digerem colgenos dos Tipo I, II e III; (2) gelatinases que
digerem elastina e colgenos IV e V; e (3) estromelisinas que digerem proteoglicanos,
fibronectina e laminina. A ativao dos genes das metaloproteinases realizada
coordenativamente, e vrias dessas enzimas interagem para amplificar a intensidade das
enzimas digestivas (Figura 3.31). Logo aps a ativao das metaloproteinases, as clulas
ativam os genes para os inibidores dessas protenas. A produo e degradao controlada
da matriz extracelular parte essencial do desenvolvimento normal.
Colagenase
Procolagenase
Plasminognio
Ativao
transcricional
Uroquinase
Prostromelisina
Plasmina
Ativa
Estromelisina
Figura 3.31
Cascata de ativao de metaloproteinases de membrana. Uroquinase um ativador de

plasminognio, que cliva o plasminognio dando plasmina. Plasmina ativa as formas precursoras de estromelisinas e colagenases produzindo uma mistura de enzimas muito ativa capaz de
digerir matrizes extracelulares. (Conforme Matrisian, 1992.)
Molculas de receptores e vias de transduo de sinais

Os destinos das clulas so freqentemente determinados pelas interaes em suas
superfcies, onde uma molcula de receptor encontra seu ligante complementar. Mas
como que certas interaes na superfcie da clula causam a transcrio de genes
especficos dentro do ncleo? As vias entre a membrana celular e o genoma so
chamadas vias de transduo de sinais. Vrias vias foram descobertas, aqui sero
mencionadas as principais. Como veremos, elas parecem ser variaes de um mesmo
tema. O tema deveras elegante: cada receptor se estende atravs da membrana
tendo uma regio extracelular, uma regio transmembrana e uma regio citoplasmtica. Quando um ligante acoplado na regio extracelular, sua forma muda e a poro
citoplasmtica passa a ter atividade enzimtica. Essa atividade usualmente a de
uma quinase, que pode usar ATP para fosforilar protenas, inclusive a si mesmo. O
receptor ativo pode agora catalizar reaes que fosforilam outras protenas, e finalmente, a fosforilao ativa um fator de transcrio, antes dormente. Esse fator de
transcrio pode agora ativar (ou reprimir) um novo conjunto de genes. O ligante
iniciador da reao pode estar ligado a uma clula ou matriz extracelular ou, ainda,
ser uma molcula difusvel. Quando a molcula difusvel vem do sangue considerada um sinal endcrino. Se o sinal vem de clulas vizinhas difundindo-se de uma
para outra chamado parcrino.
AT
A via JAK
STA
JAK--ST
No Captulo 2 discutimos um conjunto de fatores de transcrio inativos at que
um sinal de outra clula produz sua fosforilao. Esses fatores de transcrio so
as protenas STAT (transdutores de sinais e ativadores de transcrio) (Ihle,1995,
1996). As STATs so fosforiladas pela forma ativa da uma famlia de quinases, a
JAK. A via JAK-STAT muito importante na diferenciao de clulas sangneas
e na ativao do gene de casena na produo de leite (Briscoe et al., 1994; Groner
e Gouilleux, 1995). Nesses casos, um certo fator de diferenciao se liga a seus
receptores membrana-abrangente, fazendo com que esse se dimerize (que forme
dmeros) (Figura 3.32). Protenas JAK esto ligadas a cada um dos receptores (em
suas respectivas regies citoplasmticas), e agora ao serem aproximadas fosforilam
o receptor em vrios stios. Os receptores ativados tm agora sua prpria atividade quinsica e podem fosforilar certos STATs inativos, induzindo sua dimerizao.
Os dmeros so a forma ativa dos STAT que so translocados para o ncleo onde
se ligam s regies especficas do DNA.
Colagenase
muito ativa
107
108
Figura 3.32
A via JAK-STAT nesse caso, a via de ativao do gene de casena por prolactina. O gene
de casena ativado durante a ltima fase do
desenvolvimento da glndula mamria (lactognica) e seu sinal a secreo de prolactina,
um peptdeo de 9 aminocidos da glndula
pituitria anterior. Prolactina causa a dimerizao dos receptores de prolactina nas clulas
epiteliais do ducto mamrio. Uma protena
JAK especfica (Jak2) est atrelada nesses
receptores. Quando os receptores so dimerizados, as protenas JAK fosforilam umas as
outras e os receptores vizinhos, ativando a
quinase dormente desses receptores. Esses
adicionam um grupo fosfato a um resduo de
tirosina (Y) de uma protena STAT especfica
(nesse caso Stat5). Isso permite que a protena se dimerize e seja translocada para o ncleo
onde se liga a regies especficas de DNA. Em
combinaes com outros fatores de transcrio (que presumivelmente esperavam sua chegada), a protena STAT ativa a transcrio do
gene de casena. GR o glucocorticide receptor, OCT1 um fator de transcrio geral, e TBP
o conjunto de protenas responsvel pela ligao de RNA polimerase. (Para detalhes, veja
Groner e Gouilleux, 1995.)
Receptores de prolactina
Prolactina
Receptores
dimerizados
ativos
Extracelular
Citoplasma
Envoltrio nuclear
Ncleo
Inicio da
transcrio
Promotor do
gene de casena
as
-R
A via RTK
-Ras
RTK-R
A via de transduo de sinais RTK-Ras foi uma das primeiras vias a unir as vrias reas
da biologia do desenvolvimento. Pesquisadores estudando olhos de Drosophila,
vulvas de nematdeos e cnceres humanos chegaram concluso que estudavam o
mesmo gene. A via RTK-Ras comea na superfcie celular, onde o receptor tirosina
quinase liga seu ligante especfico. Ligantes que se ligam a RTKs incluem fatores de
crescimento fibroblsticos, fatores de crescimento epidrmico e fatores de crescimento derivados de plaquetas. O receptor tirosina quinase abrange a membrana e, quando
conectado com seu ligante, sofre uma mudana conformacional que permite sua
dimerizao. Esses dmeros tm uma atividade quinsica latente, ativada por mudana
conformacional fazendo com que os receptores se fosforilem um ao outro em resduos
particulares de tirosina. Assim, a introduo de um ligante no receptor causa uma
autofosforilao no domnio citoplasmtico do receptor.
A tirosina fosforilada no receptor reconhecida por uma protena adaptiva (Figura
3.33)especificamente, as tirosinas fosforiladas so reconhecidas por uma poro da
protena adaptativa chamada domnio SH2. As protenas adptativas servem como uma
ponte que liga a quinase fosforilada do receptor a um poderoso sistema intracelular de
sinalizao. Enquanto ligada ao receptor fosforilado pelo seu domnio SH2, a protena
adaptativa usa seu domnio SH3 para regular o ativador de uma protena Ras G. Normalmente, a protena de tipo selvagem Ras est na sua forma inativa e ligante de GDP.
Quando ativada pelo receptor ligante-acoplado, ela troca um fosfato de outro GTP
para transformar o GDP ligado em GTP. Essa catlise ajudada pelo fator de troca
guanina nucleotdeo. A Ras ligada a GTP a forma ativa da protena que transmite o
sinal. Aps a transmisso, o GTP hidrolizado a GDP. Essa catlise muito estimulada
Ligante
109
Figura 3.33
Receptor
Extracelular
Citoplasma
Ativao de
eventos
dependentes de
clcio e PKC
Fator de
transcrio ativo
Fator de
transcrio inativo
Ncleo
Modulao da
transcrio
pela complexao normal da protena Ras protena ativadora de GTP-ase (GAP).

Essa protena de 120-kDa aumenta a atividade hidrolizante de GTP mais de 100 vezes,
e retorna a Ras sua forma inativa (Trahey e McCormick, 1987; Gibbs et al., 1988).
Realmente, mutaes no gene RAS esto relacionadas com uma grande proporo de
tumores humanos (Shih e Weinberg, 1982), e as mutaes que tornam o gene
oncognico inibem a ligao da protena GAP. Sem a protena GAP, a protena Ras no
catalisa eficientemente a hidrlise de GTP permanecendo em sua configurao ativa
(Cales et al., 1988; McCormick,1989).
A protena Ras ativa associa-se com uma quinase chamada Raf. A protena Ras
coloca a protena inativa Raf na membrana celular onde ela se torna ativa (Leevers et
al.,1994; Stokoe et al., 1994). A protena Raf chamada MAP-quinase-quinase-quinase
(MAPKKK). (MAP quer dizer protena associada mitose, mas atualmente considerada como um conjunto maior de fatores de transcrio). A MAPKKK fosforila a
MAPKK que, por sua vez, pode fosforilar a MAP quinase. Essa ltima quinase fosforila
os fatores de transcrio que especificam o destino da clula ou a proliferao. Em
olhos de Drosophila, por exemplo, considera-se que a cascata ativa o fator de transcrio Sina (Sevenless-in-Absentia), cuja presena necessria para a diferenciao
do fotorreceptor 7 (Carthew e Rubin, 1990; Dickson et al., 1992).
Como veremos mais tarde neste livro, essa via crtica em numerosos processos
desenvolvimentais. Em humanos, mutaes nessa via do origem s formas mais
comuns de nanismo, incluindo acondroplasia, que ocorre em 1 entre 50.000 nascimentos. Aqui, o trax e a cabea crescem normalmente, mas os braos e as pernas so
encurtados proximalmente. A deficincia reside na proliferao mnima da cartilagem
da placa de crescimento dos ossos longos. A leso gentica parece estar no gene que
A via RTK-Ras amplamente usada. O receptor tirosina quinase dimerizado pelo ligante.
Isso causa a autofosforilao do receptor. A
protena SH3 reconhece as fosfotirosinas e
ativa as protenas intermedirias (GRB2 e
SOS), as quais ativam a protena Ras G por
permitir a fosforilao da poro GDP da Ras.
Ao mesmo tempo, as protenas GAP estimulam a hidrlise dessa ligao fosfato. A Ras
ativa capaz de ativar a protena quinase C
(PKC), que ao seu turno fosforila uma srie de
quinases. Por fim, a MAP quinase altera a expresso gnica, fosforilando certos fatores de
transcrio (que podem penetrar no ncleo
para mudar os tipos de genes transcritos) e
certos fatores de traduo (que alteram o nvel
de sntese de protenas). Em muitos casos, essa
via reforada pela liberao de ons clcio.
110
codifica o receptor 3 do fator de crescimento de fibroblastos (FGFR3) (Figura 9.19;

Rousseau et al., 1994; Shiang et al., 1994). Esse gene expresso nas clulas da cartilagem em desenvolvimento na placa de crescimento dos ossos longos. Quando ativado
por um FGF, o FGFR3 sinaliza o condrcito para parar de dividir e comear a diferenciao. As mutaes nesse gene causam um fentipo de ganho de funo onde o
mutante FGFR3 ativo constitutivamente (isto , sem a necessidade de ser ativado
por um FGF)* (Deng et al., 1996; Webster e Donoghue, 1996). [cell7.html]
* Nomes podem ser perigosamente ilusivos. Muitos compostos tm mais de uma funo na
clula, e o que fazem depende do contexto da clula. Certos fatores de crescimento podem inibir
o crescimento, e alguns fatores de transcrio podem ser utilizados para inibir a transcrio.
Realmente, alguns fatores de transcrio podem ser usados para regular a traduo. Aqui vemos que
molculas de adeso celular podem ser usadas para transduo de sinais. Protenas celulares no
respeitam nossas fronteiras disciplinares.
&
Especulaes
Mutaes negativas dominantes em receptores
significado funcional de uma

molcula ligante pode ser verificado eliminando seu receptor.
Uma maneira de fazer isso criando mutaes dominantes negativas de receptores. Esse tipo de experimento ser bem
sucedido se a dimerizao for crtica para
a funo do receptor. Os receptores FGF
ativos, em um caso, so dmeros de duas
molculas idnticas embebidas na membrana celular. O mutante dominante negativo no formar um dmero ativo, mesmo com um parceiro do tipo selvagem.
Portanto, quando presente em concentraes suficientemente altas, o receptor
mutante compete com receptores FGF
normais impedindo que suas protenas
sejam ativadas. Isso pode ocorrer em
mutaes naturais ou provocadas.
Amaya e colaboradores (1991) injetaram
mRNA de uma forma mutante de um receptor FGF em embries de duas clulas
de Xenopus. Essas blstulas no conseguem responder ao FGF (Figura 3.34).
Nesse experimento, embries que no tinham receptores FGF funcionais tinham
mesoderma posterior e lateral dramaticamente reduzido (Prancha 3).
(A)
FGFR normal:
FGF se liga causando dimerizao
do receptor de FGF
(B)
FGFR dominante negativo
FGF
FGFR
normal
Receptor de FGF
Domnio
da tirosina
quinase
Sinal
Receptores
sem domnios
intracelulares
so inativos
Sem sinal
FGFR
mutante
Excesso do receptor
mutante pode
seqestrar o receptor
normal do fator de
crescimento. Esse
heterodmero inativo.
Sem sinal
Figura 3.34
Ensaio para receptor dominante negativo para a importncia de um determinado receptor. O

receptor de FGF (FGFR) uma RTK transmembrana. (A) Quando dmeros de FGF se ligam
poro extracelular desses receptores, esses se dimerizam e seus dois domnios de protena
quinase se fosforilam mutuamente. Quando fosforilados, acionam um sinal atravs do citoplasma. (B) O receptor dominante negativo no tem o domnio da protena quinase. Quando liga
FGF, produz um dmero inativo, mesmo se o outro parceiro do tipo selvagem. Assim, o efeito
de FGF no transmitido clula.
111
A via do inositol fosfato

Algumas vezes, a transduo de um sinal da superfcie celular causa tantas mudanas,
que alteraes na expresso do gene constituem somente um pequeno subconjunto
do que faz o sinal. A ativao da via do inositol fosfato promove mudanas drsticas na
fisiologia da clula pela liberao de ons clcio do retculo endoplasmtico. Essa via
extremamente importante na ativao do espermatozide e do vulo, ambos necessitando de um aumento na concentrao intracelular de ons clcio.
Figura 3.35
A via do inositol fosfato. (A) A reao de

fosfolipase C, transformando PIP2 em DAG e
IP3. (B) Essa reao pode ser iniciada em dois
pontos principais na membrana celular. Primeiro, a via iniciada quando o receptor transmembrana ligado protena G ativado pela
introduo do ligante. Essa ativao resulta na
ligao de GTP protena heteromrica G e
sua dissociao em subunidades ativas. Essas
subunidades ativam enzimas fosfolipase C
(PLC) que podem catalizar a formao de DAG
e IP3. Em segundo lugar, a via pode ser ativada
pela via RTK. IP3 pode se ligar a um receptor
para liberar ons clcio do retculo endoplasmtico. Neste nterim, DAG (em presena dos
ons clcio liberados) ativa a protena quinase
C. A protena quinase estimula o transportador sdio/hidrognio a trocar ons hidrognio
celulares por ons sdio extracelulares, assim
levando a um aumento do pH.
(A)
Extracelular
Fosfolipase C
Citoplasma
(B)
RECEPTORES LIGADOS PROTENA G
RECEPTORES LIGADOS TIROSINA QUINASE (PDGF, EGF, etc).

Ligante
Ligante
Extracelular
Citoplasma
Protena G
Via IP 3 PATHWAY
MAP quinase
PKC
Receptor
IP 3
Retculo
endoplasmtico
Atividade
celular e
mitognese
112
A via pode ter dois pontos iniciais (Figura 3.35; Berridge, 1993; Shilling et al.,
1994). Um ponto de iniciao o receptor tirosina quinase, mencionado anteriormente. Alm de ativar a protena Ras G, as tirosina quinases ativadas podem
interagir com um tipo de enzima, fosfolipase C (PLC1-y1, que tambm tem um
domnio SH2 que reconhece as tirosinas autofosforiladas). Fosfolipase C pode
catalisar a hidrlise de fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PIP2) em dois segundos
mensageiros: inositol 1,4,5-trifosfato (IP3) e diacilglicerol (DAG). IP3 capaz de
abrir canais de clcio do retculo endoplasmtico, liberando uma grande quantidade de ons clcio no citoplasma. DAG ativa a protena quinase C, que por sua vez
ativa a bomba de protena que troca ons sdio por ons hidrognio (Swann e
Whitaker, 1986; Nishizuka, 1986). O resultado a elevao de ons intracelulares
de clcio e um aumento no pH intracelular.
Um segundo ponto de iniciao outra classe de receptores, algumas vezes chamado de receptores serpentina, porque tm sete domnios transmembrana e serpenteiam atravs da membrana. Esses receptores esto relacionados com outro tipo de
protena G, a protena G heteromrica. Quando o ligante liga-se ao seu receptor, esse
ativa a protena G. Essa ativao dissocia a protena G em suas subunidades, as quais
ativam outro conjunto de fosfolipase C, ou seja, PLC-1 e PLC-2. Esses dois tipos de
fosfolipase C podem clivar PIP2 em inositol 1,4,5-trifosfato e diacilglicerol. Como veremos em captulos posteriores, as mudanas nos ons hidrognio e clcio, efetuadas
por essa via, alteram no somente a transcrio de genes, mas tambm a traduo de
mRNA e a replicao de DNA.
Cruzamentos entre vias
Representamos as vias principais como se fossem cadeias lineares, onde a informao flui em condutes nicos. Na verdade, essas vias so apenas as principais
estradas pelas quais se escoa a informao, pois entre elas existem ruas e avenidas
que fazem as conexes entre elas. (Essa pode ser a razo da existncia de tantos
passos entre a superfcie da clula e o ncleo. Cada passo um ponto de regulao
em potencial e um potencial ponto de interseo). Essa comunicao cruzada pode
ser vista na Figura 3.35, onde duas vias reforam uma a outra. Deve-se lembrar
tambm que a clula tem numerosos receptores e est constantemente recebendo
muitos sinais simultaneamente. Em alguns casos, a transcrio de genes requer dois
sinais. Isso visto durante o desenvolvimento de linfcitos, onde dois sinais so
necessrios, cada um produzindo um dos dois peptdeos de um fator de transcrio
envolvido na produo de interleucina 2 (IL-2, tambm conhecida como fator de
crescimento da clula T). Um fator, c-Fos, produzido pela ligao do receptor da
clula T ao antgeno (Figura 3.36). Isso ativa a cascata Ras, criando um fator de
transcrio, Elk-1, ativador do gene c-fos que sintetiza c-Fos. O segundo sinal vem
da glicoprotena B7 na superfcie da clula que apresenta o antgeno. Esse sinal
ativa uma segunda cascata de quinases, finalmente produzindo c-Jun. Os dois
peptdeos, c-Fos e c-Jun, podem produzir a protena AP-1, um fator de transcrio
que se liga ao intensificador de IL-2 e ativa sua expresso (Liet al., 1996).
A matriz extracelular e a superfcie da clula como
fontes de sinais crticos para o desenvolvimento
Bissell e colegas (1982; Martins-Green e Bissell, 1995) propuseram que a matriz
extracelular capaz de induzir expresso gnica especfica em tecidos em desenvolvimento, especialmente aqueles do fgado e da glndula mamria, onde a induo de
fatores de transcrio especficos dependem da ligao clula-substrato (Liu et al.,
1991; Streuli et al., 1991; Notenboom et al.1996). Muitas vezes, a presena de integrina ligada previne a ativao de genes que especificam a morte celular (Brooks et al.,
1994; Montgomery et al., 1994). Portanto, a matriz extracelular uma fonte importante
de sinais que podem ser transduzidos para o ncleo para dar expresso gnica especfica. Estudos recentes mostraram que a ligao de integrinas matriz extracelular
CLULA APRESENTADORA DO ANTGENO
SINAL 1
SINAL 2
Citoplasma
MHC II
Antgeno
Receptor
da clula T
Extracelular
B7
CD28
Citoplasma
RAF
T-LINFCITO
ELK-1 ativa
transcrio de c-fos
Intensificador de
interleucina 2
Fator de transcrio AP-1
Ncleo
Transcrio de IL-2
Figura 3.36
Dois sinais so necessrios para efetuar a diferenciao de linfcitos T. O primeiro sinal vem de
receptores que ligam o antgeno apresentado na superfcie das clulas B ou macrfagos. O
segundo sinal vem da ligao da protena CD28 protena B7 que est na superfcie da clula
apresentante do antgeno. O primeiro sinal dirige a sntese de uma subunidade do fator de
transcrio AP-1. A outra subunidade sintetizada sob direo do segundo sinal. As duas
subunidades, c-fos e c-jun, formam o fator de transcrio AP-1 que pode ativar intensificadores
especficos para a clula T como os que regulam a produo de interleucina 2.
pode estimular a via RTK-Ras, como tambm pode estimular a interao da clula
com o L1, N-CAM e caderinas de uma clula vizinha (Bixby et al., 1994; Williams et
al., 1994a; Clark e Brugge, 1995). Caderinas (mesmo as solveis) podem dimerizar
receptores FGF exatamente como os ligantes normais de FGF, causando a liberao
de ons clcio, ativao transcricional e fenmenos de desenvolvimento caractersticos das respostas do FGF celular (Figura 3.37; Williams et al., 1994b; Doherty et al.,
1995). Comunicao cruzada quase certa acontecer quando as molculas de adeso celular so tambm transdutores de sinais.
Interaes recprocas na superfcie celular
Quando duas clulas interagem durante o desenvolvimento, ambas so modificadas
na maioria das vezes. Essa induo recproca mediada por interaes na membrana
113
114
Citoplasma
Molcula de
adeso celular
Receptor FGF
Extracelular
Citoplasma
Sinal
Figura 3.37
Possveis interaes de molculas de adeso celular com receptores de FGF. Os receptores FGF
podem ser seqestrados pelas molculas de adeso e colocados juntos. Isso pode ser feito
pela interao de molculas de adeso opostas, ou ligaes cruzadas de receptores de FGF das
membranas celulares opostas podem ativar seus domnios quinase.
celular. Uma via intensamente usada o sistema Wingless-Hedgehog. Nessa via,

duas clulas (ou grupo de clulas) so adjacentes; uma delas produz a protena
Hedgehog e a secreta. O peptdeo age na clula vizinha ocasionando a produo da
protena Wingless (Wnt). A protena Wingless, por sua vez, tambm secretada e se
liga clula vizinha, estimulando-a a continuar a sntese de Hedgehog. O resultado
a estabilizao de uma borda onde o tecido em um lado secreta protena Hedgehog, enquanto o tecido no outro lado produz Wingless. Essa borda crtica na
produo de segmentos e apndices em Drosophila, como tambm, subdivises
cerebrais e membros em mamferos (Figura 3.38; Ingham, 1994; Niswander et al.,
1994; Wilder e Perrimon, 1995). [cell8.html]
A superfcie celular um lugar extremamente importante para interaes desenvolvimentais. Essas incluem adeso diferencial de uma clula a outras, a adeso diferencial de um tipo de clula a uma matriz extracelular e a comunicao de sinais para a
diferenciao e diviso celulares. Em 1782, o ensaista francs Denis Diderot ps a
questo da morfognese no sonho febril de um fsico. Esse elemento podia imaginar
que o corpo era formado por uma mirade de pequenos corpos sensveis que se
juntavam para formar um agregado, mas ele no podia imaginar como esse agregado
poderia se tornar um animal. Estudos recentes mostraram que essa ordenao devida s molculas na superfcie dessas clulas. Em captulos subseqentes, veremos
com mais detalhes essas interaes morfogenticas. Estamos agora no estgio onde
podemos iniciar o estudo da embriognese precoce e ver a integrao entre os processos orgnicos, genticos e celulares no desenvolvimento animal.
Receptor Frizzled
Wingless / protena Wnt
Prot. Dishevelled
Protena
DPP
wingless
patched
decapentaplegic
Quinase Zw3
Prot. Armadillo (-catenina)
engrailed
Protena
Smoothened
Ci ativo
115
Figura 3.38
Interaes recprocas entre clulas na via

wingless-hedgehog em Drosophila. A protena Wingless secretada por uma clula e
se difunde a uma curta distncia. A clula
vizinha liga a protena Wingless originando
a ativao da protena, que bloqueia a ao
inibidora da quinase Zeste-white-3 sobre a
protena Armadillo (uma catenina). A protena Armadillo ativada induz a clula a
transcrever o gene hedgehog (hh). Essa protena secretada e ligada pela clula vizinha. Ligando a protena Hedgehog faz com
que a clula transcreva o gene wingless e
secrete a protena.
Ci inativo
hedgehog
Protena G
Protena
engrailed
Receptor
Patched
Protena
Hedgehog
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II
Padres de Desenvolvimento
4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo
5 Clivagem: Criando multicelularidade
121
167
6 Gastrulao: Reorganizando as clulas embrionrias
209
7 Incio do desenvolvimento vertebrado: Neurulao e ectoderma

8 Especificidade axnica
253
307
9 Incio do desenvolvimento vertebrado: Mesoderma e endoderma
341
CAPTULO 4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo
Fertilizao:
Iniciando um novo organismo
Desejo e desejo e desejo

Sempre o desejo procriativo do mundo.
Saindo da obscuridade iguais opostos
avanam,
Sempre substncia e aumento, sempre sexo,
Sempre uma tessitura de identidade, sempre
distino,
Sempre uma criao de vida.
WALT WHITMAN (1855)
O objetivo final de todas as intrigas amorosas, sejam elas cmicas ou trgicas, na

realidade mais importante que todas as outras finalidades na vida humana.
Ele se volta para nada menos que a composio da prxima gerao.
A SCHOPENHAUER
(CITADO POR C. DARWIN, 1871)
121
ERTILIZAO (FECUNDAO) o processo pelo qual duas clulas sexuais
(gametas) se fundem para criar um novo indivduo com potenciais genticos

derivados dos dois genitores. A fecundao, portanto, realiza duas atividades
separadas: sexo (a combinao de genes derivados dos dois pais) e a reproduo
(criao de novos organismos). Assim, a primeira funo da fecundao a de transmitir genes dos pais para a prole, e a segunda a de iniciar no citoplasma do ovo
aquelas reaes que permitem o desenvolvimento.
Embora os detalhes da fecundao variem de espcie para espcie, os eventos da
concepo consistem, em geral, de quatro atividades principais:
Contato e reconhecimento entre espermatozide e vulo. Na maioria dos
casos, isso assegura que o espermatozide e o vulo sejam da mesma espcie.
Regulao da entrada do espermatozide para o interior do vulo. Somente
um espermatozide pode, em ltima anlise, fecundar um vulo. Isso geralmente conseguido com a permisso de somente um espermatozide entrar no
vulo e a inibio da entrada de qualquer outro.
Fuso do material gentico do espermatozide e do vulo.
Ativao do metabolismo do ovo para comear o desenvolvimento.
Estrutura dos gametas

Existe um dilogo complexo entre vulo e espermatozide. O vulo ativa o metabolismo do espermatozide que essencial para a fecundao, e o espermatozide retorna
a mensagem ativando o metabolismo do vulo necessrio para o incio do desenvolvimento. Porm, antes de investigar esses aspectos da fecundao, temos que considerar as estruturas do espermatozide e do vulo dois tipos de clulas especializadas
para a fertilizao.
Espermatozide
Foi somente no sculo XIX que o papel do espermatozide na fertilizao tornou-se
conhecido. Anton van Leeuwenhoek, o microbiologista holands que co-descobriu o
espermatozide em 1678, acreditou inicialmente que ele continha animais parasitas vivendo em seu interior (da o termo espermatozides, significando animais do esperma). Assumiu originalmente que esses nada tinham a haver com a reproduo do
organismo onde se encontravam, porm, posteriormente chegou a acreditar que cada
espermatozide continha um embrio pr-formado. Leeuwenhoek (1685) escreveu que
121
122
Figura 4.1
A criana humana pr-formada no espermatozide, conforme representada por Nicolas

Hartsoeker (1964).
espermatozides eram sementes (tanto sperma como smen significam semente), e

que a fmea meramente proporcionava o solo nutriente no qual as sementes eram
plantadas. Sob esse aspecto, ele estava voltando a uma noo da procriao enunciada por Aristteles 2000 anos antes. Por mais que tentasse, Leeuwenhoek era continuamente desapontado em suas tentativas de achar um embrio pr-formado nos espermatozides. Nicolas Hartsoeker, o outro co-descobridor do espermatozide, desenhou uma figura do que pretendia encontrar: um ser humano pr-formado
(homnculo) dentro do espermatozide (Figura 4.1). Essa crena de que o espermatozide continha um organismo embrionrio inteiro, nunca recebeu muita aceitao,
porque implicava num enorme desperdcio de vida em potencial. A maioria dos investigadores consideravam o espermatozide como sem importncia (Veja Pinto-Correia,
1997, para detalhes sobre essa extraordinria histria). [fert1.html]
A primeira evidncia sugerindo a importncia do espermatozide na reproduo
veio de uma srie de experimentos realizados por Lazzaro Spallannzani em fins de 1700.
Spallanzani demonstrou que smen filtrado de r, livre de espermatozide, no fecundava vulos. Concluiu, porm, que o fluido viscoso retido pelo papel de filtro, e no o
espermatozide, era o agente da fertilizao. Ele acreditava, tambm, que os animais
espermticos eram parasitas.
A combinao das melhores lentes de microscpio e da teoria celular, levaram a
uma reapreciao da funo espermtica. Em 1924, J. L. Prevost e J. B. Dumas afirmaram que os espermatozides no eram parasitas, mas sim os agentes ativos da fertilizao. Notaram a existncia universal de espermatozides em machos sexualmente
maduros e sua ausncia em indivduos imaturos ou idosos. Essas observaes,
acopladas conhecida ausncia de espermatozides na mula estril, os convenceram
que existe uma ntima relao entre sua presena nos rgos e a capacidade
fecundadora do animal. Eles propuseram que o espermatozide penetra o vulo e
contribui materialmente para a gerao seguinte.
Essas assertivas no foram em geral levadas em considerao at a dcada de 1840,
quando A. von Kolliker descreveu a formao do espermatozide a partir de clulas
contidas em testculos adultos. Kolliker ridicularizou a idia que o smen poderia ser
normal e ainda assim tolerar a presena de um nmero enorme de parasitas. Mas ainda
assim, negou que haveria qualquer contato fsico entre espermatozide e vulo. Acreditava que o espermatozide excitava o desenvolvimento do vulo de maneira semelhante
aquela pela qual o m comunica sua presena ao ferro. Somente em 1876, Oscar Hertwig
e Hermann Fol, independentemente, demonstraram a entrada do espermatozide no
vulo e a unio de seus ncleos. Hertwig procurou um organismo adequado para observaes microscpicas detalhadas e descobriu que o ourio-do-mar Mediterrneo,
Toxopneustes lividus, era perfeito para isso. No somente era freqente na regio e
sexualmente maduro a maior parte do ano, como seus vulos eram abundantes e transparentes, mesmo sob alto aumento. Aps misturar espermatozide e vulo em suspenses, Hertwig repetidas vezes observou o espermatozide entrando no vulo e viu a
unio dos ncleos dessas clulas. Notou tambm que apenas um espermatozide era
visto penetrar em cada vulo e que todos os ncleos do embrio derivavam dos ncleos
fundidos por ocasio da fertilizao. Fol fez observaes semelhantes e detalhou o
mecanismo de penetrao do espermatozide. A fertilizao estava finalmente reconhecida como a unio de espermatozide e vulo, e a unio dos gametas do ourio-do-mar
permanece como um dos exemplos de fertilizao melhor estudado. [fert2.html]
Cada espermatozide consiste de um ncleo haplide, um sistema de propulso
para movimentar o ncleo, e um saco de enzimas que permitem a entrada do ncleo no
vulo. A maior parte do citoplasma do espermatozide eliminada durante o amadurecimento, deixando somente certas organelas modificadas para exercer a funo espermtica (Figura 4.2). Durante o transcorrer do amadurecimento, o ncleo haplide se
torna muito aerodinmico e seu DNA altamente comprimido. Na parte frontal desse
ncleo haplide comprimido est a vescula acrossmica, derivada do aparelho de
Golgi, contendo enzimas que digerem protenas e acares complexos; por isso, pode
123
ser considerado como uma vescula secretria modificada. Essas enzimas armazenadas so usadas para lisar os invlucros externos do vulo. Em muitas espcies, tais
como os ourios-do-mar, existe uma regio de molculas globulares de actina entre o
ncleo e a vescula acrossmica. Essas protenas so usadas para estender um processo de forma semelhante a um dedo durante os estgios precoces da fertilizao. Em
ourios-do-mar e vrias outras espcies, o reconhecimento mtuo entre espermatozide e vulo envolve molculas desse processo acrossmico. Juntos, o acrossomo e o
ncleo constituem a cabea do espermatozide.
Os meios pelos quais o espermatozide impulsionado variam de acordo com o
modo pelo qual a espcie se adaptou s condies ambientais. Em algumas espcies
(como o nematelminto parasitrio Ascaris), o espermatozide viaja por movimentao
amebide de extenses lamelipodiais da membrana celular. Na maioria das espcies,
porm, um espermatozide capaz de viajar por longas distncias agitando o seu
flagelo. Os flagelos so estruturas complexas. A sua principal poro motora chamada axonema. Um axonema formado pelos microtbulos que emanam do centrolo na
base do ncleo do espermatozide (Figuras 4.2 e 4.3). O centro do axonema consiste
de dois tbulos centrais rodeados por uma fileira de nove duplas de microtbulos.
Realmente, s um microtbulo est completo, contendo 13 protofilamentos; o outro
tem forma de C e tem apenas 11 protofilamentos (Figura 4.3B). Um modelo tridimensional de um microtbulo completo est apresentado na Figura 4.3C. Aqui vemos os 13
protofilamentos interligados; os quais consistem exclusivamente da protena dimrica,
a tubulina.
Embora a tubulina seja a base da estrutura do flagelo, outras protenas tambm
so crticas para a funo do flagelo. A fora para a propulso do espermatozide
proporcionada pela dinena, uma protena apensa aos microtbulos (Figura 4.3B). A
dinena hidrolisa molculas de ATP e pode converter a energia qumica liberada em
Golgi
remanescente
Centrolo
Flagelo
Centrolo
Flagelo
Vescula
acrossmica
e grnulo
Microtbulos
Poro
final
Ncleo
Mitocndrias
Aparelho
de Golgi
Cauda
Mitocndrias
Figura 4.2
Axonema
Mitocndrias
Centrolo
Ncleo
Membrana plasmtica
Vescula acrossmica
Poro mediana
Pescoo
Cabea do
espermatozide
A modificao de uma clula germinativa para formar um espermatozide de mamfero. O centrolo produz um longo flagelo na parte que vir a ser a extremidade
posterior do espermatozide, e o aparelho de Golgi forma a vescula acrossmica
na futura extremidade anterior. As mitocndrias (pontos abertos) agrupam-se ao
redor do flagelo perto da base do ncleo haplide e so incorporadas na parte
mediana do espermatozide. O citoplasma remanescente descartado e o ncleo
se condensa. O tamanho do espermatozide maduro foi aumentado em relao s
outras figuras. (Segundo Clermont e Leblond, 1955.)
124
Figura 4.3
O aparelho de movimentao do espermatozide. (A) Seo transversal do flagelo de um
espermatozide mamfero, mostrando o
axonema central e as fibras externas. (B) Diagrama interpretativo do axonema, mostrando o
arranjo 9 + 2 dos microtbulos e outros componentes flagelares. O diagrama esquemtico
mostra a associao de protofilamentos de
tubulina em um microtbulo duplo. A primeira
(A) poro do par duplo um microtbulo
normal compreendendo 13 protofilamentos. A
segunda (B) poro da dupla contm somente 11 (ocasionalmente 10) protofilamentos. (C)
Um modelo tridimensional do microtbulo A.
As subunidades -tubulina e -tubulina so
semelhantes, porm, no idnticas, e o
microtbulo pode mudar de tamanho polimerizando e despolimerizando subunidades de tubulina em qualquer um dos lados. (A cortesia de
D. M. Phillips; B segundo De Robertis et al.,
1975, e Tilney et al., 1973; C de Amos e Klug,
1974, cortesia dos autores.)
(A)
(C)
(B)
Membrana plasmtica
Trave radial
Cabea da trave
Nexina
Subfibra A
Subfibra B
Microtbulo central
MICROTBULO DUPLO
Brao interno de dinena

Brao externo de dinena
AXONEMA
energia mecnica que propulsiona o espermatozide. Essa energia pemite o

deslizamento ativo das duplas externas de microtbulos, levando o flagelo a se
curvar (Ogawa et al., 1977; Asai, 1996). A importncia da dinena pode ser avaliada
em indivduos com a sndrome gentica chamada de trade de Kartagener. Esses
indivduos no tm dinena em suas clulas ciliadas e flageladas, o que as torna
estruturas imveis. Machos com essa doena so estreis (espermatozide imvel),
susceptveis infees brnquicas (clios respiratrios imveis), e tm 50 porcento
de probabilidade de ter o corao do lado direito de seu corpo (Afzelius, 1976).
Outra importante protena flagelar parece ser a histona H1. Essa protena geralmente vista dentro do ncleo, onde dobra e aperta a cromatina em agregados. No
entanto, Multigner e colaboradores (1992), mostraram que essa mesma protena
estabiliza os microtbulos flagelados impedindo seu espalhamento.
O arranjo 9 + 2 dos microtbulos com os braos de dinena foi conservado nos
axonemas em todo o reino eucarioto, sugerindo que extremamente adequado na
transmisso de energia para a movimentao. A energia para mover o flagelo e assim
impulsionar o espermatozide vem dos anis de mitocndrias localizadas na regio
do pescoo do espermatozide (veja Figura 4.2). Em muitas espcies (notavelmente
mamferos) uma densa camada de fibras se interps entre a bainha mitocondrial e o
axonema. Essa camada fibrosa enrijece a cauda do espermatozide. Como sua espessura diminui na direo apical, as fibras provavelmente previnem que a cabea
do espermatozide balance abruptamente. Assim, o espermatozide sofreu extensa

modificao para assegurar a passagem de seu ncleo para o vulo.
Entretanto, a diferenciao do espermatozide no se completa nos testculos.
Aps sua expulso para a luz dos tbulos seminferos, os espermatozides so armazenados no epiddimo, onde adquirem a capacidade de se mover. Essa mobilidade
conseguida atravs de mudanas no sistema gerador de ATP (possivelmente atravs
da modificao da dinena), assim como de alteraes da membrana plasmtica que
permitem que ela se torne mais fluida (Yanagimachi, 1994). Os espermatozides liberados durante a ejaculao podem se mover, mas ainda no tm a capacidade de se ligar
ao vulo e fertiliz-lo. Esses estgios finais do amadurecimento espermtico (chamado capacitao) no ocorrem antes do espermatozide ter permanecido no interior do
trato reprodutivo feminino durante um certo tempo.
O vulo
Todo o material necessrio para o comeo do crescimento e desenvolvimento tem
que estar armazenado no vulo maduro. Enquanto o espermatozide eliminou a
maior parte do seu citoplasma, o vulo em desenvolvimento (chamado de ocito
antes de tornar-se haplide) no somente conserva seu material, mas continua a
acumul-lo ativamente. Sintetiza ou absorve protenas, como a gema, que atuam
como reservatrios de alimento para o embrio em desenvolvimento. Assim, gametas femininos das aves so enormes clulas singulares que se tornaram entumecidas
pela acumulao de gema. Mesmo vulos com gema relativamente esparsa so comparativamente grandes. O volume do vulo do ourio-do-mar de aproximadamente
2 x 10-4 m3, mais de 10.000 vezes aquele do espermatozide. A representao do
vulo do ourio-do-mar e do espermatozide na Figura 4.4 mostra seus tamanhos
relativos, assim como os vrios componentes do vulo maduro. Assim, enquanto o
espermatozide e o vulo tm componentes nucleares haplides iguais, o vulo tem
ainda um notvel reservatrio citoplasmtico acumulado durante seu amadurecimento. Esse armazm citoplasmtico inclui protenas, RNAs, substncias qumicas
protetoras e fatores morfogenticos:*
Protenas. Ser longo o perodo a transcorrer antes do embrio ser capaz de se
alimentar ou obter alimento de sua me. As clulas embrionrias precoces
precisam de um certo suprimento armazenvel de energia e aminocidos. Em
muitas espcies isso conseguido pelo acmulo de protenas na gema do ovo.
Muitas protenas da gema so sintetizadas em outros rgos (fgado, corpo
gorduroso) e viajam atravs do sangue materno para o ovo.
Ribossomos e tRNA. O embrio precoce precisa produzir muitas de suas prprias protenas; em algumas espcies, ocorre um surto de sntese protica pouco
aps a fecundao. A sntese protica conseguida pelos ribossomos e tRNA,
preexistentes no vulo. O vulo em desenvolvimento tem mecanismos especiais para sintetizar ribossomos, e certos ocitos de anfbios produzem at 1012
ribossomos durante a prfase meitica.
RNA mensageiro. Na maioria dos organismos, as mensagens para protenas
sintetizadas durante o desenvolvimento inicial j esto acondicionadas no
ocito. Estima-se que os vulos do ourio-do-mar contm de 25.000 a 50.000
tipos diferentes de mRNA. Porm, esse mRNA permanece dormente at aps a
fertilizao (veja Captulo 12).
Fatores morfogenticos. Essas molculas dirigem a diferenciao celular
em certos tipos de clulas. Parecem estar localizadas em diferentes regies
do vulo e se segregam em clulas diferentes durante a clivagem (veja
Captulo 13).
* Os contedos do vulo variam muito de espcie para espcie. A sntese e a colocao desses
materiais ser tratada no Captulo 22, quando discutirmos a diferenciao das clulas germinativas.
125
126
Figura 4.4
Estrutura do vulo do ourio-do-mar durante

a fertilizao. (Segundo Epel, 1977.)
Envoltrio vitelnico
Camada gelatinosa
Espermatozide
Membrana
plasmtica
Grnulo de gema
Grnulo cortical
Mitocndria
Ncleo
Substncias qumicas protetoras. O embrio no pode fugir de predadores ou

movimentar-se para um ambiente mais seguro, necessitando, por isso, estar
equipado para enfrentar esses fatores. Muitos vulos contm filtros ultravioleta
e enzimas de reparos de DNA que os protegem da luz solar; alguns vulos
contm molculas que predadores potenciais acham desagradveis; a gema de
vulos de aves contm at mesmo anticorpos. [fert3.html]
Dentro desse enorme volume de citoplasma reside um grande ncleo. Em algumas
espcies (por exemplo, ourios-do-mar), o ncleo j haplide no momento da fertilizao. Em outras espcies (incluindo muitos vermes e a maioria dos mamferos), o
ncleo do vulo ainda diplide, e o espermatozide penetra antes das divises
meiticas estarem completas. O estgio do ncleo do vulo no momento da entrada
do espermatozide est ilustrado na Figura 4.5.
Envolvendo o citoplasma est a membrana plasmtica do vulo. Essa membrana deve regular o fluxo de certos ons durante a fertilizao e deve ser capaz de
se fundir com a membrana plasmtica do espermatozide. Acima da membrana
plasmtica est o envoltrio vitelnico (Figura 4.6). O componente principal desse
envoltrio forma uma esteira fibrosa sobre o vulo. Essa esteira suplementada
por extenses de glicoprotenas da membrana plasmtica e pontes proteinceas
vitelnicas que aderem a esteira membrana (Mozingo e Chandler, 1991). O
envoltrio vitelnico essencial para a ligao espcie-especfica do espermatozide. Nos mamferos, o envoltrio vitelnico uma matriz extracelular separada e
grossa chamada zona pelcida. O vulo do mamfero tambm rodeado por uma
camada de clulas, as clulas do cumulus (Figura 4.7). A camada cumular representa clulas foliculares ovarianas que estavam alimentando o vulo quando da
sua liberao do ovrio. O espermatozide dos mamferos tem que passar por
essas clulas para fertilizar o vulo*.
Imediatamente abaixo da membrana plasmtica do vulo est uma fina casca (de
aproximadamente 5m) de um citoplasma gel-smile chamado de crtex. O citoplasma
nessa regio mais duro que o citoplasma interno e contm altas concentraes de
molculas globulares de actina. Durante a fertilizao, essas molculas polimerizam-se
*Em mamferos, as coberturas extracelulares do vulo esto divididas em duas regies: A zona
pelcida e o cumulus. O termo corona radiata refere-se quelas clulas foliculares imediatamente
adjacentes zona pelcida; so as clulas mais internas do cumulus.
Corpos
polares
Vescula
germinal
Ocito
primrio
jovem
Os vermes aneldeos
Dinophilus e
Sacocirrrus
O verme poliqueta
Histriobdella
O platelminto
Otomesostoma
O onicforo
Peripatopsis
Ocito primrio
totalmente
crescido
O nematelminto
Ascaris
O mesozorio Dicyema
A esponja Grantia
O verme poliqueta
Myzostoma
O verme concha
Nereis
O molusco Spisula
O verme equiuride Urechis
Ces e raposas
127
Proncleo
feminino
Primeira metfase
Segunda metfase
Meiose completa
O verme nemerteano
Cerebratulus
O verme poliqueta
Chaetopterus
O molusco
Dentalium
O verme central
Pectinaria
Muitos insetos
Estrela-do-mar
O anfioxo
Branchiostoma
Anfbios
Mamferos (maioria)
Peixes
Cnidrios
(e.g., anmonas)
Ourios-do-mar
Figura 4.5
para formar longos fios de actina conhecidos como microfilamentos. Microfilamentos

so necessrios para a diviso celular, e so tambm usados para estender a superfcie
do vulo para o interior das microvilosidades, que ajudam a entrada do espermatozide para dentro da clula (veja Figura 4.6; veja tambm a Figura 4.19). Ainda, dentro
desse crtex esto os grnulos corticais (veja Figuras 4.4 e 4.6). Essas estruturas
Microvilosidades
(A)
Estgios de maturao do vulo no momento

da entrada do espermatozide em diferentes
animais. (Segundo Austin, 1965.)
Envoltrio vitelnico
(B)
Figura 4.6
A superfcie do vulo do ourio-do-mar. (A) Micrografia eletrnica de varredura de um vulo

antes da fertilizao. A membrana plasmtica est exposta onde o envoltrio vitelnico foi
retirado. (B) Microfotografia eletrnica de transmisso de um ovo no-fertilizado, mostrando
microvilosidades e a membrana plasmtica, que esto estreitamente cobertas pelo envoltrio
vitelnico. Um grnulo cortical aparece diretamente abaixo da membrana plasmtica do vulo.
(de Schroeder, 1979, cortesisa de T. E. Schroeder.)
Grnulo cortical
128
Cumulus
vulo
Zona
pelcida
(A)
(B)
Figura 4.7
vulos de hamster imediatamente antes da fecundao. (A) O ovo do hamster, ou vulo, est
encaixado na zona pelcida. Essa, por sua vez, est envolvida por clulas do cumulus. Uma clula
do corpo polar, produzida durante a meiose, tambm est dentro da zona pelcida. (B) Em menor
aumento, um ocito de camundongo mostrado em relao ao cumulus. Partculas de carbono
coloidal (tinta Nanquim) so excludas pela matriz de hialuronidase. (Cortesia de R. Yanagimachi.)
ligadas membrana so homlogas vescula acrossmica do espermatozide, sendo

organelas derivadas do Golgi contendo enzimas proteolticas. No entanto, enquanto
cada espermatozide contm uma vescula acrossmica, cada vulo do ourio-do-mar
contm aproximadamente 15.000 grnulos corticais. Alm das enzimas digestivas, os
grnulos corticais tambm contm mucopolissacardeos, glicoprotenas adesivas e
protena hialina. As enzimas e os mucopolissacardeos atuam na preveno da entrada de outros espermatozides no vulo aps a entrada do primeiro, e as protenas
hialinas e adesivas envolvem o embrio precoce providenciando apoio aos blastmeros do estgio de clivagem.
Muitos tipos de vulos tm uma gelia no exterior do seu envoltrio vitelnico
(Figura 4.4). Essa rede de glicoprotenas pode ter numerosas funes, mas principalmente usada para atrair ou ativar o espermatozide. O vulo, portanto, uma clula
especializada para receber o espermatozide iniciando o desenvolvimento.
Reconhecimento do vulo e do espermatozide: Ao distncia

Muitos organismos marinhos liberam seus gametas para o ambiente. Esse ambiente pode ser to pequeno quanto uma poa de mar ou to grande como o oceano.
Alm disso, esse ambiente compartilhado com outras espcies que podem liberar suas clulas sexuais no mesmo perodo. Esses organismos enfrentam dois
problemas: 1) Como podem espermatozides e vulos se encontrarem quando em
concentraes to diludas, e 2) que mecanismo inibe o espermatozide da estrelado-mar tentar fertilizar os vulos do ourio-do-mar? Dois mecanismos principais
evoluram para resolver essas dificuldades: atrao e ativao espcie-especfica
do espermatozide.
Atrao do Espermatozide
A atrao espcie-especfica do espermatozide (um tipo de quimiotaxia) foi documentada em numerosas espcies, incluindo cnidrios, moluscos, equinodermos e
urocordados (Miller, 1985; Yoshida et al., 1993). Em 1978, Miller demonstrou que os
vulos do cnidrio Orthopyxis caliculata no somente secretam um fator quimiottico mas tambm regulam o perodo de sua liberao. Ocitos em desenvolvimento, em
(A)
(B)
(C)
129
(D)
Figura 4.8
vrios estgios de amadurecimento, foram fixados sobre lminas microscpicas, e

espermatozides foram adicionados a uma certa distncia dos vulos. Miller encontrou que quando o espermatozide era adicionado a ocitos que ainda no haviam
completado sua segunda diviso meitica, no havia atrao de espermatozide pelos
vulos. Porm, aps o trmino da segunda diviso meitica e os vulos estarem
prontos para ser fertilizados, o espermatozide migrava em sua direo. Assim, esses
ocitos no controlam somente o tipo de espermatozide que atraem, mas tambm o
momento em que o atraem.
Os mecanismos de quimiotaxia so diferentes em outras espcies (veja Metz, 1978;
Ward e Kopf, 1993). Uma dessas molculas quimiotticas, um peptdio de 14 aminocidos
chamado resact foi isolado da gelia do vulo do ourio-do-mar Arbacia punctulata
(Ward et al., 1985). Resact difunde facilmente na gua do mar e tem um profundo efeito
quando adicionado a uma suspenso de espermatozide de Arbacia, mesmo em concentrao muito baixa (Figura 4.8). Quando uma gota de gua do mar, contendo espermatozide de Arbacia, colocada em uma lmina de microscpio, o espermatozide
geralmente nada em crculos de aproximadamente 50 m de dimetro. Se uma quantidade mnima de resact for introduzida na gota, em segundos o esperma migra para a
regio da injeo e ali se congrega. medida que o resact continua a difundir-se, mais
espermatozide recrutado para dentro do crescente agrupamento. Resact especfico para A. punctulata e no atrai espermatozide de outras espcies. Espermatozide
de A. punctulata liga resact a receptores na sua membrana celular (Ramarao e Garbers,
1985; Bentley et al., 1986) e pode nadar atravs de um gradiente crescente de concentrao desse composto at alcanar o vulo.
Resact tambm age como um peptdio ativador de espermatozide. Esses peptdios
(mais de 70 foram isolados de diferentes espcies de ourios-do-mar) causam aumentos dramticos e imediatos da motilidade espermtica e do consumo de oxignio
(Hardy et al., 1994). O receptor para resact uma protena transmembrana. Quando
ela liga o resact ao lado externo da clula, resact causa uma mudana conformacional
que ativa a atividade de guanidil ciclase no lado citoplasmtico. Isso aumenta a
concentrao de GMP cclico do vulo (Shimomura et al., 1986), que parece ativar a
ATPase da dinena estimulando a agitao da cauda no espermatozide (Cook e
Babcock, 1993).
Ativao Espermtica: A Reao Acrossmica no Ourio-do-Mar
Uma segunda interao entre espermatozide e vulo envolve a ativao do espermatozide pela gelia do vulo. Na maioria dos invertebrados marinhos, essa reao
acrossmica tem dois componentes: a fuso da vescula acrossmica com a membrana
plasmtica do espermatozide (uma exocitose que resulta na liberao dos componentes da vescula acrossmica) e a extenso do processo acrossmico (Figura 4.9; Colwin
e Colwin, 1963). A reao acrossmica pode ser iniciada pela gelia do vulo
solubilizada, pela gelia que envolve o vulo, ou mesmo em certas espcies, pelo
contato com o prprio vulo. Tambm pode ser ativada artificialmente pelo aumento
da concentrao de clcio na gua do mar.
Quimiotaxia do espermatozide em Arbacia.

Um nanolitro de uma soluo 10-nM de
resact injetado em uma gota de 20ml de
suspenso de espermatozide. A posio da
micropipeta est indicada em (A). (A) Uma
fotografia de 1 segundo, mostrando espermatozide nadando em crculos estreitos antes da adio de resact. (B-D) Exposies
semelhantes de 1 segundo mostrando a migrao do espermatozide para o centro do
gradiente de resact 20, 40 e 90 segundos aps
a injeo. (de Ward et al., 1985, cortesia de
V. D. Vacquier.)
130
Membrana
acrossmica
Enzimas
acrossmicas
Membrana do
espermatozide
Actina
globular
Bindina
Microfilamentos
de actina
Ncleos
Figura 4.9
Reao acrossmica em espermatozide de

equinoderma. (A-C) A poro da membrana
acrossmica diretamente abaixo da membrana do espermatozide funde-se com essa liberando o contedo da vescula acrossmica.
(D) Enquanto as molculas de actina se agregam para produzir microfilamentos, o processo acrossmico se estende para fora. Fotografias reais da reao acrossmica no espermatozide do ourio-do-mar so mostradas em seguida. (Segundo Summers e Hylander, 1974; fotografias por cortesia de G. L.
Decker e W. J. Lennarz.)
Em ourios-do-mar, o contato com a gelia do vulo causa a exocitose da vescula

acrossmica e a liberao de enzimas digestoras de protenas que podem digerir um
caminho atravs da gelia de revestimento at a superfcie do vulo (Dan, 1967; Franklin,
1970; Levine et al., 1978). A seqncia desses eventos est esquematizada na Figura
4.9. A reao acrossmica considerada ser iniciada por um oligossacardeo ligado a
uma protena na gelia do vulo que permite a entrada de clcio na cabea do espermatozide (SeGall e Lennarz, 1979; Schackmann e Shapiro, 1981; Keller e Vacquier, 1994
a,b). A exocitose da vescula acrossmica causada por uma fuso, mediada pelo
clcio, da membrana acrossmica com a membrana plasmtica adjacente do espermatozide (Figuras 4.9 e 4.10). Essa exocitose permite que a vescula acrossmica libere
seu contedo na cabea do espermatozide*.
A segunda parte da reao acrossmica envolve a extenso do processo
acrossmico (veja Figura 4.9). Essa protruso se origina da polimerizao de molculas globulares de actina em filamentos de actina (Tilney et al., 1978). A exposio do
espermatozide do ourio-do-mar gelia do vulo tambm ocasiona a rpida utilizao de ATP e um aumento de 50% da respirao mitocondrial. A energia gerada
usada primordialmente para motilidade flagelar (Tombes e Shapiro, 1985).
Os fatores da gelia do vulo que iniciam a reao acrossmica em ourios-do-mar
so muitas vezes muito especficos. Os espermatozides dos ourios-do-mar Arbacia
punctulata e Strongylocentrotus drobachiensis reagem somente com a gelia de
seus prprios vulos. No entanto, o espermatozide de S. purpuratus tambm pode
ser ativado pela gelia de Lytechinus variegatus (mas no de A. punctulata) (Summers
e Hylander, 1975). Portanto, a gelia do vulo pode prover reconhecimento espcieespecfico em algumas espcies, mas no em outras.
* Tais reaes exocitticas podem ser vistas na liberao de insulina das clulas pancreticas e
na liberao de neurotransmissores de terminais sinpticos. Em todos os casos, h uma fuso
mediada pelo clcio entre a vescula secretria e a membrana celular. Realmente, a semelhana entre
a exocitose da vescula acrossmica e a exocitose da vescula sinptica pode ser bastante profunda.
Estudos recentes de reaes acrossmicas em ourios-do-mar e mamferos (Florman et al., 1992;
Gonzlez-Martnez et al., 1992) sugerem que quando os receptores para os ligantes ativadores do
espermatozide ligam essas molculas, causam a despolarizao da membrana que poderia abrir
canais de clcio voltagem-dependentes de maneira reminescente transmisso sinptica. As protenas que atracam os grnulos corticais membrana celular tambm parecem ser homlogas quelas
usadas na ponta do axnio (Bi et al., 1995).
131
Membrana celular do
espermatozide
Membrana
acrossmica
Fuso entre a
membrana celular
do espermatozide
e a membrana
acrossmica adjacente
Ncleo
Centrolo
Figura 4.10
Reao acrossmica em espermatozide de hamster. (A) Micrografia de transmisso eletrnica

de um espermatozide de hamster passando pela reao acrossmica. A membrana acrossmica
pode ser vista formando vesculas. (B) Diagrama interpretativo de micrografias eletrnicas
mostrando a fuso de membranas acrossmica e celular na cabea do espermatozide. (A de
Meizel, 1948, cortesia de S. Meizel; B, segundo Yanagimachi e Noda, 1970.)
&
Especulaes
Ao Distncia: Gametas de Mamferos
MUITO DIFCIL estudar as interaes que podem estar ocorrendo entre gametas de mamferos
antes do contato espermatozide-vulo.
Um motivo bvio para isso que a fertilizao ocorre dentro dos ovidutos femininos. Embora seja relativamente fcil
mimetizar as condies rodeando a fertilizao do ourio-do-mar (usando gua do
mar natural ou artificial), ainda no conhecemos os componentes dos vrios ambientes naturais encontrados pelo espermatozide dos mamferos em sua viajem ao
encontro do vulo. Um segundo motivo
para essa dificuldade que a populao
de espermatozide ejaculada para o interior da fmea provavelmente muito heterognea, contendo espermatozides em
diferentes estgios de amadurecimento.
Dos 280 x 106 espermatozides humanos
normalmente ejaculados para o interior da
vagina, somente 200 atingem a regio
ampolar do oviduto, onde ocorre a fecundao (Ralt et al., 1991). Como menos de 1
em 10.000 espermatozides chegam perto
do vulo, difcil analisar aquelas mol-
culas que permitem aos espermatozides

nadar em direo ao vulo e serem
ativados. H muita controvrsia em relao ao deslocamento do espermatozide
mamfero at o oviduto, a capacitao e
as reaes de hiperativao que parecem
ser necessrias em algumas espcies para
lig-lo ao vulo, e a possibilidade que o
vulo possa estar atraindo o espermatozide por quimiotaxia.
Translocao e Capacitao
O trato reprodutivo de mamferos femininos exerce um papel muito ativo no processo de fertilizao. Enquanto a motilidade espermtica necessria para que o
espermatozide do camundongo, uma vez
no oviduto encontre o ovo, a motilidade
espermtica provavelmente um fator de
menor importncia para entrar no oviduto. O espermatozide encontrado no
oviduto de camundongos, hamsters, cobaia, vacas e seres humanos dentro de 30
minutos aps a deposio, um perodo
demasiadamente curto para ser atingido
at mesmo pelo espermatozide mais olm-
pico, se confiar somente no poder de seus

flagelos (Storey, 1995). mais provvel
que o espermatozide seja transportado
para o oviduto por meio da atividade muscular do tero.
Espermatozide mamfero recm-ejaculado incapaz de sofrer a reao acrossmica sem ter residido por algum tempo
no trato reprodutivo feminino (Chang,
1951; Austin, 1952). Esse requisito para
capacitao varia de espcie para espcie
(Gwatkin, 1976) e pode ser mimetizado in
vitro pela incubao de espermatozide
em meios de cultura de tecidos (contendo
ons de clcio, bicarbonato e soroalbumina) ou em fluido dos ovidutos. Os espermatozides que no foram capacitados
so segurados na matriz cumular, no
atingindo assim o vulo (Austin, 1960;
Corselli e Talbot, 1987).
As alteraes moleculares que explicam a capacitao ainda so desconhecidas (veja Yanigamachi, 1994), mas existem quatro conjuntos de alteraess moleculares que podem ser importantes. Primeiro, a membrana da clula espermtica
132
pode se alterar, mudando sua composio de lipdios. A concentrao de

colesterol no espermatozide diminuda
durante a capacitao do espermatozide
em vrias espcies (Davis, 1981), e duas
protenas encontradas tanto no soro como
no trato reprodutivo feminino (albumina
e protena 1 de transferncia lipdica), foram verificadas remover colesterol do espermatozide humano (Langlais et al.,
1988; Ravnik et al., 1992). Em segundo lugar, certas protenas ou carboidratos na
superfcie do espermaozide so perdidos
durante a capacitao (Poirier e Jackson,
1981; Lopez et al., 1985; Wilson e Oliphant,
1987). possvel que essas entidades perdidas durante a capacitao estivessem
bloqueando locais de reconhecimento
para as protenas que se ligam zona
pelcida. Em terceiro lugar, certas protenas so fosforiladas por um caminho
cAMP-dependente. O AMP cclico pode
induzir artificialmente a competncia atravs da protena quinase cAMP-dependente (PKA), que necessria tanto para
a aquisio de competncia como para a
fosforilao de tirosino-quinases. possvel que o trato reprodutivo feminino estimule a adenilciclase do espermatozide
a produzir mais cAMP e que esse ative a
protena quinase que inicia a cascata de
fosforilao, terminando na fosforilao
e ativao das protenas envolvidas na
ligao do espermatozide zona pelcida
e mediando a exocitose da vescula acrossmica (Leyton e Saling, 1989a; Visconti
et al., 1995a,b). Em quarto lugar, o potencial da membrana do espermatozide
dramaticamente reduzido (de cerca de
30 para 50 mV; Zeng et al., 1995). Porm,
ainda incerto se esses eventos so independentes um do outro e at que ponto cada um deles produz capacitao do
espermatozide.
Hiperativao e Quimiotaxia
As diferentes regies do trato reprodutivo feminino podem secretar fatores diferentes, regionalmente especficos. Esses
fatores podem influenciar a motilidade
espermtica assim como a capacitao. Por
exemplo, quando os espermatozides de
certos mamferos (especialmente hamsters, cobaias e algumas variedades de camundongos) passam do tero para os
ovidutos, ficam hiperativados, passando a nadar com maior velocidade e gerando maior fora. Suarez e colaboradores
(1991) mostraram que enquanto essas reaes no so conducentes a viagens em
fluidos de baixa viscosidade, parecem ser
muito adequadas para o movimento linear do espermatozide no fluido viscoso
que poder encontrar no oviduto.
Alm de aumentar a atividade do espermatozide, fatores solveis no oviduto
tambm podem prover o componente direcional do movimento do espermatozide.
Especulou-se que o vulo (ou, mais provavelmente, o folculo ovariano no qual o
vulo se desenvolve) pode estar secretando substncias quimiotticas que poderiam atrair o espermatozide em direo ao
vulo durante os ltimos estgios da migrao (veja Hunter, 1989). Ralt e colaboradores (1991) testaram essa hiptese usando fluido de folculos humanos cujos vulos estavam sendo usados para fertilizao in vitro. Realizando um experimento
semelhante aquele descrito anteriormente
com ourios-do-mar, os autores microinjetaram uma gota do fluido folicular em uma
gota maior da suspenso de espermatozides. Feito isso, observaram que parte
do espermatozide mudou sua direo de
movimentao, passando a migrar ao encontro da fonte de fluido folicular. A
microinjeo de outras solues no teve
esse efeito. Esses estudos no eliminam a
possibilidade de que o efeito fosse devido

a uma estimulao geral do movimento ou
do metabolismo do espermatozide. No entanto, essas investigaes revelaram uma
correlao fascinante: o fluido de somente
a metade dos folculos testados mostrou
um efeito quimiottico, e em quase todos
os casos, o vulo s era fertilizvel se, e
somente se, o fluido demonstrasse habilidade quimiottica (P < 0,0001). possvel,
portanto, que tal como certos vulos de
invertebrados, o vulo humano secrete um
fator quimiottico somente quando estiver
capacitado para a fertilizao.
Deve-se notar que o prmio da corrida no vai sempre para o mais rpido. Embora algum espermatozide possa alcanar a regio ampolar do oviduto (onde ocorre a fertilizao) dentro de meia hora aps a
relao sexual, aquele espermatozide pode
ter poucas chances de fertilizar o vulo.
Wilcox e colaboradores (1995) acharam que
quase todas os engravidamentos humanos
resultam de relacionamento sexual durante um perodo de seis dias, terminando no
dia da ovulao. Isso significa que o espermatozide fertilizador poderia demorar
at seis dias para fazer a jornada. Eisenbach
(1995) props a hiptese pela qual a
capacitao um acontecimento transitrio, e que dada ao espermatozide uma
janela de competncia relativamente breve, durante a qual pode ter sucesso na fertilizao do vulo. Quando os espermatozides atingem a ampola, adquirem competncia, mas se a ficam por um perodo
demasiadamente longo, perdem-na. O espermatozide pode tambm ter diferentes
prazos de sobrevivncia, dependendo da
sua localizao dentro do trato reprodutivo; isso pode permitir que algum espermatozide chegue mais tarde, porm com uma
melhor probabilidade de sucesso do que
aquele que chegou dias antes.
Reconhecimento do vulo e espermatozide:

Contato de gametas
Reconhecimento Espcie-Especfico em Ourios-do-Mar
Uma vez que o espermatozide do ourio-do-mar tiver penetrado na gelia do vulo,
o processo acrossmico do espermatozide faz contato com o envoltrio vitelnico do
vulo (Figura 4.11). Um importante passo do reconhecimento espcie-especfico ocorre
nesse ponto. A protena acrossmica mediando esse reconhecimento chamada bindina. Em 1977, Vacquier e colaboradores isolaram essa protena insolvel, de 30.500Da, do acrossomo de Strongylocentrotus purpuratus. Essa protena capaz de se
133
Figura 4.11
Contato do processo acrossmico do espermatozide do ourio-do-mar com uma

microvilosidade do vulo. (de Epel, 1977, cortesia de F. D. Collins e D. Epel.)
ligar a vulos desgeleificados de S. purpuratus (Figura 4.12; Vacquier e Moy, 1977).

Ainda mais, sua interao com vulos relativamente espcie-especfica (Glabe e
Vacquier, 1977; Glabe e Lennarz, 1979); a bindina isolada dos acrossomos de S.
Purpurata aglutina seus prprios vulos desgeleificados, mas no aqueles de Arbacia
puctulata. Usando tcnicas imunolgicas, Moy e Vacquier (1979) demonstraram que
a bindina est especificamente localizada no processo acrossmico, exatamente onde
deve estar para o reconhecimento espermatozide-vulo (Figura 4.13).
Estudos bioqumicos mostraram que as bindinas de espcies proximamente relacionadas de ourio-do-mar so mesmo diferentes. Esse achado implica na existncia de
BINDINA DO ESPERMATOZIDE
S. purpuratus
S. fransciscanus
S. purpuratus
Partculas
de bindina
Aglutinao
Sem aglutinao
vulos
S. fransciscanus
OVOS DESGELEIFICADOS
(A)
Sem aglutinao
Aglutinao
(B)
Figura 4.12
Aglutinao espcie-especfica por bindina de vulos desgeleificados . (A) aglutinao promovida pela adio de 212 g de
bindina em um recipiente plstico contendo 0.25 ml de suspenso a 2% (volume/
volume) de vulos. Aps 2-5 min de agitao branda, os recipientes foram fotografados. Cada bindina somente se ligou a seus
prprios vulos. (B) Fotomicrografia de
fluorescncia de vulos de S. purpuratus
ligados entre si por partculas de bindina
de S. purpuratus marcadas por fluorescncia. As partculas de bindina estavam invariavelmente nos lugares onde dois vulos
se encontravam. (A baseado em fotografias
de Glabe e Vacquier, 1977; B de Glabe e
Lennarz, 1979, cortesia dos autores.)
134
(A)
DAB + H2O2
Imunoglobulina
porcina anti-coelho
conjugada com a
enzima peroxidase
(B)
Precipitado
denso
Anti-bindina
de coelho
(C)
Membrana
vitelnica do vulo
Precipitado DAB
Acrossomo
Ncleo
Processo acrossmico
Bindina
Espermatozide
Figura 4.13
Localizao de bindina no processo acrossmico. (A) a tcnica de localizao

imunoqumica coloca um anticorpo de coelho nos lugares onde a bindina est exposta.
Os anticorpos do coelho foram produzidos contra a protena bindina, e esses anticorpos
foram incubados com espermatozide que tinha sofrido a reao acrossmica. Quando a
bindina estava presente, os anticorpos do coelho permaneciam ligados ao espermatozide. Depois de todo anticorpo no-ligado ser removido por lavagem, o espermatozide foi tratado com anticorpos de porco capazes de ligar-se a anticorpos de coelho.
Esses anticorpos de porco haviam sido ligados covalentemente enzima peroxidase.
Dessa maneira, molculas de peroxidase foram colocadas em todos os lugares onde havia
bindina. Peroxidase catalisa a formao de um precipitado escuro de diaminobenzidina
(DAB) e gua oxigenada. O precipitado s se forma onde h bindina. (B) Localizao de
bindina no processo acrossmico aps a reao acrossmica (33.200x). (C) Localizao
de bindina no processo acrossmico na juno do espermatozide com o vulo. (B e C de
Moy e Vacquier, 1979, cortesia de V. D. Vacquier.)
receptores espcie-especficos de bindina no envoltrio vitelnico. Tais receptores

tambm foram sugeridos pelos experimentos de Vacquier e Payne (1973), que saturaram vulos de ourio-do-mar com espermatozide. Como pode ser visto na Figura 4.14
A, a ligao do espermatozide no se d sobre a superfcie inteira do vulo. Mesmo
(A)
Figur
a 4.14
Figura
Receptores de bindina no vulo. (A) Micrografia eletrnica de varredura do espermatozide do ourio-do-mar ligado ao
envoltrio vitelnico de um vulo. (B) ligao do espermatozide de S. purpuratus a
partculas de polistireno que foram cobertas com a protena purificada do receptor de
bindina. (A cortesia de C. Glabe, L. Perez e
W. J. Lennarz; B de Foltz et al., 1993.)
(B)
135
a nveis saturantes de espermatozide (aproximadamente 1500), parece haver espao

no vulo para mais cabeas de espermatozide, indicando haver um nmero limitante
de locais ligantes de espermatozide. Um grande complexo de glicoprotenas dos
envoltrios vitelnicos de vulos de ourio-do-mar foi isolado e mostrou ligar bindina
radioativa de maneira espcie-especfica (Glabe e Vacquier, 1978; Rossignol et al.,
1984). Essa glicoprotena tambm capaz de competir com vulos pelo espermatozide da mesma espcie. Isto , se espermatozide de S. purpuratus misturado com o
receptor de bindina de envoltrios vitelnicos de S. purpuratus, o espermatozide se
liga a ele e no ir fertilizar os vulos. O receptor isolado de S. purpuratus, porm, no
ir interferir com a fertilizao de outros ourios-do-mar relacionados. Esse receptor
de bindina uma glicoprotena transmembrana com quase 1300 aminocidos (Foltz et
al., 1993). A regio ligante de bindina se estende para o espao extracelular e provavelmente se torna um componente do envoltrio vitelnico. Esses receptores de bindina
se agregam em complexos, e centenas deles so provavelmente necessrios para
amarrar o espermatozide no vulo (Figura 4.14B). Assim, reconhecimento espcieespecfico dos gametas do ourio-do-mar ocorrem ao nvel da atrao, ativao e
adeso do espermatozide superficie do vulo. [fert4.html]
Ligao de Gametas e Reconhecimento em Mamferos
Ligao do espermatozide (%)
ZP3: A PROTENA LIGANTE DA ZONA PELCIDA DO CAMUNDONGO. A zona

pelcida tem nos mamferos um papel anlogo aquele do envoltrio vitelnico nos
invertebrados. Essa matriz de glicoprotenas sintetizada e secretada pelo ocito em
crescimento, e tem dois papis importantes durante a fertilizao: liga o espermatozide, e
inicia a reao acrossmica aps essa ligao (Saling et al., 1979; Florman e Storey, 1982;
Cherr et al., 1986). A ligao de espermatozide zona relativamente, porm no absolutamente, espcie-especfica (especificidade por espcie no deveria ser um grande problema quando a fertilizao ocorre internamente), e a ligao do espermatozide do camundongo zona dessa espcie pode ser inibida pela incubao prvia de espermatozide
com glicoprotenas da zona. Bleil e Wassarman (1980, 1986, 1988) isolaram da zona pelcida
do camundongo uma glicoprotena ZP3, de 83-kDa, que o competidor ativo nesse ensaio
de inibio. As outras duas protenas da zona, ZP1 e ZP2, no puderam competir pela
ligao do espermatozide (Figura 4.15). Ainda mais, ZP3 radiativamente marcada ligou-se
s cabeas do espermatozide do camundongo que tinha acrossomos intactos. Assim,
ZP3 a protena especfica na zona pelcida qual se liga o espermatozide do camundongo. ZP3 tambm inicia a reao acrossmica aps os espermatozides terem se ligado a ela.
O espermatozide do camundongo pode, dessa forma, concentrar suas enzimas
proteolticas diretamente no ponto de fixao zona pelcida.
(A)
ZP3 sem
carboidratos
Equivalentes da zona pelcida por l
(B)
Figura 4.15
Ligao do espermatozide zona pelcida.

(A) ensaio de inibio mostrando a diminuio especfica da ligao do espermatozide do camundongo s zonas pelcidas
quando espermatozide e zonas so incubados com aumentos crescentes da poro
carboidrato da glicoprotena ZP3. A importncia da poro carboidrato de ZP3
tambm, indicada por essa figura. (B) Ligao de ZP3 marcada radioativamente a
espermatozide capacitado do camundongo. (A segundo Bleil e Wassarman, 1980, e
Florman e Wassarman, 1985; B de Bleil e
Wassarman, 1986, cortesia dos autores.)
136
O mecanismo molecular pelo qual a zona pelcida e o espermatozide do mamfero se reconhecem mutuamente est sendo estudado. A hiptese corrente sobre
a ligao dos gametas de mamferos postula um conjunto de protenas do espermatozide capazes de reconhecer regies especficas de carboidratos na zona ZP3
do vulo (Florman et al., 1984; Florman e Wassarman, 1985; Wassarman, 1987;
Saling, 1989). A remoo desses grupos de carboidratos ligados por treonina ou
serina suprime a habilidade de ligar o espermatozide.
PROTENAS DE ADESO ESPERMATOZIDE-ZONA. O espermatozide do camun-
dongo no fura para chegar ao interior da zona. Na realidade, os espermatozides se

aproximam paralelamente ao plano da superfcie da zona e a so ativamente fixados
(Baltz et al., 1988). Como a zona capaz de ligar e conservar esses espermatozides
contorcedores? Parece que ZP3 pode ligar-se a pelo menos trs protenas adesivas na
membrana do espermatozide, e milhares desses stios podem ser necessrios para
prevenir que essas duas clulas se separem. H uma controvrsia significativa sobre a
questo de se todas as trs protenas no espermatozide so necessrias para ligao
zona, e quais as suas respectivas funes (veja Figura 4.16: Snell e White, 1996). Parece
que cada uma delas tem papis especficos, mas um tanto sobrepostos na adeso do
espermatozide e na reao acrossmica. Essas trs protenas so: a protena ligante de
galactose, a galactosil-transferase e a quinase do receptor da zona.
A PROTENA LIGANTE DE GALACTOSE 56-KDA (SP56). Uma protena crtica
ligante da zona do espermatozide parece ser a protena que especificamente se liga

aos resduos de galactose de ZP3. Bleil e Wassarman (1980) mostraram que um dos
carboidratos crticos da glicoprotena ZP3 o grupo galactose terminal. Se essa galactose
terminal for removida ou modificada quimicamente, a atividade ligante de espermatozide perdida. Esses pesquisadores posteriormente isolaram essa protena, ligando
Zona pelcida
vulo
ZP3 (protena ligante de

espermatozide) na Zona
Espermatozide
ZP3
Protenas candidatas
a ligao zona no
acrossomo
N-acetil
glicosamina
GALACTOSILTRANSFERASE
Ligao
cruzada ativa
protenas G
Galactose
Membrana
celular do
espermatozide
SP 56
(protena
perifrica da
membrana)
Ativao de sntese
de IP3 na
membrana
acrossmica
P95
Ativao
de
tirosinoquinase
Regulao de
canais inicos
ou sntese
de IP3
Liberao de Ca++
Reao acrossmica
Figura 4.16
Ligao de espermatozide zona pelcida do

camundongo: alguns possveis participantes.
A protena ZP3 da zona pelcida liga espermatozide. H evidncia da ligao de trs protenas espermticas a galactosiltransferase
da superfcie, sp56 e P95 ZP3. Essa ligao induz a reao acrossmica atravs da ativao do fluxo de clcio. Os detalhes ainda
tero que ser elucidados. (Segundo Snell e
White, 1996.)
137
Figura 4.17
ZP3 uma coluna de afinidade, passando em seguida, por essa coluna, as protenas
isoladas da membrana de espermatozides de camundongo (Bleil e Wassarman,
1990). A maioria das protenas passou pela coluna; porm um peptdio de 56kDa, ligou-se s partculas recobertas com ZP3, mas no se ligou a partculas
recobertas com ZP2 em experimento semelhante. Essa protena foi encontrada
exposta na membrana espermtica; ligava-se a resduos de galactose, sugerindo fortemente ser um receptor de espermatozide ligante entidade terminal de
galactose na glicoprotena ZP3. A protena sp56 liga-se zona pelcida de
ovos no-fertilizados (porm no dos fertilizados), bloqueando a ligao espermatozide-vulo (Figura 4.17; Bookbinder et al., 1995).
GALCTOSILTRANSFERASE. A Segunda protena do espermatozide que parece
ser importante para ligao espermatozides-zona a enzima da membrana celular do

espermatozide, glicosiltransferase. No laboratrio de Shur foi demonstrado que esse
receptor para a zona uma enzima que reconhece o acar N-acetilglicosamina na ZP3
(Shur e Hall, 1982a,b; Lopez et al., 1985; Miller et al., 1992). Essa enzima, Nacetilglicosamina:galactosiltransferase, est embebida na membrana plasmtica do
espermatozide, diretamentre acima do acrossomo, com seu stio ativo apontando
para fora. A funo enzimtica dessa enzima de 60-kDa seria a de catalisar a adio de
um acar galactose (de UDP-galactose) para uma cadeia de carboidrato terminando
em um acar N-acetilglicosamina (veja Captulo 3). No entanto, no h resduos de
UDP-galactose no trato reprodutivo feminino. Embora a enzima possa se ligar aos
resduos de protenas da zona, exatamente como qualquer enzima se ligaria a um
substrato, ela no pode catalisar a reao porque o segundo reagente est faltando.
Portanto, as enzimas (no espermatozide) ficam ligadas a seus substratos (na zona).
Se essa hiptese estiver correta, poderamos esperar que a ligao vulo-espermatozide seria inibida ou pela inibio da enzima, ou pela adio do segundo
reagente, UDP-galactose. Isso exatamente o que Shur e colaboradores acharam
ser o caso. A ligao espermatozide-zona foi bloqueada por: (1) adio de UDPgalactose, (2) remoo de resduos de N-acetilglicosamina de ZP3, (3) adio de
anticorpos que bloqueiam a atividade da galactosiltransferase, e (4) colocao de
um excesso de galactosiltransferase no meio (a enzima em excesso iria ligar-se zona
e inibir o espermatozide de se ligar) (Lopez et al., 1985; Shur e Neely, 1988). Alm
disso, membranas de espermatozide de camundongo iro transferir um acar de
UDP-galactose especificamente para ZP3 (Miller et al., 1992). Assim, a galactosiltransferase da superfcie do espermatozide parece reconhecer um grupo carboidrato
na protena ZP3 da zona pelcida do camundongo. A agregao dessas
galactosiltransferases ocasiona a ativao de uma protena G que pode ser importante na iniciao da reao acrossmica (Gong et al., 1995).
Sp56 purificada liga-se zona pelcida e inibe a ligao de espermatozide a vulos de

camundongo. (A) Ligao de sp56 zona
pelcida de ovos no-fertilizados. A pista 1
o resultado da lise de ovos no-fertilizados,
fazendo migrar as protenas extradas em um
gel, transferindo o gel, e sondando para a presena de sp56 com anticorpo marcado. No
se v sp56. A pista 2 mostra o resultado positivo obtido quando o ovo no-fertilizado
pr-incubado com sp56, indicando que sp56
se liga aos vulos. A pista 3 mostra os resultados negativos obtidos quando sp56 foi adicionada a embries bicelulares. A pista 4 mostra o controle quando sp56 purificada feita
migrar no gel. (O anticorpo reconhece a forma no-reduzida de sp56, que migra em 40
kDa). (B) Espermatozide ligando-se normalmente a ovos no-fertilizados de camundongo (aproximadamente 76 espermatozides
por vulo). Os embries bicelulares (aqui
marcados por asteriscos) so controles internos mostrando no ocorrer ligao. (C ) Na
presena de sp56, o espermatozide foi impedido de se ligar zona. (de Bookbinder et
al., 1995; cortesia de J.D. Bleil.)
138
RECEPTOR DE QUINASE DA ZONA (ZRK). Uma terceira protena espermtica

que se liga zona pelcida do camundongo parece ser uma protena transmembrana de 95-kDa com dois stios funcionais. O stio extracelular liga especificamente
ZP3, enquanto o stio intracelular tem atividade enzimtica de tirosina quinase
(Leyton et al., 1992). Essa atividade estimulada quando a protena liga ZP3. Isso
implica que a protena de 95-kDa uma tirosina quinase de receptor, e que pode
iniciar a reao acrossmica atravs da fosforilao das suas protenas alvo (veja
Captulo 3). O espermatozide humano tem uma protena semelhante, e a ZP3 humana estimula a atividade da quinase. Alm disso, peptdios sintticos que
mimetizam o domnio extracelular (que liga ZP3) dessa protena, inibem a ligao
do espermatozide zona pelcida humana, sugerindo possvel uso como
contraceptivo (Burks et al., 1995).
INDUO DA REAO ACROSSMICA EM MAMFEROS POR ZP3. Uma vez
que o espermatozide capacitado ligou-se zona pelcida, como ocorre a reao
acrossmica nos mamferos? A reao induzida pela poro protica de ZP3
(Endo et al., 1987; Leyton e Saling,1989a), e ZP3 parece atuar perfazendo ligao
cruzada com seus receptores na membrana espermtica. Esse tipo de ligao abre
os canais de clcio, aumentando a concentrao do on no espermatozide (Leyton
e Saling, 1992b). O mecanismo pelo qual age o ZP3 e a subseqente exocitose do
acrossomo permanece controversa, mas pode envolver a trajetria IP3 (Florman,
1994; Suarez e Dai, 1995). [fert5.html]
ZP1
ZP2
ZP3
Resduos de
carboidratos
Figura 4.18
Diagrama da estrutura fibrilar da zona pelcida

do camundongo. Filamentos principais da
zona pelcida so compostos por dmeros
repetitivos das protenas ZP2 e ZP3. Esses
filamentos esto ocasionalmente ligados por
ZP1, formando uma esteira de malhas. (Segundo Wassarman, 1989.)
LIGAO SECUNDRIA DO ESPERMATOZIDE ZONA PELCIDA. Durante

a reao acrossmica, a parte anterior da membrana plasmtica do espermatozide
solta (veja Figura 4.10). ali que esto localizadas as protenas ligantes de ZP3 e,
ainda assim, o espermatozide deve permanecer ligado zona para abrir, por lise, um
caminho atravs dela. Em camundongos, parece que uma ligao secundria zona
conseguida por protenas na membrana acrossmica interna que se ligam especificamente a ZP2 (Bleil et al., 1988). Enquanto espermatozide com acrossomo intacto
no ir se ligar ZP2 glicoprotena, o espermatozide cujo acrossomo reagiu o far.
Alm disso, anticorpos contra a protena ZP2 no iro impedir a ligao do espermatozide com acrossomo intacto zona, mas iro inibir a fixao do espermatozide
que j tenha reagido. A estrutura da zona consiste de unidades repetitivas de ZP3 e
ZP2, ocasionalmente ainda ligadas por ZP1 (Figura 4.18). Parece que os espermatozides com acrossomo que reagiram, transferem sua ligao com ZP3 para as molculas adjacentes de ZP2. Aps a entrada de espermatozide de camundongo no vulo,
os grnulos corticais do ovo liberam seu contedo. Uma das protenas liberadas a
protease que especificamente altera ZP2 (Moller e Wassarman, 1989). Isso inibe outros espermatozides, cujo acrossomo j reagiu, de mover-se mais para perto do vulo.
No conhecido quais das protenas do espermatozide do camundongo se
ligam ZP2. No espermatozide porcino, ligao secundria zona parece ser mediada por proacrosina. Proacrosina torna-se a protease acrosina, h muito tempo conhecida por estar envolvida na digesto da zona pelcida. No entanto, proacrosina
tambm uma protena ligante da fucose que mantm a conexo entre espermatozide que reagiu com acrosina e a zona pelcida (Jones et al., 1988). possvel que a
proacrosina se ligue zona, sendo depois convertida na enzima ativa que digere
localmente a zona pelcida.
Na cobaia, ligao secundria zona considerada ser mediada pela protena
PH-20. Quando essa protena da membrana acrossmica interna foi injetada em
cobaias macho ou fmea, 100% desses animais tornaram-se estreis por vrios meses (Primakoffet al., 1988). O soro sangneo dessas cobaias estreis tinha uma
concentrao extremamente alta de anticorpos para PH-20. O anti-soro de cobaias
esterilizadas por injees de PH-20 no s se ligou especificamente a essa protena, como tambm bloqueou a adeso espermatozide-zona in vitro. O efeito
139
contraceptivo perdurou por vrios meses, aps os quais a fertilidade foi restabelecida.
Os animais foram temporariamente esterilizados por esses anticorpos. O anlogo
humano da protena PH-20 no ainda conhecido, porm, certos antgenos do espermatozide apresentam um padro semelhante de localizao no espermatozide.
As protenas da zona pelcida humana e suas funes ainda no foram estabelecidas to claramente como no camundongo. Ainda assim, esses experimentos mostram que o princpio da contracepo imunolgica est bem fundamentado.
Fuso de gametas e a preveno da polispermia

Fuso entre as membranas do vulo e do espermatozide
O reconhecimento do espermatozide pelo envoltrio vitelnico ou zona seguido
pela lise da poro do envoltrio ou zona na regio da cabea do espermatozide
(Colwin e Colwin, 1960; Epel, 1980). Essa lise seguida pela fuso da membrana
espermtica com a membrana do vulo.
A entrada do espermatozide no vulo do ourio-do-mar est ilustrada na Figura
4.19. A superfcie do vulo est coberta de pequenas microvilosidades; a fuso
espermatozide-vulo parece causar a polimerizao da actina e a extenso de vrias
microvilosidades para formar o cone de fertilizao (Summers et al., 1975; Schatten
e Schatten, 1980, 1983). A homologia entre vulo e espermatozide novamente
(A)
(B)
Figura 4.19
Varredura ao microscpio eletrnico da entrada

do espermatozide em vulo de ourio-do-mar.
(A) Contato da cabea do espermatozide com
microvilosidades do vulo atravs do processo
acrossmico. (B) Formao do cone de fertilizao. (C) Internalizao do espermatozide no
vulo. (D) Micrografia de transmisso ao microscpio eletrnico da internalizao do espermatozide atravs do cone de fertilizao.
(A-C de Schatten e Mazia, 1976, cortesia de G.
Schatten; D cortesia de F. J. Longo.)
(C)
(D)
140
demonstrada, porque o cone de fertilizao transitrio, tal como o processo

acrossmico, parece se prolongar pela polimerizao da actina. Aps a juno, podese encontrar material do espermatozide na membrana do vulo (Gundersen et al.,
1970). O ncleo e a cauda do espermatozide passam pela ponte citoplasmtica, que
alargada pela polimerizao da actina. Yanagimachi e Noda (1970) mostraram que
processo semelhante ocorre na fuso de gametas de mamferos (Figura 4.20).
No ourio-do-mar, todas as regies do vulo so capazes de se fundir com o
espermatozide; em vrias outras espcies, existem regies especializadas na membrana para o reconhecimento e fuso com o espermatozide (Vacquier, 1979). A
fuso um processo ativo, freqentemente mediado por protenas fusognicas
especficas. Protenas como a HA do vrus da influenza e a protena F do vrus
Sendai promovem a fuso celular, sendo possvel que a bindina tambm seja uma
dessas protenas. Glabe (1985) mostrou que a bindina do ourio-do-mar promove a
fuso de vesculas fosfolipdicas e que, tal como as protenas fusognicas virais, a
bindina contm uma longa regio de aminocidos hidrofbicos perto do terminal
amino. Em abalones, a lisina que dissolve o envoltrio vitelnico tambm demonstrou ter atividade fusognica (Hong e Vacquier, 1986).
As protenas fertilinas da membrana do espermatozide dos mamferos so
essenciais para fuso espermatozide-vulo (Primakoff et al., 1987; Blobel et al.,
1992; Myles et al., 1994). A fertilina do camundongo tem regies hidrofbicas semelhantes s das protenas fusognicas virais, alm de uma seqncia que sugere
ligao com uma integrina da membrana do vulo. Evidncia atual sugere que a
fertilina do camundongo liga-se integrina 61 da membrana assumindo-se que a
regio hidrofbica da fertilina pode, em seguida, mediar a unio das duas membranas (Almeida et al., 1995). Quando as membranas se fundem, o ncleo, mitocndrias,
centrolo e flagelo podem penetrar no ovo.
Preveno da Polispermia
Assim que um espermatozide tiver penetrado o vulo, a capacidade de fuso da
membrana do vulo, que fora to necessria para conseguir a penetrao, torna-se
um risco. No ourio-do-mar, como na maioria dos animais estudados, qualquer espermatozide que penetra o vulo, pode prover um ncleo haplide e um centrolo
para o vulo. Na monospermia normal, na qual somente um espermatozide penetra
o vulo, um ncleo haplide do espermatozide e um do vulo se combinam para
formar o ncleo diplide do ovo fertilizado (zigoto), restaurando o nmero de cromossomos apropriado para a espcie. O centrolo, provindo do espermatozide, se
dividir para formar os dois plos do fuso mittico durante a clivagem.
A entrada de mltiplos espermatozides polispermia conduz conseqncias desastrosas na maioria dos organismos. No ourio-do-mar, a fertilizao por dois espermatozides resulta em um ncleo triplide, no qual cada
cromossomo est representado no duas, mas trs vezes. Pior ainda, como o
centrolo se divide para formar os dois plos do aparelho mittico, aqui, em
vez de um fuso mittico bipolar separar os cromossomos em duas clulas, os
cromossomos triplides se dividiriam em quatro clulas. Como no h mecanismos para assegurar que cada uma das quatro clulas receba o nmero e o
tipo apropriado de cromossomos, esses sero distribudos de maneira desigual.
Algumas clulas receberiam cpias extra de certos cromossomos e outras clulas no os teriam. Theodor Boveri demonstrou em 1902 que tais clulas ou
morreriam ou se desenvolveriam anormalmente (Figura 4.21). [fert6.html]
As espcies desenvolveram maneiras de prevenir a unio de mais de dois
ncleos haplides. A mais comum a de impedir a entrada de mais de um
espermatozide no vulo. O vulo do ourio-do-mar tem dois mecanismos que
evitam a polispermia: uma reao rpida, efetivada por uma mudana eltrica
na membrana plasmtica do vulo, e uma reao mais lenta, causada pela
exocitose dos grnulos corticais.
(A)
(B)
141
(C)
Zona
Ncleo
(E)
Membrana
acrossmica
interna
Figura 4.20
Entrada de espermatozide no vulo do hamster dourado. (A) Micrografia eletrnica de

varredura do ato da fuso. O ponto calvo (sem microvilosidades) o local abandonado pelo corpo polar. (B) Vista prxima da ligao espermatozide-zona. (C ) Micrografia eletrnica de transmisso mostrando a cabea do espermatozide atravessando a
zona. (D) Micrografia eletrnica de transmisso, do espermatozide fundindo em paralelo a membrana do plasma do vulo. (E) Diagrama da fuso do acrossomo do espermatozide e membranas plasmticas com as microvilosidades do vulo. (Segundo
Yanagimachi e Noda, 1970; Yanagimachi, 1994; fotografias cortesia de R. Yanagimachi.)
O BLOQUEIO RPIDO DA POLISPERMIA. A membrana celular do vulo notvel
no somente por sua habilidade de se fundir com a membrana espermtica, mas tambm por sua capacidade de resistir a uma ulterior fuso imediatamente aps a entrada
de um espermatozide (Just, 1919).
O bloqueio rpido polispermia, conseguido pela mudana do potencial eltrico
da membrana do vulo. Essa prov uma barreira seletiva entre o citoplasma e o ambiente exterior; a concentrao inica do vulo difere muito daquela do ambiente, uma
diferena especialmente pronunciada para os ons de sdio e potssio. A gua do mar
tem uma alta concentrao do on sdio, ao passo que o citoplasma do vulo tem
relativamente pouco sdio. O oposto acontece com os ons potssio. Essa condio
mantida pela membrana celular, que constantemente inibe a entrada de sdio no
Segmento
equatorial do
acrossomo
142
(A)
Ocito
Centrossomo do
espermatozide
Proncleos
do espermatozide
Proncleos
do ocito
Figura 4.21
Desenvolvimento aberrante de um vulo de ourio-do-mar fecundado por dois espermatozides. (A) Fuso de trs ncleos haplides, cada um contendo 18 cromossomos, e
diviso dos dois centrolos espermticos para formar quatro plos mitticos. (B, C) Os
54 cromossomos se distribuem aleatoriamente nos quatro fusos. (D) Na anfase da
primeira diviso, os cromossomos duplicados so arrastados para os quatro plos. (E)
Quatro clulas contendo nmeros e tipos diferentes de cromossomos so formadas,
causando a morte prematura do embrio (F). (Segundo Boveri, 1907.)
Fuso pronuclear
(B)
1a clivagem
(C)
(D)
(E)
(F)
Clulas em desintegrao;
morte do embrio
ocito e impede o escoamento de ons de potssio para o ambiente. Quando inserimos um eletrodo no vulo e colocamos um outro fora do ocito, podemos medir
a constante diferena potencial da membrana plasmtica do vulo. Esse potencial
de repouso da membrana geralmente cerca de 70 mV, e usualmente expresso
como 70 mV porque o interior da clula est carregado negativamente em relao
ao exterior. [fert7.html]
Dentro de 1-3 segundos aps a ligao do primeiro espermatozide, o potencial
da membrana muda para um nvel positivo (Longo et al., 1986). Um pequeno influxo
de ons de sdio no vulo permitido, trazendo a diferena de potencial para +20 mV
(Figura 4.22 A). Embora o espermatozide possa se fundir com membranas tendo um
potencial de 70 mV, no pode se fundir com membranas com um potencial de repouso positivo. No conhecido como a ligao ou a entrada do espermatozide sinaliza a abertura dos canais de sdio; porm, Gould e Stephano (1987, 1991) forneceram o que poder ser uma pista importante para a compreenso desse processo. Os
autores isolaram do espermatozide de Urechis (um verme equiuride marinho) uma
protena cromossmica capaz de abrir canais de sdio de vulos de Urechis. Quando tais vulos so expostos a essa protena, a mudana da velocidade do influxo de
sdio e do potencial de membrana resultante so muito parecidos com aqueles
produzidos pelo espermatozide vivo. A abertura dos canais de sdio no vulo,
parece ser causada pela ligao do espermatozide ao vulo.
Jaffe e seus colaboradores mostraram que a polispermia podia ser induzida
quando vulos foram supridos artificialmente com uma corrente eltrica que mantinha negativo o seu potencial de membrana. Reciprocamente, a fertilizao podia
ser inteiramente prevenida conservando tal potencial positivo (Jaffe, 1976). O
bloqueio rpido da polispermia podia tambm ser evitado baixando-se a concentrao do sdio da gua (Figura 4.22B-D). Se os ons de sdio no forem suficientes para ocasionar um deslocamento positivo do potencial de membrana, ocorre a
polispermia (Gould-Somero et al., 1979; Jaffe, 1980). No conhecido como diferenas no potencial de membrana atuam sobre o espermatozide bloqueando a
segunda fecundao. Muito provavelmente, o espermatozide conduz um componente (possivelmente uma protena fusognica carregada positivamente), sendo a
insero desse componente na membrana do vulo, provavelmente, regulada pela
carga eltrica transmembrana (Iwao e Jaffe, 1989). Um bloqueio eltrico polispermia
tambm ocorre em rs (Dross e Elinson, 1980), mas provavelmente no na maioria
dos mamferos (Jaffe e Cross, 1983).
O BLOQUEIO LENTO DA POLISPERMIA. vulos do ourio-do-mar (e muitos ou-
tros) tm um segundo mecanismo para assegurar que mltiplos espermatozides no

penetrem no citoplasma do vulo (Just, 1919). O bloqueio rpido transitrio, o potencial de membrana do vulo do ourio-do-mar somente permanece positivo por
cerca de um minuto. Essa curta mudana de potencial no suficiente para prevenir a
polispermia de maneira permanente. Carroll e Epel (1975) demonstraram que a
143
Figura 4.22
Potencial de membrana de vulos de ourio-do-mar antes

e aps a fertilizao. (A) antes da adio do espermatozide, a diferena de potencial atravs da membrana celular do vulo de aproximadamente 70 mV. De 1 a 3 segundos aps o espermatozide fertilizante ter entrado em
contato com o vulo, o potencial se desloca na direo
positiva. (B) Ovos controle desenvolvendo-se em Na+
490 mM. (C) Polispermia em ovos fertilizados em Na+
120 mM (colina foi substituda por sdio). Os ovos de
Lytechinus foram fotografados durante a primeira
clivagem. (D) Tabela mostrando a elevao da polispermia
com o decrscimo da concentrao do on sdio. (de Jaffe,
1980, fotografias cortesia de L. A. Jaffe.)
Adio de
espermatozide
(A)
Segundos
[Na+] (mM)
(B)
(C)
(D)
polispermia ainda pode ocorrer se os espermatozides ligados ao envoltrio

vitelnico no forem removidos de alguma maneira. Essa remoo conseguida
pela reao dos grnulos corticais, um bloqueio mecnico mais lento da polispermia
que se torna ativo cerca de 1 minuto aps a primeira ligao bem sucedida espermatozide-vulo.
Diretamente abaixo da membrana do vulo do ourio-do-mar existem 15.000
grnulos corticais, cada um com 1 um de dimetro (veja Figura 4.6B). Com a entrada do espermatozide, esses grnulos se fundem com a membrana plasmtica do
vulo, liberando seu contedo para o espao entre a membrana e a esteira fibrosa
das protenas do envoltrio vitelnico. H vrias protenas associadas com esse
processo de exocitose de grnulos corticais. As primeiras so proteases. Essas
enzimas dissolvem os postos vitelnicos que conectam as protenas do envoltrio
vitelnico membrana celular, secionando o receptor de bindina e todo espermatozide a ele ligado (Vacquier et al., 1973; Glabe e Vacquier, 1978). Outras protenas,
mucopolissacardeos liberados dos grnulos, produzem um gradiente osmtico
que permite a entrada da gua no espao entre a membrana celular e o envoltrio
e, dessa forma, o envoltrio vitelnico se expande e passa a ser chamado de
envoltrio de fertilizao (Figuras 4.23 e 4.24). Uma terceira protena, produto dos
grnulos corticais, uma peroxidase, enrijece o envoltrio de fertilizao atravs de
ligaes cruzadas entre resduos de tirosina em protenas adjacentes (Foerder e
Shapiro, 1977; Mozingo e Chandler, 1991). Como mostra a Figura 4.23, o envoltrio
de fertilizao comea a se formar no local da entrada do espermatozide e continua sua expanso ao redor do vulo. medida que esse envoltrio se forma, os
espermatozides so liberados. O processo se inicia cerca de 20 segundos aps a
fixao do espermatozide e se completa ao fim do primeiro minuto da fertilizao.
Finalmente, uma quarta protena granular, a hialina, forma uma capa em volta do
vulo (Hylander e Summers, 1982). A clula estende microvilosidades alongadas
cujas extremidades se ligam a essa camada hialina, que fornece apoio para os
blastmeros durante a clivagem.
Em mamferos, a reao granular no cria um envoltrio de fertilizao, porm, o
efeito o mesmo. Enzimas liberadas modificam os receptores de espermatozide da
Porcentagem de
ovos polisprmicos
144
Figura 4.23
Formao do envoltrio de fertilizao e remoo do excesso de espermatozide. Espermatozide foi adicionado a vulos de ourio-do-mar,
e a suspenso foi fixada em formaldedo para
evitar futuras reaes. (A) Dez segundos aps
a adio de espermatozide, esses foram vistos
rodeando o vulo. (B,C) 25 e 35 segundos aps
a inseminao, um envoltrio de fertilizao se
forma em volta do vulo, iniciado no ponto de
entrada do espermatozide. (D) O envoltrio
de fertilizao est completo, e o excesso de
espermatozide removido. (de Vacquier e
Payne, 1973, cortesia de V. D. Vacquier.)
(A)
(B)
(C)
(D)
zona pelcida de maneira que esses no mais podem ligar-se a espermatozide (Bleil
e Wassarman, 1980). Essa modificao chamada reao da zona. Durante essa
reao, tanto ZP3 como ZP2 so modificadas. Florman e Wassarman (1985), propuseram que os grnulos corticais do vulo do camundongo contm uma enzima que
corta os resduos terminais de acares de ZP3, com isso liberando espermatozide
ligado zona e evitando a fixao de mais espermatozide. Esses grnulos corticais
contm N-acetilglicosaminidases capazes de clivar N-acetilglicosamina de cadeias
de carboidrato de ZP3. Miller e colaboradores (1992, 1993) demonstraram que aps
a fertilizao, o resduo de N-acetilglicosamina removido, ZP3 no serve como
substrato para a ligao de galactosiltransferase. ZP2 cortada pelas proteases
granulares perdendo tambm sua habilidade de ligar espermatozide (Moller e Wassarman, 1989). Assim, o espermatozide no pode mais iniciar ou manter sua ligao
zona pelcida e rapidamente descartado.
CLCIO COMO O INICIADOR DA REAO GRANULAR CORTICAL . O meca-
nismo da reao dos grnulos corticais semelhante aquele da reao acrossmica.

Aps a fertilizao, a concentrao intracelular de clcio do ovo aumenta muito.
Nessas concentraes, as membranas corticais se fundem com aquelas do ovo,
causando exocitose de seu contedo (veja Figura 4.24). Aps a fuso dos grnulos
corticais ao redor do ponto de entrada do espermatozide, uma onda de exocitose se
propaga ao redor do corte at o lado oposto do ovo.
A liberao de clcio armazenado na regio intracelular, pode ser monitorada visualmente pelo uso de corantes luminescentes (isolados da gua-viva luminescente)
como a aequorina ativado pelo clcio, ou de corantes como fura-2. Esses corantes
emitem luz quando ligam ons livres de clcio. Os vulos so injetados com o corante
e fecundados. A Prancha 12 mostra a notvel onda de liberao de clcio que se
propaga atravs do vulo do ourio-do-mar; comeando no ponto de entrada do
Figura 4.24
Membrana plasmtica
(i)
do vulo
Microvilosidade
Envoltrio
vitelnico
Grnulo
cortical
(ii)
Espermatozide
supranumerrio no
envoltrio vitelnico
Enzimas proteolticas e
mucopolissacardeos so liberados
(B)
(C)
(iii)
Microfilamentos
(iv)
Envoltrio de
fertilizao
Hialina
(D)
Espermatozide liberado
Camada hialina
(A)
145
Membrana
celular
(E)
espermatozide um feixe de luz atravessa a clula (Steinhardt et al., 1977; Gilkey et al.,
1978; Hafner et al., 1988). Como documentado pelas fotografias, os ons de clcio no
se difundem simplesmente atravs do vulo a partir do ponto da entrada do espermatozide. Ao contrrio, a liberao de clcio inicia-se de um lado da clula e termina do
outro. O mecanismo dessa onda ser discutido logo adiante (veja Informaes adicionais & Especulaes, pgina 147). A total liberao de ons de clcio completada, a
grosso modo, em 30 segundos no ovo do ourio-do-mar; os ons livres de clcio so
re-seqestrados pouco aps sua liberao. Quando dois espermatozides entram no
citoplasma do vulo, a liberao de clcio pode ser vista comeando em dois pontos
separados da superfcie celular (Hafner et al., 1988).
Vrios experimentos demonstraram que ons de clcio so responsveis diretos
pela propagao da reao cortical e que so armazenados dentro do prprio vulo.
A droga A23187 um ionforo que transporta ons de clcio atravs de membranas,
permitindo a esses ctions atravessar barreiras antes impermeveis. A colocao de
Exocitose de grnulos corticais. (A) Diagrama

esquemtico mostrando os eventos levando
formao do envoltrio de fertilizao e a camada hialina. medida que os grnulos
corticais sofrem exocitose, liberam proteases
que cortam as protenas que ligam o envoltrio
vitelnico membrana celular. Mucopolissacardeos liberados pelos grnulos formam um
gradiente osmtico, causando a entrada de gua
e tumefao do espao entre o envoltrio
vitelnico e a membrana celular. Outras enzimas
liberadas dos grnulos corticais endurecem o
envoltrio vitelnico (agora o envoltrio de fertilizao) e liberam espermatozide a ele ligado. (B,C) Micrografias eletrnicas de transmisso e de varredura do crtex de um ovo no
fertilizado de ourio-do-mar. (D, E) Micrografias eletrnicas de transmisso e varredura da
mesma regio de um ovo recm-fertilizado,
mostrando a elevao do envoltrio de fertilizao e os pontos nos quais os grnulos
corticais fundiram com a membrana plasmtica do ovo (flechas em D). (A segundo Austin,
1965; B-E de Chandler e Heuser, 1979, cortesia de D. E. Chandler.)
146
ovos no-fertilizados de ourio-do-mar em gua do mar contendo A23187, leva

reao granular cortical e elevao do envoltrio de fertilizao, mesmo na ausncia de ons de clcio na gua do mar. Portanto, A23187 provoca a liberao de ons
de clcio j seqestrados em organelas dentro do vulo (Chambers et al., 1974;
Steinhardt e Epel, 1974). Estudos posteriores (Hollinger e Schuetz, 1976; Fulton e
Whittingham, 1978; Hamaguchi e Hiramoto, 1981; Kline, 1988) mostraram que o on
de clcio inicia reaes granulares corticais quando injetado em ovos de ourio-domar, camundongo e r.
Os ons de clcio internos so armazenados no retculo endoplasmtico do
vulo (Eisen e Reynolds, 1985; Terasaki e Sardet, 1991). No ourio-do-mar e na r,
cujos vulos sofrem uma reao granular cortical, esse retculo pronunciado no
crtex e rodeia os grnulos (Figura 4.25; Gardiner e Grey, 1983; Luttmer e Longo,
1985). Na r Xenopus, o retculo endoplasmtico cortical fica 10 vezes mais abundante durante o amadurecimento do vulo e desaparece localmente dentro de um
minuto aps a ocorrncia da onda de exocitose em qualquer regio do crtex. Jaffe
(1983) compara esse retculo endoplasmtico seqestrador de clcio, ao retculo
sarcoplasmtico do msculo esqueltico ou cardaco. Uma vez iniciada, a liberao de clcio autopropagada. Clcio livre capaz de liberar clcio seqestrado
de seus locais de armazenamento, causando assim uma onda libertadora do on
clcio e exocitose granular cortical.
Variaes em estratgias preventivas da polispermia existem em toda a natureza. Nos mamferos, a polispermia minimizada pelo pequeno nmero de espermatozides que atingem o local da fecundao (Braden e Austin, 1954). O bloqueio
polispermia em hamsters parece ser controlado somente pela liberao de stios
que ligam o espermatozide na zona pelcida (Miyazaki e Igusa, 1981; Jaffe e
Gould, 1985). Coelhos, no entanto, se apoiam num bloqueio da polispermia a nvel
da membrana, e ningum iria disputar o seu grau de sucesso. Finalmente, certos
mamferos tm defesas para a polispermia sobre as quais pouco sabemos. Nos
vulos ricos em gema de certas aves, rpteis e salamandras, vrios espermatozides realmente penetram o citoplasma do vulo. De uma maneira desconhecida,
todos menos um so induzidos a se desintegrar no citoplasma aps a fuso do
proncleo do vulo com um dos proncleos do espermatozide (Ginzburg, 1985;
Elinson, 1986). Qualquer que seja o mecanismo, somente um ncleo haplide de
espermatozide pode fundir-se com o ncleo haplide do vulo.
Figura 4.25
Retculo endoplasmtico rodeando grnulo cortical no vulo de ourio-do-mar. (A)

O retculo foi corado com smio-iodeto de
zinco para permitir a visualizao por micrografia de transmisso eletrnica. O grnulo visto rodeado pelo retculo. (B) Retrato de um vulo inteiro corado por anticorpos fluorescentes para os canais de liberao de clcio. Os anticorpos mostram
esses canais no retculo endoplasmtico
cortical. (A de Luttmer e Longo, 1985, cortesia de S. Luttmer; B de McPherson et
al., 1992, cortesia de F. J. Longo.)
(A)
(B)
&
147
Especulaes
A Ativao do Metabolismo dos Gametas
e a liberao do on clcio necessria para ativao do ocito, como

o espermatozide motiva essa liberao? Realmente no se sabe. Como se
pronunciou um investigador (Berridge,
1993): Exatamente como o espermatozide dispara o processo explosivo da liberao do clcio no vulo, ainda permanece algo misterioso. Dados recentes sugerem que produo do inositol 1,4,5, trifosfato (IP3) o evento primrio para a
liberao de ons clcio do seu local de
armazenamento intracelular.
IP3 injetado pode liberar ons clcio
seqestrados no vulo e muitos outros
tipos de clulas (Swann e Whitaker,
1986; Berridge, 1993); o aumento na concentrao de IP 3 intracelular visto
ocorrer dentro de 10 segundos aps a
fecundao de ovos do ourio-do-mar
(Ciapa e Whitaker, 1986). A libertao
de ons clcio e a reao dos grnulos
corticais rapidamente seguem a formao ou injeo de IP3 (Whitaker e Irvine,
1984; Busa et al., 1985). Os efeitos mediados por IP3 podem ser abortados pela
pr-injeo de agentes quelantes de
clcio no vulo (Turner et al., 1986),
confirmando que IP3 estimula a liberao de clcio armazenado.
Canais de clcio respondendo ao IP3
foram encontrados no retculo endoplasmtico do vulo. O IP3 formado no
local da entrada do espermatozide
considerado ligar-se a esses receptores
de IP3 no retculo endoplasmtico, ocasionando uma liberao local de clcio
(Ferris et al., 1989; Furuichi et al., 1989;
Terasaki e Sardet, 1991). Uma vez liberados, os ons de clcio podem difundir
diretamente, ou facilitar a liberao de
mais ons de clcio de receptores sensveis ao clcio localizados no retculo endoplasmtico (McPherson et al., 1992).
A ligao de ons de clcio a esses receptores libera mais clcio, e esse pode
continuar a onda, ligando-se a mais receptores e assim por diante. Mohri e colaboradores (1995) mostraram que o clcio liberado por IP3 necessrio e suficiente para liberao de clcio. Essa
onda de ons de clcio propagada por
toda clula, comeando no ponto da entrada do espermatozide; os grnulos

corticais se fundem com a membrana
celular na presena de concentraes
altas de clcio, respondem com uma
onda de exocitose que segue os ons
de clcio.
IP 3 tambm capaz de liberar ons
de clcio em vulos de vertebrados, e o
bloqueio do seu receptor em vulos de
hamster impede a liberao de clcio no
ato da fertilizao. Como em ourio-domar IP3 tambm parece mediar a liberao de clcio de stios no retculo endoplasmtico (Lechleiter e Clapham,
1992; Miyazaki et al., 1992; Ayabe et al.,
1995). Xu e colaboradores (1994) mostraram que o bloqueio da mediao por
IP3 da sada de clcio, impede todos os
aspectos da ativao do vulo pelo espermatozide incluindo exocitose granular, recrutamento de mRNA e recomeo do ciclo celular.
A questo ento : o que inicia a produo de IP3? H dois caminhos que parecem estimular a liberao de clcio: aquele do receptor ligado protena G, largamente conhecido como liberadora de ons
de clcio na contrao muscular, crescimento celular, secreo hormonal, percepo sensorial e liberao de neurotransmissores (Berridge, 1993). O outro caminho o do receptor da tirosinoquinase
em cascata, que tambm usado na proliferao e diferenciao celular. Conforme
apresentado no Captulo 3, o primeiro caminho se inicia pela ligao de um ligante
extracelular (como a acetilcolina ou a
serotonina) uma protena receptora
transmembrana. No interior da membrana
plasmtica esse receptor ligado protena trimrica G. Esse receptor ativa a protena G (veja Figuras 3.33 e 3.35), levando
sua dissociao em subunidades, capazes de ativar um conjunto de enzimas chamadas de fosfolipase C. Essa cataliza a
hidrlise de fosfatidilinositol 4,5-bifosfato
(PIP2) em dois segundos mensageiros:
inositol 1,4,5 trifosfato (IP3) e diacilglicerol
(DAG). O primeiro capaz de abrir canais
de clcio. DAG estimula a troca de prtons
que permite o efluxo de ons de hidrog-
nio das clulas. O resultado disso a elevao de clcio e do pH intracelulares.

O outro segundo mensageiro, DAG,
considerado ativar a protena quinase
C (PKC) da membrana, que transferida
do citosol para a membrana plasmtica
do ovo pouco aps a fecundao, e pode
ser responsvel pela ativao da protena que troca ons de sdio por ons de
hidrognio (Swann e Whitaker, 1986;
Nishizuka, 1986; Shen e Burgart, 1986;
Olds et al., 1995). O bloqueio da PKC em
vulos de ourios-do-mar inibe a alcalinizao do citosol observada durante a
fertilizao normal (Shen e Buck, 1990).
A protena que faz a troca Na + /H+, tambm necessita de ons clcio para sua
atividade. Assim, tanto DAG como IP 3
esto envolvidos nas ativao do vulo. A etapa regulatria chave a ativao da fosfolipase C, que produz esses
dois compostos. Jaffe e seus colaboradores encontraram a protena G em vulos de ourio-do-mar e r; e quando injetaram ativadores da protena G nesses vulos, causaram exocitose granular na ausncia de espermatozide
(Turner et al., 1986; Kline et al., 1991).
Tal ativao foi inibida por quelantes
de clcio, como o EGTA. [fert8.html]
Parece, portanto, que uma protena
G pode estar envolvida na regulao de
ons seqestrados de clcio, e na exocitose de grnulos corticais. Existem vrias maneiras pelas quais isso pode acontecer. Em primeiro lugar, a ligao do espermatozide a um receptor na membrana celular do vulo pode mudar a sua
conformao de modo a ativar a protena G e iniciar a cascata (Figura 4.26A),
conforme demonstrado por Kline e colaboradores (1988, 1991). Eles levantaram a hiptese que se essa protena
mediar a fertilizao por ser ativada por
um receptor ligante de espermatozide,
ento a mesma protena G poderia ser
ativada por um neurotransmissor se o
ovo contiver um receptor para neurotransmissor capaz de ativar a protena
G. Eles injetaram mRNA para o receptor
de serotonina ou de acetilcolina em vulos de r. Esses receptores da superfcie
148
celular foram sintetizados e foram detectados na membrana celular do vulo. Os vulos puderam ser fertilizados
por serotonina e acetilcolina e foi observado a reao cortical. Experimentos
semelhantes mostraram que quando
neurotransmissores ativam o caminho
da protena GIP3 em ocitos de camundongo, so induzidos os eventos da fertilizao (Williams et al., 1992; Moore et
al., 1993).
Entretanto, a cascata ligada protena-G no o nico caminho capaz de gerar IP3 (veja Captulo 3). Evidncias recentes (Moore et al., 1994; Shilling et al.,
1994; Yim et al., 1994) demonstram que a
ativao do receptor da tirosinoquinase
tambm produz IP3 e ativa a onda de clcio e a reao granular cortical (Figura
4.26b). Quando o mRNA para o receptor
dessa quinase (o receptor para o fator de
crescimento derivado das plaquetas,
PDGF) foi injetado em ocitos de estrela-do-mar, o receptor PDGF foi sintetizado e incorporado nas membranas celulares desse organismo. Quando, aps a
maturao dos ocitos, PDGF foi adicionado gua banhando os vulos, esses
apresentaram aumento de clcio intracelular livre, exocitose de grnulos corticais
e sntese de DNA. Alguns se desenvolveram em larvas. Quando o mRNA continha um ponto de mutao que impedia
Figura 4.26
Mecanismos possveis da ativao do vulo. (A) Trajetria do fosfatidilinositol mediado pela G-protena. (B) Trajetria do receptor da tirosinoquinase (RTK). (C) Trajetria da tirosinoquinase citoplasmtica. (D) Trajetria na qual a G protena ou
tirosinoquinase ativadas na membrana espermtica ativam trajetrias no vulo. (E)
Trajetrias de ativadores solveis.
CAMINHOS ANTERIORES FUSO DO ESPERMATOZIDE
(A)
(B)
(C)
Espermatozide
Fosfolipase C (PLC)
Receptor
G-protena
Tirosinoquinase
Receptor de
Tirosinoquinase
Receptor de IP3
Retculo endoplasmtico
APS A FUSO DO ESPERMATOZIDE
(D)
Fator solvel
do vulo
G-protena
Receptor de IP3
Fatores solveis
do Espermatozide
o receptor interagir com a fosfolipase C,

nenhuma dessas reaes ocorreu (Shilling
et al., 1994). Assim, tanto o caminho ligado ao receptor protena-G como aquele
do receptor da tirosinoquinase, parecem
ser capazes de ativar essa fosfolipase,
criar IP3 e induzir o fluxo de clcio no
vulo. O receptor da bindina no oferece pistas para explicar como ocorre essa
ativao, por no ter semelhante em outras protenas transmembrana. No entanto, 5 segundos aps ligar a bindina, fica
fosforilado em um dos seus resduos
tirosina citoplasmticos (Abassi e Foltz,
1994). Isso sugere que o receptor de
bindina ligado, pode interagir com a
tirosinoquinase plasmtica tal como
aqueles que medeiam a liberao de clcio durante a ativao de clulas T (Figura 4.26 C; Hall et al., 1993).
Outra possibilidade que a ativao do caminho do IP3 no devida

ligao do espermatozide e vulo, mas
fuso das membranas do vulo e do
espermatozide. Mc Culloch e Chambers
(1992) obtiveram evidncia eletrofisiolgica que a ativao dos vulos do
ourio-do-mar no ocorre at depois da
juno do espermatozide com o vulo.
Eles sugerem que os componentes
ativadores do vulo se localizam na
membrana ou no citoplasma do espermatozide. at mesmo possvel que
por ocasio da fuso das membranas,
as protenas G da membrana espermtica ou as tirosinoquinases (ativadas pela
gelia do vulo para iniciar a reao acrossmica) ativem a cascata polifosfoinositdica para liberao de clcio do
vulo. (No cenrio apresentado na Fi-
Ativao do metabolismo do vulo

Embora a fertilizao seja freqentemente descrita como mero meio de juno de dois
ncleos haplides, ela tem um papel igualmente importante na iniciao de processos
que iniciam o desenvolvimento. Esses eventos acontecem no citoplasma e ocorrem
sem o envolvimento dos ncleos.*
O vulo do ourio-do-mar maduro uma clula metabolicamente lenta, reativada
pelo espermatozide. Essa ativao apenas o estmulo; aciona um conjunto de
eventos metablicos pr-programados. As respostas do vulo ao espermatozide
podem ser divididas em precoces que ocorrem em poucos segundos aps a
reao cortical e tardias que acontecem vrios minutos aps o inicio da fertilizao (Tabela 4.1).
Respostas precoces
O contato entre o espermatozide do ourio-do-mar ativa dois principais bloqueios
polispermia: o bloqueio rpido, iniciado pelo influxo de sdio na clula, e o bloqueio
lento, iniciado pela liberao intracelular de ons de clcio. A ativao de todos os
vulos parece depender do aumento da concentrao de ons livres de clcio dentro
do vulo. Em protostomatas, como lesmas e vermes, ao menos parte do clcio geralmente entra no vulo vindo de fora. Em deuterostomatas, tais como: peixes, rs,
ourios-do-mar e mamferos, a ativao acompanhada pela liberao de ons de
clcio do retculo endoplasmtico, resultando na onda de clcio varrendo o vulo
(Jaffe, 1983; Terasaki e Sardet, 1991).
*Em certas salamandras, essa funo desenvolvimental da fertilizao est totalmente divorciada da funo gentica. A salamandra prateada (Ambystoma platineum) uma espcie hbrida
que consiste somente de fmeas. Cada uma produz um ovo com um nmero no-reduzido de
cromossomos. Esse ovo, porm, no pode se desenvolver sozinho; assim, a salamandra prateada
copula com o macho da salamandra Jefferson (A. jeffersonianum). O espermatozide desse macho
somente estimula o desenvolvimento do ovo; no contribui com material gentico (Uzzell,
1964). Para detalhes desse complexo mecanismo de procriao veja Bogart et al., 1989.
149
gura 4.26 D, a bindina meramente liga o

vulo ou, talvez, motive a fosforilao
de protenas necessrias em fases mais
avanadas do desenvolvimento.)
Ainda outra possibilidade que o
agente ativo na liberao de clcio ligado
venha do citosol do espermatozide.
Parrington e colaboradores (1996) isolaram uma protena de 33-kDA, chamada
oscilina, localizada no escasso citoplasma da cabea do espermatozide (Figura
4.26 E). A microinjeo dessa protena em
vulos de camundongo pode iniciar liberao de clcio, porm, os outros parmetros da ativao do vulo (exocitose dos
grnulos, recrutamento de mRNA e retomada do ciclo celular) no so observados. No conhecido qual o papel que
essa protena pode ter na fisiologia da ativao do vulo.
150
Tabela 4.1
Evento
Eventos da fertilizao do ourio-do-mar

ximado
aproximado
Tempo apro
aps a inseminaoa
Ligao espermatozide-vulo
Elevao do potencial de fertilizao (bloqueio rpido da polispermia)
Fuso das membranas espermatozide-vulo
Primeira deteco de aumento de clcio
Exocitose das vesculas corticais (bloqueio lento da polispermia)
Ativao da NAD quinase
Aumento de NADH e NADPH
Aumento do consumo de O2
Entrada do espermatozide
Efluxo de cido
Aumento de pH (permanece alto)
Descondensao da cromatina do espermatozide
Migrao do ncleo do espermatozide para o centro do vulo
Migrao do ncleo do vulo para o ncleo do espermatozide
Ativao da sntese protica
Ativao do transporte de aminocidos
Iniciao da sntese de DNA
Mitose
Primeira clivagem
O segundos
dentro de 1 sec
dentro de 6 sec
6 sec
15-60 sec
comea em 1 min
comea em 1 min
comea em 1 min
1-2 min
1-5 min
1- 5 min
2-12 min
2-12 min
5-10 min
comea em 5-10 min
comea em 5-10 min
20-40 min
60-80 min
85- 95 min
Principais fontes: Whitaker e Steinhardt, 1985; Mohri et al., 1995.

a
Tempos aproximados baseados em dados de S. purpuratus (15-17oC), L. pictus (16-18oC), A .
punctulata (18-20oC) e L. variegatus (22-24oC). A contagem de tempo para os eventos dentro do
primeiro minuto melhor conhecida para Lytechinius variegatus, assim os tempos apresentados
referem-se essa espcie.
Essa liberao de clcio essencial para a ativao do desenvolvimento do embrio.

Se o quelante de clcio EGTA for injetado no vulo do ourio-do-mar, no ocorre exocitose dos grnulos corticais, mudana do potencial da fertilizao, descondensao do
espermatozide, nem reincio da diviso celular (Kline, 1988). Reciprocamente, vulos
podem ser ativados artificialmente na ausncia de espermatozide por procedimentos
que liberam clcio livre no ocito. Steinhardt e Epel (1974) acharam que quantidades
micromolares do ionforo A23187 induzem no vulo a maioria das respostas caractersticas de um ovo fertilizado normalmente. A elevao do envoltrio de fertilizao, o
aumento do pH intracelular, o surto de utilizao de oxignio e o aumento da sntese de
protena e DNA so todos gerados com sua seqncia prpria. Essa ativao acontece
na ausncia total de ons de clcio na gua do mar. Na maioria desses casos, o desenvolvimento cessa antes da primeira mitose porque os ovos ainda so haplides e desprovidos do centrolo espermtico necessrio para a diviso.
Essa liberao de clcio ativa uma srie de reaes metablicas (Figura 4.27). Uma
delas a ativao da enzima NAD+ quinase, que converte o NAD+ em NADP+ (Epel et
al., 1981). Essa mudana pode ter importantes conseqncias para o metabolismo
lipdico, pois NADP+ (mas no o NAD+) pode ser utilizado como coenzima para
biossntese lipdica. Assim, a mudana de NAD+ em NADP+ pode ser importante na
construo de novas membranas exigidas durante a clivagem. Outro efeito dessa
mudana se refere ao consumo de oxignio. Um surto de reduo de oxignio visto
ocorrer durante a fertilizao, e muito desse surto respiratrio usado para cruzamento ligado da membrana de fertilizao. A enzima responsvel por essa reduo do
oxignio (para gua oxigenada) tambm dependente de NADPH (Heinecke e Shapiro,
1989). Por ltimo, o NADPH ajuda na regenerao da glutationa e de ovotiois (ovothiols)
que podem ser cruciais para remoo de radicais livres que poderiam de outra maneira
prejudicar o DNA do ovo e do embrio precoce (Mead e Epel, 1995).
Alterao do potencial
da membrana
Influxo de Na+
Bloqueio rpido
da polispermia
Ativao da
NAD+ quinase
Ligao e/ou fuso de
espermatozide
membrana celular do vulo
Estimulao de
protena G ou
de tirosinoquinase?
Produo
de IP3
Exocitose
de grnulos
corticais
Liberao
de Ca2+
Ativao de
fosfolipase C
Produo de
diacil-glicerol
Figura 4.27
151
Ativao de
proteno-quinase C
Troca
Na+/H+
Modelo de um possvel mecanismo de ativao do vulo do ourio-do-mar. (Segundo Epel,

1980 e L. A. Jaffe, comunicao pessoal.)
Respostas tardias
Pouco tempo aps o aumento dos nveis de ons clcio, o pH intracelular tambm
aumenta. Acredita-se que essas duas condies inicas (> [Ca2+], < [H+] ajam em
conjunto para fornecer o espectro completo dos eventos da fertilizao, incluindo a
sntese de protenas e de DNA (Winkler et al., 1980; Whitaker e Steinhardt, 1982). O
aumento do pH intracelular comea com o segundo influxo de ons de sdio, causando uma troca 1:1 entre ons de sdio da gua do mar e os ons hidrognio do vulo*.
Essa perda de hidrognio faz o pH elevar-se de 6.8 a 7.2, ocasionando enormes mudanas na fisiologia do ovo (Shen e Steinhardt, 1978).
As respostas tardias da fertilizao produzidas por essas alteraes inicas, incluem a ativao da sntese de DNA e da protena. O surto de sntese de protena ocorre
vrios minutos aps a entrada do espermatozide e no depende da sntese de novo
RNA mensageiro (Figura 4.28). Em seu lugar, a sntese de protena nova utiliza mRNAs
j presentes no citoplasma do ocito (muito mais sobre isso ser mencionado no
Captulo 12). Esses RNAs incluem aqueles que codificam protenas como histonas,
tubulinas, actinas e fatores morfogenticos que so utilizados durante o desenvolvimento precoce. Tal surto de sntese protica pode ser induzido pelo aumento artificial
do pH citoplasmtico por ons amnio (Winkler et al., 1980). Reciprocamente, agentes
que bloqueiam o aumento do pH inibem eventos da fertilizao tardia como a sntese
de DNA e protena. Quando ovos recm-fertilizados so colocados em solues contendo baixas concentraes de ons de sdio e amiloride (uma droga que inibe a troca
Na+/H+), a sntese protica falha, os movimentos dos proncleos do vulo e do espermatozide so prevenidos, e a diviso celular no ocorre (Dube et al., 1985).
*Novamente, a variao espcie-para-espcie est solta. No vulo muito menor do camundongo, no h elevao do pH aps a fertilizao. Similarmente no camundongo, no h um
aumento dramtico na sntese protica imediatamente em seguida fertilizao.
Aumento do pH
intracelular
Converso de
NAD+ em NADP+
Bloqueio lento
da polispermia
Formao da
camada hialina
Estimulao de sntese
protica, replicao de
DNA, e movimentos
citoplasmticos de
material morfogentico
152
Surto de sntese protica na fertilizao emprega mRNA armazenado no citoplasma do ocito. (A) Sntese protica em vulos do ourio-do-mar Arbacia punctulata fertilizada na presena ou ausncia
de actinomicina D, um inibidor da transcrio. Durante as primeiras
horas, a sntese protica ocorre sem nova transcrio dos ncleos
do zigoto ou embrio. Um segundo surto de sntese protica ocorre
durante os estgios medianos de blstula, e isso representa traduo de mensagens recm-transcritas (e, portanto, no visto em
embries crescendo em actinomicina). (B) Aumento na porcentagem de ribossomos recrutados para polissomos durante as primeiras horas do desenvolvimento do ourio-do-mar, especialmente durante o primeiro ciclo celular. (A segundo Gross et al., 1964; B
segundo Humphreys, 1971.)
Incorporao de valina[14C] na
protena/mg protena (cpm x 10-3)
Figura 4.28
gua do mar
normal
gua do mar tratada

por actinomicina
Porcentagem de ribossomos
em polissomos
Horas aps a fertilizao
Tempo de desenvolvimento (horas)
Fuso do material gentico

Em ourios-do-mar, o ncleo do espermatozide penetra o vulo perpendicularmente superficie do vulo. Aps a fuso das membranas do espermatozide e do
vulo, o ncleo do espermatozide e seu centrolo se separam das mitocndrias e
do flagelo. A mitocndria e o flagelo se desintegram dentro do vulo; assim,
poucas, se tanto, mitocndrias derivadas do espermatozide so encontradas em
organismos em desenvolvimento ou em adultos (Dawid e Blackler, 1972; Giles et
al., 1980). Em camundongos estima-se que 1 em cada 10.000 mitocndrias so
derivadas do espermatozide (Gyllensten et al., 1991). Assim, embora cada gameta
contribua para o zigoto com um genoma haplide, o genoma mitocondrial transmitido principalmente pelo parente materno. Reciprocamente, em quase todos os
animais estudados (o camundongo sendo a principal exceo), o centrossomo
necessrio para a produo do fuso mittico das divises subseqentes derivado do centrolo espermtico (Sluder et al., 1989, 1993).
O ncleo do vulo sendo haplide chamado de proncleo feminino. Dentro do
citoplasma do vulo, o ncleo do espermatozide descondensa para formar o
proncleo masculino. Uma vez dentro do vulo, o proncleo masculino sofre uma
dramtica transformao. O envoltrio pronuclear forma vesculas com pequenos
pacotes, expondo, com isso, a compacta cromatina do espermatozide ao citoplasma do vulo (Longo e Kunkle, 1978). As protenas que prendem a cromatina no seu
estado condensado, inativa, so trocadas por protenas derivadas do citoplasma do
vulo. Essa troca permite a descondensao da cromatina do espermatozide. Em
ourios-do-mar, a descondensao parece ser iniciada pela fosforilao de duas
(A)
153
(B)
Proncleo do vulo
Ponte internuclear
Proncleo do
espermatozide
Tempo (seg)
Figura 4.29
histonas espermatozide-especficas, que se ligam fortemente ao DNA. Esse processo comea quando o espermatozide entra em contato com uma glicoprotena na
gelia do vulo que eleva o nvel da atividade proteinoquinase cAMP-dependente.
(Tais proteino-quinases cAMP-dependentes foram mencionadas no Captulo 1.)
Essas quinases fosforilam vrios resduos bsicos das histonas espermatozideespecficas interferindo, desse modo, com sua ligao ao DNA (Garbers et al., 1980,
1983; Porter e Vacquier, 1986). Esse afrouxamento considerado facilitar a substituio das histonas espermatozide-especficas por outras histonas que haviam sido
estocadas no citoplasma do ocito (Poccia et al., 1981; Green e Poccia, 1985). Uma
vez descondensado, o DNA pode iniciar a transcrio e a replicao. [fert9.html]
Depois que o espermatozide do ourio-do-mar entra no citoplasma do vulo, o
proncleo masculino gira 180o fazendo com que o centrolo fique entre o proncleo do
espermatozide e o proncleo do vulo. Em seguida, o centrolo espermtico age
como um centro organizador de microtbulos, estendendo seus prprios microtbulos e integrando-os com os microtbulos do vulo formando um ster*. Esses
microtbulos se estendem atravs de todo o vulo, contatam o proncleo feminino, e
trazem os dois proncleos um para perto do outro (Hamaguchi e Hiramoto, 1980;
Bestor e Schatten, 1981). A fuso forma o ncleo zigtico diplide (Figura 4.19). A
iniciao da sntese de DNA pode ocorrer no estgio pronuclear (durante a migrao)
ou depois da formao do ncleo zigtico.
Em mamferos, o processo da migrao pronuclear dura aproximadamente 12
horas, comparado com menos de uma hora no ourio-do-mar. O espermatozide do
mamfero entra quase tangencialmente superfcie do vulo em vez de aproxim-la
perpendicularmente, e funde com numerosas microvilosidades (veja Figura 4.20). O
ncleo do espermatozide mamfero tambm se parte quando sua cromatina
descondensa, sendo depois reconstrudo por vesculas coalescentes. O DNA do
ncleo espermtico ligado por protenas bsicas chamadas protaminas; essas
protenas nucleares esto firmemente compactadas atravs de ligaes dissulfeto.
Uma vez no vulo, a glutationa reduz essas ligaes de dissulfeto, permitindo o
desdobramento da cromatina do espermatozide (Calvin e Bedford, 1971; Kvist et
*Quando Oskar Hertwig observou esse arranjo radial de steres de espermatozide no seu
recm-fertilizado ovo de ourio-do-mar, chamou-o de sol dentro do ovo, e considerou-o feliz
indicao de uma fertilizao bem-sucedida (Hertwig, 1877). Mais recentemente, Simerly e
colaboradores (1994) descobriram que certos tipos de infertilidade em homens eram devidos a
defeitos na capacidade do centrossoma formar esses steres microtubulares. Essa deficincia
causa a falncia da migrao pronuclear e a interrupo do desenvolvimento.
Eventos nucleares na fertilizao do ouriodo-mar. (A) Migrao dos proncleos do

vulo e do espermatozide em um ovo de
Clypeaster japonicus. O proncleo do espermatozide est rodeado por microtbulos do seu ster. (B) Fuso de proncleos no
ovo do ourio-do-mar. (A de Hamaguchi e
Hiramoto, 1980, cortesia dos autores; B cortesia de F. J. Longo.)
154
(A)
(B)
(C)
Figura 4.30
Movimento pronuclear em hamster. (A)

Entrada de espermatozide na clula e
tumefao do proncleo do espermatozide. (B) Aposio dos proncleos do espermatozide e do vulo. (C ) Estgio
bicelular mostrando duas clulas de tamanhos iguais com ncleos bem definidos.
Entulho no espao perivitelnico so os corpos polares em degenerao. (de Bavister,
1980, cortesia de B. D. Bavister.)
al., 1980). O proncleo masculino dos mamferos aumenta enquanto o ncleo do

ocito completa sua segunda diviso meitica (Figura 4.30 A).
O centrossomo que acompanha o proncleo masculino produz seus steres
(principalmente a partir de protenas armazenadas no ocito) e contata o proncleo feminino. Ento, cada proncleo migra ao encontro do outro, replicando seu
DNA ao longo do trajeto. No encontro, os dois envoltrios nucleares se desintegram (Figura 4.30B). No entanto, em lugar de produzir um ncleo zigtico comum
(como acontece na fertilizao do ourio-do-mar), a cromatina condensa-se para
formar cromossomos que se orientam num fuso mittico comum. Assim, um ncleo
zigtico verdadeiro em mamferos visto primeiro no no zigoto, mas no estgio
bicelular (Figura 4.30 C). [fert10.html]
&
Especulaes
A No-Equivalncia dos Proncleos de Mamferos
ERALMENTE ASSUME-SE que

machos e fmeas portam genomas haplides equivalentes.
Um dos princpios fundamentais da gentica Mendeliana que os genes derivados do espermatozide so funcionalmente equivalentes aqueles derivados
do vulo. No entanto, estudos recentes
mostram que em mamferos o genoma derivado do vulo pode ser funcionalmente diferente e ter papel complementar durante certos estgios do desenvolvimento. A primeira evidncia dessa no-equivalncia veio de estudos de um tumor
humano chamado mola hidatidiforme.
Esses tumores parecem tecido placentrio. A maioria dessas molas se desenvolve de um espermatozide haplide ferti-
lizando um vulo no qual o proncleo

feminino est ausente. Aps penetrar no
vulo, os cromossomos do espermatozide se duplicam restaurando seu nmero diplide. Assim, todo o genoma
derivado do espermatozide (Jacobs et
al., 1980; Ohama et al., 1981). Aqui vemos uma situao em que as clulas sobrevivem, se dividem e tm um nmero
normal de cromossomos, porm, apresentam um desenvolvimento anormal. Em
vez de formar um embrio, o ovo se transforma numa massa de clulas placentosmiles. No h desenvolvimento normal
quando o genoma inteiro vem do parente masculino. Evidncia para a no-equivalncia dos proncleos mamferos vem
tambm de tentativas de conseguir que
vulos se desenvolvam na ausncia de

espermatozide. A habilidade de desenvolver um embrio sem contribuio espermtica chamada partenognese (do
grego, significando nascimento virgem). Os vulos de muitos invertebrados e de alguns vertebrados so capazes de se desenvolver normalmente na
ausncia do espermatozide se o vulo
for ativado artificialmente. Nessas situaes, a contribuio do espermatozide
para o desenvolvimento parece dispensvel. Os mamferos, no entanto, no apresentam a partenognese. A colocao
de ocitos de camundongo em um meio
de cultura que artificialmente ativa o
ocito, ao mesmo tempo suprimindo a formao do segundo corpo polar, produz
ovos diplides de camundongo cuja

herana deriva somente do vulo
(Kaufman et al., 1977). Essas clulas se dividem para formar embries com medula espinhal, msculos, esqueleto e rgos, incluindo
coraes latejantes. Porm, o desenvolvimento no continua e no
dia 10 ou 11 (metade do tempo da
gestao), observam-se profundas
diferenas entre os embries normais e os partenogenticos, esses
deteriorando e ficando grosseiramente desorganizados (Figura
4.31). Nem no homem nem no camundongo o desenvolvimento
pode ser completado com cromossomos
derivados somente do vulo.
A hiptese que proncleos masculinos e femininos so diferentes, tambm
ganha apoio de experimentos de transplante pronuclear (Surani e Barton, 1983;
Surani et al., 1986; McGrath e Solter,
1984). Proncleos recm-fertilizados de
machos ou fmeas podem ser removidos
e adicionados a outros ovos recm-fertilizados. (Os dois proncleos podem ser
diferenciados nesse estgio, porque o feminino fica debaixo dos corpos polares.)
Assim, podem ser construdos zigotos
com dois proncleos masculinos ou dois
femininos. Embora ocorra a clivagem embrionria, nenhum desse tipos de ovos
155
Tabela 4.2 Experimentos de transplantes pronucleares

Classe de zigotos
reconstrudos
Nmero de transplantes
bem-sucedidos
Nmero de
sobrevivente
Bimaternal
339
Bipaternal
328
Controles
348
18
Operao
Fonte: McGrath e Solter, 1984.
se desenvolvem at o nascimento, ao
passo que alguns ovos controle (contendo um proncleo masculino e um feminino de zigotos diferentes) que sofreram tal transplante se desenvolvem normalmente (Tabela 4.20). Ainda mais, os
embries bimaternos ou bipaternos cessam o desenvolvimento ao mesmo tempo que camundongos partenogenticos.
Portanto, embora os dois proncleos
sejam equivalentes em muitos animais,
nos mamferos existem importantes diferenas funcionais entre eles.
A razo para essas mortes embrionrias que em algumas clulas somente o alelo de certos genes derivado da
me ativo, enquanto em outras clu-
Figura 4.31
(A) Embries controle e (B) partenogenticos (dois proncleos femininos) de camundongos no 11 o dia de gestao. Os camundongos estavam se desenvolvendo na mesma fmea. Alm de serem menores e em deteriorao, os embries partenogenticos
tambm tinham placentas muito menores. (de
Surani e Barton, 1983, cortesia dos autores.)
las somente o alelo de genes derivado

paternalmente funcional. (Na maioria
dos genes, naturalmente, os alelos derivados do macho e da fmea so equivalentes e so ativados no mesmo grau
em cada clula. Aqui estamos tratando
de excees a essa regra Mendeliana.)
Por exemplo, o fator de crescimento insulina-smile II (IGF-II) promove o crescimento de rgos embrionrios e fetais.
Em embries de camundongos, o alelo
de IGF-II derivado paternalmente ativo em todo o embrio, ao passo que o
alelo derivado maternalmente em geral inativo (exceto em algumas clulas
neurais). Assim, se um camundongo
herda um alelo mutante IGF-II de sua
me, ir se desenvolver at o tamanho
normal (j que o alelo derivado maternalmente no expresso); porm, se o
mesmo alelo mutante for herdado do pai,
o camundongo ter crescimento prejudicado (DeChiara et al., 1991). O padro
oposto de expresso allica se encontra para um dos receptores de IGF-II.
Aqui, o gene paterno para o receptor
mal transcrito, enquanto o alelo materno ativo (Barlow et al., 1991). As diferenas entre os alelos ativos e inativos
so consideradas ser causadas por modificaes do DNA que ocorrem de maneira diferente nos ncleos do vulo e
do espermatozide (sero discutidos
posteriormente no Captulo 11). Como
certos genes importantes para o desenvolvimento somente so ativos quando
provindos do espermatozide e outros
tais genes s so ativos quando vm do
vulo, tanto proncleos maternos como
paternos so necessrios para o desenvolvimento completo dos mamferos.
156
Rearranjo do citoplasma do vulo
Figura 4.32
Rearranjo citoplasmtico no vulo do

tunicado Styela partita. (A) Antes da fertilizao, citoplasma cortical amarelo rodeia citoplasma cinzento, tipo gema. (B)
Aps a entrada do espermatozide, o citoplasma cortical amarelo e o citoplasma claro derivado da degradao do ncleo do
ocito escorrem vegetativamente em direo ao espermatozide. (C) medida que
o proncleo do espermatozide migra para
o plo animal em direo ao proncleo do
vulo, os citoplasmas amarelo e claro os
acompanham. (D) A posio final dos citoplasmas amarelo e claro, marcam os locais onde as clulas do origem ao mesnquima e aos msculos, respectivamente.
(Segundo Conklin, 1905.)
A fertilizao pode iniciar deslocamentos radicais nos materiais citoplasmticos do

vulo. Esses rearranjos do citoplasma do ocito so muitas vezes cruciais para a
diferenciao nas etapas seguintes do desenvolvimento. Como veremos nos captulos 13 e 14, o citoplasma do vulo freqentemente contm determinantes
morfogenticos que ficam segregados em clulas especficas durante a clivagem.
Esse determinantes, em ltima anlise, conduzem ativao ou represso de genes
especficos conferindo, dessa maneira, certas propriedades s clulas que os incorporam. O arranjo espacial correto desses determinantes crucial para o desenvolvimento adequado.
Em algumas espcies, esse rearranjo na orientao pode ser visualizado pela presena de grnulos pigmentados citoplasmticos. Um exemplo o vulo do tunicado
Styela partita (Conklin, 1905). O ovo no-fertilizado desse animal est apresentado na
Figura 4.32A. Um citoplasma cinzento central est envolvido por uma camada cortical
contendo incluses lipdicas amarelas. Durante a meiose, a desintegrao nuclear
libera uma substncia clara que se acumula no hemisfrio animal (superior) do vulo.
Dentro de 5 minutos aps a entrada do espermatozide, o citoplasma interno claro e o
cortical amarelo migram para o hemisfrio vegetal (inferior) do vulo. Quando o proncleo masculino migra do plo vegetal para o equador da clula, ao longo do futuro
lado posterior do embrio, as incluses lipdicas migram com ele. Essa migrao forma
um crescente amarelo, que se estende do plo vegetal ao equador (Figura 4.32B),
trazendo o citoplasma amarelo para a rea onde mais tarde clulas musculares iro se
formar na larva tunicada. O movimento dessas regies citoplasmticas depende de
microtbulos que so gerados pelo centrolo e por uma onda de ons de clcio que
contraem o citoplasma do plo animal (Sawada e Schatten, 1989; Speksnijder et al.,
1990; Roegiers et al., 1995).
Movimento citoplasmtico tambm visto em vulos de anfbios. Na r, um nico
espermatozide pode entrar em qualquer lugar do hemisfrio animal; quando o faz,
altera o padro citoplasmtico do vulo. Originalmente, o vulo radialmente simtrico em torno do eixo animal-vegetal. Aps a entrada do espermatozide, porm, o
citoplasma cortical (externo) se desloca cerca de 30 relativos ao citoplasma interno,
em direo ao ponto de entrada do espermatozide (Manes e Elinson, 1980; Vincent et
al., 1986). Em algumas rs (como Rana), uma regio do vulo que antes estava coberta
pelo citoplasma cortical escuro do hemisfrio animal fica agora exposta (Figura 4.33).
Esse citoplasma subjacente, localizado perto do equador, no lado oposto do ponto de
entrada do espermatozide, contm grnulos pigmentados difusos e, por isso, tem
aparncia cinzenta. Essa regio tem sido referida como o crescente cinzento (Roux,
1987; Ancel e Vintenberger, 1948). Como veremos em captulos subseqentes, o crescente cinzento demarca a regio onde se iniciar a gastrulao em embries de anfbios.
Plo animal
Material do
ncleo do ocito
Ncleo do
ocito
Citoplasma
Cortical
amarelo
Citoplasma
claro
Gema cinzenta
(A)
(B)
Crio
Plo vegetal
Proncleo do Citoplasma
espermatozide amarelo
(C)
Proncleo do
espermatozide
(D)
Citoplasma
amarelo
Crescente
amarelo
Material
da gema
(A)
Ponto de
entrada do
espermatozide
(B)
Crescente
cinzento
Crtex
Citoplasma
interno
Zona de
deslizamento
Figura 4.33
Reorganizao do citoplasma no ovo recm-fertilizado da r. (A) Corte transversal

esquemtico de um ovo na metade do primeiro ciclo de clivagem. O ovo tem simetria
radial em torno do seu eixo animal-vegetal. O espermatozide entrou por um lado e
seu ncleo est migrando para o interior. O crtex est representado como o de Rana,
com um hemisfrio animal altamente pigmentado e um hemisfrio vegetal transparente. (B) Quando est aproximadamente em 80% de seu caminho na primeira clivagem,
o citoplasma cortical gira cerca de 30 o em relao ao citoplasma interno. Essa rotao
importante porque a gastrulao ir comear na regio oposta ao ponto de entrada do
espermatozide onde ocorre o maior deslocamento do citoplasma. (Segundo Gerhart
et al., 1989.)
Em rs como Xenopus, nas quais no se v um crescente cinzento, podemos assim

mesmo, observar a rotao do citoplasma cortical em relao camada interna,
subcortical. Esse movimento foi demonstrado por Vincent e seus colaboradores (1986).
Esses investigadores imprimiram uma grade hexagonal de corante (Azul Nilo) sobre o
citoplasma abaixo do crtex enquanto aplicavam outro tipo de corante (uma lectina
ligada fluorescena) superfcie do ovo. Quando o ovo foi mantido em sua posio
por incluso em gelatina, os pontos de Azul Nilo puderam ser vistos rodar de 30 em
relao s manchas da lectina fluorescente (Figura 4.34). Em ovos normais, no inclusos, a superfcie do ovo considerada girar enquanto o citoplasma subcortical, tornado pesado pelas plaquetas de gema, permanece estabilizado por gravidade.
O motor para esses movimentos citoplasmticos em ovos de anfbios parece ser
um conjunto de microtbulos paralelos que ficam entre os citoplasmas interno e cortical
do hemisfrio vegetal, na direo da rotao citoplasmtica. Os rastros dos
microtbulos so primeiramente vistos imediatamente antes do comeo da rotao, e
desaparecem quando esse movimento cessa (Figura 4.35; Elinson e Rowning, 1988).
Tratamento do ovo com colchicina ou radiao ultravioleta interrompe a formao
desses microtbulos, com isso parando as rotaes citoplasmticas. Usando anticorpos
ligantes desses microtbulos, Houliston e Elinson (1991a) acharam que esses rastros
eram formados por microtbulos derivados do espermatozide e do vulo, e que o
centrolo espermtico direciona sua polimerizao, fazendo com que cresam para o
interior da regio vegetal do ovo. Ao atingir o crtex vegetal, esses microtbulos se
desviam do ponto de entrada do espermatozide, em direo ao plo vegetal. A posio descentralizada do centrolo espermtico quando esse inicia a polimerizao
microtubular, proporciona direo rotao. A fora motriz para a rotao possivelmente, fornecida pela ATPase cinesina. Tal como a dinena e a miosina, a cinesina
pode fixar-se s fibras e produzir energia pela hidrlise de ATP. Essa ATPase est
localizada nos microtbulos vegetais e nas membranas do retculo endoplasmtico
cortical (Houliston e Elinson, 1991b).
O movimento do citoplasma cortical relativo ao citoplasma interno causa profunda
movimentao nesse ltimo. Danilchik e Denegre 1991) marcaram plaquetas da gema
157
158
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 4.34
Rotao do citoplasma subcortical relativa ao citoplasma de superfcie da clula. (A)

Um ovo recentemente fertilizado foi marcado com uma grade hexagonal de corante
Azul Nilo (que cora os lpidios nas plaquetas de gema). O ovo foi embebido em
gelatina, e as posies originais de alguns dos pontos marcados na superfcie celular
com fluorescena (crculos em A). O ponto de entrada do espermatozide est marcado
com um S. (B,C) Com o progredir do primeiro ciclo, os pontos do citoplasma
subcortical mudaram de aproximadamente 30 o em relao superfcie externa imobilizada do ovo. O local no ovo designando a futura superfcie dorsal do embrio est
marcado com um D. (D) Sumrio desses movimentos na regio vegetal (inferior) do
ovo. (de Vincent et al., 1986, fotografias cortesia de J. C. Gerhart.)
com Azul Nilo e observaram seu movimento por microscopia fluorescente (o corante
ligado emite fluorescncia vermelha). Durante a parte intermediria do primeiro ciclo
celular, a massa do citoplasma central do ovo flui do presumvel lado ventral (abdome),
para o futuro lado dorsal (posterior) do embrio (Prancha 7). Ao fim da primeira diviso, o citoplasma presumivelmente do lado dorsal do embrio, distintamente diferente daquele do provvel lado ventral. O que havia sido um embrio radialmente simtrico, agora um embrio bilateralmente simtrico.
Como veremos nos Captulos 6 e 15, esses movimentos citoplasmticos iniciam
uma cascata de eventos que determina o eixo dorso-ventral da r. Realmente, os
microtbulos paralelos que permitem esses rearranjos parecem estender-se ao longo
do futuro eixo dorso-ventral (Klag e Ubbels, 1975; Gerhart et al., 1983).
Preparao para a Clivagem
O aumento dos nveis de ons livres de clcio intracelular tambm inicia a movimentao de aparelhagem para a diviso celular. O mecanismo iniciador da clivagem
provavelmente difere entre espcies, dependendo do estgio de meiose em que
159
Figura 4.35
(B)
(A)
Arranjo paralelo de microtbulos se estendem ao longo do hemisfrio vegetal, ao longo

do futuro eixo dorso-ventral. (A) Arranjo paralelo de microtbulos vistos na segunda parte do primeiro ciclo celular por anticorpos
fluorescente tubulina. (B) Antes da rotao
citoplasmtica (cerca de metade do ciclo) nenhum arranjo pode ser visto. (C) No trmino
da rotao do citoplasma, os microtbulos
despolimerizam. (de Elinson e Rowning,
1988, cortesia de R. Elinson.)
(C)
ocorre a fecundao. No entanto, em todas as espcies estudadas, o ritmo das

divises celulares regulado pela sntese e degradao de ciclina. A ciclina mantm
as clulas em metfase, e a sua degradao permite s clulas voltarem para interfase.
Alm de suas outras atividades, os ons de clcio tambm parecem iniciar a degradao da ciclina (Watanabe et al., 1991). Uma vez degradada a ciclina, os ciclos de
diviso celular podem se reiniciar.
A clivagem tem uma relao especial com essas regies citoplasmticas. Em embries tunicados, a primeira clivagem secciona o ovo em imagens duplicadas em um
espelho. Desse estgio em diante, cada diviso em um lado do sulco de clivagem tem
uma imagem em espelho do lado oposto. De maneira semelhante, o crescente cinzento
seccionado pelo sulco da primeira clivagem em ovos de anfbios. Assim, a posio
da primeira clivagem no aleatria, mas tende a ser especificada pelo ponto de
entrada do espermatozide e a subseqente rotao do citoplasma do ovo. A coordenao do plano de clivagem e dos rearranjos citoplasmticos provavelmente mediada pelos microtbulos do ster do espermatozide (Manes et al., 1978; Gerhart et al.,
1981; Elinson, 1985).
Portanto, perto do fim do primeiro ciclo celular , o citoplasma se rearranja, os
proncleos se encontram, o DNA est se replicando e novas protenas esto sendo
sintetizadas. O palco est preparado para o desenvolvimento de um organismo
multicelular. [fert11.html], [other.html#fert13]
LITERATURA CITADA
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CAPTULO 5 Clivagem: Criando multicelularidade
Clivagem: Criando multicelularidade
Para nossa limitada inteligncia, pode parecer simples dividir um ncleo em partes
iguais. A clula, manifestadamente, abriga
uma opinio muito diferente.
E. B. WILSON, (1923)
Deve-se mostrar o mximo respeito por
tudo que cresce exponencialmente, no
importa o seu tamanho.
GARRETT HARDIN, (1968)
167
OTVEL COMO S ELA , a fertilizao o passo inicial do desenvolvi-
mento. O zigoto, com o seu novo potencial gentico e com sua nova disposio do citoplasma, inicia agora a produo de um novo organismo
multicelular. Em todas as espcies de animais conhecidas, isso comea por um processo chamado clivagem, uma srie de divises mitticas pelo qual o enorme volume do
citoplasma do ovo dividido em numerosas pequenas clulas nucleadas. Essas clulas
em estado de clivagem so chamadas de blastmeros.
Na maioria das espcies (mamferos sendo a principal exceo) a velocidade da
diviso celular e a colocao dos blastmeros um em relao ao outro esto completamente sob controle das protenas e dos mRNAs armazenados no ocito pela me. O
genoma zigtico transmitido por mitose para todas as outras clulas, no funciona em
embries com clivagem precoce. Poucos, se alguns, mRNAs so produzidos mais
tarde durante a clivagem, o embrio pode dividir-se apropriadamente at mesmo quando produtos qumicos so usados para inibir a transcrio. Tambm em muitas espcies, no h aumento do volume embrionrio durante a clivagem. Isso difere da maioria
dos casos de proliferao de clulas, do qual existe um perodo de crescimento celular
entre as mitoses: a clula se expande para quase o dobro de seu volume, da se divide.
Esse crescimento produz um aumento total de clulas enquanto mantm uma razo
relativamente constante entre volume nuclear e volume citoplasmtico. Durante a clivagem embrionria, no entanto, o volume citoplasmtico no aumenta. Antes, o enorme
volume do citoplasma zigtico dividido cada vez mais em clulas menores. O primeiro
ovo dividido ao meio, em seguida em quartos, em oitavos, e assim por diante. Essa
diviso do citoplasma do ovo, sem o aumento do seu volume, acompanhada pela
abolio do perodo de crescimento entre as divises, enquanto a clivagem dos ncleos
ocorre numa razo to rpida nunca vista antes (nem mesmo em clulas de tumor). Um
ovo de r, por exemplo, pode ser dividido em 37.000 clulas em apenas 43 horas. A
mitose na Drosophila, em estgio de clivagem, ocorre a cada dez minutos por mais de
duas horas, e em apenas 12 horas forma algo em torno de 50.000 clulas. Esse aumento
em nmero de clulas pode ser apreciado comparando a clivagem com outras fases do
desenvolvimento. A Figura 5.1 mostra o logaritmo de nmeros celulares em um embrio
de r representado graficamente em funo do tempo de desenvolvimento (Sze, 1953).
Ela ilustra uma evidente descontinuidade entre clivagem e gastrulao.
Uma conseqncia dessa diviso rpida a razo do volume citoplasmtico/nuclear se tornar cada vez menor assim que a clivagem progride. Em muitos tipos de embries, a diminuio da razo entre os volumes citoplasmtico e nuclear crucial na
167
168
Figura 5.1
Clivagem
Gastrulao
Log10 do nmero de
clulas por embrio
Formao de novas clulas durante o desenvolvimento precoce da r Rana pipiens. (Segundo

Sze, 1953.)
Horas a 150C
regulagem do tempo da ativao de certos genes. Por exemplo, na r Xenopus laevis,

a transcrio de novas mensagens s ativada aps 12 divises. A essa altura, a razo
da clivagem diminui, os blastmeros tornam-se mveis e os genes nucleares comeam
a ser transcritos. sabido que algo no ovo est sendo titulado pela recm-produzida
cromatina, porque o tempo dessa transio pode ser mudado experimentalmente alterando na clula a razo da cromatina para o citoplasma (Newport and Kirschner,
1982a,b), ainda que a clivagem comece logo aps a fertilizao e termine assim que o
embrio atinja um novo equilbrio entre o ncleo e o citoplasma.
Q PADRES DE CLIVAGEM EMBRIONRIA

Clivagem um processo muito bem coordenado e regulado pelas leis genticas. O
padro da clivagem embrionria de uma dada espcie determinado por dois parmetros principais: (1) a quantidade e a distribuio de protena do vitelo dentro do
citoplasma e (2) aqueles fatores no citoplasma do ovo que influenciam no ngulo do
fuso mittico e na determinao do tempo de sua formao.
A quantidade e distribuio de vitelo determina onde a clivagem pode ocorrer e o
tamanho relativo dos blastmeros. Quando um plo do ovo relativamente livre de
vitelo, a diviso celular ocorre nesse plo de uma forma mais rpida do que a do plo
oposto. O plo rico em vitelo chamado de plo vegetal; a concentrao de vitelo no
Tabela 5.1 Classsificao dos tipos de clivagem

Padro de clivagem
Posio do vitelo
Simetria
de clivagem
Holoblstica
(clivagem completa)
Isolcito (oligolcito)
(vitelo escasso, distribudo por igual)
Radial
Espiral
Meroblstica
(clivagem incompleta)
Mesolcito (moderadamente telolcito)

Telolcito (vitelo denso, concentrado
em uma extremidade do ovo)
Centrolcito (vitelo concentrado no
centro do ovo)
Bilateral
Rotacional
Radial
Bilateral
Discoidal
Superficial
Animais representativos
Equinodermos, Amphioxus
Maioria dos moluscos,
aneldeos, nematelmintos, platelmintos
Ascdios
Mamferos
Anfbios
Moluscos cefalpodos
Rpteis, peixes, aves
Maioria dos artrpodos
plo animal relativamente baixa. O ncleo do zigoto freqentemente deslocado em

direo ao plo animal. No geral, o vitelo inibe a clivagem. A Tabela 5.1 fornece a
classificao dos tipos de clivagem e mostra a influncia do vitelo no padro e na
simetria da clivagem. Em zigotos com relativamente pouco vitelo (ovos isolcitos e
mesolcitos) a clivagem holoblstica, significando que o sulco da clivagem se extende
por todo o ovo. Zigotos contendo grande acmulo de protena vitelnica sofrem clivagem meroblstica, onde somente uma poro do citoplasma clivado. O sulco da
clivagem no chega a penetrar na poro de vitelo do citoplasma. Clivagem meroblstica
pode ser discoidal, como nos ovos das aves, ou superficial, como em zigotos de
insetos, dependendo onde o depsito de vitelo estiver localizado, de um lado (telolcito)
ou no centro do citoplasma (centrolcito), respectivamente.
O vitelo uma extraordinria adaptao que permite ao embrio se desenvolver na
ausncia de uma fonte externa de alimentao. Animais desenvolvidos sem grandes
concentraes de vitelo, como os ourios-do-mar, normalmente formam o estgio
larval muito rapidamente. Esse estgio larval pode se alimentar por si s, o desenvolvimento continua com a larva nadando livre. Embries de mamferos, que tambm
no possuem uma grande quantidade de vitelo, adotam uma outra estratgia: a placenta, como veremos adiante, se torna a primeira diferenciao do embrio mamfero
separando as clulas que iro formar a placenta. Esse rgo fornece alimento e oxignio para o embrio durante sua longa gestao.
No outro extremo esto os ovos dos insetos, peixes, rpteis e aves. A maior parte
do seu volume celular vitelo. O vitelo deve ser o suficiente para nutrir esses animais,
sendo que eles se desenvolvem sem um estgio larval ou placentrio. A correlao
entre grandes concentraes de vitelo e a falta do estado larval conhecida em algumas espcies de rs. Algumas rs tropicais, tais como as Eleutherodactylus e a
Arthroleptella no passam pelo estgio de girino. Ao contrrio, eles provm seus
ovos com quantidades enormes de concentrao de vitelo (Lutz, 1947). Os ovos no
necessitam ser colocados na gua porque o estgio de girino foi eliminado. (Isso ser
discutido mais adiante no Captulo 19.)
No entanto, o vitelo somente um fator influenciando o padro de clivagem em
uma espcie. Existem tambm padres herdados de divises celulares que so adicionados s restries do vitelo. Isso pode ser prontamente observado em ovos isolcitos,
nos quais muito pouco vitelo est presente. Na ausncia de grandes quantidades de
vitelo, quatro tipos principais de clivagem podem ser observados: holoblstica radial,
holoblstica espiral, holoblstica bilateral e clivagem holoblstica rotacional.
Clivagem holoblstica radial

Clivagem holoblstica radial a forma mais simples de clivagem de se entender. Nesse
tipo de clivagem os sulcos tm orientao paralela e perpendicular ao eixo animalvegetal do ovo. Esse tipo de clivagem caracterstico de equinodermos e do
protocordato Amphioxus, assim como de rs e salamandras.
A holotria, Synapta
A clivagem padro da holotria, Synapta digita, ilustrada na Figura 5.2. Aps a
unio dos proncleos, o eixo da primeira haste mittica formado perpendicularmente ao eixo animal-vegetal do ovo. Para esse fim, o primeiro sulco da clivagem passa
diretamente atravs dos plos animal e vegetal, criando duas clulas filhas do mesmo
tamanho. Essa clivagem conhecida como meridional porque passa pelos dois plos
como um meridiano no globo. Os sulcos da segunda clivagem esto no ngulo reto
dos sulcos da primeira clivagem, mas continuam perpendiculares ao eixo animal-vegetal do ovo. Os dois sulcos da clivagem aparecem simultaneamente em ambos
blastmeros e tambm passam pelos dois plos. Dessa maneira, as primeiras duas
divises so, ao mesmo tempo, meridional e perpendicular uma com a outra. A terceira
diviso equatorial: as hastes mitticas de cada blastmero esto agora em posio
169
170
Figura 5.2
Plo animal
Clivagem holoblstica no equinodermo Synapta

digita, levando formao de uma blstula oca,
conforme mostrado no corte (ltimo painel).
(Segundo Saunders, 1982.)
Plano de clivagem
meridional
Plano de
clivagem
equatorial
Plo vegetal
Metade Animal
Metade Vegetal
Plo animal
Blstula oca
(aberta por corte)
Plo vegetal
paralela ao eixo animal-vegetal, e o sulco resultante da clivagem separa os dois plos um

do outro, dividindo o embrio em oito blastmeros iguais. Cada blastmero na metade
animal do embrio est agora diretamente acima do blastmero da metade vegetal.
A quarta diviso meridional novamente, produzindo duas fileiras de 8 clulas
cada, enquanto a quinta diviso equatorial, produzindo quatro fileiras de 8 clulas
cada. Sucessivas divises produzem embries de 64,128 e 256 clulas, com divises
meridionais alternando com divises equatoriais. Os embries resultantes consistem
de blastmeros dispostos em fileiras horizontais ao longo de uma cavidade central.
Em ambos os plos do embrio, os blastmeros se movem, uns em direo aos outros, para criar uma esfera oca composta de uma nica camada de clulas. Essa esfera
oca chamada de blstula, e a cavidade central referida como blastocele. A qualquer momento durante a clivagem da Synapta, um embrio seccionado atravs de
qualquer meridiano produz a imagem refletida de duas metades. Esse tipo de simetria
caracterstico de uma esfera ou cilindro e chamada de simetria radial. Dessa maneira, Synapta tem clivagem holoblstica radial.
-Mar
Ourio
do-Mar
Ourio--do
O ourio-do-mar tambm apresenta clivagem holoblstica radial, mas com algumas
importantes modificaes. A primeira e a segunda clivagem so similares as da
Synapta; ambas so meridionais e perpendiculares em relao a outra. Similarmente, a terceira clivagem equatorial, separando os dois plos um do outro (Figura
5.3). Na quarta clivagem, no entanto, os eventos so bem diferentes. As quatro
clulas da camada animal se dividem meridionalmente em oito blastmeros, cada
qual com o mesmo volume. Essas clulas so chamadas mesmeros. A camada
vegetal, no entanto, sofre uma clivagem equatorial desigual para produzir no plo
vegetal quatro clulas grandes, os macrmeros, e quatro pequenas, os micrmeros
(Figura 5.4; Summers et al., 1993). Assim que a clula com 16 embries clivar, os
oito mesmeros se dividem para formar duas camadas animais, an1 e an2, uma se
equilibrando em cima da outra. Os macrmeros se dividem meridionalmente, formando uma camada de oito clulas abaixo de an2. Os micrmeros tambm se dividem, produzindo um pequeno grupo abaixo da camada maior. Todos os sulcos de
clivagem da sexta diviso so equatoriais; a stima clivagem meridional, produzindo uma blstula com 128 clulas.
(A)
Figura 5.3
Plo animal
Plo vegetal
Metade animal
171
Mesmeros
an 1
an 2
derivados
derivados
Clivagem no ourio-do-mar. (A) Planos de clivagem nas primeiras trs divises e formao
de camadas particulares de clulas nas divises 3-6. (B-D) Fotomicrografias de embries
vivos do ourio-do-mar Lytechinus pictus, viso de cima para baixo do plo animal. (B) O
estgio de 2 clulas. (C) O estgio de 4 clulas.
(D) O estgio de 32 clulas, mostrado sem a
membrana de fertilizao para permitir a visualizao dos mesmeros do plo animal, os
macrmeros centrais e dos micrmeros vegetais em ngulo para o centro. (Fotografia cortesia de G. Watchmaker.)
veg1
veg2
Metade vegetal
Micrmeros
Macrmeros
(C)
(B)
(D)
Em 1939, Sven Hrstadius realizou um experimento simples demonstrando que o

controle do tempo e colocao de cada clivagem de ourio-do-mar independente de
clivagens preexistentes. Ele demonstrou que se inibisse a primeira, a segunda e terceira clivagens, sacudindo os ovos, ou colocando-os em gua do mar hipotnica, a
clivagem desigual (quarta) que forma os micrmeros, ainda ocorreria no tempo apropriado. Sendo assim, Hrstadius concluiu que existem trs fatores que determinam a
clivagem em um embrio de 8 clulas: (1) existem mudanas progressivas no citoplasma,
Figura 5.4
(A)
(B)
Formao de micrmeros durante a quarta diviso de embries de ourios-do-mar. Os plos vegetais dos embries so visualizados por
baixo. (A) A localizao e orientao do fuso
mittico na parte baixa das clulas vegetais
so visualizadas com luz polarizada no embrio vivo. (B) A clivagem atravs desses fusos, colocados assimetricamente, produziu micrmeros e macrmeros. (de Inou, 1982, cortesia de S. Inou.)
172
Clio
Blastocele
(A) Blstula jovem
(B) Blstula mais velha com

placa vegetal achatada e tufo ciliar
(C)
Figura 5.5
Blstulas de ourio-do-mar. (A) Esquema de um corte controle atravs de uma blstula precoce
de ourio-do-mar, mostrando uma camada nica de clulas arredondadas rodeando uma grande
blastocele. (B) Com a contnua diviso, as clulas da blstula tardia mostram diferenas de forma
medida que as clulas da placa vegetal se alongam, (C) Junes apertadas (flecha) formando
se entre clulas de uma blstula de equinodermo com 1024 clulas. (A e B segundo Giudice,
1973; C de Dan-Sohkawa e Fujisawa, 1980, cortesia dos autores.)
algum tempo aps a fertilizao, que direcionam os fusos formados para uma certa
direo; (2) deve haver material formador de micrmero no citoplasma vegetal; e (3)
deve haver algum mecanismo pelo qual o material formador de micrmeros seja ativado no tempo correto (Hrstadius,1973).
No desenvolvimento do ourio-do-mar, o estgio de blstula comea na fase de
128 clulas. Nesse estgio, as clulas formam uma esfera oca circundando a blastocele
central (Figura 5.5A,B). Nessa altura, todas as clulas so do mesmo tamanho, os
micrmeros tendo diminuda sua diviso celular e clivando menos freqentemente.
Toda a clula est em contato com o fluido proteinceo da blastocele e com a camada
hialina dentro do envoltrio de fertilizao. Durante esse tempo, os contatos entre as
clulas so estreitados. Dan-Sohkawa a Fujisawa (1980) analisaram esse mtodo em
embries de estrela-do-mar e mostraram que o fechamento da cavidade esfrica
contempornea com a formao de junes apertadas entre os blastmeros. Essas
junes unem as clulas frouxamente conectadas num tecido epitelial onde a blastocele
isolada do ambiente externo (Figura 5.5C). Dando prosseguimento a sua diviso, a
camada celular expandida e se afina. Durante esse perodo, a blstula permanece
como uma camada unicelular grossa.
Duas teorias surgiram para explicar a concomitante proliferao de clulas e
formao da blastocele. Dan (1960) conjeturou que o motivo maior dessa expanso o influxo de gua na cavidade da blastocele. J que o blastmero secreta
protena na blastocele, seu fluido torna-se espesso. Esse fluido absorve grandes
quantidades de gua por osmose, exercendo presso nos blastmeros para se expandirem. Essa presso tambm alinha o longo eixo de cada clula para que a
diviso nunca seja para dentro da blastocele. Isso criaria uma expanso adicional
fazendo com que a populao fosse orientada somente para um plano. Wolpert e
Gustafson (1961) e Wolpert e Mercer (1963) propuseram que a presso da
blastocele no necessria para se conseguir esse efeito. Eles enfatizaram o papel
de adesividade das clulas entre si e a camada hialina. Eles mostraram que enquanto permanecessem fortemente atracadas na camada hialina, as clulas no
tm alternativa a no ser a de se expandir. Essa expanso cria a blstula ao invs
do contrrio. Certamente, a camada hialina vital para expanso da blastocele, e
se a adeso de clulas da camada hialina inibida por anticorpos para a hialina,
ento a expanso da blastocele cessa (Adelson e Humphreys, 1988). Em um trabalho recente (Ettensohn e Ingersoll, 1992) concluram que provvel que ambos
173
mecanismos expandem a blastocele. Durante a clivagem precoce, a adeso camada hialina parece ser o fator mais importante, enquanto que em estgios mais
tardios, a presso osmtica tambm parece exercer o seu papel.
A clulas da blstula desenvolvem clios em sua superfcie externa (Figura 5.6),
desse modo, causando a rotao da blstula dentro do envoltrio de fertilizao. Logo
aps, as clulas da parte animal do embrio sintetizam e secretam uma enzima de
ecloso que lhes permite digerir a membrana fertilizante (Lepage et al., 1992), o embrio se torna uma blstula eclodida livre para nadar.
Anfbios
Clivagem na maioria dos embries de rs e salamandras radialmente simtrica e
holoblstica, como na clivagem do equinodermo. O ovo do anfbio, no entanto, contm muito mais vitelo. Esse vitelo, que concentrado no hemisfrio vegetal, um
impedimento clivagem. Sendo assim, a primeira diviso comea no plo animal e
vagarosamente se estende at a regio vegetal (Figura 5.7). Na salamandra axolotle, o
sulco da clivagem se estende atravs do hemisfrio animal a uma velocidade prxima
de 1mm/min. O sulco da clivagem seciona o crescente cinzento e depois diminui para
menos de 0.02-0.03mm/min ao se aproximar do plo vegetal (Hara, 1977).
A Figura 5.8A uma varredura no microscpio eletrnico, mostrando a primeira
clivagem em um ovo de r. Podemos notar as dobras nos sulcos da clivagem e a
diferena entre os sulcos nos hemisfrios animal e vegetal. A Figura 5.8B mostra que
enquanto o sulco da primeira clivagem ainda est tentando clivar o vitelo
citoplasmtico do hemisfrio vegetal, a segunda clivagem j comeou prxima ao
plo animal. Essa clivagem est em ngulos retos em relao primeira, e tambm
meridional. A terceira clivagem, como era de se esperar, equatorial. No entanto,
por causa do vitelo vegetalmente colocado, esse sulco da clivagem em ovos anfbios
muito mais prximo do plo animal. Ele divide o embrio de r em quatro
blastmeros animais pequenos (micrmeros) e quatro grandes blastmeros
(macrmeros) na regio vegetal. Essa clivagem holoblstica desigual estabelece duas
regies embrionrias principais: uma de diviso rpida de micrmeros, prxima ao
plo animal, e outra de macrmeros, mais lenta (Figura 5.8C). Assim que a clivagem
progride, a regio animal se torna abarrotada com numerosas clulas pequenas,
enquanto a regio vegetal contm uma pequena quantidade de grandes macrmeros
carregados de vitelo (ver Figura 5.7).
Embries anfbios contendo de 16 a 64 clulas so freqentemente chamados
mrulas (do Latim amora, da qual sua forma vagamente reminiscente). No estgio
de 128 clulas a blastocele se torna aparente e o embrio considerado uma blstula.
(A)
(B)
(C)
Figura 5.6
Clulas ciliadas da blstula. Cada clula desenvolve um nico clio. (Cortesia de W. J.

Humphreys.)
(D)
Figura 5.7
Crescente
Cinzento
(E)
(F)
(G)
(H)
Blastocele
Clivagem de um ovo de r. Sulcos de clivagem,

designados por nmeros romanos, esto enumerados por ordem de aparecimento. (A, B)
O vitelo vegetal impede a clivagem fazendo
com que a segunda diviso comece na regio
animal do ovo, antes da primeira diviso ter
dividido o citoplasma vegetal. (C) A terceira
diviso deslocada em direo ao plo animal.
(D-H) No final, o hemisfrio vegetal contm
blastmeros mais longos e mais escassos que
os da metade animal. (Segundo Carlson, 1981.)
174
Figura 5.8
(A)
Pregas
Sulco de
clivagem
(B)
(C)
Micrografias ao microscpio eletrnico da clivagem de um ovo de r. (A) Primeira clivagem. (B)

Segunda clivagem (4 clulas). (C) Quarta clivagem (16 clulas), mostrando a discrepncia de
tamanho entre as clulas animais e vegetais aparecendo aps a terceira diviso. (A de Beams e
Kessel, 1976, cortesia dos autores; B e C cortesia de L. Biedler.)
Na realidade, a formao da blastocele foi traada desde o primeiro sulco de clivagem.

Kalt (1971) demonstrou que na r Xenopus laevis o primeiro sulco da clivagem se
alarga no hemisfrio animal para criar uma pequena cavidade intercelular que isolada
do ambiente externo por junes intercelulares muito apertadas (Figura 5.9). Essa
cavidade se expande durante clivagens subseqentes para se tornar uma blastocele.
A blastocele provavelmente presta duas principais funes no embrio das rs: (1)
uma cavidade que permite migrao celular durante a gastrulao, e (2) previne
clulas que esto abaixo interagir prematuramente com as clulas de cima. Quando
Nieuwkoop (1973) tirou clulas do topo da blastocele de um embrio de salamandra
aqutica e colocou-as junto a clulas do vitelo vegetal na base da blastocele, essas
clulas animais se tornaram mesoderma ao invs de ectoderma. Como o tecido mesodrmico normalmente formado dessas clulas animais, que so adjacentes aos precursores do endoderma, parece plausvel que clulas vegetais influenciam clulas adjacentes para se diferenciar em tecidos mesodrmicos. Sendo assim, a blastocele aparece para prevenir o contato do endoderma com clulas destinadas para dar origem
pele e aos nervos.
Enquanto essas clulas esto dividindo-se, numerosas clulas com molculas de
adeso mantm as clulas juntas. Uma das mais importantes dessas molculas a EPcaderina. O mRNA para essa protena fornecido no citoplasma do ocito, e se essa
mensagem destruda (injetando no ocito oligonucleotdeos antisense complementares para esse mRNA), a EP-caderina no produzida e a adeso entre os blastmeros dramaticamente reduzida (Heasman et al., 1994). Isso resulta na obliterao da
blastocele (Figura 5.10).
Figura 5.9
Formao da blastocele num ovo de r. (A)

Primeiro plano de clivagem mostrando uma
pequena fenda, que posteriormente se desenvolve na blastocele. (B) embrio de oito clulas mostrando uma pequena blastocele (flecha) na juno de trs planos de clivagem. (de
Kalt, 1971, cortesia de M. R. Kalt.)
(A)
(B)
(A)
175
(B)
Figura 5.10
Depleo de EP-caderina mRNA no ocito de Xenopus, resultando na perda de adeso entre os

blastmeros e na obliterao da blastocele. Oligonucleotdeos antisense complementares mensagem da EP-caderina foram injetados no embrio unicelular, prevenindo a expresso da EPcaderina. A blastocele obliterada em embries depletados de EP-caderina, mas (B) no pelos
controles. (de Heasman et al., 1994; fotografia, cortesia de J. Heasman.)
Clivagem holoblstica espiral

Clivagem espiral caracterstica de vermes aneldeos, platelmintos turbelrios, vermes nemertinos e todos os moluscos, exceto cefalpodos. Difere da clivagem radial
em muitas maneiras. Primeiro, os ovos no se dividem em paralelo ou em orientaes
perpendiculares ao eixo animal-vegetal do ovo; de preferncia, a clivagem se d em
ngulos oblquos, formando a disposio espiral de blastmeros filhos. Segundo, as
clulas se tocam entre si em mais lugares do que em embries clivados radialmente.
Na realidade, elas assumem o empacotamento com a orientao termodinamicamente
mais estvel, parecido com o de bolhas de sabo adjacentes (Figura 5.11). Terceiro,
embries de clivagem espiral normalmente realizam menos divises antes de comear
a gastrulao, tornando possvel saber o destino de cada clula da blstula. Quando os
destinos das clulas individuais em embries de aneldeos, platelmintos turbelrios e
moluscos foram comparados, as mesmas clulas foram vistas no mesmo lugar e o seus
destinos, de uma maneira geral, foram idnticos (Wilson, 1898). As blstulas ento
produzidas no tm blastocele e so chamadas de estereoblstulas.
As Figuras 5.12 e 5.13 retratam a clivagem de embries de moluscos. As duas
primeiras clivagens so quase meridionais, produzindo quatro grandes macrmeros
(marcados A, B, C e D). Em muitas espcies, os blastmeros so de tamanhos diferentes (D sendo o maior), uma caracterstica que permite serem individualmente identificados. Em cada sucessiva clivagem, cada macrmero origina um pequeno micrmero
no seu plo animal. Cada quarteto sucessivo de micrmeros deslocado para a direita
ou para a esquerda de seu macrmero irmo, criando um relacionamento espiral caracterstico da clivagem. Observando o embrio pelo plo animal, as partes superiores
do eixo mittico parecem alternar entre o sentido horrio e o anti-horrio. Isso faz
com que micrmeros alternados se formem obliquamente para a esquerda e para a
direita do seu macrmero. Na terceira clivagem, o macrmero A dar origem a duas
clulas filhas, macrmero 1A e micrmero 1a. As clulas B, C e D se comportam
similarmente, produzindo o primeiro quarteto de micrmeros. Na maioria das espcies, os micrmeros esto direita do seu macrmero (olhando para o plo animal),
uma disposio indicando uma espiral dextra (oposta sinistra). Na quarta clivagem,
Figura 5.11
Diagrama mostrando o arranjo de quatro e oito

bolhas de sabo num prato ligeiramente cncavo. O arranjo termodinmico maximiza o
contato e muito reminiscente daquele de embries que se clivam em espiral. (Segundo
Morgan, 1927.)
176
(A)
Vista do plo animal
(B)
Vista lateral
Figura 5.12
Clivagem em espiral do molusco Trochus vista

do plo animal (A) e de um lado (B). Em B,
as clulas derivadas do blastmero A esto
coloridas. Os fusos mitticos, esquematizados
nos estgios precoces, dividem as clulas desigualmente e em ngulo aos eixos vertical e
horizontal.
Figura 5.13
Clivagem espiral do caracol Ilyanassa. O blastmero D maior que os outros, permitindo a

identificao de cada clula. A clivagem dextra.
(A) estgio de 8 clulas. PB o corpo polar.
(B) Metade da quarta clivagem; os macrmeros
j se dividiram em clulas grandes e pequenas
orientadas espiralmente. (de Craig e Morrill,
1986, cortesia dos autores.)
o macrmero 1A se divide para formar o macrmero 2A e o micrmero 2a; e o micrmero

1a se divide para formar mais dois micrmeros, 1a1 e 1a2. Mais clivagens iro produzir
blastmeros 3A e 3a a partir do macrmero 2A; e micrmeros, como por exemplo o 1a2,
se dividem para produzir clulas tais como as 1a21 e 1a22.
A orientao da clivagem plana para a esquerda ou para a direita controlada por
fatores citoplasmticos dentro do ocito. Isso foi descoberto analisando mutaes da
espiral do caracol. Alguns caracis tm sua espiral aberta direita da concha, enquanto outros tm sua abertura para esquerda. Normalmente, a rotao da espiral a
mesma para todos os membros de uma determinada espcie. Todavia, ocasionalmente, ainda so encontrados mutantes. Exemplificando, em espcies em que a espiral
abre para a direita, sero encontrados alguns indivduos com a abertura espiral para a
esquerda. Crampton (1984) analisou os embries desses caracis aberrantes e observou que sua clivagem precoce difere da normal.
(A)
Enrolamento sinistrogiro
(B)
Enrolamento dextrogiro
Figura 5.14
Olhando do plo animal de caracis enrolados para a direita e para a esquerda. A origem do
enrolamento para direita e para a esquerda do caracol pode ser reconhecida pela orientao do
fuso mittico na segunda clivagem. Os caracis sinistrogiros e dextrogiros se desenvolvem como
imagens espelhares uma da outra. (Segundo Morgan, 1927.)
A orientao das clulas aps a segunda clivagem estava diferente (Figura 5.14),
graas a uma orientao diferente do aparelho mittico nos caracis com enrolamento
sinistrogiro. Todas as subseqentes divises em embries de espiral para a esquerda
so imagens espelhares daqueles embries com espirais dextras. Na Figura 5.14, podemos notar que a posio do blastmero 4d (o qual muito importante, j que sua
prognie ir formar os rgos mesodrmicos) diferente nos dois tipos de espirais
dos embries. Geralmente, os dois caracis so formados com seus corpos em lados
diferentes da abertura da espiral.
A direo da abertura na espiral da concha do caracol controlada por um nico
par de genes (Sturtevant, 1923; Boycott et al., 1930). No caracol Limnaea peregra a
maioria dos indivduos so espiralados para a direita. Raros mutantes, exibindo abertura esquerda, foram encontrados e acasalados com caracis tipo-selvagem. Esses
acasalamentos mostraram que existe um alelo D dextrogiro que dominante em
relao ao alelo d sinistrogiro. No entanto, a direo da clivagem no determinada
pelo gentipo do caracol em desenvolvimento, mas pelo gentipo da me do caramujo.
Caramujo fmea do tipo dd pode produzir somente herdeiros de espiral sinistra, mesmo quando o gentipo dos herdeiros Dd. Um indivduo Dd ir se espiralar tanto
para a direita quanto para a esquerda dependendo do genoma de sua me. Esses cruzamentos produzem o seguinte quadro:
177
178
Os fatores genticos envolvidos no enrolamento do caracol so trazidos ao

embrio no citoplasma do ocito. o gentipo do ovrio, no qual o fentipo se
desenvolve, que determina em que direo a clivagem vai ocorrer. Quando Freeman
e Lundelius (1982) injetaram no ovo de mes dd, uma pequena quantidade de citoplasma proveniente de caracis com espirais dextras, os embries resultantes apresentaram espirais para a direita. Citoplasmas de caracis com espiral esquerda no
afetaram os embries com a espiral direita. Isso confirma a observao que mes do
tipo selvagem estavam colocando um fator em seus ovos que estava ausente ou
defeituoso nas mes dd. [cleave1.html]
Outra descoberta emocionante com relao a clivagem dos moluscos est na comunicao entre os blastmeros. Nos moluscos de blastmeros de igual tamanho no
estgio de quatro clulas*, a determinao de que a clula que originar a clula precursora mesodrmica ser alcanada entre a quinta e a sexta clivagem. Nessa altura, o
macrmero 3D se estende para dentro entrando em contato com os micrmeros do
plo animal. Sem esse contato, a clula 4d produzida pelos macrmeros 3D no produz mesoderma (van den Biggelaar e Guerrier, 1979). Injetando corantes de baixo
peso molecular, de Laat e colegas (1980) demonstraram que na hora do contato (e
no antes), pequenas molculas so capazes de difundirem-se entre os macrmeros
3D e os micrmeros centrais. Imagens ao microscpio eletrnico mostram que nesse
momento, aparecem junes de fenda na superfcie dessas clulas.
*No se preocupe, daremos no Captulo 16 mais informaes sobre embries de moluscos com
blastmeros de tamanhos desiguais.
&
Especulaes
Adaptao pela modificao da clivagem embrionria
VOLUO causada pela alterao hereditria do desenvolvimento embrionrio. s vezes, somos

capazes de identificar uma modificao da
embriognese que impediu o organismo de
sobreviver diferentemente em ambientes
hostis. Uma dessas modificaes, descoberta por Frank Lillie em 1898, causada pela
alterao do padro tpico da clivagem espiral na famlia uniondeo das ostras.
Ao contrrio da maioria das ostras, Unio
e seus aparentados vivem em locais de gua
corrente. As correntes criam um problema
para a disperso das larvas, porque os adul-
(A)
(B)
tos so sedentrios e as larvas que nadam

livremente seriam sempre carregadas correnteza abaixo. Essas ostras, no entanto, resolveram esse problema efetuando duas modificaes no seu desenvolvimento. A primeira altera a clivagem embrionria. Na tpica clivagem dos moluscos, ou todos os
macrmeros so iguais em tamanho, ou o
blastmero 2D a maior clula no estgio
embrionrio. No entanto, a diviso desse
Unio tal que o blastmero 2d fica com a
maior parte do citoplasma (Figura 5.15). Essa
clula se divide para produzir a maior parte
das estruturas larvais, incluindo uma gln-
(C)
dula capaz de produzir uma concha macia.

Essas larvas (chamadas gloqudias) assemelham-se a pequenas armadilhas para
urso; possuem plos sensveis que permitem as vlvulas da concha fecharem-se
abruptamente quando tocadas pelas guelFigura 5.15
Formao de larvas de gloqudia

pela modificao da clivagem em espiral. Aps
formao do embrio de 8 clulas (A), a disposio do fuso mittico motiva a maioria do
citoplasma D penetrar no blastmero 2d (B).
Esse blastmero grande 2d se divide (C), para
finalmente originar a grande concha armadilha de urso da larva (D). (Segundo Raff e
Kaufman, 1983.)
(D)
ras ou barbatanas dos peixes que por ali

estiverem passando. Elas pegam uma carona com o peixe at estarem prontas para
cair e, atravs de metamorfose, transformarse em moluscos adultos. Dessa maneira,
podem se espalhar correnteza acima.
Em algumas espcies, as gloqudias so
liberadas da bolsa de criao da fmea e
meramente aguardam um peixe passar. Outras espcies, tal como a Lampsilis ventricosa, aumentaram as chances de suas larvas encontrarem um peixe realizando outra
modificao no seu desenvolvimento
(Welsh, 1969). Muitos moluscos desenvolvem um manto fino e saliente em volta da
concha circundando a bolsa de criao. Em
alguns uniondeos, a forma da bolsa de criao (marspio) e as ondulaes do manto
Figura 5.16
Peixe falso sobre o molusco

uniondeo lampsilis ventricosa. O peixe ,
na verdade, a bolsa da cria e o manto do
molusco. (Fotografia, cortesia de J. H. Welsh.)
imitam o comportamento e a forma de pequenos peixes nadando. Para tornar a iluso mais completa, desenvolveram uma
mancha preta em forma de olho (ocelo) de
um lado e uma nadadeira do outro. O peixe visto na Figura 5.16 no um peixe real,
mas sim a bolsa de criao e o manto abaixo
dela. Quando o peixe que estiver ao alcance
for atrado, o molusco despeja as gloqudias
da bolsa de criao. Dessa maneira, a modificao de padres de comportamentos j
existentes permitiram moluscos uniondeos
sobreviver em ambientes hostis.
Clivagem Holoblstica Bilateral

Clivagem holoblstica bilateral encontrada primariamente nos ascdios (tunicados).
A Figura 5.17 mostra a clivagem padro de um tunicado, Styela partita. O fenmeno
mais admirvel nesse tipo de clivagem que o primeiro plano de clivagem estabelece
o nico plano de simetria no embrio, separando o embrio do que ser o seu futuro
lado direito e esquerdo. Cada diviso sucessiva orienta-se em relao a esse plano de
simetria, e o meio embrio formado de um lado da primeira clivagem a imagem espelhar
do meio embrio do outro lado. A segunda clivagem meridional, como a primeira
diviso; mas ao contrrio da primeira diviso, no passa atravs do centro do ovo. Em
vez disso, ela cria duas grandes clulas anteriores (blastmeros A e D) e duas pequenas clulas posteriores (blastmeros B e C). Cada lado tem agora um blastmero
grande e um pequeno. Durante as trs prximas divises, as diferenas no tamanho e
na forma destacam a simetria bilateral desses embries. No estgio de 32 clulas, uma
pequena blastocele se forma e comea a gastrulao.
Como foi mencionado no captulo 4, certos tunicados (incluindo S. partita) contm regies citoplasmticas coloridas. Durante a clivagem, essas se tornam fracionadas
em clulas diferentes. Alm do mais, o tipo de citoplasma que a clula recebe determina seu destino. Clulas recebendo citoplasmas claros se tornam ectoderma; aquelas
contendo citoplasma amarelo se transformam em clulas mesodrmicas; as clulas
(A
(B)
(C)
Figura 5.16
Simetria bilateral em um ovo de tunicado.

(A) Ovo no-clivado, mostrando os destinos das vrias regies citoplasmticas. (B)
embrio de oito clulas, mostrando os blastmeros e os destinos das vrias clulas.
Pode ser visualizado como duas metades de
4 clulas; daqui em diante, cada diviso no
lado direito do embrio tem uma diviso
espelhar do lado esquerdo. (C, D) Vistas de
embries mais tardios do plo vegetal. (As
regies do citoplasma destinadas a formar
determinados rgos esto marcadas em A e
so codificadas por cor em todo o diagrama.) (Segundo Balinsky, 1981.)
(D)
Ectoderma
Ectoderma
neural
Msculo
Notocorda
Mesnquima
Endoderma
Plo vegetal
179
Plo vegetal
Vista do plo vegetal
180
que incorporam incluses ardsia se tornam endoderma e as clulas cinza claro, o

tubo neural e a notocorda. Esses plasmas coloridos esto localizados bilateralmente
em volta do plano de simetria e, assim, eles sero divididos pelo sulco da primeira
clivagem em metades direita e esquerda do embrio. A segunda clivagem motiva o
provvel mesoderma se posicionar nas duas clulas posteriores, enquanto o provvel
tubo neural e cordomesoderma sero formados pelas duas clulas anteriores. Mais
adiante, a terceira diviso ir repartir essas regies citoplasmticas, de modo que as
clulas formadoras do mesoderma so confinadas aos dois blastmeros vegetais posteriores, e as clulas do cordomesoderma so restritas as duas clulas vegetais anteriores. O destino de cada clula do embrio precoce de Styela tem sido acompanhado e
ser discutido em detalhe no Captulo 13.
Clivagem holoblstica rotacional

No surpresa alguma que o estudo da clivagem em mamferos tenha-se tornado um
desafio. Os ovos de mamferos esto entre os menores do reino animal, tornando
difcil seu manuseio experimental. O zigoto humano, por exemplo, tem somente 100
m de dimetro, praticamente invisvel, sendo seu volume menor de um milsimo do
ovo de Xenopus. Tambm, zigotos de mamferos no so produzidos em nmeros
comparveis aos embries do ourio-do-mar ou de rs. Normalmente, menos de 10
ovos so ovulados por uma fmea em um determinado tempo, tornando difcil a obteno de material para estudos bioqumicos. E como uma barreira final, o desenvolvimento dos embries dos mamferos se completa dentro de outro organismo ao invs
de um ambiente externo. S recentemente foi possvel a duplicao de algumas dessas
condies internas e observar o desenvolvimento in vitro.
Com todas essas dificuldades, valeu a pena esperar o conhecimento da clivagem
de mamferos, j que a clivagem nos mamferos completamente diferente de outros padres de diviso celular embrionria. O ocito dos mamferos liberado pelo
ovrio e varrido pelas fmbrias at o oviduto (Figura 5.18). A fertilizao ocorre na
ampola do oviduto, regio prxima ao ovrio. A meiose ento completada, e a
primeira clivagem comea um dia depois. A clivagem nos mamferos est entre as
mais lentas do reino animal de 12 a 24 horas de separao. Enquanto isso, os clios
no oviduto empurram o embrio em direo ao tero; a primeira clivagem ocorre
durante essa jornada.
Existem vrias caractersticas da clivagem dos mamferos que as distinguem de
outros tipos de clivagem. A primeira relativa a lentido das divises. A segunda
diferena fundamental a singular orientao dos blastmeros dos mamferos um em
relao ao outro. A primeira clivagem uma diviso meridional normal; no entanto, na
Estgio de 2 clulas
Zona pelcida
tero
Primeira clivagem
Figura 5.18
Desenvolvimento de um embrio humano desde a fertilizao at a implantao. A compactao em embries humanos ocorre no dia 4,
quando ele est no estgio de 10 clulas. O ovo
eclode da zona quando alcana o tero, e
provvel que a zona evite a adeso das clulas
em clivagem de se colarem ao oviduto, em lugar de viajar para o tero. (Segundo TuchmannDuplessis et al., 1972.)
Oviduto
Mrula
Blastocisto
Ovrio
Estgio precoce
da implantao
Fertilizao
Ovulao
Plano de
clivagem II
Plano de
clivagem I
Plano de
clivagem IIA
181
Figura 5.19
Plano de
clivagem I
Comparao da clivagem precoce (A) em

equinodermos (clivagem radial) e (B) em mamferos (clivagem rotacional). Nematides tambm
tm uma forma rotacional de clivagem, porm,
no formam a estrutura blastocstica caracterstica dos mamferos. Detalhes sobre a clivagem
dos nematides sero fornecidos no Captulo 13.
(Segundo Gulyas, 1975.)
Plano de
clivagem IIB
(A) EQUINODERMO
(Ourio-do-mar)
(B) MAMFERO
(Coelho)
segunda clivagem um dos dois blastmeros se divide meridionalmente e o outro se

divide equatorialmente (Figura 5.19). Esse tipo de clivagem chamada de clivagem
rotacional (Gulyas, 1975).
A terceira principal diferena entre a clivagem nos mamferos e a da maioria dos
outros embries marcada pela falta de sincronizao das divises precoces. Os
blastmeros de mamferos no se dividem ao mesmo tempo. Dessa maneira, embries
de mamferos no aumentam por igual do estgio de 2 para 4 e para 8 clulas, mas
freqentemente contm nmeros mpares de clulas. Tambm, diferente dos outros
genomas animais, o genoma mamfero ativado durante a clivagem precoce, sendo o
responsvel pela produo de protena necessria para a clivagem. No camundongo e
na cabra, a mudana do controle maternal para o zigtico ocorre no estgio de duas
clulas (Piko e Clegg, 1982; Prather 1989). [cleave2.html]
Compactao
Talvez a diferena mais crucial entre a clivagem de mamfero e todos os outros tipos
envolva o fenmeno da compactao. Como mostra a Figura 5.20, blastmeros mamferos, atravessando o estgio de 8 clulas, formam um arranjo solto com espao suficiente entre eles. Seguindo a terceira clivagem, no entanto, os blastmeros passam
(A)
(B)
(C )
Figura 5.20
(D)
(E)
(F)
Clivagem de um nico embrio de camundongo in vitro. (A) estgio de 2 clulas. (B) estgio
de 4 clulas. (C) incio do estgio de 8 clulas.
(D) Estgio de 8 clulas compactado. (E)
Mrula. (F) Blastocisto. (de Mulnard, 1967,
cortesia de J. G. Mulnard.)
182
(A)
(B)
Figura 5.21
Micrografia ao microscpio eletrnico de embries de camundongos de 8 clulas. (A) nocompactados e (B) compactados. (Cortesia de C. Ziomek.)
por uma mudana espetacular em seu comportamento. De repente, se amontoam,

maximizando seu contato com outros blastmeros, formando uma bola compacta de
clulas (Figuras 5.20C,D e 5.21). Esse pacote estabilizado por junes apertadas
que se formam entre as clulas, selando o interior da esfera (Figura 5.22). As clulas
no interior da esfera formam junes com espaos, desse modo, permitindo pequenas
molculas e ons passarem entre elas.
As clulas do embrio compactado se dividem para produzir uma mrula de 16
clulas. Essa mrula consiste de um pequeno grupo de clulas internas rodeadas por
um grupo maior de clulas externas (Barlow et al.,1972). A maior parte dos descendentes das clulas externas se tornam clulas do trofoblasto (trofectoderma). Esse
grupo de clulas no produz estruturas embrionrias. Ao invs disso, formam o tecido
do crio, a parte embrionria da placenta. O crio permite ao feto conseguir oxignio
e nutrientes da me. Tambm secreta hormnios para que o tero da me retenha o
feto e produza reguladores de resposta imune, fazendo com que a me no rejeite o
embrio como faria com um rgo transplantado. No entanto, clulas do trofoblasto
no so capazes de produzir clulas do prprio embrio. Elas so necessrias para
implantar clulas do embrio na parede uterina (Figura 5.23).
O embrio do camundongo derivado dos descendentes das clulas internas do
estgio de 16 clulas, suplementada por clulas divididas do trofoblasto durante a
transio para o estgio de 32 clulas (Pedersen et al., 1986; Fleming, 1987). Essas
clulas geram a massa celular interna que dar origem ao embrio, acompanhada da
bolsa com vitelo, alantide e mnio. Essas clulas no aparentam ser somente diferentes das clulas do trofoblasto, mas tambm sintetizam protenas diferentes nesse estgio do desenvolvimento precoce. Durante o estgio de 64 clulas, a massa celular
interna (aproximadamente 13 clulas) e as clulas do trofoblasto se tornam camadas
de clulas separadas, nenhuma delas contribuindo para clulas do outro grupo (Dyce
et al., 1987; Fleming, 1987). Dessa forma, a distino entre os blastmeros do trofoblasto e da massa celular interna representa o primeiro evento diferenciado no desenvolvimento dos mamferos.
Inicialmente, a mrula no tem uma cavidade interna. No entanto, durante um
processo chamado cavitao, a clula do trofoblasto secreta um fluido para dentro da
mrula para criar a blastocele. A massa celular interna fica posicionada de um lado do
anel de clulas do trofoblasto (veja Figuras 5.20, 5.22 e 5.23). Essa estrutura chamada
blastocisto e outro marco da clivagem de mamferos.
(A) Estgio precoce de 8 clulas: no-polar, porm com efeitos de contato local
183
Figura 5.22
Compactao e formao do blastocisto de

camundongo. (A,B) embrio de 8 clulas, (C)
mrula de 16 clulas, (D) blastocisto de 32
clulas. O lado esquerdo representa o organismo inteiro ou sua viso em corte. O lado direito detalha as mudanas associadas com o amadurecimento do trofoblasto. (Figuras direita
segundo Fleming, 1992.)
(B) Compacto de 8 clulas: polar, correntes inicas.

Basolateral: adeso de E-caderina; junes de fendas, ZO-1. Microtbulos acetilados.
Apical: microvilosidades, actina cortical, endossomos, actina citoplasmtica, microtbulos
Apical
Junes apertadas
Lateral
Basal
(C) 16 clulas:
Adeso basolateral intensificada, laminina, cingulina, mitocndria, vesculas lipdicas.
Basal: lisossomos, Golgi
Junes apertadas
entre clulas exteriores
Junes de fendas
entre clulas interiores
(D) 32 clulas: transporte vetorial de fluido.

Basolateral: desmossomos. Basal: Na+, K+ - ATPase. Apical: transportadores e canais
Microvilosidades
Massa celular
interna (ICM)
Blastocele
Trofoblasto
E-caderinaDesmossomos
Direo da corrente inica
Desmossomos
Lisossomos secundrios
Junes apertadas (ZO-1)

(ZO-1) + cingulina
Na+, K+ - ATPase
Golgi
Actina cortical
Junes de fendas
Filamentos de
citoqueratina
Microtbulos e actina
citoplasmtica
Microvilosidades
Protenas da membrana
apical
Mitocndrias
184
Figura 5.23
Implantao de blastocistos de mamferos

no tero. (A) Blastocistos de camundongo
entrando no tero. (B) Implantao inicial
do blastocisto no tero de um macaco
Rhesus. (A de Rugh, 1967; B cortesia da
Carnegie Institution of Washington, Chester
Reather, fotgrafo.)
(A)
(B)
&
Especulaes
A Superfcie da Clula e o Mecanismo de Compactao
OMPACTAO CRIA AS circunstncias que trazem tona a primeira diferenciao no desenvolvimento de mamferos: a separao do trofoblasto da massa celular interna. Como isso
feito? Existe uma crescente evidncia que a
compactao realizada por intermdio de
eventos que ocorrem na superfcie das clulas dos blastmeros adjacentes. No primeiro
estgio da compactao, cada um dos oito
blastmeros interage com os seus vizinhos
para sofrer polarizao da membrana.
Componentes diferentes da superfcie das clulas migram para regies diferentes da clula (veja Figura 5.22; Ziomek e Johnson,
1980). Isso pode ser observado, marcando
certas molculas da superfcie celular com
corantes fluorescentes. Uma dessas marcaes, que reconhece a classe das glicoprotenas, mostra que no estgio de 4 clulas, essas glicoprotenas so aleatoriamente distribudas por toda a membrana (Figura 5.24A).
No entanto, na metade do estgio de 8 clulas, essas molculas so encontradas predominantemente nos plos mais distantes do
centro do agregado (Figura 5.24B). A polarizao da membrana influenciada por interaes clula a clula porque acontece somente quando a clula est em contato, no
mnimo, com um outro blastmero. Se um
blastmero for separado do resto do embrio
perde sua polarizao.
Protenas especficas da superfcie celular cumprem o seu papel na compactao.
Uma dessas molculas, E-caderina (tam-
(A)
(B)
Figura 5.24
Polarizao de componentes
da membrana em blastmeros de camundongo
durante o estgio de 8 clulas. (A) Distribuio homognea, no-polar, de componentes
da membrana marcados com concanavalina A
fluorescente no estgio de 4 clulas. (B) Distribuio heterognea, polar, desses componentes no estgio de 8 clulas. (A de Fleming
et al., 1986; B de Levy et al., 1986. Fotografias cortesia dos autores.)
bm conhecida como uvomorulina), uma

glicoprotena adesiva de 120-kDa, sintetizada no estgio de 2 clulas distribuda
uniformemente por toda a membrana celular. No entanto, com a ocorrncia da
compactao, a E-caderina se torna restrita
aqueles stios da membrana celular que esto em contato com os blastmeros adjacentes. Anticorpos para essa molcula causam
a descompactao da mrula (Figura 5.25;
Peyrieras et al., 1983; Johnson et al., 1986).
A poro de carboidrato dessa glicoprotena pode ser essencial para o seu funcionamento, sendo a tunicamicina (droga que inibe a glicosilao das protenas) tambm
capaz de prevenir a compactao.
Experimentos recentes mostraram que
a via do fosfatidilinositol tambm pode ser
importante para inicializar a compactao.
Se embries de 4 clulas de camundongo
forem colocados em um meio contendo drogas que ativam a protena quinase C, ocorre
compactao prematura. Similarmente
diacilglicerdeos podem momentaneamente provocar a compactao de embries de
4 clulas. Quando isso ocorre, a E-caderina
acumula-se especificamente nas junes
entre os blastmeros (Winkel et al., 1990).
Esses resultados sugerem que a ativao da
protena quinase C pode iniciar a compactao mudando a localizao da E-caderina.
E finalmente, a membrana celular pode
tambm ser modificada durante a compactao, por meio de reorganizao do citoesqueleto. As microvilosidades, extendidas
por actino-filamentos, aparecem na superfcie de clulas adjacentes, unindo uma clula outra. Essas microvilosidades podem
ser os stios onde a E-caderina est funcionando para mediar adeso intercelular. O
achatamento dos blastmeros um contra o
outro pode, portanto, ter acontecido em virtude do encolhimento do blastmero atravs da despolimerizao da actina (Pratt et
al., 1982; Sutherland e Calarco-Gillam, 1983).
Dessa maneira, existem evidncias crescentes de que a compactao causada
por mudanas na arquitetura da superfcie
celular dos blastmeros. No entanto, no
est totalmente certo como esses eventos
se relacionam um com o outro, ou como
so coordenados e integrados na cadeia
de eventos que causa a compactao.
(A)
185
(B)
Figura 5.25
Preveno da compactao por anti-soro contra a glicoprotena da superfcie celular, E-caderina,

promotora da adeso. (A) Compactao normal ocorrendo em ausncia do anti-soro. (B) Proliferao sem compactao ocorrendo na presena de anticorpos contra a E-caderina. (Fotografias
cortesia de C. Ziomek.)
Formao da massa celular interna

O processo crucial para o precoce desenvolvimento dos mamferos a criao da
massa celular interna distinta do trofoblasto. Como a clula direcionada para um ou
outro desses caminhos? Como a clula informada que dar origem a uma poro do
mamfero adulto ou que dar origem a um singular tecido de sustentao que ser
descartado no nascimento? As observaes de embries vivos sugerem que essa importante deciso est meramente no fato de a clula estar no lugar certo na hora certa.
At o estgio de 8 clulas, no existem diferenas bvias na bioqumica, morfologia
ou potncia de qualquer um dos blastmeros. No entanto, a compactao forma clulas internas ou externas com propriedades muito diferentes. Marcando os vrios blastmeros, muitos investigadores descobriram que as clulas que estavam do lado de
fora formariam o trofoblasto, enquanto que as clulas do lado de dentro formariam o
embrio (Tarkowski e Wrblewska,1967; Sutherland et al.,1990).*Hillman e colegas
(1972) mostraram que quando cada blastmero de um embrio de camundongo de 4
clulas colocado na superfcie externa de uma massa de blastmeros agregados, as
clulas externas transplantadas somente daro origem ao tecido trofoblasto. Portanto,
a opo da clula transformar-se em trofoblasto ou embrio depende se essa clula era
externa ou interna aps a compactao.
elcida
Pelcida
Fuga da Zona P
Enquanto o embrio est se movendo atravs do oviduto, rumo ao tero, o blastocisto se expande dentro da zona pelcida (a matriz extracelular do vulo foi essencial
para a ligao do espermatozide durante a fertilizao). As membranas celulares das
clulas trofectodrmicas contm uma bomba para o sdio (a Na+/K+-ATPase) de frente para a blastocele; as protenas bombeiam sdio para a cavidade central. Essa acumulao de ons de sdio permite que a gua entre por osmose, dessa maneira, dilatando a blastocele (veja Figura 5.22; Borland, 1977; Wiley, 1984). Durante esse perodo, essencial que a zona pelcida previna o blastocisto de aderir s paredes do
oviduto. Quando tal aderncia acontece em humanos, chamada de ectpica ou
* As clulas internas mostraram virem mais freqentemente da primeira clula a se dividir no estgio
de 2 clulas. Essa clula normalmente produz o primeiro par de blastmeros a alcanar o estgio de 8
clulas, e essas clulas se dividem de tal modo que elas esto soltas dentro dos blastmeros agregados
(Graham e Kelly, 1977).
186
Figure 5.26
Blastocisto de camundongo eclodindo da zona

pelcida. (Fotografia de Mark et al., 1985, cortesia de E. Lacy.)
gravidez tubria. Essa condio especialmente grave, porque a implantao do

embrio no oviduto pode causar uma hemorragia com perigo de morte. Quando o
embrio alcana o tero, no entanto, ele deve livrar-se da zona pelcida para que
possa aderir parede uterina.
O blastocisto do camundongo se livra da zona pelcida perfurando um pequeno
buraco e se espremendo atravs dele enquanto se expande (Figura 5.26). Uma protease
semelhante tripsina, a estripsina, localizada na membrana celular lisa a matriz fibrilar
da zona pelcida (Perona e Wassarman, 1986; Yamazaki e Kato, 1989). Uma vez fora,
o blastocisto pode fazer contato direto com o tero. O epitlio uterino agarra o
blastocisto em uma matriz extracelular contendo colgeno, laminina, fibronectina, cido
hialurnico e receptores heparan sulfato. As clulas do trofoblasto contm os elementos que iro se juntar ao colgeno uterino, fibronectina e laminina; eles sintetizam o
proteoglicano heparan sulfato dramaticamente no momento anterior implantao
(veja Carson etal., 1983). Uma vez na clula epitelial uterina, o trofoblasto secreta
outro conjunto de proteases, incluindo colagenase, estromelisina e ativador de
plasminognio. Essas enzimas digestoras de protenas digerem a matriz extracelular
do tecido uterino, impedindo o blastocisto de cobrir a si mesmo com a parede uterina
(Strikland et al., 1976; Brenner et al.,1989).
&
Especulaes
Gmeos e clulas embrionrias precursoras
S CLULAS PRECOCES do embrio podem substituir uma

outra e compensar uma clula
ausente. Isso foi primeiramente demonstrado em 1952, quando Seidel destruiu
uma clula de um embrio de coelho e
demonstrou que a clula remanescente
poderia produzir o embrio por inteiro.
Uma vez que a massa celular interna
(ICM) se separou do trofoblasto, as clulas da ICM constituem um grupo de
equivalncia onde cada clula da ICM
tem a mesma potncia (nesse caso, cada
clula pode originar todos os tipos de
clulas do embrio, menos o trofoblasto), e seus respectivos destinos sero
determinados por interaes entre os
seus descendentes. Gardiner e Rossant
(1976) tambm mostraram que se as clulas da massa celular interna (mas no clulas do trofoblasto) so injetadas no
blastocisto, tambm contribuem para um
novo embrio. J que seus blastmeros
podem gerar qualquer tipo de clula no
corpo, a massa celular interna tem sido
referida, s vezes, como pluriblasto
(Johnson e Selwood, 1996).
Gmeos humanos so classificados

em dois grandes grupos: gmeos monozigticos (um ovo ou idnticos) e gmeos dizigticos (dois ovos ou fraternos).
Gmeos fraternos so o resultado de dois
eventos separados de fertilizao, ao passo que, gmeos idnticos so formados
de um nico embrio cujas clulas, de alguma forma, dissociam uma da outra. Gmeos idnticos so provavelmente produzidos pela separao de blastmeros
precoces ou mesmo pela separao da
massa celular interna em duas regies no
mesmo blastocisto. [cleave3.html]
Casos de gmeos idnticos ocorrem em
aproximadamente 25% dos nascimentos
humanos. Cerca de 33 % dos gmeos idnticos tm dois crios completos e separados, indicando que a separao ocorreu
antes da formao do tecido trofoblasto,
no quinto dia (Figura 5.27A). O restante
dos gmeos idnticos compartilham do
mesmo crio, sugerindo que a separao
ocorreu dentro da massa celular interna,
aps a formao do trofoblasto. No nono
dia, o embrio humano j completou a construo de uma outra camada extra-embrio-
nria, o mnio. Esse tecido forma a bolsa

amnitica (ou bolsa de gua), envolvendo
o embrio com fluido amnitico, protegendo-o da dessecao e movimentos bruscos (veja Captulo 6). Se a separao do
embrio acontecesse aps a formao do
crio, no quinto dia, mas antes da formao do mnio, no nono dia, os embries
resultantes deveriam ter um crio e dois
mnios (Figura 5.27B). Isso acontece em
aproximadamente dois teros dos casos de
gmeos humanos idnticos. Uma pequena
porcentagem de gmeos idnticos nascem
com um nico crio e mnio (Figura 5.27C).
Isso significa que a diviso do embrio
aconteceu aps o nono dia, e tais recmnascidos correm o risco de serem gmeos
ligados (Siameses). [cleave4.html]
A habilidade de produzir um embrio
completo, a partir de clulas que normalmente iriam produzir somente uma poro,
chamada de regulao e discutida no
Captulo 15. Regulao tambm vista na
habilidade que dois ou mais embries precoces tm para formar um camundongo quimrico ao invs de gmeos, trigmeos ou
um monstro de mltiplas cabeas. Camun-
Embrio
Saco vitelnico
187
2 Crios
mnio
(A)
2 mnios
Massa celular interna
1 Crio
(B)
2 mnios
Embrio
bicelular
Blastocele
1 Crio
(C)
1 mnio
Crio
Figura 5.27
Diagrama mostrando a relao entre a formao de gmeos monozigticos humanos e as membranas extra-embrionrias. (A) A ciso ocorre antes da formao da trofectoderma, de modo que
cada gmeo tem o seu prprio crio e mnio. (B) A ciso ocorre aps a formao da trofectoderma,
porm, antes da formao do mnio, resultando em gmeos que tm sacos amniticos individuais, porm, compartilhando um crio. (C) Ciso aps a formao do mnio conduz a gmeos em
um saco amnitico, e um nico crio. (Segundo Langman, 1981.)
dongos quimricos so o resultado de duas

ou mais clivagens precoces (normalmente
4- ou 8-clulas) de embries que foram agregados artificialmente para formar um embrio
composto. Como mostrado na Figura
5.28A, as zonas pelcidas de dois embries
geneticamente diferentes so removidas e
os embries so unidos para formar um
blastocisto em comum. Esses blastocistos
preparados so implantados no tero da me
adotiva. Quando nascem, os descendentes
quimricos tm algumas clulas de cada embrio. Isso prontamente observado quando os blastmeros agregados vm de uma
linhagem que difere na cor da pelugem.
Quando blastmeros de linhagem preta e
branca so agregados o resultado normalmente um camundongo malhado (Figura
5.28B). Existe at evidncia que embries
humanos podem formar quimeras (de la

Chappelle et al.,1974; Mayr et al.,1979). Esses indivduos tm dois tipos de clulas diferentes (XX e XY) dentro do mesmo corpo, cada uma com o seu conjunto de caractersticas genticas. A explicao mais simples para tal fenmeno que esses indivduos resultaram da agregao de dois embries, um macho e outro fmea, que estavam se desenvolvendo ao mesmo tempo.
Se essa explicao estiver correta, ento dois
gmeos fraternos se fundem para criar um
nico indivduo composto.
Markert e Petters (1978) mostraram que
embries precoces de 8-clulas podem se
unir para formar uma mrula compactada
comum (Figura 5.29) e que o camundongo resultante pode ter a cor da pelugem
de trs linhagens diferentes (prancha 21).
Alm disso, eles mostraram que cada um

dos trs embries deram origem a precursores dos gametas. Quando um quimrico (preto/marrom/branco) fmea de camundongo acasalava com um macho de
pelugem de cor branca (recessivo), a ninhada era um de cada cor.
De acordo com nossas observaes
sobre formao de gmeos e camundongos quimricos, cada blastmero da massa celular interna deve ser capaz de produzir qualquer clula do corpo. Essa hiptese tem sido confirmada, e ter importantes conseqncias no estudo do desenvolvimento dos mamferos.
Quando as massas celulares internas
so isoladas e crescem sob certas condies, permanecem indiferentes e continuam a se dividir em cultura (Evans e Kaufman,
188
Figura 5.28
(A)
Pronase
Zona
pelcida
Blastmeros
Blastocisto
Blastocistos implantados
na me de criao
Produo de camundongos quimricos. (A)

Procedimento experimental para a produo
de camundongos quimricos. Embries de camundongos geneticamente distintos (aqui
aqueles com diferentes cores do plo) no incio do estgio de 8 clulas so isolados dos
ovidutos dos camundongos e reunidos aps
remoo de suas zonas pelcidas por ao de
enzimas proteolticas. As clulas formam um
blastocisto composto, que implantado no
tero de uma me de criao. (B) Um camundongo adulto quimrico mostrando contribuies dos embries pigmentados (pretos) e
no-pigmentados (brancos). (Fotografia cortesia de B. Mintz.)
1981; Martin, 1981). Essas clulas so chamadas de clulas-tronco embrionrias (clulas ES). Como foi mostrado no captulo
2, essas clulas podem ser alteradas na placa de Petri. Genes clonados podem ser inseridos dentro de seu ncleo, ou genes
existentes podem ser mutados. Quando
essas clulas ES so injetadas nos
blastocistos de um outro gene de camundongo, elas podem integrar a sua massa
celular interna hospedeira. O embrio resultante tem clulas vindas de ambos tecidos, hospedeiro e doador. Essa tcnica se
tornou extremamente importante para determinar a funo dos genes durante o desenvolvimento de mamfero.
(A)
(B)
(B)
(C )
Figura 5.29
Agregao e compactao de trs embries de camundongo, no estgio de 8 clulas, para formar um
nica mrula compactada. Clulas de trs diferentes embries (A) so agregadas para formar uma
mrula (B) que sofre compactao para formar um
blastocisto nico (C). O camundongo quimrico resultante mostrado na Prancha 21. (de Markert e
Petters, 1978, cortesia de C. Markert.)
Clivagem Meroblstica
Como j foi mencionado anteriormente, concentraes de vitelo cumprem um papel
importante na clivagem celular. Em parte alguma isso est to aparente como nos tipos
de clivagem meroblstica. Aqui, as grandes concentraes de vitelo probem a clivagem
no seu todo, exceto em uma pequena poro do citoplasma do ovo. Na clivagem
189
discoidal, a diviso celular limitada a um pequeno disco de citoplasma sem vitelo no

topo de um monte formado por vitelo. Na clivagem superficial, o vitelo centralizado
permite a clivagem somente na borda perifrica do ovo.
Clivagem discoidal
Clivagem discoidal uma caracterstica de aves, peixes e rpteis.
AVES. A Figura 5.30 mostra a clivagem de um ovo de ave. A massa do ocito
tomada pelo vitelo, permitindo que a clivagem ocorra somente no blastodisco, uma
regio de citoplasma ativo de aproximadamente 2-3mm de dimetro no plo animal
do ovo. Porque essas clivagens no se estendem para o vitelo citoplasmtico, as
clulas da clivagem precoce so, na realidade, contnuas nas suas bases. O primeiro
sulco de clivagem aparece centralizado no blastodisco, e outras clivagens se seguem
para criar um blastoderma de camada nica. Num primeiro instante, essa camada
celular est incompleta, j que as clulas permanecem contnuas ao vitelo subjacente.
Da por diante, clivagens equatoriais e verticais dividem o blastoderma em um tecido de cinco a seis camadas celulares. Essas clulas permanecem ligadas com junes apertadas (Bellairs et al.,1975; Eyal-Giladi, 1991). Entre o blastoderma e o
vitelo existe um espao chamado cavidade subgerminal, criado quando uma clula
blastodrmica absorve fluido da albumina (branco do ovo) e secreta-o entre si e o
vitelo (New, 1956). Nesse estgio, as clulas mais profundas do centro do blastoderma
so descartadas para criar uma zona pelcida unicelular (as clulas descartadas
parecem morrer). O anel perifrico das clulas blastodrmicas que no so descartadas constituem a zona opaca.
Quando uma galinha se considera pronta para botar um ovo, o blastoderma j
contm 60.000 clulas. Algumas dessas clulas so delaminadas em cavidades
subgerminais para formar uma segunda camada (Figura 5.31). Dessa maneira, logo
aps a galinha ter botado o ovo, esse contm duas camadas de clulas: a superior
epiblasto e a inferior hipoblasto. Entre elas est a blastocele. Detalharemos a formao do hipoblasto no prximo captulo.
PEIXES. Nos ltimos anos, o peixe zebra, Danio rerio, se tornou o organismo favorito para quem deseja estudar o desenvolvimento dos vertebrados. Esses peixes tm
grandes crias, procriam o ano inteiro, so facilmente mantidos, tm embrio transparente que se desenvolve fora da me (uma caracterstica importante para a microscopia),
e pode ser criado para que mutantes possam ser protegidos e propagados. Ademais,
eles se desenvolvem rapidamente, para que 24 horas aps a fertilizao, o embrio j
tenha formado a maior parte de seus tecidos e rgos primordiais, apresentando como
caracterstica a forma semelhante ao girino (veja Granato e Nsslein-Volhard, 1996;
Langeland e Kimmel, 1997).
Os ovos de peixes com muito vitelo desenvolvem-se similarmente aos das aves,
com a diviso celular ocorrendo somente no blastodisco do plo animal. Observaes da clivagem de ovos de peixe atravs de micrografia ao microscpio eletrnico
Sulcos de clivagem
Blastoderma
Figura 5.30
Clivagem discoidal em um ovo de galinha,

vista do plo animal. Os sulcos de clivagem
no penetram no vitelo, e produzido um
blastoderma formado por uma nica camada
de clulas.
Figura 5.31
Formao de um embrio do pinto com duas

camadas. Essa seo sagital prxima margem
posterior, mostra uma camada superior consistindo de um epiblasto central que ir entrar
nas clulas da foice de Koller (ks) e na zona
marginal posterior (mz). Certas clulas do epiblasto caem (delaminam) da camada superior
para formar ilhas de polinvaginao (pi) com 5
a 20 clulas cada. Essas clulas sero acrescidas por aquelas clulas hipoblsticas (hyp)
que migraram anteriormente da foice de Koller
para formar a camada inferior (hipoblstica).
(Sc a cavidade subgerminal; gwm a margem
da parede germinal). (de Eyal-Giladi et al.,
1992, cortesia de H. Eyal-Giladi.)
190
(A)
(B)
(C)
(E)
(F)
(D)
Figura 5.32
Clivagem discoidal em um peixe-zebra, criando uma regio celular acima do vitelo denso. Em (A), BD significa a regio do
blastodisco. (de Beams e Kessel, 1976, cortesia dos autores.)
de varredura mostram, de uma bela maneira, a natureza incompleta da clivagem

discoidal (Figura 5.32). Como nos embries de anfbios e de ourios-do-mar, divises com clivagens precoce seguem um padro altamente reprodutvel de clivagem
meridional e equatorial. Essas divises so rpidas, com periodicidade de aproximadamente 15 minutos cada. As primeiras 12 divises ocorrem sincronicamente, formando um monte celular situado no plo animal de uma grande clula de vitelo.
Inicialmente, todas as clulas mantm conexes abertas umas com as outras e com a
clula de vitelo subjacente para que clulas de tamanho moderado (17-kDa) passem
livremente de um blastmero ao outro (Kimmel e Law, 1985). Comeando por volta da dcima diviso, pode ser detectado o incio da transio da blstula intermediria: comea a transcrio do gene zigtico, desacelerao das divises celulares e o
movimento celular evidente (Kane e Kimmel, 1993).
Neste ponto, duas populaes de clulas podem ser distinguidas. A primeira a
camada de vitelo sincicial (YSL). A YSL formada no nono ou dcimo ciclo, quando as clulas da parte vegetal do blastoderma se fundem com a clula do vitelo adjacente. Isso produz um anel de ncleos com essa parte do citoplasma da clula do
vitelo localizado bem embaixo do blastoderma. Expandindo vegetalmente, o
blastoderma envolve a clula do vitelo, parte do vitelo sincicial se mover para baixo
do blastoderma, para formar a YSL interna e parte dos ncleos se mover vegetalmente,
ficando frente da margem do blastoderma, para formar a YSL externa (Figura 5.33A,B).
A funo da YSL ainda no foi esclarecida.
A segunda populao celular distinguida na transio da blstula intermediria a
camada envolvente (EVL; veja Figura 5.33A). Essas so as clulas mais superficiais do
(A)
191
(B)
Blastoderma
Camada
envolvente (EVL)
Clulas
profundas
YSL interna
Ncleos
sinciciais
do vitelo
YSL externa
Microtbulos
Clula do vitelo
Figura 5.33
(C)
Plo animal
Nariz,
olho
Crebro
Epiderme
Ectoderma
Medula espinhal
Crista neural
Mesoderma
Ventral
Somito do msculo
Prnefron
Cabea
Sangue Nadadeiras Corao Msculo
Intestino
Dorsal
Notocorda
Faringe
Fgado
Margem do blastoderma
Endoderma
A blstula do peixezebra. (A) antes da gastrulao, clulas profundas esto rodeadas pelo EVL. A superfcie animal do vitelo achatada
e contm os ncleos do YSL. Microtbulos se estendem atravs do
citoplasma vitelnico e da regio externa do YSL. (B) Estgio tardio de
blstula, mostrando a YSL. Os ncleos dessas clulas so derivados
de clulas da margem do blastoderma, que liberou seus ncleos para o
citoplasma vitelnico. (C) Mapa do destino das clulas profundas
depois que a mistura de clulas cessou. A vista lateral mostrada, e
no todos os destinos dos rgos esto identificados (para clareza). O
mapa gerado injetando clulas com corante de alto peso molecular,
determinando em seguida, quais rgos as clulas carregadas de corante
geraram. (A e C segundo Langeland e Kimmel, 1996; B de Trinkaus,
1993, cortesia do autor.)
Clula do vitelo
Plo vegetal
blastoderma, e a EVL uma cobertura epitelial fina composta apenas de uma camada
de clulas. A EVL finalmente forma a periderme, uma proteo extra-embrionria cobrindo o que se pensa ser descartado mais tarde durante o desenvolvimento.
Entre a EVL externa e a YSL interna esto as clulas profundas, das quais surgir
o embrio propriamente dito. Os destinos das clulas blastodrmicas precoces no
esto determinados, e os estudos de linhagem celular (onde um corante fluorescente
no difusvel injetado em uma das clulas e os descendentes daquela clula podem
ser seguidos) mostram que existe muita mistura de clulas durante a clivagem. Alm
do mais, qualquer clula pode dar origem a uma variedade imprevisvel de descendentes de tecido (Kimmel e Warga, 1987; Helde et al., 1994). O destino da clula
blastodrmica parece ser fixado pouco antes do comeo da gastrulao. Nesse perodo, clulas em regies especficas do embrio originam certos tecidos de uma maneira
altamente previsvel, permitindo que um mapa do destino possa ser traado (Figura
5.33C; Kimmel et al., 1990).
O processo pelo qual a clula contribui para o tecido envolve uma narrativa progressiva de possveis destinos para o desenvolvimento de uma determinada clula. Esse comportamento pode ser observado em algumas das primeiras clulas a terem seu destino
estabelecido - as clulas precursoras do corao (Stainer et al., 1993; Lee et al., 1994).
192
Figura 5.34
(B)
(A)
Mapa do destino das clulas profundas da

blstula do peixe-zebra. Injeo de um nico
blastmero na blstula precoce (estgio de
256-512 clulas) com rodamino-dextrano. Se
a clula estiver perto da margem, a meio caminho entre os plos dorsal e ventral, a prognie da clula est restrita a formar parte do
corao. Nesse estgio, as clulas marcadas
formam descendentes que podem popular
tanto a aurcula como o ventrculo. Se a injeo em tais clulas for feita em um estgio
mais tardio da blstula, seus descendentes iro
popular uma cmara somente. (Segundo
Stainier et al., 1993.)
Figura 5.35
Clivagem superficial em embrio de Drosophila. O numeral acima de cada embrio

corresponde ao nmero de minutos decorrido
aps a deposio do ovo; o numeral abaixo de
cada embrio indica o nmero de ncleos presentes. Clulas polares (que formaro as clulas germinativas) so vistas no estgio de 512
ncleos, embora o blastoderma celular se forme 3 horas mais tarde. Os tempos so representativos, j que a durao de cada ciclo de
diviso depende, em parte, da temperatura em
que o ovo est sendo incubado.
Ventral
Dorsal
Clula do vitelo
Saco
vitelnico
Clulas individuais que margeiam na metade do caminho as futuras superfcies

dorsal e ventral de um embrio em estgio de meia clivagem, podem dar origem s
clulas que povoam ambos, o endocrdio e o miocrdio (Figura 5.34A,B). Um
pouco mais tarde, os descendentes de qualquer clula podem povoar somente o
miocrdio ou o endocrdio. Mais tarde ainda, os descendentes de uma clula somente sero capazes de povoar subcompartimentos especficos de tecido. Por
exemplo, clulas da blstula intermediria podem contribuir para a prognie de
ambos, trio e ventrculo do corao.
Clivagem Superficial
A maior parte dos ovos dos insetos passa por clivagem superficial, onde uma grande
quantidade de vitelo centralizada confina a clivagem para a borda citoplasmtica do
ovo. Um dos detalhes fascinantes desse tipo de clivagem que as clulas no se formam at que os ncleos tenham se dividido. A clivagem de um ovo de inseto mostrada na Figura 5.35. O ncleo do zigoto sofre vrias divises mitticas dentro da parte
central do ovo. Na Drosophila, 256 ncleos so produzidos por uma srie de divises
nucleares durando, em mdia, 8 minutos cada. Depois o ncleo migra para a periferia
do ovo, onde as mitoses continuam, embora com uma velocidade diminuda. O em-
Ncleos
(enrgides)
Enrgides migram
para a periferia
Clulas
polares
Blastoderma
celular
Clulas polares
brio chamado agora de blastoderma sincicial, significando que todas clivagens

nucleares esto contidas em um nico citoplasma. Nenhuma membrana celular existe
a no ser a do prprio ovo. Aqueles ncleos migrando para o plo posterior do ovo
logo ficam envolvidos pelas novas membranas celulares para formar o plo de clulas
do embrio. Essas clulas do origem s clulas germinativas dos adultos. Dessa maneira, um dos primeiros eventos do desenvolvimento dos insetos a separao das
futuras clulas germinativas do resto do embrio.
Aps as clulas polares terem sido formadas, a membrana do ocito dobra-se para
dentro, entre os ncleos, conseqentemente, separando cada ncleo somtico para
uma nica clula (Figura 5.36). Isso forma o blastoderma celular, com todas as
clulas arranjadas como uma cobertura de camada nica envolvendo o ncleo do ovo.
Como qualquer outra formao celular, a criao do blastoderma celular envolve uma
interao delicada entre microtbulos e microfilamentos. A primeira fase da
celularizao do blastoderma caracterizada pela invaginao das membranas celulares e sua rede de actina subjacente nas regies entre o ncleo. Esse processo inibido
por drogas que bloqueiam os microtbulos. Aps as membranas e sua actina terem
passado o nvel do ncleo, a segunda fase da celularizao ocorre. Aqui a velocidade
da invaginao aumenta, e o complexo de actino-membranas comea a apertar o que
ser o terminal basal da clula (Schejter e Wieschaus, 1993; Foe et al., 1994). Na
Drosophila, essa camada composta por aproximadamente 6000 clulas e formada
4 horas aps a fertilizao. [cleave5.html]
Embora os ncleos se dividam originalmente dentro de um citoplasma em comum,
isso no significa que o citoplasma seja uniforme. Karr e Alberts (1986) mostraram que
cada ncleo dentro do blastoderma sincicial est contido dentro de seu prprio pequeno territrio de protenas citoesquelticas. Quando o ncleo alcana a periferia
durante o dcimo ciclo da clivagem, cada ncleo fica cercado por microtbulos e
Superfcie do ovo
Fuso mittico
Sulco de clivagem
ster
Ncleo
Canal do sulco
Microtbulos
Figura 5.36
Membrana vitelnica
Alongamento nuclear e celularizao do blastoderma de Drosophila. (Segundo Fullilove e

Jacobson, 1971.)
193
(A)
(B)
(C)
Prfase 12
194
Ncleos
Microfilamentos
Microtbulos
Figura 5.37
Localizao do citoesqueleto em volta de ncleos no blastoderma sincicial de Drosophila. Um

embrio de Drosophila entrando na prfase da dcima-segunda diviso mittica, foi secionado
e corado triplamente. (A) Os ncleos foram localizados por um corante que se liga ao DNA. (B)
Microfilamentos foram identificados usando anticorpo fluorescente para actina. (C) Microtbulos foram reconhecidos por um anticorpo fluorescente para tubulina. Domnios do citoesqueleto podem ser vistos em volta de cada ncleo. (de Karr e Alberts, 1986, cortesias de T. L. Karr.)
microfilamentos. O ncleo e suas ilhas citoplasmticas associadas so chamados

enrgides. A Figura 5.37 mostra o ncleo e seu microfilamento essencial e os domnios
do microtbulo na prfase da dcima segunda diviso mittica.
Aps o ncleo alcanar a periferia, o tempo necessrio para completar cada uma
das prximas quatro divises se torna gradualmente maior. Enquanto os ciclos de 1 a
10 duram 8 minutos cada, o ciclo 13, o ltimo ciclo no blastoderma sincicial, leva 25
minutos para se completar. O embrio de Drosophila forma clulas no ciclo 14 (i.e.
aps 13 divises), e o ciclo 14 assincrnico. Alguns grupos de clulas completam
esse ciclo em 75 minutos, enquanto outro grupo leva 175 minutos (Foe, 1989). A
transcrio desses ncleos (que comea por volta do dcimo primeiro ciclo) muito
intensificada. A desacelerao da diviso celular da Drosophila e o aumento
concomitante na transcrio do RNA freqentemente referido como transio da
blstula intermediria (midblastula transition). Tais transies tambm so vistas
nos embries de inmeros vertebrados e de filos invertebrados. O controle dessa
desacelerao mittica (em embries de Xenopus, ourio-do-mar, estrela-do-mar e
Drosophila) aparenta sofrer efeito da razo da cromatina para o citoplasma (Newport
e Kirshner, 1982a; Edgard et al., 1986). Edgard e seus colegas compararam o desenvolvimento inicial de embries de Drosophila do tipo selvagem com os do mutante
haplide. Os embries haplides de Drosophila tm a metade da cromatina a cada
diviso celular, em comparao com os do tipo selvagem. Daqui para frente, um embrio haplide no oitavo ciclo celular tem a mesma quantidade de cromatina quanto
um embrio do tipo selvagem no stimo ciclo. Esses investigadores descobriram que
enquanto embries do tipo selvagem formam sua camada celular imediatamente aps
a dcima terceira diviso, os embries haplides passaram por uma diviso extra, a
dcima quarta, antes da celularizao. Alm do mais, a durao dos ciclos 11 a 14 em
embries do tipo selvagem, corresponde aos ciclos 12 ao 15 em embries haplides.
Dessa maneira, os embries haplides seguem um padro similar aos embries do tipo
selvagem, porm, com defasagem de uma diviso celular.
Se essa defasagem fosse devida ao fato dos mutantes haplides terem uma
razo de cromatina para o citoplasma de metade, em relao a do tipo selvagem,
em um determinado ciclo, ento seria possvel acelerar a celularizao amarrando
(ligando) algum citoplasma, fazendo com que os ncleos se dividam em um volume menor. Quando essa ligao foi realizada, o padro mittico do embrio foi
acelerado. A diviso final do blastoderma, sinalizando o fim do perodo de clivagem,
195
alcanada quando existe um ncleo para cada 61 m3 de citoplasma. Em Xenopus, uma desacelerao similar na taxa mittica observada aps a dcima segunda diviso celular. Aqui tambm, as divises daqui para frente se tornam
assincrnicas. Experimentos de ligao sugerem que o tempo de durao da transio dessa blstula intermediria tambm funo da razo volumes cromatina/
citoplasma (Newport e Kirschner, 1982a,b).
Em ambos, Drosophila e Xenopus, a iniciao da transcrio pode ser induzida
prematuramente aumentando artificialmente a durao do ciclo celular. Quando
cicloheximida (um inibidor da sntese protica) atrasa a diviso celular, a transio da
blstula intermediria induzida precocemente em Xenopus, e uma exploso de transcries ocorre em Drosophila (Edgard et al., 1986; Kimelman et al., 1987).
&
Especulaes
Excees, Generalizaes,
e Clivagem Parastica da Vespa
QUE CONSIDERAMOS normal e o que marginalizamos

como excees, freqentemente reflete quais animais so mais acessveis para o estudo e mais facilmente domesticados para o laboratrio. No necessrio dizer, que isso no reflete necessariamente as condies do mundo natural. Pelo contrrio, nossas discusses de
desenvolvimento animal so freqentemente dificultadas por certos organismos
em particular. O desenvolvimento de anfbios geralmente representado pelo Xenopus laevis, e o camundongo e o homem so os nicos mamferos cujos desenvolvimentos so usualmente estudados. Similarmente, embora haja mais de
800.000 espcies de insetos conhecidas,
a maior parte dos biologistas do desen-
volvimento conhecem apenas o desenvolvimento de uma espcie: Drosophila melanogaster. A Drosophila ganhou proeminncia somente depois que se fez necessrio relacionar fenmenos embriolgicos com genes particulares. Em 1941, o
maior compndio do desenvolvimento de
insetos (Embriologia dos insetos e
Miripodes, Johannsen e Butt) sequer
mencionava essa espcie em seu ndice.
Insetos so um excepcionalmente bemsucedido e espalhado subfilo, no sendo
surpreendente encontrar uma grande variabilidade no seu desenvolvimento. O desenvolvimento da vespa parasita Copidosomopsis tanytmemus difere marcadamente
daquele da Drosophila cannica. Como
muitas outras espcies parasitrias, a fmea C. tanytmemus deposita seu ovo den-
Olho/cabea da
lagarta hospedeira
Esfago
Mrula de
4 dias
Corpo gorduroso
do hospedeiro
Ovo
(A)
Poligerme
precoce
Poligerme
(B)
Poligerme em expanso
tro do ovo de uma outra espcie. Com o

desenvolvimento do ovo hospedeiro (normalmente de uma mariposa), o mesmo acontece com o ovo do parasita. No entanto,
enquanto o ovo do hospedeiro comea o
seu desenvolvimento no padro superficial usual, o ovo da vespa divide holoblasticamente. Ademais, ao invs de diferenciar o eixo do corpo, as clulas do embrio
parasita dividem-se repetidamente para se
tornar uma massa de clulas no diferenciadas chamadas poligerme. Em duas semanas, a poligerme em crescimento fica
suspensa no hospedeiro, permanecendo
frouxamente atada ao crebro e traquia
larvais (Figura 5.38A; Cruz, 1986a).
Figura 5.38
Desenvolvimento de vespas
parasitrias (Encyrtidae). (A) Clivagem
holoblstica do ovo de Copidosomopsis
tanytmenus produz uma poligerme de clulas
no-diferenciadas. (B) Larvas precoces de um
gnero relacionado, Pentalitomastix, atacam a
larva de Trathala dentro do mesmo hospedeiro. A fotografia de um hospedeiro recmaberto. (A segundo Cruz, 1986a; B de Cruz,
1981, cortesia de Y. Cruz.)
196
Com o crescimento, a poligerme se divide em dzias (s vezes milhares, dependendo da espcie) de discretos grupos de clulas. Cada um desses grupos se torna um
embrio! A vespa poliembrionria Copidosoma floridanum produz at 2000 indivduos de um nico ovo fertilizado (Grbic et al.,
1996). Essa habilidade que um ovo tem para
se transformar em uma massa de clulas,
que rotineiramente forma numerosos embries, chamada de poliembrionia. (Poliembrionia caracterstica de certos grupos de
insetos e certas espcies de mamferos, tais
como o tatu de nove bandas, cujos ovos
formam qudruplos idnticos.) A maior parte desses embries de vespa parasita se desenvolvem em larvas normais que levam
aproximadamente 30 dias para se desenvolver. Um grupo menor, de cerca de 10
porcento do nmero total de embries, se
tornam larvas precoces (Figura 5.38B), que
se desenvolvem em uma semana. Elas no
s se desenvolvem precocemente, como tm
muito pouca estrutura e no sofrem metamorfose. So essencialmente um conjunto
de mandbulas mveis. Essas larvas no se
reproduzem, morrendo assim que as larvas

normais se formam. Enquanto elas vivem, no
entanto, vo at o embrio hospedeiro matando as larvas parasitas de outros indivduos (de espcies diferentes e de outros clones
da mesma espcie). Em outras palavras, as
larvas precoces so formas predatrias que
eliminam possveis competidores (Cruz, 1981,
1986b; Grbic and Strand, 1992).
Com a morte das larvas precoces (e
suas presas), a larva normal emerge da
sua primeira mudana de pele, comea a
se alimentar vorazmente dos rgos da
larva hospedeira. Em 40 dias, a criao
parasita j se alimentou dos msculos do
hospedeiro, gordura corporal, gnadas,
glndulas de seda, intestinos, cordes
nervoso e hemolinfa, e o hospedeiro um
pouco mais do que um saco de pele segurando cerca de 70 larvas pupantes de vespa. Aps outros 5 ou 6 dias, os novos
adultos perfuram o tegumento do hospedeiro e, em uma cena recordando o filme
Alien, provocam a abertura e a sada do
hospedeiro, literalmente por comer o seu
corpo. Esses adultos freqentemente co-
MECANISMO
DE
pulam (a maioria das vezes sobre o corpo

do hospedeiro morto), acham um novo
hospedeiro para depositar os seus ovos
e morrem logo em seguida.
Tal ciclo de vida incomodava Charles
Darwin, fazendo-o questionar o conceito de
uma divindade benigna conhecida por todos. Em 1860 ele escreveu ao biologista
americano Asa Gray: Eu no consigo me
convencer de que o benevolente e onipotente Deus tenha planejado e criado a
Ichneumonidae com a expressa inteno
delas se alimentarem dentro dos corpos vivos de lagartas. No entanto, alm de sua
utilidade de provocar noes de desconforto no que se refere a ordem natural e natureza da individualidade, as vespas parasitas podem ter conseqncias econmicas importantes. Macrocentrus grandii
uma vespa poliembrionria que parasita a
broca Europia do milho. A habilidade de
um inseto se formar de um embrio por clivagem holoblstica, deve tambm nos encorajar a apreciar a plasticidade da natureza,
desencorajando generalizaes precipitadas
sobre um completo subfilo de organismos.
CLIVAGEM
Regulando o ciclo da clivagem

O ciclo celular das clulas somticas funcionalmente dividido em quatro estgios
(Figura 5.39A). Aps a mitose (M), temos o intervalo da pr-replicao (G1), em
seguida acontecendo a sntese do DNA (S). Aps o perodo da sntese, temos o intervalo pr-mittico (G2), seguido pela mitose. A progresso dessas fases regulada por
fatores de crescimento. Em blastmeros de clivagem precoce, no entanto, a diviso
celular pode ser muito simples. Blastmeros precoces de ourio-do-mar no tm G1
replicando o seu DNA durante a ltima parte (telfase) da mitose prvia (Hinegardner
et al., 1964). Os ncleos de Xenopus e Drosophila eliminaram as fases G1 e G2 durante a clivagem precoce. (Embries de Xenopus adicionam essas fases ao ciclo celular,
algum tempo aps a dcima segunda clivagem. Drosophila adiciona G2 durante o ciclo
14 e G1 durante o ciclo 17.) Nas primeiras 12 divises, Xenopus divide-se sincronicamente em um ciclo celular bifsico: S para M e M para S (Figura 5.39B; Laskey et al.,
1977; Newport e Kirschner, 1982a).
Os fatores que regulam esse ciclo bifsico esto localizados no citoplasma. Ocitos
normais de Xenopus, quando aumentam, so detidos na primeira prfase meitica. So
incapazes de se dividirem. Se os ncleos de clulas divididas forem transplantados
para esses ocitos, tambm param a diviso. Quando ocitos normais so estimulados
por progesterona, retomam sua diviso meitica e param na metfase da segunda
meiose. Se o ncleo de clulas no divididas (como neurnios) so colocados no
citoplasma de ocitos tratados com progesterona, tambm iniciam a diviso e param
(A)
(B)
Ciclina B
Ciclina D
Ciclina A
Ciclina E
Ciclina A
Figura 5.39
Ciclos celulares de clulas somticas e blastmeros precoces. (A) Ciclo celular de uma clula
somtica tpica. A Mitose (M) seguida por uma condio de interfase. Esse ltimo perodo
subdividido em fases G1, S (sntese) e G2. Clulas que esto se diferenciando so geralmente
removidas do ciclo celular e esto numa fase G1 estendida chamada G0. As ciclinas e suas
respectivas quinases, responsveis para progresso atravs do ciclo celular, so mostradas no
seu ponto de regulao do ciclo celular. (B) Ciclo celular bifsico mais simples dos blastmeros
precoces de anfbios, tendo somente dois estados, S e M. (A segundo Nigg, 1995.)
na metfase (Gurdon, 1968). O citoplasma de ocitos estimulados com progesterona

ainda passam por contraes corticais peridicas (caracterstica da diviso), mesmo
na ausncia de ncleos ou centrolos. Se fragmentos clonados de DNA so injetados
nesses embries anucleados, sua replicao sofre o controle desse ciclo (Hara et al.,
1980; Harland e Laskey, 1980; Karsentiket al.,1984). Dessa maneira, a capacidade de
diviso celular regulada pelo citoplasma.
Fator promotor de maturao
Alguns dos fatores que governam a sntese do DNA e a diviso celular foram identificados. O fator induzido por progesterona que permite o ncleo do ocito retomar suas divises uma fosfoprotena de duas subunidades chamada de fator de
promoo da maturao (MPF, tambm conhecida como fator promotor da mitose.
O MPF foi primeiro descoberto como o principal fator responsvel pela retomada
das divises celulares meiticas no ovo ovulado de r (Smith e Ecker, 1969; Masui
e Markert, 1971). Esse mesmo fator continua realizando o seu papel aps a fertilizao, regulando o ciclo bifsico dos blastmeros precoces de Xenopus. Gerhart e
colegas (1984) mostraram que o MPF sofre mudanas cclicas nos nveis de atividade nas clulas mitticas. A atividade do MPF de blastmeros precoces de rs
maior durante M e no detectvel durante S. Durante essa fase S, o MPF existe em
estado inativo. Essa ciclicidade tambm observada em blastmeros anucleados.
Newport e Kirschner (1984) demonstraram que a replicao do DNA (S) e mitose
(M) so dirigidas somente pelo ganho ou perda de atividade do MPF, mesmo na
ausncia de sntese protica. As clulas em clivagem pode ficar presas na fase S,
incubando-as com um inibidor de sntese protica. Quando o MPF microinjetado
nessas clulas, elas entram em M. Seus envoltrios nucleares se partem e suas
cromatinas condensam-se em cromossomos. Aps uma hora, o MPF degradado e
os cromossomos retornam fase S.
197
198
&
Especulaes
MPF e Seus Reguladores

A pequena subunidade do MPF:
A cdc2 Quinase (QuinaseCiclina-dependente, CDK)
MPF tem uma subunidade grande e outra
pequena. A pequena subunidade de MPF
uma protena quinase que, quando ativada,
pode fosforilar uma variedade de protenas.
Dessa forma, MPF funciona adicionando
grupos fosfatos s protenas especficas.
Um desses alvos a histona H1, que se liga
ao DNA. A fosforilao dessa protena pode
levar condensao cromossmica. Outro
alvo o envoltrio nuclear. Quinze minutos
aps a adio do MPF, as trs protenas
principais (as lminas) do envoltrio nuclear se tornam hiperfosforiladas, e nos prximos 15 minutos, o envoltrio se despolimerizou e est se desfazendo (Miake-Lye e
Kirschner, 1985; Arion et al., 1988). A MPF
quinase purificada j foi mostrada fosforilar
esses envoltrios nucleares de protenas, e
realizar sua despolimerizao in vitro (Peter
et al., 1990; Ward e Kirschner, 1990). Um
terceiro alvo parece ser a RNA polimerase
(Cisek e Corden, 1989), e a fosforilao da

RNA polimerase pode ser a responsvel
pela inibio da transcrio durante a
mitose. Um quarto alvo da quinase parece ser a subunidade reguladora de miosina
citoplasmtica. Quando essa protena
fosforilada, ela se torna inativa e incapaz
de funcionar como uma ATPase dirigindo
os filamentos de actina envolvidos na diviso celular (Satterwhite et al., 1992). A
inibio dessa miosina durante os estgios iniciais da mitose, pode prevenir divises da clula at depois dos cromossomos terem-se separado.
Figura 5.40 O desenvolvimento da regulao do ciclo celular na embriognese de Drosophila.
(A) Ciclina e protena cdc25 (cordo) so abundantes antes da fertilizao. Portanto, durante os
primeiros sete ciclos celulares, a atividade da MPF quinase permanece constante e as divises
celulares prosseguem to rapidamente quanto funcionam as enzimas e os substratos. medida
que a ciclina degradada, sua sntese (de mRNA estocado no citoplasma) torna-se limitante no
ciclo 8. No ciclo 14, o mRNA materno para ciclina desapareceu, e deve ser sintetizado de genes
nucleares. Alm disso, a degradao das protenas do cordo comanda nova sntese a partir do
ncleo. Pr-MPF acumula mas no ativado at que a fosfatase cordo cliva os fosfatos T-14 e
Y-15 da cdc2 quinase. O mecanismo que relaciona a atividade do MPF com o trmino da sntese
de DNA e a iniciao da citocinese esto sendo investigados. (Segundo Edgar et al., 1994.)
Regulado maternalmente
Ciclina maternal
e protenas de
cordo presentes
MPF ativo
A pequena subunidade de MPF tem

sido notavelmente conservada atravs da
evoluo e quase idntica quela da fosfoprotena indutora de mitose, p34, sintetizada pelo gene cdc2 da levedura (Dunphy
et al., 1988; Gautier et al., 1988). De fato, o
gene humano que codifica a protena correspondente pequena subunidade do
MPF de Xenopus pode ser inserido no genoma da levedura e causar diviso nos
mutantes de levedura deficientes em cdc2
(Lee e Nurse, 1987). A protena p34 pode
existir em formas fosforiladas e desfosforilada. A forma ativa parece ser fosforilada
Regulado zigoticamente
Protena maternal de cordo presente

Ciclina
Ciclina mRNA
Ciclina
Degradao
Protena Ciclina
Pr-MPF
Ciclina
Sntese de
ciclina
(zigtica)
MPF ativo
Desfosforilao
Ciclina
cdc 25/cordo
fosfatase (zigtica)
Ciclina
Ciclina
MPF ativo
Sntese de
ciclina
Ciclina
Degradao da ciclina
Mitose
Quinase ativa de
protenas maternas
(limita substrato)
Ciclo
Divises nucleares
Mitose
Ciclo dirigido pela traduo de
nova ciclina de mRNA materno
Mitose
Ciclo dirigido pela cdc25/fosfatase de cordo
Mitose
em treonina-161 (T-161) e desfosforilada em

tirosina-15 (Y-15). Ambas condies so
importantes para a atividade da quinase
(Gould e Nurse, 1989; Solomon, 1993).
A maior subunidade do MPF:

Ciclina
Ento, como regulado o MPF? Desde que
a clivagem de Xenopus parecia ser regulada
por uma protena similar quela que regula a
diviso celular da levedura, pensou-se que
qualquer regulador da protena da levedura
teria contrapartida no embrio animal. Um
dos principais reguladores da protena MPF
de levedura o produto do gene cdc13, uma
protena 56-kDa chamada p56cdc13. Esse gene
foi clonado, e a seqncia de sua protena codificada foi considerada muito semelhante s
protenas ciclina B encontradas em numerosos animais (Goebl e Byers, 1988; Solomon
et al., 1988). As protenas ciclina B em clulas em estgio de clivagem mostram um comportamento peridico, acumulando durante a fase S e sendo degradada durante a
mitose (Evans et al., 1983; Swenson et al.,
1986). Ciclinas so freqentemente codificadas pelo mRNA armazenado no citoplasma do ocito, e se sua transformao em
protenas seletivamente inibida, a clula
no entrar em mitose (Minshull et al.,
1989). A protena ciclina B combina com a
quinase cdc2 do MPF para criar o comple-
(A)
(B)
xo MPF. A ciclina permite a subunidade

quinase cdc2 tornar-se fosforilada nos resduos treonina-14 (T14), tirosina-15 (Y15)
e treonina-161 (Figura 5.40). A fosforilao
no T-161 necessria para a atividade do
MPF, mas fosforilaes nos T-14 e Y-15 a
inibem. Dessa forma, quando fosforilada
nessas posies a quinase permanece inativa, porm, potencialmente funcional. O
suprimento de molculas MPF potencialmente funcionais (pr-MPF) acumula durante o perodo tardio de S.
A Fosfatase cdc25:
Iniciadora de Mitose
A mitose se inicia com uma abrupta
desfosforilao de todas essas subunidades
MPF quinase na posio 15. Isso conseguido pelo aparecimento da fosfatase cdc25
(Edgar e OFarrell, 1989; Gautier et al.,
1991; Jessus e Beach, 1992; Lee et al.,
1992). Dessa maneira, a acumulao gradual do MPF convertida em uma breve
exploso de atividade quinase que inicia
a mitose. Essa fosfatase (que tem sido encontrada em inmeros organismos) ela
prpria regulada pelo desenvolvimento.
Na Drosophila, a fosfatase cdc25 (produto do gene string, de cordo) inicialmente sintetizada pelo mRNA armazenado no ocito durante os 13 primeiros ciclos celulares. No entanto, durante o pr-
199
ximo ciclo, o cordo mRNA materno degradado; se o ncleo no transcrever seu

prprio cordo mRNA, as clulas no se
dividiro. Edgard e OFarrel (1989) mostraram que aquelas clulas que se dividem esto sintetizando a sua prpria
fosfatase cdc25, enquanto aquelas que
no so capazes de se juntar a esse ciclo,
no realizaro a diviso (Figura 5.41). Essa
degradao e a necessidade de re-sintetizar essa protena explicariam a mudana
de controle citoplasmtico para controle
nuclear da diviso como visto no ciclo 14.
Em Drosophila, existe uma maturao
desenvolvimental da regulao da quinase
MPF ativa (veja Figura 5.40; Edgard et al.,
1994). Na ovulao, o complexo pr-MPF
armazenado no ovo desfosforilado em T14 e Y-15 pelo recm-traduzido cordo
(cdc25) da protena. Durante os primeiros
sete ciclos nucleares, o MPF ativo permanece em nveis altos, e o ncleo divide-se
to rapidamente quanto as enzimas sintetizadoras de DNA permitem. Durante os
ciclos 8-13, a ciclina comea a ser degradada na metfase, levando a flutuaes peridicas de atividade MPF-quinase. A sntese da ciclina do mRNA armazenado no
ocito armazenado se torna o passo
limitante para a mitose. A degradao do
cordo da ocito-protena leva parada
do ciclo celular na interfase do ciclo 14.
Figura 5.41 Correlao da expresso do gene string (cordo) com

a diviso celular em embries de Drosophila. (A) Nesse exemplo, um
embrio de estgio tardio 14 corado com uma seqncia nucleotdica
radioativa que especificamente reconhece e liga o mRNA cordo (visto
aqui como pontos brancos na auto-radiografia). (B) Um embrio ligeiramente mais velho corado com anticorpos fluorescentes para tubulina para mostrar os microtbulos dos fusos mitticos. Uma comparao da microfotografia de fluorescncia com a auto-radiografia obtida
da ligao da sonda radioativa mostra que somente aquelas clulas
capazes de se dividirem, sintetizam mRNA string. (C) Anticorpos
para a protena ciclina A mostram que ela degradada aps a mitose e
no vista nas regies que contm a protena de cordo. (de Edgar e
OFarrell, 1989, cortesia de B. A. Edgar.)
(C)
200
Grandes concentraes de pr-MPF se

acumulam. As mitoses para as divises 14,
15 e 16 so iniciadas somente quando essa
pr-MPF desfosforilada nas posies T14 e Y-15 pela protena cordo. Essa protena derivada de transcrio nuclear ao
final de cada perodo G2. A mitose passou
do controle citoplasmtico para o nuclear.
Outras ciclinas e quinases ciclinadependentes

MPF o primeiro membro descoberto de
uma famlia de protenas dimricas que tm
estruturas muito similares. Cada uma dessas protenas contm uma ciclina e uma
quinase ciclina-dependente, que quando dependente do MPF chamada cdk1. Pelo
menos outras sete quinases ciclina-dependentes esto envolvidas em clulas maduras de vertebrados, e mais de uma dzia de
ciclinas foram identificadas. Os papis de
algumas dessas quinases foram determinados (como mostra a Figura 5.39). Entre essas enzimas, uma das mais crticas a ciclina
E/cdk2. Enquanto MPF (ciclina B/cdk1)
crtica para a entrada na mitose (M), ciclina
E/cdk2 crtica para a habilidade da clula
entrar na fase S, permitindo a ocorrncia de
sntese do DNA. A regulamentao do desenvolvimento dessa protena uma fase
crtica no desenvolvimento da Drosophila.
Embries de Drosophila adicionam um
estgio G2 antes da mitose, quando a protena de cordo se torna limitante no ciclo 14.
A fase G1 adicionada ao ciclo 17 quando
ciclina E se torna o fator limitante para a
replicao do DNA. Em embries precoces,
ciclina E e cdk2 esto sempre presentes,
seus mRNA sendo fornecidos pelo ocito e
traduzidos atravs de todos os primeiros 15
ciclos de diviso. A mensagem para ciclina
degradada durante o ciclo 16, levando
deficincia dessa protena no ciclo 17. Dessa forma, a maioria das clulas param no G1
desse ciclo, no entrando no perodo de sntese do DNA. A comeam a diferenciar-se.
(As excees so as clulas precursoras
dos nervos que continuam a proliferar, e as
clulas do intestino, que continuam a produzir DNA na ausncia de diviso celular.
Nesses casos, a ciclina E derivada dos
genes zigticos.) Se ciclina E induzida
ectopicamente, as clulas retidas sofrem uma
nova rodada de sntese de DNA (Knoblich
et al., 1994). Pensa-se que a ciclina E controla a sntese do DNA, fosforilando certos
fatores de transcrio que regulam as transcries das protenas necessrias para a
replicao do DNA (Duronio e OFarrell,

1994). Certamente, quando as clulas saem
normalmente do ciclo para comear a se diferenciarem, expressam a protena Dacapo,
um inibidor de ciclina E/cdk2 (Lane et al.,
1996; de Nooij et al., 1996).
A regulao das ciclinas uma funo
crtica no desenvolvimento. Primeiro, imagine as clulas da cartilagem de nossas pernas sofrendo mais uma diviso celular; seramos muito maiores do que agora. Pior, imagine que essa desregulao ocorresse em
somente uma de nossas pernas. Ainda pior,
imagine se a diviso da cartilagem no fosse coordenada com a diviso da pele e dos
vasos sangneos. A regulao desses
eventos coordenada atravs de hormnios e fatores de crescimento que, por fim,
regulam as ciclinas que controlam a passagem atravs dos ciclos das clulas. Segundo, quando a ciclina se torna ativa sem regulao externa ou quando ciclinas se tornam estimuladas por protenas mutantes, o
crescimento das clulas continua sem controle externo, e se desenvolve um tumor. Em
clulas maduras de vertebrados, as ciclinoenzimas D/cdk4,6 cumprem um papel crucial
no desenvolvimento. Em diversos tipos de
clulas, controlam a dicotomia entre a diviso e a diferenciao celular. [cleave6.html]
Pontos de Controle para Diviso Celular: DNA e Fusos

O ciclo celular exige uma excepcional intricada coreografia da citocinese, replicao
de DNA, montagem de fusos e metabolismo celular. Nesse conjunto, ciclinas e
quinases ciclina-dependentes so alvos e
causadores da regulao. O sistema ciclinaquinase parece coordenar esses eventos.
Por exemplo, a fibra do fuso mittico no
pode formar at a ciclina B/cdk1 sinalizar o
Estmulo para amadurecimento

(progesterona ou MPF)
comeo da mitose; mas a prpria montagem do fuso necessria para o funcionamento apropriado da ciclina B (Minshull et
al., 1994). Se os fusos so formados incorretamente, a ciclina B cessa seu funcionamento, e a mitose pra. Tambm parece haver retroalimentao entre a cromatina replicante e as quinases ciclina-dependentes, fazendo com que a mitose no comece
at que o DNA tenha comeado a replicarse, e somente uma rodada de replicao
normalmente permitida durante a diviso
celular (Chong et al., 1995; Madine et al.,
1995). As molculas que mediam essas trocas esto agora sendo estudadas.
Fator Citosttico
A sntese e a degradao do MPF leva a
ciclagem das clulas. No entanto, se a degradao da ciclina for prevenida, o MPF
permanece ativo e a clula travada na
metfase (Murray et al., 1989). Isso o que
acontece, aparentemente, durante o desenvolvimento do ocito da r. O ocito maduro da r cessa a diviso celular produzindo uma protena chamada fator citosttico (CSF), que mantm o ocito preso na
metfase da segunda diviso meitica (Figura 5.42). Essa protena contm os produtos dos genes c-mos e cdk-2, e parece
agir bloqueando a degradao da ciclina
(veja o Captulo 22). Uma vez que a ciclina
no degradada, MPF permanece ativo, e
Figura 5.42
Nveis do fator promotor de amadurecimento

(MPF) durante o desenvolvimento precoce da
r Xenopus laevis. O sinal normal de maturao o hormnio progesterona, que estimula a
ovulao dos ocitos e o incio da meiose. (Segundo Murray e Kirschner, 1989.)
Entrada de espermatozide, aumento
de Ca2+ livre, inativao de CSF
CSF estabiliza MPF

Alta
Atividade
de MPF
Baixa
Ocito
Imaturo
Meiose
I
Meiose
II
Ocito
maduro
Primeira
clivagem
Segunda
clivagem
o ocito permanece na metfase. A liberao de ons de clcio durante a fertilizao

ativa a protease que especificamente inativa o CSF (Watanabe et al., 1991). Quando
o CSF degradado, a ciclina pode ento
ser degradada, e a clula pode retornar
fase S. Dessa maneira, um dos efeitos da
liberao de ons de clcio na fertilizao

de iniciar a degradao da ciclina e permitir
que a clula comece a replicao do DNA.
Em seguida, os ritmos da diviso celular
so controlados pela atividade do MPF,
que por sua vez baseada nos ritmos
cclicos da sntese e degradao da ciclina.
201
Enquanto os ons de clcio esto ocupados desligando a mitose, os sinais da fertilizao que ativam a protena quinase C
esto estabelecendo condies de interfase: descondensao da cromatina e reforma do envoltrio nuclear (Bement e
Capco, 1991).
O mecanismo citoesqueltico da mitose

Clivagem na verdade o resultado de dois processos coordenados. O primeiro desses
processos cclicos a cariocinese, a diviso mittica do ncleo, cujo agente mecnico
o fuso mittico, com seus microtbulos compostos de tubulina (o mesmo tipo de
protena componente do flagelo do espermatozide). O segundo processo a
citocinese, a diviso da clula. O agente mecnico da citocinese o anel contrtil de
microfilamentos feitos de actina (o mesmo tipo de protena que alonga os microvilos
do vulo e o processo acrossmico do espermatozide). A Tabela 5.2 apresenta uma
comparao desses sistemas de diviso. O relacionamento e coordenao entre os
dois sistemas durante a clivagem representado na Figura 5.43A, onde o ovo do
ourio-do-mar mostrado passando pela primeira clivagem. O fuso mittico e o anel
contrtil esto perpendiculares um com o outro, e o fuso interno ao anel contrtil. O
sulco da clivagem finalmente seciona o plano da mitose criando, portanto, dois blastmeros geneticamente equivalentes.
Os microfilamentos de actina so encontrados no crtex do ovo ao invs do citoplasma central. Sob o microscpio eletrnico, o anel de microfilamentos pode ser visto
formando uma banda cortical distinta de 8-10 m de espessura (Figura 5.43B). Esse
anel contrtil existe somente durante a clivagem e se estende por 0.1m para o centro
do ovo. responsvel por exercer a fora que separa o zigoto em blastmeros; se
interrompido, a citocinese pra. Schroeder (1973) props um modelo de clivagem em
que o anel contrtil parte o ovo como um fecho de bolsa apertando o ovo, enquanto a
clivagem continua. Esse aperto dos anis de microfilamentos cria o sulco da clivagem.
Embora a cariocinese e a citocinese sejam normalmente coordenadas, elas so, s
vezes, separadas por condies naturais ou experimentais. Nos ovos dos insetos, a
cariocinese ocorre diversas vezes antes da citocinese. Outra maneira de induzir esse
estado tratar os embries com a droga citocalasina B, que inibe a formao e a
organizao de microfilamentos no anel contrtil, assim, interrompendo a clivagem
sem parar a cariocinese (Schroeder, 1972). Em alguns momentos, o ncleo continua a
se dividir e expressar protenas reguladoras do desenvolvimento, mesmo quando a
clivagem bloqueada (Lillie, 1902; Whittaker, 1979).
Tabela 5.2
Cariocinese e citocinese
Processo
Agente mecnico
Principal
composio protica
Localizao
Principal droga
disruptora
Cariocinese
Citocinese
Fuso mittico
Anel contrtil
Microtbulos de tubulina
Microfilamentos de actina
Citoplasma central
Citoplasma cortical
Colchicina, nocodazola
Citocalasina B
Como foi verificado que a colchicina inibe independentemente vrias funes da membrana, incluindo a osmorregulao e o transporte de ons e
nucleosdeos, nocodazol tornou-se a principal droga usada para inibir processos mediados por microtbulos (veja Hardin, 1987).
202
Figura 5.43
Papel dos microtbulos e microfilamentos na

diviso celular. (A) Diagrama da telfase da
primeira clivagem. Os cromossomos esto sendo arrastados para os centrolos por microtbulos, enquanto o citoplasma est sendo apertado pela contrao dos microfilamentos. (B)
Localizao de microfilamentos da actina no
sulco de clivagem. Marcao fluorescente dos
microfilamentos de actina mostra o anel
contrtil no sulco da primeira clivagem (flecha) de um ovo de ourio-do-mar na telfase.
(C) marcao fluorescente da tubulina mostra
os steres microtubulares de um ovo de ourio-do-mar durante a telfase da primeira clivagem. (B de Bonder et al., 1988; C de White
et. al., 1987.)
(B)
(A)
Microfilamentos
(anel contrtil)
Centrolo
Microtbulos
Cromossomo
(C)
Um dos mais intrigantes problemas no resolvidos da clivagem embrionria,

como a citocinese e a cariocinese so coordenadas entre si. Pesquisas in vitro
sugerem que a replicao do DNA pode controlar a fosforilao da subunidade
quinase cdc2 do MPF e que essa fosforilao pode controlar a habilidade da actina
de se contrair (Smythe e Newport, 1992). No entanto, essas observaes podem
no ser consistentes com as observaes feitas em clulas embrionrias precoces
(Ferrell et al., 1991). O nmero e o local desses sulcos de clivagem parecem ser
controlados pelos steres dos microtbulos. Esses steres (Figura 5.43C) so raios microtubulares que se estendem dos plos do fuso mittico para a periferia da
clula. Clivagem normal ocorre somente se um par de steres est presente (Wilson, 1901), e ovos polisprmicos (obtendo centrolos de cada espermatozide)
formam sulcos de clivagem mltiplos no mesmo ovo (veja Figura 4.20). Em estudos
mais recentes, Raff e Glover (1989) mostraram que no embrio de Drosophila, se
os centrolos migram ao plo posterior, eles podem formar clulas polares, mesmo
na ausncia de ncleo. Dessa maneira, parece que os steres so elementos sine
qua non da clivagem.
O segundo tipo de evidncia ligando os steres com a formao do sulco de
clivagem vem de experimentos nos quais a direo de clivagem mudada pela colocao do ovo sob presso. Pflger (1884) descobriu que quando um zigoto de rs
levemente comprimido entre duas placas de vidro, as direes das primeiras trs
clivagens so todas perpendiculares ao plano das placas. Ambos, Driesch e Morgan
(revisto por Morgan, 1927) fizeram observaes semelhantes com embries de ourio-
Zigotos
Sulco de clivagem normal
(A)
Bola de vidro
deslocando o
aparelho mittico
(B)
steres
Sulco extra de clivagem extra

(C)
Interrupo do
sulco de clivagem
203
(D)
Fuso
do-mar. Em ambos os casos, o plano da terceira clivagem (que normalmente paralelo

ao equador do ocito) foi deslocado em 90o. Dessa maneira, com a mudana do local
do fuso mittico, pode-se alterar a direo do sulco de clivagem.
Rappaport (1961) estendeu esse tipo de experimento, deslocando os fusos
mitticos para os lados das clulas. Na Figura 5.44, uma bola de vidro foi usada para
deslocar os steres do centro da clula em direo periferia. O sulco de clivagem
resultante se estende somente enquanto a bola no aparece do outro lado. Dessa
maneira, formada uma clula binucleada, em forma de ferradura. Na prxima diviso, dois aparelhos de fuso se formam entre quatro steres, mas so gerados trs
sulco de clivagem! Cada brao da ferradura tem o seu prprio fuso mittico e sulcos
de clivagem como esperado, mas um terceiro sulco aparece entre os dois steres no
topo da ferradura (Figura 5.44C). Isso demonstra claramente que se os dois steres
estiverem prximos um do outro, suas interaes causam a formao de um sulco de
clivagem, mesmo na ausncia de um fuso mittico entre eles. Novamente ns observamos que a diviso celular pode ocorrer sem diviso nuclear enquanto os steres
estiverem presentes.
A formao de novas membranas

Nossa ltima considerao sobre clivagem embrionria envolve a formao de novas
membranas celulares. Sero essas membranas recm-sintetizadas ou so meras extenses da membrana celular do ocito? A resposta que provavelmente ambos mecanismos contribuem para as membranas celulares internas.
Embries de anfbios fornecem evidncias que novos componentes da membrana
esto sendo sintetizados durante a clivagem precoce. A Figura 5.45A mostra o primeiro sulco da clivagem de um zigoto pigmentado de r. Ao passo que a membrana
original tem uma regio cortical pigmentada associada a ela, a nova membrana branca. Essa nova membrana tem tambm propriedades de condutividade eltrica diferentes daquelas da membrana original. Byers e Armstrong (1986) radiorotularam componentes de membrana de ovos de Xenopus recm-fertilizados e seguiram a redistribuio
dessas molculas atravs da clivagem, por auto-radiografia. Durante a primeira clivagem,
a membrana da superfcie externa do embrio e a membrana da borda principal do
sulco de clivagem so altamente marcadas (mostrando serem as regies originais da
membrana). Entre elas h uma grande regio desprovida de rtulo radioativo (Figura
5.45B). Dessa maneira, a membrana do sulco um mosaico de diferentes partes. A
membrana da parte onde o sulco termina derivada de uma superfcie externa
preexistente do ovo, marcada, mas a maior parte da membrana do sulco derivada de
regies que so inacessveis aos marcadores de superfcie. Byers e Armstrong especulam que o domnio da membrana intensamente marcada, na borda do sulco, contm as
membranas ncoras para o anel subjacente de microfilamentos corticais. A borda do
Figura 5.44
Criao de um novo sulco de clivagem pelo

deslocamento dos steres. (A,B) Pela interrupo de um sulco de clivagem com uma bola
de vidro, cria-se uma clula com forma de ferradura. Na prxima diviso (C,D), cria-se um
novo sulco de clivagem, apesar de no haver
fuso mittico que o atravessa. (de Rappaport,
1961, cortesia de R. Rappaport.)
204
(A)
Nova membrana no-pigmentada
(B)
Figura 5.45
Formao de novas membranas na primeira clivagem

do ovo de Xenopus. (A) A membrana antiga tem grnulos de pigmento. A nova membrana aparece clara porque no tem esses grnulos. (B) Auto-radiografia de
protenas de membrana no sulco da primeira clivagem.
A superfcie celular foi radiativamente marcada antes
da diviso. (A de Laat e Bluemink, 1974; B de Byers e
Armstrong, 1986, cortesia dos autores.)
sulco em embries precoces de Xenopus, tambm contm microtbulos curtos, dispostos radialmente. Pensa-se que esses microtbulos poderiam fornecer um caminho
para o movimento de vesculas das membranas em direo ao lugar onde so inseridos
na membrana (Danilchik e Funk, 1996).
Esses processos de clivagem dividem o citoplasma do zigoto em numerosas
clulas. Cada clula pode ter os mesmos genes nucleares, mas seus respectivos
citoplasmas podem diferir significativamente. No prximo captulo veremos como
esses blastmeros se locomovem e interagem um com o outro para iniciar a estrutura do corpo.
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347-349.
Ziomek, C. A. and Johnson, M. H. 1980. Cell
surface interactions induce polarization of
mouse 8-cell blastomeres at compaction. Cell
21: 935-942.
Gastrulao:
Reorganizando as clulas embrionrias
Meu querido amigo..... a vida infinitamente mais complexa do que qualquer coisa que
a mente humana possa imaginar. No ousaramos sequer conceber as coisas que so
meros detalhes da existncia.
A. CONAN DOYLE (1891)
No o nascimento, o casamento ou a morte, mas a gastrulao que verdadeiramente a parte mais importante de nossa vida.
LEWIS WOLPERT (1986)
ASTRULAO o processo pelo qual movimentos altamente integrados
de clulas e tecidos, dramaticamente, reorganizam as clulas da blstula. A

blstula consiste de numerosas clulas, cujas posies foram estabelecidas
durante a clivagem. Durante a gastrulao, essas clulas recebem novas posies e
novos vizinhos, e estabelecido o multifacetado plano do corpo do organismo. As
clulas que formaro os rgos endodrmicos e mesodrmicos so trazidas para dentro do embrio, ao passo que as precursoras da pele e do sistema nervoso so distribudas na superfcie externa. Assim, as trs camadas germinativas ectoderma externo, endoderma interno e mesoderma intersticial so produzidas inicialmente durante
a gastrulao. Ainda, o palco est montado para as interaes desses tecidos recmposicionados.
Os movimentos da gastrulao envolvem o embrio inteiro, e migraes celulares em uma parte do organismo gastrulante devem estar intimamente coordenadas
com outros movimentos ocorrendo simultaneamente. Mesmo que o padro de
gastrulao seja extremamente variado em todo o reino animal, relativamente poucos mecanismos esto envolvidos. A gastrulao, geralmente, envolve os seguintes
tipos de movimentos:
Epibolia. O movimento de camadas epiteliais (usualmente de clulas ectodrmicas) que se espalham como uma unidade e no individualmente, para envolver as camadas mais profundas do embrio.
Invaginao. O dobrar para dentro de uma regio de clulas, de maneira semelhante cavidade formada quando se empurra com o dedo a superfcie de uma
bola de borracha macia.
Involuo. A internao ou movimento de interiorizaro de uma camada externa em expanso, de modo a se espalhar na superfcie interna das clulas externas remanescentes.
Ingresso de clulas. A migrao de clulas individuais da camada superficial
para o interior do embrio.
Delaminao. A separao de uma camada celular em duas ou mais camadas
mais ou menos paralelas.
Ao considerarmos gastrulao em diferentes tipos de embrio, devemos levar em
conta as seguintes questes (Trinkaus, 1984a):
Qual a unidade da atividade migratria? a migrao dependente do
movimento de clulas individuais, ou so as clulas parte de uma camada
migrante? Por mais extraordinrio que possa parecer, propriedades migratrias
regionais podem ser totalmente controladas por fatores citoplasmticos que
209
210
so independentes da celularizao. F. R. Lillie (1902) conseguiu ativar, partenogeneticamente, vulos do aneldeo Chaetopterus e suprimir sua clivagem.
Muitos eventos do desenvolvimento precoce ocorreram mesmo na ausncia
de clulas. O citoplasma do zigoto se separou em regies definidas, e os clios
se diferenciaram nas partes apropriadas do ovo. Ainda mais, o citoplasma claro
externo migrou para baixo em direo regio vegetativa, de uma maneira
muito parecida epibolia das clulas do hemisfrio animal durante o desenvolvimento normal. Isso ocorreu precisamente no momento em que ocorreria a
epibolia durante a gastrulao. Assim, a epibolia pode ser (pelo menos em
alguns aspectos) independente das clulas que formam a regio migratria.
A expanso ou dobramento de uma camada celular deve-se a fatores intrnsecos prprios, ou s foras extrnsecas que a estendem ou a distorcem?
essencial conhecer a resposta a essa pergunta se queremos entender como os
vrios movimentos celulares da gastrulao so integrados. Por exemplo, esto as clulas involutivas puxando as clulas epibolizantes para baixo em sua
direo, ou so os dois movimentos independentes?
Existe uma expanso ativa do tecido total, ou a margem limitante que se
expande e arrasta o resto da camada celular, passivamente?
So as mudanas na forma e na motilidade celular, durante a gastrulao,
conseqncias de mudanas nas propriedades da superfcie celular, tais como
adesividade ao substrato ou a outras clulas?
Considerando essas questes, observaremos os vrios padres de gastrulao encontrados em equinodermos, anfbios, peixes, aves e mamferos*.
Gastrulao em ourio-do-mar
A blstula do ourio-do-mar consiste de uma nica camada de mais ou menos 1000
clulas. Essas clulas derivadas de diferentes regies do zigoto tm tamanhos e propriedades diferentes. As Figuras 6.1 e 6.2 mostram o destino das vrias regies do
zigoto enquanto ele se desenvolve atravs da clivagem e da gastrulao na larva
pluteus, caracterstica dos ourios-do-mar. O destino de cada camada pode ser visto
atravs de seus movimentos durante a gastrulao.
Ingresso do Mesnquima Primrio
FUNO DAS CLULAS PRIMRIAS DO MESNQUIMA. Logo aps a ecloso
da blstula da membrana de fecundao, o seu hemisfrio vegetal comea a se espessar e achatar (Figura 6.2, 9 horas). No centro dessa placa vegetativa achatada, um
aglomerado de pequenas clulas comea a se modificar. Essas clulas apresentam
movimentos de vibrao em suas superfcies internas, estendendo e contraindo longos e finos processos (30x5 m) chamados filopdios. As clulas ento se dissociam
da monocamada epitelial e ingressam na blastocele (Figura 6.2, 9-10 horas). Essas
clulas so chamadas de mesnquima primrio e so derivadas dos micrmeros. As
64 ou mais clulas mesenquimatosas primrias do ourio-do-mar so as descendentes
dos quatro blastmeros que se formaram pela quarta clivagem assimtrica.
Gustafson e Wolpert (1961) usaram filmes com exposio contnua para seguir os
movimentos microscpicos das clulas mesenquimatosas dentro da blastocele. No
*A discusso da gastrulao de Drosophila ser transferida para o Captulo 14, quando ela ocorre
no contexto da formao do eixo. Lembre-se do alerta feito pelo pesquisador de gastrulao, Ray
Keller (comunicao pessoal) Estudantes NO deveriam ler esse material apressadamente, ao
contrrio uma cena tpica aquela em que um pobre coitado est debruado sobre este texto s 2.30
horas da madrugada com uma xcara de caf, examinando desesperadamente as figuras para ver se ele
ou ela podem entender o que est se passando. Gastrulao (como diz Wolpert na citao no
comeo deste captulo) a poca mais importante da sua vida. Vale a pena examin-la criticamente
e apreci-la vagarosamente.
CAPTULO 6 Gastrulao: Reorganizando as clulas embrionrias
Animal
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
(F)
211
(G)
Mesmeros
Macrmeros
(H)
veg1
veg2
Micrmetros
Vegetal
Tufo ciliar
(I)
(J)
Mesnquima
secundrio
(K)
(L)
(Vista lateral)
Estomodeu
(boca)
Mesnquima
primrio
(M)
Endoderma
invaginante
Bastonetes
esquelticos
(mesoderma)
Figura 6.1
Desenvolvimento normal do ourio-do-mar, seguindo o destino das camadas celulares da blstula. (A-F) Clivagem at o estgio de 60 clulas (omitindo o estgio de 2-clulas). (G) Blstula
precoce com clios. (H) Blstula tardia com tufo ciliar e placa vegetal achatada. (I) Blstula com
mesnquima primrio. (J) Gstrula com mesnquima secundrio. (K) Larva em estgio prismtico.
(L,M) Larva pluteus. Os destinos do citoplasma zigtico podem ser seguidos pelas variaes
no sombreamento. (N) Fotomicrografia de uma larva pluteus viva de ourio-do-mar. (A-M
segundo Hrstadius, 1939; N cortesia de G. Watchmaker.)
Envoltrio
ectodrmico
Intestino
(endoderma)
(Vista ventral)
(N)
Boca
Bastonetes
esquelticos
9 hs.
9.5 hs.
10 hs.
10.5 hs.
11 hs.
11.5 hs.
12 hs.
13 hs.
nus
Figura 6.2
15 hs.
13.5 hs.
17 hs.
18 hs.
Seqncia completa da gastrulao em

Lytechinus variegatus. O tempo mostra
a durao do desenvolvimento a 25oC.
(Cortesia de J. Morrill.)
212
(A)
(B)
Figura 6.3
Formao dos cordes sinciciais por clulas mesenquimatosas do ourio-do-mar. (A) Clulas
mesenquimatosas primrias da gstrula precoce se alinham e se fundem para depositar a matriz
da espcula de carbonato de clcio. (B) microfotografia eletrnica de varredura de espculas
formadas pela fuso das clulas mesenquimatosas primrias para formar os cordes sinciciais.
(C) Anel de clulas mesenquimatosas em volta do arquntero (intestino primitivo). A metade
animal e todo o arquntero foram removidos. (D) Colocao das clulas mesenquimatosas
primrias na larva precoce de Lytechinus variegatus. (A e D de Ettensohn, 1990; B e C de
Morrill e Santos, 1985; todas as fotografias, cortesia dos autores.)
comeo, as clulas parecem se movimentar ao acaso, ao longo da superfcie interna da

blastocele, ativamente produzindo e quebrando conexes filopdicas com a parede da
blastocele. Finalmente, essas clulas tornam-se localizadas dentro da provvel regio
ventrolateral da blastocele, onde considera-se que sua aderncia seja maior. Aqui, as
clulas mesenquimatosas primrias se fundem em cordes sinciciais, que formaro o
eixo das espculas de carbonato de clcio do esqueleto larval (Figura 6.3). Estudos
mais recentes (Cherr et al., 1992) sugerem que a migrao inicial das clulas mesenquimatosas primrias dirigida pela parede da blastocele e pelas fibrilas paralelas do
material da matriz extracelular que invadem a blastocele. As clulas mesenquimatosas
primrias parecem migrar ao longo da superfcie da blastocele e so envolvidas no
emaranhado dessas fibrilas (Figura 6.4).
(C)
Agregados Ventrolaterais
IMPORTNCIA DA LMINA EXTRACELULAR NO INTERIOR DA BLASTOCELE.

Cadeia
dorsal
(D)
Cadeia
ventral
Espcula
Os eventos que se do no citoplasma e na superfcie celular so fundamentais para o

ingresso e a migrao das clulas mesenquimatosas primrias. Gustafson e Wolpert
(1967) propuseram um modelo no qual o ingresso dos micrmeros se d atravs de
modificaes de sua adeso a outras clulas e s matrizes extracelulares que os rodeiam. Em 1985, Fink e McClay confirmaram as especulaes de Gustafson e Wolpert,
medindo as foras de adeso dos blastmeros de ourio-do-mar, em relao camada
hialina, lmina basal e a outras clulas. Originalmente todas as clulas da blstula
esto ligadas pela sua superfcie externa camada hialina e sua superfcie interna
ligada lmina basal secretada pelas clulas (veja Captulo 3). Na sua lateral, cada
clula tem outra clula como vizinha. Fink e McClay verificaram que os futuros
ectoderma e endoderma (descendentes dos macrmeros e mesmeros, respectivamente) se ligam fortemente entre si e camada hialina, mas aderem fracamente lmina
basal (Tabela 6.1). Os micrmeros da blstula mostram, originalmente, um padro similar de ligao. Entretanto, o padro de ligao dos micrmeros muda na gastrulao.
(A)
(B)
Figure 6.4
Fotografias ao estreo-microscpio eletrnico de varredura de clulas mesenquimatosas primrias dentro da matriz extracelular de fibrilas da blastocele. (A) Clulas mesenquimatosas primrias enredadas na matriz extracelular da gstrula precoce de Strongylus centrotus. (B,C) migrao de clulas mesenquimatosas em estgio de gstrula. As fibrilas da matriz extracelular da
blastocele ficaram paralelas ao eixo animal-vegetal e esto intimamente associadas com as clulas mesenquimatosas primrias. (de Cherr et al., 1992; cortesia de G. Cherr.)
Enquanto outras clulas mantm sua forte ligao camada hialina e s clulas vizinhas, as precursoras do mesnquima primrio perdem sua afinidade a essas estruturas
(para aproximadamente 2% do valor original), enquanto que sua afinidade aos componentes da lmina basal e matriz extracelular aumenta 100 vezes. Essa mudana na
afinidade faz com que os micrmeros percam suas ligaes com a camada hialina
externa e com as clulas circundantes e, atrados pela lmina basal, migram para o
interior da blastocele (Figura 6.5). As modificaes na afinidade celular foram
Tabela 6.1 Afinidades de clulas mesenquimatosas e no-mesenquimatosas

aos componentesa celulares e extracelulares
Fora de deslocamento (em dinas)
Tipo celular
Micrmeros em
estgio de 16 clulas
Clulas mesenquimatosas
em estgio migratrio
Ectoderma e
endoderma gastrular
Hialino
Monocamadas de
clulas gastrulares
Lmina basal
5.8 x 10-5
6.8 x 10-5
4.8 x 10-7
1.2 x 10-7
1.2 x 10-7
1.5 x 10-5
5.0 x 10-5
5.0 x 10-5
5.0 x 10-7
Fonte: Segundo Fink e McClay, 1985.
a
Clulas testadas foram colocadas em placas contendo hialino, lmina basal extracelular, ou
monocamadas celulares. As placas foram invertidas e centrifugadas a vrias foras para deslocar
as clulas. A fora de deslocamento calculada pela fora centrfuga necessria para remover as
clulas teste do substrato.
(C)
213
214
Clulas
Mesenquimatosas primrias
Matriz
extracelular fibrilar
Blastocele
Lmina basal
(A)
Camada
hialina
Clios
(B)
(C)
(D)
(E)
Figure 6.5
Ingresso de clulas mesenquimatosas primrias. (A-E) Diagramas interpretativos descrevendo

alteraes nas interaes adesivas nas presumidas clulas mesenquimatosas primrias (cor).
Essas clulas perdem suas afinidades pelo hialino e por seus blastmeros vizinhos enquanto
adquirem afinidade pela lmina basal. Blastmeros no-mesenquimatosos retm suas originais
afinidades pelo hialino e clulas vicinais. (F) Montagem de micrografia eletrnica de varredura
mostrando o ingresso de clulas primrias de Lytechinus variegatus. (F cortesia de J. B. Morrill
e D. Flaherty.)
(F)
correlacionadas com modificaes nas molculas da superfcie celular que ocorreram

durante esse perodo (Wessel e McClay, 1985).
Como mostra a Figura 6.4, h uma alta concentrao de material da lmina extracelular
ao redor das clulas mesenquimatosas primrias ingressantes (Galileo e Morrill, 1985;
Cherr et al., 1992). Alm disso, uma vez dentro da blastocele, as clulas mesenquimatosas primrias parecem migrar ao longo da matriz extracelular da parede da blastocele,
extendendo seus filopdios a sua frente (Galileo e Morrill, 1985; Karp e Solursh, 1985). A
orientao das fibrilas, ao longo do eixo animal-vegetal, pode estar guiando as clulas
em sua migrao. Trs protenas parecem ser importantes nessa migrao. Uma a
fibronectina, uma grande glicoprotena (400-kDa), que um componente comum das
lminas basais, incluindo aquela da blastocele do ourio-do-mar (Wessel et al., 1984).
Fink e McClay mostraram que durante a gastrulao, a afinidade dos micrmeros por
essa molcula especfica aumenta dramaticamente. O segundo grupo de molculas consiste de proteoglicanos sulfatados encontrados na superfcie das clulas mesenquimatosas ingressantes (veja Captulo 3; Sugiyama, 1972; Lane e Solursh, 1991). Se a sntese
(ou sulfatao) desses proteoglicanos inibida, as clulas mesenquimatosas entram na
blastocele, mas no continuam a migrar* (Figura 6.6; Karp e Solursh, 1974; Anstrom et
al., 1987). A terceira protena, ECM18, encontrada nas matrizes extracelulares das clulas da blastocele e expressa somente durante a gastrulao. Bloquear ECM18 com
anticorpos previne tanto a migrao mesenquimatosa primria quanto a invaginao
secundria do endoderma (Berg et al., 1996).
Porm, esses sinais de orientao no so suficientes, pois os micrmeros sabem
quando parar seu movimento e formar espculas perto do equador da blastocele. As
clulas mesenquimatosas primrias se organizam em forma de anel em uma posio
especfica ao longo do eixo animal-vegetal. Em dois stios perto do futuro lado ventral da
larva, muitas dessas clulas mesenquimatosas primrias se agrupam para iniciar a formao de espculas (Figura 6.3). Se um micrmero marcado de outro embrio injetado na
blastocele em gastrulao de um embrio de ourio-do-mar, ele migra para o local correto
*Em um dos primeiros experimentos em embriologia qumica, Curt Herbst (1904)

observou que embries de ourio-do-mar no gastrulavam adequadamente quando
colocados em gua do mar que no continha ons sulfato. Na poca, ele no podia
entender o porqu.
(A)
215
Figura 6.6
(B)
Efeito da privao de sulfato no movimento

do mesnquima primrio do ourio-do-mar Lytechinus. (A) Gstrula normal. (B) Gstrula
anormal formada quando embries so cultivados em gua do mar livre de sulfato. (de
Karp e Solursh, 1974, cortesia de M. Solursh.)
e contribui para a formao das espculas embrionrias (Prancha 35). Se clulas mesenquimatosas primrias de embries mais velhos so injetadas em gstrulas mais jovens,
elas atrasaro sua diferenciao, migraro como as clulas mais jovens e sero incorporadas normalmente no mesnquima do hospedeiro. Alm disso, se todas as clulas
mesenquimatosas do hospedeiro so removidas antes da injeo de clulas mesenquimatosas mais velhas, essas repetiro os estgios iniciais de sua migrao, formando um
anel mesenquimatoso e o esqueleto, normalmente (Ettensohn, 1990). Considera-se que
essa informao posicional fornecida pelas futuras clulas ectodrmicas e suas lminas basais (von bisch, 1939; Harkey e Whiteley, 1980). Somente clulas mesenquimatosas primrias (e no outros tipos de clulas ou partculas de ltex) so capazes de
responder a esses sinais modeladores (Ettensohn e McClay, 1986). Miller e colegas
(1995) observaram a existncia de filopdios extremamente delgados (0.3 m de dimetro) no mesnquima esqueletognico (skeletonogenic); esses parecem explorar e sentir
a parede da blastocele (Figura 6.7). Esses filopdios contm actina e no so considerados como locomotores. Em lugar disso, so considerados como sensores do ambiente,
da mesma maneira que os filopdios nas pontas dos cones de crescimento axonal. Essas
extenses delgadas podem ser responsveis pela captao de sinais modeladores
dorsoventral e animal-vegetal, a partir do ectoderma (Malinda et al., 1995).
Primeiro estgio da invaginao do arquntero
Enquanto se forma o anel de clulas mesenquimatosas primrias no plo vegetal da
blastocele, mudanas importantes esto ocorrendo nas clulas que permanecem na
Figura 6.7
Videomicrografia de Nomarski mostrando um filopdio longo e fino estendendo-se

de uma clula mesenquimatosa primria at a parede ectodrmica da gstrula,
assim como um filopdio mais curto estendendo-se para dentro do ectoderma. Os
filopdios mesenquimatosos estendem-se atravs da matriz extracelular e contatam
diretamente a membrana celular das clulas ectodrmicas. (de Miller et al., 1995;
fotografia cortesia de D. McClay.)
216
placa vegetativa. Essas clulas permanecem ligadas umas s outras e camada hialina
do ovo, e se movem para ocupar os vazios deixados pelo ingresso do mesnquima;
portanto, a placa vegetal se achata ainda mais. Verifica-se, tambm, que a placa vegetal
se dobra para dentro e se estende por um quarto ou at a metade do seu caminho para
a blastocele (veja Figura 6.2, 10.5-11.5 horas; Figura 6.8A). Ento, repentinamente, a
invaginao cessa. A regio invaginada chamada de arquntero (intestino primitivo)
e sua abertura no plo vegetal chamada de blastporo.
Quais foras atuam para invaginar essas clulas? Lane e colaboradores (1993)
mostraram que o envergamento semelhante aquele produzido pelo aquecimento de
uma faixa bimetlica. A camada hialina , na verdade, formada de duas lminas: uma
externa, formada primariamente de protena hialina, e uma interna, composta de protenas fibropelinas* (Hall e Vacquier. 1982; Bisgrove et al., 1991). As clulas da placa
vegetal (e somente essas clulas) secretam um proteoglicano de condroitina sulfato
na lmina interna da camada hialina, diretamente abaixo delas. Essa molcula
higroscpica (absorvente de gua) incha a lmina interna mas no a externa. Isso
causa o envergamento da camada hialina (Figura 6.8B,C). Um pouco mais tarde, uma
*Fibropelinas so armazenadas em grnulos secretores dentro dos ocitos. So secretadas desses
grnulos aps a liberao da protena hialina pela exocitose granular cortical. No estgio de blstula,
as fibropelinas j formaram um envoltrio, tipo rede, sobre a superfcie do embrio.
(A)
Figura 6.8
Invaginao da placa vegetal. (A) Invaginao da placa vegetal de Lytechinus variegatus vista
por micrografia eletrnica de varredura da superfcie externa da gstrula precoce. O blastporo
est claramente visvel. (B) a camada hialina consiste de lminas internas e externas. Microvilosidades da placa vegetal estendem-se atravs da camada hialina e seu citoplasma contm
vesculas secretoras que armazenam um proteoglicano de sulfato de condroitina (CSPG). (C)
Os grnulos de armazenamento secretam o proteoglicano para dentro da lmina interna da
camada hialina. O proteoglicano absorve gua e entumece a lmina interna, enquanto a lmina
externa, ao qual est fixado, no entumece. Isso ocasiona a curvatura para dentro do envoltrio
hialino e do epitlio a ele ligado. (A de Morrill e Santos, 1985, cortesia de J. B. Morrill e C
segundo Lane et al., 1993.)
(B)
(C)
Clulas da placa vegetal empurradas para cima
Blastocele interior
Clulas de placa vegetal
Camada hialina
Lmina interna
Lmina externa
Microvilosidades
Vesculas secretoras
com proteoglicano de
sulfato de condroitina
(CSPG)
CSPG secretado para

a lmina interna absorve
gua, causando tumefao
Gastrulao precoce
Gastrulao tardia
217
Figura 6.9
Rearranjo celular durante a extenso do

arquntero em embries de ourio-do-mar.
Nessa espcie, o arquntero precoce tem 20 a
30 clulas ao redor de sua circunferncia. Mais
tardiamente na gastrulao, o arquntero tem
uma circunferncia constituda de somente 6
a 8 clulas. Clones marcados fluorescentemente podem ser vistos estendendo-se
apicalmente. (Segundo Hardin, 1990.)
blastporo
segunda fora resultante dos movimentos das clulas epiteliais adjacentes placa
vegetal, pode facilitar essa invaginao puxando para dentro a camada envergada
(Burke et al., 1991).
Segundo e terceiro estgios da invaginao do arquntero
A invaginao das clulas vegetais ocorre em trs estgios discretos. Aps uma breve
pausa, comea a segunda fase da formao do arquntero. Durante essa fase, o
arquntero se estende dramaticamente, algumas vezes triplicando seu comprimento.
No processo de extenso, o largo e curto intestino rudimentar transformado em um
tubo longo e delgado; mas no so formadas novas clulas (veja Figura 6.2, 12 horas;
Figura 6.9). Para produzir essa extenso, as clulas do arquntero se reorganizam
migrando umas sobre as outras e sofrendo um achatamento (Ettensohn, 1985; Hardin
e Cheng, 1986). Esse fenmeno, onde clulas se intercalam para estreitar o tecido e, ao
mesmo tempo, lev-lo adiante chamado extenso convergente.
Em pelo menos algumas espcies de ourio-do-mar, ocorre um terceiro estgio no
alongamento do arquntero. Essa ltima fase iniciada pela tenso propiciada pelas
clulas mesenquimatosas secundrias, que se formam na ponta do arquntero e l
permanecem (veja Figura 6.2, 13 horas; Figura 6.10). Os filopdios se estendem dessas
clulas atravs do fluido da blastocele e fazem o contacto com a superfcie interna da
Figura 6.10
(A)
(B)
Estgio de gstrula intermediria do ouriodo-mar Lytechinus pictus, mostrando extenses de filopdios do mesnquima secundrio estendendo-se da ponta do arquntero at
a parede da blastocele. (A) Clulas mesenquimatosas estendendo filopdios da ponta
do arquntero. (B) Cabos de filopdios
conectando a parede da blastocele ponta do
arquntero. A tenso nos cabos pode ser avaliada pela trao exercida sobre a parede da
blastocele no ponto de fixao. (Fotografias
cortesia de C. Ettensohn.)
218
parede da blastocele (Dan e Okazaki, 1956; Schroeder, 1981). Os filopdios se ligam

parede nas junes entre as clulas do blastoderma e, em seguida, se contraem, arrastando o arquntero para cima. Hardin (1988) removeu as clulas mesenquimatosas
secundrias com um laser, e como conseqncia o arquntero s pode se alongar
aproximadamente em dois teros do seu comprimento total. Quando algumas clulas
mesenquimatosas secundrias foram deixadas, o alongamento continuou, embora em
velocidade menor do que nos controles. As clulas mesenquimatosas secundrias
tm, ento, um papel essencial em elevar o arquntero at a parede da blastocele
durante a ltima fase da invaginao.
Mas, podem os filopdios mesenquimatosos secundrios se ligar a qualquer parte
da parede da blastocele, ou existe um alvo especfico no hemisfrio animal que precisa
estar presente para que a ligao ocorra? Existe alguma regio da parede da blastocele
que predestinada a se tornar o lado ventral da larva? Estudos de Hardin e McClay
(1990) mostram que existe um alvo especfico para os filopdios do hemisfrio animal, que difere de outras regies. Os filopdios das clulas mesenquimatosas secundrias se estendem, tocam a parede da blastocele ao acaso e, em seguida, se retraem.
Entretanto, quando os filopdios atingem uma regio especfica da parede, eles permanecem ligados naquele local, se achatam contra essa regio e puxam o arquntero
em direo a ela. Quando Hardin e McClay comprimiram o outro lado da parede da
blastocele, de modo que o contato com a regio se tornou mais eficiente, os filopdios
continuaram a se estenderem e a se contrarem ao tocar a parede daquela regio.
Somente quando os filopdios encontraram o alvo que cessaram os movimentos.
Com a gstrula contrada de modo a impedir que os filopdios jamais atingissem a rea
alvo, as clulas secundrias mesenquimatosas continuaram sua explorao at que
finalmente se afastaram do arquntero e encontraram o tecido alvo, como clulas
migratrias livres. Parece ento, que existe uma regio alvo destinada a se transformar
na regio ventral da larva, que reconhecida pelas clulas mesenquimatosas secundrias e que posiciona o arquntero na regio onde se formar a boca.
Quando o topo do arquntero encontra a parede da blastocele nessa regio, as
clulas mesenquimatosas secundrias se dispersam no interior da blastocele, onde
proliferam para formar os rgos mesodrmicos (veja Figura 6.2, 13.5 horas). Onde o
arquntero contata a parede se formar, finalmente, uma boca que se fundir a ele
formando um tubo digestivo contnuo. Assim, como caracterstico para os
deuterostomatas, o blastporo marca a posio do nus.
Gastrulao em peixes
A transio da blstula intermediria
e a aquisio de motilidade celular
Durante o dcimo ciclo de clivagem do peixe-zebra, as divises celulares perdem
sua sincronia, novos genes so expressos e as clulas se tornam mveis. Essa
transio da blstula intermediria (MBT) tambm evidente em rs e em Drosophila. Como discutido no Captulo 5, a MBT parece ser regulada pela relao entre
cromatina e citoplasma. Peixes haplides entram na MBT um ciclo mais tarde;
peixes tetraplides entram um ciclo antes (Kane e Kimmel, 1993). Parece que alguma coisa na cromatina est removendo por titulao alguma substncia (at
agora desconhecida) do citoplasma.
O primeiro movimento celular a epibolia das clulas blastodrmicas sobre o
vitelo. Na fase inicial, as clulas blastodrmicas internas se movem para o exterior e se
intercalam com as clulas mais superficiais (Warga e Kimmel, 1990). Mais tarde, as
clulas se movem sobre a superfcie do vitelo envolvendo-o completamente (Figura
6.11). Esse movimento no devido a um arrasto ativo dos blastmeros. Pelo contrrio, o movimento propiciado pela expanso autnoma da camada sincicial do vitelo
(YSL) dentro do citoplasma do hemisfrio animal. A camada envolvente (EVL) est
Figura 6.11
(A)
30% DE EPIBOLIA (4.7 HS)
Movimentos celulares durante a gastrulao do telesteo Danio rerio. (A) O

blastoderma com epibolia 30 porcento completa. (B) Formao do hipoblasto,
por involuo de clulas na margem do blastoderma em epibolizao ou por
delaminao de clulas do epiblasto. (C) Detalhe da regio marginal. (D) Com
90 porcento de epibolia, o mesoderma pode ser visto rodeando o vitelo, entre
o ectoderma e o endoderma. (E) Trmino da gastrulao. (Segundo Driever,
1995, e Langeland e Kimmel, 1997.)
Plo animal
Camada envolvente
219
Camada profunda
Camada sincicial
do vitelo
Ventral
Dorsal
Clula do vitelo
Ncleo do vitelo
Plo vegetal
(B)
ESCUDO (6.0 HS.)
(C)
Ingresso celular
Plo animal
Epiblasto
Hipoblasto
Hipoblasto
Camada envolvente
Escudo
Epiblasto
Ventral
Dorsal
Clulas em involuo
Clulas em noinvoluo
Sinal indutor
mesodrmico
Plo Vegetal
(D)
Sinais indutores
mesodrmicos
e dorsais
Camada sincicial
do vitelo
Grnulo do vitelo
(E)
Anterior
Plo animal
Mesoderma
dorsal
Camada
envolvente
Plo animal
Regio ceflica
Camada
envolvente
Somito #1
Ventral
Dorsal
Ventral
Dorsal
Mesoderma
Ectoderma,
neuroectoderma
Plo vegetal
Mesendoderma: precursores
para mesoderma e endoderma
Coto caudal
Posterior
Plo animal
Endoderma
(90% EPIBOLIA (9 HS)
Regio do
tronco
1 SOMITO (10.3 HS)
fortemente ligada YSL e arrastada junto com ela. As clulas mais profundas do
blastoderma enchem o espao entre a YSL e a EVL enquanto a epibolia se desenvolve.
Isso pode ser demonstrado cortando a ligao entre YSL e EVL. Quando isso feito,
as clulas blastodrmicas retornam ao topo do vitelo enquanto YSL continua sua
expanso ao redor da clula do vitelo (Trinkaus, 1984b, 1992). A expanso de YSL tem
como base uma rede de microtbulos em sua estrutura, e radiao ou drogas que
220
impedem a polimerizao de tubulina inibem a epibolia (Strahle e Jesuthasan, 1993;

Solnica-krezel e Driever, 1994).
Durante a migrao, um dos lados do blastoderma se torna visivelmente mais
grosso do que o outro. Experimentos com marcao de clulas indicam que o lado mais
delgado marca o stio da futura superfcie dorsal do embrio (Schmidt e CamposOrtega, 1995).
Formao das camadas germinais
Depois que as clulas blastodrmicas cobrem aproximadamente a metade da clula do
vitelo do peixe-zebra (e mais cedo em ovos de peixes com vitelos maiores) um
espessamento ocorre ao longo de toda a margem. Esse espessamento chamado de
anel germinativo, e composto de uma camada superficial, o epiblasto, e uma camada
interna, o hipoblasto. No entendemos como produzido o hipoblasto. Alguns laboratrios alegam que o hipoblasto formado pela involuo das clulas superficiais
abaixo da margem, seguida por sua migrao para o plo animal (veja Figura 6.11). A
involuo comea na futura poro dorsal do embrio, mas ocorre na margem inteira.
Outros laboratrios alegam que essas clulas hipoblsticas ingressam para formar o
hipoblasto (veja Trinkaus, 1996). ( possvel que ambos os mecanismos ocorram com
diferentes maneiras de formar o hipoblasto predominando em espcies diferentes.)
Uma vez formado o anel, as clulas profundas de ambos, epiblasto e hipoblasto, se
intercalam no futuro lado dorsal do embrio, para formar um espessamento localizado,
o escudo embrionrio (Figura 6.12). Esse escudo funcionalmente equivalente ao
lbio dorsal do blastporo de anfbios, pois ele pode organizar um eixo embrionrio
secundrio quando transplantado a um embrio hospedeiro (Oppenheimer, 1936; Ho,
1992; veja discusso de gastrulao em anfbios).
Assim, enquanto as clulas realizam a epibolia em torno do vitelo, elas tambm
esto involuindo nas margens e convergindo anteriormente e dorsalmente em direo
(A)
Figura 6.12
Plo animal
Extenso
Escudo
embrionrio
Convergncia
Involuo
Epibolia
Convergncia e extenso no peixe-zebra. (A) Vista dorsal de movimentos de

convergncia e extenso durante a gastrulao do peixe-zebra. A epibolia estende o blastoderma sobre o vitelo; a involuo ou o ingresso geram o hipoblasto;
convergncia e extenso trazem clulas do hipoblasto e epiblasto para o lado
dorsal para formar o escudo embrionrio. Dentro do escudo, a intercalao
estende o cordomesoderma em direo ao plo animal. (B,C) Extenso convergente do cordomesoderma mostrada por aquelas clulas exprimindo o
gene no tail (sem cauda), um gene que expresso pelas clulas da notocorda.
(D,E) Extenso convergente de clulas mesodrmicais adaxiais (marcadas pela
sua expresso de gene snail para flanquear a notocorda. (de Langeland e
Kimmel, 1997.)
Clula do
vitelo
(B)
(C)
(D)
(E)
(A)
(B)
Vidro para
segurar o
embrio
Discos de gar
com corante
(C)
Manchas de
corante no embrio
Lbio dorsal
do blastporo
Embrio
Seco em
plano de
viso (E)
Figura 6.13
Colorao vital de embries de anfbios. (A) Mtodo de Vogt para marcao de clulas especficas da superfcie embrionria com corantes vitais. (B-D) Vistas da superfcie do corante em
embries sucessivos. (E) Embrio de trito dissecado no plano mediano para mostrar clulas
coradas no interior. (Segundo Vogt, 1929.)
ao escudo embrionrio (Trinkaus, 1992). As clulas hipoblsticas do escudo embrionrio convergem e se estendem anteriormente, finalmente estreitando-se ao longo da
linha dorsal mdia do hipoblasto. Esse o cordomesoderma, o primrdio da notocorda
(Figura 6.12B,C). As clulas adjacentes ao cordomesoderma, as clulas adaxiais, so
as precursoras dos somitos mesodrmicos (Figura 6.12D,E). A convergncia e a extenso no epiblasto traz as clulas presuntivas do crebro de todo o epiblasto para a linha
mdia dorsal onde formam a quilha neural. O resto do epiblasto se torna a pele do
peixe. O mapa de destino do peixe-zebra, ento, no to diferente daquele da r ou
outros vertebrados (como logo veremos). Se abrirmos, conceitualmente, uma blstula
de Xenopus no plo vegetal e esticarmos a abertura em um anel marginal, o mapa de
destino resultante se parece muito com aquele do embrio do peixe-zebra quando
metade do vitelo estava coberto pelo blastoderma (Langeland e Kimmel, 1997).
Gastrulao de anfbios
O estudo da gastrulao em anfbios ao mesmo tempo uma das mais antigas e uma
das mais novas reas da embriologia experimental; mesmo considerando que gastrulao de anfbios foi estudada extensamente no sculo passado, a maior parte de
nossas teorias relacionadas aos mecanismos do movimento no desenvolvimento,
foram revisadas na dcada passada. O estudo da gastrulao em anfbios foi complicado pelo fato de existir mais de um tipo de gastrulao nos anfbios. Espcies diferentes empregam diferentes maneiras para atingir o mesmo objetivo (Smith e Malacinski,
1983; Lundmark, 1986). Nos ltimos anos, a pesquisa mais intensa se concentrou em
Xenopus, portanto, daremos nfase ao seu processo de gastrulao.
Movimentos celulares durante a gastrulao de anfbios
As blstulas de anfbios tm as mesmas tarefas que seus companheiros, equinodermos e peixes, ou seja, trazer para dentro aquelas reas destinadas a formar os rgos
endodrmicos, envolver o embrio com clulas capazes de formar o ectoderma e colocar as clulas mesodrmicas no lugar apropriado entre elas. Os movimentos pelos
quais isso conseguido podem ser visualizados pela tcnica de colorao vital. Vogt
(1929) saturou fragmentos de gar com corante, como vermelho neutro ou sulfato de
azul do Nilo, os quais coram mas no danificam as clulas embrionrias. Esses fragmentos corados de gar foram pressionados contra a superfcie da blstula e uma
parte do corante foi transferida para as clulas contatadas (Figura 6.13). Os movimentos de cada grupo de clulas coradas foram acompanhados atravs da gastrulao, e
(D)
(E)
221
222
Figura 6.14
Mapas do destino da blstula da r Xenopus

laevis. Mapas de destino (A) de clulas exteriores e (B) interiores indicam que a maioria
dos derivados mesodrmicos so formados
de clulas interiores. Nessa vista lateral, o
ponto em que se forma o lbio dorsal do
blastporo est indicado por uma flecha. (Segundo Keller, 1976.)
Epiderme
Placa neural
Endoderma
acima do
blastporo
Mesoderma
lateral
Endoderma
abaixo do blastporo
(A) EXTERIOR
Notocorda
Blastporo
Somitos
Blastporo
(B) INTERIOR
os resultados sumariados em mapas de destino. Esses mapas foram recentemente

confirmados e ampliados por tcnicas de microscopia eletrnica de varredura e de
injeo de corantes (Smith e Malacinski, 1983; Lundmark, 1986).
Estudos com corantes vitais de Lvtrup (1975; Landstrom Lvtrup, 1979) e de
Keller (1975, 1976) mostraram que as clulas da blstula de Xenopus tm diferentes
destinos, conforme se encontrem nas camadas profundas ou superficiais do embrio
(Figura 6.14). Em Xenopus, os precursores mesodrmicos existem somente na camada
profunda, enquanto que o ectoderma e endoderma se originam da camada superficial
do embrio. Os precursores da notocorda e outros tecidos mesodrmicos esto localizados abaixo da superfcie, na regio equatorial (marginal) do embrio. Em urodelos
(salamandras, tais como: Triturus e Ambystoma) e em algumas rs sem ser o Xenopus,
os precursores da notocorda e do mesoderma so encontrados em ambas, nas clulas
da superfcie e nas clulas marginais profundas (Purcell e Keller, 1993).
A gastrulao em embries de r iniciada no futuro lado dorsal do embrio, logo
abaixo do equador na regio do crescente cinzento (Figura 6.15). Nesse ponto, as
futuras clulas endodrmicas locais invaginam dando lugar formao de um blastporo
em forma de fenda. Essas clulas modificam sua forma dramaticamente. O corpo principal de cada clula deslocado na direo interna do embrio, mas o contacto com a
superfcie externa mantido por um delgado filamento semelhante a um pescoo
(Figura 6.16). Essas clulas garrafa revestem o arquntero inicial. Assim, como na
gastrulao do ourio-do-mar, uma invaginao de clulas inicia a formao do
arquntero. Entretanto, ao contrrio da gastrulao em ourio-do-mar, a gastrulao
na r no comea no plo vegetativo, mas na zona marginal prxima ao equador da
blstula, onde se encontram os hemisfrios animal e vegetal. Aqui, as clulas
endodrmicas no so to grandes e nem to ricas em vitelo como os blastmeros do
plo vegetativo.
A prxima fase da gastrulao envolve a involuo das clulas da zona marginal,
enquanto as clulas do plo animal sofrem epibolia e convergem no blastporo. Quando
as clulas marginais migratrias chegam ao lbio dorsal do blastporo, elas se dirigem
para dentro e migram ao longo da superfcie interna das lminas celulares externas.
Dessa forma, as clulas que constituem o lbio do blastporo esto constantemente
mudando. As primeiras clulas que compem o lbio dorsal so as clulas garrafa que
invaginam para formar a borda anterior do arquntero. Essas clulas, mais tarde, se
tornam as clulas farngeas do intestino anterior. Enquanto essas primeiras clulas
passam para o interior do embrio, o lbio do blastporo passa a ser composto de
clulas que involuem para dentro do embrio, tornando-se os precursores do
mesoderma da cabea. As prximas clulas involuindo para o embrio, atravs do
lbio dorsal do blastporo, so as clulas cordomesodrmicas. Essas clulas formaro
a notocorda, uma espinha dorsal mesodrmica transitria que essencial para o
incio da diferenciao do sistema nervoso.
medida que as novas clulas migram para dentro do embrio, a blastocele
deslocada para o lado oposto ao lbio dorsal do blastporo. Enquanto isso, o lbio do
blastporo se expande lateral e ventralmente, bem como os processos de formao
das clulas garrafa e involuo continuam no blastporo. O blastporo em expanso
223
Plo animal (AP)

Arquntero
Blastocele
Lbio dorsal
do blastporo
Clulas
superficiais
Clulas
profundas
(A)
Mesoderma
Blastocele
deslocada
(B)
Endoderma
(C)
Plo vegetal
Mesoderma dorsal
Ectoderma
Arquntero
Notocorda
Lbio dorsal
do blastporo
Mesnquima
Ectoderma
Notocorda
Lbio dorsal
do blastporo
Lbio lateral
do blastporo
Lbio lateral
do blastporo
Endoderma
(D)
Ectoderma
Tampo do
vitelo
Lbio ventral
do blastporo
(E)
Endomesoderma
anterior
(F)
Mesoderma
ventral
Figura 6.15
Movimentos celulares durante a gastrulao da r. As sees so cortadas atravs da

metade do embrio, e so posicionadas de modo que o plo vegetal seja inclinado na
direo do observador e ligeiramente para a esquerda. Os principais movimentos celulares esto indicados por flechas, e as clulas superficiais do hemisfrio animal esto
coloridas para permitir o seguimento de sua movimentao. (A,B) Gastrulao precoce.
Clulas de garrafa da margem movem-se para o interior para formar o lbio do blastporo,
e precursores mesodrmicos involuem sob o teto da blastocele. AP marca a posio do
plo animal, que ir mudar medida que a gastrulao prossegue. (C,D) Gastrulao
intermediria. O arquntero se forma e desloca a blastocele, e as clulas migram dos
lbios lateral e ventral do blastporo para dentro do embrio. As clulas do hemisfrio
animal migram em direo da regio vegetal, movendo o blastporo para regio prxima
do plo vegetal. (E,F) Perto do fim da gastrulao, a blastocele obliterada, o embrio
fica envolvido pelo ectoderma, o endoderma foi internalizado, e as clulas mesodrmicas
se posicionaram entre o ectoderma e o endoderma. (Segundo Keller, 1986.)
(A)
(B)
Figura 6.16
Estrutura do lbio do blastporo. (A) Diagrama de clulas de uma seo da gastrulao do embrio da salamandra, mostrando a
extenso das clulas-garrafa do blastporo.
(B) Viso de superfcie de um lbio dorsal
precoce do blastporo de Xenopus. A diferena de tamanho entre os blastmeros animais e vegetais est claramente aparente. (C)
Detalhe da regio onde as clulas do hemisfrio animal esto involuindo atravs do lbio do blastporo. (A segundo Holtfreter,
1943; B e C, micrografias de varredura eletrnica cortesia de C. Phillips.)
(C)
Clulasgarrafa
Blastporo
224
(A)
(B)
Lbio dorsal
i
ii
iii
Obturador
do vitelo
Lbio lateral
Lbio do
blastporo
iv
Lbio ventral
Obturador
do vitelo
Figura 6.17
Epibolia do ectoderma. (A) Movimentos morfogenticos de clulas migrando para o interior do

blastporo e em seguida sob a superfcie. (B) Mudanas na regio ao redor do blastporo
quando se formam sucessivamente os lbios dorsal, lateral e ventral. Quando o lbio ventral
completa o crculo, o endoderma torna-se progressivamente internalizado. Nmeros ii-v correspondem s Figuras 6.15B-E, respectivamente. (B de Balinsky, 1975, cortesia de B. I. Balinsky.)
como um crescente, desenvolve lbios laterais e, finalmente, um lbio ventral sobre

o qual passam clulas precursoras adicionais, mesodrmicas e endodrmicas. Com a
formao do lbio ventral, o blastporo forma uma anel ao redor das grandes clulas
endodrmicas que permanecem expostas na superfcie do plo vegetativo. Esse pedao remanescente de endoderma chamado de rolha ou obturador do vitelo; ele tambm finalmente internalizado (Figura 6.17). Naquele ponto, todos os precursores
endodrmicos foram trazidos para o interior do embrio, o ectoderma envolveu a
superfcie e o mesoderma foi colocado entre eles.
Posicionando o blastporo
Tendo visto os aspectos gerais da gastrulao em anfbios, podemos agora nos ocupar de cada passo em detalhe. A gastrulao no existe como um processo independente na vida do animal. Na verdade, a preparao para a gastrulao j pode ser
visualizada no preciso momento da fuso vulo-espermatozide. O vulo tem uma
polaridade ao longo do eixo animal-vegetal. O destino geral dessas regies pode ser
previsto antes da fecundao. A superfcie do hemisfrio animal se transformar nas
clulas do ectoderma (pele e nervos), o hemisfrio vegetal formar as clulas do intestino e rgos associados (endoderma), e as clulas mesodrmicas sero formadas a
partir do citoplasma interno, ao redor do equador. Assim, as camadas germinativas
podem ser mapeadas no vulo; porm, isso nada diz sobre qual parte do ovo formar
a frente e qual as costas. Os eixos dorsoventral (dorso-frente), ntero-posterior e
direito-esquerdo ainda no foram determinados.
Os eixos dorsoventral e ntero-posterior so especificados pelo deslocamento
do citoplasma do zigoto durante a fecundao. No Captulo 4 discutimos a rotao
do citoplasma cortical relativo ao citoplasma interno no ovo da r. O citoplasma
interno permanece orientado em relao gravidade devido a sua densa acumulao de vitelo, enquanto o citoplasma cortical gira 30o na direo do hemisfrio animal (para cima) em direo ao ponto de entrada do espermatozide (veja Figura 4.34).
Normal
Girada
Porcentagem de embries
Essa rotao faz com que o eixo animal-vegetal da superfcie do ovo se desloque 30o
relativo ao eixo animal-vegetal do citoplasma interno. Dessa maneira, um novo estado de simetria adquirido. Enquanto que o vulo era radialmente simtrico em
relao ao eixo animal-vegetal, o ovo fecundado agora tem um eixo dorsoventral e
bilateralmente simtrico (tem lados direito e esquerdo). O citoplasma interno tambm se move, e microscopia de fluorescncia de embries precoces mostrou que os
padres citoplasmticos das clulas presuntivas dorsais so diferentes daqueles
das clulas presuntivas ventrais (Prancha 7).
Esses movimentos citoplasmticos ativam o citoplasma oposto ao ponto de
entrada do espermatozide, a iniciar a gastrulao (Figura 6.18). O lado pelo qual
entra o espermatozide marca a futura superfcie ventral do embrio; o lado oposto,
onde se inicia a gastrulao, marca o futuro dorso (costas) do embrio (Gerhart et al.,
1981; Vincent et al., 1986). Mesmo que o espermatozide no seja necessrio para
induzir esses movimentos no citoplasma do ovo, ele importante na determinao
da direo dessa rotao. Se um ovo artificialmente estimulado anucleado, a rotao cortical ainda se d no tempo correto. Entretanto, a direo desse movimento
imprevisvel. (De fato, em ovos disprmicos existe uma nica direo de rotao.) O
espermatozide parece fornecer um sinal espacial que orienta a rotao autnoma
do citoplasma, mas a rotao citoplasmtica que essencial para o futuro desenvolvimento. Alm disso, se essa rotao cortical bloqueada, no h o desenvolvimento dorsal, e o embrio morre como uma massa de clulas ventrais (primariamente
intestinais) (Vincent e Gerhart, 1987). A direo do movimento citoplasmtico determina qual lado ser o dorsal e qual ser o ventral.
A direo preferencial fornecida pelo ponto de entrada do espermatozide pode
ser sobrepujada por um redirecionamento mecnico da relao espacial entre os
citoplasmas cortical e subcortical. Quando se impede a rotao do ovo (por imerso
em um polissacardeo que provoca o colapso do espao perivitelino entre o ovo e o
envoltrio de fertilizao) ele pode sofrer uma rotao de 90o de modo que o eixo
animal-vegetal fique horizontal e no vertical e o ponto de entrada do espermatozide voltado para cima (Gerhart et al., 1981; Kirschner e Gerhart, 1981; Cooke, 1986).
Quando ovos fecundados so inclinados dessa maneira por trinta minutos, partindo
da metade do primeiro ciclo de clivagem, o citoplasma gira de tal maneira que quase
todos os embries iniciam a gastrulao no mesmo lado da entrada do espermatozide (veja Figura 6.18).
A discusso precedente sugere que deve ser possvel ter dois stios de iniciao
de gastrulao se houver a combinao de rotao orientada pelo espermatozide
com uma rotao do ovo artificialmente induzida. Black e Gerhart (1985) permitiram a
rotao inicial orientada pelo espermatozide, mas em seguida imobilizaram os ovos
em gelatina e os centrifugaram levemente, de modo que o citoplasma interno se movesse para o ponto de entrada do espermatozide. Quando foi permitido que os ovos
centrifugados se desenvolvessem em gua normal, apareceram dois stios de gastrulao, levando ao aparecimento de larvas gmeas ligadas (Figura 6.19). A hiptese de
Black e Gerhart (1986) que tal produo de gmeos causada pela formao de duas
reas de interao: um eixo se forma onde a rotao cortical normal deu origem s
interaes citoplasmticas no plo vegetal da clula; o outro eixo se forma onde o
citoplasma dirigido pela centrifugao interage com os componentes do plo vegetal.
Gmeos tambm podem ser produzidos em gravidade normal, colocando o lado do
ovo onde penetra o espermatozide voltado para cima, aps remover o envoltrio de
fertilizao (Gerhart et al., 1981).
A possibilidade de se obter dois lbios funcionais dos blastporos tambm sugere
que no h nada especial a respeito do crescente cinzento, onde se observa pela
primeira vez o incio da gastrulao. Na verdade, os fatores indutores da gastrulao
parecem ser criados pelas interaes dos citoplasmas animal e vegetal, interaes
essas que, provavelmente, ativam algum componente do citoplasma vegetal. Gimlich
e Gerhart (1984) realizaram uma srie de experimentos de transplante que confirmaram
225
ngulo do lbio do blastporo

do ponto de entrada de espermatozide
Figura 6.18
Relao entre o ponto da entrada do espermatozide e o lbio dorsal do blastporo em

ovos de r normais e naqueles que sofreram
rotao. Ovos de Xenopus foram fertilizados,
desgeleificados e colocados em Ficoll para desidratar o espao perivitelino. A entrada do
espermatozide foi marcada com corante. Os
ovos sofreram rotao, foram inclinados em
900, com o ponto de entrada do espermatozide virado para cima, 50-80 minutos aps
a fertilizao. (Segundo Gerhart et al., 1981.)
226
(A)
(B)
Figura 6.19
Blastporos gmeos produzidos pela rotao

de ovos desgeleificados de Xenopus com o lado
ventral para cima (ponto de entrada do espermatozide), no momento da primeira clivagem. (A) Dois blastporos so instrudos para
formar: o original (oposto ao ponto de entrada
do espermatozide) e o novo, criado pelo deslocamento de material citoplasmtico. (B) Esses ovos desenvolvem dois eixos completos,
que formam girinos gmeos, ligados ventralmente. (Cortesia de J. Gerhart.)
a hiptese de que os fatores que iniciam a gastrulao originalmente esto no citoplasma profundo das clulas vegetativas dorsais, e no no crescente cinzento. Eles
demonstraram que em um embrio de Xenopus, no estgio de 64 clulas, os trs
blastmeros vegetais mais dorsais so capazes de induzir a formao do lbio dorsal
do blastporo e de um eixo dorsal completo em embries hospedeiros irradiados com
luz ultravioleta (que, de outra maneira, no seriam capazes de iniciar a gastrulao;
Figura 6.20A). Alm disso, esses trs blastmeros, situados abaixo da regio do
prospectivo lbio dorsal, podem tambm induzir uma invaginao secundria e um
eixo quando transplantados para o lado ventral de um embrio normal, no estgio de
64 clulas, no irradiado (Figura 6.20B). Esse pequeno grupo de blastmeros vegetais
permite a invaginao de clulas marginais adjacentes e a formao do eixo mesodrmico dorsal do embrio. Holowacz e Elinson (1993) observaram que o citoplasma
cortical, das clulas vegetativas dorsais do embrio de Xenopus, no estgio de 64
clulas, era capaz de induzir a formao de eixos secundrios quando injetado em
clulas vegetativas ventrais. Nem o citoplasma cortical de clulas animais e nem o
citoplasma profundo das clulas ventrais puderam induzir esses eixos.
Parece, ento, que os rearranjos internos do citoplasma, provavelmente orientados pela entrada do espermatozide, so responsveis pela distribuio assimtrica
de fatores subcelulares. Essa assimetria cria uma distino dorsoventral no ovo que,
em ltima instncia, dirige o posicionamento do blastporo acima de um conjunto de
blastmeros vegetais e oposto ao ponto de entrada do espermatozide. As molculas
que podem estar envolvidas na formao do stio vegetal de iniciao da gastrulao
(o centro de Nieuwkoop) sero discutidas no Captulo 15.
Movimentos celulares e a construo do arquntero
O INCIO DA GASTRULAO. A gastrulao em anfbios iniciada quando um
grupo de clulas endodrmicas marginais, na superfcie dorsal da blstula, penetra no

interior do embrio. As superfcies externas (apicais) dessas clulas se contraem dramaticamente, enquanto seus terminais internos (basais) se expandem. O comprimento
apical-basal dessas clulas aumenta bastante, originando a forma caracterstica de
garrafa. Na salamandra, essas clulas parecem ter um papel ativo nos movimentos
iniciais da gastrulao. Johannes Holtfreter (1943, 1944) observou que as clulas garrafa de gstrulas precoces de salamandra poderiam aderir s lamnulas de vidro e guiar
o movimento das clulas ligadas a elas. At mais convincentes foram os experimentos
(A)
Ponto de
entrada do
espermatozide
DOADOR
NORMAL
227
(B)
RECEPTOR
IRRADIADO POR UV
Ponto de entrada
do espermatozide
DOADOR
NORMAL
RECEPTOR
NORMAL
Ponto de
entrada do
espermatozide
UV
Sem transplante
Transplante
Pea embrionria
ventral carente de
eixo corporal
Novo local de
gastrulao e forma
de eixo corporal
Figura 6.20
de recombinao de Holtfreter, nos quais clulas da zona marginal dorsal (que dariam
origem ao lbio dorsal do blastporo) foram combinadas com o tecido endodrmico
interno. Quando as clulas da zona marginal dorsal foram removidas e colocadas no
prospectivo tecido endodrmico interno, as clulas precursoras do blastporo formaram clulas garrafas e se aprofundaram abaixo da superfcie do endoderma interno
(Figura 6.21). Mais ainda, ao se aprofundarem, criaram uma depresso reminiscente do
blastporo precoce. Sendo assim, Holtfreter sugeriu que a habilidade de invaginar
com profundidade para dentro do endoderma uma propriedade inata das clulas da
zona marginal dorsal.
Implante
Clulas
endodrmicas
Sulco no blastporo
Figura 6.21
Um implante de clulas de anfbios da regio do lbio dorsal do blastporo submerge para

dentro de uma camada de clulas endodrmicas e forma um sulco do blastporo. (Segundo
Holtfreter, 1944.)
Experimentos de transplante demonstrando

que as clulas vegetativas, abaixo das regies
do futuro lbio dorsal do blastporo, so responsveis pelo incio da gastrulao. (A) Salvamento de embries irradiados pelo transplante de blastmeros do segmento mais dorsal (cor) de um embrio, no estgio de 64 clulas, para uma cavidade criada pela remoo de
um nmero semelhante de clulas vegetais. Um
zigoto irradiado sem tal transplante no sofre
gastrulao normal. (B) Formao de um novo
local para gastrulao e eixo corporal pelo transplante das clulas vegetativas, mais dorsais,
de um embrio de 64 clulas, para regio vegetal mais ventral, de outro embrio de 64 clulas. (Segundo Gimlich e Gerhart, 1984.)
228
A situao no embrio da r um pouco diferente. R. E. Keller e seus orientados

(Keller, 1981; Hardin e Keller, 1988) mostraram que apesar das clulas garrafa terem um
papel na iniciao da involuo da zona marginal ao adquirem a forma de garrafa, elas
no so essenciais para a continuao da gastrulao. A forma peculiar de garrafa
dessas clulas necessria para iniciar a gastrulao; a constrio das clulas que
puxa a zona marginal na direo vegetativa, enquanto empurra as clulas vegetativas
para dentro (Figura 6.22 A,B). O estiramento da zona marginal permite a expanso do
ectoderma em direo ao plo vegetal e o envolvimento do embrio; empurrar as
clulas vegetais permite a esses precursores da mesoderme anterior contatar o lado de
(A)
(B)
(C)
Clulas
marginais
profundas
(D)
Endoderma
Clulas
garrafa
Intercalao
radial de clulas
profundas
Clulas
marginais
superficiais
Futuro
mesoderma
posterior
IMZ
profunda
Clulasgarrafa
Lbio dorsal
do blastporo
Futuro
mesoderma anterior
Blastporo
Morfologia de
mudanas das
clulas profundas
O lbio se
extende lateral
e vegetalmente
Clulas garrafa
(E)
Precursores do
mesoderma ceflico do
endoderma da faringe
(F)
Ectoderma
Precursores do
mesoderma ceflico do
endoderma da faringe
Plo animal
Clulas garrafa
re-espalhadas
Blastocele
IMZ superficial
movendo-se em
direo do plo animal
Endoderma
Intercalao
medianolateral
Figure 6.22
Modelo integrativo dos movimentos celulares durante a gastrulao precoce de Xenopus.

(A) Estrutura da zona marginal involutiva (IMZ) antes da gastrulao. A IMZ profunda
consiste do futuro mesoderma anterior e do futuro mesoderma posterior. (B) Constrio
das clulas garrafa arrasta o futuro mesoderma anterior para cima e gira a IMZ para fora. (C)
Os precursores do mesoderma anterior conduzem o movimento do mesoderma para dentro
da blastocele. (D) Ocorre intercalao radial (interdigitao) das clulas profundas da IMZ.
O mesoderma move-se na direo ao plo animal, arrastando as clulas superficiais e as
clulas garrafa por involuo. (E) medida que continua a gastrulao, as clulas marginais
profundas se achatam, e as clulas previamente superficiais formam a parede do arquntero.
(F) Intercalao como em (D), olhando da superfcie dorsal para baixo em direo do lbio
dorsal do blastporo. Na NIMZ (zona marginal no involutiva) e parte superior da IMZ,
clulas profundas (mesodrmicas) esto se intercalando radialmente, configurando uma fita
estreita de clulas achatadas. Esse estreitamento de vrias camadas em poucas outras causa
extenso na direo lbio do blastporo. Imediatamente acima do lbio, intercalao
medianolateral das clulas produz tenses que arrastam a IMZ por cima do lbio, a intercalao medianolateral continua, alongando e estreitando o mesoderma axial. (Segundo Hardin
e Keller, 1988; Wilson e Keller, 1991.)
baixo dos precursores mesodrmicos posteriores e comear a migrar no teto da blastocele (Hardin e Keller, 1988).
Entretanto, aps comear esses movimentos, as clulas garrafa do Xenopus no
so mais necessrias. Quando as clulas garrafa so removidas aps sua formao, a
involuo, a formao do blastporo e o fechamento continuam. O fator principal no
movimento das clulas para dentro do embrio parece ser a involuo das clulas
marginais subsuperficiais mais do que as superficiais. Parece que essas clulas
subsuperficiais ou clulas da zona marginal involutiva profunda se viram para dentro
e migram em direo ao plo animal, ao longo das superfcies internas das clulas
profundas remanescentes (Figura 6.22C-E), e que a camada superficial forma o revestimento do arquntero unicamente porque ela est ligada s clulas profundas, que
esto migrando ativamente. O movimento das clulas garrafa mais profundamente
dentro do embrio depende da sua ligao s clulas profundas subjacentes. A remoo das clulas garrafa no afeta a involuo das clulas profundas ou das clulas
superficiais da zona marginal para dentro do embrio, mas a remoo das clulas
marginais dorsais profundas e sua substituio por clulas do hemisfrio animal (que
normalmente no sofrem involuo) interrompe a formao do arquntero.
A FORMAO DO MESODERMA DURANTE A GASTRULAO DE XENOPUS
A Figura 6.22 (D-F) esboa o comportamento dessas clulas da zona marginal

involutiva (IMZ) em sucessivos estgios da gastrulao em Xenopus (Keller e
Schoenwolf, 1977; Keller, 1980, 1981; Hardin e Keller, 1988). Pouco antes de sua
involuo atravs do lbio do blastporo, as vrias camadas de clulas IMZ profundas se intercalam radialmente para formar uma fina e larga camada. Essa intercalao
estende ainda mais a IMZ vegetalmente. Ao mesmo tempo, as clulas superficiais se
espalham se dividindo e achatando. Quando as clulas profundas atingem o lbio
do blastporo, elas involuem para dentro do embrio e iniciam um segundo tipo de
intercalao. Essa intercalao causa uma extenso convergente ao longo do eixo
mediolateral (Figura 6.22F) que integra vrias correntes mesodrmicas para formar
um longa e estreita banda. A parte anterior dessa banda migra em direo ao hemisfrio animal. Assim a corrente mesodrmica continua a migrar em direo ao plo
animal e a camada superposta de clulas superficiais (incluindo as clulas garrafa)
so passivamente puxadas em direo ao hemisfrio animal, formando o teto do
arquntero (Figuras 6.15 e 6.22E). Portanto, ainda que as clulas garrafa possam ser
responsveis pela indentao inicial, a fora motivadora para essa involuo parece
vir da camada profunda de clulas marginais. Mais ainda, a intercalao radial e
mediolateral da camada de clulas profundas parece ser responsvel pelo movimento contnuo do mesoderma para dentro do embrio.
Migrao do mesoderma involutivo
Com o progresso dos movimentos mesodrmicos, a expanso convergente tambm
continua a estreitar e encompridar a zona marginal involutiva. A IMZ contm o
prospectivo teto endodrmico do arquntero na sua camada superficial (IMZS) e as
prospectivas clulas mesodrmicas, incluindo aquelas da notocorda na sua regio
profunda (IMZD). Durante o tero mdio da gastrulao, a lmina em expanso do
mesoderma converge em direo linha mediana do embrio. Esse processo dirigido
pela contnua intercalao mediolateral de clulas ao longo do eixo ntero-posterior,
estreitando ainda mais a banda. No fim da gastrulao, a notocorda localizada centralmente se separa do mesoderma somtico em ambos os lados, e as clulas sofrem
elongao separadamente (Wilson e Keller, 1991). Essa extenso convergente do
mesoderma parece ser autnoma, porque os movimentos dessas clulas ocorrem mesmo se essa regio do embrio isolada do resto (Keller, 1986).
Durante a gastrulao, o plo animal e as clulas da zona marginal no-involutiva
(NIMZ) expandem-se por epibolia cobrindo todo o embrio. A poro dorsal das clulas marginais no-involutivas expande-se mais rapidamente que a poro ventral,
229
230
assim, causando o movimento dos lbios do blastporo em direo ao lado ventral.

Enquanto essas clulas mesodrmicas, entrando atravs do lbio dorsal do blastporo,
do origem ao mesoderma dorsal axial, o resto do mesoderma do corpo (o qual forma
o corao, os rins, sangue, ossos e partes de vrios outros rgos) entra atravs dos
lbios ventral e lateral para criar o manto mesodrmico. O endoderma derivado das
clulas da IMZS que formam o revestimento do teto do arquntero e das clulas
vegetativas sub-blastoporais que se tornam o assoalho do arquntero (Keller, 1986).
&
Especulaes
Reguladores moleculares do desenvolvimento:

Fibronectinas e as vias da migrao mesodrmica
omo que as clulas involutivas

so informadas para aonde ir, uma
vez que se encontram no interior
do embrio? Na salamandra, parece que
os precursores mesodrmicos involutivos
migram em direo ao plo animal em uma
rede de fibronectina secretada pelas clulas do teto da blastocele. Pouco antes da
gastrulao, o ectoderma presuntivo do
teto da blastocele secreta uma matriz extracelular que contm fibrilas de fibronec-
Figura 6.23
Fibronectinas e gastrulao de anfbio. (A) Imunofluorescncia revela uma rede fibrilar de

fibronectina na superfcie basal de prospectivas clulas ectodrmicas forrando o teto da blastocele do embrio da salamandra. (B-E) Micrografias ao microscpio eletrnico de varredura de
gastrulao normal (B,C) e anormal (D,E) da salamandra. A blastocele em (D) e (E) foi injetada
com o fragmento ligante clula de fibronectina, enquanto a blstula gastrulando normalmente
foi injetada com a soluo controle. (B) Seo durante gastrulao intermediria. (C) O obturador do vitelo ao fim da gastrulao. (D,E) Os estgios finais da gastrulao detida, onde os
precursores mesodrmicos, tendo fixado fibronectina sinttica, no conseguem reconhecer a
via de migrao normal forrada de fibronectina. O arquntero no se forma, e os precursores noinvoludos do mesoderma permanecem na superfcie. (ar, arquntero; bc, blastocele; bl, blastporo;
ec, ectoderma; en, endoderma; mes, mesoderma; yp, obturador do vitelo.) (A de Boucaut et al.,
1985; B-E de Boucaut et al., 1984, cortesia de J. C. Boucaut e J.-P. Thiery.)
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
tina (Figura 6.23A; Boucaut et al., 1984;

Nakatsuji et al., 1985). O mesoderma
involutivo parece migrar nessas fibras de
fibronectina. Isso foi confirmado pela sntese qumica de uma falsa fibronectina
que pode competir com a genuna da matriz extracelular. Clulas se ligam a uma
certa regio da protena fibronectina que
contm uma seqncia de trs aminocidos (Arg-Gly-Asp; RGD). Boucaut e colaboradores injetaram grandes quantidades de um pequeno peptdio contendo
essa seqncia na blastocele de embries de salamandra, pouco antes do incio
da gastrulao. Se a fibronectina fosse essencial para a migrao celular, ento as
clulas ligadas a esse fragmento solvel
de peptdio, em lugar da fibronectina real
ligante de clulas, deveriam parar. Impossibilitadas de encontrar sua estrada, as
clulas mesodrmicas deveriam cessar sua
involuo. Isso precisamente o que
ocorreu (Figura 6.23B-E). No foram vistas clulas migratrias ao longo do lado
de baixo do ectoderma. Em vez disso, os
precursores mesodrmicos permaneceram
fora do embrio, formando uma massa celular convoluta. Outros pequenos peptdios sintticos (incluindo outros fragmentos da molcula de fibronectina) no impediram a migrao.
Considera-se que as clulas mesodrmicas aderem fibronectina atravs da
v1 protena integrina (Alfandari et al.,
1995). A migrao mesodrmica pode ser
tambm interrompida pela microinjeo de
anticorpos contra fibronectina ou contra
a subunidade 1 de integrina que funciona como parte do receptor de fibronectina (DArribre et al., 1988, 1990). Alfandari
e colegas (1995) mostraram que logo aps
a fecundao, a subunidade v da integrina progressivamente perdida das membranas das clulas do blastmero. Entretanto, pouco antes e durante a gastrulao, a subunidade v expressa na superfcie das clulas mesodrmicas migratrias. Parece ento, que a sntese desse
receptor de fibronectina pode sinalizar o
tempo para o mesoderma comear e continuar a migrao.
A matriz extracelular contendo fibronectina, permite a ligao das clulas
mesodrmicas rede de fibronectina e,
alm disso, parece fornecer sinais para a
direo da migrao celular. Shi e colegas (1989) removeram os tetos da blasto-
cele de gstrulas precoces de salamandra

e os depositaram em recipientes de plstico com suas matrizes extracelulares tocando o plstico (Figura 6.24A). O eixo do
blastporo ao plo animal foi marcado e,
aps 2 horas, o explante foi removido, deixando sua matriz extracelular. Um explante
menor da zona marginal dorsal foi removido de outra gstrula precoce e colocado
sobre a matriz com seu prprio eixo
blastporo-plo animal, perpendicular
quele da matriz. Seria possvel s clulas
desse explante migrarem na matriz, e se
migrassem o fariam em uma direo particular? Foi verificado que as clulas migraram, e que a migrao podia ser inibida
por anticorpos que impedem que a clula
(A)
Plo animal
231
reconhea a fibronectina. Alm disso, as

clulas das DMZ no migraram ao acaso,
mas migraram em direo ao plo animal
da matriz extracelular que havia sido absorvida no plstico (Figura 6.24B).
Em Xenopus, a extenso convergente
empurra as clulas migratrias para cima,
em direo ao plo animal. Entretanto, a
fibronectina parece delinear os limites
dentro dos quais esses movimentos podem ocorrer. A fibronectina das gstrulas
de Xenopus no forma grades complexas,
mas se organiza em pequenos aglomerados fibrilares. Se a fibronectina for sintetizada mas no organizada nessas fibrilas,
as clulas mesodrmicas dorsais vo aderir superfcie basal do ectoderma
presuntivo, mas no migraro (Winklbauer e Nagel, 1991). As fibrilas de fibronectina so necessrias para que as clulas
mesodrmicas da cabea se achatem e estendam largos processos (lameliformes)
na direo da migrao (Winklbauer et al.,
1991; Winklbauer e Keller, 1996). A importncia dessas fibrilas de fibronectina
tambm vista em hbridos interespecficos
que se detm na gastrulao. Delarue e
colegas (1985) mostraram que certos hbridos inviveis, entre duas espcies de
sapos, morrem durante a gastrulao porque no secretam essas fibrilas de fibronectina. Parece ento, que a matriz extracelular do teto da blastocele, e particularmente seu componente fibronectina, importante na migrao das clulas mesodrmicas durante a gastrulao em anfbios.
Figura 6.24
(B)
AP
A direo da migrao das clulas da zona marginal dorsal (DMZ) depende da orientao da
matriz extracelular do teto da blastocele. (A)
Explantes do teto da blastocele do blastforo
(BP) para o plo animal (AP) foram dissecados de embries de salamandra em estgio precoce de gastrulao e colocados em placas plsticas. A matriz extracelular aderiu placa, e o
tecido foi ento removido. Um explante menor de uma gstrula precoce, contendo clulas
da DMZ, foi ento colocado sobre essa matriz, com o seu prprio eixo perpendicular
aquele da matriz. (B) Clulas da DMZ do
explante migraram para o plo animal da matriz. A linha pontilhada indica a borda original
do explante, e a flecha branca representa seu
eixo blastporo-plo animal. (de Shi et al.,
1989, fotografia cortesia dos autores.)
232
Epibolia do ectoderma
Enquanto a involuo est ocorrendo no lbios do blastporo, os precursores
ectodrmicos esto se expandindo sobre todo o embrio. Keller (1980) e Keller e
Schoenwolf (1977) usaram microscopia eletrnica de varredura para observar as modificaes tanto nas clulas superficiais como nas clulas profundas das regies
animal e marginal. O mecanismo principal de epibolia na gastrulao do Xenopus
parece ser um aumento no nmero de clulas (atravs de diviso), acoplado a uma
concomitante integrao de vrias camadas profundas em uma s (Figura 6.25). Durante a gastrulao precoce, trs rodadas de diviso celular aumentam o nmero de
camadas de clulas profundas no hemisfrio animal. Ao mesmo tempo, completa
integrao de numerosas clulas profundas em uma camada tambm ocorre. A camada
mais superficial se expande por diviso e achatamento celular. O espalhamento de
clulas nas zonas marginais dorsal e ventral, se d provavelmente pelo mesmo mecanismo, ainda que mudanas na forma celular parecem ter um papel mais importante do
que no hemisfrio animal. O resultado dessas expanses a epibolia das clulas
superficiais e profundas do plo animal e regies marginais no involutivas sobre a
superfcie do embrio (Keller e Danilchik, 1988). A maior parte das clulas da regio
marginal, como mencionado anteriormente, involuem para se juntar corrente de clulas mesodrmicas dentro do embrio.
Gastrulao no Xenopus uma orquestrao de vrios eventos distintos. A primeira indicao de gastrulao envolve a invaginao local das clulas garrafa do
endoderma na zona marginal, em tempo e lugar precisamente definidos. Em seguida, a
involuo das clulas marginais atravs do lbio do blastporo, comea a formao
do arquntero. Essas clulas involutivas, na margem anterior do manto mesodrmico,
migram ao longo da superfcie interna do teto do blastporo, e o prospectivo cordomesoderma atrs delas, se estreita e se alonga posteriormente, por extenso convergente, na poro dorsal do embrio. Ao mesmo tempo, as clulas precursoras ectodrmicas epibolizam vegetalmente por diviso celular e pela integrao de camadas celulares previamente independentes. O resultado desses movimentos celulares o posicionamento adequado das trs camadas germinativas em preparao para sua diferenciao em rgos do corpo. Estudos moleculares (a serem discutidos no Captulo 15)
esto comeando a nos dar pistas relacionadas a mecanismos pelos quais as clulas
so informadas de como comear e finalizar essas migraes
Estgio
Figura 6.25
Micrografias eletrnicas de varredura do teto da blastocele de Xenopus, mostrando as mudanas

na forma e arranjo das clulas. Os estgios 8 e 9 so de blstula; estgios 10-11.5 representam
gstrulas progressivamente mais avanadas. (de Keller, 1980, cortesias de R. E. Keller.)
233
Gastrulao em aves
Generalidades sobre gastrulao em aves
A clivagem em embrio de aves cria um blastodisco acima de um enorme volume de
vitelo. Essa massa subjacente e inerte de vitelo impe vrias restries aos movimentos celulares, e a gastrulao em aves parece, primeira vista, ser muito diferente
daquela do ourio-do-mar ou da r. Realmente, logo veremos que existem numerosas
similaridades entre a gastrulao em aves e as gastrulaes que j estudamos. Alm
disso, veremos que embries de mamferos - que no tem vitelo- retm movimentos de
gastrulao muito parecidos com aqueles dos embries de aves e rpteis.
FORMAO DO HIPOBLASTO E EPIBLASTO. As clulas centrais do blastodisco
das aves so separadas do vitelo por uma cavidade subgerminativa e parecem mais
claras - por isso, o centro do blastodisco chamado de rea pelcida. Em contraste, as
clulas da margem da rea pelcida parecem opacas, devido a seu contato com o
vitelo, formam a rea opaca (Figura 6.26). Enquanto a maioria das clulas permanece na
superfcie formando o epiblasto, certas clulas migram individualmente para a cavidade subgerminativa, para formar as ilhas de polinvaginao (hipoblasto primrio), um
arquiplago de aglomerados desconectados contendo cada um de 5 a 20 clulas (veja
Figuras 6.26 e 5.33). Pouco tempo depois, uma lmina de clulas da margem posterior
do blastoderma (crescente de Koller e a zona marginal atrs dele) migra em direo
anterior para se juntar s ilhas de polinvaginao e formar o hipoblasto secundrio
(Eyal-Giladi et al.,1992). O blastoderma de duas camadas (epiblasto e hipoblasto) tem
as camadas unidas na margem da rea opaca, e o espao entre as camadas uma
blastocele. Assim, a estrutura do blastodisco das aves no diferente da blstula de
anfbios ou equinodermos.
Blastoderma
Epiblasto
Anterior
Zona marginal
posterior
rea opaca
Espao subgerminativo
Vitelo
Clulas do hipoblasto
delaminando-se do epiblasto
rea pelcida
Figura 6.26
rea opaca
rea opaca
Epiblasto
Blastocele
Clulas do hipoblasto migrando de

clulas profundas da regio posterior
Formao do blastoderma de duas camadas

do embrio da galinha. As primeiras clulas
hipoblsticas delaminam individualmente,
para formar ilhas de clulas sob o epiblasto.
Clulas da margem posterior (clulas de foice
de Koller e clulas marginais posteriores) produzem uma populao de clulas que migra
abaixo do blastodisco e incorpora as ilhas
poli-invaginadas. Essa camada inferior tornase o hipoblasto. A camada superior o
epiblasto. medida que o hipoblasto se move
no sentido anterior, clulas do epiblasto se
agregam na regio anterior foice de Koller
para formar a linha primitiva.
234
O mapa de destino para o embrio de aves restrito ao epiblasto. Ou seja, o

hipoblasto no contribui com clulas para o embrio em desenvolvimento (Rosenquist,
1966, 1972). Em lugar disso, as clulas do hipoblasto formam pores da membrana
externa, especialmente o saco vitelnico e o pednculo, que liga a massa do vitelo ao
tubo digestivo endodrmico. Todas as trs camadas germinativas do embrio propriamente dito (mais uma quantidade considervel de membrana extra-embrionria) so
formadas das clulas epiblsticas. Mapas de destino de epiblasto de galinha esto
representados na Figura 6.27. Esses mapas integram vrios tipos de mapeamento.
Corantes vitais e transplantes de clulas radioativas foram teis no mapeamento de
tendncias prioritrias, pois com esses mtodos se marcam grupos de clulas que se
difundem ao prosseguir o desenvolvimento. Transplantar clulas marcadas geneticamente, tais como clulas de codorna colocadas em embries de galinha, contornou o
problema de difuso, mas ainda assim marcava aglomerados relativamente grandes de
clulas. Recentemente, o uso de vrus ou corantes fluorescentes permitiu aos pesquisadores acompanhar clulas individuais atravs do desenvolvimento (Schoenwolf,
1991). Como pode ser visto nessas figuras, existe uma significante extenso convergente enquanto a linha primitiva progride anteriormente. Mesmo que clulas em uma
regio especfica da gstrula tendam a se transformarem em tipos especficos de clulas, elas ainda podem produzir diferentes tipos celulares se transplantadas a uma outra
regio do embrio.
FORMAO DA LINHA PRIMITIVA. A estrutura majoritria caracterstica da gas-
trulao em aves, rpteis e mamferos a linha primitiva. Essa linha visvel inicialmente como um espessamento de uma camada de clulas do epiblasto, na regio
posterior do embrio, imediatamente anterior ao crescente de Koller (Figura 6.27A).
Esse espessamento causado pelo ingresso de clulas mesodrmicas do epiblasto
para dentro da blastocele, e pela migrao de clulas da regio lateral do epiblasto
posterior em direo ao centro (Figura 6.27B; Vakaet, 1984; Bellairs, 1986; Eyal-Giladi
et al., 1992). medida que a rea espessada se estreita, ela se move anteriormente e
se contrai para formar a linha primitiva definitiva. Essa linha se estende em 60-75%
do comprimento da rea pelcida e marca o eixo ntero-posterior do embrio (Figura
6.27C-E). Enquanto as clulas convergem para formar a linha primitiva, se forma uma
depresso na linha. Essa depresso chamada fenda primitiva, e serve como um
blastporo, atravs do qual as clulas migratrias passam para a blastocele. Assim,
a fenda primitiva anloga ao blastporo de anfbios. Na ponta anterior da linha
primitiva h um espessamento regional de clulas chamado ndulo primitivo ou
ndulo de Hensen. O centro desse ndulo contm uma depresso em forma de funil
(algumas vezes chamada cova primitiva), atravs da qual as clulas passam para a
blastocele. O ndulo de Hensen o equivalente funcional do lbio dorsal do
blastporo de anfbios. [gast1.html]
To logo se forma a linha primitiva, as clulas do epiblasto comeam a migrar sobre
os lbios dessa e para dentro da blastocele (Figura 6.28). De maneira similar ao
blastporo de anfbios, a linha primitiva tem uma populao celular se modificando
constantemente. Clulas migrando atravs do ndulo de Hensen passam para dentro
da blastocele, migram anteriormente formando o intestino anterior, o mesoderma da
cabea e a notocorda; clulas passando atravs das pores laterais da linha primitiva
do origem maioria dos tecidos endodrmicos e mesodrmicos (Schoenwolf et al.,
1992). Em contraste com o mesoderma de Xenopus, o qual migra como lminas de
clulas para a blastocele, clulas entrando no embrio de aves o fazem individualmente. Em lugar de formar uma lmina de clulas fortemente organizadas, a populao
ingressante cria um mesnquima fracamente conectado. Alm disso, no se forma um
verdadeiro arquntero na gstrula de aves.
Enquanto as clulas entram na linha primitiva, essa se estende na direo da futura
regio da cabea. Ao mesmo tempo, as clulas do hipoblasto secundrio esto continuando a migrar da margem posterior do blastoderma, na direo anterior. A elongao
(A)
Anterior
(B)
(I)
Ectoderma
rea opaca
Posterior
(C)
Endoderma
Mesoderma
Axial
Paraxial (vrtebras, rins, musculatura)
rea pelcida
rea de
engrossamento
do blastoderma
235
Placa lateral (incluindo o corao)

Extra-embrionria
(D)
(J)
rea opaca
rea
pelcida
Figura 6.27
Linha primitiva
tomando forma
(E)
(F)
Anterior
Ndulo
de Hensen
(K)
Processo
ceflico
rea
pelcida
rea
opaca
Ndulo
de Hensen
Sulco primitivo
(G)
Borda anterior
do mesoderma
Ectoderma da
dobra ceflica
Dobra neural
(H)
Dobra ceflica
Intestino
anterior
Somito
Notocorda
Ndulo
de Hensen
Placa
segmental
Linha primitiva
da linha primitiva parece ser coincidente com a migrao em direo anterior dessas
clulas do hipoblasto secundrio.
MIGRAO ATRAVS DA LINHA PRIMITIVA: FORMAO DO ENDODERMA E
MESODERMA. As primeiras clulas a migrarem atravs da linha primitiva so
aquelas destinadas a se transformarem no intestino anterior. Essa situao, novamente, similar quela vista nos anfbios. Uma vez dentro da blastocele, essas clulas
migram anteriormente e finalmente deslocam as clulas do hipoblasto na poro anterior do embrio. As clulas hipoblsticas esto confinadas a uma regio na poro
anterior da rea pelcida. Essa regio, o crescente germinativo, no forma estruturas
Movimentos celulares da linha primitiva do

embrio de galinha. (A-E) Viso dorsal da formao e alongamento da linha primitiva. O blastoderma visto em (A) 3-4 horas, (B) 5-6
horas, (C) 7-8 horas, (D) 10-12 horas e (E) 1516 horas. O movimento precoce das clulas
epiblsticas HNK-1+ mostrado por flechas.
(F-H) A formao da notocorda e somitos
mesodrmicos medida que a linha primitiva
regride mostrada em (F) 19-22 horas, (G)
23-24 horas e (H) no estgio de quatro somitos.
(I-K) Mapas do destino do epiblasto em dois
estgios da gastrulao. Extenso convergente
mostrada na linha mediana, e as clulas precursoras endodrmicas ingressam mais rapidamente que as clulas precursoras mesodrmicas. (Adaptado de vrias fontes, especialmente Spratt, 1946, e Balinsky, 1975; I-K segundo Vakaet, 1985.)
236
Figura 6.28
(A)
Migrao de clulas endodrmicas e mesodrmicas atravs da linha primitiva. (A) Micrografia eletrnica de varredura mostra clulas
epiblsticas passando para a blastocele, estendendo seus terminais apicais para transformarem em clulas garrafa. (B) Estereograma
de um embrio gastrulante de galinha, mostrando a relao da linha primitiva, das clulas
migratrias e das duas camadas originais do
blastoderma. A camada inferior se transforma
em um mosaico de clulas hipoblsticas e
endodrmicas; porm, as clulas hipoblsticas
finalmente se separam para formar uma camada abaixo daquela do endoderma e contribuem
para o saco vitelnico. (A de Solursh e Revel,
1978, cortesia de M. Solursh; B segundo
Balinsky, 1975.)
(B)
Ndulo de Hensen
Linha primitiva
Epiblasto
Blastocele
Hipoblasto
Endoderma
Clulas migratrias
(mesnquima)
embrionrias, mas contm os precursores das clulas germinativas, que mais tarde
migram atravs dos vasos sangneos at as gnadas. As prximas clulas que entram na blastocele atravs do ndulo de Hensen (e o primeiro quarto anterior da linha
primitiva) tambm se movem anteriormente, mas no se movem to ventralmente como
as clulas presuntivas endodrmicas do intestino anterior. Essas clulas permanecem
entre o endoderma e o epiblasto para formar as clulas do mesoderma da cabea e do
cordomesoderma (notocorda) (veja Psychoyos e Stern, 1996). Essas clulas de ingresso precoce se moveram todas anteriormente, empurrando para cima a regio medianoanterior do hipoblasto, a fim de formar o processo ceflico (Figura 6.29). Enquanto
isso, as clulas continuam a migrar para dentro, atravs da poro lateral da linha
primitiva. Quando entram na blastocele, essas clulas se separam em duas correntes.
Uma corrente se move mais profundamente e encontra o hipoblasto em sua regio
mediana, deslocando as clulas hipoblsticas para os lados. Essas clulas de movimento profundo do origem a todos os rgos endodrmicos do embrio, assim como
a maioria das membranas extra-embrionrias (o hipoblasto forma o restante). A segunda corrente migratria se espalha atravs da blastocele como uma camada frouxa, mais
ou menos a meio caminho entre o hipoblasto e o epiblasto. Essa camada origina as
pores mesodrmicas do embrio e das membranas extra-embrionrias. Aps 22 horas de incubao, a maior parte das clulas presuntivas endodrmicas esto no interior do embrio, apesar das clulas presuntivas mesodrmicas continuarem a migrar
para o interior por um tempo mais longo.
Endoderma
farngeo
Ilhas
de sangue
Processo ceflico
(notocorda anterior)
237
Dobra
ceflica
Intestino anterior
Sulco neural
Ndulo de
Hensen
Somito
Linha primitiva
rea
pelcida
Linha primitiva
rea opaca
(B)
(C)
Linha de
referncia
Regr
es
da li s o
p r i m nha
itiva
Alongamento da notocorda
(A)
Borda posterior da rea pelcida
Horas
(D)
(E)
Agora comea uma nova fase da gastrulao. Enquanto continua o ingresso do

mesoderma, a linha primitiva comea a regredir, movendo o ndulo de Hensen de uma
posio prxima do centro da rea pelcida, para uma posio mais posterior (veja
Figura 6.29). Ela deixa em seu lugar o eixo dorsal do embrio e o processo ceflico. Ao
mesmo tempo que o ndulo avana posteriormente, a poro remanescente (posterior) da notocorda estabelecida. Finalmente, o ndulo regride para sua posio mais
posterior, formando a regio anal. Nesse ponto, o epiblasto composto inteiramente
de clulas ectodrmicas presuntivas.
Como uma conseqncia desse processo de gastrulao em duas etapas, os embries de aves (e mamferos) exibem um distinto gradiente de maturidade de desenvolvimento ntero-posterior. Enquanto clulas das pores posteriores do embrio esto
gastrulando, clulas da poro anterior j esto comeando a formar rgos. Pelos
prximos dias, a ponta anterior estar mais avanada no seu desenvolvimento (podese dizer que teve uma vantagem inicial) do que a poro posterior.
Enquanto as clulas presuntivas do mesoderma e do endoderma se moviam para
dentro, os precursores ectodrmicos proliferavam para se tornar a nica populao de
clulas remanescente na camada superior. Ainda mais, clulas ectodrmicas migraram
para fora do blastodisco para envolver o vitelo por epibolia. O enclausuramento do
vitelo (novamente reminiscente da epibolia do ectoderma de anfbios) uma tarefa de
Hrcules, que dura 4 dias para ser completada e envolve a produo contnua de novo
Figura 6.29
Gastrulao do embrio de galinha de aproximadamente 24 at perto de 28 horas. (A) A

linha primitiva totalmente estendida (24 horas). O processo ceflico (notocorda anterior)
pode ser visto estendendo-se a partir do ndulo de Hensen. (B) Estgio de dois somitos
(25 horas). Anteriormente v-se o endoderma
farngeo, enquanto a notocorda anterior empurra para cima o processo ceflico que estava
embaixo. A linha primitiva est regredindo. (C)
Estgio de quatro somitos (27 horas). (D) Aps
28 horas, a linha primitiva regrediu at a poro caudal do embrio. (E) Regresso da linha
primitiva, deixando a notocorda em seu rastro.
Vrios pontos da linha foram acompanhados
aps atingir seu comprimento mximo. O tempo representa as horas decorridas aps atingir
o comprimento mximo em aproximadamente
18 horas. (Fotografias cortesia de K. Linask; E
segundo Spratt, 1947.)
238
material celular e a migrao das clulas ectodrmicas presuntivas ao longo da superfcie inferior do envoltrio vitelnico. Assim, chegando ao fim da gastrulao em aves,
o ectoderma envolveu o vitelo, o endoderma substituiu o hipoblasto e o mesoderma
se posicionou entre essas duas regies.
Mecanismos de gastrulao em aves
O PAPEL DO HIPOBLASTO E A FORMAO DOS EIXOS EMBRIONRIOS. O
eixo dorso-ventral (costa-frente) crtico para a formao do hipoblasto e para o
contnuo desenvolvimento do embrio. Esse eixo estabelecido quando as clulas em
clivagem do blastoderma, produzem uma barreira entre a albumina bsica (pH 9.5)
acima do blastodisco e o espao subgerminativo cido (pH 6.5), abaixo do disco.
gua e ons de sdio so transportados da albumina atravs das clulas para dentro
do espao subgerminativo criando uma diferena de potencial de membrana de 25 mV
atravs da camada de clulas (positivo no lado ventral das clulas). Isso cria dois
lados para as clulas: um lado frente albumina negativa e bsica, e outro lado frente
ao fluido do espao subgerminativo positivo e cido. O lado frente albumina se torna
o dorsal, e aquele frente ao espao subgerminativo se torna o ventral. Isso pode ser
revertido ou invertendo o gradiente de pH ou invertendo a diferena de potencial
atravs da camada de clulas (reviso em Stern e Canning, 1988).
A converso de um blastoderma radialmente simtrico em uma estrutura simtrica
bilateral determinada pela gravidade. Enquanto o vulo rola oviduto abaixo, ele gira
a uma velocidade de 10 a 15 revolues por hora. O citoplasma que dever se tornar a
camada celular est sempre girando para baixo, mas deslocado para cima pelo vitelo
mais denso. Portanto, no est em cima do vitelo, mas um pouco deslocado para o
lado. A poro mais alta do blastodisco se transforma na ponta caudal (rabo) do
blastoderma, a parte onde comea a gastrulao (Kochav e Eyal-Giladi, 1971). Assim,
os eixos ntero-posterior e dorsolateral so determinados antes da gastrulao, enquanto o vulo est lentamente rolando oviduto abaixo.
O blastoderma do embrio de galinha age como um sistema nico integrado para
formar um nico embrio; se o blastoderma separado em partes, cada uma tendo
sua zona marginal, cada parte vai formar seu prprio embrio (Spratt e Haas, 1960).
O controle desse campo parece residir na zona marginal posterior, a regio onde
comea a formao do hipoblasto. Essas clulas marginais posteriores no s contribuem com as clulas indutoras do hipoblasto, como tambm impedem que outras
regies marginais induzam seus hipoblastos. Khaner e Eyal-Giladi (1989) verificaram
que na transposio da zona marginal posterior para uma rea marginal lateral (Figura 6.30A), o rasgo posterior cicatriza e duas linhas primitivas aparecem. Similarmente, se uma regio posterior reciprocamente transposta com uma regio lateral (Figura 6.30B), somente se forma uma linha primitiva e ela provm da regio posterior
original. Entretanto, se uma zona marginal posterior colocada em um embrio que
retm sua margem posterior original (Figura 6.30C), somente a margem posterior
original do hospedeiro forma o hipoblasto que est subjacente linha primitiva.
Khaner e Eyal-Giladi sugerem que as clulas da zona marginal formam um gradiente
de atividade cujo pico est na ponta posterior. As clulas posteriores formaro o
hipoblasto e, ao mesmo tempo, evitaro que qualquer clula, com menos atividade,
forme hipoblastos prprios.*
*Pesquisadores anteriores (Waddington, 1932; Azar e Eyal-Giladi, 1981) consideravam que o

hipoblasto induzia formao da linha primitiva e a contemplava com uma polaridade nteroposterior. Entretanto, Khaner (1995) girou o epiblasto com relao ao hipoblasto, em diferentes
estgios do desenvolvimento da galinha, e mostrou que o epiblasto inicia a formao da linha
primitiva e mantm sua polaridade independentemente da orientao do hipoblasto.
EXPERIMENTO
(A)
RESULTADOS
239
INTERPRETAO
Anterior
Zona marginal
rea
opaca
Epiblasto
Posterior
Cicatriz
Linhas primitivas
(B)
(C)
Figura 6.30
ACUMULAO CELULAR NA LINHA PRIMITIVA. Evidncias dos estudos de

Stern e Canning (1990) sugerem que o epiblasto no um tecido homogneo, nodiferenciado, como foi assumido por muito tempo. Pelo contrrio, parece haver diferenciao nas clulas epiblsticas mesmo antes que a formao da linha primitiva se
inicie. Esses estudos mostram que certas clulas, dispersas ao acaso no epiblasto,
podem ser distinguidas por uma molcula especfica na superfcie celular (HNK-1,
uma forma sulfatada do cido glucurnico). As clulas expressando HNK-1 ingressam individualmente na blastocele e migram para a regio posterior. provvel que
o tecido marginal posterior secrete uma substncia que atrai as clulas que expressam HNK-1, enquanto o tecido marginal anterior secreta uma molcula repelente
(Jephcott e Stern, citado em Stern, 1991). As clulas expressando HNK-1, que se
juntam na margem posterior, produziro o endoderma e o mesoderma, e nenhuma
clula expressando HNK-1 formar derivados ectodrmicos. Se as clulas HNK-1
so seletivamente destrudas (por anticorpos), enquanto ainda esto no epiblasto,
o embrio no formar mesoderma nem endoderma. Essas clulas HNK-1 positivas
interagem com as clulas do epiblasto acima delas, para formar o rudimento inicial da
linha primitiva. Esse rudimento de linha sofre um processo de extenso convergente
que o estreita e alonga. Quando a linha chega ao seu comprimento quase total, as
Experimentos de Khaner e Eyal-Giladi demonstrando que a poro posterior da zona

marginal (PMZ) contribui para as clulas
indutoras da linha primitiva do hipoblasto e
impedem outras regies marginais de criarem
seus prprios hipoblastos. (Segundo Khaner
e Eyal-Giladi, 1989.)
240
clulas HNK-1 positivas dissolvem a lmina basal do epiblasto central para formar
uma canal atravs da linha primitiva. Isso permite que clulas do epiblasto (que
nunca expressaram HNK-1) sejam recrutadas para a linha que est se estendendo
anteriomente e, assim, contribuir (junto com as clulas HNK-1 positivas) para os
mesoderma e endoderma embrionrios.
Movimento dentro da blastocele amniota feito por clulas individuais, e no por
uma camada epitelial. Mas, como na gastrulao de anfbios, clulas de aves passando pelo blastporo sofrem uma constrio no seu terminal apical e se tornam clulas
garrafa (Figura 6.28). Na ponta anterior do canal, ndulo de Hensen, a destruio da
lmina basal e a liberao dessas clulas do epiblasto pode ser realizada por uma
protena de 190-kDa chamada fator de espalhamento (Stern et al., 1990). O fator de
espalhamento secretado somente no ndulo de Hensen, e tem sido implicado na
dissociao de clulas nessa regio e na induo do tecido neural a partir do epiblasto, na vizinhana do ndulo (Streit et al., 1995). Quando se implantam resinas contendo o fator de espalhamento abaixo do epiblasto de embries de galinha, em gastrulao precoce, novas regies da linha primitiva podem ser induzidas. O fator de
espalhamento se liga a receptores tirosina quinase em clulas adjacentes, e agindo
atravs da cascata da protena G, fosforila as -cateninas que ancoram as E-caderinas
membrana celular (Hartmann et al., 1994). Na ausncia de E-caderina funcional, a
lmina epitelial se desmonta naquela regio e as clulas se tornam mesnquima. As
clulas, uma vez liberadas da linha primitiva, entram na blastocele, so achatadas e
passam a fazer parte de uma corrente de clulas migratrias independentes.
Polissacardeos extracelulares podem tambm ter um papel importante nessa migrao. Um desses complexos polissacardeos o cido hialurnico, um polmero linear
de cido glucurnico e N-acetilglicosamina (veja Figura 3.35). Esse composto produzido pelas clulas ectodrmicas e se acumula na blastocele, onde reveste a superfcie
das clulas que esto chegando. Fisher e Solursh (1977) mostraram que quando esse
material digerido (injetando a enzima hialuronidase na blastocele), as clulas mesenquimatosas se aglomeram e no conseguem migrar adequadamente. Muito estudos
tm mostrado que o cido hialurnico importante para manter as clulas mesenquimatosas migratrias separadas umas das outras. Alm disso, o cido hialurnico comea a se acumular precisamente no momento em que as primeiras clulas entram na
blastocele. O cido hialurnico capaz de manter as clulas separadas, provavelmente devido a sua capacidade de se expandir em gua. Em ambiente aquoso, esse polmero
pode expandir em at 1000 vezes o seu volume original. Portanto, o cido hialurnico
pode ser um fator importante para manter as clulas mesenquimatosas dispersas durante sua migrao, assegurando que a migrao continue.
cido hialurnico e outros polissacardeos facilitam a migrao de clulas individuais (veja Captulo 3), mas no parecem dirigir o movimento dessas clulas (Fisher e
Solursh, 1979). Na verdade, o movimento dessas clulas est ligado, mais uma vez,
presena de uma rede de fibronectina na lmina basal extracelular das clulas do
epiblasto. Essa camada rica em fibronectina aparece na superfcie inferior das clulas
da camada de cima, pouco antes da formao da linha primitiva e desaparece na regio
da linha. Dentro da linha, as clulas se separam e migram lateralmente ao longo da
membrana basal do epiblasto, rica em fibronectina (Duband e Thiery, 1982). No existe
evidncia clara de que essa fibronectina essencial para o direcionamento do movimento celular que afasta as clulas lateralmente da linha primitiva.
FORMAO SECUNDRIA DA NOTOCORDA. Enquanto a poro anterior da
notocorda formada pelo ingresso de clulas atravs do ndulo de Hensen e a subseqente migrao anterior, a notocorda posterior formada de maneira diferente. Aps
o somito 17 (da galinha), a notocorda se forma pela condensao de tecido mesodrmico
que ingressou atravs da linha primitiva (isto , no atravs do ndulo de Hensen).
Isso se estende posteriormente para o broto da cauda do embrio (incluindo os
somitos 28-50) (Le Douarin et al., 1996).
241
EPIBOLIA DO ECTODERMA. Durante a gastrulao, as clulas precursoras do ecto-
derma se expandem externamente para envolver o vitelo. Essas clulas esto ligadas
entre si por ligaes firmes e migram como uma unidade, mas no individualmente.
Nas aves, a superfcie superior da rea opaca adere fortemente superfcie inferior do
envoltrio vitelnico e se espalha ao longo dessa superfcie interna. O mesmo comportamento visto em cultura de clulas. New (1959) demonstrou que o blastoderma
isolado se estende normalmente sobre o envoltrio vitelnico isolado, e Spratt (1963)
demostrou que esse espalhamento no ocorre com outros substratos. Essas observaes sugerem que o envoltrio vitelnico essencial para a extenso da lmina celular.
interessante observar que somente as clulas marginais (isto , as clulas da rea
opaca) se ligam firmemente superfcie vitelnica. A maioria das clulas blastodrmicas
aderem frouxamente, quando o fazem. As clulas marginais so inerentemente diferentes das outras clulas blastodrmicas, pois podem estender longos processos citoplasmticos (500m) em direo ao envoltrio vitelnico. Esses filopdios alongados
so considerados o aparelho locomotor das clulas marginais.
Existem vrias linhas de evidncia indicando que as clulas marginais da rea
opaca so os agentes da epibolia ectodrmica. Em primeiro lugar, o blastoderma se
espalha somente quando as margens esto se expandindo. Se as clulas marginais so
removidas, a epibolia do ectoderma cessa. Segundo, quando as clulas marginais so
isoladas do resto do blastoderma, elas continuam a migrar sozinhas. Assim, parece
que as clulas precursoras do ectoderma so levadas junto com as clulas ativamente
migratrias da rea opaca (Schlesinger, 1958). Existe tambm uma relao especfica
entre as membranas celulares das clulas marginais e a superfcie inferior da membrana
vitelnica. New (1959) mostrou que quando o blastoderma colocado sobre o envoltrio
vitelnico de forma invertida (camada profunda em contato com o envoltrio vitelnico),
as bordas do blastoderma se curvam para dentro de modo que as clulas marginais da
camada superior esto, mais uma vez, em contato com a superfcie vitelnica (Figura
6.31). Lash e seus colaboradores (1990) expandiram esses resultados mostrando que a
fibronectina est presente na superfcie interna do envoltrio vitelnico. Ento, como
no experimento discutido anteriormente, no qual Boucaut e colaboradores injetaram o
composto sinttico contendo a seqncia do stio de ligao fibronectina (RGD), na
blastocele de salamandra, Lash e colegas aplicaram a seqncia RGD ao envoltrio
vitelnico enquanto as clulas migravam sobre ele. Esse tratamento quebrou especificamente o contato entre as clulas marginais e o envoltrio vitelnico, causou retrao
dos filopdios das clulas marginais e parou a migrao do blastoderma.
Identificamos muitos dos processos envolvidos na gastrulao de aves, mas ignoramos como esses processos so realizados; no sabemos ainda como se forma a
cavidade subgerminativa, como certas clulas so destinadas a se tornarem clulas do
hipoblasto, como certas clulas expressam HNK-1, enquanto suas vizinhas no o
fazem, como clulas expressando HNK-1 migram para a margem posterior e como l
interagem com as clulas do epiblasto, como a linha primitiva se estende e se retrai, ou
como as clulas so designadas aos seus respectivos destinos. Recentemente, Gary
Figura 6.31
Endoderma
Presuntivo
(camada
profundas)
(A)
(B)
Ectoderma
Presuntivo
Envoltrio Vitelnico
Propriedades migratrias dos precursores

ectodrmicos de galinha. (A) Quando um blastoderma de galinha colocado no envoltrio
vitelnico, com os precursores em contato com
a superfcie vitelnica, as clulas marginais migram e cobrem o envoltrio vitelnico com ectoderma. (B) Quando as camadas profundas
so colocadas em contato com o envoltrio
vitelnico, a camada blastodrmica se enrola
para permitir que as clulas da camada superficial possam aderir e migrar sobre a camada
vitelnica. O resultado uma vescula fechada.
(Segundo New, 1959.)
242
Schoenwolf (1991) comentou: A despeito de tudo que foi escrito, certo dizer que o
que sabemos sobre gastrulao e neurulao em aves consideravelmente menos do
que ainda resta conhecer.
Gastrulao em mamferos
Aves e mamferos so descendentes de espcies de rpteis. Portanto, no surpreendente que o desenvolvimento de mamferos se d paralelamente ao dos rpteis e aves. O que surpreendente que os movimentos de gastrulao de embries de rpteis e aves, que evoluram como uma adaptao a ovos com vitelo, so
mantidos mesmo na ausncia de grandes quantidades de vitelo no embrio mamfero. A massa celular interna nos mamferos pode ser visualizada como assentada
sobre uma bola imaginria de vitelo, seguindo instrues que parecem mais apropriadas a seus ancestrais.
Modificaes para desenvolvimento dentro de outro organismo
Em lugar de desenvolver-se isoladamente dentro do ovo, a maioria dos mamferos
evoluiu para uma admirvel estratgia de desenvolvimento dentro da prpria me.
O embrio mamfero obtm seus nutrientes diretamente da me e no depende de
vitelo armazenado. Essa evoluo ensejou uma dramtica reestruturao da anatomia materna (tal como a expanso do oviduto para formar o tero) como tambm o desenvolvimento de um rgo fetal capaz de absorver os nutrientes maternos. Esse rgo fetal -a placenta- derivado primariamente de clulas
trofoblsticas embrionrias, suplementado por clulas mesodrmicas derivadas
da massa celular interna.
TECIDOS
EMBRIONRIOS
Ectoderma
embrionrio
Epiblasto
embrionrio
Epiblasto
Mesoderma
embrionrio
Linha primitiva
Ectoderma
amnitico
Massa celular
interna
Hipoblasto
Endoderma
extra-embrionrio
Endoderma
amnitico
Envoltrio
vitelnico
Mesoderma
extra-embrionrio
Blastocisto
TECIDOS
EXTRA-EMBRIONRIOS
Trofoblasto
Citrofoblasto
Sinciciotrofoblasto
Figura 6.32
Diagrama esquemtico mostrando a derivao de tecidos de embries humanos e do macaco

rhesus. (Segundo Luckett, 1978, e Bianchi et al., 1993.)
(A)
Blastocisto, 7 dias
(B)
243
8 dias
Revestimento uterino
Capilar maternal
Epitlio uterino
(endomtrio)
Sinciciotrofoblasto
proliferando no
tecido uterino
Massa celular interna

Blastocele
Trofoblasto
Epiblasto
Cavidade amnitica
Blastocele
Trofoblasto
(C)
9 dias
Lacunas
trofoblsticas
10-11 dias
(D)
Cavidade
amnitica
Lacunas
trofoblsticas
(suprimento de
sangue materno)
Sinciciotrofoblasto
Epiblasto
Hipoblasto
Trofoblasto
Cavidade
Amnitica
Blastocele
Formao de
mesoderma extraembrionrio
Figura 6.33
Formao de tecido no embrio humano entre 7 e 12 dias. (A,B) Blastocisto humano imediatamente antes da gastrulao. A massa celular interna delaminam clulas hipoblsticas que forram
o trofoblasto, formando, com isso, o envoltrio vitelnico primitivo e um blastodisco de duas
camadas (epiblasto e hipoblasto), semelhante aquele visto em embries de aves. O trofoblasto
em alguns mamferos pode ser dividido em trofoblasto polar, que cobre a massa de clulas
internas, e o trofoblasto mural, que no o faz. O trofoblasto se divide no citotrofoblasto que
forma as vilosidades, e o sinciciotrofoblasto que ir ingressar no tecido uterino. (C) Ao mesmo
tempo o epiblasto se divide em ectoderma amnitico (que rodeia a cavidade amnitica) e epiblasto
embrionrio. O mamfero adulto se forma das clulas do epiblasto embrionrio. (D) O endoderma
extra-embrionrio forma o saco vitelnico. (Segundo Gilbert, 1989, e Larsen, 1993.)
As origens dos tecidos mamferos precoces esto sumariadas na Figura 6.32. A

primeira segregao de clulas dentro da massa celular interna envolve a formao do
hipoblasto (algumas vezes chamado endoderma primitivo) (Figura 6.33). Essas clulas
se separam da massa celular interna para revestir a cavidade da blastocele onde elas
originam a endoderme do saco vitelnico. Como em embries de aves, essas clulas no
produzem partes do organismo neonato. O tecido da massa celular interna remanescente, acima do hipoblasto, agora chamado de epiblasto. As clulas do epiblasto so separadas por pequenas fendas que coalescem para separar o epiblasto embrionrio das outras
clulas do epiblasto, as quais formam o revestimento do mnio (Figuras 6.33C e 6.34). Uma
Retculo
extra-embrionrio
244
Figura 6.34
Estrutura do mnio e movimentos celulares

durante a gastrulao humana. (A) Embrio
humano e conexes uterinas aps 15 dias de
gestao. Na representao superior, o embrio
foi cortado sagitalmente atravs da linha mediana; a representao inferior olha de cima para
baixo sobre a superfcie dorsal do embrio. (B)
Os movimentos das clulas epiblsticas para
dentro da linha primitiva e o ndulo de Hensen,
e por baixo do epiblasto esto sobrepostas na
viso da superfcie dorsal. Aos dias 14 e 15, o
epiblasto ingressante considerado substituir
as clulas hipoblsticas (que contribuem ao
forro do saco vitelnico), enquanto no dia 16,
as clulas ingressantes se espalham como um
leque para formar a camada mesodrmica. (Segundo Larsen, 1993.).
(A)
Sinciciotrofoblasto
Mesoderma
Extra-embrionrio
Disco germinativo
bilaminar
Cavidade amnitica
Epiblasto
Sulco primitivo
Hipoblasto
Saco vitelnico
(B)
14-15 dias
Cavidade
amnitica
Sulco
Primitivo
Sulco
primitivo
Ndulo de
Hensen
Epiblasto
Hipoblasto
Endoderma
16 dias
Saco
vitelnico
Mesoderma
Endoderma
Mesoderma
extra-embrionrio
vez completado o revestimento do mnio, ele se enche com uma secreo chamada
fluido amnitico, que serve como absorvente de choques para o embrio em desenvolvimento, enquanto impede a sua dessecao.
O epiblasto embrionrio parece conter todas as clulas que vo dar origem ao
prprio embrio e , de muitas maneiras, semelhante ao epiblasto de ave. Kirstie Lawson
e seus colegas (1991) marcaram clulas individuais do epiblasto com peroxidase de
rabanete (horseradish) o que lhes permitiu construir um detalhado mapa de destino do
epiblasto de camundongo (Figura 6.35). Como as clulas do epiblasto de galinha, o
mesoderma e o endoderma de mamfero migram atravs da linha primitiva. Enquanto
penetram a linha, as clulas do epiblasto deixam de expressar E-caderina, que mantm
as clulas unidas, e elas migram como clulas individuais (Burdsal et al., 1993). As
clulas migrando atravs do ndulo de Hensen do origem notocorda. Na formao
da notocorda do camundongo, as clulas devem se integrar no endoderma do intestino primitivo, portanto, de maneira diferente da formao da notocorda da galinha
(Jurand, 1974; Sulik et al., 1994). Essas clulas podem ser vistas como uma banda de
clulas pequenas e ciliadas se estendendo para cima do ndulo de Hensen (Figura
6.36). Elas formam a notocorda convergindo mediamente e se dobrando em uma direo dorsal com afastamento do teto do intestino.
Figura 6.35
(A)
Mapa do destino do embrio do camundongo. (A) O estgio do ovo cilndrico, 6 dias aps a
fertilizao. Notar que ao contrrio dos epiblastos da galinha e humano, o epiblasto do camundongo firmemente curvado. Os endodermas parietal e visceral so derivados do hipoblasto,
no do trofectoderma. (B) Mapa do destino de um epiblasto de 7 dias na gastrulao precoce. (O
mapa do destino do camundongo foi achatado e deve ser visto como enrolado para cima com a
linha primitiva nas bordas.) (Segundo Lawson et al., 1991.)
Os precursores ectodrmicos esto localizados anteriormente linha primitiva

completamente estendida, posio similar que ocupam no epiblasto de galinha; mas
enquanto o mesoderma de galinha se forma de clulas posteriores ao fim da linha, o
mesoderma de camundongos se forma de clulas anteriores linha primitiva. Em alguns casos, clones de clulas do origem a descendentes em mais de uma camada
embrionria ou para ambos os derivados, embrionrio e extra-embrionrio. Assim, no
estgio de epiblasto, as linhagens no se separaram umas das outras. Como nos
embries de aves, as clulas migrando entre as camadas de hipoblasto e epiblasto
parecem estar envolvidas em cido hialurnico cuja sntese se inicia durante a formao da linha primitiva (Solursh e Morriss, 1977). Considera-se (Larsen, 1993) que a
substituio das clulas hipoblsticas pelos precursores endodrmicos ocorre nos
dias 14-15 da gestao, enquanto que a migrao de clulas formando o mesoderma
no comea antes do dia 16.
245
Cone ectoplacentrio
do trofoblasto
Cavidade amnitica
Epiblasto
tero
Endoderma
visceral
Endoderma parietal
Saco vitelnico
Trofoblasto
(B)
Anterior
mnio
Ectoderma
Mesoderma
Endoderma
Formao de membranas extra-embrionrias

Enquanto o epiblasto embrionrio est apresentando movimentos celulares
reminiscentes daqueles vistos na gastrulao de rpteis e aves, as clulas extra-embrionrias esto produzindo os tecidos distintivos dos mamferos que permitem ao feto
sobreviver dentro do tero materno. Apesar da aparncia normal das clulas
trofoblsticas iniciais no camundongo e no homem, elas do origem a uma populao
de clulas onde a diviso nuclear se d em ausncia de citocinese. O tipo inicial de
clula trofoblstica constitui uma camada chamada citotrofoblasto, enquanto que o
tipo de clula multinucleada forma o sinciciotrofoblasto. O citotrofoblasto adere
parede uterina (endomtrio) atravs de uma srie de molculas de adeso que foram
discutidas no Captulo 3. As clulas citotrofoblsticas humanas tambm contm enzimas
proteolticas que lhes permitem entrar no tero e remodelar os vasos sangneos
uterinos, de modo que o sangue materno possa banhar os vasos sangneos fetais. O
Posterior
Notocorda
Mesoderma
extra-embrionrio
Linha primitiva
Tubo neural
presuntivo
Mesnquima
Endoderma
Notocorda
presuntiva
Figura 6.36
Tubo neural
Notocorda
(A)
(B)
Formao da notocorda no camundongo. (A)

A superfcie ventral do embrio de 7.5 dias
vista pelo microscpio eletrnico de varredura. As clulas presuntivas da notocorda so
pequenas clulas ciliadas na linha mediana,
flanqueadas pelas clulas endodrmicas maiores do intestino primitivo. (B) Formao da
notocorda pela dobra dorsal das pequenas clulas ciliadas. (de Sulik et al., 1994, cortesia de
K. Sulik e G. C. Schoewolf.)
246
tecido do sinciciotrofoblasto parece promover a progresso do embrio para dentro

do tero. A atividade proteoltica cessa aps a dcima segunda semana de gestao
(Fisher et al., 1989). O tero, por sua vez, supre essa rea com vasos sangneos
que, por fim, entram em contato com o sinciciotrofoblasto. Pouco depois, o tecido
mesodrmico se estende para fora do embrio em gastrulao (veja Figura 6.33).
Estudos recentes com embries humanos e de macaco rhesus sugerem que o saco
vitelnico (e portanto o hipoblasto) a fonte desse mesoderma extra-embrionrio
(Bianchi et al., 1993), que se junta s extenses trofoblsticas e d origem aos vasos
sangneos que levam nutrientes da me para o embrio. O estreito pednculo de
conexo do mesoderma extra-embrionrio que liga o embrio ao trofoblasto forma os
vasos do cordo umbilical. O rgo completamente desenvolvido, consistindo de
tecido trofoblstico e mesoderma contendo vasos sangneos, chamado crio e
esse se funde com a parede uterina para formar a placenta. Assim, a placenta tem
uma poro materna (o endomtrio uterino que modificado durante a gravidez) e
um componente fetal, o crio. Esse pode estar fortemente justaposto ao tecido
materno, mas ainda passvel de separao (como na placenta de contato no porco),
ou to intimamente integrado que os dois tecidos no podem ser separados sem
causar dano para a me e para o feto em desenvolvimento (como na placenta decdua
da maioria dos mamferos, incluindo o homem).* [gast2.html]
A Figura 6.37 mostra as relaes entre os tecidos embrionrios e extra-embrionrios de embrio humano de 6 semanas. O embrio encontra-se envolvido pelo mnio e
protegido pelo crio. Os vasos sangneos se estendendo do crio ao embrio e
desse ao crio so facilmente observados, como tambm as vilosidades que se projetam da superfcie externa do crio. Essas vilosidades contm os vasos sangneos e
*Existem numerosos tipos de placenta, e as membranas extra-embrionrias se formam de

maneira diferente nas diferentes ordens de mamferos (veja Cruz e Pedersen, 1991). Mesmo que o
camundongo e o homem gastrulam e implantam da mesma maneira, suas estruturas extra-embrionrias so distintas. muito arriscado extrapolar fenmenos de desenvolvimento de um grupo de
mamferos para outro. At Leonardo da Vinci errou (Renfree, 1982). Seu extraordinrio desenho do
feto humano dentro da placenta excelente arte, mas pobre cincia: a placenta de vaca.
Figura 6.37
Embrio humano e placenta aps 40 dias de gestao. O embrio est deitado

dentro do mnio, e seus vasos sangneos podem ser vistos estendendo-se para
dentro das vilosidades corinicas. A esfera direita do embrio o saco vitelnico.
(Instituto Carnegie de Washington, cortesia de C. F. Reather.)
247
Figura 6.38
Para o feto
Relao entre as vilosidades corinicas e o sangue materno no tero.

Do feto
Do feto
Artrias umbilicais
Veia umbilical
mnio
Vilosidades
corinicas
Crio (poro fetal da placenta)
Clulas trofoblsticas
Poro maternal da placenta (clulas deciduais)
Para a me
Da me
Veia maternal
Artria maternal
permitem ao crio ampliar a rea exposta ao sangue materno. Assim, apesar de no

haver fuso dos sistemas circulatrios materno e fetal, a difuso de substncias solveis pode ocorrer atravs das vilosidades (Figura 6.38). Dessa maneira, a me proporciona nutrientes e oxignio ao feto, e o feto envia seus produtos descartveis (principalmente dixido de carbono e uria) para a circulao materna. Os vasos sangneos
das vilosidades corinicas so formados do mesoderma extra-embrionrio que penetra nos pequenos montes de tecido citotrofoblstico chamados vilosidades primrias
(Figura 6.39). As estruturas resultantes, as vilosidades secundrias, se formam na
segunda semana de gestao. No fim da terceira semana, uma parte desse mesoderma
extra-embrionrio produziu vasos sangneos, e essas vilosidades tercirias esto
aptas a trazer nutrientes e oxignio da me para o embrio. [other.html#gast4]
O trofoblasto necessrio para a aderncia e entrada do embrio nos tecidos
uterinos, e o crio permite troca de gases e nutrientes entre a me e o feto. Mas o
crio tem uma importncia at maior; tambm um rgo endcrino. A poro
sinciciotrofoblstica do crio produz trs hormnios essenciais para o desenvolvimento dos mamferos. Primeiro, ele produz a gonadotrofina corinica, um hormnio peptdico que capaz de induzir outras clulas da placenta (e do ovrio materno) a produzir progesterona. A progesterona o hormnio esteride que mantm
a parede uterina espessada e cheia de vasos sangneos. Nos primatas, os ovrios podem ser removidos depois do primeiro tero da gravidez, sem danos para o
desenvolvimento do feto, porque o crio tem capacidade para produzir os
esterides necessrios para manter a gestao (Zander e von Mnstermann, 1956).
A progesterona placentria tambm usada pela glndula supra-renal fetal como
um substrato para a produo de hormnios corticosterides biologicamente
248
(B)
(A) Vilosidade primria

Endomtrio
Espao entre
vilosidades
Sinciciotrofoblasto
Citotrofoblasto
Mesoderma extraembrionrio
Vilosidade secundria
(C)
Vilosidade terciria
Endomtrio
Casca
citotrofoblstica
Sinciciotrofoblasto
Espao entre
vilosidades
Citotrofoblasto
Capilares das
vilosidades
Figura 6.39
Desenvolvimento das vilosidades corinicas

em humanos. (A) Vilosidade primria composta de tecido citotrofoblstico encaixado no
sinciciotrofoblasto. (B) Vilosidade secundria
formada quando o mesoderma extra-embrionrio subjacente penetra na vilosidade primria. Tais vilosidades secundrias juntam-se s
vilosidades adjacentes para formar a casca
citotrofoblstica que ir ancorar as vilosidades
ao endomtrio. (C) dentro do mesoderma extra-embrionrio, formam-se capilares que iro
se conectar aos ramos da artria e veia umbilicais. (Segundo Gilbert, 1989.)
Mesoderma
extra-embrionrio
importantes. O terceiro hormnio produzido pelo crio a somatomamotropina

corinica (freqentemente chamada lactognio placentrio). Esse hormnio responsvel pelo desenvolvimento do seio materno durante a gestao, assim, permitindo a produo de leite mais tarde.
Estudos recentes indicam que o crio pode ter ainda outra funo, que a de
proteger o feto da resposta imune da me. Uma pessoa com um sistema imune normal
reconhece e rejeita clulas estranhas dentro do seu corpo; esse fato demonstrado
pela rejeio a transplantes de pele e de rgos de indivduos geneticamente diferentes. As glicoprotenas responsveis por essa rejeio so chamadas de antgenos de
histocompatibilidade principais e, provavelmente, diferem de indivduo a indivduo.
Uma criana expressa antgenos de histocompatibilidade principais de ambos, o pai e
a me, e o corpo da me rejeitar a pele ou rgos de seus descendentes porque eles
contm antgenos derivados do pai. Como ento, pode o feto humano permanecer 9
meses dentro do corpo da me? Porque a me no rejeita imunologicamente o seu feto,
como ela rejeitaria um rgo daquela criana? Parece que o crio desenvolveu vrios
mecanismos pelos quais ele pode inibir a resposta imune contra o feto (Chaouat,
1990). Ele pode secretar protenas solveis que bloqueiam a produo de anticorpos,
e pode promover a produo de certos tipos de linfcitos que impedem a resposta
imune normal dentro do tero. As clulas citotrofoblsticas tambm contm uma forma de antgeno de histocompatibilidade principal, especfico da placenta, que parece
proteger o embrio de ser reconhecido pelo sistema imune da me (Carosella et al.,
1996; Pazmany et al., 1996). Assim, as funes da placenta incluem no s suporte
fsico e troca nutricional, mas tambm a regulao das relaes endcrinas e
imunolgicas entre a me e o feto. [gast3.html]
Na gastrulao, observamos uma srie incrivelmente bem coordenada de movimentos celulares pelos quais os blastmeros do estgio de clivagem so rearranjados
e comeam a interagir com seus vizinhos. Alm disso, apesar de haver diferenas entre
os movimentos na gastrulao de embries de ourio-do-mar, anfbios, aves e mamferos, certos mecanismos so comuns a todos. Cada grupo tem o problema de trazer as
clulas precursoras do mesoderma e do endoderma para dentro do corpo, e envolver
o embrio com precursores ectodrmicos. Dadas as diferentes quantidades e distribuies de vitelo, como tambm outras consideraes ambientais, cada tipo de organismo foi capaz de desenvolver uma maneira de conseguir esse objetivo. O palco est,
agora, pronto para a formao dos primeiros rgos.
249
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CAPTULO 7 Neurulao e o Ectoderma

Neurulao e ectoderma
Porque a verdadeira maravilha, se voc quiser se maravilhar, este processo. Voc inicia como uma nica clula derivada da unio
entre um espermatozide e um vulo; essa
se divide em duas, depois quatro, depois oito
e assim por diante e, em um certo estgio
aparece uma nica clula, cuja descendncia total o crebro humano. A mera existncia de tal clula deveria ser uma das coisas assombrosas da Terra. As pessoas deveriam vagar o dia inteiro, enquanto acordadas, chamando umas s outras, maravilhadas, falando de nada exceto da clula.
LEWIS THOMAS (1979)
Ainda mais atraente do que a mata virgem, era a floresta que se estendia a minha frente naquele momento: o sistema
nervoso central.
RITA LEVI-MONTALCINI (1988)
253
M 1828 KARL ERNST VON BAER, o mais eminente embriologista de sua
poca*, anunciou: Eu tenho dois pequenos embries preservados em lcool, que esqueci de identificar. No momento, no consigo determinar o gnero ao qual pertencem. Eles podem ser lagartos, pequenas aves ou mesmo mamferos. A Figura 7.1 permite-nos apreciar seu dilema e ilustra as quatro leis gerais da
embriologia propostas por von Baer. De seu estudo detalhado sobre o desenvolvimento da galinha e da comparao de tais embries com embries de outros
vetebrados, von Baer estabeleceu quatro generalizaes, ilustradas aqui com alguns exemplos de vertebrados.
1. As caractersticas gerais de um grande grupo de animais aparecem no embrio mais cedo do que os aspectos especializados. Todos os vertebrados em
desenvolvimento (peixes, rpteis, anfbios, aves e mamferos) so muito semelhantes logo aps a gastrulao. Somente mais tarde no desenvolvimento que
as caractersticas especiais da classe, ordem e, finalmente, espcie aparecem
(veja Figura 7.1). Todos os embries de vertebrados tm arcos de guelras,
notocordas, medulas espinhais e rins pronfricos.
2. Caracteres menos gerais so desenvolvidos a partir dos mais gerais, at
finalmente aparecerem os caracteres mais especializados. Inicialmente todos
os vertebrados tm o mesmo tipo de pele. Somente mais tarde se desenvolvem
as escamas de peixes, as escamas de rpteis, as penas das aves, ou o plo,
garras e unhas dos mamferos. Da mesma maneira, o desenvolvimento precoce
de membros essencialmente o mesmo em todos os vertebrados. Somente
mais tarde que diferenas entre pernas, asas e braos se tornam evidentes.
3. Cada embrio de uma dada espcie, em lugar de passar atravs de todos os
estgios adultos de outros animais, se afasta mais e mais deles. As fendas
viscerais em embries de aves e mamferos no se parecem em detalhe s
fendas das guelras de peixes adultos. Ao contrrio, elas se parecem s fendas
viscerais de peixes embrionrios e outros vertebrados embrionrios. Enquanto peixes preservam e elaboram essas fendas tornando-as verdadeiras guelras,
os mamferos as convertem em estruturas tais como os tubos de Eustquio
(entre o ouvido e a boca).
4. Assim, o embrio precoce de um animal superior nunca como um animal inferior, mas somente como seu embrio precoce. Von Baer verificou que diferentes
* K. E. von Baer descobriu a notocorda, o ovo de mamfero e o ovo humano, alm de contribuir
para o progresso conceitual aqui descrito. Seu trabalho ser mais discutido no Captulo 23.
253
254
Figura 7.1
Ilustrao das leis de von Baer. Embries precoces de vertebrados mostram aspectos comuns ao subfilo inteiro. Com o progresso do
desenvolvimento, os embries se tornam reconhecveis como membros de sua classe, sua
ordem, sua famlia e, finalmente, sua espcie.
(de acordo com Romanes, 1901).
II
III
Peixe
Salamandra Tartaruga
Galinha
Porco
Boi
Coelho
Homem
grupos de animais compartilham aspectos comuns durante o desenvolvimento

embrionrio precoce e que esses aspectos se tornam mais e mais caractersticos da espcie medida que progride o desenvolvimento. Embries humanos
nunca passam por estgios equivalentes a um peixe ou uma ave adultos; realmente, embries humanos inicialmente compartilham caractersticas comuns
com embries de peixes e aves. Mais tarde, os embries de mamferos e outros
divergem, nenhum deles passando pelos estgios dos outros.
Von Baer tambm reconheceu que existe um modelo comum para todo o desenvolvimento de vertebrados: as trs camadas germinativas originam diferentes rgos, e
essa derivao dos rgos constante se o organismo um peixe, uma r ou uma
galinha. O ectoderma forma a pele e os nervos; o endoderma forma os sistemas respiratrios e digestivos; e o mesoderma forma o tecido conjuntivo, as clulas do sangue,
o corao, o sistema urogenital e partes da maioria dos rgos internos. Neste captulo acompanharemos o desenvolvimento precoce do ectoderma; este, e o captulo
seguinte enfocam a formao do sistema nervoso nos vertebrados. O Captulo 9 acompanhar o desenvolvimento precoce dos rgos endodrmicos e mesodrmicos.
Q FORMAO DO SISTEMA NERVOSO CENTRAL

Neurulao: aspectos gerais
Talvez a mais intrigante de todas as perguntas se o crebro suficientemente poderoso para resolver o problema da sua prpria criao. Assim Gregor Eichele (1992)
terminou, recentemente, uma reviso de pesquisa sobre desenvolvimento do crebro de
mamferos. A construo de um rgo que reconhece, pensa, ama, odeia, lembra, troca,
engana a si mesmo, e coordena nossos processos corporais conscientes ou inconscientes indubitavelmente o mais desafiante dos enigmas do desenvolvimento. Uma combinao de abordagens genticas, celulares e orgnicas est fornecendo uma compreenso preliminar de como a anatomia bsica do crebro se torna ordenada.
O processo pelo qual o embrio forma o tubo neural, o rudimento do sistema

nervoso central, chamado neurulao, e um embrio sofrendo essas transformaes
chamado nurula. Existem dois caminhos principais para a formao do tubo neural.
Em neurulao primria, o cordomesoderma estimula o ectoderma, que o recobre, a
se proliferar, invaginar e a se destacar da superfcie formando um tubo oco. Na
neurulao secundria, o tubo neural se origina de um slido cordo de clulas que
se embebe no embrio e subseqentemente se torna oco (forma uma cavidade) para
formar o tubo neural (veja Schoenwolf, 1991b). O quanto essas formas de construo
so usadas depende da classe de vertebrados. A neurulao em peixes exclusivamente secundria. Em aves, as pores anteriores do tubo neural so construdas por
neurulao primria, ao passo que o tubo neural, caudal ao par somito 27 (isto , tudo
posterior aos membros posteriores), construdo por neurulao secundria (Pasteels,
1937; Catala et al., 1996). Em anfbios, como o Xenopus, a maior parte do tubo neural do
girino produzida por neurulao primria, mas o tubo neural caudal derivado de
neurulao secundria (Gont et al., 1993). Em camundongo (provavelmente no homem, tambm), a neurulao secundria comea aproximadamente ao nvel do somito
35 (Schoenwolf, 1984; Nievelstein et al., 1993).
Neurulao primria
Em vertebrados, a gastrulao cria um embrio com uma camada endodrmica interna,
uma camada mesodrmica intermediria e um ectoderma externo. A interao entre o
mesoderma dorsal e o ectoderma que a ele se sobrepem uma das interaes mais
importantes em todo o desenvolvimento de tetrpodes, porque ela inicia a
organognese, a criao de tecidos e rgos especficos. Nessa interao, o cordomesoderma estimula o ectoderma acima dele a formar o tubo neural oco, que se diferenciar em crebro e medula espinhal. Os eventos da neurulao primria esto no
(A)
Placa neural
Prega neural
(B)
(C)
Crista neural
Figura 7.2
Neurulao em anfbios e amniotas. (A) Diagrama representativo da formao do tubo neural.

As clulas ectodrmicas esto representadas como precursoras da crista neural (preto) ou como
precursoras da epiderme (cor). O ectoderma se dobra no ponto mais dorsal, formando a epiderme
externa e um tubo neural interno conectados pelas clulas da crista neural. (B) Fotomicrografias
de neurulao em um embrio de galinha de 2 dias. (C) Formao do tubo neural vista em sees
transversais do embrio de galinha na regio do futuro mesencfalo (setas em B). Cada fotografia
em C corresponde outra acima dela. (HF, prega ceflica; HP, processo ceflico; HN, ndulo de
Hensen; M, mesencfalo; NP, placa neural.) (Fotomicrografias, cortesia de R. Nagele.)
Epiderme
Tubo neural
255
256
Figura 7.3
Quatro vistas da neurulao em um embrio

de anfbio, mostrando em cada caso nurulas
precoce (esquerda), mdia (centro) e tardia
(direita). (A) Seo transversal no centro do
embrio. (B) A mesma seqncia olhando a
superfcie dorsal do embrio inteiro, de cima
para baixo. (C) Seo sagital pelo plano mediano do embrio. (D) Simulao computadorizada em trs dimenses da constrio, extenso e levantamento da placa neural. (A-C de
acordo com Balinsky, 1975; D de acordo com
Jacobson e Gordon, 1976.)
diagrama da Figura 7.2. Durante a neurulao primria, o ectoderma original dividido

em trs conjuntos de clulas: (1) o tubo neural posicionado internamente, que formar
o crebro e a medula espinhal, (2) a epiderme da pele posicionada externamente, e (3)
as clulas da crista neural, as quais migram da regio de conexo entre o tubo neural e
a epiderme, e iro gerar os neurnios perifricos e a glia, as clulas pigmentadas da
pele e vrios outros tipos de clulas. O fenmeno de induo embrionria, que inicia a
neurulao na regio dorsal do embrio, ser detalhada no Captulo 15. Neste captulo
estamos considerando a resposta dos variados tecidos ectodrmicos.
Placa
neural
Placa neural
Tubo neural
Notocorda
Prega neural
Notocorda
Mesoderma
Notocorda
Arquntero
(A)
SEO
TRANSVERSAL
Endoderma
Endoderma
Mesoderma
Endoderma
Epiderme
Epiderme
Epiderme
Notocorda
Notocorda
Prega neural
Cavidade
do intestino
Mesoderma
Cavidade do intestino
Placa neural
Prega neural
Tubo neural
Placa neural
Prega neural
Blastporo
Epiderme
(B)
SEO
SAGITAL
Blastporo
Cavidade do
intestino
Cavidade do
intestino
Mesoderma
Arquntero
Resto da
blastocele
Endoderma
Epiderme
Mesoderma
Mesoderma
Endoderma
Epiderme
Endoderma
Divertculo
do fgado
Tubo neural
Placa neural
Prega neural
Placa neural
Prega neural
Pregas
neurais
fundidas
(C)
VISTA DA
SUPERFCIE
DORSAL
Blastporo
(D)
SIMULAO
COMPUTADORIZADA
DA DEFORMAO
DA LMINA DE
ECTODERMA (LINHA C)
Blastporo
(A) Formao das pregas neurais
Epiderme
presuntiva
(B) Elevao das pregas neurais
257
(C)
Notocorda
Placa neural
presuntiva
Formao
de cunha
Zona de
transio
Placa neural
Formao
de sulco
Ancoragem
Epiderme
Notocorda
Figura 7.4
O processo de neurulao primria em embries de r est descrito na Figura 7.3 e

parece ser similar em anfbios, rpteis, aves e mamferos (Galera, 1971). A primeira
indicao que uma regio do ectoderma est destinada a se tornar tecido neural uma
mudana na forma celular (Figura 7.4). As clulas ectodrmicas da linha mdia tornamse alongadas, enquanto as clulas destinadas a formar a epiderme se tornam mais
achatadas. O alongamento das clulas ectodrmicas dorsais causa a elevao dessas
regies neurais presuntivas acima do ectoderma circundante, criando assim, a placa
neural. At 50% do ectoderma est includo nessa placa. Logo aps, as bordas da
placa neural se engrossam e se movem para cima formando as pregas neurais, enquanto um sulco neural, em forma de -U- aparece no centro da placa, dividindo os
futuros lados direito e esquerdo do embrio (veja Figuras 7.3 e 7.4). As pregas neurais
migram em direo linha mdia do embrio, finalmente se fundindo para formar o
tubo neural abaixo do ectoderma sobreposto. As clulas da poro mais dorsal do
tubo neural se tornam as clulas da crista neural.
A mecnica da neurulao primria
A neurulao ocorre com algumas variaes em diferentes regies do corpo. A cabea,
o tronco e a cauda formam, cada um, sua regio do tubo neural de maneira a refletir a
relao da notocorda com o ectoderma que a ela se sobrepe. Tanto as regies da
cabea como as do tronco, sofrem variantes da neurulao primria, e esse processo
pode ser dividido em cinco estgios distintos, mas espacialmente e temporalmente se
superpondo estgios (Schoenwolf, 1991a; Catala et al., 1996): (1) a formao da placa
neural, (2) a formao do assoalho da placa neural, (3) a modelagem da placa neural, (4)
o dobramento da placa neural para formar o sulco neural, e (5) o fechamento do sulco
neural para formar o tubo neural.
A formao da placa neural
A formao da placa neural como uma regio distinta de outras clulas ectodrmicas
ser discutida em detalhe nos Captulos 8 e 15. Em geral, considera-se que o mesoderma dorsal subjacente (em colaborao com outras regies do embrio) sinaliza s
clulas ectodrmicas acima dela para se desenvolverem em clulas colunares da placa
neural (Smith e Schoenwolf, 1989; Keller et al., 1992; discusso posterior neste captulo). Como resultado dessa induo neural, as clulas da placa neural presuntiva se
distinguem do ectoderma circundante, a qual se transformar em epiderme. As clulas
da placa neural e as clulas da epiderme possuem seus prprios movimentos intrnsecos (Moury and Schoenwolf, 1995). Se a epiderme ao redor da placa neural isolada,
Representao esquemtica do dobramento do

epitlio durante a neurulao na galinha. (A)
Formao das pregas neurais ocorre quando as
clulas epidrmicas presuntivas se movem para
dentro, na direo da linha mdia do embrio.
Essa epiderme presuntiva empurra a placa
neural abaixo dela, enquanto se move. (B) Enquanto as clulas da linha mdia da placa neural
(clulas da placa do assoalho) so ancoradas
notocorda, as pregas neurais so elevadas. Esses movimentos parecem continuar enquanto
a epiderme, se movendo para o meio, puxa
com ela a placa neural, resultando na justaposio das pregas neurais. (C) Nas trs regies
de articulao (no ponto de articulao mediano MHP e nos dois pontos de articulao
dorsolateral a -DLHP), as clulas da placa
neural mudam seu comprimento e sofrem uma
constrio nos seus pices. (De acordo com
Moury e Schoenwolf, 1995.)
258
as clulas se movem em direo ao centro (ou seja, em direo rea onde estava a
placa neural). Se a placa neural isolada, suas clulas convergem e se estendem para
formar uma placa mais delgada, mas no se fundem para formar um tubo neural. Esses
movimentos da placa neural e da epiderme originam as pregas neurais. Inicialmente, o
ectoderma torcido e logo a epiderme presuntiva comea a recobrir a placa neural.
(Realmente, se a regio de transio contendo os dois tecidos isolada, ela formar
pequenas pregas neurais em cultura). Esses movimentos coordenados finalmente
causaro a elevao e o dobramento do tubo neural (veja Figura 7.4; Jacobson e
Moury, 1995; Moury e Schoenwolf, 1995).
Formao do assoalho da placa neural
Anteriormente, considerava-se que somente as clulas da linha mdia da placa neural
formavam a placa do assoalho do tubo neural. Ou seja, no fechamento da placa para
formar o tubo neural, suas clulas mais centrais se localizariam no fundo do tubo. As
partes mais perifricas, as pregas neurais, se tornariam as pores mais dorsais do tubo
neural. Provavelmente assim que se forma a regio da cabea. Evidncia recente,
entretanto, sugere que o assoalho do tubo neural do tronco tem uma outra origem - que
se origina em parte do ndulo de Hensen e inserido no centro da placa neural.
Esse modelo foi proposto por Catala e colaboradores (1995) baseado nos seus
dados e em estudos anteriores de vrios laboratrios. Para acompanhar as clulas
embrionrias individuais do ndulo eles usaram o sistema de quimera galinha-codorna. Embries de galinha e codorna se desenvolvem de maneira muito semelhante
(especialmente no desenvolvimento precoce), e quando pores do embrio de
codorna so enxertadas em uma regio equivalente do embrio de galinha, as clulas se integram no embrio e participam da construo dos rgos adequados. O
enxerto pode ser feito enquanto o embrio ainda est dentro do ovo, e o pinto que
eclode uma quimera, tendo uma poro do seu corpo composta de clulas de
codorna (Figura 7.5; Le Douarin, 1969; Le Douarin e Teillet, 1973). As clulas de
galinha e codorna, entretanto, tm duas diferenas crticas. Primeiro, na codorna a
heterocromatina do ncleo est concentrada ao redor dos nuclolos. Isso cria uma
grande massa que se cora intensamente e facilmente distinta da heterocromatina
difusa da galinha. Segundo, existem alguns antgenos que so especficos para a
(A)
Figura 7.5
Uma quimera galinha-codorna. (A) Duas quimeras galinha-codorna

e uma galinha controle 4 dias aps a ecloso. Nas quimeras, o tubo
neural dorsal anterior da codorna substituiu uma regio equivalente
da galinha no embrio de 12-somitos. Melancitos de codorna,
originrios da crista neural, migram para as penas da cabea, ao
nvel do enxerto. (B) Uma regio do embrio contendo tanto clulas
de codorna (com sua cromatina altamente condensada) como clulas de galinha (com sua cromatina mais difusa). (de Le Douarin et
al., 1996; fotografias, cortesia de N. M. Le Douarin.)
(B)
Clula de
galinha
Clula
de codorna
(A)
Somito 6
259
(B)
Tubo
neural
Somito
Ndulo
de
Hensen
Codorna
Galinha
codorna e no so encontrados em clulas da galinha. Os dois fenmenos permitem

distinguir clulas individuais de codorna, mesmo quando a populao celular , na
sua maioria, de galinha.
Esses pesquisadores removeram o ndulo de Hensen e o trmino caudal da notocorda em alongao de embries de galinha com 6-somitos (1.5 dias) e os substituiram com
seus equivalentes de codorna. Daquele nvel at a cauda, tanto a notocorda como a
placa do assoalho foram compostas de clulas de codorna. As paredes do tubo neural
foram produzidas da placa neural da galinha (Figura 7.6). interessante notar que (como
previsto pela regresso do ndulo, discutida no Captulo 6) a placa do assoalho e as
clulas da notocorda, associadas com a placa neural, se localizavam mais em direo
cauda do que o prprio ndulo. Portanto, o ndulo de Hensen contm as clulas necessrias para a formao da placa do assoalho caudal e da notocorda.
As clulas da placa do assoalho se inserem na parte central do ectoderma dorsal e
somente mais tarde que a notocorda se separa da placa do assoalho pela formao
de uma membrana basal entre elas (Figura 7.7).* O tubo neural tem duas fontes distintas - uma ectodrmica e uma do ndulo de Hensen.
A modelagem e dobramento da placa neural
Foras intrnsecas placa neural esto envolvidas na sua modelagem. Ao se tornarem
mais colunares, as clulas provocam um estreitamento da placa neural, mas a modelagem mais importante da placa produzida pelas suas clulas da linha mediana que se
situam diretamente acima da notocorda. Em aves e mamferos, essas clulas da linha
mediana da placa neural so chamadas clulas do ponto de articulao mediano (MHP)
e so derivadas da placa neural imediatamente anterior ao ndulo de Hensen e da sua
linha mdia anterior (do ndulo de Hensen) (Schoenwolf, 1991a,b; Catala et al., 1996).
Tanto em anfbios como amniotas, as clulas da placa neural sofrem uma extenso
convergente pela intercalao de vrias camadas de clulas no meio de poucas camadas (Jacobson e Sater, 1988; Schoenwolf e Alvarez, 1989). Dessa maneira, elas alongam e estreitam a placa neural (veja Figura 7.3c).
O dobramento da placa neural conseqncia de foras intrnsecas e extrnsecas
s suas clulas. Na galinha, a placa neural comea a dobrar-se mesmo quando ainda
est sendo modelada. As clulas MHP ficam ancoradas notocorda, abaixo delas,
* A idia de que a notocorda e a placa do assoalho so derivadas da mesma populao de clulas
de apreciao recente, mas esse fenmeno j havia sido documentado em um famoso livro de
embriologia. O livro Induo embrionria e desenvolvimento de Hans Spemann em 1938 tem uma
ilustrao do famoso experimento de enxerto de Spemann e Mangold. Nas pginas 144 e 146 daquele
livro (e reproduzido aqui na Figura 15.12), o enxerto do lbio dorsal do blastporo mostrado como
dando origem ao mesoderma dorsal (notocorda e somitos) e placa do assoalho do tubo neural.
Endoderma
dorsal
Figura 7.6
A placa do assoalho do tubo neural do tronco

da galinha derivado do ndulo de Hensen.
(A) Esquema da operao pela qual o ndulo
de um embrio de galinha de 6-somitos substitudo pelo seu correspondente de codorna.
(B) Anlise do eixo quimrico (marcado com
antgeno especfico para a codorna) mostrando clulas de codorna na notocorda (flecha) e
placa do assoalho (cabeas de flecha). (B de
Catala et al., 1996; fotografia, cortesia de N.
M. Le Douarin.)
260
Placa neural
Poo do ndulo de
Hensen
Articulao cordoneural
Figura 7.7
O ndulo de Hensen contribui tanto para a notocorda como para a placa do assoalho neural.
Seo atravs do ndulo de Hensen no estgio do somito-6, mostrando que esse contribui
para a camada superior das clulas embrionrias. (de Catala et al., 1996; fotografia, cortesia
de N. M. Le Douarin.)
originando uma articulao em forma de sulco na linha mdia dorsal. Essas clulas so
induzidas pela notocorda a diminuir sua altura e adquirir a forma de cunha (van Straaten
et al., 1988; Smith e Schoenwolf, 1989). As clulas laterais MHP no sofrem essas
mudanas (Figuras 7.4 e 7.8). Logo aps, duas outras regies de articulaes formam
sulcos prximos conexo da placa neural ao restante do ectoderma. Essas regies
so chamadas pontos de articulao dorsolateral (DLHPs), e esto ancoradas ao
ectoderma da superfcie da prega neural. Essas clulas aumentam sua altura e adquirem a forma de cunha. Essa transformao (modelagem como cunha) est intimamente
ligada s modificaes da forma celular. Nos pontos de articulao dorsolateral, tanto
microtbulos como microfilamentos esto envolvidos nessas transformaes. A
colchicina, um inibidor de polimerizao de microtbulos, inibe o alongamento dessas
clulas, enquanto citocalasina B, um inibidor da formao de microfilamentos, impede
a constrio apical dessas clulas impedindo, assim, a formao de cunha (Burnside,
1971, 1973; Karfunkel, 1972; Nagele e Lee, 1980, 1987). Depois da formao inicial de
sulcos, a placa neural se dobra ao redor dessas regies com articulaes. Cada uma
delas age como um eixo que dirige a rotao das clulas ao seu redor (Smith e
Schoenwolf, 1991).
Enquanto isso, foras extrnsecas tambm esto em ao. O ectoderma superfcial
do embrio de galinha empurra na direo central do embrio, fornecendo mais uma
fora motora para o dobramento da placa neural (veja Figura 7.4 B,C; Alvarez e
Schoenwolf, 1992). Esse movimento da epiderme presuntiva e a ancoragem da placa
neural ao mesoderma subjacente deve ser tambm importante para assegurar que o
tubo neural se dobre para dentro do embrio e no para fora. Se pequenos pedaos da
placa neural so isolados do resto do embrio (incluindo o mesoderma) eles tendem a
se enrolar para fora (Schoenwolf, 1991a).
Fechamento do tubo neural
O tubo neural se fecha ao se aproximarem os pares de dobras neurais na linha mdia
dorsal; as dobras aderem umas s outras e as clulas das duas partes se renem. Em
algumas espcies, as clulas nessa juno formam as clulas da crista neural. Mas em
aves, as clulas da crista neural no migram da regio dorsal at que o tubo neural
tenha sido fechado naquele local. Em mamferos, entretanto, as clulas da crista neural
cranial (que formam as estruturas da face e do pescoo) migram enquanto as dobras
neurais esto se elevando (ou seja, antes do fechamento do tubo), enquanto que na
regio da medula espinhal, as clulas da crista esperam at que o fechamento ocorra
(Nichols, 1981; Erickson e Weston, 1983).
(A)
(B)
(C)
Figura 7.8
Micrografia eletrnica de varredura da formao do tubo neural no embrio de galinha. (A) Sulco
neural rodeado por clulas mesenquimatosas. (B) Clulas neuroepiteliais alongadas formam um
tubo, enquanto as clulas epidrmicas achatadas so trazidas linha mdia do embrio. As
clulas MHP formam uma articulao no fundo do tubo, enquanto as clulas da placa neural,
ligadas rea basal do ectoderma da superfcie formam as regies de articulaes dorsolaterais.
Essas trs articulaes podem ser vistas como sulcos. (C) A formao do tubo neural completada. As clulas que eram a placa neural esto agora dentro do embrio. A epiderme presuntiva
se localiza acima do tubo, e o tubo neural ladeado pelos somitos mesodrmicos e no fundo
limitado pela notocorda. (Fotografias, cortesia de K. W. Tosney.)
A formao do tubo neural no ocorre simultaneamente ao longo do ectoderma.

Isso pode ser melhor observado naqueles vertebrados (como aves e mamferos) cujo
eixo corporal se alonga antes da neurulao. A Figura 7.9 detalha a neurulao em um
embrio de galinha com 24 horas. A neurulao na regio ceflica (cabea) est bastante adiantada, enquanto a regio caudal (rabo) do embrio est ainda gastrulando. A
regionalizao do tubo neural tambm ocorre como resultado de mudanas na forma
261
262
Figura 7.9
Estereograma de um embrio de galinha de 24

horas. As pores ceflicas esto terminando
a neurulao enquanto as pores caudais esto ainda gastrulando. (de Patten, 1971; de
acordo com Huettner, 1949.)
Ectoderma da cabea
Anterior
Ectoderma do blastoderma
Mesnquima
Prega neural
Notocorda
Sulco neural
Espao
subceflico
Intestino
Mesoderma extraembrionrio
Celoma extraembrionrio
Vitelo
Prega lateral
do corpo
Prega neural
Regio
pericrdica
do celoma
Placa neural
Endoderma
Vitelo
aderente ao
endoderma
Porta
intestinal
anterior
Sulco
neural
Somito
Prega
neural
Mesoderma
intermedirio
Placa
neural
Mesoderma
somtico
Celoma
Endoderma do
intestino mdio
Somito
Mesoderma
esplncnico
Divergncia
das pregas
neurais
N de Hensen
Poo
primitivo
Mesoderma
Ilhota
sagnea
Sulco
primitivo
Linha
primitiva
Margem
primitiva
Posterior
do tubo. Na ponta ceflica (onde se formar o crebro) a parede do tubo larga e

grossa. Aqui, uma srie de inchaos e constries definiro os vrios compartimentos
do crebro. Na parte caudal regio da cabea, entretanto, o tubo neural permanece
um simples tubo que se afina em direo cauda. As duas pontas abertas do tubo
neural so chamadas neurporo anterior e neurporo posterior.
O fechamento do tubo neural nos mamferos, diversamente da galinha, se inicia
em vrios locais ao longo do eixo ntero-posterior (Golden e Chernoff, 1993; Van
Allen et al., 1993). Vrios defeitos no tubo neural so causados pelo no fechamento
em alguns segmentos (Figura 7.10). Falha no fechamento na regio posterior do
tubo neural humano aos 27 dias (ou a ruptura subseqente do neurporo posterior
logo em seguida) resulta na condio denominada espinha bfida, cuja severidade
depende de quanto da medula espinhal permanece aberta. Falha no fechamento do
(A)
(B)
Neurporo
anterior
Prega neural
Ectoderma
da superfcie
Intumescncia
pericardaca
Placdio
tico
Somitos
Crista
neural
(C)
(D)
263
(E)
Intumescncia
pericardaca
Tubo neural
Borda
cortada do
mnio
Somitos
Sulco
neural
22 dias
Neurporo
posterior
23 dias
Normal
Figura 7.10
Neurulao em embries humanos. (A) Sees dorsal e transversal de um embrio humano de 22

dias, iniciando a neurulao. Ambos neurporos, anterior e posterior, esto abertos ao lquido
amnitico. (B) Vista dorsal de um embrio humano em neurulao, um dia depois. A regio do
neurporo anterior est se fechando, enquanto o neurporo posterior permanece aberto. (C)
Regies de fechamento do tubo neural postulado por evidncia gentica (superimposta ao corpo
do recm-nascido). (D) Anencefalia devido a falta de fuso da placa neural na regio 2. (E)
Espinha bfida devida a falta de fuso na regio 5 (ou pela falta de fechamento do neurporo mais
posterior). (C-E de acordo com Van Allen et al., 1993.)
tubo neural anterior resulta em uma condio letal, anencefalia. Aqui, o crebro
anterior permanece em contato com o lquido amnitico e em seguida degenera. O
desenvolvimento do crebro anterior fetal cessa, e a abboda do crnio no se
forma. Essas anormalidades no so raras em humanos, pois esto presentes em
aproximadamente um em cada quinhentos nascimentos viveis. Defeitos de fechamento do tubo neural podem freqentemente ser identificados durante a gravidez
por vrios testes fsicos e qumicos.
O fechamento do tubo neural humano envolve uma complexa interao entre fatores genticos e ambientais. Certos genes, Pax3, sonic hedgehog e openbrain, so
essenciais para a formao do tubo neural de mamferos, mas fatores da dieta como
colesterol e cido flico parecem ser crticos.* Foi estimado que aproximadamente
50% dos defeitos do tubo neural poderiam ser evitados se as mulheres grvidas
tomassem suplementos de cido flico (vitamina B12), e o Servio de Sade Pblica
dos Estados Unidos da Amrica recomendam que todas as mulheres em idade frtil
tomem 0.4mg dirios de folato para reduzir o risco de defeitos do tubo neural durante
a gravidez (Milunsky et al., 1989; Czeizel e Dudas, 1992; CDC, 1992). [ecto1.html]
O tubo neural finalmente forma um cilindro fechado que se separa do ectoderma da
superfcie. Considera-se que essa separao mediada pela expresso de diferentes
molculas de adeso celular. As clulas que se tornaro o tubo neural, originalmente
expressam E-caderina, mas elas param de expressar essa protena ao se formar o tubo
e, em vez disso, sintetizam N-caderina e N-CAM (veja Figura 3.17). Como resultado,
os dois tecidos no aderem mais um ao outro. Se o ectoderma da superfcie passar a
expressar N-caderina (injetando mRNA de N-caderina em uma das clulas do embrio
de Xenopus de duas cabeas), a separao do tubo neural da epiderme presuntiva
dramaticamente impedida (Detrick et al., 1990; Fujimori et al., 1990).
*Colesterol parece ser necessrio para a autoclivagem da protena Sonic hedgehog. Mutaes da
Sonic hedgehog podem impedir o fechamento do tubo neural em camundongos e no homem (Chiang
et al., 1996; Roessler et al., 1996); a poro ativa da Sonic hedgehog sua regio N-terminal. Essa
regio clivada da molcula precursora em uma reao que requer colesterol como um cofator
(Porter et al., 1996). No homem, certas sndromes envolvendo falhas no fechamento do tubo
neural foram relacionadas s mutaes na sntese de colesterol (Kelley et al., 1996).
Anencefalia
Espinha bfida
264
&
Especulaes
A modelagem dorsoventral do sistema nervoso
NQUANTO O TUBO NEURAL

est sendo formado, ele est recebendo sinais de dois outros conjuntos de tecidos. Esses sinais so instrues para que o tubo neural tenha uma determinada polaridade dorsoventral. O tubo
neural ventral parece ser modelado pela
protena Sonic hedgehog originria da notocorda e das clulas da placa do assoalho
(veja Figura 7.7B; Ericson et al., 1996). Essa
protena induz certas clulas do lado
ventrolateral do tubo neural a expressar
genes que as transformam em neurnios
motores (Figura 7.11A; Prancha 32). Sonic
hedgehog tambm funciona reprimindo a
expresso de genes como dorsalin, Pax3
e msx1 da poro ventral do embrio. Esses genes seriam expressos normalmente
ao longo do tubo neural mas so inibidos
pelo sinal, ventralmente produzido pela
(A)
Sonic hedgehog. O destino dorsal do

tubo neural determinado pelas protenas morfogenticas do osso, provavelmente BMP4 e BMP7. Essas protenas so
expressas na epiderme dorsal presuntiva
(Figura 7.11B,C) e foi demonstrado que
elas contrariam o efeito da Sonic hedgehog
(permitindo a expresso de genes como
msx1 e Pax3 na poro dorsal do tubo

neural), alm de promover a expresso de
outros genes dorsalmente especficos (Figura 7.11D). O papel dessas protenas foi
confirmado por experincias in vitro nas
quais tubos neurais isolados foram expostos a produtores desses sinais (Yamada et
al., 1993; Liem et al., 1995).
(B)
Figura 7.11
(C)
Conjunto secundrio de
neurnios motores
A modelagem dorsoventral do tubo neural.

(A) Diferenciao de neurnios motores vista nos neurnios ventrolaterais; se as clulas
da placa do assoalho ou as clulas que expressam o Sonic hedgehog so transferidas
para uma posio lateral, neurnios motores
tambm sero formados. (B) BMP4 expresso na epiderme dorsal presuntiva durante a
formao do tubo neural. (C) Expresso de
BMP7 enquanto o tubo neural se fecha. (E)
Resumo das interaes pela quais Sonic hedgehog promove o desenvolvimento de neurnios motores e inibe sinais de dorsalizao.
(de Yamada et al., 1993; Liem et al., 1995;
fotografias, cortesia de K.Liem.)
(E)
Placa do assoalho
ventral doada
por outro embrio
Sinais dorsais
(D)
Inibio dos sinais
dorsais por Sonic
hedgehog
Neurnios
motores
Induo de neurnios
motores ventrolaterais
Placa do assoalho ventral
Neurulao secundria
A neurulao secundria envolve a formao do cordo medular e seu subseqente
esvaziamento interno formando o tubo neural. Na r e na galinha, esse tipo de neurulao geralmente identificado na formao das vrtebras lombar e da cauda. Em
ambos os casos, a neurulao secundria pode ser vista como continuao da gastrulao. Entretanto, as clulas do lbio dorsal do blastporo continuam a crescer
Notocorda
Placa neural
presuntiva
Blastocele
Medula espinhal
Canal
ependimrio Intestino
Assoalho
Te t o
Notocorda
Articulao
cordoneural
Movimentos de
extenso posterior
Movimentos
involutivos
Parede
posterior
Ectoderma
(A)
(B)
Lbio dorsal tardio

(articulao cordoneural)
265
(C)
Figura 7.12
Movimentos celulares durante a neurulao secundria em Xenopus. (A) Involuo da mesoderma no estgio de gstrula mdia.(B) Movimentos do lbio dorsal do blastporo nos estgios de
gstrula tardia/ gstrula precoce. A involuo cessou e ambos, o ectoderma e o mesoderma do
lbio tardio do blastporo se movem posteriormente. (C) Estgio de girino precoce, onde as
clulas revestindo o blastporo formam o canal neurentrico, parte do qual se torna o lmen do
tubo neural secundrio. (de Gont et al., 1993.)
ventralmente, em lugar de involuir para o embrio (Figura 7.12A,B). A regio em crescimento, na ponta do lbio, chamada articulao cordoneural (Pasteels, 1937), e
contm precursores da poro mais posterior da placa neural e a poro posterior da
notocorda. O crescimento dessa regio converte a gstrula aproximadamente esfrica,
1.2mm de dimetro, em um girino linear com 9mm de comprimento. A ponta da cauda
um descendente direto do lbio dorsal do blastporo, e as clulas que revestem o
blastporo formam o canal neurentrico. A parte proximal do canal neurentrico,
funde com o nus, enquanto que a poro distal se torna o canal ependimrio (isto ,
o lmen do tubo neural) (Figura 7.12C; Gont et al., 1993).
Na galinha, os tecidos localizados posteriomente ao neurporo recentemente
fechado so chamados de broto da cauda. Como o broto da cauda da r, essa
estrutura no uma massa no diferenciada de clulas. Enxertando pequenas regies do broto da cauda da codorna no broto da cauda da galinha, Catala e colaboradores (1995) mostraram que o broto de cauda precoce, j tem clulas com um destino
determinado. Exatamente como no Xenopus, existe uma articulao cordoneural, e
essa regio contm as clulas que dividem-se para formar ambas, a notocorda e a
corda medular. Como se d na r, essas clulas se movem posteriomente. O tubo
neural se forma medida que a corda medular produz pequenas cavidades, que se
fundem umas s outras (Figura 7.13).
Diferenciao do tubo neural

A diferenciao do tubo neural nas vrias regies do sistema nervoso central ocorre
simultaneamente de trs maneiras diferentes. Em nvel anatmico macro, o tubo neural
e seu lmen se expandem e se contraem para formar as cmaras do crebro e a medula
espinhal. A nvel de tecido, a populao celular da parede do tubo neural se rearranja
para formar as regies funcionalmente diferentes do crebro e da medula espinhal.
Finalmente, no nvel celular, as prprias clulas neuroepiteliais se diferenciam em
numerosos tipos de neurnios e clulas de suporte (gliais) presentes no corpo.
Formao das regies do crebro
O desenvolvimento precoce da maioria dos crebros de vertebrados parecido, mas
como o crebro humano provavelmente a matria mais organizada do sistema solar e
o rgo mais interessante do reino animal, nos concentraremos no desenvolvimento
daquele que supostamente faz o Homo sbio.
nus
Canal neurentrico
266
Figura 7.13
(A)
Formao do tubo neural secundrio no embrio de galinha de 25-somitos. (A) A formao do

cordo medular na ponta mais caudal do broto da cauda da galinha. (B) Cordo medular pouco
mais anterior no broto da cauda. (C) Formao de cavidades do tubo neural e formao da
notocorda. (D) Lumens coalescem para formar o canal central do tubo neural. (de Catala et al.,
1995; fotografias, cortesia de N. M. Le Douarin.)
(B)
(C)
Notocorda
O tubo neural precoce de mamferos uma estrutura reta. Entretanto, mesmo antes
que a poro posterior do tubo se forme, a poro mais anterior est sofrendo mudanas drsticas. Nessa regio anterior, o tubo neural se expande em trs vesculas primrias (Figura 7.14): crebro anterior (prosencfalo), crebro mdio (mesencfalo) e crebro posterior (rombencfalo). Quando se fecha a ponta posterior do tubo neural,
dilataes secundrias -as vesculas pticas- se estendem lateralmente de cada lado
do crebro anterior em desenvolvimento.
O crebro anterior se subdivide no telencfalo anterior e o diencfalo mais caudal. O telencfalo formar os hemisfrios cerebrais, e o diencfalo formar o tlamo
e o hipotlamo e tambm a regio que recebe os impulsos neurais da retina. Na
verdade, a prpria retina uma derivao do diencfalo. O mesencfalo no se
subdivide e seu lmen se tornar o aqueduto cerebral. O rombencfalo se subdividir em um mielencfalo posterior e um metencfalo mais anterior. O mielencfalo vai
dar origem medula oblongata (Bulbo), cujos neurnios do origem aos nervos que
regulam os movimentos respiratrios, gastrointestinais e cardiovasculares. O
metencfalo d origem ao cerebelo, a parte do crebro responsvel pela coordenao dos movimentos, postura e equilbrio. O crebro posterior (rombencfalo) desenvolve um modelo segmentado que especifica os lugares de onde se originam
certos nervos. Alargamentos peridicos chamados rombmeros dividem o
(D)
Figura 7.14
Desenvolvimento precoce do crebro humano. As trs vesculas cerebrais primrias so subdivididas enquanto o desenvolvimento continua. A direita esto os derivados em adultos, formados pelas paredes e cavidades do crebro. (De acordo com Moore e Persaud, 1993.)
Derivados Adultos
Lobos olfativos - Cheiro
3 vesculas primrias
Parede
5 vesculas primrias
Hipocampo
Crebro
- Armazenamento de memria
- Associao
Retina
Epitlamo
- Viso
- Glndula pineal
Tlamo
- Centro de retransmisso para neurnios

pticos e auditivos
- Temperatura, sono e
regulao respiratria
Cavidade
Telencfalo
Crebro anterior
(Prosencfalo)
Crebro mdio
(Mesencfalo)
Diencfalo
Hipotlamo
Mesencfalo
Crebro mdio - Fibras nervosas entre os crebro

anterior e posterior,
lobos pticos e tectum.
Metencfalo
Crebro posterior
(Rombencfalo)
Cerebelo
Mielencfalo
Ponte
Medula espinhal
Medula
- Coordenao de movimentos
musculares complexos
- Fibras nervosas entre o crebro e o
cerebelo (somente mamferos)
- Centro reflexo de atividades
involuntrias
rombencfalo em compartimentos menores. Os rombmeros representam territrios separados de desenvolvimento onde clulas de cada rombmero podem se
misturar livremente dentro dele, mas no com clulas de rombmeros adjacentes
(Guthrie e Lumsden, 1991). Alm disso, cada rombmero tem um destino de desenvolvimento diferente. Isso foi extensivamente estudado na galinha, onde os primeiros neurnios aparecem nos rombmeros de nmero par, r2, r4 e r6 (Figura 7.15;
Lumsden e Keynes, 1989). Neurnios dos gnglios r2 formam o quinto nervo cranial
(trigmeo); aqueles do r4 formam o stimo nervo cranial (facial) e o oitavo
(vestibuloacstico); o nono nervo cranial (glossofarngeo) nasce do r6. [ecto2.html]
A expanso do crebro embrionrio precoce notvel em sua velocidade, extenso e no fato de que isso resulta primariamente em um aumento de tamanho de cavidade e no de crescimento de tecido. Em embries de galinha, o volume do crebro
expande 30 vezes entre os dias 3 e 5 do desenvolvimento. Considera-se que essa
rpida expanso causada por uma presso fluida positiva, exercida contra as paredes
do tubo neural pelo fluido no seu interior. Seria de se esperar que essa presso do
fluido fosse dissipada pela medula espinhal, mas isso parece no acontecer. Na verdade, enquanto as pregas neurais vo fechando a regio entre o crebro presuntivo e a
medula espinhal, o tecido dorsal circundante empurra para dentro, produzindo uma
constrio no tubo, na base do crebro (Figura 7.16; Schoenwolf e Desmond, 1984;
Desmond e Schoenwolf, 1986; Desmond e Field, 1992). Essa ocluso (que tambm
ocorre no embrio humano) efetivamente separa a regio cerebral presuntiva da futura
medula espinhal (Desmond, 1982). Se for removida a presso do fluido na poro
anterior de um tubo neural assim ocludo, o crebro da galinha aumenta a uma velocidade muito menor e contm um nmero menor de clulas, quando comparado com
embries controles, normais. A regio ocluda do tubo neural abre novamente aps a
expanso inicial, rpida, dos ventrculos cerebrais.
(A)
(B)
267
Figura 7.15
O crebro posterior (Rombencfalo) de um embrio de galinha de 2 dias, aberto para mostrar

as paredes laterais. Neurnios foram visualizados pela marcao com anticorpo para protenas de neurofilamentos. Rombmeros 2, 4 e
6 podem ser identificados pela alta densidade
de axnios nesse estgio precoce do desenvolvimento. (de Lumsden e Keynes, 1989, cortesia de A. keynes.)
(D)
Figura 7.16
Ocluso do tubo neural para permitir a expanso da futura regio do crebro. (A) Corante
injetado na poro anterior do tubo neural de
galinha de 3 dias, enche a regio do crebro
mas no passa para a regio espinhal. (B,C)
Seo do tubo neural da galinha na base do
crebro (B) antes da ocluso e (C) durante a
ocluso. (D) A reabertura da ocluso, aps aumento inicial do crebro, permite a passagem
do corante da regio do crebro para a da medula espinhal. (Cortesia de M. Desmond.)
268
&
Especulaes
Determinando as regies
do crebro anterior e crebro mdio
identidade ntero-posterior de
cada vescula do crebro de mamferos especificada durante a
gastrulao pelo mesoderma precordal e
pela notocorda. Essa especificao parece ser estabilizada no estgio de placa
neural, por interaes a nvel do ectoderma. Somente as molculas principais envolvidas na especificao dos crebros
anterior e mdio sero aqui discutidas; os
detalhes da especificao do crebro posterior e da medula espinhal pelo gene Hox
sero discutidos no Captulo 16.
As regies dos crebros anterior e
mdio so definidas pelo mesoderma
subjacente e pela notocorda anterior. Os
genes Lim1 e Otx2 so expressos por
esses tecidos mesodrmicos anteriores.
Se um deles no est presente, o embrio
no forma o crebro anterior ou o mdio.
Na parte caudal, em relao ao rombmero 2, os embries parecem normais (Figura 7.17; Acampora et al., 1995; Shawlot
e Behringer, 1995).
Rubenstein e Puelles (1994) propuseram que o crebro anterior composto
por seis regies neuromricas chamadas
prosmeros. Os prosmeros p1-p3 correspondem ao diencfalo e os prosmeros p4-p6 ao hipotlamo (ventralmente)
e ao telencfalo (dorsalmente). Os limites prosomricos coincidem com os limites de expresso de vrios genes que so
considerados importantes na especificao neural. Eles tambm so considerados como limitantes de respostas a certos estmulos externos. A interface p2/p3
Figura 7.17
Fentipo sem cabea de camundongo deficiente em Lim1. Dois camundongos com

knockout de Lim1 esto na parte de baixo
da figura; um filhote do tipo selvagem est na
parte de cima. A maioria dos mutantes Lim1
morrem antes do nascimento. As pinas do ouvido (flechas) so as estruturas mais anteriores nesses mutantes. (de Shawlot e Behringer,
1995; cortesia dos autores.)
pode ser crtica na modelagem da regio

do crebro anterior. Essa interface
corresponde a uma zona limitans e tambm a fonte de Sonic hedgehog, uma protena difusvel considerada indutora de
modelagem durante a gastrulao e formao de membros (Figura 7.18; Rubenstein e Puelles, 1994).
Uma das regies crticas para o desenvolvimento do crebro mdio a borda entre o metencfalo/mesencfalo que
normalmente dar origem aos tecidos do
istmo. Aqui no se verifica uma fronteira
morfolgica, mas ela marcada pela poro mais posterior, onde se expressa o
gene Otx2. Quando tecido da juno
mesencfalo mdio e anterior transplantado ao diencfalo ou rombencfalo, ele
induz as clulas que o rodeiam a desenvolver destinos mesenceflicos (no
diencfalo) ou cerebelares (no rombencfalo) (Figura 7.19A; Bally-Cuif e Wassef,
Prosencfalo
Mesencfalo
Mes/Met
limite
Metencfalo
Rombencfalo
Medula espinhal
En (Engrailed)
Wnt1
Fgf8 (Fator de
crescimento do fibroblasto)
shh (Sonic
hedgehog)
Figura 7.18
Estrutura neuromrica do crebro com superposio dos hipotticos eventos indutivos. A

rea limite mesencfalo/metencfalo positiva para a expresso dos genes Fgf8 e Wnt1. A
borda p2/p3 considerada a fonte da protena
Sonic hedgehog. (de acordo com Bally-Cuif e
Wassef, 1995.)
1994; Marin e Puelles, 1994). Se a juno

for girada pode se dar uma triplicao,
pois tecidos em ambos os lados do enxerto so induzidos (Figura 7.19B).
Essa regio indutora mes/met parece
ser controlada pelo fator de crescimento
de fibroblasto 8 (FGF8). Crossley e colegas (1996) verificaram que esse tecido formador de istmo secreta FGF8. Mais ainda,
quando transplantaram partculas contendo FGF8 para o diencfalo ou o rombencfalo, eles obtiveram duplicadas as mesmas estruturas do crebro mdio. Partculas controle embebidas em salina no
mostraram essa duplicao. As partculas
com FGF8 tambm induziram a expresso

de trs genes nos tecidos circundantes Wnt1, Engrailed-2 e o prprio Fgf8. Esses trs genes so normalmente expressos na regio do istmo. Wnt1 e Engrailed
so considerados importantes na formao do cerebelo. Mesmo que o cerebelo
no expresse genes Wnt1, camundongos
deficientes em Wnt1 no possuem a regio do crebro mdio e nem o cerebelo

(McMahon e Bradley, 1990; Thomas e
Cappecchi, 1990). Wnt1 parece manter a
expresso do gene Engrailed nas clulas
precursoras cerebelares, permitindo a sua
proliferao (Dickinson et al., 1994;
Danielian e McMahon, 1996). [ecto3.html]
(A)
Mesencfalo
Diencfalo
Crebro mdio e cerebelo

Tectum
Mes/Met
limite
269
Figura 7.19
A regio da juno mesencfalo/metencfalo

(mes/met) pode agir como um indutor do
desenvolvimento do crebro mdio e da expresso engrailed quando rodada ou transplantada a outras regies do crebro. (A) O
transplante da juno mes/met induz a expresso do gene engrailed e das estruturas do crebro mdio e cerebelo em posies ectpicas.
(B) Rotao da juno mes/met causa triplicao de certas estruturas, como o tectum
ptico. Abreviaes: gt, griseum tectale; TS,
torus semicircularis: P1, segmento pre-tectal;
P2, segmento talmico dorsal; cb, cerebelo; ot,
tectum ptico; ist, istmo; III, terceiro nervo
cranial ou oculomotor; IV, quarto nervo cranial
ou troclear. A polaridade postulada representada por flechas. (B de acordo com Rubenstein e Puelles, 1994.)
Regio expressando En
Telencfalo
En (Engrailed)
Wnt1
Fgf8 (Fator de
crescimento do fibroblasto)
Crebro posterior
Metencfalo
Crebro mdio
Cerebelo
Rombencfalo
(B)
Pea
invertida
Diencfalo
Mesencfalo
ist/cb
istmo/
cerebelo
Induo
da estrutura
mesenceflica
Rombencfalo
Mesencfalo
Duplicao e polarizao
relativa ao tecido cerebelar
En mais prximo
Mesencfalo
Diencfalo
Diencfalo
Eixo longo
Rombencfalo
Rombencfalo
270
ecido no Sistema Nervoso Central

Arquitetura de T
Tecido
Os neurnios do crtex cerebral esto organizados em camadas, cada uma tendo diferentes funes e conexes. O tubo neural original composto de um neuroepitlio
embrionrio, formado por uma nica camada de clulas. Essa populao de clulas
divide-se rapidamente. Sauer (1935) e outros mostraram que essas clulas esto presentes na parede do tubo neural continuamente, da borda luminal at a borda externa, mas
como seus ncleos esto em diferentes alturas, tem-se a impresso que a parede do tubo
neural composta por diversas camadas de clulas. A sntese de DNA (fase S) ocorre
quando o ncleo est na borda externa do tubo, e o ncleo migra luminalmente enquanto
a mitose continua (Figura 7.20). A mitose ocorre no lado luminal da camada celular.
Durante o desenvolvimento precoce de mamferos, 100% das clulas do tubo neural
incorporam timidina radioativa ao DNA (Fujita, 1964). Logo em seguida, certas clulas
no mais incorporam esses precursores de DNA, indicando que no esto mais participando da sntese de DNA e da mitose. Essas clulas neurnicas e da glia podem, agora,
se diferenciar na periferia do tubo neural (Fujita, 1966; Jacobson, 1968).
Se clulas em diviso so marcadas com timidina radioativa em um nico estgio
de seu desenvolvimento e seus descendentes so identificados no crtex externo
do crebro adulto, isso significa que os neurnios tiveram que migrar para sua
posio cortical a partir do neuroepitlio embrionrio. Isso acontece quando a clula se divide verticalmente em lugar de horizontalmente. Nesses casos, a clula
adjacente ao lmen fica ligada superfcie ventricular, enquanto a outra clula filha
se afasta (Chenn McConnell, 1995). Essa diviso a ultima do neurnio e chamada
de aniversrio do neurnio. Diferentes neurnios e clulas gliais tm seus aniversrios em tempos diferentes. Marcao em diferentes pontos do desenvolvimento
mostra que clulas com aniversrios mais precoces migram distncias mais curtas.
Clulas com aniversrios mais tardios, migram atravs dessas camadas para formar
as regies superficiais do crtex. A diferenciao que se segue depende da posio
que esses neurnios ocupam uma vez fora da regio de clulas em diviso
(Letourneau, 1977; Jacbson, 1991).
Figura 7.20
Seo esquemtica do tubo neural de um embrio de galinha, mostrando a posio do ncleo de

uma clula neuroepitelial como funo do ciclo celular. Clulas mitticas so encontradas prximo ao centro do tubo neural, adjacente ao lmen. (B) Micrografia eletrnica de varredura de um
tubo neural de galinha, recm-formado, mostrando clulas em diferentes estgios do ciclo celular.
(A de acordo com Sauer, 1935; B, cortesia de K. Tosney.)
(A)
Estgio do ciclo celular
Lmen do tubo neural
(B)
Medula espinhal
Placa cortical (CP)
Lmina dissecans (L)
Zona intermediria (I)
Zona marginal (M)
Camada ependimria (E)
Camada granular (GL)
Zona ventricular
germinal (V)
Zona
subventricular (S)
Camada granular
externa (EG)
Camada das clulas

de Purkinje (P)
271
Camada molecular
de axnios das
clulas granulares
Cerebelo
Tubo neural
Camada molecular
Neocrtex
Crtex cerebral
Massa branca
Enquanto as clulas adjacentes ao lmen continuam a se dividirem, as clulas

migratrias formam uma segunda camada ao redor do tubo neural original. Essa
camada se torna progressivamente mais espessa medida que mais clulas do
neuroepitlio embrionrio so adicionadas. Essa nova camada chamada zona do
manto (ou intermediria) e o epitlio embrionrio agora chamado de zona
ventricular (e, mais tarde, epndima) (Figura 7.21). As clulas da zona do manto se
diferenciam em neurnios e clulas gliais. Os neurnios fazem conexes entre si e
emitem axnios se afastando do lmen, criando portanto uma zona marginal pobre
em clulas. Clulas gliais cobrem muitos desses axnios da zona marginal com bainhas de mielina, dando-lhes uma aparncia esbranquiada. Assim, a zona do manto,
contendo os corpos celulares, freqentemente referida como massa cinzenta, e a
camada marginal, axonal, como massa branca.
O esquema bsico de trs camadas: a ependimria, a do manto e a marginal
mantido durante todo o desenvolvimento, tanto na medula espinhal como no bulbo. A
massa cinzenta (manto) gradualmente adquire uma estrutura com forma de borboleta
rodeada pela massa branca; ambas so envolvidas por tecido conjuntivo. medida
que o tubo neural amadurece, um sulco longitudinal -sulcus limitans- aparece para
dividi-lo em duas partes, dorsal e ventral. A poro dorsal recebe estmulos dos
Figura 7.21
Diferenciao das paredes do tubo neural. Seo de um tubo neural humano de 5 semanas,
contendo 3 zonas: ependimria, manto e marginal. Na medula espinhal e no bulbo (linha
superior), o epndima a nica fonte de neurnios e clulas gliais. No cerebelo (linha do
meio) uma segunda camada mittica, a camada granular externa, se forma na regio mais
remota do epndima. Neuroblastos dessa camada migram de volta para a zona intermediria para formar as clulas do grnulo. No crtex
cerebral (linha inferior), os neuroblastos ou
glioblastos em migrao formam uma placa
cortical contendo seis camadas. (De acordo com
Jacobson, 1991.)
272
(A)
(B)
(C)
(D)
Epiderme
Regio
presuntiva basal
Sulcus
limitans
Regio
presuntiva alar
(E)
Gnglio da
raiz dorsal
Neurnio de associao
Nervo
espinhal
Raiz dorsal
Neurnio
sensorial
Neurnio
somtico motor
Camada marginal
Camada
do manto
Figura 7.22
Desenvolvimento da medula espinhal humana. (A-D) O tubo neural funcionalmente dividido nas regies dorsal (alar, A) e ventral
(basal, B), separadas pelo sulcus limitans.
Enquanto os condroblastos da regio esclertoma do somito formam as vrtebras espinhais,
o tubo neural se diferencia nas zonas ependimria, do manto e marginal, e o teto e o
assoalho se tornam distintos. (E) Um segmento da medula espinhal com suas razes sensoriais (alar) e motoras (basal). (De acordo com
Larsen, 1993.)
Camada ependimria
(ventricular)
neurnios sensoriais, enquanto a poro ventral est envolvida na realizao de vrias funes motoras (Figura 7.22).
Organizao do cerebelo
No encfalo, a migrao celular, o crescimento diferencial e a morte celular seletiva
produzem modificaes no modelo de trs camadas, especialmente no cerebelo e no
crebro. Alguns neurnios penetram a massa branca para diferenciarem-se em aglomerados de neurnios chamados ncleos. Cada ncleo desempenha o papel de uma
unidade funcional, servindo como uma estao de retransmisso entre as camadas
externas do cerebelo e outras partes do encfalo. Alm disso, as clulas neurnicas
precursoras, em diviso, neuroblastos, migram para a superfcie externa do cerebelo
em desenvolvimento, formando uma nova zona embrionria, camada embrionria
externa, prxima ao limite externo do tubo neural. No limite externo da camada embrionria externa (na espessura de uma ou duas clulas), os neuroblastos proliferam. Na
parte interna da camada esto os neuroblastos ps-mitticos que so os precursores
dos neurnios mais importantes do crtex do cerebelo, as clulas granulares. Essas
clulas neuronais pr-granulares migram de volta para a massa branca do cerebelo em
desenvolvimento para produzir clulas neurnicas granulares em uma regio chamada
camada granular interna. Enquanto isso, a camada ependimria original do cerebelo
origina uma grande variedade de neurnios e clulas gliais, incluindo os notveis e
grandes neurnios de Purkinje. Cada um deles tem um enorme aparelho dendrtico,
que se espalha como um leque sobre o corpo celular em forma de bulbo. Uma clula
de Purkinje tpica pode formar at 100.000 sinapses com outros neurnios, mais do que
qualquer outro neurnio estudado. Cada neurnio de Purkinje tambm emite um axnio
delgado que se comunica com outras clulas nos ncleos cerebelares profundos.
O desenvolvimento de uma organizao espacial crtico para o funcionamento
correto do cerebelo. Todos os impulsos regularo a atividade da clulas de Purkinje,
que so os nicos neurnios que liberam impulsos para fora do crtex cerebelar. Para
que isso acontea, as clulas adequadas devem se diferenciar no tempo e local adequados. Como isso acontece?
Um mecanismo considerado importante para posicionar neurnios jovens dentro
de encfalo de mamferos em desenvolvimento o direcionamento glial (Rakic, 1972;
Hatten, 1990). Atravs do crtex, os neurnios parecem caminhar no monotrilho da
glia para seu respectivo destino. No cerebelo, os precursores das clulas granulares
caminham nos longos prolongamentos da glia de Bergmann (Figura 7.23; Rakic e
Sidman, 1973; Rakic, 1975). A interao neuroglial consiste em uma complexa e fascinante srie de eventos, envolvendo reconhecimento recproco entre a glia e o
neuroblasto (Hatten, 1990; Komuro e Rakic, 1992). O neurnio mantm sua adeso
clula da glia atravs de vrias protenas, a mais importante sendo uma protena de
adeso chamada astrotactina. Se a astrotactina na clula nervosa mascarada pelo
seu respectivo anticorpo, a clula nervosa no adere ao prolongamento da glia
(Edmondson et al., 1988; Fishell e Hatten, 1991).
A anlise de mutaes neurolgicas no camundongo poder, em breve, fornecer
conhecimentos novos sobre os mecanismos de ordenao espacial. Mais de 30 mutaes conhecidas afetam o arranjo de neurnios cerebelares. Muitos dos mutantes
cerebelares foram encontrados porque o fentipo de tais mutantes - principalmente a
inabilidade de manter o equilbrio ao andar - pode ser facilmente reconhecido. Por
razes bvias essas mutaes so identificadas na lngua inglesa com nomes como
weaver, reeler, staggerer e waltzer. [ecto4.html], [ecto5.html]
(B)
(A)
Processo condutor
do neurnio
(C)
Neurnio em
migrao
Processo da
clula glial
273
Figura 7.23
Migrao neurnica em prolongamentos gliais.

(A) Diagrama com um neurnio cortical migrando em um prolongamento da clula glial.
(B) Micrografia eletrnica da regio onde a
soma do neurnio adere ao prolongamento glial.
(C) Fotografias seqenciais de um neurnio
migrando em um prolongamento de glia
cerebelar. A extremidade anterior do neurnio
apresenta vrias extenses filopdicas. Ela
atinge velocidades de 60 m/hora em sua migrao nos prolongamentos gliais. (A de acordo com Rakic, 1975; B de Gregory et al., 1988;
C de Hatten, 1990, cortesia de M. Hatten.)
274
Organizao cerebral
Figura 7.24
Gradiente invertido na formao do crtex

cerebral no macaco rhesus. Os aniversrios
dos neurnios corticais foram determinados
injetando [3H]-timidina endovenosamente nos
animais em determinados tempos de gestao.
Aps o nascimento dos animais, verificou-se
que as clulas mais fortemente marcadas eram
aquelas que estavam na fase S do seu ltimo
ciclo de diviso. Essas clulas migraram para
vrias regies e foram detectadas por autoradiografia de cortes microscpicos. A figura
representa a posio desses neurnios indicados no crtex visual. O tempo de gestao no
macaco rhesus de 165 dias. Os neurnios
mais jovens esto na periferia do tubo neural
(De acordo com Rakic, 1974.)
A disposio em trs zonas tambm modificada no crebro, que organizado de

duas maneiras distintas. Primeiro, de maneira anloga ao cerebelo, a organizao vertical feita em camadas que interagem entre si (veja Figura 7.21). Certos neuroblastos
da zona do manto migram na glia atravs da massa branca para dar origem a uma
segunda zona de neurnios. Essa nova zona de manto chamada crtex do neopleo.
Esse crtex se estratifica em seis camadas de corpos celulares e a forma adulta desses
neurnios do neopleo s se completa na metade da infncia. Cada camada do crtex
cerebral diferente da outra em relao s suas propriedades funcionais, os seus tipos
de neurnios e os conjuntos de conexes que produzem. Por exemplo, neurnios da
camada 4 recebem seu principal estmulo do tlamo (a regio que se forma do
diencfalo), enquanto os neurnios na camada 6 enviam sua maior produo de volta
para o tlamo. Segundo, horizontalmente o crtex cerebral est organizado em mais de
40 regies que regulam, anatomica e funcionalmente, processos distintos. Por exemplo, neurnios da camada cortical 6 do crtex visual projetam axnios para o ncleo
lateral geniculado do tlamo, enquanto neurnios da camada 6 do crtex auditivo
(localizado mais anteriormente que o crtex visual) projetam axnios ao ncleo mdio
geniculado do tlamo.
Nem a organizao vertical e nem a horizontal so especificamente clonadas. Na
verdade, existe um grande nmero de movimentos celulares que misturam a descendncia de vrias clulas precursoras. Aps sua mitose final, a maioria dos neurnios
recm- gerados migram radialmente, ao longo dos prolongamentos da glia, para fora
da zona ventricular (ependimria) e formam a placa cortical abaixo da pia-mater do
crebro. Assim como no crtex cerebelar, os neurnios com os aniversrios mais
cedo formam a camada mais prxima do ventrculo. Os neurnios subseqentes caminham distncias maiores para formar as camadas mais superficiais do crtex. Isso
forma um gradiente de desenvolvimento ao avesso (ou invertido) (Figura 7.24;
Rakic, 1974). Uma nica clula germinativa pode produzir neurnios (e clulas gliais)
Injees de [3H] - timidina

Camadas
corticais
Massa
branca
Camada
ventricular
Dias de gestao
Nascimento
(A)
[3H]-timidina no dia embrionrio 29
(C)
275
(D)
Migrao
neural do
hospedeiro
Massa
branca
Camadas corticais
[3H]-timidina no dia ps-natal 1
Camadas corticais
Porcentagem de neurnios marcados com [3H]-timidina
Migrao neural
do hospedeiro
Camada
intermediria
Camada
ventricular
Destino independente da
clula quando transplantada
aps ltima fase S.
Clula glial
Destino condicionado ao
hospedeiro quando
transplantado na fase S.
Figura 7.25
Massa
branca
Camadas corticais
Determinao de identidade laminar em crebro de doninha. (A) Precursores neuronais precoces (aniversrios no dia embrionrio 29) migram para a camada 6. (B) Precursores neuronais
tardios (aniversrios no dia ps-natal 1) migram mais adiante para as camadas 2 e 3. (C)
Quando os precursores precoces (vermelho) so transplantados em zonas ventriculares mais
velhas, aps sua ltima fase S mittica, os neurnios que eles formam migram para a camada
6. (D) Se esses precursores so transplantados antes ou durante sua ltima fase S, seus
neurnios migram (com os neurnios do hospedeiro) para a camada 2. (De acordo com
McConnell e Kaznowski,1991.)
em qualquer das camadas corticais (Walsh e Cepko, 1988). Mas, como que a clula
reconhece a camada na qual deve entrar? McConnell e Kaznowski (1991) mostraram
que a determinao da identidade laminar (isto , para qual camada a clula migrar)
feita durante a diviso celular final. Clulas transplantadas de crebros jovens (onde
elas formariam a camada 6) para crebros mais velhos, cujos neurnios migratrios
esto formando a camada 2 aps sua ltima diviso, mantm seu destino e migram
somente para a camada 6. Entretanto, se as clulas so transplantadas antes de sua
diviso final (na metade da fase S), elas no tm destino fixo e podem migrar para a
camada 2 (Figura 7.25). Os destinos de clulas progenitoras mais velhas so mais
determinados. As clulas cerebrais corticais progenitoras precoces tm o potencial
para transformarem-se em qualquer neurnio (nas camada 2 ou 6, por exemplo), mas as
clulas corticais progenitoras tardias do origem somente a neurnios da camada
superior (camada 2) (Frantz e McConnell, 1996). Ainda no conhecemos a natureza da
informao transmitida clula ao ser fixado o seu destino.
Nem todos os neurnios migram radialmente. ORourke e seus colegas (1992)
marcaram neurnios jovens com corante fluorescente e seguiram sua migrao atravs do crebro. Enquanto mais ou menos 80% dos jovens neurnios migraram radialmente em processos gliais, da zona ventricular para a placa cortical, aproximadamente
12% deles migraram lateralmente de uma regio funcional do crtex para outra. Essas
observaes esto de acordo com aquelas de Walsh e Cepko (1992), que infectaram
clulas ventriculares com um retrovrus e conseguiram corar essas clulas e seus
descendentes aps o nascimento. Eles descobriram que os descendentes neurais de
276
uma nica clula ventricular estavam dispersos atravs das regies funcionais do
crtex. Quando neurnios do crtex do crebro anterior foram transplantados para a
regio que formaria o corpo estriado, essas clulas adquiriram a morfologia do estriado
(Fishell, 1995). Portanto, a especificao de funes determinadas pelas reas corticais
ocorre aps a neurognese. Considera-se que chegando a seu destino final, as clulas
produzem molculas adesivas especficas que as organizam e as agrupam como ncleos cerebrais (Matsunami e Takeichi, 1995).
O crebro bastante plstico e o desenvolvimento do crtex neopleo humano
particularmente notvel a esse respeito. O crebro humano continua a se desenvolver
na velocidade do desenvolvimento fetal, mesmo aps o nascimento (Holt et al., 1975).
Baseado em critrios morfolgicos e de comportamento, Portmann (1941, 1945) sugeriu que, comparada com outros primatas, a gestao humana deveria durar 21 meses
em lugar de 9. Entretanto, nenhuma mulher poderia dar luz um feto de 21 meses, pois
sua cabea no passaria pelo canal do parto; assim a espcie humana d luz aps 9
meses. Montagu (1962) e Gould (1977) sugeriram que durante o primeiro ano de vida,
somos essencialmente fetos extra-uterinos, e eles especulam que a inteligncia humana vem da estimulao do sistema nervoso que est se formando durante aquele
primeiro ano.*
Tipos de neurnios
O crebro humano consiste de mais de 1011 clulas nervosas (neurnios) associadas
com mais de 1012 clulas gliais. Aquelas clulas que permanecem como componentes
integrais do revestimento do tubo neural se transformam em clulas ependimrias.
Essas clulas podem dar origem a precursores de neurnios e clulas gliais. Considera-se que a diferenciao dessas clulas precursoras principalmente determinada
pelo ambiente no qual elas entram (Rakic e Goldman, 1982) e que, em pelo menos
alguns casos, uma determinada clula precursora pode formar ambos, neurnios e
clulas gliais (Turner e Cepko, 1987). Existe uma grande variedade de tipos de neurnios e clulas gliais (como fica evidente pela comparao entre uma clula granular
relativamente pequena e o enorme neurnio de Purkinje). As delgadas extenses das
clulas, usadas para captar impulsos eltricos so chamadas dendritos (Figura 7.26).
Alguns neurnios desenvolvem somente alguns dendritos, enquanto outras clulas
(como os neurnios de Purkinje) desenvolvem extensas reas para interaes celulares. Muito poucos dendritos so encontrados em neurnios corticais no nascimento,
mas uma das coisas maravilhosas, a respeito do primeiro ano de vida do ser humano,
o aumento do nmero dessas regies receptivas nos neurnios corticais. Durante
esse ano, cada neurnio cortical desenvolve um nmero suficiente de dendritos (ou
superfcie dendrtica) para acomodar at 100.000 conexes com outros neurnios. O
neurnio cortical, em mdia, se conecta com 10.000 outros neurnios. Esse padro de
conexes neurais (sinapses) permite ao crtex humano funcionar como o centro para
o aprendizado, raciocnio e memria, e a desenvolver a capacidade de expresso simblica, bem como a produo de respostas a estmulos interpretados.
Outra caracterstica importante de um neurnio em desenvolvimento seu axnio
(s vezes chamado um neurito). Enquanto os dendritos so freqentemente numerosos e no se extendem muito alm do corpo da clula nervosa, ou soma, os axnios
podem se alongar por vrios centmetros. Os receptores da dor no dedo grande (hlux)
do p, por exemplo, precisam transmitir suas mensagens por um longo caminho at a
* Ao contrrio do que afirma um filme antiaborto, amplamente divulgado, o crtex cerebral
humano no tem conexes neurnicas na 12a semana de gestao (e, portanto, no pode se mover
em resposta a um pensamento, nem mostrar conscincia ou medo). A atividade eltrica mensurvel,
caracterstica de clulas neurais (o padro do eletroencefalograma, ou EEG) verificada inicialmente aos 7 meses de gestao. Morowitz e Trefil (1992) sugeriram provocativamente que tendo a
sociedade, nos Estados Unidos, aceito que a definio de morte a perda do padro de EEG, talvez
ela devesse aceitar a aquisio do padro de EEG como o comeo da vida humana.
Figura 7.26
Dendritos
Diagrama de um neurnio motor. Impulsos recebidos pelos dendritos e o neurnio estimulado podem transmitir impulsos eltricos atravs do axnio (que podem ter 60 a 90 cm de
comprimento) para o tecido alvo. A bainha de mielina que promove o isolamento do axnio
formada pelas clulas de Schwann adjacentes. (De acordo com Bloom e Fawcett, 1975.)
RECEPTOR
Cone do
axnio
Segmento
inicial
do axnio
CONDUTOR
277
Chegada de impulsos
via axnios de outros
neurnios
N de
Ranvier
Impulso
nervoso
Clula de
Schwann
Bainha de mielina
EFETOR
Msculo esqueltico
medula espinhal. Um dos conceitos fundamentais da neurobiologia que o axnio

uma extenso contnua do corpo da clula nervosa. Na virada do sculo vinte, vrias
teorias competiam para explicar a formao de axnios. Schwann, um dos fundadores
da teoria celular, acreditava que numerosas clulas neurais se ligavam umas s outras,
em forma de cadeia, para formar um axnio. Hensen, o descobridor do ndulo embrionrio, admitia que o axnio se formava ao redor de fibras citoplasmticas pr-existentes entre as clulas. Wilhelm His (1886) e Santiago Ramn y Cajal (1890) postularam
que o axnio era, na verdade, uma projeo (apesar de extremamente grande) do corpo
celular (soma). Em 1907, Ross Harrison demonstrou a validade da teoria da projeo
com um elegante experimento que foi a pedra fundamental tanto da cincia do desenvolvimento neurobiolgico como da tcnica de cultura de tecidos. Harrison isolou
uma poro de um tubo neural de um girino de r de 3mm; nesse estgio, logo aps o
fechamento do tubo neural, no h uma diferenciao visvel dos axnios. Ele colocou
esses neuroblastos em uma gota de linfa de r sobre uma lamnula e a inverteu sobre
outra lmina com depresso, de modo a poder observar o que se passava nessa gota
pendente. O que Harrison viu foi a emergncia de axnios como projees dos neuroblastos, alongando a 56 m/hora.
Esse prolongamento do nervo liderado pela ponta do axnio, chamada de cone
de crescimento (Figura 7.27). Esse cone no progride em linha reta, mas vai abrindo
caminho ao longo do substrato. O cone de crescimento se move por elongao e
contrao de filopdios afilados, chamados microespculas. Essas microespculas
contm microfilamentos, orientados paralelamente ao eixo longo do axnio (essa
uma situao similar quela dos microfilamentos filopdicos das clulas mesenquimatosas secundrias em equinodermos). Tratando os neurnios com citocalasina B, as
microespculas de actina so destrudas, inibindo seu avano ulterior (Yamada et al.,
1971; Forscher e Smith, 1988). Dentro do prprio axnio, o suporte estrutural
278
Cone de crescimento
Microespculas
(A)
(B)
(C)
Figura 7.27
Microespculas de actina em cones de crescimento de axnios como vistos por (A) microscopia
eletrnica de transmisso, (B) microscopia de contraste da interface diferencial e (C) microscopia
de fluorescncia com anticorpos fluorescentes actina. (A de Letourneau,1979; B e C de
Forscher e Smith, 1988. Todas fotografias, cortesia dos autores.)
fornecido por microtbulos, e o axnio se retrair se for colocado em uma soluo de

colchicina. Assim, o neurnio em desenvolvimento retm as mesmas cartactersticas
que foram observadas nas regies de articulao dorsolateral do tubo neural, a saber,
alongamento por microtbulos e modificaes da forma apical pelos microfilamentos.
Como na maioria das clulas migratrias, os filopdios exploratrios do axnio aderem
ao substrato e exercem uma fora que puxa o resto da clula para frente. Os axnios
no crescero se o cone de crescimento no conseguir avanar (Lamoureux et al.,
1989). Alm da funo estrutural na migrao de axnios, os filopdios tm tambm
uma funo sensorial. Explorando o ambiente frente do cone de crescimento, cada
filopdio faz a amostragem dos microambientes e manda sinais de volta para o corpo
da clula (Davenport et al., 1993). Como veremos no Captulo 8, os filopdios so as
organelas fundamentais envolvidas na determinao do caminho do neurnio.
Neurnios transmitem impulsos eltricos de uma regio a outra. Usualmente esses
impulsos vo dos dendritos soma do nervo, de onde so focalizados nos axnios.
Para impedir a disperso do sinal eltrico e facilitar a sua conduo, o axnio, no
sistema nervoso central isolado em intervalos por processos que se originam de um
tipo de clula glial chamada oligodendrcito. Um oligodendrcito se enrola ao redor
do axnio em desenvolvimento; produz, ento, uma membrana especializada que rica
em protena bsica mielina e se espirala ao redor do axnio central (Figura 7.28). Essa
membrana especializada chamada bainha de mielina. (No sistema nervoso perifrico,
uma clula glia chamada clula de Schwann realiza essa mielinizao.) A bainha de
mielina essencial para uma adequada funo neural, e a desmielinizao das fibras
nervosas est associada convulses, paralisia e vrios outros problemas de sade,
debilitantes ou mortais. No mutante trembler do camundongo, as clulas de Schwann
no conseguem produzir um determinado componente protico da bainha de mielina,
fazendo com que a mielinizao do sistema nervoso perifrico seja deficiente, mas
normal no sistema nervoso central. Ao contrrio, em outro mutante de camundongo,
jimpy, o sistema nervoso central deficiente em mielina, enquanto o perifrico no
afetado (Sidman et al., 1964; Henry e Sidman, 1988).
O axnio tambm precisa ser especializado na secreo de neurotransmissores
especficos nos pequenos espaos (fendas sinpticas) que separam o axnio da superfcie da clula alvo (soma, dendritos, ou o axnio de um neurnio receptor ou um
279
Figura 7.28
Clula oligodendroglial
MIELINIZAO
NO SISTEMA
NERVOSO CENTRAL
Axnio
Mielinao nos sistemas nervosos central e perifrico. (A) No

sistema nervoso perifrico, as clulas de Schwann se enrolam ao
redor do axnio; no sistema nervoso central, a mielinao realizada por prolongamentos de oligodendrcitos. (B) O mecanismo
desse enrolamento leva produo de um enorme complexo de
membrana. (C) Micrografia de um axnio envolvido pela membrana de mielina de uma clula de Schwann. (Fotografia cortesia
de C. S. Raine.)
N de Ranvier
Axnio
(A)
(B)
MIELINIZAO NO
SISTEMA NERVOSO PERIFRICO
Clula de Schwann
Clula de Schwann
Axnio
(C)
stio receptor em um rgo perifrico). Alguns neurnios so capazes de sintetizar e

secretar acetilcolina, enquanto outros desenvolvem vias enzimticas para sintetizar e
secretar epinefrina, norepinefrina, octopamina, serotonina, cido aminobutrico,
dopamina, ou algum outro neurotransmissor. Cada neurnio precisa ativar aqueles
genes responsveis pela produo de enzimas capazes de sintetizar seus
neurotransmissores. Portanto, o desenvolvimento neurnico envolve diferenciao
tanto estrutural como molecular.
Desenvolvimento do olho em vertebrados

O indivduo conhece seu ambiente pelos seus rgos sensoriais. Os principais rgos
do sentido da cabea se desenvolvem a partir das interaes do tubo neural com uma
srie de espessamentos epidrmicos chamados de placdios ectodrmicos cranianos.
Os placdios mais anteriores so os dois placdios olfativos que formam os gnglios
dos nervos olfativos, responsveis pelo sentido do olfato. Os placdios auditivos, da
mesma maneira, se invaginam para formar o labirinto do ouvido interno, cujos neurnios formam o gnglio acstico que nos permite ouvir. Nessa parte, focalizaremos o
olho porque esse rgo, mais que qualquer outro do corpo, precisa se desenvolver
com uma coordenao exata.
Dinmica do desenvolvimento tico
A histria do desenvolvimento tico comea na gastrulao, quando o endoderma
involutivo e o mesoderma interagem com o adjacente, prospectivo ectoderma da cabea. Essa interao induz o ectoderma da cabea formao de lentes (cristalino) (Saha
et al., 1989). *Mas, nem todas as partes do ectoderma da cabea formam os cristalinos,
e o cristalino deve ter uma relao precisa com a retina. A ativao dessa habilidade
* As indues que permitem a formao do olho sero detalhadas no Captulo 17.
280
Parede do
crebro anterior
Ectoderma
da cabea
Vescula
ptica
primria
Camada
neural
Vescula
ptica
(B) Embrio de 4.5-mm
Cristalino
Vescula
do
cristalino
Placdio
do
cristalino
(A) Embrio de 4-mm
Camada
pigmentada
(C) Embrio de 5-mm
(D) Embrio de 7-mm
Figura 7.29
Desenvolvimento do olho de vertebrado. (A)

A vescula ptica evagina do crebro e contata
o ectoderma sobreposto. (B,C) O ectoderma
sobreposto diferencia-se em clulas do cristalino enquanto as vesculas pticas se dobram
sobre si mesmas e os placdios do cristalino
se tornam vesculas do cristalino. (C) A vescula
ptica se torna a retina neural e pigmentada,
enquanto o cristalino internalizado. (D) A
vescula do cristalino induz o ectoderma sobreposto a se tornar crnea. (Ilustraes superiores de acordo com Mann, 1964; micrografias A-C de Hilfer e Yang, 1980, cortesia de
S. R. Hilfer; D, cortesia de K. Tosney.)
latente na formao do cristalino e o posicionamento do cristalino em relao retina

realizado pela vescula ptica. No homem, as vesculas pticas tm incio como duas
protuberncias nas paredes laterais do diencfalo em embries de 22 dias (Figura
7.29). Essas protuberncias continuam a crescer lateralmente ao tubo neural e esto
ligadas ao diencfalo por pednculos pticos. Subseqentemente, quando essas
vesculas atingem o ectoderma da cabea, essa se espessa formando o placdio do
cristalino. A necessidade de um contato ntimo entre as vesculas pticas e o ectoderma superficial comprovada experimentalmente e em certos mutantes. Por exemplo, no
mutante de camundongo, eyeless, as vesculas pticas no fazem contato com a superfcie e a formao do olho cessa (Webster et al., 1984).
Uma vez formado, o placdio do cristalino causa, de maneira recproca, modificaes na vescula ptica que sofre uma invaginao formando um clice ptico de
parede dupla (veja Figura 7.29C). medida que a invaginao continua, a conexo
entre o clice ptico e o crebro reduzida, tornando-se alongada e estreita. Ao
mesmo tempo, as duas camadas do clice ptico comeam a se diferenciar em direes
diferentes. As clulas da camada externa produzem pigmentos e finalmente se transformam na retina pigmentada (um dos poucos tecidos, alm das clulas da crista
neural, que podem sintetizar sua prpria melanina). As clulas da camada interna
proliferam rapidamente e do origem a uma variedade de glia, neurnios ganglionrios,
interneurnios e neurnios fotorreceptores sensveis luz. Coletivamente, essas constituem a retina neural. Os axnios das clulas ganglionares da retina neural se encontram na base do olho e se dirigem para baixo, pelo pednculo ptico. O pednculo
ento chamado nervo ptico.
Diferenciao da retina neural
Como os crtices cerebral e cerebelar, a retina neural se desenvolve em uma sucesso
de camadas com diferentes tipos de neurnios (Figura 7.30). Essas camadas incluem
as clulas fotorreceptoras sensveis luz e cor (bastonetes e cones), os corpos
celulares das clulas ganglionrias e os interneurnios bipolares que transmitem o
281
Bastonetes e cones
dos fotorreceptores
Corpos celulares
dos fotorreceptores
Camada
neuroblstica
externa
Camada
plexiforme externa
Camada dos
nervos bipolares
Camada
neuroblstica
interna
Camada
plexiforme interna
Camada de clulas ganglionares
(A)
Clulas ganglionares
(B)
Fibras do nervo ptico

(C)
(D)
Luz
estmulo eltrico dos bastonetes e cones s clulas ganglionrias. Alm disso, existem
numerosas clulas gliais de Mller que mantm a integridade da retina, bem como
neurnios amcrinos (sem grandes axnios) e neurnios horizontais que transmitem
impulsos eltricos no plano da retina.
Nos estgios iniciais do desenvolvimento da retina, a diviso celular de uma camada embrionria e a migrao e morte diferencial das clulas resultantes formam o
padro laminar, estriado, da retina neural. A formao desse tecido altamente estruturado
um dos problemas mais intensamente estudado em neurobiologia do desenvolvimento. Mostrou-se que (Turner e Cepko, 1987) uma nica clula precursora do
neuroblasto retinal pode dar origem a pelo menos trs tipos de neurnios ou dois
tipos de neurnios e uma clula glia. Essa anlise foi feita usando uma tcnica engenhosa para marcar as clulas geradas por uma clula precursora especfica. Ratos
recm-nascidos (cujas retinas ainda esto se desenvolvendo) foram injetados, no
fundo do olho, com um vrus que se integra ao seu DNA. Esse vrus continha um gene
da -galactosidase (no presente na retina do rato) que seria expresso somente nas
clulas infectadas. Um ms aps a infeco dos ratos, as retinas foram removidas e
coradas para detectar a presena de -galactosidase. Somente os descendentes das
clulas infectadas deveriam ser coradas de azul. A Figura 7.31 mostra uma fita de
clulas derivadas de uma clula precursora infectada. A colorao pode ser vista em
cinco bastonetes, um neurnio bipolar e uma clula glia (Mller).
Figura 7.30
(A)
Figura 7.31
(B)
4-6 semanas
Cristalino
Retina
Epitlio
pigmentado
Remova a
retina, fixe
e core e
analise os
clones
Desenvolvimento da retina humana. Neurnios da retina se distribuem em camadas funcionais durante o desenvolvimento. (A,B)
Separao inicial de neuroblastos dentro da
retina. (C) As trs camadas de neurnios na
retina adulta e as camadas sinpticas entre
elas. (D) Uma apresentao funcional dos
principais caminhos dos neurnios na retina.
A luz atravessa as camadas at ser recebida
pelos fotorreceptores. Os axnios dos fotorreceptores fazem sinapse com neurnios bipolares que transmitem a despolarizao para
os neurnios ganglionares. Os axnios das
clulas ganglionares se renem para formar o
nervo ptico que entra no crebro. (A e B
segundo Mann, 1964; fotografia cortesia de
G. Grunwald.)
Determinao da linhagem de uma clula precursora na retina do rato. (A) Tcnica pela
qual um vrus contendo um gene de galactosidase funcional injetado na parte dorsal do olho para infectar algumas das clulas
precursoras da retina. Aps um ms ou 6 semanas, o olho removido e a retina corada
para -galactosidase. (B) Clulas coradas formando uma banda atravs da retina neural, incluindo 5 bastonetes (r), um neurnio bipolar
(bp), um neurnio terminal (t) e clulas gliais
de Mller (mg). As identidades dessas clulas
foram confirmadas por microscopia de contraste Nomarski. (Barra de escala, 20 m). (de
Turner e Cepko, 1987, fotografia cortesia de
D. Turner.)
282
Muitas clulas do crebro anterior expressam um fator de transcrico chamado

Pax6. Essa protena parece ser especialmente importante para o desenvolvimento da
retina. Na verdade, pode ser um denominador comum para clulas fotorreceptoras em
todos os filos. O gene Pax6 tem provavelmente muitos papis, e um deles determinar
tecidos a se tornarem olhos. Se o gene Pax6 do camundongo inserido no genoma da
Drosophila e ativado casualmente, olhos se formam nas clulas onde o Pax6 do
camundongo est sendo expresso (Halder et al., 1995)! Apesar do gene ser tambm
expresso no crebro anterior e posterior e em placdios nasais murinos, os olhos
parecem ser os mais sensveis sua falta. No homem e no camundongo, heterozigotos
Pax6 tm olhos pequenos, enquanto homozigotos nas mesmas espcies (e na Drosophila) no tm olhos (Jordan et al., 1992; Glaser et al., 1994; Quiring et al., 1994). Esse
gene ser mais discutido no Captulo 23.
&
Especulaes
Porque os bebs no enxergam bem
ecm-nascidos humanos no
tm boa viso. Devem existir vrias razes para isso, mas a que
mais chama a ateno a imaturidade dos
fotorreceptores da retina. Estudos anatmicos realizados por Yuodelis e Hendrickson (1986) e estudos fsicos por Banks e
Bennett (1988) mostraram que os cones
fotorreceptores da retina central do recmnascido tm mais de 7.5m de dimetro,
que diminui at o valor adulto normal de
2m em cerca de 3 anos. Durante esse tempo, a densidade em cones nessa regio
aumenta de 18 fotorreceptores para 42 por
100 m, e os fotorreceptores desenvolvem tanto seus segmentos externos (que
captam a luz) quanto os seus axonais
basais. A Figura 7.32 destaca as diferenas entre os fotorreceptores em retinas

neonatal e adulta. A retina neonatal tem
receptores fracamente diferenciados, e
aqueles que existem so to largos que
poucos cabem em uma dada rea. Banks e
Bennett calcularam que isso causa um
decrscimo de absoro de luz na regio
central da retina do recm-nascido que
350 vezes pior do que a absoro de uma
mesma rea no adulto. Esse pequeno n-
mero de fotorreceptores por rea da retina tambm impede bebs de discriminar

dois pontos distncia. Essa pode ser a
razo pela qual os bebs apenas respondem a estmulos visuais quando esses so
trazidos prximo s suas faces. O desenvolvimento dos fotorreceptores da retina
no homem um excelente exemplo de diferenciao que comea cedo no desenvolvimento, mas que no se completa at
anos aps o nascimento.
Figura 7.32
Desenvolvimento de cones fotorreceptores na

regio central da retina humana. Sees de
microscopia de luz foram fotografadas e um
cone em cada retina delineado para clareza. O
epitlio pigmentado (PE), a camada plexiforme
externa (OPL), a glia de Mller (M), e os segmentos externos do fotorreceptor (OS) foram
marcados. (A) Feto de gestao de 22 semanas.
(B) Neonato 5 dias aps o nascimento. (C) Pessoa de 72 anos. A flecha aponta para a membrana limitante externa, que originalmente serviu
como borda para os axnios da retina. O axnio
delineado em (C) na realidade mais curto que
o normal, permitindo que a sinapse com o
neurnio bipolar possa ser mostrada na figura.
A sinapse formada no pedculo sinptico do
cone (CP). (de Yuodelis e Hendrickson, 1986,
cortesia de A. Hendrickson.)
(A)
(B)
(C)
283
Diferenciao do cristalino e da crnea

Durante o seu desenvolvimento progressivo em cristalino, o placdio do cristalino se
arredonda e contata o novo ectoderma que o recobre (veja Figura 7.29D). O ectoderma
ento induzido pela vescula do cristalino a formar a crnea transparente. Aqui,
parmetros fsicos tm um papel importante no desenvolvimento do olho. Presso de
fluido intraocular necessria para uma correta curvatura da crnea, de modo que a
luz possa ser focalizada na retina. A importncia dessa presso ocular pode ser demonstrada experimentalmente; a crnea no desenvolver sua curvatura caracterstica quando um pequeno tubo de vidro for inserido atravs da parede do olho da
galinha em desenvolvimento, para drenar os fluidos intraoculares (Coulombre, 1956,
1965). A presso intraocular sustentada por um anel de ossos esclerais (provavelmente derivados da crista neural), que funciona como uma restrio sem elasticidade.
A diferenciao do tecido do cristalino em uma membrana transparente capaz de
dirigir a luz na retina envolve modificaes na estrutura e forma celulares, assim como
a sntese de protenas especficas do cristalino chamadas cristalinas (Figura 7.33). As
cristalinas so sintetizadas enquanto a clula muda de forma, assim, fazendo com que
a vescula do cristalino se torne o cristalino definitivo. As clulas da poro interna da
vescula do cristalino se alongam, e sob a influncia da retina neural, produzem as
fibras do cristalino (Piatigorski, 1981). Enquanto as fibras continuam a crescer, elas
sintetizam cristalinas, as quais acabam enchendo a clula, causando a extruso do
ncleo. As fibras sintetizadoras de cristalinas continuando a crescer e preenchem o
espao entre as duas camadas da vescula do cristalino. As clulas anteriores da
vescula do cristalino constituem um epitlio embrionrio que continua a se dividir.
Essas clulas em diviso se movem em direo ao equador da vescula, e ao passar
pela regio equatorial elas tambm comeam a se alongar (Figura 7.33D). Assim, o
cristalino contm trs regies: uma zona anterior com clulas epiteliais em diviso,
uma zona equatorial de elongao celular e uma zona posterior e central de clulas
fibrosas contendo cristalinas. Esse arranjo persiste ao longo da vida do animal, pois
as fibras so continuamente depositadas. Na galinha adulta, a diferenciao de uma
clula epitelial em uma fibra do cristalino leva 2 anos (Papaconstantinou, 1967).
Diferenciao das clulas do cristalino. (A)

Vescula do cristalino conforme mostrada na
Figura 7.29. (B) Alongamento das clulas interiores, produzindo fibras do cristalino. (C)
Cristalino cheio de clulas sintetizando o cristalino. (D) Novas clulas do cristalino derivadas do epitlio anterior do cristalino. (E)
medida que o cristalino cresce, novas fibras
se diferenciam e os ncleos degeneram. (Segundo Paton e Craig, 1974.)
Cavidade
oca da
vescula do
cristalino
Epitlio
do cristalino
(A)
Figura 7.33
(B)
Cpsula anterior
do cristalino
Fibras primrias
se alongando
Epitlio
anterior
do cristalino
Regio
equatorial
(C)
Fibras
primrias
do cristalino
Fibras secundrias
do cristalino
(D)
Fibras
secundrias do cristalino
(E)
Cpsula
posterior do cristalino
Fibras primrias
do cristalino
284
Diretamente frente do cristalino, est um tecido muscular pigmentado chamado

ris. Esses msculos controlam o tamanho da pupila (e d ao indivduo a cor caracterstica de seus olhos). Parte da ris derivada da camada ectodrmica, o que diferente
de outros msculos do corpo (que so derivados do mesoderma). Especificamente,
essa regio da ris se desenvolve de uma poro do clice ptico que contnua com
a retina neural, mas no produz fotorreceptores.
Q A CRISTA NEURAL
A crista neural e seus derivados
Embora derivada do ectoderma, a crista neural algumas vezes considerada a quarta
camada germinativa devido sua importncia. Tem sido dito, talvez hiperbolicamente,
que a nica coisa interessante a respeito dos vertebrados a crista neural (citado
em Thorogood, 1989). As clulas da crista neural se originam na regio mais dorsal do
tubo neural. Experimentos com transplantes, onde uma placa neural de codorna
enxertada no ectoderma no-neural de galinha, mostram que justapondo esses tecidos se induz a formao de clulas da crista neural e que ambas, as prospectivas placa
neural e a epiderme, contribuem para a crista neural (Selleck e Bronner-Fraser, 1995;
Mancilla e Mayor, 1996). As clulas da crista migram extensivamente dando origem a
um incrvel nmero de tipos de clulas diferenciadas. Esses incluem (1) os neurnios
e clulas gliais dos sistemas nervosos sensorial, simptico e parassimptico, (2) as
clulas produtoras de epinefrina (medula) da glndula supra-renal, (3) as clulas
pigmentares da epiderme, e (4) muitos dos componentes dos tecidos esquelticos e
conjuntivos da cabea. O destino das clulas da crista neural depende, na sua maioria,
do lugar para onde elas migram e onde se instalam. A crista neural pode ser dividida em
quatro principais (mas parcialmente sobrepostos) domnios:
A crista neural ceflica (cabea), cujas clulas migram dorsolateralmente para
produzir o mesnquima craniofacial que se diferencia em cartilagem, osso, neurnios cranianos, glia e tecidos conjuntivos da face. Essas clulas tambm
entram nas bolsas farngeas para originar as clulas do timo, odontoblastos
dos primrdios dos dentes e a cartilagem do ouvido interno e o queixo.
A crista neural do tronco, cujas clulas tomam um de dois caminhos principais. Clulas da crista neural, que se tornam os melancitos sintetizadores de
pigmentos, migram dorsolateralmente para o ectoderma, e continuam em seu
caminho em direo linha mdia ventral do abdmen. Entretanto, a maioria da
clulas da crista neural do tronco passa ventrolateralmente atravs da metade
anterior de cada esclertomo. (Esclertomos so blocos de clulas mesodrmicas que cercam o tubo neural e diferenciam-se na cartilagem vertebral da espinha.) Essas clulas da crista neural do tronco que permanecem nos esclertomos
formam os gnglios dorsais da raiz. As clulas que continuam mais ventralmente formam os gnglios simpticos, a medula da supra-renal e o agrupamento de nervos circundando a aorta.
A crista neural cervical e sacral, cujas clulas do origem aos gnglios
parassimpticos (entricos) do intestino (Le Douarin e Teillet, 1973; Pomeranz
et al., 1991). A crista cervical tem posio oposta aos somitos 1-7 da galinha,
enquanto que a crista neural sacral posterior ao somito 28. A ausncia de
migrao da clula da crista neural para o clon resulta na falta de gnglios
entricos e, portanto, a ausncia de movimento peristltico nessa regio.
Isso resulta na obstruo funcional, dilatao e aumento da regio acima do
clon (megaclon).
Tabela 7.1
Alguns derivados da crista neural
Derivado
Tipo de clula ou estrutura derivados
Sistema nervoso perifrico

(PNS)
Neurnios, incluindo gnglios sensoriais

gnglios simpticos e parassimpticos,
e plexos
Clulas neurogliais
Clulas de Schwann
Derivados endcrinos e
paraendcrinos
Medula supra-renal
Clulas secretoras de calcitonina
Clulas do tipo I do corpo carotdeo
Clulas pigmentadas
Clulas epidrmicas pigmentadas
Cartilagem facial e ossos
Cartilagem facial e ventral anterior do crnio e ossos
Tecido conjuntivo
Endotlio e estroma corneano

Papilas dentais
Derme, msculo liso e tecido adiposo da
pele da cabea e do pescoo
Tecido conjuntivo das glndulas salivares,
lacrimais, do timo, tireide e pituitria
Tecido conjuntivo e msculo liso nas
artrias originadas do arco artico
Fonte: Segundo Jacobson, 1991, baseado em mltiplas fontes.
A crista neural cardaca pode estar localizada entre as cristas ceflica e do

tronco. Existem evidncias de que essas clulas da crista neural esto situadas
desde o primeiro at o terceiro somito de embries de galinha, sobrepondo-se
poro vagal anterior da crista neural que se estende do primeiro ao stimo
somito (Kirby, 1987; Kirby e Waldo, 1990). Essas clulas da crista neural podem
se desenvolver em melancitos, neurnios, cartilagem e tecido conjuntivo (do
terceiro, quarto e sexto arcos farngeos). Alm disso, essa regio da crista
neural produz a parede total do tecido muscular conjuntivo das grandes artrias ao se originarem do corao, como tambm contribui para o septo que
separa a circulao pulmonar da aorta (Le Livre e Le Douarin, 1975).
A Tabela 7.1 sumariza alguns tipos de clulas derivadas da crista neural.
A crista neural do tronco

Vias de migrao das clulas da crista neural do tronco
Como mostra a Figura 7.2, a crista neural do tronco uma estrutura transitria, pois
suas clulas se dispersam logo aps o fechamento do tubo neural. Existem duas vias
principais seguidas pelas clulas migratrias da crista neural (Figura 7.34).
A VIA DORSOLATERAL. Uma via possvel para migrao das clulas da crista neural
do tronco a via dorsolateral, pela qual os precursores dos melancitos se movem
pela periferia do embrio atravs do mesoderma subjacente derme. Elas penetram no
ectoderma atravs de minsculos orifcios na membrana basal (as quais elas podem
produzir) e colonizam a pele e os folculos, onde elas se diferenciam em melancitos
285
286
Epiderme
Caudal
Tubo neural
Dermomitomo
Esclertomo
Notocorda
Post.
Aorta
Ant.
Clulas da Via 2 tomam um

rota dorsolateral entre a epiderme
e o dermomitomo
Somito
Rostral
Figura 7.34
Migrao das clulas da crista neural no tronco do embrio do pinto. Via 1: As clulas viajam ventralmente atravs do esclertomo anterior (aquela poro do somito que gera a cartilagem vertebral). Aquelas clulas inicialmente opostas s pores posteriores dos
esclertomos migram ao longo do tubo neural
at alcanar uma regio anterior. Essas clulas
contribuem para os gnglios simpticos e
parassimpticos assim como para as clulas
da medula supra-renal e os gnglios da raiz
dorsal. Via 2: Algum tempo depois, clulas penetram na rota dorsolateral abaixo do ectoderma. Essas clulas se tornam melancitos produtores de pigmento.
Clulas da Via 1
viajam ventralmente atravs
do mitomo anterior
(Mayer, 1973; Erickson et al., 1992). Essa via foi demonstrada em uma srie de experimentos clssicos por Mary Rawles e outros (1948), que transplantaram o tubo neural
e a crista de uma linhagem pigmentada de galinha para o tubo neural de um embrio de
galinha albina. O resultado foi uma galinha branca com penas coloridas em uma regio
especfica (Figura 7.35A). A crista neural responsvel pela produo de todas as
clulas contendo melanina no organismo (com exceo de certos derivados neurais
como a retina pigmentada).
A VIA VENTRAL. Enxertando uma parte do tubo neural e a crista associada de embri-
es de galinha, radioativos ou geneticamente marcados, em outros embries, foi possvel identificar outra rota principal de migrao das clulas da crista neural do tronco
(Weston, 1963; Le Douarin e Teillet, 1974), investigadores foram capazes de traar uma
outra rota maior de migrao das clulas da crista neural (Figura 7.35B,C). Estudos
mais recentes estenderam essas pesquisas usando anticorpos fluorescentes, corantes
vitais, ou clulas transformadas por vrus para marcar e seguir clulas individuais da
crista neural at seu destino. As clulas saindo pela via ventral se tornam neurnios
sensoriais (raiz dorsal) e simpticos, clulas adrenomedulares e clulas de Schwann.
Como pode ser visto na Figura 7.36 e Prancha 19, essas clulas da crista neural do
tronco migram ventralmente atravs da poro anterior, mas no da poro posterior
dos esclertomos (Rickmann et al., 1985; Bronner-Fraser, 1986; Loring e Erickson,
1987; Teillet et al. 1987). Teillet e colaboradores associaram o procedimento com
anticorpos a um transplante de clulas da crista neural de codornas geneticamente
marcadas, a embries de galinha. O anticorpo marcador reconhece e marca as clulas
da crista neural de ambas espcies; o marcador gentico permite aos pesquisadores
(A)
(B)
Hospedeiro
Doador marcado
radioativamente
Figura 7.35
Migrao das clulas da crista neural. (A) Pinto resultante do transplante de uma regio da crista
neural do tronco de uma linhagem pigmentada de galinhas para uma regio da crista neural do
tronco de uma linhagem no-pigmentada. As clulas da crista que deram origem ao pigmento
foram capazes de migrar para a pele da asa. (B) Tcnica de enxerto para o mapeamento de clulas
da crista neural. Um pedao de eixo dorsal excisado de um embrio doador; o tubo neural e a
crista associada so isolados e implantados no embrio hospedeiro, cujo tubo neural e crista
haviam sido excisados. Quando as clulas da crista do doador so marcadas radioativamente
(com timidina tritiada) ou marcadas geneticamente (de uma espcie ou variedade diferentes),
seus descendentes podem ser detectados no embrio hospedeiro durante o processo do desenvolvimento. (C) Auto-radiografia mostrando localizaes de clulas da crista neural que migraram da crista neural radioativa doadora para formar melanoblastos (M), gnglios simpticos
(SG), gnglios da raiz dorsal (DRG) e clulas gliais (G). (A, fotografia original dos arquivos de
B. Willier; B segundo Weston, 1963; C cortesia de J. Weston.)
distinguir entre clulas de codorna e galinha. Esses estudos mostram que clulas da
crista neural, antes opostas regio posterior dos somitos, migram anteriormente ou
posteriormente ao longo do tubo neural penetrando, assim, na regio anterior de seus
somitos ou de outros adjacentes. Essas clulas da crista neural se juntam com outras
que inicialmente estavam opostas poro anterior dos somitos, e formam a mesma
estrutura. Dessa maneira, cada gnglio da raiz dorsal composto de trs populaes
de crista neural: uma da crista neural oposta poro anterior do somito e uma de cada
lado das regies de crista neural adjacentes, opostas s pores posteriores dos
somitos. Em regies especficas do tronco, clulas da crista migrando pela mesma via,
se agregam para formar gnglios simpticos e as clulas secretoras de epinefrina da
medula da supra-renal. A diviso parassimptica do sistema nervoso perifrico tambm formada pelas clulas da crista neural migrando por essa via, mas somente nas
regies sacral e cervical do embrio.
A matriz extracelular e a migrao da crista neural do tronco
Em qualquer anlise de migrao (seja de pssaros, borboletas ou clulas da crista
neural) deve-se fazer trs perguntas: Como se inicia a migrao? Como os agentes
migratrios conhecem a via a ser percorrida? Quais sinais indicam que o destino foi
alcanado e que a migrao deve terminar? Mais ainda, deve -se perguntar se o agente
competente para responder a esses sinais. Clulas da crista neural, pr-migratrias,
expressam a protena Slug, um fator de transcrio. Oligonucleotdeos antisense
contra o mRNA do slug impediro a migrao da crista neural, sugerindo que a protena
(C)
287
288
Esclertomo
do somito
Tubo
neural
Anterior
Posterior
Anterior
Posterior
Anterior
Posterior
Figura 7.36
Migrao de clulas da crista neural. Fotomicrografias de fluorescncia de sees longitudinais de um embrio de pinto de dois dias,
marcadas com anticorpo HNK-1, que reconhece seletivamente as clulas da crista neural.
Extensa marcao vista na metade anterior,
porm, no na posterior do esclertomo. (de
Bronner-Fraser, 1986, cortesia de M.
Bronner-Fraser.)
Slug deve ser necessria para que a clula epitelial imvel se torne um migrante (Nieto
et al., 1994). Outro fator em potencial na iniciao da migrao da clula da crista neural
a molcula de adeso N-caderina. Originalmente na superfcie da clula da crista
neural, ela regulada para decrescer na poca da migrao celular. Clulas da crista em
migrao no tm N-caderina em sua superfcie, mas comeam a express-la novamente enquanto se agregam para formar a raiz dorsal e os gnglios simpticos (Takeichi,
1988; Akitaya e Bronner-Fraser, 1992). Ao mesmo tempo que as clulas da crista neural
perdem sua N-caderina e se tornam aptas a migrar como clulas individuais, a superfcie extracelular que as rodeia se torna mais adesiva (Perris et al., 1990). Parece haver
vias especficas que devem ser seguidas pelas clulas da crista neural e quando as
clulas, ou seus derivados, so colocadas (por transplante ou por injeo) em sua via
normal de migrao em um embrio hospedeiro, elas migram ao longo dessa (BronnerFraser e Cohen, 1980; Erickson et al., 1980).
O caminho das clulas da crista neural controlado pela matriz extracelular do
embrio (Newgreen e Gooday, 1985; Newgreen et al., 1986). Pesquisas sobre o desenvolvimento de salamandra indicaram que a direo de migrao das clulas da crista
neural determinada pela matriz extracelular sobre a qual elas migram. Em salamandras
axolotle existe uma mutao onde h formao da crista neural mas suas clulas no
migram pela via dorsolateral. Isso pode ser visto facilmente pela falta de clulas
pigmentadas em todos os lugares, com exceo do topo do tubo neural desses animais (Figura 7.37), e essas clulas finalmente degeneram. Quando cristas neurais do
tipo selvagem so transplantadas para embries mutantes, as clulas da crista so
incapazes de migrar. Entretanto, quando cristas de embries mutantes so transplantadas em embries selvagens, suas clulas migram normalmente (Spieth e keller, 1984).
Assim, o defeito nesse mutante est no ambiente em que as clulas encontram e no
nas prprias clulas. (A estrada deficiente mas no o veculo.) Lfberg e colaboradores (1989) usaram essa informao para mostrar que a matriz extracelular contm compostos que so crticos na regulao da migrao das clulas da crista neural. Eles
adsorveram, em microtransportadores da membrana, a matriz extracelular da regio
subepidrmica da pele (atravs da qual migrariam as clulas da crista neural formadoras de pigmentos). Os microtransportadores foram ento colocados junto s cristas
neurais de embries mutantes e do tipo selvagem, pouco antes do momento quando
ocorreria a migrao. Os microtransportadores sozinhos no estimularam a migrao
em nenhum dos dois embries. Os microtransportadores contendo matriz extracelular
de mutantes tambm no estimularam migrao primativa de clulas da crista neural
em nenhum dos embries. Entretanto, aqueles transportadores contendo a matriz
extracelular do tipo selvagem estimularam a migrao de clulas da crista neural tanto
no embrio mutante como no selvagem, demonstrando assim a importncia da matriz
extracelular na migrao de clulas da crista neural.
Uma situao semelhante se d em embries de galinha, pois o transplante de
diferentes regies do mesoderma para a rea adjacente crista neural pode produzir
diferentes modelos de migrao (Goldstein et al., 1990; Bronner-Fraser e Stern, 1991).
As regies que permitem migrao de clulas da crista neural so determinadas no
mesoderma antes que ocorra a migrao.
Mas quais so as molculas que permitem ou impedem a migrao de clulas da
crista neural? A matriz extracelular que suporta essa migrao uma mistura rica em
molculas como fibronectina, laminina, tenascina, vrias molculas de colgeno e
proteoglicanos. Experimentos programados para estudar esse aspecto devem ser
cuidadosamente planejados, pois as clulas da crista neural podem ter necessidades
de migrao diferentes em diferentes espcies e mesmo em diferentes partes do mesmo embrio. Uma soluo preparar anticorpos contra molculas das regies da
matriz extracelular s quais as clulas se ligam. Quando esses anticorpos so injetados
no embrio, bloqueando as regies da matriz, verifica-se alguma perturbao na migrao das clulas da crista neural? A migrao das clulas da crista neural craniana de
galinha pode ser severamente alterada quando so injetados, no embrio em desen-
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 7.37
Deficincia na migrao das clulas da crista neural no mutante d/d do axolotle. (A) As
larvas de axolotles do tipo selvagem so caracterizadas por clulas pigmentadas por todo o
corpo exceto nas pores mais ventrais. (B) No mutante d/d, as clulas pigmentadas derivadas da crista neural formam uma estria ao longo da linha mediana dorsal da larva. (C,D)
Micrografias eletrnicas de varredura da crista neural embrionria mostram que (C) as
clulas da crista dos embries de tipo selvagem migram sobre o tubo neural para o interior
dos somitos, enquanto (D) aquelas do mutante permanecem sobre o tubo neural. (de Lfberg
et al., 1989, cortesia dos autores.)
volvimento, anticorpos fibronectina, a receptores de fibronectina, tenascina, ou ao

proteoglicano laminina-heparan sulfato (Poole e Thiery, 1986; Perris e Bronner-Fraser,
1989). Entretanto, esses anticorpos no alteram significativamente a migrao de clulas da crista neural do tronco na galinha.
No momento, existem dois candidatos principais para o papel de molculas
modeladoras das clulas da crista neural do tronco. Uma delas o receptor de aglutinina
do amendoim, um composto que liga resduos especficos de carboidratos de glicoprotenas. Quando troncos de embrio de galinha so tratados com aglutinina de amendoim, as clulas da crista neural migram na mesma velocidade, tanto para a metade caudal
como para a ventral dos somitos (Krull et al., 1995). A outra molcula uma tirosina
quinase receptora relacionada Eph. Essas molculas so capazes de guiar os axnios
(veja Captulo 8) e sua expresso est ligada aos rombmeros do crebro posterior que
excluem as clulas da crista neural (Irving et al., 1996; Weinstein et al., 1996).
Em 1963, Weston sugeriu que no eram necessrias molculas especficas para
sinalizar a via de migrao das clulas da crista neural do tronco; na verdade, essas
clulas seriam capazes de usar qualquer espao livre para sua migrao, desde que
essa no fosse ativamente inibida. Ele girou a crista neural, de modo a coloc-la na
parte de baixo do tubo neural e notou que quando as clulas emergiam da regio
ventral do tubo, elas migravam na direo ventro-dorsal (o inverso da migrao normal)
atravs da metade anterior do esclertomo. Assim, parece no haver um direcionamento
inerente migrao de clulas da crista. As clulas vo para onde h lugar para elas.
Tanto barreiras qumicas como fsicas podem criar os modelos de migrao das clulas
da crista neural.
289
290
&
Especulaes
Anlise das mutaes que afetam o

desenvolvimento das clulas da crista neural
S PROPRIEDADES MIGRATRIAS e a diferenciao das clulas da crista neural tambm esto

sendo estudadas levando em considerao mutaes que prejudicam uma ou mais
linhagens de clulas da crista neural. As
mutaes incluem as seguintes:
White-spotting. As clulas da crista

neural desses camundongos no tm ckit tirosina quinase receptor funcional. A
condico homozigtica geralmente letal
mas os heterozigotos sobrevivem e podem ser reconhecidos pelas manchas sem
pigmentos em seu plo. No homem, os
heterozigotos tm um fentipo com manchas brancas e escuras. onde regies do
cabelo e da pele so brancas, por no terem melancitos (Spritz et al., 1992).
Lethal-spotting e Piebald-lethal.
Nessas mutaes, a deficincia de
endotelina-3 e seu receptor, o receptor de
endotelina-B. Endotelina-3 um fator de
crescimento que estimula a proliferao
de clulas como as da crista neural, e
critico para o desenvolvimento de melancitos e neurnios entricos que causam o peristaltismo no trato digestivo. A
ausncia homozigtica de genes para o
receptor de endotelina-B produz o megaclon, a distenso do intestino grosso
devido a impossibilidade de evacuar. No
Steel. Esses camundongos no tm o

fator da clula germinativa, o ligante para
a protena quinase c-kit. Esse fator
secretado por tecidos ao longo da rota de
migrao e usado pelas clulas migratrias da crista neural, alm de estimular a
diviso celular. A condio do homozigoto letal na maioria dos casos, e o heterozigoto tem uma pelagem de cor cinza
esmaecida (veja White, 1990).
Splotch. Os camundongos no tm o
fator de transcrio Pax3. Como j mencionado, essa protena expressa na regio dorsal do tubo neural. Camundongos homozigotos para esse gene tm defeitos no fechamento do tubo neural e
nas estruturas derivadas das clulas da
crista neural, especialmente gnglios
cranianos e nervos (Figura 7.38). O
heterozigoto tem regies de pigmentao e outras sem pigmento. No homem, a
condio heterozigtica conhecida
como sndrome de Waardenburg (tipo I)
(Tremblay et al., 1995).
homem, essa condio chamada doena de Hirschsprung. A ausncia de

endotelina-3 d origem ao padro de manchas dos melancitos e, tambm, a falta
de gnglios no intestino (Baynish et al.,
1994; Hosoda et al., 1994; Puffenberger et
al., 1994; Lahav et al., 1996).
Ret e GDNF. Como o receptor de
endotelina-B, o receptor tirosina quinase Ret
necessrio para a diferenciao dos neurnios entricos. Os camundongos que no
apresentam o receptor no tm neurnios
entricos nem rins (a importncia de Ret para
o desenvolvimento do rim ser discutida no
Captulo 17). No homem, a perda de um dos
genes ret pode produzir outra forma de doena de Hirschsprung- um megaclon
ganglinico (Edery, 1994; Romeo et al., 1994).
O ligante para a protena Ret parece ser o
fator de crescimento derivado da glia, GDNF
(Pichel et al., 1996). Camundongos sem as
protenas GDNF tambm no tm rins nem
neurnios entricos.
Microphthalmia. Esses camundongos
no tm um fator de transcrio determinado, levando surdez e deficincias melanocticas. A condio heterozigtica humana
induz a sndrome de Waardenburg (tipo II)
(Hemesath et al., 1994; Steingrimsson et al.,
1994; Tassbehji et al., 1994).
Figura 7.38
Superfcie ventral de um camundongo heterozigtico para a mutao White. O camundongo

tem nmeros reduzidos de clulas sangneas,
clulas germinativas e melancitos. A mancha
branca no ventre caracterstica de heterozigotos, pois esses no tm melancitos suficientes
para circundar o camundongo. Animais White
viveis no tm pigmento no tronco.
Silky. Essa mutao na galinha envolve a via da pigmentao. Em adio a um

fentipo onde o adulto retm as penas
macias de sua juventude, os rgos internos so pigmentados pela migrao e proliferao de melancitos. Em contraste, as
penas permanecem brancas. Estudos com
transplantes (Hallet e Ferrand, 1984) mostraram que esse defeito no devido aos
precursores dos melancitos, mas sim devido ao ambiente para onde migram as
clulas da crista neural. [ecto6.html]
A potncia de desenvolvimento das clulas da crista neural do tronco

EVIDNCIA INDICANDO PLURIPOTNCIA DAS CLULAS DA CRISTA NEURAL
DO TRONCO. Uma das caractersticas mais notveis das clulas da crista neural
sua pluripotencialidade. Uma nica clula da crista neural pode se diferenciar em

vrios tipos diferentes de clulas, dependendo de sua localizao no embrio. Por
exemplo, os neurnios parassimpticos, formados pelas clulas da crista neural cervical
(pescoo) (opostas aos somitos 1-7) produzem tanto a acetilcolina como seu neurotransmissor; so portanto neurnios colinrgicos. Os neurnios simpticos formados pelas clulas da crista neural torcica produzem norepinefrina; esses so os neurnios adrenrgicos. Mas, quando cristas neurais cervicais e torcicas da galinha so
reciprocamente transplantadas, a crista torcica original produz os neurnios
colinrgicos dos gnglios parassimpticos, e a crista cervical original forma neurnios
adrenrgicos nos gnglios simpticos (Le Douarin et al., 1975). Kahn e colaboradores
(1980) mostraram que clulas da crista neural do tronco, pr-migratrias, tanto da
regio cervical como da torcica, tm enzimas para sintetizar tanto acetilcolina como
norepinefrina. Dessa maneira, clulas da crista torcica so capazes de desenvolverem-se em neurnios colinrgicos quando so colocadas no pescoo, e as clulas da
crista cervical podem se tornar neurnios adrenrgicos se colocadas no tronco.
A pluripotncia de algumas clulas da crista neural de tal ordem, que regies da
crista que nunca produzem nervos em embries normais podem faz-lo em certas
condies. Clulas da crista neural mesenceflica normalmente migram para o olho e
interagem com a retina pigmentada, se diferenciando nas clulas da esclertica (Noden,
1978). Entretanto, se essa regio da crista neural transplantada para a regio do
tronco, pode formar neurnios dos gnglios sensoriais, clulas adrenomedulares,
gliais e clulas de Schwann (Schweizer et al., 1983).
As pesquisas citadas estudaram o potencial de populaes de clulas. Ainda no
est claro se a maioria das clulas que deixam a crista neural so pluripotentes ou se a
maioria j teve seu destino restrito a certas funes. Bronner- Fraser e Fraser (1988,
1989) mostraram que algumas, se no a maioria das clulas individuais da crista neural,
so pluripotentes ao deixar a crista. Eles injetaram molculas de dextrano fluorescente
em clulas individuais da crista neural, enquanto as clulas ainda estavam acima do
tubo neural e verificaram em que tipos de clulas elas se diferenciaram, aps a migrao. A prognie de uma nica clula da crista neural podia se transformar em neurnios sensoriais, clulas pigmentares, clulas adrenomedulares e gliais (Figura 7.39).
Alm disso, verificaram que marcando clulas individuais da crista do tronco enquanto migravam ventralmente pelo embrio, a marcao podia ser encontrada mais tarde
em vrios tipos de clulas, incluindo neurnios sensoriais, neurnios simpticos e
clulas de Schawnn. Em mamferos, a clula da crista neural tambm vista como uma
clula germinativa que pode dar origem a outras clulas multipotentes da crista neural.
Entretanto, se algumas das clulas migratrias da crista neural so pluripotentes outras tm destinos mais restritos (Stemple e Anderson, 1992).
EVIDNCIAS INDICANDO POTNCIA RESTRITA DE CLULAS DA CRISTA
NEURAL DO TRONCO. At na poca de emigrao, algumas clulas da crista neural
podem estar mais determinadas do que outras. Tambm, a potncia se torna mais
restrita medida que a clula envelhece. Clulas da crista neural do tronco na galinha
que migram mais cedo podem formar uma ampla variedade de derivados, incluindo
clulas pigmentares, neurnios e clulas adrenrgicas. Clulas migrando mais tarde,
na sua maioria, se tornam melancitos (Serbedzija et al., 1989; Artinger e Bronnerfraser, 1992). Realmente, as emigrantes tardias da crista neural parecem j estar destinadas a se tornarem melancitos antes de entrarem na via dorsolateral (Erickson e
Goins, 1995). Existe evidncia de que alguma restrio de potncia pode ser identificada
mesmo em algumas clulas emigrantes precoces. Vrios pesquisadores (veja SieberBlum e Sieber, 1984; Stocker et al., 1991; Weston, 1991) verificaram que um nmero
291
292
Figura 7.39
Pluripotncia das clulas da crista neural do

tronco. Uma nica clula da crista neural injetada com uma molcula de dextrano altamente fluorescente. A descendncia dessa clula
ir, cada uma, receber algumas dessas molculas fluorescentes. (A) Injeo de dextrano fluorescente pouco antes da migrao das clulas
da crista neural ser iniciada. (B) Aps dois
dias, tecidos derivados da crista contm clulas marcadas, descendentes do precursor que
foi injetado. A figura resume dados de dois
experimentos diferentes (caso 1 e caso 2). (Segundo Lumsden, 1988).
Injeo
Caso 1
Crista neural
Injeo
Caso 2
Dextrano
fluorescente
Resultados
Caso 1
Resultados
Caso 2
Melancitos
Gnglios da
raiz dorsal
Clulas de Schwann
da raiz ventral
Gnglios
simpticos
Aorta
Medula supra-renal
(A)
(B)
significante de clulas da crista neural formam clones contendo relativamente poucos

tipos de clulas. Alm disso, estudos com transplantes por Le Douarin e Smith (1988)
sugerem que muitas clulas derivadas da crista neural que formam os neurnios sensoriais dos gnglios da raiz dorsal, so incapazes de formar os neurnios autonmicos
dos gnglios sensoriais, e vice-versa. Esses estudos sugerem que algumas das clulas da crista neural j tm uma potencialidade restrita ao iniciar a migrao. Dois tipos
de clulas da crista neural que teriam papis pr-determinados seriam o precursor do
melancito-clula de Schwann (Nichols e Weston, 1977; Ciment, 1990), e um precursor
simpatoadrenal que pode originar somente gnglios simpticos e clulas
adrenomedulares (Landis e Patterson, 1981; Anderson e Axel, 1986).
O mecanismo para o sucesso diferencial dessas clulas pr-determinadas pode
envolver diferentes fatores de crescimento. Os precursores determinados dos neurnios ganglionares da raiz dorsal parecem necessitar de um fator neurotrfico derivado
do crebro (BDNF), um fator de crescimento produzido pelo prprio tubo neural. Se
uma membrana fina impermevel for colocada entre o tubo neural e a futura regio do
gnglio da raiz dorsal, os gnglios no se formaro. Aquelas clulas da crista neural
que continuaram sua migrao ventral para as regies dos gnglios do simptico,
conseguiram sobreviver. A inibio na produo de gnglios da raiz dorsal pode ser
revertida revestindo a barreira com um extrato de tubo neural ou com BDNF (Kalcheim
et al., 1987; Sieber-Blum, 1991). Essa concluso fortalecida pela observao de que o
gene BDNF enfraquecido em embries de camundongo provoca o desaparecimento
dos gnglios da raiz dorsal e dos neurnios sensoriais dos placdios, mas no afeta
os neurnios motores (Ernfors et al., 1994; Jones et al., 1994). As clulas da crista
neural determinadas a formar gnglios simpticos no necessitam do fator de crescimento para sobreviver. Na verdade, sua diferenciao parece ser estimulada pelo fator
de crescimento bsico dos fibroblastos e o fator neurotrfico derivado da glia (Kalcheim
e Neufeld, 1990; Maxwell et al., 1996).
Diferenciao final das clulas da crista neural
A diferenciao final das clulas autonmicas da crista neural principalmente determinada pelo ambiente no qual as clulas se desenvolvem. A diferenciao no envolve a morte seletiva daquelas clulas j determinadas a secretar outro tipo de neurotransmissor (Coulombe e Bronner-Fraser, 1987). As clulas do corao, por exemplo,
secretam uma protena, fator de inibio da leucemia (LIF), que pode converter neurnios adrenrgicos do simptico em neurnios colinrgicos, sem mudar sua sobrevivncia ou crescimento (Chun e Patterson, 1977; Fukada, 1980; Yamamori et al., 1989).
293
Figura 7.40
NGF
GF
bF
Clula
pluripotente
da crista
neural
Clula NGF
competente
Gl
ico
co
rtic
Clula
id
precursora
es
bipotente
Inibio da
diferenciao
neural
Incapacidade de
responder a
glicocorticides
Neurnio
simptico
Glicocorticides
Clula
precursora
cromafim
Promoo
de enzimas
cromafim
especificas
Clula cromafim
(adrenomedular)
Analogamente, a protena morfogentica do osso 2 (BMP2), uma protena secretada

pelo corao, pulmo e aorta dorsal, influencia clulas da crista neural do rato a diferenciarem-se em neurnios colinrgicos. Esses neurnios formam os gnglios simpticos na regio desses rgos (Shah et al., 1996). Enquanto BMP2 pode induzir essas
clulas da crista neural a se tornarem neurnios, o fator de crescimento da glia (GGF;
neuregulina) suprime a diferenciao neurnica e dirige o desenvolvimento para destinos gliais (Shah et al., 1994). possvel que outro fator parcrino, endotelina-3,
estimule a produo de melancitos (Lahav et al., 1996).
Assim, parece que o destino de uma clula determinada da crista neural pode ser
dirigido pelo ambiente tissular no qual ela se estabelece. As clulas da crista neural do
tronco da galinha que migram para a regio destinada a se tornar a medula da suprarenal podem se diferenciar em duas direes. A presena da protena morfogentica
do osso 7 (BMP7) pode induzir essas clulas a se tornarem produtoras de epinefrina
(Varley et al., 1995). Essas clulas usualmente se diferenciam em neurnios
noradrenrgicos do simptico. Entretanto, se essas clulas da crista neural recebem
glicocorticides, como aqueles produzidos pelas clulas corticais da glndula suprarenal, elas se diferenciam em clulas adrenomedulares (Figura 7.40; Anderson e Axel,
1986; Vogel e Weston, 1990). O tipo de matriz importante na diferenciao das clulas
da crista neural da salamandra. Se clulas da crista de axolotle so cultivadas em
matrizes de regies subepidrmicas (onde esto as clulas pigmentares), elas se tornam melancitos. Entretanto, se as mesmas clulas da crista so cultivadas em matrizes da regio dos gnglios da raiz dorsal, elas desenvolvem um fentipo neuronal
(Perris et al., 1988).
A crista neural ceflica

Vias migratrias das clulas da crista neural ceflica
O rosto principalmente o produto da crista neural ceflica (cranial), e a evoluo
dos maxilares, dentes, cartilagem facial resulta de mudanas na colocao dessas
clulas (veja Captulo 23). Como j mencionado, o crebro posterior segmentado
ao longo do eixo ntero-posterior em rombmeros. As clulas da crista neural ceflica
da galinha migram de acordo com sua origem rombomrica e existem trs vias principais usadas por essas clulas migratrias (Figura 7.41; Lumsden e Guthrie, 1991). Na
Diferenciao final de uma clula da crista

neural destinada a ser uma clula adrenomedular (cromafim) ou um neurnio simptico.
Glicocorticides parecem agir em dois lugares. Primeiro, inibindo as aes daqueles fatores que promovem a diferenciao neural;
segundo, induzindo as enzimas caractersticas das clulas adrenais. As clulas expostas
seqencialmente ao fator de crescimento fibroblstico bsico (bFGF) e ao fator de crescimento nervoso (NGF) se diferenciam em
neurnios simpticos.
294
Pregas
neurais
(A)
Clulas migratrias
da crista neural
(B)
Ro
m
mb
ero
Tubo
neural
Gnglios IX, X
Bolsa farngea III

Clulas migratrias
da crista neural
Gnglios
VII e VIII
Bolsa farngea II
Primeiro arco farngeo

(C)
(D)
Clulas migratrias
da crista neural
Bolsa farngea
Cartilagem
facial
e
Tubo neural
Martelo
Cartilagem
de Meckel
Bigorna
Tronco arterial
Estribo
Bulbus cordis
Processo
estilide
Aorta descendente
Osso hiide
Artria vitelnica
Cartilagem tireide
Cartilagem cricide
Artria
umbilical
Anis traqueais
Figura 7.41
Migrao de clulas da crista neural na cabea de mamferos. (A) Micrografia de varredura

eletrnica de um embrio de rato com parte de seu ectoderma lateral removido da superfcie.
A migrao da crista neural pode ser vista sobre o mesencfalo, e a migrao da coluna de
clulas da crista neural migrando para o futuro arco farngeo evidente. (B) A anlise da
migrao de clulas cranianas da crista neural de rombmeros 4-6 no camundongo sugere que
h uma migrao maior para os arcos farngeos e uma migrao menor para formao de
gnglios dos nervos cranianos. (C) Estruturas formadoras na face humana pelas clulas ectomesenquimatosas da crista neural. Os elementos cartilaginosos das bolsas farngeas esto
indicados por cores, e a regio pontilhada indica o esqueleto facial produzido pelas regies
anteriores da crista ceflica. (D) Formao do septo tronco-conal (entre a aorta e a veia
pulmonar) das clulas da crista neural cardaca. Clulas da crista do crebro posterior humano
migram para os arcos farngeos 4 e 6 durante a quinta semana da gestao e entram no tronco
arterial para gerar os septos. (A de Tan e Morriss-Kay, 1985, cortesia de S.-S. Tan; B, segundo
Sechrist et al. 1993; D segundo Kirby e Waldo, 1990.)
primeira, clulas do rombmero 2 migram para a primeira bolsa farngea (mandibular) e

tambm geram o gnglio do nervo trigmeo. Elas tambm so levadas pela epiderme
em expanso a formar o processo naso-frontal (anterior). Na segunda via, clulas do
rombmero 4 populam a segunda bolsa farngea (formando a cartilagem hiide do
pescoo) e tambm produzem os gnglios para os nervos geniculado e o vestbuloacstico. Na terceira via, clulas do rombmero 6 migram para a terceira e quarta
bolsas farngeas para formar as glndulas timo, paratireide e tireide, como tambm
os gnglios dos nervos vago e glossofarngeo. Se a crista neural removida dessas
regies incluindo o rombmero 6, o timo, as glndulas paratiride e a tireide no se
formam (Bockman e Kirby, 1984). As clulas da crista neural dos rombmeros 3 e 5 no
migram atravs do mesoderma que os envolve, mas sofrem morte celular apopttica
ou entram nas correntes de clulas da crista em cada um de seus lados (Graham et al.,
1993; Sechrist et al., 1993; Graham et al., 1994).
Em embries de mamferos, clulas da crista neural cranial migram antes que o
tubo neural se feche (Tan e Morriss-Kay, 1985) e do origem ao mesnquima facial
(Johnston et al., 1985). As clulas da crista que se originam nos crebros anterior e
mdio contribuem para o processo nasal, palato e o mesnquima da primeira bolsa
farngea. Essa estrutura se torna parte do aparelho da guelra dos peixes; no homem
origina os ossos da mandbula e os ossos martelo e bigorna do ouvido mdio. As
clulas da crista neural, originando na regio anterior do crebro posterior, do
origem ao mesnquima do segundo arco farngeo, que produz o osso estribo no
homem, como tambm a maior parte da cartilagem facial (veja Figura 7.41 C; Tabela
7.2). As clulas da crista neural cervical do origem ao mesnquima do terceiro,
quarto e sexto arcos farngeos (no homem, o quinto degenera) os quais produzem os
ossos do pescoo e os msculos.
Como discutido no Captulo 2, uma srie de genes parecem especificar os destinos
das clulas da crista neural e suas vias migratrias. Chisaka e Capecchi (1991) eliminaram o gene Hoxa-3 de camundongos intracruzados encontrando que esses animais
mutantes tinham as glndulas do timo, paratireide e tireide fortemente deficientes
ou ausentes, vrtebras do pescoo encurtadas, e os principais vasos do corao mal
formados. possvel que os genes Hoxa-3 sejam responsveis pela especificao das
clulas da crista neural cranial que do origem cartilagem do pescoo e aos derivados do arco farngeo. Entretanto, esse gene no controla a migrao menor das clulas
da crista neural que formam os gnglios neurais cranianos. Essa via migratria
afetada quando os genes Hoxb-1 so eliminados. Nesse mutante, existem defeitos na
produo do nervo facial* (Goddard et al., 1996; Studer et al., 1996).
Potncia de desenvolvimento das clulas da crista neural ceflica
Pela discusso anterior, pode parecer que todas as clulas da crista neural so
idnticas na sua potncia original. Entretanto, este no o caso. Aqui, novamente
as clulas da crista neural cranial so diferentes das clulas do tronco porque somente as primeiras so capazes de formar a cartilagem da cabea. Quando a crista
neural craniana transplantada para a regio do tronco, ela participa da formao da
cartilagem do tronco, que normalmente no produzida a partir de componentes da
crista neural. Em alguns casos, essas clulas da crista neural craniana so instrudas
precocemente a respeito de quais tecidos estaro aptas a formar. Noden (1983)
removeu regies da crista neural da galinha, que normalmente deveria gerar o segundo arco farngeo, e as substituiu por clulas que migrariam para o primeiro arco
farngeo. Os embries hospedeiros desenvolveram dois conjuntos de estruturas
* O fentipo dos camundongos mutantes, Hoxb-1, se assemelha ao de certas condies humanas como a Paralisia de Bell e a Sndrome de Moebius (paralisia facial congnita) e pode fornecer
possveis esclarecimentos para essa condio.
295
296
Tabela 7.2 Alguns derivados dos arcos farngeos

Arco farngeo
Elementos
esquelticos
(crista neural mais
mesoderma)
Arcos, artrias
(mesoderma)
Msculos
(mesoderma)
Nervos cranianos
(tubo neural)
Bigorna e martelo
(da crista neural);
mandbula, maxila
e regies do osso
temporal (da crista
do mesnquima
drmico)
Ramo maxilar da
artria cartida
(para ouvido,
nariz e queixo)
Msculos do
queixo, soalho
bucal; msculos
do ouvido e do
palato mole
Divises maxilares
e mandibulares do
nervo trigmeo
Osso estribo do
ouvido mdio
apfise estilide
do osso temporal;
parte do osso hiide
do pescoo (todos
da cartilagem da
crista neural)
Artrias para a
regio do ouvido:
artria crticotimpnica (adulto);
artria estribal
(embrio)
Msculos da
expresso facial;
msculos do
queixo e pescoo
superior
Nervo facial (VII)
Borda inferior e
cornos maiores do
osso hiide (da
crista neural)
Artria cartida
comum; raiz da
cartida interna
Estilofarngeo
(para elevar a
faringe)
Glossofarngeo
(IX)
Cartilagens laringeanas
(do mesoderma da
placa lateral)
Arco da aorta;
artria subclvia
direita; bicos artrias
originais de pulmonares
Constritores
da faringe e
cordas vocais
Ramo superior
laringeano do
nervo vago
Cartilagens laringeanas
(do mesoderma da
placa lateral)
Duto arterioso;
razes das artrias
pulmonares definitivas
Msculos
intrnsecos
da laringe
Ramo recorrente
laringeano do nervo vago
Fonte: Baseado em Larsen, 1992
mandibulares, pois as clulas derivadas do enxerto tambm produziram uma mandbula. A base para essa instruo ser discutida no Captulo 16.
Quando clulas da crista neural ceflica da galinha ou codorna so cultivadas, se
obtm uma populao heterognea de clulas (Baroffio et al., 1991). Algumas das
clulas so pluripotentes, e seus clones contm clulas de vrios tipos. Outras clulas
da crista do derivados mais restritos. interessante notar que nem todas as combinaes de cartilagem, glia, neurnios colinrgicos, melancitos e neurnios adrenrgicos
so observadas. A Figura 7.42 mostra os tipos de clones que emergem e traa vias
hipotticas para os tipos restritos de clula
A crista neural cardaca

Como ser detalhado no Captulo 9, o corao formado inicialmente na regio do
pescoo, diretamente abaixo dos arcos farngeos, e no surpreendente que adquira
clulas da crista neural. Entretanto, as contribuies da crista neural ao corao s
foram consideradas recentemente. A regio caudal da crista cfalica algumas vezes
chamada de crista neural cardaca, porque essas clulas da crista neural (e somente
essas clulas determinadas da crista) podem dar origem ao endotlio das artrias do
arco artico e o septo entre a aorta e a artria pulmonar (veja Figura 7.41D). Na galinha,
a crista neural cardaca se localiza acima da regio do tubo neural a partir do rombmero 7 at a medula espinhal, oposta ao terceiro somito, e essas clulas da crista migram
para os arcos farngeos 3, 4 e 6. Se a crista neural cardaca for removida e substituda
Figura 7.42
Neurnios
colinrgicos
Cartilagem
Clulas adrenrgicas
Clulas semelhantes
s germinativas
Clulas gliais
Melancitos
Clulas
germinativas de
linhagem restrita
Progenitores
unipotentes
Cartilagem
Neurnios
colinrgicos
Clulas gliais
297
Clulas
adrenrgicas
Melancitos
Tipos celulares
derivados da
crista neural
pela crista neural do tronco ou pela crista ceflica anterior, ocorrem anormalidades
cardacas (especialmente a falta da separao artica-pulmonar). Fica evidente, que a
crista cardaca j est determinada para gerar clulas cardacas, e outras regies da
crista neural no podem substitu-la (Kirby, 1989; Kuratani e Kirby, 1991). Defeitos
cardacos congnitos no homem com freqncia ocorrem com defeitos nas glndulas
paratireide, tireide e timo. No seria surpresa se esses estivessem ligados a defeitos
na migrao de clulas da crista neural. [ecto7.html]
Q A EPIDERME E A ORIGEM DAS ESTRUTURAS CUTNEAS

A origem das clulas epidrmicas
As clulas que cobrem o embrio aps a neurulao formam a epiderme presuntiva.
Inicialmente, esse tecido tem a espessura de uma camada de clulas, mas na maioria
dos vertebrados, logo em seguida se transforma em uma estrutura de duas camadas. A
camada externa d origem periderme, uma cobertura temporria que descartada to
logo se diferencia a camada inferior para formar a verdadeira epiderme. A camada
interna, chamada camada basal (ou estrato germinativo), um epitlio germinativo
que d origem a todas as clulas da epiderme (Figura 7.43). A camada basal se divide
dando origem a uma outra, composta de uma populao de clulas externas chamada
camada espinhosa. Essas duas camadas epidrmicas so conhecidas como a camada
de Malpighi. As clulas da camada de Malpighi se dividem para produzir a camada
granular da epiderme, assim chamada porque as clulas so caracterizadas por grnulos da protena queratina. De maneira diferente das clulas que permanecem na camada de Malpighi, as clulas da camada granular no se dividem, mas comeam a se
diferenciar em clulas da pele, ou queratincitos. Os grnulos de queratina se tornam
mais proeminentes medida que as clulas da camada granular envelhecem e migram
para fora. Aqui, elas formam a camada crnea (estrato crneo), na qual as clulas se
Restrio hipottica de linhagem nas clulas da crista neural ceflica da codorna. Um total de 533 clones, cada um
derivado de uma nica clula, foram observados para os tipos celulares derivados de cada clula. Os resultados so
consistentes com a restrio progressiva do destino celular de clula germinativa pluripotente, atravs de clulas germinativas mais restritas, at uma clula
progenitora unipotente. (A, neurnio
adrenrgico; C, cartilagem; G, clulas da
glia; M, melancitos; N, neurnios
colinrgicos.) (Segundo Le Douarin et
al., 1994.)
298
Figura 7.43
Diagrama das camadas da epiderme humana.

As clulas basais so mitoticamente ativas,
enquanto as clulas totalmente queratinizadas,
caractersticas da pela externa, esto mortas
e so descartadas. Os queratincitos obtm
esse pigmento pela transferncia de melanossomos dos processos de melancitos que restam na camada basal. (Segundo Montagna e
Parakkal, 1974.)
Membrana
plasmtica engrossada
Queratina
Camada crnea
Grnulos de queratina
Clula de transio
Melanossomos
Camada granular
Camada
espinhosa
Camada
de Malpighi
Camada
basal
Lmina basal
Melancito
transformaram em sacos achatados da protena queratina. A profundidade da camada

crnea varia de lugar a lugar, mas usualmente tem a espessura de 10 a 30 clulas. Os
ncleos dessas clulas so deslocados para uma de suas margens. Logo aps o
nascimento, as clulas da camada crnea so descartadas e substitudas por clulas
novas da camada granular. Por toda a vida, as clulas mortas queratinizadas da camada crnea so eliminadas (os seres humanos perdem 1.5 gramas dessas clulas cada
dia)* e so substitudas por clulas novas, originrias das clulas mitticas da camada
de Malpighi. As clulas pigmentadas da crista neural tambm se situam na camada de
Malpighi, onde transferem seus grnulos de pigmentos (melanossomos) aos
queratincitos em desenvolvimento.
As clulas germinativas epidrmicas da camada de Malpighi esto ligadas membrana basal por suas protenas, integrinas. Entretanto, ao se tornarem determinadas
para diferenciar elas suprimem suas integrinas e as perdem enquanto migram para a
camada espinhosa (Jones e Watt, 1993).
Existem dois fatores de crescimento estimulando o desenvolvimento da epiderme.
). O TGF- produzido
(TGF-
O primeiro o fator de crescimento transformador-
pelas clulas basais e estimula sua prpria diviso. Quando um fator de crescimento
produzido pela mesma clula que o recebe ele chamado fator de crescimento
autcrino. Esses fatores precisam ser cuidadosamente regulados porque se tiverem
seus nveis aumentados, mais clulas so rapidamente produzidas. Na pele adulta,
uma clula nascida na camada de Malpighi leva aproximadamente 8 semanas para
* A maior parte dessa pele se transforma em poeira de casa em cima de mveis e no assoalho.
Se voc tem alguma dvida, queime uma poro dessa poeira; o cheiro ser de pele chamuscada.
299
alcanar o estrato crneo e permanece na camada crnea mais ou menos duas semanas. Em indivduos com psorase, uma doena caracterizada por esfoliao de uma
enorme quantidade de clulas epidrmicas, o tempo de permanncia na camada crnea
de somente dois dias (Weinstein e van Scott, 1965; Halprin, 1972). Essa condio
est ligada a uma super expresso de TGF- (a qual ocorre secundariamente a uma
inflamao imune) (Elder et al., 1989). Analogamente, se o gene TGF- for ligado a um
promotor para queratina 14 (uma das principais protenas da pele), e inserido no proncleo do camundongo, os animais transgnicos ativam o gene TGF- em suas clulas da pele e no podem suprimi-lo. O resultado um camundongo com pele escamosa,
pouco plo e um enorme excesso de epiderme queratinizada sobre uma nica camada
de clulas basais (Figura 7.44C; Vassar e Fuchs, 1991).
O outro fator de crescimento necessrio para a produo de epiderme o fator de
crescimento do querancito (KGF; tambm chamado fator de crescimento fibroblstico 7) um fator parcrino que produzido pelos fibroblastos da derme subjacente
(derivada do mesoderma). O KGF recebido pelas clulas basais que esto acima dos
fibroblastos da derme e se considera que ele regula a proliferao dessas clulas
basais. Se o gene KGF fundido com o promotor de queratina 14 e so produzidos
camundongos transgnicos, o KGF se torna autcrino. Os animais resultantes (Figura
7.44A) tm uma epiderme espessada, pele solta, muitas clulas basais e no tm folculos
de plo, nem mesmo folculos do bigode (Guo et al., 1993). Essas clulas basais so
foradas a entrar na via de diferenciao da epiderme. A alternativa para a clula
basal ajudar a gerar o folculo do plo.
Apndices cutneos
A epiderme e a derme tambm interagem em stios especficos para criar as glndulas
sudorparas e os apndices cutneos: plos, escamas ou penas (dependendo da espcie). A primeira indicao de que um folculo do plo se formar em um local especfico
uma agregao de clulas na camada basal da epiderme. Essa agregao dirigida
pelas clulas dermais subjacentes e ocorre em diferentes tempos e locais no embrio.
As clulas basais se alongam, se dividem e penetram na derme. As clulas dermais
(B)
(C)
(A)
Figura 7.44
KGF
Tipo selvagem
TGF-
Fatores de crescimento e proliferao epidrmica. (A) Um camundongo transgnico expressando baixos nveis de KGF em seus queratincitos. Notar a rarefao do plo ao redor das patas, olhos e focinho. (B) Um camundongo de tipo selvagem. (C) Um companheiro de ninhada de (B) que est expressando altos nveis de TGF- em seus queratincitos. Tem pele descamada e muito pouco
plo. Abaixo de cada camundongo est um
corte atravs de sua pele. O animal expressando KGF em excesso no tem folculos
pilosos e um nmero aumentado de clulas
epidrmicas basais. O camundongo expressando TGF- tem camadas muito extensas
de epitlio queratinizado, o qual ele descarta.
(de Vassar e Fuchs, 1991, e Guo et al., 1993.
Fotografias cortesia de E. Fuchs.)
300
(A)
(B)
(C)
Ectoderma
epidrmico
Mesoderma
condensado
(D)
Canal piloso em
desenvolvimento
Mesoderma
drmico
Ponta do plo
Papila drmica
Glndula
sebcea
Bulbo contendo
clulas germinativas
pluripotentes do
folculo piloso
Figura 7.45
Desenvolvimento de folculos pilosos na pele

fetal humana. (A) Clulas epidrmicas basais
tornam-se colunares e se abaulam ligeiramente
para dentro da derme. (B) Clulas epidrmicas
continuam a proliferar, e clulas mesenquimatosas da derme se agregam na base do germe
primrio do plo. (C) Comea a diferenciao
da haste do plo no germe piloso alongado.
(D) A haste pilosa queratinizada se estende da
raiz do plo, o broto secundrio forma a glndula sebcea, e por baixo existe uma regio que
pode conter as clulas germinativas pilosas
para o prximo ciclo produtor de plo. (E)
Fotografia de um germe piloso alongado. (Segundo Hardy, 1992, e Miller et al., 1993. Fotografia cortesia de W. Montagna.)
Plo
respondem a esse ingresso de clulas epidrmicas basais formando um pequeno ndulo (a papila dermal) abaixo do tampo epidrmico. A papila drmica, em um movimento ascendente, estimula as clulas basais germinativas a dividirem-se mais rapidamente e produzir clulas ps-mitticas que se diferenciaro na haste queratinizada do
plo (veja Hardy, 1992; Miller et al., 1993). Melanoblastos, que estavam presentes
entre as clulas epidrmicas enquanto ingressavam, diferenciam-se em melancitos e
transferiam seu pigmento haste (Figura 7.45). Enquanto isso ocorre, duas intumescncias epiteliais comeam a crescer nos lados do folculo. As clulas da intumescncia inferior podem reter uma populao de clulas germinativas que regeneraro a
haste do plo periodicamente, quando ela for descartada (Pinkus e Mehregan, 1981;
Cotsarelis et al., 1990). As clulas da intumescncia superior formaro as glndulas
sebceas que produzem uma secreo oleosa, o sebo. Em muitos mamferos, incluindo
o homem, o sebo se mistura com clulas peridrmicas escamadas para formar a vernix
caseosa, esbranquiada, que envolve o feto no nascimento. [ecto8.html]
Os primeiros plos do embrio humano so finos, localizados muito prximos, e
formam o chamado lanugo. Esse tipo de plo geralmente descartado antes do nascimento e substitudo (pelo menos em parte, por novos folculos) por plos curtos e
sedosos, o velo. Velo permanece em muitas partes do corpo humano, usualmente
consideradas sem plos como a testa e as plpebras. Em outras partes do corpo, o velo
d lugar para o plo definitivo. Durante a vida de uma pessoa, alguns dos folculos
que produziram velo podem, mais tarde, formar plos definitivos, depois reverter para
a produo de velo. As axilas das crianas, por exemplo, tm folculos que produzem
velo at a adolescncia. Nessa fase, as hastes definitivas so produzidas. Inversamente, em calvcie normal masculina, os folculos do couro cabeludo voltam a produzir
plos velos muito finos e no pigmentados (Montagna e Parakkal, 1974). A localizao
e o padro de plos, penas, escamas e glndulas sudorparas envolve interaes da
epiderme e da derme, e essas sero discutidas em detalhe no Captulo 17. Da mesma
forma que existe uma clula germinativa neural, cuja descendncia se torna clulas
neurais e clulas gliais, tambm parece existir uma clula germinativa epidrmica
pluripotente, cujos descendentes podem se tornar epiderme, glndulas sebceas e
hastes de plo.
Concluses
Neste captulo acompanhamos a diferenciao do ectoderma embrionrio em uma
ampla variedade de tecidos. Vimos que o ectoderma produz trs conjuntos de clulas
durante a neurulao: (1) O tubo neural que d origem aos neurnios, s clulas gliais
301
e s clulas ependimrias do sistema nervoso central; (2) as clulas da crista neural,

que do origem ao sistema nervoso perifrico, clulas pigmentadas, medula da suprarenal e certas reas da cartilagem da cabea; e (3) a epiderme da pele, que contribui
para a formao das estruturas cutneas como o plo, penas, escamas e glndulas
sudorparas e sebceas, como tambm a cobertura protetora externa dos nossos corpos. Tambm observamos como as interaes das clulas epidrmicas esto envolvidas na origem dos vrios tecidos do olho.
Os Captulos posteriores (16 e 17) discutem com mais detalhe a induo do tubo
neural e o desenvolvimento coordenado do olho. No prximo captulo discutiremos
os mecanismos pelos quais os neurnios so dirigidos para locais especficos, assim,
permitindo o desenvolvimento de reflexos e comportamentos.
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Especificidade axnica
Assim, para alm de questes de quantidade, existem questes de padres que so essenciais para a compreenso da Natureza.
ALFRED NORTH WHITEHEAD (1934)
Tal como o entomologista procura de borboletas brilhantes coloridas, minha ateno

perseguiu no jardim da matria cinzenta,
clulas de formas delicadas e elegantes, as
misteriosas borboletas da alma.
S. RAMN Y CAJAL (1937)
O SOMENTE AS CLULAS PRECURSORAS NEURONIAIS MIGRAM
para os seus locais de atuao, como tambm o fazem os seus axnios.

Diferentemente da maioria das clulas cujas partes permanecem no mesmo
lugar, a clula nervosa capaz de alongar axnios que podem se estender por metros.
O axnio tem seu prprio aparelho locomotor residindo no cone de crescimento, que
pode responder aos mesmos tipos de sinais que as clulas migratrias podem perceber. Assim, o movimento axnico pode ser direcionado pela quimiotaxia, galvanotaxia,
e conduo por contato, tal como as clulas migratrias. Os sinais para a migrao
axnica podem, alm disso, ser ainda mais especficos que aqueles empregados para
conduzir certos tipos de clulas para determinadas reas. O crebro humano, por
exemplo, a matria mais organizada conhecida. Cada um dos seus 1011 neurnios
tem o potencial de interagir especificamente com milhares de outras clulas, e um
neurnio grande (tal como uma clula de Purkinje ou um neurnio motor) pode
receber informaes de mais de 105 outras clulas (Figura 8.1; Gershon et al., 1985).
O entendimento da gerao dessa complexidade organizada um dos maiores desafios para a cincia moderna.
Goodman e Doe (1993) enumeram oito estgios de neurognese: (1) induo e
padronizao de uma regio formadora de neurnios (neurognica); (2) nascimento e
migrao de neurnios e glia; (3) gerao de destinos celulares especficos; (4) conduo de cones de crescimento para alvos especficos; (5) formao de conexes sinpticas; (6) ligao de fatores trficos para a sobrevivncia e diferenciao; (7) rearranjo
competitivo de sinapses funcionais; e (8) continuada plasticidade sinptica durante a
vida do organismo. Os dois primeiros processos foram tpicos do captulo anterior.
Aqui, continuamos a investigar o processo do desenvolvimento neural. [axon1.html]
A gerao da diversidade neuronial

Neurnios so moldados em uma maneira hierrquica. A primeira deciso se uma
determinada clula dever ser um neurnio ou algo diferente. Se a clula deve tornarse um neurnio, a deciso seguinte informa o neurnio sobre seu tipo. Ele dever
tornar-se um neurnio motor, um neurnio sensorial, um neurnio comissural, ou
algum outro tipo? Aps esse destino ter sido determinado, ainda tomada outra
deciso, dando ao neurnio um alvo especfico. Para ilustrar essa especificao progressiva, iremos enfocar os neurnios motores de vertebrados e Drosophila.
307
308
Figura 8.1
Conexes de axnios a um neurnio do

hipocampo cultivado. O neurnio foi delineado pela protena sinptica sinaptotagmina, que
est presente nos terminais dos axnios que
contatam o neurnio. (Cortesia de M. Matteoli
e P. De Camilli.)
ertebrado
Especificao do Neurnio Motor de V
Vertebrado
Vertebrados formam um tubo neural dorsal, enquanto invertebrados, tal como a
Drosophila, formam um tubo neural ventral. No entanto, a especificao do ectoderma neural mediada pela ligao de protenas semelhantes. Em Xenopus (e provavelmente outros vertebrados) a notocorda secreta as protenas Chordin e Noggin.
Essas protenas ligam BMP4, e o ectoderma na vizinhana da notocorda desenvolve
a capacidade de formar neurnios. Se o ectoderma est exposto a BMP4, ele torna-se
epidrmico (Sasai et al., l995; Piccolo et al., 1996; veja Captulo 16). Na ausncia de
estimulao por BMP4 as clulas ectodrmicas dos vertebrados parecem sintetizar
um fator de transcrio (ou um conjunto de fatores de transcrio) que compromete
as clulas uma linhagem neural. Posteriormente, as clulas iro sintetizar outras
protenas (tal como a NeuroD) que levam-nas a expressar seu fentipo neural (Turner
e Weintraub, 1994; Lee et al., 1995).
As decises relativas ao tipo de neurnio parecem ser controladas pela posio
do precursor neuronial no interior do tubo neural e pelo momento quando esse sofre
sua ltima diviso celular. Conforme descrito no captulo anterior, os neurnios na
margem ventro-lateral tornam-se neurnio motores, enquanto os neurnios sensoriais so derivados de clulas na regio dorsal do tubo. Como transplante de clulas da
placa ectpica do assoalho ou notocorda (que secretam a protena Sonic hedgehog)
para reas laterais pode re-especificar clulas dorsolaterais em neurnios motores,
essa deciso quanto ao tipo de neurnio provavelmente uma funo de sua posio
em relao placa do assoalho. Ericson e colega (1996) mostraram que so necessrios dois perodos de sinalizao de Sonic hedgehog para especificar os neurnios
motores: um perodo precoce durante o qual as clulas so instrudas para se tornarem
neurnios ventrais e um perodo mais tardio (que inclui a fase S de sua diviso de
aniversrio) que especifica que o neurnio ventral est para se tornar um neurnio
motor (em vez de um interneurnio). A primeira fase provavelmente regulada pela
secreo de Sonic hedgehog pela notocorda, enquanto o estgio mais tardio mais
CAPTULO 8 Especificidade Axnica
309
provavelmente regulado pelas clulas da placa do assoalho. A Sonic hedgehog parece

especificar os neurnios motores pela induo do fator de transcrio Islet-1. Essa
protena encontrada em todos os neurnios motores mas em nenhum outro tipo de
neurnio (Ericson et al., 1992; veja Prancha 32). Outro fator que afeta o tipo neuronial
a idade da clula por ocasio da ltima diviso. Como discutido no captulo anterior,
o aniversrio de uma clula determina em que camada do crtex ela ir penetrar.
A prxima deciso envolve a especificidade do alvo. Se uma clula se destina a ser
um neurnio e, especificamente, um neurnio motor, esse neurnio motor ir inervar a
coxa, o membro anterior, ou a lngua? A determinao da especificidade parece ser
regulada pela posio do neurnio motor ao longo dos eixos ntero-posterior e mediano-lateral do tubo neural. O tubo neural tem uma distinta polaridade ntero-posterior do
prosencfalo ao longo da medula espinhal. No Captulo 16 iremos discutir o complexo do
gene Hox que determina essa polaridade dentro da medula espinhal e que fornece
especificidade de alvo aos respectivos neurnios motores. Esses genes trabalham em
combinao para definir a identidade posicional de cada regio do embrio. Landmesser
(1978) e Holliday (1980b) mostraram que os neurnios motores que tm a mesma especificidade esto agrupados. Os corpos celulares de neurnios motores que se projetam
para um nico msculo esto agregados em uma coluna longitudinal formando um
pool. Os pools esto agregados formando colunas maiores de acordo com seu alvo.
Neurnios motores na Coluna de Terni (CT) se projetam ventralmente para dentro dos
gnglios simpticos. Pools motores da coluna motora lateral (LMC) se estendem para
a musculatura dos membros, enquanto os neurnios motores na coluna motora mediana
(MMC) se projetam para dentro dos msculos axiais. As colunas dos membros e as
axiais so subdivididas ao longo do eixo mediano-lateral de maneira a se correlacionar
com a posio dorsoventral dos seus respectivos alvos (Figura 8.2; Tosney et al., 1995).
Esse arranjo de neurnios motores constante para os vertebrados. [axon2.html]
As especificidades dos alvos desses neurnios motores so especificadas antes
de seus axnios se estenderem para a periferia. Isso foi mostrado por Lance-Jones e
Landmesser (1980), que reverteram segmentos da medula espinhal de pintos fazendo
com que os neurnios motores se encontrassem em novos locais. Os axnios se
dirigiram para seus alvos originais, no para aqueles esperados devido suas novas
posies (Figura 8.3). A base molecular dessa especificidade poderia residir em membros da famlia de protenas LIM (veja Figura 8.2; Tsushida et al., 1994). A famlia LIM
inclui Islet-1. Islet-2, LIM-1, LIM-2 e LIM-3, e cada uma dessas protenas um fator de
transcrio. As protenas LIM foram implicadas na especificao do destino de clulas em nematides (nos quais o gene LIM mec-3 especifica um neurnio receptor de
Nveis
Colunas de um lado
do tubo neural
Ordem da
Neurnio
expresso gnica motor
Projeo de neurnios
dentro de cada coluna
Figura 8.2
Tubo neural
Cervical
Torcica
Msculo
Membro
anterior
Dorsal
Parede
do corpo
Ventral
Torcico
Membro posterior
Msculo
Dorsal
ou
Membro
posterior
Ventral
Tempo
Organizao de neurnios motores e especificao LIM. esquerda est metade da medula

espinhal. Os neurnios nessas colunas apresentam conjuntos especficos de genes LIM, e
neurnios dentro de cada coluna fazem decises semelhantes quanto escolha de trajetrias. Neurnios motores CT projetam-se ventralmente para os gnglios simpticos. A coluna MMC projeta-se para os msculos axiais, e
a LMC envia axnios para a musculatura dos
membros. Quando essas colunas so subdivididas, as subdivises medianas (m) se projetam para as posies ventrais e as subdivises
laterais (l) enviam axnios para as regies dorsais dos tecidos alvo. (Segundo Tsushida et
al., 1994; Tosney et al., 1995.)
310
(A)
Estgio 15-16
Estgio 28.5
Plexo
crural
Estgio 28.5
Plexo
crural
Axial
Sartrio
(B) Controle
Axial
Sartrio
(C) Revertido
Figura 8.3
Compensao por pequenos deslocamentos da posio de iniciao axnica no embrio do pinto.

(A) Um pedao da medula espinhal compreendendo vrios segmentos T7-S3 (stimo torcico ao
terceiro lombo-sacral) revertido no embrio de 2.5 dias. (B) Padro normal de projeo axnica
para diferentes msculos aos 6 dias. (C) Projees axnicas no segmento revertido. Os neurnios localizados ectopicamente finalmente acharam seus caminhos neurais apropriados e inervaram
os msculos apropriados. (de Lance-Jones e Landmesser, 1980.)
toque; Way e Chalfie, 1988) e so importantes para o desenvolvimento cerebral em

camundongos (Shawlot e Behringer, 1995). Por exemplo, todos os neurnios motores
expressam Islet-1 e (um pouco depois) Islet-2. Se nenhum outro desses genes LIM for
expresso, os neurnios se projetam para os msculos da parede ventral do corpo.
Aqueles neurnios na coluna mediana da MMC tambm expressam LIM-3, o que os
distingue dos outros neurnios motores. Os pools laterais da coluna de LMC so
distinguidos pela sua expresso curta de LIM-1, enquanto os neurnios motores CT
param de expressar Islet-2. Assim, cada projeo caracterizada por uma constelao
particular de fatores de transcrio LIM.
Especificao dos Neurnios Motores em Drosophila
A especificao do ectoderma neural em vertebrados e artrpodes parece ser conduzida
de maneira surpreendentemente semelhante. A especificao do ectoderma neurognico
em Drosophila envolve a secreo do homlogo de Chordin da Drosophila, a protena Short-gastrulation. Essa protena produzida pelas clulas ventro-laterais do blastoderma, e liga-se ao homlogo da BMP4 da Drosophila, a protena Decapentaplegic
(veja Figura 15.32; Holley et al., 1995). As clulas que secretam a protena Shortgastrulation so poupadas dos efeitos lateralizantes da Decapentaplegic, e tornam-se
capazes de formar o cordo nervoso ventral. Durante a gastrulao, as clulas colocadas mais vegetalmente, as precursoras do mesoderma, invaginam para o interior da
blastocele vitelnica, causando a localizao do ectoderma neurognico na regio
ventral do embrio (Figura 8.4). O ectoderma delamina cerca de 60 clulas (30 de cada
lado) dentro do embrio, e essas (em conjunto com as clulas da linha mediana ventral) so as precursoras dos neurnios, os neuroblastos. O compromisso de tornar-se
ectoderma uma conseqncia do posicionamento ao longo do eixo dorsoventral do
embrio e ser discutido em captulos subseqentes. O compromisso de tornar-se um
neuroblasto em lugar de uma clula epidrmica feito por um grupo de genes chamados
311
Figura 8.4
Embrio de Drosophila
Blastoderma
celular
Gastrulao
Alongamento da
banda geminativa
Delaminao
do neuroblasto
Ectoderma
superficial
Neuroectoderma
presuntivo
Clulas presuntivas
da linha mediana
Mesoderma
Neuroblastos
Ectoderma ventral (do
ectoderma neurognico)
Precursores
da linha
mediana
Neurnios
Clula-me do
gnglio
Crescimento
axnico
Neuroblasto
NB 1-1
Interno
Externo
genes proneurais (Figura 8.5). Esses constituem um conjunto de fatores de transcrio encontrados em arranjos de cerca de quatro a seis clulas na regio ectodrmica.*
Cada arranjo forma uma zona de interao onde uma (e apenas uma) das clulas se
torna um neuroblasto. Uma clula compromissada para formar um neuroblasto, inibe
as outras clulas de seu arranjo de se tornarem neuroblastos. Isso conseguido pela
interao com um grupo de genes chamados de genes neurognicos. As protenas
Notch e Delta so crticas nessas reaes. Essas protenas se integram na membrana
celular. Suas interaes sugerem que a clula que est destinada a se tornar um
neuroblasto diminui a regulao da sua protena Notch, que leva suas vizinhas a
diminuir a regulao das suas protenas Notch. Essa deciso comunicada atravs de
protenas Delta. Dessa maneira, o neuroblasto inibe lateralmente outras clulas do
agregado de se tornarem neuroblastos (veja Captulo 17). [axon3.html]
Tal como acontece em vertebrados, a especificao de neuroblasto em Drosophila
conseguida pela expresso combinatria de diferentes genes. (De maneira interessante, esses genes foram usados anteriormente para especificar cada regio do
blastoderma da Drosophila). Se quaisquer desses genes no forem capazes de funcionar, os neuroblastos se comportam como se fossem outros tipos de neurnios, freqentemente formando nervos que enviam seus axnios para alvos errados (ChuLaGraff et al., 1995). [axon4.html]
*Esses fatores de transcrio so membros da famlia achaete-scute. Interessantemente, alguns

dos fatores de transcrio envolvidos na determinao neural de vertebrados so tambm membros
dessa famlia (Turner e Weintraub, 1994).
Desenvolvimento da regio neurognica de insetos. No blastoderma, o neuroectoderma

presuntivo est localizado em um outro lado
dos precursores mesodrmicos. Durante a gastrulao e extenso da banda germinativa, o
mesoderma se invagina da superfcie para o
interior do embrio. As clulas precursoras da
linha neural mediana so agora as clulas mais
ventrais do embrio. O ectoderma delamina
neuroblastos para dentro do embrio (juntamente com clulas da linha mediana ventral)
para formar o sistema nervoso central. Os neuroblastos geram uma srie de clulas-me ganglionares, cada uma das quais gera dois neurnios. No caso, mostrado o neuroblasto 1-1.
(Segundo Goodman e Doe, 1993.)
312
Figura 8.5
Ectoderma
superficial
Ectoderma
neurognico
(A) Sinais posicionais:

genes de segmentao (A/P),
genes dorso/ventrais
(B) Especificao neuroblstica
genes de identidade neuroblstica
(C) Formao neuroblstica

genes proneurais
(D) Inibio lateral

genes neurognicos
(E) Linhagem celular neuroblstica

clulas-me ganglionares e genes
de identidade neural
Neurnios
Clulas-me
ganglionares
Neuroblastos
(F)
Especificao seqencial da linhagem de neuroblastos. (A) O ectoderma neurognico especificado por sinais posicionais ao longo dos eixos dorsoventral e ntero-posterior. (B,C) Agregados de neuroblastos potencias esto especificados por genes proneurais como o achaete (mostrado em F). (D) Interao entre neuroblastos potenciais seleciona uma clula do agregado para ser
neuroblasto, e essa clula inibe as outras clulas do agregado de se tornarem neuroblastos. (E) Os
neuroblastos brotam das clulas-me ganglionares (da maneira que ser discutida no Captulo
13), cada uma indo formar dois neurnios. (F) Embrio de Drosophila corado para o transcrito
de achaete. Os agregados neurognicos expressam esse gene. Os parnteses indica um domnio
de atividade neurognica. (Segundo Goodman e Doe, 1993; fotografia de Skeath e Carrol, 1922;
cortesia de J. Skeath.)
Formao de padres no sistema nervoso

O funcionamento do crebro vertebrado no depende somente da diferenciao e do
posicionamento das clulas neurais, mas tambm das conexes especficas dessas
clulas entre si e seus alvos perifricos. De alguma maneira, os nervos de um rgo
sensorial como o olho devem se conectar a neurnios especficos no crebro, que
podem interpretar estmulos visuais, e os axnios do sistema nervoso tm que atravessar grandes extenses de tecidos antes de inervar o tecido alvo apropriado. Como
sabe o axnio nervoso atravessar numerosas outras clulas alvos em potencial para
fazer sua conexo especifica? Harrison (1910) sugeriu que a especificidade do crescimento axnico devida s fibras nervosas pioneiras, que avanam na frente de outros
axnios e servem como guias para elas.* Essa observao simplifica, mas no resolve,
o problema de como os neurnios formam padres apropriados de interconexes.
Harrison tambm observou que os axnios devem crescer em um substrato slido, e
especulou que diferenas nas superfcies embrionrias podem permitir aos axnios
viajar em certas regies especficas. As conexes finais ocorreriam por interaes
complementares na superfcie celular:
Que deve haver uma espcie de reao na superfcie entre cada tipo de fibra
nervosa e a estrutura particular a ser inervada parece claro a partir do fato de
que fibras sensoriais e motoras, embora correndo prximas no mesmo feixe,
ainda assim formem conexes perifricas apropriadas, umas com a epiderme e as
outras com o msculo... Esses Fatos sugerem que pode haver aqui certa analogia com a unio do vulo com o espermatozide.
Pesquisa sobre a especificidade de conexes neuroniais tem enfocado dois tipos
principais de sistemas: neurnios motores, cujos axnios viajam de um nervo para um
msculo especfico, e o sistema ptico, cujos axnios originando na retina encontram
seu caminho de retorno ao crebro. Em ambos, a especificidade das conexes axnicas
desenrola-se em trs etapas (Goodman e Shatz, 1993):
Seleo de trajetria, onde os axnios viajam por uma rota que os conduz a
uma regio particular do embrio.
*Os cones de crescimento dos neurnios pioneiros migram para seus tecidos alvos enquanto as
distncias embrionrias ainda so curtas e o tecido embrionrio interveniente ainda relativamente
no-complicado. Mais tardiamente no desenvolvimento, os outros neurnios que inervam o tecido
alvo se ligam (fasciculam) ao neurnio pioneiro e assim penetram no tecido alvo. Klose e Bentley
(1989) mostraram que em alguns casos, os neurnios pioneiros morrem aps outros neurnios
terem atingido sua destinao. No entanto, tivesse esse neurnio pioneiro sido impedido de se
diferenciar, os outros axnios no teriam atingido seu tecido alvo.
Seleo de alvo, onde os axnios, uma vez atingido a rea correta, reconhecem
e ligam-se a um conjunto de clulas com as quais podem formar conexes
estveis.
Seleo de endereo, onde os padres iniciais so refinados fazendo cada
axnio se ligar a um pequeno subconjunto (s vezes de somente um) de seus
possveis alvos.
Os dois primeiros processos so independentes da atividade neuronial. O terceiro

envolve interaes entre diversos neurnios ativos e converte projees sobrepostas, em um padro de conexes finalmente concatenadas. conhecido desde 1930 que
os axnios motores podem encontrar seus msculos apropriados mesmo quando a
atividade neural dos axnios est bloqueada. Twitty (que havia sido aluno de Harrison)
e seus colegas acharam que os embries do trito Taricha torosa secreta uma toxina,
tetrodotoxina, que bloqueava a transmisso neural em outras espcies. Transplantando pedaos de Taricha torosa para outros embries de salamandra, eles foram capazes de paralisar os embries hospedeiros por dias enquanto ocorria o desenvolvimento. Aproximadamente no momento em que os girinos iriam se alimentar, a toxina desaparecia, e as salamandras nadaram e se alimentaram normalmente (Twitty e Johnson,
1934; Twitty, 1973). Experimentos mais recentes usando mutantes do peixe-zebra tendo receptores neurotransmissores no-funcionais, demonstraram de maneira semelhante que os neurnios motores estabeleciam seus padres normais de inervao na
ausncia de atividade neuronial (Westerfield et al., 1990).
Porm, permanecia a questo, Como so instrudos os axnios a respeito do local
para onde devem ir? Conforme mencionado no Captulo 3, as clulas migratrias recebem seus sinais de substncias difusivas, ons, ou da matriz extracelular sobre a qual
viajam. O cone de crescimento capaz de responder ao mesmo tipo de sinais, e conduz
o axnio da soma da clula neural para o seu tecido alvo. Deve-se recordar do captulo
anterior que o cone de crescimento arrasta o axnio para frente. O axnio no esticado pelos empurres vindos do corpo celular.
Seleo de trajetrias: Orientao pela matriz extracelular

A matriz extracelular pode prover informao para a navegao de vrias maneiras
algumas mais especficas que outras. Canais e pregas na matriz extracelular podem
restringir o caminho de crescimento axnico uma certa regio; isso uma maneira
muito crua de orientao. Alm disso, certas protenas da lmina basal podem ser mais
adesivas que outras e estender vis para a movimentao axnica ao longo da membrana basal. Finalmente, molculas na matriz extracelular podem repelir ativamente
certos axnios, causando o colapso do cone de crescimento. Como veremos, todos
esses mecanismos parecem atuar no embrio.
Orientao pelo T
erreno Fsico: Orientao por Contato
Terreno
Uma das primeiras hipteses a respeito da especificidade do crescimento axnico
envolve a orientao por contato, ou estereotropismo. Aqui, sinais fsicos do substrato
dirigem o crescimento neural. Harrison desenvolveu uma tcnica de desenvolver
axnios em cogulos sangneos, e usando essa tcnica, Weiss (1955) observou que
os axnios em crescimento no somente necessitavam de um substrato slido para
migrar, mas tambm que a migrao tendia a seguir descontinuidades no cogulo.
Quando as fibras do cogulo se orientavam de maneira aleatria, os axnios seguiam
esse padro aleatrio. Porm, quando as fibras foram produzidas paralelas pela aplicao de tenso sobre o cogulo, os axnios do nervo caminhavam ao longo dessas
fibras, no se afastando da retido (veja Figura 3.31). Singer e seus colaboradores (1979)
encontraram evidncia que tais fatores fsicos operam in vivo para guiar os cones de
crescimento. Eles detectaram grandes canais entre clulas epidrmicas da medula
espinhal da salamandra, atravs das quais migram os axnios em crescimento. Eles
313
314
consideraram a hiptese de que esses canais proviam sinais para guiar os axnios
em direo s regies apropriadas do crebro. Canais celulares foram tambm detectados na retina do camundongo (Silver e Sidman, 1980), e parecem guiar os cones de
crescimento das clulas ganglionares da retina para o caule ptico durante seu
desenvolvimento.
A presena de canais preexistentes provavelmente no crtica para o crescimento
da maioria dos axnios. O cone de crescimento parece capaz de digerir seus prprios
canais atravs de uma matriz extracelular secretando enzimas proteolticas para sua
vizinhana imediata (Pittman, 1985).
Orientao para Gradientes de Adeso: Haptotaxia
O cone de crescimento de um axnio em desenvolvimento encontra numerosos
microambientes, e alguns locais podem conter molculas que so mais adesivas que
outras encontradas em outros locais. A capacidade de um cone de crescimento (ou de
uma clula) para migrar subindo um gradiente de adesividade chamada haptotaxia. O
cone de crescimento tem receptores que reconhecem protenas encontradas em certas
lminas basais e o cone conduz o axnio ao longo de caminhos recobertos por essas
protenas. A hiptese da especificidade adesiva diferencial postula que o cone de crescimento ir encontrar um ambiente irregular e que reconhece o seu caminho por ter
receptores particulares para certas molculas no ambiente. Isso pode ser visto in vitro.
Quando colocado em cultura, um pedao de tecido da retina neural no emite facilmente
Figura 8.6
Efeitos dos fatores do substrato no crescimento

neural. (A,B) Efeitos de fibronectina no crescimento neural de agregados da retina neural.
O agregado em (A) foi cultivado por 36 horas
em plstico de cultura de tecidos no-tratado.
O agregado em (B) foi cultivado em plstico
tratado com 50g de fibronectina por mililitro. (C) Crescimento de neurnios sensoriais
colocados em substrato padronizado consistindo de faixas paralelas de laminina aplicadas sobre um fundo de colgeno de tipo IV.
(A e B de Akers et al., 1981, cortesia de J.
Lilien; C de Gundersen, 1987, cortesia de R.
W. Gundersen.)
axnios para a placa de plstico. Porm, se a placa for recoberta com fibronectina ou
laminina, crescimento de longos axnios so observados (Figura 8.6). Reciprocamente,
glicosaminoglicanos, outro conjunto de protenas associadas com matrizes extracelulares,
parecem impedir esses crescimentos neurais (Tosney e Landmesser, 1985).
A presena de tais molculas delineia as trajetrias atravs do embrio (Akers et
al., 1981; Gundersen, 1987), e muitos dos caminhos percorridos pelos axnios parecem
ser pavimentados por laminina. Letourneau e colaboradores (1988) mostraram que os
axnios de certos neurnios espinhais migram atravs do neuroepitlio por uma superfcie transitoriamente recoberta por laminina que indica precisamente o caminho
desses axnios. De maneira semelhante, existe muito boa correlao entre o alongamento dos axnios da retina e a presena de laminina nas clulas neuroepiteliais e
astrcitos no crebro do embrio do camundongo (Cohen et al., 1986, 1987; Liesi e
Silver, 1988). Depsitos puntiformes de laminina so vistos nas superfcies das clulas
gliais ao longo do caminho levando da retina para o tectum ptico, ao passo que reas
adjacentes onde o nervo tico deixa de crescer no h tais depsitos de laminina.
Aps os axnios da retina terem alcanado o tectum, as clulas gliais se diferenciam e
perdem sua laminina. Nesse ponto, os neurnios ganglionares da retina que formaram o
nervo tico perdem seu receptor integrina para a laminina. Depsitos de laminina podem
tambm ser necessrios para a regenerao do tecido neural. Clulas astrogliais contendo laminina puntiforme em suas superfcies podem induzir a regenerao quando colocadas em embries nos quais os caminhos neuroniais do corpo caloso foram rompidos.
Existem ao menos quatro regies da glicoprotena laminina que podem sustentar
a migrao e o crescimento axnico (Figura 8.7). Primeiro, as integrinas do cone de
crescimento podem se ligar seqncia RGD da protena laminina. Segundo, outro
receptor do cone de crescimento pode reconhecer a seqncia de aminocidos YIGSR
na laminina, enquanto a regio de 10 aminocidos rica em isoleucina do peptdeo B2
crtica para o crescimento neurtico de certos neurnios (Matsuzawa et al., 1996). O
quarto receptor para laminina do cone de crescimento a glicosiltransferase que
reconhece certas cadeias laterais de carboidrato da molcula de laminina (Begovac e
Shur, 1990; Thomas et al., 1990). Esses carboidratos podem residir no domnio de
crescimentos neurticos da cadeia A da laminina.
Conduo por Sinais Migratrios Especficos do Axnio:
A Hiptese das Trajetrias Marcadas
Por serem encontradas em muitos lugares atravs do embrio, molculas da matriz
extracelular como a laminina e N-CAM podem usualmente proporcionar somente sinais gerais para a movimentao dos cones de crescimento. Seria difcil para tais
molculas generalizadas dirigir cones de crescimento de diferentes tipos em direes
diferentes. Apesar disso, em Drosophila, gafanhotos e Caenorhabditis (e provavelmente na maioria dos invertebrados), a padronizao do movimento axnico um
processo surpreendentemente preciso, e os axnios adjacentes esto dando instrues migratrias diferentes de seus ambientes. Por exemplo, de dentro de cada segmento do gafanhoto emergem 61 neuroblastos (30 de cada lado e um no centro). Um
desses, o neuroblasto 7-4, uma clula germinativa e d origem a uma famlia de seis
neurnios, chamados C, G, Q1, Q2, Q5 e Q6. Essa famlia de neurnios est mostrada na
Figura 8.8, do mesmo modo que os neurnios amarelos na Prancha 20. Os cones de
crescimento axnico desses neurnios alcanam seus alvos seguindo caminhos especficos formados por outros neurnios precoces. Q1 e Q2 seguem um caminho reto
juntos, atravessando numerosas outras clulas, at encontrar o axnio do neurnio
precursor da linha mediana dorsal (dMP2), na qual eles seguem posteriormente. Os
outros quatro neurnios da famlia 7-4 migram atravs do axnio dMP2 como se esse
no existisse. Axnios do neurnios C e G progridem juntos por um longo caminho,
mas finalmente C segue os nervos X1 e X2 para a parte posterior do segmento, enquanto G adere aos axnios P1 e P2 (que prosseguiro posteriormente) e move-se
anteriormente sobre suas superfcies (Goodman et al., 1984, Taghert et al., 1984).
315
Cadeia A
Regio de ligao
de clulas epiteliais
Cadeia B1
Local YIGSR
de fixao celular
e migrao
Local de fixao
de clulas RDG
Cadeia B2
Domnio de
ligao de
colgeno
tipo IV
Regio de
crescimento
de neuritos
Regio ligante de
heparina e axnio
Figura 8.7
Estrutura de laminina e propostas para regies

ligantes.
316
Precursor da linha mediana

Neuroblasto lateral
Neuroblasto 7-4
Neuroblasto mediano
Neuroblasto 7-4
Clulas-me ganglionares
Prognie:
Neurnios irmos
Axnios
Cones de
crescimento
Fascculos axnicos
Figura 8.8
Cada um dos 17 segmentos do embrio precoce do gafanhoto tem o mesmo padro de neuroblastos. Existem 30 neuroblastos laterais de
cada lado, um neuroblasto mediano e 7 precursores na linha mediana. Os neuroblastos da
linha mediana se dividem uma vez, enquanto
os neuroblastos so clulas-tronco que dividem-se repetidamente para formar as clulasme ganglionares. Cada uma das clulas se
divide uma vez para fornecer dois neurnios
irmos. O neuroblasto 7-4 tem uma prognie
de quase 100 neurnios, dos quais os primeiros 6 so aqui mostrados. (Segundo Goodman
e Bastiani, 1984.)
O cone de crescimento G ter encontrado mais de 100 superfcies diferentes s quais

poderia aderir, mas ele especfico para os neurnios P. Se os neurnios P so destrudos
por laser, os cones de crescimento G agem anormalmente, seus filopdios procurando
aleatoriamente pela superfcie migratria apropriada. Se qualquer dos outros cento e
tantos neurnios forem destrudos, o cone de crescimento G comporta-se normalmente.
Essa formulao de encontro de trajetrias axnicas em insetos foi chamada de
hiptese de trajetrias marcadas porque significa que um dado neurnio pode reconhecer especificamente a superfcie de outro neurnio que se desenvolveu anteriormente. A evidncia para essa especificidade vem de estudos usando anticorpos
monoclonais (Bastiani et al., 1987). Neurnios aCC e pCC so neurnios irmos no
gafanhoto (ambos so derivados do neuroblastos 1-1) que tm destinos muito diferentes. Alm disso, conjuntos diferentes de axnios aderem a cada um deles, criando
feixes independentes de axnio, chamados fascculos. A especificidade dessa
fasciculao depende da presena da protena fasciclina I. Essa protena encontrada nos dois neurnios aCC de cada segmento do embrio de 10 horas, mas no est
presente nos neurnios pCC. Perto da hora 11, porm, outros neurnios (mas no
pCC) so vistos expressar essa molcula da superfcie celular. Esses neurnios so
precisamente aqueles (RP1, RP2, U1, U2 ) cujos axnios fasciculam com aCC. Existem
pelo menos quatro molculas de fasciclina expressas em diferentes subconjuntos de
neurnios, e cada uma dessas molculas permite aos cones de crescimento de certos
neurnios reconhecer especificamente aqueles axnios com os quais iro fascicular
(Harrelson e Goodman, 1988; Zinn et al., 1988).
Em outros animais com sistemas nervosos relativamente simples, tal como a sanguessuga, existe evidncia de que cada neurnio teria molculas de superfcie celular
qualitativamente diferentes e que essas molculas poderiam ser importantes na especificidade sinptica. O sistema nervoso da sanguessuga consiste de 34 gnglios
(A)
317
(B)
Figura 8.9
pareados contendo cerca de 400 neurnios cada. Foram identificados neurnios individuais, e as funes de muitos desses neurnios so conhecidas. Zipser e Mckay
(1981) injetaram o sistema nervoso da sanguessuga em camundongos e obtiveram
centenas de anticorpos monoclonais que se ligaram a vrias regies do sistema nervoso. Em alguns casos, essas diferenas puderam ser correlacionadas com funo. O
anticorpo monoclonal Lan 3-1 se ligou especificamente a um nico par de neurnios
em cada um dos gnglios do corpo mediano (Figura 8.9). Esses pares de neurnios so
conhecidos por controlar o processo da everso peniana nas sanguessugas em
copulao. Outro anticorpo monoclonal, Lan 3-2, reconheceu todos os quatro neurnios em cada gnglio, que respondem a estmulos mecnicos nocivos. A situao,
de acordo com Zipser e Mckay parece bastante anloga a cabos eltricos codificados por cores contendo muitos fios, onde cada fio tem sua prpria molcula (corante)
para facilitar o reconhecimento apropriado e conexo terminais.
Estudos sobre trajetrias marcadas especificamente em vertebrados esto muito
atrasados em comparao com aqueles em invertebrados, mas estudos recentes nos
neurnios motores do peixe-zebra indicam que as trajetrias marcadas tambm funcionam aqui. O peixe-zebra poder tornar-se o organismo de escolha em neurobiologia
desenvolvimental em vertebrados, porque tem desenvolvimento muito rpido, muitos
indivduos podem ser comparados, e os embries so transparentes, permitindo aos
neurobiologistas observar o crescimento dos axnios em embries vivos. Neurnios
podem ser identificados pela injeo de substncias marcadas por fluorescncia em
percursores neuroniais (Kimmel e Law, 1985), e o crescimento axnico pode ser seguido visualmente ou por registro em vdeo. Eisen e colegas (1986) observaram o alongamento axnico de trs neurnios motores pioneiros nesses embries. Aps deixar a
medula espinhal, todos os trs seguiram o mesmo caminho ao longo de um msculo
at alcanarem um determinado local no embrio. Nesse ponto, eles divergiram em trs
trajetrias especficas levando aos msculos apropriados. A hiptese das trajetrias
marcadas tem sido extremamente importante tanto como modelo para a gerao de
pesquisas, como em um contexto no qual podem ser inseridos dados existentes sobre
a especificidade neuronial.
Orientao pela Repulso Especfica de Cones de Crescimento
Alm da adeso especfica existe tambm a possibilidade da repulso especfica pela
matriz extracelular. Axnios dos neurnios dos gnglios da raiz dorsal do tronco passam somente atravs da parte anterior da rea de cada somito (assim como as clulas da
crista neural iro migrar somente atravs dessas regies e no das regies posteriores)
Neurnios funcionais especficos corados por

anticorpos monoclonais para componentes da
superfcie celular. (A) Anticorpos Lan 3-1 reconhecem um nico par de neurnios em um
determinado gnglio. Esses neurnios funcionam na everso peniana. (B) Um conjunto de
neurnios reconhecidos pelos anticorpos Lan
3-2; esses neurnios respondem estimulao
nociva da pele da sanguessuga. (de Zipser e
Mckay, 1981, cortesia de B. Zipser.)
318
(A)
Esclertomo
Tubo neural
(B)
Notocorda
(C)
Figura 8.10
Repulso de cones de crescimento de gnglios da raiz dorsal. (A)

Padro segmentado do crescimento axnico atravs do mesoderma
somtico. Axnios (corados de negro com tetrxido de zinco) movemse atravs da poro anterior de cada somito, mas no da posterior. O
limite entre anterior e posterior est assinalado com uma estrela. (B)
Cone de crescimento de um axnio do neurnio ganglionar da raiz
dorsal crescendo sobre laminina. Seus lamelipdios e filipdios podem ser facilmente visualizados. (C) Cone de crescimento colapsado
de um neurnio ganglionar da raiz dorsal quando a protena inibitria
foi adicionada cultura. (A segundo Keynes e Stern, 1984; B e C
segundo Raper e Kapfhammer, 1990. Todas as fotografias cortesia
dos autores.)
(Figura 8.10A). A superfcie celular da poro posterior do somito pode estar inibindo essa migrao. Davies e colegas (1990) mostraram que membranas isoladas da
poro posterior do somito causam o colapso dos cones de crescimento dos neurnios dos gnglios da raiz dorsal (Figura 8.10B,C). Alm disso, eles isolaram uma
frao de glicoprotena da soma de pinto, que causa o colapso desses cones; e os
componentes dessa frao so especificamente encontrados na poro posterior
dos somitos. Em insetos, a semaforina I (tambm conhecida como fasciculina IV)
uma protena transmembrana que expressa em uma banda de clulas epiteliais no
membro em desenvolvimento. Essa protena parece inibir os cones de crescimento
dos neurnios sensoriais Ti1 moverem-se para frente, levando-os a se virarem (Figura 8.11; Kolodkin et al., 1992, 1993).
G-Sema I
Figura 8.11
A ao da semaforina I no membro em desenvolvimento

do gafanhoto. Axnios de neurnios sensoriais Ti1 se
projetam para o sistema nervoso central (CNS). (As longas flechas escuras representam etapas seqenciais do caminho.) Quando encontram a banda de clulas epiteliais
expressando semaforina-I, eles reorientam seus cones de
crescimento e se extendem ventralmente ao longo da borda
distal das clulas expressando a semaforina I. Quando
seus filipdios se conectam ao par de clulas Cx1, eles
atravessam a borda e se projetam para o CNS. Quando a
semaforina bloqueada por anticorpos, os cones de crescimento procuram aleatoriamente as clulas Cx1. (Segundo Kolodkin et al., 1993.)
Ti1
Membro em
Desenvolvimento
CNS
Cordo nervoso ventral
&
319
Especulaes
Sexo, Odor e Adeso Especfica
M FINAIS DO SCULO DEZENOVE, o professor John Mackenzie
da Universidade Johns Hopkins

(1898), o psiquiatra alemo Wilhelm Fliess
(1887) e o sexologista vienense Richard
Von Krafft-Ebing (1886) compartilharam a
viso errnea de que havia semelhanas
entre o desenvolvimento do pnis e do
nariz. Todos trs investigadores usaram
o mesmo estudo de caso como evidncia;
o relato de um homem que no tinha sensao de olfato ausncia de nervos olfativos ou nasais e cujos rgo genitais
eram muito menores que o normal.
Tais pessoas so agora conhecidas
por ter a sndrome de Kallmann, uma doena ligada ao X, caracterizada por
anosmia (sem sensao de olfato), genitlia pequena e gnadas estreis. A
anosmia devida a falta de neurnios cerebrais que recebem influxo de axnios
oriundos de neurnios nasais. As gnadas e a genitlia pequenas so resultado
da falta do hormnio liberador de gonodotrofina (GnRH). GnRH um hormnio
peptdico secretado pelo hipotlamo que
instrui a hipfise anterior a secretar o hormnio luteinizante, necessrio para o desenvolvimento das gnadas e amadurecimento genital. O que une esses dois problemas? Em 1989, dois laboratrios
Lobo
Frontal
(Schwanzel-Fukada e Pfaff, 1989; Wray et

al., 1989) fizeram a supreendente descoberta que os neurnios secretores de
GnRH no se originavam no hipotlamo.
Ao contrrio, eles se originavam no
epitlio olfativo (o rgo vomeronasal) no
rudimento nasal e migravam para a regio
hipotalmica do crebro durante o desenvolvimento fetal (Figura 8.12). Os neurnios receptores olfativos do nariz originam-se do mesmo lugar. Os axnios dos
neurnios receptores olfativos penetram
no crebro para fazer sinapse com o bulbo olfativo, enquanto os corpos celulares desses neurnios permanecem no nariz em desenvolvimento. Pacientes com a
sndrome de Kallmann no tm bulbo olfativo no crebro, pois o desenvolvimento desse bulbo requer inervao dos neurnios olfativos (Stout e Gradziadi, 1980).
O defeito na sndrome de Kallmann
pode ser atribudo falncia dos neurnios secretores de GnRH e dos cones de
crescimento dos neurnios olfativos que
migram para o crebro de origem do
placdio olfativo (Scwanzel-Fukada et al.,
1989). Admite-se que o axnios olfativos
migrem primeiro e que os neurnios

secretores de GnRH sigam os fascculos
do nervo olfativo para dentro do crebro
(Livne et al., 1993). O gene cuja ausncia
ou anormalidade causa a sndrome foi
clonado, e sua seqncia de cDNA prediz
uma protena de adeso celular da superfamlia das imunoglobulinas (Franco et al.,
1991; Legouis et al., 1991). Membros dessa classe de protenas so conhecidas por
mediar adeso clula-clula ou axnioaxnio (Grumet, 1991), e eles incluem NCAM, L1, LFA-1, CD4, fascilina II,
contactina e neurogliana. A protena da
sndrome de Kallmann tambm contm
regies que se assemelham molcula de
fibronectina, uma molcula da matriz extracelular de importncia crtica para numerosas migraes celulares durante o desenvolvimento. No entanto, os testes para
verificar se essa protena se encontra nos
trajetos seguidos pelas clulas migratrias e se os axnios alongam-se do epitlio
olfativo, no foram ainda realizados em
mamferos; tampouco determinou-se se os
axnios ou clulas dessa regio realmente se ligam essa protena.
Figura 8.12
Modelo para a etiologia da sndrome de Kallmann. Na ilustrao esquerda, neurnios sensoriais do epitlio olfativo estendem axnios para o bulbo olfativo do crebro. Na sndrome de
Kallmann, o bulbo olfativo degenerou, e essa perda considerada secundria carncia de
axnios dos neurnios sensoriais. A srie de cortes sagitais da cabea de camundongos embrionrios mostra a migrao de neurnios secretores de GnRH (colorido) do primrdio nasal
para dentro da poro hipotalmica do crebro. Essa migrao no ocorre na sndrome de
Kallmann. (Segundo Calof, 1992.)
Bulbo
olfativo
Bulbo olfativo
Hipotlamo
Epitlio Olfativo
Lngua
Cavidade
Nasal
Clula
neurossensorial
primria
Epitlio
olfativo
Clula
neurossensorial
secundria
Nariz
Dia 11
Dia 13
Dia 14
Maxilar
Dia 15
rea
pr-ptica
320
Seleo de trajetria: Orientao por molculas difusveis
(A)
Gradiente de
netrina-2
Neurnio
comissural
Gradiente de
netrina-1
Placa do assoalho
(B)
Placa do assoalho
Figura 8.13
Trajetria dos axnios comissurais da medula

espinhal do rato. (A) Desenho esquemtico de
um modelo onde os neurnios comissurais
experienciam pela primeira vez um gradiente
de netrina-2 e depois um gradiente mais ngrime
de netrina-1. Os axnios comissurais so guiados quimiotaticamente em direo ventral descendo a margem lateral da medula espinhal em
direo placa do assoalho. Ao ating-la, os
axnios comissurais mudam sua direo devido conduo por contato das clulas do
assoalho. (B) Localizao auto-radiogrfica do
mRNA de netrina-1 pela hibridizao in situ
para o crebro de um embrio de rato de 16
dias usando RNA antisenso. A hibridizao d
um intenso sinal dos neurnios da placa de
assoalho. (B de Kennedy et al., 1994; fotografia cortesia de M. Tessier-Lavigne.)
A idia de que sinais quimiotticos guiam os axnios no sistema nervoso em desenvolvimento foi primeiro proposta por Ramn y Cajal (1982). Ele sugeriu que os neurnios comissurais da medula espinhal poderiam viajar de suas posies dorsais para a
placa ventral do assoalho por meio de fatores difusveis. Os axnios desse neurnio
comeam a crescer ventralmente abaixo do lado do tubo neural. Porm, aproximadamente a dois-teros do caminho, sua direo muda, e eles se projetam atravs da rea
do neurnio (motor) ventrolateral do tubo neural em direo s clulas da placa do
assoalho (Figura 8.13). [axon1.html], [axon5.html]
Em 1994, Serafini e colegas desenvolveram um ensaio que lhes iria permitir selecionar tais molculas difusveis. Quando explantes da medula espinhal dorsal foram
colocados sobre placas de colgeno, a presena de clulas da placa de assoalho nas
proximidades promoveria o crescimento dos axnios comissurais desses explantes.
Serafini e seus colegas tomaram fraes de crebro de embries de pinto e homogenaram
e testaram essas fraes para ver se alguma de suas protenas imitaria essa atividade.
Isso resultou na identificao de duas protenas, netrina-1 e netrina-2. Netrina-1
produzida e secretada pelas clulas da placa de assoalho, enquanto netrina-2 sintetizada na regio mais inferior da medula espinhal, mas no na placa de assoalho (veja
Figura 8.13). Os efeitos quimiotticos dessas netrinas foram mostrados pela transformao de clulas COS (que em geral no produzem essas protenas) com um vetor
contendo um gene netrin ativo (Kennedy et al., 1994). Agregados das clulas COS
secretoras de netrina provocaram o crescimento do axnio comissural de explantes da
espinha dorsal do rato, enquanto aquelas clulas COS tratadas com o vetor sem o
gene netrin ativo no provocaram tal atividade (Figura 8.14). Ambas netrinas se associam matriz extracelular.* possvel que os neurnios comissurais primeiro encontrem um gradiente de netrina-2, que os trazem para os domnios do gradiente mais
ngreme da netrina-1 (veja Figura 8-13).
As netrinas tm numerosas regies de homologia com UNC-6, uma protena envolvida no direcionamento da migrao circunferencial de axnios ao redor do corpo
de Caenorhabditis elegans. No nematide de tipo selvagem, a UNC-6 induz axnios
de certas posies centrais a moverem-se ventralmente, e isso induz alguns corpos
celulares localizados ventralmente a estenderem o axnio dorsalmente (Figura 8.15).
Em mutaes de perda-de-funo do gene unc-6, nenhum desses movimentos axnicos
ocorre (Hedgecock et al., 1990; Ishii et al., 1992; Hamelin et al., 1993). Mutaes do
gene unc-40 interrompem a migrao axnica ventral (mas no a dorsal), enquanto
mutaes do gene unc-5 somente previnem a migrao dorsal. Culotti (1994) props
que a protena UNC-6 pode atrair o conjunto de axnios que sintetiza UNC-40 e repelir
os axnios que produzem UNC-5. Estudos recentes (Wadsworth et al., 1996) mostram
que a UNC-6 restrita espacialmente s clulas mais ventrais da hipoderme (pele) e
sistema nervoso, e que as propriedades atrativas e repulsivas dessa molcula so
mediadas pelas regies diferentes da protena. Alm disso, os sinais da netrina tambm guiam clulas mesodrmicas assim como axnios.**
Se a UNC-6 atrativa para certos neurnios e repulsiva para outros, poder-se-ia
pensar que esse duplo papel tambm seria atribudo s netrinas. Colamarino e TessierLavigne (1995) mostraram que isso o caso observando a trajetria do nervo troclear
*A ligao de um fator solvel matriz extracelular cria uma ambigidade interessante entre quimiotaxia, haptotaxia e trajetrias marcadas. A natureza no se conforma
necessariamente s nossas categorias.
**No somente UNC-6 homloga netrina, mas UNC-40 homloga ao receptor de netrina dos mamferos e da Drosophila (Chan et al., 1996; Keino-Masu et al.,
1996; Kolodziej et al., 1996). Em todos os tipos de organismos, a molcula de netrina
parece proporcionar orientao para a migrao de clulas portando seu receptor.
(A)
(C)
(B)
(D)
(quarto craniano). Em seu caminho para inervar um msculo do olho, os axnios do

nervo troclear se originam na placa do assoalho do pednculo cerebral e migram
dorsalmente afastando-se da regio da placa dorsal. Essa trajetria mantida quando
as regies do pednculo cerebral so explantadas para gis de colgeno. O crescimento dorsal dos neurnios trocleares pode ser impedido colocando as clulas da placa
do assoalho ou clulas COS secretoras de netrina-1 dentro de 450m da poro dorsal
do explante. Esse crescimento dorsal no foi impedido pelos explantes dorsais do
tubo neural ou pelas clulas COS que no continham o gene netrim-1 ativo (Figura
8.16). Portanto, netrinas e UNC-6 parecem ser quimiotticas para certos neurnios e
quimiorepulsivas para outros.
A famlia semaforina compreende outro conjunto de molculas quimiorepulsivas
(ainda no foram encontrados membros atrativos nessa famlia). A semaforina I
encontrada em insetos e uma protena ligada membrana que inibe a ramificao dos
axnios quando a encontram em um membro (Kolodkin et al., 1992). A semaforina
secretada em Drosophila por nico grande msculo torcico. Dessa maneira, o msculo torcico previne a si mesmo de ser inervado por axnios inapropriados (Matthes
321
Figura 8.14
Agregados de clulas COS secretando netrinas

provocam o crescimento de axnios comissurais oriundos de explantes de medula espinhal
dorsal de embrio de rato de 11-dias. (A) O
crescimento do neurnio comissural visto
quando o explante da medula espinhal dorsal
(tecido superior) encontra um explante da placa do assoalho. (B) No h crescimento quando o explante dorsal exposto s clulas COS
agregadas que foram transfectadas com o vetor
clonador somente (sem o gene netrin). (C,D)
Crescimentos de neurnios comissurais de clulas COS agregadas, que estavam expressando o gene para netrina-1 (C) e para netrina -2
(D). Sua identidade como neurnios comissurais foi confirmada por imunohistologia mostrando antgenos especficos das comissuras
nesses axnios. (Barra de escala, 100 m.) (de
Kennedy et al., 1994; fotografias cortesia de
M. Tessier-Lavigne.)
322
Figura 8.15
Expresso de UNC e funo na conduo axnica. (A) No corpo

do embrio do tipo selvagem de C.elegans, neurnios sensoriais
projetam-se ventralmente e neurnios motores projetam-se dorsalmente. Os epidermoblastos da parede ventral do corpo expressando unc-6 so preenchidos. (B) Nos embries mutantes unc-6
no ocorre migrao alguma. (C) As mutaes de perda-defuno unc-5 somente afetam os movimentos dorsais dos neurnios motores. (D) As mutaes de perda-de-funo unc-40 somente afetam a migrao ventral dos cones de crescimento sensoriais. (Segundo Goodman, 1994.)
C. elegans
(A)
(B)
neurnios
sensoriais
de unc 40+
Tipo
selvagem
Epidermoblastos
da parede ventral
do corpo
(C)
Neurnios
motores unc5+
(D)
et al., 1995). A semaforina III, encontrada em mamferos e aves, tambm conhecida

como colapsina (Luo et al., 1993). Essa protena secretada causa o colapso de
cones de crescimento originrios dos gnglios da raiz dorsal (veja Figura 8.10C).
H vrios tipos de axnios nos gnglios da raiz dorsal que penetram na medula
espinhal dorsal. A maioria desses axnios impedida de viajar adiante e de penetrar a medula espinhal ventral. Entretanto, um subconjunto desses neurnios viaja
ventralmente atravs das clulas neurais (Figura 8.17). Esses neurnios particulares (responsivos NT-3) no so inibidos pela semaforina III, enquanto os outros
neurnios o so (Messersmith et al., 1995). Isso sugere que semaforina/colapsina
padronizam as projees sensoriais dos gnglios da raiz dorsal repelindo seletivamente axnios para que terminem dorsalmente.
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 8.16
Netrina inibe o crescimento de axnios trocleares da medula espinhal dorsal. Axnios trocleares,
corados para antgeno especfico do axnio troclear, emergem dorsalmente e no so inibidos
pelo explante de medula espinhal dorsal (A) ou pelas clulas COS (B). Eles so inibidos pelas
clulas COS secretando netrina-1 (C) ou pela placa do assoalho da medula espinhal (D). (Segundo Colamarino e Tessier-Lavigne, 1995; fotografias cortesia de M. Tessier-Lavigne).
(A)
323
Gnglio da raiz dorsal
Neurnios aferentes Ia
(responsivos NT-3)
Aferente para mecanorreceptores
de baixo limiar
Receptores de temperatura e dor
(B)
Figura 8.17
Semaforina III como inibidor seletivo de projees axnicas para a medula espinhal
ventral. (A) Trajetria de axnios em relao expresso de semaforina III na medula
espinhal do embrio de rato de 14 dias. Os neurnios responsivos neurotrofina-3
podem viajar para a regio ventral da medula espinhal, mas os neuritos aferentes para os
mecanorreceptores e neurnios receptores de temperatura e dor terminam dorsalmente.
(B) Clulas COS secretoras de semaforina III inibem o crescimento de axnios
mecanorrecepores (aqui mostrados crescendo num meio tratado com NGF, mas inibidos de crescer em direo fonte de semaforina III). (C) Os neurnios que so
responsivos NT-3 para crescimento no so inibidos de se estenderem em direo
fonte de semaforina III. (A segundo Marx, 1995; B e C segundo Messersmith et al.,
1995; fotografias cortesia de A. Kolodkin.)
Sinais para conduo mltipla

ertebrados
Neurnios Motores V
Vertebrados
Um dos mais importantes programas de pesquisa em neurobiologia do desenvolvimento refere-se inervao dos msculos dos membros. Crescimento axnico de
neurnios motores ocorre muito cedo no desenvolvimento, antes da soma dos neurnios motores ter migrado para suas posies definitivas na medula espinhal e antes
dos msculos terem se condensado fora do mesnquima (Landmesser, 1978; Hollyday,
1980a). Esse estgio pode ser visto na Figura 8.18. Para inervar a musculatura dos
Tubo neural
(medula
espinhal)
Nervos
espinhais
Rudimento
renal
Intestino
Broto de
membro
Sulco
ectodrmico
apical
Figura 8.18
Micrografia eletrnica de varredura de um corte

de um embrio de pinto de 4-dias, mostrando a
emergncia de nervos espinhais para dentro do
broto do membro em desenvolvimento. (de
Tosney e Landmesser, 1985, cortesia de
K.Tosney.)
324
(A)
Medula espinhal
Neurnios
motores
(B)
Barreira
Esclertomo posterior
e
Trajetria
Esclertomo
dorso-anterior
Nervos epaxiais
(para o dorso)
Plexo
Nervo espinhal
Tronco nervoso
dorso-anterior
Tronco
nervoso ventroanterior
Nervo do
msculo
Barreira
Mesnquima
perinotocordal
Trajetria
Mesnquima
do plexo
Barreira
precursor do
cinturo plvico
Figura 8.19
Trajetrias de axnios motores na regio do

membro posterior do embrio do pinto. (A)
Padro neural do membro posterior. Axnios
do neurnio motor unem-se no plexo e em seguida se separam em troncos nervosos dorsal e
ventral. Um plexo anterior; o outro, posterior.
(B) Os componentes ambientais que criam o
padro neural. A segmentao dos nervos espinhais criada pelo esclortomo. O esclertomo dorsal anterior permite a migrao, enquanto
o esclertomo dorsal posterior e todo o ventral
(o mesnquima perinotocordal) uma barreira
para os axnios do nervo motor. O plexo
mesenquimatoso permissivo, mas o cinturo
plvico forma uma barreira. Os dois orifcios
nessa barreira permitem a passagem e extenso
dos troncos nervosos. (Segundo Tosney, 1991.)
membros, o axnio se estende sobre centenas de clulas em um ambiente complexo

e cambiante. Pesquisa recente descobriu vrias trajetrias e vrias barreiras que
ajudam a conduo dos axnios para seus destinos apropriados. Conforme mencionado acima, em cada lado da medula espinhal h blocos de tecido mesodrmico
chamados somitos. Pouco antes dos axnios iniciarem seu alongamento, o somito
se cinde em dois tipos de tecido. A poro dorsal torna-se o dermomitomo (que
produz a derme e a musculatura do dorso), enquanto a poro ventral do somito
passa a ser o esclertomo (que produz a cartilagem vertebral). Lateralmente aos
somitos, na base do broto do membro, est o mesnquima do plexo e as
prospectivas clulas do cinturo escapular. Os corpos celulares dos neurnios
motores esto nas regies ventrolaterais do tubo neural (Figura 8.19). Axnios
dos neurnios motores que iro inervar os msculos dos membros esto misturados quando emergem da medula espinhal. Populaes de axnios de vrios nveis
segmentais da medula espinhal podem formar um nervo espinhal comum. Esses
nervos espinhais se renem em um plexo. Nesses plexos, porm, os axnios de
diferentes regies percorrem trajetrias diferentes. Por exemplo, na Figura 8.19,
neurnios motores para msculos diferentes divergem para apropriados troncos
nervosos e finalmente se projetam para msculos singulares.
Por meio de vrias manipulaes cirrgicas foram descobertas, no embrio precoce do pinto, alguns dos sinais ambientais que direcionam essa migrao. A parte
ventral do esclertomo que circunda a notocorda forma uma barreira contra o alongamento do axnio motor. Apesar das clulas nessa regio parecerem soltas e facilmente evitadas, elas repelem os axnios em sua vizinhana. Quando o tubo neural
girado para fazer com que os neurnios motores emerjam ventralmente para essa
regio, eles imediatamente giram para evit-la, migrando somente atravs do esclertomo dorsal anterior (Figura 8.19B). Assim, o esclertomo perinotocordal uma
barreira para o crescimento do axnio motor, enquanto o esclertomo anterior dorsal
uma trajetria (Tosney e Oakley, 1990; Tosney, 1991). Os axnios que progredirem
atravs do esclertomo dorsal anterior (juntamente com as clulas da crista neural
que seguem pela mesma rota) chegam ao plexo mesenquimatoso na base do broto do
membro, tambm um ambiente favorvel para o crescimento axnico. Porm, pouco
alm do mesnquima do plexo ficam as clulas precursoras do cinturo plvico.
Essas clulas inibem o crescimento axnico e os axnios se afastam delas. H dois
orifcios no tecido precursor do cinturo plvico cheios de plexo mesenquimatoso;
axnios se estendem por esses orifcios para formar os troncos nervosos anterior e
posterior que penetram no membro. Se outros orifcios forem feitos esperimentalmente no tecido precursor do cinturo plvico, os axnios os atravessam prontamente (Tosney e Landmesser, 1984, 1985).
Os nervos podem at mesmo alcanar seus respectivos destinos se as clulas
formadoras de msculos tiverem sido removidas (Phelan e Hollyday, 1990), e provvel que as outras clulas mesenquimatosas no broto do membro (tal como aquelas que formam a derme ou a cartilagem) estejam provendo os sinais direcionais.
Essas trajetrias para as regies musculares dos membros parecem ser muito bem
definidas. Quando se redireciona axnios de uma origem diferente (como um gnglio
diferente) para o membro, eles se ramificam como o fazem os axnios que originalmente inervaram o membro. Em outras palavras, o membro capaz de ditar o padro
de inervao para um conjunto de axnios que normalmente no o penetrariam
(Hamburger, 1939; Hollyday et al., 1977). Ainda mais, se segmentos da medula espinhal do pinto forem revertidos fazendo com que seus neurnios motores se encontrem em novas localizaes, seus axnios iro encontrar seus alvos originais (veja
Figura 8.3; Lance-Jones e Landmesser, 1980). No entanto, quando membros se desenvolvem com reas duplicadas (como duas coxas), os neurnios inervando a
segunda coxa no sero neurnios especficos da coxa, mas neurnios que usualmente inervam a panturrilha (Whitelaw e Holliday, 1983). Esses experimentos apresentam um paradoxo ainda a ser resolvido: Axnios particulares esto predispostos a crescer para lugares especficos; no entanto, axnios de pools de neurnios
motores diferentes podem substituir um outro no estabelecimento de padres nervosos normais (Purves e Lichtman, 1985). A explicao mais plausvel que vrios
mecanismos atuam simultaneamente para assegurar que os axnios cheguem a seus
lugares apropriados. Um desses mecanismos parece ser a conduo da superfcie
celular de clulas mesenquimatosas no formadoras de msculos no broto do membro, enquanto outro mecanismo provavelmente envolve a quimiotaxia de mioblastos
do broto do membro (Goodman e Shatz, 1993).
Axnios da Retina
Tambm se postularam sinais de orientao mltipla para explicar como neurnios
retinianos individuais so capazes de enviar axnios para a rea apropriada do crebro, mesmo quando transplantados para longe do nervo ptico (Harris, 1986). Essa
capacidade indica que os sinais de orientao no esto distribudos somente ao
longo da trajetria normal, mas existem atravs de todo o crebro embrionrio. Orientar um axnio de um corpo celular nervoso para seu destino atravs do embrio um
fenmeno complexo, e vrios tipos de sinais diferentes podem ser usados simultaneamente para assegurar que sejam estabelecidas as conexes corretas.
Os primeiros passos para levar os axnios retinianos para suas regies especficas no tectum ptico se realizam no interior da retina (Figura 8.20A). medida que
as clulas ganglionares retinianas se diferenciam, sua posio na margem interna da
retina determinada pelas molculas de caderina (N-caderina assim como a R-caderina
especfica da retina) das suas membranas celulares (Matsunaga et al., 1988; Inuzuka
et al, 1991). Os axnios dessas clulas crescem ao longo da superfcie interna da
retina em direo cabea do nervo ptico (Figura 8.20B). A adeso e o crescimento
dos axnios das clulas da retina podem ser controlados pela lmina basal contendo
laminina. Porm, a fixao laminina no pode explicar o direcionamento do crescimento. possvel que um gradiente da molcula inibidora do proteoglicano de sulfato de condroitina da matriz extracelular tenha um papel na especificao da direo
do crescimento (Hynes e Lander, 1992).
Quando os axnios penetram no nervo ptico, eles crescem sobre as clulas gliais
em direo ao crebro. Estudos in vitro sugerem que numerosas molculas de adeso
celular N-CAM, caderinas e integrinas tm funes na orientao do axnio para
o tectum ptico (Neugebauer et al., 1988). N-CAM parece ser especialmente importante aqui, pois a migrao direcionada dos cones de crescimento ganglionares retinianos
325
326
(A) Estabelecimento das camadas retinianas

(clulas ganglionares na superfcie interna)
Anti-N-caderina causa desarranjo
(B)
Retina
Crescimento axnico direcionado

Anti-N-CAM interfere
Forte crescimento neurtico em laminina in vitro
(C) Progresso organizada para o nervo ptico

Nervo ptico
Anti-N-CAM rompe. Possveis papis para laminina e

caderinas. Enfeixamento axnico especfico para posio
(D)
Trato ptico
Deciso de atravessar ou girar

Possveis sinais inibidores e especificidade da fasciculao
(E) Voltando para a regio alvo

Possvel papel para laminina. Sinais para a posio global
(F)
Chegada ao alvo
Perda de laminina in vivo
Perda de resposta laminina in vitro
Te c t
um
(G)
ptic
Estabelecimento de um mapa topogrfico

Inibidores especficos para posio. Possibilidade
de outros sinais graduados
Figura 8.20
Sinais para a orientao mltipla direcionam o movimento dos axnios dos gnglios retinianos
para o tectum ptico. (Segundo Hynes e Lander, 1992.)
dependem dos ps terminais gliais expressando N-CAM na superfcie interna retiniana

(Figura 8.20C; Stier and Schlosshauer, 1995). Ao chegar no nervo ptico, os axnios
fasciculam com axnios que j esto presentes. N-CAM tambm crtica para essa
fasciculao, e anticorpos contra N-CAM (ou remoo do seu componente polisilico)
faz com que os axnios entrem no nervo ptico de maneira desordenada, causando-os
a emergir em posies erradas no tectum (Thanos et al., 1994; Yin et al., 1995).
Ao entrar no crebro, os axnios retinianos de mamferos atingem o quiasma
ptico, onde eles tm que decidir se iro continuar diretamente em frente ou se giram
90 e entram do outro lado do crebro (Figura 8.20D). Parece que aqueles axnios no
destinados a atravessar para o outro lado do crebro, so repelidos de assim o fazerem
quando entram no quiasma (Godement et al., 1990); a base molecular dessa repulso
no conhecida. No trajeto para o tectum ptico, os axnios viajam por uma via (o
trato ptico), sobre clulas gliais cujas superfcies so recobertas por laminina (Figura
8.20E). Muito poucas reas no crebro tm laminina, e a laminina nesse trajeto existe
somente quando as fibras do nervo ptico esto nele crescendo (Cohen et al., 1987).
O axnio que migra da retina para o tectum encontra numerosas outras clulas e
alvos potenciais para inervao. No entanto, a combinao de vrios sinais de orientao, provavelmente envolvendo tanto atrao como repulso, orientam o axnio ao
longo de seu caminho. Nesse ponto, os axnios retinianos alcanaram a regio ptica
do crebro (Figura 8.29F), e comea a seleo de alvos.
Seleo de alvos
Quando os axnios chegam ao fim desse trajeto forrado de laminina, eles se espalham e acham seus alvos especficos. Estudos em rs e peixes (onde os neurnios
retinianos de cada olho se projetam para o lado oposto do crebro) indicaram que
cada axnio retiniano envia seu impulso para um local especfico (uma clula ou
TECTUM ESQUERDO
Rostral
Caudal
TECTUM DIREITO
Posterior
Dorsal
Anterior
Posterior
Dorsal
Campo
visual direito
Ventral
OLHO ESQUERDO
Campo
visual esquerdo
Ventral
OLHO DIREITO
Figura 8.21
Mapa da projeo retinotectal normal no Xenopus adulto. O olho direito inerva o tectum esquerdo, e o olho esquerdo inerva o tectum direito. Os nmeros nos campos visuais (retina) e os tecta
mostram regies de correspondncia; isto , estimulao do ponto 15 na retina direita envia
impulsos eltricos para a regio tectal esquerda 15. As flechas negras e coloridas sumariam o
padro das conexes retinotectais. (de Jacobson, 1967.)
pequeno grupo de clulas) dentro do tectum (Sperry, 1951). Como mostra a Figura
8.21, existem dois tecta ptico no crebro da r. Os axnios do olho direito entram no
tectum ptico esquerdo, enquanto aqueles do olho esquerdo formam sinapses com
as clulas do tectum ptico direito. O crescimento de neurnios no trato ptico de
Xenopus parece ser mediado por fatores de crescimento fibroblstico secretados
pelas clulas forrando o trato. Os axnios ganglionares retinianos expressam receptores FGF nos seus cones de crescimento. Porm, medida que as clulas ganglionares atingem o tectum, a quantidade de FGF diminui, talvez retardando os axnios
e permitindo-lhes achar seus alvos (McFarlane et al., 1995).
O mapa das conexes retinianas at o tectum ptico da r (a projeo retinotectal)
foi detalhada por Marcus Jacobson (1967). Jacobson definiu esse mapa lanando um
estreito feixe de luz numa regio pequena e limitada da retina e anotou, por meio de um
eletrodo registrador no tectum, quais clulas tectais estavam sendo estimuladas. A
projeo retinotectal de Xenopus laevis mostrada na Figura 8.21. A luz iluminando a
parte ventral da retina estimula clulas na superfcie lateral do tectum. Da mesma
maneira, luz focalizada na parte posterior da retina estimula clulas na poro caudal
do tectum. Esses estudos demonstraram uma correspondncia ponto-por-ponto entre
as clulas da retina e do tectum. Quando um grupo de clulas da retina ativado, um
grupo muito pequeno e especfico de clulas tectais estimulado. Podemos tambm
observar que os pontos formam um contnuo; em outras palavras, pontos adjacentes
na retina se projetam sobre pontos adjacentes no tectum. Esse arranjo permite r ver
uma imagem inteira. Essa intrincada especificidade levou Sperry (1965) a lanar a
hiptese da quimioafinidade:
Os complicados circuitos das fibras nervosas cerebrais crescem, se juntam e se
organizam atravs de intricados cdigos qumicos sob controle gentico. No
incio do desenvolvimento, as clulas nervosas, contadas em milhes, adquirem
327
e retm depois disso, tarjas de identificao individual, de natureza qumica,

pelas quais podem ser distinguidas e reconhecidas de outras.
Nmero de clulas retinianas dorsais marcadas

com 32p aderindo metade tectal
328
Teorias atuais no propem uma especificidade ponto-para-ponto entre cada axnio

e o nervo contatado. Ao contrrio, a presente evidncia demonstra que gradientes de
adesividade (em especial aqueles envolvendo a repulso) tm um papel na definio
de territrios nos quais os axnios entram e que a competio gerada pela atividade
entre esses neurnios determina a conexo final de cada axnio.*
Tempo de coleta (horas)
Figura 8.22
Adeso diferencial de clulas dorsais radioativas da retina do pinto s metades tectais dorsal e ventral. Clulas radioativas da metade
dorsal de retinas de pinto de 7 dias foram adicionadas s metades dorsal (cor) e ventral (negro) de tecta pticos de pintos de 12 dias. Os
dados mostram a adeso seletiva das clulas
retinianas dorsais ao tecido tectal ventral. (Segundo Roth e Marchase, 1976).
ectum
egies do T
desivas em Diferentes R
Especificidades A
Tectum
Regies
Adesivas
Existe boa evidncia que as clulas ganglionares retinianas podem distinguir entre
as regies do tectum. Clulas preparadas da metade ventral da retina neural do pinto
aderem-se preferencialmente s metades dorsais do tectum (Figura 8.22; Roth e
Marchase, 1976). Gottlieb e colaboradores (1976) acharam que neurnios retirados
da parte mais dorsal da retina do pinto aderem-se preferencialmente poro mais
ventral do tectum e que os neurnios do extremo ventral da retina aderem-se preferencialmente aos extremos mais dorsais do tectum. Esses resultados foram confirmados sob outras condies experimentais usando extremidades axnicas em lugar
de neurnios inteiros (Halfter et al., 1981).
Um gradiente que foi identificado funcionalmente um gradiente de repulso que
mais alto no tectum posterior e mais fraco no tectum anterior. Bonhoeffer e colegas
(Walter et al., 1987) prepararam um tapete de membranas tendo tiras alternadas
derivadas dos tecta posterior e anterior. Eles deixaram, ento, clulas das regies nasal
(anterior) ou temporal (posterior) da retina estenderem axnios nesse tapete. As clulas ganglionares da poro nasal da retina estendem axnios igualmente bem nas
membranas anterior e posterior do tectum. Os neurnios do lado temporal da retina,
porm, estenderam axnios somente nas membranas tectais anteriores (Figura 8.23). A
base dessa especificidade parece ser o fator repulsivo nas membranas das clulas
tectais posteriores. Quando o cone de crescimento de um axnio retiniano temporal
contata a membrana da clula tectal posterior, os filopdios do cone se retraem, e o
cone de crescimento entra em colapso e se retrai (Cox et al., 1990). Baier e Bonhoffer
(1992) demonstraram que um gradiente de uma substncia inibidora isolada da poro
posterior do tectum capaz de guiar os axnios temporais da retina.
Duas dessas molculas repulsivas foram identificadas em embries de pinto.
Chamadas RAGS (sinal repulsivo de orientao axnica) e ELF-1 (famlia ligante de
Eph 1), esto presentes num gradiente caudal-para-rostral atravs do tectum, e a
protena clonada capaz de repelir axnios (Figura 8.24; Drescher et al., 1995). RAGS
e ELF-1 revelaram ser ligantes para uma famlia de tirosina quinases receptores
chamadas Quinases receptoras Eph. Essas quinases foram encontradas nas clulas
ganglionares da retina do pinto, e elas so expressas em um gradiente temporalpara-nasal ao logo dos axnios da retina (Cheng et al., 1995). Parece haver vrios
receptores Eph na retina e ligantes no tectum que podem ter o papel de empurra-epuxa na orientao dos axnios retinianos temporais para o tectum anterior e permitir os axnios retinianos se projetarem para a poro posterior do tectum.
*Nos ltimos anos, os pesquisadores encontraram dzias de mutantes no peixe-zebra que

afetam a migrao dos axnios retinianos para o tectum ou a especificidade das conexes retinotectais.
Esses mutantes vm somente sendo analisados agora, porm, prometem fornecer vises da maior
importncia dos mecanismos pelos quais nossa descarga sensorial entra no crebro. A publicao de
dezembro de 1996 (volume 123) de Development contm vrios artigos mapeando os genes envolvidos na migrao do axnio da retina para o crtex ptico. Foram encontrados mais de 30 genes
mutantes que afetam ou a capacidade dos axnios retinianos do peixe-zebra acharem o tectum
ptico, ou a capacidade dos axnios encontrarem suas apropriadas conexes dentro do tectum
(Karlstrom et al., 1997).
Membranas tectais
329
Figura 8.23
Repulso diferencial de axnios temporais da

retina sobre membranas tectais. Fitas alternadas de membranas tectais anteriores e posteriores foram absorvidas em papel de filtro. Quando os axnios das clulas ganglionares
retinianas temporais (posterior) cresceram em
tais tapetes alternados, elas preferencialmente
estenderam axnios sobre membranas tectais
anteriores. (de Walter et al., 1987.)
Anterior
Posterior
Anterior
Posterior
Anterior
Posterior
Anterior
A possvel importncia de ELF-1 no tectum ptico foi demonstrada por Nakamoto

e colegas (1996). Quando infectaram regies do crebro posterior do pinto com um
vrus expressando ELF, pedaos de ELF-1 ficaram expressos em regies do tectum que
normalmente pouco expressam essa molcula. Axnio da regio temporal (mas no
Nasal
Olho
Crebro
Temporal
Temporal
Tectum
Receptor Eph da
tirosina quinase
(Mek-4)
(A)
Ligantes (RAGS, ELF-1)
Retina
Anterior
Nasal
Posterior
Temporal
Tectum
Figura 8.24
(B)
Retina temporal
Gradiente da protena ligante

nas membranas tectais
Retina nasal
Adeso retinotectal diferencial por gradientes

receptoras Eph da tirosina quinase e seus
ligantes. (A) Representao dos dois gradientes duplos receptor Eph da tirosina quinase
(Mek-4) na retina, e seu ligante (RAGS, ELF1) no tectum. (B) Experimento mostrando que
axnios temporais, mas no nasais, da retina
respondem a um gradiente das membranas
tectais posteriores, se afastando ou se retardando. (Segundo Barinaga, 1995.)
330
aqueles da regio nasal) da retina evitaram as regies expressando ELF-1. Assim, ELF1 pode prover sinais negativos para as regies temporais da retina.
O aparecimento de RAGS e ELF-1 regulado pela expresso da protena Engrailed.
A protena Engrailed expressa no dia 2 do desenvolvimento do pinto em uma banda
que inclui a poro caudal (posterior) do futuro tectum ptico (veja Figura 7.18). Se a
protena Engrailed for induzida experimentalmente na poro rostral do tectum, tambm essa adota um fentio caudal. Quando isso ocorre, RAGS e ELF-1 so expressos
atravs de todo o tectum, e os axnios temporais so repelidos das duas metades
(Logan et al., 1996). Assim, a expresso precoce de Engrailed parece induzir a expres-
(A) Cone de crescimento contata miotbulo
(D)
Axnios
Miotbulo
Receptores de ACh
(B)
Agrina neuronial induz agregao

de receptores de ACh
(E)
Miotbulo
(C)
Forma-se a lmina basal sinptica
Matriz extracelular
(F)
Vescula
neurotransmissora
Envolvimento pelas
clulas de Schwann
2
laminina
Figura 8.25
Diferenciao da sinapse do neurnio motor com o msculo. Partes (E) e (G) esto representadas em menor aumento que outras para dar uma viso panormica da regio onde o axnio
encontra o msculo. (A) Um cone de crescimento se aproxima de uma clula muscular em
desenvolvimento. (B) O axnio pra e forma um contato no-especializado na superfcie do
miotbulo. A agrina, liberada pelo tubo neural, causa a agregao de receptores de aceticolina.
(C) Vesculas neurotransmissoras penetram no axnio terminal, e uma matriz extracelular
conecta o axnio terminal com a clula muscular medida que a sinapse se alarga. Essa matriz
contm uma laminina especfica do nervo. (D) Outros axnios convergem para o mesmo local
sinptico. (E) Viso geral da inervao muscular por vrios axnios (vista em mamferos no
nascimento). (F) Todos os axnios menos um so eliminados. O axnio remanescente pode se
ramificar para formar uma juno complexa com o msculo. Cada terminal do axnio est
recoberto por um processo de uma clula de Schwann e dobras se formam na membrana da
clula muscular. (G) Viso panormica da inervao muscular vrias semanas aps o nascimento. (Segundo Hall e Sanes, 1993; Purves, 1994; Hall, 1995.)
(G)
Na maturidade
so de RAGS e ELF-1, e essas duas protenas mediam a excluso dos axnios retinianos
temporais da poro caudal (posterior) do tectum.
Seleo de endereo:
Desenvolvimento dependente de atividade
Quando um axnio contata seu alvo (em geral um msculo ou outro neurnio)
forma uma juno especializada chamada sinapse. Neurotransmissores do terminal
do axnio so liberados nessas sinapses para despolarizar ou hiperpolarizar a membrana da clula do outro lado da fenda sinptica. A construo de uma sinapse
envolve vrios passos (Figura 8.25). Quando neurnios motores na medula espinhal
estendem axnios para os msculos, os cones de crescimento que contatam as
recm-formadas clulas musculares migram sobre suas superfcies. Quando o cone
de crescimento adere primeiro membrana da clula muscular, a especializao no
pode ser vista em membrana alguma. Porm, logo os terminais axnicos comeam a
acumular vesculas sinpticas contendo neurotransmissores, as membranas de ambas
as clulas se engrossam na regio de contato, e a fenda entre as clulas se enche
com matriz extracelular que inclui uma forma especfica de laminina. Essa laminina
derivada do msculo, especificamente liga os cones de crescimento dos neurnios
motores e pode agir como um sinal de parada para o crescimento axnico (Martin
et al., 1995; Noakes et al., 1995). Aps esse primeiro contato, os cones de crescimento de outros axnios convergem para esse local para formar sinapses adicionais.
Durante o desenvolvimento, todos os msculos de mamferos estudados parecem
ser inervados por, ao menos, dois axnios. No entanto, essa inervao polineuronial
transitria. Durante a fase precoce da vida ps-natal, todos esses ramos axnicos,
menos um, so recolhidos. Esse rearranjo est baseado na competio entre os
axnios (Purves e Lichtman, 1980; Thompson, 1983). Quando um dos neurnios
motores est ativo, ele suprime as sinapses dos outros neurnios, possivelmente
atravs de um mecanismo dependente de xido ntrico (Dan e Poo, 1992; Wang et al.,
1995). Finalmente, as sinapses menos ativas so eliminadas. O terminal axnico
remanescente se expande e revestido pela clula de Schwann.
A formao de sinapse dependente de atividade tambm parece estar envolvida
nos estgios finais da projeo da retina para o crebro. Em embries de r, ave e
roedor tratados com tetrodotoxina, os axnios iro crescer normalmente para seus
respectivos territrios e iro estabelecer sinapses com os neurnios tectais. Porm,
o mapa retinotectal grosseiro, carente de resoluo fina. Tal como na especificao
final da sinapse do neurnio motor, a atividade neuronial necessria para a projeo retiniana ponto-por-ponto at os neurnios tectais (Harris, 1984; Fawcett e
OLeary, 1985; Kobayashi et al., 1990). Essa eliminao de contatos retinianos transitrios pelo tectum tambm pode envolver a expresso do xido ntrico pelas clulas tectais alvo (Wu et al., 1994).
Sobrevivncia diferencial aps a inervao:

Fatores neurotrficos
Refletindo sobre sua vida como um embrio, Lewis Thomas (1992) escreve,
At o momento do meu nascimento, mais de mim havia morrido do que sobrevivido. No de se admirar que eu no possa recordar; durante aquele tempo passei
por crebro aps crebro durante nove meses, finalmente conseguindo aquele
modelo que podia ser humano, equipado para a linguagem.
Realmente, um dos fenmenos mais intrigantes no desenvolvimento do sistema
nervoso a morte da clula neuronial. Em muitas partes dos sistemas nervosos
central e perifrico de vertebrados, mais da metade dos neurnios morrem durante
331
332
o progresso normal do desenvolvimento. Alm disso, no parece ter semelhanas

entre as espcies. Por exemplo, na retina do gato, cerca de 80 porcento das clulas
ganglionares retinianas morrem, enquanto na retina do pinto, esse nmero de
somente 40 porcento. Nas retinas de peixes e anfbios no parece haver morte das
clulas ganglionares retinianas (Patterson, 1992).
A extino de um neurnio no causada por qualquer defeito bvio. Na realidade, esses neurnios se diferenciaram e estenderam com sucesso axnios para seus
alvos. Ao contrrio, parece que o tecido alvo regula o nmero de axnios que o
inerva limitando um suprimento de algum fator crtico de sobrevivncia. Parece
haver competio por esse fator limitante. Por exemplo, se mais de um tecido alvo
transplantado no alvo original, mais axnios sobrevivem, e se o tecido alvo for
removido antes dos axnios o alcanarem, quase todos os neurnios morrem. Esses
fatores neurotrficos foram isolados e mostrados regular a sobrevivncia de diferentes subconjuntos de neurnios.
O fator neurotrfico melhor caracterizado o fator de crescimento do nervo
(NGF), uma glicoprotena composta de duas subunidades 13-kDa idnticas. O
NGF necessrio para a sobrevivncia de neurnios simpticos e sensoriais.
Tratar embries de camundongo com anticorpos anti-NGF reduz o nmero de
neurnios ganglionares e da raiz dorsal do trigmeo simptico para 20% do seus
valores controle (Levi-Montalcini e Booker, 1960; Pearson et al., 1983). O NGF
parece funcionar aps ter ocorrido a inervao, j que o NGF no secretado
pelos tecidos alvos at depois da inervao, e axnios em crescimento carecem de
receptores para NGF, ento eles no podem responder antes (Davies et al., 1987).
A remoo desses tecidos alvos causa a morte dos neurnios que os teriam
inervado, e existe uma boa correlao entre a quantidade de NGF secretado e a
sobrevivncia dos neurnios que inervam esses tecidos (Korsching e Thoenen,
1983; Harper e Davies, 1990). [axon1.html]
Outras protenas neurotrficas foram caracterizadas. Duas dessas protenas fator neurotrfico derivado do crebro (BDNF) e neurotrofina 3 (NT-3) repartem a
mesma estrutura bsica que NGF. Porm, elas favorecem a sobrevivncia de grupos de
neurnios um tanto diferentes. Enquanto alguns neurnios respondem a todos os
trs fatores, outros respondem somente a um ou dois (Figura 8.26; Oppenheim et al.,
1992). O NGF suporta o crescimento e a diferenciao de clulas ganglionares do
simptico e de certos neurnios sensoriais, mas no parecem influenciar a sobrevivncia dos neurnios motores. O BNDF, porm, pode salvar neurnios motores fetais
in vivo da morte celular que ocorre normalmente e da morte celular induzida aps
remoo de seus tecidos alvo. Os resultados desses estudos in vitro foram corroborados por experimentos de eliminao de genes, onde a deleo de determinados
fatores neurotrficos causa a perda de somente certos subconjuntos de neurnios
(Crowley et al., 1994; Jones et al., 1994). A NT-3 produzida pelos tecidos alvo podem
sustentar a sobrevivncia de neurnios viscerais que no so responsivos ao NGF
(Hohn et al., 1990; Maisonpierre et al., 1990). BDNF, NT-3 e duas outras molculas
neurotrficas neurotrofina 4/5 (NT-4/5) e fator 5 de crescimento de fibroblastos
(FGF5)- so sintetizadas em clulas musculares dos membros de ratos quando axnios
dos neurnios motores esto crescendo para dentro do msculo e competindo por
tais fatores de sobrevivncia. Alm disso, BNDF, NT-3, NT-4/5 e vrios FGFs previnem
a morte de neurnios motores embrionrios de rato em cultura (Henderson et al, 1993,
Hughes et al., 1993). Outra recm-descoberta neurotrofina, fator neurotrfico derivado da linhagem de clula glial (GDNF), estimula a sobrevivncia de outro grupo de
neurnios: os neurnios dopaminrgicos do mesencfalo cuja destruio caracteriza a
doena de Parkinson (Lin et al., 1993). Esse fator pode evitar a morte desses neurnios
em crebros adultos (veja Lindsay, 1995). Ainda outra neurotrofina, fator neurotrfico
ciliar (CNTF), parece apoiar a sobrevivncia de neurnios motores embrionrios; CNTF
capaz de evitar a degenerao de neurnios motores em um mutante de camundongo
caracterizado pela perda progressiva de neurnios motores (Sendtner et al., 1992).
(A)
Simptico
(B) Raiz dorsal
(C)
333
Figura 8.26
Nodoso
Efeitos do NGF (parte superior) e BDNF (em

baixo) no crescimento de neuritos de (A)
gnglios simpticos, (B) gnglios da raiz dorsal, e (C) gnglios nodosos. Enquanto tanto
NGF como BDNF tinham um leve efeito estimulante do crescimento axnico do gnglio
da raiz dorsal, os gnglios simpticos responderam ao NGF e quase de modo algum ao
BDNF, enquanto o contrrio se demonstrou
para o gnglio nodoso. (de Ibez et al., 1991.)
Sobrevivncia neuronial (%)
A sobrevivncia real de um dado neurnio no embrio pode depender de uma

combinao de genes. Schmidt e Kater (1993) mostraram que fatores neurotrficos,
despolarizao, e interaes com o substrato se combinam sinergicamente para
determinar a sobrevivncia neuronial. Por exemplo, a sobrevivncia de neurnios do
gnglio ciliar do pinto em cultura foi promovida pelo FGF, laminina ou despolarizao.
Porm, o FGF no promoveu sobrevivncia quando a laminina estava ausente, e os
efeitos combinados da laminina, FGF e despolarizao foram maiores do que a soma
dos efeitos de cada um deles (Figura 8.27). Os fatores neurotrficos e os outros
agentes ambientais parecem funcionar pela supresso de um programa suicida
que seria expresso constitutivamente se no fosse reprimido por esses fatores (veja
Captulo 13; Raff et al., 1993). A sobrevivncia das clulas ganglionares retinianas
em cultura est baseada em fatores neurotrficos, mas essas clulas somente podem
responder a esses fatores se tiverem sido despolarizadas (Meyer-Franke et al., 1995).
Alm disso, j que a atividade neuronial estimula a produo de fatores neurotrficos
pelos nervos ativos, provvel que neurnios recebendo um sinal produzam mais
fator neurotrfico (Thoenen, 1995). Esse fator poderia ter um efeito sobre as sinapses
prximas que esto ativas (i.e., capazes de responder a esse fator), com isso estabilizando um conjunto de sinapses ativas com excluso das inativas.
A descoberta e purificao dessas protenas neurotrficas e a anlise de suas
interaes com substratos e condies eltricas pode possibilitar novas terapias para
doenas neurodegenerativas. Numerosas companhias farmacuticas esto iniciando
testes clnicos de fatores neurotrficos para o possvel alvio de leses na medula
espinhal (NGF), doena de Parkinson (GNDF), esclerose lateral amotrfica (BDNF,
CNTF), neuropatias perifricas (NGF, NT-3) e doena de Alzheimer (NGF, GDNF).
Neurnios revestidos com laminina

Neurnios revestidos com colgeno IV
Figura 8.27
Sem
adio de
agentes
FGF2
Despolarizao
FGF2
+
Despolarizao
Interaes entre substrato, despolarizao e fator neurotrfico bsico

FGF (FGF2) na sobrevivncia de neurnios do gnglio ciliar. Neurnios foram revestidos com laminina (um substrato favorecendo
sobrevivncia) ou colgeno IV (que no favorece sobrevivncia
neuronial) e observados aps 24 horas de cultura na presena ou
ausncia de despolarizao ou FGF2. Quando as clulas foram
despolarizadas e se desenvolveram na presena de FGF2, no importou em qual substrato elas cresceram. Todavia, quando o FGF2
estava presente sem despolarizao, o substrato causou uma grande
diferena. (de Schmidt e Kater, 1993.)
334
&
Especulaes
Neurnios Fetais em Hospedeiros Adultos
m 1976, Lund e Hauschka implantaram tecido cerebral fetal de rato

no crebro de um rato recm-nascido. Os neurnios fetais fizeram as conexes apropriadas com o crebro do hospedeiro. Esse estudo ofereceu a possibilidade de que transplantes de neurnios fetais
possam ser capazes de reparar regies
danificadas no crebro humano. H muitas doenas degenerativas neuroniais, e a
doena de Parkinson uma das mais freqentes, afetando cerca de um milho de
pessoas na Amrica. Nessa doena, neurnios produtores de dopamina da substncia nigra (um conjunto de clulas no
pednculo cerebral) so destrudos, e seus
terminais axnicos no ncleo caudado e
putmen (dois ncleos cerebrais) degeneram. Isso leva a tremores musculares, dificuldade para iniciar movimentos voluntrios e problemas de cognio. A injeo de
L-dopa (que o organismo metaboliza em
dopamina) alivia temporariamente esses
sintomas, mas a L-dopa perde seu efeito
com o uso prolongado e algumas vezes
tem efeitos adversos.
Em 1990, Lindvall e colegas implantaram clulas neuroniais humanos da substncia nigra de fetos de 8 a 9 semanas, em
um paciente com mal de Parkinson. Doa-
dor e recipiente no precisavam ser parentes, j que o crebro separado do sistema

imune pela barreira hematoenceflica, que
protege transplantes de tecidos no crebro da rejeio pelo sistema imune. Dentro
de 5 meses, o transplante tinha restaurado
muito da dopamina normalmente produzida pela substncia nigra, assim como a
capacidade para movimentos voluntrios
do paciente. Dois outros laboratrios relataram restauraes semelhantes de funo
aps transplantes de neurnios fetais em
pacientes (Freed et al., 1992; Spencer et al.,
1992). Segundo Bjrkland (1987), o tecido
doador timo aquele contendo presumidos neurnios secretores de dopamina, que
tinham passado pela sua ltima diviso
celular mas ainda no haviam formado extensas conexes sinpticas. Em 1992,
Widner e colegas mostraram que enxertos
de mesencfalos fetais foram capazes de
restaurar funes motoras em dois pacientes que haviam destrudo suas substncias nigras injetando-os com uma de herona sinttica contaminada com o biproduto
MPTP. Esse composto havia criado uma
condio que parecia com a severa doena de Parkinson.
Dois estudos recentes mostraram que
transplantes de clulas humanas fetais
no so a nica maneira de se restaurar a

anatomia funcional da substncia nigra
em pacientes com Parkinson. Em primeiro
lugar, os estudos de Isacson e colegas
(1995) sugerem que as clulas embrionrias do doador no necessitam ser de humanos. Clulas do mesencfalo do embrio de porco reconstruram as conexes
neuroniais normais quando injetadas no
estriado de ratos adultos com uma doena semelhante doena de Parkinson. Em
segundo lugar, quando Gash e colegas
(1996) injetaram fator de crescimento derivado da glia nos crebros de macacos
que haviam sido induzido para ter sndromes semelhantes ao Parkinson pela injeo de MPTP, os macacos injetados mostraram recuperao funcional de seus sintomas. Ainda mais, eles tinham substancialmente mais dopamina e neurnios produtores de dopamina. Como a doena de
Parkinson progressiva, no sabido se
os neurnios enxertados ou recm-divididos sero acometidos pelo mesmo processo que havia destrudo os neurnios
endgenos. Porm, parece provvel que
enxertos fetais e neurnios novos so capazes de reestabelecer conexes sinpticas que os neurnios destrudos haviam
estabelecido.
O desenvolvimento de comportamentos:
Constncia e plasticidade
Um dos aspectos mais fascinantes da neurobiologia do desenvolvimento a correlao de certas conexes neuroniais com certos comportamentos. Existem dois aspectos notveis desse fenmeno. Primeiro h aqueles casos nos quais os padres complexos do comportamento esto inerentemente presentes no circuito do crebro no
nascimento. O ritmo cardaco de um embrio de pinto de 19 dias se acelera quando ele
escuta o chamado de aflio, e nenhum outro chamado provocar essa resposta
(Gottlieb, 1965). Alm disso, um pinto recm-eclodido imediatamente ir buscar abrigo
se apresentado sombra de um gavio. O gavio verdadeiro no necessrio a
sombra pela sua silhueta em papel ser suficiente, mas sombra de nenhuma outra ave
causar essa resposta (Tinbergen, 1951). Parece, portanto, que so certas conexes
neuroniais que levam a comportamentos inerentes em vertebrados.
So igualmente notveis os exemplos em que o sistema nervoso to plstico que
novas experincias podem modificar o conjunto original de conexes neuroniais,
335
causando a criao de novos neurnios ou a formao de novas sinapses entre neurnios existentes. Iremos discutir a plasticidade neuronial em maior detalhe no Captulo
21, mas suficiente dizer neste ponto que o crebro no cessa de se desenvolver com
o nascimento. O trabalho ganhador do prmio Nobel de Hubel e Wiesel (1962, 1963)
demonstrou que havia competio entre neurnios retinianos de cada olho por alvos
no crtex, e que suas conexes tinham que ser fortalecidas pela experincia. Em pssaros canoros, alm disso, novos neurnios so criados e novas sinapses formadas
quando os pssaros aprendem seu canto (Alvarez-Buylla et al., 1990), e quando ratos
adultos aprendem novas atitudes, seus neurnios corticais desenvolvem novas
sinapses (Black et al., 1990). Assim, o sistema nervoso continua a se desenvolver na
vida adulta, e o padro de conexes neuroniais um produto de padronizao herdada
e padronizao produzida pela experincia. [axon6.html]
Como um investigador (Purves, 1994) recentemente concluiu em sua anlise do
desenvolvimento cerebral:
Embora a grande maioria dessa construo deve se originar de programas
desenvolvimentais configurados durante a evoluo de cada espcie, a atividade neuronial pode modular e instruir esse processo, armazenando assim a
imensido de informao idiossincrtica que cada um de ns adquire pela experincia individual e prtica.
LITERATURA CITADA
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CAPTULO 9 Mesoderma e Endoderma

Mesoderma e endoderma
Da fisiologia de alto a baixo, eu canto,

Nem fisionomia somente nem crebro somente so dignos da Musa,
Eu digo a forma completa de longe mais
valorosa,
A Fmea igualmente com o Macho eu canto.
WALT WHITMAN (1867)
Teorias vm e teorias vo. A r permanece.
341
OS CAPTULOS 7 e 8 acompanhamos os vrios tecidos formados pelo ecto-
derma em desenvolvimento. Neste captulo acompanharemos o desenvolvimento precoce das camadas germinativas mesodrmica e endodrmica. Veremos que o endoderma forma o revestimento dos tubos digestivo e respiratrio, com
seus rgos associados; o mesoderma ser observado gerando todos os rgos entre
a parede ectodrmica e os tecidos endodrmicos.
QMESODERMA
JEAN ROSTAND (1960)
O mesoderma de um embrio em estgio de nurula pode ser dividido em cinco regies

(Figura 9.1). A primeira regio o cordomesoderma. Esse tecido forma a notocorda, um
rgo transitrio cuja principal funo inclui a induo da formao do tubo neural e
estabelece o eixo corporal ntero-posterior. Como observamos no Captulo 6, o
cordomesoderma se forma no centro do embrio no futuro lado dorsal. A segunda
regio o mesoderma dorsal somtico. O termo dorsal se refere observao de que
os tecidos em desenvolvimento originrios dessa regio estaro na parte de trs do
embrio, ao longo da espinha. As clulas nessa regio formam somitos, blocos de
clulas mesodrmicas em ambos os lados do tubo neural que iro produzir muitos dos
tecidos conjuntivos das costas (osso, msculo, cartilagem e derme). O mesoderma
intermedirio forma o sistema urinrio e os dutos genitais; discutiremos essa regio
em detalhe em captulos posteriores. Mais distante da notocorda, o mesoderma da
placa lateral d origem ao corao, vasos sangneos e clulas sangneas do sistema circulatrio, como tambm ao revestimento da cavidade do corpo e de todos os
componentes mesodrmicos dos membros exceto os msculos. Ele tambm ir formar
uma srie de membranas extra-embrionrias que so importantes para o transporte de
nutrientes para o embrio. Por ltimo, o mesnquima da cabea ir contribuir para os
tecidos conjuntivos e a musculatura da face.
Mesoderma dorsal: A notocorda e a diferenciao dos somitos

Mesoderma Paraxial
Uma das principais tarefas da gastrulao criar uma camada mesodrmica entre o
endoderma e o ectoderma. Como mostra a Figura 9.2, a formao de rgos mesodrmicos
341
342
Zigoto
Clulas
germinativas
primordiais
Gametas
Clivagem
Bexiga urinria
Ectoderma embr. ext.

do mnio e crio
Glndulas
sudorparas*
Gastrulao
Unhas
Glndulas mamrias*
ENDODERMA
Alantide*
Fgado
Traquia*
brnquios*
Pulmes
Pncreas*
Tubo digestivo*
Tireide
Cabelo
INTESTINO
PRIMITIVO
NOTOCORDA
(CORDOMESODERMA)
Glndulas
sebceas*
Cristalino do olho
Vescula
auditiva*
MESODERMA
FARINGE
EPITLIO EXTERNO
DO CORPO
ECTODERMA
Epitlio
estomodeal
Bolsas farngeas*
MESODERMA
PARAXIAL
DORSAL
Recessos
tonsilares*
Ouvido mdio*
tubo de eustquio
Timo primitivo*,
paratireides*
Mecanismo do
ouvido interno
Epitlio
proctodeal
Esclertomos
Brotos dos
apndices
Esqueleto
apendicular
Mitomos
TUBO NEURAL
Dutos mulerianos
Vagina* Ovidutos* tero*

Mes. embr. ext. do
mnio e crio
Crebro
Nervos motores cranianos
Nervos e gnglios
cranianos sensoriais
Razes dos nervos

sensoriais espinhais
Medula da
supra-renal
Gnglios da raiz
dorsal espinhal
Dentina
dentria
MESODERMA
LATERAL
Crnio e
cartilagens
branquiais
MESNQUIMA
DA CABEA
Tecido conectivo
Ms.emb. ext.
ceflico
do saco vitelnico
Gnglios
simpticos
Camadas externas
da cabea
e alantide
Mesoderma
esplncnico
Pleura,
pericrdio,
peritnio
Vesculas pticas
CRISTA NEURAL
Pronefro
Mesoderma somtico
Estroma
das gnadas
Retina* e
nervo ptico
MESODERMA
INTERMEDIRIO
Metanefro,
tbulos renais*
Pars neuralis
Razes dos nervos
da hipfise
motores espinhais
Medula espinhal
Canal
anal*
Msculos
Msculos dos
esquelticos do tronco
apndices
Camadas de tecido
Dermtomos
conjuntivo da pele
Epiddimo
vasos deferentes
Divertculo metanfrico,
ureteres pelve renal,
Dutos mesonfricos
tbulos coletores
Mesonefro, dutos
eferentes
Esmalte dentrio
Lbulo anterior da hipfise
Paratireides*
Corpos
ps-branquiais*
Esqueleto
axial
Epitlio oral
Epitlio nasal e olfativo

e nervo olfativo
Crtex da
supra-renal
Msculos
Mesentrios
Peritnio visceral
Mesnquima
Pleura visceral
Epimiocrdio
epicrdio
miocrdio
Tecido hemangioblstico
* O esquema indica somente a origem
da parte epitelial do rgo. Todos esses
rgos tm investimentos de sustentao secundria de origem mesodrmica.
Tecido conjuntivo e
msculo liso das vsceras e
vasos sangneos
Corpsculos
sangneos
Endotlio dos
vasos sangneos
Endocrdio
Corao
343
Figura 9.1
O esquema ilustra a linhagem das partes especializadas do corpo, derivadas das trs camadas
germinativas embrionrias. As clulas germinativas esto representadas como uma linhagem
de clulas separada das trs camadas germinativas somticas pois, apesar dos precursores das
clulas germinativas se localizarem no endoderma ou mesoderrma presuntivos, elas so provavelmente um nico tipo celular. (Segundo Carlson, 1981.)
e ectodrmicos no subseqente formao do tubo neural, mas ocorre sincronicamente. A formao da notocorda foi discutida no Captulo 6. Essa haste epitelial se
estende desde a base da cabea at a cauda. Em cada lado da notocorda existem faixas
grossas de clulas mesodrmicas. Essas faixas de mesoderma paraxial so referidas
como as placas segmentares (nas aves) e mesoderma no segmentado (nos mamferos). Com a regresso dos sulcos primitivos, as dobras neurais comeam a se aglomerar no centro do embrio, o mesoderma paraxial se separa em blocos de clulas chamadas somitos. Embora os somitos sejam estruturas transitrias, elas so muito importantes na organizao do padro segmentar de embries de vertebrados. Como vimos
no captulo anterior, os somitos determinam os caminhos da migrao das clulas da
crista neural e axnios do nervo espinhal. Os somitos geram clulas que formam (1) as
vrtebras e costelas, (2) a derme e a pele dorsal, (3) os msculos esquelticos das
costas e (4) os msculos esquelticos da parede do corpo e membros.
Somitmeros e a Iniciao da Formao do Somito
Os primeiros somitos aparecem na parte anterior do embrio, e os novos somitos
brotam da extremidade rostral do mesoderma paraxial em intervalos regulares (Figuras 9.2C,D e 9.3). Devido aos embries poderem se desenvolver em taxas um pouco
diferentes (da mesma maneira que acontece com embries de galinha quando so
incubados em temperaturas um pouco diferentes), o nmero de somitos presentes
Sulco primitivo
(A)
Endoderma
Clulas mesodrmicas migratrias
Epiderme
(B) Endoderma
Placa neural
Mesoderma paraxial
Epiderme
Epiblasto
Notocorda
Tubo neural
(C) Mesoderma intermedirio
Mesoderma lateral
Mesoderma somtico
Somito
Mesoderma
Esplncnico
Celoma
Esclertomo do somito
Dermtomo do somito
Notocorda
Celoma intra-embrionrio
Mitomo
do somito
Celoma
extra-embrionrio
(D)
Aortas dorsais
Figura 9.2
O desenvolvimento progressivo do embrio

do pinto, enfocando o componente mesodrmico. (A) Regio do sulco primitivo mostrando precursores migratrios mesodrmicos e
endodrmicos. (B) Formao da notocorda e
do mesoderma paraxial. (C,D) Diferenciao
dos somitos, celoma e das duas aortas (as quais
finalmente iro se fundir). A-C, embrio de
24 horas; D, embrio de 48 horas.
344
Figura 9.3
Tubo neural e somitos. Micrografia ao microscpio eletrnico de varredura, mostrando

somitos bem-formados e mesoderma paraxial
(embaixo direita) que ainda no se separou
em somitos distintos. Um arredondamento do
mesoderma paraxial em um somitmero pode
ser visto na parte inferior esquerda, e as clulas
da crista neural podem ser vistas em migrao
ventral, a partir do teto do tubo neural. (Cortesia de K. W. Tosney.)
geralmente o melhor indicador para definir o progresso do desenvolvimento. A

quantidade final de somitos formados uma caracterstica de cada espcie.
O mecanismo para a formao do somito no foi ainda bem estabelecido, mas
diversos estudos em pintos mostraram que as clulas da placa segmentar esto organizadas em espirais de clulas chamadas somitmeros (Meier, 1979; Packard e Meier,
1983). A converso de somitmero para somito observada quando as clulas mais
anteriores do somitmero se tornam compactas. Essa transio de um somitmero
frouxamente compactado para um somito epitelial est correlacionada com a sntese
de duas protenas da matriz extracelular, fibronectina e N-caderina (Figura 9.4A;
Ostrosky et al., 1984; Lash e Yamada, 1986; Hatta et al., 1987). Essas protenas, por sua
vez, podem ser reguladas pela expresso de Notch1 e Paraxis. O gene Notch1 codifica o fator transcrio que est ativo na regio mais anterior do mesoderma dorsal no
segmentado, e camundongos com falta desse fator desenvolvem somitos desalinhados de vrios tamanhos (Figura 9.4B,C; Conlon et al., 1995). Paraxis, um gene codificando um outro fator de transcrio, expressado na extremidade rostral (anterior) do
mesoderma no segmentado de embries de camundongos e pintos. A injeo de
oligonucleotdeos antisenso complementares ao Paraxis produz defeitos de
segmentao somtica (Burgess et al., 1995; Barnes et al., 1997). Clulas de somitos
normais recm-formados so organizadas aleatoriamente, mas logo se tornam organizadas em uma bola de clulas epiteliais colunares que circundam uma pequena cavidade repleta de clulas frouxamente conectadas. As clulas epiteliais se fixam umas s
outras atravs de junes apertadas. A Paraxis uma parte essencial dessa converso
de mesnquima em epitlio (Burgess et al.,1996).
Gerao de Tipos de Clulas Somticas
Quando o somito primeiro formado, qualquer uma de suas clulas pode se tornar
qualquer das estruturas derivadas de somitos. No entanto, com a maturao do
somito, as vrias regies do somito se tornam comprometidas em formar somente
certos tipos de clulas. A clulas mediano-ventrais do somito (aquelas clulas localizadas o mais distante das costas, mas prximas ao tubo neural) sofrem mitose,
perdem sua caracterstica epitelial redonda, se tornando clulas mesenquimatosas
(A)
(B) Notch1
presente
Mesoderma
paraxial (pr-somtico)
Somitos
Figura 9.4
Transio de um somitmero para um somito. (A) A expresso da N-caderina se correlaciona com a converso de clulas
mesenquimatosas soltas em um somito epitelial. (B) Nos embries de tipo selvagem, expresso de Notch1 vista na regio mais anterior do mesoderma paraxial no segmentado
(i.e., a poro que est sendo organizada em um somito). (C)
Em embries deficientes em Notch1, a organizao dos
somitos perturbada. (A de Hatta et al., 1987; cortesia de M.
Takeichi; B e C segundo Conlon et al., 1995.)
Concentrao de
protena Notch
( C ) Notch1
ausente
Somitos
Anterior
Transio
Mesoderma paraxial
Posterior
Clulas do
esclertomo
em migrao
(A)
Condensao
de condrcitos
das clulas do
esclertomo
Dermtomo
Figura 9.5
(B)
Mitomo
Aorta dorsal
Nefrtomo do rim
em desenvolvimento
Camada
mesodrmica
somtica
Camada
mesodrmica
esplncnica
(C)
Celoma
intra-embrionrio
Intestino
Camada
mesodrmica
somtica
(D)
Tubo neural
345
Diagrama de uma seo transversal atravs

do tronco de (A) um embrio humano precoce de 4 semanas e (B) um embrio tardio de 4
semanas, mostrando a formao das estruturas do somito. (A) As clulas do esclertomo
comeam a migrar afastando-se do dermtomo e mitomo. (B) Ao fim da quarta semana,
as clulas do esclertomo esto se condensando para formar vrtebras cartilaginosas, o
dermtomo comea a formar a derme, e as
clulas do mitomo estendem-se ventralmente ao longo das paredes do embrio. (C-E) A
estrutura do somito do pinto em mudana
enquanto ocorrema migraes celulares. (A e
B segundo Langman, 1981; C-E segundo
Ordahl, 1993).
(E)
Dermamitomo
Dermtomo
Clulas migratrias
(Musculatura dos membros
e ventrolateral)
Medial Lateral
Esclertomo
Notocorda
novamente. A poro do somito que d origem a essas clulas chamada de esclertomo, e essas clulas mesenquimatosas no final se tornam condrcitos vertebrais
(Figuras 9.2 e 9.5). Os condrcitos so responsveis pela secreo de um tipo especial
de colgeno e GAGs (tais como o sulfato de condroitina) caractersticos da cartilagem.
Esses condrcitos em particular sero responsveis pela construo do esqueleto
axial (vrtebras, costelas, cartilagem e ligamentos). As clulas da poro lateral do
somito (a regio mais distante do tubo neural) tambm se dispersam. Essas clulas
formam os precursores dos msculos, dos membros e da parede do corpo. Ordahl e Le
Douarin (1992) seguiram essas clulas transplantando pores de somitos de codorna
em somitos de embries de galinha. As clulas dos pintos e das codornas podem ser
distinguidas pela sua morfologia nucleolar. Os pesquisadores notaram que aquelas
clulas que estavam mais distantes do tubo neural migram para formar a parede do
corpo e a musculatura dos membros, mesmo se essas clulas doadoras forem originalmente da poro medial do somito.
Uma vez que o esclertomo e os precursores das clulas musculares dos membros e da parede do corpo migraram para longe dos somitos, as clulas somticas
prximas ao tubo neural migram ventralmente em direo poro epitelial remanescente do somito para formar uma slida camada epitelial dupla chamada
dermamitomo (veja Figuras 9.2 e 9.5 ). A camada dorsal dessa estrutura chamada
de dermtomo, sendo a responsvel pela gerao do tecido conectivo
mesenquimatoso da pele dorsal: a derme. (A derme de outras reas do corpo se forma
de outras clulas mesenquimatosas e no de somitos.) A camada interna de clulas
chamada de mitomo, e essas clulas do origem aos msculos vertebrais que
Mitomo
Esclertomo
346
(A)
Ectoderma dorsal
Musculatura apaxial
Ectoderma dorsal
Medial
Derme
Msculos da
parede corporal
NT-3
Dermamitomo
Derme
Wnt
?Wnt
Tubo
neural
Tubo
neural
Clulas
musculares apaxiais
Lateral
Myf5
BMP4
?FGF5
Msculos
dos
membros
Shh
Aorta dorsal
Notocorda
Esclertomo
Mesoderma lateral
Notocorda
Myf5
c-met, MyoD
Pax3
Pax1
Mesoderma lateral
Figura 9.6
Modelo das principais interaes postuladas

para a modelagem do somito. (A) Sonic hedgehog da notocorda e placa do assoalho induz
formao do esclertomo; Wnt do tubo neural
induz a regio do mitomo que forma musculatura apaxial, e a combinao da protena Wnt
da epiderme e BMP4 (e talvez FGF5) do mesoderma da placa lateral induz a poro do
mitomo que d origem aos msculos da parede corporal. Neurotrofina 3 do tubo neural pode
causar a diferenciao das clulas do dermamitomo. (B) diferentes fatores de transcrio
nas diferentes regies do somito anunciam o
destino celular. As clulas do esclertomo expressam Pax1, enquanto as clulas medianas
do dermamitomo expressam a protena
miognica Myf5. As clulas laterais do dermamitomo expressam o fator de transcrio
miognico o MyoD assim como o receptor cmet para o fator de espalhamento. A poro
central do dermamitomo torna-se a derme e
expressa Pax3. (Segundo Cossu et al., 1996b.)
circundam as vrtebras permitindo que as costas se curvem (Chevallier et al., 1977;

Christ et al., 1977). Dessa maneira, os somitos so essenciais para a formao das
costas de nosso corpo: as vrtebras que circundam a espinha dorsal, os msculos e
o tecido conectivo que seguram as junes vertebrais, a subcamada drmica da pele
das costas, e a musculatura das costas. E o que acontece com a notocorda, aquela
estrutura mesodrmica central? Aps ter fornecido a integridade axial do embrio
precoce, e induzido a formao do tubo neural dorsal, a maior parte degenera. Em
qualquer lugar onde as clulas do esclertomo formaram o corpo vertebral, as clulas da notocorda morrem. No entanto, entre as vrtebras, as clulas da notocorda
formam o tecido dos discos intervertebrais, chamados ncleos pulposos. Esses so
os discos que se deslocam em certos tipos de leses nas costas.
A especificao do somito completada pela interao de diversos tecidos que
formam o seu ambiente. A poro mediana-ventral do somito induzida a se tornar
esclertomo por fatores, especialmente pela protena Sonic hedgehog, secretada
pela notocorda e pela placa do assoalho do tubo neural (Fan e Tessier-Lavigne,
1994; Johnson et al., 1994). Se pores da notocorda (ou outra fonte de Sonic
hedgehog) forem transplantadas prximas a outras regies do somito, essas regies, tambm, se tornaro clulas do esclertomo. Essas clulas expressam um novo
fator de transcrio, Pax1, que ativa genes especficos da cartilagem e cuja presena
necessria para a formao das vrtebras (Figura 9.6; Smith e Tuan, 1996). Elas
tambm expressam I-mf, um inibidor da famlia de fatores de transcrio MyoD que
d incio formao muscular (Chen et al., 1996). Por caminhos similares, o mitomo
induzido por dois sinais distintos. As clulas musculares epaxiais (que circundam
o eixo do corpo) vm da poro medial do somito e so induzidas por fatores do tubo
neural dorsal, provavelmente membros da famlia Wnt (Mnsterberg et al., 1995;
Stern et al., 1995). Os msculos hipaxiais (que so formados pela poro medial do
somito e formam a musculatura dos membros e parede do corpo) so provavelmente
induzidos atravs da combinao de protenas Wnt procedentes da epiderme e da
protena-4 morfogentica do osso, (BMP4) da placa lateral do mesoderma (Cossu et
al., 1996a; Pourqui et al., 1996). Esses fatores levam as clulas do mitomo a expressarem fatores de transcrio particulares (MyoD e Myf5) que ativam os genes especficos do msculo. O dermtomo se diferencia em resposta a outro fator secretado
pelo tubo neural, neurotrofina 3 (NT-3). Anticorpos que bloqueiam as atividades da
NT-3 previnem a converso do dermtomo epitelial em mesnquima drmico solto

que migra por baixo da epiderme (Brill et al., 1995). Alm desses sinais positivos,
existem pelo menos dois outros conjuntos de protenas necessrias para a padronizao do somito em suas regies particulares. Um desses fatores previne a ativao
de um grupo de clulas pelas protenas inapropriadas. Por exemplo, o sinal BMP4 do
mesoderma da placa lateral neutralizado por um fator do tubo neural que previne
nveis reduzidos de BMP4 de agir em mais clulas mediais. O outro conjunto de
protenas necessrio para a manuteno do padro da expresso do gene iniciada
pelo sinal original (Pownall et al., 1996). [mesend1.html]
Miognese: Diferenciao do Msculo Esqueltico
A clula do msculo esqueltico extremamente grande, clula alongada que contm muitos ncleos. Em meados da dcada de 1960, biologistas do desenvolvimento
debateram se cada um dessas clulas (freqentemente chamadas de miotubos) era
derivada de uma fuso de diversas clulas precursoras musculares mononucleadas
(mioblastos) ou de um nico mioblasto que sofre diviso nuclear sem citocinese.
Evidncia da fuso de mioblastos esquelticos para a formao de miotubos
multinucleados vem de duas fontes independentes. A evidncia crucial para a fuso
do mioblasto esqueltico veio de camundongos quimricos. Esses camundongos
podem ser formados pela fuso de dois embries precoces, que se ajustam para
produzir um nico camundongo contendo duas populaes de clulas distintas
(veja Figura 5.28). Mintz e Baker (1967) fundiram embries de camundongos que
produziam diferentes tipos da enzima isocitrato desidrogenase. Essa enzima, encontrada em todas as clulas, composta de duas subunidades idnticas. Dessa maneira, se miotubos so formados de uma clula cujo ncleo se divide sem citocinese,
esperava-se encontrar duas formas distintas de enzimas, isto , as duas formas
parentais no camundongo alofnico (Figura 9.7). Mas se os miotubos so formados
pela fuso entre as clulas, a expectativa seria de se encontrar clulas musculares
expressando no somente os dois tipos parentais de enzimas (AA e BB), mas tambm uma terceira classe composta de uma subunidade procedente de cada tipo
parental (AB). As formas diferentes de isocitrato desidrogenase podem ser separadas e identificadas pela sua mobilidade eletrofortica. Os resultados demonstraram
claramente que apesar dos dois tipos parentais estarem presentes em todos os
outros tecidos do camundongo alofnico, a enzima hbrida (AB) estava presente em
extratos de tecido muscular esqueltico. Dessa maneira, os miotubos devem ter se
formado pela fuso de inmeros mioblastos.
Essa evidncia foi importante para mostrar que a fuso do mioblasto realmente
ocorreu dentro do embrio. A anlise de como essa fuso acontece foi baseada em
eventos de fuso ocorridos em cultura. Konigsberg (1963) descobriu que mioblastos
isolados de embries de pinto proliferariam em placas de Petri revestidas com colgeno. Aps aproximadamente dois dias, no entanto, esses mioblastos pararam de se
dividir e comearam a se fundir com seus vizinhos para produzir extensos miotubos
sintetizantes de protenas especficas do msculo. A sntese de DNA e a diviso
nuclear no foram encontradas em miotubos multinucleados. Esse processo de fuso uma complexa orquestrao de eventos bioqumicos na superfcie da clula
mioblasto. A primeira etapa parece ser a retirada das clulas do ciclo da primeira
diviso. Enquanto existir fatores de crescimento no meio (particularmente fatores de
crescimento do fibroblasto), o mioblasto vai proliferar sem se diferenciar. Quando
esses fatores so exauridos, o mioblasto cessa de se dividir, secreta fibronectina
para sua matriz extracelular, fixando-se a essa atravs da sua integrina 51 , o
principal receptor de fibronectina (Menko e Boettiger, 1987; Boettiger et al., 1995).
Se essa adeso bloqueada, no resulta desenvolvimento muscular adicional algum, e parece que o sinal da ligao integrina-fibronectina decisivo para iniciar a
diferenciao do mioblasto em clula muscular (Figura 9.8). A segunda etapa o
347
348
(A) Modelo de diviso
(B) Modelo de fuso
Mioblastos
Msculo
Homogenize e coloque
na origem de uma
placa de eletroforese
Msculo
Miotubos
Enzimas de isocitrato
desidrogenase vistas
por eletroforese
Origem
Origem
AA
AA
AB
BB
BB
Gentipo AA
Gentipo BB
Enzima hbrida
formada
Polipeptdeo A
Polipeptdeo B
Enzima AA
Enzima BB
Enzima AB
Figura 9.7
Os dois mecanismos possveis da formao do msculo esqueltico, e como distingu-los. Camundongos quimricos so produzidos da fuso de embries de duas raas diferentes de camundongos, cada uma produzindo uma forma diferente da enzima isocitrato desidrogenase. Essa
enzima composta de duas subunidades; uma raa produz isocitrato desidrogenase AA (indicada
em negro) e a outra produz BB (colorida). (A) Se as enzimas forem produzidas em uma nica
clula ou em clulas multinucleadas surgindo de divises nucleares dentro de uma nica clula, a
enzima ser puramente AA ou BB. (B) Se houver dois diferentes ncleos em uma mesma clula,
porm, um poder codificar para subunidades B enquanto o outro poder codificar para A, com
o resultado de que algumas molculas da enzima sero hbridas (AB). Por eletroforese pode-se
separar esses trs tipos de molculas. A presena de molculas AB no msculo esqueltico (mas
no em outro tipos de clulas) confirma o modelo de fuso. (Segundo Mintz e Bakerr, 1967.)
Figura 9.8
Auto-radiografia mostrando sntese de DNA

em mioblastos e sada de clulas em fuso do
ciclo celular. Fosfolipase C pode congelar
os mioblastos aps eles terem se alinhado com
outros mioblastos, mas antes da fuso das
membranas. Esses mioblastos cultivados foram tratados com fosfolipase C e expostos
timidina radioativa. Mioblastos no fixados
ainda se dividem e incorporam a timidina radioativa em seu DNA. Clulas alinhadas (mas
ainda no fundidas) (setas) no incorporam o
marcador. (de Nameroff e Munar, 1976, cortesia de M. Nameroff.)
alinhamento dos mioblastos em cadeias. Essa etapa mediada por glicoprotenas

das membranas celulares, incluindo diversas caderinas e CAMs (Knudsen,1985:
Knudsen et al., 1990). O reconhecimento e alinhamento entre clulas acontece
somente se as duas clulas forem mioblastos. A fuso pode acontecer mesmo
entre os mioblastos de rato e galinha (Yaffe e Feldman,1965); as identidades das
espcies no so cruciais em cultura.
A terceira etapa consiste no prprio evento da fuso celular. Como na maioria
das fuses de membranas, ons de clcio so cruciais, e a fuso pode ser ativada
pelos ionforos de clcio tais como A23187, que transporta ons de clcio atravs
das membranas celulares (Shainberg et al., 1969; David et al., 1981). A fuso parece
ser mediada por um conjunto de metaloproteinases chamadas meltrinas. Essas protenas foram descobertas durante uma pesquisa para se encontrar protenas de
mioblastos que poderiam ser homlogas fertilina, uma protena envolvida na fuso
vulo-espermatozide. Yagami-Hiromasa e colegas (1995) descobriram que uma dessas meltrinas (meltrina-) expressa em mioblastos aproximadamente ao mesmo
tempo em que comea a fuso, e que o RNA antisenso para a mensagem meltrina-
inibiu a fuso quando adicionado aos mioblastos.
&
349
Especulaes
Construo Muscular e a Famlia MyoD

de Reguladores Transcricionais
omo uma clula mesenquimatosa

embrionria instruda a formar
uma clula muscular em lugar de
uma clula da cartilagem, um fibroblasto
ou uma clula adiposa? Quais molculas
comprometem seu destino para uma linhagem e no para outra? Em 1986, Lassar e
colaboradores tomaram DNA de clulas
mioblastos e o transfectaram em um certo
tipo de clula embrionria de camundon1
go, a clula C3H10T 2 . Essa clula tem um
aspecto semelhante ao do fibroblasto, mas
parece mesnquima primitivo, pois pode
se tornar clula adiposa, uma clula muscular ou cartilagem. Quando DNA do msculo foi adicionado a essas clulas, as clu1
las C3H10T 2 foram transformadas em clulas musculares. DNA isolado de fibroblastos ou de outros tipos celulares no
pode efetuar essa converso. Atravs de
clonagem de subtrao (veja Captulo 2),
foi encontrado um mRNA especfico do
mioblasto que tambm podia efetuar essa
mudana em um fentipo diferenciado. O
mRNA mioblasto codificava uma protena
chamada protena 1 de determinao do
mioblasto ou, mais comumente, MyoD
(Davis et al., 1987). O gene MyoD somente
expresso em clulas das linhagens musculares. Parece ser um gene comutador-mor
pois pode converter outros tipos celulares
em msculo se esse gene nelas for ativo.
Essa hiptese foi testada clonando o gene
MyoD em um vetor viral de modo a mantlo sob o controle de um promotor viral
constitutivamente ativo (estava sempre ligado). Quando esse gene de fuso MyoD
foi transfectado em vrias clulas, clulas
pigmentadas, clulas nervosas, clulas
adiposas, fibroblastos e clulas do fgado,
foram convertidas em clulas semelhantes
s musculares (Figura 9.9; Weintraub et al.,
1989). Assim, MyoD parece ser suficiente
para ativar os genes especficos do msculo que compem o fentipo muscular.
MyoD codifica uma protena nuclear
ligante de DNA que pode se ligar a regies do DNA adjacentes aos genes especficos do msculo, e ativ-los. Por exemplo,
Protenas especficas do msculo

(desmina, cadeias pesadas de miosina)
Gene MyoD
Neuroblastos,
clulas
gordurosas,
fibroblastos
Promotor viral ativo
Ncleo
Figura 9.9
Receptores especficos do msculo

e molculas de membrana
Miotubo
Sumrio de vrios experimentos em que o gene MyoD foi ativado por um promotor viral e
transfectado para clulas no musculares. A protena MyoD parece no levar em conta os
reguladores originais do fentipo celular, convertendo as clulas em msculos.
a protena MyoD parece ativar diretamente

o gene da fosfoquinase da creatina especfica do msculo, ligando-se ao DNA
imediatamente superior aquele (Lassar et
al., 1989). De maneira semelhante, h dois
stios ligantes de MyoD no DNA adjacente uma subunidade do gene do receptor da acetilcolina do msculo da galinha (Piette et al., 1990). Ele tambm ativa a
si prprio diretamente. Uma vez que o gene
MyoD est ligado, seu produto protico
liga-se ao DNA imediatamente a montante do gene MyoD e o impede de ser desligado (Thayer et al., 1989). Em outros casos, os efeitos de MyoD podem ser indiretos. Nem todos os genes envolvidos na
produo do fentipo muscular podem ser
ativados diretamente pela protena MyoD.
MyoD provavelmente atua indiretamente
ativando outros genes reguladores, que
em seguida ativam os genes estruturais
especficos do msculo.
MyoD no o nico gene comutador
de msculo. H uma famlia de protenas
semelhantes MyoD que tem estruturas
muito semelhantes e parecem ser capazes
de substituir extensamente uma a outra. Essa
famlia (algumas vezes chamada a famlia
MyoD ou protenas miognicas bHLH)
inclui miogenina, Myf5 e MRF4; essas protenas parecem ligar-se a stios semelhantes no DNA (a ser discutido no Captulo
10). A transfeco de qualquer desses genes miognicos para um extenso espectro

de clulas em cultura tambm as converte
em msculo. A expresso de MyoD leva
expresso da miogenina, e a transfeco dos
genes da miogenina ativa a expresso de
MyoD. Assim, h um enlace de retroalimentao recproca positiva que faz com que
quando miogenina ou MyoD ativado, tambm o o outro gene (Thayer et al., 1989).
No pinto, MyoD ativado em clulas
somticas que geram a musculatura abdominal e dos membros, enquanto myf5 ativado em clulas produzindo os msculos
do dorso. Em ambos os casos, essa ativao compromete as clulas somticas linhagem miognica. Ambos grupos celulares expressam miogenina e MRF4 para
produzir seus miotubos e miofibras (Figura 9.10; Lyons e Buckingham, 1992; Pownall
e Emerson, 1992a,b; Braun e Arnold, 1996;
Cossu et al., 1996a).
Em alguns casos, esses fatores de
transcrio miognica podem compensar
para a perda de um ou de outro. Usando
uma tcnica de alvejar genes (veja Captulo 2), Rudnicki e colegas (1992) mostraram que Myf5 e MyoD podem realizar as
mesmas funes. Quando camundongos
carecem de ambos genes MyoD, a expresso do gene myf5 assume o controle. Os
camundongos resultantes tm desenvol-
350
(A)
Myf5
ou
MyoD
Clula no somito
Mesoderma Paraxial
(B)
Clulas do sangue
MRF4
Miogenina
Mioblasto
Tubo neural
Notocorda
Miotubo
Miofibra
Dermtomo
Mitomo
(C)
Figura 9.10
Comprometimento e diferenciao muscular mediada pela famlia MyoD de fatores de transcrio. (A) Papis
postulados para protenas miognicas durante a formao do msculo esqueltico no camundongo. (B)
Hibridizao in situ indicando a ausncia do mRNA myf5 no mesoderma paraxial no segmentado do
embrio. O lado esquerdo mostra fotografia sob o microscpio ptico da rea. (C) Hibridizao in situ
mostrando a presena do mRNA myf5 no mitomo do somito embrionrio do camundongo. (A segundo
Rudnicki et al., 1993; fotografias cortesia de G. Lyons.)
vimento muscular normal. Quando os camundongos carecem de seus genes myf5,

eles tambm tm desenvolvimento muscular normal. Porm, a ausncia da protena Myf5 atrasa em vrios dias a formao
do mitomo, causando falha no desenvolvimento adequado da poro lateral do
esclertomo. Embora esses camundongos
tenham msculos normais, suas caixas
torcicas esto distorcidas e eles so incapazes de respirar (Braun et al., 1992).
Experimentos recentes no laboratrio de
Rudolf Jaenisch (Rudnicki et al., 1993)
mostram que quando os genes myf5 e
MyoD esto ambos ausentes do embrio,
no se formam msculos e costelas.* Enquanto MyoD e Myf5 podem substituir
uma a outra, no parece haver redundncia nas funes da miogenina. Camundongos homozigotos para uma mutao
alvejada no gene myogenina morrem logo
aps o nascimento por causa dos defei-
tos na formao de suas clulas musculares (Hasty et al., 1993; Nabeshima et al.,
1993). Os somitos se formaram normalmente e foram compartimentalizados em
mitomo, esclertomo e dermtomo, mas
os mioblastos deixaram de se diferenciar
em miofibras (Venuti et al, 1995).
MyoD e seus parentes parecem ser crticos para a remoo de mioblastos do ciclo celular. Conforme j mencionado,
mioblastos em diviso no se diferenciam.
Essa distino entre diviso e diferenciao caracterstica de vrios tipos celulares derivados de populaes de clulas
germinativas (Bischoff e Holtzer, 1969;
Holtzer et al., 1975). Parece haver duas
maneiras pelas quais o mioblasto se retira
do ciclo celular. O primeiro mecanismo
inibir o caminho da diviso celular. Para
isso, a protena MyoD induz a expresso
de p21, um inibidor de quinases dependentes de ciclina (Figura 9.11; Halevy et
*Isso significa que existe alguma redundncia no desenvolvimento dos msculos esquelticos.
Tal redundncia j do conhecimento dos embriologistas h longa data (Spemann, 1938), mas os
geneticistas a esto redescobrindo (para sua consternao, j que confunde a interpretao de tais
experimentos). Gould (1990) considera a redundncia desenvolvimental essencial para evoluo
ocorrer, j que um dos scios redundantes fica livre para conseguir uma nova funo enquanto o
outro scio mantm a funo original.
al., 1995). O segundo mecanismo envolve

a sub-regulao de seus receptores para
o fator de crescimento. Um dos principais
fatores de crescimento que promove a diviso das clulas mioblastos o fator de
crescimento fibroblstico bsico. O FGF2
promove diviso da clula mioblasto, ao
mesmo tempo que inibe a diferenciao
do mioblasto suprimindo a transcrio de
MyoD e myogenina (Vaidya et al., 1989;
Brunetti e Goldfine, 1990). Os receptores
FGF so perdidos quando o mioblasto se
diferencia em uma clula muscular (Olwin
e Hauschka, 1988; Moore et al., 1990).
Como so ativadas as protenas da famlia MyoD? Novos experimentos forneceram as bases para algumas fascinantes
especulaes. George-Weinstein e seus
colegas (1996) demonstraram que quando epiblastos de galinha so isolados do
resto da gstrula e separados em clulas
individuais, essas clulas epiblastos se
tornam msculo. Alm disso, os pesquisadores acharam que o mRNA de MyoD
(e talvez a protena) est presente nessas
clulas. Parece que clulas epiblastos tm
a capacidade preferencial de ficarem
comprometidas com os mioblastos, e que
Figura 9.11
(A)
Proliferao
Diferenciao
MyoD
Ciclina D1
Cdk4
p21
Ativao
Inibio
(B)
Proliferao
Diferenciao
MyoD
Ciclina D1
Cdk4
p21
Comutao entre proliferao e diferenciao.

(A) Condies favorecendo proliferao (como
quando h abundncia de fatores de crescimento de fibroblastos no meio) favorecem a continuada expresso da quinase 4 dependente de
ciclina. Essa quinase capaz de reprimir a
expresso de MyoD. (B) Reciprocamente, uma
vez formada, o MyoD pode suprimir cdk4
atravs das ativao da protena p21. Dessa
maneira, as clulas em diviso no se diferenciaro e as clulas diferenciadas no se dividiro. (Segundo Halevy et al., 1995.)
somente suas interaes com outros

tipos de clulas que as previnem de se
tornarem msculos. Nesse caso, os fatores que promovem a miognese (como as
protenas Wnt) podem faz-lo atravs da
represso dos inibidores. Um desses inibidores pode ser a protena Twist. Essa
protena um ligante de DNA muito parecido com MyoD. Porm, ela parece inibir
MyoD e outras protenas ligadas aos promotores de seus genes-alvo especficos
do msculo. O gene twist est originalmente presente em todo o somito preco-
Osteognese: O Desenvolvimento dos Ossos

Algumas das estruturas mais bvias que derivam do mesoderma somtico so os
ossos. Neste captulo descreveremos em linhas gerais os mecanismos da formao
dos ossos, e estudantes que gostariam de obter maiores detalhes podem faz-lo ao
consultar livros de histologia os quais dedicam captulos inteiros a esse tema. Existem
trs linhagens que geram o esqueleto. O esclertomo gera o esqueleto axial, o mesoderma
da placa lateral gera o esqueleto dos membros, e a crista neural craniana d origem ao
arco branquial e os ossos craniofaciais e a cartilagem.* Existem dois modos principais
de formao dos ossos, ou osteognese, e ambos envolvem a transformao de um
tecido mesenquimatoso prexistente no tecido sseo. A converso direta do tecido
mesenquimatoso em osso chamada de ossificao intramembranosa. Isso ocorre
primeiramente nos ossos do crnio. Em outros casos, as clulas mesenquimatosas se
diferenciam em cartilagem, e essa cartilagem posteriormente reposta pelo osso. Esse
processo pelo qual uma cartilagem intermediria resposta por clulas sseas chamada de ossificao endocondral.
OSSIFICAO INTRAMEMBRANOSA. Ossificao intramembranosa o meio ca-
racterstico pelo qual so formados os ossos chatos do crnio. Clulas mesenquimatosas derivadas da crista neural interagem com a matriz extracelular das clulas epiteliais
da cabea para formar o osso. Se as clulas mesenquimatosas no contatam essa
matriz, no ser formado osso algum (Tyler e Hall, 1977; Hall, 1988). Isso foi demonstrado in vitro por Hall e colegas (1983), que isolaram clulas mesenquimatosas da
* O desenvolvimento da cartilagem craniofacial foi discutido no Captulo 7 e ser revisado no

Captulo 23; o desenvolvimento dos membros ser detalhado no Captulo 18.
351
ce, mas em seguida se torna especificamente ausente no mitomo (Spicer et al.,

1996). possvel que MyoD e outras protenas bHLH miognicas j estejam presentes nas clulas epioblastos mas que
estejam proibidas de funcionar at que a
protena twist fique sub-regulada. Essa
sub-regulao pode possivelmente vir
como um resultado da secreo da protena Wnt (pela epiderme ou tubo neural), que
poderia anular um efeito inibitrio mediado por Notch1.
Alm das protenas bHLH, outro fator
de transcrio, MEF2A, parece ser de importncia para o desenvolvimento muscular esqueltico. MEF2A tambm induz fibroblastos a se tornarem msculos, e parece
cooperar com MyoD nos intensificadores
de genes especficos do msculo. Kaushal
e colegas (1994) especulam que MEF2A fornece especificidade adicional para a adeso
do MyoD de tal forma que MyoD no ative
inadvertidamente genes no musculares
que possuam seqncias de regulao capazes de ligar protenas bHLH.
352
Figura 9.12
Diagrama esquemtico da ossificao membranosa. (A) Clulas mesenquimatosas, provavelmente derivadas da crista neural, se condensam para produzir osteoblastos, que depositam matriz osteide. Esses osteoblastos
ficam enfileirados ao longo da regio
calcificada da matriz. Osteoblastos aprisionados dentro da matriz ssea tornam-se
ostecitos. (B) Espalhamento de espculas
sseas do local da ossificao primria nos
ossos chatos do crnio de um embrio humano de trs meses. Os ossos mostrados em
negro so formados por ossificao endocondral. (Segundo Langman, 1981.)
Osteoblastos
Matriz
osteide
Osso
calcificado
Espculas do
osso parietal
Clula ssea
(ostecito)
Espculas do
osso frontal
(A)
Mesnquima frouxo
Osteoblastos
(B)
cabea e as colocaram em placas de cultura. Se nenhuma matriz extracelular estiver

presente na superfcie dessas placas, as clulas permanecem mesenquimatosas. No
entanto, se clulas epiteliais da cabea tivessem secretado primeiro uma matriz extracelular na superfcie, as clulas se diferenciariam em clulas sseas.
Os mecanismos responsveis pela converso de clulas mesenquimatosas em
clulas sseas ainda desconhecido, mas evidncias recentes apontam para um grupo de molculas em particular na juno epitlio-mesnquima. Protenas
morfogenticas do osso podem ser isoladas do osso adulto e injetadas em msculo
embrionrio ou tecidos conjuntivos. Quando isso realizado, a cartilagem se desenvolve das clulas dentro desses tecidos e posteriormente substituda pelas clulas
sseas (Syftestad and Caplan, 1984; Urist et al., 1984; veja Captulo 17).
Durante a osssificao intramembranosa, as clulas mesenquimatosas se proliferam e se condensam em nodos compactos. Algumas dessas clulas se desenvolvem
em capilares, outras mudam sua forma para se tornar osteoblastos, clulas capazes de
secretar a matriz ssea. A matriz colgeno-proteoglicana secretada capaz de aglomerar sais de clcio, levados para essa regio atravs dos capilares. Desse modo, a matriz
se torna calcificada. Na maioria dos casos, os osteoblastos so separados da regio
de calcificao por uma camada de matriz pr-ssea (osteide) secretada por eles.
Ocasionalmente, esses osteoblastos ficam presos na matriz calcificada e se tornam
ostecitos - clulas sseas. Com a continuidade da calcificao, as espculas sseas
se irradiam para fora do centro, que onde comeou a ossificao (Figura 9.12).
Ademais, a regio inteira de espculas calcificadas fica rodeada por clulas mesenquimatosas compactas que formam o peristeo. As clulas da parte interna do peristeo
tambm se tornam osteoblastos e depositam matriz ssea em paralelo com quela das
espculas j existentes. Dessa maneira, muitas camadas de osso so formadas.
OSSIFICAO ENDOCONDRAL. Ossificao endocondral envolve a formao de
tecido cartilaginoso de clulas mesenquimatosas agregadas e a subseqente reposio desse tecido por osso (Horton, 1990). O tecido cartilaginoso um modelo para o
osso que o sucede. Os componentes esquelticos da coluna vertebral, a plvis, e as
extremidades so primeiramente formados de cartilagem e posteriormente mudados
para osso. Esse processo notvel coordena a condrognese (produo de cartilagem)
com a osteognese (crescimento do osso); os elementos esquelticos esto simultaneamente suportando uma carga, crescendo em largura e respondendo a estresses
locais. As clulas que formam tecidos cartilaginosos expressam Scleraxis, um fator de
transcrio ao qual atribuda a ativao de genes especficos da cartilagem (veja
Figura 9.13; Pgina de rosto; Cserjesi et al., 1995). Dessa maneira, a Scleraxis expressa nos esclertomos, no mesnquima facial que forma os precursores cartilaginosos
353
Figura 9.13
Localizao da mensagem da scleraxis nos

locais de formao dos condrcitos. (A) Expresso de scleraxis em somitos de um embrio de camundongo de 12,5 dias. Essa seo
foi cortada tangencialmente, e o tubo neural
corre ao longo do eixo ntero-posterior. (B)
Seo atravs de um embrio de camundongo
de 11,5 dias onde transcries de scleraxis so
vistas na cartilagem condensada do nariz e face
e nos precursores dos membros e costelas. (Segundo Cserjesi et al., 1995; fotografias cortesia do Dr. E. Olson.)
(A)
(B)
do osso e no mesnquima do membro. Essa protena se mantm ativa at a cartilagem

comear a ser substituda por tecido sseo. [mesend2.html]
A formao da cartilagem pode ser dividida em trs fases: proliferao do
mesnquima, condensao do mesnquima pr-cartilaginoso e diferenciao do
condrcito. A condrognese iniciada quando as clulas mesenquimatosas divididas da pr-cartilagem comeam a expressar protenas da matriz extracelular causando-as a se condensarem em ndulos. A N-caderina parece ser importante na iniciao dessas condensaes, e N-CAM tambm aparenta ser essencial para mant-las
nessa situao (Oberlender e Tuan, 1994; Hall e Miyake, 1995). Uma vez condensadas,
as clulas se tornam condrcitos e comeam a secretar proteoglicanos e colgenos
especficos do condrcito.*
Em humanos, os ossos longos dos brotos dos membros embrionrios se formam
de clulas mesenquimatosas que formam ndulos nessa regio que iro se transformar em ossos. Essas clulas se tornam condrcitos, e secretam a matriz extracelular da
cartilagem. As clulas mesenquimatosas em sua volta se tornam o peristeo (Figura
* Mutaes que afetam a formao de ndulos freqentemente causam anomalias nos membros.
Nas galinhas, as mutaes talpid so caracterizadas pela duplicao e fuso dos membros. Isso, por
sua vez, descobriu-se, ter sido causado por condensaes pr-condrognicas anormalmente grandes.
Esses grandes ndulos so causados pelo excesso de adesividade das clulas mesenquimatosas nessas
condensaes, e foi diretamente ligado a uma super expresso de N-CAM (Ede 1983; Chuong et al.,
1993). Em humanos, o gene SOX9 expresso por condensaes pr-cartilaginosas, e isso codifica
uma protena ligante de DNA. As mutaes do gene SOX9 causa displasia camptomelica, uma
doena rara do desenvolvimento esqueltico, causando uma srie de deformidades nos ossos do
corpo. A maioria dos bebs afetados morrem de parada respiratria devido a m-formao das
cartilagens traqueobronquiais e das costelas. (Wright et al., 1995).
354
Cartilagem epifisria
Mesnquima
Cartilagem
Condrcitos
hipertrficos
Osteoblastos
(osso)
Vasos
sangneos
Condrcitos
proliferando
Placa de
crescimento
Medula
ssea
Osso
(A)
(B)
(C)
Figura 9.14
Diagrama esquemtico da ossificao endocondral. (A,B) Clulas mesenquimatosas se condensam em ndulos cartilaginosos que formam
o modelo do osso. (C) Condrcitos no centro
da haste sofrem hipertrofia e alteram sua matriz
extracelular, permitindo a entrada de vasos
sangneos. (D,E) Vasos sangneos trazem
osteoblastos que se ligam matriz cartilaginosa
em degenerao e deposita matriz ssea. (F-H)
Formao das placas de crescimento epipifisrio
pelos condrcitos, que se proliferam antes de
hipertrofiar. Centros secundrios de ossificao
tambm se formam quando vasos sangneos
penetram perto das extremidades do osso. (Segundo Horton, 1990.)
(D)
(E)
Placa de
crescimento
(F)
(G)
Centro de
ossificao
secundria
(H)
9.14). Logo aps o modelo cartilaginoso ser formado, as clulas na parte central do
modelo se tornam dramaticamente maiores e comeam a secretar um tipo diferente de
matriz, que contm tipos diferentes de colgeno, mais fibronectina e menos inibidor de
protease. Essas clulas so os condrcitos hipertrficos. A sua matriz mais susceptvel invaso pelas clulas de vasos sangneos do peristeo. Um capilar do peristeo
invade, em seguida, o centro da haste da cartilagem previamente avascular. Com a
degradao da matriz da cartilagem, as clulas da cartilagem hipertrfica morrem, e
osteoblastos (clulas formadoras de ossos), transportados pelos vasos sangneos,
comeam a secretar matriz ssea sobre a cartilagem parcialmente degradada (Hattori et
al.,1995). Finalmente toda a cartilagem substituda por osso.
Como o centro do modelo da cartilagem convertido em osso, formada uma
frente de ossificao entre o osso recm-sintetizado e o restante da cartilagem. O lado
da cartilagem dessa frente contm a cartilagem hipertrfica que prepara a haste para a
invaso pelos vasos sangneos, e o lado do osso contm as clulas osteoblsticas
depositando a matriz ssea. Essa frente se espalha de dentro para fora em ambas as
direes a partir do centro, enquanto mais cartilagem se transforma em osso. Se isso
fosse tudo, no entanto, no existiria crescimento, e nossos ossos seriam somente do
tamanho do modelo cartilaginoso original. Porm, com a frente de ossificao se aproximando dos finais do modelo cartilaginoso, os condrcitos prximos frente de
ossificao se proliferam antes de sofrer hipertrofia. Isso estica a parte final cartilaginosa
do osso, fornecendo uma fonte para nova cartilagem. Essas regies cartilaginosas no
final dos ossos longos so chamadas placas de crescimento epifisrio. Essas placas
contm trs regies: uma regio de proliferao de condrcitos, uma regio de
condrcitos maduros, e uma regio de condrcitos hipertrofiados (Figura 9.15; Chen
et al.,1995). Como essa cartilagem se hipertrofia e a frente de ossificao se estende
mais adiante, a cartilagem remanescente na placa epifisria se prolifera. Essa cartilagem forma a rea de crescimento do osso. Dessa maneira, o osso se mantm em
crescimento pela produo de novas clulas cartilaginosas que sofrem hipertrofia,
permitindo aos vasos sangneos entrarem, e morrem medida que a matriz ssea
(B)
Cartilagem
de reserva
355
(C)
Clulas
cartilaginosas
em proliferao
(A)
Zona de
condrcitos
maduros
Hipertrofia e
calcificao das
clulas
cartilaginosas
Zona de
degenerao
e ossificao de
cartilagem
Osso calcificado
Figura 9.15
depositada. Enquanto as placas de crescimento epifisrio forem capazes de produzir

condrcitos o osso continua a crescer.
As placas de clulas de crescimento epifisrio so muito sensveis a hormnios, e
sua proliferao estimulada pelo hormnio de crescimento e fatores de crescimento
semelhantes insulina. Nilsson e colegas (1986) mostraram recentemente que
hormnios de crescimento estimulam a produo do fator I de crescimento semelhante insulina (IGF-I) nesses condrcitos e que esses condrcitos respondem a isso
proliferando-se. Quando eles adicionaram hormnio de crescimento placa de crescimento da tbia de um camundongo jovem (que no conseguia fabricar o seu prprio
hormnio de crescimento porque suas hipfises haviam sido removidas), os hormnios
de crescimento estimularam a formao de IGF-I dos condrcitos na zona proliferativa
(veja Figura 9.15). A combinao de hormnios de crescimento e IGF-I parece fornecer
um sinal mittico extremamente forte. Os pigmeus da floresta Ituri, no Zaire, tm nveis
normais de hormnios de crescimento e IGF-I at a puberdade. No entanto, na puberdade, os nveis de IGF-I nos pigmeus caem para aproximadamente um tero em comparao com os de outros adolescentes. Parece que IGF-I essencial para uma arrancada
normal no crescimento durante a puberdade (Merimee et al., 1987). Hormnios tambm
so responsveis pela interrupo no crescimento. No final da puberdade, nveis elevados de estrgeno e testosterona fazem com que a cartilagem remanescente da placa
epifisria sofra hipertrofia. Essas clulas cartilaginosas crescem, morrem e so substitudas por ossos. Sem alguma cartilagem adicional, o crescimento desses ossos cessa.
A reposio de condrcitos por osteoblastos parece depender da mineralizao
da matriz extracelular. Em embries de galinha, a fonte de clcio o carbonato de
clcio da casca do ovo, e durante o seu desenvolvimento, o sistema circulatrio da
galinha transloca aproximadamente 120 mg de clcio da casca do ovo para o esqueleto (Tuan, 1987). Quando embries de galinha so removidos de suas cascas no
terceiro dia e crescem em cultura sem a casca (em envelopes plsticos) durante o
restante do seu desenvolvimento, muito do esqueleto cartilaginoso deficiente em
clcio no se desenvolve em tecido sseo (Figura 9.16; Tuan e Lynch, 1983). Nos
mamferos, o clcio transferido atravs da placenta e depositado na matriz pelos
Proliferao de clulas na placa epifisria em

resposta ao hormnio de crescimento. (A) Regio cartilaginosa em um rato jovem tornado
deficiente em hormnio de crescimento pela
remoo de sua hipfise. (B) A mesma regio
no rato aps injeo de hormnio de crescimento. (C) Cartilagem corada em regies particulares da placa de crescimento. (Fotografias
de I. Gersh, de Bloom e Fawcett, 1975: C de
Chen et al., 1995; cortesia de P. Goetinck.)
356
Figura 9.16
Mineralizao esqueltica em um embrio de

pinto de 17 dias que se desenvolve (A) em
uma cultura sem casca e (B) dentro da casca
durante a incubao normal. Os embries foram fixados e corados com vermelho de
Alizarina par mostrar a matriz calcificada. (de
Tuan e Lynch, 1983, cortesia de R. Tuan.)
(A)
(B)
condrcitos. J foi demonstrado que condrcitos hipertrficos mudam a respirao

de aerbica para anaerbica (Brighton e Hunt, 1974; Brighton, 1984), causando uma
diminuio no ATP celular e no emprego de uma via para energia mediada pela
fosfocreatina, tal como a usada em msculos esgotados de oxignio (Shapiro et al.,
1992). Por algum mecanismo ainda desconhecido, imagina-se que essas mudanas
metablicas resultem em depsito de clcio na matriz extracelular, dentro de pequenas estruturas limitadas por membranas, conhecidas como vesculas da matriz
(Wuthier, 1982). Isso inicia o processo da calcificao e permite os osteoblastos
aderir e iniciar a formao do osso (Figura 9.17).
medida que novo material sseo adicionado perifericamente da superfcie
interna do peristeo, ocorre uma cavitao na regio interna para formao da cavidade da medula ssea. Essa destruio de tecido sseo devida aos osteoclastos,
clulas multinucleadas que adentram o osso atravs dos vasos sangneos (Kahn e
Simmons, 1975; Manolagas e Jilka, 1995). Osteoclastos so provavelmente derivados
dos mesmos precursores que as clulas sangneas, e so responsveis pela dissoluo de ambas pores da matriz do osso, a inorgnica e a protena (Ash et al., 1980;
Blair et al., 1986). Os osteoclastos estendem numerosos processos celulares na matriz,
bombeando ons de hidrognio oriundos do osteoclasto para o material em seu redor,
acidificando-o e solubilizando-o (Figura 9.18; Baron et al., 1985, 1986). Os vasos
sangneos tambm importam as clulas formadoras de sangue, que iro residir na
medula pelo resto da vida do organismo.
Condrcitos
Clcio na matriz
extracelular
Figura 9.17
Deposio de clcio pelos condrcitos na regio distal da zona hipertrfica. Clcio (corado em
escuro nesta montagem de micrografia eletrnica) colocado na matriz pelas clulas em crescimento. (de Brighton e Hunt, 1974; cortesia de C. T. Brighton.)
Porcentagem do osso solubilizado
(A)
(B)
(C)
45
357
Ca
[3H] Prolina
Tempo (horas)
Figura 9.18
Atividade osteoclstica na matriz ssea. (A) Micrografia eletrnica da membrana franzida de um

osteoclasto de pinto cultivado em uma matriz ssea reconstituda. (B) Seo da membrana
franzida corada para detectar presena de uma ATPase capaz de transportar ons de hidrognio da
clula. A ATPase est restrita membrana do processo celular. (C) Solubilizao de componentes
inorgnicos e colagenosos da matriz (conforme medido pela liberao de [45Ca] e prolina [3H],
respectivamente) pelos 10.000 osteoclastos incubados sobre fragmentos sseos marcados. (A e
C de Blair et al., 1986; B de Baron et al., 1986, cortesia dos autores.)
&
Especulaes
Controle da Condrognese na Placa de Crescimento
ESCOBERTAS RECENTES de mu-
taes do desenvolvimento esqueltico de seres humanos e murinos forneceram notveis vises sobre como a diferenciao, proliferao e padronizao de
condrcitos so reguladas.
Receptores do Fator de Crescimento

Fibroblstico
A proliferao das clulas epifisrias das
clulas da placa de crescimento e da cartilagem facial pode ser interrompida pela
presena de fatores de crescimento fibroblstico (Deng et al., 1996; Webster e
Donoghue, 1996). Esses fatores parecem
instruir os precursores da cartilagem de
se diferenciarem em vez de se dividirem.
Em humanos, mutaes nos receptores
para fatores de crescimento de fibroblastos podem fazer com que esses receptores se tornem prematuramente ativados.
Isso d origem aos principais tipos de nanismo humano. A acondroplasia uma
mutao dominante causada por mutaes na regio transmembrana do receptor 3 do fator de crescimento fibroblstico (FGFR3). Aproximadamente 95% dos
anes acondroplsicos tm a mesma mutao de FGFR3, uma substituio do par
de bases que converte glicina em arginina
na posio 380 na regio transmembrana
da protena. Alm disso, mutaes na poro extracelular da protena FGFR3 ou no
domnio da tirosina quinase intracelular
resultaram na displasia tanatofrica, uma
forma letal de nanismo que se parece com
a acondroplasia homozigota (Figura 9.19;
Bellus et al., 1995; Tavormina et al., 1995).
Mutaes em FGFR1 podem causar a sndrome de Pfeiffer, caracterizada por defeitos nos membros e fuso prematura
das suturas cranianas (craniosinostose),
resultando em formas anormais do crnio e da face. Mutaes diferentes em
FGFR2 podem originar vrias anomalias
nos membros e/ou face (Park et al., 1995;
Wilkie et al., 1995). [cell7.html]
A matriz extracelular da cartilagem

tambm crtica para a diferenciao e
organizao apropriadas de condrcitos
da placa de crescimento. Mutaes que
afetam o colgeno do tipo IV ou a
sulfatao de proteoglicanos da cartilagem podem causar severas anomalias
esquelticas. Camundongos com deficincia de colgeno de tipo XI morrem ao
nascer com anormalidades nas cartilagens dos membros, mandbula, costelas
e traquia (Li et al., 1995). Falncia em
adicionar grupos sulfato a glicoproteoglicanos da cartilagem causa displasia
distrfica, um nanismo humano caracterizado por uma severa curvatura da espinha, p torto e lbulos da orelha deformados (Hstbacka et al., 1994).[cell6.html]
Receptores de Estrgeno
Hormnios tambm so conhecidos por ter
um efeito marcado sobre a epfise humana.
O surto de crescimento puberal e amadurecimento subseqente da placa epifisria
358
(A)
(B)
(C)
(i.e., a converso de clulas em proliferao para cartilagem madura e osso) so

induzidas por hormnios sexuais (Kaplan
e Grumbach, 1990). Em condies de puberdade precoce, existe uma arrancada no
crescimento inicial (tornando o indivduo
mais alto do que o seu par), seguido pela
interrupo da diviso celular epifisria
(permitindo que seu par alcance e ultrapasse o seu peso). No se pensava que,
no sexo masculino, o estrgeno tivesse alguma participao nesses eventos. No entanto, em 1994 Smith e colegas relataram o
caso verdico de um homem cujo crescimento ainda era linear apesar de ter passado por uma puberdade normal. Suas placas epifisrias no haviam maturado, e ele
ainda possua proliferao de condrcitos

aos 28 anos de idade. Sua idade ssea - a
quantidade de cartilagem epifisria que havia retido - era aproximadamente a metade
de sua idade cronolgica. Descobriu-se que
nessa pessoa no estava presente qualquer
receptor de estrgeno funcional. Portanto,
o estrgeno cumpre um papel na maturao
epifisria no sexo masculino tanto quanto
no feminino. Hormnios da tireide e
hormnios relacionados paratireide tambm so importantes na regulao da maturao e no programa de hipertrofia da placa
de crescimento epifisrio (Ballock e Reddi,
1994). Dessa forma, crianas com hipotireoidismo so susceptveis a desenvolver doenas da placa de crescimento.[limb3.html]
Figura 9.19
Displasia ssea humana causada por mutaes

dominantes ativadoras do receptor 3 do fator
de crescimento fibroblstico. (A) Displasia
tanatofrica, uma condio fatal caracterizada
por severo encurtamento das costelas e membros devido cobertura das epfises por tecido
sseo. A morte devido a problemas respiratrios. (B) Fotografia por raios-X de um infante nascido com displasia tanatofrica. (C) Seo microscpica mostrando a desorganizao
de uma epfise na displasia tanatofrica. Notar
a ausncia de condrcitos em diviso. (de
Gilbert-Barness e Opitz, 1996.)
Mesoderma da Placa Lateral

Nem todos os mantos mesodrmicos so organizados em somitos. Adjacente ao
mesoderma somtico est a regio mesodrmica intermediria. Essa corda de clulas mesodrmicas se desenvolve no tbulo pronfrico, que precursor do rim e dos
dutos genitais. O desenvolvimento desses sistemas de rgos ser discutido em
detalhe nos Captulos 17 e 19, respectivamente. Mais adiante lateralmente em cada
lado chegamos placa mesodrmica lateral. Essas placas se dividiem horizontalmente em mesoderma (parietal) somtico dorsal, abaixo do ectoderma e o mesoderma
(visceral) esplncnico ventral, que se superpe ao endoderma (veja Figura 9.2C).
Entre essas camadas est a cavidade corporal - o celoma - que se estende da futura
regio do pescoo at a parte posterior do corpo. Mais tarde no desenvolvimento,
os celomas do lado direito e esquerdo se fundem e se dobram alongando-se do
(A) EMBRIO DE R
Crista neural
Placa neural
Tubo neural
Somito
Notocorda
Mesoderma
somtico
Endoderma
Celoma
Mesoderma
Esplncnico
Intestino
mdio
(B)
359
Mesoderma
da placa
lateral
EMBRIO DO PINTO
Cortes para remoo do embrio
Figura 9.20
Vitelo
Comparao entre o desenvolvimento mesodrmico em embries de r e pinto. (A) Embries de r em estgio de nurula mostrando
desenvolvimento progressivo do mesoderma
e celoma. (B) Seo transversa de um embrio de pinto. (C) Quando o embrio de pinto separado da sua enorme massa de vitelo,
parece uma nurula anfbia em estgio semelhante. (A segundo Rugh, 1951; B e C segundo Patten, 1951.)
Intestino primitivo
Rasgo
Rasgo
( C ) PINTO TRANSFORMADO EM R
Tubo neural
Somito
Celoma
Intestino
primitivo
Vitelo
EMBRIO DE PINTO
(removido do vitelo;
margens rejuntadas)
EMBRIO DE R
mesoderma somtico, dividem o celoma em cavidades separadas. Nos mamferos, o

celoma subdividido em espaos pleural, pericardaco e peritoneal, envolvendo o
trax, corao e abdome, respectivamente. O mecanismo para a criao de somitos
mesodrmicos e revestimento corporais mudou pouco atravs da evoluo dos
vertebrados, e o desenvolvimento do mesoderma da galinha pode ser comparado
com estgios similares nos embries da r (Figura 9.20).
Formao das Membranas Extra-Embrionrias
O desenvolvimento embrionrio nos rpteis, aves e mamferos tomou uma nova direo. Os rpteis desenvolveram um mecanismo para depositar ovos na terra seca,
dessa forma liberando-os para explorar nichos que no estavam to perto das guas.
Para conseguir isso, o embrio produziu quatro conjuntos de membranas extra-embrionrias para medi-lo com o ambiente, e mesmo que a maior parte dos mamferos
tenha desenvolvido placentas ao invs de cascas, o padro bsico das membranas
extra-embrionrias permaneceu o mesmo. Em rpteis, aves e mamferos em desenvolvimento, inicialmente no existe distino entre domnios embrionrios e extra-embrionrios. No entanto, como o corpo do embrio toma forma, o epitlio lateral se divide
desigualmente para criar dobras corporais, isolando o embrio do vitelo e delineando
quais reas devero ser embrionrias e quais extra-embrionrias (Miller et al., 1994).
360
(A)
(B)
Dobra da cabea do mnio
Cabea do embrio
Celoma
extra-embrionrio
Celoma
extra-embrionrio
Ectoderma
Ectoderma
Mesoderma somtico
Mesoderma somtico
Mesoderma esplncnico
Endoderma
Endoderma
Envoltrio vitelnico
Envoltrio vitelnico
Vitelo
Vitelo
Dobra da
cabea do mnio
Embrio
Dobra caudal
do mnio
(C)
Crio
Ectoderma
Cavidade amnitica
mnio
Tubo neural
Cavidade crio-amnitica
Notocorda
Aorta
Mesnquima
Intestino mdio
Intestino posterior
Endoderma
Mesoderma
Esplncnopleura
do saco vitelnico
Proctdeo
Invaginao Alantica
(D)
Alantide adentrando o
celoma extra-embrionrio
(E)
Embrio
Membrana
alantica
Embrio
mnio
Intestino
Intestino
mnio
Cavidade
amnitica
Cavidade
amnitica
Crio
Vitelo
Alantide
Crio
Vitelo
Saco vitelnico
Figura 9.21
Desenho esquemtico das membranas extraembrionrias do pinto. O embrio est cortado longitudinalmente e os revestimentos de
albumina e da casca no so mostrados. (A)
embrio de 2 dias. (B) Embrio de 3 dias. (C)
Diagrama esquemtico detalhado da regio
caudal (posterior) do embrio do pinto, mostrando a formao da alantide. (D) Embrio
de 5 dias. (E) Um embrio de 9 dias. (Segundo Carlson, 1981.)
Membrana
alantica
As dobras membranosas so formadas pela extenso do epitlio ectodrmico e

endodrmico escorado pelo mesoderma. A combinao de ectoderma e mesoderma,
freqentemente referida como somatopleura, forma as membranas do mnio e crio e
a combinao de endoderma e mesoderma - a esplancnopleura - forma o saco vitelnico
e a alantide. Os tecidos endodrmicos e ectodrmicos agem como clulas epiteliais
funcionais; e o mesoderma gera o suprimento de sangue essencial para l e para c do
epitlio. A formao dessas dobras pode ser observada na Figura 9.21.
O primeiro problema de um ovo vivendo na terra a dessecao. Clulas embrionrias secariam rapidamente se no estivessem em um ambiente aquoso. Esse
ambiente suprido pelo mnio. As clulas dessa membrana secretam fluido amnitico;
assim, a embriognese ainda acontece na gua. Esse avano evolucionrio to
significativo e caracterstico que rpteis, aves e mamferos esto agrupados como
vertebrados amniticos.
O segundo problema desses ovos a troca de gases. Essa troca realizada pelo
crio, a membrana extra-embrionria mais externa. Nas aves e rpteis, essa membrana
se adere casca, permitindo a troca de gases entre o ovo e o ambiente. Nos mamferos,
como havamos dito, o crio evoluiu tornando-se placenta, que tem muitas funes
alm da respirao.
A alantide armazena resduos urinrios e media a troca de gases. Nos rpteis e
aves, a alantide se torna um grande saco, j que no existe outro modo para manter os
subprodutos do metabolismo do embrio em desenvolvimento. A camada mesodrmica
da membrana da alantide freqentemente alcana e se funde com a camada
mesodrmica do crio para criar a membrana corioalantica. Esse envelope extremamente vascularizado crucial para o desenvolvimento da ave, e o responsvel pelo
transporte de clcio da casca do ovo para o embrio para produo de ossos (Tuan,
1987). Nos mamferos, o tamanho da alantide depende do sucesso da remoo dos
resduos de nitrognio pela placenta corinica. Em humanos a alantide um saco
vestigial; enquanto nos porcos um rgo grande e importante.
O saco vitelnico a primeira membrana extra-embrionria a ser formada, visto que
ele medeia a nutrio em aves e rpteis em desenvolvimento. Ele derivado de clulas
endodrmicas que crescem sobre o vitelo para englob-lo. O saco vitelnico conectado
ao intestino mdio por um tubo aberto, o duto vitelnico, para que as paredes do saco
vitelnico e do intestino sejam contnuas. Os vasos sangneos dentro do mesoderma
da esplancnopleura transportam nutrientes do vitelo para o corpo, pois o vitelo no
levado diretamente para o corpo atravs do duto vitelnico. Ao contrrio, clulas
endodrmicais digerem a protena em aminocidos solveis, que podem ento ser
passados aos vasos sangneos envolvendo o saco vitelnico. Outros nutrientes,
incluindo vitaminas, ons e cidos graxos so armazenados no saco vitelnico e transportados pela circulao embrionria. Por esses caminhos, as quatro membranas extra-embrionrias permitem que o embrio se desenvolva em terra.
O Corao
O sistema circulatrio uma das grandes conquistas do mesoderma da placa lateral.
Consistindo de um corao, clulas sangneas e um intricado sistema de vasos sangneos, o sistema circulatrio fornece a nutrio para o embrio vertebrado em desenvolvimento. O sistema circulatrio a primeira unidade funcional no embrio em
desenvolvimento, e o corao o primeiro rgo funcional. O corao vertebrado
surge de duas regies do mesoderma esplncnico que interagiu com tecido adjacente
para se tornar especfico para o desenvolvimento do corao. Essas clulas
cardiognicas migram para uma posio mediana ventral e se fundem para se tornar
um tubo simples de clulas musculares que se contraem. Esse corao tubular se
contorce formando uma estrutura em forma de S, com um nico trio e um nico
ventrculo. Com a continuao do desenvolvimento, o ventrculo forma suas camadas
e se prolifera mais rapidamente que o trio, os septos separam as cmaras do corao
e as vlvulas se desenvolvem.
FUSO DOS RUDIMENTOS DO CORAO. Nos anfbios, as duas provveis
regies formadoras do corao so inicialmente encontradas na posio mais anterior da manta mesodrmica. Enquanto o embrio est sofrendo neurulao, essas duas regies se juntam na regio ventral do embrio para formar uma cavidade
pericardial comum. Nas aves e mamferos, o corao tambm se desenvolve pela
361
362
Clulas se
tornam
notocorda
m distante do ndulo de Hensen
Anterior (rostral)
Clulas se
tornam
corao
Ndulo de Hensen
Tronco
arterioso
Ventrculo
Bulbus cordis
Seio venoso
(A)
(B)
Posterior (caudal)
+ = promotor de determinantes cardacos

- = repressor de determinantes cardacos
Figura 9.22
Ectoderma
Mesoderma
Endoderma
Clulas formadoras do corao no embrio do pinto. (A) Origem de clulas cardacas no embrio
precoce do pinto (estgio 3b). O padro ntero-posterior geral do sulco primitivo visto no
endocrdio e miocrdio do corao. (B) Modelo para a especificaco do mesoderma cardaco.
Os caminhos da migrao mesodrmica nas vrias regies do sulco primitivo esto representados
por setas. Sinais que induzem miognese cardaca esto representados por + , e inibidores da
induo cardaca esto representados como - . O mesoderma migratrio na regio 1 no encontra
indutores ou repressores. Clulas migrando da regio 3 encontram ambos. Somente clulas
migrando da regio 2 encontram o indutor sem o inibidor. (C) Micrografia eletrnica de varredura
do mesoderma formador do corao no embrio de pinto de 24 horas. O mesoderma facilmente
separado do ectoderma, mas permanece em ntima associao com o endoderma. (A segundo
Garcia-Martinez e Schoenwolf, 1993; B segundo Schultheiss et al., 1995; C de Linask e Lash,
1986, cortesia de K. Linask.)
(C)
fuso de primrdios pareados, mas a fuso desses dois rudimentos ocorre muito
mais tardiamente no desenvolvimento. Nesses vertebrados amniticos, o embrio
um disco achatado, e o mesoderma da placa lateral no circunda completamente
o saco vitelnico. As provveis clulas do corao se originam no sulco primitivo
precoce, um pouco posterior ao ndulo de Hensen e se estendem at cerca da
metade do seu comprimento (Figura 9.22A). Essas clulas migram atravs do sulco
e formam dois grupos de clulas mesodrmicas laterais ao (e no mesmo nvel do)
ndulo de Hensen (Figura 9.22B; Garcia-Martinez e Schoenwolf, 1993). Quando o
embrio do pinto tiver somente 18 a 20 horas de idade, essas provveis clulas do
corao se movem anteriormente entre o ectoderma e o endoderma em direo ao
meio do embrio, permanecendo em estreito contato com a superfcie endodrmica
(Figura 9.22C; Linask e Lash, 1986). Quando as clulas alcanam a rea onde o
intestino se estendeu at a regio anterior do embrio, a migrao cessa. O
direcionamento para essa migrao parece ser fornecido pelo endoderma. Se o
endoderma da regio cardaca girado com respeito ao resto do embrio, a migrao das clulas mesodrmicas pr-cardacas invertida. Pensa-se que o componente endodrmico responsvel por esse movimento um gradiente ntero-posterior de concentrao da fibronectina. Anticorpos contra a fibronectina interrompem a migrao, enquanto anticorpos contra outros componentes da matriz extracelular no o fazem (Linask e Lash, 1988a,b).
O endoderma tambm faz com que as clulas pr-cardacas comecem seu desenvolvimento como msculos do corao. O endoderma anterior pode fazer com que as
clulas mesodrmicas no cardacas expressem protenas especficas do corao tanto em aves como em anfbios (Jacobson, 1961; Sugi e Lough, 1994; Nascone e Mercola,
1995; Schultheiss et al., 1995). Essa diferenciao ocorre independentemente nos dois
primrdios formadores do corao, um migrando ao encontro do outro. As presuntivas
clulas do corao de aves e mamferos formam um tubo de parede dupla consistindo
de um endocrdio interior e um epimiocrdio exterior. O endocrdio formar o revestimento interno do corao, e o revestimento externo formar a camada dos msculos
do corao que iro bombear por toda a vida do organismo.
Com a continuao da neurulao, o intestino anterior fechado pelo dobramento
interno do mesoderma esplncnico (Figura 9.23). Esse movimento junta os dois tubos,
finalmente unindo o epimiocrdio em um tubo nico. Os dois endocrdios ficam em
uma cmara comum por um curto perodo, mas tambm iro se fundir. Nessa altura, a
dupla cmara celmica original se une para formar a cavidade do corpo que aloja o
corao. A origem bilateral do corao pode ser demonstrada atravs de interveno
cirrgica, prevenindo a fuso do mesoderma da placa lateral (Grper, 1907; DeHaan,
1959). Isso resulta em uma condio chamada crdia bfida, na qual um corao em
separado se forma em cada lado do corpo (Figura 9.24). A prxima etapa na formao
do corao a fuso dos tubos endocrdicos para formao de uma nica cmara de
bombeamento (veja Figura 9.23C,D). Essa fuso ocorre aproximadamente s 29 horas
do desenvolvimento das aves e na terceira semana da gestao humana. As partes
posteriores no fundidas do endocrdio se tornam as aberturas das veias vitelnicas
para o corao (Figura 9.25). Essas veias vo carregar nutrientes do saco vitelnico
para o seio venoso. O sangue ento passa atravs de uma lmina semelhante vlvula
de forma achatada, para a regio atrial do corao. Contraes do tronco arterioso
aceleram o sangue para a aorta.
As pulsaes do corao comeam enquanto os primrdios pareados ainda esto
se fundindo. O marcapasso dessa contrao o seio venoso. Contraes comeam
aqui e uma onda de contrao muscular ento propagada at o corao tubular.
Desse modo, o corao pode bombear sangue mesmo antes do seu intricado sistema
de vlvulas ter sido completado. As clulas musculares do corao tm na sua prpria
herana a habilidade de contrair, e clulas do corao isoladas de um rato com 7 dias
ou de embries de pintos, vo continuar a bater em placas de Petri (Harary e Farley,
1963; DeHaan, 1967). No embrio, essas contraes se tornam reguladas por estmulos eltricos procedentes da medula oblongata via nervo vago, e em 4 dias, o
eletrocardiograma de um embrio de pinto se aproxima daquele de um animal adulto.
FORMAO DAS CMARAS DO CORAO. Em um embrio de pinto de 3 dias ou
um embrio humano de 5 semanas, o corao um tubo de duas cmaras, com um trio

e um ventrculo. Em um embrio de pinto podemos observar a olho nu, o extraordinrio
ciclo do sangue entrando na cmara de baixo e sendo bombeado para fora atravs da
aorta. A separao desse tubo em um trio e um ventrculo distintos completada
quando clulas do miocrdio produzem um fator (provavelmente o fator transformador de crescimento 3) que faz com que as clulas do endocrdio adjacente se desprendam e entrem na gelatina cardaca rica em hialuronato situada entre as duas
camadas (Markwald et al., 1977; Potts et al., 1991). Nos seres humanos, essas clulas
causam a formao do colcho endocrdico que divide o tubo nos canais trioventriculares direito e esquerdo (Figura 9.26). Enquanto isso, o trio primitivo dividido pelo crescimento de dois septos que crescem ventralmente em direo aos colches endocrdicos. Os septos, no entanto, possuem orifcios para que o sangue
ainda possa atravess-los. Esse atravessar do sangue necessrio para a sobrevivncia do feto antes que a circulao para os pulmes funcionais seja estabelecida. Na
primeira respirao, no entanto, esses orifcios se fecham e os circuitos circulatrios
direito e esquerdo ficam estabelecidos (veja Informaes Adicionais e Especulaes
363
364
Figura 9.23
(A)
Formao do corao. Sees transversais atravs da regio formadora do corao do pinto

de (A) 25 horas, (B) 26 horas, (C) 28 horas e
(D) 29 horas. (Segundo Carlson, 1981.)
Ectoderma da placa neural
Sulco
neural
Mesnquima ceflico
Ectoderma superficial
Notocorda
Somatopleura
Intestino
Epimiocrdio (mesoderma
esplncnico engrossado)
Cavidade
pericardial
Esplncnopleura
Endoderma
Conjuntos celulares
angiogenticos
(B)
Sulco neural (fechando)
Mesnquima ceflico
Somatopleura
Cavidade
pericardial
Primrdio do
epicrdio
Esplancnopleura
Primrdio
endocrdio
(C)
Canal neural
Intestino anterior
Somatopleura
Cavidade Pericrdica
Esplancnopleura
Tubo endocrdico
Mesocrdio ventral
Epimiocrdio
(D)
Tubo neural
Intestino anterior
Somatopleura
Cavidade Pericrdica
Esplancnopleura
Tubo endocrdico
Epimiocrdio
Mesocrdio ventral
(desaparecendo)
na pgina 372). A separao entre esses ventrculos completada pelo crescimento do

septo ventricular em direo ao colcho endocrdico. Com essa separao (que normalmente ocorre na stima semana do desenvolvimento humano), o corao uma
estrutura com quatro cmaras com um tronco pulmonar conectado ao ventrculo direito e a aorta conectada ao esquerdo.
365
Figura 9.24
Fuso dos rudimentos cardacos esquerdos e

direitos para formar um tubo cardaco nico.
(A) Embrio de pinto ( 30 horas) mostrando
os primrdios do corao pareados, encontrando-se nas linhas medianas ventrais. (B)
Crdia bfida no embrio do pinto causado pelo
impedimento da fuso de dois primrdios cardacos. (A cortesia de K. Linask; B cortesia de
R. L. DeHaan.)
(A)
(B)
Uma questo que surge nesses estudos , como a polaridade direita-esquerda

surge no corao se esses lados comeam igualmente? Por que o lado esquerdo do
corao se torna diferente do lado direito? Estudos em fetos com coraes mal
formados que possuem dois lados direitos ou dois lados esquerdos, mostram uma
correlao entre a presena do bao e o lado esquerdo do corao. Polisplenia (um
(A)
(B)
(C)
Razes articas
Bulbus
cordis
Bulbus
cordis
Ventrculo
Ventrculo
trio
trio
Sulco
bulboventricular
Seio Venoso
Seio venoso
Veias
vitelnicas
21 dias
22 dias
(D)
24 dias
Figura 9.25
(E)
Tronco arterioso
trio direito
Razes
articas
trio esquerdo
trio esquerdo
Bulbus
cordis
Ventrculo
Esquerdo
Ventrculo
direito
Ventrculo
esquerdo
trio
esquerdo
Veias vitelnicas
25 dias
Sulco interventricular
29 dias
Formao da cmara cardaca durante a terceira semana do desenvolvimento humano, mostrando a formao das cmaras a partir de um
tubo simples. Vistas A-D mostram o corao
em desenvolvimento do lado esquerdo; E
uma viso frontal. Embora os trios sejam distintos externamente, no esto separados dentro do corao. Note que h duas razes articas
e que essas se ramificam para formar os arcos
articos (veja Figura 9.27). (Segundo
Langman, 1981, e Larsen, 1993.)
366
Veia cava superior

Septo primrio
Septo atrial
secundrio
Forame primrio
Septo
atrial
primrio
Seio venoso
Canal
trio-ventricular
esquerdo
Colches
endocrdicos
fundidos
Vlvula da
veia cava
inferior
Vlvula
do seio
coronrio
Veia cava inferior

Septo
interventricular
(A)
25 dias
(B)
40 dias
Figura 9.26
Formao das cmaras do corao. (A) Corte

diagramtico transversal do corao humano
de 4,5 semanas. Os septos do rtrio e do ventrculo esto crescendo em direo ao colcho
endocrdico. (B) Seo transversal do corao humano antes do nascimento. O sangue
pode passar do lado direito do corao para o
esquerdo, atravs das aberturas nos septos
primrios e secundrios do trio. (Segundo
Larsen, 1993.)
bao tanto do lado esquerdo como direito do corpo) est associada a coraes com
dois lados esquerdos, enquanto asplenia (ausncia do bao) est associada a coraes com dois lados direitos (Anderson et al., 1990; Ho et al., 1991). O mecanismo
para a assimetria esquerda-direita no entendido, mas Tsuda e colegas (1996)
mostraram uma deposio assimtrica precoce da protena flectina, da matriz extra
celular, a qual pode predispor um lado do corao a se desenvolver diferentemente
do outro (Prancha 33)*.
asos Sangneos
Formao dos V
Vasos
LIMITAES RELATIVAS CONSTRUO DE VASOS SANGNEOS. Existem
trs limitaes principais para a construo de vasos sangneos. A primeira
fisiolgica. Diferentemente de novas mquinas, que no necessitam funcionar at
terem sado da linha de montagem, os organismos novos precisam funcionar mesmo enquanto se desenvolvem. As clulas embrionrias precisam obter nutrientes
antes que exista um intestino, fazer uso do oxignio antes que existam pulmes, e
excretar resduos antes que os rins estejam prontos. Portanto, a fisiologia ciculatria
do embrio em desenvolvimento difere daquela do organismo adulto, e o seu
sistema circulatrio reflete tais diferenas. O alimento no absorvido atravs do
intestino, mas pelo vitelo ou placenta, e a respirao no conduzida pelas guelras ou pulmes, mas atravs da membranas corinicas ou alanticas. Os principais vasos sangneos embrionrios devem ser construdos para servir a essas
estruturas extra-embrionrias.
A segunda limitao evolucionria. O embrio mamfero estender vasos sangneos at o saco vitelnico mesmo no havendo vitelo no interior. Alm disso, o
sangue que deixa o circuito do corao passa por cima do intestino anterior para
formar a aorta localizada dorsalmente. Os seis pares de arcos articos passam por cima
da faringe (Figura 9.27). Nos peixes primitivos, esses arcos persistem e permitem que
*Discutiremos polaridade direita-esquerda no Captulo 16.
Figura 9.27
Os arcos articos do embrio humano. (A) Originalmente, o tronco arterioso bombeia sangue
para a aorta, que se ramifica para ambos os lados do intestino anterior. Os seis arcos articos
tomam sangue da aorta ventral e o permitem fluir para a aorta dorsal. (B) Os arcos comeam a
se desintegrar ou se modificar: as linhas pontilhadas indicam estruturas em degenerao. (C)
Finalmente, os arcos remanescentes so modificados e o sistema arterial adulto formado.
(Segundo Langman, 1981.)
as guelras oxigenem o sangue. Na ave ou mamfero adultos, onde os pulmes oxigenam o sangue, tal sistema faz pouco sentido, mas todos os seis pares de arcos articos
so formados nos embries mamferos e das aves antes que o sistema finalmente seja
simplificado em um nico arco. Dessa maneira, mesmo que nossa fisiologia no requeira tal estrutura, nossa condio embrionria reflita nossa histria evolutiva.
O terceiro conjunto de limitaes fsico. De acordo com a lei dos movimentos
dos fluidos, o transporte mais efetivo de fluidos obtido por grandes tubos. Quando o raio dos vasos sangneos fica menor, a resistncia ao fluxo aumenta de r4 (Lei
de Poiseuille). Um vaso sangneo que metade da largura de outro tem uma resistncia ao fluxo 16 vezes maior. No entanto, a difuso dos nutrientes ocorre somente
quando o sangue flui vagarosamente e tem acesso membrana. Ento temos aqui
um paradoxo: As restries na difuso ordenam que os vasos sangneos sejam
pequenos, enquanto que a lei da hidrulica ordena que os vasos sejam grandes.
Organismos vivos resolveram esse paradoxo desenvolvendo um sistema circulatrio com uma hierarquia no tamanho dos vasos (LaBarbera, 1990). Essa hierarquia
formada muito cedo no desenvolvimento, como pode ser visto em embries de pinto
de 3 dias. Nos ces, o sangue dos vasos grandes (aorta e veia cava) flui 100 vezes
mais rapidamente do que nos capilares. Havendo vasos grandes especializados
para o transporte e pequenos especializados para a difuso (onde o sangue passa a
maior parte do tempo), nutrientes e oxignio podem alcanar as clulas individuais
do organismo em crescimento. Mas essa no a estria completa. Se um fluido sob
presso constante move-se diretamente de um tubo de grande dimetro para um
tubo de pequeno dimetro (como um bico de esguicho), a velocidade do lquido
aumenta. A soluo evolucionria para esse problema foi o surgimento de muitos
vasos pequenos ramificados de um vaso sangneo de maior tamanho, tornando o
corte secional coletivo de todos os vasos pequenos, maior que o daquele do grande
vaso. Esse relacionamento (conhecido como lei de Murray) explica que o cubo do
raio do vaso parental se aproxima da soma dos cubos dos raios de vasos menores. A
construo de qualquer sistema circulatrio precisa negociar entre essas limitaes
fsicas, fisiolgicas e evolucionrias.
(A) 29 dias
Arcos
articos
Tronco arterioso
Aorta dorsal direita
Aorta dorsal esquerda
(B)
49 dias
Artria
cartida
interna
Artrias
cartidas externas
Artria
cartida
comum
Artria
subclvia
direita
Stima artria
intersegmental
Artria
pulmonar
Arco
da
aorta
Duto
arterioso
Aorta
(C) 56 dias
Artria cartida
externa direita
Artria
subclvia
Direita
VASCULOGNESE: FORMAO DE VASOS SANGNEOS DE ILHAS DE SANGUE. A criao de vasos sangneos de novo a partir do mesoderma chamada vascu-
lognese (Pardanaud et al., 1989). No intestino, pulmo, aorta e tambm no revestimento mesodrmico esplncnico do saco vitelnico, uma rede de vasos capilares surge independentemente dentro de seus prprios tecidos (Auerbach et al.,1989;
Pardanaud et al., 1989). Nesses casos, os capilares no aparecem como extenses
cada vez menores de vasos sangneos originados do corao. Pelo contrrio, o
mesoderma de cada um desses rgos contm clulas chamadas angioblastos que se
organizam em vasos capilares. Essa rede de capilares especficos do rgo finalmente
se liga s extenses dos principais vasos sangneos.
No pinto, existem duas fontes de angioblastos (Figura 9.28; Pardanaud et al.,
1996). A primeira fonte o mesoderma paraxial. O mesoderma paraxial ceflico fornece
angioblastos para os vasos sangneos da cabea (Couly et al., 1995), enquanto o
mesoderma paraxial somtico do tronco contm angioblastos que migram para formar
os vasos da parede do corpo, membros, rins e pores dorsais da aorta. A segunda
fonte de angioblastos o mesoderma esplancnopleural. Esses angioblastos colonizam
367
Artria cartida
externa esquerda
Artria cartida
comum esquerda
Artria
subclvia
Esquerda
Ligamento
Aorta ascendente
Artria pulmonar
Aorta descendente
368
Figura 9.28
Tubo neural
Duas fontes de angioblastos no embrio

do pinto formam os endotlios de regies separadas. Os angioblastos dos
somitos migram atravs do mesoderma
intermedirio (rim), somatopleura e regies laterais do assoalho da aorta. Os
angioblastos da esplancnopleura formam
os vasos do intestino e rgos viscerais
assim como do assoalho da aorta. Os
angioblastos do assoalho da orta tambm
produzem clulas sangneas. (Segundo
Pardanaud et al., 1996.)
Mesoderma
intermedirio
Somito
Somito
Aorta
Somatopleura
Broto dos
membros
Veia
cardinal
Esplancnopleura
Notocorda
Aorta
1 dias
Intestino
3 dias
Figura 9.29
Vasculognese. A formao de vasos sangneos primeiro vista na parede do saco

vitelnico onde (A) mesnquima indiferenciado se condensa para formar (B) conjuntos
de clulas angiogenticas. (C) O centro desses agregados forma as clulas sangneas, e
a parte externa dos agregados desenvolve as
clulas endoteliais dos vasos sangneos. (Segundo Langman, 1981.)
(A)
os rgos viscerais, intestino e o assoalho da aorta. Esses angioblastos so na realidade hemangioblastos, porque no s geram revestimento endotelial como tambm
fornecem os precursores das clulas sangneas (Pardanaud et al.,1996).
A agregao de clulas do mesoderma esplncnico crucial para o progresso do
desenvolvimento amnitico porque esses agrupamentos angiogenticos (por vezes
chamados de ilhas de sangue) que forram o saco vitelnico produzem as veias vitelnicas
(onfalomesentricas) que trazem nutrientes para o corpo e transportam os gases de
ida e volta para os lugares onde so realizadas trocas gasosas (Figura 9.29). Essas
clulas so primeiro vistas na rea opaca no estgio da dobra da cabea na embriognese do pinto, quando o sulco primitivo est totalmente estendido (Pardanaud et al.,
1987). Esses cordes de clulas logo cavitam transformando-se em tubos com parede
dupla anlogos aos tubos duplos do corao. A parede interna se torna o revestimento liso de clulas endoteliais do vaso, e as clulas externas se tornam msculo liso.
Entre essas camadas existe a lmina basal contendo um tipo de colgeno especfico
para vasos sangneos. Pensa-se que essa lmina basal inicia a diferenciao dos
tipos de clulas no vaso (Murphy e Carson, 1978; Kubota et al., 1988). As clulas
centrais das ilhas de sangue se diferenciam em clulas sangneas embrionrias. Com
o crescimento, as ilhas de sangue finalmente se juntam para formar a rede capilar
drenando as duas veias vitelnicas, que trazem alimento e clulas sangneas para o
corao recm- formado.
Trs fatores de crescimento podem ser responsveis pela iniciao da vasculognese. Um deles, o fator de crescimento fibroblstico bsico (FGF2) necessrio para
a gerao de angioblastos a partir do mesoderma. Quando as clulas do blastodisco
das codornas so dissociadas em cultura, elas no formam ilhas de sangue ou clulas
endoteliais. No entanto, quando essas clulas so cultivadas em FGF2, surgem ilhas
de sangue na cultura, e essas formam clulas endoteliais (Flamme e Risau, 1992). O
FGF2 sintetizado na membrana corioalantica do embrio de pinto e responsvel
pela vascularizao desse tecido (Ribatti et al., 1995). A segunda protena o fator de
(B)
Endoderma do saco vitelnico
Clulas mesenquimatosas
Agregado de clulas angiogenticas
(C)
Clula sangnea primitiva
Clula endotelial
(A)
Mesoderma
perifrico Avascular
Sulco
ectodrmico apical
Veia
marginal Anterior
Somitos
Estgio
Artria Subclvia
Figura 9.30
Vascularizao do membro anterior do pinto. (A) Desenvolvimento do sistema vascular durante

o desenvolvimento precoce do broto alar do pinto. A periferia do broto avascular; e mais
regies avasculares se formaro nas regies onde os condrcitos iro se condensar para formar
os precursores cartilaginosos para o osso. (B) Vista dorsal do broto alar injetado com tinta da
China no estgio 22. (A segundo Feinberg, 1991; B de Feinberg e Cafasso, 1995; fotografia
cortesia do Dr. R. N. Feinberg.)
crescimento vascular endotelial (VEGF), que parece ser especfica para permitir a
diferenciao dos angioblastos e sua multiplicao para formar os tubos endoteliais.
Alm disso, os receptores para VEGF so encontrados nas ilhas de sangue e em
outros lugares onde VEGF pode estar ativo (Millauer et al., 1993). Se embries de
camundongos no possuem os genes codificando o principal receptor para VEGF
(FlK1 tirosina quinase) as ilhas de sangue do saco vitelnico no aparecem, e a vasculognese no ocorre. Camundongos carentes de genes para o segundo receptor para
VEGF (Flt1 tirosinoquinase), tm as clulas endoteliais e ilhas de sangue diferenciadas, mas essas clulas no so organizadas em vasos sangneos (Fong et al.,1995;
Shalaby et al., 1995). Um terceiro fator, angiopoietina-1, intermedia a interao entre as
clulas endoteliais e os msculos lisos recrutados para cobri-las. Mutaes de cada
uma dessas angiopoietinas ou seus receptores levam a vasos sangneos mal-formados, deficientes em msculos lisos que normalmente os envolvem (Davis et al.,1996;
Suri et al., 1996; Vikkula et al., 1996).
ANGIOGNESE: O SURGIMENTO DOS VASOS SANGNEOS. Vasculognese no
o nico meio de se produzir vasos sangneos. Em outros rgos (notavelmente nos

brotos dos membros, nos rins e no crebro), vasos sangneos existentes se desenvolvem e enviam clulas endoteliais para o rgo em desenvolvimento (Wilson, 1983;
Sariola, 1985). Esse tipo de formao de vaso sangneo, no qual novos vasos emergem da proliferao de vasos sangneos preexistentes chamado angiognese. No
broto do membro anterior, por exemplo, a rede de capilares derivada do brotamento
de clulas procedentes da aorta (Evans, 1909; Feinberg, 1991). Dentro dessa rede de
capilares, uma artria central (que se torna a subclvia) forma o principal vaso de
alimentao. O sangue retorna ao corpo atravs da veia marginal que se forma dos
capilares anteriores e posteriores (Figura 9.30). Acredita-se que as regies formadoras
de rgos secretam fatores de angiognese que promovem a mitose e a migrao de
clulas endoteliais para aquela rea. VEGF (mencionado anteriormente como um fator
de vasculognese) tambm promove a migrao de clulas endoteliais procedentes de
vasos sangneos da superfcie do rgo para esses rgos. O grau de vascularizao
dos membros est ligado aos nveis de VEGF no broto dos membros, e os padres
espao-temporais da expresso de VEGF correlacionam-se bem com a hora e o lugar
onde vasos sangneos penetram nos rins e no crebro (Figura 9.31; Breier et al., 1992;
Millauer et al., 1993; Flamme et al., 1995).
(B)
Veia marginal
posterior
369
370
Figura 9.31
Produo do fator da angiognese pelo tecido

fetal de camundongo. Hibridizao in situ mostra que mRNA para VEGF secretado sintetizado pelos glomrulos do rim fetal do camundongo de 15 dias. A fotografia em campo iluminado esquerda corresponde a auto-radiografia em campo escuro direita. (de Breier et
al., 1992, cortesia de W. Risau.)
Alguns rgos parecem produzir seus prprios fatores de angiognese. A placenta um rgo cuja funo depende do redirecionamento de vasos sangneos existentes dentro dela. Quando a placenta primeiro formada, induz a angiognese secretando a proliferina (PLF), um fator parecido com o hormnio de crescimento. Quando os
vasos sangneos placentrios se estabeleceram (no camundongo aps o dcimo
segundo dia), a placenta secreta uma protena relacionada proliferina (PRP), um
peptdeo que age como um inibidor da angiognese (Jackson et al., 1994). O osso em
desenvolvimento um outro rgo que redireciona vasos sangneos para si enquanto est em formao. Como j foi mencionado, a cartilagem normalmente um tecido
avascularizado, exceto quando os capilares invadem a placa de crescimento para converter cartilagem em osso. Cartilagem hipertrfica (mas no cartilagem em diviso ou
madura) secreta um fator de angiognese de 120-kDa (Alini et al., 1996). interessante
que esse fator produzido somente quando os condrcitos hipertrficos precoces
foram expostos a vitamina D. Isso ajudaria explicar as deformidades nos ossos vistas
em pacientes com raquitismo.
A angiognese crucial no crescimento de qualquer tecido, incluindo os tumores.
Os tumores so bem sucedidos somente quando so capazes de direcionar para si
os vasos sangneos. Portanto, os tumores secretam fatores de angiognese. A habilidade de inibir tais fatores pode se tornar uma maneira extremamente importante para
prevenir o crescimento de tumores e metstases (Fidler e Ellis, 1994).[mesend3.html]
CIRCULAO EMBRIONRIA. O sistema circulatrio embrionrio para e do embrio
do pinto e saco vitelnico mostrado na Figura 9.32. O sangue bombeado atravs da
aorta dorsal passa sobre os arcos articos e se direciona para baixo, entrando no
embrio. Parte desse sangue deixa o embrio atravs das artrias vitelnicas entrando
no saco vitelnico. Nutrientes e oxignio so absorvidos, e o sangue retorna atravs
das veias vitelnicas para o corao atravs do seio venoso. Nos embries de mamferos, alimento e oxignio so obtidos da placenta. Dessa maneira, embora o embrio de
mamfero possua vasos anlogos s veias vitelnicas, o principal suprimento de oxignio e alimento procede da veia umbilical, que une o embrio com a placenta (Figura
9.33). Essa veia, que leva o sangue oxigenado e carregado de alimento de volta ao
embrio derivada do que seria nas aves a veia vitelnica direita. A artria umbilical,
carregando os resduos da placenta, derivada do que teria sido a artria alantica do
pinto. Ela estende-se da poro caudal da aorta e prossegue ao longo da alantide e
emergindo depois para a placenta.
Aps a sua entrada no corao embrionrio do mamfero, o sangue bombeado
para uma srie de arcos articos que circundam a faringe para trazer o sangue dorsalmente. Nos mamferos, o membro esquerdo dos quarto par de arcos articos o
nico que sobrevive para alcanar a aorta. O membro direito desse par se tornou a
raiz da artria subclvia. O terceiro arco artico se modificou para formar artrias
cartidas comuns, que fornecem sangue para o crebro e cabea. O sexto arco
modificado para formar a artria pulmonar; o primeiro, o segundo e o quinto arcos
degeneram. A aorta e a artria pulmonar, portanto, tm uma abertura para o corao
em comum, durante a maior parte do seu desenvolvimento. Finalmente, divises se
Veia vitelnica
anterior
(B)
(A)
371
Arcos articos
Corao
Aorta
dorsal
Veia
vitelnica
Artria
vitelnica
Capilares
Seio terminal
Figura 9.32
formam dentro do tronco arterioso para criar dois vasos diferentes. Somente quando a primeira respirao do animal recm-nascido indica que os pulmes esto preparados para a oxigenao do sangue, o corao se modifica para bombear sangue
separadamente para a artria pulmonar.
Veia cardinal
posterior
Vilosidades
corinicas
Artria
e veia
vitelnica
Sistema circulatrio do embrio de ave precoce. (A) Construo da vasculatura em um

somito 7 de embrio de codorna corado com
um anticorpo fluorescente que reconhece clulas endoteliais. A ilhas de sangue podem
ser vistas nas margens. (B) Sistema circulatrio de um embrio de pinto de 44 horas. Esta
viso mostra artrias em cor; as veias esto
pontilhadas. O seio terminal o limite externo
do sistema circulatrio e o local da gerao
das clulas do sangue. (Montagem fotogrfica de Pardanaud et al., 1987; cortesia do Dr.
F. Dieterlen-Livre; B segundo Carlson, 1981.)
Veia cardinal comum

Aorta dorsal
Broto pulmonar
Bolsa farngea IV
Arco artico III
Raiz artica ventral
Veia cardinal anterior

Placenta
Veia
umbilical
Artria
cartida
Interna
Artria
Umbilical
Saco vitelnico
Figura 9.33
Sistema circulatrio de um embrio humano de

4 semanas. Embora nesse estgio todos os
vasos sangneos principais estejam pareados
esquerda e direita, somente so mostrados
os vasos direita. As artrias esto coloridas.
(de Carlson, 1981.)
372
&
Especulaes
Redirecionando o Fluxo Sangneo no

Mamfero Recm-nascido
to a necessidade de conseguir
oxignio e nutrientes para seus tecidos, a
fisiologia do feto mamfero difere drasticamente daquela do adulto. A principal
diferena a falta de pulmes e intestinos
funcionais. Todo oxignio e nutrientes
devem provir da placenta. Isso levanta
duas questes. Primeiro, como o feto obtm oxignio do sangue materno? E segundo, como a circulao do sangue
redirecionada aos pulmes uma vez que o
cordo umbilical for cortado e a respirao se fizer necessria?
A soluo para o problema do feto conseguir oxignio do sangue de sua me envolve o desenvolvimento de uma hemoglobina fetal. A hemoglobina das hemcias
fetais difere um pouco daquela do corpsculo adulto. Dois dos quatro peptdeos das
cadeias da hemoglobina do adulto e do feto
so idnticos - a cadeia alfa () - mas a
hemoglobina do adulto tem duas cadeias
beta (), onde o feto tem duas cadeias gama
() (Figura 9.34). Cadeias normais fixam o
regulador natural difosfoglicerato, que ajuda na descarga do oxignio. As cadeias
isoformas no fixam difosfoglicerato to
bem e portanto tm uma maior afinidade
pelo oxignio. No ambiente de baixa
oxigenao da placenta, o oxignio liberado da hemoglobina adulta. Nesse mesmo ambiente, a hemoglobina fetal no distribui oxignio, mas o fixa. Essa pequena
diferena na afinidade pelo oxignio media
a transferncia do oxignio da me para o
feto (Figura 9.34). No feto, a mioglobina dos
msculos fetais tem uma afinidade ainda
maior por oxignio, fazendo com que molculas de oxignio passem de hemoglobina
fetal para armazenagem e uso pelos msculos fetais. A hemoglobina fetal no nociva
ao recm-nascido, e em humanos, a reposio de clulas sangneas contendo hemoglobina fetal por clulas sangneas contendo hemoglobina adulta no se completa
at 6 meses aps o nascimento.*
Hemoglobina
fetal
H
Saturao com O2 (%)
MBORA O FETO EM DESENVOLVIMENTO divida com o adul-
em
ia
em
fe
ta
ia
is
e
at
rn
ai
Hemoglobina
adulta
Presso de O2
Figura 9.34
Transferncia de oxignio da me para o feto em embries humanos. Molculas adultas e fetais

de hemoglobina diferem em suas subunidades proticas. A cadeia fetal liga difosfoglicerato
menos avidamente que o faz a cadeia adulta. Conseqentemente, a hemoglobina fetal pode ligar
o oxignio mais eficientemente que a hemoglobina adulta. Na placenta, h um fluxo lquido de
oxignio (seta) do sangue materno (que cede oxignio ao tecido com menor presso de oxignio)
para o sangue fetal, que ainda o est recolhendo.
Mas uma vez que o feto no est conseguindo oxignio da me, como ele reestrutura sua circulao para conseguir
oxignio de seus prprios pulmes? Durante o desenvolvimento fetal, uma abertura - o duto arterioso - direciona a passagem do sangue da artria pulmonar para a
aorta (e conseqentemente para a placenta). Como o sangue no retorna da veia
pulmonar no feto, mamferos em desenvolvimento tm que ter alguma outra maneira de obter sangue no seu ventrculo
esquerdo para ser bombeado. Isso conseguido pelo forame oval, uma abertura
no septo separando o trio direito do esquerdo. O sangue pode entrar no trio direito, passar pelo forame em direo ao
*A base molecular para essa mudana
nas globinas ser posteriormente discutida
no Captulo 11.
trio esquerdo, e depois entrar no ventrculo esquerdo (Figura 9.35). Quando ocorre a primeira respirao, o oxignio no sangue faz com que os msculos que envolvem o duto arterioso feche a abertura. O
aumento da presso sangnea no lado esquerdo do corao causa o fechamento do
septo sobre o forame oval, com isso separando a circulao sistmica e pulmonar**.
Dessa maneira, quando comea a respirao, a circulao respiratria desviada da
placenta para os pulmes. [other.html#4]
**Em algumas crianas, o septo no se fecha, e o formen oval deixado aberto. Em
geral, a abertura to pequena que essas crianas
no apresentam sintomas fsicos, e o formen
finalmente acaba se fechando. No entanto, se o
segundo septo falha na sua formao, a abertura
septal do trio pode causar um aumento do lado
direito do corao, que pode levar falncia
cardaca durante a idade adulta jovem.
De e para a cabea
Veia cava superior
FETO
De e para o brao
Artria
pulmonar
Ducto
arterioso
De e para o brao
Forame oval
est aberto
Forame oval
Veia cava
inferior
Ducto venoso
Pulmo
Parede
corporal
Rim
Fgado
Veia
umbilical
De e para o
Intestino
Artrias
umbilicais
NEONATO
Ducto arterioso
se fecha
De e para as pernas
Forame oval
se fecha
Placenta
Figura 9.35
Redirecionamento do fluxo sangneo no nascimento. A expanso de ar para os pulmes causa

alteraes de presso que redirecionam o fluxo de sangue para o neonato. O ducto arterioso se
comprime e se fecha, rompendo a conexo entre a aorta e a artria pulmonar, e o forame oval, uma
passagem entre os trios esquerdo e direito, tambm se fecha. Dessa maneira, a circulao
pulmonar fica separada da circulao sistmica.
O Desenvolvimento de clulas sangneas

Tronco
O Conceito de ClulaClula-T
Enquanto muitas das clulas que possumos hoje so as mesmas clulas que adquirimos quando ramos embries, existem diversas populaes de clulas que esto
constantemente se regenerando. Perdemos e repomos aproximadamente 1011 hemcias
e pequenas clulas intestinais cada dia. De onde vm essas clulas de reposio? Elas
so procedentes de populaes de clulas-tronco. Uma clula-tronco capaz de
373
374
Figura 9.36
Auto-manuteno
Maturao e
diferenciao
Modelo da dinmica da proliferao e diferenciao da clula-tronco. A proliferao est representada por crculos horizontais, e a diferenciao se d ao longo do eixo vertical progredindo
para baixo, para tipos mais diferenciados de clulas. As clulas-tronco iniciais (S) podem
permanecer quiescentes (na fase G0 ) ou entrar no ciclo celular. Clulas-tronco que produzem
mais clulas-tronco permanecem em um nvel, mas podem se dividir para produzir um tipo de
clula de transio que cai para o prximo nvel. Em cada nvel mais baixo, a probabilidade de
cair ainda mais na prxima diviso aumenta. Finalmente, uma clula madura diferenciada
gerada. (Segundo Potten e Loeffer, 1990).
Clula-tronco
Fase S
Ciclo
celular
Mitose (M)
Diferenciao
Reabastecendo nicho
do tronco (renovao
/regenerao)
Clula-tronco intermediria
tipo 1
Clula-tronco
intermediria tipo 2
Clula-tronco
intermediria tipo 3
Blastoclula comprometida
com a diferenciao
Clula madura
totalmente diferenciada
M Reproduo (diviso / mitose)

Auto-reproduo / replicao
Reproduo / Replicao
extensa proliferao, criando mais clulas-tronco (auto-renovao) assim como uma

prognie celular mais diferenciada. Clulas-tronco so, na realidade, uma populao
embrionria de clulas, que sofrem um desenvolvimento posterior dentro de um organismo adulto. Nossas clulas sangneas, clulas das criptas intestinais, epiderme e
espermatcitos (em homens) so populaes em estado estvel de equilbrio no qual
a produo de clulas equilibra-se com a perda de clulas (Hay, 1966). Na maioria dos
casos, as clulas-tronco podem regular a produo de mais clulas-tronco ou mais
clulas diferenciadas, quando o equilbrio estressado por leso ou pelo meio ambiente. (Isso percebido pelo aumento da produo de uma grande quantidade de
hemcias quando o organismo sofre anoxia.) As clulas-tronco foram identificadas em
todos os tecidos mencionados anteriormente, mas elas so mais estudadas no desenvolvimento das hemcias.
Potten e Loeffler (1990) apresentaram uma viso na qual algumas clulas-tronco
so potencialmente clulas-tronco no-cclicas presas em Go, enquanto outras clulas-tronco esto ativamente no ciclo celular. Uma clula-tronco em ciclo, normalmente
se divide para criar mais clulas-tronco, mas tambm pode gerar um tipo de clulatronco transitrio intermedirio (T1). Uma clula T1 pode regenerar-se, mas normalmente prossegue para produzir um segundo tipo de clula transitria, T2. (Sob certas
condies, uma clula T1 pode regenerar a clula-tronco original se a populao de
clulas-tronco original estiver muito esgotada.) A clula T2 pode se manter, mas normalmente se divide para criar clulas T3. Finalmente, um tipo de clula transitria
produzida, que sempre amadurece para um tipo de clula diferenciada (Figura 9.36).
Assim, o corpo vertebrado retm populaes de clulas-tronco, e essas clulas-tronco podem produzir tanto populaes de clulas-tronco como de clulas que passaro
por um desenvolvimento futuro.
O caminho do desenvolvimento pelo qual uma clula-tronco passa depende do
meio molecular no qual ela reside. Isso se tornou aparente quando evidncias experimentais mostrou que hemcias (eritrcitos), clulas brancas (granulcitos, neutrfilos
e plaquetas), e linfcitos compartilham de um precursor comum, a clula-tronco
hematopoitica pluripotencial (por vezes chamada de clula-tronco hematopotica
repopuladora a longo prazo).
Clulas
Clulas--Tronco Pluripotenciais e
Microambientes Hematopoticos
O CFU-S. A clula-tronco hematopotica pluripotencial uma das clulas mais impressionantes do nosso corpo. A partir dela iro surgir eritrcitos, neutrfilos,
basfilos, eosinfilos, plaquetas, mastcitos, moncitos, macrfagos dos tecidos,
osteoclastos, e os linfcitos T e B. A existncia de uma clula-tronco hematopotica
pluripotencial foi mostrada por Till and McCulloch (1961), que injetaram clulas da
medula ssea em camundongos fatalmente irradiados, procedentes da mesma linhagem gentica que os doadores da medula. (A irradiao mata as clulas
hematopoiticas do hospedeiro, permitindo que se veja as novas colnias do camundongo doador.) Algumas dessas clulas doadoras produzem ndulos discretos
no bao do animal hospedeiro (Figura 9.37). Estudos microscpicos mostraram que
esses ndulos so compostos de precursores de eritrcitos, granulcitos e plaquetas.
Assim, uma nica clula oriunda da medula ssea foi capaz de formar muitos dos
diferentes tipos de clulas sangneas. A clula responsvel foi chamada de CFU-S,

(colony-forming unit), unidade formadora de colnias do bao. Estudos mais avanados usaram marcadores cromossmicos para provar que os diferentes tipos de
clula em uma colnia foram formados de uma mesma CFU-S. Aqui, clulas da medula foram irradiadas para que poucas pudessem sobreviver. Muitas das que sobreviveram tinham cromossomos anormais que puderam ser detectados microscopicamente. Quando essas clulas CFU-S irradiadas foram injetadas em um camundongo
cujas clulas-tronco formadoras de sangue haviam sido destrudas, cada clula da
colnia do bao, fosse precursora de granulcito ou de eritrcito, apresentou a
mesma anormalidade cromossmica (Becker et al., 1963). Uma parte importante do
conceito de clula-tronco o requisito de que a clula-tronco seja capaz de formar
mais clulas-tronco alm dos seus tipos de clulas diferenciadas. E realmente isso
tem acontecido. Quando colnias do bao derivadas de uma nica CFU-S so
resuspensas e injetadas em outros camundongos, muitas colnias do bao so
vistas emergir (Jurskov e Tkadlecek, 1965; Humphries et al., 1979). Assim, vemos
que uma nica clula da medula consegue formar numerosos tipos de clulas diferentes e tambm pode sofrer auto-renovao; em outras palavras, a CFU-S uma
clula-tronco hematopotica pluripotencial.
A informao anterior indica que embora as CFU-S possam gerar diversos tipos
de clulas sangneas, elas no so capazes de gerar linfcitos. Essa concluso
amparada pelos experimentos de Abramson e seus colegas (1977), que mostrou que
ambos CFU-S e linfcitos so derivados de uma outra clula-tronco hematopotica
pluripotencial, por vezes chamada de unidade formadora de colnias de clulas
mielides e linfides, ou CFU-M,L. Quando eles injetaram clulas da medula ssea
irradiadas em camundongos com deficincia hereditria na formao de clulas sangneas, os pesquisadores encontraram as mesmas anormalidades cromossmicas
em colnias do bao e em linfcitos circulantes. Esse trabalho foi confirmado por
estudos nos quais clulas da medula foram injetadas com certos tipos de vrus que
se incorporam ao DNA celular aleatoriamente. Os mesmos genes derivados viralmente
foram encontrados nos mesmos lugares do genoma, nos linfcios e clulas sangneas (Keller et al., 1985; Lemischka et al., 1986). Em 1995, Berardi e colegas isolaram uma frao de clulas que pode ser a CFU-M,L humana. Eliminando todas as
clulas que se dividem quando expostas a citocinas que iriam ativar clulas-tronco, foi deixada uma clula nucleada para cada 10.000 originalmente presentes na
medula ssea. Essas clulas podem gerar ambas linhagens, sangnea e linfide.
LINHAGENS SANGNEAS E LINFOCTICAS. A Figura 9.38 sumariza diversos estu-
dos. A primeira clula-tronco hematopotica pluripotencial a CFU-M. L. O desenvolvimento dessa CFU-M,L parece ser dependente do fator de transcrio SLC. Camundongos carentes dessa protena morrem por ausncia de todas linhagens de clulas
sangneas e linfocticas. SLC pode especificar o mesoderma ventral como o destino de
uma clula sangnea ou pode envolver a formao ou manuteno de clulas CFU-M,L
(Porcher et al., 1996; Robb et al., 1996). Essa clula d origem s CFU-S (clulas sangneas)
e aos CFU-L (linfcitos). As CFU-S e as CFU-L tambm so clulas-tronco pluripotenciais
porque sua prognie pode se diferenciar em numerosos tipos de clulas. A prognie
imediata da CFU-S, no entanto, so clulas-tronco restritas s linhagens. Cada uma
pode produzir somente um tipo de clula alm de renovar a si mesma. A BFU-E (unidade
formadora de rompimento de eritride), por exemplo, formada da CFU-S e ela pode
formar somente um tipo de clula alm de si mesma. Essa nova clula a CFU-E (unidade
formadora de colnia de eritride), a qual capaz de responder ao hormnio eritropoetina
para produzir o proeritroblasto, o primeiro membro diferenciado reconhecvel da linhagem do eritrcito. Eritropoetina uma glicoprotena que rapidamente induz a sntese do
mRNA para globina (Krantz e Goldwasser, 1965). Ela produzida predominantemente no
rim, e sua sntese responde s condies ambientais. Se o nvel de oxignio do sangue
cair, a produo de eritropoeitina aumentada, um evento levando produo de mais
375
Figura 9.37
Colnias formadoras de sangue isoladas.

Quando a medula ssea contendo clulastronco hematopoiticas injetada em um camundongo irradiado, discretas colnias de
clulas de sangue so vistas na superfcie do
bao desse camundongo. (de Till, 1981, cortesia de J. E, Till.)
376
CLULASTRONCO RESTRITIVAS DE LINHAGEM (COMPROMETIDAS)
CLULAS-TRONCO
PLURIPOTENTES
CLULAS EM
DIFERENCIAO
Clula T
Clula pr-T
Clula-tronco
linfide
F ent
SC mbi
oa
cr
CLULAS
DIFERENCIADAS
Clula T ativada
Clula plasma
Clula pr-B
Clula-B
Basfilos
Clula-tronco
de granulcitos
Eosinfilos
Mic
SCF i e n t e
mb
roa
Neutrfilos
Clula-tronco
totipotente autorenovadora
Moncito
Clula-tronco
mielide
Macrfagos
CFC-Meg
Megacaricito
Plaquetas
Eriotroblasto
Proeritroblasto
Reticulcito
Clulas sangneas
vermelhas (hemcias)
(Eritrcitos)
Figura 9.38
Um modelo para a origem de clulas linfides e de sangue de mamferos. (Outros modelos so

consistentes com os dados e este sumariza aspectos de diversos modelos). EPO, eritropoietina;
G-CSF, fator estimulador de colnias de granulcitos; GM-CSF, fator estimulador de colnias
de granulcitos-macrfagos; IL, interleucina; LIF, fator inibidor de leucemia; M-CSF, fator
estimulador de colnias de macrfagos; SCF, fator de clulas-tronco. (Segundo Nakauchi e
Gachelin, 1993.)
hemcias. Com a maturao, as hemcias se tornam eritroblastos, capazes de sintetizar enormes quantidades de hemoglobina. Finalmente, o eritroblasto mamfero expele
o seu ncleo, tornando-se um reticulcito. Os reticulcitos j no conseguem mais
sintetizar mRNA da globina, mas ainda conseguem traduzir mensagens existentes na
globina. O estgio final da diferenciao o eritrcito. Nesse estgio no h diviso,
sntese de RNA ou sntese de protena. As clulas deixam a medula ssea para exercer
o seu papel de fornecedoras de oxignio aos tecidos corporais. Similarmente, existem
clulas-tronco restritivas de linhagem para plaquetas e granulcitos (neutrfilos,
basfilos e eosinfilos) e macrfagos.
Alguns fatores de crescimento hematopoitico (tal como o IL-3) estimulam a
diviso e a maturao de outras clulas-tronco mais primitivas, desse modo aumentando o nmero de tipos de clulas sangneas. Outros fatores (como a
eritropoetina) so especficos somente para algumas linhagens de clulas. A habilidade da clula em responder a esses fatores depende da presena de receptores
para esses fatores na sua superfcie. O nmero desses receptores muito baixo.
Existem somente cerca de 700 receptores para eritropoetina em uma CFU-E, e a
maioria das outras clulas progenitoras tem o mesmo baixo nmero de receptores
do fator de crescimento. A exceo o receptor para o fator de estimulao de
colnia de macrfagos -M-CSF, tambm conhecido como CSF-1- do qual pode
haver at 73.000 por clula em algumas clulas progenitoras.
MICROAMBIENTES HEMATOPOITICOS INDUTIVOS. Alguns fatores de cresci-
mento hematopoitico so formados por clulas estromticas (fibroblastos e outros

elementos do tecido conjuntivo) da prpria medula ssea. Outros fatores de crescimento viajam atravs do sangue e so retidos pela matriz extracelular das clulas
estromticas. No bao, as clulas-tronco esto comprometidas com o desenvolvimento do eritride. Na medula ssea, o desenvolvimento de granulcitos predomina. O caminho do desenvolvimento percorrido pelos descendentes de uma clulatronco pluripotencial depende de quais fatores de crescimento ela encontra, e isso
determinado pelas clulas estromticas da medula ssea. Wolf e Trentin (1968) demonstraram que interaes de curto alcance entre as clulas estromticas e as clulas-tronco determinam o destino do desenvolvimento da prognie das clulas-tronco. Esses investigadores colocaram plugues de medula ssea no bao e, em seguida, injetaram clulas-tronco. As colnias no bao eram predominantemente eritrides,
ao passo que aquelas que se formaram nos plugues de medula eram predominantemente granulcitos. De fato, aquelas colnias que cobriam as bordas, se tornaram
predominantemente eritrides no bao e granulocticas na medula. As regies de
determinao so referidas como microambientes hematopoiticos indutivos (HIMs)
As clulas estromticas da medula ssea criam HIMs atravs da sua habilidade de
agregar fatores de crescimento hematopoitico (Hunt et al., 1987; Whitlock et al.,
1987). GM-CSF e o fator de crescimento multilinhagens IL-3 ligam-se ao
glicosaminoglicano heparan sulfato do estroma da medula ssea (Gordon et al., 1987;
Roberts et al., 1988). Alm disso, eles permanecem ativos quando ligados. Desse
modo, os fatores de crescimento podem ser concentrados e compartimentalizados,
estimulando clulas-tronco em uma rea para se diferenciarem em um tipo de clula,
permitindo que esse mesmo tipo de clula-tronco em outra rea se diferencie em outro
tipo de clula. Sem esses fatores de crescimento, as clulas-tronco morrem.
Desenvolvimento Osteoclstico
Como vimos, as clulas-tronco so influenciadas por numerosos fatores de crescimento hematopoitico. Alm disso, esses fatores so, eles mesmos, influenciados
pelo meio hormonal do organismo. Esse fato pode ser de extrema importncia na
osteoporose ps-menopausa. A perda da funo ovariana em muitas fmeas de
mamferos causa uma perda de massa ssea que pode ser freqentemente prevenida
377
378
pelo fornecimento de estrgeno ao indivduo, e essa perda ssea foi associada com
o aumento da produo de osteoclastos. Acredita-se que o osteoclasto (clula responsvel para formar buracos nos ossos, como descrito anteriormente) procedente da mesma clula-tronco que os macrfagos e granulcitos, o CFU-GM (Kurihara
et al., 1990; Hattersley et al., 1991). O fator de crescimento interleucina 6 (IL-6)
estimula a produo de osteoclastos. No entanto, a produo de IL-6 inibida pelo
estrgeno que, quando adicionado s clulas de medula de camundongo em cultura, tanto a produo de IL-6 como a de osteoclastos so inibidas (Girasole et al,
1992). Jilka e colegas (1992) mostraram que a remoo dos ovrios do camundongo
causa um aumento no nmero de CFU-GMs, acentuando o desenvolvimento do
osteoclasto, e um aumento no nmero de osteoclastos encontrados no osso. Essas
mudanas podem ser prevenidas injetando nesses camundongos estrgeno ou IL6. Isso sugere que o estrgeno normalmente suprime a produo de IL-6 e a formao de osteoclastos em fmeas de mamferos, e que a perda ssea ps-menopausa
pode ser devida produo de novos osteoclastos pela IL-6.* [mesend4.html]
Locais de Hematopoiese
Nas espcies avcolas e anfbias, as primeiras clulas do sangue derivam do vitelo ou
saco vitelnico. Essa populao celular, no entanto, transitria; as clulas-tronco
hematopoiticas que perduram por toda vida do organismo so derivadas da rea
mesodrmica que envolve a aorta. Isso foi demonstrado no pinto atravs de uma srie
de experimentos elegantes por Dieterlen-Livre, que enxertou o blastoderma de um
*Ento, como os machos - que no tm ovrios ou mesmo estrgeno - normalmente no sofrem
perda ssea osteoportica? Parece que a testosterona tambm suprime o desenvolvimento osteoclstico
(Bellido et al., 1995). Nos seres humanos machos, a produo de testosterona normalmente mantida
com a chegada da idade. Dada a fisiologia do osteoclasto, ns podemos apreciar a intuio presciente
de H. L. Menken (1919): A vida uma luta, mas no contra o pecado ou o Poder Econmico, ou
contra o malicioso magnetismo animal, mas contra os ons de hidrognio.
(B)
Clula
de pinto
Clula
de codorna
Figura 9.39
Mapeamento de clulas sangneas por quimeras pinto-codorna. (A) Fotografia de uma quimera de saco vitelnico onde o blastoderma de
uma codorna foi transplantado para o saco
vitelnico de um pinto. (B) Fotografia de clulas de pinto e de codorna no timo de um animal
quimrico, mostrando a diferena na colorao
nuclear. As clulas linfides so todas de pinto, enquanto as clulas estruturais do timo so
originrias da codorna. (C) Seo atravs da
aorta de um embrio de pinto de trs dias, mostrando as clulas (setas) que do origem s clulas-tronco hematopoiticas. Se clulas dessa
regio forem retiradas de embries de codorna
e colocadas em embries de pinto, os embries
de pinto tero sangue de codorna. (de Martin
et al., 1978, e Dieterlen-Livre e Martin, 1981,
fotografias cortesia de F. Dieterlen-Livre.)
(A)
(C)
pinto em um vitelo de codorna japonesa (Figura 9.39). As clulas do pinto so facilmente distinguidas daquelas da codorna porque o ncleo celular da codorna escurece
muito mais (devido a seus densos nuclolos), assim fornecendo uma marca permanente para a distino entre os dois tipos de clulas. Usando essas quimeras do saco
vitelnico, Dieterlen-Livre e Martin (1981) mostraram que as clulas-tronco do saco
vitelnico no contribuem com clulas para o animal adulto, mas que as verdadeiras
clulas-tronco so formadas dentro dos ndulos do mesoderma que revestem os
principais vasos sangneos e o mesentrio. Esses so os hemangioblastos que so
derivados da esplancnopleura (veja Figura 9.28; Pardanaud et al., 1996). No embrio
de pinto de 4 dias, a parede da orta parece ser a fonte mais importante de clulas
sangneas novas, onde foi encontrado numerosas clulas-tronco hematopoiticas
(Cormier e Dieterlen-Livre, 1988).
Nos mamferos a situao mais controversa, mas comea a ficar bem parecida
com a do pinto. As primeiras ilhas sangneas no embrio do camundongo aparecem
no mesoderma extra-embrionrio e saco vitelnico. Essas clulas parecem ter atividade de CFU-C. Essa populao derivada do saco vitelnico provavelmente transitria ou pode suprir somente as necessidades respiratrias do embrio (produzindo
hemcias nucleadas). No dcimo primeiro dia, clulas-tronco hematopoiticas e clulas CFU-S podem ser encontradas na regio mesodrmica embrionria do camundongo que inclui a aorta, gnadas e mesonefro (a regio AGM; Kubai e Auerbach,
1983; Godlin et al., 1993; Medvinsky et al., 1993). Essas so as precursoras das
clulas sangneas que iro colonizar o fgado e constituir o sistema circulatrio do
feto e do adulto (Medvinsky e Dzierak, 1996). Mller e colegas (1994) propuseram
(A)
Saco vitelnico
(B)
AGM
Aorta dorsal
Prnefro
Mesonefro
Sulco genital
CFU-C no
rudimento heptico
Figura 9.40
Colonizao de fgado de camundongo por duas ondas

de clulas-tronco hematopoiticas. As duas principais fontes das clulas progenitoras hematopoiticas so o saco
vitelnico e a regio AGM. (A) No dia 9 o saco vitelnico
contribui com uma linha precoce de clulas CFU-C que
provavelmente no permanecem muito tempo aps o nascimento, e que produz um populao predominante de
clulas sangneas vermelhas. Essa considerada a principal fonte da primeira onda hematopoitica do fgado.
(B) No dia 10, as clulas derivadas da AGM fornecem
clulas CFU-S e clulas-tronco hematopoiticas
pluripotentes. Essas constituem as principais clulas da
segunda onda. (Segundo Dzierzak e Medvinsky, 1995).
Inco das atividades

hematopoiticas no fgado
AGM
CFU-C
CFU-S
Clula-tronco
hematopoitica
pluripotente
Segunda onda
Primeira onda
Dias aps o coito
379
380
que duas ondas de clulas colonizam o fgado fetal. A populao menor dessas
clulas viriam do saco vitelnico e seriam predominantemente clulas CFU-C. A maior parte da populao viria de stios AGM e constituiriam tanto CFU-S como clulastronco hematopoiticas pluripotentes (Figura 9.40). Essa proposta foi fortalecida
com a descoberta de que camundongos com deficincia no fator de transcrio
AML1 possuem hematopoiese normal dos sacos vitelnicos, mas no tem
hematopoiese (AGM) definitiva (Okuda et al., 1996). Esses camundongos mutantes,
morrem no dia embrionrio 12,5. O seu fgado contm um pequeno nmero de hemcias
nucleadas primitivas, enquanto os fgados controles esto repletos de clulas
sangneas derivadas da AGM. A protena AML essencial para a ativao dos
genes envolvidos na hematopoiese difinitiva. Ao redor da poca do nascimento, as
clulas-tronco do fgado povoam a medula ssea, que assim se torna o principal
local formador de sangue por toda a vida adulta.
QENDODERMA
Faringe
A funo do endoderma embrionrio construir o revestimento de dois tubos dentro do organismo. O primeiro se estende atravs do comprimento do corpo; o tubo
digestivo. Brotos desse tubo formam o fgado, vescula biliar e o pncreas. O segundo, o tubo respiratrio, que cresce a partir do tubo digestivo, finalmente se bifurcando e se transformando nos dois pulmes. Os tubos digestivo e respiratrio
dividem uma cmara comum na regio anterior do embrio; essa regio chamada de
faringe. Bolses epiteliais exteriores da faringe do origem as amgdalas, as glndulas tireide, timo e paratireide.
Os tubos digestivo e respiratrio so ambos derivados do intestino primitivo
(Figura 9.41). Com o avano do endoderma em direo ao centro do embrio, so
formados o intestino anterior e posterior. Antes, a parte terminal oral bloqueada por
uma regio do ectoderma chamada placa oral, ou estomodeu. Finalmente (aproximadamente aps 22 dias nos embries humanos), o estomodeu se rompe, criando a abertura
oral do tubo digestivo. Essa abertura revestida por clulas ectodrmicas. Esse arranjo cria uma situao interessante, porque o ectoderma da placa oral est em contato
com o ectoderma do crebro, qual se curvou ao redor da poro ventral do embrio. As
duas regies ectodrmicas interagem mutualmente uma com a outra. A cobertura da
regio oral forma a bolsa de Rathke e se torna a parte glandular da glndula pituitria.
O tecido neural no assoalho do diencfalo d origem ao processo infundibular, que se
torna a poro neural da pituitria. Assim, a glndula pituitria tem um dupla origem:
essa natureza dupla se reflete em suas funes no adulto.
A poro endodrmica dos tubos digestivo e respiratrio, se inicia na faringe.
Aqui, o embrio de mamfero produz quatro pares de bolsas farngeas (Figura 9.42).
Em vertebrados aquticos, essas estruturas produzem as guelras, porm, as bolsas
farngeas humanas foram modificadas para o ambiente terrestre. Como discutido no
Captulo 7, clulas da crista neural craniana migram para essas bolsas para formar o
componente mesenquimatoso ou cartilaginoso dessas estruturas revestidas de
endoderma. Entre essas estruturas esto os arcos farngeos. O primeiro par das
bolsas farngeas se torna as cavidades auditivas do ouvido mdio e os tubos de
eustquio associados. O segundo par d origem s paredes das amgdalas. O timo
derivado do terceiro par de bolsas farngeas; ele ir direcionar a diferenciao dos
linfcitos T durante os estgios tardios do desenvolvimento. Um par das glndulas
paratireides tambm deriva do terceiro par das bolsas farngeas; o outro par deriva
do quarto. Alm dessas bolsas pareadas, um pequeno divertculo central formado
entre as segundas bolsas farngeas no assoalho da faringe. Essa bolsa de endoderma
e mesnquima brotar da faringe e migrar descendo pelo pescoo para se tornar a
glndula tireide.
(A)
381
(B)
Ndulo de Hensen
Notocorda
Placa neural
Primrdio
cardaco
Ilha
sangnea
Vilosidade corinica
Cavidade
amnitica
Pregas neurais
comeando a se fundir
Intestino anterior
Saco vitelnico
Corao
Celoma
pericardaco
Divertculo
alantico no
pednculo
de conexo
mnio
(secionado)
Intesti
no po
sterio
r
Intestino
mdio
Saco
vitelnico
Portal
intestinal
anterior
Intestino
primitivo
Pednculo
de conexo
Portal
intestinal
posterior
Sulco neural
mnio
Somito
Cavidade
amnitica
Mesoderma somtico
Saco vitelnico
Intestino mdio
(C)
(D)
Estmago
Broto pulmonar
Pncreas
Tireide
Tireide
Faringe
Pulmo
Estomodeu
Neurporo
anterior
Fgado
Corao
Saco
vitelnico
Mesentrio
Dorsal
Placa
da cloaca
Broto
caudal
Pednculo
corporal
Aorta dorsal
Estomodeo
(agora aberto)
Notocorda
Alantide
Bolsa
de Rathke
Corao
Infundbulo
Saco
vitelnico
Fgado
Crebro
Proctodeu
mnio
(secionado)
Tubo Neural
Mesoderma
Somtico
Intestino
Mdio
Mesentrio
dorsal
Cavidade
abdominal
Tubo
neural
Pncreas
dorsal
Peritnio
visceral
Saco vitelnico
Duodeno
Mesentrio
Dorsal
Figura 9.41
Formao do sistema digestivo humano, apresentado aps aproximadamente (A) 16 dias, (B) 18
dias, (C) 22 dias e (D) 28 dias. (Segundo Crelin, 1961.)
Peritnio
parietal
382
(A)
Infundbulo
Hipfise
Notocorda
Processo
mandibular
(da bolsa
farngea I)
Bolsa de Rathke
(C)
(B) 29 dias
Embrio
secionado ao
nvel mostrado
esquerda
32 dias
Broto
lingual lateral
Broto
lingual mediano
Sulcos
farngeos
Expanso do
segundo arco
Arcos
farngeos
Traquia
Duto heptico
Fgado
Entrada para
o esfago
Estmago
(D) 42 dias
Esfago
Vescula biliar
Pednculo vitelnico
Alantide
Membrana da cloaca
Seio urogenital
Intestino caudal
Figura 9.42
Desenvolvimento endodrmico de um embrio

humano de 6 semanas. (A) viso sagital do
embrio. A regio estomacal comeou a se dilatar, e o pncreas est representado por dois
brotos que no final iro se fundir. (B-D) Sees atravs do embrio de 6 semanas nos planos em (A), mostrando os destinos dos sulcos
farngeos. O primeiro sulco forma as passagens auditivas externas, enquanto o segundo
se expande, para finalmente cobrir os sulcos 2,
3 e 4. (Segundo Larsen, 1993.)
Pncreas dorsal
Pncreas ventral
Abertura
auditiva
externa
Cavidade peritoneal
Amgdala
Reto
Tubo auditivo
Seio cervical lateral
Glndula
paratireide
inferior
Glndula
paratireide
superior
O tubo digestivo e seus derivados

Posteriormente faringe, o tubo digestivo se constringe para formar o esfago, o qual
seguido na seqncia pelo estmago, intestino menor e intestino maior. As clulas
endodrmicas geram somente o revestimento do tubo digestivo e de suas glndulas,
pois clulas mesenquimatosas mesodrmicas iro rodear esse tubo provendo os msculos para o peristaltismo.
A Figura 9.42 mostra que o estmago se desenvolve como uma regio dilatada
prxima faringe. Mais caudalmente, se desenvolvem os intestinos, e a conexo entre
o intestino e o saco vitelnico posteriormente cortada. Na terminao caudal do
intestino forma-se uma depresso onde o endoderma encontra o ectoderma
sobrejacente. Aqui, uma fina membrana cloacal separa os dois tecidos. Essa por fim
se rompe, formando a abertura que ir originar o nus. O desenvolvimento das vrias
regies do tubo digestivo ser detalhado no Captulo 17.
Fgado, Pncreas e V
escula Biliar
Vescula
O endoderma tambm forma o revestimento de trs rgos acessrios que se desenvolvem imediatamente em posio caudal ao estmago. O divertculo heptico o
tubo de endoderma que se estende do intestino anterior para dentro do mesnquima
circunjacente. O mesnquima induz o endoderma a se proliferar, ramificar e formar o
epitlio glandular do fgado. Uma poro do divertculo heptico (aquela regio mais
prxima do tubo digestivo) continua a funcionar como um duto de drenagem do
fgado e um ramo desse duto produz a vescula biliar (Figura 9.43).
O pncreas se desenvolve da fuso dos divertculos dorsal e ventral distintos.
Ambos primrdios nascem do endoderma imediatamente caudal ao estmago, e
medida que eles crescem se aproximam um do outro, para finalmente se fundirem. Em
seres humanos, somente o duto ventral sobrevive para transportar enzimas para o
intestino. Em outras espcies (tais como o co), tanto o duto dorsal como o ventral
se esvaziam no intestino. Tal como outros rgo endodrmicos, o pncreas se
Estmago
Broto
Heptico
383
Duto
pancretico acessrio
Duto biliar
Duto
Heptico
Pncreas
dorsal
Vescula
biliar Broto
pancretico
ventral
Vescula biliar
Broto
pancretico
dorsal
(A)
Duto
pancretico
Dorsal
Duto biliar
Vescula biliar
Pncreas
ventral
(B)
Duodeno
Duto
pancretico ventral
Duto
pancretico
ventral
Duodeno
Duto
pancretico principal
(D)
(C)
Figura 9.43
desenvolve atravs de interaes entre o epitlio e seu mesnquima associado.

Ambos tecidos tm especificidades proporcionadas por sua posio ao longo do
eixo ntero-posterior (a ser discutido nos Captulos 16 e 17). Se o epitlio pancretico cultivado num ambiente permissivo na ausncia de mesnquima, ele se diferencia quase inteiramente em clulas de llhotas, secretoras de insulina e glucagon. No
so produzidas estruturas acinares (secretoras de quimotripsina ou amilase) nem
dutos (Gittes et al., 1996). Isso sugere que a condio de ausncia de comando do
epitlio pancretico a de produzir hormnios endcrinos e que as clulas secretoras
e os dutos caractersticos de sua funo digestiva (excrina) so resultado de suas
interaes com o mesnquima. O gene pdx-1 parece fornecer ao epitlio pancretico
a capacidade de responder a seu mesnquima. Camundongos carentes desse gene
no apresentam pncreas, embora seu epitlio seja capaz de se diferenciar em
clulas pr-ilhotas que sintetizam pequenas quantidades de glucagon e insulina
(Johnson et al., 1994; Ahlgren et al., 1996; Offield et al., 1996). O epitlio pancretico, portanto, pode ter capacidade endcrina autnoma, mas necessita interagir
com o mesnquima para formar clulas excrinas e os dutos que transportam suas
secrees para o duodeno.
espiratrio
ubo R
OT
Respiratrio
Tubo
Os pulmes tambm so um derivado do tubo digestivo, embora no tenham papel na
digesto. No centro do assoalho farngeo, entre o quarto par de bolsas farngeas, o
sulco laringotraqueal estende-se ventralmente (Figura 9.44). Esse sulco se bifurca em
seguida em dois ramos, que formam o par de brnquios e pulmes. O endoderma
laringotraqueal torna-se o revestimento da traquia, os dois brnquios e os sacos
areos (alvolos) dos pulmes. Como veremos em um prximo captulo, a ramificao
desse tubo endodrmico depende de interaes com os diferentes tipos de clulas
mesodrmicas ao longo de sua trajetria.
Os pulmes so uma novidade evolucionria, e esto entre os ltimos rgos do
mamfero a se diferenciar totalmente. Os pulmes tm que ser capazes de recolher
oxignio no momento da primeira respirao do beb. Para consegu-lo, as clulas
alveolares secretam um surfactante para o fluido que banha os pulmes. Esse
surfactante, consistindo de fosfolipdios tais como a esfingomielina e a lecitina,
secretado muito tardiamente na gestao, e usualmente atinge nveis teis fisiologicamente ao redor da semana 34 da gestao humana. Esses compostos permitem s
clulas alveolares tocarem-se mutuamente, sem se colarem. Assim, infantes nascidos
prematuramente, freqentemente tm dificuldade respiratria e tm que ser colocados
em respiradores at o amadurecimento de suas clulas produtoras de surfactante.
Desenvolvimento pancretico em humanos. (A)

Aps 30 dias, o broto pancretico ventral est
prximo aos primrdios hepticos. (B) Aos 35
dias comea a migrar posteriormente e (C) entra em contato com o broto pancretico dorsal
durante a sexta semana do desenvolvimento.
(D) Na maioria dos indivduos, o broto pancretico dorsal perde o seu duto para o duodeno;
porm, em cerca de 10 porcento da populao,
o sistema duplo de dutos persiste. (Segundo
Langman, 1981.)
384
Figura 9.44
Intestino
anterior
Diviso do destino anterior em esfago e

divertculo respiratrio durante as terceira e
quarta semanas de gestao humana. (A) Viso lateral, fim da semana 3. (B,C) Viso ventral, semana 4. (Segundo Langman, 1981.)
Faringe
Traquia
Brotos dos
membros
Divertculo respiratrio
(Sulco laringotraqueal)
Esfago
(A)
(B)
(C)
Isso conclui nosso levantamento dos aspectos precoces do desenvolvimento

animal. Agora nos dedicaremos aos mecanismos que permitem a ocorrncia desse
desenvolvimento. Na parte III, enfocamos os eventos moleculares que direcionam a
diferenciao celular. Na parte IV, vemos os papis dessas molculas na formao dos
eixos do corpo embrionrio. A parte V ir discutir as foras genticas, celulares e
ambientais que interagem durante a formao dos rgos.
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Mecanismo da
Diferenciao Celular
10
Regulao transcricional da expresso gnica: Fatores de transcrio

e a ativao de promotores especficos 391
11
III
Regulao transcricional da expresso gnica: A ativao da cromatina

12
Controle do desenvolvimento pelo processamento e traduo

diferencial do RNA
461
431
10
Regulao transcricional
da expresso gnica: Fatores de transcrio
e a ativao de promotores especficos
Quaisquer que sejam as operaes imediatas dos genes, elas certamente pertencem
categoria de processos do desenvolvimento
e, portanto, se enquadram no espao da embriologia. Esse problema central da biologia bsica est sendo, atualmente, tratado
sob vrios aspectos, tanto por fisiologistas
como bioqumicos e por geneticistas; mas
essencialmente um problema embriolgico.
C. H. WADDINGTON (1956)
Entramos na clula, a manso onde nascemos e estamos comeando o inventrio da

riqueza que adquirimos.
DIFERENTES TIPOS DE CLULAS produzem diferentes conjuntos de prote-
nas, mesmo que seus genomas sejam idnticos. Cada ser humano tem aproximadamente 150.000 genes em cada ncleo, mas cada clula usa somente
um pequeno subgrupo desses genes. Alm disso, diferentes tipos de clulas usam
diferentes subgrupos de genes. As clulas vermelhas do sangue produzem globinas,
as clulas do cristalino produzem cristalinas, as clulas nervosas produzem
neurotransmissores e as glndulas endcrinas produzem seus hormnios especficos.
Gentica do desenvolvimento a disciplina que examina como o gentipo se transforma no fentipo, e o paradigma principal da gentica do desenvolvimento a expresso gnica diferencial a partir do mesmo repertrio nuclear. A regulao da expresso gnica pode ser realizada em vrios nveis:
ALBERT CLAUDE (1974)
Transcrio gnica diferencial, regulando quais dos genes nucleares so transcritos em RNA
Processamento seletivo do RNA nuclear, regulando quais dos RNAs transcritos passaro para o citoplasma tornando-se RNAs mensageiros
Traduo seletiva de RNA mensageiro, regulando quais dos RNAs mensageiros no citoplasma sero traduzidos em protena
Modificao protica diferencial, regulando quais protenas permanecero ou
funcionaro na clula
Alguns genes (tais como aqueles codificando as protenas globina da hemoglobina) so regulados em cada um desses nveis. Neste e no prximo Captulo sero
discutidos os mecanismos da transcrico gnica diferencial: como genes diferentes
so ativados em diferentes tipos de clulas em tempos determinados. Os fenmenos
bsicos da transcrio diferencial de genes foram discutidos no Captulo 2. Os tufos
de cromossomos politnicos representam a ativao de grupos de genes em resposta a um hormnio produzido na larva do inseto. Analogamente, a expresso de genes
especficos do endoderma na larva do ourio-do-mar foi controlada ao nvel da
transcrio do gene. Nestes Captulos, discutiremos os mecanismos pelos quais
diferentes genes podem ser ativados ou reprimidos em clulas especficas enquanto
elas se diferenciam.
391
392
xons e ntrons
Quando genes so observados, a primeira coisa que se torna aparente que a maioria
dos genes de eucariotos no se parecem maioria dos genes procariotos. Genes
eucariotos no so colineares com seus produtos peptdicos. Ao contrrio, os terminais 3' e 5' do mRNA eucarioto se originam de regies no-contguas no cromossomo.
Entre as regies de codificao de protenas no DNA-xons- esto seqncias intercaladas-ntrons- que no tm relao com a seqncia de aminocidos da protena.*
A estrutura do gene da -globina humana est ilustrada na Figura 10.1. Esse gene
consiste dos seguintes elementos:
1. Uma regio promotora responsvel pela ligao da RNA polimerase e subseqente iniciao da transcrio. Essa regio promotora do gene da -globina
humana tem trs unidades distintas e se estende de 95 a 26 pares de base
antes (a montante de) do stio de iniciao da transcrio (isto , de -95 a 26).
2. A seqncia ACATTTG, onde a transcrio se inicia. Essa freqentemente
chamada seqncia de capeamento (cap) porque representa o terminal 5' do
RNA, que receber um capeamento de nucleotdeos modificados logo aps
sua transcrio. A seqncia especfica do capeamento varia entre os genes.
3. O cdon ATG para o incio da traduo. Esse cdon est localizado 50 pares
de base depois do ponto de iniciao da transcrio (apesar dessa distncia
variar muito em genes diferentes). A seqncia interposta de 50 pares de
nucleotdeos entre os pontos de iniciao da trancrio e a traduo chamada seqncia lder. A seqncia lder pode determinar a velocidade de iniciao da traduo.
4. O primeiro xon contendo 90 pares de bases codificando para os aminocidos
1-30 da -globina humana.
5. Um ntron contendo 130 pares de bases sem seqncias codificadoras para a
globina. A estrutura desse ntron importante para permitir que o RNA seja
processado a RNA mensageiro e saia do ncleo.
6. Um xon contendo 222 pares de bases codificando para os aminocidos 31- 104.
7. Um grande ntron- 850 pares de bases- sem relao com a estrutura da protena globina.
8. Um xon contendo 126 pares de bases codificando para os aminocidos 105- 146.
9. Um cdon de terminao da traduo, TAA.
10. Uma regio 3' no-traduzida que, apesar de transcrita, no traduzida em
protena. Essa regio inclui a seqncia AATAAA, a qual necessria para
colocar uma cauda de cerca de 200 a 300 resduos adenilados no transcrito
de RNA. Essa cauda de poli(A) confere estabilidade e traduzibilidade ao mRNA,
e inserida no RNA cerca de 20 bases a jusante da seqncia AAUAAA.
Entretanto, a transcrio continua alm do stio AATAAA por ainda 1000
nucleotdeos aproximadamente, antes de ser terminada. Dentro da seqncia
3' transcrita mas no traduzida (mais ou menos 600 a 900 pares de bases do
stio AATAAA) est uma seqncia de DNA que serve como um intensificador. Essa seqncia necessria para a expresso temporal e especfica de
tecido do gene da -globina em precursores das clulas vermelhas do sangue
de adulto (Trudel e Constantin, 1987).
* O termo xon tem dois significados sobrepostos. No sentido original, isso definido
anatomicamente como uma seqncia nucleotdica cujo RNA sai do ncleo. O termo tomou
tambm a definio funcional de uma seqncia de nucleotdeos que codifica uma protena. Para
discusso aqui, usaremos a primeira definio e definiremos as seqncias lderes e as seqncias 3'
no traduzidas como xons no traduzidos. Alguns genes eucariotos (como os genes de histonas) no
tm seqncias interpostas, e qualquer hiptese sobre funes de ntrons deve considerar essas
excees. Por conveno, direes a montante, a jusante, 5' e 3' so especficas em relao ao RNA.
Assim, o promotor est a montante do gene, perto de seu terminal 5'.
CAPTULO 10
(A)
Stio de iniciao
da transcrio
(capeamento)
Stio de iniciao da
traduo de Aminocido (aa) 1
Fatores de transcrio e promotores especficos 393
Stio de terminao
da traduo
Regio do promotor
Elementos
promotores a
montante
TATA
Box
Stio de adio
de poli(A)
Stio terminal
da transcrio
Lder (Regio no traduzida 5)
Regio no traduzida 3
Figura 10.1
(B)
O RNA nuclear original transcrito para tal gene contm a seqncia do capeamento, a
seqncia lder, os xons, os ntrons e a regio 3' no traduzida (Figura 10.2). Em
adio, ambos terminais se modificam. Um capeamento consistindo de guanosina
metilada colocado no terminal 5' do RNA em polaridade oposta ao prprio RNA.
Assim, enquanto todas as bases no precursor da mensagem esto ligadas 5a 3', a
Seqncia nucleotdica do gene da -globina

humana. (A) Representao esquemtica da
localizao da regio do promotor, stio de
iniciao da transcrio (capeamento), seqncia lder, xons e ntrons do gene da globina. xons esto coloridos; os nmeros
que os ladeiam, indicam a posio dos aminocidos que codificam na -globina. (B) A
seqncia nucleotdica do gene da -globina,
mostrada do terminal 5 ao terminal 3 do
RNA. As seqncias promotoras esto enquadradas, como tambm esto os cdigos de
incio de traduo e terminao, ATG e TAA.
As letras maisculas grandes enquadradas em
cores correspondem a xons, e os aminocidos para os quais codificam esto abreviadas
acima dos quadros. As letras maisculas pequenas so as bases das seqncias interpostas. Os cdons representados por letras maisculas aps o trmino da traduo esto no
mRNA da globina mas no so traduzidas em
protenas. Dentro desse grupo est a seqncia considerada necessria para a poliadenilao. Um G no primeiro ntron (seta) mutado
para um A em uma forma de +-talassemia.
(Seqncia de Lawn et al., 1980.)
394
Iniciao da
transcrio
Regio promotora
(ligao da RNA
polimerase)
Seqncia
ATA
ATG:
cdon iniciador
da traduo
AATAAA:
seqncia de
adio de poli(A)
TAA: cdon
terminador da
traduo
Seqncia
terminadora da
transcrio
GENE (DNA) PARA

-GLOBINA
Lder
Stio de adio de poli(A)
Transcrio
RNA NUCLEAR
(capeamento)
Cauda
Processamento
RNA MENSAGEIRO
Lder
Cauda
Traduo
PROTENA -GLOBINA
Modificao ps-traduo
Figura 10.2
Sumrio das etapas envolvidas na produo

da -globina e hemoglobina.
HEMOGLOBINA
estrutura do capeamento est ligada 5' a 5'. Isso significa que no h grupo fosfato 5'
livre no RNA nuclear (Figura 10.3). Molculas de RNA mensageiro esto igualmente
capeadas, apesar de no se ter certeza se o capeamento do mRNA o original
recebido no ncleo. O capeamento 5' necessrio para a ligao do mRNA ao ribossomo
e para a subseqente traduo (Shatkin, 1976).
O terminal 3' usualmente modificado no ncleo pela adio de uma cauda de
cerca de 200 resduos adenilados. Esses resduos de cido adenlico so ligados
enzimaticamente e adicionados ao transcrito. Eles no so parte da seqncia do
gene. Ambas as modificaes 3' e 5' podem proteger o RNA das exonucleases
(Sheiness e Darnell, 1973; Gedamu e Dixon, 1978), assim estabilizando a mensagem e seu precursor.
Estrutura e funo do promotor

Alm da estrutura do gene que acabamos de discutir, existem seqncias reguladoras
que podem estar em um ou outro terminal do gene (ou mesmo dentro dele). Essas seqncias,
CAPTULO 10
ANTES DO CAPEAMENTO
Terminal 5 da molcula
APS O CAPEAMENTO
7-metil guanosina
Direo da traduo
Direo da
traduo
Figura 10.3
Capeamento do terminal 5 de um mRNA eucaritico. Um

capeamento de 7-metil-guanilato ligado 5 a 5 com a primeira
base do mRNA recentemente transcrito. O terminal 5 original
do mRNA tinha trs grupos fosfato. O mecanismo de
capeamento une o GTP com o terminal, usando um grupo fosfato
de GTP e dois grupos fosfato do mRNA. Em seguida, uma
enzima metila a guanosina na posio 7; a primeira e a segunda
bases de mRNA original so, com certa freqncia, tambm
metiladas. (De acordo com Rottman et al., 1974.)
os promotores e intensificadores (introduzidas no Captulo 2), so necessrias para

controlar onde e quando um determinado gene transcrito.
Dois tipos de elementos reguladores so necessrios para efetuar a transcrio nos
stios adequados. O primeiro conjunto de elementos reguladores chamado de cisreguladores. Esses representam seqncias especficas de DNA em um dado cromossomo. Cis-reguladores agem somente em genes adjacentes. O segundo grupo de
elementos reguladores chamado trans-reguladores. Esses so molculas solveis
(incluindo protenas e RNAs) que so produzidas por um gene e interagem com genes
no mesmo ou em diferentes cromossomos. Relembrando a induo gnica no operon
lac de E.coli, foi visto que um gene repressor produz uma protena repressora que
interage com a seqncia operadora dos genes do operon lac. Nesse caso, o DNA
operador um elemento cis-regulador porque controla somente o operon lac adjacente no seu prprio cromossomo. A protena repressora, entretanto, um trans regulador porque ele pode ser produzido por um cromossomo e se ligar ao operador cisregulador em outro cromossomo.
Em genes eucariotos que codificam RNA mensageiro, foram descobertos dois
tipos de seqncias de DNA cis-reguladoras que influenciam tais genes serem transcritos em tais clulas. Esses so os promotores e os intensificadores. Promotores,
tipicamente esto localizados imediatamente a montante do stio onde se inicia a
transcrio e geralmente tm centenas de pares de bases na sua cadeia. Eles so
necessrios para a ligao da RNA polimerase II e para a exata iniciao da transcrio. RNA polimerases de eucariotos requerem fatores proticos adicionais para a
ligao eficiente ao promotor. O intensificador uma seqncia de DNA que pode
ativar a utilizao do promotor, controlando a velocidade e eficincia de transcrio
daquele promotor especfico. Intensificadores s podem ativar promotores ligados
aos cis (ou seja, promotores no mesmo cromossomo), mas podem faz-lo a grandes
Terminal 3
da molcula
Terminal 3
da molcula
396
distncias (algumas to grandes como 50 quilobases alm do promotor). Alm disso,

intensificadores no precisam estar no lado 5' (a montante) do gene. Eles podem
estar no lado 3', nos ntrons, ou mesmo na fita de DNA complementar (Maniatis et
al., 1987). Como o promotor, os intensificadores funcionam ligando protenas especficas trans-reguladoras chamadas fatores de transcrio.
Um tipo de intensificador um intensificador negativo, tambm chamado
silenciador. Quando fatores de transcrio se ligam a silenciadores, eles reprimem a
transcrio dos promotores ligados aos cis. Algumas seqncias podem agir como
intensificadores positivos em certas clulas e como negativos em outras, dependendo
de outros fatores de transcrio presentes na clula.
Estrutura do promotor
Elementos
promotores a
montante
TATA
box
Iniciao de
mRNA
Figura 10.4
Regio promotora tpica de um gene eucarioto

codificando uma protena. O gene no diagrama
contm uma seqncia TATA de elementos
promotores a montante. Exemplos de alguns
desses elementos a montante esto ilustrados
abaixo do diagrama. (De acordo com Maniatis
et al., 1987.)
Promotores de genes que transcrevem quantidades relativamente grandes de mRNA

tm estruturas similares. Eles tm uma seqncia TATA (algumas vezes chamada TATA
box ou Goldberg-Hogness box) cerca de 30 pares de base a montante do stio onde
se inicia a transcrio, bem como um ou mais elementos promotores ainda mais a
montante (Figura 10.4; Grosschedl e Birnstiel, 1980; McKnight e Tjian, 1986). A
anatomia funcional de uma regio promotora pode ser analisada determinando-se
quais de suas bases so necessrias para uma transcrio eficiente. Genes clonados
podem ser precisamente transcritos quando colocados nos ncleos de ocitos de r ou
de fibroblastos ou quando incubados com RNA polimerase na presena de nucleotdeos e extratos nucleares (Wasylyk et al., 1980). Depois que a transcrio de um gene
confirmada, usa-se enzimas de restrio para fazer delees especficas no gene ou em
regies vizinhas. Pode-se observar se um gene assim modificado ainda ser transcrito
precisamente. Tais estudos nos genes da -globina (Grosveld et al., 1982; Dierks et
al.,1983) mostraram que os primeiros 109 pares de bases precedendo o stio do
capeamento eram suficientes para a correta iniciao da transcrio do gene da globina pela RNA polimerase.
Myers e colaboradores (1986) melhoraram essa anlise clonando a regio de um
gene de -globina de camundongo, desde 106 pares de bases a montante do comeo da
transcrio (-106) at os primeiros 475 pares de bases (+ 475) do primeiro xon. Esses
clones foram submetidos a mutagnese in vitro (onde mutaes especficas podem ser
colocadas em um gene clonado). Dessa maneira, 130 substituies de base nica diferentes foram introduzidas na regio do promotor do gene da globina. Esses genes
clonados foram colocados em plasmdeos contendo um intensificador de um gene normalmente expresso em todos os tecidos. Os plasmdeos recombinantes foram em seguida introduzidos por transfeco em clulas cultivadas que normalmente no produzem
globina. Deveriam essas clulas transcreverem uma mensagem de globina truncada (475
bases) a partir dos clones? A Figura 10.5 mostra os resultados. Na maioria dos casos,
mutando uma base na regio flanqueando o terminal 5' no afetou a eficncia da transcrio do gene da globina. Entretanto, as mutaes reduziram drasticamente as transcries em trs agrupamentos de nucleotdeos. Um agrupamento foi na seqncia TATA,
outro no elemento promotor a montante, CAAT, e um terceiro foi na regio CACCC,
aproximadamente 95 a 87 pares de bases a montante do stio de capeamento.
As seqncias CAAT e TATA foram consideradas elementos crticos em numerosos promotores eucariotos (Efstratiadis et al., 1980), mas a seqncia CACCC
raramente encontrada a no ser nos promotores do gene da -globina em vrias
espcies. Em humanos, essa seqncia parece ser crtica. Uma mutao natural nessa seqncia causa a perda total da transcrio do gene da -globina (Orkin e
Kazazian, 1984), e essa seqncia reconhecida por um fator de transcrio especfico de eritrcitos (Mantovani et al., 1988). Duas mutaes, nas posies -78 e -79,
realmente aumentaram a transcrio a um nvel trs vezes maior que o tipo selvagem.
Considera-se que essas modificaes facilitam a interao do promotor com as protenas trans-reguladoras.
CAPTULO 10
Nvel relativo de transcrio
Figura 10.5
Posio
Stio do
capeamento
O efeito de mutaes pontuais especficas no

promotor da -globina do camundongo na habilidade do promotor de iniciar a transcrio.
Cada linha representa o nvel de transcrio
de um promotor mutante relativo ao nvel de
transcrio de um promotor da globina do
tipo selvagem testado simultaneamente. Os
pontos escuros representam nucleotdeos
para os quais no foram produzidas mutaes. O diagrama abaixo do histograma mostra a posio da seqncia TATA e os dois
elementos promotores a montante no gene da
-globina do camundongo. (De acordo com
Myers et al., 1986.)
Funo do promotor
Promotores podem funcionar no somente na ligao da RNA polimerase, mas tambm na especificao do lugar e tempo que a transcrio pode ocorrer daquele gene.
Essa funo dos promotores pode ser claramente demonstrada em certos animais
transgnicos. Aqui, um novo gene construdo, onde o promotor normal de um determinado gene substitudo pelo promotor de algum outro gene, e o gene fundido
colocado no proncleo de um zigoto de mamfero. Palmiter e colaboradores (1982)
isolaram o gene do hormnio de crescimento do rato e deletaram sua regio promotora 5'. Nesse espao, eles substituram a seqncia promotora de outro gene-Mt-1 por
metalotionena 1 de camundongo, uma pequena protena envolvida na regulao dos
nveis de zinco no soro. O gene hbrido est ilustrado na Figura10.6A. O gene Mt-1
pode ser induzido pela presena de metais pesados tais como zinco e cdmio, e as
seqncias responsveis por essa induo esto no promotor desse gene. Fundindo
essa regio do promotor de metalotionena ao gene do hormnio de crescimento do
(A)
seqncia ladeando 5 de Mt-1

seqncia ladeando 5 de GH
Seqncias reguladoras do Mt-1 no transcrito
Gene GH do rato
Seqncias reguladoras do Mt-1 do camundongo
Gene GH do rato
Figura 10.6
Funo do promotor vista em camundongos

transgnicos. (A) Plasmdeo recombinante
contendo o gene estrutural do hormnio de
crescimento do rato, a regio reguladora da
metalotionena do camundongo e o plasmdeo
bacteriano pBR322. O plasmdeo, pMGH, foi
injetado nos ocitos do camundongo. Os
enquadramentos escuros no plasmdeo injetado correspondem aos xons do gene GH. A
direo da transcrio indicada por uma seta.
(B) Um camundongo derivado dos ovos injetados com pMGH (esquerda) e um membro
normal da ninhada (direita). (de Palmiter et
al., 1982; fotografia cortesia de R. L. Brinster.)
398
Figura 10.7
Funo do promotor vista em carneiros transgnicos. O gene estrutural para uma protena
de importncia farmacutica como a 1antitripsina ou peptdeos do fator de coagulao so ligados ao promotor para a lactalbumina (ou casena) do leite de carneiro. O gene recombinante injetado no proncleo de um ovo de carneiro recentemente fertilizado, e o ovo implantado no tero de
uma me adotiva. Os carneiros recm-nascidos so analisados (por PCR ou transferncia Southern) para verificar a presena do
transgene. Quando os carneiros transgnicos
fmeas maturam, o transgene deveria ser ativado na glndula mamria e a protena
secretada no leite. Do leite pode-se isolar o
composto de importncia farmacutica. (De
acordo com Watson et al., 1992.)
Gene 1-antitripsina (AAT)
Promotor da
-lactoglobulina
*Dois fatos surgiram desse experimento. O primeiro nossa potencial habilidade para curar
doenas genticas fertilizando ovos in vitro e injetando um gene normal dentro de um proncleo.
Esses ovos podem iniciar seu desenvolvimento e, em seguida, ser retornados ao tero da mulher. O
segundo fato que surgiu foi nossa responsabilidade (que geralmente proporcional ao nosso poder,
quer queiramos ou no).
vulo de
carneiro
DNA
recombinante
injetado no
proncleo
Pipeta
suporte
rato (rGH), esse colocado sob o controle do promotor da metalotionena. Nesse

caso, a mensagem para o hormnio de crescimento do rato deve ser concretizada
quando o promotor de Mt-1 for ativado pela presena do zinco ou cdmio.
Um plasmdeo contendo esse gene fundido foi cultivado em bactrias (veja Captulo 2), o pedao Mt-1/rGH foi isolado, e cerca de 600 cpias desse fragmento foram
injetadas nos proncleos de ovos de camundongos recentemente fertilizados.
Hibridizao de DNA mostrou que muitos desses camundongos recm-nascidos haviam incorporado, em seus cromossomos, numerosas cpias do gene do hormnio de
crescimento do rato. Esses animais transgnicos foram ento alimentados com uma
dieta com suplemento de zinco. Os fgados desses camundongos foram induzidos pelo
zinco a secretar grandes quantidades de hormnio de crescimento do rato. (O fgado
o local onde usualmente produzida a metalotionena, ao passo que o hormnio de
crescimento secretado pela glndula pituitria.) A quantidade de hormnio de crescimento secretado foi correlacionada com o tamanho desses camundongos. Os camundongos transgnicos se tornaram enormes, at 80% maiores do que os membros
normais da ninhada (Figura 10.6B).* O promotor da metalotionena regulou a sntese
do hormnio de crescimento nesses camundongos transgnicos.
Atualmente, essa estratgia est sendo utilizada por indstrias farmacuticas para
produzir grandes quantidades de produtos proticos tais como hormnios peptdicos,
1-antitripsina (usada por pacientes com enfisema) e fatores de coagulao do sangue. Proncleos de vacas, carneiros e cabras foram injetados com DNA recombinante
contendo a seqncia do gene da protena desejada, fundida aos promotores dos genes
para casena, lactalbumina, ou -lactoglobulina (trs principais protenas do leite).
Vacas em lactao sintetizam enormes quantidades de protenas do leite, e a maior
parte dessa produo regulada pela transcrio de novas mensagens. A esperana
que os animais ao transcreverem os genes para a casena ou lactalbumina (em resposta
ao hormnio prolactina) tambm transcrevam e sintetizem os genes para essas protenas teraputicas. Por exemplo, em um caso, um gene humano para a protena 1antitripsina foi fundido a um promotor da -lactoglobulina e injetado nos proncleos
de zigotos de carneiro. Um desses embries de carneiro se desenvolveu em uma fmea cujo leite continha 35 g/L de protena 1-antitripsina humana (Figura 10.7; Wright
et al., 1991).** Os promotores, ento, exercem um papel na especificao de qual
gene transcrito em qual clula durante o desenvolvimento.
**A maior parte da secreo no leite do animal transgnico no to grande assim, provavelmente
porque os genes no esto ligados aos seus intensificadores apropriados, como veremos mais tarde.
Implante na me adotiva
Prognie transgnica
identificada por PCR
Obteno de leite de
animais trransgnicos
Expresso de AAT restrita

ao tecido mamrio
Fracionamento de
protenas do leite
Protena ATT
secretada no leite
Protena ATT pura
CAPTULO 10
&
Especulaes
RNA polimerase e os fatores

trans-reguladores no promotor
TRANSCRIO REQUER a inte-
rao entre a RNA polimerase e

o DNA promotor. As clulas eucariticas possuem trs tipos de RNA polimerases, cada uma com funes e propriedades especficas (Rutter et al., 1976).
RNA polimerase I encontrada na regio
nucleolar do ncleo e responsvel pela
transcrio dos grandes RNAs ribossmicos; RNA polimerase II transcreve precursores do RNA mensageiro; e RNA polimerase III transcreve RNAs pequenos
tais como RNA de transferncia, RNA
ribossmico 5S e outras pequenas seqncias de DNA.* Nenhuma das RNA
polimerases eucariticas se ligam eficientemente ao DNA. Na realidade, existem
famlias de protenas ligantes de DNA que
se ligam inicialmente ao DNA, e uma vez
ligadas, interagem com a RNA polimerase
para iniciar a sntese de RNA.
O elemento TATA e a RNA polimerase II.
O diagrama clssico de transcrio mostra
que o DNA, na presena da RNA polimerase e ribonucleosdeos trifosfato, transcreve molculas de RNA. Mas esse esquema simples no leva em considerao dificuldades como (1) fazer com que o RNA se
inicie no local correto e (2) fazer com que a
transcrio de um gene especfico ocorra
somente em tempos e clulas especficos.
Devem existir fatores que permitam que a
RNA polimerase se ligue somente a promotores de determinados genes. Aqui, discutiremos aquelas protenas e seqncias
de DNA que localizam a RNA polimerase
nos stios promotores. A enzima responsvel pela transcrio de RNAs mensageiros
a RNA polimerase II. Entretanto, no vai
haver uma transcrio exata dos genes clonados, in vitro, se esses forem incubados
* Na maioria das clulas, os RNAs ribossmico
e de transferncia so sintetizados constitutivamente.
Entretanto, os animais desenvolveram mecanismos
extraordinrios para acelerar a sntese de rRNA em
seus ocitos. Assim, adiaremos a discusso sobre
RNA polimerases I e III at o detalhamento de eventos na oognese no Captulo 22.
com RNA polimerase purificada e nucleosdeos trifosfato. necessrio adicionar extratos nucleares para que se inicie uma
transcrio exata. Quais so esses fatores
que permitem o incio da transcrio? Pelo
menos seis protenas nucleares foram consideradas como necessrias para uma iniciao adequada da transcrio pela RNA
polimerase II (Figura 10.8; Buratowski et
al., 1989; Sopta et al., 1989).
TFIID e TFIIA.** Na primeira etapa da transcrio do mRNA, o complexo TFIID se liga
seqncia TATA. Isso foi demonstrado
em experimentos de proteo de DNase
onde TFIID foi adicionado a genes clonados
e o DNA, ento, foi digerido pela DNase. A
nica maneira de salvar o DNA da digesto lig-lo ao TFIID, impedindo o acesso
da DNase. Dessa maneira, Sawadogo e
Roeder (1984) demonstraram que TFIID se
liga especificamente regio TATA dos
genes. TFIID uma protena multimrica e
um de seus componentes-a protena ligante
da seqncia TATA (TBP)- se liga diretamente no sulco menor da seqncia TATA
(Lee et al., 1991; Starr e Hawley, 1991). O
complexo TFIID tem vrias atividades; a primeira ligar a seqncia TATA e servir como
fundao ao complexo transcricional. Outro papel do TFIID impedir a estabilizao
de nucleossomos na regio do promotor.
Quando DNA contendo promotor incorporado nos nucleossomos, esses genes no
podem ser transcritos quando TFIID, RNA
polimerase II e outros fatores so adicionados mais tarde. Entretanto, quando TFIID
adicionado antes ou durante a formao de
nucleossomos, a cromatina resultante
transcricionalmente ativa (Workman e
Roeder, 1987). Bloqueando a formao de
nucleossomos, TFIID parece agir antagonicamente histona H1. Histona H1 (como
**TF significa fator de transcrio; II indica que
o fator foi, inicialmente, considerado necessrio para
a RNA polimerase II; as designaes de letras se
referem s fraes da coluna de fosfocelulose que
tinham a atividade.
veremos no prximo captulo) estabiliza

nucleossomos e impede a transcrico na
regio onde ela se liga. A adio de histona
H1 impede que TFIID encontre os stios de
TATA e, dessa maneira, a transcrio no
se d; a inibio superada se TFIID adicionado antes (Laybourn e Kadonaga,
1991). A ligao de TFIID facilitada e estabilizada pelo fator de transcrio TFIIA
(Buratowski et al., 1989; Maldonado et al.,
1990). Muitos fatores de transcrio ativam
a funo transcrio recrutando TFIID e ativando-o de modo que TFIID possa ligar
outros membros do complexo de transcrio (Chi e Carey, 1996; Stargell e Struhl,
1996). Assim, a deciso de transcrever ou
no um gene particular depende do equilbrio entre os fatores inibidores (como as
histonas) e TFIID e TFIIA.
TFIIB e RNA polimerase II. O complexo

TFIID/TFIIA no pode formar um complexo estvel diretamente com a RNA polimerase II. Em lugar disso TFIID liga o fator
TFIIB. A ligao de TFIIB a TFIID parece
ser a etapa limitante mais importante da velocidade de transcrio de numerosos genes.
Essa velocidade pode ser dramaticamente
aumentada pela proximidade de certos fatores de transcrio ligantes de promotores
e intensificadores. Esses fatores de transcrio so especficos de seqncias e podem
determinar quais genes sero transcritos. O
domnio ativador desses fatores de transcrio se liga diretamente com TFIIB e facilita sua montagem com TFIID (Lin e
Greene, 1991; Lin et al., 1991). Uma vez
que TFIIB est localizado, ele pode ligar a
RNA polimetrase II. A maior parte da RNA
polimerase posicionada pela sua interao
com TFIIB, mas a cauda carboxiterminal da
subunidade grande da RNA polimerase II
interage diretamente com TFIID (veja Figura 10.8D). Dessa maneira, RNA polimerase II situada no promotor.
TFIIE/F e TFIIH. Imediatamente antes ou
durante sua ligao a TFIIB, a RNA poli-
400
O complexo TFIID se liga sequncia

TATA atravs da subunidade TBP
(A)
+1
Stio de iniciao
da transcrio
(B)
TFIID estabilizado pelo TFIIA
TFIIB e TFIIH se juntam ao

complexo na sequncia TATA
(C)
RNA
polimerase II
Domnio carboxi-terminal (CTD)
(D)
RNA polimerase II
(E)
Um complexo de RNA polimerase II, TFIIE

e TFIIF posicionado pelo TFIIB e seu
domnio carboxi-terminal ligado pelo TFIID
O CTD fosforilado pelo TFIIH e liberado

pelo TFIID; comea a transcrio
Transcrito de RNA
Figura 10.8
Formao do complexo de iniciao ativo nos eucariotos. O diagrama representa os complexos formados na seqncia TATA pelos fatores de transcrio e RNA polimerase II. (A) O
complexo TFIID se liga seqncia TATA atravs de sua subunidade TBP. (B) TFIID
estabilizado pelo TFIIA. (C) TFIIB eTFIIH se juntam ao complexo na seqncia TATA
enquanto TFIIE e TFIIF se associam RNA polimerase II. (D) RNA polimerase posicionada
pelo TFIIB, e seu domnio carboxi-terminal (CTD) ligado pelo TFIID. (E) O CTD
fosforilado pelo TFIIH e liberado pelo TFIID. A RNA polimerase II est agora competente
a transcrever o mRNA do gene.
merase II se associa ao TFIIF e TFIIE

(Buratowski et al., 1991; Conaway et al.,
1991). TFIIF tem uma atividade enzimtica necessria para desenrolar a hlice do
DNA. TFIIE uma ATP-ase dependente
de DNA e provavelmente necessria para
gerar a energia para a transcrio (Bunick
et al., 1982; Sawadogo e Roeder, 1984).
Mas qual a vantagem de tudo isso, se a
RNA polimerase permanece ligada a esse
complexo na seqncia TATA? Para que
haja transcrio, a RNA polimerase deve
ser liberada da regio do promotor. Essa
atividade de liberao parece ser funo
do TFIIH. A RNA polimerase est fortemente ligada pelo seu domnio carboxiterminal (CTD) ao FTIID. Entretanto,
TFIID somente se ligar forma no fosforilada de CTD. Nos mamferos CTD
contm 52 repeties da seqncia de
sete aminocidos YSPTSPS. Quando o
complexo de iniciao est formado, o
complexo completo ativa a protena quinase serina/treonina do TFIIH, o qual
fosforila cada uma das 52 repeties (veja
Figura 10.8E; Koleske et al., 1992; Lu et
al., 1992; Usheva et al., 1992). TFIID no
pode ligar essa regio altamente fosforilada e libera a RNA polimerase. Ao passo
que a primeira ligao fosfodiester pode
ser feita sem a fosforilao do CTD, essa
fosforilao parece ser essencial para a
transcrio posterior do RNA mensageiro (Akoulitchev et al., 1995).
TAFs e a ativao da transcrio basal.
TFIID uma protena multimrica, mas
somente uma de suas unidades se liga
seqncia TATA. Algumas das outras subunidades so chamadas fatores associados das protenas ligantes de TATA
(TAFs). Purificao das TAFs, a partir de
TFIID do homem e da Drosophila, mostrou que essas so compostas por um conjunto protenas (Figura 10.9; Dynlacht et
al., 1991). Considera-se que as TAFs servem a duas funes: (1) elas podem determinar se TFIID permanece ou no no promotor, e (2) elas podem funcionar como
co-ativadores, fazendo uma ponte entre as
protenas ligadas ao intensificador e o complexo de transcrio atravs de interaes
protena-protena.
de importncia para o gene se as protenas ligantes de TATA permanecem no
promotor. Se elas sarem, o gene no ser
transcrito. Verrijzer e colegas (1995) mostraram que as TAFs de 250- e 150- kDa
CAPTULO 10
(A) Um complexo mnimo de TBP e um TAF

no ativa a transcrio (Sp1 e NTF no
podem se associar com TBP)
(B)
Adio do TAF p150 ou TAF p60 permite a

ativao transcricional pelo NTF, mas no
Sp1
Iniciao da
transcrio
Iniciao da
transcrio
(C) Adio do TAF p110 e do TAF p150 permite

a ativao de ambos, NTF e Sp1
Iniciao da
transcrio
(D) O holo-TFIID suporta a ativao por

vrios fatores e permitir o acesso de
outras protenas de ativao ao
complexo transcricional
Iniciao da
transcrio
Protena de
ativao
ligante de DNA
Figura 10.9
Esquema de experimentos sugerindo que diferentes TAFs interagem com diferentes fatores de
transcrio para ativar a transcrio. O complemento total das TAFs ilustrado em (D). O
ativador em (D) uma protena ligada uma seqncia de DNA que foi estabilizada pelas
outras interaes. (De acordo com Chen et al., 1994.)
tm importncia crtica ao determinar se

TBP permanece ligado seqncia TATA.
Os TAFs reconhecem elementos a montante do promotor, os quais, se presentes, estabilizam ou desestabilizam o TBP no
promotor. Isso significa que alguns promotores so intrinsicamente mais difceis de serem transcritos e que certos
fatores deveriam estar presentes para produzir esses promotores transcritveis.
Como veremos adiante, alguns promotores (como aquele para interferon- humano) so transcritos somente aps
grande esforo em dobr-los, contorclos de modo a envolver o frgil complexo
de transcrio.
A associao de TBP com diferentes
TAFs permite a ativao do complexo de
transcrio por protenas ligadas a stios de
intensificadores e a montante dos promotores. Alm disso, diferentes TAFs podem
co-ativarem com fatores trans diferentes.
Por exemplo, um dos fatores de transcrio mais comum o Sp1. Essa protena
no-TAF se liga s seqncias promotora ou intensificadora GGGCGG atravs de
seu terminal carboxila mas regula a atividade transcricional, via seu terminal amino
(Dynan e Tjian, 1985; Kadonaga et al.,
1988). Provavelmente, esse fator encontrado em todas as clulas e, portanto, no
regula expresso gnica diferencial. Apesar disso, ele parece estar envolvido em
interaes entre as regies promotora e
intensificadora de maneira a produzir
transcrio diferencial de determinados
genes em determinadas clulas. Sp1 necessita se ligar ao TAF de 110-kDa para
que seja ativado o complexo de transcrio. Dessa maneira, esse TAF faz uma
ponte entre o Sp1 e o TBP formando uma
ala no DNA (Hoey et al., 1993; Chen et
al., 1994). TAFs permitiriam a formao de
alas no DNA de maneira que os elementos Sp1 no intensificador encontrariam a
protena TFIID no promotor (veja Figura
10.9). O fator de transcrio Bicoid se liga
aos TAFs de 110- e 60- kDa, e mutaes
em quaisquer desses TAFs reduzem a
transcrio dependente de Bicoid em em-
bries de Drosophila (Sauer et al., 1996).

Da mesma forma, o fator de transcrio
NTF-1 de Drosophila se liga a ambos os
TAFs de 60- e 150- kDa, e no homem, a
ativao transcricional pelo receptor de
estrgeno consumada pela sua ligao
ao TAF de 30-kDa (Jacq et al., 1994). Na
verdade, Jacq e colegas mostraram que
nem todos TBPs tinham o TAF de 30-kDa.
Parece que alguns TAFs so encontrados em todos TFIIDs, enquanto outros
parecem ser mais especficos.
Promotores sem elementos TATA.
Existem muitos genes (a maioria codificando protenas metablicas gerais e no protenas especficas em clulas) que usam
RNA polimerase II, mas cujos promotores
no tm a seqncia TATA. Nesse caso, outras protenas se ligam na regio do promotor; usualmente so protenas ligantes de
promotores tais como o SP1. A protena Sp1
no promotor rico em GC liga-se ao TFIID,
diretamente ou atravs de um TAF. O TFIID
est agora apto a iniciar a cascata de fatores
que formaro o complexo de iniciao da
transcrio e a ligao de uma protena da
RNA polimerase II regio do promotor
(Figura 10.10; Pugh e Tjian, 1991; Rigby,
1993). Mesmo que esses promotores no
tenham uma seqncia TATA, TFIID ainda o fator decisivo para a regulao da
ocorrncia da transcrio.
TAFs
Sp1
Protena ligante
de TATA
RNA polimerase II
e fatores basais
Figura 10.10
Configurao possvel para fatores de transcrio mediando a ligao da RNA polimerase

II a um promotor sem TATA contendo um
stio de ligao de Sp1. (De acordo com Pugh e
Tjian, 1991; Comai et al., 1992.)
402
Estrutura e funo dos intensificadores

Necessidade de intensificadores
Alm de promotores, os intensificadores tambm so importantes na regulao da
transcrio de genes vizinhos. Um dos primeiros intensificadores celulares encontrado foi demonstrado controlando a especificidade celular da transcrio do gene da
imunoglobulina. As clulas B so as nicas do corpo que produzem a protena imunoglobulina (anticorpo). Gillies e seus colaboradores (1983) transfectaram um gene
clonado da cadeia pesada da imunoglobulina, em clulas cultivadas de linfcitos B de
tumores que haviam perdido sua habilidade de produzir sua prpria cadeia pesada.
Essas clulas transfectadas passaram a sintetizar a cadeia pesada codificada pelo gene
incorporado. Porm, adicionando o mesmo gene - mas sem uma pequena regio de
um determinado ntron- nessas clulas B defeituosas foi observada apenas uma pequena transcrio do gene inserido. Havia uma regio intensificadora dentro do ntron
que era necessria para a transcrio (Figura 10.11).
Intensificadores so tambm elementos primrios responsveis pela transcrio
especfica para tecidos: os genes clonados de imunoglobulina no so transcritos
quando inseridos nos ncleos de clulas outras que as clulas B (Banerji et al., 1983;
Linhagem de clulas de
mieloma produzindo IgG
Figura 10.11
Especificidade tecidual do efeito do elemento

intensificador. O gene da cadeia pesada da imunoglobulina foi isolado e clonado de uma linhagem de clulas de mieloma produzindo IgG.
Alguns dos clones foram mantidos intactos,
enquanto em outros, vrias regies do ntron
entre os xons VDJ e Cg (que sero discutidos
mais tarde) foram excisadas com enzimas de
restrio. DNA dos clones resultantes foi
transfectado em clulas de mieloma que haviam perdido seus genes de imunoglobulina. O
mRNA acumulado das clulas transfectadas
foi isolado e separado por eletroforese em gel
de poliacrilamida, junto com mRNAs de um
fibroblasto normal de camundongo e da clula
original do mieloma. O RNA foi transferido
para papel de nitrocelulose e hibridizado com
um fragmento de enzima de restrio radioativa da regio C. Se a regio C estivesse sendo
transcrita desses genes clonados, a sonda radioativa deveria se ligar a ela. A sonda detectou a
mensagem de C somente dos clones que continham uma certa regio do ntron (indicada
pela barra colorida dentro do ntron). Quando
transfectado em clulas fibroblsticas de camundongo, entretanto, mesmo o gene clonado
inteiro no transcreveria mRNA de C. ( Protocolo e dados de Gillies et al., 1983.)
Isolamento e clonagem do gene da

cadeia pesada de imunoglobulina
Gene da cadeia
pesada de Ig
Transfectar com
gene normal
Mielomas de
camundongos
sem genes da
cadeia pesada
Remover pores do ntron
Transfeco com
diferentes
pores faltantes
do ntron
Sem
transfeco
Transfectar com
gene normal
Fibroblasto de
camundongo
Extrair mRNA, separar em gel, transferir para papel,

hibridizar com fragmento radioativo C de DNA
Posio do mRNA
de C normal
CAPTULO 10
Gillies et al., 1983). Alm disso, quando a regio do intensificador da cadeia pesada da
imunoglobulina inserida em um gene clonado de -globina, ele estimula a transcrio
daquele gene da hemoglobina somente se o gene inserido em uma clula B. Ambos,
os elementos reguladores cis e os fatores reguladores trans so necessrios para a
transcrio de gene especfico da clula.
Funo do intensificador:
Modelos temporais e espaciais de transcrio
Intensificadores podem regular a expresso temporal e especfica do tecido de todos
os genes regulados diferencialmente, e genes ativos em tipos de clulas adjacentes
tm diferentes intensificadores. No pncreas, por exemplo, os genes para as protenas
excrinas (para as protenas quimotripsina, amilase e tripsina) tm intensificadores
diferentes daqueles do gene para a protena endcrina insulina. Esses intensificadores
se situam nas seqncias ladeando o terminal 5 dos seus respectivos genes. Walker e
colegas (1983) colocaram essas regies de flanco no gene para o cloranfenicol acetill
transferase de bactria (CAT), um gene cujo produto enzimtico no encontrado em
clulas de mamfero. Atividade de CAT facilmente determinada em clulas de mamferos e usada como um gene reprter para mostrar ao pesquisador se um determinado intensificador est funcionando. Em seguida, os pesquisadores transfectaram
esses genes hbridos em (1) clulas de ovrio (que no secretam insulina ou quimotripsina), (2) em uma linhagem de clulas que secretam insulina, e (3) em uma linhagem de clulas excrinas, e mediram a atividade da enzima marcadora em cada uma
dessas clulas. Como mostrado na Figura 10.12, nenhuma das seqncias
intensificadoras promoveu a produo da enzima nas clulas ovarianas. Nas clulas
secretoras de insulina, a regio flanqueando a posio 5 do gene da insulina permitiu
a expresso do gene da cloranfenicol acetiltransferase, mas a regio flanqueando a 5
do gene da quimotripsina, no o permitiu. Inversamente, quando os clones foram
colocados na linhagem de clulas pancreticas excrinas, a regio flanqueando a 5 da
quimotripsina permitiu a expresso de CAT enquanto o intensificador da insulina no
(A)
Linhagem de clulas ovarianas
(B)
Linhagem de clulas pancreticas

secretando insulina
Figura 10.12
Especificao tissular de intensificadores de

genes pancreticos. As regies ladeando o terminal 5 do gene da insulina (I) e o gene da
quimotripsina (C) foram separadamente inseridos prximo ao gene para CAT bacteriano.
Como um controle positivo, o intensificador
do vrus do sarcoma de Rous (V), que parece
operar em todos os tipos de clulas, foi tambm colocado prximo ao gene CAT. Os trs
clones foram transfectados em trs tipos de
clulas, (A) uma linhagem de clulas ovarianas
que no produzem nem insulina nem quimotripsina, (B) uma linhagem de clulas secretando insulina, ou (C) uma linhagem de clulas
secretando quimotripsina. A atividade de CAT
foi ensaiada em todos lisatos celulares. As inseres mostram auto-radiografias tpicas do
ensaio de CAT onde cloranfenicol radioativo
(o substrato da reao de CAT) pode ser separado do cloranfenicol monoacetato (o produto
da reao de CAT) por cromatografia. (De acordo com Walker et al., 1983.)
(C)
Linhagem de clulas pancreticas

excrinas (secretando quimotripsina)
Cloranfenicol
monoacetato (produto)
Cloranfenicol
(substrato)
Intensificador
viral
Intensificador de
quimotripsina
Intensificador
de insulina
Tempo de incubao em minutos
Tempo de incubao em minutos
Tempo de incubao em (horas)
404
Stio de ligao de
protena especfica
do sexo
yp1
Regio do
intensificador
yp2
Intensificador
do ovrio
Intensificador
dos corpos
gorduros
Figura 10.13
Estrutura modular da regio do intensificador

da protena do vitelo de Drosophila. Os dois
genes da protena do vitelo ( yp1, yp2) so
regulados por um intensificador entre eles.
Uma regio do intensificador liga fatores de
transcrio nos ncleos ovarianos e permite a
expresso desses genes no ovrio. Outra regio do intensificador permite a expresso do
gene nos corpos gordurosos. Dentro da regio
controlando a expresso dos genes das protenas do vitelo nos corpos gordurosos existem
seqncias de DNA que ligam fatores de transcrio especficos do sexo.
o permitiu. Os intensificadores para 10 protenas excrinas compartilham uma seqncia de consenso de 20 pares de bases, sugerindo que essas seqncias similares
tenham um papel na ativao desses genes nas clulas excrinas do pncreas (Boulet
et al., 1986). Assim, parece que a expresso dos genes em clulas endcrinas e excrinas
do pncreas controlada por intensificadores diferentes.
Intensificadores so crticos para a regulao do desenvolvimento normal, durante
a ltima dcada foram feitas cinco generalizaes que enfatizam sua importncia para
a expresso gnica diferencial:
1. A maioria dos genes requer intensificadores para sua transcrio.
2. Intensificadores so os principais determinantes do tempo e do espao (tipo
celular) na transcrio diferencial.
3. Estando o intensificador a uma distncia relativamente grande do promotor
isso significa que pode haver mltiplos sinais para determinar se um dado gene
transcrito. Um gene pode ter vrios stios de intensificadores a ele ligados, e
cada intensificador pode se ligar a mais de um fator (que pode regular, seja
inibindo ou estimulando, a transcrio).
4. A interao entre as protenas ligadas aos stios intensificadores com o sistema
de transcrio agrupado no promotor considerada como regulador da transcrio. O mecanismo dessa associao no inteiramente conhecido, e nem
entendemos como o promotor integra todos esses sinais.
5. Intensificadores so modulares. Existem elementos de DNA que conferem expresso gnica temporal e espacial, e esses podem ser misturados e pareados.
Por exemplo, o intensificador da protena do vitelo da Drosophila melanogaster
construdo de tal forma que um dos elementos do DNA permite a expresso
do gene nos corpos gordurosos, outro elemento de DNA permite a expresso
nos ovrios e o terceiro elemento liga protenas especficas do sexo (as protenas Doublesex). A protena Doublesex especfica da fmea estimula a transcrio; a protena especfica do macho inibe a transcrio. Assim, o gene da
protena do vitelo ativado somente nos corpos gordurosos e ovrios da
mosca fmea (Figura 10.13; Garabedian et al., 1985; An e Wensink, 1995). O
elemento de DNA para expresso nos corpos gordurosos compartilhado com
outros genes que so expressos nesse rgo, e o elemento de DNA ligado s
protenas Doublesex tambm compartilhado pelos genes cuja expresso
especfica para o sexo.
Fatores de transcrio:
Os trans-reguladores dos promotores e dos intensificadores
Fatores de transcrio so protenas que se ligam s regies intensificadoras ou promotoras e que interagem de tal maneira que a transcrio ocorre somente a partir de um
pequeno grupo de promotores numa dada clula. A maioria dos fatores de transcrio
pode se ligar s seqncias especficas de DNA, e essas protenas trans-reguladoras
podem ser agrupadas em famlias baseadas em similaridades de estrutura. Dentro de
cada famlia, as protenas compartilham uma armao estrutural comum nos seus respectivos stios de ligao ao DNA, e pequenas diferenas de aminocidos no stio de
ligao podem alterar a seqncia do DNA ao qual elas se ligam. Alm de terem o
domnio ligante de DNA que especfico para uma seqncia, os fatores de transcrio contm um domnio envolvido na ativao da transcrio do gene cujo promotor
ou intensificador ele ligou. Freqentemente, esse domnio trans-ativador permite ao
fator de transcrio interagir com protenas envolvidas na ligao da RNA polimerase.
Essa interao com freqncia aumenta a eficincia com a qual o complexo transcricional bsico pode ser construdo e ligar a RNA polimerase II. Existem vrias famlias de
fatores de transcrio; as aqui discutidas so de alguns tipos principais.
CAPTULO 10
Figura 10.14
O homeodomnio da protena Engrailed se liga em um stio especfico do DNA. A hlice 3 contata os pares de bases no sulco principal, enquanto a poro amino-terminal do homeodomnio entra no
sulco menor. (Segundo Pabo e Sauer, 1992.)
Protenas de homeodomnio
Uma famlia extremamente importante de fatores trans-reguladores o conjunto de
protenas de homeodomnio. Essas protenas so crticas para a especificao dos
eixos corporais ntero-posteriores em todo o reino animal; elas sero mais detalhadas nos Captulos 14 e 16. O homeodomnio consiste de 60 aminocidos organizados em hlice-giro-hlice, de tal maneira que a terceira hlice se estende para dentro
do sulco principal do DNA que ela reconhece. Os aminocidos da poro aminoterminal do homeodomnio tambm contactam as bases no sulco menor (Figura
10.14). Esse homeodomnio foi visto pela primeira vez em protenas que especificam
a identidade de segmentos na Drosophila. Mutaes nessas protenas causaram a
transformao de um segmento do corpo em outro (uma transformao conhecida
como homeosis, que ser discutida em detalhe no Captulo 14). Vrias protenas de
homeodomnio na Drosophila melanogaster foram clonadas, seqenciadas e testadas para sua habilidade de regular a transcrio. A Tabela 10.1 mostra nove protenas de Drosophila contendo homeodomnios e as seqncias de DNA que elas
reconhecem. O reconhecimento de promotores especficos pelas protenas contendo o homeodomnio tem sido considerado essencial para o desenvolvimento da
Drosophila. A protena Bicoid, por exemplo, um fator de transcrio de homeodomnio que se liga aos promotores do gene hunchback. Essa ligao ativa a transcrio desse gene; a protena Hunchback resultante tambm um fator de transcrio,
e se liga aos intensificadores daqueles genes necessrios para a formao da cabea e do trax da Drosophila (Driever e Nsslein-Volhard, 1989; Struhl et al., 1989).
Pequenas modificaes na composio de aminocidos do stio de ligao ao DNA
podem mudar a seqncia de DNA reconhecida pela protena. Treisman e seus
colegas (1989) demonstraram que alterando um nico aminocido no homeodomnio
podia-se modificar os promotores que essa protena ativaria.
406
Tabela 10.1
Principais protenas de homeodomnio da Drosophila

melanogaster e seus stios de ligao ao DNA.
Protena
Stio(s) de ligao ao DNA
Abdominal B
TAATTTGCAT
TCAATTAAAT
Antennapedia
TAATAATAATAATAA
Bicoid
TCCTAATCCC
Engrailed
TCAATTAAAT
Even-skipped
TCAATTAAAT
TAATAATAATAATAA
TCAGCACCG
Fushi tarazu
TCAATTAAAT
TAATAATAATAATAA
Paired
Ultrabithorax
Zerknlt
TCAATTAAAT
TAATAATAATAATAA
TCAATTAAAT
Os fatores de transcrio POU

Alguns fatores de transcrio tm tanto um homeodomnio como uma segunda regio
de ligao ao DNA (Figura 10.15). Em alguns casos, essa regio que compreende o
homeodomnio e a segunda regio de ligao ao DNA chamada domnio POU (Herr
et al., 1988). As iniciais so de quatro protenas nas quais pela primeira vez foram
vistas contendo tais domnios: Pit-1 (tambm chamada GHF1), um fator especfico da
pituitria que ativa os genes, codificando o hormnio de crescimento, prolactina e
outras protenas da pituitria; Oct1, uma protena de ampla distribuio que reconhece uma certa seqncia de oito pares de bases chamada seqncia octa (octa box), e
Oct2, a protena especfica da clula B que reconhece a octa box e ativa os genes da
imunoglobulina; e UNC-86, um produto gentico do nematdeo envolvido na determinao do destino de clulas neuroniais. O homeodomnio de Pit-1 reconhece a seqncia ATATTCAT, enquanto o homeodomnio de Oct2 reconhece a seqncia similar ATTTGCAT. Se o elemento de DNA reconhecido pela Pit-1 alterado em dois
lugares, ele se torna um stio de ligao de Oct-2, e o gene de prolactina expresso em
linfcitos B (Elsholtz et al., 1990). Assim, uma modificao de duas bases no intensificador reconhecido pela protena POU pode converter uma transcrio especfica da
pituitria em uma transcrio especfica do linfcito.
Domnio POU
Principal
domnio
trans-ativador
POU-especfico
Homeodomnio
Alta afinidade,
Interao
stio-especfico,
protena-protena,
ligante de DNA,
ligante de DNA
interao
protena-protena
dependente de DNA
Figura 10.15
Os domnios dos fatores de transcrio da famlia POU
CAPTULO 10
Gene Pit-1 do
primrdio da
pituitria no
expresso
Transcrio do gene
Pit-1 especfico
do rgo
Figura 10.16
Traduo de Pit-1
especfico da clula
Estrgeno
Embrio de
14 dias
Embrio de
16 dias
Somatotrofos
Lactotrofos
Tireotrofos
Corticotrofos
Gonadotrofos
A protena Pit-1 encontrada somente em clulas da pituitria. Quando genes do

hormnio de crescimento (que so ativos na pituitria) so clonados e colocados em
extratos nucleares de clulas outras que no as da pituitria, esses genes no so
transcritos, ao passo que a transcrio se dar se os genes do hormnio de crescimento forem colocados em extratos nucleares de clulas da pituitria anterior. Alm disso,
a adio de Pit-1 ao extrato nuclear das clulas no pituitrias permitir a transcrio
do gene do hormnio de crescimento (Bodner e Karin, 1987). Conclui-se, ento, que a
expresso especfica do gene do hormnio de crescimento na pituitria anterior
mediada por uma protena trans-reguladora especfica para o tecido. Inversamente,
quando outros genes (tais como aqueles para a globina) so clonados prximo s
seqncias ligantes de Pit-1 e so usados para produzir camundongos transgnicos,
esses genes mostram uma transcrio especfica da pituitria (Behringer et al., 1988).
O intensificador ligante da protena Pit-1 , por sua vez, regulado pelo desenvolvimento (Doll et al., 1990; Simmons et al., 1990). Transcrio do gene Pit-1 do
camundongo detectada dentro de um dia aps o aparecimento histolgico da bolsa de Rathke, o primrdio da pituitria anterior, mas a traduo desse mRNA em
protena no ocorre antes de 2 ou 3 dias. O mRNA do hormnio de crescimento
primeiro detectado quando o gene Pit-1 traduzido. interessante notar que em
dois tipos de clulas da pituitria anterior, os corticotrofos que sintetizam a
corticotrofina (tambm chamada hormnio adrenocorticotrfico, ou ACTH) e os
gonadotrofos que sintetizam gonadotrofinas, o mRNA de Pit-1 produzido, mas
no traduzido (Figura 10.16). Somente nas clulas da pituitria dos somatotrofos
(produzem hormnio do crescimento), lactotrofos (produzem prolactina) e tireotrofos
(que sintetizam hormnio estimulador da tireide) a mensagem do Pit-1 traduzida
em protena nuclear que liga DNA. O intensificador ligante da protena Pit-1 no
somente mediador da transcrio dos produtos diferenciados dessas clulas, mas
necessrio para a formao das clulas da pituitria anterior na bolsa de Rathke.
Duas mutaes dwarf em camundongos so causadas por uma mutao na protena
Pit-1. Esses camundongos no tm as clulas tireotrficas, lactotrficas e
somatotrficas da pituitria anterior (Li et al., 1990).
INTERAES COMBINATRIAS E FORMAO DE ALAS NA REGULAO DA
TRANSCRIO DO GENE DA PROLACTINA. A atividade da protena Pit-1 no gene
para a prolactina ilustra muitas das caractersticas dos fatores de transcrio. Primeiro, o intensificador do gene prolactina liga vrios fatores diferentes cuja interao
regula a transcrio. O gene prolactina ativado durante a gravidez para produzir o
hormnio da pituitria (prolactina) que estimula a produo de leite; esse gene estimulado ao mximo pela combinao de Pit-1 e estrgeno. Essa combinao regula o
lugar (a glndula pituitria) e o tempo (gravidez e logo aps) para a sntese de prolactina. Simmons e colegas (1990) mostraram que esse sinergismo ocorre na regio do
Determinao do tipo celular por combinaes de protenas trans-reguladoras. O mRNA

para o fator de transcrio Pit-1 transcrito
em todos tipos de clulas destinadas a residir
na pituitria anterior. Entretanto, a protena
Pit-1 traduzida somente nas clulas
tireotrficas, somatotrficas e lactotrficas.
Somatotrofos sintetizam hormnio de crescimento aps a traduo de Pit-1. Lactotrofos
sintetizam alguma prolactina concomitante
com a traduo de Pit-1 mas produzem quantidade significante de prolactina quando somente co-estimulados com estrgeno (e sua
protena receptora trans-reguladora). O mecanismo distinguindo a transcrio do hormnio estimulador da tireide parece envolver a regio do silenciador (veja Figura 10.17).
(De acordo com Simmons et al., 1990.)
408
Figura 10. 17
Sinergismo combinatrio no intensificador da

prolactina. (A) Sinergismo entre stios do intensificador da prolactina no rato. O intensificador da prolactina foi fundido com um gene
reprter (luciferinase) e o nvel de atividade
do gene reprter determinado quando o gene
fundido foi adicionado a clulas cultivadas.
Quando Pit-1 ou estrgeno estavam presentes nessas clulas havia somente um pequeno
aumento no nvel de transcrio. Entretanto,
a adio de ambas as substncias causou um
aumento de 1400 vezes no nvel da transcrio. (B) Sinergismo entre os stios intensificadores e promotores do gene da prolactina
no camundongo. Genes fundidos foram produzidos portando o gene reprter e (1) a regio inteira 5 do intensificador da prolactina,
seqncias laterais e o promotor da prolactina;
(2) somente o intensificador especfico do tecido e o promotor da prolactina; (3) s o
promotor de prolactina; (4) o intensificador
da prolactina mais o promotor do gene
timidina quinase (TK); e (5) somente o promotor do gene Tk. Essas construes foram
colocadas em zigotos de camundongos, e a
expresso do gene reprter foi monitorada
em clulas lactotrficas e tireotrficas da
pituitria. (C) Modelo para a regulao da
expresso do gene da prolactina. Ambos, o
promotor e o intensificador tm quatro stios
de ligao de Pit-1. O receptor de estrgeno
liga-se ao elemento responsivo de estrgeno
(ERE) da regio do intensificador. As regies
que inibem a transcrio de prolactina em
tireotrofos e somatotrofos esto escuras.( A
de acordo com Simmons et al., 1990; B de
acordo com Crenshaw et al., 1989.)
(A)
Pit-1
Estrgeno
Nmero de vezes da estimulao acima da linha de base

(B)
Construes do
promotor da prolactina
Seqncia
flanqueadora
Especificidade celular na expresso

do transgene da prolactina
Lactotrofos
Tireotrofos
Promotor
Intensificador
(C)
Sinergismo promotorintensificador
Sinergismo do
intensificador
Promotor
Regies
Ativantes:
DNA
Regies
restritivas:
Somatotrofos
Somatotrofos
Tireotrofos
Tireotrofos
intensificador do gene. A protena Pit-1 se liga a uma regio do intensificador enquanto o estrgeno, atravs da sua protena receptora, se liga a outra regio do
intensificador. Quando esses fatores esto presentes ao mesmo tempo, a transcrio
muito maior que aquela resultante da adio de cada um separadamente (Figura
10.17A). Mais ainda, parece haver regies silenciadoras flanqueando o intensificador que so necessrias para desligar o gene da prolactina nos tireotrofos (que de
outra maneira ativariam o gene da prolactina) (Figura 10.17B,C; Crenshaw et al.,
1989). Assim, Pit-1 age de forma combinatria com outros fatores de transcrio
para regular seus genes alvos.
Segundo, h um sinergismo entre o intensificador e o promotor do gene da prolactina. O intensificador do gene da prolactina no estimular o promotor de outro gene
to eficientemente como estimular o seu prprio promotor (Figura 10.17B,C; Crenshaw
CAPTULO 10
et al., 1989). Esse sinergismo entre os stios promotor e intensificador parece ser
causado pela formao de alas no DNA entre os dois stios. No gene da prolactina do
rato, o intensificador est localizado a mais de 1300 pares de bases a montante do seu
promotor. Usando um ensaio que funde DNA aproximado por interaes protenaprotena, Cullen e colegas (1993) mostraram que as regies do promotor e do intensificador so reunidas somente quando Pit-1 e estrgeno esto presentes. Parece que
o receptor do estrgeno ligado ao hormnio no intensificador capaz de estabilizar a
interao entre essa regio e a do promotor, assim permitindo a interao entre as
protenas ligadas ao intensificador (Pit-1 e receptor do estrgeno) com o sistema de
transcrio do promotor.
Terceiro, a protena Pit-1 regula positivamente sua prpria sntese. Um dos alvos da protena Pit-1 o intensificador do prprio gene Pit-1 (Rhodes et al., 1993).
Uma vez que o gene Pit-1 foi ativado (por outros fatores de transcrio), a protena
Pit-1 se liga ao seu prprio intensificador e mantm a transcrio do gene Pit-1.
Esse tipo de auto-regulao positiva importante como um mecanismo que compromete a clula a um determinado caminho de desenvolvimento. Assim o gene Pit-1,
uma vez ativo, mantm o fentipo da pituitria. Tal auto-regulao tambm se d para
a protena MyoD (que envolve a clula na via do desenvolvimento da clula muscular) e para vrias protenas de Drosophila que mantm os limites especficos dos
segmentos e individuais do sexo.
&
Especulaes
Regulao da transcrio dos genes

de cadeia leve das imunoglobulinas
HABILIDADE de se obter linha-
gens clonadas de clulas congeladas em um estgio determinado do seu desenvolvimento nos

permite amostrar os fatores de transcrio presentes naquele momento. Tais
clones so obtidos de tumores de certos
tecidos, e leucemias de linfcitos B (clulas B) do sistema imune permitiu aos
pesquisadores identificar muitos dos
elementos reguladores cis e trans, necessrios para o desenvolvimento da linhagem de clulas B.
A estrutura dos genes da imunoglobulina.
At agora, nosso modelo tem sido aquele em que cada clula do corpo contm
exatamente os mesmos genes. Isso provavelmente verdade para a maioria dos
tipos de clulas, mas os linfcitos so
diferentes. Em cada clula B, o genoma
foi organizado de tal forma que cada uma
capaz de produzir um tipo de anticorpo
(de um repertrio contendo possivelmente mais de 10 milhes de anticorpos).
Anticorpos so produzidos quando uma

substncia estranha o antgeno - entra em
contato com as clulas B, que residem nos
ndulos linfticos e no bao. Mesmo antes
do contato com o antgeno, cada uma das
clulas B em repouso produz protenas
imunoglobulinas mas no as secretam. Em
lugar disso, as molculas de imunoglobulinas so inseridas nas membranas das clulas B e so usadas como receptores de
antgenos. Esses receptores, ao se ligarem
aos antgenos, sinalizam para a clula se dividir e em seguida se diferenciar. Cada clula B produz um anticorpo que reconhece
uma e somente uma forma antignica. Portanto, um anticorpo reconhecendo o
envoltrio protico de um poliovrus no
deveria reconhecer a toxina da clera, membranas da E. coli ou caspa de zebra.
Todas as protenas do anticorpo na membrana da clula B tm uma estrutura muito semelhante. Cada uma consiste de dois pares de
subunidades polipeptdicas. Existem duas cadeias pesadas idnticas e duas cadeias leves
idnticas; as cadeias esto ligadas entre si por
pontes de dissulfeto (Figura 10.18). A especificidade da molcula de anticorpo (isto , se

ela se ligar a um poliovrus, uma clula de E.
coli ou alguma outra molcula) determinada
pela seqncia de aminocidos na regio varivel. Essa regio composta dos aminoterminais das cadeias leve e pesada. As regies variveis das molculas de anticorpo so
ligadas s regies constantes que do ao anticorpo suas propriedades efetuadoras necessrias para inativar o antgeno. Durante dcadas, os imunologistas se espantavam considerando como o sistema imune teria condio de produzir tantos tipos diferentes de anticorpos. Poderiam todos os 107 diferentes tipos de protena de anticorpo serem codificados no genoma? Isso tomaria uma quantidade enorme de espao cromossmico. Mais
ainda, como o sistema imune saberia como
produzir um anticorpo contra uma molcula
que nem encontrada fora do laboratrio?
Surpreendentemente, foi descoberto que a
produo de molculas especficas de anticorpos envolve a criao de novos genes durante a diferenciao da clula B.
410
Stio de combinao
do antgeno
Sitio de combinao
do antgeno
Cadeia leve
Pontes de dissulfeto
Cadeia pesada
Figura 10.18
HOOC
Sito efetuador
COOH
Estrutura de uma protena imunoglobulina tpica (anticorpo). Duas cadeias pesadas idnticas
so ligadas por pontes de dissulfeto. O stio de combinao do antgeno composto de regies
variveis (branco) de cadeias leves e pesadas, enquanto o stio efetuador do anticorpo (que
controla se aglutina antgenos, se liga aos macrfagos, ou entra em secrees mucosas) determinado pela seqncia de aminocidos da regio constante da cadeia pesada (colorida).
Criao dos genes de cadeia

leve dos anticorpos
Os genes para as cadeias pesadas e leves
dos anticorpos esto organizados em segmentos. Genes de cadeia leve de mamferos
contm trs segmentos (Figura 10.19). O
primeiro segmento do gene, V, codifica os
primeiros 97 aminocidos da regio varivel
da cadeia leve. Existem aproximadamente
300 seqncias V, unidas umas as outras no
genoma do camundongo. O segundo segmento, J, consiste de 4 ou 5 seqncias possveis de DNA para os ltimos 15-17 resduos da regio varivel da cadeia leve do
anticorpo. O terceiro segmento a regio
constante (C) da cadeia leve. Durante a diferenciao da clula B, um dos 300 segmentos V e um dos cinco segmentos J se
combinam para formar a regio varivel do
gene do anticorpo. Isso feito movendo
uma seqncia do segmento V para uma
seqncia do segmento J, um rearranjo que

elimina o DNA interveniente.
Esse rearranjo dos genes foi visto inicialmente por Hozumi e Tonegawa (1976), que
isolaram DNA de um embrio de camundongo e de uma clula B de tumor secretando a
cadeia leve.* Eles digeriram separadamente
os dois DNAs com a enzima de restrio
BamHI (veja Captulo 2), que cliva o DNA
sempre que ela localiza a seqncia
GGATCC. O resultado foi uma srie de fragmentos de DNA, de tamanho determinado
pelo comprimento da molcula de DNA entre dois stios de clivagem. Os fragmentos
de DNA foram colocados em uma cavidade
na extremidade de um gel e submetidos
eletroforese. Enquanto o DNA migrava para
o eletrodo positivo, os fragmentos menores
se moviam mais rapidamente do que os maiores, separando efetivamente os fragmentos de acordo com o tamanho. Aps a
Figura 10.19
Rearranjo dos genes da cadeia leve durante o desenvolvimento do linfcito B. Enquanto a clula
B em desenvolvimento ainda est maturando na medula ssea, um dos 300 ou mais segmentos
V do gene, se combina com um dos cinco segmentos J do gene e se aproxima do segmento
constante do gene (C).
Organizao original do gene
Organizao do gene em linfcitos B

produzindo anticorpos de Vn-1 e J4
eletroforese, o gel foi cortado em vrios

pedaos, cada um contendo pedaos de
DNA de um certo tamanho. O DNA em cada
segmento de gel foi eludo e desnaturado
em cadeias nicas. Parte desse DNA foi
hibridizado com RNA radioativo, que codificava a cadeia leve inteira e foi isolado
do tumor de clula B original. A outra parte
foi hibridizada com RNA radioativo codificando somente a regio C da cadeia leve (a
metade 3 da mensagem do RNA). Em dois
segmentos do gel, o DNA do embrio ligou o mRNA da cadeia leve. O DNA do
primeiro segmento tinha um peso molecular
(MW) de aproximadamente 6 milhes; o
peso do DNA do segundo segmento foi
de 3.9 milhes. Quando o DNA do embrio
de camundongo foi hibridizado com o
mRNA da regio C da cadeia leve, somente
o DNA de peso molecular 6 milhes se ligou ao RNA. Portanto, no embrio do camundongo, a regio C estava codificada
dentro de fragmentos de DNA com peso
molecular de 6 milhes (entre os stios de
BamHI), enquanto a regio V estava codificada dentro de uma regio de peso
molecular de 3.9 milhes (Figura 10.20).
O DNA do tumor linfoctico, entretanto, deu resultados muito diferentes. O nico
DNA linfoctico que ligou o mRNA de cadeia leve tinha um peso molecular de 2.4
milhes, e ele tambm ligou o mRNA da
regio C da cadeia leve. Assim, tanto a regio C como a V foram codificadas no mesmo fragmento de DNA! A explicao mais
simples (confirmada por numerosos laboratrios e mtodos; veja Bernard et al., 1978;
Brack et al., 1978) foi a de que dois fragmentos de genes, um codificando a regio C da cadeia leve e outro codificando
uma regio V especfica da cadeia leve se
fundiram para formar um novo gene durante o desenvolvimento do linfcito. O
modelo proposto para tal sntese do gene
est apresentado na Figura 10.21.
* Tumores de clula B (mielomas) foram usados porque produzem uma quantidade enorme de
uma imunoglobulina especfica (e do mRNA para
aquela imunoglobulina).
CAPTULO 10
Figura 10.20
Clulas de mieloma
Protocolo e resultados do experimento de Hozumi e Tonegawa. DNAs de clulas de embrio de camundongo e clulas B de tumores (mielomas) foram
digeridos separadamente em BamHI, separados por eletroforese e eludos do
gel. Aps a desnaturao, cada amostra de DNA eludo foi hibridizada com
mRNA radioativo codificando as regies V e C da cadeia leve da imunoglobulina (total) ou com um mRNA radioativo fragmentado codificando somente a
regio C daquela protena de cadeia leve (a metade 3). Para o DNA embrionrio, as regies V e C da protena de cadeia leve foram encontradas em dois
pedaos diferentes de DNA (regio V em um pedao com peso molecular de
3.9x106, e a regio C em um fragmento de DNA de peso molecular de 6x106).
No tumor linfoctico, as regies V e C foram encontradas juntas em um nico
fragmento de DNA de peso molecular 2.4x106.
Camundongo embrionrio
DNA extrado de clulas

de mieloma e
camundongos embrionrios
Enzimas de
restrio
DNA tratado com enzimas

de restrio dando fragmentos de
DNA
Sonda
de V-CmRNA
ou
sonda
de CmRNA
Fragmentos so
desnaturados e
tratados com a
sonda marcada para
V-C
ou C
As duas sondas se ligam aos mesmos

fragmentos de DNA do mieloma, mas
as sondas se ligam a diferentes
fragmentos de DNA embrionrio
DNA de mieloma
DNA de embrio
cpm no hbrido
V-CRNA
C-RNA
cpm no hbrido
Criao de genes de cadeia

pesada do anticorpo
Os genes de cadeia pesada dos anticorpos
contm mais segmentos do que a cadeia
leve. Segmentos do gene de cadeia pesada
incluem um segmento V (200 diferentes seqncias para os primeiros 97 aminocidos),
um segmento D (10 a 15 seqncias diferentes codificando de 3 a 14 aminocidos), e
um segmento J (4 seqncias para os ltimos 15 a 17 aminocidos da regio V). O
prximo segmento codifica a regio C. A regio varivel da cadeia pesada formada
justapondo um segmento V a um segmento
D e a um segmento J (Figura 10.22A,B). Essa
seqncia da regio varivel VDJ est agora adjacente primeira regio constante dos
genes de cadeia pesadaa regio C, especificamente para anticorpos que podem
ser inseridos na membrana plasmtica. Assim formada uma molcula de imunoglobulina a partir de dois genes criados durante o desenvolvimento do linfcito B no estgio independente do antgeno. Podem ser
formadas cerca de 103 cadeias leves e 104
cadeias pesadas. Como cada uma formada independentemente da outra, cerca de
107 tipos de anticorpos podem ser criados
pela unio de uma cadeia leve e uma cadeia
pesada dentro da clula. Cada clula produz somente um desses 10 7 tipos de
anticorpos e os coloca na membrana celular
para serem usados como receptores de
antgenos. O genoma de cada clone de
linfcito pode ser bastante diferente daquele
de qualquer outra clula.
Mais tarde no desenvolvimento adulto,
algumas clulas B sofrem outro arranjo chamado troca de classe. Aqui, toda a seqncia VDJ do gene de cadeia pesada transferido da regio C a outra regio C. A nova
regio C ter propriedades diferentes. Na
Figura 10.22C e D, a seqncia VDJ
transferida para uma regio C. A seqncia
C codifica a regio constante que permite
que anticorpos sejam secretados na mucosa
Tamanho do fragmento
ligando-se sonda
e aparelho digestivo, onde protegem o corpo contra antgenos no ar e nos alimentos.

A clula B no o nico tipo celular
que altera seu genoma durante a diferenciao. A outra clula importante do sistema
imune, o linfcito T, tambm deleta uma
poro do seu genoma na construo do
V-CRNA
C-RNA
Tamanho do fragmento
ligando-se sonda
seu receptor de antgeno (Fujimoto e

Yamagishi, 1987). As enzimas responsveis
pela mediao dos eventos de recombinao do DNA parecem ser os mesmos nas
linhagens de clulas B e T. Chamadas
recombinases (Schatz et al., 1989; Oettinger
et al., 1990), essas duas protenas reconhecem
412
PM 6x106
PM 3.9x106
Stio Bam HI
DNA embrionrio
DNA de clula B de tumor
as regies sinalizadas de DNA imediatamente a montante do DNA recombinvel e forma um complexo que inicia as quebras na
fita dupla (Hiom e Gellert, 1997). Os genes
para essas enzimas, so ativos somente nas
clulas pr-B e clulas pr-T, onde os genes
esto sendo recombinados. Esses genes de
recombinases no so ativos em clulas maduras, tanto B como T, e tambm no esto
na maioria de outros tipos de clulas.*
Regies cis-reguladoras dos
genes de imunoglobulinas.
A descoberta da juno de V(D)J e a troca
de classe resolveu a maioria dos proble-
PM 2.4x106
Figura 10.21
Modelo de modificaes no DNA entre clulas embrionrias e o linfcito B, de acordo com os

dados de Hozumi e Tonegawa (1976).
mas relacionados origem da diversidade

dos anticorpos. Entretanto, outros problemas foram criados. Cada segmento V tem
seu prprio promotor a ele ligado. Por que
no h expresso de cada gene dos segmentos V? Mapeamentos de deleo em
genes clonados mostrou que o promotor
da cadeia leve da imunoglobulina contm
vrias regies crticas para a transcrio.
Um desses elementos, a montante do promotor, chamado seqncia octa (octa box)

(Bergman et al., 1984; Parslow et al., 1984),
devido a seus oito pares de bases:
ATTTGCAT. Essa seqncia octa foi encontrada em todos os promotores da cadeia leve da imunoglobulina estudados. O
promotor do gene de cadeia pesada da imunoglobulina tem uma sequncia octa in-
(A)
Formao da regio varivel
(B)
Troca de classe
(C)
Figura 10.22
Formao da regio varivel do gene e troca de classe na produo de cadeias pesadas da

imunoglobulina. (A) uma cadeia pesada contm trs segmentos (V, D e J) que se juntam
para formar a regio varivel (V) e a regio constante (C). As quatro principais classes
de anticorpos so classificadas com base na regio constante (IgA contm C: IgM, C;
IgG, C). (B) Antes da apresentao do antgeno, a regio varivel se forma pela unio
dos segmentos V, D e J. Esse segmento VDJ do gene est adjacente regio C e o
anticorpo resultante est localizado na membrana celular. (C) Aps a apresentao do
antgeno, pode ser feita uma ala na regio do DNA, de tal maneira que o segmento VDJ
fique adjacente a uma outra regio C (nesse caso, a regio C, que permite a anticorpos
penetrar em secrees mucosas). (D) Essa troca de classes mediada por uma srie de
seqncias (S) de trocas, adjacentes a cada uma das regies constantes. (De acordo com
Davis et al., 1980a,b.)
* At recentemente, considerava-se que as protenas recombinase eram encontradas somente em
linfcitos, mas evidncia recente (Chun et al., 1991;
Matsuoka et al., 1991) mostrou que eventos de
recombinao e recombinases existem tambm no
tecido cerebral. No se conhece a funo nas clulas neurais, mas fascinante especular que alguns
dos receptores que ligam o axnio da clula nervosa ao seu alvo especfico podem ser feitos pela
recombinao de vrias regies do gene.
CAPTULO 10
(A)
Gene da linhagem germinativa: sem transcrio

Regio D
Regio J
Intensificador
Figura 10.23
Modelo para a atividade do intensificador da

imunoglobulina. (A) A regio do intensificador do gene de cadeia pesada da imunoglobulina parece envolver seqncias entre o segmento J do gene e as seqncias de troca (S)
precedendo C. Se o intensificador removido, a transcrio muito diminuda. O promotor 5 precede cada um dos segmentos da regio V do gene e est originalmente muito distante do intensificador. (B) O rearranjo VDJ
do gene trs um promotor para perto do intensificador e permite que a transcrio se concretize. (C) Durante a troca de classe, o intensificador permanece com os segmentos VDJ
enquanto eles so colocados perto de uma nova
regio constante (C).
(B) Gene rearranjado: transcrio da imunoglobulina

Intensificador
DNA
RNA nuclear
mRNA
(C)
Gene trocado de classe: Transcrio de nova classe de imunoglobulina

Intensificador
O rearranjo no gene coloca um determinado promotor na proximidade de um intensificador. Um evento semelhante ocorre com o gene de cadeia pesada, e durante
a troca de classe (quando uma regio do
DNA transformada em ala e deletada), a
regio do intensificador permanece prxima ao pedao VDJ (Figura 10.23).
DNA
RNA nuclear
mRNA
vertida: ATGCAAAT. Quando a seqncia octa colocada a montante de um gene

da globina em um linfcito B cultivado, a
transcrio do gene de globina aumenta
de 11 a 18 vezes. Esse aumento visto somente em clulas linfides e no foi observado em fibroblastos (Wirth et al., 1987).
A seqncia do intensificador do gene
de cadeia leve da imunoglobulina est localizada no primeiro ntron entre a seqncia
VJ e a regio C (Queen e Baltimore, 1983;
Bergman et al.,1984). Quando essa seqnPre-B
cia translocada para genes de globina

clonados, a transcrio desses genes tambm pode ocorrer especificamente em linfcitos (Picard e Schaffner, 1984). Para que a
transcrio ocorra no linfcito, o promotor
deve ser trazido para a proximidade do intensificador. Todos os segmentos V levam
um promotor, mas somente o segmento V
trazido prximo regio constante (com seu
intensificador) ser ativado (Mather e Perry,
1982). Essa localizao ocorre durante a
construo do gene da imunoglobulina.
PC
Non-B
trans-Regulao da sntese
de imunoglobulinas
O rearranjo de genes em si, no suficiente para sua ativao, pois um gene de
imunoglobulina rearranjado no transcrever ativamente quando colocado em um
fibroblasto ou clula do fgado. Devem
estar presentes fatores trans-reguladores
especficos para a clula em questo.
Staudt e colaboradores, em 1986, identificaram dois fatores que se ligam a promotores. Para isso, eles incubaram um pequeno pedao de DNA contendo uma
seqncia octa com extratos nucleares de
vrias clulas. Os produtos resultantes foram analizados em um gel. Se o extrato
Figura 10.24
Ligao no
especfica
Ligao especfica
da linhagem B
Fragmento de DNA
somente
Ensaio de troca de mobilidade em gel. Extratos nucleares de clulas

da linhagem B [pr-B, B e clulas de plasma (PC)] e clulas no-B
(linhagens de clulas cervicais, de fibroblastos, de clulas precursoras dos glbulos vermelhos do sangue) foram misturadas com
um pequeno segmento de DNA contendo o octmero. Aps incubao, as misturas foram separadas eletroforeticamente em um gel,
transferidas para papel de nitrocelulose, e hibridizadas com DNA
radioativo complementar seqncia do octmero. Na ausncia de
uma ligao, fragmento contendo o octmero migra rapidamente
para o fundo do gel. Todos os ncleos contm uma protena que se
liga no-especificamente ao octmero e impede fortemente a migrao. Os ncleos da linhagem de clulas B, entretanto, tambm
contm outra protena que inibe a migrao ligando-se seqncia
do octmero. (de Staudt et al., 1986, cortesia de D. Baltimore.)
414
Figura 10.25
Regulao de NF-B por I-B. I-B se liga

subunidade maior de NF-B e impede a entrada
do complexo no ncleo. I-B pode ser fosforilado por vrias quinases que so ativadas pela
replicao de vrus, antgenos, lipopolissacardeos
ou o fator de necrose tumoral. A fosforilao
de I-B libera NF-B que pode ento entrar no
ncleo e se ligar aqueles stios promotores e intensificadores que ele reconhece. Esses genes incluem os que codificam a cadeia leve da imunoglobulina kappa, fator de necrose tumoral,
interleucina 2, e o receptor para interleucina 2. O
vrus da imunodeficincia humana tambm tem
stios para ligao de NF-B.
Receptor de antgeno
de clula T ou B
Entrada
do vrus
ds RNA
quinase
Receptor de
lipopolissacardeo
Protena
quinase C
Receptor do fator de
necrose tumoral
Outras
protenas quinases
IB inativo
Fosforilao
de IB
NF-B ativo
Complexo
nuclear no tivesse uma protena capaz

de se ligar a esse DNA, o pequeno fragmento de DNA deveria migrar rapidamente pelo gel. Mas, se uma protena se ligou
a esse DNA, a migrao deveria ser prejudicada. Esse ensaio de mudana de mobilidade (Figura 10.24) demonstrou que cada
ncleo tinha pelo menos um fator capaz
de se ligar ao fragmento de DNA. Entretanto, a linhagem de clulas B (clulas prB, clulas B e clulas de plasma) continham, alm disso, um outro fator capaz de
se ligar especificamente seqncia octa
do DNA. Essas protenas ligantes foram
isoladas, e a protena especfica para linfcitos foi denominada Oct2 (NF-A2).
Ensaios similares foram usados para
encontrar uma protena nuclear restrita
linhagem de clulas B, que se ligasse especificamente s seqncias intensificadoras dos genes de cadeia leve das imunoglobulinas (Sen e Baltimore, 1986a;
Atchinson e Perry, 1987). Uma tal proteB, foi encontrada somente em cna, NF-
lulas B maduras e clulas de plasma, e reconhecia a seqncia de ligao 5GGGACTTTCC-3 no intensificador da cadeia leve. Alm disso, quando clulas prB so induzidas a se tornarem clulas B,
aparece a protena ativa NF-B*.
Neste ponto o problema da atividade
gnica diferencial levado a outro nvel: O
que controla a sntese dos fatores transreguladores especficos da clula B, como
Oct2 ou NF-B? (Ou seja, para explicar como
so produzidas especificamente em uma clula, devemos explicar como essas protenas nucleares so produzidas nessas clulas especficas.) Parece que a protena NFB est presente em vrios tipos de clula,
mas est ligada por uma protena de 65-kDa
B (inibidor de kappa). No estachamada I
do ligado, NF-B no pode entrar no ncleo
e se ligar ao DNA (Figura 10.25; Henkel et
inativo
Ncleo
Stio B
al., 1992). Assim, NF-B pode reconhecer a

regio do seu intensificador somente naquelas clulas que ou no sintetizam ou no
ativam seu IB- ou seja, em linfcitos maduros (Sen e Baltimore, 1986b; Baeuerle e
Baltimore, 1988). A sntese de cadeias leves
de imunoglobulinas provavelmente iniciada quando um sinal na superfcie celular ativa protenas quinases que podem fosforilar
IB. Considera-se que essa fosforilao libe-
Outros stios
ra NF-B e permite sua entrada no ncleo

(Ghosh e Baltimore, 1990; Kerr et al., 1991).
Alm da regulao positiva na transcrio do gene da imunoglobulina identificada nas clulas B, tambm existe regulao negativa da produo de imunoglobulina em clulas no-B. Parece haver vrios stios ladeando os genes da imunoglobulina, que so ligados pelas protenas que inibem a transcrio dos genes
* As clulas B so as nicas clulas que sintetizam imunoglobulinas. A clula pr-B pode produzir
a cadeia pesada mas no a cadeia leve da protena imunoglobulina. NF-B ativo tambm foi
encontrado em clulas T ativadas (mas no em inativadas). Genes especficos para a clula T, tais
como os que codificam a interleucina 2 (fator de crescimento da clula T) e seu receptor tm
intensificadores que ligam NF-B. Essa responsividade a NF-B pode ser importante na propagao
do vrus da imunodeficincia humana (HIV). Quando HIV infecta uma clula T, ele induz a formao
do NF-B ativo (Sen e Baltimore, 1986b; Lenardo e Baltimore, 1989). A produo de NF-B ativo
estimula os genes da clula T, que tm stios nos intensificadores para essa protena. Assim, a clula
T estimulada a se proliferar. Ao mesmo tempo, HIV tambm tem elementos intensificadores de
NF-B que tambm o permitem transcrever seus produtos rapidamente. bvio que a NF-B tem
um papel muito importante no desenvolvimento de linfcitos normal ou alterado.
Pode-se conjecturar o que a protena, no especfica, ligante da seqncia octa, est fazendo em clulas
no-B. Embora as protenas Oct1 e Oct2 possam se ligar mesma seqncia octa, elas exercem seus efeitos
interagindo com outras protenas em certos promotores (Tanaka et al., 1992).
CAPTULO 10
(Calame, 1989). Protenas capazes de se

ligar a essas regies silenciadoras dos
genes da imunoglobulina tambm foram
identificadas em clulas no-B. Concluise que a transcrio pode ser estimulada
ou inibida por protenas trans-regulado-
ras, dependendo do histrico do desenvolvimento da clula.

A anlise da transcrio especfica da
clula dos genes de cadeia leve da imunoglobulina progrediu, ento, para um
nvel onde se considera mais o produto
final na diferenciao de uma clula. Sabemos que a transcrio desse gene da

imunoglobulina depende da atividade anterior de duas protenas nucleares, Oct2 e
NF-B, cuja atividade vista somente em
linhagens de clulas B.
Fatores de transcrio bsicos do tipo hlice-ala-hlice.

Outro arranjo proeminente, identificado em protenas que se ligam aos promotores e
intensificadores do DNA, o motivo (motif) bsico hlice-ala-hlice (bHLH). Os
fatores de transcrio especficos do msculo, MyoD e miogenina (discutidos no
Captulo 9) contm esse motivo, tal como vrias outras protenas da Drosophila que
determinam as clulas do seu sistema nervoso perifrico: os produtos dos genes
daughterless, achaete-scute e extramacrochaetae. Como veremos no Captulo 20, os
genes que determinam o sexo na Drosophila tambm contm o modelo bHLH. As
protenas bHLH se ligam ao DNA atravs de uma regio de aminocidos bsicos
(tipicamente resduos 10 a 13) que precede a primeira -hlice (Figura 10.26). A hlice
contm aminocidos hidrofbicos em cada terceira ou quarta posio, fazendo com
que a hlice apresente uma superfcie de resduos hidrofbicos ao ambiente. Isso
permite protena um pareamento, por interaes hidrofbicas, com a mesma protena
ou outra relacionada, que apresenta tal superfcie (Jones, 1990).
Estudos recentes mostraram que homodmeros (entre duas protenas bHLH idnticas) no se ligam adequadamente ao DNA. Na realidade, as protenas bHLH reconhecem suas seqncias promotoras de acordo com o seguinte paradigma (Tabela
10.2). Existe uma protena bHLH ubqua, sintetizada pela maioria das clulas que
pode formar um dmero com qualquer um de dois parceiros em potencial. Um deles
um regulador positivo (que estimula a transcrio); o outro parceiro um regulador
negativo. Quando o regulador positivo se dimeriza com a protena bHLH ubqua,
forma-se um complexo ativador que estimula a transcrio dos genes que ele reconhece. Quando a dimerizao da protena com o regulador negativo, o produto resultante reprime a transcrio desses mesmos genes. Por exemplo, a famlia de protenas
MyoD ativa na promoo da miognese quando complexada com as protenas E12
ou E 47- duas protenas bHLH ubquas (French et al., 1991; Lassar et al., 1991). O
desenvolvimento do msculo inibido quando as protenas MyoD, E12 ou E47 esto
ligadas protena Id (inibidor da diferenciao). A protenas Id contm o motivo
HLH, mas no a regio bsica que se liga ao DNA. Dimerizao de Id com MyoD, E12
ou E47 interfere com a habilidade dessas protenas se ligarem ao DNA, e a expresso
de Id na clula impede a atividade das protenas MyoD (Benezra et al., 1990). A protena Id produzida enquanto os precursores da clula muscular ainda esto se dividindo, e desaparecem quando os mioblastos deixam o ciclo celular para comear a se
diferenciarem em miotubos. Se Id for super expressa em mioblastos cultivados, eles
no se diferenciaro em miotubos (Jen et al., 1992).
Tabela 2 Dmeros bHLH no desenvolvimento
Neurognese de
Miognese de
Dmero
Drosophila
Mamfero
Diviso celular
de Mamfero
Protena onipresente
Regulador positivo
Regulador negativo
Max
myc
Mad ou Max
daughterless
achaete-scute
extramacrochaetae
E12, E47
Famlia MyoD
Id
HOOC
Hlice
Ala
Hlice
Domnio de
ligao do
DNA
COOH
Hlice
Ala
Hlice
Domnio de
ligao do
DNA
Figura 10.26
Domnios dos fatores de transcrio bsicos

hlice-ala-hlice.
416
&
Especulaes
Regulando as protenas bHLH miognicas:

Governando a troca entre proliferao e diferenciao de clulas musculares
XISTEM DUAS MANEIRAS de regu-
lar protenas bHLH miognicas,

alm da dimerizao com Id. Sabese h muito tempo (Stockdale e Holtzer, 1961;
Bischoff e Holter, 1969) que clulas musculares geralmente no se diferenciam at que
a proliferao esteja terminada. As clulas
musculares em proliferao no expressam
o fentipo especfico do msculo, enquanto que msculos diferenciados no mais se
dividem. Crescimento e diferenciao so
considerados estados mutuamente exclusivos no desenvolvimento do msculo esqueltico, e uma vez que a clula muscular
abandonou o ciclo celular, ela no pode
voltar, mesmo que sejam fornecidos fatores de crescimento (Konigsberg et al.,
1960; Nadal-Ginard, 1978). Essa exclusividade mtua entre diferenciao e proliferao tambm vista no desenvolvimento de neurnios, adipcitos, clulas do
sangue e queratincitos da pele. Os mecanismos para essas trocas durante a
miognese parecem envolver a regulao
das protenas bHLH miognicas.
O primeiro desses mecanismos responsvel pela preveno da diferenciao muscular prematura quando as protenas bHLH
miognicas comeam a aparecer. Protenas
bHLH miognicas so extremamente sensveis a fatores de crescimento. Enquanto eles
esto presentes para estimular a mitose, a

miognese no ocorre mesmo que protenas MyoD ou Myf-5 estejam presentes na
clula (Olson, 1992). A inativao dessas
protenas bHLH est associada a sua inabilidade em se ligar seqncia CANNTG do
DNA (onde N qualquer base) (Brennan et
al., 1991). Por que essas protenas bHLH
miognicas no podem funcionar? Fatores
de crescimento tal como o fator de crescimento de fibroblastos (FGF) no somente
estimulam a transcrio de Id mas tambm
ativam a protena quinase C. Essa quinase
induz a fosforilao das protenas bHLH
miognicas exatamente no seu stio de ligao ao DNA (Li et al., 1992). Quando esse
stio fosforilado as bHLH miognicas no
ligaro DNA. Assim, enquanto os fatores de
crescimento estiverem presentes e aptos a
serem recebidos, a miognese no ocorrer.
O segundo tipo de regulao envolve
o impedimento da expresso de MyoD
onde ela no necessria. MyoD um dos
mais poderosos reguladores de transcrio. Como discutido no Captulo 9, se o
regulador expresso dentro da maioria das
clulas, essas clulas se tornam msculo.
Isso significa que ele deve ser fortemente
controlado. Um mecanismo fazer as clulas sintetizarem um inibidor potente da funo de MyoD e liberar esse controle so-
mente em certas reas. Esse parece ser o

caso na expresso de MyoD no somito
onde Twist inibe a expresso de MyoD no
dermtomo e no esclertomo. (Captulo 9).
MyoD pode tambm ser suprimida pela
sinalizao da protena do receptor Notch.
A protena Notch ativada estimula a transcrio do gene hes-1 que codifica outra protena bHLH. Essa protena parece se ligar
MyoD, e inibir sua habilidade de funcionar
como um fator de transcrio indutor do
msculo (Sasai et al., 1992; Kopan et al., 1994;
Jarriault et al., 1995). Como as clulas do
epiblasto da galinha expressam MyoD e se
tornam msculos quando dissociados em
cultura, possvel que um sinal, mediado
por contacto de clula justaposta, como o
Notch, seja responsvel pela inibio dessa expresso e reteno da pluripotncia do
epiblasto (Kopan et al., 1994; GeorgeWeinstein et al., 1996).
MyoD freqentemente chamado um
gene regulador mestre, pois seu produto
capaz de converter quase todas as clulas em msculo. O paradoxo que qualquer gene controlador mestre tem que
ser controlado com maestria. Seus produtos so to poderosos que a clula desenvolveu numerosos meios- em diferentes
nveis- para impedir sua expresso nas clulas erradas e nos momentos imprprios.
Fatores de transcrio do zper bsico da leucina

A estrutura dos fatores de transcrio do zper bsico da leucina muito semelhante
a das protenas bHLH. As protenas bZip so dmeros, cada uma de suas subunidades, tendo no carboxi terminal, um domnio bsico ligante de DNA logo seguido por
uma hlice contendo vrios resduos de leucina. Essas leucinas esto colocadas
na hlice de tal maneira que elas interagem com outros resduos de leucinas similarmente espaados em outras protenas bZIP, para formar um zper de leucina entre
elas, causando a formao de dmeros. Esse domnio seguido por um domnio
regulador que interage com o promotor para estimular ou reprimir a transcrio
(Landschulz et al., 1988; Pathak e Sigler, 1992). Os fatores de transcrio C/EBP, AP1
e o GCN4 de levedo so membros da famlia bZip. Mtodos genticos e de
cristalografia de Raios X convergiram em um modelo de ligao de DNA mostrado
CAPTULO 10
Figura 10.27
Representao estereoscpica da regio ligante de DNA da protena bZip, C/EBP, interagindo com 20 pares de bases contendo a
seqncia CCAAT. (Topo) Vista dorsal olhando para baixo,
para uma dupla hlice do DNA e paralelamente ao zper de leucina.
(Embaixo) Vista lateral em ngulo reto ao diagrama acima e perpendicularmente ao eixo do DNA. Resduos de leucina conectando
as duas subunidades podem ser vistas embaixo, como tambm as
alas da tesoura no DNA. (Se voc no est acostumado a cruzar seus olhos para ver a estreo imagem composta, use um
estereptico.) (de Pathak e Sigler, 1992.)
na Figura 10.27 (Vinson et al., 1989; Pu e Struhl, 1991). Na figura, as duas hlices
contendo a regio ligante de DNA esto inseridas no sulco maior desse DNA, cada
hlice encontrando uma idntica seqncia de DNA. A ligao resultante assume a
aparncia de uma tesoura ou hemostato.
Sabe-se que existem vrias protenas bZIP que podem se ligar seqncia CCAAT;
uma das mais importantes chamada protena ligante do intensificador CCAAT
(C/EBP). C/EBP tem um papel na adipognese semelhante ao das protenas
miognicas bHLH na miognese. Expresso precoce de C/EBP em clulas pradiposas em diviso causa a cessao da diviso celular e a iniciao do fentipo
adiposo (Umek et al., 1991). (Ao contrrio das protenas bHLH miognicas, as quais
podem converter clulas nervosas e fibroblastos em msculos, C/EBP no parece
converter outros tipos de clulas na linhagem de adipcitos). A protena bZIP C/EBP
se liga aos intensificadores de numerosos genes especficos de adipose quando a
adipognese iniciada em cultura (Figura 10.28; Christy et al., 1989; Kaestner et al.,
1990). mRNA antisenso contra C/EBP suprime a expresso coordenada de mensagens especficas de adipcitos e a diferenciao de pr-adipcitos em adipcitos.
(Samuelsson et al., 1991; Lin e Lane, 1992).
C/EBP tambm enriquecido nas clulas hepticas, e um dos mais importantes
reguladores da expresso gnica especfica do fgado. Em hepatcitos de camundongo,
418
(A)
(B)
(C)
Figura 10.28
Adipognese (formao de clulas gordurosas) mediada pelo fator de transcrio C/EBP.

Colorao de lipdios mostrada no quadro da direita. A coluna da esquerda mostra os
mRNAs para as protenas SCD1 e GLUT4 que esto envolvidas na diferenciao de adipcitos.
(A) Adipognese normal na linhagem de clulas pr-adipcitos 3T3-L1 em cultura. Os genes
SCD1 e GLUT4 so ativados, e as clulas sintetizam e acumulam grandes quantidades de
triglicerdeos. (B,C) Duas linhagens de clulas 3T3-L1 transfectadas com RNA antisenso
contra a mensagem C/EBP. Nenhum dos genes est bem expresso, e os nveis de triglicerdeos
so 15 e 5 % do normal (de Lin e Lane, 1992.)
outros fatores de transcrio se ligam s regies do promotor e intensificador de

genes especficos do fgado durante o desenvolvimento. Entretanto, esses genes no
transcrevem grandes quantidades de protena (tal como a albumina) at que C/EBP
seja expresso nessas clulas imediatamente antes do nascimento (Milos e Zaret, 1992).
Outro gene especfico de fgado, ativado por C/EBP, o gene para o fator IX da
coagulao do sangue. Mutaes no gene desse fator da coagulao causam a hemofilia
B. Em alguns pacientes, a causa dessa doena foi relacionada s mutaes no stio de
ligao da C/EBP na regio promotora do gene do fator IX. Essas mutaes impedem
a ligao de C/EBP ao gene (Crossley e Brownlee, 1990).
&
Especulaes
Armadilhas do intensificador: natural e experimental

Leucemias induzidas por translocao
Um fator de transcrio crtico muito importante para a regulao da diviso celular a protena c-Myc. Essa um membro
da classe de protenas ligantes ao DNA
que incorporaram um zper de leucina e um
motivo bsico hlice-ala-hlice. As protenas c-Myc funcionam de maneira similar s protenas bHLH e bZIP, formando
heterodmeros que ligam DNA (veja Tabela 10.2). A c-Myc forma um complexo
ativador quando unida protena de ampla distribuio Max. O complexo entre
Max e uma protena inibidora, Mad, cria a
protena repressora Mad-Max, que se liga
ao mesmo stio que o complexo c-Myc/

Max, ou seja CACGTG (Ayer et al., 1993).
O gene c-myc o homlogo celular do
gene produtor de cncer, ou oncogene, vmyc do vrus da mielocitomatose aviria
(Donner et al., 1982). O gene c-myc sintetiza
mRNA de curta durao e produtos proticos quando estimulado por uma variedade
de fatores de crescimento (Kelly et al., 1983).
Esses produtos do gene c-myc aparecem
repentinamente enquanto as clulas so
induzidas do estado G0 ao estado G1 e so
degradados logo em seguida. As protenas
c-Myc sinalizam a diviso celular, e se no
so degradadas rapidamente, a clula con-
tinuar a se proliferar, aumentando portanto o risco de formao de tumor.

Considerando que os intensificadores
esto aptos a controlar a expresso dos
genes reprteres no relacionados aos seus
alvos normais, pareceria que essas seqncias so reguladores muito poderosos da
especificidade da transcrio de genes. O
que aconteceria, se uma transposio cromossmica espontnea trouxesse um intensificador para uma protena adjacente a um
gene estrutural para outra protena? Na maioria dos casos isso no seria importante.
Mesmo que o intensificador estimulasse a
expresso do gene na clula errada, o pro-
CAPTULO 10
duto de uma nica clula seria regulado de

forma anormal. Talvez a clula morresse e
fosse substituda por outra. tambm possvel que os descendentes dessa clula formassem um clone de clulas expressando
uma protena que as outras clulas no tecido no produziam. Entretanto, se pela
translocao o gene c-myc fosse colocado
prximo a um intensificador de um gene ativamente transcrito, o gene c-myc seria ativado para transcrever grandes quantidades
da mensagem enquanto a clula se diferenciava. Nesse caso, a clula nica daria origem a um tumor.
Translocaes cromossmicas envolvendo o gene c-myc parecem ser responsveis por tumores das clulas B sintetizadoras de imunoglobulinas do nosso sistema
imune (Croce, 1987). Aqui, o gene c-myc no
fim do brao curto do cromossomo 8 humano foi translocado para o cromossomo 14, 22
ou 2. Esses trs cromossomos contm os
genes para as protenas imunoglobulinas, e
o gene c-myc foi translocado para a regio
dos intensificadores do gene da imunoglobulina (Leder et al., 1983; Croce, 1985). A quantidade de mRNA de c-myc transcrito desses
cromossomos translocados se correlaciona
com a ativao dos genes da imunoglobulina. Assim, quando os intensificadores dos
genes da imunoglobulina so ativados (durante o desenvolvimento da clula B), eles
ativam o gene adjacente -que agora c-myc.
O mRNA de c-myc produzido em quantidades enormes e traduzido em fator de transcrio c-Myc. Esse fator instrui a clula a se
dividir, o que ela continua fazendo na presena contnua do fator, assim, se forma o
tumor chamado linfoma de Burkitt (Nishikura
et al., 1983; Croce et al., 1984). Nessas situaes, a translocao do gene c-myc a um
intensificador de imunoglobulina em uma nica clula pode ser o causador de toda a
leucemia. Realmente, a maior parte das
leucemias resulta de uma nica clula.
Vrios tipos de leucemias so causadas quando outros genes de fatores de
transcrio so translocados a regies dos
intensificadores dos genes da imunoglobulina. Esses tipos de rearranjos entre regies codificando fatores de transcrio
e regies reguladoras especficas para linfcitos, podem ser erros causados pelas
recombinases VDJ que so especficas
para linfcitos e explicariam porque essas
translocaes so vistas em tantas
leucemias (Rabbitts, 1991).
(A)
Reprter
Promotor
fraco
Ativao
Intensificador
Elemento de transposio
contendo um gene
reprter em um promotor
fraco
Transcrio
Promotor fraco
Reprter
Gene normalmente
regulado pelo
intensificador
(B)
Figura 10.29
Tcnica da armadilha para intensificadores. (A) um gene reprter fundido a um promotor fraco
que no pode dirigir uma transcrio sozinho. A construo injetada no ncleo do ovo e se
integra no genoma, aleatoriamente. Se a integrao for prxima de um intensificador, o gene
reprter ser expresso quando o intensificador for ativado, mostrando um padro de expresso
de um gene normalmente associado ao intensificador. (B) Expresso do gene reprter em Drosophila injetada com uma armadilha de intensificador. Esses intensificadores so ativos no
desenvolvimento do sistema nervoso do inseto e no estavam identificados antes deste procedimento. (Fotografias cortesia Y. Hiromi.)
Identificao de intensificadores
por meio de genes reprteres
A habilidade de um intensificador em ativar
outros genes foi usada pelos cientistas para
encontrar novos intensificadores e os genes
que os regulam. Para fazer isso faz-se uma
armadilha para intensificador. A armadilha
consiste de um gene reprter (como o gene
para a -galactosidade de E. coli ou a protena fluorescente verde) fundido a um promotor eucarioto relativamente fraco. Esse
promotor no iniciar a transcrio do gene
reprter sem a ajuda de um intensificador.

Essa armadilha de intensificador recombinante ento introduzida em um ovo ou
ocito de vrias maneiras (veja Captulo 2),
onde ele se integra aleatoriamente ao genoma. Se o gene reprter for expresso, isso significa que ele deve ter entrado no domnio de
um intensificador ativo (Figura 10.29). Isolando essa regio do genoma em moscas do tipo
selvagem ou camundongos, o gene normal
ativado por esse intensificador pode ser descoberto (OKane e Gehring, 1987). [trancr1.html]
420
Transativao
Ligao a DNA
Figura 10.30
Domnios funcionais dos fatores de transcrio dedo de zinco.

Cistena (C) e histidina (D) coordenam um tomo de zinco,
causando a formao de alas, dedos de zinco.
Transativao
Interface de dimerizao,
ligao de HSP90,
funo inibitria, transativao
Fatores de Transcrio Dedo de Zinco

Outro tipo de domnio ligante a DNA o motivo dedo de zinco. Protenas dedo de zinco
incluem: WT-1 (um fator de transcrio importante, crtico na formao dos rins e das
gnadas); o fator de transcrio de ampla distribuio, Sp1; o fator de transcrio de
5S rRNA, TFIIIA de Xenopus; Krox 20 (uma protena que regula a expresso gnica no
desenvolvimento do crebro posterior); Egr-1 (que compromete o desenvolvimento
dos leuccitos para a linhagem dos macrfagos); Krppel (uma protena que especifica as clulas abdominais na Drosophila); e numerosos fatores de transcrio ligantes
de esterides. Cada uma dessas protenas tem dois ou mais dedos ligantes de DNA,
domnios em hlice, cujos aminocidos centrais tendem a ser bsicos. Esses domnios esto ligados em fila e so estabilizados por um on de zinco localizado centralmente e coordenado por duas cistenas (na base da hlice) e duas histidinas internas
(Figura 10.30). A estrutura cristalina mostra que os dedos de zinco se ligam no sulco
principal do DNA.
A protena WT-1 contm quatro regies dedos de zinco, e usualmente expressa
nos rins e gnadas fetais. Pessoas com um alelo mutante WT1 (geralmente uma deleo
do gene ou da regio de dedo de zinco) apresentam malformaes urogenitais e desenvolvem o tumor de Wilm nos rins (Haber et al., 1990; Bruening et al., 1992; veja
Captulo 17). Em camundongos, ambos os genes WT1 podem ser deletados por
endereamento de genes (gene targeting), e os camundongos resultantes morrem
no tero, no tendo nem rins nem gnadas (Kriedberg et al., 1993). O fator WT1 se liga
s regies reguladoras de vrios genes que so ativos durante o desenvolvimento dos
rins e tambm se considera que ele inibe a expresso de certos fatores de crescimento
(especialmente o fator de crescimento II semelhante insulina) no rim em desenvolvimento (Drummond et al., 1992).
Receptores Nucleares de Hormnios e
Seus Elementos Responsivos a Hormnios
Hormnios esteride especficos so conhecidos por aumentar a transcrio de determinados conjuntos de genes. Uma vez que o hormnio entra na clula, ele se liga
protena de seu receptor especfico, que assume uma conformao que lhe permite
penetrar no ncleo e ligar seqncias particulares de DNA (Miesfeld et al., 1986; Green
e Chambon, 1988). A famlia dos receptores de hormnios esterides inclui protenas
que reconhecem estrgenos, progesterona, testosterona e cortisona, como tambm
lipdios no esterides como o cido retinico, a tiroxina e a vitamina D. As seqncias
de DNA capazes de ligar receptores nucleares de hormnios so chamadas elementos
responsivos a hormnios, e podem ser promotores ou intensificadores. Um grupo de
CAPTULO 10
(A)
PROTENA
Transativao
Ligao
a DNA
Ligao a
hormnio
(B)
Dedos de zinco
Cadeia principal
da protena
Mdulo 1
(C)
Mdulo 2
DNA
Elemento responsivo a glicocorticide

Elemento responsivo a estrgeno
Elemento responsivo tiroxina
e ao cido retinico
esterides inclui os hormnios glicocorticides (cortisona, hidrocortisona e o hormnio sinttico dexametasona). Esses se ligam aos receptores de hormnios glicocorticides e lhes permitem se ligar aos elementos responsivos aos glicocorticides nos
cromossomos (Figura 10.31).
Os elementos responsivos aos hormnios esterides so muito semelhantes entre
si e so reconhecidos pelas protenas muito relacionadas. As protenas receptoras de
esterides contm, cada uma, trs domnios funcionais: (1) um domnio ligante de
hormnio, (2) um domnio ligante de DNA que reconhece o elemento responsivo ao
hormnio, e (3) um domnio de trans-ativao que est envolvido na mediao do sinal
para o incio da transcrio. Essas funes podem sobrepor-se parcialmente, e todos
os domnios parecem ter algum papel na ativao da transcrio (Beato, 1989). Para
ocorrer a ativao transcricional, o receptor deve penetrar no ncleo e dimerizar com
uma protena similar ligante de hormnio. A ligao do hormnio ao seu domnio
ligante de hormnio pode ser necessria para a dimerizao, translocao para o ncleo, e habilidade da regio ligante de DNA em reconhecer o elemento responsivo a
hormnio. (Kumar et al., 1987)
Os elementos responsivos aos hormnios dentro do DNA foram inicialmente
identificados por ensaios de ligao competitiva (Pfahl, 1982; Karin, 1984), onde
fragmentos de restrio especficos do DNA foram testados para verificar sua habilidade de ligao a receptores de hormnios carregando hormnios radioativos.
Usando vrios fragmentos derivados de enzimas de restrio do DNA e comparando as seqncias de vrios elementos responsivos a glicocorticides, foi determinado que a seqncia de consenso do elemento responsivo ao glicocorticide
AGAACANNNT-GTTCT (onde N pode ser qualquer base). Mostrou-se que essas
seqncias ligantes de glicocorticides agem como intensificadores: quando o
Figura 10.31
Organizao estrutural do receptor de hormnios de protenas ligantes de DNA. (A)

Estrutura geral de uma protena ligante de
hormnio esterides. As funes de cada frao foram determinadas analisando os efeitos
de mutaes em cada uma dessas regies e
produzindo molculas de protenas quimricas tendo regies derivadas de diferentes protenas receptoras. Uma estrutura similar
vista no receptor do cido retinico e no receptor do hormnio tireoideano. (B) Regio
dedo de zinco, ligante de DNA do receptor de
glicocorticides. Resduos enquadrados no
mdulo 1 discriminam entre elementos
responsivos a estrgenos ou glicocorticides.
Resduos nos crculos esto envolvidos na
dimerizao. (C) A regio dedo de zinco do
receptor de glicocorticide ligada a seu elemento responsivo. As seqncias de DNA
para os elementos responsivos esto mostradas esquerda. Note que elas so palndromos invertidos, de modo que cada dmero
exposto ao mesmo stio. N, qualquer base;
GRE, elemento responsivo a glicocorticide
(e progesterona); ERE, elemento responsivo
a estrgeno; TRE, elemento responsivo
tiroxina e cido retinico. A distino entre
receptores ligando glicocorticides ou
progesterona versus receptores ligando
tiroxina ou cido retinico determinada pelo
espaamento dos elementos responsivos, por
quantidades limitantes de receptores, e por
outras interaes de elementos cis. (De acordo com Kaptein, 1992.)
422
(A)
Figura 10.32
Gene viral responsivo a hormnio
Seqncia ligante
de glicocorticide
Teste para a seqncia do intensificador de glicocorticide. (A) Um vrus recombinante contendo o intensificador responsivo ao glicocorticide do vrus de tumor mamrio de camundongo e o gene da timidina quinase do vrus de Herpes simplex podem se integrar no genoma de
uma clula sem o gene da timidina quinase. Pelo
tratamento com glicocorticides, o gene recombinante transcreve a timidina quinase viral. P,
regio promotora; TK, gene da timidina quinase;
VG, gene viral do vrus do tumor mamrio de
camundongo. (B) Micrografia eletrnica dos elementos intensificadores de glicocorticides,
mostrando o receptor de hormnio ligado quela regio do gene. (A modificado de Chandler et
al., 1983: B de Payvar et al., 1983, cortesia de
K. R. Yamamoto.)
Gene viral no responsivo ao

hormnio (timidina quinase)
Enzimas de
restrio
Enzimas de
restrio
Ligao
e
seleo
Precipitar vrus contendo gene

recombinante com fosfato de clcio e
sobrepor em clulas sem timidina quinase
(B)
Algumas clulas incorporam

o gene recombinante em
seus cromossomos
Estimular com
glicocorticide
Timidina quinase induzida
elemento responsivo ao glicocorticide foi ligado a genes que normalmente no so

dependentes de hormnio, aqueles genes se tornaram responsivos aos glicocorticides (Figura 10.32; Chandler et al.,1983).
A ligao da protena receptora ao elemento intensificador responsivo ao hormnio feita atravs da regio do dedo de zinco no domnio de ligao ao DNA
(Green et al., 1988). Quando so produzidas protenas quimricas, onde o domnio
do dedo de zinco do receptor de estrgeno substitui a mesma regio do receptor
de glicocorticide, a protena reconhece o DNA que tem elementos responsivos a
estrgenos e faz com que o gene seja responsivo aos glicocorticides. Os aminocidos crticos parecem se localizar na articulao do dedo de zinco (Danielsen
et al., 1989; Umesono e Evans, 1989). Mesmo mudando somente dois aminocidos
na articulao da regio do dedo de zinco j haver mudana na especificidade da
protena ligante. Assim, mesmo que os domnios de ligao a DNA das protenas
receptoras de hormnios sejam muito semelhantes, eles podem distinguir diferenas sutis nas seqncias dos intensificadores. Por exemplo, a seqncia
(palindrmica) 5-GGTCACTGTGACC-3 um forte elemento intensificador
responsivo a estrgeno que ligar a protena receptora contendo estrgeno. Duas
mutaes simtricas nessa seqncia, dando 5-GGACACTGTGTCC-3, converter esse DNA em um intensificador responsivo ao glicocorticide (Klock et al.,
CAPTULO 10
1987; Martinez et al., 1987). Dadas as similaridades entre protenas receptoras de

hormnios e as similaridades entre os elementos responsivos a hormnios, provvel que cada hormnio esteride o mediador de sua ativao transcricional usando o mesmo mecanismo geral.
(A)
Enhanceosome
Protenas que dobram o DNA

Alm das protenas ligantes de DNA, existe um conjunto de fatores de transcrio que
funciona primariamente como protenas que dobram o DNA. A maioria dessas protenas se caracteriza por um elemento de ligao ao DNA chamado HMG box, um conjunto de cerca de 80 aminocidos que medeia a ligao dessas protenas ao sulco
menor do DNA. Essas protenas incluem o fator determinante do sexo do cromossomo Y, SRY (a ser discutido no Captulo 20), a protena LEF-1 intensificadora do
linfcito, e as protenas HMG-1(Y) e HMG-2 da cromatina. Considera-se que essas
protenas no ativam a transcrio pela interao direta com o aparelho de transcrio. Ao contrrio, a hiptese que elas dobram o DNA de modo que ativadores e
repressores so colocados em contacto. Por exemplo, a ligao de SRY ao DNA
causa uma dobra de 70o-80o na hlice, convertendo o I em um L. Mutaes pontuais que impedem esse dobramento tambm impedem a protena de mediar a formao de testculos. Considera-se que a protena SRY dobra o DNA de modo que fatores que, de outra forma, estariam afastados no cromossomo so colocados em contacto
(veja Figura 20.5; Werner et al., 1995).
As protenas que dobram DNA podem criar estruturas tridimensionais chamadas
enhanceosomes (Thanos e Maniatis, 1995). Um modelo para tal enhanceosomes
mostrado na Figura 10.33A. Thanos e Maniatis mostraram que interaes protenaprotena diretas entre fatores de transcrio so muito facilitadas pela presena de
HMG-1, uma protena dobradora de DNA. Existem trs stios para essa protena dentro
do intensificador para o gene interferon- humano (IFN), e esses stios so essenciais para a ativao sinrgica do complexo pelos fatores de transcrio. Eles tambm
mostraram que a mera presena desses fatores de transcrio no suficiente para a
ativao do promotor de IFN. Os fatores de transcrio tinham que estar na ordem
correta no intensificador. Embaralhando os elementos de ligao do DNA, eles produziram diferentes combinaes. Somente a combinao do tipo selvagem foi eficiente.
Thanos e Maniatis mostraram tambm que a fase helicoidal importante. Adicionando
um pouco de DNA que causava uma meia volta da hlice, o intensificador era inativado.
Inserindo outra volta de meia hlice, tornava o intensificador novamente ativo. Portanto, o arranjo linear dos fatores de transcrio e sua organizao tridimensional era
crtica. A protena HMG-1 ligava todos eles no enhanceosome. Quando esse estava
completo, o DNA que antes tinha uma inclinao natural de 20o, agora estava com
uma inclinao de +26o. Mais ainda, um intensificador inativo foi transformado em um
ativador (Figura 10.33B; Falvo et al., 1995).
Ativao dependente de contexto ou silenciamento

As interaes entre os receptores de esterides e outras protenas reguladoras da
transcrio podem determinar se o efeito do esteride positivo ou negativo. Diamond
e colaboradores (1990) demonstraram que o efeito dos hormnios glicocorticides
na transcrio do gene Proliferin do camundongo pode ser positivo ou negativo
dependendo do estado fisiolgico anterior da clula. Uma seqncia de 25 pares de
bases a montante do gene Proliferin pode ligar o receptor de glicocorticide e o
dmero bZip de c-Jun e c-Jun ou de c-Jun e cFos. A ligao de c-Jun a esse stio
necessria para a funo do receptor de glicocorticide. Se o dmero c-Jun/c-Jun
estivesse presente nesse stio (sem o receptor de glicocorticide) haveria pouca
transcrio. Essa transcrio dramaticamente aumentada pela adio de glicocorticides (Figura 10.34). Entretanto, se o dmero c-Jun/c-Fos estivesse presente
Sistema basal da transcrio
Figura 10.33
Estrutura de um enhanceosome. (A) A protena que dobra DNA, HMG-I(Y), empacota uma espiral 60 pares de bases do DNA ao
redor de ativadores transcricionais NF-B
(o complexo p50/p65), IRF1, e ATF2/c-Jun.
O HMG-I(Y) est no sulco menor, enquanto os outros fatores de transcrio operam
no sulco principal da dupla hlice. Uma vez
que o enhanceosome montado, ele
contata o sistema basal de transcrio em
vrios stios. (B) O DNA tem inclinao de
20o, antes da formao do enhanceosome.
Aps a formao do enhanceosome ele se
inclina na direo oposta +26o. Esse ltimo
complexo estimula a transcrio. (A de acordo com Thanos e Maniatis, 1995; B de acordo com Falvo et al., 1995.)
424
Figura 10.34
Sem glicocorticide
Efeitos alternativos intensificadores e silenciadores dos elementos

responsivos a glicocorticides a montante do gene Proliferin do camundongo. O efeito do glicocorticide depende da condio anterior
da clula (isto , se altas concentraes de c-Fos estavam sendo
sintetizadas). As setas representam transcrio do gene Proliferin.
O crculo grande representa o receptor de glicocorticide ligado ao
hormnio. A protena c-Jun representada como um crculo menor,
enquanto a protena c-Fos um pequeno quadrado. (De acordo com
Diamond et al., 1990.)
Com glicocorticide
Hormnio
Stio de iniciao
da transcrio
Receptor de
glicocorticide
Sem transcrio
Sem transcrio
Sem c-Jun
nem c-Fos
c-Jun:c-Jun
c-Jun: c-Jun
Pouca transcrio
Muita transcrio
c-Jun: c-Fos
c-Jun: c-Fos
Muita transcrio
Pouca transcrio
no stio, ele poderia dirigir uma transcrio extremamente eficiente do gene Proliferin.
Essa transcrio inibida pela presena de glicocorticides. Assim, se o
glicocorticide tem um efeito estimulador ou inibidor na transcrio do gene
Proliferin depende do estado fisiolgico anterior da clula. Uma nica seqncia de
DNA ligando um determinado receptor de hormnio pode ser tanto um intensificador como um silenciador para a mesma protena.
Existem outras maneiras para um elemento cis-regulador ser ativador em algumas
situaes e repressor em outras. Por exemplo, o fator de transcrio Krppel da
Drosophila (uma protena cuja atividade veremos no Captulo 14, responsvel
pela formao do trax e abdmen superior da mosca) um ativador em baixas
concentraes e um repressor em altas concentraes. Em baixas concentraes, ele
se liga a seu elemento cis-regulador no DNA, e interage com TFIIB para facilitar a
construo do complexo de iniciao da transcrio. Em altas concentraes, ele se
liga a si mesmo, e os dmeros resultantes no complexam com TFIIB (Sauer et al.,
1995). Em lugar disso, os dmeros interagem com TFIIE e podem bloquear sua funo. Se a protena p53 supressora de tumor um ativador ou repressor depende da
estrutura do promotor do gene especfico. Se existe no promotor um elemento ligante
de p53, a protena p53 age como um ativador. Se no existe um elemento p53 no
promotor, p53 pode se ligar a TAF em TFIID e impedir a transcrio. Ela pode tambm interagir com o fator de transcrio WT1. Esse fator usualmente um ativador
de transcrio, mas se est ligado p53, se torna um repressor* (Figura 10.35; Seto
et al., 1992; Maheswaran et al., 1993).
*Temos boa e m novidades. A boa novidade que at o fim desta dcada, conheceremos a maioria,
seno todos os fatores de transcrio ativos em muitos tipos de clulas, e como eles interagem para iniciar
ou reprimir a transcrio. A m notcia que muitos de ns teremos que aprender fsico-qumica para
entender esses dados.
CAPTULO 10
(A)
Protena
Krppel
Ativao
Figura 10.35
Sem ativao
Protena
Krppel
Elemento
ligante de Kr
Elemento
ligante de Kr
(B)
Sem ativao
Ativao
Elemento
ligante de p53
(C)
Elemento
ligante de WT1
Sem
ativao
Ativao
Elemento
ligante de WT1
Regulao da atividade do fator de transcrio

Se os fatores de transcrio so protenas que regulam a expresso de determinados
genes, ento como os fatores de transcrio so regulados por si prprios? Uma maneira bvia regular a sntese dos fatores de transcrio por outros fatores de transcrio. Esse mtodo est presente no desenvolvimento de Drosophila, no qual existe
uma cascata de snteses de fatores de transcrio (veja Captulo 14). Em mamferos,
vrios fatores de transcrio so igualmente regulados pela sntese de outros fatores
de transcrio. A ativao do fator de transcrio Pit-1 na pituitria de mamferos, por
exemplo, realizada pela ligao do fator de transcrio contendo o homeodomnio
Prop1 seqncia ladeando o terminal 5 do gene Pit-1 durante um estgio anterior do
desenvolvimento da pituitria (Sornson et al., 1996).
Alm disso, fatores de transcrio freqentemente tm intensificadores muito complexos e promotores que permitem sua expresso somente em certas clulas. O gene
Myogenin do camundongo, por exemplo, expresso no mitomo, arcos farngeos e
brotos dos membros. Parece haver pelo menos trs stios separveis na regio reguladora a montante para esse gene. O stio mais prximo necessrio para a transcrio
desse gene nos brotos dos membros. Se esse stio mutado, o gene Myogenin no
l transcrito. Um segundo stio, mais a montante, necessrio para a expresso de
Myogenin nos brotos de membros, arcos farngeos e clulas centrais dos somitos
posteriores (Figura 10.36; Cheng et al., 1993; Yeo e Rigby, 1993). Um terceiro stio,
ainda mais a montante, necessrio para aumentar a eficincia da transcrio do gene.
Esses trs stios ligam diferentes fatores de transcrio. Uma situao semelhante
parece existir para myf-5, onde regies diferentes do DNA regulam os diferentes elementos dos padres de expresso (Prancha 24; Patapoutian et al., 1993).
Outro mecanismo de regulao da atividade de fatores de transcrio por fosforilao. Em um grupo de casos, a protena do fator de transcrio est presente, mas
inativa, e a fosforilao ativa a protena dormente. Como discutimos antes, a fosforilao de uma fator de transcrio seqestrado ou seu inibidor (como IB) pode liberar a
Fatores de transcrio podem ser ativadores

ou repressores, dependendo do contexto. (A)
Protena Krppel em baixas concentraes
estimula TFIIB e ativa a transcrio. Em altas concentraes, forma dmeros que no se
ligam a TFIIB (e que podem interferir com
TFIIE). (B) A protena p53 um ativador
onde existem stios especficos de ligao. Em
alguns promotores, entretanto, ela pode se
ligar a TFIID e inativ-lo quando tais stios
esto ausentes. (C) A protena WT1 um
ativador quando p53 est ausente. Na presena de altas concentraes de p53, a ligao
de WT1 bloqueia a transcrio.
426
(A)
(B)
(C)
Figura 10.36
A expresso de Myogenin no embrio de camundongo de 10.5 dias. Um gene reprter da galactosidase foi ligado s seqncias reguladoras a montante do gene Myogenin, e isso foi usado
para produzir camundongos transgnicos. Os embries transgnicos com 10.5 dias foram corados para identificar a presena da -galactosidade bacteriana. (A) Regio promotora de Myogenin
selvagem, mostrando todos os lugares onde o gene Myogenin usualmente expresso. (B) Expresso de um promotor de Myogenin com uma mutao em um stio prximo ao gene Myogenin.
No h transcrio desse gene nos brotos dos membros. (C) Expresso de um promotor de
Myogenin com uma mutao em um stio mais a montante do gene. No vista transcrio do
promotor nos arcos farngeos, membros ou clulas centrais posteriores do mitomo. (de Cheng
et al., 1993.)
inibio e permitir ao fator de transcrio (nesse caso NF-B) penetrar no ncleo e

ligar sua seqncia de DNA. A fosforilao tambm pode funcionar mais diretamente.
Como discutido no Captulo 3, os fatores de transcrio JAK/STAT esto presentes
no citoplasma mas somente entram no ncleo quando so fosforilados em resposta a
um sinal na membrana celular. A fosforilao tambm pode ser usada para reprimir
fatores de transcrio, como quando a ligao de DNA por Pit-1, Oct1, ou miogenina
inibida por estarem fosforilados (Hunter e Karin, 1992).
Conclumos que a atividade dos fatores de transcrio pode ser regulada em diferentes nveis. Como cada gene freqentemente regulado por vrios fatores de transcrio, a clula tem muitas opes sobre como expressar certos genes em somente
certos tipos de clulas. Nos ltimos cinco anos, nosso conhecimento sobre fatores de
transcrio progrediu imensamente e nos deu uma nova e dinmica viso da expresso
gnica. O gene, ele prprio, no mais visto como uma entidade independente controlando a sntese de protenas. Ao contrrio, o gene dirige e dirigido pela sntese
de protenas. Angier (1992) escreve:
Uma srie de novas descobertas sugere que o DNA mais parecido a um certo
tipo de poltico, rodeado por um rebanho de manipuladores e consultores de
protenas que devem massage-lo vigorosamente, torc-lo e, ocasionalmente,
reinvent-lo antes que o grande plano do corpo possa fazer algum sentido.
Certamente, as interaes entre o DNA e seus fatores de transcrio esto levando
a relao interativa do ncleo e do citoplasma a novos e esplendidamente complexos
nveis. At agora, focalizamos nossa ateno no relacionamento dos fatores de transcrio ao DNA. Mas os fatores de transcrio no contemplam um mero DNA. Ao
contrrio, eles se confrontam com um complexo de protena e DNA altamente
estruturado chamado cromatina. Para iniciar a transcrio, necessrio considerar
estruturas celulares de ordem maior; continuaremos nossa discusso sobre a regulao transcricional do desenvolvimento no prximo captulo.
CAPTULO 10
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Regulao transcricional da
expresso gnica: A ativao da cromatina
Enquanto meu companheiro contemplava

com seriedade e satisfao a magnfica aparncia das coisas, eu me deleitava em investigar suas causas.... Curiosidade, pesquisa sincera para conhecer as leis misteriosas da natureza, satisfao perto do xtase enquanto
elas a mim se revelavam, esto entre as sensaes mais antigas que posso lembrar.
MARY WOLLSTONECRAFT SHELLEY (1817)
Ento, no podemos negar categoricamente que em ltima anlise poderemos triturar genes em um almofariz e em seguida
cozinh-los em um bquer.
H. J. MULLER (1922)
11
T AGORA, limitamos nossa discusso sobre a transcrio de RNA mensa-
geiro estrutura do prprio gene. Mas genes no existem em uma forma

isolada dentro do ncleo, facilmente acessvel RNA polimerase ou s protenas ligantes de intensificador ou promotor. Ao contrrio, cromossomos eucariticos
contm tanta protena (por peso) quanto cido nucleico, e esse complexo DNA-protena chamado cromatina. As protenas mais abundantes da cromatina so polipeptdeos
bsicos chamados histonas, que so organizados em nucleossomos.
Alm dos nucleossomos, que so inibidores gerais da transcrio, outros elementos prioritrios na cromatina tambm podem ser importantes na regulao da expresso gnica. Assim, existem regies controladoras de loco (LCRs) regulando a expresso de uma regio do cromossomo; existem regies associadas matriz (MARs)
onde o DNA est ancorado matriz nuclear e onde podem estar ativas protenas que
desenrolam o DNA; e existem insulantes, seqncias que separam domnios reguladores e assim impedem que elementos reguladores, positivos e negativos, em um
domnio possam agir em genes no domnio adjacente.
Nucleossomos e a ativao da cromatina reprimida

O nucleossomo a unidade bsica da estrutura da cromatina. composto de um
octmero de histona (duas molculas cada, de histonas H2A-H2B e histonas H3H4) envolvido por duas alas de DNA com aproximadamente 140 pares de bases
(Figura 11.1; Kornberg e Thomas, 1974). A cromatina pode ento ser visualizada
como um cordo de contas nucleossmicas ligadas por 10 a 100 pares de bases de
DNA. Enquanto geneticistas clssicos consideravam que genes se pareciam a
contas em um cordo, geneticistas moleculares acham que os genes se assemelham a cordo nas contas.
Os fatores de transcrio devem ser capazes de encontrar seqncias de DNA,
apesar da maior parte desse estar acondicionado nos nucleossomos. Atualmente se
considera que tornar um gene competente para transcrever RNA envolve (1) a ligao de fatores de transcrio ao DNA e (2) a excluso de nucleossomos da regio
promotora do gene. As interaes de fatores de transcrio especficos e o DNA que
eles ligam causam o fenmeno da transcrio gnica temporal e tissularmente especficos. Assim que a RNA polimerase comea a transcrio, possvel deslocar
431
432
PARTE III Mecanismos da Diferenciao Celular
Figura 11.1
(A)
(B)
Estrutura da cromatina e do nucleossomo. (A)

Modelo da estrutura do nucleossomo como
visto por cristalografia de Raios-X a uma resoluo de 0.33nm. A unidade protica
bicncova central (branca) o tetrmero H3H4. Cada um dos dois ovides escuros
flanqueando o tetrmero um dmero H2AH2B. (B) Relacionamento da histona H1 ao
nucleossomo central (contendo duas cpias de
cada histona, H2A, H2B, H3, e H4). (C) H1
pode juntar o DNA em formas compactas e
pode aglomerar os nucleossomos. Aproxima- (C)
damente 140 pares de bases envolvem o
octmero da histona, e quase 60 pares de baDNA
ses de DNA juntam os nucleossomos. (D)
Modelo para a disposio dos nucleossomos Nucleossomo
em uma estrutura de cromatina em solenide,
e altamente compacta. Um modelo alternativo, colocando H1 entre o octmero do nucleossomo e uma ala do DNA foi proposto recentemente e est sendo testado (Pruss et al.,
1996). Aqui, uma ponta da H1 se liga ao nucleossomo, enquanto a outra liga o DNA. (A de Histonas H1
Burlingame et al., 1985; B-D de acordo com
Wolfe, 1993.)
Ligante
H1
Partcula central:
2 H2A;
2H2B;
2H3;
2H4
(D)
Nucleossomo central
DNA
H1
Cromatina
DNA ligante
temporariamente o DNA do nucleossomo e sintetizar RNA (Clark e Felsenfeld, 1992;

veja Lewin, 1994). [chrom1.html]
Os nucleossomos no so os nicos impedimentos na ligao dos fatores de transcrio s suas seqncias de DNA, porque os prprios nucleossomos esto enrolados como solenides rgidos estabilizados pela histona H1. A histona H1 encontrada nos aproximados 60 pares de bases do DNA ligante entre os nucleossomos
(Figuras 11.1 e 11.2; Weintraub, 1984). Essa conformao dos nucleossomos dependente de H1 inibe a transcrio de genes nas clulas somticas pelo empacotamento
de nucleossomos adjacentes em conjuntos to apertados que impedem o acesso de
fatores de transcrio e RNA polimerases (Thoma et al., 1979; Schlissel e Brown, 1984).
reguladores
Acessibilidade a fatores trans
trans-reguladores
realmente incrvel que o DNA possa se tornar acessvel a fatores trans-reguladores.
Existe DNA suficiente em um nico corpo humano para estender o dimetro do sistema solar (Crick, 1966), e essa enorme extenso precisa estar rigidamente empacotada
nos ncleos de nossas clulas. Mas apesar disso, nossa biblioteca gentica pode ser
especificamente acessada em cada tipo celular. Experimentos de hibridizao solvel
sugerem que no mnimo existem 10.000 genes especficos para tecidos no genoma da
maioria dos vertebrados; de modo que no surpreendente que em um dado tipo de
clula, a maioria desses genes estejam reprimidos. Geralmente, ento, considera-se
que a condio de ausncia da cromatina um estado reprimido e que genes
CAPTULO 11 A Regulao Transcricional da Expresso Gnica
(A)
433
(B)
Figura 11.2
especficos de tecidos so ativados pela interrupo local de fatores repressivos

(Weintraub, 1985). Como j mencionado, o principal mecanismo de represso geral do
gene provavelmente a compactao do DNA em aglomerados de nucleossomos, e a
iniciao da transcrio depende da remoo dos nucleossomos da regio promotora
do gene. Existem duas maneiras pelas quais isso pode ser feito. Primeiro, durante a
sntese de DNA (fase S no ciclo celular), nucleossomos so removidos de uma fita de
DNA e so repostos pouco tempo depois. Nesse tempo de substituio, poderia
haver competio pelos stios promotores entre histonas e fatores de transcrio tais
como o TFIID ligante de TATA. Segundo, parece haver ativadores transcricionais
(tais como o receptor de glicocorticide) que podem se ligar aos nucleossomos existentes e desorganiz-los (Rigaud et al., 1991; Adams e Workman, 1993). Uma vez que
os nucleossomos esto dissociados na regio promotora, outros fatores de transcrio podem se ligar (Figura 11.3).
A habilidade dos fatores de transcrio em remover nucleossomos de genes ativos e seus promotores pode ser vista em experimentos com nucleases. A acessibilidade de um gene s protenas nucleares pode ser detectada tratando a cromatina de um
tecido com pequenas quantidades de DNase I. Essa DNase pancretica digere regies
acessveis do DNA, mas o DNA coberto pelos nucleossomos protegido. Aps a
digesto, o DNA da cromatina tratada extrado e misturado com cDNA radioativo de
um determinado gene (Figura 11.4). Se o cDNA encontra seqncias as quais pode se
ligar, ento o gene foi protegido da digesto pelas protenas da cromatina- ou seja, ele
no estava acessvel DNase, e provavelmente no estaria acessvel tambm aos
fatores de transcrio ou RNA polimerase. Entretanto, se a sonda de cDNA no
encontra seqncias as quais possa se ligar, ento o gene foi exposto DNase e
provavelmente seria acessvel RNA polimerase e a fatores trans-reguladores.
Foi determinado que a susceptibilidade de um determinado gene ao da DNase I
dependente do tipo de clula na qual ele reside (Tabela 11.1; Weintraub e Groudine,
1976). Tratando cromatina de clulas vermelhas do sangue de pinto em desenvolvimento com DNase I, e misturando o DNA extrado com cDNA radioativo de globina, esse
encontrou muito poucas possibilidades de ligao. Os genes da globina na cromatina
foram digeridos por uma pequena quantidade de DNase I. Entretanto, tratando cromatina de clulas de crebro com as mesmas quantidades de DNase I, essa no destruiu os
genes da globina. Portanto, o gene da globina estava acessvel s enzimas externas na
cromatina de clulas vermelhas do sangue em desenvolvimento mas no na cromatina
de clulas do crebro. De modo semelhante, o gene da ovalbumina (clara de ovo)
suscetvel digesto pela DNase I em cromatina do oviduto mas no na cromatina das
O papel da H1 na compactao da cromatina.

(A) Cromatina de fgado de galinha observada
no microscpio eletrnico. As contas representam os nucleossomos. (B) A mesma cromatina aps a remoo da histona H1 por
eluio salina. A cromatina se tornou muito
menos compacta (de Oudet et al., 1975; fotografias cortesia de P. Chambon.)
434
Figura 11.3
Nucleossomo
A ligao de um fator de transcrio (TF) a um nucleossomo pode desestabiliz-lo, permitir a remoo de

histonas e expor a regio a outros fatores de transcrio. (De acordo com Adams e Workman, 1993.)
DNA est enrolado ao

redor de um ncleo da
histona, formando
nucleossomos
Um TF (fator de transcrio)
inicial se liga a um nucleossomo
central, deslocando parte do
ncleo da histona
Fatores adicionais podem

se ligar ao complexo,
desestabilizando mais ainda
o ncleo da histona
TF se ligando ao
nucleossomo
Histona H1
Outros TFs
Quando as histonas so
deslocadas, outros TFs
podem se ligar
Outros TFs
Histona ou
protenas carreadoras
clulas vermelhas do sangue. Quando a cromatina tratada com DNase I e o DNA

extrado, o cDNA da ovalbumina capaz de encontrar seqncias na preparao de
eritrcitos mas no no DNA da cromatina de oviduto tratada. Temos, aqui, uma clara
correlao entre regulao gnica diferencial e a estrutura da cromatina.
Stios hipersensveis DNase I
Algumas regies da cromatina so identificadas como stios hipersensveis DNase
I. Esses stios, identificados em transferncias Southern (Southern blots) por pequeTabela 11.1 Estudos de ligao com cromatina tratada com DNase I
Origem (galinha)
DNA da clula
vermelha do sangue
Cromatina da clula
do crebro
Cromatina do
fibroblasto
Cromatina da clula
vermelha do sangue
Cromatina da clula
vermelha do sangue
Porcentagem de
ligao mxima
do cDNA radioativo
ao DNA extrado da
cromatina tratada
Tratamento
com DNase
Sonda de cDNA
radioativo
cDNA da globina
94
cDNA da globina
90-100
cDNA da globina
90-100
cDNA da globina
25
cDNA da ovalbumina
Fonte: De acordo com Weintraub e Groudine, 1976.
90-100
Eritrcito nucleado
ou clula do
oviduto
435
Figura 11.4
Protocolo para a determinao de especificidade na digesto

da cromatina por DNase I. Veja na Tabela 11.1 os resultados
do experimento de digesto com DNase I.
Extrair
cromatina
Regies sensveis
DNase I
Fibra, 30-nm
Digesto com DNase I at

digeto de 10% do DNA
Isolar DNA da cromatina
Produzir fita nica, hibridizar com

sonda
Hbrido de
sonda e DNA
Medida de nucleotdeos
radioativos ligados
nos fragmentos de DNA radioativo, so destrudos por quantidades muito pequenas

de DNase, indicando que eles so altamente acessveis s molculas externas. Essa
acessibilidade parece decorrer da quase total ausncia de nucleossomos nessa regio
de DNA nos tecidos que os expressam (Elgin, 1988). Os stios hipersensveis DNase
I marcam regies da cromatina, tais como promotores e intensificadores ativos, onde
esto ligadas protenas ligantes de DNA. Regies hipersensveis DNase I esto
portanto, associadas a genes especficos de tecido regulados pelo desenvolvimento.
(Elgin, 1981; Conklin e Groudine, 1984). Por exemplo, genes da globina nas clulas
vermelhas do sangue e seus precursores imediatos contm stios hipersensveis
DNase I, mas genes da globina em outras clulas no os contm (Stalder et al.,1980;
Groudine et al., 1983). A regio flanqueando a extremidade 5 do gene da vitelogenina
do pinto contm vrios stios hipersensveis na cromatina do fgado de galinhas em
postura; mas esses stios no esto presentes na cromatina do fgado de machos,
fgado embrionrio, crebro ou linfcitos (Burch e Weintraub, 1983).
Os stios hipersensveis DNase I freqentemente se situam dentro ou nas
adjacncias de stios que tm funes intensificadoras, e certos fatores trans-reguladores so capazes de induzir a formao desses stios hipersensveis. Zaret e
436
Nucleossomo
Yamamoto (1984), estudando o intensificador responsivo a glicocorticides do vrus do tumor mamrio do camundongo, demonstraram que antes da adio do hormnio s clulas contendo o vrus, essa seqncia intensificadora no mostrou
sensibilidade especial DNase I. Aps a administrao do hormnio, um stio discretamente hipersensvel DNase I se desenvolveu nessa regio. A formao do
stio hipersensvel coincidiu com o incio da transcrio do gene viral; quando o
hormnio foi retirado, ambos o stio hipersensvel e a transcrio do gene viral
desapareceram. Zaret e Yamamoto especularam que a interao entre o complexo do
receptor de glicocorticide e o intensificador de DNA altera a configurao da
cromatina para facilitar a transcrio do promotor vizinho. Esse seria o caso se,
como j mencionado, o receptor de glicocorticide pudesse remover nucleossomos
da regio contendo a seqncia de DNA onde ele se liga.
Ruptura e reorganizao de nucleossomos:
o papel dos complexos de ruptura
Fatores de
transcrio
Figura 11.5
Modelo para o mecanismo proposto para o

NURF em um nucleossomo. NURF pode
hidrolizar ATP e utilizar a energia para
reconfigurar as interaes histona-DNA (ou
histona-histona). Essas perturbaes parecem facilitar a acessibilidade dos fatores de
transcrio ao DNA nucleossmico. Isso
pode levar a novas modificaes na estrutura do nucleossomo. (De acordo com
Tsukiyama e Wu, 1995.)
Como possvel remover nucleossomos? Estudos recentes identificaram dois

fatores que podem ser importantes nesse processo. O fator de transcrio GAGA
(uma protena constitutiva expressa em Drosophila que est ligada a numerosos
promotores tendo seqncias GA) um desses fatores que podem romper nucleossomos. Quando esse se liga a um nucleossomo contendo a seqncia TATA do
gene hsp70 (codificando a protena do choque trmico de 70-kDa), o nucleossomo
se rompe e cria um stio hipersensvel DNase I no stio da seqncia TATA. Esse
processo muito eficiente quando o nucleossomo no tem histona H1. O fator
GAGA no produz esse efeito isoladamente, mas funciona em conjunto com uma
protena contendo quatro peptdios chamada fator de remodelagem de nucleossomos (NURF). Na ausncia de fatores de transcrio, o NURF pode perturbar o
nucleossomo em uma maneira dependente de ATP. Isso permite que fatores de
transcrio tal como o GAGA se liguem s regies promotoras, rompendo os nucleossomos mais distante (Figura 11.5; Tsukiyama et al., 1994; Tsukiyama e Wu,
1995). Outro complexo protico capaz de romper nucleossomos, o complexo SW1/
SNF, foi originalmente descoberto no levedo, mas j foi encontrado na Drosophila
e no homem (Peterson e Tamkun, 1995). Quando a seqncia TATA incorporada
no DNA nucleossmico, ela no est acessvel protena ligante de TATA e a
transcrio severamente reduzida. Essa inibio pode ser anulada por modificaes do nucleossomo dependentes de ATP, efetuadas por SW1/SNF (Imbalzano
et al., 1994). De maneira semelhante, SW1/SNF pode romper os nucleossomos nas
regies intensificadoras e permitir a ligao de fatores de transcrio (Kwon et al.,
1994; Pazin et al., 1994). Parece que o complexo SW1/SNF realmente parte da
RNA polimerase e est ligado ao seu domnio carboxi-terminal (Wilson et al., 1996).
Esse complexo pode ser ativado por fatores de transcrio capazes de romper
nucleossomos.
Uma das principais vias de ruptura de nucleossomos atravs de acetilao.
Existe uma boa correlao entre a acetilao de histona e a atividade transcricional de
uma determinada regio da cromatina. Regies transcricionais extremamente ativas
tm nucleossomos que so altamente acetilados, enquanto que domnios de transcrio reprimida tm histonas hipoacetiladas em seus nucleossomos (Braunstein et al.,
1993; Jeppesen e Turner, 1993; Hebbes et al., 1994). Quando grupos acetil so colocados nas lisinas das caudas das histonas h uma mudana na estrutura total do nucleossomo (Figura 11.6 ; Lee et al., 1993; Garcia-Ramirez et al., 1995). As caudas se movem
para fora, perdendo o contato com a dupla hlice, e tambm perdendo severamente
seu domnio sobre o DNA. O DNA se torna muito mais acessvel ao fatores de transcrio. Uma acetiltransferase da histona, que acetila histonas em nucleossomos foi
identificada em Tetrahymena, e um homlogo de um ativador transcricional do levedo (Brownell et al., 1996). Mais ainda, foi demonstrado recentemente que a subunidade
TAF (250-kDa) de TFIID capaz de acetilar histonas H3 e H4 (Mizzen et al., 1996). Essa
atividade enzimtica pode ter um papel importante permitindo que TFIID substitua os
nucleossomos.
Histona
acetiltransferase
Ruptura e reorganizao de nucleossomos:

o papel da competio de histonas
A competio entre histonas e fatores de transcrio foi inicialmente sugerida para a
regulao dos genes de rRNA 5S em Xenopus. Foi demonstrada uma competio entre
o fator de transcrio TFIIIA e a histona H1 pelos stios regulando a sntese de rRNA
5S. Se esse gene fosse incubado com TFIIIA antes da histona H1, mesmo em presena
de histonas centrais, havia a formao do complexo transcricional. Se H1 estivesse
presente antes de TFIIIA, a transcrio era bloqueada (Schlissel e Brown, 1984). Prioleau
e colegas (1994) relacionaram a competio entre histonas e a protena ligante de
TATA e a ocorrncia da transio da blstula intermediria. Genes ativados na transio da blstula intermediria so reprimidos durante a clivagem precoce. Quando tais
genes so injetados em ncleos de Xenopus na fertilizao ou em estgios precoces
da clivagem, eles so envolvidos pela cromatina e so reprimidos. Aps a transio da
blstula intermediria, os genes injetados so transcritos. A represso durante a
clivagem precoce pode ser aliviada por uma pr-incubao dos genes injetados com a
protena ligante de TATA. Portanto, em alguns sistemas possvel que a competio
entre fatores de transcrio e histonas possa regular a expresso gnica. O grau de
metilao do DNA (a ser logo discutido) pode ser crtico para essa competio, pois
histona H1 se liga mais avidamente ao DNA metilado do que ao no metilado (McArthur
e Thomas, 1996).
Regies de controle de loco: transcrio do gene da globina

Regies controladoras de loco (LCRs) so seqncias de DNA que so essenciais
para o estabelecimento de uma configurao aberta da cromatina. Ou seja, essas
regies podem inibir a represso normal da transcrio em uma rea relativamente
grande contendo vrios genes. Uma das LCRs melhor estudada a que regula a
expresso especfica de tecido dos genes da famlia das -globinas no homem,
camundongo e pinto.
Em muitas espcies, incluindo o pinto e o homem, a hemoglobina embrionria
ou fetal diferente daquela encontrada em clulas vermelhas do sangue de adultos. Um diagrama esquemtico dos tipos de hemoglobina humana e dos genes que
as codificam est apresentado na Figura 11.7. Hemoglobina embrionria humana
consiste principalmente de duas cadeias da globina, duas cadeias da globina e
quatro molculas de heme. Durante o segundo ms da gestao humana a sntese
de - e -globinas cessa abruptamente, enquanto que a sntese de e globinas
aumenta (Figura 11.8). A associao de duas cadeias de -globina com duas de globina produz a hemoglobina fetal (22). No terceiro ms de gestao os genes
da e globinas comeam a ficar ativos, e seus produtos crescem vagarosamente
enquanto que os nveis de -globina gradualmente decrescem. Essa troca altamente acelerada aps o nascimento, e a hemoglobina fetal substituda pela he22). O perfil da hemoglobina adulta normal de 97 porcento
moglobina adulta: (
22, 2-3 porcento 22, e 1 porcento 22. No homem, os genes das globinas - e
- esto no cromossomo 16, e os genes das -, -, - e -globinas esto ligados
entre si na ordem de aparecimento, no cromossomo 11. Parece existir, ento, um
mecanismo que dirige a troca seqencial dos genes do cromossomo 11 das globinas
embrionrias s fetais s adultas.
Alm dos stios hipersensveis DNase nos promotores e intensificadores perto e
dentro de cada gene de globina, ainda existe uma regio controladora do loco bem a
montante do membro mais 5 () do complexo de genes da -globina. Essa LCR
437
DNA
Histona
deacetilase
Figura 11.6
Histona acetiltransferase pode modificar as

caudas da histona e modificar sua conformao com o DNA nucleossmico. Isso permite
a soltura do DNA do nucleossomo central. (De
acordo com Lee et al., 1993.)
438
Figura 11.7
Cromossomo
Cromossomo
Ativao gnica seqencial na sntese da hemoglobina

durante o desenvolvimento.
Embrionrio
Adulto
minoritrio
Genes da globina
Genes da globina
Fetal
Adulto
majoritrio
Protenas
globina
contm quatro stios que so hipersensveis DNase I somente em clulas precursoras de eritrides e que parecem ser necessrios para altos nveis de ativao da transcrio especfica nessas clulas, da famlia inteira dos genes da -globina (-, -, - e
-globinas) no cromossomo 11 humano (Grosveld et al., 1987). Deleo ou mutao da
LCR causa o silenciamento de todos esses genes. Inversamente, se a LCR colocada
adjacente a genes que no so usualmente expressos nas clulas vermelhas do sangue (como o gene especfico da clula T, thy-1) e ento transfectados nas clulas
precursoras de eritrides, esses novos genes so expressos nas clulas vermelhas do
sangue. Esse efeito especfico para precursores das clulas vermelhas do sangue,
pois somente elas teriam os fatores trans-reguladores apropriados para se ligar a essa
regio (Blom van Assendelft et al., 1989; Fiering et al., 1993).
A LCR responsvel por permitir expresso gnica em uma regio inteira. Alm
disso, se os genes da globina permanecem ligados LCR, eles podem ser expressos
em clulas eritrides independentemente de onde elas residem no genoma. Se eles so
separados da LCR, os genes da globina so reprimidos, mesmo nas clulas eritrides
que transcreveriam os genes da globina. Ryan e colaboradores (1989) produziram
Stio da eritropoiese
Fgado
Bao
Medula ssea
Figura 11.8
Porcentagens de cadeias polipeptdicas de

hemoglobina em funo do desenvolvimento
humano. A importncia fisiolgica da cadeia
de globina na hemoglobina fetal foi examinada no Captulo 9. (De acordo com Karlsson
e Nienhaus, 1985.)
Porcentagem da sntese
total de globina
Saco vitelnico
Idade ps-concepo
(semanas)
Nascimento
Idade ps-natal
(semanas)
(A)
LCR
Deleo nessa rea

causa a, , , ,
-talassemia
Genes da globina
(B)
(i)
Figura 11.9
Stios hipersensveis DNase
Deleo nessa rea causa

persistncia da hemoglobina
fetal
Nucleossomos
LCR
Protenas ligantes do promotor
Garfo de
replicao
Promotor ou
intensificador
(ii)
Nucleossomo
formando no DNA
replicado
O complexo promotor-LCR
estabilizado pelas protenas
ligantes de promotores durante
a construo do nucleossomo
Promotor
LCR
Protenas ligantes
do promotor
(iii)
LCR
Promotor ou
intensificador
hipersensveis
camundongos transgnicos contendo o gene da -globina humana e seus promotores e intensificadores imediatos. Estes animais transgnicos produziram somente pequenas quantidades da -globina humana (menos de 0.3 porcento da -globina celular total). Entretanto, quando os pesquisadores adicionaram LCR, a -globina humana
correspondia a mais da metade da globina total nesses camundongos. Esse resultado
explica observaes clnicas em pacientes que no tinham essa regio e mostravam
deficincias de -, -, -, e -globinas, apesar de seus genes para essas protenas
estarem intactos e os genes de globinas no outro cromossomo funcionarem normalmente (Tuan et al., 1987).
A regio controladora do loco est abarrotada com stios de ligao de fatores
trans-reguladores. Como foi observado por Gary Felsenfeld (1992) Os domnios parecem ter sido montados por um estudante super-entusiasmado determinado a construir um poderoso elemento atuante como cis. Ele sugere que uma das funes da
LCR formar uma ala ao redor de uma das regies promotoras durante a replicao do
DNA e se ligar a ela de maneira a impedir que nucleossomos se formem naquele
promotor de globina (Figura 11.9). Realmente, os promotores da globina no so
hipersensveis DNase I exceto na presena da LCR.
439
Diagrama da famlia de genes da globina

humana no cromossomo 11. (A) A regio LCR
especfica para eritrides est localizada de 6 a
22 quilobases a montante do gene da globina.
Os quatro stios hipersensveis DNase I dentro dessa regio esto indicados por setas. Um
quinto stio hipersensvel DNase I a jusante
do gene da globina est tambm marcado, e
uma deleo dessa regio causa a persistncia
da transcrio do gene da globina. Dois genes quase idnticos da globina (fetal) esto
a jusante do gene da globina (embrionrio).
Em seqncia a esses esto os genes da e
globinas adultas. (B) Um modelo possvel
para a atividade de LCR. Fatores de transcrio ligados a promotores da globina so estabilizados no garfo de replicao pela ligao
LCR. Dessa forma, o complexo no seria
dissociado, e as regies associadas LCR permaneceriam livres de nucleossomos. (A de acordo com Ryan et al., 1989; B de acordo com
Felsenfeld, 1992.)
440
&
Especulaes
Trocas no gene de globina
PESAR DE SER BVIO que a trans-
crio do gene da globina passa

pelas isoformas embrionria, fetal
e adulta durante o desenvolvimento, no
conhecemos o mecanismo dessa troca.
Modelos recentes da troca de globina focalizam a competio e cooperao entre
intensificadores, promotores e a regio controladora de loco. [chrom2.html]
Regulao do gene da globina humana

O sistema de trocas na expresso gnica
das globinas humanas complicado. Existem vrios elementos cis-reguladores
para a -globina. J discutimos a regio
promotora da -globina e a regio controladora do loco que mantm toda a regio do cromossomo pronta para ser
transcrita. Alm disso, h um intensificador 3 (a montante do gene da -globina)
que regula a expresso temporal do gene,
e existe um outro intensificador intragnico que ajuda a regulao da especificidade tissular na expresso do gene da globina. Esse ltimo intensificador est
realmente localizado dentro do terceiro
xon do prprio gene da -globina
Figura 11.10
Representao esquemtica do gene da

globina humana e suas regies reguladoras. As reas sombreadas representam diferentes fatores de transcrio e as setas
duplas indicam que mais de um fator pode
se ligar naquele stio. (De acordo com
Ottalenghi, 1992.)
(Behringer et al., 1987; Trudel e Constantini,

1987). Como mostra a Figura 11.10, essas regies cis-reguladoras tm numerosos stios
para fatores de transcrio ubquos e especficos para eritrides. Um dos fatores especficos para eritride mais importante a protena dedo de zinco, GATA-1 (Orkin, 1992).
Esse fator se liga s seqncias GATA, que
so encontradas ao longo das LCR bem
como nos promotores e intensificadores de
numerosos genes que so expressos nas clulas vermelhas do sangue (incluindo alguns
dos genes para globina, sntese de heme e o
receptor de eritropoietina). Experimentos de
endereamento de genes (gene-targeting)
mostram que camundongos sem o gene para
GATA-1 no produzem a linhagem de clulas eritrides (Pevny et al., 1991). Um segundo fator de transcrio crtico parece ser o
NF-E2. Esse fator de transcrio bZIP especfico para eritrides se liga a reas da LCR e
pode mediar a comunicao entre a LCR e as
regies promotoras (talvez se ligando
GATA-1) (Talbot and Grosveld, 1991; Gong
and Dean, 1993). Gata-1 e NF-E2 so tambm
necessrios para a formao de um dos stios hipersensveis DNase I na LCR (Stamatoyannopoulos et al., 1995).
Persistncia hereditria da
hemoglobina fetal
A maioria das pessoas trocam a globina fetal
pela adulta ao redor do nascimento, mas isso
Protenas ligantes de promotor
no acontece com algumas pessoas. Esses indivduos retm a transcrio de seu

gene da -globina e so consideradas como
tendo persistncia hereditria da hemoglobina fetal ((HPFH). Isso no lhes causa
dano.* As mutaes que do origem
HPFH se agrupam nas regies cis-reguladoras. Mutaes deletivas que removem
as regies promotoras ou intensificadoras
da -globina so suficientes para elevar
os nveis de -globinas em clulas adultas.
Mutaes pontuais nos promotores de um
ou outro gene da -globina podem tambm causar HPFH (Martin et al., 1989). Uma
dessas mutaes cria um novo stio de ligao para GATA-1, enquanto a outra cria
um stio de ligao forte para o fator ubquo Sp1 (Ottolenghi, 1992). Assim, parece
*Indivduos com HPFH so fenotipicamente normais e so identificados atravs de varreduras de populaes para identificar outras anormalidades de globinas (como talassemia e anemia falciforme). Pesquisadores gostariam muito de saber reativar o gene da globina em
pessoas sofrendo de talassemia, anemia
falciforme e outras doenas da globina. Se o
gene da -globina fosse reativado, mesmo fracamente, muitos dos sintomas dessas doenas
poderiam ser aliviados. Estudos recentes sugerem que a administrao de butirato ou a combinao de hidroxiuria e eritropoietina podem
provocar a elevao da hemoglobina fetal em
clulas vermelhas do sangue recm-geradas
(Perrine et al., 1993; Rodgers et el., 1993).
Esto em andamento estudos de avaliao desses procedimentos.
Protenas ligantes de intensificador
Intensificador intragnico
Promotor
Gene da
globina
Intensificador flanqueando
a extremidade 3
haver uma competio entre os promotores dos genes de - e -globinas (Enver

et al., 1990). Essa competio influenciada pela presena de fatores trans-reguladores intensificadores e silenciadores.
Existem tambm mutaes pontuais que
causam HPFH impedindo a ligao de um
regulador negativo ao promotor da globina em clulas adultas (Berry et al.,
1992). Bacon e colegas (1995) tiveram evidncia de que a relao entre os fatores
de transcrio GATA-1 e Sp1 muda ao longo do tempo e que o tipo de globina pode
depender da concentrao relativa desses fatores.
Fator de transcrio no stio

hipersensvel 3
441
Aglomerado de genes
semelhantes globina
Embrionrio
Fetal
Adulto
Holocomplexo
A LCR e a troca de globina no homem

Figura 11.11
A principal competio pode no ser para a

ativao pelo intensificador 3 (que pode
funcionar localmente), mas pela LCR. Enquanto alguns investigadores consideram
que o principal efeito da LCR manter a
cromatina contendo locos da globina em
uma conformao transcricionalmente permissiva (veja Martin et al., 1996), outros pesquisadores imaginam interaes especficas
entre diferentes promotores do gene da
globina e as regies da LCR. interessante
notar que a distncia entre a LCR e os genes
da globina afetam sua ativao (Hanscombe
et al., 1991). Quando unido prximo LCR,
o gene da -globina humana expresso em
clulas embrionrias de camundongos
transgnicos. Sua ativao correta (somente em clulas adultas) restaurada somente
quando ele colocado mais longe da LCR.
De maneira semelhante, o gene da -globina
humana reprimido mais cedo (como o gene
normal da -globina) quando ele est mais
separado da LCR. Isso sugere que a interao entre LCR e os genes da globina polarizada (veja Figura 11.10; Hanscombe et al.,
1991): os genes da globina mais perto da
LCR so ativados mais cedo, enquanto os
mais distantes o so mais tarde. Presumivelmente, existe um contato fsico entre a
LCR e os promotores e intensificadores especficos dos genes.
O mecanismo pelo qual a distncia da
LCR poderia regular a ativao de diferentes promotores em diferentes tempos ainda
tem que ser explicado. Um modelo (Figura
11.11; Ellis et al., 1996) foi recentemente proposto considerando que camundongos
transgnicos contm pedaos de LCR no
seu genoma. Nesse modelo, o terceiro stio
Mecanismo proposto para ativao da famlia das globinas pela LCR. (A) O stio hipersensvel 3 da LCR ativado por um fator transativador. (B) Uma vez aberto o stio 3, os outros
stios hipersensveis abrem e ligam seus fatores de transcrio. Interaes entre essas protenas
formam um holocomplexo de DNA e protena. Esse pode formar uma ala e interagir com os
promotores dos genes da globina. Competio por essa interao, pela presena de diferentes
concentraes de fatores de transcrio, permitiria a ativao diferencial e seqencial desses
genes durante o desenvolvimento dos eritrcitos. (De acordo com Ellis et al., 1996.)
hipersensvel DNase aberto por um fator

de transcrio trans-ativador. Uma vez aberto esse stio, os outros trs stios especficos para tecidos tambm se abrem. Interaes protena-protena entre esses stios os
agrupa para formar um holocomplexo, que
espalha a alterao na estrutura da cromatina atravs da regio da -globina. O holocomplexo formaria uma ala de interao com
cada um dos genes da globina, e interagiria
seqencialmente com as regies promotoras de cada gene. Os fatores de transcrio
envolvidos nas sndromes de HPFH podem
ser aqueles que so mediadores nas interaes entre os promotores e os stios hipersensveis da LCR. Alm disso, esses stios
no so permutveis (isto , o stio 4 no
pode substituir o stio 3) e, portanto, devem
ter diferentes papis nessas interaes
(Bungert et al., 1995).
Nesses modelos, h uma competio
entre os promotores pela LCR. Um fator de
transcrio recentemente descoberto,
EKLF (fator de eritride semelhante ao
Krppel), pode ser crucial na regulao
dessa competio por estabilizar as interaes entre LCR e o promotor da -globina.
Em camundongos sem EKLF, mas tendo
um sistema funcional do gene da -globina
humana (incluindo a LCR humana), as - e
-globinas so produzidas normalmente.

Entretanto, a troca para -globina no
feita. Isso sugere que o holocomplexo da
LCR continua a interagir com os promotores do gene da -globina a no ser que
seja estabilizado ao promotor do gene da
-globina pelo EKLF (Wijgerde et al.,
1996). Inversamente, fatores de transcrio tais como GATA1 e YY1 podem interferir com a ligao de LCR com um promotor, enquanto eles intensificam a ligao
da LCR a outro promotor (Raich et al.,
1996; Wandersee et al., 1996). As interaes entre stios de LCR e promotores e
como essas poderiam ser reguladas por
diferentes relaes e tipos de fatores de
transcrio ainda devem ser elucidadas,
mas essas interaes entre intensificadores, promotores e a LCR devem fornecer
uma estria fascinante sobre a expresso
gnica diferencial em clulas humanas.*
* Se voc acha que as coisas esto complicadas, voc est certo. Harold Weintraub, que foi
um dos lderes da pesquisa em cromatina disse:
Um intensificador complexo pode ter 10 stios
de ligao, uma LCR provavelmente outro tanto, um complexo de transcrio pode conter 15
protenas e a RNA polimerase talvez 12. Que
confuso! (H. Weintraub, comunicao pessoal). No sabemos porque existem tantos fatores
diferentes regulando a transcrio desses genes.
442
Metilao de DNA e atividade gnica

Freqentemente, assume-se que o gene contm exatamente os mesmos nucleotdeos na forma ativa ou inativa. Um gene da -globina em precursores de clulas
vermelhas do sangue deveria ter os mesmos nucleotdeos que um gene da globina em um fibroblasto ou clula retiniana do mesmo animal. Existem, entretanto, diferenas sutis no DNA. Em 1948, R. D. Hotchkiss descobriu uma quinta
base no DNA, 5-metilcitosina. Em alguns eucariotos, essa base produzida
enzimaticamente aps replicao do DNA, e aproximadamente 5% das citosinas
em DNA de mamferos so convertidas em 5-metilcitosina. Essa converso s
pode ocorrer quando o resduo de citosina seguido por uma guanosina (CpG).
Estudos recentes mostraram que o grau de metilao das citosinas em um gene
pode tambm controlar a transcrio do gene. Em outras palavras, a metilao do
DNA pode mudar a estrutura do gene e, assim fazendo, regula sua atividade. A
metilao da citosina parece ser um mecanismo majoritrio na regulao transcricional em vertebrados. Entretanto, Drosophila, nematdeos e talvez a maioria dos
invertebrados no metilam o seu DNA.
Existem trs reas nas quais a metilao do DNA parece contribuir para a atividade gnica diferencial. Primeiro, a metilao de seqncias do promotor contribui
para a regulao temporal e espacial dos genes codificando protenas especficas
de tecidos. Segundo, a metilao do DNA considerada responsvel pela distino entre certos genes derivados do vulo ou do espermatozide nos mamferos,
assim permitindo a expresso de somente um deles durante o desenvolvimento
precoce. Terceiro, a metilao do DNA considerada responsvel pela represso continuada de genes em um dos dois cromossomos X em cada clula feminina de mamferos.
Correlaes entre metilao do promotor e inatividade gnica
A primeira evidncia de que a metilao do DNA ajuda a regular a atividade do gene
vem de estudos mostrando correlao entre atividade gnica e baixa metilao da
citosina (hipometilao), especialmente na regio promotora do gene. Em clulas
vermelhas do sangue em desenvolvimento, no homem e no pinto, o DNA envolvido
na sntese da globina est completamente (ou quase completamente) no metilado,
enquanto que os mesmos genes, em clulas que no produzem globinas, esto
altamente metilados (Figura 11.12). Clulas de fgado fetal que produzem hemoglobina no desenvolvimento precoce tm genes no metilados para a hemoglobina fetal.
Esses genes so metilados no tecido adulto (van der Ploeg e Flavell, 1980; Groudine
e Weintraub, 1981; Mavilio et al., 1983).
Modelos de metilao com especificidade tissular podem tambm ser encontrados no gene da ovalbumina do pinto; o gene no est metilado nas clulas do
oviduto, mas em outros tecidos do pinto est metilado (Mandel e Chambon, 1979).
Desmetilao acompanha a troca de classe na sntese das imunoglobulinas (Rogers
e Wall, 1981) e se correlaciona com a habilidade de linfcitos murinos em produzir a
protena ligante de metais, metalotionena I (Compere e Palmiter, 1981). Em somitos
de camundongo, a desmetilao de um intensificador MyoD precede sua transcrio
e essencial para a especificao dessas clulas como precursores musculares
(Brunk et al., 1996). Portanto, a ausncia de metilao do DNA tem boa correlao
com a expresso especfica de tecido de certos genes.
Um segundo tipo de evidncia indicando a metilao do DNA como um processo regulador vem de experimentos nos quais a expresso de genes clonados
alterada pela introduo ou remoo de grupos metila em seus resduos de citosina.
Quando Busslinger e colaboradores (1983) adicionaram genes de globina clonados
a clulas (por co-precipitao com fosfato de clcio), essas absorveram o DNA e, em
muitos casos, o incorporaram em seus ncleos. Em tais casos, os genes da globina
Figura 11.12
Promotor
metilado
Promotor no
metilado
Gene da globina
Gene da globina
6 semanas
DNA
Ativo
globina
Inativo
Metilao de genes da globina em clulas

sangneas embrionrias em humanos. A atividade dos genes da globina tem correlao inversa com a metilao de seus promotores.
(De acordo com Mavilio et al., 1983.)
12 semanas
Inativo
443
Ativo
globina
clonados foram transcritos. Se certas regies dos genes de globina clonados forem
protegidos da metilao, antes de adicion-los s clulas, ser possvel criar clones
nos quais os genes da globina tm seqncias idnticas mas diferentes padres de
metilao. Um gene completamente no metilado transcrito, enquanto que um gene
completamente metilado (grupo metila em cada apropriado resduo C) no transcrito.
Usando clones parcialmente metilados, Busslinger e colaboradores mostraram que a
metilao na regio 5 do gene da globina (nucleotdeos 760 a +100) previne a
transcrio. Parece, portanto, que a metilao no terminal 5 de um gene tem um
papel direto na regulao da expresso gnica. De modo geral, a metilao da regio
promotora inibe a transcrio de genes.
Metilao e a manuteno dos padres de transcrio
Diferenas na metilao podem ser responsveis pela manuteno (como o oposto
iniciao) de um padro de atividade transcricional ao longo de vrias geraes
de clulas (Holliday, 1987). Durante a replicao, cada fita de DNA serve como um
molde para sua fita complementar. Nas regies de metilao, os grupos metila esto
nas duas fitas da dupla hlice, visto que uma CpG em um lado do DNA refletida por
uma CpG antiparalela no outro lado. Se o C em uma das fitas est metilado, o C na na
outra fita tambm est (Figura 11.13). Durante a replicao, uma fita de DNA (a fita
molde) teria o padro de metilao, ao passo que a fita recm-sintetizada no o teria.
Entretanto, a enzima DNA (citosina-5)-metiltransferase tem uma forte preferncia
por DNA com uma fita metilada, e quando encontra um metil-CpG em um lado do
DNA, a enzima metila a nova citosina no outro lado (Gruenbaum et al., 1982; Bestor
e Ingram, 1983).
duvidoso que modificaes na metilao realmente iniciam modificaes na
atividade do gene, pois a DNA metiltransferase no tem uma especificidade inerente em relao a uma seqncia (salvo uma propenso geral para reas ricas em
CpG). Como o padro de metilao deve ser herdado aps cada diviso celular,
alguma outra coisa deve reconhecer os genes de clulas diferenciadas no seu
estado metilado e subseqentemente desmetil-los. Isso foi demonstrado
transfectando um gene metilado de -actina para clulas cultivadas de mioblastos
(que normalmente transcrevem aquele gene). Quando transfectado para os
mioblastos, esse gene foi desmetilado e transcrito. Entretanto, se transferido a
Figura 11.13
Modelo para a propagao de padres de metilao. Quando o DNA se replica, somente uma
das duas fitas (a fita velha) retm o padro original de metilao. A outra fita (a fita nova)
no metilada. Uma enzima metilante especfica para CpG seria capaz de se ligar aos pares de
CpG onde um resduo C estava metilado, e ento metilaria o resduo C na fita complementar.
(De acordo com Browder, 1984.)
Replicao
Novas fitas de DNA
Metilao de
novas fitas de DNA
444
outros tipos de clulas, esse gene especfico para o msculo permaneceu metilado.
A desmetilao especfica para o msculo no necessitou de sntese de novo
DNA mas certas seqncias cis-DNA foram necessrias (Yisraeli et al., 1986;
Paroush et al., 1990). Uma situao semelhante foi vista na desmetilao de genes
da imunoglobulina e vitelogenina (protena do vitelo) (Frank et al., 1990; Jost,
1993). Portanto, a metilao pode ser necessria para estabilizar o padro de transcrio do gene, mas a ativao inicial do gene provavelmente realizada por
fatores de transcrio especficos para tecidos.
Como que a metilao impede a transcrio? Uma possibilidade que os fatores
de transcrio no podem se ligar s suas seqncias intensificadoras ou promotoras se o DNA estiver metilado (Iguchi-Ariga e Schaffner, 1989). Outra possibilidade
que o DNA metilado seja especificamente reconhecido por certas protenas que
competem contra os fatores de transcrio por esses stios. Boyse e Bird (1991,
1992) forneceram evidncias para esse segundo modelo mostrando que seqncias
promotoras metiladas esto ligadas por uma protena ligante de metil-CpG. Essa
protena parece competir com a ligao de fatores de transcrio, desse modo reduzindo a transcrio desses stios.
A metilao do DNA pode tambm influenciar a formao de nucleossomos. Keshet
e colaboradores (1986) demonstraram que a metilao afeta a estrutura da cromatina e
sugerem que a desmetilao cria stios hipersensveis DNase I. Quando eles
transfectaram genes da globina desmetilados em ncleos de fibroblastos de camundongo, os genes foram empacotados em cromatina sensvel DNase (independente
da habilidade transcricional do gene). Quando os mesmos genes foram metilados em
todos os stios CpG, as regies sensveis DNase no se formaram, possivelmente
porque sua metilao os levou a um empacotamento de forma inacessvel. possvel
que quando os fatores trans-reguladores removem os nucleossomos do DNA, essas
regies se tornam desmetiladas. Essa desmetilao pode ser necessria para estabilizar essas regies de atividade. Os grupos metila interagiriam com as histonas para
permitir que os nucleossomos se formem somente no DNA metilado e no no DNA
desmetilado, deixando as regies ativas livres de nucleossomos no DNA (Keshet et
al., 1986). Uma vez estabelecidas essas regies, seria mais fcil para outros elementos
trans-reguladores encontrar essas regies livres de nucleossomos.
&
Especulaes
Metilao e impresso gnica
O CAPTULO 4, vimos que os

genomas do espermatozide e do
vulo nos mamferos no so
equivalentes. Os zigotos no se desenvolvem adequadamente se seus ncleos so
derivados de dois proncleos do vulo ou
do espermatozide. Essa inabilidade de desenvolvimento provavelmente devida a
certos genes que somente so ativos se
forem derivados do espermatozide ou do
vulo. Para a maioria dos genes (como foi
previsto pela gentica Mendeliana) no importa se ele provem do pai ou da me, exis-
tem aproximadamente uma dzia de genes

para os quais importante se ele deriva do
espermatozide ou do vulo. Em algumas
mutaes no camundongo e no homem, uma
situao severa ou letal se desenvolve se o
gene mutante derivado de um genitor, mas
o mesmo gene mutante no tem efeito deletrio se herdado do outro genitor. Por exemplo, em camundongos, o gene para o fator
de crescimento II semelhante insulina (Igf2) no cromossomo 7 ativo em embries
precoces somente no cromossomo transmitido pelo pai. Inversamente, o gene (Igf-
2r) para uma protena ligante desse fator de

crescimento no cromossomo 17 ativo somente quando transmitido pela me (Barlow
et al., 1991; DeChiara et al., 1991; Bartolomei
e Tilghman, 1992). Igf-2r age ligando e degradando o excesso de Igf-2. Um filhote de
camundongo que herda uma deleo do
gene Igf-2r de seu pai normal, mas se a
mesma deleo herdada da me, o crescimento do feto intensificado e ele morre
tardiamente na gestao.* No homem, a perda de um segmento especfico do brao longo do cromossomo 15 resulta em diferentes
Origem genitora
Me
Pai
Fentipo
Alelo normal
Alelo mutante
Sndrome de Prader-Willi
Alelo mutante
Alelo normal
Sndrome de Angelman
Duas cpias do alelo
Alelo ausente
Sndrome de Prader-Willi
Duas cpias do alelo
Sndrome de Angelman
Alelo ausente
Fonte: De acordo com Nicholls et al., 1993.
fentipos, dependendo se a perda no cromossomo derivado do homem ou da mulher

(Tabela 11.2). Se o cromossomo com o segmento defeituoso ou ausente vem do pai, a
criana nasce com a sndrome de PraderWilli, uma doena associada a um ligeiro
retardamento mental, obesidade, gnadas
pequenas e baixa estatura. Se o gene defeituoso ou ausente vem da me, a criana tem
a sndrome de Angelman, caracterizada por
severo retardamento mental, convulses,
falta de fala e riso inapropriado (Knoll et al.,
1989; Nicholls et al., 1989). [chrom3.html]
Atualmente, considera-se que a maioria, seno todas, as diferenas entre genes
pronucleares de machos e de fmeas em
mamferos, envolvem diferenas em seus
padres de metilao do DNA. A distribuio dos CG metilados ou no pode ser analisada cortando o DNA com duas enzimas
de restrio, HpaII e MspI (McGhee e
Ginder, 1979). Ambas as enzimas cortam no
mesmo stio-CCGG- mas HpaII no cortar
o DNA se o C central est metilado, enquanto MspI corta se a seqncia est ou
no metilada. Portanto, o DNA de certo
tipo de clula pode ser digerido separadamente com HpaII e MspI e os fragmentos
de DNA obtidos transferidos pela tcnica
Southern e hibridizados com uma sonda
radioativa especfica para o gene (veja Captulo 2). Diferenas no padro de bandas
na autoradiografia dos fragmentos clivados por MspI ou HpaII podem ser relacionadas s diferenas de metilao.
*O aumento de 30% no crescimento causado por um excesso de Igf-2. A letalidade
provavelmente devida a defeitos lisossmicos,
pois a protena ligante de Igf-2 tambm serve
para direcionar enzimas lisossmicas para
aquela organela. (Wang et al., 1994.)
A Figura 11.14 mostra o resultado de

um experimento onde DNA de espermatozide foi isolado e tratado com HpaII ou
MspI. A sonda foi um DNA radioativo do
segundo xon do gene da globina. A
auto-radiografia de fragmentos da digesto com MspI mostra que essa sonda se
liga a fragmentos de DNA com 1400 pares
de bases entre os stios CCGG. A autoradiografia da digesto de HpaII mostra
que no espermatozide esses stios (e provavelmente numerosos outros) so metilados e que essa seqncia de DNA agora
reside em um pedao de 25000 pares de
bases do DNA onde todos os stios CCGG
so metilados (Groudine e Conklin, 1985).
Essa tcnica mostrou que os ncleos
das clulas germinativas primordiais nos
mamferos, macho e fmea, so surpreendentemente hipometilados (Monk et al.,
1987; Driscoll e Migeon, 1980), mas ambos
os genes do espermatozide e do vulo
sofrem extensa metilao no amadurecimento dos gametas. Parece que na formao
das clulas germinativas, informaes prvias sobre metilao so apagadas e, durante a meiose, nova informao introduzida no genoma. O padro de metilao em
um determinado gene pode diferir entre o
espermatozide e o vulo, e essas diferenas de metilao especficas dos genes
podem ser vistas nos cromossomos das
clulas embrionrias (Reik et al., 1987;
Sanford et al., 1987; Sapienza et al., 1987;
Chaillet et el., 1991; Kafri et al., 1992). Portanto, diferenas de metilao entre os
genes do espermatozide e do vulo podem especificar um gene vindo do pai ou
da me. Essa impresso materna ou paterna adiciona informao aos genomas herdados, informao essa que pode regular
temporal e espacialmente a atividade gnica

e o comportamento cromossmico.
Swain e colaboradores (1987) acompanharam esses eventos seguindo um gene
especfico que sofre metilao diferencial no
espermatozide e no vulo. Eles produziram uma linhagem de camundongos transgnicos nos quais um gene particular, c-myc,
foi inserido em uma regio particular do genoma do camundongo. Quando esse gene
foi herdado do genitor macho, ele foi transcrito especificamente no corao e em nenhum outro tecido. Quando esse gene foi
herdado do genitor fmea, ele no se expressou. O padro de expresso foi
correlacionado com o grau de metilao;
esse gene metilado durante a maturao
do vulo mas permanece hipometilado durante a formao do espermatozide. Em
animais que herdam o transgene do macho,
o gene no est metilado e expresso no
corao. Em animais que adquirem o
transgene de suas mes, o gene metilado
e silencioso. Em ambos, macho e fmea, o
padro de metilao eliminado nas clulas
germinativas (Chaillet et al., 1991; Kafri et
al., 1992). No camundongo, diferenas de
metilao dos gametas tambm so vistas
na impresso dos genes para Igf-2r e H19
(Ferguson-Smith et el., 1993; Stger et al.,
1993). Alm disso, se esses genes so colocados em uma linhagem de camundongos
Msp I Hpa II
=25
Pares de bases (x103)
Tabela 11.2 Evidncia que a impresso gnica afeta o fentipo em

distrbios do gene humano no cromossomo 15 (loco 11q13)
445
1.4
Figura 11.14
Deteno de stios de metilao no DNA. DNA

foi isolado de espermatozide de galinha e digerido com MspI (pista 1) ou HpaII (pista 2).
Os fragmentos foram separados por eletroforese, transferidos para papel e hibridizados
por uma sonda de DNA radioativo do segundo
xon do gene da globina. Essa sonda se ligou a um fragmento de 1400 bases no digerido
de MspI, mas a um fragmento de 25.000 bases
no digerido de HpaII. (De acordo com
Groudine e Conklin, 1985; fotografia cortesia
de M. Groudine.)
446
mutantes que no possui a enzima capaz de

metilar os stios CpG, a transcrio do gene
H19 ocorre a partir do alelo previamente silencioso, enquanto que a transcrio de Igf2r perdida (Li et al., 1993). Assim, em genes
impressos, a metilao pode ser um sinal
negativo ou positivo para a transcrio.

Essas diferenas de metilao especfica
para gametas fornecem uma explicao plausvel para a falta de desenvolvimento nos
mamferos partenogenticos e para a necessidade da presena de ambos os proncleos,
macho e fmea, no zigoto. Elas fornecem

tambm um lembrete de que o organismo
no pode ser explicado somente na base de
seus genes. So necessrios conhecimentos tanto de parmetros desenvolvimentais
como genticos.
Compensao de dosagem do cromossomo X de mamferos

Em animais to diversos como a Drosophila e o homem, as fmeas se caracterizam
por terem dois cromossomos X por clula, enquanto os machos s tem um por
clula. Em contraste com o cromossomo Y, o cromossomo X tem milhares de genes
essenciais para a atividade celular. Mas, apesar das clulas femininas possurem um
nmero de cromossomos X que o dobro das masculinas, as clulas de ambos tm
quantidades aproximadamente iguais de produtos gnicos codificados pelo cromossomo X. Essa equalizao chamada compensao de dosagem. As taxas de
transcrio dos cromossomos X foram alteradas de tal forma que clulas masculinas
e femininas transcrevem a mesma quantidade de RNAs de seus cromossomos X. Na
Drosophila, ambos os cromossomos X na fmea so ativos, mas h uma crescente
transcrio do cromossomo X do macho, de modo que o nico cromossomo X das
clulas do macho produz tanto produto quanto os dois cromossomos nas clulas
femininas (Lucchesi e Manning, 1987). Isso possibilitado pela ligao de fatores
de transcrio especficos a centenas de stios ao longo do cromossomo X do
macho (Kuroda et al., 1991).
Nos mamferos a compensao de dosagem do cromossomo X ocorre por inativao de um cromossomo X em cada clula feminina. Dessa forma, cada clula somtica
em mamferos, seja de macho ou de fmea, tem somente um cromossomo X funcional.
Esse fenmeno chamado inativao do cromossomo X. A cromatina do cromossomo
X inativo convertida em heterocromatina- cromatina que permanece condensada ao
longo da maior parte do ciclo celular e se replica aps a maior parte da cromatina do
ncleo (a eucromatina). Essa heterocromatina, em uma formao chamada corpo de
Barr (Figura 11.15), freqentemente vista no envoltrio nuclear de clulas femininas
(Barr e Bertram, 1949). A inativao do cromossomo X deve ocorrer precocemente no
desenvolvimento. Tagaki e Abe (1990) usando um cromossomo X mutado que no se
inativava, mostraram que a expresso de dois cromossomos X por clula em embries
de camundongo leva morte das clulas ectodrmicas e ausncia de formao do
mesoderma, finalmente causando a morte embrionria no 100 dia de gestao.
Figura 11.15
Ncleos de clulas do epitlio oral humano coloridos com Cresil violeta. (A) Clula de um
homem normal XY, mostrando ausncia do corpo de Barr. (B) Clula de uma mulher normal XX,
mostrando um nico corpo de Barr (seta). (C) Clula de uma mulher com trs cromossomos X.
Dois corpos de Barr podem ser vistos, e somente um cromossomo por clula ativo. (De acordo
com Moore, 1977.)
CLIVAGEM
PRECOCE
IMPLANTAO
NA FERTILIZAO
Corpos de Barr
Cromossomo X
materno
Cromossomo
X paterno
Zigoto feminino
com dois
cromossomos X
(A)
Os dois cromossomos X
so ativos em todas
as clulas
Inativao ao acaso de
um cromossomo X
em todas as
clulas do embrio
(B)
Figura 11.16
Inativao do cromossomo X em mamferos. (A) Diagrama esquemtico ilustrando inativao ao acaso do cromossomo X. Considera-se que a inativao
ocorra aproximadamente na poca da implantao. (B) Um camundongo fmea
heterozigoto para o gene dappled, da colorao da pelagem, ligado ao X. Podem ser observadas regies distintamente pigmentadas. (Fotografia cortesia
de M. F. Lyon.)
A inativao precoce de um cromossomo X por clula tem conseqncias

fenotpicas importantes. Uma das primeiras anlises da inativao do cromossomo
X foi feita por Mary Lyon (1961), que observou os padres de colorao na pelagem
de camundongos. Se o animal heterozigoto para um gene autossmico controlando a pigmentao do plo, ento ele se parece a um dos dois genitores ou tem uma
cor intermediria. Em qualquer caso, o camundongo tem uma cor nica. Mas se um
camundongo fmea heterozigoto para o gene da pigmentao no cromossomo X, o
resultado diferente: faixas da cor de um dos genitores se alternam com outras da
cor do outro genitor (Figura 11.16). Lyon props a seguinte hiptese para explicar
esses resultados:
1. Muito precocemente no desenvolvimento de mamferos do sexo feminino, ambos
cromossomos X so ativos.
2. Prosseguindo o desenvolvimento, um cromossomo X desligado em cada
clula.
3. Essa inativao ao acaso. Em algumas clulas, o cromossomo X derivado do
pai o inativado; em outras aquele proveniente da me.
4. Esse processo irreversvel. Uma vez que um cromossomo X foi inativado, o
mesmo cromossomo X inativado em toda a prognie daquela clula. (As
reas de pigmentao nesses camundongos so manchas amplas, no um
padro de sal e pimenta.) Desse modo, todos os tecidos em fmeas de mamferos so mosaicos de dois tipos de clulas.
447
448
Figura 11.17
Reteno da inativao do cromossomo X.

Aproximadamente 30 clulas de uma mulher
heterozigota para a deficincia de HPRT foram colocadas em uma placa de Petri e permitido o seu crescimento. As clulas foram
visualizadas por auto-radiografia aps incubao em um meio contendo hipoxantina radioativa. Clulas com HPRT incorporam o composto radiomarcado em seu RNA e escurecem
a emulso fotogrfica colocada sobre elas. Os
clones de clulas sem HPRT parecem mais claros porque suas clulas no podem incorporar
o composto radioativo. (De acordo com
Migeon, 1971, cortesia de B. Migeon.)
Algumas das evidncias mais impressionantes em favor desse modelo vm de

estudos bioqumicos em clones de clulas humanas. Em humanos, existe uma
doena gentica- Sndrome de Lesch-Nyhan- que se caracteriza pela falta de uma
enzima ligada ao cromossomo X, hipoxantina fosforibosiltransferase (HPRT). A
sndrome de Lesch-Nyhan transmitida atravs do cromossomo X ou seja,
homens que tm essa mutao em seu nico cromossomo X sofrem (e morrem) da
doena. Em indivduos do sexo feminino, entretanto, a presena do gene mutante
HPRT pode ser mascarada pelo outro cromossomo X, que carrega o alelo do tipo
selvagem. Uma mulher que tem filhos com essa doena considerada uma portadora, pois ela tem um gene HPRT mutante em um cromossomo, e um gene HPRT do
tipo selvagem no outro cromossomo X. Se a hiptese de Lyon correta, cada
clula dessa mulher deveria estar produzindo HPRT ativa ou inativa, dependendo
de qual cromossomo X est ativo. Barbara Migeon (1971) testou essa possibilidade tomando clulas da pele de uma mulher heterozigota para o gene HPRT e colocando-as em cultura. Cada uma dessas clulas se dividiu formando clones de
clulas. Migeon usou mtodos de colorao para detectar a presena de HPRT
tipo selvagem nesses clones, verificando que aproximadamente metade dos clones
tinham a enzima e a outra metade no ( Figura 11.17).
A hiptese de Lyon sobre a inativao do cromossomo X fornece uma excelente explicao sobre a inativao gnica diferencial a nvel da transcrio. Algumas
excees em relao regra geral mostram ainda mais sua importncia. Primeiro, a
inativao do cromossomo X somente se d em clulas somticas, no em clulas
germinativas. Em clulas germinativas femininas, o cromossomo X inativo
reativado imediatamente antes que as clulas entrem em meiose (Gartler et al.,
1973; Migeon e Jelalian,1977; Kratzer e Chapman, 1981). Assim, em ocitos maduros, ambos cromossomos X esto ativos. Em cada gerao, a inativao do cromossomo X tem que ser renovada.
Segundo, existem algumas excees regra do acaso no padro da inativao. A
primeira inativao do cromossomo X no camundongo vista no trofectoderma,
onde o cromossomo X paterno especificamente inativado (Tagaki, 1974; West et
al., 1977). Terceiro, a inativao do cromossomo X no se estende a cada gene no
cromossomo X humano. Existem vrios genes no brao curto do cromossomo X
(como aquele codificando a sulfatase de esterides) que escapam da inativao
relacionada dosagem (Mohandas et al., 1980; Brown e Willard, 1990), e mesmo no
brao longo, existem alguns genes que so transcritos de ambos os cromossomos X
em cada clula somtica feminina. Portanto, no homem, a heterocromatizao no se
estende por todo o cromossomo X.
A quarta exceo, na verdade, acaba provando a regra. Existem alguns mamferos machos, cujos padres da cor de pelagem no poderia ser encontrada a no ser
que os animais exibissem inativao do cromossomo X. Felinos machos tipo malhado e casco de tartaruga esto entre esses exemplos. Esses modelos de pelagem
com manchas so normalmente encontrados em fmeas e considerados resultantes de uma inativao ao acaso do cromossomo X. Mas raros machos exibem
tambm esses tipos de pelagem. Como pode ser isso? Acontece que esses felinos
so XXY. O cromossomo Y os torna machos (veja Captulo 20), mas um cromossomo X inativado, como nas fmeas, de modo que h somente um X ativo por clula
(Centerwall e Benirschke, 1973). Dessa forma, esses felinos tm clulas com um
corpo de Barr e inativao ao acaso do cromossomo X. Est claro, ento, que um
dos mecanismos para o controle do nvel de transcrio da regulao gnica
produzir um grande nmero de genes heterocromticos e portanto transcricionalmente inertes.
&
449
Especulaes
O mecanismo de inativao do cromossomo X
de inativao do cromossomo X ainda no bem conhecido, mas pesquisa recente

nos d algumas indicaes dos fatores
que podem estar envolvidos na iniciao
e manuteno de um cromossomo X heterocromtico.
MECANISMO
Iniciao da inativao do cromossomo X:

O gene Xist
As primeiras indicaes sobre a existncia de um iniciador na inativao do cromossomo X vieram de estudos genticos
onde cromossomos X rearranjados em
camundongos no podiam ser inativados
(Russell, 1963; Cattanach et al., 1969;
Mattei et al., 1981). Esses cromossomos
no tinham uma certa regio, chamada
posteriormente de centro de inativao do
cromossomo X (XIC). Em 1991, Brown e
seus colegas encontraram um transcrito
de RNA originado unicamente de um cromossomo X inativo de humano. (Nos se-
res humanos, nos locos que escapam

inativao do cromossomo X, ambos os
cromossomos X sintetizam o transcrito.
Aqui o transcrito provinha somente do X
inativo.) Esse transcrito, XIST, estava
sendo produzido por um gene dentro da
regio XIC. Alm disso, esse transcrito
no parece codificar uma protena. Ele permanece dentro do ncleo e interage com
a cromatina X inativa do corpo de Barr
(Brown et al., 1992). Uma situao similar
existe no camundongo, onde o gene Xist
do cromossomo X inativo sintetiza um
RNA nuclear cuja seqncia no pode codificar uma protena* (Borsani et al., 1991;
Brockdorrf et al., 1992).
O gene Xist um excelente candidato para o iniciador da inativao do X.
Primeiro, os transcritos do gene Xist so
vistos em embries de camundongo antes da inativao do cromossomo X, o
que seria de se esperar se o gene tem um
papel em iniciar essa inativao (Kay et
al., 1993). Segundo, derrubando um
Clulas germinativas:
TATA
DNA
Espermatozide
TATA
vulo
Clulas somticas:
TATA
X-inativo
loco de Xist em uma clula XX impedese a inativao do X naquele cromossomo (Penny et al., 1996). Terceiro, a transferncia de um segmento de 450 quilobases contendo o gene Xist do camundongo para um autossomo de clulas precursoras embrionrias masculinas causa
a inativao aleatria daquele autossomo ou do cromossomo X endgeno (Lee
et al., 1996). O autossomo contado
como um cromossomo X. A expresso de
Xist somente necessria para a iniciao da inativao do cromossomo X.
Uma vez ocorrida a inativao ele se torna dispensvel (Brown e Willard, 1994).
Ainda no se sabe o que o RNA do Xist
faz para inativar o cromossomo.
O loco do Xist est impresso nos
gametas, e a impresso efetuada pela
metilao diferencial na regio promotora
do Xist. Durante a espermatognese, trs
stios CG no promotor do Xist so desmetilados, enquanto que os mesmos stios
so completamente metilados durante a
oognese. Em clulas somticas, o gene
Xist ativo (no cromossomo X inativo)
praticamente no metilado, enquanto que
o gene Xist inativo (no cromossomo X
ativo) est completamente metilado (Figura 11.18; Norris et al., 1994; Ariel et al.,
1995; Zuccotti e Monk, 1995). Esse padro de expresso do Xist mantido nos
tecidos extra-embrionrios do camundongo (de tal modo que o Xist de origem paterna est desmetilado e ativo, levando
inativao daquele cromossomo). Entretanto, as clulas do epiblasto embrionrio perdem os padres de impresso de
seus ancestrais e reestabelecem as diferenas de metilao ao acaso.
TATA
X-ativo
Stios de correlao
da transcrio
do gene
Figura 11.18
Sumrio dos padres de metilao do Xist no espermatozide, vulo e dois cromossomos X em

clulas somticas. Quadrados abertos representam stios CG no metilados; quadrados cheios
representam stios CG metilados. As reas sombreadas indicam stios correlacionados com a
transcrio dos genes. (De acordo com Zuccotti e Monk, 1995.)
*A lista de tipos de RNA est crescendo. Alm

dos bem conhecidos mRNA, tRNA, rRNA e pequenos RNAs nucleares (envolvidos nas emendas de RNA), existem tambm RNA H19 e RNA
Xist, nenhum dos quais codificam protenas. Em
Captulos mais adiante discutiremos RNAs de
controle de traduo (antisenso natural) e RNAs
como X1srt usados para localizar mensagens para
regies do citoplasma de ocitos. O embrio usa
RNAs de maneiras muito mais criativas do que
os organismos adultos.
450
Impedindo a transcrio:
O nucleossomo no acetilado.
O que est impedindo que a transcrio do
DNA do cromossomo X inativo seja como
aquela do ativo? Um estudo recente de
Jeppeson e Turner (1993) sugere que os cromossomos X ativo e inativo diferem entre
si pela acetilao de suas respectivas
histonas H4. Uma das melhores maneiras
de liberar protenas do DNA adicionar
cargas negativas s protenas. Isso pode
ser feito adicionando grupos fosfato ou
acetato s regies da protena ligante de
DNA. A acetilao de histona H4 tem sido
correlacionada a genes transcrevendo ativamente. Nucleossomos de regies promotoras com CG no metilados tm protenas H4 altamente acetiladas, e a acetilao
da histona H4 se correlaciona com a ativao de certos genes (Chahal et al., 1980;
Tazi e Bird, 1990). Alm disso, apesar do
fator de transcrio TFIIIA no poder se
ligar ao gene do RNA 5S se esse estiver
envolvido em um nucleossomo, aquele fator pode se ligar ao gene se as histonas
do nucleossomo estiverem acetiladas (Lee
et al., 1993). A acetilao de histonas parece no ser obrigatria para a transcrio do gene, mas pode facilitar a transcrio em vrios sistemas (Turner, 1991).
Usando um anticorpo que reconhece a
histona H4 acetilada (mas no a no acetilada), Jeppesen e Turner encontraram
que cromossomos X ativos, no homem e
no camundongo, tm tanta histona H4
acetilada como a maioria dos outros cromossomos. Entretanto, o cromossomo X
inativo tem pouqussima histona H4 acetilada (Figura 11.19). No se sabe como a
expresso de Xist causaria a ocorrncia
de H4 no acetilada nos nucleossomos
do cromossomo X inativo.
Trancamento dos padres de transcrio:
metilao do DNA
O trancamento do estgio transcricional
inativo feito pela metilao. A primeira
evidncia indicando tais cis diferenas
entre o estado ativo e o inativo do DNA
do cromossomo X foi obtida quando
Liskay e Evans (1980) transfectaram o
gene ligado ao X para HPRT para clulas
de camundongo deficientes em HPRT em
cultura. Quando o DNA vinha de um
clone de clulas nas quais o gene para
(A)
(B)
Figura 11.19
O cromossomo X inativo de clulas de indivduos humanos do sexo feminino contm histonas

H4 subacetiladas. (A) Esfregao metafsico de uma clula fibroblstica feminina humana
corada com Hoechst 33258, que cora cromatina. (Cromossomos 7 e 11 esto numerados, e a
seta aponta o X inativo.) (B) A mesma preparao corada com anticorpo fluorescente para a
histona H4 acetilada. Enquanto todos os outros cromossomos esto claramente visveis o X
inativo no est. (de Jeppesen e Turner, 1993; fotografias cortesia dos autores.)
HPRT estava no cromossomo X inativo,

o DNA no produzia a enzima na clula
hospedeira deficiente em HPRT. Entretanto, se o DNA era derivado do clone de
clulas expressando o gene HPRT no seu
cromossomo X ativo, as clulas transfectadas produziram HPRT desse gene.
Logo em seguida, Mohandas e colegas
(1981) demonstraram que 5-azacitidina
(uma droga que inibe a citosina metiltransferase) poderia reativar localmente esses
genes no cromossomo X inativo. Pesquisas posteriores, usando enzimas de restrio e sondas de cDNA, mostraram que
as ilhas de CG nos stios promotores
de vrios genes esto metilados no cromossomo X inativo e no metilados no
cromossomo ativo (Wolf et al., 1982;
Keith et al., 1986). Esses modelos de metilao so removidos durante a formao da clula germinativa, permitindo
assim que um novo padro de inativao

do cromossomo X ocorra na prxima gerao. Durante o primeiro trimestre do
desenvolvimento humano, estabelecido de novo o padro adulto de metilao
e inativao do cromossomo X (Migeon
et al., 1991).*
Ainda no conhecemos o mecanismo
pelo qual o transcrito de Xist regula o estado da cromatina e como se d o espalhamento da inativao. Tambm, ainda no
conhecemos as vias pelas quais a transcrio de Xist, a modificao dos nucleossomos e a metilao do DNA se relacionam
heterocromatizao de um cromossomo X.
Ainda no sabemos como feita originalmente a escolha entre os dois cromossomos X ou como o RNA de Xist transcrito
de uma regio rodeada por genes inativados. Ainda h muito que aprender a respeito desse crtico fenmeno nos mamferos.
*Como mencionado em captulos anteriores, difcil extrapolar de um grupo de mamferos para

outro. Certamente o caso da inativao do cromossomo X. Somente porque a inativao do
cromossomo X acontece dessa maneira na placenta do camundongo, no significa que acontece da
mesma maneira na placenta de todos os mamferos. Nas vilosidades corinicas humanas, algumas
clulas contm dois cromossomos X ativos, e os cromossomos X inativados podem ser reativados
(Migeon et al., 1985, 1986). Tambm a inativao do cromossomo X na placenta humana parece ser
ao acaso; qualquer um dos dois cromossomos derivados do pai ou da me podem ser extintos. Nos
marsupiais, o cromossomo X derivado do pai preferencialmente inativado em todo o embrio
(Cooper et al., 1971; Sharman, 1971; Samollow et al., 1987). No homem, existem regies bvias do
cromossomo X que escapam inativao. As diferenas somticas entre humanos com os caritipos
XX e XO tambm predizem que devem existir genes ligados ao X que seriam necessrios em duas doses
para o desenvolvimento normal de mulheres. No camundongo, a inativao do cromossomo X parece
se estender ao cromossomo todo (Ashworth et al., 1991). Na determinao do sexo (Captulo 20),
crucial que os genes para a compensao de dosagem do X sejam ligados aos genes responsveis pelo
fentipo sexual. Se a dosagem no equalizada, o embrio geralmente morre.
451
Associao do DNA ativo com a matriz nuclear

Ligao da cromatina ativa a uma matriz nuclear
As enzimas de replicao dentro do ncleo, de alguma maneira, devem encontrar
seus stios para a iniciao da sntese de DNA; os fatores de transcrio e as polimerases devem encontrar seus promotores e intensificadores; os fatores de
processamento de RNA devem encontrar seus stios de emendas no RNA; e o RNA
mensageiro deve eficientemente encontrar os poros atravs dos quais ele sair do
ncleo. Isso muito para se esperar de molculas em soluo. Deveria se esperar
que os vrios fatores envolvidos na transcrio estivessem flutuando no fluido
nuclear trombando ao acaso no DNA. O RNA assim formado seria ento emendado
e estaria se movimentando no ambiente nuclear, ao acaso, at encontrar um poro
atravs do qual deixaria o ncleo.
Um modelo alternativo sugere que o RNA transcrito em um substrato slido no
qual todas as enzimas necessrias para transcrio, processamento e transporte
esto situadas juntamente. Existem precedentes para pensar nesses termos. A cadeia de transporte de eltrons das mitocndrias um agregado com tal ordenao, e
conhecido h muito tempo que as enzimas de sntese de DNA em bactrias residem
na face interna da membrana celular. Ento, o que se deve perguntar o seguinte:
Existe um retculo nuclear onde tais enzimas poderiam ser encontradas? Se existe tal
rede, esto os genes transcricionalmente ativos nela localizados? Se tal rede existe,
esto as enzimas de sntese de RNA nela localizados?
Uma matriz nuclear pode ser isolada dissolvendo ncleos em detergentes
lipdicos e solubilizando a maior parte do DNA com DNases (Berezney e Coffey,
1977; Capco et al., 1982). Microscopia eletrnica de transmisso de tais complexos mostra um emaranhado de protenas que se estende atravs do ncleo e se
conecta ao citoesqueleto no envoltrio nuclear (Figura 11.20). Essa matriz
vista em todos os ncleos eucariotos at agora examinados (Wilson, 1985; Nelson et al., 1986).
Quando se isola tal matriz, a DNase j removeu cerca de 98% do DNA. Est o
DNA ainda ligado a essa matriz (e presumivelmente protegido da DNase por estar
to fortemente associado matriz) enriquecida para transcrever genes ativamente?
Existe evidncia que isso verdade para alguns genes. O gene da ovalbumina
preferencialmente associado com a matriz nuclear em clulas do oviduto de galinhas
adultas mas no em clulas do fgado ou eritrcitos na mesma espcie. Os genes da
globina, entretanto, no esto associados com a matriz nuclear das clulas do oviduto
(Robinson et al., 1982; Thorburn e Knowland, 1993). Ciejek e colaboradores (1983)
confirmaram e estenderam essas observaes, mostrando que a unidade inteira da
transcrio induzvel por hormnio do gene da ovalbumina est ligado matriz
nuclear. Dentro de 100.000 pares de bases dessa unidade nenhum outro gene est
associado a essa matriz. Alm disso, quando o estrgeno foi retirado dos animais, a
conexo especfica desses genes matriz nuclear foi abolida. Os genes parecem
estar ligados matriz nuclear somente quando esto ativados.
Em 1985, Hutchinson e Weintraub mostraram que stios sensveis DNase no
so encontrados uniformemente por todo o ncleo. Eles trataram ncleos com DNase
I e ento repararam os cortes com nucleotdeos radioativos. O DNA marcado deveria
representar somente os genes transcrevendo ativamente (ou seja, sensveis DNase
I). Os resultados desse tratamento mostraram que o DNA sensvel DNase I estava
localizado na periferia do ncleo e ao longo dos canais ou fibras que se ligavam ao
envoltrio nuclear (Figura 11.21). Ento, possvel que genes ativos esto especificamente associados ao envoltrio nuclear ou matriz.
Outro tipo de evidncia indicando a participao da matriz nuclear na transcrio a demonstrao de que a maioria do RNA recm-sintetizado (alguns consideram 95%) parece estar ligado matriz nuclear (Herman et al., 1978; Miller et al., 1978;
Figura 11.20
Micrografia de transmisso eletrnica

(47.000x) de uma poro da matriz nuclear e
citoplasma ao redor. Filamentos do citoesqueleto so claramente visveis. As clulas
fibroblsticas do camundongo foram extradas com detergente para remover lipdios e
em seguida tratadas com DNase I. Em 1895,
E. B. Wilson, usando o microscpio de luz,
relatou que o ncleo era atravessado por fibras que eram contnuas com aquelas do
retculo citoplasmtico e que rodeavam a
cromatina. (de Capco et al., 1982, cortesia
de S. Penman.)
452
(A)
(B)
Alas de DNA cromossmico conectadas matriz

nuclear atravs de origens de replicao. O empacotamento
em nucleossomos e fibras de 30nm no mostrado
para simplificao
Genes ativos ligados aos
canais da matriz atravs de
domnios reguladores e
RNA polimerase
temporariamente imobilizada
Figura 11.21
Presena de cromatina ativa ao longo da periferia e canais nucleares.
(A) Ncleos de eritrcitos tratados com DNase I, que parecem cortar
regies de cromatina transcrevendo ativamente. Esse corte foi curado por traduo de corte dentro do ncleo em presena de nucleotdeos, cuja presena pode ser detectada por fluorescncia. Os nucleotdeos marcados foram encontrados na periferia do ncleo e ao longo
de estruturas levando para dentro a partir do envoltrio nuclear. (B)
Modelo especulativo da organizao da cromatina na interfase, imaginando a matriz nuclear como uma srie de canais internos. (A de
Hutchinson e Weintraub, 1985, cortesia de N. Hutchinson; B de
acordo com Razin e Gromova, 1995.)
Canal da
matriz
nuclear
mRNA coberto
com protenas
DNA
RNA sendo
transportado
para o citoplasma
Citoplasma
Matriz nuclear
Poro nuclear
van Eekelen e van Venrooij, 1981; Mariman et al., 1982). Essa ligao parece ser
mediada por um conjunto de protenas da matriz nuclear. Essas protenas incluem
laminina B1, um componente principal do envoltrio nuclear (Ludrus et al., 1992),
uma protena ligante de DNA especfica do timo que desenrola o DNA adjacente ao
seu stio de ligao (Dickinson et al., 1992), e o fator de transcrio YY1/NF-E1 que
foi considerado idntico protena 1 da matriz nuclear (NMP-1) (Guo et al., 1995).
Considerando que genes ativos, RNA polimerase, e transcritos nascentes parecem
estar ligados a uma matriz nuclear, Jackson e Cook (1985) propuseram que a transcrio no ocorre pela migrao de uma polimerase ao longo do gene. Ao contrrio,
eles imaginaram uma RNA polimerase acorrentada matriz nuclear, com o DNA
migrando atravs dela.
Existe tambm alguma evidncia de que o DNA ativo possa estar ligado matriz
nuclear atravs de seqncias de DNA ricas em AT e denominadas regies associadas matriz (MARs), ou regies associadas a andaimes (Gasser e Laemmli, 1986). A
maior parte dessas MARs se localizam perto ou dentro de intensificadores ou promotores. A importncia dessas regies foi mostrada por Stief e colaboradores (1989), que
identificaram duas MARs no gene da lisozima do pinto. Nesse caso, as MARs no
estavam no intensificador e por essa razo puderam ser separadas. Quando eles fundiram o intensificador e o promotor da lisozima do pinto ao gene CAT reprter e
transfectaram o clone em clulas produtoras de lisozima, isso no produziu muita
protena CAT. Ento eles produziram um gene similar que continha o promotor, o
intensificador e seqncias CAT e o conjunto foi flanqueado por duas MARs. Quando
453
Figura 11.22
Intensificador
Promotor
Gene CAT
Importncia das regies associadas matriz na

transcrio. Na transfeco de clones consistindo de promotor da lisozima, intensificador e o
gene CAT, para uma linhagem celular secretora
de lisozima, muito pouca protena CAT produzida, como determinado pela atividade
enzimtica de CAT. Entretanto, se as duas MARs
so includas no gene clonado, muito mais protena CAT pode ser encontrada nessas clulas.
(De acordo com Stief et al., 1989.)
Regio associada matriz
Topoisomerase II
Produtos
Substrato
Resultados da transfeco
Stios de ligao para

topoisomerase II
esse clone foi transfectado em clulas produtoras de lisozima, a sntese de CAT foi
enormemente aumentada (Figura 11.22). Da mesma forma, duas MARs flanqueiam um
intensificador do loco da cadeia pesada da imunoglobulina de camundongo, e a
transcrio desse gene requer a presena tanto do intensificador como das duas
MARs. As MARs parecem cooperar com o intensificador para estender uma regio de
cromatina acessvel a fatores, ao promotor do gene da imunoglobulina (Forrester et al.,
1994; Jenuwein et al., 1997).
Topoisomerases e transcrio gnica
Em vrios estudos, foram identificadas regies associadas matriz que continham
ou eram adjacentes a uma seqncia de DNA que reconhecida por uma enzimatopoisomerase II que pode ser essencial transcrio (Cockerill e Garrard, 1986;
Adachi et al., 1989; Scheuermann e Chen, 1989). Estudos recentes sugeriram que
desenrolar a hlice de DNA importante para a facilitao da transcrio. Cromatina
ativa transcricionalmente tem que ser torcida para permitir o desenrolar das fitas
(Ryoji e Worcel, 1984), e a toro realizada por superespiralamento da hlice de
DNA (Figura 11.23). Villeponteau e colaboradores (1984) mostraram que stios sensveis DNase I em genes ativos so formados somente quando os genes esto sob
tenso torcional. A topoisomerase II a enzima responsvel pela toro do DNA e
separao das fitas. Usando anticorpos para essa protena, Berrios e colegas (1985)
Figura 11.23
Superespiralamento do DNA durante a transcrio. Topoisomerase II junta duas regies do

DNA e introduz o superespiralamento quebrando transitoriamente e recombinando as fitas de
DNA. Como resultante da distoro, uma poro da dupla hlice se separa em duas fitas,
permitindo RNA polimerase (e presumivelmente a outros fatores trans-reguladores) iniciar a
transcrio. Os stios de ligao da topoisomerase foram encontrados no DNA ligado matriz
(Cockerill e Garrard, 1986). (De acordo com Darnell et al., 1986.)
RNA polimerase
Superespiral
negativa
454
Figura 11.24
Uma das quatro regies do intensificador do

gene de cadeia pesada da imunoglobulina protegida pela protena NF-NR. NF-NR foi
adicionada ao DNA da regio do intensificador
e o DNA foi digerido com DNase. Somente as
seqncias cobertas pela NF-NR seriam preservadas. A regio protegida (cinza) inclui uma
seqncia associada matriz e um stio de ligao da topoisomerase II (colorido). (De acordo com Scheuermann e Chen, 1989.)
Stio de ligao da
topoisomerase
Seqncia de
ligao matriz
Protegida por
NF-NR
demonstraram que a topoisomerase II est localizada no complexo matriz nuclearenvoltrio nuclear. A proximidade entre as MARs e as regies de ligao da
topoisomerase II sugerem que a ancoragem do DNA matriz deve ser necessria
para impedir a rotao livre do DNA, permitindo assim que as topoisomerases ligadas matriz toram a cromatina (Bode et al., 1992).
Se a ligao matriz essencial para a transcrio do RNA, possvel que protenas reguladoras negativas como os silenciadores possam inibir essa associao.
Essa possibilidade foi sugerida por Scheuermann e Chen (1989), que isolaram uma
protena que inibe a transcrio do gene de cadeia pesada da imunoglobulina. Essa
protena, NF-NR, expressa em clulas no B e nos estgios precoces do desenvolvimento da clula B, mas est ausente em clulas B maduras que transcrevem grandes
quantidades de genes da imunoglobulina. Essa protena se liga em quatro locais
flanqueando o intensificador da cadeia pesada: duas seqncias de consenso MAR e
duas seqncias de consenso topoisomerase II ( Figura 11.24). possvel que, com a
presena de NF-NR no ncleo, essa se ligue s regies flanqueando o intensificador
e impea a associao do gene de cadeia pesada da imunoglobulina com a matriz
nuclear e a topoisomerase. Quando a protena no est presente, essas associaes
no ocorrem resultando na transcrio do gene. A demonstrao de que a protena da
matriz nuclear NMP-1 a mesma que o fator de transcrio YY1 especialmente
interessante, pois YY1 foi implicado no silenciamento do gene de -globina uma vez
que os genes da -globina so expressos (Raich et al., 1995; Wandersee et al., 1996).
Isoladores e domnios
O genoma eucarioto no meramente parcelado em determinados genes. Na verdade, ele parece estar dividido em regies de desenvolvimento relativamente independentes freqentemente denominadas domnios. Evidncia para os domnios veio de
estudos onde blocos de DNA foram colocados prximos a genes reprteres que podiam ser normalmente ativados por um intensificador. Certas seqncias impediram o
intensificador de ativar o gene reprter, enquanto que outras seqncias no o fizeram
(Geyer e Corces, 1992). Foi proposto que essas seqncias isoladoras ligam protenas
que impedem a interao de intensificadores e promotores no seu outro lado. Desse
modo, elas poderiam estabelecer fronteiras: a ativao poderia ocorrer em um de seus
lados, mas no cruzar para o outro lado. Algumas dessas seqncias fronteirias
foram isoladas de DNA de Drosophila, como tambm algumas das protenas ligantes.
Kellum e Schedl (1991) mostraram que o gene hsp70 (para a protena do choque
trmico em Drosophila) estava confinado por duas seqncias, scs e scs, que impediam os efeitos da cromatina adjacente de influenciar sua transcrio. Zhao e colegas
(1995) identificaram uma protena de 32-kDa que se liga ao elemento de fronteira scs e
est localizada entre as bandas de numerosos genes na Drosophila (veja Prancha 31;
Zhao et al., 1995). Isso pode ser visto quando os genes formam tufos e a colorao
dessas protenas as mostram nas bordas dos tufos. O stio scs no complexo Bithorax
parece estar localizado aps o ltimo gene (AbdB), de modo que a unidade inteira
possa ser regulada como um nico loco gentico.
455
Resumo
A transcrio gnica diferencial uma via majoritria na regulao do desenvolvimento. As regies cis-reguladoras no DNA e as protenas trans-reguladoras que
ativam e reprimem a transcrio esto sendo identificadas e seus mecanismos de
ao delineados. Parece que certos fatores de transcrio rompem ou previnem a
formao de nucleossomos nos intensificadores e regies promotoras, assim permitindo a ligao da RNA polimerase II ao promotor e a transcrio do gene. Certos
fatores de transcrio estimulam o processo interagindo com o complexo transcricional e acelerando sua formao. A desmetilao e o desenrolamento de regies
genticas na matriz nuclear provavelmente tambm esto envolvidas na regulao
da expresso gnica. Como disse Albert Claude, ns apenas comeamos a apreciar
nossa riqueza adquirida.
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Controle do desenvolvimento
pelo processamento e traduo
diferencial do RNA
Entre a concepo
E a criao...
Entre a potncia
E a existncia
Entre a essncia
E a origem
Cai a Sombra.
T. S. ELIOT (1936)
No h descanso para o mensageiro at

a mensagem ser entregue.
JOSEPH CONRAD (1920)
12
REGULAO DA EXPRESSO GNICA no est restrita transcrio dife-
rencial do DNA. Mesmo que um determinado transcrito de RNA seja sintetizado, no h garantia que ele ir criar uma protena funcional na clula. Para
se formar uma protena ativa, o RNA tem que ser: (1) processado em um RNA mensageiro pela remoo de ntrons, (2) trasladado do ncleo para o citoplasma, e (3) traduzido pelo aparelho sintetizador de protenas. Em alguns casos, a protena sintetizada
no est em sua forma madura e (4) tem que ser modificada, aps a traduo, para
tornar-se ativa. A regulao pode ocorrer em qualquer um desses passos durante o
desenvolvimento.
Q CONTROLE DO DESENVOLVIMENTO
PELO PROCESSAMENTO DIFERENCIAL DE RNA
A essncia da diferenciao a produo de diferentes conjuntos de protenas em
diferentes tipos de clulas. Nas bactrias, a expresso diferencial de genes pode ser
efetuada a nvel da transcrio, traduo e modificao das protenas. Nos eucariotos,
porm, outro nvel possvel de diferenciao existe, a saber, o controle ao nvel do
processamento e transporte de RNA. Este captulo ir apresentar duas maneiras pelas
quais o processamento diferencial do RNA pode regular o desenvolvimento. A primeira envolve a censura pela qual transcritos nucleares podem ser processados em
mensagens citoplasmticas. Aqui, diferentes clulas podem selecionar diferentes transcritos nucleares para ser processados e colocados no citoplasma como o RNA mensageiro. O mesmo pool de transcritos nucleares pode, com isso, dar origem a diferentes populaes de mRNAs citoplasmticos em diferentes tipos de clulas. O segundo
modo de processamento diferencial do RNA se refere a emendar precursores de mRNA
em protenas diferentes usando diferentes combinaes de xons em potencial. Se um
precursor de mRNA deve passar a ter cinco xons em potencial, uma clula poderia
usar xons 1, 2, 4 e 5, uma outra clula poderia utilizar xons 1, 2 e 3, e ainda outra clula
poderia usar uma combinao diferente. Assim, um gene pode criar uma famlia de
protenas relacionadas.
461
462
Controle do desenvolvimento precoce

pela seleo de RNA nuclear
Figura 12.1
Hibridizao de RNA nuclear de embries de

ourio-do-mar com [3H]DNA de cpia nica.
DNA de cpia nica radioativo foi misturado
com RNA de blstula, RNA de plteo ou RNA
da mistura de blstula e plteo. As misturas
foram incubadas para permitir o pareamento de
todas as seqncias complementares. (O eixo
RNA Cot a concentrao do RNA vezes o
tempo deixado para incubar). Nos trs casos,
cerca de 15 porcento do DNA hibridizou com
o RNA. (Segundo Kleene e Humphreys, 1977.)
Porcentagem de [3H]DNA nos hbridos RNA:DNA
Em fins da dcada de 70, numerosos investigadores acharam que o mRNA no era o

transcrito primrio dos genes. Ao contrrio, os genes transcreviam um RNA nuclear
(nRNA), s vezes chamado RNA nuclear heterogneo (hnRNA) devido ao seu amplo
espectro de tamanhos. Esse nRNA era freqentemente vrias vezes mais comprido
que a mensagem, e parecia decair mais rapidamente. Hoje sabemos que o RNA nuclear
contm ntrons que so excisados durante a passagem do ncleo para o citoplasma.
Ainda, estudos em ourios-do-mar sugeriram que transcritos inteiros so degradados
em algumas clulas e processados para mRNA em outras. Em outras palavras, esses
estudos sugeriram que diferentes tipos celulares podem estar transcrevendo o mesmo
tipo de RNA nuclear, mas que diferentes subconjuntos dessa populao esto sendo
processados para mRNA em diferentes tipos de clulas. [RNA1.html]
Kleene e Humphreys (1977, 1985) mostraram que o RNA nuclear de larvas pluteus
intactas e de blstulas eram (dentro do erro experimental) idnticos. Ambos se ligavam
aos mesmos 30% do genoma. Quando a complexidade foi analisada, o nRNA de clulas da blstula ligava-se a 15 porcento desse DNA (i.e., a 30% do DNA de cpia nica
do genoma). Semelhantemente, o nRNA do estgio plteo, mesmo quando presente
em grande excesso, tambm se ligava aos 30 porcentos do DNA de cpia nica. Sero
esses dois conjuntos de seqncias de DNA os mesmos, ou sero diferentes? Essa
questo foi examinada misturando-se RNAs nucleares de blstula e plteo e adicionando-os ao DNA de cpia nica desnaturado. Se as seqncias fossem completamente diferentes, poder-se ia esperar 30 porcento do DNA estar combinado (i. e., 60
porcento do genoma estaria codificando para o conjunto combinado de mensagens
de blstula e plteo). Se fossem idnticos, poder-se ia esperar 15 porcento do DNA
estar ligado. O resultado est mostrado na Figura 12.1. A mistura ligou-se somente a 15
porcento do DNA. As seqncias de nRNA de blstula e plteo se ligavam ao mesmo
DNA. Dentro do erro experimental, o nRNA de clulas da blstula e do plteo eram
idnticos. Wold e colegas (1978) estenderam essas observaes mostrando que seqncias presentes no RNA mensageiro da blstula (isolado de polissomos em traduo) mas ausentes no mRNA da gstrula e do tecido adulto estavam, apesar disso,
presentes no RNA nuclear da gstrula e do tecido adulto. Esses resultados foram
interpretados como indicando que mais genes so transcritos no ncleo do que aqueles permitidos se tornarem mRNAs no citoplasma (Figura 12.2; Tabela 12.1).
RNA de
blstula + plteo
RNA de blstula
RNA de plteo
CAPTULO 12 Processamento diferencial do RNA e Traduo
463
Tabela 12.1 Comparaes entre tecidos das seqncias de genes estruturais em RNA mensageiros e RNA nucleares
Reao normalizada
com mRNA parental
Pista referencial
complementar a
mRNA
OURIO-DO-MAR
mRNA de blstula (DNA de cpia nica)
Blstula
Crebro
Crebro
CAMUNDONGO
mRNA cerebral (cDNA total)
mRNA cerebral (cDNA
representando mensagens raras)
Reao normalizada
com outro mRNA
Reao normalizada
com nRNA
mRNA
nRNA
100
Intestino
Celomcito
12
13
Intestino
Celomcito
97
101
100
100
Rim
Rim
78
56
Rim
Rim
102
100
Fonte: Davidson e Britten, 1979.
Porcentagem de [3H]DNA reativo nos hbridos RNA:DNA
mRNA das blstula
RNA do citoplasma intestinal
Complexidade do RNA (106 nucleotdeos)
(A)
Figura 12.2
(B)
(C)
Clula tipo 1
Clula tipo 2
nRNA do celomcito
nRNA da gstrula
nRNA do intestino
Seqncias encontradas no RNA nuclear de

vrios tipos de clulas mas no no mRNA. (A)
Especificidade do cDNA mensageiro da
blstula do ourio-do-mar. Hibridizao do
cDNA mensageiro da blstula (cDNA ao
mRNA da blstula) com mRNA de blstula e
RNA do citoplasma intestinal mostra que os
mRNAs so muito diferentes. (B) A hibridizao do cDNA mensageiro da blstula com
RNAs nucleares (nRNAs) de gstrulas e
celomcitos adultos e clulas intestinais sugere a identidade de todos os RNAs nucleares.
(C) Modelo especulativo baseado no processamento diferencial do RNA. Em ambos tipos
celulares, os mesmos RNAs (a, b, c, d, e) so
transcritos, mas em um tipo celular, as seqncias c, d e e so processadas para mRNA
citoplasmtico, enquanto em outro tipo de clula, seqncias a, b e c so processadas e enviadas para o citoplasma. (A e B segundo Wold
et al., 1978.)
464
Figura 12.3
Ensaios para deteco do acmulo de uma

mensagem no citoplasma. (A) Ensaio de proteo de ribonuclease. RNA isolado e purificado de tecido embrionrio. Uma sonda de
RNA radioativo sintetizada, complementar
a um pequeno trecho do RNA que est sendo
analisado. Se o RNA especfico estiver presente, a sonda radioativa se ligar a ele. RNase
adicionada em seguida, destruindo todo o
RNA exceto aquele da regio de dupla fita
que contm o oligonucleotdeo radioativo.
Esse pode ser submetido eletroforese em gel
e auto-radiografado. (B) Ensaio nuclear runon (isola o ncleo e usa marcador radioativo
para marcar o transcrito). Ncleos so isolados de tecido embrionrio. UTP radioativa
adicionada aos ncleos. O mRNA que est
sendo sintetizado incorpora a marca radioativa enquanto continua sendo transcrito. O
mRNA pode ser isolado e hibridizado com
seqncias complementares de DNA imobilizadas em papel. Se o transcrito radioativo
ligar, ser detectado por auto-radiografia.
Dividir o tecido
em duas amostras
(A)
Ensaio de proteo de RNase
Isolar RNA
(B)
Ensaio run-on nuclear
Isolar ncleos
Ncleo
RNA polimerase
Adicionar
oligonucleotdeo
radioativo
Transcrito nascente
de RNA
Adicionar UTP radioativo
Ajunte RNase; RNA

degradado
Poro radioativa
de RNA
Eletroforese em gel
Auto-radiografia
Isolar RNA; hibridizar

para DNA por
transferncia Southern
Filtro de papel
Auto-radiograma
Esse controle ps-transcricional do processamento do RNA foi confirmado para

mensagens especficas por ensaios de proteo de ribonuclease e ensaios run-on
(isola-se o ncleo e usa-se marcador radioativo para marcar o transcrito) de transcrio nuclear. O ensaio de proteo de ribonuclease um teste sensvel para determinar
a presena (ou ausncia) de uma determinada seqncia em uma populao de RNAs
(Figura 12.3). Produz-se um RNA relativamente pequeno, marcado radiotivamente,
que complementar a uma seqncia especfica do RNA que se deseja detectar. Essa
sonda de RNA misturada com o RNA celular que est sendo testado para a presena de uma determinada sequncia. Se a seqncia estiver presente, a sonda se liga
ela. Ento, ribonuclease (RNase, uma enzima que digere RNA de cadeia nica) adicionada mistura para clivagem e remoo de todo o RNA que no est hibridizado. O
RNA de dupla fita formado pela hibridizao dos RNAs radioativo e celular no
clivado. Esse RNA de dupla fita pode ser corrido em um gel e detectado por autoradiografia. Se a seqncia de RNA estiver presente, uma banda de um determinado
tamanho dever aparecer na auto-radiografia. Gagnon e colaboradores (1992) realizaram essa anlise nos transcritos dos genes Spec1 e CyllIa do ourio-do-mar Strongylocentrotus purpuratus. Esses genes codificam protenas ligantes de clcio e actina,
respectivamente, que so expressas somente no ectoderma aboral da larva plteo.
Usando sondas que se ligam a um xon e a um ntron, eles acharam que esses genes
estavam sendo transcritos no apenas nas clulas ectodrmicas mas tambm no mesoderma e endoderma. A anlise do gene CyIIIa mostrou que a concentrao de
ntrons era a mesma tanto no ectoderma da gstrula como nas amostras de mesoderma
e endoderma, sugerindo que esse gene estava sendo transcrito com a mesma velocidade em todos os tipos celulares (Figura 12.4A). O xon, porm, se acumulava no
ectoderma (que expressa a protena), mas no no mesoderma ou endoderma (que no
o fazem). Assim, enquanto os genes parecem ser transcritos com velocidades semelhantes no ectoderma e outros tecidos, o mRNA para essas protenas (representado
pelos xons) se acumula somente no ectoderma.
Essa concluso foi confirmada quando ncleos foram isolados de tecidos da
gstrula. UTP radioativo permitiu aos pesquisadores seguir qualquer RNA que estivesse sendo transcrito no momento em que os ncleos foram isolados. Tanto os
ncleos do ectoderma como endoderma/mesoderma estavam transcrevendo o gene
Spec1 no estgio de gstrula (Figura 12.4B). Assim, a expresso dos genes Spec1 e
CyIIIa est no nvel do processamento de RNA na gstrula. Mais tardiamente no
desenvolvimento (no estgio plteo), esses genes ficam sob o controle transcricional,
no qual a transcrio dos genes cessa nas clulas que no esto expressando essas
protenas. Parece, assim, que o processamento de RNA tem um papel majoritrio no
controle da expresso gnica em embries precoces do ourio-do-mar.
Os mecanismos de emenda de RNA: Spliceosomes

A emenda do pr-mRNA mediada atravs de uma partcula nuclear 60S chamada
spliceosome. O spliceosome composto de cinco RNAs nucleares pequenos
(sn) (os snRNAs U1, U2, U4, U5 e U6) e numerosas protenas. Essas protenas freqentemente se associam aos snRNAs para formar pequenas partculas nucleares de
ribonucleoprotenas (snRNPs), assim chamadas por seus snRNAs associados (tal
como o snRNP U2). O spliceosome no existe como um complexo pr-formado
boiando no ncleo, mas reunido no pr-mRNA por um processo de mltiplas etapas.
O local da emenda 5 primeiramente identificado pelo snRNA U1 por complementaridade de bases. O local da emenda 5 no comeo de cada ntron tem uma seqncia
consensual que reconhecida pelo snRNA U1 (Figura 12.5). O final 3 do ntron
reconhecido pelo fator auxiliar snRNA U2, U2AF (Ruskin et al., 1988; Wu e Maniatis,
1993). Esse reconhecimento do local da emenda estabelece um complexo de comprometimento onde outros snRNAs iro se associar com essas protenas e finalmente
catalisar a remoo do ntron (Hodges e Beggs, 1994). [RNA2.html]
465
(A)
ntron Cyllla
xon Cyllla
Ectoderma
Endoderma +
mesoderma
Vetor
(B)
Spec1
Figura 12.4
Regulao da expresso do gene especfico do

ectoderma por processamento de RNA. (A)
Auto-radiografias do ensaio de proteo de
ribonuclease. A coluna esquerda representa
RNA isolado do tecido ectodrmico da gstrula;
a coluna do lado direito representa RNA isolado dos tecidos endodrmicos e mesodrmicos.
A banda superior o RNA protegido por uma
sonda que se liga a uma seqncia de ntron
(que deve ser encontrada somente no ncleo)
de Cyllla. A banda inferior representa o RNA
protegido por uma sonda complementar a uma
seqncia de xon. (B) Resultados de um ensaio run-on de um transcrito nuclear. RNAs
radioativos sintetizados in vitro por ncleos
ectodrmicos (esquerda) e ncleos mesodrmicos e endodrmicos(direita) foram hibridizados com um ntron do gene Spec1 afixado a
um filtro. Ncleos tanto do ectoderma como
endoderma/mesoderma estavam transcrevendo
esse gene na gstrula do ourio-do-mar, apesar
da mensagen Spec1 ser vista somente nas clulas do ectoderma. (de Gagnon et al., 1992, cortesia de R. e L. Angerer.)
466
COMPLEXO DE COMPROMETIMENTO
ntron
xon
xon
SPLICEOSOME
xon
xon
O pr-mRNA vertebrado mdio consiste de xons relativamente curtos (em mdia

cerca de 140 bases), separados por ntrons que so usualmente muito mais compridos.
Qualquer mecanismo coordenador das emendas em um RNA multi-xon tem que prover uma explicao de como xons pequenos so conservados e separados dos ntrons
grandes. Berget (1995) props a noo que a emenda feita de um terminal do xon
para o outro, em vez de atravs do ntron. Essa hiptese da definio do xon sustenta
que o tamanho reduzido dos xons permite ao snRNA U2 (no terminal 5 do xon)
conectar-se com o snRNA U1 no outro terminal. Seguindo essa definio dos limites do xon, os vrios xons so ajuntados.
O processamento de mRNA maduro tambm requer a adio de uma cauda poli
(A) ao mRNA nuclear. O terminal 3 da maioria dos mRNA eucariticos (mensagens
de histonas sendo as nicas excees conhecidas) formado pela clivagem do
transcrito original e adio de segmentos de resduos de adenilato. A regio 3
no-traduzida da maioria dos precursores do mRNA contm a seqncia AAUAAA,
que essencial para a clivagem do RNA, 10 a 30 bases a jusante desse stio
(Proudfoot e Brownlee, 1976). Mutaes nessa seqncia previnem a formao do
terminal 3 do mRNA (Wickens e Stephenson, 1984; Orkin et al., 1985). Outro elemento de atuao cis uma seqncia rica em GU ou U, usualmente localizada
mais a jusante (3) da clivagem. Essa seqncia parece ser crtica para a clivagem
eficiente do RNA nuclear no stio de processamento 3 (McDevitt et al., 1984;
Christofori e Keller, 1988). [RNA3.html]
Emenda alternativa do RNA:

Criando protenas alternativas a partir do mesmo gene
Um Gene, Muitas Protenas Relacionadas
xon
xon
ntron
Figura 12.5
Emendar o ntron e conectar os xons adjacentes. No complexo de comprometimento levando formao do spliceosome, as duas
junes de emenda 5 e 3 no ntron foram
reconhecidas pelo snRNA U1 e pela protena
U2AF, respectivamente. Ambas so estabilizadas por protenas da famlia SR. As protenas U2AF e SR so consideradas ser substitudas por riboprotenas nucleares pequenas
(snRNPs) que facilitam a clivagem do ntron e
a ligao de dois xons adjacentes. (Segundo
Hodges e Beggs, 1994.)
Em adio deciso sobre quais RNAs tero entrada no citoplasma, a regulao

do desenvolvimento pelo processamento do RNA tambm pode ocorrer pela emenda
alternativa do RNA. A maioria dos pr-mRNAs mamferos contm numerosos
ntrons. Pelo seu reconhecimento seletivo pode-se ter uma emenda alternativa do
RNA. Isso pode ocorrer de vrias maneiras (ver Figura 12.6). As clulas podem
diferir em sua habilidade de reconhecer o stio de emenda 5 ou o stio de emenda
3. Ou algumas clulas poderiam no reconhecer uma seqncia como um ntron,
conseqentemente retendo-o dentro da mensagem. Se uma clula vai reconhecer
os stios das emendas, depende de certos fatores no ncleo que podem interagir
com esses stios e competir ou cooperar com as protenas que normalmente os
reconhecem. O stio de emenda 5 reconhecido pelo snRNA U1, mas somente
com a cooperao de uma protena chamada fator 2 de emenda (SF2; fator de
emenda alternativa). Em pelo menos alguns casos, a escolha entre os stios da
emenda 5 alternativo influenciada pela razo da protena SF2 e outra protena,
hnRNP-A1. Em geral, um excesso de SF2 resulta na utilizao do stio de emenda 5
proximal (mais prximo), enquanto um excesso de hnRNP-A1 resulta na utilizao
pelo spliceosome do stio de emenda 5 distal (mais distante) (Mayeda e Krainer,
1992). A escolha de stios de emenda 3 alternativos muitas vezes controlada por
aquele stio de emenda que melhor pode ligar U2AF.
O que um ntron no ncleo de uma clula pode ser um xon no ncleo de
outra clula. Processamento alternativo de RNA foi encontrado controlando as
formas alternativas de expresso de mais de 100 protenas. Deleo de certos
xons em potencial em algumas clulas mas no em outras permite a um gene criar
uma famlia de protenas estreitamente relacionadas. Em vez de um gene-um
polipeptdeo pode-se ter um gene-uma famlia de protenas. Por exemplo, o precursor mRNA para a molcula de adeso N-CAM pode ser alternadamente processado para mais de 100 formas diferentes, dependendo de quais xons so includos
no mRNA. Embora somente quatro formas principais dessa protena so usual-
EMENDA CONSTITUTIVA
TIPOS SELECIONADOS DE EMENDA ALTERNATIVA

xons emendados
Figura 12.6
Diagrama esquemtico da emenda alternativa do pr-mRNA. xons esto representados

como caixas sombreadas, xons emendados alternativamente esto representados por caixas
hachuradas, e ntrons esto representados por linhas grossas. Por conveno, a trajetria da
emenda mostrada por linhas finas em forma de V. (A) As bordas xon-ntron, mostrando
as seqncias consensuais nos terminais 3 e 5 do ntron. R representa qualquer purina, Y
qualquer pirimidina, e N qualquer nucleotdeo. (B) a emenda de um pr-mRNA com 5
xons. (C-F) Emenda alternativa por (C) stios de emenda 5 alternativa, (D) stio de emenda
3 alternativa (em alguns casos isso iria prover terminais diferentes ao mRNA, e ambos
stios necessitariam de uma seqncia de poliadenilao, aqui mostrada como An), (E) uma
deciso emenda/no emenda, e (F) incluso de xon/ excluso de xon. (Segundo Horowitz
e Krainer, 1994.)
mente vistas em qualquer embrio, algumas das formas menos importantes so

vistas no crebro e no corao (Zorn e Krieg, 1992). De maneira semelhante, a
emenda alternativa do RNA permite que o gene para tropomiosina codifique
tanto as formas do msculo esqueltico como as do fibroblasto dessa protena. O
RNA nuclear para a tropomiosina contm 11 xons. xons 1-5, 8 e 9 so comuns
a todos os RNAs expressos por esse gene. xons 6 e 11 so tambm usados em
fibroblastos e clulas de msculo liso, enquanto xons 7 e 10 so usados na
sntese da tropomiosina do msculo esqueltico (Figura 12.7). Nos msculos
lisos e nos fibroblastos formada uma protena que impede spliceosomes de se
formarem nos stios de emenda especficos dos msculos esquelticos (Guo et al.,
1991; dOrval et al., 1991). No sistema nervoso, a diversidade do canal de K+ tem
um papel importante na regulao da excitabilidade da membrana. Essas diferenas cinticas foram correlacionadas com a emenda alternativa de precursores de
mensagens do gene shaker (Mottes e Iverson, 1995).
467
468
mRNA da tropomiosina
especfico de msculo estriado
Figura 12.7
Diagrama esquemtico da emenda alternativa do RNA no precursor do mRNA da tropomiosina. No msculo esqueltico, xons
possveis 6 e 11 so evitados (e transformados em ntrons), enquanto em fibroblastos e
clulas do msculo liso, xons possveis 7 e
10 so tornados ntrons, e 6 e 11 so usados
como xons.
Processamento de
clula muscular
Processamento de fibroblasto,
clula do msculo liso
Precursor RNA nuclear

de tropomiosina
mRNA de tropomiosina de
fibroblasto e msculo liso
Em alguns casos, as propriedades das protenas emendadas alternativamente podem ter conseqncias importantes durante o desenvolvimento. As cinco diferentes
protenas fibronectinas humanas so geradas por um par de genes idnticos da
fibronectina. As formas diversas (e em alguns casos especficas de rgos) da
fibronectina vm de mRNAs diferentes gerados pela emenda de diferentes xons dos
precursores do mRNA da fibronectina (Tamkun et al., 1984; Hynes, 1987). Algumas
formas de fibronectina so encontradas nas trajetrias sobre as quais migram clulas
embrionrias, enquanto outras no o so, o que sugere que formas de fibronectina
emendadas alternativamente tm diferentes funes embrionrias (ffrench-Constant e
Hynes, 1989). Algumas isoformas emendadas do fator 8 de crescimento fibroblstico
(FGF8) somente interagem com receptores gerados da emenda particular de RNA.
Assim, o FGF8b (uma das sete variantes emendadas de FGF8) se ligar a receptores
FGF 2c e 3c, mas no aos receptores FGF 1b, 1c, 2b ou 3b. No camundongo em
desenvolvimento, o FGF8b produzido do sulco ectodrmico apical no broto dos
membros e dos arcos branquiais e fossas nasais da cabea. Em cada um desses locais,
o mesnquima subjacente expressa o receptor FGFR2c (Fotografia de rosto, Crossley
e Martin, 1995; MacArthur et al., 1995).
Processamento Alternativo de RNA e Determinao Sexual em Drosophila
A emenda alternativa do RNA pode gerar famlias de protenas cujos membros
podem ter diferentes funes. Nada previne tal emenda alternativa de produzir protenas de fatores de transcries alternativas, e essa tcnica foi usada pela Drosophila
para controlar sua diferenciao sexual. Alm disso, a diferenciao sexual em
Drosophila regulada por uma cascata de eventos processadores de RNA (veja
Baker et al., 1987; MacDougall et al., 1995).
Conforme veremos no Captulo 20, o desenvolvimento do fentipo sexual em
Drosophila mediado por uma srie de genes que convertem a relao cromossomo X-autossomo em uma clula de macho ou uma de fmea. Quando a relao 1
(i.e., quando existem dois cromossomos por clula diplide), o embrio se desenvolve em uma mosca fmea. Quando a relao de 0.5 (i.e., quando a mosca XY
com apenas um cromossomo X por clula diplide), o embrio se desenvolve em
um macho (Figura 12.8).
Um dos genes chave nessa trajetria o transformer (tra1). Esse gene necessrio para produo de fmeas, e sua perda resulta em moscas macho, independentemente da relao cromossmica. Atravs de todo o perodo larval, o gene tra1
sintetiza ativamente um transcrito que processado em um mRNA geral (que
encontrado tanto em fmeas como em machos), ou em um mRNA especfico para

fmeas (Figura 12.9). Somente fmeas contm a mensagem emendada alternativamente. O mRNA geral encontrado tanto em machos como em fmeas contm um
cdon de parada precoce (UGA) no segundo xon, e a pequena protena produzida
por esse mRNA no funcional. Portanto, o transcrito no-especfico geral no est
relacionado com a determinao do sexo (Belote et al., 1989). Porm, na mensagem
especfica para fmeas, esse cdon UGA est em um ntron que desemendado
durante a formao do mRNA e no interfere com a traduo da mensagem. Em
outras palavras, o transcrito fmea o nico transcrito funcional desse gene. De
fato, quando o cDNA desse transcrito especfico de fmea incorporado nos genomas de moscas XY, essas moscas se tornam fmeas. A protena codificada pelo
mRNA especfico de fmea parece ser um peptdeo rico em arginina com comprimento de 196 aminocidos (Boggs et al., 1987).
O que faz o gene transformer (tra1) processar um transcrito especfico de
fmea em clulas XX e no em clulas XY? Parece que a emenda alternativa especfica do sexo do nRNA tra1 envolve competio entre dois possveis stios de
emenda 3 (aceptores) no ntron. Sosnowski e seus colegas (1989) apresentaram
evidncia de que essa competio alterada pela presena ou ausncia de um
produto funcional do gene Sex-lethal. O gene Sex-lethal (Sxl) um dos primeiros
genes na via do fentipo sexual, e age antes do transformer. Se a relao X-paraautossomo for 1, a protena funcional SXl ser produzida*. Esse gene no produz
uma protena funcional em embries XY ou larvas. Quando o gene Sex-lethal
funcional, o gene transformer produz tanto o transcrito geral como o transcrito
especfico de fmea e a mosca se tornar uma fmea. Se o gene Sex-lethal for
deletado ou mutado, o gene transformer s produzir o transcrito no-funcional e
a mosca se tornar um macho. Parece que o produto do gene Sex-lethal controla
qual dos stios de emenda 3 est sendo usado.
H duas maneira principais pelas quais a protena Sex- lethal poderia controlar
qual stio de emenda 3 usado. Uma, bloquear o uso do stio geral do aceptor de
modo que somente o stio alternativo aceptor especfico de fmea pode ser usado. A
outra maneira ativar o stio aceptor especfico de fmea de um modo positivo.
Valcrcel e colegas (1993) mostraram que a protena Sex-lethal inibe a emenda no
stio aceptor (no especfico de fmea), ligando-se especificamente ao seu trato
polipirimidina. Isso bloqueia a ligao de um fator de emenda, U2AF, ao stio geral,
levando-o a usar o stio de menor afinidade especfico de fmea. Portanto, parece
que se o stio de emenda aceptor geral 3 do transformer estiver bloqueado (seja por
mutao ou pela protena Sex-lethal), o stio aceptor alternativo especfico ser
usado (veja Figura 12.9). O resultado ser uma mosca fmea.
A protena Transformer-1 , ela prpria, um fator de emenda alternativo, e regula
a emenda do transcrito nuclear do gene doublesex (dsx). Esse gene necessrio
para a produo de ambos fentipos sexuais, e mutaes de dsx podem reverter o
fentipo esperado, fazendo com que embries XX se tornem machos, ou embries
XY se tornem fmeas. Durante o estgio de crislida, doublesex produz um transcrito que pode ser processado de duas maneiras alternativas. Pode gerar um mRNA
especfico de fmea ou um mRNA especfico de macho (veja Figura 12.9; Nagoshi et
al., 1988). Em fmeas e machos, os trs primeiros xons so os mesmos. Porm, os
quartos xons so diferentes. O RNA especfico de macho deleta uma grande seo
do RNA precursor que inclui o xon especfico de fmea.
Tian e Maniatis (1992) mostraram que o processamento especfico do sexo do prmRNA dsx envolve a ativao do stio de emenda 3 especfico de fmea pelos produtos dos genes transformer e transformer-2. A polipirimidina (rica em U/C) do trato em
*A protena Sxl ela prpria um produtor de um complexo tipo de emenda alternativa do RNA.
Mais ser dito sobre isso no Captulo 20.
XX;AA
XY;AA
Sex lethal
Sex lethal
mRNA especfico
de fmea
transformer
mRNA especfico
de fmea
Doublesex
mRNA especfico
de fmea
Fentipo
feminino
469
mRNA no
funcional
transformer
mRNA no
funcional
Doublesex
mRNA especfico
de macho
Fentipo
masculino
Figura 12.8
Determinao do sexo em Drosophila. Esse

esquema simplificado mostra que a razo Xautossomo monitorada pelo gene Sex-lethal.
Se esse gene estiver ativo, ele processa o prmRNA transformer em uma mensagem funcional especfica de fmea. Na presena da protena Transformer especfica de fmea, o transcrito do gene doublesex processado de forma
especfica de fmea, levando produo do
fentipo feminino. Se o gene transformer no
produzir um produto especfico de fmea (i.e.,
se o gene Sex-lethal no for ativado), o transcrito double-Sex emendado da maneira especfica de macho, levando obteno de um
fentipo masculino. (Os detalhes dessa trajetria sero discutidos no Captulo 20.)
470
Stios de emenda alternativa 3

xon ntron
ntron xon
gene tra1
Cdon de parada
Cdon de parada
FMEA
MACHO
Protena Sx1 funcional
Sem protena Sx1 funcional
prmRNA
tra1
prmRNA
tra1
Sx1 bloqueia ligao de
U2AF (e spliceosome) ao
stio mais eficiente; assim,
stio de emenda 3 menos
eficiente usado
U2AF se liga s regies

ricas em polipirimidina
para stios de emenda 3
mRNA transformer
(macho e fmea)
constitutivo produz
protena truncada,
no-funcional
RNA Transformer
feminino
Protena transformer
Protena degrada
Gene
doublesex
Stio de emenda 3 ineficiente
Pr-mRNA
doublesex
Pr-mRNA
doublesex
Protenas Tra ajudam ligao
de U2AF ao stio ineficiente
mRNA doublesex
especfico de fmea
Protena
Doublesex (DSX)
especfica de fmea
Ativa genes especficos de fmea
Suprime genes especficos de macho
mRNA doublesex
especfico de macho
Protena
Doublesex (DSX)
especfica de macho
Ativa genes especficos de macho
suprime genes especficos de fmea
Figura 12.9
Representao esquemtica de eventos de emenda alternativa na trajetria da determinao

do sexo em Drosophila. A trajetria feminina est esquerda, a trajetria masculina est
direita, e os genes transformer-1 e doublesex esto no centro. Na trajetria feminina, a
protena Sxl ativa produzida quando a razo X-para-autossomo for 1. (Como isso ocorre
ser discutido no Captulo 20.) A protena Sxl ativa bloqueia o stio usual de emenda 3 do
primeiro ntron do pr-mRNA tra1. Isso obriga o spliceosome a usar um outro stio de
emenda 3. Na trajetria masculina, no produzida a protena Sxl, e o spliceosome usa o
stio mais eficiente. Isso conduz incorporao no mRNA de seqncias que codificam
precocemente um cdon de parada precoce (UAG) na mensagem. O peptdeo truncado
produzido dessa mensagem no parece ter uma funo. como se o gene fosse inativo. Na
trajetria feminina, a protena Tra1 ativa se combina com a protena Tra2 para estabilizar
U2AF, e a assemblia de spliceosome no stio de emenda 3 do terceiro ntron do prmRNA doublesex. Isso leva formao de um mRNA contendo o quarto xon. Em machos,
a ausncia da protena Tra1 previne a ligao de U2AF e a assemblia do spliceosome
nesse stio. Em vez disso, xons 5 e 6 so utilizados no mRNA masculino. (Segundo
MacDougall et al., 1995.)
frente ao xon 4 no precursor do mRNA doublesex geralmente um ligante fraco de

U2AF, porque ele quebrado por um grupo de resduos de purina (representado pela
linha serrilhada na Figura 12.9). Portanto, ele usualmente no um eficiente stio de
emenda 3. Porm, na presena das protenas Transformer (e Transformer 2), esse stio
torna-se um stio utilizado eficientemente (Tian e Maniatis, 1993). Isso significa que o
stio de emenda ser utilizado em fmeas (que tm as protenas Transformer ativas),
mas no em machos (que no as tm). O mRNA doublesex masculino no ter o xon
4, enquanto o transcrito feminino o tem. As protenas Doublesex produzidas por esses
mRNAs so ambas fatores de transcrio. Alm disso, elas reconhecem a mesma
seqncia de DNA. Porm, enquanto a protena Doublesex feminina ir ativar intensificadores especficos de fmea (como aqueles que produzem protenas do vitelo), as
protenas Doublesex masculinas iro inibir a transcrio desses mesmos intensificadores (Coschigano e Wensink, 1993; Jursnich e Burtis, 1993). Reciprocamente, a protena Doublesex feminina pode inibir a transcrio a partir de genes que seriam, de
outra maneira, ativados pela protena Doublesex masculina. A pesquisa sobre a
determinao do sexo em Drosophila mostra que o processamento diferencial do
RNA tem papel extremamente importante ao longo de todo o desenvolvimento.
Uso Disseminado do Processamento
de RNA para o Controle da Expresso Gnica
Ainda sabemos relativamente pouco sobre os mecanismos de processamento alternativo do mRNA ou sobre as vias pelas quais algumas clulas processam transcritos que
outras clulas no seguem. O mecanismo subjacente a tal processamento diferencial
de RNA pode nos fornecer uma viso sobre a verdadeira essncia da diferenciao
celular e da determinao embrionria.
Q REGULAO DA TRADUO DOS

PROCESSOS DESENVOLVIMENTAIS
Aps o RNA mensageiro ter sido transcrito, processado e exportado do ncleo, ele
ainda precisa ser traduzido para formar a protena codificada no genoma. Nas sees
seguintes, iremos ver que a regulao a nvel da traduo um mecanismo extremamente importante no controle da expresso gnica. Nesses casos, a mensagem j est
presente no citoplasma mas pode ou no ser traduzida, dependendo de certas condies celulares. Assim, o controle da traduo da expresso gnica pode ser usado
quando uma exploso de sntese protica necessria imediatamente (como no caso
de ovos recm-fecundados), ou pode ser usado como um mecanismo afinado para
assegurar que uma quantidade muito precisa de protena seja produzida do suprimento disponvel de mensagens (como a sntese de hemoglobina). Iremos tambm ver que
471
472
h vrias maneiras para realizar o controle da traduo e que clulas diferentes desenvolveram diferentes meios de o fazerem.
Mecanismos da traduo eucaritica
Figura 12.10
Representao esquemtica dos eventos da traduo eucaritica. Os passos da iniciao renem as subunidades ribossmicas 40S e 60S,
mRNA e o tRNA iniciador, que est complexado ao aminocido metionina (Met). Durante
o alongamento, aminocidos so trazidos para
o polissomo, e ligaes peptdicas so formadas entre os aminocidos. A seqncia de aminocidos na protena em crescimento
direcionada pela seqncia de cdons de cidos nuclicos no mRNA. Aps a ltima ligao peptdica da protena ter sido feita, um dos
cdons UAG, UGA, ou UAA sinaliza o trmino da traduo. As subunidades ribossmicas
e a mensagem podem ser reutilizadas.
INICIAO
Traduo o processo pelo qual a informao contida numa seqncia de

nucleotdeo do mRNA instrui a sntese de um determinado polipeptdeo. Esse
processo, esquematizado na Figura 12.10, foi dividido em trs fases - iniciao,
alongamento e terminao - e regulado por protenas solveis chamadas (apropriadamente) fatores de iniciao, fatores de alongamento e fatores de terminao
(Hershey, 1989; Safer, 1989).
A iniciao consiste de reaes pelas quais o primeiro RNA de transferncia
do aminoacil e o mRNA so ligados ao ribossomo. O nico RNA de transferncia
(tRNA) capaz de iniciar a traduo um tRNA iniciador especial (tRNAi), que
transporta o aminocido metionina. Conforme mostrado na Figura 12.11, as primeiras reaes envolvem a formao de um complexo de iniciao consistindo do
tRNA iniciador do metionil ligado uma subunidade ribossmica 40S (pequena).
Essa reao catalisada pela forma ativa do fator 2 de iniciao eucaritica (eIF2GTP) que liga o iniciador Met-tRNA subunidade ribossmica 40S. Note que essa
ligao ocorre na ausncia de mRNA. O mRNA adicionado em seguida. Primeiro,
uma protena cap ligante-eIF4E - liga-se ao cap de metil-guanosina no terminal 5
da mensagem. Sem esse cap, a ligao do mRNA subunidade ribossmica
muitas vezes no completada (Shatkin, 1976, 1985), e o eIF4E crtico para o
prosseguimento da traduo. No entanto, h menos eIF4E do que o nmero de
mensagens na clula, o que faz pensar que cada mRNA tem que competir por essa
protena cap ligante (Thach, 1992). O fator 4A de iniciao se complexa em seguida
com o eIF4E e se posiciona numa ala helicoidal fechada na seqncia lder do
mRNA. O eIF4A (estimulado por eIF4B e ATP) desenrola a hlice. Esse passo pode
ser limitante se a eIF4A da ala helicoidal fechada for ocultada por alguma outra
estrutura secundria estvel. A subunidade ribossmica 40S viaja em seguida ao
longo da mensagem at atingir o cdon AUG no contexto adequado. Kozak (1986)
mostrou que no apenas qualquer um AUG ir servir. Para que a subunidade
ALONGAMENTO
TERMINAO
Polipeptdeo
nascente
tRNA
iniciador
Ligao
peptdica
Ribossomo
Subunidades
ribossmicas
Fator de
liberao
Subunidades
ribossmicas
recicladas
Polipeptdeo
completado
473
Figura 12.11
Unidade
ribossmica
pequena
Ligao do fator de iniciao
tRNA
Iniciador
Escaneamento
Reciclagem
de eIF2
Subunidade 60S
ribossmica pare e inicie a traduo, os nucleotdeos ao redor de AUG tambm so

importantes. Mutando genes clonados e analisando a traduo de seus RNAs,
Kozak achou que a seqncia tima seria ACCAUGG. Mutaes nos nucleotdeos nos flancos podiam reduzir a traduo em 20 vezes. A importncia dos nucleotdeos nos flancos tambm foi vista in vivo. Morle e colaboradores (1985) reportaram o caso de um paciente cuja talassemia (deficincia da subunidade
globina da hemoglobina) era devida uma alterao nessa seqncia de ACCAUGG
para CCCAUGG. A ligao da subunidade 40S AUG da mensagem posiciona o
Fase de iniciao da traduo eucaritica. Todos os fatores de iniciao esto representados

como crculos. O primeiro complexo produzido pela unio da subunidade ribossmica 40S
com o tRNA iniciador. O tRNA iniciador foi
complexado com a forma ativa (GTP) do fator
2 de iniciao. Aps a formao desse complexo, o mRNA posicionado com o auxlio
da protena cap ligante (eIF4E) e outras subunidades eIF4. Uma vez estando o mRNA colocado em seu lugar, o eIF5 media a juno da
subunidade ribossmica 60S e a liberao dos
prvios fatores de iniciao. O eIF2, agora em
sua forma inativa (GDP), reativado por
eIF2B. (Segundo Hershey, 1989; Thach, 1992;
Cooper, 1996.)
474
Figura 12.12
Polissomo individual transcrevendo o mRNA

gigante do puff BR2 de Chironomus tentans.
(A) Microscopia eletrnica de um polissomo
contendo 24 ribossomos. As protenas nascentes podem ser vistas se estendendo dos
ribossomos e crescendo medida que os
ribossomos se movimentam do terminal 5 da
mensagem para o terminal 3. Prximo do terminal 3 esto ribossomos dos quais a protena se destacou. (B) Um tal polissomo sob
maior aumento; o polissomo foi esticado durante a preparao do espcime. A relao entre
o mRNA e as subunidades ribossmicas e o
polipeptdeo nascente pode ser vista. (de
Francke et al., 1982; fotografias cortesia de J.
E. Edstrom.)
(A)
(B)
tRNA iniciador sobre o cdon AUG. Somente aps o mRNA ter sido posicionado
apropriadamente na subunidade ribossmica pequena, pode a unidade ribossmica
60S (grande) se ligar. Isso completa a reao de iniciao. Durante esse processo, o GTP no eIF2 hidrolisado em GDP. Para o eIF2 captar um novo tRNA iniciador, esse tem que ser regenerado para eIF-GTP pelo eIF2B.
O alongamento envolve a ligao seqencial de tRNAs do aminoacil ao
ribossomo e a formao de ligaes peptdicas entre os aminocidos medida que
eles abandonam seqencialmente seus tRNAs transportadores (veja Figura 12.10).
medida que aminocidos so ajuntados, o ribossomo viaja ao longo da mensagem, expondo novos cdons para a ligao de tRNA. Isso permite a um outro
ribossomo iniciar sua viajem no terminal 5 da mensagem. Assim, em geral, qualquer mRNA ter vrios ribossomos ligados a ele. Essa estrutura ento chamada
poliribossomo- ou mais comumente, polissomo (Figura 12.12). A terminao da
sntese protica ocorre quando um dos cdons mRNA UAG, UAA ou UGA exposto no ribossomo. Esses tripletes de nucleotdeos (chamados cdons de terminao) no so reconhecidos pelos tRNAs e portanto no codificam para quaisquer aminocidos. Ao contrrio, eles so reconhecidos pelos fatores de liberao,
que hidrolizam o peptdeo do ltimo tRNA, destacando-o do ribossomo. O
ribossomo se separa em duas unidades, e o ciclo da traduo recomea.
Controle da sntese protica

pela longevidade diferencial do mRNA
Uma das principais maneiras de regular a expresso gnica ao nvel de traduo envolve degradao ou estabilizao seletiva do mRNA. Se o mRNA fosse degradado
rapidamente aps penetrar no citoplasma, ele somente poderia gerar poucas protenas. Porm, se a mensagem com uma meia-vida relativamente curta for seletivamente
475
estabilizada em certas clulas em certos momentos, ento ele poderia produzir grandes
quantidades de uma protena particular em certos momentos e em certos locais.
Degradao Seletiva de mRNAs
LONGEVIDADE DE UM mRNA E SUA REGIO 3 NO TRADUZIDA. Nem todos os
mRNAs tm a mesma estabilidade dentro da clula. Uma mensagem estvel como a
globina tem uma meia-vida de cerca de 17 horas, enquanto os mRNAs para vrios
fatores de crescimento tm meia-vida de menos de 30 minutos. Assim, a quantidade
de protena produzida de uma nica mensagem de globina deve ser muito maior que
aquela de uma mensagem de um nico fator de crescimento. Dados recentes, sumariados por Decker e Parker (1994), sugerem que as seqncias de RNA dentro da
regio 3 no-traduzida (3UTR) podem promover a rpida desadenilao da cauda
do poliadenilato 3. Isso leva perda da cobertura do terminal 5 da mensagem e de
sua subseqente degradao 5 a 3. Portanto, os principais determinantes reguladores da meia-vida da mensagem parecem residir na 3 UTR. As espcies mais efmeras
de RNA contm uma ou mais seqncias ricas em AU nessa regio. Shaw e Kamen
(1986) inseriram uma regio rica em AT com 51 pares de bases oriundas da 3UTR do
gene para o fator de crescimento GM-CSF na 3UTR do gene da globina do coelho
(Figura 12.13). A mensagem da globina resultante tinha uma meia-vida de menos de
30 minutos. Uma seqncia semelhante, mas contendo 14 resduos G e C, foi inserida
em um outro gene da globina como um controle. Sua mensagem para globina
normalmente tinha a meia-vida longa.
A capacidade de degradar seletivamente mRNAs crtica para a funo celular.
Por exemplo, o gene c-fos codifica um fator de transcrio necessrio para a diviso
celular normal do fibroblasto (Holt et al., 1986). Tal como a mensagem do fator de
crescimento GM-CSF, o mRNA para c-fos contm grandes regies 3 no-traduzidas
ricas em seqncias AU. Se essas regies forem deletadas (experimentalmente ou
por mutao natural), a mensagem ganha uma meia-vida mais longa. Conseqentemente, mais protena C-fos produzida, e a clula recebe sinalizao contnua para
se dividir. O resultado um tumor das clulas que tm o gene c-fos, carente da 3
UTR rica em AU (Meijlink et al., 1985). Wilson e Treisman (1988) descobriram que
essa regio estimula a remoo da cauda poli(A) quando a mensagem traduzida.
Quando a regio rica em AU foi deletada ou substituda por uma outra seqncia, a
cauda poli(A) permanecia, e a mensagem tinha uma meia-vida mais longa. Foram
encontradas vrias protenas que reconhecem essas regies 3UTR ricas em AU, e
elas podem acelerar a degenerao das mensagens quando ligada elas (Chen et al,
1992, 1994). Reciprocamente, a 3UTR do RNA de longa vida da globina contm
trs regies ricas em C que ligam protenas que parecem estabilizar a mensagem
(Kiledjian et al., 1995).
Encurtamento diferencial da cauda poli(A) tem um papel decisivo no ciclo vital do
fungo limoso Dictyostelium. Nesse organismo, um novo conjunto de mensagens
transcrito durante a mudana do crescimento vegetativo (ameba) para o desenvolvi-
Figura 12.13
Regulao da longevidade do mRNA por uma

seqncia na regio 3 no traduzida. (A) O
terminal 3 do gene -globina do coelho foi
alterado pela insero de um fragmento de 62
pares de base derivado do terminal 3 do gene
humano GM-CSF ou uma seqncia relacionada, na qual vrios pares AT foram substitudos por pares GC (indicados em cores). (B)
Os clones foram injetados em culturas de clulas de camundongo, e a presena da mensagem aps 30 horas foi medida incubando-se
extratos celulares com DNA marcado com 32P,
complementar ao terminal 5 da mensagem.
Se a mensagem -globina ainda existisse, o
cDNA radioativo a ela se ligaria e seria, portanto, resistente nuclease S1 (que destri
somente cidos nuclicos de fita nica). Se a
mensagem no estivesse presente, a nuclease
S1 adicionada iria digerir a sonda at mononucleotdeos, e nenhum DNA radioativo seria ligado. As solues resultantes foram corridas em um gel e auto-radiografadas. Pista
1: Extratos de clulas incorporando o tipo selvagem (WT) do gene clonado da -globina.
Pista 2: Extrato de clulas incorporando o gene
-globina do coelho com o terminal 3 rico
em AT (no mostrando mRNA aps 30 horas). Pista 3: Extrato de clulas incorporando
o gene da -globina de coelho com o terminal
3 substitudo por GC (mostrando mRNA
estvel aps 30 horas). O gene e a sonda
para 2-microglobulina (produzindo um
mRNA longevo) foram usados como controle. (Segundo Shaw e Kamen, 1986.)
RNA globina
Terminais 3 alternativos
CAP
(A)
ntron
RNA de controle
2-microglobulina
ntron
(B)
Porcentagem da marcao
(pulso) inicial
476
Com prolactina
Sem prolactina
Perodo aps o rastreamento (horas)
Figura 12.14
Degradao de mRNA da casena na presena e ausncia de prolactina. Clulas mamrias em

cultura foram tratadas com precursores radiativos de RNA (pulso) e aps um dado perodo foram
lavadas e alimentadas com precursores no-radiativos (rastreamento). O mRNA da casena
sintetizado durante o tempo de pulsao foi em seguida isolado e contado. Na ausncia de
prolactina, o mRNA da casena recm-sintetizado decaiu rapidamente, com uma meia-vida de 1.1
horas. Quando o mesmo experimento foi feito em um meio contendo prolactina, a meia-vida
estendeu-se para 28.5 horas. (Segundo Guyette et al., 1979.)
mento (grex). Ao mesmo tempo, as caudas poli(A) dos mRNAs existentes no estgio
vegetativo so dramaticamente encurtadas. Como resultado, as mensagens recmtranscritas so traduzidas, enquanto as mensagens pr-existentes no o so (Palatnik
et al., 1984). Esse mecanismo tambm foi observado em glndulas salivares na larva de
Drosophila (Restifo e Guild, 1986).
ESTABILIZAO HORMONAL DE RNAs MENSAGEIROS ESPECFICOS. Produtos
diferenciados de genes so freqentemente sintetizados em resposta induo

hormonal. Em alguns casos, hormnios no aumentam a transcrio de certas mensagens, mas atuam a nvel de traduo. Um desses casos envolve a sntese da casena
por mamferos em lactao. A casena a principal fosfoprotena do leite sendo, por
isso, um produto diferenciado da glndula mamria. Como ser discutido mais
detalhadamente no Captulo 19, a glndula mamria preparada pela ao seqencial
de vrios hormnios. Prolactina, porm, o hormnio responsvel pela lactao isto
, a real produo do leite. A prolactina aumenta a transcrio de mensagens da casena
somente cerca de duas vezes; seu principal efeito parece ser a estabilizao do mRNA
da casena (Guyette et al., 1979). A prolactina aumenta a longevidade da mensagem da
casena fazendo com que ela exista por um tempo 25 vezes maior que a maioria das
outras mensagens na clula (Figura 12.14). Conseqentemente, cada mRNA da casena
pode ser usado para mais repeties da traduo. Dessa maneira, um nmero maior do
que o normal pode ser sintetizado de cada mensagem de casena. A Tabela 12.2 resume
esses dados e mostra que outros hormnios tambm aumentam a estabilidade de
RNAs mensageiros especficos.
Controle da traduo de mensagens do ocito

Na maioria das espcies animais, o ncleo diplide no expresso imediatamente. A
evidncia que o desenvolvimento precoce controlado por fatores armazenados no
ou produzidos pelo ocito veio de diversos experimentos no fim do sculo XIX (revisados por Davidson, 1976). Esses experimentos demonstraram claramente a dominncia
de traos maternos durante o estgio inicial da embriognese, e uma troca para caractersticas paternas ou hbridas surgindo somente mais tardiamente no desenvolvimento. Tais efeitos maternos de longo alcance j foram mencionados em nossa dis-
Tabela 12.2 Estabilizao de RNAs mensageiros especficos pelos hormnios

mRNA
Clula ou tecido
Efetuador
Regulatrio
Viteologenina
Albumina
Vitelogenina
Apo VLDL II
Casena
Hormnio do crescimento
Insulina
Ovalbumina
Fgado de Xenopus
Fgado de Xenopus
Fgado de ave
Fgado de ave
Glndula mamria de rato
Culturas de clula
pituitria de rato
Clulas de ilhotas
pancreticas de rato
Oviduto de galinha
Estrgeno
Estrgeno
Estrgeno
Estrgeno
Prolactina
Dexametasona e tiroxina
Glicose
Estrgeno, progesterona
Fonte: Segundo Shapiro et. al., 1987.
cusso sobre a orientao da clivagem em embries de lesmas, nos quais o citoplasma

do ocito contm um fator que direciona as rotaes dos planos de clivagem nas
direes direita ou esquerda. [cleave1.html]
Caracterizao de RNAs Mensageiros Armazenados em Ocitos
TIPOS DE mRNAS ARMAZENADOS EM OCITOS. Davidson e seus colegas avali-
aram a complexidade do mRNA do ocito de maneira semelhante quela empregada em

sua anlise da complexidade do RNA nuclear. RNA (em grande excesso) foi hibridizado
com DNA desnaturado, e a metade do valor Cot da hibridizao foi encontrada ser
proporcional s quantidades das diferentes seqncias de RNA presentes. Por essa
anlise, eles estimaram que cada ocito (em numerosos filos) tinha seqncias
nucelotdicas diferentes em nmero suficiente para se responsabilizar por aproximadamente 1600 cpias cada de 20.000 a 50.000 tipos de RNA (Galau et al., 1976; HoughEvans et al., 1977). Essa a maior complexidade de mensagens de qualquer tipo de
clula conhecida, e isso reflete o enorme potencial do desenvolvimento do ocito.
Relativamente poucas dessas mensagens foram caracterizadas. Alm disso, muitos
desses mRNAs no so utilizados no ocito, mas so armazenados e traduzidos aps
a fecundao. Isso foi primeiro demonstrado usando inibidores da sntese protica;
mais recentemente, ensaios de PCR e de proteo de RNase tambm mostraram a
existncia de RNAs armazenados no ocito e primeiro traduzidos durante a maturao
(imediatamente antes e durante a ovulao), fecundao ou clivagem precoce. A Tabela 12.3 apresenta uma lista parcial desses mRNAs armazenados. [RNA4.html]
Alguns desses RNAs so para protenas que sero necessrias durante a
clivagem, quando o embrio produz quantidades enormes de cromatina, membranas celulares e componentes do citoesqueleto. Uma das situaes mais notveis
a armazenagem da informao necessria para produzir ribonucleotdeo redutase
para o embrio do molusco. A grande subunidade armazenada como uma protena no citoplasma do ocito. A pequena unidade armazenada como uma mensagem materno no-traduzvel. Somente aps a fecundao, quando o mRNA para a
pequena subunidade tiver sido traduzida, pode a recm-sintetizada pequena
subunidade combinar-se com a grande subunidade pr-formada para gerar a enzima
funcional (Standart et al., 1986).
Alguns desses mRNAs armazenados regulam o perodo da diviso celular precoce. Em muitas espcies (incluindo o ourio-do-mar e a Drosophila) a taxa e o
padro das divises celulares precoces no requerem um ncleo. Ao contrrio, eles
requerem sntese de protena contnua a partir do mRNA materno armazenado
(Wagenaar e Mazia, 1978). A razo dessa dependncia de mensagens armazenadas
foi mostrada em 1983, quando Evans e colegas acharam uma classe de protenas que
Meia-vida (horas)
+Efetuador
500
10
22
26
92
202
-Efetuador
16
3
~2.5
3
5
77
29
~24
2-5
477
478
Tabela 12.3
Alguns mRNAs armazenados no citoplasma do ocito

e traduzidos prximo ou na fecundao
mRNAs codificando
Funo(es)
Organismo(s)
Ciclinas
Regulao da diviso
celular
Movimento celular
e contrao
Formao de fusos
mitticos, clios, flagelos
Sntese de DNA
Ourio-do-mar, molusco,
estrela-do-mar, r
Camundongo, estrela-do-mar
Actina
Tubulina
Molusco, camundongo
Pequena subunidade da
ribonucleotdeo redutase
Hipoxantina fosforil-transferase Sntese de purinas
Vg1
Determinao
mesodrmica (?)
Ourio-marinho, molusco,
estrela-do-mar
Camundongo
R
Histonas
Caderinas
Metaloproteinases
Fatores de crescimento
Ourio-do-mar, r, molusco
R
Camundongo
Fator FEM-3 de
determinao do sexo
Produtos gnicos PAR
Morfgeno SKN-1
Morfgeno Hunchback
Morfgeno Caudal
Morfgeno Bicoid
Morfgeno Nanos
Morfgeno GLP 1
Protena Germ cell-less
Protena Oskar
Ornitina transcarbamilase
Fator de alongamento 1
Protenas ribossmicas
Formao de cromatina
Adeso de blastmeros
Implantao no tero
Crescimento celular;
crescimento de clulas
uterinas (?)
Formao de espermatozide
Camundongo
C. elegans
Segregam determinantes
morfognicos
Determinao do destino
do blastmero
do anterior
do posterior
do anterior
do posterior
do anterior
Determinao da clula
germinativa
Drosophila
Localizao da
clula germinativa
Ciclo da uria
Sntese protica
Sntese protica
Drosophila
R
R
R, Drosophila
C. elegans
C. elegans
Drosophila
Drosophila
Drosophila
Drosophila
C. elegans
Fontes: Compilado de numerosas fontes, incluindo Raff, 1980; Shiokawa et al., 1983; Rappollee
et al., 1988; Brenner et al., 1989; Standart, 1992.
chamaram ciclinas. Essas protenas regulam a diviso celular (conforme discutido

no Captulo 5) e so codificadas por mRNAs materno. O que surpreendente sobre
as ciclinas que elas so destrudas na diviso celular e tm que ser resintetizadas
a partir de mensagens armazenadas aps o trmino de cada clivagem. A sntese de
ciclinas oriundas de mensagens estocadas vista declinar medida que o embrio
se aproxima do estgio de blstula.
Outras mensagens armazenadas codificam protenas que determinam o destino celular. As mensagens bicoid e nanos da Drosophila, o mRNA vg1 de Xenopus, e o mRNA glp-1 de C. elegans so todas crticas para a determinao do
destino celular. Como veremos posteriormente neste captulo, no somente o perodo de sua traduo crtico, como tambm o a localizao do mRNA quando
ele traduzido.
(A)
479
Figura 12.15
Demonstrao de mensagens localizadas nos plos animal e vegetal do

ocito de Xenopus. RNA foi obtido do ovo inteiro (T), do hemisfrio
pigmentado animal (A) ou do hemisfrio pigmentado vegetal (V) e separado eletroforeticamente em gel. O RNA foi transferido para papel pelo
procedimento Northern, e o papel incubado com DNA radioativo de clones
derivados de cDNA complementar mensagem do ocito. O DNA radioativo do clone An2 hibridiza para a mensagem presente no plo animal, mas
no no plo vegetal. A distribuio oposta vista para a mensagem
hibridizando para o DNA do clone vg1. (B) Hibridizao in situ mostrando
a mensagem vg1 em diferentes estgios de localizao no ocito de Xenopus. No ocito maduro, ela reside somente no crtex vegetal. (O RNA vg1
foi recentemente mostrado codificar um fator crtico para a determinao do
eixo dorso-ventral em vertebrados e ser discutido mais extensamente no
Captulo 15.) (A de Rebagliati et al., 1985, cortesia de D. Melton; B de
Melton, 1987.)
(B)
LOCALIZAO DE mRNAS ARMAZENADOS. Alguns mRNAs armazenados no so
uniformemente distribudos no ocito (Rodgers e Gross, 1978). Rebagliati e colaboradores (1985) mostraram que enquanto a maioria das mensagens maternas encontrada distribuda uniformemente atravs do ovo no-fecundado de Xenopus, alguns
mRNAS armazenados se localizam no plo animal ou vegetal do citoplasma. Eles
extraram RNA contendo poli(A) de ocitos e usaram transcriptase reversa e DNA
polimerase para converter os RNAs em uma populao de DNAs de dupla fita. Esses
DNAs foram em seguida inseridos em vetores clonados e cultivados separadamente
em E. coli. Cerca de 2 milhes de clones foram derivados dessa maneira. O DNA
desses clones (a biblioteca do ocito de Xenopus) foi ento transferido para dois
pedaos de papel de filtro e desnaturado sob condies de fornecer DNA de fita
simples. Em seguida, os investigadores cortaram o plo animal ou vegetal do ovo e
extraram o RNA contendo poli(A) dessas regies. cDNAs radioativos foram produzidos a partir dos RNAs, e um grupo e filtros contendo DNA foi incubado em cDNAs
das mensagens animal, enquanto o outro foi incubado em cDNAs das mensagens
vegetal. Quando a ligao de cDNAS radioativos foi medida, a maioria dos clones
ligaram quantidades iguais de cDNA dos plos animal e vegetal, indicando que essas
mensagens estavam igualmente distribudas. Porm, cerca de 1.2 porcento dos clones
somente ligaram cDNA produzido de mensagens do plo animal, e cerca de 0.2 porcento
dos clones somente se ligaram ao cDNA derivado do mRNA do plo vegetal.
O DNA dos clones especfico para mensagens animal ou vegetal pde, ento, ser
usado para identificar os mRNAs localizados. RNA foi extrado de ovos inteiros ou
de seus plos animal e vegetal e corrido em gel. Os RNAs foram separados
eletroforeticamente e foram transferidos para papel de nitrocelulose (transferncia
Northern) e examinados com sondas de DNA radioativo para cada um dos clones
especficos para a regio. Dois dos resultados esto mostrados na Figura 12.15 e
Prancha 8. A localizao desses mRNAs em regies especficas do ovo conseguida
atravs do citoesqueleto e ser detalhada nos Captulos 13 e 20.
480
&
Especulaes
Determinando o Destino Celular por Meio do

mRNA Localizado do Ocito
UITAS DAS ATIVIDADES do
desenvolvimento precoce ocorrem sem ativao do ncleo embrionrio. J que a especificao dos eixos
embrionrios em geral um dos primeiros
processos da embriognese, durante muito tempo foi considerado que esses eventos poderiam ser regulados pelo mRNA
materno. Nos anos recentes, isso foi demonstrado ser o caso.
O eixo ntero-posterior (cabea-cauda)
da Drosophila especificado principalmente pelas protenas codificadas pelos genes
bicoid, nanos e hunchback (Figura 12.16).
Embora suas atuaes sero detalhadas de
maneira mais completa nos prximos captulos, discutiremos suas regulaes de traduo aqui. Primeiramente, os mRNAs de
bicoid e nanos so transportados das clulas foliculares do ovrio para dentro do ovo.
O RNA bicoid permanece na regio mais anterior do ocito, enquanto a mensagem nanos
vai para o plo posterior do ovo. A mensagem bicoid parece ser amarrada pelas suas
3UTR aos microtbulos anteriores pelos
produtos dos genes swallow e staufen (Ferrandon et al., 1994; veja Captulo 22). A mensagem bicoid colocada no ocito tem uma
cauda poli(A) relativamente curta, de cerca
de 70 resduos. Porm, dentro do primeiro
ciclo de diviso, a mensagem poliadenilada
de maneira a sua cauda quase dobrar de tamanho (Salls et al., 1994; Lieberfarb et al.,
1996). Essa poliadenilao coincide com a
capacitao da mensagem bicoid ser traduzida. A protena Bicoid se difunde atravs da
poro anterior do embrio precoce, sendo
responsvel pela especificao das regies
da cabea e trax da larva de Drosophila. Os
produtos dos genes cortex e grauzone parecem ser crticos para a poliadenilao do
mRNA bicoid porque mutaes nesse gene
previnem a poliadenilao e traduo da mensagem bicoid.
O mRNA nanos est localizado no plo
posterior do ovo durante a oognese, mas
quantidades significativas permanecem distribudas atravs do citoplasma. Durante o
desenvolvimento precoce, porm, somente
RNA hunchback
RNA
bicoid
RNA nanos
Figura 12.16
Controle da polaridade ntero-posterior em
RNA oskar embries de Drosophila pelo mRNA materno.

(A) As mensagens bicoid, nanos, oskar e
Anterior
Posterior
hunchback so fornecidas ao ovo pelas clulas
Localizao do RNA
nutrizes ovarianas. Elas so codificadas pelo
Poliadenilao de
caudas de RNA para
bicoid,
derepresso de nanos
Gradiente
de protena
bicoide
(AJ P)
Gradiente
de protena
nanos
(A I P)
Nanos de liga 3
UTR hunchback
Gradiente de protena hunchback
a mensagem nanos ligada no citoplasma

posteror traduzida (Gavis e Lehmann,
1994). O posicionamento correto dessa mensagem tambm devido as suas 3UTR e se
outros mRNAs (tal como aquele para a
tubulina) tiverem sido dado a 3UTR de
nanos, essas mensagens ficaro localizadas
no posterior do ocito. Quando traduzida, a
protena Nanos se difunde atravs da parte
posterior do embrio e especifica aquelas
clulas que a rtem para tornarem-se abdominais. A mensagem nanos parece ser reprimida durante a traduo pela ligao da protena Smaug a dois stios em sua 3UTR
(Smibert et al., 1996). Essa represso
abolida uma vez que o mRNA nanos se localiza no plo posterior. A protena Oskar
pode estar aqui envolvida na ligao da mensagem nanos ao citoesqueleto, e a protena
Vasa pode atuar como helicase para desenrolar o RNA (Lian et al., 1994). A protena
Oskar propriamente regulada por traduo. Porm, em contraste com a mensagem
nanos, que traduzida aps a fecundao,
o mRNA oskar sintetizado e transportado
para o interior do ocito precocemente na
oognese e fica localizado no plo posterior durante os estgios medianos da oognese. Uma vez localizada, a mensagem tra-
genoma materno. O mRNA oskar entra primeiro, transportado para o plo posterior e
traduzido na meia oognese, antes da chegada
de outras mensagens. A mensagem bicoid
amarrada no anterior do ovo pela sua 3UTR. A
mensagem nanos direcionada pela sua 3UTR
para ir ao plo posterior, onde interage com a
protena Oskar. O mRNA hunchback visto
em todo o ocito. (B) Aps fecundao e ativao do ovo, o mRNA bicoid poliadenilado e
se torna ativo para traduo, formando um gradiente ntero-posterior da protena Bicoid. O
mRNA nanos no plo posteror torna-se competente para traduo e comea a produzir um
gradiente posterior-para-anterior da protena
Nanos. (C) A protena Nanos liga-se 3UTR
da mensagem hunchback para impedir a traduo. A protena Bicoid liga-se a regio intensificadora do gene hunchback para promover a
transcrio de novas mensagens hunchback. O
resultado um gradiente ngreme da protena
Hunchback. Essa protena ir ativar diferentes
genes em diferentes concentraes, com isso
especificando as diferentes regies do embrio.
duzida em protena que se mantm no plo

posterior (Kim-H et al., 1995). Tal como as
mensagens bicoid e nanos, sua localizao
e momento de traduo dependem de sua
3UTR. Os mRNAs nanos e oskar tm extenses relativamente curtas de poli(A) que
no so significativamente alongadas quando as mensagens se tornam traduzveis. Isso
sugere que h ao menos dois mecanismos
de ativao das mensagens materna em
ovos de Drosophila (Salles et al., 1994). O
primeiro depende da posio, e no envolve o crescimento da cauda poli(A) (p.ex.,
oskar e nanos). O segundo independe da
posio e requer sntese de poli(A) (bicoid,
e tambm mensagens de Toll e torso).
As protenas Bicoid e Nanos realizam
suas funes regulando a sntese da protena Hunchback. Essa ir finalmente especificar a cabea e o trax da mosca de uma
maneira dependente da concentrao. A protena Bicoid (agora ativa no anterior) age
como um fator de transcrio para ativar o
gene hunchback, produzindo assim mais

mensagem hunchback e protena no anterior do embrio. A protena Nanos, porm,
trabalha ao nvel de traduo para inibir a
produo da protena Hunchback a partir
do mRNA hunchback existente. Isso cria um
gradiente pelo qual a sntese da protena
Hunchback aumentada no anterior do
embrio e ativamente reprimida no posterior (Wharton e Struhl, 1991; Wang et al.,
1994). A 3 UTR do mRNA contm vrios
stios que ligam dois fatores (Pumilio e uma
protena de 55-kDa) que por si no bloqueiam a traduo. Porm, essas duas protenas
parecem formar uma stio de aterrisagem
para a protena Nanos. Quando Nanos se
liga, a traduo do mRNA hunchback inibida (Murata e Wharton, 1995).
A protena Bicoid tambm trabalha a
nvel de traduo para bloquear a sntese
mRNA
glp-1
Anterior
Posterior
(A)
mRNA hunchback
Poly (A)
mRNA glp-1
Poly (A)
Figura 12.18
(B)
Hunchback
(Drosophila)
GLP-1 (C.
elegans)
Protena
Protena
GLP-1
Figura 12.17
Comparao entre a localizao da protena

GLP-1 e a mensagem glp-1. A mensagem glp1 materna encontrada atravs do desenvolvimento precoce em cada clula do embrio de C.
elegans. A protena GLP-1, porm, vista somente na prognie da clula anterior formada na
primeira diviso. (Segundo Evans et al., 1994.)
481
da protena Caudal. Como Nanos, a protena Caudal crtica para o estabelecimento

dos segmentos posteriores da mosca, mas
ao contrrio da mensagem nanos, o mRNA
caudal materno distribudo uniformemente atravs do ovo da Drosophila. A
protena Bicoid liga-se 3UTR do mRNA
caudal, impedindo-o de ser traduzido na
parte anterior do embrio (Dubnau e Struhl,
1996). Os mecanismos pelos quais a regulao gnica da traduo determina o eixo
ntero-posterior do embrio de Drosophila sero detalhados no Captulo 14.
Isso parece ser uma soluo exeqvel
para a especificao axial quando o embrio
do estgio precoce de clivagem permanece
um sinccio que permite a formao de tais
gradientes. Porm, experimentos recentes
(Evans et al., 1994) mostraram que tal controle da traduo da especificao celular
tambm pode ocorrer em embries que formam clulas logo aps a fecundao. No
nematdeo C. Elegans, muito da embriognese precoce depende da protena GLP-1.
Essa um receptor da superfcie da clula
que recebe sinais de clulas posteriores para
Mecanismos para a regulao

da traduo das mensagens dos ocitos
No Captulo 4, vimos evidncia de que o ocito contm RNAs mensageiros que estavam presentes mas no traduzidos at a fecundao ou ativao do ocito (como na
ativao da progesterona da r pouco antes da fecundao). H atualmente ao menos
5 mecanismos que regulam a traduo do mRNA do ocito. Trs deles envolvem a
Semelhanas na a regulao de mRNAS

hunchback e glp-1 atravs de suas 3UTRs.
(A) A 3UTR da mensagem hunchback contm vrias regies consideradas essenciais para
a ligao de Nanos e a supresso da traduo.
Esses elementos de resposta nanos consistem nos motivos GUUGU e AUUGUA. Os
mesmos elementos podem ser vistos na
3UTR da mensagem glp-1. (B) Modelo para
a regulao da traduo de hunchback e glp-1.
Ambas mensagens esto distribudas uniformemente atravs do ovo e embrio precoce.
Em ambos os casos, a mensagem reprimida
na parte posterior do embrio. O regulador da
traduo hunchback a protena Nanos localizada posteriormente. O regulador da traduo
de glp-1 ainda no conhecido mas pode ser a
protena PAL-1. (Segundo Evans et al., 1994.)
especificar destinos das clulas anteriores

(veja Captulo 17). Ela ativa entre os estgios de clivagem de 4 28 clulas. Colorao por anticorpos mostra que as nicas
clulas que contm essa protena so os
descendentes da clula anterior do estgio
de 2 clulas. Porm, hibridizao in situ mostrou que a mensagem materna para essa protena encontrada em todas as clulas do
embrio (Figura 12.17). A clula posterior do
estgio bicelular e sua prognie parecem ter
um inibidor da traduo do RNA glp-1. Esse
inibidor no foi ainda encontrado, mas o
seqenciamento das 3UTR mostrou que o
mRNA gip-1 tem uma 3UTR com as mesmas seqncias que reconhecem Pumilio e
Nanos (Figura 12.18). Assim, as clulas anteriores de C. Elegans, tal como as de Drosophila, so especificadas pela regulao
gnica da traduo.
482
disponibilidade de mRNAs; os outros dois envolvem a eficincia da traduo do

mRNA. A maioria das espcies provavelmente usa mais de um mecanismo para
regular a traduo do mRNA do ocito. A pergunta fundamental , Como so recrutados os mRNAs para os polissomos? Embora o ocito e os blastmeros precoces
contenham a mesma populao de mensagens, diferentes subconjuntos esto sendo traduzidos no ovo e no embrio (Young e Raff, 1979; Mermod et al., 1980; Rosenthal
et al., 1990; Taylor e Smith, 1985). A pergunta ento se torna, Como mRNAS que
estavam dormentes no citoplasma do ocito repentinamente adquirem a competncia de serem traduzidos?
A Hiptese da Mensagem Materna Mascarada
Essa hiptese sustenta que as mensagens do ocito esto mascaradas fisicamente
pelas protenas, prevenindo os mRNAs se prenderem aos ribossomos. Na maturao ou fecundao, as protenas mascaradoras se desligariam, permitindo ao mRNA
ser traduzido. RNA mensageiro nunca encontrado sem protenas. Porm, o tipo de
protena associada com o RNA pode variar. Spirin, em 1966, props que o mRNA do
ocito estocado em informossomos (informosomes), complexos de ribonucleoprotenas nos quais o mRNA est mascarado. As mensagens mascaradas seriam
incapazes de se ligar aos ribossomos, e assim no seriam traduzidas. Na fecundao,
as protenas mascaradoras seriam liberadas (possivelmente devido s alteraes
inicas ocorrendo durante a fecundao) e a mensagem estaria livre para iniciar a
traduo. Apoio para essa hiptese apareceu rapidamente. Em 1968, Infante e Nemer
acharam que o ovo no-fecundado do ourio-do-mar contm partculas de RNP que
sedimentam mais lentamente que os ribossomos, e Gross e colaboradores (1973)
acharam que essas partculas contm vrios mRNAs.
Apoio para a hiptese da mensagem materna mascarada veio de experimentos
mostrando que enquanto o mRNA do ovo no-fecundado estocado em RNPs no
pode ser traduzido, os mesmos RNAs podiam ser traduzidos se seus RNPs fossem
colocados em solues mimetizando o estado inico mudado do ovo aps a fecundao (Jenkins et al, 1978; Raff, 1980). Foi proposto que o influxo de sdio durante a
fecundao poderia desestabilizar a partcula de RNP, permitindo assim a traduo de
seu mRNA. Tal desmascaramento poderia estar ocorrendo no molusco bivalve Spisula,
no qual os mRNAs codificando a pequena subunidade de ribonucleotdeo redutase e
ciclina A so severamente reprimidos nos ocitos, e eles no so traduzidos at a
fecundao. Dois procedimentos podem desmascarar essas mensagens. Primeiro,
altas concentraes de sal (KCL 0,5 M) permitem a esses mRNAs produzir protenas;
assim tambm o faz a remoo de certas seqncias de bases nas regies 3 notraduzidas dessas mensagens (Figura 12,19; Standart et al., 1990). H regies nas
3UTRs de ambas mensagens que so muito semelhantes, podendo constituir stios
de ligao para uma protena de 82-kDA que se liga 3UTR desses mRNAs (Standart,
1992). Na fecundao, essa protena fosforilada, e parece que a forma fosforilada no
pode mais bloquear a traduo. A fosforilao dessa protena poderia ser conseguida
pela quinase cdc2 que ativada na fecundao (Walker et al., 1996).
Outro apoio para a hiptese da mensagem mascarada vem da anlise da traduo
da mensagem codificando o receptor-1 do fator de crescimento do fibroblasto de
Xenopus. Essa mensagem est presente, mas no traduzida em ocitos em crescimento. Ela comea a ser traduzida quando a progesterona inicia a maturao meitica.
Robbie e colaboradores (1995) mostraram que a nova traduo no depende do
alongamento da cauda poli(A) nem da translocao da mensagem. Ao contrrio,
parece haver uma protena de 43-kDA que est associada com a 3UTR do mRNA
Xfgfr1 e que possivelmente removida quando a progesterona estimula a maturao
do ocito. Essa associao estoca o RNA 5S sob uma forma inativa at ser mais
tarde incorporado em novos ribossomos. Ocitos de anfbios contm protenas
especficas que se ligam a alguns mRNAs mas no a outros (Richter e Smith, 1984;
(A)
(B)
Extrato
RNA
KCI
RNA
antisenso (ug/ml)
Peso molecular (KDa)
Figura 12.19
Desmascarando a pequena subunidade da ribonucleotdeo redutase (RR) em ocitos de moluscos. (A) A

mensagem RR do molusco est presente mas no
traduzida nos ocitos. Extratos de ocitos (pista 1) ou
ovos ativados (pista 2) foram misturados com
ribossomos, fatores de traduo, aminocidos radioativos e traduzidos in vitro. As protenas foram corridas
em um gel, e auto-radiografadas. A protena RR
produzida no extrato do ovo, mas no no extrato do
ocito. Quando o mRNA dos ocitos (Pista 3) e dos
ovos (pista 4) foram isolados e separados de todas as
protenas (por extrao com fenol), a mensagem RR foi
traduzida em ambos os casos. (B) O grau de
desmascaramento depende da presena de uma alta concentrao de sal ou da adio de mRNA antisenso, que
bloqueia o stio ligante de protena da 3UTR. (Segundo Standart et al., 1990.)
Audet et al., 1987; Swiderski e Richter, 1988), mas no sabido se essas protenas
mascaram funcionalmente RNAs endgenos. possvel que essas protenas facilitem a ligao de uma protena mascaradora de RNA geral que se associaria com o
mRNA fazendo com que ele fique intraduzvel. A protena FGRY2 ativa em ocitos de
Xenopus poderia ser uma tal protena mascaradora geral (Bouvet e Wolffe, 1994).
Essa protena se complexa com certos transcritos de ocitos que esto sendo transcritos no ncleo e capaz de silenciar tais mensagens. O desempacotamento
global de tais mensagens na fecundao pode envolver alteraes inicas, a fosforilao de certas protenas, ou mudanas na composio do RNP.
A Hiptese da Cauda Poli(A)
Estudos recentes demonstraram que a poliadenilao alterada crtica para estabelecer o momento da traduo do mRNA do ocito e que essa poliadenilao alterada
regulada pela regio 3 no-traduzida.
A 3UTR pode regular a eficincia da traduo de mensagens do ocito controlando o tamanho da cauda poli(A). Em ocitos, o encurtamento dessa cauda no
condena a mensagem extino. Apenas reprime sua capacidade de ser traduzida
(Hyman e Wormington, 1988). Essa represso muitas vezes temporria. Em ocitos
de camundongo, aqueles mRNAs que esto sendo usados para o crescimento e
metabolismo do ocito retm suas longas caudas poli(A) e so imediatamente traduzidos. Entretanto, aqueles mRNAs que devero ser estocados no ocito para traduo na maturao meitica (logo antes da ovulao) ou na fecundao tendem a
perder a maior parte da suas caudas poli(A) quando entram no citoplasma. Esses
483
484
Ncleo
Ocito
mRNA nuclear poliadenilado
Remoo da
cauda poli(A)
Ocito primrio
imaturo e em
crescimento
Mensagem
Mensagem
Dormente
Recomeo da
meiose
Cauda poli(A)
Ativamente traduzido
Adenilao
Desadenilao
Cauda poli(A)
Ocito em
maturao
Ativamente traduzido
Dormente
Figura 12.20
Modelo para a regulao da traduo dos mRNAs do ocito do camundongo. Os mRNAs a

serem usados no metabolismo do ocito tm seqncias de poliadenilao em suas 3UTRs e
retm suas caudas poli(A). Esses mRNAs so traduzidos at a maturao meitica (logo antes da
ovulao), quando perdem suas caudas poli(A). Aqueles mRNAs que permanecem
traducionalmente dormentes at a maturao meitica tm elementos de poliadenilao citoplasmtica (CPEs), assim como suas seqncias de poliadenilao, e eles perdem suas caudas
poli(A) no citoplasma do ocito imaturo. Quando a maturao meitica comea, as caudas so
restauradas e a traduo dessas mensagens iniciada.
RNAs somente retm entre 15 e 90 resduos de adenilato (Figura 12.20). Na maturao meitica, uma inverso ocorre. Aqueles mRNAs que haviam sido ativamente
traduzidos perdem suas caudas poli(A) e no mais funcionam, enquanto aqueles
mRNAs pouco adenilados que haviam sido estocados, rapidamente adquirem longas caudas poli(A) (150 a 600 adenilatos) e so traduzidos em protenas (Vassalli et
al., 1989; Huarte et al., 1992).
Em mamferos, as mensagens que so traduzidas no ocito imaturo tm uma seqncia padro AAUAAA de poliadenilao. Essas mensagens retm suas caudas
poli(A) at o recomeo da maturao meitica. Nesse momento, suas caudas so
desadeniladas, e se tornam inativas para a traduo. Aqueles mRNAs que iro ser
estocados no citoplasma do ocito imaturo para traduo aps a maturao tm suas
caudas poli(A) cortadas imediatamente aps abandonarem o ncleo. Essas mensagens tem dois sinais em suas 3UTR: a seqncia de poliadenilao AAUAAA e uma
seqncia conhecida como o elemento de poliadenilao citoplasmtica (CPE), tambm chamado de elemento de controle da adenilao (ACE); sua seqncia consensual
em camundongos e rs UUUUUAU (Fox et al., 1989; Bachvarova, 1992; Huarte et al.,
1992). Quando recomea a maturao do ocito, esses transcritos estocados so
novamente poliadenilados (provavelmente pela mesma enzima de poliadenilao encontrada no ncleo) e tornam-se ativos para traduo. A aquisio de uma longa
cauda crtica para o comeo da traduo do mRNA estocado do ocito; o controle
desse alongamento depende da presena ou ausncia de um CPE.
Em ocitos de Xenopus, a histria semelhante porm com algumas variaes.*

Tal como os mRNAs de ocitos de mamferos, uma longa cauda poli(A) necessria
para a traduo da mensagem. Uma troca na traduo de RNA ocorre durante a
maturao. Quando a vescula germinativa (o ncleo haplide) se desintegra para
iniciar a diviso meitica, liberam-se fatores de desadenilao. Os mRNAs sem CPEs
so desadenilados, enquanto as mensagens contendo CPEs so capazes de ser
poliadeniladas (Fox e Wickens, 1990; Varnum e Wormington, 1990; Varnum et al.,
1992). Tanto a seqncia de adenilao como o CPE so necessrios para a ativao
da traduo dessas mensagens, mas em alguns casos, a presena per se de uma
cauda poli(A) no suficiente. Nesses casos o processo de poliadenilao crtico
para a traduo da mensagem. Isto , um mRNA injetado com uma cauda poli(A) prexistente no ser traduzido. possvel que o processo da poliadenilao tambm
remova um inibidor protico que mascara a mensagem (Fox et al., 1989; McGrew et
al., 1989). Existem algumas diferenas entre os CPEs, e essas diferenas podem produzir diferentes padres de poliadenilao nas mensagens que os contm (Paris e
Richter, 1990). Por exemplo, um certo CPE com um trecho de 12 bases U inibe a
poliadenilao daqueles mRNAs que os contm, durante o perodo de maturao do
ocito. Porm, aps a fecundao, os mRNAs contendo esse CPE so poliadenilados
e traduzidos em protenas (Simon et al., 1992).
Isso sugere que h fatores especficos que se ligam a esses CPEs em diferentes
perodos. Joel Richter e colaboradores (Paris et al., 1991; Hake e Richter, 1994) demonstraram que uma protena do ocito de 58k-Da, CPEB, se liga a um CPE especfico
(UUUUUAAU). Essa protena foi isolada por cromatografia de afinidade de RNA, na
qual protenas do ocito de Xenopus foram incubadas com partculas de sefarose
ligada a RNAs contendo um CPE com a seqncia UUUUUAAU. A ligao de CPEB
a esse CPB previne a poliadenilao e pode inibir a traduo dessas mensagens at a
maturao do ocito (logo antes da fecundao). Nesse momento, CPEB fosforilada
por quinase cdc2. (A quinase cdc2 ativada pela progesterona, que estimula o ocito
a reiniciar a meiose antes da fecundao.) Essa fosforilao parece permitir a CEPB
recrutar uma polimerase poli(A) citoplasmtica para a mensagem (Ballantyne et al.,
1995; Gebauer e Richter, 1995). Essas mensagens ficam poliadeniladas e so subseqentemente traduzidas.
A quinase cdc2 (conforme lembramos do Captulo 5) somente ativa quando
complexada com uma ciclina. As protenas ciclinas tambm esto sob regulao para
traduo, e as 3UTRs dos mRNAs das ciclinas determinam os momentos que elas
sero traduzidas. Em ocitos de Xenopus, os mRNAs para ciclinas A1, B1 e B2 tm
todos, caudas poli(A) truncadas. Cinco horas aps o sinal de progesterona (na
primeira metfase meitica), as caudas poli(A) dessas mensagens de ciclina so
alongadas, e comea sua traduo (Sheets et al., 1994). Isso demonstra que avisos
desenvolvimentais podem regular qual conjunto de mRNAs deve tornar-se funcional. Isso mostra tambm que existem cascatas de regulao gnica da traduo
durante as horas precedendo a ativao do ncleo.
A ativao de mensagens pela poliadenilao parece ser um processo de importncia crtica no desenvolvimento. No entanto, ainda no sabemos porque
caudas poli(A) curtas no so capazes de iniciar a traduo, enquanto caudas
*As funes das seqncias poli(A) e CPEs diferem entre ocitos de camundongo e de r. Nos
ocitos de r, a desadenilao que ocorre na maturao o estado de ausncia, e desadenilao
e inativao para traduo ocorrem, a no ser que CPE esteja presente. A poliadenilao ir ativar
a mensagem mascarada e manter a traduo dos mRNAs associados aos polissomos. Em ocitos
de camundongo, o CPE controla tanto a poliadenilao como a desadenilao. Em ocitos
imaturos, mensagens sem CPE so imediatamente traduzidas, enquanto mRNAs contendo CPE
so desadenilados e inativados para a traduo. Na maturao, o sistema do camundongo torna-se
semelhante ao de Xenopus, e os RNAs contendo CPE so agora poliadenilados e ativados para
traduo (Huarte et al., 1992).
485
486
Figura 12.21
[3H] Valina incorporada na protena (cpm x 103)
Evidncia da ineficincia da sntese protica em nveis de pH pr-fecundao. O sistema de

traduo in vitro feito de ovos no-fecundados mantido a pH 6.9 ou dializado para pH 7.4.
Mensagens endgenas so traduzidas muito mais eficientemente no pH ps-fecundao. (Segundo Winkler e Steinhardt, 1981.)
maiores o podem. Uma possibilidade (Kuge e Richter, 1995) que a adio de

3poli(A) estimula a metilao do cap 5. Eles encontraram que a maturao
meitica estimulada por progesterona causava a metilao de caps de mRNA, e
que essa metilao podia ser inibida prevenindo-se a poliadenilao. Assim, os
terminais 3 e 5 da mensagem parecem interagir. Outra possibilidade (Hentze, 1997)
que a cauda poli(A) se ligue a um fator de inibio na subunidade ribossmica
40S para estimular a traduo.
A Hiptese da Eficincia da Traduo
Tempo (minutos)
Os modelos precedentes da regulao da traduo assumem que o aparelho de

traduo capaz de traduzir eficientemente qualquer mensagem, mas que o mRNA
e os ribossomos so conservados separados por meios fsicos ou qumicos. Isso
no precisa ser o caso. O baixo pH inicial do ocito por si mesmo capaz de
impedir a sntese protica. Conforme discutido no Captulo 4, h uma dramtica
liberao de ons de hidrognio durante a fecundao do ovo do ourio-do-mar,
resultando em uma elevao do pH citoplasmtico. Quando Winkler e Steinhardt
(1981) aumentaram o pH de um lisado de ocitos (pH 6.9) para aquele do zigoto
(pH 7.4), eles obtiveram um surto de sntese de protena semelhante aquele observado durante a fecundao (Figura 12.21).
Hille e colegas (1985; Danilchik et al., 1986) sugeriram que a mudana de pH ativa
o aparelho de traduo do ovo. Ribossomos e fatores de iniciao derivados de
ovos no-fecundados eram menos ativos na traduo que aqueles derivados de
ovos fecundados. Ainda mais, a injeo de mensagem exgena de globina em ovos
no-fecundados no aumentou a quantidade de protena sendo sintetizada. O mRNA
da globina estava sendo traduzido s custas de outras mensagens, sugerindo que
h uma quantidade limitada de alguma poro do aparelho tradutor. O fator limitante
, provavelmente, um fator iniciador da traduo. A adio de eIF2B (o fator reciclante
ligante de GTP) ou eIF4F (que contm protenas cap ligantes) a um lisado preparado
de ovos no fecundados aumentou a eficincia tradutora desse lisado (Colin et al.,
1987; Lopo et al., 1988). A alcalinizao do citoplasma do ovo pode servir tanto para
desmascarar o mRNA (fisicamente ou atravs da poliadenilao) como para ativar
fatores de iniciao. Apoio para essa noo vem de Winkler e colegas (1985; KelsoWinemiller e Winkler, 1991), que viram aumentar de trs vezes a ligao do mRNA a
ribossomos aps elevao do pH.
Outros sistemas de ativao do mRNA:
Mensagens sem Cap e Mensagens Seqestradas
mRNA SEM cap. Os terminais 3 e 5 modificados do RNA mensageiro so necess-
rios para a traduo eficiente. J vimos como diferenas no comprimento da cauda

3poli(A) pode efetuar traduo diferencial de RNA em ocitos de Xenopus e Spisula.
Certas mariposas usam um mecanismo para controle de traduo envolvendo mudanas no cap 5 (Kastern et al., 1982). Para serem traduzidas eficientemente,
quase todas as mensagens eucariticas necessitam de um cap de 7-metilguanosina
em seus terminais 5 (Shatkin, 1976). As mensagens armazenadas da lagarta chifruda
do tabaco tm um cap no-metilado. A guanosina est presente, mas o grupo
metila no foi adicionado. Tais mensagens no so traduzidas em protenas em um

sistema livre de clulas. Porm, na fecundao, h um surto de metilao nesses
ocitos, e o caps so completados. Os mRNAs com os cap completos so ento
capazes de se ligar aos ribossomos e iniciar a traduo. Dados sobre mensagens
artificiais sugerem que estruturas secundrias (como alas tipo grampos de cabelo)
na regio 5 no-traduzida, tambm podem regular o perodo da traduo do RNA no
ocito (Fu et al., 1991).
mRNA SEQESTRADO. Em alguns casos, o aparelho sintetizador de protenas est
compartimentalizado, impedindo que o mRNA (dentro do RNP) chegue perto dos
ribossomos (Moon et al., 1982). Os mRNAs das histonas do ocito do ourio-domar parecem ser regulados por esse tipo de restrio. As mensagens de histona do
ocito no so encontradas no citoplasma. Em lugar disso, esto localizadas no
grande proncleo do ovo no-fecundado. Somente quando o proncleo se desintegra no fim da fecundao, o mRNA da histona entra no citoplasma (Figura 12.22; De
Leon et al., 1983). Isso pode no ser o caso para outras mensagens. Menos de 0.1
porcento do mRNA total do ovo no-fecundado se encontra no proncleo (Angerer
e Angerer, 1981; Showman et al., 1982). A observao de que algumas mensagens
maternas assim como ribossomos individuais esto ligadas ao citoesqueleto (Moon
et al., 1983) sugere que o citoesqueleto tambm pode separar mRNAs dos ribossomos.
possvel que todos esses mecanismos de controle da traduo sejam utilizados no
mesmo ocito. O ovo desenvolveu numerosos meios de regular a traduo do seu
mRNA armazenado, e as espcies esto habilitadas a usar vrios desses mecanismos ao mesmo tempo.
70 minutos
80 minutos
80 minutos
90 minutos
Figura 12.22
Seqestro das mensagens de histona do ocito do ourio-do-mar. A sonda de cDNA que reconhece a mensagem da histona hibridizada para ovos de ourio-do-mar fixados em vrios
perodos ps-fecundao. A auto-radiografia mostra a mensagem a ser seqestrada no proncleo
materno at sua degradao 80-90 minutos aps a entrada do espermatozide. (Segundo DeLeon
et al., 1983, cortesia de L. e R. Angerer.)
487
488
&
Especulaes
Densidade da banda de tRNA ()
Frao de clulas
com membranas
mveis
Densidade da banda
Sntese de RNA
Sntese de RNA (gros por ncleo) (o)
PERODO de eventos do desenvolvimento difere enormemente

entre espcies animais. Vinte e
quatro horas aps a fecundao, larvas de
Drosophila eclodiram e esto ocupadas
comendo; embries de anfbios esto ou
nos estgios de gstrula tardia, ou nurula
precoce; e o embrio do ourio-do-mar
uma blstula tardia ou gstrula precoce
com centenas de clulas. Embries de mamferos no se apressam. Aps 24 horas
de desenvolvimento, um zigoto de camundongo somente se dividiu uma vez, e o ovo
humano ainda tem 6 horas at sua primeira
clivagem. Os organismos tambm diferem
no perodo e aspereza, da transio do controle citoplasmtico para a regulao do
desenvolvimento pela transcrio nuclear.
Na maioria das espcies estudadas, o embrio precoce um mundo de RNA onde
o genoma nada conta (Wickens, 1992). Em
outros embries, a transcrio nuclear se
inicia logo aps a fecundao, e novos produtos dos genes so vistos durante o primeiro ciclo celular (Tabela 12.4).
Embries de Xenopus parecem se desenvolver atravs do estgio de clivagem
sem necessidade de transcrio nuclear.
Conforme mencionado no Captulo 5, o ncleo essencialmente inativo at a transio da blstula intermediria ao fim da 12
diviso celular (Figura 12.23; Newport e
Kirschner, 1982). At o momento dessa tran-
Frao de clulas mveis ()
A Ativao do Genoma Embrionrio
Clivagem
Tempo (minuto)
Figura 12.23
Ativao da transcrio e motilidade da membrana em Xenopus aps a dcima segunda diviso.

A transcrio foi avaliada por auto-radiografia, pelo nmero de gros de prata sobre os ncleos
de embries imersos em uridina radioativa e pela ativao de um gene de tRNA clonado, cujo
produto radioativo podia ser analisado medindo-se a densidade da banda no gel auto-radiografado. A motilidade foi avaliada determinando-se a frao de clulas mostrando pseudpodos ou
vesculas em registros de vdeo. (Segundo Davidson, 1986).
sio na blstula intermediria, o desenvolvimento emprega os materiais estocados no

citoplasma do ocito. Finalmente, a transcrio iniciada no ncleo do embrio. Aps
a transio da blstula intermediria, diferentes genes so acionados em momentos
diferentes, mas os genes ativados primeiro
podem estar sendo ativados por fatores maternos no ocito. A protena OZ1 um fator
de transcrio produzido no ocito em de-
senvolvimento. Ele liga-se uma seqncia

de DNA de 14 pares de bases encontrada
nos promotores de vrios genes que so
acionados no momento, ou pouco depois
da transio da blstula intermediria
(Ovsenek et al., 1992). Se outros genes
(como o gene -globina de Xenopus) estiverem conectados a essa seqncia, eles
ficaro expressos na transio da blstula
intermediria; porm, se a seqncia for
Tabela 12.4 Ativao de genomas embrionrios e durao do mRNA materno funcional

Organismo
Longevidade da
mensagem materna funcional
Estgio tardio de 1-clula (11-17 h)

Clivagem precoce ( 32 clulas) da
blstula intermediria (3 h)
Zigoto (estgio pronuclear)
( 0.5 h)
Mrula precoce de 8-16 clulas

(dia 3)
12a clivagem (4000 clulas)
da blstula intermediria (7 h)
Blstula intermediria
(~128 clulas) (11h)
Estgio de clivagem
de 4 clulas (dia 2-4)
Estgio de nurula
(15-30 h)
Blstula tardia
(15 h)
Blastoderma sincicial aps a

10a diviso nuclear (2.5 h)
Blastoderma celular aps a

14a diviso nuclear (3.5 h)
Organognese intermediria
(~15 h)
Perodo da maior
nova transcrio nucleara
Mamfero
(Mus musculus)
Anfbio
(Xenopus laevis)
Equinodermo
(S. purpuratus e
outros ouriosdo-mar)
Inseto
(Drosophila
melanogaster)
Perodo da primeira transcrio

observvel do ncleoa
Fonte: Adaptado de Wilt, 1964; Woodland e Ballantine, 1980; Clegg e Piko, 1983; Gilbert e Solter, 1985; Poccia et al., 1985; Weir e Kornberg,
1985; Davidson, 1986; Edgar e Schubiger, 1986; Shiokawa et al., 1989.
a Perodos indicam incubao nas temperaturas apropriadas.
mutada eles no sero corretamente expressados (Figura 12.24). possvel que essa
protena OZ1 seja por si mesma inativa, at
que algum outro fator (talvez associado com
o alongamento do ciclo celular) a ative.
O conceito de que protenas maternas
podem ativar o genoma durante a transio
da blstula intermediria apoiado por investigaes sobre o mutante o da salamandra axolotle. Essa uma mutao de efeito
materno no qual fmeas homozigotas produzem ovos que so fecundados com sucesso sendo completamente normais at os
estgios de clivagem tardia e blstula precoce (Briggs e Cassens, 1966). Na blstula
intermediria, ovos descarregados por uma
fmea o/o tm mitoses mais lentas e continuam a formar um lbio do blastporo dorsal, mas sempre param na gastrulao.
Malacinski (1971) e Carroll (1974) mostraram que em embries de fmeas do tipo selvagem, RNA novo e sntese protica comeam nesse estgio de blstula intermediria.
No entanto, as blstulas intermedirias de
ovos de mes o/o no sofrem esse surto de
sntese de protena e tm um padro de protenas idntico aquele produzido por zigotos
enucleados (Figura 12.25). Briggs e Cassens
(1966) demonstraram que os embries de
mes o/o no tinham um fator que ativa o
genoma nuclear da blstula intermediria. Na
ausncia de tal fator, o nico desenvolvimento
que ocorre aquele que pode ser provido
pelo mRNA estocado no ocito. Em anfbios, h material estocado no ocito suficiente
para permitir ao embrio entrar na gastrulao. Porm, sem a sntese de novo RNA, no
pode ocorrer ulterior desenvolvimento.
Em Drosophila tambm parece haver
uma transio da blstula intermediria dos
mRNAs e protenas do citoplasma do ocito
para a transcrio nuclear. Essa transio
primeiro vista aps a dcima diviso nuclear. Esse o primeiro ciclo com uma fase G2,
que aumenta de comprimento entre 10 minutos aps o dcimo ciclo at 60 minutos
aps o dcimo quarto. Na fase G2 do dcimo quarto ciclo, o genoma est transcrevendo no mais alto nvel de atividade visto
durante a embriognese (Anderson e
Lengyel, 1979; Weir e Kornberg, 1985). Edgar e Schubiger (1986) mostraram que ncleos de Drosophila tornam-se competentes para transcrever no ciclo 10 mas que a
maioria dos genes necessita de fases G2 mais
longas para ficarem ativados. A alta atividade transcricional de embries de ciclo 14
pode ser induzida prematuramente, esten-
Auto-radiograma
489
Sem molde
Sem intensificador MBT
globina
Intensificador MBT
tipo selvagem
globina
Intensificador
MBT mutante
globina
Outro intensificador
MBT mutante
globina
Figura 12.24
Efeito do intensificador da transio da blstula intermediria (MBT) ligante de OZ1. A seqncia de DNA que ativa a transcrio na MBT para o gene GS17 de Xenopus laevis foi colocada
em um gene da -globina e injetada em ocitos de Xenopus. Essa construo de globina ficou
expressa no estgio de blstula intermediria. Genes de globina sem esse intensificador ou com
um intensificador MBT mutado no mostraram expresso significativa nesse estgio. (Segundo
Ovsenek et al., 1992.)
dendo-se artificialmente o perodo G2 de

embries jovens com cicloheximida. Essa
ativao pode ser conseguida com embries to jovens como os do dcimo ciclo,
mas no antes. Parece, portanto, que a maioria dos genes ficam capacitados para a ativao durante o ciclo 10, mas no iniciam
sua transcrio at o ciclo 14.
Ourios-do-mar no apresentam uma

transio da blstula intermediria distinta. Embora seus ovos enucleados possam
se desenvolver atravs dos estgios de
blstula, e embora certamente h um surto de transcrio nuclear a partir dos ncleos da blstula intermediria, no parece haver perodo no desenvolvimento do
Figura 12.25
Incorporao de [3H]uridina no RNA dos embries de axolotles tipo selvagem e mutante o/o.
Embries em estgio de blstula foram incubados no precursor RNA radioativo por 3 horas,
lavados, fixados, corados e observados por auto-radiografia. (A) Clulas embrionrias normais
mostrando intensa radioatividade, indicando sntese de RNA. (B) Embrio de uma fmea o/o.
Colorao est presente, mas no se v marcao significativa, indicando que pouca ou nenhuma
transcrio havia ocorrido. (Segundo Carroll, 1974.)
490
ourio-do-mar em que o ncleo embrionrio no esteja funcionando. Baixos nveis de transcrio (incluindo novas mensagens de histonas) podem ser vistos em
proncleos mesmo antes de sua fuso
(Poccia et al., 1985). Essas mensagens recm-transcritas entram no pool maior
do mRNA materno. A cromatina das quatro primeiras clivagens feita primariamente com histonas estocadas no citoplasma do ocito e histonas sintetizadas
de mensagens maternas. Do estgio de
16 clulas em diante, porm, a maioria das
histonas sintetizada de mensagens
transcritas de ncleos de clulas embrionrias (Goustin e Wilt, 1981). Esse padro
est em contraste marcado com aquele de
embries de Xenopus, nos quais um grande pool de protena histona estocada
pela me, e um grande suprimento de mensagem histona estocada no ocito so utilizados por milhares de clulas.
Embries de mamferos, ascdios,
nematides e moluscos tambm parecem
iniciar a transcrio dentro do primeiro
ciclo celular (Schauer e Wood, 1990). Porm, tal como em muitos eventos do desenvolvimento, no se pode dizer que os
mamferos tenham aperfeioado uma estratgia uniforme. No grupo mamfero mais
estudado, os camundongos, o genoma
embrionrio extremamente ativo duran-
te o estgio de 2 clulas. Entre os estgios de 1 e 2 clulas do embrio, mais de

dois teros das protenas sofrem uma alterao de cinco vezes em sua sntese
(Latham et al., 1991, 1992). Quando cultivadas com o inibidor da transcrio aaminitina (que bloqueia a RNA polimerase II), ovos de camundongo so bloqueados no estgio bicelular (Flach et al., 1982).
Em camundongos, os mRNAs maternos
persistem por cerca de dois dias- a grosso modo, o mesmo tempo que em outros
filos- e em seguida, durante o segundo
dia, os mensageiros maternos so rapidamente degradados (Clegg e Piko, 1983;
Paynton et al., 1988). medida que os
produtos gnicos codificados pelas mensagens maternas decaem, eles so substitudos por novas protenas produzidas
de mRNA que est sendo recm-transcrito do ncleo. Na maioria dos casos, os
cromossomos derivados do espermatozide so provavelmente ativados simultaneamente com cromossomos derivados do
ovo (Gilbert e Solter, 1985). Latham e colegas (1992) transplantaram ncleos para diferentes citoplasmas e demonstraram que
o citoplasma muda durante a parte tardia
do estgio de 1 clula. O citoplasma da
clula precoce do embrio de 1 clula no
suporta a transcrio de genes de ncleos de embries mais tardios. Porm, o ci-
toplasma de embries tardios de 1 clula

o suporta. Como inibidores da protenaquinase (PKA) dependente de cAMP inibem a competncia do citoplasma para
suportar a transcrio, possvel que a
ativao de PKA seja essencial para a
aquisio pelo citoplasma de seu estado
transcricionalmente permissivo. Outros
mamferos no seguem necessariamente
o mesmo programa. A sntese do mRNA
humano primeiro vista no estgio de 4
clulas, e inibidores da transcrio bloqueiam o desenvolvimento no estgio de
4- a 8-clulas. Em vacas e ovelhas, a atividade transcricional vista nos estgios de 8- a 16-clulas (Braude et al., 1988;
Telford et al., 1990).
Em todas as espcies animais observadas, h um perodo de tempo em que
os fenmenos do desenvolvimento precoce so controlados pelas mensagens
e protenas estocadas no citoplasma do
ocito. Na maioria das espcies (os mamferos sendo a exceo), o genoma nuclear ativado muito antes das mensagens maternas serem degradadas, fazendo com que ambos conjuntos de mRNAs
sejam traduzidos simultaneamente. Finalmente, quando as mensagens maternas
tiverem sido degradadas nos dias 1 e 2,
os transcritos do genoma embrionrio se
tornaro mais importantes.
Regulao dos genes da traduo em larvas e adultos

O controle da traduo no existe somente para ovos e seus embries precoces.
Estudos recentes mostraram o uso generalizado da regulao dos genes da traduo
para vrios processos crticos do desenvolvimento mais tardio. Tal como em estudos
sobre a embriognese precoce, as 3UTR mostraram ter um papel crtico. Essa regio
da mensagem por muito tempo vista como terra perdida de informao gentica
(Wickens, 1992) est comeando a se tornar uma das reas mais interessantes da
regulao gnica do desenvolvimento.
Determinao de Gametas em C. elegans
Um papel particularmente dramtico para a 3UTR no mRNA mascarado visto em
Caenorhabditis elegans. Esse verme nematide tem um corpo feminino, mas hermafrodita, produzindo tanto espermatozide como vulo em perodos diferentes. As
primeiras clulas germinativas a se diferenciarem no nematide tornam-se espermatozide, os quais so armazenados no tero para uso posterior. Aps a quarta muda (de
larva para adulto), as clulas germinativas deixam de produzir espermatozide e comeam a produzir vulos. Esses vulos iro finalmente ser fecundados pelo espermatozide estocado. O processo determinando qual o caminho a clula germinativa segue
para espermatozide ou para vulo depende da represso da traduo de mensagens
diferentes. A iniciao da formao de espermatozide conseguida pela represso da
491
mensagem tra-2. A protena TRA-2 essencial para o desenvolvimento de vulos e

clulas do organismo feminino, e a represso da traduo do mRNA tra-2 em clulas
germinativas faz com que elas se tornem espermatozide. A 3UTR dessa mensagem
contm duas regies de 28 nucleotdeos, cada uma das quais parece ligar uma protena
repressora putativa que sintetizada durante estgios larvais associados espermatognese. Se essas regies forem mutadas, a traduo de mRNA tra-2 no reprimida,
nenhum espermatozide produzido, e o nematide fmea funcional em lugar de
hermafrodita (Evans et al., 1992). Uma protena que se liga a essas regies foi isolada;
e pode mediar a represso da traduo (Figura 12.26; Goodwin et al., 1993).
A histria no termina aqui. A mudana de espermatognese para ovognese
tambm requer a supresso da traduo de mRNA fem-3 atravs de sua 3UTR. A
protena FEM-3 crtica para a especificao de clulas do organismo masculino e
produo de espermatozide. A transcrio do gene fem-3 inibida pela protena
TRA-2, mas a represso de mensagens fem-3 existentes tambm necessria. A represso da traduo parece ser afetada pela ligao de um inibidor de traduo pela
3UTR do mRNA fem-3 (veja Figura 12.26; Ahringer and Kimble, 1991; Evans et al.,
1992). Assim, a iniciao da espermatognese em nematides hermafroditas e a transio de espermatognese para ovognese parece ser regulada pela represso da traduo atravs da 3UTR.
no-traduzido
espermatozides
traduzido
traduzido
vulos
no-traduzido
Figura 12.26
A transio de espermatognese para oognese durante o quarto instar da larva de C. elegans

regulada pela traduo das mensagens tra-2 e
fem-3. Em ambos os casos, o bloqueio da traduo ocorre atravs da ligao de uma protena inibidora respectiva 3 UTR.
RNA Antisenso Natural

Parece que tudo que as protenas podem fazer, os RNAs tambm podem. Se protenas
podem regular a traduo ligando-se a stios especficos na 3UTR de RNAs mensageiros, assim tambm o podem fazer RNAs pequenos. O RNA de controle da traduo foi originalmente proposto por Bester e colaboradores, em 1975. Desde ento, foi
encontrado em C. elegans e pintos.
Caenorhabditis elegans faz jus a seu nome, tendo desenvolvido uma soluo particularmente elegante para o problema do controle da expresso gnica larval (Lee et al.,
1993; Wightman et al., 1993). Altos nveis do fator de transcrio LIN-14 especificam a
sntese protica em rgos larvais precoces. Depois disso, a protena LIN-4 no mais
vista, embora mensagens lin-4 sejam detectadas atravs de todo o desenvolvimento. C.
elegans capaz de inibir a sntese de LIN-14 de seu mRNA, ativando o gene lin-4. Em
mutaes de perda-de-funo de lin-4, a protena LIN-14 sintetizada continuamente, e
o desenvolvimento precoce do nematide interrompido. O gene lin-4 no codifica
protena alguma. Em vez disso, ele codifica dois pequenos mRNAs (o mais abundante
tendo 25 nucleotdeos de comprimento, o outro continuando por mais 40 nucleotdeos)
Figura 12.27
Modelo hipottico para a regulao do mRNA

lin-14 pelos mRNAs lin-4. (Isso no foi confirmado experimentalmente.) O gene lin-4 no
produz um mRNA. Em lugar disso, ele produz
RNAs pequenos que no produzem protenas.
Esses RNAs so complementares a uma seqncia repetida na 3UTR do mRNA lin-14.
(Segundo Wickens e Takayama, 1994.)
Seqncia de codificao
Poli(A)
492
que so complementares a um stio imperfeitamente repetido na 3UTR de lin-14. A

Figura 12.27 mostra um esquema hipottico do que pode estar acontecendo. Parece que
a ligao desses transcritos lin-4 para a 3UTR do mRNA lin-14 no sinaliza a destruio da mensagem; antes, previne a mensagem de ser traduzida. [RNA5.html]
No embrio do pinto, mRNA antisenso visto regular a sntese do fator do
crescimento do fibroblasto bsico (FGF2). Alguns tecidos (como o mesonefro)
tm mensagens Fgf2 sem o transcrito antisenso, enquanto outros tecidos (como
uma linha no-diferenciada do mesoderma de membros) contm tanto o mRNA de
Fgf2 como seu complemento antisenso. Acredita-se que o RNA antisenso conduz
a sua prpria degradao e a do transcrito Fgf2 (Kimelman e Kirschner, 1989;
Savage e Fallon, 1995).
Disjuntores do Controle da Traduo
A regulao oposta e coordenada das duas principais protenas ligantes de ferro
de mamferos, ferritina e o receptor de transferrina, foi recentemente elucidada
(veja Klausner e Harford, 1989; Klausner at al., 1993). Os mRNAs tanto da ferritina
como do receptor de transferrina contm regies que ligam uma protena ligante
responsiva ao ferro (IRE-BP). A mensagem da ferritina tem essa seqncia em sua
seqncia lder (5 para a regio codificadora de protena), enquanto a mensagem
do receptor de transferrina contm duas dessas seqncias na sua regio 3 notraduzida. Quando o ferro celular est em baixo suprimento, a protena ligante de
ferro no pode ligar o ferro e encontra-se em uma conformao para se ligar a
esses mRNAs. Quando se liga seqncia lder da mensagem da ferritina, ela
bloqueia sua traduo, impedindo assim a sntese dessa protena de armazenagem
de ferro. Simultaneamente a protena se liga ao terminal 3 da mensagem do receptor de transferrina, estabilizando-a contra a degradao e permitindo a produo
de mais receptores de transferrina. Os receptores de transferrina trazem mais ferro
para o interior da clula (Figura 12.28).
mRNA da FERRITINA
IRE-BP presente
IRE-BP ausente
Seqncias de reconhecimento para
protena reguladora ligante de ferro
(IRE-BP)
Regio codificadora
de protena
Traduo
de mRNA
IRE-BP liga-se seqncia

de reconhecimento
Sem traduo de mRNA
mRNA DO RECEPTOR DE TRANSFERRINA

IRE-BP ausente
Figura 12.28
Regulao da traduo coordenada e oposta

da ferritina e do receptor da transferrina.
Ambas mensagens contm regies que so
reconhecidas por uma protena reguladora
ligante de ferro (IRE-BP). Na ausncia de ferro intracelular, essa protena se liga a essas
mensagens inibindo a traduo do mRNA da
ferritina e estabilizando o mRNA para o receptor de transferrina. (Segundo Klausner e
Harford, 1989.)
IRE-BP presente
Seqncias de
reconhecimento para IRE-BP
Regio
codificadora
de protena
Degradao de mRNA
Sem degradao de mRNA
493
Editorao do RNA
Um dos mecanismos mais inesperados do controle da traduo foi visto recentemente na regulao das protenas apolipoprotenas-B. Protenas apo-B so componentes de protenas sricas portadoras de lipdios, e so consideradas como tendo
um papel preponderante na gnese da arteriosclerose. Apo-B48 (48-kDA) sintetizada no intestino e torna-se parte do complexo de quilomcrons necessrios para
absoro e transporte do colesterol e triglicerdeos dietticos. Apo-B100 (100-KDA)
produzida no fgado e a principal componente das protenas portadoras de lipdios
de densidade muito-baixa, baixa e intermediria. Apo-B100 e Apo-B48 so transcritas do mesmo gene e no se nota processamento diferencial algum para gerar mRNAs
diferentes para essas duas protenas. A anlise dos DNAs de Apo-B indica que a
mensagem apo-B no fgado codifica todo o peptdeo Apo-B100. A mensagem intestinal, porm, difere daquela do fgado por apenas uma base. Uma transio C-paraU ocorreu, mudando um cdon normal de glutamina (CAA) para um cdon terminador
(UAA) no cdon 2153. Essa diferena resulta na formao de uma protena Apo-B48
mais curta no intestino (Chen et al, 1987; Powell et al., 1987). Essa editorao do RNA
um exemplo de uma situao em que uma mudana especfica de base feita em um
RNA existente, com isso alterando a mensagem. O transcrito primrio do gene apoB no parece ser editado, e a editorao C-para-U pode estar sendo conseguida por
um fator contido no ncleo. Por isso, Lau e colegas (1991) concluram que essa
editorao do RNA realizada durante os passos de processamento do RNA. A
protena responsvel por essa editorao a citidina desaminase (Navaratnam et al.,
1995); e pela alterao da estrutura seqencial do RNA prximo da citosina editada,
Chen e colaboradores (1990) descobriram duas regies que so crticas para a
editorao. Uma a regio de nucleotdeos conservada por vrias espcies de mamferos, e a outra uma seqncia espcie-especfica mais a jusante. Eles postulam
uma enzima que reconhece essas duas regies e coloca seu stio cataltico sobre a
citosina em questo. A desaminao dessa citosina converte-a em um resduo de
uridina (Figura 12.29). At agora tem sido um axioma da biologia molecular que a
seqncia de nucleotdeos de uma mensagem, uma vez transcrita, no pode ser
alterada. Embora a editorao do RNA seja um evento excepcionalmente raro,
tambm visto em certas mensagens de organelas (veja Scott, 1995; Simpson e
Thiemann, 1995), na alterao da permeabilidade do on de clcio de certos canais
inicos com portal de glutamato, durante o desenvolvimento do crebro de mamferos (Sommer et al., 1991; Higuchi et al., 1993), e na alterao do fator de transcrio
WT1 (Sharma et al., 1994).
Enzima editora
Figura 12.29
mRNA Apo-B 5
NH 3
Stio cataltico
No espcieespecfico
Espcie-especfico
Stio de reconhecimento
Modelo de um mecanismo enzimtico que

poderia permitir a desaminao de uma
citosina especfica do mRNA apo-B. Duas
regies so necessrias para a editorao do
RNA: uma regio que conservada em vrios mamferos e um elemento espcie-especfico que tem uma estrutura tipo grampo de
cabelo que poderia ser reconhecida pela
enzima. (Segundo Chan, 1993.)
494
Subunidades
Heme
Heme
Heme
Heme
Subunidades
Figura 12.30
A estrutura da hemoglobina do humano adulto, com quatro cadeias polipeptdicas (duas , duas
) e quatro molculas de heme. (Segundo Dickerson e Geis, 1983.)
Controle da traduo e sntese protica coordenada:

Produo de Hemoglobina
Succinil coenzima
A + glicina
sintase DALA
Inibio
cido aminolevulnico
Porfobilingeno
Protoporfirina IX
Heme
Figura 12.31
Regulao por retroalimentao (feedback) da

sntese do heme. (Segundo Harris, 1975.)
Um dos principais problemas da regulao gnica a produo coordenada de vrios

produtos de diferentes regies do genoma. Quando uma clula sangnea vermelha
em desenvolvimento sintetiza hemoglobina, ela deve garantir que as cadeia de
globina, globina e molculas de heme estejam na relao 2:2:4 (Figura 12.30). Qualquer desvio maior dessa relao resulta em molstias severamente debilitantes.
A molcula de heme parece regular a sntese proporcional dos componentes da
hemoglobina. Esse feito conseguido de duas maneiras. Primeiro, um excesso de
heme (i.e., heme no ligado uma protena como a globina) desliga sua prpria sntese
(Karibian e London, 1965), inativando sintase aminolevulinato (sintase DALA), a
primeira enzima na via de produo de heme (Figura 12.31). Assim, quando existe mais
heme presente do que molculas para o ligar, ele no ser mais produzido. Em segundo
lugar, o excesso de heme estimula a produo da protena globina (Gribble e Schwartz,
1965; Zucker e Schulman, 1968). Quando heme (ou sua forma oxidada, hemina)
adicionado a um sistema de traduo isento de clulas mas que inclui todos os fatores
necessrios para traduzir mRNAs (Tabela 12.5), a sntese da globina muito estimulada (Figura 12.32A). Portanto, se no h globina para ligar o heme, o excesso de heme
desliga sua prpria sntese e estimula a produo de mais globina.
Vrios laboratrios investigaram como uma molcula to pequena como o heme
pode regular a sntese protica. Em 1972, Adamson e colegas demonstraram que o
efeito estimulador do heme na sntese da globina podia ser imitado pela adio ao
sistema de traduo daquelas protenas que esto frouxamente associadas aos
ribossomos. Como tais solues so ricas em fatores de iniciao da traduo, cada
495
Tabela 12.5 Componentes do sistema de traduo in vitro contendo lisato de reticulcitos de coelho
Concentrao
(em 100 l)
Componente
50 l
10 mM
1 mM
0.2 mM
5 mM
10 g
2 mM
Lisato de reticulcitos (1:1)

Tampo tris-HCl (pH 7.6)
ATP
GTP
Fosfato de creatina
Fosfoquinase de creatina
Acetato de magnsio
Concentrao
(em 100 l)
Componente
KCl
Mistura proporcional de aminocidos
[14 C]Leucina
leucina fria
Hemina
H2O para trazer o volume da reao
para 100 l
76 mM
6-170 M
0.8 Ci
26 M
10-30 M
Fonte: Segundo London et al., 1976.
fator foi testado separadamente. Achou-se que o fator 2 de iniciao eucaritica (eIF2)
restaurava a sntese protica para lisatos deficientes de heme no sistema de traduo
(Figura 12.32B). Esse fator de iniciao responsvel pela combinao com o tRNA
iniciador e complex-lo subunidade ribossmica 40S.
Qual, ento, a relao entre heme e eIF2? Para responder a isso, London e colaboradores (Levin et al., 1976; Ranu et al., 1976; Ramaiah et al., 1992) adicionaram
lisatos deficientes de heme a sistemas de traduo suplementados com heme. Eles
acharam que uma poro do lisato deficiente de heme podia realmente deprimir a
sntese da globina no sistema de traduo ao qual ele fora adicionado. Esse achado
indicou que um inibidor estava presente. Essa protena inibidora responsiva ao heme,
HRI, foi isolada e verificou-se que era uma quinase capaz de fosforilar eIF2. A hemina
liga-se a essa quinase, inativando-a (veja Chen e London, 1995).
O eIF2 finalmente ir parar a traduo. Normalmente, uma vez que as subunidades ribossmicas se juntam, o eIF2 liberado como um complexo com GDP
(Raychaudhury et al., 1985). Para o eIF2 ser novamente usado na iniciao, ele
(A)
+Hemina
-Hemina
Tempo (minutos)
[14C]Leucina incorporada (cpm x 10-3)
[14C]Leucina incorporada (cpm x 10-4)
+Hemina
(B)
Sem adies
Tempo (minutos)
Figura 12.32
Regulao da traduo por hemina e pelo fator 2 de iniciao eucaritica. (A) Traduo do
mRNA da globina no sistema de sntese
protica in vitro do reticulcito de coelho. A
incluso de hemina ocasiona uma dramtica
elevao da sntese protica. (B) Efeito da adio do fator 2 de iniciao eucaritica no sistema de traduo in vitro do reticulcito de coelho. O eIF2 elevou o nvel da sntese protica
para perto daquele do sistema estimulado pela
hemina. (A segundo London et al., 1976; B
segundo Clemens et al., 1974.)
496
Figura 12.33
Esquema para o controle da traduo da sntese

da globina. Como um resultado da inativao
pela protena quinase, o eIF2 depletado a no
ser que o heme inative a protena quinase.
Traduo
Subunidade ribossmica 40S

Complexo de iniciao
Protena
quinase ativa
Heme
Protena quinase
inativa
eIF2 - P (Seqestra o
fator de reciclagem)
dever complexar-se com o eIF2B (fator de reciclagem). Esse eIF2B troca GTP por
GDP (veja Figura 12.11), e o complexo eIF2-GTP resultante capaz de entrar num
outro ciclo de iniciao. Porm, se a subunidade do eIF2 for fosforilada, o fator de
reciclagem eIF2B se liga mas no consegue se despregar (Gross et al., 1985; Thomas
et al., 1985). Por fim, todo eIF2B (cuja concentrao 10- a 20-vezes mais baixa que
aquela do eIF2) ligado a esses complexos, e a traduo cessa. A adio de eIF2B a
lisatos deficientes em heme restitui a sntese protica aos nveis dos sistemas
suplementados com heme (Grace et al., 1984). Heme em excesso capaz de se ligar
protena quinase, inativando-a (Fagard e London, 1981). Quinase inativada no ir
fosforilar eIF2, fazendo com que a traduo prossiga. Assim, enquanto heme estiver presente, a sntese da globina continuar (Figura 12.33).
A histria do controle da traduo da sntese da globina no termina aqui. Conforme discutimos no Captulo 11, h quatro genes globina ativos por clula diplide e
somente dois genes globina ativos. Se cada gene fosse transcrito e traduzido com
a mesma velocidade, esperar-se-ia duas vezes mais molculas globina que globina.
Isso claramente no o caso. Encontra-se uma relao 1.4:1 de mRNA :, mas uma
relao 1:1 de protenas (Lodish, 1971). A igualizao das protenas parece envolver
regulao da traduo.
Kabat e Chappell (1977) sugeriram que a igualizao feita no estgio de iniciao da traduo. Eles mostraram que o mRNA da globina compete com a mensagem da globina para fatores de iniciao e que a mensagem da globina parece
ser o melhor competidor. A mensagem da globina reconhecida mais eficientemente pelos fatores de iniciao sendo por isso traduzida mais freqentemente.
Quando os dois mRNAs esto presentes em quantidades iguais, mas com um suprimento de fatores de iniciao severamente limitante, somente 3% da protena resultante era globina. Porm, quando o mRNA no-fracionado (mensagens e
globinas de clulas lisadas) foi adicionado a um excesso de tais fatores de iniciao,
todos os mRNAs foram traduzidos com igual eficincia e a relao : resultante foi
de 1.4:1. A protena cap ligante foi implicada como sendo o fator responsvel pela
discriminao entre os dois tipos de mensagem da globina (Ray et al., 1983; Sarkar et
al., 1984). Enquanto ainda no conhecido como se d a discriminao, conhecido
que a estrutura secundria da seqncia lder 5 afeta a eficincia da traduo (Pelletier
e Sonenberg, 1985). Como pode ser visto na Figura 12.34, os terminais 5 das mensagens e globina diferem significativamente. Assim, as razes apropriadas de
globina e globina, e heme so estabelecidas no passo de iniciao da traduo.
Embora a sntese da hemoglobina envolva regulao nos nveis de transcrio e
processamento de RNA, a molcula final construda atravs da coordenao fina
ao nvel da traduo.
mRNA da globina
497
mRNA da globina
Fator 12.34
Ao mesmo tempo, outro notvel exemplo da regulao da traduo est ocorrendo

dentro da clula vermelha do sangue. O mRNA codificando a enzima 15-lipoxigenase
(15-LOX) transcrito durante os estgios precoces do desenvolvimento da clula
vermelha do sangue na medula ssea, mas ele somente traduzido quando a clula
vermelha do sangue est a ponto de entrar na circulao perifrica. Essa enzima
responsvel pela digesto das mitocndrias durante os ltimos estgios da formao
da clula vermelha sangnea. A 3 UTR do mRNA 15-lox tem 10 repeties acopladas
de uma seqncia rica em pirimidina que liga uma protena de 48-kDA especfica para
eritrcitos. Essa protena reprime a traduo da mensagem 15-lox at o eritrcito estar
pronto para entrar na circulao (Ostarek-Lederer et al., 1994). No ainda conhecido
como essa protena repressora regulada durante o desenvolvimento da clula vermelha sangnea.
Eplogo: Regulao Ps-traduo

O controle da traduo, portanto, um mecanismo importante e largamente empregado para regular a expresso gnica durante o desenvolvimento. Ele pode ser usado
para ativar um certo conjunto de mRNAs existente em um certo momento ou para
regular a relao pela qual diferentes mRNAs competitivos podem ser traduzidos. Os
animais desenvolveram vrios mecanismos pelos quais mRNAs podem ser armazenados no ocito para posterior uso durante a embriognese precoce. As bases moleculares desses mecanismos reguladores da traduo esto sendo estudadas.
Porm, a histria ainda no acabou quando o peptdeo sintetizado. Uma vez
que uma protena tiver sido produzida, ela torna-se parte de um nvel mais elevado
de organizao. Ela pode tornar-se parte da estrutura de suporte da clula, ou ela
pode se envolver em um dos variados caminhos enzimticos para a sntese ou degradao de metablitos celulares. De qualquer maneira, a protena individual agora
parte de um complexo ecossistema que a integra em um relacionamento com nu-
Provveis estruturas secundrias para os terminais 5 das cadeias de -globina e de globina do camundongo. Os cdons AUG iniciadores da traduo esto coloridos. (Segundo Pavlakis et al., 1980.)
498
merosas outras protenas. Assim, ainda podem ocorrer vrias mudanas que determinam se uma protena est ou no ativa. Em primeiro lugar, algumas protenas
recmsintetizadas so inativas sem ulteriores modificaes que podem envolver a
remoo por clivagem de certos setores inibitrios da protena, ou a ligao de um
pequeno composto para intensificar sua atividade. Segundo, algumas protenas
podem ser inativadas seletivamente. Em alguns casos, a inativao envolve a degradao da prpria protena; em outros, a inativao pode ser causada pela ligao de
um ligante inibidor. Terceiro, algumas protenas tm que ser endereadas a seus
destinos intracelulares especficos. A clula no simplesmente um saco de enzimas:
protenas so muitas vezes seqestradas em certas regies, tais como membranas,
lisossomos, ncleos ou mitocndrias. Em quarto lugar, algumas protenas tm que
se juntar a outras protenas para formar uma unidade funcional. A protena hemoglobina, o microtbulo e o ribossomo so todos exemplos de numerosas protenas
juntadas para formar uma unidade funcional. Portanto, a expresso da informao
gentica ainda pode ser influenciada no nvel ps-traduo. Alguns desses casos
(como a fosforilao do fator promotor da mitose) j foram discutidos, enquanto
outros sero discutidos medida que aparecerem. Neste ponto, abandonaremos
nossa discusso dos aspetos moleculares da expresso gnica e voltaremos para a
dinmica do embrio em desenvolvimento. Podemos agora olhar para processos
desenvolvimentais precoces para estudar mecanismos moleculares para a determinao do destino celular e da estrutura tissular.
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Especificao do Destino
Celular e os Eixos Embrionrios
IV
13 Especificao celular autnoma por determinantes citoplasmticos

14 A gentica da especificao axial em Drosophila
505
543
15 Especificao do destino celular por interaes clula-clula progressivas

16 Estabelecimento dos eixos corporais em mamferos e aves
635
591
Especificao celular autnoma

por determinantes citoplasmticos
Considero provvel que nas clulas

germinativas existem tnues diferenas internas que predeterminam a transformao
subseqente s substncias determinantes;
essas diferenas no so meras potncias presentes nas clulas germinativas, mas diferenas materiais reais to pequenas que at
agora no pudemos demonstr-las.
R. VIRCHOW (1858)
Estudando a fase de clivagem nos aproximamos da nascente de onde emergem os rios
progressivamente ramificados da diferenciao que desguam finalmente em plcidas
lagoas, as clulas individuais do complexo
organismo adulto.
E. E. JUST (1939)
13
ADA ORGANISMO METAZORIO formado por uma complexa variedade
de clulas especializadas. Por exemplo, as clulas vermelhas e brancas do

sangue no s diferem umas das outras mas tambm diferem das clulas do
corao, responsveis pela propulso dessas clulas pelo corpo. Tambm so diferentes dos neurnios alongados que conduzem impulsos neurnicos do crebro ao
corao, e de clulas glandulares que secretam hormnios no sangue. A Tabela 13.1
apresenta uma lista incompleta dos tipos de clulas especializadas, seus produtos
caractersticos e suas funes.
Comprometimento celular e diferenciao

O desenvolvimento de tipos especializados de clulas de um nico ovo fertilizado
chamado diferenciao. Essa evidente mudana na bioqumica e funo celular
precedida por um processo envolvendo um comprometimento dissimulado das clulas a um destino em particular ou a um conjunto de destinos. Nessa fase, a clula no
parece ser fenotipicamente diferente do seu estado no comprometido, mas de alguma forma o seu desenvolvimento se tornou restrito. Embora os embriologistas tenham
usado rotineiramente a palavra determinao para descrever esse comprometimento
oculto, um tipo de tecido em particular pode ser classificado como determinado, ou
no determinado, dependendo de qual ensaio foi usado para a determinao (ver
Harrison, 1933). Slack (1991) dividiu esse comprometimento em dois estgios,
especificao e determinao. Uma clula ou tecido pode ser especificado quando
capaz de diferenciar-se de forma autnoma quando colocado em um ambiente neutro
tal como uma placa de petri. (Esse ambiente neutro em relao via do desenvolvimento.) Uma clula ou tecido pode ser determinado quando capaz de diferenciarse de maneira autnoma quando colocado em outra regio do embrio. Se a diferenciao se d de acordo com o destino original mesmo com a colocao em outra regio
do embrio, assume-se que o comprometimento irreversvel.
Ns conhecemos trs vias principais pelas quais esse comprometimento pode
acontecer (Tabela 13.2). O primeiro mecanismo de comprometimento, envolve a segregao citoplasmtica de molculas determinativas durante a clivagem embrionria
pelo qual os planos de clivagem separam regies qualitativamente diferentes do citoplasma do zigoto em clulas-filha diferentes. Cada clula se torna especfica pelo tipo
de citoplasma que ela adquire durante a clivagem, de modo que o destino da clula
determinado sem nenhuma referncia s clulas vizinhas. Esse mecanismo de comprometer o destino das clulas chamado de especificao autnoma, porque as clulas
505
506
PARTE III Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
Tabela 13.1 Alguns tipos de clulas diferenciadas e seus principais produtos

Tipo de clula
Queratincito
(clula da pele)
Eritrcito
(clula vermelha do sangue)
Clula do cristalino
Linfcito B
Linfcito T
Produto da clula
diferenciada
Queratina
Proteo contra abraso

e dessecao
Hemoglobina
Cristalinas
Imunoglobulinas
Antgenos da superfcie
celular (linfocinas)
Transporte de oxignio
Transmisso de luz
Sntese de anticorpos
Destruio de clulas
estranhas; regulao
da resposta imune
Produo de pigmento
Regulao do
metabolismo de
carboidratos
Caractersticas sexuais
masculinas
Tendes e ligamentos
Melancito
Clulas das
ilhotas pancreticas
Melanina
Insulina
Clula de Leydig ()
Testosterona
Condrcito
(clula da cartilagem)
Osteoblasto
(clula formadora de osso)
Micito
(clula muscular)
Hepatcito
(clula do fgado)
Sulfato de condroitina;
colgeno tipo II
Neurnios
Clula tubular ( )
do oviduto da galinha
Clula folicular ( )
do oviduto de inseto
Funo especializada
Matriz ssea
Actina e miosina
do msculo
Suporte do esqueleto
Contrao
Albumina do soro;
numerosas enzimas
Produo de protenas
do soro e numerosas
funes enzimticas
Transmisso de
impulsos eltricos
Neurotransmissores
(acetilcolina,
epinefrina, etc.)
Ovalbumina
Protenas corinicas
Protenas do
albmen do
ovo e proteo
do embrio
Protenas da casca do
ovo para proteo
do embrio
so especificadas pelos seus prprios componentes citoplasmticos internos

(Davidson, 1991). Dessa maneira, se um determinado blastmero fosse removido precocemente no desenvolvimento, esse produziria as mesmas clulas como quando
ainda fazia parte de um embrio maior, e o embrio remanescente no possuiria aquelas
clulas (e somente aquelas clulas) que teriam sido formadas pelas clulas que foram
retiradas (veja Figura 1.29). A especificao autnoma faz surgir um padro de embriognese referido como desenvolvimento em mosaico, uma vez que o embrio parece ser
formado por um mosaico de peas autodiferenciadas.
Uma segunda maneira de comprometer o destino das clulas envolve a interao
com clulas vizinhas. Aqui, as clulas originalmente tm a habilidade de seguir mais de
um caminho de diferenciao, e a interao dessas clulas com outras clulas ou
tecidos restringe os destinos de um ou ambos os participantes. Esse tipo de determinao do destino celular muitas vezes chamado de especificao condicional, porque o destino de uma clula depende das condies nas quais ela se encontra. Se um
blastmero fosse removido de um embrio precoce de um organismo com especificao
condicional de suas clulas, as clulas embrionrias remanescentes poderiam alterar
seus destinos normais para que o papel da clula desaparecida fosse preenchido.
Dessa maneira, a especificao condicional faz surgir um padro de embriognese
chamado de desenvolvimento regulador. Como ainda veremos, todos os organismos
CAPTULO 13 Especificao celular autnoma por determinantes citoplasmticos
Tabela 13.2 Modelos de especificao do tipo celular e suas caractersticas

I.
Especificao autnoma
Caracterstica da maioria dos invertebrados.
Especificao pela aquisio de certas molculas citoplasmticas presentes no ovo.
Clivagens invariantes produzem as mesmas linhagens em cada embrio da espcie.
Destinos dos blastmeros so geralmente invariantes.
Linhagens de Clulas ncoras so usualmente especificadas de maneira autnoma
nos plos dos eixos embrionrio.
Especificao do tipo celular precede qualquer migrao celular embrionria em larga escala.
Produz desenvolvimento em mosaico (determinativo): clulas no podem
modificar o destino se um blastmero perdido.
II. Especificao condicional

Caracterstica de todos vertebrados e poucos invertebrados.
Especificao por interaes entre clulas. Posies relativas so importantes.
Clivagens variveis no produzem destinaes invariantes para as clulas.
Enormes rearranjos e migraes celulares precedem ou acompanham a especificao.
Capacidade para desenvolvimento regulativo: permite que as clulas adquiram
diferentes funes.
III. Especificao sincicial
Caracterstica da maioria das classes de insetos.
Especificao das regies do corpo por interaes entre regies citoplasmticas
antes da celularizao do blastoderma.
Clivagem varivel no produz destinos celulares rgidos para certos ncleos.
Aps a celularizao, a especificao condicional vista com freqncia.
Fonte: De acordo com Davidson, 1991.
usam ambos os meios, autnomo e condicional para especificar diferentes tipos de

clulas, existindo um espectro de variaes entre o desenvolvimento em mosaico e o
desenvolvimento regulativo. No entanto, na maioria dos invertebrados a especificao do tipo celular predominantemente autnoma, enquanto os vertebrados so
caracterizados pelo uso extensivo da especificao condicional.
Muitos insetos tambm usam uma terceira via para a determinao do destino
celular. Nesses casos, interaes entre componentes maternos dentro do blastoderma
sincicial ocorrem antes que tenham se formado as membranas celulares que separam
os ncleos. Na especificao sincicial, grande parte das decises quanto aos destinos das clulas so feitas antes mesmo que as clulas tenham sido formadas. Este
captulo focalizar experimentos que demonstram a especificao autnoma, enquanto que os captulos seguintes iro cobrir os modos condicionais e sinciciais do comprometimento celular durante a embriognese precoce.
Pr-formao e epignese
Qualquer explicao sobre a diferenciao das diversas clulas corporais, a partir do
ovo fertilizado tem que explicar (1) a constante morfologia de cada espcie (i.e., que
galinhas somente geram galinhas, e no crocodilos) e (2) a diversidade entre as partes
corporais de cada organismo. Na verdade, uma das principais caractersticas do desenvolvimento que cada espcie reproduz seu padro de desenvolvimento. O desenvolvimento envolve a expresso das propriedades herdadas pelas espcies.
No sculo dezessete, a unio de herana e desenvolvimento foi obtida com a
hiptese do pr-formacionismo. De acordo com essa viso, todos os rgos do adulto estariam prefigurados em miniatura dentro do espermatozide ou (mais usualmente)
no vulo. Os organismos no eram considerados como desenvolvidos, mais sim
desenrolados. Essa hiptese encontrava apoio na cincia e na filosofia (Gould,
507
508
1977; Roe, 1981). Primeiro, porque todos os rgos eram prefigurados, o desenvolvimento embrionrio meramente requeria o crescimento de estruturas existentes, e no a
formao de novas. Nenhuma fora misteriosa extra era necessria para o desenvolvimento embrionrio. Segundo, assim como o organismo adulto era prefigurado em
clulas germinativas, a outra gerao j existia em estado prefigurado dentro das
clulas germinativas da primeira gerao prefigurada. Esse corolrio, chamado de
embitment (encapsulao), assegurava que as espcies sempre permaneceriam constantes. Embora alguns microscopistas alegassem enxergar miniaturas humanas totalmente desenvolvidas dentro do espermatozide ou do vulo, os maiores proponentes
dessa hiptese - Albrecht von Haller e Charles Bonnet- sabiam que o desenvolvimento dos sistemas orgnicos se dava em velocidades diferentes e que as estruturas
embrionrias no precisavam estar no mesmo lugar daquelas do recm-nascido.
Os pr-formacionistas no tinham uma teoria celular para fornecer um limite inferior para o tamanho dos seus organismos pr-formados, e nem tinham uma viso do
domnio do ser humano sobre a Terra como sendo infinito. Pelo contrrio, como disse
Bonet (1764) O trabalho da natureza to pequeno quanto ela deseja, e a espcie
humana existia no finito espao compreendendo a criao e a ressurreio. Isso estava de acordo com a melhor cincia da poca, e de acordo com o princpio do matemtico e filsofo francs Ren Descartes sobre a divisibilidade infinita de uma natureza
mecnica iniciada, mas no interferida por Deus.
A pr-formao era uma teoria conservadora, enfatizando a falta de mudanas
entre geraes. Sua principal falha era a inabilidade em explicar as variaes j conhecidas pela limitada evidncia gentica da poca. Sabia-se, por exemplo, que a unio
entre uma pessoa branca e outra negra gerava filhos de uma cor intermediria entre as
duas, uma impossibilidade se a herana e o desenvolvimento ocorressem somente
atravs do vulo ou do espermatozide. Em experimentos com um controle maior, o
botnico alemo, Joseph Klreuter (1766) produziu plantas hbridas de tabaco contendo caractersticas de ambas as espcies. Ademais, cruzando o hbrido tanto com o
ascendente masculino ou o feminino, Klreuter foi capaz de reverter as caractersticas do hbrido de volta quelas de um ou outro ascendente, aps vrias geraes.
Dessa maneira, a herana parecia depender de uma mistura de componentes dos pais.
E mais, a pr-formao no podia explicar a gerao de monstruosidades e determinados desvios, tal como o hexadactilismo (seis dedos em cada mo), quando ambos
os pais eram normais.
Desenvolveu-se, ento, uma hiptese alternativa: epignese. De acordo com essa
hiptese, cada organismo adulto se desenvolveria novamente a partir de uma condio no diferenciada. Essa viso do desenvolvimento, tendo razes filosficas remontando a Aristteles, foi revivida por Kaspar Friedrich Wolff, um embriologista alemo
que trabalhava em St. Petersburg. Observando cuidadosamente embries de pinto,
Wolff demonstrou que as partes embrionrias se desenvolvem de tecidos que no tm
contrapartida no organismo adulto. O corao e os vasos sangneos (que de acordo
com os pr-formacionistas, tinham que estar presentes desde o comeo para assegurar o crescimento embrionrio) podiam ser vistos se desenvolvendo de novo em cada
embrio. Similarmente, foi visto que o tubo intestinal se originava das dobras de um
tecido originalmente plano. Essa ltima observao foi explicitamente detalhada por
Wolff (1767) que declarou: Quando a formao do intestino por essa maneira for
adequadamente avaliada no existir nenhuma dvida, eu acredito, sobre a verdade
da epignese. No entanto, para explicar como o organismo criado novamente a cada
gerao, Wolff teve que postular uma fora desconhecida, a vis essentialis (fora
essencial), a qual agindo como a gravidade ou o magnetismo organizaria o desenvolvimento embrionrio.
O pr-formacionismo explica melhor a continuidade das geraes, enquanto que a
epignese explica melhor a variao e as observaes diretas na formao dos rgos.
Uma certa reconciliao entre as partes foi tentada pelo filsofo alemo Immanuel
Kant (1724-1804) e seu colega, o biologista Friedrich Blumenbach (1752-1840). Na
tentativa de construir uma teoria cientfica de descendncia racial, Blumenbach postulou uma fora mecnica, objetivamente dirigida chamada Bildungstrieb (fora de
desenvolvimento). Tal fora, dizia ele, no era terica, mas poderia ser demonstrada
atravs de experimentao. A Hydra, quando cortada, regenera suas partes amputadas atravs de um remanejamento de elementos existentes. Algum tipo de fora
organizadora proposital podia ser observada nessa operao, e essa fora era uma
propriedade do prprio organismo. Imaginava-se que essa Bildungstrieb fosse uma
herana adquirida atravs de clulas germinativas. Dessa maneira, o desenvolvimento
poderia prosseguir epigeneticamente atravs de uma fora predeterminada inerente
matria do embrio (Cassirer, 1950; Lenoir, 1980). Ademais, acreditava-se que tal fora
era suscetvel a mudanas, como demonstrado pela variante da concha do caracol,
com espirais voltadas para o lado esquerdo.
Nessa hiptese, onde o desenvolvimento epigentico direcionado por instrues pr-formadas, no estamos muito distantes da viso de alguns biologistas modernos considerando que A descrio completa do organismo j est escrita no ovo
(Brenner, 1979). No entanto, at a redescoberta dos trabalhos de Mendel, no comeo
do sculo vinte, no havia uma teoria gentica consistente na qual se poderia encaixar
tais idias sobre variaes herdadas, e cada cientista era livre para especular sobre os
mecanismos pelos quais os padres de desenvolvimento so herdados.
Os T
eratologistas F
ranceses
Teratologistas
Franceses
As tentativas de encontrar hipteses que explicassem a constncia das espcies e o
desenvolvimento epigentico levaram criao da moderna embriologia. As buscas
por tais hipteses foram executadas sob duas tradies intelectuais diferentes. Uma,
centralizada na Frana, buscava os mecanismos pelos quais erros embriolgicos causavam o nascimento de crianas com anormalidades de desenvolvimento. Essa cincia ficou conhecida como teratologia, ou estudo de malformaes congnitas. A segunda busca estava centralizada na Alemanha, e estava voltada para a fisiologia dos
processos do desenvolvimento. Ambas as correntes de pesquisa iniciaram a manipulao de embries para verificar como um organismo em desenvolvimento iria responder a essas perturbaes (Churchill, 1973; Fischer e Smith, 1984).
Os experimentos teratolgicos franceses comearam na dcada de 1820 com os
estudos de Etienne Geoffrey Saint-Hilaire e seu filho, Isadore. Essas investigaes
tentaram mostrar que nascimentos anmalos eram produtos de uma falha no desenvolvimento fetal ao invs de aberraes pr-formadas. Eles buscavam produzir anomalias de desenvolvimento artificialmente, alterando as condies de incubao do
ovo de galinha em desenvolvimento. Apesar dos inmeros fracassos dessas tentativas (suas tcnicas rudimentares, ou permitiam a continuao do desenvolvimento
normal ou terminavam por matar os embries), eles abriram o caminho para as anlises
mais refinadas de Dareste em 1877. Dareste realizou milhares de experimentos e acompanhou anormalidades no desenvolvimento de aves desde os primeiros estgios do
seu desenvolvimento.
Mas o embrio de pinto foi uma m escolha de organismo para estudar os primeiros estgios da embriognese. Se a inteno era examinar se perturbaes nos primeiros estgios do desenvolvimento afetavam as estruturas adultas, dever-se-ia usar um
outro organismo. Em 1866, um francs, estudante de medicina, Laurent Chabry, comeou a estudar a teratognese no embrio de tunicado, um organismo mais acessvel.
Essa foi uma escolha muito feliz, porque esses embries desenvolvem-se rapidamente
em larvas, com relativamente poucas variedades de clulas. Chabry se concentrou em
produzir malformaes especficas, lancetando blastmeros especficos de embries
de tunicados em clivagem. Ele descobriu que cada blastmero era responsvel pela
produo de um conjunto particular de tecidos larvares. Na ausncia dessas clulas,
a larva deixava de apresentar justamente as estruturas normalmente formadas por
aquelas clulas. Alm disso, ele observou que quando algumas clulas em particular
509
510
eram isoladas do resto do embrio, elas formavam sua estrutura caracterstica independentemente do contexto das outras clulas. Dessa maneira, cada uma das clulas
tunicadas aparentavam estar se desenvolvendo de maneira autnoma.* Como discutimos anteriormente, essa habilidade de cada clula desenvolver-se independentemente de outras clulas embrionrias freqentemente chamada de desenvolvimento
autnomo ou em mosaico, porque o embrio aparenta ser um mosaico de partes
autodiferenciadas.
Especificaes autnomas em embries de tunicados

Estudos mais recentes mostraram que o embrio de tunicado de fato se assemelha a
um mosaico de partes autodiferenciadas construdo com informaes armazenadas
no citoplasma do ocito. Com a diviso do embrio, diferentes clulas incorporam
diferentes regies do citoplasma. Acredita-se que essas diferentes regies
citoplasmticas contenham determinantes morfogenticos que controlam o compromisso da clula com um determinado tipo de clula. Estudos de determinao em
Figura 13.1
Segregao dos determinantes citoplasmticos

por ocasio da fertilizao. (A) Mapa de destino das regies citoplasmticas do tunicado
Halocynthia roretzi logo aps o trmino dos
movimentos citoplasmticos da fertilizao.
Anterior para a esquerda, posterior para a
direita. (B) Os rgos da larva tunicada. (A de
acordo com Nishida, 1987.)
(A)
*Essa no foi a resposta pela qual Chabry esperava ou pretendia encontrar. Na Frana do sculo
dezenove, os conservadores favoreciam a viso dos pr-formacionistas, que era interpretada como
apoio s desigualdades hereditrias dos membros de uma comunidade. O que voc era, era determinado pela sua linhagem. Os liberais, especialmente os socialistas, aprovaram as vises epigenticas,
as quais foram interpretadas como indicando que todos comeavam com a mesma dotao hereditria, e que ningum tinha o direito a uma posio mais alta do que a do outro. Chabry, um
socialista que odiava os direitos hereditrios dos aristocratas, se esforou para no extrapolar seus
dados para nada alm dos embries tunicados.
Clulas pigmentadas
Tronco cerebral
Medula espinhal
Msculo
Notocorda
VISTA ANIMAL
VISTA LATERAL
Medula espinhal
Tronco cerebral
Clulas
pigmentadas
Epiderme
Palpos
Msculo
Crebro
Mesnquima
Tronco cerebral
Medula espinhal
Notocorda
Crebro
Clulas filamentosas
endodrmicas
Palpos
Endoderma
Clulas
pigmentadas
Tronco cerebral
Medula espinhal
Clulas filamentosas endodrmicas
Epiderme
Clulas laterais do tronco
Msculo
VISTA VEGETAL
Msculo
Endoderma
Notocorda
Clulas laterais
do tronco
Msculo
Tronco
cerebral
(B)
Notocorda
Mesnquima
Manto
(Ectoderma)
Mancha ocelar
Crebro
Cordo nervoso
Notocorda
Boca
Clulas
filamentosas
endodrmicas
Palpo
Estmago
Medula espinhal
Msculo
Mesnquima
Clulas
laterais do tronco
Notocorda
Faringe
(endoderma)
Corao
Endstilo
(endoderma)
Clula
muscular
511
clulas de tunicados tm sido imensamente auxiliados por ovos de certas espcies

que segregam o seu citoplasma em uma srie de regies coloridas, imediatamente aps
a fertilizao (Prancha11).
O determinante formador de msculos do crescente amarelo
Em 1905, E. G. Conklin descreveu como esses plasmas coloridos se repartiam em vrios
blastmeros. A primeira clivagem separa o ovo em duas partes, imagens espelhares
direita e esquerda. Da em diante, cada diviso celular em um lado paralela a uma
diviso celular do outro lado. Observando o destino de cada blastmero do tunicado
Styela partita, Conklin tirou a surpreendente concluso de que cada regio colorida
do citoplasma delineia um destino embrionrio especfico (Figura 13.1). O citoplasma
do crescente amarelo d origem s clulas musculares; o crescente equatorial cinza
produz a notocorda e o tubo neural; o citoplasma claro do plo animal se torna a
epiderme larval; e a regio vegetativa cinza do vitelo d origem ao intestino larval.
Reverberi e Minganti (1946) analisaram a determinao tunicada em uma srie de
experimentos de isolamento, e eles tambm observaram a autodiferenciao de cada
blastmero isolado e o restante do embrio. O resultado de um desses experimentos
mostrado na Figura 13.2. Quando o embrio de oito clulas separado em seus quatro
pares (os lados direito e esquerdo sendo equivalentes), a determinao em mosaico
a regra. O par posterior de blastmeros do plo animal do origem ao ectoderma; o par
posterior do plo vegetal produz o endoderma, o mesnquima e o tecido muscular,
como esperado pelo mapa de destino. O desenvolvimento neural uma exceo. As
clulas produtoras de nervos so geradas por ambos os quadrantes anteriores, animal e
vegetal, e nenhum deles as produz sozinho. Todavia, quando esses pares anteriores so
reunidos surgem os tecidos do crebro e do palpo. Mesmo em embries estritamente
PLO ANIMAL
Ectoderma
ANTERIOR
POSTERIOR
Sistema nervoso
Mesnquima
Notocorda
Msculo
Endoderma
PLO VEGETAL
Separao dos pares
de blastmeros
Ectoderma
Notocorda
Ectoderma
Msculo
Mesnquima
Endoderma
Endoderma
Figura 13.2
Determinao em mosaico nos tunicados.

Quando os quatro pares de blastmeros do
embrio de oito clulas esto dissociados, eles
se desenvolvem como indicado, cada um formando estruturas separadas. (De acordo com
Reverberi e Minganti, 1946.)
512
Estgio celular
Horas a 100 C
A6.1 endoderma
A7.3 notocorda
Animal
Anterior
Vegetal
A7.5 endoderma
A7.6 clulas laterais do tronco
A7.7 notocorda
medula espinhal
msculo
crebro
palpos
Tronco cerebral
Medula espinhal
Crebro
Faringe primordial
palpos
epiderme
epiderme
Clula pigmentada
Crebro
epiderme
epiderme
msculo
Vegetal
Posterior
mesnquima
notocorda
filamento endodrmico
mesnquima
msculo
Animal
Direita
Esquerda
endoderma
epiderme
epiderme
epiderme
Endoderma
Filamento
endodrmico
Msculo
Endoderma
Msculo
Medula espinhal
Filamento
endodrmico
Tronco cerebral
Medula espinhal
Msculo
b5.4 epiderme
Figura 13.3
Linhagem determinativa de blastmeros

tunicados. (A) Mapa de destino de linhagem
no desenvolvimento embrionrio do tunicado
H. roretzi. Como as metades direita e esquerda
se desenvolvem da mesma maneira, somente
metade do embrio aqui representado. (B)
Linhagens das clulas musculares. (A de acordo com Nishida, 1987; B de acordo com
Nishida, 1992a.)
determinados como os dos tunicados, algumas interaes indutivas acontecem entre

os blastmeros. De fato, Ortolani (1959) mostrou que essa regio do ectoderma no
est determinada para originar tecido nervoso at o estgio de 64 clulas, pouco antes
da gastrulao. Dessa maneira, embora a maioria dos tecidos sejam determinados
imediatamente aps a segregao do citoplasma do ovo, certos tecidos nesses embries tm uma determinao condicional por interao clula a clula.
Pelos estudos de linhagem celular de Conklin e outros (Figuras 13.2 e 13.3), j era
conhecido que somente um par de blastmeros (vegetativo posterior; B4.1) no embrio de oito clulas capaz de produzir o tecido muscular da cauda. Quando o
citoplasma transferido do blastmero B4.1 (formador de msculo) para o blastmero
b4.2 (formador do ectoderma) de um embrio tunicado de 8 clulas, o blastmero
Localizao do citoplasma formador de msculos durante o desenvolvimento precoce de ascdios.

Regies do citoplasma foram transferidas para o blastmero a4.2 (epiderme presuntiva) e investigadas para detectar protenas especficas do msculo produzidas por clulas derivadas de a4.2.
A regio colorida representa o crescente amarelo, que deve conter os determinantes da formao muscular. Porcentagens indicam a frao do espcimen mostrando expresso do gene
muscular. (A) embrio de oito clulas; (B) ovo no fertilizado; (C) ovo fertilizado na primeira fase
dos movimentos citoplasmticos. (D) ovo fertilizado na segunda fase dos movimentos citoplasmticos. (De acordo com Nishida, 1992b.)
Figura 13.4
(B)
Estgio de
64 clulas
Estgio de
32 clulas
Estgio de
16 clulas
Estgio de 8 clulas
Especificao muscular autnoma
Especificao muscular
condicionada
formador do ectoderma gera clulas musculares como tambm sua prognie ectodrmica
normal (Whittaker, 1982). Alm disso, o citoplasma da rea de plasma amarelo do ovo
fertilizado pode tambm fazer com que o blastmero 4.2a expresse protenas especficas do msculo (Figura 13.4; Nishida, 1992a). Tung e colegas (1977) mostraram o
inverso, que quando os ncleos larvais so transplantados a fragmentos enucleados
de ovos de tunicados, as clulas recm-formadas mostram uma estrutura tpica daquelas clulas que fornecem o citoplasma, e no daquelas clulas que fornecem o ncleo.
(A) 8 clulas
(B) ovo no fertilizado
(C) Segregao da
primeira fase
(D) Segregao da
segunda fase
Crescente
amarelo
Lateral
513
514
Podemos concluir, ento, que certos determinantes que existem no citoplasma causam
a formao de certos tecidos. Esses determinantes morfogenticos parecem agir ativando (ou inativando) seletivamente genes especficos. A determinao dos
blastmeros e a ativao de certos genes so controlados pela localizao espacial de
determinantes morfogenticos dentro do citoplasma do ovo. [cyto1.html]
Existe a hiptese de que o determinante miognico do crescente amarelo regula a
transcrio de genes especficos para o msculo. Imaginava-se que os tunicados
poderiam segregar uma protena semelhante MyoD dentro do crescente amarelo. No
entanto, embora essa protena seja vista nas clulas musculares do embrio tunicado,
ela s comea a funcionar no estgio de 32 clulas no sendo ento o fator do crescente amarelo (Satoh et al.,1995). Um melhor candidato a determinante miognico do
crescente amarelo o RNA materno que parece estar ligado ao citoesqueleto do
ocito e que segregado junto com o citoplasma formador de msculos. Esse RNA
encontrado no crtex de ocitos maduros, segregado juntamente com o citoplasma
amarelo formador de msculos para a coroa do plo vegetal na primeira fase dos
movimentos citoplasmticos durante a fertilizao, e a partir da muda para a regio
vegetativa posterior do zigoto enquanto se forma o crescente amarelo definitivo (Figura 13.5; Swalla e Jeffery, 1995). Esse RNA provavelmente no codifica uma protena,
e no se sabe se pode direcionar o desenvolvimento muscular quando inserido em
uma clula no muscular.
Especificao citoplasmtica das linhagens
endodrmicas e epidrmicas e o eixo ntero-posterior
Figura 13.5
Localizao espacial de um RNA (YC-RNA)

que se segrega com o citoplasma formador de
msculo do crescente amarelo. Hibridizaes
in situ foram realizadas em vrios estgios do
desenvolvimento de Styela clava. (A) Ovo no
fertilizado. (B) Aps a primeira fase dos movimentos de fertilizao do citoplasma oognico.
(C) Seo frontal de um embrio de 4 clulas
mostrando expresso em ambos os blastmeros
vegetais. (D) Seo frontal de um embrio de
32 clulas mostrando expresso em seis clulas musculares posteriores. (E) Embrio com
broto caudal mostrando expresso de YC-RNA
em clulas musculares progenitoras em ambos
os lados da notocorda. (de Swalla e Jefferey,
1995; fotografias cortesia dos autores.)
(C)
A anlise das clulas endodrmicas e epidrmicas foi feita de maneira semelhante.

Reverberi e Minganti (1946) confirmaram o mapa de destino de Conklin, e Whittaker
(1977) mostrou que enzimas especficas do endoderma eram sintetizadas somente nas
clulas destinadas a formar o intestino. Mais recentemente, Nishida (1993) fundiu
clulas e fragmentos de clulas para seguir os determinantes que davam origem s
(A)
(B)
(D)
(E)
Primeira fase
da segregao
Segunda fase
da segregao
Embrio de
8 clulas
Msculo
Endoderma
Epiderme
linhagens de clulas epidrmicas e endodrmicas. Aps a fuso da clula ou do fragmento de clula a uma clula de outra linhagem, Nishida usou um marcador bioqumico
ou antignico para determinar se aquela clula assumiu o novo destino. Os
determinantes epidrmicos migram para a regio apical da clula durante a fertilizao
e entram nos blastmeros da coroa do plo animal (o par a4.2 e o par b4.2) do embrio
de 8 clulas. Inversamente, foi encontrado que os determinantes endodrmicos migram para o hemisfrio vegetal do zigoto e se distribuem entre os blastmeros
vegetativos (Figura 13.6; Nishida, 1994a).
O eixo ntero-posterior tambm determinado durante a migrao das regies
citoplasmticas do ocito. Pela remoo de aproximadamente 10% do citoplasma da
regio vegetativa posterior do ovo, aps o segundo movimento ooplsmico, a maioria
dos embries no formou o eixo ntero-posterior. Em lugar disso, os embries se
desenvolveram em larvas radialmente simtricas com destinos anteriores. Esse citoplasma vegetativo posterior (PVC) era dominante em relao a outros citoplasmas,
pois ao se transplantar o PVC para a regio vegetativa anterior de zigotos que tiveram
seu prprio PVC removido, o anterior da clula se transformou no novo posterior, e o
eixo foi invertido (Nishida, 1994b). Esses resultados sugerem que o destino posterior
determinado por um determinante especfico do citoplasma, enquanto que o destino
anterior determinado pela ausncia do citoplasma vegetativo posterior. Isso se
correlaciona bem com a observao de que a maioria dos destinos celulares posteriores (como o msculo e o endoderma) so especificados pelo citoplasma, mas os destinos celulares anteriores (como o crebro e a notocorda) so gerados por indues
(Figura 13.7).
No embrio de tunicado, os movimentos ooplsmicos na fertilizao criam domnios citoplasmticos distintamente diferentes, que se distribuem proporcionalmente
nos blastmeros. A identidade desses determinantes e seus mecanismos de ao
ainda no foram esclarecidos.
Localizao citoplasmtica em embries de moluscos

O tipo de diferenciao em mosaico largamente difundido no reino animal, especialmente em organismos protostomatas, tais como ctenforo, aneldeos, nematdeos e
moluscos, os quais, em sua totalidade, iniciam a gastrulao na futura extremidade
anterior, aps somente algumas divises celulares. Moluscos fornecem alguns dos
exemplos mais impressionantes de desenvolvimento em mosaico e do fenmeno de
515
Figura 13.6
Comparao dos movimentos dos determinantes citoplasmticos em trs tipos de tecidos

de tunicados. Estas figuras representam somente a superfcie dos ovos. (De acordo com
Nishida, 1994a.)
516
Figura 13.7
Comparao de embries normais de tunicados e embries cujo citoplasma vegetativo posterior

(PVC) foi removido. (A) Larva do tipo selvagem. (B) Larva radialmente simtrica de ovo cujo
PVC foi removido. A larva no tem o eixo ntero-posterior. Essas larvas consistem de uma
camada epidrmica externa, uma massa notocordal central e uma camada endodrmica intermediria. (C) Vista vegetal de um embrio normal com 76 clulas. (D) Vista vegetal de um embrio
radialmente simtrico cujo PVC foi removido. (De acordo com Nishida, 1994b.)
localizao citoplasmtica, onde os determinantes morfogenticos so encontrados

em uma regio especfica do ocito. Alm disso, esses fatores citoplasmticos so
ativamente transportados para um plo da clula, de tal modo que um blastmero
tendo esses fatores pode restringir sua transmisso para somente uma de suas clulas-filha. O destino das duas clulas-filha definido por qual delas recebe o
determinante morfogentico.
E. B. Wilson, o famoso embriologista americano do comeo do sculo XX, isolou
blastmeros precoces de embries do molusco Patella coerulea e comparou seu
desenvolvimento com o das mesmas clulas deixadas dentro de outros embries de
Patella. A Figura 13.8 mostra um grupo de resultados publicados por Wilson em 1904.
Os blastmeros isolados no s seguiram seus destinos normais de desenvolvimento
(nesse caso, para produzir as clulas trocoblsticas ciliadas), como tambm completaram o nmero normal de divises celulares precisamente ao mesmo tempo que as
Desenvolvimento normal de Patella
Trocoblasto
presuntivo
Figura 13.8
(A-C) Diferenciao de clulas trocoblsticas

no embrio normal do molusco Patella. (A)
Estgio de 16 clulas visto de lado; as clulas
trocoblsticas presuntivas esto sombreadas.
(B) Estgio de 48 clulas. (C) Estgio de larva
ciliada, visto do plo animal. So observados
clios nas clulas trocoblsticas. (D-G) Diferenciao de clulas trocoblsticas isoladas e
cultivadas in vitro. (D) Clula trocoblstica isolada. (E,F) Resultados da primeira e segunda
divises em cultura. (G) Produto ciliado de (F).
Mesmo em cultura isolada as clulas se tornam
ciliadas no momento correto. (De acordo com
Wilson, 1904.)
(A)
(B)
(C)
Desenvolvimento do trocoblasto isolado
(D)
(E)
(F)
(G)
Figura 13.9
Citoplasma
animal claro
Clivagem no molusco Dentalium. A extruso

e a reincorporao do lbulo polar ocorre duas
vezes. (De acordo com Wilson, 1904.)
Citoplasma
equatorial
granular
Citoplasma
vegetal claro
Lbulo polar absorvido

no blastmero CD
517
Lbulo
polar
Segunda extruso
do lbulo polar
Lbulo polar
absorvido no
blastmero D
clulas permanecendo dentro do embrio. Suas clivagens se deram na orientao

correta, e as clulas derivadas se tornaram ciliadas na poca apropriada. Desses experimentos, Wilson concluiu que essas clulas possuam dentro de si todos os fatores
que determinavam a forma e o ritmo da clivagem e que a diferenciao complexa e
caracterstica que elas sofriam era completamente independente de sua relao com o
resto do embrio. [cyto2.html]
O lbulo polar
Em seu experimento seguinte, Wilson pde demonstrar que tal desenvolvimento era
assegurado pela segregao de determinantes morfogenticos especficos em
blastmeros especficos. Certos embries clivando espiralmente (principalmente nos
filos molusco e aneldeo) expelem um bulbo de citoplasma imediatamente antes da
primeira clivagem (veja Figura 13.9). Essa protruso chamada lbulo polar. Em certas
espcies de caracis, a regio unindo o lbulo polar ao resto do ovo se torna um tubo
delgado. A primeira clivagem divide o zigoto assimetricamente, de tal forma que o
lbulo polar est ligado somente ao blastmero CD. Em vrias espcies, quase um
tero do volume citoplasmtico total est presente nesses lbulos anucleados dandolhes a aparncia de outra clula. Essa estrutura trilobulada freqentemente referida
como o embrio no estgio triflio (Figura 13.10). O blastmero CD absorve ento o
material do lbulo polar, mas o extruda novamente antes da segunda clivagem (Figura
13.9). Aps essa diviso, o lbulo polar est ligado somente ao blastmero D, que
absorve seu material. A partir da, no mais se forma o lbulo polar.
Wilson mostrou que se o lbulo polar for removido no estgio triflio, as clulas
remanescentes dividem-se normalmente. Entretanto, em lugar de produzir uma larva
trocfora normal (caracol), elas produzem uma larva incompleta, sem seus rgos
mesodrmicos - msculos, boca, glndula da concha e p.* Ainda mais, Wilson demonstrou que o mesmo tipo de embrio anormal pode ser produzido removendo o
A glndula da concha um rgo formado por induo pelas clulas mesodrmicas. Sem o
mesoderma, no existem clulas presentes para induzir o ectoderma competente. Mais uma vez
vemos alguma induo limitada em um embrio em mosaico.
(A)
(B)
Figura 13.10
Lbulos polares de moluscos. (A) Micrografia eletrnica de varredura do lbulo polar em extenso no ovo no clivado de
Buccinum undatum. As cristas superficiais
so restritas regio do lbulo polar. (B)
Seo atravs da primeira clivagem ou estgio triflio do embrio de Dentalium. A seta
aponta o grande lbulo polar grande. (Cortesia de M. R. Dohmen.)
518
(A)
Figura 13.11
Desenvolvimento do blastmero D. (A) Diagramas esquemticos da linhagem do blastmero D em embries de Ilyanassa. (i) Embrio
de 4 clulas. (ii) Blastmeros 1D e 1d no estgio de 8 clulas. (iii) Estgio de 16 clulas contendo blastmeros 2D e 2d (derivados de 1D).
As clulas derivadas do D (coloridas) freqentemente se dividem mais tarde do que as outras. (iv) Diviso do macrmero 2D para gerar
clulas 3D e 3d, enquanto a clula 2d se divide
em 2d1 e 2d2. (v) Estgio de 64 clulas. O
blastmero 3D produz as clulas 4D e 4d. (vi)
O blastmero 4d divide-se simetricamente para
produzir os dois mesentoblastos ME1 e ME2.
(B) Embrio de 8 clulas. A pequena clula
PB o lbulo polar e no parte do embrio.
(C) Embrio de 12 clulas (1a-1d ainda no
dividiram). (D) Embrio de 32 clulas. (A de
acordo com Clement, 1962; fotografias de Craig
e Morrill, 1986, cortesia dos autores.)
blastmero D do embrio de 4 clulas. O pesquisador concluiu que o citoplasma do

lbulo polar contm os determinantes mesodrmicos e que esses do ao blastmero
sua capacidade formadora do mesoderma. Wilson mostrou tambm que a localizao
dos determinantes mesodrmicos estabelecida logo aps a fertilizao, demonstrando assim que uma regio citoplasmtica especfica do ovo, destinada a ser inclusa no
blastmero D, contm os fatores (quaisquer que sejam) necessrios para os ritmos de
clivagem especiais desse blastmero e para a diferenciao do mesoderma.
Os determinantes morfogenticos seqestrados dentro do lbulo polar esto provavelmente localizados no citoesqueleto ou no crtex e no no citoplasma difusvel
do embrio. Isso foi evidenciado a partir de estudos de A. C. Clement (1968). Quando
o hemisfrio animal separado do vegetal no caracol Ilyanassa obsoleta, o hemisfrio
animal forma rgos ectodrmicos que se assemelham a embries formados de ovos
sem lbulos. Clement usou aqueles embries que haviam iniciado a reabsoro do seu
segundo lbulo polar e os colocou em placas de gelatina. Em seguida, ele centrifugou
os embries embebidos, forando o fluido citoplasmtico do vitelo da parte vegetativa
da clula para dentro do hemisfrio animal. Centrifugando esses embries em um
segundo meio viscoso, ele causou a separao dos hemisfrios animal e vegetal. As
metades animais desses embries centrifugados no desenvolveram mais estruturas
mesodrmicas e endodrmicas do que aquelas de ovos no centrifugados. Portanto,
os determinantes do lbulo polar no foram transferidos ao hemisfrio animal pelo
contedo fludico do hemisfrio vegetal. Van den Biggelaar obteve resultados semelhantes quando removeu o citoplasma do lbulo polar com uma micropipeta. O citoplasma de outras regies da clula fluram para o lbulo polar, repondo a poro que
havia sido removida O desenvolvimento subseqente desses embries foi normal.
Alm disso, quando o citoplasma solvel do lbulo polar foi adicionado ao blastmero
B, no houve duplicaes de estruturas (Verdonk e Cather, 1983). Portanto, a parte
difusvel do citoplasma no contm esses determinantes morfogenticos. Eles provavelmente se localizam no citoplasma cortical, no fluido, ou no citoesqueleto.
(A)
(B)
519
(C)
Clement tambm analisou o desenvolvimento subseqente do blastmero D para

observar a futura partio desses determinantes. O desenvolvimento do blastmero D
est ilustrado na Figura 13.11. Esse macrmero, tendo recebido o contedo do lbulo
polar, maior do que os outros trs. Se for removido o blastmero D ou o seu primeiro
ou segundo macrmeros derivados (1D ou 2D), obtm-se uma larva incompleta, sem
corao, intestino, velum (a borda ciliada da larva), glndula da concha, olhos e p. Se
o blastmero removido o 3D (aps a diviso da clula 2D para formar o blastmero
3d), obtm-se um embrio quase normal, tendo olhos, p, velum e parte da glndula da
concha, mas sem corao ou intestino (Figura 13.12). Portanto, alguns dos
determinantes morfogenticos originalmente presentes no blastmero D foram reservados para a clula 3d. Aps a produo da clula 4d (pela diviso do blastmero 3D),
a remoo do derivado de D (a clula 4D) no produz diferena qualitativa no desenvolvimento. Realmente, todos os determinantes essenciais para a formao do corao e intestinos esto agora no blastmero 4d, e a remoo daquela clula resulta em
uma larva sem corao e intestino (Clement, 1986). O blastmero 4d responsvel pela
formao (na sua prxima diviso) dos dois mesentoblastos, as clulas que do origem a ambos rgos, mesodrmico (corao) e endodrmico (intestinos).
Figura 13.12
Importncia do lbulo polar no desenvolvimento de Ilyanassa. (A) Larva vliger normal. (B)
Larva anormal, tpica para os casos onde o lbulo polar do blastmero D removido. (E,
olho; F, p; S, concha; ST, estatocisto, rgo de
equilbrio; V, velum; VC, clios velares; Y, vitelo
residual; ES, estomodeu evertido; DV, velum
desorganizado.) (de Newrock e Raff, 1975,
cortesia de K. Newrock.)
520
Embrio normal
(A)
(B)
Embrio duplo
Figura 13.13
Formao de embries gmeos suprimindo a formao do lbulo polar em Dentalium. (A)

Embrio normal no estgio da sexta clivagem. (B) Embries gmeos formados quando
baixas concentraes de citocalasina inibem a formao do lbulo polar e o material do
lbulo polar distribudo para ambos os blastmeros, AB e CD. (De acordo com Guerrier
et al., 1978.)
O material do lbulo polar tambm responsvel pela organizao da polaridade

dorso-ventral (costas-ventre) do embrio. Quando permitido que material do lbulo
polar passe para o blastmero AB, como tambm para a clula CD, so formadas larvas
gmeas unidas por suas superfcies ventrais (Figura 13.13; Guerrier et al., 1978; Henry
e Martindale, 1987).
Resumindo, experimentos mostraram que o citoplasma no difusvel do lbulo
polar extremamente importante para o desenvolvimento normal de moluscos porque:
1. Contm os determinantes para um adequado ritmo e orientao de clivagem do
blastmero D.
2. Contm certos determinantes (aqueles entrando no blastmero 4d e, portanto,
levando produo dos mesentoblastos) para a diferenciao mesodrmica e
intestinal.
3. Permite interaes indutivas (atravs do material entrando no blastmero 3d)
que levam formao da glndula da concha e o do olho.
4. Contm determinantes necessrios para a especificao do eixo dorso-ventral
do embrio.
Apesar da evidente importncia do lbulo polar no desenvolvimento normal do caracol, ainda no se conhece os mecanismos desses efeitos. Parece no haver diferenas
importantes no mRNA ou na sntese de protenas entre embries com ou sem o lbulo
polar (Brandhorst e Newrock, 1981; Collier, 1983, 1984). Um possvel indcio foi fornecido por Atkinson (1987), que observou clulas diferenciadas no velum, aparelho
digestivo e glndula da concha no embrio sem lbulo. Embries sem lbulo podem
produzir essas clulas, mas parecem incapazes de organiz-las em tecidos e rgos
funcionais. Tecidos do trato digestivo podem ser encontrados, mas no so ligados;
micitos esto espalhados ao redor da larva sem lbulo, mas no esto organizados
em um tecido muscular funcional. Parece, assim, que as funes do lbulo polar no
desenvolvimento so muito complexas. [cyto3.html], [evo2.html]
521
Especificao celular no nematdeo Caenorhabditis elegans

A habilidade em analisar o desenvolvimento exige organismos apropriados. Ourios-do-mar h muito tempo tm sido o organismo favorito dos embriologistas porque pode-se facilmente obter seus gametas em grande nmero, seus ovos e embries so transparentes, e a fertilizao e o desenvolvimento podem ocorrer em condies de laboratrio. Mas, ourios-do-mar dificilmente podem ser criados no laboratrio por mais de uma gerao, dificultando o estudo de sua gentica. Geneticistas, de outro lado (especialmente aqueles que trabalham com eucariotos
multicelulares), preferem a Drosophila. O rpido ciclo vital, facilidade de reproduo e os cromossomos politnicos da larva da mosca (que permite a localizao de
genes) tornam esse animal soberbamente adequado para anlises hereditrias. Mas
o desenvolvimento da Drosophila muito complexo e difcil de estudar. Um programa de pesquisa encabeado por Sidney Brenner (1974) foi organizado para identificar um organismo onde se pudesse identificar cada gene envolvido no desenvolvimento, como tambm seguir a linhagem de cada clula individual. Tal organismo o
Caenorhabditis elegans, um pequeno nematdeo (1mm de comprimento) de vida
livre encontrado no solo (Figura 13.14 A). um organismo com um rpido perodo de
embriognese (aproximadamente 16 horas), que pode ser realizada em placas de
Petri e relativamente poucos tipos de clulas. Alm disso, sua forma predominante
hermafrodita, cada indivduo contendo vulos e espermatozides. Esses nematdeos
podem reproduzir-se ou por autofertilizao ou fertilizao cruzada com machos que
ocorrem com pouca freqncia. O corpo de um C. elegans hermafrodita contm
exatamente 959 clulas somticas, cuja linhagem total foi identificada atravs de sua
cutcula transparente (Figura 13.14 B; Sulston e Horvitz, 1977; Kimble e Hirsch,1979;
Sulston et al.,1983). Alm disso, ao contrrio das linhagens de clulas dos vertebrados,
(A)
Figura 13.14
Caenorhabditis elegans. (A) Vista lateral do

adulto hermafrodita. No incio do seu desenvolvimento, o espermatozide formado. Esse
espermatozide armazenado durante os estgios posteriores, de tal forma que um vulo
maduro passe atravs do espermatozide no
seu caminho para a vulva. Dessa maneira, o
hermafrodita une os seus prprios espermatozide e vulo. (B) Mapa completo da linhagem
celular para C. elegans. Cada linha vertical
representa uma clula; cada linha horizontal
representa uma diviso celular. (De acordo com
Pines, 1992, baseado em Sulston e Horvitz,
1977, e Sulston et al., 1983.)
Gnada
Intestino
Faringe
Sistema
nervoso
nus
Reto
vulo
Vulva
Espermatozide
vulo
(B)
Clulas produtoras
de cutcula
Sistema nervoso
Faringe
Vulva
Gnada
Intestino
Celulas
germinativas
522
Ovo fertilizado
PO (zigoto)
Hipoderme
Neurnios
Msculos farngeos
Um msculo do corpo
Glndulas
(389 clulas)
Msculos do corpo
Msculos farngeos
Neurnios
Glndulas
(80 clulas)
Intestino
(20 clulas)
Hipoderme
Msculos do corpo
Dois neurnios
(47 clulas)
Msculos do corpo
(20 clulas)
Linhagem germinativa
Figura 13.15
Mapa resumido da linhagem celular de C.

elegans, enfatizando os precursores da linhagem germinativa (clulas P, P0-P4) que recebem os grnulos P. O nmero de clulas (em
parnteses) se refere s clulas presentes na
larva recm-eclodida. Algumas dessas continuam a se dividir para produzir as 959 clulas
somticas do adulto. (de Strome e Wood, 1983,
cortesia de W. Wood.)
a linhagem de clulas do C. elegans quase inteiramente invarivel de um indivduo

para o outro. Existem poucas possibilidades para o acaso (Sulston et al., 1983). (Essa
uma conseqncia da organizao espacial da segregao citoplasmtica.)
Caenorhabditis tambm tem um pequeno nmero de genes para um organismo
multicelular- aproximadamente 15.000 (Sulston et al., 1992).
A polaridade inicial parece residir no ovo alongado, o eixo ntero-posterior sendo
o eixo longo do ovo. Entretanto, a deciso sobre qual ponta se tornar a anterior e qual
ser a posterior parece depender do espermatozide. A posio de entrada do espermatozide no ncleo define o plo posterior (Goldstein e Hird, 1996).
O esquema de diviso de C. elegans (Figura 13.15) semelhante ao da linhagem
de clulas precursoras, pois durante a clivagem precoce, divises assimtricas produzem uma clula-filha diferenciada (coletivamente chamadas de clulas ncoras
e denominadas como AB, MS, E, C e D) e outra clula precursora (a linhagem P1-P4).
A localizao das substncias citoplasmticas em blastmeros especficos foi elegantemente demonstrada nessas divises assimtricas. Dentro do ovo est um conjunto de grnulos da linhagem germinativa, ou grnulos P, que so redistribudos
no zigoto, pouco depois da fertilizao e so restritos s clulas capazes de formar
gametas. Usando anticorpos fluorescentes contra um dos componentes dos grnulos P, Strome e Wood (1983) descobriram que durante a migrao pronuclear no
zigoto, os grnulos P aleatoriamente espalhados passam a se localizar na ponta
posterior do zigoto (em direo ao stio de entrada do espermatozide), de modo que
somente entram no blastmero (P1) formado do citoplasma posterior (Figura 13.16;
Prancha 10). Aps a clivagem, os grnulos P se dispersam atravs do blastmero P1
at o incio da mitose, quando eles novamente migram para a ponta posterior da
clula. Aqui eles ficam reservados para o blastmero P2. Finalmente, os grnulos P
se localizaro na clula P4, cuja descendncia se torna os espermatozides e os
vulos do adulto. A localizao dos grnulos P requer microfilamentos mas pode
ocorrer na ausncia de microtbulos. Tratando os zigotos com citocalasina D (um
inibidor de microfilamentos), se impede a segregao desses grnulos na poro
posterior da clula, enquanto que demicolcina (um inibidor microtubular semelhante
colchicina) no impede esse movimento (Strome e Wood,1983). Uma vez dentro da
regio posterior do zigoto, os grnulos P l permanecem, mesmo que os
microfilamentos sejam destrudos (Hill e Strome, 1987, 1990). [other.html#cyto4]
523
Figura 13.16
Localizao assimtrica dos grnulos P durante a fertilizao e a primeira

clivagem. As figuras esquerda esto coradas para mostrar o DNA; as
figuras direita mostram as mesmas clulas marcadas com anticorpos
fluorescentes contra a protena do grnulo P. (A) Um zigoto antes da migrao pronuclear mostra uma disperso aleatria dos grnulos P. (B) Com a
aproximao dos proncleos, os grnulos se localizam na periferia posterior do zigoto. (C) Um embrio de duas clulas no qual P1 est entrando na
prfase mittica; Os grnulos P esto agora posicionados na periferia
posterior para serem transportados para a clula P2. (de Strome e Wood,
1983, cortesia de S. Strome.)
(A)
(B)
(C)
Os mecanismos para o movimento e a ancoragem desses grnulos citoplasmticos

ainda so desconhecidos, mas eles so regulados pelos genes par que controlam a
partio do citoplasma durante as primeiras clivagens do C. elegans. Mutaes em seis
genes par (defectivos na partio) so expressas como mutantes com efeito materno,
onde as distribuies de microfilamentos so aberrantes e os grnulos P so distribudos anormalmente (Kemphues et al., 1988; Kirby et al., 1990). Clivagens precoces nesses
Figura 13.17
(A)
(B)
(C)
(D)
Actina anormal e distribuio de grnulos P

no mutante par-3. Distribuio da actina citoplasmtica no embrio do tipo selvagem
(A) e no embrio de uma fmea deficiente
em par-3 (B). A distribuio dos grnulos P
assimtrica no embrio do tipo selvagem
(C), mas simtrica no embrio deficiente em
par-3 (D). No embrio mutante de 4 clulas
(E), os grnulos P podem ser vistos em todas as quatro clulas. (de Kirby, 1992, cortesia de C. M. Kirby.)
(E)
524
embries mutantes so simtricas e sincronizadas, e os grnulos P so encontrados em

vrios blastmeros (Figura 13.17). Os fentipos dos mutantes par-2 e par-3 se parecem
aos embries do tipo selvagem quando esses so expostos a um inibidor de
microfilamentos por um perodo de 10 minutos durante o primeiro ciclo celular (Hill e
Strome, 1990). Alm disso, pelo menos trs das protenas (PAR-1, PAR-2 e PAR-3) so
elas mesmas assimetricamente distribudas no crtex do zigoto (Etemad-Moghadam et
al., 1995; Guo e Kemphues, 1995; Boyd et al., 1996). A protena PAR-2 uniformemente
distribuda pelo crtex do ocito, mas se torna localizada no crtex posterior no embrio
de uma clula. Na primeira clivagem, a protena PAR-2 entra somente na clula-filha
posterior, P1. De forma similar, PAR-2 se torna restrita ao plo posterior de P1, P2 e P3. A
protena PAR-2 parece ser crtica para a manuteno da protena PAR-1 no crtex posterior, e PAR-1 parece estar envolvida em ligao com os grnulos P (Boyd et al., 1996).
Controle maternal da identidade do blastmero: O controle
gentico das clulas progenitoras farngeas de C. elegans.
A determinao na maior parte do embrio de C. elegans autnoma, sendo os destinos celulares determinados por fatores citoplasmticos internos, e no por interaes
entre clulas vizinhas. Considera-se que os fatores proticos podem determinar o
destino celular entrando no ncleo de blastmeros especficos e ativando ou reprimindo certos genes determinantes do destino. Foram encontrados fatores de transcrio em linhagens celulares determinadas de maneira autnoma? Apesar dos grnulos
P de C. elegans estarem localizados de maneira consistente com um papel de
determinante morfogentico, eles no entram no ncleo e sua funo no desenvolvimento ainda desconhecida. Entretanto, a protena SKN-1 do embrio de C. elegans
uma candidata muito promissora para um morfgeno de fator de transcrio.
A protena SKN-1 um polipeptdeo especificado maternalmente que pode controlar o destino do blastmero EMS, a clula que gera a faringe posterior. Aps a primeira
clivagem, somente o blastmero posterior, P1, tem a habilidade de produzir as clulas
farngeas de maneira autnoma quando isolado. Depois da diviso de P1, somente o
EMS capaz de gerar clulas musculares farngeas, mesmo quando isolado das outras
clulas do corpo (Priess e Thomson, 1987). Similarmente, quando a clula EMS se
divide, somente uma de sua prognie, MS, tem a habilidade intrnseca para gerar
tecido farngeo. Isso sugere que o destino da clula farngea pode ser determinado
autonomamente por fatores maternos residindo no citoplasma que destinado particularmente para essas clulas. Bowerman e seus colaboradores (1992) procuraram
mutantes de efeito materno que no tm clulas farngeas, e eles isolaram uma mutao no gene skn-1. Embries de mes homozigotas, deficientes em skn-1, no tm
derivativos farngeos e intestinais de EMS (Figura 13.18). Em lugar de produzir as
estruturas farngeas e intestinais normais, esses embries parecem produzir tecido
hipodrmico (pele) extra, onde deveriam estar a faringe e o intestino. Somente aquelas
clulas destinadas a formar faringe ou intestino so afetadas por essa mutao. Alm
disso, a protena que seria codificada por essa mensagem tem uma seqncia no stio
de ligao do DNA semelhante aquele visto na famlia bZIP de fatores de transcrio
(Blackwell et al.,1994).
Bowerman e colegas (1993) mostraram que a protena SKN-1 est presente no
citoplasma do ovo. Entretanto, aps a primeira clivagem muito mais dessa protena
entra no ncleo P1 do que no ncleo AB (Figura 13.19). Aps a segunda diviso,
ambos os derivados P1 recebem a protena SKN-1 em seus ncleos. Assim, possvel
que a protena SKN-1 seja um morfgeno que ativa certos genes na clula P1 e seus
descendentes. Entretanto, alguma coisa a mais necessria para restringir a funo de
SKN-1 clula EMS e para impedir seu funcionamento em P2.
Restringir a identidade de EMS a um nico blastmero do embrio de 4 clulas
requer a atividade de dois outros genes, ambos parecendo regular skn-1. Mutaes
dos genes pie-1 (pharyngeal, intestinal excess) e mex-1 (muscle excess) alteram a
Tipo selvagem
Mutante skn-1
Antgeno do
msculo
da faringe
(A)
(B)
(C)
(D)
525
Figura 13.18
Deficincias de intestino e faringe de mutantes

skn-1. Embries de fmeas do tipo selvagem
(A,C) e de fmeas homozigotas para o mutante skn-1 (B,D) foram testados para verificar a
presena de msculos farngeos (A,B) e grnulos especficos do intestino (C,D). O
anticorpo especfico para o msculo farngeo
marca a musculatura da faringe nos embries
derivados de fmeas do tipo selvagem, mas
no se liga a nenhuma estrutura dos embries
de fmeas mutantes de skn-1. Analogamente,
os grnulos birrefringentes do intestino esto
ausentes nos embries derivados das fmeas
mutantes para skn-1. (de Bowerman et al.,
1992,cortesia de B.Bowerman.)
Grnulos
especficos
do intestino
determinao de clulas no embrio de oito clulas de C. elegans de tal maneira que

vrias clulas adicionais no embrio so determinadas como clulas MS (Mello et al.,
1992). Em embries derivados de fmeas deficientes em pie-1 os blastmeros irmos
P3 e C so convertidos em blastmeros E e MS, respectivamente, enquanto que embries derivados de fmeas deficientes em mex-1, todos os descendentes da clula AB
so redefinidos como clulas MS. Fmeas simultaneamente deficientes nos produtos
de mex-1 e pie-1 geram embries nos quais as seis clulas anteriores so clulas MS
e as duas posteriores, clulas E. Desse modo, as protenas PIE-1 e MEX-1 agem
independentemente- MEX-1 durante a primeira diviso e a protena PIE-1 durante a
segunda diviso (Figura 13.20; Bowerman et al., 1993). Em todos os casos o gene do
tipo selvagem SKN-1 necessrio para a formao das clulas MS extras, e embries
sem skn-1 no tm faringe. Isso relaciona as protenas MEX-1 e PIE-1 ativao (mais
Tipo selvagem
mex-1
Figura 13.19
Localizao citoplasmtica da protena SKN1. Anticorpos protena SKN-1 mostram que

ela est presente predominantemente no ncleo da clula P1, aps a primeira diviso.
Aps a segunda diviso, essa protena se acumula nas duas clulas derivadas de P1, mas
no nas clulas derivadas de AB (compare as
intensidades dos ncleos indicados pelas setas). Em mutantes mex-1 a protena SKN-1
est distribuda igualmente em todos os
blastmeros. (de Bowerman et al., 1993, cortesia de B. Bowerman.)
526
Figura 13.20
Modelo esquemtico da determinao da clula MS em embries do tipo selvagem e mutantes. (A) O determinante MS (considerado como
o produto do gene skn-1) est presente no estado inativo dentro do ovo. Durante a primeira
diviso nos embries do tipo selvagem, o determinante MS est localizado no blastmero
posterior (P1), e na segunda diviso, ele vai se
localizar na clula EMS. Na terceira diviso, a
clula EMS se divide na clula MS (onde o
fator ativado) e a clula E. Em embries derivados de fmeas deficientes em mex-1, o fator
no se segrega na primeira diviso, mas a segregao a partir de P1 normal na diviso
seguinte. Em embries derivados de fmeas
deficientes em pie-1, a segregao inicial do
determinante de MS para o P1 normal, mas a
segunda distribuio assimtrica do determinante (para a clula EMS) defeituosa. No
mutante combinado, os padres so superpostos, de modo que todas as clulas do embrio
de 4 clulas tm o determinante MS inativo.
(B) Sumrio das interaes envolvendo skn-1,
pie-1 e mex-1. (A de acordo com Mello et al.,
1992; B de acordo com McGhee, 1995.)
(A)
Ovo
Tipo selvagem
(B)
Em mutantes mex-1,
a protena SKN-1
tambm encontrada
nos ncleos AB
A protena SKN-1
normalmente
encontrada nos
ncleos de EMS e P2
O produto de pie-1
pode reprimir
atividade de
skn-1 no ncleo P2
P2 precisa contactar
EMS para haver
diferenciao do intestino
do que a localizao) de SKN-1*. Assim, a protena SKN-1 localizada no citoplasma do

ovo pode ser um fator de transcrio que ativa genes especficos no blastmero MS,
determinando o seu destino. A protena PIE-1 impede que SKN-1 especifique a faringe
em P2 e, provavelmente tambm um fator de transcrio que antagoniza sua ao
(Mello et al., 1996; Seydoux et al., 1996).
provvel que PIE-1 tambm tenha um papel positivo. Durante cada diviso, a
protena PIE-1 retida pelo centrossomo da clula que se torna o prximo blastmero
da linhagem germinativa. Mutaes do gene pie-1 materno resultam em blastmeros
da linhagem germinativa que adotam destinos somticos, com a clula P2 se comportando como um blastmero EMS do tipo selvagem. A localizao e as propriedades genticas de PIE-1 sugerem que esse reprime a determinao celular somtica e
preserva a totipotncia da linhagem das clulas germinativas (Mello et al., 1996;
Seydoux et al., 1996).
A localizao adequada de SKN-1 parece depender de protenas PAR, especialmente PAR-3 e

PAR-6 (Watts et al., 1996).
527
Na terceira diviso, o blastmero EMS d origem ao E (que forma o intestino) e MS

(que predominantemente forma a faringe e as clulas da parede muscular). As clulas
EMS contm SKN-1, e cada um dos seus descendentes contm quantidades iguais de
SKN-1. Assim, enquanto SKN-1 crtica na determinao de qual clula pode dar
origem ao mesoderma farngeo (ou seja, qual blastmero se torna a clula EMS),
alguma coisa alm de SKN-1 especifica MS excluindo E. Estudos de Lin e colegas
(1995) mostraram que a protena POP-1 crtica na especificao de MS. Na ausncia
de POP-1, a clula MS adota o destino de outro blastmero E do tipo selvagem.
Nesses mutantes de efeito maternal, a clula MS no produz nem clulas farngeas
nem musculares, e em lugar disso produz clulas intestinais. A protena POP-1 provavelmente um fator de transcrio, e pode interagir com SKN-1 para especificar o desenvolvimento de MS. [cyto5.html], [cyto6.html]
Regulao em C. elegans
O desenvolvimento de C. elegans principalmente autnomo, mas interaes
regulatrias entre clulas tambm so importantes na especificao do destino celular.
Se o blastmero EMS separado de todas as outras clulas no estgio de 4 clulas
logo aps sua formao, ele no formar os grnulos de rabditina (rhabditin), especficos do intestino. Mas se for recombinado com o blastmero P2 formar esses grnulos; mas isso no acontecer se combinado com ABa, ABp, ou com ambos os derivados de AB (Figura 13.21; Goldstein,1992). Interaes celulares so necessrias para
esse estgio de determinao intestinal.
Como o nematdeo tem linhagens celulares invariantes, tem tambm interaes
clula-clula invariantes. No embrio de 4 clulas, os blastmeros irmos Aba (anterior) e ABp (posterior) tm diferentes destinos no desenvolvimento. ABa produz neurnios, clulas hipodrmicas e clulas farngeas anteriores, enquanto ABp produz somente neurnios e clulas hipodrmicas. Entretanto, se sua posio invertida experimentalmente, seus destinos tambm so invertidos e se forma um embrio normal.
Em outras palavras, ABa e ABp so clulas equivalentes cujos destinos so determinados por suas posies dentro do embrio (Priess e Thomson, 1987). Entretanto, em
circunstncias normais, o esquema invariante de clivagem embrionria determina que
os descendentes de ABa, no ABp, produzam 19 clulas farngeas. Clulas-filha de
(A)
(B)
Intestino se diferencia
Intestino no se diferencia
(C)
Tempo de separao
(minutos antes da clivagem de EMS)
Figura 13.21
Resultados de experimentos de isolamento e

recombinao mostrando que so necessrias
interaes celulares para que a clula EMS
forme determinantes da linhagem intestinal.
(A) Quando o blastmero EMS separado
logo aps a sua formao, ele no pode produzir grnulos especficos para o intestino.
Se ele deixado por perodos mais longos,
ento, ele pode produzir. (B) Se a clula EMS
recombinada com cada um ou ambos derivados do blastmero AB, no formar grnulos especficos para o intestino. (C) Se recombinado com o blastmero P2, a clula
EMS dar origem a estruturas especficas do
intestino.(de Goldstein, 1992.)
528
ABa se diferenciam nessas clulas musculares farngeas devido sua interao com o
blastmero EMS ou seus descendentes (os quais produzem 18 clulas musculares da
faringe de maneira autnoma).
Estudos genticos mostraram que ABp se torna diferente de ABa pela interao
com a clula P2. Alm disso, esses estudos mostraram que essa interao mediada
pela protina GLP-1 na clula ABp e a protena APX-1 (anterior pharynx excess) no
blastmero P2. Em um embrio no manipulado, tanto ABa como ABp contactam o
blastmero EMS, mas somente ABp contacta a clula P2. Se a clula P2 destruda na
fase precoce do estgio de 4 clulas, a clula ABp no gera as clulas da vlvula
intestinal, o que normalmente faria (Bowerman et al., 1992). O contato entre ABp e P2
essencial para a especificao do destino das clulas ABp, e a clula ABa pode ser
mudada em um tipo de clula ABp se for forado seu contacto com P2 (Hutter e
Schnabel, 1994; Mello et al., 1994). O produto materno do gene glp-1 parece ser crtico
na distino entre ABa e ABp. Nos embries de mes com glp-1 mutante, o ABp
transformado em uma clula ABa (Hutter e Schnabel, 1994; Mello et al., 1994). Usando
alelos de glp-1 sensveis temperatura, foi mostrado que o momento para a interao
dependente de GLP-1 entre os estgios de 4 a 12 clulas, quando P2 necessrio
para o estabelecimento dos destinos de ABp (Figura 13.22). A protena um membro
de uma famlia amplamente conservada chamada de protenas Notch, que servem
como receptores de membranas celulares em muitas interaes clula-clula e tambm
detectada nas clulas ABa e ABp (Evans et al 1994).*
Um dos ligantes mais importantes para protenas Notch como GLP-1 uma outra
protena de superfcie chamada Delta. No C. elegans uma protena semelhante Delta
a APX-1 encontrada na clula P2 (Mango et al., 1994; Mello et al., 1994). Esse sinal
APX-1 parece quebrar a simetria entre ABa e ABp, pois estimula a protena GLP-1
somente no descendente AB que toca, ou seja, o blastmero ABp. Fazendo assim, a
clula P2 inicia o eixo dorsoventral de C. elegans.
Figura 13.22
Experimento com deslocamento de temperatura para determinar em qual

estgio o produto do gene glp-1 materno est ativo. Neste mutante a
protena GLP-1 funciona a 15o C, mas no a 25o C. Variando a temperatura
em diferentes estgios embrionrios foi determinado que a protena GLP1 era necessria entre os estgios de 4 a 28 clulas. (De acordo com Priess
et al., 1987.)
Larvas com musculatura

farngea derivada do blastmero AB (%)
* Como discutido no captulo anterior, a protena GLP1 est localizada nos blastmeros ABa e
ABp mas o mRNA do glp-1, maternalmente codificado, encontrado em todo o embrio. Evans e
colegas (1994) postularam que deve haver algum determinante de traduo no blastmero AB que
permite que a mensagem glp-1 seja traduzida nos seus descendentes. O gene glp-1 tambm ativo
na regulao das interaes clula-clula ps-embrionrias. Ele usado mais tarde pela clula da
extremidade distal da gnada para controlar o nmero de clulas germinativas entrando em meiose;
da o nome proliferao da linhagem germinativa (em ingls: germinal line proliferation) (veja
Captulos 17 e 22; Austin e Kimble, 1987).
Nmero total de clulas no embrio

quando a temperatura variou.
Prancha 2
Unidades de transcrio ativa em
um cromossomo de trito
Ocitos de anfbios como Notophtalmus viridescens tm

cromossomos tipo escova-de-lmpada nos quais os genes
sintetizadores de RNA ativos se projetam para fora. O eixo
do DNA dessas projees est corado com um corante branco. A mancha vermelha de um anticorpo que se liga s
protenas ligantes de RNA. Captulo 22. (Fotografia cortesia
de M. B. Roth e J. Gall.)
Prancha 1
Um clone de rs Xenopus
Os ncleos de todos os membros desse clone vieram de um nico indivduo um

girino fmea do estgio de broto de membro, cujos antecessores (painel superior
direita) foram ambos marcados com genes albinos. Os ncleos foram transferidos para ovos no-fecundados, enucleados e ativados de uma fmea do tipo
selvagem. As rs resultantes eram todas fmeas e albinas (painel inferior). Captulo 2. (Fotografia cortesia de J. Gurdon.)
Prancha 3
O fator de crescimento do fibroblasto
essencial para produo dos mesodermas
lateral e ventral em Xenopus
Quando ovos de Xenopus so injetados com um receptor mutante negativo e dominante para o fator de
crescimento de fibroblasto (FGF), o embrio incapaz de responder ao FGF. Na ausncia do sinal do
FGF, os mesodermas lateral e ventral no se formam,
e o embrio carece de tronco e cauda. Captulos 3 e
15. (Fotografia cortesia de M. Kirschner.)
Prancha 4
Capacidade do lbio
dorsal do blastporo
gerar o eixo neural
secundrio em anfbios
O lbio dorsal do blastporo

de embries de anfbios pode
organizar um segundo eixo
embrionrio quando transplantado para o lado ventral
de outra gstrula. Esta fotografia foi tirada de uma lmina real preparada por
Hilde Mangold e mostra que
as estruturas dorsais secundrias contm tanto tecidos
do hospedeiro (no pigmentados) quanto do doador
(pigmentados). Captulo 15.
(Fotografia cortesia de P.
Fssler e K. Sander.)
(A)
Prancha 5
Salvamento de
estruturas dorsais pela
protena Noggin
A protena Noggin pode ser

crtica para a induo do
mesoderma dorsal e do tubo
neural. Quando ovos de Xenopus so expostos irradiao UV antes da primeira
clivagem, no se formam estruturas dorsais (painel superior). Se uma clula precoce
de tal embrio for injetada com
RNA de noggin, os embries
formam estruturas dorsais. Se
a mensagem noggin for injetada em demasia, os embries
produzem muito mais tecido
anterior dorsal (painel inferior). Captulo 15. (Fotografias
cortesia de R. M. Harland.)
(B)
(C)
Prancha 6 ( direita)
O gene noggin transcrito no mesoderma dorsal e tecido mesodrmico
O RNA de noggin se acumula na regio da zona marginal dorsal (A) e visto no lbio dorsal
do blastporo (B). Quando essas clulas involuem, a expresso de noggin vista na notocorda
e endoderma farngeo (C), que se estende anteriormente, no centro do embrio (D). Captulo
15. (Fotografias cortesia de R. M. Harland.)
(D)
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
(F)
Prancha 7
Rearranjos do citoplasma em Xenopus laevis
O ovo no-fertilizado de Xenopus laevis tem simetria radial. (B) Movimentos citoplasmticos
so vistos medida que o ovo comea a clivar, 90 minutos aps a fecundao. O citoplasma
do futuro lado dorsal ( direita) difere daquele do futuro lado ventral ( esquerda). Essas
diferenas podem ser vistas durante toda a clivagem embrionria (C,D) e resultam no
posicionamento dos determinantes morfogenticos dorsais, no lado do embrio oposto ao
ponto de entrada do espermatozide. (E) Os movimentos citoplasmticos se correlacionam
com o deslocamento da -catenina. No estgio bicelular precoce, a -catenina (cor laranja)
est localizada predominantemente na futura superfcie dorsal do embrio. Esse padro
persiste no estgio de blstula (F). Captulos 4, 6 e 15. (A-D cortesia de M. V. Danilchik; E
e F cortesia de R. T. Moon.)
Prancha 8
Localizao de um RNA
especfico numa regio do ovo
Prancha 9
Efeito do cido retinico na
regenerao de membros
O RNA de vg1 que codifica um fator

de crescimento da famlia TGF-, aps
hibridizao in situ, encontrado residindo exclusivamente na regio vegetal do ovo de Xenopus. O crescente
branco no fundo do ovo devido
radioatividade da sonda que reconhece o RNA; o resto do ovo verde
devido colorao com o corante
Giemsa. Captulos 12, 15 e 22. (Fotografia cortesia de D. A. Melton.)
O cido retinico (RA) faz com que as clulas

em regenerao esqueam sua posio original. Tecido do pulso da salamandra em regenerao, usualmente formar somente um
pulso. Aps tratamento com RA, porm, o
tecido em regenerao (aqui de uma salamandra pigmentada escura) regenera todo o antebrao (membro inferior direito) quando enxertado em um membro posterior cortado de
um animal com pigmentao diferente. Captulo 18. (Cortesia de K. Crawford.)
Prancha 10
Localizao progressiva no citoplasma
A segregao de certos grnulos citoplasmticos (grnulos P) vista progredindo para dentro das clulas mais posteriores do embrio de Caenorhabditis elegans.
Essas clulas geram o espermatozide e o vulo do nematide. Quando os
proncleos se encontram durante a fecundao, os grnulos P se movem para a
poro posterior da clula. Esse movimento prossegue at os grnulos serem
encontrados somente na clula P que d origem aos gametas. A coluna esquerda
est corada para mostrar a posio dos ncleos, enquanto a coluna direita est
corada para mostrar os grnulos P. Captulo 13. (Fotografias cortesia de S. Strome.)
Prancha 11
Localizao citoplasmtica em
embries de tunicados
A clivagem separa regies do citoplasma em clulas

particulares. O crescente amarelo do embrio de Styela
fica localizado em um pequeno grupo de clulas que
iro gerar a musculatura larval. Esta figura mostra os
estgios de 2-, 4-, 16- e 64-clulas. Captulo 13. (Fotografias cortesia de J. R. Whittaker.)
Prancha 12
Onda de ons de clcio atravs de ovos do
ourio-do-mar durante a fertilizao
Quando o espermatozide se funde com o vulo, uma onda de clcio se

inicia no local da entrada do espermatozide e se propaga atravs do vulo.
Isso pode ser monitorado pr-carregando o ovo com um corante que fluoresce
quando liga o clcio. A onda leva 30 segundos para atravessar o ovo.
Captulo 4. (Fotografia cortesia de G. Schatten.)
(A)
Prancha 13
Regies responsivas ao cido
retinico do embrio de camundongo
(B)
(C)
Um transgene consistindo de um elemento

responsivo ao cido retinico fundido a um
gene da -galactosidase foi inserido em um
embrio de camundongo. Colorao para galactosidase deve revelar as clulas que respondem s concentraes endgenas de cido
retinico. (A) O estgio de 3-somitos mostrando responsividade ao cido retinico na
regio mediana do embrio; (B) Embries de
11,5 dias mostrando colorao regio frontonasal e crebro anterior; (C) Embrio de 14,5
dias mostrando colorao no maxilar, regio
ptica, coxim do bigode e regies interdigitais
do membro. Captulos 11, 18 e 21. (Fotografias cortesia de J. Rossant.)
Prancha 14
Formao de padres em Drosophila
(A) O eixo ntero-posterior especificado por mRNAs e protenas

citoplasmticas. O gradiente da protena Bicoid especialmente importante. Altas concentraes dessa protena (amarelo a vermelho)
causam formao da cabea e do trax ativando o gene hunchback.
(B) Os gradientes de protenas no embrio precoce ativam os genes
gap. Os produtos proticos dos genes gap (tais como hunchback e
Krppel) definem grandes domnios no corpo do inseto. Essas protenas interagem para formar limites especficos no embrio. Aqui,
as protenas Hunchback (laranja) e Krppel (verde) se sobrepem
para formar um limite (amarelo). (C) Os nveis das protenas gap
promovem a ativao de genes pair-rule especficos (aqui visveis
pelas bandas escuras) que dividem o embrio em segmentos ao longo
do eixo ntero-posterior. (D) No estgio da banda germinativa estendida, as 14 bandas do gene da polaridade segmentar engrailed podem
ser vistas. Captulo 14. (Fotografias cortesia de (A) W. Driever e C.
Nsslein-Volhard; (B) C. Rushlow e M. Levine; (C) T. Karr e (D) S.
Carroll e S. Padock.)
Prancha 15
Compartimentao do disco imaginal da asa de Drosophila
O corante imunofluorescente vermelho marca as clulas onde a protena Vestigial produzida (a futura asa ventral); o corante verde
marca as clulas que expressam a protena Apterous (necessria para
a formao da asa dorsal). A rea sobreposta amarela. Captulo 19.
(Fotografia cortesia de S. Carroll.)
Prancha 16
Localizao da RNA polimerase II nos
ocitos do bicho-da-seda gigante
Fotomicrografia de fluorescncia (usando lentes

confocais) da cmara do ovo de Hyalophora cecropia.
Fluorescncia laranja indica a presena da RNA polimerase
II (corada com amanitina marcada). Fundo verde indica a
localizao da actina. (B) Maior aumento da regio cortical
do ocito de Antherea polyphemus e clulas foliculares.
Laranja indica RNA polimerase II. As outras cores so
colorao de fundo de grnulos do vitelo e clulas
foliculares. Captulo 22. (Fotografias cortesia de S. Berry.)
Prancha 17 ( acima )
Mariposa ginandromorfa
Um mosaico sexual (ginandromorfo) de uma mariposa lo, dividido bilateralmente

em uma metade feminina rosa-pardacenta e uma metade masculina amarela, de
asa menor. Tais mosaicos sexuais so causados quando um cromossomo X
perdido de um ncleo durante a diviso mittica precoce. Captulo 20. (Fotografia de T. R. Manley; cortesia do The Journal of Heredity.)
Prancha 18 (esquerda)
Controle do desenvolvimento pelo ambiente
Lagartas de Nemoria arizonaria que eclodem na primavera ingerem flores do

carvalho e desenvolvem uma cutcula que mimetiza as flores. Lagartas da mesma
espcie que eclodem no vero (aps o desaparecimento das flores) ingerem folhas de carvalho; essas lagartas desenvolvem cutculas que se parecem com as
folhas do carvalho. Substncias qumicas nas folhas parecem modificar o desenvolvimento da cutcula. Captulo 21. (Fotografias cortesia de E. Greene.)
Prancha 19
Migrao das clulas da crista neural do pinto
Clulas da crista neural do pinto podem ser seguidas em sua migrao corando-as com
um anticorpo monoclonal marcado, fluorescente. As clulas da crista neural (coradas de
verde) so consideradas migrar atravs das regies anteriores (A) mas no das regies
posteriores (B) do tecido somtico. Esse padro especfico de migrao das clulas da
crista neural tem um papel na determinao da colocao dos neurnios perifricos.
Captulo 7. (Fotografias cortesia de M. Bronner-Fraser.)
Prancha 20
Vias de migrao neural em insetos
Axnios neurais em embries de insetos migram de acordo

com padres muito especficos. Neurnios derivados de
um precursor comum (aqui mostrados com a mesma colorao) produzem axnios que migram seletivamente com
outros axnios. O axnio Q1, por exemplo, viaja at encontrar o axnio dMP2 e em seguida viaja com esse, enquanto o axnio do neurnio G continua a mover-se em
uma linha reta at encontrar o axnio P1. Captulo 8. (Fotografia cortesia de C. Goodman.)
Prancha 21
Um camundongo com seis pais
O camundongo multicolorido foi formado misturando clulas de trs embries do estgio de 4 clulas: Um embrio
oriundo de dois camundongos pretos; um embrio oriundo
de dois camundongos brancos; e um embrio oriundo de
dois camundongos castanhos. Em lugar de formar um monstro de trs cabeas, o embrio regulou-se para formar um
camundongo de tamanho normal com contribuies de cada
um dos trs embries. Cada um dos trs embries tambm
proveu clulas da linhagem germinativa, o que foi mostrado
acasalando esse camundongo com um camundongo recessivo
(branco); esse acasalamento produziu descendncia de todas
as trs cores. Captulo 5. (Fotografia cortesia de C. Markert
eThe Journal of Heredity.)
529
O eixo esquerdo-direito determinado mais tarde, no estgio de 12 clulas quando

o blastmero MS contacta metade da prognie das clulas ABa e ABp, convertendoas em ABal (anterior esquerda) e ABpl (posterior esquerda), enquanto as outras duas
clulas se tornam as contrapartidas do lado direito. O sinal da clula MS parece ativar
GLP-1 na prognie de AB (Evans et al., 1994). Entretanto, o ligante dando esse sinal
diferente de APX-1 e ainda no foi descoberto (Hutter e Schnabel, 1995).
&
Especulaes
Ser ou No Ser: Esse o Fentipo
ERTAMENTE, estamos sempre

enfrentando decises de vida ou
morte, mas essa dicotomia existencial raramente to inflexvel como
aquela vista na linhagem celular de C.
elegans. Durante o desenvolvimento normal de C. elegans, 131 clulas se suicidam. Essa morte celular programada, ou
apoptose, um evento ativo iniciado por
dois genes, ced-3 e ced-4. Quando esses
genes so expressos, as clulas que os
expressam morrem. Mutaes de perda de
funo em qualquer um desses genes permitem a sobrevivncia de clulas que normalmente sofreriam apoptose. Os produtos de ced-3 ou ced-4 so considerados
txicos para a clula ou causam a formao de compostos txicos a partir de outros metablitos (Ellis e Horvitz, 1986;
Yuan e Horvitz, 1990)
O que determina quais clulas vivero e quais morrero? Estudos no laboratrio de Robert Horvitz (Hengartner et
al., 1992) demonstraram que o gene ced9 inibe as atividades de ced-3 e ced-4.
Mutaes que inativam a protena CED9 fazem com que numerosas clulas que
normalmente sobreviveriam ativem seus
genes ced-3 e ced-4 e morram. Isso leva
morte do embrio. Inversamente, mutantes de ganho de funo de ced-9 impedem a morte de clulas que normalmente sofrem apoptose. (Essas so as
mesmas clulas que sobrevivem nos
mutantes ced-3 e ced-4.) Portanto, a funo normal de CED-9 impedir as clulas, que devero viver, que iniciem o programa de morte celular (Figura 13.23). O
gene ced-9 parece funcionar como um
comutador binrio regulando a escolha
entre vida ou morte. Essa deciso feita
independentemente em cada clula do

embrio; possvel que cada clula do
embrio esteja preparada para morrer, e
aquelas que sobrevivem o fazem porque
um gene ced-9 ativo impede a ocorrncia da morte celular programada.[cyto7.html]
No se sabe como CED-9 impede a
morte das clulas, nem como a protena
se torna diferencialmente regulada, apesar de outros genes produzirem produtos
que a ativam. Genes similares esto sendo descritos tambm nos mamferos. O
gene BCL-2 codifica uma protena da
membrana intracelular que previne ou atrasa a apoptose normal de neurnios e
linfcitos humanos (Hockenbery et al.,
1990; Williams et al., 1990; Allsopp et al.,
1993). A maioria dos linfcitos e seus precursores morrem durante sua maturao,
e aqueles que sobrevivem tm um limitado tempo de vida. Eles so protegidos da
morte por certos fatores de crescimento
(A)
ced-9
bcl-2
(B)
ced-9
Inibe
ced-3
ced-4
(apopain)
Morte
celular
Sobrevivncia
da clula
Morte celular
Figura 13.23
Modelo para o funcionamento do gene ced-9

em C. elegans. (A) ced-9 age como em regulador negativo de ced-3 e ced-4, os dois genes
cujas atividades causam a morte celular. Em
mamferos, o homlogo de ced-9 o Bcl-2 e o
homlogo de ced-3 o apopain. Ainda no foi
encontrado o homlogo para ced-4. (B) A troca
binria efetuada por ced-9. Quando na forma
ligada, as atividades de ced-3 e ced-4 so inibidas e a clula sobrevive. Se ced-9 no est ligado, os produtos dos genes ced-3 e ced-4 matam
a clula. (De acordo com Hengartner et al.,1992.)
que parecem ativar o gene BCL-2. Alm

disso, se genes BCL-2 em um promotor
constitutivamente ativo so transferidos
para clulas que vo morrer logo, a protena BCL-2 produzida e os intervalos de
vida das clulas so significativamente
aumentados (Nuez et al., 1990). Isso
feito naturalmente pelo vrus de Epstein
Barr (que causa mononucleose). Linfcitos infectados com o vrus de EpsteinBarr no morrem como seria usual porque
uma das protenas virais induz a atividade do gene BCL-2 (Henderson et al., 1991).
As similaridades entre ced-9 e BCL-2
so to impressionantes que se o gene
humano BCL-2 ativo colocado em embries de C. elegans, ele impede que a
morte celular ocorra normalmente (Vaux
et al., 1992). Isso sugere que BCL-2 funciona no homem por sua ao nos homlogos humanos de ced-3 e ced-4. Os homlogos humanos de ced-3 foram encontrados, e constituem uma famlia de proteases
de cistena que inclui apopana (CPP32). A
apopana capaz de inativar, no incio da
apoptose, a enzima poli(ADP-ribose)
polimerase, uma protena que necessria para a estrutura e integridade do genoma (Nicholson et al., 1995). Considera-se
ainda que a apopana deva ser negativamente regulada por BCL-2. Certas doenas degenerativas (como a apoptose
linfoctica induzida por vrus na AIDS, ou
doenas neurodegenerativas como apoplexias) podem se originar da inativao
ou do impedimento da ativao de genes
como BCL-2. Se for mostrado que esse
o caso, aqueles genes ativos em impedir a
morte celular no desenvolvimento podem
se situar entre os genes do nosso corpo
mais importantes para a medicina.
530
Divises celulares assimtricas no desenvolvimento tardio

Estudos do desenvolvimento do sistema nervoso da Drosophila forneceram evidncia de que a segregao de determinantes morfogenticos podem ocorrer no desenvolvimento tardio, aps o estabelecimento do plano principal do corpo. Na formao
do sistema nervoso central da larva da Drosophila, clulas-tronco neurais (neuroblastos) se dividem formando dois tipos distintos de clulas. Uma clula-filha outro
neuroblasto (ou seja, outra clula-tronco para manter o crescimento da populao),
enquanto a outra clula-filha uma clula-me ganglionar cuja prognie est comprometida a se tornar neurnios (Captulo 8). Essa clula-me ganglionar contm um
distinto conjunto de protenas, incluindo a protena de membrana Numb e o fator de
transcrio Prospero, que especificam seu comprometimento neuronial. Surpreendentemente, tanto a protena Numb como a Prospero no so sintetizadas na clulame ganglionar; elas so sintetizadas no neuroblasto. Esse paradoxo foi resolvido
quando os pesquisadores encontraram que enquanto no neuroblasto, as protenas
Numb e Prospero permanecem no citoplasma. Entretanto, quando aquela clula comea a se dividir, essas protenas se associam membrana que ir formar a clula-me
ganglionar. Quando a diviso termina, todas as protenas Numb e Prospero foram
repartidas para a clula-me ganglionar onde elas exercem suas respectivas funes
(Figura 13.24; Hirata et al., 1995; Knoblich et al., 1995; Spana e Doe, 1995). Essas duas
protenas compartilham uma seqncia de aminocidos considerada responsvel pela
sua segregao assimtrica. Quando esse segmento de aminocidos removido dessas protenas, elas se distribuem aleatoriamente em ambas as clulas-filha. [cyto8.html]
(B) Metfase
Protena Prospero se acumula
na membrana polar
Anfase
(A)
Clula-me
ganglionar
Clula-tronco do
neuroblasto
(C)
(D)
Telfase
Interfase
Figura 13 24
Distribuio assimtrica da protena Prospero durante o desenvolvimento da clula-me

ganglionar. (A) Clula-tronco do neuroblasto sintetiza a protena Prospero, a qual permanece
difusamente distribuda no citoplasma. (B) Na metfase, toda a protena Prospero est acumulada em um dos plos do neuroblasto em diviso. (C) Na anfase e telfase, a protena Prospero entra na clula-me ganglionar e excluda do neuroblasto. (D) A protena Prospero, sendo
um fator de transcrio, entra no ncleo da clula-me ganglionar. A protena Numb se junta
Prospero ao deixarem o neuroblasto, mas no entra no ncleo do neuroblasto. (De acordo
com Hirata et al., 1995.)
531
Localizao citoplasmtica de
determinantes de clulas germinativas
Determinantes localizados no citoplasma so encontrados em todo o reino animal. Os
determinantes observados mais freqentemente so os responsveis pela determinao de precursores de clulas germinativas, ou seja, as clulas que do origem aos
gametas. Mesmo em embries onde outros aspectos do desenvolvimento precoce
so reguladores, aquelas clulas contendo determinadas regies do citoplasma do
ovo so destinadas a se tornarem precursoras de clulas germinativas.
Determinao de clulas germinativas em nematdeos
Theodor Boveri (1862-1915) foi o primeiro a observar os cromossomos de um organismo ao longo do seu desenvolvimento. Nesse estudo, ele descobriu um aspecto fascinante do desenvolvimento do nematdeo Parascaris aequorum (antes Ascaris
megalocephala). Esse nematdeo tem somente dois cromossomos por clula haplide,
permitindo assim observaes detalhadas dos cromossomos individuais. O plano de
clivagem da primeira diviso embrionria pouco usual, porque sendo equatorial
separa a metade animal da metade vegetal do zigoto (Figura 13.25A). Mais estranho,
no entanto, o comportamento dos cromossomos na diviso subseqente desses
primeiros dois blastmeros. As extremidades dos cromossomos no blastmero derivado do hemisfrio animal se fragmentam em dezenas de pedaos imediatamente antes
da clivagem dessa clula. Esse fenmeno chamado diminuio cromossmica, porque somente sobrevive uma parte do cromossomo original. Numerosos genes so
perdidos nessas clulas pela fragmentao dos cromossomos, e esses genes no
esto includos nos ncleos recentemente formados (Tobler et al., 1972). Enquanto
isso, no blastmero vegetativo, os cromossomos permanecem normais. Durante a
segunda diviso, a clula animal cindida meridionalmente, enquanto a clula vegetal
novamente se divide equatorialmente. Ambas as clulas derivadas vegetativamente
tm cromossomos normais. Entretanto, os cromossomos de um dos dois blastmeros
vegetativos, o mais prximo do plo animal, fragmentam-se antes da terceira diviso.
Desse modo, no estgio de 4 clulas, somente uma clula- a mais vegetal- contm um
conjunto completo de genes. Em clivagens sucessivas, ncleos somticos so emitidos
(A)
Plasma germinativo
Distribuio do plasma germinativo (colorido)

durante a clivagem de zigotos de Parascaris
(A) normais e (B) centrifugados. (A) O plasma germinativo conservado normalmente no
blastmero mais vegetal, como mostrado pela
falta de diminuio cromossmica naquela clula especfica. Desse modo, no estgio de 4
clulas, o embrio tem uma clula-tronco para
seus gametas. (B) Quando a primeira clivagem
deslocada 90o pela centrifugao, ambas as
clulas resultantes tm plasma germinativo vegetal, e nenhuma delas sofre diminuio de cromossomos. Aps a segunda clivagem, essas
duas clulas do origem s clulas-tronco germinativas. (De acordo com Waddington, 1996.)
Diminuio de
cromossomos
Sem diminuio
de cromossomos
Clulas-tronco
(B)
Plasma germinativo
Figura 13.25
Sem diminuio
de cromossomos
Clulas-tronco
532
dessa linhagem, a mais vegetal, at o estgio de 16 clulas quando existem somente

duas clulas com cromossomos no diminudos. Um desses dois blastmeros d
origem s clulas germinativas; o outro finalmente sofre diminuio de cromossomos
e forma clulas somticas. Os cromossomos s permanecem intactos nas clulas destinadas a formar a linhagem germinativa. Se esse no fosse o caso, haveria degenerao da informao gentica ao se passar de uma gerao para a outra. As clulas que
sofreram diminuio de cromossomos originam as clulas somticas.*
Boveri foi considerado o ltimo dos grandes observadores da embriologia e o
primeiro dos grandes experimentadores. No satisfeito em observar a reteno do
completo conjunto cromossmico pela clula germinativa, ele se disps a investigar
se uma regio especfica do citoplasma protege o ncleo nela inserido da diminuio.
Se esse fosse o caso, qualquer ncleo localizado nessa regio deveria ser protegido.
Boveri (1910) testou essa possibilidade, centrifugando ovos de Parascaris pouco
antes da primeira clivagem. Esse tratamento modificou a orientao do fuso mittico.
Quando o fuso se forma perpendicularmente sua orientao normal, ambos os
blastmeros resultantes devem conter parte do citoplasma vegetativo (veja Figura
13.25). De fato, Boveri encontrou que depois da primeira diviso, nenhum ncleo
sofreu diminuio cromossmica. Entretanto, a prxima diviso foi equatorial ao longo do eixo animal-vegetal. Agora, ambos os blastmeros animais resultantes sofreram
diminuio, mas no as duas clulas vegetativas. Boveri concluiu que o citoplasma
vegetativo contm um fator (ou fatores) que protege os ncleos da diminuio cromossmica e os determina que sejam clulas germinativas.
O plasma do plo dos nematdeos, incluindo o de C. elegans, permanece pouco
caracterizado. A RNA helicase parece se localizar no plasma germinativo tanto de C.
elegans como de Ascaris, e estudos com anticorpos sugerem que essas enzimas
podem ser parte dos grnulos P (Roussell e Bennett, 1993; Kuznicki et al., 1996).
Determinao da clula germinativa em insetos
O citoplasma germinativo de insetos diferente de qualquer outro citoplasma no ovo.
Hegner (1911) mostrou que quando se removia ou destrua essa regio de ovos de
besouro, antes que ocorresse a formao da clula polar, os embries resultantes no
possuiam clulas germinativas e eram estreis. Geigy (1931) mostrou que irradiando o
plasma polar do ovo da Drosophila com luz ultravioleta eram produzidas moscas
estreis; Okada e colaboradores (1974) estenderam essa linha de experimentao mostrando que a adio do plasma polar de embries doadores no irradiados, podia curar
a esterilidade de ovos irradiados (Figura 13.26). Nenhuma outra parte do citoplasma
podia reverter essa esterilidade. O plasma polar posterior convenientemente marcado com os grnulos polares (Figura 13.27A). No se conhece o seu papel na determinao das clulas germinativas, mas sua constante associao com o plasma polar e
as clulas polares dele derivadas, fazem dos grnulos um marcador conveniente dessa regio. A regio das clulas polares identificada facilmente no microscpio eletrnico de varredura (Figura 13.27B). [cyto9.html]
Trabalhos recentes sobre o citoplasma da clula polar esto focalizados principalmente em embries de Drosophila. Os ncleos de embries de Drosophila no estgio
sincicial so totipotentes e podem dar origem a qualquer tipo celular. Quaisquer dos
ncleos que se encontram no plo posterior so os primeiros a formar clulas e incorporar o plasma germinativo. Essas clulas se tornam os precursores dos gametas
(Schbiger e Wood, 1977). A natureza confirmou a importncia do plasma polar e de
seus grnulos polares. Fmeas homozigotas de Drosophila para a mutao grandchildless produzem descendentes normais mas estreis: GG x gg UGg (estril).
* Enquanto esses casos de diminuio e eliminao de cromossomos so excees da regra geral
de que clulas diferenciadas retm genes no usados, no h evidncia que diferentes clulas somticas
em Parascaris retm diferentes partes do genoma.
(A)
Agulha
Agulha
Plasma polar removido
do ovo doador
Plasma polar injetado (ligeiramente fora

do centro) no ovo hospedeiro irradiado
(B)
Blastoderma
Blastoderma
Blastoderma
Clulas
polares
Clulas
polares
Figura 13.26
Habilidade do plasma polar para corrigir a esterilidade induzida por radiao. (A) Tcnica de
transplante de plasma polar de um doador no irradiado a um hospedeiro irradiado. (B) Sees
longitudinais da poro posterior do embrio de Drosophila fixado ao se completar a clivagem.
(i) Embrio normal com o blastoderma completo e clulas polares. (ii) Embrio irradiado durante
a clivagem precoce. O blastoderma se formou, mas as clulas polares esto ausentes. (iii)
Embrio irradiado durante a clivagem precoce, mas subseqentemente injetado com plasma polar
de embries normais. O blastoderma e clulas polares esto presentes. (De acordo com Okada
et al., 1974, cortesia de M. Okada.)
Mahowald e colegas (1979) mostraram que essas fmeas cruzadas com machos normais produzem embries cujos ncleos nunca migram para o plasma polar no ovo. No
se formam clulas polares, e os adultos resultantes no tm clulas germinativas
primordiais para a produo de gametas. Outra mutao de efeito materno agameticcausa a ausncia de clulas germinativas em cerca de metade das gnadas dos descendentes de moscas fmeas homozigotas. Nesse caso, so formadas clulas polares
em nmero normal, mas os grnulos polares degeneram logo aps a fertilizao
(Engstrom et al., 1982). Experimentos com transplantes demonstram que o defeito est
no citoplasma polar e no no ambiente ovariano. Dessa maneira, temos agora evidncia bastante segura que o plasma polar est diretamente envolvido na determinao
da clula germinativa.
(A)
Figura 13. 27
O plasma polar de Drosophila. (A) Micrografia eletrnica de grnulos polares de uma frao
particulada de clulas polares de Drosophila. (B) Micrografia eletrnica de varredura de clulas
polares de um embrio de Drosophila pouco antes do trmino da clivagem. As clulas polares
podem ser vistas direita da fotografia. (Fotografias, cortesia de A. P. Mahowald.)
(B)
533
534
Componentes do plasma polar da Drosophila

O que so os determinantes do plasma polar da Drosophila e como eles se localizam
na parte posterior do embrio? Grnulos polares de Drosophila foram isolados e
parecem ser compostos de protena e RNA (Mahowald, 1971a,b; Waring et al., 1978),
mas a identidade dessas macromolculas (e existem ainda algumas de identidade desconhecida) no foi estabelecida at que fosse usado um procedimento gentico. Um
dos componentes do plasma germinativo o mRNA do gene germ cell-less (gcl). Esse
gene foi descoberto por Jongens e seus colegas (1992) quando eles mutaram Drosophila e fizeram uma varredura procurando as fmeas que no tinham netos (descendentes de segunda gerao?). A argumentao era que se uma fmea no colocasse o
plasma germinativo funcional em seus vulos, ela ainda podia ter descendentes, mas
esses seriam estreis (pois no possuam clulas germinativas). O gene gcl do tipo
selvagem transcrito nas clulas nutrizes do ovrio da mosca, e seu mRNA transportado para o vulo atravs dos canais anelares. Uma vez dentro do vulo, ele transportado para a poro mais posterior e permanece dentro do que ser o plasma polar
(Figura 13.28AB). Essa mensagem traduzida em protena durante os estgios precoces da clivagem (Figura 13.28C,D). A protena codificada pelo gcl parece entrar no
ncleo e essencial para a produo de clulas polares. Moscas mutantes para esse
gene no tm clulas germinativas, e quando RNA antisenso contra a mensagem de
glc colocado no embrio, a habilidade em formar clulas germinativas tambm
destruda (Figura 13.29).
O segundo candidato a determinante de plasma germinativo a protena Nanos. A
mensagem nanos est localizada no plo posterior do vulo e a protena Nanos dela
traduzida necessria para a formao do abdmen na Drosophila. Recentemente,
Kobayashi e colegas (1996) mostraram que a protena tambm necessria para a
formao de clulas germinativas. Clulas polares sem Nanos no migram para as
gnadas e no se tornam gametas.
Um terceiro candidato plasma germinativo foi uma grande surpresa: RNA
ribossmico grande das mitocndrias. Usando o sistema de ensaio com ovos irradiados com luz ultravioleta, Kobayashi e Okada (1989) mostraram que a injeo de RNA
ribossmico grande das mitocndrias (mtlrRNA) restaura a habilidade de formar clulas polares por esses embries. Alm disso, em ovos normais de mosca, o mtlrRNA
est localizado fora das mitocndrias somente no plasma polar de embries em estgio
de clivagem, onde aparece como um componente dos grnulos polares (Kobayashi et
al., 1993: Amikura et al., 1996). Apesar do mtlrRNA estar envolvido na formao de
clulas polares, elas no o contm.
Tipo selvagem
Mutante
Figura 13.28
Localizao dos produtos do gene germ cellless na parte posterior do ovo e do embrio. O
mRNA de gcl pode ser visto no plo posterior
em embries produzidos por fmeas do tipo
selvagem, na fase precoce de clivagem (A),
mas no nos embries produzidos por fmeas
mutantes deficientes em gcl (B). Anticorpos
contra a protena codificada pelo gene gcl podem ser detectados no estgio de blastoderma
celular de embries produzidos por fmeas do
tipo selvagem (C), mas no em embries de
fmeas mutantes (D). (De acordo com Jongens
et al.,1992, cortesia de T. A. Jongens.)
RNA
gcl
(A)
(B)
(C)
(D)
Protena
Gcl
Tipo selvagem
Mutante
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
(F)
Um quarto componente do plasma polar da Drosophila (e um que se localiza nos

grnulos polares) um RNA no traduzvel chamado componente do grnulo polar
(Pgc). Sua exata funo permanece desconhecida, mas as clulas polares de moscas
transgnicas fmeas que produzem RNA antisenso contra Pgc no migram para as
gnadas (Nakamura et al., 1996).
O que dirige o mRNA de germ cell-less, a mensagem de nanos, e o mtlrRNA (e
provavelmente outras molculas do plasma polar) parte posterior do ovo? Existem
pelo menos outros sete mutantes incapazes de formar clulas germinativas, e esses
mutantes tambm tm abdomens malformados. Essas mutaes esto nos genes
capuccino, spire, staufen, oskar, vasa, valois e tudor. Cada um desses genes ativo
no ovrio e coloca um de seus produtos no ocito em crescimento. Sondando a
localizao do mRNA ou protena para um gene em um mutante que no possui um
outro gene, pode-se colocar as aes desses genes em uma ordem definida (Figura
13.30). Esses estudos (revisados por Strome, 1992; Ephrussi e Lehmann, 1992) mostram que duas protenas, aquelas produzidas pelos genes capuccino e spire, so
necessrias para a localizao da protena Staufen no lado posterior. (Ou seja, a protena Staufen no ser colocada no posterior dos vulos de mes cujos ovrios no
podem produzir Capuccino ou Spire.) A protena Staufen necessria para a localizao posterior do mRNA de oskar. A protena produzida pela mensagem oskar um
componente dos grnulos polares e crtica para a localizao posterior da protena
Vasa, outro componente dos grnulos polares. Mutantes de tudor e valois no afetam
o posicionamento de Vasa, mas parecem ser crticos para a manuteno do plasma
polar, uma vez formado (Hay et al., 1990; Lasko e Ashburner, 1990).
A construo do plasma polar organizada pela mensagem oskar. A quantidade e
posio desse mRNA determina o nmero de clulas polares e o lugar onde elas se
535
Figura 13.29
Migrao de clulas germinativas em embries

produzidos por fmeas do tipo selvagem e em
embries produzidos por mutantes que no
podem sintetizar a protena do gene germ cellless. A marcao das clulas germinativas
obtida por anticorpos dirigidos contra Vasa,
um componente do grnulo polar que no
mutado em nenhum dos tipos de Drosophila.
Um embrio de fmea do tipo selvagem no
estgio de blastoderma precoce (A), tem clulas polares no plo posterior. Embries de fmeas mutantes de glc (B) no as tm. Em embries de fmeas do tipo selvagem, essas clulas polares podem ser removidas para o
primrdio do intestino mdio posterior (C) de
onde elas migram para as gnadas (E). Essas
clulas no so vistas em embries de fmeas
sem a atividade do gene germ cell-less (D,F).
(De acordo com Jongens et al., 1992, cortesia
de T. A. Jongens.)
536
Figura 13.30
(A) Diagrama explicativo da determinao de etapas da via gentica que leva

os determinantes da clula germinativa
a uma localizao posterior. (B) Sumrio dessas etapas.
(A)
Sonda oskar no ovo

do tipo selvagem
Sonda oskar no ovo

deficiente de staufen
Sonda staufen no
ovo do tipo selvagem
Sonda staufen no ovo

deficiente de oskar
Staufen afeta a posio do

mRNA de oskar. oskar no
afeta a posio do mRNA de
staufen. Portanto, a funo do
gene staufen precede a funo
do gene oskar
(B)
cappucino
spire
oskar
staufen
(localizado posteriormente)
vasa
tudor
Determinantes da
clula germinativa
formam.* Embries derivados de fmeas com somente uma cpia do gene oskar produzem de 10 a 15 clulas polares no estgio de blastoderma celular, enquanto aquelas
que contm duas cpias do gene produzem aproximadamente 35 clulas polares. Aumentando-se o nmero de cpias do gene oskar para quatro, sero formadas cerca de
50 clulas polares. Alm disso, Ephrussi e Lehmann (1992) demonstraram que clulas
germinativas sero formadas onde estiver localizada a mensagem oskar e os estgios
que a precedem so cruciais somente na colocao do mRNA de oskar no plo posterior do ovo. Se a mensagem oskar se localiza na parte anterior do embrio (o que pode
ser feito experimentalmente), o plasma e as clulas germinativas se formaro no anterior. A protena Oskar provavelmente constri a primeira parte estrutural dos grnulos
polares. As protenas Vasa e Tudor se ligam Oskar tornando a estrutura mais complexa e apta a ligar os determinantes da clula germinativa (Breitwieser et al., 1996). A
localizao do mRNA de gcl e do mtlrRNA no plo posterior do ovo frustrada por
qualquer uma das mutaes precedentes. Em mutantes valois e tudor, pequenas quantidades da mensagem de glc podem ser vistas no plasma posterior em embries em
clivagem precoce, mas essa localizao perdida na clivagem tardia (Jongens et al.,
1992). Assim, os grnulos polares incluem os determinantes das clulas germinativas
e a estrutura que os mantm no posterior do ovo e do embrio. A estrutura ligar o
mRNA do germ cell-less (e provavelmente produtos gnicos para outros determinantes
de clulas germinativas). Essas mensagens so traduzidas em protenas durante a
clivagem precoce, entram no ncleo das clulas polares, e (de uma forma ainda no
conhecida) determinam que essas clulas devam ser germinativas.
Determinao de clulas germinativas em anfbios
A localizao citoplasmtica de determinantes de clulas germinativas foi tambm
observada em embries de vertebrados. Bounoure (1934) mostrou que a regio
vegetativa de ovos fertilizados de r contm um material com propriedades de colorao semelhantes s do plasma polar de Drosophila (Figura 13.31). Ele conseguiu
*O nome oskar no vm de Grouch nem do rei da Noruega, mas do anti-heri ano do romance
de Gnter Grass, The Tin Drum. A traduo especfica de regio do mRNA do oskar em isoformas
especficas um processo complexo. A mensagem oskar translocada atravs do ovo ao plo
posterior por uma estrutura contendo tropomiosina que ligada pela protena repressora Bruno,
para prevenir sua traduo prematura (Erdyli et al., 1995; Kim-Ha et al., 1995). Com a localizao
do mRNA no plo posterior, a protena Staufen permite sua traduo. A protena Oskar necessria
para reter o mRNA de oskar (e a protena Oskar) no plo posterior (Markussen et al., 1995; Rongo
et al., 1995; Captulo 22).
Plaquetas de vitelo
(A)
Plasma
germinativo
Plo vegetativo do zigoto
Plasma germinativo
(B)
Fuso
mittico
Plaquetas
de vitelo
Figura 13.31
Clula
somtica
Plasma germinativo de embries de r. (A) Plasma germinativo (reas escuras) perto do plo
vegetativo de um zigoto recentemente fertilizado. (B) Clula contendo plasma germinativo na
regio endodrmica da blstula na anfase mittica. Note o plasma germinativo penetrando em
somente uma das clulas-filha carregadas com vitelo. (C) Clula germinativa primordial e clulas
somticas perto do assoalho da blastocele na gstrula precoce. (Cortesia de A. Blackler.)
seguir esse citoplasma cortical at algumas clulas no endoderma presuntivo que

normalmente migraria para a crista genital. Transplantando clulas geneticamente
marcadas de um embrio para outro, Blackler (1962) mostrou que essas clulas eram
precursoras das clulas germinativas primordiais. Os movimentos precoces do plasma
germinativo foram analisados em detalhe por Savage e Danilchik (1993), que marcaram
o plasma germinativo com corante fluorescente. Eles encontraram que o plasma
germinativo de ovos no fertilizados consiste de pequenas ilhas que parecem estar
amarradas massa do vitelo prximo ao crtex vegetativo. Essas ilhas do plasma
germinativo se movem com essa massa de vitelo vegetativo durante a rotao cortical
na fertilizao. Aps a rotao, as ilhas so liberadas da massa de vitelo e comeam a
se fundir e migrar para o plo vegetal. Essa agregao depende de microtbulos, e o
movimento desses conjuntos ao plo vegetal dependente de uma protena semelhante quinesina que pode funcionar como um motor no movimento do plasma
germinativo (Robb et al., 1996). Mais tarde, contraes peridicas da superfcie da
clula vegetativa parecem empurrar esse plasma germinativo ao longo dos sulcos nos
blastmeros recmformados, permitindo-lhe penetrar no embrio.
Quando luz ultravioleta aplicada superfcie vegetativa (e em nenhum lugar
mais) do embrio da r, os animais resultantes so normais mas no tm clulas
germinativas em suas gnadas (Bounoure, 1939; Smith, 1966). Muito poucas clulas
germinativas primordiais chegam s gnadas, e as que chegam tm cerca de um dcimo do volume das clulas germinativas primordiais normais e tm ncleos com formas
aberrantes (Zst e Dixon, 1977). Savage e Danilchik (1993) mostraram que a luz UV
impede as contraes da superfcie vegetativa e inibe a migrao do plasma germinativo
ao plo vegetal. Os homlogos do Xenopus de Nanos (uma protena da Drosophila
essencial para a migrao da clula polar) e Vasa so especificamente localizadas
nessa regio (Forristal et al., 1995; Ikenishi et al., 1996; Zhou e King, 1996). Ento,
como no plasma polar da Drosophila, o citoplasma da regio vegetativa dos zigotos
de r contm os determinantes para a formao das clulas germinativas.
(C)
Plaquetas
de vitelo
Clula germinativa
537
538
Resumo
Temos evidncia que em certos organismos a determinao do destino de uma clula
devida poro do citoplasma do ovo que ela adquire durante a clivagem. Tal clula
diferencia-se independentemente das outras clulas, e os organismos que utilizam o
mecanismo tendem a um tipo de desenvolvimento em mosaico ou determinado. Essa
forma de desenvolvimento exibida por moluscos, tunicados e nematdeos. A localizao dos determinantes morfogenticos dentro do citoplasma do ovo, sua redistribuio
durante o desenvolvimento do ovo e a fertilizao e os padres de clivagem celular so
importantes para determinar o destino de cada clula. Cada um desses fenmenos uma
funo do ovo. Apesar da maior parte do desenvolvimento desses organismos seguir o
padro de mosaico, alguma determinao interativa tambm existe. Em tunicados, o
sistema nervoso e alguns msculos so formados por interaes indutivas entre
blastmeros, e os caracis e nematdeos tambm tm certos rgos formados de maneira interativa. No prximo captulo nos ocuparemos de certos organismos nos quais as
interaes entre molculas no blastoderma sincicial de ovos de insetos constituem o
mecanismo primrio da determinao do destino celular.
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A gentica da especificao axial

em Drosophila
Quando um espermatozide penetra no vulo, entra em um sistema celular que j alcanou um certo grau de organizao.
ERNST HADORN (1955)
Aqueles de ns que esto trabalhando com
Drosophila encontram um aspecto da questo. Pois o material disponvel tudo que se
pode desejar, e mesmo experimentos embriolgicos podem ser realizados... Depende de
ns utilizarmos essas oportunidades. Temos
uma histria completa a desemaranhar, pois
podemos trabalhar as coisas por ambos trminos aos mesmo tempo.
JACK SCHULTZ (1935)
Inicialmente a principal vantagem da

Drosophila foi uma que escapou viso
dos historiadores: era um organismo excelente para projetos de estudantes.
ROBERT E. KOHLER (1994)
14
O LTIMO CAPTULO, discutimos as especificaes de clulas embrionri-
as precoces, quando adquirem diferentes determinantes citoplasmticos que

estavam armazenados no ocito. As membranas celulares estabelecem a regio do citoplasma incorporado em cada clula, e acredita-se que determinantes
morfogenticos direcionam, em seguida, a expresso gnica nesses blastmeros. Durante o desenvolvimento de Drosophila, as membranas celulares no se formam antes
da dcima terceira diviso nuclear. Antes disso, todos os ncleos dividem entre si um
citoplasma comum, e o material pode difundir atravs do embrio. Nesses embries, a
especificao de clulas ao longo dos eixos ntero-posterior e dorsoventral
conseguida pelas interaes de materiais citoplasmticos dentro de uma nica clula
multinucleada. Alm disso, o incio das diferenas entre os eixos controlada pela
posio do vulo dentro do ovrio materno. Embora o local da entrada do espermatozide possa fixar os eixos em ascdios e nematides, os eixos ntero-posterior e dorsoventral da mosca so especificados por interaes entre o vulo e suas clulas foliculares que o circunda.
Resumo do desenvolvimento de Drosophila

Como discutido no Captulo 3, os embries de Drosophila desenvolvem-se muito
rapidamente atravs de um srie de divises nucleares que formam um blastoderma
sincicial. Durante o nono ciclo da diviso, cerca de cinco ncleos alcanam a superfcie do plo posterior do embrio. Esses ncleos ficam envolvidos pelas membranas
celulares e geram as clulas polares que do origem aos gametas do adulto. A maioria
dos outros ncleos chegam periferia do embrio no ciclo dez e em seguida sofrem
mais quatro divises com velocidades progressivamente menores. Aps o ciclo 13,
membranas celulares crescem entre os ncleos para formar o blastoderma celular de
cerca de 6000 clulas (Turner e Mahowald, 1977; Foe e Alberts, 1983). No ciclo 14, o
nvel da transcrio geral, que era muito baixo, aumenta dramaticamente. Ao mesmo
tempo, o embrio de 2 a 3 horas inicia a gastrulao.
Os primeiros movimentos da gastrulao de Drosophila segregam o mesoderma, o
ectoderma e o endoderma presuntivos (Figura 14.1). O mesoderma presuntivo - aproximadamente 1000 clulas contendo a linha ventral mediana - se dobram para produzir
o sulco ventral. Esse sulco se desprende da superfcie para tornar-se o tubo ventral no
543
544
PARTE IV Especificao do Destino Celular e os Eixos Embrionrios
(A)
(B)
(C)
Invaginao
do intestino
anterior
Sulco ceflico
Sulco ventral Sulco ventral
Clulas polares
na invaginao
do intestino
mdio
(D)
(E)
Clipeolabro
Regio proceflica
Crista
ptica
(F)
Segmento anterior
Crista
dorsal
Figura 14.1
Gastrulao em Drosohila. (A) Sulco ventral comeando a formar medida que as clulas
flanqueando a linha mediana ventral se invaginam. (B) O sulco se fecha, com clulas mesodrmicas colocadas internamente e ectoderma superficial flanqueando a linha mediana ventral. (C)
Vista dorsal de um embrio um pouco mais velho mostrando as clulas polares e o endoderma
posterior mergulhando no embrio. (D) Vista lateral mostrando migrao completa da banda
germinativa. Sutis reentrncias marcam o comeo da segmentao ao longo da banda germinativa: Ma, Mx e Lb correspondem aos segmentos mandibular, maxilar e labial da cabea. T1-T3,
segmentos torcicos; A1-A8, segmentos abdominais. (E) Banda germinativa revertendo sua
direo. Os segmentos reais so agora visveis, assim como os outros territrios da cabea dorsal,
tal como o clipeolabro, a regio proceflica, a crista ptica e a crista dorsal. (F) Larva recmeclodida do primeiro instar. (Cortesia de F. R. Turner.)
CAPTULO 14 Especificao axial em Drosophila
545
interior do embrio. Em seguida, se achata para formar uma camada de tecido mesodrmico sob o ectoderma ventral. O endoderma prospectivo invagina em duas bolsas nos
terminais anterior e posterior do sulco ventral. As clulas polares so internalizadas
juntamente com o endoderma. Nesse momento, o embrio se curva para formar o sulco
ceflico e as dobras transversais anterior e posterior. [other.html#droso1]
As clulas que permanecem na superfcie (o ectoderma) sofrem convergncia e
extenso, migrando para a linha ventral mediana para formar a banda germinativa. Essa
se estende posteriormente e talvez devido ao invlucro do ovo, se enrola em volta da
superfcie superior (dorsal) do embrio. Assim, ao final da formao da banda
germinativa, as clulas destinadas a formar as estruturas larvais mais posteriores
esto localizadas logo aps a futura regio da cabea. Nesse momento, comeam a
aparecer os segmentos corporais, dividindo o ectoderma e o mesoderma. A banda
germinativa se retrai em seguida, colocando os presuntivos segmentos posteriores na
extremidade posterior do embrio.
Enquanto a banda germinativa estiver em sua posio estendida, vrios processos chaves morfogenticos ocorrem: organognese, segmentao e segregao dos
discos imaginais.* Alm disso, o sistema nervoso forma-se a partir de duas regies de
clulas ectodrmicas localizadas ventralmente. Conforme descrito no Captulo 8, os
neuroblastos se diferenciam desse ectoderma neurognico dentro de cada segmento
(e tambm da regio no-segmentada do ectoderma da cabea). Portanto, em insetos
como a Drosophila, o sistema nervoso est localizado ventralmente, em vez de ser
derivado do tubo neural dorsal, como nos vertebrados.
AS ORIGENS DA POLARIDADE NTERO-POSTERIOR

Viso panormica
O plano geral do corpo da Drosophila o mesmo no embrio, na larva e no adulto,
cada qual tendo um terminal da cabea e um da cauda distintos, entre os quais esto
unidades repetitivas segmentares (Figura 14.2). Trs desses segmentos formam o
trax, enquanto outros oito segmentos formam o abdome. Cada segmento da mosca
*Os detalhes da diferenciao do disco imaginal sero discutidos no Captulo 19. Para maiores
informaes sobre a anatomia do desenvolvimento de Drosophila veja Bate e Martinez-Arias,
1993; Tyler e Schetzer, 1996; e Schwalm, 1997.
Cabea
Protrax
Mesotrax
Metatrax
Figura 14.2
Segmentos
abdominais
Comparao entre segmentao larval e adulta

em Drosophila. Os trs segmentos torcicos
podem ser distinguidos por seus apndices: T1
(protorcico) somente tem patas; T2 (mesotorcico) tem asas e patas; T3 (metatorcico) tem
halteres e patas.
546
Polaridade
citoplasmtica
(efeito
materno)
Gradiente de
protena
Hunchback
Genes
gap
Genes
pair-rule
Genes de
polaridade
segmentar
Genes
hometicos
Figura 14.3
Modelo generalizado da formao do padro

de Drosophila. O padro estabelecido por
genes de efeito materno que formam gradientes e regies de protenas morfognicas. Esses determinantes morfognicos criam um gradiente da protena Hunchback que ativa diferencialmente os genes gap que definem territrios amplos do embrio. Os genes gap permitem a expresso de genes pair-rule cada qual
dividindo o embrio em regies de largura
aproximada equivalente a dois segmentos primordiais. Os genes da polaridade segmentar
dividem o embrio em unidades de tamanho
segmentar ao longo do eixo ntero-posterior.
A combinao desses genes define os domnios espaciais dos genes hometicos que definem as identidades de cada segmento. Dessa maneira, periodicidade gerada a partir de
no-periodicidade, e cada segmento recebe
uma nica identidade.
adulta tem a sua prpria identidade. O primeiro segmento torcico por exemplo, somente
tem patas; o segundo segmento torcico contm patas e asas. O terceiro segmento
torcico tem patas e halteres (equilibradores). Os segmentos torcicos e abdominais
tambm podem ser diferenciados por suas cutculas. Como aparece esse padro? Durante a ltima dcada, a combinao de mtodos da biologia molecular, gentica e embriologia,
levou a um modelo detalhado descrevendo como gerado o padro peridico ao longo
do eixo ntero-posterior, e como cada segmento diferenciado dos outros.
A polaridade ntero-posterior no embrio, na larva e no adulto tem sua origem na
polaridade ntero-posterior do ovo(Figura 14.3). Os genes de efeito materno nos
ovrios da mosca produzem RNAs mensageiros que so colocados em diferentes
regies do ovo. Esse codifica protenas regulatrias transcricional e de traduo que
se difundem atravs do blastoderma sincicial, e ativam ou reprimem a expresso de
certos genes zigticos. Um par dessas protenas, Bicoid e Hunchback, regula a produo de estruturas anteriores, enquanto outro par de protenas especificado maternalmente, Nanos e Caudal, regulam a formao da parte posterior do embrio. Em seguida, os genes zigticos regulados por esses fatores maternos so expressos em certos
domnios largos (cerca de trs segmentos de largura), parcialmente sobrepostos. Esses genes so chamados genes gap (genes de fenda-porque suas mutaes causam
fendas no padro de segmentao) e esto entre os primeiros genes transcritos no
embrio. As diferentes concentraes das protenas dos genes gap causam a transcrio dos genes pair-rule que dividem o embrio em unidades peridicas. O padro de
transcrio desses genes pair-rule fornece um padro de listas de sete bandas verticais perpendiculares ao eixo ntero-posterior. As listas das protenas dos genes pairrule ativam a transcrio dos genes de polaridade segmentar (segment polarity genes).
Seus mRNAs e produtos proticos dividem o embrio em 14 unidades de largura
segmentar. Isso estabelece a periodicidade do embrio. Ao mesmo tempo, protenas
dos genes gap, pair-rule e de polaridade segmentar interagem para regular outra
classe de genes, os genes hometicos, cuja transcrio determina o destino desenvolvimental de cada um desses segmentos.
Os genes de efeito materno

Evidncia Embriolgica da Regulao da Polaridade
pelo Citoplasma do Ocito
Experimentos embriolgicos clssicos demonstraram que existem pelo menos dois
centros de organizao no ovo do inseto. Um o centro de organizao anterior, o
outro o centro de organizao posterior. Klaus Sander (1975) postulou que essas duas
reas de organizao formam dois gradientes, um iniciado no terminal anterior, e o
outro no terminal posterior. Cada um desses gradientes forma as suas estruturas
prprias nos plos e interage com o outro gradiente para formar a estrutura central do
embrio. Sander baseou esse modelo em experimentos envolvendo a ligao do embrio em vrios tempos durante o desenvolvimento, e transplantando regies do
citoplasma polar de uma regio do ovo para outra (Figura 14.4). Primeiro, quando ele
moveu o citoplasma do plo posterior para mais anteriormente, obteve um pequeno
embrio anterior ao plasma do plo posterior, enquanto segmentos extras, no organizados em um embrio, formavam-se atrs dele (veja Figura 14.4D). Em segundo lugar,
ele quando ligava o ovo precocemente durante o desenvolvimento, separando a regio anterior da posterior, metade se desenvolveu em um embrio anterior, enquanto a
outra metade se desenvolveu em um embrio posterior, porm, nenhuma das metades
continha os segmentos medianos do embrio. Quanto mais tardiamente no desenvolvimento era feita a ligadura, menos segmentos medianos estavam faltando. Assim,
pareceu que realmente havia gradientes emanando dos dois plos durante a clivagem
e que esses gradientes interagiam para produzir a informao posicional determinante
da identidade de cada segmento.
547
Anterior
Prosencfalo
Segmentos
da cabea
Segmentos
torcicos
Segmentos
abdominais
Posterior
Figura 14.4
Experimento de ligadura de Sander no embrio do inseto saltador de folhas Euscelis. (A) Embrio normal em viso ventral. A bola preta na base representa um agregado de bactrias simbiticas
que marca o plo posterior. (B) Aps ligadura do embrio precoce, forma-se um embrio parcial,
mas a cabea e os segmentos torcicos esto ausentes em ambos embries. (C) Quando ligados
mais tarde (no estgio de blastoderma) so formados mais dos segmentos faltantes, mas a maioria
dos embries ainda no tem os segmentos mais centrais. (D) Quando o citoplasma do plo
posterior transplantado para um embrio ligado no estgio de blastoderma, um embrio pequeno, porm completo, forma-se na metade anterior, enquanto a metade posterior forma um embrio
parcial invertido. Esses resultados podem ser explicados em termos de gradientes nos plos do
embrio que ativam um conjunto de estruturas e reprimem a formao de outras. (Segundo
Sander, 1960, e French, 1988.)
A possibilidade do mRNA ser responsvel pela gerao do gradiente anterior foi

sugerida por uma srie de experimentos de Kalthoff e Sander (1968). Esses autores
acharam que quando a poro anterior de ovo de Smittia (mosquito plvora) foi
exposta luz ultravioleta de comprimentos de onda capazes de inativar RNA (265 e 285
nm), os embries desenvolviam dois abdomes e telsos (caudas) com simetria de imagem espelhar: telso-abdome-abdome-telso (Figura 14.5). Evidncia adicional que o
RNA importante para a especificao da poro anterior do embrio da mosca foi
obtida por Kandler-Singer e Kalthoff (1976), que submergiram ovos de Smittia em
solues contendo vrias enzimas e em seguida puncionaram os ovos em regies
especficas. Abdomes duplos resultaram da permisso para a entrada de RNase no
terminal anterior. Outras enzimas no causaram essa anormalidade, nem a RNase causou esse efeito quando penetrou em outras regies do ovo. Assim, o laboratrio de
Sander postulou a existncia de um gradiente em cada terminal do ovo, e pareceu
provvel que o ovo seqestrou um RNA que gerava um gradiente de material nteroformador.
O Modelo Molecular: Gradientes Proticos no Embrio Precoce
Em 1988, a hiptese do gradiente foi unida com uma metodologia gentica de estudo
da embriognese de Drosophila. Se houvesse gradientes, quais eram os morfgenos
cujas concentraes mudavam ao longo do espao? Quais eram os genes que moldavam esses gradientes? E essas substncias agiriam ativando ou inibindo certos genes
nas reas onde estavam concentradas? Christiane Nsslein-Volhard conduziu um programa de pesquisa que encontrou um conjunto de genes que codificava morfgenos
de gradientes para a parte anterior do embrio, outro conjunto de genes que codificava
Figura 14.5
Embries normal e irradiado do mosquito-plvora (Smittia). O embrio normal (no alto)

mostra uma cabea esquerda e segmentos
abdominais direita. O embrio irradiado com
luz UV no tem a regio da cabea mas tem
segmentos abdominais em ambos os lados. (De
Kalthoff, 1969, cortesia de K. Kalthoff.)
548
Tabela 14.1 Genes de efeito materno que afetam a polaridade ntero-posterior do embrio de Drosophila
Gene
Fentipo
Funes e estruturas propostas
Cabea e trax deletados, substitudos

por telso invertido
Estruturas anteriores da cabea deletadas
Estruturas anteriores da cabea deletadas
Morfgeno anterior graduado contm

homeodomnio, reprime caudal
ncora mRNA bicoid
ncora mRNA bicoid
Morfgeno posterior; reprime huchback
Localizao de Nanos
Localizao de Nanos
Localizao de Nanos
pumilio (pum)
Sem abdome
Sem abdome, sem clulas polares
Sem abdome, sem clulas polares
Sem abdome, sem clulas polares;
oognese defeituosa
Sem abdome, sem clulas polares;
celularizao defeituosa
Sem abdome
caudal (cad)
Sem abdome
Estabilizao da localizao do
complexo Nanos
Ajuda protena Nanos ligar mensagem
hunchback
Ativa genes do terminal posterior
GRUPO TERMINAL
torso (tor)
trunk (trk)
fs(1)Nasrat[fs(1)N]
fs(1)polehole[fs(1)ph]
Sem terminais
Sem terminais
Sem terminais; ovos em colapso
Sem terminais; ovos em colapso
Possvel morfgeno para terminais

Transmite sinal torsolike para torso
GRUPO ANTERIOR
bicoid (bcd)
exuperantia (exu)
swallow (swa)
GRUPO POSTERIOR
nanos (nos)
tudor (tud)
oskar (osk)
vasa (vas)
valois (val)
Fonte: Segundo Anderson, 1989
os morfgenos responsveis pela organizao da regio abdominal do embrio e um

terceiro conjunto codificava protenas que produziam as regies terminais de ambas
as extremidades do embrio (Figura 14.6; Tabela 14.1). Esse trabalho resultou em um
Prmio Nobel para a pesquisadora e seu colega Eric Wieschaus, em 1995. [droso1.html]
O eixo ntero-posterior para o embrio de Drosophila parece ser padronizado
antes mesmo do ncleo comear a funcionar (Figura 14.7). As clulas nutrizes do
ovrio depositam mRNAs no ocito em desenvolvimento, e esses mRNAs se tornam
poro de diferentes regies da clula. Em especial, quatro mRNAs so crticos para a
formao do eixo ntero-posterior:
mRNAs bicoid e hunchback, cujos produtos proticos so crticos para a
formao da cabea e do trax
mRNAs nanos e caudal cujos produtos proticos so crticos para a formao
dos segmentos abdominais
Os mRNAs bicoid so amarrados aos microtbulos anteriores, enquanto as mensagens nanos so ligadas ao citoesqueleto cortical posterior. Os mRNAs hunchback e
caudal so distribudos atravs de todo o ocito. Aps a fecundao, os mRNAs
podem ser traduzidos em protenas. No plo anterior o RNA bicoid traduzido em
protena Bicoid, que forma um gradiente mais alto no anterior. No plo posterior, a
mensagem nanos traduzida em protena Nanos, que forma o gradiente mais alto no
Figura 14.6
Trs vias genticas independentes interagem para formar o eixo ntero-posterior do embrio de
Drosophila. Em cada caso, a assimetria inicial estabelecida durante a oognese, e o padro
organizado pelos produtos maternos logo aps a fertilizao. A realizao do padro ocorre
quando os produtos maternos localizados ativam ou reprimem genes zigticos especficos em
diferentes regies do embrio. (Segundo St. Johnston e Nsslein-Volhard, 1992.)
Meiaoognese
Concluso da
oognese
Blastoderma
sincicial
mRNA bicoid
mRNA
bicoid
Blastoderma
celular
Protena Bicoid
RNA do gene
gap anterior
Expresso
gnica
Protena
Hunchback
cron
Fentipo
Tipo selvagem
Cabea
Clulas
nutrizes
Trax
Abdome
Telso
Deficiente em bicoid
Telso
Protena
Caudal
Ocito
mRNA bicoid
localizado no anterior
por produtos de
exuparantia e
swallow
Clulas nutrizes ovarianas

secretam mRNA bicoid
para o ocito, cujo ncleo
interage com clulas
foliculares posteriores
RNA
hunchback
Materno
Clulas
embrionrias
Clulas
polares
Protena Bicoid ativa

os genes gap anterior,
orthodentical
buttonhead,
e o gene hunchback
mRNA bicoid
traduzido forma
gradiente protico;
reprime traduo de
mRNA caudal
Abdome
Telso
Anterior Bicoid:
Protena
Hunchback
RNA nanos
Deficiente em nanos
cron
Cabea
Trax
Protena
Staufen
Protena
Nanos
RNA
oskar
RNA giant
RNA nanos
mRNA nanos
secretado por clulas
nutrizes ovarianas
localizadas no
plo posterior
Clulas nutrizes
ovarianas secretam
forma posterior para
ligar mRNA nanos
Telso
RNA
Knirps
mRNA nanos traduzido

bloqueia traduo
da mensagem
hunchback no
posterior do embrio
nanos ativa genes

gap posteriores
(tais como
knirps e giant)
Posterior: Nanos
Protena
Torsolike
Protena
Torso
Protena
Torsolike
Protena
Torso ativada
mRNA
tailess e
huckebein
Deficiente em torso
Cabea
Trax
Protena
Torsolike
Clulas foliculares
ovarianas produzem
protena Torsolike
nas extremidades
anterior e posterior
Abdome
Clulas
foliculares
Torsolike ativa
Torso nas
extremidades
Terminal: Torso
mRNA tailess
e huckebein
Torso ativa
genes gap
terminais
A) Ocito
(C)
Concentrao
ANTERIOR
mRNA bicoid
Bicoid
Hunchback
caudal
Anterior
Cortex,
Grauzone,
Staufen
Nanos
Posterior
mRNA caudal
Protena Bicoid
(B) Embrio de clivagem precoce

Protena Caudal
PROTENA
POSTERIOR
Hunchback
Bicoid
Caudal
Nanos
Concentrao
550
mRNA nanos
Smaug
Oskar
Protena
Nanos
Anterior
Embrio de
clivagem precoce
Posterior
mRNA
hunchback
Pumilio p55
Protena
Hunchback
Figura 14.7
Um modelo da gerao do padro ntero-posterior por genes de efeito materno. (A) Os RNA
mensageiros bicoid, nanos, hunchback e caudal so colocados no ocito pelas clulas nutrizes
ovarianas. A mensagem bicoid seqestrada anteriormente. A mensagem nanos enviada para
o plo posterior. (B) Na traduo, o gradiente da protena Bicoid enviado para o plo posterior,
e o gradiente da protena Nanos se estende do posterior para o anterior. Nanos inibe traduo da
mensagem hunchback (no posterior), enquanto Bicoid previne a traduo da mensagem caudal
(no anterior). Isso resulta na oposio dos gradientes Caudal e Hunchback. O gradiente Hunchback
reforado secundariamente pela transcrio do gene hunchback dos ncleos anteriores (j que
Bicoid age como um fator de transcrio ativando a transcrio do gene hunchback). (C) Interaes paralelas pelas quais a regulao da traduo gnica estabelece o padro ntero-posterior do
embrio de Drosophila. No anterior do embrio, o mRNA bicoid ligado ao citoesqueleto
anterior e impedido de ser traduzido por ter uma pequena cauda poliadenilada. Na fecundao, a
cauda estendida de maneira dependente das protenas Cortex, Grauzone e Staufen, e o mRNA
bicoid traduzido. A protena Bicoid suprime a traduo do mRNA caudal. Na regio posterior
do embrio, o mRNA nanos suprimido no ocito pela protena Smaug (que se liga sua
3UTR). Na fertilizao, Oskar ajuda em sua traduo e a protena Nanos age como um supressor
da traduo de mRNA hunchback. (C segundo Macdonald e Smibert, 1996.)
posterior. A protena Bicoid inibe a traduo do RNA caudal, permitindo com isso que
a protena Caudal seja somente sintetizada na parte posterior da clula. Reciprocamente, a protena Nanos, em conjunto com a protena Pumilio, liga-se ao RNA hunchback,
impedindo sua traduo na parte posterior do embrio. Bicoid tambm eleva o nvel da
protena Hunchback no anterior do embrio ligando-se aos intensificadores do gene
hunchback e estimulando sua transcrio (Figura 12.18). O resultado dessas interaes a criao de quatro gradientes proticos no embrio precoce:
Um gradiente anterior-para-posterior da protena Bicoid
Um gradiente anterior-para-posterior da protena Hunchback
Um gradiente posterior-para-anterior da protena Nanos
Um gradiente posterior-para-anterior da protena Caudal
O palco est agora preparado para a ativao dos genes zigticos naqueles ncleos que
tinham sido ocupados dividindo-se enquanto esse gradiente estava sendo estabelecido.
&
551
Especulaes
Modelos de Gradientes da Informao Posicional
OMO PODEM CLULAS ser informadas de sua posio no

embrio e em seguida usar tal
informao para diferenciar-se no tipo
apropriado de clula? Uma explicao prope gradientes de substncias morfogenticas (Boveri, 1901; Child, 1941; Wolpert, 1971). Nesses modelos, uma substncia solvel (morfgeno) posicionada
de forma a se difundir de uma fonte (onde
produzida) para um ralo (onde degradada), estabelecendo um intervalo contnuo de concentraes dentro dessa regio. Consideraes tericas (veja Crick,
1970) sugerem que cada um desses gradientes somente pode atuar ao longo de distncias curtas, menos que 100 clulas de
dimetros. Em modelos de gradientes, a
concentrao de morfgenos muda com
a distncia, as concentraes mais altas
esto prximas da fonte do morfgeno.
As clulas teriam que ter sensores que
responderiam diferentemente a concentraes diferentes do gradiente. Se o
morfgeno for um fator de transcrio,
elementos intensificadores ou promotores poderiam ligar o morfgeno com foras diferentes (Figura 14.8). Por exemplo,
se um morfgeno estiver sendo produzido no anterior do corpo, os genes responsveis pela organizao do desenvolvimento da cabea poderiam ter um intenAmbos
genes
ativos
Gene A inativo Ambos genes

Gene B ativo
inativos
Figura 14.8
Gene A
Limiar B
Limiar A
Gene B
Concentrao do morfgeno
sificador que liga o morfgeno fracamente. Somente quando houver uma grande
concentrao do morfgeno esse gene
estaria ativo. O(s) gene(s) responsveis
pela formao do trax, por outro lado,
poderiam apresentar um intensificador que
ligasse o morfgeno mais eficazmente, o
que o habilitaria a responder a nveis relativamente baixos daquele morfgeno. As
clulas da cabea expressariam ambos os
genes, enquanto os genes do trax expressariam somente aquele gene cujo intensificador puder ligar baixas quantidades do morfgeno. As clulas das pores posteriores do corpo no veriam
quantidade alguma desse morfgeno, e
nenhum desses genes seria ativado. Dessa maneira, as clulas poderiam sentir a
presena de um morfgeno e responder
diferentemente. O sensor no precisaria
ser um intensificador; poderia bem ser
um receptor para um fator de crescimento especfico na superfcie celular (veja
Captulo 17).
A maioria dos modelos de gradiente
assume que todas as clulas que podem
responder a um gradiente so equivalentes. Todas essas clulas interpretam o sinal do morfgeno da mesma maneira e a
concentrao de morfgeno que recebem
determina sua identidade. Porm, a interpretao dos gradientes no necessari-
Distncia da fonte
Modelo hipottico para gradientes estabelecendo informao posicional. A concentrao do

morfgeno diminui a partir da origem. Neste
diagrama, os receptores para o morfgeno so
elementos intensificadores para dois genes que
controlam o destino celular, porm, os receptores tambm poderiam ser citoplasmticos ou
de membrana. Um dos receptores (neste caso,
o intensificador no gene A) necessita de uma
alta concentrao de morfgeno para atuar. Em
altas concentraes de morfgeno, ambos genes A e B so ativos. Em concentraes moderadas, somente o gene B ativo. Onde a concentrao do morfgeno cai abaixo de outro
limiar, nenhum dos genes ativo. (Segundo
Wolpert, 1978.)
(A)
(C)
(B)
Concentrao Q
(D)
Gradiente Q
Gradiente P
Centro da
pinta ocular
Veias alares
Figura 14.9
Modelo de um gradiente de informao

posicional proposto para explicar pintas em asas
de borboleta. (A) Fotografia de uma pinta ocular na asa de Morpho peleides. (B) Diagrama
de um modelo de dois gradientes que pode explicar a maneira pela qual a pinta foi gerada. A
origem do morfgeno est no centro da pinta e
corresponde ao pice de um cone, cuja altura
reflete sua concentrao. A concentrao Q representa o nvel de morfgeno necessrio para
alcanar o limiar de sensibilidade para formao de cor naquelas clulas alares. (C) Fotografia da asa de Smyrna blomfildia, na qual as
pintas oculares so elpticas. (D) Orientaes
diferentes do gradiente de sensibilidade Q podem resultar em tais pintas elpticas. (Segundo
Nijhout, 1981, cortesia de H. F. Nijhout.)
amente linear. Considere por exemplo, uma

srie de notas de um exame que se estende uniformemente de 100 a 60. Em um esquema (uma leitura linear), uma nota
entre 100 e 90 A, 89-80 B, 79-70 C e
69-60 D. Em uma outra classe (usando
leitura curva), 100-95 A, 94-85 B, 8470 C e 69-60 D. Nijhout (1981) usou um
modelo de dois gradientes para explicar o
desenvolvimento dos padres marcas de
olhos das asas de borboleta. Um gradiente consiste de uma difuso linear de
morfgeno. O segundo envolve a interpretao desse morfgeno; ou seja, o limiar de sensibilidade das clulas envolvidas difere em diferentes regies das asas.
A existncia do segundo gradiente d origem a uma marca elptica, no a marca circular que resultaria se no existisse o gradiente de sensibilidade (Figura 14.9).
552
Figura 14.10
(A)
Fentipo de um embrio fortemente

afetado, oriundo de uma fmea deficiente no gene bicoid. (A) Padro da
cutcula de um tipo selvagem. (B)
Mutante bicoid. A cabea e o trax
foram substitudos por um segundo
conjunto de estruturas do telso posterior. Abreviaes: fk, filzkrper;
ap, placas anais (ambas estruturas de telsos);
T1-T3, segmentos torcicos; A1, A8, os dois
segmentos abdominais terminais; mh, cs, estruturas da cabea. (de Driever et al. 1990.
Cortesia de W. Driever.)
(B)
Evidncia que o Gradiente da Protena Bicoid Constitui o

Centro de Organizao Anterior
Em Drosophila, o fentipo do mutante bicoid muito interessante em ternos de
gradientes. Em lugar de ter estruturas anteriores (cron, cabea e trax) seguidas por
estruturas abdominais e um telso, a estrutura do mutante bicoid telso-abdomeabdome-telso (Figura 14.10). Parece que esses embries carecem de todo morfgeno
necessrio para as estruturas anteriores. Alm disso, pode-se postular que a substncia da qual esses mutantes carecem aquela sugerida por Sander e Kalthoff de ativar
os genes para as estruturas anteriores e desligar genes para as estruturas do telso
(Compare as Figuras 14.10 e 14.5).
Outros estudos reforaram o ponto de vista de que o produto do gene bicoid do
tipo selvagem (bcd) o morfgeno que controla o desenvolvimento anterior. Em
primeiro lugar, bicoid um gene de efeito materno. O RNA mensageiro dos genes
(A)
(B)
Figura 14.11
Gradiente da protena Bicoid no embrio precoce de Drosophila.

(A) Localizao do mRNA bicoid na extremidade anterior do
embrio. (B) Gradiente da protena Bicoid logo aps a fecundao. Notar que a concentrao mais alta anteriormente, diminuindo posteriormente. Notar tambm que a protena Bicoid est
concentrada nos ncleos do embrio. (C) Escaneamento
densidomtrico do gradiente da protena Bicoid. A curva superior representa o gradiente da protena Bicoid em embries tipo
selvagem. A curva inferior representa a protena Bicoid em embries de mes deficientes em bicoid. (A de Kaufman et al.,
1990; B e C de Driever e Nsslein-Volhard, 1988a; fotografias
cortesia dos autores.)
Concentrao da protena Bicoid

(intensidade da mancha)
(C)
Tipo selvagem
Mutante bicoid
Anterior
Posterior
bicoid materno colocado no embrio pelas clulas ovarianas maternas (Frigerio et

al., 1986; Berleth et al., 1988; detalhes no Captulo 22). O RNA bicoid est estritamente
localizado na parte anterior do ocito (Figura 14.11A). Driever e Nsslein-Volhard
(1988a) mostraram que quando a protena Bicoid traduzida desse RNA durante a
clivagem precoce, forma um gradiente com a concentrao mais alta no anterior do
ovo e com nveis de fundo na terceira parte posterior do ovo. Alm disso, essa protena logo fica concentrada nos ncleos embrionrios da poro anterior do embrio
(Figura 14.11B,C; Prancha 14A).
Mais evidncia que a protena Bicoid o morfgeno anterior veio de experimentos
que alteraram a inclinao do gradiente. Dois genes, exuperantia e swallow, so
responsveis pela manuteno da mensagem bicoid no plo anterior do ovo. Em sua
ausncia, a mensagem bicoid difunde mais para o posterior do ovo, e o gradiente da
protena Bicoid aumenta mais vagorosamente (Driever e Nsslein-Volhard, 1988b). O
fentipo produzido por esses dois mutantes semelhante aquele de embries deficientes em bicoid, porm, menos severo. Esses embries carecem de suas estruturas
anteriores e tm uma boca e regio torcica estendida. Assim, alterando-se o gradiente
da protena Bicoid, em correspondncia altera-se o destino das regies embrionrias.
A confirmao que a protena Bicoid crucial para o incio da formao da cabea
e do trax veio de experimentos nos quais RNA bicoid purificado foi injetado nos
embries em clivagem precoce (Figura 14.12; Driever et al., 1990). Quando injetado no
anterior de embries deficientes de bicoid (cujas mes no tinham genes bicoid), o
RNA bicoid salvou os embries e fez com que tivessem polaridade ntero-posterior
normal. Alm disso, qualquer local no embrio onde as mensagens bicoid haviam sido
injetadas, tornaram-se cabea. Quando RNA bicoid foi injetado no centro do embrio,
essa regio mediana tornou-se a cabea e as laterais tornaram-se estruturas torcicas.
Se uma grande quantidade de RNA bicoid foi colocada no plo posterior de um
embrio de tipo selvagem (com sua prpria mensagem bicoid no plo anterior), duas
cabeas emergiram, uma em cada terminal. Portanto, o gene bicoid atualmente considerado codificar o morfgeno anterior do embrio de Drosophila.
A prxima questo que emergiu foi: Como foi conseguida essa localizao do RNA
bicoid? As teorias correntes sero detalhadas no Captulo 22, mas resumidamente, o
citoesqueleto anterior ancora o RNA bicoid atravs da regio 3 no-traduzida da
mensagem 3. O citoesqueleto posterior tem locais especficos de ancoragem que iro
mRNA bicoid
Figura 14.12
Representao esquemtica do experimento

demonstrando que o gene bicoid codifica o
morfgeno responsvel pelas estruturas da cabea em Drosophila. Os fentipos dos embries deficientes em bicoid e tipo selvagem so
mostrados nos lados. Quando embries deficientes em bicoid so injetados com mRNA
bicoid, o local da injeo forma as estruturas
da cabea. Quando o plo posterior de um
embrio de clivagem precoce do tipo selvagem injetado com mRNA bicoid, estruturas
de cabea se formam em ambos os plos. (Segundo Driever et al., 1990.)
Tipo selvagem
Fentipo deficiente
em bicoid
cron
Tipo selvagem
Fentipo
tipo selvagem
Cabea
Trax
Abdome
Telso
553
554
Figura 14.13
A importncia das interaes ocito-folculo

na formao dos eixos dorsoventral e nteroposterior de Drosophila. (A) O ncleo do
ocito fica localizado no lado posterior do ovo.
Ele localiza um fator (a protena Gurken) que
recebido pelas clulas no terminal posterior da
cmara do ovo. (B,C) Isso faz com que as clulas foliculares se diferenciem em clulas foliculares posteriores e secretem algum fator que
motiva o ocito a realinhar seus microtbulos.
possvel que esse fator atue ativando a protena quinase A (PKA) na membrana celular do
ocito (veja Captulo 22). (D) Essa reorganizao permite o transporte da protena Oskar e
mRNA nanos para o plo posterior do ovo e
retm a mensagem bicoid no plo anterior do
ovo. Ao mesmo tempo, o ncleo do ocito viaja ao longo dos microtbulos repolarizados
em direo regio dorso-anterior do ovo. Aqui,
o mesmo sinal (a protena Gurken) inicia o eixo
dorsoventral sinalizando essas clulas para tornarem-se clulas foliculares dorsais. (Segundo
Gonzles-Reyes et al., 1995.)
(A) Estgio 1-6 (?)

Clulas
nutrizes
Ocito
Clulas
foliculares
polares nocomprometidas
(D) Estgio 9
(B) Estgio 6-7
(C) Estgio 7-8

Ncleo do
ocito
gurken
Ncleo do
ocito com
mRNA gurken
Clulas
foliculares
anteriores
Mensagem gurken
sobre o ncleo
Clulas
foliculares
posteriores
mRNA bcd
Clulas foliculares dorsais
Microtbulos
Clulas foliculares
posteriores
mRNA osk
Clulas foliculares ventrais
reconhecer a 3UTR da mensagem nanos. Assim, a organizao global do citoesqueleto do ocito crucial para o desenvolvimento. Como ocorre essa organizao do
citoesqueleto? No meio da oognese, o ncleo do ocito est posicionado perto do
plo posterior do ocito (i.e., longe das clulas nutrizes). O ncleo do ocito serve
como um local de coleta para o RNA gurken, uma mensagem que codifica um
homlogo do fator de crescimento epidrmico e cuja sntese no bem compreendida.
A mensagem gurken se coleta diretamente sobre o ncleo, entre o ncleo e as clulas
foliculares dorsais posteriores. Aqui, ele traduzido em protena Gurken e secretado
pelo ocito para aquelas clulas foliculares mais prximas do ncleo as clulas
foliculares posteriores. Isso altera essas clulas foliculares motivando-as a secretar
um fator que induz a reorganizao dos microtbulos do ocito. Esses microtbulos
iniciam a reorganizao do citoesqueleto do ocito permitindo ao ncleo mover-se de
sua posio posterior para a poro dorso-anterior do ocito em crescimento (Figura
14.13; Gonzles-Reyes et al., 1995; Roth et al., 1995). Assim, o primeiro sinal para o eixo
ntero-posterior do embrio vem das clulas foliculares maternas. A distino entre
clulas foliculares anteriores e posteriores no ovrio causa a distino entre o eixo
anterior e posterior do embrio.
A prxima questo emergiu em seguida: Como podia um gradiente da protena
Bicoid controlar a determinao do eixo ntero-posterior? Evidncia recente sugere
que Bicoid age de duas maneiras para especificar o anterior do embrio de Drosophila. Primeiro, agindo como um repressor da formao do posterior. Ela faz isso ligando
e suprimindo a traduo do RNA caudal que encontrado em todo o ovo e no embrio
precoce. O homeodomnio da protena Bicoid liga-se uma regio especfica da regio
3 no-traduzida da mensagem caudal (Dubnau e Struhl, 1996; Rivera-Pomar et al.,
1996). Essa supresso necessria, pois se a protena Caudal for produzida no anterior, cabea e trax no sero formados de maneira apropriada. O segundo modo de
funo de Bicoid a nvel da ativao transcricional. A protena Bicoid parece penetrar nos ncleos dos embries em clivagem. Aqui, ela ativa o gene hunchback (hb). A
transcrio de hunchback somente vista na metade anterior do embrio a regio
onde vista a protena Bicoid. Mutantes deficientes em protena Hunchback materna
e zigtica carecem de partes orais e estruturas torcicas. Em fins da dcada de 1980,
555
dois laboratrios demonstraram, independentemente, que a protena Bicoid se liga e

ativa o gene hunchback (Driever e Nsslein-Volhard, 1989; Struhl et al., 1898). A
protena Hunchback derivada da sntese do novo mRNA hunchback junta-se protena Hunchback sintetizada pela traduo de mensagens materna no anterior do embrio. A protena Hunchback, tambm um fator de transcrio, considerada reprimir
genes abominais especficos, permitindo com isso que a regio de expresso hunchback
forme a cabea e o trax. Usando determinao da pegada (footprinting) de DNase
(na qual as protenas so ligadas a um segmento de DNA, DNase adicionada, e o
nico DNA que permanece aquele protegido pela protena ligante de DNA), os
pesquisadores encontraram que a protena Bicoid se liga a cinco stios na regio
promotora a montante do gene hunchback. Todos esses stios tm a seqncia
consensual 5-TCTAATCCC-3.
Porm, ligao no significa necessariamente ativao. A ativao desse gene
pela protena Bicoid foi demonstrada fundindo esses stios promotores de hunchback
com genes reprteres da acetiltransferase cloroanfenicol (CAT) e injetando esses
genes em embries precoces de Drosophila. Em todos os casos, a protena Bicoid
foi necessria para ativar os genes reprteres. Quando injetada em embries deficientes em bicoid no se produziu CAT (Figura 14.14). Tambm, enquanto alguma
ativao foi vista quando somente uma das cinco seqncias ligantes de Bicoid
estava presente, a expresso total do gene reprter (e presumivelmente de
hunchback) apareceu quando trs dos cinco stios estavam presentes. Assim, o
gradiente da protena Bicoid provavelmente atua ativando a transcrio do gene
hunchback na poro anterior do embrio.
A protena Hunchback tambm trabalha com a Bicoid gerando o padro anterior do
embrio. Driever e colaboradores (1989) predisseram que ao menos um outro gene
anterior alm de hunchback deve ser ativado por Bicoid. Primeiro, delees de
hunchback produzem somente alguns dos defeitos observados no fentipo mutante
bicoid. Segundo, conforme vimos nos experimentos com swallow e exuparentia,
somente nveis moderados da protena Bicoid so necessrios para ativar a formao
do trax (i.e., expresso gnica hunchback), mas a formao da cabea necessita de
concentraes mais altas. Driever et al. (1989) predisseram que promotores tais como
o gene gap especfico da cabea teriam stios de ligao de baixa afinidade para a
protena Bicoid. Esse gene somente seria ativado em concentraes extremamente
altas da protena Bicoid - isto , perto da extremidade anterior do embrio. Desde
ento, trs genes gap da cabea dependentes de concentraes muito altas da protena Bicoid para sua expresso foram descobertos (Cohen e Jrgens, 1990; Finkelstein
e Perrimon, 1990; Grossniklaus et al., 1994). Os genes buttonhead (bth), empty spiracles
(sem) e orthodenticle (otd) so necessrios para especificar progressivamente as
Stios ligantes do promotor hunchback

para o promotor bicoid
Gene transferido para:

Embries deficientes
em bicoid
Embries tipo selvagem
Figura 14.14
Gene
CAT
Atividade CAT
Influncia da protena Bicoid na ativao do gene hunchback. Diferentes regies do promotor hunchback foram fundidas com o gene
reprter CAT e injetadas em outros embries tipo selvagem, ou
embries de mes deficientes em bicoid. Quanto mais stios ligantes
de Bicoid havia na regio promotora, tanto mais eficaz era sua
expresso nos embries de tipo selvagem. Em embries sem protena Bicoid, nenhuma transcrio resultou de qualquer dos genes
movimentados pelo promotor hunchback. (Segundo Driever e
Nsslein-Volhard, 1989.)
556
regies anteriores da cabea. Em adio sua necessidade por nveis altos de Bicoid
para ativao, esses genes tambm requerem a presena da protena Hunchback para
serem transcritos (Simpson-Brose et al., 1994; Reinitz et al., 1995). As protenas Bicoid
e Hunchback atuam sinergicamente como intensificadores desses genes da cabea
promovendo suas transcries.
O Centro de Organizao Posterior:
Localizando e Ativando o Produto de nanos
O centro de organizao posterior definido pelas atividades do gene nanos (Lehmann
e Nsslein-Volhard, 1991; Wang e Lehmann, 1991; Wharton e Struhl, 1991). O RNA
nanos produzido no ovrio e transportado para o vulo, onde se liga na regio
posterior (a mais distante das clulas nutrizes ovarianas). Os produtos de vrios
outros genes (oskar, valois, vas, staufen e tudor) os mesmos produtos gnicos que
colocam o determinante do plasma germinativo no plasma do plo posterior (veja
Captulo 13) so necessrios para colocar RNA nanos na parte posterior do ovo.* Se
nanos ou qualquer desses genes de efeito materno esto ausentes na me, no h
formao de abdome embrionrio (Lehmann e Nsslein-Volhard, 1986; Schpbach e
Wieschaus, 1986).
A mensagem nanos traduzida em protena logo aps a fecundao, tal como
acontece com a mensagem bicoid. Tautz (1988) mostrou que durante a formao normal do abdome, o produto protico do gene nanos reprime a traduo do RNA
hunchback (veja Figura 14.7). Esse RNA hunchback est inicialmente presente em
todo o embrio, embora mais dele possa ser produzido a partir de ncleos zigticos se
forem ativados pela protena Bicoid. Assim, a combinao das protenas Nanos e
Bicoid causa um gradiente de protena Hunchback atravs do ovo (Figura 14.15). A
protena Bicoid ativa a transcrio do gene hunchback na parte anterior do embrio,
enquanto a protena Nanos inibe a traduo do RNA hunchback na parte posterior do
embrio. Se o produto do gene nanos no estivesse presente, a protena Hunchback
seria fabricada em todo o embrio, e presumivelmente inibiria a expresso de genes
gap geradores do abdome, como knirps (Hlskamp et al., 1989; Irish et al., 1989;
Struhl, 1990). O gene hunchback, portanto, parece ser o ponto focal sob regulao
tanto do centro organizador anterior como do posterior, h muito conhecido existir no
desenvolvimento dos insetos. Esses estudos de funes nanos e bicoid podem agora
explicar experimentos embriolgicos. Luz ultravioleta ou tratamento com RNase iria
destruir RNA bicoid, causando a perda de estruturas anteriores e a duplicao do
abdome; procedimentos de ligao podem bloquear o espalhamento de Nanos, permitindo assim o acmulo de nveis mais altos da protena Hunchback.
Embora Nanos seja considerado o principal morfgeno posterior, duas outras
protenas, Pumilio e Caudal, tambm so importantes para a construo dos segmentos posteriores da Drosophila. A protena Nanos no se liga diretamente mensagem
hunchback. Em seu lugar, Pumilio, uma protena encontrada por todo o embrio, ligase a 3UTR da mensagem hunchback formando um stio de ligao ao qual Nanos
pode se ligar (Barker et al., 1992; Murata e Wharton, 1995). A ligao de Nanos crtica
para a represso da traduo da mensagem hunchback. A protena Caudal tambm
importante para a formao de estruturas posteriores. Embora embries possam
*Tal como a colocao da mensagem bicoid, a localizao da mensagem nanos determinada

pela sua regio 3 no-traduzida. Se a 3UTR bicoid for colocada sobre a regio codificadora do RNA
nanos, a mensagem nanos ser colocada na parte anterior do ovo. Quando o RNA for traduzido, a
protena Nanos ir inibir a traduo dos mRNAs bicoid e hunchback e o embrio formar dois
abdomens um no anterior do embrio e um no posterior (Gavis e Lehmann, 1992). A localizao
do RNA nanos ir, em ltima anlise, depender das interaes entre o ocito e as clulas foliculares
vizinhas que localizam a mensagem oskar no plo posterior e localizam o RNA bicoid no plo
anterior (veja Captulo 22).
(A)
MATERNOS
Fatores de transcrio
Figura 14.15
Converso de gradientes maternos em expresso zigtica do gene gap.

(A) Os gradientes dos fatores de transcrio maternos Bicoid, Caudal
e Hunchback regulam a transcrio dos genes gap. As protenas
Hunchback e Caudal vm de ambas mensagens maternas e nova transcrio zigtica. (B) A concentrao das protenas Bicoid, Hunchback
e Caudal crtica na especificao das posies onde os genes gap so
transcritos. Essas protenas se difundem, e a interao entre elas ser
crtica para ativao da transcrio dos genes pair-rule. Nos dois terminais, a interao entre Torso e Torsolike ativa os genes gap tailless
e huckebein. (Segundo Rivera-Pomar e Jckle, 1996.)
ZIGTICOS
cron
Cabea
Trax
Abdome
557
Telso
formar segmentos abdominais na ausncia de Caudal, esses segmentos so freqentemente fundidos uns aos outros ou esto parcialmente ausentes (MacDonald e Struhl,
1986; Mlodzik e Gehring, 1987).
erminal
O Grupo Gene T
Terminal
Quando ambos os centros de organizao, anterior e posterior, forem no-funcionais,
um embrio pode ainda desenvolver algum padro ntero-posterior (Nsslein-Volhard
et al., 1987). Quando fmeas so tornadas duplamente mutantes tanto para o morfgeno
anterior como para o posterior, seus embries produzem dois telsos, um em cada
terminal do embrio. Assim, existe um terceiro conjunto de genes de efeito materno
que ajudam a criar os extremos do eixo ntero-posterior. Mutaes nesses genes
terminais resultam na perda das extremidades no-segmentadas do organismo: o cron
anterior e o telso posterior. Na ausncia dos produtos desses genes, a poro segmentada do embrio se expande at as extremidades (Degelmann et al., 1986; Klingler
et al., 1988). Portanto, o conjunto de genes terminais define os limites das partes
segmentadas do corpo.
O gene crtico aqui parece ser torso, um gene codificando uma tirosina quinase
receptora (veja Figura 14.6). O RNA torso sintetizado por clulas ovarianas, depositado no ocito e traduzido aps a fecundao. A protena transmembrana Torso no
est restrita espacialmente aos terminais do ovo, mas est distribuda uniformemente
pela membrana plasmtica (Casanova e Struhl, 1989). Uma mutao dominante de
torso, que proporciona atividade constitutiva ao receptor, converte toda a metade
anterior do embrio em um cron e toda a metade posterior em um telso. Assim, Torso
precisa normalmente ser ativada somente nos terminais do ovo. Realmente, Stevens e
seus colegas (1990) mostraram que a protena Torso ativada por clulas foliculares
em cada plo do embrio. O ativador da protena Torso provavelmente Torsolike,
558
Figura 14.16
Torsolike
Modelo hipottico da sinalizao de Torso. A protena Torsolike, secretada pelas clulas foliculares anteriores e posteriores ligada pelo receptor Torso
(que encontrado por toda a membrana do ocito).
Ligao do ligante conduz ativao de torso e
autofosforilao em resduos especficos de tirosina.
Os grupos fosfotirosina sero reconhecidos pelo
domnio da protena Drk. O domnio SH3 da protena Drk liga-se protena SOS, com isso ativando a
GTPase da protena Ras. Isso ir ativar a protena
Raf que o primeiro membro de uma cascata de serina/
treonina. Essa cascata em geral funciona fosforilando
um fator de transcrio permitindo-lhe com isso entrar ou funcionar no ncleo. Esse fator no foi ainda
identificado. O resultado final a estimulao da transcrio dos genes gap huckebein e tailless. (Segundo
Duffy e Perrimon, 1994.)
RAS
Extracelular
Citoplasma
Ativao
de RAS
Ativao
de Torso
MAP quinase quinase
MAP quinase
Fator de transcrio
Transcrio dos genes

huckebein e tailless
pois a mutao de perda-de-funo do gene torsolike cria um fentipo quase idntico

ao produzido por torso. O gene torsolike expresso nas clulas foliculares anteriores
e posteriores, e a protena Torsolike secretada permanece prxima dessas clulas
(Martin et al., 1994). Stevens e colegas mostraram que quando as clulas foliculares
nos plos da cmara do ovo so deficientes no gene torsolike (mesmo quando outras
clulas foliculares expressam o alelo tipo selvagem desse gene), o embrio resultante
ter o fentipo semelhante quele de torso. Parece que a protena Torsolike secretada
por clulas foliculares e que ativa a protena Torso na membrana do ocito.
A ativao da tirosina quinase do receptor de Torso envolve a autofosforilao de
resduos de tirosina e a subseqente ativao das protenas Ras e Raf (Figuras 14.15
e 14.16; Duffy e Perrimon, 1994). Essas protenas ativam a cascata da quinase MAP
(veja Captulo 3), que (de uma maneira ainda desconhecida) estimula a transcrio dos
genes gap, tailless e huckebein. Esses genes em seguida especificam os terminais do
embrio. A distino entre os terminais anterior e posterior depende da presena de
Bicoid. Se os genes terminais agem sozinhos, clulas se diferenciam em telsos. Porm,
se Bicoid estiver tambm presente, as regies formam um cron (Pignoni et al., 1992).
O eixo ntero-posterior do embrio portanto especificado por trs conjuntos de
genes: aqueles que definem o centro de organizao anterior, aqueles que definem o
centro de organizao posterior, e aqueles que definem a regio limtrofe terminal. O
centro de organizao anterior est localizado no terminal anterior do embrio e age
atravs de um gradiente da protena Bicoid que ativa os genes gap especficos do
anterior e suprime genes gap especficos do posterior. O centro de organizao
posterior est localizado no plo posterior e age atravs da formao da protena

Nanos, que transportada para a regio abdominal. Aqui, Nanos inibe o inibidor da
expresso gnica especfica do abdome e ativa aqueles genes que formam o abdome.
Os limites do cron e do telso so definidos pelo produto do gene torso, que ativado
nas extremidades do embrio.
Os genes da segmentao
Uma Viso Panormica
O compromisso do destino celular em Drosophila parece ser um processo de duas
etapas: especificao e determinao (Slack, 1983). Precocemente no desenvolvimento, o destino de uma clula depende de sinais ambientais tais como aqueles fornecidos
pelos gradientes j mencionados. Essa especificao do destino celular flexvel e
ainda pode ser alterada em resposta a sinais ambientais. Finalmente, as clulas iro
sofrer uma transio desse tipo de comunicao frouxa para uma determinao
irreversvel. Aqui, o destino da clula tornou-se intrnseco da clula.* A transio de
especificao para determinao em Drosophila mediada pelos genes de segmentao
(segmentation genes). Esses genes dividem o embrio precoce em uma srie repetitiva
de primrdios segmentares ao longo do eixo ntero-posterior. Mutaes em genes de
segmentao causam ao embrio tornar-se carente de certos segmentos ou partes de
segmentos; essas mutaes demonstram a existncia de trs classes de genes de
segmentao (Tabela 14.2). Freqentemente essas mutaes afetam parasegmentos,
regies do embrio separadas por engrossamentos mesodrmicos e sulcos
ectodrmicos e que dividem o embrio em 14 regies (Martinez-Arias e Lawrence,
1985). Os parasegmentos do embrio no se transformam nos segmentos da larva ou
do adulto. Ao invs disso, incluem a parte posterior do segmento anterior e a poro
anterior do segmento que o sucede (Figura 14.17). Embora os segmentos sejam as
principais divises anatmicas do plano corporal da larva e do adulto, esses segmentos so construdos de acordo com regras que usam o parasegmento como a unidade
bsica da construo.
* Aficionados da teoria da informao iro reconhecer que o processo pelo qual a informao
ntero-posterior em gradientes morfogenticos transferida para domnios discretos de genes
seletores hometicos representa uma transio de especificao analgica para digital. Especificao analgica, determinao digital. Isso permite que a informao transitria dos gradientes no
blastoderma sincicial seja estabilizada de modo a poder ser utilizada muito mais tarde no desenvolvimento (Baumgartner e Noll, 1990).
TABELA 14.2 Principais locais afetando o padro de segmentao em Drosophila

Categoria
Locais
Categoria
Locais
Genes gap
Krppel (Kr)
knirps (kni)
hunchback (hb)
giant (gt)
tailless (tll)
huckebein (hkb)
buttonhead (btd)
empty spiracles (ems)
Genes pair-rule
(secundrios)
fushi tarazu (ftz)

odd-paired (op)
odd-skipped (odd)
sloppy-paired (slp)
paired (prd)
Genes de polaridade
segmentar
engrailed (en)
wingless (wg)
cubitus interruptusD (ciD)
hedgehog (hh)
fused (fu)
armadillo (arm)
patched (ptc)
gooseberry (gsb)
pangolin (pan)
Genes pair-rule
(primrios)
orthodenticle (otd)
hairy (h)
even-skipped (eve)
runt (run)
559
560
Segmentos
Comportamentos
Parasegmento
Figura 14.17
Embrio
precoce
(normal)
rea da
ao gnica
Embrio
mais
tardio
(normal)
Larva
(mutante
letal)
Larva
(normal)
rea da
ao gnica
Bandas de
dentcula
(A) Gap: Krppel
(B) pair-rule: fushi tarazu
Segmentos e parasegmentos. A e P representam os compartimentos anterior e posterior

dos segmentos. Os parasegmentos so mudados para um compartimento frente. Ma, Mx
e Lb representam trs dos segmentos da cabea (mandibular, maxilar e labial), os segmentos T so torcicos, e os segmentos A so abdominais. Os parasegmentos esto numerados
de 1 at 14. Abaixo do mapa esto os limites da expresso gnica observada pela hibridizao in situ do cDNA radioativo do gene pair-rule fushi tarazu (ftz). (Segundo MartinezArias e Lawrence, 1985.)
Existem trs classes de genes de segmentao, cada classe expressa aps outra
(Figura 14.3). A transio de um embrio caracterizado por gradientes de morfgenos
para um embrio tendo unidades distintas realizada por produtos dos genes gap. Os
genes gap so ativados ou reprimidos pelos genes de efeito materno, e dividem o
embrio em largas regies contendo vrios primrdios parasegmentares. O gene
krppel, por exemplo, expresso primeiramente nos parasegmentos 4-6 no centro do
embrio de Drosophila (Figuras 14.18A e 14.19; Prancha 14A); a ausncia de krppel
faz com que o embrio no apresente essas regies. Os produtos proticos dos genes
gap interagem com as suas protenas vizinhas codificadas por genes gap e ativam a
transcrio de genes pair-rule. A transcrio desses genes subdivide os largos domnios do gene gap em parasegmentos. Mutaes dos genes pair-rule (como em fushi
tarazu; Prancha 14C) usualmente deleta pores de cada segmento alternante. As
Figuras 14.18 e 14.20 comparam o morfologia do embrio de tipo selvagem com aquela
do mutante fushi tarazu. Finalmente, os genes de polaridade segmentar so responsveis pela manuteno de certas estruturas repetitivas dentro de cada segmento. Mutaes nesse grupo de genes faz com que uma poro de cada segmento seja deletada
e substituda por uma estrutura em imagem espelhar de outra poro do segmento. Por
exemplo, em mutantes engrailed, as pores posteriores de cada segmento so substitudas por duplicatas da regio anterior do segmento subseqente (Figura 14.18C;
Prancha 14D). Assim, os genes de segmentao so fatores de transcrio que tomam
os gradientes do embrio de clivagem precoce e transformam o embrio em uma peridica estrutura parasegmentar.
Figura 14.18
(C) Polaridade segmentar: engrailed
Trs tipos mutantes de padres de segmentao. O painel esquerda mostra o embrio em estgio
de clivagem, com a regio onde um determinado gene normalmente transcrito no embrio tipo
selvagem mostrado em cores. Nos trs painis direita, as reas coloridas foram deletadas
medida que esses mutantes se desenvolvem. (Segundo Mange e Mange, 1990.)
561
Aps os limites parasegmentares terem sido produzidos, os genes pair-rule e gap

interagem para regular os genes hometicos que determinam a identidade de cada
segmento. No fim do estgio de blastoderma celular, a cada primrdio segmentar foi
atribuda uma identidade individual por sua constelao nica de produtos de genes
gap, pair-rule e hometicos (Levine e Harding, 1989).
Os Genes de gap
Figura 14.19
Os genes gap foram originalmente definidos por uma srie de mutantes cujos embries no tinham grupos de segmentos consecutivos (Nsslein-Volhard e Wieschaus,
1980). Conforme mostra a Figura 14.21, delees causadas pelos genes hunchback
(hb), Krppel (Kr) e knirps (kr) cobrem toda regio segmentar do embrio da
Drosophila. O gene gap giant (gt), superpe-se a esses trs genes e os fentipos
dos mutantes tailless e huckebein deletam pores dos terminais no-segmentados do embrio.
A expresso desses genes dinmica. Em geral, h um baixo nvel de atividade
transcricional atravs de todo o embrio que se define em discretas regies de alta
atividade medida que a clivagem continua (Jckle et al., 1986). O elemento crtico
parece ser a expresso da protena Hunchback, que ao fim do ciclo 12 da diviso
nuclear, est em nveis altos na parte anterior do embrio e em seguida forma um
gradiente ngreme por 15 ncleos. O ltimo tero do embrio no tem expresso de
detectvel Hunchback. Os padres de transcrio dos genes gap anterior so
iniciados pelas diferentes concentraes das protenas Hunchback e Bicoid.
Expresso do gene Krppel no centro e no

posterior do embrio de Drosophila (setas).
Um embrio de 25 horas foi hibridizado com
cDNA que reconhecia acumulaes de mRNA
Krppel. (de Levine e Harding, 1989, cortesia
de M. Levine.)
(A)
(B)
Pr-ceflico
Maxilar
Figura 14.20
Clipeolabro
Labial
(C)
Mandbula
Defeitos constatados no embrio ftz-. (A) Micrografia eletrnica

de varredura de um embrio do tipo selvagem, visto lateralmente.
(B) O mesmo estgio em um embrio ftz-. As linhas brancas
conectam as pores homlogas de uma banda germinativa segmentada. (C) Diagrama da segmentao embrionria do tipo selvagem. As regies sombreadas mostram os parasegmentos da banda
germinativa que esto faltando no embrio ftz-. (Segundo Kaufman
et al., 1990, fotografias cortesia de T. Kaufman.)
562
hunchback
krppel
Knirps
tailless
giant
Figura 14.21
Delees segmentares em mutantes de genes gap. A tabela sob as fotografias indica por
barras brancas regies segmentares faltantes. Em mutantes hunchback, a regio estendida
(sobreamento mais claro) quando tanto a me como o zigoto no tm atividade do gene
hunchback. Os reais domnios da expresso hunchback no foram completamente expressos. (Segundo Gaul e Jckle, 1990; expresso huckebein segundo Weigel et al., 1990;
fotografias cortesia de E. Wieschaus.)
Altos nveis da protena Hunchback induzem a expresso de giant, enquanto os

transcritos de Krppel aparecem sobre a regio onde Hunchback comea a declinar (veja Figura 14.15). Tambm, altos nveis da protena Hunchback previnem a
transcrio dos genes gap posterior (tal como knirps) na parte anterior do embrio (Struhl et al., 1992).
No posterior, a protena Hunchback encontra-se em nveis baixos ou ausente.
Considera-se que um gradiente da protena Caudal, mais alto no plo posterior,
seja responsvel pela ativao dos genes gap abdominais knirps e giant. O gene
giant tem dois modos de ativao um para sua banda de expresso anterior, e um
para a banda de expresso posterior (veja Figura 14.15; Rivera-Pomar, 1995; Schultz
e Tautz, 1995).
Aps a colocao inicial dessas protenas pelos genes de efeito materno e
Hunchback, elas se estabilizam e so mantidas por interaes entre os diferentes
genes gap*. Por exemplo, a expresso do gene Krppel regulada negativamente
no seu limiar anterior pela protena Hunchback, e no seu limiar posterior pelas
protenas Knirps e Tailless (Jckle et al., 1986; Harding e Levine, 1988; Hoch et al.,
1992). Se a atividade de Hunchback est faltando, o domnio da expresso de
Krppel estende-se anteriormente. Se a atividade Knirps estiver faltando, a expresso gnica Krppel estende-se mais posteriormente. Os limites entre as regies de transcrio dos genes gap so provavelmente criados por represso mtua. Tal como as protenas Giant e Hunchback podem controlar o limite anterior da
transcrio de Krppel, assim tambm Krppel pode determinar os limites posteriores da transcrio de giant e hunchback. Se um embrio no tiver o gene Krppel,
a transcrio de hunchback continua para dentro da rea usualmente reservada
para Krppel (Jckel et al., 1986; Kraut e Levine, 1991). Essas inibies formadoras de limites so consideradas ser mediadas diretamente pelos produtos dos
genes gap, porque todos os principais genes gap (hb, gt, Kr e kni) codificam
protenas ligantes de DNA que podem ativar ou reprimir a transcrio (Kniple et
al., 1985; Gaul e Jckle, 1990; Capovilla et al., 1992).
Alm do mais, essas interaes so altamente especficas e o produto de um
gene gap pode se ligar aos promotores de outros genes gap. A determinao da
pegada (footprinting) de DNase I mostra que a protena codificada pelo gene
Krppel tipo selvagem liga-se regio promotora do gene hunchback (que ele
inibe) e regio promotora do gene knirps (que ele estimula). A regio promotora de
knirps tambm reconhecida pelo produto protico do gene tailless, que inibe a
transcrio de knirps. A protena Hunchback (alm de reconhecer o promotor de
Krppel) tambm reconhece seu prprio promotor, sugerindo que hunchback est
envolvido na regulao de sua prpria expresso (Pankratz et al., 1990; Stanojevc et
al., 1989; Treisman e Desplan, 1989).
Os Genes pair-rule
A primeira indicao de segmentao no embrio da mosca vem quando os genes
pair-rule so expressos durante o dcimo-terceiro ciclo da diviso. Os padres de
transcrio desses genes so marcantes porque cada um divide o embrio em reas
precursoras do plano do corpo segmentado. Como pode ser visto na Figura 14.22 e
Prancha 14C, uma faixa vertical de ncleos (as clulas esto apenas comeando a se
formar) expressa esse gene, seguida por outra faixa de ncleos que no o expressa, e
em seguida por outra faixa que o faz. O resultado um padro de faixa de zebra ao
longo do eixo ntero-posterior, dividindo-o em 15 subunidades (Hafen et al., 1984).
Oito genes atualmente so conhecidos como capazes de dividir o embrio precoce
desse modo; eles esto listados na Tabela 14.2. importante notar que nem todos os
ncleos expressam os mesmos genes pair-rule. Realmente, em cada parasegmento,
cada fila de ncleos provavelmente tem sua prpria constelao de genes pair-rule
que a distingue de qualquer outra fila.
Como so instrudos alguns ncleos do embrio de Drosophila a transcrever
um determinado gene, enquanto seus vizinhos so instrudos para no o fazer? A
resposta parece vir da distribuio de produtos proticos dos genes gap. Enquanto o RNA de cada um dos genes gap tem uma distribuio muito discreta que
*As interaes entre genes e produtos de genes so facilitadas pelo fato de que essas reaes
ocorrem dentro de um sinccio. As membranas celulares ainda no se formaram.
563
564
(A)
Figura 14.22
Regies promotoras especficas do gene even-skipped (eve) controlam bandas de transcrio

especficas no embrio. (A) um gene -galactosidase reprter foi fundido regio do promotor
even-skipped e inseridos no genoma da mosca. A regio promotora completa produz as sete
faixas normais de transcrio. (B) Se somente os 480 pares de bases mais proximais esto
presentes, somente se formam as faixas 2, 3 e 7. (C) Mapa parcial do promotor eve, mostrando as
regies responsveis pelas vrias faixas e pela auto-regulao. (Fotografias cortesia de S. Carroll
e M. Levine.)
(B)
(C)
Faixa #4, #5, #6
Faixa #1
Auto-regulao
Faixa #3
Faixa #2 + #7
define projetando ou ligeiramente superpondo regies de expresso, os produtos

proticos desses genes estendem-se mais extensamente. Na realidade, eles se
superpem por ao menos 8-10 ncleos (que nesse estgio contam com dois a trs
segmentos primordiais). Isso foi demonstrado de uma maneira marcante por
tanojevc e colaboradores (1989). Esses autores fixaram blastodermas
celularizantes, coraram a protena Hunchback com um anticorpo contendo um
corante vermelho, e simultaneamente coraram a protena Krppel com anticorpo
contendo um corante verde. As regies celularizantes que continham ambas protenas ligaram ambos anticorpos e foram coradas de amarelo brilhante (Prancha
14B). De maneira semelhante, a protena Krppel superps-se protena Knirps
na regio posterior (Pankratz et al., 1990).
Trs genes so conhecidos como os genes pair-rule primrios. Esses genes
hairy, even-skipped e runtso essenciais para a formao do padro peridico
e so os genes diretamente controlados pelas protenas Gap. Os promotores dos
genes pair-rule primrios so reconhecidos por protenas do gene gap, e acredita-se que as diferentes concentraes dessas protenas determinam se o gene vai
ser transcrito ou no. Os promotores desses genes so freqentemente
moduladores: o controle sobre cada faixa est localizado em uma discreta regio
do DNA. Por exemplo, uma deleo particular da regio promotora do gene evenskipped previne a formao da terceira faixa even-stripped, enquanto uma deleo
pouco mais abaixo causa a perda da segunda faixa even-skipped (Figura 14.23). A
determinao da pegada da DNase I dessa regio final mostra que ela contm
seis stios para a protena Krppel, trs para Hunchback e cinco para Bicoid.
Evidncia gentica mostra que se alguns desses stios so deletados, a posio
da segunda faixa se movimenta. tanojevc e colaboradores (1991) mostraram que
a segunda faixa even-skipped reprimida tanto pelas protenas Giant como Krppel
e ativada pela protena Hunchback, em baixas concentraes de Bicoid. Esse modelo mostrado na Figura 14.23B,C. A regio responsvel pela terceira faixa de
transcrio even-skipped contm 20 stios de ligao Hunchback e nenhum stio
para a protena Krppel (tanojevc et al., 1989). Essa situao permitir ao stio
responder a nveis muito baixos do produto do gene hunchback. Protenas Gap
ativam a transcrio de alguns genes pair-rule enquanto reprimem transcrio de
outros. O resultado o padro de faixas de transcrio que emergem medida que
o embrio se desenvolve.
Uma vez iniciado por protenas Gap, o padro de transcrio dos genes primrios
pair-rule fica estabilizado por suas interaes (Levine e Harding, 1989). Os genes
primrios pair-rule tambm formam o contexto que permite ou inibe a expresso dos
(A)
565
Figura 14.23
hunchback
krppel
Knirps
Hiptese para a formao da segunda faixa de transcrio do gene

even-skipped. (A) O gene ativo onde concentraes da maioria das
protenas Gap baixa. (B) Assim, os limites da transcrio de eve
so determinados por concentraes altas dessas protenas. Diferentes elementos intensificadores contm seqncias de ligao para
diferentes fraes. No intensificador para a segunda banda de transcrio eve, a ligao da protena Hunchback estimula a transcrio.
(C) Elementos intensificadores para a regulao da faixa 2, contendo
seqncias ligantes para protenas Krppel, Giant, Bicoid e
Hunchback. Notar que quase cada stio ativador est intimamente
ligado a um stio repressor, sugerindo interaes competitivas nessas posies. (A e B segundo Reinitz e Sharp, 1995; C segundo
tanojevc et al., 1991.)
giant
giant
(B)
Faixas eve
(C)
Bicoid
Hunchback
Ativadores
Repressores
Giant
Krppel
genes pair-rule secundrios de ao tardia. Um desses genes pair-rule secundrios

o fushi tarazu (ftz, japons demasiadamente poucos segmentos). No comeo do
ciclo 14, o RNA ftz e a protena so vistos atravs de toda a regio segmentada do
embrio. No entanto, medida que as protenas dos genes pair-rule primrios comeam a interagir com o promotor ftz, o gene ftz reprimido em certas faixas de ncleos
para criar as regies inter-faixas. Nesse perodo, a protena Ftz interage com seu prprio promotor para estimular mais transcrio do gene ftz (Figura 14.24; Edgar et al.,
1986; Karr e Kornberg, 1989; Shier e Gehring, 1992).
Os Genes de Polaridade Segmentar (segmentation genes)
(A)
At aqui, nossa discusso identificou interaes entre molculas dentro do embrio

sincicial. Porm, uma vez formadas as clulas, interaes passam a acontecer entre
elas. Essas interaes intercelulares so mediadas pelos genes da polaridade segmentar e realizam duas tarefas importantes. Primeiro, reforam a periodicidade
parasegmentar estabelecida por fatores transcricionais anteriores. Em segundo lugar, atravs dessa sinalizao celular, os destinos das clulas so estabelecidos
dentro de cada parasegmento.
Muitos genes de polaridade segmentar codificam protenas que so constituintes de trajetos sinalizadores celulares. Por exemplo, Wingless e Hedgehog so protenas secretadas que agem como ligantes, enquanto Patched uma protena
transmembrana que age como receptor (para Hedgehog). Outros genes de polaridade segmentar, como disheveled, zeste white-3 e fused, codificam transdutores de
sinais (veja Captulo 3), e alguns, como engrailed, armadillo e cubitus interruptus,
so considerados fatores de transcrio ativados por essas trajetrias. Mutaes
nesses genes de polaridade segmentar levam a defeitos na segmentao e padronizao atravs do parasegmento.
(B)
(C)
(D)
(E)
Figura 14.24
Transcrio do gene ftz. (A-D) No comeo do ciclo 14, h baixa transcrio em cada ncleo da
regio segmentada do embrio de Drosophila. Dentro dos prximos 30 minutos, o padro da
expresso se altera enquanto a transcrio de ftz intensificada em certas regies (que formam as
faixas) e reprimida nas regies entre as faixas. (E) Dupla marcao dos transcritos even-skipped
(bandas mais escuras) e fushi tarazu (bandas mais claras), mostrando que ftz expresso entre a
bandas. (A-D segundo Karr e Kornberg, 1989; E cortesia de M. Levine.)
566
O desenvolvimento de padres normais se baseia no fato de que alguns desses

genes so transcritos em domnios espaciais especficos (Prancha 14D). Por exemplo,
wingless, engrailed e hedgehog so cada um expressos em 14 bandas distintas da
clula. Em particular, wingless expresso numa faixa de clulas anteriormente adjacente uma faixa de clulas que co-expressam engrailed e hedgehog. A expresso errnea de qualquer desses genes destri o padro do parasegmento. O estabelecimento
desses padres restritos de expresso determinado pelas protenas par-rules. A
transcrio do gene wingless reprimida por protenas Fushi tarazu e Even-skipped e
estimulada por ativadores gerais encontrados em todo o embrio. Ao mesmo tempo, o
gene engrailed est ativo nas clulas contendo a protena Fushi tarazu (que estimula
a transcrio de engrailed) e carente de Odd-skipped (que inibe tal transcrio). Isso
faz com que o wingless seja transcrito somente na clula diretamente anterior s
clulas onde engrailed transcrito (Figura 14.25 A).
Uma vez que a expresso de wingless e engrailed estiver estabelecida em clulas
adjacentes, esse padro tem que ser mantido para que seja conservada a periodicidade parasegmentar do plano corporal, estabelecida pelos genes pair-rule. Deve ser
lembrado que os mRNAs e as protenas envolvidos na iniciao desses padres so
de vida curta, mas que esses padres tm que ser mantidos depois que os iniciadores
de padro no estiverem mais sendo sintetizados. A manuteno desses padres
regulada por interaes entre as clulas expressando wingless e aquelas expressando
engrailed. A protena Wingless, secretada por clulas expressando wingless, sinaliza
para clulas adjacentes, ligando-se protena transmembrana D-Frizzled-2 (veja Figura 3.38; Bhanot et al., 1996). Isso ativa o transdutor de sinais Disheveled, que ir
causar a reduo da atividade da quinase Zeste white-3. Acredita-se que a diminuio
da regulao dessa quinase permite a entrada da protena no-fosforilada Armadillo
(-catenina) no ncleo, onde age como um fator de transcrio regulando positivamente e, assim, mantendo a expresso do gene engrailed (Siegfried et al., 1994).
A ativao inicia outra poro dessa trajetria recproca. A protena Engrailed
ativa a transcrio do gene hedgehog (hh). Esse gene codifica uma protena secretada
que ativa uma trajetria sinalizadora de transduo nas clulas que esto respondendo anteriormente, levando manuteno da transcrio de gene wingless na
clula vizinha. O resultado um enlace recproco pelo qual as clulas sintetizando
Engrailed secretam a protena Hedgehog, que mantm a expresso do gene wingless
na clula vizinha, enquanto a clula secretora de Wingless conduz expresso dos
genes engrailed e hedgehog em outra clula (Heemskerk et al., 1991; Ingham et al.,
1991; Mohler e Vani, 1992). Dessa maneira, o padro de transcrio dessas duas
clulas permanece estabilizado.
A segunda tarefa realizada pelos genes de polaridade segmentar estabelecer os
destinos celulares atravs de cada parasegmento. Isso no est completamente compreendido, mas o grupo de clulas estabilizadas flanqueando o limiar parasegmentar
expressando wingless e hedgehog, respectivamente, essencial. Isso pode ser observado na epiderme dorsal, onde as filas de clulas produzem diferentes estruturas
cuticulares, dependendo de suas posies dentro do segmento. A 1a fila consiste de
grandes dentculos pigmentados. Posteriormente a essas clulas, a 2a fila produz uma
cutcula epidrmica lisa. As prximas duas filas tm um 3o destino, produzindo pequenos plos grossos; e so seguidas por vrias filas de clulas que adotam o 4o destino,
que o de produzir plos finos.
As clulas expressando wingless ficam dentro da regio que diferencia os plos
finos, enquanto as clulas expressando hedgehog esto prximas das clulas da 1a
fila. Os destinos das clulas podem ser alterados experimentalmente, aumentando ou
diminuindo os nveis das protenas Hedgehog ou Wingless (Heemskerek e DiNardo,
1994; Bokor e DiNardo, 1996; Porter et al., 1996). Por exemplo, se hedgehog for colocado num promotor de choque trmico e os embries forem criados numa temperatura
que ativa o gene hh, mais protena Hh ser produzida, e as clulas normalmente mostrando destinos da 3a fila tornar-se-o clulas do segundo tipo. As filas de clulas da
567
Figura 14.25
Segmento
Parasegmento
Segmento
Parasegmento
Segmento
Parasegmento
Iniciao por produtos de genes pair-rule
Concentrao de
produtos dos genes
(A)
Segmento
Parasegmento
Eve
Ftz
Eve
Ftz
Posterior
Anterior
Clulas
(B) Interao entre engrailed e wingless
Um segmento
Anterior
Engrailed competente
wingless competente
Posterior
engrailed competente
Difuso da protena Wingless
Expresso wingless
Receptores Patched
Expresso engrailed
Difuso da protena
Hedgehog
Protena Wingless
Frizzled
Transcrio
de wingless
Armadillo
Cubitus interruptus
Receptores
Patched
Hedgehog
Protena smoothened
Transcrio
de engrailed,
hedgehog
Modelo para a transcrio dos genes de polaridade segmentar engrailed (en) e wingless
(wg). (A) A expresso de wg e en iniciada
por genes pair-rule. O gene engrailed expresso quando as clulas contm altas concentraes das protenas Even-skipped ou
Fushi tarazu. O gene wingless transcrito
quando nem o gene eve nem ftz esto ativos,
mas um terceiro gene (provavelmente oddpaired) expresso. (B) A expresso contnua de wg e en mantida pela interao entre
clulas expressando engrailed e wingless. A
protena Wingless secretada e se difunde
para as clulas circunjacentes. Nas clulas
com competncia para expressar engrailed
(tendo protenas Eve ou Ftz), a protena
Wingless ligada pelo receptor Frizzled. Isso
permite a ativao do gene engrailed. A protena Engrailed ativa a transcrio do gene
hedgehog e tambm ativa a transcrio de
seu prprio gene (engrailed). A protena
Hedgehog se difunde dessas clulas e se liga
protena Patched. Essa ligao impede a
protena Patched de inibir a sinalizao da
protena Smoothened. O sinal permite a transcrio do gene wingless e a subseqente secreo da protena Wingless.
568
Gradiente
Hedgehog
Gradiente
Wingless
Figura 14.26
Especificao celular pelo centro sinalizador Wingless/Hedgehog. (A) Fotografia em campo

iluminado de embrio tipo selvagem de Drosophila, mostrando a posio do terceiro segmento
abdominal. (B) Aproximao da rea dorsal do segmento A3, mostrando as diferentes estruturas cuticulares produzidas pelas 1a, 2 a, 3a e 4a filas de clulas. (C) Modelo para o papel de
Wingless e Hedgehog. Cada sinal responsvel por aproximadamente metade do padro. Cada
sinal, ou age de uma maneira gradual (aqui mostrada como gradientes diminuindo a partir de
suas respectivas fontes) para especificar os destinos de clulas distantes dessas fontes, ou cada
sinal pode agir localmente sobre clulas vizinhas para iniciar uma cascata de indues (aqui
mostrada como setas em seqncia). (Segundo Heemskerk e DiNardo, 1994; fotografias
cortesia dos autores).
4a mais distante das clulas secretoras de Wg tambm podem tornar-se de 3a ou 2a.

Parece que as clulas mais prximas das secretoras de Wg no podem responder a Hh,
e Hh no pode, por si s, especificar o 1o destino. (Isso pode requerer a expresso dos
produtos do gene pair-rule, especialmente Engrailed.) Assim, Hedgehog e Wingless
parecem necessrias para a elaborao de todo o padro de tipos celulares do
parasegmento. Porm, o mecanismo pelo qual conseguem tal especificao no est
claro. Ou esses sinais agem de uma forma gradual como morfgenos, ou agem localmente iniciando uma cascata de eventos do local de sinalizao, onde cada interao
569
usa um ligante e um receptor diferentes (Figura 14.26). O padro dos destinos celulares tambm muda o foco da padronizao de parasegmento em segmento. Tem-se
agora marcadores externos, as clulas expressando engrailed tornando-se as clulas
mais posteriores de cada segmento.
Os genes de seleo hometica

Padres de Expresso dos Genes Hometicos
Aps os limites segmentais terem sido estabelecidos, as estruturas caractersticas de
cada segmento so especificadas. Essa especificao conseguida pelos genes
seletores hometicos (Lewis, 1978). Existem duas regies do cromossomo 3 da Drosophila que contm a maioria desses genes hometicos (Figura 14.27). Uma regio, o
complexo Antennapedia, contm os genes hometicos labial (lab), Antennapedia
(Antp), Sex comb reduced (Scr), Deformed (Dfd) e proboscipedia (pb). Os genes
labial e Deformed especificam os segmentos da cabea, enquanto Sex comb reduced
e Antennapedia contribuem para dar identidade aos segmentos torcicos. O gene
proboscipedia parece atuar somente em adultos, mas em sua ausncia, os palpos
labiais da boca so transformados em patas (Wakimoto et al., 1984; Kaufman et al.,
1990). A segunda regio de genes hometicos o complexo bithorax (Lewis, 1978).
Existem trs genes codificadores de protenas nesse complexo: Ultrabithorax (Ubx),
que necessrio para a identidade do terceiro segmento torcico, e abdominal A
(abdA) e Abdominal B (AbdB), que so responsveis pelas identidades dos segmentos abdominais (Snchez-Herrero et al., 1985). O fentipo letal do mutante de trspontos Ubx-, abdA-, AbdB- idntico aquele de uma deleo de todo o complexo
bithorax (Casanova et al., 1987). A regio do cromossomo contendo tanto o complexo
Antennapedia como o complexo bithorax freqentemente referida como o complexo
hometico (Hom-C).
(A)
Figura 14.27
Complexo Antennapedia
(B)
Complexo Bithorax
Os domnios funcionais dos genes dos complexos bithorax e Antennapedia em Drosophila. (A) O complexo bithorax foi dividido em trs
grupos complementares letais identificados por E. B. Lewis. Os genes
do complexo Antennapedia so labial (lab), Deformed (Dfd), Sex comb
reduced (Scr) e Antennapedia (Antp). (B) Sumrio do controle dos
genes AbdA e AbdB em Drosophila. Os limites so controlados pelos
genes gap. As sries de mutaes infra-abdominal controlam os elementos reguladores desses genes. (A segundo Dessain et al., 1992; B
segundo Casares e Snchez-Herrero, 1995.)
570
Figura 14.28
(A)
(A) Cabea de uma mosca tipo selvagem. (B)

Cabea de uma mosca contendo a mutao
Antennapedia que converte antenas em patas.
(Segundo Kaufman et al., 1990, cortesia de T.
C. Kaufman.)
Como esses genes so responsveis pela especificao das partes corporais da

mosca, suas mutaes levam a fentipos bizarros. Em 1984, William Bateson chamou
esses organismos de mutantes hometicos, que fascinaram biologistas do desenvolvimento por dcadas. O gene Antennapedia, por exemplo, considerado especificar a identidade do segundo segmento torcico. Na mutao dominante de
Antennapedia, esse gene expresso na cabea bem como no trax, e os discos imaginais
da regio da cabea so especificados como torcicos. Com isso, patas em lugar de
antenas crescem dos soquetes da cabea (Figura 14.28). No mutante recessivo de
Antennapedia, o gene deixa de ser expresso no segundo segmento torcico, e antenas brotam das posies das patas (Struhl, 1981; Frischer et al., 1986; Schneuwly et al.,
1987). De maneira semelhante, quando o gene Ultrabithorax deletado, o terceiro
segmento torcico (caracterizado por halteres) se transforma em outro segundo segmento torcico. O resultado (Figura 14.29) uma mosca com quatro asas - uma situao embaraosa para um dptero clssico*.
*Dpteros (insetos com duas asas como as moscas) so considerados ter evoludo de insetos
normais com quatro asas; possvel que essa mudana ocorreu atravs de alteraes no complexo
bithorax. O Captulo 23 inclui mais especulaes sobre a relao entre genes bithorax e a evoluo.
Figura 14.29
A mosca das frutas de quatro asas foi construda juntando-se

trs mutaes em reguladores cis do gene Ultrabithorax.
Essas mutaes transformam eficazmente o terceiro segmento torcico em outro segundo segmento torcico (i.e., halteres
em asas). (Cortesia de E. B. Lewis.)
571
Segmentos:
gene en:
Parasegmentos:
gene ftz:
Complexo Antennapedia
labial
(lab)
Deformed
(Dfd)
Sex combs reduced

(Scr)
Epiderme
Sistema
nervoso
central (CNS)
Epi
CNS
Epi
CNS
Antennapedia
(Antp)
Epi
CNS
Complexo bithorax
Ultrabithorax
(Ubx)
Epi
CNS
abdominal A
(abdA)
Epi
CNS
Abdominal B
(AbdB)
Epi
CNS
caudal
(cad)
Epi
Figura 14.30
Esses principais genes seletores hometicos foram clonados e sua expresso analisada por hibridizao in situ (Harding et al., 1985; Akam, 1987). Os resultados desses
experimentos esto sumariados na Figura 14.30. Transcritos de cada loco so detectados em regies especficas do embrio sendo especialmente proeminentes no sistema
nervoso central. Em mutantes hometicos, essa expresso normal fica alterada. Por
exemplo, em alelos dominantes de Antennapedia, o gene Antennapedia foi invertido
no cromossomo, fazendo com que perdesse seu prprio promotor ficando sob o controle de um promotor diferente, ativo na cabea. Isso causa a expresso ectpica de
Antp na cabea. De maneira semelhante, se o gene Ultrabithorax for colocado em um
novo promotor e expresso na regio da cabea, as antenas comeam a produzir estruturas especficas de patas e protenas (Mann e Hogness, 1990).
Regies de expresso gnica hometica (tanto

mRNA como protena) no blastoderma e (algumas horas mais tarde) no sistema nervoso
central do embrio de Drosophila. As reas
escurecidas so segmentos ou parasegmentos
com mais produto. As barras adjacentes ilustrao representam a expresso gnica dentro
dos limites parasegmentares. (Segundo
Kaufman et al., 1990.)
572
Iniciando os Padres da Expresso dos genes Hometicos
(B)
A iniciao dos domnios dos genes hometicos influenciada pelos genes gap e
genes pair-rule. Por exemplo, a expresso dos genes abdA e AbdB reprimida
pelas protenas Gap Hunchback e Krppel. Essa inibio impede esses genes que
especificam para o abdome, serem ativos na cabea e no trax (Casares e SnchezHerrero, 1995). Reciprocamente, o gene Ultrabithorax ativado por certos nveis
da protena Hunchback, fazendo com que seja originalmente transcrito em uma
larga banda no meio do embrio, e a protena Gap Krppel ative a transcrio de
Antennapedia (Figura 14.31; Harding e Levine, 1988; Struhl et al., 1992). Os limites
de expresso dos genes hometicos so logo confinados a parasegmentos definidos pela protenas Fushi tarazu e Even-skipped (Ingham e Martinez-Arias, 1986;
Mller e Bienz, 1992).
Figura 14.31
Mantendo os Padres de Expresso dos genes Hometicos
(A)
A expresso inicial do gene hometico Antennapedia (B) est baseada na expresso

anterior de Krppel (A) na mesma rea. Se a
colocao da expresso Krppel for alterada, assim tambm a ser a expresso de Antennapedia. (de Levine e Harding, 1989, cortesia dos autores.)
A expresso de genes hometicos um processo dinmico. O gene Antp, por exemplo,

embora expresso inicialmente no parasegmento 4 presuntivo, logo aparece no
parasegmento 5. medida que a banda germinativa se expande, a expresso do gene
Antp vista no tubo neural presuntivo to posteriormente quanto o segmento 12.
Durante o desenvolvimento ulterior, o padro se contrai novamente, e transcritos
Antp esto fortemente localizados nos parasegmentos 4 e 5. Tal como outros genes
hometicos, a expresso Antp regulada negativamente por todos os produtos de
genes hometicos posteriores a ele (Harding e Levine, 1989; Gonzlez-Reyes e Morata,
1990). Em outras palavras, cada um dos genes do complexo bithorax reprime a expresso de Antennapedia. Se Ultrabithorax for deletado, a atividade de Antp se estende
atravs da regio que normalmente teria expresso Ubx e pra onde a regio Abd
comea. (Isso permite que o terceiro segmento torcico forme asas tal como o segundo segmento torcico, como est na Figura 14.29). Se todo o complexo bithorax for
deletado, a expresso de Antp se estende atravs de todo abdome. (A larva no
sobrevive, mas o padro da cutcula atravs de todo o abdome aquele do segundo
segmento torcico).
As protenas Gap e as protenas Pair-rule so transitrias, mas as identidades dos
parasegmentos tm que ser conservadas para que possa ocorrer a diferenciao especfica. Assim, uma vez que os padres de transcrio dos genes hometicos estiverem
estabilizados, eles so presos nos seus lugares por alteraes na conformao da
cromatina nesses genes. A represso dos genes hometicos parece ser mantida pela
famlia de protenas Polycomb, enquanto a estrutura ativa da cromatina parece ser
mantida pela protena trithorax (Ingham e Whittle, 1980; McKeon e Brock, 1991;
Simon et al., 1992).
GENES REALIZADORES. Foi desencadeada a procura por genes realizadores,
genes que so alvos dos genes hometicos e que funcionam para formar os
primrdios de tecidos especficos ou rgos. Um mtodo, pioneiro no laboratrio
de Walter Gehring, usou armadilhas de intensificadores para detectar aqueles
genes regulados por Antennapedia. Aqui, um transpson contendo um gene reprter da -galactosidase acoplado a um promotor fraco e introduzido aleatoriamente no genoma de diferentes Drosophila. A expresso da -galactosidase (que
pode ser facilmente detectada por colorao) fica sob o controle de intensificadores na vizinhana do promotor. Se o intensificador for regulado pela protena
Antennapedia (que est presente na regio torcica, mas no na cabea do embrio), ento a atividade da -galactosidase deveria ser diferente quando tecidos
torcico e da cabea so comparados. Usando essa tcnica, Wagner-Bernholz e
colaboradores (1991) encontraram o que pode ser o gene crtico regulado por
Antennapedia. Esse gene, salm, no ativo em discos imaginais de pata do trax,
Disco antenal
(A)
(B)
(C)
Figura 14.32
A armadilha de intensificador do transpson transporta um gene -galactosidase, ativado

quando colocado perto de um intensificador. Em uma linhagem, o transpson ficou incorporado
perto de um gene regulado diferencialmente na cabea e no trax. (A) Discos imaginais da pata de
larvas do tipo selvagem (no terceiro instar logo antes da transformao em crislida) no expressam um gene particular salm. (B) Os discos antenais da mesma larva expressam salm. (C) Discos
antenais de um mutante de Antennapedia mostram que esse gene est reprimido nesse mutante.
(Segundo Wagner-Bernholz et al., 1991, cortesia de W. J. Gehring.)
mas expresso no disco imaginal da antena (Figura 14.32). Assim, salm parece ser
um gene que reprimido pela protena Antennapedia. A represso do gene salm
pode ser crtica para a formao de tecido das patas, em lugar de tecido antenal,
dos discos imaginais torcicos.
Outro mtodo empregado para achar tais genes tem sido o seqenciamento. O
seqenciamento de genes mostrou que alguns genes tm elementos intensificadores
que ligam os genes hometicos, com isso, fazendo com que eles sejam regulados por
padres de expresso dos genes hometicos. Um gene alvo, decapentaplegic, tem
um stio de ligao em seu intensificador para a protena Ultrabithorax. Isso permite
protena Decapentaplegic ser expressa no mesoderma visceral do parasegmento 7,
onde necessria para o desenvolvimento do intestino mdio (Immergluck et al., 1990;
Panganiban et al., 1990).
Outro alvo das protenas hometicas, o gene Distal-less (ele prprio um gene
contendo um homeobox) necessrio para o desenvolvimento dos membros e
ativo somente no trax. A expresso Distal-less reprimida no abdome, provavelmente por uma combinao de protenas Ubx e AbdA que podem-se ligar a seu
intensificador e bloquear a transcrio (Vachon et al., 1992; Castelli-Gair e Akam,
1995). Isso apresenta um paradoxo, j que ambos, o parasegmento 5 (inteiramente
torcico e produtor de patas) e o parasegmento 6 (que inclui a maior parte do
primeiro segmento abdominal livre de patas) expressam Ultrabithorax. Como podem dois segmentos to diferentes ser especificados pelo mesmo gene? CastelliGair e Akam (1995) mostraram que a mera presena da protena Ubx em um grupo
de clulas no suficiente para a especificao. Em vez disso, o momento e o local
de sua expresso dentro do parasegmento podem ser crticos. Antes da expresso
Ubx, os parasegmentos 4-6 tm potenciais semelhantes. No estgio 10, a expresso de Ubx nas partes anteriores dos parasegmentos 5 e 6 impede-os de formarem
estruturas (como a espiral anterior), caractersticas do parasegmento 4. Alm disso, no compartimento posterior do parasegmento 6 (mas no do parasegmento 5),
a protena Ultrabithorax bloqueia a formao do primrdio dos membros reprimindo os genes Distal-less. No estgio 11, quando Ubx tiver alcanado todo
parasegmento 6, o gene Distal-less tornou-se auto-regulatrio e no pode ser
reprimido por Ultrabithorax (Figura 14.33).
573
574
Figura 14.33
Anterior
Representao esquemtica das diferenas entre a expresso de Ubx

nos parasegmentos 5 e 6. (A) Antes da expresso de Ubx, cada segmento tem competncia para produzir espirculos e patas. (B) No
estgio 10, a expresso precoce de Ubx (sombreada) bloqueia a formao do espirculo anterior em PS5 e PS6, e previne a formao de
patas no compartimento posterior de PS6. A protena AbdA prov o
mesmo papel nos outros segmentos abdominais. (C) No estgio 11, o
domnio da expresso Ubx se estende ao primrdio das patas de PS5
e PS6, mas vem tarde demais para reprimir a expresso do gene
Distal-less. (Segundo Castelli-Gair e Akam, 1995.)
Posterior
Segmentos:
(A)
Primrdio
do espirculo
Primrdio da pata
Parasegmentos
Protena Ubx
(B)
Protena AbdA
(C)
Os Elementos Cis-Reguladores e o Complexo Bithorax

As diferenas temporais e espaciais na expresso de Ubx entre os parasegmentos
5 e 6 sugerem que Ubx regulado por diferentes elementos reguladores. Lewis e
seus colegas (Lewis, 1978, 1985; Bender et al., 1983; Karch et al, 1985) identificaram essas regies cis-reguladoras. No princpio (antes que os trs genes do complexo bithorax fossem identificados), essas regies foram consideradas codificar
protenas especficas. Hoje, sabe-se que elas regulam a transcrio de um dos trs
genes do complexo bithorax em parasegmentos especficos. Por exemplo, os mutantes anterobithorax (abx) e bithorax (bx) faz com que o compartimento anterior
do terceiro segmento torcico (equilibradores anteriores) assuma a identidade do
compartimento anterior do segundo segmento torcico (asas anteriores). De maneira semelhante, os mutantes posterobithorax (pbx) e bithoraxoid (bxd) faz
com que o compartimento posterior do terceiro segmento torcico se parea aquele do segundo segmento torcico. A combinao das mutaes abx, pbx e bxd em
um nico embrio, causa a transformao total do terceiro segmento torcico em
um outro segundo segmento torcico. (O resultado a mosca mostrada na Figura
14.29). Embora essas mutaes tivessem originalmente sido consideradas estar
em genes separados, parece agora que so mutaes de elementos intensificadores que possibilitam a expresso especfica da posio do gene Ubx (Lewis, 1985;
Peifer et al., 1987).
A relao entre as mutaes cis-reguladoras e as trs unidades de transcrio do
complexo bithorax mostrada na Figura 14.34. As regies codificadoras da protena
do complexo bithorax ocupam menos que um dcimo do DNA nesse complexo. As
mutaes reguladoras em geral, colocam-se nas regies flanqueadoras desses trs
genes ou em ntrons no seu interior. Evidncia adicional que abx, bx e bxd so
elementos cis-reguladores vem da anlise de mutaes e delees especficas. A
deleo do gene Ubx resulta na transformao hometica do parasegmento 5 (T2
posterior e T3 anterior) e parasegmento 6 (T3 posterior e A1 anterior) em cpias do
Segmentos
Compartimentos
Parasegmentos
Mutaes
Ultrabithorax
Mutaes
reguladoras
Seqncias reguladoras
Genes estruturais
Unidades de transcrio
Figura 14.34
Mutaes reguladores no complexo bithorax. A mosca adulta esquematizada dividida em

segmentos e compartimentos anterior e posterior. As regies reguladoras do gene Ultrabithorax
esto mostradas abaixo da mosca. As reas sombreadas representam a regio especificada pelo
domnio regulador particular. A linha contnua abaixo desse representa a regio de 300.00 pares
de bases do complexo. As trs unidades de transcrio que codificam as trs protenas hometicas do complexo bithorax esto mostradas em relao aos locais reguladores. Cada um desses
genes transcrito da direita para a esquerda. Os xons so mostrados como caixas escuras, os
ntrons por linhas interrompidas. Acima da linha esto as seqncias reguladoras definidas por
mutaes genticas, e a cor das linhas corresponde ao gene que a seqncia regula positivamente.
(Segundo Peifer et al., 1897; Beachy, 1990; Casares e Snchez-Herrero, 1995.)
parasegmento 4 (T1 posterior e T2 anterior). Tal transformao letal; o embrio

morre antes de eclodir. Nos mutantes abx e bx, porm, somente o parasegmento 5
transformado no parasegmento 4, quando a expresso de Ubx reduzida no
parasegmento 5 (Casanova et al., 1985; Peifer e Bender, 1986). Da, a asa anterior
emerge no que, de outra maneira, seria um haltere anterior. De modo semelhante, as
mutaes bxd reduzem a expresso Ubx no parasegmento 6 (Peifer et al. 1987). O
elemento regulador bithorax para Ubx, contm um intensificador que liga as protenas codificadas pelos genes de segmentao: tailless, fushi tarazu e hunchback
(Quian et al, 1991). Na regio abdominal, as seqncias cis-reguladoras
intraabdominal (iab) 2-8 direcionam a expresso de abdA ou AbdB nos vrios
segmentos (Boulet et al., 1991; Snchez-Herrero, 1991).
575
576
&
Especulaes
Regulao Molecular do Desenvolvimento:

As Protenas do Homeodomnio
O Homeodomnio
Protenas do homeodomnio so uma famlia de fatores de transcrio caracterizados
por um domnio de 60 aminocidos que se
ligam a certas regies do DNA. O homeodomnio foi primeiro visto naquelas protenas cuja ausncia ou m-regulao causa
transformaes hometicas em segmentos
da Drosophila. Considera-se que protenas
do homeodomnio ativem baterias de genes
que especificam as propriedades particulares quele segmento. Tais protenas contendo homeodomnios incluem os produtos dos oito genes hometicos do complexo hometico, assim como outras protenas,
como Fushi tarazu, Caudal e Bicoid. Fatores
de transcrio do homeodomnio so importantes para a determinao dos eixos nteroposteriores tanto de invertebrados como de
vertebrados. Em Drosophila, a presena de
certas protenas contendo homeodomnios
tambm necessria para a determinao
de neurnios especficos. Sem esses fatores de transcrio, os destinos desses
neurnios so alterados (Doe et al., 1988).
O homeodomnio codificado por um
homeobox de 190 pares bases (veja Captulo 10). Os homeodomnios parecem especificar os stios de ligao para essas
protenas e so crticos para a especificao do destino celular. Por exemplo, se uma
(A)
protena quimrica construda em maior

parte por Antennapedia, mas com o terminal carboxlico (incluindo o homeodomnio)
de Ultrabithorax, a protena pode ser substituda por Ultrabithorax e especificar as
clulas apropriadas como parasegmento 6
(Mann e Hogness, 1990). O homeodomnio isolado de Antennapedia ir se ligar
aos mesmos promotores que a protena
Antennapedia inteira, indicando que a ligao dessa protena depende de seu homeodomnio (Mller et al., 1988).
O homeodomnio se dobra em trs -hlices, as ltimas duas se dobrando em uma
conformao hlice-giro-hlice que caracterstica de uma famlia de fatores de transcrio que ligam DNA ao sulco maior da dupla
hlice (Otting et al., 1990; Percival-Smith et
al., 1990). A terceira hlice a hlice de reconhecimento, e aqui que os aminocidos
entram em contato com as bases do DNA.
Uma seqncia de quatro bases, TAAT,
conservada em quase todos os stios reconhecidos pelos homeodomnios; ela provavelmente distingue aqueles stios aos quais
as protenas do homeodomnio podem se ligar. O terminal T 5 parece ser crtico para
esse reconhecimento, pois se mutado ele destri toda ligao do homeodomnio. Os pares
de bases que seguem a seqncia TAAT so
importantes para distinguir entre os stios si(B)
Stio bicoid, 7 pares de bases
Citosina
Guanina
Hlice III
milares de reconhecimento. Por exemplo, o

prximo par de bases reconhecido pelo aminocido 9 dentro da hlice de reconhecimento. Estudos de mutaes mostraram que os
homeodomnios das protenas Bicoid e Antennapedia usam, respectivamente, lisina ou
glutamina na posio 9 para distinguir stios
de reconhecimento relacionados. A lisina do
homeodomnio de Bicoid reconhece o G de
pares CG, ao passo que a glutamina do homeodomnio de Antennapedia reconhece A
de um par AT (Figura 14.35; Hanes e Brent,
1991). Se essa lisina for substituda por glutamina, uma protena Bicoid ir reconhecer
stios ligantes de Antennapedia (Hanes e
Brent, 1989, 1991). Outras protenas com homeodomnios mostram um padro semelhante, reconhecendo a seqncia comum, enquanto outra poro reconhece uma estrutura especfica prxima ao TAAT.
Figura 14.35
Interaes homeodomnio-DNA. (A) homeodomnio hlice-giro-hlice dentro do sulco

maior do DNA. (B) Pareamento proposto entre a lisina do homeodomnio Bicoid e o par de
bases CG da seqncia de reconhecimento, e
entre a glutamina do homeodomnio de Antennapedia e o par de bases TA de sua seqncia
de reconhecimento. Em ambos os casos o nono
aminocido da hlice se liga ao par de bases
imediatamente posterior seqncia TAAT. (A
segundo Riddihough, 1992; B. segundo Hanes
e Brent, 1991.)
Stio Antp, 7 pares de bases
Timina
Adenina
Co-fatores para os Genes Hom-C

Os genes hoemticos do complexo hometico da Drosophila especificam o destino segmentar, mas podem requerer alguma ajuda para isso. Os stios ligantes
de DNA reconhecveis pelos homeodomnios das protenas Hom-C so muito
semelhantes, e h alguma superposio
em suas especificidades de ligao. Em
1990, Peifer e Wieschaus descobriram
que o produto do gene Extradenticle
(Exd) interage com vrias protenas
Hom-C e pode ajudar na especificao
de identidades segmentais. Por exemplo,
a protena Ubx responsvel pela especificao da identidade do primeiro segmento abdominal (A1); sem a protena
Extradenticle, ela ir transformar esse

segmento em A3. Alm disso, as protenas Exd e Ubx so necessrias para a regulao de decapentaplegic, e a estrutura do promotor decapentaplegic sugere que a protena Extradenticle pode
dimerizar com a protena Ubx no intensificador desse gene de alvo (Raskolb e
Wieschaus, 1994; van Dyke e Murre,
1994). A protena Extradenticle inclui um
homeodomnio, e a protena humana
PBX1 se parece com a protena Extradenticle e pode ter um papel semelhante
como um co-fator para genes hometicos humanos.
O produto do gene teashirt tambm
pode ser um co-fator importante. Esse
A GERAO DA POLARIDADE DORSOVENTRAL EM DROSOPHILA

Em 1936, o embriologista E. E. Just criticou os geneticistas que achavam que podiam
explicar o desenvolvimento olhando as mutaes especficas que afetam a cor dos
olhos, o nmero de cerdas e a forma das asas. Ele dizia que no estava interessado no
desenvolvimento das cerdas nas costas de uma mosca; ao contrrio, ele queria saber
como o embrio da mosca produzia as prprias costas. Cinqenta anos mais tarde,
embriologistas e geneticistas esto finalmente respondendo essa pergunta*.
A protena Dorsal:
Morfgeno para a polaridade dorsoventral
A polaridade dorsoventral estabelecida pelo gradiente de um outro fator protico de
transcrio, Dorsal. Em contraste com Bicoid, cujo gradiente estabelecido dentro de
um sinccio, o gradiente Dorsal forma-se sobre um campo de clulas estabelecido
como uma conseqncia de eventos celulares sinalizadores.
A especificao do eixo dorsoventral pode ser dividida em vrias etapas. A etapa
crtica a translocao da protena Dorsal do citoplasma para os ncleos das clulas
ventrais durante o ciclo da dcima quarta diviso. Anderson e Nsslein-Volhard (1984)
isolaram 11 genes de efeito materno, cuja ausncia de cada um est associada com a
falta de estruturas ventrais (Figura 14.36). Alm disso, a ausncia de outro gene de
efeito materno, cactus, causa a ventralizao de todas as clulas. As protenas codificadas por esses genes maternos so crticas para certificar que a protena Dorsal entre
somente em ncleos da superfcie ventral do embrio. As etapas posteriores
translocao da protena Dorsal afetam aquilo que essa protena faz para especificar
as diferentes regies do embrio. Aqui, diferentes concentraes da protena Dorsal
parecem especificar os diferentes destinos dessas clulas.
Translocao da Protena Dorsal
A protena que realmente distingue o dorso do ventre o produto protico do gene
dorsal. O RNA dos genes dorsais da me colocado no interior do vulo pelas clulas
*De uma maneira que no poderia ter sido predita por Just, revela-se que alguns dos genes (como
o decapentaplegic) envolvidos na regulao do nmero de cerdas ou forma das asas tambm tm
funes anteriores na regulao da polaridade dorsoventral.
577
fator de transcrio dedo de zinco necessrio para o funcionamento do produto Scr distinguindo entre os segmentos labial e primeiro torcico. Ele crtico para a especificao da identidade
do protorcico anterior (parasegmento
3), e pode ser o gene que especifica a
condio basal do complexo hometico. Se o complexo bithorax e o gene
Antennapedia forem removidos, todos
os segmentos se tornam protrax anterior. A funo do gene teashirt parece
ser crtica para o trabalho com a protena Scr, distinguindo o trax da cabea e
trabalhando atravs do tronco para impedir a formao de estruturas da cabea (Roder et al., 1992). [droso2.html]
578
ovarianas da mosca me. Porm, a protena Dorsal no sintetizada a partir da mensagem materna antes de decorridos 90 minutos aps a fecundao. Quando essa protena traduzida, ela encontrada em todo o embrio, no somente no lado ventral ou
dorsal. Como pode ento essa protena atuar como um morfgeno, se existe por todo
o embrio? Em 1989, a surpreendente resposta foi encontrada (Roth et al., 1989; Rushlow
et al., 1989; Steward, 1989). Enquanto a protena Dorsal pode ser encontrada em todo
o blastoderma sincicial no embrio precoce de Drosophila, ela somente transportada para os ncleos celulares na parte ventral do embrio (Figura 14.37A,B). Aqui, a
protena Dorsal se liga a certos genes nucleares para ativar ou suprimir suas transcries. Se a protena Dorsal no penetrar no ncleo, os genes ventralizantes (snail e
twisted) no so transcritos, os genes dorsalizantes (decapentaplegic e zerknllt)
no so reprimidos, e todas as clulas do embrio so especificadas como clulas
dorsais. Essa hiptese de que o eixo dorsoventral da Drosophila especificado pelo
transporte seletivo da protena morfognica Dorsal para o ncleo reforada pela
anlise de mutaes com um fentipo inteiramente dorsalizado ou ventralizado (Figura 13.37C,D). Nesses mutantes quando todas a clulas estiverem dorsalizadas (conforme se evidencia pela sua cutcula dorsal), a protena Dorsal no penetra no ncleo de
nenhuma clula. Reciprocamente, nos mutantes cujas clulas tm um fentipo ventral,
a protena Dorsal encontrada em todos os ncleos.
(A)
(B)
Figura 14.36
Salvamento da larva por injeo de mRNA do

tipo selvagem em ovos destinados a ter o
fentipo snake. (A) Larva deformada consistindo inteiramente de clulas dorsais. Larvas
como essas se desenvolvem de ovos de uma
fmea homozigota para o alelo snake. (B) Aparncia tipo selvagem de larvas desenvolvendose de ovos snake que haviam recebido injees
de mRNA de ovos tipo selvagem. (de Anderson
e Nsslein-Volhard, 1984. Cortesia de C.
Nsslein-Volhard.)
Provendo o sinal assimtrico para a

translocao da protena Dorsal
Sinal do Ncleo do Ocito para as Clulas Foliculares
Se a protena Dorsal for encontrada no todo do embrio, mas se for transladada somente para os ncleos das clulas ventrais, algo mais deve estar provendo os sinais
assimtricos (Figura 14.38). Parece que tal sinal mediado atravs de uma complexa
interao entre o ocito e suas clulas foliculares adjacentes. O epitlio folicular ao
redor do ocito em desenvolvimento inicialmente simtrico, mas essa simetria
Figura 14.37
Incluso da protena Dorsal em ncleos ventrais, mas no laterais ou dorsais. (A) Mapa de
destinos atravs do centro do embrio de Drosophila. A parte mais ventral vira o mesoderma, a
parte superior seguinte vira o ectoderma neurognico (ventral). O ectoderma lateral e epidrmico
pode ser distinguido na cutcula, e a regio mais dorsal torna-se a amnioserosa, a camada extraembrionria que envolve o embrio. (B-D) Seo transversal de embries corados com anticorpo
para mostrar a presena da protena Dorsal. Em todos os casos, a mancha escura representa a
protena Dorsal. (B) Um embrio tipo selvagem, mostrando a protena Dorsal nos ncleos mais
ventrais. (C) Um mutante dorsalizado, mostrando ausncia de protena Dorsal em todos os
ncleos. (D) Um mutante ventralizado; a protena Dorsal penetrou no ncleo de cada clula. (A
de Rushlow et al., 1989; B-D de Roth et al., 1989, cortesia dos autores.)
(A)
(B)
Dorsal
Amnioserosa
Ectoderma dorsal
Ectoderma lateral
Ectoderma
neurognico
Mesoderma
Ventral
Viso lateral
Seo transversal
(C)
(D)
(A)
Clulas nutrizes
ovarianas
(B)
Dorsal
579
(C)
Ocito
Torpedo
Ncleo
Destino da
s clulas do
rsais
Dorsal
Cactus
Protena
Toll
Sinal
Toll
Clulas
foliculares
Inibio da
sntese das
protenas
Windbeutel,
Nudel, Pipe
Ncleo
Nenhum
sinal para o
lado ventral
Membrana
celular
Protease
Easter
ativada
Easter
Sntese de Windbeutel,
Nudel, Pipe
las
das clu
Destino
Sptzle
ativado
Sptzle
mRNA
gurken
Snake
ventrais
Windbeutel
Gastrulation
defective
Nudel
Pipe
Envoltrio
vitelnico
Ventral
1.
Ncleo do ocito viaja para o lado dorsal

anterior do ocito. Ele coleta mRNA
cornichon e gurken
2.
Mensagens cornichon e gurken traduzidas.

A protena Gurken recebida pelas protenas Torpedo durante a meia oognese
5.
Clulas foliculares ventrais sintetizam protenas Windbeutel, Nudel e Pipe
6.
Protenas foliculares ventrais absorvem

protenas Snake e Gastrulation-defective
para realizar ciso do zimgeno Easter, produzindo protease Easter ativa, somente no
lado ventral
7.
Easter cinde Sptzle, que se liga protena

receptora Toll
3 b. Sntese de protenas Windbeutel, Nudel e

Pipe inibida nas clulas foliculares dorsais
8.
Sinal Toll causa fosforilao e degradao

da protena Cactus, liberando-a de Dorsal.
4.
9.
A protena Dorsal entra no ncleo e

ventraliza a clula
Figura 14.38
Representao esquemtica de um modelo para

a gerao da polaridade dorsoventral em Drosophila. (A) O ocito desenvolve um folculo
ovariano consistindo de 15 clulas nutrizes (que
suprem protenas maternas e mensagens ao ovo
em desenvolvimento) e clulas foliculares. (B)
O ncleo do ocito reside no local que ir tornar-se o lado dorsal. Os genes cornichon e
gurken do ocito sintetizam um sinal que recebido pelo receptor produzido pelo gene torpedo das clulas foliculares. Dada a curta
difusibilidade do sinal, somente as clulas foliculares mais prximas do ncleo do ocito (i.e.,
as clulas foliculares dorsais) recebem esse sinal. O sinal do receptor Torpedo faz com que
as clulas foliculares se diferenciarem para uma
morfologia dorsal caracterstica e (de alguma
maneira) inibir a sntese das protenas
Windbeutel, Nudel e Pipe. Portanto, essas protenas somente so produzidas pelas clulas
foliculares ventrais. (C) As trs protenas foliculares ventrais so consideradas ser incorporadas na membrana vitelnica, porm, somente
no lado ventral. Elas cindem os produtos dos
genes snake e gastrulation defective para criar
3 a. O sinal Torpedo faz com que as clulas foliculares se diferenciem para uma morfologia dorsal
Protenas Cornichon e Gurken no se difundem para o lado ventral
uma enzima ativa que ir cindir a forma

zimognica da protena Easter numa protease
Easter ativa. Essa ltima, cinde a protena
Sptzle para uma forma que pode se ligar ao
receptor Toll (que encontrado em toda a membrana celular). Assim, somente o lado ventral
recebe o sinal Toll. Esse sinal separa a protena
Cactus da protena Dorsal, permitindo essa ltima ser translocada para o ncleo. A protena
Dorsal entra no ncleo e ventraliza as clulas.
(Segundo Schpbach et al., 1991; Roth, 1994;
Hong e Hashimoto, 1995.)
580
Figura 14.39
Quimeras de linhagem germinativa produzidas

trocando-se clulas do plo (precursoras de clulas germinativas) entre embries de tipo selvagem e embries de mes homozigotas para o
gene torpedo. Esses transplantes produzem
fmeas do tipo selvagem cujos embries vm
de ovos das mes mutantes, e embries deficientes em torpedo com ovos do tipo selvagem.
Os ovos das mes deficientes em torpedo produzem embries normais se os ovos se desenvolvem no ovrio do tipo selvagem, enquanto
os ovos do tipo selvagem produzem embries
ventralizados se os ovos se desenvolvem no
ovrio mutante.
quebrada por um sinal do ncleo do ocito. Conforme j mencionado neste captulo,

o ncleo do ocito est inicialmente localizado no terminal posterior do ocito, longe
das clulas nutrizes. Em seguida, ele transladado anteriormente, abaixo de uma superfcie cortical do ocito, para uma posio dorsal anterior, ao longo de uma trilha de
microtbulos. O ncleo do ocito ento sinaliza para as clulas foliculares a ele sobrepostas, e as dorsaliza (Montell et al., 1991; Schpbach et al., 1991). As clulas foliculares
acima do ncleo assumem uma forma mais colunar que outras clulas foliculares.
Essas diferenas de forma e empacotamento tornam-se acentuadas medida que o
vulo amadurece, terminando por distinguir as clulas foliculares dorsais das ventrais. O sinal dorsalizante do ncleo do ocito parece ser produzido pelos produtos
dos genes gurken e cornichon (Schpbach, 1987; Forlani et al., 1993). Mutaes
desses genes no ocito provocam a ventralizao tanto do embrio como de suas
clulas foliculares circunjacentes. (Se a mutao se der nas clulas foliculares e no no
vulo, o embrio normal.)
O sinal dorsalizante parece ser recebido pelas clulas foliculares atravs de um
receptor codificado pelo gene torpedo. A anlise molecular mostrou que gurken codifica um homlogo do fator de crescimento epidrmico (EGF), enquanto torpedo codifica um homlogo do receptor EGF de vertebrado (Price et al., 1989; Neuman-Silberberg
e Schpbach, 1995). Deficincia materna de torpedo causa a ventralizao do embrio.
Alm disso, o gene torpedo ativo nas clulas foliculares ovarianas e no no embrio.
Isso foi descoberto produzindo quimeras da linhagem germinativa/somtica. Schpbach
(1987) transplantou precursores de clulas germinativas de embries tipo selvagem
para embries cujas mes carregavam a mutao torpedo. Reciprocamente, foi feito o
transplante dessas clulas de embries torpedo para embries tipo selvagem (Figura
14.39). Os resultados foram surpreendentes pois os ovos do tipo selvagem produziram embries ventralizados quando esses ovos se desenvolveram em folculos do
mutante torpedo. Os ovos desse mutante foram capazes de produzir embries normais
quando se desenvolviam dentro de um ovrio do tipo selvagem. Assim, diferentemente dos produtos dos genes gurken e cornichon, o gene torpedo do tipo selvagem
necessrio nas clulas foliculares, no no vulo propriamente.
Sinalizao das Clulas Foliculares para o Citoplasma do Ocito
Os genes nudel (nd), pipe (pip) e windbeutel (wind) tambm so necessrios na
clula folicular e no no ocito. Se a me no tiver algum desses trs genes, o embrio
Clulas germinativas
deficientes em torpedo em
uma fmea tipo selvagem
Embrio de me
tipo selvagem
Eixo
dorsoventral
Clulas polares
(precursoras das
clulas germinativas)
Embrio de
me deficiente
no gene
torpedo
Ocito deficiente
em torpedo no
folculo tipo selvagem
Troca entre
clulas polares
Clulas germinativas tipo
selvagem em uma fmea
deficiente em torpedo
No h eixo
dorsoventral
(o todo do
embrio
dorsal)
Clulas germinativas tipo
selvagem em um folculo
deficente em torpedo
forma um fentipo totalmente dorsalizado. Esses genes so desligados pela ativao

do receptor de Torpedo (Stein et al., 1991). Se forem permitidos ser ativos (como
normalmente ocorre no caso de clulas foliculares ventrais), suas protenas so consideradas como incorporadas na poro ventral do envoltrio vitelnico que secretado
ao redor do envoltrio adjacente ao ovo pelas clulas foliculares (Hecht e Anderson,
1992; Stein e Nsslein-Volhard, 1992). Dessa maneira, um sinal assimtrico est agora
presente no envoltrio adjacente ao ovo, e dele separado pelo fluido perivitelnico. No
entanto, essas protenas no so suficientes para criar o sinal para a translocao da
protena Dorsal para o ncleo. Mais uma vez, retornamos ao ocito (agora um embrio) para suprir componentes essenciais que iro gerar o sinal ventral das clulas
foliculares para o embrio.
O complexo formado pelas protenas Nudel, Pipe e Windbeutel considerado
ativar trs proteases serina secretadas pelo embrio para o fluido perivitelnico (veja
Figura 14.38; Hong e Hashimoto, 1995). Essas proteases so os produtos dos genes
gastrulation defective (gd), snake (snk) e easter (ea). Como a maioria das proteases
extracelulares, elas so secretadas em uma forma inativa, tornando-se ativas por
clivagem peptdica. Considera-se que o complexo Nudel-Pipe-Windbeutel primeiro
arrasta e ativa a protena Gastrulation defective. Essa protena uma protease, e cliva
a protena Snake. Essa clivagem ativa a atividade protesica da protena Snake; em
seguida, a protena Snake ativada cliva a protena Easter, que cliva a protena Sptzle
(Chasan et al., 1992; Hong e Hashimoto, 1995).
A protena Sptzle clivada agora capaz de se ligar a um receptor na membrana
celular do ocito, o produto do gene Toll. A protena Toll tambm um produto
materno regularmente distribudo na membrana celular do ovo (Hashimoto, 1988,
1991). A mutao recessiva de Toll tem um fentipo dorsalizado semelhante, e injees de RNA de ovos do tipo selvagem iro restaurar a polaridade dorsoventral de
ovos postos por mes Toll-/Toll-. No entanto, diferentemente do caso de snake ou
dos outros 10 genes maternos, o local da injeo importante. Qualquer parte injetada do ovo torna-se a regio ventral do embrio resgatado (Anderson et al., 1985).
Isso sugere que ovos Toll-/Toll- no tm um eixo dorsoventral (enquanto em snake,
a regio ventral est no seu lugar normal). No desenvolvimento normal, o receptor
Toll est espalhado atravs de toda a membrana celular do ocito, mas torna-se
somente ativo no local onde se liga protena Sptzle, produzida no lado ventral do
ovo. Dessa maneira, os receptores Toll no lado ventral do ovo esto efetuando a
transduo de um sinal para o interior do ovo, ao passo que os receptores Toll do
lado dorsal do ovo no o fazem.
O Estabelecimento do Gradiente da Protena Dorsal
SEPARAO DAS PROTENAS DORSAL E CACTUS. O desenlace crucial da sinalizao atravs do receptor Toll o estabelecimento de um gradiente da protena
Dorsal. Como estabelecido esse gradiente? Parece que a protena Cactus est assentada na poro da protena Dorsal que lhe permite penetrar nos ncleos. Enquanto a
protena Cactus est ligada protena Dorsal, essa permanece no citoplasma. Porm,
esse complexo sistema de sinalizao est organizado para cindir a protena Cactus da
protena Dorsal na parte ventral do ovo. Quando Sptzle se liga e ativa a protena Toll,
essa pode ativar a quinase da protena Pelle. (A protena Tube provavelmente
necessria para trazer Pelle at a membrana celular, onde pode ser ativada; Gallindo et
al., 1995). A quinase da protena Pelle pode ento fosforilar a protena Cactus. Uma vez
fosforilada, Cactus degradada, e a protena Dorsal pode entrar no ncleo (Kidd,
1992; Shelton e Wasserman, 1993; Whalen e Steward, 1993; Reach et al., 1996). O
resultado um gradiente de localizao de Dorsal nas clulas ventrais do embrio,
com as mais elevadas concentraes da protena dorsal nos ncleos mais ventrais.
O processo descrito para a translocao da protena Dorsal para os ncleos
muito parecido com aquele descrito no Captulo 10 para a translocao do fator de
581
582
(A) Embrio de Drosophila
(B) Linfcito mamfero
IL-1
Sptzle
Receptor
Toll
Membrana
plasmtica
Citoplasma
do ocito
quinase pelle
Cactus
Receptor
IL-1
Quinase
Membrana
plasmtica
Citoplasma do
linfcito
Dorsal
Dorsal
Ncleo
Regulao de genes
ventralmente especficos
Ncleo
Regulao de genes das imunoglobulinas
Figura 14.40
Modelo de uma trajetria conservada para regular o transporte nuclear de fatores de transcrio em Drosophila e mamferos. (A) Em
Drosophila, a protena Toll liga o sinal da protena Sptzle e ativa a regio da quinase da
protena Pelle. A protena Pelle fosforila
Cactus e Dorsal, fazendo com que as duas
protenas se separem uma da outra. A protena Dorsal pode ento entrar no ncleo e regular a transcrio de genes ventralmente especficos. (B) Em linfcito de mamferos, o receptor IL-1 pode causar a fosforilao de IB
(atravs de uma protena quinase ainda no
identificada). Isso permite protena NF-B
penetrar no ncleo e efetuar a transcrio de
vrios genes especficos do linfcito. (Segundo Shelton e Wasserman, 1993.)
transcrio NF-B para o ncleo de linfcitos de mamferos. De fato, existe uma substancial homologia entre NF-B e Dorsal, entre IB e Cactus, entre a protena Toll e o
receptor da interleucina 1 (IL-1), entre a protena Pelle e uma protena quinase associada a IL-1, e entre as seqncias de DNA reconhecidas por Dorsal e NF-B (GonzlesCrespo e Levine, 1944; Cao et al., 1996). Assim, a via bioqumica usada para especificar
a polaridade dorsoventral em Drosophila parece ser a mesma que aquela usada para
diferenciar linfcitos em mamferos (Figura 14.40).*
LEITURA DO GRADIENTE DA PROTENA DORSAL. O que faz a protena Dorsal
uma vez localizada nos ncleos das clulas ventrais? Olhando o mapa de destino do
corte transversal pelo meio do embrio de Drosophila no dcimo quarto ciclo da
diviso (veja Figura 14.37), torna-se bvio que as 16 clulas com a mais alta concentrao da protena Dorsal so as que geram o mesoderma. A prxima clula acima dessa
regio gera as clulas especializadas da glia e as clulas neurais da linha mediana. As
prximas duas clulas so aquelas que do origem epiderme ventral e cordo nervoso
*Lemaitre e colegas (1996) mostraram que Toll e seu ligante (Sptzle) tambm esto envolvidos na resposta imune da Drosophila s infeces fngicas.
583
Figura 14.41
Gastrulao em Drosophila. Nesta seo transversal, as clulas mesodrmicas na poro ventral do embrio se dobram para o interior, formando um tubo que em seguida se achata e
forma os rgos mesodrmicos. Os ncleos
esto corados por anticorpos contra a protena
Twist. (de Leptin, 1991b, cortesia de M. Leptin.)
ventral, enquanto as nove clulas acima dessas produzem a epiderme dorsal. O grupo
mais dorsal de seis clulas no se divide; ele gera a cobertura amnioserosa do embrio
(Ferguson e Anderson, 1991).
Esse mapa de destinos gerado pelo gradiente da protena Dorsal nos ncleos.
Grandes quantidades especificam que as clulas sejam mesoderma, enquanto quantias menores especificam-nas para ser tecido glial ou ectodrmico (Jiang e Levine,
1993). O primeiro evento morfogentico da gastrulao de Drosophila a invaginao
das 16 clulas mais ventrais do embrio (Figura 14.41). Todos os derivados mesodrmicos dos msculos, corpos gordurosos e gnadas originam-se dessas clulas (Foe,
1989). A protena Dorsal especifica essas clulas para tornarem-se mesoderma de duas
maneiras. Primeiro, a protena pode ativar genes especficos que criam o fentipo
mesodrmico. Trs dos genes alvo de Dorsal so twist, snail e rhomboid (Figura
14.42). Esses genes so transcritos somente nos ncleos da clulas ventrais que
receberam altas concentraes da protena Dorsal, pois esses intensificadores no se
zerknllt
Dorsal
Figura 14.42
Subdiviso do eixo dorsoventral pelo gradiente de protena Dorsal nos ncleos. A protena Dorsal ativa os genes zigticos
rhomboid, twist e snail de acordo com sua
concentrao nuclear. A protena Snail, formada mais ventralmente, inibe a transcrio
da protena Rhomboid. A protena Dorsal
inibe a expresso de tolloid, decapentaplegic e zerknllt na regio ventral. Diferentes
concentraes da protena Zerknllt determinam os destinos das clulas dorsais. (Segundo Steward e Govind, 1993.)
Padronizao ventral
(ativao)
Amnioserosa
Padronizao dorsal
(represso)
dorsal
dorsal
Ectoderma dorsal
Ativao
tolloid
decapentaplegic
rhomboid
Inibio
Ectoderma lateral
rhomboid
Ectoderma neurognico
twist
snail
Ventral
Mesectoderma
Mesoderma
twist
snail
Inibio
tolloid
dpp
zerknllt
584
ligam protena Dorsal com alta afinidade (Thisse et al., 1988; Jiang et al., 1991; Pan et
al., 1991). A protena Twist ativa genes mesodrmicos, enquanto a protena Snail
reprime genes no-mesodrmicos em particular que poderiam, de outro modo, ser
ativos. O gene rhomboid interessante porque ativado por Dorsal mas reprimido
por Snail. Assim, a expresso de rhomboid no encontrada nas clulas mais ventrais
(i.e., as precursoras do mesoderma), mas expressa nas clulas adjacentes ao
mesoderma que formam o neuroectoderma presuntivo (veja Figura 14.42; Jiang e Levine,
1993). Tanto snail como twist so necessrios para produzir o fentipo mesodrmico
e gastrulao apropriada (Leptin et al., 1991a). A borda aguda entre as clulas
mesodrmicas e as clulas elas adjacentes que geram as clulas gliais produzida
pela presena de produtos dos genes snail e twist nas clulas mais ventrais (Kosman
et al., 1990). Em mutantes de snail, as clulas mais ventrais ainda tm o gene twist
ativado, e parecem-se com as clulas mais laterais (Nambu et al., 1990).
A protena dorsal tambm determina o mesoderma diretamente. Alm de ativar
genes estimuladores do mesoderma (twist e snail), ela inibe diretamente os genes
dorsalizantes zerknllt (zen) e decapentaplegic (dpp). Assim, nas mesmas clulas, a
protena Dorsal pode agir como um ativador de certos genes e um repressor de outros.
A opo se funciona como um ativador ou um repressor, depende da estrutura dos
Figura 14.43
Ativao e represso pela protena Dorsal. Um intensificador em um gene ativado pela protena
Dorsal (como twist ou snail) tem mltiplos stios de ligao de baixa afinidade para a protena
Dorsal e nenhum stio ligante de DSP1. Intensificadores naqueles genes que so reprimidos por
Dorsal contm tanto stios ligantes de Dorsal, como um stio ligante de DSP1. (A) Na ausncia
da protena Dorsal (i.e., naquelas futuras clulas ectodrmicas nas quais a protena Dorsal no
penetrou no ncleo) os genes twist e snail no so ativados e genes como zerknllt no so
reprimidos. (B) Reciprocamente, na presena da protena Dorsal no ncleo, os genes twist e snail
tornam-se ativos e o gene zerknllt desligado. (Segundo Ip, 1995.)
Embrio de Drosophila
Dorsal
(A)
Co-repressores putativos
que ligam seqncias ricas
em AT de AT1-3
DSP1
Sem twist
ou snail
Ectoderma
dorsal
Dorsal
Neuroectoderma
Mesoderma
Inibio
(B)
Ativao
twist,
Snail
Gradiente de
Dorsal nuclear
Stios de ligao de Dorsal

Ventral
585
intensificadores dos genes. O intensificador zen contm um stio de ligao para uma
protena chamada DSP1 (protena de comutao dorsal 1). Essa protena encontrada em todo o embrio. Quando a protena Dorsal est ausente, no parece ter efeito
algum sobre a transcrio. Porm, quando Dorsal tambm est presente no stio do
intensificador, ela converte a funo ativadora de Dorsal em funo repressora (Figura
14.43; Lehming et al., 1994; Ip, 1995). Mutantes de dorsal expressam genes dpp e zen
atravs do embrio (Rushlow et al., 1987), e embries deficientes em dpp e zen deixam
de formar estruturas dorsais (Irish e Gelbart, 1987). Assim, em embries tipo selvagem,
os precursores mesodrmicos expressam twist e snail (mas no zen e dpp); precursores da epiderme dorsal e da amnioserosa expressam zen e dpp, mas no twist ou snail;
precursores da glia (mesectoderma) expressam somente snail; enquanto os precursores neuroectodrmicos laterais no expressam qualquer um desses quatro genes
(Kosman et al., 1991; Ray et al., 1991). Assim, em conseqncia das respostas ao
gradiente da protena Dorsal, o eixo fica subdividido em mesoderma, mesectoderma,
ectoderma neurognico, epiderme e amnioserosa. [droso3.html]
PRIMRDIOS DE RGOS E EIXOS

O modelo de coordenadas cartesianas e a
especificao dos primrdios dos rgos
Os eixos ntero-posterior e dorsoventral de embries de Drosophila formam um sistema coordenado que pode ser empregado para especificar posies no embrio. Teoricamente, clulas que inicialmente so equivalentes quanto a seu potencial de desenvolvimento podem responder s suas coordenadas expressando diferentes conjuntos
de genes. Isso foi visto na formao dos rudimentos da glndula salivar (Panzer et al,
1992). Primeiro, glndulas salivares s se formam na faixa de clulas definidas pelo
gene Sex combs reduced (Scr) ao longo do eixo ntero-posterior (parasegmento 2).
Glndulas salivares no so formadas em mutantes deficientes em Scr. Alm disso, se
Scr motivado a funcionar atravs de todo o embrio, os genes das glndulas salivares so expressos em uma faixa ventrolateral ao longo da parte mais longitudinal do
embrio. A posio da glndula salivar ao longo do eixo dorsoventral reprimida tanto
por Decapentaplegic como por Dorsal. Essas protenas inibem a formao de glndulas salivares tanto dorsal como ventralmente. Assim, a glndula salivar se forma na
interseo da banda de expresso vertical de Scr (segundo parasegmento) e a regio
horizontal no meio da circunferncia do embrio que no apresenta produtos de genes
decapentaplegic nem dorsal (Figura 14.44). As clulas que formam a glndula salivar
so direcionadas a assim o fazer pela atividade de genes que intersectam os eixos
ntero-posterior e dorsoventral.
Uma situao semelhante vista em tecidos encontrados em todos os segmentos
da mosca. Neuroblastos se formam de 10 agregados de 4 a 6 clulas cada um, que se
formam duas vezes em cada segmento na faixa do neuroectoderma da linha mediana
do embrio (Skeath e Carroll, 1992). O potencial para formar clulas neurais conferido
a essas clulas pela expresso de genes proneurais do complexo de genes achaetescute: achaete (ac), scute (sc) e lethal of scute (lsc). As clulas em cada agregado
interagem (nos modos discutidos nos Captulos 8 e 17) para gerar uma nica clula
neural do agregado. Skeath e colegas (1993) mostraram que o padro de transcrio de
achaete e de scute imposto por um sistema de coordenadas. Sua expresso reprimida pelas protenas Decapentaplegic e Snail ao longo do eixo dorsoventral, enquanto reforo positivo pelos genes pair-rule ao longo do eixo ntero-posterior causa sua
repetio em cada meio-segmento. O intensificador reconhecido por essas protenas
especificadoras do eixo fica entre os genes achaete e scute e parece regular ambos.
muito provvel, portanto, que as posies dos primrdios dos rgos so especificadas
por toda a mosca atravs de um sistema de coordenadas bidimensional baseado na
interseo dos eixos ntero-posterior e dorsoventral.
Scr Ativa
Inibe dpp
Inibe grupo
dl, spitz
Figura 14.44
Sistema de coordenadas cartesianas para expresso de genes que originam as glndulas

salivares. Os genes so ativados pelo produto
protico do gene hometico Sex combs reduced
ao longo do eixo ntero-posterior, e so inibidos nas regies marcadas por produtos dos
genes decapentaplegic e dorsal ao longo do
eixo dorsoventral. Isso permite que as glndulas salivares se formem na linha mediana do
segundo parasegmento do embrio. (Segundo
Panzer et al., 1992.)
586
Resumo: Alguns princpios do

desenvolvimento da Drosophila
Estamos comeando a aprender como o genoma influencia a construo do organismo. Os genes regulando a formao de padres em Drosophila operam de acordo com
certos princpios.
Existem morfgenos - tais como Bicoid e Dorsal cujos gradientes determinam
a especificao de diferentes tipos celulares. Esses morfgenos podem ser
fatores de transcrio ou atuar como molculas sinalizadoras.
Existe uma ordem temporal pela qual diferentes classe de genes so transcritos, e os produtos de um gene freqentemente regulam a expresso de outro
gene. Em Drosophila, limites de expresso de genes podem ser criados pela
interao entre fatores de transcrio e seus alvos gnicos. Aqui, os fatores de
transcrio transcritos anteriormente regulam a expresso do prximo conjunto de genes.
O controle da traduo extremamente importante no embrio precoce; mRNAs
localizados so crticos para a padronizao do embrio.
Destinos celulares individuais no so imediatamente definidos. Em seu lugar,
h uma especificao gradativa onde um dado campo dividido e subdividido,
finalmente regulando os destinos de clulas individuais.
Estudos genticos no embrio de Drosophila desvendaram numerosos genes que
so responsveis pela especificaes dos eixos ntero-posterior e dorsoventral.
Estamos longe de entender completamente a formao de padres formadores em
Drosophila, mas estamos muito mais conscientes de sua complexidade do que estvamos h cinco anos atrs. As mutaes de Drosophila nos forneceram nossos primeiros vislumbres dos mltiplos nveis de regulao de padres em um organismo
complexo e permitiram o isolamento desses genes e seus produtos. Alm disso, conforme veremos nos captulos subseqentes, esses genes podem proporcionar pistas
para um mecanismo geral de formao de padres usado em todo o reino animal.
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Especificao do destino celular por

interaes clula-clula progressivas
O estudo da funo dos genes na ontogenia

um campo da fisiologia do desenvolvimento. Isso no quer dizer que o geneticista ser
excludo na resoluo desse problema - ele
se tornar um embriologista gentico experimental. Aps uma longa jornada onde algumas vezes ele se distanciou de seus colegas biologistas, ele volta para casa com alguns novos conceitos e instrumentos.
CURT STERN (1936)
Nos mantemos eretos e andamos com partes
de nosso corpo que poderiam ser usadas para
raciocinar se elas tivessem se desenvolvido
em outras partes do embrio.
HANS SPEMANN (1943)
15
O LTIMO CAPTULO, observamos que a determinao celular e a especi-
ficao do eixo podem ser causadas por interaes de substncias plasmticas

especficas dentro de uma clula sincicial. Somente mais tarde ocorrem interaes clula-clula que fixam o destino celular. Mas, a maioria dos tipos de organismos no possui o estgio sincicial na embriognese precoce. Em muitas espcies,
incluindo a maioria dos vertebrados, as clulas so especificadas pelas suas interaes com clulas vizinhas.
Desenvolvimento regulativo
Em deuterostomatas, tais como ourio-do-mar e vertebrados, o destino da clula depende de sua posio no embrio e no da parte do citoplasma que ela adquiriu.
Sidney Brenner (Citado em Wilkins, 1993) observou que o desenvolvimento animal
pode se dar de duas maneiras. Alguns organismos so especificados predominantemente no estilo Europeu; ou seja, cada clula determinada por quem eram seus
ancestrais. A linhagem o fator importante. Inversamente, os blastmeros da maioria
dos vertebrados so especificados predominantemente no estilo Americano; existe
uma grande mistura de clulas e cada clula determinada pela natureza de suas
vizinhas. Toda clula se inicia com um potencial similar e se desenvolve de acordo com
o que encontra. Nesses embries, em pelo menos parte da clivagem, cada clula
capaz de se desenvolver no embrio todo se ela for separada das outras, e as clulas
remanescentes so capazes de alterar seu destino para produzir o embrio completo
(como na formao de gmeos). Esse tipo de comprometimento chamado especificao
condicional (ou dependente), e d origem ao desenvolvimento regulativo.
Durante o desenvolvimento autnomo, o eixo do embrio determinado pela distribuio de materiais em cada um dos blastmeros. Entretanto, no desenvolvimento
regulativo, os eixos se formam a partir de interaes das clulas constituintes. Neste
captulo acompanharemos os experimentos que se iniciaram h mais de um sculo para
entender como se d a especificao do sistema nervoso nos anfbios.
591
592
Testando a teoria do plasma germinativo

August Weismann: A teoria do plasma germinativo
A descoberta da determinao regulativa tem suas razes no insucesso das teorias do
desenvolvimento em mosaico formuladas na Alemanha no fim do sculo dezenove.
Em 1883, August Weismann comeou propondo uma teoria que integrava fenmenos
biolgicos diversos como hereditariedade, desenvolvimento, regenerao, reproduo sexual e evoluo por seleo natural. Esse modelo mecnico para a diferenciao
celular foi chamado de teoria do plasma germinativo. Baseado no escasso conhecimento sobre fertilizao existente na poca, Weissmann audaciosamente props que
a contribuio cromossmica do espermatozide e do vulo ao novo organismo era
igual, no s quantitativa como qualitativamente. Ainda mais, foi postulado que os
cromossomos transportavam os potenciais herdados pelo novo organismo e foram
considerados como a base da continuidade entre geraes.* Entretanto, era considerado que nem todos os determinantes dos cromossomos entravam em cada clula do
embrio; em lugar de dividir-se igualmente, a hiptese era que os cromossomos se
dividiam de tal maneira que diferentes determinantes nucleares entravam em clulas
diferentes. Enquanto o ovo fertilizado estaria levando a carga completa de determinantes, certas clulas conteriam os determinantes formadores do sangue e outras
os determinantes formadores dos msculos. Somente os ncleos daquelas clulas
destinadas a se tornarem gametas (as clulas germinativas) reteriam, como se pensava, todos os tipos de determinantes. Os ncleos de todas as outras clulas teriam
somente uma frao dos tipos determinantes originais.
A hiptese de Weismann propunha a continuidade do plasma germinativo e a
diversidade das linhagens somticas. A diferenciao era devida segregao
de determinantes nucleares para vrios tipos de clulas. Os cromossomos, apesar de iguais em todas as clulas, seriam desiguais em suas qualidades. Somente a
linhagem das clulas germinativas manteria todos os determinantes, e essa linhagem seria totalmente independente das clulas somticas. Assim, no haveria
herana de caractersticas adquiridas pelas clulas somticas. Weismann conseguiu suporte para esse modelo, cortando a cauda de camundongos recm-nascidos por 19 geraes. Os animais de cada gerao subseqente tinham caudas de
tamanho normal, indicando que a linhagem germinativa estava protegida contra
os insultos ao tecido somtico.**
A teoria do plasma germinativo de Weismann est ilustrada na Figura 15.1. A teoria
enfatiza a continuidade e a imortalidade da linhagem germinativa em contraste com a
natureza temporria do organismo adulto, mostrando, como notado pelo fisiologista
Michael Foster, que o corpo animal na realidade um veculo para os vulos. E. B.
Wilson, que considerava seu extraordinrio livro, The Cell in Development and
Inheritance (1896), como oriundo da hiptese de Weismann, tambm reconheceu as
implicaes desse esquema:
* Os embriologistas pensavam nesses termos cerca de 15 anos antes da redescoberta do trabalho
de Mendel. Weismann (1892, 1893) tambm especulou que esses determinantes nucleares da herana funcionavam elaborando substncias que se tornavam ativas no citoplasma.
** Nessa poca, o ponto de vista alternativo mais importante era o da pangnese. Essa
hiptese, defendida como uma hiptese provisria por Charles Darwin, propunha que cada clula
somtica continha partculas (pangenes) que migravam de volta para as clulas sexuais para permitir a transmisso das caractersticas daquelas clulas. De acordo com essa teoria, Weismann deveria
ter obtido camundongos com caudas mais curtas. Mais recentemente, Thomas Jukes, comentando
os resultados de Weismann citou a intuio de Hamlet que existe uma divindade que d forma aos
nossos fins, no importa a crueza com que os fazemos. Deve ser notado que a independncia da
linhagem germinativa em relao somtica no absoluta em todos os organismos. Em esponjas,
platelmintos, hidrozorios e tunicados coloniais, as clulas germinativas podem se desenvolver de
tecidos somticos, e mudanas genticas feitas nesses tecidos somticos podem ser herdados (Berrill
e Liu, 1948; Buss, 1987).
CAPTULO 15 Especificao Condicional
Clulas
somticas
A clula germinativa
593
Diferenciao das
clulas somticas
Continuidade das clulas germinativas
Figura 15.1
A teoria da herana de Weismann. A clula germinativa d origem s clulas somticas diferenciveis

do corpo (indicadas em cor), como tambm s novas clulas germinativas. (de Wilson, 1986.)
A morte de um indivduo no envolve soluo de continuidade na srie de divises celulares pelas quais a vida da raa continua. O indivduo morre, verdade, mas as clulas germinativas continuam, levando com elas as tradies da
raa da qual se originaram e as repassando aos seus descendentes.
Wilhelm Roux: Desenvolvimento em mosaico
Weismann intuiu que os cromossomos so os portadores da informao herdada para
o desenvolvimento. Mais importante que isso, ele props uma hiptese de desenvolvimento que podia ser testada imediatamente. Weismann dizia que quando a primeira
diviso da clivagem separava a futura metade direita do embrio da futura metade
esquerda, haveria uma separao dos determinantes direitos dos determinantes
esquerdos nos blastmeros resultantes. Essa afirmao foi testada por Wilhelm
Roux, um jovem embriologista alemo. Em 1888, Roux publicou o resultado de uma
srie de experimentos nos quais usou embries de r de 2 e 4 clulas, e destruiu
algumas das clulas com uma agulha aquecida. A hiptese de Weismann predizia a
formao de embries pela metade, direita ou esquerda; Roux obteve mrulas incompletas (metades), justamente como havia sido previsto por Weismann (Figura 15.2).
Essas se desenvolveram em nurulas tendo somente um lado completo, direito ou
esquerdo, com uma dobra medular, uma fossa auditiva e assim por diante. Portanto, ele
concluiu que o embrio da r era um mosaico de partes autodiferenciveis e era provvel que cada clula estivesse recebendo um conjunto especfico de determinantes e se
diferenciava de acordo com isso. Com essa srie de experimentos, Roux inaugurou seu
programa de mecnica do desenvolvimento (Entwicklungsmechanik), um enfoque
fisiolgico experimental da embriologia (veja Sander, 1991a,b). Nunca mais, insistia
Roux, ser a embriologia submetida por estudos evolucionrios. Pelo contrrio, a
embriologia assumiria seu papel como uma cincia experimental independente.
Figura 15.2
O desenvolvimento em mosaico, como Roux

tentou mostrar. A destruio de uma clula
de um embrio de r com 2 clulas resulta
no desenvolvimento de somente uma metade do embrio.
Agulha quente
Tecido
morto
Tecido
vivo
Meio embrio
Clivagem
Ovo fertilizado de r
Estgio de 2 clulas
Estgio de blstula
Metade destruda
(tecido morto)
Estgio de nurula
594
(A) Larva pluteus normal
(B) Plutei desenvolvidas de clulas isoladas de embrio de 4 clulas
Figura 15.3
Demonstrao do desenvolvimento regulativo por Driesch. (A) Uma larva pluteus normal. (B)
Plutei menores, mas normais, cada uma delas se desenvolveu a partir de um blastmero de um
embrio dissecado de 4 clulas. (Todas as larvas esto desenhadas na mesma escala.) (De acordo
com Hrstadius e Wolsky, 1936.) Note que as larvas derivadas dessa maneira no so idnticas,
apesar de sua capacidade de gerar todos os tipos celulares necessrios. Essas variaes tambm
esto presentes nos ourios-do-mar adultos formados dessa maneira (Marcus, 1979).
Hans Driesch: Desenvolvimento Regulativo

Ningum mais do que Hans Driesch apreciava a abordagem experimental embriologia.
A meta de Driesch era explicar o desenvolvimento em termos das leis da fsica e da
matemtica. Sua investigao inicial era semelhante de Roux. Os experimentos de
Roux eram, tecnicamente, estudos de defeitos, que respondiam questo de como os
blastmeros remanescentes de um embrio se desenvolveriam quando uma parte deles era destruda. Driesch (1892) procurou estender essa pesquisa realizando experimentos de isolamento. Blastmeros de ourio-do-mar eram separados uns dos outros
por agitao vigorosa (ou, mais tarde, colocando-os em gua do mar sem clcio). Para
a surpresa de Driesch, cada um dos blastmeros de um embrio de 2 clulas se desenvolveu em uma larva completa. Analogamente, quando Driesch separou os blastmeros
de embries de 4 e 8 clulas, algumas das clulas produziram larvas plutei inteiras
(Figura 15.3). Esse era um resultado drasticamente diferente daquele previsto por
Weismann e Roux. Em lugar de se autodiferenciar como sua futura parte embrionria,
cada blastmero podia regular seu desenvolvimento de modo a produzir um organismo completo. Essa era a primeira situao experimentalmente observvel do desenvolvimento regulativo.
O desenvolvimento regulativo tambm foi demonstrado em outro experimento de
Driesch. Em ovos de ourio-do-mar, os primeiros dois planos de clivagem so meridionais passando pelos plos animal e vegetal, enquanto que a terceira diviso equatorial, dividindo o embrio em quatro clulas superiores e quatro inferiores (veja Figura 5.3). Driesch (1893) mudou a direo da terceira clivagem comprimindo suavemente
os embries precoces entre duas placas de vidro, por conseguinte, fazendo com que
a terceira diviso fosse meridional tal como as duas clivagens precedentes. Aps a
diminuio da presso, a quarta diviso foi equatorial. Esse procedimento relocou os
ncleos, de modo que um ncleo normalmente localizado na regio destinada a formar
o endoderma estivesse agora na regio ectodrmica presuntiva. Alguns ncleos que
8 clulas
Vista
superior
16 clulas
8 clulas
Vista
superior
16 clulas
Vista lateral
Placa de vidro
(A) CLIVAGEM NORMAL
Vista lateral
(B) CLIVAGEM SOB PRESSO
Figura 15.4
Experimento de Driesch com placas de presso para alterar a distribuio dos ncleos. (A)
Clivagem normal de embries de ourio-do-mar com 8 a 16 clulas, com vistas do plo animal
(seqncia superior) e lateral (seqncia inferior). (B) Planos de clivagem anormal formados
sob presso, como observados do plo animal e lateralmente. (De acordo com Huxley e
deBeer, 1934.)
normalmente produziriam estruturas dorsais agora eram encontrados em clulas ventrais (Figura 15.4). Se a segregao dos determinantes nucleares tivesse ocorrido
(como havia sido proposto por Wiesmann e Roux), o embrio resultante deveria estar
estranhamente desorganizado. Entretanto, Driesch obteve larvas normais desses embries. Ele concluiu que A posio relativa de um blastmero dentro do conjunto
provavelmente definir de um modo geral o que com ele originar.
As conseqncias desses experimentos foram monumentais para a embriologia e
pessoalmente para Driesch. Primeiro, Driesch havia demonstrado que a potncia
prospectiva de um blastmero isolado (aqueles tipos de clulas que ele tinha a possibilidade de formar) maior do que seu destino prospectivo (os tipos de clulas
que normalmente originaria no curso inalterado do seu desenvolvimento). De acordo
com Weismann e Roux, a potncia prospectiva e o destino prospectivo de um blastmero deveriam ser idnticos. Segundo, Driesch concluiu que o embrio do ourio-domar era um sistema eqipotencial harmonioso, porque todas essas partes potencialmente independentes funcionavam juntas para formar um nico organismo. Terceiro,
ele concluiu que o destino de um ncleo dependia unicamente da sua localizao
dentro do embrio. Driesch (1894) hipotetizou uma srie de eventos onde o desenvolvimento prosseguia por interaes do ncleo e do citoplasma:
Como contm um ncleo, cada clula carrega durante a ontognese a totalidade dos primrdios; como ela contm um corpo celular citoplasmtico especfico,
est especificamente apta a responder somente a efeitos especficos... Ento quando o material nuclear ativado, sob seu controle, o citoplasma de uma clula
que a princpio havia influenciado o ncleo por sua vez modificado, e ento
est estabelecida a base para um novo processo elementar, o qual no somente
o resultado mas tambm a causa.
Esse surpreendente conceito moderno de interao ncleo-citoplasma e equivalncia
nuclear, por fim, fez Driesch abandonar a cincia. Ele no podia mais imaginar o embrio como uma mquina fsica, porque esse podia ser subdividido em partes, cada
uma capaz de reformar o organismo todo. Em outras palavras, Driesch passou a acreditar que o desenvolvimento no podia ser explicado por foras fsicas. Ele foi levado
595
596
Tabela 12.2
151 Procedimentos
Estabilizao de
experimentais
RNAs mensageiros
e resultados
especficos
de Roux
por e
hormnios
Driesch
Pesquisador
Organismo
Tipo de experimento
Concluso
Interpretao em relao
potncia e destino
Roux (1888)
R (Rana fusca)
Defeito
Ourio-do-mar
(Echinus
microtuberculatus)
Ourio-do-mar
(Echinus e
Paracentrotus)
Isolamento
Desenvolvimento em
mosaico (autnomo)
Desenvolvimento regulativo
(condicional)
Potncia prospectiva
igual ao destino prospectivo
Potncia prospectiva maior
que o destino prospectivo
Desenvolvimento
regulativo (condicional)
Potncia prospectiva maior

que o destino prospectivo
Driesch (1892)
Dreisch (1893)
Recombinao
a invocar uma fora vital, entelechy (fora dirigida por uma meta interna), para explicar
como prosseguia o desenvolvimento. Essencialmente, ele acreditava que o embrio
era imbudo de uma psique interna e sabedoria para conseguir suas metas, apesar dos
obstculos colocados no seu caminho por embriologistas. Incapaz de explicar seus
resultados pela Fsica de sua poca, Driesch renunciou ao estudo da fisiologia do
desenvolvimento e se tornou um professor de filosofia, proclamando o vitalismo at
sua morte em 1941. Outros, especialmente Oscar Hertwig (1894), puderam incorporar
os experimentos de Driesch em uma embriologia experimental mais sofisticada.*
As diferenas entre os experimentos de Roux e os de Driesch esto resumidas na
Tabela 15.1. A diferena entre experimentos de isolamento e de defeitos e a importncia
das interaes fornecidas pelos blastmeros destrudos foi enfatizada em 1910, quando J. F. McClendon mostrou que blastmeros isolados de r se comportam exatamente
como clulas isoladas de ourio-do-mar. Portanto, o desenvolvimento em mosaico
dos primeiros dois blastmeros da r no estudo de Roux foi um artefato do experimento de defeito. Alguma coisa dentro do blastmero morto ou sobre ele ainda informava
s clulas vivas que ele existia. Ns j vimos que blastmeros precoces de mamferos
tm um desenvolvimento do tipo regulativo. Como discutimos no Captulo 5, cada
blastmero isolado de uma massa de clulas internas do camundongo capaz de gerar
um animal inteiro e frtil. A habilidade de dois ou mais embries precoces de camundongo se fundirem em um embrio normal (veja Figura 5.28) e o fenmeno de gmeos
idnticos (veja Figura 5.27) tambm atestam a habilidade regulativa dos blastmeros
de mamferos. Portanto, mesmo que Weismann e Roux tenham sido pioneiros no estudo da fisiologia do desenvolvimento, sua proposio que a diferenciao causada
pela segregao de determinantes nucleares logo se mostrou incorreta.
*Esses experimentos reforaram dentro da embriologia um tipo de filosofia mecanstica chamada organicismo holstico. Essa filosofia se refere aos conceitos que (1) as propriedades do todo
no podem ser previstas unicamente a partir das propriedades das partes componentes, e (2) as
propriedades das partes so informadas pela sua relao ao todo. Como uma analogia, o significado
de uma sentena obviamente depende do significado de suas partes componentes, as palavras.
Entretanto, o significado de cada palavra depende da sentena toda. Na sentena Os lderes do
partido estavam divididos no palanque, o significado possvel de cada substantivo e verbo limitado pelo significado da sentena toda e pelas relaes com outras palavras dentro da sentena.
Similarmente, uma clula no embrio desenvolve seu fentipo dependendo de suas interaes dentro
do embrio inteiro. O conceito materialista oposto o reducionismo, que mantm que as propriedades do todo podem ser conhecidas se todas as propriedades das partes forem conhecidas. Tradicionalmente, a embriologia tem apoiado o organicismo holstico, enquanto que a gentica tem se
caracterizado como sendo uma disciplina reducionista (Haraway, 1976; Roll-Hansen, 1978; Allen,
1985; Tauber e Sarkar, 1992; Gilbert e Faber, 1996). Driesch se tornou um conhecido opositor do
Nazismo, e foi um dos primeiros professores no judeus a se aposentar foradamente quando Hitler
assumiu o poder (Harrington, 1996).
597
Sven Hrstadius: Potncia e gradientes em ocitos

Mas Driesch tambm no estava totalmente correto. Como vimos no captulo anterior,
existem numerosos animais que desenvolvem-se principalmente como um mosaico de
partes autodiferenciadas. Mais importante, no entanto, que mesmo o embrio do
ourio-do-mar no uma coleo de clulas completamente eqipotenciais. Em uma
srie de experimentos realizados entre 1928 e 1935 o biologista sueco Sven Hrstadius
separou, com finas agulhas de vidro, vrias camadas de embries precoces de ouriodo-mar, e observou seu desenvolvimento subseqente (Hrstadius, 1928, 1939). Quando o embrio de 8 clulas foi dividido meridionalmente atravs do plo animal ao
vegetal, as duas metades produziram larvas plutei, exatamente como Driesch havia
previsto. Mas quando embries no mesmo estgio foram divididos equatorialmente
(separando os plos animal e vegetal), nenhuma das partes se desenvolveu em uma
larva completa (Figura 15.5). Em lugar disso, a metade animal se tornou uma bola vazia
de clulas epidrmicas ciliadas (chamada uma dauerblstula), e a metade vegetal se
desenvolveu em um embrio ligeiramente anormal com um intestino expandido.
Hrstadius conseguiu duplicar esses resultados cortando pela metade vulos no
fertilizados de ourio-do-mar e fertilizando as metades separadamente. No ourio-domar, os fragmentos dos ovos (merognias) podem se dividir e se desenvolver mesmo
tendo somente um ncleo haplide. Se o espermatozide penetrar na metade que no
tem o ncleo haplide do vulo, a merognia ainda se desenvolver (Figura 15.6).
Quando o vulo foi partido meridionalmente, embries normais se formaram das duas
metades do vulo. Entretanto, quando o ocito foi cortado equatorialmente, a fertilizao produziu uma bola animal ciliada ou um embrio com um intestino expandido a
partir do plo vegetal. Portanto, mesmo em embries do ourio-do-mar parece haver
certo grau de mosaicismo, pelo menos ao longo do eixo animal-vegetal. Isso foi confirmado por Maruyama e colaboradores (1985) que, analogamente, dividiram
meridionalmente ou equatorialmente vulos no fertilizados de ourio-do-mar. Eles
observaram que ao separar a metade animal da metade vegetal, somente a metade
vegetal fertilizada era capaz de formar micrmeros e gastrular. Portanto, os determinantes que permitem a formao de micrmeros e a gastrulao parecem estar localizados
na poro vegetal do vulo. [regul1.html]
(A)
(B)
Plo animal
Plo animal
Agulha
de vidro
Plo vegetal
Plo vegetal
Figura 15.5
Clios
Dauerblstula
(blstula permanente)
Larva
(levemente anormal)
Larva
(pequena, mas normal)
Larva (pequena,
mas normal)
Assimetria precoce no embrio de ourio-domar. (A) Quando os 4 blastmeros do plo

animal so separados dos quatro blastmeros
do plo vegetal e permitido que cada metade
se desenvolva, as clulas animais formam uma
dauerblstula ciliada e as clulas vegetativas
formam uma larva com o intestino expandido.
(B) Quando o embrio de 8 clulas dividido
de modo que cada metade contenha clulas animais e vegetativas, desenvolvem-se larvas pequenas com aparncia normal.
598
Figura 15.6
Assimetria no ovo de ourio-do-mar. (A) Quando Hrstadius dividiu o ovo do ourio-do-mar

meridionalmente, de modo que ambas merognias contivessem citoplasma vegetal e animal, se desenvolveram pequenas plutei com
aparncia normal. (B) Quando o vulo do ourio-do-mar foi dividido em metades animal e
vegetal (merognias) e as metades foram fertilizadas por espermatozides, a metade animal
se desenvolveu em uma dauerblstula ciliada, e
a metade vegetal produziu uma pluteus com
um intestino expandido.
(A)
Plo
animal
(B)
Plo
animal
Plo
vegetal
Plo
vegetal
Merognias
Merognias
Fertilizao
Fertilizao
Larva
(pequena,
mas normal)
Larva
(pequena,
mas normal)
Dauerblstula
(blstula anormal)
Larva
(quase normal)
REGULAO DO DESTINO CELULAR EM EMBRIES DE CLIVAGEM TARDIA.
Essas observaes levaram Hrstadius a realizar algumas das experincias mais excitantes da histria da embriologia. Primeiro, Hrstadius (1935) acompanhou o desenvolvimento normal de cada uma das 6 camadas de clulas do embrio de ourio-domar com 64 clulas. Como mostrado na Figura 15.7A, as clulas animais e a primeira
camada vegetativa normalmente produzem o ectoderma; a segunda camada vegetativa
d origem ao endoderma e parte do mesoderma larval; e os micrmeros geram o esqueleto mesodrmico.
Em seguida, Hrstadius removeu a membrana de fertilizao dos embries de 64
clulas, separou as camadas com finas agulhas de vidro e as recombinou de vrias
maneiras. O hemisfrio animal isolado se tornou uma bola de clulas ectodrmicas
ciliadas (Figura 15.7B). Essa dauerbstula ciliada foi chamada de animalizada. Quando Hrstadius recombinou um hemisfrio animal isolado com a camada veg1 (Figura
15.7C), a larva resultante estava menos animalizada. O desenvolvimento ciliar foi suprimido, e foi formada uma poro do intestino. Entretanto, quando o hemisfrio animal foi combinado com a camada veg2 (Figura 15.7D), desenvolveu-se uma larva pluteus
normal. Nessa combinao, as clulas veg2, que normalmente formam somente o
arquntero e seus derivados, esto agora formando tambm as estruturas esquelticas.
Analogamente, quando a metade animal foi combinada com somente os micrmeros
(Figura 15.7E), uma pequena pluteus normal foi formada, mas nesse caso o endoderma
foi completamente derivado das clulas animais. Nesse caso, o intestino foi formado
por clulas que normalmente teriam dado origem ao ectoderma ciliado. Esses experimentos mostraram que as clulas animais tm potencial gentico para se tornarem
clulas do intestino mesmo no estgio de 64 clulas.
Formao de um organismo integrado:
Restringindo a potncia das clulas vizinhas
Driesch se referiu ao embrio como um sistema harmnico eqipotencial porque
cada uma das clulas que o compem abdica da maior parte de seu potencial para fazer
parte de um nico organismo completo. Cada clula poderia sozinha se tornar um
Figura 15.7
(A) Desenvolvimento normal

Hemisfrio
animal
Micrmeros
Larva pluteus
(B) Somente metade animal
599
Dauerblstula
Animalizao
completa
(C) Metade animal e veg1
Animalizao
(incompleta)
(D) Metade animal e veg2
Larva reconhecvel;
mesoderma da
camada veg2
(E) Metade animal e micrmeros
Larva reconhecvel;
endoderma das
camadas animais
animal completo, mas no o faz. O que fazia as clulas cooperarem em lugar de se

tornarem entidades autnomas? No caso dos caracis e tunicados, a resposta era
simples. O citoplasma materno no permite que cada clula se torne autnoma; cada
clula pode somente se desenvolver em uma poro do embrio. Em ourio-do-mar e
outros embries que mostram regulao, a resposta mais complexa.
Evidncia recente sugere que o sistema harmnico eqipotencial causado por
eventos de induo negativa que restringem mutuamente o destino de clulas vizi-
Demonstrao da regulao em ourio-do-mar

por Hrstadius. (A) Destino de cada camada
de clulas do embrio de ourio-do-mar de 64
clulas, desde a blstula at o estgio de larva
pluteus. As diferentes camadas de clulas esto marcadas como na Figura 6.1. (B) Destino
da metade animal isolada. (C) Recombinao
da metade animal com a camada de clulas veg1.
(D) Recombinao da metade animal com a
camada de clulas veg2. (E) Recombinao da
metade animal mais os micrmeros. Em cada
caso, o destino original das clulas foi alterado
pelos novos vizinhos. (De acordo com
Hrstadius, 1939.)
600
Mesmeros
Macrmeros
Micrmeros
Figura 15.8
Sumrio das indues inibitrias na blstula

do ourio-do-mar. Setas duplas ilustram as interaes mutuamente restritivas entre clulas
adjacentes. (De acordo com Henry et al., 1989.)
nhas. Jon Henry e colegas no laboratrio de Rudolf Raff (1989) mostraram que se
forem isolados pares de clulas do hemisfrio animal pigmentado de um embrio de
ourio-do-mar com 16 clulas, essas clulas podem originar componentes tanto
ectodrmicos como mesodrmicos. Entretanto, sua capacidade de formar mesoderma
severamente restringida se elas so agregadas a outros pares do hemisfrio animal
pigmentado. Assim, a presena de clulas vizinhas, mesmo sendo do mesmo tipo,
restringe a potncia de ambos os parceiros. Ettensohn e McClay (1988) mostraram que
a potncia tambm restringida quando uma clula combinada com suas vizinhas ao
longo do eixo animal-vegetal. Primeiro, eles demonstraram que o nmero de clulas
mesenquimatosas primrias parece ser fixo e pode ser regulado por variaes nos
macrmeros. Se todas as 60 clulas mesenquimatosas primrias de Lytechinus
variegatus so removidas da gstrula precoce, um nmero igual de clulas
mesenquimatosas secundrias (do arquntero que havia sido macrmeros do plo
vegetal) se convertem em mesnquima primrio e comeam a formar espculas. Se so
removidas 20 clulas mesenquimatosas primrias, cerca de 20 clulas mesenquimatosas
secundrias se tornam clulas mesenquimatosas primrias formadoras de espculas. E
assim por diante. Portanto, as clulas mesenquimatosas primrias tm uma influncia
restritiva, impedindo a formao de novas clulas mesenquimatosas primrias a partir
do arquntero, havendo ento a ocorrncia de uma induo negativa. No conhecemos o mecanismo pelo qual as clulas mesenquimatosas primrias impedem que o
arquntero forme o mesnquima primrio e estabelecem um limite para o nmero de
tais clulas na blastocele.
Recombinando clulas de vrias camadas, Khaner e Wilt (1990, 1991) observaram
que na maioria dos casos, a clula de uma camada restringe a habilidade de uma clula
de outra camada em expressar seus destinos potenciais (Figura 15.8). A exceo mais
importante - como mencionado acima- a recombinao das clulas mesomricas do
plo animal com certos micrmeros do plo vegetal para formar tecido intestinal dos
mesmeros. Entretanto, no desenvolvimento normal de ourio-do-mar, essas clulas
nunca se associam entre si.
Regulao durante o desenvolvimento de anfbios

Hans Spemann: Determinao progressiva das clulas embrionrias
Nas sees anteriores descrevemos a evidncia do desenvolvimento regulativo.
Notamos que dois aspectos principais da regulao - primeiro, que um blastmero
isolado tem uma potncia maior do que seu destino embrionrio normal, e segundo,
que o destino de uma clula determinado por interaes entre clulas vizinhassendo verdadeiro durante os estgios precoces da clivagem em ourio-do-mar. Finalmente, entretanto, os blastmeros se tornam comprometidos a certos destinos.
Em 1918, Hans Spemann, da Universidade de Freiburg, descobriu que existia uma
situao similar no ovo da salamandra. Os experimentos pelos quais ele e seus
colegas analisaram esse fenmeno nos 20 anos seguintes formam a base de boa
parte de nosso conhecimento da fisiologia embrionria e deram o Prmio Nobel a
Spemann em 1935.
Spemann, assim como Roux e Driesch, pretendia verificar a hiptese de Weismann
e por um mtodo engenhoso, ele demonstrou que os blastmeros precoces da
salamandra aqutica tm ncleos idnticos, cada um capaz de produzir uma larva
completa. Logo aps a fertilizao de um vulo dessa salamandra, Spemann usou um
fio de cabelo de beb para laar o zigoto no plano da primeira clivagem. Ele ento
produziu uma constrio parcial do ovo fazendo com que todas as divises nucleares
acontecessem em um dos lados da constrio. Freqentemente, at no estgio de 16
clulas, um ncleo escapava atravs da constrio para o lado no nucleado. Assim se
iniciava a clivagem tambm nesse lado, quando o lao foi apertado ainda mais at que
as duas metades estivessem completamente separadas. Larvas gmeas se desenvol-
601
Ligadura
Estgio de 8 clulas
Estgio de 16 clulas
140 dias
Figura 15.9
veram, uma ligeiramente mais velha do que a outra (Figura 15.9). Spemann concluiu
desse resultado que os ncleos precoces de anfbios so geneticamente idnticos e
que cada clula capaz de originar um organismo completo. Nesse respeito, os
blastmeros de anfbios eram similares aqueles de ourio-do-mar.
Alm do mais, quando Spemann realizou um experimento similar com uma constrio
ainda longitudinal, mas perpendicular ao plano da primeira clivagem (separando as
futuras regies dorsal e ventral e no os lados direito e esquerdo), ele obteve um
resultado completamente diferente. Os ncleos continuaram a se dividir em ambos os
lados da constrio, mas somente um lado - o futuro lado dorsal do embrio- dava
origem a uma larva normal. O outro lado produzia um massa desorganizada de tecido
com clulas ventrais, que Spemann chamou de Bauchstck - poro ventral. Essa
massa de tecido era uma bola de clulas epidrmicas (ectoderma) contendo sangue e
mesnquima (mesoderma) e clulas de intestino (endoderma), mas nenhuma estrutura
dorsal tal como sistema nervoso, notocorda ou somitos (Figura 15.10).
Porque deveriam esses dois experimentos dar resultados diferentes? Poderia ser
que quando o ovo dividido perpendicularmente ao plano da primeira clivagem,
algumas substncias citoplasmticas no so igualmente divididas entre as duas
(A)
Demonstrao da eqivalncia nuclear na

clivagem da salamandra aqutica feita por Spemann. (A) Quando o ovo fertilizado da salamandra Triturus taeniatus foi constringido por
uma ligadura, o ncleo foi restrito a uma metade do embrio. A clivagem daquele lado do
embrio atingiu o estgio de 8 clulas enquanto
o outro lado permaneceu no dividido. (B) No
estgio de 16 clulas, um nico ncleo penetrou na parte no dividida, e a ligadura foi
constringida de modo a completar a separao
das duas metades. (C) Aps 140 dias, cada
metade tinha se desenvolvido em um embrio
normal. (De acordo com Spemann, 1938.)
(B)
Primeira clivagem
Crescente
Cinzento
Separao dos
blastmeros e
desenvolvimento
Figura 15.10
Poro
ventral
Desenvolvimento
Normal
Desenvolvimento
Normal
Desenvolvimento
Normal
Assimetria no ovo de anfbio. (A) Quando o plano da primeira clivagem divide o

ovo em dois blastmeros, de modo que cada um receba uma metade do crescente
cinzento, cada clula separada experimentalmente se desenvolve em um embrio
normal. (B) Quando somente um dos dois blastmeros recebe todo o crescente
cinzento, ele sozinho forma um embrio normal. O outro pedao no tem estruturas dorsais e permanece como uma massa desorganizada de tecidos. (De
acordo com Spemann, 1938.)
602
metades? Felizmente, o ovo da salamandra era um bom lugar para procurar respostas. Como foi visto nos Captulos 4 e 6, existem movimentos dramticos do citoplasma cortical aps a fertilizao de ovos de anfbios, e em alguns deles esses movimentos expem uma rea cinzenta do citoplasma em forma de um crescente na regio
diretamente oposta ao ponto de entrada do espermatozide. Alm disso, o primeiro
plano de clivagem normalmente divide essa regio em partes iguais, dando origem a
dois blastmeros. Se essas clulas forem separadas, duas larvas completas se desenvolvem. Entretanto, se esse plano de clivagem for anormal (em um raro evento
natural ou em um experimento onde o investigador faz uma constrio com um fio de
cabelo, perpendicularmente ao plano normal de clivagem) o material do crescente
cinzento passa para somente um dos dois blastmeros. Spemann observou que
quando esses dois blastmeros so separados, somente aquele contendo o crescente cinzento se desenvolve normalmente.
Parece, ento, que algo contido na regio do crescente cinzento essencial para o
desenvolvimento embrionrio adequado. Mas como isso funciona? Qual o seu papel
no desenvolvimento normal? A pista mais importante veio do mapa de destino dessa
rea do ovo, ao mostrar que a regio do crescente cinzento origina as clulas que
iniciam a gastrulao. Essas clulas formam o lbio dorsal do blastporo. Como visto
no Captulo 6, as clulas do lbio dorsal do blastporo so de certa maneira comprometidas a invaginar para dentro da blstula, iniciando assim a gastrulao e a formao do arquntero. Porque o desenvolvimento futuro do anfbio depende da interao
das clulas rearranjadas durante a gastrulao, Spemann especulou que a importncia
do crescente cinzento era devida sua habilidade em iniciar a gastrulao, onde
ocorriam mudanas cruciais para o desenvolvimento.
Em 1918, Spemann demonstrou que enormes modificaes na potncia celular de
fato ocorriam durante a gastrulao. Ele verificou que as clulas da gstrula precoce
no estavam comprometidas com respeito diferenciao final, mas que o destino das
clulas da gstrula tardia eram fixos. Spemann trocou os tecidos de gstrulas precoces de duas espcies pigmentadas de salamandra aqutica (Figura 15.11). Quando a
regio das clulas epidrmicas prospectivas foi transplantada para uma rea de formao da placa neural, as clulas transplantadas deram origem ao tecido neural. Quando
clulas da prospectiva placa neural foram transplantadas regio destinada a se
tornar pele do ventre, as clulas se tornaram epidrmicas (Tabela 15.2). Portanto, essas
clulas da gstrula precoce ainda no estavam comprometidas a um tipo especfico de
diferenciao. Suas potncias prospectivas eram ainda maiores que seus destinos
prospectivos. Essas clulas exibem desenvolvimento condicional (regulativo ou
Tabela 15.2 Resultados com transplantes de tecidos durante os estgios

de gstrulas precoce e tardia na salamandra aqutica
Regio doadora
Regio hospedeira
Diferenciao do
tecido doador
Concluso
GSTRULA PRECOCE
Neurnios prospectivos
Epiderme
prospectiva
Epiderme
Desenvolvimento
dependente (condicional)
Epiderme prospectiva
Neurnios
prospectivos
Neurnios
Desenvolvimento
dependente (condicional)
Neurnios prospectivos
Epiderme
prospectiva
Neurnios
Desenvolvimento
(determinado)
independente (autnomo)
Epiderme prospectiva
(determinada)
Neurnios
prospectivos
Epiderme
Desenvolvimento
independente (autnomo)
GSTRULA TARDIA
(A)
Ectoderma
neural presuntivo
Figura 15.11
Epiderme
presuntiva
Placa neural
TRANSPLANTE EM
GSTRULA PRECOCE
Forma-se
a epiderme
(B)
Ectoderma
neural presuntivo
Epiderme
presuntiva
603
Placa
neural
TRANSPLANTE EM
GSTRULA TARDIA
Forma-se a placa
neural secundria
dependente) porque seu destino final depende da sua localizao no embrio. Entretanto, quando os mesmos experimentos de transplantes heteroplsticos (entre espcies) foram feitos entre gstrulas tardias, Spemann obteve resultados completamente
diferentes. Em lugar de regular sua diferenciao de acordo com sua nova localizao
as clulas transplantadas exibiram desenvolvimento autnomo (ou independente, ou
em mosaico). Seus destinos prospectivos estavam determinados e as clulas se desenvolveram independentemente de sua nova localizao embrionria. Especificamente, clulas neurais prospectivas agora se desenvolviam em tecido cerebral mesmo
quando localizadas na regio prospectiva da epiderme, e epiderme prospectiva formava epiderme mesmo na regio do prospectivo tubo neural. Durante o intervalo de
tempo entre a gastrulao precoce e a tardia, as clulas ficavam restritas s suas vias
de diferenciao. Essas clulas so consideradas como determinadas: elas no podem
mais regular sua diferenciao em outros tipos de clulas. Deve ser notado que os
critrios para a determinao so puramente operacionais. No ocorrem modificaes
bvias nas clulas e no se detecta qualquer diferenciao. A base molecular da
determinao permanece como uma das principais incgnitas do desenvolvimento.
Hans Spemann e Hilde Mangold: Induo embrionria primria
Os mais espetaculares experimentos com transplantes foram publicados por Hans
Spemann e Hilde Mangold em 1924*. Eles mostraram que ao se colocar tecidos em
novos locais, o lbio dorsal do blastporo a nica regio autodiferencivel da gstrula.
Quando o tecido do lbio dorsal do blastporo de uma gstrula precoce foi transplantado para o ectoderma ventral de outra gstrula, ele no s continuou a ser o lbio do
blastporo, como tambm iniciou a gastrulao e a embriognese no tecido vizinho.
Nesses experimentos, Spemann e Mangold usaram embries de duas espcies de
* Hilde Proescholdt Mangold morreu em um trgico acidente quando seu aquecedor a gasolina
explodiu. Na poca, ela tinha 26 anos e seu trabalho estava sendo publicado. Sua tese de doutoramento
foi uma das poucas teses em biologia que resultaram diretamente na concesso do Prmio Nobel.
Para maiores informaes sobre Hilde Mangold e sua poca veja Hamburger (1984) e Fssler e
Sander (1996).
Determinao do ectoderma durante a gastrulao da salamandra aqutica. O ectoderma

neural presuntivo de um embrio de salamandra transplantado a uma regio de outro
embrio que normalmente se torna epiderme.
(A) Quando a transferncia feita na gstrula
precoce, o tecido neural presuntivo se desenvolve em epiderme e se observa somente uma
placa neural. (B) Quando o mesmo experimento feito em tecidos da gstrula tardia, as
clulas neurais presuntivas formam tecido
neural, causando a formao de duas regies
neurais no hospedeiro. (De acordo com Saxn
e Toivonen, 1962.)
604
(A)
Blastocele
Notocorda
presuntiva
Somitos presuntivos
Lbio dorsal
do blastporo
Endoderma
presuntivo
Estruturas
secundrias induzidas
(B)
Invaginao
primria
Epiderme
presuntiva
Estruturas primrias
Somito
Lmen do intestino
Notocorda
Tubo neural
Somito
Notocorda
Lmen do
intestino
Endoderma
Tubo neural
Invaginao
primria
Invaginao
secundria
(C)
Figura 15.12
Autodiferenciao do tecido do lbio dorsal do blastporo. (A) O lbio dorsal do blastporo da

gstrula precoce transplantado em outra gstrula precoce na regio que normalmente se torna
epiderme ventral. (B) O tecido se invagina e forma um segundo arquntero e depois um segundo
eixo embrionrio. Tanto o tecido do doador como o do hospedeiro visto no tubo neural,
notocorda e somitos. (C) Finalmente, se forma um segundo embrio ligado ao hospedeiro. Esta
ilustrao e a Prancha 4 mostram o experimento onde o lbio dorsal do blastporo pigmentado de
T. taeniatus foi implantado em uma gstrula precoce de um T. cristatus hospedeiro.
salamandra aqutica com pigmentao diferente: Triturus taeniatus com pigmentao

escura e Triturus cristatus sem pigmentao. Ao preparar esses transplantes, Spemann e Mangold podiam identificar o tecido hospedeiro e o doador baseados na
colorao. O lbio dorsal do blastporo (o tecido da regio marginal dorsal) de gstrulas
precoces de T. cristatus foram removidos e implantados em regies da gstrula precoce de T. taeniatus destinadas a se tornar epiderme ventral (Figura 15.12). Diferentemente de outros tecidos da gstrula jovem, que se desenvolveram de acordo com sua
nova localizao, o lbio do blastporo doado no se tornou epiderme ventral. Ao
contrrio, ele invaginou como o faria normalmente (mostrando autodeterminao) e
desapareceu sob as clulas vegetativas. O tecido no pigmentado doador continuou
sua autodiferenciao em cordomesoderma e outras estruturas mesodrmicas que
constituam o destino original do tecido do blastporo. Com a formao do eixo, as
clulas do hospedeiro comearam a participar da formao do novo embrio, tornando-se rgos que normalmente nunca formariam. Assim, podia-se ver somitos contendo tanto tecido incolor (doador) como pigmentado (hospedeiro). Mais espetacular
(B)
(A)
Transplante do ndulo
de Hensen do pato
Embrio de pato
Tubo neural
induzido
Embrio
hospedeiro
Embrio de pinto
Figura 15.13
Induo de um novo eixo embrionrio pelo ndulo de Hensen. (A) O tecido do ndulo de Hensen
removido de um embrio de pato e implantado em um embrio de pinto hospedeiro. (B) Um
tubo neural accessrio induzido no local do enxerto. (De acordo com Waddington, 1933.)
ainda, era que as clulas do lbio dorsal do blastporo podiam interagir com os tecidos do hospedeiro para formar uma placa neural completa a partir do ectoderma do
hospedeiro. Por fim, formou-se um embrio secundrio, face a face com o seu hospedeiro (veja Figura 15.12; Prancha 4). Essas experincias, tecnicamente difceis, foram
repetidas recentemente com marcadores nucleares e os resultados de Spemann e
Mangold foram confirmados (Gimlich e Cook, 1983; Smith e Slack, 1983; Jacobson,
1984; Recanzone e Harris, 1985).* [regul2.html]
Spemann (1938) se referiu s clulas do lbio dorsal do blastporo como o
organizador porque (1) elas induziam os tecidos ventrais do hospedeiro a mudar seus
destinos para formar um tubo neural e tecido mesodrmico dorsal e (2) elas organizavam esses tecidos do doador e do hospedeiro em um embrio secundrio com ntidos
eixos ntero-posterior e dorsoventral. Ele props que durante o desenvolvimento
normal, essas clulas organizariam o ectoderma dorsal em um tubo neural e transformariam o mesoderma dos flancos no eixo do corpo. Sabe-se agora (graas principalmente a Spemann e seus alunos) que a interao entre o cordomesoderma e o ectoderma no suficiente para organizar o embrio completo. Em lugar disso, essa interao inicia uma srie de eventos indutivos seqenciais. O processo pelo qual uma
regio embrionria interage com uma segunda regio para influenciar a sua diferenciao ou comportamento (da segunda regio) chamado de induo. Como existem
numerosas indues durante o desenvolvimento embrionrio, essa induo principal
onde as clulas do lbio do blastporo induzem o eixo dorsal e o tubo neural tradicionalmente chamada de induo embrionria primria.**
Sabemos tambm que o lbio dorsal do blastporo ativo na organizao de
embries secundrios em Amphioxus, ciclstomos e em uma variedade de anfbios.
Em aves e mamferos, o organizador se origina na foice de Koller (margem posterior do
embrio), e o ndulo de Hensen age como o lbio dorsal do blastporo. Clulas
migrando atravs do ndulo de Hensen se tornam o endoderma e o cordomesoderma
da cabea, enquanto que clulas migrando atravs de outras partes da linha primitiva
se tornam clulas mesodrmicas laterais e ventrais. Quando o ndulo de Hensen de
uma gstrula jovem transplantado em um epiblasto de outra gstrula jovem ele induz
a formao de outro eixo secundrio completo (Figura 15.13; Waddington, 1933; Storey
et al., 1992; Khaner, 1995).
*O laboratrios de Spemann e de seus alunos usavam embries de salamandra para seus
experimentos. Foi demonstrado que o ectoderma de r muito mais difcil de ser induzido do que
o desses urodeles.
** Esse termo clssico tem sido uma fonte de confuso, porque a induo do tubo neural pela
notocorda no mais considerada como o primeiro processo indutivo no embrio. Logo discutiremos os eventos indutivos que precedem essa induo primria.
605
606
O centro de Nieuwkoop
Apesar do considervel volume de pesquisa realizada com embries de anfbios,
estamos apenas comeando a conhecer os mecanismos bsicos da induo embrionria primria. Na ltima dcada, numerosos laboratrios focalizaram seus esforos para
explicar a induo embrionria em um anfbio Xenopus laevis e existe um consenso
em relao s linhas gerais da induo embrionria primria nesse organismo.
Os dados indicam uma orquestrao da induo que tem pelo menos quatro
estgios. O primeiro estgio da induo se d na fertilizao. O vulo no fertilizado radialmente simtrico ao redor do eixo animal-vegetal. A entrada do espermatozide quebra essa simetria causando a rotao do citoplasma interno do ovo em
relao ao crtex (veja Captulo 4). Essa assimetria especifica o eixo dorsoventral
pela mistura dos citoplasmas animal e vegetal nas clulas vegetativas que se
formam em oposio ao ponto de entrada do espermatozide. Parece que a mistura
dos citoplasmas ativa determinantes da dorsalizao nessas clulas vegetativas.
Essas clulas vegetativas dorsalizadas so chamadas centro de Nieuwkoop. No
segundo estgio, os descendentes dessas clulas vegetativas induzem as clulas
acima delas a se tornarem o organizador de Spemann-Mangold. As outras clulas
vegetativas induzem as clulas marginais acima delas a se tornarem os mesodermas
lateral e ventral. Portanto, existe uma induo antes da induo primria. No
terceiro estgio, o organizador converte o mesoderma vizinho em mesoderma dorsal, e instrui o ectoderma dorsal a se tornar tecido neural. O quarto estgio envolve a caracterizao regional do tecido neural induzido (crebro anterior, crebro
posterior, medula espinhal, etc.).
Fragmentos de blstula dissecada do
origem a diferentes tecidos em cultura:
Clulas do
hemisfrio
animal
pigmentado
Clulas
equatoriais
Clulas
vegetativas
Ectoderma
Mesoderma
Endoderma
Fragmentos animais e vegetais do mesoderma

Hemisfrio animal
pigmentado (ectoderma
presuntivo) convertido a
Mesoderma
por fatores liberados

das clulas vegetativas
Figura 15.14
Sumrio dos experimentos de Nieuwkoop e os

de Nakamura e Takasaki, mostrando induo
mesodrmica pelo endoderma vegetativo. Clulas isoladas do hemisfrio animal pigmentado
se tornam uma massa de epiderme ciliada; clulas vegetativas isoladas geram tecido semelhante a intestino, e clulas isoladas equatoriais
(zona marginal) se tornam mesoderma. Se as
clulas do hemisfrio animal pigmentado so
combinadas com clulas do hemisfrio vegetal, muitas das clulas do hemisfrio animal
pigmentado geram tecido mesodrmico.
A formao do centro de Nieuwkoop e a polaridade mesodrmica

O endoderma capaz de instruir as clulas acima dele a se tornarem o mesoderma.
Alm disso, a polaridade do endoderma transferida s clulas mesodrmicas. Pieter
Nieuwkoop (1969, 1973, 1977) demonstrou a importncia das clulas vegetativas
(endoderma presuntivo) na induo do mesoderma. Ele removeu as clulas equatoriais da blstula e mostrou que nem o hemisfrio vegetal nem o animal produziram tecido
mesodrmico. Entretanto, quando os dois hemisfrios foram recombinados, as clulas
do hemisfrio animal foram induzidas a formar estruturas mesodrmicas tais como a
notocorda, msculos, clulas renais e clulas do sangue (Figura 15.14). A polaridade
dessa induo (se a regio das clulas animais formava notocorda ou msculos, etc.)
dependia da polaridade dorsoventral do fragmento endodrmico. Esse conjunto de
fatores capazes de induzir o mesoderma dorsal tem sido chamado de centro de
Nieuwkoop (Gehart et al.,1989), e em Xenopus laevis, ele se localiza nas clulas
vegetativas mais dorsais da blstula ( Figura 15.15). [regul5.html]
As clulas vegetativas ventrais e laterais tambm tm papis na especificao
do mesoderma. Enquanto as clulas vegetativas ventrais e laterais especificam os
tipos intermedirio (msculo e mesnquima) e ventral (mesnquima, sangue, rim
pronfrico) do mesoderma, as clulas vegetativas mais dorsais especificam os
componentes mesodrmicos axiais (notocorda e somitos; Figura 15.16). Parece
haver dois sinais: (1) um geral de todas as clulas vegetativas, vamos produzir
mesoderma e (2) um sinal mais especfico essas clulas acima de ns so o
mesoderma dorsal (organizador), vindo das clulas vegetativas mais dorsais (D1).
Dale e Slack (1987) forneceram evidncia para um terceiro sinal indutivo, vindo
das clulas organizadoras (aquelas clulas marginais diretamente acima do centro
de Nieukoop) que dorsalizam as clulas mesodrmicas marginais adjacentes a
elas. Quando as clulas marginais ventrais so isoladas, elas originam principalmente os tecidos mesodrmicos ventrais. Entretanto, se elas so cultivadas adjacentes s clulas marginais dorsais (ou seja, o organizador), elas geram tecido
mesodrmico intermedirio. Um quarto sinal parece vir da regio ventral que se
ope aos sinais do organizador. Assim, existe evidncia para uma especificao
do mesoderma em trs etapas (Figura 15.17): (1) a induo da atividade do
organizador pelas clulas vegetativas mais dorsais (o centro de Nieuwkoop), (2) a
induo do mesoderma ventral pelas outras clulas vegetativas e (3) a dorsalizao
das clulas marginais laterais adjacentes s clulas marginais dorsais para produzir o mesoderma intermedirio enquanto que outras clulas marginais seguem destinos ventrais. Na dcada passada foram feitas tentativas para identificar as
interaes moleculares que originam essa modelagem mesodrmica.
Organizador
A especificao da polaridade dorsoventral na fertilizao

Como vimos nos Captulos 4 e 6, a especificao dorsoventral consumada pela
rotao do citoplasma interno do ovo em relao ao crtex. Se essa rotao inibida
por luz ultravioleta, o embrio no formar estruturas dorso-anteriores (Vincent e
Gerhart, 1987). Render e Elinson (1986) e Wakahara (1989) cortaram ovos em fragmentos antes e depois dessa rotao. Se o ovo fosse cortado antes da rotao,
ambos os lados desenvolviam estruturas dorso-anteriores: cabea, notocorda e
tubo neural. Se o corte era feito aps a rotao, um fragmento desenvolvia a cabea,
corao, e algumas estruturas mesodrmicas dorsais, enquanto o outro fragmento
se desenvolvia essencialmente em um Bauchstck, consistindo quase unicamente
de clulas ventrais, tendo pouco ou nada de mesoderma dorsal e sem sistema nervoso. Sakai (1996) mostrou que se o citoplasma vegetativo do ovo fosse deletado
antes da rotao, no se formaria o eixo dorsal, e certos determinantes dorsais se
movem do crtex vegetativo para a zona marginal no futuro lado dorsal. Parece
ento, que essa rotao citoplasmtica movimenta os determinantes que so
ativadores dorsais em direo ao futuro lado dorsal do ovo.
607
Sinais ventrais
(FGF, BMP-4)
Sinais dorsais
(Vg1, Noggin,
activina, Wnt)
Centro de
Nieuwkoop
Figura 15.15
Modelo para induo do mesoderma em Xenopus. Um sinal ventral (provavelmente FGF2

ou BMP4) liberado em toda a regio vegetal
do embrio. Isso induz as clulas marginais a
se tornarem mesoderma. BMP4 pode especificar as clulas marginais a se tornarem mesoderma posterior. No lado dorsal (fora do local
de entrada do espermatozide), um sinal (provavelmente iniciado por Vg1 e propagado pelas protenas activina, Noggin e Wnt) liberado pelas clulas vegetativas do centro de
Nieuwkoop. Esse sinal dorsal induz a formao do organizador de Spemann nas clulas da
zona marginal sobreposta ao centro. (De acordo com De Robertis et al., 1992.)
Porcentagem de indues totais

Dorsal Intermediria Ventral
Plo
animal
Plo
vegetal
Figura 15.16
Plo
animal
Camada D
Plo
vegetal
Especificidade regional na induo do mesoderma pela recombinao de clulas do embrio de Xenopus com 32 clulas. As clulas
do plo animal de embries de 32 clulas foram combinadas com blastmeros vegetativos
individuais. As clulas do plo animal foram
marcadas com polmeros fluorescentes para
identificao de seus descendentes. As
indues resultantes dessas recombinaes esto resumidas direita. (De acordo com Dale e
Slack, 1987.)
608
Endoderma
farngeo
Blastocele
Arquntero
Arquntero
Ec
tod
erm
Blastocele
Mesoderma
ventral
Mesoderma
dorsal
Animal
Figura 15.17
Mesoderma
intermediria
Interaes indutivas durante o desenvolvimento precoce de Xenopus. Durante a oognese, o eixo

animal-vegetal se eleva. A fertilizao causa rearranjos citoplasmticos que subdividem a regio
vegetal nas reas dorso-vegetal (DV) e ventro-vegetal (VV). Durante a clivagem, a induo
mesodrmica ocorre de tal modo que a regio DV induz a atividade do organizador (O) nas
clulas marginais dorsais acima dela, enquanto a VV induz as clulas acima para se tornarem
mesoderma ventral (M). Um sinal do organizador converte o mesoderma ventral prximo em
mesoderma lateral (M2, M3, M4). Durante a gastrulao, os mesodermas ventral e lateral vo
para os lados da gstrula (no mostrado), enquanto o mesoderma dorsal se expande e induz a
polaridade nas clulas ectodrmicas. Isso faz com que as clulas ectodrmicas se tornem diferentes regies do tubo neural (N1, N2, N3, N4). C representa a glndula do cimento, a estrutura mais
anterior do girino. A polaridade do endoderma assim transferida ao tecido neural. O ectoderma
no induzido se torna epiderme. (De acordo com Smith et al., 1985; Slack e Tannahill, 1992.)
Gastrulao
Animal
Mesoderma
ventral
Dorsalizao do
mesoderma ventral
Espermatozide
Mesoderma
dorsal (organizador)
Animal
Animal
Mesoderma
ventral
Clivagem
Vegetal
Centro de Nieuwkoop
Induo do mesoderma por

clulas vegetativas
Oognese
No estgio de 32 clulas, os determinantes dorso-anteriores esto contidos nos

blastmeros mais dorsais (D1) (Figura 6.20; Gimlich e Gehart, 1984; Gimlich, 1985,
1986). Essa localizao foi confirmada por experimentos de recombinao (veja Figura 15.16). Dale and Slack (1987) recombinaram blastmeros vegetativos isolados de
um embrio de Xenopus de 32 clulas com a camada animal mais superior de um
embrio no mesmo estgio, marcado por fluorescncia. A clula vegetativa mais
dorsal, como esperado, induziu as clulas do plo animal a se tornarem mesoderma
dorsal. As clulas vegetativas remanescentes de modo geral induziam as clulas
animais a produzirem tecidos mesodrmicos intermedirios ou ventrais. Portanto,
clulas vegetativas dorsais podem induzir clulas animais a se tornarem tecido
mesodrmico dorsal.
Deve ser notado que em Xenopus (e outros vertebrados), a formao do eixo
ntero-posterior se segue a formao do eixo dorsoventral. Uma vez estabelecida a
poro dorsal do embrio, o movimento do mesoderma involutivo estabelece o eixo
ntero-posterior. O mesoderma que migra inicialmente atravs do lbio dorsal do
blastporo d origem s estruturas anteriores; o mesoderma na margem ventral forma
as estruturas posteriores.
A base molecular da induo mesodrmica

Estabelecendo a regionalizao dorsal:
o possvel papel da catenina
A catenina uma protena multifuncional que pode funcionar como uma ncora
para as caderinas da membrana celular (Captulo 3) ou como um fator de transcrio
nuclear. Em embries de Xenopus, a rotao cortical da fertilizao remove as
cateninas para a futura parte dorsal do ovo. A catenina continua a se acumular
preferencialmente no lado dorsal durante a clivagem precoce, e essa acumulao
observada nos ncleos das clulas dorsais (Figura 15.18 A,B; Prancha 7E,F; Schneider
et al., 1996; Larabell et al., 1997). Essa regio de acumulao de catenina originalmente parece conter tanto o centro de Nieuwkoop como as regies do organizador.
Durante as clivagens posteriores, as clulas com catenina podem se localizar especificamente no centro de Nieuwkoop (Heasman et al., 1994; Guger e Gumbiner, 1995).
A catenina necessria para a formao do eixo dorsal, pois a depleo de
transcritos de catenina com oligonucleotdeos antisenso resulta na falta de estruturas dorsais (Heasman et al., 1994). Alm disso, a injeo de catenina exgena no
lado ventral do embrio produz um eixo secundrio (Funayama et al., 1995; Guger e
Gumbiner, 1995). A catenina parte da via Wnt de transduo sinalizadora e
negativamente regulada pela quinase 3 da sntese glicognio (GSK-3; Captulo 3).
GSK-3 tambm crtica para a formao de eixo e GSK-3 ativada bloqueia a formao
de eixo quando adicionada ao ovo (Pierce e Kimelman, 1995; He et al., 1995; Yost et al.,
1996). Se o GSK-3 endgeno eliminado por uma mutao negativa dominante nas
clulas ventrais do embrio precoce, um segundo eixo se forma (Figura 15.18C). Experimentos com marcao (Yost et al., 1996; Larabell et al., 1997) sugerem que a
catenina inicialmente sintetizada (a partir de mensagens maternas) em todo o embrio, mas que degradada pela fosforilao de GSK-3 especificamente nas clulas
ventrais. No se conhece a causa dessas variaes regionais na atividade de GSK-3.
Experimentalmente a GSK-3 endgena pode ser inibida pela adio de protenas Wnt
ao ovo, e foi observado que essas Wnts induzem eixos secundrios (McMahon e
Moon, 1989; Sokol et al., 1991). Mas Wnts podem no ser as reguladoras naturais de
GSK-3 no lado dorsal do embrio; mutaes dominantes negativas de protenas Wnt
e seus receptores no conseguem bloquear a formao do eixo normal (Hoppler et al.,
1996; Sokol, 1996). Atualmente esto sendo realizados estudos para verificar se a
rotao cortical em ovos de Xenopus de certa maneira regula a atividade de GSK-3 e se
existe um outro agente (alm das protenas Wnt) capaz de inativar GSK-3.
609
610
(A)
(B)
-catenina ativada
dorsalmente por
rotao cortical
(D)
Traduo,
processamento
e difuso de Vg1
Expresso mxima
de Siamois: centro
de Nieuwkoop
(C)
Figura 15.18
Papel da via das protenas Wnt na especificao do eixo dorsoventral. (A,B) Translocao
diferencial da protena -catenina para os ncleos de blastmeros de Xenopus. (A) Lado dorsal
presuntivo de uma blstula de Xenopus corado para -catenina mostra a localizao do ncleo.
(B) Tal localizao nuclear no vista no lado ventral do mesmo embrio. (C) Formao do
eixo dorsal causado pela injeo de ambos os blastmeros de um embrio de Xenopus de 2
clulas com GSK-3 inativa dominante. O destino dorsal ativamente suprimido pela GSK3 tipo selvagem. (D) Modelo irnico pelo qual o centro de Nieuwkoop (caracterizado pela
expresso do gene Siamois e a habilidade para induzir o mesoderma dorsal) criado pelo
sinergismo da ativao dorsal da -catenina e a ativao vegetal de Vg1. (A e B de Schneider
et al., 1996, fotografias cortesia de P. Hausen; C de Pierce e Kimelman, 1995, fotografia
cortesia de D. Kimelman.)
A catenina um fator de transcrio do tipo HMG-box e pode ser uma protena

de dobramento de DNA. Ela pode tornar clulas diferentes predispostas a responder de maneiras diferentes aps o incio da expresso gnica na transio da blstula
intermediria. Uma vez dentro do ncleo das clulas vegetativas dorsais, ela ativa
determinados genes alvo, um deles sendo o gene Siamois que contm a seqncia
homeobox. Esse gene expresso no centro de Nieuwkoop imediatamente aps a
transio da blstula intermediria. Se esse gene expresso ectopicamente nas
clulas vegetativas ventrais, um eixo secundrio emerge no antigo lado ventral do
embrio, e se a rotao cortical impedida, a expresso de Siamois eliminada
(Lemare et al., 1995; Brannon e Kimelman, 1996). Estudos recentes (Brannon e
Kimelman, 1996) sugerem que a expresso mxima de Siamois ocorre quando h
sinergismo entre GSK-3/catenina e um sinal TGF- vegetalmente expresso. A rotao cortical pode ativar as cateninas e permitir a expresso de Siamois na regio
dorsal do embrio. Ao mesmo tempo, a traduo das mensagens localizadas
vegetalmente codificando um fator da famlia TGF- pode produzir uma protena que
permite uma melhor ativao da catenina nas clulas vegetativas do que nas
clulas animais (Figura 15.18D). Cui e colegas (1996) mostraram que esse membro da
famlia TGF- a protena Vg1 madura, uma protena expressa somente nas clulas
vegetativas. O resultado que Siamois seria expresso nas clulas vegetativas mais
dorsais que constituem o centro de Nieuwkoop.
O funcionamento do centro de Nieuwkoop:
funes para Vg1 e Noggin
A PROTENA VG1 ATIVADA. Existem vrias maneiras de induzir o mesoderma dorsal.
Primeira, a protena Vg1 pode induzir a formao do mesoderma dorsal nas clulas
acima dela. O mRNA para Vg1 restrito pela massa de vitelo vegetativo durante a
oognese e permanece no hemisfrio vegetal durante a clivagem (Captulos 4 e 12;
Prancha 8). Aps a fertilizao, a protena Vg1 produzida no hemisfrio vegetal da
Controle
611
Vg madura
EF1 (controle)
Actina cardaca
(mesoderma dorsolateral)
Xbra
(mesoderma geral)
(A)
Gsc (mesoderma
dorsal anterior)
Noggin (mesoderma
dorsal anterior)
Xwnt8 (mesoderma
ventrolateral)
NCAM (neural)
(B)
(C)
Figura 15.19
blstula, mas est na forma de um precursor inativo que precisa ser cindido para ser
ativo. A protena Vg1 ativada capaz de (1) induzir o mesoderma dorsal nas clulas do
hemisfrio animal; (2) induzir um eixo embrionrio completo quando microinjetada em
clulas vegetativas ventrais; e (3) recuperar o eixo dorsal em ovos irradiados com luz
UV quando microinjetada nas clulas vegetativas dorsais (Dale et al., 1993; Thomsen
e Melton, 1993; Kessler e Melton, 1995).
Kessler e Melton (1995) mostraram que a protena Vg1 ativada causava a
elongao ativa do mesoderma da notocorda como tambm a ativao dose-dependente dos marcadores mesodrmicos. Quando coroas do plo animal, no estgio de
blstula so colocadas em baixa concentrao de Vg1 processada, a protena Vg1
induz a expresso de genes como Brachyury, que caracteriza o mesoderma geral.
Doses ligeiramente maiores de Vg1 induz a expresso de marcadores mesodrmicos
laterais (Xwnt8 e actina), e em altas concentraes, a Vg1 induz essas clulas a
expressar os marcadores mesodrmicos dorsais goosecoid e noggin (Figura 15.19).
Entretanto, Cui e colaboradores (1996) encontraram que a Vg1, sozinha, no capaz
de causar diferenciao da notocorda in vivo. Para que isso ocorra, as clulas necessitam dos produtos de Vg1 e Wnt. (A via Wnt no foi suficiente para induzir
sozinha o mesoderma dorsal.) possvel que a combinao de Vg1 com algum
produto especificado pelo gene Siamois seja capaz de induzir a especificao do
mesoderma dorsal e sua diferenciao na notocorda*.
A protena Vg1 madura (processada) parece ser crtica para o funcionamento (se
no o estabelecimento) do centro de Nieuwkoop nos anfbios. Vg1 tambm
identificada na regio homloga do embrio de galinha - a zona marginal posterior.
Alm disso, quando a protena Vg1 introduzida experimentalmente em reas laterais
* Alternativamente, isso pode ser outro exemplo do conceito de Spemann (1938) chamado de
dupla certeza. O embrio poderia especificar o mesoderma dorsal pelo sinergismo de Vg1 e catenina (sem um centro de Nieuwkoop). O mesmo resultado poderia ser obtido a partir de um sinal
iniciado pelo gene Siamois do centro de Nieuwkoop abaixo dele. Spemann considerava dupla
certeza em analogia a usar tanto um cinto como suspensrios.
Protena Vg1 madura induz movimentos

morfogenticos e expresso gnica mesodrmica dorsal em explantes ectodrmicos.
Explantes de hemisfrio animal pigmentado no
estgio de blstula foram cultivados (A) em
meio no tratado ou (B) em meio contendo a
protena Vg1 madura (clivada). A protena Vg1
induziu movimentos de extenso convergente
no hemisfrio animal pigmentado. Quando
deixados no meio tratado por um tempo maior
(C) os explantes do hemisfrio animal
pigmentado formaram estruturas semelhantes
larva, incluindo a notocorda, msculos, olhos,
glndula do cimento e eixo ntero-posterior.
(D) Com o aumento de sua concentrao, a
protena Vg1 induz um conjunto mais dorsal
de marcadores mesodrmicos. A concentrao mais baixa 0 (controle), seguida por 1, 3,
10 e 30% em sobrenadante de Vg1. (De acordo com Kessler e Melton, 1995; fotografias
cortesia de D. A. Melton.)
612
do blastoderma do pinto, um novo centro de Nieuwkoop formado e um eixo secundrio induzido (Seleiro et al., 1996).
Induo de especificidade mesodrmica ventral e lateral
At aqui discutimos a induo do mesoderma dorsal pelas clulas vegetativas mais
dorsais. Mas, no s isso. As outras clulas vegetativas so capazes de induzir as
clulas acima delas a se tornarem mesoderma ventral. Experimentos de Smith e seus
colegas (1991) mostraram que na blstula intermediria os blastmeros vegetativos
ventrolaterais e dorsais de Xenopus induzem a expresso do gene Brachyury nas
clulas marginais acima deles. O mRNA de Brachyury codifica um fator de transcrio cuja funo crucial para a formao do mesoderma. Ele expresso antes da actina e outras protenas que so produtos das clulas mesodrmicas, e se o gene
Brachyury expresso em clulas onde o fator de transcrio est normalmente
inativo, aquelas clulas se tornam mesodrmicas (Cunliffe e Smith, 1992). Se o hemisfrio animal contendo as clulas da zona marginal removido do hemisfrio
vegetal na blstula intermediria no se forma o mesoderma no hemisfrio animal.
Entretanto, se clulas vegetativas so adicionadas de volta aos hemisfrios animais, o gene brachyury expresso, e as clulas que o expressam se tornam
mesodrmicas. Desse modo, as clulas vegetativas induzem a expresso de genes
mesodrmicos em clulas da zona marginal. Sem essa interao, as clulas da zona
marginal permanecem ectodrmicas.
FATORES DE CRESCIMENTO FIBROBLSTICO. Existe muito debate sobre a
identidade dos indutores da mesodrmicos gerais encontrados nas clulas

vegetativas ventrais e laterais. Os fatores de crescimento fibroblstico (e suas
mensagens) foram encontrados no ovo e no embrio de Xenopus, e se considera
que eles permitem s clulas marginais responderem Vg1 (ou a outra protena
semelhante a activina) (Cornell e Kimelman, 1994; LaBonne e Whitman, 1994). O
significado funcional dessas molculas FGF secretadas foi demonstrado pela destruio dos receptores para FGF no embrio por mutaes dominantes negativas
(Captulo 3). Quando esse experimento foi feito, os embries que no tinham receptores FGF funcionais tinham reduzido dramaticamente as quantidades de
mesoderma posterior e lateral (Prancha 3). Uma possibilidade que a quantidade
graduada de Vg1 ativa cria o padro, com pequena quantidade induzindo o
mesoderma ventral, quantidades maiores induzindo o mesoderma lateral e ainda
maiores concentraes induzindo o mesoderma dorsal. Tais gradientes foram vistos em cultura.
Figura 15.20
A importncia de BMP4 na produo de estruturas posteriores pode ser vista quando o

mRNA de bmp4 foi injetado em embries e as
clulas da coroa animal resultantes foram transplantadas diretamente abaixo do ectoderma de
gstrulas jovens. As larvas tratadas, de modo
geral, desenvolveram uma cauda extra. (de Jones
et al., 1992, cortesia de B. Hogan.)
BMP4. Outra molcula considerada importante para a especificao do mesoderma

a protena morfogentica 4 do osso (BMP4). Parece haver uma relao antagnica entre a BMP4 e o mesoderma dorsal. Se o mRNA para a BMP4 injetado em
ovos de Xenopus com uma clula, todo o mesoderma no embrio se torna
mesoderma ventrolateral, e no ocorre involuo no lbio do blastporo (Dale et
al., 1992; Jones et al., 1992). Experimentos de implantao produziram mais evidncia em relao ao papel da BMP4 na induo do mesoderma ventrolateral. Quando
o hemisfrio animal pigmentado de embries injetados com a mensagem bmp4 foi
isolada e implantada na blastocele de blstulas jovens de Xenopus, elas causaram
a formao de uma cauda extra (Figura 15.20). Inversamente, a super expresso de
um receptor negativo dominante de bmp4 resultou na formao de dois eixos
dorsais (Graff et al., 1994; Maeno et al., 1994). possvel que a BMP4 esteja
induzindo um conjunto de fatores de transcrio que especificam o mesoderma
para que seja lateral ou posterior (Stennard et al., 1996; Zhang e King, 1996).
Assim, a formao do mesoderma posterior (ventrolateral) parece ser originada
pelas aes de FGF e BMP4.
A criao da atividade do organizador

Protenas secretadas do organizador
O organizador induzido pelo centro de Nieuwkoop. Enquanto as clulas do centro de
Nieuwkoop permanecem endodrmicas, as clulas do organizador se tornam o
mesoderma dorsal (mesoderma da cabea, notocorda, mesoderma paraxial) e se
posicionam abaixo do ectoderma dorsal. Nesse local, induziro a formao do sistema
nervoso central. As propriedades do tecido organizador podem ser divididas em cinco
funes principais:
1. A habilidade de se tornar mesoderma dorsal (notocorda, etc.)
2. A habilidade de dorsalizar o mesoderma circundante em mesoderma lateral
(que de outra maneira formaria o mesoderma ventral)
3. A habilidade de dorsalizar o ectoderma em ectoderma neural
4. A habilidade de iniciar os movimentos da gastrulao
5. A habilidade de fazer com que a placa neural se torne o tubo neural
As clulas do organizador, em ltima anlise, contribuem para quatro tipos de
clulas endoderma da faringe, mesoderma da cabea, notocorda e a dobradia
cordoneural (Keller, 1976; Gont et al., 1993). O endoderma farngeo lidera a migrao do tecido organizador e parece induzir as estruturas mais anteriores da cabea. O mesoderma da cabea induz o crebro anterior e o intermedirio, a notocorda
induz o crebro posterior e o tronco, e a dobradia cordoneural induz a extremidade da cauda. Recentemente, Vodicka e Gerhart (1995) correlacionaram tcnicas de
marcao fluorescente de clulas e hibridizao in situ para obter um mapa da
clulas que do origem ao organizador. Foi encontrado que a poro mais animal
(10%) era derivada dos blastmeros A1 da blstula de 32 clulas; a regio central
(70%) era derivada da prognie dos blastmeros B1; e cerca de 20% (as clulas
vegetativas e as profundas) era derivada do blastmero C1 diretamente acima das
clulas D1 do centro de Nieuwkoop. Todos os seis blastmeros, A1, B1 e C1
produziram clulas profundas e superficiais. A prognie do blastmero C1 produz
a parte mais vegetal, lder do organizador, e essas so as clulas que formam o
mesoderma da cabea.
Quando o organizador foi inicialmente descrito, iniciou-se o primeiro programa
de pesquisa realmente internacional - a procura das molculas do organizador.
Pesquisadores da Inglaterra, Alemanha, Frana, Estados Unidos, Blgica, Finlndia, Japo e Unio Sovitica, todos tentaram encontrar essas extraordinrias molculas (veja Gilgert e Saxn, 1993). R. G. Harrison (citado por Twitty, 1966) se
referiu gstrula dos anfbios como o novo Yukon para o qual mineiros ansiosos
estavam se dirigindo rapidamente para escavar ouro ao redor do blastporo.
Infelizmente, suas ps e picaretas se mostraram muito rudes para descobrir essas
molculas. A anlise das molculas do organizador teve que esperar at que a
tecnologia do DNA recombinante permitisse a produo de clones de cDNA do
mRNA do lbio do blastporo para verificar qual desses clones codificava fatores
que poderiam dorsalizar o embrio. A formao do mesoderma dorsal (organizador)
envolve a ativao de vrios genes. Considera-se que as protenas secretadas no
centro de Nieuwkoop ativam um conjunto de fatores de transcrio nas clulas
mesodrmicas acima dele. Esses fatores de transcrio ativariam os genes codificando os produtos secretados pelo organizador. Vrias protenas especficas do
organizador foram encontradas e se acham listadas na Tabela 15.3. Como as propriedades do organizador dependem desses fatores secretados, comearemos com
essas protenas. [regul3.html]
Vrias fontes evidenciaram a presena de sinais difusveis da notocorda, principalmente a partir dos estudos crticos com transfiltros pelo grupo de pesquisadores
613
614
Tabela 15.3
Protenas expressas somente, ou quase exclusivamente,

no organizador (lista parcial)
Protenas nucleares
Protenas secretadas
Lim1
XANF1
Goosecoid
Protenas relacionadas
A HNF3 (p.ex., Forkhead, Pintallavis)
Chordin
Noggin
Follistatin
Sonic hedgehog
Cerberus
Protenas relacionadas Nodal (vrias)
Filandeses (Saxn, 1961; Toivonen et al., 1975; Toivonen e Wartiovaara, 1976). O lbio
dorsal da salamandra aqutica foi colocado em um lado de um filtro suficientemente
fino, de modo que nenhum processo pudesse atravessar os poros, e o ectoderma
competente de gstrula foi colocado no outro lado do filtro. Aps vrias horas, estruturas neurais foram observadas no tecido ectodrmico (Figura 15.21). As identidades
desses fatores difundindo do organizador levaram um quarto de sculo para serem
definidas. Atualmente, vrias dessas molculas esto sendo estudadas: Chordin,
Noggin, Follistatin, Sonic hedgehog e Cerberus.
(A)
CHORDIN. Um dos papis iniciais do organizador se proteger contra a
(B)
Figura 15.21
Fatores indutivos solveis e sua identificao.

(A) Estruturas neurais induzidas no ectoderma
presuntivo pelo lbio dorsal da salamandra aqutica, separado do ectoderma por um filtro
Nucleopore com poros de dimetro mdio de
0.05 m. Clulas neurais do tipo anterior so
evidentes, incluindo alguns olhos induzidos.
(B) Tipo similar de induo visto quando o
hemisfrio animal pigmentado de Xenopus (ectoderma presuntivo) injetado com mRNA de
chordin e tratado com FGF2 solvel. (A de
Toivonen, 1979; B de Sasai et al., 1996; fotografias cortesia de L. Saxn e E. De Robertis,
respectivamente.)
ventralizao. A BMP4 produzida em toda a blstula de Xenopus e ativamente

produz mesoderma ventral (Graff et al., 1994). Em outras palavras, a produo do
mesoderma ventral no meramente devida ausncia de sinais dorsais; ela
ativamente construda. Alm do mais, como j descrito, a BMP4 pode bloquear os
sinais dorsais. O mesoderma dorsalizado bloqueia o sinal de BMP4 secretando
Chordin e Noggin (Sasai et al., 1994; Holley et al., 1995). Chordin uma protena
secretada que ativada pelos fatores de transcrio Goosecoid e Xnot2 contendo
o homeodomnio. A protena originalmente detectada na zona marginal dorsal
cerca de uma hora antes da gastrulao; ao se iniciar a gastrulao, a mensagem
chordin vista somente no lbio dorsal do blastporo (Figura 15.22). Daqui em
diante, chordin expressa na placa precordal (o mesoderma da cabea que precede anteriormente a notocorda) e na notocorda. Quando esto ocorrendo as ltimas indues na cauda, Chordin encontrada na dobradia cordoneural, o ltimo
vestgio do organizador. Chordin pode induzir um eixo secundrio quando
microinjetada nos lados ventrais da blstula de Xenopus, possivelmente por interferir com a ao de BMP4.
BMP4 inicialmente expressa nas regies ectodrmicas e mesodrmicas da
blstula tardia. Entretanto, durante a gastrulao, transcritos de bmp4 esto restritos zona marginal ventrolateral (Hemmati-Brivanlou e Thomsen, 1995; Northrop
et al., 1995). A protena BMP4 induz a expresso de vrios fatores de transcrio
(Xvent-1, Vox, Mix.1, Xom) que so reguladores-chaves no desenvolvimento do
mesoderma ventral. Portanto, a BMP4 ativa a expresso gnica ventral. Os fatores
de transcrio induzidos por BMP4 reprimem goosecoid e outros genes dorsais,
enquanto ao mesmo tempo ativam protenas mesodrmicas ventrolaterais (Gawantka
et al., 1995; Hawley et al., 1995; Mead et al., 1996; Schmidt et al., 1996). Dessa
maneira, a BMP4 ativa o desenvolvimento mesodrmico e suprime o desenvolvimento dorsal. Em Xenopus, chordin e noggin se ligam diretamente e inativam a
BMP4, impedindo assim que a protena aja em clulas prximas ao organizador
(Figura 15.23; De Robertis e Sasai, 1996; Piccolo et al., 1996; Sasai et al., 1996;
Zimmerman et al., 1996).
(A)
(B)
(C)
Figura 15.22
Localizao do mRNA de chordin. (A) Montagem total da hibridizao in situ mostra que
imediatamente antes da gastrulao, a mensagem chordin expressa na regio que se tornar o
lbio dorsal do blastporo. (B) Quando a gastrulao comea, chordin expresso no lbio dorsal
do blastporo, e (C) visto nos tecidos do organizador. (de Sasai et al., 1994; fotografias cortesia
de E. De Robertis.)
(A)
Animal
Ectoderma
epidrmico
Ectoderma neural
Ventral
Dorsal
MOLCULAS DO ORGANIZADOR:
Chordin, Noggin, Follistatin, Xnr3
Mesoderma
Endoderma dorsal
Vegetal
(B)
Screw
Tolloid
Decapentaplegic
Genes homeobox
no neurais
Chordin
Short gastrulation
Cordados
Drosophila
Figura 15.23
Modelo para a ao do organizador. (A) BMP4 (e outras certas molculas) so poderosos fatores
ventralizantes. Protenas do organizador como Chordin e Noggin podem bloquear a ao de
BMP4. (Follistatin pode inibir a ao de BMP7, que combina com BMP4 para ativ-lo.) Os
efeitos antagnicos dessas protenas podem ser vistos em todas as trs camadas germinativas. (B)
Vias do desenvolvimento homlogo na formao do sistema nervoso central de um vertebrado
(Xenopus) e de um invertebrado (Drosophila). O fator vertebrado est em preto, a protena
homloga da Drosophila em cor. (De acordo com De Robertis e Sasai, 1996; Sasai et al., 1996.)
615
616
&
Especulaes
BMP4 e a lagosta de Geoffroy
ECENTEMENTE, os laboratri-
os de De Robertis e Kimelman
mostraram que a reao que
leva formao do tubo neural dorsal no
Xenopus so as mesmas reaes que levam formao do cordo nervoso ventral nos insetos (veja Figura 15.23B;
Holley et al., 1995; Schmidt et al., 1995).
Em Drosophila, o homlogo do gene
bmp4 o decapentaplegic (dpp). Como
discutido no captulo anterior, a protena
Dpp responsvel pela modelagem do
eixo dorsoventral na Drosophila, e est
presente na poro dorsal do embrio e
difunde-se ventralmente. Aqui, ela sofre
a oposio de uma protena chamada
Short-gastrulation (Sog). A Short-gastrulation a homloga de Chordin na Drosophila. Esses homlogos no s se
parecem como tambm podem ser substitudos um pelo outro. Quando o mRNA
do short-gastrulation injetado nas regies ventrais de embries de Xenopus,

ele induz a notocorda e o tubo neural do
embrio. A injeo do mRNA de chordin
em Drosophila origina tecido nervoso
ventral. Apesar da Chordin de Xenopus
funcionar como um dorsalizador do embrio, ela ventraliza o embrio de Drosophila. Isso porque na mosca a Dpp
produzida dorsalmente. Em Xenopus,
BMP4 produzida ventralmente. Em ambos os casos, Sog/Chordin produz tecido neural bloqueando os efeitos de Dpp/
BMP4. Em Drosophila, a Dpp interage
com o produto do gene screw para seu
funcionamento. Em Xenopus, o homlogo
de screw, Bmp7, parece ser essencial para
o efeito ventralizante de BMP4 (Hawley
et al., 1995).
Em 1822, o anatomista francs
Etienne Geoffroy Saint-Hilaire provocou
um dos mais calorosos e crticos confrontos em biologia quando ele props

que a lagosta era um vertebrado de cabea para baixo. Ele acreditava que o
lado ventral da lagosta (com seu cordo nervoso) era homlogo ao lado dorsal dos vertebrados (Appel, 1987). Parece que ele tinha razo ao nvel molecular, mas no no anatmico. De Robertis
e Sasai (1996) propuseram que todos os
filos bilatrios tinham uma origem comum- uma criatura hipottica (denominada Urbilateria) de cerca de 600 milhes de anos atrs que era o ancestral
de ambos os subreinos, protostomatas
e deuterostomatas. A interao BMP4
(Dpp)/Chordin(Sog) um exemplo de
processos homlogos, sugerindo uma
unidade de princpios de desenvolvimento em todos os animais (Gilbert et
al., 1996).
NOGGIN. Um dos outros agentes do organizador deve ser o produto do gene noggin.
Smith e Harland (1991, 1992) isolaram esse gene construindo uma biblioteca de cDNAs
de gstrulas dorsalizadas (tratadas com ltio). RNAs sintetizados de conjuntos desses
plasmdeos foram injetados em embries ventralizados produzidos por irradiao com
luz UV. Os conjuntos de plasmdeos cujos RNAs recuperavam o eixo dorsal foram
divididos em conjuntos menores, e assim por diante, at o isolamento de clones nicos cujos mRNAs eram capazes de restaurar o eixo dorsal nesses embries. Um desses clones continha noggin. Smith e Harland (1992) mostraram que mRNA do noggin,
recentemente transcrito, est localizado inicialmente na regio do lbio dorsal do
blastporo e depois expresso na notocorda (Prancha 6). Ainda mais, se o embrio
precoce tratado com cloreto de ltio (LiCl) de modo que o manto mesodrmico inteiro
se torne um tecido organizador semelhante notocorda, ento o mRNA de noggin
encontrado no manto mesodrmico inteiro. Tratamento do embrio precoce com luz
ultravioleta (que impede a formao do lbio dorsal do blastporo) inibe a sntese do
mRNA de noggin. Injeo de mRNA de noggin em embries de uma clula, irradiados
com luz ultravioleta, restaura completamente o eixo dorsal e permite a formao do
embrio completo (Prancha 5). Se muita protena Noggin sintetizada nessa ocasio,
o embrio se torna hiperdorsal, formando somente a regio da cabea (da o nome
noggin). O mRNA para a protena Noggin j est presente no ovo fertilizado, e a
seqncia da protena (como deduzida pelo gene) sugere fortemente que Noggin
uma protena secretada. Parece ento, que Noggin um excelente candidato para
mediar algumas das funes do organizador.
Evidncia recente sugere que a protena Noggin pode realizar duas funes importantes do organizador de Spemann-Mangold: ela induz o tecido neural do ectoderma
dorsal, e dorsaliza as clulas mesodrmicas que, de outra maneira, contribuem para o
mesoderma ventral. Smith e colaboradores (1993) mostraram que a protena Noggin
pode dorsalizar as clulas da zona marginal ventral na gastrulao e reespecificar seu
destino a partir do mesoderma ventral (mesnquima e clulas do sangue) a destinos
mais intermedirios (msculo, corao e rim pronfrico). Quando Smith e colaboradores removeram as zonas marginais ventrais (o mesoderma ventral presuntivo) da gstrula
de Xenopus e as colocaram em um meio contendo a protena Noggin solvel, esses
explantes produziram um mRNA especfico para msculo que normalmente reservado para explantes marginais dorsais. Esses explantes tambm se tornaram alongados
(outra caracterstica do desenvolvimento dorsal). Entretanto, os explantes alongados
no coravam como tecido notocordal. Esses experimentos mostram que a protena
solvel Noggin pode induzir clulas mesodrmicas ventrais da gstrula a se tornarem
msculo (mas no notocorda) e, portanto, ela se assemelha ao sinal do organizador
que dorsaliza o tecido mesodrmico lateral (veja Figura 15.17).
A protena Noggin tambm pode induzir tecido neural no ectoderma da gstrula
sem a presena de qualquer mesoderma dorsal (Lamb et al.,1993). Quando Noggin
adicionada ao ectoderma da gstrula (ou hemisfrio animal pigmentado), as clulas
ectodrmicas so induzidas a expressar marcadores neurais especficos para o crebro
anterior. Alm disso, os produtos gnicos para as clulas do msculo ou da notocorda
no so induzidos pela protena Noggin. Como Noggin uma protena secretada
sintetizada pelos derivados do organizador (o mesoderma da cabea e o
cordomesoderma) durante a gastrulao (quando se d a induo), e desde que ela
inativa a BMP4 (a qual ventraliza o embrio), considera-se que Noggin tem um papel
na dorsalizao do mesoderma e na dorsalizao do ectoderma dorsal.*
FOLLISTATIN. Hemmati-Brivanhou e Melton (1994) demonstraram que a protena
Follistatin, ligante de activina, est presente no lbio dorsal do blastporo e posteriormente se torna restrita notocorda. Embora originalmente se pensasse ligar
somente a activina, agora existe evidncia (Yamashida et al., 1995) que a Follistatin
pode inibir as atividades da BMP7. A BMP7 necessria para a ativao da BMP4,
assim pela inibio da BMP7, a Follistatin pode tambm prevenir a ventralizao do
mesoderma. A Follistatin tambm tem um papel na dorsalizao do ectoderma. Parece que a activina (ou, provavelmente, uma protena semelhante activina, tal como
a BMP7) necessria para a represso da induo neural. Ligando essa protena
Follistatin a inibio liberada e permite que o tecido se torne neural (HemmatiBrivanlou et al., 1994; Hawley et al., 1995).
interessante que Noggin, Chordin e Follistatin so todas inibidoras. Aqui vemos
um princpio que a base de boa parte do desenvolvimento: a ativao freqentemente realizada inibindo um repressor. Isso pode ser explicado pelo fato de que em
cada ncleo a maioria dos genes esto reprimidos. Para ativar um determinado gene,
necessrio um inibidor dessa represso. Analogamente, a inibio freqentemente
realizada pela supresso do inibidor do repressor. (Biologistas do desenvolvimento se
acostumam a falar com negativas duplas e triplas). Nesse caso, o estado default do
ectoderma se tornar neural, a no ser que sofra a ao de BMP4. As protenas do
mesoderma organizador impedem a ao de BMP4 no ectoderma.
*Noggin pode tambm estar funcionando como parte do centro de Nieuwkoop. Um material do
mRNA de noggin traduzido na blstula precoce (Smith e Harland, 1992) e uma investigao
recente (Lustig et al., 1996) mostra que Noggin funciona com um co-fator, Xenopus nodal related1(Xnr-1), para induzir a gstrula precoce. Xnr-1 pode tambm estar envolvido na formao do eixo
esquerdo-direito em Xenopus. Durante a neurulao, ele expresso assimetricamente no mesoderma
da placa lateral, estando presente somente no lado esquerdo do embrio. Esse modelo de expresso
se assemelha aquele dos genes nodal em pintos e camundongos, onde a expresso de nodal crtica
para o estabelecimento do eixo esquerdo-direito (Captulo 16).
617
618
Placa do assoalho
ventral secundrio
Conjunto de neurnios
motores secundrios
Conjunto de neurnios
motores secundrios
Regio do
neurnio
Motor
Placa do assoalho ventral

doadora ou outras clulas
secretando Hedgehog
Notocorda
doadora
Placa do
assoalho ventral
Notocorda
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 15.24
Cascasta de indues iniciada pela notocorda

no tubo neural recm-formado. (A) Dois tipos
de clulas no tubo neural recm-formado. As
clulas mais perto da notocorda se tornam as
clulas da placa do assoalho ventral. Os neurnios motores emergem nos lados ventrolaterais.
(B) Se uma segunda notocorda transplantada
adjacente ao tubo neural, ela induz um novo
conjunto de clulas da placa do assoalho e dois
novos conjuntos de neurnios motores. (C) Se
as clulas da placa do assoalho ventral so transplantadas adjacentes ao tubo neural, novos conjuntos de neurnios motores se diferenciam.
(D) As interaes indutivas entre essas clulas. As setas vermelhas representam a secreo
da protena Sonic hedgehog. (De acordo com
Placzek, et al., 1990.)
SONIC HEDGEHOG. Sonic hedgehog utilizada aps a concretizao da maioria
dos eventos indutivos da neurulao. Ela usada para padronizar o tubo neural
recm-formado. Sonic hedgehog expressa na notocorda e a poro aminoterminal
dessa protena secretada (veja Figura 7.11). Se fragmentos da notocorda de um
embrio so transplantados para as laterais de um tubo neural hospedeiro, esse
formar, nas suas laterais, outro conjunto de clulas da placa do assoalho. Se um
pedao da notocorda removido de um embrio, o tubo neural adjacente regio
deletada no tem clulas da placa do assoalho (Figura 15.24; Placzek et al., 1990;
Yamada et al.,1991). Essas clulas da placa do assoalho, uma vez induzidas, induzem
a formao dos neurnios motores em um de seus lados. O mesmo resultado pode
ser obtido se os fragmentos de notocorda so substitudos por aglomerados de
clulas secretando Sonic hedgehog (Echelard et al., 1993; Roelink et al., 1994). A
Sonic hedgehog das clulas da placa do assoalho capaz, em seguida, de polarizar
o tubo neural. Ela induz os neurnios motores nas regies ventrolaterais, e impede
a dorsalizao do tubo neural ventral antagonizando os efeitos de BMP4 originada
na epiderme dorsal* (veja Captulo 7).
CERBERUS. A induo da estruturas mais anteriores da cabea realizada por uma
protena secretada chamada Cerberus. Diferentemente de outras protenas secretadas,
Cerberus promove a formao da glndula do cimento, olhos e placdios olfatrios.
Entretanto, diferente de Noggin e Chordin, a protena Cerberus suprime a formao do
mesoderma dorsal, enquanto induz o mesoderma cardaco e fgado (um derivado
endodrmico do intestino anterior). Quando o mRNA de Cerberus foi injetado no
conjunto de blastmeros vegetativos ventrais (D4) no estgio de 32 clulas, se formaram estruturas ectpicas da cabea (Figura 15.25; Bouwmeester et al., 1996). Essas
estruturas da cabea foram produzidas tanto a partir das clulas injetadas como das
clulas circundantes. O gene cerberus expresso naquelas clulas que lideram o
movimento anterior das clulas em gastrulao para dentro do embrio. Essas so as
clulas do endoderma involutivo (na camada profunda do organizador) que do origem ao intestino anterior e seus derivados, os quais esto sob a cabea. A mensagem
*BMP4 age como um agente ventralizador na formao do tubo neural (impedindo ativamente
sua formao na parte ventral do embrio), mas uma vez que o tubo neural est produzido, a
protena pode agir como um agente dorsalizante, sendo secretada da epiderme superior para dorsalizar
o tubo neural (veja Captulo 7). Um parceiro verstil, ela estimular o desenvolvimento do msculo
no mitomo, padroniza o desenvolvimento do dente, e at destri a rede formada entre nossos
dedos da mo e do p. A BMP4 freqentemente pareada com a Sonic hedgehog na formao dos
primrdios dos rgos.
619
Figura 15.25
O mRNA de Cerberus injetado em um nico blastmero D4 (vegetativo

ventral) de um embrio de Xenopus de 32 clulas induz estruturas da
cabea como tambm um corao e um fgado duplicados. Um olho
secundrio (um nico olho ciclpico) e um placdio olfatrio podem ser
vistos facilmente. (de Bouwmeester et al., 1996; fotografia cortesia de E.
M. De Robertis.)
do cerberus dependente da atividade do resto do organizador, e a sua transcrio

ativada por Follistatin, Noggin e Chordin. Isso pode explicar porque a transcrio de
cerberus limitada regio do endoderma involutivo mais prxima ao organizador,
uma regio que se sobrepe expresso de chordin.
Fatores de transcrio induzidos no organizador
Considera-se que as atividades do centro de Nieuwkoop ativam um conjunto de genes
codificando fatores de transcrio no mesoderma acima dele. Foram encontrados vrios fatores de transcrio especficos do organizador; ou seja, eles so expressos
somente no lbio dorsal do blastporo e na notocorda resultante. Duas dessas protenas so XANF-1 e Goosecoid.
XANF-1 um fator de transcrio contendo o homeodomnio que pode ser um dos
primeiros a ser expresso. No comeo da gastrulao, a XANF-1 est predominantemente nas camadas profundas do lbio dorsal do blastporo, os precursores do
mesoderma da cabea, e uma injeo de mRNA de XANF-1 nos blastmeros ventrais
induz a formao de um eixo secundrio. Essas clulas injetadas se tornam o mesoderma
anterior do eixo secundrio (Zaraisky et al., 1995). Assim, a XANF-1 parece controlar
o comportamento migratrio das clulas profundas do lbio dorsal do blastporo e a
diferenciao dessas clulas em tecido do organizador.
Goosecoid parece funcionar de maneira muito semelhante XANF-1. A mensagem para a Goosecoid foi encontrada fazendo uma varredura das bibliotecas de
cDNA do lbio dorsal do blastporo com sondas para genes que so ativos na
formao do eixo em Drosophila (Blumberg et al., 1991; Cho et al., 1991a). Os transcritos de goosecoid so detectados inicialmente no estgio de blstula tardia, indicando que esse um gene controlado pelo ncleo, e esses transcritos se acumulam
na rea localizada diretamente sobre o lbio dorsal do blastporo nas clulas precursoras mesodrmicas dorsais (blastmero C1). Em culturas do hemisfrio animal
pigmentado, a protena Vg1 ou a activina, mas no FGF2 ou Noggin, podem induzir
a transcrio do gene goosecoid (Cho et al., 1991a; Thomsen e Melton, 1993). A
expresso do mRNA de goosecoid tambm se correlaciona com o domnio do
organizador em animais tratados experimentalmente. Quando LiCl usado para aumentar o mesoderma indutor do dorso-anterior da zona marginal, a expresso de
goosecoid da mesma forma aumentado. Inversamente, quando ovos so tratados
com luz UV antes da primeira clivagem, ambas, a induo dorso-anterior e a expresso de goosecoid, so significativamente inibidas. Injeo do comprimento total da
mensagem goosecoid nos dois blastmeros ventrais do embrio de Xenopus com 4
620
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 15.26
Habilidade do mRNA de goosecoid para induzir um novo eixo. (A) Na gstrula, o embrio
controle (no injetado ou injetado com mRNA semelhante a goosecoid mas sem o homeobox)
tem um lbio dorsal do blastporo. (B) Um embrio no estgio de 16 clulas cujos blastmeros
vegetativos ventrais foram injetados com a mensagem goosecoid. Note o lbio dorsal do blastporo
secundrio. (C) Superior, duas nurulas injetadas com mRNA de goosecoid, mostrando dois
eixos; inferior, duas nurulas controle. (D) Embrio duplicado produzido pela injeo de goosecoid.
Foram induzidas estruturas completas da cabea. (De acordo com Cho et al., 1991a; Niehrs et al.,
1993; cortesia de E. De Robertis.)
(A)
Xbra
Noggin
Goosecoid
Xnr3
(B)
clulas faz com que a prognie desses blastmeros involuam, sofram extenso convergente e formem o mesoderma dorsal e o endoderma da cabea do eixo secundrio
(Figura 15.26; Niehrs et al., 1993). Alm disso, experimentos com marcao (Niehrs et
al., 1993) mostram que clulas injetadas com goosecoid so tambm capazes de
recrutar para o eixo dorsal clulas vizinhas do hospedeiro. Resumindo, o centro de
Nieuwkoop ativa o gene goosecoid codificando uma protena ligante de DNA que
(1) ativa as propriedades de migrao (involuo e extenso convergente) das clulas do lbio dorsal do blastporo, (2) de forma autnoma, determina os destinos
endodrmico da cabea e mesodrmico dorsal das clulas que o expressam, e (3)
permite s clulas que expressam goosecoid recrutarem clulas vizinhas para dentro
do eixo dorsal. Foi observado que Goosecoid ativa o gene Xotx2 no mesoderma
anterior e no ectoderma presuntivo do crebro (Blitz e Cho, 1995). Xotx2 o homlogo
do gene orthodenticle em Xenopus que essencial para o desenvolvimento do
crebro em moscas e camundongos.
A expresso gnica especfica para o organizador pode ser usada para subdividir o organizador precoce em regies tendo diferentes combinaes dessas mensagens (Figura 15.27; Vodicka e Gerhart, 1995). No comeo da gastrulao, enquanto
as clulas do organizador involuem para o embrio, essas configuraes mudam.
Dentro das clulas profundas, o goosecoid agora visto nas pores mais anteriores (na maior parte construda de clulas C1), especialmente o mesoderma da placa
precordal da cabea. A sobreposio parcial dos genes noggin e Xbra define a
notocorda, e a regio tendo Xbra sem noggin define o domnio destinado a se
tornar o endoderma posterior. Um segundo domnio de expresso de noggin visto
na placa neural anterior. [regul6.html]
Figura 15.27
Estrutura fina do organizador. (A) No comeo da gastrulao, o Xbra est nas clulas mais
animais do organizador, enquanto o noggin est mais vegetal. As clulas vegetativas involuem
primeiro e se localizam mais anteriormente. (B) Os mesmos fatores vistos perto do fim da
gastrulao. As zonas de expresso so mais discretas e menos superpostas, e no h correlao
entre a localizao original das clulas e seu padro de expresso gnica posterior. (De acordo
com Vodicka e Gerhart, 1995.)
&
621
Especulaes
Como o Organizador Neuraliza o Ectoderma?
ESMO QUE a identidade das
molculas sinalizadoras esteja sendo estabelecida, o mecanismo de suas aes ainda um enigma. provvel que alm de bloquear o
sinal ventralizante (BMP4), o organizador deve tambm ativar as clulas ectodrmicas para se tornarem a placa
neural. Apesar de no se conhecer a(s)
molcula(s) responsvel(s), possvel
que a neuralizao possa se dar pela
combinao de duas reaes separadas:
o aumento do AMP cclico intracelular
nas clulas ectodrmicas e a ativao
da Protena Quinase C (PKC) nas suas

membranas celulares. Vrios estudos
(Davids et al., 1987; Davids, 1988; Otte
et al., 1988, 1989) mostraram que se somente um desses eventos ocorre, no
h formao do tecido neural. Entretanto, se a Protena Quinase C e a adenil
ciclase forem ativadas artificialmente
nas membranas das clulas ectodrmicas, o tecido neural gerado. Nesse
modelo, a induo neural realizada por
duas reaes, e cada reao pode ser
iniciada por uma molcula diferente. A
participao de PKC na induo neural
A especificidade regional da induo

A determinao das diferenas regionais
Um dos mais fascinantes fenmenos na induo neural a especificidade regional
das estruturas neurais que so produzidas. As regies do crebro anterior
(arquenceflica), do crebro posterior (deuterenceflica) e espinocaudal do tubo
neural devem estar exatamente organizadas em uma direo anterior para posterior.
Dessa maneira, o tecido organizador no somente induz o tubo neural mas tambm
especifica as regies do tubo neural. Essa induo especfica da regio foi demonstrada por Otto Mangold (1933) em uma srie de experimentos onde vrias regies do
teto do arquntero de Triturus (salamandra-aqutica) foram transplantadas para
embries em gstrula precoce (Figura 15.28). Aps a remoo da placa neural
superadjacente, quatro sees sucessivas do teto do arquntero foram retiradas de
embries que tinham acabado de completar a gastrulao e colocadas em blastoceles
de gstrulas precoces. A poro mais anterior do teto do arquntero induziu os
equilibradores e as pores do aparelho oral (Figura 15.28A); a prxima poro mais
anterior induziu a formao de vrias estruturas da cabea, incluindo nariz, olhos,
equilibradores e vesculas ticas (Figura 15. 28B); a terceira seo induziu a estrutura do crebro posterior (Figura 15.28C); e o segmento mais posterior induziu a formao do tronco dorsal e o mesoderma da cauda (Figura 15.28D). A induo do
mesoderma dorsal- e no do ectoderma dorsal do sistema nervoso- pela ponta posterior da notocorda foi confirmada por Bjtel (1931) e Spofford (1945) que mostraram
que o quinto posterior da placa neural d origem aos somitos da cauda e s pores
posteriores do ducto pronfrico do rim.
Alm disso, quando lbios dorsais do blastporo de embries precoces de
salamandra (gstrulas precoces) foram colocados em outros embries precoces de
salamandra, eles formaram cabeas secundrias. Quando os lbios dorsais de embries em estgio mais avanado foram transplantados a embries precoces de
salamandra, eles induziram a formao de caudas secundrias (Figura 15.29; Mangold,
natural foi novamente confirmada quando Otte e colaboradores (1991; Otte e

Moon, 1992) demonstraram que a PKC
do ectoderma dorsal difere do PKC do
ectoderma ventral, tanto na sua estrutura como na sua habilidade de ser ativada por compostos externos. Somente
a PKC encontrada no ectoderma dorsal
pode ser correlacionada com a habilidade de responder a indutores naturais.
possvel que ningum ainda tenha conseguido isolar o fator indutor neural
natural porque vrios fatores esto agindo simultaneamente.
622
Figura 15.28
A especificidade regional da induo pode ser

demonstrada implantando diferentes regies
(coloridas) do teto do arquntero em gstrulas
precoces de Triturus. Os animais resultantes
tm partes secundrias. (A) Cabea com
equilibradores. (B) Cabea com equilibradores,
olhos e crebro anterior. (C) Parte posterior da
cabea, deuterencfalo e vesculas ticas. (D)
Segmento tronco-cauda. (De acordo com
Mangold, 1933.)
(A)
(B)
Poro do teto do
arquntero transplantado
para gstrula precoce
Animal
resultante
(C)
(D)
(A) Transplante do lbio dorsal de gstrula jovem
(B) Transplante do lbio dorsal de gstrula avanada
Figura 15.29
Ao indutora especfica regionalmente do lbio dorsal do blastporo. (A) Labios dorsais de

blastporos jovens (que formaro a poro anterior do mesoderma dorsal) induzem estruturas
anteriores quando colocadas em gstrulas jovens da salamandra aqutica. (B) Lbios dorsais de
blastporos mais velhos colocados em gstrulas de salamandra similares produzem estruturas
mais posteriores. (de Saxn e Toivonen, 1962, fotografias cortesia de L. Saxn.)
623
1933). Isso significa que as primeiras clulas do organizador a entrarem no embrio

induzem a formao de crebros e cabeas, enquanto as clulas que formam o lbio
dorsal do blastporo de embries em estgio mais avanado induzem as clulas acima
delas a se tornarem medulas espinhais e caudas. Um fenmeno similar ocorre em
embries de pinto (Storey et al., 1992).
O modelo do duplo gradiente
Nos anos de 1950, P. Nieuwkoop (1952) e Toivonen e Saxn (1955) propuseram modelos para a especificidade regional que envolviam duas etapas. Na primeira delas, o
tecido neural era induzido pelo organizador. Esse tecido neural era o tecido
arquenceflico do crebro anterior. A segunda etapa consistia em um sinal de
posteriorizao distribudo como um gradiente, com maior concentrao caudal. O
sinal de posteriorizao agia no ectoderma anterior transformando-o em crebro posterior e tecido da medula espinhal. A evidncia de Nieuwkoop veio de transplantes de
dobras do ectoderma competente em vrias posies ao longo do eixo ntero-posterior da gstrula hospedeira. As pores proximais dessas dobras produziram estruturas tpicas da regio de insero do hospedeiro, enquanto que a parte mais distal da
dobra se desenvolveu em estruturas neurais de natureza mais anterior do que da
insero (Figura 15.30). A evidncia de Toivonen e Saxn veio de estudos com indutores
artificiais especficos de tecidos. Foi observado que a medula ssea de cobaia, por
exemplo, induz somente estruturas mesodrmicas. Fragmentos de fgado de cobaia,
entretanto, podiam induzir estruturas do crebro anterior. Eles implantaram os dois
indutores juntamente dentro da blastocele da mesma gstrula precoce. Enquanto o
fgado induziria somente o crebro anterior e a medula ssea induziria somente o
mesoderma, os dois juntos induziram tudo normal; o crebro anterior, o crebro posterior, a medula espinhal e o mesoderma do tronco (Toivonen e Saxn, 1955). Portanto, a
especificidade regional da induo neural pode ser devida a gradientes opostos de
substncias indutoras do crebro anterior e da medula espinhal (Figura 15.31). Resultados semelhantes vieram de estudos onde o ectoderma neural anterior foi misturado
Anterior
Posterior
Figura 15.30
Evidncia para um modelo de induo neural

em dois estgios: ativao e transformao.
Uma dobra do ectoderma de gstrula foi implantada em uma regio da placa neural. As
estruturas mais anteriores esto no lado esquerdo e 1-4 representam diferentes estruturas
neurais. Dobras do ectoderma de gstrula no
especfica tendiam a se diferenciar em estruturas neurais anteriores, mas eram posteriorizadas
por material oriundo do posterior do embrio.
(De acordo com Doniach, 1993.)
(A)
Medula
ssea
Fgado
Figura 15.31
(B)
Crebro anterior
Olho
Nariz
Equilibrador
Crebro posterior
Vescula do ouvido
Medula espinhal
Notocorda
Somitos
Prnefros
Nadadeira
Fgado
113 casos
Fgado + medula
ssea 66 casos
Medula ssea
34 casos
Evidncia para o modelo de induo em

gradiente duplo. (A) Implantao simultnea de um indutor neuralizante (fgado de
cobaia) e um indutor de mesoderma (medula ssea de cobaia) na blastocele de uma
gstrula precoce da salamandra aqutica.
(B) Resultados dessa implantao. Estruturas do crebro posterior e da medula espinhal que eram intermedirias entre o crebro anterior e o mesoderma no mapa de
destino da placa neural, no foram bem induzidas por cada um dos indutores. Quando os dois indutores foram implantados
em conjunto, essas estruturas foram produzidas. (De acordo com Toivonen e
Saxn, 1955.)
624
Crebro anterior
Crebro posterior
Medula espinhal
Porcentagem
Figura 15.32
Evidncia para a induo em gradiente duplo e

dois estgios no embrio de anfbios. A regio
anterior da placa neural (ou seja, clulas j induzidas naturalmente por um indutor do crebro anterior, aqui vistas em cor) e clulas da
notocorda posterior foram removidas e misturadas em diferentes propores. A freqncia
de estruturas intermedirias (crebro posterior) aumenta medida que a propores de clulas da placa neural anterior e clulas
mesodrmicas se aproxima de 1:1. Isso sugere
que a especificao regional ocorre aps a determinao das clulas da placa neural como
neurais. (de Gilbert e Saxn, 1993.)
com diferentes quantidades de mesoderma dorsal posterior (Figura 15.32; Toivonen e

Saxn, 1968). Assim, o tecido neural foi determinado a ser inicialmente crebro anterior,
mas em seguida foi posteriorizado de maneira gradativa por substncias caudais. A
maioria dos modelos de induo neural convergiram a um esquema que inclui (1) uma
etapa de ativao inicial que determina que as clulas tm capacidade de se converterem em clulas neurais do crebro anterior e (2) uma etapa de transformao na
qual um gradiente de material do mesoderma posterior causa a posteriorizao da
especificao neural (Figura 15.33). [regul4.html]
Correlatos moleculares da caudalizao neural
Cada um dos indutores neurais: Chordin, Noggin e Follistatin induz exclusivamente
tecidos neurais anteriores (tipo de crebro anterior). Ento, quais podem ser o(s)
fator(es) que posteriorizam o tubo neural? Vrios estudos recentes apontam para o
FGF como sendo o fator que especifica que o ectoderma neural se torne mais caudal
(Cox e Hemmati-Brivanlou, 1995; Lamb e Harland, 1995). Quando o ectoderma de
gstrula precoce (ainda sem a subcamada de mesoderma dorsal) foi isolado e
Formao da cabea
anterior (Cerberus)
Anterior
Figura 15.33
O modelo de ativaotransformao na padronizao neural. De acordo com este modelo, a induo neural original (ativao) faz
com que o ectoderma neural seja especificado
como o tipo de clulas neurais mais anteriores.
A caudalizao (transformao) dessas clulas realizada por um gradiente de uma outra
substncia, cuja concentrao a mais alta posteriormente. (De acordo com Doniach, 1995.)
Transformao
posterior
Ativao neural
(Chordin, Noggin,
Follistatin)
Posterior
Transformao posterior
FGF, RA, Wnt?
Ativao:
(Chordin
Noggin
Follistatin
Xnr3)
Posterior
Ativao da cabea
anterior (Cerberus)
Mesoderma dorsal
Anterior
Lbio dorsal do blastporo
Endomesoderma
anterior
Ectoderma
Endoderma
Concentrao de RA
em contato com a
nurula tardia
No tratada
cido
retinico
Controle
rRNA
Glndula do cimento
XCG-1
Glndula do
cimento XAG-1
XA-1 Cabea
XIF-1 Cabea
XIHbox6 Tronco
Sistema neural N-CAM
Xhox36 Cauda
Figura 15.34
cido retinico (RA) causa a posteriorizao de estruturas neurais. (A) Embries em nurula
tardia foram expostos continuamente a diferentes concentraes de cido retinico e seu
crescimento foi permitido at que os controles atingissem o estgio de girinos. (B) Efeito na
expresso do mRNA do marcador neural quando as blstulas so tratadas com 10-6 M de cido
retinico por 2 horas (suficiente para produzir girinos aceflicos). Efeito inibitrio pode ser visto
nos genes expressos mais anteriormente. (A de acordo com Ruiz i Altaba e Jessell, 1991; B de
acordo com Sive et al., 1990.)
neuralizado por Noggin, Chordin ou Follistatin foram encontrados marcadores neurais

do tipo anterior. Quando o tecido foi incubado com um indutor neural mais FGF2, o
ectoderma expressou marcadores neurais mais posteriores. Realmente, o FGF2 capaz
de induzir o crebro anterior a expressar genes especficos do crebro posterior. Quando a sinalizao de FGF bloqueada in vivo por um receptor dominante negativo do
FGF, os girinos resultantes no tm seus segmentos posteriores (Amaya et al., 1991).
O FGF2 provavelmente no o FGF posteriorizador natural em Xenopus, pois no
secretado e no est localizado em lado nenhum do embrio. Entretanto, uma forma
embrionria de FGF (eFGF, um FGF de Xenopus semelhante ao FGF4 de mamferos)
encontrada no mesoderma posterior e do broto da cauda de Xenopus e tem os mesmos
efeitos que FGF2 (Isaacs et al., 1992). A super expresso de eFGF estimula vrios
genes expressos posteriormente, incluindo o homlogo de caudal em Xenopus. Isso,
por sua vez, parece ativar a expresso de genes Hox mais posteriores, levando maior
especificao posterior do sistema nervoso (Pownall et al., 1996).
Alm dos FGFs, outros fatores podem estar envolvidos na padronizao do sistema nervoso de Xenopus. Quando gstrulas precoces de Xenopus so tratadas com
concentraes nanomolares a micromolares de cido retinico (AR), seu desenvolvimento do crebro anterior e intermedirio prejudicado de forma dependente das
concentraes usadas (Figura 15.34A; Papalopulu et al., 1991; Sharpe, 1991). Quando
so usadas concentraes mais baixas, a induo do tecido neural no parece ser
inibida, mas so produzidas menos mensagens e estruturas do crebro anterior (Figura 15.34B; Durston et al., 1989, 1991; Sive et al., 1990). O cido retinico parece afetar
tanto o mesoderma como o ectoderma. Ruiz i Altaba e Jessell (1991) verificaram que o
mesoderma dorsal anterior de gstrulas tratadas com cido retinico eram incapazes
625
Embri
Xwnt3a pode caudalizar o tecido neural anterior. Explantes de ectoderma competente ligados ao lbio dorsal do blastporo foram isolados como na Figura 15.30. Os mRNAs especficos expressos foram identificados por PCR
de transcriptase reversa. Nesta figura, os
marcadores neurais expressos mais anteriormente esto localizados mais ao alto. A
superexpresso de Wnt3a no embrio com
Xwnt3a anulou os marcadores neurais mais
anteriores. As regies ectodrmicas de embries no injetados ou aquelas superexpressando uma protena controle (prolactina) no
foram afetadas. (de McGrew et al., 1995; fotografia cortesia de R. T. Moon.)
Figura 15.35
Xwnt3
o
No in
jetad
626
XAG1
Glndula do cimento
XANF2
Glndula pituitria
OtxA
Crebro anterior
En2
Crebro intermedirio
Krox20
Crebro posterior
Xlhbox6
Medula espinhal
NCAM
Neural (geral)
Actina muscular
Mesoderma
de induzir estruturas da cabea em embries hospedeiros, e Sive e Cheng (1991)

encontraram que o ectoderma tratado com cido retinico no respondia induo
anterior do mesoderma de gstrulas no tratadas. Outro candidato para fator de
caudalizao o Wnt3a de Xenopus (McGrew et al., 1995). Essa protena encontrada
no ectoderma neural da nurula precoce. Quando o ectoderma isolado das gstrulas
de Xenopus mas permanece ligada ao lbio dorsal do blastporo, o ectoderma desenvolve uma seqncia de marcadores neurais ntero-posteriores. Se o embrio tivesse
sido injetado com RNA de Xwnt3a (causando a super expresso dessa protena), os
marcadores anteriores seriam perdidos (Figura 15.35).
&
Especulaes
Sinais verticais e horizontais do organizador
OSSA DISCUSSO se limitou,

at o momento, aos sinais que
vo verticalmente do organizador ao ectoderma que a ele se sobrepe.
Sabe-se agora que existe um segundo
conjunto de sinais que produzido pelo
lbio dorsal do blastporo e enviado
horizontalmentre atravs do plano do
ectoderma (Figura 15.36). Dados recentes
sugerem que ambas, a induo vertical
atravs do cordomesoderma e a induo
horizontal (planar) atravs do ectoderma,
so necessrias para a induo embrionria completa. E qual seria o papel desses sinais? Primeiro, existe alguma evidncia que sinais planares podem estar en-
volvidos nas atividades neuralizantes do

organizador. possvel que eles forneam
os sinais que faltam para ativar a neurulao (como oposto aos sinais que bloqueiam a ventralizao). Se sinais planares
movimentando-se do lbio dorsal do

blastporo atravs do ectoderma so responsveis pela induo neural, ento a
fonte original de tais sinais deveria ser o
Sinais
verticais
Figura 15.36
Duas maneiras de induzir o eixo dorsal. No

mecanismo planar, molculas so transferidas
do tecido do lbio dorsal do blastporo atravs
do plano do ectoderma. No mecanismo vertical, molculas solveis do cordomesoderma
derivado do lbio dorsal do blastporo induzem as clulas acima delas para se tornarem
tecido neural. (de Doniach, 1993.)
Sinal
planar
Arquntero
Blastocele
Anterior
Lbio dorsal
do blastporo
Posterior
epitlio da zona marginal dorsal e no as

clulas mesenquimatosas profundas daquela zona do organizador. Shih e Keller
(1992) mostraram que isso correto. Eles
repetiram os experimentos de Spemann e
Mangold, mas em lugar de usar a zona
marginal dorsal (DMZ) inteira, eles transplantaram as clulas epiteliais ou as clulas profundas da DMZ (as quais marcaram com partculas fluorescentes de
dextrano). As clulas epiteliais tinham todas as propriedades indutivas do organizador de Spemann e se diferenciaram em
tecido mesodrmico. O epitlio tambm
recuperou os embries ventralizados por
irradiao com luz ultravioleta. Essas atividades do organizador no puderam ser
realizadas nem pelas clulas profundas da
DMZ nem pelas clulas marginais ventrais. Uma protena indutora, recentemente descoberta, Xenopus nodal-related-3
(Xnr3), foi encontrada nessa camada superficial do organizador, e pode converter
hemisfrios pigmentados do plo animal
em ectoderma neural anterior. Ao contrrio de outros indutores, ela no dorsaliza
o mesoderma. Ainda no se sabe se essa
protena parte do sistema sinalizador
planar (Hansen et al., 1997).
Entretanto, os sinais planares no so
considerados suficientes para a induo
neural. Nieuwkoop e Koster (1995) impediram a ocorrncia de induo vertical durante a gastrulao de Xenopus, e observaram que no houve diferenciao neural.
Alm do mais, se o fragmento ligante de
fibronectina, RGD, for injetado na blastocele de gstrulas de Rana pipiens, o
mesoderma axial no migra em direo ao
plo animal. Em lugar disso, ela se divide
em dois ramos que involuem horizontalmente ao longo do equador do embrio,
formando duas notocordas localizadas lateralmente. Cada notocorda induz uma placa neural, mas uma placa neural no se forma no ectoderma dorsal, onde os sinais
planares se espalhariam (Saint-Jeannet e
Dawid, 1994). Assim, nesse modelo, os sinais planares so redundantes ou podem
apoiar os sinais verticais da notocorda.
No segundo modelo, os sinais planares podem ser importantes contribuintes
para a especificidade regional da induo.
Doniach e seus colegas (1992) mostraram
que informaes instrutivas, posicionalmente especficas so fornecidas por sinais planares atravessando o ectoderma.
Quando so usados explantes de gstrulas
(A)
Plo
animal
627
(B)
Corte
Ventral
Corte
Blastporo
Dorsal
(C)
Embrio controle
(D)
Tecido do explante
Figura 15.37
Padro de expresso dos marcadores neurais induzidos por contato com o lbio dorsal do
blastporo no plano do ectoderma. (A) Seo sagital de gstrula precoce de Xenopus mostrando
onde foram feitos os cortes. (B) Explante demonstrando a polaridade ntero-posterior esperada
pelo mapa de destino: a regio branca a epiderme; a regio pontilhada o neuroectoderma
presuntivo; a regio colorida o mesoderma dorsal; a regio estriada o teto do arquntero. Os
explantes foram colocados sob lamnulas para impedir a migrao do mesoderma. (C) Expresso
dos marcadores neurais no embrio controle, estgio 21. Os genes homeobox engrailed-2 e
XlHbox6 so expressos na borda do crebro do posteriorintermedirio e na medula espinhal,
respectivamente; o gene Krox-20 da protena do dedo de zinco expresso nos rombmeros 3 e 5
do crebro posterior. (D) A mesma ordem de expresso vista no ectoderma daqueles explantes
tendo uma conexo com o lbio dorsal do blastporo. (De acordo com Doniach et al., 1992.)
precoces de Xenopus de tal forma que o

ectoderma retm contato com o lbio dorsal do blastporo mas no com o mesoderma, no s so induzidos no ectoderma
os marcadores pan-neurais NCAM e NF3, mas tambm so expressos quatro
marcadores neurais especficos para posio -engrailed-2, Krox-20, XlHbox1 e
XlH-box6- no explante de ectoderma na
seqncia ntero-posterior apropriada
(Figura 15.37). Parece ento que os sinais
horizontalmente indutivos do lbio dorsal do blastporo so suficientes para induzir o padro neural ntero-posterior.
Ruiz i Altaba (1992) tambm confirmou uma
extensa padronizao neural nessas exogstrulas, mostrando que o padro de
marcadores neurais nas exogstrulas reflete os padres normais, com exceo
do crebro anterior e regies ventrais.
Ele tambm fornece evidncia de que a
transmisso desses sinais horizontais se
d atravs da notoplaca (o ectoderma

acima da notocorda).
No terceiro modelo, os sinais planares complementam os sinais verticais na
criao do tubo neural. Os sinais planares parecem estar envolvidos na induo
da extenso convergente do crebro posterior e do ectoderma da medula espinhal
adjacente a ele (enquanto que o dobramento da placa neural em um tubo neural
parece ser induzido pela notocorda) (Keller
et al., 1992; Nieuwkoop e Koster, 1995).
Ainda estamos tentando localizar todos
os pedaos do quebra-cabea da induo,
enquanto novos pedaos esto sendo
descobertos. Spemann previu que os cientistas descobririam que o embrio usava mais de um mecanismo (segurana
dupla) para atingir seus objetivos. O
embrio pode muito bem estar usando
ambos os sinais planares e verticais para
induzir seu sistema nervoso.
628
Genes homeobox na especificao neural

Uma das mais espetaculares descobertas desta dcada foi que moscas e camundongos usam os mesmos genes homeobox para especificar regies ao longo do eixo
ntero-posterior. Entretanto, a anlise dos genes homeobox em Xenopus no progrediu tanto devido a impossibilidade de se fazer anulao (knock out) de genes
nessas rs. Como veremos no Captulo 16, o cido retinico capaz de converter
uma parte do corpo do camundongo em uma parte mais posterior, causando a expresso de genes homeobox que so caractersticos da regio mais posterior. Isso
tambm se d em Xenopus. Tanto o cido retinico como o eFGF se mostraram
capazes de alterar a expresso de genes Hox. Pownall e colegas (1996) mostraram
que o eFGF promove a expresso de genes Hox posteriores no ectoderma de Xenopus, e tanto Cho e colegas (1991b) como Sive e Cheng (1991) mostraram que o cido
retinico altera a expresso de genes homeobox em uma direo posterior tanto no
ectoderma como no mesoderma. Assim, em uma variao do modelo de dois estgios antes proposto, agora prope-se que a induo neural leva criao de uma
determinao neural anterior (do tipo crebro anterior) que influenciada por um
gradiente posterior de cido retinico, eFGF ou Wnt3a para a criao de
especificidades regionais (Otte et al., 1991; Sharpe, 1991). Tal gradiente de cido
retinico (dez vezes maior no posterior do que no anterior) foi detectado no mesoderma dorsal de nurulas precoces de Xenopus (Chen et al., 1994).
Competncia e cascatas indutivas

As interaes indutivas primrias, apesar de complexas, no podem construir o embrio inteiro. Entretanto, a formao do tubo neural, mesoderma dorsal, endoderma
farngeo e outros tecidos cria as condies para uma cascata de eventos indutivos
posterior. Interaes pelas quais um tecido interage com outro para dirigir especificamente seu destino so chamadas interaes secundrias.*
Qualquer sistema de induo embrionria tem pelo menos dois componentes: um
tecido capaz de produzir o estmulo indutor e um tecido capaz de receber e responder
ao estmulo. At agora, estivemos vendo a especificidade de produo; agora precisamos ver a especificidade das clulas que respondem ao estmulo. A habilidade para
responder de uma forma especfica a um dado estmulo chamada competncia. Ns
vimos que na gstrula precoce, um lbio do blastporo implantado pode induzir uma
nova placa neural e eixo embrionrio em qualquer lugar do embrio onde ele pode
encontrar ectoderma. Entretanto, com o aumento da idade embrionria, o ectoderma
perde sua habilidade de responder, e a implantao de um lbio dorsal do blastporo
abaixo da epiderme prospectiva de um embrio em estgio de nurula, no causar a
formao de uma nova placa neural. O embrio perdeu sua competncia para responder ao novo lbio do blastporo.
Apesar do ectoderma da nurula tardia no ser mais competente para responder
ao lbio do blastporo, ela se tornou competente para responder a novos indutores.
Essa competncia pode ser localizada em reas determinadas. Durante a gastrulao
e neurulao precoce, o ectoderma da cabea (mas no o ectoderma do tronco) se
torna competente para formar o cristalino, o nariz e os placdios do ouvido. Essa
competncia adquirida porque a regio da placa neural est atuando sobre ele
(Henry e Grainger, 1990). Assim, a regio da cabea na nurula agora competente
para responder ao contato da vescula ptica (derivada do crebro anterior) para se
tornar cristalino.
*Apesar das indues que se seguem s indues embrionrias primrias terem, freqentemente, sido chamadas de secundrias, no existe diferena conceitual entre elas. Retornaremos s
indues secundrias no Captulo 17.
629
Mais ainda, uma vez que um tecido foi induzido, ele pode induzir outros tecidos.
Os blastmeros D1 do centro de Nieuwkoop induzem as clulas acima dele a se tornarem o organizador. O organizador ento induz o ectoderma acima dele a se tornar o
tubo neural. O tubo neural pode induzir o ectoderma da cabea a formar o cristalino. E
as indues continuam. Mais ainda, um tecido pode induzir vrios outros. O organizador induz tanto o mesoderma como o ectoderma. A Sonic hedgehog da notocorda no
induz somente a placa do assoalho no tubo neural; originando-se tanto da placa do
assoalho como da notocorda, A Sonic hedgehog induz o somito ventral mediano a se
tornar o esclertomo formador de cartilagem (veja Figura 9.6; Fan e Tessier-Lavigne,
1994; Johnson et al., 1994). Continuaremos nossa discusso de indues secundrias
no Captulo 17.
Estamos finalmente dando nomes aos agentes e fatores solveis dos embriologistas experimentais. Estamos finalmente delineando as vias intercelulares dos fatores parcrinos e fatores de transcrio que constituem os primeiros passos nos processos da organognese. O programa internacional de pesquisa iniciado pelo laboratrio de Spemann na dcada de 1920 est chegando a sua concluso. Mas essa pesquisa encontrou nveis de complexidade muito mais profundos que Spemann teria
concebido, e da mesma forma que seus experimentos nos mostraram o quanto no
sabamos, assim hoje, enfrentamos um novo conjunto de problemas gerados pelas
nossas solues aos problemas mais velhos: Como iniciado o centro de Nieuwkoop?
Qual a atividade de Siamois? Como o mesoderma se torna padronizado? Como so
limitados os sinais da notocorda? Como a notocorda se diferencia? Como o ectoderma
adquire sua competncia?
Analisando o campo em 1927, Spemann observou:
Ns ainda estamos em presena de enigmas, mas no sem a esperana de os
resolver. E enigmas com esperana de soluo - o que mais um cientista poderia
desejar?
O desafio ainda permanece.
LITERATURA CITADA
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CAPTULO 16 Estabelecimento dos eixos corporais em mamferos e aves
Estabelecimento dos eixos corporais

em mamferos e aves
Entre o quinto e o dcimo dia, a pequena

massa disforme de clulas germinativas diferencia-se no plano geral da construo do
embrio [do camundongo] e de seus rgos.
um pouco como uma massa de ferro transformando-se numa nave espacial. Realmente, esse o maior milagre que ns ainda podemos imaginar e aceitar, e ao mesmo tempo
to comum, que temos que nos forar para
nos maravilhar com o carter maravilhoso
dessa maravilha.
MIROSLAV HOLUB (1990)
sabido que a natureza trabalha constantemente com os mesmos materiais. Ela engenhosa em variar apenas as formas. Como
se ela estivesse restrita s mesmas idias primitivas, vemo-la tendendo sempre a fazer
com que os mesmos elementos reapaream,
com o mesmo nmero, nas mesmas circunstncias e com as mesmas conexes.
E. GEOFFROY SAINT-HILAIRE (1807)
635
16
STE CAPTULO DETALHA parte da pesquisa que forneceu conhecimentos

sobre a maneira como foram estabelecidos os eixos do organismo dos mamferos e aves. Muito deste trabalho utiliza dados fornecidos pela anlise de
embries cujo desenvolvimento ficou malformado atravs de mutaes ou rompido
por determinados produtos qumicos.
Apesar das tentativas do citado savant Geoffroy Saint-Hilaire (que acreditava que
todos os animais do mundo compartilhavam de um plano corporal em comum), a
maioria dos biologistas do desenvolvimento no teria predito que o plano corporal de
moscas e de mamferos seria especificado pelo mesmo conjunto de genes. Tendo
divergido h 500 milhes de anos atrs, o corpo da mosca e o corpo do vertebrado
parecem excepcionalmente diferentes. A maioria dos insetos especifica seus eixos no
citoplasma comum do blastoderma sincicial, ao passo que os eixos de vertebrados so
especificados pelas interaes indutivas entre grupos de clulas. No embrio de
Drosophila, o plano corporal geral especificado enquanto as clulas so uma monocamada cilndrica envolvendo o vitelo; nos mamferos, as clulas j sofreram extensa
movimentao quando suas partes corporais so especificadas. A formao dos apndices nos insetos resulta da extenso dos discos imaginais, ectodrmicos enquanto o
membro do mamfero gerado por complexas interaes indutivas entre as clulas
mesodrmicas e as ectodrmicas que migraram para essas reas. Porm, estudos recentes mostraram que o eixo ntero-posterior de mamferos em desenvolvimento
especificado pelos mesmos genes hometicos que especificam o eixo do corpo de
Drosophila. Realmente, a seqncia homeobox foi chamada a pedra de Rosetta da
Biologia do desenvolvimento (Riddihough, 1992; Slack e Tannahill, 1993), porque nos
permite transferir nosso conhecimento gentico de embries de Drosophila para a
regio menos conhecida do desenvolvimento dos mamferos.
Iniciando o eixo ntero-posterior

Estabelecendo um Centro de Nieuwkoop
O estabelecimento do organizador parece ser semelhante para todos os vertebrados.
Nos peixes telesteos, as clulas do blastoderma permanecem relativamente coerentes at a gastrulao, e os precursores mesodrmicos formam um cinto ao redor da
margem, adjacente s clulas vitelnicas (Wilson et al., 1995). Existe evidncia
635
636
Figura 16.1
Uma estratgia comum para estabelecer o centro de Nieuwkoop em vertebrados. Durante a

oognese, determinantes maternos inativos
(crculos abertos) so transportados (talvez com
o vitelo) para um novo ambiente citoplasmtico.
Isso resulta em sua converso para uma forma
ativa (crculos cheios). No ovo de anfbio isso
conseguido por rotao citoplasmtica. Nos
embries de telesteos e aves o mecanismo no
conhecido, mas os determinantes ativados
ficam concentrados perto de um grupo de clulas da margem mesodrmica. (Segundo
Grunwald e Wilson, 1996.)
Redistribuio citoplasmtica
ativa localmente os
determinantes maternos
Distribuio de
determinantes ativados
na blstula tardia
Anfbio
Dorsal
Telesteo
Dorsal
Clula
do vitelo
Ave
Vitelo
(Openheimer, 1936; Tung et al., 1945; Grunwald e Wilson, 1996) que o futuro lado
dorsal da clula vitelnica age como um centro de Nieuwkoop, transferindo fatores
maternos para o blastoderma (Figura 16.1). Nos embries de aves (e presumivelmente
tambm em mamferos) a zona marginal posterior (PMZ) pode ser equivalente ao centro de Nieuwkoop (Eyal-Giladi e Khaner, 1989; Khaner e Eyal-Giladi, 1989). Experimentos de transplante demonstraram que esse o local onde as clulas se renem para
formar a linha primitiva. Pensou-se que o hipoblasto tinha habilidade indutora de
eixos, mas estudos recentes (Khaner, 1995) sugerem que essa capacidade reside somente na PMZ. O hipoblasto parece apenas dirigir os movimentos subseqentes da
linha. A identificao da zona marginal posterior do pinto com o centro de Nieuwkoop
reforada pela descoberta de que o homlogo Vg1 do pinto transcrito nessa
regio. Alm disso, quando clulas cultivadas secretando a protena Vg1 madura
(processada) do pinto so colocadas ao longo das bordas laterais do blastoderma,
elas induzem a formao de novas linhas primitivas (Seleiro et al., 1996). Tal como o
centro Nieuwkoop de anfbios, a futura posio da PMZ fixada pouco depois da
fecundao e depende da gravidade e rotao.
ecidos Organizadores
Expresso Gnica em T
Tecidos
Conforme mencionado no Captulo 6, o homlogo mamfero do lbio dorsal do
blastporo dos anfbios o seu ndulo no terminal anterior da linha primitiva. Em
aves, esse chamado ndulo de Hensen, e em mamferos (apesar de ter sido primeiro
descrito por Hensen em coelhos), essa estrutura freqentemente chamada apenas
de ndulo. A linha primitiva porta-se como os lbios laterais do blastporo. O ndulo
contm muitas das mesmas protenas encontradas no organizador da r, incluindo
Goosecoid, Nodal, Lim-1 e HNF3. O gene nodal essencial para a iniciao da linha
primitiva e para sua contnua manuteno. Sua expresso primeiro vista na margem
ventral (onde comea a gastrulao). Em seguida, a protena Nodal vista na regio
mais anterior da linha (Figura 16.2; Conlon et al., 1994). Quando esse gene deletado,
o embrio em desenvolvimento tem uma linha defeituosa e no pode gastrular. Mais
tardiamente na gastrulao (como veremos), a expresso do gene nodal importante
na formao do eixo esquerdo-direito do embrio.
De maneira semelhante, o mRNA goosecoid primeiro visto nas clulas da foice de

Koller, quando as clulas que formam a linha primitiva a se agregam. Ele , em seguida,
detectado no ndulo de Hensen, medida que a linha se movimenta para frente.
Porm, quando o ndulo regride, as clulas expressando goosecoid permanecem no
mesoderma da cabea e no endoderma farngeo (placa precordal) tal como nos anfbios; medida que se forma a regio da cabea, a expresso de goosecoid ocorre nas
clulas mais anteriores (Izpisa-Belmonte et al., 1993). Sua expresso nessas clulas
parece ser crtica para a induo dos genes envolvidos na formao da cabea. Se os
genes goosecoid forem deletados em embries de camundongo, os eixos se formam
normalmente, mas a cabea no se forma adequadamente (Rivera-Prez et al., 1995).
Outro gene, Lim-1, tambm expresso nessas clulas, e camundongos que tm os
seus genes Lim-1 erradicados no desenvolvem cabeas (veja Figura 7.17).
O gene HNF-3 se parece com genes semelhantes no organizador de Xenopus
(XFH1, XFD1/1 e pintallavis). O HNF-3 encontrado no mesoderma precordal que
considerado induzir a especificidade regional no crebro anterior e no mesencfalo,
e quando o gene deletado, no se forma o ndulo. Os embries tm severas deficincias no seu mesoderma da cabea e na notocorda, deixam de gastrular adequadamente, e no apresentam estruturas do prosencfalo e mesencfalo (Ang e Rossant, 1994;
Weinstein et al., 1994).
Enquanto Goosecoid, Lim-1 e HNF-3 parecem ser necessrias para especificar
clulas do mesoderma dorsal anterior, o eixo dorsal mdio e posterior parece ser
especificado pela protena Brachyury (T) (MacMurray e Shin, 1988; Yanagisawa,
1990; Stott et al., 1993). A formao e a diferenciao da notocorda requerem a
expresso do gene T (Gluecksohn-Schoenheimer, 1938; Herrmann, 1991; Rashbass
et al., 1991), e mutaes do gene Brachyury causam malformaes do eixo posterior
(Figura 2.25C).
medida que o ndulo comea a se formar, ele comea a secretar fator de
espalhamento (scatter factor). Essa protena parece promover a habilidade das clulas epiblsticas responderem a sinais de induo do ndulo e/ou da notocorda (Streit
et al., 1995.) Conforme discutido no Captulo 6, a linha primitiva se alonga, e o tubo
neural formado ao longo da linha mediana do embrio. O mesoderma precordal
considerado induzir as estruturas da cabea, ao passo que a notocorda pode induzir o
crebro posterior e a medula espinhal. medida que o tubo neural depositado,
torna-se especificado para o tipo de tubo neural que vir a ser - prosencfalo,
mesencfalo, crebro posterior ou medula espinhal. O mesoderma e o endoderma so
padronizados de maneira semelhante. Estudos recentes sugerem agora que essa especificao conseguida pelos mesmos genes homeobox, que especificam o eixo nteroposterior em Drosophila.
Especificando o eixo ntero-posterior de mamfero:

A hiptese do cdigo Hox
Homologia dos Complexos de Genes Hometicos entre
Drosophila e Mamferos
O complexo de genes hometicos de Drosophila (HOM-C) no cromossomo 3, contm as classes Antennapedia e Bithorax de genes hometicos e pode ser visto como
uma unidade funcional nica. (Realmente, em outros insetos, como o caruncho da
farinha Tribolium, ele uma unidade nica.) Os genes HOM-C esto arranjados na
mesma ordem geral que seu padro de expresso ao longo do eixo ntero-posterior,
os genes mais 3 (labial) sendo requeridos para produo das estruturas mais anteriores, os genes mais 5 (AbdB) especificando o desenvolvimento do abdome posterior. Genomas humanos e do camundongo contm quatro cpias de HOM-C por
conjunto haplide (Hox A a D no camundongo, HOXA a D em humanos; Boncinelli
et al., 1988; McGinnis e Krumlauf, 1992; Scott, 1992). No somente so encontrados
637
Figura 16.2
Expresso do gene organizador em embries

de camundongo em desenvolvimento. Expresso do gene nodal durante a extenso da linha
primitiva. (Fotografia cortesia de M. R. Kuehn.)
638
os mesmos tipos gerais de genes hometicos em ambos, moscas e mamferos, mas

a ordem desses genes nos respectivos cromossomos notavelmente semelhante. E
caso essa semelhana no seja suficiente para argumentar a favor de um esquema
comum de formao axial, foi descoberto que o padro de expresso desses genes
segue o mesmo modelo: aqueles genes de mamferos homlogos aos genes de
Drosophila: labial, proboscipedia e Deformed so expressos anteriormente, enquanto os genes homlogos aos genes Abdominal-B da Drosophila so expressos
posteriormente. Os genes mamferos Hox/HOX so numerados de 1 a 13, comeando daquele terminal do complexo sendo expressos mais anteriormente. A Figura 16.3
mostra as relaes entre os conjuntos de genes hometicos da Drosophila do camundongo. Os genes equivalentes em cada complexo do camundongo (como Hoxa1, Hoxb-1 e Hoxd-1) so chamados de grupo parlogo. considerado que os quatro
complexos Hox de mamferos foram formados de duplicaes cromossmicas. Como
no existe uma correspondncia um-para-um entre os genes HOM-C de Drosophila
e os genes Hox de mamferos, provvel que tenham ocorridos duplicaes independentes depois que esses dois ramos animais divergiram (Hunt e Krumlauf, 1992).
Expresso de Genes Hox no
Sistema Nervoso Central e seus Derivados
A expresso do gene Hox pode ser vista ao longo do eixo dorsal (tubo neural,
crista neural, mesoderma paraxial e mesoderma superficial) do limiar anterior do
crebro posterior at a cauda. Tambm vista nos derivados desses tecidos,
especialmente os derivados das clulas da crista neural. Por exemplo, a regio do
crebro anterior da cabea d origem no s ao crebro anterior e seus gnglios
cranianos, mas tambm cartilagem das orelhas, mandbula e pescoo, arcos
articos, e rgos como as glndulas tireide, paratireide e timo. Conforme discutido no Captulo 7, o tubo neural do crebro posterior divide-se em unidades
segmentais chamadas rombmeros. A migrao das clulas da crista neural craniana
tambm parece estar organizada no padro rombomrico fazendo com que um
gnglio craniano especfico e o arco branquial por ele inervado se originem da
crista do mesmo rombmero (Lumsden et al., 1991). Essas clulas da crista neural
tambm parecem reter informao posicional de seu lugar original ao longo do eixo
ntero-posterior. Quando clulas pr-migratrias da crista neural de aves que normalmente migrariam para o primeiro arco branquial (para formar a cartilagem da
mandbula) so colocadas na regio da crista cujas clulas normalmente migram
para o segundo arco branquial (para formar a cartilagem hiide), as clulas enxertadas da crista neural migram para o segundo arco branquial, mas elas formam as
estruturas (cartilagem da mandbula) caractersticas do primeiro arco. Alm disso,
elas iro interagir com o ectoderma superficial e o mesoderma paraxial para formar
a musculatura do primeiro arco (bico e msculos da mandbula). Isso sugere
marcadamente que antes de migrar, as clulas da crista neural j esto comprometidas a formar ao menos algumas das estruturas apropriadas para seu nvel no eixo
ntero-posterior (Noden, 1988).
Esse compromisso posicional pode ser o resultado dessas clulas expressarem
combinaes particulares de genes Hox. Por exemplo, os genes Hox-B so expressos no presuntivo tubo neural do camundongo antes da formao da crista neural,
e quando as clulas da crista neural migrarem, iro reter o padro de expresso do
gene Hox-B caracterstico do seu lugar de origem (Hunt et al., 1991a). Com uma
nica exceo conhecida (Hoxb-1), o limite anterior de cada gene Hox pra no
rombmero mais prximo, dois rombmeros frente do mais anterior do prximo
gene Hox (Wilkinson et al., 1989; Keynes e Lumsden, 1990). Conforme representado na Figura 16.4, os genes homeobox Hoxb-2, -3, e 4 so encontrados atravs
de toda a medula espinhal, mas o Hoxb-2 pra no limiar dos rombmeros 2 e 3; o
Hoxb-3 pra no limiar 4/5, e o Hoxb-4 pra na fronteira entre o sexto e stimo
639
Figura 16.3
(A)
HOM-C de
Drosophila
Hox-A
Camundongo
Subgrupos
Parlogos
3 Anterior
Crebro posterior
Tronco
Precoce
Posterior
Tardio
Fraca resposta de
cido retinico
Forte resposta de
cido retinico
(B)
Drosophila
Camundongo
Medula
Tor
cica
Lo
mb
ar
Cervical
espinhal
Crebro
intermedirio
Crebro
anterior
Crebro
posterior
Conservao evolucionria da organizao

gnica hometica e expresso transcricional em
moscas e camundongos. (A) Conservao entre o agregado homeobox no cromossomo 3 de
Drosophila e os quatro agregados de genes
Hox no genoma murino. As regies sombreadas mostram semelhanas estruturais particularmente fortes entre as espcies, e pode-se ver
que a ordem nos cromossomos foi conservada. Os genes no terminal 5 (como todos genes
homeobox murinos so transcritos na mesma
direo) so aqueles que so expressos mais
posteriormente, so expressos mais tarde, e
podem ser induzidos somente por altas doses
de cido retinico. Genes tendo estruturas semelhantes, as mesmas posies relativas em
cada um dos quatro cromossomos, e padres
de expresso semelhantes pertencem ao mesmo grupo parlogo. (B) Comparao entre os
padres de transcrio dos genes HOM-C e
Hox-B de Drosophila (10 horas) e camundongos (12 dias), respectivamente. Outro conjunto de genes que controla a formao da cabea
da mosca (orthodenticle e empty spiracles) tem
homlogos no camundongo que se expressam
no crebro intermedirio e anterior. Os genes
homlogos humanos so chamados (em maisculas) genes HOX. (A segundo Krumlauf,
1993; B segundo McGinnis e Krumlauf, 1992.)
640
(A)
(B)
Arcos viscerais
Ectoderma
superficial
Mesnquima
do arco
Sistema nervoso
Gnglios
craniais
Tubo
neural
Rombmero 2
Arco
branquial 1
Arco
Branquial 2
Figura 16.4
Arco
Branquial 3
Arco
Branquial 4
Medula
espinhal
Transcrio do gene Hox. (A) Diagrama do padro de transcrio

do gene Hox no camundongo. Notar que o padro est distribudo
entre o tubo neural e o mesoderma (de modo que as clulas da crista
do terceiro rombmero entrem no segundo arco branquial) e os
limites da expresso do gene Hox coincide com os limites
rombmeros. (B) Padres de transcrio de genes hometicos HoxB no crebro posterior do camundongo de 9,5 dias. (A de McGinnis
e Krumlauf, 1992; B de Hunt et al., 1991a.)
rombmero. Os genes Hox, mais 5 so encontrados somente nas regies posteriores do tubo neural, onde formam tambm um conjunto aninhado. Os genes
mais 5 tm limites de expresso mais posteriores que os genes menos 5. Quando
as clulas da crista neural entram em contato com o ectoderma superficial levam as
clulas ectodrmicas a expressarem o mesmo conjunto de genes Hox (Figura 16.4
A; Hunt et al., 1991b).
Alguns dos genes Hox de mamferos so to semelhantes a seus homlogos de
Drosophila, que eles podem substituir um ao outro. O gene do camundongo Hox-6
pode realizar algumas das funes reguladoras do gene Antennapedia da Drosophila
quando o gene murino transfectado para a Drosophila. O gene humano HOXD-4
tambm pode executar algumas das funes do seu homlogo da Drosophila,
Deformed (Malicki et al., 1990; McGinnis et al., 1990). Alm disso, a regio intensificadora do gene Deformed da Drosophila (um gene especificando a expresso gnica
especfica da cabea em Drosophila) pode causar expresso gnica no crebro posterior do camundongo; e as seqncias reguladoras do homlogo humano de Deformed
fornecem expresso gnica especfica da cabea em embries de Drosophila
(Awgulewitsch e Jacobs, 1992; Malicki et al., 1992).
Um padro semelhante da expresso gnica de Hox parece existir tambm dentro
do tronco. Aqui os padres da expresso gnica correspondem a limiares somticos
(em lugar de rombomricos) (Kessel e Gruss, 1991), e alguns genes parlogos so
expressos em limiares somticos ligeiramente diferentes (Figura 16.5).
Anlise Experimental de um Cdigo Hox: Gene Alvo
Os padres de expresso dos genes Hox murinos sugerem um cdigo pelo qual certas
combinaes de genes Hox especificam uma determinada regio do eixo ntero-posterior (Hunt e Krumlauf, 1991). Conjuntos particulares de genes parlogos fornecem
identidade segmentria ao longo do eixo ntero-posterior do corpo. A evidncia para
tal cdigo vem de trs fontes:
Vrtebras
occipitais
Vrtebras
cervicais
Vrtebras
torcicas
Vrtebras
lombares
Vrtebras
sacrais
641
Vrtebras
caudais
cido retinico causa a

expresso de genes em
segmentos mais posteriores
cido retinico causa a

expresso de genes em
segmentos mais anteriores
Figura 16.5
Experimentos de eliminao (knock-out) ou de gene alvo (gene targeting)

(veja Captulo 2) nos quais so construdos camundongos carentes de ambas
cpias de um ou mais genes Hox particulares.
Homeose induzida por cido retinico, na qual embries de camundongo
tratados com o cido retinico tm um padro de expresso diferente do gene
Hox ao longo do eixo ntero-posterior e diferenciao anormal de suas estruturas axiais.
Anatomia comparada, pela qual tipos de vertebrados em diferentes espcies
so correlacionados com a constelao de genes Hox nesses vertebrados.
Quando Chisaka e Capecchi (1991) expulsaram o gene Hox-3 de camundongos
endgamos, os mutantes homozigotos Hoxa-3 morreram logo aps o nascimento. Na
autpsia mostrou-se que esses animais tinham a cartilagem do pescoo anormalmente
curta e grossa e as glndulas tireides, paratiredes e timos severamente deficientes
ou ausentes. Seus coraes e vasos sangneos estavam tambm malformados (Figura 16.6). Esse conjunto de malformaes muito semelhante desordem congnita
humana, a sndrome de DiGeorge, na qual so encontradas essas mesmas deficincias
em estruturas derivadas da crista neural. Anlises ulteriores mostraram que o nmero
e a migrao de clulas da crista neural que formam essas estruturas so normais.
Assim, parece que os genes Hoxa-3 so responsveis pela especificao do destino
das clulas da crista neural craniana e pela permisso para que essas clulas se diferenciem e se proliferem formando a cartilagem do pescoo e os derivados do quarto e
sexto arcos farngeos (Manley e Capecchi, 1995).
O cdigo do somito Hox no tronco e no pescoo do embrio do camundongo. As reas

principais de expresso esto indicadas em
cor mais escura, enquanto as regies posteriores da expresso no so to definidas como
sugere a cor mais clara. O efeito do cido
retinico o de empurrar a expresso gnica
anterior mais posteriormente e a expresso
gnica posterior mais anteriormente. (Segundo Kessel, 1992.)
642
Figura 16.6
Desenvolvimento deficiente de estrutura de arcos farngeos derivados

da crista neural em camundongos deficientes em Hox-3. direita, um
embrio de 10,5 dias de um camundongo Hox-3 heterozigoto mostrando
desenvolvimento normal do timo (bolsa 3), paratireide (bolsa 4) e outras estruturas. esquerda, um mutante homozigoto deficiente em Hox3 no apresenta desenvolvimento apropriado dessas estruturas. (de
Chisaka e Capecchi, 1991.)
Mutante
Tipo selvagem
Outro experimento de alvejar genes eliminou o gene Hoxa-1 (Lufkin et al., 1991). A
expresso de Hoxa-1 se sobrepe ao gene Hoxa3, mas tambm expressa mais
anteriormente que Hoxa-3. Esses embries sem genes Hoxa-1 funcionais mostram
uma constelao de anormalidades que indicam especificao deficiente dos
rombmeros 4-7. Esses mutantes freqentemente deixam de fechar seus tubos neurais,
no tm estruturas do ouvido interno, e no tm os gnglios do crebro posterior (que
formam os nervos acstico, glossofarngeo e vago), derivados desses rombmeros.
No entanto, no foram encontradas malformaes dos arcos farngeos, glndulas
tireide, paratireide e timo, ou cartilagem do pescoo. Assim, defeitos dos mutantes
Hoxa-1 somente so vistos na regio anterior da rea de expresso desse gene. (
possvel que suas funes no sejam requeridas ou sejam redundantes na poro
posterior a seu alcance.) Ao contrrio dos defeitos (que se limitam crista neural) de
camundongos Hox3 deficientes, os defeitos de Hox-1 so notados no sistema nervoso central e no tecido derivado do placdio, assim como no mesoderma paraxial. A
eliminao de Hoxa-2 tambm produz camundongos cujas clulas da crista neural
foram re-especificadas. Elementos cranianos normalmente formados pelas clulas da
crista neural do segundo arco branquial (estribo, ossos estilides) esto faltando e
so substitudos pela duplicao de estruturas do primeiro arco branquial (bigorna,
martelo, etc.) (Gendron-Maguire et al., 1993; Rijli et al., 1993). Assim, sem certos genes
Hox, alguns rgos regionalmente especficos ao longo do eixo ntero-posterior deixam de se formar ou so re-especificados para outras regies. A evidncia inicial apia
a noo que diferentes conjuntos de genes Hox so necessrios para a especificao
completa de toda regio do eixo e que um conjunto de genes parlogos pode ser
responsvel por diferentes subconjuntos de rgos nessas regies.
Transformao Parcial de Segmentos por
Eliminao de Genes Hox Expressos no Tronco
Se os genes Hox realmente formam um cdigo que especifica o eixo ntero-posterior,
poder-seia esperar que a alterao da constelao de genes Hox expressos em qualquer regio particular do embrio poderia alterar uma estrutura em outra ao longo do
eixo ntero-posterior. Isso mostrou ser o caso quando o gene Hoxc-8 deletado do
embrio por mira ao gene alvo (Le Mouellic et al., 1992). Nesses camundongos, vrios
segmentos esquelticos axiais parecem mais com segmentos anteriores, de tipo muito
semelhante ao que se v em mutaes hometicas de perda-de-funo em Drosophila. Como pode ser visto na Figura 16.7, nesse camundongo a primeira vrtebra lombar
formou uma costela algo caraterstico das vrtebras anteriores ela. A eliminao do
gene Hoxb-4 converte parcialmente a segunda vrtebra cervical (a vrtebra axial) em
(A)
(B)
uma cpia da primeira vrtebra cervical (o atlas), e a deleo do gene Hoxa-5 causa a
transformao posterior da stima vrtebra cervical (pescoo) em uma vrtebra torcica
formadora de costela (Jeannotte et al., 1993; Ramirez-Solis et al., 1993).
Pode-se conseguir severas transformaes axiais eliminando dois ou mais genes do
conjunto parlogo. Camundongos homozigotos para a deleo de Hoxd-3 tm anormalidades moderadas da juno crnio-cervical (o atlas est reduzido em tamanho), enquanto camundongos homozigotos para a deleo de Hoxa-3 no tm anormalidades
nessa juno (veja a discusso anterior sobre esse mutante). Quando os dois mutantes
so criados juntos, ambos conjuntos de problemas ficam mais severos. Os camundongos sem conjuntos de genes Hoxa-3 nem Hoxd-3 no tm osso atlas algum, e as cartilagens hiide e tireide so de tamanho to reduzido que h buracos no esqueleto (Condie
e Capecchi, 1994). Parece que ocorrem interaes sinrgicas entre os produtos dos
genes Hox e que para algumas funes, um dos parlogos pode substituir ao outro.
A regulao dos genes Hox de vertebrados parece ser controlada por fatores
semelhantes aqueles que regulam os genes HOM-C em moscas. Em Drosophila, h
um gene homeobox, caudal, que reside externamente ao complexo HOM-C. Esse gene
de efeito materno em Drosophila funciona para co-direcionar a expresso dos genes
HOM-C mais posteriores (AbdB). Um homlogo mamfero desse gene, Cdx1, tem um
papel semelhante no mesoderma paraxial. Ele torna-se expresso na linha primitiva
durante a gastrulao, quando a especificao do eixo ntero-posterior est sendo
feita; e desligado pouco depois. Se esse gene for deletado do embrio do camundongo, os padres de expresso dos genes Hox mudam posteriormente para um somito, e
estruturas esquelticas anteriores so encontradas mais posteriormente (Subramanian
et al., 1995). De maneira semelhante, a represso de genes Hom-C de Drosophila
mediada por um conjunto de genes que inclui extra sex combs (esc). Se o homlogo
murino desse gene (embryonic ectoderm development; eed) desempenhar o mesmo
papel, poder-se-ia esperar que mutaes em eed resultassem na anti-depresso de
genes Hox e na transformao hometica de estruturas anteriores em posteriores.
Isso realmente acontece. Genes eed mutantes causam a transformao de estruturas
esquelticas anteriores em posteriores (Schumacher et al., 1996).
Anlise Experimental do Cdigo Hox:
etinico
Teratognese do cido R
Retinico
Tais alteraes hometicas tambm podem ser vistas quando a embries de camundongos so administradas doses teratognicas de cido retinico. O cido retinico
exgeno dado a embries in utero pode fazer com que certos genes Hox sejam expres-
643
(C)
Figura 16.7.
Transformaes hometicas no camundongo

induzidas por eliminao de genes expressos
no tronco. (A) Transformao parcial da primeira vrtebra lombar em uma vrtebra torcica
pela eliminao de um gene Hox-8. Vrtebras
torcicas, mas no lombares, apresentam associao com as costelas. (B,C) Transformao
parcial da segunda vrtebra cervical em uma
segunda cpia da primeira vrtebra cervical pela
eliminao do gene Hoxb-4. (B) O camundongo tipo selvagem tem a primeira vrtebra caracterizada por um tubrculo ventral. (C) No camundongo mutante, a segunda vrtebra cervical
tambm tem esse tubrculo (seta). (A de Le
Mouellic et al., 1992; B e C de Ramirez-Solis
et al., 1993; Fotografias cortesia dos autores.)
644
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 16.8
Embries de camundongos cultivados sob condies controle no dia 8 (A,C), ou em um meio

contendo retinides teratognicos (B,D). No
dia 2 (A,B), o primeiro arco farngeo dos embries tratados tem uma aparncia encurtada e
achatada e aparentemente se fundiu com o segundo arco farngeo. No dia 17 (C,D) podem
ser vistas malformaes crnio-faciais na cartilagem derivada da crista neural dos embries
tratados. A cartilagem de Meckel est completamente deslocada da regio mandibular (maxilar inferior) para a regio maxilar (boca superior). As cartilagens do martelo e da bigorna
tambm no se formaram. (A e B de Goulding
e Pratt, 1986; C e D de Morriss-Kay, 1993;
Fotografias cortesia dos autores.)
sos em grupos de clulas que usualmente no os expressam (Conlon e Rossant, 1992;

Kessel, 1992). Alm disso, as anormalidades crnio-faciais de embries murinos de
mes tratadas com doses teratognicas de cido retinico (Figura 16.8) podem ser
mimetizadas quando se faz com que o Hoxa-7 se expresse atravs do embrio (Balling
et al., 1989). Se doses altas de cido retinico podem ativar genes Hox em clulas
inapropriadas ao longo do eixo ntero-posterior, e se essa constelao de genes hox
ativos especifica a regio do eixo ntero-posterior, ento camundongos tratados com
cido retinico no tero devem mostrar transformaes hometicas manifestadas por
malformaes ocorrendo ao longo desse eixo. Kessel e Gruss (1991) acharam que esse
era o caso. Camundongos tipo selvagem tm 7 vrtebras cervicais (pescoo), 13 vrtebras torcicas, e 6 vrtebras lombares (em adio s vrtebras sacrais e caudais).
Quando expostos ao cido retinico no dia 8 da gestao, a primeira ou as duas
primeiras vrtebras lombares foram transformadas em vrtebras torcicas, enquanto a
primeira vrtebra sacral freqentemente se tornou uma vrtebra lombar (Figura 16.9).
Em alguns casos, a regio posterior inteira do embrio de rato deixou de se formar.
Essas alteraes estruturais eram correlacionadas com alteraes na constelao dos
genes Hox expressos nesses tecidos. Por exemplo, quando o cido retinico foi dado
a embries no dia 8 (durante a gastrulao), a expresso de Hoxa-10 foi deslocada
posteriormente, e um conjunto adicional de costelas se formou onde havia a primeira
(A)
Figura 16.9
cido retinico administrado a ratas grvidas

altera a expresso do gene Hox e o fentipo
em fetos. A figura mostra mudanas no esqueleto axial (vrtebras e costelas) causadas
por exposio ao cido retinico no tero no
dia 8. (A) O tipo selvagem tem 7 vrtebras
cervicais, 13 torcicas, 6 lombares, 4 vrtebras sacrais fundidas e vrtebras caudais.
Esse arranjo alterado pelo cido retinico
dado s mes. Em alguns casos (B,C) o cido
retinico causou a perda de vrtebras lombares, sacrais e caudais. (A e B segundo Kessel
e Gruss, 1991; C de Kessel, 1992; Fotografias cortesia dos autores.)
(B)
(C)
Figura 16.10
O cido retinico media a transformao hometica em regies do crebro posterior. Em embries de camundongo no tratados, no dia 8.5, a expresso de Hoxb-1 se limita ao rombmero
r4. Quando expostos ao cido retinico nesse momento, a expresso de Hoxb-1 se expande
anteriormente em direo ao crebro intermedirio. Aps 2 dias, em embries normais Hoxb-1
expresso nas clulas descendentes do rombmero r4 e em clulas da linha mediana de r5, que
geram o nervo motor facial (mnVII). Em embries tratados com cido retinico, o padro normal
de r4/5 foi duplicado em r2/3. A expresso da crista neural de Hoxb-2 tambm est duplicada, e
um segundo nervo motor facial formado. Isso sugere que o cido retinico media a transformao hometica de r2/3 em r4/5. (Segundo Krumlauf, 1993.)
645
Dia 8.5
Controle
+ cido retinico
Crebro
intermedirio
Crebro
Posterior
vrtebra lombar. Quando genes Hox posteriores no foram expressos, a parte caudal
do embrio deixou de se formar. *
No sistema nervoso central, o cido retinico induz a expresso anterior dos genes
hox que usualmente so somente expressos mais posteriormente, e fazem com que os
rombmeros 2 e 3 assumam a identidade dos rombmeros 4 e 5 (Figura 16.10; Marshall
et al., 1992; Kessel, 1993). Nessa situao, o nervo trigmeo (que se origina do
rombmero 2) transformado em outro nervo facial (caracterstico do rombmero 4), e
anormalidades do primeiro arco branquial indicam que as clulas da crista neural do
segundo e terceiro rombmeros foram transformadas em fentipos mais posteriores.
O cido retinico provavelmente desempenha um papel na especificao axial
durante o desenvolvimento normal, e a fonte desse cido provavelmente o ndulo
de Hensen (Hogan, 1992; Maden et al., 1996). Desde que o ndulo precoce parece
conter os precursores tanto de estruturas anteriores como posteriores, possvel
que a especificao dessas clulas dependa da quantidade de tempo despendido no
meio de alta concentrao de cido retinico no ndulo. Quanto mais tempo for
despendido no ndulo, mais posterior ser a especificao. Isso visto ocorrer em
cultura, quando clulas embrionrias de carcinoma expressam mais genes Hox posteriores quanto maior for o tempo de sua exposio ao cido retinico (Simeone et
al., 1990). Alm disso, Hoxa-1, Hoxb-1 e Hoxd-4 tem, cada um, elementos sensveis
ao cido retinico nas regies reguladoras a montante (veja Captulo 21). A administrao de cido retinico exgeno iria mimetizar a situao normalmente encontrada
somente pelas clulas posteriores. Avantaggiato e colegas (1996) mostraram que
quando o cido retinico dado a embries durante os estgios de meia-linha, as
regies mais anteriores do tubo neural no se formam e so substitudas por tecido
parecendo o crebro anterior. Isso se correlaciona com uma perda de expresso
gnica (Emx1, Emx2) do crebro anterior e mdio nessa regio, e sua substituio
por genes Hox especficos para o crebro posterior como Hoxb-1. A evidncia aponta
para um cdigo Hox enquanto constelaes diferentes de genes Hox especificam as
caractersticas regionais ao longo do eixo ntero-posterior. Alm disso, como esses
padres de expresso so semelhantes para mamferos e insetos, parece que existe
um plano de desenvolvimento comum sobre o qual construdo o eixo nteroposterior da maioria dos animais.
Evidncia para um Cdigo Hox da Anatomia Comparada
Um novo tipo de embriologia comparada est atualmente emergindo. Gaunt (1994) e
Burke e seus colaboradores (1995) compararam as vrtebras do camundongo e do
pinto. Embora ambos tenham um nmero semelhante de vrtebras, elas distribuemnas diferentemente. Camundongos (como todos os mamferos, sejam elas girafas ou
baleias) tm somente 7 vrtebras cervicais (pescoo). Essas so seguidas por 13
*Hoxa-10 tambm importante para a especificao do padro axial dos dutos genitais.
Eliminaes de Hoxa-10 criam camundongos cuja regio uterina superior transformada em tecido
parecendo o oviduto. Essa regio coincide com o limite anterior da expresso de Hoxa-10 no duto
Mlleriano tipo selvagem (Benson et al., 1996).
Medula
Espinhal
Dia 10.5
Vescula
tica
Expresso de hoxb-1
Expresso de Krox-20
Expresso hoxb-2
da crista neural
646
Figura 16.11
Representao esquemtica do padro vertebral do camundongo e do pinto ao longo do

eixo ntero-posterior. Os limites de certos genes
Hox foram colocados nestes domnios.
Cervical
Torcico
Lombar
Sacral Coccgeas
Pinto
Vrtebras
Somitos
Vrtebras
Camundongo
Cervical
Occipital
Cervical
Torcico
Torcico
Lombar
Lombar
Sacral
Sacral
Caudal
Caudal
Transicional
vrtebras torcicas (ligadas s costelas), 6 vrtebras lombares, 4 sacrais e um nmero

varivel (20+) de vrtebras caudais (Figura 16.11). O pinto, por outro lado, tem 14
vrtebras cervicais, sete vrtebras torcicas, 12 ou 13 vrtebras lombosacrais (dependendo da variedade), e 5 vrtebras coccgeas. A pergunta : A constelao de genes
Hox correlaciona-se com o tipo de vrtebra (e.g., cervical ou torcica) ou com a posio relativa das vrtebras (e.g., nmero 8 ou 9)? A resposta que a constelao de
genes Hox prediz o tipo de vrtebra. No camundongo, a transio entre vrtebras
cervicais e torcicas ocorre entre as vrtebras 7 e 8; no pinto est entre as vrtebras 13
e 14. Em ambos os casos, os parlogos de Hox-5 so vistos nas ltimas vrtebras
cervicais, enquanto o limite anterior dos parlogos de Hox-6 se estende at a primeira
vrtebra torcica. De maneira semelhante, em ambos os casos a transio torcico/
lombar vista no limite entre os grupos parlogos de Hox-9 e de Hox-10. Parece que
h um cdigo de expresso do gene Hox que determina o tipo de vrtebra ao longo do
eixo ntero-posterior.
&
Especulaes
Animais como Variaes sobre o

Mesmo Tema Desenvolvimental
M DOS MAIS CELEBRADOS (e

custicos) debates em biologia foi
realizado no apogeu da Revoluo Francesa em Paris. A, na Academie des
Sciences, E. Geoffroy Saint-Hilaire contestou Georges Cuvier sobre a natureza do reino animal. Cuvier, o eminente anatomista
comparativo que tinha tornado a zoologia
uma cincia francesa enfatizou as diferenas que separam os filos entre si. No poderia haver uma Corrente de Existncia ligando todos os organismos, nem poderia
haver qualquer maneira que partes de um
inseto poderiam ser vistas como homlogas
daquelas de um molusco ou vertebrado. A
nica coisa ligando uma pata de inseto, um

p de molusco e uma perna de vertebrado
era a sua funo locomotora. Anatmica e
embriologicamente, elas eram entidades distintas, no-comparveis.
Geoffroy Saint-Hilaire enfatizou as semelhanas entre todos os filos. Ele argumentou que todos os animais estavam organizados de acordo com os mesmos princpios bsicos, e que um inseto no era
mais que um vertebrado virado de cabea
para baixo. Uma cabea era formada em
uma extremidade, uma cauda na outra, e
todos os animais tinham tubos neurais,
fossem eles dorsais ou ventrais. Em lugar
de uma natureza composta de espcies

intrinsecamente diferentes, todos os animais estavam unidos em uma espcie de
irmandade, reminescente da egalit et
fraternit revolucionrias (Appe, 1987).
Desde aquele tempo, diferentes tradies biolgicas enfatizaram as diferenas,
ou as semelhanas entre os organismos. A
anatomia comparada (seguindo Cuvier)
enfatiza as diferenas, enquanto a morfologia (seguindo Geoffroy Saint-Hilaire) celebra as unidades subjacentes. A Gentica
e a Biologia celular olham para todos os
animais (e plantas) como compostos basicamente da mesma maneira, seguindo as
mesmas leis, enquanto a embriologia tradicionalmente via cada espcie se desenvolvendo de uma maneira diferente.
Recentemente, porm, a embriologia
est fornecendo evidncia para a unidade
subjacente da natureza animal. Jonathan
Slack e seus colegas (1993) definiram um
animal como um organismo que exibe um
particular padro espacial de expresso do
gene Hox. eles propem que o plano corporal de cada filo tipificado em um particular estgio filotpico durante seu desenvolvimento. Para vertebrados, isso seria o estgio do broto caudal (onde, apesar
de suas diferentes clivagens e gastrulaes,
os embries de vertebrados convergem e
tm brotos caudais e bolsas farngeas); para
insetos, a banda germinativa completamente segmentada o local onde os embries
convergem. Nesse estgio, o padro de
expresso gnica hometica dos genes
Hox/HOM-C visto mais claramente, sendo notavelmente semelhante em todos animais. Os genes parecendo com Deformed
e labial so expressos no anterior do embrio; aqueles parecendo com Abdominal
B so expressos no posterior. Mesmo
nematides e hidras tm agregados de
genes hometicos que parecem ser expressos da mesma maneira ntero-posterior
(Schummer et al., 1992; Wang et al., 1993).
Embora fungos e plantas tenham genes
homeobox, esses no so homlogos com
aqueles dos animais, nem esto arranjados
na mesma ordem cromossmica, nem esto expressos pelo mesmo padro nteroposterior. Assim, o padro espacial da expresso do gene Hox est sendo usado
como a caracterstica subjacente primria
definindo a existncia animal. Essa observao ainda no foi testada em vrios filos,
e ser muito interessante ver se esse padro geral visto em todo o reino animal.
Recebendo uma Cabea: Mais

Homologias Vertebradas e Invertebradas
Em Drosophila, o crebro composto de
trs neurmeros. Esses so especificados
por dois genes contendo homeobox que
no esto ligados regio HOM-C; esses
genes so orthodenticle (old), que expresso predominantemente no neurmero
mais anterior, e empty spiracle (ems), expresso nos dois neurmeros cerebrais
posteriores. Mutaes de perda-de-funo de old eliminam o neurmero mais
anterior do embrio de Drosophila em
desenvolvimento, e mutaes de perdade-funo de ems eliminam o segundo e
terceiro neurmeros (Hirth et al., 1995). Em
rs e camundongos, os homlogos desses genes (Otx-1, Otx-2, Emx-1, Emx-2)
tambm so expressos no crebro (Simeone et al, 1992), embora os padres exatos
de transcrio no sejam idnticos (Figura 16.12). O gene Otx-2 foi eliminado como
gene alvo (Acampora et al., 1995; Matsuo
et al., 1995; Ang et al., 1996), e os camundongos resultantes tinham deficincias
neurais e mesodrmicas da cabea anteriores para o rombmero r3. Em seres humanos, mutaes de EMX-2 levam uma
condio rara conhecida como esquizoencefalia, na qual h sulcos atravessando todo o crtex cerebral (Brunelli et al.,
1996). Apesar dos genes old e ems de
Drosophila serem especificados pelos
gradientes Bicoid e Hunchback, e os transcritos Otx e Emx serem induzidos pelo
mesoderma dorsal anterior, parece que
esses mesmos genes so usados para especificar as regies cerebrais.
Drosophila
647
Camundongo
Crebro
anterior
Crebro
intermedirio
Crebro
posterior
r1-r8
Medula
espinhal
Figura 16.12
Expresso dos genes reguladores em Drosophila e no camundongo enfatizando os genes

expressos na cabea. A1-9 so segmentos abdominais; b1-3 so segmentos neurmeros
(cerebrais); 1b, md e mx so os segmentos
labial, mandibular e maxilar, respectivamente;
r, rombmero; T1-3, segmentos torcicos. (Segundo Thor, 1995.)
*Alm de expressar os homlogos dos genes contendo homeobox ems e otd, o crebro de
mamfero tambm expressa o homlogo do gene tailess. Esse gene expresso nas pores mais
anteriores e posteriores do embrio de Drosophila, e um membro da famlia dos receptores
esterides (Monaghan et al., 1995).
Eixos dorsoventral e esquerdo-direito em mamferos e aves

Muito pouco conhecido sobre a maneira pela qual mamferos formam o eixo
dorsoventral. Em pintos, o eixo determinado por gravidade que coloca o
hipoblasto no lado ventral (veja Captulo 5). Em camundongos e humanos, o
hipoblasto se forma no lado da massa celular interna que est exposta ao fluido
blastocstico. medida que prossegue o desenvolvimento, a notocorda mantm a
polaridade dorsoventral, induzindo padres dorsoventrais de expresso gnica
no tubo neural (Goulding et al., 1993). [mamaxis1.html]
Tambm muito pouco sabemos sobre a formao de eixo equerdo-direito. O
corpo do mamfero no simtrico. O corao demarcado para o lado esquerdo
648
(A)
(B)
(C)
Figura 16.13
Assimetria da expresso gnica no embrio do

camundongo. (A) Hibiridizao in situ para o
mRNA nodal no embrio murino de 5 somitos.
A expresso do gene nodal est restrita ao
mesoderma da placa lateral no lado esquerdo
do embrio. (B) Seo transversal atravs do
embrio no mesmo estgio que em (A). (C)
Em camundongos com a mutao inverted (iv),
a expresso de nodal vista no mesoderma da
placa lateral em ambos os lados do embrio. O
corao tem a mesma chance de voltear para o
outro lado. (Segundo Lowe et al., 1996; fotografias cortesia de M.R.Kuehn.)
da cavidade torcica, embora se forme no centro. O bao encontrado somente no

lado esquerdo do abdome, enquanto o principal lobo heptico fica no lado direito.
No conhecido o que regula essas assimetrias. Porm, achados recentes sugerem que dois nveis regulam o eixo esquerdo-direito: um nvel global e um nvel
especfico do rgo.
No camundongo, so conhecidos dois genes cujas mutaes destrem a
assimetria esquerda-direita normal. O primeiro gene, situs inversus viscerum (iv),
aleatoriza o eixo esquerdo-direito para cada rgo assimtrico (Hummel e Chapman,
1959; Layton, 1976). Isso significa que o corao pode se voltar para a esquerda
em um animal homozigoto, ou se voltar para a direita em outro. Alm disso, a
direo da volta do corao no est coordenada com a colocao do bao ou do
estmago. Isso pode causar srios problemas, at mesmo a morte. O segundo
gene, inversion of embryonic turning (inv), causa um fentipo mais global. Camundongos homozigotos para uma mutao de insero nesse local, foram encontrados tendo todos seus rgo assimtricos no lado errado do corpo (Yokoyama
et al., 1993).* J que todos os rgo esto invertidos, essa assimetria no tem
conseqncias danosas para os camundongos. Embora no saibamos quais protenas so codificadas por iv e inv, alguns dos componentes dessa trajetria foram recentemente descobertos.
No camundongo, os genes lefty e nodal so expressos somente no mesoderma da
placa lateral esquerda, e sua expresso precede a caracterstica volta direita do
corao e a rotao direita do embrio (Figura 16.13; Collignon et al., 1996; Lowe et
al, 1996; Meno et al., 1996). Em camundongos homozigotos para a mutao inversion
of embryonic turning, esses genes so expressos somente no lado direito do mesoderma da placa lateral, enquanto que em camundongos com a mutao aleatria situs
inversus viscerum, a expresso de nodal e lefty ou normal, trocada ou est ausente.
Esses genes codificam fatores parcrinos da famlia TGF-, e no conhecido quais
os tecidos eles influenciam. Um possvel local da influncia o tubo cardaco simtrico que se forma na linha mediana do embrio. Entre o endocrdio interno e o miocrdio
externo desse tubo de parede dupla est uma matriz extracelular (gelia cardaca) que
contm a protena Flectina. No embrio do pinto, essa protena expressa
assimetricamente na hora do volteamento cardaco, acumulando-se predominantemente no lado esquerdo da matriz (Prancha 33; Tsuda et al., 1996).
Os mecanismos que dariam transcrio assimtrica de nodal e lefty ainda no
esto claros, mas indcios esto vindo de estudos com o embrio do pinto (Levin
et al., 1995). A observao crtica que durante a gstrula intermediria, a mensagem sonic hedgehog (shh) transcrita simetricamente atravs de todo o ndulo de
Hensen. Algumas horas depois, porm, a transcrio do lado direito cessa, e a
transcrio de shh vista somente do lado esquerdo do ndulo. Ao mesmo tempo
que se desenvolve essa assimetria, o gene receptor IIa da activin (cActRIIa)
expresso somente do lado direito do ndulo (Figura 16.14). Esse receptor pode ser
induzido pela activina. A expresso de sonic hedgehog no lado esquerdo no
permanece por muito tempo, desaparecendo aps aproximadamente 24 horas de
incubao, e a expresso do gene nodal do pinto fica expressa somente do lado
esquerdo (Prancha 25). tentador colocar esses genes em um trajeto em comum
onde a activina (ou uma molcula semelhante activina) seria somente produzida
do lado direito do ndulo de Hensen do embrio do pinto. Isso induziria a sntese
do receptor da activina IIa e funcionaria atravs desse receptor para bloquear a
expresso sonic hedgehog onde quer que esse receptor estivesse localizado. Assim,
*Esse gene foi descoberto acidentalmente quando Yokoyama e colegas (1993) produziram
camundongos transgnicos com o transgene (para a enzima tirosinase) inserido aleatoriamente
no genoma. Em um caso, esse gene se inseriu em uma regio do cromossomo 4, eliminando o
gene existente.
Figura 16.14
(A) ESQUERDO
Caminho para a assimetria esquerda-direita no embrio do pinto. (A) Topo: padro de expresso
de genes sonic hedgehog, activin receptor IIa e cNR-1, em relao ao ndulo de Hensen. O
receptor de activina o primeiro, seguido por sonic hedgehog e por ltimo por cNR-1. Base:
Aps um dia, a assimetria vista no lao do lado direito do corao. O caminho hipottico entre
esses genes mostrado abaixo deles. (B,C) Vistas dorsal e em aproximao da hibridizao in
situ do mRNA sonic hedgehog. (D,E) Vistas dorsal e em aproximao da mensagem de activin
receptor IIa. (A segundo Roush, 1995, e Wolpert e Brown, 1995; B-E de Levin,et al., 1995,
cortesia de C. Tabin e C. Stern.)
649
DIREITO
12-13 horas
sonic hedgehog
cNR-1
(nodal)
Notocorda
Receptor IIa
da activina
Ndulo de
Hensen
(A)
(C)
(D)
Linha primitiva
(E)
sonic hedgehog
isso iria bloquear a transcrio no lado direito do ndulo. Sonic hedgehog seria
assim somente expresso no lado esquerdo do ndulo. A protena Sonic hedgehog
seria ento secretada no lado esquerdo do embrio ativando o gene nodal no
mesoderma da placa lateral que contm os precursores do corao. A, poderiam
causar acmulo da protena flectina no lado esquerdo da matriz extracelular. Experimentos sugerem que esse caminho uma boa aproximao. A activina realmente sintetizada no momento apropriado e somente do lado direito do ndulo de
Hensen. Se bloqueada pela adio experimental de Follistatin, a assimetria da
expresso de sonic hedgehog desaparece, e o corao tem uma chance igual de
voltar-se para qualquer dos lados (Levin et al., 1997). Quando gotas impregnadas
com activina foram colocadas no lado esquerdo do ndulo de Hensen, induziram
a sntese de cActRIIa nesse lado, e o gene shh (usualmente expresso somente do
lado esquerdo) foi reprimido. Isso, por sua vez, suprimiu a transcrio de nodal.
Nessa situao, o tubo cardaco se formou aleatoriamente, tendo uma probabilidade igual de ir para a esquerda ou para a direita. Uma condio semelhante foi
produzida quando clulas secretando Sonic hedgehog foram implantadas no lado
direito do ndulo. Nesse caso, Nodal foi induzida simetricamente no mesoderma
da placa lateral, e o corao teve 50 porcento de chance de ter um tubo esquerda
(Figura 16.15). A formao do eixo esquerdo-direito no camundongo tambm parece usar receptores de activina e protena nodal, porm no parece ligar os dois
atravs de Sonic hedgehog (Collignon et al., 1996). O pinto e o camundongo
parecem ter variaes sutis sobre como construir seus eixos. [mamaxis2.html]
Vrios caminhos diferentes teratognese, eliminao de genes, estudos de genes
organizadores especficos, gentica clnica, at mesmo gentica da mosca das frutas
esto nos conduzindo compreenso de um mistrio fundamental: como o embrio
vertebrado comea a saber distinguir o lado de cima do lado de baixo, a boca do nus,
e a esquerda da direita. Aprendemos mais sobre isso nos ltimos cinco anos do que
em todos os anos que os precederam.
Sonic
hedgehog
Activina
cNR-1 no
mesoderma
da placa lateral
Receptor
IIa da
activina
Tubo cardaco
40-45 horas
650
(A)
Notocorda
Ndulo de Hensen
(B)
Pastilha de
Sonic hedgehog
Figura 16.15
Expresso ectpica de sonic hedgehog leva expresso simtrica de cNR-1 (nodal) e aleatorizao
do volteamento cardaco. (A) Expresso tipo selvagem de cNR-1, mostrando expresso no lado
esquerdo. Quase todos os coraes desenvolvem voltas do lado direito. Esse padro tambm
visto quando pastilhas contendo substncias controles so implantadas no lado direito do ndulo
ou quando uma pastilha contendo Sonic-hedgehog implantada no lado esquerdo (onde shh em
geral expresso). (B) Quando pastilhas de Sonic hedgehog so implantadas no lado direito do
ndulo, a expresso de cNR-1 se torna bilateralmente simtrica. (de Levin et al., 1995; fotografias
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Interaes Celulares
Durante a Formao do rgo
17 Interaes proximais de tecidos: Induo secundria
18 Desenvolvimento do membro de tetrpode
655
701
19 Interaes celulares distncia: Hormnios como mediadores do desenvolvimento

20 Determinao do sexo
773
21 Regulao ambiental do desenvolvimento animal

22 A saga da linhagem germinativa
805
843
23 Mecanismos desenvolvimentais da mudana evolucionria
883
733
CAPTULO 17 Interaes Proximais de Tecidos
Interaes proximais de tecidos:

Induo secundria
655
17
Tratando-se de um sistema to complexo

como o embrio em desenvolvimento ftil
perguntar se certo rudimento de rgo determinado e se alguma propriedade de sua
vizinhana, com excluso de outras, o determina. Uma srie de diferentes fatores
pode estar envolvida e seus efeitos entrelaados da maneira mais intrincada. Para resolver esse emaranhado temos que inquirir
de que maneira o sistema sob considerao
reage com outras partes do embrio durante
os sucessivos estgios do desenvolvimento,
sob uma variedade de condies experimentais to ampla o quanto for possvel impor.
R. G. HARRISON (1933)
RGOS SO ESTRUTURAS COMPLEXAS compostas de numerosos tipos de tecidos. No olho do vertebrado, por exemplo, a luz transmitida
atravs do tecido corneano transparente e focalizada pelo tecido do cristalino (cujo dimetro controlado pelo tecido muscular), para finalmente atingir o
tecido neural da retina. O arranjo preciso dos tecidos nesse rgo no pode ser
alterado sem lesar a sua funo. Tal coordenao na construo dos rgos
conseguida por um grupo de clulas modificando o comportamento de um conjunto
adjacente de clulas, desse modo, fazendo com que elas mudem sua forma, velocidade mittica ou diferenciao. Essa ao queima-roupa, s vezes chamada interao proximal ou induo secundria, permite a um grupo de clulas responder a um
segundo grupo de clulas, em modificao, tornando-se freqentemente capazes de
alterar um terceiro conjunto de clulas.
Aspirar a verdade mais precioso do que

assegurar sua posse.
G. E. LESSING (1778)
Howard Holtzer (1968) distinguiu dois modos principais de interao entre tecidos
proximais. Na interao instrutiva, um sinal da clula indutora necessrio para
iniciar nova expresso gnica na clula responsiva. Sem a clula indutora, a clula
responsiva no seria capaz de se diferenciar de uma maneira particular. Por exemplo,
no Captulo 15 discutimos a capacidade da notocorda induzir a formao de clulas
da placa do assoalho no tubo neural. Todas as clulas do tubo neural so capazes
de responder ao sinal da notocorda, porm, somente aquelas mais prximas da
notocorda so induzidas. As outras clulas no se tornam clulas da placa do
assoalho. Ainda mais, se removermos a notocorda do embrio, as clulas que normalmente se tornariam clulas da placa do assoalho no se diferenciaro nesse tipo
de clula, e se adicionarmos uma notocorda lateralmente placa neural, essa nova
notocorda ir induzir um conjunto secundrio de clulas da placa do assoalho. As
clulas responsivas do tubo neural seriam, de alguma maneira, comandadas a expressar um conjunto de genes diferentes do conjunto de genes que expressariam, se
no tivessem estado em contato com a notocorda. A notocorda considerada ser
um tecido indutor que age instrutivamente. Wessell (1977) props quatro princpios
gerais caractersticos da maioria das interaes instrutivas:
Interaes instrutivas e permissivas
655
656
PARTE V Interaes Celulares Durante a Formao do rgo
1. Na presena do tecido A, o tecido responsivo B desenvolve-se em uma certa

maneira.
2. Na ausncia do tecido A, o tecido responsivo B no se desenvolve dessa
maneira.
3. Na ausncia do tecido A, mas em presena de tecido C, o tecido B no se
desenvolve dessa maneira.
4. Na presena da tecido A, um tecido D que normalmente desenvolve-se diferentemente, mudado para desenvolver-se como B.
O segundo tipo de interao tissular proximal a interao permissiva. Aqui, o
tecido responsivo contm todo o potencial necessrio para ser expresso, e somente
requer um ambiente que permita a expresso desses traos. Por exemplo, muitos tecidos em desenvolvimento necessitam de um substrato slido contendo fibronectina
ou laminina para se desenvolver. A fibronectina ou laminina no altera o tipo de clula
que dever ser produzido, somente permite sua expresso*.
Competncia e receptores
Deve-se notar que nos princpios acima, o tecido responsivo deve ser competente
para responder. Competncia a capacidade de responder a um sinal indutivo
(Waddington, 1940). Isso no um estado passivo, mas uma condio adquirida.
Quando detalhamos a induo do tubo neural, observamos que o ectoderma da
gstrula capaz de ser induzido pelo lbio dorsal do blastporo ou seus derivados
mesodrmicos. Assim, o ectoderma da gstrula dito ser competente para responder a estmulos indutivos. Essa competncia para a induo neural adquirida durante a clivagem tardia e perdida durante os estgios tardios da gstrula. medida
que essa competncia para responder induo pelo lbio dorsal diminui, algumas
regies do ectoderma adquirem competncia para responder a indutores do cristalino. Mais tarde ainda, a competncia dos indutores do cristalino perdida, mas o
ectoderma pode responder a indutores do placdio do ouvido (Serventnick e
Grainger, 1991). Portanto, a prpria competncia um fentipo diferenciado que
distingue clulas tanto espacial como temporalmente.
Considera-se, em geral, que a competncia pode ser adquirida de vrias maneiras.
Primeiro, uma clula pode tornar-se competente sintetizando um receptor para a molcula indutora. Como veremos mais adiante neste captulo, uma clula B no competente para responder induo por clulas T at que tenha ligado antgenos. Quando
os antgenos so ligados, eles criam um conjunto de receptores que os capacitam a
responder s molculas indutoras secretadas pelas clulas T. Esse mecanismo de
competncia tambm visto na induo da diferenciao de neurnios simpticos
(Birren e Anderson, 1990; Cattanco e McKay, 1990). Desde o incio da dcada de 1960,
era conhecido que a diferenciao dos neurnios simpticos depende do fator de
crescimento nervoso (NGF); porm, quando as clulas progenitoras desses neurnios
foram isoladas, elas no responderam ao NGF. Alm disso, no tinham receptores
capazes de ligar NGF. Em vez disso, para se diferenciarem, essas clulas tinham que ser
primeiro expostas ao fator de crescimento de fibroblasto (FGF). Essa exposio resultava na expresso de NGF nas suas membranas celulares. Tais clulas tratadas por
FGF podiam responder ao NGF (Figura 17.1). A clula progenitora original no era
competente para ser induzida pelo NGF porque no tinha o receptor NGF. Quando
esse foi induzido pelo FGF, tornou-se competente para responder ao NGF.
* fcil distinguir as relaes permissivas e instrutivas por uma analogia com uma situao mais
familiar. Este livro foi possvel ser feito pelas interaes permissivas e instrutivas. Os revisores
podem convencer-me a alterar o material no captulo. Isso uma interao instrutiva, j que a
informao passar a ser diferente daquela que teria sido. Porm, a informao no livro no poderia
ter sido expressa sem as interaes permissivas com o editor e o impressor.
Clula progenitora do nervo

simptico
FGF Responsivo, NGF no responsivo

Receptor FGF
Ligao FGF sinaliza a
sntese do receptor NGF
Neurnio primitivo
Receptor NGF
Ligao de NGF sinaliza a clula
para se diferenciar em um
neurnio simptico maduro
Neurnio
simptico maduro
Neurnio dependente de NGF
Figura 17.1
Induo e competncia de uma linhagem precursora de neurnio simptico. A clula germinativa

original uma clula mitoticamente ativa que no tem receptores NGF, mas que pode responder
a FGF. Isso d origem a uma clula neural primitiva que tem processos, mas ainda se divide. Esse
neurnio primitivo tem receptores para NGF. A clula responsiva ao NGF pode se diferenciar em
um neurnio simptico maduro que no se divide (caracterizado pelo seu grande soma, nuclolos
proeminentes, extensos processos e dependncia de NGF para a sobrevivncia). (Segundo Birren
e Anderson, 1990.)
Em segundo lugar, uma clula pode alcanar a competncia sintetizando uma molcula que permite o funcionamento do receptor. Receptores podem ligar o indutor,
mas isso no significa que os receptores sejam funcionais. Freqentemente, um receptor atua enviando um sinal para o ncleo. Como vimos no Captulo 3, uma vez que o
receptor tenha fixado um ligante, ele ativa enzimas que fabricam o sinal para diviso ou
diferenciao. Se alguma dessas enzimas no estiver presente, o sinal no transmitido. Assim, uma clula pode alcanar competncia sintetizando um elo faltante na
trajetria da sinalizao.
Em terceiro lugar, a competncia pode ser adquirida pela represso de um inibidor.
Se o inibidor estiver presente, uma clula poder ligar o indutor, enviar o sinal para o
ncleo e, apesar disso, no ser capaz de ser induzida. Por exemplo, os indutores
freqentemente causam alteraes da forma celular (como na induo do tubo neural).
Se a clula estiver inibida de mudar sua forma, ela no ser capaz de responder.
Fatores parcrinos
Interaes proximais so em geral mediadas por protenas que podem difundir-se ao
longo de curtas distncias para induzir mudanas em suas clulas vizinhas. Essas
protenas so muitas vezes chamadas de fatores parcrinos ou fatores de diferenciao
657
658
e crescimento (GDFs).* Enquanto os fatores endcrinos (hormnios) circulam pelo

sangue para exercer seus efeitos, os fatores parcrinos (como FGF e NGF mencionados anteriormente) so secretados para os espaos imediatamente ao redor da clula
que os produz. Durante a dcada retrasada, os biologistas do desenvolvimento descobriram que a formao de numerosos rgos realmente efetuada por uma populao relativamente pequena de protenas. O embrio herda uma caixa de ferramentas
relativamente compacta e usa muitas das mesmas protenas para construir o corao,
os rins, os dentes, os olhos e outros rgos. Alm disso, as mesmas protenas so
utilizadas atravs do reino animal, e os fatores ativos na criao do olho ou corao de
Drosophila so muito semelhantes aqueles usados na gerao de rgos de mamferos. Essas protenas podem ser agrupadas em quatro famlias principais na base de
suas estruturas. Essas famlias so: a famlia do fator de crescimento fibroblstico
(FGF), a famlia Hedgehog, a famlia Wingless (Wnt) e a superfamlia TGF.
Os Fatores de Crescimento Fibroblstico
A famlia FGF tem nove membros relacionados estruturalmente. FGF1 tambm
conhecido como FGF acdico, FGF2 s vezes chamado de FGF bsico e FGF7, fator
de crescimento de queratincitos. Embora existam nove genes FGF distintos, esses
podem gerar uma variedade de isoformas de protenas variando suas emendas de
RNA ou do cdon de iniciao em diferentes tecidos (Lappi, 1995).Os FGFs ativam
um conjunto de tirosina quinases receptoras chamado de receptores do fator de
crescimento fibroblstico As reaes iniciadas por esses fatores de crescimento
fibroblstico ativados foram discutidas no Captulo 3. Os FGFs esto associados
com vrias funes desenvolvimentais, incluindo a angiognese, a formao do
mesoderma e a extenso axnica. Enquanto os FGFs muitas vezes podem substituir
um ao outro, seus padres de expresso lhes do funes separadas. O FGF2
especialmente importante na angiognese, e o FGF8 importante para o desenvolvimento do crebro intermedirio (Crossley et al., 1996). No camundongo, rompimentos de certos genes FGF produzem anormalidades especficas. A ausncia de Fgf3
leva formao desorganizada de somitos, vrtebras caudais anormais, e defeitos
do ouvido interno, enquanto a ausncia de Fgf4 resulta em morte embrionria precoce causada pela falncia do crescimento da massa celular interna. O nico problema
de camundongos deficientes em Fgf5 parece ser plo anormalmente longo (Figura
17.2; Herbert et al., 1994; Wilkie et al., 1995).
Os FGFs so tambm ativos na placa de crescimento dos ossos longos e na suturas dos ossos cranianos (Muenke e Schell, 1995). Mutaes levando a ativao prematura de receptores de FGF so a principal causa do nanismo (maturao precoce
das placas de crescimento dos ossos longos) e craniosinostoses (fuso prematura de
ossos cranianos) (Figura 9.19). [cell7.html]
*Os fisiologistas descreveram trs maneiras principais pelas quais molculas solveis efetuam
mudanas em clulas. Os fatores parcrinos so molculas solveis que efetuam mudanas nas
clulas adjacentes, ou prximas, clula secretora. Em embriologia, tais fatores tm tambm sido
chamados de morfgenos. Os fatores endcrinos (hormnios) so molculas solveis que viajam
pelo sangue para realizar mudanas em clulas distantes da clula secretora. Os fatores autcrinos
so molculas que efetuam mudanas nas clulas que os secretaram. Para que os efeitos autcrinos
ocorram, a clula sintetiza uma molcula para qual ela tenha seu receptor prprio. Embora a
estimulao autcrina no seja comum, ela vista em clulas citotrofoblsticas placentrias que
sintetizam e secretam o fator de crescimento derivado das plaquetas, cujo receptor est na membrana celular daquelas clulas (Goustin et al., 1985). O resultado a proliferao explosiva daquele
tecido. Existe aprecivel debate sobre at que ponto fatores parcrinos podem operar. A activina,
por exemplo, pode difundir-se por muitos dimetros celulares e pode induzir diferentes conjuntos de
genes em diferentes concentraes (Gurdon et al., 1994, 1995). As protenas Vg1, BMP4 e Nodal,
porm, provavelmente somente trabalham sobre seus vizinhos adjacentes (Jones et al., 1996; Reilly
e Melton, 1996). Esses fatores podem induzir a expresso de outros fatores de curto alcance desses
vizinhos, e uma cascata de indues parcrinas pode ser iniciada.
(A)
659
Figura 17.2
Papis dos fatores de crescimento fibroblstico e seus receptores. Crescimento do plo em

um camundongo deficiente em FGF5 (a mutao angor) (A) torna o plo muito mais longo
que o dos companheiros de ninhada no controle (B). (Fotografias cortesia de C. Peterson.)
(B)
A famlia hedgehog
Em Drosophila, a protena Hedgehog tem vrios papis crticos na padronizao da
mosca em desenvolvimento. No embrio precoce, ela atua de maneira dependente da
concentrao na especificao de cada parasegmento embrionrio e como veremos
nos prximos captulos, hedgehog tambm trabalha mais tardiamemte no desenvolvimento, especificando os eixos da pata e dos discos imaginais alares (Basler e Struhl,
1994; Heemskerk e DiNardo, 1994). Os vertebrados tm pelo menos trs homlogos do
gene hedgehog de Drosophila: sonic hedgehog (shh), desert hedgehog (dhh) e
indian hedgehog (ihh). O Desert hedgehog expresso nas clulas de Schwann e
Sertoli, e camundongos homozigotos para um alelo zero (null) de dhh tm
espermatognese defeituosa. O indian hedgehog expresso no intestino e na cartilagem (Bitgood e McMahon, 1995; Bitgood et al., 1996).
Entre os trs homlogos de vertebrados Sonic hedgehog a mais empregada.
Confeccionada pela notocorda, a protena responsvel pela induo de clulas da
placa de assoalho e neurnios motores no tubo neural (Placzek et al., 1990; Yamada et
al., 1993; veja Captulo 8). A protena Hedgehog secretada pela notocorda (na realidade, os dois-teros do N-terminal dessa protena) tambm responsvel pela induo
do esclertomo nos somitos (Fan e Tessier-Lavigne, 1994; Johnson et al., 1994). A
Sonic hedgehg foi mostrada mediar a formao do eixo esquerdo-direito em pintos,
iniciar o eixo ntero-posterior nos membros, e induzir o eixo polarizado do intestino
(Riddle et al., 1993; Levin et al., 1995; Roberts et al., 1995). Freqentemente, a Sonic
hedgehog trabalha com outros fatores parcrinos, como Wnt e FGF. Como veremos
no prximo captulo, o shh no broto dos membros induz a expresso de FGF4 no
mesoderma posterior, e a combinao de FGF4 e Wnt7a necessria para manter a
expresso de shh. No dente em desenvolvimento, Sonic hedgehog, FGF4, e outros
fatores parcrinos esto concentrados em regies onde ocorrem interaes celulares
(Figura 17.3; Vaahtokari et al., 1996a).
660
Bucal
(bochecha)
Mesial
(interno)
N de esmalte
N de esmalte
Figura 17.3
Concentrao do fator parcrino de crescimento e fatores de diferenciao na regio onde a

morfognese e a diferenciao esto ocorrendo
no molar inferior do embrio do camundongo
de 14 dias. (O limite do epitlio dental mostrado em branco.) Os fatores parcrinos esto
sendo secretados pela clulas epiteliais no se
dividindo, o n de esmalte. (O painel esquerda mostra que as clulas do n de esmalte no
esto replicando DNA.) Acima de cada hibridizao in situ est a reconstruo seriada da
rea de expresso. Veja pgina 682 para detalhes. (de Jernvall, 1995; fotografias cortesia de
A. Vaahtokari, J. Jernvall e I. Thesleff.)
A famlia Wnt
Esta famlia compreende uma famlia de glicoprotenas ricas em cistena; existem pelo
menos 15 membros dessa famlia em vertebrados. Seu nome advm da fuso do nome
do gene da polaridade segmentria de Drosophila, wingless, com o nome de um dos
seus homlogos vertebrados, integrated. Como vimos no Captulo 7, a Wnt1 parece
ser ativa na induo do mitomo nos somitos e no estabelecimento dos limites do
crebro intermedirio (McMahon e Bradley, 1990; Ku e Melton, 1993; Stern et al.,
1995). Conforme veremos em captulos subseqentes, os genes Wnt tambm so importantes no estabelecimento da polaridade dos membros vertebrados, tal como o
wingless estabelece a polaridade durante o desenvolvimento dos membros dos insetos. interessante que em ambos os casos ocorrem interaes com membros da
famlia hedgehog. Durante a gastrulao do camundongo Wnt3a, Wnt5a e Wnt5b so
todos expressos em regies sobrepostas mas distintas na linha primitiva. A Wnt3a a
nica protena Wnt vista nessa regio da linha que ir gerar o mesoderma dorsal
(somito), e camundongos homozigotos para o alelo zero do gene Wnt3a no tm
somitos caudais aos membros anteriores (Figura 17.4; Takada et al., 1994).
A trajetria sinalizando Wnt est intimamente conectada trajetria hedgehog.
Como mostrado na Figura 3.38, hedgehog estimula a expresso de wg e a protena
Wingless estimula a expresso de hedgehog. Em Drosophila, uma das coisas
feitas por Hedgehog para ativar a expresso gnica de wingless de contrapor a
represso da protena Patched. Uma vez eliminada a represso do gene patched, o
wingless pode ser expresso. A expresso ectpica do gene patched inibe o crescimento celular. Pensa-se existir uma trajetria semelhante em humanos, e cada uma
das molculas na trajetria de Drosophila tem um homlogo humano. Em humanos, mutaes espordicas de perda-defuno do gene patched em tecidos
somticos causam carcinomas de clulas basais, o tipo mais comum do cncer
(A)
(B)
661
Figura 17.4
Ausncia de somitos caudais em embries de

camundongos homozigotos para um alelo zero
de Wnt3a. (A) Embrio de camundongo do
tipo selvagem de 12,5 dias. (B) O mesmo estgio em um embrio de um mutante Wnt3a,
mostrando falta de broto caudal e um eixo truncado. (C) Seo transversal atravs da rea do
membro posterior de um embrio tipo selvagem de camundongo de 9,5 dias. (D) Seo
transversal no mesmo estgio de um embrio
mutante Wnt3a. No so vistos somitos (A
massa de clulas perto da medula espinhal
mais provavelmente oriunda da crista neural.)
(de Takada et al., 1994; fotografias cortesia de
A. P. McMahon.)
(C)
(D)
humano. Mutaes herdveis do gene pathched do origem sindrome nevus da

clula basal, uma condio autossmica dominante caraterizada por anomalias
desenvolvimentais (alteraes craniofaciais e das costelas, dedos ligados) e tumores malignos (meduloblastomas e carcinomas de clulas basais) (Hahn et al.,
1996; Johnson et al., 1996).*
A superfamlia TGF
Existem mais de 30 membros estruturalmente relacionados da superfamlia TGF, que
regulam algumas das interaes mais importantes do desenvolvimento (Figura 17.5).
Os peptdeos codificados pelos genes dessa superfamlia so processados de modo
que a regio carboxlica terminal contenha o peptdeo maduro. Esses peptdeos so
dimerizados em homodmeros (consigo mesmo) ou heterodmeros (com outros
peptdeos TGF) e secretados pela clula. A superfamlia TGF inclui a famlia TGF
, a famlia activina, as protenas da morfognese ssea (BMPs), a famlia Vg1, e outras
protenas, incluindo a Dorsalina (ativa na padronizao do tubo neural, veja Captulo
7), o fator neurotrfico derivado da glia (necessrio para a diferenciao dos neurnios
entricos e renais), e o fator inibidor Mlleriano (que envolvido na determinao
sexual dos mamferos, veja Captulo 20). Em Drosophila, a protena decapentaplegic
homloga BMP4 de vertebrado.
Os receptores que ligam os membros da superfamlia TGF transmitem o sinal
para o ncleo pela ativao de protenas smad especficas. Essas protenas residem no citoplasma, mas quando os receptores ligam membros da superfamlia
* Carcinomas de clulas basais, tumores da camada de clulas basais da epiderme, afligem cerca
de 750.000 pessoas cada ano nos Estados Unidos, a maioria desses cnceres se originando aps
exposio luz solar de pessoas de origem norte-europia. Por outro lado, a sndrome nevus de
clulas basais (s vezes chamada de sndrome de Gorlin) extremamente rara.
662
Famlia BMP
osteogenina
Dorsalina 1 (pinto)
(braquipodismo)
(orelha curta)
(camundongo)
(Xenopus)
(ourio-do-mar)
Screw (Drosophila)
Nodal
activina
activina
Inibina
Figura 17.5
Relacionamentos entre membros da superfamlia TGF-b. (Segundo Hogan, 1996.) *

*Infelizmente, laboratrios diferentes usam
letras maisculas e/ou hifens para os nomes desses e de outros fatores de maneiras diferentes. A
nossa ortografia particular no foi planejada para
priorizar qualquer desses laboratrios ou convenes. Porm, lembramos o dito (Cohen,
1982) que Acadmicos podem mais facilmente
compartilhar suas escovas de dentes do que a
nomenclatura um do outro.
TGF, eles ativam (provavelmente por fosforilao) um desses polipeptdeos de

50-kDa. Isso converte a protena smad em um fator de transcrio que pode penetrar no ncleo e ativar genes especficos (Graff et al., 1996; Hoodless et al., 1996;
Liu et al., 1996).
. Essa famlia inclui TGF1, 2, 3 e 5. TGF1 parece ser imporA FAMLIA TGF
tante para a formao de rgo ramificados. TGF1 exgeno foi achado inibir o
crescimento de duetos em glndulas mamrias do camundongo (Daniel, 1989;
Silberstein et al., 1992), causar malformaes de glndulas salivares embrionrias
murinas (Hardman et al, 1994), e prevenir a ramificao dos rins embrionrios (Ritvos
et al.,1995). Assim, TGF1 pode ser crtico no processo normal de ramificao,
talvez mediando esse e outros processos, intensificando a produo de componentes da matriz extracelular como a fibronectina, colgenos I e IV (Ignotz e Massagu,
1968; Penttinen et al, 1988), osteonectina (Wrana e al., 1991) e proteoglicanos (Bassols
e Massagu, 1988; Morales e Roberts, 1988), enquanto inibe a protelise da matriz
celular (Edwards et al, 1987; Saksela et al., 1987). Isso poderia ter um efeito lquido de
estabilizao da estrutura tissular. Os efeitos exatos das protenas TGF dependem, muitas vezes, do tipo celular que encontram, e a mesma TGF pode ter efeitos
opostos (tal como interrompendo ou acelerando a diviso celular) em diferentes
tipos de clulas.
Os efeitos de TGF so de difcil separao porque componentes da famlia
parecem funcionar de maneira semelhante e podem compensar por perdas dos outros
quando expressos conjuntamente. Alm disso, delees apontadas para o gene Tgfb1
so difceis de interpretar, pois a me pode suprir esse fator atravs da placenta e do
leite (Letterio et al., 1994).
A FAMLIA BMP. Embora originalmente descoberta devido sua habilidade em
induzir o crescimento sseo, as BMPs regulam processos desenvolvimentais to
diversos como proliferao celular, apoptose, migrao celular, diferenciao celular e morfognese (Hogan, 1996). (Revelou-se que a BMP1 no membro dessa
famlia.) BMPs se distinguem dos outros grupos da superfamlia TGF por terem
sete, em vez de nove, cistenas conservadas no peptdeo maduro. J vimos protenas BMP tal como a Nodal (ativa na formao do eixo tanto em Xenopus como em
camundongos), BMP4 (importante na especificao mesodrmica, polaridade do
tubo neural e padronizao de somitos), e Decapentaplegic (que determina a polaridade dorsoventral em Drosophila). A BMP4 tambm est implicada na induo
de apoptose em clulas da crista neural migrando de rombmeros de nmeros
mpares (Graham et al., 1993) e membrana entre dedos dos ps dos embries de
pintos (veja Captulo 23). BMP4 e Decapentaplegic so extremamente semelhantes, e genes BMP4 humanos podem salvar embries de moscas carentes de dpp
(Padgett et al., 1993). A ausncia de algumas BMPs causa anormalidades
esquelticas especficas (Kingsley et al., 1994; Storm et al., 1994). Mutaes do
gene BMP5 resultam em um esqueleto pequeno e orelhas pequenas devido
reduo de condensaes da precartilagem, enquanto mutaes de gdf5 causam
membros curtos e um nmero reduzido de dedos do p. Como os outros membros
TGF, as BMPs funcionam dimerizando receptores nas clulas-alvo e ativando
suas quinases serina/treonina (Liu et al., 1995).
Sinalizao Justcrina (juxtacrine)

Embora a maioria dos reguladores da induo conhecidos sejam protenas difusveis,
algumas protenas podem permanecer ligadas superfcie celular. Certas protenas
Wnt, por exemplo, carecem de um sinal para secreo e podem interagir com receptores de suas vizinhas enquanto ligadas suas membranas celulares. De maneira semelhante, as protenas Hedgehog podem existir em forma ligada membrana antes de seu
663
Figura 17.6
Citoplasma
Serrate
Sinalizao clula-clula entre duas clulas justapostas. Este modelo especulativo para a sinalizao Delta-Notch baseado em evidncia gentica de cruzamentos de Drosophila. A protena receptora
Notch pode se ligar s protenas Serrate ou Delta das clulas adjacentes atravs de seus domnios extracelulares. A protena Delta
age como um ligante e dimeriza a protena Notch na membrana
desse ltimo. Essa dimerizao estabilizada por interaes entre
as protenas, que podem permitir a troca da protena Suppressor of
Hairless com Deltex. A protena Suppressor of Hairless estava
ligada ao lado citoplasmtico da molcula Notch, mas uma vez
liberada, torna-se um fator de transcrio. Esse fator pode controlar
o destino da clula, direcionando-a a tornar-se pele em vez de tecido
neural. (Segundo Artavanis-Tsakonas et al., 1995.)
Delta
Monmero
Notch
Notch
Extracelular
Citoplasma
Deltex
Suppressor
of Hairless
Suppressor of Hairless
Ncleo
Hairless
processamento proteoltico. Nessa sinalizao, as clulas teriam que estar em contato

direto para o sinal ser eficaz. Tal caminho foi visto para o sinal Delta recebido pela
protena Notch, um sinal cujas funes desenvolvimentais em Drosophila sero discutidas mais tarde. Notch se estende atravs da membrana celular, e sua superfcie
externa contata protenas Delta ou Serrate que se estendem de clulas adjacentes.
Quando as protenas Delta se conectam Notch, estabilizam a sua dimerizao e
permitem a ocorrncia de mudanas conformacionais no lado citoplasmtico da protena Notch. Essas mudanas permitem protena Deltex trocar com a protena chamada
Suppressor of Hairless. Quando se separa da protena Notch, a protena Suppressor
of Hairless entra no ncleo para se tornar um fator de transcrio (Figura 17.6; ArtavanisTsakonas et al, 1995). Assim, a protena Notch capaz de receber o sinal de Delta
somente quando as clulas esto justapostas. Por isso, esse tipo de sinalizao , s
vezes, chamado de sinalizao juxtcrina (juxtacrine). [prox1.html]
Interaes epitlio-mesnquima
Alguns dos casos melhor estudados de induo secundria so aqueles envolvendo as
interaes de lminas epiteliais com clulas mesenquimatosas adjacentes. So chamadas interaes epitelio-mesnquima. O epitlio pode originar-se de qualquer camada
germinativa, enquanto o mesnquima geralmente derivado de tecido mesodrmico
frouxo ou da crista neural. Exemplos dessas interaes esto listados na Tabela 17.1.
Especificidade Regional da Induo
Usando como nossos exemplos a induo de estruturas cutneas, iremos examinar
as propriedades das interaes epitlio-mesnquima. O primeiro fenmeno a
especificidade regional da induo. A pele composta de dois tecidos principais: a
664
Tabela 17.1
Algumas interaes epitlio-mesnquima
rgo
Componente epitelial
Componente
mesenquimatoso
Estruturas cutneas (plo,

penas, glndulas sudorparas,
glndulas mamrias)
Epiderme (ectoderma)
Derme (mesoderma)
Membro
Epiderme (ectoderma)
Mesnquima
(mesoderma)
rgos viscerais (fgado, pncreas,

glndulas salivares)
Epitlio (endoderma)
Mesnquima
(mesoderma)
rgos associados farngeo e

respiratrio (pulmo, timo, tireide)
Epitlio (endoderma)
Mesnquima
(mesoderma)
Rim
Epitlio do broto uretrico

(mesoderma)
Mesnquima
(mesoderma)
Dente
Epitlio maxilar (ectoderma)
Mesnquima
(crista neural)
epiderme externa, derivada do ectoderma e a derme derivada do mesoderma. A

epiderme do pinto sinaliza as clulas drmicas subjacentes a formarem condensaes
(provavelmente secretando Sonic hedgehog e TGF2); o mesoderma condensado
responde secretando fatores que causam a formao de estruturas cutneas regionalmente especficas, compostas quase inteiramente de clulas ectodrmicas (Nohno
et al., 1995; Tingerret e Chuong, 1996; Prancha 23). Essas so as penas largas das
asas, penas estreitas das coxas, e as escamas e garras das patas. Aps separar o
epitlio embrionrio e o mesnquima um do outro, pode-se recombin-los de diferentes maneiras (Saunders et al., 1957). Algumas das recombinaes esto ilustradas na Figura 17.7. Conforme se v, o mesnquima responsvel pela especificidade
da induo no ectoderma competente. Esse mesmo tipo de ectoderma se desenvolve de acordo com a regio de onde foi retirado o mesoderma. Aqui, o mesnquima
tem um papel instrutivo, chamando a participao de diferentes conjuntos de genes
nas clulas responsivas.
Essa especificidade regional da induo crtica durante o desenvolvimento
dos sistemas digestivo e respiratrio. Na morfognese dos tubos endodrmicos, o
Fonte do mesoderma
Asa
Figura 17.7
Especificidade regional da induo. Quando clulas da derme (mesoderma) so recombinadas com a epiderme (ectoderma) no
pinto, o tipo de estrutura cutnea produzida
pelo ectoderma determinado pela localizao original do mesoderma. (Adaptado de
Saunders, 1980.)
Coxa
Ectoderma alar
Induo especfica
Pena
da asa
Pena
da coxa
Escamas,
garra
epitlio endodrmico capaz de responder diferentemente aos diferentes mesnquimas especficos regionalmente. Isso capacita o tubo digestivo e o tubo respiratrio
desenvolverem diferentes estruturas em diferentes regies do tubo. Assim, medida que o tubo digestivo encontra novos mesnquimas, se diferencia em esfago,
estmago, intestino delgado e clon (Gumpel-Pinot et al., 1978; Fukumachi e
Takayama, 1980). Essa especificidade regional da induo do mesnquima fica dramaticamente aparente na formao do sistema respiratrio. No mamfero em desenvolvimento, o tubo respiratrio epitelial responde de duas maneiras distintas. Quando na regio do pescoo, ele cresce de modo reto, formando a traquia. Aps penetrar no trax, ele se ramifica, formando os dois brnquios e depois o pulmo. O
epitlio respiratrio pode ser isolado logo depois de ter se dividido nos dois
brnquios, e os dois lados podem ser tratados de maneira diferente. A Figura 17.8
mostra o resultado de tal experimento. O epitlio bronquial direito manteve seu
mesnquima pulmonar, enquanto o brnquio esquerdo foi rodeado pelo mesnquima traqueal (Wessells, 1970). O brnquio direito se proliferou e se ramificou sob a
influncia do mesnquima pulmonar, enquanto o lado esquerdo continuou a crescer
de uma maneira no-ramificada. Assim, o epitlio extremamente malevel e pode se
diferenciar de acordo com suas instrues mesenquimatosas.
A especificidade do mesoderma considerada ser controlada por suas interaes
com o tubo endodrmico durante os estgios precoces do desenvolvimento. Roberts
e colegas (1995) implicaram a Sonic hedgehog nessa especificao. No incio do desenvolvimento, a expresso de shh limitada ao endoderma posterior do intestino
terminal. Isso parece ser necessrio para a induo no mesoderma de um conjunto
aninhado de genes Hox que se parece com o conjunto posterior de genes HOM-C de
Drosophila. Tal como a situao nas vrtebras, as margens anteriores do padro de
expresso delineiam os limites morfolgicos das regies que iro formar a cloaca, o
intestino grosso, o ceco, ceco mdio (na margem intestino mdio/intestino terminal), e
a poro posterior do intestino mdio (Prancha 22; Figura 17.9). Assim, a expresso
endodrmica de Sonic parece induzir uma expresso aninhada de genes Hox no mesoderma. Esses genes Hox provavelmente especificam o mesoderma de modo que eles
possam interagir com o tubo endodrmico e especificar suas regies.
Grupo
paralogo
Hox
665
Figura 17.8
Capacidade do epitlio presuntivo pulmonar de

se diferenciar em relao fonte do mesnquima indutor. Aps o epitlio pulmonar do camundongo ter se ramificado em dois brnquios,
o rudimento inteiro excisado e cultivado. O
brnquio direito deixado intocado, enquanto
a extremidade do brnquio esquerdo coberta
com mesnquima traqueal. A extremidade do
brnquio direito forma os ramos caractersticos do pulmo, mas no ocorre ramificao na
extremidade do brnquio esquerdo. (de
Wessells, 1970, cortesia de N. Wessells.)
Intestino delgado
Ceco mediano
Ceco
Neurulao
precoce
Intestino
grosso
Cloaca
Estgio do broto mediano
Figura 17.9
Especificao regional do mesoderma visceral

atravs de interaes com o endoderma do intestino posterior. A expresso e secreo de
Sonic hedgehog no endoderma gera um conjunto aninhado de expresso do gene Hox no
mesoderma adjacente. Aps o mesoderma ter
sido especificado, ele pode atuar sobre o tubo
endodrmico para induzir regies morfolgicas
especficas. (Segundo Roberts et al., 1995.)
666
Especificidade Gentica da Induo

Enquanto o mesnquima pode instruir o epitlio sobre quais conjuntos de genes
deve ativar, o epitlio responsivo somente pode obedecer a essa informao at o
ponto que seu genoma permitir. Em um experimento clssico, Hans Spemann e Oscar
Schott (1932) transplantaram ectoderma do flanco de uma gstrula precoce de r
para regio de uma gstrula de salamandra destinada a se tornar parte da boca. De
maneira semelhante, o tecido ectodrmico presuntivo do flanco de uma gstrula de
salamandra foi colocado na presuntiva regio oral de embries de rs. As estruturas da regio oral diferem muito entre as larvas de salamandras e rs. A larva da
salamandra Triturus tem equilibradores em forma de clava sob a boca, enquanto os
girinos de rs produzem glndulas secretoras de muco e sugadores (Figura 17.10).
Os girinos de rs tm tambm um maxilar cornificado sem dentes, enquanto a salamandra tem um conjunto de dentes de calcrio em sua mandbula. As larvas resultantes dos transplantes eram quimeras. As larvas da salamandra tinham bocas semelhantes s das rs, e os girinos de rs tinham dentes de salamandra e equilibradores.
Em outras palavras, as clulas mesodrmicas instruram o ectoderma a produzir uma
boca, mas o ectoderma respondeu produzindo a nica boca que saba como produzir, no importa quo inadequada.*
A mesma especificidade gentica encontrada em combinaes de pele de pinto e
pele de camundongo (Coulombre e Coulombre, 1971). Quando ectoderma normalmente destinado a se tornar crnea isolado de embries de pinto e combinado com
*Spemann reportado como tendo descrito dessa maneira: O ectoderma diz ao indutor, voc
me diz como produzir uma boca; est bem, assim o farei, porm, no posso produzir o seu tipo de
boca; s posso produzir a minha e isso farei. (Citado por Harrison, 1933.)
Doador
Hospedeiro
Resultado
rea do
presuntivo ectoderma oral
Gstrula
de r
Gstrula de
salamandra
Sugador
Salamandra com
sugadores de
girino de r
Figura 17.10
Especificidade gentica da induo. O transplante recproco entre as presuntivas regies

ectodrmicas orais das gstrulas da salamandra e da r conduz a larvas de salamandra com
sugadores de girino e girino de r com
equilibradores de salamandra. (Segundo
Hamburgh, 1970.)
Gstrula
de salamandra
Gstrula de R
Equilibradore
Girino de r com
equilibradores de
salamandra
667
Figura 17.11
(A)
(B)
mesoderma de pele de pinto, o ectoderma produz botes de penas tpicos da pele do

pinto. Alm disso, quando o mesmo tecido - ectoderma presuntivo da crnea -
combinado com ectoderma da pele de camundongo, botes de penas tambm aparecem (Figura 17.11). O mesoderma do camundongo instruiu a crnea do pinto a produzir uma estrutura cutnea. No camundongo, isso normalmente seria plo. O ectoderma
competente do pinto, porm, faz o melhor que pode, desenvolvendo suas estruturas
cutneas ou seja, penas.
Assim, as instrues enviadas pelo tecido mesenquimatoso podem atravessar
barreiras entre espcies. Salamandras respondem a sinais de rs, e tecido de pinto
responde a indutores de mamferos. A resposta do epitlio, porm, espcieespecfica. Enquanto a especificidade do tipo de rgo (pena ou garra) usualmente controlada pelo mesnquima dentro de uma espcie, a especificidade da espcie controlada
pelo epitlio responsivo. [prox2.html]
Cascatas de induo embrionria: Induo do cristalino

Os Fenmenos da Induo do Cristalino
As interaes entre clulas prximas provem um mecanismo pelo qual o desenvolvimento coordenado pode ocorrer, para um tecido responsivo tambm poder tornar-se
um tecido indutor. Estudos recentes mostraram que a induo secundria um processo muito complexo. Na verdade, o que tradicionalmente estivemos chamando de
indues secundrias usualmente so apenas a ltima induo em uma cascata que
comeou muito antes na embriognese, e muitos tecidos adquirem sua competncia
atravs de uma induo prvia. Embora esses tecidos possam parecer inalterados ao
microscpio, eles foram induzidos para poder responder a um novo indutor. Isso
provavelmente acontece nas indues epidrmicas mencionadas acima, e certamente
verdadeiro para a induo secundria mais estudada, a formao do cristalino.
O MODELO DO CLICE PTICO NA INDUO DO CRISTALINO. Conforme
discutido no Captulo 7, as clulas que formam o cristalino derivam da regio do

ectoderma da cabea que contatado pela vescula ptica do crebro anterior.
Esse trabalho pioneiro de Hans Spemann e sua reviso desses estudos em 1938,
tornaram a induo do cristalino o paradigma dos eventos indutivos secundrios.
Os experimentos bsicos foram como segue. Primeiro, quando Spemann (1901)
destruiu o primrdio da vescula ptica da r Rana temporaria, no ocorreu o
desenvolvimento do cristalino. Assim, Spemann conclui que o contato da vescula
ptica com o ectoderma acima dela foi essencial para a formao do cristalino.
Segundo, Warren Lewis (1904, 1907) confirmou e estendeu essa concluso. Ele
removeu vesculas pticas de nurulas de estgio tardio e transplantou-as para o
ectoderma da cabea de regies que usualmente no formariam cristalino. Ele achou
que o ectoderma da cabea dessa regio formaria ento estruturas semelhantes ao
Especificidade gentica da induo cutnea. (A)

Seo da regio corneana de um embrio de
pinto de 17 dias. Aos 5 dias de incubao, o
cristalino deste olho foi substitudo pela derme
do flanco de um embrio precoce de camundongo. Uma condensao de clulas embrionrias murinas est localizada diretamente sob
o epitlio do pinto. (B) Formao de penas a
partir do epitlio corneano de tal espcimen.
Clulas de camundongo esto presentes no rudimento das penas. (de Coulombre e Coulombre, 1971, cortesia de A. J. Coulombre.)
668
cristalino, e concluiu que a vescula ptica era suficiente para induzir a formao
de tecido do cristalino em ectoderma, que de outra maneira no o teria formado.
Pareceu que o contato com a vescula ptica era tudo o que era necessrio para
induzir cristalino no ectoderma sobrejacente.
DESACORDOS COM O MODELO DO CLICE PTICO. Houve dissidentes dessa
viso; Mencl (1908) notou que certos peixes tinham defeitos congnitos devido aos
quais no formavam olhos. Apesar disso, esses peixes tinham cristalino no seu
ectoderma da cabea. Mais importante, quando King (1905) tentou repetir os experimentos de Spemann, ele encontrou ao contrrio do esperado que o cristalino ainda se
formava mesmo quando rudimentos da vescula ptica tinham sido obliterados. Esses
e outros investigadores comearam a achar que os cristalinos podiam se formar sem
contato com a vescula ptica.*
medida que mais dados se acumulavam, pareceu que havia um alto grau de
diversidade de espcies. Algumas espcies pareciam formar cristalinos sem a necessidade de vesculas pticas, ao passo que em outras espcies, os cristalinos pareciam depender inteiramente do contato com essa vescula. Spemann (1938) reconciliou esses resultados argumentando que um organismo podia evoluir com uma margem de segurana, desenvolvendo duas maneiras de formar determinado tecido.
Assim, o cristalino normalmente se originaria pelo contato com a vescula ptica,
porm, essa falhando, poderia originar-se separadamente se assim ele tivesse que
fazer. Esse conceito foi chamado de hiptese da dupla segurana. Em 1966, Jacobson
integrou mais dados nesse modelo. Ele notou que o ectoderma formador do cristalino entra seqencialmente em contato com o endoderma presuntivo do intestino
anterior, o endoderma presuntivo do corao e a vescula ptica. Ele sugeriu que
cada um desses tecidos atuaria de uma maneira aditiva para induzir a formao do
cristalino nesse tecido. Em algumas espcies, o limiar para a induo do cristalino
seria baixo, e o contato com o ectoderma seria suficiente. Em outras, o limiar seria
alto, e todos os trs indutores teriam que estar ativos. Assim, a formao do cristalino parecia depender da vescula ptica, mas na realidade, essa seria somente o
ltimo dos trs indutores.
A Base Celular da Induo do Cristalino
Sem descartar o papel do mesoderma e endoderma, estudos recentes em Xenopus
enfatizam a importncia da placa neural anterior como um indutor precoce do
ectoderma do cristalino. Esses experimentos indicam que o ectoderma presuntivo
do cristalino recebe sua habilidade de tornar-se cristalino muito cedo durante o
desenvolvimento (durante os estgios de gstrula tardia para meia-nurula) e que a
vescula ptica apenas localiza a diferenciao desse tecido j autnomo. Em outras
palavras, o ectoderma da cabea formar cristalinos sem o contato do clice ptico,
mas esse necessrio para a completa diferenciao do cristalino e seu
posicionamento adequado em relao ao restante do olho. Este modelo (Figura
17.12; Saha et al., 1989; Grainger, 1992) divide a determinao do ectoderma do
cristalino em quatro estgios: competncia, propenso, determinao e diferenciao final. Competncia para responder ao sinal indutor inicial vista como um processo autnomo dentro do ectoderma, e a propenso para produzir cristalino
provida pela placa neural anterior. A especificao do cristalino ocorre ao tempo do
fechamento da placa neural, quando a vescula ptica se aproxima do ectoderma da
cabea, e a determinao final induzida pela vescula ptica.
*A interpretao desses experimentos foi extremamente difcil devido s diferenas especficas
nos mecanismos de induo, a temperatura na qual ocorre induo mxima, e a dificuldade de
conseguir pedaos de tecidos no contaminados para transplante. Veja Jacobson e Sater (1988) e
Saha et al. (1989, 1991) para revises sobre esses dissidentes e seus experimentos.
(A) Gstrula precoce

(competncia pr-cristalino)
Ectoderma
Mesoderma
(B)
Gstrula intermediria tardia

(competncia do cristalino)
Endoderma
rea da retina
rea
do cristalino
( C ) Nurula precoce
(vis de formao do cristalino)
Placa
neural
rea do cristalino
Ectoderma do
cristalino
(D)
Nurula tardia
(especificao do cristalino)
Tubo
neural
Vescula
ptica
Ectoderma
do cristalino
Crebro em
desenvolvimento
(E)
Girino jovem
(diferenciao do cristalino)
Clice ptico
Cristalino
COMPETNCIA ECTODRMICA E PROPENSO DO CRISTALINO. Em 1987,
Henry e Grainger demonstraram que a determinao da habilidade de formao do

cristalino ocorre muito precocemente no desenvolvimento de Xenopus. Eles transplantaram ectoderma de embries de Xenopus para a regio formadora do cristalino da
nurula. Seria esse ectoderma capaz de formar um cristalino quando contatado horas
mais tarde pela vescula ptica? Ectoderma de gstrulas muito jovens no foi competente. Porm, quando ectoderma de gstrula tardia foi transplantado para nurulas,
mostrou-se capaz de responder vescula ptica com a formao de um cristalino
(Tabela 17.2). Tecido algum respondeu dessa maneira. Outras regies ectodrmicas de
gstrulas tambm tinham uma habilidade limitada de formar cristalinos, porm, essa
era perdida durante o prosseguir do desenvolvimento.
Parecia, pois, que o ectoderma formador de cristalino alcanava a competncia
muito antes de ser contatado pela vescula ptica. Quando e como era alcanado
esse estado formador de cristalino? Experimentos por Nieuwkoop (1952) haviam
sugerido que um sinal da placa neural podia viajar atravs do ectoderma. Poderia a
placa neural induzir a epiderme presuntiva lateral, a se tornar ectoderma formador de
669
Figura 17.12
Um modelo corrente da induo do cristalino.

Os sinais indutivos esto indicados por setas.
(A) Na gstrula precoce, o ectoderma ainda
no alcanou a competncia para tornar-se cristalino (embora tenha competncia para tornarse tecido neural). (B) Durante a gstrula intermediria, o ectoderma formador do cristalino
torna-se competente para responder ao sinal
indutor do cristalino da presuntiva placa neural
(possivelmente as presuntivas clulas da retina). Durante a gstrula tardia, esse sinal do
ectoderma neuralizado (provavelmente a regio
presuntiva do olho) induz o presuntivo ectoderma formador do cristalino. Um sinal indutivo
adicional pode estar vindo do mesoderma
presuntivo ou do endoderma do intestino anterior. (C) Na nurula precoce, os sinais da regio neural anterior causaram o vis de formao do cristalino no ectoderma da cabea. Esse
sinal pode ser reforado pela induo do mesoderma lateral anterior. (D) No estgio de nurula
tardia, a vescula ptica contata o ectoderma
formador do cristalino, sinalizando a determinao final desse tecido em cristalino. (E) No
estgio de girino, o presuntivo ectoderma do
cristalino diferencia-se em tecido do cristalino.
(Segundo Saha et al., 1989; Grainger, 1992.)
670
Tabela 17.2
Aumento com a idade da capacidade responsiva do ectoderma prospectivo do cristalino

Operao
Estgio do
Doador
Doador
Nurula
hospedeira
Nmero
examinados
Cristalinos
induzidos
(%)
Corpo
semelhante
ao cristalino
%
Espessamento
ectodrmico
(%)
Corpo sem
cristalino
(%)
Sem
resposta
(%)
Total
positivo
Gstrula
intermediria
24
38
50
1 (4%)
Gstrula tardia
21
10
14
42
10
24
5 (24%)
Nurula precoce
24
75
13
20 (83%)
Nurula tardia
20
95
20 (100%)
Fonte: Segundo Henry e Grainger, 1987.
cristalino? Henry e Grainger (1990) testaram essa hiptese combinando a regio

prospectiva anterior da placa neural de embries em gstrula tardia com ectoderma
da regio que iria finalmente tornar-se cristalino. Enquanto o ectoderma isolado de
uma potencial regio formadora de cristalino no produzia protenas do cristalino
quando cultivado sozinho, a mesma regio produzia protenas do cristalino quando
cultivada prxima do tecido prospectivo da placa neural anterior. Embora a diferenciao do cristalino era freqentemente rudimentar, ela era muito especfica. As
protenas do cristalino no foram produzidas quando o ectoderma da gstrula foi
combinado com outros tecidos, incluindo o endoderma do intestino anterior ou o
mesoderma cardaco (Figura 17.13A). Esses experimentos mostram que a poro
anterior da prospectiva placa neural (a qual contm a futura regio da retina) fornece
um sinal que predispe esse tecido a se tornar o cristalino.
Porm, todos os tecidos so capazes de responder a um sinal vindo da placa
neural anterior? Servetnick e Grainger (1991) mostraram que somente o ectoderma
de gstrula intermediria gstrula tardia competente para responder a esses
sinais. Eles removeram ectodermas do hemisfrio animal pigmentado de vrios
estgios de gstrula e transplantaram-nos para a regio presuntiva do cristalino
de embries em estgio de placa neural (Figura 17.13B). O ectoderma de gstrulas
precoces mostrou pouca ou nenhuma competncia para formar cristalinos (quando testado por meio da produo de protenas cristalinas), porm, o ectoderma de
estgios um pouco mais tardios foi capaz de formar cristalinos. No fim da gastrulao, essa capacidade de responder ao sinal da placa neural tinha se perdido.
Essa competncia foi verificada ser inerente ao prprio ectoderma e no ser induzida
por outros tecidos circunjacentes. O ectoderma do hemisfrio animal pigmentado
de vrios estgios embrionrios podia ser removido, cultivado in vitro por certos
perodos, e colocado novamente em embries no estgio de placa neural. Tal
ectoderma mostrou o mesmo padro de competncia, apesar de ter permanecido
durante parte de seu desenvolvimento em uma placa de Petri. Parece, portanto,
que o ectoderma adquire a competncia de responder a sinais indutores da placa
neural anterior nos estgios precoces da gstrula intermediria, e que durante a
gstrula tardia, a placa neural anterior induz um vis na formao do cristalino
nesse tecido. Esse vis pode ser demonstrado transplantando-se o tecido para
outras regies da cabea e tornando-o cristalino (enquanto o ectoderma dos estgios anteriores no pode faz-lo).
DETERMINAO E DIFERENCIAO DO CRISTALINO. A determinao do cris-
talino pode ser mostrada isolando-se ectoderma e cultivando-o separado do embrio.

No momento do fechamento do tubo neural, o ectoderma das regies laterais do
(A) FONTE DE ATIVIDADE PRECOCE INDUTIVA DE CRISTALINO

Indutor
Operao
putativo
Figura 17.13
Resposta do
cristalino
Endomesoderma
lateral
Cultura
Placa
neural
Cultura
(B) DETERMINAO DO PERODO COMPETENTE DO CRISTALINO
Estgio
Operao
671
Resposta
do cristalino
Gstrula
precoce
Gstrula
intermediria
Gstrula
tardia
crebro anterior ir dar origem pequenos cristalinos, mesmo sob essas condies. O
clice ptico no contatou ainda esse tecido, mostrando que no crtico para a
induo do cristalino em Xenopus. Porm, ele exerce uma funo em capacitar o fentipo
completo do cristalino para ser expresso. Os cristalinos que se formam na ausncia da
vescula ptica so em geral muito rudimentares. No conhecido se a influncia da
vescula ptica diretamente positiva, promovendo a diferenciao do placdio do
cristalino para um cristalino totalmente diferenciado, ou se tal influncia se d removendo um inibidor da diferenciao do cristalino. Foi proposto (von Woellwarth, 1961;
Henry e Grainger, 1987) que as clulas da crista neural impedem a diferenciao do
cristalino e que o contato com a vescula ptica serve como escudo do placdio do
cristalino, frente a esses sinais inibidores.
Determinao precoce da capacidade formadora do cristalino do ectoderma de Xenopus. (A)

A fonte do sinal formador do cristalino foi achada ser a placa neural anterior. O ectoderma
presuntivo do cristalino foi cultivado com ou
sem endoderma lateral/mesoderma, ou com a
placa neural anterior (os dois principais tecidos
a ele adjacentes). O ectoderma somente formou protenas do cristalino quando cultivado
com a placa neural. (B) O perodo no qual as
clulas da placa neural anterior podiam induzir
competncia no ectoderma foi determinado
transplantando ectoderma presuntivo de
gstrulas de doadores de estgio diferente para
a regio formadora do cristalino da nurula.
Somente o ectoderma de embries em gstrula
intermediria foi competente para responder aos
sinais. (Segundo Grainger, 1992.)
672
O fator de transcrio Pax6 participa de vrias maneiras nos processos de determinao e diferenciao do tecido ocular. Mutantes homozigotos Pax6 de humanos,
camundongos, ratos e moscas no tm olhos. O ectoderma do embrio de ratos deficientes em Pax6 incapaz de tornar-se cristalino, mesmo quando cultivado com
vesculas pticas de embries de tipo selvagem. O ectoderma da cabea no foi determinado por sinais anteriores da placa neural ou do mesoderma (Fujiwara et al., 1994).
Pax6 tambm crtico para a expresso das cristalinas cristalino. No somente so
vistos stios ligantes de Pax6 nas regies reguladoras de vrios genes do cristalino,
mas a expresso especfica do cristalino dessas protenas depende da expresso de
Pax6 (Cvekl et al., 1995; Richardson et al., 1995).
O cristalino est situado entre as cmaras anterior e vtrea do olho, e acreditase que sua diferenciao (discutida no Captulo 7) seja mediada por fatores de
crescimento emanando dessas duas cmaras. A cmara anterior parece concentrar
uma protena mitognica (cuja identidade permanece desconhecida) que especfica para causar mitose e inibir a diferenciao no epitlio formador do cristalino.
Essa protena tida como proveniente dos capilares sangneos para a cmara
anterior. Na cmara vtrea, FGF1 e 2 estimulam o alongamento e a diferenciao das
clulas do cristalino e bloqueiam a atividade mitognica do fator de crescimento
da cmara anterior (Hyatt e Beebe, 1993; Schulz et al., 1993). O resultado o
alongamento daquelas clulas do cristalino na superfcie dorsal do placdio do
cristalino, e a continuada proliferao de clulas no lado ventral do placdio do
cristalino (Figura 17.14).
Formao da Crnea
Aps ter invaginado, o placdio do cristalino fica coberto por duas camadas
de clulas do ectoderma adjacente. Agora, o cristalino em desenvolvimento pode
atuar como um indutor. O ectoderma destinado a se tornar crnea, provavelmente
j havia sido determinado durante um estgio anterior do desenvolvimento (Meier,
1977). Agora, a diferenciao da crnea ocorre sob influncia do cristalino. O
ectoderma sobrejacente torna-se colunar e se enche de grnulos secretores. Esses grnulos migram para a base das clulas e secretam um estroma primrio contendo cerca de 20 camadas de colgeno dos tipos I e II (veja Figura 17.14). As
clulas endoteliais vizinhas migram para essa regio (no estroma primrio) e
secretam cido hialurnico para essa matriz. O cido hialurnico faz com que a
matriz se expanda e se torne um bom substrato para a migrao de duas ondas de
clulas mesenquimatosas derivadas da crista neural. Ao penetrar a matriz, a segunda onda dessas clulas a permanece, secretando colgeno do tipo I e
hialuronidase. Essa causa o encolhimento do estroma. Sob a influncia da tiroxina
da glndula tireide em desenvolvimento, esse estroma secundrio desidratado,
e a matriz rica em colgeno dos tecidos epitelial e mesnquima, transforma-se na
crnea transparente (veja Hay, 1980; Bard, 1990).
Podemos ver, assim, que simples interaes indutivas so na realidade dramas
bem coordenados, nos quais os atores tm que vir ao palco e falar seus trechos no
momento e posio corretos. Por adquirir nova informao, elas podem tambm transmitir informaes para outros usarem. Tendo isso em mente, ns podemos agora
passar a estudar alguns dos princpios sobre a induo secundria, obtidos de outros
rgos em desenvolvimento.
Formao de rgos parenquimatosos

As interaes epitlio-mesnquima so tambm vistas na formao de rgos formadores de dutos, como o rim, fgado, pulmo, glndula mamria e pncreas. Na formao desses rgos, notamos a induo recproca do mesnquima atuando sobre o
epitlio e vice-versa.
Figura 17.14
Cristalino
Borda do
clice ptico
Mesnquima
da cabea
Vtreo
Clice ptico induz a formao do

cristalino
Cmara anterior
Epitlio
Fatores de crescimento das cmaras
anterior e vtrea fazem com que as
clulas dorsais se diferenciem e as
clulas ventrais se proliferem
Mesnquima
Cmara vtrea
Endotlio
Epitlio
corneano
Mesnquima
O cristalino induz o ectoderma
sobrejacente em epitlio colunar e
secretor
Estroma
primrio
Mesnquima
Grnulos induzidos secretam estroma

primrio contendo colgeno
Endotlio
Estroma
primrio
Cristalino
Mesnquima
Clulas endoteliais entram e secretam cido hialurnico, levando o

estroma a engrossar; clulas mesenquimatosas entram
Epitlio
Cristalino
673
Estroma secundrio Secrees das clulas mesenquimatosas levam o estroma a encolher; sob
Endotlio
a influncia de tiroxina o estroma
ir finalmente tornar-se crnea
Morfognese do Rim de Mamfero

A PROGRESSO DOS TBULOS RENAIS. Como o olho, o rim mamfero uma
estrutura extraordinariamente intrincada. Sua unidade funcional, o nefro, contm mais

de 10.000 clulas de no mnimo 12 tipos diferentes, cada tipo localizado em um espao
particular em relao aos outros ao longo do nefro. O desenvolvimento do rim mamfero progride atravs de trs estgios. No incio do desenvolvimento (dia 22 em humanos, dia 8 em camundongos), o duto pronfrico surge no mesoderma intermedirio
imediatamente ventral aos somitos anteriores. As clulas desse duto migram
caudalmente, e a regio anterior do duto induz o mesnquima adjacente a formar os
tbulos pronfricos do rim (Figura 17.15 A). Embora os tbulos pronfricos formam
rins funcionais em peixes e em larvas de anfbios, eles so considerados inativos em
amniotas mamferos. Em mamferos, os tbulos pronfricos e a poro anterior do duto
pronfrico degeneram, mas as pores mais caudais do duto persistem tornando-se o
Desenvolvimento corneano e do cristalino. O

clice ptico induz a determinao final do cristalino. Protenas mitognicas (setas pretas) na
cmara anterior mantm uma linha de clulas
em proliferao na superfcie ventral do cristalino, enquanto fatores de crescimento fibroblstico (setas coloridas) estimulam a diferenciao do epitlio dorsal do cristalino. Sob a influncia indutiva do cristalino, o epitlio corneano
se diferencia e secreta estroma primrio consistindo em camadas de colgeno; clulas
endoteliais ento secretam cido hialurnico para
essa regio, permitindo a entrada de clulas
mesenquimatosas da crista neural. Em seguida, a hialuronidase (secretada pelo mesnquima ou pelo endotlio) digere o cido hialurnico,
levando o estroma primrio a se encolher. (Segundo Hay e Revel, 1969; Hyatt e Beebe, 1993.)
674
(A)
(B)
(C)
(D)
Tbulos
mesonfricos
Prnefros
Duto nfrico
Cordo
nefrognico
Gnada
Gnada
Mesonefros
Mesonefros
Duto nfrico
(Wolffiano)
Cordo nefrognico
Mesnquima
metanefrognico
Cloaca
Broto uretrico
Duto nfrico
Mesnquima
metanefrognico
Ureter
Figura 17.15
Esquema geral do desenvolvimento do rim vertebrado. (A) Os tbulos originais, constituindo o rim pronfrico, so induzidos a partir do
mesnquima nefrognico pelo duto pronfrico
migrando caudalmente. (B) medida que o
prnefro de degenera, formam-se os tbulos
mesonfricos. (C) O rim mamfero final, o
metanefro, induzido pelo broto uretrico. (D)
Seo de um rim de camundongo mostrando a
iniciao do rim mesonfrico (abaixo) enquanto o mesonefro ainda est aparente. O tecido do
duto est corado com um anticorpo fluorescente para citoqueratina encontrada no duto mesonfrico e seus derivados. ( A-C segundo Saxn,
1987; D cortesia de S. Vainio.)
componente central do sistema excretor atravs de todo seu desenvolvimento

(Toivonen, 1945; Saxn, 1987). Esse duto remanescente freqentemente referido
como duto nfrico ou Wolffiano.
medida que os tbulos pronfricos degeneram, a poro mediana do duto
nfrico inicia um novo conjunto de tbulos renais no mesnquima adjacente.
Esse conjunto de tbulos constitui o mesonefro, ou rim mesonfrico. No ser
humano, comeando ao redor do dia 25, formam-se cerca de 30 tbulos
mesonfricos. Porm, medida que mais tbulos so induzidos caudalmente, os
tbulos mesonfricos anteriores comeam a regredir (embora em camundongos,
os tbulos anteriores permanecem, ao passo que os posteriores regridem; Figura 17.15B). Em fmeas de mamferos essa regresso completa. Porm, como
discutiremos no Captulo 20, alguns desses tbulos mesonfricos persistem em
machos para se transformar em tubos carreadores de espermatozide (vasos
deferentes e dutos deferentes) dos testculos.
O rim permanente dos aminotas, o metanefro, gerado por alguns dos mesmos
componentes dos tipos anteriores transitrios do rim, e acredita-se ser originado
atravs de uma complexa interao entre componentes mesenquimatosos e epiteliais
do mesoderma intermedirio. Nos dois primeiros passos, o mesnquima
metanefrognico se forma em regies localizadas posteriormente do mesoderma
intermedirio, e induz a formao de um ramo de cada um dos dutos nfricos
pareados. Esses tubos epiteliais so chamados de brotos uretricos. Esses brotos
finalmente se separam do duto nfrico para tornarem-se os ureteres que levam a
urina para a bexiga. Quando os brotos uretricos emergem do duto nfrico, entram
no mesnquima metanefrognico. No terceiro e quarto passos, os brotos uretricos
induzem esse tecido mesenquimatoso a se condensar ao redor dos brotos e se
diferenciar nos nefros do rim dos mamferos. O quinto passo da iniciao renal
ocorre quando esse tecido formador do nefro induz a ramificao adicional do
broto uretrico (Figura 15C,D).
675
Dutos
coletores
Mesnquima
Metanefrognico
Ureter
Broto
uretrico
Ureter
Tbulos
Renais
Tbulo distal
Mesnquima
Broto
Uretrico
Tbulo
Proximal
Corpo com
forma de S
Cpsula de
Bowman do
glomrulo
Clulas
endoteliais
Figura 17.16
INDUO RECPROCA DURANTE O DESENVOLVIMENTO RENAL. Esses dois
tecidos mesodrmicos, o broto uretrico e o mesnquima metanefrognico interagem

e induzem um ao outro reciprocamente (Figura 17.16). O mesnquima metanefrognico
leva o broto uretrico a se alongar e se ramificar. Na ponta dessas ramificaes, o broto
uretrico induz as clulas mesenquimatosas frouxas a formarem um agregado epitelial.
Cada agregado de cerca de 20 clulas prolifera-se e se diferencia na intrincada estrutura do nefro renal. Primeiro, cada ndulo se alonga tomando a forma de uma vrgula,
formando em seguida o caracterstico tubo em forma de S. Logo em seguida formao do tubo em forma de S, as clulas desse epitlio comeam a se diferenciar em tipos
regionais de clulas especficas, como as clulas da cpsula, os podcitos e as clulas
dos tubos renais distal e proximal. Nesse perodo, desenvolve-se uma conexo entre o
broto uretrico e o tubo recm-formado que permite a passagem de material de um para
o outro. Os tubos recm-formados derivados do mesnquima formam os nefros
secretores do rim funcional, e o broto uretrico ramificado d origem aos dutos coletores renais e ao ureter, que drena a urina do rim.
Clifford Grobstein (1955, 1956) documentou essa induo recproca, in vitro. Ele
separou o broto uretrico do mesnquima e cultivou-os individualmente ou em conjunto. Na ausncia do mesnquima, os brotos uretricos no se ramificam. Na ausncia do broto uretrico, o mesnquima logo morre. Quando eles so colocados juntos,
porm, o broto uretrico cresce e se ramifica, e tbulos se formam atravs do
mesnquima (Figura 17.17). Embora certos outros tecidos (em especial o tubo neural)
permitam ao mesnquima metanefrognico formar tbulos renais, o broto uretrico
somente se ramifica sob instrues do mesnquima metanefrognico. Mesnquimas
que induzem ramificao em outros epitlios (tais como a glndula salivar) no induziro a ramificao do broto uretrico (Bishop-Calame, 1996).
Induo recproca no desenvolvimento do rim

dos mamferos. medida que o broto
uretrico penetra no mesnquima metanefrognico, esse o induz a se ramificar. Nas extremidades dos ramos, o epitlio induz o mesnquima a se agregar e cavitar para formar os
tbulos renais. A formao de nefro a partir
das clulas mesenquimatosas mostrada na
insero. Aps se agregar nos ramos, as clulas mesenquimatosas formam um ndulo
epitelial que se estende em um tubo em forma
de S, e se funde com o epitlio do broto
uretrico. (Insero segundo Romanoff, 1960.)
676
Tbulos renais
(A)
Dutos coletores
(B)
Figura 17.17
Induo de rim estudada in vitro. (A) Um rudimento metanfrico do

camundongo de 11 dias inclui tanto o broto uretrico como o mesnquima metanefrognico. (B) Aps o primeiro dia em cultura,
podem ser vistos tbulos nas extremidades dos ureteres em ramificao. (C) Os dutos coletores ramificados formados pelo broto
uretrico e os tbulos renais formados pelas condensaes mesenquimatosas nas extremidades desses brotos podem ser claramente
vistos aps 8 dias de cultura. (A e B de Saxn e Sariola, 1987; C de
Grobstein, 1955; todas fotografias cortesia dos autores.)
(C)
Os primeiros nefros metanfricos so, ento, imediatamente ligados aos dutos

coletores. medida que o ureter continua a crescer, esses nefros so levados em
direo externa para o mesnquima metanefrognico (Figura 17.18A). Os terminais
dos brotos uretricos, porm, conservam sua capacidade de induzir a formao dos
tbulos nesse mesnquima, e o resultado a formao de arcadas tubulares (Figura
17.18B). medida que o ramo uretrico migra atravs do mesnquima, so formados
novos nefros que se renem no mesmo duto coletor (Figura 18.18C; Osathanondh e
Potter, 1963).
Os Mecanismos da Organognese Renal
Parece haver ao menos seis conjuntos de sinais operando na induo recproca do
metanefro.
SINAL 1: FORMAO DO MESNQUIMA METANEFROGNICO. Uma coisa
afirmar que o broto uretrico induz o mesnquima metanefrognico a se tornar o

epitlio dos nefros. Outra compreender como esse processo ocorre. Tal como o
desenvolvimento do cristalino pela vescula ptica, considera-se que a induo do
mesnquima metanefrognico pelo broto uretrico seja apenas a ltima etapa que
engatilha uma cascata de eventos no mesnquima competente. Somente o mesnquima metanefrognico tem a capacidade de responder ao broto uretrico para formar
tbulos renais; se induzido por outros tecidos (tais como a glndula salivar ou o tubo
neural embrionrios), o mesnquima metanefrognico ir responder formando tbulos
renais e nenhuma outra estrutura (Saxn, 1970; Sariola et al., 1982). Assim, o mesnquima metanefrognico no pode tornar-se qualquer outro tecido que seno os tbulos
renais. A competncia para responder a indutores do broto uretrico considerada ser
regulada por WT1, um fator de transcrio encontrado no mesnquima metanefrognico; e se esse mesnquima no tiver esse fator, as clulas no-induzidas morrem
(Kriedberg et al., 1993). A hibridizao in situ mostra que Wt1 normalmente primeiro
expressa no mesoderma intermedirio antes da formao do rim, sendo depois expressa no rim em desenvolvimento, gnadas e mesotlio (Pritchard-Jones et al., 1990; van
Heyningen et al., 1990; Armstrong et al., 1992). Embora esse mesnquima parea ser
homogneo, o mesnquima metanefrognico, pode conter tanto tecido derivado do
677
Broto uretrico
(A)
Mesnquima
condensando
Glomrulo
(B)
Ureter
(C)
mesoderma como algumas clulas originrias da crista neural (Le Douarin e Tiellet,
1974; Sariola, 1989; Sainio et al., 1994).
SINAL 2: FORMAO DO BROTO URETRICO. O segundo sinal no desenvol-
vimento do rim um conjunto de molculas difusivas que causa o crescimento de

dois brotos uretricos dos dutos nfricos. Pesquisas recentes mostraram que o
fator neurotrfico derivado da glia (GDNF), um componente crtico desse sinal. O
GDNF sintetizado no mesnquima metanefrognico, e camundongos cujos genes
gdnf foram eliminados morrem logo aps o nascimento em conseqncia da falta de
rins (Moore et al., 1996; Pichel et al., 1996; Snchez et al., 1996). O receptor GDNF (a
protena c-Ret) sintetizado nos dutos Wolffianos e posteriormente se concentra
nos brotos uretricos em crescimento (Figura 17.19: Schuchardt et al., 1996; Trupp
et al., 1996). Camundongos carentes de GDNF tambm morrem em conseqncia de
agnese renal. Outra protena sintetizada pelo mesnquima metanefrognico o
fator de crescimento heptico (HGF; fator de espalhamento); o receptor de HGF
produzido pelos brotos uretricos. Anticorpos contra HGF bloqueiam o crescimento
expansivo dos brotos uretricos em rudimentos renais em cultura (Santos et al.,
1994; Woolf et al., 1995). A sntese de GDNF e HGF pelo mesnquima considerada
ser regulada pelo gene WT1.
Em outra mutao murina, o mutante Danforth short-tail, o broto uretrico iniciado mas no penetra no mesnquima metanefrognico (Gluecksohn-Schoenheimer,
1943). Aqui, tambm, o rim no se forma. A falta de crescimento dos brotos uretricos
tem sido correlacionada com a ausncia da expresso Wnt11 nas extremidade do broto
uretrico. A expresso de Wnt11 mantida por proteoglicanos produzidos pelo
mesnquima. Parece que uma vez que o broto entra na regio mesenquimatosa, os
proteoglicanos mesenquimatosos estimulam seu contnuo crescimento mantendo a
expresso e secreo de Wnt11 (Davies et al., 1995; Kispert et al., 1996).
SINAL 3: PREVENO DA APOPTOSE MESNQUIMA. O terceiro sinal envia-
do do broto uretrico ao mesnquima, e altera o destino das clulas mesenquimatosas.

Se deixadas no induzidas pelo broto uretrico, as clulas mesenquimatosas sofrem
apoptose (Koseki et al., 1992). Porm, se induzidas pelo broto uretrico, as clulas
Figura 17.18
Representao esquemtica do desenvolvimento do nefro humano. (A) Formao de

nefros precoces diretamente ligados ao epitlio
do broto uretrico. (B) Formao de arcadas
de nefros nas quais vrios nefros so ligados
ao mesmo duto coletor. (C) O arranjo geral
dos nefros humanos no nascimento. Os nefros
mais profundos constituem uma arcada, enquanto os nefros mais prximos da superfcie
esto diretamente conectados aos dutos coletores do ureter. (Segundo Osathanondh e
Potter, 1963.)
678
Duto
Wolffiano
Duto Wolffiano
Broto
uretrico
Broto
uretrico
Duto
Wolffiano
(A)
(B)
Receptor
Ret
Mesnquima
metanefrognico
(C)
Duto
Wolffiano
Receptor
Ret
Broto
uretrico
(D)
Figura 17.19
O crescimento do broto uretrico depende de

GDNF (fator neurotrfico derivado da glia) e
seu receptor. (A) O broto uretrico do rim de
um embrio murino do tipo selvagem de 11,5
dias cultivado durante 72 horas tem padro de
ramificao caracterstico. (B) Em camundongos embrionrios heterozigotos para os genes
codificando GNDF, o tamanho do broto
uretrico e o nmero e comprimento de seus
ramos est reduzido. (C) Em camundongos sem
ambas cpias dos genes gdnf, o broto uretrico
no se forma a partir do duto Wolffiano. (D)
Os receptores para GDNF esto concentrados
na poro posterior do duto Wolffiano. O
GDNF secretado pelo mesnquima metanefrognico estimula o crescimento do broto uretrico
desse duto. Em estgios posteriores, o receptor de GDNF somente encontrado nas extremidades dos brotos uretricos. Barras de escala iguais a 100m. (A-C de Pichel et al., 1996;
fotografias cortesia de J. G. Pichel e H. Sariola;
D segundo Schuchardt et al., 1995.)
mesenquimatosas so salvas do precipcio da morte e so convertidas em clulas

germinativas em proliferao (Bard e Ross, 1991; Bard et al., 1996). Os fatores
secretados do broto uretrico incluem o fator 2 de crescimento fibroblstico (FGF2)
e a protena morfogentica 7 do osso (BMP7). O FGF2 tem trs modos de ao,
inibindo a apoptose, promovendo a condensao de clulas mesenquimatosas e
mantendo a sntese de WT1 (Perantoni et al., 1995). O BMP7 tem efeitos semelhantes, e na ausncia de BMP7, o mesnquima do rim sofre apoptose (Figura 17.20;
Rim
Glndula
Supra-renal
Rim
Figura 17.20
Malformao renal em um embrio de camundongo deficiente em BMP7. No dia embrionrio 19,

os rins mutantes so significativamente menores que aqueles dos embries tipo selvagem. (de
Dudley et al., 1995; fotografia cortesia de E. J. Robinson.)
679
Figura 17.21
O proteoglicano syndecan da matriz extracelular no sintetizado ou secretado por clulas do mesnquima at aps a induo. Essa
molcula provavelmente est envolvida na
estruturao do novo epitlio tubular, e distingue as clulas do tbulo, do mesnquima
remanescente. (A) Colorao imunolgica de
syndecan mostra sua presena nas clulas
mesenquimatosas recm-induzidas (T) que esto se tornando epiteliais. Alguma colorao
(U) tambm vista no epitlio do broto
epitelial. (B) Colorao intensa de syndecan
vista na regio tubular em desenvolvimento
que ir se tornar o glomrulo renal (G). (de
Vainio et al., 1989, cortesia de L. Saxn.)
(A)
(B)
Dudley et al., 1995; Luo et al., 1995). As clulas mesenquimatoses induzidas tambm
sintetizam receptores para o fator de crescimento epidrmico e o fator de crescimento neural, e podem responder essas protenas com a proliferao.
SINAL 4: CONVERSO DE CLULAS MESENQUIMATOSAS EM EPITLIO. O
broto uretrico causa mudanas dramticas na matriz extracelular das clulas do
mesnquima metanefrognico. O mesnquima no-induzido secreta uma matriz extracelular consistindo predominantemente de fibronectina e colgenos dos tipos I e II.
Aps a induo, essas protenas desaparecem e so substitudas por uma lmina
epitelial basal feita de laminina e colgeno do tipo IV. As alteraes na matriz extracelular parecem ser crticas para formao dos tbulos, pois o mesnquima induzido
secreta um receptor para laminina que permite sua participao na formao epitelial
(Ekblom et al., 1994). O citoesqueleto tambm muda de uma caracterstica de clulas
mesenquimatosas para um tpico de epitlio (Ekblom et al., 1983, Lehtonen et al., 1985).
Dessa maneira, as clulas mesenquimatosas frouxas so ligadas umas s outras como
um epitlio polarizado sobre uma lmina basal.
Antes dessas mudanas o mesnquima metanefrognico rcem-induzido sintetiza duas protenas adesivas, E-caderina e Syndecan. A Syndecan um proteoglicano
primeiro notado ao redor das clulas mesenquimatosas envolvendo o broto uretrico
quando entra na regio do mesnquima. Quando o broto inicia sua primeira ramificao, toda a regio mesnquima ao redor do ramos se cora positivamente para
Syndecan (Figura 17.21). O mRNA de Syndecan est presente no mesnquima renal
no-induzido, mas no traduzido em protena a no ser que o mesnquima seja
induzido (Figura 17.22; Vainio et al., 1989a, 1992). No s pode Syndecan regular a
condensao do mesnquima em um epitlio, como pode tambm promover a proliferao dessas clulas. Por marcao de clulas em proliferao com bromodeoxiuridina (que incorporada em DNA somente em clulas em diviso) e marcando as
clulas expressando Syndecan com anticorpos fluorescentes essa protena, Vainio
e colegas (1992) demonstraram uma estreita correlao entre as clulas em diviso e
aquelas expressando Syndecan.
Alm disso, o fator de transcrio Pax2 sintetizado no mesnquima induzido.*
Quando o RNA antisenso ao Pax2 previne a traduo do mRNA de Pax2 que transcrito em resposta induo, as clulas do mesnquima de rudimentos de rim em
cultura, deixam de se condensar (Rothenpieler e Dressler, 1993). [prox3.html]
* Pax2 tem vrios papis durante o desenvolvimento renal. Sua funo mais crtica ocorre at
mesmo antes da converso do mesnquima, pois parece que o Pax2 pode ser importante na
especificao do mesoderma intermedirio. Em mutantes de Pax2 de camundongo no se forma o
sistema urogenital (Torres et al., 1995).
680
Figura 17.22
(A)
Induzido
Syndecan isolado (contagem/min)
Expresso de syndecan em mesnquimas renais induzidos e no-induzidos.

(A) Hibridizao in situ localizando
mRNA de syndecan nos agregados
mesenquimatosas de um rim embrionrio de camundongo de 15 dias. A visualizao da auto-radiografia feita por
iluminao de campo escuro. (B) Mesnquima renal isolado (M) induzido por
medula espinhal (SPC) mostra expresso intensa de syndecan aps colorao
com anticorpos ao syndecan, fluorescentes. O mesnquima no-induzido no
o faz. (C) A quantidade de syndecan
(marcado com enxofre radioativo) isolada de um mesnquima induzido de rim
dez vezes maior que aquela isolada de
um quantidade semelhante de mesnquima no-induzido. (Segundo Vainio et
al., 1992, cortesia de S. Vainio.)
No-induzido
(B)
(C)
Uma vez induzido e aps ter comeado a se condensar, o mesnquima comea a

secretar Wnt4, que atua de uma maneira autcrina para completar a transio de massa
do mesenquimatosas para o epitlio (Stark et al., 1994). A expresso de Wnt4 detectada nas clulas mesenquimais em condensao e nos agregados em forma de vrgula.
No agregado em forma de S, ele encontrado na regio na qual as clulas rcemepitelizadas se fundem com as pontas do broto uretrico. Em camundongos sem os
genes Wnt4, o mesnquima permanece indiferenciado morfologicamente, no se formando agregados pr-tubulares.
SINAL 5: CONVERSO DAS CLULAS AGREGADAS EM UM NEFRO. No
quinto estgio da formao do rim, o epitlio condensado especificado em

diferentes tipos celulares do nefro; e os genes responsveis pela especificao
celular esto ativados. Nos ltimos anos foram encontrados trs genes cujos
produtos podem ser importantes para essa especificao. O primeiro o gene
para protena gap da juno, Conexina 43. Essa protena vista no mesnquima
condensado e conecta as clulas do corpo em forma de S (Sainio et al., 1992). O
segundo gene o Pax2, que est ativo no mesnquima condensado e desligado quando as clulas se diferenciam. Se ele permanecer ativo, os podcitos, os
glomrulos e as clulas tubulares proximais se formam de maneira anormal
(Dressler et al., 1993). O terceiro gene codifica o receptor de baixa afinidade do
fator de crescimento nervoso, NGFR. Esse fator est ausente no mesnquima
no condensado, mas se apresenta em abundncia nas clulas condensadas que
posteriormente formam os nefros. Quando oligonucletidos antisenso para o

NGFR foram adicionados a rudimentos renais em cultura, as clulas condensadas
deixaram de formar tbulos renais (Figura 17.23; Sariola et al., 1991). O sinal que
converte agregados em nefros no conhecido.
SINAL 6: O CRESCIMENTO CONTNUO DO BROTO URETRICO E A DIFERENCIAO DO NEFRO. Aps as interaes iniciais terem criado os primeiros agrega-
dos, as clulas do mesnquima metanefrognico perto da margem renal comeam a

proliferar para formar clulas germinativas. Essas clulas podem interagir com os ramos do broto uretrico para formar novos nefros, ou podem produzir clulas do estroma.
Essas clulas migram para a parte central do rim e produzem fatores (ainda desconhecidos) que (1) permitem o crescimento contnuo do broto uretrico e (2) estimulam a
diferenciao do nefro em tbulos renais convolutos, ala de Henle, glomrulos e
aparelho justaglomerular. O fator de transcrio BF2 sintetizado nessas clulas
estromticas, e quando eliminado de embries de camundongo, o rim resultante no
tem a rvore uretrica ramificada (ramifica somente trs ou quatro vezes em lugar de
sete ou oito, resultando em uma reduo de 8 a 16 vezes no nmero de ramos), e os
agregados no se diferenciam em nefros (Hatini et al., 1996). Assim, parece que os
fatores necessrios para essas duas funes so sintetizados pelas clulas do estroma
e regulados pelo fator de transcrio BF2.
Existe tambm evidncia que interaes recprocas entre o broto uretrico e o
mesnquima metanefrognico podem ser crticas para a manuteno dessas clulas
estromticas. A combinao de FGF2 e um meio condicionado de linhagens celulares
do broto uretrico do rato capaz de induzir a completa diferenciao de nefros no
mesnquima metanefrognico isolado. O FGF2 necessrio para induzir a agregao
de clulas mesenquimatosas, porm as substncias secretadas para o meio de cultura
pelas clulas do broto uretrico so capazes de transformar esses agregados em nefros
(Karavonova et al., 1996). provvel que os fatores do broto uretrico (que permanecem no identificados) estimulam as clulas estromticas a produzirem seus fatores
(que tambm permanecem no identificados), de modo que o agregado possa se diferenciar em nefro e assim as ramificaes podem continuar a crescer. A identificao
desses fatores tornou-se um dos novos focos de importncia para a biologia do
desenvolvimento (Bard, 1996).
(A)
(B)
(C)
Figura 17.23
Papel do receptor NGF de baixa afinidade na morfognese do rim. (A) Hibridizao in situ mostra a localizao de
mRNA de NGFR nos mesnquimas condensados de um rim embrionrio de rato de 18 dias. (B) Maior aumento do
padro de ramificao do broto uretrico (corado com anticorpos para uma citoqueratina epitelial especfica) em rim de
13 dias cultivado durante 5 dias, in vitro. (C) Broto uretrico de um rim igual aquele em (B) mas cultivado em presena
de oligonucletidos antisenso ao mRNA de NGFR . (de Sariola et al., 1991, cortesia de H. Sariola.)
681
682
&
Especulaes
Diferenciao Coordenada e Morfognese no Dente
URANTE A MORFOGNESE de
qualquer rgo ocorrem numerosos dilogos entre os tecido em
interao. Nas interaes epitlio-mesnquima, o mesnquima influencia o epitlio;
o tecido epitelial, uma vez modificado pelo
mesquima, pode secretar fatores que alteram o mesnquima. Tais interaes continuam at que seja formado um rgo com
clulas mesenquimatosas especficas do
orgo e epitlio especfico. A identificao
das substncias envolvidas nessas conversas inter-tissulares est sendo estudada em diversos laboratrios. Algumas das
interaes mais investigadas so aquelas
que formam os dentes dos mamferos. Aqui,
o epitlio da mandbula se diferencia em
ameloblastos, enquanto as clulas mesenquimatosas derivadas da crista neural se tornam os odontoblastos secretores da dentina.
Em primeiro lugar, o epitlio faz com
que o mesnquima se agregue em locais
especficos. Nesse momento, o epitlio
possui o potencial de gerar estruturas
dentais a partir de vrios tipos de clulas
mesenquimatosas (Mina e Kollar, 1987;
Lumsden, 1988). Porm, esse potencial
de formao do dente logo transferido
para o mesnquima que se agrega abaixo
dele. Essas clulas mesenquimatosas
formam a papila dental e so agora capazes de induzir a morfognese dental em
outros epitlios (Kollar e Baird, 1970).
Nesse estgio, o epitlio maxilar perdeu
sua capacidade de instruir a formao do
dente em outros mesnquimas. Assim, o
potencial odontognico passou do
epitlio para o mesnquima. Na membrana basal que separa o epitlio do mesnquima, o epitlio induz o mesnquima a
se transformar em odontoblastos, enquanto o mesnquima induz o epitlio a
se transfornar em clulas ameloblsticas
(Figura 17.24; Thesleff et al., 1989).
Esse deslocamento do potencial odontognico coincide com o deslocamento da
sntese da protena morfogentica 4 do osso
(BMP4). Durante as fases mais precoces do
desenvolvimento do dente, a BMP4 sintetizada no epitlio; e induz a diferenciao
do mesnquima e estimula-o a expressar trs
fatores de transcrio, incluindo protenas

contendo os homeodomnios Msx1 e Msx2.
A induo da diferenciao do mesnquima pode ser mimetizada colocando-se BMP4
em partculas de agarose e aplicando-as
massa mesenquimatosa (Vainio et al., 1993).
Assim, a BMP4 parece ser um sinal morfognico crtico do epitlio para o mesnquima.
Um evento crtico na anlise do desenvolvimento dental foi a descoberta que
o centro de sinalizao para o desenvolvimento dental um obscuro grupo de
clulas epiteliais referidas como o n do
esmalte (Jernvall et al., 1994). Esse grupo
de clulas, primeiro visto no comeo do
estgio de hemisfrio pigmentado, aparece como uma populao de clulas em no
diviso, no centro das cspides em crescimento (veja Figura 17.3). Alm disso, a
hibridizao in situ mostrou que esse n
de esmalte a fonte da secreo de Sonic
hedgehog, FGF4, BMP7, BMP4 e de
BMP2 (Koyoma et al., 1996; Vaahtokari et
al., 1996a). Sendo uma populao que no
se divide, secretando fatores de crescimento capazes de serem recebidos tanto
pelo epitlio como pelo mesnquima, o n
de esmalte considerado dirigir a morfognese das cspides do dente e ser crtico no direcionamento das mudanas
evolutivas na estrutura dentria nos mamferos (Jernvall, 1995).
Um resumo de pesquisas recentes
correlacionando induo e diferenciao
do mesnquima mostrado na Figura
17.24. Como se pode ver, o mesnquima
em um estgio diferente daquele em outros. As clulas mesenquimatosas so primeiro induzidas (pela expresso epitelial
de BMP4, BMP2, BMP7 e provavelmente
FGF8) a expressar um conjunto de fatores
de transcrio que incluem Msx1 e Lef1.
Se os genes para cada uma dessas protenas so eliminados, o camundongo em
desenvolvimento no tem dentes. No ser
humano, numa condio causada por uma
mutao de MSX1, os pacientes tm falhas dentrias (Satokata e Maas, 1994;
Kratochwil et al., 1996; Vastardis et al.,
1996). medida que as clulas mesenquimatosas condensam-se, elas so induzi-
das a sintetizar a protena de membrana

syndecan e a protena da matriz extracelular tenascina. Essas protenas (que podem
se ligar uma outra) aparecem na ocasio
em que o epitlio induz a agregao do
mesnquima; Thesleff e colegas (1990)
propuseram que essas duas molculas
podem interagir para efetivar essa condensao. Como no rim, a expresso de
syndecan tambm se correlaciona com a
proliferao das clulas mesenquimatosas
agregadas, sugerindo que ela est regulando a diviso celular assim como a agregao (Vainio et al., 1991).
Depois de se agregarem, as clulas
mesenquimatosas comeam a secretar
FGF3, BMP3, BMP4, HGH e activina
(Wilkinson et al., 1989, Thesleff e Sahlberg,
1996). Esses sinais, presumivelmente, induzem a formao do n de esmalte no
epitlio. O n em seguida secreta seu potente coquetel de fatores de crescimento
e diferenciao, os quais promovem o
crescimento e a diferenciao tanto do mesoderma como do epitlio. As clulas
mesenquimatosas comeam a se diferenciarem em odontoblastos, e a tenascina
induzida para ser expressa em nveis muito mais elevados e nos mesmos locais que
a fosfatase alcalina. Essas protenas foram associadas com a diferenciao do
osso e da cartilagem, e podem promover a
mineralizao da matriz extracelular
(Mackie et al., 1987).
Por ltimo, medida que emerge o
fentipo do odontoblasto, so secretados osteonectina e colgeno de tipo I
como componentes da matriz extracelular. O n de esmalte desaparece por
apoptose (Vaahtokari et al., 1996b). Por
esse processo em etapas, as clulas da
crista neural craniana da mandbula podem ser transformadas em odontoblastos
secretores de dentina. Essas interaes
ocorrem durante perodos especficos do
desenvolvimento e so correlacionadas
com a maturao do epitlio. Em condies normais, dois fenmenos independentes morfognese e diferenciao
celular - so coordenados na formao
dos rgos.
Ectomesnquima
Condensao
Papila dental
Formao da cspide
Odontoblastos
Epitlio
Mesnquima
N de esmalte
Pr-odontoblastos
Nvel de diferenciao
Osteonectina
Colgeno tipo I
FGF3
BMP4, 3
activina- A
do mesnquima
ao epitlio
BMP2,
4 FGF8 do
epitlio ao
mesnquima
BMP2, 4, 7
Sonic hedgehog
FGF4 do n de
esmalte
Fosfatase alcalina,
Tenascina
receptor EGF
metaloprotenas
BMP4 do
mesnquima
Syndecan, tenascina
TGF- no mesnquima
msx1, 2
Iniciao
Agregao
Morfognese
Diferenciao terminal
Idade desenvolvimental
Figura 17.24
Diferenciao coordenada e morfognese no dente do mamfero. medida que progride o desenvolvimento, o mesnquima da mandbula derivado da crista neural sofre diferenciao gradual
interagindo com o epitlio mandibular (Segundo Thesleff et al., 1990; Thesleff e Sahlberg, 1996.)
Mecanismos de ramificao na formao

de rgos parenquimatosos
A gerao dos padres de ramificao epitelial especfica do rgo permanece uma rea
largamente inexplorada. Estudos anteriores (para revises, veja Bard, 1990; Mizuno e
Yasugi, 1990) revelaram trs padres principais pelos quais o mesnquima regula a
especificidade da ramificao. No rim, somente um tipo de mesnquima pode causar
ramificao (Saxn, 1987). Nas glndulas salivares e mamrias, o mesnquima especifica
o padro de ramificao, mas a diferenciao do epitlio determinada de modo autnomo pelo epitlio (Lawson, 1974; Sakakura et al., 1976). Nos tubos epiteliais que formam
os tratos contendo diferentes regies em ramificao (tais como os tratos respiratrio,
digestivo e reprodutivo), os mesnquimas regionais especificam tanto o padro de
ramificao como os tipos de protena em cada regio (Wessells, 1979; Cunha et al.,
1976a,b; Hilfer et al., 1985; Haffen et al., 1987). Por exemplo, na regio do tubo endodrmico
que ir se tornar o fgado, o mRNA para a albumina (uma protena especfica do fgado)
sintetizado na regio heptica do epitlio, mesmo antes das clulas se agregarem para
formar o rudimento do fgado. Tudo que necessrio para a sntese do mRNA da albumina
que o epitlio esteja em estreito contato com as clulas mesenquimatosas dessa rea.
Tanto no fgado como no pncreas, essas interaes precoces com o mesnquima especfico da regio produzem um baixo nvel de expresso gnica especfica na regio do tubo
endodrmico em proliferao (Rutter et al., 1964; Cascio e Zaret, 1991). Esse padro inicial
ser amplificado quando os rgos formarem suas estruturas morfolgicas.
683
684
A Matriz Extracelular como um Elemento Crtico na Ramificao

Os mecanismos para essa ramificao podem ter tanto os componentes gerais como
os especficos (Grobstein, 1967), e podem depender da interao entre as foras que
esto promovendo o crescimento celular e as foras que esto promovendo a coeso
intercelular. Os componente gerais so considerados envolver a degradao seletiva
da membrana epitelial basal nos locais da ramificao (Bernfield et al., 1984; Mizuno e
Yasugi, 1990).
Conforme visto no rim e em muitos outros rgos, o mesnquima pode interagir
com um tubo epitelial levando-o a se ramificar. Isso ocorre quando os crescimentos
epiteliais so divididos por fendas, apresentando lbulos de cada lado da fenda.
Esses lbulos crescem criando ramos. A ramificao dos brotos epiteliais depende da
presena do mesnquima. Em alguns casos, tal como na interao do epitlio respiratrio com mesnquimas diferentes, a interao instrutiva. Na maioria dos casos,
porm, a interao meramente permissiva. Os brotos so preparados para ramificar e
formar cinos, mas necessitam do apoio do mesnquima. hoje admitido que o
mesnquima promova a formao de fendas e ramificaes cindindo o lbulo e digerindo seletivamente parte da lmina basal do tecido epitelial.
O controle da formao de fendas parece ser, em parte, uma funo das molculas
de colgeno. Fibras de colgeno III so produzidas por clulas mesenquimatosas, mas
se acumulam somente dentro das fendas lobulares (Figura 17.25; Grobstein e Cohen,
1965; Nakanishi et al., 1988a). Alm disso, a extenso da ramificao pode ser regulada
artificialmente pela preservao ou remoo das molculas de colgeno (Nakanishi et
al., 1986a). A Figura 17.26 mostra a ramificao de um rudimento de 12 dias de uma
glndula submandibular sob condies que impedem a degradao das fibras de
colgeno (um inibidor de colagenase foi adicionado ao meio). Sem o colgeno, no se
vem fendas, mas quando a colagenase endgena incapaz de remover o colgeno
em excesso, aparecem fendas extranumerrias.
Clulas
mesenquimatosas
Clula
epitelial
Colgeno na
fenda entre
clulas epiteliais
Figura 17.25
Micrografia eletrnica de varredura da acumulao de fibras de colgeno dentro da fenda precoce da glndula salivar de um embrio de camundongo de 12 dias. (de Nakanishi et al., 1986b, cortesia de Y. Nakanishi.)
1 hr
(A)
Controle
(B)
Adio de colagenase
(C)
Adio de inibidor de colagenase
18 hr
25 hr
O mecanismo pelo qual o colgeno inicia essa ramificao permanece inexplicado.

Nakanishi e colaboradores (1986b) propuseram que as clulas mesenquimatosas
alinham as fibras de colgeno por trao para formar cristas que cortam o epitlio
lobular formando fendas. Essas fendas ficam mais claramente definidas medida
que mais clulas mesenquimatosas migratrias deformam o lbulo por tracionamento
(Nakanishi et al., 1987). As fibras de colgeno podem tambm ser responsveis pelo
desenvolvimento da fenda em ramos distintos. Bernfield e Banerjee (1982) propuseram que o colgeno pode proteger a lmina basal das clulas epiteliais contra a
hialuronidase secretada pelas clulas mesenquimatosas. Eles mostraram que essas
clulas realmente digerem o glicosaminoglicano (GAG) do lbulo (Banerjee e Bernfield,
1979) e que os GAGs nas pontas so mais susceptveis que aqueles nas fendas.
Quando GAGs de heparan sulfato so removidos de rudimentos de glndula salivar
em cultura, a ramificao cessa (Nakanishi et al., 1993). A degradao da lmina basal
permitiria a expanso do ramo pelo aumento das mitoses estimuladas nessa rea.
Nesse modelo, mostrado na Figura 17.27, o mesnquima promove o crescimento
epitelial, degrada o GAG, e deposita fibras de colgeno na fenda. O epitlio sintetiza
materiais da lmina basal e estimula a sntese de colgeno do mesnquima. Isso
resulta na degradao diferencial da lmina basal nas extremidades dos lobos, permitindo assim s clulas em diviso do lobo formarem ramos. Aqui, a interao de
clulas mesenquimatosas com a matriz extracelular do epitlio ir determinar o padro de ramificao do rgo.
685
Figura 17.26
Controle da formao da fenda epitelial pelo

colgeno do mesnquima. Rudimentos da glndula salivar de um rato de 12 dias foram cultivados e observados em 1, 18 e 25 horas. (Linha A) Desenvolvimento normal, mostrando
trs principais lbulos. (Linha B) Crescimento
do lbulo mas sem ramificao quando a
colagenase exgena (5g/ml) foi adicionada ao
meio. (Linha C) Ramos supranumerrios quando o inibidor de colagenase (5g/ml) foi adicionado ao meio para suprimir a atividade da
colagenase endgena. (Segundo Nakanishi et
al., 1986a; cortesia de Y. Nakanishi.)
686
(A)
Fenda estreita
(B)
Hialuronidase
Colgeno
Degradao da matriz
extracelular causada por
hialuronidase
Fibras de
colgeno
Mais
mitose
GAG
Clulas
mesenquimais
Clulas
epiteliais
Clulas
mesenquimais
Clulas
epiteliais
Colgeno
Figura 17.27
Um modelo para a formao e ramificao em

um rudimento de glndula salivar de camundongo. (A) Um sulco produzido no lbulo
pela contrao de um feixe de fibras de colgeno (mostrado aqui como uma estrutura torcida,
como corda) pela trao das clulas mesenquimatosas. Como mostrado na Figura 17.25, as
fibras se estendem entre dois grupos de clulas
mesenquimatosas. (B) Alongamento dos dois
lbulos separados em ramos pode ocorrer, j
que as GAGs nas extremidades dos lbulos
so mais sensveis hialuronidase, pois eles
no tm a proteo das fibras de colgeno. O
talo do lbulo estvel, enquanto o aumento da
diviso nas extremidades (estimulado pelo
mesnquima) empurra o lbulo para a frente.
(A de Nakanishi et al., 1986b; B segundo
Wessells, 1977.)
O colgeno tambm importante para a estabilizao das ramificaes formadas.

Quando se adiciona colagenase a rudimentos de glndula salivar aps a ramificao,
o colgeno removido e os ramos coalescem em um globo (Grobstein e Cohen, 1965;
Wessels e Cohen, 1968).
Fatores Parcrinos Efetuando Padres de Ramificao
Ainda no temos certeza sobre as identidades das molculas secretadas pelo
mesnquima que so responsveis pela induo desses padres de ramificao
epitelial. Evidncia recente implicou vrios fatores parcrinos nesses eventos. O
primeiro candidato o fator 1 de crescimento transformado (TGF1). Essa molcula abundante em rgos embrionrios. Quando o TGF1 exgeno adicionado
a culturas de glndulas mamrias, ou de glndulas salivares embrionrias, pulmo,
ou rudimentos de rim, o fator previne o epitlio de se ramificar (Figura 17.28; Silberstein
et al., 1990; Hardman et al., 1994; Serra et al., 1994; Ritvos et al., 1995). O TGF1
sabido promover a sntese de protenas da matriz extracelular e de inibir as
metaloproteinases que podem digerir essas matrizes (Penttinen et al., 1988; Nakamura
et al., 1990). possvel que esse fator tenha um papel na estabilizao dos ramos
aps seus surgimentos.
Uma segunda molcula que pode ter importncia na ramificao epitelial a activina.
A activina conhecida por sua importncia na especificao do eixo esquerdo/direito
em pintos, e foi detectada em glndulas salivares, pncreas e rins de embries de
camundongos. Quando a activina adicionada exogenamente ao rim, ou rudimentos
salivar ou pancretico do embrio de rato, a activina distorce severamente o padro de
ramificao normal (Figura 17.29; Ritvos et al., 1995). As clulas epiteliais no esto
mortas e ainda so capazes de induzir as clulas mesenquimatosas a formarem nefros,
mas os ramos esto muito desorganizados. As semelhanas entre os rudimento da
glndula salivar tratada com colagenase e aqueles tratados com activina sugerem que
essa ltima possa desencadear a digesto de matriz extracelular no local de um novo
ramo, e que a sua adio exgena promove a destruio da matriz extracelular atravs
de todo o epitlio.
Vrios fatores parcrinos adicionais parecem ser responsveis pela induo da
ramificao do epitlio pulmonar. Uma forma de fator de crescimento derivado das
plaquetas pode induzir a ramificao pulmonar, e o RNA antisenso contra sua mensagem o inibe (Souza et al., 1995). Epitlio pulmonar em cultura tambm pode ser
687
Figura 17.28
O efeito do TGF-1 na morfognese do epitlio

renal. (A) Um rim de camundongo de 11 dias
cultivado por 4 dias no meio controle tem ramificao normal. (B) Um rim de um camundongo de 11 dias cultivado em TGF-1 s apresenta ramificao na periferia do mesnquima,
e os ramos formados so alongados. (Segundo
Ritvos et al., 1995.)
(A)
(B)
estimulado a se ramificar expondo-o anfiregulina, um fator parcrino semelhante ao

fator de crescimento epidrmico. Anticorpos contra anfiregulina iro inibir a ramificao nessas culturas (Schugar et al., 1996). O mesnquima do pulmo do embrio do
camundongo secreta FGF7, enquanto o epitlio pulmonar sintetiza o receptor FGF7.
Oligonucletidos antisenso para FGF7 ou seu receptor bloqueiam a ramificao epitelial
em rudimentos de pulmo em cultura, assim como o fazem as mutaes de perda-defuno desse receptor* (Peters et al., 1994; Post et al., 1996). Alm da secreo de
anfiregulina e FGF7 pelo mesnquima, a Sonic hedgehog parece ser secretada pelos
terminais distais dos brotos pulmonares (Bellusci et al., 1996).
Induo ao nvel de uma nica clula

A induo embrionria ocorre quando interaes entre clulas indutoras e
responsivas trazem mudanas na trajetria desenvolvimental da clula responsiva
(Jacobson e Sater, 1988). Sem a induo, a clula responsiva se tornaria um tipo de
* Em uma notvel coincidncia, a formao do sistema traqueal de Drosophila tambm depende de FGF (Glazer e Shilo, 1991; Samakoulis et al., 1996). Os pulmes e as traquias dos vertebrados
so novidades evolucionrias que no tm semelhanas anatmicas ou embrionrias com as traquias dos insetos.
Figura 17.29
(A)
(B)
Os efeitos da activina na morfognese do epitlio

da glndula salivar. Rudimentos da glndula
salivar embrionria foram cultivados por 4 dias
em meio controle (A), e em meio contendo
activina 7.5 nM (B). Aps 4 dias, os rgos
foram fixados e corados para citoqueratina
epitelial. (de Ritvos et al., 1995.)
688
Figura 17.30
Microfotografia eletrnica de varredura de um

olho composto de Drosophila. Cada faceta
um nico omatdio. Uma cerda sensorial se
projeta de cada omatdio. (Cortesia de T.
Venkatesh.)
clula; com a induo, torna-se um outro. Nossas discusses sobre induo usualmente ocuparam-se de tecidos e no de clulas. Porm, a induo tambm pode
ocorrer ao nvel da nica clula. Os primeiros exemplos desse fenmeno vieram de
estudos com o sistema imune. Aqui, a recepo de antgeno (substncias estranhas)
pela clula B deu-lhe a competncia de responder a fatores parcrinos e justcrinos
sintetizados pelas clulas T auxiliares. H um dilogo recproco entre as clulas B e
as clulas T pelo qual ambas se diferenciam e se proliferam na presena de antgeno
estranho (Clark e Ledbetter, 1994; Essen et al., 1995). Na verdade, a AIDS uma
doena de induo, na qual a clula T auxiliar foi destruda e no pode induzir a
diferenciao de clulas B e macrfagos.* [prox4.html]
Pesquisas recentes sobre o desenvolvimento de Drosophila e Caenorhabditis
mostraram que a induo realmente ocorre no nvel clula-para-clula. Alguns dos
exemplos melhor estudados envolvem a formao dos fotorreceptores da retina do
olho da Drosophila. A retina consiste de cerca de 800 unidades chamadas omatdios
(Figura 17.30). Cada omatdio composto de 20 clulas organizadas em um padro
preciso. O olho desenvolve-se na camada epitelial plana do disco imaginal do olho
da larva. No h clulas diretamente acima ou abaixo dessa camada, de modo que as
interaes so limitadas s clulas vizinhas em duas dimenses. A diferenciao das
clulas epiteliais arranjadas de maneira aleatria nos fotorreceptores da retina e seu
tecido do cristalino ao redor ocorre durante o ltimo (terceiro) estgio larval. Uma
reentrncia se forma na margem posterior do disco imaginal, e esse sulco
morfogentico comea a trafegar para frente em direo ao anterior do epitlio (Figura 17.31). O movimento do sulco depende das protenas do conjunto marcador,
Hedgehog e Decapentaplegic. Hedgehog expresso por clulas imediatamente posteriores ao sulco (i.e., aquelas que acabaram de se diferenciar) e induz a expresso da
protena decapentaplegic dentro do sulco (Heberlein et al., 1993; Ma et al., 1993).
medida que as clulas da retina comeam a se diferenciar atrs do sulco, elas secretam
a protena Hedgehog, que empurra o sulco anteriormente (Brown et al., 1995). Quando o sulco passa atravs de uma regio de clulas, essas comeam a se diferenciar
em uma ordem especfica. A primeira clula a se desenvolver o fotorreceptor central (R8). (Ainda no sabido como o sulco instru certas clulas a se tornarem
fotorreceptores R8, mas possvel que as protenas DPP e Hedgehog na regio do
sulco induzam a determinao de R8). A clula R8 considerada induzir a clula
anterior e a clula posterior a ela (em relao ao sulco), para se tornarem os fotorreceptores R2 e R5, respectivamente. Os fotorreceptores R2 e R5 so funcionalmente
equivalentes, sendo o sinal de R8 provavelmente o mesmo para ambas (Tomlinson e
Ready, 1987). Sinais dessas clulas induzem mais quatro clulas adjacentes a tornarem-se os fotorreceptores R3, R4, e depois R1 e R6. Em ltimo lugar aparece o
fotorreceptor R7. As outras clulas ao redor desses fotorreceptores tornam-se clulas do cristalino. A determinao do cristalino a condio de revelia (default) se
as clulas no forem induzidas. [prox5.html]
Uma srie de mutaes foram encontradas bloquear alguns dos passos dessa
cascata indutora. A mutao rough (ro), por exemplo, bloqueia a induo dos fotorreceptores R3 e R4. A mutao sevenless (sev) e a mutao bride of sevenless (boss)
pode, cada uma, prevenir as clulas R7 de se diferenciarem. (Essas clulas tornam-se
ento clulas do cristalino). A anlise dessas mutaes mostrou que elas esto envolvidas no processo indutivo. O gene sevenless requerido na prpria clula R7. Se
embries mosaico so produzidos de modo que algumas das clulas do disco ocular
sejam heterozigotas (normais) e algumas homozigotas para a mutao sevenless, o
fotorreceptor R7 visto desenvolver-se somente se o precursor R7 tem o alelo sevenless
* Em seres humanos, essas clulas T so chamadas clulas T auxiliares / indutoras, um nome que
reconhece seu papel no desenvolvimento. A glicoprotena CD4 normalmente est envolvida na
mediao celular da adeso no-especfica entre a clula T auxiliar/indutora e os linfcitos B (Doyle
e Strominger, 1987).
689
Figura 17.31
Diferenciao de fotorreceptores no disco

imaginal do olho da larva tardia. O sulco
morfogentico (seta) atravessa o disco do
posterior (esquerda) ao anterior (direita).
Atrs do sulco, as clulas fotorreceptoras se
diferenciam em uma seqncia definida (mostrada abaixo). A primeira clula fotorreceptora
a se diferenciar a R8, que parece induzir a
diferenciao de R2 e R5; a cascata de induo
continua at que o fotorreceptor R7 tenha se
diferenciado. (Segundo Tomlinson, 1988,
fotografia cortesia de T. Venkatesh.)
Poro antenal
do disco
Diferenciao mais
tardia (posterior ao
sulco morfogentico)
tipo selvagem (Basler e Hafen, 1989; Bowtell et al., 1989). Anticorpos para essa protena encontram-na na membrana celular, e a seqncia do gene sevenless sugere que ela
uma protena transmembrana com um stio tirosina quinase em seu domnio
citoplasmtico (Banerjee et al., 1987; Hafen et al., 1987). Isso consistente com a
suposio da protena ser um receptor para algum sinal.
Esse sinal para o precursor R7 diferenciar-se no fotorreceptor R7, provavelmente
vem diretamente de uma protena codificada pelo alelo tipo selvagem de bride of
sevenless (boss). Moscas homozigotas para a mutao boss no tm os fotorreceptores R7. Estudos com genes de mosaico onde algumas das clulas do disco imaginal
so normais e algumas das clulas so homozigotas para mutao boss mostram que
o gene boss tipo selvagem no necessrio na clula precursora R7. Ao contrrio, o
fotorreceptor R7 somente se diferencia se o gene boss tipo selvagem expresso na
clula R8. Assim, o gene bride of sevenless est codificando alguma protena cuja
existncia na clula R8 necessria para a diferenciao da clula R7.* O sinal
produzido pela protena Boss provavelmente trabalha por contato celular. Genes
* Todos os precursores de fotorreceptores sintetizam a protena Sev, e o sinal Boss dado pelo
fotorreceptor R8 provavelmente dado e recebido por todas as clulas circunjacentes. O que,
ento, impede as clulas R1-R6 de tambm se tornarem clulas R7? O agente restritivo provavelmente o produto do gene seven-up (sup). Em mutante deficientes em sup, os precursores R1,
R3, R4 e R6 todos desenvolvem o fentipo R7. O gene sup codifica um fator de transcrio da
famlia receptora de esterides (Mlodzik et al., 1990). Isso, porm, no toda a histria. Provavelmente existe um caminho paralelo, pelo qual o receptor Sevenless tambm ativa a protena
Corkscrew. Corkscrew ativa a protena Daughter-of-sevenless (dos). A protena Dos facilita a
ativao de Ras (Herbst et al., 1996).
Diferenciao precoce
(entrando no sulco
morfogentico)
690
boss tipo selvagem numa clula R8 em um omatdio no iro corrigir a deficincia de

alelo boss mutante nos omatdios adjacentes, e o domnio extracelular da protena
Boss suficiente para ativar a tirosina quinase sevenless em uma clula vizinha
(Reinke e Zipursky, 1988; Hart et al., 1993). Um resumo das indues clula-paraclula conhecidas na retina de Drosophila (Figura 17.32) mostra que clulas individuais so capazes de induzir outras clulas individuais a criar o arranjo preciso de
clulas em tecidos particulares.
Figura 17.32
Sumrio de genes conhecidos por estarem envolvidos na induo dos fotorreceptores de

Drosophila. Para que o desenvolvimento continue para alm da diferenciao dos fotorreceptores R8, R2 e R5, o gene rough (ro) deve
estar presente tanto nas clulas R2 como nas
R5. Para a diferenciao do fotorreceptor R7, o
gene sevenless (sev) deve estar ativo na clula
precursora R7, enquanto o gene bride of
sevenless (boss) deve estar ativo no fotorreceptor R8. (Segundo Rubin, 1989.)
Induo V
ulvar no Nematide Caenorhabditis elegans
Vulvar
A vulva de Caenorhabditis elegans um caso onde um sinal indutor pode gerar
uma variedade de tipos celulares. Esse rgo se forma durante o estgio larval de
seis clulas do blasto chamadas clulas precursoras vulvares (VPCs). A clula que
conecta a gnada sobrejacente clulas precursoras vulvares chamada clula
ncora. Ela secreta a protena LIN-3, um parente do fator de crescimento epidrmico
(Hill e Sternberg, 1992). Se a clula ncora destruda (ou se o gene lin-3 mutado),
as VPCs no formam uma vulva; elas tornam-se parte da hipoderme (pele) (Kimble,
1981). As seis clulas precursoras vulvares sob influncia da clula ncora formam
um grupo de equivalncia. Cada membro desse grupo competente para ser induzido pela clula ncora e pode assumir um de trs destinos, dependendo de sua
proximidade essa clula (Figura 17.33). A clula diretamente abaixo da clula ncora se divide para formar as clulas vulvares centrais. As duas clulas flanqueando a
clula central se dividem para tornarem-se as clulas vulvares laterais, enquanto as
trs clulas mais distantes da clula ncora geram as clulas hipoblsticas. Se a
clula ncora destruda, todas as seis clulas do grupo de equivalncia dividem-se
uma vez e contribuem para o tecido hipodrmico. Se as trs clulas centrais forem
destrudas, as trs clulas externas, que normalmente formam clulas hipodrmicas,
geram clulas vulvares em seu lugar. A protena LIN-3 recebida pela tirosina quinase
do receptor LET-23 nas VPCs, e o sinal transferido para o ncleo atravs da trajetria Ras-MAP quinase (veja Captulo 3).
(A)
Gnada
Clula ncora
VPCs (clulas precursoras vulvares)
(B) Membrana basal

Gnada
Figura 17.33
As VPCs e seus descendentes. (A) Localizao da gnada, clula

ncora, e VPCs no segundo instar da larva de um C. elegans hermafrodita. (B,C) Relao da clula ncora com as seis VPCs e suas
linhagens subseqentes. As primeiras linhagens resultam em clulas
vulvares centrais; as segundas constituem as clulas vulvares laterais;
as terceiras geram as clulas hipodrmicas. O esquema da vulva
mostrado no quarto instar da larva, os crculos representando as posies do ncleo. (Segundo Katz e Sternberg, 1996.)
Cutcula
(C)
Clula ncora
691
H trs mecanismos pelos quais tais indues podem ocorrer (Katz e Sternberg, 1996):
1. A hiptese do sinal graduado. Aqui, a VPC mais prxima da clula ncora
recebe as mais altas concentraes de protena LIN-3 e gera as clulas vulvares
centrais. As duas VPCs adjacentes recebem uma baixa quantidade de LIN-3 e
se tornam as clulas vulvares laterais. As VPCs mais distantes da clula ncora
no recebem LIN-3 suficiente, e se tornam hipoderme (Katz et al., 1995).
2. O modelo da induo seqencial. Aqui, a protena LIN-3 trabalha somente
sobre a clula imediatamente abaixo a ela. Essa clula ir gerar a linhagem
vulvar central. Ir tambm sinalizar lateralmente para as duas clulas adjacentes e instru-las para gerar linhagens vulvares laterais. Essas clulas no iro
instruir as clulas perifricas de VPCs de fazer algo; por isso, essas tornam-se
hipoderme (Koga e Oshima, 1995; Simske e Kim, 1995).
3. O modelo da no-equivalncia. Aqui, as VPCs podem substituir uma a outra,
mas no so idnticas. Elas tm os seus vieses e podem responder at a baixas
concentraes da protena LIN-3. Porm, os vieses fazem com que a clula
abaixo da clula ncora gere a linhagem vulvar central (Sternberg, 1989;
Sternberg e Horvitz, 1989).
Interessante, existe evidncia que todos os trs modelos funcionam durante o
desenvolvimento normal (Kenyon, 1995; Katz e Sternberg, 1996). Provavelmente h
um sinal graduado de LIN-3 da clula ncora, que refora os vieses das VPCs j
existentes. Alm disso, uma vez que a VPC abaixo da clula ncora fica determinada a
formar a linhagem vulvar central, ela sinaliza as clulas a ela adjacentes proibindo-as
de tambm formar clulas vulvares centrais. Essa inibio lateral das clulas precursoras vulvares secundrias pelas VPC primria conseguida atravs das protenas LIN-12 (Figura 17.34; Sternberg, 1988). Se todos esses sistemas estiverem operando durante o desenvolvimento normal, conforme nota Kenyon (1995), ento em conjunto elas poderiam produzir as to-perfeitas pequenas vulvas pelas quais C. elegans
to famoso.
LET-3
Sinal ativa genes Vulval
Sinal
ativa
lin-12
Vul ligado
lin-12 ligado
Hipoderme
Sinal
ativa
lin-12
Vul ligado
Vulva
Figura 17.34
Vol ligado
lin-12 ligado
Hipoderme
Modelo para determinao de linhagens de

clulas vulvares em C. elegans. O sinal LIN3 da clula ncora promove a determinao da
clula P6.p gerar a linhagem vulvar central.
Doses menores de LIN-3 fazem com que as
clulas P5.p e P7.p formem as linhagens
vulvares laterais. A clula P6.p (linhagem central) tambm secreta um sinal de curto alcance
que induz as clulas vizinhas a ativarem a protena LIN-12. Isso tambm previne as clulas
P5.p e P7.p de gerarem a linhagem primria
de clulas vulvares centrais.
692
&
Especulaes
Interaes Clula-Clula e Possibilidade na

Determinao de Tipos Celulares
DESENVOLVIMENTO da vulva
em C. elegans mostra vrias situaes de indues ao nvel

celular. A primeira situao se refere
induo da clula ncora gonadal. A formao da clula ncora mediada pelo
gene lin-12, que codifica uma protena
receptora da superfcie celular. Em hermafroditas do tipo selvagem, duas clulas
adjacentes, Z1.ppp e Z4.aaa, tm o potencial de se tornarem clula ncora gonadal.
Elas interagem de maneira a causar uma
delas ser a clula ncora, enquanto a outra se torna o precursor do tecido uterino.
Em mutantes recessivos lin-12, ambas
clulas se tornam clulas ncora, enquanto
em mutantes dominantes, ambas se tornam precursores uterinos (Greenwald et
al., 1983). Estudos usando mosaicos genticos e ablaes celulares mostraram
que essa deciso feita no segundo estgio larval e que o gene lin-12 somente
precisa funcionar na clula destinada a se
tornar a clula precursora uterina. A
presuntiva clula ncora no o necessita.
Seydoux e Greenwald (1989) especulam
que essas duas clulas originalmente sintetizam o sinal para a diferenciao uterina
(a protena LAG-2) e o receptor para essa
molcula (a protena LIN-12) (Figura 17.35;
Wilkinson et al., 1994). Durante um certo
perodo no desenvolvimento larval, a clula que por acaso estiver secretando mais
desse sinal de diferenciao faz com que
sua vizinha pare de produzir a molcula
sinalizadora e aumente a produo da protena LIN-12. A clula secretando o sinal
se torna a clula ncora gonadal, enquanto a clula recebendo o sinal atravs de
sua protena LIN-12 se torna a clula precursora uterina ventral. Assim, as duas
clulas so consideradas determinar uma
a outra antes de seus respectivos eventos de diferenciao.
A deciso clula ncora/precursora
uterina ventral ilustra dois aspectos importantes da determinao de duas clulas originalmente equivalentes. Primeiro,
Sinal
Receptor
(A)
(B)
(C)
(D)
Clula ncora
Precursor
uterino ventral
Figura 17.35
Modelo para a gerao de dois tipos de clulas

(clula ncora e precursor uterino ventral) de
duas clulas equivalentes (Z1.ppp e Z4.aaa). (A)
As clulas comeam como equivalentes, com
quantidades flutuantes de sinal (seta) e receptor
(seta invertida). O gene lag-2 considerado codificar o sinal; o gene lin-12 considerado codificar o receptor. A recepo do sinal diminui a
produo de LAG-2 e aumenta a de LIN-12.
(B) Um evento estocstico (aleatrio) causa uma
clula a produzir mais substncia sinalizadora
que outra em certo perodo crtico. Isso estimula
mais atividade de LIN-12 na clula vizinha. (C)
Essa diferena ampliada, j que a clula com
mais LIN-12 no produz tanto sinal. (D) Finalmente, uma clula envia o sinal, e outra o recebe.
A clula sinalizadora torna-se a clula ncora; a
clula receptora torna-se o precursor uterino ventral. (Segundo Greenwald e Rubin, 1992.)
a diferena inicial entre elas criada pelo

acaso. Segundo, essas diferenas iniciais
so reforadas por retroalimentao. Tal
determinao tambm vista na determinao de qual das clulas epidrmicas,
originalmente equivalentes, do embrio do
inseto geram os neurnios do sistema
nervoso perifrico. Aqui, a escolha entre tornar-se uma pele (hipodrmica) ou
um neuroblasto. O gene Notch de Drosophila tambm canaliza uma clula bipotencial em uma de duas trajetrias alternativas. Logo aps a gastrulao, uma
regio de cerca de 1800 clulas ectodrmicas encontra-se ao longo da linha mediana ventral do embrio de Drosophila.
Essas clulas tm o potencial de formar o
cordo nervoso ventral do inseto, e cerca
de um-quarto delas se tornam neuroblastos, enquanto o resto se torna precursoras da hipoderme. As clulas que do origem aos neuroblastos esto intermisturadas com as clulas que so destinadas a
dar origem a precursores hipodrmicos.
Assim, cada clula ectodrmica nas regies
formadoras de nervos do embrio da mosca pode dar origem ou a clulas hipodrmicas ou a clulas precursoras neurais
(Hartenstein e Campos-Ortega, 1984), Na
ausncia de transcrio do gene Notch
no embrio, as clulas se desenvolvem
em precursores neurais em lugar de uma
mistura de clulas precursoras neurais e
hipodrmicas (Figura 17.36; ArtavanisTsakonis et al., 1983; Lehmann et al., 1983).
Esses embries morrem, com um grande
excesso de clulas neurais, s custas da
hipoderme ventral e da cabea (Poulson,
1937; Hoppe e Greenspan, 1986). O gene
Notch foi clonado (Kidd et al., 1983;
Yedvobnick et al., 1985) e encontrado ser
transcrito durante a metade precoce da
embriognese (e mais tarde no estgio
pupal precoce). Tanto a protena Notch
como a LIN-12 compartilham notveis
homologias seqenciais entre si. Ambas
so protenas transmembrana que podem
atuar como receptores de sinais de clulas adjacentes (Yochem et al., 1988).
Heitzler e Simpson (1991) propuseram
que a protena Notch, tal como a LIN-12, funciona como um receptor para sinais intercelulares envolvendo a distino entre clulas
equivalentes. Alm disso, elas provem evidncia que outra protena transmembrana,
produto do gene delta (cuja ausncia cria
um fentipo muito semelhante aquele das
693
Figura 17.36
Representao do efeito da mutao Notch. Em embries tipo selvagem, as

clulas ectodrmicas neurognicas geram tanto neuroblastos como clulas de
pele (hipodrmicas). Em embries deficientes em Notch, porm, todo o ectoderma neurognico gera neuroblastos. A proporo de neuroblastos para
clulas hipodrmicas difere entre as regies do embrio.
Neuroblasto
Tipo selvagem
Dorsal
Hipoderme
Clulas
ectodrmicas
neurognicas
Ventral
deficincias Notch) o ligante de Notch.

Mosaicos genticos mostram que enquanto Notch requerido por clulas que devem se tornar epiderme, o gene delta necessrio nas clulas que induzem o
fentipo epidrmico.
Greenwald e Rubin (1992) propuseram
um modelo baseado na hiptese LIN-12
para explicar o espaamento dos neuroblastos nos agregados pr-neurais de precursores epidrmicos e neurais (Figura 17.37).
Inicialmente, todas as clulas tm potenciais e sinalizaes iguais. Porm, quando
uma das clulas, por acaso, produz mais
sinal (como o produto delta), ela ativa os
receptores em clulas adjacentes, reduzindo o nvel de sinalizao. Como os nveis
de sinalizao em clulas adjacentes so
baixos, as vizinhas das clulas de baixa sinalizao tendero ser sinalizadores de alto
nvel. Dessa maneira, um espaamento de
neuroblastos produzido.
O papel do acaso na determinao
celular no to incomum como se pode
supor. Conforme discutiremos no Captulo 22, o amadurecimento de somente um
vulo por ms em humanos determinado
(A)
(B)
Mutante
notch
principalmente pelo nmero aleatrio de

receptores hormonais nas clulas foliculares. De maneira semelhante, a deciso
sobre se uma clula tornar-se- ou no
parte do embrio ou parte do trofoblasto
certamente uma deciso fundamental
no desenvolvimento do mamfero tam-
bm determinada pela posio aleatria da clula durante a compactao. Tais

fatores aleatrios podem ocasionar interaes que so amplificadas, distinguindo, finalmente, entre dois tipos celulares
naquilo que havia sido uma populao
celular homognea.
Figura 17.37
Modelo para explicar os padres de espaamento de neuroblastos entre as clulas ectodrmicas

neurognicas inicialmente equivalentes. Baseando-se no modelo para duas clulas mostrado na
Figura 17.36, cada clula tanto d como recebe o mesmo sinal. (A) Um campo de clulas equivalentes, todas sinalizando e recebendo igualmente. (B) Um evento aleatrio causa uma das clulas
(sombreamento mais intenso) a produzir mais sinalizao. Suas clulas circunjacentes recebem essa
quantidade aumentada de sinal e reduzem seu prprio nvel de sinalizao (sombreado mais leve).
(C) O restante do padro est agora constrangido. Aquelas clulas que reprimiram sua prpria
sinalizao (em resposta aos eventos em B), provavelmente no expressaro mais sinalizao que
suas clulas vizinhas. As clulas rodeadas por sinalizadores mais reprimidos tero maior probabilidade de se tornar sinalizadoras. (D,E) Os destinos das clulas atravs do campo ficam especificadas
medida que a amplificao dos sinais cria populaes de sinalizadores rodeados por populaes de
receptores. No caso dos genes neurognicos, o sinal considerado emanar da protena Delta, o
receptor sendo a protena Notch. (Segundo Greenwald e Rubin, 1992.)
(C)
(D)
Induo o processo iniciado quando uma clula ou grupo de clulas sinaliza

clulas ou grupos de clulas vizinhas para mudar seu destino desenvolvimental. Em
organismos to complexos como os mamferos, as interaes indutivas recprocas so
essenciais para coordenar as partes em um todo coerente.
(E)
694
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CAPTULO 18 Desenvolvimento do Membro de Tetrpode
Desenvolvimento do
membro de tetrpode
Meus braos so mais longos do que minhas pernas.... Eu sou meu prprio escultor:
estou partindo do meu interior e me modelando com materiais vivos, molhados e
maleveis: qual outro artista teve sua disposio um desenho to perfeito como esse
disposio de meus martelos e cinzis: as
clulas migram para o local exato para construir um brao: a primeira vez que elas o
fizeram, nunca antes e nunca mais, entendem vocs mercies benz o que eu estou
dizendo? Eu nunca serei repetido.
CARLOS FUENTES (1989)
O que pode ser mais curioso do que a mo de
um homem, formada para pegar, a de uma
toupeira para cavar, a perna de um cavalo, a
nadadeira de um boto e a asa de um morcego, todos devem ser construdos no mesmo
modelo e devem incluir ossos similares na
mesma posio relativa?
CHARLES DARWIN (1859)
701
18
Padronizao no membro
PADRONIZAO um processo pelo qual as clulas embrionrias formam arranjos de
tecidos diferenciados, espacialmente ordenados. A possibilidade de realizao desse processo uma das propriedades mais dramticas do organismo em desenvolvimento, provocando um senso de estupefao em cientistas e leigos. Como que o
embrio capaz no s de produzir os diferentes tipos de clulas do corpo, mas
tambm produzi-las de maneira a formar tecidos e rgos funcionais? Uma coisa
diferenciar os condrcitos e ostecitos que sintetizam a cartilagem e as matrizes dos
ossos, respectivamente; outra coisa produzir essas clulas em uma orientao
temporal e espacial gerando um osso funcional. E ainda outra coisa produzir um
osso que um mero e no uma pelve ou um fmur. A habilidade das clulas dos
membros em pressentir suas posies relativas e diferenciar-se de acordo com essas
posies tem sido o tema de intensos debate e experimentao. Como que as
clulas que se diferenciam em cartilagem do osso embrionrio so especificadas de
modo a formar dedos em uma ponta e o ombro na outra? (Seria um apndice quase
desnecessrio se a ordem fosse inversa.) Aqui, os tipos de clulas so os mesmos,
mas os padres que os originam so diferentes.
O membro dos vertebrados um rgo muito complexo com uma distribuio
assimtrica de partes. Os ossos do membro anterior, seja uma asa, uma mo, uma
nadadeira ou uma barbatana, consistem de um mero proximal (adjacente parede do
corpo), um rdio e um cbito na regio mediana, e os ossos distais do pulso e dos
dedos (Figura 18.1). Originalmente, essas estruturas so cartilaginosas, mas finalmente a maioria delas substituda por ossos. A posio de cada um dos ossos e dos
msculos no membro precisamente determinada. A polaridade tambm existe em
outras dimenses. No homem, bvio que cada mo se desenvolve como a imagem
espelhar da outra. possvel tambm a existncia de outros arranjos- como o polegar
se desenvolver no lado esquerdo de ambas as mos- mas isso no comum. Analogamente, a palma (ventral) facilmente distinta do pulso (dorsal). De alguma maneira, a estrutura tridimensional do membro anterior produzida rotineiramente. O problema fundamental da morfognese- como estruturas especficas se situam em lugares determinados- exemplificado no desenvolvimento dos membros. Como que o
mesoderma da placa lateral desenvolve capacidades formadoras de membros? Como
que dedos se formam em uma das extremidades do membro e em nenhum outro
lugar? Como que o dedo mnimo se desenvolve em uma margem do membro e o
polegar em outra?
701
702
Figura 18.1
Padro esqueltico da asa de pinto. De acordo com a conveno, os

dgitos so numerados II,III, IV. Dgitos I e V no so encontrados
em asas de pinto. (De acordo com Saunders, 1982.)
Rdio
mero
Dgitos
Metacarpos
Cbito
Anterior
Proximal
Distal
Posterior
As regras morfogenticas bsicas para a formao dos membros parecem ser as

mesmas para todos tetrpodes (veja Hinchliffe, 1991). Fallon e Crosby (1977) mostraram que enxertos de pedaos de brotos membros de mamferos ou de rpteis podem
dirigir a formao de membros de pinto, e Sessions e colaboradores (1989) demonstraram que regies dos brotos de membros de salamandra e r podem, uns aos outros,
dirigir a padronizao dos seus membros. Ainda mais, a regenerao dos membros da
salamandra parece seguir as mesmas regras do desenvolvimento (Muneoka e Bryant,
1982). Mas quais so essas regras morfogenticas?
A informao posicional necessria para construir um membro deve funcionar em
um sistema coordenado tridimensional.* Durante os ltimos cinco anos, foram
identificadas certas protenas que tm um papel na formao de cada um dos eixos do
membro. O crescimento prximo-distal (ombro-dedo; coxa-artelho) parece ser regulado pela famlia de protenas do fator de crescimento dos fibroblastos (FGF). O eixo
ntero-posterior (polegar-dedo mnimo) deve ser regulado pela protena Sonic hedgehog, e o eixo dorsoventral (n dos dedos-palma da mo) regulado, pelo menos em
parte, por Wnt7a. A interao dessas protenas determina a diferenciao dos tipos de
clulas, alm de se apoiarem mutuamente.
Formao do broto do membro

O campo do membro
Um campo morfogentico pode ser descrito como um grupo de clulas cuja posio e
destino so especificados em relao ao mesmo conjunto de limites (Weiss, 1939;
Wolpert, 1977). Um campo especfico de clulas dar origem a seu rgo particular
(membro anterior, olho, cauda, etc.) quando transplantado a uma parte diferente do
embrio, e as clulas do campo podem regular seus destinos, contornando a falta de
clulas no campo (Huxley e De Beer, 1934; Opitz, 1985; De Robertis et al., 1991). Um
dos primeiros campos a serem identificados foi o campo do membro.
As clulas mesodrmicas que originam o membro de vertebrados podem ser
identificadas por (1) remoo de certos grupos de clulas e observando se um membro
se desenvolve em sua ausncia (Detwiler, 1918; Harrison, 1918), (2) transplantando
certos grupos de clulas a novos locais e observando se elas formam um membro
(Hertwig, 1925), e (3) marcando grupos de clulas com corantes ou precursores radioativos e observando quais descendentes das clulas marcadas participam no desenvolvimento dos membros (Rosenquist, 1971). Com esses procedimentos, a rea
prospectiva dos membros foi precisamente localizada em muitos embries de verte* Realmente, um sistema tetradimensional no qual o tempo o quarto eixo. Biologistas do
desenvolvimento se acostumam a ver a natureza em quatro dimenses.
brados. A Figura 18.2 mostra a rea prospectiva do membro anterior no estgio de

broto caudal da salamandra Ambystoma maculatum. O centro desse disco normalmente destinado a originar o prprio membro. Adjacente a ele esto as clulas que
formaro o tecido do flanco peribraquial e a cinta do ombro. Essas duas regies
compreendem o clssico disco do membro usado em experimentos citados neste
captulo. Entretanto, se todas essas clulas so extirpadas do embrio, ainda se formar um membro, ainda que mais tarde, a partir de um anel adicional de clulas que
envolve essa rea. Se esse anel de clulas for includo no tecido extirpado, no haver
desenvolvimento do membro. Essa regio maior, representando todas as clulas na
rea capazes de formar um membro, chamada campo do membro.
O campo do membro originalmente tem a habilidade de regular a perda ou a
adio de partes. No estgio de broto da cauda em Ambystoma, qualquer das metades do disco do membro capaz de regenerar o membro completo quando enxertado
em um novo stio (Harrison, 1918). Esse potencial tambm pode ser evidenciado
dividindo verticalmente o disco do membro em dois ou mais segmentos e colocando
delgadas barreiras entre os segmentos para impedir sua reunio. Quando isso
feito, cada parte se desenvolve em um membro completo. A habilidade reguladora do
broto do membro foi realada recentemente em um admirvel experimento da natureza. Em um pequeno lago em Santa Cruz, Califrnia, foram encontrados numerosas
salamandras e rs com vrias pernas (Figura 18.3). A presena desses apndices
extras foi relacionada infestao do abdmen das larvas por vermes trematides
parasticos. Os ovos desses vermes provavelmente dividiram o broto do membro em
vrios locais enquanto o girino estava iniciando a formao dessas estruturas
(Sessions e Ruth, 1990). Assim, como um embrio precoce de ourio-do-mar, o campo do membro representa um sistema eqipotencial harmonioso onde a clula
pode ser instruda a formar qualquer parte do membro.
Somitos
703
Rim
pronfrico
Guelras
Tecido do
flanco
peribraquial
Membro
livre
Cinta do
ombro
Figura 18.2
Campo prospectivo do membro anterior da salamandra Ambystoma maculatum. A rea central contm aquelas clulas destinadas a formar
o membro propriamente dito; as clulas rodeando o membro livre so aquelas que do origem ao tecido do flanco peribraquial e a cinta
do ombro. As clulas fora dessas regies geralmente no so includas nos membros, mas
podem formar um membro se os tecidos mais
centrais so extirpados. (De acordo com Stocum
e Fallon, 1982.)
Especificao dos campos do membro:

Genes Hox e cido retinico
Os membros no se formaro simplesmente em qualquer lugar ao longo do eixo corpreo.
Ao contrrio, existem posies muito distintas onde os campos do membro so originados. Interessantemente, em todos os vertebrados existem somente quatro brotos
de membros por embrio, e eles so sempre opostos entre si em relao linha mediana. Membros de diferentes vertebrados podem diferir em relao ao nvel do somito
de onde se originam, mas sua posio constante em relao ao nvel de expresso do
gene Hox ao longo do eixo ntero-posterior. Por exemplo, nos peixes (onde as nadadeiras peitorais e plvicas correspondem aos membros anteriores e posteriores, respectivamente), anfbios, aves e mamferos, os brotos dos membros anteriores so
encontrados na regio mais anterior expressando o gene Hoxc-6, a posio da primeira vrtebra torcica (Oliver et al., 1988; Molven et al., 1990; Burke et al., 1995). A placa
mesodrmica lateral na regio dos membros tambm especial, pois induz os mioblastos
a sair dos somitos e penetrar no broto do membro. Isso no feito por nenhuma outra
regio da placa mesodrmica lateral (Hyashi e Ozawa, 1995). [limb1.html], [mesend1.html]
O cido retinico parece ser crtico para o incio do crescimento dos brotos dos
membros, pois bloqueando a sntese de cido retinico com certas drogas se impede
a iniciao do broto do membro (Stratford et al., 1996). Bryant e Gardiner (1992) sugerem que um gradiente de cido retinico ao longo do eixo ntero-posterior pode ativar
certos genes hometicos em clulas particulares que so, dessa forma, especificadas
para serem includas no campo do membro. A fonte de cido retinico seria o ndulo
de Hensen (Hogan et al., 1992). A especificao de um campo de membro pelos genes
Hox, ativados por cido retinico, pode explicar uma observao estranha feita por
Mohanty-Hejmadi e colaboradores (1992) e repetida por Maden (1993). Quando caudas de girinos foram amputadas e o coto exposto ao cido retinico durante os primeiros dias de regenerao, esses girinos regeneraram vrias pernas do coto de sua
Figura 18.3
Habilidade reguladora do campo do membro,

vista quando os campos dos membros posteriores precoces de um girino de Hyla regila
foram divididos por numerosos ovos de
trematides. (Cortesia de S. Sessions.)
704
cauda (Figura 18.4). possvel que o cido retinico tenha causado uma transformao hometica na cauda em regenerao, reespecificando o tecido da cauda em campos de membros (Mller et al., 1996).
Crescimento do broto de membro precoce: fatores de crescimento
dos fibroblastos como indutores do broto do membro
Figura 18.4
Regenerao de pernas a partir do blastema da

cauda de um girino de r balo marmorizado
(marbled balloon). O blastema da cauda foi tratado com cido retinico aps a amputao. (de
Mohanty-Hejmadi et al., 1992, cortesia de P.
Monhanty-Hejmadi.)
O desenvolvimento dos membros comea quando as clulas mesenquimatosas comeam a proliferar a partir da camada somtica do mesoderma da placa lateral do campo do
membro (precursores esquelticos do membro), e a partir dos somitos (precursores
musculares do membro) (Figura 18.5). As clulas acumulam-se sob o tecido epidrmico
da nurula. A protuberncia circular na superfcie do embrio chamada broto do membro. As clulas mesenquimatosas no broto do membro se multiplicam para criar uma
protuberncia que vai se proliferar para formar um membro. Os estgios iniciais dessa
proliferao podem ser regulados pelo mesoderma intermedirio vizinho, tal como os
mesonefros (o rim primitivo). Se nesse estgio, o mesonefro de um dos lados do embrio
removido, ou se uma delgada membrana impermevel inserida entre o mesonefro e um
broto de membro, as clulas mesenquimatosas daquele broto de membro especfico
param de se multiplicar (Stephens et al., 1991; Geduspan e Solursh, 1992).
Experimentos recentes (Crossley et al., 1996) sugerem que a molcula proveniente
do mesoderma intermedirio o fator 8 de crescimento do fibroblasto (FGF8). No
mesnquima mesonfrico do pinto, nos estgios 14 e 15 (quando os prospectivos
brotos do membro comeam a aparecer), as regies de expresso de FGF8 nos
mesonefros coincidem com as regies onde se formaro os brotos de membro (Figura
18.6). Alm disso, os FGFs podem induzir a formao de membros. Uma partcula
embebida em FGF8 (ou FGFs relacionados) pode ser inserida na regio intramembro
(oposta aos somitos 21-25; veja Figuras 18.6 e 18.7) no estgio 15. Aps uma semana
de incubao, um membro ectpico l se forma. [limb2.html]
Induo da crista ectodrmica apical
A habilidade do FGF8 (ou outros FGFs) em induzir o crescimento mesodrmico do broto
do membro precoce pode ser somente uma atividade permissiva, e no instrutiva. A
formao do broto do membro necessita, alm de um indutor mesodrmico ativo, de um
ectoderma competente. O ectoderma competente para formar um broto de membro parece se localizar somente na borda entre as superfcies dorsal e ventral do embrio.
Mitomo
do somito
Precursor do
msculo
do membro
Medula
espinhal
Notocorda
Clulas
mesodrmicas
Broto do
membro
Prnefro
Figura 18.5
Formao do broto do membro. A proliferao

das clulas mesodrmicas da regio somtica
do mesoderma da placa lateral causa uma projeo externa do broto do membro no embrio
de anfbio. Essas clulas do origem aos elementos esquelticos do membro. (Migrao de
clulas somticas para o broto do membro gera
a musculatura do membro.)
Precursor
esqueltico
do membro
Endoderma
Mesoderma
da placa lateral
Mesoderma
da placa lateral
*Assim chamada devido ao gene fringe de Drosophila. A procura dos homlogos do gene fringe
nos vertebrados foi motivada por estudos (a serem discutidos no prximo captulo) mostrando que
a formao da margem da asa na Drosophila depende da expresso marginal desse gene. Como os
genes hedgehog e wingless parecem ter funes na formao de membros tanto nos vertebrados
como nos insetos, vrios laboratrios procuraram os genes fringe em vertebrados para verificar se
haveria a criao do equivalente margem da asa, ou seja, a AER. Foi previsto que expresses
limtrofes entre as regies dorsal e ventral seriam crticas na formao de membros vertebrados e
invertebrados (Bryant et al., 1981; Meinhardt, 1984; Javois e Iten, 1986), mas as molculas
envolvidas s agora esto sendo identificadas.
Estgios embrionrios
Membro anterior
Somitos
Membro posterior
Enquanto o broto do membro se forma, as clulas mesodrmicas induzem o ectoderma sobrejacente a formar uma estrutura chamada crista ectodrmica apical (AER;
Figura 18.8; Kieny, 1960; Saunders e Reuss, 1974). Essa crista corre ao longo da
margem distal do broto do membro e se tornar o principal centro sinalizador para o
membro em desenvolvimento. Suas funes incluem (1) manter o mesoderma abaixo
dela em uma fase plstica e proliferativa permitindo o crescimento linear (prximodistal) do membro; (2) manter a expresso daquelas molculas que geram o eixo nteroposterior (polegar-dedo mnimo); e (3) interagir com as protenas especificando os
eixos ntero-posterior e dorsoventral permitindo a cada clula receber instrues de
como se diferenciar.
A AER est localizada na juno entre o ectoderma dorsal e o ventral. No broto
do membro precoce, s o ectoderma nessa juno tem a habilidade de formar uma
AER (Goetinck, 1964; Fraser e Abbott, 1971). Nos mutantes onde o ectoderma do
broto do membro est dorsalizado (como o mutante limbless de pinto), a AER no se
forma e o desenvolvimento do membro cessa (Carrington e Fallon, 1988). Ainda
mais, partculas embebidas com FGF no induziro uma AER quando colocadas
abaixo do ectoderma puramente dorsal ou ventral das costas ou do ventre. A juno
dorsoventral parece ser crtica. Experimentos recentes (Laufer et al., 1997; Rodriguez
e Izpisa-Belmonte, 1997; Tanaka et al., 1997) demonstraram que a aposio do
ectoderma dorsal e ventral do broto do membro do pinto necessria para causar a
formao de uma AER. Quando o ectoderma dorsal do broto do membro foi enxertado no ectoderma ventral de outro broto do membro, uma nova AER se formou em
adio original (Figura 18.9). Parece que no estgio 15 (justamente antes da formao do broto do membro), o ectoderma dorsal est sintetizando uma protena secretora
chamada Radical fringe.* Ao emergir, o broto do membro (no estgio 17) se produz
705
Mesoderma
intermedirio
Expresso
de FGF8
Mesoderma
segmentrio
Figura 18.6
Expresso de FGF8 no mesoderma intermedirio do embrio de pinto nos estgios 13-15.

Diagrama esquemtico representando a metade lateral do embrio durante a induo do broto do membro. Os nmeros esquerda indicam nveis de somitos. (Os somitos so representados como crculos se desprendendo do
mesoderma segmentrio, que est representado por uma barra colorida). A faixa sombreada
indica a posio do mesoderma intermedirio;
a expresso de FGF8 nesse mesoderma intermedirio mostrada pelas regies mais escuras na faixa. As posies dos membros
prospectivos, anterior e posterior foram
marcadas em cinza. (De acordo com Crossley
et al., 1996.)
Figura 18.7
Membro ectpico formado pela implantao de uma partcula embebida em FGF

no mesoderma entre-membros no estgio 15. Embrio tardio mostrando membro anterior, membro posterior e membro intermedirio induzido pela partcula
embebida em FGF. (Fotografia cortesia de G.R. Martin.)
706
Crista ectodrmica apical
Figura 18.8
Micrografia eletrnica de varredura de um broto de membro precoce de pinto, com sua crista
ectodrmica apical em primeiro plano. (Cortesia de K. W. Tosney.)
uma forte demarcao entre as clulas dorsais que expressam o gene radical fringe
e as clulas do ectoderma ventral que no o expressam. Durante o crescimento do
broto, a expresso do radical fringe se restringe quase exclusivamente quelas
clulas do ectoderma dorsal na margem dorsal/ventral do broto do membro. Essas
clulas comeam a expressar Fgf8 e se tornam a AER. (Como veremos, a FGF8
secretada da AER considerada crtica por sua capacidade em manter a proliferao
do mesoderma abaixo dela e manter a expresso do gene sonic hedgehog para a
organizao do eixo ntero-posterior; veja Figura 18.10.)
A importncia da margem expressando ou no o radical fringe confirmada em
estudos onde esse gene expresso ectopicamente em retrovrus. Se as clulas ventrais do broto do membro so infectadas com um retrovrus expressando radical
fringe, um novo limite criado entre as clulas que expressam o gene e aquelas que
no o expressam, e uma nova AER nela originada. Inversamente, se a expresso
ectpica de radical fringe destri a fronteira entre as clulas que o expressam e as que
no o expressam, aquela regio da AER original no se forma.
A formao da AER pode envolver uma interao entre a secreo de FGFs (tal
como FGF8) pelo mesoderma e o limite de expresso de radical fringe ao longo da
borda dorsoventral do ectoderma. A secreo limitada de FGFs pode ser crtica na
identificao de quais clulas, ao longo do flanco dorsoventral do embrio produzem
os brotos do membro. Ainda no se conhece como a borda entre expresso e no
expresso de radical fringe e os FGFs induzem a formao da AER.
Produo do eixo prximo-distal dos membros

Figura 18.9
Formao de uma AER ectpica quando tecido

ventral transplantado para o tecido dorsal do
broto do membro. (A) Procedimento onde ectoderma ventral de um broto do membro posterior de pinto transplantado para a superfcie
dorsal de um broto do membro posterior hospedeiro, no mesmo estgio. (B) Aps 26 horas
de incubao se forma uma AER ectpica (a
AER original est indicada por uma flecha e a
AER ectpica por uma cabea de flecha). (C)
Enquanto a AER se forma, a expresso de radical fringe (cabea de flecha) no broto do
membro se torna confinada s clulas dorsais
na juno D/V que formar a AER. (de Laufer
et al., 1997; fotografias cortesia de E. Laufer.)
Estgio 18/19
Broto da perna
do hospedeiro
O crescimento prximo-distal e a diferenciao do broto do membro possibilitado

por uma srie de interaes entre o mesnquima do broto do membro e a AER (Figura
18.11; Harrison, 1918; Saunders, 1948):
Estgio 18/19
Jaqueta ectodrmica
do doador
(A)
Somitos
A crista ectodrmica apical: O componente ectodrmico
Enxerto
ectodrmico
AER
1. Quando a AER removida em qualquer tempo durante o desenvolvimento do

membro, cessa o desenvolvimento posterior de elementos esquelticos do
membro distal.
(B)
(C)
Estgio 15
Estgio 16
Estgio 17
Figura 18.10
Estgio 18
AER
Induzido
por Fgf8
Sinal
dependente
de Fgf8?
Proliferao
mantida
por FGF8
Somitos
Proliferao
mantida por
FGF8 + FGF4
Anterior
Posterior
shh
induzido
por FGF8
Mesoderma
intermedirio
shh mantido
por FGF8
+FGF4
Fgf4
induzido
por Shh
Ectoderma
superficial
Mesoderma da
placa lateral
707
Fgf8 (Fator de crescimento dos fibroblastos)

shh (sonic hedgehog)
Um modelo molecular para a iniciao do broto do membro. FGF8 secretado pelo mesoderma intermedirio e/ou expresso de radical fringe na margem ectodrmica induz a expresso de FGF8 no ectoderma superficial que
a recobre. A borda ntero-posterior est presente no estgio 16 (e talvez antes). A secreo de FGF8 pelo ectoderma induz a proliferao nas clulas mesenquimais e induz a expresso de Sonic hedgehog na regio posterior do broto do membro. A Sonic hedgehog
induz a expresso de FGF4 na poro posterior do ectoderma do broto do membro. A
FGF2 tambm produzida pelo ectoderma,
apesar de no estar claro se induzido pelo
FGF8 do mesoderma mesofrnico. (De acordo com Crossley et al., 1995.)
Fgf4 +Fgf8
2. Quando uma AER extra enxertada em um broto de membro existente, so

formadas estruturas supranumerrias, freqentemente na direo da extremidade distal do membro.
3. Quando mesnquima da perna colocado diretamente abaixo da AER da asa,
se desenvolvem estruturas distais do membro posterior (artelhos) na ponta do
membro. (Entretanto, se esse mesnquima colocado mais longe da AER, o
mesnquima do membro posterior se integra s estruturas da asa.)
4. Quando mesoderma no proveniente de membros enxertado abaixo da AER,
a AER regride e o desenvolvimento do membro cessa.
AER
removida
Cessa
desenvolvimento
do membro
AER
extra
Asa
Mesoderma
do membro
anterior
Perna
Asa
Mesoderma
da Perna
AER regride; cessa

desenvolvimento
do membro
Mesoderma
no de membro
Figura 18.11
Sumrio do efeito da crista ectodrmica apical

(AER) sobre o mesnquima subjacente. (Modificado de Wessells, 1977.)
708
Figura 18.12
Corte transversal atravs da regio distal de

um membro de pinto, 3 dias aps a retirada de
uma fatia de AER de uma rea que formaria
tecido interdigital. Em lugar de degenerar, o
tecido interdigital remanescente formou um
dgito extra. (de Hurle et al., 1989, cortesia
dos autores.)
Portanto, apesar das clulas mesenquimatosas induzirem e sustentarem a AER, e

determinarem o tipo de membro a ser formado, a AER ainda a responsvel pelo
contnuo crescimento e desenvolvimento do membro (Zwilling, 1955; Saunders et al.,
1957; Saunders, 1972; Krabbenhoft e Fallon, 1989). A AER mantm o mesnquima
diretamente subjacente em um estado de proliferao mittica e impede a formao de
cartilagem pelas clulas mesenquimatosas. Hurle e colaboradores (1989) mostraram
que pelo corte de pequena poro da AER de uma regio que normalmente cairia entre
os dgitos da perna do pinto, um dgito extra emerge naquele lugar (Figura 18.12).
Parece mesmo que uma funo da AER manter as clulas mesenquimatosas se proliferando e, portanto, impedindo que formem cartilagem.
A zona progressiva: O componente mesodrmico
O eixo prximo-distal definido somente aps a induo da crista ectodrmica apical
pelo mesoderma subjacente. O broto do membro se alonga pela proliferao das clulas mesenquimatosas abaixo da AER. Essa regio de diviso celular chamada zona
progressiva, e se estende cerca de 200 m para dentro da AER. Considera-se que as
molculas da AER mantm as clulas mesenquimatosas da zona progressiva em diviso e que essas molculas responsveis so os FGFs (Savage e Fallon, 1995; Crossley
et al., 1996). Quando as clulas mesenquimatosas deixam a zona progressiva, elas se
diferenciam de maneira regionalmente especfica. As primeiras clulas deixando a zona
progressiva formam as estruturas proximais; aquelas clulas que sofreram numerosas
divises na zona progressiva se tornam as estruturas mais distais (Saunders, 1948;
Summerbell, 1974). Portanto, quando a AER removida de um broto de asa em estgio
precoce, as clulas da zona progressiva param de se diferenciar e somente um mero
se forma. Quando a AER removida um pouco mais tarde, se formam o mero, o rdio
e o cbito (Figura 18.13; Rowe et al., 1982).
A polaridade prximo-distal reside no compartimento mesodrmico do membro. Se
a AER fornece a informao posicional- de certa maneira instruindo o mesoderma
subjacente, no diferenciado, sobre quais estruturas produzir- ento as AERs mais
velhas combinadas com mesoderma mais jovem deveriam produzir membros com
delees na sua parte mediana, enquanto as AERs mais jovens combinadas com
mesoderma mais velho deveriam produzir duplicaes de estruturas. Mas no foi isso
o que se encontrou (Rubin e Saunders, 1972). Ao contrrio, se formaram membros
normais em ambos os experimentos. Mas quando a zona progressiva inteira, incluindo
o mesoderma e a AER de um embrio precoce foi colocada no broto do membro de um
embrio em estgio mais avanado, novas estruturas proximais foram produzidas alm
daquelas j presentes. Inversamente, quando zonas progressivas mais velhas so
adicionadas a brotos de membros jovens, imediatamente se desenvolveram estruturas
distais, de tal forma que se viu dgitos emergindo do mero, sem o rdio e o cbito
intermedirios (Figura 18.14; Summerbell e Lewis, 1975).
(A)
(B)
(D)
(E)
709
(C)
Figura 18.13
Vista dorsal do padro esqueltico do pinto aps remoo total da AER do broto da asa direita de
embries em vrios estgios. A ltima foto (E) do esqueleto de uma asa normal. (de Iten, 1982,
cortesia de L. Iten.)
Genes Hox e a especificao do eixo prximo-distal do membro

A anlise de mutaes naturais ou experimentalmente induzidas deu origem a hiptese
de que os genes Hox 5 (Abdominal-B) especificam pores individuais do eixo prximo-distal do membro. As extremidades 5 da srie de genes parlogos Hoxa e Hoxd
(parlogos 9-13) parecem ser ativas no broto do membro anterior do camundongo.
Davis e colegas (1995) eliminaram todos os quatro locus para os genes parlogos
Hoxa-11 e Hoxd-11. (No existem genes Hoxb-11 em camundongo, e Hocx-11 no
bem expresso no membro anterior, apesar de s-lo no membro posterior.) Os camundongos resultantes no tinham o cbito e o rdio de seus membros anteriores (Figura
18.15A,B). Com base nos padres de expresso dos genes das sries Hoxa e Hoxd,
onde os genes mais 5 dos conjuntos Hox so expressos mais distalmente, esses
(A)
(B)
Figura 18.14
Controle da especificao prximo-distal por

clulas da zona progressiva (PZ). (A) Conjunto extra de cbito e rdio formado quando
PZ de broto precoce transplantada para o
broto tardio da asa que j formou o cbito e o
rdio. (B) Falta de estruturas intermedirias
observada quando a PZ de broto tardio transplantada para broto precoce de membro. A
posio das dobradias indica o local dos enxertos. (de Summerbell e Lewis, 1975, cortesia de D. Summerbell.)
710
(A)
(C)
Grupos parlogos de Hox cognatos
(B)
(D)
Figura 18.15
Deleo de elementos sseos do membro por deleo dos genes Hox parlogos. (A) Membro
anterior de camundongo tipo selvagem. (B) Membro anterior de camundongo produzido duplamente mutante, com a falta funcional dos genes Hoxa-11 e Hoxd-11. O cbito e o rdio esto
ausentes. (C) Sinpolidactilia resultante de homozigosidade nos locos HOXD-13. (D) Hiptese
considerando que os parlogos 5 dos genes Hox poderiam especificar determinadas regies do
membro anterior. (A, B e D de acordo com Davis et al., 1995; fotografia cortesia de M. Capecchi.
C de Muragaki et al., 1996, cortesia de B. Olsen.)
pesquisadores propuseram um modelo onde os genes parlogos especificam a identidade de uma regio do membro (Figura 18.15D). Esse modelo est sendo testado e faz
previses bvias em relao ao fentipo de outros camundongos com dupla ou tripla
eliminao (quando os parlogos 13 ou 12 so deletados).
Esse modelo tem suporte na anlise de duas mutaes naturais. Camundongos
homozigotos para um alelo de perda-de-funo de Hoxa-13 apresentam severa
malformao nas quatro patas, que desenvolvem somente um dgito, uma verso
malformada do dgito 4 (Mortlock et al., 1996). Homozigotos humanos para uma
mutao de perda-de-funo de Hoxd-13 mostram anormalidades nos ps e nas
mos onde ossos metacrpicos e metatrsicos so transformados em ossos crpicos
e trsicos curtos. Isso resulta na fuso dos dgitos (Figura 18.15C; Muragaki et al.,
1996). Em ambos os casos, o autpodo (a poro mais distal do membro) afetado
pela perda-de-funo do gene Hox mais 5. O mecanismo pelo qual os genes Hox
podem especificar o eixo prximo-distal ainda no est esclarecido, mas uma pista
vem da anlise do Hoxa-13 de galinha. A expresso ectpica desse gene (que
usualmente expresso nas extremidades distais dos membros em desenvolvimento
do pinto) parece tornar mais pegajosas as clulas que o expressam. Isso, por sua
vez, causaria condensao de ndulos cartilaginosos em formas especficas
(Yokouchi et al., 1995; Newman, 1996).
Interaes entre a AER e a zona progressiva
Os sinais moleculares da interao entre a AER e o mesnquima da zona progressiva
esto comeando a ser identificados. A diviso das clulas mesenquimatosas na zona
progressiva parece ser regulada pela secreo de membros da famlia FGF, tais como
FGF2 (Fallon et al., 1994), FGF4 (Niswander et al., 1993) e FGF8 (Mahmood et al., 1995;
Crossley et al., 1996; Vogel et al., 1996). Considera-se que esses fatores de crescimento
do fibroblasto so secretados da AER para o mesnquima adjacente (veja Capa; Figura 18.16). Ainda mais, se a AER removida, ela poder ser substituda pela implantao
de partculas esfricas (contas) cheias de FGF2, FGF8 ou FGF4 (Figura 18.17). Parece,
portanto, que a AER promove o crescimento pela secreo de fatores de crescimento
do fibroblasto (Crossley et al., 1996; Vogel et al., 1996). O FGF8 uma das primeiras
molculas identificadas na regio do ectoderma que se torna a AER, e sua expresso
crtica no crescimento do broto do membro (Figura 18.16).
Mutaes nas interaes entre a zona progressiva e a AER
A relao entre a AER e o mesnquima do broto do membro pode ser melhor apreciada
em mutaes no desenvolvimento de membros do pinto. A mutao polydactylous,
como o nome sugere, adiciona dgitos extras em cada membro. Recombinando tecidos
(A)
(B)
(C)
Figura 18.16
FGF8 e morfognese de membros. (A) Hibridizao in situ mostrando expresso da mensagem

de Fgf8 no ectoderma enquanto o broto do membro comea a se formar. (B) Expresso do RNA
Fgf8 na crista ectodrmica apical, a fonte de sinais mitticos para o mesoderma subjacente. (C)
Em embries normais de pinto (estgio 17; cerca de 24 horas), FGF8 expresso na crista
ectodrmica apical de ambos os brotos do membro, anteriores e posteriores. tambm expresso
em vrios outros lugares no embrio. (D) No mutante limbless de galinha, FGF8 no expresso
nos brotos do membro, apesar de no estar perdido em outras regies do embrio. Aqui, os
brotos do membro se formam mas no se desenvolvem em membros (A e B cortezia de J. C.
Izpisa Belmonte; C e D cortesia de A. Lpez-Martnez e J. F. Fallon.)
(D)
711
712
(A)
Remover
AER
20 horas
Forma o mero
Sem
AER
(B)
Remover
AER
Adicionar
partcula com
soluo salina
20 horas
Forma o
mero
Partcula
(C)
Remover
AER
Adicionar partcula
contendo FGF2
20 horas
mero
Rdio
Cbito
Partcula
Dgitos
(D)
mero
Rdio
Cbito
Remover
AER
Adicionar partcula
contendo FGF2
24 horas
Implantar
segunda
partcula
contendo
FGF2
20 horas
Segunda
partcula
Carpos
Figura 18.17
Habilidade de FGF2 para substituir a crista ectodrmica apical no broto do membro anterior em
desenvolvimento do pinto. (A) Quando a AER removida dos brotos da asa do pinto no estgio
20, somente se forma o mero. (B) Se uma partcula gelatinosa de lenta liberao embebida em
soluo salina colocada no mesnquima da zona progressiva, o membro ainda fica truncado e
forma somente o mero. (C) Quando um broto embebido em FGF2 colocado na zona progressiva o crescimento do broto do membro continua, e o cbito e o rdio so formados. (D) Se uma
segunda partcula contendo FGF2 colocada na zona progressiva aps a dissipao da maioria
do FGF2 da primeira partcula, o broto do membro continua a crescer e a produzir metacarpos e
dgitos. (De acordo com Fallon et al., 1994.)
Tabela 18.1
713
Mutaes que afetam as interaes recprocas entre a AER e seu

mesnquima subjacentea
Mesoderma
Epiderme
Resultado
Concluso
POLIDCTILO
Polidctilo
Tipo selvagem
Tipo selvagem
Polidctilo
Polidctilo
Tipo selvagem
Mesoderma afetado
pela mutao
EUDIPLOPODIA
Eudiplopodia
Tipo selvagem
Tipo selvagem
Eudiplopodia
Tipo selvagem
Eudiplopodia
Ectoderma afetado
pela mutao
LIMBLESS
Limbless
Tipo selvagem
Tipo selvagem
Limbless
Tipo selvagem
Limbless
Ectoderma
afetado pela mutao
aPor transplante recproco entre o tipo selvagem e AER mutante e mesnquima, o compartimento aberrante da induo pode ser identificado.
mutantes e do tipo selvagem (Tabela 18.1), os defeitos podem ser traados para as
clulas mesodrmicas que induzem amplamente uma AER. No mutante eudiplopodia
(Grego, dois bons ps), alm dos dgitos extras aparecem duas seqncias completas de dedos em cada membro posterior (Figura 18.18). Experimentos semelhantes com
reconstituio mostram que aqui o defeito est no tecido ectodrmico. Embries de
pintos homozigotos para a mutao limbless iniciam a formao do broto do membro,
mas a AER no se forma. Experimentos de recombinao mostram que o ectoderma de
limbless incapaz de formar uma AER, mesmo quando colocado no mesoderma de
membro do tipo selvagem; uma crista normal pode ser formada quando ectoderma
normal enxertado no campo do membro em lugar do ectoderma mutante (Figura
18.19; Carrington e Fallon, 1988).
Alm disso, existem vertebrados naturalmente sem membros, cuja falta de membros pode ser relacionada s deficincias na interao AER-mesnquima. A praga
contra cobras no Livro do Gnesis parece ter sido dirigida extremidade distal do
broto do membro, pois a AER desses rpteis degenera-se prematuramente e ao mesmo
tempo em que ocorre a morte celular no mesnquima adjacente (Lande, 1978). No se
sabe se o defeito inicial est no mesnquima ou na AER. [limb3.html]
(A)
(B)
Figura 18.18
Seces transversais dos brotos dos membros posteriores em eudiplopodia de embries de pinto. (A) Duas AERs no broto do
membro posterior; crescimento extra no lado
dorsal formar um conjunto extra de dedos.
(B) Ambas as regies de crescimento esto
cobertas por uma AER. Recentemente foi
demonstrado (Laufer et al., 1997) que duas
reas de radical fringe aparecem no broto do
membro desse mutante, e cada uma se associa com a nova AER. (De Goetinck,1964,
cortesia de P. Goetinck.)
714
Figura 18.19
O embrio limbless no forma AER, e o defeito parece residir no ectoderma. Se o ectoderma de codorna do tipo selvagem substitui o ectoderma
mutante do pinto na regio que forma o membro anterior, a asa se desenvolver naquele lado do embrio. No se forma outro membro. (De acordo
com Carrington e Fallon, 1988; fotografia cortesia de J. Fallon.)
&
Especulaes
A regenerao dos membros da salamandra e a

reteno do eixo prximo-distal
REQENTEMENTE TIL encontrar modelos adultos de desenvolvimento embrionrio. Durante

dois sculos, a regenerao do membro
de anfbios foi no somente uma das mais
extraordinrias demonstraes de regulao, mas tambm um modelo para o desenvolvimento do membro tetrpode nos
vertebrados. Quando um membro da salamandra amputado, as clulas remanescentes so capazes de reconstruir um
membro completo com todas suas clulas
diferenciadas organizadas de maneira correta. extraordinrio que no s o membro tenha sido regenerado, mas tambm
que as clulas que ficaram mantiveram a
informao especificando sua prpria
posio como tambm a das clulas removidas. Em outras palavras, as novas
clulas constroem somente as estruturas
perdidas e nada mais; por exemplo, quando um punho amputado, a salamandra
forma um novo punho e no um novo
cotovelo (Figura 18.20). De certa maneira,
o membro da salamandra sabe onde o
eixo prximodistal foi cortado e pode
regener-lo daquele ponto em diante. Oscar Schott disse que daria seu brao direito para conhecer o segredo da regenerao do membro (em Goss, 1991).
Ao se amputar um membro, forma-se um
cogulo de plasma; e dentro de 6-12 horas,
clulas epidrmicas do coto remanescente,
Figura 18.20
Regenerao do membro anterior da salamandra. Na esquerda, a amputao foi feita abaixo

do ombro; a amputao mostrada direita cortou atravs do mero. Em ambos os casos, a
informao posicional correta foi reespecificada.
(de Goss, 1969, cortesia de R. J. Goss)
migram para cobrir a superfcie do ferimento,

formando a epiderme do ferimento. Essa
estrutura em monocamada necessria para
a regenerao do membro. Ela se prolifera
para formar o hemisfrio ectodrmico apical.
A inervao do membro se degenera em uma
curta distncia a partir do plano de amputa-
o (veja Chernoff e Stocum, 1995). Durante os prximos 4 dias as clulas abaixo do

hemisfrio em desenvolvimento sofrem uma
dramtica desdiferenciao: clulas sseas,
clulas da cartilagem, fibroblastos, micitos
e clulas neurais perdem suas caractersticas diferenciadas e se destacam umas das
outras. Genes expressos em tecidos diferenciados (como os genes MRF4 e Myf5
expressos em clulas musculares) so reprimidos, enquanto h um dramtico aumento
na expresso de genes, tal como msx1, que
so associados com o mesnquima da zona
progressiva em proliferao (Simon et al.,
1995). Portanto, a bem estruturada regio
do membro, na face cortada do toco, forma
uma massa proliferante de clulas indistintas e desdiferenciadas, logo abaixo do hemisfrio ectodrmico apical. Essa massa de
clulas desdiferenciadas chamada de
blastema de regenerao, e essas clulas
continuaro a se proliferar e se diferenciar
para formar as novas estruturas do membro. Se as clulas do blastema forem
destrudas, a regenerao no se dar
(Butler, 1935). Ainda mais, uma vez que as
clulas se desdiferenciaram para formar um
blastema, elas recuperaram sua plasticidade embrionria.
Na maioria dos casos, entretanto, o tecido neural essencial para a formao do
novo membro pelas outras clulas. Singer
(1954) demonstrou que um nmero mnimo
(A)
(B)
Figura 18.21
Efeitos da vitamina A (um retinide) em membros de salamandra em regenerao. (A) Membro normal regenerado de axolotle (9x) com
mero, rdio e cbito pareados, carpos e dgitos. A linha pontilhada mostra o plano de amputao. (B) Regenerao aps a amputao
atravs da rea do corpo, mas aps a colocao
do blastema do membro em palmitato de retinol
por 15 dias. Aparecem um novo mero, cbito,
rdio, conjunto de carpos e conjunto de dgitos
(5x). (de Maden et al., 1982; fotografias cortesia de M. Maden.)
de fibras nervosas devem estar presentes

para que se d a regenerao. Considerase que os neurnios liberam um fator estimulante de mitose que aumenta a proliferao das clulas do blastema (Singer e
Caston, 1972; Mescher e Tassava, 1975).
Aps uma fase inicial dependente de neurnios, a regenerao pode prosseguir sem
estimulao neural. Um candidato para essa
substncia neural crucial o fator de crescimento da glia (GGF). Sabe-se que esse
peptdeo produzido pelas clulas neurais
da salamandra aqutica, est presente no
blastema e perdido na enervao. Quando o GGF adicionado ao blastema
enervado, as clulas mitoticamente reprimidas so aptas a dividir-se novamente
(Brockes e Kinter, 1986). Outro candidato
a transferrina, uma protena transportadora de ferro que necessria para a mitose
em todas as clulas em diviso (pois a

redutase ribonucleotdica, a enzima limitante da velocidade na sntese de DNA, requer um on frrico no seu stio ativo).
Quando so removidos os membros posteriores, o nervo citico transporta a
transferrina pelo axnio e libera grandes
quantidades dessa protena no blastema
(Munaim e Mescher, 1986; Mescher, 1992).
Tanto extratos neurais como transferrina
so capazes de estimular a diviso celular
em membros enervados, e a quelao dos
ons frricos nos extratos neurais impede
sua atividade mittica (Munaim e Mescher,
1986; Albert e Boilly, 1988). Um terceiro
candidato o FGF2. Mullen e colaboradores (1996) mostraram que o hemisfrio ectodrmico apical transcreve grandes quantidades de Dlx3, um homlogo anfbio de
Distal-less de Drosophila. Durante os estgios de regenerao dependentes de
neurnios, a expresso ectodrmica de Dlx3
dependente da inervao. Existe uma
correlao entre a presena de Dlx3 e uma
epiderme permissiva de crescimento. Nos
estgios tardios da regenerao, a expresso de Dlx3 no depende dos neurnios.
Se membros amputados so enervados em
um estgio dependente de neurnios, a
expresso de Dlx3 e a regenerao podem
ser mantidas por partculas contendo FGF2
(Mullen et al., 1996).
O cido retinico parece ter uma funo importante tanto na desdiferenciao
das clulas para formar o blastema de regenerao como no processo de reespecificao quando as clulas rediferenciam.
Se os blastemas de membros de salamandra em regenerao so mergulhados em
solues com concentraes adequadas
de cido retinico (ou outros retinides),
os membros em regenerao tm duplicaes ao longo do eixo prximo-distal (Figura 18.21; Niazi e Saxena, 1978; Maden
1982). Um membro completo (comeando

do osso mais proximal) se desenvolve a
partir do coto do membro, independentemente do nvel original da amputao.
possvel que o cido retinico cause a reespecificao das clulas para a posio
mais proximal (Figura 18.22; Prancha 9;
Crawford e Stocum, 1988b).
O cido retinico sintetizado na
epiderme do ferimento do membro em regenerao, formando um gradiente ao longo do eixo prximo-distal do blastema
(Brockes, 1992; Scadding e Maden, 1994).
Esse gradiente de cido retinico pode
ativar os genes diferencialmente em regies diferentes do blastema. Um dos genes
responsivos ao cido retinico o msx1
que associado proliferao do mesnquima (Shen et al., 1994; Viviano et al.,
1995). Outro conjunto de genes que podem ser reespecificados pelo cido retinico so os genes HoxA. Gardiner e colaboradores (1995) mostraram que o padro da expresso de certos genes HoxA
nas clulas distais do blastema em regenerao modificado pelo cido retinico exgeno para um padro de expresso
caracterstico de clulas mais proximais.
provvel que durante a regenerao normal, a epiderme do ferimento/hemisfrio
ectodrmico apical secrete cido retinico que ativa os genes necessrios para a
proliferao celular, reprima os genes especficos para clulas diferenciadas e, finalmente, ative um conjunto de genes Hox
que orientam as clulas quanto ao lugar
onde esto e quanto devem crescer. O mecanismo pelo qual isso realizado pelos
genes Hox no conhecido, mas foram
verificadas variaes tanto na adeso clula-clula como em outras qualidades de
superfcie das clulas (Nardi e Stocum,
1983; Stocum e Crawford, 1987; Bryant e
Gardiner, 1992).
Soluo de
cido retinico
Soluo
controle
Blastema forma
punho e dgitos
Colocar blastema
de punho doador na
regio do ombro
do membro cortado
do hospedeiro
715
BLASTEMA
de punho
doador
Colocar blastema de
punho doador na regio do
ombro do membro
cortado do hospedeiro
Proximalizao
dos destinos
do blastema
Figura 18.22 - Blastemas de punho de membros de axolotle recentemente cortados regeneram
o punho quando colocados em membros hospedeiros cortados na rea do ombro (Veja Captulo
3). Entretanto, se forem colocados em soluo de cido retinico, esses blastemas comearo a se
regenerar no local onde foram colocados no tecido hospedeiro, e geram estruturas proximais
quelas do punho. (Dados de Crawford e Stocum, 1998a,b.)
716
Assim, estamos frente a uma situao

onde as clulas adultas de um organismo
podem retornar a uma condio embrionria e comeam novamente a formao
de um membro. Exatamente como no desenvolvimento embrionrio, o blastema
forma sucessivamente estruturas mais
distais (Rose, 1962). Portanto, o blastema
deve conter alguma informao posicional que informa ao blastema de um coto
contendo um mero, que no deve produzir outro mero e nem comear imediatamente a produzir dgitos. No somente
o blastema regenera essas estruturas comeando no nvel prximo-distal apropriado no membro, como tambm as polaridades dos eixos ntero-posterior (polegar-dedo mnimo) e dorsoventral (punhopalma da mo) tambm correspondem
quelas do coto.
Especificao do eixo ntero-posterior dos membros

A zona de atividade polarizante
Uma autodiferenciao do eixo ntero-posterior a primeira modificao da condio
pluripotente. Em pintos, esse eixo especificado muito antes que o broto do membro
seja reconhecvel. Hamburger (1938) mostrou que j no estgio precoce de 16 somitos,
o mesoderma prospectivo da asa transplantada para a rea do flanco se desenvolve
em um membro com as polaridades ntero-posterior e dorsoventral do enxerto doado
e no daquelas do tecido hospedeiro (Figura 18.23).
Anterior
Dorsal
Ventral
Desenvolvimento
normal dos brotos
do membro nas asas
Posterior
Brotos enxertados
diferem do hospedeiro
no eixo dorsoventral
Relacionamento
de eixos entre
enxerto
(sombreado)
e hospedeiro
Brotos enxertados
diferem do
hospedeiro no eixo
ntero-posterior
Figura 18.23
Especificao dos eixos ntero-posterior e

dorsoventral na asa do pinto. O broto do membro enxertado se desenvolve de acordo com
sua prpria polaridade e no adota a polaridade do seu hospedeiro. As asas que se desenvolvem dos brotos do membro enxertados
esto coloridas. Para maior clareza, as asas
que o hospedeiro normalmente desenvolve
no esto apresentadas. (De acordo com
Hamburger, 1938.)
Brotos enxertados
diferem do
hospedeiro nos
eixos ntero-posterior
e dorsoventral
Estgio 17
Figura 18.24
Dgitos duplicados aparecem como imagem espelhar de dgitos normais quando

ZPA enxertada no mesoderma do broto do membro anterior. (de Honig e
Smmerbell, 1985, fotografia cortesia de D. Summerbell.)
Considera-se que a diferenciao das estruturas prximo-distais depende do nmero de divises realizadas pela clula enquanto na zona progressiva, mas a informao posicional instruindo a clula quanto sua posio nos eixos ntero-posterior e
dorsoventral deve vir de outras fontes. Vrios experimentos (Saunders e Gasseling,
1968; Tickle et al.,1975; Summerbell, 1979) sugerem que o eixo ntero-posterior especificado por um pequeno bloco de tecido mesodrmico perto da juno posterior do
jovem broto do membro com a parede do corpo. Quando esse tecido de um jovem
broto de membro transplantado para uma posio no lado anterior de outro broto de
membro (Figura 18.24), o nmero de dgitos na asa resultante duplicado. Alm disso
as estruturas do conjunto extra de dgitos a imagem espelhar daquelas estruturas
normalmente produzidas. A polaridade foi mantida, mas agora a informao vem ao
mesmo tempo das direes anterior e posterior. Essa regio do mesoderma chamada
de zona de atividade polarizante (ZPA).
A distribuio e a fora da atividade de sinalizao posicional da ZPA na asa do
pinto e brotos da perna foram mapeados (Hinchliffe e Sansom, 1985; Honig e
Summerbell, 1985). Como indicado nos desenhos da Figura 18.25, a atividade polarizante
(medida aps o enxerto das clulas marginais posteriores na margem anterior do broto
do membro) maior em uma regio determinada da margem posterior e de l vai diminuindo. A atividade enfraquece enquanto progride o desenvolvimento.
A
Sonic hedgehog como definidor da ZP
ZPA
A procura de molcula(s) conferindo atividade polarizante ao broto do membro do
pinto se tornou uma das mais intensas buscas da biologia do desenvolvimento. Os
candidatos atuais a fatores da ZPA foram identificados a partir de estudos que assumiram uma homologia evolucionria dos sistemas reguladores do desenvolvimento
entre a Drosophila e os vertebrados. Como deve ser lembrado do Captulo 16, os
genes hometicos da Drosophila tm contrapartidas nos vertebrados os quais tm
Estgio 19
Estgio 21
Estgio 23
Estgio 25
Estgio 27
Figura 18.25
Mapa da atividade sinalizadora de posio enquanto o membro se desenvolve. As cores representam a intensidade de expresso de sonic hedgehog. Os nmeros representam a porcentagem de
enxertos mostrando duplicaes completas quando essas regies foram transplantadas para a
margem anterior do broto do membro precoce. (Desenhos de acordo com Honig e Summerbell,
1985, dados de expresso de Riddle et al., 1993.)
Estgio 29
717
718
Transfectar vrus expressando shh e

permitir que o vrus se espalhe
Cepa infectvel de
clulas fibroblsticas
do embrio de pinto
Clulas compactadas
por centrifugao
Implante na poro anterior do broto do

membro (Embrio no estgio 19-23)
Anterior
Cepa resistente
do embrio
hospedeiro
Plete de
clulas
secretando
Shh
Posterior
Figura 18.26
Ensaio para a atividade polarizante de Sonic hedgehog. O gene sonic hedgehog foi inserido no
promotor ativo de um vrus de pinto, e o vrus recombinante colocado em clulas fibroblsticas
cultivadas de embrio de pinto. As clulas infectadas pelo vrus foram compactadas e implantadas
na margem anterior do broto do membro de um embrio de pinto resistente infeco por esse
vrus. O vrus no podia infectar o hospedeiro, mas podia expressar e secretar altos nveis de
Sonic hedgehog. Os membros resultantes mostraram que o material secretado tinha atividade
polarizante. (De acordo com Riddle et al., 1993.)
funes desenvolvimentais crticas. E como foi mencionado no Captulo 14, o gene

hedgehog responsvel pela polaridade de segmentos parece codificar uma protena
difusvel que interage com as clulas vizinhas. Seria muito perguntar se existe um
homlogo nos vertebrados que realiza uma funo semelhante?
Usando a seqncia conhecida do gene hedgehog em Drosophila, Riddle e
seus colaboradores (1993), usaram a reao da cadeia de polimerase para identificar uma mensagem semelhante a hedgehog em brotos de membros de pinto. Eles
nomearam o gene como sonic hedgehog*. Hibridizao in situ mostrou que a
expresso de sonic hedgehog no se d no broto do membro inteiro, mas localizada exatamente na regio que, segundo Honig e Summerbell, contm a maior
atividade de ZPA (Figura 18.25).
Riddle e colaboradores mostraram que a secreo da protena Sonic hedgehog
poderia ser suficiente para a atividade de ZPA. Eles transfectaram fibroblastos embrionrios de pinto (que normalmente nunca sintetizariam essa protena) com um vetor
viral contendo o gene sonic hedgehog (Figura 18.26). O gene foi expresso e traduzido
nesses fibroblastos, os quais foram inseridos em uma crista anterior de um broto de
membro precoce do pinto. Foi demonstrada tambm a reverso de polaridade dos
dgitos, de maneira semelhante ZPA. Mais recentemente, partculas contendo a
protena Sonic hedgehog provocaram as mesmas duplicaes (Lpez-Martinez et al.,
1995). Portanto, a Sonic hedgehog parece ser o agente ativo da ZPA.
A para integrar crescimento e padro
Interaes entre a AER e a ZP
ZPA
Como Sonic hedgehog determina o padro ntero-posterior do membro? Pesquisas
recentes indicam que a protena no age sozinha e que a cooperao com sinais da
AER crtica para sua funo. Essas interaes podem estabelecer padres de expresso do gene Hox que especificariam o eixo ntero-posterior.
SONIC HEDGEHOG COMO INICIADOR DE SECREO DE MORFGENOS. Ain-
da no se sabe como a ZPA especifica o eixo ntero-posterior. Um modelo sugere que

sinais de curto alcance especificam as clulas que produziro os dgitos e que essas
clulas migram atravs do broto do membro (Figura 18.27A). Entretanto, essa migrao no foi observada. Isso conduz a dois outros modelos. No modelo da cascata
indutiva (Figura 18.27B), uma progresso de sinais de curto alcance sucessivamente
propagada da ZPA para os tecidos responsivos. Portanto, Sonic hedgehog no se
difunde atravs do broto do membro em um gradiente suavemente decrescente. Em
lugar disso, Sonic hedgehog se difunde a uma curta distncia e induz as clulas
*Sim, como o personagem do desenho Sega. O gene hedgehog em Drosophila, como na

maioria dos genes, tem o nome do seu fentipo mutante. (Isso causa muita confuso. Os genes
para falta de olhos ou de membros so na verdade aqueles genes cujos produtos impedem essas
deficincias.) Em Drosophila, a deficincia da expresso do hedgehog resulta em uma cutcula
tendo mais dentculos pontiagudos, portanto, parecendo um hedgehog (porco-espinho).
(A) Sinalizao de curto alcance e deslocamento
(B)
Sinalizao seqncial de curto alcance
Difuso de
curto alcance
(C)
Espalhamento progressivo de um sinal graduado e promoo em uma via

Difuso de alcance
mais longo com o
passar do tempo
Figura 18.27
Modelos de atividade da ZPA. (A) Modelo de funo da ZPA por sinalizao de curto alcance e
subseqente deslocamento do tecido especificado. (B) Modelo de funo da ZPA por sinais
seqenciais de curto alcance. (C) Modelo de funo de ZPA por espalhamento progressivo de um
sinal graduado, onde o tecido responsivo responde a gradiente de concentrao. (De acordo com
Tickle, 1995.)
responsivas a secretar outra protena. Essa segunda protena se difunde tambm em

uma curta distncia para ativar as clulas na sua vizinhana e essas clulas secretam
uma terceira protena, e assim por diante. Dessa maneira, uma srie de sinais enviada
da fonte de Sonic hedgehog em direo parte anterior do broto do membro (veja
Lpez-Martnez et al., 1995). O terceiro modelo chamado de modelo do morfgeno
solvel (Figura 18.27C; Wolpert, 1969, 1977; Tickle, 1981) onde o tecido responde de
maneira diferente a diferentes concentraes de molculas solveis secretadas pela
ZPA. Inicialmente, o tecido mais perto da ZPA recebe baixas concentraes do
morfgeno e especificado para ser o dgito mais distal. Entretanto, ao continuar a
secreo, aquele tecido exposto a uma maior concentrao e reespecificado como
um dgito mais proximal (posterior). A prxima regio de clulas, ligeiramente mais
afastada da ZPA, recebe uma baixa concentrao do morfgeno e se torna especificada
para estruturas mais distais (anteriores). Isso continua at que todos os dgitos so
especificados atravs do broto do membro.
Nenhum dos dois ltimos modelos foi excludo, mas existe evidncia que mesmo
que a Sonic hedgehog defina ou energiza a ZPA, a protena no o morfgeno
solvel responsvel pela especificao dos dgitos. Deve existir uma cascata de sinais
indutivos. Foi demonstrado que a parte ativa da protena Sonic hedgehog a sua
regio N-terminal, que cindida do resto da protena em membros do pinto. Essa
extremidade ativa pode se difundir da clula, mas essa difuso no vai muito longe de
sua fonte no broto do membro posterior (Lpez-Martnez et al., 1995). Quando ela se
719
720
FGF4
cido
retinico
Manter proliferao na
zona progressiva;
ativar a expresso do
gene HoxD
Desenvolvimento
esqueltico posterior
Wnt7a
Sonic
hedgehog
Figura 18.28
Algumas interaes moleculares pelas quais

o broto do membro iniciado e mantido. Padro de expresso dinmica do gene HoxD
durante uma parte da morfognese da asa do
pinto. Algumas das principais ligaes incluem (1) a manuteno de Sonic hedgehog (Shh)
pela combinao de Wnt7a e FGF4; (2) a
manuteno de Shh pela combinao de cido
retinico e FGF4; (3) a induo recproca de
FGF4 e Shh para a manuteno de cada um;
(4) a interao entre FGF4 e Shh para ativar a
expresso dos genes HoxD e para manter a
diviso celular no mesnquima da zona progressiva. (De acordo com Nelson et al., 1996;
Niswander et al., 1994.)
difunde, parece ativar protenas morfogenticas do osso, especialmente a BMP2 (Francis

et al., 1994; Laufer et al., 1994). Essas protenas tambm no se difundem para muito
longe, e pesquisadores esto a procura de outras molculas que podem ser ativadas
pelas protenas morfogenticas do osso.
SONIC HEDGEHOG COMO CO-ATIVADOR DE GENES HOX E PROLIFERAO
CELULAR. Alm da ativao dos genes para as protenas morfogenticas do osso
(especialmente a BMP2), existem outros dois importantes alvos para Sonic hedgehog.
O primeiro conjunto de alvos podem ser os genes Hoxd 5 (Figura 18.28; Hoxd-9 a
Hoxd-13). Durante o desenvolvimento normal dos membros de pinto ou camundongo, desenvolve-se um padro caracterstico de expresso de genes Hoxd concentricamente aninhados e centrados na margem posterior que tinha sido definida como a
ZPA (Doll et al., 1989; Nelson et al., 1996). A regio mais prxima do centro tem todos
esses genes Hoxd 5 expressos, mas a expresso desses genes cai seqencialmente
medida que as clulas esto progressivamente mais afastadas da ZPA. Alm disso, o
transplante de ZPA ou de clulas secretoras de Sonic hedgehog para a margem anterior leva formao de padres de imagens espelhares na expresso dos genes Hoxd
e padres de imagens espelhares de dgitos (Izpisa-Belmonte et al., 1991; Nohno et
al., 1991; Riddle et al., 1993).
Originalmente parecia haver um cdigo pelo qual a expresso dos diferentes genes
HoxD especificaria o padro ntero-posterior dos dgitos, mas estudos recentes mostram que o problema mais complexo. Sonic hedgehog pode estar agindo em conjuno com sinais da AER na especificao de padres. Primeiro, a expresso de genes
Hoxd controlada pela cooperao de AER e ZPA. Na ausncia de uma AER, a Sonic
hedgehog incapaz de induzir a expresso de genes Hoxd (Laufer et al., 1994). Entretanto, a adio de cido retinico pode substituir a falta de AER (Helms et al., 1996;
Ogura et al., 1996).* H muito tempo se sabe que o cido retinico induz polarizao de
membros. Partculas embebidas em cido retinico podem mimetizar o tecido ZPA, e
induzir uma reverso da imagem espelhar na polaridade ntero-posterior (Tickle et al.,
1982, 1985), e uma nica partcula embebida com cido retinico pode substituir uma
ZPA quando o tecido ZPA normal foi removido (Eichele, 1989). Entretanto, o contedo
de cido retinico na ZPA no parece suficientemente alto para ativar genes
responsivos ao cido (Prancha 13; Noji et al., 1991; Rossant et al., 1991), e consideraes tericas (veja Wanek et al., 1991) indicam que pouco provvel que o cido
retinico seja o agente ativo da ZPA. De outro lado, estudos recentes sugerem que o
O cido retinico morfogeneticamente ativo no broto do membro pode diferir de acordo com
a espcie. No membro do pinto, o cido retinico ativo parece ser o cido didehidroretinico.
Entretanto, essa forma no encontrada no broto do membro de camundongo (Stratford et al.,
1996).
cido retinico induz um co-fator de Sonic hedgehog. Enquanto Sonic hedgehog

sozinha poderia induzir Hoxd-9 at Hoxd-11, a induo dos genes mais 5 Hoxd,
Hoxd-12 e Hoxd-13, somente pode ser realizada na presena de cido retinico (Ogura
et al., 1996). Experimentos com enxertos mostram que esses fatores induzidos pelo
cido retinico so produzidos na AER (Helms et al.,1996).
Um candidato para fator induzido por cido retinico o FGF4. O cido retinico
induz a expresso de Fgf4 na AER, e o faz independentemente da Sonic hedgehog
detectvel (Niswander et al., 1994). Ainda mais, quando uma partcula contendo FGF4
substitui a AER, a expresso dos genes HoxD promovida (Laufer et al., 1994). Duprez
e colegas (1996) verificaram que o cido retinico induz a BMP2 e essa, por sua vez,
induz tanto o FGF4 na AER como a expresso de Hoxd11 e 13 no mesoderma. Portanto, a induo normal dos genes mais 5 Hox (que no pode ser feita por Shh sozinha)
feita por uma combinao de BMP2 e FGF4.
Isso cria uma situao interessante porque Sonic hedgehog e FGF4 se ativam
mutuamente. A Sonic hedgehog ativa a expresso do gene Fgf4 na regio posterior da
AER (veja Figura 18.9), enquanto a expresso de Fgf4 necessria para a expresso
normal do gene sonic hedgehog. (Tal relao foi sugerida pelos estudos de Todt e
Fallon, 1987, mostrando que a AER era necessria para a funo da ZPA). Existe,
ento, uma ala de retroativao positiva onde a Sonic hedgehog do mesoderma
posterior ativa o Fgf4 na AER, e o FGF4 (provavelmente em conjunto com o FGF8) da
AER mantm a expresso de sonic hedgehog (veja Figura 18.28; Laufer et al., 1994;
Niswander et al., 1994).
Especificando a ZP
A
ZPA
Ainda no sabemos o que causa a ativao dos genes sonic hedgehog, especificamente nas clulas do broto do membro posterior e no nas clulas mais anteriores.
possvel que o gene sonic hedgehog esteja sendo ativado por uma protena FGF
oriunda da crista ectodrmica apical, recentemente formada, e FGF8 estando presente
na AER capaz de ativar sonic hedgehog. Mas por que no h ativao de todas as
clulas mesenquimatosas abaixo da crista? A resposta pode estar na diferente competncia de certas clulas mesenquimatosas em responder ao sinal de FGF. Charit e
colegas (1994) sugeriram que a protena Hoxb-8 pode ser crtica no fornecimento
dessa competncia restrita. Eles observaram que o gene Hoxb-8 era geralmente expresso na metade posterior do broto do membro anterior do camundongo. Ento, eles
produziram camundongos transgnicos nos quais o gene Hoxb-8 estava sob o controle de um novo promotor que causava sua expresso em todos os brotos de membros anteriores. Isso resultou na expresso de sonic hedgehog na poro anterior dos
brotos dos membros, a criao de uma nova ZPA, uma nova regio de expresso de
genes HoxD e duplicaes de membros anteriores como imagens espelhares. Essa
evidncia sugere que a protena Hoxb-8 est envolvida na especificao da expresso
de sonic hedgehog e portanto no estabelecimento da ZPA.
A produo do eixo dorsoventral

O terceiro eixo do membro define sua parte dorsal (ns dos dedos, unhas) e sua
parte ventral (palmas e solas). Em 1974, MacCabe e colaboradores demonstraram que
a polaridade dorsoventral do broto do membro determinada pelo seu envolvimento
pelo ectoderma. Se o ectoderma gira 180o em relao ao mesnquima do broto do
membro, o eixo dorsoventral parcialmente revertido; os elementos distais (dgitos)
esto de cabea para baixo. Isso sugeriu que a especificao tardia do eixo dorsoventral do membro regulada pelo seu componente ectodrmico. O gene Wnt7a
expresso no ectoderma dorsal (mas no no ventral) dos brotos de membros do pinto e
do camundongo (Deally, 1993; Parr et al., 1993). In 1995, Parr e MacMahon deletaram
geneticamente o Wnt7a do embrio do camundongo. Os embries resultantes tinham
721
722
(A)
(B)
Figura 18.29
Transformaes dorsal-para-ventral de regies do membro em camundongos deficientes de

ambos os genes Wnt7a. (A) Seco histolgica (corada com hematoxilina e eosina) da pata do
membro anterior em embrio de camundongo de 15.5 dias. Os tendes ventrais e as almofadas
ventrais dos ps so facilmente vistas. (B) A mesma seo atravs de um embrio mutante
deficiente em Wnt7a. Tendes e almofadas dos ps esto agora duplicados no que seria a face
dorsal da pata. dt, tendes dorsais; dp almofada dorsal do p; vp, almofada ventral do p; vt,
tendo ventral. Os nmeros indicam identidade dos dgitos. (de Parr e McMahon, 1995;
fotografias cortesia dos autores.)
solas em ambas as superfcies de suas patas, mostrando que a Wnt7a era necessria
para a padronizao dorsal do membro (Figura 18.29). A Wnt7a induz o gene Lmx1 no
mesnquima dorsal, e esse gene codifica um fator de transcrio que parece ser essencial para a especificao do destino das clulas dorsais no membro (Riddle et al., 1995;
Vogel et al., 1995). Se esse fator expresso nas clulas do mesnquima ventral, elas
desenvolvem um fentipo dorsal.
Os camundongos deficientes em Wnt7a tambm no tinham dgitos posteriores,
sugerindo que o Wnt7a tambm era necessrio para o eixo ntero-posterior. Yang e
Niswander (1995) fizeram observaes similares no embrio de pinto. Esses pesquisadores removeram o ectoderma dorsal do membro em desenvolvimento e observaram que esse procedimento resultou na perda dos elementos esquelticos posteriores dos membros. Esses membros no tinham dgitos posteriores porque a expresso de sonic hedgehog e Fgf4 estavam faltando. A expresso de Wnt7a induzida por
vrus podia substituir o ectoderma dorsal e restaurar a expresso de sonic hedgehog
e o padro posterior. A sntese de Sonic hedgehog estimulada pela combinao
das protenas Wnt7a e FGF4. Os trs eixos do embrio de pinto so todos interrelacionados e coordenados.
Distinguindo o membro anterior do membro posterior

At agora, tratamos os membros anteriores e os posteriores como se fossem os mesmos. Realmente, ele seguem as mesmas regras da formao do padro. Mas seus
padres so diferentes. Um p no uma mo, e uma perna de pinto certamente no
uma asa. Ento, como eles se tornam diferentes? Parece que as clulas da precartilagem
da asa e da perna do pinto respondem de maneira muito diferente aos fatores de
crescimento, e isso faz com que se associem umas as outras e se diferenciem de
diferentes maneiras (Downie e Newman, 1994). Em culturas de clulas embrionrias, o
cido retinico aumenta a condrognese no mesnquima da asa e inibe a condrognese
no mesnquima da perna. O TGF-1 converte ndulos formadores da cartilagem da
perna em camadas, mas no tem efeito nos ndulos cartilaginosos da asa exceto para
promover a condrognese. As clulas da precartilagem da asa produzem um padro
diferente de fibronectina daquele produzido pelas clulas correspondentes da cartilagem da perna (Figura 18.30).
Asa
Perna
Soro
TGF
cido retinico
Figura 18.30
Resposta diferencial de clulas da precartilagem da asa e da perna (estgio24) a fatores

morfogenticos especficos. Fotografias das clulas em soro, TGF- e cido retinico so
fotografias macroscpicas de colnias de clulas. As fotografias das redes de fibronectina
depositadas pelas clulas so fotomicrografias fluorescentes em aumento de 40x. (de Downie
e Newman, 1994.)
Essa deposio variada de fibronectina pode ser muito importante considerando as diferenas entre a perna e a asa. A localizao, temporalidade e arquitetura
na deposio de cartilagem em culturas de tecido do broto do membro so estritamente paralelas deposio de fibronectina. Em culturas de asa, as condensaes
de cartilagem eram amplas e planas; em culturas de perna, elas eram compactas e
esferoidais. Em ambos os casos, a deposio de cartilagem era paralela localizao da fibronectina (Downie e Newman, 1995). Portanto, existem diferenas inerentes entre as clulas mesenquimatosas precartilaginosas nos membros anteriores e posteriores, e que so responsveis pelas respostas diferentes aos fatores
de crescimento e pela diferente deposio de fibronectina. A disposio de
fibronectina crtica no direcionamento da colocao e extenso da condrognese.
O mecanismo pelo qual se d a formao e bifurcao da cartilagem para formar o
esqueleto do membro assunto de grande interesse. [limb4.html]
Recentemente foi demonstrada a expresso diferenciada de pares relacionados de
fatores de transcrio em brotos de membros anteriores e posteriores. No pinto, Hoxc4 e Hocx-5 so expressos nos brotos das asas, enquanto que Hocx-9, Hocx-10 e
Hocx-11 so expressos exclusivamente nos brotos das pernas (Nelson et al., 1996). O
gene tbx5 semelhante ao Brachyury transcrito nos membros anteriores do camundongo, enquanto o gene estreitamento relacionado, o tbx4 expresso nos membros
posteriores (Gibson-Brown et al., 1996). Ainda tem que ser verificado se qualquer um
desses genes causalmente envolvido ao direcionar a especificao para membros
anteriores ou membros posteriores*. Entretanto, a perda de TBX5 humana resulta na
sndrome de Holt-Oram, caracterizada por anormalidades do corao e membros superiores (Basson et al., 1996; Li et al., 1996). As pernas no so afetadas.
*Quando se refere mo tem-se um conjunto ordenado de nomes para especificar cada dgito
(Digitus pollicis, d. indicis, d. medius, d. annularis e d. minimus, respectivamente do polegar ao
dedo mnimo). No existe tal nomenclatura para os dgitos do p, mas o plano proposto por Phillips
(1991) tem muito mrito. Os dgitos do p, desde o hlux at o dedinho, seriam chamados porcellus
fori, p. domi, p. carnivorus, p. non voratus e p. plorans domi, respectivamente.
Rede de fibronectina
723
724
&
Especulaes
Lies de limbless
OMO J MENCIONADO, o mu-
tante limbless pode formar brotos de membros, mas esses brotos regridem porque no forma uma
AER. Estudos recentes sobre a expresso gnica nesse mutante mostra que o
brotamento do membro acompanhado
por padres normais de expresso
gnica que no so estabelecidos pelos trs centros de sinalizao. Esses
dados sugerem que os padres de expresso gnica, normalmente associados ao desenvolvimento do membro
tetrpode, teriam se dado de qualquer
maneira e representam um pr-padro
que dirige o desenvolvimento desse
membro (Ros et al., 1996). Os centros
sinalizadores somente reforam e suportam esse padro.
Em primeiro lugar, o broto do membro

limbless no expressa nem FGF4 nem
FGF8, implicando que essas protenas no
so necessrias para o brotamento normal. Segundo, o mesoderma do limbless
expressa os genes Hoxd-11 a Hoxd-13 de
forma aninhada posteriormente, junto com
a expresso assimtrica de BMP4 e Wnt5a.
Isso se d na ausncia de expresso
detectvel de sonic hedgehog ou de uma
AER (Grieshammer et al., 1996; Noramly
et al., 1996; Ros et al., 1996).
A anlise experimental do broto do membro de limbless revela que esse formar
AERs e membros se receber partculas
secretando FGFs. Mais ainda, essas partculas induzem Sonic hedgehog na regio
posterior, mostrando que existe uma polaridade no broto do membro, mesmo em au-
sncia da AER. Interessantemente, o membro formado bi-dorsal, expressando Wnt7a

em todo o ectoderma. Isso levanta a possibilidade de que a induo da AER necessita
de uma interface ectodrmica dorsoventral.
O mutante limbless tambm sugere a
possibilidade de que o mesoderma da placa
lateral j tem a habilidade para expressar os
genes padronizadores ntero-posterior e
prximo-distal, e que esse pr-padro subseqentemente estabilizado, mantido ou
aumentado pela AER e Sonic hedgehog. O
membro um rgo complicado e pesquisa
atual o faz parecer ainda mais complexo. A
anlise do desenvolvimento do membro
tetrpode deu aos biologistas alguns dos
maiores sucessos no entendimento do desenvolvimento, mas tambm tem levantado
alguns dos nossos maiores desafios.
Morte celular e a formao de dgitos

A morte celular tambm tem uma funo na escultura do membro. Na verdade essencial para a formao de juntas e para a separao dos dedos (Zaleske, 1985). A morte
(ou a falta de morte) em clulas especficas do membro de vertebrados geneticamente programada e foi selecionada durante a evoluo. Um dos casos envolve a formao ou no da membrana interdigital nos ps. A diferena entre um p de galinha e um
de pato envolve a presena ou ausncia de morte celular entre os dgitos (Figura
18.31A,B). Saunders e colaboradores (1962; Saunders e Fallon, 1966) mostraram que
na galinha, aps certo estgio, as clulas entre a cartilagem dos dgitos esto destinadas a morrer e o faro mesmo que transplantadas a outra regio do embrio ou colocadas em cultura. Entretanto, se antes desse estgio forem transplantadas para um
membro de pato elas sero salvas. Entre a poca em que a morte celular determinada
e quando ela realmente se d, os nveis de DNA, RNA e sntese de protenas decrescem dramaticamente (Pollack e Fallon, 1976).
Alm da zona necrtica interdigital, existem trs outras regies que so esculpidas pela morte celular. O cbito e o rdio so separados entre si por uma zona
necrtica interior, e duas outras regies, as zonas necrticas anterior e posterior,
acabam a modelagem do fim do membro (Figura 18.31B; Saunders e Fallon, 1966).
Apesar dessas zonas serem chamadas necrticas, isso uma herana da poca
quando no se distinguia entre morte celular necrtica e morte celular apopttica.
Essas clulas morrem por apoptose, e a morte do tecido interdigital est associada
fragmentao de DNA (Mori et al., 1995). Em humanos, existem vrias sndromes
caracterizadas por dedos ligados (sndromes sindctilas), mas a mutao responsvel conhecida somente em um situao (Vortkamp et al., 1991; Hui e Joyner,
1993), na qual o gene codifica um fator de transcrio que expresso no mesnquima interdigital. O sinal para apoptose em membros de pinto pode ser a protena
BMP4. A expresso de BMP4 observada nos espaos interdigitais em membros de
(A) PRIMRDIO DA PERNA DO PATO

Morte celular mnima
Zona
necrtica
interior
(B) PRIMRDIO DA PERNA DO PINTO
Morte celular extensa
Zona necrtica
interdigital
Zona
necrtica
anterior
Zona
necrtica
posterior
Zona
necrtica
interior
(C) Expresso gnica em regies da perna do

embrio de pinto antes da morte celular
Receptor de
cido retinico
CRBP
msx-1
Figura 18.31
Padres de morte celular em primrdios de pernas de embries de (A) pato e (B,C) de pinto.
Sombreamento indica reas de morte celular. No pato, a morte celular mnima, enquanto que
existem regies de extensa morte celular no tecido interdigital da perna do pinto (De acordo com
Saunders e Fallon, 1966.)
pinto, e a inibio da sinalizao de BMP4 impede a apoptose em clulas interdigitais.

interessante considerar que essa expresso de BMP no vista nessa fase no
mesnquima interdigital embrionrio do pato (Gaan et al., 1996; Zou e Niswander,
1996; veja Captulo 23).
Os membros tm sido uma pedra fundamental no estudo da produo de padres
em vertebrados. Isso se origina de numerosos processos inter-relacionados que envolvem a disposio e crescimento do broto do membro, a induo da AER, a manuteno do mesnquima da zona progressiva, a formao e manuteno mtua de ZPA
e AER, a formao do eixo dorsoventral, a gerao de condensaes precartilaginosas
do mesnquima que formaro os tecidos cartilaginoso e sseo, e a imposio de
assimetria ao broto do membro pela ZPA. Ainda existem animados debates em relao
aos mecanismos desses processos e considervel controvrsia sobre as molculas
que poderiam regular tais fenmenos.
725
726
&
Especulaes
Evoluo do membro tetrpode

Sobre nadadeiras e membros
Macroevoluo, a produo de novidades
morfolgicas na evoluo de novas espcies e grupos taxonmicos mais altos, resulta de alteraes do desenvolvimento.
Algumas das mais importantes modificaes macroevolucionrias resultaram da
transio de animais aquticos para terrestres. Uma das mudanas mais bvias foi a
da nadadeira do peixe para a perna do anfbio. Como apontado por Richard Owen
(1849) existe uma considervel homologia
entre os ossos da nadadeira e do membro
tetrpode, sendo as nadadeiras peitorais e
plvicas do peixe homlogas aos membros
anterior e posterior, respectivamente. Foi
possvel fazer homologias especficas entre os elementos proximais da nadadeira e
do membro (zeugpode; tbia e fbula), mas
as homologias entre o autpode do membro (a mo ou o p na ponta distal) e os
raios da nadadeira no se consolidaram.
Isso era verdade mesmo ao se comparar o
membro tetrpode s nadadeiras dos peixes crossoptergios (nadadeiras lobulares),
considerados como estreitamente relacionados aos ancestrais dos anfbios (veja
Coates, 1994; Hinchliffe, 1994). O problema fica mais vexatrio quando se observa
os membros dos primeiros tetrpodes conhecidos. Em lugar de ter cinco dgitos
cannicos, esses anfbios primitivos tinham seis (Turlepedon), sete (Ichthyostega), ou mesmo oito (Acanthostega) dgitos em seus membros. Esses membros no
possuem raios semelhantes s nadadeiras
associadas a eles, e considera-se que funcionavam mais como remos em poas rasas de gua do que como suporte do peso
do corpo em terra. Novamente, apesar da
homologia para os elementos proximais do
membro, o autpode parece algo novo- o
que os biologistas evolucionrios chamam
de estrutura neomrfica.
Estudos recentes fortemente sugeriram que a localizao do terminal 5 (semelhante a Abd) dos genes Hox do grupo
HoxD pode ser crucial na troca de nadadeiras para membros. Nos brotos de membros precoces de pintos e de camundongo, os genes 5 (Hoxd-11, 12, 13) esto
(A) Perna do pinto
(B) Peixe (Danio)
Estgio 21
Mesnquima
Mesnquima
Dobra ectodrmica
apical da nadadeira
Estgio 26
Figura 18.32
Diferenas na expresso de Hoxd-11 em apndices embrionrios nos peixes e no pinto. (A)

Regies de expresso de Hoxd-11 no membro
posterior do camundongo desde o estgio de
broto precoce at um estgio mais tardio. Durante os estgios mais tardios, o padro de expresso de Hoxd-11 atravessa a borda nteroposterior da zona progressiva. (B) Na nadadeira peitoral do peixe zebra, Hoxd-11 continua a
ser expresso posteriormente, mas no se estende anteriormente. hpf, horas aps a fertilizao
(De acordo com Sordino et al., 1995.)
restritos extremidade posterior do broto

do membro. Algo semelhante ocorre no
broto da nadadeira do peixe zebra (Figura
18.32). Entretanto, nos tetrpodes, existe
uma segunda fase onde muda a expresso dos genes HoxD semelhantes a Abd.
Em lugar de ficar restrita ao posterior do
broto do membro, a expresso dos genes
5 HoxD perpassa o mesnquima distal,
logo abaixo da AER. Essa banda de expresso coincidente como o arco digital do qual se formam os dgitos (Morgan
e Tabin, 1994; Sordino et al., 1995; Nelson
et al., 1996). Esses estudos mostram que
enquanto o padro de expresso do gene
HoxD homlogo nas regies proximais,
a expresso no mesnquima distal do broto tardio nova. Isso tambm confirma os
estudos paleonto-desenvolvimentais de
Shubin e Alberch (1986), que propuseram
que a via de formao dos dgitos no era
(como previamente se acreditava) atravs

do quarto dgito (produzindo os raios da
nadadeira homlogos aos outros dgitos),
mas atravs de um arco de condensaes
distais de punho (metaptergio) que comeam posteriormente e se dirigem anteriormente atravs do mesnquima distal
(Figura 18.33). Portanto, a borda de expresso do gene 5 HoxD segue o eixo
metaptergio que Shubin e Alberch
hipotetizaram como sendo a origem dos
dgitos. Sordino e colegas propuseram
que a localizao proximal dos transcritos
do gene HoxD representa o padro original e comum a todos os vertebrados. A
fase reorientada, distal, da expresso do
gene HoxD representa uma condio nova
e derivada. Isso, por sua vez, pode ter
evoludo em resposta s modificaes na
regulao dos genes 5 HoxD. O padro
precoce de HoxD formado independentemente de Sonic hedgehog, mas o padro de expresso distalizado pode ser
(A)
(B)
(C)
Figura 18.33 Origem dos dgitos (autpodos)
como uma novidade evolucionria dependente

da expresso 5 do gene HoxD (semelhante a
AbdB). (A) Representao de uma nadadeira
primitiva de peixe, mostrando um eixo central
(preto) com raios irradiando anteriormente (cinza claro) e posteriormente (cinza escuro). (B)
Representao da hiptese mais antiga do desenvolvimento do membro tetrpode. O eixo
central est curvado atravs do quarto dgito. O
quinto dgito era considerado homlogo a um
raio posterior; o primeiro, segundo e terceiro
dgitos eram considerados homlogos aos raios
anteriores. (C) Viso atual da formao autpode.
O eixo originalmente se estende posteriormente,
e em seguida se dobra anteriormente atravs da
cartilagem metaptergia. Considera-se que a tbia se ramifica anteriormente mas os dgitos no
so homlogos aos raios. (De acordo com Nelson e Tabin,1995.)
governado pela expresso de Sonic hedgehog. O p e a mo parecem ser novas

estruturas na evoluo, e provvel que
tenham sido formados por um reposicionamento da expresso do gene HoxD durante o desenvolvimento da nadadeira.
desnecessrio enfatizar que essa no a
nica modificao que ocorreu na criao dos dgitos. Outros genes Hox e
provavelmente sonic hedgehog mudaram tambm seu padro de expresso.
Estamos chegando a um ponto na biologia onde mudanas na expresso gnica
podem ser relacionadas s grandes variaes evolucionrias.
Sobre pernas de moscas e
pernas de galinha
Evoluo envolve modificao com descendncia. Isso foi freqentemente documentado com homologias. A nadadeira de uma foca, a asa de um morcego, o
brao de um esquilo e o brao de um homem so todos baseados em um mesmo
plano homlogo, mas com modificaes. Cada um uma modificao diferente do plano de membros reptilianos,
que por sua vez homlogo ao dos vertebrados. Uma das mais importantes descobertas da moderna biologia do desenvolvimento est relacionada homologia
de processos e estruturas. Como veremos no Captulo 23, certas vias de desenvolvimento e interaes foram conservadas durante o tempo da evoluo e
foram modificadas por diferentes grupos
animais. Isso pode ser visto com o desenvolvimento do membro. Membros de
mosca e membros de vertebrados so
exemplos familiares de analogia (como o
oposto da homologia). Onde estruturas
homlogas so vistas como modificaes
de uma estrutura original e podem agora
ter diferentes funes, as estruturas anlogas tm a mesma funo mas no so
727
Expresso experimental de hedgehog

no primrdio do membro anterior
Desenvolvimento normal
Broto do
membro
Pinto
Expresso
de shh
Expresso de hh
Membro
embrionrio
Drosophila
Disco
imaginal da asa
Asa
adulta
Figura 18.34
Homologia de processos de formao dos eixos ntero-posterior em Drosophila e apndices em

pinto. (A) Um broto de membro do pinto expressa sonic hedgehog na sua regio posterior. Se
sonic hedehog tambm for expresso em uma regio anterior, o membro em desenvolvimento
desenvolve uma duplicao que a imagem espelhar do eixo ntero-posterior. (B) Um disco da
asa da Drosophila expressa hedgehog no seu compartimento posterior. Se hedgehog tambm for
expresso em um compartimento anterior, a asa desenvolve uma duplicao que a imagem
especular do eixo ntero-posterior. (De acordo com Ingham, 1994.)
consideradas como derivadas de uma

mesma estrutura.
Membros de moscas e membros de
vertebrados tm pouco em comum a no
ser sua funo. Entretanto, ambos os
membros do vertebrado e da mosca parecem ser formados atravs da mesma via
de desenvolvimento. (Parece haver uma
homologia de processos subjacente
analogia de estruturas). Como vimos,
sonic hedgehog usualmente expresso
na parte posterior do broto do membro.
Se for expresso na parte anterior do broto, aparecem duplicaes que so imagens
espelhares (Riddle et al., 1993).
No disco da asa da Drosophila (o
campo de clulas que d origem a asa
durante a metamorfose), a protena Hedgehog usualmente expressa na poro

posterior do disco. Se for expressa anteriormente surgiro duplicaes que so
imagens espelhares da asa (Figura 18.34;
Basler e Struhl, 1993; Ingham, 1994).
Alm disso, certos genes regulados por
Hedgehog tambm foram conservados
(Marigo et al., 1996), e os compartimentos
ventrais dos membros de insetos e vertebrados parecem ser regulados pela expresso do gene engrailed (Davis et al., 1991;
Loomis et al., 1996). Assim, parece que a
natureza descobriu como produzir um membro somente uma vez, e ambos artrpodos
(Drosophila) e vertebrados (galinhas e camundongos) usam esse processo at hoje.
728
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Interaes celulares distncia:

Hormnios como mediadores
do desenvolvimento
Mudou a velha ordem cedendo seu espao

para a nova.
ALFRED LORD TENNYSON (1886)
As fases iniciais presas na terra construram

aparelhos digestivos enormes e os movimentou sobre ps de lagartas. Mais tarde na histria da vida, esses recursos puderam ser liquidados e reinvestidos na construo de um
organismo inteiramente novo- uma mquina voadora dedicada ao sexo.
CARROLL M. WILLIAMS (1958)
19
FORMAO DE RGOS NOS ANIMAIS consumada por interaes de
numerosos tipos de clulas. Nos dois captulos precedentes discutimos

como as interaes no desenvolvimento podem ser mediadas por populaes celulares adjacentes. Neste captulo discutiremos a regulao do desenvolvimento pelas molculas difusveis que se deslocam em longas distncias, de um tipo de
clula a outro. Reguladores difusveis do desenvolvimento que se deslocam pelo
sangue para promover modificaes na diferenciao ou morfognese de outros tecidos so chamados hormnios.
Metamorfose: o direcionamento
hormonal do desenvolvimento
extremamente difcil isolar hormnios de embries pois quantidades muito pequenas
desses so suficientes para concretizar sua ao. Portanto, algumas das anlises mais
detalhadas do controle hormonal do desenvolvimento foram centralizadas na dramtica reprogramao do desenvolvimento conhecida como metamorfose.
Em muitas espcies de animais, o desenvolvimento embrionrio leva a um estgio
larval com caratersticas muito diferentes daquelas do organismo adulto. Muito freqentemente, as formas larvais so especializadas para algumas funes tais como crescimento ou disperso. A larva pluteus do ourio-do-mar, por exemplo, pode se deslocar em
correntes ocenicas, enquanto o ourio adulto leva uma existncia sedentria. As larvas, em forma de lagarta, das borboletas e mariposas so especializadas para a alimentao, ao passo que suas formas adultas so especializadas para o vo e a reproduo e
freqentemente no possuem as partes da boca necessrias para a alimentao. A diviso de funes entre a larva e o adulto freqentemente bastante distinta (Wald, 1981).
As efemridas eclodem de ovos e se desenvolvem durante vrios meses. Todo esse
desenvolvimento lhes permite passar um dia como insetos alados completamente desenvolvidos, acasalando rapidamente antes de morrer. Como seria de se esperar dessa
discusso, a forma larval e o adulto com freqncia vivem em ambientes diferentes. Mais
ainda, como primeiro observado por Weismann (1875), as larvas devem ter sua prpria
adaptao para lhes ajudar a sobreviver. A borboleta viceroy adulta (limenitis archippus)
mimetiza a menos apetitosa borboleta monarca, mas a lagarta viceroy no se parece com
a bonita lagarta da monarca. Ao contrrio, a larva viceroy escapa da deteco parecendo
excremento de pssaros (Begon et al., 1986).
733
734
PARTE V Interaes Durante a Formao do rgo
Durante a metamorfose, hormnios especficos reativam processos do desenvolvimento, e o organismo inteiro se modifica preparando-se para sua nova existncia.
Essas modificaes no so somente na forma. Em girinos de anfbios, a metamorfose
causa no s a maturao desenvolvimental de enzimas do fgado, da hemoglobina e
de pigmentos do olho, como tambm remodela os sistemas nervoso, digestivo e
reprodutor. Portanto, a metamorfose uma fase de mudanas dramtica no desenvolvimento, afetando o organismo todo.
Este captulo focaliza trs casos nos quais os hormnios reativam os processos de
desenvolvimento aps o nascimento: metamorfose em anfbios, metamorfose em insetos e desenvolvimento das mamas do camundongo.
Metamorfose anfbia
Em anfbios, a metamorfose geralmente associada com as mudanas que preparam
um organismo aqutico para uma existncia terrestre. Em urodelos (salamandras), as
modificaes incluem a reabsoro das nadadeiras da cauda, a destruio das guelras externas e a mudana da estrutura da pele. Nos anuros (rs e sapos), as mudanas metamrficas so mais surpreendentes, e quase todos os rgos so modificados (Tabela 19.1). As modificaes na forma so muito bvias (Figura 19.1). Mudanas regressivas incluem a perda dos dentes crneos e das guelras internas do girino,
como tambm a destruio de sua cauda. Ao mesmo tempo, so evidentes os pro-
Tabela 19.1
Resumo de algumas modificaes metamrficas em anuros
Sistema
Larva
Adulto
Locomotivo
Aqutica; nadadeiras de cauda
Terrestre; tetrpode sem cauda
Respiratrio
Guelras, pele, pulmes;

hemoglobinas larval
Pele, pulmes; hemoglobinas adultas
Circulatrio
Arcos articos; aorta;

veias cardinais anteriores,
posteriores e comuns
Arco cartido; arco sistmico;

veias jugulares
Nutricional
Herbvoros: longo intestino em

espiral- simbiontes intestinais;
boca pequena- mandbulas
corneadas, dentes labiais
Carnvoros: intestino curto- proteases;

boca grande- lngua longa
Nervoso
Falta da membrana nictitante;

porfiropsina, sistema de linha
lateral- Neurnios de Mauthner
Desenvolvimento de msculos
oculares, membrana nictitante,
rodopsina, perda do sistema de linha
lateral- degenerao dos neurnios de
Mauthner; membrana timpnica
Excretrio
Principalmente amnia,
pouca uria (amonotlico)
Principalmente uria, alta atividade das

enzimas do ciclo ornitina-uria
(ureotlico)
Integumentrio
Epiderme fina com bicamada e

derme fina; sem glndulas
mucosas ou granulares
Epiderme escamosa estratificada com

queratinas adultas; derme bem
desenvolvida contm glndulas
mucosas e granulares secretando
peptdeos antimicrobianos
Fonte: Dados de Turner e Bagnara, 1976; Reilly et al., 1994.
CAPTULO 19 Hormnios e metamorfose
cessos construtivos como o desenvolvimento dos membros e a construo da glndula dermide. Para a locomoo, a cauda tipo remo retrocede enquanto os membros
anteriores e posteriores se diferenciam. O crnio cartilaginoso do girino substitudo pelo crnio predominantemente sseo da pequena r. Os dentes crneos,
construdos para dilacerar plantas das lagoas, desaparecem enquanto a boca e a
mandbula assumem novas formas e se desenvolve o msculo da lngua. Enquanto
isso, o amplo intestino caracterstico dos herbvoros se encurta para se adaptar
dieta mais carnvora da r adulta. As guelras regridem e os arcos das guelras degeneram. Os pulmes aumentam, e msculos e cartilagem se desenvolvem para bombear ar para dentro e para fora dos pulmes. O sistema sensorial muda, tambm,
assim como o sistema da linha lateral do girino degenera e o olho e o ouvido sofrem
mais diferenciaes. No ouvido se desenvolve o ouvido mdio e a membrana do
tmpano, to caracterstica de rs e sapos. No olho, aparecem as membranas nictitantes
e as plpebras; o pigmento do olho tambm muda. Nos girinos, como nos peixes de
gua doce, o fotopigmento mais importante da retina a porfiropsina, um complexo
entre a protena opsina e o aldedo da vitamina A2. Em rs adultas, o pigmento muda
para rodopsina, o fotopigmento caracterstico dos vertebrados terrestres e martimos. A Rodopsina um conjugado de opsina e o aldedo da vitamina A1 (Wald, 1945,
1981; Smith-Gill e Carver, 1981; Hanken e Hall, 1988).
Outros eventos bioqumicos tambm esto associados metamorfose. A hemoglobina do girino liga o oxignio mais rapidamente e o libera mais lentamente do que
a hemoglobina do adulto (McCutcheon, 1936). Alm disso, Riggs (1951) mostrou
que a ligao do oxignio pela hemoglobina do girino independente do pH, ao
passo que a hemoglobina da r (como a maioria das outras hemoglobinas de vertebrados) mostra um aumento na ligao de oxignio com o aumento do pH (efeito de
Bohr). Outra mudana bioqumica na metamorfose de certas rs a induo daquelas enzimas necessrias para a produo de uria. Girinos, como a maioria dos peixes
de gua doce so amonotlicos; ou seja, eles excretam amnia. Muitas rs adultas
(tal como o espcie Rana mas no o Xenopus) so ureotlicos, excretando uria,
como a maioria dos vertebrados terrestres. Durante a metamorfose, o fgado desenvolve enzimas necessrias para produzir uria de dixido de carbono e amnia.
Essas enzimas constituem o ciclo da uria, e cada uma delas aparece durante a
metamorfose (Figura 19.2).
Controle hormonal da metamorfose de anfbios
Todas essas variadas modificaes so induzidas pela secreo dos hormnios da
tireide tiroxina (T4) e triiodotironina (T3), durante a metamorfose (Figura 19.3). Atualmente se acredita que T3 o hormnio ativo, pois ele causa mudanas metamrficas
em girinos tireoidectomizados em concentraes muito menores do que o faria o T4
(Kistler et al., 1977; Robinson et al., 1977). O controle da metamorfose pelos hormnios
da tireide foi demonstrado por Gudernatsch (1912), observando que girinos sofriam
uma metamorfose prematura ao serem alimentados com a glndula tireide de carneiro
pulverizada. Allen (1916) e Hoskins e Hoskins (1917) mostraram que pela retirada do
rudimento da tireide de girinos precoces, a larva no sofria metamorfose tornandose, em lugar disso, um girino gigante.
MODIFICAES REGIONALMENTE ESPECFICAS. Os vrios rgos do corpo
respondem de maneira diferente estimulao hormonal. O mesmo estmulo causa a

degenerao de certos tecidos enquanto outros se desenvolvem e se diferenciam. Por
exemplo, a degenerao das estruturas da cauda so claramente associadas a nveis
crescentes de hormnios da tireide. A degenerao das estruturas da cauda relativamente rpida, pois o esqueleto sseo no se estende at a cauda, que somente
suportada pela notocorda (Wassersug, 1989). Essa degenerao pode ser mostrada in
vitro (Weber, 1967) quando pedaos isolados de cauda so colocados em recipientes
735
Figura 19.1
Seqncia da metamorfose na r Rana pipiens.

(A) Girino premetamrfico. (B) Girino
prometamrfico mostrando crescimento do
membro posterior. (C) Incio do clmax
metamrfico ao emergirem os membros anteriores. (D,E) Estgios do clmax.
736
Figura 19.2
(A)
Desenvolvimento do ciclo da uria durante a

metamorfose de anuros. (A) Os principais aspectos do ciclo da uria, pelo qual resduos
nitrogenados podem ser detoxificados e
excretados. (B) Emergncia de atividades
enzimticas do ciclo da uria correlacionada
com mudanas metamrficas na r Rana
catesbeiana. (De acordo com Cohen, 1970.)
Carbamoilfosfato
sintase
Carbamoilfosfato
Ornitina
carbamoiltransferase
Citrulina
Ornitina
Aspartato
Argininosuccinato
sintetase
Uria
Arginase
Argininosuccinato
Arginina
Argininosuccinato
liase
Fumarato
Porcentagem de nveis de enzimas

ps-metamrficas
(B)
Carbamoilfosfato sintase
Ornitina carbamoiltransferase
Argininosuccinato sintetase
Argininosuccinato liase
Excreo de uria
Estgio do desenvolvimento
com gar e submetidos a tratamentos qumicos. As caudas cultivadas em meio no

tratado permanecem sadias, enquanto aquelas colocadas em meio contendo hormnios da tireide sofrem uma regresso caracterstica. Alm disso, a prolactina inibe a
degenerao da cauda induzida pelos hormnios da tireide (Brown e Frye, 1969).
Considera-se que a regresso da cauda se d em quatro estgios. Primeiro, a sntese
de protena diminui nas clulas do msculo estriado da cauda (Little et al., 1973). Em
seguida, h um aumento das enzimas do lisossoma. As concentraes de proteases,
RNase, DNase, colagenase, fosfatase e glicosidases aumentam na epiderme, notocorda e clulas do cordo nervoso (Fox, 1973). Provavelmente a morte celular causada
pela liberao dessas enzimas no citoplasma. A epiderme ajuda a digesto do tecido
muscular, possivelmente pela liberao dessas enzimas digestivas. Se a epiderme
cirurgicamente removida das extremidades da cauda, essas no sofrero regresso
quando cultivadas em tiroxina (Eisen e Gross, 1965; Niki et al., 1982). Aps essa morte
celular, macrfagos se acumulam na regio da cauda, digerindo os detritos com suas
prprias enzimas proteolticas (Kaltenbach et al., 1979). O resultado que a cauda se
737
Tiroxina (T 4 )
Triiodotironina (T 3 )
Figura 19.3
Frmulas da tiroxina (T4) e da triiodotironina (T3).
Concentrao da protease catepsina lisossmica

(unidades/g nitrognio)
torna uma grande sacola de enzimas proteolticas (Figura 19.4). As principais enzimas
proteolticas parecem ser as colagenases e outras metaloprotenases cuja sntese depende dos hormnios da tireide. Se um inibidor de metaloprotenases (TIMP) adicionado s caudas, ele impede a regresso da cauda induzida pelo hormnio da tireide
(Oofusa e Yoshizato, 1991; Patterson et al., 1995).
A resposta aos hormnios da tireide intrnseca ao prprio rgo e no depende dos tecidos vizinhos. Na epiderme, a resposta aos hormnios tireoidianos depende de qual parte do corpo a epiderme est cobrindo. As clulas epidrmicas da
cabea e do corpo do girino sofrem uma lenta renovao (como esperado na pele), e
T3 no modifica essa velocidade. Na cauda, entretanto, T3 causa um rpido aumento
na queratinizao e morte dessas clulas. Tambm se d uma supresso, especfica
para a cauda, das divises das clulas precursoras que poderiam originar mais clulas epidrmicas. O resultado a morte das clulas epidrmicas da cauda enquanto
Figura 19.4
Comprimento relativo da cauda (%)
Aumento da atividade protesica lisossmica

durante a regresso da cauda em Xenopus
laevis. As enzimas lisossmicas so consideradas responsveis pela digesto das clulas da
cauda. (De acordo com Karp e Berrill, 1981.)
738
(A)
(B)
Extremidade da
cauda transplantada
no tronco
Figura 19.5
Especificidade de rgos durante a metamorfose da r. (A) Extremidades da cauda regridem

mesmo quando transplantadas no tronco, enquanto (B) os clices oculares permanecem
intactos mesmo quando transplantados para a
cauda em regresso. (De acordo com Schwind,
1933; fotografias de Geigy, 1941, cortesia do
Journal of Experimental Zoology.)
Cauda
que a epiderme da cabea e do corpo continua a funcionar (Nishikawa et al., 1989).

Essas respostas epidrmicas locais parecem ser controladas pela especificidade
regional do mesoderma drmico. Se as clulas do dermtomo da cauda (que do
origem a derme da cauda) so transplantadas para o tronco, a epiderme que elas
contactam sofrer degenerao na metamorfose. Inversamente, quando o dermtomo do tronco transplantado para a cauda, aquelas regies da pele persistem.
Modificando o ectoderma no se altera a resposta regional aos hormnios da tireide
(Kinoshita et al., 1989).
Essa resposta especfica dos rgos dramaticamente demonstrada quando extremidades da cauda so transplantadas para a regio do tronco ou quando clices
oculares so colocadas na cauda (Schwind, 1933; Geigy, 1941). A extremidade da
cauda extra colocada no tronco no protegida da degenerao, mas o olho retm sua
integridade apesar de estar colocado dentro da cauda em degenerao (Figura 19.5).
Portanto, a degenerao da cauda representa uma morte celular autnoma programada. Somente tecidos especficos morrem quando dado o sinal. Essas mortes celulares programadas so importantes na modelagem do corpo. Em humanos, a degenerao programada ocorre nos tecidos entre os dedos e os artelhos, e a degenerao da
cauda humana durante a semana 4 do desenvolvimento se parece regresso da
cauda do girino (Fallon e Simandl, 1978).
739
COORDENAO DAS MUDANAS NO DESENVOLVIMENTO. Um dos princi-
pais problemas da metamorfose a coordenao dos eventos desenvolvimentais. A

cauda no deve degenerar at que outro meio de locomoo- os membros- estejam
desenvolvidos, e as guelras no devem regredir at que o animal possa utilizar os seus
msculos pulmonares recm-desenvolvidos. A maneira de coordenar os eventos
metamrficos parece ser atravs de diferentes quantidades de hormnio que produzem diferentes efeitos especficos (Kollros, 1961). Esse modelo chamado de conceito
do limite. Com o crescimento gradual da concentrao de hormnios da tireide,
diferentes eventos ocorrem dependendo do nvel de concentrao do hormnio. Quando girinos privados de suas tireides so colocados em uma soluo diluda de hormnios da tireide, os nicos efeitos morfolgicos so o encurtamento dos intestinos
e o crescimento acelerado dos membros posteriores. Entretanto, em concentraes
mais altas do hormnio, a regresso da cauda observada antes da formao dos
membros posteriores. Esses experimentos sugerem que ao se elevarem os nveis de
hormnio da tireide, os membros posteriores se desenvolvem primeiro e depois regride
a cauda. Analogamente, quando girinos recebem T3 induz-se a formao dos ossos
precoces nas dosagens mais baixas e os mais tardios em dosagens mais altas,
mimetizando a situao natural (Hanken e Hall, 1988). Portanto, o planejamento na
metamorfose regulado pela competncia dos diferentes tecidos em responder aos
hormnios da tireide.
MUDANAS NEURONIAIS. Mas o que acontece com o sistema nervoso quando o
animal est construindo um novo organismo a partir do velho? A anatomia adaptiva

de uma r certamente difere daquela de seu girino. Uma conseqncia imediata da
metamorfose nos anuros observada na transferncia dos olhos para frente, a partir
de sua posio lateral original (Figura 19.6).* Os olhos laterais do girino so tpicos
de herbvoros como presa, ao passo que os olhos frontais da r so mais adequados
*Um dos movimentos mais espetaculares de olhos durante a metamorfose ocorre nos peixes
chatos como o linguado. Originalmente, os olhos esto em lados opostos da face. Todavia, durante
a metamorfose, um dos olhos migra dorsalmente para encontrar o outro no topo da cabea,
permitindo ao peixe permanecer no fundo, olhando para cima (Martin e Drewry, 1978).
Figura 19.6
A migrao do olho e mudanas neuroniais

associadas durante a metamorfose do girino de
Xenopus laevis. Os olhos do girino so localizados lateralmente, por isso, existe um plano
binocular relativamente pequeno. Os olhos
migram dorsalmente e rostralmente durante a
metamorfose, criando um amplo campo
binocular para a r adulta. Abaixo do girino em
metamorfose est uma representao da regio
ptica de seu crebro. Quando se injeta
peroxidase de rabanete (horseradish) na retina,
os neurnios pticos a transportam para o lado
contralateral (oposto) do crebro (flecha pequena), mas no para o lado ipsilateral. Com a
continuao da metamorfose, as projees
ipsilaterais (envolvidas na viso binocular) comeam a ser vistas (flecha grande). (de Hoskins
e Grobstein, 1984, cortesia de P. Grobstein.)
740
ao seu estilo predatrio de vida. Para alcanar sua presa, a r deve enxergar em trs
dimenses. Ou seja, ela deve adquirir um campo de viso binocular onde os sinais
de ambos os olhos convergem no crebro. No girino, o olho direito inerva o lado
esquerdo do crebro e vice-versa. No existem projees ipsilaterais (do mesmo
lado) dos neurnios da retina. Entretanto, durante a metamorfose essas vias
ipsilaterais adicionais emergem, permitindo que sinais de ambos os olhos atinjam a
mesma rea do crebro (Currie e Cowan, 1974; Hoskins e Grobstein, 1985a). Em
Xenopus, essas novas vias neuroniais no resultam da remodelao de neurnios
existentes, mas da formao de novos neurnios que se diferenciam em resposta
aos hormnios da tireide (Hoskins e Grobstein, 1985a,b). Tanto o movimento dos
olhos para sua nova posio como a diferenciao de novos neurnios que estendem processos ipsilaterais para o crebro so modificaes dependentes de hormnios da tireide.
Outros neurnios tambm sofrem mudanas profundas. Algumas clulas nervosas morrem, como aquelas que inervam os msculos da cauda de girinos (Forehand e
Farel, 1982). Essa morte neuronial parece ser uma outra resposta ao hormnio da
tireide, e no causada pela morte do tecido alvo. Outros neurnios, como certos
neurnios motores na mandbula do girino trocam sua fidelidade do msculo larval
para o msculo adulto recm-formado (Alley e Barnes, 1983). E ainda outros neurnios, como aqueles inervando a lngua (um msculo recm-formado, no presente na
larva) estiveram dormentes durante o estgio de girino e s iniciam a formao de
conexes durante a metamorfose (Grobstein, 1987). O crebro tambm sofre mudanas
em sua estrutura durante a metamorfose. Portanto, o sistema nervoso dos anuros
sofre enorme reestruturao durante a metamorfose. Alguns neurnios morrem, outros nascem, e outros mudam sua especificidade.
MUDANAS DE COMPORTAMENTO. A metamorfose tambm traz mudanas de
comportamento; obviamente, o comportamento de uma r diferente do seu girino.

Recentemente, o estudo de rs tropicais demonstrou comportamentos surpreendentes envolvendo inter-relaes r-girino. A r flecha de veneno, Dendrobates,
encontrada nas florestas tropicais da Amrica Central. A maior parte do tempo,
essas rs altamente txicas vivem nos detritos foliares do solo da floresta. Aps a
postura dos ovos sobre uma folha mida, um dos pais (s vezes o macho, outras a
fmea) serve de guardio dos ovos. Quando os ovos se transformam em girinos, o
guardio permite que eles se aboletem em suas costas (veja Prancha 34). A r sobe
ento para a copa das rvores at encontrar bromlias com poas de gua em suas
folhas da base, onde deposita um de seus girinos. Em seguida, vai buscar outro, e
assim por diante at que a ninhada toda tenha sido depositada em numerosas pequenas poas de gua. Em seguida, a fmea retorna todos os dias a essas poas
onde deposita ovos no fertilizados, e reabastece o suprimento de alimento para os
girinos, quando esse escasseia, at que se complete a metamorfose (Mitchell, 1988;
vanWijngaarden e Bolanos, 1992; Brust, 1993). No se sabe como a fmea se lembraou informada- onde foram depositados os girinos.
Repostas Moleculares aos Hormnios
da Tireide Durante a Metamorfose
Evidncia de experimentos com inibidores sugeriram que os hormnios da tireide
controlam a metamorfose ao nvel da transcrio. Weber (1967) demonstrou que a
injeo de actinomicina D em girinos prometamrficos normais inibiu a regresso da
cauda e a remodelao da cabea. No fgado (que remodelado na metamorfose e no
destrudo ou substitudo) as mudanas metamrficas so acompanhadas por aumentos dramticos da sntese de RNA ribossmico e mensageiro, com a velocidade de
sntese de protenas aumentada quase 100 vezes dentro de 4 horas aps a estimulao
pelos hormnios da tireide (Cohen et al., 1978). Muitos desses novos mRNAs esto
codificando as novas enzimas do fgado adulto. Mori e colaboradores (1979) mostraram que muito do aumento de carbamoilfosfato sintase pode ser atribudo ao aumento
da transcrio do seu gene.
O mtodo de transferncia de manchas, onde mRNA radioativo de girinos da r boi
(bullfrog) na fase premetamrfica e em metamorfose hibridizado com genes clonados,
demonstrou trs tipos de resposta aos hormnios da tireide. A transcrio de um
conjunto de genes aumenta em resposta a uma metamorfose induzida natural ou experimentalmente; a transcrio de um outro conjunto de genes dramaticamente reduzida; e um terceiro conjunto de genes permanece inalterado pelos hormnios da tireide
(Lyman e White, 1987; Mathison e Miller, 1987). A transcrio dos mRNAs para
albumina, globina adulta, queratina da pele adulta e o homlogo de Sonic hedgehog
em Xenopus controlada por T3. A transcrio do gene sonic hedgehog interessante, pois sugere que o padro regional de formao de rgos durante a metamorfose
pode ser conseqncia do reaparecimento de algumas das mesmas molculas que
haviam estruturado o embrio (Stolow e Shi, 1995).
Mas essas so respostas ao T3 relativamente tardias. A resposta a T3 mais precoce
a ativao transcricional dos genes do receptor do hormnio da tireide (TR) (Yaoita
e Brown, 1990; Kawahara et al., 1991). Os receptores de hormnios da tireide so
membros de uma superfamlia de receptores de hormnios esterides dos fatores de
transcrio. Existem dois tipos principais de TR, TR e TR, e os mRNAs de ambos
esto presentes em nveis relativamente baixos antes do incio da metamorfose (Tabela 19.2; Kawahara et al., 1991; Baker e Tata, 1992). Entretanto, a sntese desses mRNAs
acelerada dramaticamente ao se iniciar a metamorfose. A injeo de T3 exgeno causa
um aumento de 2 a 5 vezes na mensagem de TR e um aumento de 20 a 50 vezes no
mRNA para TR. Essa auto-induo da mensagem do receptor de T3 pelo prprio T3
pode ter um papel significativo na acelerao da metamorfose (Figura 19.7). Quanto
mais receptores de T3 tiver um tecido, mais competente ele ser para responder
pequenas quantidades de T3. Portanto, o clmax metamrfico, quando as mudanas
visveis da metamorfose ocorrem rapidamente, pode ser conseqncia de um aumento
na produo e induo de mais receptores de T3. O mecanismo dessa induo no
conhecido, mas Kanamori e Brown (1992) mostraram que a acelerao na formao do
mRNA de TR significativamente bloqueada por inibidores da sntese de protenas.
Assim, outras protenas esto provavelmente envolvidas na responsividade de genes
de TR ao T3. O TR no funciona sozinho, mas forma um dmero com o receptor retinide,
RX. Esse dmero liga hormnios da tireide e pode entrar no ncleo para efetuar a
transcrio (Wong e Shi, 1995).
Tabela 19.2
Acumulao relativa de
e em
mRNA TR
girinos de Xenopus
aps tratamento com
T3 e prolactina
Unidades relativas
TR
TR
505
24
1290
368
Prolactina + T3
799
<10
Prolactina
405
43
Tratamento
Nenhum
T3
Fonte: De acordo com Baker e Tata, 1992.
741
742
(A) PREMETAMORFOSE
Concentrao baixa de tirotropina
Concentrao
baixa de T3 e T4
Concentrao baixa
do receptor de T3
(B)
METAMORFOSE PRECOCE
(PROMETAMORFOSE)
Concentrao de tirotropina aumenta

Concentrao de
T 3 e T4 aumenta
Concentrao
do receptor
de T3 aumenta
(C)
CLMAX METAMRFICO
Alta concentrao de tirotropina

Alta
concentrao
de T3 e T4
Alta
concentrao do
receptor de T3
Gene do receptor de T3
Transcrio
(Nenhuma transcrio)
Outros genes responsivos a T3
Transcrio
Ligao ao receptor
de T3 estimula a
produo de mais
receptores de T3
Aumenta transcrio
dos genes induzidos
por T 3
Transcrio
Transcrio
Ligao ao receptor de T3 estimula
a transcrio de outros genes
Transcrio
Transcrio
Algumas protenas induzidas por T3

estimulam mais mensagem de T3
Figura 19.7
Modelo hipottico para a acelerao da metamorfose em Xenopus pela auto-induo de receptores

de T3 por T3. (A) No girino, a premetamorfose caracterizada por baixos nveis de tirotropina
(fator de liberao do hormnio da tireide), hormnios da tireide e receptores de T3. (B) No
incio da metamorfose, os nveis de tirotropina aumentam (provavelmente devido maturao
desenvolvimental da glndula pituitria). Isso aumenta a quantidade de T3 que se liga pequena
quantidade de seu receptor estimulando a transcrio de mais mRNA do receptor de T3. Algumas
outras protenas induzidas por T3 tambm so necessrias para a transcrio de mais mensagem
de T3. (C) No clmax metamrfico, as grandes concentraes de T3 induzem, ainda mais, a sntese
de seus receptores, o que causa uma resposta mais rpida ao T3.
Foi observado que o hormnio prolactina tambm inibe o aumento de mRNAs de

TR e TR. Ainda mais, se a acelerao dos receptores da tireide bloqueada pela
prolactina, a cauda no reabsorvida, e o gene de queratina especfico para o adulto
no ativado (Tata et al., 1991; Baker e Tata, 1992). Injees de prolactina estimulam
o crescimento larval e inibem a metamorfose (Bern et al., 1967; Etkin e Gona, 1967),
mas controverso se isso reflete o papel natural da prolactina (Taka hashi et al.,
1990; Buckbinder e Brown, 1993). Ainda no conhecemos o mecanismo de regulao
dos nveis de hormnios da tireide no girino, nem como a recepo do hormnio
desencadeia respostas diferentes (proliferao, diferenciao, morte celular) em tecidos diferentes.
&
743
Especulaes
Heterocronia
MAIORIA DAS ESPCIES animais
se desenvolve atravs de uma fase

larval. Entretanto, algumas espcies modificaram seus ciclos de vida alongando ou encurtando seu perodo larval. O
fenmeno pelo qual os animais modificam o
perodo de aparecimento e a velocidade de
desenvolvimento de caracteres j presentes em seus ancestrais chamado heterocronia. Aqui discutiremos trs tipos extremos de heterocronia. Neotenia, se refere
reteno da forma juvenil devido a um atraso no desenvolvimento do corpo, em relao s clulas germinativas e s gnadas,
cuja maturidade alcanada em tempo normal. Prognese tambm se refere reteno da forma juvenil, mas nesse caso as
gnadas e a linhagem germinativa se desenvolvem mais rapidamente do que o normal e elas se tornam sexualmente maduras,
enquanto o resto do corpo est ainda na
fase juvenil. No desenvolvimento direto, os
embries abandonam completamente os estgios de desenvolvimento larval e passam
a construir um pequeno adulto.
Neotenia
Em certas salamandras, a maturidade sexual ocorre em uma fase que considerada larval. O sistema reprodutivo e as clulas germinativas amadurecem, enquanto
o resto do corpo retm a forma juvenil ao
longo de sua vida. Na maioria dos casos,
a metamorfose no se concretiza, e a maturidade sexual se d em um corpo larval.
A axolotle Mexicana, Ambystoma mexicanum, no sofre metamorfose na natureza porque sua glndula pituitria no libera a forma ativa do hormnio estimulante da tireide (TSH) para que seja estimulada a sntese de T3 em sua glndula tireide
(Prahlad e De-Lanney, 1965; Norris et al.,
1973; Taurog et al., 1974). Assim, quando
os pesquisadores forneceram A. mexicanum o hormnio da tireide ou TSH, eles
observavam uma metamorfose em um adulto no encontrado na natureza (Huxley,
1920). Outras espcies como a A. tigrinum,
s sofrem metamorfose se receberem sinais do ambiente. Isso no acontecendo,
elas se tornam neotnicas e realizam, como
(A)
(B)
Figura 19.8
Metamorfose induzida no axolotle. (A) Condio normal do axolotle. (B) Espcimen tratado com
tiroxina para induzir a metamorfose. (Cortesia de G. Malacinski.)
larvas, acasalamentos bem sucedidos. Em

parte do seu habitat, A. tigrinum uma
salamandra neotnica, se deslocando atravs dos frios lenis de gua das Montanhas Rochosas. Entretando, na parte mais
quente do seu habitat, a forma larval de A.
tigrinum transitria, originando-se a salamandra tigre terrestre. Populaes
neotnicas das Rochosas podem ser induzidas a sofrer metamorfose quando colocadas em guas mais quentes. Parece que
o hipotlamo dessas espcies no pode
produzir o fator liberador de TSH em baixas temperaturas.
Algumas salamandras, entretanto, so
permanentemente neotnicas, mesmo no
laboratrio. Enquanto a tiroxina capaz de
produzir a antiga forma adulta perdida de A.
mexicanum (Figura 19.8), as espcies
neotnicas Necturus e Siren no respondem a hormnios da tireide (Frieden, 1981);
sua neotenia permanente. Yaoita e Brown
(1990) notaram que o mRNA para o receptor
do hormnio da tireide est ausente em
Necturus e, portanto, no pode ser induzido por T3. As leses genticas consideradas responsveis pela neotenia em vrias
espcies esto mostradas na Figura 19.9.
De Beer (1940) e Gould (1977) especularam que a neotenia um dos fatores importantes na evoluo de grupos taxonmicos mais complexos. Retardando o desenvolvimento de tecidos somticos, se d
seleo natural um substrato mais flexvel. De acordo com Gould, a neotenia estaria fornecendo um escape da especializao. Os animais podem abandonar suas
formas adultas especializadas, retornar
labilidade da juventude e se preparar para
novas direes evolucionrias.
Prognese
Na prognese, a maturao das gnadas
acelerada enquanto o resto do corpo se
desenvolve normalmente a um certo estgio. A prognese permitiu que certas espcies de salamandra encontrassem novos
nichos ecolgicos. Bolitoglossa occidentalis uma salamandra tropical diferente
de outros membros do seu gnero, por viver em rvores. Essa salamandra palmpedes e tem um corpo pequeno, condies
adequadas para uma vida arbrea; os ps
produzem a suco para a subida e o corpo pequeno torna a trao eficiente.
Alberch e Alberch (1981) mostraram que
744
Estmulos externos
Hipotlamo
Ambystoma tigrinum
Ambystoma gracilus
Hormnio liberador de
tirotropina (TSH-RF)
Pituitria
Ambystoma mexicanum
Hormnio
estimulante da tireide
Tireide
Tiroxina,
Triiodotironina
Eurycea neotenes
Espcies de Necturus
e Siren
Tecidos alvo capazes

de sofrer metamorfose
mento direto, tpico em espcies de rs

que no tm girinos e ourios-do-mar que
no tm larvas pluteus. Elinson e seus
colegas (del Pino e Elinson, 1983; Elinson,
1987) estudaram uma pequena r, Eleutherodactylus coqui, que um dos animais mais abundantes na ilha de Porto
Rico. Diversamente dos ovos de Rana e
Xenopus, os ovos de E. coqui so fertilizados enquanto esto no corpo da fmea.
Cada ovo tem 3.5mm de dimetro (cerca
de 20 vezes o volume dos ovos de Xenopus). Aps a postura, o macho permanece levemente apoiado sobre os embries,
protegendo-os de predadores e da dessecao (Taigen et al., 1984). O desenvolvimento precoce semelhante maioria
das rs. A clivagem holoblstica, a gastrulao iniciada na posio subequatorial (Figura 19.10A), e as dobras neurais
se elevam a partir da superfcie (Figura
19.10B). Entretanto, logo aps o fechamento do tubo neural, os brotos dos membros aparecem na superfcie (Figura
19.10C). Essa emergncia precoce de brotos de membros a primeira indicao de
que o desenvolvimento direto e que no
passar pelo estgio de girino sem membros. Mais ainda, a emergncia dos membros no depende de hormnios da
tireide (Lynn e Peadon, 1955). O que
emerge do ovo gelatinoso, trs semanas

aps a fertilizao, no um girino, mas
uma pequena r (Figura 19.10D). A pequena r tem uma cauda durante a primeira
parte de sua vida, mas ela usada para
respirao e no para a locomoo. Tais
rs com desenvolvimento direto no necessitam de gua para seus estgios
larvais e podem, portanto, colonizar novas regies inacessveis a outras rs.
Raff (1987) estudou o desenvolvimento direto em ourios-do-mar. Em ouriosdo-mar tpicos, as clulas mesenquimatosas primrias invaginam e secretam o
esqueleto de carbonato de clcio da larva
pluteus. Essas larvas se alimentam e crescem at que se formem as vesculas
celmicas (tambm derivadas dos micrmeros) nos lados do intestino (Pehrson e
Cohen, 1986). O celoma esquerdo continua a crescer produzindo uma hidrocele
que induz o ectoderma sobrejacente a
invaginar formando um vestbulo. A
hidrocele e o vestbulo formam um rudimento que cresce dentro da larva at ser
liberado na metamorfose para se tornar
um ourio-do-mar juvenil (Figura 19.11).
Vrias espcies de ourio-do-mar tm
estgios suprimidos da larva pluteus enquanto aceleram o desenvolvimento do rudimento adulto. Como no desenvolvimento
Figura 19.9
Estgios ao longo do eixo hipotlamo-pituitriatireide da salamandra onde se considera que

vrias espcies tm bloqueio da metamorfose.
Eurycea, Necturus e Siren parecem ter um defeito no receptor dos tecidos responsivos.
Eurycea ter metamorfose ao ser exposta concentraes extremamente altas de tiroxina, enquanto que Necturus e Siren no respondem a
qualquer dose. (De acordo com Frieden, 1981.)
B. accidentalis se assemelha aos juvenis

das espcies relacionadas B. subpalmata
e B. rostrata (cujos jovens so pequenos, com dgitos que ainda no ultrapassaram a interligao). Considera-se que
B. occidentalis se tornou um adulto sexualmente maduro com um tamanho muito menor do que seus predecessores. Isso
deu-lhe um fentipo que possibilitou a
vida em rvores.
Desenvolvimento direto
Enquanto alguns animais estenderam o
perodo larval de sua vida, outros aceleraram seu desenvolvimento abandonando suas formas larvais normais. Esse
ltimo fenmeno, chamado desenvolvi-
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 19.10
Desenvolvimento direto da r Eleutherodactylus coqui. (A) Gstrula precoce mostrando o lbio

do blastporo. (B) Vista dorsal da nurula mostrando a elevao das dobras neurais. (C) Um dia
aps o fechamento das dobras neurais, pode se ver os brotos dos membros. (D) Trs semanas
aps a fertilizao eclode uma pequena r, aqui vista ao lado de uma moeda de um penny
Canadense (a inflao da cauda um artefato causado pelos fixadores qumicos usados para
preparar o espcimen). (de Elinson, 1987, cortesia de R. P. Elinson.)
(A)
(B)
Rudimento do
ourio-do-mar
(C)
Estmago
(D)
Rudimento do
ourio-do-mar
Apndices
adultos
Figura 19.11
Metamorfose normal da larva pluteus para adulto no ourio-do-mar Lytechinus pictus. (A) Larva
pluteus, 8 dias aps a fertilizao. (B) Larva pluteus de 11 dias com rudimento do ourio-do-mar
e bolsa celmica esquerda. (C) Uma pluteus de 19 dias com o rudimento do ourio-do-mar em
desenvolvimento. (D) Cerca de 11 minutos aps a fixao ao substrato, os braos da larva
comeam a ser reabsorvidos. (De Hinegardner, 1969, cortesia de R. T. Hinegardner.)
direto na r, esse desenvolvimento em ourio-do-mar depende de um ovo grande

com vitelo. De fato, Raff encontrou uma
correlao entre o volume do ovo e a extenso do desenvolvimento direto (Tabela
19.3). Ourios-do-mar na Amrica do Norte e na Europa tm ovos cujo dimetro varia de 60 a 200 m. Essas espcies tm um
desenvolvimento indireto atravs da larva
pluteus. Ovos no intervalo de 300-350 m
produzem larvas pluteus parciais que possuem o esqueleto larval mas no o intestino
(portanto, no se alimentam). Essas espcies mostram um crescimento acelerado

do rudimento adulto, de modo que um ourio-do-mar juvenil, capaz de se alimentar,
produzido rapidamente. Existem alguns
ovos com vitelo alcanando um dimetro
de 2mm (prximo do volume de ovos de
Xenopus). Esses embries desenvolvemse diretamente sem qualquer estgio
pluteus. O estgio de alimentao no
necessrio porque a nutrio garantida
pelo vitelo.
Tabela 19.3 Relao entre o tipo de desenvolvimento e o tamanho do

ovo em ourios-do-mar
Nmero de Espcies
83
Intervalos de tamanho
m)
de ovo (
60 - 345
Tipo de desenvolvimento
Larva pluteus com alimentao
280
Pluteus com alimentao facultativa
300 - 350
Pluteus abreviada, sem alimentao
19
400 - 2000
Pluteus perdida; desenvolvimento direto
Fonte: De acordo com Raff, 1987.
745
A natureza forneceu uma excelente

comparao em duas espcies australianas de ourio-do-mar do gnero Heliocidaris. Heliocidaris erythrogramma e H.
tuberculata so espcies comuns, que de
acordo com dados morfolgicos e de seqenciamento de DNA, so estreitamente relacionadas. Eles vivem lado a lado e
desovam ao mesmo tempo no vero. Entretanto, H. erythrogramma tem um ovo
com o dimetro de 425m e de desenvolvimento direto; H. tuberculata produz
um ovo com 95m de dimetro e se desenvolve atravs de uma larva pluteus tpica. Uma comparao entre as duas espcies revela que o desenvolvimento direto eliminou os estgios larvais e h um
prosseguimento direto para a formao do
celoma e a construo do ourio-do-mar
juvenil (Figura 19.12). A larva pluteus
destinada natao e alimentao (Strathmann, 1971, 1975), usando seus braos
como suporte de faixas de clios que varrem partculas de alimento para dentro da
boca. As clulas nos organismos de desenvolvimento direto mudaram seus destinos de modo a no se formar o esqueleto larval ou a boca. Tambm, na gastrulao desses ourios-do-mar de desenvolvimento direto no se observa descendentes das clulas do micrmero que
invaginam para formar o esqueleto larval.
Pelo contrrio, essas clulas so imediatamente envolvidas na formao da espinha calcria do jovem adulto. Tambm, a
extremidade do arquntero nas formas de
ourio-do-mar com desenvolvimento direto forma uma extensa hidrocele que
interage com o vestbulo ectodrmico para
formar o rudimento de ourio-do-mar na
gastrulao. No desenvolvimento indireto, somente duas clulas iniciam a formao do vestbulo, e essas interagem com
a hidrocele depois do estabelecimento da
estrutura de pluteus (Wray e Raff, 1990,
1991). Dessa forma, temos um interessante paradoxo. De um lado, o desenvolvimento dos estgios larvais parecem estar
fortemente contidos. Larvas de diferentes classes de equinodermos so muito
parecidas, e os girinos de diferentes grupos de rs so tambm muito semelhantes. Entretanto, essas contenes podem
ser eliminadas se for abandonada a necessidade de um estgio larval para alimentao. O aumento da quantidade de
vitelo disposio do embrio parece tornar isso possvel.
746
Figura 19.12
Modificaes no destino celular e gastrulao

no ourio-do-mar em desenvolvimento direto
e indireto. Os mapas de destino no estgio de
32 clulas mostram as diferenas de destino
celular. Os destinos vegetais (indicados por
sombreamento) incluem o celoma (C), intestino (G), clulas pigmentadas (P) e mesnquima
esqueletognico (S). As clulas dando origem
aos tecidos neurais so denotadas como N.
Note que o desenvolvimento direto no produziu micrmeros e macrmeros separados. No
desenvolvimento indireto forma-se uma pluteus,
e dentro dessa estrutura larval as interaes
formam o rudimento do ourio-do-mar juvenil
(colorido). No desenvolvimento direto, tais interaes entre o celoma e as clulas do vestbulo ocorrem imediatamente na gastrulao, e o
rudimento juvenil (colorido) formado sem o
estgio larval de alimentao. Ambos os tipos
de desenvolvimento geram as mesmas estruturas adultas. (De acordo com Raff, 1994.)
DESENVOLVIMENTO INDIRETO
S. purpuratus, H. tuberculata
Seqestro do adulto
para o primrdio
da bolsa celmica
Destinos em 32 clulas
Pluteus
4 semanas
DESENVOLVIMENTO DIRETO
Ourio-do-mar
juvenil
H. erythtogramma
Destinos em
32 clulas
4 dias
Sem alongamento do
arquntero, iniciao
do esqueleto larval,
formao do intestino
larval ou seqestro
do primrdio embrionrio
Metamorfose em insetos
Everso e Diferenciao dos Discos Imaginais
Enquanto a metamorfose em anfbios caracterizada pela remodelao de tecidos
existentes, a metamorfose nos insetos freqentemente envolve a destruio de tecidos larvais e sua substituio por uma populao de clulas totalmente diferente.
Existem trs padres principais de desenvolvimento dos insetos. Alguns poucos
insetos, como os poduras (subordem dos colmbolos) no tm o estgio larval e se
desenvolvem diretamente. Outros insetos, notavelmente gafanhotos e insetos
rastejantes, sofrem uma metamorfose gradual hemimetablica (Figura 19.13A). rgos adultos so formados sem uma descontinuidade intensa. Os rudimentos da asa,
rgos genitais e outras estruturas adultas esto presentes na ecloso, e se tornam
mais maduros em cada muda. Na ltima muda, o inseto emergente um adulto alado e
sexualmente maduro. A forma larval do inseto hemimetablico chamada de ninfa.
Nos insetos holometablicos (moscas, besouros, mariposas e borboletas) existe
uma transformao dramtica e sbita entre os estgios de larva e adulto (Figura
19.13B). A larva juvenil (lagarta, verme, larva de inseto) sofre uma srie de mudas
enquanto se torna maior. Uma larva de inseto recm-eclodida coberta com uma dura
cutcula. Para crescer, o inseto precisa produzir uma cutcula nova e maior, como
tambm descartar a cutcula velha. Portanto, o desenvolvimento ps-embrionrio
(A) DESENVOLVIMENTO
HEMIMETABLICO
(B)
DESENVOLVIMENTO
HOLOMETABLICO
Muda
Muda
Muda
Muda
Muda
Muda
Muda
Muda
Muda e metamorfose pupa
Muda e metamorfose
Metamorfose
Adulto
Adulto
Figura 19.13
(A) Metamorfose hemimetablica (incompleta). (B) Metamorfose holometablica (completa).
desses insetos consiste em uma sucesso de mudas. O nmero de mudas antes da

fase adulta caracterstico das espcies, apesar de fatores ambientais poderem aumentar ou diminuir esse nmero. Os estgios entre essas mudas so chamados instares. Os estgios instar crescem em degraus, cada um sendo qualitativamente maior do
que o anterior. Aps o ltimo estgio instar, a larva sofre uma muda metamrfica para
se tornar uma pupa. A pupa no se alimenta, e sua energia deve se originar daqueles
alimentos ingeridos enquanto larva. Durante a pupao, as estruturas adultas so
formadas e substituem as estruturas larvais. Finalmente, uma muda imaginal permite
ao adulto descartar o invlucro pupal e emergir.
A Drosophila sofre quatro mudas no seu ciclo vital. O embrio se desenvolve no
primeiro instar da larva e muda, em seguida, para se tornar a larva do segundo instar.
Mudas subseqentes separam o segundo instar do terceiro, do terceiro para a pupa e
da pupa para o adulto. Em cada muda, as clulas epidrmicas se separam da cutcula e
secretam um fluido de muda nos espaos intervenientes. Aps a secreo da nova
cutcula, as clulas epidrmicas degradam a velha pela ativao de enzimas no fluido
de muda (Hepburn, 1985). A transformao de juvenil para adulto ocorre dentro da
cutcula pupal. A maior parte do corpo antigo da larva sistematicamente destrudo ao
se desenvolverem novos rgos adultos a partir de ninhos de clulas no diferenciadas,
747
748
Figura 19.14
Discos para:
As localizaes e os destinos desenvolvimentais dos discos imaginais de Drosophila melanogaster. (De acordo com Fristrom
et al., 1969.)
Parte da boca
Discos imaginais
Placa frontal e
lbio superior
Antena
Cabea
Olho
Trax
Perna
Haltere
Asa
Abdmen
Genitlia
Larva de
Drosophila
Metamorfose
Adulto de
Drosophila
os discos imaginais (e, em alguns insetos, os histoblastos). Quando o organismo

adulto (imago) est desenvolvido, a muda imaginal resulta no descarte da cutcula e
na emergncia do inseto adulto. Em larvas holometablicas, ento, existem dois tipos
de populaes celulares: as clulas larvais, usadas para as funes do juvenis, e as
milhares de clulas imaginais, as quais esperam em aglomerados o sinal para diferenciar. A Figura 19.14 mostra a localizao dos discos imaginais na Drosophila e as
estruturas nas quais eles se desenvolvem.
Na Drosophila existem 10 pares principais de discos imaginais, que reconstroem o
adulto inteiro (com exceo do abdmen), e um disco genital que forma as estruturas
reprodutivas. A epiderme abdominal se forma de um pequeno grupo de clulas imaginais chamadas histoblastos, que se situam na regio do intestino larval, e outros
ninhos de histoblastos localizados em toda a larva formam os rgos internos do
adulto. Os discos imaginais podem ser vistos na larva recm eclodida como
espessamentos locais da epiderme. Na Drosophila esses discos recm-eclodidos do
olho-antena, asa, halteres, pernas e genitais contm 70, 38, 20, 36-45 e 64 clulas,
respectivamente (Madhavan e Schneiderman, 1977). Enquanto que a maioria das clulas larvais tem uma capacidade mittica limitada, os discos imaginais dividem-se rapidamente em tempos caracteristicamente especficos. Ao se proliferarem, as clulas
formam um epitlio tubular que se dobra sobre si mesmo em uma espiral compacta
(Figura 19.15A). O disco maior, o da asa, contm cerca de 60.000 clulas, ao passo que
os discos da perna e do haltere contm 10.000 (Fristrom, 1972). Na metamorfose, essas
clulas se diferenciam e se alongam (Figura 19.15B).
O mapa do destino e a seqncia de alongamento do disco da perna esto ilustrados na Figura 19.16. No fim do desenvolvimento larval, o disco da perna um saco
epitelial conectado epiderme larval por um delgado pednculo. Em um lado do saco,
o epitlio est dobrado em uma srie de dobras concntricas, reminescentes da rosca
Dinamarquesa (Kalm et al., 1995). No fim do perodo larval, as clulas do centro do
disco se projetam para fora para se tornarem as pores mais distais da perna- a garra
e o tarso. As clulas de fora se tornam as estruturas proximais- a coxa e a epiderme
(A)
749
(B)
Figura 19.15
Alongamento do disco imaginal. Eletromicrografia de varredura do disco da perna de Drosophila

no terceiro instar antes (A) e aps (B) o alongamento. (De Fristrom et al., 1977, cortesia de D.
Fristrom.)
adjacente. Aps a diferenciao, as clulas dos apndices e epiderme secretam uma

cutcula apropriada para a regio especfica. Apesar dos discos serem compostos
primariamente de clulas epidrmicas, um pequeno nmero de clulas adepiteliais
migram para o disco no incio do desenvolvimento. Durante o perodo pupal, essas
clulas do origem aos msculos e nervos que servem essa estrutura.
O processo de alongamento pode ser iniciado em cultura colocando-se discos
imaginais em soluo contendo o hormnio de muda, 20-hidroxiecdisona. Ainda mais,
tal everso pode ser inibida adicionando um de trs conjuntos de drogas. (1) Inibidores
de sntese de RNA e de protenas inibem a everso quando adicionados a discos
imaginais cultivados, ao mesmo tempo que o 20-hidroxiecdisona. Sabe-se que a sntese de RNA e de protena ocorrem antes do alongamento e que algumas dessas protenas
so necessrias para que isso ocorra. (2) Citocalasina B, um inibidor da funo de
microfilamentos, tambm inibe o alongamento, indicando assim a necessidade de
microfilamentos de actina. (3) Inibidores de proteases tambm inibem o alongamento
(Pino-Heiss e Schubiger, 1989), pois proteases da superfcie das clulas so necessrias para a liberao de constritores da forma celular. Em conjunto, esses dados sugerem que a everso de discos imaginais requer sntese de novas protenas, um sistema
bem desenvolvido de microfilamentos de actina e alguma comunicao celular atravs
da superfcie da clula (Fristrom et al., 1977; Kalm, 1995).
Estudos de Condic e seus colegas (1990) demonstraram que o alongamento do
disco imaginal devido primariamente s mudanas da forma celular dentro do epitlio
Trocanter
Trax
presuntivo
Fmur
Coxa
Membrana
peripodial
T2-5
T1
Fmur
Tbia
Tbia
Trocanter
T1
Tbia
Fmur
Tbia
T1
Fmur
T2-5
Coxa
Garra
Fmur
Trocanter
Coxa
(A)
T1
T2-5
Garras
Trax
presuntivo
(B)
Fmur
Trocanter
Trax
presuntivo
Tbia
Coxa
Trocanter
Trax
presuntivo
(C)
Tarso
Figura 19.16
Seqncia de alongamento do disco da perna de Drosophila. (A) Vista da superfcie do disco no

invertido. (B,C) Seco longitudinal atravs do disco da perna em alongamento e completamente
invertido. t1, basitarso; t2-5, segmentos tarsais 2-5. (D) Perna adulta. (de Fristrom e Fristrom,
1975, cortesia de D. Fristrom.)
(D)
Garras
750
Figura 19.17
(A)
(B)
(C)
Modificaes na forma da clula durante o alongamento do disco imaginal da perna da Drosophila. Superior: Sees pticas atravs do segundo disco da perna em alongamento. As flechas marcam os segmentos basitarsais, e a barra de calibrao representa 100m. Inferior:
Aumento maior (barra de calibrao representa
10m) dos pices celulares atravs da rea
basitarsal. Os limites celulares esto marcados
com faloidina marcada por fluorescncia. (A)
Incio do estgio prepupal. (B) Prepupa com 6
horas. (C) Disco da perna de uma prepupa em
fase inicial tratada com tripsina. As clulas
basitarsais esto inicialmente comprimidas ao
longo do eixo prximo-distal. Por tratamento
com hidroxiecdisona ou tripsinizao, a compresso liberada, e as clulas se expandem
para alongar o tecido. (de Condic et al., 1990,
do disco. Usando faloidina marcada por fluorescncia para corar os microfilamentos

perifricos das clulas do disco da perna, eles mostraram que as clulas dos discos
precoces do terceiro instar esto fortemente comprimidas ao longo do eixo prximodistal. Essa compresso mantida por vrias rodadas de diviso celular. Ento, ao se
iniciar o alongamento do tecido, a compresso removida e as clulas saltam para
sua forma mais arredondada (Figura 19.17). Essa converso de um epitlio de clulas
comprimidas em um epitlio mais longo de clulas no comprimidas representa um
novo mecanismo para a extenso de um rgo durante o desenvolvimento.
&
Especulaes
A determinao dos discos imaginais da perna e da asa

Determinao dos discos do ectoderma
A biologia molecular da metamorfose de
insetos comea com a especificao de
certas clulas epidrmicas para se tornarem precursoras do disco imaginal. Como
foi discutido no Captulo 14, os rudimentos de rgos na Drosophila so especificados em uma grade ortogonal pela
interseco dos sinais ntero-posterior e
dorsoventral. Na maioria dos segmentos,
os produtos do gene homeobox impedem
a expresso do gene Distal-less e o estabelecimento de primrdios dos membros;
mas naqueles segmentos especificados
para serem torcicos permitida a formao de membros (veja Figura 14.33). Cohen
e colegas (1993) demonstraram que a perna e a asa se originam do mesmo conjunto
de precursores imaginais, especificados na
interseco entre as faixas ntero-posteri-
or da expresso da protena Wingless (Wg)

e a banda horizontal de clulas expressando a protena Decapentaplegic (Dpp).
Ambas as protenas so solveis e tm um
alcance limitado. No embrio precoce de
Drosophila (em uma extenso da banda
germinativa cerca de 4.5 horas aps a fertilizao), um nico grupo de clulas na
interseco desses domnios forma os precursores do disco imaginal no abdmen.
Essas clulas (e somente elas) expressam
a protena Distal-less. Enquanto as clulas
expressando dpp so movidas dorsalmente, essas clulas expressando Distal-less
se movem para estabelecer um agrupamento secundrio de clulas imaginais (derivadas do agrupamento ventral original). Os
agrupamentos iniciais formam os discos
imaginais da perna, enquanto que os secundrios formam os discos da asa e do
haltere. Portanto, os discos da perna e da

asa tm uma origem comum (Figura 19.18).
Determinao da identidade do disco
Apesar de sua origem comum, bvio que
os discos da perna e da asa so determinados para se tornarem estruturas diferentes. Como detalhado anteriormente, a
especificao desses discos para seus
destinos particulares provavelmente realizada pelas interaes dos genes hometicos. Mesmo assim, ainda no conhecemos as molculas que especificam que os
discos da perna sejam diferentes dos discos da asa, ou que os discos do olho sejam diferentes dos discos da antena. Sabemos sim que quando certos genes hometicos so expressos nos lugares errados (como a expresso de Antennapedia
no disco do olho-antena), os discos se
751
Clula expressando Distal-less

Alcance do sinal Wg
Alcance do sinal Dpp
Clula expressando dpp
Clula expressando wg
4.5 horas
10 horas
Embrio maduro
Figura 19.18
Modelo esquemtico para a alocao e separao do disco perna-asa no trax da Drosophila. O

embrio dividido em uma grade ortogonal com faixas verticais de Wingless (Wg) e uma banda
horizontal de sntese e secreo de Decapentaplegic (Dpp). O disco inicial se forma na interseco
desses domnios secretores. As clulas secretoras de Dpp migram dorsalmente, trazendo com
elas algumas clulas do disco imaginal. Essas clulas do disco dorsal geram o disco da asa,
enquanto as clulas remanescentes formam o disco da perna. (De acordo com Cohen et al., 1993.)
reespecificam (de modo que pernas nascem do disco da antena). A determinao

do disco da asa parece ser regulada pelo
gene vestigial, que regula a sua (do disco
da asa) identidade. Usando um sistema
de endereamento da expresso gnica,
Kim e colegas (1996) fizeram com que o
gene vestigial fosse expresso nos discos
do olho, antena e perna (Figura 19.19).
Quando isso acontece, regies da estrutura normal so convertidas em asa.
Determinao da polaridade do disco
Evidncia recente sugere que os eixos da
perna e da asa so especificados por interaes nos limites de seus compartimentos (Meinhardt, 1980; Causo, 1993;
Tabata, 1995). Aps essas interaes ini-
ciais, um sistema polar coordenado (semelhante aquele discutido no captulo

anterior, para o desenvolvimento do membro de vertebrados) pode subdividir mais
precisamente as regies (Held, 1995).
O eixo ntero-posterior
Durante o primeiro instar larval, os discos
imaginais da perna e da asa adquirem seu
eixo ntero-posterior (A/P). Os discos se
tornam divididos em dois compartimentos
representando as futuras regies anterior
e posterior dos apndices (ou seja, da frente para trs da asa). O compartimento posterior definido pela expresso do gene
engrailed nas clulas posteriores do disco (Figura 19.20; Garcia-Bellido et al., 1973;
Lawrence e Morata, 1976). Se a funo
engrailed est ausente, todas as clulas

do disco se tornam anteriorizadas. O limite
entre os compartimentos anterior e posterior estritamente observado. Clulas de
um lado no podem produzir descendentes que cruzam o limite para o outro lado.
No disco da asa, as clulas posteriores
expressam a protena Hedgehog que age
como um sinal de curto alcance para induzir a expresso de Dpp nas clulas anteriores adjacentes, enquanto a expresso de
engrailed nas clulas posteriores as torna
no responsivas Hedgehog que elas secretam. A protena Dpp age como um sinal
de longo alcance para estabelecer o eixo
ntero-posterior da asa (Guillen et al., 1995;
Tabata et al., 1995; Nellen et al., 1996).
No disco da perna, o compartimento
posterior tambm secreta a protena Hedgehog. Aqui, entretanto, Hedgehog induz
as clulas dorsais do compartimento anterior a secretar Dpp enquanto essa induz as
clulas ventrais do mesmo compartimento
a secretar Wingless (Jiang e Struhl, 1996).
(A)
Gene vestigial
Protena
GAL4
Intensificador
do olho
GAL4
Elemento
ligante de
GAL4 (USP)
Vestigial expresso
ectopicamente nas
clulas do olho
(B)
Vista ventral da cabea da Drosophila
Crescimento semelhante
asa a partir do olho ventral
O eixo dorsoventral
No segundo instar da larva, um segundo
eixo, o dorsoventral determinado no disco
da asa. O limite D/V se situa na futura margem da lmina da asa, assim separando as
superfcies superior e inferior da asa (Bryant,
1970; Garcia-Bellido et al., 1973). O gene
envolvido nesse evento de compartimentao o apterous. Clulas expressando o
gene apterous se tornam as clulas dorsais
Olho
Figura 19.19
O gene vestigial determina a identidade do disco da asa. (A) Kim e colegas

construram linhagens de Drosophila que possuem a protena ativadora transcricional do levedo
GAL4 acoplada a um intensificador, tal como o intensificador do olho mostrado nesta figura. Apesar
de GAL4 ser expressa nos olhos dessas moscas, no h ligao a qualquer DNA da Drosophila.
Entretanto, se a mosca cruzada com outra espcie que contm o gene vestigial a vazante do elemento
ligante de GAL4 (a seqncia ativadora a montante - UAS), a protena GAL4 ativa esse gene.
Portanto, nessas moscas, a protena GAL4 produzida no disco do olho e ativa a expresso do gene
vestigial. (B) O olho resultante contm regies do tecido da asa. (De acordo com Kim et al., 1996.)
752
Primeiro instar
Anterior
Posterior
Segundo instar
Ventral
Dorsal A
Fim do terceiro instar
Margem
Figura 19.20
Compartimentao e expresso gnica no disco da asa. (A) No primeiro instar da larva foi
formado o eixo ntero-posterior e manifestado pela expresso do gene engrailed no compartimento posterior. No segundo instar, forma-se o eixo dorsoventral, e visto pela expresso do gene apterous na futura superfcie
dorsal. No terceiro instar da larva, as bordas da
expresso de engrailed se estendem ligeiramente alm do limite de A/P. Onde h interao das
protenas secretadas e da membrana na juno
dos eixos D/V e A/P, as clulas so determinadas a se tornar a extremidade distal da asa (X).
(De acordo com Blair, 1995.)
Ventral
Dorsal
Lmina da asa
Adulto
Dorsal
Ventral
Margem
engrailed
apterous
ambos
perna realizada por interaes nos limites entre os eixos D/V e A/P.
Na perna, a protena Hedgehog do
compartimento posterior induz as clulas
mais prximas do compartimento anterior
dorsal, a secretar a protena Decapentaplegic e induz a protena Wingless das
clulas mais prximas do compartimento
anterior ventral. Ambas as protenas, Decapentaplegic e Wingless ativam o gene
optomotorblind, cujo produto protico
promove o crescimento dos apndices do
membro (Wilder e Perrimon, 1995; Grimm
e Pflugfelder, 1996). Ainda mais, onde essas trs protenas difusveis se encontram
se define a extremidade mais distal do
(B)
(Prancha 15; Frontispcio; Blair, 1993; DiazBenjumea et al., 1993). Quando o apterus
deletado, todas as clulas no disco adquirem destinos ventrais. Tanto engrailed
como apterous so considerados genes
seletores pois eles regulam o destino de um
compartimento. Da mesma maneira que os
genes hometicos seletores discutidos no
Captulo 14, esses genes contm homeoboxes que parecem codificar fatores de transcrio. Na asa, no h crescimento ao longo
do eixo D/V, pois o ectoderma permanece
com a espessura de uma camada de clulas
em cada lado da margem da asa. No se
sabe o que causa a polaridade inicial do D/
V no disco da perna.
O eixo prximo-distal
A interao entre os eixos D/V e A/P nos
seus limites crtica para o crescimento
ao longo do eixo prximo-distal. Durante
a metamorfose, a distalizao do eixo
prximo-distal da base do trax para fora
em direo extremidade da asa ou da
membro (ou seja, a garra). Essa regio

comea a expressar os genes Distal-less
e arista-less que caracterizam a regio da
extremidade distal e estimulam o crescimento e a diferenciao das clulas (Figura 19.21A; Campbell et al., 1993; Basler
e Struhl, 1994; Diaz-Nenjumea et al., 1994).
Se a protena Dpp produzida por um
aglomerado de clulas no compartimento
anterior ventral ou se a protena Wingless
expressa por um pequeno grupo de clulas no compartimento anterior dorsal
(ativando genes), um eixo prximo-distal
inteiramente novo ser formado no local
da expresso (Figura 19.21B; Prancha 27).
A situao na asa um pouco mais difcil de compreender. A protena Hedgehog
do compartimento posterior induz as clulas adjacentes dos compartimentos anterior
dorsal e anterior ventral a secretar Dpp. Isso
estabelece as condies de crescimento
celular e padronizao ao longo do eixo A/
P. Nas clulas que do origem margem, as
clulas da superfcie dorsal que expressam
(A)
Distalless
Anterior
Posterior
(C)
Figura 19.21 Modelo da formao do eixo na perna da Drosophila em desenvolvimento.

(A) A protena Hedgehog somente sintetizada e secretada pela clulas sintetizadoras de Engrailed
no lado posterior do disco. A protena Hedgehog se difunde em uma distncia de alguns dimetros celulares e induz a faixa de clulas posteriores adjacentes na regio dorsal do disco a
expressarem os genes decapentaplegic. A protena Dpp ento se difunde e padroniza o lado
dorsal anterior do disco. A secreo de Hedgehog pelas clulas posteriores instrui as clulas
anteriores ventrais, adjacentes s clulas posteriores, a sintetizarem e secretarem a protena Wingless.
Isso ajudar a padronizar a asa anterior ventral. (B) Quando um clone de clulas expressando
Wingless produzido na regio dorsal do disco (pela manipulao de um transgene wingless),
esse organiza a formao de um novo eixo do membro. Aqui, esse eixo pode ser visto quando
corado para a presena de expresso do gene Distalless. (C) Novo eixo de membro formado
quando um clone de clulas expressando Dpp expresso ectopicamente. (B e C de DiazBenjumea et al., 1994; fotografias cortesia dos autores.)
Prancha 22
Expresso de sonic hedgehog no
embrio do pinto de trs dias.
Prancha 23
Expresso de sonic hedgehog no embrio
do pinto de dez dias.
O sonic hedgehog est envolvido em numerosas interaes indutivas nas quais um tecido influencia a diferenciao de outro tecido. Hibridizao in situ da
montagem total encontra mRNA de sonic hedgehog
na notocorda, clulas da placa do assoalho neural,
intestino anterior e mediano e no mesoderma do broto
do membro posterior. Captulos 7, 8 , 15 e 18. (Fotografia cortesia de C. Tabin.)
Depois de mediar vrias interaes importantes durante a formao de

rgos, sonic hedgehog torna-se expresso no ectoderma dos germes das
penas em desenvolvimento e escamas dos ps. Essa hibridizao in situ
da montagem total mostra o arranjo hexagonal do padro das penas.
Captulo 17. (Fotografia cortesia de Won-Sun Kim e John F. Fallon.)
Prancha 24
xpressa em precursores da clula muscular
expressa
muscular..
A protena Myf-5 e
Os elementos genticos regulando a expresso temporal e espacial do gene Myf-5

podem ser discernidos fundindo-se o gene da -galactosidase com as seqncias
envolvendo o loco Myf-5. Aqui, uma seqncia particular a montante do gene Myf5 causa a expresso do gene (cor preta) nos msculos do pescoo, arcos farngeos,
msculos oculares, msculos dos membros anteriores, e mitomos segmentados do
embrio de camundongo de 13.5 dias. Captulos 2 e 9. (Fotografia cortesia de A.
Patapoutian, G. Lyons, J. Miner e B. Wold.)
Prancha 25
Expresso assimtrica do gene nodal no
embrio do pinto de 24 horas.
Hibridizao in situ da montagem total usando sondas para o gene nodal do

pinto encontra-o expresso no mesoderma da placa lateral somente do lado
esquerdo. Pode aqui ser visto como a regio de cor prpura. Esse gene
importante para o estabelecimento do eixo esquerdo-direito do pinto. Captulo 16. (Cortesia de C. Stern.)
Prancha 26
Regulao da expresso
hometica dos genes na
formao das patas dos insetos.
Ao contrrio das lagartas das borboletas, as

larvas das moscas no tm pr-pernas. Aqui,
os produtos dos genes hometicos Ultrabithorax e abdominal-A esto corados de verde e a protena Distal-less (necessria para o
desenvolvimento dos membros) est corada de laranja. Na larva precoce da borboleta
do castanheiro Precis, os membros torcicos
(de T1-3) so facilmente vistos. Alguns segmentos abdominais (A3-6) comeam a produzir buracos em seu domnio de expresso das protenas hometicas. Abaixo, quando a lagarta cresceu, a expresso de Distalless pode ser vista nessas regies. (O amarelo indica sobreposio de domnios de
expresso.) Captulos 14, 19 e 23. (Fotografias cortesia de B. Warren, S. Paddock e
S. Carroll.)
Prancha 27
A protena Wingless tem um papel crtico na organizao do disco alar imaginal de Drosophila
Drosophila..
Clulas na juno entre os compartimentos dorsal e ventral do disco alar induzem a expresso da protena Wingless
em uma estreita faixa de clulas abarcando esse limite. A
protena Wingless induz ento a expresso de outras protenas tal como a Vestigial (aqui corada de vermelho) a
vrios dimetros de distncia. Captulo 19. (Fotografia
cortesia de K. Basler.)
Prancha 28
Expresso ectpica do gene eyeless de Drosophila causa a
formao de novos olhos em outras regies do adulto.
Aqui, o gene eyeless foi ativado experimentalmente nas regies da larva

da mosca que formam a cutcula da cabea. Na metamorfose, olhos
compostos pigmentados emergiram desse tecido. Captulo 23. (Fotografia cortesia de W. Gehring e Science.)
Prancha 30
Expresso do fator de transcrio Oct4
no blastocisto do camundongo.
Prancha 29
Polifenismo sazonal de Araschina levana
levana,,
a borboleta mapeada europia.
Vrias espcies de borboletas desenvolvem-se de maneira diferente nas diferentes estaes do ano. Em A. levana, a forma de vero representada no alto;
a forma de primavera representada abaixo. Neste caso, as diferenas
desenvolvimentais so produzidas pelo ambiente, especificamente as diferenas na durao do dia. Captulo 21. (Fotografia cortesia de H. F. Nijhout.)
O fator de transcrio Oct4 encontrado nas clulas que

iro formar o embrio, ao passo que est ausente naquelas
clulas que iro formar a placenta. A cromatina est corada
com iodeto de propdio (vermelho) enquanto a protena
Oct4 est corada de verde. A sobreposio indicada pela
cor amarela que mostra a presena de Oct4 somente nas
clulas da massa celular interna. Captulos 5 e 22. (Fotografia cortesia de H. R. Schler.)
Prancha 31
Isoladores da expresso gnica.
A protena BEAF-32 liga-se a centenas de stios nos

cromossomos politnicos de Drosophila, dividindo
os cromossomos em domnios funcionais. Suspeitase que sinais regulatrios de um domnio no atravessem o limite para o prximo. O DNA foi corado
de vermelho com iodeto de propdio. O anticorpo da
protena BEAF-32 est corado de verde e a
sobreposio aparece em amarelo. Captulo 11. (Fotografia cortesa de U. K Laemmli.)
Prancha 33
Expresso assimtrica da protena Flectina no
corao em desenvolvimento do pinto.
Prancha 32
Polaridade dorsoventral do tubo neural do pinto.
Sinais difusveis da notocorda (tubo verde em baixo) induzem a formao da placa do assoalho no lado ventral do tubo neural (verde). As
clulas da placa do assoalho induzem a formao de duas regies de
neurnios motor (dourado) nos lados ventrolaterais. A notocorda tambm restringe a expresso da protena Dorsalin (necessria para o desenvolvimento das clulas da crista neural) para a regio mais dorsal do
tubo neural (azul). Captulos 7 e 17. (Fotografia cortesia de T. M. Jessell.)
Essa protena da matriz extracelular (corada de amarelo) acumula-se predominantemente no lado esquerdo do embrio do pinto no estgio 10. Captulos 9 e
16. (Fotografia confocal laser de varredura cortesia
de K. Linask.)
Prancha 35
Localizao das clulas mesenquimatosas
-mar
primrias no embrio do ourio
do-mar
-mar..
ourio--do
Prancha 34
Cuidado parental de girinos de r.
Girinos da r de jato-venenoso reticulada (poison-dart frog) so

carregados no dorso de seus pais para pequenas poas de gua na base
de folhas de bromlia no dossel da floresta tropical. A fmea das
espcies amaznicas do Peru, em seguida, supre ovos no-fertilizados
como alimento aos girinos em desenvolvimento. Captulo 9. (Fotografia por M. Fogden/DRK Foto.)
Nesta micrografia confocal imunofluorescente somente mostrada parte da blstula mesenquimatosa. As clulas mesenquimatosas primrias esto coradas de verde e a -catenina est
corada de vermelho. -catenina vista nas junes aderentes das
membranas celulares embrionrias, e tambm encontrada no
citoplasma e ncleos das clulas que servem de alvos para a
migrao das clulas mesenquimatosas primrias. Captulo 6.
(Fotografia cortesia de J. R. Miller e D. McClay.)
Segmentos da antena
ANTENA
Arista
Garras
PERNA
Coxa
Segmentos tarsais
Trocanter
Tbia
Fmur
Figura 19.22
Correspondncia entre pores da antena e pores da perna. No mutante Antennapedia, regies

da antena so transformadas em estruturas da perna. As flechas mostram as pores da antena
que formam pores correspondentes especficas da perna. Essa correspondncia foi tambm
observada nos padres de transcrio de genes tais como salm. (De acordo com Postlethwait e
Schneiderman, 1971.)
apterous se encontram com as clulas

ventrais que no expressam apterous. O
fator de transcrio de Apterous ativa a expresso dos genes fringe e serrate nas clulas dorsais (Irvine e Wieschaus, 1994;
Williams et al., 1994; Kim et al., 1995). As
protenas Fringe e Serrate agem promovendo a transcrio dos genes vestigial e
wingless nas clulas que revestem a fronteira D/V (Frontispcio). O fator de transcrio Vestigial ativa os genes especficos da
asa ventral, enquanto que a protena
Wingless se difunde da clula para sinalizar
a clula dorsal adjacente que expresse seus
genes especficos da asa dorsal. Dessa maneira, o crescimento e a diferenciao das
superfcies dorsal e ventral da asa so coordenados. As superfcies dorsal e ventral da

asa so grudadas pelas integrinas em ambos epitlios (Brower e Jaffe, 1989; Kim et
al., 1996). [meta1.html]
A hiptese do limite aqui discutida,
no explica certas observaes envolvendo a polaridade D/V da perna ou a
distalizao dos apndices. Held (1995)
sugere que existe um gradiente da protena Dpp que estimula a sntese de molculas (ainda no identificadas) necessrias
para estender o apndice e estabelecer a
polaridade nas trs dimenses.
Especificao homloga. As molculas
Remodelao do sistema nervoso

Como na metamorfose de anuros, a metamorfose de insetos causa uma grande
reestruturao do sistema nervoso do organismo. Alguns nervos morrem, outros assumem novas funes. No Captulo 17, vimos o desenvolvimento de fotorreceptores
a partir das clulas epiteliais do disco do olho. Aqui, um novo conjunto de neurnios
gerado para assumir uma nova funo. Os neurnios que se conectaram para matar
tecidos, ou morrem com o tecido ou so reespecificados para novas funes. O nervo
do msculo proleg da lagarta da mariposa Manduca independentemente sensvel
ecdisona e morre simultaneamente com o tecido alvo larval. Entretanto, o neurnio
753
usadas pelos discos imaginais para especificar informao posicional podem ser
as mesmas na mosca inteira. Ou seja, os
discos podem especificar os destinos respectivos de suas clulas pelos mesmos
mecanismos. Isso chamado de especificao homloga. Portanto, clulas no disco do olho podem responder s mesmas
deixas posicionais que as clulas no
disco da perna. Especificao homloga
pode ser vista com certos mutantes hometicos como Antennapedia, na qual
estruturas antenais so transformadas em
pernas (Postlethwait e Schneiderman,
1971). Ocasionalmente, a antena inteira se
torna uma perna inteira, mas mais comum que somente uma poro da antena
seje parecida com a perna. No ltimo caso,
a troca absolutamente especfica da posio. As clulas do disco da antena que
normalmente formariam a extremidade
distal da antena (arista) so transformadas na poro mais distal da perna (garra); clulas especificadas para dar origem
segunda poro da antena so transformadas na segunda poro (trocanter) da
perna. As partes correspondentes das
duas estruturas esto ilustradas na Figura 19.22. Ento, aparente que os dois
discos determinados diferentemente usam
um mecanismo comum para a especificao dos destinos das clulas dentro dos
respectivos discos.*
Sim, muito complexo e provvel que
fique ainda mais complexo. Mas no h falta de
humor. Sidney Brenner (1996) relembra a frustrao do Prmio Nobel Francis Crick com essa
complexidade dizendo Deus sabe como esses
discos imaginais funcionam. Brenner fantasiou
uma reunio onde Crick pergunta a Deus como
ele construiu essas entidades e fazendo com que
o prprio Deus tambm se supreendesse com
essa complexidade. Finalmente tudo o que Deus
pde fazer foi assegurar a Crick que estamos
construindo moscas aqui por 200 milhes de anos
e no tivemos nenhuma reclamao.
754
motor inervando o segundo msculo oblquo da larva sobrevive a morte de seu alvo,
para inervar um msculo adulto recm-formado (o quarto msculo externo dorsal) que
se diferencia durante a metamorfose (Truman et al., 1985).
Em alguns casos, as funes larvais so assumidas por diferentes regies no
adulto. O vaga-lume larval tem suas lanternas pareadas no oitavo (ltimo) segmento
abdominal; os neurnios desse segmento controlam a luminescncia da larva. Durante a pupao, o sexto e o stimo segmentos tambm desenvolvem os fotocitos produtores de luz e os nervos para controlar a regulagem do flash. No fim da pupao,
somente o sexto e o stimo segmentos tm lanternas funcionais. Ainda mais, se as
lanternas larvais forem removidas, as lanternas adultas ainda se formaro (Strause et
al., 1979). Portanto, o que havia sido uma funo neural dos gnglios do oitavo segmento se tornou uma funo dos gnglios do sexto e stimo segmentos.
Controle Hormonal da Metamorfose de Insetos
O controle hormonal da metamorfose de insetos foi mostrado nos experimentos
dramticos de Wigglesworth (1934), que estudou o Rodnius prolixus, um inseto
sugador de sangue que tem cinco instares antes de sofrer uma surpreendente metamorfose. Quando uma larva de Rodnius do primeiro instar foi decapitada e fundida
a uma larva em muda do quinto instar, o diminuto primeiro instar desenvolveu a
cutcula, a estrutura do corpo e a genitlia do adulto. Isso mostrou que os hormnios carreados pelo sangue so responsveis pela induo da metamorfose.
Wigglesworth tambm mostrou que a corpora allata, perto do crebro do inseto,
produz um hormnio que contra ataca essa tendncia para sofrer metamorfose. Se a
corpora allata fosse removida de uma larva do terceiro instar, a prxima muda transformaria a larva em um adulto precoce. Inversamente, se a corpora allata de uma
larva do quarto instar fosse implantada em uma larva do quinto instar, essas larvas
se tornariam larvas enormes do sexto instar e no adultos. Sabemos atualmente
que a corpora allata secreta o hormnio juvenil, um inibidor natural da metamorfose
(que ser discutido em breve).
Transplante de tecidos em insetos, realizados em vrios laboratrios, permitiram
o estabelecimento de uma viso integrada de como se d a metamorfose. Ainda que
o mecanismo detalhado da metamorfose seja diferente entre as espcies, o padro
geral da ao hormonal usualmente bastante similar (Figura 19.23). Como na metamorfose dos anfbios, a metamorfose nos insetos parece ser regulada por hormnios
efetores controlados por hormnios peptdicos neurosecretores no crebro (para
revises, veja Gilbert e Goodman,1981; Granger e Bollenbacher, 1981). O processo
de muda iniciado no crebro, onde clulas neurosecretoras liberam o hormnio
protoracicotrpico (PTTH) em resposta a fatores neurais, hormonais ou ambientais.
PTTH uma famlia de hormnios peptdicos com um peso molecular de aproximadamente 40.000, que estimulam a produo de ecdisona pela glndula protorcica
(Figura 19.24). A ecdisona, entretanto, no um hormnio ativo, mas um pr-hormnio que precisa ser convertido para a forma ativa. Essa converso realizada por
uma oxidase contendo heme nas mitocndrias e microssomos de tecidos perifricos
como o corpo gorduroso. Aqui a ecdisona transformada no hormnio ativo 20hidroxiecdisona (Figura 19.25).*
Cada muda ocasionada por um ou mais pulsos de 20-hidroxiecdisona. Para uma
muda de uma larva, o primeiro pulso produz um pequeno aumento na concentrao de
hidroxiecdisona na hemolinfa da larva (sangue) e produz uma mudana no comprometimento celular. O segundo, grande pulso de hidroxiecdisona inicia os eventos de
Desde sua descoberta em 1954, quando Butenandt e Karlson isolaram 25mg de ecdisona a partir
de 500kg de pupas da mariposa do bicho-da-seda, a 20-hidroxiecdisona teve vrios nomes, incluindo
-ecdisona, ecdisterona e crustecdisona.
Hormnio protoracicotrpico (PTTH)
PTTH
Ecdisona
Glndula
protorcica
Clulas
neurossecretoras
Crebro
755
Corpus
cardiacum
Hidroxiecdisona
20-hidroxiecdisona
Regulao
Corpus
allatum
Protena ligante
(JHBP)
Hormnio
juvenil (JH)
Epiderme L/P
L/P Epiderme
Hormnio juvenil
P/A
discos
imaginais
Disco
imaginal
P,L/A
Epiderme
P/A
JH-JHBP
Dia do quarto
instar
Dia do quinto instar
Pupa
Figura 19.23
Diagrama esquemtico ilustrando o controle da muda e da metamorfose na mariposa do

verme chifrudo do tabaco. Parecem haver perodos criticamente sensveis quando a presena
ou ausncia de JH determina se um tecido retido no mesmo estgio ou se muda a um estado
de maior maturidade. Diferentes tecidos tm diferentes perodos sensveis. (De acordo com
Nijhout, 1994.)
diferenciao associados com a muda. A hidroxiecdisona produzida por esses pulsos

compromete e estimula as clulas epidrmicas a sintetizar enzimas que digerem e reciclam
os componentes da cutcula. Em alguns casos, condies ambientais podem controlar
a muda, como no caso da mariposa do bicho-da-seda Hyalophora cecropia. Aqui, a
secreo de PTTH cessa aps a formao da pupa. A pupa permanece nesse estado de
suspenso chamado diapausa, durante todo o inverno. Se no for exposta ao frio, a
diapausa pode durar indefinidamente. Mas se for exposta ao frio por duas semanas, a
pupa pode sofrer uma muda quando retornada a uma temperatura mais quente (Williams,
1952,1956; veja Captulo 21).
O segundo importante hormnio efetor no desenvolvimento de insetos o hormnio juvenil (JH). A estrutura de um ativo hormnio juvenil comum em borboletas
e lagartas de mariposas est ilustrada na Figura 19.25A. O JH secretado pela
corpora allata. As clulas secretoras da corpora allata so ativas durante as mudas
larvais mas inativas na muda metamrfica. Esse hormnio responsvel pela preveno da metamorfose. Enquanto o JH est presente, as mudas estimuladas por
hidroxiecdisona resultam em um novo instar larval. No ltimo instar larval, o nervo
mediano do crebro corpora allata inibe a produo do hormnio juvenil pela
glndula, e h um aumento simultneo na habilidade do corpo em degradar o JH
existente (Safranek e Williams, 1989). Ambos os mecanismos causam uma queda dos
nveis de JH a um valor abaixo do limite crtico. Isso desencadeia a liberao de
PTTH do crebro (Nijhout e Williams, 1974; Rountree e Bollenbacher, 1986). PTTH,
por sua vez, estimula as glndulas protorcicas a secretar uma pequena quantidade
de ecdisona. A hidroxiecdisona resultante, na ausncia de JH, compromete as clulas
Figura 19.24
Localizao celular do mRNA de PTTH na

larva de Bombyx mori (mariposa do bichoda-seda). Hibridizao in situ de um gene
radioativo clonado para o peptdeo de 224
aminocidos localiza o mRNA do PTTH em
duas clulas neurossecretoras no hemisfrio
esquerdo do crebro e duas clulas neurossecretoras no hemisfrio direito. Nesta seo, uma clula secretora de PTTH pode ser
vista em cada lado. A barra representa
100m. (de Kawakami et al., 1990, cortesia
de H. Ishizaki e A. Kawakami.)
756
Hormnio juvenil
Ecdisona
20-hidroxiecdisona
Figura 19.25
Estruturas de um hormnio juvenil de ocorrncia comum, ecdisona, e do hormnio ativo da

muda, 20-hidroxiecdisona.
para o desenvolvimento pupal. Os mRNAs especficos para as larvas no so substitudos e novos mRNAs so sintetizados, cujos produtos proticos inibem a transcrio das mensagens larvais. Aps o segundo pulso de ecdisona, so sintetizados
novos produtos de genes especficos de pupas (Riddiford, 1982), e a muda subseqente transforma o organismo de larva para pupa. Parece, portanto, que o primeiro
pulso de ecdisona durante o ltimo instar larval desencadeia o processo que inativa
os genes especficos da larva e prepara para transcrio os genes especficos de
pupa. O segundo pulso de ecdisona transcreve os genes especficos para a pupa e
inicia a muda (Nijhout, 1994).
At recentemente e desde a dcada de 1950, acreditava-se que o tipo de muda era
determinado pela concentrao de hormnio juvenil no momento dos pulsos de
ecdisona. Altos nveis de JH induziam as larvas, nveis intermedirios produziam pupas
e baixos nveis de JH produziam adultos (veja Piepho,1951; veja tambm o Captulo 20
da Quarta Edio deste livro). Entretanto, quando o ttulo de JH pde efetivamente ser
determinado, encontrou-se que ele flutuava durante o perodo do ltimo instar, tendo
picos e vales especficos. A metamorfose no est correlacionada a um declnio progressivo na atividade de JH e nem causada por ele. O controle da metamorfose deve
ser mais complexo.
Na mariposa chifruda do tabaco Manduca sexta, existem momentos quando
diferentes clulas so sensveis a hormnios juvenis (veja Figura 19.23). Como regra
geral, se o JH est presente em um perodo sensvel ao hormnio, o estado corrente
do desenvolvimento mantido, mas se o JH estiver ausente nesse perodo esse
tecido progredir a um estgio de desenvolvimento mais maduro. O incio e a durao do perodo sensvel ao JH parece ser um estado autnomo da clula e no
controlado por hormnios (Nijhout, 1994). (Foi considerado que esse deve ser um
momento quando receptores de JH esto disposio nesses tecidos.) Em cada
instar larval existe um perodo quando a presena de JH impede a transformao da
epiderme larval em epiderme pupal. Se o JH est presente, a epiderme continua a ser
larval; se o JH est ausente, ela se torna pupal. Em larvas no penltimo instar, os
ttulos de JH conseguem reter a epiderme no seu estado larval. Durante o ltimo
instar existem duas janelas de sensibilidade ao JH. A primeira para a epiderme;
nesse momento, entretanto, os nveis de JH j baixaram significativamente e a
epiderme ser transformada de larval a pupal. O segundo perodo sensvel ao JH diz
respeito ao tecido do disco imaginal. Nesse momento, todavia, o ttulo de JH aumentou novamente, de modo que os discos imaginais no so instrudos para inverter
ou diferenciar. A muda transforma a larva em pupa (Nijhout e Wheeler, 1982). No
momento seguinte, ocorrem pulsos de ecdisona, e no se identifica JH nos perodos
crticos. A epiderme se transforma de pupal adulta, e os discos imaginais podem
inverter e se diferenciar. A injeo de JH na pupa nesse momento pode fazer com que
ele mude para uma segunda pupa (Williams, 1959).
Como na metamorfose da r, a regulagem da ecdise deve ser meticulosamente
coordenada. Muitos dos comportamentos vistos durante a metamorfose so caractersticos daquele estgio, e o fracasso em realiz-los deixa o inseto fatalmente enredado
na sua velha cutcula. A coordenao dos movimentos e trocas de cutcula provavelmente regulada por uma cascata de hormnios, onde o hormnio da ecloso do crebro ativa a secreo de hormnios desencadeadores de ecdise pelas clulas na base
de cada espirculo. Os hormnios desencadeadores de ecdise sinalizariam os gnglios
abdominais de cada segmento para iniciar os movimentos que permitem que a larva
descarte sua velha casca (itan et al., 1996).
Na Drosophila, existe uma variao desse tema geral (Riddiford, 1993). A ecdisona
liberada pela glndula em anel (uma estrutura tendo regies similares tanto ao
corpus allatum como a glndula protorcica). Um pulso de ecdisona com ttulo alto
no fim do terceiro instar sinaliza o incio da metamorfose. A larva cessa o movimento,
inverte seus espirculos e permite que a cutcula larval endurea em um puparium
(casulo pupal) que envolve o organismo durante sua metamorfose. Nesse estgio,
757
os discos imaginais se invertem para formar o esquema bsico do corpo adulto, mas
ainda com a cabea presa dentro da cavidade do corpo. Aps 12 horas (a 25C), um
breve pulso de ecdisona desencadeia a emergncia da cabea a partir do trax e a
transio de prepupa pupa. A cabea empurrada para fora pela contrao de
msculos abdominais, que empurram uma bolha de ar para o interior, produzindo um
espao para a cabea everter (Fristrom e Fristrom, 1993). Um surto subseqente de
ecdisona completa a diferenciao final da pupa de Drosophila para a forma adulta,
imediatamente antes da ecloso, a produo do adulto a partir do casulo pupal.
Como em outros insetos, a Drosophila tem um hormnio de ecloso que inicia os
movimentos e comportamentos que permitem ao adulto se desvencilhar de seu casulo pupal para um mundo maior.
A biologia Molecular da Atividade da Hidroxiecdisona
A LIGAO DE HIDROXIECSIDONA AO DNA. Durante a muda e a metamorfose,
certas regies dos cromossomos politnicos da Drosophila formam tufos em certas
clulas (Veja Figura 2.13; Clever, 1966; Ashburner, 1972; Ashburner e Berondes,
1978). Esses tufos cromossmicos representam reas onde o DNA est sendo ativamente transcrito. Mais ainda, o padro especfico de rgos de formao de tufos
pode ser reproduzido cultivando o tecido larval e adicionando hormnios ao meio
ou fornecendo hidroxiecdisona larva em um estgio precoce. Quando a hidroxiecdisona adicionada s glndulas salivares da larva, certos tufos so produzidos e
Figura 19.26
Tufos induzidos por ecdisona em clulas cultivadas da glndula salivar de

D. melanogaster. Aqui, a regio do cromossomo a mesma da Figura
2.13. A formao de tufos induzida pela ecdisona. (i) Controle no
induzido. (ii-v) Cromossomos estimulados por hidroxiecdisona aps 25
minutos, 1, 2 e 4 horas. (Cortesia de M. Ashburner.)
758
outros regridem (Figura 19.26). A formao de tufos mediada pela ligao de hidroxiecdisona a locais especficos nos cromossomos; anticorpos fluorescentes contra
a hidroxiecdisona encontram esse hormnio localizado nas regies sensveis a ele
(Gronemeyer e Pongs, 1980).
DIFERENTES RECEPTORES DE HIDROXIECDISONA EM DIFERENTES TECIDOS. Os tecidos de larvas em instares tardios podem ser grosseiramente divididos
em trs tipos com base em suas respostas hidroxiecdisona: (1) os tecidos estritamente larvais (tais como, glndulas salivares, msculo e intestino) que sofrem morte
celular em resposta hidroxiecdisona; (2) os tecidos imaginais que se dividem e se
diferenciam para produzir estruturas adultas quando expostos hidroxiecdisona; e
(3) tecidos que sofrem extensas modificaes ou remodelagem, tais como o corpo
gorduroso ou o sistema nervoso central. No se sabe como um grupo de clulas
prolifera enquanto outro degenera recebendo o mesmo sinal, mas estudos recentes
(Talbot et al., 1993; Truman et al., 1994) sugerem que nem todos os receptores de
ecdisona so os mesmos em cada tecido. O gene para o receptor de ecdisona (EcR)
pode ser alternativamente emendado dentro de trs mRNAs que fornecero trs
protenas diferentes, mas relacionadas: EcR-A, EcR-B1 e EcR-B2 (Figura 19.27). Todas as clulas parecem ter um pouco de cada uma, mas os tecidos estritamente
larvais e os neurnios regressivos so caracterizados por sua abundncia em EcRB1 em comparao com EcR-A. Discos imaginais e neurnios diferenciados, de outro lado, mostram uma preponderncia da isoforma EcR-A sobre EcR-B1. possvel,
portanto, que os diferentes receptores ativem diferentes conjuntos de genes quando ligam hidroxiecdisona.
Figura 19.27
Formao dos receptores de ecdisona. Emendas alternativas no mRNA de transcritos do

receptor de ecdisona (EcR) cria trs tipos de
mRNAs de EcR. Esses geram protenas com
os mesmos stios de ligao tanto para o DNA
como para a hidroxiecdisona, mas com aminoterminais muito diferentes. (De acordo com
Talbot et al., 1993.)
A1
A2
O BROAD-COMPLEX. Outra razo para a resposta especfica de tecidos ecdisona

pode ser a presena de outros fatores de transcrio nesses tecidos. Um dos genes
precoces estimulados pela ecdisona o gene Broad-Complex (Br-C). Esse um
gene complexo, composto de unidades de transcrio parcialmente superpostas
que criam vrias protenas de fatores de transcrio atravs de mensagens diferencialmente emendadas. Em alguns mutantes de BR-C, as glndulas salivares no
morrem como normalmente o fazem na metamorfose. Em outros mutantes, a cabea
no emerge ou o SNC no sofre remodelao. A marcao com anticorpos especficos para as isoformas mostra uma fascinante correlao entre o tipo de protena BRC no ncleo e o tipo de resposta ecdisona. rgos como as glndulas salivares,
destinadas histlise durante a metamorfose, expressam a isoforma Z1; os discos
imaginais destinados diferenciao celular expressam a isoforma Z2; e o sistema
nervoso central (que sofre intensa remodelao na metamorfose) expressa todas as
isoformas, com Z3 predominando (Figura 19.28; Emery et al., 1994). Moscas
A3
Sntese de mRNA
Protena EcR
Seqncias lider ou
seguidora (no traduzidas)
xons traduzidos
ntrons
Stio de
ligao
de DNA
Stio de ligao
de ecdisona
(A)
Corpo gorduroso
Figura 19.28
(B)
Anti Z3
Glndula salivar
759
Colorao de DNA
Corpo gorduroso
Glndula salivar
Especificidade das isoformas do BroadComplex. Anticorpos fluorescentes localizam

a isoforma Z3 nos ncleos do corpo gorduroso
mas no nos ncleos das glndulas salivares.
(A) Preparaes de cromossomos do corpo
gorduroso (esquerda) e da glndula salivar (direita) marcados com anticorpos especficos
isoforma Z3 do Broad-Complex. (B) As mesmas preparaes coradas para DNA. (Fotografias cortesia de I. Emery.)
transgnicas demonstraram que essas diferenas so funcionalmente importantes.

Transcrio de genes dependente de ecdisona nas glndulas salivares (finalmente
levando sua destruio) envolve a expresso precoce, dependente de ecdisona,
da isoforma Z1 do Broad-Complex. As protenas Z2, Z3, ou Z4 no sero suficientes
(Crossgrove et al., 1996). Essas isoformas tambm tm correlao com os tipos de
mutao gerados pelos alelos mutantes nesse loco. Portanto, a especificidade de
resposta pode ser controlada por uma isoforma especfica do Broad-Complex que
estimulada pela ecdisona. Entretanto, algum outro fator no tecido larval deve interagir
com o mecanismo de emenda na clula produzindo a estrutura especfica do xon na
mensagem BR-C.
Complexo receptor
de ecdisona (EcR)
Hidroxiecdisona
EcR
DIFERENTES RECEPTORES DE ECDISONA DENTRO DE UMA NICA CLULA.
As respostas hidroxiecdisona devem ser coordenadas tanto temporal quanto espacialmente. Assim, em adio heterogeneidade de respostas hidroxiecdisona entre
tecidos, existe tambm uma heterogeneidade de respostas dentro de uma clula individual. Os tufos sensveis hidroxiecdisona ocorrendo nos estgios tardios da larva
no terceiro instar (ao se preparar para formar a pupa) podem ser divididos grosseiramente em trs categorias: tufos que regridem devido hidroxiecdisona; tufos que a
hidroxiecdisona induz rapidamente; e tufos vistos inicialmente algumas horas aps a
estimulao. Por exemplo, nas glndulas salivares da larva, cerca de seis tufos emergem dentro de poucos minutos aps o tratamento com hidroxiecdisona. Esses genes
no necessitam de sntese de protena para serem ativos. Um conjunto muito maior de
genes induzido mais tarde no desenvolvimento, e esses necessitam de sntese protica
para serem transcritos. Ashburner (1974, 1990) predisse que os genes precoces
produzem uma protena que essencial para a ativao dos genes tardios. Ainda
mais, essa prpria protena desligaria a transcrio do gene precoce (Figura 19.29).
Pesquisas recentes suportam essa idia e sugere que os genes precoces representam fatores de transcrio que podem mediar o efeito da ecdisona. Os receptores de
ecdisona (EcRs) constituem uma famlia de fatores de transcrio derivados de um
nico gene, e eles ligam esse hormnio esteride e o trazem regio especfica do
DNA. Como nos receptores ligantes de esterides dos vertebrados, os EcRs formam
Tufo precoce
Tufo tardio
Sntese de
protena
Figura 19.29
Modelo de Ashburner da regulao de hidroxiecdisona da transcrio. A hidroxiecdisona

se liga ao seu receptor e esse composto se liga
a um gene de tufo precoce e a um gene de tufo
tardio. O gene do tufo precoce ativado, e seu
produto protico (1) reprime a transcrio de
seu prprio gene e (2) ativa o gene do tufo
tardio, talvez por deslocar o receptor de
ecdisona. (De acordo com Richards, 1992.)
760
Figura 19.30
(A)
Formao do puparium
Padres de expresso gnica regulada por

ecdisona na metamorfose de Drosophila. (A)
Padro temporal da expresso gnica. Os pulsos de ecdisona so as barras verticais na parte
superior, a altura corresponde intensidade dos
pulsos. O desenvolvimento progride da esquerda para a direita, comeando com o terceiro
instar, as mudas so representadas por linhas
pontilhadas. (B) Interaes subjacentes aos
padres de transcrio temporal. Flechas representam ativao, enquanto as linhas bloqueadas representam os efeitos repressivos. (De
acordo com Thummel, 1996.)
Pupa
Larva do terceiro instar
Prepupa
Picos de ecdisona
mRNAs precoces
mRNA precoce-tardio
mRNA prepupal intermedirio
Genes de adeso
Genes tardios L71
(B)
Genes ng
Pig-1
Genes de resposta
secundria
Larva
precoce do
terceiro
instar
Larva tardia
do terceiro
instar
Prepupa
intermediria
Prepupa
tardia
Baixa
concentrao de
ecdisona
Alta
concentrao de
ecdisona
Baixa
concentrao de
ecdisona
Alta
concentrao de
ecdisona
Genes
de adeso
Genes
tardios
L71
Genes
tardios
heterodmeros. Os receptores de ecdisona no ligam ecdisona ou suas respectivas

seqncias de DNA sem antes formar um heterodmero com o produto do gene
ultraspiracle (USP) (o anlogo do receptor retinide em Drosophila; Yao et al., 1992;
Thomas et al., 1993). Quando o heterodmero EcR/USP est formado, ele liga a hidroxiecdisona e ativa os genes responsivos ecdisona mais precoces.
Algumas dessas interaes esto sendo elucidadas. Como ilustrado na Figura
19.30, os genes EcR, BR-C e E74B so expressos em baixas concentraes de ecdisona,
tais como aquelas encontradas no final do perodo do terceiro instar. As protenas BRC so necessrias para manter a transcrio dos genes das protenas de aderncia (as
protenas de aderncia permitem pupa da Drosophila aderir ao seu substrato) e a
reprimir genes larvais anteriores. E74B necessria tanto para manter a ativao dos
genes de aderncia como para reprimir genes como o L71 cujas protenas formam o
puparium. No fim do perodo do terceiro instar, existe um pulso alto e caracterstico de
ecdisona. Essas concentraes mais altas de ecdisona reprimem os genes da aderncia
761
e substituem a transcrio do gene E74 que em lugar de sintetizar E74B passa a

transcrever a protena E74A relacionada.* Enquanto E74B inibia a expresso do gene
L71, E74A a estimula (Urness e Thummel, 1995). Nesse e em outros casos, est ocorrendo a transio de larva para pupa.
Alm disso, a cascata de ativaes e represses transcricionais pode gerar novos
receptores de ecdisona. Quando o gene EcR desacelerado na formao do puparium,
os produtos dos genes E75 ou E78 podem assumir suas funes (Koelle et al 1991;
Stone e Thummel, 1993). Dessa maneira, a ecdisona induz uma cascata de fatores de
transcrio que podem ativar ou reprimir diferentes conjuntos de genes.
Assim, possvel que a ecdisona inicie ondas de ativao transcricional, e que
diferentes nveis do hormnio possam ativar diferentes conjuntos de genes. Dessa
maneira, o desenvolvimento da Drosophila parece ser semelhante ao dos anfbios, a
coordenao das mudanas sendo orquestradas por diferentes concentraes de
hormnios. Os alvos desses fatores de transcrio esto comeando a ser identificados. Alguns desses alvos parecem ser fatores de competncia que do a outros
genes a possibilidade de serem induzidos mais tarde no desenvolvimento. Por exemplo, na metade do estgio prepupal o ttulo de ecdisona diminudo. Isso torna possvel a transcrio de outro fator, FTZ-F1. O gene codificando FTZ-F1 necessita ter
um pulso anterior de ecdisona para se tornar potencialmente ativo, mas ele inicia a
transcrio somente quando o ttulo do hormnio diminudo. Outros alvos podem
incluir os genes reaper e hid, que se tornam ativados naqueles tecidos (como as
glndulas salivares) que sofrem morte celular dependente de ecdisona.
A biologia molecular est comeando a interpretar uma das mais fascinantes redes
de interaes conhecidas da biologia do desenvolvimento e certamente um dos primeiros exemplos de desenvolvimento animal que conhecemos- a metamorfose da larva para um inseto adulto.
* As protenas E74A e E74B se originam do mesmo gene pela ativao de diferentes promotores. Ambas partilham a mesma ponta carboxi-terminal com sua regio de ligao a DNA. Entretanto, a protena E74A tem um amino terminal mais longo. Os mRNAs de E74B so transcritos em
concentraes de ecdisona dez vezes menores do que aquelas necessrias para ativar a transcrio
das mensagens de E74A (Karim e Thummel, 1991).
&
Especulaes
Controle ambiental sobre a

forma e a funo da larva
MAIORIA DAS DISCUSSES

no desenvolvimento se limitam
ao interior do corpo do organismo. Entretanto, o desenvolvimento de um
organismo algumas vezes pode ser regulado por fatores ambientais, fora do corpo. Existem vrios tipos de fenmenos
desenvolvimentais onde substncias produzidas por um organismo (freqentemente de outra espcie) induz modificaes
no desenvolvimento de outro organismo.
Quando Karel Slma veio da Checoslovquia para trabalhar no laboratrio de
Carroll Williams em Harvard, ele trouxe

consigo seu principal animal experimental, o inseto de plantas Europeu Pyrrhocoris apterus. Para a consternao geral
do laboratrio, os insetos no sofreram
metamorfose no fim do quinto instar, mas
se tornaram grandes larvas do sexto instar- o que nunca havia sido observado no
laboratrio ou na natureza- e no fim morreram antes de se tornarem adultos. Aps
o teste de muitas variveis, foram testadas as toalhas de papel que forravam os
recipientes para verificar seu efeito sobre
as larvas. Os resultados foram tanto conclusivos como surpreendentes: larvas

cultivadas sobre papel Europeu (incluindo pginas da revista Nature) sofriam
metamorfose como sempre, mas as larvas
criadas em papel Americano (tais como
cpias descartadas da revista Science)
no sofreram metamorfose. Finalmente, foi
verificado que a fonte do papel Americano era um abeto balsmico, uma rvore
indgena do Norte dos Estados Unidos e
Canad. Essa rvore sintetiza um composto muito semelhante ao hormnio juvenil
762
Primeiro
estgio
da ninfa
Segundo
estgio
da ninfa
Terceiro
estgio
da ninfa
Quarto
estgio
da ninfa
Quinto
estgio
da ninfa
Adulto
Precoceno 1
Aps tratamento
com precocenos
no estgio 2
Adulto precoce
Precoceno 2
(A)
(B)
(Bowers et al., 1966; Slma e Williams,

1966; Williams, 1970), e provavelmente usa
esse anlogo do hormnio juvenil para se
livrar de certos predadores de insetos.
Outras plantas tm compostos que
produzem o mesmo efeito- a morte de predadores de insetos- mas o fazem induzindo a metamorfose muito cedo. Dois compostos que foram isolados de ervas compostas causam metamorfose precoce em
larvas de certos insetos transformandoos em adultos estreis (Bowers et al., 1976).
Esses compostos so chamados preco-
Figura 19.31
Metamorfose precoce no inseto Dysdercus causada por precocenos. (A) Estrutura de dois precocenos ativos encontrados em plantas. (B) Desenvolvimento inibido no Dysdercus. Quando ninfas no segundo estgio so tratadas
com precocenos, elas se metamorfoseiam em adultos precoces estreis em
lugar de continuar sua seqncia de mudas do desenvolvimento normal. (De
acordo com Bowers et al., 1976.)
cenos e suas estruturas qumicas esto

representadas na Figura 19.31A. Quando
as larvas ou ninfas desses insetos so
pulverizadas com qualquer um dos compostos, elas sofrem mais uma muda e se
metamorfoseia forma adulta (Figura
19.31B). Precocenos causam a morte seletiva das clulas do corpus allatum no inseto imaturo (Schooneveld, 1979; Pratt et
al., 1980). Essas clulas so responsveis
pela sntese do hormnio juvenil. Sem esse
hormnio, a larva comea suas mudas
metamrficas e imaginais. Mais ainda, o
hormnio juvenil tambm responsvel

pela maturao do ovo do inseto (Captulo 21). Sem esse hormnio, as fmeas so
estreis. Assim, os precocenos podem
proteger as plantas causando uma metamorfose prematura de certas larvas de insetos a adultos estreis.*
Muitas mais dessas mudanas induzidas pelo

ambiente no desenvolvimento das larvas sero
discutidas no Captulo 21.
Interaes hormonais mltiplas no

desenvolvimento da glndula mamria
O desenvolvimento das mamas iniciado durante o desenvolvimento embrionrio,
mas somente completado no mamfero lactante no fim da gravidez. Durante o desenvolvimento da mama, diferentes hormnios fornecem informao variada ao tecido
rudimentar. O desenvolvimento da mama pode ser dividido em quatro estgios: o
estgio embrionrio; o estgio adolescente, a gravidez e a lactao. Os produtos
diferenciados das glndulas mamrias, casena e outras potenas do leite, so produzidos somente durante o estgio final (Topper e Freeman, 1980).
Estgio embrionrio
No desenvolvimento normal da fmea do camundongo, duas bandas elevadas de
tecido epidrmico aparecem em ambos os lados da linha mediana ventral no dia 11
da gestao. Esse tecido chamado de crista mamria. Dentro de cada crista, as
clulas se renem em centros de concentrao e l permanecem formando os brotos
mamrios (Figura 19.32). No camundongo existem cinco desses brotos em cada
lado; nos humanos, somente um por lado. Nos dias imediatamente antes do nascimento, as clulas epiteliais nesses lugares proliferam-se rapidamente, dando origem
763
Figura 19.32
(A)
Seqncia do desenvolvimento precoce da glndula mamria no camundongo fmea. (A) Broto mamrio no feto de 12 dias. Clulas ectodrmicas
epiteliais invadem o mesnquima. (B) Corda mamria de um feto de 15
dias. Uma pequena fenda no fundo sinaliza o incio da ramificao. (C)
Cavidade da corda se estendendo para formar um lmen oco no feto de 20
dias. (de Hogg et al., 1983, cortesia de C. Tickle.)
(B)
(C)
corda mamria. Essa corda abre na pele, em uma extremidade, formando um mamilo
enquanto a outra extremidade comea a se ramificar em dutos. Aqui o desenvolvimento cessa at a puberdade.
O desenvolvimento do tecido mamrio no camundongo macho idntico ao da
fmea at 13-15 dias de gestao. Nessa poca, o mesnquima se condensa ao redor
do centro do broto mamrio, e as clulas da corda morrem. Portanto, uma pequena
corda de clulas epiteliais destacada da pele (Figura 19.33), e a glndula mamria no
se estende at a superfcie. No ocorre desenvolvimento adicional.
Essa morte celular na corda mamria dos machos tem sido estudada cultivando
os brotos mamrios in vitro. Tais brotos de camundongos fmeas normalmente
desenvolvem lbulos conectados superfcie (Figura 19.34). Entretanto, se testosterona adicionada ao meio de cultura, os brotos se degeneram. Os brotos mamrios
de camundongos machos tambm desenvolvem lbulos quando cultivados em ausncia de testosterona; portanto, o hormnio testosterona impede o desenvolvimento mamrio no macho. A testosterona motiva essa morte celular especfica instruindo as clulas mesenquimatosas a destruir a corda epitelial. Isso foi mostrado
por uma srie de experimentos de recombinao. Existe em camundongos (e tambm
em humanos) uma mutao chamada sndrome de insensibilidade andrognica, na
qual indivduos cromossomicamente machos (XY) no produzem um receptor funcional de testosterona. Assim, apesar desses indivduos possurem testculos que
esto secretando testosterona ativamente, eles so incapazes de responder a ela.
Um dos resultados que esses indivduos tm um desenvolvimento mamrio do
tipo feminino (veja Figura 19.9). Kratochwil e Schwartz (1976) isolaram clulas epiteliais
e mesenquimatosas a partir de brotos mamrios normais e mutantes e os cultivaram
em vrias combinaes. Algumas culturas tiveram a adio de testoterona e outras
no. Os resultados esto mostrados na Figura 19.35. Quando ambos, o mesnquima
e o epitlio, eram do tipo selvagem, o rudimento se desenvolvia em tecido mamrio.
Figura 19.33
Rudimento mamrio em um feto de camundongo macho. O rudimento (flecha) se separou da epiderme. (de Raynaud, 1961.)
764
Figura 19.34
Papel da testosterona como mediador do desligamento da corda mamria. (A) O tecido mamrio do camundongo fmea, in vivo ou em
cultura, crescer para baixo a partir da epiderme
e se ramifica. (B) Quando o tecido mamrio do
camundongo fmea cultivado na presena de
testosterona, o broto se alonga, mas as clulas
mesenquimatosas se agregam ao redor da haste e a poro inferior separada, exatamente
como no desenvolvimento normal do macho.
(C) Quando o tecido mamrio do camundongo
macho cultivado em ausncia de testosterona,
o desenvolvimento o mesmo que o da fmea.
(De acordo com Kratochwil, 1971.)
Epiderme
Broto
Derme
Haste
Lbulos
(A) TECIDO NORMAL
DE FMEA
(B) TECIDO DE FMEA

MAIS TESTOSTERONA
(C) TECIDO DE MACHO

SEM TESTOSTERONA
Quando testosterona foi adicionada, o mesnquima se condensou ao redor do broto

e a corda foi separada. Quando epitlio normal foi cultivado com mesnquima mutante (que no podia responder testosterona), o desenvolvimento normal da mama
ocorreu na presena de testosterona. Entretanto, quando o mesnquima era normal
e o epitlio mutante, a testosterona era capaz de causar a degenerao da corda
Figuras 19.35
Evidncia de que a clula mesenquimatosa o

alvo da testosterona na interrupo do desenvolvimento mamrio. (A) Cultivo de um rudimento mamrio de um embrio de fmea de 14
dias. (B) Rudimento mamrio de um embrio
de macho de 14 dias comeando sua resposta
testosterona. (C) Broto mamrio recombinado
contendo clulas epiteliais do tipo selvagem e
mesnquima insensvel a andrgenos, cultivado com testosterona. No se verifica resposta a
andrgenos. (D) Broto mamrio recombinado
contendo clulas epiteliais insensveis a
andrgenos e mesnquima do tipo selvagem,
cultivado com testosterona. As clulas mesenquimatosas esto condensando na constrio
do broto. (de Kratochwil e Schwartz, 1976,
cortesia de K. Kratochwil.)
(A)
(B)
(C)
(D)
765
mamria. Assim, o alvo da testosterona o mesnquima e no o epitlio. O mesnquima deve ser responsivo testosterona para que sua ao ocorra. Nos machos, a
testosterona induz o mesnquima mamrio a destruir seu epitlio adjacente. O efeito
especfico para o rgo visto que nenhum outro mesnquima destruir o epitlio
mamrio, e nenhum outro epitlio pode ser destrudo pelo mesnquima mamrio
(Drnberger e Kratochwil, 1980).
Adolescncia
Durante a adolescncia (que no camundongo ocorre da semana 4 semana 6), o
sistema de dutos da glndula mamria prolifera extensivamente. As clulas alveolares
secretoras de leite nas extremidades dos dutos ainda no se diferenciaram e o leite no
produzido. A extensa diviso celular est sob o controle de hormnios estrognio e
de crescimento e parece estar concentrada nas extremidades dos dutos. Estudos da
pesquisadora Coleman e seus colegas (1988) implicaram o fator de crescimento
epidrmico (EGF) como o fator responsvel pelo crescimento dos dutos nesse perodo. Eles implantaram pletes plsticos de lenta liberao contendo EGF em glndulas
mamrias de camundongos de 5 semanas. Os ovrios desses camundongos haviam
sido removidos e, portanto, seu desenvolvimento mamrio foi interrompido. Os dutos
adjacentes ao implante de EGF reiniciaram seu crescimento e desenvolvimento
morfolgico, ao passo que os dutos mais distantes no o fizeram (Figura 19.36). Ainda
mais, quando seces da glndula mamria foram incubadas com EGF radioativo, o
EGF foi detectado na extremidade dos dutos e associado com as clulas sofrendo
mitose. Provavelmente o EGF age diretamente causando o crescimento das glndulas
mamrias durante a adolescncia.*
Gravidez e lactao
Figura 19.36
Entre a adolescncia e a gravidez, as clulas da mama no camundongo esto mitoticamente dormentes e indiferenciadas. Esse estado se modifica durante a segunda metade da gravidez. Sob a influncia dos hormnios estrognio e progesterona (o ltimo
da placenta), novos dutos so formados, e suas clulas distais comeam a desenvolver as caractersticas de um tecido secretor.
O receptor do fator de crescimento epidrmico (EGFR) pode ser um elemento chave na
etiologia dos cnceres de mama (que afetam uma em cada oito mulheres nos Estados Unidos).
Considera-se que alguns cnceres de mama podem se desenvolver se o estrognio induz TGF-, um
ligante alternativo para o EGFR. A ativao de EGFR causaria a contnua proliferao do tecido
mamrio (Sainsbury et al., 1985; Klijn et al., 1992; McIntyre et al., 1995).
(A)
(B)
(C)
Crescimento da glndula mamria dependente

de EGF em ausncia de estrognio. (A) No se
observa crescimento de dutos ou diferenciao
em camundongos deficientes em estrognio
quando um plete de albumina de soro bovino
(*) implantado na glndula mamria. (B)
Quando um plete contendo EGF implantada
na glndula mamria deficiente em estrognio,
dutos vizinhos aumentam de tamanho e desenvolvem tecido lobular em suas extremidades
(flechas). (C) Desenvolvimento normal dos
dutos mamrios em um camundongo controle
de 5 semanas virgem. (de Coleman et al., 1988,
cortesia de S. Coleman.)
766
Clula precursora
Clula secretora
secretando casena
Insulina e hidrocortisona
(diviso celular e
diferenciao)
Prolactina
(sem diviso celular)
Insulina (diviso celular)

Retculo
endoplasmtico
rugoso
(A)
(B)
Figura 19.37
Diferenciao da glndula mamria dependente de hormnios. (A) Diagrama esquemtico

do desenvolvimento dependente de hormnio
da glndula mamria in vitro. (B) Auto-radiografia da glndula mamria de um camundongo virgem com uma sonda de cDNA radioativo para o mRNA da casena. (C) Auto-radiografia da glndula mamria de um camundongo em lactao, com uma sonda de cDNA reconhecendo a mensagem da casena. (D) Autoradiografia da glndula mamria de um camundongo virgem incubada com insulina, hidrocortisona e prolactina, 72 horas antes de ser
submetida a uma sonda de cDNA para a mensagem da casena. (A de acordo com Turkington,
1968; B-D de Liscia et al., 1988; fotografias
cortesia de G. Smith.)
(C)
(D)
Quando glndulas mamrias da metade da gravidez so cultivadas in vitro, a maior

parte das clulas tem pouco retculo endoplasmtico rugoso e aparelho de Golgi e no
tem grnulos de casena. Quando insulina ou outro promotor de sntese de DNA
adicionado a essas culturas, as clulas se tornam responsivas a outros hormnios
(Turkington et al., 1965). ( provvel que a insulina esteja apenas mimetizando os
efeitos dos lactognios placentrios, hormnios que tm uma estrutura semelhante e
so produzidos durante a gravidez). Glucocorticides ento induzem a formao do
retculo endoplasmtico rugoso, onde a casena e outras protenas so sintetizadas.
Quando o camundongo d luz, a prolactina secretada. A prolactina causa a transcrio do gene da casena e estabiliza a mensagem da casena uma vez formada (Figura
19.37). Durante o perodo de lactao (quando os filhotes esto mamando), um camundongo fmea pode produzir cerca de 10% do seu peso corporal em leite por dia. Quase
80% das protenas daquele leite so casenas, e destas, a -casena a mais abundante.
O promotor do gene da -casena no camundongo est localizado imediatamente a
montante do gene de -casena e ligado por um fator de transcrio, o fator da
glndula mamria (MGF). Altos nveis desse fator de transcrio se acumulam perto
do fim da gravidez e na lactao, mas o fator inativo a no ser que seja fosforilado. A
fosforilao de MGF ocorre quando a prolactina rene seus dois receptores na superfcie da clula. Isso ativa seus domnios de tirosina quinase, que fosforilam uma tirosina
Delees no 5 da -casena
Figura 19.39
Atividade de CAT
CAT (cpm convertidas/min/g)
Construes importantes na identificao do intensificador do gene da -casena no camundongo. O gene CAT foi usado como um reprter e foi fundido ponta 5 do gene da -casena no
camundongo. A exonuclease removeu pedaos sucessivamente maiores da regio do gene
flanqueando a ponta 5. Enquanto o gene contendo 1677 pares de bases na seqncia flanqueando
a ponta 5 foi totalmente ativo, a seqncia contendo somente 1517 pares de bases apresentou
pouca atividade. Portanto, foi postulado que o intensificador estava dentro dos 160 pares de
bases. (De acordo com Schmidhauser et al., 1992.)
Somente Insulina
Auto-radiograma
-casena
(B)
Intensificador
de -casena
Promotor
de -casena
Gene
CAT
Plstico
Matriz extracelular
Plstico
Matriz extracelular
Insulina + prolactina
Insulina + hidrocortisona
767
Sntese de CAT
especfica na molcula de MGF. O MGF fosforilado pode entrar no ncleo e se ligar

regio do promotor nos genes das protenas do leite (Groner e Gouilleux, 1995). A
separao dos filhotes da me durante a lactao resulta em um rpido decrscimo da
atividade de MGF. A volta amamentao dos filhotes faz com que a atividade volte ao
seu mximo dentro de 4 horas. O efeito pode ser mediado pelos hormnios pituitrios
ou hipotalmicos que so responsivos suco (Schmitt-Ney et al., 1992).
A casena sintetizada nas clulas mamrias competentes em resposta prolactina
somente quando as clulas esto ancoradas a uma matriz extracelular (Figura 19.38). O
intensificador de -casena responsivo a ambos, a prolactina e a matriz extracelular.
Usando um gene reprter (CAT) ligado a diferentes regies da seqncia flanqueando
a ponta 5, Schmidhauser e colegas (1992) encontraram uma seqncia com 160 pares
de bases, a 1517 pares de bases do stio de incio da transcrio (Figura 19.39). Esse
stio intensificador s funciona em clulas mamrias, e responsivo prolactina e
matriz extracelular (veja Figura 19.38B).
Portanto, o desenvolvimento da glndula mamria envolve uma complexa interao
de vrios hormnios, protenas parcrinas e fatores ambientais em quatro diferentes
estgios da vida: embrionrio, adolescncia, gravidez e lactao. A glndula mamria
nunca se desenvolve em machos normais e no se torna um rgo completamente
diferenciado nas fmeas at a metade da gravidez no organismo adulto. Estudos desse
rgo nos deu uma viso da complexidade do controle local e hormonal no desenvolvimento de mamferos.
Plstico
Substratos
Matriz extracelular
Hormnios
Plstico
(A)
Nveis de mRNA de -casina em culturas de clulas da glndula mamria de camundongo em

diferentes condies de cultura. (A) mRNA endgeno de -casena quando as clulas foram
cultivadas durante 6 dias em matriz extracelular ou plstico em meio contendo hormnios como
insulina, hidrocortisona ou prolactina. A matriz extracelular e a prolactina foram essenciais. (B)
Expresso do gene reprter CAT quando fundido a uma construo contendo o intensificador e
o promotor de -casena. O gene fundido foi transfectado para clulas mamrias do camundongo
cultivadas durante 6 dias sob vrias condies de substrato e hormnios. O gene fundido foi
expresso somente em presena de prolactina e matriz extracelular. Sem o intensificador (tendo
somente o promotor), no houve transcrio em nenhuma das condies. (De acordo com
Schmidhauser et al., 1992.)
Matriz extracelular
Figura 19.38
Insulina, hidrocortisona
+ prolactina
768
Vimos que a regulao difusvel nas interaes clula-clula so tambm importantes na regulao do desenvolvimento. Estudando a reativao do desenvolvimento
que ocorre durante a metamorfose e o desenvolvimento da mama, podemos identificar
o papel dos hormnios na elicitao de novos padres de diferenciao e morfognese. Podemos tambm ver as interaes entre o desenvolvimento do organismo e o
ecossistema do qual ele faz parte. No prximo captulo, estudaremos os papis de
fatores difusveis e autnomos da clula nos processos responsveis pelo desenvolvimento das gnadas e pela determinao do sexo.
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Determinao do sexo
A reproduo sexual ... a obra-prima da

Natureza.
ERASMUS DARWIN (1791)
curioso notar que o nmero de especulaes conectadas com a natureza do sexo praticamente dobraram desde que Drelincourt,
no sculo dezoito, reuniu duzentas e sessenta e duas hipteses sem fundamento,
e desde que Blumenbach causticamente observou que nada era mais certo do que a
teoria do prprio Drelincourt constituir a
ducentsima sexagsima terceira hiptese.
J. A. THOMSON (1926)
20
S MECANISMOS pelos quais determinado o sexo de um indivduo uma
das grandes perguntas da embriologia desde a antigidade. Aristteles, que

colecionava e dissecava embries, afirmava que o sexo era determinado pelo
calor do parceiro masculino durante a relao sexual. Quanto mais calorosa a paixo,
maior era a probabilidade de uma prognie masculina. (Aristteles aconselhava homens idosos a conceber no vero se quisessem ter herdeiros masculinos.) Aristteles
(ca. de 335 A.C.) promulgou uma hiptese muito direta para determinao sexual: as
mulheres eram homens cujo desenvolvimento havia parado porque o frio do ventre
materno suplantara o calor do smen masculino. Mulheres eram mais frias e mais
passivas que os homens, e os rgos sexuais femininos no haviam amadurecido at
o ponto em que poderiam prover sementes ativas. Essa viso foi aceita pela igreja
crist e por Galeno (cujos textos de anatomia foram o padro durante mais de 1000
anos). Ao redor do ano 200 D.C., Galeno escreveu:
Assim como a espcie humana a mais perfeita de todos os animais, assim
dentro da humanidade, o homem mais perfeito que a mulher, e a razo para
essa perfeio seu excesso de calor, pois o calor o instrumento primrio da
Natureza... a mulher menos perfeita que o homem em relao s suas partes
geradoras. Porque as partes foram formadas em seu interior enquanto ela
ainda era um feto, mas devido ao defeito do calor, no podiam emergir e se
projetar para o exterior.
O ponto de vista que as mulheres eram apenas homens subdesenvolvidos e que seus
rgos genitais eram iguais aos dos homens, somente virados de dentro para fora, foi
muito popular durante mais de mil anos. Mesmo em 1543, Andreas Vesalius, o anatomista
paduano que derrubou muito da anatomia de Galeno (e que se arriscou censura pela
igreja por reiterar que homens e mulheres tm o mesmo nmero de costelas), manteve
esse conceito. As ilustraes de seus dois principais trabalhos, De Humanis Corporis
Fabrica e Tabulae Sex, mostram que ele via a genitlia feminina como uma representao interna da genitlia masculina (Figura 20.1). Apesar disso, o livro de Vesalius
iniciou uma revoluo na anatomia, e ao fim do sculo XVI, os anatomistas descartaram as representaes galnicas da anatomia feminina. Durante os sculos XVII e
XVIII, seres femininos foram reconhecidos como produtores de ovos que podiam
773
774
(A)
(B)
transmitir traos parentais, e a fisiologia dos rgos sexuais comeou a ser estudada.
Ainda assim, no havia consenso sobre como os sexos eram determinados (veja
Horowitz, 1976; Tuana, 1988; Schiebinger, 1989).
Naquele tempo o ambiente em especial, calor e nutrio - eram acreditados ser
de importncia para a determinao do sexo. Em 1890, Geddes e Thomson resumiram
todos os dados disponveis sobre a determinao sexual, e chegaram concluso que
constituio, idade, nutrio e ambiente dos pais deveriam ser especialmente considerados em qualquer dessas anlises. Eles argumentavam que fatores favorecendo a
armazenagem de energia e nutrientes influenciavam a favor de prognie feminina,
enquanto que fatores favorecendo a utilizao da energia e nutrientes influenciavam
a favor de prognie masculina.
Essa viso ambiental da determinao sexual permaneceu a nica teoria cientfica
importante at a descoberta do trabalho de Mendel em 1900 e da redescoberta do
cromossomo sexual por McClung em 1902. Baseado em seu conhecimento do
Mendelismo, Correns especulou que a relao sexual 1:1 da maioria das espcies,
podia ser conseguida se o macho fosse heterozigoto e a fmea homozigota para algum
fator determinante do sexo. Porm, somente em 1905 a correlao (em insetos) do sexo
feminino com os cromossomos sexuais XX e do sexo masculino com os cromossomos
XY ou XO foi estabelecida (Stevens, 1905; Wilson, 1905). Isso sugeriu fortemente que
um componente nuclear especfico era responsvel pelo direcionamento do desenvolvimento do fentipo sexual. Assim, acumulou-se evidncia que a determinao sexual
ocorria por herana nuclear em vez de por circunstncias ambientais.
Hoje, achamos que tanto os mecanismos ambientais como os internos da determinao sexual podem atuar em diferentes espcies. Iremos primeiro discutir os mecanismos cromossmicos da determinao do sexo, e em seguida considerar os meios pelos
quais o ambiente regula o fentipo sexual.
Determinao cromossmica do sexo em mamferos

Determinao Sexual Primria
Figura 20.1
Representaes de Vesalius (1538, 1543) dos

rgos reprodutivos femininos. (A) Interpretao de Vesalius concepo de Galeno do
trato feminino da vagina ao tero. (B) Interpretao de Vesalius do sistema reprodutivo feminino. (Reproduzido em Schiebinger, 1989.)
A determinao sexual primria se refere determinao das gnadas. Nos mamferos, a determinao do sexo estritamente cromossmica e no usualmente influenciada pelo ambiente. Na maioria dos casos, a fmea XX e o macho XY. Cada
indivduo tem que ter ao menos um cromossomo X. Como a fmea XX, cada um de
seus vulos tem um nico cromossomo X. O macho, sendo XY, pode gerar dois tipos
de espermatozide: metade contm o cromossomo X, metade o Y. Se o vulo receber
outro cromossomo X do espermatozide, o indivduo resultante XX, forma ovrios,
e feminino; se o vulo recebe um cromossomo Y do espermatozide, o indivduo
XY, forma testculos, e masculino. O cromossomo Y carrega um gene que codifica um
fator determinador de testculos. Esse fator organiza a gnada em um testculo em vez
de um ovrio. Diferentemente do caso da Drosophila (a ser discutido adiante), o
cromossomo Y do mamfero um fator crucial para determinao do sexo nessa espcie. Uma pessoa com cinco cromossomos X e um cromossomo Y (XXXXXY) seria
macho. Alm disso, um indivduo com somente um nico cromossomo X e nenhum
segundo X ou Y (i.e., XO) se desenvolve como fmea e comea a formar ovrios, mas
incapaz de manter os folculos ovarianos.
Determinao Secundria do Sexo
A determinao secundria do sexo se refere ao fentipo corporal externo s gnadas. Um mamfero masculino tem um pnis, vesculas seminais, uma glndula
prstata, e freqentemente tamanho, cartilagem vocal e musculatura especficos
do sexo. Um mamfero feminino tem a vagina, crvix, tero, ovidutos, glndulas
mamrias, e freqentemente tamanho, cartilagem vocal e musculatura especficos
CAPTULO 20 Determinao do Sexo
Genitlia interna
feminina (tero,
oviduto, crvix,
vagina superior)
Clulas
Foliculares
OVRIO
Folculos
Clulas
tecais
Sulco Genital
Gnada
bipotencial
775
Duto Mlleriano
TESTCULOS
Clulas
de Sertoli
Clulas
de Leydig
Regresso
Seio urogenital do
tubrculo genital
Testosterona
Pnis,
prstata
Duto
Wolffiano
Genitlia interna
masculina
(epiddimo, vasos
deferentes, vescula
seminal)
do sexo. As caractersticas sexuais secundrias so geralmente determinadas pelos

hormnios secretados pelas gnadas. Porm, na ausncia das gnadas, gerado o
fentipo feminino. Quando Jost (1953) removeu as gnadas de fetos de coelhos antes
da sua diferenciao, os coelhos resultantes eram fmeas, independentemente de
serem XX ou XY. Cada um tinha ovidutos, um tero e uma vagina, mas no tinha um
pnis ou estruturas acessrias masculinas.
O esquema da determinao do sexo de mamferos est mostrado na Figura 20.2. Se
o cromossomo Y estiver ausente, os primrdios gonadais desenvolvem-se em ovrios. Os hormnios estrognicos produzidos pelo ovrio permitem o desenvolvimento
do duto Mlleriano em tero, ovidutos e terminal superior da vagina. Se o cromossomo Y estiver presente, formam-se testculos que secretam dois hormnios principais.
O primeiro -hormnio anti-duto Mlleriano (AMH; tambm chamado de substncia
inibidora Mlleriano, (MIS) -destri o duto Mlleriano. O segundo hormnio -testosterona- masculiniza o feto estimulando a formao do pnis, escroto e outras pores
da anatomia masculina, inibindo tambm o desenvolvimento dos primrdios do seio.
Assim, o corpo tem o fentipo feminino a no ser que seja mudado pelos dois hormnios elaborados pelos testculos fetais. Olharemos agora mais detalhadamente para
esses eventos.
As Gnadas em Desenvolvimento
O desenvolvimento das gnadas uma situao embriolgica nica. Todos os outros
rudimentos de rgos normalmente se diferenciam em um nico tipo de rgo. Um
rudimento de pulmo somente pode tornar-se pulmo e um rudimento de fgado somente se desenvolve em fgado. O rudimento da gnada, porm, tem duas opes
normais. Quando se diferencia, pode desenvolver-se em um ovrio ou em um testculo. O tipo de diferenciao seguido por esse rudimento determina o desenvolvimento
sexual futuro do organismo. Porm, antes dessa deciso ser tomada, a gnada do
mamfero se desenvolve primeiro atravs de um estgio indiferente (bipotencial) durante o qual no tem caractersticas femininas nem masculinas. Em humanos, o rudimento da gnada aparece no mesoderma intermedirio durante a quarta semana e
permanece sexualmente indiferente at a stima semana. Durante esse estgio, o epitlio
do sulco genital se prolifera para dentro do tecido mesenquimatoso conjuntivo frouxo
acima dele (Figura 20.3A,B). Essas camadas epiteliais formam as cordas sexuais, que
iro envolver as clulas germinativas que migram para a gnada humana durante a
Figura 20.2
Cascatas postuladas levar formao de

fentipos sexuais em mamferos. A converso
do sulco genital na gnada bipotencial necessita dos genes SF1 e WT1, pois camundongos
carentes de um ou de outro desses genes no
tm gnadas. A gnada bipotencial parece ser
conduzida para a via feminina pelos genes
WNT4 e DAX1, e para a via masculina pelo
gene SRY (do cromossomo Y), em conjunto
com genes autossmicos como SOX9. O ovrio produz clulas tecais e clulas granulosas,
que juntas so capazes de sintetizar estrgeno.
Sob estrgeno (primeiro provindo da me, em
seguida das gnadas), o duto Mlleriano se
diferencia em genitlia feminina e a prole desenvolve caractersticas sexuais secundrias
femininas. Os testculos produzem dois hormnios principais, o fator anti-duto Mlleriano
(AMH), que causa regresso do duto, e a testosterona, que causa a diferenciao do duto
Wolffiano em genitlia interna masculina. Na
regio urogenital, a testosterona convertida
em diidrotestosterona (DHT) que causa a morfognese do pnis e da prstata. (Segundo
Marx, 1995).
776
GNADAS INDIFERENTES
Duto
Wolffiano
Sulco
mesonfrico
Glomrulo
Tbulo
Sulco
mesonfrico
Genital
excretrio
(A)
Aorta
Mesentrio
Dorsal
Duto
Wolffiano
Duto
Mlleriano
4 SEMANAS
Epitlio
celmico em
proliferao
(B)
Cordas sexuais
primitivas
6 SEMANAS
DESENVOLVIMENTO TESTICULAR
DESENVOLVIMENTO OVARIANO
Tbulo
mesonfrico em
degenerao
Tbulo mesonfrico
em degenerao
Duto Wolffiano
(vasos deferentes)
Cordas da
rede testicular
Mesnquima
urogenital
Duto Wolffiano
Cordas
sexuais corticais
Cordas
testiculares
Duto Mlleriano
Tnica albugnea
(C)
8 SEMANAS
(E)
Cordas da
rede testicular
Dutos eferentes
(vasos eferentes)
Epitlio
superficial
Duto Mlleriano
8 SEMANAS
Cordas sexuais
em degenerao
Epitlio
Superficial
Tnica
albugnea
Cordas
testiculares
Duto Wolffiano
(vasos deferentes)
Duto Mlleriano
Oognia
Duto Wolffiano
Folculos
ovarianos
Duto Mlleriano
(D)
16 SEMANAS
(F)
20 SEMANAS
Figura 20.3
Diferenciao das gnadas humanas mostrada em seo transversal. (A) Sulco genital de um embrio de
4 semanas. (B) Sulco genital de uma gnada indiferente de 6 semanas mostrando cordas sexuais primitivas. (C) Desenvolvimento testicular na oitava semana. As cordas sexuais perdem contato com o epitlio
cortical e desenvolvem a rede testicular. (D) Na dcima-sexta semana de desenvolvimento, as cordas
testiculares so contnuas com a rede testicular e se conectam com o duto Woffiano. (E) O desenvolvimento ovariano em um embrio humano de 8 semanas, quando as cordas sexuais primitivas degeneram. (F)
O ovrio humano de 20 semanas no se conecta ao duto Wolffiano, e novas cordas sexuais corticais
rodeiam as clulas germinativas que migaram para o sulco genital. (Segundo Langman, 1981.)
sexta semana. Tanto em gnadas XY como XX, as cordas sexuais permanecem

conectadas ao epitlio superficial.
Se o feto for XY, as cordas sexuais continuam a proliferar durante a oitava semana, estendendo-se profundamente no tecido conjuntivo.* Essas cordas fundem-se
uma com a outra, formando uma rede de cordas sexuais internas (medulares) e, em
seu terminal mais distal, a rede testicular (rete testis) mais fina (Figura 20.3C,D). No
fim, as cordas testiculares perdem o contato com o epitlio superficial e dele ficam
separadas pela grossa matriz extracelular, a tnica albugnea. Assim, as clulas germinativas so encontradas nas cordas dentro dos testculos. Durante a vida fetal e
a infncia, essas cordas permanecem slidas. Na puberdade, porm, ficam ocas para
formar os tbulos seminferos, e as clulas germinativas comeam a produo de
espermatozide. O espermatozide transportado do interior dos testculos atravs
da rede testicular, que se junta com os dutos eferentes. Esses tbulos eferentes so
os remanescentes da rim mesonfrico, e ligam os testculos ao duto Wolffiano. Esse
duto tinha sido o tubo coletor do rim mesonfrico. Em machos, o duto Wolffiano se
diferencia em vasos deferentes, o tubo atravs do qual o espermatozide passa para
uretra e para fora do corpo. No intervalo, durante o desenvolvimento fetal as clulas
mesenquimatosas intersticiais dos testculos se diferenciaram em clulas de Leydig,
que produzem a testosterona. As clulas das cordas testiculares se diferenciam em
clulas de Sertoli, que criam o espermatozide e secretam o hormnio anti-duto
Mlleriano.
Em fmeas, as clulas germinativas iro residir perto da superfcie externa da gnada.
Ao contrrio das cordas sexuais nos machos, que continuam sua proliferao, as
cordas sexuais iniciais de gnadas XX degeneram. Porm, o epitlio logo passa a
produzir um novo conjunto de cordas sexuais, que no penetram profundamente no
mesnquima, mas permanecem perto da superfcie externa (crtex) do rgo. Por isso,
so chamadas cordas sexuais corticais. Essas cordas so divididas em agregados,
cada qual envolvendo uma clula germinativa (Figura 20.2E,F). A clula germinativa se
transformar em vulo, e as cordas sexuais epiteliais que a rodeiam iro se diferenciar
em clulas granulosas. As clulas mesenquimatosas do ovrio diferenciam-se em
clulas tecais. Juntas, as clulas tecais e granulosas formam os folculos que envolvem as clulas germinativas e secretam hormnios esterides. Cada folculo ir conter
uma nica clula germinativa. Em fmeas, o duto Mlleriano permanece intacto, e se
diferencia em ovidutos, tero, crvix e vagina superior; o duto Wolffiano, privado de
testosterona, degenera. Um resumo do desenvolvimento dos sistemas reprodutivos
dos mamferos encontra-se na Figura 20.4. [sex1.html]
Determinao sexual primria dos mamferos:

Genes cromossmicos Y para a determinao dos testculos
Vrios genes cuja funo necessria para a diferenciao sexual normal foram encontrados. Ao contrrio do que ocorre em outros rgos em desenvolvimento, os
genes envolvidos na determinao do sexo diferem extensamente entre os filos, fazendo com que no se possa olhar para genes determinantes de sexo em Drosophila
esperando ver seus homlogos direcionando a determinao sexual de mamferos.
Todavia, desde que o fentipo de mutaes em genes determinantes do sexo muitas
vezes a esterilidade, estudos clnicos foram empregados para identificar aqueles
genes ativos na determinao do sexo em humanos femininos ou masculinos. As
manipulaes experimentais visando confirmar as funes desses genes puderam ser
realizadas em camundongos.
* Em camundongos e coelhos, algumas clulas do mesonefro (o rim primitivo) migram para o
sulco genital e tornam-se parte da populao celular intersticial. Essas parecem ser necessrias para
estabelecer a estrutura normal da corda (Buehr et al., 1993).
777
778
Figura 20.4
Sumrio do desenvolvimento das gnadas e

seus dutos em mamferos. Notar que tanto os
dutos Wolffiano como o Mlleriano esto presentes no estgio da gnada indiferenciada.
O desenvolvimento dos dutos Wolffianos depende do mesnquima que eles encontram.
As partes inferiores do duto Wolffiano que
normalmente formariam o epiddimo formaro o tecido da vescula seminal se cultivados
com mesnquima associado com pores superiores (vescula seminal) do duto. (Higgins
et al, 1989.)
(A)
SEXUALMENTE INDIFERENTES
Gnadas
Rim metanfrico
Mesonefro
Ureter
Duto Wolffiano
Duto
Mlleriano
Epiddimo
Cloaca
Rins
metanfricos
Testculos
Oviduto
Ovrios
Ureteres
Duto Wolffiano
degenerado
Bexiga
Bexiga
urinria
urinria
Duto Mlleriano
degenerado
Duto Wolffiano
(vasos deferentes)
Duto Mlleriano
(oviduto)
tero
Uretra
Uretra
Vagina
(B)
MASCULINO
(C)
FEMININO
GNADAS
Tipo gonadal
Cordas sexuais
Testculos
Medular (interno)
Ovrio
Cortical (externo)
DUTOS
Dutos remanescentes para
clulas germinativas
Wolffiano
Mlleriano
Diferenciao do duto
Vasos deferentes
Epiddimo, vescula seminal
Oviduto, tero, crvix,

parte superior da vagina
xual do Cromossomo Y
Sexual
SRY:: O Determinante Se
SRY
Em seres humanos, o principal gene para o fator determinante dos testculos reside no
brao curto do cromossomo Y. Indivduos que nascem com o brao curto, porm, sem
o brao longo do cromossomo Y so machos enquanto que indivduos que nascem
com o brao longo do cromossomo Y, mas no o brao curto, so fmeas. Analisando
o DNA de homens XX e fmeas XY, a posio do gene determinador dos testculos foi
restringida uma regio de 35.000 pares de bases do cromossomo Y, localizada perto
da extremidade do brao curto [sex2.html]. Nessa regio, Sinclair e colaboradores
(1990) encontraram uma seqncia de DNA especfica de macho que podia codificar um peptdio de 223 aminocidos. Tal peptdio provavelmente seria um fator de
transcrio, j que contm um domnio ligante de DNA chamado de seqncia (box)

HMG. Esse domnio HMG (grupo de alta mobilidade) encontrado em vrios fatores
de transcrio e protenas de cromatina no-histnicas; ele induz curvatura na regio
de DNA qual ele se liga (Figura 20.5: Giese et al., 1992). O gene foi chamado SRY
(regio determinante do sexo do Y) e existe evidncia que realmente ele codifica o fator
determinante dos testculos humanos. O SRY encontrado em machos XY e nos raros
machos XX, estando ausente em fmeas normais XX e em muitas fmeas XY. Outro
grupo de fmeas XY foi achado ter mutaes de ponta ou de mudana de moldura no
gene SRY, e essas mutaes impedem a protena SRY de se ligar ao DNA ou curv-lo
(Pontiggia et al., 1994; Werner et al., 1995). Pelo menos dois genes envolvidos na
determinao sexual secundria (os genes para AMH e a aromatase P450 envolvida na
sntese de esterides) contm stios ligantes de SRY em seus promotores (Haqq et al.,
1993), a ligao especfica de sequncia de SRY a um outro gene especfico de testculo leva ativao daquele gene (Cohen et al., 1994).
Se SRY realmente codifica o principal fator determinante dos testculos, poderse-ia esperar que ele atuasse no sulco genital imediatamente antes, ou durante, a
diferenciao dos testculos. Essa previso foi confirmada por estudos do gene
homlogo encontrado em camundongos. O gene do rato (Sry) tambm se correlaciona com a presena de testculos; ele est presente em machos XX e ausente de
fmeas XY (Gubbay et al., 1990; Koopman et al., 1990). O gene Sry expresso nas
clulas somticas da gnada indiferenciada do camundongo, imediatamente antes
ou durante sua diferenciao em um testculo; sua expresso desaparece em seguida (Hacker et al, 1995).
A evidncia mais convincente de que o Sry o gene para o fator determinante dos
testculos vem de camundongos transgnicos. Se Sry induz os testculos, a insero
de seu DNA no genoma de um zigoto de camundongo XX normal deve lev-lo a formar
testculos. Koopman e colaboradores (1991) tomaram a regio de 14 kilobases do DNA
que inclui o gene Sry (e presumivelmente seus elementos regulatrios) e microinjetaram
essa seqncia em proncleos de zigotos de camundongos recm-fertilizados. Em
vrios casos, os embries XX assim injetados, desenvolveram testculos, rgos acessrios masculinos e pnis (Figura 20.6). (No se formou espermatozide funcional;
porm, isso era esperado porque a presena de dois cromossomos X previne a formao
Controle
(A)
(B)
Figura 20.6
Um camundongo XX transgnico para Sry macho. (A) A reao da cadeia de polimerase

seguida por eletroforese mostra a presena do gene Sry em machos XX normais, e em um
camundongo Sry XX transgnico. O gene est ausente na fmea XX da ninhada. (B) A genitlia
externa do camundongo transgnico masculina (direita) e essencialmente a mesma como a de
um macho XY (esquerda). (Segundo Koopman et al., 1991; fotografia cortesia dos autores.)
779
Figura 20.5
Associao de DNA com a protena SRY pode

levar o DNA a se curvar de 70o - 80o. As partes
escuras representam a seqncia (box) HMG
da protena SRY. A espiral vermelha a dupla
hlice do DNA ligado especificamente por
SRY. Nesse caso, uma regio do promotor
do gene do hormnio anti-Mlleriano. (Segundo Haqq et al., 1994; Werner et al., 1995.)
780
de espermatozide em camundongos e homens XXY.) H, por isso, boas razes para

se pensar que Sry/SRY o gene principal no cromossomo Y para a determinao de
testculos em mamferos.
O gene determinante de testculos do cromossomo Y necessrio mas no suficiente para o desenvolvimento dos testculos em mamferos. Estudos em camundongos
(Eicher e Washburn, 1983; Washburn e Eicher, 1989) haviam mostrado que a SRY de
algumas variedades de ratos deixam de produzir testculos quando colocados em meio
autossmico diferente. Quando a protena SRY se liga a seus stios no DNA, provavelmente cria grandes alteraes conformacionais. Desenrola a dupla hlice em sua vizinhana e curva o DNA em at 80o (Pontiggia et al., 1994; Werner et al., 1995). Essa
curvatura pode levar protenas ligadas distncia do aparelho de transcrio a um
maior contato, permitindo-lhes interagir e influenciar a transcrio. A identidade dessas protenas ainda no conhecida. [sex3.html]

Genes autossmicos na determinao de testculos
SOX9: Reverso Autossmica na Displasia Campomlica
Se SRY for um fator de transcrio, deveria ser esperado ativar ou reprimir uma bateria
de genes no sulco genital. Um candidato para tal gene o SOX9 em seres humanos. O
SOX9 codifica um fator de transcrio putativo que tambm contm uma seqncia
HMG. Indivduos sem uma cpia funcional desse gene tm uma sndrome chamada de
displasia campomlica, uma doena envolvendo numerosos sistemas do esqueleto e
rgos; eles morrem logo aps o nascimento em conseqncia de dificuldades respiratrias decorrentes de brnquios e traquias defeituosos (Foster et al., 1994; Wagner
et al., 1994; Mansour et al., 1995). Cerca de 75 porcento dos pacientes XY com essa
sndrome desenvolvem-se como fentipos femininos ou hermafroditas. Parece que
SOX9 essencial para a formao de testculos. Alm disso, o homlogo murino desse
gene, Sox9, expresso somente nos sulcos genitais masculinos (XY), mas no nos
femininos (XX), e nas mesmas clulas do sulco genital que Sry. Sox9 expresso
somente pouco aps a expresso de Sry (Wright et al., 1995; Kent et al., 1996).
Masculinass
SF1: A Ligao Entre SRY e as Trajetrias Desenvolvimentais Masculina
Uma outra protena que poderia ser ativada por SRY e ser um cofator com SRY o fator
de transcrio SF1. O SF1(fator 1 esteroidognico) uma protena que ativa vrios
genes envolvidos na sntese de esterides. Na verdade, ele atua nas clulas de Leydig
dos testculos, ativando genes que codificam as enzimas da via da testosterona. Todavia, o SF1 foi recentemente mostrado ter duas outras funes crticas (Figura 20.7).
Primeiro, deletando os genes Sf1 dos camundongos, esses se desenvolvem sem as
glndulas supra-renais ou as gnadas (Luo et al., 1994). (As gnadas se desenvolvem
mas degeneram em seguida, e os camundongos morrem por falta de corticosterona.)
Segundo, o SF1 parece estar relacionado ao desenvolvimento dos testculos. medida que os nveis de SF1 declinam no sulco genital dos embries XX, o SF1 permanece
nos testculos em desenvolvimento. Acredita-se que a SRY ative o gene Sf1, e que a
protena SF1, em seguida, ative ambos componentes da diferenciao sexual masculina (o AMH de Sertoli e a via Leydig da testosterona) (Shen et al., 1994). Tanto SRY
como SF1 podem ser necessrias para ativar o gene AMH, sugerindo que interaes
entre essas protenas sejam importantes (Haqq et al. 1994, Shen et al., 1994).
A pesquisa de reverso de sexo em camundongos mostrou que o cromossomo Y
de um tipo no necessariamente produz testculos em outra linhagem de camundongos. Parece que as protenas SRY divergiram tanto que elas podem, no muito distante, interagir com outra protenas do aparelho de transcrio (Coward et al., 1994;
Eicher, 1994).
Rim
Rim
Epiddimo
Testculo
Oviduto
(A)
(B)
Figura 20.7
Funes de SF1 durante a gonadognese. (A). Eliminao do gene SF1 do embrio do camundongo leva perda tanto das supra-renais como dos testculos. (O duto Mlleriano persiste e
torna-se o oviduto.) (B) Um controle mostrando epiddimo e testculos. (C) Hibridizao in situ
mostrando a ativao do gene Sf1 atravs do desenvolvimento testicular de um embrio de
camundongo de 12.5 dias. (A de Luo et al., 1994; C de Shen et al., 1994.)

Desenvolvimento ovariano
DAX1: Um Potencial Gene Determinante de Ovrio no Cromossomo X
Em 1980, Bernstein e colaboradores descreveram o caso de duas irms geneticamente
XY. Seus cromossomos Y eram normais, mas tinham duplicado uma pequena poro
do brao curto do cromossomo X (Xp21). Subseqentes casos foram encontrados;
concluiu-se que quando houvesse duas cpias dessa regio no cromossomo X ativo,
o sinal SRY seria revertido (Figura 20.8). Uma dose dupla dessa regio interromperia a
formao dos testculos, mas a ausncia dessa regio foi compatvel com a formao
de testculos. Bardoni e colegas (1994) propuseram que essa regio continha um gene
que compete com o fator SRY e que foi importante para o direcionamento do desenvolvimento do ovrio. No desenvolvimento testicular, esse gene seria suprimido, mas a
presena de duas cpias ativas do gene se sobreporia a essa represso. Esse gene,
DAX1, foi clonado e mostrou codificar um membro da famlia do receptor do hormnio
nuclear (Muscatelli et al., 1994; Zanaria, 1994). Dados preliminares (Zanaria, 1994)
sugerem que o DAX1 expresso nos sulcos genitais do embrio de camundongo.
Wnt4a: Um potencial Gene Determinante de Ovrio em um Autossomo
O gene WNT4a outro gene que pode ser crtico para a determinao ovariana. Esse
gene expresso no sulco genital do camundongo quando ele ainda est no seu
estgio indiferenciado. Depois, se torna indetectvel nas gnadas XY (que se tornam
(C)
781
782
Gentipo
DAX1
inativo
2 cpias
de DAX1
Gnadas
Testculos
Ovrio
Disgnese gonadal
Fentipo
Macho
Fmea
Fmea
Figura 20.8
Reverso sexual fenotpica em seres humanos tendo duas cpias do loco DAX1. DAX1 (no cromossomo X) mais SRY no Y produzem testculos. DAX1 sem SRY (pois o outro loco DAX1 est no
cromossomo X inativo) produz ovrios. Duas cpias ativas de DAX1 (no cromossomo X ativo)
mais um SRY (do cromossomo Y) levam a uma gnada mal-formada. Como a gnada no produz
AMH nem testosterona, o fentipo feminino. (Segundo Genetics Review Group, 1995.)
testculos), enquanto que a expresso de WNT4a mantida nas gnadas XX quando

elas comeam formar ovrios. Se forem criados camundongos sem os genes WNT4a,
o ovrio no se forma de maneira adequada, e suas clulas expressam marcadores
especficos do testculo, incluindo AMH e testosterona produzindo enzimas (Vainio e
McMahon, 1996).
possvel que SRY forme testculos reprimindo a expresso de WNT4a no sulco
genital, como tambm promovendo SF1. Deve-se compreender que tanto o desenvolvimento dos testculos como o do ovrio so processos ativos. Em mamferos, a
determinao sexual primria em caso algum um estado revelia (Eicher e Washburn,
1986). Embora os ltimos anos tenham presenciado notvel progresso, ns ainda no
sabemos o que fazem os genes determinantes do testculo ou do ovrio, e o problema
da determinao sexual primria permanece (como desde a pr-histria), uma das grandes questes no resolvidas da biologia. [sex4.html]
Determinao sexual secundria em mamferos

Regulao Hormonal do Fentipo Sexual
A determinao sexual primria envolve a formao de um ovrio ou de um testculo de
uma gnada indiferenciada. Isso, porm, no fornece o fentipo sexual completo. A
determinao sexual secundria se refere ao desenvolvimento dos fentipos masculino e feminino por hormnios secretados pelos ovrios e testculos. A determinao
sexual secundria, tanto masculina como feminina, tem dois componentes temporais
principais. O primeiro ocorre dentro do embrio durante a organognese; o segundo
ocorre durante a adolescncia.
Conforme mencionado anteriormente, se gnadas indiferentes so removidas de
um animal embrionrio concebido o fentipo feminino. Os dutos Mllerianos se
desenvolvem enquanto o duto Wolffiano se degenera. Isso tambm visto em certos
seres humanos que nascem sem gnadas funcionais. Indivduos cujas clulas tm
somente um cromossomo X (e nenhum cromossomo Y) originalmente desenvolvem
ovrios; porm, esses ovrios se atrofiam antes do nascimento, e as clulas germinativas morrem antes da puberdade. Porm, sob a influncia de estrgeno primeiramente
derivado do ovrio, mas depois da me e da placenta, essas crianas nascem com um
trato genital feminino (Langman e Wilson, 1982).*
A formao do fentipo masculino envolve a secreo de hormnios testiculares
que promovem o desenvolvimento do duto Wolffiano e promovem atrofia do duto
Mlleriano. O primeiro desses hormnios o hormnio anti-duto Mlleriano, o hormnio da clula de Sertoli que causa a degenerao do duto Mlleriano. O segundo
desses hormnios a testosterona esteride, que secretado pelas clulas de Leydig
testiculares fetais. Esse hormnio causa a diferenciao do duto Wolffiano em
epiddimo, vasos deferentes e vesculas seminais, e causa o desenvolvimento de
tumefaes urogenitais e seios no interior do escroto e pnis. A existncia desses dois
sistemas independentes de masculinizao demonstrada em pessoas tendo sndrome
da insensibilidade andrgena. Esses indivduos XY tm o gene do fator determinante
testicular e, por isso, tm testculos que produzem testosterona e AMH. Porm, essas
pessoas no tm a protena receptora de testosterona e portanto no podem responder testosterona produzida em seus testculos (Meyer et al., 1975). Porque elas so
capazes de responder ao estrgeno produzido em suas glndulas supra-renais, elas
so de aparncia distintamente feminina (Figura 20.9). Porm, apesar dessa aparncia
feminina, esses indivduos tm testculos, e embora no possam responder testosterona, eles respondem ao AMH. Assim, seus dutos Mllerianos degeneram. Essas
pessoas se desenvolvem como mulheres normais mas so estreis, no tendo um
tero ou ovidutos e tendo testculos em seu abdome.**
Testosterona e Diidrotestosterona
Existem dois diferentes hormnios masculinizantes, testosterona e AMH. Existe evidncia que a testosterona, em certos tecidos, pode no ser o hormnio ativo. A testosterona
parece ser responsvel pela promoo da formao de estruturas reprodutivas masculinas (o epiddimo, vesculas seminais e vasos deferentes) do primrdio do duto Wolffiano.
No entanto, a testosterona no masculiniza diretamente a uretra masculina, prstata,
-diidrotestosterona.
pnis ou escroto. Essas funes posteriores so controladas pela 5
Siiteri e Wilson (1974) mostraram que a testosterona convertida em 5diidrotestosterona nos seios urogenitais e tumefaes, mas no no duto Wolffiano.
Imperato - McGinley e colegas (1974) acharam uma pequena comunidade na Repblica Dominicana na qual vrios habitantes tinham uma deficincia gentica da enzima
5-cetoesteride redutase 2, que converte testosterona em diidrotestosterona. Indiv-
*Os mecanismos pelos quais o estrgeno poderia promover a diferenciao dos dutos Mllerianos
no so bem compreendidos. Durante o desenvolvimento embrionrio, o duto extremamente
sensvel a compostos estrognicos, conforme conhecido pelos efeitos teratognicos da
dietilstilbesterol (DES). Esse composto um estrgeno sinttico que foi dado s mulheres nas
dcadas de 1940 at 1960 para manuteno da gravidez. As filhas nascidas dessas mulheres que
usaram essa droga apresentaram alta incidncia de anomalias do duto Mlleriano, incluindo malformaes dos epitlios vaginal e cervical, anomalias estruturais dos ovidutos e tero, e uma incidncia
acima do normal de cncer vaginal (Robboy et al., 1982; Bell, 1986).
**A sndrome da insensibilidade andrgena uma de vrias condies chamadas pseudohermafroditismo. Os hermafroditas verdadeiros (raros em humanos e na maioria dos mamferos,
mas normal em certos invertebrados) contm tecidos gonadais tanto masculino como feminino.
Hermafroditas mamferos verdadeiros tm anormalidades na determinao sexual primria e podem ocorrer quando o cromossomo Y translocado para o cromossomo X. Se o X translocado for
inativado, o Y ser desligado. Algumas das clulas gonadais sero XX e outras XY (Berkovitz et al.,
1992). Na condio pseudo-hermafrodita, existe somente um tipo de gnada, mas as caractersticas
sexuais secundrias diferem daquilo que esperado do sexo gonadal. Em humanos, pseudo-hermafroditas masculinos podem resultar da sndrome da insensibilidade andrgena, ou da incapacidade de
produzir testosterona devido a um defeito gnico em uma das enzimas levando sua sntese (Geissler
et al., 1994). Pseudo-hermafroditas femininos ocorrem quando o organismo tem uma superproduo de testosterona.
783
Figura 20.9
Um indivduo XY com a sndrome da insensibilidade andrgena. Apesar do caritipo

XY e da presena de testculos, o indivduo
desenvolve caractersticas sexuais secundrias femininas. Internamente, porm, a
mulher no tem os derivados do duto
Mlleriano e tem testculos no descidos.
(Cortesia de C. B. Hammond.)
784
Bexiga urinria
Reto
Vescula
seminal
Pbis
Prstata
Pnis
Uretra
Vaso deferente
Epiddimo
Testculo
Dependente de diidrotestosterona
Dependente de testosterona
Figura 20.10
Regies dependentes de testosterona e diidrotestosterona no sistema genital do feto humano

masculino. (Segundo Imperato-McGinley et al., 1974.)
duos afetados no tinham um gene funcional para essa enzima (Andersson et al.,
1991; Thigpen et al, 1992). Embora esses indivduos XY tenham testculos funcionantes,
eles tm uma bolsa vaginal cega e um clitris aumentado. Pareciam meninas e so
criadas como tais. Suas anatomia interna, porm, masculina: testculos, desenvolvimento de duto Wolffiano e degenerao do duto Mlleriano. Assim, parece que a
formao da genitlia externa est sob o controle da diidrotestosterona, enquanto que
a diferenciao do duto Wolffiano controlada pela prpria testosterona (Figura
20.10). interessante que a genitlia externa torna-se responsiva testosterona na
puberdade, causando bvia masculinizao em uma pessoa originalmente considerada como sendo uma menina.
Hormnio Anti-Mlleriano
O hormnio anti-duto Mlleriano (AMH) uma glicoprotena com 560 aminocidos
(Cate et al., 1986) produzido nas clulas de Sertoli (Tran et al., 1977). Quando fragmentos de testculos fetais ou clulas de Sertoli isolados so colocados ao lado de segmentos em cultura, contendo pores dos dutos Wolffiano e Mlleriano, o duto
Mlleriano se atrofia apesar de nenhuma alterao ocorrer no duto Wolffiano (Figura
20.11). Essa atrofia causada tanto pela morte celular como pela transformao em
mesnquima e migrao de clulas epiteliais do duto (Trelstad et al., 1982). O gene
AMH de camundongo tem uma seqncia promotora que ligada tanto pela protena
SF1 como por SRY (Haqq et al., 1994; Shen et al., 1994). [sex5.html]
Vemos assim, que uma vez formados, os testculos secretam dois hormnios que
causam a masculinizao do feto. Um desses hormnios - testosterona - pode ser
convertido em uma forma mais ativa pelos tecidos que criam a genitlia externa. Em
fmeas, o estrgeno secretado pelos ovrios fetal parece ser suficiente para induzir a
diferenciao do duto Mlleriano em tero, ovidutos e crvix. Dessa maneira, os
cromossomos sexuais controlam o fentipo sexual de um indivduo.
785
Figura 20.11
Exame da atividade do hormnio anti-duto

Mlleriano no segmento anterior do trato
reprodutivo de um feto de rato de 15.5 dias,
aps 3 dias em cultura. (A) Tanto o duto
Mlleriano (seta esquerda) quanto o duto
Wolffiano (seta direita) esto abertos. (B) O
duto Wolffiano (seta) est aberto, mas o duto
Mlleriano se degenerou e se fechou. (Cortesia de N. Josso.)
(A)
(B)
O Sistema Nervoso Central

Uma das reas mais controversas da determinao sexual secundria envolve o desenvolvimento de comportamentos especficos do sexo. Em aves canoras, a testosterona vista regular o crescimento de agregados neuroniais especficos do macho no
crebro. Machos de canrios e tentilhes-zebra cantam eloqentemente, enquanto as
fmeas cantam pouco ou nunca. Esses cantos servem para marcar territrios e atrair
consortes. A habilidade de cantar controlada por seis diferentes agregados de neurnios (ncleos) no crebro da ave (Figura 20.12). Neurnios conectam cada uma
dessas regies entre si. Em canrios machos, esses ncleos so vrias vezes maiores
que agregados correspondentes de neurnios em canrios-fmea; em fmeas de
tentilhes-zebra, uma dessas regies pode at estar inteiramente ausente (Arnold,
1980; Konishi e Akutagawa, 1985).
A testosterona tem um papel importante na produo do canto. Em machos adultos de tentilhes-zebra, Prve (1978) demonstrou uma correlao linear entre a quantidade de canto e a concentrao de testosterona srica. Foi mostrado que mudanas
sazonais nos nveis de testosterona esto correlacionadas com os padres canoros
desses pssaros. Quando os nveis de testosterona esto baixos, no somente ocorre
um decrscimo de canto do pssaro mas tambm uma diminuio do tamanho dos
ncleos cerebrais especficos de machos (Nottebohm, 1981). Em tentilhes adultos, a
castrao elimina o canto, mas a injeo de testosterona induz tais pssaros a cantar
mesmo em Novembro, o que normalmente no fazem (Thorpe, 1958). Em vrias espcies de pssaros, as fmeas podem ser induzidas a cantar pela injeo de testosterona
(Nottebohm, 1980). Quatro regies controladoras do canto no crebro dessas aves
crescem 50-69 porcento em tais pssaros, enquanto outras regies cerebrais no o
fazem. Estudos auto-radiogrficos (Arnold et al., 1976) mostraram que os neurnios
dos ncleos controladores do canto incorporam testosterona radioativa, enquanto
outras regies do crebro no o fazem. Parece, portanto, que os hormnios das gnadas tm um papel importante no desenvolvimento das regies do sistema nervoso que
geram comportamentos especficos do sexo.
Tentilho-zebra macho
Syrinx
Figura 20.12
Dimorfismo sexual no crebro avicular. O diagrama esquemtico indica as principiais rea neurais
acreditadas estar envolvidas na produo do canto no tentilho-zebra. Os crculos representam
reas cerebrais especficas; o tamanho de cada crculo proporcional ao volume ocupado por
essa regio. Crculos com linhas hachuriadas so volumes estimados. Os nmeros dentro de
cada crculo representam a porcentagem de clulas que incorporam testosterona radioativa. As
diferenas de volume entre trs dessas regies (HVc, RA e NXIIts) so significantes entre os
sexos, e a rea X no foi observada nos crebros de tentilhes fmeas. As diferenas na ligao
de testosterona nas regies HVc e MAN so significativas, e no foram observadas diferenas
sexuais relativas ligao de hormnio esteride em outras regies do crebro. As setas indicam
as vias axnicas conectando as regies no tentilho macho. (Segundo Arnold, 1980.)
Tentilho-zebra fmea
786
A situao menos clara em mamferos, porque a h menos comportamentos que

caracterizam exclusivamente um sexo. A penetrao peniana em ratos um desses
comportamentos, e controlado por neurnios motores dos msculos levator ani e
bulbocavernoso. Ambos neurnios se originam de um ncleo espinhal que especificamente concentra testosterona. Em ratas, esses msculos so vestigiais, e o volume
dos seus neurnios controladores muito reduzido (Breedlove e Arnold, 1980; Tobin
e Joubert, 1992). A testosterona parece promover dois tipos de mudanas nesses
neurnios responsivos. Em fetos e ratos recm-nascidos, a testosterona impede a
morte normal de neurnios nessa regio. Ratas perdem at 70 porcento dos neurnios desse ncleo espinhal, enquanto ratos machos perdem somente 25 porcento. Em
ratos adultos, a testosterona atua nesse ncleo para manter o tamanho das clulas
nevosas e seus dendritos. A rea do soma e o comprimento dos dendritos desse
ncleo espinhal so reduzidos metade quando um rato adulto castrado. Essa
reduo revertida pela injeo de testosterona (Nordeen et al., 1985; Kurz et al.,
1986). Em seres humanos, as diferentes taxas de crescimento entre os sexos produzem
aspectos anatmicos ligeiramente diferentes. Embora os crebros humanos femininos
sejam 10 porcento menores que os masculinos, a camada granular de algumas regies
corticais contm neurnios empacotados mais densamente em comparao com regies semelhantes de crebros masculinos (Witelson et al., 1995).
A testosterona no o nico esteride capaz de mediar o comportamento. No
crebro do mamfero, tambrm so vistos neurnios sensveis ao estrgeno. Esses
neurnios esto colocados em posies dos circuitos neurais conhecidas por mediar
o comportamento reprodutivo: o hipotlamo, a hipfise e a amgdala (Figura 20.13;
McEwen, 1981). Pfaff e McEwen (1983) demonstraram que o estrgeno altera as propriedades eltricas e qumicas dos neurnios hipotalmicos capazes de ligar estrgeno
em sua cromatina. Terasawa e Sawyer (1969) j tinham encontrado que a atividade
eltrica desses neurnios varia durante o ciclo estrognico sazonal do rato, aumentando no perodo da ovulao. Alm disso, o estrgeno parece estimular aqueles
neurnios nas regies que induzem o comportamento reprodutivo feminino. Ratas
ovariectomizadas injetadas com estrgeno diretamente no hipotlamo exibem lordose,
uma posio que estimula o comportamento de monta em camundongos machos,
enquanto que ratas ovariectomizadas controles no mostraram tal comportamento
(Barfield e Chen, 1977; Rubin e Barfield, 1980). O mecanismo pelo qual o estrgeno
promove atividade neuronial especfica nesses perodos considerado envolver aumento da permeabilidade ao potssio desses neurnios (Nabekura et al., 1986).
Telencfalo
Diencfalo
Mesencfalo
Rom- Medula
benc- espinhal
falo
Cerebelo
Crtex
Te t o
ptico
Bulbo
olfativo
Figura 20.13
Representao das regies ligantes de estrgeno no crebro de uma rata. (Segundo Kandel e
Schwartz, 1985.)
Septo
rea
pre-ptica
Hipotlamo
Hipfise
Medula
espinhal
&
787
Especulaes
O Desenvolvimento de Comportamentos Sexuais

A Hiptese da Organizao/Ativao
A exposio pr-natal (ou neonatal) a certos hormnios impe mudanas especficas do sexo no sistema nervoso central?
Tais mudanas neurais especficas do
sexo foram demonstradas nas regies do
crebro que regulam a fisiologia sexual
involuntria. A secreo cclica de hormnio luteinizante pela hipfise da rata
adulta depende da falta de testosterona
durante a sua primeira semana de vida. A
secreo do hormnio luteinizante das
ratas pode ser tornada no-cclica dandolhes testosterona 4 dias aps o nascimento; inversamente, as secrees do hormnio luteinizante em machos podem ser tornadas cclicas removendo seus testculos dentro de um dia aps o nascimento
(Barraclough e Gorski. 1962). Acredita-se
que os hormnios sexuais podem atuar
durante o estgio fetal ou neonatal da vida
dos mamferos para organizar o sistema
nervoso e que durante a vida adulta, os
mesmos hormnios podem ter efeitos
ativadores transitrios. Isso chamado
hiptese da organizao/ativao.
Interessantemente, o principal hormnimo responsvel pelo padro do crebro
masculino o estradiol.* A testosterona
do sangue fetal ou neonatal pode ser convertida em estradiol pela aromatase P450;
e essa converso ocorre no hipotlamo e
no sistema lmbico -duas reas do crebro
conhecidas por regular os comportamentos reprodutivos e hormonais (Reddy et
al., 1974; MdEwen et al., 1977). Assim, a
testosterona capaz de causar seus efeitos atravs da converso em estradiol. Mas
o ambiente fetal rico em estrgenos oriundos das gnadas e da placenta. O que impede os estrgenos de masculinizar o sistema nervoso de um feto feminino? O
estrgeno fetal (tanto masculino como feminino) ligado -fetoprotena. Essa protena produzida no fgado fetal e torna-se
Os termos estrgeno e estradiol so freqentemente usados indistintamente. Todavia, o
estrgeno refere-se uma classe de hormnios
esterides responsveis pela estabilizao e manuteno das caractersticas femininas especficas. O estradiol um desses hormnios, e na
maioria dos mamferos (incluindo os humanos)
ele o mais potente dos estrgenos.
o principal componente do sangue fetal e

fluido crebro-espinhal. Ela se ligar ao
estrgeno, mas no testosterona.
Tentativas de estender a hiptese da
organizao/ativao aos comportamentos
sexuais voluntrios so mais controversos porque no h um comportamento verdadeiramente especfico do sexo que distinga os dois sexos de muitos mamferos e
porque existem mltiplos efeitos do tratamento hormonal no mamfero em desenvolvimento. Por exemplo, a injeo de testosterona em uma rata de uma semana ir
aumentar seus impulsos plvicos e diminuir sua quantidade de lordose (Phoenix
et al., 1959; Kandel et al., 1995). Essas mudanas podem ser atribudas s alteraes
mediadas por testosterona no sistema nervoso central, mas tambm podem ser devidas a efeitos hormonais em outros tecidos.
A testosterona possibilita o crescimento
dos msculos que permitem o impulsionamento plvico. Visto que a testosterona estimula o amplo crescimento das fmeas e o
fechamento de seus orifcios vaginais, no
se pode concluir que a ausncia de lordose
seja somente devida s mudanas mediadas pela testosterona no circuito nervoso
(Harris e Levine, 1965; De Jonge et al., 1988;
Moore, 1990; Moore et al., 1992; FaustoSterling, 1995).
A extrapolao de ratos para humanos um empreendimento muito arriscado, j que nenhum comportamento especfico do sexo foi identificado em humanos, e o que masculino em uma cultura pode ser considerado feminino em
outra (veja Jacklin, 1981; Bleier, 1984;
Fausto-Starling, 1992). Conforme conclui
uma reviso (Kandel et al., 1995):
Existe ampla evidncia que a organizao neural dos comportamentos
reprodutivos, enquanto influenciada
de maneira importante por eventos
hormonais durante um perodo prnatal crtico, no exerce uma influncia imutvel sobre o comportamento
sexual do adulto, ou mesmo sobre uma
orientao sexual individual. Ao longo da vida de um indivduo, motivos
religiosos, sociais ou psicolgicos
podem levar pessoas semelhantes biologicamente a divergirem extensamente em suas atividade sexuais.
Homossexualidade Masculina
Certos comportamentos so freqentemente citados como sendo parte do fentipo
completo masculino ou feminino. Temse dito que o crebro do homem maduro
formado de forma que ele tenha o desejo
de copular com uma mulher madura, e o
crebro da mulher madura faz com que ela
deseje copular com um homem maduro.
Porm, por mais importantes que sejam os
desejos em nossas vidas, eles no podem
ser detectados por hibridizao in situ nem
isolados por anticorpos monoclonais. No
sabemos ainda se os desejos sexuais so
instilados em ns pela nossa educao
social ou se so armados em nossos crebros por genes ou hormnios durante
nosso desenvolvimento intra-uterino ou
por outros meios.
Em 1991, Simon LeVay props que parte do hipotlamo anterior de homens homossexuais tinha a forma anatmica tpica
da mulher em lugar daquela de homens
heterossexuais. O hipotlamo considerado ser a fonte de nossas necessidades sexuais, e ratos tm uma rea sexualmente
dimrfica no hipotlamo anterior que parece regular o comportamento sexual. Esse
estudo gerou muita publicidade e discusso. Os principais resultados esto mostrados na Figura 20.14. Os ncleos
intersticiais do hipotlamo anterior (INAH)
foram divididos em quatro regies. Trs
delas no mostraram sinais de dimorfismo
sexual. Uma delas, INAH3, mostrou uma
diferena estatstica significativa entre
machos e fmeas; foi apregoado que o
INAH3 masculino , em mdia, mais de
duas vezes maior que o INAH3 feminino.
Alm disso, os dados de LeVay sugeriram
que o INAH3 de homens homossexuais
era semelhante ao das mulheres e tinha
menos da metade do tamanho do INAH3
de homens heterossexuais. Esse achado,
proclamou LeVay, sugere que a orientao sexual tem um substrato biolgico.
Houve vrias crticas essa interpretao dos dados por LeVay. Em primeiro
788
Figura 20.14
Uma parte dos dados que podem sugerir uma

base biolgica para o homossexualismo.
INAH4 e INAH3 so dois grupos de neurnios hipotalmicos. O INAH4 no mostra dimorfismo sexual no volume, enquanto o
INAH3 mostra agregao estatisticamente significativa, embora o intervalo seja semelhante.
O INAH3 de autpsias de crebros masculinos homossexuais mostra agregao em direo da distribuio feminina. Porm, no se
pode posicionar uma relao causa e efeito.
(Segundo LeVay, 1991.)
Mulheres
Homens
heterossexuais
presumidos
Homens
homossexuais
presumidos
Mulheres
Homens
heterossexuais
presumidos
Homens
homossexuais
presumidos
lugar, os dados provinham de populaes,

no de indivduos. Pode-se tambm dizer
que h um intervalo estatstico e que homens e mulheres tm o mesmo intervalo geral.
Na realidade, o INAH3 de um homem homossexual era maior do que de todos,
exceto de um dos 16 homens heterossexuais. Em segundo lugar, os homens heterossexuais no eram necessariamente heterossexuais, nem os homens homossexuais eram necessariamente homossexuais;
os crebros vieram de cadveres de pessoas cujas preferncias sexuais no eram conhecidas. Isso levanta um outro aspecto: o
homossexualismo tem muitas formas e, por-
tanto, no um fentipo no sentido usual

da palavra. Em terceiro lugar, os crebros
dos homens homossexuais eram de pacientes que tinham falecido de AIDS. A AIDS
afeta o crebro, e seu efeito sobre os neurnios hipotalmicos no conhecido. Em
quarto lugar, como o estudo foi feito em crebros de sujeitos mortos, no se pode inferir causa e efeito. Conforme mencionado no
Captulo 1, tais dados mostram apenas correlaes, no causas.
to provvel comportamentos poderem afetar o tamanho da densidade neuronial regional como a densidade neuronial regional poder afetar comportamentos.
Se os dados forem interpretados como indicando que o INAH3 de homossexuais
masculinos menor que aquele de heterossexuais masculinos, ainda no se sabe
se isso um resultado da homossexualidade ou uma causa. Em quinto lugar, mesmo se a diferena existe, no h evidncia
que a diferena tenha algo a ver com sexualidade. Em sexto lugar, esses estudos no
indicam quando tais diferenas (se existirem) emergem. A questo se diferenas de
INAH3 entre homens, mulheres e homens
homossexuais ocorrem durante o desenvolvimento embrionrio, logo aps o nascimento, durante os primeiros anos de vida,
durante a adolescncia, ou em um outro
momento, no foi estudada.
Em 1993, foi feita um correlao entre
uma certa seqncia de DNA no cromossomo X e um certo subgrupo de homosse-
xuais masculinos (homens homossexuais

que tinham um irmo homossexual). Entre
40 pares de irmos homossexuais dos quais
um havia herdado uma regio particular no
cromossomo X de sua me, 33 deles tinham
irmos que tambm haviam herdado essa
regio (Hamer et al., 1993). Era de se esperar que isso tivesse ocorrido, em mdia, em
somente 20 deles. Novamente, isso somente uma concordncia estatstica, que
poderia ser coincidente. Alm disso, o controle (a observao se o mesmo marcador
existia nos homens no-homossexuais
dessas famlias) no foi apresentado, e o
vis estatstico das observaes foi questionado, especialmente porque outros laboratrios no foram capazes de repetir o
resultado (Risch et al., 1993; Marshall,
1995). Em um estudo mais recente do mesmo laboratrio, Hu e colegas (1995) encontram pouco ou nenhum aumento nessa regio quando homens homossexuais foram
comparados com seus irmos no-homossexuais. Os autores concluram que essa
regio era nem necessria nem suficiente
para uma orientao homossexual. Assim,
apesar de relatos desses estudos na mdia
pblica, no foi encontrado o gene gay.
Merece ser lembrado que genes codificam RNAs e protenas, no comportamentos. Enquanto os genes podem causar vis em resultados comportamentais,
no temos evidncia para sua ao controladora sobre eles. A existncia de pessoas com a sndrome da personalidade
mltipla indica que um gentipo pode
apoiar um grande intervalo de personalidades. Isso certamente um problema
para qualquer definio de um fentipo
homossexual, j que muitas pessoas alternam entre comportamentos homossexual e heterossexual. Assim, a pergunta
se desejos homossexuais so formados
por genes dentro do ncleo, por hormnios sexuais durante o desenvolvimento
fetal, ou por experincias ps-nascimento ainda permanece uma questo aberta.
Determinao sexual cromossmica em Drosophila

A Via do Desenvolvimento Sexual
Os mecanismos determinantes do sexo em mamferos e insetos como Drosophila so
muito diferentes. Nos mamferos, o cromossomo Y tem papel de piv na determinao
do sexo masculino. Assim, mamferos XO so fmeas, com ovrios, tero, ovidutos
(em geral, porm, com pouqussimos, se tanto, vulos). Em Drosophila, a determinao
789
Tabela 20.1 Razes de cromossomos X para autossomos em diferentes

fentipos sexuais de Drosophila melanogaster
Cromossomos X
Conjuntos de
Autossomos (A)
Relao X:A
3
4
4
3
2
2
1
1
2
3
4
3
2
3
2
3
1.50
1.33
1.00
1.00
1.00
0.66
0.50
0.33
Sexo
Metafmea
Metafmea
Fmea normal
Fmea normal
Fmea normal
Intersexo
Macho normal
Metamacho
Fonte: Segundo Strickberger, 1968.
sexual conseguida por um equilbrio entre determinantes femininos no cromossomo

X e determinantes masculinos nos autossomos (cromossomos no-sexuais). Se houver ao menos um cromossomo X em uma clula diplide (1X:2A), a mosca ser macho.
Se houver dois cromossomos X em um clula diplide (2X:2A) a mosca ser fmea
(Bridges, 1921,1935). Assim, Drosophila XO so machos estreis. A Tabela 20.1 mostra as diferentes relaes X-para-autossomos e o sexo resultante.
Em Drosophila, e insetos em geral, podem-se observar ginandromorfos animais nos quais certas regies so masculinas e outras femininas (Figura 20.15;
Prancha 17). Isso pode acontecer quando um cromossomo X perdido de um ncleo
embrionrio. As clulas descendentes daquela clula, em vez de serem XX (fmeas)
so XO (masculinas). Como no h hormnios sexuais para modular tais eventos em
insetos, cada clula produz a sua prpria deciso sexual. As clulas XO exibem
caractersticas masculinas, enquanto as clulas XX exibem traos femininos. Essa
situao fornece um belo exemplo da associao entre cromossomos X e sexo. Conforme pode ser visto nesse exemplo, o cromossomo Y no tem qualquer papel na
determinao do sexo em Drosophila. Ele somente necessrio para garantir fertilidade em machos. O cromossomo Y somente ativo tardiamente no desenvolvimento, durante a formao de espermatozide.
Qualquer teoria de determinao sexual em Drosophila precisa explicar como lida
a razo X-para-autossomo, e como essa informao transmitida aos genes que controlam os fentipos masculinos ou femininos. Embora ns ainda no conheamos os
mecanismos ntimos pelo qual a razo X:A tornada conhecida para as clulas, a
pesquisa durante a ltima dcada revolucionou nossa viso da determinao sexual
em Drosophila. Muito dessa pesquisa se ocupou da identificao e anlise dos genes
que so necessrios para a diferenciao sexual e a colocao desses genes em uma
seqncia desenvolvimental. Mutaes de perda-de-funo na maioria desses genesSex-lethal (Sxl), transformer (tra) e transformer-2 (tra2)- transformam indivduos
Crista sexual masculina
Figura 20.15
Tipo
selvagem
eosin eye
miniature wing
eosin eye
miniature wing
Ginandromorfo de D. melanogaster no qual o

lado esquerdo feminino (XX) e o lado direito
masculino (XO). O lado masculino perdeu
um cromossomo portando os alelos tipo selvagem da cor dos olhos e forma das asas, permitindo com isso a expresso dos alelos recessivos eosin eye e miniature wing no cromossomo X remanescente. (Segundo Morgan, 1919.)
790
Razo X:A
No-ativado (sem
protena funcional)
No-ativado (sem
protena tra funcional)
Reprime
Protenas Dsx
especficas
da fmea
genes
msl
ix
Genes
ligados ao X
Taxa de
transcrio
feminina
Genes de
diferenciao
feminina
Protenas Dsx
especficas
da macho
Reprime
Genes de
diferenciao
masculina
Fentipo
feminino
Genes
msl
Reprime
Genes de
diferenciao
masculina
Fentipo
masculino
Genes de
diferenciao
feminina
Genes
ligados ao X
Taxa de
transcrio
masculina
Figura 20.16
Cascata da regulao proposta para a determinao sexual somtica em Drosophila.

Setas representam ativao, enquanto um bloco no fim de uma linha indica supresso. Os
locos msl, sob o controle do gene Sxl, regulam a transcrio compensatria de dosagem
do cromossomo X masculino. (Segundo
Baker et al., 1987.)
XX em machos. Tais mutaes no tm efeito sobre a determinao sexual em machos

XY. A homozigozidade do gene intersex (ix) leva moscas XX a desenvolver um fentipo
intersexual que tem pores de tecido masculino e feminino no mesmo rgo. O gene
doublesex (dsx) importante para a diferenciao sexual dos dois sexos. Se dsx estiver ausente, tanto moscas XX como XY se transformam em intersexuais (Baker e
Ridge, 1980; Belote et al., 1985a).
A posio desses genes numa trajetria desenvolvimental est baseada (1) nas
interpretaes de cruzamentos genticos resultando em moscas tendo duas ou mais
dessas mutaes e (2) na determinao do que acontece quando ocorre ausncia total
dos produtos de um desses genes. Tais estudos geraram o modelo da cascata regulatria
visto na Figura 20.16.
O Gene Sex-lethal como o Piv para a Determinao do Sexo
INTERPRETANDO A RAZO X:A. A primeira fase da determinao sexual em
Drosophila requer a leitura da razo X:A. Quais elementos no cromossomo X so
contados e como usada essa informao? Parece que valores altos da razo
X:A so responsveis pela ativao do gene comutador feminilizante Sex-lethal
(Sxl). Em valores baixos (machos), Sxl permanece inativo durante os estgios
precoces do desenvolvimento (Cline, 1983; Salz et al., 1987). Em Drosophila XX,

Sxl ativado durante as primeiras duas horas aps a fecundao, e esse gene
transcreve um particular tipo embrionrio de mRNA Sxl que somente encontrado
durante mais duas horas (Salz et al., 1989). Uma vez ativado, esse gene permanece
ativo apesar de ulteriores mudanas na razo X:A (Snchez e Nthiger, 1983).
Funo precoce de Sxl necessria para que embries XX iniciem a via desenvolvimental feminina e mantenham um nvel apropriado de transcrio de dois cromossomos X.
Essa ativao especfica da fmea de Sxl considerada ser estimulada pelos
elementos numeradores no cromossomo X que constituem a parte X da razo
X:A. Cline (1988) demonstrou que dois desses elementos numeradores so os genes
sisterless-a e sisterless-b. O gene Sxl no parece sentir esses elementos numeradores sem a presena de produtos dos genes runt e daughterless (da). A falta da
protena Daughterless previne a ativao de Sxl. Isso no afeta os embries XY (j
que de qualquer maneira eles no ativam Sxl), mas letal em embries femininos, j
que o mecanismo para a compensao de dosagem faz com que os dois cromossomos X sejam transcritos com uma taxa maior (masculina) (Cline, 1986; Cronmiller e
Cline, 1987; Duffy e Gergen, 1991) da o nome da mutao. Assim, pouco aps a
fecundao, os genes sis-a, sis-b, runt e da permitem o Sxl ser somente transcricionalmente ativo em embries femininos.
Os elementos denominadores so aqueles genes que so contados dos
autossomos. Um dos principais elementos denominadores parece ser o gene
deadpan (YoungerShepherd et al., 1992). Machos com uma razo demasiadamente alta de sis-b para deadpan ativam Sxl e morrem, enquanto que fmeas com essa
razo demasiadamente baixa no ativam o Sxl e morrem. Outro gene denominador
codifica Extramachrochaetae, uma protena que compete com a ligao de
Daughterless ao promotor Sxl (Van Doren et al., 1991). Os genes daughterless, sisa, sis-b e deadpan so todos fatores de transcrio Hlice-lao-hlice (HLH), e
possvel que as protenas denominadora e numeradora formem heterodmeros uma
com a outra. Presumivelmente, as protenas denominadoras so capazes de formar
heterodmeros que bloqueiam aqueles das protenas ativadoras (Sis e Daughterless)
(Figura 20.17). Parece, portanto, que a razo X:Autossomo medida pela competio da ativao codificada pelo X e repressores codificados autossomicamente
no promotor do gene Sxl. [sex6.html]
MANUTENO DA FUNO SXL. Pouco aps a transcrio de Sxl, um segundo
promotor no gene Sex-lethal ativado, e esse gene transcrito tanto em machos
como em fmeas. Porm, a anlise de cDNA do mRNA Sxl mostra que o mRNA Sxl
dos machos difere daquele das fmeas (Bell et al., 1988). Isso o resultado do
processamento diferencial do RNA. Alm disso, a protena Sxl parece ligar-se a seu
prprio precursor de mRNA emendando-o da maneira feminina. Como machos no
tm protena Sxl disponvel, os seus novos transcritos so processados da maneira
masculina (Keyes et al., 1992). O mRNA Sxl masculino no funcional. Enquanto a
mensagem Sxl especfica de fmea codifica uma protena de 354 aminocidos, o
transcrito Sxl especfico de macho contm um cdon de terminao tradutora (UGA)
posterior ao aminocido 48. O processamento diferencial do RNA que coloca esse
cdon de terminao no mRNA especfico para machos est mostrado nas Figuras
20.17B e 20.18. Em machos, o transcrito nuclear emendado de uma maneira que
fornece trs xons, e o cdon de terminao est no interior do xon central. Em
fmeas, o processamento de RNA fornece somente dois xons, e o xon central
especfico de macho est agora externalizado como um grande ntron. Assim, o
mRNA especfico de fmea carece do cdon de terminao.
A protena produzida pelo transcrito Sxl especfico de fmea pode ser predita a
partir de sua seqncia nucleotdica. Essa protena conteria duas regies que so
importantes para ligao ao RNA compartilhadas com protenas nucleares ligantes de
791
792
(A)
2X:2A
feminino
(B)
TRANSCRIO PROMOTORA PRECOCE
1X:2A
masculino
Fatores de transcrio de heterodmeros no iniciam a transcrio de Sxl
dos promotores precoces
Gene Sxl
Gene Sxl
Transcrio
Protena Sxl
Cdon
Iniciador
No h transcrio de Sxl,
traduo ou subseqente atividade
do fator de emenda da protena Sxl
Emenda e
traduo
TRANSCRIO PROMOTORA TARDIA
TRANSCRIO PROMOTORA TARDIA
Transcrio
Transcrio
Sem
M Protena
Protena Sxl age como fator

de emenda para remover
o xon do transcrito
Cdon
iniciador
Cdon
Terminao
Emenda masculina revelia inclui

cdon de parada no transcrito de
RNA; protena no traduzida
Figura 20.17
Ativao diferencial do gene Slx em machos e fmeas. (A) em Drosophila tipo selvagem com
dois cromossomos X e dois conjuntos de autossomos (XX; AA), as subunidades do fator
de transcrio numerador (sis-a, sis-b, etc.) no esto totalmente complexadas pelas
subunidades inibidoras derivadas dos genes (como deadpan) nos autossomos. Esses fatores
numeradores ativam o promotor precoce do gene Sxl, que produz um transcrito que automaticamente emendado no mRNA especfico de fmea que codifica a protena Sxl funcional.
Por fim, a transcrio constitutiva de Sxl comea a partir do promotor tardio. Se Sxl j estiver
disponvel (i.e., de uma transcrio precoce), o mRNA de Sxl ser emendado para formar a
mensagem funcional especfica de fmea. (B) Em Drosophila de tipo selvagem com um
cromossomo X e dois conjuntos de autossomos (XO; AA), os fatores de transcrio numeradores so ligados pelas subunidades denominadoras e no podem ativar o promotor precoce. Quando o gene Sxl for transcrito do promotor tardio, a emenda de RNA no ir excluir
o xon especfico de macho no mRNA. A mensagem resultante codifica um peptdio truncado e no-funcional, visto que o xon especfico de macho contm um cdon de terminao
da traduo. (Segundo Keyes et al. 1992.)
RNA tais como quelas em snRNPs. Bell e colegas (1988) propuseram que existem dois
alvos para a protena ligante de RNA codificada pelo Sxl. Um desses alvos o prmRNA do prprio Sxl. Isso seria o mecanismo que manteria o estado feminino da
trajetria aps a ocorrncia do evento ativador inicial. O segundo alvo seria o prmRNA do prximo gene da trajetria, transformer.
793
Os Genes transformer
O gene Sxl regula a determinao sexual somtica controlando o processamento do
transcrito do gene transformer. Como vimos no Captulo 12, o gene transformer (tra)
emendado alternadamente em machos e fmeas. Existe um mRNA especfico de
fmea e tambm um mRNA no-especfico encontrado tanto em fmeas como em
machos. Tal como a mensagem Sxl masculina, o mRNA tra contm um cdon de
terminao precoce na mensagem, tornando a protena no-funcional (Boggs et al.,
1987). Em tra, o segundo xon do mRNA no-especfico tem um cdon de terminao.
Esse xon no utilizado na mensagem especfica de fmea (veja Figura 20.18). Como
fmeas produzem um transcrito diferente dos machos? Acredita-se que a protena
especfica de fmea do gene Sxl ative um local de emenda 3 especfico de fmea no
pr-mRNA do transformer fazendo com que ele seja processado de uma maneira que
expele o segundo xon. Para isso, a protena Sxl bloqueia a ligao do fator de emenda
U2AF ao stio de emenda no-especfico, ligando-se especificamente ao trato de
polipirimidina adjacente. Isso leva o U2AF a se ligar ao local de emenda 3 de menor
afinidade (especfico de fmea) e gerar um mRNA especfico de fmea (Valcrcel et al.,
1993). A protena codificada por essa mensagem crtica para a determinao do sexo
feminino. Se o transcrito especfico de fmea for produzido artificialmente em moscas
XY, essas moscas se tornam fmeas. O transcrito no-especfico no tem efeito quer
em machos quer em fmeas (McKeown et al., 1988).
O produto de tra especfico de fmea age em conjunto com o gene transformer-2
(tra2) para ajudar a gerar o fentipo feminino. (O gene tra2 no necessrio para a
determinao do sexo masculino, embora seja necessrio mais tarde para a espermatognese.) O gene tra2 constitutivamente ativo e produz o mesmo produto protico
em machos e fmeas. Essa protena TRA-2, tal como a protena especfica de fmea Sxl,
contm um domnio ligante de RNA (Amrein et al., 1988; Goralski et al., 1988). Propese que o gene tra2 pode se ligar ao transcrito do gene doublesex, mas somente na
presena da protena Tra especfica de fmea (Baker, 1989).
Figura 20.18
doublesex
doublesex:: O Gene Comutador da Determinao Sexual
O gene doublesex ativo tanto em machos como fmeas, mas seu transcrito primrio processado de uma maneira especfica do sexo (veja Figura 12.9; Baker et al.,
1987). Os transcritos masculino e feminino so idnticos atravs dos trs primeiros
xons. Os xons 3 diferem marcadamente. O que um xon para os transcritos especficos de fmea parte do terminal 3 no-traduzido da mensagem especfica de macho. Alm disso, anlises moleculares das mutaes dsx dominantes revelam que elas
mRNA feminino
Emenda
especfica
de fmea
Pr-mRNA
O padro de emenda do RNA especfico do

sexo em trs principais genes determinantes
do sexo em Drosophila. Os pr-mRNAs esto localizados no centro do diagrama e so
idnticos nos ncleos masculinos e femininos. Em cada caso, o transcrito especfico de
fmea mostrado esquerda, enquanto o
transcrito revelia (seja masculino ou noespecfico) mostrado direita. xons esto
numerados, e as posies dos cdons terminais e stios poli(A) esto marcados. (Segundo Baker, 1989.)
Emenda
revelia
mRNA masculino
ou no-especfico
Sex-lethal
AAA
Cdon de parada
Transformer
AAA
Cdon de parada
Doublesex
AAA
794
contm inseres no xon especfico de fmea. Se existir um alelo dsx dominante em

um indivduo XX, a mosca se torna um macho.
O processamento alternativo de RNA parece ser o resultado dos genes transformer
(veja Figura 20.18). As protenas Tra2 e as protenas especficas de fmea Tra1
ligam-se especificamente uma seqncia de DNA adjacente ao local de emenda 3
especfica de fmea do pr-RNA dsx, e recruta fatores de emenda no-especficos
para esse stio (Tian e Maniatis, 1993). Se tra no for produzido, o transcrito doublesex
emendado de uma maneira especfica de macho. O stio de emenda 3 a jusante
usado para produzir um transcrito especfico de macho. Esse codifica uma protena
ativa que inibe traos femininos e promove traos masculinos. Por outro lado, se o
gene trasnformer estiver produzindo sua protena ativa especfica de fmea d-se
um tipo diferente de processamento (Ryner e Bruce, 1991). As protenas Transformer
se ligam seqncia no interior do xon especfico de fmea e ativam o stio de
emenda 3 especfico de fmea. (A alternativa seria elas bloquearem o stio 3 especfico de macho). Essa ativao, de um outro modo no usada do stio de emenda 3
especfico de fmea, produz um mRNA codificando uma protena especfica de fmea que ativa genes especficos de fmea (como aqueles das protenas do vitelo) e
inibe o desenvolvimento masculino.
As funes das protenas Doublesex podem ser observadas na formao da
genitlia de Drosophila. Aqui, tanto genitlia masculina como feminina derivam de
populaes celulares diferentes. Em moscas masculinas (XY), o primrdio feminino
reprimido e o masculino se diferencia em estruturas genitais adultas. Em moscas
femininas (XX), o primrdio masculino reprimido, e o feminino se diferencia. Se o
gene doublesex estiver ausente (e a nenhum transcrito ser produzido), ambos
primrdios, masculino e feminino, se desenvolvem e sero produzidas genitlias
intersexuais. Assim, um dos papis dos transcritos doublesex especficos do sexo
o de inibir ativamente o crescimento da genitlia inapropriada. Transcritos dsx masculinos inibem o desenvolvimento da fmea; transcritos dsx especficos de fmea
inibem o desenvolvimento masculino (Nthiger et al., 1977; Schpbach et al., 1978).
De acordo com esse modelo (Baker, 1989), a cascata da determinao sexual se reduz
a qual tipo de mRNA ser processado do transcrito doublesex. Se a razo X:A for 1,
ento Sxl produz um fator de emenda especfico de fmea que faz com que o transcrito do gene tra seja emendado de uma maneira especfica de fmea. Essa protena
especfica de fmea interage com o fator de emenda Tra2 para levar o pr-mRNA
doublesex a ser emendado de uma maneira especfica de fmea. Se o transcrito
doublesex no sofre tal atuao, ele ser processado revelia para produzir a mensagem especfica de macho.
Genes-alvo para a Cascata de Determinao Sexual
Muitas protenas esto presentes em um sexo de Drosophila e no no outro. Em
fmeas, essas incluem as protenas do vitelo e as da casca do ovo (crio). Em machos, as cristas sexuais das patas so estruturas especficas do sexo. Coschigano e
Wensink (1993) mostraram que tanto os transcritos doublesex masculinos como os
femininos se ligam a trs stios no interior do intensificador de 127 pares de bases
dos genes yolk protein (protenas do vitelo). Seus estudos de ligao e mutagnese
demonstram que o produto Doublesex especfico de macho inibe a transcrio ligando-se a esses stios, enquanto a protena Doublesex especfica de fmea ativa a
transcrio gnica a partir dos mesmos stios. Alm disso, a protena Doublesex
masculina pode tambm exercer um papel positivo na promoo da diferenciao
das cristas sexuais masculinas (Jursnich e Burtis, 1993).
Mutaes termosensveis dos genes determinantes do sexo podem capacitar pesquisadores a determinarem os momentos crticos em que certos genes-alvo esto
sensveis a uma comutao determinante do sexo. Quando alelos sensveis temperatura (ts) do gene tra2 foram usados, as vias de desenvolvimento sexual em Drosophila
795
mostraram-se ativas desde os estgios larvais tardios at o perodo adulto. O gene

tra2ts um alelo sensvel temperatura no qual o fentipo feminino expresso em
temperaturas permissivas (mais frias) e o fentipo masculino em temperaturas nopermissivas (mais quentes). Durante estgios tardio larval e de pupa, o aumento da
temperatura de nveis permissivos para no-permissivos faz com que uma larva ou
pupa XX se desenvolva em macho. Alm disso, quando mutantes adultos so conservados a temperaturas baixas, o corpo gorduroso adulto produz protenas do vitelo
(yolk proteins) que iro penetrar no ocito. Quando movidos para temperatura mais
altas, no-permissivas, a transcrio dos genes yolk protein cessa (Belote et al.,
1985b). Um achado notvel foi que se moscas adultas XX tra2ts so conservadas em
temperatura no-permissiva durante vrios dias, elas comeam a exibir comportamento de cortejar masculino (Belote e Baker, 1987).
Hermafroditismo
Hermafroditismo no Nematide C. elegans
O nematide Caenorhabditis elegans tem usualmente dois tipos sexuais: hermafrodita e macho. A maioria dos indivduos dessa espcie so hermafrodticos,* tendo
tanto testculos como ovrios. Quando larvas, esses hermafroditas produzem espermatozide, que armazenado no trato genital do nematide (Figura 20.19). O ovrio
adulto produz vulos que so fertilizados quando migram para o tero. (O espermatozide j est presente no hermafrodita adulto.) A autofertilizao quase sempre produz
mais hermafroditas. Somente 0.2 porcento da prognie so machos. Esses, porm,
podem copular com hermafroditas; como seu espermatozide tem uma vantagem competitiva sobre o espermatozide hermafrodita endgeno, a razo sexual resultante de
tais unies de cerca 50% hermafroditas e 50% machos (Hodgkin, 1985).
Em C. elegans, o hermafrodita XX, e o macho XO. Como em Drosophila, o sexo
determinado pela razo de cromossomos X para autossomos. Em espcies estreitamente relacionadas de nematides so encontradas fmeas XX, sugerindo que os
hermafroditas evoluram de fmeas. Somaticamente, as fmeas e os hermafroditas so
idnticos, a nica diferena sendo a produo de espermatozide durante o desenvolvimento precoce antes dos hermafroditas mudarem para a produo de vulos. Em C.
elegans existe uma mutao dominante (tra-1D) que transforma indivduos XX ou XO
*Hermafroditas receberam o nome em homenagem ao filho de Hermes (Mercrio) e Afrodite
(Vnus). Tendo herdado a beleza de ambos os pais, excitou o amor da ninfa da fonte de Salmacis.
Enquanto ele se banhava nessa fonte, ela o abraou, pedindo aos deuses que eles ficassem unidos para
sempre. Ela conseguiu seu desejo da forma mais literal possvel.
Hermafrodita: XX
Ovrio
vulos no
tero
Espermatozide
na espermateca
Boca
Macho: XO
Ovrio
Ocitos
nus
rgo
copulatrio
Vulva
Figura 20.19
Espermatozide Vasos
deferentes
Testculos
Cloaca
Diagramas esquemticos do macho e do hermafrodita de Caenorhabditis elegans, enfatizando seus sistemas reprodutivos. (de
Hodgkin, 1985.)
796
1.0
Baixo
Alto
Baixo
Alto
Baixo
Alto
Hermafrodita
Ratio
X:A
Alto
Baixo
Alto
Baixo
Alto
Baixo
Macho
Figura 20.20
Modelo esquemtico da determinao sexual

somtica em C. elegans. O gene sdc-1 postulado estar envolvido na transmisso da razo
X/A. Ele controla compensao de dosagem
do cromossomo X assim como a supresso do
gene her-1 se a razo for 1. A designao alto/
baixo reflete a atividade funcional do gene. A
atividade dos genes sdc, ao final, leva atividade do gene tra-1, cuja atividade promove o
fentipo hermafrodita. Os genes scd podem
ser inibidos pelo gene xol, que somente ativo
em XO (machos). (Segundo Hodgkin, 1985;
Miller et al., 1988.)
em fmeas frteis. Em colnias com tal alelo, trs sexos so possveis e funcionais
(Hodgkin, 1980).
Como em Drosophila, a determinao do sexo em C. elegans envolve vrios genes
autossmicos que lem e respondem razo X:A. O gene que integra os numeradores
e denominadores do desenvolvimento de C. elegans o xol-1 (XO-lethal). Nveis
altos de XOL-1 durante a gastrulao desligam a trajetria para o desenvolvimento
hermafrodtico, transformando com isso o animal em um macho (Rhind et al., 1995).
XOL-1 parece conseguir isso reprimindo os genes sdc (controle da determinao do
sexo), cujas atividade tornam o animal hermafrodita (Miller et al., 1988).
A trajetria para determinao do sexo em C. elegans foi decifrada encontrando-se
mutaes em genes necessrios para o desenvolvimento hermafrodita (os genes tra),
bem como outros necessrios para a expresso do fentipo masculino (os genes her
e fem). Criando gentipos carreando diferentes combinaes dessas mutaes Hodgkin
(1980) e outros foram capazes de construir um modelo para essa via desenvolvimental
(Figura 20.20). Por exemplo, mutaes tra-2 suprimiram a mutao her-1, indicando
que her-1 mais tardio na trajetria.
O gene crucial na trajetria para a determinao sexual parece ser o tra-1. Se o
tipo selvagem tra-1 for ativo, o indivduo um hermafrodita. Se esse gene no for
funcional, o indivduo um macho. Os outros genes parecem regular esse gene
singular de troca.
Porm, o que tem essa via gentica linear a ver com os reais eventos celulares
levando determinao sexual? Estudos recentes indicam que alguns desses genes
codificam protenas de uma via sinalizadora entre clulas. A anlise de mosaicos
genticos sugere que sdc-1 e her-1 no so necessariamente ativos nas clulas
que os produzem. Ao contrrio, esses genes parecem produzir produtos secretados. Em contraste, tra-1 age de um modo celular autnomo e, portanto, provavelmente parte de um aparelho receptor de sinais. A seqncia do gene tra-1 sugere
que esse codifica um fator de transcrio dedo de zinco (Hunter e Wood, 1990;
Zarkower e Hodgkin, 1992; Perry et al., 1993). Kuwabara e Kimble (1992) propuseram recentemente um modelo que integra essa via gentica com a biologia celular
da determinao do sexo. A protena HER-1 considerada promover o desenvolvimento masculino em nematides XO inibindo a TRA-2. A protena codificada por
tra-2, porm, no um fator de transcrio ou um fator de emenda, mas sim uma
protena integral de membrana com mltiplos domnios transmembrana. Alm disso, seu mRNA encontrado (em quantidade diferentes) tanto em machos como em
fmeas. De acordo com esse modelo especulativo (Figura 20.21), as protenas
FEM se combinam para criar um grande complexo de protena FEM, e esse complexo est ligado pela protena TRA-2 da membrana. Em indivduos XX, esse complexo ligado membrana, e a protena TRA-1 pode entrar no ncleo. Em nematides
XO, porm, a protena HER-1 se liga regio extracelular da protena TRA-2,
causando a liberao do complexo FEM. Esse complexo, uma vez livre no citoplasma, pode ligar a protena TRA-1 e impedir sua entrada no ncleo. Desde que a
Hermafroditas XX
Machos XO
797
Figura 20.21
Esquema hipottico para as aes dos genes

determinantes do sexo em C. elegans. Em indivduos XX, as protenas FEM esto seqestradas prximo da membrana celular pelos produtos dos genes tra-2. Na ausncia das protenas FEM, a protena TRA-1 penetra no ncleo
para transcrever os genes necessrios para o
desenvolvimento hermafrodtico. Em indivduos XO, a protena HER-1 se liga ao produto
de TRA-2, levando-o a liberar as protenas
FEM. Uma vez livres no citoplasma, essas protenas podem se ligar ao produto de TRA-1,
impedindo-o de penetrar no ncleo. (Segundo
Kuwabara e Kimble, 1992.)
Citoplasma
Ncleo
protena TRA-1 (um fator de transcrio putativo) no pode entrar no ncleo, ela
no poder ativar os genes especficos do hermafrodita. Mais estudos tero que
ser realizados para confirmar ou desaprovar esse modelo que, no entanto, til
por sugerir novas pesquisas e por visualizar como os genes poderiam gerar vias
para a determinao sexual em C. elegans.
Um dos problemas mais interessantes desse nematide seu hermafroditismo.
Como se originou essa condio em um organismo que provavelmente tinha um sistema sexual macho/fmea? Quais mudanas genticas apareceram, e haveria outras
solues que poderiam ter prevalecido? Os genes determinantes do sexo de uma
espcie estreitamente relacionada, a C. ramanei (com indivduos macho e fmea)
esto sendo agora identificados para se poder responder a essas perguntas. [sex7.html]
Hermafroditismo em Peixes
Embora o hermafroditismo no seja incomum em vermes e insetos, s visto raramente em vertebrados. Em aves e mamferos, o hermafroditismo geralmente uma condio patolgica causando infertilidade. Os hermafroditas vertebrados mais comuns
so peixes, que exibem vrios tipos de hermafroditismo (Yamamoto, 1969). Alguns
peixes, porm, so gonocorsticos; isso , eles tm um sexo determinado cromossomicamente como macho ou fmea. Peixes hermafroditas podem ser divididos em trs
grupos. Os primeiros so os hermafroditas sincrnicos, nos quais ovrios e tecidos
testiculares existem ao mesmo tempo e nos quais tanto espermatozide como vulos
so produzidos. Uma dessas espcies Servanus scriba. Na natureza e em aqurios,
esses peixes formam pares procriadores. Assim que um dos peixes pe seus ovos, o
outro peixe os fertiliza. Em seguida os peixes invertem seus papis, e o peixe que havia
sido macho pe seus ovos para que possam ser fertilizados pelo espermatozide de
seu parceiro (Clark, 1959).
Em outras espcies hermafroditas, um indivduo passa por uma mudana sexual
geneticamente programada durante seu desenvolvimento. Nesses caso, as gnadas
so dimrficas, tendo tanto reas femininas como masculinas. Uma ou outra predomina durante certa fase da vida. Em hermafroditas protginos (fmea primeiro), o
animal comea sua vida como uma fmea para mais tarde tornar-se um macho. O
reverso acontece em espcies protndreas (machos primeiro). A Figura 20.22
798
Figura 20.22
Alteraes nas gnadas no peixe hermafrodita

Sparus auratus, mostradas em seo atravs
da gnada de (A) a fase masculina, (B) a fase
transitria e (C) a fase feminina final. (Cortesia
da famlia de T. Yamamoto.)
(A)
FASE MASCULINA
(B)
FASE TRANSITRIA
(C)
FASE FEMININA
Ovrio
Ovrio
Ovrio
Testculo
Testculo
Testculo
mostra as mudanas gondicas no peixe hermafrodita protndreo Sparus auratus. A

princpio predomina o tecido testicular, mas aps um perodo de transio no qual so
vistos tanto tecidos testiculares como ovarianos, as clulas ovarianas predominam.
Determinao ambiental do sexo

emperatura em Rpteis
xual Dependente de T
Determinao Se
Temperatura
Sexual
Enquanto o sexo da maioria das serpentes e lagartos determinado pelos cromossomos sexuais no momento da fecundao, o sexo da maioria das tartarugas e todas as
espcies de crocodilos determinado pelo ambiente aps a fecundao. Nesses rpteis, a temperatura dos ovos durante um certo perodo do desenvolvimento o fator
decisivo na determinao do sexo (Bull, 1980), e pequenas alteraes na temperatura
podem causar mudanas dramticas na razo sexual. Em geral, ovos incubados baixa
temperatura (22o 27oC ) produzem um sexo, enquanto ovos incubados a temperaturas
mais altas (30oC e acima) produzem o outro. H somente um pequeno intervalo de
temperatura que permite tanto machos como fmeas emergir de um mesmo choco de
ovos. A Figura 20.23 mostra mudana abrupta causada por mudana de temperatura
nas razes sexuais para certas espcies de tartarugas. Se os ovos forem incubados
abaixo de 28oC, todas as tartarugas sero machos. Acima de 32oC cada ovo origina uma
fmea. Em temperaturas intermedirias daro origem a indivduos de ambos os sexos.
Existem variaes disso. Os ovos das tartarugas mordedoras (snapping turtles), por
exemplo, sero fmeas no frio (20oC ou abaixo) ou no calor (30oC ou acima). Entre esses
extremos, predominam os machos.
Um dos rpteis melhor estudados a tartaruga europia de lagoas, Emys obicularis.
No laboratrio, a incubao de ovos de Emys temperaturas acima de 30oC produz
fmeas, enquanto abaixo de 25oC as crias sero todas masculinas. A temperatura limite
(na qual a razo sexual 1) de 28.5oC (Pieau et al., 1994). O perodo desenvolvimental
durante o qual ocorre a determinao sexual, pode ser estudado incubando ovos na
temperatura produtora de machos por um certo perodo, e em seguida mudando os
ovos para uma incubadora temperatura produtora de fmeas (e vice-versa). Em
Emys, a ltima tera parte do desenvolvimento parece ser o perodo mais crtico para a
determinao sexual. No se acredita que as tartarugas possam reverter seu sexo aps
esse perodo.
Os caminhos para a masculinidade e feminilidade esto apenas sendo delineados.
O estrgeno induz a diferenciao ovariana temperaturas masculinizantes, e o perodo sensvel para os efeitos do estrgeno coincide com quele em que a determinao
(B) Tartarugas
Todos machos
Agama
agama
Eublepharis
macularius
Todas fmeas
Porcentagem de nascimentos masculinos
Porcentagem de nascimentos masculinos
(A) Lagartos
799
Graptemys (3 espcies)
Chrysemys picta
Todos machos
Emys obicularis
Testudo
graeca
Caretta
caretta
Todas fmeas
Figura 20.23
Relao entre a razo sexual e a temperatura de incubao em rpteis. (A) Duas espcies de
lagartos nas quais temperaturas mais altas resultam na gerao de prole masculina. (B) Sete
espcies de tartarugas nas quais temperaturas mais altas resultam em prole feminina. (Segundo
Bull, 1980.)
do sexo normalmente ocorre (Bull et al., 1988; Gutzke e Chymiy, 1988). Parece que a
enzima aromatase (que pode converter testosterona em estrgeno) importante. A
atividade da aromatase de Emys muito baixa temperatura masculina de 25oC.
temperatura feminina de 30oC, a atividade da aromatase aumenta dramaticamente
durante o perodo crtico para a determinao do sexo (Desvages et al., 1993; Pieau et
al., 1994). Atividade dependente de temperatura de aromatase tambm vista em
terrapneos (tartarugas-diamondback terrapins), e sua inibio masculiniza suas
gnadas (Jeyasuria et al., 1994). possvel que o regulador da atividade da aromatase
seja o hormnio anti-Mlleriano. AMH conhecido por diminuir a atividade da aromatase em gnadas de Emys (Desvages e Pieau, 1992).
Ferguson e Joanen (1982) estudaram a determinao sexual no jacar do Mississipi,
tanto no laboratrio como no campo; eles concluram que o sexo determinado entre
7 e 21 dias de incubao. Ovos criados a 30oC ou abaixo produzem fmeas, enquanto
aqueles incubados a 34oC ou acima produzem somente machos. Alm disso, ninhos
construdos sobre barragens (perto de 34oC) produzem machos, enquanto aqueles
construdos em pntanos midos (perto de 300C) produzem fmeas. As vantagens e
desvantagens da determinao sexual dependente de temperatura so discutidas no
Captulo 21.
Determinao Sexual Dependente da Localizao
em Bonellia viridis e Crepidula fornicata
O sexo do verme equiuride Bonellia depende de onde a larva se aloja. Bonellia
fmea marinha, habita rochas, tem um corpo de cerca de 10 cm (Figura 20.24), Tem,
porm, uma probscide que pode se estender por mais de um metro. Essa probscide
tem duas funes. Em primeiro lugar, varrer comida das rochas para o trato digestivo
da fmea. Em segundo lugar, se uma larva aterrissar na probscide, essa entra na boca
do animal, migra at o tero, e se diferencia em macho simbitico de 1-3 mm de comprimento. Assim, quando uma larva se aloja numa superfcie rochosa, torna-se uma fmea, mas se a mesma larva se aloja sobre a probscide de uma fmea, se torna um
macho. O macho de Bonellia passa sua vida no interior do corpo da fmea, fecundando seus ovos.
Baltzer (1914) demonstrou que quando larvas eram cultivadas na ausncia de
fmeas adultas, cerca de 90 porcento se tornavam fmeas. Porm, quando essas larvas
Probscide
(A)
(B)
Figura 20.24
Dimorfismo sexual extremo em Bonellia viridis.

(A) Fmea, de cerca de 10 cm, com uma
probscide capaz de se estender por mais de
um metro. (B) Macho simbitico (muito aumentado comparado com a fmea), 1-3 mm de
comprimento. (Segundo Barnes, 1968.)
gua do mar pura

gua do mar
e fragmentos de probscide
Porcentagem
800
Indiferentes
Figura 20.25
Anlise in vitro da diferenciao de Bonellia. Larvas foram colocadas em gua do mar normal ou
em gua do mar contendo fragmentos de probscide feminina. A maioria dos animais cultivados
na presena dos fragmentos de probscide tornaram-se machos, enquanto normalmente se tornariam fmeas. (Segundo Leutert, 1974.)
eram cultivadas na presena de uma fmea adulta ou de sua probscide isolada, 70

porcento aderiam probscide e desenvolviam estruturas masculinas. Esses resultados foram mais recentemente confirmados por Leutert (1974; Figura 20.25).
A(s) molcula(s) responsvel pela masculinizao das larvas podem ser extradas
da probscide de fmeas adultas. Quando larvas so cultivadas em gua do mar
normal, na ausncia de fmeas adultas, a maioria se torna fmea. Quando cultivadas
em gua do mar contendo extratos aquosos de tecido da probscide, a maioria adquire
forma de macho ou intermediria, nem totalmente masculina nem feminina (Nowinski,
1934; Agius, 1979). O composto ou compostos que atraem a larva para a probscide e
causam sua masculinizao esto sendo purificados.
Outro exemplo em que a determinao sexual afetada pela posio do organismo
o caso do caramujo escorregador Crepidula fornicata. Aqui, indivduos se empilham
uns em cima dos outros para formar um montculo (Figura 20.25). Indivduos jovens
so sempre machos. Essa fase seguida pela degenerao do sistema reprodutivo
masculino e um perodo de labilidade. A prxima fase pode ser masculina ou feminina,
dependendo da posio do animal no montculo. Se a lesma est fixada uma fmea,
torna-se macho. Se tal lesma for removida da fixao, torna-se fmea. Da mesma maneira, a presena de um grande nmero de machos ir fazer com que alguns dos machos
se tornem fmeas. Porm, uma vez que o indivduo se torna fmea, no ir reverter para
macho (Coe, 1936).
Resumo
A Natureza forneceu muitas variaes em sua obra prima. Em algumas espcies, o sexo
determinado somente por cromossomos, enquanto em outras, sexo uma questo
de condies ambientais. Entre essas grandes categorias, existem numerosas variaes. Um catlogo completo dos mecanismos de determinao sexual conhecidos iria
requerer um volume em separado (e muito interessante).
Figura 20.26
Morto
Agregados de lesmas Crepidula. Dois indivduos esto mudando de machos para fmeas.
Aps esses moluscos se tornarem fmeas, sero fecundados pelo macho acima deles. (Segundo Coe, 1936.)
801
LITERATURA CITADA
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Regulao ambiental do
desenvolvimento animal
Podemos agora passar a considerar adaptaes para o ambiente externo; e inicialmente

as adaptaes diretas.... nas quais um animal, durante seu desenvolvimento, modificado por fatores externos de tal maneira
que h um aumento da eficincia com que
esses fatores so tratados.
C. H. WADDINGTON (1957)
21
A PRIMEIRA METADE do sculo 19, biologia era o estudo do organis-
mo em relao s suas condies de existncia, e a investigao do organismo vivo era geralmente realizada em seu habitat original. Somente ao
redor de 1850, que a fisiologia emergiu como uma tentativa de quantificar o fenmeno biolgico no laboratrio. A embriologia permaneceu dentro do reino da biologia,
enquanto a fisiologia investigava as estruturas e funes dos organismos adultos
independentemente dos seus ambientes originais (Nyhart, 1995).
Dentro desse contexto biolgico, a embriologia foi vista como o motor da mudana evolucionria, e o desenvolvimento como sendo condicionado pelo ambiente.
Por exemplo, Augusto Weismann (1875) verificou que borboletas da mesma espcie
eclodindo em estaes diferentes podiam apresentar cores diferentes, e ele podia
transformar a forma do vero na forma da primavera, resfriando as pupas. Carl Siebold
mostrou que alguns afdios partenogenticos podiam dar origem a machos e fmeas
sexuadas tardiamente na poca de reproduo para produzir um ovo que hibernava (e
que invariavelmente eclodia como uma fmea partenogentica), e vrios pesquisadores estudaram a determinao sexual pelo ambiente na Bonellia e em colmias de
insetos (veja Hertwig, 1894). A primeira gerao de embriologistas experimentais
estudou os efeitos do ambiente sobre o desenvolvimento, incluindo o efeito de falta
de ons ou de nutrientes na determinao do sexo e na morfognese (Selenka 1876;
Born, 1881; Herbst, 1893). (Os estudos de Born mostrando que o sexo de embries de
rs podia ser alterado por fatores ambientais foi mostrado com proeminncia no filme
Jurassic Park.)
Mas a mar estava mudando. Nas dcadas de 1870 e de 1880, jovens zoologistas
se afastavam dessas questes biolgicas em direo s questes de fisiologia
interna e anatomia. Embriologistas mais velhos, como Carl Siebold e Ernst Haecke,
que desenvolveram seus trabalhos em um contexto evolucionrio ou ambiental, se
desesperavam porque a prxima gerao de zoologistas cientficos somente conheceria cortes seccionais e tecidos corados, mas nem o animal inteiro e nem seu
modo de vida (Haeckel, 1881). Eles estavam atnitos pela falta de interesse dos
805
806
jovens pesquisadores em estudar o embrio vivo no seu habitat natural.* Siebold

justificou esses excessos observando que a presso para publicar exercida sobre os
jovens cientistas os forava a realizar pesquisa que podia ser feita em poucos meses, em lugar das que ele realizava e que levavam anos para serem completadas
(Nyhart, 1995). Quando Wilhelm Roux tentou unir a embriologia experimental
com a fisiologia, ele postulou que o desenvolvimento era causado por fatores internos, especialmente aqueles dentro do ncleo. A embriologia experimental se afastou das explicaes ambientais e se concentrou naquelas foras dentro do ovo fertilizado que permitem o desenvolvimento do embrio. Essa tem sido a direo geral da biologia do desenvolvimento.
Agora, com o novo interesse na relao entre desenvolvimento e evoluo, com a
surpreendente perda de diversidade nos organismos e os efeitos dos poluentes
ambientais, existe uma renovada preocupao com a regulao do desenvolvimento
pelo ambiente (veja Weele, 1995). Algumas pessoas esto convencidas de que o
DNA fornece o programa que controla o desenvolvimento do embrio (Wolpert,
1991) ou que tudo que necessrio para formar o embrio est dentro do ovo fertilizado. Entretanto, existem numerosos exemplos (e o Homo sapiens fornece os melhores)
onde o ambiente tem um papel crtico na determinao do fentipo do organismo. Ns
j discutimos a regulao ambiental do desenvolvimento quando estudamos a determinao do sexo em Bonellia, Crepidula e muitos rpteis (veja Captulo 20). Naturalmente, a habilidade gentica para responder a tais fatores ambientais deve ser herdada, mas nesses casos o ambiente que pode dar os diferentes fentipos a partir do
mesmo gentipo nuclear.
Q REGULAO AMBIENTAL DO
DESENVOLVIMENTO NORMAL
Sugestes ambientais usadas pelos organismos

para completar seus desenvolvimentos
Certas sugestes ambientais, tais como um campo gravitacional de 1G ou um oceano
salino a 0.85%, podem ser utilizados durante o desenvolvimento. Portanto, no
surpreendente que muitos ovos usam a gravidade como a fora que assegura a polaridade de seus ocitos, e a perturbao da gravidade pode desregular o desenvolvimento em rs e aves (Pflger, 1883; Born, 1884). Analogamente, vimos no Captulo
4 que ocitos de ourio-do-mar (e sem dvida os ocitos de muitas outras espcies)
usam ons de sdio da gua do mar para substituir os ons de hidrognio e ajudar a
ativar o ovo (Jaffe, 1980). Embries de mamferos esto intimamente ligados ao seu
alimento, oxignio e fontes inicas durante seu inteiro desenvolvimento pr-natal.
Nesses casos, as sugestes para o desenvolvimento normal no esto no ocito, mas
assume-se que esto presentes no ambiente onde o ovo se desenvolve.
A colonizao larval
A incluso de sugestes ambientais no desenvolvimento normal ocorrem durante a
colonizao de larvas marinhas. Aqui, as sugestes podem no ser universais, mas
devem ser parte do ambiente se o desenvolvimento deve prosseguir. Uma larva
planctnica freqentemente necessita se estabelecer prximo a uma fonte de alimento ou a um substrato firme no qual sofre a metamorfose. Se a presa ou as ncoras
fornecem molculas solveis, essas molculas podem ser usadas pelas larvas como
* Essas preocupaes e a retrica que as expressa so extraordinariamente similares quelas dos
embriologistas mais velhos de hoje que se desesperam porque os pesquisadores mais jovens so somente
clonadores de genes sem conhecimentos sobre a estrutura total dos embries (veja Nyhart, 1995).
CAPTULO 21
Regulao Ambiental do Desenvolvimento Animal
Tabela 21.1 Substratos especficos para a colonizao de larvas de moluscos

Espcies de moluscos
Substrato
GASTROPODA (caracis, nudibrnquios)

Nassarius obsoletus
Philippia radiata
Adalaria proxima
Doridella obscura
Phestila sibogae
Rostanga pulchra
Trinchesia aurantia
Elysia chlorotica
Haminoea solitaria
Aplysia californica
Aplysia juliana
Aplysia parvula
Stylocheilus longicauda
Onchidoris bilamellata
Lama do habitat do adulto

Porites lobata (um cnidrio)
Electra pilosa (um briozorio)
Electra crustulenta (um briozorio)
Porites compressa (um cnidrio)
Ophlitaspongia pennata (uma esponja)
Tubularia indivisa (um cnidrio)
Filme primrio de microorganismos do habitat do adulto
Filme primrio de microorganismos do habitat do adulto
Laurencia pacifica (uma alga vermelha)
Ulva spp. (algas verdes).
Chondrococcus hornemanni (uma alga vermelha)
Lyngbya majuscula (uma cianobactria)
Crustceos vivos
AMPHINEURA (CHITONS)
Tonicella lineata
Lithophyllum sp. e Lithothamnion sp. (algas vermelhas)
LAMELLIBRANCHIA (Bivalvos)
Teredo sp.
Bankia gouldi
Mercenaria mercenaria
Placopecten magellanicus
Mytilus edulis
Crassostrea virginica
Madeira
Madeira
Lquidos de moluscos; areia
Concha adulta; areia; etc.
Algas filamentosas; outro material no biolgico de seda
Lquido da concha; extrato do corpo; glicognio de crustceo
sugestes para iniciar sua colonizao. Nos moluscos, freqentemente existem sugestes muito especficas para a colonizao (Tabela 21.1). A maioria das larvas dos
nudibrnquios (lesma do mar) sofrem metamorfose somente se induzida por uma
presa adulta viva (que diferente de espcie a espcie). Em alguns casos, foi identificado o produto solvel da presa que dispara a metamorfose (Hadfield, 1977). A
larva do teredo (shipworm) Teredo navalis induzida a se estabelecer por compostos
liberados pela madeira, e material solvel eludo de conchas de ostras induzem a
colonizao das larvas de ostras.*
O haliote vermelho (abalone) Haliotis rufescens tem larvas que somente colonizam quando entram em contacto fsico com algas vermelhas coralinas. Somente um
contacto breve necessrio para que a larva competente pare de nadar e comece a
metamorfose. Ainda no foi isolado o agente qumico responsvel por essa modificao, mas o reconhecimento de um peptdeo de algas induz a metamorfose em larvas
competentes. As larvas que no so competentes para a induo da metamorfose
parecem no ter esse receptor. Considera-se que esse receptor esteja ligado a uma
* Em 1880, William Keith Brooks, um embriologista na Universidade de Johns Hopkins (e supervisor
da tese de T. H. Morgan, E. B. Wilson, R.G. Harrison e E. G. Conklin), foi solicitado a ajudar a
problemtica indstria de ostras de Chesapeake Bay. Durante dcadas, as ostras foram dragadas da baa,
e sempre havia uma nova colheita em seu lugar. Mas, recentemente, a produo estava caindo ano a ano.
O que seria responsvel por esse declnio? Realizando experimentos com larvas de ostras, Brooks
descobriu que a ostra Americana (diferentemente de sua prima Europia- melhor conhecida) necessitava
de um substrato rgido no qual sofriam metamorfose. Durante anos, os pescadores de ostras jogavam as
conchas de volta para o mar, mas com o advento das caladas suburbanas, os pescadores estavam
vendendo as conchas para as fbricas de cimento. A soluo de Brooks: jogar as conchas de volta na baa.
A populao de ostras respondeu: o cais de Baltimore at hoje vende seus descendentes.
807
808
protena G semelhante quelas encontradas em vertebrados, e a ativao dessa protena G pode ser necessria para a induo da colonizao larval e a metamorfose
(Morse et al., 1984; Baxter e Morse, 1992; Degnan e Morse, 1995).
O alimento no a nica sugesto usada na colonizao larval. A larva da mosca
preta, por exemplo, se adere a superfcies duras nos rios e se alimenta passivamente
das partculas suspensas no fluxo. Essas larvas procuram ativamente reas com correntes de alta velocidade. Nessa zona de alta velocidade as larvas so relativamente
imunes aos ataques dos platelmintos. Em experimentos de laboratrio (Hansen et al.,
1991), platelmintos no podiam capturar larvas da mosca preta em fluxos mais rpidos
que 35 cm/segundo. A razo disso que os platelmintos ingerem sua presa elevando
a cabea para fora da superfcie. Isso expe sua superfcie frontal ao fluxo e reduz a
rea da superfcie de aderncia ao substrato. Portanto, em correnteza de alta velocidade, os platelmintos correm o risco de serem levados rio abaixo se eles tentam se
alimentar. Dessa maneira, as moscas pretas sobrevivem, sofrem metamorfose e dificultam a vida dos prximos acampados.
Refeies de sangue
Em muitos mosquitos, a produo de ovos induzida por uma refeio sangnea.
(Na Drosophila a sugesto ambiental para a produo de ovos parece ser o
fotoperodo.) Nos mosquitos, s a fmea pica e ela no produz vitelogenina antes
dessa refeio. No Aedes aegypti, os produtos digeridos do alimento sangneo
estimulam o crebro a secretar o hormnio neurosecretor para o desenvolvimento
do ovo (EDNH, tambm conhecido como hormnio ecdisteroidognico ovariano,
OEH). Esse estimula o ovrio a produzir ecdisterides, os quais instruem as clulas do corpo gorduroso a produzir vitelogenina para os ocitos (Fallon et al., 1974;
Hagedorn, 1983; Borovsk et al., 1990). A vitelogenina crtica para a produo de
ovos. Portanto, sem uma refeio sangnea, no h vitelogenina e nem ovos
(Figura 21.1).
No inseto sugador de sangue, Rhodinus prolixus, as fmeas adultas produzem
uma nova carga de ovos toda vez que sugam sangue. Esse alimento sangneo serve
a dois propsitos. As protenas do sangue fornecem os aminocidos necessrios para
a sntese de vitelogenina, e o estiramento fsico do abdmen pelo sangue inicia o
estmulo endcrino que ativa a secreo do hormnio juvenil pela corpora allata. O
hormnio juvenil estimula a sntese de vitelogenina no ovrio e no corpo gorduroso
(veja Nijhout, 1994). Alm disso, o estiramento causado por uma nica refeio
sangnea induz a muda larval. Se esse inseto se alimentar com vrias pequenas
refeies, ele sobreviver, mas no sofrer muda e nem crescer. Nessa situao,
mamferos so usados em parte do desenvolvimento de insetos.
Simbiose no desenvolvimento
Em alguns dos exemplos acima, o desenvolvimento de um indivduo possvel
pela presena de outro indivduo de uma espcie diferente. Em alguns organismos,
essa relao se tornou simbitica (Sapp, 1994). Aqui, os simbiontes esto fortemente integrados ao organismo hospedeiro, e esse no pode se desenvolver sem
eles. A lula adulta Euprymna scolopes est equipada com um rgo de luz composto de sacos contendo a bactria luminosa Vibrio fischeri. A lula juvenil no tem
esses simbiontes emitentes de luz e nem as estruturas para abrig-los. Na verdade,
a lula adquire a bactria atravs da gua do mar bombeada atravs da cavidade de
sua cobertura. As bactrias se ligam a um epitlio ciliado que se estende nessa
cavidade. As bactrias induzem a morte dessas clulas, sua substituio por um
epitlio no ciliado e a diferenciao das clulas epiteliais vizinhas para se tornar
receptculos de armazenagem das bactrias (Figura 21.2; McFall-Ngai e Ruby,
1991; Montgomery e McFall-Ngai, 1995).
CAPTULO 21
Emergncia
EDNH
Acasalamento e
comportamento alimentar
JH
Ovrio
imaturo
Competncia
Diagrama de fluxo mostrando as interaes

que permitem a produo de ovos no mosquito Aedes aegypti. (De acordo com Hagedorn,
1983; Nijhout, 1994.)
Crebro
Corpora allata
809
Figura 21.1
Refeio de sangue
Crebro
Corpo
gorduroso
Competncia
crescimento
Vitelogenina
Ovrio no
estgio de repouso
Ovrio vitelognico
Corpo gorduroso
competente
Ovos e ovrio
ps-vitelognico
Ecdisterides
A simbiose entre massas de ovos e algas fotossintticas crtica para o desenvolvimento de certas espcies. O suprimento de oxignio limita a taxa de desenvolvimento quando os ovos esto agrupados em massas compactas, e o desenvolvimento dos
embries na parte interna do aglomerado retardado em comparao com aqueles
mais prximos da superfcie (Strathmann e Strathmann, 1995). Apesar do forte gradiente de oxignio partindo de fora do aglomerado para seu interior, os embries parecem
ter resolvido o problema envolvendo-se com uma fina camada de algas fotossintticas.
Em ninhadas de ovos de anfbios e caracis, fotossntese infratora das algas permite produo lquida de oxignio na luz, enquanto a respirao excede a fotossntese no
escuro (Bachmann et al., 1986; Pinder e Friet, 1994; Cohen e Strathmann, 1996). Portanto, as algas salvam os ovos pela fotossntese.
Uma ligao ainda mais intensa entre morfognese e simbiose verificada na
cigarrinha Euscelis incisus. Aqui, a simbiose ocorre dentro do ovo. Existem bactrias
simbiticas nessas espcies que esto dentro do citoplasma do ovo e que so
transferidas atravs de geraes, exatamente como as mitocndrias. Essas bactrias
se tornaram to especializadas que s podem se multiplicar dentro do citoplasma do
organismo, e o embrio do hospedeiro se tornou to dependente da bactria que lhe
Figura 21.2
(A)
(B)
Micrografia eletrnica de varredura do primrdio do rgo

de luz de uma lula juvenil E. scolopes de 3 dias. (A) rgo
de luz em um juvenil no infectado. (B) rgo de luz de um
juvenil infectado com a bactria simbitica V. fischeri. Regresso do epitlio bvia em (B). (De acordo com
Montgomery e McFall-Ngai, 1995; fotografias cortesia de
M. McFall-Ngai.)
810
Figura 21.3
Simbiontes microbianos so necessrios para

a formao do intestino da cigarrinha Euscelis
incisus. (A) Embrio controle com simbiontes tem formao normal do intestino. (B)
Embrio anormal com formao deficiente
do intestino quando antibiticos eliminaram
a maioria das bactrias do ovo. (De acordo
com Schwemmler, 1974; fotografias cortesia de W. Schwemmler.)
Trax
Cabea
Abdmen
0.1 mm
(A)
Cabea
Trax
Abdmen
0.1 mm
(B)
impossvel completar a embriognese sem ela. De fato, considera-se que os simbiontes

bacterianos so essenciais para a formao do intestino embrionrio. Se as bactrias
so removidas cirurgicamente ou metabolicamente (alimentando as larvas ou os adultos com antibiticos), elas podem ser eliminadas dos ovos em desenvolvimento. Esses ocitos livres de simbiontes se desenvolvem em embries que no tm o abdmen
(Figura 21.3; Sander, 1968; Schwemmler, 1974, 1989). O endossimbionte pode estar
secretando um fator que penetra no citoplasma do ovo.
Existe at uma simbiose desenvolvimental no intestino de mamferos. As bactrias colonizam o intestino desde o momento do nascimento, e a sucesso ecolgica
no intestino humano progride atravs de uma srie de colonizaes envolvendo
cerca de 400 espcies bacterianas. As clulas epiteliais do intestino de camundongos mantidos livres de germens, no sintetizam certos mRNAs que codificam determinadas enzimas de glicosilao (Bry et al., 1996). Entretanto, se uma determinada
cepa de bactrias comea a colonizar seus intestinos, esses micrbios induzem o
mRNA a se tornar expresso. [env1.html]
Diferenas ambientais previsveis

como sugestes para o desenvolvimento
x
olvo
xo: Afdios e V
Sazonalidade e se
olvox
Volvo
sex
Como j mencionado, vrias espcies de afdios partenogenticos tm um fascinante estilo de vida onde os ovos eclodidos do origem vrias geraes de fmeas
reproduzindo-se assexualmente. Entretanto, durante o outono produzido um determinado tipo de fmea, cujos ovos podem dar origem a machos e fmeas sexuadas.
Essas formas sexuadas se acasalam, e o ovo que se forma est apto a sobreviver o
inverno. Quando esse eclode, uma nova gerao de fmeas assexuadas produzida.
Um dos grandes mistrios desse tipo de partenognese foi resolvido em 1909 por
CAPTULO 21
Nmero de
cromossomos
Oognese completa
Ovo com 12
cromossomos
Ovo
Ovo
Me precursora
partenognico
hibernal
assexuada
Fema
capaz de
produzir
gerao
sexuada
Ovo haplide
Fmea
sexuada
Espermatognese
completa
Ovo com 10
cromossomos
Macho
sexuado
Figura 21.4
Mudanas cromossmicas durante o ciclo vital do afdio da famlia Phylloxeridal. O clima

do outono induz a produo de machos e fmeas, que se cruzam para produzir o ovo
hibernal.
Thomas Hunt Morgan (antes dele comear a trabalhar com a mosca da fruta). Morgan
analisou os cromossomos do afdio da nogueira (hickory) durante vrias geraes
(Figura 21.4). Ele encontrou que o nmero diplide das fmeas de afdios 12.
Durante a oognese, somente um corpo polar expelido do vulo em desenvolvimento, de modo que o nmero diplide de 12 retido. Esse ovo desenvolve-se
partenogeneticamente sem ser fertilizado. Nas fmeas que podem dar origem a ovos
que se tornam macho ou fmea, ocorre uma modificao dessa oognese. Nos ovos
produtores de fmeas, seis pares de cromossomos penetram no nico corpo polar.
Portanto, o nmero diplide de 12 retido. Nos ovos produtores de machos, entretanto, um par extra de cromossomos entra no corpo polar. O nmero diplide do
macho 10. Esses machos e fmeas so sexuados e tm divises meiticas completas. A fmea produz ocitos com um conjunto haplide de 6 cromossomos. Os
machos, entretanto, dividem os seus 10 cromossomos para produzir uma parte do
espermatozide com o nmero haplide de 4 cromossomos e a outra parte com o
nmero haplide de 6 cromossomos. O espermatozide com 4 cromossomos se
degenera. O espermatozide com 6 cromossomos fertiliza o ovo com esses para
restaurar o nmero diplide de cromossomos a 12. Quando o ovo eclode, aps o
inverno, uma fmea.
Isso resolveu uma charada. A outra, de como o clima do outono regula se a
fmea sexuada ou partenognica ou se o organismo alado ou ptero permanece
sem soluo. Da mesma maneira, no sabemos o que regula o ocito diplide a
produzir ovos dando machos ou fmeas. Alm disso, fatores ambientais so usados de maneiras diferentes pelas vrias espcies. A Figura 21.5 mostra um tipo de
ciclo vital encontrado em afdios. Nos afdios da nogueira e na Megoura viciae,
existe uma alternncia de geraes sexuadas e assexuadas. Em Megoura, a temperatura determina o sexo precocemente no desenvolvimento (temperaturas extremas favorecendo a produo de fmeas). No desenvolvimento da fmea, o
fotoperodo e a temperatura determinam se a fmea se reproduzir sexualmente ou
partenogeneticamente, e uma combinao de temperatura e densidade populacional
determinar se a fmea alada ou sem asas (Beck, 1980). possvel que o hormnio juvenil controle a troca partenogentica/sexual (adio de hormnio juvenil a
adultos produzindo descendentes sexuados os leva a ter descendentes partenogenticos) e inibe a formao de asas (Hardie, 1981; Hardie e Lees, 1985). Mas no
se sabe como as mudanas ambientais se transformam em ttulos de hormnio
juvenil ou como o clima de outono ou a luz solar causam o movimento diferencial
dos cromossomos para o corpo polar.
Cruzamento
Fertilizao
Degenerao
811
812
Figura 21.5
(A)
Efeitos ambientais no ciclo vital do afdio

Megoura viciae. (A) Alternncia de geraes
sexuadas e assexuadas, onde a gerao
sexuada produzida no outono. (B) Alternativas de desenvolvimento fornecidas por fatores ambientais no ciclo vital de Megoura.
(A de acordo com Nijhout, 1994; B de acordo com Beck, 1980.)
Primavera
Vero
Fmea
assexuada
sem asas
Fmea
assexuada alada
Macho
Ovo hibernal
Inverno
Outono
Fmea sexual
(B)
Aglomerao,
baixa temperatura
Dia longo,
alta temperatura
Temperatura
alta ou baixa
Isolamento,
alta temperatura
Dia curto,
temperatura mdia
Fmeas
assexuadas
aladas
Fmeas
assexuadas
sem asas
Fmea
sexuada
Temperatura
mdia
Macho
No Captulo 1, discutimos o ciclo vital do volvox e sua dependncia da temperatura. Aqui, tambm, a temperatura responsvel pela troca das formas assexuadas do
organismo pelas formas sexuadas. A fmea reproduzindo-se assexualmente d origem
a descendentes que produzem espermatozides ou vulos. O resultado dessa fertilizao o zigoto cuja camada externa pode proteg-lo da dessecao e do frio ao secar
a lagoa e chegada do inverno.
Diapausa
Muitas espcies de insetos desenvolveram uma estratgia chamada diapausa.
Diapausa a suspenso do desenvolvimento que pode ocorrer no estgio embrionrio, larval, pupal ou adulto, dependendo das espcies. Em algumas espcies, a
diapausa facultativa e ocorre somente quando induzida por condies ambientais;
em outras espcies, a diapausa se tornou uma parte obrigatria do ciclo vital. Essa
ltima freqentemente encontrada em insetos da zona temperada, onde a diapausa
induzida por mudanas no fotoperodo (a durao relativa dos dias e das noites).
O comprimento do dia onde 50% da populao entrou em diapausa chamado de
comprimento crtico do dia, e geralmente bastante repentino (Figura 21.6). Insetos
entrando na diapausa quando o comprimento do dia cai abaixo desse limite so
chamados de insetos de dia longo. Os insetos que se desenvolvem normalmente
quando existem somente algumas horas de luz solar e que entram em diapausa
quando expostos a dias mais longos so chamados de insetos de dia curto. O comprimento crtico do dia uma propriedade geneticamente determinada (Danilevskii,
1965; Tauber et al., 1986).
A diapausa no uma resposta fisiolgica desencadeada por condies drsticas.

Sem dvida, ela induzida por estmulos sinalizadores que so um pressgio de
mudana no ambiente, antes que as condies adversas realmente se instalem. A
diapausa especialmente importante para os insetos da zona temperada, permitindolhes sobreviver o inverno. Embries do bicho-da-seda Bombyx mori passam o inverno como embries, entrando na diapausa pouco antes da segmentao. A mariposa
cigana Lymantia dispar inicia sua diapausa como uma larva completamente formada,
pronta a eclodir assim que a diapausa termine. Outros insetos experimentam a diapausa
como ovos, pupas ou mesmo como adultos.
No bicho-da-seda Bombyx, a diapausa embrionria parece ser regulada pelo
hormnio da diapausa, um peptdeo de 24 aminocidos que produzido no gnglio
subesofagiano (Fukuda, 1952; Hasegawa, 1952). Esse hormnio age nos ocitos
em maturao no estgio pupal e leva interrupo do desenvolvimento, uma vez
que o embrio alcance 12.000 clulas (Kitazawa et al., 1963). A diapausa larval,
entretanto, parece ser controlada pela inibio de produo do PTTH (veja Captulo 19). Isso impede que a larva sofra uma muda e se transforme em pupa. Em
muitas borboletas, a inibio de PTTH devida a um ttulo elevado contnuo do
hormnio juvenil. Analogamente, a falta de secreo de PTTH e ecdisona uma
vez ocorrida a pupao, originar a diapausa nessa etapa do desenvolvimento.
Pupas em diapausa podem ser reativadas pela adio de 20-hidroxiecdisona.
Entretanto, em condies normais, o crebro de uma pupa em diapausa (tal como
a mariposa Hyalophora) ativado pela exposio ao clima frio durante certo
tempo. Pupas de mariposas conservadas em condies aquecidas permanecero
em diapausa at a morte (veja Nijhout, 1994). Os mecanismos pelo quais essas
modificaes na temperatura e no comprimento do dia regulam a produo
hormonal devem ainda ser elucidados. [env2.html]
Plasticidade fenotpica: Polifenismo e regras de reao

A habilidade de um indivduo em expressar um fentipo sob um conjunto de circunstncias e outro fentipo sob outro conjunto de condies ambientais chamada
plasticidade fenotpica. Existem dois tipos principais de plasticidade fenotpica:
polifenismo e regras de reao. Polifenismo se refere a fentipos descontnuos (um
ou outro) elicitados pelo ambiente. Gafanhotos migratrios, por exemplo, existem
em duas formas mutuamente exclusivas: a fase solitria de asas curtas e colorao
uniforme e a fase gregria de asas longas e cores brilhantes. O ambiente (principalmente a densidade populacional) determina qual morfologia assumir o jovem gafanhoto (veja Pener, 1991). Analogamente, as ninfas de gafanhotos de plantas podem
se desenvolver de duas maneiras, dependendo do seu ambiente. Alta densidade
populacional e certas comunidades de plantas levam a produo de insetos migratrios, onde o terceiro segmento torcico produz uma grande asa posterior. Densidade
populacional baixa e outras plantas alimentcias levam ao desenvolvimento de sugadores de plantas, no voadores, onde o terceiro segmento torcico se desenvolve em
uma asa vestigial semelhante a um haltere (Figura 21.7; Raatikainen, 1967; Denno et
al., 1985). A mudana sazonal da colorao do plo de animais rticos um outro
exemplo de polifenismo.*
Em certos casos, o genoma codifica uma variedade potencial de fentipos, e o
ambiente seleciona aquele fentipo que usualmente o mais adaptativo. Por exemplo, o trabalho intenso e constante pode fazer com que os msculos aumentem de
tamanho; mas existe um limite geneticamente definido que determina o quanto a
* Apesar do polifenismo sazonal ser geralmente considerado como adaptativo, existem certas
ocasies que no h aumento da aptido do organismo. Por exemplo, o fotoperodo pode fazer com
que o plo da lebre mude de marrom para branco, mas se no houver neve, a lebre ficara conspcua
em um segundo plano escuro.
porcentagem de indivduos entrando na diapausa
CAPTULO 21
813
Laspeyresia
molesta
Pieris
brassicae
Acronycta
rumicis
Leptinotarsa
decemlineata
Comprimento do dia (horas)
Figura 21.6
A resposta fotoperidica de insetos de dia longo, que so induzidos a entrar em diapausa

quando as horas de luz natural caem abaixo de
certo nvel. Cada uma das quatro espcies
aqui mostradas, (Laspeyresia molesta, Pieris
brassicae, Acronycta rumicis e Leptinotarsa
decemlineata) deixam a diapausa com luz
solar de 14-17 horas. (De acordo com
Danilevskii, 1965.)
814
Figura 21.7
Forma estacionria
Forma migratria
Diagrama composto mostrando as formas de asa curta (esquerda)

e de asa longa (direita) do gafanhoto de plantas Prokelisia marginata.
A forma de asa longa um excelente voador; a forma de asa curta
no voadora. (De acordo com Denno et al., 1985.)
hipertrofia possvel. Analogamente, o micro-habitat de uma salamandra jovem

pode causar sua mudana de cor (novamente, dentro de limites geneticamente
definidos). Essa variao contnua de fentipos expressos por um nico gentipo
atravs de uma srie de condies ambientais chamada de regra de reao
(Woltereck, 1909; Schmalhausen, 1949; Stearns et al., 1991). A regra de reao ,
portanto, uma propriedade do genoma e pode tambm ser selecionada. de se
esperar que diferentes gentipos sejam diferentes na direo e quantidade de
plasticidade que sero capazes de expressar (Gotthard e Nylin, 1995; Via et al.,
1995). A extenso pela qual regras de reao podem ser herdadas fornece a base
para a evoluo da plasticidade fenotpica.
Polifenismo sazonal em borboletas
Um exemplo dramtico de polifenismo ocorre na mariposa Nemoria arizonaria. Essa
mariposa tem um ciclo vital bastante tpico. Os ovos eclodem na primavera, e as
lagartas se alimentam das flores jovens do carvalho (amentos). Essas larvas sofrem
metamorfose no final da primavera, se acasalam no vero, e produzem outra prole de
lagartas nos carvalhos. Essas lagartas comem as folhas do carvalho, sofrem metamorfose e se acasalam. Seus ovos hibernam para novamente comear o ciclo na
prxima primavera. O que surpreendente que as lagartas que eclodem na primavera em nada se parecem com seus descendentes que eclodem no vero (Prancha18).
As lagartas que eclodem na primavera e se alimentam de amentos so castanhoamareladas, rugosas e pontilhadas parecendo um amento. Elas esto magnificamente
camufladas contra predadores. E as lagartas que eclodem no vero, quando os amentos
j no existem? Elas tambm esto bem camufladas parecendo ramos de carvalhos
de um ano de idade. Como isso controlado? Fazendo experimentos de alimentao
recproca, Greene (1989) conseguiu transformar as formas de primavera em formas
de vero, alimentando-as com folhas de carvalho. O experimento recproco no transformou as formas de vero em lagartas semelhantes aos amentos. Parece, portanto,
que a forma do amento o estado normal (default state) e alguma coisa induz a
morfologia semelhante aos ramos do carvalho. Essa substncia provavelmente um
tanino que concentrado nas folhas de carvalho durante sua maturao.
Outro exemplo de polifenismo sazonal a borboleta do mapa Europeu, Araschnia
levana, que tem dois fentipos to diferentes que foram classificados por Linnaeus
como duas espcies diferentes (Weele, 1995). A forma da primavera cor de laranja brilhante com manchas pretas, enquanto a forma do vero quase toda preta
com uma banda branca (Figura 21.8; Prancha 29). A mudana das formas da primavera para as do vero controlada tanto por mudanas no comprimento do dia
como da temperatura durante o perodo larval. Esses fatores regulam a liberao de
ecdisona, que inicia as ltimas mudas metamrficas (Shapiro, 1976; Koch e
Buchmann, 1987). Quando pupas em diapausa so injetadas com 20-hidroxiecdisona de modo a recomear o desenvolvimento dentro de 3 dias aps a pupao, a
forma que emerge a do vero. Se a injeo for feita 10 dias aps a pupao, so
produzidas as formas da primavera.
CAPTULO 21
815
Figura 21.8
Polifenismo sazonal na borboleta Araschnia

laevana. (A) A forma do vero que emerge
da pupa em no diapausa. (B) A forma
alaranjada e marrom da primavera, que emerge da pupa em diapausa. (Veja Prancha 29
para fotografias coloridas.) (Fotografias cortesia de H. F. Nijhout.)
(A)
(B)
Em quase toda a rea do Hemisfrio Norte, pode-se verificar o polifenismo nas

borboletas Colias e Pieris (repolhos brancos e sulfurosas) entre aquelas que eclodem
durante os longos dias do vero e aquelas que eclodem no fim da estao, nos dias
curtos do outono. O pigmento da asa posterior nas formas de dia curto mais escuro
do que nas borboletas de dia longo. Isso tem uma vantagem funcional durante os
meses mais frios do outono; as borboletas mais escuras de dia curto usam seus pigmentos para se aquecer entre os vos. Os pigmentos mais escuros absorvem a luz
mais eficientemente, aumentando a temperatura do corpo mais depressa do que os
pigmentos mais claros (Shapiro, 1968; 1978; Watt, 1968, 1969; Hoffmann, 1973;
veja Nijhout, 1991). [env3.html]
Nas zonas tropicais do mundo, freqentemente existem estaes secas e chuvosas. Na frica, a borboleta do Malawi Bicyclus anynana tem um polifenismo que
adaptivo s mudanas sazonais. A forma da estao fria e seca crtica, parecendo as
folhas mortas de cor castanha do seu habitat. A forma da estao quente e chuvosa
mais ativa, e ela tem manchas em forma de olhos (ocelos) nas asas posteriores ventrais que desviam ataques de aves predadoras e lagartos (Figura 21.9). O fator determinante parece ser a temperatura durante a pupao. Baixas temperaturas produzem
a forma da estao seca; altas temperaturas, a forma da estao chuvosa (Brakefield
e Reitsma, 1991). O desenvolvimento das manchas em forma de ocelos nas borboletas comea nos estgios larvais tardios, quando a transcrio do gene Distal-less est
restrita a um pequeno foco que se tornar o centro de cada ocelo. Durante a fase
precoce do estgio pupal, a expresso de Distal-less vista em uma rea maior, e
considera-se que esse o sinal ativador que determina o tamanho da mancha. Finalmente, as clulas recebendo o sinal determinam a cor que elas tero. As formas sazonais de Bicyclus parecem divergir nos estgios mais adiantados da ativao de sinais
e diferenciao de cor (Figura 21.10; Brakefield et al., 1996).
(A)
(B)
Figura 21.9
As duas formas sazonais da borboleta de Malawi, Bicyclus anynana. (A) A forma da estao
seca que se mistura a restos de folhas mortas, secas e escuras. (B) Forma da estao chuvosa com
visveis manchas em forma de ocelos das asas posteriores ventrais. A forma da estao chuvosa
pode ser mimetizada pelo cultivo da larva em temperaturas mais altas (23oC); larvas cultivadas em
temperaturas mais baixas (17oC, se aproximando das temperaturas na transio para a estao
seca) se desenvolvem na forma da estao seca. (De acordo com Brakefield et al., 1996; fotografias cortesia de S. Carroll e P. Brakefield.)
816
Figura 21.10
(A)
Estgios do desenvolvimento levando formao das manchas em forma de ocelos. (A) A

expresso do gene Distal-less nas regies do
disco imaginal da asa onde h potencial para a
formao das manchas em forma de ocelos.
(B) Focos de expresso de Distal-less so
estabilizados em regies especficas da asa. (C)
Na pupa, os focos de Distal-less se expandem.
(D) As clulas vizinhas respondem ao sinal
produzindo pigmentos especficos, dependendo de suas distncias do foco e de suas posies na asa. No Bicyclus, as duas formas so
indistinguveis at o estgio de sinalizao (C).
(De acordo com Brakefield et al., 1996.)
(B)
Diviso
da asa
(C)
(D)
Expresso de
Distal-less
T alta
T baixa
Prepadronizao
Determinao
Focal
Sinalizao
Diferenciao
Polifenismo nutricional
Nem todo polifenismo controlado pelas estaes. Nas abelhas, o tamanho da larva
fmea na muda pupal determina se o indivduo ser uma operria ou uma rainha. A
larva que alimentada com gelia real, rica em nutrientes, retm a atividade da sua
corpora allata durante o estgio do ltimo instar. O hormnio juvenil secretado por
esses rgos atrasa a pupao, fazendo com que a abelha emergente seja maior e (em
algumas espcies) mais especializada em sua anatomia (Figura 21.11A; Brian, 1974,
1980; Plowright e Pendrel, 1977). Os nveis de hormnio juvenil em larvas destinadas a se tornar rainha 25 vezes maior que o ttulo das destinadas a serem operrias,
e a aplicao desse hormnio em larvas operrias pode transform-las em rainhas
(Wirtz, 1973; Rachinsky e Hartfelder, 1990).
Analogamente, colnias de formigas so predominantemente fmeas, e essas
podem ser extremamente polimrficas (Figura 21.11A). Os dois tipos principais de
fmeas so a operria e a gine. A gine uma rainha em potencial. Em espcies mais
especializadas, tambm se observa uma operria maior, o soldado. Na Pheidole
bicarinata, essas castas so determinadas pelos nveis de hormnio juvenil nas larvas em desenvolvimento. Larvas recebendo alimento rico em protenas tm um ttulo
elevado de hormnio juvenil que causa uma abrupta mudana no desenvolvimento
(A)
(B)
(C)
Nascimento
Nascimento
Gines
Operrias
Gines
Operrios
secundrios
Operrios
principais
(soldados)
Figura 21.11
(A) Fotografia do notvel dimorfismo da formiga operria (esquerda) e a rainha (direita) na

espcie Pheidologeton diversus. As duas so irms, mas uma foi alimentada de tal maneira
que sua larva continua a crescer e finalmente se metamorfoseia em uma rainha frtil. (B,C)
Formao da gine (rainha) e da operria nas formigas. reas levemente coloridas representam
bipotencialidade para se tornarem operrias ou gines. O N no crculo representa uma troca
nutricional controlada pelo ambiente da larva. (B) Myrmica rubra, onde somente as larvas que
hibernam (OW) permanecem bipotenciais. No ltimo instar, a troca nutricional determina a casta.
(C) Pheidole pallidula, onde a rainha controla a determinao das gines, atravs dos hormnios
que agem durante a embriognese. (Fotografia com copirraite, cortesia de Mark W. Moffett na
National Geographic Society; B e C de acordo com Wheeler, 1986.)
CAPTULO 21
817
que reprograma o tamanho no qual as larvas iniciaro a metamorfose. Isso causa

uma grande e descontnua diferena de tamanho entre as castas de soldados e operrias, com a cabea e as mandbulas crescendo mais rapidamente do que o resto do
corpo. Essa reprogramao tambm envolve mudanas na atividade gnica, pois as
protenas cuticulares das operrias e dos soldados so diferentes (Passera, 1985;
Wheeler, 1991).
Em espcies diferentes, a determinao de casta pode ser ambiental, hormonal ou
a combinao de ambos. Os padres do desenvolvimento na determinao de castas
foram analisados por Diana Wheeler (1986, 1991) e esto resumidos na Figura
21.11B,C. Na maioria das espcies, larvas de formigas so bipotenciais at perto da
pupao. Na Myrmica rubra, somente larvas que hibernam permanecem bipotenciais.
Aps o inverno, a rainha estimula os operrios a subalimentar as larvas do ltimo
instar. Isso significa que enquanto houver uma rainha, no podero resultar outras.
Se as larvas so alimentadas, elas podem se tornar gines. Portanto, as larvas permanecem bipotenciais at bem tarde no seu ltimo instar. Em outras espcies como a
Pheidole pallidula, a rainha controla a formao de gines atravs de substncias qumicas que agem durante a embriognese, de modo a no se formarem novas rainhas.
Entretanto, as operrias permanecem bipotenciais e podem se tornar majoritrias ou
minoritrias, dependendo da nutrio.
Determinao se
xual dependente do ambiente
sexual
Existem muitas espcies onde o ambiente determina se o indivduo ser macho ou
fmea. A determinao sexual em peixes e rpteis, dependente da temperatura, representa o caso melhor estudado. A Figura 21.12 demonstra os principais padres de
determinao sexual dependente da temperatura em rpteis. Esse tipo de determinao sexual ambiental tem vantagens e desvantagens. Uma das vantagens que d s
espcies o benefcio da reproduo sexual sem limit-las a uma relao de sexos 1:1.
Nos crocodilos, onde extremos de temperatura produzem fmeas e temperaturas
moderadas produzem machos, a relao de sexos pode ser de at 10 fmeas para um
macho (Woodward e Murray, 1993). A maior desvantagem na determinao sexual
dependente da temperatura pode estar no estreitamento dos limites de temperatura
dentro dos quais uma espcie pode existir. Isso significaria que poluio trmica (ou
localmente ou por aquecimento global) pode realmente eliminar uma espcie em
uma determinada rea (Janzen e Paukstis, 1991). Ferguson e Joanen (1982) especularam que os dinossauros podem ter tido uma determinao sexual dependente da
temperatura e que seu sbito desaparecimento pode ter sido causado por uma pequena mudana da temperatura criando condies onde somente machos ou fmeas
eclodiam de seus ovos.
Charnov e Bull (1977) argumentaram que a determinao sexual ambiental seria
adaptativa em certos habitats caracterizados por retalhamento, havendo certas regies onde mais vantajoso ser macho e outras onde mais vantajoso ser fmea.
Conover e Heins (1987) forneceram evidncia que em certos peixes, as fmeas se
Muitas tartarugas
Porcentagem de fmeas
Lagartos, crocodilos
Temperatura (oC)
Figura 21.12
Padres da determinao sexual dependente da

temperatura. Nos primeiros trs painis, diferentes temperaturas do a predominncia de
machos ou fmeas. No ltimo painel, a temperatura no tem efeito. De acordo com Bull, 1980.)
Tartarugas mordedoras
(e outras), crocodilos
Alguns lagartos,
cobras e tartarugas
818
Relacionamento entre temperatura e razo sexual F:(F+M)

durante o perodo da determinao sexual em Menidia
menidia. Nos peixes coletados na poro mais norte da rea
(Nova Scotia), a temperatura teve pouco efeito na determinao sexual. Quando foram coletados embries de peixes em
locais mais ao sul (especialmente da Virginia para a South
Carolina), o ambiente teve um grande efeito. (De acordo com
Conover e Heins, 1987.)
Razo sexual: F/(F+M)
Figura 21.13
Norte
Nova Scotia
Prince Edward Island
New York
Virginia
North Carolina
South Carolina
Sul
beneficiam por serem maiores, pois tamanho se traduz em maior fecundidade. uma
vantagem nascer cedo na poca da reproduo para uma fmea Menidia, que teria um
perodo mais longo de alimentao e um tamanho maior. Nos machos, o tamanho no
tem importncia. Conover e Heins mostraram que na parte sul da rea da Menidia, as
fmeas realmente nascem cedo na estao de reproduo. A temperatura parece ter um
papel importante. Entretanto, na parte norte de sua regio, a mesma espcie no mostra determinao sexual ambiental. Na verdade, uma relao 1:1 gerada em todas as
temperaturas (Figura 21.13). Os autores especulam que as populaes mais ao norte
tm uma estao de alimentao muito curta, de modo que no h vantagem para uma
fmea nascer antes. Portanto, essa espcie de peixes tem uma determinao sexual
ambiental nas regies onde adaptiva e uma determinao sexual genotpica nas
regies onde no adaptiva. Aqui, novamente, observa-se que o ambiente pode
induzir um fentipo sexual, ou o fentipo sexual pode ser uma propriedade do genoma,
como o caso na maioria dos mamferos.
Fatores ambientais imprevisveis

controlando o desenvolvimento animal
A maioria dos estudos de adaptao se preocupa com o papel assumido pelas estruturas adultas, permitindo que o indivduo sobreviva em ambientes precrios e hostis.
Entretanto, o embrio tambm deve sobreviver no seu habitat, e ele tem que faz-lo
antes que essas adaptaes adultas sejam feitas. Como j mencionado, a colorao
protetora da larva um dos exemplos, e a habilidade da larva em ingerir alimentos
txicos para seus predadores outro exemplo. Essas duas estratgias so
exemplificadas pelas lagartas das borboletas viceroy e monarca, respectivamente (veja
pgina 733). A temperatura no o nico fator ambiental que pode efetuar a determinao sexual no peixe. O sexo do peixe limpador (wrasse) de cabea azul, um
peixe Panamenho, depende da populao que ele encontra. Se o embrio atinge um
recife onde um macho vive com muitas fmeas, o peixe limpador cresce e se acasala
como fmea. Quando o macho morre, uma das fmeas (usualmente a maior) se torna
CAPTULO 21
819
macho. Dentro de um dia, seus ovrios regridem e seus testculos crescem. Se o

mesmo embrio tivesse chegado a um recife que no tivesse machos ou a um territrio no defendido por um macho, o embrio se desenvolveria como um peixe limpador macho (Warner, 1993).
Defesas induzveis contra a predao
Alguns embries so protegidos das condies ambientais por materiais secretados
dentro do ovo ou ao seu redor. Em outros casos, o ambiente induz uma via especfica
de desenvolvimento em lugar da via normal. Na lagarta Nemoria, a dieta altera o
fentipo e protege o indivduo da predao. Alguns animais levaram isso um passo a
frente: O desenvolvimento de um jovem modificado por substncias liberadas pelo
prprio predador, permitindo aos jovens escapar desses mesmos predadores. Isso
algumas vezes chamado de defesa induzida pelo predador (ou polifenismo induzido pelo predador).
Para demonstrar defesa induzida pelo predador, deve-se demonstrar que a mudana fenotpica causada pelo predador (geralmente por substncias solveis liberadas pelo predador) e que a modificao fenotpica aumenta a aptido de seus portadores quando o predador est presente (Adler e Harvell, 1990).* Por exemplo, vrias
espcies de Daphnia e rotferos alteraro sua morfologia quando desenvolvidos em
guas onde seus predadores foram cultivados (Figura 21.14; Dodson, 1989; Adler e
Harvell, 1990). O rotfero predatrio Asplanchna libera na gua um composto solvel que induz os ovos de uma espcie de presa, Keratella slacki, a se desenvolver em
indivduos com um corpo ligeiramente maior, mas com espinhas anteriores 130%
mais longas do que seria o normal. Essas modificaes as torna mais difceis de
serem devoradas. O caracol Thais lamellosa desenvolve uma concha mais grossa e
um dente na sua abertura quando exposto ao efluente das espcies de caranguejo
que so seus predadores. Em uma populao mista, os caranguejos no atacam os
caracis mais espessos at que mais de 50% dos normais tenham sido devorados
(Palmer, 1985).
Polifenismo envolvendo predadores no se limita aos invertebrados. McCollum
e Van Buskirk (1996) mostraram que na presena de seus predadores, a nadadeira da
cauda da r de rvore Hyla chrysoscelis cresce mais e se torna vermelho brilhante.
*O fenmeno da ciclomorfose, no qual h uma variao cclica da morfologia em certas espcies de
Daphnia (Woltereck, 1909), no foi correlacionado com um predador especfico. O fenmeno pode ser
devido a outros fatores (Dodson, 1989).
Figura 21.14
Polifenismo induzido por predadores. Formas

tpicas (linha superior) e induzidas por predadores (linha inferior) em vrios organismos.
Os nmeros abaixo de cada coluna representam a porcentagem de organismos sobrevivendo predao, quando indivduos induzidos e
no induzidos foram submetidos a predadores
(em vrios ensaios). (Dados de Adler e Harvell,
1980 e referncias neles citados.)
Forma
tpica
Abertura
grossa com dente
Inflado e
com corcova
Forma
induzida
por
predador
Cladocera
(Daphnia)
Rotfero
(Keratella)
Cirrpede
(Chthalamus)
Bryozoa
(Membranipora)
Sobrevivncia (tpica/induzida)
Molusco (Thais)
Sem predao at que
50% das formas tpicas
sejam devoradas
Carpa (Carassius)
820
Isso permite que o girino se afaste nadando rapidamente e desvie golpes na regio da
cauda. A carpa Carassius carassius reponde presena do lcio (pike) predatrio
somente se esse j se alimentou com peixe. A carpa cresce adquirindo uma forma
entumecida e com uma corcova que no mais se ajusta s mandbulas do lcio. Como
na maioria das defesas induzidas pelo predador, existe uma contrapartida (ou ento
seria de se esperar que a forma induzida se tornasse o fentipo normal). Nesse caso, a
morfologia induzida produz um retardamento nas condies de natao, e o peixe mais
gordo no pode nadar to eficientemente (Brnmark e Pettersson, 1994). A Figura
21.14 mostra as formas tpicas e as induzidas pelo predador para vrias espcies. Em
cada caso, filtrados solveis da gua envolvendo o predador so capazes de induzir
essas modificaes. Como mostra a Figura 21.14, a forma induzida mais susceptvel
a sobreviver ao seu predador. [env4.html]
Plasticidade fenotpica e mudanas no ambiente
O sapo p de espada (spadefoot toad), Scaphiopus couchii, tem um ciclo de vida
extraordinrio. Os sapos terminam a hibernao com o barulho do trovo que acompanha as primeiras tempestades da primavera no deserto de Sonoran. (Infelizmente,
motocicletas produzem o mesmo som, fazendo com que esses sapos saiam da hibernao e morram no escaldante sol do Arizona.) Os sapos se reproduzem nas lagoas
temporrias formadas pelas chuvas, e os embries se desenvolvem rapidamente em
larvas. Aps a metamorfose das larvas, os novos sapos retornam ao deserto, se afundando na areia at que as tempestades do ano seguinte os tragam para fora.
As lagoas do deserto so poas efmeras e tanto podem secar rapidamente como
persistir por algum tempo, dependendo da profundidade inicial e a freqncia das
chuvas. Poderia se considerar que existem somente dois cenrios alternativos confrontando o embrio do sapo: ou (1) a lagoa persiste at que ele sofra a metamorfose
e ele vive, ou (2) a lagoa seca antes da metamorfose e ele morre. Esses sapos (e
numerosos outros anfbios), entretanto, desenvolveram uma terceira alternativa. A
poca da metamorfose controlada pela lagoa. Se essa no seca, o desenvolvimento
continua em uma velocidade normal, e os girinos se alimentando de algas finalmente
se transformam em sapos p de espada juvenis. Entretanto, se a lagoa est secando,
se cria uma superpopulao e alguns dos girinos embarcam em uma via alternativa
de desenvolvimento. Eles desenvolvem uma boca mais larga e necessitam de msculos mais fortes nas mandbulas que os permita comer, entre outras coisas, outros
girinos de Scaphiopus. Esses girinos carnvoros sofrem uma rpida metamorfose,
ainda que em uma verso menor do sapo p de espada juvenil. Mas eles sobrevivem,
enquanto que os outros girinos Scaphiopus morrem ou por dessecao ou ingeridos
por seus companheiros de lagoa (Figura 21.15; Newman, 1989, 1992).
Grupo de msculo
hiideos da mandbula
Figura 21.15
Polifenismo nos girinos do sapo p de espada,

Scaphiopus couchii. A forma tpica a onvora, usualmente se alimentando de insetos e algas. Quando as lagoas esto secando formada a forma carnvora (canibalstica). A boca
mais larga, os msculos das mandbulas so
maiores, e o intestino modificado para uma dieta carnvora. (Fotografia e desenho cortesia
de R. Ruibel.)
Msculo
interhiideo
Alas
intestinais
CARNVORO
(outros girinos)
Superfcie ventral
Grupo de msculo
hiideos da mandbula
Musculo
interhiideo
Alas
intestinais
ONVORO (camaro do mar,

algas) Superfcie ventral
CAPTULO 21
821
Essa plasticidade fenotpica vista tambm em larvas de equinodermos. Quando o

alimento est escasso, os membros ciliados da larva pluteus crescem mais longos e
aumenta a habilidade da larva em obter alimento. Mas isso feito com um custo para
o rudimento do adulto que cresce dentro da larva, e leva mais tempo para essas plutei
de membros longos (mesmo que elas possam adquirir alimento) sofrerem metamorfose
(Hart e Strathmann, 1994).
A plasticidade fenotpica d ao indivduo a habilidade para responder s diferentes condies ambientais. Diferentes fentipos se adaptam melhor em diferentes
ambientes. No sapo p de espada, a forma de rpido desenvolvimento mais adequada para lagoas que secam rapidamente, mas os sapos de desenvolvimento lento (os
quais se desenvolvem em sapos maiores, e mais robustos) so mais adequados para
condies com mais gua. Existe um custo nessa plasticidade fenotpica, mas assegurado que sempre alguns animais sobrevivero em cada condio.
&
Especulaes
Assimilao Gentica
a discusso sobre a relao custo/
benefcio entre formas induzidas
e no induzidas, foi mencionado
que se a forma induzida no tivesse um custo significativo, seria de se esperar que essa
se tornasse a forma predominante da espcie. Isso foi previsto independentemente por
C. H. Waddington e I. I. Schmalhausen para
explicar como algumas espcies podiam
evoluir rapidamente em determinadas direes (veja Gilbert, 1994). Ambos estavam
impressionados com os calos encontrados
nos ps de avestruzes. Na maioria dos mamferos, a pele capaz de formar calos nas
reas que se desgastam em contacto com o
solo ou outra superfcie.*
Aqui, as clulas da pele respondem
frico proliferando-se. Apesar dos exemplos de calos induzidos pelo ambiente serem muito difundidos, o avestruz nasce com
calos onde tocar o solo (Figura 21.16).
Waddington e Schmalhausen propuseram
que as clulas da pele j so competentes
para serem induzidas pela frico, elas poderiam ser induzidas por outras coisas tambm. Com a evoluo dos avestruzes, uma
mutao permitiu que as clulas da pele respondessem a uma substncia dentro do
embrio. Waddington (1942) escreveu:
* E at este sculo, escritores eram reconhecidos pelos calos em seus dedos. (Portanto, da observao dos seus dedos, Sherlock Holmes corretamente deduziu que o homem ruivo havia sido contratado como um escriba.)
Presumivelmente sua pele, como a de

outros animais, reagiria diretamente
presso externa e frico tornando-se
mais espessa... Essa capacidade para
reagir deve ser dependente de genes...
No deve ser difcil que ocorra uma
mutao gnica que modificar alguma
outra rea no embrio, de tal maneira
que ela passa a assumir a funo da presso externa, interagindo com a pele, de
modo a puxar o gatilho e desencadear o desenvolvimento de calosidades.
Por essa transferncia de induo, de um
indutor externo para um interno, um carter induzido pelo ambiente se tornou parte
do genoma do organismo e pode ser selecionado. Waddington chamou esse fenmeno de assimilao gentica enquanto
Schmalhausen (1949) chamou-o de seleo estabilizada. Ambos os cientistas usaram a embriologia e a gentica ortodoxas
para explicar exemplos que haviam sido
considerados casos Lamarckianos de herana de caractersticas adquiridas.
A transferncia de estmulos ambientais
para estmulos genticos pode ser vista na
determinao sexual em Menidia e na determinao de casta em formigas. Analogamente, a plasticidade de desenvolvimento preexistindo nas larvas alimentares nos
equinodermos pode ter sido a ponte na transio da larva pluteus (alimentar) para a larva que no tem os membros ciliados. A troca na distribuio de recursos entre as es-
Figura 21.16
Lado ventral de um avestruz; a flecha marca os

calos. (de Waddington, 1942.)
truturas larval e juvenil paralela quela

vista onde as reservas de alimento so estocadas no ovo. Portanto, as trocas j presentes como adaptaes s fontes externas de
recursos alimentares poderiam ter se tornado geneticamente fixas naquelas espcies
cujas larvas no precisam procurar seu alimento (Strathmann et al., 1992).
822
Se a assimilao gentica indica a fixao de um dos fentipos adaptivamente expressos, ento as borboletas seriam uma boa
fonte onde encontrar mais exemplos. Brakefield e colegas (1996) mostraram que podiam fixar geneticamente as diferentes formas do polifenismo adaptivo de Bicyclus,
e Shapiro (1976) mostrou que o fentipo
adaptivo ao dia curto (clima frio) de vrias

borboletas o mesmo que o nico fentipo,
geneticamente produzido, de espcies relacionadas ou subespcies vivendo em altas altitudes ou latitudes. Pode-se tambm
produzir o fentipo de clima frio incubando no refrigerador as larvas ou pupas das
borboletas da estao quente. [env5.html]
A assimilao gentica pode ter um

papel importante fornecendo um vis
para mudanas evolucionrias. Se um organismo herda uma norma de reao, as
vias de desenvolvimento levando a um
fentipo particular j esto colocadas, e
tudo o que a evoluo deve fazer suprir
um iniciador constante dessas vias.
A contnua plasticidade do desenvolvimento

A habilidade de um organismo em monitorar e responder mudana ambiental
crtica para a sobrevivncia em habitats complexos. Nossos dois principais sistemas
sensoriais, os sistemas nervoso e imune, nos permite regular desenvolvimentalmente
nosso corpo em resposta aos estmulos ambientais.
O sistema imune: Desenvolvimento no adulto
Se o polifenismo induzido por predadores uma resposta adaptativa s ameaas
potenciais, o sistema imune dos mamferos seu maior feito. O sistema imune dos
mamferos um mecanismo incrivelmente elaborado para detectar e destruir materiais estranhos ao corpo. Quando somos expostos a uma molcula estranha (chamada
antgeno), ns produzimos anticorpos e os secretamos no soro sangneo (veja Captulos 10 e 17 para detalhes). Os anticorpos combinam com os antgenos inativando-os
ou eliminando-os. A base da resposta imune resumida na hiptese da seleo clonal
(Burnett, 1959). Ela contm cinco postulados principais:
1. Cada linfcito B (clula B) pode produzir um e somente um tipo de anticorpo.
Ou seja, uma clula B pode estar produzindo um anticorpo que se liga ao
poliovrus, enquanto uma clula vizinha pode estar produzindo um anticorpo
que se liga toxina diftrica.
2. Cada clula B colocar o anticorpo que produz na sua membrana celular com
o lado portador da especificidade voltado para fora.
3. Os antgenos so apresentados s clulas B (geralmente na superfcie dos
macrfagos).
4. Somente aquelas clulas B que se ligam ao antgeno podem completar seu
desenvolvimento em clulas plasmticas secretoras de anticorpo. As clulas
B dividem-se repetidamente, produzem um extenso retculo endoplasmtico
rugoso, e sintetizam enormes quantidades de molculas de anticorpos. Esses
anticorpos so secretados no sangue.
5. A especificidade do anticorpo exatamente a mesma daquela na superfcie
celular das clulas B.
O tipo de molcula de anticorpo na superfcie celular da clula B determinado
por acaso. De dez milhes de tipos de anticorpos proticos que a clula pode sintetizar, cada clula B produz somente um tipo. Essas clulas B so continuamente criadas e destrudas. Entretanto, quando um antgeno se liga a um conjunto de clulas B,
essas clulas so estimuladas a se dividir e se diferenciar em clulas plasmticas (que
secretam o anticorpo) e clulas de memria (que populam os ndulos linfticos e
respondem rapidamente quando expostas mais tarde ao mesmo antgeno) (Figura
21.17). Portanto, a constelao de clulas plasmticas e de memria de cada pessoa
difere dependendo de quais antgenos ela encontrou. Gmeos idnticos tm diferentes populaes de descendentes de clulas B em seus baos e ndulos linfticos.
CAPTULO 21
Linfcito
em repouso
Clula B
Dia 1
823
Anticorpo na superfcie
celular reconhecendo o
antgeno B
Anticorpo na superfcie
celular reconhecendo o
antgeno A
Ncleo
Citoplasma
Antgeno A
Sem diviso ou diferenciao
dos linfcitos cujos anticorpos
da superfcie celular no
reconhecem o antgeno A
Clones de
linfcito
em repouso
Ribossomos
Dia 2
Figura 21.17
Modelo de seleo clonal na formao de

anticorpos. Cada clula B produz um tipo particular de protena de anticorpo (imunoglobulina) e a expe na sua superfcie celular. Quando
um antgeno (estranho ao corpo) se liga s protenas do anticorpo na membrana da clula B, a
clula B est apta a se dividir e se diferenciar
em uma clula plasmtica secretora de
anticorpos. A clula plasmtica secreta somente
aquele tipo especfico de anticorpo que foi originalmente produzido pela clula B.
Molculas de
anticorpo so
sintetizadas no
retculo
endoplasmtico
Dia 3
Proliferao
Retculo
endoplasmtico
Dia 4
Diferenciao
Anticorpo anti-A secretado
Clula
plasmtica
Clula de
memria
Dia 5
Anticorpo secretado
Aprendizado: Um sistema nervoso adaptvel ao ambiente

No Captulo 8, discutimos como a atividade pode ser um fator crtico na deciso de
quais sinapses neuroniais so retidas pelo organismo adulto. Aqui, estenderemos
aquela discusso para realar aquelas situaes extraordinrias onde novas experincias modificam o conjunto original de conexes neuroniais, causando a criao de
novos neurnios ou a formao de novas sinapses entre neurnios existentes. Como
neurnios aps formados no se dividem, o seu aniversrio pode ser identificado
tratando o organismo com timidina radioativa. Normalmente, muito pouca timidina
radioativa incorporada no DNA de um neurnio que j se formou. Entretanto, se um
novo neurnio se diferencia por diviso celular durante o tratamento, ele incorporar
a timidina radioativa no seu DNA. A produo de tais novos neurnios pode ser
observada em machos de aves canoras quando esses aprendem suas canes. Os
tentilhes-zebra juvenis memorizam uma msica modelo e em seguida aprendem o
padro de contraes musculares necessrias para cantar uma frase especfica. Nesse
processo de aprendizado e repetio, so gerados novos neurnios no corpo
hiperestriado do crebro do tentilho. Muitos desses novos neurnios enviam axnios
ao arquistriado que responsvel pelo controle da musculatura vocal (Nordeen e
Nordeen, 1988). Essas modificaes no so observadas em machos que so muito
velhos para aprender a msica, e nem em fmeas juvenis (que no cantam essas
frases); isso discutido mais completamente no Captulo 20.
824
Os crtices cerebrais de ratos jovens criados em ambiente estimulante tm mais

neurnios, sinapses e dendritos do que so encontrados em animais criados isolados
(Turner e Greenough, 1983). Mesmo o crebro adulto est se desenvolvendo em
resposta s novas experincias. Quando canrios adultos aprendem uma nova msica, eles geram novos neurnios cujos axnios se projetam de uma regio vocal do
crebro a outra (Alvarez-Buylla et al., 1990). Analogamente, quando ratos adultos
aprendem a se equilibrar sobre cilindros de madeira, seus neurnios das clulas de
Purkinje do cerebelo desenvolvem novas sinapses (Black et al., 1990). Portanto, o
sistema nervoso continua a se desenvolver na vida adulta, e o padro das conexes
neuroniais o produto do padro herdado e do padro produzido pelas experincias.
Essa interao entre o desenvolvimento inato e o experimental foi detalhada o mais
dramaticamente em estudos da viso em mamferos.
MUDANAS EXPERIMENTAIS NAS VIAS VISUAIS INERENTES NOS MAMFEROS. Algumas das pesquisas mais interessantes sobre padronizao neuronial
em mamferos se concentram nos efeitos da privao sensorial no desenvolvimento do sistema visual em gatinhos e macacos. As vias pelas quais os impulsos
eltricos passam da retina ao crebro nos mamferos esto ilustradas na Figura
21.18. Os axnios das clulas ganglionares da retina formam os dois nervos pticos,
que se encontram no quiasma ptico. Como nos girinos de Xenopus, algumas
fibras vo para o lado oposto (contralateral) do crebro, mas diferentemente da
maioria dos outros vertebrados, as clulas retinianas dos mamferos tambm enviam sinais para o mesmo lado (ipsilateral) do crebro. Esses nervos terminam nos
dois ncleos geniculados laterais. Aqui, a entrada de cada olho mantida separada, as camadas mais superiores e anteriores recebendo os axnios do olho contralateral, e o meio dos corpos recebendo a entrada do olho ipsilateral. A situao se
torna mais complicada quando os neurnios do ncleo geniculado lateral se
conectam com os neurnios do crtex visual. Mais de 80% das clulas neurais no
crtex recebem entradas de ambos os olhos. O resultado viso binocular e percepo de profundidade. Outro conhecimento importante que a projeo
retinocortical a mesma para os dois olhos. Se um neurnio cortical estimulado
por luz reluzindo atravs de uma regio do olho esquerdo, 5o acima e 1o esquerda
da fvea,* ele tambm ser estimulado por uma luz reluzindo atravs de uma regio do olho direito, 5o acima e 1o esquerda da fvea. Alm disso, a resposta
evocada na clula cortical quando ambos os olhos so estimulados maior do que
a resposta quando cada retina estimulada sozinha.
Hubel, Wiesel e seus colaboradores (veja Hubel, 1967) demonstraram que o
desenvolvimento do sistema nervoso depende at certo ponto da experincia do
indivduo durante um perodo crtico do desenvolvimento. Em outras palavras, nem
todo o desenvolvimento neuronial est codificado no genoma: uma parte aprendida. A experincia parece reforar ou estabilizar algumas conexes neuroniais que j
esto presentes no nascimento e enfraquecer ou eliminar outras conexes. Essas
concluses vm de estudos de privao sensorial parcial. Hubel e Wiesel (1962,
1963) fecharam com costura as plpebras direitas de gatos recmnascidos e as
deixaram fechadas durante trs meses. Aps esse tempo, eles descosturaram as
plpebras direitas. As clulas corticais desses gatos no puderam ser estimuladas
por luz brilhante no olho direito. Quase todas as entradas no crtex visual vinham
somente do olho esquerdo. O comportamento dos gatinhos revelava a ineficincia
do olho direito: quando o olho esquerdo desses animais foi vedado, eles se tornaram funcionalmente cegos. Como os neurnios geniculados laterais pareciam ser
estimulados pelos dois olhos, direito e esquerdo dos gatinhos, o defeito fisiolgico
parecia ser entre os ncleos geniculados laterais e o crtex visual. Nos macacos
*A fvea uma depresso no centro da retina onde somente os cones esto presentes e os bastonetes
e vasos sangneos esto ausentes. Aqui ela se torna um marco conveniente.
CAPTULO 21
Olho direito
(A)
825
Olho esquerdo
Retina
Nervo
ptico
Quiasma
ptico
Ncleo
geniculado
lateral
Radiaes pticas
Crtex visual
Vias visuais do olho direito (vista da

superfcie ventral do crebro)
Vias visuais do olho esquerdo
Vias visuais combinadas,

esquerda e direita
Figura 21.18
(B)
(C)
rhesus, onde fenmenos semelhantes so observados, o defeito foi relacionado

falta de sntese de protenas nos neurnios geniculados laterais inervados pelo
olho coberto (Kennedy et al., 1981).
Seria tentador concluir que a cegueira resultante foi devida no formao de
conexes visuais apropriadas, mas esse no o caso. Realmente, quando um gato
nasce, axnios dos neurnios geniculados laterais recebendo entradas de cada olho
se superpe extensivamente no crtex visual (Hubel e Wiesel, 1963). Entretanto,
quando um olho coberto muito cedo na vida do filhote, suas conexes com o crtex
visual so assumidas por aquelas do outro olho (Figura 21.19). Existe competio, e
a experincia tem um papel na fortificao e estabilizao das conexes de cada
ncleo geniculado lateral ao crtex visual. Portanto, quando ambos os olhos do gatinho so costurados durante 3 meses, a maioria das clulas corticais pode ser estimulada pela iluminao apropriada de um ou outro olho. O tempo crtico no desenvolvimento do gato para essa validao das conexes neuroniais comea entre a quarta e a
sexta semana na vida do animal. A privao monocular at a quarta semana produz
pouca ou nenhuma deficincia fisiolgica, mas aps 6 semanas ela produz todas as
mudanas neuroniais caractersticas. Se um gatinho teve uma experincia visual durante os primeiros 3 meses, qualquer privao monocular posterior (mesmo por um
ano ou mais) no tem efeito. As sinapses se estabilizaram.
Vias principais do sistema visual de mamferos. (A) Em mamferos, o nervo ptico de cada
olho se ramifica, enviando fibras nervosas a
um ncleo geniculado lateral em cada lado do
crebro. No lado ipsilateral, uma parte especfica da retina vai a uma parte especfica do ncleo geniculado lateral. No lado contralateral,
o ncleo geniculado lateral recebe entradas de
todas as partes da retina. Neurnios de cada
ncleo geniculado lateral inervam o crtex visual no mesmo lado. (B,C) Retinas isoladas (e
filetadas) mostrando projees ipsilaterais (B)
e contralaterais (C), das clulas ganglionrias
da retina de um embrio de camundongo de 16
dias. O corante fluorescente carbocianina DiI
foi inserido atrs do quiasma ptico, e foi permitido que o corante penetrasse nos axnios
retinianos. O corante se difunde ao longo dos
axnios, assim demarcando a sua origem. Projees ipsilaterais na sua maioria vm de uma
nica parte da retina (neste caso, da regio
ventro-temporal). Projees contralaterais para
o mesmo stio vm de toda a retina. (B e C de
Colello e Guillery, 1990, cortesia dos autores.)
826
(B)
(A)
(C)
(D)
Camada cortical 3
Camada cortical 4
Figura 21.19
Auto-radiografia de fundo escuro do crtex

estriado de macaco, 2 semanas aps injeo de
[3H]prolina no humor vtreo de um olho. Cada
neurnio retiniano absorve a marcao radioativa e a transfere para as clulas com as quais
forma sinapses. (A) Padro normal de marcao. As listas brancas indicam que cerca da
metade das colunas absorveram a marcao,
enquanto a outra metade no a obsorveu; esse
padro indica que metade das clulas estavam
inervadas pelo olho marcado e metade pelo olho
no marcado. (B) Padro de marcao quando
o olho no marcado permaneceu fechado por
suturas durante 18 meses. As projees
axnicas do olho normal (marcado) assumem
as regies que normalmente seriam inervadas
pelo olho suturado. (C,D) Desenhos de axnios
dos ncleos geniculados de gatinhos que tiveram um olho ocludo por 33 dias. A ramificao terminal dos axnios no olho ocludo (C)
foi muito menos extensa do que aquela do
olho no ocludo (D). (A e B de Wiesel, 1982,
cortesia de T. Wiesel; C e D de acordo com
Antonini e Stryker, 1993.)
Portanto, dois princpios podem ser visualizados na padronizao do sistema

visual nos mamferos. Primeiro, conexes neuroniais envolvidas na viso esto
presentes mesmo antes que o animal enxergue; e segundo, a experincia tem um
papel importante na determinao de quais conexes permanecem.* Da mesma
maneira que a experincia refina as conexes neuromusculares originais, ela tambm tem um papel no refinamento e melhora das conexes visuais. tambm
possvel, que funes adultas como aprendizado e memria se originam no estabelecimento e/ou reforo de diferentes sinapses pela experincia. Purves e
Lichtman (1985) observaram:
A interao entre animais individuais e seu mundo continua a moldar o sistema
nervoso atravs da vida de uma maneira impossvel de ter sido programada.
Modificao do sistema nervoso pela experincia , portanto, a ltima e mais
sutil estratgia desenvolvimental.
*Estudos recentes (Colman et al., 1997) mostraram que a divergncia na liberao de

neurotransmissores resulta em modificao da adesividade sinptica e causa a remoo do axnio
fornecendo a estimulao mais fraca. Os que estudaram neurobiologia se lembraro (se potenciados
adequadamente) que o conceito da sinapse de Hebbian se baseia na premissa que a experincia
influencia vias neuroniais. Se um axnio do neurnio A ativa o neurnio B, de tal maneira que o
disparo de B est sempre associado ao de A, ento a sinapse entre os neurnios A e B reforada.
Existem vrias maneiras pelas quais esse reforo poderia ocorrer, mas a maioria das hipteses
focalizam as modificaes que permitiriam a entrada mais rpida de ons de clcio no neurnio B.
Esse tipo de sinapse poderia explicar o fenmeno de potenciao de longo prazo, a qual considerada como a base da memria correlativa (onde uma sensao relembra outras). Tais mecanismos
Hebbianos podem mediar a competio entre os axnios dos ncleos geniculados laterais por clulas
no crtex visual (Stent, 1973; Reite e Stryker, 1988).
CAPTULO 21
827
Q DISTRBIOS AMBIENTAIS DO
DESENVOLVIMENTO NORMAL
Malformaes e distrbios
Da primeira parte deste captulo, ficou claro que as instrues para o desenvolvimento no residem completamente nos genes ou mesmo no zigoto. O organismo sensvel s sugestes do ambiente. Entretanto, isso torna o organismo vulnervel s mudanas ambientais que podem provocar distrbios no desenvolvimento.
Se parece surpreendente que qualquer um de ns sobrevive para nascer, isso
real; estima-se que da metade a dois teros de todas as concepes humanas no se
desenvolvem a termo com sucesso (Figura 21.20). Muitos desses embries expressam sua anormalidade to cedo que no h implantao no tero. Outros se implantam mas no conseguem estabelecer uma gravidez de sucesso. Portanto, a maioria
dos embries anormais so espontaneamente abortados antes mesmo que a mulher
saiba que est grvida (Bou et al., 1985). Edmonds e colaboradores (1982) usando
um teste imunolgico muito sensvel que pode detectar a presena de gonadotropina
corinica humana (hCG) 8 ou 9 dias aps a fertilizao, monitoraram 112 gestaes
em mulheres normais. Dessas gestaes determinadas por hCG, 67 no foram mantidas.
Parece, ento, que muitos embries humanos so prejudicados cedo no desenvolvimento e no sobrevivem por muito tempo no tero. Os defeitos nos pulmes, membros, face ou boca no seriam deletrios para o feto (que no depende desses rgos
enquanto dentro da me), mas podem ameaar seriamente a vida aps o nascimento.
Cerca de 5% de todos os nascimentos humanos tm uma malformao reconhecvel,
algumas leves, outras muito severas (McKeown, 1976).
Anormalidades congnitas (no nascimento) e a eliminao de embries e fetos
antes do nascimento so causadas tanto intrinsecamente como extrinsecamente. As
anormalidades causadas por eventos genticos (mutaes, aneuploidia, translocaes)
so chamadas malformaes. Por exemplo, aniridia (ausncia da ris) causada pela
mutao do gene PAX6, uma malformao. A sndrome de Down, causada pela
trissomia do cromossomo 21, tambm uma malformao. A maior parte da eliminao precoce de embries e fetos provavelmente devida s anormalidades
cromossmicas que interferem com o processo normal do desenvolvimento.
vulos em contacto com

o espermatozide
Fertilizao bem sucedida
Implantao bem sucedida

Desenvolvimento bem
sucedido, 4 semanas
Desenvolvimento bem
sucedido, 8 semanas
Nmero de
sobreviventes
dos 20 originais
Fetos levados a termo
Porcento
Figura 21.20
Os destinos hipotticos de 20 ovos que so

fertilizados naturalmente nos Estados Unidos
e Europa ocidental. Em condies normais,
somente 6.2 ovos dos 20 originais teriam
possibilidade de se desenvolver a termo com
sucesso. (De acordo com Volpe, 1987.)
828
Tabela 21.2 Alguns agentes considerados causadores de distrbios no desenvolvimento fetal humanoa
DROGAS E SUBSTNCIAS QUMICAS
cido retinico (Isotretinoina, Accutane)
cido valprico
Agentes antitirideos (PTU)
lcool
Aminoglicosdeos (Gentamicina)
Aminopterina
Bromo
Chumbo
Cocana
Cortisona
Dietilestilbesterol (DES)
Difenilhidantona
Estreptomicina
Fumaa de cigarro
Herona
Metilmercrio
Penicilamina
Talidomida
Tetraciclina
Trimetadiona
Warfarina
RADIAO IONIZANTE (RAIOS-X)
HIPERTERMIA
MICROORGANISMOS INFECCIOSOS
Cytomegalovrus
Herpes simplex
Parvovrus
Rubola (Sarampo Alemo)
Toxoplasma gondii (toxoplasmose)
Treponema pallidum (sfilis)
Vrus Coxsackie
CONDIOES METABLICAS NA ME
Doena auto-imune
(incluindo incompatibilidade de Rh)
Diabetes
Deficincias dietticas, malnutrio
Fenilcetonria
Fonte: Adaptado de Opitz, 1991.
a
Esta lista inclui agentes teratognicos conhecidos e possveis e no exaustiva.
Anormalidades devidas a agentes exgenos (certos agentes qumicos ou vrus,

radiao ou hipertermia) so chamados distrbios. Os agentes responsveis pelos
distrbios so chamados teratognicos (do Grego, formadores de monstros), e o
estudo de como agentes ambientais rompem o desenvolvimento normal chamado
teratologia.* Teratognicos funcionam durante certos perodos crticos no desenvolvimento. O perodo mais crtico para qualquer rgo quando ele est crescendo e
formando suas estruturas. Diferentes rgos tm diferentes perodos crticos, apesar
do espao de tempo entre 15 e 60 dias ser crtico para muitos rgos. O corao se
forma primariamente durante as semanas 3 e 4, enquanto a genitlia externa mais
sensvel nas semanas 8 e 9. O crebro e o esqueleto so sempre sensveis, do comeo
da semana 3 at o fim da gravidez e alm.
Agentes teratognicos
Agentes diferentes so teratognicos em diferentes organismos. Uma lista parcial de
agentes teratognicos no homem est apresentada na Tabela 21.2.
A principal classe de teratognicos inclui drogas e compostos qumicos
ambientais. Alguns compostos qumicos que so encontrados naturalmente no
ambiente podem causar defeitos de nascimento. Mesmo nos puros campos alpinos intocados das Montanhas Rochosas so encontrados teratognicos. Aqui nasce
o repolho de gamb Veratrum californicum, que algumas vezes serve de alimento
para os carneiros. Se ovelhas grvidas se alimentam dessa planta, seus fetos tendem a desenvolver graves danos neurolgicos, incluindo ciclopia, a fuso dos
dois olhos no centro da face (Figura 21.21). Essa condio tambm ocorre no
homem, porco e muitos outros mamferos; o organismo afetado morre logo aps
o nascimento (como resultado do grave defeito no crebro, incluindo a falta da
glndula pituitria).
Quinina e lcool, duas substncias derivadas de plantas, podem tambm causar
malformaes. A quinina pode causar surdez, e o lcool (quando mais de 60-90 g por
dia so ingeridas pela me) pode causar retardamento fsico e mental na criana. No
foi provado que a nicotina e a cafena causam anomalias congnitas, mas mulheres
que fumam muito (20 cigarros ou mais por dia) podem ter crianas menores que
aquelas nascidas de mes que no fumam. Fumar tambm diminui significativamente o
nmero e a motilidade de espermatozides em homens que fumam pelo menos quatro
cigarros por dia (Kulikauskas et al., 1985).
Alm disso, nossa sociedade industrial produz anualmente centenas de novos
compostos artificiais que passam para o uso geral. Pesticidas e compostos orgnicos
de mercrio tm causado anormalidades neurolgicas e de comportamento em bebs
cujas mes os ingeriram durante a gravidez. Uma trgica demonstrao disso ocorreu
em 1965, quando uma firma japonesa despejou mercrio em um lago, onde foi ingerido pelos peixes que foram comidos por mulheres grvidas da aldeia de Minamata.
O dano cerebral congnito e a cegueira nas crianas nascidas se tornou conhecido
como a doena de Minamata.
Em alguns casos, as mesmas condies podem ser causadas por um distrbio (causado por um agente
exgeno) ou uma malformao (do ncleo). Por exemplo, certas malformaes axiais em camundongos
podem ser produzidas pela administrao de cido retinico ou por mutaes em certos genes Hox. Considera-se que, em alguns casos, a mutao e o teratognico esto afetando a mesma enzima. A
condroplasia puntacta um defeito congnito do osso e da cartilagem, caracterizada por uma
mineralizao anormal do osso, subdesenvolvimento da cartilagem nasal e dedos encurtados; esse
defeito causado por um gene defeituoso no cromossomo X. Um fentipo idntico produzido pela
ingesto de warfarina, o composto que mata ratos. Parece que o gene defeituoso normalmente
responsvel pela produo de uma protena, a arilsulfatase, necessria para o crescimento da cartilagem. O composto warfarina inibe essa mesma enzima (Franco et al., 1995).
CAPTULO 21
829
cido retinico como um teratgeno

Em alguns casos, um composto usado para o desenvolvimento no corpo pode ter
efeitos deletrios se fornecido em grandes quantidades em tempos determinados.
O cido retinico importante na formao do eixo ntero-posterior do embrio de
mamferos e tambm na formao de membros. Nesse caso, o cido retinico
produzido de clulas discretas e funciona em uma pequena rea. Entretanto, se
cido retinico fornecido pela me em grandes quantidades, as clulas respondem a isso, pois normalmente no receberiam concentraes to altas dessa molcula. No Captulo 16, discutimos o efeito do cido retinico no desenvolvimento
do camundongo. No corpo, vitamina A e cido 13-cis-retinico so isomerizados
s formas ativas de cido retinico no desenvolvimento, cido retinico todotrans- e cido retinico 9-cis (Creech Kraft, 1992). O cido retinico no pode
ligar-se diretamente aos genes. Para a funo de regular os genes, o cido retinico deve se ligar a um grupo de fatores de transcrio chamado de receptores de
cido retinico (RARs). Essas protenas tm a mesma estrutura geral que os receptores de esterides e de hormnios da tireide, e so ativos somente quando
ligados ao cido retinico (Linney, 1992). Os receptores de cido retinico se
ligam a elementos intensificadores especficos no DNA que so denominados
elementos de resposta ao cido retinico. Os elementos de resposta ao cido
retinico contm pelo menos duas cpias da seqncia GGTCA (Ruberte et al.,
1990, 1991a). Alguns genes Hox tm elementos de resposta a cido retinico nos
seus promotores (Yu et al., 1991; Ppperl e Featherstone, 1993; Studer et al., 1994).
Existem trs tipos principais de receptores de cido retinico: RAR-, RAR- e
RAR-. Cada um deles liga ambas as formas de cido retinico e cada um deles se
liga ao mesmo elemento de resposta a cido retinico.
O cido retinico tem sido til no tratamento da acne cstica grave e est disponvel (sob o nome de Accutane; no Brasil um dos produtos farmacuticos contendo
cido retinico Retin-A) desde 1982. Os efeitos deletrios resultantes da administrao de grandes doses de vitamina A ou seus anlogos para vrias espcies de
animais em gestao so conhecidos desde a dcada de 1950 (Cohlan, 1953; Giroud
e Martinet, 1959; Kochhar et al., 1984), e por essa razo a droga contm uma etiqueta
de alerta indicando que no pode ser usada por mulheres grvidas. Apesar disso,
cerca de 160.000 mulheres em idade frtil (15 a 45 anos) tomaram essa droga desde
que foi introduzida, e algumas a usaram durante a gravidez. Lammer e colaboradores
(1985) estudaram um grupo de mulheres que se expuseram inadvertidamente ao
cido retinico e que decidiram permanecer grvidas. Dos 59 fetos, 26 nasceram sem
anomalias observveis, 12 abortaram espontaneamente e 21 nasceram com anomalias bvias. Os bebs malformados tinham um padro caracterstico de anomalias,
incluindo orelhas ausentes ou defeituosas, queixos ausentes ou pequenos, lbio
leporino, anormalidades do arco artico, deficincias do timo e anormalidades do
sistema nervoso central.*
Esse padro de mltiplas anomalias congnitas semelhante aquele visto em
embries de rato e de camundongo cujas mes quando grvidas receberam essas
drogas. Goulding e Pratt (1986) colocaram embries de camundongo de 8 dias em uma
soluo contendo cido retinico 13-cis em concentraes muito baixas (2x10-6M).
Mesmo nessa concentrao, aproximadamente um tero dos embries desenvolveram
*Sade Pblica um fator crtico, pois existe uma significante sobreposio entre a populao
que usa medicamentos para a acne e a populao de mulheres em idade frtil. Alm disso, considerase que metade das gestaes na Amrica do Norte no so planejadas (Nulman et al., 1997). A
prpria vitamina A teratognica quando injetada em mega doses. Rothman e colegas (1995)
encontraram que mulheres grvidas que tomaram mais de 10.000 unidades internacionais de vitamina A pr-formada/dia (na forma de suplementos vitamnicos) tinham cerca de 2 por cento de chance
de terem uma criana nascida com distrbios semelhantes aqueles produzidos pelo cido retinico.
Figura 21.21
Cabea de carneiro ciclope nascido de uma cabra que havia ingerido Veratrum californicum
no incio da gestao. Os hemisfrios cerebrais se fundiram, formando um nico olho e
sem glndula pituitria. (de Binns et al. 1964,
cortesia de J. F. James e o USDA-ARS
Poisonous Plant Laboratories.)
830
Figura 21.22
Embrio de camundongo normal com 17 dias

(A) e um embrio de camundongo de 17 dias
cuja me recebeu cido retinico no dia 8 da
gestao (B). Podem ser vistas malformaes
craniofaciais na cartilagem derivada da crista
neural dos embries tratados. A cartilagem de
Meckel est completamente deslocada da regio mandibular (queixo inferior) para a regio
maxilar (parte superior da boca). As cartilagens do martelo e bigorna tambm no so formadas. (de Morriss-Kay, 1993; fotografia cortesia de G. Morriss-Kay.)
(A)
(B)
um padro de anomalias muito especfico, incluindo uma dramtica reduo no tamanho do primeiro e segundo arcos farngeos (Figura 21.22). Em camundongos normais,
o primeiro arco forma o maxilar e a mandbula do queixo e dois ossculos do ouvido
mdio, enquanto o segundo arco forma o terceiro ossculo do ouvido mdio como
tambm outros ossos faciais.
A base para esse distrbio do desenvolvimento parece residir na habilidade da
droga em alterar a expresso dos genes Hox e, portanto, reespecificar pores do
eixo ntero-posterior e inibir a migrao das clulas da crista neural da regio craniana
do tubo neural (Moroni et al., 1994; Studer et al., 1994). O cido retinico marcado
radioativamente se liga s clulas da crista neural craniana e impede no s sua
proliferao como sua migrao (Johnston et al., 1985; Goulding e Pratt, 1986). A
ligao parece ser especfica s clulas derivadas da crista neural craniana, e o
efeito teratognico da droga confinado a um perodo especfico do desenvolvimento (dias 8-10 no camundongo; dias 20-35 em humanos). A teratognese do cido
retinico em modelos animais tem sido extremamente bem sucedida em elucidar seus
mecanismos a nvel celular. [env6.html]
Talidomida como um teratgeno
Antes de 1961, havia pouca evidncia sobre malformaes induzidas por drogas
em humanos. Mas, naquele ano, Lenz e McBride independentemente acumularam evidncia de que um sedativo leve, talidomida, causava um enorme aumento
em uma sndrome previamente rara de anomalias congnitas. A mais evidente dessas anomalias era a focomelia, uma condio na qual os ossos longos dos membros esto ausentes (amelia) ou severamente deficientes (peromelia), fazendo com
que os apndices resultantes paream membros de foca (Figura 21.23). Mais de
7000 crianas afetadas nasceram de mes que haviam tomado a droga, e uma
mulher necessitava ingerir apenas um comprimido para produzir crianas com os
quatro membros deformados (Lenz, 1962, 1966; Toms,1962). Outras anormalidades
induzidas pela ingesto de talidomida incluem defeitos no corao, ausncia de
ouvidos externos e intestinos malformados. A droga foi retirada do mercado em
Novembro de 1961.
Nowack (1965) documentou o perodo de susceptibilidade durante o qual a
talidomida causava essas anormalidades. Foi encontrado que a droga era teratognica
somente durante os dias 34-50 aps a ltima menstruao (cerca de 20 a 36 dias
ps-concepo). A especificidade da ao da talidomida mostrada na Figura
21.23C. Do dia 34 ao dia 38, no se observa anormalidades nos membros. Durante
esse perodo, a talidomida pode causar a ausncia ou deficincia dos componentes
do ouvido. Malformaes dos membros superiores so vistas antes daquelas dos
membros inferiores, pois durante o desenvolvimento os braos se formam pouco
antes do que as pernas.
CAPTULO 21
(A)
(B)
831
Figura 21.23
Estrutura e efeito da talidomida. (A) Estrutura qumica da

talidomida. (B) Focomelia em uma criana cuja me tomou
talidomida durante os primeiros dois meses de gestao. (C)
Perodo de suceptibilidade aos efeitos teratognicos da
talidomida. (De acordo com Nowack, 1965.)
(C)
Ausncia de ouvido
Dedos ausentes ou mal formados
Ausncia de braos
Severo encurtamento dos braos
Deslocamento da bacia
Malformao do ouvido
Ausncia de pernas
Severo encurtamento das pernas
Dedos malformados
Dias aps a ltima menstruao
A tragdia da talidomida mostrou os limites de modelos animais como testes do

potencial efeito teratognico de drogas. Diferentes espcies (e linhagens dentro das
espcies) metabolizam talidomida de maneira diferente. Ratas e camundongos fmeas grvidas - os animais usados normalmente para testar tais compostos-no produzem filhotes malformados quando recebem talidomida. O coelho produz alguns descendentes malformados, mas os defeitos so diferentes daqueles vistos em crianas
humanas afetadas. Primatas, tais como o sagi parecem ter uma susceptibilidade
semelhante do homem, e fetos de sagi afetados tm sido estudados como uma
tentativa de descobrir como a talidomida causa esses distrbios. McCredie (1976a,b)
props que a talidomida pode afetar a diferenciao das clulas derivadas da crista
neural, e McBride e Vardy (1983) mostraram que a diferena mais notvel vista antes
das malformaes dos membros se referia ao tamanho da raiz dorsal dos gnglios e
seus neurnios. O nmero de neurnios nesses gnglios marcadamente reduzido
(Figura 21.24). Esses autores especulam que os neurnios desses gnglios so necessrios para a manuteno do desenvolvimento dos membros e que a talidomida interfere com os neurnios ou os destroem.
Outra hiptese (Neubert et al., 1995; Geitz et al., 1996) prope que o alvo inicial da
talidomida so as molculas de adeso do broto do membro e seus capilares. A adio
de pequenas doses de talidomida a sagis ou a clulas endoteliais cultivadas resulta
em uma desacelerao de vrias molculas de adeso clula-clula ou clula-substrato.
832
Figura 21.24
Efeitos da talidomida no feto de sagi. As figuras superiores mostram fentipos de fetos de sagis tardiamente na gestao. As figuras inferiores mostram sees da medula espinhal ao nvel dos membros anteriores.
(A) Feto de um sagi controle. (B) Feto de um sagi tratado com 25mg de talidomida por quilograma de peso
coporal entre os dias 38 e 46 da gestao. (de McBride e Vardy, 1983, cortesia de W. G. McBride.)
Um terceiro mecanismo para explicar a teratogenicidade da talidomida foi proposto

por Lash e Saxn (1972). Lash (1963) observou que o rim primitivo, o mesonefro,
induzia o crescimento da cartilagem em tecido de membro cultivado. Lash e Saxn
observaram que a talidomida inibia esse crescimento de cartilagem induzido por
mesonefros em culturas de rgos humanos obtidos de embries abortados
eletivamente. Alm disso, a talidomida radioativa parecia se ligar especificamente ao
mesonefro humano. O mecanismo molecular dessa teratogenicidade seletiva da
talidomida ainda no conhecido, e isso ser um problema difcil de ser estudado
enquanto nossos nicos modelos animais forem outros primatas.
A tragdia da talidomida acentua outro princpio importante: o metabolismo em
embries diferente do que nos adultos, e a construo de um rgo pode ser
afetado por substncias qumicas que no tm efeito deletrio sobre o funcionamento daquele rgo. Vrios medicamentos para adultos so teratognicos para
embries. Esses incluem metotrexato (uma droga usada para deter o crescimento de
CAPTULO 21
833
clulas tumorais), anticonvulsivantes como trimetadiona e fenitona, e anticoagulantes

como warfarina. Fumar cigarros durante a gravidez foi associado com o retardamento do crescimento fetal, mas nem a ingesto de caf ou de antidepressivos triocclicos
produziu anormalidades significativas de desenvolvimento (veja Friedman, 1992:
Nulman et al., 1997).
lcool como um teratognico
Em termos de freqncia e custo sociedade, o teratognico mais devastador indubitavelmente o etanol. Em 1968, Lemoine e colegas verificaram uma sndrome
de defeitos de nascimento em crianas de mes alcolatras. Jones e Smith (1973)
tambm observaram a sndrome alcolica fetal (FAS). Bebs com FAS eram caracterizados como tendo uma cabea pequena, um filtro indistinto (o par de cristas que
correm entre o nariz e a boca acima do centro do lbio superior), um lbio superior
estreito, e uma baixa fossa nasal. O crebro dessa criana pode ser dramaticamente
menor do que o normal e freqentemente mostra defeitos na migrao neuronial e glial
(Figura 21.25; Clarren, 1986). Existe tambm uma proeminente morte celular extra no
processo frontonasal e nos gnglios do nervo craniano (Sulik et al., 1988). A sndrome
alcolica fetal o terceiro tipo mais prevalente de retardamento mental (atrs da sndrome do X frgil e da sndrome de Down) e afeta uma entre 500 a 750 crianas
nascidas nos Estados Unidos (Abel e Sokol, 1987).
Crianas com sndrome alcolica fetal so retardadas no desenvolvimento e mentalmente, com um QI mdio ao redor de 68 (Streissguth e LaDue, 1987). Foi determinado que pacientes com uma idade cronolgica mdia de 16.5 anos tinham um vocabulrio funcional de crianas de 6.5 anos e habilidades matemticas de alunos da
quarta-srie. A maioria dos adultos e adolescentes com FAS no podem gerenciar
dinheiro ou suas prprias vidas, e eles tm dificuldades em aprender com experincias
passadas. Entretanto, em muitos exemplos de FAS, as anormalidades de comportamento existem sem grandes mudanas fsicas no tamanho da cabea ou no QI (J.
Opitz, comunicao pessoal, 1996). Existe uma grande variao na habilidade de
mes e fetos para metabolizar o etanol, e se considera que 30-40% das crianas nascidas de mes alcolicas que bebem durante a gravidez tero FAS. A ingesto de
menores quantidades de etanol pela me pode levar ao efeito alcolico fetal, uma
forma menos severa de FAS, mas uma condio que diminui as habilidades funcionais e intelectuais do paciente.*
* Para uma notvel descrio da criao de uma criana com sndrome alcolica fetal bem como uma
anlise de FAS na cultura dos ndios Americanos nos Estados Unidos, veja Dorris (1989). Os efeitos
pessoais e sociolgicos de FAS esto bem integrados aos dados cientficos e econmicos.
Figura 21.25
Comparao de um crebro de uma criana com sndrome alcolica

fetal (esquerda) com o crebro de uma criana normal da mesma
idade (direita). O crebro de uma criana com FAS significativamente menor, e o padro de convolues est obscurecido pelas
clulas gliais que migraram sobre o topo do crebro. (Fotografia
cortesia de S. Clarren.)
834
Figura 21.26
Porcentagem de clulas aderentes
Possveis mecanismos que produzem a

sndrome alcolica fetal. (A-C) Morte celular
pelos radicais de superxido induzidos pelo
etanol. Colorao com sulfato de Azul do
Nilo revela reas de morte celular. (A) Regio
da cabea de um embrio controle de camundongo de 9 dias. (B) Regio da cabea de um
embrio tratado com etanol, mostrando reas
de morte celular. (C) Regio da cabea de um
embrio de 9 dias tratado com etanol e
superxido dismutase, um inibidor de radicais
superxido. O inibidor do superxido impede
a morte celular induzida pelo lcool. (D) Grfico representando a inibio da adeso celular
mediada por L1 pelo etanol. (A-C de Kotch et
al., 1995; fotografias cortesia de K. Sulik; D de
acordo com Ramanathan et al., 1996.)
Clulas
aderindo
pelo L1
Clulas controle no
expressando L1
Concentrao de etanol, mM
Um sistema modelo no camundongo foi usado para explicar os efeitos do

lcool na face e no sistema nervoso. Quando camundongos recebem etanol na
poca da gastrulao, induzido o mesmo espectro de defeitos do desenvolvimento como em humanos. Aps 12 horas da ingesto de lcool pela me, j so
observadas anormalidades do desenvolvimento. As estruturas da linha mediana
no se formam, permitindo a proximidade anormal dos processos medianos da
face. So vistas tambm anomalias no crebro anterior, e os fetos afetados mais
severamente no tm um crebro anterior completo (Sulik et al., 1988). Nos embries tratados com etanol, a morte celular pode ser vista com proeminncia no
processo frontonasal (facial), como tambm nos gnglios do nervo craniano e
no mesoderma do arco visceral. Estudos recentes sugerem que etanol pode induzir seus efeitos teratognicos por mais de um mecanismo. Primeiro, evidncia
anatmica sugere que a migrao da crista neural severamente prejudicada.
Segundo, a morte celular pode ser causada pela produo de radicais de
superxido que oxidam membranas celulares e levam citlise (Figura 21.26A-C;
Davis et al., 1990; Kotch et al., 1995). Terceiro, o lcool pode impedir diretamente
que a molcula L1 de adeso celular funcione mantendo as clulas agregadas.
Ramanathan e colegas (1996) mostraram que o etanol pode bloquear as funes
CAPTULO 21
adesivas das protenas L1 in vitro a nveis to baixos como 7mM, uma concentrao de etanol produzida no sangue ou crebro com um nica dose (Figura
21.26D). Alm disso, mutaes nos genes L1 humanos causam uma sndrome de
retardamento mental e malformaes semelhantes quelas vistas em casos severos da sndrome alcolica fetal. [env7.html]
Outros agentes teratognicos
Drogas e substncias qumicas no so os nicos agentes capazes de causar distrbios no desenvolvimento. Outra classe de teratognicos inclui os vrus. Gregg (1941)
foi o primeiro a documentar o fato que mulheres com rubola (sarampo Alemo)
durante o primeiro tero da gravidez tinham uma chance em seis de dar luz uma
criana com catarata ocular, malformaes cardacas ou surdez. Essa foi a primeira
evidncia de que a me no podia proteger totalmente seu feto contra o meio ambiente externo. Quanto mais cedo na gravidez ocorria a infeco por rubola, maior era
o risco de que o embrio seria malformado. As primeiras cinco semanas parecem ser
as mais crticas, porque nesse perodo que esto sendo formados o corao, os
olhos e os ouvidos. A epidemia de rubola entre 1963 e 1965 nos Estados Unidos
provavelmente resultou em 20.000 mortes fetais e 30.000 crianas com defeitos de
nascena. Dois outros vrus, Cytomegalovirus e Herpes simplex, so tambm
teratognicos. Infeco por Cytomegalovirus em embries precoces quase sempre fatal, mas infeco mais tardia pode levar cegueira, surdez, paralisia cerebral e
retardamento mental.
Bactrias e protistas so raramente teratognicos, mas dois deles podem prejudicar embries humanos. Toxoplasma gondii, um protozorio carreado por coelhos e
gatos (e por suas fezes), pode atravessar a placenta e causar defeitos no crebro e
olhos do feto. Treponema pallidum, a causa da sfilis, pode matar fetos precoces e
produzir surdez em outros mais velhos.
A radiao ionizante pode quebrar cromossomos e alterar a estrutura do DNA.
Por essa razo, mulheres grvidas so alertadas para evitar RaiosX desnecessrios, mesmo que no exista evidncia para anomalias congnitas resultantes de
radiao diagnstica (Holmes, 1979). O calor em febres altas tambm um
teratognico possvel. [env8.html], [env11.html]
Apesar de conhecermos as causas de certas malformaes, a maioria das anormalidades congnitas ainda no esto explicadas. Por exemplo, anomalias cardacas congnitas ocorrem 1 em 200 nascimentos vivos. As causas genticas so responsveis
por cerca de 8% dessas anomalias cardacas, e cerca de 2% podem ser explicadas por
teratognicos conhecidos. Isso deixa 90% das anomalias sem explicao (ORahilly e
Mller, 1992). Ainda existe muita pesquisa a ser realizada e ainda no foram feitas
anlises da maioria das substncias qumicas para avaliar seus efeitos teratognicos.
Atualmente, existem mais de 50.000 substncias qumicas artificiais em uso na nossa
sociedade e entre 200 e 500 novos materiais sendo produzidos a cada ano (Johnson,
1980). O problema de analisar esses produtos qumicos de grande importncia, e
protocolos padro so caros, longos, e sujeitos a diferenas metablicas entre espcies. Ainda no existe consenso em como testar a teratogenicidade de uma substncia
em embries humanos.
Na antiga Unio Sovitica, a prtica no regulada de uma produo industrial a
qualquer custo, deixa uma herana de defeitos de nascimentos em elevao. Em
algumas regies do Kazakhstan, teratognicos como o chumbo, o mercrio e o zinco
so encontrados em altas concentraes na gua potvel, nos vegetais e no ar. Nesses
lugares, quase metade das pessoas testadas apresentaram extensa quebra cromossmica. Em algumas reas, a incidncia de defeitos de nascimento dobrou desde 1980
(Edwards, 1994). Apesar da constante presena de teratognicos entre ns, os fetos
esto expostos a riscos cada vez maiores com o aparecimento anual de muitos compostos no testados em nosso ambiente.
835
836
&
Especulaes
Estrognos Ambientais
ma das maiores controvrsias na

toxicologia ambiental , provavelmente, a questo se pesticidas so os responsveis pelo cncer de
mama, pelo declnio da contagem de espermatozides no homem e por malfunes congnitas em animais selvagens. Os
Americanos usam quase 2 bilhes de libras de pesticidas cada ano. Alm disso,
alguns resduos de pesticidas permanecem
na cadeia alimentar durante dcadas. O
DDT foi banido nos Estados Unidos em
1972 mas sua meia-vida ambiental de
100 anos (Nature, 1995). Evidncia recente
mostrou que o DDT [dicloro-difeniltricloroetano] e seu principal produto metablico, DDE (que no tem um dos tomos de cloro), podem agir como compostos estrognicos, mimetizando o hormnio sexual feminino estrogno, ou inibindo a eficincia de andrognios (Davis et
al., 1993; Kelce et al., 1995). Esses compostos foram associados a problemas ambientais como o decrscimo na populao de crocodilos na Flrida, a feminizao de peixes no Lago Superior, o aumento de cncer de mama, e o declnio mundial nas contagens de espermatozide humano (Carlsen et al., 1992; Keiding e
Skakkebaek, 1993; Stone, 1994). Guillette
e colaboradores (1994) associaram uma
contaminao de DDT no lago Apopka na
Flrida a um declnio em 90% no ndice de
nascimentos de crocodilos e ao tamanho
reduzido do pnis em machos jovens.
Dioxina, outro ingrediente de pesticidas,
foi relacionado com cncer; e os descendentes machos de ratas prenhes expostas
dioxina tm contagem de espermatozide
mais baixa, testculos menores e menos
comportamentos especficos de machos.
Alguns cientistas, entretanto, consideram exageradas essas afirmaes. Apesar de pesticidas poderem mimetizar os
estrgenos, s o fazem em grandes quantidades e se ligam ao receptor de estrgeno 1000 vezes mais fracamente do que
os estrgenos normais. Outro argumento
que alguns componentes de pesticidas
tm fracos efeitos anti-estrognicos, que
cancelariam os fracos efeitos estrogni-
cos. Crticos de pesticidas, entretanto,

alegam que ainda que esses componentes se liguem fracamente ao receptor de
estrgenos, eles esto presentes no soro
sangneo 100 vezes mais do que a concentrao dos estrgenos normais. Eles
tambm argumentam que pequenas quantidades de outros compostos ativos podem agir sinergisticamente para estimular a atividade estrognica normalmente
fraca dessas molculas (veja Hansen e
Jansen, 1994; Stone, 1994). Arnold e colegas (1996), por exemplo, mostraram que
a combinao de dois fracos estrgenos
ambientais produz um efeito 1000 vezes
mais forte do que cada composto sozinho. Um trabalho recente de Kelce e colegas (1995) sugere que o modo de operao crtico pode no ser o efeito fracamente estrognico do DDT, mas o potente efeito antitestosterona de seu metablito, DDE. O DDE capaz de inibir a transcrio responsiva a andrognios em doses comparveis quelas encontradas em
solos contaminados nos Estados Unidos
e outros pases.
Alguns compostos estrognicos podem estar no nosso alimento ou na sua
embalagem, pois compostos qumicos
usados para estabilizar plsticos foram,
em alguns casos, demonstrados como estrognicos. A descoberta desse efeito dos
estabilizadores de plsticos foi feita de
maneira preocupante. Pesquisadores da
Tufts University Medical School estudavam clulas tumorais responsivas a
estrgenos. Essas clulas requerem o
estrgeno para proliferar. Os experimentos foram bem at 1987 quando algo
aconteceu. As clulas controle estavam
crescendo to bem como as tratadas com
estrgenos. Parecia que o meio havia sido
contaminado por estrgenos. Qual seria
a fonte de contaminao? Aps quatro
meses de testes com todos os componentes de seu sistema experimental, os pesquisadores descobriram que a fonte de
estrgeno era os tubos plsticos que continham a gua e o soro. A companhia que
produziu os tubos se recusou a identificar seu novo processo de estabilizao
do plstico polistireno e os pesquisadores tiveram que faz-lo eles mesmo. Descobriu-se que o composto era o pnonilfenol, usado para endurecer o plstico PVC dos encanamentos que trazem
gua e para estabilizar o plstico polistireno que contm gua, leite, suco de laranja e outros lquidos (Soto et al., 1991;
Colburn et al., 1996). Esse composto
tambm o produto de degradao de detergentes e produtos de limpeza caseira.
Um composto relacionado, 4-tert-pentilfenol, tem um potente efeito estrognico
em clulas humanas cultivadas e pode
fazer com que carpas machos (Cyprinus
carpis) desenvolvam ovidutos, tecido
ovariano e ocitos (Gimeno et al., 1996).
Alguns outros estrgenos ambientais
so os bifenis policlorinados (PCBs). Esses compostos eram muito usados como
refrigeradores at serem banidos, na dcada de 1970, como causadores de cncer em ratos. Entretanto, eles permanecem na cadeia alimentar e tm sido responsabilizados pelo declnio generalizado da capacidade reprodutiva de lontras, focas, vises e peixes. Os PCBs se
assemelham ao dietil-estilbesterol (DES)
na forma, e eles podem afetar o receptor
de estrgenos como o faz o DES, talvez
se ligando a outro stio do receptor estrognico. A estrutura desses compostos se parece com a estrutura dos hormnios da tireide (Figura 21.27). Hormnios da tireide so crticos para o crescimento da cclea do ouvido interno, e
ratos cujas mes foram expostas a PCBs
mostravam ccleas mal desenvolvidas e
defeitos de audio (Goldey e Crofton
em Stone, 1995). [env9.html]
No norte dos Estados Unidos e sul do
Canad est havendo um dramtico aumento no nmero de rs com deformaes desenvolvimentais no que parecem
ser puras lagoas de florestas. As principais anormalidades so membros extras
e malformados. No se conhece a causa
desses distrbios, mas a especulao (veja
Hilleman, 1996) que pesticidas (pulverizados para o controle de mosquitos e
carrapatos) estejam ativando os recepto-
CAPTULO 21
Estradiol-17
Dietilestilbesterol
837
Figura 21.27
Estruturas de hormnios e compostos que provocam distrbios em hormnios.
Bisfenol-A
o,p-DDT
Tiroxina
Estrutura PCB
Interaes gentica-ambiental
A observao de que uma substncia pode ser teratognica em uma espcie mas no
em outra, sugere fortemente que existe um componente gentico para que uma substncia possa ou no produzir modificaes no desenvolvimento normal. Evidncia
recente sugere que diferentes alelos na populao humana podem influenciar se uma
substncia benigna ou perigosa para o feto. Por exemplo, existe na populao em
geral, um pequeno risco de que o fumo intenso pela me cause malformaes faciais
no seu feto. Entretanto, se o feto possui um determinado alelo (A2) do gene para o
fator de crescimento TGF-, a fumaa absorvida atravs da placenta pode aumentar
de dez vezes o risco de lbio e plato fissurados (Shaw et al., 1996). Analogamente,
diferentes alelos codificando a enzima lcool desidrogenase-2 tm diferentes habilidades de degradar o etanol. Se o alto consumo de lcool pela me leva uma sndrome
alcolica fetal ou a um efeito alcolico fetal depender do tipo de isozimas de lcool
desidrogenase presentes na me e no feto (McCarver-May, 1996). Portanto, se um
composto teratognico depende de muitos fatores, incluindo os genes do indivduo a ele exposto.
Resumo
Freqentemente, o desenvolvimento ocorre em um meio ambiente rico, e a maioria dos animais sensvel s sugestes do ambiente. O ambiente pode determinar o
fentipo sexual, pode induzir incrveis adaptaes qumicas e estruturais de acordo
com a estao, pode induzir determinadas modificaes morfolgicas que permitem
res de cido retinico e reespecificando

tecidos como membros.
difcil documentar os efeitos dos
compostos ambientais no homem, e ainda mais difcil determinar os efeitos de
cocktails consistindo de diferentes
compostos ingeridos em tempos diferentes. Ainda necessrio um grande volume de pesquisa na bioqumica desses
compostos, seus efeitos no desenvolvimento e a epidemiologia das anormalidades do desenvolvimento. No momento, a evidncia proveniente de estudos
com animais sugere que o homem e as
populaes de animais silvestres esto
ameaados por esses moduladores hormonais, mas no esto disponveis todos
os dados necessrios. [env10.html]
838
que o indivduo escape predao e pode induzir a determinao de castas nos insetos.
O ambiente tambm pode alterar a estrutura de nossos neurnios e a especificidade de
nossas clulas imunocompetentes. Infelizmente, o ambiente tambm pode ser a fonte de
compostos qumicos que prejudicam processos normais de desenvolvimento.
Enquanto o desenvolvimento ocorre normalmente em um ambiente natural complexo, ele pode ser facilmente estudado no laboratrio. Na verdade, nossos sistemas
modelo so animais facilmente domesticados, cujo desenvolvimento pouco afetado por fatores ambientais (Bolker, 1995). Entretanto, ao conhecermos a complexidade do desenvolvimento, compreendemos que esse criticamente ligado ao ambiente.
necessria uma comunidade para desenvolver um embrio. A explorao de como
o ambiente regula o desenvolvimento est apenas comeando.
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A saga da linhagem germinativa
E o fim de todo nosso explorar

Ser o retorno para de onde partimos
E pela primeira vez o conhecimento do lugar.
T. S. ELIOT (1942)
22
OMEAMOS NOSSA ANLISE do desenvolvimento animal discutindo a
fecundao, e iremos terminar nosso estudo sobre o desenvolvimento individual investigando a gametognese, os processos pelos quais so formados o espermatozide e o vulo. Clulas germinativas proporcionam a continuidade
da vida entre as geraes, e os ancestrais mitticos de nossas prprias clulas
germinativas residiram uma vez nas gnadas de rpteis, anfbios, peixes e invertebrados. Em muitos animais, como insetos, nematelmintos e vertebrados existe uma
clara e precoce separao das clulas germinativas de tipos celulares somticos. Em
vrios filos animais (e no todo do reino vegetal), essa diviso no est to bem estabelecida. Nessas espcies (que incluem cnidrios, platelmintos e tunicados), as clulas somticas podem facilmente se tornarem clulas germinativas mesmo em organismos adultos. Os zoides, brotos e plipos de muitos filos de invertebrados atestam
a capacidade das clulas somticas dar origem a novos indivduos.
Naqueles organismos nos quais existe uma linhagem germinativa estabelecida, separando-se precocemente no desenvolvimento, as clulas germinativas no se originam de dentro da gnada propriamente. Ao contrrio, seus precursores as clulas
germinativas primordiais (PGCs) migram para o interior das gnadas em desenvolvimento. O primeiro passo na gametognese, portanto, envolve a formao das PGCs
e sua conduo para o sulco genital medida que a gnada est se formando. A iniciao da linhagem da clula germinativa (a linhagem germinativa) em anfbios, insetos e
nematelmintos foi discutida no Captulo 13. Reiniciamos nossa histria da linhagem
germinativa com a migrao das PGCs de seu local de origem para as gnadas.
Migrao das clulas germinativas

Migrao das Clulas Germinativas em Anfbios
Conforme discutido no Captulo 13, o plasma germinativo de anfbios anuros sapos
e rs se agrupa ao redor do plo vegetal do embrio de 1 clula. Durante a clivagem,
esse material levado para cima atravs do citoplasma vitelnico, e os grnulos ricos
em RNA se associam com as clulas endodrmicas revestindo o assoalho da blastocele (Figura 22.1; Bounoure, 1934; Ressom e Dixon, 1988; Kloc et al., 1993). As
PGCs ficam concentradas na regio posterior do intestino larval, e medida que se
forma a cavidade abdominal, as PGCs do anuro emigram ao longo do lado dorsal do
843
844
Figura 22.1
Alteraes na posio do plasma germinativo (colorido) no

embrio precoce da r. Originalmente localizado perto do plo
vegetal do ovo no-clivado (A), o plasma germinativo avana
ao longo dos sulcos de clivagem (B) at se localizar no assoalho
da blastocele (C). (Segundo Bounoure, 1934.)
Sulco de clivagem
Plo animal
(A)
(B)
Plasma
germinativo
Plo vegetal
(C)
Blastocele
intestino, primeiramente ao longo do mesentrio dorsal (que conecta o intestino com

a regio onde os rgos mesodrmicos esto se formando) e em seguida ao longo da
parede abdominal e para dentro dos sulcos genitais. Elas migram para cima nesse
tecido at atingirem as gnadas em desenvolvimento (Figura 22.2). As PGCs de Xenopus se movimentam extruindo um nico filopdio e em seguida escorrendo seu
citoplasma vitelnico para o filopdio enquanto retraem sua cauda. Conduo por
contato dessa migrao parece provvel pois ambas as clulas e a matriz extracelular
sobre a qual elas migram esto orientadas na direo dessa migrao (Wylie et al.,
1979). Alm disso, a adeso e a migrao de PGC pode ser inibida se o mesentrio
for tratado com anticorpos contra a fibronectina de Xenopus (Heasman et al., 1981).
Assim, o caminho para a migrao das clulas germinativas nessas rs parece ser
constitudo por uma matriz extracelular contendo fibronectina orientada. As fibrilas
sobre as quais as PGCs viajam perdem essa polaridade logo aps o trmino da migrao.* Enquanto elas migram, as PGCs de Xenopus se dividem cerca de trs vezes, e
aproximadamente 30 PGCs colonizam as gnadas (Whitngton e Dixon, 1975; Wylie
e Heasman, 1993). Essas iro se dividir para formar as clulas germinativas.
As clulas germinativas primordiais dos anfbios urodelos (salamandras) tm uma
origem aparentemente diferente, que foi tracejada por experimentos de transplantes
recprocos para as regies do mesoderma que involuem atravs dos lbios ventrolaterais
do blastporo. Alm disso, no parece existir qualquer plasma germinativo em ovos
de salamandra. Em vez disso, a interao das clulas endodrmicas dorsais e as clulas do hemisfrio animal cria as condies necessrias para formar clulas germinativas nas reas particulares que involuem atravs dos lbios ventrolaterais (Sutasurya
e Nieuwkoop, 1974). Assim em salamandras, as PGCs so formadas por induo dentro da regio mesodrmica e presumivelmente seguem um caminho diferente para o
interior da gnada.
Migrao das Clulas Germinativas em Mamferos
Figura 22.2
Migrao das clulas germinativas primordiais

em uma r. Esta fotomicrografia de contraste
de fase de uma seo atravs da parede corporal e mesentrio dorsal de um embrio de Xenopus mostra a migrao de duas grandes clulas germinativas primordiais (setas) ao longo
do mesentrio dorsal. (de Heasman et al., 1977,
No existe plasma germinativo bvio em mamferos, e as clulas germinativas de

mamferos no so morfologicamente distintas durante o desenvolvimento inicial.
Porm, usando anticorpos monoclonais que reconhecem diferenas na superfcie celular entre as PGCs e suas clulas circunjacentes, Hahnel e Eddy (1986) mostraram que
as PGCs de camundongos residem originalmente no epiblasto do embrio em gastrulao. Ginsburg e seus colegas (1990) localizaram essa regio no mesoderma extraembrionrio imediatamente posterior estria primitiva do embrio de camundongo de
sete dias. Aqui so vistas cerca de oito grandes clulas coradas pela fosfatase alcalina. Se essa rea for removida, o embrio remanescente torna-se livre de clulas
germinativas, enquanto o segmento isolado desenvolve um grande nmero de clulas
primordiais. Em embries de camundongos normais, os precursores das clulas
*Isso no parece necessariamente ser verdade para todos os anuros. Na r Rana pipiens, as clulas
germinativas seguem um caminho semelhante mas podem ser viajantes passivos ao longo do mesentrio
em vez de clulas ativamente mveis (Subtelny e Penkala, 1984).
CAPTULO 22 A Saga da Linhagem Germinativa
845
Figura 22.3
Intestino
anterior
Intestino
posterior
Alantide
Sulcos
genitais
Corao
Clulas
germinativas
primordiais
Mesonefros
Mesentrio
dorsal
Saco vitelnico
(A)
(B)
Cloaca
Intestino
posterior
Clulas germinativas
primordiais
(C)
Clulas germinativas primordiais
(D)
Mesentrio
dorsal
Sulcos
genitais
germinativas no mesoderma extra-embrionrio migram em seguida de volta para o

embrio, primeiramente para o mesoderma da linha primitiva e em seguida para o
endoderma atravs da alantide. O caminho dessa migrao (Figura 22.3) assemelhase migrao de PGCs em anuros. Aps juntarem-se na alantide no dia 7.5 (Chiquoine,
1954; Mintz, 1957), as PGCs de mamferos migram para o saco vitelnico adjacente
(Figura 22.3A,C). Nesse tempo, elas j se separaram em duas populaes que iro
migrar para o sulco genital direito ou esquerdo. Em seguida, as PGCs iro se mover
caudalmente no saco vitelnico atravs do intestino posterior recm-formado subindo
pelo mesentrio dorsal para dentro do sulco genital (Figura 22.3B,D.) A maioria das
PGCs alcanam a gnada em desenvolvimento no dcimo primeiro dia aps a fecundao. Durante esse trajeto, elas tero se proliferado de uma populao inicial de 10 a 100
clulas para as 2500 a 5000 PGCs presentes nas gnadas no dia 12. Tal como as PGCs
de Xenopus, as PGCs de mamferos parecem estar estreitamente associadas com a
clulas sobre as quais elas migram, movimentando-se por extenso de filopdios
sobre as superfcies celulares subjacentes. Essas clulas tambm so capazes de
Trajetria para a migrao de clulas germinativas primordiais de mamfero. (A) clulas germinativas primordiais vistas no saco vitelnico
prximas da juno do intestino posterior e da
alantide. (B) Migrao atravs do intestino e,
dorsalmente, acima do mesentrio dorsal para
o interior do sulco genital. (C) Quatro grandes
PGCs no intestino posterior de um embrio de
camundongo (perto da alantide e do saco
vitelnico) se coram positivamente para altos
nveis de fosfatase alcalina. (D) Tais clulas
podem ser vistas migrando subindo o mesentrio dorsal e entrando nos sulcos genitais. (A
e B de Langman, 1981; C de Heath, 1879; D de
Mintz, 1957; fotografias cortesia dos autores.)
846
penetrar monocamadas celulares e migram atravs de camadas celulares (Stott e Wylie,

1986). O mecanismo pelo qual as clulas germinativas primordiais tm conhecimento
da rota dessa jornada permanece ainda desconhecido. A fibronectina provavelmente
um substrato importante sobre as quais as PGCs migram (ffrench-Constant et al.,
1991), e evidncia in vitro sugere que os sulcos genitais dos embries de camundongo de 10.5 dias secretam uma protena semelhante TGF-1 difusvel que capaz de
atrair as clulas germinativas primordiais do camundongo (Godin et al., 1990; Godin e
Wylie, 1991). Permanece por ser testado se o sulco genital pode prover tais sinais.
Embora nenhum plasma germinativo tenha sido encontrado, a reteno da potncia total foi correlacionada com a expresso de um fator de transcrio nuclear, o Oct4.
Esse fator expresso em ncleos do blastmero de clivagem precoce sendo em seguida expresso na massa celular interna. Durante a gastrulao, ele expresso somente
naquelas clulas epiblsticas posteriores consideradas dar origem s clulas
germinativas primordiais. Depois, essa protena somente vista nas clulas
germinativas primordiais e em ocitos (Figura 22.4; Yeom et al., 1996; Prancha 30).
A proliferao das PGCs parece ser provida pelo fator da clula-tronco, o mesmo fator de crescimento necessrio para a proliferao dos melanoblastos derivados
da crista neural e de clulas-tronco hematopoiticas (veja Captulo 7). O fator da
clula-tronco produzido pelas clulas ao longo do seu trajeto de migrao e permanece ligado s suas membranas celulares. Parece que a apresentao dessa protena
nas membranas importante para sua atividade. Camundongos homozigotos para a
mutao White (W) so deficientes em clulas germinativas (e em melancitos e
clulas sangneas), j que suas clulas-tronco carecem do receptor para o fator de
crescimento da clula-tronco. Camundongos homozigotos para a mutao Steel tm
um fentipo semelhante, pois tambm carecem da capacidade de produzir esse fator
de crescimento. Camundongos homozigotos para o alelo Steel-Dickie (Sld) tm um
nmero reduzido de clulas germinativas, pois embora esses camundongos possam
produzir o fator de crescimento da clula-tronco, esse no permanece ligado s suas
membranas (Dolci et al., 1991; Matsui et al., 1991). A adio do fator da clulatronco precursor s PGCs retiradas de camundongos de 11 dias ir estimular sua
proliferao por cerca de 24 horas e parece prevenir a morte programada de clulas
que de outra maneira iria ocorrer (Pesce et al., 1993).
(A)
(B)
(C)
Figura 22.4
Expresso de mRNA Oct4 se correlaciona com a totipotncia e a capacidade de formar clulas

germinativas. Um transgene Oct4/lacZ impulsionado pela regio promotora Oct4 mostra sua
expresso na (A) massa celular interna, (B) epiblasto posterior de um embrio de 8.5 dias, e (C)
em PGCs migrando em um embrio de 10.5 dias. (Segundo Yeom et al., 1996; permisso cortesia
de H. R. Schler.)
847
&
Especulaes
Teratocarcinomas e Clulas-Tronco Embrionrias
FATOR DA CLULA-TRONCO
aumenta a proliferao de clulas

germinativas primordiais de camundongo em cultura, e essa proliferao pode ainda ser aumentada pela adio
de outro fator de crescimento, o fator de inibio de leucemia (LIF). Porm, o tempo
de vida dessas clulas curto e elas morrem logo. Se um regulador mittico adicional- o fator de crescimento de fibrobalsto
bsico for adicionado, acontece uma mudana notvel. As clulas continuam a proliferar, produzindo uma clula-tronco embrionria pluripotente com caractersticas semelhantes s das clulas da massa
celular interna (Matsui et al., 1992). Discutimos essas clulas-tronco embrionrias anteriormente, pois so as clulas que
podem ser transfectadas com genes recombinantes e inseridas no blastocisto
para criar camundongos transgnicos.
Tal clula germinativa ou clula-tronco
de mamfero contm em seu interior toda a
informao necessria para o subseqente
desenvolvimento. O que aconteceria se tal
clula se tornasse maligna? Em um tipo de
Epitlio
Clulas
queratinizadas
Eritrcitos
Matriz ssea
Cartilagem
Tecido
conjuntivo
Epitlio
queratinizante
Figura 22.5
tumor, as clulas germinativas tornam-se clulas-tronco embrionrias, tal como nos experimentos j referidos. Esse tipo de tumor
chamado teratocarcinoma. Seja espontneo ou produzido experimentalmente, um
teratocarcinoma contm uma populao de
clulas-tronco no diferenciadas que tem
propriedades bioqumicas e desenvolvimentais notavelmente semelhantes quelas das
clulas da massa celular interna (Graham,
Fotomicrografia de uma seo atravs de um

teratocarcinoma mostrando numerosos tipos de
clulas diferenciadas. (de Gardner, 1982, fotografia de C. Graham, cortesia de R. L. Gardner.)
1977). Alm disso, essas clulas-tronco no

somente se dividem, como tambm podem
se diferenciar em uma grande variedade de
tecidos, incluindo epitlios intestinal e respiratrio, msculos, nervos, cartilagem e osso
Insero no
blastocisto
Transferncia cirrgica
para a me de criao
Incorporao
na massa
celular interna
Isolamento da linhagem de
clulas-tronco
Teratocarcinoma
maligno
Figura 22.6
Mosaico
Tipo selvagem
F1 onde as clulas germinativas

foram derivadas do tumor
Nova linhagem formada quando

foram cruzados dois camundongos F1
Protocolo para a criao de camundongos cujos genes so predominantemente derivados de clulas tumorais. Clulas-tronco
foram isoladas de um teratocarcinoma de camundongo e inseridas
em blastocistos de uma variedade diferente de camundongo. Os
blastocistos quimricos foram colocados em uma me de criao. Se as clulas tumorais estiverem integradas no blastocisto,
o camundongo que se desenvolve ter muitas de suas clulas
derivadas do tumor. Se o tumor tiver dado origem s clulas
germinativas, os camundongos mosaicos podem ser cruzados
com camundongos normais para produzir uma gerao F1. Os
animais F1 devem ser heterozigotos para todos os cromossomos
das clulas tumorais. Cruzamentos entre animais F1 produzem
camundongos F2 tendo alguns genes homozigotos derivados
das clulas tumorais. (Segundo Stewart e Mintz, 1981.)
848
(Figura 22.5). Uma vez diferenciadas, essas

clulas no podem mais se dividir e, portanto, no so malignas. Tais tumores podem
dar origem maioria dos tipos de tecidos no
organismo. Assim, as clulas-tronco do teratocarcinoma copiam o desenvolvimento mamfero precoce, mas o tumor que formam
caracterizado por desenvolvimento randomizado, descontrolado.
Em 1981, Stewart e Mintz formaram
um camundongo de clulas derivadas em
parte de uma clula-tronco de teratocarcinoma. Clulas-tronco que haviam surgido em um teratocarcinoma de uma va-
riedade agouti (ponta-amarela) de camundongo foram cultivadas por vrias geraes e foram vistas manter o complemento cromossmico caracterstico do camundongo ancestral. Clulas-tronco individuais desse tipo foram injetadas em
blastocistos de camundongos negros. Os
blastocistos foram em seguida transferidos para o tero de uma me de criao,
nascendo camundongos vivos. Alguns
desses tinham pelagem de duas cores, indicando que as clulas tumorais haviam
se integrado no embrio. Alm disso,
quando cruzado com um camundongo
portando um marcador apropriado, o camundongo quimrico foi capaz de gerar

camundongos tendo parte do fentipo do
tumor paterno. A clula do carcinoma
embrionrio maligno tinha produzido
muitos, seno todos, tipos de clulas
somticas normais, e tinham mesmo produzido clulas germinativas normais,
funcionais! Quando camundongos tendo uma clula tumoral para um pai foram
cruzados entre si, a prole resultante continha camundongos homozigotos para
um grande nmero de genes da clula
tumoral (Figura 22.6).
Migrao de Clulas Germinativas em Aves e Rpteis

Em aves e rpteis, as clulas germinativas primordiais so derivadas de clulas epiblsticas que migram da regio central da rea pelcida para uma zona em forma de
crescente no hipoblasto na borda anterior da rea pelcida (Figura 22.7; Eyal-Giladi et
al., 1981; Ginsburg e Eyal-Giladi, 1987). Essa regio extra-embrionria chamada de
crescente germinativo, e as clulas germinativas primordiais a se multiplicam. Ao
contrrio das PGCs em anfbios e mamferos, as clulas germinativas em aves e rpteis
migram primariamente por meio da corrente circulatria (Figura 22.8). Quando os vasos sangneos se formam no crescente germinativo, as PGCs penetram nos vasos e
so carreadas pela circulao para a regio onde est se formado o intestino posterior.
Aqui, elas saem da circulao, associam-se ao mesentrio, e migram para os sulcos
genitais (Swift, 1914; Kuwana, 1993). As PGCs do crescente germinativo parecem
entrar nos vasos sangneos por diapedese, um tipo de movimento em comum de
linfcitos e macrfagos que permite s clulas se espremerem entre as clulas
endoteliais dos vasos sangneos menores.
Crescente
germinativo
rea pelcida
rea opaca
Ndulo de Hensen
Figura 22.7
Vista dorsal de um embrio em estgio de linha primitiva, mostrando a regio, chamada crescente
germinativo, na qual se originam as clulas germinativas. (Segundo Swift, 1914.)
849
Vaso sangneo
Clulas sangneas
Epitlio gonadal
Clula
germinativa
primordial
(A)
(B)
Figura 22.8
Dessa forma, as PGCs entram no embrio sendo transportadas pelo sangue (Pasteels,
1953, Dubois, 1969). As PGCs tm tambm que saber como sair do sangue quando
encontram a gnada em desenvolvimento (veja Figura 22.8B). Quando o crescente
germinativo de um embrio de pinto removido, e a circulao desse embrio juntada quela de um embrio normal, as clulas germinativas primordiais do embrio normal iro migrar para ambos conjuntos de gnadas (Simon, 1960). No conhecido o
que causa a atrao para os sulcos genitais. Uma possibilidade que a gnada em
desenvolvimento produz uma substncia quimiottica que atrai as PGCs e as retm
nos capilares limitando a gnada (Regulska, 1969). (Tais substncias so conhecidas
como secretadas pelos linfcitos nos locais de infeco para atrair os macrfagos
permitindo que esses passem atravs da parede capilar por diapedese.) A evidncia
para essa quimiotaxia veio de estudos (Kuwana, et al., 1986) nos quais as PGCs
circulantes do pinto foram isoladas do sangue e cultivadas entre rudimentos gonadais
e outros tecidos embrionrios. As PGCs migraram para o interior dos rudimentos
gonadais durante 3 horas de incubao.
Outra possibilidade que as clulas endoteliais dos capilares gonadais tm um
composto na superfcie celular que promove as PGCs aderirem especificamente a esse
local. Usando anticorpos monoclonais que reconhecem diferentes molculas da superfcie celular, Auerbach e Joseph (1984) mostraram que as clulas endoteliais de
vrias redes capilares tm diferentes componentes da membrana celular, e que as
clulas endoteliais de capilares ovarianos diferem de todas as outras testadas.* Tanto
a quimiotaxia como os mecanismos diferenciais de adeso celular podem estar atuando. Seja como for, esses fatores no so espcie-especficos. A gnada do pinto
atrai as PGCs circulantes do peru e at mesmo do camundongo (Reynaud, 1969;
Regulska et al., 1971).
rimordiais em Drosophila
Migrao de Clulas Germinativas P
Primordiais
Durante a embriognese de Drosophila, as clulas germinativas passam do plo
posterior para as gnadas. O primeiro passo uma fase passiva, na qual as clulas
germinativas so deslocadas pelos movimentos das clulas embrionrias durante
a gastrulao. A diferenciao do endoderma aciona o movimento amebide ativo
*Uma situao semelhante parece ocorrer quando linfcitos migram atravs da corrente sangnea
e abandonam a circulao quando entram no leito capilar de um determinado rgo linfide. O mecanismo para esse alojamento e especificidade para o rgo envolvem a capacidade do linfcito de
aderir especificamente s clulas endoteliais dos vasos sangneos nesses rgos. Clulas endoteliais
dos ndulos linfticos perifricos contm uma glicoprotena, uma selectina, em suas membranas
celulares que essencial para a ligao e sada daqueles linfcitos que podem reconhec-la. Para
cada selectina nessas clulas endoteliais, existe uma molcula complementar no linfcito que
pode reconhec-la (Gallatin et al., 1983, 1986).
Clulas germinativas primordiais no embrio

do pinto. (A) Micrografia eletrnica de varredura de PGC de pinto em um capilar de um
embrio em gastrulao. A PGC pode ser
identificada pelo seu grande tamanho e as
microvilosidades em sua superfcie. (B) Seo transversal prxima prospectiva regio
gonadal do embrio. Vrias PGCs dentro do
vaso sangneo se agregam prximo ao
epitlio. Uma PGC est atravessando o
endotlio da parede vascular, e outra j est
localizada no interior do epitlio. (A de
Kuwana, 1993, cortesia de T. Kuwana; B segundo Romanoff, 1960.)
850
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
Figura 22.9
Migrao de clulas germinativas em Drosophila. (A) Clulas germinativas coradas com

anticorpos contra a protena Vasa mostram clulas germinativas originando do plo posterior. (B) Durante a extenso da banda
germinativa, as clulas so movidas para o
intestino intermedirio posterior. (C) Clulas
germinativas migram atravs da parede do intestino (o embrio est contracorado para a
protena Engrailed) e (D) migram em duas
filas nicas atravs do mesoderma, onde (E)
elas se agregam nas gnadas em desenvolvimento. (F) Processo de migrao atravs da
parede intestinal, iniciado pela diferenciao
endodrmica. (A-F de Warrior 1994, permisso cortesia de R. Warrior; F segundo Jaglarz
e Howard, 1995.)
Clulas germinativas
(F)
nas clulas germinativas promordiais, e elas viajam atravs do endotlio intestinal, migrando em direo ao mesoderma. A se dividem em dois grupos, cada qual
ficando associado com um primrdio da gnada em desenvolvimento (Figura 22.9;
Warrior et al., 1994).
O produto do gene wuwen parece ser responsvel pelo direcionamento da migrao
das PGCs do endoderma para dentro do mesoderma. Essa protena expressa no
endoderma imediatamente antes da migrao da PGC, e ele repele as PGCs. Nos mutantes de perda de funo desse gene, as PGCs viajam ao acaso (Zhang et al., 1997).
Meiose
Uma vez na gnada, as clulas germinativas primordiais continuam a dividir-se mitoticamente, produzindo milhes de gametas potenciais. As PGCs de gnadas tanto
masculinas como femininas enfrentam ento a necessidade de reduzir seu nmero de
cromossomos da condio diplide para a haplide. Nessa ltima, cada cromossomo
est representado somente uma vez, enquanto as clulas diplides tm duas cpias de
cada cromossomo. Para conseguir essa reduo, as clulas germinativas masculina e
feminina passam por meiose.
Aps a ltima diviso meitica, ocorre um perodo de sntese de DNA, fazendo
com que as clulas iniciando a meiose tenham o dobro da quantidade normal de
DNA em seus ncleos. Nesse estado, cada cromossomo consiste de duas cromtides
irms fixadas a um centrmero comum. (Em outras palavras, o ncleo diplide
contm quatro cpias de cada cromossomo, mas os cromossomos so vistos como
duas cromtides ligadas.) A meiose (mostrada na Figura 1.13) envolve duas divises
celulares. Na primeira diviso, cromossomos homlogos (p.e., o par cromossmico 3
851
na clula diplide) se juntam e so ento separados em clulas diferentes. Assim,

a primeira diviso meitica separa cromossomos homlogos em duas clulas-filhas de modo que cada clula tenha somente uma cpia de cada cromossomo.
Porm, cada um dos cromossomos j se replicou. A segunda diviso meitica em
seguida separa as duas cromtides irms uma da outra. Em conseqncia, cada
uma das quatro clulas produzidas pela meiose tem uma nica cpia (haplide) de
cada cromossomo.
A primeira diviso meitica se inicia com uma longa prfase, que subdividida
em cinco partes. Durante o estgio leptteno (do grego, fio fino), a cromatina
das cromtides muito finamente esticada, e no possvel identificar os cromossomos individuais. Porm, a replicao do DNA j ocorreu, e cada cromossomo consiste de duas cromtides paralelas. No estgio zigoteno (do grego, fios
juntados), os cromossomos homlogos formam pares lado a lado. Esse emparelhamento chamado sinapse sendo caracterstico da meiose, e no ocorre durante
as divises mitticas. Embora o mecanismo pelo qual cada cromossomo reconhece seu homlogo no seja conhecido, o emparelhamento parece requerer a presena da membrana nuclear e a formao de uma fita protica chamada complexo
sinptico. Esse complexo uma estrutura tipo escada com um elemento central e
duas barras laterais (von Wettstein, 1984; Schmekel e Daneholt, 1995). A cromatina est associada com as duas barras laterais e as cromtides esto assim ligadas
uma a outra (Figura 22.10). O exame do ncleo da clula meitica pelo microscpio
eletrnico (Moses, 1968; Moens, 1969) sugere que os pares de cromossomos
esto ligados membrana nuclear, e Comings (1968) sugeriu que o envoltrio
nuclear favorece o encontro dos cromossomos homlogos. A configurao formada pelas quatro cromtides e do complexo sinptico referida como uma ttrade
ou uma bivalente.
Durante o prximo estgio da prfase meitica, as cromtides engrossam e se
encurtam. Esse estgio foi por isso chamado de paquiteno (do grego, fio grosso). As cromtides individuais podem agora ser distinguidas sob o microscpio
Cromatina
Elementos laterais
(A)
(B)
Filamentos
transversos
Figura 22.10
O complexo sinptico. (A) cromossomos homlogos conservados juntos na primeira prfase meitica no ocito de Neottiella.
(B) Diagrama interpretativo da estrutura do complexo sinptico.
(A de von Wettstein, 1971, cortesia de D. von Wettstein; B segundo Schmekel e Daneholt, 1995.)
Elementos centrais
Pilar
Elementos laterais
Cromatina
852
Figura 22.11
Quiasmas em cromossomos bivalentes dipltenos de ocitos de salamandra. Centrmeros so

visveis como crculos intensamente corados; as setas apontam para os dois quiasmas. (Cortesia de J. Kezer.)
de luz, e pode ocorrer crossing-over. Esse crossing-over representa trocas de

material gentico atravs do qual genes de uma cromtide so trocados por genes
homlogos de outra cromtide. Esse crossing-over continua no prximo estgio,
o diplteno (do grego, duplos fios). Aqui, o complexo sinptico se decompe, e
os dois cromossomos homlogos comeam a se separar. Em geral, porm, eles
ficam fixados em vrios lugares chamados quiasmas, os quais so considerados
representar regies onde ocorre o crossing-over (Figura 22.11). O estgio diplteno
se caracteriza por um alto nvel de transcrio gnica. Em algumas espcies, os
cromossomos tanto de clulas germinativas masculinas como femininas assumem a aparncia de escova caracterstica de cromossomos que esto ativamente fabricando RNA. Durante o prximo estgio, diacinese (do grego se afastando), os centrmeros se afastam um do outro, e os cromossomos permanecem
ligados somente nas pontas das cromtides. Esse ltimo estgio da prfase meitica
termina com a desintegrao da membrana nuclear e a migrao dos cromossomos para a placa da metfase.
Durante a anfase I, os cromossomos homlogos so separados um do outro de
uma maneira independente. Esse estgio conduz telfase I, durante a qual so formadas duas clulas-filhas, cada uma contendo um dos parceiros do par de cromossomos homlogos. Aps uma breve intercinese, ocorre a segunda diviso da meiose,
durante a qual o centrmero de cada cromossomo se divide durante a anfase fazendo
com que cada uma das novas clulas obtenha uma das duas cromtides, o resultado
final sendo a criao de quatro clulas haplides. Notar que a meiose tambm reagrupou
os cromossomos em novos grupamentos. Cada uma das clulas haplides tem agora
um sortimento diferente de cromossomos. Em humanos, nos quais h 23 diferentes
pares de cromossomos, pode haver 223 (perto de 10 milhes) de diferentes tipos de
clulas haplides formados do genoma de uma nica pessoa. Alm disso, os cruzamentos (crossing-over) que ocorrem durante os estgios paquiteno e diplteno da
prfase I aumentam ainda mais a diversidade gentica tornando incalculvel o nmero
de gametas diferentes.
O mecanismo do emparelhamento homlogo desconhecido. Pensa-se que
os primeiros eventos envolvam a procura por regies homlogas de cromatina e
que esse processo possa utilizar enzimas reparadoras de DNA (Baker et al., 1996).
Mutantes de camundongo carentes de tais enzimas de reparo tm sinapses anormais. Aps o alinhamento das regies homlogas, a sinapse iniciada em regies
localizadas. Em Drosophila, evidncia recente sugere que as sinapses so iniciadas em regies de heterocromatina (Dernburg et al., 1996). Alm disso, interaes entre a protena Mei-S332 e a heterocromatina rodeando o cinetocentro so
crticas para manter as cromtides irms juntas (Karpen et al, 1995, 1996; Kerrebrock
et al. 1995). O gene para a protena Mei-S332 foi encontrado selecionando-se
mutaes para incapacidade de completar a meiose. Nesses mutantes, as
cromtides irms separam-se precocemente durante 90 porcento do tempo. Em
vertebrados, a protena Rad51 corresponde aos elementos laterais do complexo
sinptico e parece mediar o emparelhamento dos homlogos (Ashley et al., 1995).
Ao fim da meiose, essa protena est localizada somente em stios onde ainda
esto fixados os homlogos. Seria importante saber como essas e outras protenas
interagem durante a gametognese humana, j que a maioria dos eventos no
disjuncionais (como aqueles levando trissomias) so considerados defeitos do
pareamento meitico (veja Yoon et al., 1996).
853
&
Especulaes
Grandes Decises: Mitose ou Meiose?

Espermatozide ou vulo?
M MUITAS ESPCIES, as clulas
germinativas migrando para o interior das gnadas so bipotenciais e podem diferenciar-se em espermatozides ou vulos, conforme seu ambiente
gonadal. Quando ovrios de salamandras
so transformados experimentalmente em
testculos, as clulas germinativas residentes cessam sua diferenciao oognica e
comeam a desenvolver-se em espermatozide (Burns, 1930; Humphrey, 1931). Da
mesma maneira, na mosca domstica e no
camundongo, a gnada pode direcionar a
diferenciao da clula germinativa
(McLaren, 1983; Inoue e Hiroyoshi,
1986). Assim, na maioria dos organismos,
o sexo das gnadas e de suas clulas germinativas o mesmo.
Porm, o que se passa em animais hermafroditas, nos quais a mudana de produo de espermatozide para produo de
vulos um evento fisiolgico que ocorre
naturalmente? Como pode o mesmo animal
ser capaz de produzir espermatozide durante parte de sua vida e ocitos durante
outra? Usando Caenorhabditis elegans,
Kimble e seus colegas identificaram duas
decises que clulas germinativas presumveis tm que fazer. A primeira envolve a
deciso de entrar em meiose ou permanecer
uma clula-tronco dividindo-se mitoticamente. A segunda se a clula meitica ir
se converter em um vulo ou um espermatozide. Evidncia recente mostra que essas
decises esto intimamente ligadas. A deciso mittica/meitica controlada por uma
nica clula que no se divide, no terminal
de cada gnada, a clula da extremidade
distal. Os precursores das clulas germinativas prximos dessa clula dividem-se mitoticamente formando o reservatrio de clulas germinativas, mas medida que essas
clulas se afastam da clula da extremidade
distal, elas entram em meiose. Se as clulas
da extremidade distal forem destrudas por
um feixe focalizado de raio laser, todas as
clulas germinativas entram em meiose, e se
a clula da extremidade distal for colocada
em um local diferente na gnada, clulas-
(A) Gnada intacta

Regio de
meiose
Zona de
transio
Regio de
mitose
Clula da
extremidade distal
(B) Clula da extremidade distal removida
Todas clulas sofrem meiose
Figura 22.12
(C)
MITOSE
Regulador
terminal
para mitose
OOGNESE
Trajetria da
determinao
sexual
ESPERMATOGNESE
tronco da linhagem germinativa sero produzidas perto dessa nova posio (Figura
22.12; Kimble, 1981; Kimble e White,
1981). Parece que as clulas da extremidade
distal secretam alguma substncia que mantm essas clulas em mitose e inibe sua diferenciao meitica. Austin e Kimble (1987)
isolaram uma mutao que mimetiza o
fentipo obtido quando as clulas da extremidade distal so removidas. Todos os precursores das clulas germinativas de
nematides homozigotos para a mutao
recessiva glp-1 iniciam a meiose, no deixando populao mittica. Em lugar das
1500 clulas germinativas geralmente encontradas no quarto estgio larval do desenvolvimento hermafrodito, esses mutantes
Regulao da deciso meiose-mitose pela clula

da extremidade distal do ovo-teste de C. elegans.
(A) Gnada intacta no incio do desenvolvimento com regies de mitose (clulas sombreadas) e
meiose. (B) Gnadas aps ablao por laser da
clula da extremidade distal. Todas as clulas
germinativas entram em meiose. (C) Modelo para
as interaes pelas quais clulas germinativas
adotam um destino nico. O gene gld-1 est
ativo (e ocorre oognese) a no ser que seja
inibido ou pelo sinal mittico (se a clula for
ativada por GLP-1) ou pelo sinal espermatognico (se os genes da determinao sexual como
tra-1 e fem-3 estiverem ativos). O sinal mittico
pode inibir tanto o sinal oognico (GLD-1) como
o sinal espermatognico (FOG-1, FOG-3).
Ambos sinais inibem o sinal mittico, e o sinal
espermatognico pode inibir o sinal oognico.
A mitose promovida pela ativao de GLP-1
da clula germinativa, enquanto a trajetria da
determinao sexual pode ativar os genes fog-1
e fog-3. (C segundo Ellis e Kimble, 1995.)
produzem somente de 5 a 9 clulas espermticas. Quando so produzidas quimeras

genticas nas quais so encontrados precursores de clulas germinativas do tipo selvagem em larvas mutantes, as clulas do tipo
selvagem so capazes de responder s clulas da extremidade distal e sofrer mitose.
Porm, quando precursores de clulas germinativas mutantes so encontrados em
854
(A) Tipo selvagem: Espermatozides e ocitos
Espermateca
(regio de
armazenagem de
espermatozide)
Espermatozides Primeiro ocito

maduros
Estgios precoces da espermatognese
(B) Feminilizado: Somente ocitos
Espermateca (vazia)
Primeiro ocito
(C) Masculinizado: Somente espermatozides
Espermateca
Espermatozide maduro
Figura 22.13
Estgios precoces
da espermatognese
Gnadas de C. elegans tipo selvagem e mutante. (A) Hermafrodita tipo selvagem produzindo
primeiro espermatozides e em seguida vulos. (B) Animal fmea produzido por mutao fem1 produz somente vulos. (C) Hermafrodita masculinizado produzido por mutaes de perda-defuno de genes mog (ou mutaes do 3UTR de fem-3) produz somente espermatozides.
(Fotografia cortesia de J. Kimble.)
larvas do tipo selvagem, essas entram em

meiose. Assim, o gene glp-1 parece ser responsvel pela capacitao de clulas germinativas responderem ao sinal das clulas
da extremidade distal.*
Aps as clulas comearem suas divises meiticas, ainda precisam transformarse em espermatozide ou vulo. Geralmen* O gene glp-1 parece estar envolvido em vrias interaes indutivas em C. elegans. Deve ser
relembrado que glp-1 tambm necessitado pelo
blastmero AB para receber os sinais indutivos do
blastmero EMS para formar os msculos farngeos
(veja Captulo 13).
te, em cada ovrio/testculo, as clulas germinativas mais prximas produzem espermatozide, enquanto as mais distantes (perto da extremidade) tornam-se vulos
(Hirsch et al., 1976). A gentica dessa mudana est atualmente sendo analisada.
Conforme discutido no Captulo 20, os
genes para a determinao sexual geram
ou um corpo feminino funcionalmente hermafrodita ou um corpo masculino. Na linhagem germinativa, o caminho da determinao sexual ativa ou reprime certos
genes que so crticos para as clulas se
transformarem em vulo ou espermatozi-
de. Por exemplo, mutantes homozigotos

mog (masculinizao da linhagem germinativa) se desenvolvem como machos produtores de espermatozide, e mutantes homozigotos fem-1 desenvolvem-se como fmeas produtoras de vulos (Figura 22.13).
Os mutantes duplos homozigotos tanto
para tra-1 como para fem-1 tm um nico
fentipo. Eles so somaticamente machos,
mas so fmeas na linhagem germinativa
(Doniach e Hodgkin, 1984). Isso sugere que
tra-1 o gene chave na determinao sexual dos tecidos somticos, mas que os
genes fem so responsveis pela deciso espermatozide/ocito (Figura 22.14).
Os laboratrios de Hodgkin (1985) e
Kimble (1986) isolaram vrios genes necessrios para a seleo do caminho da clula germinativa. A Figura 22.14 apresenta
um esquema de como esses genes podiam
funcionar na mudana de formao de espermatozide para a formao de ocito.
Durante o desenvolvimento precoce, os
genes fem, em especial fem-3, so crticos
para a especificao das clulas espermticas. Mutaes de perda-de-funo desses
genes convertem nematides XX em fmeas (i.e., hermafroditas sem espermatozide).
Enquanto so produzidas protenas FEM
nas clulas germinativas, so produzidos
espermatozides. Os genes fem ativos so
considerados ativar os genes fog (cujas mutaes de perda-de-funo causam a feminizao da linhagem germinativa e eliminam a espermatognese). Os produtos do
gene fog ativam os genes envolvidos na
transformao da clula germinativa em espermatozide e tambm inibem aqueles
genes que iriam de outra maneira dirigir as
clulas germinativas para iniciar a oognese. A oognese pode comear somente
quando a atividade fem suprimida. Essa
supresso parece atuar ao nvel da traduo do RNA. A regio 3 no-traduzida
(3UTR) do mRNA de fem-3 contm uma
seqncia que liga um repressor durante o
desenvolvimento normal. Se essa regio
mudada de maneira que a protena repressora no pode se ligar, o mRNA de fem-3
permanece traduzvel, e a oognese nunca
ocorre. O resultado um corpo de hermafrodita que somente produz espermatozide (Ahringer e Kimble, 1991; Ahringer et
al., 1992). O fator de represso que age no
trans ainda no foi identificado, mas provavelmente o produto de um dos genes
mog (Graham e Kimble, 1993). Pensa-se que
protenas ou mensagens estocadas no
Figura 22.14
(A) Determinao sexual somtica
baixo
ALTO
baixo
ALTO
baixo
ALTO
ALTO
baixo
ALTO
baixo
ALTO
baixo
Modelo da determinao sexual na linhagem

germinativa de hermafroditas de C elegans,
baseado na anlise de mutaes. (A) Determinao sexual em tecidos somticos, mostrando uma hierarquia de regulao negativa.
(B) Controle da determinao sexual na linhagem germinativa. Os genes fog-2 e mog-1 regulam a determinao sexual na linhagem
germinativa. Os genes fog-1 e fog-3 agem a
jusante para iniciar a espermatognese. (Segundo Ellis e Kimble, 1995.)
(B) Determinao sexual da linhagem germinativa
baixo
precoce
baixo
tardio
ALTO
855
ALTO
ALTO
baixo
ALTO
ESPERMATOZIDES
ALTO
baixo
ALTO
baixo
OCITOS
baixo
ALTO
baixo
ALTO
ESPERMATOZIDES
ocito podem controlar o momento desse

processo, fazendo com que a espermatognese ocorra enquanto h repressores da expresso de mog. Quando esses inibidores
maternos da expresso de mog decaem, as
protenas MOG tornam-se capazes de inibir a sntese das protenas FEM, com isso
mudando a gametognese de espermatozide para vulos. Um outro gene gld-1

(defeituoso no desenvolvimento da linhagem germinativa) essencial para que a
oognese ocorra. A entrada de ocitos
presuntivos na via meitica correlacionase com um dramtico aumento de GLD-1.
Espermatognese
A espermatognese a produo de espermatozide pelas clulas germinativas primordiais. Uma vez que as clulas germinativas primordiais de mamferos chegam no
sulco genital dos embries masculinos, elas se incorporam s cordas sexuais. A permanecem at a maturidade quando as cordas sexuais tornam-se ocas para formar os
tbulos seminferos, e o epitlio dos tbulos se diferencia em clulas de Sertoli. Durante sua vida, um homem pode produzir de 1012 a 1013 gametas (Reijo et al., 1995). As
clulas espermticas so ligadas s clulas de Sertoli por molculas de N-caderina em
suas respectivas superfcies celulares, e por molculas de galactosil-transferase nas
clulas espermatognicas que ligam um receptor nas clulas de Sertoli (Newton et al.,
1993; Pratt et al., 1993.) As clulas de Sertoli alimentam e protegem as clulas espermticas em desenvolvimento, e espermatognese - a via de desenvolvimento da clulatronco espermatognia at o espermatozide maduro ocorre nos recessos das clulas de Sertoli (Figura 22.15). Os processos pelos quais as PGCs produzem espermatozide foram estudados em detalhe em vrios organismos, mas enfocaremos aqui a
espermatognese em mamferos. Aps atingir a gnada, as PGCs se dividem para
formar espermatognias tipo A1. Essas clulas so menores que as PGCs e so caracterizadas por um ncleo ovide que contm cromatina associada com a membrana
nuclear. As espermatognias A1 so encontradas adjacentes membrana basal externa das cordas sexuais. Na maturidade, essas espermatognias so consideradas dividir-se para produzir uma outra espermatognia tipo A1, assim como um tipo de clula
mais plida, a espermatognia tipo A2. Assim, cada espermatognia tipo A1 uma
clula-tronco capaz de se regenerar assim como produzir um novo tipo de clula. A
espermatognia tipo A2 se divide para produzir a espermatognia tipo A3, que produz
Em mutantes de perda-de-funo para gld1, a oognese est ausente e as clulas da

linhagem germinativa continuam a proliferar formando tumores (Francis et al., 1995;
Jones et al., 1996).
Em Drosophila, as clulas germinativas so instrudas pelas clulas gonadais,
para se diferenciarem em espermatozide
ou vulo. As clulas gonadais femininas
produzem um produto que recebido pela
clula geminativa e que ativa uma srie
de protenas cuja atividade essencial para
a transcrio precoce do gene Sxl da clula germinativa. Uma razo apropriada X:
autossomo tambm necessria. Por esse
mecanismo, as moscas XX acabam produzindo vulos, enquanto as moscas XY produzem espermatozide (Burtis, 1993,
Oliver et al., 1993).
856
Lmem do tbulo
Espermtides
Corpo residual
Espermatcito secundrio
Espermatcito primrio
Espermatognia Tipo A1
Clula de
Sertoli
Espermatognia
Tipo A2
Espermatognia
Tipo B
Figura 22.15
Desenho de uma seo do tbulo seminfero,

mostrando a relao entre clulas de Sertoli e o
espermatozide em desenvolvimento. medida que as clulas amadurecem, elas progridem
em direo ao lmen do tbulo seminfero. (Segundo Dym, 1977.)
a espermatognia tipo A4. possvel que cada tipo de espermatognia A seja uma
clula-tronco capaz de auto-renovao. A espermatognia A4 tem trs opes. Ela
pode formar outra A4 (auto-renovao); pode apresentar morte celular (apoptose), ou
pode diferenciar-se na primeira clula-tronco comprometida, a espermatognia intermediria. Essas esto comprometidas a se tornarem espermatozide e se dividem uma
vez para formar as espermatognias tipo B. Essas clulas so os precursores dos
espermatcitos e so as ltimas clulas a sofrerem mitose. Essas clulas dividem uma
vez, gerando os espermatcitos primrios - as clulas que entram em meiose. No
conhecido o que faz com que as espermatognias tomem o caminho da diferenciao
em lugar da auto-renovao; tambm no conhecido o que estimula as clulas a
entrar em diviso meitica em vez de mittica (Dym, 1994).
Examinando a Figura 22.16, vemos que durante as divises espermatognicas, a
citocinese no completa. Antes, as clulas formam um sinccio pelo qual cada clula
se comunica com a outra atravs de pontes citoplamticas de cerca de 1 m de dimetro (Dym e Fawcett, 1971). As sucessivas divises produzem clones de clulas
interconectadas, e como ons e molculas passam facilmente por essas pontes intercelulares, cada grupo amadurece sincronicamente.
Cada espermatcito primrio sofre a primeira diviso meitica para fornecer um par
de espermatcitos secundrios, que completam a segunda diviso da meiose. As
clulas haplides formadas so chamadas espermtides e ainda esto conectadas
uma a outra por pontes citoplasmticas. Essas espermtides tm ncleos haplides
mas so funcionalmente diplides, j que o produto gnico formado em uma clula
pode facilmente se difundir para o citoplasma de suas vizinhas (Braun et al., 1989).
Durante as divises de espermatognias tipo A1 at a espermtide, as clulas se
distanciam mais e mais da membrana basal do tbulo seminfero e se aproximam de seu
lmen (veja Figura 22.15). Assim, cada tipo de clula pode ser encontrado em uma
camada particular do tbulo. As espermtides esto localizadas na margem do lmen,
Espermatognia tipo A1
Mais espermatognia tipo A1
Figura 22.16
Formao de clones sinciciais de clulas germinativas masculinas humanas. (Segundo

Bloom e Fawcett, 1975.)
ou
Espermatognias tipo A2
Espermatognias tipo A 3
Espermatognias tipo A 4
Espermatognias intermedirias
Espermatognias
tipo B
Espermatcitos primrios
(1a diviso meitica)
857
Pontes citoplasmticas
Espermatcitos secundrios
(2a diviso meitica)
Espermtides
Corpos residuais
Clulas espermticas
aqui perdendo duas conexes citoplasmticas e diferenciando-se em clulas espermticas. Em humanos, a progresso da clula-tronco espermatognica at o espermatozide maduro demora 65 dias (Dym, 1994).
Espermiognese
A espermtide haplide uma clula redonda no-flagelada que no se parece em
absoluto com o espermatozide maduro dos vertebrados. O prximo passo na
maturao do espermatozide, portanto, a espermiognese (ou espermateliose), a
diferenciao da clula espermtica. Para que a fecundao possa ocorrer, o espermatozide ter que encontrar e ligar-se ao vulo; a espermiognese diferencia o espermatozide para essas funes de motilidade e interao. Os processos da diferenciao do espermatozide mamfero podem ser vistos na Figura 4.2. O primeiro passo envolve a construo da vescula acrossmica a partir do aparelho de Golgi. O
acrossomo forma uma coroa que cobre o ncleo espermtico. medida que a coroa
formada, o ncleo gira fazendo com que a coroa acrossmica fique de frente para a
858
membrana basal do tbulo seminfero. Essa rotao necessria porque o flagelo est
comeando a se formar do centrolo do outro lado do ncleo, e esse flagelo ir se
estender para o interior do lmen. Durante o ltimo estgio da espermiognese, o
ncleo se achata e se condensa, o citoplasma remanescente (a gotcula citoplasmtica)
descartado, e as mitocndrias formam um anel em volta da base do flagelo. O
espermatozide resultante penetra em seguida no lmen do tbulo.
No camundongo, o integral desenvolvimento da clula-tronco at o espermatozide leva 34.5 dias. Os estgios espermatognicos duram 8 dias, a meiose 13 dias, e a
espermiognese gasta mais 13.5 dias. Em seres humanos, o desenvolvimento
espermtico perto de duas vezes mais longo. Como as espermatognias do tipo A1
so clulas-tronco, a espermatognese pode ocorrer continuamente. Cada dia, perto
de 100 milhes de espermatozides so produzidos em cada testculo humano, e
cada ejaculao liberta cerca de 200 milhes de espermatozides. Quando no usado, esses so reabsorvidos ou eliminados do organismo pela urina.
&
Especulaes
Expresso Gnica
Durante o Desenvolvimento do Espermatozide
Expresso Gnica Antes da
Meiose Masculina
A expresso gnica no espermatozide estgio-especfica, e mesmo as clulas haplides so aptas a sintetizar certos produtos. A
iniciao da espermatognese na puberdade provavelmente regulada pela sntese
de BMP8B pelas espermatognias. Quando BMP8B atinge uma concentrao crtica, as espermatognias podem se diferenciar em espermtides redondas. Essas clulas
produzem altos nveis de BMP8B, que podem estimular as espermatognias a se diferenciarem. Camundongos carentes de
BMP8B no iniciam a espermatognese na
puberdade (Zhao et al., 1996). Em humanos, o gene DAZ localizado no brao longo
do cromossomo Y est deletado em muitos
homens infrteis, muitos dos quais no produzem espermatozide algum. O gene DAZ
expresso exclusivamente em clulas germinativas masculinas, especialmente nas espermatognias, e parece codificar uma protena ligante de RNA (Reijo et al., 1995;
Menke et al., 1997). DAZ homlogo de
dois genes da Drosophila, Rb97D e boule,
os quais tambm codificam protenas
ligantes de RNA, e ambos so essenciais para
a espermatognese. Espermatognias se degeneram em moscas masculinas deficientes
em Rb97D, enquanto as clulas germinativas de moscas carentes do gene boule no
entram em meiose (Karsch-Mizrachi e
Haynes, 1993; Eberhart et al., 1996). Prote-
nas ligantes de RNA so crticas na espermatognese porque muitos dos genes expressos no espermatozide so regulados no
nvel da traduo (Schfer et al., 1995). Realmente, em alguns animais, muito da espermatognese ocorre na ausncia de transcrio de novos genes. A sntese de
protamina, a protena bsica que substitui
as histonas no ncleo espermtico haplide
do espermatozide, regulada pela fosforilao de uma protena ligante de 18-kDa
que reconhece a regio 3 no-traduzida da
mensagem protamina do camundongo
(Kwon e Hecht, 1993).
Em Drosophila, o gene roughex transcrito por espermatognias de Drosophila
pr-meitica controla o nmero de divises meiticas. Machos carentes de cpias funcionais do gene roughex sofrem
uma metfase meitica extra em adio s
duas normais. O aumento da concentrao de Roughex resulta na incapacidade
de executar meiose II (Gnczy et al., 1994).
Expresso Gnica durante a
Meiose Masculina
Muito da transcrio gnica durante a espermatognese ocorre durante o estgio
diplteno da prfase meitica. Os genes que
so transcritos especificamente durante a
espermatognese so freqentemente aqueles cujos produtos so necessrios para motilidade do espermatozide ou sua fixao
ao vulo. Em Drosophila melanogaster, um
dos genes especficos do espermatozide

transcrito aquele para a 2-tubulina. Essa
isoforma da tubulina vista somente durante a espermatognese, e responsvel
pela formao de fusos meiticos, do
axonema e dos microtbulos associados
com as mitocndrias em processo de extenso.* Hoyle e Raff (1990) mostraram que
uma outra isoforma da tubulina, a 3tubulina (que normalmente expressa em
clulas mesodrmicas e na epiderme), no
pode substituir a 2-tubulina.. Quando os
autores fundiram a regio regulatria 5 do
gene da 2-tubulina com a seqncia
codificadora do gene da 3-tubulina, esse
gene pde ser expresso no espermatozide
em desenvolvimento. Quando esse gene foi
expresso na ausncia do gene da 2tubulina, as clulas germinativas resultantes no sofreram meiose, reunio de
axonemas, ou conformao nuclear. Somente ocorreu a extenso mitocondrial. Isso
indica que a formao dos fusos meiticos
e do axonema de clulas espermticas no
* A confeco do axonema espermtico em
Drosophila uma tarefa de monta. A cauda do espermatozide tem 2 mm de extenso to comprida quanto a mosca masculina inteira. O espermatozide da espcie relacionada D. bifurca, de 58.3 mm
de comprimento, aproximadamente 20 vezes
mais longo que as moscas que o produzem.
notvel que o ovo de D. melanogaster incorpora todo o espermatozide (Karr, 1991). Somente cerca de 3 mm do espermatozide de D. bifurca incorporado pelo ovo (Pitnick et al., 1995).

conseguida por qualquer tubulina e que
a transcrio de suas isoformas especficas
do espermatozide importante.
Os genes cujos produtos so necessrios para ligao do espermatozide e das
matrizes extracelulares do vulo so tambm transcritos durante a espermatognese. O gene da bindina do ourio-domar transcrito relativamente tarde na
espermatognese e seu mRNA traduzido em bindina logo aps ser produzido
(Nishioka et al., 1990). A bindina se acumula em vesculas que se fundem para
formar a vescula acrossmica nica no
espermatozide maduro do ourio-domar. A Figura 22.17 mostra a localizao
da protena bindina na vescula acrossmica do espermatozide enquanto esse
ainda est nos testculos.
Expresso Gnica Haplide
em Espermatcitos.
Alm da transcrio de genes em clulas
diplides durante a prfase meitica, certos genes so transcritos na espermtide
(revisado por Palmiter et al., 1984). Essa
evidncia para expresso gnica haplide vem de estudos envolvendo camundongos heterozogotos nos quais so vistas duas populaes diferentes de espermatozide uma expressando o fentipo
mutante, e outra expressando a caracterstica tipo selvagem. Se a sntese do RNA
ou da protena ocorresse enquanto as clulas ainda fossem diplides, todo o espermatozide apresentaria o mesmo
fentipo. Transcries do gene para a
protamina so vistas nas clulas haplides precoces (espermtides redondas) embora sua traduo seja retardada por vrios dias (Peschon et al., 1987). O gene para
a 1, 4-galactosiltransferase que liga o espermatozide zona pelcida somente
transcrito durante a fase haplide da maturao do espermatozide do camundongo (Hardvin-Lepers et al., 1993). Esses
genes expressos no estgio haplide podem ser regulados pelo hormnio estimulador de folculos da glndula pituitria
(Foulkes et al. 1993; Blendy et al.,1996;
Nantel et al., 1996).*
859
para o alelo mutante, leva a embries normais. Um desses genes de efeito paterno o
spe-11 em C. elegans. Os espermatozides
contendo alelos mutantes nesse loco so incapazes de direcionar movimentos cromossmicos que orientam o fuso mittico do embrio, sugerindo que a mutao afeta as regies organizadoras dos microtbulos, tais
como os centrolos (Figura 22.18; Hill et al.,
1989). Mutaes de efeito paterno foram
identificadas em Drosophila e essas podem
tambm envolver a estrutura do fuso mittico
do zigoto (Karr, 1996). [fert10.html]
Figura 22.17
Localizao de bindina no acrossomo do espermatozide, por meio de anticorpos antibindina marcados com ouro. Os tomos de ouro
permitem aos anticorpos aparecerem como
pontos negros na micrografia eletrnica. Esses espermatozides ainda esto no interior
dos testculos do ourio-do-mar. (Cortesia de
D. Nishioka.)
Genes de Efeito Paterno

Em algumas espcies, o espermatozide fornece importante informao desenvolvimental que no pode ser compensada pelo vulo.
J discutimos a impresso (imprinting) de
cromossomos de mamferos no qual o DNA
do espermatozide e do vulo diferem nos
seus padres de metilao (veja Captulos 4 e
11). Existem tambm casos de genes de efeito paternos. Aqui, alelos homozigotos recessivos no macho causam desenvolvimento
anormal no embrio, mesmo se a fmea for
homozigota para o alelo de tipo selvagem,
enquanto o cruzamento recproco, no qual o
pai do tipo selvagem e a me homozigota
* Esse mecanismo parece indevidamente complexo. Os genes ps-meiticos parecem ser regulados
pelo fator de transcrio CREM. Esse gene para o fator de transcrio, o modulador do elemento responsivo
ao AMP-cclico transcrito durante a espermatognese precoce, mas a mensagem decai rapidamente. A
protena que produz, inibe a transcrio de dois genes ps-meiticos. Porm, a recepo de FSH pelas clulas
meiticas causa a emenda alternativa do precursor do mRNA de CREM, fazendo com que ele se torne uma
mensagem estvel para uma isoforma ativadora da molcula. O direcionamento para o alvo do gene CREM
de camundongo resulta na ausncia da expresso gnica ps-meitica e na morte dos espermatcitos.
Expresso Gnica Terminal

Por fim, o genoma haplide condensado
medida que as histonas so substitudas
por protaminas ou histonas especificamente modificadas. Muitas histonas do espermatozide so modificadas no estgio de
espermtide tardia da espermiognese. Essas modificaes (tal como a desfosforilao das regies N-terminais de certas
histonas causam a condensao da cromatina), que resulta em severa reduo da
transcrio. Assim, a transcrio do genoma masculino no detectada novamente
at ser reativada algum tempo durante o
desenvolvimento (Poccia,1986; Green e
Poccia, 1988).
(A)
(B)
Figura 22.18
Fotomicrografias imunofluorescentes de fusos

mitticos no embrio de primeira clivagem de
C. elegans quando o espermatozide (A) de
um macho tipo selvagem e (B) de um macho
homozigoto para o gene spe-11 de efeito paterno. Em (B), trs centrolos organizadores de
microtbulos podem ser vistos em lugar dos
dois plos mitticos usuais. (De Hill et al., 1989,
cortesia de S. Strome.)
Oognese
Meiose oognica
Oognese - a diferenciao do vulo- difere de vrias maneiras da espermatognese.
Enquanto o gameta formado pela espermatognese essencialmente um ncleo mvel,
o gameta formado pela oognese contm todos os fatores necessrios para iniciar e
manter o metabolismo e o desenvolvimento. Portanto, alm de formar um ncleo
haplide, a oognese tambm constri um reservatrio de enzimas citoplasmticas,
mRNAs, organelas e substratos metablicos. Enquanto o espermatozide torna-se diferenciado para motilidade, o ocito desenvolve um citoplasma notavelmente complexo.
Os mecanismos da oognese variam mais que os da espermatognese. Essa diferena no deve surpreender, j que os padres de reproduo variam extremamente
entre espcies. Em algumas espcies, tais como os ourios-do-mar e as rs, a fmea
rotineiramente produz centenas ou milhares de vulos de uma vez, enquanto em outras
espcies, como nos seres humanos e na maioria dos mamferos, somente so produzidos alguns vulos durante a vida de um indivduo. Nas espcies que produzem milhares de vulos, as oognias so clulas-tronco auto-renovveis que perduram durante a
vida do organismo. Nas espcies que produzem menos vulos, as oognias se dividem
para formar um nmero limitado de clulas precursoras de vulos. Em humanos, as
mil, ou coisa assim, oognias dividem-se rapidamente do segundo ao stimo ms da
gestao para formar cerca de 7 milhes de clulas germinativas (Figura 22.19). Aps o
stimo ms do desenvolvimento, porm, o nmero de clulas germinativas decresce
abruptamente. A maioria das oognias morre durante esse perodo, enquanto as oognias
remanescentes entram na prfase da primeira diviso meitica (Pinkerton et al., 1961).
Essas clulas tardias, chamadas de ocitos primrios, progridem atravs da primeira
prfase meitica at o estgio diplteno, no qual so mantidas at a puberdade. Com o
advento da adolescncia, grupos de ocitos periodicamente reiniciam a meiose. Assim,
na fmea humana, a primeira parte da meiose iniciada no embrio, e o sinal para
reiniciar a meiose no dado antes de decorridos cerca de 12 anos. Na realidade, alguns ocitos so mantidos em prfase meitica por perto de 50 anos. Como indicado
na Figura 12.19, ocitos primrios continuam a morrer mesmo aps o nascimento. Dos
milhes de ocitos primrios presentes na ocasio do nascimento, somente cerca de
400 amadurecem durante a vida da mulher.
Nascimento
Nmero de clulas germinativas x 106
860
Meses antes
da concepo
Anos aps o nascimento
Figura 22.19
Mudanas no nmero de clulas germinativas no ovrio humano. (Segundo Baker, 1970.)
861
Figura 22.20
Formao do corpo polar no ocito do peixe branco Coregonus. (A) Anfase da primeira diviso
meitica, mostrando o primeiro corpo polar comprimindo-se com seus cromossomos. (B) Metfase
(no interior do ocito, seta) da segunda diviso meitica, com o primeiro corpo polar ainda no seu
lugar. O primeiro corpo polar pode ou no dividir-se novamente. (de Swanson et al., 1981,
cortesia de C. P. Swanson.)
A meiose oognica tambm difere da espermatognese na sua colocao na placa

metafsica. Quando o ocito primrio se divide, o seu ncleo, chamado de vescula
germinativa, se desintegra e o fuso metafsico migra para a periferia da clula. Na
telfase, uma das duas clulas-filhas contm praticamente nada de citoplasma, enquanto a outra tem quase a totalidade do volume dos constituintes celulares (Figura
22.20). A clula menor chamada de primeiro corpo polar, e a clula maior referida
como o ocito secundrio. Durante a segunda diviso da meiose, ocorre uma citocinese
semelhante. A maior parte do citoplasma retida pelo vulo maduro e o segundo
corpo polar recebe pouco mais que um ncleo haplide. Assim, a meiose oognica
serve para conservar o volume do citoplasma do ocito em uma nica clula em lugar
de dividi-lo igualmente entre quatro prognies.
Em algumas espcies de animais, a meiose severamente modificada fazendo
com que o gameta resultante seja diplide e no necessite ser fertilizado para se
desenvolver. Tais animais so ditos ser partenogenticos. Na mosca Drosophila
mangabeirai, um dos corpos polares atua como espermatozide e fecunda o ocito
aps a segunda diviso meitica. Em outros insetos (como a Moraba virgo) e o
lagarto Cnemidophorus uniparens, a oognia duplica seu nmero de cromossomos
antes da meiose, a fim de que a diviso dos cromossomos restaure o nmero diplide.
As clulas germinativas do gafanhoto Pycnoscelus surinamensis dispensam a meiose
por completo, formando vulos diplides atravs de duas divises mitticas (Swanson
et al., 1981). Nos exemplos precedentes, as espcies consistem inteiramente de fmeas. Em outras espcies, a partenognese haplide largamente empregada no somente como um meio de reproduo, mas tambm como um meio de determinao
sexual. Nos Himenpteros (abelhas, vespas e formigas), ovos no-fertilizados desenvolvem-se em machos, enquanto ovos fertilizados, sendo diplides, desenvolvem-se
em fmeas. Os machos haplides so capazes de produzir espermatozide abandonando a primeira diviso meitica, com isso formando duas clulas espermticas atravs da segunda meiose.
(A)
(B)
Maturao do Ocito em Anfbios

O ovo responsvel pela iniciao e direcionamento do desenvolvimento, e em algumas espcies (conforme visto anteriormente), a fecundao nem necessria. O
material acumulado no citoplasma do ocito inclui fontes de energia e organelas (o
vitelo e as mitocndrias); as enzimas e precursores para sntese de DNA, RNA e
protenas; RNAs mensageiros armazenados; protenas estruturais; e fatores reguladores morfogenticos que controlam a embriognese precoce. Um catlogo parcial
dos materiais armazenados no citoplasma do ocito mostrado na Tabela 22.1. A
maior parte dessa acumulao ocorre durante a prfase meitica I, e esse estgio
freqentemente subdividido em fases pr-vitelognica (do grego, antes da formao
do vitelo) e vitelognica (formadora de vitelo).
Ovos de peixes e anfbios so derivados de uma populao de clulas-tronco
oognias que pode gerar um novo grupo de ocitos cada ano. Na r Rana pipiens, a
oognese dura trs anos. Durante os dois primeiros anos, o ocito aumenta de tamanho gradualmente. Durante o terceiro ano, porm, o rpido acmulo de vitelo no
ocito faz com que o vulo inche, atingindo seu caracterstico tamanho grande (Figura 22.21). Os vulos amadurecem em grupos anualmente, o primeiro grupo amadurece pouco aps a metamorfose; o prximo grupo amadurece um ano depois.
Tabela 22.1 Componentes celulares

armazenados no ocito maduro de
Xenopus laevis
Componente
Excesso aproximado em
relao quantidade
existente em clulas larvais
Mitocndria
RNA polimerases
DNA polimerases
Ribossomos
tRNA
Histonas
Deoxirribonucleosdeo
trifosfatos
100.000
60.000 100.000
100.000
200.000
10.000
15.000
2.500
Fonte: Segundo Laskey, 1979.
862
Figura 22.21
Crescimento de ocitos na r. Durante os trs

primeiros anos de vida so produzidos trs grupos de ocitos. Os desenhos seguem o crescimento dos ocitos da primeira gerao. (Segundo Grant, 1953.)
Primeiro grupo
Dimetro (mm)
Fase vitelognica
Fase pr-vitelognica
Segundo grupo
Primeiro ano
Segundo ano
Inverno
Outono
Vero
Primavera
Inverno
Outono
Vero
Primavera
Inverno
Outono
Vero
Primavera
Terceiro grupo
Terceiro ano
A vitelognese ocorre quando o ocito alcana o estgio diplotnico da prfase

meitica. O vitelo no uma substncia nica, mas uma mistura de materiais usados
para a nutrio do embrio. O principal componente do vitelo uma protena de 470kDa, chamada vitelogenina. Essa no produzida no ocito da r (como so as
principais protenas do vitelo de organismos tais como os aneldeos e o lagostim),
mas sintetizada no fgado e levada pela corrente sangnea at o ovrio (Flickinger
e Rounds, 1956). Essa grande protena passa entre as clulas foliculares do ovrio e
incorporada ao ocito por micropinocitose, o desligamento de vesculas envoltas
pela membrana na base das vilosidades (Dumont, 1978). No ocito maduro, a
vitelogenina cindida em duas protenas menores: a altamente fosforilada fosvitina
e lipoprotena lipovitelina. Essas duas protenas esto acondicionadas juntas em
plaquetas do vitelo envoltas pela membrana (Figura 22.22A). Grnulos de glicognio
e incluses lipocondriais armazenam o carboidrato e os componentes lipdicos do
vitelo, respectivamente.
A maioria dos vulos so altamente assimtricos, e durante a oognese que
o eixo animal-vegetal do vulo especificado. Danilchik e Gerhart (1987) mostraram que embora a concentrao de vitelo em ocitos de Xenopus aumente cerca de
10 vezes medida que vai do plo animal para o plo vegetal do ovo maduro, a
captao de vitelogenina uniforme na superfcie do ocito. O que difere seu
movimento dentro do ocito, que depende do local onde se deu a entrada das
protenas vitelnicas. Quando as plaquetas do vitelo so formadas no futuro hemisfrio animal, movimentam-se em direo ao centro da clula. As plaquetas do
vitelo vegetal, porm, no se movem ativamente, permanecendo na periferia por
muito tempo, a aumentando de tamanho. Elas so depois deslocadas lentamente
do crtex medida que novas plaquetas entram da superfcie. Como um resultado
desse transporte intracelular diferenciado, a quantidade de vitelo aumenta regularmente no hemisfrio vegetal, at que a metade vegetal do ocito maduro de
Xenopus contenha perto de 75% do vitelo (Figura 22.22B-E). O mecanismo dessa
translocao permanece desconhecido.
(A)
(B)
(C)
Figura 22.22
Distribuio do vitelo em Xenopus. (A) Uma plaqueta de vitelo anfbio. (B-E) Estabelecimento
da polaridade animal-vegetal das plaquetas de vitelo em ocitos de Xenopus. (B) No ocito no
final do estgio III (600 m), plaquetas de vitelo penetram na clula igualmente por todos os
pontos da superfcie. (C,D) medida que o ocito cresce, as plaquetas do futuro plo animal
so deslocadas para o plo vegetal, enquanto aquelas no plo vegetal a permanecem. Continua
a entrada de vitelo por todos os lados. (E) Ao fim da vitelognese, as plaquetas mais precoces
(III) esto todas no hemisfrio vegetal, que concentrou agora 75% do vitelo do ocito. O
momento de entrada do vitelo nas plaquetas do ocito est indicado pelo grau de sombreamento
e nmeros romanos: III, plaquetas de estgio III; IV-e, plaquetas do estgio precoce IV; IVl:plaquetas de estgio tardio IV; V, plaquetas do estgio V; gv, vescula germinativa. (Segundo
Danilchik e Gerhart, 1987; fotografia cortesia de L. K. Opresko.)
medida que o vitelo est sendo depositado, as organelas tambm se arranjam assimetricamente. Os grnulos corticais comeam a se formar a partir do aparelho de Golgi, estando originalmente espalhados aleatoriamente atravs do citoplasma do ocito. Posteriormente, migram para a periferia da clula. As mitocndrias
se replicam nesse perodo, dividindo-se para formar milhes de organelas que
sero distribudas para as diferentes clulas durante a clivagem. (Em Xenopus no
so formadas novas mitocndrias antes do incio da gastrulao.) Quando a
vitelognese se aproxima de seu final, o citoplasma do ocito se estratifica. Os
grnulos corticais, mitocndrias e grnulos pigmentados so encontrados na periferia da clula, dentro do crtex do ocito rico em actina. No interior do citoplasma interior, emergem gradientes distintos. Enquanto as plaquetas do vitelo se
concentram mais no plo vegetal, os grnulos de glicognio, ribossomos, vesculas
lipdicas e retculo endoplasmtico so encontrados mais em direo do plo animal. Mesmo os mRNAs especficos armazenados no citoplasma se localizam em
determinadas regies do ocito. [germ1.html]
Enquanto os mecanismos precisos para o estabelecimento desses gradientes
permanecem desconhecidos, estudos usando inibidores mostraram que o citoesqueleto criticamente importante para a localizao de RNAs especficos e de
fatores morfogenticos. Parece haver dois caminhos para conseguir a localizao
no crtex vegetal (Foristall et al., 1995; Kloc e Etkin, 1995). Mensagens tais como
as que codificam a protena Vg1 esto inicialmente presentes em todo o ocito,
sendo trasladadas para o crtex vegetal em dois passos (Yisraeli et al., 1990). Na
primeira fase, so necessrios microtbulos para trazer o mRNA Vg1 para o hemisfrio vegetal. Na segunda fase, os microfilamentos so responsveis pelo
ancoramento da mensagem de Vg1 no crtex. A poro do mRNA Vg1 que se liga
a esses elementos citoesquelticos reside na regio 3 no-traduzida. Quando uma
seqncia especfica de 340 bases colocada sobre uma mensagem de -globina, o
mRNA -globina colocado de maneira semelhante no crtex vegetal (veja Captulo 12; Mowry e Melton, 1992). Outros mRNAs, como Xlsirt (uma famlia de RNAs
(D)
(E)
863
864
RNAs
maternos
Estgio 1-2
que no codificam protenas mas podem ser necessrios para a manuteno de Vg1
no crtex), Xwnt11 e Xcat2 (que codifica uma protena ligante de RNA relacionada
a Nanos), deixam a vescula germinativa para se localizarem na nuvem mitocondrial no plo vegetal do ncleo. Essas mensagens ficam compartimentalizadas em
agregados associados com o plasma germinativo e so transportadas para o crtex
vegetal de uma maneira que parece ser independente do citoesqueleto (Figura 22.23;
Kloc et al., 1996).
Concluso da meiose: P
rogesterona e Fecundao
Progesterona
Estgio 2-3
Estgio 4
Trajetria Vg1
Trajetria metro
(Xwnt11, Xcat2)
Figura 22.23
Representaes esquemticas de duas trajetrias para a localizao de mRNAs na regio

vegetal do ocito de Xenopus. A trajetria
METRO (organizadora do transporte de mensagens message transport organizer) acumula mensagens na nuvem mitocondrial, e suas
ilhas so transportadas para o crtex do plo
vegetal. Na trajetria Vg1 so vistas mensagens por todo o ovo, porm, essas so trasladadas por um sistema movido pelos microtbulos para os microfilamentos do crtex vegetal. (Segundo Kloc e Etkin, 1995.)
Ocitos de anfbios podem permanecer anos no estgio diplteno da prfase meitica.

O recomeo da meiose no ocito primrio dos anfbios requer progesterona. Esse
hormnio secretado pelas clulas foliculares em resposta ao hormnio
gonadotrfico secretado pela hipfise. Seis horas aps a estimulao por
progesterona, ocorre a desintegrao da vescula germinativa (GVBD), as
microvilosidades se retraem, os nuclolos se desintegram e os cromossomos em
forma de escova se contraem e migram para o plo animal para iniciar a diviso.
Pouco depois, ocorre a primeira diviso meitica, e o vulo maduro liberado pelo
ovrio pelo processo da ovulao. Quando liberado, esse vulo se encontra na
segunda metfase meitica.
Como pode a progesterona capacitar o vulo a interromper sua dormncia e reiniciar
a meiose? Para compreender esse mecanismo de ativao, necessrio revisar rapidamente o modelo para diviso precoce do blastmero apresentado no Captulo 5. O
fator promotor da maturao (MPF) responsvel pelo reincio da meiose. Sua atividade cclica, sendo alta durante a diviso celular e indetectvel durante a interfase. O
MPF uma protena quinase que contm uma subunidade enzimtica (ciclina). Como
todos os componentes do MPF esto presentes no ocito do anfbio, considera-se
que a progesterona de alguma maneira converte um complexo pr-MPF em MPF ativo,
talvez pela ativao da fosfatase cdc25 (veja Captulo 5; Minishull, 1993).
O mediador do sinal de progesterona provavelmente a protena c-mos. A
progesterona reinicia a meiose, fazendo o ovo poliadenilar o mRNA c-mos maternal que havia sido armazenado em seu citoplasma (Sagata et al., 1988, 1989; Sheets
et al., 1995). Essa mensagem traduzida em uma fosfoprotena de 39-kDa, pp39mos,
detectvel somente durante a maturao do ocito, sendo rapidamente destruda
aps a fecundao. No entanto, durante sua breve vida, essa protena exerce um
papel principal na liberao do vulo da sua dormncia. Se a traduo de pp39mos
for inibida (injetando-se mRNA mos-antisenso no ocito), esse no aparece e a
desintegrao da vescula germinativa e a renovao da maturao do ocito no
acontecem. Aps ter estimulado o reincio da meiose, pp39mos capacita o ocito a
passar por uma diviso meitica, mas congela o segundo ciclo meitico na metfase.
Esse bloqueio causado pelas aes combinadas de pp39mos e outra protena, a
quinase 2 dependente de ciclina (cdk2; Gabrielli et al., 1993). Essas duas protenas
so consideradas constituir o fator citoesttico (CSF) encontrado nos ovos maduros da r, que pode bloquear os ciclos celulares na metfase (Masui, 1974).
Acredita-se que o CSF previne a degradao da ciclina.
A prxima pergunta envolve os mecanismos pelos quais a fecundao capacita
o ocito que est na segunda metfase a completar a diviso para formar um gameta
haplide. Evidncia recente sugere que o fluxo de ons de clcio ocorrendo durante
a fecundao capacita a protena ligante de clcio calmodulina a tornar-se ativa. A
calmodulina, por sua vez, pode ativar a protena quinase II dependente de calmodulina.
Essa necessria e suficiente para inativar a quinase cdc2 e estimular a degradao
de c-mos (Lorca et al., 1993). A calpaina II, uma protease dependente de clcio,
degrada pp39mos (Watanabe et al., 1989). Assim, os dois componentes do CSF so
inativados ou destrudos. Sem CSF, a ciclina pode ser degradada, e a diviso meitica
pode ser completada (Figura 22.24).
Liberao da
parada da metfase
pela fertilizao
Progesterona secretada
pelas clulas foliculares
libera a parada da interfase
Estgio do
ciclo celular
Parada em
interfase
Meiose I
em metfase
865
Metfase: meiose II
parada de metfase
mediada por CSF
Mitose I
em metfase
Primeira fase-S
Atividade de MPF
Alta
Baixa
Sntese protica
Calpaina II
Cam-PK II
Estgio
desenvolvimental
Ciclina B
Espermatozide
Ocito Imaturo
(Parada G2)
GVBD
(primeira meiose)
Ocito ou
vulo maduro
(segunda meiose)
Fertilizao
Primeira
mitose
Primeira
clivagem
Figura 22.24
Representao esquemtica da maturao do ocito de Xenopus, mostrando a regulao da diviso meitica da clula por pp39mos, cdk2 e calpaina II. A linha slida no grfico representa os
nveis relativos de MPF ativo. As barras sob o traado mostram os perodos quando as snteses
de determinadas protenas so necessrias para a entrada na prxima fase M. GVBD o ponto da
desintegrao da vescula germinativa. A morfologia do ocito est representada embaixo. (Segundo Minishull, 1993.)
Transcrio Gnica em Ocitos

Na maioria dos animais (insetos sendo uma exceo importante), o ocito em crescimento ativo na transcrio de genes onde os produtos so ou (1) necessrios para
o metabolismo celular, (2) necessrios para processos especficos do ocito, ou (3)
requeridos para o desenvolvimento precoce antes do ncleo comear a funcionar. Em
camundongos, por exemplo, o ocito diplteno em crescimento est ativamente transcrevendo os genes para as protenas da zona pelcida ZP1, ZP2 e ZP3. Esses genes
so transcritos somente no ocito e no em qualquer outra clula (Epifano et al., 1995;
veja Captulo 2).
O ocito anfbio tem certos perodos em que a sntese de RNA muito ativa.
Durante o estgio diplteno, certos cromossomos estendem grandes laos de DNA,
fazendo com que o cromossomo se assemelhe a uma escova (um til instrumento para
limpeza de tubos de ensaio em tempos anteriores ao uso de materiais descartveis).
Esses cromossomos em forma de escova (Prancha 2) podem ser vistos nos locais da
sntese de RNA por hibridizao in situ. Cromossomos de ocitos podem ser preparados, desnaturados e incubados com RNA radiativo que codifica uma protena especfica. Aps o RNA no-ligado ter sido removido por lavagem, a auto-radiografia visualiza
a localizao precisa do gene. A Figura 22.25 mostra o cromossomo diplteno I da
salamandra Triturus cristatus aps incubao com mRNA da histona radiativo. Fica
bvio que o gene (ou conjunto de genes) da histona est localizado em uma das
dobras do cromossomo em forma de escova (Old et al., 1977). Micrografias eletrnicas
de transcritos de genes dos cromossomos em forma de escova tambm permitem que
se veja cadeias de mRNA destacando-se de cada gene medida que esse estiver
sendo transcrito (Hill e MacGregor, 1980).
Figura 22.25
Localizao (ponta da seta) dos genes histona

em um cromossomo em forma de escova em um
ocito de anfbio. Os genes foram visualizados
por hibridizao in situ e auto-radiografia. (de
Old et al., 1977, cortesia de H. G. Callan.)
866
Figura 22.26
Alta
Taxa relativa de sntese
Produo de RNA ribossmico em ocitos de

Xenopus. (A) Taxas relativas da sntese de
DNA, tRNA e rRNA na oognese de anfbios
durante os ltimos trs meses antes da ovulao. (B) A transcrio do precursor do RNA
dos RNAs ribossmicos 28S, 18S e 5.8S. Essas unidades esto ligadas em srie, aproximadamente 450 por genoma haplide. (A de
Gurdon, 1976; B cortesia de O. L. Miller Jr.)
tRNA
RNAs ribossmicos
DNA
RNA 5S
Baixa
Amplificaes de rDNA
Comea o
acmulo de vitelo
Ocito
totalmente
crescido
3 meses crescimento do ocito
(B)
Comea a transcrio
Transcrio por
gravidade do RNA
ribossmico
Fim da
transcrio
Hormnio
pituitrio
Fertilizao
Maturao
16 horas
DNA de espaamento no-transcrito
Em adio sntese de mRNA, os padres de transcrio de rRNA e tRNA so

tambm regulados durante a oognese. A Figura 22.26 A mostra a sntese de
ribossomos e RNA de transferncia durante a oognese de Xenopus. A transcrio
parece comear em ocitos precoces (estgio I, 25-40 m), durante o estgio diplteno
da meiose. Nesse ponto, todos os RNAs ribossmico e de transferncia necessrios
para a sntese protica at o estgio de blstula intermediria so produzidos, e
todos os mRNAs maternos para o desenvolvimento precoce so transcritos. Esse
estgio dura meses em Xenopus. A taxa de produo de RNA ribossmico espantosa. O genoma do ocito de Xenopus tem mais de 1800 genes codificando o rRNA
18S e 28S, e esses genes so amplificados seletivamente at que existam mais de
500.000 genes produzindo esses RNAs ribossmicos (Figura 22.26B; Brown e Dawid,
1968). Aps atingir certo tamanho, os cromossomos do ocito maduro (estgio VI)
se condensam, e os genes no esto transcrevendo ativamente. Essa condio de
ocito maduro tambm pode perdurar por meses. Aps estimulao hormonal, o
ocito completa sua primeira diviso meitica e ovulado. Os mRNAs armazenados
pelo ocito agora se juntam aos ribossomos para iniciar a sntese protica. Dentro
de horas, a segunda diviso meitica comeou, e o ocito secundrio foi fertilizado.
Os genes do embrio no comeam a transcrio ativa antes da transio da blstula
intermediria (Davidson, 1986). [germ2.html]
Conforme vimos no Captulo 12, os ocitos de vrias espcies produzem duas
classes de mRNAs aqueles de uso imediato no ocito e aqueles que so armazenados para uso durante o desenvolvimento precoce. Em ourios-do-mar, a traduo
das mensagens maternas armazenadas iniciada pela fecundao, enquanto em rs o
sinal para tal traduo iniciado pela progesterona quando o ovo est prestes a ser
ovulado. Uma das aes da atividade da quinase MPF induzida pela progesterona pode
ser a fosforilao das protenas ligantes de CPE nos mRNAs do ocito armazenados.
867
A fosforilao desses fatores est associada com o prolongamento das caudas

poli(A) nas mensagens armazenadas e com a traduo dos mRNAs armazenados
(Paris et al., 1991).
Oognese Merostica em Insetos
Existem vrios tipos de oognese em insetos, mas a maioria dos estudos focalizaram
os insetos, tais como Drosophila e mariposas, que sofrem oognese merostica.
Nesse processo as conexes citoplasmticas permanecem entre as clulas produzidas
pelo oognio. Em Drosophila, cada oognio se divide quatro vezes para produzir um
clone de 16 clulas conectadas uma outra atravs de canais anelares. A produo
dessas clulas interconectadas (chamadas cistcitos) envolve uma seqncia altamente organizada de divises celulares (Figura 22.27). Somente as duas clulas apresentando quatro interconexes so capazes de se desenvolver em ocitos, e dessas
duas, somente uma torna-se um vulo. A outra inicia a meiose mas no a termina.
Assim, somente um de 16 cistcitos pode tornar-se um vulo. Todas as outras clulas
se tornam clulas nutrizes. Mostra-se que a clula destinada a ser o ocito aquela
residindo na extremidade mais posterior da cmara do ovo que contm o clone de 16
clulas. Porm, j que as clulas nutrizes esto conectadas ao ocito atravs de suas
pontes citoplasmticas, o complexo inteiro pode ser visto como uma unidade produtora de um vulo.
O ovrio merostico nos confronta com alguns problemas interessantes. Se todas
as clulas esto conectadas de modo que as protenas e os RNAs podem transitar
livremente entre elas, porque teriam destinos desenvolvimentais diferentes? Porque
uma clula se torna o ocito enquanto as outras se tornam fbricas sintetizadoras de
RNA, enviando mRNAs, ribossomos e mesmo centrolos para o interior do ocito?
Porque o fluxo de protena e RNA vai somente em uma direo? medida que os
cistcitos se dividem, se forma uma grande estrutura rica em espectrina chamada
fussomo, cobrindo as pontes citoplasmticas entre as clulas (Figura 22.27). Esse
construdo assimetricamente, pois sempre cresce do plo do fuso que permaneceu
em uma das clulas (Lin e Spradling, 1995). A clula que reteve o fussomo durante a
primeira diviso se torna o ocito. No ainda conhecido se o fussomo contm determinantes oognicos, ou se ele dirige o trfego de materiais para o interior dessa
clula em particular.
Uma vez estabelecidos os padres de transporte, o citoesqueleto fica ativamente
envolvido no transporte de mRNAs das clulas nutrizes para o citoplasma do ocito
(Cooley e Theurkauf, 1994). O arranjo microtubular crtico para a determinao do
ocito. Se essa grade for rompida (quimicamente ou por mutaes tais como bicaudal-D
(A) Anterior
Figura 22.27
A formao de 16 cistcitos interconectados

em Drosophila. (A) Diagrama de um ovarolo
adulto mostrando a seqncia da oognese com
cistos germinativos mais jovens, amadurecendo dentro do ovarolo. (B) Diviso das clulas
formadoras de cistcitos (cistoblastos). As
clulas esto representadas esquematicamente
dividindo-se em um nico plano. Uma clulatronco se divide para produzir outra clula-tronco mais uma clula comprometida a formar os
cistcitos. Somente um dos 16 cistcitos torna-se um ocito; os outros tornam-se clulas
nutrizes, conectadas ao ocito por canais anelares (pontes citoplasmticas). O centrolo do
cistcito 1 retm o fussomo (em vermelho),
que cresce atravs do canal anelar em direo
sua irm mittica. A seta mostra a polaridade,
apontando para a clula da qual cresceu o
fussomo. Aps mais trs divises mitticas
formado o cisto de 16 clulas. Se o transporte
intracelular for coordenado pelo fussomo, o
transporte de mRNAs e protenas iria para o
cistcito 1, que assim se tornaria o ocito. (A
segundo Ruohola et al., 1991; B segundo Lin e
Spradling, 1995.)
Clula nutriz
Ocito
Posterior
Clulas
foliculares
posteriores
(B)
Mais 2
divises
Cistoblasto
em diviso
Fussomo
Cisto de 2 clulas
868
Figura 22.28
Transporte de mRNA de clulas nutrizes para

ocitos da mosca. (A,B) Auto-radiografias da
clula folicular da mosca domstica, Musca
domestica, aps incubao com citidina [3H].
(A) Cmara do ovo fixada imediatamente aps
introduo da marca. Os ncleos das clulas
nutrizes esto fortemente marcados, indicando que esto sintetizando novo RNA. O ocito
permanece no-marcado exceto onde algum
RNA esteja escapando para o ocito atravs
da conexo citplasmtica entre esse e a clula
nutriz (seta). (B) Uma cmara do ovo semelhante fixada 5 horas mais tarde. A marca
desapareceu dos ncleos da clula nutriz,
movendo-se para o citoplasma. Alm disso, o
RNA radiativo pode ser visto passando para
o citoplasma do ocito atravs dos dois canais
entre as clulas nutrizes e o ocito. (C) Autoradiografia da cmara do ovo de Drosophila
corada por uma sonda radioativa para o mRNA
bicoid. Essa mensagem transportada das clulas nutrizes e permanece na poro mais anterior do ocito. (A e B de Bier, 1963, cortesia de D. Ribbert; C de Stephanson et al.,
1988, cortesia de E. C. Stephanson.)
(A)
Ncleo da
clula nutriz
Citoplasma da
clula nutriz
Citoplasma
do ocito
Epitlio
folicular
ou egalitarian), os produtos dos genes so transmitidos em todas as direes e

todas as 16 clulas se diferenciam em clulas nutrizes (Gutzeit, 1986; Theurkauf et
al., 1992, 1993; Spradling, 1993). possvel que alguns compostos transportados
das clulas nutrizes para o ocito fiquem associados com protenas transportadoras
como a cinesina, o que poderia capacit-las a viajar na esteira de microtbulos
estendendo-se atravs do canal anelar (Theurkauf et al., 1992; Sun e Wyman, 1993).
A actina pode tornar-se importante na manuteno dessa distino durante os estgios mais tardios da oognese. Mutaes que impedem microfilamentos de actina
forrarem os canais anelares previnem o transporte de mRNAs da clula nutriz para o
ocito, e a ruptura dos filamentos de actina faz com que a distribuio de mRNA seja
ao acaso (Cooley et al., 1993; Watson et al., 1993). Assim, o citoesqueleto microtubular
e microfilamentoso parece controlar o movimento de organelas e RNAs entre clulas
nutrizes e ocito fazendo com que os sinais desenvolvimentais sejam trocados
somente na direo apropriada.
TRANSPORTE DE RNA DAS CLULAS NUTRIZES PARA O OCITO. Os ocitos
de insetos merosticos no passam pelo estgio transcricional ativo, nem apresentam
cromossomos em forma de escova. Ao contrrio, evidncia auto-radiogrfica mostra
que a sntese de RNA , em grande parte, confinada s clulas nutrizes e que o RNA
produzido por essas clulas ativamente transportado para o citoplasma do ocito.
Isso pode ser visto na Figura 22.28. Quando as cmaras de ovo da mosca domstica
so incubadas em citidina radioativa, os ncleos das clulas nutrizes mostram intensa
marcao. Quando a marcao interrompida, e as clulas so incubadas por mais 5
horas em meios no-radioativos, o RNA marcado visto entrar no ocito a partir das
clulas nutrizes (Bier, 1963). A oognese ocorre em somente 12 dias, sendo as clulas nutrizes metabolicamente muito ativas durante esse tempo. Elas so ajudadas na
sua eficincia transcricional tornando-se politnicas. Em lugar de ter duas cpias de
cada cromossomo, elas replicam seus cromossomos at terem produzido 512 cpias.
As 15 clulas nutrizes so conhecidas por passar RNAs ribossmicos e mensageiros
assim como protenas para o citoplasma do ocito; e ribossomos inteiros podem ser
tambm transportados (Prancha 16). Os mRNAs no se associam com polissomos,
sugerindo que eles no so imediatamente ativos na sntese protica (Paglia et al.,
1976; Telfer et al., 1981).
(B)
(C)
869
&
Especulaes
A Origem dos Eixos Embrionrios de

Drosophila Durante a Oognese
S EIXOS NTERO-POSTERIOR e
dorsoventral so estabelecidos
durante a metade da oognese
(Gonzlez-Rayes et al., 1995; Roth et al.,
1995). O mRNA para o determinante anterior, bicoid, colocado na regio anterior
do vulo; os mRNAs para os determinantes posteriores, oskar e nanos, so enviados para o plo posterior; a mensagem
gurken fica concentrada em uma regio do
vulo, a iniciando as reaes que estabelecem esse lado como a superfcie dorsal
do embrio. Os mecanismos para a construo desses eixos envolvem complexas
interaes entre as clulas nutrizes, o ocito
e as clulas foliculares (veja Figura 14.13).
Primeiro, a mensagem gurken produzida
pelas clulas nutrizes, e se aglutina ao redor do ncleo do ocito, posicionando-se
entre o ncleo e a membrana plasmtica. O
ncleo est na regio posterior do vulo, e
a protena Gurken recm-transcrita ativa seu
receptor nas clulas foliculares no plo posterior. (A protena Gurken se parece com o
fator de crescimento epidrmico.) Essas clulas foliculares do plo posterior respondem enviando um sinal (talvez AMP
cclico) que ativa a protena quinase A
(PKA) na membrana celular do ocito.
Como um resultado da ativao de PKA,
os microtbulos do ocito so reorientados (Lane e Kalderon, 1994).* Em lugar
de ter seus terminais positivos apontados
para as clulas nutrizes (i.e., anteriormente), elas revertem seus terminais positivos
de modo que fiquem posteriores (onde
havia estado o ncleo).
*PKA tambm conhecida por organizar microtbulos no crescimento axnico (Shea et al.,
1992), e como vimos no Captulo 1, isso pode
mediar a diferenciao da clula peduncular em
Dictyostelium (Williams et al., 1993).
A reorientao dos microtbulos um

evento crtico. Os mRNAs nanos e oskar
so sintetizados pelas clulas nutrizes e so
inicialmente vistos na futura zona anterior
do vulo. Esses mRNAs podem ser transportados para o plo posterior ao longo dos
microtbulos para o teminal positivo (mas
no para o terminal negativo). Assim, essas
mensagens podem agora ser transportadas
para o plo posterior. A mensagem oskar
crtica para a organizao do plasma polar,
e se for traduzida antes de atingir o plo
posterior, pode estabelecer abdomens e clulas germinativas em outros lugares. Durante sua jornada para o posterior, a mensagem oskar reprimida pela protena Bruno (que se liga 3UTR da mensagem
oskar). Uma vez na posio posterior, essa
represso abolida e a protena Oskar pode
ser produzida (Kim-Ha et al., 1995; Rongo
et al., 1995). Reciprocamente, a mensagem
bicoid conservada no anterior pelos terminais negativos dos microtbulos. Se esses forem desagregados, a mensagem se
difunde para o citoplasma, e se a polaridade dos microtbulos for retida em sua conformao original (como nas moscas carentes em PKA), a mensagem bicoid ser transportada para o plo posterior (Figura 22.29;
Macdonald et al., 1991; Marcey et al., 1991;
Pokrywka e Stephenson, 1991.) Esse posicionamento do mRNA bicoid na futura
posio anterior a das mensagens oskar e
nanos na futura posio posterior estabelece as condies para a organizao do eixo
ntero-posterior (veja Captulo 15).
O realinhamento dos microtbulos facilita o movimento do ncleo com seu sinal
Gurken, ao longo da membrana plasmtica
do vulo em direo ao canto dorsal anterior (Roth et al., 1995; GonzlezReyes et al.,
1995). Aqui, a protena Gurken faz com que
TRANSPORTE DAS PROTENAS DO VITELO PARA O OVO. As trs principais

protenas do vitelo em Drosophila so produzidas no corpo gorduroso e ovrio,
mas no no ocito propriamente dito (Bownes, 1982; Brennen et al., 1982). A sntese
do vitelo controlada por vrios agentes interativos, incluindo sexo, nveis de
(A)
WT
gurken
Ncleo
oskar
bicoid
gurken
(B)
PKA -
oskar
bicoid
Figura 22.29
Localizao do RNA nos ocitos de Drosophila tipo selvagem e mutantes deficientes em PKA.
(A) No ocito do tipo selvagem (estgio 9), o
mRNA oskar est no plo posterior, o mRNA
bicoid est nas margens anteriores, e o mRNA
gurken est localizado no canto anterior dorsal.
(B) Nos ocitos deficientes em PKA, a distribuio da mensagem gurken no afetada, mas
o mRNA oskar deixa de se localizar no plo
posterior e se acumula centralmente, enquanto o
mRNA bicoid transportado para o plo posterior. (Segundo Lasko, 1995.)
as clulas foliculares adjacentes se convertam em clulas dorsais. (As clulas foliculares polares e laterais produzem protenas diferentes e respondem de maneira diferente
ao sinal Gurken. As clulas foliculares polares ativam a PKA do ocito; as clulas foliculares laterais se tornam dorsalizadas e reprimem a sntese de protenas ventralizantes). Assim, os eixos ntero-posterior e dorsoventral em Drosophila so iniciados antes mesmo de ocorrer a fertilizao.
870
Crebro
Hormnio cerebral
Corpora allata
Hormnio juvenil
Ovrio
Clulas
abdominais
produtoras de
ecdisona
Protenas
vitelnicas
Ecdisterides
Corpo
gorduroso
Protenas
vitelnicas
Figura 22.30
Modelo para a regulao hormonal da sntese

de peptdio vitelnico em D. melanogaster. Em
resposta a um hormnio cerebral, o corpora
allata produz hormnio juvenil, que faz com
que o ovrio produza protenas vitelnicas e
ecdisterides. O hormnio juvenil tambm induz a sntese de ecdisterides nas clulas abdominais. Esses ecdisterides motivam o corpo
gorduroso a produzir protenas vitelnicas que
so transportadas para o ovrio. (Segundo
Bownes, 1982.)
hormnio juvenil, ecdisona e nutrio. Esses agentes fisiolgicos so integrados pela regio intensificadora entre os dois genes da protena do vitelo de
Drosophila (veja Figura 10.13; Bownes et al, 1988). Esses genes so somente
ativos em moscas fmeas, e isso regulado pela ligao da protena Doublesex
especfica de fmea a essa regio do intensificador. Acredita-se que um hormnio
cerebral, respondendo a sinais ambientais*, estimule o corpora allata a secretar
hormnio juvenil (Figura 22.30). O hormnio juvenil (1) regula a captao de
peptdeos vitelnicos na superfcie do ocito, (2) estimula a sntese de protenas
vitelnicas do ovrio (que so idnticas quelas produzidas pelo corpo gorduroso), e (3) faz com que os folculos ovarianos e outras clulas abdominais secretem
ecdisona. Essa metabolizada para sua forma ativa - 20-hidroxiecdisona - e estimula o corpo gorduroso a produzir protenas do vitelo, tal como o estradiol estimula o fgado anfbio a faz-lo. Da mesma maneira, a administrao de ecdisona a
machos adultos faz com que seus corpos gordurosos secretem protenas vitelnicas
(Postlethwait et al., 1980) e que a protena vitelnica seja levada para os ocitos de
insetos atravs de endocitose mediada por receptores (Raikhel e Dhadialla, 1992).
Os receptores para a vitelogenina esto localizados em regies da membrana do
ocito na base das microvilosidades e entre as mesmas. Os complexos receptorvitelogenina so internalizados e a vitelogenina liberada do receptor dentro do
vacolo endoctico. Esse se funde com outros endossomos para formar o grnulo
repleto de vitelogenina armazenado pelo vitelo.
Oognese em Mamferos
A ovulao do vulo dos mamferos segue um de dois padres bsicos, dependendo
da espcie. Um tipo de ovulao estimulado pelo ato fsico da copulao. A
estimulao fsica do crvix desencadeia a liberao de gonadotrofinas da hipfise.
Essas gonadotrofinas sinalizam o ovo para recomear a meiose e iniciar os eventos
que expelem o vulo do ovrio. Esse mtodo assegura que a maior parte das copulaes
conduz a vulos fertilizados; e animais que utilizam esse mtodo de ovulao coelhos e vises tm a reputao de procriaes bem sucedidas.
A maioria dos animais, porm, tem um tipo peridico de ovulao. A fmea
apenas ovula em pocas especficas do ano, chamadas de estro (ou seu equivalente portugus cio). Nesses casos, sinais ambientais, mais notavelmente a
quantidade e o tipo de iluminao diurnos, estimulam o hipotlamo a liberar o fator
liberador de gonadotrofina. Esse estimula a hipfise para liberar suas
gonadotrofinas o hormnio estimulante de folculos (FSH) e o hormnio luteinizante (LH) que faz com que as clulas foliculares se proliferem e secretem
estrgeno. O estrgeno subseqentemente penetra em certos neurnios e evoca
o padro de comportamento copulatrio caracterstico da espcie. As
gonadotrofinas tambm estimulam o crescimento folicular e a iniciao da ovulao. Assim, estro e ovulao ocorrem em pocas prximas.
Os seres humanos apresentam variao sobre o tema da ovulao peridica.
Embora fmeas humanas tenham ovulao cclica (em mdia de cerca de 29.5
dias), sem estro anual definido, a maior parte da fisiologia reprodutiva humana
compartilhada com outros primatas. A caracterstica periodicidade dos primatas
na maturao e liberao de vulos chamada ciclo menstrual porque envolve o
* Em Drosophila, o sinal ambiental parece ser o fotoperodo. No mosquito comum, o sinal a refeio
sangnea. Somente mosquitos fmeas picam, e elas no produzem vitelogenina antes da refeio.
Algum fator sangneo estimula o crebro do mosquito para liberar o hormnio juvenil e o fator estimulador
do corpocardaco. Esse ltimo fator causa a liberao do hormnio neurosecretrio do desenvolvimento do ovo (EDNH). Esse estimula o ovrio a secretar vitelogenina (Hagedorn, 1983; Borovsk
et al., 1990). (Veja Captulo 21.)
(A)
Clulas
Granulosas
Clulas
tecais
871
Clulas
Granulosas
Clulas
tecais
FOLCULOS
PRIMORDIAIS
(B)
Zona pelcida
Clulas tecais
Coroa radiata
Antro
Clulas granulosas
Membrana
granulosa
Ocito
FOLCULO GRAAFIANO
Figura 22.31
O folculo ovariano dos mamferos. (A) Maturao do folculo ovariano. Quando maduro, ele
freqentemente chamado folculo Graafiano. (B) Microfotografia eletrnica de varredura de um
foliculo maduro no rato. O ocito (centro) est rodeado pelas menores clulas granulosas que iro
constituir a coroa. (A segundo Carlson, 1981; B cortesia de P. Bagavandoss.)
peridico sangramento e descarte de detritos celulares do tero em intervalos

mensais.* O ciclo menstrual representa a integrao de trs atividades muito diferentes: (1) o ciclo ovariano, cuja funo amadurecer e liberar um ocito, (2) o
ciclo uterino, cuja funo prover o ambiente apropriado para o blastocisto desenvolvido se implantar, e (3) o ciclo cervical, cuja funo de somente permitir a
entrada do espermatozide no trato reprodutivo feminino no momento apropriado. Essas trs funes esto integradas atravs dos hormnios da hipfise,
hipotlamo e ovrio.
A maioria dos ocitos so mantidos no interior do ovrio humano adulto no estgio diplteno prolongado da primeira prfase meitica (freqentemente referida como
o estado dictado). Cada ocito est envolvido por um folculo primordial consistindo
de uma camada nica de clulas granulosas epiteliais e uma camada menos organizada
de clulas tecais mesenquimatosas (Figura 22.31). Periodicamente um grupo de folculos
primordiais entra em estgio de crescimento. Nesse perodo, o ocito sofre um aumento de volume de 500 vezes (correspondendo a um aumento do dimetro de 10 m em
um folculo primordial, para 80 m em um folculo totalmente desenvolvido).
* O descarte peridico do revestimento uterino um processo ativo observado em todos os mamferos.

O tero tem intrincadas adaptaes circulatrias (como as artrias espirais) que permitem ao sangue fluir
livremente por algum tempo sem coagular e em seguida cessar seu fluxo (para evitar uma hemorragia).
Profet (1993) props que a menstruao trata-se de uma crucial funo imunolgica, protegendo o tero
contra infeces pelo smen ou outros agentes ambientais.
872
Concomitantemente com o crescimento do ocito ocorre um aumento no nmero de

clulas granulosas foliculares, que forma camadas concntricas ao redor do ocito.
Essa proliferao das granulosas mediada pelo fator parcrino, GDF-9, um membro
da famlia TGF- (Dong et al., 1996). Atravs de todo esse perodo de crescimento, o
ocito permanece no estgio dictaco. O folculo completamente crescido contm
um grande ocito rodeado por vrias camada de clulas granulosas. Muitas dessas
clulas permanecero com o vulo liberado, formando o cumulus, que envolve o
vulo no oviduto. Alm disso, durante o crescimento do folculo se forma um antro
(cavidade), que se enche com uma complexa mistura de protenas, hormnios, cAMP
e outras molculas. A qualquer momento, um pequeno grupo de folculos est
madurecendo. Porm, aps progredir para um estgio mais maduro, a maioria dos
ocitos e seus folculos morrem. Para sobreviver, um folculo tem que encontrar uma
fonte de hormnios gonadotrficos e pegando a onda no momento apropriado,
ele tem que cavalg-la at que atinja o cume. Assim, para que ocorra a maturao do
ocito, o folculo ter que estar em um certo estgio de desenvolvimento quando
nascem as ondas de gonadotrofina.
O dia 1 do ciclo menstrual considerado ser o primeiro dia do sangramento
(Figura 22.32). Esse sangramento da vagina representa o desbastamento de tecido extra-uterino e vasos sangneos que teriam ajudado na implantao do
blastocisto. Na primeira fase do ciclo (chamada fase proliferativa ou folicular),
a glndula pituitria comea a secretar quantidades cada vez maiores de FSH. O
grupo de folculos em maturao que j sofreram algum desenvolvimento, respondem a esse hormnio com mais crescimento e proliferao celular. O FSH
induz tambm a formao de receptores de LH nas clulas granulosas. Pouco
aps esse perodo de crescimento folicular inicial, a pituitria comea a secretar
LH. Em resposta ao LH, o bloqueio meitico quebrado. A membrana nuclear de
ocitos competente se desintegra e os cromossomos se renem para sofrer a primeira diviso meitica. Um conjunto de cromossomos conservado no interior do
ocito, e o outro fornecido ao pequeno corpo polar. Ambos esto revestidos
pela zona pelcida, que foi sintetizada pelo ocito em crescimento. nesse estgio que o ovo ser ovulado.
As duas gonadotrofinas, atuando em conjunto, fazem com que as clulas foliculares produzam quantidades crescentes de estrgeno, que tem ao menos cinco principais atividades na regulao do progresso do ciclo menstrual:
1. Faz com que a mucosa uterina inicie sua proliferao e se enriquea em vasos
sangneos.
2. Faz com que o muco cervical se afine, permitindo o espermatozide entrar nas
pores internas do trato reprodutivo.
3. Causa um aumento do nmero de receptores de FSH nas clulas granulosas
(Kammerman e Ross, 1975) e simultnea diminuio da produo de FSH
pela hipfise. Estimula tambm as clulas granulosas a secretarem o hormnio
peptdico inibina, que tambm suprime a secreo hipofisria de FSH (Rivier et
al., 1986; Woodruff et al., 1988).
4. Em baixas concentraes, inibe a produo de LH, mas em altas concentraes a estimula.
5. Em concentraes muito altas e longos perodos, o estrgeno interage com o
hipotlamo, fazendo com que ele secrete o fator liberador de gonadotrofina.
medida que os nveis de estrgeno aumentam como um resultado da produo folicular, os nveis de FSH declinam. Todavia os nveis de LH continuam a
aumentar medida que mais estrgeno secretado. medida que o estrgeno
produzido (dias 7-10), as clulas granulosas continuam a crescer. Comeando no
dia 10, a secreo de estrgeno aumenta pronunciadamente. Esse aumento seguido no meio do ciclo por uma enorme onda de LH e uma menor exploso de FSH.
873
Figura 22.32
Gonadotrofinas
(da hipfise anterior)
Hormnio luteinizante (LH)
(A)
Hormnio estimulante de folculos (FSH)

(B)
Eventos no ovrio
Folculo em desenvolvimento
Corpo lteo
Ovulao
Ovo
(C)
Hormnios ovarianos
Progesterona
Estrgeno
Revestimento uterino
(D)
Menstruao
Fase folicular
Fase ltea
Dia do ciclo menstrual
Experimentos com macacas mostraram que a exposio do hipotlamo a mais de

200pg de estrgeno por ml de sangue por mais que 50 horas resulta na secreo
hipotalmica do fator libertador de gonadotrofina. Esse fator subseqentemente
causa a liberao de FSH e LH da hipfise. Dez a 12 horas aps o pico de
gonadotrofina, o vulo ovulado (Figura 22.33; Garcia et al., 1981). Embora o
mecanismo detalhado da ovulao no seja ainda conhecido, a expulso fsica do
ocito maduro do folculo parece ser devida a um aumento induzido de LH na
colagenase, ativador de plasminognio e prostaglandina no interior do folculo
(Lemaire et al., 1973). O mRNA para o ativador de plasminognio encontrava-se
dormente no citoplasma do ocito. O LH faz com que essa mensagem seja
poliadenilada e traduzida nessa poderosa protease (Huarte et al., 1987). As
prostaglandinas podem causar contraes localizadas nos msculos lisos do ovrio e pode tambm aumentar o fluxo de gua dos capilares ovarianos (Diaz-Infante
et al., 1974; Koos e Clark, 1982). Se a sntese de prostaglandina ovariana for inibida, a ovulao no ocorre. Alm da presso induzida pela prostaglandina, as
colagenases e a protease ativadora de plasminognio se afrouxam e digerem a
matriz extracelular do folculo (Beers et al., 1975; Downs e Longo, 1983). O resultado do efeito do LH seria, ento, um aumento da presso folicular acoplada com a
degradao da parede folicular. Um orifcio seria formado e digerido, atravs do
qual o vulo irromperia.
O ciclo menstrual humano. A coordenao de

ciclos (B) ovarianos e (D) uterinos controlada pelos (A) hormnios hipofisrio e (C)
ovariano. Durante a fase folicular, o ovo amadurece dentro do folculo, e o revestimento
uterino preparado para receber o embrio.
O ovo maduro liberado ao redor do dia 14.
Se um embrio no for implantado no tero, a
parede uterina comea a se desintegrar, levando menstruao.
874
Figura 22.33
Ovulao no coelho. O ovrio de um coelho vivo anestesiado foi

exposto e observado. Quando o folculo comeou a ovular, o ovrio
foi removido, fixado e corado. (Cortersia de R. J. Blandau.)
Cumulus
Ocito
Ovrio
Folculo imaturo
Clulas foliculares
remanescentes
Aps a ovulao, comea a fase ltea do ciclo menstrual. As clulas restantes do

folculo rompido sob a influncia do LH tornam-se o corpo lteo. (Elas so capazes de
responder a esse LH porque o surto de FSH as estimula a desenvolver mais receptores
de LH.) O corpo lteo secreta algum estrgeno, mas a sua secreo predominante a
progesterona. Esse hormnio esteride circula at o tero, onde completa a tarefa de
preparar o tecido uterino para a implantao do blastocisto, estimulando o crescimento da parede uterina e seus vasos sangneos. O bloqueio do receptor da progesterona
com o esteride sinttico mifepristona (RU486) impede a parede uterina de engrossar
e previne a implantao do blastocisto no tero (Couzinet et al., 1986).* A progesterona
tambm inibe a produo de FSH, com isso prevenindo a maturao de mais folculos
e vulos. (Por essa razo, tal combinao de estrgeno e progesterona tem sido usada
em plulas de controle da natalidade. O crescimento e a maturao de novos vulos
so prevenidos enquanto o FSH estiver inibido).
Se o vulo no for fecundado, o corpo lteo se degenera, a secreo de progesterona
cessa e a parede uterina descartada. Com o declnio dos nveis de progesterona
srica, a hipfise volta a secretar FSH e o ciclo recomeado. Porm, se ocorrer
fertilizao, o trofoblasto secreta um novo hormnio, luteotropina, que faz com que
o corpo lteo permanea ativo e os nveis de progesterona srica se mantenham altos.
Assim, o ciclo menstrual permite a maturao peridica e a ovulao dos vulos
humanos permitindo ao tero desenvolver-se periodicamente em um rgo capaz de
nutrir durante nove meses um organismo em desenvolvimento.
O vulo e o espermatozide iro ambos morrer se no se encontrarem. Voltamos
assim para onde comeamos. O palco est preparado para a fecundao. Como reconhecido por F. R. Lillie em 1919, Os elementos que se unem so clulas nicas, cada
qual a ponto de morrer; mas pela sua unio formado um indivduo rejuvenescido,
que constitui um elo no eterno processo da Vida.
* RU486 considerado competir pelo receptor de progesterona no interior do ncleo. RU486
pode se ligar ao stio de progesterona no receptor, e o complexo receptor-RU486 parece formar
heterodmeros com o receptor normal de progesterona a essa ligado. Quando esse complexo RU486progesterona se liga aos elementos intensificadores responsivos progesterona no DNA, a transcrio desse stio inibida (Vegeto et al., 1992; Spitz e Bardin, 1993). Na Europa o RU486 tornou-se
uma alternativa largamente empregada ao aborto cirrgico (Palka, 1989; Maurice, 1991).
875
&
Especulaes
O Reincio da Meiose nos Ocitos de Mamferos
E NUMEROSOS FOLCULOS so
capazes de maturar quando
secretado o hormnio estimulante de folculos, por que em geral somente
um folculo e seu ocito prevalecem? Parece que o folculo capaz de produzir a
maior quantidade de estrgeno em resposta ao FSH aquele que amadurece, enquanto todos os outros morrem. Aqueles
conjuntos de folculos que inicialmente
receberam FSH no somente comeam a
proliferar, mas tambm produzir novos receptores de hormnio luteinizante nas suas
clulas tecais (Figura 22.34). A recepo
de LH faz com que essas clulas iniciem a
produo de estrgeno. Como vimos, o
estrgeno tem dois efeitos diferentes envolvendo a futura recepo de FSH. Em
um nvel, deprime a secreo hipofisria
de FSH, enquanto em outro nvel aumenta os receptores de FSH nas clulas foliculares. Assim, quanto mais estrgeno um
Recepo de FSH
Mais
receptores
de LH
Diminuio dos
nveis de FSH
Mais
receptores
de FSH
LH
Mais estrgeno
secretado
pelo folculo
Figura 22.34
Ciclo de retroalimentao positiva em clulas

foliculares de mamferos. A recepo do hormnio estimulante de folculos (FSH) leva
produo de mais receptores do hormnio luteinizante (LH). As clulas foliculares secretam estrgeno quando estimuladas pelo LH; o
estrgeno ocasiona tanto um aumento no nmero de receptores de FSH como um decrscimo na produo de FSH pela hipfise. Por
fim, muito poucos folculos permanecem capazes de receber as pequenas quantidades de
FSH produzidas, com isso amplificando sua
capacidade de receber LH. Esses poucos
folculos so capazes de amadurecer.
folculo produz, mais receptores de FSH

ele tem, e menos FSH permanece na circulao. medida que a concentrao de
FSH diminui progressivamente, somente
um folculo pode ligar o FSH disponvel.
Somente esse folculo pode crescer; os
outros folculos morrem.
O que faz o LH causar o reincio da
meiose? Para responder a essa pergunta, a
natureza do bloqueio meitico foi intensamente estudada. Como em ocitos de
anfbios, o estgio dictado extremamente importante porque durante esse perodo que os ocitos crescem, diferenciam as
estruturas especficas para ocitos, e adquirem a capacidade de recomear a
meiose (Sorensen e Wassarman, 1976).
Experimentos iniciais demonstraram que
ocitos envoltos em folculos no sofrem
maturao in vivo ou in vitro a no ser
quando expostos a gonadotrofinas, enquanto ocitos removidos dos folculos
reiniciam espontaneamente a meiose mesmo na ausncia de estimulao hormonal
(Pincus e Enzmann, 1935).
Parece, portanto, que a meiose normalmente inibida pelas clulas foliculares e
pode ser reiniciada pelas gonadotrofinas.
Essa hiptese que as clulas foliculares
so importantes reguladores da meiose
fortalecida por observaes que clulas
granulares se comunicam com o ocito
por processos que se estendem atravs da
zona. Esses processos tm junes de fenda que permitem pequenas molculas passarem entre o ocito e as clulas granulosas do folculo (Figura 22.35; Anderson e
Albertini, 1976; Gilula et al., 1978).
Porque a elevao dos nveis de cAMP
inibe a maturao do ocito (Cho et al.,
1974), foi proposto que a parada meitica
mantida pela transferncia de cAMP atravs das junes de fenda da clulas granulosas foliculares para o ocito (Dekel e
Beers, 1978, 1980). O surto de hormnio
luteinizante poderia desencadear a maturao terminando a comunicao pela juno de fenda, com isso inibindo a transferncia da cAMP para o ocito. Vrias linhas de evidncia apoiam essa hiptese.
Primeiramente, o declnio de cAMP parece
(A)
Processo da
clula folicular
(B)
Ocito
Figura 22.35
Comunicao entre ocito e clulas granulosas. (A) Ocito de carneiro rodeado pela zona
pelcida e clulas foliculares. As clulas granulosas do folculo esto estendendo processos atravs da zona pelcida, tocando o ocito.
(B) Micrografia eletrnica de processos de clulas foliculares estabelecendo conexes de juno de fenda com um ocito de macaco rhesus.
Junes de fenda (setas) esto coradas com
lantanio ionizado. (A de Moor e Cran, 1980,
cortesia dos autores; B de Anderson e Albertini,
1976, cortesia de D. Albertini.)
ser crtico para o reincio da meiose. A desintegrao da vescula germinativa pode

ser prevenida inibindo-se a degradao de
cAMP em ovos livres de folculos ou diretamente provendo tais ovos com cAMP
(Bornslaeger et al., 1986). O declnio da
concentrao de cAMP do ocito ocorre
876
imediatamente antes do reincio da meiose

(Figura 22.36; Schultz et al., 1983).
Em segundo lugar, as gonadotrofinas
podem causar a perda de comunicao entre
as clulas foliculares e o ocito. As clulas
foliculares parecem ser fontes importantes
de cAMP do ocito, e mudanas da concentrao de cAMP nessas clulas se refletem
nos nveis de cAMP no ocito (Bornslaeger
e Schultz, 1985; Racowsky, 1985). Essa observao explica porque os ocitos permanecem em parada meitica quando rodeados por clulas foliculares, mas reiniciam a
meiose quando essas so removidas.
O surto de gonadotrofinas pode elevar
a concentrao de cAMP da clula folicular
para novos nveis. Em resposta a essa elevao, as clulas foliculares maduras sintetizam cido hialurnico, que causa ruptura
fsica do contato entre os processos das clulas foliculares e o ocito (Eppig, 1979;
Larsen et al., 1986). As pontes pela quais o
cAMP flui da clula granulosa folicular
para o ocito, com isso, foram removidas,
permitindo o ocito mamfero reiniciar a
meiose (Dekel e Sherizly, 1985; Racowsky
e Satterlie, 1985).
Tal como ocitos de anfbios, o ocito
ovulado do camundongo est suspenso
na segunda metfase meitica e fecundado nesse estado. Paules e colaboradores (1989) mostraram que ocitos de camundongo em maturao tambm contm
Baixa atividade de adenil ciclase

ou alta atividade da fosfodiesterase
Alta atividade de adenil ciclase ou

baixa atividade de fosfodiesterase
Alta concentrao de cAMP
Baixa concentrao de cAMP
Alta atividade da quinase

dependente de cAMP
Baixa atividade da quinase

dependente de cAMP
Fosforilao de certas
protenas do ocito
Manuteno da
parada meitica
Certas protenas do
ocito no so fosforiladas
Desintegrao da vescula
germinativa; liberao
da parada meitica
Figura 22.36
Sumrio do mecanismo proposto por meio do qual o nvel de cAMP do ocito regula o recomeo
da meiose pelo ocito. Os nveis de cAMP no ocito so providos, ao menos em parte, pelo
cAMP das clulas foliculares. O AMP cclico no pode atravessar membranas celulares, mas
pode penetrar no ocito atravs das junes de fenda conectando o ocito com suas clulas
foliculares. Quando as conexes so liberadas, os nveis de cAMP do ocito declinam, conduzindo liberao da parada meitica.
o fator citosttico pp39mos responsvel pela

parada de meiose na metfase II. Camundongos fmeas deficientes no gene mos
no param sua diviso na metfase II, e
seus ovos freqentemente tentam desen-
volver-se partenogeneticamente (Colledge et al., 1994: Hashimoto et al., 1994).

evidente que eventos semelhantes tm que
ocorrer para a maturao dos ocitos de
anfbios e mamferos.
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Mecanismos desenvolvimentais
da mudana evolucionria
Como a acontece a novidade no mundo?

Como nasce? De que fuses, tradues,
junes, realizada? Como ela sobrevive
extrema e perigosa como ?
Que compromissos, que acordos, que
traies de sua natureza secreta dever
fazer para afastar os tripulantes
destruidores, o anjo exterminador, a
guilhotina?
SALMAN RUSHDIE (1988)
O primeiro Pssaro nasceu do ovo
de um Rptil.
WALTER GARSTANG (1922)
23
harles Darwin foi herdeiro de sculos de especulao relacionada com as

origens da diversidade da vida animal. A prpria educao de Darwin foi
baseada na tradio Britnica da teologia natural que sustentava que a onipotncia e benevolncia de Deus podiam ser observadas nos trabalhos de Sua criao. A parte dominante dessa tradio foi o relato da Criao proclamando que as
espcies foram trabalhos planejados intrincadamente do Criador. Os dedos da mo
humana eram encarados como um requinte (alguns diziam ser perfeito) de inventos
planejados que permitiu aos humanos dominarem o seu meio ambiente. As garras em
forma de p da toupeira estavam, novamente, perfeitamente adaptadas no seu trabalho de existncia, tal como as asas de um pssaro ou as barbatanas de um peixe.
Uma forma mais sofisticada da teologia natural, definida na Gr Bretanha pelo
anatomista e embriologista Richard Owen, que afirmou que as adaptaes eram apenas de importncia secundria. Pelo contrrio, as homologias eram crticas. Estruturas homlogas eram aqueles rgos que tinham as mesmas partes bsicas arranjadas
da mesma forma, fazendo das diferenas a sua modificao secundria. O que era
realmente importante era que a mo humana, as garras da toupeira, as asas do pssaro
e as barbatanas do peixe foram cada uma baseada no mesmo plano. Resumindo o
plano dos membros, ns podiamos determinar o grandioso desenho pelo qual Deus
construiu todos os apndices dos vertebrados. Para Owen (1848), as homologias
baseadas na diversidade animal eram o que contava, e no as adaptaes secundrias
dessas unidades bsicas.
Unidade de Tipo e Condies de Existncia

A Sntese de Charles Darwin
Darwin reconheceu sua dvida com esses debates primrios quando escreveu em
(1859), amplamente reconhecido que todos os seres orgnicos foram formados
segundo duas grandes leis - Unidade de Tipo e Condies de Existncia. Darwin
continuou a explicar que sua teoria poderia explicar a unidade de tipo atravs da
descendncia. As mudanas criando esses tipos e causando adaptaes maravilhosas
para as condies de existncia, alm disso, eram explicadas atravs da seleo natural.
Darwin chamou isso de Linhagem com modificao. Aps a leitura do sumrio de
Johannes Mller sobre a lei de von Baer em 1842, Darwin acreditou que semelhanas
883
884
(A) Tetraclita
(B) Penaeus
Figura 23.1
Larvas nauplius de (A) crustceo (Tetraclita,

vista pela face ventral) e (B) um camaro
(Penaeus, vista pela face dorsal). O camaro e
a craca tm um estgio larval similar apesar da
radical divergncia no desenvolvimento posterior. (De acordo com F. Mller, 1864.)
embrionrias seriam um argumento muito forte em favor da conexo gentica em grupos de animais diferentes. Uma comunidade de estruturas embrionrias revela uma
comunidade de linhagem, ele concluiria na Origens das espcies.
Formas larvais foram usadas para a classificao taxonmica mesmo antes de
Darwin. J. V. Thompson, por exemplo, demonstrou que a larva da craca (cirrpede) era
quase idntica s larvas do caranguejo e portanto contou as cracas como artrpodes
e no como moluscos (Figura 23.1; Winsor, 1969). Darwin, um perito em taxinomia da
craca comemorou esse achado: Mesmo o ilustre Cuvier no se apercebeu de que a
craca tratava-se de um crustceo, mas num relance a larva mostra isso de maneira
indubitvel. A interpretao evolucionria de Darwin sobre a lei de von Baer criou
um paradigma que foi seguido por muitas dcadas, especificamente, que relaes
entre grupos podem ser descobertas observando-se formas larvais em comum.
Kowalevsky (1871) faria em breve uma descoberta similar (publicada em Descent of
Man por Darwin) que a larva tunicada tem notocordas e forma o seu tubo neural e
outros rgos de uma maneira muito similar ao cordado anfioxo primitivo. Os
tunicados, outro enigma dos esquemas de classificao (normalmente colocados,
juntamente com as cracas, como um molusco), desse modo encontraram um lar entre
os cordados. Darwin tambm notou que organismos embrionrios, s vezes, produzem estruturas que so inapropriadas para sua forma adulta, mas que mostram sua
relao com outros animais. Ele mostrou a existncia de olhos em toupeiras embrionrias, rudimentos plvicos em cobras embrionrias, e dentes nas barbatanas em
embries de baleia. Neste livro, notamos que os embries mamferos formam um
saco vitelnico rudimentar, enviam vasos sangneos para esse saco, e sofrem gastrulao de uma maneira semelhante s aves e rpteis, cujo desenvolvimento
confinado pelo vitelo.
Darwin tambm argumentou que as adaptaes que partem do tipo e permitem
que o organismo sobreviva em ambiente prprio, se desenvolvem mais tarde no
embrio. Ele notou que diferenas entre espcie e gneros so, como as previstas
pela lei de von Baer, somente produzidas mais tarde no desenvolvimento; ele at
mesmo colocou pombos em clorofrmio (com grande relutncia) para provar a si
prprio de que esse era realmente o caso. Dessa maneira, Darwin reconheceu duas
maneiras de encarar a linhagem com modificao. Poderamos enfatizar a linhagem comum, assinalando homologias embrionrias entre dois ou mais grupos de
animais, ou poderamos enfatizar as modificaes mostrando como o desenvolvimento foi alterado para produzir estruturas que permitem aos animais se adaptarem
s condies particulares.
Darwin no procurou construir filogenias completas a partir de dados embriolgicos, mas o seu trabalho influenciou muitos dos seus contemporneos a faz-lo. Um dos
primeiros cientistas a perceber a importncia evolucionria dos estudos de von Baer foi
Elie Metchnikoff. Metchnikoff reconheceu que a evoluo consiste na modificao de
organismos embrionrios, e no de adultos. Assim ele escreveu (1891):
O homem parece ser um resultado unilateral, mas no total, de um organismo
melhorado, no s pela juno de macacos adultos, mas preferivelmente por ter
seus fetos desenvolvidos desigualmente. Do ponto de vista puramente histrico
natural, seria possvel reconhecer o homem como um monstro de macaco, com
um crebro, face e mos enormemente desenvolvidos.
Dessa maneira, os organismos eram vistos atravs das mudanas no seu desenvolvimento embrionrio. No incio do sculo 20, essa fuso de evoluo e embriologia foi
mal interpretada apoiando o modelo linear de evoluo (oposto ao ramificado). A
interpretao de Ernst Haeckel foi de que muitos organismos evoluram pela adio
terminal de um estgio novo ao fim do anterior. Dessa maneira, ele interpretou todo
o reino animal como representaes de etapas encurtadas do desenvolvimento humano (veja Gasman,1971; Gould, 1977). [evo1.html]
CAPTULO 23 Mecanismos Desenvolvimentais da Mudana Evolucionria
E. B. Wilson e F
R.. Lillie
F.. R
Se mudanas no desenvolvimento embrionrio afetaram mudanas evolucionrias,
como acontecem essas mudanas de desenvolvimento? No final do sculo 19, muitos investigadores tentaram ligar o desenvolvimento filogenia atravs de anlises
das linhagens celulares. Eles observaram meticulosamente cada clula nos embries
em desenvolvimento e compararam os caminhos pelos quais organismos diferentes
formaram seus tecidos. Em 1898, dois embriologistas eminentes realizaram palestras
sobre linhagem celular no Marine Biology Laboratories em Woods Hole,
Massachusetts, e suas palestras serviram para enfatizar os dois caminhos da embriologia que estavam sendo usados para apoiar a biologia evolucionria. A primeira
palestra, apresentada por E. B. Wilson, foi um marco no uso de homologias embrionrias para estabelecer relaes filogenticas. Wilson havia observado que os padres de clivagem espiral de platelmintos, moluscos e aneldeos e ele havia descoberto que em cada caso, os mesmos rgos provinham do mesmo grupo de clulas.
Para ele, isso significou que esses filos tinham um antepassado comum. Os vrios
grupos de clulas em estgio de clivagem em platelmintos, moluscos e aneldeos
Mostram uma correspondncia to prxima tanto em relao origem como ao
destino, que parece impossvel explicar a similaridade obtida a no ser como um
resultado da comunidade de linhagem. As muitas diferenas, como veremos, do
algumas das mais interessantes e convincentes evidncias da afinidade gentica;
para processos nos quais nas formas inferiores desempenham um papel importante no desenvolvimento esto nas formas superiores to reduzidos a ponto de
no ser mais que vestgios ou reminiscncias do que eram, e em alguns casos
parecem ter desaparecidos to completamente como os dentes de pssaros ou os
membros de serpentes.
O prximo palestrante foi F. R. Lillie, que tambm havia realizado pesquisas
sobre o desenvolvimento de embries de moluscos e em modificaes de linhagens
celulares. Ele enfatizou as modificaes, no as similaridades, da clivagem. Suas
pesquisas no Unio, um mexilho cuja clivagem foi alterada para produzir uma larva
com forma de armadilha de urso permitindo-lhe sobreviver em gua corrente, foram descritas no Captulo 5. Lillie argumentou que os estudos evolucionrios modernos estavam melhor concentrados nas mudanas do desenvolvimento embrionrio que permitiram a sobrevivncia em ambientes particulares em vez de enfocar
homologias ancestrais que uniam os animais em linhas de descendncia.
Em 1898, portanto, as duas principais vias de aproximao para a evoluo e o desenvolvimento estavam claramente definidas: encontrar unidades bsicas que unem grupos
de animais distintos, e detectar diferenas no desenvolvimento que permitem espcies se
adaptarem a ambientes particulares. (Certamente, essas mesmas linhas de pensamento
caracterizaram os dois tipos de teologia natural antes de Darwin.) Darwin pensou serem
apenas distines temporrias, isto , seriam encontradas unidades bsicas nos primeiros
estgios, enquanto os ltimos estgios se divergiriam para permitir adaptaes especficas (veja Ospovat, 1981). No entanto, Wilson e Lillie estavam ambos discutindo o estgio da clivagem da embriognese. Essas duas maneiras de caracterizar o desenvolvimento e a evoluo ainda so as principais correntes de pensamento hoje.
A evoluo do desenvolvimento precoce: E. Pluribis Unum

A emergncia dos embries
Na evoluo e desenvolvimento de organismos vivos, podemos observar a emergncia
de multicelularidade a partir de organismos unicelulares. Uma nova totalidade formada de componentes celulares. Isso um passo fundamental na emergncia de um novo
885
886
patamar de complexidade. As volvocaceas e os dictiosteldeos mencionados no Captulo 1 representam somente 2 de 17 tipos de protistas nos quais a multicelularidade foi
conseguida (Buss, 1987). No entanto, somente trs grupos (aqueles que geraram fungos, plantas e animais) desenvolveram a capacidade de formar agregados multicelulares
que poderiam se diferenciar em tipos de clulas particulares, i. e., um embrio.
Os primeiros embries tiveram que resolver um problema fundamental. Uma vez
que cada um dos componentes celulares tinha o aparelho gentico e a arquitetura
citoplasmtica necessria para a diviso, porque cada clula no haveria de continuar
a sua prpria proliferao? O que causaria essas clulas sacrificarem sua capacidade
proliferativa para formar um indivduo coletivo? Pode ter havido mais de uma soluo. Buss sugere que nesses embries precoces houve uma dicotomia abrupta entre a
proliferao e a diferenciao e que nosso ancestral protista nunca aprendeu o truque
da diviso aps a diferenciao dos clios. Enquanto outros grupos de protistas (especialmente os ciliados) podiam produzir mais centros organizadores de microtbulos, nossos ancestrais no o podiam. At os dias atuais, nenhuma clula metazoria
ciliada se divide (embora clulas metazorias ciliadas podem perder os seus clios e
depois se dividir). Buss especula que os ancestrais dos metazorios de hoje pararam
sua proliferao celular se diferenciando em uma blstula de clulas ciliadas. (Os
embries precoces dos primeiros filos metazorios- esponjas e cnidrios- so caracterizados como bolas de clulas ciliadas, como os embries de ourio-do-mar discutidos no Captulo 5.) Essas blstulas ciliadas podiam se mover, mas parecia que todo
o seu desenvolvimento havia parado, para as clulas ciliadas no se dividirem, nem
se tornarem outro tipo diferenciado de clula. Para se desenvolver em um organismo,
esse dilema tinha que ser resolvido.
Esse problema foi resolvido pela reteno ou produo de uma populao de clulas no-ciliadas. Essas clulas podiam se proliferar em novas clulas, enquanto as clulas ciliadas permitiam ao embrio se mover. Mas essas clulas divididas no podiam
simplesmente ir para qualquer lugar. No podiam crescer em cima das clulas ciliadas ou
seu movimento cessaria. Elas no podiam crescer na gua ou seriam sugadas pelos
movimentos do embrio. Ao contrrio, teriam que migrar para dentro da blastocele (Figura 23.2). Acredita-se que esse movimento e proliferao de clulas seja a origem da
gastrulao. Dessa maneira, a blstula surge como uma maneira de juntar clulas autnomas em uma federao. A gstrula surgiu como um acordo com essa federao permitindo ao embrio se desenvolver enquanto se move (Buss, 1987).*
Os primeiros embries provavelmente se desenvolveram sob essa forma de mosaico. No entanto, a induo proporcionou um segundo mecanismo para assegurar
que blastmeros totipotentes permanecessem juntos para formar um nico indivduo. Aqui, cada clula sacrificou sua autonomia para criar uma comunidade coerente. Henry e seus colaboradores (1989) descobriram que enquanto os blastmeros
individuais do ourio-do-mar podem ser totipotentes, os agregados produzidos dessas mesmas clulas no o so. Ao contrrio, cada clula restringe a potncia da sua
vizinha (veja Captulo 15). Essa regulao restritiva tambm vista em camundongos
quimricos (veja Captulo 5), onde blastmeros de mamferos se combinam para formar
um nico camundongo quimrico ao invs de dois camundongos individuais. Parece
haver restries muito importantes na potncia celular, uma vez que as clulas se
juntam. Ademais, uma vez que a populao interna pode interagir com a populao
*Essa uma modificao da teoria originalmente proposta por Metchnikoff (1886) para explicar a
origem dos organismos multicelulares. Usando embries de hidrides e de esponjas, Metchnikoff assinalou que certas clulas da parede da blstula arrastadas por seu flagelo, se tornam amebides e mveis, se
multiplicam por diviso, preenchem a cavidade da blstula, e se tornam capazes de fazer digesto. Esse
estado embrionrio, ele sentiu, como com o direito de ser considerado o prottipo dos seres multicelulares.
Metchnikoff tentou fazer uma filogenia de todos os organismos baseada nas suas camadas germinativas,
e ele acreditava que todas as clulas mesodrmicas poderiam ser caracterizadas por sua habilidade de
fagocitar substncias estranhas. As suas descobertas em embriologia comparativa finalmente lhe permitiu
formular fundaes conceituais de uma nova cincia, a imunologia. (Para maiores detalhes sobre a teoria
de origens multicelulares de Metchnikoff, veja Chernyak e Tauber, 1988, 1991.)
887
Figura 23.2
(A)
Aequoria foskalea
(F)
Clava squamata
(B)
(C)
(G)
(D)
(H)
(E)
Gastrulao em dois cnidrios hidrides. (AE) Gastrulao em Aequoria foskalea, onde

formada uma blstula ciliada. As clulas do
plo vegetal perdem seus clios e migram para
dentro da blastocele para formar uma populao em diviso mittica. (F-I) Gastrulao em
Clava squamata, onde uma estereoblstula repleta de clulas formada e em seguida a camada externa se torna ciliada. Ambos os planos convergem para a larva plnula ciliada
caracterstica dos cnidrios. (A epbole de um
ectoderma no-ciliado no est presente em
embries livres para nadar.) (De acordo com
Buss, 1987.)
(I)
celular externa e com outras partes da populao interna, eventos indutivos podem
dar origem ao surgimento de novos rgos.
Independentemente da maneira pela qual essa comunidade de clulas foi formada, a integrao delas em um embrio unificado realizada pela contribuio materna ao citoplasma do ovo. esse conjunto de instrues que causa a clivagem das
clulas de um modo especfico, aderir uma a outra, e se diferenciar em perodos
particulares. Como foi observado no Captulo 12, o embrio do ourio-do-mar se torna
uma blstula ciliada mesmo na ausncia de transcrio nuclear. Somente na gastrulao o ncleo comea a regular o desenvolvimento. Dessa maneira, seleo a nvel de
propagao celular (que tem sido a regra da sobrevivncia entre os protistas) foi
suplantada pela seleo ao nvel de organismos multicelulares individuais.
ilo: Modificando os
Formao de um Novo F
Filo:
Caminhos do Desenvolvimento
Somente trs dzias de modelos de corpos animais esto sendo usados atualmente
neste planeta (Margulis e Schwartz, 1988; Brusca e Brusca, 1990). Esses constituem
o filos animais. Isso no quer dizer que esses modelos so os nicos possveis. O
Burgess Shale, um depsito de fsseis de corpos moles do perodo Cambriano inicial, conhecido por conter representantes de 20 filos ou mais que nunca desenvolveram descendentes nas camadas superiores (Figura 23.3). Alm disso, essa pequena
banda de sedimento, aproximadamente do tamanho de um quarteiro, contm cerca
de uma dzia de classe de artrpodes previamente desconhecida. Esses animais no
so membros primitivos de uma classe ou filo existente, mas so exemplos
especializados do seus prprios grupos. (Whittington, 1985; Gould, 1989). Existem
tambm duas espcies no Burgess Shale que podem estar relacionadas s formas
ancestrais do filo existente. Uma um animal parecido com um peripato, que deve
ser prximo uma forma ancestral de inseto; e outro aparenta ser um cordado bem
preservado chamado Pikaia gracilens que pode estar relacionado aos cordados ancestrais (veja Figura 23.3B). Esse ltimo fssil apresenta muitos traos que recomendam que seja classificado em nosso filo: ele parece ter uma notocorda, e as bandas
(A)
(B)
Figura 23.3
Dois organismos fsseis do Burgess Shale da

metade do perodo Cambriano. (A) Opabina,
um organismo com cinco olhos na cabea, um
apndice frontal com uma garra terminal, segmentos corpreos com guelras dorsais e um
pedao de cauda de trs segmentos. (B) Pikaia
gracilens, possivelmente um cordato. (de
Gould, 1989.)
888
Medusas reprodutivas
sexualmente com
clulas mutantes
Boca
Tentculo
Colnias jovens
compostas de
clulas mutantes
Plipo
reprodutivo
Plipos de
nutrio
Ovo
Broto de
medusa
Zigoto
Larva
Espermatozide
Brotamento
Mutao somtica
d origem a uma
nova linhagem
Colnia madura
Figura 23.4
Aparecimento rpido de novas variantes em invertebrados com alternao de geraes. Aqui,

uma mutao somtica ocorre nas clulas de uma colnia hidride. Algumas dessas clulas
mutantes se tornam parte do plipo reprodutivo, dando origem s medusas (gua-viva) que
contm os alelos mutantes. Essas medusas se reproduzem para formar uma nova colnia que
pode ser produzida de clulas mutantes.
em zigue-zague ao longo de sua lateral se parecem muito com a musculatura derivada

de somito encontrada nos Amphioxus (Conway Morris e Whittington, 1979).* Dessa
maneira, todos os filos metazorios conhecidos (e muitos at agora desconhecidos)
parecem ter se formado pela radiao Cambriana h cerca de 540 milhes de anos atrs
(Bowring et al., 1993; Wray et al., 1996).
Como que nenhum filo novo surgiu nos ltimos 500 milhes de anos? Kauffman
(1993) prope um modelo matemtico que prev que qualquer sistema evolutivo
(sendo ele filo, espcie, automvel ou religio) mostra esse padro de divergncia
seguido pela clausura dentro de um subconjunto particular da diversidade original.
Kauffman usa uma metfora de um terreno acidentado onde existem picos e vales de
aptido, e todos os organismos comeam com o mesmo valor de aptido mdio igual
(na metade do pico). Se eles do saltos grandes, eles tm uma chance de 50% de se
tornarem organismos fisicamente aptos. Por fim, a chance de encontrar um plano
corporal fisicamente apto diminui se um organismo d um salto para longe de onde
est situado. Saltos longos se tornam arriscados, e as chances desses picos mais
altos j estarem ocupados aumenta. Ao invs disso, saltos pequenos (sobre o mesmo pico) podem tornar um organismo fisicamente mais apto do que a populao ao
seu redor. Portanto, o que vemos uma diversificao em torno de poucos modelos
de sucesso. Geralmente, o intervalo entre saltos longos com sucesso duplica a cada
tentativa. No comeo do perodo Cambriano, possvel que o genoma no tivesse
se estabilizado nos conjuntos de interaes que vemos hoje. Alm do mais, em
muitos grupos invertebrados existe uma alternao de geraes onde uma forma
sexuada gera uma forma assexuada (zoide, plipo, broto) que ento d origem
novamente uma forma sexuada. Em tais casos, mutaes somticas na forma
assexuada podem entrar no corpo da forma sexuada e serem propagadas de uma
forma muito rpida (Figura 23.4; Buss, 1987).
*Um fssil ainda mais antigo, Yunnanazoon lividum, do comeo do perodo Cambriano, em torno de
525 milhes de anos atrs, foi primeiramente reportado como sendo um cordado (Chen et al., 1995). No
entanto, a interpretao da notocorda fssil foi questionada por Shu e colegas (1996), que interpretaram o
Yunnanazoon como sendo o hemicordado mais antigo conhecido.
Como, ento, podemos modificar um Bauplan para criar um outro Bauplan? O

primeiro passo seria modificar os primeiros estgios do desenvolvimento. De acordo
com von Baer (veja Captulo 7), animais de diferentes espcies mas do mesmo gnero,
divergem muito tardiamente no desenvolvimento. Quanto mais divergente for uma
espcie da outra, mais cedo poderemos distinguir os seus embries. Dessa maneira,
embries de gansos da neve so indistinguveis dos gansos azuis at quase os ltimos estgios. No entanto, o desenvolvimento do ganso da neve diverge do desenvolvimento do pinto um pouco antes, e os embries do ganso podem tambm serem
distinguidos de embries de lagarto em estgios ainda mais precoces. Parece ento
que mutaes que criaram Bauplne novos poderiam faz-lo alterando os primeiros
estgios do seu desenvolvimento.
Essas mudanas precoces do desenvolvimento podem ser afetadas pela mudana
de localizao dos determinantes citoplasmticos, mudando a razo da diviso celular de uma clula ou grupo de clulas relativa a outras, ou mudando as posies das
clulas enquanto elas se dividem. No Captulo 5, vimos que a modificao da clivagem
do molusco pode dar a massa de citoplasma para as clulas ectodrmicas que formam a concha larval. Isso devido mudana na maneira pelo qual os blastmeros
dividem e partilham o citoplasma. Nos vermes aneldeos, as diferenas entre poliquetas
e oligoquetas, derivam de diferenas na localizao citoplasmtica de morfgenos
dentro do ovo (Figura 23.5). Embora ambos sofram clivagem espiral, eles partilham
(A) Podarke
889
Figura 23.5
Comparao do desenvolvimento de duas classes de vermes aneldeos, (A) o poliqueto

Podarke e (B) o oligoqueto Tubifex. Esto mostrados seus embries em clivagem, mapas de
destino da blstula e produtos da gastrulao.
No Podarke, a gastrulao leva formao de
uma larva trocfora. No Tubifex, no h um
estgio larval, e o embrio se desenvolve diretamente em um corpo segmentado. (De acordo
com Anderson, 1973.)
Mapa de destino
Larva trocfora
Tufo apical
Tufo apical presuntivo
Prototroco
Ectoderma
anterior presuntivo
Prototroco
presuntivo
Estomodeu
Ectoderma
presuntivo
posterior
Embrio de 40 clulas
Estomodeu
presuntivo
Intestino
mdio
presuntivo
(B) Tubifex
Mesoderma
presuntivo
Ectomesoderma
presuntivo
Ectoderma dorsal
temporrio do
saco vitelnico
Ectoderma do
saco vitelnico
presuntivo
Estomodeu
presuntivo
Intestino
mdio
Banda
mesodrmica
Somitos
mesodrmicos
Banda
ectoteloblstica
Ectoteloblasto
Ectoderma do
ectoteloblasto
presuntivo
Intestino
mdio
presuntivo
Embrio em clivagem
Mesoderma
presuntivo
Mapa de destino
Ectoteloblasto
Ectoderma ventral
temporrio do
saco vitelnico
Intestino
mdio
Gastrulao
890
Vestimentiferano
Polygordius
Patella
(A)
(B)
(C)
Figura 23.6
Divergncia no desenvolvimento aps o estgio larval de trocfora. (A-C) A metamorfose

do aneldeo poliqueto Polygordius a partir de
sua forma larval trocfera de nado livre mostra
a formao de um tronco segmentado. Por fim,
as estruturas larvais se encurtam na extremidade anterior medida que a cabea se forma. (DE) Metamorfose do molusco prosobrnquio
(mexilho) Patella. Aps o estgio trocforo,
ele desenvolve um p de molusco, uma glndula da concha e uma corcova visceral. (F)
Micrografia eletrnica de varredura de uma larva trocfora de um vestimentiferano. (A-E de
acordo com Grant, 1978; F de Jones e Gardiner,
1989; cortesia dos autores.)
(D)
(E)
(F)
seus morfgenos em clulas diferentes. Poliquetas sofrem uma clivagem espiral relativamente padronizada, dando origem larva trocfora. Oligoquetas, no entanto, colocam a maior parte de seu citoplasma nas clulas destinadas formao de estruturas
adultas, ao invs de larvais. Esse grupo passa depois para o estgio larval. Se uma
mutao colocasse um certo morfgeno citoplasmtico em uma nica regio do ovo
ao invs de uma outra, ou se a mutao originasse uma mudana no eixo da diviso
celular para que conjuntos diferentes de clulas adquirissem esses determinantes,
ento um fentipo radicalmente diferente poderia ser produzido. Como E. G. Conklin
escreveu em 1915, Ns somos vertebrados porque nossas mes eram vertebrados e
produziram ovos de padro vertebrado.
Uma outra maneira de evoluo de um novo filo pode envolver uma modificao da larva. Darwin e outros pensavam que similaridades na forma larval significavam origem em comum. No entanto, isso pode ser reinterpretado para significar
que as mudanas que originam filos diferentes podem ocorrer na larva. Caramujos,
equiurides e poliquetos tm padres de diviso muito semelhantes e formam larvas trocforas (Figura 23.6). De fato a colocao do filo recm-descoberto
Vestimentfera (invertebrados vermelho brilhante, sem tubo digestivo, encontrados nas valas profundas do oceano) prximo aos aneldeos foi feita em parte baseada nas larvas trocforas das vestimentferas (Jones e Gardiner, 1989; Young et al.,
1996). Assim, um dos principais mecanismos para estabelecer novos filos e classes
pode ser a relocao do desenvolvimento durante o estgio larval para que a metamorfose surja com novos tipos de organizao. Garstang (1928) mostrou como a
larva vliger de alguns caramujos pode ter surgido atravs de mutao e depois ter
sido selecionada porque a nova disposio da cabea e concha permitiam que a
cabea se retrasse, por segurana, abaixo da concha. Ele tambm inventou a hiptese de que cordados se desenvolveram das larvas tunicadas ancestrais que se
tornaram neotnicas. Infelizmente, larvas de corpo mole raramente se fossilizam,
portanto sabemos muito pouco dos mecanismos pelos quais cordados e outros filos
surgiram de larvas* Cambrianas precoces.
* Formas larvais freqentemente preenchem a lacuna entre as diferentes formas adultas. A forma
larval vista ou como sendo ancestral a dois grupos ou como um separador por neotenia e formando um
diferente tipo de organismo. Isso vem freqentemente sendo hipotetizado como um mecanismo pelo qual
os cordados emergiram de invertebrados e vertebrados surgiram de cordados. A larva tornaria dos
hemicordados formada de uma maneira deuterstoma, similar s larvas equinodermos e se mostra muito
parecida com uma larva equinodermo tendo sido originalmente confundida com elas. Isso ligaria os
equinodermos e cordados. Garstang (1928) e Berril (1955) hipotetizaram que as larvas de certos tunicados
podiam ter evoludo em cordados tais como os anfioxos pelo desenvolvimento neotnico. Desse modo, os
tunicados manteriam a notocorda, musculatura larval e o aparelho alimentar da larva tunicada enquanto se
tornam sexualmente maduras. Existem, na verdade, tunicados nadadores neotnicos (como as Larvacea).
Modificaes dessa interpretao (usando linhagens de protocordados diferentes) foram sugeridas por
Jefferies (1986). A origem dos cordados permanece um problema difcil.
Modularidade: O pr-requisito para mudana

evolutiva atravs do desenvolvimento
Existem somente cerca de 35 Bauplne, mas existem milhes de diferentes espcies,
cada uma com o seu padro de desenvolvimento. Portanto, a maior parte da evoluo
ocorreu nos moldes de um Bauplan existente. Como isso feito? Como o desenvolvimento de um embrio pode ser modificado j que um processo to precisamente
afinado e complexo? Costumava-se pensar que o nico caminho para promover a
evoluo era adicionar um degrau no fim do desenvolvimento embrionrio, mas agora sabemos que mesmo os estgios mais iniciais podem ser alterados para produzir
novidades evolucionrias. A razo pela qual mudanas podem ser produzidas durante o desenvolvimento que o embrio, como o organismo adulto, composto por
uma srie de mdulos que se interagem (Riedl, 1978; Bonner, 1988).
Modularidade
O desenvolvimento ocorre atravs de mdulos discretos e interativos (Riedl, 1978;
Gilbert et al., 1996; Raff, 1996; Wagner, 1996). Os organismos so construdos de
unidades que so coerentes em si e ainda parte de uma unidade maior. Dessa maneira, clulas fazem parte dos tecidos, que fazem parte dos rgos, que fazem parte de
um sistema, e assim por diante. Tal sistema to hierarquicamente entrelaado foi
chamado de arranjo modular interagindo em nveis (Dyke, 1988). No desenvolvimento, esses mdulos incluem campos morfogenticos (por exemplo, aqueles descritos para o membro ou o olho) discos imaginais, linhagens celulares (tais como a
massa celular interna ou trofoblasto), parasegmentos de insetos e rudimentos de
rgos de vertebrados. Unidades modulares permitem que diferentes partes do corpo
mudem sem a interferncia de outras funes.
O princpio fundamental da modularidade permite trs processos de alterao do desenvolvimento: dissociao, duplicao e divergncia, e co-opo (Raff, 1996). Uma vez
que os mdulos esto em todos os nveis, do molecular ao orgnico, no surpreendente
que esses princpios sejam vistos operando em todos os nveis do desenvolvimento.
Dissociao: Heterocronia e Alometria
Nem todas as partes do embrio so conectadas umas s outras. Podemos dissecar
um campo do membro de uma nurula de salamandra sem afetar os olhos. Por mutao
ou perturbao ambiental, uma parte do embrio pode mudar sem a outra parte. Essa
modularidade do desenvolvimento pode permitir mudanas que so tanto espaciais
quanto temporais. Heterocronia uma mudana no ajustamento relativo de dois processos do desenvolvimento durante a embriognese, de uma gerao para outra. Em
outras palavras, um mdulo pode mudar sua expresso temporal relativa para outros
mdulos do embrio. Chegamos a esse conceito em nossas discusses de neotenia e
prognese em salamandras (veja Captulo 19). A heterocronia pode ser causada de
diferentes maneiras. Em heterocronias de salamandra onde o estgio larval retido, a
heterocronia causada por mutaes gnicas no sistema de competncia da induo.
Outros fentipos heterocrnicos, entretanto, so causados pela expresso
heterocrnica de certos genes. O desenvolvimento direto do rudimento do ourio-domar adulto (veja Captulo 19) envolve a ativao precoce de genes adultos e a supresso da expresso do gene larval (Raff e Wray, 1989). A heterocronia pode retornar
um organismo para o seu estado larval, livre das adaptaes especializadas do adulto.
A heterocronia tambm pode dar caractersticas larvais a um organismo adulto, como
nos pequenos e enredados ps da salamandra arbrea ou na taxa de crescimento fetal
do tecido cerebral do recm nascido humano. [evo2.html]
Outra conseqncia da modularidade a alometria. Alometria ocorre quando diferentes partes do organismo crescem com taxas diferentes. Alometria pode ser muito
891
892
Nasal
Figura 23.7
Crescimento alomtrico na cabea da baleia. A mandbula se estendeu

para frente, fazendo com que o nariz se deslocasse para o topo do crnio.
(O pr-maxilar est presente no feto humano precoce, mas ele se funde ao
maxilar j no fim do terceiro ms de gestao. O pr-maxilar humano foi
descoberto por Wolfgang Goethe, entre outros, em 1786.) (De acordo
com Slijper, 1962.)
Parietal
Pr-maxilar
Occipital
Maxilar
Frontal
Parietal
Nasal
Zigomtico
Occipital
Maxila
Mandbula
Figura 23.8
Seco transversal atravs da regio anterior

do embrio da toupeira com bolso (Thomomys) mostrando a abertura anterior da bolsa (AP) e a continuidade entre a bolsa neste
estgio e a cavidade bucal (BC) atravs da
rea de desenvolvimento do lbio. (EP, clulas epiteliais; MC, cartilagem de Meckel; T,
lngua.) (De acordo com Brylski e Hall, 1988,
Escamoso (temporal)
importante na formao de variantes de planos corporais dentro do Bauplan. Tais

mudanas no crescimento diferencial podem envolver uma alterao da sensibilidade
das clulas alvo a fatores de crescimento ou alterao da quantidade de fatores de
crescimento produzidos. Novamente, o membro vertebrado pode fornecer uma ilustrao til. Diferenas locais nos condrcitos fazem com que o crescimento do dgito
central do cavalo seja 1.4 vezes maior se comparado aos dgitos laterais (Wolpert,
1983). Isso significa que medida que o cavalo aumentava de tamanho durante a
evoluo, essa diferena regional transformou o cavalo de 5 dgitos em um cavalo de
um s dgito. Um exemplo particularmente dramtico de alometria na evoluo vem do
desenvolvimento do crnio. No embrio muito jovem da baleia (4-5 mm), o nariz se
encontra na posio usual dos mamferos. No entanto, o enorme crescimento do
maxilar e do pr-maxilar (parte superior da mandbula) empurra o osso frontal e fora o
nariz para o topo do crnio (Figura 23.7). Essa nova posio do nariz (orifcio do sopro)
permite que a baleia tenha uma mandbula grande e altamente especializada que permite a respirao enquanto paralela superfcie da gua (Slijper,1962).
Alometria pode tambm gerar novidades evolucionrias atravs de pequenas
mudanas incrementais que finalmente cruzam algum limite do desenvolvimento
(algumas vezes chamado de ponto de bifurcao). Finalmente, uma mudana na
quantidade se torna uma mudana na qualidade quando esses limites so ultrapassados. Foi postulado que esse tipo de mecanismo produziu as bolsas externas,
revestidas de plos, do pescoo das toupeiras com bolso e dos ratos cangurus
que moram no deserto. As bolsas externas diferem das internas (1) por apresentar
plos e (2) no apresentar conexo interna com a boca. Elas so muito teis pois
permitem a esses animais armazenarem sementes sem correrem o risco de desidratao. Brylski e Hall (1988) dissecaram a cabea de embries de toupeiras com bolso e
ratos cangurus com bolsa, e observaram como a bolsa bucal externa construda.
Quando os dados desses animais foram comparados com dados de animais que
formam bolsas bucais internas (como os hamsters), os investigadores descobriram
que as bolsas so formadas de maneiras muito semelhantes. Em ambos os casos, as
bolsas so formadas dentro das bochechas embrionrias atravs de uma
protuberncia em forma de bolsa no epitlio da bochecha (bucal) para dentro do
mesnquima facial (Figura 23.8). Em animais com bolsa bucal interna, essas
evaginaes ficam dentro da bochecha. No entanto, nos animais que formam bolsas
externas, o alongamento do focinho leva essas bolsas a se elevarem para a regio do
lbio. medida que o epitlio labial rola para fora da cavidade oral, tambm o fazem
as bolsas externas. O que antes era interno agora externo. O revestimento de pele
provavelmente derivado de bolsas externas que entram em contato com o mesnquima dermal, que pode induzir o epitlio formao de cabelo (veja Captulo 17).
893
Essa bolsa no possui abertura interna para a boca. Certamente, a transio de bolsa
interna para externa uma questo de limiares. A localizao das evaginaes, anterior ou posteriormente, determina se a bolsa interna ou no. No existe estgio de
transio com duas aberturas, uma interna e outra externa. Poderia-se imaginar
essa externalizao como uma ocorrncia de mutao por acaso deslocando a posio da bolsa externa para uma posio um pouco mais anterior. Esse trao seria
selecionado no deserto. Como Van Valen refletiu em 1976, a evoluo pode ser
definida como o controle do desenvolvimento pela ecologia.
Duplicao e Divergncia
Modularidade tambm permite a ocorrncia de duplicao e divergncia. A parte da
duplicao nesse processo permite a formao de estruturas redundantes, e a parte
divergente do processo permite que essas estruturas assumam novos papis. Uma
das cpias pode manter o papel original enquanto as outras esto livres para mutar e
divergir funcionalmente. Isso pode acontecer em vrios nveis. A famlia TGF-, a
famlia MyoD e as globinas, cada uma provavelmente comeou como um nico gene
que se duplicou diversas vezes. Aps a duplicao, mutaes causaram as divergncias que deram aos membros de cada famlia novas funes. Em nvel de tecido,
podemos observar duplicao e divergncia nos somitos que do origem aos esqueletos cervicais, lombares e torcicos.
Tambm existem duplicaes e divergncias de padres particulares do desenvolvimento. Interaes epitlio-mesnquima parecem ser variaes de um nico tema (Figura
23.9; Maderson, 1975; Burke, 1989a). As glndulas de secreo da epiderme so modificaes do mesmo tipo de induo - glndulas mamrias so glndulas sudorparas
INDUO
INICIAL
INDUES
SECUNDRIAS
Figura 23.9
As inter-relaes nas indues epidrmicasmesenquimatosas. Durante a morfognese, o

mesnquima pode causar a invaginao (A-C)
ou a evaginao (D-H) da epiderme adjacente.
Em alguns casos, como na formao dos membros ou da carapaa da tartaruga, o mesnquima causa a formao de uma crista ectodrmica
apical (G,H). (De acordo com Burke, 1989a.)
(A) Cabelo (na pele)
(B) Glndula sudorpora ou

mamria (na pele)
Epitlio
ectodrmico
(C) Dente (na gengiva)
Morfognese
Mesnquima
(D) Pena (na pele de aves)
(E) Escama (na pele do rptil)
(F) Escama (na pele do peixe)
(G) Membro (em vertebrados)
(H) Carapaa (em tartaruga)
894
Figura 23.10
Seco atravs do meio do tronco do embrio

da tartaruga Chelydra serpentina. (A) A crista
da carapaa (seta) se forma no limite entre o
mesoderma da placa somtica e o mesoderma
da placa lateral e agora representa o limite dorsoventral. As bandas mesodrmicas engrossadas se estendendo do centro para a rea da carapaa so as condensaes da costela. (B)
Aumento maior da crista da carapaa. (De acordo com Burke, 1989b, cortesia do autor.)
(A)
(B)
modificadas embriologicamente. Da mesma maneira, a temida fileira de dentes do tubaro so modificaes das escamas do corpo. Mudanas na induo podem transformar
escamas em penas (como no caso das galinhas garniz) e so responsveis por adaptaes to extraordinrias quanto o pulmo das aves, o estmago dos ruminantes, as
presas dos elefantes (incisivos modificados), e as presas das morsas (dentes caninos
superiores modificados). A carapaa (casco) da tartaruga uma novidade evolucionria
que parece se formar de maneira reminiscente aos membros. Existe at mesmo uma crista
da carapaa que organiza o mesnquima de maneira semelhante crista ectodrmica
apical do broto do membro (Figura 23.10; Burke, 1989b).
Co
Co--opo
Nenhuma estrutura destinada a um propsito particular. Um lpis pode ser usado para
escrita, mas ele tambm pode ser usado como um palito, uma adaga, um instrumento
perfurante ou uma baqueta. Ao nvel molecular, sabemos que o gene engrailed, usado
para segmentao nos embries de Drosophila, usado posteriormente tambm para
especificar seus neurnios e usado nos estgios larvais para fornecer um eixo nteroposterior aos discos imaginais. Similarmente, uma protena que funciona como uma
enzima no fgado pode funcionar como uma protena cristalina estrutural no cristalino
(Piatigorsky and Wistow, 1991). Em outras palavras, unidades prexistentes podem ser
recrutadas para novas funes. Essa co-opo tambm vista a nvel morfolgico. As
asas evoluram trs vezes durante a evoluo dos vertebrados, e em cada caso, diferentes estruturas de antebraos foram modificados para uma funo inteiramente nova.
Um dos casos mais celebrados de co-opo o uso de partes da mandbula embrionria para a criao do ouvido mdio dos mamferos (revisado por Gould, 1990).
Clulas da crista neural distinguem vertebrados dos protocordados e invertebrados.
Os protocordados tm um tubo neural dorsal e notocorda, mas no uma cabea
verdadeira. As clulas da crista neural craniana so as grandes responsveis pela
criao da face, crnio e arcos branquiais. Considera-se que o desenvolvimento da
cabea originalmente permitia uma predao mais eficiente, pela colocao das estruturas sensoriais adjacentes s mandbulas que capturam as presas (Gans e Northcutt,
1983; Langille e Hall, 1989; Hall, 1992). Duas transies notveis ocorreram na
evoluo da mandbula do vertebrado. A primeira a criao de mandbulas a partir
895
dos arcos das guelras de peixes sem mandbulas. A segunda o uso de ossos que
articulavam as mandbulas superiores e inferiores nos rpteis para a formao dos
ossos martelo e bigorna do ouvido mdio. Nos primeiros vertebrados, uma srie de
guelras se abriu atrs de uma boca sem mandbula. Quando as fendas das guelras
foram sustentadas por elementos cartilaginosos, o primeiro conjunto desses suportes
de guelras circundou a boca para formar a mandbula. Existem amplas evidncias de
que as mandbulas so suportes de guelras modificadas. Primeiro, esses dois conjuntos de ossos so produzidos de clulas da crista neural. (A maioria dos outros ossos
procedem de tecidos mesodrmicos.) Segundo, ambas estruturas se formam de barras superiores e inferiores que se curvam para a frente e so dobradas no meio. Terceiro, a musculatura da mandbula parece ser homloga musculatura dos suportes
de guelras originais. Dessa maneira, a primeira transformao da cartilagem do primeiro arco branquial foi aquela do aparelho da guelra para o aparelho da mandbula.
Mas a histria no termina aqui.
A parte superior do segundo arco branquial que suporta a guelra se transforma
no osso hiomandibular de peixes com mandbula. Esse elemento segura o crnio e
junta a mandbula ao crnio (Figura 23.11A). Como vimos no Captulo 7, essa funo
do osso hiomandibular nos mamferos realizada pelo estribo, um dos ossos do
ouvido mdio. Mas os peixes no usam esse osso para escutar; ento, como um
osso usado para suporte de guelras e depois como suporte para o crnio se torna
parte do aparelho auditivo dos mamferos? Quando o peixe chegou terra deparou-se com um novo problema: como conseguir escutar em um meio to pouco
denso como o ar? Acontece que o osso hiomandibular est prximo da cpsula
auditiva, e a matria ssea um excelente transmissor do som. Dessa maneira,
enquanto ainda funcionava como um suporte para o crnio, o osso hiomandibular
dos primeiros anfbios tambm comeou a funcionar como um transdutor de som
(Clark, 1989). medida que os vertebrados terrestres alteraram sua locomoo,
estrutura mandibular e postura, o crnio prendeu-se firmemente em seu lugar sem
necessitar de apoios hiomandibulares. Parece ter se especializado em seguida como
o osso estribo do ouvido mdio. O que havia sido a segunda funo desse osso
acabou se tornando sua funo primria.
Os ossos originais da mandbula tambm mudaram. O primeiro arco branquial
gera o aparelho da mandbula. Nos anfbios, rpteis e pssaros, a poro posterior
dessa cartilagem forma o osso quadrado da mandbula superior e o osso articular da
mandbula inferior. Esses ossos se conectam e so responsveis pela articulao na
mandbula superior e inferior. No entanto, nos mamferos, essa articulao ocorre em
outra regio (os ossos dentrios e escamosos), com isso liberando esses elementos
sseos para adquirirem novas funes. Os osso quadrado da mandbula superior dos
rpteis evoluiu nos mamferos transformando-se no osso bigorna e o osso articular
da mandbula inferior dos rpteis se tornou nosso osso martelo. Esse segundo processo foi primeiramente descrito por Reichert em 1837, que observou no embrio do
porco que a mandbula se ossifica pelo lado da cartilagem de Meckel, enquanto a
regio posterior dessa cartilagem se ossifica, se destaca do resto da cartilagem, e
entra na regio do ouvido mdio para se tornar o osso martelo (Figura 23.11B,C)*
* A falta de formas de transio freqentemente citada pelos Criacionistas como uma crtica
da evoluo. Por exemplo, na transio de rpteis para mamferos, trs ossos da mandbula dos
rpteis se tornaram martelo e bigorna, deixando somente um osso (dentrio) na mandbula inferior.
Gish (1973), um Criacionista, disse que isso uma situao impossvel, pois nenhum fssil com dois
ou mais ossos da mandbula e dois ou trs ossculos do ouvido fora encontrado. Ele considerou que tal
animal teria arrastado suas mandbulas pelo cho. Entretanto, tal forma de transio especfica no
precisaria ter existido (h mais de dzia de formas de transio documentadas entre crnios de
rpteis e mamferos). Hopson (1966) mostrou com bases embriolgicas como os ossos da mandbula
poderiam ter se dividido e usados para diversas funes, e Romer (1970) encontrou fsseis de rpteis
onde as novas articulaes da mandbula j eram funcionais enquanto ossos mais antigos se tornavam inteis. Existem vrias espcies de rpteis terapsdeos com duas articulaes de mandbula, com
a bigorna junto a parte superior do osso quadrado (que vir se tornar o osso bigorna). [evo3.html]
(A)
Mandbula
superior
Caixa
craniana
Suportes
das guelras
Hiomandibular
Mandbula
inferior
Escamoso
(B)
Quadrado
Pr-maxilar
Maxilar
Nasal
Articular
Dentrio
(C)
Escamoso
(temporal)
Nasal
Auditivo
Zigomtico
Maxila
Mandbula
Figura 23.11
Evoluo da mandbula no peixe (A), no rptil

(B) e no mamfero (C). (A) Homologias da
mandbula e dos arcos das guelras como vistas
no crnio do tubaro paleozico Cobeledus
aculentes. (B) Vista lateral do crnio de um
crocodilo. A poro articular da mandbula inferior se articula com o osso quadrado do crnio. Nos mamferos, o quadrado se internaliza
para formar a bigorna do ouvido mdio. O osso
articular mantm seu contato com o quadrado,
tornando-se o martelo do ouvido mdio. Vista
lateral do crnio humano, mostrando a juno
da mandbula inferior com a regio escamosa
(temporal) do crnio. (De acordo com Zangerl
e Williams, 1975.)
896
A existncia de discretos mdulos de desenvolvimento permitiu que os princpios de dissociao, duplicao e divergncia e co-opo formassem novos tipos de
organismos.
Progresso correlacionada
(A) Crebro mdio

Crebro
posterior
Estribo
(B)
Parte da
caixa craniana
Esqueleto
da lngua
Processo
retroarticular
Figura 23.12
Clulas da crista neural de rombmeros do

embrio de pinto e seus pacotes msculoesquelticos. (A) Embrio de pinto de dois dias
mostrando a contribuio das clulas da crista
rombomrica aos arcos farngeos. (A maioria
das clulas da crista neural de r3 e r5 sofrem
apoptose, enquanto que o resto dessas clulas
contribuem para a populao maior de clulas
da crista neural de r4.) (B) Embrio de 10 dias
mostrando os ossos das mandbulas superior e
inferior, o esqueleto da lngua e o ouvido mdio derivados das clulas da crista rombomrica.
Os msculos derivados de r4 so ligados aos
ossos do mesmo rombmero, e a parte da caixa
craniana ligada ao msculo da abertura da mandbula derivado de r4 tambm derivada do
mesmo rombmero. (Para maior clareza outros msculos foram omitidos.) (De acordo com
Ahlberg, 1997.)
Uma conseqncia evolucionria da natureza modular do desenvolvimento a progresso correlacionada. Aqui, mudanas em uma parte do embrio induzem mudanas em outras. A cartilagem esqueltica informa a colocao dos msculos, e os
msculos induzem a colocao dos axnios dos nervos. Nesses casos, se uma estrutura muda, isso ir induzir que outras estruturas tambm o faam (Thomson, 1988).
As mudanas dramticas na organizao dos ossos, desde os gnatos at os peixes
com mandbulas, dos peixes com mandbulas at os anfbios, e dos rpteis at os
mamferos foram todas coordenadas atravs de mudanas nas estruturas da mandbula, musculatura da mandbula, deposio e formato dos dentes e modificaes da
abboda cranial e ouvido (Kemp, 1982; Thomson, 1988). Em 1995, Rowe formulou
a tese de que a migrao da cartilagem da mandbula dos rpteis para formar a cartilagem do ouvido mdio por si s um caso de progresso correlacionada, ou seja, uma
conseqncia do aumento da caixa craniana pelo qual os precursores da cartilagem
foram liberados para migrar caudalmente.
Podemos observar tambm a progresso correlacionada ao longo de um curto
perodo em animais domsticos. Humanos tm um grande talento para selecionar
variantes hereditrias em animais domsticos que envolvem aquelas clulas da crista
neural formadoras dos processos mandibular e frontonasal. Em tais casos, como o do
bulldog, a raa selecionada para se obter uma face larga com um ngulo muito
pequeno entre a mandbula e a cabea. Outras raas como o collie so selecionadas
visando obter um focinho estreito com uma mandbula alongada distanciando-se da
cabea. Todas as raas podem mover suas mandbulas, sacudir suas cabeas e latir,
apesar das diferenas na via que seus ossos so formados ou posicionados. Cada
variao geneticamente determinada; e importante notar que cada uma representa
uma reordenao harmoniosa dos diferentes ossos que interagem entre si e com suas
ligaes musculares. Com a seleo dos elementos esquelticos, tambm foram selecionados os msculos que os movem, os nervos que controlam os movimentos, e os
vasos sangneos que os alimentam.*
O mecanismo pelo qual o aparelho da mandbula manteve sua integridade desde
as lamprias at os amniotas um extraordinrio exemplo de mdulos embrionrios.
As estruturas da cabea de vertebrados derivadas da crista neural, incluem os arcos
farngeos (os precursores da mandbula, ouvido mdio, esqueleto da lngua, etc.) to
bem quanto os ossos drmicos da face e a musculatura facial (veja Captulo 7). A
caixa craniana um produto de tecidos mesodrmicos. Substituindo rombmeros
individuais de pinto pelos de codornas, Kntges e Lumsden (1996) foram capazes de
mapear os destinos das clulas da crista neural associadas com os rombmeros da
codorna (Figura 23.12). Os anticorpos marcando as clulas da crista neural das codornas mostraram que cada rombmero d origem a um elemento esqueltico em
particular e aos msculos a eles atados. Ademais, se descobriu que os mdulos msculo-e-esqueleto de cada rombmero foram enervados por um nervo cranial especfico. Por exemplo, as clulas da crista neural do rombmero 4 geraram quatro tecidos
esquelticos - o processo retroarticular da mandbula inferior (encontrado nas aves
mas no nos mamferos), uma poro do esqueleto da lngua, o osso bigorna do
ouvido mdio, e supreendentemente, a pequena poro da caixa craniana onde os
msculos de abertura da mandbula se ligam ao crnio, principalmente derivado do
mesoderma. Os msculos que conectam esses quatro elementos esquelticos tambm
*Entretanto essa coordenao no totalmente universal. Em ces com faces muito acentuadas (como
os bulldogs), a pele no coordenou o seu desenvolvimento com os ossos e, portanto, fica pendente em
dobras desde a cabea (Stockard, 1941).
(A) Padres esquelticos embrionrios
(B) Padres esquelticos finais
897
(C) Padres musculares finais
Archaeopteryx
Ave moderna
Msculo
poplteo
Ave
experimental
Rptil
(Crocodylus)
(D)
vieram das clulas da crista neural do rombmero 4. Todos esses msculos so

inervados pelo nervo cranial VII. Os rombmeros formam uma unidade modular, constituindo dos elementos esquelticos do arco farngeo, os msculos que os movem, o
local de ligao dos msculos caixa craniana, e os nervos que inervam os msculos.
Como esses msculos e ossos so formados das mesmas clulas, suas relaes podem ser mantidas apesar das mudanas dramticas nas posies e funes que esses
elementos poderiam sofrer ao longo do tempo.
A progresso correlacionada tambm foi mostrada experimentalmente. Repetindo experimentos anteriores de Hamp (1959), Gerd Muller (1989) inseriu barreiras
folheadas de ouro dentro de brotos precondrognicos de membros posteriores de um
embrio de pinto de trs dias e meio. A barreira separava as regies da formao da
tbia e da formao fbula. Os resultados desse experimento so duplos. Primeiro, a
tbia encurtada e a fbula se dobra e retm sua conexo ao fibular. Tais relacionamentos entre a tbia e a fbula no so muito comuns em pssaros, mas so caractersticos
de rpteis (Figura 23.13). Segundo, a musculatura do membro posterior sofre mudanas paralelas com os ossos. Trs dos msculos que se ligam a esses ossos agora
mostram padres de insero caractersticos de rpteis. Nos parece, portanto, que
manipulaes experimentais que alteram o desenvolvimento de uma parte do campo
mesodrmico formador de membros tambm altera o desenvolvimento de outros componentes mesodrmicos. Como na progresso correlacionada observada no desenvolvimento da face, essas mudanas parecem ser todas devidas s interaes dentro
de um campo, nesse caso, o campo dos membros posteriores do pinto. Esses no so
efeitos globais e podem ocorrer independente de outras partes do corpo.
Figura 23.13
Atavismos experimentais produzidos pela

alterao de campos embrionrios no membro.
(A-C) Resultados dos experimentos de Mller
onde lminas folheadas de ouro dividem o campo do membro posterior do pinto. (A,B) O
padro embrionrio e final do osso, indicando
que a estrutura fibular foi retida pelo membro
experimental do pinto, como o em rpteis
existentes e como se considera que foi no
Archaeopteryx. (C) Algumas das mudanas
musculares correlacionadas nos embries experimentais de pinto. O msculo poplteo est
presente no pinto, mas ausente nos membros
de rpteis e nos membros experimentais. O
msculo fibular brevis, que normalmente se
origina da tbia e da fbula no pinto, assume o
padro reptiliano originando somente da fbula
nos membros operados. (D) Archaeopteryx
fssil em calcrio. A impresso das penas pode
ser vista claramente. Se no fossem as penas,
esse organismo dentado seria provavelmente
classificado como um rptil. (A-C de acordo
com Mller, 1989; fotografia cortesia de B. A.
Mller/Biological Photo Service.)
898
Restries ao desenvolvimento
Embora discretamente, os mdulos de desenvolvimento podem interagir uns com os
outros. Essas interaes limitam os fentipos possveis que podem ser criados, e
tambm permitem a ocorrncia de mudanas em certas direes com maior eficincia do que em outras.* Coletivamente, essas restries na produo de fentipos so
chamadas de restries do desenvolvimento.
Restries Fsicas
Fizemos aluso ao fato de que existem relativamente poucos Bauplne, e podemos
facilmente imaginar tipos de animais que no existem dentro de um filo existente. Por
que no existem mais tipos principais de corpos entre os animais? Para responder a
isso, temos que considerar as restries impostas na evoluo. Existem trs classes
principais de restries na evoluo morfogentica. Primeiro, existem as restries
fsicas na construo de um organismo. Essas restries de difuso, hidrulica e
sustentao fsica permitem que somente certos mecanismos do desenvolvimento
ocorram. Podemos observar que no existe um vertebrado com apndices virados
(parecido com que Dorothy viu em o Mgico de Oz) porque o sangue no circula em
rgos que giram; toda essa possibilidade da evoluo foi abandonada. Similarmente,
parmetros estruturais e a dinmica de fluidos impossibilitam a existncia de um
pernilongo de um metro e meio de altura. [evo4.html]
Restries Morfogenticas
Existem tambm restries envolvendo regras de construo morfogentica (Oster et al.,
1988). Bateson (1894) ressaltou que quando organismos se afastam do seu desenvolvimento normal, eles o fazem em somente um nmero limitado de maneiras. Pesquisas nessa
rea tentam encontrar parmetros arquitetnicos pelos quais os organismos so construdos
e procuram mostrar como esses parmetros podem ser modificados durante a evoluo.
Alguns dos melhores exemplos desses tipos de restries vm da anlise da formao de
membros em vertebrados. Holder (1983) afirma que embora possam ter havido muitas
modificaes do membro vertebrado nestes 300 milhes de anos, algumas modificaes
(tais como o dedo indicador ser mais curto que os dedos vizinhos) no foram encontradas.
Alm do mais, anlises de populaes naturais sugerem que existe um nmero relativamente pequeno de caminhos pelos quais a mudana nos membros pode ocorrer (Wake e
Larson, 1987). Se um membro mais longo favorvel em determinado ambiente, o mero
pode se tornar alongado. Jamais veremos dois meros pequenos unidos juntos em dois
lugares, embora possamos imaginar as vantagens seletivas que essa distribuio poderia
ter. Isso indica um esquema de construo que tem certas regras.
As regras principais para a formao de um membro vertebrado foi resumida por
Oster e seus colegas (1988). Eles descobriram que o mecanismo de reao-difuso
pode explicar as morfologias conhecidas do membro e tambm pode explicar porque
outras morfologias so proibidas. Esse modelo postula que as agregaes da cartilagem recrutam ativamente mais clulas da rea em volta e inibem lateralmente a formao de outros focos de condensao. O nmero de focos depende da geometria do
tecido e a fora da inibio lateral. Se a inibio permanece a mesma, o tamanho do
volume do tecido deve aumentar para permitir a formao de dois focos onde inicialmente s havia um. Num dado limite (chamado de limite de bifurcao), esse tamanho
alcanado, e o membro pode se ramificar em dois focos.
*Leibniz, provavelmente o filsofo que mais influenciou Darwin, notou que a existncia deve ser limitada
no somente pelo possvel, mas tambm pelo mutuamente compatvel. Isto , enquanto diversas coisas podem
vir a existir, somente aquelas que so mutualmente compatveis iro realmente existir (veja Lovejoy, 1964).
Assim, embora muitas mudanas do desenvolvimento sejam possveis, somente aquelas que podem se integrar
ao resto do organismo (ou que podem causar mudanas compensatrias no resto do organismo) sero vistas.
899
Prognese natural
(D) Hemidactylium scutatum
(E) Proteus anguinus
Tbia
Tbia
VARIAO
NATURAL
(A) Ambystoma mexicanum

Fbula
Fbula
Tbia
Fbula
Tbia
Tbia
VARIAO
EXPERIMENTAL
Fbula
Decrscimo experimental no nmero de clulas
Evidncias para esse modelo matemtico vm de manipulaes experimentais e da

anatomia comparativa. Quando um broto do membro de axolotle tratado com a droga
antimittica colchicina, as dimenses dos membros so reduzidas. Nesses membros
no ocorre somente a reduo dos dedos, mas a reduo de certos dedos em uma certa
ordem, como esperado pelo modelo matemtico e pelas morfologias proibidas. Ademais, essas redues de dedos especficos so muito similares aqueles membros de
salamandras progenticas, aquelas espcies que alcanam a maturidade em um estgio menor do que seus ancestrais e cujos membros se desenvolvem a partir de brotos
de membros menores (Figura 23.14; Alberch e Gale, 1983, 1985). Dessa maneira, o uso
de mecanismos de reao-difuso para construir membros pode restringir as possibilidades que podem ser geradas durante o desenvolvimento, porque somente certos
tipos de membros so possveis usando essas regras.
Restries F
ilticas
Filticas
Restries filticas compreendem o terceiro conjunto de restries na evoluo de
novos tipos de estruturas (Gould e Lewontin, 1979). Essas so as restries histricas baseadas na gentica do desenvolvimento do organismo. Por exemplo, uma vez
gerada uma estrutura por interaes indutivas, difcil recomear novamente. A
notocorda, que ainda funcional em protocordados adultos (Berril, 1987), considerada vestigial em mamferos e aves adultos. No entanto, ela pode ser momentaneamente necessria no embrio para especificar o tubo neural. Similarmente,
Waddington (1938) notou que embora o rim pronfrico do embrio de pinto seja
considerado vestigial (uma vez que no tem habilidade para concentrar urina), ele
a fonte do broto uretrico que induz a formao de um rim funcional durante o
desenvolvimento do pinto.
Esse tipo de restrio filtica foi recentemente revisto por Raff e colegas (1991).
At recentemente, acreditava-se que os primeiros estgios do desenvolvimento seriam os mais difceis para mudar, porque a sua alterao iria destruir o embrio ou gerar
um fentipo radicalmente novo. Mas trabalho recente (e reavaliao do antigo) mostrou que alteraes podem ser feitas nas primeiras clivagens sem alteraes no resultado final. Modificaes de morfgenos em embries de moluscos podem dar origem
Fbula
Figura 23.14
Relao entre o nmero de clulas e o nmero

de dgitos na salamandra. (A) O membro posterior de um axolotle (Ambystoma mexicanum)
com seus cinco dgitos simtricos. (B,C) Dgitos no membro posterior do axolotle aps incubao do broto do membro posterior em colchicina para reduzir o nmero de clulas. (D,E)
Duas salamandras selvagens formadas por
prognese, cada uma possuindo um broto de
membro menor. (D) Hemidactylium scutatum.
(E) Proteus anguinus. Os paralelos entre as
variaes experimental e natural podem ser vistos, e o denominador comum o nmero reduzido de clulas nos brotos do membro. (De
acordo com Oster et al., 1988.)
900
a novos tipos de larvas que ainda sofrem metamorfose em moluscos, e mudanas nos
morfgenos citoplasmticos do ourio-do-mar podem gerar ourios-do-mar que se
desenvolvem sem larvas mas ainda so ourios-do-mar. Na realidade, ao olharmos
para os vertebrados, podemos observar que existe uma histria completa que nos leva
at o famoso diagrama da lei de von Baer mostrado no Captulo 7. Todos os vertebrados chegam a esse estgio particular do desenvolvimento (chamado de farngula),
mas o fazem por meios diferentes (Figura 23.15). Aves, rpteis e peixes chegam a esse
ponto aps clivagens meroblsticas de tipos diversos; os anfbios chegam a esse
estgio por meio de clivagem holoblstica radial; e os mamferos alcanam o mesmo
ponto aps construrem um blastocisto, crion e mnio. Portanto, os primeiros estgios do desenvolvimento parecem ser extremamente plsticos. Similarmente, os ltimos
SALAMANDRA
Ovo
(em escala)
Blstula
(seco)
Gstrula
Figura 23.15
O gargalo no estgio faringular do desenvolvimento dos vertebrados. A parte inferior deste esquema a ilustrao padro da lei
de von Baer (como mostrado no Captulo 7), demonstrando a divergncia das classes de vertebrados aps um estgio embrionrio
comum. A parte superior deste esquema representa os incios divergentes do desenvolvimento. O prprio von Baer (1886) estava
consciente desse gargalo. (De acordo com Elinson, 1987.)
PINTO
HOMEM
estgios so muito diferentes, como as diferenas nos fentipos de camundongos,

peixes-lua, cobras e salamandras demonstram amplamente. Existe algo no meio do
desenvolvimento que aparenta ser invariante.
Raff argumenta que a formao de novos Bauplne inibida pela necessidade de
seqncias globais de induo durante o estgio de nurula (Figura 23.16). Antes
desse estgio, existem poucos eventos indutivos. Aps aquele perodo, existem muitos efeitos indutivos, mas quase todos eles feitos em mdulos discretos. Durante a
organognese precoce, no entanto, existem diversos eventos indutivos ocorrendo
simultaneamente que so globais na natureza. Nesse estgio, os mdulos se sobrepem e interagem uns com os outros. Nos vertebrados, usando o exemplo de von
Baer, nos primeiros estgios se d a especificao dos eixos e a gastrulao. A induo
no aconteceu em larga escala. Ademais, como Raff e seus colegas mostraram (Henry
et al.,1989), existe aqui uma grande habilidade regulativa, assim, pequenas mudanas na distribuio dos morfgenos, ou na posio das clivagens planas podem ser
acomodadas. Aps a fixao do principal plano corporal, ocorrem indues por todo
o corpo, mas essas so compartimentalizadas em discretos sistemas de formao de
rgos. O cristalino induz a formao da crnea, e se essa falhar, somente o olho
afetado. Similarmente, existem indues na pele que formam penas, escamas ou plo.
Se essas no ocorrerem, a pele ou parte dela pode no ter essas estruturas. Mas durante a organognese precoce, as interaes so mais globais (Slack, 1983). Uma
falha na colocao do corao em determinado lugar pode afetar a induo dos olhos
(veja Captulo 17). Uma falha na induo do mesoderma em uma certa regio leva a
m formao dos rins, membros e cauda. esse estgio que restringe a evoluo e
que tipifica o filo vertebrado. Dessa maneira, uma vez vertebrado, muito difcil se
desenvolver em outra coisa.
Evoluo Conjunta do Ligante e Receptor: Isolamento Reprodutivo
Outra restrio do desenvolvimento envolve a habilidade de um tecido de interagir
com outro. No desenvolvimento, as coisas tm de se ajustar perfeitamente se o
organismo ir sobreviver. Os ligantes tm que se ajustar aos receptores, e devem ser
expressos no lugar certo e na hora certa. Mudanas no ligante tm que ser acomodadas por mudanas complementares no receptor para que esse possa funcionar. No
entanto, se a mudana na estrutura do ligante (ou receptor) produzir uma mudana
muito grande, esse no se ligar ao seu receptor (ou ligante), e o desenvolvimento
ir cessar. Essas mudanas complementares podem levar a uma separao de funes, como pode ser observada na evoluo das famlias de hormnios e seus
receptores (Moyle et al.,1994).
Tal separao de funes pode causar isolamento reprodutivo e a separao
de espcies quando o receptor e o ligante so protenas no espermatozide e no
vulo. Enquanto a maioria das protenas de espcies marinhas relacionadas so
muito similares, as protenas responsveis pela fertilizao so muitas vezes extremamente diferentes (Metz et al., 1994). Nos ourios-do-mar, a bindina do espermatozide e os receptores complementares do vulo co-evoluram em conjunto de
modo que a bindina de uma espcie freqentemente no reconhece os receptores
bindina no ocito de outra. Hofmann e Glabe (1994) propuseram um modelo onde
existiriam diversos stios de reconhecimento distintos entre a bindina e seus receptores. As mutaes poderiam causar alguma alterao nesses stios e, dessa
forma, selecionando alteraes complementares no gameta oposto. Existiria um
estgio no qual alguns espermatozides poderiam se unir, embora precariamente
aos vulos, mas finalmente, esse processo de alterao e acomodao produziria
dois grupos reprodutivos isolados dentro das espcies (Figura 23.17). Nos haliotes,
as mutaes de uma pequena regio da protena lisina e seus receptores correspondentes parecem ser as responsveis pela especificidade de fertilizao da espcie. Ademais, a evoluo dessas mudanas nas protenas lisina e bindina parece
901
(A)
(B)
(C)
Figura 23.16
Mecanismo do gargalo no estgio faringular

do desenvolvimento em vertebrados. (A) No
embrio em clivagem existem interaes globais, mas elas so muito poucas (principalmente
para especificar os eixos do organismo). (B)
Entre os estgios de nurula e farngula existem muitas interaes globais. (C) Aps o estgio faringular existem ainda mais interaes indutivas, mas essas so principalmente
de efeito local, confinadas aos seus prprios
campos. (De acordo com Raff, 1994.)
902
Figura 23.17
Modelo hipottico para o sistema de reconhecimento entre o espermatozide e o vulo em duas espcies relacionadas de ourio-domar. O espermatozide de Strongylocentrotus purpuratus pode
ligar o receptor no vulo. Analogamente, o espermatozide de S.
franciscanus pode se ligar com seu receptor do vulo. O
espematozide de S. purpuratus no se ligar a vulos de S.
franciscanus, mas o espermatozide desse se ligar fracamente a
vulos de S. purpuratus. Postula-se que cada um dos elementos
repetidos na protena bindina interage com stios complementares
nos seus respectivos receptores de bindina. A co-evoluo entre a
bindina e seu receptor pode ter separado as duas espcies. (De
acordo com Shaw et al., 1994.)
Cruzamento
homlogo
Protena bindina do
espermatozide
Bindina S.p.
Bindina S.f.
Receptor S.f.
Receptor S.p.
Protena do
receptor no vulo
Cruzamento
heterlogo
Bindina S.p.
Bindina S.f.
Receptor S.p.
Receptor S.f.
Sem ligao
Ligao fraca
ser rpida e se correlaciona com a especiao (Shaw et al.,1994; Lee et al., 1995;
Metz e Palumbi, 1996).*
O mecanismo gentico do desenvolvimento da mudana

evolucionria: Genes reguladores homlogos
Descendncia com modificao pode ser demonstrada agora a nvel molecular.
Ademais, pode se mostrar que as modificaes envolvem genes reguladores. Roth
(1984) definiu homologia como o compartilhamento de vias do desenvolvimento,
as quais so controladas por genes relacionados genealogicamente. Mas quando
Roth fez essa definio influente, os caminhos do desenvolvimento ainda no haviam sido elucidados. Podemos dizer agora muito mais sobre evoluo e desenvolvimento e podemos dar sustentao ao conceito de que herdamos vias de desenvolvimento e que a evoluo pode ocorrer quando os elementos dessas vias so mudados.
Pax6 e o desenvolvimento do olho
Na gentica populacional, a principal suposio relacionada evoluo foi que a
busca de genes homlogos completamente intil a no ser em parentes muito prximos (Dobzhansky, 1955; Mayr, 1966). No entanto, a biologia molecular e a gentica do desenvolvimento mostraram que essa suposio totalmente invlida. A extraordinria concluso que os genes responsveis por determinadas funes no
desenvolvimento foram conservados por mais de 100 milhes de anos. Ademais, modificaes nesses genes e seus alvos podem causar a maior parte da diversidade dos
organismos vivos. Uma das descobertas mais eletrizantes foi que o gene Pax6 rege o
desenvolvimento do olho em espcies to distantes quanto moscas e humanos.
O desenvolvimento do olho do mamfero, do inseto e do molusco, so muito
diferentes um do outro. O olho das moscas contm numerosos omatdios e se desenvolvem a partir de um sulco morfogentico que se estende ao longo de um disco
imaginal. O olho do cefalpode se desenvolve atravs da separao das regies
formadoras do cristalino e da retina a partir de um placdio comum. O olho de
*Um outro exemplo de mutao do desenvolvimento que causa isolamento reprodutivo envolve uma
funo mais mecnica. As mutaes no espiralamento da concha do caramujo discutidas no Captulo 5 so
mutaes que agem durante o desenvolvimento precoce para mudar a posio dos rgos mesodrmicos. O
acasalamento entre caramujos de conchas com espiralamento para a esquerda e com caramujos de conchas
com espiralamento direita mecanicamente muito difcil, para no dizer impossvel, em algumas espcies.
(Clark e Murray, 1969). Como essa mutao herdada como um gene de efeito materno, seria produzido
um grupo de caramujos relacionados podendo se acasalar um com o outro, mas no com outros membros
da populao original. Esses caramujos reprodutivamente isolados poderiam expandir seu alcance, e por
acumulao de novas mutaes, formar uma nova espcie (Alexandrov Sergievski, 1984).
mamfero se desenvolve atravs de uma srie de interaes indutivas envolvendo

uma protuberncia do diencfalo em contato com o ectoderma da superfcie (veja
Captulo 17). Considerava-se que os trs tipos de olhos mostravam evoluo convergente e que o olho tinha evoludo independentemente em cada um desses trs
grupos. Porm, pesquisas recentes mostram que os olhos de insetos e de vertebrados no tm origens distintas, mas se originaram em um passado distante de um
antepassado em comum.
Alelos mutantes do gene humano PAX6 so responsveis por malformaes do
olho (Hanson et al., 1994). Heterozigotos so notveis pois carecem de ris. Um feto
humano que se acreditava ter mutaes homozigotas do PAX6 foi descrito como
no tendo olhos e com vrias anormalidades craniofaciais (Hodgson e Saunders,
1980). No camundongo e no rato, esse gene chamado Small eyes, devido ao fentipo
do heterozigoto. Fetos homozigotos de camundongo e rato morrem logo aps o
nascimento e no tm nariz nem olhos (Hogan et al., 1986; Grindley et al., 1995). A
grande semelhana entre a estrutura e funo dos genes Pax6 em camundongos e
humanos era esperada. Porm, em 1994, a pesquisadora Quiring e seus colegas no
laboratrio de Walter Gehring mostraram que o genoma da Drosophila continha um
homlogo de Pax6 que codificava uma protena cuja seqncia mostrava 94% de
identidade com a protena Pax6 humana. Mutaes de perda-de-funo no Pax6 da
Drosophila apontam para o gene eyless, um gene caracterizado por olhos pequenos
em heterozigotos e falta de olhos em homozigotos. Parece, portanto, que existe um
gene em comum - Pax6 - que necessrio para o desenvolvimento dos olhos tanto
em insetos como vertebrados.*
Como evidncia positiva mais forte do que evidncia negativa, o laboratrio de
Gehring expressou o Pax6 de Drosophila (i.e., o gene eyeless tipo selvagem) em
discos imaginais que normalmente no o expressam. Halder e seus colegas (1995)
colocaram genes codificando a protena ativadora de transcrio, GAL4, do levedo
a jusante de um intensificador que iria funcionar em uma poro no-neural da
mosca, tal como um disco imaginal de uma perna ou asa. Em seguida, eles construram um transposon, colocando o cDNA para o gene eyless a jusante de uma seqncia composta de cinco stios de ligao de GAL4. A protena GAL4 s podia ser
produzida em um determinado disco imaginal, e quando essa protena fosse produzida, causaria a transcrio do cDNA de eyeless nessas clulas em particular (Figura
23.18A). Em moscas nas quais o cDNA eyeless era expresso nos discos antenais, as
antenas tornaram-se os omatdios pigmentados e com cerdas, caractersticas dos
olhos de Drosophila (Prancha 28). Quando o cDNA de eyeless foi expresso no disco
alar, parte da cutcula alar deu origem a olhos (Figura 23.18B). Mais notvel ainda,
quando o cDNA do eyeless de Drosophila foi substitudo por cDNA de Pax6 de
camundongo e colocado sob controle do sistema de expresso GAL4, a protena
Pax6 murina causou a formao de olhos ectpicos de Drosophila (Figura 23.18C)!
O gene Pax6 parece ser um regulador da via formadora do olho tanto de vertebrados
como de insetos. Mas os olhos no so os mesmos. Permanece para ser entendido
como esses caminhos divergiram durante a evoluo para produzir os diferentes
tipos de olhos atualmente vistos.
Parece que o gene Pax6 conservado em todo o do reino animal e que codifica um
fator de transcrio que se liga a genes formadores de olhos em todo esse reino. O
gene Pax6 no o nico regulador do desenvolvimento que parece ser homlogo em
insetos e mamferos. Outro tal gene o tinman que contm a seqncia homebox. Esse
gene expresso no mesoderma esplncnico de Drosophila, finalizando por residir na
*O modelo antes dessa pesquisa era que os olhos haviam se desenvolvido independentemente
pelo menos 40 vezes. O laboratrio de Gehring mencionou a clonagem de homlogos de Pax6 de
platelmintos e cefalpodes. Um segundo gene de Drosophila, dachshund (dac), tambm pode dar
origem a olhos ectpicos quando expresso no disco imaginal errado. Como parece que eyeless pode
ativar a expresso de dachshund, e vice-versa, os dois genes podem ter desenvolvido uma ala de
retroalimentao (feedback) positiva autoreforante (Shen e Mardon, 1997).
903
904
Figura 23.18
Pax-6 como um gene homlogo para o desenvolvimento do olho em insetos e vertebrados.

(A) A expresso dirigida do cDNA de Pax6
em um disco imaginal no de olho em Drosophila. Uma espcie de Drosophila construda
onde o gene para a protena GAL4 do levedo
colocado a jusante de uma seqncia intensificadora que estimula a expresso no disco
imaginal da asa, perna ou antena. Normalmente, a protena do levedo no encontra uma seqncia para ativar. Entretanto, se adicionado
ao embrio um transposon que leva um cDNA
para Pax6 a jusante dos stios de ligao de
GAL 4, aquele cDNA ser expresso em quaisquer dos discos imaginais onde produzida a
protena GAL4. (B) Omatdios de Drosophila
emergindo da asa de uma mosca da fruta quando o cDNA de eyeless foi expresso no disco da
asa de Drosophila. (C) Omatdios de Drosophila emergindo na perna de uma mosca da
fruta quando o cDNA de Pax6 de camundongo
foi expresso no disco da perna de Drosophila.
(de Halder et al., 1995; fotografias cortesia de
W. J. Gehring.)
Seqncia
intensificadora
especfica do
disco imaginal
GAL4
Protena
ativadora
de GAL4
Expresso GAL4 especfica de tecido
Stios ligantes
de GAL4
cDNA
de Pax6
Expresso do cDNA de Pax6

especfica de tecido
regio do mesoderma cardaco. Mutantes de perda-de-funo de tinman no tm o

corao (da seu nome segundo o personagem do Mgico de Oz) (Bodmer, 1993). Em
camundongos, o gene homlogo chamado Cardiac-specific homebox (Csx), e
tambm expresso originalmente no mesoderma esplncnico e em seguida continua a
ser expresso nas clulas que iro formar os tubos cardacos (Manak e Scott, 1994).
Assim, embora o corao dos vertebrados e o corao dos insetos praticamente nada
tm em comum, exceto sua capacidade de bombear fluidos, ambos parecem ser preditos pela expresso do mesmo gene Csx/tinman. A diferena entre os coraes deve
residir nos genes regulados pela protena CSX/Tinman.
BMP4 e a Morfognese dos Membros
Em alguns casos, um gene homlogo pode assumir uma nova funo quando expresso em um novo local. A expresso de Bmp4 no membro do pinto um bom exemplo de
como uma pequena mudana desenvolvimental pode criar uma importante alterao
morfolgica, do ponto de vista evolucionrio. A maioria das pessoas concordaria que
o pato e o pinto no so iguais, embora sua embriognese seja extremamente semelhante at os ltimos dias. Nesse momento, o bico do pato torna-se distinguvel do
bico do pinto, e os ps interdigitados do pato so retidos, mas a interdigitao
perdida nos ps posteriores do pinto.
BMP4 conhecida como indutora de apoptose em clulas na crista neural craniana,
no mesnquima pulmonar e nos brotos dentais. Ela tambm causa apoptose no tecido
interdigital frouxo do membro do pinto. No s o Bmp4 expresso no tecido interdigital,
mas se os membros do pinto forem infectados com um vrus expressando uma forma
negativa dominante do receptor de BMP, o tecido interdigital no sofrer apoptose
quando receber o sinal BMP4 (Figura 23.19; Yokouchi et al., 1996; Zou e Niswander,
1996). O pinto e o pato mostram padres muito similares na expresso de BMP. Porm,
embries de pato no expressam Bmp4 (ou BMP2 ou 7, relacionados) em seus tecidos
905
(B)
(A)
Figura 23.19
interdigitais. Portanto, mudando ligeiramente a regulao de Bmp4 produzida uma

nova morfologia que pode ser selecionada ou rejeitada pela seleo natural. Alteraes no desenvolvimento podem produzir a chegada do mais apto. Sua sobrevivncia depende do seu ambiente.
Genes Ho
x e a Evoluo dos V
ertebrados
Hox
Vertebrados
Uma das mais notveis peas de evidncia da profunda homologia entre todos animais do mundo fornecida pelos genes Hox. Conforme mencionado no Captulo 16,
os genes Hom-C da mosca da fruta so homlogos aos do mamfero. No somente
so os genes homlogos, como tambm esto na mesma ordem em seus respectivos
cromossomos. Os padres de expresso so tambm notavelmente semelhantes; a
expresso dos genes do terminal 3 ocorre anteriormente, enquanto aqueles do terminal 5 so expressos mais posteriormente. Como se essa evidncia de homologia no
fosse o suficiente, Malicki e colegas (1992) demonstraram que o gene humano HOX4B
podia imitar a funo de seu homlogo na Drosophila, Deformed, quando introduzido em embries de Drosophila deficientes em Dfd. Slack e colegas (1993) postularam que o padro de expresso do gene Hox define o desenvolvimento de todos os
animais e que constante para todos os filos, o gene Hox tipo labial sendo expresso
anteriormente, o gene Hox tipo Ubx no centro, e o gene Hox tipo AbdB posteriormente. A regulao global desses genes Hox tambm semelhante de espcies para espcies. A protena Caudal usada para induzir os domnios posteriores da Drosophila, e
parece fazer o mesmo em camundongos e nematides (Subramanian et al., 1995). Se a
expresso subjacente do gene Hox for uniforme, considera-se que diferenas nos filos
emergem de diferenas em como esses genes so regulados e quais genes so regulados pelas protenas derivadas de Hox.*
Em vertebrados, existem quatro complexos Hox. Em anfioxus, um cordado novertebrado que carece de uma cabea verdadeira, crebro, tecidos da crista neural, e
medula espinhal, h somente um complexo Hox muito parecido com aquele dos insetos (Figura 23.20; Holland e Garcia-Fernndez, 1996). Quando da evoluo dos peixes,
haviam quatro complexos Hox. Os genes Hox parecem interpretar a informao
posicional ao longo do eixo ntero-posterior do corpo, e a importncia desses genes
relacionando evoluo e desenvolvimento foi sugerida por certas estruturas
atavisticas que resultaram da perda de determinados genes Hox. A ruptura de genes
* Considera-se que a razo dessa notvel conservao de estrutura do complexo do gene Hox o
compartilhamento de regimes cis-reguladores pelos genes vizinhos. Se um gene Hox movido para uma
regio diferente dentro do complexo, sua regulao alterada. Os regimes reguladores crticos podem ser os
stios ligantes para as protenas Polycomb. Essas protenas so tambm conservadas atravs da evoluo,
e silenciam os genes Hox em determinados momentos e locais. Aqui, portanto, vemos uma restrio
filtica a nvel molecular (Chiang et al., 1995; Mller et al., 1995; van der Hoeven et al., 1996).
Expresso de BMP necessria para a induo

de apoptose no enredamento interdigital em
embries de pinto. (A) A BMP4 vista no
enredamento interdigital do membro posterior do pinto (esquerda) mas no no do pato
(direita) no mesmo estgio do desenvolvimento. (B) Quando o sinal de BMP bloqueado
por um receptor negativo dominante infectado
no membro posterior, a apoptose interdigital
no ocorre e os dgitos so mais curtos. (de
Zou e Niswander, 1996; fotografias cortesia
de L. Niswander.)
906
Figura 23.20
Ascendncia postulada de genes hometicos a

partir de um ancestral hipottico tanto de
deuterostomatas como protostomatas. Anfioxos tm somente um aglomerado, semelhante
aos insetos. Vertebrados tm quatro aglomerados, nenhum dos quais completo. (De acordo
com Holland e Garcia-Fernndez, 1996.)
HOM-C de
Drosophila
HOM-C de
inseto em geral
Ancestral
comum
hipottico
Aglomerado
Hox de
Anfioxo
Hox- de
Camundongo
Hox- de
Camundongo
Hox-C de
Camundongo
Hox-D de
Camundongo
Hoxa-2 resulta numa transformao parcial do segundo arco farngeo em uma cpia
do primeiro arco. Os fetos mutantes carecem dos ossos estribo e estilide formados
do segundo arco, mas tm extra os ossos martelo, bigorna, timpnico e escamoso. Eles
tm tambm uma cartilagem filamentosa que est fundida ao elemento alisfenide e
cujo terminal caudal est em contato com a bigorna supranumerria. Essa cartilagem
no tem contrapartida em camundongos normais, mas suas relaes anatmicas sugerem que seja homloga com a cartilagem pterigoquadrtica vista em rpteis. O complexo formado por essa cartilagem e a bigorna considerado ter estado presente em
terapsdeos, o grupo de rpteis que deu origem aos mamferos (Rijli et al., 1993; Mark
et al., 1995). Quando o gene Hoxa-2 desregulado pela eliminao de receptores de
cido retinico, uma distinta cartilagem pteroquadrada se desenvolve ligando os ossos bigorna e alisfenide (Figura 23.21; Lohnes et al., 1994).
Porm, permanecia a pergunta se os genes Hox especificam o eixo de acordo
com um sistema de contagem ou por um cdigo pelo qual diferentes genes Hox
especificam vrtebras diferentes. Essa uma pergunta importante porque d a
viso de como os mesmos genes Hox podem especificar corpos diferentes. Comparando os padres de expresso do gene Hox com o tipo de vrtebras mostrouse que esse era especificado pela constelao de genes Hox expressos nos somitos
(Gaunt, 1994; Burke et al., 1995). Por exemplo, o camundongo tem 5 vrtebras
occipitais, 7 cervicais, 13 torcicas, 6 lombares e 4 sacrais. O pinto, por outro lado,
tem 5 vrtebras occipitais, 14 cervicais, 7 torcicas, 9 lombares e 4 sacrais. Embora
o nmero total de vrtebras pr-sacrais difira somente por uma (34 versus 35),
existem bvias transposies entre as espcies (Goodrich, 1930). Em ambos os
animais, Hoxc-5 expresso no fim das vrtebras cervicais, enquanto Hoxc-6 aparece no comeo da srie torcica. No camundongo isso ocorre no limiar entre a
dcima segunda e dcima terceira vrtebra e em pintos entre a dcima nona e a
vigsima. Assim em vertebrados, alteraes da morfologia podem se concretizar
mudando-se os domnios da expresso gnica de Hox.
Figura 23. 21
Representao de elementos do esqueleto derivados do primeiro arco farngeo (em cinzento) e do

segundo arco farngeo (em preto). (AS, alisfenide; I, bigorna; I2 bigorna duplicado; P e P2,
cartilagem pteride normal e duplicada; PQ, cartilagem pterigoquadrada; SQ, escamoso; SQ2
escamoso duplicado.) (De acordo com Mark et al., 1995.)
Camundongo selvagem/mamfero
Genes Hox e a Evoluo dos Artrpodes

A mesma pergunta produziu uma resposta diferente quando feita a respeito dos
artrpodes. Borboletas (Lepidpteros) diferem de Drosophila (Dpteros) de duas
bvias maneiras. Primeiro, borboletas tm quatro asas, ao passo que os dpteros
tm duas. Segundo, larvas de borboletas tm membros abdominais chamados prpernas que no existem em larvas de moscas. A maneira mais provvel de criar
essas diferenas seria alterar o padro da expresso do gene hometico (Lewis,
1978). Em Drosophila, o Ultrabithorax (Ubx) expresso nos halteres, mas no nas
asas. Mutaes de perda-de-funo de Ubx convertem os halteres em asas
mesotorcicas, enquanto que a expresso ectpica de Ubx nos discos alares faz
com que eles formem halteres (veja Captulo 14). Poder-se-ia esperar, por isso, que
o Ubx seria inativo nos discos das asas posteriores da borboleta. Esse no o caso.
Warren e colaboradores (1994) mostraram nveis altos de expresso de Ubx nos
discos das asas posteriores da borboleta buckeye, Precis coenia. Na realidade, o
padro de expresso do gene Hom-C em Precis foi essencialmente o mesmo que o
padro em Drosophila. Na borboleta, o Ubx modifica a morfologia alar para produzir uma asa posterior (em lugar de uma anterior). Na mosca, ele modifica a asa
em um haltere. A hiptese atual que os genes alvo de Ubx podem ter mudado,
mas no o padro da expresso de Ubx.
A EVOLUO DO NMERO DE ASAS. As asas dos insetos so consideradas ter
evoludo de apndices multiramificados de guelras de crustceos ancestrais. Especificamente, o padro de expresso ptero das abas osmorreguladoras dorsais (eppodos)
dos crustceos se parece com sua expresso em asas de insetos em desenvolvimento
(Kukalova-Peck, 1978; Averof e Cohen, 1997). Carroll e seus colegas (1995) sugerem que o inseto original tinha asas saindo de todos os segmentos (como as guelras
dos crustceos). Em insetos modernos, diferentes genes hometicos suprimem esse
potencial na maioria dos segmentos. Em outras palavras, a formao das asas originou-se independentemente dos genes hometicos em um organismo que estava usando
os genes hometicos para identidade segmentar ou padronizao neural. Somente
mais tarde o programa formador de asas ficou sob o controle dos genes hometicos.
H vrias observaes apontando para essa concluso. Primeiro, embora o Antennapedia seja expresso em dois segmentos (segundo e terceiro torcico), capazes de
produzir asas, ele no necessrio para formao das asas. O segmento mesotorcico alar (T2) pode, portanto, representar o estado fundamental presente em todos os
segmentos antes dos genes hometicos comearem a regular a formao das asas.
Segundo, em vez do Antennaedia estar regulando positivamente o desenvolvimento
alar em T2 e T3 parece que outros genes Hom-C reprimem o desenvolvimento alar
em outros primrdios. Mutaes de perda-de-funo dos genes Hom-C causam a
formao de primrdios alares ectpicos nos segmentos em que so expressos (veja
Figura 14.29 mostrando uma mosca cujo Ubx foi removido). Portanto, com a possvel exceo dos segmentos abdominais inferiores controlados por Abd-b, o potencial
para o desenvolvimento de asas existe em todos os segmentos e reprimido pelos
genes hometicos. Terceiro, se a expresso de Scr induzida em discos alares (usando o sistema GAL4 mencionado anteriormente), o desenvolvimento alar abortado
em seus estgios precoces.
Rptil
Mutante com Hoxa-2 anulado
907
908
(A) Apterigoto
Figura 23.22
Esquema evolucionrio do desenvolvimento da asa. Apterigotos (A) j tinha o esquema

padro Hom-C dos insetos. Quando emergiram as asas (B,C), todos os segmentos as possuam, independente dos genes Hom-C neles expressos. (D,E) Na maioria dos insetos, AbdB,
Scr e abdA impediram a formao da asa. (F) Em dpteros tais como a Drosophila, Ubx
tambm adquiriu a habilidade para reprimir o desenvolvimento da asa. (De acordo com
Carroll et al., 1995.)
(B) Ninfa Paleodictiptera
(C) Ninfa de efemrida paleozica
Combinando gentica do desenvolvimento e registro fssil (Kukalova-Peck, 1978),

Carroll e colegas propuseram o seguinte cenrio (Figura 23.22): quando as asas se
originaram, elas foram encontradas em todos os segmentos, e no havia regulao
hometica de seu nmero ou carter. Admitindo que o padro de expresso gnica de
Hom-C tenha permanecido o mesmo, as protenas HOM-C adquiriram a capacidade de
regular a formao de asas atravs da evoluo de stios sensveis a Scr, AbdA e Ubx
nas regies reguladoras dos genes formadores de asas. A evoluo de elementos
responsivos a Scr levaria modificao ou reduo das asas protorcicas (T1), enquanto os elementos responsivos a AbdA levariam reduo das asas abdominais.
Em insetos de quatro asas, o Ubx reprime a formao de asas no primeiro segmento
abdominal (A1) e, em insetos de duas asas, ele controla o desenvolvimento de asas em
ambos, A1 e T3. Assim, diferentemente da situao em mamferos, a evoluo da
identidade de segmentos de insetos no parece corresponder com mudanas nos
genes Hom-C. Ao contrrio, as protenas codificadas por esses genes hometicos
adquiriram novos alvos reguladores.
EVOLUO DO NMERO DE PATAS DE INSETOS. Outra importante lio
(D) Adulto neptero primitivo
(E) Endopterigoto moderno (Lepidptero)
(F) Endopterigoto moderno (Dptero)
evolucionria que os genes Hom-C no so reguladores todo-poderosos. Ao contrrio, eles podem ser regulados localmente pelos produtos de outros genes. Em
artrpodes, muitos grupos so distinguidos pelo nmero de membros. Os insetos tm
seis patas quando adultos, trs pares se originando de cada um dos trs segmentos
torcicos. Em Drosophila, o gene Distal-less (Dll) crtico para prover o eixo prximo-distal dos apndices (veja Figuras 14.33 e 19.21). A expresso de Distal-less ocorre
nos discos formadores de membros ceflicos e torcicos (tanto para patas, mandbulas e asas), mas excluda no abdmen pelas protenas AbdA e Ubx. Assim, os apndices crescem como patas e asas no trax e como mandbulas na cabea. A larva de
Drosophila nunca desenvolve membros no seu abdmen.
No obstante, larvas de borboletas e mariposas so caracterizadas por patas abdominais rudimentares chamadas pr-patas. A pesquisadora Panganiban e seus colegas (1994) clonaram o homlogo do Distal-less da borboleta buckeye e mapearam
sua expresso durante o desenvolvimento da borboleta. Durante a poro precoce da
embriognese de Precis a expresso de Dll a mesma que em Drosophila. Primeiro
vista nas regies da cabea durante a gastrulao (segmentos antenais, maxilares, e
labiais) e nas regies torcicas que iro dar origem aos discos imaginais das patas
(Figura 23.23A). No entanto, com o progresso do desenvolvimento, o gene Dll de
Precis torna-se expresso do terceiro at o sexto segmento abdominal (Figura 23.22B).
Enquanto a expresso de Dll vista tanto no anel proximal como em soquetes das
patas torcicas verdadeiras, a expresso de Distal less no abdmen est restrita ao
anel proximal.
Assim, as pr-pernas dos lepidpteros parecem ser homlogas poro proximal
das patas torcicas. A expresso nos segmentos maxilar e labial tanto em Drosophila
como em Precis interessante por ser consistente com recente evidncia paleontolgica
(Kukalova-Peck et al., 1992) de que embora essas estruturas da mandbula se originaram de primrdios de membros, elementos de membros distais esto perdidos de todas
as mandbulas de artrpodes.
909
Figura 23.23
Expresso do gene Distal-less em Precis. (A)

Aos 12% da embriognese, transcritos de Dll
aparecem em trs segmentos torcicos (T1,
T2, T3) como tambm nos segmentos antenal
(an), maxilar (mx),o embrionrio, a expresso de Dll em Precis divergiu significativamente daquela da Drosophila mostrando tambm expresso Dll nos segmentos abdominais 3-6. (A e B de acordo com Panganiban et
al., 1994, cortesia dos autores.)
(A)
(B)
A presena de pr-pernas larvais e a expresso de Distal-less nos segmentos

abdominais de Precis sugere que Distal-less regulado de maneira diferentemente em
dpteros e lepidpteros. Duas possibilidades chegam frente. (1) Os genes Distal-less
de Precis no so reprimidos pelas protenas AbdA e Ubx do homeodomnio, ou (2) a
expresso dos genes repressores do homeodomnio de alguma maneira abolida nas
regies abdominais de Precis. Warren e colaboradores. (1994), mostraram que os
embries de Drosophila e Precis tm o mesmo padro inicial da expresso gnica de
Hom-C. Porm, a cerca de 20% do caminho da embriognese de Precis, a expresso
do gene Hom-C perdida em pequenos pedaos dos segmentos A3-A6. Nem Ubx
nem AbdA so expressos na regio dos segmentos abdominais que do origem s
pr-pernas (Prancha 26). Pouco tempo depois, os genes Distal-less e Antennapedia
so expressos nesses furos. No conhecido quais molculas so empregadas para
reprimir a expresso dos genes abdA e Ubx nas regies de expresso do Distal-less.
Os genes do grupo Polycomb so os suspeitos mais provveis por serem capazes de
reprimir ambos genes em Drosophila.
Caminhos homlogos do desenvolvimento

Uma das descobertas mais emocionantes da dcada passada no foi somente os
genes reguladores homlogos, mas tambm as vias homlogas do desenvolvimento
(Zuckerkandl, 1994; Gilbert, 1996; Gilbert et al., 1996). Duas dessas vias j foram
discutidas em captulos anteriores. Primeiro, como foi visto no Captulo 15, a via
chordin/BMP4 demonstra que em ambos, vertebrados e invertebrados, a chordin/
short-gastrulation inibe os efeitos de lateralizao de BMP4/decapentaplegic, portanto, permitindo ao ectoderma protegido por chordin/short-gastrulation se tornar ectoderma neurognico. As reaes so to parecidas que a protena decapentaplegic da
Drosphila pode induzir destinos ventrais em Xenopus e pode substituir para a protena short-gastrulation (Holley et al., 1995). Em segundo lugar, vimos no Captulo 18,
que as interaes entre Hedgehog e Wingless foram conservadas entre insetos e
910
Figura 23.24
Drosophila melanogaster (corpo gorduroso)
Regulao semelhante do gene da lcool desidrogenase em Drosophila e humanos. CREB/ATF e C/EBP so reguladores positivos do
gene da lcool desidrogenase. AEF um regulador negativo. (De
acordo com Abel et al., 1992; Zuckerkandl, 1994.)
Seqncia reguladora
a montante
Homo sapiens (fgado)
Seqncia reguladora
a montante
Figura 23.25
A via RTK-RAS amplamente usada. O esquema da via est mostrado no lado esquerdo junto com os nomes em diferentes espcies. O
ligante, que pode ser solvel (como no EGF)
ou uma protena ligada membrana em outra
clula (como na protena Boss [Bride of
sevenless] associada ao sevenless do RTK).
Os domnios citoplasmticos das RTKs so
autofosforilados ao se dimerizarem, e isso lhes
permite se ligar protena adaptadora e estimular a protena Ras G. A protena Ras G transloca
a protena Raf para a membrana celular, dessa
maneira ativando-a. Isso pode ser inibido pelas
protenas gap, as quais podem inativar Ras. A
protena Raf ativada inicia a cascata de fosforilao que termina em um fator de transcrio
fosforilado (ativado) que entrando no ncleo
efetua a transcrio do RNA.
Ligante
vertebrados na formao dos membros. Na verdade, as mesmas interaes so usadas

para estabelecer o padro de segmentao em embries precoces de Drosophila (veja
Captulo 14) e para estabelecer compartimentos no crebro dos mamferos (veja Captulo 7). Tambm foi mostrado que numerosas interaes DNA-protena regulando
genes especficos so conservadas atravs de espcies divergentes. Dessa maneira,
o gene da lcool desidrogenase controlado no corpo gorduroso da Drosophila pelo
mesmo conjunto de protenas que governa sua expresso no fgado humano (Figura
23.24; Abel et al.,1992).
Entre as primeiras vias homlogas conhecidas est a via de transduo do sinal
RTK-Ras que foi recentemente identificada em todo o reino animal, embora usada
estritamente em diferentes funes (veja Captulo 3; Figura 23.25). Na Drosophila, a determinao do fotorreceptor sete cumprida quando a protena Sevenless
Receptor
Protena G
Fora da clula
Membrana plasmtica
Citoplasma
Domnio
da tirosina
quinase
Organismo e tecido
Ligante
Tirosina
quinase do
receptor
Protena
SH2-SH3
Protena G
Ativador de GTPase
e protenas
de troca GDP/GTP
Efeito
Vulva de C. elegans
Protena
LIN-3
Protena
LET-23
SEM-5
Protena
LET-60
?/LET-341 (?)
Diferenciao e diviso
da clula vulvar
Pele de mamfero
EGF
Receptor
de EGF
GRB2
Protena Ras
GAP/GNRP
Diviso da clula epidrmica
Olho de Drosophila
Bride of
sevenless
Sevenless
Drk
Ras1
Gap1/ Son of sevenless
Diferenciao do fotorreceptor
sete em cada omatdio
(no suposto fotorreceptor 7) se junta protena Bride Sevenless (Boss) no fotorreceptor 8. Essa interao ativa a tirosina quinase da protena Sevenless a se
autofosforilar. A protena DRK se liga ento a essas novas tirosinas fosforiladas
atravs da sua regio de homologia-2 de Src (SH2) e ativa a protena Son of Sevenless
(SOS). Essa protena uma trocadora de nucleotdeos de guanosina e troca GDP por
GTP na protena Ras1 G. Isso ativa a protena G, permitindo que ela transmita seu
sinal ao ncleo atravs da cascata da quinase MAP. Esse mesmo sistema foi encontrado na determinao da vulva do nematide, da epiderme do mamfero, e dos
segmentos terminais da Drosophila. A similaridade nesses sistemas to impressionante que muito dos componentes so intercambiveis entre as espcies. O gene
para o GRB2 humano pode corrigir os defeitos fenotpicos dos nematides deficientes em Sem-5 e a protena do nematide SEM-5 pode se juntar forma fosforilada do
receptor EGF humano (Stern et al.,1993).
Caminhos homlogos formam a infra-estrutura bsica do desenvolvimento. Os
alvos desse caminho podem mudar, dependendo do organismo. No ectoderma de um
organismo, o caminho RTK-Ras pode ativar os genes responsveis pela proliferao.
Em outro organismo, o mesmo caminho pode ativar os genes responsveis pela produo de um fotorreceptor. E num terceiro organismo, o caminho ativa os genes necessrios para a construo de uma vulva.
Criando novos tipos de clulas:

O mistrio evolucionrio bsico
Uma das principais questes no resolvidas na biologia evolucionria e do desenvolvimento , Como os organismos desenvolvem um novo tipo de clula? Essa uma
questo importante, uma vez que mudanas no filo esto associadas com a evoluo
de novos tipos de clulas. Hipoteticamente, novas combinaes de genes tambm
podem criar novos tipos de clulas. No entanto, isso permanece uma hiptese ainda
no provada. Kauffman (1993) modelou matematicamente a gerao de novos tipos
de clulas a partir de um genoma aleatrio consistindo de 10.000 genes, cada um
regulado por 2 outros genes. Em tais casos, ele encontra somente 100 estados estveis de interao (de aproximadamente 210.000 estados possveis). Cada um desses
estados possveis representa um tipo celular diferenciado. Em alguns casos, a mutao de um gene regulador suficiente para a restruturao das interaes, e quando
uma nova clula criada. A maioria dos genes, no entanto, permanecem inalterados
por esse novo arranjo.
A criao de novos tipos de clula um evento raro na natureza, e freqentemente pode mudar a natureza do animal. Como mostra a Figura 23.26, os vertebrados so
conhecidos por terem surgido de invertebrados nas diversas etapas que envolveram a
formao e modificao de novos tipos de clulas.
Como mencionado anteriormente neste captulo, as clulas da crista neural foram importantes na origem dos cordados. Enquanto no sabemos como surgiram
as clulas da crista neural, Holland e colegas (1996) forneceram uma fascinante
especulao que envolve dissociao, duplicao e divergncia, e co-opo. Tambm envolve os homlogos vertebrados do gene da Drosophila discutidos anteriormente, Distal-less. Anfioxo um protocordado que tem notocorda, somitos, e um
tubo neural oco. Falta-lhe um crebro e estruturas faciais e, o mais importante, no
possui clulas da crista neural. Como a Drosophila, o anfioxo tem somente uma
cpia do gene Distal-less por genoma haplide, e como na Drosophila, esse gene
expresso na epiderme e no sistema nervoso central. No entanto, enquanto o anfioxo
tem somente uma cpia desse gene, os vertebrados tm de quatro a seis cpias bem
parecidas do Distal-less, cada uma provavelmente originria de um nico gene ancestral que se assemelha ao do anfioxo (Price, 1993; Boncinelli, 1994). Esses
homlogos Distal-less encontraram novas funes. Algumas esto no mesoderma,
911
CORDADOS
Gnatostomatas
Agnatos
Cefalocordados
(Amphioxus)
Urocordados
(ascidianos)
Hemicordados
Conodontes
Calcicordados
VERTEBRADOS
Equinodermos
912
Modificao do
arco mandibular
em mandbulas
Crista neural, placdios

epidrmicos (formao da cabea)
Podcitos renais
Mesoderma forma a notocorda
Cordo nervoso dorsal oco
Simetria radial
Sistema vascular aquoso
Fendas farngeas pareadas

Arcos articos
Simetria bilateral em adultos
Sistema circulatrio fechado
Larva ciliada bilateralmente simtrica
Formao de deutorostomatas
Mesoderma enteroclico
Figura 23.26
Mudanas de desenvolvimento na evoluo de invertebrados para vertebrados. Os invertebrados

deuterostomatas originais foram capazes de formar os equinodermos e outros organismos que
finalmente deram origem linhagem vertebrada. A habilidade do mesoderma para formar a
notocorda e seu ectoderma sobrejacente para se tornar um tubo neural, separou os cordatos dos
invertebrados remanescentes. O desenvolvimento das clulas da crista neural e os placdios
epidrmicos que do origem aos nervos sensoriais da face distinguem os vertebrados dos
protocordatos. (De acordo com Gans, 1989; Langille e Hall, 1989.)
um lugar onde o Distal-less no expresso em anfioxos. Outros homlogos vertebrados de Distal-less so expressos no crebro anterior, imitando um padro de
expresso visto no anterior do tubo neural do anfioxo. Isso sugere que o crebro
anterior vertebrado homlogo ao tubo neural anterior do anfioxo. Um outro
homlogo vertebrado de Distal-less expresso nas clulas da crista neural. Embora
no esteja comprovado, possvel que um novo tipo do gene Distal-less possa
fazer com que as clulas ectodrmicas migratrias dos anfioxos evoluam em clulas da crista neural.
Uma nova sntese evolucionria

Em 1922, Walter Garstang declarou que a ontogenia (desenvolvimento individual) no recapitula a filogenia (evoluo); ela cria a filogenia. Os animais que surgiram mais tarde na histria evolucionria, no surgiram atravs de uma adio terminal em um embrio existente. Ao contrrio, surgiram atravs de mutaes que afetaram a interao de mdulos j existentes no Bauplan do organismo:
Uma casa no um chal com um andar extra em cima. Uma casa representa um
grau maior na evoluo de uma residncia, mas o prdio todo alterado- fundaes, madeiramento e telhado- mesmo que os tijolos permaneam os mesmos.
Dessa maneira, quando dizemos que o cavalo moderno de um s dedo evoluiu

de um ancestral com cinco dedos, ns queremos dizer que ocorreram mudanas
hereditrias na diferenciao do mesoderma do membro para condrcitos durante a embriognese na linhagem do cavalo. Nessa perspectiva, a evoluo o
resultado de mudanas hereditrias afetando o desenvolvimento.* Esse o caso
se a mutao muda o embrio do rptil em um pssaro ou muda a cor dos olhos
da Drosophila.
Essa perspectiva do desenvolvimento, no entanto, esteve perdida durante a dcada de 1940. Um dos maiores eventos na teoria evolucionria foi a sntese moderna da biologia evolucionria e gentica Mendeliana (Mayr e Provine, 1980).
Um resultado dessa fuso duramente obtida que a evoluo foi redefinida para
significar mudanas nas freqncias gnicas de uma populao atravs do tempo.
Uma vez que a evoluo uma mudana na composio gentica das populaes, escreveu Dobzhansky (1937), os mecanismos da evoluo constituem problemas da gentica de populaes. A abordagem desenvolvimental da evoluo foi
excluda da sntese (Hamburger, 1980; Gottlieb, 1992; Dietrich, 1995; Gilbert et
al., 1996). Pensava-se que a gentica de populaes poderia explicar a
macroevoluo, de modo que a morfologia e o desenvolvimento foram considerados como tendo papis de menor importncia na teoria evolucionria moderna
(Adams, 1991). Em outras palavras, a macroevoluo (as grandes mudanas
morfolgicas vistas entre espcies, classes e filos) poderia ser explicada pelos mecanismos da microevoluo, os valores adaptativos diferenciais de gentipos ou
desvios no acasalamento aleatrio ou ambos fatores agindo juntos (Torrey e
Feduccia, 1979).
No entanto, essa viso tinha seus crticos (seus hereges, alguns diriam). Talvez o mais importante desses tenha sido Richard Goldschmidt. Goldschmidt comeou o seu livro The Material Basis of Evolution (1940) com um desafio sntese moderna.
Eu podia desafiar os devotos da viso estritamente Darwiniana, a qual estamos
discutindo aqui, para tentar explicar a evoluo das seguintes caractersticas
pela acumulao e seleo de pequenos mutantes: plo nos mamferos, penas
nos pssaros, segmentao nos artrpodes e vertebrados, a transformao dos
arcos de guelras em filogenia incluindo os arcos articos, msculos, nervos,
etc.; mais adiante, dentes, conchas dos moluscos, ectoesqueletos, olhos compostos, circulao sangnea, alternao de geraes, estatocistos, sistemas
ambulacrrios de equinodermos, pedicelria dos mesmos, cnidocistos, aparelho
de veneno das cobras, osso da baleia, e finalmente, diferenas qumicas como
hemoglobina versus hemocianina.
Goldschimidt afirmou que as novas espcies no surgiram do mecanismo da
microevoluo e que a gentica de populaes era incapaz de explicar novos tipos de
estrutura que envolvem diversos componentes mudando simultaneamente. Tais mudanas macroevolucionrias requerem outros mtodos evolucionrios do que simplesmente acumulao de micromutaes. Goldschmidt viu mutantes hometicos
como macromutaes que poderiam mudar uma estrutura em outra e possivelmente
criar novas estruturas ou novas combinaes de estruturas. Essas mutaes no
seriam nos genes estruturais, mas nos genes reguladores. Uma nova espcie, afirma
ele, comearia como um esperanoso monstro (uma frase um tanto infeliz tendo
como antecedentes a prosa de Metchnikoff).
*Uma maneira de visualizar isso usar uma analogia matemtica (Gilbert et al., 1996):
Biologia funcional = anatomia, fisiologia, biologia celular, expresso gnica
Biologia do desenvolvimento = [biologia funcional]/ t
Biologia evolucionria = [biologia do desenvolvimento]/ t
913
914
Ao mesmo tempo, Conrad H. Waddington estava tentando descobrir mecanismos de desenvolvimento para a produo dessas novas espcies. Ele tambm considerou mutaes hometicas em moscas como modelos de fentipos drasticamente novos, formulando a noo de transferncia de competncia (assimilao gentica, veja Captulo 21) para explicar certos aspectos da evoluo morfolgica. Poucos cientistas prestavam ateno a Goldschmidt ou Waddington porque eles no
estavam escrevendo no paradigma da gentica de populaes da sntese moderna e
seus programas cientficos eram suspeitos. (Goldschmidt no acreditava na opinio
de Morgan sobre o gene como uma entidade particular, e o trabalho de Waddington
foi mal interpretado como apoiando a herana de traos adquiridos.) No entanto, na
dcada de 1970, eventos na paleontologia (teoria do equilbrio pontuado), eventos
na sociedade (os Criacionistas dando a disputa microevolucionria para os biologistas mas contestando a macroevoluo), e eventos em biologia molecular
(Notadamente o trabalho de King e Wilson em 1975 mostrando que os DNAs, humano e do chimpanz, eram mais do que 99% idnticos) levaram os cientistas a considerar seriamente que mutaes em genes reguladores podem criar grandes mudanas na morfologia.
Na dcada de 1990, as tcnicas de biologia molecular permitiram aos biologistas
descobrirem (1) genes reguladores homlogos como o Pax6, que controlam o desenvolvimento dos mesmos rgos em todo reino animal, (2) caminhos homlogos
para o desenvolvimento, cujas funes podem mudar entre organismos ou entre
clulas do mesmo organismo, e (3) os padres de mudana da expresso dos genes
hometicos, permitindo que diversas partes do corpo tenham estruturas e funes
diferentes. Tais descobertas convergiram para a formao de uma sntese evolucionria do desenvolvimento que incorpora a abordagem da gentica de populaes
mas que expande a teoria evolucionria para explicar tambm o fenmeno
macroevolucionrio. A sntese evolucionria do desenvolvimento tambm retm
uma multiplicidade de paradigmas. Em alguns momentos (tais como a criao das
clulas da crista neural), uma mudana qualitativa ocorre, enquanto em outros casos (como a formao da bolsa do toupeira com bolso), quantidade se torna qualidade quando um limite ultrapassado. Sinalizando a unio dessa sntese, Biologia
Evolucionria do Desenvolvimento se tornou um tpico separado em uma enciclopdia da cincia (Hall, 1996), e o Rouxs Archives of Developmental Biology, uma
das mais antigas publicaes da embriologia experimental, mudou o nome para Development, Genes, and Evolution.
Ns estamos em um extraordinrio momento de nosso entendimento da natureza, pois a sntese da gentica do desenvolvimento com a biologia evolucionria
pode transformar nossa apreciao dos mecanismos fundamentais da mudana
evolucionria e diversidade animal. Tal sntese na realidade um retorno a uma
teoria evolucionria mais ampla que se fragmentou na virada do ltimo sculo (Figura 23.27). Nos ltimos anos do sculo 19, a biologia evolucionria continha as cincias que ns chamamos hoje de biologia evolucionria, sistemtica, ecologia, gentica e desenvolvimento. Quando Wilhelm Roux (1894) anunciou a criao da mecnica do desenvolvimento, ele no rompeu totalmente com a biologia evolucionria.
Ao contrrio, ele afirmou que uma mecnica do desenvolvimento ontogentico e
filogentico deve ser aperfeioada. Ele citou que a mecnica do desenvolvimento
dos embries (o ramo ontogentico) iria crescer mais rpido do que os estudos em
filogentica, mas afirmou que em conseqncia das conexes causais ntimas entre
os dois, muitas das concluses surgidas da investigao sobre ontogenia [iriam]
esclarece os processos filogenticos.
Cem anos mais tarde, estamos em um ponto onde podemos nos ater segunda
mecnica do desenvolvimento de Roux e criar uma teoria unificada da evoluo.
915
Figura 23.27
EVOLUO
Roteiro disciplinar do lado evolucionrio da

biologia, desde 1880 at o presente. Para maior
clareza, outras vias (tais como a da gentica
geral gentica humana ou da evoluo
imunologia) no foram mostradas.
Roux, Wilson,
outros
Questo geracional
Mecnica desenvolvimental
Biologia evolucionria
Sistemtica
Ecologia
Anatomia comparada
Morgan
Gentica
Gentica de
populaes
Embriologia experimental
Grupo
do fago
Sntese moderna
NeoDarwinismo
Regenerao
Fertilizao
Imunologia
Biologia celular
Biologia do
desenvolvimento
Gentica molecular
Gentica do
desenvolvimento
Sob Construo
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DESENVOLVIMENTAL
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C-1
ndice de Autores
Abassi, Y A., 149
Abbott, U. K., 705
Abe, K., 446
Abel, E. L., 833
Abel, T., 910
Abramson, S., 375
Acampora, D., 268, 647
Adachi, Y., 453
Adams, C. C., 433, 434
Adams, M., 913
Adamson, S. D., 494
Adeslon, D. C., 173
Adler, F. R., 819
Afzelius, B. A., 124
Agius, L., 800
Ahlberg, P. E., 896
Ahlgren, U., 383
Ahringer, J., 491, 854
Akam, M. E., 571, 573, 574
Akers, R. M., 314, 315
Akitaya, T., 288
Akoulitchev, S., 400
Akutagawa, E., 785
Alberch, J., 744
Alberch, P., 726, 743, 899
Albert, P., 715
Albertini, D. F., 875
Alberts, B. M., 193, 194, 543
Alexandrov, D. A., 902
Alfandari, D., 231
Alini, M., 370
Allen, B. M., 735
Allen, G. E., 36, 37, 38, 596
Alley, K. E., 740
Allsopp, T. E., 529
Almeida, E. A. C., 140
Alvarez, I. S., 259, 260
Alvarez-Buylla, A., 335, 824
Amaya, E., 110, 625
Amikura, R., 534
Amos, L. A., 124
Amrein, H., 793
An, W., 404
Ancel, P., 157
Anderson, C., 366
Anderson, D. J., 291, 292, 293,
656, 657
Anderson, D. T., 889
Anderson, E., 875
Anderson, K. V., 489, 548, 577,
581, 583
Andersson, S., 784
Ang, S.-L., 637

Angerer, L. M., 465, 487
Angerer, R. C., 465, 487
Angier, N., 426
Anstrom, J. A., 214
Antonini, A., 827
Appel, T. A., 616, 646
Ariel, M., 449
Arion, D., 198
Aristotle, 773
Armstrong, J. F., 676
Armstrong, P. B., 85, 86, 203,
204, 785, 786
Arnold, H.-H., 349
Arnold, S. F., 836
Artavanis-Tsakonis, S., 692
Artinger, K. B., 291
Asai, D. J., 124
Ash, P. J., 356
Ashburner, M.,51,52,535,757,759
Ashley, T., 852
Ashworth, A., 450
Atchinson, M. L., 414
Atkinson, J. W., 520
Audet, R. G., 483
Auerbach, R., 367, 379, 849
Austin, C. R., 127, 131, 145, 146
Austin, J., 528, 853
Averof, M., 907
Awgulewitsch, A., 640
Axel, R., 292, 293
Ayabe, T., 147
Ayer, D. E., 418
Azar, Y., 238
Babcock, D. F., 129
Bachmann, M. D., 809
Bachvarova, R. F., 484
Bacon, E. R., 441
Baeuerle, P. A., 414
Bagavandoss, P., 871
Bagnara, J. T., 734
Baier, H., 328
Baird, G., 682
Baker, B., 468
Baker, B. S., 741, 742, 790, 793,
794, 795
Baker, S. M., 852
Baker, T. G., 860
Baker, W. W., 347, 348
Balinsky, B. I., 179, 224, 235,
236, 256
Ballantine, J. E. M., 488

Ballantyne, S., 485
Ballock, R. T., 358
Bally-Cuif, L., 268
Baltimore, D., 413, 414
Baltz, J. M., 136
Baltzer, F., 37, 799
Banerjee, S. D., 685
Banerjee, U., 689
Banerii, J., 402
Banks, M. S., 282
Barclay, A. N., 95
Bard, J. B. L., 672, 678, 681, 683
Bardin, C. W., 874
Bardoni, B., 781
Barfield, R. J., 786
Barinaga, M., 329
Barker, D. D., 556
Barlow, D. P., 155, 444
Barlow, P., 182
Barnes, G. L., 344
Barnes, M. D., 740
Barnes, R. D., 799
Barnett, T., 51
Baroffio, A., 296
Baron, R., 356, 357
Barr, M. L., 446
Barraclough, C. A., 787
Bartolomei, M. S., 444
Barton, S. C., 155
Basler, K., 659, 689, 727, 752
Basson, C. T., 723
Bastiani, M. J., 96, 316
Bate, M., 545
Bateson, W., 570, 898
Baumgartner, S., 559
Bavister, B. D., 154
Baxter, G. T., 808
Baynish, A. G., 290
Beach, D., 199
Beachy, P. A., 575
Beams, H. W., 174, 190
Beato, M., 421
Beck, S. D., 811, 812
Becker, A. J., 375
Becker, H. J., 50
Beckerle, M. C., 104
Bedford, J. M., 154
Beebe, D. C., 672, 673
Beermann, W., 50, 51, 52, 53
Beers, W. H., 873, 875
Beggs. J. D., 466
Begon, M., 733

Begovac, P. C., 315
Behrendsten, O., 106
Behringer, R. R., 268, 310, 268,
407, 440
Bell, L. R., 791, 792
Bell, S. E., 783
Bellairs, R., 189, 234
Bellido, T., 378
Bellus, G. A., 357
Bellusci, S., 687
Belote, J. M., 469, 790, 795
Bement, W. M., 201
Bender, W., 574, 575
Benezra, R., 415
Benirschke, K., 448
Bennett, K. I., 532
Bennett, P. J., 282
Bensen, G. V., 645
Bentley, D., 312
Bentley, J. K., 129
Benzer, S., 91
Berardi, A. C., 375
Berezney, R., 451
Berg, L. K., 214
Berget, S. M., 466
Bergman, K., 13, 15
Bergman, Y., 412, 413
Berkovitz, G. D., 783
Berleth, T., 553
Bern, H. A., 742
Bernard, O., 410
Bernfield, M., 102, 103, 684, 685
Bernstein, R., 781
Berondes, H. D., 51, 757
Berridge, M. J., 111, 147
Berrill, N. J., 592, 737, 890, 899
Berrios, M., 453
Berry, M., 441
Bertram, E. G., 446
Bester, A. J., 491
Bestor, T. H., 443
Bestor, T. M., 153
Beug, H., 25, 95
Bevilacqua, A., 98
Bhanot, P., 566
Bi, G-Q., 130
Bianchi, D. W., 242, 246
Biedler, L., 174
Bienz, M., 572
Bier, K., 868
Bijtel, J. H., 621
IA1 - 1
IA1 - 2
ndice de Autores
Binns, W., 829

Bird, A. P., 444, 450
Birnstiel, M. L., 396
Birren, S. J., 656, 657
Bischoff, R., 350, 416
Bischoff, T. L. W., 36
Bisgrove, B. W, 216
Bishop-Calame, S., 675
Bissell, M. J., 112
Bitgood, A J., 659
Bixby, J. L., 113
Bjrkland, A., 334
Black, J. E., 335, 824
Black, S. D., 225
Blackler, A. W., 152, 537
Blackwell. T. K., 524
Blair, H. C., 356, 357
Blair, S. S., 752
Blandau, R. J., 874
Blattner, F. R., 56
Bleier, R., 787
Bleil, J. D., 135, 136, 137, 138, 143
Blendy, J. A., 859
Blitz, I. L., 620
Blobel, C. P., 140
Blom van Assendelft, G., 438
Bloom, W., 277, 355, 857
Bluemink, J. G., 204
Blumberg, B., 619
Bockman, D. E., 295
Bode, J., 454
Bodmer, R., 904
Bodner, M., 407
Boettiger, D., 347
Bogart, J. P., 149
Boggs, R. T., 469, 793
Boilly, B., 715
Bokor, P., 566
Bolanos, F., 740
Bolker, J. A., 838
Bollenbacher, W. E., 754, 755
Boncinelli, E., 637, 911
Bonder, E. M., 202
Bonhoeffer, F., 328
Bonner, J. T., 22, 23, 28, 891
Bonnet, C., 508
Bookbinder, L. H., 137
Booker, B., 332
Borland, R. M., 185
Born, G., 805, 806
Bornslaeger, E. A., 875, 876
Borovsk, D., 808, 870
Borsani, G., 449
Boucaut, J. C., 82, 230, 231
Bou, A., 827
Boulet, A. M., 403, 575
Bounoure, L., 536, 537, 843, 844
Bouvet, P., 483
Bouwmeester, T., 618, 619
Boveri, T., 36, 37, 55, 140, 142,
531, 532, 551
Bowerman, B., 524, 525, 528
Bowers, W. S., 762
Bownes, M., 869, 870
Bowring, S. A., 888
Bowtell, D. D. L., 689
Boycott, A. E., 177
Boyd, L., 524
Boyse, E. A., 89
Boyse, J., 444
Brack, C., 410
Brackenbury, R., 95
Braden, A. W. H., 146
Bradley, A., 269, 660
Brakefield, P. M., 815, 816, 822
Brandhorst, B. P., 520
Brannon, M., 610
Braude, P., 490
Braun, R. E., 856
Braun, T., 349, 350
Braunstein, M., 436
Breedlove, S. M., 786
Breier, G., 369, 370
Breitweiser, W., 536
Brennen, M. D., 869
Brenner, C. A., 186, 478
Brenner, S., 509, 521, 753
Brent, R., 576
Brian, M. V, 816
Bridges, C. B., 789
Briggs, R., 42, 44, 489
Brighton, C. T., 356
Brill, G., 347
Brinster, R. I., 70, 397
Brinton, C. C. Jr., 12
Briscoe, J., 107
Britten, R. J., 463
Brock, H. W., 572
Brockendorrf, N., 449
Brockes, J. P., 715
Brnmark, C., 820
Bronner-Fraser, M., 104, 284,
286, 288, 289, 291, 292
Brooks, P. C., 112
Brooks, W. K., 807
Browder, L. W., 443
Brower, D. L., 105, 753
Brown, C. J., 448, 449
Brown, D. D., 432, 437, 741,
742, 743, 866
Brown, N. A., 649
Brown, N. L., 688
Brown, P. S., 736
Brownell, J. E., 436
Brownlee, G. G., 418, 466
Bruce, B. S., 794
Bruening, W, 420
Brunelli, S., 647
Brunetti, A., 350
Brunk, B. P., 442
Brusca, G. J., 887
Brusca, R. C., 887
Brush, S., 37
Brust, D. G., 740
Bry, L., 810
Bryant, S. V., 702, 703, 705, 715
Brylski, P., 892
Bchmann, D., 814
Buck, W. R., 147
Buckbinder, L., 742
Buckingham, M. E., 349
Buehr, M., 777
Bull, J. J., 798, 799, 817
Bungert, J., 441
Bunick, D., 400
Buratowski, S., 399, 400
Burch, J. B., 435

Burgart, L. J., 147
Burgess, R., 344
Burian, R., 40
Burke, A. C., 645, 646, 703,
893, 894, 906
Burke, R. D., 217
Burkholder, G. D., 50
Burks, D. J., 138
Burlingame, R. W., 432
Burnett, F. M., 822
Burns, R. K., Jr., 853
Burnside, B., 260
Bursdal, C. A., 244
Burtis, K. C., 471, 794, 855
Busa, W. B., 147
Buss, L. W., 592, 886, 887, 888
Busslinger, M., 442
Butenandt, A., 754
Butler, E. G., 714
Butt, F. H., 195
Byers, B., 199
Byers, T. J., 203, 204
Cafasso, E., 369
Calame, K. L., 414
Calarco-Gillam, P. G., 185
Cales, C., 109
Callan, H. G., 865
Calof, A. L., 319
Calvin, H. I., 154
Campbell, G., 752
Campos-Ortega, J., 220, 692
Canning, D. R., 238, 239
Cao, Z., 582
Capco, D. G., 201, 451
Capecchi, M., 69, 70, 295, 641,
642, 643, 710
Caplan, A. I., 352
Capovilla, M., 563
Cappecchi, M. R., 269
Carey, M., 399
Carlsen, E., 836
Carlson, B. M., 173, 343, 360,
364, 371, 871
Carlson, E. C., 368
Carnahan, J., 12
Carosella, E. D., 248
Carrington, J. L., 705, 713, 714
Carroll, C. R., 489
Carroll, E. J., 142
Carroll, S. B., 312, 564, 585,
815, 905, 908
Carson, D. D., 106, 186
Carver, V., 735
Casanova, J., 557, 569, 575
Casares, F., 569, 572, 575
Cascio, S., 683
Cassens, G., 489
Cassirer, E., 509
Castelli-Gair, J., 573, 574
Caston, J. D., 715
Catala, M., 255, 257, 258, 259,
260, 265, 266
Cate, R. L., 784
Cather, J. N., 518
Cattanach, B. M., 449
Cattanco, E., 656
Causo, J. P., 751

Centerwall, W. R., 448
Cepko, C. L., 274, 275, 276, 281
Chabry, L. M., 509, 510
Chahal, S. S., 450
Chaillet, J. R., 445
Chalfie, M., 310
Chambers, E. L., 146, 149
Chambon, P., 420, 433, 442
Chan, L., 493
Chan, S. S.-Y., 320
Chandler, D. E., 126, 143, 145
Chandler, V. L., 422
Chang, M. C., 131
Chaouat, G., 248
Chapman, A. L., 28
Chapman, D. B., 648
Chapman, V. M., 448
Chappell, M. R., 496
Charit, J., 721
Charnov, E. L., 817
Chasan, R., 581
Chen, C.-M., 346, 354
Chen, C.-Y A., 475
Chen, J.-J., 401, 495, 786
Chen, J.-Y., 888
Chen, Q., 355
Chen, S.-H., 493
Chen, U., 453, 454
Chen, W T., 104
Chen, Y. P., 628
Cheney, C. M., 101
Cheng, H-J., 328
Cheng, L. Y., 217
Cheng, P. F., 626, 628
Cheng, T.-C., 425, 426
Chenn, A., 270
Chernoff, E. A. G., 714
Chernoff, G. F., 262
Chernyak, L., 886
Cherr, G. N., 135, 212, 213, 214
Chevallier, A., 345
Chi, T., 399
Chiang, A., 905
Chiang, C., 263
Child, C. M., 551
Chiquet, M., 104
Chiquoine, A. D., 845
Chisaka, O., 70, 295, 640, 641, 642
Cho, K. W. Y., 619, 620, 628
Cho, W. K., 875
Chong, J. P. J., 200
Christ, B., 345
Christofori, G., 466
Christy, R. J., 417
Chu-LaGraff, Q., 312
Chun, J. J. M., 412
Chun, L. L. Y., 292
Chuong, C. -M., 97, 353, 664
Churchill, F. B., 509
Chymiy, D. B., 799
Ciapa, B., 147
Ciejek, E. M., 451
Ciment, G., 292
Cisek, L. J., 198
Clack, J. A., 895
Clapham, D. E., 147
Clark, B., 902
ndice de Autores
Clark, D. J., 432

Clark, E. A., 688, 797
Clark, M. R.. 873
Clarren, S. K., 833
Clegg, K. B., 181, 488, 490
Clemens, M. J., 495
Clement, A. C., 518, 519
Clermont, Y., 123
Clever, U., 51, 757
Cline, T. W., 791
Coates, M. I., 726
Cockerill, P. N., 453
Coe, W. R., 800
Coffey, D. S., 451
Cohen, A. M., 288
Cohen, B., 750, 751
Cohen, C. S., 809
Cohen, D. R., 779
Cohen, J., 315, 326, 684, 686
Cohen, J. H., 686
Cohen, L. H., 744
Cohen, P. P., 736, 740
Cohen, S. M., 555, 907
Cohen, S. N., 56
Cohlan, S. Q., 829
Colamarino, S. A., 320, 322
Colburn, T., 836
Colello, R. J., 825
Coleman, S., 765
Colin, A. M., 486
Colledge, W H., 876
Collier, J. R., 520
Collignon, J., 648, 649
Collins, F. D., 133
Colman, H., 826
Colwin, A. L., 129, 139
Colwin, L. H., 129, 139
Comai, L., 401
Comings, D. E., 851
Compere, S. J., 442
Conaway, R. C., 400
Condic, M. L., 749, 750
Condie, B. G., 643
Conklin, E. G., 156, 511, 513,
890
Conklin, K. F., 435, 445
Conlon, F. L., 636
Conlon, R. A., 344, 644
Conover, D. O., 817, 818
Constantini, F., 392, 440
Conway Morris, S., 888
Cook, J., 605
Cook, P. R., 452
Cook, S. P., 129
Cooke, J., 225
Cooley, L., 867, 868
Cooper, D. W, 450
Cooper, G. M., 473
Corces, V. G., 454
Corden, J. L., 198
Cormier, F., 379
Cornell, R. A., 612
Corselli, J., 131
Coschigano, K. T., 471, 794
Cossu, G., 346, 349
Cotsarelis, G., 300
Coulombe, J. N., 292
Coulombre, A. J., 283, 666, 667
Coulombre, J. L., 666, 667

Couly, G., 367
Couzinet, B., 874
Covault, J., 95
Cowan, W. M., 740
Coward, P., 781
Cox, E. C., 328
Cox, W. G., 624
Craig, J. A., 283
Craig, M. M., 176, 518
Crampton, H. E., 176
Cran, D. G., 875
Crawford, K., 87, 88, 715
Creech Kraft, J., 829
Crelin E. S., 381
Crenshaw, E. B., 408, 409
Crick, F. H. C., 432, 551
Croce, C. M., 419
Crofton, 836
Cronmiller, C., 791
Crosby, G. M., 702
Cross, N. L., 142
Crossgrove, K., 759
Crossley, M., 418
Crossley, P. H., 268, 468, 658,
704, 705, 707, 708, 711
Crowley, C., 332
Cruz, Y. P., 195, 196, 246
Cserjesi, P., 352, 353
Cui, Y., 610, 611
Cullen, K. E., 409
Culotti, J. G., 320
Cunha, G. R., 683
Cunliffe, V., 612
Currie, J., 740
Cuvier, G., 646, 647
Cvekl, A., 672
Czeizel, A., 263
da Silva, A. M., 25
Dale, L., 606, 607, 609, 611, 612
Dan, J. C., 130
Dan, K., 172, 218
Dan, Y., 331
Daneholt, B., 53, 851
Danielian, P. S., 269
Danielsen, M., 422
Danilchik, M. V., 157, 204, 232,
486, 537, 862, 863
Danilevskii, A. S., 812, 813
Dan-Sohkawa, M., 172
Dareste, C., 509
Darnell, J. E., 394, 453
DArribre, T., 231
Dai, X., 138
Darwin, C., 196, 883, 884, 885,
890, 898
Davenport, R. W., 278
David, J. D., 348
Davids, M., 621
Davidson, E. H., 463, 476, 488,
506, 507, 866
Davidson, N., 54
Davies, A. M., 332
Davies, J. A., 318, 677
Davis, A. P., 710, 727
Davis, B. K., 132
Davis, D. L., 836
Davis, M. M., 412

Davis, R. L., 349, 369
Davis, W. L., 834
Dawid, I. B., 64, 66, 67, 152,
627, 866
Dazy, A.-C., 9
De Beer, G. R., 595, 702, 743
De Jonge, F. H., 787
de la Chappelle, A., 187
de Laat, S. W, 178, 204
de Nooij, J. C., 200
De Robertis, E. D. P., 124
De Robertis, E. M., 607, 614,
615, 616, 619, 620, 702
Dealy, C. N., 722
Dean, A., 440
DeCamilli, P., 308
DeChiara, T. M., 155, 444
Decker, G. L., 130
Degelmann, A., 557
Degnan, B. M., 808
DeHaan, R. L., 363, 365
Dekel, N., 875, 876
del Pino, E. M., 744
DeLanney, L. E., 743
Delarue, M., 231
DeLeon, C. V., 487
Denegre, J. M., 158
Deng, C., 357
Denno, R. F., 813, 814
Dernburg, A. F., 852
Desmond, M. E., 267
Desplan, C., 563
Dessain, S., 569
Desvages, G., 799
Detrick, R. J., 95, 263
Detwiler, S. R., 702
Devreotes, P., 23
Dhadialla, T. S., 870
Diamond, M. I., 423, 424
Diaz-Benjumea, F. J., 752
Diaz-lnfante, A., 873
DiBerardino, M. A., 42, 44, 45
Dickerson, R. E., 494
Dickinson, L. A., 452
Dickinson, M. E., 269
Dierks, P., 396
Dieterlen-Livre, F., 371, 378, 379
Dietrich, M., 913
DiNardo, S., 568, 659
Dixon, G. H., 394
Dixon, K. E., 537, 843, 844
Dobzhansky, T. G., 902, 913
Dodson, S., 819
Doe, C. Q., 307, 311, 312, 530, 576
Dohmen, M. R., 517
Dolci, S., 846
Doll, P., 407, 720
Dong, J., 872
Doniach, T., 623, 624, 626, 627, 854
Donner, P., 418
Donoghue, D. J., 110, 357
Dorris, M., 833
dOrval, B. C., 467
Downie, S. A., 722, 723
Downs, S., 873
Doyle, C., 688
Drescher, U., 328
IA1 - 3
Dressler, G. R., 680

Drewry, G. E., 739
Driesch, H., 202, 594, 595, 596,
597, 600
Driever, W., 219, 220, 405, 552,
553, 555
Driscoll, D. J., 445
Drummond, I. A., 420
Duband, J. L., 240
Dube, F., 152
Dubnau, J., 481, 554
Dubois, R., 849
Dudas, I., 263
Dudley, A. T., 678
Duffy, J. B., 558, 791
Dulhunty, A. F., 97
Dumas, J. B., 122
Dumont, J. N., 41, 862
Dunphy, W. G., 198
Duprez, D. M., 721
Drnberger, H., 765
Duronio, R. J., 200
Durston, A., 27, 625
Dyce, J., 182
Dyke, C., 891
Dym, M., 856, 857
Dynan, W. S., 401
Dynlacht, B. D., 400
Dzierak, E., 379
Early, A., 26
Eberhart, C. G., 858
Echelard, Y., 618
Ecker, R. E., 197
Eddy, E. M., 844
Ede, D. A., 353
Edelman, G. M., 88, 95, 97
Edery, P., 290
Edgar, B. A., 194, 195, 198,
199, 488, 489, 565
Edmonds, D. K., 827
Edmondson, J. C., 273
Edstrom, J. E., 474
Edwards, M., 835
Efstratiadis, A., 396
Eichele, G., 254., 720
Eicher, E. M., 780, 781, 782
Eisen, A., 146
Eisen, A. Z., 736
Eisen, J., 317
Eisenbach, M., 132
Ekblom, P., 679
Elder, J. T., 299
Elgin, S., 435
Elinson, R. P., 142, 146, 156,
157, 159, 226, 607, 744, 900
Ellis, J., 441
Ellis, L. M., 370
Ellis, R. E., 529, 853, 855
Elsholtz, H. P., 406
Emerson, C. E., Jr., 349
Emery, I. F., 758, 759
Endo, Y. G., 138
Engstrom, L., 524
Enver, T., 440
Enzmann, E. V., 875
Epel, D., 126, 133, 139, 142,
146, 150, 151
IA1 - 4
ndice de Autores
Ephrussi, A., 536

Epifano, O., 865
Eppig, J. J., 876
Erdlyi, M., 536
Erickson, C. A., 260, 264, 285,
286, 288, 291
Ericson, J., 308, 309
Ernfors, P., 292
Etemad-Moghadam, B., 524
Etkin, L., 863, 864
Etkin, W., 742
Ettensohn, C. A., 84, 173, 212,
215, 217, 600
Evans, H. M., 369
Evans, M.J., 188
Evans, R., 450
Evans, R. M., 422
Evans, T., 199
Evans, T. C., 481, 491, 528, 529
Eyal-Giladi, H., 189, 233, 234,
238, 239, 636, 848
Faber, M., 596
Fagard, R., 496
Faix, J., 25
Fallon, A. M., 808
Fallon, J. F., 492, 702, 703, 705,
708, 711, 712, 713, 714,
721, 724, 725, 738
Falvo, J. V, 423
Fan, C. M., 346, 629, 659
Farach, M. C., 106
Farel, P. B., 740
Farley, B., 363
Fssler, P. E., 603
Fausto-Sterling, A., 787
Fawcett, D. W., 277, 355, 856, 857
Fawcett, J. W., 331
Featherstone, M. S., 829
Feduccia, A., 913
Feinberg, R. N., 369
Feldman, M., 348
Fell, P., 30
Felsenfeld, G., 432, 439
Ferguson, E. L., 583
Ferguson, M. W. J., 799, 817
Ferguson-Smith, A. C., 445
Ferrand, R., 290
Ferrell, J. E., 202
Ferris, C. D., 147
ffrench-Constant, C., 468, 846
Fidler, I. J., 370
Field, M. C., 267
Fiering, S., 438
Fink, R., 83
Fink, R. D., 212, 213, 214
Finkelstein, R., 555
Firtel, R. A., 28
Fischer, J -L., 510
Fishell, G., 273, 276
Fisher, M., 240
Fisher, S. J., 246
Flach, G., 490
Flaherty, D., 214
Flamme, I., 368, 369
Flavell, R. D., 442
Fleming, T. P., 182, 183, 184
Flickinger, R. A., 862
Fliess, W., 319

Flor, H., Florman, H. M., 130,
135, 136, 138, 144
Foe, V. E., 193, 194, 543, 583
Foerder, C. A., 143
Fol, H., 122
Foltz, K. R., 134, 135, 149
Fong, G.-H., 369
Forehand, C. J., 740
Forlani, S., 580
Forrester, W. C., 453
Forristall, C., 537, 863
Forscher, P., 277, 278
Foster, J. W., 780
Foty, R. A., 87
Foulkes, N., 859
Fox, C. A., 484, 485
Fox, H., 736
Francis, P. H., 719
Francis, R., 855
Francke, C., 474
Franco, B., 319, 828
Frank, D., 444
Franklin, L. E., 130
Frantz, G. D., 275
Fraser, R. A., 705
Fraser, S. E., 96, 291
Freed, C. R., 334
Freeman, C. S., 762
Freeman, G., 178
French, B. A., 415
French, V., 547
Frieden, E., 743, 744, 749
Friedman, J. M., 833
Friet, S. C., 809
Frigerio, G., 553
Frischer, L. E., 570
Fristrom, D., 749, 757
Fristrom, J. W., 748, 757
Frye, B. E., 736
Fu, L., 487
Fuchs, E., 299
Fujimori, T., 95, 263
Fujimoto, S., 411
Fujisawa, H., 172
Fujita, S., 270
Fujiwara, M., 672
Fukada, K., 292
Fukuda, S., 813
Fukumachi, H., 665
Fullilove, S. L., 193
Fulton, B. P., 146
Fulton, C., 10, 12
Funayama, N., 609
Funk, C., 204
Furuichi, T., 147
Gabrielli, B., 864
Gachelin, G., 375
Gagnon, M. L., 465
Galau, G., 477
Gale, E., 899
Galen, C., 773, 774
Galileo, D. S., 214
Galindo, R. L., 581
Gall, J. G., 63 , Gallatin, W. M., 849
Gallera, J., 257
Gaan, Y., 725
Gans, C., 894, 912

Garabedian, M. J., 404
Garbers, D. L., 129, 153
Garcia, E., 9
Garcia, J. E., 873
Garcia-Bellido, A., 751
Garcia-Fernndez, J., 905, 906
Garcia-Martinez, V., 362
Garcia-Ramirez, M., 436
Gardiner, D. M., 146, 703, 715
Gardiner, R. C., 186
Gardiner, S. L., 890
Gardner, R. L., 70, 847
Garrard, W. T., 453
Garstang, W., 890, 912
Gartler, S. M., 448
Gash, D. M., 334
Gasman, D., 884
Gasseling, M. T., 717
Gasser, S. M., 452
Gaul, U., 562, 563
Gaunt, S. J., 645, 906
Gautier, C., 198
Gautier, J., 199
Gavis, E. R., 480, 556
Gawantka, V., 614
Gebauer, F., 485
Gedamu, L., 394
Geddes, P., 774
Geduspan, J. S., 704
Gehring, A. J., 557, 572
Gehring, W. J., 419, 565, 573,
903, 904
Geigy, R., 532, 738
Geis, I., 494
Geissler, W. M., 783
Geitz, H., 831
Gelbart, W. M., 585
Gellert, M., 412
Gendron-Maguire, M., 642
Geoffroy Saint-Hilaire, E., 509,
616, 635, 646, 647
George-Weinstein, M., 350, 416
Gergen, J. P., 791
Gerhart, J. C., 157, 158, 159,
197, 225, 226, 227, 606,
607, 613, 620, 862, 863
Gerisch, G., 24, 95
Gershon, M. D., 307
Geyer, P. K., 454
Ghosh, S., 414
Gibbs, J. B., 109
Gibson-Brown, J. J., 722
Giese, K., 779
Gilbert, L. I., 754
Gilbert, S. F., 32, 37, 38, 40,
488, 490, 596, 613, 616,
624, 821, 891, 909, 913
Gilbert, S. G., 243, 248
Gilbert-Barness, E., 358
Giles, R. E., 152
Gilkey, J. C., 145
Gillies, S. D., 402
Gilula, N. B., 98, 875
Gimeno, S., 836
Gimlich, R. L., 226, 227, 605,
607, 609
Ginder, G. D., 445

Ginsburg, M., 844, 848
Ginzburg, A. S., 146
Girasole, G., 378
Giroud, A., 829
Gish, D. T., 895
Gittes, G., 383
Giudice, A., 172
Giudice, G., 84
Glabe, C. G., 132, 133, 134, 135,
140, 143, 901
Glaser, T., 282
Glazer, L., 687
Glover, D. M., 202
Gluecksohn-Schoenheimer, S.,
39, 637, 677
Goddard, J. M., 295
Godement, P., 326
Godin, L, 846
Godlin, I. E., 379
Goebl, M., 199
Goethe, W., 892
Goetinck, P., 355, 705, 713
Goins, T. L., 291
Golden, J. A., 262
Goldey, 836
Goldfine, I. D., 350
Goldman, P. S., 276
Goldschmidt, R. B., 38, 913, 914
Goldstein, B., 522, 527
Goldstein, R. S., 288
Goldwasser, E., 375
Gona, A. G., 742
Gnczy, P., 858
Gong, Q., 440
Gong, X., 137
Gont, L. K., 255, 265, 613
Gonzlez-Crespo, S., 582
Gonzlez-Martinez, M. T., 130
Gonzlez-Reyes, A, 554, 572, 869
Gooday, D., 288
Goodenough, U. W., 13, 15
Goodman, C. S., 307, 311, 312,
315, 316, 322, 325
Goodman, W., 754
Goodrich, E. S., 906
Goodwin, E. B., 491
Goralski, T. J., 793
Gordon, R., 256
Gordon, M. Y., 377
Gorski, R. A., 787
Goss, R. J., 714
Gossler, A., 70
Gotthard, K., 814
Gottlieb, D. I., 328
Gottlieb, G., 334, 913
Gouillex F., 767
Gould, K., 198
Gould, M., 142, 146
Gould, S. J., 276, 350, 743, 884,
887, 894, 899
Goulding, E. H., 644, 647, 829, 830
Gould-Somero, M., 142
Goustin, A. S., 490, 658
Govind, S., 583
Grace, M., 496
Gradziadi, P. P. C., 319
Graf, J., 105
ndice de Autores
Graff, J. M., 612, 614

Graham, A., 295
Graham, C. E., 847
Graham, C. F., 185
Graham, P. L., 855
Grainger, R. M., 628, 656, 668,
669, 670, 671
Granato, M., 189
Granger, N. A., 754
Grant, P., 862, 890
Grper, L., 363
Grbic, M., 195, 196
Green, G. R., 153, 859
Green, S., 420, 422
Greene, E., 814
Greenough, W. T., 824
Greenspan, R. J., 692
Greenwald, G., 90, 281
Greenwald, I., 692, 693
Gregg, N. M., 835
Gregory, W. A., 273
Grey, R. D., 146
Gribble, T. J., 494
Grieshammer, W., 724
Grimm, S., 752
Grindley, J. C., 903
Grobstein, C., 675, 676, 684, 686
Grobstein, P., 739, 740
Gromova, I. I., 452
Gronemeyer, H., 758
Groner, B., 107, 108, 767
Gross, J., 28, 736
Gross, K. W., 482
Gross, M., 496
Gross, P. R., 152, 479
Grossbach, U., 52
Grosschedl, R., 396
Grossniklaus, U., 555
Grosveld, F., 396, 438, 440
Groudine, M., 433, 434, 435,
442, 445
Gruenbaum, Y., 443
Grumbach, M. M., 358
Grumet, M., 319
Grunwald, D. J., 636
Gruss, P., 640, 644
Gubbay, J., 779
Guerrier, P., 178, 520
Guger, K. A., 609
Guild, G. M., 60, 476
Guillen, I., 751
Guillery, R. W., 825
Guillette, L. J., 836
Gulyas, B. J., 181
Gumbiner, B. M., 94, 609
Gumpel-Pinot, M., 665
Gundersen, G. G., 140
Gundersen, R. W., 314, 315
Guo, B., 452
Guo, L., 299
Guo, S., 524
Guo, W., 467
Gurdon, J. B., 43, 44, 196,
658, 866
Gustafson, T., 172, 210, 212,
Guthrie, S., 267, 293
Gutzeit, H. O., 868
Gutzke, W. H. N., 799
Guyette, W. A., 476

Gwatkin, R. B. L., 131
Gyllensten, U., 152
Haas, H., 238
Haber, D. A., 420
Hacker, A., 779
Hadfield, M. G., 807
Hadler, N. M., 102
Haeckel, E., 805, 884
Hafen, E., 563, 683, 689
Hafner, M., 145
Hagedorn, H. H., 808, 809, 870
Hahn, H., 661
Hahnel, A. C, 844
Hakamori, S., 103
Hake, L.E., 485
Halder, G., 282, 903, 904
Halevy, O., 350, 351
Halfter, W., 328
Hall, B. K., 351, 353, 735, 892,
894, 912, 914
Hall, C. G., 149
Hall, H. G., 216, 137
Hall, Z. W., 330
Hallet, M. M., 290
Halprin, K. M., 299
Hamaguchi, M. S., 146, 153
Hamburger, V., 39, 325, 603,
716, 913
Hamburgh, M., 666
Hamelin, M., 320
Hamer, D. H., 788
Hmmerling, J., 8, 9
Hammond, C. B., 783
Hamp, A., 897
Hanes, S. D., 576
Hanken, J., 735
Hanscombe, O., 441
Hansen, C. S., 627
Hansen, L. G., 836
Hansen, R. A., 808
Hanson, I. M., 903
Haqq, C. M., 779, 780, 784
Hara, K., 173, 197
Harary, I., 363
Haraway, D. J., 596
Hardie, J., 811
Hardin, J. D., 201, 217, 218,
228, 229
Harding, K. W., 561, 563, 564,
571, 572
Hardman, P., 686
Hardvin-Lepers, A., 859
Hardy, D. M., 129
Hardy, M. H., 300
Harford, J. B., 492
Harkey, M. A., 215
Harland, R. M., 197, 616, 617, 624
Harper, S., 332
Harrelson, A. L., 96, 316
Harrington, A., 596
Harris, G. W., 787
Harris, H., 9, 494
Harris, W. A., 325, 331, 605
Harrison, R. G., 38, 39, 277,
312, 313, 505, 666, 702,
703, 706
Hart, A. C., 690

Hart, M. W., 821
Hartenstein, V., 692
Hartfelder, K., 816
Hartmann, G., 240
Hartmann, M., 17
Hartsoeker, N., 122
Harvell, C. D., 819
Harwood, A. J., 27, 28
Harwood, J., 40
Hasegawa, K., 813
Hashimoto, C., 579, 581
Hashimoto, N., 876
Hstbacka, J., 357
Hasty, P., 350
Hatini, V., 681
Hatta, K, 94, 344
Hatten, M. E., 273
Hattersley, G., 378
Hattori, M., 354
Hauschka, S. D., 334, 350
Hausen, P., 610
Hawley, D. K., 399
Hawley, S. H. B., 614, 616, 617
Hay, B., 535
Hay, E. D., 374, 672, 673
Hayashi, K., 703
Haynes, S. R., 858
He, X., 609
Heasman, J. M., 94, 95, 103,
174, 175, 609, 844
Heath, J. K., 845
Hebbes, T. R., 436
Heberlein, U., 688
Hebert, J., 658
Hecht, N. B., 858
Hecht, P. M., 581
Hedgecock, E. M., 320
Heemskerk, J., 566, 568, 659
Hegner, R. W, 532
Heinecke, J. W, 150
Heins, S. W., 817, 818
Heitzler, P., 692
Held, L. I. Jr., 751, 753
Helde, K. A., 191
Helms, J. A., 720, 721
Hemesath, T. J., 290
Hemler, M. F., 104
Hemmati-Brivanlou, A., 614,
617, 624
Henderson, C. E., 332
Henderson, S., 529
Hendrickson, A., 282
Hengartner, M. O., 529
Henkel, T., 414
Hennen, S., 45
Henry, E. W., 278
Henry, J. J., 520, 600, 628, 669,
670, 671, 886, 901
Hensen, V., 277
Hentze, M. W, 486
Hepburn, H. R., 747
Herbst, C., 214, 805
Herbst, R., 689
Herman, R., 452
Herr, W, 406
Herrmann, B. G., 637
Hershey, J. W B., 472, 473
IA1 - 5
Hertwig, O., 36, 122, 153, 596,

702, 805
Heuser, J., 145
Higgins, S. J., 778
Higuchi, M., 493
Hilfer, S. R., 280, 683
Hill, D. P., 522, 524, 859
Hill, R. J., 690
Hill, R. S., 865
Hille, M. B., 486
Hilleman, B., 836
Hillman, N., 185
Hinchliffe, J. R., 702, 717, 726
Hinegardner, R. T., 196, 745
Hiom, K., 412
Hiramoto, Y., 146, 153
Hirata, J., 530
Hird, S. N., 522
Hiroyoshi, T., 853
Hirsh, D., 521, 854
Hirth, F., 647
His, W., 36, 277
Hitt, A. L., 105
Ho, S. Y., 366
Ho, R. K., 220
Hoch, M., 563
Hockenbery, D. M., 529
Hodges, P. E., 466
Hodgkin, J., 795, 796, 854
Hodgson, S., 903
Hoey, T., 401
Hoffmann, R. J., 815
Hoffner, N., 42
Hofmann, A., 901
Hogan, B. L. M., 58, 612, 645,
703, 903
Hogg, N. A. S., 763
Hogness, D. S., 571, 576
Hohn, A., 332
Holder, N., 898
Holland, N. D. et al., 911
Holland, P. W. H., 58, 905, 906
Holley S. A., 310, 614, 616, 909
Holliday, R., 443
Hollinger, T. G., 146
Hollyday, M., 309, 323, 325
Holmes, L. B., 835
Holowacz, T., 226
Holt, A. B., 276
Holt, J. T., 475
Holter, H., 416
Holtfreter, J., 80, 82, 83, 92, 94,
223, 227
Holtzer, H., 350, 416, 655
Hong, C. C., 579, 581
Hong, K., 140
Honig, L. S., 717, 718
Hoppe, P. E., 692
Hoppler, S., 609
Hopson, J. A., 895
Horder, T., 39
Horowitz, D. S., 467
Horowitz, M. C., 774
Hrstadius, S., 171, 172, 211,
594, 597, 598, 599
Horton, W. A., 352, 354
Horvitz, H. R., 521, 529, 691
Horwitz, A., 104, 105
IA1 - 6
ndice de Autores
Hoskins, E. R., 735

Hoskins, M. M., 735
Hoskins, S. G., 739, 740
Hosoda, K., 290
Hotchkiss, R. D., 442
Hough-Evans, B. R., 477
Houliston, E., 157
Howard, K. R., 850
Hoyle, H. D., 858
Hozumi, N., 410, 411, 412
Hu, S., 788
Huarte, J., 484, 485, 873
Hubel, D. H., 335, 824, 825
Huettner, A. F., 262
Hughes, R. A., 332
Hui, C.-C., 724
Hlskamp, M., 556
Hummel, K. P., 648
Humphrey, R. R., 853
Humphreys, T., 152, 173, 462
Humphreys, W. J., 173
Humphries, R. K., 375
Hunt, P., 356, 377, 638, 640
Hunter, C. P., 796
Hunter, R. H. F., 132
Hunter, T., 426
Hurle, J. M., 708
Hutchinson, N., 451, 452
Hutter, H., 528, 529
Huxley, J. S., 595, 702, 743
Hyatt, G. A., 672, 673
Hylander, B. L., 130, 143
Hyman, L. E., 483
Hynes, R. O., 325, 326, 468
Ibez, C. F., 333
Iguchi-Ariga, S. M. M., 444
Igusa, Y., 146
lhle, J. N., 107
Ikenishi, K., 537
Imbalzano, A. N., 436
Immergluck, K., 573
Imperato-McGinley, J., 783, 784
Infante, A., 482
Ingersoll, E. P., 173
Ingham, P. W., 114, 566, 572, 727
Ingram, V. M., 443
Inoue, H., 853
lnou, S., 171
Inuzuka, H., 325
Ip, Y. T., 584, 585
Irish, V. F., 556, 585
Irvine, K. D., 753
Irvine, R. F., 147
Irving, C., 289
Isaacs, H. V., 626
Isacson, O., 334
Ishii, N., 320
Ishizaki, H., 755
Iten, L. E., 705, 709
Iverson, L. E., 467
Iwao, Y., 142
Izpisa-Belmonte, J.-C., 637,
705, 711, 720
Jckle, H., 557, 561, 562, 563
Jacklin, D., 787
Jackson, D., 370
Jackson, D. A., 452

Jackson, J., 132
Jacob, F., 48
Jacobs, D., 640
Jacobs, P. A., 154
Jacobson, A. G., 193, 256, 258,
259, 363, 668, 687
Jacobson, M., 270, 271, 285,
327, 605
Jacq, X., 401
Jaffe, L. A., 142, 143, 146, 147,
151, 806
Jaffe, L. F., 146, 149
Jaffe, S. M., 753
Jaglarz, M. K., 850
James, J. F., 829
Jamrich, J., 67
Jansen, H. T., 836
Janzen, F. J., 817
Jarriault, S., 416
Javois, L. C., 705
Jeannotte, L., 643
Jefferies, R. P. S., 890
Jeffery, W. R., 514
Jelalian, K., 448
Jen, Y., 415
Jenkins, N. A., 482
Jenuwein, T., 453
Jephcott, 239
Jeppesen, P., 436, 450
Jermyn, K. A., 21, 26, 27
Jernvall, J., 660, 682
Jessell, T., 625
Jessus, C., 199
Jesuthasan, S., 220
Jeyasuria, P, 799
Jiang, J., 583, 584, 751
Jilka, R. L., 356, 378
Joanen, T., 799, 817
Johannsen, O. A., 195
Johnson, E. M., 835
Johnson, H. H., 313
Johnson, M. H., 184, 186
Johnson, R. L., 23, 346, 629,
659, 661
Johnston, M. C., 295, 830
Jones, A. R., 855
Jones, C. M., 612, 658
Jones, K. L., 833
Jones, K. R., 292, 332
Jones, M. L., 890
Jones, N., 415
Jones, P. H., 298
Jones, R., 138
Jongen, W. M. F., 98
Jongens, T. A., 534, 535, 536
Jonnson, J., 346, 383
Jordan, T., 282
Joseph, J., 849
Josso, N., 785
Jost, A., 775
Jost, J. P., 444
Joubert, Y., 786
Joyner, A. L., 724
Judson, H. F., 48
Jukes, T., 592
Jurand, A., 244
Jrgens, G., 555
Jursnich, V. A., 479, 794

Jurskov, V., 375
Just, E. E., 38, 39, 80, 141,
142, 577
Kabat, D., 496
Kadokawa, Y., 93, 106
Kadonaga, J. T., 399, 401
Kaestner, K. H., 417
Kafri, T., 445
Kahn, A. J., 356
Kahn, C. R., 291
Kalcheim, C. R., 292
Kalderon, D., 869
Kalimi, G. H., 97
Kalt, M. R., 174
Kaltenbach, J. C., 736
Kalthoff, K., 547, 552
Kamen, R., 475
Kammerman, S., 872
Kanamori, A., 741
Kandel, E. R., 786, 787
Kandler-Singer, I., 547
Kane, D. A., 190, 218
Kapfhammer, J. P., 318
Kaplan, S. L., 358
Kaptein, R., 421
Karavanova, I. D., 681
Karch, F., 574
Karfunkel, P., 260
Karibian, D., 494
Karim, F. D., 761
Karin, M., 407, 421, 426
Karlson, P., 754
Karlsson, S., 438
Karlstrom, R. O., 328
Karp, G. C., 214, 215, 737
Karpen, G. H., 852
Karr, T. L., 193, 194, 565,
858, 859
Karsch-Mizrachi, I., 858
Karsenti, E., 197
Kastern, W. H., 486
Kater, S. B., 333
Kato, Y., 186
Katz, W. S., 690, 691
Kauffman, S. A., 888, 911
Kaufman, M. H., 155, 188
Kaufman, T. C., 178, 552, 569,
570, 571
Kaushal, S., 351
Kawahara, A., 741
Kawakami, A., 755
Kay, G. F., 449
Kay, R. R., 24, 26
Kazazian, H. H., 396
Kaznowski, C. E., 274, 275
Keiding, N., 836
Keino-Masu, K., 320
Keith, D. H., 450
Kelce, W. R., 836
Keller, E. F., 22, 40
Keller, G., 375
Keller, R. E., 210, 222, 223,
228, 229, 230, 231, 232,
257, 288, 613, 627
Keller, S. H., 130
Keller, W., 466
Kelley, R. I., 263

Kellum, R., 454
Kelly, K., 418
Kelly, S. J., 185
Kelso-Winemiller, L., 486
Kemp, T. S., 896
Kemphues, K. J., 523, 524
Kennedy, C., 825
Kennedy, T. E., 320, 321
Kent, J., 780
Kenyon, C., 691
Kerr, L. D., 414
Kerrebrock, A. W., 852
Keshet, I., 444
Kessel, M., 640, 641, 644, 645
Kessel, R. G., 174, 190
Kessler, D. S., 611
Keyes, L. N., 791, 792
Keynes, R., 267, 318, 638
Kezer, J., 852, Khaner, O., 238,
239, 600, 605, 636
Kidd, S., 581, 692
Kieny, M., 705
Kiledjian, M., 475
Kim, J., 751, 753
Kim, S. K., 691
Kimble, J., 491, 521, 528, 796,
797, 853, 854, 855
Kimelman, D., 195, 492, 609,
610, 612, 616
Kim-Ha, J., 480, 536, 869
Kimmel, C. B., 189, 190, 191,
218, 219, 220, 221, 317
Kimmelman B. A., 38
King, H. D., 668
King, M. C., 914
King, M. L., 537, 612
King, T. J., 42, 43, 44
Kinoshita, T., 738
Kinter, C. R., 715
Kintner, C., 95
Kirby, C. M., 523
Kirby, M. L., 285, 294, 295, 297
Kirk, D. L., 16, 17, 18, 19, 21
Kirk, M. M., 21
Kirschner, M. W., 168, 194,
196, 197, 198, 200, 225,
488, 492
Kispert, A., 677
Kistler, A., 735
Kitazawa, T., 813
Klag, J. J., 158
Klausner, R. D., 492
Kleene, K. C., 462
Klein, C., 25
Klijn, I. G. M., 765
Kline, D., 146, 147, 150
Klingler, M., 557
Kloc, M., 843, 863, 864
Klock, G., 422
Kloppstech, K., 9
Klose, M., 312
Klug, A., 124
Knecht, D. A., 24, 25
Knipple, D. C., 563
Knoblich, J. A., 200, 530
Knoll, J. H. M., 445
Knowland, J., 451
ndice de Autores
Knudsen, K., 104, 348

Kobayashi, S., 534
Kobayashi, T., 331
Koch, P. B., 814
Kochav, S. M., 238
Kochert, G., 19
Kochhar, D. M., 829
Koelle, M. R., 761
Koga, M., 691
Khler, G., 90
Koleske, A. J., 400
Kollar, E. J., 682
Kollros, J. J., 739
Kolodkin, A. L., 318, 321, 323
Kolodziej, P. A., 320
Klreuter, J. G., 508
Komuro, H., 273
Konigsberg, I. R., 347, 416
Konijn, T. M., 22
Konishi, M., 785
Kntges, G., 896
Koopman, P., 779
Koos, R. D., 873
Kopan, R., 416
Kopf, G. S., 129
Kornberg, R. D., 431
Kornberg, T., 488, 489, 565
Korsching, S., 332
Koseki, C., 677
Kosman, D., 584, 585
Koster, K., 627
Kotch, L. E., 834
Kowalevsky, A., 884
Koyoma, E., 682
Kozak, M., 472, 473
Krabbenhoft, K. M., 708
Krainer, A. R., 466, 467
Krantz, S. B., 375
Kratochwil, K., 682, 763, 764, 765
Kratzer, P. G., 448
Kraut, R., 563
Kreidberg, J. A., 420, 676
Krieg, P. A., 467
Krull, C. E., 289
Krumlauf, R., 637, 638, 639,
640, 645
Krutch, J. W., 20
Ku, M., 660
Kubai, L., 379
Kubota, Y., 368
Kuehn, M. R., 637, 648
Kukalova-Peck, J., 907, 908
Kulikauskas, V., 828
Kumar, V., 421
Kunkle, M., 153
Kuratani, S. C., 297
Kurihara, N., 378
Kuroda, M. I., 446
Kurz, E. M., 786
Kuwabara, P. E., 796, 797
Kuwana, T., 848, 849
Kuznicki, K., 532
Kvist, U., 154
Kwon, H., 436
Kwon, Y. K., 858
LaBarbera, M., 367
LaBonne, C., 612
Lacy, E., 186

LaDue, R. A., 833
Laemmli, U. K., 452
Lahav, R., 290, 293
Lamb, T. M., 617, 624
Lambert, B., 53
Lammer, E. J., 829
Lamoureux, P., 278
Lance-Jones, C., 309, 310, 325
Lande, R., 713
Lander, A. D., 95, 325, 326
Landis, S. C., 292
Landmesser, L. T., 96, 309, 310,
315, 323, 325
Landschulz, W. H., 416
Landstrom, U., 222
Lane, M. C., 214, 216
Lane, M. D., 417, 418
Lane, M. E., 200, 869
Langeland, J., 189, 191, 219,
220, 221
Langille, R. M., 894, 912
Langlais, J., 132, 187, 345, 352,
365, 367, 368, 383, 384,
776, 783, 845
Lappi, D. A., 658
Larabell, C. A., 609
Larsen, W. J., 243, 244, 245,
272, 296, 272, 296, 365,
366, 382, 876
Larson, A., 898
Lasco, P, 869
Lash, J. W, 101, 103, 241, 362,
363, 832
Laskey, R. A., 196, 197, 861
Lasko, P. F., 535
Lassar, A. B., 349, 415
Latham, K. E., 490
Lau, P. P., 493
Laufer, E., 705, 706, 713, 719,
720, 721
Law, R. D., 190., 317
Lawn, R. M., 393
Lawrence, P. A., 560, 751
Lawson, K. A., 244, 245, 683
Laybourn, P. J., 399
Lazarides, E., 103, 105
Le Douarin, N. M., 241, 258,
259, 260, 266, 284, 285,
286, 291, 292, 297, 345, 677
Le Livre, C. S., 285
Le Mouellic, H., 642, 643, 649
Leblond, C. P., 123
Lechleiter, J. D., 147
Ledbetter, J. A., 688
Leder, P., 419
Lederman, M., 38
Lee, C.-H., 94
Lee, D. K., 399
Lee, D. Y., 436, 437, 450
Lee, H. Y., 260
Lee, J. E., 308
Lee, M. S., 198, 199
Lee, R. C., 491
Lee, R. K., 191
Lee, S., 98
Lee, Y-H., 902
Lees, A. D., 811
Leevers, S. J., 109

Legouis, R., 319
Lehmann, R., 480, 535, 536,
556, 692
Lehming, N., 585
Lehtonen, E., 679
Leibniz, 898
Lemaire, P., 610
Lemaire, W. J., 873
Lemaitre, B., 582
Lemischka, I. R., 375
Lemmon, V., 96
Lemoine, E. M., 833
Lenardo, M. J., 414
Lengyel, J. A., 489
Lennarz, W. J., 130, 133, 134
Lenoir, T., 509
Lenz, W., 830
Leonard, C. M., 102
Lepage, T., 173
Leptin, M., 105, 583
Letourneau, P. C., 270, 315
Leutert, T. R., 800
LeVay, S., 787, 788
Levi-Montalcini, R., 332
Levin, D., 495
Levin, M., 648, 649, 650, 659
Levine, A. E., 130
Levine, M., 561, 563, 564, 565,
572, 582, 583, 584
Levine, S., 787
Levy, J. B., 184
Lewin, B., 432
Lewis, E. B., 58, 569, 570,
574, 907
Lewis, J. H., 708, 709
Lewis, W., 667
Lewontin, R. C., 899
Leyton, L., 132, 138
Li, E., 446
Li, L., 416
Li, Q. Y., 723
Li, S., 407
Li, Y., 357
Li. W., 112
Liang, L., 480
Lichtman, J. W., 325, 331, 826
Lieberfarb, M. F., 480
Liem, K., 264
Liesi, P., 315
Lilien, J., 314
Lillie F. R., 38, 39, 178, 201,
876, 885
Lin, F.-T., 417, 418
Lin, H., 867
Lin, L.-F. H., 332
Lin, R., 527
Lin, Y.-S., 399
Linask, K. K., 237, 362, 363, 365
Linask, K. L., 103
Lindsay, R. M., 332
Lindvall, O., 334
Linney, E., 829
Lira, A. A., 74, 75
Liscia, D. S., 766
Liskay, R. M., 450
Little, G., 736
Liu, C. K., 592
IA1 - 7
Liu, J.-K., 112

Livne, I., 319
Lo, C., 97, 98
Lodish, H. F., 496
Loeffler, M., 374
Lfberg, J., 288, 289
Logan, C., 331
Lohnes, D., 906
London, I. M., 494, 495, 496
Longo, F. J., 139, 142, 146, 152,
153, 873
Loomis, C. A., 727
Loomis, W. F., 24, 26
Lopez, L. C., 132, 137
Lpez-Martnez, A., 711, 718, 719
Lopo, A. C., 486
Lorca, T., 864
Loring, J. F., 286
Lough, J., 363
Lovejoy, A. O., 898
Lovtrup, S., 222
Lowe, L. A., 648
Lu, H., 400
Lucchesi, J. C., 446
Luckett, W. P., 242
Ludrus, L. A., 452
Lufkin, T., 642
Lumsden, A., 267, 292, 293,
638, 682, 896
Luna, E. J., 105
Lund, R. D., 334
Lundelius, J. W, 178
Lundmark, C., 221, 222
Luo, G., 679
Luo, X., 780, 781
Luo, Y., 322
Lustig, K. D., 617
Luttmer, S., 146
Lutz, B., 169
Lyman, D. F., 741
Lynch, M. H., 355, 356
Lynn, W. G., 745
Lyon, M. F., 447
Lyons, G. E., 349, 350
Ma, C., 688
Maas, R., 682
MacArthur, C. A., 468
MacCabe, J. A., 721
Macdonald, P. M., 550, 557, 869
MacDougall, C., 468, 471
MacGregor, H. C., 865
Mackenzie, J. L., 319
Mackie, E. J., 682
MacMurray, A., 637
Maden, M., 645, 703, 715
Maderson, P. F. A., 893
Madhavan, M. M., 748
Madine, M. A., 200
Maeda, Y., 27
Maeno, M., 612
Maheswaran, S., 424
Mahmood, R., 711
Mahowald, A. P., 533, 534, 543
Maisonpierre, P. C., 332
Malacinski, G. M., 221, 222, 489
Maldonado, E., 399
Malicki, J., 640, 905
IA1 - 8
ndice de Autores
Malinda, K. M., 215

Malocinski, G., 743
Manak, J. R., 904
Mancilla, A., 284
Mandel, J. L., 442
Manes, M. E., 156, 159
Mange, A. P., 560
Mange, E. J., 560
Mango, S. E., 528
Mangold, H., 603, 604, 605
Mangold, O., 621, 622
Maniatis, T., 396, 423, 465,
469, 471, 794
Manley, N. R., 641
Mann, I., 280, 281
Mann, R. S., 571, 576
Manning, J. E., 446
Manolagas, S., 356
Mansour, S., 780
Mantovani, R., 396
Marcey, D., 869
Marchase, R. B., 328
Marcus, N. H., 594
Mardon, G., 903
Margulis, L., 887
Marigo, V., 727
Mariman, E. C. M., 452
Marin, F., 268
Mark, M., 906, 907
Mark, W. H., 186
Markert, C. L., 187, 188, 197
Markussen, F.-H., 536
Markwald, R. R., 363
Marshall, E., 788
Marshall, H., 645
Martin, C., 378
Martin, D. I. K., 440, 441
Martin, F. D., 739
Martin, G. R., 188, 468, 705
Martin, J. R., 558
Martin, P. T., 331
Martindale, M. Q., 520
Martinet, M., 829
Martinez, E., 422
Martinez-Arias, A., 545, 559,
560, 572
Martins-Green, M., 112
Maruyama, Y. K., 597
Marx, J., 775
Massagu, J., 102
Masui, Y, 197, 864
Mather, E. L., 413
Mathison, P. M., 741
Matrisian, L. M., 106, 107
Matsui, Y., 846, 847
Matsukuma, S., 27
Matsunaga, M., 325
Matsunami, H., 94, 276
Matsuo, I., 647
Matsuoka, M., 412
Matsuzawa, M., 315
Mattei, M. G., 449
Matteoli, M., 308
Matthes, D. J., 322
Maurice, J., 874
Mavilio, F., 442, 443
Mayeda, A., 466
Mayer, T. C., 285
Mayor, R., 284

Mayr, E., 902, 913
Mayr, W. R., 187
Mazia, D., 139, 477
McArthur, M., 437
McBride, W. G., 830, 831, 832
McCarver-May, D. G., 837
McClay, D. R., 83, 84, 212, 213,
214, 215, 218, 600
McClendon, J. F., 596
McClung, C. E., 774
McCollum, S. A., 819
McConnell, S. K., 270, 274, 275
McCormick, F., 109
McCredie, J., 831
McCulloch, E. A., 374
McCulloh, D. H., 149
McCutcheon, F. H., 735
McDevitt, M. A., 466
McDonald, S. A., 27
McEwen, B. S., 786, 787
McFall-Ngai, M. J., 808, 809
McFarlane, S., 327
McGhee, J. D., 445, 526
McGinnis, N., 640
McGinnis, W., 58, 59, 637, 639
McGrath, J., 45, 46., 155
McGrew, L., 485, 626
McIntyre, B. S., 765
McKay, R., 317, 656
McKeon, J., 572
McKeown, M., 793
McKeown, T., 827
McKinnell, R. G., 43, 44
McKnight, S., 396
McLaren, A., 853
McMahon, A. P., 269, 609, 659,
660, 661, 722, 782
McPherson, S. M., 146, 147
Mead, K. S., 151
Mead, P. E., 614
Medvinsky, A. L., 379
Mee, J. D., 27
Mehregan, A. H. H., 300
Meier, S., 344, 672
Meijlink, F., 475
Meinhardt, H., 705, 751
Meizel, S., 131
Mello, G. C., 525, 526, 528
Melton, D. A., 479, 611, 617,
619, 658, 660, 863
Mencken, H. L., 378
Mencl, E., 668
Mendel, G., 35, 774
Menke, D. B., 858
Menko, A. S., 347
Meno, C., 648
Mercer, E. H., 172
Merimee, T. J., 355
Mermod, J. J., 482
Mescher, A. L., 715
Messersmith, E. K., 322, 323
Messing, J., 56
Metchnikoff, E., 884, 886, 913
Metz, C. B., 129
Metz, E. C., 901, 902
Meyer, W. J., 783
Meyer-Franke, A., 333
Miake-Lye, R., 198

Miesfeld, R., 420
Migeon, B. R., 445, 448, 450
Millauer, B., 369
Miller, B. A., 897
Miller, D. J., 137, 144
Miller, J. R., 215
Miller, L., 741
Miller, L. M., 796
Miller, O. L., Jr., 8, 866
Miller, R. L., 128, 129
Miller, S. A., 359
Miller, S. J., 300
Miller, T. E., 452
Milos, P. M., 418
Milstein, C., 90
Mina, M., 682
Minganti, A., 511, 514
Minishull, J., 864, 865, 199, 200
Mintz, B., 188, 347, 348, 845,
847, 848
Mitchell, A. W., 740
Miyake, T., 353
Miyazaki, S.-I., 146, 147
Mizuno, T., 683, 684
Mizzen, C. A., 437
Mlodzik, M., 557, 689
Moens, P. B., 851
Moffett, M. W., 816
Mohandas, T., 448, 450
Mohanty-Hejmadi, P., 703, 704
Mohler, J., 566
Mohri, T., 147, 150
Moller, C. C., 138, 144
Molven, A., 703
Monaghan, P., 647
Monk, M., 445, 449
Monod, J., 47, 48
Monroy, A., 85
Montagna, W., 298, 300
Montagu, M. F. A., 276
Montell, D. J., 580
Montgomery, A. M. P., 112
Montgomery, M. K., 808, 809
Moon, R. T., 487, 609, 621
Moor, R. M., 875
Moore, C. L., 787
Moore, G. D., 148
Moore, J. A., 48
Moore, J. W., 350
Moore, K. L., 266, 446
Moore, M. W., 677
Morange, M., 40
Morata, G., 751
Morgan, B. A., 726
Morgan, T. H., 35, 36, 38, 175,
177, 202, 789, 810, 914
Mori, C., 724
Mori, M., 741
Morle, F., 473
Moroni, M. C., 830
Morowitz, H. J., 276
Morrill, J. B., 176, 211, 212,
214, 216, 518
Morris, H. R., 26
Morriss, G. M., 245
Morriss-Kay, G., 294, 295,
644, 830
Morse, A. N. C., 808

Morse, D. E., 808
Mortlock, D. P., 710
Moscona, A. A., 84, 85
Moses, M. J., 851
Mottes, J. R., 467
Moury, J. D., 257, 258
Moury, J. G., 258
Moustafa, L. A., 70
Mowry, K. L., 863
Moy, G. W., 132, 133, 134
Moyle, W. R., 901
Mozingo, N. M., 126, 143
Muenke, M, 658
Mullen, L. M., 715
Mller, A. M., 379
Mller, F., 835, 884
Mller, G., 704
Wller, G. B., 897
Mller, J., 572, 883, 905
Mller, K., 24
Mller, M., 576
Mulnard, J. G., 181
Multigner, L., 124
Munaim, S. I., 715
Munar, E., 348
Muneoka, K., 702
Mnsterberg, A. E., 346
Muragaki, Y., 710
Murata, Y., 481, 556, 572
Murphy, M. E., 368
Murray, A. W., 200
Murray, J. D., 22, 23, 817, 902
Murre, C., 577
Muscatelli, F., 781
Myers, R. M., 396, 397
Myles, D. G., 140
Nabekura, J., 786
Nabeshima, Y., 350
Nadal-Ginard, B., 416
Nagafuchi, A., 94
Nagel, M., 231
Nagele, R. G., 255, 260
Nagoshi, R. N., 469
Nakamoto, M., 329
Nakamura, A., 535
Nakamura, O., 606
Nakamura, T., 686
Nakanishi, Y., 684, 685, 686
Nakatsuji, N., 231
Nakauchi, H., 375
Nambu, J. R., 584
Nameroff, M., 348
Nantel, F., 859
Nardi, J. B., 87, 715
Nascone, N., 363
Nathans, D., 55
Navaratnam, N., 493
Neely, C. A., 137
Nellen, O., 751
Nelson, C. E., 720, 722, 726
Nelson, W. G., 451
Nemer, M., 482
Neubert, R., 831
Neufeld, G., 292
Neugebauer, K. M., 325
Neuman-Silberberg, F. S., 580
ndice de Autores
New, D. A. T., 189, 241

Newell, P., 28
Newgreen, D. F., 288
Newman, R. A., 820
Newman, S. A., 711, 722, 723
Newport, J. W., 168, 194, 196,
197, 202, 488
Newrock, K. M., 519, 520
Newton, S. C., 855
Niazi, I. A., 715
Nicholls, R. D., 445
Nichols, D. H., 260, 292
Nicholson, 529
Niehrs, C., 619, 620
Nieto, M. A., 287
Nieuhaus, A. W., 438
Nieuwkoop, P. D., 174, 606,
623, 627, 669, 844
Nievelstein, R. A. J., 255
Nigg, E. A., 197
Nijhout, H. F., 551, 755, 756,
808, 809, 812, 813, 815
Niki, K., 736
Nilsson, A., 355
Nishida, H., 510, 512, 513, 514,
515, 516
Nishikawa, A., 738
Nishikura, K., 419
Nishioka, D., 859
Nishizuka, Y., 112, 147
Niswander, L., 114, 711, 720,
721, 722, 725, 904, 905
Noakes, P. G., 331
Noda, Y. D., 131, 140, 141
Noden, D. M., 291, 295, 638
Nohno, T., 720, 664
Noji, S., 720
Noll, M., 559
Noramly, S., 724
Nordeen, E. J., 786, 823
Nordeen, K. W., 823
Norris, D. O., 743
Norriss, D. P., 449
Northcutt, R. G., 894
Northrop, J., 614
Nose, A., 93, 94
Notenboom, R. G. E., 112
Nthiger, R., 791, 794
Nottebohm, F., 785
Nowack, E., 830, 831
Nowinski, W, 800
Nulman, I., 829, 833
Nuez, G., 529
Nurse, P., 198
Niisslein-volhard, C., 189, 405,
547, 548, 552, 553, 555,
556, 557, 561, 577, 578, 581
Nyhart, L. K., 805, 806
Nylin, S., 814
Oakley, R. A., 324
Oberlander, S. A., 353
Oettinger, M. A., 411
OFarrell, P. H., 199, 200
Ofield, M. F., 383
Ogawa, K., 124
Ogura, T., 720, 721
Ohama, K., 154
Ohmori, T., 27
Ohshima, Y., 691
Okada, M., 532, 533, 534
OKane, C. J., 419
Okazaki, K., 218
Okuda, T., 379
OLeary, D. D. M., 331
Old, L. J., 89
Old, R. W., 865
Olds, J. L., 147
Oliphant, G., 132
Oliver, B., 855
Oliver, G., 703
Olsen, B., 710
Olson, E. N., 416
Olwin, B. B., 350
Oofusa, K., 737
Opitz J. M., 358, 702, 828, 833
Oppenheim, R. W., 332
Oppenheimer, J. M., 40, 220, 636
Opresko, L. K., 863
ORahilly, R., 835
Ordahl, C. P., 345
Orkin, R. W., 102
Orkin, S. H., 396, 440, 466
ORourke, N. A., 275
Orr, N. H., 45
Ortolani, G., 512
Osathanondh, V., 676, 677
Ospovat, D., 885
Ostareck-Lederer, A., 497
Oster, G. F., 898, 899
Ostrovsky, D., 344
Otte, A. P., 621, 628
Otting, G., 576
Ottolenghi, S., 440
Oudet, P., 433
Ovsenek, N., 489
Owen, R., 726., 883
Ozawa, E., 703
Pabo, C. O., 405
Packard, D. S., Jr., 344
Paglia, L. M., 868
Palatnik, C. M., 476
Palka, J., 874
Palmer, A. R., 819
Palmiter, R. D., 397, 442, 859
Palumbi, S. R., 902
Panganiban, G., 573, 908, 909
Pankratz, M. J., 563, 564
Panzer, S., 585
Papaconstantinou, J., 283
Papalopulu, N., 625
Parakkal, P. F., 298, 300
Pardanaud, L., 367, 368, 371, 379
Pardue, M. L., 63
Paris, J., 485, 867
Park, W.-J., 357
Paroush, Z., 444
Parr, B. A., 722
Parrington, J., 149
Parslow, T. G., 412
Passera, L., 817
Pasteels, J., 255, 265, 849
Patapoutian, A., 425
Pathak, D., 416
Paton, D., 283
Patten, B. M., 262, 359

Patterson, D., 737
Patterson, P. H., 292, 332
Paukstis, G. L., 817
Paul, D. B., 38
Paules, R. S., 876
Pavlakis, G. N., 497
Payne, J. E., 134, 144
Paynton, B. V., 490
Payvar, F., 422
Pazin, M. J., 436
Pazmany, L., 248
Peadon, A. M., 744
Pearson, J., 332
Pedersen, R. A., 182, 246
Pehrson, J. R., 744
Peifer, M., 574, 575, 577
Pelletier, J., 496
Pendrel, B. A., 816
Pener, M. P., 813
Penkala, J. E., 844
Penman, S., 451
Penny, G. D., 449
Penttinen, R. P., 686
Peracchia, C., 97
Perantoni, A. O., 678
Percival-Smith, A., 576
Perez, L., 134
Perona, R. M., 186
Perreault, S. D., 154
Perrimon, N., 114, 555, 558, 752
Perrine, S. P., 440
Perris, R., 288, 289, 293
Perry, M. D., 796
Perry, R. P., 413
Persaud, T. V. N., 266
Perucho, M., 69
Pesce, M., 846
Peschon, J. J., 859
Peter, M., 198
Peters, K., 687
Peterson, C. L., 436, 659
Petters, F. M., 187, 188
Pettersson, L., 820
Pevny, L., 440
Peyrieras, N., 184
Pfaff, D. W., 319, 786
Pfahl, M., 421
Pflger, E., 36, 202, 806
Pflugfelder, G. O., 752
Phelan, K. A., 325
Phillips, C., 223
Phillips, D. M., 124
Phillips, J., 723
Phoenix, C. H., 787
Piatigorsky, 1., 283, 894
Picard, D., 413
Piccolo, S., 308, 614
Pichel, J. G., 290, 677, 678
Pieau, C., 798, 799
Piepho, H., 756
Pierce, M., 106
Pierce, S. B., 609, 610
Pierschbacher, M. D., 104
Piette, J., 349
Pignoni, F., 558
Piko, L., 181, 488, 490
Pincus, G., 875
IA1 - 9
Pinder, A. W., 809

Pinkerton, J. H. M., 860
Pinkus, H., 300
Pino-Heiss, S., 749
Pinto-Correia, C., 122
Pitnick, S., 858
Pittman, R. N., 314
Placzek, M., 618, 659
Plowright, R. C., 816
Poccia, D., 153, 488, 859
Poccia, E. L., 153
Poirier, G. R., 132
Pokrywka, N. J., 869
Pollak, R. D., 724
Pomeranz, H. D., 284, 284
Pommerville, J., 19
Pongs, O., 758
Pontiggia, A., 779, 780
Poo, M.-M., 331
Poole, T. J., 289
Ppperl, H., 829
Porcher, C., 375
Porter, D. C., 153
Porter, J. A., 566
Portmann, A., 276
Post, M., 687
Postlethwait, I. H., 753. 870
Potten, C. S., 374
Potter, E., 676, 677
Potts, J. D., 363
Poulson, D. F., 692
Pourqui, O., 346
Powell, L. M., 493
Powers, J. H., 21
Pownall, M. E., 347, 349,
387, 625
Prahlad, K. V., 743
Prather, R. S., 46, 181
Pratt, G. E., 762
Pratt, H. P. M., 185
Pratt, R. M., 644., 829, 830
Pratt, S. A., 855
Prevost, J. L., 122
Price, J. V., 580
Price, M., 911
Priess, R. A., 524, 527, 528
Primakoff, P., 138, 140
Prioleau, M. N., 437
Pritchard-Jones, K., 676
Profet, M., 871
Proudfoot, N. J., 466
Prve, E., 785
Provine, W., 913
Psychoyos, D., 236
Pu, W.T., 417
Puelles, L., 268, 269
Puffenberger, E. G., 290
Pugh, B. F., 401
Purcell, S. M., 222
Purves, D., 325, 330, 331,
335, 826
Qian, S., 575
Queen, C., 413
Quiring, R., 282, 903
Raatikainen, M., 813
Rabbitts, T, H., 419
IA1 - 10
ndice de Autores
Rachinsky, A., 816

Racowsky, C., 876
Raff, E. C., 858
Raff, J. W., 202
Raff, M. C., 333
Raff, R. A., 178, 478, 482, 519,
600, 744, 745, 746, 891,
899, 901
Raich, N., 441, 454
Raikhel, A. S., 870
Rakic, P., 273, 274, 276
Ralt, D., 131, 132
Ramaiah, K. V. A., 495
Ramanathan, R., 834
Ramarao, C. S., 129
Ramirez-Solis, R., 643
Ramn y Cajal, S., 277, 320
Ranu, R. S., 495
Raper, J. A., 318
Raper, K. B., 23
Rappaport, R., 203
Rappollee, D., 66, 478
Rashbass, P. R., 637
Raskolb, C., 577
Ratner, N., 102
Raunio, A. M., 32
Ravnik, S. E., 132
Rawles, M. E., 286
Ray, B. K., 496
Ray, R., 585
Raychaudhury, P., 495
Raynaud, A., 763
Razin, S. V., 452
Reach, M., 582
Ready, D. F., 688
Reather, C., 184, 246
Reaume, A. G., 98
Rebagliati, M. R., 479
Recanzone, G., 605
Reddi, A. H., 358
Reddy, V R., 787
Reichert, C. B., 895
Reijo, R., 855, 858
Reik, W., 445
Reilly, 734
Reilly, K. M., 658
Reinitz, J., 556, 565
Reinke, R., 690
Reiter, H. O., 826
Reitsma, N., 815
Render, J., 607
Renfree, M. B., 246
Ressom, R. E., 843
Restifo, L. L., 476
Reuss, C., 705
Revel, J.-P., 236, 673
Reverberi, G., 511, 514
Reyer, R. W., 41
Reynaud, G., 849
Reynolds, G. T., 146
Rhind, N. B., 796
Rhodes, S. J., 409
Ribatti, D., 368
Ribbert, D., 868
Richards, G., 759
Richardson, J., 672
Richter, J. D., 483, 485
Rickmann, M., 286
Riddiford, L. M., 756

Riddihough, G., 576, 635
Riddle, R. D., 659, 717, 718,
720, 722, 727
Ridge, K. A., 790
Riedl, R., 891
Rigaud, G., 433
Rigby, P. W. J., 401, 425
Riggs, A. F., 735
Rijli, F. M., 642, 906
Risau, W., 368, 370
Risch, N., 788
Ritvos, O., 69, 686, 687
Rivera-Prez, J. A., 637
Rivera-Pomar, R., 554, 557, 563
Rivier, C., 872
Robb, D. L., 537
Robb, L., 375
Robbie, E. P., 482
Robboy, S. J., 783
Roberts, D. J., 659, 665
Roberts, R., 377
Robertson, A., 22
Robins, D. M., 69
Robinson, E. J., 678
Robinson, H., 735
Robinson, S. L., 451
Robl, J. M., 46
Roder, L., 577
Rodgers, G. P., 440
Rodgers, W. H., 479
Rodriguez, C., 705
Roeder, R. G., 399, 400
Roegiers, F., 156
Roelink, H., 618
Rogers, J., 442
Rogulska, T., 849
Roller, R. J., 74, 75
Roll-Hansen, N., 596
Romanes, G. J., 254
Romanoff, A. L., 675, 849
Romeo, G., 290
Romer, A. S., 895
Rongo, C., 536, 869
Ros, M. A., 724
Rose, S. M., 715
Rosenberg, U. B., 73
Rosenquist, G. C., 234, 703
Rosenthal, E. T., 482
Ross, A. S. A., 678
Ross, F., 28
Ross, J., 872
Rossant, J., 186, 637, 644, 720
Rossignol, D. P., 135
Roth, S., 92, 94, 106, 328, 554,
578, 579, 869
Roth, V. L., 902
Rothenpieler, U. W., 680
Rothman, K. J., 829
Rothman, F. A., 395
Rounds, D. E., 860
Rountree, D. B., 755
Roush, W., 649
Rousseau, F., 110
Roussell, D. L., 532
Roux, W., 36, 157, 593, 594,
595, 596, 600, 806, 914
Rowe, D. A., 708
Rowe, T., 896

Rowning, B., 157, 159
Rubenstein, J. L. R., 268, 269
Ruberte, E., 829
Rubin, B. S., 786
Rubin, G. M., 70, 690, 692, 693
Rubin, L., 708
Ruby, E. G., 808
Rudnicki, M. A., 349, 350
Rugh, R., 184, 359
Ruibel, R., 820
Ruiz i Altaba, A., 625, 627
Ruohola, H., 867
Ruoslahti, E., 104
Rushlow, C. A., 578, 585
Ruskin, B., 465
Russell, L. B., 449
Ruth, S. B., 703
Rutishauser, U., 94
Rutter, W., Jr., 399, 683
Ryan, T. M., 438, 439
Ryner, L. C., 794
Ryoji, M., 452
Safer, B., 472
Safranek, L., 755
Sagata, N., 864
Saha, M., 279, 668, 669
Sahlberg, C., 682, 683
Saiki, R. K., 66
Sainio, K., 97, 677, 680
Sainsbury, J. R. C., 765
Saint-jeannet, J.-P., 627
Sakai, M., 607
Sakakura, T., 683
Saling, P. M., 132, 135, 136, 138
Salls, F. J., 480
Salz, H. K., 791
Samakoulis, C., 687
Samollow, P. B., 450
Samuelsson, L., 417
San Antonio, J. D., 102
Snchez, L., 791
Snchez, M. P., 677
Snchez-Herrero, E., 569,
572, 575
Sander, K., 40, 546, 547, 552,
593, 810
Sanderson, D., 102, 103
Sandler, K., 603
Sanes, J. R., 95, 330, 445
Sanger, F., 59
Sansom, A., 717
Santos, L. L., 212, 216
Santos, O. F. P., 677
Sapienza, C., 445
Sapp, J., 38, 808
Sardet, C., 146, 147, 149
Sargent, M., 67
Sargent, T. D., 64, 66
Sariola, H., 369, 676, 677,
678, 681
Sarkar, G., 496
Sarkar, S., 596
Sasai, Y., 308, 416, 614, 615, 616
Sater, A. K., 259, 668, 687
Sato, H., 106
Satokata, L., 682
Satou, Y., 514

Satterlie, R. A., 876
Satterwhite, L. L., 198
Sauer, F., 270, 401, 424
Saunders, J. W., Jr., 170, 664,
702, 705, 706, 708, 717,
724, 725
Saunders, K., 903
Savage, M. P., 492, 708
Savage, R. M., 537
Sawada, T., 156
Sawadogo, M., 399, 400
Sawyer, C. H., 786
Saxena, S., 715
Saxen, L., 603, 613, 614, 622,
623, 624, 674, 676, 679,
683, 832
Scadding, S. R., 715
Schaap, P., 26, 28
Schackmann, R. W., 130
Schfer, M., 858
Schaffner, W., 413, 444
Scharff, M. D., 89
Schatten, G., 139, 153, 156
Schatten, H., 139
Schatz, D. G., 411
Schauer, I. E., 490
Schedl, P., 454
Schejter, E. D., 193
Schell, U., 658
Schetzer, J. W., 545
Scheuermann, R. H., 453, 454
Schickler, M., 74
Schiebinger, L., 774
Schier, A. F., 565
Schindler, J., 28
Schlesinger, A. B., 241
Schlissel, M. S., 432, 437
Schlosshauer, B., 326
Schmalhausen, I. I., 814, 821
Schmekel, K., 851
Schmidhauser, C., 767
Schmidt, B., 220
Schmidt, J. E., 614, 616
Schmidt, M., 333
Schmitt-Ney, M., 767
Schnabel, R., 528, 529
Schneider, S., 609, 610
Schneiderman, H. A., 748, 753
Schneuwly, S., 570
Schoenwolf, G. C., 229, 232,
234, 242, 245, 255, 257,
258, 259, 260, 267, 362
Schler, H. R., 846
Schooneveld, H., 762
Schott, O., 666, 714
Schroeder, T. E., 127, 201, 218
Schubiger, G., 488, 489, 532, 749
Schuchardt, A., 677, 678
Schuetz, A. W., 146
Schugar, L., 687
Schulman, H. M., 494
Schultheiss, T. M., 362, 363
Schultz, R. M., 875, 876
Schulz, C., 563
Schulz, M. W., 672
Schumacher, A., 643
Schummer, M., 647
ndice de Autores
Schpbach, T., 556, 579, 580, 794

Schwalm, F., 545
Schwanzel-Fukada, M., 319
Schwartz, H. C., 494
Schwartz, J. H., 786
Schwartz, K. V., 887
Schwartz, P., 763, 764
Schweiger, H. G., 9
Schweizer, G., 291
Schwemmler, W., 810
Schwind, J. L., 738
Scott, J., 493
Scott, M., 637, 904
Sechrist, J., 294, 295
Segal, L. A., 22
SeGall, G. K., 130
Seidel, F., 186
Seleiro, E. A. P., 612, 636
Selenka, E., 805
Selleck, M. A., 284
Selwood, L., 186
Sen, R., 414
Sendtner, M., 333
Serafini, T., 320
Serbedzija, G. N., 291
Sergievsky, S. O., 902
Serra, R., 686
Servetnick, M., 656, 670
Sessions, S. K., 702, 703
Seto, E., 424
Seydoux, G., 526, 692
Shaffer, B. M., 22
Shah, N. M., 293
Shainberg, A., 348
Shalaby, F., 369
Shapiro, A. M., 814, 815, 822
Shapiro, B. M., 130, 143, 150
Shapiro, D. J., 477
Shapiro, I., 356
Sharma, P. M., 493
Sharman, G. B., 450
Sharp, D. H., 565
Sharpe, C. R., 625, 628
Shatkin, A. J., 394, 472, 486
Shatz, C. J., 312, 325
Shaulsky, G., 26
Shaw, A., 902
Shaw, G., 475
Shaw, G. M., 837
Shawlot, W., 268, 310
Shea, T. B., 869
Sheets, M. D., 485, 664
Sheiness, D., 394
Shelton, C. A., 581, 582
Shen, R. Q., 715
Shen, S. S., 147, 151
Shen, W., 903
Shen, W.-H., 780, 781, 784
Sherizly, I., 876
Shi, D.-L., 231
Shi, Y. B., 741
Shiang, R., 110
Shih, C., 109
Shih, J., 627
Shilling, F. M., 111, 148, 149
Shilo, B. Z., 687
Shimamura, K., 94
Shimomura, H., 129
Shin, H.-S., 637

Shiokawa, K., 478, 488
Showman, R. M., 487
Shu, D., 888
Shubin, N. H., 726
Shur, B. D., 106, 137, 315
Sidman, R. L., 273, 278, 314
Sieber, F., 292
Sieber-Blum, M., 292
Siebold, C., 805, 806
Siegert, F., 23, 27
Siegfried, E., 566
Sies, H., 25
Sigler, P. B., 416
Siiteri, P. K., 783
Silberstein, G. B., 686
Silver, J., 314, 315
Simandl, B. K., 738
Simeone, A., 645, 647
Simerly, C., 153
Simmons, D. J., 356
Simmons, D. M., 407, 408
Simon, D., 849
Simon, H. G., 714
Simon, J., 572
Simpson, L., 493
Simpson, P., 692
Simpson-Brose, M., 556
Simske, J. S., 691
Sinclair, A. H., 778
Singer, S., 28
Singer, M., 313, 714, 715
Sive, H. L., 625, 626, 628
Skakkebaek, N. E., 836
Skeath, J., 312, 585
Slack, J. M. W., 505, 559, 605,
606, 607, 608, 609, 635,
647, 901, 905
Slma, K., 761, 762
Slijper, E. J., 892
Sluder, G., 152
Smibert, C. A., 480, 550
Smith, C. A., 345
Smith, D. W, 833
Smith, E. P., 358
Smith, G., 766
Smith, H. O., 55
Smith, J., 509
Smith, J. C., 221, 222, 605,
608, 612
Smith, J. L., 257, 259, 260, 292
Smith, L. D., 43, 197, 482,
483, 537
Smith, S. J., 277, 278
Smith, W. C., 616, 617
Smith-Gill, S. J., 735
Smythe, C., 202
Snell, W. J., 136
Sokol, R. J., 833
Sokol, S., 609
Solnica-Krezel, L., 220
Solomon, M. J., 198, 199
Solter, D., 45, 46, 155, 488, 490
Solursh, M., 214, 215, 236, 240,
245, 704
Sommer, B., 493
Sonenberg, N., 496
Sopta, M., 399
Sordino, P., 726

Sorensen, R., 875
Sornson, M. W., 425
Sosnowski, B. A., 469
Soto, A., 836
Southern, E. M., 58
Souza, P., 686
Spallanzani, L., 122
Spana, E. P., 530
Speksnijder, J. E., 156
Spemann, H., 38, 39, 259, 350,
600, 601, 602, 603, 604,
605, 611, 627, 629, 666,
667, 668
Spencer, D. D., 335
Sperry, R. W., 327
Spicer, D. B., 351
Spiegelman, S., 47, 48
Spieth, J., 288
Spirin, A. S., 482
Spitz, I. M., 874
Spofford, W. R., 621
Spradling, A. C., 70, 867, 868
Spratt, N. T., Jr., 235, 237,
238, 241
Spring, J., 104
Spritz, R. A., 290
St. Johnston, D., 548
Stainier, D. Y. R., 191, 192
Stalder, J., 435
Stamatoyannopoulos, J. A., 440
Standart, N., 477, 478, 482, 483
Stanojevic, D., 563, 564
Stargell, L. A., 399
Stark, K., 680
Starr, D. B., 399
Staudt, L. M., 413
Stearns, S. C., 814
Stein, D., 581
Steinberg, M. S., 85, 87, 92
Steingrimsson, E., 290
Steinhardt, R. A., 145, 146, 150,
151, 486
Stemple, D. L., 291
Stennard, F., 612
Stent, G. S., 826
Stephano, J. L., 142
Stephens, T. D., 704
Stephanson, E. C., 868, 869
Stephenson, P., 466
Stern, C. D., 236, 238, 239, 240,
288, 318, 649
Stern, H. M., 346, 660
Stern, M. J., 911
Sternberg, P. W., 690, 691
Stevens, L. M., 557
Stevens, N. M., 37, 774
Steward, F. C., 46, 47
Steward, R., 578, 582, 583
Stewart, T. A., 847, 848
Stice, S. J., 46
Stief, A., 452
Stier, H., 326
Stockard, C. R., 896
Stockdale, F. E., 416
Stocker, K. M., 292
Stocum, D., 87, 88, 703, 714, 715
Stger, R., 445
IA1 - 11
Stokoe, D., 109

Stolow, M. A., 741
Stone, B. L., 761
Stone, R., 836
Storey, B. T., 131, 135
Storey, K., 605, 623
Stott, D., 637, 846
Stout, R. P., 319
Strahle, U., 220
Strand, M. R., 196
Stratford, T., 703, 720
Strathmann, M. F., 809
Strathmann, R. R., 745, 809, 821
Strause, L. G., 754
Streissguth, A. P., 833
Streit, A., 240, 637
Streuli, C. H., 112
Strickberger, M. W., 13, 14, 789
Strickland, S., 186
Strome, S., 522, 523, 524, 525,
535, 859
Strominger, J. L., 688
Struhl, G., 405, 481, 554, 555,
556, 557, 562, 570, 572,
659, 727, 752
Struhl, K., 399, 417
Stryker, M. P., 826
Studer, M., 829, 830
Sturtevant, M. H., 177
Suarez, S. S., 132, 138
Subramanian, V., 643, 905
Subtelny, S., 844
Sugi, Y., 363
Sugiyama, K., 214
Sulik, K., 244, 245, 834
Sulston, J. E., 521, 522
Summerbell, D., 708, 709,
717, 718
Summers, R. G., 130, 139,
143, 170
Sumper, M., 20
Sun, Y-A., 868
Surani, M. A. H., 155
Suri, C., 369
Sussman, M., 28
Sutasurya, L. A., 844
Sutherland, A. E., 185
Swain, J. L., 445
Swalla, B. J., 514
Swann, K., 112, 147
Swanson, C. P., 861
Swenson, K. L., 199
Swiderski, R. E., 483
Swift, C. H., 848
Sze, L. C., 167, 168
Tabata, T., 751
Tabin, C., 649, 726
Tagaki, N., 446, 448
Taghert, P. H., 315
Taigen, T. L., 744
Takada, S., 660, 661
Takahashi. N., 742
Takasaki, H., 606
Takayama, K., 491
Takayama, S., 665
Takeichi, M., 92, 93, 94, 276, 288
Takeuchi, I., 27
IA1 - 12
ndice de Autores
Talbot, D., 440

Talbot, P., 131
Talbot, W. S., 758
Tamkun, J. W., 104, 436, 468
Tan, S.-S., 104, 294, 295
Tanaka, M., 414, 705
Tannahill, D., 608, 635
Tarkowski, A. K., 185
Tassabehji, M., 290
Tassava, R. A., 715
Tata, J. R., 741, 742
Tauber, A. I., 596, 886
Tauber, M. J., 812
Taurog, A., 743
Tautz, D., 556, 563
Tavormina, P. L., 357
Taylor, M. A., 482
Tazi, J., 450
Teillet, M.-A., 258, 284, 286
Telfer, W H., 868
Telford, N. A., 490
Terasaki, M., 146, 147, 149
Terasawa, E., 786
Tessier-Lavigne, M., 320, 321,
322, 346, 629, 659
Thach, R. E., 472, 473
Thanos, D., 423
Thanos, S., 326
Thayer, M. J., 349
Thesleff, I., 102, 660, 682, 683
Theurkauf, W. E., 867, 868
Thiemann, O. H., 493
Thiery, J. P., 88, 230, 240, 289
Thigpen, A. E., 784
Thisse, B., 583
Thisse, C., 583
Thoenen, H., 332, 333
Thoma, F., 432
Thomas, H. E., 760
Thomas, J. D., 431
Thomas, K. R., 269
Thomas, L., 331
Thomas, N. S. B., 496
Thomas, W. A., 315
Thompson, J. V., 884
Thompson, W. J., 331
Thomsen, G. H., 611, 614, 619
Thomson, J. A., 774
Thomson, J. N., 524, 527
Thomson, K. S., 896
Thor, S., 647
Thorburn, A., 451
Thorogood, P., 284
Thorpe, W. H., 785
Thummel, C. S., 760, 761
Tian, M., 469, 471, 794

Tickle, C., 717, 719, 720, 763
Tiellet, M.-A., 677
Tilghman, S. M., 444
Till J. E., 374
Tilney, L. G., 124, 130
Timmins, W. N., 36
Tinbergen, N., 335
Ting-Berreth, S. A., 664
Tjian, R., 396, 401
Tkadlecek, L., 375
Tobin, C., 786
Tobler, H., 531
Todt, W. L., 721
Toivonen, S., 603, 614, 622,
623, 674
Tombes, R. M., 130
Tomchick, K. J., 23
Tomlinson, A., 688, 689
Toms, D. A., 830
Tonegawa, S., 410, 411, 412
Toole, B. P., 102, 106
Topper, Y. J., 762
Torres, M., 679
Torrey, T. W., 913
Tosney, K. W., 95, 309, 315,
323, 324, 325, 706
Townes, P. L., 80, 82, 83, 94
Trahey, M., 109
Tran, D., 784
Trefil, J. S., 276
Treisman, J., 405, 563
Treisman, R., 475
Trelstad, R. L., 784
Tremblay, P., 290
Trentin, J. J., 377
Trinkaus, J. P., 83, 191, 209,
219, 220, 221
Trudel, M., 392, 440
Truman, J. W., 754, 758
Trupp, M., 677
Tsuda, T., 366, 648
Tsukiyama, T., 436
Tsushida, T., 309
Tuan, D., 439
Tuan, R. S., 345, 353, 355,
356, 361
Tuana, N., 774
Tuchmann-Duplessis, H., 180
Tung, T. C., 513, 636
Turkington, R. W., 766
Turley, E. A., 106
Turner, A. M., 824
Turner, B. M., 436, 450
Turner, C. D., 734
Turner, D. L., 276, 281, 308, 311

Turner, F. R., 543, 544
Turner, P. R., 147
Turner, R. S., Jr., 30
Twitty, V. C., 313, 613
Tyler, A., 99
Tyler, M. S., 351, 545
Tyson, J. J., 22, 23
Ubbels, G. A., 158
Uehlinger, V., 43
Umek, R. M., 417
Umesono, K., 422
Urist, M. R., 352
Urness, L.D., 761
Ursprung, H., 50
Usheva, A., 400
Uzzell, T. M., 149
Vaahtokari, A., 659, 660, 682
Vachon, G., 573
Vacquier, V. D., 129, 130, 132,
133, 134, 135, 140, 143,
144, 153, 216
Vaidya, T. B., 350
Vainio, S., 102, 674, 679, 680,
682, 782
Vakaet, L., 234, 235
Valcrcel, J., 469, 793
Van Allen, M. I., 262, 263
Van Buskirk, J., 819
Van den Biggelar, J. A. M.,
178, 518
van der Hoeven, F., 905
van der Ploeg, L. H. T., 442
van der Weele, C., 806, 814
Van Doren, 791
van Driel, R., 26
van Dyke, M. A., 577
van Eekelen, C. A. G., 452
van Essen, D., 688
van Heyningen, V., 676
van Leeuwenhoek, A., 121, 122
van Scott, E. J., 299
Van Straaten, H. W. M., 259
Van Valen, L. M., 893
van Venrooij, W. J., 452
van Wijngaarden, R., 740
Vani, K., 566
Vardy, P. H., 831, 832
Varley, J. E., 293
Varnum, S. M., 485
Vassalli, J. D., 484
Vassar, R., 299
Vastardis, H., 682
Vaux, D. L., 529

Vegeto, E., 874
Venkatesh, T., 90, 91, 688, 689
Venuti, J. M., 350
Verdonk, N. H., 518
Verrijzer, C. P., 400
Vesalius, A., 773, 774
Via, S., 814
Vierra, J., 56
Vikkula, M., 369
Villeponteau, B., 453
Vincent, J. P., 156, 157, 158,
225, 607
Vinson, C. R., 417
Vintenberger, P., 157
Visconti, P. E., 132
Vits, L., 96
Viviano, C. M., 715
Vodicka, M. A., 613, 620
Vogel, A., 711, 722
Vogel, K. S., 293
Vogt, W., 221
Volpe, E. P., 827
von Baer, K. E., 253, 254, 883,
884, 889, 900, 901
Von Kalm, L., 748, 749
von Kolliker, A., 122
von Krafft-Ebing, R., 319
von Mstermann, A. M., 247
von bisch, L., 215
von Wettstein, D., 851
von Woellwarth, V., 671
Vortkamp, A., 724
Vuorio, E., 100
Waddington, C. H., 40, 48,
238, 531, 605, 656, 821,
899, 914
Wadworth, W. G., 320
Wagenaar, E. B., 477
Wagner, G. P., 891
Wagner, T., 70, 780
Wagner-Bernholz, J. T., 572, 573
Wakahara, M., 607
Wake, D. B., 898
Wakimoto, B. T., 569
Wald, G., 735
Waldo, K. L., 285, 294
Walker, J., 482
Walker, M. D., 403
Wall, R., 442
Walsh, C., 10, 11, 274, 275
Walter, J., 328, 329
ndice de Assuntos
Termos definidos no texto esto
indexados em negrito
abdA. veja gene abdominal A
abdB. veja gene abdominal B
Abelhas, polifenismo nutricional, 816
abx. veja gene anterobithorax
ac. veja gene achaete
Acanthostega, 726
Accutane, 829
ACE. veja Adenilao, elemento controle
Acetabularia, morfognese, 6-10
Acetilao
na desagregao de nucleossomos, 436-437
na inativao do cromossomo X, 450
Acetilao de histonas, 436-437,450
Acetilcolina, 147,148,279,291
cido -aminobutrico, 279
cido flico, 263
cido hialurnico, 240,245,672,876
cido retinico (RA)
como um teratgenio, 829-830
elementos responsivos ao DNA, 829
genes homeobox e, 628
na anlise do cdigo Hox, 641,643-645
na caudalizao neural, 625-626
na especificao do campo dos membros,
703-704
na especificao do eixo, 645
na polarizao dos membros, 720-721
na regenerao dos membros, 715
Acinos, 684
Acne cstica, 829
Acondroplasia, 109-110,357
Acron, 558
Acrossomo, 122-123,129-130,132,857
ACTH. veja Hormnio adrenocorticotrfico
Actina, 15. veja tambm Microfilamentos
em fuso de gametas, 139-140
em microespiges, 277
em microfilamentos do ovo, 126-127
em oognese merostica, 868
em processo acrossmico, 130
-actinina, 104
Actinomicina D, 740
Activina, 617,619
em assimetria esquerda-direita, 648-649
em ramificao do epitlio, 686
Adenil ciclase, 621
Adenosina 3,5 monofosfato cclico
(cAMP), 22-23
na capacitao de espermatozide, 132
na descondensao da cromatina em
espermatozide, 153
na diferenciao de Dictyostelium, 26-28
na neuralizao, 621
no reincio da meiose em ocitos, 875-876
Adeso. veja Adeso celular
Adolescncia, desenvolvimento mamrio, 765
Aedes, 808
Aequorina, 144
AER. veja Crista ectodrmica apical
Afdeos, partenognese, 810-811
Afinidade. veja Afinidade celular
Afinidade celular
diferencial, 80,82-88,99
matriz extracelular e, 99
micrmeros de ourio-do-mar, 212-214
modelo termodinmico, 84-88
neurnios e, 327-328
Afinidade celular diferencial, 80
experimentos de reagregao, 80,82-84
modelo termodinmico, 84-88
Agregao
em Dictyostelium, 22-23
histiotpica, 84
Agregao histotpica, 84
Agrupamentos angiogenticos, 368
AIDS, 688,788
Alantide, 31,361,845
Albumina, 189,683
lcool desidrogenase-2, 837
lcool, como um teratognio, 828,833-835
Alelo Steel-Dickie (Sld), 846
Algas, em simbiose desenvolvimental, 808-809
Alometria, 891-893
Alternncia de geraes, 888
Aluno, 284
Alvolos, 383
Ambystoma, 703, 743
Amebas sociais, 21
Ameboflagelados, diferenciao, 10-11
Amelia, 830
Ameloblastos, 682
Amendoim, aglutininas, 289
AMH. veja hormnio anti-ducto Mlleriano
Amgdalas, 380,786
Amiloride, 151-152
-aminolevulinato sintase (DALA sintase), 494
mnio, 31,186,243-244, 361
Amnia
em diferenciao de Dictyostelium, 28
excreo de girinos, 735
Amphioxus, 169,888,911-912
Ampola, 132,180
Analogia, 727
Anatomia comparada
evidncia para o cdigo Hox, 641,645-646
no desenvolvimento, 646-647
Andrgenos, sndrome de insensibilidade
a, 763,783
Anel contrtil, 201
Anel de Balbiani 2 (BR2), 52-54
Anel germinativo, 220-221
Anencefalia, 262
Anfbio. veja tambm Metamorfose de
anfbios; tipos especficos
ativao do genoma embrionrio, 489
clulas garrafa em, 226-229
clivagem, 173-174
desenvolvimento autnomo, 603
desenvolvimento condicionado, 602-603
determinao progressiva em, 600-603
especificao de polaridade, 607-609
experimentos de clonagem, 42-45
experimentos de reagregao, 80,82-83
induo embrionria primria em, 603-605
induo especfica de regio, 621-623
migrao da clula germinativa, 843-844
modelagem mesodrmica em, 606-607
mrulas,173-174
neurulao, 255
oognese, 861-864
rearranjo no ovo, 156-157
Anfiregulina, 687
Angioblastos, 367-369
Angiognese, 369-370
Angiopoietina-1, 369
Animais, definio do gene Hox, 647
Aniridia, 827
Anormalidades congnitas
cigarros e, 833,837
defeitos cardacos, 297
malformaes, 827
rupturas, 828
teratgenos e, 828-835
Anosmia, 319
Anticonvulsivos, em anormalidades congnitas,
833
Anticorpos, 822
especificidade axnica e, 316-317
linfcitos B e, 409
monoclonais, 89-91
regio constante, 409
regio varivel, 409
Anticorpos monoclonais, 89-91
especificidade axnica e, 316-317
Antidepressivos tricclicos, em anormalidades
congnitas, 833
IA2 - 1
IA2 - 2
ndice de Assuntos
Antidepressivos, em anormalidades
congnitas, 833
Antgeno, 822
diferenciao, 89-90
histocompatibilidade principal, 248
Antgenos de diferenciao, 89-90
1-antitripsina, 398
Antp. veja gene Antennapedia
Antro, 872
Anuros. veja Sapo
nus, formao nos deuterostomatas, 218
Aorta, 363,369,370-371
Aparelho dendrtico, 272
Apndices cutneos, 299-300
Apo-B. veja Apolipoproteina B
Apolipoproteina-B (Apo-B), 493
Apoptose. veja tambm Morte celular
inibio, 677-679
na corda mamria, 763-765
Aprendizado, respostas neuroniais, 823-826
Araschnia, 814
Arbacia, 129-130
Arco digital, 726
Arcos articos, 366-367,370-371
Arcos Farngeos, 380
rea (zona) pelcida, 189,233
rea opaca, 189,233
em gastrulao de ave, 241
Arista, 753
Armadilha intensificadora, 418-419
Aromatase, 799
Aromatase P450, 787
Arquntero, 216
anfbio, 222,226-229
na prognese, 745
ourio-do-mar, 215-218
Arquecito, 29-30
Arquistriato, 823
Artria pulmonar, 370-371
Artria subclvia, 369,370
Artria umbilical, 370
Artrias vitelnicas, 370
Arthroleptella, 169
Artrpodos. veja tambm Drosophila
evoluo, 907-909
Asa
determinao do disco imaginal, 750-753
evoluo em insetos, 907-908
Ascdios, clivagem, 179
Asplachna, 819
Assimetria, no desenvolvimento do corao,
366,648-649
Assimilao gnica, 821-822
steres, 153,154
rearranjo do ovo e, 159
sulco de clivagem e, 202
Astrotactina, 273
Ativador plasminognio, 186,873
trio, desenvolvimento, 363-365
Autofosforilao, 108
Autoradiografia, 56,64
Autoregulao, na transcrio, 409
Aves. veja tambm pinto; pato
centro de Nieuwkoop em, 636
clivagem, 189
colapsina, 322
comportamento especfico do sexo, 785
eixo dorso-ventral, 647-650

eixo esquerdo-direito, 647-650
fechamento do tubo neural, 260-262
mapa de destino, 234
migrao de clulas germinativas, 848-849
neurulao, 255
ovo, 189
Aves canoras
comportamento especfico do sexo, 785
respostas neuroniais ao aprendizado, 823
Avestruz, assimilao gentica e, 821
Axonema, 123-124
Axnio, 276. veja tambm Neurnio; axnio
Retiniano
crescimento, 227-228
desenvolvimento dependente de atividade, 331
direcionamento, 313-314,320-322,323-326
especificidade adesiva, 328-331
especificidade, 312-313
fascculos, 316
haptotaxia e, 314-315
hiptese das trajetrias marcadas, 315-317
hiptese de quimioafinidade, 327-328
impulsos eltricos, 278
migrao, 307
N-CAM, 95-96
neurnios motores e, 323-325
neurotransmissores, 278-279
repulso especfica de cones de crescimento,
317-318
seleo de alvos, 326-328
teorias da formao, 276-277
Axnio retiniano, 824,845
formao de sinapse, 331
migrao, 314,315
seleo de alvos, 326-328
Azul do Nilo, 157,158,221
A23187, 145-146,150,348
Bao, unidades formadoras de colnias, 374-375
Bactrias
como teratgenios, 835
em simbiose do desenvolvimento, 808
sexo em, 12
Bainha de mielina, 278
BamHI, 55,56,57
Banda germinativa, 545
Bauchstck (poro ventral), 601,607
Bauplan. veja Plano corporal
BDNF. veja Fator neurotrfico derivado do
crebro
BFU-E. veja unidade formadora de
rompimento de eritride
bHLH. veja Hlice-ala-hlice bsica
Bibliotecas, 61
Bicyclus, 815,822
Bifenis policlorinados (PCBs), 836
Bilateria, 30
Bindina, 132-135,149
atividade fusognica, 140
coevoluo e, 901-902
na espermatognese, 859
Biologia celular no desenvolvimento, 647
Biologia do desenvolvimento, 3
abordagens histricas, 883-885
definio, 1-2
problemas em, 2-3
Bivalente, 851
Blastema de regenerao, 87,714-716

Blastema, regenerao de, 87-88,714-716
Blastocele, 170
formao, 172-173
lmina extracelular em, 212-215
sapo, 174
Blastocisto, 182
tero e, 186
zona pelcida e, 185-186
Blastoderma
celular, 193
de aves, 238
sincicial, 192-194
Blastoderma celular, 193
Blastoderma sincicial, 192-194
Blastodisco, 189,233-234
Blastmero, 3,170
anfbio, 226
comunicao clula-para-clula e, 178
molculas de adeso celular e, 174
polarizao de membrana, 184
Blastporo, 216
anfbio, 222-226
lbio dorsal, 222-224,264-265
lbio ventral, 224
neurulao secundria, 264-265
Blstula, 3,170
desenvolvimento evolutivo, 886
eclodida, 173
formao, 174
ourio-do-mar, 172-173,210
Blstula eclodida, 173
BMP. veja Protena morfogentica 2 do osso
(BMP2)
Boca, formao em deuterostomatas, 218
Bolitoglossa, 743-744
Bolsa bucal, evoluo e, 892-893
Bolsa dgua (bolsa amnitica), 186
Bolsa de chocar, 179
Bolsa de Rathke, 380
Bolsas Farngeas, 284,295,380
Bombyx, 813
Bonellia, determinao do sexo dependente da
localizao, 799-800
Borboleta
assimilao gentica e, 822
na evoluo, 907,909
polifenismo, 814-815
BR2. veja Anel de Balbiani 2
BR-C. veja gene Broad-complex
BR-C. veja Protena Broad-complex
Bromodeoxiuridina, 679
Brnquios, 383
Broto caudal, 241,265
Broto dos membros, 704. veja tambm
Membro tetrpode
formao do osso e, 353-354
formao, 702-706
mesnquima, 708,711,713
migrao de neurnio motor, 325
Broto uretrico, 674
crescimento continuado, 681
formao, 677
inibio da apoptose e, 678
na induo recproca, 675-676
Brotos mamrios, 762-763
btd. veja gene buttonhead
bx. veja gene bithorax
ndice de Assuntos
bxd. veja gene bithoraxoid

C/EBP. veja Protena ligante do intensificador
CCAAT
cActRIIa. veja Receptor activin IIa
Caderina, 92-95. veja tambm E-caderina;
EP-caderina; N-caderina
em compactao, 184
retiniana, 325-326
transduo de sinal e, 113
Caderina epitelial. veja E-caderina
Caderina neural. veja N-caderina
Caderina placentria. veja P-caderina
Caenorhabditis, veja tambm Nematdeo
determinao da clula germinativa em,
853-855
hermafroditismo, 795-797
induo vulvar, 690-691
Caf, em anormalidades congnitas, 833
Cafena, como teratgeno, 828
Calcificao, matriz ssea, 352
Clcio
como fator citosttico, 200-201
ionforos, 145-146,150,348
na adeso celular, 92
na ativao do ovo, 147-151
na degradao de ciclina, 159
na diviso celular, 158-159
na fuso mioblstica, 348
na osteognese, 355-356
na reao acrossmica, 129,130,138
na reao do grnulo cortical, 144-146
ondas, 144-145
retculo endoplasmtico e, 146
via do inositol fosfato, 111-112
Clice ptico, 280
modelo, 667-668
Calmodulina, 864
Calo, 47
Calpana II, 864
CAM. veja Molculas de adeso celular
Camada basal, 297
Camada cornificada, 297-298
Camada de Malpighi, 297-299
Camada envolvente (EVL), 190-191,219-220
Camada espinhosa, 297
Camada germinativa externa, 272
Camada germinativa, 3,220-221
Camada granular, 297-298
Camada granular interna, 272
Camada hialina, 143
na formao da blastocele, 172-173
na invaginao do arquntero, 216
Camada sincicial do vitelo (YSL), 190
na transio da blstula intermediria, 219-220
cAMP. veja Adenosina 3,5 monofosfato cclico
na capacitao do espermatozide, 132
na diferenciao de Dictyostelium, 28
Campo formador dos membros, 702-704
Campo morfogentico, 702
Camundongo. veja tambm Camundongos
transgnicos
anlise do cdigo Hox, 640-645
anomalias induzidas pelo cido retinico,
829-830
anormalidades congnitas relacionadas ao
lcool, 834-835
assimetria esquerda-direita, 648,649

clulas germinativas primordiais, 844-845
deficincia de Wnt7a, 722
derivados de clulas tumorais, 847-848
desenvolvimento da epiderme, 299
desenvolvimento da glndula mamria, 762-768
desenvolvimento das clulas sangneas,
374-375
desenvolvimento osteoclstico, 378
determinao do ovrio, 781-782
embries, 182
espermatognese, 858
experimentos de reagregao, 84
fertilina, 140
formao de membros, 709-711
formao do broto uretrico, 677
fuso mioblstica, 347
gene Hoxa-3, 70-73
gene Sry em, 779-780
gene ZP3, 74-75
genes MyoD, 349-350
impresso gnica em, 444-445
inativao do cromossomo X, 447-448
ligao de espermatozide, 135-139
mesoderma, 245
mutaes das clulas da crista neural, 290
mutaes de desmielinizao, 278
mutaes dwarf, 407
mutaes Fgf, 658
mutaes neurolgicas, 273
mutaes no colgeno, 357
mutantes pticos, 280
no-equivalncia do proncleo, 154-155
notocorda, 244
protenas TGF- em, 662
quimeras, 70-73,187-188,347,666-667
receptor do fator de crescimento do
endotlio vascular, 369
reiniciao da meiose ooctica, 876
stios hematopoiticos, 379-380
transplante nuclear, 45-46
Camundongo
branco, 846
Danforth short-tail, 676, 677
eyeless, 280
GDNF, 290
dwarf, 407
Jimpy, 278
Lethal-spotting, 290
Microphtalmia, 290
Piebald-lethal, 290
reeler, 273
Ret, 290
Silky, 290
Splotch, 290
staggerer, 273
Steel, 290,846
trembler, 278
waltzer, 273
Weaver, 273
White-spotting, 290
Camundongo quimrico, 70-73,187-188,
347,666-667
Camundongos transgnicos, 70
derivados de clulas tumorais, 847-848
desenvolvimento da epiderme em, 299
expresso da -globina em, 439
IA2 - 3
gene Sry em, 779-780

impresso gnica em, 439
Canais anelares, 867
Canal de sdio, em ocitos, 142
Canal ependimrio, 265
Canal neurentrico, 265
Capacitao, 125,131-132
Capilares. veja Vasos sangneos
Caramujo, espiralamento em, 176-178
Carbamoilfosfato sintase, 741
Carcinoma
clula basal, 660-661
teratocarcinoma, 847-848
Carcinomas de clulas basais, 660-661
Crdia bfida, 363
Cariocinese, 201
Cartilagem
de Meckel, 895
formao, 352-354
no desenvolvimento dos membros,
722-723
ossificao, 354-356
pterigoquadrada, 906
Casaquisto, poluio teratognica no, 835
Casena, 476
sntese durante a lactao, 766-767
CAT. veja Cloranfenicol acetiltransferase
Cateninas, 92
na formao do eixo dorsal, 609-610
Cauda, degenerao na metamorfose, 735-738
Cauda poli(A), 392
encurtamento diferencial, 475-476
mRNA de ocitos e, 480-481,483-486
no processamento do mRNA, 466
Caudalizao neural, 624-626
Cavalo, evoluo em, 892
Cavidade pericrdica, 362
Cavidade subgerminal, 189
Cavitao, 182,255
C-caderina, 94
cdc2 quinase, 198,482,485
cdc25 fosfatase, 199
cdk. veja Quinase dependente de ciclina
cDNA, 54-55,61-63,64
Celoma, 358-359,744
Clula
basal, sndrome de nevus, 661
C3H10T1/2, 349
com forma de cunha, 259-260
do vitelo, 190
Z1.ppp, 692
Z4.aaa, 692
Clula garrafa, 222-224
anfbios, 226-229
Clulas. veja tambm tipos especficos
diferenciadas, 40-41
evoluo de, 886,911-912
sensibilidade DNase I, 433-434
Clulas
adaxiais, 221
adepiteliais, 749
adrenomedulares, 286
ncoras, 690-691
bastonetes, 280
ciliadas, na evoluo, 886
conais, 280
da extremidade distal, 853
da glia de Mller, 281
IA2 - 4
ndice de Assuntos
da zona marginal involutiva profunda, 229

da zona marginal no involutiva (NIMZ), 229
de Leydig, 777,783
de Schwann, 278,286,331,659
diferenciadas, transformaes em, 40-41
do cumulus, 126
endcrinas, expresso gnica em, 403
ependimrias, 276
epiteliais, 80,92
excrinas, expresso gnica em, 403
germinativas, 5,193,743
granulares, 272
granulosas, 777,872,875
neurosecretoras, 754
nutrizes, 867,868
plasmticas, 822
polares, 193
precursoras vulvares (VPC), 690-691
pr-esporo, 21,27
pr-pednculo, 21,27
profundas, 191,220
PstA, 27
PstB, 27
tecais, 777
-esporo, 21
-tronco embrionrias (ES cells), 188
-tronco hematopoiticas pluripotenciais,
347-377,378
Clulas B. veja linfcito B
Clulas da crista neural, 257
compromisso posicional, 638
expresso de N-caderina, 94
gene Hoxa-3 e, 641
migrao, 285-290,293-295
potncia, 291-292,295-296
Clulas de Sertoli, 659,777
hormnio anti-duto Mlleriano e, 784
Clulas ES. veja Clulas-tronco embrionrias
Clulas estromais
Microambientes de indutivos
hematopoiticos, 377
no desenvolvimento do rim, 681
Clulas germinativas primordiais (PGC), 843
de anfbios, 843-844
diapedese e, 848
em aves e rpteis, 848-849
em Drosophila, 849-850
em mamferos, 844-846
fator da clula-tronco e, 846
meiose, 850-852
teratocarcinoma e, 847-848
Clulas gliais
formao, 270-272
interao com neurnios, 273
Mller, 281
precursores, 276
Clulas mesenquimatosas, 80
na formao do osso, 351-352
Clulas nervosas. veja Neurnios
Clulas sangneas. veja tambm tipos especficos
Clulas somticas, 5
pluripotncia em, 43-45
Clulas vegetativas
de anfbios, 226
invaginao, 217
Clulas ventrais, translocao da protena
Dorsal, 577
Clulas vermelhas do sangue
controle da traduo em, 486-497
gene globina e, 438-439,440
linhagem, 375-377
Clulas-tronco, 373-374. veja tambm
Clulas-tronco hematopoiticas
pluripotenciais
embrionrias, 188
epidrmicas, 298,300
restrita linhagem, 375
Centrolo, espermatozide, 153
Centro de inativao do cromossomo X
(XIC), 449
Centro de Nieuwkoop, 226,606-609
fatores de transcrio do organizador e,
619-620
iniciao em vertebrados, 635-636
na formao do organizador, 613
protena Vg1 e, 610-612
Centro organizador anterior, 552-556
Centrossomo, proncleo masculino, 154
Cerebelo, 266-267
organizao, 272-273
Crebro
expanso de volume, 267
formao de regies, 265-269
organizao cerebelar, 272-273
organizao cerebral, 274-276
organizao tissular, 270-272
sensibilidade aos teratgenos, 828
sndrome alcolica fetal e, 834
Crebro, organizao, 274-276
Crvix, 784,870
5-cetoesteride redutase, 2,783-784
CFU-GM, 378
CFU-M,L. veja Unidade formadora de colnias
das clulas mielides e linfides
CFU-S. veja Unidade formadora de colnias
do bao
Chaetopterus, 210
Chironomus, 50-54
Chlamydomonas, 16
reproduo sexual, 13-15,17
Ciclina E, 200
Ciclinas, 159,199,200
na regulao do ciclo celular, 198-201
mRNA de ocito armazenado, 477-478
regulao traducional de, 485
Ciclo celular. veja tambm Diviso celular
bifsica, 196-197
inibio em mioblastos, 350
na clivagem, 196-197
regulao, 198-201
Ciclo cervical, 871
Ciclo da uria, 735
Ciclo de clivagem, regulao, 196-201
Ciclo menstrual, 870-873
Ciclo ovariano, 871
Ciclo uterino, 871
Cicloheximida, 195
Cigarros, em anormalidades congnitas, 833,837
Clios, 173,886
Cinesina, 156,868
Cintura plvica, migrao de neurnios
motores, 324-325
cis-reguladores, 395-396
atividade dependente de contexto, 424

complexo bithorax e, 574-575
genes das imunoglobulinas e, 412-413
Cistcitos, 867
Citidina desaminase, 493
Citocalasina B, 201,260,277
Citoesqueleto
integrinas e, 104
mRNA seqestrado e, 487
na determinao do eixo, 553-554,869
na mitose, 201-203
na oognese merostica, 867-868
na vitelognese, 863
Citoplasma
ciclo de clulas bifsicas e, 196-197
contedo de ovos, 125-126
migrao celular e, 209-210
na regulao de polaridade, 546-547
nas teorias da herana, 36-37
rearranjo no ovo, 156-159, 224-226,607
translocao da protena dorsal e, 580-581
Citoquinese, 201
Citosina, metilao, 442
Citotactina, 103-104
Citotrofoblasto, 245,248
Clmax metamrfico, 741
Clivagem, 3,167
discoidal, 169,188-192
equatorial, 169-170
espiral holoblstica, 175-178
espiral, 30
holoblstica bilateral, 179-180,
holoblstica radial, 169-174
holoblstica rotacional, 180-188
holoblstica, 169
iniciao, 159
mamfero, 180-188
mecanismos, 196-204
meridional, 16
meroblstica, 169,188-195
modificaes adaptativas, 178-179
mRNA de ocitos armazenados e, 477
radial, 30
rearranjo do citoplasma, 158-159
relao de volume citoplasma-ncleo, 167-168
superficial, 169,189,192-195
transcrio e, 167-168
transio da blstula intermediria, 194-195
Clivagem discoidal, 169,188-192
Clivagem embrionria. veja Clivagem
Clivagem equatorial, 169,170
Clivagem espiral, 30
Clivagem holoblstica, 169
bilateral, 179-180
espiral, 175-178
radial, 169-174
rotacional, 180-188
Clivagem meridional, 169
Clivagem meroblstica, 169,188-195
Clivagem radial, 30
Clivagem rotacional, 181
Clivagem superficial, 169,189,192-195
Clonagem
DNA, 55-57,66,68-69
espermina e, 45
mamfero, 45-46
plantas, 46-47
pluripotncia em, 43-45
ndice de Assuntos
restrio da potncia nuclear, 42-43

subtrao, 66
tcnicas, 42-45
vetores, 56
Clonagem de genes, 55
Clonagem de subtrao, 66
Cloranfenicol acetiltransferase (CAT),
403,555
Cnemidophorus, 861
CNTF. veja Fator neurotrfico ciliar
Cobaia, induo especfica de regio, 623
Cclea, 836
Cdigo de terminao da traduo, 392
Coevoluo, 901-902
Colagenase, 106,186,737
no ciclo menstrual, 873
Colgeno, 99,100,345,682
anormalidades do esqueleto e, 357
mesnquima metanefrognico e, 679
na formao da crnea, 672
ramificao do tubo epitelial e, 684-686
Colapsina, 322
Colcho endocrdico, 363
Colchicina, 260,278
Colesterol, espermatozide, 132
Colias, 815
Coluna de imunoafinidade, 90
Coluna de Terni (CT), 309-310
Coluna motora lateral (LCM), 309,310
Coluna motora medial (MMC), 309,310
Compactao, 181-183
acaso e, 693
mecanismo, 184-185
Compartimentos, 751
Compensao de dosagem, 446
Competncia, 628-629,656-657
em zona de atividade polarizante,721
na induo do cristalino, 668,669
Complexo antennapedia, 569
Complexo bithorax, 569
reguladores cis, 574-575
represso de Antennapedia, 572
Complexo de genes achaete-scute, 585
Complexo de iniciao, 472
Complexo Hometico (Hom-C), 569
co-fatores, 577
homologia a genes Hox, 637-638
na evoluo de insetos, 907-909
regulao em Drosophila, 643
Complexo sinaptonemal, 851
Complexo SW1/SNF, 436
Complexos de ribonucleoprotena (RNP), 482
Comportamento
especfico do sexo, 785-786
metamorfose de anfbios e, 740
Comportamento especfico do sexo, 785-786
hiptese da organizao/ativao, 787
homossexualidade masculina, 787-788
voluntrio, 787
Compresso, em discos imaginais, 750
Comprimento do dia crtico, 812
Comprimidos para controle da natalidade, 864
Conceito de limiar, 739
Condensao, em genoma do espermatozide, 859
Condrcitos hipertrficos, 354,356
Condrcitos, 345,353-356
Condrognese, 352,722-724
em anormalidades esquelticas, 357-358
talidomida e, 832
Condutividade, membrana, 203
Cone de crescimento, 277
hiptese da especificidade adesiva diferencial,
314-315
repulso especfica, 317-318
Cone de fertilizao, 139-140
Conexina, 98,680
Conjugao, 12
Contato, celular, 80
Contato placentrio, 246
Contracepo, 138,139,864
Contracepo imunolgica, 139
Contralateral, 825
Controle da herana, 35-37
Controle da traduo, 10
em eucariotos, 472-474
em hemcias, 496-497
em larvas e adultos, 490-493
em ocitos, 476-487
longevidade diferencial do mRNA e, 474-476
na produo de hemoglobina, 494-497
no desenvolvimento, 471-472
trocas, 492
Controle ps-traduo, 11
Controle transcricional, 11
Co-opo, no desenvolvimento, 894-896
Copidosomopsis, poliembrionismo, 195-196
Corao. veja tambm desenvolvimento do
corao
contrao, 363
embrionrio, 370,371
fator inibidor da leucemia e, 292
genes reguladores homlogos e, 904
sensibilidade aos teratgenos, 828
Corantes fluorescentes, 144
Corda mamria, 762-765
Cordo medular, 264
Cordo umbilical, formao, 246
Cordas sexuais, 775-776
corticais, 777
medulares, 777
Cordes sinciciais, 212
Cordomesoderma, 221,222,341
de aves, 236,237
na neurulao primria, 255
Crio, 31,182,246,361
em gmeos, 186
produo de hormnio, 247-248
Crnea
diferenciao, 283-284
formao, 672
Corpo de Barr, 446
Corpo frutfero, 21
Corpo polar, 861
Corpora allata, 754,755
Corpus luteum, 874
Crtex neoplio, 274,276
Crtex visual, 824-825
Crtex, ovo, 126
Corticotrficos, 407
Coxa, 748
CPE. veja Elemento de poliadenilao
citoplasmtica
Crnio
evoluo no, 892
formao, 351-352
Craniosinostomose, 658
IA2 - 5
Crassius, 820
Crepidula, determinao do sexo, 800
Crescente amarelo, 156
Crescente cinzento, 156,225-226,602
Crescente germinativo, 235-236,848
Criao, progresso correlacionada e, 896
Crista ectodrmica apical (AER), 704-705
interaes com ZPA, 718-721
mesnquima do broto dos membros e,
708,711,713
no crescimento prximo-distal, 706-708
Crista mamria, 762
Crista neural, 260
cardaca, 285,296-297
ceflica, 284,293-296,641,830
derivados, 284-285
mesenceflica, 291
mutaes no desenvolvimento, 290
na neurulao primria, 256
sacral, 284
sagal, 284
torcica, 291
tronco, 284,285-293
vagal, 291
Crista neural ceflica, 284
potencial de desenvolvimento, 295-296
teratognese de cido retinico e, 830
vias de migrao, 293-295
Crista neural craniana. veja Crista neural ceflica
Crista neural do tronco, 284
diferenciao final, 292-293
matriz extracelular e migrao, 287-290
potncia desenvolvimental, 291-292
trajetrias migratrias, 285-287
Cristalinas, 283
Cristalino. veja tambm Induo do cristalino
fibras, 283
formao, 279-280
regenerao em salamandra, 40-41
Cromatdeos, na meiose, 850-852
Cromatina, 431
acessibilidade a trans-reguladores, 432-434
complexos de disrupo de nucleossomos,
436-437
descondensao no espermatozide, 153-154
em genes hometicos, 572
matriz nuclear e, 451-453
metilao, 444
na meiose, 851
nucleossomos em, 431-432
regies controladoras de locos, 437-441
stios hipersensveis DNase I, 434-436
topoisomerases e, 453-454
Cromossomos. veja tambm cromossomo X;
cromossomo Y
em forma de escova, 865
homlogos, 850-852
nas teorias da herana, 36-38
politeno, 50-54
sntese diferencial de RNA e, 51-54
teoria do plasma germinativo, 592
translocaes, 418-419
trissomia, 827
tufos (puffs), 51-54,757-758,759
Cromossomo X
compensao de dosagem, 446-450
descoberta, 37
IA2 - 6
ndice de Assuntos
elementos do numerador, 791

mutaes em Drosophila, 38
na determinao do sexo em Drosophila,
788-791
na determinao primria do sexo,774
no desenvolvimento do ovrio, 781
Cromossomo Y
798-790
na determinao dos testculos, 777-780
na determinao primria do sexo, 774
Cromossomos politnicos, 50
ligao de hidroxiecdisona, 757-758,759
sntese de RNA e, 50-54
Cruzamento (crossing-over), 851-852
CSF. veja Fator citosttico
CSF-1. veja Fator estimulante de colnias de
macrfago
Csx. veja Gene Cardiac-specific homeobox
CT. veja Coluna de Terni
CTD. veja Dominio carboxi-terminal
Culminao, 27-28
Cumulus, 872
Cutcula, 746
Cyclopia, 828
Cytomegalovirus, 835
da. veja gene daughterless
DAG. veja Diacilglicerol
DALA sintase, 494
Danio
clivagem, 189-192
desenvolvimento do corao, 191-192
Daphnia, 819
Dauerblstula, 597-598
DDE, 836
DDT, 836
Dedo de zinco, 420,577
em gene tra-1, 796
intensificadores responsivos a hormnios e, 422
Dedos, formao, 724-727
Defesa induzida por predador, 819-820
Delaminao, 209
Dendritos, 276
Dendrobates, comportamento, 740
Dente. veja Odontognese
Dermamitomo, 324,345
Dermtomo, 345,346-347
Descondensao, 153-154
Desdiferenciao, 714
Desenvolvimento, 3
alometria e, 891-893
ambiente e, 75,827-837
autnomo, 603
condicional, 602-603
co-opo e, 894-896
cromossomo X e, 37-38
definido, 79
dependente, 602-603
direto, 743-745
dissociao e, 891-893
divergncia e, 893-894
duplicao e, 893-894
estgios, 3-5
genes reguladores homlogos e, 902-909
heterocronia e, 891
independente, 603
modulao do, 891
mosaico, 593,603
plasticidade do, 822-826

processamento diferencial de RNA e, 461
progresso correlacionada e, 896-897
regulativo, 591,602-603
restries no, 898-902
unidade em, 646-647
vertebrados, 254
vias homlogas, 909-911
Desenvolvimento autonmo, em anfbios, 603
Desenvolvimento condicional, em anfbios,
602-603
Desenvolvimento dependente, 602-603
Desenvolvimento direto, 743-745
Desenvolvimento do corao
assimetria no, 366
conexinas e, 98
crista neural cardaca, 296,297
fibronectina e, 103
formao das cmaras, 363-366
fuso dos rudimentos, 361-363
peixes, 191-192
polaridade, 365-366
Desenvolvimento em mosaico, 593,597,603
Desenvolvimento independente, 603
Desenvolvimento ptico. veja Olho
Desenvolvimento regulativo, 591,602-603
experimentos de isolamento no, 594-596
teoria do plasma germinativo e, 592-600
Desenvolvimento, transferncia Northern,
64,66
Desnaturao, 54
Destino celular. veja tambm Mapa de destino
em embries de clivagem tardia, 598
mRNA localizado de ocito e, 480-481
Destino prospectivo, 595,602-603
Destino, perspectiva, 595,602-603
Determinao, 559. veja tambm
Determinao do sexo
acaso e, 692-693
dos eixos embrionrios, 224-226,238,480481,554
dos mioblastos, 349-351
em discos imaginais, 750-753
em induo do cristalino, 670-672
neuronial, 308-309
progressiva, 600-603
Determinao da pegada da DNAse, 555
Determinao do sexo
comportamento especfico do sexo, 785-788
cromossmicos, 774-777
dependente da temperatura, 798-799,817-818
dependente do local, 799-800
desenvolvimento ovariano e, 781-782
desenvovlvimento das gnadas na, 775-777
determinao do testculo e, 777-781
em Drosophila, 468-471,788-795
em ginandromorfos, 789
em hermafroditas, 795-798
em peixes, 818-819
emenda alternativa do RNA e, 468-471
genes autossmicos e, 780-781,790791,795-796
genes do cromossomo Y e, 777-780
partenognese, 810-811
perspectivas histricas, 773-774
primria, 774,777-781
regulamentao ambiental, 810-812
secundria, 774-775,782-788
Determinao do sexo em aligtor, 799
Determinao progressiva, em anfbios, 600-603
Determinao sexual primria, 774
Determinao sexual secundria, 774-775
Determinantes morfogenticos, 125,156,551
Deuterostomatas, 30
ativao do ovo, 149-151
formao da boca, 218
formao do nus, 218
padres do desenvolvimento, 30-32
Dfd. veja gene Deformed
DHP. veja Ponto de articulao dorsolateral
Diacilglicerol (DAG), 112,147
Diacinesia, 852
Diapausa, 755,812-813
Diapedese, 848
Dicloro difenil-tricloroetano (DDT), 836
Dictyostelium
agregao, 22-23
ciclo vital, 21
diferenciao, 23,26-28
encurtamento diferencial da cauda poli(A)
em, 475-476
molculas de adeso celular, 24-25
Dideoxinucleotdeos, 59-61
Diencfalo, 266,268
Dietilstilbesterol, 836
DIF. veja Fator indutor da diferenciao
Diferenciao, 2
ameboflagelados, 10-11
definida, 47-48
em Dictyostelium, 23,26-28
em Volvocaceanas, 16-17
modelo operon e, 48
na induo do cristalino, 670-672
no dente de mamferos, 682
no desenvolvimento, 79
teoria do plasma germinativo e, 592
Digesto, em interaes clula-clula, 106-107
Dihidrotestosterona, na determinao do sexo,
783-784
-dihidrotestosterona, 783
5
Dinena, 123-124
Dioxina, 836
Diploteno, 852
Direcionamento da glia, 273
Direcionamento de contato, 313-314
Disco dos membros, 703
Disco imaginal da perna, 748,750-753
Discos imaginais, 746-753
Disjuntores, no controle da traduo, 492
Displasia campomlica, 780
Displasia tanatofrica, 357
Disrupo, 828
Dissociao, no desenvolvimento, 891-893
Divergncia, no desenvolvimento, 893-894
Diversidade, emergncia dos filos e, 888
Divertculo heptico, 382
Diviso Celular. veja tambm Ciclo celular;
clivagem; mitose
clulas do tubo neural, 270
em procariotos, 5
longevidade do mRNA e, 475
MPF e, 197
DMZ. veja Zona marginal dorsal
DNA. veja tambm cDNA; sntese de DNA
acessibilidade a trans-reguladores, 432-434
ndice de Assuntos
clonagem, 55-57
determinao da pegada (footprinting) da
DNAse, 555
elementos de resposta ao cido retinico, 829
elementos responsivos a hormnio, 420-423
em eucariotos, 5-6
em procariotos, 5-6
ensaio de transferncia de mobilidade, 414
enzimas reparadoras na meiose, 852
hibridizao, 54-55;58-59
metilao, 442-446
polimerase de reao em cadeia e, 66,68-69
recombinante, 56
regies controladoras de locos, 437-441
separao de fitas, 453-454
seqenciamento, 59-61
seqncias limitantes, 454
tcnicas de insero, 69-70
DNA complementar. veja cDNA
DNA ligase, 56
DNA polimerase. 69
DNA recombinante, 56
DNA, protenas dobradoras de DNA, 423
DNAse I, 433-434
DNAse I, stios hipersensveis, 434-436,451
metilao, 444
regies de controle de locos e, 440,441
Dobradia cordoneural, 265
Dobras corpreas, 359
Dobras neurais, 257,258
Dobras transversais anteriores, 545
Dobras transversais posterior, 545
Doena de Alzheimer, 334
Doena de Hirschprung, 290
Doena de Minamata, 828
Doena de Parkinson, 332,334
Doenas neurodegenerativas, 333-334
Domnio, 454
Domnio carboxi-terminal (CTD), 400
Domnio de ligao de hormnio, 421
Domnio do trans-ativador, 404-421
Domnio ligante de DNA, 404,421
Domnio POU, 406-407
Dopamina, 279
Dorsal, definido, 341
dpp, veja gene decapentaplegic
Drosophila. veja tambm Metamorfose de insetos
clulas germinativas em, 849-850,855
ciclo de clivagem, 196
compensao de dosagem em, 446
complexos de ruptura nucleossmica, 436
compromisso do destino celular em, 559-561
determinao do sexo, 468-471,788-795
determinao dos eixos, 480-481,585
discos imaginais, 747-753
ecdise em, 756-757
encurtamento diferencial da cauda poli(A)
em, 476
espaamento do neuroblasto, 692-693
especificao da glndula salivar, 585
especificao das clulas neurais, 585
especificao do neurnio motor, 310-312
espermatognese, 858-859
famlia da protena Hedgehog em, 659
fatores de transcrio, 400,401
formao de fotoreceptores retinianos, 688-690
formao do sistema nervoso, 545

gastrulao, 543-545
genes de efeito materno, 546-559
genes de segmentao, 559-569
genes Hom-C, em 643,905
genes seletores hometicos, 569-577
homologia do gene hometico, 616,637638,640
integrinas e, 104-105
mapa de destino, 582-585
muda, 747-748
mutaes do cromossomo X, 38
mutaes hometicas, 570-571
mutaes oculares, 688-690
na evoluo, 907-909
neurmeros, 647
oognese, 867-870
partenognese em, 861
periodicidade em, 546
plano corporal, 545-546
polaridade ntero-posterior, 545-577
polaridade dorso-ventral, 577-585
primrdios de rgos, 585
protenas do homeodomnio, 405
protenas Wnt em, 660
regulao desenvolvimental da quinase
MPF, 199
Semaphorin II e, 321-322
seqncias limitantes em, 454
trajetria RTK-Ras em, 910-911
DSP1. veja Protena 1 de comutao dorsal
Dsx. veja gene doublesex
Ducto Mleriano, 775
atrofia, 783,784
desenvolvimento, 784
Ducto nfrico, 674
Ducto pronfrico, 673-674
Ducto Wolffiano, 674,777
desenvolvimento, 783,784
Dupla garantia, 627,668
Duplicao, no desenvolvimento, 893-894
Duto arterioso, 372
Dutos eferentes, 674,777
Dutos mamrios, 765
Ea. veja gene easter
E-caderina, 93,184
na migrao celular, 240
na regulao da conexina, 98
Ecdise, 756-757
Ecdisona, 754,755-756
na captao da protena do vitelo, 870
no polifenismo, 814
Ecloso, 757
ECM18, 214
EcR. veja Receptor da ecdisona
EcR. veja gene Ecdysone receptor
Ectoderma, 3-4. veja tambm Crista
ectodrmica apical
anfbio, 222-224,232
ave, 241-242
na determinao neuronial, 308
na formao da crnea, 672
na formao da placa neural, 257-258
na neurulao primria, 255-257
na organognese, 255
IA2 - 7
na polarizao dorso-ventral dos membros,

721-722
vertebrado, 254
Editorao do RNA, 493
EDNH. veja Hormnio neurosecretor no
desenvolvimento do ovo
Eed. veja gene embyonic ectoderm development
Efeito do lcool no feto, 833
eFGF, 625,628
EGF. veja Fator de crescimento epidrmico
Egr-1, 420
EGTA, 150
eIF2. veja Fator 2 de iniciao eucaritica
eIF4E. veja Proteina cap ligante
Eixos. veja tambm Eixo ntero-posterior;
Eixo Dorso-ventral
animal-vegetal, 862
embrionrio, 224-226,238,480-481,869
esquerdo-direito, 647-650
na determinao dos discos imaginais, 751-753
prximo-distal, 706-716,752-753
Eixo A/P. veja Eixo ntero-posterior
Eixo animal-vegetal, transporte de
vitelogenina e, 862
Eixo ntero-posterior
cido retinico e, 645
determinao, 224-225,238
em discos imaginais, 751
em oognese merostica, 869
especificao em mamferos, 637-647
genes de efeito materno e, 546-559
genes de segmentao e, 559-569
genes hometicos e, 569-577
iniciao em vertebrados, 635-637
modelo cartesiano coordenado, 585
mRNA de ocitos e, 480-481
na formao de membros, 716-721
viso panormica em Drosophila, 545-546
Eixo D/V. veja Eixo dorso-ventral
Eixo dorso-ventral
determinao, 224-225,238
em mamferos e aves, 647-650
especificao, 607-610
modelo em coordenadas cartesianas e, 585
na formao dos membros, 721-722
na oognese merostica, 869
nos discos imaginais, 751-752
protena dorsal no, 577-578
semelhana com a diferenciao de
linfcitos, 582
sistema nervoso central, 264
translocao da protena dorsal, 578-585
Eixo esquerdo-direito, em mamferos e aves,
647-650
Eixo prximo-distal
na formao de membros, 706-716
na regenerao de membros, 714-716
EKLF. veja Fator do eritride semelhante ao
Krppel
Elemento controle da adenilao (ACE), 484
Elemento de poliadenilao citoplasmtico
(CPE), 484
Elemento transponvel, na insero do DNA, 69
Elementos responsivos a hormnios, 420-423
Eletroporao, 69
Eleutherodactylus, 169,744
ELF-1. veja Famlia ligante de Eph 1
Elongao, 474
IA2 - 8
ndice de Assuntos
dos discos imaginais, 749-750

em. veja gene empty spiracles
Embrio, 3. veja tambm Pinto; Clivagem;
Drosophila; Camundongo; Xenopus
ativao genmica, 488-490
clivagem, 158-159
desenvolvimento evolutivo, 885-890
destino celular no, 598
destino celular tardio, 598
determinao axial, 224-225,238,480-481
nurula e, 254
periodicidade no, 548
potencial da membrana no, 238
regulao, 186-188
simetria, 157-158
sistema circulatrio, 366,370-371
tipos celulares, 80
tunicado, 159
Embrio de codorna
formao da placa do assoalho neural, 258-259
ilhas de sangue no, 368
Embriognese, 3-5
traos maternais no, 476-477
Embriologia
estudo de defeitos em, 593
experimentos de isolamento na, 594-596
leis gerais, 253-254
mecnica do desenvolvimento e, 593
modelo operon, 48
na biologia evolutiva, 884
na taxonomia, 884
regulao ambiental e, 805-806
relao com a gentica, 38-40
teoria dos genes e, 35-38
Emenda alternativa do RNA, 466-471
Emys, 798-799
Endereamento de genes (gene targetting), 70-73
na anlise do cdigo Hox, 640-643
Endocrdio, 363
Endoderma, 4,380-384
anfbio, 222-224
avirio, 235-238
mamfero, 244,245
na induo mesodrmica, 606
vertebrado, 254
Endoderma do saco vitelnico, 243
Endomtrio, 245
Endonuclease de restrio, 55
Endotelina-3, 290,293
Enrgdes, 194
Enhanceosomes, 423
Ensaio de proteo de ribonuclease, 465
Ensaio de transferncia de mobilidade, 414
Entelechy, 596
Envoltrio vitelnico, 126,132-135,241
Envoltrio de fertilizao, 143
Enzima de Ecloso, 173
Enzima de manuteno Purina, 89
Enzima de restrio HpaII, 445
Enzima de restrio MspI, 445
Enzima de Restrio, 55
Enzimas. veja tambm tipos especficos
digestivas, 106-107
eclosivas, 173
restritivas, 55
Enzimas adaptativas, 47
Enzimas proteolticas, na metamorfose de
anfbios, 736-737
EP-caderina, 94,174
Epndima, 271
Epiblasto, 189,220-221,233
de aves, 233-234,239-240
de mamfero, 243-245
Epibolia, 209
controle citoplasmtico, 210
microtbulos e, 220
na gastrulao de anfbio, 222-224,232
no ectoderma de ave, 241-242
Epiderme
apndices, 299-300
desenvolvimento, 297-299
ferimento, 714
na neurulao primria, 256,257-258
nos discos imaginais, 748-750
Epiderme do ferimento, 714
Epiddimo, 125
Epfises, 357-358
Epimiocrdio, 363
Epinefrina, 279
Epitlio olfatrio, 319
Epitlio pancretico, 383
Equinoderma, clivagem, 169
Equivalncia genmica, evidncia para a, 40-47
Eritroblasto, 377
Eritride. veja tambm Clula sangnea
vermelha, 375,377
gene globina e, 438-439,440
unidade formadora de ruptura, 375
Eritropoietina, 375
Esc. veja gene extra sex combs
Esclerose lateral amotrfica, 333
Esclertomo, 284,324-325,345
gerao, 346-347
Escroto, 783
Escudo embrionrio, 220-221
Especificao, 559
condicional, 591
dependente, 591
homloga, 753
Especificao axial. veja eixo nteroposterior; eixo Dorso-ventral
Especificao condicional, 591
Especificao dependente, 591
Especificao homloga, 753
Espermateliose, 857-858
Espermtides, 856,859
Espermatcitos, 856,859
Espermatcitos primrios, 865
Espermatcitos secundrios, 856
Espermatognese, 855-859
gene desert hedgehog e, 659
Espermatognia, 855-856
Espermatognia intermediria, 856
Espermatognia tipo A1, 855
Espermatognia tipo A2, 855
Espermatognia tipo B, 856
Espermatozide. veja tambm Espermatognese
ativao do vulo, 147-149
ativao, 129-130
atrao, 128-129
capacitao, 125,131-132
centrolo, 153
conceitos iniciais do, 121-122
condensao no, 859
de mamfero, 131-132
determinao em hermafroditas, 853-855

diferenciao, 122-123,125
fuso com o vulo, 139-140
hiperativao, 132
humano, 131,138,858
impresso em, 445-446
ligao secundria zona pelcida, 138-139
polaridade do vulo e, 225
preveno da poliespermia, 140-144
proncleo, 152-154
propulso, 123-124
reao acrossmica, 129-130,138-139
translocao, 131-132
Espermina, na clonagem de anfbio, 45
Espermiognese, 857-858
Espcula, formao, 214-215
Espinha bfida, 262
Espirais
destra, 175
em caramujos, 176-178
Espiral destra, 175
Espiralamento em lesmas,176-178
Esplancnopleura, 360
Esponjas, padres de desenvolvimento, 29-30
Esqueleto. veja tambm Osso; Osteognese
anormalidades, 357-358
expresso do gene Hox e, 642-643
gerao, 351
precursores, 345
sensibilidade a teratgenios, 828
Esqueleto axial
expresso do gene Hox e, 642-643
precursores, 345
Esquizoencefalia, 647
Estgio bipotencial, 775
Estgio dictiado, 871
Estgio indiferente, 775
Estereoblstula, 175
Estereotropismo, 313-314
Estomodeo, 380
Estradiol, 787
Estrato crneo, 297-298
Estrato germinativo, 297
Estripsina, 186
Estro, 870
Estrgeno, 765
ambiental, 836-837
comportamento especfico do sexo e, 786
fetal, 787
na determinao do sexo, 784,798-799
na maturao dos folculos, 875
na ovulao, 870
na regulao do ciclo menstrual, 872-874
produo de IL-6, 378
receptores na epfise, 357-358
regulao da prolactina, 407-409
Estrgenos ambientais, 836-837
Estroma primrio, na formao da crnea,
672
Estromelisina, 106,186
Estruturas anlogas, 727
Estruturas homlogas, 727
na teologia natural, 883
Etanol. veja lcool
Eucariontes, 5-6
estrutura gentica, 74
genoma, 454
traduo em, 472-474
ndice de Assuntos
Eucariotos coloniais. veja Dictyostelium;

Volvocaceas
Eucariotos unicelulares
diferenciao, 10-11
morfognese, 6-10
reproduo sexual, 12-16
Eucromatina, 446
Eudorina, 16
Euprymna, 808
Euscelis, 809
Everso, dos discos imaginais, 749-750
Evidncia correlativa, 25
Evidncia de ganho-de-funo, 25
Evidncia de perda-de-funo, 25
Evidncia, tipos, 25
EVL. veja Camada envolvente
Evoluo
assimilao gentica e, 821-822
de novos tipos celulares, 911-912
em insetos, 907-909
enfoques histricos, 883-885,912-914
genes hox e, 905-907
membros de tetrpodes e, 726-727
modularidade desenvolvimental e, 891-897
neotenia e, 743
no desenvolvimento precoce, 885-890
restries desenvolvimentais e, 898-902
sistema circulatrio e, 366-367
trajetrias desenvolvimentais homlogas e,
909-911
Exd. veja gene Extradenticle
Exocitose
grnulos corticais, 143,144,146
vescula acrossmica, 130,132
xon, definio, 466
xons, 392-394,466
Experimentos de eliminao (knockout), 70-73
na formao dos membros, 709-711
Experimentos de isolamento, 594-596
Experimentos de reagregao, 80,82-84
Experimentos imperfeitos, 593,596
Expresso do gene haplide, 859
Expresso gnica. veja tambm Transcrio;
fatores de transcrio
em espermatognese, 858-859
em genes hometicos, 403,569-573,572
em mutantes sem membros (limbless), 724
em organizador de mamferos, 636-637
genes Hox, 642-643
haplide, 859
pancretica, 403
processamento diferencial de RNA e, 471
Extenso convergente, 217,231
Face. veja Processo facial
Famlia de protenas Wnt, 346,626,628,660661,680
na induo do mesoderma dorsal, 611
na formao do eixo dorsal, 609-610
Famlia ligante de Eph 1 (ELF-1), 328-331
Farngula, 900
Farmacuticos, uso de promotores, 398
FAS. veja Sndrome alcolica fetal
Fasciclina I, 316
Fasciclinas, 96,318
Fascculos, 316
Fase folicular, 872
Fase luteal, 874
Fase pr-vitelognica, 861

Fase proliferativa, 872
Fase vitelognica, 861
Fator bsico do crescimento de
fibroblasto (FGF2), 619,658
em anormalidades do esqueleto, 357
em cultura de clulas mesenquimatosas, 681
em vasculognese, 368
na caudalizao neural, 625
na induo do cristalino, 672
na miognese, 350
na organognese do rim, 678
na proliferao de clulas germinativas, 847
na regenerao de membros, 715
regulao, 492
Fator citosttico (CSF), 200-201,864
Fator da clula-tronco, 290,846
Fator da glndula mamria (MGF), 766-767
Fator de coagulao sangnea IX, 418
Fator de crescimento autcrino, 298
Fator de crescimento da cmara anterior, 672
Fator de crescimento da glia (GGF),715
Fator de crescimento de queratincito
(KGF), 299
Fator de crescimento derivado das plaquetas
(PDGF), 148-149
Fator de crescimento do endotlio
vascular (VEGF), 369
Fator de crescimento do nervo (NGF),
332,656
Fator de crescimento dos hepatcitos
(HGF), 677,682
Fator de crescimento epidrmico (EGF), 580
no desenvolvimento mamrio, 765
Fator de crescimento fibroblstico (FGF),
292,357,658,702
em formao da AER, 706
embrionrio, 625
especificidade no alvo retiniano, 327
na caudalizao neural, 625
na comptncia neuronial, 656
na induo do broto dos membros, 704
na induo do mesoderma, 612
no crescimento do broto dos membros, 711
receptores, 658
zona de progresso e, 708
Fator 1 de crescimento fibroblstico (FGF1)
na induo do cristalino, 672
na sndrome de Pfeiffer, 357
Fator 2 de crescimento fibroblstico (FGF2).
veja Fator bsico do crescimento de
fibroblasto
Fator 3 de crescimento fibroblstico (FGF3),
682
em acondroplasia, 357
Fator 4 de crescimento fibroblstico (FGF4), 659
em mutantes sem membros (limbless), 724
na odontogense, 682
na polarizao de membros, 721,722
332
na ramificao epitelial, 687
268,704
emenda alternativa do RNA, 468
no crescimento do broto do membro, 711
no mutante limbless, 724
IA2 - 9
Fator de crescimento II semelhante insulina

(IGF-II), 155,444
Fator de crescimento semelhante
insulina (IGF-I), 355
Fator 2 de emenda (SF2), 466
Fator de eritride semelhante ao Krppel
(EKLF), 441
Fator de espalhamento, 240,637
Fator de inibio da leucemia (LIF), 292,847
Fator de iniciao eucaritica 2 (eIF2GTP), 472,474,494-496
Fator de remodelagem do nucleossomo
(NURF), 436
Fator de transcrio AML1, 379-380
Fator de transcrio NTF-1, 401
Fator de transcrio SCL, 375
Fator de transcrio Sp1, 401
Fator de troca de nucleotdeo de guanina,
108-109
Fator determinante do sexo do cromossomo Y
(SRY), 423
Fator esteroidognico 1 (SF1), 780-781
Fator estimulador de colnias de macrfagos
(M-CSF, CSF-1), 377
Fator indutor de diferenciao (DIF), 26
Fator neurotrfico ciliar (CNTF), 332-333
Fator neurotrfico derivado da glia
(GDNF), 290,292,332,677
Fator neurotrfico derivado do crebro
(BDNF), 292,332
Fator promotor da maturao (MPF)
em ocitos de anfbios, 864,866-867
na regulao de cdc25 fosfatase, 199
no ciclo celular, 197
subunidade grande, 198-199
subunidade pequena, 198
Fator promotor da mitose. veja Fator
promotor da maturao
transformador do crescimento
Fator-
), 298
(TGF-
1 transformador do crescimento
Fator-
1), 686
(TGF-
Fatores ambientais
desenvolvimento e, 75
determinao do sexo em Drosophila e, 795
formas larvais e, 761-762
na determinao do sexo, 798-800
na diapausa, 755
na neotenia, 743
Fatores associados das protenas ligantes
de TATA (TAFs), 400-401
Fatores de crescimento. veja tambm Tipos
especficos
Fatores de crescimento e diferenciao
(GDFs), 657-663
Fatores de transcrio, 396. veja tambm
Tipos especficos; Trans-reguladores
atividade dependente de contexto, 423-424
competio com histonas, 437
domnio do ativador, 399
especfica de eritrides, 440
hormnio esterides como, 420-423
induzida por organizadores, 619-620
inibidores da cromatina, 431-432
Pax6, 282
proteinas de dobramento do DNA, 423
regulao dos, 425-426
rompimento de nucleossomos e, 432-434
IA2 - 10
ndice de Assuntos
Fatores endcrinos, 658

Fatores neurotrficos, 331-334
Fatores parcrinos, 657-663,686-687
Fenda ceflica, 545
Fenda primitiva, 234
Fenitona, em anormalidades congnitas, 833
Ferritina, 492
Fertilizao, 3
ativao do metabolismo dos gametas, 147-152
coevoluo e, 901-902
definio, 121
descoberta, 122
fuso de gametas, 139-140
fuso nuclear, 152-154
ligao de gametas, 132-139
mamferos, 135-139,153-154,180
meiose ooctica e, 864
no-equivalncia, 154-155
rearranjo do ovo na, 156-159
reconhecimento de gametas, 128-132
sntese de DNA na, 151-152
Feto
lcool e, 833-835
estrgeno e, 787
hemoglobina e, 372,437,440-441
oxigenao, 372
-fetoprotena, 787
FGF acdico. veja Fator 1 de crescimento
fibroblstico
FGF. veja. Fator de crescimento fibroblstico
FGFR3. veja Receptor 3 do fator de
crescimento fibroblstico
Fibras, no cristalino, 283
Fibronectina, 102-103
emenda alternativa do RNA em, 468
na condrognese, 722-723
na fuso mioblstica, 347
na migrao celular, 240,362-363
na migrao das clulas germinativas, 844,846
na migrao do mesnquima primrio, 214
na migrao mesodrmica, 230-231
somitmeros e, 344
Fgado, 382
na formao do sangue, 379-380
ramificaes no, 683-684
Filo. veja Filos
Filopdios, 210
elongao do arquntero e, 217-218
em axnios, 277-278
em migrao do mesnquima primrio, 214
formao de espculas e, 215
Filos, emergncia evolucionria, 887-890
Fmbrias, 180
Fissuras, na ramificao do tubo epitelial, 684-686
Flagelos, 10-11,123-124
Fluido amnitico, 244
Fluidos, leis do movimento, 367
Focomelia, 830
Foice de Koller, 233,234,605
Folculos, 777
cabelo, 299-300
hormnios e, 777,870,872-874,875
maturao, 875
na ativao do grupo de genes terminais,
557-558
na determinao do eixo embrionrio, 554

na ovulao, 870,871-874
na reiniciao da meiose ooctica, 875
quimiotaxia e, 132
translocao da protena Dorsal e, 578-581
Folistatina, 617,624,649
Forame oval, 372
Formao do mamilo, 763
Formao do padro, 701-702
Formiga, polifenismo nutricional, 816-817
Fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (PIP2),
112,147,184
Fosfolipase C, 112,147,149
Fosforilao, regulao de fatores de
transcrio, 424-425
Fosvitina, 862
Fotoperodo
na diapausa, 812
na partenognese de afdeos, 811
Fotoreceptores, 280
em neonatos, 282
induo clula-para-clula em, 688-690
Fotossntese, na simbiose desenvolvimental,
808-809
Fragmentos de restrio, 55
Fronteira metencfalo-mesencfalo, 268
FSH. veja Hormnio folculo estimulante
Ftz. veja Gene fushi tarazu
Ftz. veja Protena Fushi tarazu
Fungos, genes homeobox, 647
Fura-2, 144
Fuso de gametas, 139-140
Fuso mittico
ciclina B e, 200
sulco de clivagem e, 202-203
Fusossomo, 867
Gafanhoto, movimento axnico, 315
GAG. veja Glicosaminoglicano
GAGA, fator de transcrio, 436
-galactosdeo, 56
Galactosiltransferase, 105-106,136,137
Gametas, 3. veja tambm vulo;
Espermatozide
ativao metablica, 147-152
atrao, 128-129
em hermafroditas, 490-491
estrutura, 121-128
fuso, 139-140,152-154
mamferos, 131-132
no equivalncia, 154-155
reao acrossmica em, 129-130
reconhecimento, 128-139
Gametognese, 5,483
Gnglios, 280
entricos, 284
parassimpticos, 284
raiz dorsal, 284,287,292
retinianos, 325,328-331,825
simpticos, 284,287,292
talidomida e, 831
Gnglios da raiz dorsal, 284,287
precursores, 292
talidomida e, 831
Gnglios retinianos, 825
diferenciao, 325
especificidade adesiva, 328-331,825
Gnglios simpticos, 284,287
diferenciao, 292
GAP. veja Protena ativadora de GTP-ase
Gstrula, desenvolvimento evolucionrio, 886
Gastrulao, 3,209-210
crescente cinzento em, 602
desenvolvimento evolucionrio, 886
Drosophila, 543-545
em anfbios, 221-232
em aves, 233-242
em peixes, 218,221
gradiente de maturidade, 237
peixes, 218-221
GATA-1, 440
Gato, padro neuronial do sistema visual, 824-826
Gd. veja Gene gastrulation defective
GDF. veja Fatores de crescimento e
diferenciao
GDNF. veja Fator neurotrfico derivado da glia
Gelatinase, 106
Gelia cardaca, 363
Gelia do ovo, 128
na reao acrossmica, 129-130
Gema, 31,125
absoro de protena, 870
cerco, 237-238
distribuio, 168-169
importncia evolucionria, 169
intensificador de protena, 404
prognese e, 745
Gmeos
fraternos, 186
idnticos, 186
unidos, 186
Gmeos conjugados, 186
Gmeos dizigticos, 186
Gmeos monozigticos, 186
Gmeos siameses, 186
Gene(s).veja tambm Genes autossmicos;
Expresso gnica; Transcrio
acesso a trans-reguladores, 432-434
autossmicos, 447
dorsalizao, 578
em efeitos teratognicos, 837
emenda alternativa do RNA e, 468-471
especficos para o fgado, 417-418
estrutura, 74,392
xons, 392-394
experimentos de eliminao, 70-73
identificao com anticorpos monoclonais,
90-91
impresso, 444-446
intensificadores, 402-404
interaes com sntese de protenas, 426
metilao de DNA e, 442-446
modelo operon, 47-48
promotores, 394-401
regulao, 6,391
seqncias de limite, 454
sntese diferencial de RNA e, 49-54
sntese em linfcitos B, 410-415
tcnicas de insero, 69-70
transcrio, 392-394,431-432
ventralizao, 578
Gene
abdominal A (abdA), 569,572,575
ndice de Assuntos
abdominal B (abdB), 569, 572, 575, 637,

638, 647
achaete (ac), 585
actin, 611
Antennapedia (Antp), 58-59
anterobithorax (abx), 574-575
apo-B, 493
apterous, 751-752
arista-less, 752
armadillo, 565
BDNF, 292
bicoid, 478
bithorax (bx), 574-575
bithoraxoid (bxd), 574
BMP4, 616,724
BMP7, 616
boule, 858
Brachyury, 64
Broad-Complex (BR-C), 758-759,760
buttonhead (bth), 555-556
cactus, 577
Cardiac-specific homeobox (Csx), 904
CAT, 403,452-453
caudal, 643
cdc2, 198
cdc13, 199
Cdx1, 643
cerberus, 618-619
c-fos, 475
chordin, 614
c-myc, 418-419,445
cornichon, 580
cortex, 480
cubitus interruptus, 565
Cyllla, 465
da ovalbumina, 442
daughterless (da), 791
DAX1, 781
DAZ, 858
deadpan, 791
decapentaplegic (dpp), 573,578,584,616
Deformed (Dfd), 569,638,640,647
desert hedgehog (dhh), 659
disheveled, 565
Distal-less (Dll), 573,752
Dlx3, 715
dorsal, 577-578
dorsalin, 264
doublesex (dsx), 793-794
E74, 761
E74B, 760
E75, 761
E78, 761
easter (ea), 581
Ecdysone receptor (EcR), 758,760,761
embryonic ectodermic development (eed), 643
empty spiracles (ems), 555-556
Emx, 647
EMX-2, 647
engrailed, 565-569
engrailed-2, 268-269,627
even-skipped, 564
extra sex combs (esc), 643
Extradentcule (Exd), 577
exuperandia, 553
eyeless, 903
fem, 796,854
fem-3, 491
fog, 854
fringe, 753
fused, 565
fushi tarazu (ftz), 560,565,575
gastrulation defective (gd), 581
giant (gt), 561-563
Globina, 442-443
-globin, 863
glp-1, 478,853-854
goosecoid, 611,614,619,637
grauzone, 480
gurken, 554,580,869
H19, 445-446
hairy, 564
hedgehog (hh), 566-568,660,718
her, 796
hid, 761
HNF3, 637
Hoxa-2, 642
Hoxa-3, 70-73,295
HPRT, 448-450
hsp, 436
hsp70, 454
huckbein, 561
hunchback (hb), 405-575
Igf-2, 444
Igf-2r, 444,445-446
indian hedgehog (ihh), 659
Interferon (INF), 423
intersex (ix), 790
intra-abdominal (iab), 575
inversion of embryonic turning (inv), 648
knirps (kni), 556,561-563
krox-20, 627
krppel (Kr), 73,560,561-563
L71, 761
labial (lab), 569,637,638,647
lefty, 648
lethal of scute (lsc), 585
Lim-1, 268,637
Lmx1, 722
15-lox, 497
Luciferinase, 74
mog, 854
MRF4, 349
msx-1, 397-398,264,714,715
MT-1, 397-398
myf5, 349
MyoD, 349-350,416,442
myogenin, 349
nanos, 478,556
Netrin, 320
nodal, 636-637,648-649
noggin, 611,614,616,620
Notch, 692-693
Notch-1, 344
nudel (nd), 580-581
openbrain, 263
optomotorblind, 752
orthodenticle(otd), 555-556,620,647
oskar, 480,556,869
Otx-2, 268,647
Paraxis, 344
patched, 660-661
Pax2, 680
Pax3, 263,264
Pax6, 282,902-903
PAX6, 827,903
IA2 - 11
pdx-1, 383
pipe (pip), 580-581
Pit-1, 407-409
posterobithorax (pbx), 574
proboscipedia (pb), 569,638
prolactin, 407-409
Proliferin, 423-424
radical fringe, 706
Ras, 109
Rb97D, 858
reaper, 761
rGH, 397-398
rhomboid, 583-585
roughex, 858
runt, 564,791
salm, 572-573
screw, 616
scute (sc), 585
serrate, 753
Sex comb reduced (Scr), 569,585
Sex-determining region of the Y (SRY), 778-780
Sex-letal (Sxl), 469
Sf1, 780
shaker, 467
Siamois, 610-611
sisterless, 791
situs inversus viscerum (iv), 648
Small eyes, 903
snail, 578,583-585
snake (snk), 581
sonic hedgehog (shh), 263,648-649,659,718
SOX9, 780
spe-11, 859
Spec1, 465
staufen, 480,556
string, 199
swallow, 480,553
tailless, 561,563,575
teashirt, 577
TGF -, 299
tinman, 903-904
Toll, 581
torpedo, 580
torso, 557
torsolike, 558
transformer (tra), 468-469,789-790
transformer-1 (tra-1), 468-469
transformer-2 (tra-2), 469,490-491,789-790
tudor, 556
twist, 351,583-585
twisted, 578
Ultrabithorax (Ubx), 569,571,572,573,616
ultraspiracle (usp), 760
unc, 320
valois, 556
vasa, 556
vestigal, 751,753
Vg1, 478,863
Vitellogenin, 444
v-myc, 418
windbeutel (wind), 580-581
wingless (wg), 566,660,753
Wnt, 268,269,677,680,724,781-782
Wnt7a, 721-722,724
WT-1, 420,677
wuwen, 850
Xbra, 620
Xcat2, 863
IA2 - 12
ndice de Assuntos
Xenopus nodal-related-3 (Xnr3), 627

Xist, 449
XlHbox, 627
Xlsirt, 863
Xol-1, 796
Xotx2, 620
Xwnt, 611,863
zerknllt (zen), 578,584
zeste white-3, 565
ZP3, 74-75
Gene Antennapedia (Antp), 58-59,569,640,
751,907,909
mutaes, 570-571
na especificao homloga, 753
na regulao gnica, 572-573
Gene bicoid, 478
determinao de eixo, 480-481,548-550,869
mutaes, 552
no desenvolvimento anterior, 552-553
Gene Brachyury, 64
na induo mesodrmica, 611,612
Gene caudal, 643
na determinao do eixo, 481,548-550,554
Gene decapentaplegic (dpp), 573,578,584,616
regulao do, 577
Gene Distal-less (Dll), 573,752
na evoluo, 908-909,911-912
no polifenismo da borboleta, 815
Gene doublesex (dsx)
793-794
Gene empty spiracles (ems), 555-556
mutaes de perda-de-funo, 647
Gene engrailed, 565-569
em trajetrias desenvolvimentais homlogas,
727
mutaes, 560
na determinao do disco imaginal, 751
Gene Globina
metilao, 442-443
transcrio, 437-441
troca no, 440-441
Gene -globin, 863
promotor, 396
transcrio, 437-441
Gene Hoxa-2, 642
na evoluo, 906
Gene Hoxa-3, 70-73,295
no destino da clula da crista neural
craniana, 641
Gene hunchback (hb), 405-575
na ativao dos genes gap, 561-563
na determinao do eixo ntero-posterior,
480-481,548-550
no centro organizador anterior, 554-555
no centro organizador posterior, 556-557
Gene myogenin, 349
regulao mltipla do, 425
Gene nanos, 478,556
480-481,548-550
na determinao dos eixos do ocito, 869
Gene Notch, em espaamento neuroblstico,
692-693
Gene Proliferin, regulao dependente de
contexto do, 423-424
Gene Sex-letal (Sxl), 469
mutaes perda-de-funo, 789-790
processamento diferencial de RNA e, 791-792

razo cromossomo X-para-autossomo e,
790-791
Gene sonic hedgehog (shh), 263,648-649,
659,718
na evoluo, 727
na metamorfose, 741
na polarizao dos membros, 721
no mutante limbless (sem membros), 724
ZPA e, 718
Gene transformer (tra), 468-469,789-790
em determinao do sexo em Drosophila, 793
Gene transformer-1 (tra-1), 468-469
na determinao da clula germinativa, 854
na determinao do sexo em Caenorhabditis,
796
Gene transformer-2 (tra-2), 469,490-491,
789-790
alelos sensveis temperatura, 794-795
na determinao do sexo em Drosophila, 793
Gene Ultrabithorax (Ubx), 569,571,572,573,616
cis-reguladores, 574
na evoluco, 907
Genes
Autossmicos, 447
controladores da determinao sexual, 796
de cadeia leve, 410
de cadeia leve, 410
de cadeia pesada, 411-412
de efeito materno, 546,560
de efeito paterno, 859
de polaridade segmentar, 546,565-569
de segmentao, 559,559-561
dorsalizantes, 578
especficos do fgado C/EBP e, 417-418
fgf, 269,658,706,721
Gap, 546,560-561,572
Homeobox, 628
Hometicos, 546,569
Hox, 625,628
Hoxa, 642,644,710-711
Hoxb, 295,644,721
Hoxc, 723
Hoxd, 644
Imunoglobulina, 402
islet-1, 310
LIM, 310
lin, 491,692
Neurognicos, 311
pair rules, 546,560-561,563-565,572
pair-rule primrios, 564-565
pair-rule secundrios, 565
Proneurais, 311
Realizadores, 572-573
reguladores homlogos, 902-909
sdc, 796
seletores, 752
seletores hometicos, 569.
tbx, 723
Ventralizantes, 578
yolk protein, 444,794-795
Genes Autossmicos, 447
na determinao do sexo, 780-781,790791,795-796
Genes de efeito materno, 546,560
evidncia embriolgica, 546-547
gradientes de protena e, 547-550
grupo terminal, 557-559
no centro organizador anterior, 552-556

no centro organizador posterior, 556-557
Genes Homeobox
em plantas e fungos, 647
na induo neural, 628
Genes Hometicos, 546,569. veja tambm
Complexo hometico; Genes Hox
cromatina em, 572
expresso, 569-573
homologia em, 637-638
mutaes, 570-571
seqenciamento de genes e, 573
Genes Hox, 625,628
anlise experimental, 640-645
anatomia comparada e, 641,645-646
evoluo de artrpodos e, 907-909
evoluo de vertebrados e, 905-907
expresso no tronco, 642-643
grupo parlogo, 638
homologia aos genes de Drosophila, 640
homologia aos genes Hom-C, 637-638,905
na definio de animais, 647
na especificao do campo dos membros,
703-704
na induo especfica de regio, 665-666
no eixo prximo-distal dos membros, 709-711
no sistema nervoso, 638-640
regulao de, 643
teratognese de cido retinico e, 830
Genes Hoxa, 642,644,710-711
na regenerao de membros, 715
Genes Hoxd, 644
na evoluo dos membros, 726
na polarizao dos membros, 720-721
no mutante limbless (sem membros), 724
Genes Imunoglobulina
anticorpos e, 409
cadeia leve, 410
cadeia pesada, 411-412
metilao, 444
regies associadas matriz e, 453
silenciadores e, 454
trans-reguladores, 413-415
Genes pair-rule primrios, 564-565
gap, 561-563
pair-rules, 563-565
polaridade segmentar, 565-569
Genes seletores hometicos, 569. veja
tambm Genes hometicos
Gentica
do desenvolvimento, 39-40
relacionada embriologia, 35,38-40
teoria do gene, 35-38
Gentica do desenvolvimento, 39-40,391
Genitlia
desenvolvimento na Drosophila, 794
externa, 783-784
maturao, 319
sensibilidade a teratgenos, 828
Genitlia externa, sensibilidade a teratgenos, 828
Genoma
ativao no embrio, 488-490
condensao, 859
domnios, 454
ndice de Assuntos
isoladores, 454
Gestao, humana, 276
GGF. veja Fator de crescimento da glia
GHF1. veja Pit-1
Ginandromorfos, 789
Gines (rainha em potencial), 816-817
Girino. veja tambm Metamorfose de anfbios
campo dos membros, 703-704
excreo de amnia, 735
Glndula mamria
adolescente, 765
embrionria, 762-765
na gravidez e lactao, 765-768
Glndula paratireide, 380
Glndula pituitria, 380,786
gene Pit-1 e, 407
hormnio luteinizante e, 787
no ciclo menstrual, 871,872
Glndula salivar
especificao em Drosophila, 585
protena BR-C e, 758-759
Glndula tireide, 380
Glndulas sebceas, 300
Glia de Bergmann, 273
Glicoprotenas
extracelulares, 102-104
integrinas, 104-105
proteoglicanos, 90,100-102
Glicosaminoglicano (GAG), 100,345,685
Glicosiltransferases, 105
Globina, controle traducional da, 494-497
-globina, longevidade de mRNA, 475
Gloqudias, 178-179
Glutationa, 151,154
GM-CSF, 377
GnRH. veja Hormnio liberador de
gonadotrofina
Goldberg-Hogness box (seqncia TATA), 396
Gnadas
desenvolvimento, 319,775-777
em heterocronia, 743
estgio indiferente, 775
fatores de transcrio dedo de zinco e, 420
hermafroditas, 853-855
Gonadotrofinas
corinica, 247
na reiniciao da meiose ooctica, 875-876
no ciclo menstrual, 870,872-874
Gonadotrofos, 407
Gonadotropina corinica (hCG), 827
Gondios, 18
Gonium, 16
Gonocoristismo, 797
Gradientes adesivos, migrao de axnios,
314-315
Grnulos corticais, 127-128
exocitose, 143,144,146
na vitelognese, 862-863
Grnulos secretores, na formao da crnea, 672
Gravidez
desenvolvimento mamrio na, 765-768
Gravidez ectpica, 186
Gravidez tubria, 186
Grex, 21,27-28
Grupo box de alta mobilidade (HMG), 779
Grupo de equivalncia, 186,690
Grupo terminal do gene, 557-559
Grupos parlogos, 638
GSK-3. veja Quinase 3 da sntese de glicognio

gt. veja gene giant
Guelras, na evoluo de vertebrados, 895-896
GVBD. veja Quebra da vescula germinativa
Haliotis, 807
Haptotaxia, 314-315
Haste de conexo, 246
hb. veja gene hunchback
HCG. veja Gonadotropina corinica
Hlice-ala-hlice bsica (bHLH), 415-416
Helocidaris, 745
Hemangioblasto, 367-368
Hematopoiese, 374-377,378-380
Heme, na regulao da produo de hemoglobina,
494-496
Hemisfrio animal, 156
derivados, 224
destino de clulas no, 598
Hemisfrio ectodrmico apical, 714
Hemisfrio pigmentado animal, 229
Hemisfrio vegetal, 156
derivados, 224
Hemisfrios cerebrais, 266
Hemofilia B, mutaes C/EBP, 418
Hemoglobina
adulta, 372
fetal, 372,437,440-441
na metamorfose de anfbios, 735
produo, 494-497
tipos, 437
Hemoglobina de Adulto, 437
Hemoglobina embrionria, 437
Hemoglobina fetal, 372,437,440-441
Hereditariedade, controle da, 35-37
Hermafroditismo, 795
determinao de clulas germinativas, 853-855
determinao de gametas e, 490-491
em Caenorhabditis, 795-797
em peixes, 797-798
protndrico, 797-798
protognico, 797
sncrnico, 797
Herpes, 853
Heterocromatina, 446
na meiose, 852
Heterocronia, 743-745,891
Heterogamia, 17
HGF. veja Fator de crescimento de
hepatcitos
hh. veja gene hedgehog
Hialuronidase, 672
Hibridizao
cidos nuclicos, 54-55
DNA, 58-59
Hibridizao do cido nuclico, 54-55
Hibridizao in situ, 63-64
Hibridoma, 89
Hidrocele, 744,745
Hidroxiecdisona
genes Broad-complex e, 758-759
ligao ao DNA, 757-758
receptores, 758,759-761
20-hidroxiecdisona, 749,754-756
na diapausa, 813
na incorporao de protenas do vitelo, 870
HIM. veja Microambientes indutivos
hematopoticos
Himenptera, partenognese em, 861
IA2 - 13
Hiperestriato, 823
Hipoblasto, 189,220-221,690
de aves, 233-234,238
de mamferos, 243
primrio, 233
secundrio, 233
Hipometilao, 442
Hipotlamo, 268,319,786
comportamento sexual e, 787
Hiptese da adeso diferencial, 86
Hiptese da afinidade diferencial de
substrato, 99
Hiptese da cauda poli(A), 483-486
Hiptese da eficincia da traduo, 486
Hiptese da especificidade da adeso
diferencial, 314-315
Hiptese da mensagem maternal mascarada,
482-483
Hiptese da quimioafinidade, 327-328
Hiptese da seleo clonal, 822
Hiptese das vias marcadas, 315-317
Hiptese do cdigo Hox, 637-647
Hiptese do sinal gradativo na induo da
vulva, 691
Hipoxantina fosforibosiltransferase (HPRT),
89,448,450
Histoblastos, 748
Histocompatibilidade, antgenos principais, 248
Histonas, 5,124,399,431
acetilao, 436-437
na estrutura de nucleossomos, 432
HLH, fator de transcrio hlice-lao-hlice, 791
HNK-1, 239-240
hnRNA, 462
hnRNA-A1, 466
Holocomplexo, 441
Hom-C. veja Complexo hometico
Homeobox, 576
Homeodomnio, 576
Homeose, induzida por cido retinico, 641
Homologia
de membros e nadadeiras, 726-727
em genes hometicos, 637-638
em genes reguladores, 902-909
entre genes Hox e Hom-C, 905
nas vias de desenvolvimento, 727,909-911
Homlogos, 616
Homossexualidade, 787-788
Hormnio, 658,733. veja tambm Tipos
especficos
como fator de transcrio, 420-423
corinico, 247-248
da placenta, 247-248
em epfises, 357-358
estrgeno ambiental, 836-837
na determinao secundria do sexo, 775,
782-788
na estabilizao de mRNA, 476
na formao de ossos, 355
na metamorfose de anfbios, 735-743
na metamorfose de insetos, 749,754-761
na ovulao, 870
no desenvolvimento da glndula mamria,
762-768
Hormnio adrenocortocotrfico (ACTH), 407
Hormnio anti-duto Mlleriano (AMH),
775,784
IA2 - 14
ndice de Assuntos
aromatase e, 799
ativao, 780
clulas de Sertoli e, 777
Hormnio da diapausa, 813
Hormnio da ecloso, 756
Hormnio desencadeador de ecdise, 756
Hormnio ecdisteroidognico ovariano
(OEH), 808
Hormnio folculo estimulante (FSH)
na maturao de folculos, 875
Hormnio Juvenil, 754,755-756
na absoro da protena do vitelo, 870
na diapausa, 813
na partenognese, 811
no polifenismo nutricional, 816-817
Hormnio liberador de gonadotrofina (GnRH),
319
Hormnio luteinizante (LH), 319,787
na maturao folicular, 875
Hormnio neurosecretrio do
desenvolvimento do ovo (EDNH), 808
Hormnio protracicotrfico (PTTH),
754,755-756,813
Hormnios esterides
como fatores de transcrio, 420-423
folculos e, 777
Hormnios glicocorticides, 420-424
Hormnios peptdicos, 754
Hormnios sexuais
em epfises, 358
sistema nervoso central e, 785-788
HPFH. veja Persistncia hereditria da
hemoglobina fetal
HPRT. veja Hipoxantina fosforibosil-transferase
HRI. veja Protena inibidora responsiva ao heme
Humano
anormalidades congnitas, 297,827-837
ciclo menstrual, 870-873
defeitos do tubo neural, 262-263
deficincia da protena TBX5, 722
desenvolvimento do cabelo, 300
determinao do sexo, 778-780,781,782-784
epfise, 357-358
espermatozide, 131,138,858
fatores de transcrio, 400-401
fertilizao, 132
formao do crebro, 265-269
fotoreceptores em neonatos, 282
gene Hoxd13, mutao de perda-de-funo,
710-711
gestao, 276
impresso gnica, 444-445
inteligncia, 276
morte celular programada, 783
mutaes das clulas da crista neural, 290
mutaes do gene patched, 660-661
mutaes EMX-2, 647
oognese, 860,870-876
placenta, 246
quimeras, 187
regulao do gene da globina, 440,441
sindactilia, 724-725
Hyalophora, 755,813
Hyla, 819-820
-B, 414-415,582
I
iab. veja gene intra-abdominal
Ichthyostega, 726
Id. veja Inibidor da diferenciao
Idade celular, na determinao de neurnios, 309
IFN. veja gene Interferon
IGF-II. Veja Fator II de crescimento
semelhante insulina
ihh. veja gene indian hedgehog
IL-3. veja Interleucina 3
IL-6. veja Interleucina 6
Ilhas de polinvaginao, 233
Ilhas de sangue, 367-369
Ilhota-1, 309
Imago, 748
IMZ. veja Zona marginal involutiva
INAH. veja Ncleo intersticial do hipotlamo
anterior
Inativao do cromossomo X, 446-448
mecanismo, 449-450
Induo, 605. veja tambm Induo
embrionria primria; Induo
especfica de regio
broto dos membros, 704
cascatas, 629,667
clula-para-clula, 687-693
cristalino, 667-672
definida, 48
especificidade gentica na, 666-667
mesodrmico, 606,609-612,614
modelo seqencial, 691
na ramificao epitelial, 683-687
negativa, 599-600
neural, 257,621-624,626-627,628
no desenvolvimento evolutivo, 886-887
recproca, 113-114,675-676
secundria, 628-629,655
Induo clula-a-clula. veja Induo
Induo do cristalino
base celular, 668-672
formao da crnea, 672
modelo do clice optico, 667-668
Induo embrionria primria, 603-605
atividade organizadora na, 613-621
base molecular, 609-612
centro de Nieuwkoop e, 606-609
especificidade regional, 621-628
Induo especfica de regio
caudalizao neural, 624-626
determinao de diferenas regionais, 621-623
em interaes epitlio-mesnquima, 663-666
modelo de duplo gradiente, 623-624
Induo negativa, 599-600
Induo neural, 257
especificidade regional, 621-623
genes homeobox e, 628
modelo do gradiente duplo, 623-624
sinais planares e, 626-627
Induo recproca, 113-114, 675-676
Induo secundria, 628-629,655. veja
tambm Interao proximal
Inervao
neurnio motor e, 313
sobrevida diferencial na, 331-334
Informosomos, 482
Ingresso, 209
na formao do hipoblasto, 220
no mesnquima primrio, 210
nos micrmeros do ourio-do-mar, 212-215
Inibio lateral, 311,691
Inibidor da diferenciao (Id), 415-416

Inibidor da metaloprotease (TIMP), 737
Iniciao, 472
Iniciador (primer), 55
Inositol 1,4,5-trifosfato (IP3), 112
na fuso de gametas, 149
na reao acrossmica, 138
Insetos. veja tambm Metamorfose de insetos
clivagem, 192-195
diapausa, 812-813
evoluo, 907-909
oognese, 867-870
Instar, 747
Integrinas, 104-105
v1, 231
na fuso de mioblastos, 347
nas clulas-tronco epidrmicas, 298
transduo de sinais e, 112-113
Inteligncia, humano, 276
Intensificador de glicocorticide, 435-436
Intensificador negativo, 396
Intensificadores, 74,395-396,402-404
armadilha intensificadora, 418-419
no cncer, 418-419
responsivos a hormnios, 420-423
sinergismo e, 408-409
stios hipersensveis DNase I e, 435-436
Interao. veja tambm Interao proximal
instrutiva, 655-656
permissiva, 656
Interao proximal, 655-656
competncia e, 656-657
epitlio-mesnquima, 663-667
fatores parcrinos, 657-663
na formao do dente, 682-683
na induo clula-para-clula, 687-693
na ramificao epitelial, 683-687
no desenvolvimento do rim, 673-681
Interaes clula-clula
acaso e, 692-693
blastmeros e, 178
digesto, 106-107
polarizao da membrana e, 184
tipos, 80
Interaes epitlio-mesnquima, 663-667
Intercinese, 852
Interleucina 3 (IL-3), 377
Interleucina 6 (IL-6), 378
Interneurnios, 280
Intervalo da pr-replicao, no ciclo celular, 196
Intervalo pr-meitico, no ciclo celular, 96
Intestino
simbiose do desenvolvimento e, 810
Intestino anterior, 235
Intestino primitivo, 216,380
ntrons, 392-394,466
Inv. veja gene inversion of embryonic turning
Invaginao, 209
na gastrulao de Xenopus, 232
no arquntero do ourio-do-mar, 215-218
Invertebrados
movimento axnico, 315-317
partenognese, 154-155
Involuo, 209
clulas da zona marginal e, 222-224
na gastrulao de anfbio, 229-231
ndice de Assuntos

on hidrognio. veja pH
Ionforo, clcio, 145-146,348
IP3. veja Inositol 1,4,5-trifosfato
Ipsilateral, 825
IRE-BP. veja Protena ligante responsiva ao ferro
ris, 284
aniridia, 827
Isocitrato desidrogenase, 347
Isogamia, 17
Isolamento reprodutivo, 901-902
Isolantes, 431,454
Istmo, 268-269
iv. veja gene situs inversus viscerum
ix. veja gene intersex
JAK quinases, 107-108, trajetria JAKSTAT, 107-108
Junes aderentes, 92
Junes em fenda, 97-99
em blastmeros, 178
em ocitos, 875
Keratella, 819
KGE. veja Fator de crescimento de queratincito
kini. veja gene knirps
Kr. veja gene Krppel
lsc. veja gene lethal of scute
lab. veja gene labial
Lbio dorsal do blastporo, 222-224
na induo embrionria primria, 603-605
na iniciao da gastrulao, 602
sinais planares do, 627
Lactao, 765-768
Lactotrofos, 407
Lamina B1, 452
Lmina basal, 99
afinidade de micrmero, 212-214
Lmina extracelular, na blastocele do ouriodo-mar, 212-215
Lmina reticular, 99
Laminina, 103
formao de sinapse, 331
migrao axnica, 314-315
migrao de axnios retinianos, 325,326
Lampsilis, 179
Lanternas, vaga-lume, 754
Lanugo, 300
Larvas
colonizao, 806-808
controle traducional em, 490-493
em evoluo, 890
em taxonomia, 884
fatores ambientais e, 761-762
precoces, 196
segmentos, 559-561
Larvas Pluteus, 744-745,821
Larvas precoces, 196
L-CAM, 93
LCR. veja Regio controladora de loco
LEF-1. veja Protena intensificadora de linfcito
Lei de Murray, 367
Lei de Poiseuille, 367
Leptoteno, 851
Lesma marinha, colonizao larval, 807
Leucemia, induzida por translocao, 418-419
Levedo, gene cdc2, 198
LH. veja Hormnio luteinizante
LIF. veja Fator inibidor da leucemia
Ligao homoflica, 94
Ligao homoflica, 94
Ligante, em co-evoluo, 901-902
Limnaea, 177-178
Linfcito. veja tambm Linfcitos B
gerao, 374,375
via de diferenciao, 582
Linfcito B
criao de genes de cadeia leve, 410-411
criao de genes de cadeia pesada, 411-412
fatores de transcrio, 412-415
hiptese de seleo clonal, 822
protenas-anticorpos e, 409
sntese de anticorpos monoclonais, 89-90
troca de classe, 411
Linfcito T, 410-411
Linfoma de Burkitt, 419
Linha primitiva, 234
acmulo celular na, 239-240
formao, 234-235
migrao celular na, 235-238
organizador mamfero e, 636-637
Lipovitelina, 862
15-lipoxigenase (15-LOX), 497
Lisossomos, na metamorfose de anfbio, 736
LMC. veja Coluna motora lateral
Lbulos, 684,685
Lordose, 786,787
15-LOX. veja 15-lipoxigenase
Lula, simbiose de desenvolvimento na, 808,
809-810
Luteotropina, 874
Lymantia, 813
Lytechinus, 130
Macaco. veja Macaco Rhesus
Macaco Rhesus, padronizao neuronial do
sistema visual, 824-825
Macrocentrus, 196
Macrmero, 170
Malformaes, 827-828
Mamfero(s)
gametas, 131-132
circulao embrionria, 370-371
clivagem, 180-188
clonagem, 45-46
colapsina em, 322
compactao em, 181-183
desenvolvimento da crista neural, 295
desenvolvimento da glndula mamria,
762-768
desenvolvimento do ouvido mdio, 894-896
determinao sexual, 774-788
eixo esquerdo-direito, 647-650
especificao do eixo ntero-posterior,
637-647
fechamento do tubo neural, 260,262
fertilizao, 135-139,153-154,180
gastrulao, 242-248
hemoglobina, 372
hiptese da cauda poli(A), 484
homologia do gene hometico, 637-638
inativao do cromossomo X, 446-450
induo embrionria primria em, 605
mapa do destino, 244
IA2 - 15
no-equivalncia de proncleos, 154-155

odontognese, 682
oognese, 870-876
organizador em, 636-637
origens dos tecidos, 242-245
padronizao neuronial do sistema visual,
824-826
preveno da polispermia, 146
reao do grnulo cortical em, 143-144
Mandbula
co-opo evolucionria e, 894-896
progresso correlacionada e, 896-897
Manduca, metamorfose, 753-754,756
Manto mesodrmico, 230
MAP. veja protena associada mitose
Mapa de destino
do disco da perna de Drosophila, 748
em aves, 234
mamferos, 244
peixes, 221
rombmeros, 267
salamandra, 222
Xenopus, 221,222
MAR. veja Regio associada matriz
Mariposa chifruda do tabaco. veja Manduca
Mariposas, oognese, 867-870
Marspio (bolsa de criao), 179
Massa celular interna, 182,185,186-188
Matria branca, 271
Matria cinzenta, 271
Matriz do cumulus, 131
Matriz extracelular, 99
colgeno, 99,100
crescimento axnico e, 313-319
glicoprotenas, 102-104
migrao da clula neural do tronco e, 287,290
na sntese da casena, 767
proteoglicanos, 99,100-102
ramificao do tubo epitelial e, 684-686
receptores celulares, 104-106
repulso especfica do cone de crescimento,
317-318
transduo de sinal e, 112-113
Matriz nuclear
fixao da cromatina, 451-453
MBT. veja Transio da blstula intermediria
M-CSF. veja Fator estimulador de colnias de
macrfagos
Mecnica do desenvolvimento, 593
Medula espinhal
leses, 334
migrao do neurnio comissural, 320
organizao embrionria, 271-272
Medula supra-renal, 284,293
Medula, organizao embrionria, 271-272
Medulla oblongata, 266
MEF2A, 351
Megoura, 811
Meiose, 13
em clulas germinativas primordiais, 850-852
reiniciao em ocitos, 864-865,875-876
Melanina, 280
Melancitos, 284
cabelo, 300
diferenciao, 293
IA2 - 16
ndice de Assuntos
migrao, 285-286
Meltrinas, 348
Membrana. veja tambm Potencial de membrana
condutncia, 204
polarizao, 184
sntese, 203-204
Membrana basal, 99
Membrana celular. Veja Membrana plasmtica
Membrana cloacal, 382
Membrana corioalantica, 361
Membrana plasmtica, 88,126. veja
tambm Potencial da membrana
interaes recprocas, 113-114
na fuso de gametas, 139-140
Membranas extraembrionrias, formao em
mamferos, 245-248
Membro anterior, distinto do membro
posterior, 722-723
Membro posterior, distinto do membro
anterior, 722-723
Membro tetrpode
diferena membro anterior/membro
posterior, 722-723
eixo prximo-distal, 706-716
eixo ntero-posterior, 716-721
evoluo de, 726-727
formao do broto do membro, 702-706
formao dos dedos, 724-727
padro de formao em, 701-702
regenerao, 714-716
talidomida e, 830-833
Membros. veja tambm Broto dos membros;
Membro tetrpode
condrognese em, 722-723
evoluo, 904-905,908-909
homologia s nadadeiras, 726-727
regenerao, 87-88,714-716
restrio morfogentica na formao, 898-899
talidomida e, 830-833
Memria, 826
Menidia, 818,821
Mensageiros secundrios, 112,147
Mercrio, como um teratgeno, 828
Merognias, 597
Mesencfalo, 266
determinao, 268-269
Mesnquima. veja tambm Mesnquima
metanefrognico
cabea, 341
crista ectodrmica apical e, 708,711,713
cultura de, 681
facial, 295
induo da ramificao epitelial, 683-687
ingresso na gastrulao em ourio-do-mar,
210-215
mamrio, 763-765
Mesnquima metanefrognico, 674
apoptose e, 677-679
converso em epitlio, 679-680
formao, 676-677
na induo recproca, 675-676
Mesnquima primrio, 210-215
induo negativa e, 600
Mesnquima secundrio, elongao do
arquntero, 217-218
Mesoderma, 4. veja tambm Mesoderma
dorsal; Mesoderma da placa lateral

de anfbios, 222-224,229-231,606-607
de aves, 235-238
de mamferos, 245
de vertebrados, 254
esplncnico, 358
formao em Xenopus, 229
induo, 606,609-612,614
involuo, 229-231
migrao, 230-231
modelagem em anfbios, 606-607
no segmentado, 343
protena Dorsal e, 583-585
regies, 341
zona de atividade polarizante, 716-717
Mesoderma da placa lateral, 341,358
na formao da membrana extra-embrionria,
359-361
no desenvolvimento de vasos sangneos,
366-373
no desenvolvimento do corao, 361-366
regies, 358
Mesoderma drmico, na metamorfose de
anfbios, 738
Mesoderma dorsal
desenvolvimento do osso, 351-358
diferenciao do msculo esqueltico, 347-351
formao de somitos, 343-344
gerao de tipos de somitos, 344-347
induo, 610-612
na organognese, 255
paraxial, 341,343
protena Noggin e, 617
Mesoderma dorsal somtico, 341
Mesoderma esplncnico, 358
Mesoderma intermedirio, 341
Mesoderma lateral, induo, 612
Mesoderma no segmentado, 343
Mesoderma Paraxial, 341,343
Mesoderma parietal, 358
Mesoderma posterior, induo, 612
Mesoderma precordal, 268
Mesoderma somtico, 358
Mesoderma ventral, induo, 612
Mesoderma ventrolateral, induo, 612
Mesoderma visceral, 358
Mesmero, 170
Mesonefros, 674
na induo do broto de membro, 704
talidomida e, 832
Metaloproteinase, 106-107,737
Metaloproteinases degradantes da
matriz, 106-107
Metalotionena 1, 397-398
Metamorfose, 773-774
anfibios, 734-742
conceito de limiar, 739
heterocrnica e, 742-745
inseto, 746-762
Metamorfose de insetos
atividade da hidroxiecdisona, 757-761
controle hormonal, 754-757
discos das asas, 750-753
discos imaginais, 746-753
fatores ambientais, 761-762
sistema nervoso, 753-754
Metamorfose em Anfbios,
conceito limiar, 739

degenerao da cauda, 735-738
heterocronia e, 743-744
hormnios da tireide e, 735-742
mudanas de comportamento, 740
mudanas morfolgicas gerais, 734-735
mudanas neuroniais, 739-740
Metamorfose hemimetbola, 746
Metamorfose holometbla, 746
Metanefros, 674
na induo recproca em, 676-681
Metaplasia, 40-41
Metaptergio, 726
Metazorios, 28-32
Metencfalo, 266
Metilao
cap 5, 486-487
citosina, 422
DNA, 442-446
5-metilcitosina, 442
Metotrexato, em anormalidades congnitas,
832-833
MGF. veja Fator da glndula mamria
MHP. veja Ponto de articulao mediano
Microambientes indutivos hematopoiticos
(HIM), 377
Microespculas, 277
Microfilamentos
em cunha celular, 260
em neurnios, 278
enrgides e, 194
na compactao, 184-185
na oognse merostica, 868
na vitelognese, 863
no anel contrtil, 201
no blastoderma celular, 193
ovo, 127
Microinjeo, 69
Micrmero, 170
na gastrulao do ourio-do-mar, 212-215
Micropinocitose, 862
Microtbulos
em flagelos, 123
em microespculas, 277-278
enrgides e, 194
na cunha celular, 260
na epilobia, 220
na fuso nuclear de gametas, 153
na sntese da membrana, 204
na vitelognese, 863
no blastoderma celular, 193
no rearranjo do ovo, 157,159
sulco de clivagem e, 202
Microvilosidades, 139,153
na compactao, 184-185
Mielencfalo, 266
Mieloma, 89
Mifepristona (RU486), 874
Migrao. veja Migrao celular
Migrao celular
afinidade diferencial de substrato e, 99
axnios e, 307,313-314,320-322
clulas cardacas presuntivas, 362-363
clulas da crista neural ceflica, 293-295
clulas da crista neural do tronco, 285-290
clulas do mesnquima primrio, 210-215
ndice de Assuntos
clulas germinativas, 843-850

fatores citoplasmticos, 209-210
fibronectina e, 103,204,230-231,240,
362-363
na linha primitiva das aves, 235-238
neurnios do cerebelo, 272-273
neurnios do crebro, 274-276
quimotaxia em, 320-322
Migrao de clulas germinativas
em anfbios, 843-844
em aves e reptis, 848-849
em Drosophila, 849-850
Mioblasto, 347-348
determinao, 349-351
inibio do ciclo celular e, 350
metilao do gene e, 443-444
Miognese, 347-348,415-416
Miogenina, 349
Mitomo, 345-346
Miotubos, 347
MIS. veja Substncia inibidora Mlleriana
Mitocndria
herana materna, 152
na vitelognese, 863
Mitose, 5
mecanismos citoesquelticos, 201-203
MPF e, 197
regulao, 198-201
Mixamebas, 21
MMC. veja Coluna motora medial
Modelo de coordenadas cartesianas,
primrdios dos rgos, 585
Modelo de induo seqencial, na induo
vulvar, 691
Modelo de no-equivalncia, 691
Modelo operon, 47-48
Modelos de gradiente, informao posicional
e, 551
Modularidade, no desenvolvimento, 891
Mola hidatidiforme, 154
Molculas da juno celular, 88,97-99
Molculas de adeso celular (CAM), 2425,92. veja tambm N-CAM
blastmeros e, 174
caderinas e, 92-95
classes, 88
no fechamento do tubo neural, 263
sndrome alcolca fetal e, 834-835
superfamlia de imunoglobulinas e, 95-97
talidomida e, 831
transduo de sinais e, 112-113
Molculas de adeso da clula neural, 95
Molculas de adeso de substrato, 88
Molusco
clivagem, 175-178
colonizao larval, 806-808
Molusco bivalve
Hiptese da mensagem materna mascarada,
482
mRNA de ocito armazenado, 477
Monospermia, 140
Morfognese, 2
afinidade celular diferencial na, 80,82-88
em Acetabularia, 6-10
na formao dos membros em tetrpodes e,

701-702
no dente de mamfero, 682
no rim, 673-676
problemas na, 79-80
processos celulares e, 80
Morfognese do desenvolvimento. veja
Morfognese
Morfologia, no desenvolvimento, 647
Morte. veja tambm Morte celular
Morte celular. veja tambm Apoptose
em metamorfose de anfbio, 735-739
na formao de dedos, 724-727
neurnios e, 331-334
Mrulas, 173-174,182
Mosca boss, 688-690
Mosca bride of sevenless (boss), 688-690
Mosca preta, colonizao larval, 808
Mosca rough (ro), 688-690
Mosca sevenless (sev), 688-690
Mosquitos, refeies de sangue, 808
Movimento celular. veja tambm Tipos
especficos
fatores citoplasmticos, 209-210
na linha primitiva das aves, 235-238,239-240
no arquntero de anfbios, 226-229
tipos, 209
transio da blastula intermediria (MBT),
218-220
MPF. veja Fator promotor da maturao
MRF4, 349
mRNA. veja tambm mRNA de ocitos
anlise com bibliotecas de cDNA, 61-63
degradao seletiva, 475-476
em Acetabularia, 9
longevidade diferencial, 474-476
791-794
na metamorfose, 740-742
ovo, 125
protenas mascaradas, 482-483
reao em cadeia da polimerase e, 66,68-69
mRNA do ocito
caracterizao, 477-479
de anfbios, 865-867
na determinao dos eixos, 480-481
na transio para o genoma embrionrio,
488-490
regulao da traduo, 481-487
sem cap, 486-487
seqestrado, 487
Mucopolissacardeos, 143
Muda, 746-748
hidroxiecdisona e, 754-755
hormnio juvenil e, 756
imaginal, 747-748
Muda imaginal, 747-748
Msculo. veja tambm Miognese
compromisso celular, 349-351
formao de sinapses, 331
inervao, 323-325
precursores, 345-346
Msculo epaxial, 346
Msculo esqueltico, diferenciao, 347-348
Msculo hipaxial, 346
Msculos dos membros
inervao, 323-325
IA2 - 17
precursores, 345
Msculos vertebrais, precursores, 345-346
Mutao eudiplopodia, 713
Mutao polydactylous, 711,713
Mutante limbless, 705,713,724
MyoD. veja Protena 1 determinante do
mioblasto
Myrmica, 817
N-acetilglucosamina
na zona pelcida, 137
nos grnulos corticais, 144
NAD+ quinase, 150
Nadadeiras, homologia aos membros, 726-727
NADPH, 150-151
Naegleria, 10-11
centro organizador posterior e, 556-557
480-481,548-550
Nanismo, 658
N-caderina, 94,287-288
em somitmeros, 344
na condrognese, 353
no fechamento do tubo neural, 263
N-CAM, 95
migrao de axnios retinianos, 325-326
na condrognese, 353
na emenda alternativa do RNA, 467
nd. veja Gene nudel
Nefro, 674,675-676,680-681
Nematide. veja tambm Caenorhabditis
migrao axnica, 320
mRNA de ocitos e determinao de eixo, 481
RNA antisenso em, 491-492
Nemoria, 814,819
Neotenia, 743
Nervo ptico, 280
Netrin-1, 320,321
Netrin-2, 320
Neuralizao. veja tambm Induo neural
organizador na, 621
protena Noggin e, 616-617
Neuroblastos, 272,310-312,585
Neuroepitlio, 265
germinativo, 270-271
Neurognese, 307
Neurmeros, 647
Neurnio. veja tambm Axnio
apoptose e, 331-334
axnios e, 276-279
dendritos e, 276
fatores neurotrficos, 331-334
formao, 270-272
hiptese da quimoafinidade, 327-328
identidade laminar, 274-275
interao com a glia, 273
na metamorfose de insetos, 753-754
na organizao do cerebelo, 272-273
na organizao do crebro, 274-276
na regenerao do membro, 715
na trajetria visual, 824-826
precursores, 276
respostas ao aprendizado, 823-826
retiniano, 280-282
talidomida e, 831
tipos, 276-279,280-281
IA2 - 18
ndice de Assuntos
Neurnio simptico, competncia, 656

Neurnios adrenrgicos, 291
Neurnios amcrinos, 281
Neurnios colinrgicos, 291,292-293
Neurnios comissurais, 320
Neurnios horizontais, 281
Neurnios motores
determinao, 308-309
em vertebrados, 323-325
especificao em Drosophila, 310-312
especificidade de direo, 309-310
inervao, 313
pools, 309
sinais de mltiplo direcionamento, 323-325
Neurnios olfatrios, 319
Neurnios Purkinje, 272,273
Neurnios sensoriais, 286
Neurnios simpticos, 286
Neuropatias perifricas, 334
Neurporo, 262
Neurporo anterior, 262
Neurporo posterior, 262
Neurotransmissores, 278-279
Neurotrofina 3 (NT- 3), 332,347
Nurula, 254
na evoluo de planos corporais, 901
Neurulao, 254-255
primria, 255-264
secundria, 255,264-265
Neurulao primria, 255
ectoderma e, 255-257
mecansmo, 257
placa neural e, 257-260
Neurulao secundria, 255,264-265
B, 582,414-415
NF
NF-mNR, 454
NF-E2, 440
NGF. veja Fator de crescimento de nervos
NGFR. veja Receptor do fator de crescimento
de nervos
Nicotina, como teratgeno, 828
NIMZ. veja Clulas da zona marginal no
involutiva
Ninfa, 746
N de esmalte, 682
Ndulo de Hensen, 234,240,244,362
na assimetria esquerda-direita, 648-649
na especificao do campo dos membros, 703
na formao do tubo neural, 258,259
na induo embrionria primria, 605
organizador mamfero e, 636,637
Ndulo primitivo, 234
Norepinefrina, 279,291
Norma de reao, 614
Notocorda, 222
de aves, 236,237,240-241
em mamferos, 244
formao, 259
interao instrutiva e, 655
na determinao de neurnios, 308
na padronizao do crebro, 268
ncleos pulposos, vestgios da notocorda, 346
primrdios em peixes, 221
protena Noggin e, 616-617
sonic hedgehog e, 618
NPM-1. veja Protena 1 da matriz nuclear
nRNA, 462-465
NT-3. veja Neurotrofina-3

Ncleo do zigoto, 153-154
Ncleo geniculado lateral, 824-825
Ncleo intersticial do hipotlamo anterior
(INAH), 787-788
Ncleo, protena dorsal e, 578-580
Ncleos pulposos, 346
Ncleos, neuroniais, 272
Nucleossomo, 5,431
complexos de ruptura, 436-437
em stios hipersensveis DNase-1, 435
estrutura, 431
inibio da transcrio, 431-432
metilao, 444
ruptura nas regies promotoras, 433
Nudibrnquios, colonizao larval, 807-808
NURF. veja Fator de remodelagem do
nucleossomo
Obturador do vitelo, 224
Oct1, 406
Oct2, 406,414,415
Oct4, 486
Octa box (seqncia), 406,412
Octopamina, 279
Odontoblastos, 682
Odontognese, 682
OEH. veja Hormnio ecdisteroidognico
ovariano
Olho. veja tambm Induo do cristalino
diferenciao da crnea, 283-283
diferenciao do cristalino, 280-282
diferenciao neural da retina, 280-282
dinmica do desenvolvimento, 279-280
fator de crescimento da cmara anterior e, 672
padronizao neuronial, 824-826
regenerao em salamandras, 40-41
Oligodendrcitos, 278
Omatdio, 688
Oncogene, 418
Ocito, 125. veja tambm vulo; mRNA do
ocito; oognese
determinao axial em, 480-481,546-547,
554,869
gene ZP3, 74-75
maturao em anfbios, 861-864
potencial da membrana e, 141-142
primrio, 860
secundrio, 861
trmino da meiose em, 864-865,875-876
transcrio em, 865-867
translocao da protena dorsal, 578-581
Ocito primrio, 860
Ocito secundrio, 861
Oogamia, 17
Oognese, 860-861
concluso da meiose em, 864-865,875-876
em anfbios, 861-864
na determinao dos eixos, 869
partenogentica, 861
transcrio de genes em, 865-867
Oognese merostica, 867-870
Oognia, 860
Opsina, 735
Organismos amonotlicos, 735
Organismos transgnicos
experimentos com, 70-73
tcnicas, 69-70
Organismos ureotlicos, 735
Organizador, 605
centro de Nieuwkoop e, 613
fatores de transcrio e, 619-620
induo especfica de regio e, 621-623
mapa de destino do, 613
na neuralizao, 621
propriedades, 613
protenas difusveis e, 613-619
sinais planares do, 626-627
Organizador Spemann-Mangold, 606-609
Organognese, 4-5,255
rim, 676-681
rgo primordial, modelo cartesiano
coordenado, 585
rgo vomeronasal, 319
rgos. veja rgos parenquimatosos
rgos endcrinos, crion, 247-248
rgos parenquimatosos
desenvolvimento do rim, 673-681
mecanismos de ramificao nos, 683-687
Oscilina, 149
Ossificao endocondral, 351,352-356
Ossificao intramembranosa, 351-352
Ossificao, 351-356
Osso. veja tambm Esqueleto
crescimento de vasos sangneos, 370
medula, 377
Osso alisfenide, 902
Osso bigorna, 895,906
Osso hiomandibular, 895
Osso martelo, 895
Ossos longos, formao, 353-356
Osteoblasto, 352,355
Ostecito, 352
Osteoclasto, 356
Osteognese, 351-358
Osteonectina, 682
Osteoporose, na ps-menopausa, 377-378
otd. veja Gene orthodenticle
Ourio-do-mar
ativo do genoma embrionrio, 489
atrao do espermatozide, 129
blstula, 172-173
clivagem, 170-173
coevoluo em, 901-902
descoberta da fertilizao em, 122
desenvolvimento em mosaico, 597
destino celular, 598
experimentos de isolamento em, 594-596
experimentos de reagregao em, 83-84
formao da boca, 218
formao da espcula, 214-215
formao do nus, 218
fuso de gametas, 139-140,152-154
gastrulao, 210-218
induo negativa, 600
mRNA seqestrado do ocito, 487
mRNAs especficos do endoderma, 61-63
ondas de clcio, 144-145
plasticidade fenotpica, 821
ndice de Assuntos
preveno da polispermia, 140-144

processamento de RNA em, 465
prognese e, 744-745
reao acrossmica, 130
reconhecimento de gametas, 132-135
seleo de RNA nuclear em, 462
Ouvido
desenvolvimento, 295
evoluo em mamferos, 894-896
Ouvido mdio, 380
evoluo, 894-896
Ovrio
desenvolvimento, 777,781-782
Oviduto, 180,784
translocao de espermatozide, 131-132
Ovo amnitico, 31
Ovo centrolcito, 169
Ovo isolcito, 169
Ovo mesolcito, 169
Ovo telolcito, 169
Ovos, 777
Ovothiol, 151
Ovulao, 864,870-873
vulo, 125,693
merostico, 867
quimiotaxia, 132
vulo. veja tambm Ocito; oognese
ativao metablica, 147-152
atrao do espermatozide, 128-129
aves, 189
clara, 189
contedos citoplasmticos, 125-126
determinao em hermafroditas, 853-855
distribuio do vitelo, 168-169
eixo vegetal-animal, 862
estrutura, 126-128
formao, 359-361
fragmentos, 597
fuso com espermatozide, 139-140
hemisfrios, 156
impresso gnica no, 444-445
polaridade, 224-226
preveno da polispermia, 140-146
prognese e, 745
proncleo, 152-154
protena, 125
quimiotaxia e, 132
reao acrossmica e, 129-130
reao granular cortical no, 143-144
rotao citoplasmtica, 156-159,224-226,607
simbiose desenvolvimental e, 808-810
tipos, 169
p21, 350
p34, 198
p53, 424
p56cdc13, 199
Pncreas, 382-383
expresso gnica no, 403
ramificao no, 683-684
Papila drmica, 300
Paquiteno, 851
Paramcios, conjugao, 12
Parasegmentos, 559-561,566
Parazoa, 29
Partenognese, 154-155,810-811,861
Pato
expresso de BMP4, 904-905
formao digital, 724-725

Pax6, 282,672
pb. veja gene proboscipedia
pbx. veja gene posterobithorax
P-caderina, 93
PCBs, 836
PCR. veja Reao de polimerase em cadeia
PDGF. veja Fator de crescimento derivado das
plaquetas
Pednculo, 21
Pednculos pticos, 280
Peixe zebra
clivagem, 189-192
especificidade do axnio, 317
gastrulao, 218-221
mapa do destino, 221
Peixes
centro de Nieuwkoop em, 635-636
clivagem, 189-192
determinao do sexo, 818-819
neurulao, 255
rins, 673
Peixes telesteos, 635-636
Pele, induo especfica de regio, 663-664
Penas, desenvolvimento, 97
Pnis, 783
Pepino marinho, clivagem, 169-170
Peptdeo ativador de espermatozde, 129
Periderma, 191,297
Periodicidade, embrio de Drosophila, 546
Perodo de susceptibilidade, 830
Peristeo, 352
Peromelia, 830
Peroxidase, na reao do grnulo cortical, 143
Persistncia hereditria da hemoglobina
fetal (HPFH), 440-441
Pesticidas, anormalidades congnitas e, 836-837
PGC. veja Clulas germinativas promordiais
PH
no controle da traduo do mRNA do
ocito, 486
PH-20, 138-139
Pharynx, 380
Pheidole, 817
Pieris, 815
Pikaia, 887-888
Pilus sexual, 12
Pinto
assimetria direita-esquerda, 648
centro de Nieuwkoop em, 636
crista neural, 286-287,288-289,293,295-296
especificidade de axnio retiniano, 328-331
expanso do volume cerebral, 267
expresso de BMP4, 904-905
expresso de MyoD, 350-351
formao da placa do assoalho neural, 258-259
formao de dedos, 724-725
fuso mioblstica, 347
induo regional especfica em, 664
mutaes no desenvolvimento dos
membros, 705,711,713
neurnios motores, 309,324-325
neurulao secundria, 264-265
osteognese, 355
IA2 - 19
progresso correlacionada em, 896-897

quimeras, 258-259,666-667
RNA antisenso em, 492
sistema circulatrio, 363,367-368,370-371
Pip. veja gene pipe
PIP2. veja Fosfatidilinositol 4,5-bifosfato
Pit-1, 406-409
PKA. veja Protena quinase dependente de
cAMP
PKC. veja Protena quinase C
Placa do assoalho neural
formao, 258-259
na determinao neuronial, 308-309
Placa neural, 257
formao, 257-258
formato e dobramento, 259-260
na neurulao primria, 257-260
Placa oral, 380
Placa segmental, 343
Placa vegetativa, 210,215-218
Placas do crescimento epifisrio, 354
nas anormalidades do esqueleto, 357-358
Placenta, 169,182
circulao e troca de nutrientes, 246-247
contato, 246
crescimento de vasos sangineos, 370
formao, 242,246
inibio da resposta imune, 248
produo de hormnio, 247-248
Placenta decdua, 246
Placdios, 279-280
Placdios auditvos, 279
Placodios do cristalino, 280
Placodios ectodrmicos cranianos, 279
Placides olfatrios, 279
Plano corporal
alometria e, 891-893
Drosophila, 545-546
na evoluo, 887-890,901
Plantas
clonagem, 46-47
genes homeobox, 647
precocenos, 762
Plaquetas do vitelo, 862
Plasmas, coloridos, 179-180
Plasmdeo, clonagem de genes, 56-57
Plasticidade fenotpica, 813-818,820-821
Plsticos, estrgenos ambientais em, 836
Platelmintos turbelrios, clivagem, 175
Platelmintos, predadores da mosca preta, 808
Pleodorina, 16-17
Plexo, 324
PLF. veja Proliferina
Pluriblasto, 186
Pluripotncia. veja tambm Potncia
nas clulas da crista neural do tronco, 291-292
nas clulas somticas, 43-45
nas clulas-tronco da epiderme, 300
p-nonilfenol, 836
Polaridade. veja tambm Eixos; Regulao da
polaridade
especificao em anfbios, 607-609
nos discos imaginais, 751
ovo, 224-226
Poliadenilao. veja tambm Cauda poli(A)
IA2 - 20
ndice de Assuntos
elemento de poliadenilao citoplasmtico,

484
no controle da traduo do mRNA de
ocitos, 485-486
Poliembrionrio, 195-196
Poliespenia, 366
Poliespermia, 140
bloqueio lento, 142-144
bloqueio rpido, 141-142
preveno em mamferos, 146
Polifenismo, 813
em borboletas, 814-815
induzido por predadores, 819-820
nutricional, 816-817
Polifenismo induzido por predador,
819-820
Polifenismo nutricional, 816-817
Poligerme, 195
Polissomo, 474
Plo animal, 168,479
Plo vegetal, 168,479
Poluio, efeitos teratognicos, 828,835,836-837
Ponto mediano de articulao (MHP),
259-260
Pontos de articulao dorsolaterais
(DLHPs), 260
Pools neuroniais, 309
Porco, placenta, 246
Porfiropsina, 735
Porfero, padres de desenvolvimento, 29-30
Potssio
neurnios e, 786
ocitos e, 141-142
Potncia. veja tambm Pluripotncia
massa celular interna e, 186-188
nas clulas da crista neural ceflica, 295-296
nas clulas da crista neural do tronco, 291-292
no desenvolvimento evolucionrio, 886-887
nuclear, 42-43
prospectiva, 595,602-603
restrio, 598-600
Potncia nuclear, restrio, 42-43
Potncia prospectiva, 595,602-603
Potencial de membrana
em embrio de aves, 238
em ocitos, 141-142
em repouso, 142
Potencial de repouso da membrana, 142
pp39mos, 864,876
Precis, 907,908
Precocenes, 762
Prmio Nobel, 548,600
Primeiro corpo polar, 861
Proacrosina, 138
Probscide, em Bonellia, 799-800
Procariotos, 5-6
Processamento diferencial do RNA
emenda alternativa e, 465-471
gene Sex-lethal e, 791-792
468-471
na expresso gnica, 471
seleo de RNA nuclear em, 462-465
Processo acrossmico, 123,129-130
Processo da cabea, 236,237
Processo facial
Processo frontonasal, 295
Sndrome alcolica fetal e, 834
Proeritroblasto, 375
Prognese, 743-745
Progesterona, 874
na meiose do ocito, 864
placentria, 247
Progresso correlacionada, 896-897
Projeo retinocortical, 824
Projeo retinotectal, 327
Projees ipsilaterais, 740
Prolactina
na metamorfose de anfbios, 736,742
na sntese da casena, 476,766-767
Proliferina (PLF), 370
Promotores, 74,394-395
em genes pair-rule, 564
estrutura, 396
falta de elementos TATA, 401
funo, 397-398
metilao, 442-443
ruptura de nucleossomos nos, 433
sinergismo e, 408-409
uso em produtos farmacuticos, 398
Proncleo, 152-154
mRNA seqestrado e, 487
no equivalncia em mamferos, 154-155
Proncleo feminno, 152-154
Proncleo masculino, 152-154
Pr-pernas, 907,908-909
Prosencfalo, 266
determinao, 268-269
Prosmeros, 268
Prostaglandina, no ciclo menstrual, 873
Prstata, 783
Protaminas, 154
Protease, acrosina, 138
Protease, na reao do grnulo cortical, 143
Protena. veja tambm Tipos especficos
como fatores de crescimento, 102
gradientes, 551
junes de fendas e, 97-99
na adeso espermatozide-zona, 136-138
ovo, 125
sntese, 151-152,426,472-476
Protena
Antennapedia, homeodomnio, 576
Apterous, 752-753
Armadillo, 566
associada mitose (MAP), 109
ativadora de GTP-ase (GAP), 108-109
BF2, 681
Bicoid, 401,405,546
Brachyury, 637
Broad-Complex, 758-759
Bruno, 869
cactus, 581-582
cap ligante (eIF4E), 472
Caudal, 481,546
Cerberus, 618-619
Chordin, 308,614,616,617,619,624
c-mos, 864
c-Myc, 418-419
1 comutadora dorsal (DSP1), 584
CPEB, 485
c-Ret, 677
1 da matriz nuclear (NMP-1), 452,454
da superfamlia TGF-, 610,661-662
Daughterless, 791
Decapentaplegic, 310,585,616,662
1 determinante do mioblasto (MyoD),
346,349-351
D-Frizzled-2, 566
Disheveled, 566
Distal-less, na determinao do disco
imaginal, 750
Dorsal, 577,585
Dorsalin, 661
Doublesex, 404
E12, 415
E47, 415
E74A, 761
E74B, 760-761
Engrailed, 330-331,566
Even-skipped, 564
Extradenticle, 577
F, 140
FEM, 796
FEM-3, 491
Flectina, 648,649
FRGY2, 483
FTZ-F1, 761
Fushi tarazu, 565,566,572,576
G, 108
G heteromrica, 112
G trimrica, 147
Gastrulation-defective, 581
Giant, 564
GLP-1, 481
Goosecoid, 614,619-620,636,637
Gurken, 554,869
HA, 140
Hedgehog, 114,556-568,659
HER-1, 796
Hialina, 128,143
HNF3, 636,637
Hoxb-8, 721
Hunchback, 546,572
inibidora responsiva ao heme (HIR), 495
intensificadora de linfcito (LEF-1), 423
Krox-20, 420
Krppel, 420,572
L1, 834-835
ligante da seqncia TATA (TBP), 399-401
ligante de galactose, 136-137
ligante de metil-CpG, 444
ligante do intensificador CCAAT
(C/EBP), 417-418
ligante responsiva ao ferro (IRE-BP), 492
Lim-1, 636,637
Mad, 418
Mei-S332, 852
Mix 1, 614
morfogentica do osso (BMP), 264, 293,
352,662
morfogentica 2 do osso (BMP2), 682
morfogentica 3 do osso (BMP3), 682
morfogentica 4 do osso (BMP4),
264,308,616,662
morfogentica 7 do osso (BMP7), 264,617
morfogentica 8B do Osso (BMP8B), 858
Myf5, 346,349
Nanos, 546
ndice de Assuntos
Nodal, 662
Noggin, 308,614,616-617,619,624
Notch, 311,416
Nudel, 581
Odd-skipped, 566
Oskar, 480,869
OZ1, 488-489
Pax2, 679-680
PBX1, 577
Pelle, 581-582
Pipe, 581
Pumilio, 550-556
quinase C (PKC), 147
quinase dependente de cAMP (PKA),
490,869
Rad51, 852
Radical fringe, 705-706
Raf, 109
relacionada Proliferina (PRP), 370
repressora Mad-Max, 418
RGD, 627
Sex comb reduced, 577
Sexual indutiva, em Volvox, 20-21
Short-gastrulation (Sog), 310,616
Slug, 287
Smaug, 480
Snail, 583-584,585
Sonic hedgehog, 264,268,346,618,659,702
Sptzle, 581
SRY, 780-782
Syndecan, 679
Toll, 581-582
Torso, 557
Torsolike, 558
TRA-1, 797
TRA-2, 490-491,793,796
Twist, 350,583-584
Ultrabithorax, 573,576,577
UNC-6, 320-321
Vg1, 610-612,619,636
Vox, 614
Windbeutel, 581
Wingless (Wg), 114,566,568
Wnt7a, 702,722
WT-1, 420,424,676
Xnot2, 614
XOL-1, 796
Xom, 614
Xvent-1, 614
Zeste, 566
Protena Bicoid, 401,405,546
centro organizador do anterior e, 552-556
determinao do eixo, 480-481,548-550
genes terminais e, 558
homeodomnio, 576
na ativao do gene gap, 561
na regulao do gene pair-rule, 564
Protena Caudal, 481,546
centro de organizao posterior e, 550,
556-557
homeodomnio, 576
na ativao do gene gap, 562
Protena Decapentaplegic, 310,585,616,662
na determinao dos discos imaginais, 750,
751,752-753
na formao de fotoreceptores, 688
Protena Dorsal, 577,585
gradiente, 581-585
mapa do destino de Drosophila e, 582-585

sinalizao assimtrica e, 578-581
translocao, 577-578
Protena Doublesex, 404
na absoro de protenas vitelnicas, 870
nas cascatas da determinao do sexo, 794-795
Protena G
em colonizao de larvas, 807-808
heteromrica, 112
na reao acrossmica, 137
produo de IP3 e, 147-149
protena Ras G, 108-109
receptor, 147-149
trimrica, 147
Protena Hedgehog, 114,556-568,659
na determinao dos discos imaginais,
751,752
na formao do fotoreceptor, 688
nas trajetrias desenvolvimentais
homlogas, 727
Protena Hunchback, 546,572
centro organizador anterior e, 555-556
distribuio, 564
na ativao dos genes gap, 561-563
480-481,550
na regulao dos genes pair-rule, 564
Protena Krppel, 420,572
atividade dependente de contexto, 424
distribuio, 564
na regulao dos genes pair-rule, 564
Protena L1, sndrome lcolica fetal e, 834835
Protena morfogentica 2 do osso (BMP2)
na odontognese, 682
na polarizao dos membros, 719,721
Protena morfogentica 4 do osso
(BMP4), 264,308,616,662
na apoptose dos membros, 725
na evoluo, 904-905
na formao muscular, 346,347
na induo mesodrmica, 612,614
na odontognese, 682
Protena morfogentica 7 do osso
(BMP7), 264,617
na odontognese, 682
na organognese renal, 678
Protena Nanos, 546
centro organizador posterior e, 556-557
480-481,548-550
Protena Nodal, 662
de mamferos, 636,637
na assimetria esquerda-direita, 649
Protena quinase C (PKC), 147
na compactao, 184
na neutralizao, 621
Protena quinase dependente de cAMP
(PKA), 490,869
na diferenciao de Dictyostelium, 28
Protena Sonic hedgehog,
264,268,346,618,659,702
na assimetria esquerda-direita, 649
na especificao do neurnio motor, 308-309
na evoluo, 726-727
na induo especfica da regio, 665
na polarizao dos membros, 718-721,722
IA2 - 21
na ramificao epitelial, 687

Protena Wingless (Wg), 114,566,568
na determinao do disco imaginal, 750,
751,752-753
Protenas
de adeso espermatozide-zona, 136-138
Delta, 311
do homeodomnio, 405,576-577
dobradoras de DNA, 423
Fertilinas, 140
Fibropelinas, 216
Fusognicas, 140
Gap, 583
LIM, 309-310
LIN, 491,690-691,692
Mascaradas, 482
Miognicas bHLH, 349,351
Msx, 682
Polycomb, 572
Smad, 661-662
Transformadoras, 794
Trithorax, 572
Protenas Gap, controle dos genes pair-rule,
563-565
Protenas Hometicas, genes realizadores e,
572-573
Protenas mascaradas, mRNA de ocitos e,
482-483
Protenas transformadoras, na determinao
do sexo em Drosophila, 794
Proteoglicanos
na camada hialina, 216
na migrao do mesnquima primrio, 214
Proteoglicanos de sulfato de condroitina, 216
Proteoglicanos sulfatados, migrao do
mesnquima primrio, 214
Protistas. veja tambm Eucariotos unicelulares
como teratgenos, 835
Protostomatas, 30
na ativao do ovo, 149
padres do desenvolvimento, 30-32
PRP. veja Protena relacionada proliferina
Pseudoplasmdio, 21
Psorase, 299
PTTH. veja Hormnio protracicotrfico
pUC18, 56
Pulmes, 383
Pupa, 747
em diapausa, 813
na Drosophila, 757
Puprio, 757
Pycnoscelus, 861
Pyrrhocoris, 761-762
Quebra da vescula germinativa (GVBD),
864
Queratina, 297-299
Quiasma ptico, 326,825
Quiasmata, 852
Quilha neural, 221
Quimeras
camundongo, 70-73, 187-188,347,666-667
e especificidade gentica da induo,
666-667
humanas, 187
pinto, 258-259,666-667
saco vitelnico, 378-379
Quimiorepulso
na especificidade axnica da retina, 328-331
IA2 - 22
ndice de Assuntos
na migrao axnica, 321-322

Quimiotaxia, 22
na fertilizao, 128-129,132
na migrao axnica, 320-322
Quimotripsina, 403
Quinase. veja tambm Tipos especficos
famlia JAK, 107-108
Quinase 3 da sntese de glicognio (GSK-3),
609-610
Quinase II dependente de calmodulina, 864
Quinase dependente de ciclina,
198,200,864
Quinase do fator promotor de maturao, 199
Quinases do receptor Eph, 328-331
Quinina, como um teratgeno, 828
RA. veja cido retinico
Radiao, como um teratgenio, 835
Radiata, 30
RAGS. veja Sinais de direcionamento
repulsivos aos axnios
Ramificao, em rgos parenquimatosos,
683-687
Rana. veja tambm Sapo
crescente cinzento, 156-157
induo do cristalino, 667-668
oognese, 861-862
potncia nuclear, 42-43
RAR. veja Receptor do cido retinico
Rato
comportamento especfico do sexo, 786,787
funes de promotores no, 397-398
respostas neuroniais ao aprendizado, 824
Rato canguru, evoluo e, 892-893
Reao acrossmica, 129-130,131,138
Reao de polimerase em cadeia (PCR),
66,68-69
Reao do grnulo cortical, 143-144
clcio e, 144-146
Receptor IIa da activina (cActRIIa), 648-649
Receptor da ecdisona (EcR), 758,759-761
Receptor da endotelina-B, 290
Receptor da Transferina, 492
Receptor de bindina, 135
Receptor do cido retinico (RAR), 829
Receptor 1 do fator de crescimento de
fibroblsticos de Xenopus (XFGFR1), 428
Receptor 3 do fator de crescimento
fibroblstico (FGFR3), 110
Receptor do fator de crescimento do nervo
(NGFR), 680-681
Receptor do hormnio da tireide (TR), 714
Receptor GNDF, 677
Receptor relacionado protena G, 147-149
Receptor retinide (RX), 741
Receptor tirosina quinase (RTK), 108
migrao de clulas da crista neural, 289
Produo de IP3, 148-149
Receptor tirosina quinase Ret, 290
Receptores veja tambm Tipos especficos
na co-evoluo, 901-902
na determinao de competncia, 656-657
Receptores celulares. veja tambm Tipos
especficos
glicosiltransferases, 105-106
integrinas, 104-105
matriz extracelular e, 104-106
serpentina, 112
vias de transduo de sinais e, 107-114
Receptores do fator de crescimento

hematopoitico, 377
Receptores serpentina, 112
Recombinases, 411-412
Rede testicular (rete testis), 777
Refeies de sangue, 808
Regenerao
membro, 87-88,714-716
no tecido neural, 315
olho, 40-41
Regenerao neural, 315
Regio 3 no traduzida (3UTR), 392,475
hiptese da cauda poli(A), 483-484
na determinao de gametas de nematide,
490-491
no RNA de ocitos, 480-481
Regio AGM, 379
Regio associada matriz (MAR),
431,452-453
Regio controladora de loco (LCR),
431,437-441
stios hipersensveis DNase-1, 440-441
trans-reguladores e, 439
trocas de globina e, 441
Regio mesodrmica intermediria, 358
Regio promotora, 392
Regras da construo morfogentica,
898-899
Regulao, 24
da expresso gnica. veja Transcrio;
embrio, 186-188
no desenvolvimento de anfbios, 600-605
Regulao ambiental
agentes teratognicos e, 828-835,837
assimilao gentica e, 821-822
estrgenos ambientais e, 835-837
na diapausa, 812-813
na embriologia histrica, 805-806
nas defesas induzidas por predadores, 819-820
nas malformaes, 827-828
no aprendizado e, 823-826
para completar o desenvolvimento, 806-813
plasticidade fenotpica e, 813-818,820-821
sazonalidade, 810-812
sistema imune e, 822
Regulao da polaridade
citoplasma do ocito e, 546-547
gradientes proticos, 547-550
grupo de genes terminais, 557-559
protena Bicoid, 552-556
protena Nanos, 556-557
RNA em, 547
Regulao ps-traduo, 497-498
Relao cromossomo X-para-autossomo,
468,469
em Caenorhabditis, 795-796
gene Sex-lethal (Sxl)e, 790-791
789-791
Relao de volume cromatina-citoplasma,
embriognese, 194
Relao do volume citoplasma-ncleo, na
embriognese, 194
Repolho de gamb (skunk cabbage), 828
Repressores, inibio de, 617
Reproduo assexuada, Volvox, 18-19
Reproduo sexual, 12-15

tipos, 17
Reproduo, definida, 12
Rpteis
determinao do sexo dependente de
temperatura, 798-799
Resact, 129
Respirao anaerbica, condrcitos
hipertrficos, 356
Resposta imune, na gastrulao de
mamferos, 248
Restries filticas, 899-901
Restries fsicas, 898
Restries no desenvolvimento, 898-902
Retardo mental, sndrome alcolica fetal e, 833
armazenamento de clcio, 146
em clulas da glndula mamria, 766
Retculo endoplasmtico rugoso, nas clulas da
glndula mamria, 766
Retculcito, 377
Retina.veja tambm Axnio retiniano
antgenos de diferenciao e, 90
induo clula-para-clula na, 688-690
Retina neural, 280-282
Retina pigmentada, 280
Reverso sexual, genes autossmicos e, 780
Rhodinus, 754,808
Ribonucleoprotenas nucleares
pequenas. veja snRNP
Ribonucleotdeo, redutase, 477
Ribossomo
no ovo, 125
pequeno, 472-474
Rim
fatores de transcrio dedo de zinco, 420
mesonfrico, 674
morfognese, 673-676
organognese, 676-681
Rim mesonfrico, 674
RNA. veja tambm Processamento diferencial
de RNA; Tipos especficos
cauda poli(A), 466
edio, 493
emenda alternativa, 466-471
hibridizao, 54-55
matriz nuclear e, 452
mecanismos de emenda, 465-466
modificaes nucleares, 393-394
na regulao da polaridade, 547
polimerase, 399-401,452
seleo nuclear, 462-465
sntese, 49-54, 375,377,865-867
tcnicas de localizao, 63-66
transferncia, 64,66
transporte na oognese merostica, 868
RNA antisenso, 73,491-492
RNA mensageiro. veja mRNA
RNA nuclear heterogneo. 462. veja hnRNA
RNA nuclear pequeno. veja snRNA
RNA nuclear. veja nRNA
RNA polimerase I, 399
RNA polimerase II, 399-401
RNA polimerase III, 399
RNP. veja Complexos de ribonucleoprotena
Rodopsina, 735
Rombencfalo, 266,267
ndice de Assuntos
Rombmeros, 267,293,638-640
Rotferos, polifenismo induzido por
predadores, 819
rRNA, em ocitos de anfbios, 866
RTK. veja Receptor tirosina quinase
Rubola, 835
RX. veja Receptor retinide
Saco amnitico, 186
Saco vitelnico, 31,361
quimeras, 378-379
Sacos areos, 383
Salamandra
clulas garrafa, 226-229
clivagem, 169,173
diferenciao da crista neural, 293
disco dos membros, 703
inervao dos neurnios motores, 313
migrao da crista neural, 288
migrao das clulas germinativas, 844
mutante o, 489
neotenia na, 743
prognese em, 743-744
quimeras, 666
regenerao do olho na, 40-41
regenerao dos membros, 87-88,714-716
Salamandra aqutica (Newt)
cromossomos em forma de escova, 865
induo especfica de regio, 621
inervao do neurnio motor, 313
Salamandra axolotle. veja Salamandra
Sangue, leis de movimento, 367
Sanguessuga, sistema nervoso, 316-317
Sapo
migrao da clula germinativa no , 843-844
plasticidade fenotpica, 820
Sapo. veja tambm Metamorfose anfbia; Xenopus
anormalidades congnitas relacionadas
poluio, 836
blastocele, 174
clivagem,169,173
crescente cinzento, 156-157
estudos de defeitos em, 593
migrao de clulas germinativas em, 843-844
neurulao primria em, 256-257
neurulao secundria em, 264-265
oognese, 861-864
polifenismo induzido por predadores, 819-820
potncia nuclear, 42-43
quimeras, 666
seleo de alvos de axnios retinianos em,
326-328
Sapo leopardo (Rana pipiens), potncia
nuclear, 42-43
Sazonalidade, na regulao desenvolvimental,
810-812
sc. veja gene scute
Scaphiopus, 819
Scleraxis, 352
Scr. veja gene Sex comb reduced
Scr. veja Protena Sex comb reduced
Sebo, 300
Segmentos, larvas, 559-561
Seio venoso, 363
Seleo natural, 883-884

Semaforina I, 318
Semaforinas, 318,321-322
Seqncia (box) HMG, 423,779
Seqncia de capeamento, 392,393-394
Seqncia lder, 392
Seqncia TATA (TATA box), 396,399
seqenciamento de genes, genes hometicos e, 573
Seqenciamento dideoxi, 59-61
Seqenciamento, DNA, 59-61
Seqncias limitantes, 454
Serotonina, 147,148,279
Serpentes, falta de membros, 713
Servanus, 797
Sexo
em bactrias, 12
definido, 12
SF1. veja Fator esteroidognico 1
SF2. veja Fator de emenda 2
Silenciador, 396,454
Simbiose, desenvolvimento, 808-810
Simetria. veja tambm Assimetria; Eixos
embrio, 157-158
Simetria radial, blstula, 170
Sinais
endcrinos, 107
parcrinos, 107
Sinais de direcionamento repulsivos aos
axnios (RAGS), 328-331
Sinais planares, na induo neural, 626-627
Sinalizao justcrina, 662-663
Sinapse, 331
Sinciciotrofoblasto, 245-246
Sindactilia, sndrome, 724-725
Sndrome alcolica fetal (FAS), 833-835
Sndrome de Angelman, 445
Sndrome de DiGeorge, 641
Sndrome de Down, 827
Sndrome de Holt-Oram, 722
Sndrome de Kallmann, 319
Sndrome de Lesh-Nyan, 448
Sndrome de Pfeiffer, 357
Sndrome de Waadenburg, 290
Sndrome Prader-Willi, 445
Sntese de DNA,
ciclina E e, 200
em clulas do tubo neural, 270
MPF e, 197
na fertilizao, 151-152
Sistema circulatrio
embrionrio, 370-371
fetal, 372
placentrio, 246-247
Sistema digestivo, em induo especfica de
regio, 664-665
Sistema imune
induo clula-para-clula no, 688
plasticidade do desenvolvimento do, 822
Sistema nervoso. veja tambm Sistema
nervoso central
formao de padres, 312-313
formao em Drosophila, 545
genes Hox e, 638-640
na metamorfose de insetos, 753-754
N-CAM e, 95-96
IA2 - 23
respostas neuroniais ao aprendizado, 823-826

sanguessuga, 316-317
Sistema nevoso central. veja tambm Sistema
nervoso
desenvolvimento do olho, 279-284
diferenciao do tubo neural, 265-276
hormnios sexuais e, 785-788
modelagem dorso-ventral, 264
neurulao e, 254-265
tipos neuroniais, 276-279
Sistema nervoso perifrico, parassimptico, 287
Sistema respiratrio, induo especfica de
regio, 664-665
Sistema visual, padronizao neuronial do,
824-826
Sistema Wingless-Hedgehog, 114
Snk. veja gene snake
snRNA, 465
snRNP, 465-466
Sdio
em ocitos, 141-142
Sog. veja Protena short gastrulation
Soma, 276
Somatomatropina, corinica, 248
Somatopleura, 360
Somatotrofos, 407
Somitmeros, 343-344
Somitos, 341,343-347
SP56, na adeso espermatozide-zona, 136-137
Sparus, 797-798
Spisula. veja Molusco bivalve
Spliceosome, 465-466
SRY. veja Fator determinante do sexo do
cromossomo Y
Sry. veja gene sex-determining region of the Y
STAT. veja Transdutores e ativadores de sinais
da transcrio
Strongylocentrotus, 130,133,135
Styela, 179-180
Substncia inibidora Mlleriana, 661,775
Substncias difusveis, 80
Sulco de clivagem, fuso mittico e, 202-203
Sulco genital, 775,780,781
Sulco laringotraqueal, 383
Sulco morfogentico, 688
Sulco neural, 257
Sulco ventral, 543-545
Sulcus limitans, 271-272
Superfamlia das imunoglobulinas
CAMs, 92,95-97,319
Superfamlia de receptores do homnio
esteride, 741
Surfactante, alveolar, 383
Sxl. veja gene Sex lethal
Synapta, clivagem, 169-170
T3. veja Triiodotironina
T4. veja Tiroxina
TAFs. veja Fatores associados protena
TATA-ligante
Tlamo, 274
-talassemia, 473
Talidomida, 830-833
Talina, 104
Taninos, em polifenismo, 814
Taricha, 313
Tarso, 748
Taxonomia, formas larvais e, 884
IA2 - 24
ndice de Assuntos
TBP. veja Protena ligante de TATA

Tectum ptico, 325-327
especificidade adesiva, 328-331
Telencfalo, 266,268
Telson, 552,557,558
Temperatura
na determinao do sexo de afdeos, 811
na determinao do sexo de Volvox, 812
na determinao do sexo, 795,798-799,
817-818
no polifenismo de borboletas, 815
Tenascina, 103-104
Tenso superficial, de tecido, 87
Teologia natural, 883
Teoria do gene, embriologia e, 35-38
Teoria do plasma germinativo, 592-593
desenvolvimento em mosaico e, 593
desenvolvimento regulador e, 594-596
gradientes de ocitos e, 597-598
restrio de potncia na, 598-600
Teratocarcinoma, 847-848
Teratognese, na anlise do cdigo Hox,
643-645
Teratgenos, 828,829-830,835
cido retinico, 829-830
lcool, 833-835
estrgenos ambientais, 836-837
talidomida, 830-833
Teratologia, 828
Terminao, 474
Termodinmica, em afinidade celular
diferencial, 84-88
4-tert-pentilfenol, 836
Testculos
genes autossmicos e, 780-781
genes do cromossomo Y e, 777-780
tbulos mesonfricos em, 674
Testosterona, 775
clulas de Leydig e, 777
comportamento especfico do sexo e, 785-786
na degenerao da corda mamria, 763-765
receptor, 783
Ttrade, 851
Tetrodotoxina, 313,331
TFIIA, 399,420,437
TFIIB, 399,424
TFIID, 399-401
na disrupo do nucleossomo, 436-437
TFIIE, 399-400,424
TFIIF, 399-400
TFIIH, 399-400
TGF-. veja Fator- transformador de
crescimento
TGF-1. veja Fator-1 transformador de
crescimento
Thais, 819
Thermococcus litoralis, 69
Thermus aquaticus, 69
Timo, 380
TIMP. veja Inibidor da metaloproteinase
Tireide, hormnio estimulador da (TSH), 743
Tireide, hormnios na metamorfose de
anfbios, 735-742
Tirosina quinase do receptor LET-23, 690
Tirotrtrofos, 407
Tiroxina (T4), 735,743
Topoisomerase II, 453-454
Totipotncia
clonagem de Xenopus, 43-45
nas clulas germinativas primordiais, 846
Toupeiras com bolso, evoluo e, 892-893
Toxoplasma, 835
Toxopneustes, 122
TR. veja Receptor do hormnio da tireide
tra. veja gene transformer
tra-1. veja gene transformer-1
tra-2. veja gene transformer-2
Traduo, 392,472. veja tambm Controle da
traduo
em eucariotos, 6
em procariotos, 6
mecanismos, 472-474
na regulao do desenvolvimento, 471-472
Trajetria do inositol fosfato, 111-112
Trajetrias da transduo de sinais
Comunicao cruzada em 112
trajetria do inositol-fosfato, 110-112
trajetria JAK-STAT, 107-108
trajetria RTK-Ras, 108-110
Transcrio, 392-394. veja tambm Fatores
de transcrio
autoregulao, 409
compensao de dosagem do cromossomo
X, 446-450
de genes da -globina, 437-441
durante a clivagem, 167-168
em Acetabularia, 9-10
em eucariotos, 6
em genes da imunoglobulinas, 409-415
em ocitos, 865-867
em procariotos, 6
especfica da clula, 403
especfica do tecido, 402-403
fatores trans-reguladores, 399-401
inibio, 431-432
metilao do DNA e, 442-446
na metamorfose, 741
na regulao da diviso celular, 418-419
promotores, 394-401
sinergismo em, 408-409
Transcrio gnica, transferncia de mancha,
64,66
Transcriptase reversa, 55
Transdiferenciao, 41
Transdutores e ativadores de sinais da
transcrio (STAT), 107-108
Transfeco, 69
Transferncia de mancha, 64,66
Transferncia de RNA, 64,66
Transferncia Northern, 64,66
Transferncia Southern, 58-59
Transferncias de DNA, 58-59
Transferina, 715
Transio da blstula intermediria
(MBT), 194-195
ativao do genoma embrionrio e, 488-490
ativao e represso do gene na, 437
movimentao celular na, 218-220
Translocaes, em leucemia, 418-419
Transplante nuclear, em camundongos, 45-46
Transplantes heteroplsticos, 604-605
Trans-reguladores, 395-396
armadilhas de intensificadores e, 418-419
dedo de zinco, 420
domnios, 404,421
genes das imunoglobulinas e, 413-415
hlice-ala-hlice bsico, 415-416
POU, 406-409
protenas do homeodomnio e, 405
regio controladora de locos e, 439
responsivos a hormnios, 420-423
RNA polimerase e, 399-401
ruptura de nucleossomos e, 432-434
stios hipersensveis DNase-I e, 435-436
ziper bsico de leucina, 416-418
Traquia, 383
Trato ptico, 326
Treponema, 835
Trade de Kartagener, 124
Triiodotironina (T3), 735,737,739,741,743
Trimetadiona, em anomalidades congnitas, 833
Tripsina, 84
Trissomia, 827
Triturus, 865
induo embrionria primria em, 603-605
induo especfica de regio em, 621
tRNA, 472,474
em ocitos de anfbios, 866
ovo, 125
Troca de classes, 411
Trocanter, 753
Trofoblasto, 182
de mamferos, 245-247
formao, 185
implantao no tero, 186
P-caderina e, 93
Trofoectoderma, 182
Trompas de eustquio, 380
Tronco arterioso, 363,371
Tronco, expresso do gene Hox, 642-643
-tropomiosina, 467
TSH. veja Hormnio estimulador da tireide
Tubo de fertilizao, 15
Tubo digestivo, 380
derivados, 382-383
Tubo neural, 254-255,258
defeitos, 262-263
diviso celular no, 270
eixo dorso-ventral, 264
fechamento, 260-264
formao, 258-259
neurulao primria e, 256,260-264
Tubo respiratrio, 380
derivados, 383
Tubos epiteliais, mecanismos de ramificao,
683-687
Tubulina, 10-11. veja tambm Microtbulos
em flagelos, 123
na epilobia, 220
na espermatognese, 858-859
Tbulos renais, 673-674
Tbulos renais pronfricos, 673-674
Tbulos seminferos, 777
na espermatognese, 856-857
Tufos (puffs) de cromossomos, 51-54,
757-758,759
Tulerpedon, 726
Tumor de Wilm, 420
ndice de Assuntos
Tumores. veja tambm Carcinoma

angiognese e, 370
gene Ras e, 109
verruga hidatidiforme, 154
Tnica albuginea, 777
Tunicados, clivagem, 179
Tunicamicina, 184
U2AF, 465-466,469 793
Ubs. veja gene Ultrabithorax
UDP-galactose, 137
UNC-86, 406
Unidade de tipo, 883-884
Unidade formadora de colnias do bao
(CFU-S), 374-377
Unidade formadora de colnias em
clulas mielides e linfides
(CFU-M,L), 375-377
Unidade formadora de rompimento de
eritride (BFU-E), 375
Unio, 178-179
Urechis, 142
Ureteres, 674
Uretra, 783
Urodeles. veja tambm Salamandra
tero, 784
blastocisto e, 186-187
3 UTR. veja Regio 3 no traduzida
Uvomorulina, 93,184
Vaga-lume, metamorfose, 754
Vasculognese, 367-369
Vaso deferente, 674,777
Vasos sangneos. veja tambm Sistema
circulatrio
angiognese, 369-370
na circulao embrionria, 370-371
na migrao da clula germinativa
primordial, 848-849
represses sobre a formao, 366-373
vasculognese, 367-369
VEGF. veja Fator de crescimento do endotlio
vascular
Veia umbilical, 370
Veias onfalomesentricas, 368
Veias vitelnicas, 363,368
Velo, 300
Ventrculos, desenvolvimento, 363-365
Veratrum, 828
Vermelho neutro, 221
Vermes aneldeos, clivagem, 175
Vermes Nemertea, clivagem, 175
Vertebrados
amniotas, 361
co-opo evolucionria e, 894-896
desenvolvimento do olho, 279-284
famlia de protenas Hedgehog em, 659
formao de membros, 898-899
genes Hox e, 638-640,905-907
iniciao do eixo nterior-posterior, 635-637
neurnios motores, 308-310,323-325
Vertebrados amniticos, 361
Vrtebras, genes Hox e, 645-646

Vescula acrossmica, 122-123,129-130,132
Vescula biliar, 382
Vescula germinativa, 485,861
Vesculas da matriz, 356
Vesculas pticas, 266,280
na induo do cristalino, 667-668,671
Vespa parastica, poliembrionria,195-196
Vestbulo, na prognese, 745
Vestimentifera, 890
Vetores
clonagem, 56
retrovirais, 69-70
Via da quinase Ras-MAP, 690
Via da tirosina quinase, ativao do ovo, 149
Via RTK-Ras, 108-110,910-911
Vibrio, 808
Vis, na induo do cristalino, 668,669
Vilosidades corinicas, 246-247
Vilosidades primrias, 247
Vilosidades secundrias, 247
Vilosidades tercirias, 247
Vrus, como teratgenos, 835
Vrus da Mielocitomatose, 418
Vrus influenza, protena HA, 140
Vrus Sendai, protena F, 140
Vitamina A, 829
Vitamina B12, 263
Vitelognese, 862-863
Vitelogenina, 808,862
Volvocaceanas, 16-17
Volvox, 16-17
determinao do sexo sensvel temperatura, 81
protena indutora do sexo, 20-21
reproduo assexuada, 18-19
Vulva, induo clula-para-clula, 690-692
Warfarina, em anormalidades congnitas, 833
wind. veja gene windbeutel
Wrasse, determinao do sexo, 818-819
XANF-1, 619
Xenopus. veja tambm Metamorfose em
Anfbios
ativao do genoma embrionrio, 488-489
atividade do organizador, 613-621
clulas garrafa em, 226-229
ciclo de clivagem, 196
experimentos de clonagem, 43-45
expresso da N-caderina, 94-95
formao da blstula, 174
formao do mesoderma, 229,609-612
gastrulao, 221-232
hiptese da cauda poli(A), 485-486
hiptese da mensagem materna mascarada,
482-483
homlogos aos genes de Drosophila, 616
induo do cristalino, 668-671
induo embrionria primria, 606-609
localizao do mRNA armazenado, 479
mapa de destino, 221,222
IA2 - 25
migrao da clula germinativa em, 844

projeo retinotectal, 327
rearranjos no ovo, 157
retculo endoplasmtico cortical, 146
RNA de ocitos, 866
sntese de membrana, 203-204
transcrio no zigoto, 168
transferncias de manchas, 64,66
XFGFR1, veja Xenopus receptor-1 do fator de
crescimento fibroblsticos
X-gal, 56
XIC. veja Centro de inativao do cromossomo X
Xisto de Burgess, 887
Xnr3. veja gene Xenopus nodal-related-3
YSL Externa, 190
YSL interna, 190
YSL. veja camada sincicial do vitelo
YY1, 454
YY1/ NF-E1, 452
zen. veja gene zerknllt
Zigoteno, 851
Zigoto, 3
Ziper bsico da leucina, 416-418
Zona de atividade polarizante (ZPA), 716-717
especificao, 721
interaes com AER, 718-721
sonic hedgehog e, 717-718
Zona de progresso, 708,711,713
Zona de reao, 144
Zona do manto, 271
Zona do receptor quinase (ZRK), 136,138
Zona intermediria, 271
Zona limitans, 268
Zona marginal, 222-224,271
dorsal, 231
em clulas involutivas profundas, 229
na gastrulao de ave, 241
no involutiva, 229-230
posterior, 238
Zona marginal dorsal (DMZ), 627
migrao in vitro, 231
Zona marginal involutiva (IMZ), 229
Zona marginal posterior (PMZ), 238
Centro de Nieuwkoop, 636
Zona necrtica anterior, 724
Zona necrtica intergdigital, 724
Zona necrtica anterior, 724
Zona necrtica posterior, 724
Zona pelcida. 126,132
adeso do espermatozide e, 135-139
blastocisto e, 185-186
ligao secundria do espermatozide, 138-139
protenas, 865
reao do grnulo cortical e, 143-144
Zona ventricular, 271
Zonas necrticas, 724
ZP1, 138
ZP2, 138, 144
ZP3, 135-138,144
ZRK. veja Zona do receptor quinase
ndice de Abreviaturas
ACE, Adenylation control element, 484
ACTH, Adrenocorticotropic hormone, 407
ADH, Alcohol dehydrogenase, 50
AER, Apical ectodermal ridge, 705
Aldox, Aldehyde oxidase, 50
AMH, Anti Mllerian duct hormone, 775
AP, Animal pole, 223
BDNF, Brain-derived neurotrophic factor, 292
bFGF, Basic fibroblast growth factor, 293
BFU-E, Burst-forming unit, erythroid, 375
bHLH, Basic helix-loop-helix, 415
BMP2, Bone morphogenetic protein 2, 293
BMPs, Bone morphogenesis proteins, 661
BR2, Balbiani ring 2, 52
bZip, Basic leucine zipper, 416
C/EBP, CCAAT enhacer-biding protein, 417
cActRIIa, Activin receptor IIa, 648
cAMP, Cyclic adenosine 3,5-monophosphate, 22
CAMs, Cell adhesion molecules, 92
CAT, Chloranphenicol acetyltransferase, 403
CDK, Cyclin-dependent kinase, 198
cdk2, Cyclin-dependent kinase 2, 864
cDNA, Complementary DNA, 54
CFS, Cytostatic factor, 864
CFU-E, Colony-forming unit, erythroid, 375
CFU-M,L, Colony-forming unit of the myeloid and lymphoid
cells, 375
CFU-S, Colony-forming unit of the spleen, 375
CNS, Central nervous system, 318
CNTF, ciliary neurotrophic factor, 332
CP, Cone synaptic pedicle, 282
CPE, Cytoplasmic polyadenylation element, 484
CSF, Cytostatic factor, 200
CSPG, Chondroitin sulfate proteoglycan, 216
CT, Column of Terni, 309
CTD, Carboxy-terminal domain, 400
DAB, Diaminobenzidine, 134
DAG, Diacylglycerol, 112
DDT, Dichloro-diphenyl-trichloroethane, 836
DHT, Dihydrotestosterone, 775
DIF, Differentiation-inducing-factor, 26
DLHP, Dorsolateral hinge positions, 260
dMP2, Dorsal midline precursor neuron, 315
DMZ, Dorsal marginal zone, 231

DRG, Dorsal root ganglia, 287
DSP1, Dorsal switch protein 1, 585
EcR, Ecdysone receptor, 758
EDNH, Egg development neurosecretory hormone, 808
EEG, Electroencephalogram, 276
EGF, Epidermal growth factor, 580
EGFR, Epidermal growth factor receptor, 765
EKLF, Erythroid krppel-like factor, 441
ELF-1, Eph ligand family 1, 328
elF2-GTP, Eukaryotic initiation factor 2, 472
elF4E, Cap-binding protein, 472
EPO, Erythropoietin, 376
ERE, Estrogen-responsive element, 408
ES, Embryonic stem cells, 72
EVL, Enveloping layer, 190
FAS, Fetal alcohol syndrome, 833
FGF, Fibroblast growth factor, 656
FGF2, Basic fibroblast growth factor, 368
FGF5, Fibroblast growth factor 5, 332
FGF8, Fibroblast growth factor 8, 268
FGFR3, Fibroblast growth factor receptor 3, 110
FSH, Follicle-stimulating factor, 870
G1, Prereplication gap, 196
G2, Premitotic gap, 196
GAG, Glycosaminoglycan, 100
GAP, GTPase-activating protein, 109
G-CSF, Granulocyte colony stimulating factor, 376
GDFs, Growth and differentiation factors or paracrine
factors, 657
GDNF, glial-derived neurotrophic factor, 677
GGF, Glial growth factor, 293
GM-CSF, Granulocyte-macrophage colony stimulating
factor, 376
GnRH, Gonadotropin-releasing hormone, 319
GRE, Glucocorticoid (and progesterone)-responsive
element, 421
GSK-3, Glycogen synthase kinase 3, 609
GVBD, Germinal vesicle breakdown, 864
gwm, Germ wall margin, 189
hCG, Human chorionic ganadotropin, 827
HF, Head fold, 255
HGF, Hepatocyte growth factor, 677
HIMs, Hematopoietic inductive microenvironments, 377
HLH, Helix-loop-helix, 791
IA3 - 1
IA3 - 2
ndice de abreviaturas
HN, Hensens node, 255

hnRNA, Heterogeneous nuclear RNA, 462
HOM-C, Homeotic gene complex, 637
HP, Head process, 255
hpf, Hours past fertilization, 726
HPFH, Hereditary persistence of fetal hemoglobin, 440
HPRT, Hypoxanthine phosphoribosyltransferase, 89
HRI, Heme-responsive inhibitor protein, 495
hyp, Hypoblast cells, 189
ICM, Inner cell mass, 186
Id, Inhibitor of differentiation, 415
IGF-1, Insulin-like growth factor 1, 355
IGFII, Insulin-like growth factor, 155
IgM, Immunoglobulin, 96
IL, Interleukin, 376
IL-6, Interleukin 6, 378
IMZ, Involuting marginal zone, 228
INAH, Interstitial nuclei of the anterior hypothalamus, 787
IP3, Inositol 1,4,5-triphosphate, 112
IRE-BP, Iron-binding regulatory protein, 492
ISN, Intersegmental neuron, 96
JH, Juvenile hormone, 755
KGF, Keratinocyte growth factor, 299
ks, Cells of Kollers sickle, 189
LCRs, Locus control regions, 431
LH, Luteinizing hormone, 870
LIF, Leukemia inhibition factor, 292
LMC, Lateral motor column, 309
MARs, Matrix-associated regions, 431
MBT, Midblastula transition, 489
M-CSF, Macrophage colony stimulating factor, 376
METRO, Message transport organizer, 864
MGF, Mammary gland factor, 766
MHP, Medial hinge point cells, 259
MIS, Mllerian-inhibiting substance, 775
MMC, Medial motor column, 309
MPF, Maturation-promoting factor, 197
MTB, Midblastula transition, 218
mtlrRNA, Mitochondrial large ribosomal RNA, 534
MW, Molecular weight, 410
mz, Marginal zone, 189
N-CAM, Neural cell adhesion molecule, 95
NGF, Nerve growth factor, 293
NGFR, Receptor for nerve growth factor, 680
NIMZ, No involuting marginal zone, 228
NMP-1, Nuclear matrix protein 1, 452
NP, Neural plate, 255
nRNA, Nuclear RNA, 462
NT-3, Neurotrophin 3, 332
NT-4/5, Neurotrophin 4/5, 332
NURF, Nucleosome-remodeling factor, 436
ODH, Octanol dehydrogenase, 50
OEH, Ovarian ecdysteroidogenic hormone, 808
OPL, Outer plexiform layer, 282
OS, Outer segments of the photoreceptor, 282
PB, Polar body, 176

PCR, Polymerase chain reaction, 66
PDGF, Platelet-derived growth factor, 148
PE, Pigment epithelium, 282
Pgc, Pollar granule component, 535
PGCs, Primordial germ cells, 843
pi, Polyinvagination islands, 189
PIP2, Phosphatidylinositol 4,5-biphosphate, 112
PKA, Protein kinase A, 554
PKC, Protein kinase C, 147
PLF, Proliferin, 370
PMC, Primary mesenchyme cells, 213
PMZ, Posterior part of the marginal zone, 239
PNS, Peripheral nervous system, 285
pstA, Prestalk cell A, 27
pstB, Prestalk cell B, 27
pstO, Prestalk cell O, 27
PTTH, Prothoracicotropic hormone, 754
PVC, Posterior vegetal cytoplasm, 515
PZ, Progress zone, 709
RAGS, Repulsive axon guidance signal, 328
RARs, Retinoic acid receptors, 829
rGH, Rat growth hormone gene, 397-398
RTK, Receptor tyrosine kinase, 108
Sc, Subgerminal cavity, 189
SCF, Stem cell factor, 376
SF1, steroidogenic factor 1, 780
SF2, Splicing factor, 466
SG, Sympathetic ganglia, 287
SH2, Src-homology- 2, 911
snRNAs, Small nuclear RNAs, 465
snRNPs, Small nuclear ribonucleo-protein particules, 465
SRY, Sex-determining region of the y, 779
STAT, Signal transducers and activators of transcription, 107
TkB, Inhibitor of kappa, 414
TAFs, TATA-binding protein-associated factors, 400
TBP, TATA-binding protein, 399
TF, Transcription factor, 434
TGF-, Transforming growth factor , 298
TGF-1, Transforming growth factor 1, 686
THS, Thyroid-stimulating hormone, 743
THS-RF, Thyrotropin-releasing hormone, 744
TR, Thyroid hormone receptor, 741
TRE, Thyroxine-and retinoic-acid-responsive element, 421
tRNA, Transfer RNA, 472
tRNAi, Initiator transfer RNA, 472
3UTR, 3Untranslated region, 475
VEGF, Vascular endothelial growth factor, 369
VPCs, Vulval precursor cells, 690
XIC, X chromossome inactivation center, 449
Xnr1, Xenopus nodal-related-1, 617
Xnr3, Xenopus nodal-related-3, 627
YSL, Yolk syncytial layer, 190
ZPA, Zone of polarizing activity, 717
ZRK, Zona receptor kinase, 138
FUNPEC - Editora
Editor Chefe
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Editor Associado
Prof. Dr. David De Jong

Supervisora de Produo
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Revisora Tcnica
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Engenheiro de Sistemas
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Coordenador de Produo Grfica e Diagramao
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