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Desenvolvimento
QUINTA EDIO
Biologia do
Desenvolvimento
QUINTA EDIO
Scott F. Gilbert
Swarthmore College
Traduo e Reviso
Adolfo Max Rothschild
Zuleika Rothschild
Francisco A. de Moura Duarte
Maria Helena Corra Marques
A capa
FOTOGRAFIA DA CAPA: O mRNA para o Fator 8 de Crescimento
As pginas de ttulo
PGINA ESQUERDA: A expresso gnica gera limites nos discos imagi-
Tabela de Contedos
30
25
28
27
39
Metaplasia 40
Clonagem de Anfibios: A Restrio da Potncia
Nuclear 42
Clonagem de Anfbios: A Pluripotncia de Clulas
Somticas 43
16
Evidncia e Anticorpos
Q
16
35
Genes e desenvolvimento:
Introduo e tcnicas 35
47
54
Seqenciamento de DNA
45
58
59
vii
A via JAK-STAT
107
A via RTK-Ras 108
80
84
87
88
110
88
89
92
121
121
140
Preveno da Polispermia
139
147
149
152
156
158
Clivagem: Criando
multicelularidade 167
PADRES DE CLIVAGEM EMBRIONRIA 168
Clivagem holoblstica radial 169
A holotria, Synapta
Ourio-do-Mar 170
Anfbios 173
169
175
viii
Gastrulao em mamferos
180
181
Clivagem Meroblstica
188
197
Q
198
Gastrulao em ourio-do-mar
Gastrulao em peixes
218
Gastrulao de anfbios
Gastrulao em aves
233
233
279
282
283
284
221
210
265
Gastrulao: Reorganizando as
clulas embrionrias 209
265
254
196
186
238
242
292
293
ix
Concluses
297
297
300
308
Selees de alvos
358
366
323
326
319
MESODERMA 341
Mesoderma dorsal: A notocorda e a diferenciao dos
somitos 341
307
Incio do desenvolvimento
vertebrado: Mesoderma e
endoderma 341
ENDODERMA 380
Faringe 380
O tubo digestivo e seus derivados
334
373
382
382
10
394
402
Regulao transcricional da
expresso gnica: A ativao da
cromatina 431
11
444
Necessidade de intensificadores
402
Funo do intensificador: Modelos temporais e
espaciais de transcrio 403
442
440
431
432
449
451
12
475
476
488
xi
13
505
509
510
517
529
Resumo
538
532
534
A gentica da
especificao axial em
Drosophila 543
14
Os genes da segmentao
559
565
569
xii
577
Q
15
606
635
600
609
16
621
592
O centro de Nieuwkoop
621
613
613
xiii
17
655
Interaes epitlio-mesnquima
658
663
663
666
667
668
676
687
Desenvolvimento do membro
de tetrpode 701
706
726
19
18
724
743
Metamorfose em insetos
746
746
xiv
754
Hermafroditismo
Resumo
765
Regulao ambiental do
desenvolvimento animal 805
20
800
778
21
782
782
810
817
820
821
822
806
808
798
762
795
795
Interaes gentica-ambiental
Resumo 837
836
837
827
A saga da linhagem
germinativa 843
Migrao das clulas germinativas
22
843
Meiose 850
Q Informaes adicionais & Especulaes
Grandes Decises: Mitose ou Meiose?
Espermatozide ou vulo? 853
Espermatognese
855
Espermiognese
Q
857
Oognese
860
Mecanismos desenvolvimentais
da mudana evolucionria 883
xv
23
883
Restries ao desenvolvimento
891
898
Restries Fsicas
898
Restries Morfogenticas
898
Restries Filticas
899
Evoluo Conjunta do Ligante e Receptor:
Isolamento Reprodutivo 901
Prefcio
s ltimos anos do sculo 20 encontram a biologia do desenvolvimento retornando posio que ela ocupou no incio do sculo: a
disciplina que unifica os estudos da hereditariedade, evoluo e
fisiologia. Em 1896, a primeira edio de B. Wilson do The Cell in Development
and Inheritance anunciou a verdade maravilhosa que uma nica clula pode
conter em seu interior sua extenso microscpica da soma-total da herana
das espcies. Hoje, a biologia do desenvolvimento est na vanguarda desse
estudo de nossa herana natural. Nos seus aspectos moleculares, ela toca a
qumica fsica na sua investigao dos mecanismos bioqumicos pelos quais
protenas diferentes so produzidas em clulas diferentes do mesmo genoma. Ela tambm est na liderana dos estudos evolucionrios que procuram
entender como mudanas macroevolucionrias ocorreram. Ela abriu recentemente uma rea nova da biologia do desenvolvimento ecolgico, onde mudanas ambientais so vistas criando alteraes no desenvolvimento do
organismo. Durante os ltimos 3 anos, a biologia do desenvolvimento tambm expandiu para a medicina, fundindo-se com a gentica clnica para criar
uma cincia revitalizada da embriologia humana, uma cincia que j se
tornou importante na explanao das malformaes congnitas.
A quinta edio do Biologia do Desenvolvimento foi revisada e reescrita
para refletir essas revolues que esto acontecendo. Aconteceram quatro
mudanas importantes na estrutura do livro desde sua ltima edio. Primeiro, tornou-se impossvel discutir os princpios fundamentais da embriologia sem o conhecimento da atividade gnica ou vias da transduo de sinais.
Portanto, essa informao foi trazida dentro da seo introdutria do livro
de modo que interaes celulares, tais como fertilizao e induo, podem
ser apreciadas tanto no mbito molecular quanto no morfolgico.
Segundo, novo interesse nos efeitos do ambiente no desenvolvimento
normal e anormal conduziu a um novo captulo. O Captulo 21, Regulao
Ambiental do Desenvolvimento Animal, diz respeito s vias pelas quais o
meio ambiente afeta o fentipo do organismo. Interesse na proteo ambiental
e em controvrsias envolvendo a possibilidade de poluentes teratognicos
foraram uma nova percepo das influncias que o meio ambiente representa no desenvolvimento normal e anormal. Na verdade, os biologistas do
desenvolvimento podem rapidamente encontrar-se frente dos movimentos da conservao ecolgica. As primeiras quatro edies deste livro buscaram integrar abordagens molecular, celular e orgnica biologia do desenvolvimento; esta edio adiciona a dimenso ecolgica.
Terceiro, esta edio introduz novas nfases nos papis dos fatores
parcrinos no desenvolvimento. No somente os estudos da transduo
de sinais esto colocados na seo introdutria deste livro, como a Parte V
Prefcio
da Quinta Edio inicia com uma viso geral das famlias do fator de crescimento fibroblstico, TGF-, Wnt e Hedgehog dos fatores de crescimento
e diferenciao.
Quarto, este livro est conectado a um website onde estudantes e professores podem encontrar mais material em muitos tpicos selecionados.
Tal material inclui (1) detalhes de experimentos que so extremamente
especializados para serem colocados no texto, (2) informao histrica sobre reas particulares da biologia do desenvolvimento e personalidades
envolvidas, (3) implicaes mdicas de fenmenos particulares do desenvolvimento, (4) debates ou comentrios em questes relevantes para o campo, e (5) atualizaes do material do texto nessa rea da biologia de crescimento cada vez mais rpido. Filmes e entrevistas gravadas esto includas
e esses artigos de destaque podero ser expandidos medida que a tecnologia
os tornar mais fceis para serem usados. Esse website est conectado tambm a outros websites e podem ser usados para enriquecer a perspectiva de
algum sobre o que est acontecendo no desenvolvimento animal. A presena de um website nos permite manter o direcionamento deste livro s pessoas para as quais isso foi originalmente pretendido: estudantes dos ltimos
anos da graduao e do incio da ps-graduao. Ele tambm me ajudou a
no deixar o livro tornar-se um substituto para peso de papel.
A viso de Roux foi que a biologia do desenvolvimento algum dia constituiria a base de todas as outras disciplinas biolgicas e, em continuada
simbiose com essas disciplinas, desempenharia uma parte proeminente nas
solues dos problemas da vida. Essas foram palavras audaciosas, at mesmo arrogantes h cem anos atrs; hoje, elas expressam uma aceitao amplamente sustentada. O desenvolvimento integra todas as reas da biologia e
desempenha um papel crucial em relacionar o gentipo ao fentipo. O desenvolvimento pode ser estudado usando qualquer organismo e em qualquer
nvel de organizao, de molculas a filos.
medida que o campo continuar a se expandir e se aprofundar , uma
palavra de advertncia requerida: a biologia do desenvolvimento no pode
ser aprendida ou ensinada em um nico semestre. Este texto uma tentativa para prover cada pessoa com material suficiente para seu curso, mas um
instrutor no necessita se sentir culpado por no determinar todos os captulos, e os estudantes no necessitam se sentir privados se eles no lerem
todos os captulos. Isto o comeo do caminho, no sua concluso.
xvii
xviii
Prefcio
Agradecimentos
Esta edio, como suas precursoras, deve muito s sugestes e crticas dos
estudantes em minhas classes de biologia do desenvolvimento e gentica
do desenvolvimento. O grupo de funcionrios e docentes extremamente
corporativo da Universidade Swarthmore tambm desempenharam papis importantes na produo deste livro, e os bibliotecrios da rea de
cincia E. Horikawa e M. Spencer merecem agradecimentos especiais por
terem segurado volumes recentes na biblioteca enquanto eu estava escrevendo o livro. Os cientistas que revisaram estes captulos forneceram enorme ajuda tanto na preciso tcnica dos captulos quanto nas sugestes
para trabalho futuro. Esses investigadores incluem: S. Carroll, J. CebraThomas, E. M. De Robertis, S. DiNardo, E. Eicher, C. Emerson, G. Grunwald,
D. J. Grunwald, M. Hollyday, L. A. Jaffe, W. Katz, R. Keller, K. Kemphues, D.
Kirk, G. Martin, H. F. Nijhout, D. Page, R. Raff, R. Schultz, C. Stern, S.
Tilghman, R. Tuan e M. Wickens. Eu tambm quero agradecer aos muitos
cientistas que desviaram do seu caminho para ajudar a tornar esta edio
melhor lendo pores especficas dos captulos. Eles incluem: M. BronnerFraser, J. Fallon, N. M. Le Douarin, E. McCloud, J. Opitz, K. Sainio, H. Sariola,
I. Thesleff e T. Valente. Se eu deixei algum fora, por favor me desculpem.
desnecessrio dizer que os julgamentos editoriais finais foram de minha
responsabilidade. Meus agradecimentos especiais a Judy Cebra-Thomas
que no somente me aconselhou em certos captulos mas quem deu excelente ajuda durante meu perodo sabtico permitindo-me terminar este
livro. Agradecimentos tambm aos cientistas e filsofos, especialmente: C.
van der Weele, R. Amundson, L. Nyhart, R. Burian, H. F. Nijhout, A. F.
Sterling, K. Smith e A. I. Tauber, que participaram nos workshops de biologia do desenvolvimento da Sociedade Internacional para a Histria, Filosofia e Estudos Sociais da Biologia. Algumas das melhores crticas construtivas deste livro-texto vieram dessas pessoas.
Andy Sinauer uma vez mais conseguiu reunir as mesmas e extraordinrias pessoas neste projeto, e foi um privilgio trabalhar com eles. Meus
agradecimentos a ele e aos editores Nan Sinauer e Carol Wigg, coordenador
de produo Chris Small, artistas John Woolsey e Gary Welch, designer
Susan Schmidler, editor de texto Janet Greenblatt, e artista de layout Janice
Holabird. As habilidades editoriais de Tinsley Davis so extremamente reconhecidas. Devido ao fato de que os prazos finais devem ser cumpridos e
outro trabalho posto de lado, eu tenho que agradecer minha famlia por
mais uma vez me permitir prosseguir com isso. Em particular, este livro
nunca poderia ter sido completado se no fosse pelo encorajamento de minha esposa, Anne Raunio, que, como uma obstetra, gosta do lado mais prtico da biologia do desenvolvimento. Meus agradecimentos a todos vocs.
SCOTT F. GILBERT
1 DE MARO DE 1997
Introduo Biologia
do Desenvolvimento
1 Introduo ao desenvolvimento animal
35
79
tarefa mais rdua que algum haver de realizar. Para se tornar um embrio,
voc teve que construir a si mesmo a partir de uma nica clula. Teve que
respirar antes que tivesse pulmes, digerir alimentos antes que seus rgos estivessem formados, construir ossos a partir de uma massa e ordenar os neurnios antes
mesmo de adquirir a capacidade de pensar. Uma diferena marcante entre voc e a
mquina que a mquina nunca requisitada para uma funo antes que esteja
terminada. Todo animal tem que estar em funcionamento enquanto se auto-constri.
nveis molecular e qumico (p. ex., Como os genes globina so transcritos, e como os
fatores que ativam sua transcrio interagem uns com os outros e com o DNA?), a nveis
celular e tissular (p. ex., Quais so as clulas capazes de produzir globina, e como o
mRNA da globina deixa o ncleo?), a nvel de rgos ou sistema de rgos (p. ex., Como
vasos capilares so formados em cada tecido, e como so instrudos a se conectarem e
ramificarem?) e, at mesmo, a nveis ecolgicos e evolucionrios (p. ex., Como diferenas
na ativao do gene globina permitem o fluxo de oxignio da me para o feto, e como
fatores ambientais acionam a diferenciao de mais hemcias?). Biologistas do desenvolvimento podem estudar qualquer organismo e todo tipo de clula.
Biologia do desenvolvimento um dos campos que mais tem crescido e tambm
um dos mais emocionantes da biologia. Parte dessa emoo vem dos assuntos estudados, porque estamos apenas comeando a entender o mecanismo molecular do
desenvolvimento animal. Outra parte da emoo vem do papel unificador que a biologia do desenvolvimento assume nas cincias biolgicas. A biologia do desenvolvimento est criando uma estrutura que integra a biologia molecular, fisiologia, biologia
celular, anatomia, pesquisa do cncer, neurobiologia, imunologia, ecologia, e biologia
evolucionria. O estudo do desenvolvimento tornou-se essencial para a compreenso
de qualquer rea da biologia.
Espermatozide
Mrula
Blstula
Ocito
Clula germinativa
(Germ plasm)
Espermatozide
(gameta
masculino)
Ocito
(gameta
feminino)
GAMETOGNESE
Adulto
sexualmente maduro
Blastporo
Ectoderma
Gnada
Mesoderma
Estgios
larvais
imaturos
Endoderma
INCUBAO (NASCIMENTO)
Figura 1.1
revestimento do tubo digestivo e rgos associados (pncreas, fgado, pulmes, etc.); e o mesoderma, camada do meio, d origem a diversos rgos
(corao, rins, gnadas), tecidos conjuntivos (ossos, msculos, tendes, vasos sangneos) e clulas sangneas.
3. Uma vez que as trs camadas embrionrias esto estabelecidas, as clulas
interagem umas com as outras e se reorganizam para produzir tecidos e rgos.
Esse processo chamado organognese. (Nos vertebrados, a organognese
iniciada quando uma srie de interaes celulares induzem as clulas ectodrmicas da poro mediana do dorso a formar o tubo neural. Esse tubo originar
o crebro e a coluna vertebral). Muitos rgos contm clulas de mais de uma
camada embrionria, e no incomum o exterior de um rgo ser derivado de
uma determinada camada e o interior de outra. Tambm durante a organognese,
algumas clulas sofrem longas migraes do seu lugar de origem at sua localizao final. Essas clulas migrantes incluem os precursores das clulas sangneas, clulas linfticas, clulas pigmentadas e gametas. A maior parte dos
ossos de nossa face so provenientes de clulas que migraram ventralmente
da regio dorsal da nossa cabea.
4. Como observado na Figura 1.1, em muitas espcies, uma parte especializada
do citoplasma do ovo d origem s clulas que so precursoras dos gametas.
Essas clulas so chamadas de clulas germinativas, sendo destinadas
funo reprodutiva. Todas as outras clulas do corpo so chamadas clulas
somticas. Essa separao entre clulas somticas (que do origem a um
corpo individual) e clulas germinativas (que contribuem para a formao de
uma nova gerao) freqentemente uma das primeiras diferenciaes que
ocorrem durante o desenvolvimento animal. As clulas germinativas finalmente migram para as gnadas, onde se diferenciam em gametas. O desenvolvimento de gametas, chamado de gametognese, normalmente no completado at que o organismo tenha se tornado fisicamente maduro. Na maturidade, os gametas podem ser liberados e participar de uma fertilizao dando
incio a um novo embrio. O organismo adulto finalmente sofre envelhecimento e morre.
Figura 1.2
ntron
2
ntron
1
Gene
DNA
xon
1
xon
2
xon
3
Transcrio
Transcrio
Ncleo
RNA nuclear
Processamento de RNA
mRNA
mRNA
Traduo
Citoplasma
Traduo
mRNA
Protena
mRNA
Protena
Prfase:
O envoltrio nuclear
quebra e um fuso se forma
entre dois centrolos.
Prometfase:
Os cromossomos se
ligam s fibras dos fusos.
Ncleo
Cromatdeos do
cromossomo
Cromatina
Nuclolo
Regio do centrmero
Fuso em
desenvolvimento
Centrolos
ster
Envoltrio
nuclear
Envoltrio
nuclear
rompe
Nuclolo
Cromossomos filhos
Metfase:
Os cromossomos se
alinham no equador da clula.
Telfase:
Os cromossomos atingem
os plos mitticos e a clula
comea a invaginar.
Figura 1.3
Anfase:
Os cromossomos duplicados
(chamados cromatdeos) so
separados.
nucleados e anucleados (reviso por Wilson, 1986). Quando vrios protistas foram
fragmentados, quase todas as partes morreram. No entanto, os fragmentos que continham ncleo foram capazes de sobreviver, regenerando todo a complexa estrutura
celular (Figura 1.5)
O controle nuclear da morfognese celular e a interao do ncleo e citoplasma
esto muito bem demonstrados nos estudos da Acetabulria. Essa enorme clula
individual (2 a 4 cm de comprimento) consiste de trs partes: o disco reprodutivo, o
pednculo e o rizide (Figura 1.6A). O rizide est localizado na base da clula onde
essa presa ao substrato. O ncleo individual da clula se localiza dentro do rizide. O
tamanho da Acetabulria e a localizao do seu ncleo permitiram que pesquisadores
Diagrama de mitose em clulas animais. Durante a interfase o DNA duplicado em preparao para a diviso celular. Durante a
prfase, o envoltrio nuclear quebra e forma-se um fuso entre os dois centrolos. Na
metfase, os cromosssomos se alinham no
equador da clula e se inicia a anfase, os
cromossomos duplicados (cada duplicata de
cromossomo um cromatdeo) so separados. Na telfase os cromossomos atingem
os plos mitticos e a clula comea a
invaginar. Cada plo contm o mesmo nmero e tipos de cromossomos que continha a
clula antes da diviso.
Ribossomos
DNA
RNA
Figura 1.4
removessem o ncleo de uma clula e o substitusse por outro, de outra clula. Nos
anos 30, J. Hmmerling tirou proveito dessa singular caracterstica e trocou ncleos
entre duas espcies morfologicamente distintas, A. mediterranea e A. crenulata. Como
mostrado na fotografia, essas duas espcies tm discos reprodutivos muito diferentes. Hmmerling descobriu que quando um ncleo de uma determinada espcie era
transplantado para o pednculo de outra, o novo disco em formao finalmente assumia a forma associada com o ncleo do doador (Figura 1.6B). Assim, foi considerado
que o ncleo era o controlador do desenvolvimento da Acetabulria.
A formao de um disco reprodutivo um evento morfognico complexo, envolvendo a sntese de um grande nmero de protenas, que devem ser acumuladas em
certa poro da clula e ento organizadas em estruturas complexas especficas da
espcie. O ncleo transplantado da clula realmente direciona a sntese de seu disco
reprodutivo espcie-especfico, mas uma tarefa que pode levar semanas para ser
realizada. Alm disso, se o ncleo for removido da clula de Acetabulria em estgio
inicial do desenvolvimento, antes de formar o disco reprodutivo, um disco normal se
formar semanas depois, ainda que o organismo ir morrer. Esses estudos sugerem
que (1) o ncleo contm informao especfica sobre o tipo de disco reprodutivo
produzido (isto , contm informao gentica que especifica as protenas necessrias para a produo de um certo tipo de disco reprodutivo), e (2) o material contendo
essa informao entra no citoplasma muito antes dessa produo ocorrer. A informao no citoplasma no ser usada por vrias semanas.
Fragmento
anucleado morre
Corte
Ncleo
Fragmento
nucleado
se regenera
Corte
Figura 1.5
Fragmento
anucleado morre
(B)
Disco
reprodutivo
(A)
Disco
reprodutivo
Pednculo
A. crenulata
Pednculo
A. mediterranea
Ncleos transplantados
Ncleo
Ncleo
Rizide
Rizide
1 cm
Rizide
1 cm
A estrutura do disco
reprodutivo a do
ncleo doador
Figura 1.6
Uma hiptese atual, proposta para explicar essas observaes, que o ncleo sintetiza
um mRNA estvel, posicionado em estado dormente no citoplasma at a formao do
disco reprodutivo. Essa hiptese amparada por uma observao publicada por Hmmerling
em 1934. Hmmerling fracionou uma Acetabulria jovem em diversas partes (Figura 1.7). A
poro com o ncleo finalmente formou um novo disco, conforme esperado; da mesma
forma o fez a extremidade apical do pednculo. No entanto, a parte intermediria do pednculo no formou o disco reprodutivo. Por isso, Hmmerling postulou (aproximadamente 30
anos antes de sabermos da existncia do mRNA), que as instrues para a formao do
disco reprodutivo se originavam no ncleo, sendo de alguma forma guardadas dormentes prximo extremidade do pednculo. Muitos anos mais tarde, Kloppstech e
Schweiger (1975) estabeleceram que o mRNA derivado do ncleo se acumula nessa
regio. Ribonuclease, uma enzima que cliva RNA, inibe completamente a formao do
disco reprodutivo quando adicionada gua marinha na qual cresce a Acetabulria. Em
clulas anucleadas, esse efeito permanente; uma vez que o RNA destrudo, no pode
mais haver a formao do disco reprodutivo. Em clulas nucleadas, no entanto, um novo
disco pode ser formado aps a eliminao da ribonuclease, presumivelmente porque um
novo mRNA ento produzido pelo ncleo. Garcia e Dazy (1986) tambm demonstraram
que a sntese da protena especialmente ativa no pice da Acetabulria.
Fica claro pela discusso anterior, que a transcrio nuclear tem um papel importante na formao do disco reprodutivo da Acetabulria. Mas deve ser notado que o
10
Disco reprodutivo e
pednculo regenerados
Extremidade
apical do
pednculo
Poro central
do pednculo
Sem regenerao
Rizide
e ncleo
Regenerao total
Figura 1.7
citoplasma tambm cumpre uma parte essencial na formao desse disco. O mRNA
no traduzido durante semanas, mesmo estando no citoplasma. Algo no citoplasma
controla quando as mensagens devem ou no ser utilizadas. Portanto, a expresso do
disco reprodutivo controlada no somente pela transcrio nuclear como tambm
pelo controle de traduo do RNA citoplasmtico. Nesse organismo unicelular, o
desenvolvimento controlado em ambos estgios de transcrio e de traduo.
Diferenciao em Ameboflagelados Naegleria
Um dos casos mais marcantes de diferenciao em protistas, aquele de Naegleria
gruberi. Esse organismo ocupa um lugar especial na taxonomia protista porque pode
mudar sua forma, de uma ameba para a de um flagelado (Figura 1.8). Durante a maior
parte do seu ciclo de vida, a N. gruberi uma ameba tpica, alimentando-se de bactrias do solo e dividindo-se por ciso. No entanto, quando as bactrias so diludas
(tanto pela gua da chuva quanto pela gua nos experimentos), cada N. gruberi
desenvolve rapidamente uma forma aerodinmica e dois longos flagelos anteriores,
que so usados para encontrar regies mais abundantes em bactrias. Nessas condies, ao invs de existirem diversos tipos de clulas diferenciadas em um nico organismo, essa clula nica tem estruturas celular e bioqumica diferentes nos diferentes
estgios de sua vida.
Diferenciao para a forma de flagelado ocorre aproximadamente em uma hora
(Figura 1.9). Durante esse perodo, a ameba tem que criar centrolos para servir como
corpos basais do flagelo (centros organizadores de microtbulos), assim como criar o
prprio flagelo. Os corpos basais e os flagelos so compostos de diversas protenas,
das quais a mais abundante a tubulina. As molculas de tubulina so organizadas em
microtbulos; esses so posteriormente arranjados para permitir o movimento flagelar.
Fulton e Walsh (1980) mostraram que a tubulina dos flagelos de Naegleria no existe
(A)
(B)
(C)
11
(D)
Figura 1.8
12
Figura 1.9
co
a
in
ul
b
tu e a
da o m
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es r
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S ag
fl
rp
os
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o
c ta
b a
F m
ag
se
to
Fl
co
100
Porcentagem da populao com flagelo
80
Clulas de corpo com
forma flagelar
60
40
20
0
0
Figura 1.10
20
40
60
Tempo aps suspenso (minutos)
80
100
Microncleo
Fuso
meitico
Macroncleo
Ponte
citoplasmtica
Dois paramcios
formam
ponte citoplasmtica
Microncleos passam
por meiose, formando 8
ncleos haplides por clula;
macroncleos degeneram
Todos menos um
dos microncleos de
cada parceiro degeneram
Microncleo
estacionrio
Microncleo
migratrio
Microncleo restante se
divide para formar um microncleo
estacionrio e um migratrio
Microncleos migratrios
atravessam a ponte citoplasmtica
e fertilizam os microncleos
estacionrios do parceiro
Figura 1.11
Unio de paramcios atravs da ponte citoplasmtica, onde dois paramcios podem trocar
material gentico, deixando cada um com genes que diferem daqueles com os quais iniciaram o
processo. (Strickberger, 1985.)
13
14
Figura 1.12
Reproduo
sexual
Acasalamento
Fuso citoplasmtica
Zigoto (diplide)
Maturao (meiose)
Germinao
Dois parceiros tipo mais e tipo menos
Figura 1.13
MEIOSE I
Envoltrio
nuclear
Cromatina
Cromossomos
homlogos
Cromatdeos
homlogos
Ncleo
Interfase
Prfase I precoce
Meia prfase I
Prfase I tardia
Metfase I
(A)
15
Figura 1.14
(B)
Microfilamentos
Esse tubo conecta e se funde com um local especfico no indivduo menos. interessante que o mecanismo usado para estender esse tubo - polimerizao da protena
actina - tambm usado para estender processos do espermatozide e vulo do
ourio-do-mar. No Captulo 4, veremos que o reconhecimento e fuso de espermatozide e vulo ocorrem de uma maneira espantosamente semelhante a desses protistas.
Eucariotos unicelulares parecem ter os elementos bsicos do processo de desenvolvimento que caracterizam os organismos mais complexos: a sntese celular controlada pela regulao transcricional, por traduo e ps-traduo; existe um mecanismo para processar o RNA atravs da membrana nuclear; as estruturas de genes individuais e cromossomos so como sero atravs da evoluo eucaritica; mitose e
meiose so aperfeioadas; e a reproduo sexual existe, envolvendo a cooperao
entre clulas individuais.Tal cooperao intercelular se torna ainda mais importante
com a evoluo de organismos multicelulares.
MEIOSE II
Anfase I
Telfase I
Os dois cromossomos
homlogos originais so
segregados em clulas
diferentes
Metfase II
Anfase II
Telfase II
O centrmero se divide
16
Figura 1.15
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
(F)
17
Figura 1.16
(A)
(B)
(C)
clulas do lado posterior podem se reproduzir. Em P. californica, a colnia normalmente tem 128 ou 64 clulas, e a relao do nmero de clulas somticas para o nmero de
clulas reprodutivas normalmente 3:5. Dessa maneira, uma tpica colnia de 128
clulas tem 48 clulas somticas e uma colnia de 64 clulas tem 24 clulas somticas.
Nos Volvox, quase todas clulas so somticas, e muito poucas clulas so capazes de produzir novos indivduos. Em algumas espcies de Volvox, clulas reprodutivas como as da Pleodorina, so derivadas de clulas que originalmente parecem e
funcionam como clulas somticas antes de crescer e se dividir para formarem uma
nova prognie. No entanto, em outros membros do gnero, como o V. carteri, existe
uma diviso do trabalho completa: as clulas reprodutivas que vo criar a nova gerao so colocadas de lado durante a diviso das clulas reprodutivas que esto
formando um novo indivduo. As clulas reprodutivas nunca desenvolvem um flagelo
funcional e nunca contribuem para motilidade e outras funes somticas do indivduo; so inteiramente especializadas para reproduo. Ainda que as volvocaceas
mais simples sejam consideradas organismos coloniais (porque cada clula capaz de
existncia independente e perpetuao da espcie), no V. carteri temos um organismo
verdadeiramente celular com dois tipos de clulas independentes e distintos (somtico
e reprodutivo), ambos requeridos para a perpetuao da espcie (Figura 1.16C). Embora nem todos os animais separem suas clulas reprodutivas das clulas somticas (e
as plantas raramente o fazem), essa separao de clulas germinativas das clulas
somticas no incio do desenvolvimento caracterstica de muitos filos animais e ser
discutida em maior detalhe no Captulo 13.
Embora todas as volvocaceas, incluindo seu parente unicelular Chlamydomonas, se reproduzam predominantemente por meios assexuados, tambm so capazes
de reproduo sexual. Isso envolve a produo e fuso de gametas haplides. Em
muitas espcies de Chlamydomonas, incluindo a ilustrada na Figura 1.12, a reproduo sexual isogmica, j que os gametas haplides que se encontram so similares
em tamanho, estrutura e motilidade. No entanto, em outras espcies de Chlamydomonas - assim como as vrias espcies de volvocaceas coloniais - gametas nadadores de diversos tamanhos so produzidos por parceiros de acasalamentos diferentes. Isso chamado heterogamia. Mas as volvocaceas maiores desenvolveram uma
forma especializada de heterogamia, chamada oogamia, que envolve a produo de
vulos grandes e relativamente imveis por um parceiro do acasalamento e espermatozides pequenos e mveis pelo outro parceiro (veja Vises Colaterais & Especulaes). Aqui vemos um gameta especializado para reteno de recursos nutricionais
e de desenvolvimento e outro gameta especializado para transporte de ncleos.
Assim, as volvocaceas incluem os organismos mais simples que tm macho e fmea
distinguveis, e possuem caminhos diferentes para desenvolver o vulo ou o espermatozide. Em todas as volvocaceas, a reao da fertilizao se assemelha do
Chlamydomonas porque resulta na produo de um zigoto diplide dormente, inativo, capaz de sobreviver a condies ambientais severas. Quando as condies
permitem aos zigotos germinar, eles primeiro sofrem meiose para produzir herdeiros
haplides dos dois parceiros em nmeros iguais. [other.html#intro1]
18
Informaes adicionais
&
Especulaes
Morte e Diferenciao
Organismos unicelulares que se reproduzem atravs de uma simples diviso celular, tais como as amebas, so potencialmente imortais. A ameba que vemos sob
um microscpio no tem ancestrais mortos! Quando uma ameba se divide, nenhuma das duas clulas resultantes pode ser
considerada ancestral ou prognie; elas
Expanso
de adultos
e juvenis
Embriognese
Adulto com
juvenis
Adulto com
gondios maduros
Maturao
dos gondios
Expanso continuada
da matriz extracelular
Morte de clulas
somticas - progenitores
Expanso
continuada
de juvenis
Liberao
de juvenis
(A)
(B)
(F)
Figura 1.18
(G)
(C)
(H)
(D)
(I)
(E)
(J)
clulas em forma de garrafa abre um buraco em um dos lados do embrio produzindo tenso sobre a camada de clulas interconectadas (Figura 1.19). O embrio se
utiliza desse buraco para fazer a inverso
e depois o fecha. Posteriormente, as colnias juvenis so enzimaticamente soltas
do progenitor e nadam livres.
19
Figura 1.19
20
(A)
assexuadamente e se tornam potencialmente imortais (Figura 1.20). O fato desses mutantes nunca terem sido encontrados na
natureza, indica que a morte das clulas
tem um papel importante na sobrevivncia
do V. carteri sob condies naturais.
[intro2.html]
Entra o sexo
Mesmo o V. carteri se reproduzindo assexuadamente a maior parte do tempo, na
natureza se reproduzem sexualmente uma
vez por ano. Quando o faz, uma gerao
de indivduos morre, e uma nova gerao
geneticamente diferente produzida. O
naturalista Joseph Wood Krutch (1956)
colocou isso de uma forma mais potica:
(B)
Figura 1.20
Figura 1.21
Desenvolvimento
sexual de gondios
Indutor
sexual
Espermatozide
Macho assexuado
Gondio
Desenvolvimento embrionrio
modificado dos gondios resultando
em produo de gametas
Macho sexuado
vulos
Indutor
sexual
Zigotos
vulo
Fmea sexuada
Fmea assexuada
Meiose e germinao
21
22
Lesma
(Pseudoplasmdio; grex)
15 h
16 h
14 h
17 h
CULMINAO
MIGRAO
20 h
12 h
Esporos
23 h
10 h
AGREGAO
Mixamebas
9 h
Corpo de frutificao
6 h
Fluxos
celulares
maduro
24h
Figura 1.22
Ciclo vital de Dictyostelium discoideum. Esporos haplides originam mixamebas, que podem
reproduzir-se assexualmente para formar mais mixamebas haplides. A medida que diminui o
suprimento alimentar, ocorre agregao em pontos centrais, e forma-se um agregado de
pseudoplasmdio. Finalmente, esse pra de se movimentar e forma um corpo de frutificao
que libera mais esporos. Os nmeros referem-se s horas decorridas desde que a diluio
nutricional iniciou a seqncia desenvolvimental.
(A)
Adenina
23
(B)
(C)
(D)
Figura 1.23
* A bioqumica dessa reao envolve um receptor que liga o cAMP. Quando essa ligao
ocorre, realiza-se transcrio especfica de genes, iniciada movimentao em direo fonte de
cAMP, e enzimas adenilciclases (que sintetizam cAMP a partir de ATP) so ativadas. O cAMP
recm-formado ativa seus receptores prprios, assim como aqueles de seus vizinhos. As clulas
na rea permanecem insensveis s novas ondas de cAMP at que o cAMP ligado seja removido
dos receptores por outra enzima da superfcie celular, a fosfodiesterase (Johnson et al., 1989).
A matemtica de tais reaes de oscilao prev que a difuso de cAMP seria inicialmente
circular. Porm, medida que o cAMP interage com as clulas que recebem e propagam o sinal,
as clulas que recebem a parte frontal da onda comeam a migrar com uma velocidade diferente
daquela das clulas atrs delas. O resultado a espiral rotatria de cAMP e a migrao vistas na
Figura 1.23. interessante que as mesmas frmulas matemticas predizem o comportamento de
certas reaes qumicas e a formao de novas estrelas em galxias espirais rotatrias (Tyson e
Murray, 1989).
24
Figura 1.24
de acordo com sua localizao dentro do organismo inteiro, e assim compensar por
partes faltantes, chamada regulao. Veremos esse fenmeno em muitos embries,
inclusive naqueles dos mamiferos.
MOLCULAS DE ADESO CELULAR EM DICTYOSTELIUM. Como essas clulas
individuais aderem entre si para formar um organismo coeso? Este o mesmo problema que enfrentam as clulas embrionrias, e a soluo que evoluiu para os protistas
a mesma que aquela usada pelos embries: molculas de adeso celular reguladas
pelo desenvolvimento.
Enquanto esto crescendo mitoticamente em bactrias, clulas de Dictyostelium
no aderem umas s outras. Porm, uma vez que a diviso celular cessa, as clulas se
tornam progressivamente mais adesivas, alcanando um patamar de coesividade mxima aproximadamente aps 8 horas de inanio. A adeso clula-clula mediada por
uma glicoprotena de 24.0000 Da (24-kDa) que est ausente em clulas em crescimento
mas pode ser vista pouco depois dessa fase (Figura 1.24; Knecht et al., 1987; Loomis,
1988). Essa protena sintetizada a partir de mRNA recm-transcrito e fica localizada
nas membranas celulares das mixamebas. Se essas clulas so tratadas com anticorpos que se ligam a essa protena e a mascaram, as clulas no iro aderir umas s
outras e todo desenvolvimento subseqente cessa.
Uma vez que essa agregao inicial tiver ocorrido, estabilizada por uma segunda
molcula de adeso celular. Essa glicoprotena de 80-kDa tambm sintetizada durante a fase de agregao. Se apresentar defeitos ou estiver ausente nas clulas, lesmas
pequenas se formaro, e seus corpos de frutificao s atingiro aproximadamente um
tero de seu tamanho normal. Assim, o segundo sistema de adeso celular, parece ser
necessrio para a reteno de um nmero de clulas suficientemente grande para a
formao de grandes corpos de frutificao (Mller e Gerisch, 1978; Loomis, 1988). Um
terceiro sistema de adeso ativado tardiamente no desenvolvimento, quando a lesma estiver migrando. A protena ou grupo de protenas que intervem no terceiro sistema pode existir somente em clulas pr-esporo e pode ser responsvel pela separao
de clulas pr-esporo de clulas pr-pednculo (Loomis, comunicao pessoal). Assim, Dictyostelium evoluiu para trs sistemas de adeso clula-clula regulados pelo
desenvolvimento, e que so necessrios para a morfognese de clulas individuais
para formar um organismo coerente. Como veremos em captulos subseqentes, clulas de metazorios tambm usam molculas de adeso celular para formar os tecidos e
rgos do embrio.
Dictyostelium um organismo multicelular em tempo parcial que no forma
muitos tipos de clulas (Kay et al., 1989), e os organismos multicelulares mais complexos no se formam pela agregao de clulas anteriormente independentes. No entanto, muitos dos princpios do desenvolvimento demonstrados por esse simples or-
25
Informaes adicionais
&
Especulaes
Evidncia e Anticorpos
* Em uma carta irnica, caoando de tais inferncias correlativas, Sies (1988) demonstrou uma
notvel boa correlao entre o nmero de cegonhas vistas na Alemanha Ocidental de 1965 at 1980
e o nmero de bebs nascidos durante esses mesmos anos.
26
(A)
(B)
Figura 1.25
Informaes adicionais
27
&
Especulaes
Clulas pr-pednculo A
Clulas pr-pednculo B
Clulas pr-pednculo AB
Direo do movimento celular
Clulas pr-esporo
Pr-pednculo AB
Guarda da
retaguarda
Pr-pednculo A
luz solar, cessa de migrar e sofre a diferenciao final em esporos e pednculo. Durante esse processo (chamado culminao), o grex se apia em um dos terminais
fazendo com que as clulas traseiras se
tornem sua base. Algumas clulas pstA
migram para o tubo central de clulas pstB,
e quando entram em contato com o tubo
central, diferenciam-se em clulas pstB, sintetizando componentes de uma nova matriz
extracelular. As clulas novas so adicionadas regio anterior do tubo, forando-o
mais para dentro da estrutura culminativa.
Esse tubo se diferencia para tornar-se o pednculo. Ao mesmo tempo, as clulas pstA
que tinham ficado na regio posterior do
Figura 1.26
Regulao da diferenciao de clulas pedunculares durante a fase de culminao do crescimento de Dictyostelium. Representao
esquemtica mostrando que clulas pr-esporo
e pr-pednculo esto em geral misturadas no
estgio precoce da agregao, mas se separam
de modo que a maioria das clulas prpednculo se encontrem na parte anterior do
grex. As clulas pr-pednculo A constituem
a maior parte do anterior do grex, com alguma
clulas similares no posterior. Clulas prpednculo B so vistas na parte central da
poro anterior do grex. Nos estgios precoces da culminao, as clulas pr-pednculo
do posterior migram para formar o disco basal
e os clices do saco de esporos; as clulas prpednculo A do anterior migram para o centro
e se tornam clulas pr-pednculo B. Isso estende o pednculo at que esse eleve a caixa de
esporos acima da superfcie. (Segundo
Harwood et al., 1992).
Clice superior
Clulas
pr-esporo
Pr-pednculo AB
Clice
Inferior
Pr-pednculo AB
Pr-pednculo B
Disco basal interior
Disco basal exterior
Pr-pednculo B
Pr-pednculo B
Agregado
Grex
Culminante precoce
Culminante mdio
Culminante tardio
28
Amnia
passa a fosforilar um repressor que estava inibindo a expresso dos genes de diferenciao do pednculo. No estado fosforilado, o inibidor inativo. Portanto, uma
vez que os nveis de cAMP se elevam (pela
remoo da amnia), a PKA pode inativar
o inibidor dos genes formadores do pednculo (Figura 1.27). [intro.4html]
Figura 1.27
cAMP
Repressor ativo da
diferenciao e de
genes de migrao
peduncular
Migrao
continuada
do grex
PKA
inativa
Luz solar
cAMP
PKA
ativa
Repressor inativo
(fosforilado)
Transcrio
do gene da protena B
da matriz extracelular;
migrao de clulas
pr-pednculo;
diferenciao e
culminao peduncular
BILATERIA
DEUTEROSTOMATAS
Artrpodos
Aneldeos
No-segmentados
Nematelmintos
Larva
trocfora
da
lo
ad
Clivagem em
espiral gastrulao
protostosomal
ma
ce
eu
lo
Platelmintos primitivos
(acelomados)
ad
em
nh
ac
ag
qu
es
nh
nh
ag
em
Li
em
ag
SIMETRIA
BILATERAL
Li
Li
Clivagem radial
gastrulao
deuterostomal
ps
ce
izo
Larva dipleura
(tornria)
Segmentados
Moluscos
Equinodermos
elo
Ascdios
(Tunicados)
RADIATA
PARAZOA
Cnidrios
(Celenterados)
Porferos
(Esponjas)
PROTOSTOMATAS
do
Vertebrados
29
SIM
ET
RA
RIA
DIA
Larvas planulides
Protozorios coloniais
primitivos
Protistas flagelados
Figura 1.28
Os Porferos
Considera-se que os protistas coloniais deram origem, ao menos, a dois grupos de
metazorios, ambos passando por estgios embrionrios. Um desses grupos o Porfero
(esponjas). Esses animais desenvolvem-se de um modo to diferente daquele de qualquer outro grupo de animais, que alguns taxonomistas sequer consideram-nos
metazorios (chamando-os, parazorios). Uma esponja tem trs tipos principais de
clulas somticas, mas um deles, o arquecito, pode se diferenciar em todos os outros
Platelmintos
30
tipos. As clulas de uma esponja quando passadas por uma peneira, podem regenerar
novas esponjas a partir de clulas individuais. Ainda mais, em alguns casos, tal reagregao espcie-especfica: se clulas individuais de esponja de duas espcies
diferentes forem misturadas, cada uma que se re-forma contm somente clulas de
uma espcie (Wilson, 1907). Nesses casos, admite-se que os arquecitos mveis colecionam clulas de sua espcie, mas no das outras (Turner, 1978). Esponjas no contm mesoderma, no havendo portanto verdadeiros sistemas de rgos em Porfero;
esses seres no tm tubo digestivo, sistema circulatrio, nervos ou msculos. Assim,
apesar de passarem por estgios embrionrios e larvais, esponjas so muito pouco
parecidos com a maioria dos metazorios (veja Fell, 1997).
Protostomatas e Deuterostomatas
O outro grupo de metazorios emergindo dos protistas coloniais caracterizado pela
presena de trs camadas germinativas durante o desenvolvimento. Alguns membros
do grupo constituem os Radiatas, assim chamados porque tm simetria radial tal como
um tubo ou uma roda. Os Radiatas incluem os cnidrios (medusas, corais e hidras) e
ctenforos (medusas de crista). Nesses animais, o mesoderma rudimentar, consistindo de clulas escassamente disseminadas em uma matriz gelatinosa. Porm, a maioria
dos metazorios tem simetria bilateral, constituindo assim, os Bilaterias. Esses filos
bilaterais so classificados como platelmintos, protostomatas ou deuterostomatas.
Pensa-se que todos os Bilateria descendam de um tipo primitivo de platelminto. Esses
platelmintos foram os primeiros a ter mesoderma verdadeiro (embora no tivessem
ficado ocos para formar uma cavidade corprea), e foram considerados parecidos com
as larvas de certos celenterados contemporneos. Enquanto os platelmintos so desprovidos de celoma (cavidade corprea), os nematelmintos (e rotiferas) tm uma cavidade corprea diferente daquela de todos os outros animais, por ser desprovida de
revestimento mesodrmico. A maioria dos filos so celomados, isto , possuem uma
cavidade corporal revestida por mesoderma.
As diferenas entre as duas divises de Bilateria esto ilustradas na Figura 1.29.
Protostomatas (do Grego, boca primeiro), incluem os filos dos moluscos, artrpodos
e vermes; so assim chamados porque a boca formada em primeiro lugar, junto ou
prximo da abertura intestinal, produzida durante a gastrulao. O nus se forma mais
tarde em outro local.
A cavidade corprea desses animais se forma a partir de uma previamente slida
corda de clulas mesodrmicas, tornadas ocas. A outra grande diviso dos Bilateria
a linhagem dos deuterostomatas. Os filos nessa diviso incluem os chordatas e os
equinodermos. Embora possa parecer estranho classificar seres humanos e cavalos
no mesmo grupo que estrelas-do-mar e ourios-do-mar, alguns traos embriolgicos
acentuam esse parentesco. Em primeiro lugar, nos deuterostomatas (do Grego significando boca depois), a abertura bucal formada depois da abertura anal. Tambm,
enquanto prostostomatas em geral formam suas cavidades corpreas tornando oco
um bloco slido de mesoderma (formao esquizelide), a maioria dos deuterostomatas
formam suas cavidades corpreas a partir de bolsas mesodrmicas estendendo-se do
intestino (formao enteroclica). Porm, deve-se mencionar que h muitas excees
a essas generalizaes.
Protostomatas e deuterostomatas diferem na maneira pela qual so clivados. Na
maioria dos deuterostomatas, os blastmeros so perpendiculares ou paralelos uns aos
outros. Isso chamado clivagem radial. Protostomatas ao contrrio, tm uma extensa
variedade de tipos de clivagem. Muitas espcies formam blstulas compostas por clulas que esto em ngulos agudos relativamente ao eixo polar do embrio. So por isso
considerados sofrer clivagem espiral. Alm disso, os blastmeros em estgio de clivagem,
na maioria dos deuterostomatas, tm maior capacidade de regular seu desenvolvimento
do que os prostostomatas. Se um nico blastmero removido de um embrio
quadricelular de ourio-do-mar ou camundongo, tal blastmero ir desenvolver-se em
um organismo inteiro, e os trs-quartos restantes do embrio tambm iro se desenvolver
(A) PROTOSTOMATAS
(B) DEUTEROSTOMATAS
1. Clivagem espiral
1. Clivagem radial
2. Desenvolvimento esquizoclico
2. Desenvolvimento enteroclico
Celoma
Bolsa
Intestinal
Blastocele
Blastocele
Mesoderma
se divide
Mesoderma
Intestino
3. Tendncia a no regulao
Embrio de
de 4 clulas
Celoma
Bolsas se
destacam
Mesoderma
Intestino
31
Intestino
Intestino
3. Tendncia regulao
Um blastmero
excludo
Desenvolvimento
interrompido
Embrio de
de 4 clulas
Um blastmero
excludo
Figura 1.29
32
Figura 1.30
Diagrama do ovo amnitico do pinto, mostrando o desenvolvimento das membranas envolvendo o embrio. (A) Incubao de trs dias.
O mesoderma extra-embrionrio se estende do
embrio para prover vasos sangneos para e
de vrias regies fora do embrio. (B) Incubao de sete dias. A origem das membranas ser
detalhada no captulo 9. A gema ser finalmente rodeada pelo saco vitelnico que permite a
entrada de nutrientes nos vasos sangneos. O
crio derivado em parte do ectoderma e estende-se do embrio at a casca (onde ir trocar oxignio e gs carbnico e obter clcio da
casca). O mnio prove o meio fluido no qual
cresce o embrio, e a alantide coleta resduos
nitrogenados que seriam perigosos para o embrio. Finalmente, o endoderma se transforma
no intestino e envolve a gema. A evoluo do
mnio e das outras membranas extra-embrionrias constituiu uma grande linha divisria
entre aqueles vertebrados cuja reproduo est
ligada gua (anamniotas) e aqueles que podem se reproduzir em reas secas (amniotas).
Embrio
Intestino
mnio
Cavidade
amnitica
Alantide
Crio
Gema
Saco vitelino
(A)
Alantide
(B)
LITERATURA CITADA
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of cell aggregates by chemotaxis in the development of the slime mold Dictyostelium discoideum. J. Exp. Zool. 106: 1-26.
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33
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Shaffer, B. M. 1953. Aggregation in cellular
slime molds: In vitro isolation of acrasin.
Nature 171: 975.
34
Genes e desenvolvimento:
Introduo e tcnicas
36
(B)
Figura 2.1
(A)
Quando Morgan e Wilson entraram nesse debate, a disputa j estava bem ativa.
Uma escola associada a Oskar Hertwig, Wilhelm Roux e Theodor Boveri, propunha
que os cromossomos do ncleo continham os elementos construtores de formas.
Esse grupo era desafiado por Eduard Pflger, T. L. W. Bischoff, Wilhelm His e seus
colegas, que acreditavam que estruturas pr-formadas no poderiam causar to enormes mudanas durante o desenvolvimento; ao contrrio, eles acreditavam que os
padres herdados de desenvolvimento eram causados pela criao de novas molculas do gameta interativo, citoplasmas. Morgan aliou-se a esse ltimo grupo e obteve
dados que interpretou com sendo consistentes com o modelo citoplasmtico da herana. Em seu experimento mais crucial, ele removeu citoplasma do rcem-fertilizado
ovo ctenforo (gelia de crista). Em 1897 Morgan relatou:
Aqui, embora todo o ncleo de segmentao esteja presente, devido perda de
parte do citoplasma, produz-se embries com defeito... Parece no haver escape
da concluso que no citoplasma, e no no ncleo, est o poder de diferenciao
dos estgios precoces do desenvolvimento.
37
(A)
(B)
Figura 2.2
O carter singular do cromossomo foi mostrado por Boveri e Stevens. (A) Theodor Boveri
(1862-1915) cujo trabalho Wilson (1918) comentou: conseguiu a verdadeira fuso de
citologia, embriologia e gentica um feito biolgico que... no fica atrs de qualquer outro
de nosso tempo. Fotografia tirada em 1908,
quando os estudos cromossmicos e embriolgicos de Boveri estavam no seu apogeu. (B)
Nettie M. Stevens (1861-1912), que treinou
tanto com Boveri como com Morgan, vista
aqui em 1904 quando era estudante de psdoutorado, realizando a pesquisa que correlacionou o nmero de cromossomos X com o
desenvolvimento sexual. [(A) cortesia de
Baltzer, 1967; (B) cortesia do Instituto
Carnegie de Washington.]
38
(A)
(B)
Figura 2.3
(C)
39
40
41
neural promove sua regenerao a partir da retina pigmentada, e uma nova lente pode
ser formada a partir das clulas da ris dorsal. A regenerao do tecido lenticular da ris
(a assim chamada regenerao Wolffiana a partir da pessoa que primeiro a observou
em 1894) foi intensamente estudada. Yamada e seus colegas (Yamada, 1966, Dumont e
Yamada, 1972) acharam que aps a remoo de uma lente, uma srie de acontecimentos
leva produo de uma nova lente a partir da ris (Figura 2.4). Os ncleos do lado
dorsal da ris comeam a sintetizar quantidades enormes de ribossomos, seu DNA se
replica, e divises mitticas se sucedem. As clulas da ris pigmentada comeam, em
seguida, a se desdiferenciar expelindo seus melanossomos (os grnulos pigmentados
que do ao olho a sua cor; esses melanossomos so ingeridos por macrfagos que
entram no local da ferida). A ris dorsal continua a se dividir, formando um globo de
tecido desdiferenciado na regio da lente removida. Essas clulas comeam ento a
sintetizar os produtos diferenciados de clulas lenticulares, as protenas do cristalino. Essas protenas so fabricadas na mesma ordem que no desenvolvimento normal
da lente. Uma vez formada uma nova lente, as clulas do lado dorsal da ris cessam sua
atividade mittica.
Esses eventos no so a via normal pela qual a lente dos vertebrados formada.
Como ser visto em detalhe mais tarde, a lente normalmente se desenvolve a partir de
uma camada de clulas epiteliais da cabea, induzida pelas clulas retinais precursoras
subjacentes. A formao da lente por clulas diferenciadas da ris representa metaplasia
(ou transdiferenciao), a transformao de um tipo celular diferenciado em outro
(Okada, 1991). A ris da salamandra, portanto, no havia perdido gene algum daqueles
usados na diferenciao das clulas da lente.
Retina
pigmentada
Retina
neural
ris dorsal
Figura 2.4
Lente
ris
ventral
(A)
(D)
(B)
(E)
(C)
(F)
(G)
42
Plo animal
Agulha de vidro
Fuso
meitico
Grnulos
pigmentados
Fuso
meitico isolado
Ovo ativado
enucleado
Micropipeta
Extrao e lise da
clula doadora
Ncleo doador
inserido na clula
enucleada
Figura 2.5
Membrana
cicatriza
Figura 2.6
Bl
st
a
ul
ta
a
di
tr
a
ul
pr
G
ec
e
oc
tr
a
ul
ta
o
br
a
di
N
ru
la
to
43
ca
a
ud
m ard
co o c
m
o
s t
c
no e n
os
iri t i m
n
i
G
ir
ba
G
co
Grfico de transplantes nucleares bem sucedidos, em funo da idade do desenvolvimento nuclear. A abscissa representa o estgio no qual o ncleo doador (de R. pipiens) foi
isolado e inserido no ocito ativado e enucleado. A ordenada mostra a porcentagem desses transplantes capazes de
produzir blstulas que podiam em seguida direcionar o desenvolvimento para o estgio do girino nadador (Segundo
McKinnell, 1978.)
Horas a 18oC
44
Figura 2.7
Procedimento empregado para obter rs maduras de ncleos intestinais de girinos de Xenopus. O ovo de tipo selvagem (2 nuclolos
por ncleo; 2-nu) irradiado para destruir os
cromossomos maternos, e um ncleo intestinal de um girino marcado (1-nu) inserido. Em
alguns casos no ocorre diviso; em alguns casos o desenvolvimento do embrio sustado;
porm, em outros casos, uma r inteiramente
nova formada tendo um gentipo 1-nu. (Segundo Gurdon, 1968, 1977.)
EXPERIMENTO
Ovo no-fertilizado
(cepa 2 nu)
Girino
(cepa 1 nu)
Ncleo intestinal
epitelial inserido
no ovo irradiado
Irradiao UV destri
comossomos do ovo
Micropipeta
Ovo receptor
irradiado
Ncleo intestinal
RESULTADOS
Blstula
Girino
Blstula
Girino
(morre)
Blstula
Sem diviso
Embrio
anormal
R adulta
(Cepa 1 nu)
45
de gerar girinos natatrios (Orr et al., 1986; DiBerardino, 1989). Embora DiBerardino
(1987) tenha observado que at o presente, ncleo algum de uma clula
documentadamente especializada, nem de uma clula adulta tenha mostrado ser
totipotente, tal ncleo pode no entanto instruir a formao de todos os rgos do
girino natatrio.
Algumas das diferenas entre os resultados dos laboratrios de Briggs e de Gurdon,
podem envolver diferenas na fisiologia do desenvolvimento das rs Rana e Xenopus.
Quando se transfere um ncleo de uma clula diferenciada para o citoplasma do ocito,
se est pedindo ao ncleo para reverter para condies fisiolgicas s quais ele no
est acostumado. Os ncleos da clivagem das rs dividem-se rapidamente, enquanto
alguns ncleos de clulas diferenciadas dividem-se raramente, se tanto. Falhas em
replicar DNA rapidamente podem levar a quebras cromossmicas: tais anormalidades
foram vistas em muitas clulas de girinos clonados. Sally Hennen (1970) mostrou que
o sucesso desenvolvimental de ncleos doadores pode ser ampliado tratando-se
esses ncleos com espermina e resfriando os ovos para dar tempo ao ncleo de se
adaptar ao citoplasma do ovo. Acredita-se que a espermina remova histonas da
cromatina podendo re-acertar a atividade dos ncleos. Quando ncleos do endoderma
de girinos de Rana pipiens, no estgio de broto caudal, foram tratados dessa maneira,
62 porcento daqueles ncleos que iniciaram desenvolvimento normal, prosseguiram
at a gerao de girinos normais. Em animais controle, nenhum dos ncleos conseguiu gerar tais girinos. Assim, os genes para o desenvolvimento do girino completo
no pareceram ter sido perdidos pelas clulas do endoderma.
Podemos olhar para esses experimentos de clonagem de anfbios de duas maneiras. Primeiro, reconhecer uma restrio geral de potncia concomitante ao desenvolvimento. Segundo, facilmente ver que o genoma da clula diferenciada notavelmente
potente em sua habilidade de produzir todos os tipos celulares do girino anfbio. Em
outras palavras, mesmo existindo um debate sobre a totipotncia de tais ncleos,
existe pouca dvida de que eles so extremamente pluripotentes. Certamente, muitos
genes no usados na pele ou em clulas sangneas, podem ser reativados para
produzir os nervos, o estmago, ou o corao de um girino natatrio. Assim, cada
ncleo no corpo contm a maioria (se no todos) dos mesmos genes.
Informaes adicionais
&
Especulaes
46
(A)
(C)
(B)
(D)
Figura 2.8
Figura 2.9
Planta de
cenoura
madura
Corte
transversal
da raiz
Proliferao de
massa celular
(calo) em meio
de cultura de
leite de coco
Planta
jovem
Planta embrionria
transferida para meio
de cultura de agar
Planta de cenoura
madura no agar
*A grande exceo a essa regra da constncia dos genes os genes das imunoglobulinas
discutida no Captulo 10. Cada clula tem todas as subunidades gnicas das imunoglobulinas, mas em
linfcitos, algumas dessas subunidades esto rearranjadas ou mesmo suprimidas do genoma. O
terceiro desafio - a explicao de como o ambiente pode direcionar o desenvolvimento foi
prontamente compreendida, uma vez que a explicao geral para a expresso diferencial da expresso gnica foi estabelecida. Conforme veremos, o modelo do operon demonstrou como uma
substncia do ambiente podia efetuar a expreso gnica diferenciada.
47
so destacadas como uma linhagem distinta de clulas no incio do desenvolvimento), as plantas normalmente derivam seus gametas de clulas somticas.
Portanto, no to surpreendente que
uma nica clula de uma planta possa
se diferenciar em outros tipos de clulas e formar um clone geneticamente
idntico (clone, do grego klon, significando ramo).
48
49
Figura 2.10
Gene indutor
Promotor
Operador
Genes estruturais
para utilizao
da lactose
No h transcrio
de genes estruturais
Protena repressora
produzidas por
i liga-se a o
Lactose
RNA
polimerase
mRNA
-galactosidase
mRNA transcrito
Lactose combinando
com o repressor,
previne ligao a o
50
1. Cada ncleo celular contm o genoma completo estabelecido no ovo fertilizado. Em termos moleculares, os DNAs de todas as clulas diferenciadas so
idnticos.
2. Os genes no-usados das clulas diferenciadas no so destrudos ou mutados,
retendo o potencial de serem expressos.
3. S uma pequena porcentagem do genoma est sendo expressa em cada clula,
e uma poro do RNA sintetizado especfica para aquele tipo de clula.
Os dois primeiros postulados j foram discutidos. O terceiro que s uma pequena
parte do genoma est ativo produzindo produtos especficos dos tecidos foi primeiro testado em larvas de insetos. Aps a ecloso, uma larva de inseto tem duas populaes celulares diferentes, formadas por cerca de 10.000 clulas. A maior parte tem
cromossomos politnicos. Tais cromossomos sofrem replicao de DNA na ausncia
de mitose, contendo portanto 512 (29), 1024 (210), ou mesmo mais hlices duplas paralelas de DNA em lugar de somente uma (Figura 2.11; Prancha 31). Essas clulas no
sofrem mitose, e crescem expandindo seu volume at 150 vezes. Durante a metamorfose, tais clulas morrem sendo substitudas por clulas diplides no politnicas agrupadas em certas regies da larva (veja Captulo 19). Beermann (1952) mostrou que o
padro de distribuio das bandas de cromossomos politnicos era idntico ao longo
da larva e que no se notavam perdas ou adies de qualquer regio cromossmica
quando diferentes tipos de clulas eram comparados (Figura 2.12). Porm, Beermann
estudando o mosquito Chironomus e Becker (1959) estudando Drosophila, acharam
regies cromossmicas que estavam estufadas. Esses tufos apareciam em lugares
diferentes nos cromossomos em cada tecido; seu aparecimento mudava com o desenvolvimento dessas clulas (Figura 2.13). Ainda mais, alguns tufos podiam ser
Figura 2.11
51
estimulados ou inibidos por certas mudanas fisiolgicas causadas pelo calor ou por
hormnios (Clever, 1966; Ashburner, 1972; Ashburner e Berondes, 1978).
Beermann (1961) apresentou evidncias que esses tufos representam um afrouxamento localizado de cromossomos politnicos (Figura 2.14) e que so stios de sntese
ativa de RNA. Duas espcies intercruzadas diferentes de Chiromonus foram encontradas: uma produzindo grande quantidade de protena salivar e a outra no (Figura
2.15). Os produtores tinham uma tufo grande (anel de Balbiani) em determinada banda;
esse tufo no existia nos no-produtores. O cruzamento de produtor com no-produtor resultou em larvas produzindo quantias intermedirias de protena salivar. Cruzando duas moscas hbridas, a capacidade de produzir protena salivar segregou-se de
forma Mendeliana: 1 alto produtor: 2 intermedirios:1 no-produtor. Altos produtores
tinham dois tufos (um em cada cromossomo homlogo), produtores intermedirios
tinham apenas um, e no-produtores nenhum tufo. Beermann concluiu que a informao gentica necessria para a sntese dessa protena salivar est presente nessa
banda distal do cromossomo e que sua produo dependia de transformao em uma
regio estufada.
(A)
Glndula
salivar
Tbulos de
Malpighi
Tecido
retal
Intestino
(B)
Figura 2.12
52
Figura 2.13
Seqncia de estufamentos de uma poro do cromossomo 3 da glndula salivar de Drosophila melanogaster. (A,B) larva de 110 horas; (C) larva de 115
horas; (D,E) estgio pr-pupa (aps 4 horas). Notar
o estufamento e a regresso das bandas 74EF e 75B.
Outras bandas (71DE, 78D) estufam mais tarde, porm, a maioria no estufa de modo algum durante o
perodo. (Cortesia de M. Ashburner.)
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
(A)
(B)
Figura 2.14
53
BR4(SZ)
Alto
produtor
No-produtor
BR2
Todos produtos
intermedirios
BR1
BR3
Alto produtor
(A)
(B)
(C)
No-produtor
Produtores
Intermedirios
Figura 2.15
Correlao de padres de estufamento com funes especializadas nas clulas das glndulas
salivares de Chironomus pallidivitatus. (A)
Cromossomo de uma clula produzindo uma
secreo granular e mostrando um anel de
Balbiani adicional [BR4(SZ)]. (B) Cromossomo 4 de uma clula salivar, mostrando somente anis de Balbiani 1, 2 e 3 (BR1, BR2, BR3).
(C) Evidncia gentica que a sntese de uma
importante protena salivar depende da formao de tufos BR4(SZ). Larvas com altos
nveis de secrees granulares tm clulas salivares glandulares com tufos BR4(SZ) em ambos cromossomos 4 (coloridos), enquanto larvas sem essas secrees no tm tais tufos.
Produtores intermedirios tm somente um
cromossomo 4 com uma regio estufada
BR4(SZ) em cada clula salivar realizando a
secreo. (A e B segundo Beermann, 1961, cortesia de W. Beermann.)
(A)
Figura 2.16
(B)
BR 2
(C)
(A,B) Isolamento da regio BR2 de Chironomus tentans por micromanipulao. O cromossomo intacto 4 pode ser dividido em trs regies, uma contendo BR2. (C) Transcrio da
regio BR2 mostrado por uma auto-radiografia in situ aps hibridizao do BR2 RNA com
a preparao cromossmica. (A e B de Lambert
e Daneholt, 1975; C de Lambert, 1972; fotografias cortesia de B. Lambert.)
54
Portanto, os tufos nos cromossomos salivares esto produzindo mRNA ativamente. Em clulas que sintetizam essa protena, o gene est ativado; em clulas que no
usam essa protena, o gene permanece reprimido.
(A)
Condies de
desnaturao
(calor, lcali)
Condies de
re-anelamento
Figura 2.17
Hibridizao de cidos nuclicos. (A) Se a hlice de DNA for separada em duas fitas, essas
devem se re-anelar sob condies adequadas
de fora inica e tempo. De maneira semelhante, se o DNA for separado em suas duas fitas,
o RNA deve ficar capacitado a se ligar a genes
que o codificam. Se presente em quantidades
suficientemente grandes em comparao com
o DNA, o RNA ir substituir uma das fitas de
DNA nessa regio.
RNA
(B)
Desnaturar; adicionar
RNA (em grande
quantidade em
comparao com DNA)
RNA hibridiza
com uma
fita de DNA
dos precursores radiativos. Alm disso, o DNA pode hibridizar tanto com o gene que
produziu o RNA (embora a outra fita) e com o prprio RNA, tornando-o extremamente
til para a deteco de pequenas quantidades de RNAs especficos.[other.html#gene6]
55
mRNA
Anelar iniciador
mRNA
Tabela 2.1
Stio
enzimtico*
Derivao
Reconhecimento e clivagem
EcoRI
Escherichia coli
BamHi
Bacillus amyloliquifaciens
HindIII
Haemophilus influenzae
SalI
Streptomyces albus
SmaI
Serratia marcescens
HhaI
Haemophilus haemolyticus
HaeIII
Haemophilus aegyptius
AluI
Arthrobacter luteus
G AA T T C
C T TAA G
G G AT C C
C C TAG G
A AG CTT
TTC GA A
G TC GAC
CAG C T G
CCC GGG
GGG CCC
GCG C
C GCG
GG CC
CC GG
AGCT
T C GA
Transcriptase
reversa
mRNA
cDNA
lcali
cDNA
Figura 2.18
56
Stio
Hind III
Stio BamHI
57
Stio Eco RI
Poli-ligante
Plasmdeo cortado
no gene lacZ
Quebra
endonucleoltica
por BamHI
Fragmentos
de gene
humano
incubados e
ligados em um
plasmdeo
Plasmdeo
recombinante
com gene lacZ
interrompido
DNA humano
Quebra endonucleoltica
por BamHI
Figura 2.19
Um protocolo geral para clonar DNA, usando como exemplo a insero de uma seqncia de DNA humano em um plasmdeo com um stio sensvel BamHI.
Colnias
incolores
Meio contendo
ampicilina
Colnias azuis
Aplicao das colnias
incolores nos crculos do
papel de filtro; lisar para
expor o DNA
mRNA
radioativo
Papel de filtro incubado com mRNA
radioativo do gene a ser clonado
58
Figura 2.20
Peso
Papel-toalha
Contatos de
papel de filtro
Desnaturar fragmentos de
DNA fitas simples em lcali
Suporte
Cuba com
soluo tampo
Gel
Figura 2.21
Drosophila Besouro
melanogaster
Ubx
ftz
59
Galinha Camundongo
10
10
10
10
3
Antp
1
1
1
1
Seqenciamento de DNA
Dados de seqncia podem dar informaes sobre a estrutura da protena codificada e podem identificar seqncias regulatrias de DNA que certos genes tm em
comum. A simplicidade da tcnica de seqenciamento didesoxi de Sanger (Sanger
et al.,1977) tornou-a um procedimento padro em muitos laboratrios de biologia
molecular. No incio, usa-se um vetor contendo o gene clonado e se isola uma fita
nica do DNA circular (Figura 2.22). Funde-se (anela-se) ento um iniciador (primer)
radioativo de DNA (aproximadamente 20 pares de bases) complementar ao DNA
do vetor imediatamente 3' ao gene clonado. (Porque essas seqncias dos vetores
so conhecidas, iniciadores oligonucleotdicos podem ser facilmente sintetizados
ou adquiridos comercialmente). O iniciador tem uma ponta 3' livre qual mais
nucleotdeos podem ser adicionados. Coloca-se o DNA alvo e o iniciador juntamente com todos os quatro desoxirribonucleosdeos trifosfatos em quatro tubos
de ensaio. Cada um dos tubos contm a subunidade polimerizante da DNA polimerase e um diferente didesoxinucleosdeo trifosfato: um tubo contm didesoxi-G,
outro didesoxi-A e assim por diante. As estruturas dos desoxinucleotdeos e dos
didesoxinucleotdeos esto representadas na Figura 2.23. Enquanto o
desoxirribonucleotdeo no tem um grupo hidroxila (OH) no carbono 2' do seu
acar, o didesoxirribonucleotdeo no tem grupos hidroxila em ambos os carbonos, 2' e 3'. Assim, mesmo que um didesoxirribonucleotdeo possa ser ligado a uma
crescente cadeia de DNA pela DNA polimerase, ele interrompe o crescimento da
cadeia por no ter um grupamento 3' ao qual se ligaria um novo nucleotdeo.
Assim, quando a DNA polimerase est sintetizando DNA do iniciador, o novo
DNA ser complementar ao gene clonado. No tubo com didesoxi-A, entretanto,
sempre que a polimerase coloca um A na cadeia crescente, existe a possibilidade
de que um didesoxi-A seja colocado em lugar do desoxi-A. Se isso acontecer, a
cadeia pra. Similarmente, no tubo com didesoxi-G, a cadeia tem o potencial de
parar toda vez que um G inserido. (O processo foi comparado uma dana
folclrica grega na qual uma pequena porcentagem dos danarinos em potencial
tem um brao em uma tipia).
60
Iniciador
Seqncia da fita
do iniciador
Seqncia
complementar
Fragmentos
maiores
Fragmentos
menores
Figura 2.22
Adenina
Base 1
Adenina
Base 2
Adenina Desoxiadenosina
trifosfato (acar desoxirribose)
(A)
Didesoxiadenosina
trifosfato (acar
didesoxirribose)
(B)
Figura 2.23
Em cada tubo esto sendo feitas milhes de cadeias e por essa razo eles contero
uma populao de cadeias, algumas interrompidas no primeiro stio possvel, outras
no ltimo e algumas em stios intermedirios. O tubo com didesoxi-A, por exemplo,
conter cadeias com diferentes e distintos comprimentos, cada uma terminando com o
resduo A. Os fragmentos de DNA radioativo resultantes sero separados por eletroforese. O resultado uma escada de fragmentos onde cada degrau uma seqncia de nucleotdeos de comprimento diferente. Lendo escada acima, obtem-se a seqncia do DNA complementar quela do gene clonado.
61
62
(A)
Preparao de cDNA
clonvel
Regio codificadora
mRNA
(B)
DNA de fago
Brao esquerdo
Brao direito
cDNA
No necessrio para
a replicao do fago
mRNA
Hidrlise alcalina
cDNA de dupla fita
preparado como
descrito em (A)
cDNA
DNA polimerase I
Regio codificadora
cDNA
S1 nuclease
Regio codificadora
Fita
dupla
cDNA
Adicionar finais Bam HI
cDNA do
mRNA, agora
clonado em
vetores virais
Transferir alguns
fagos para filtros
de nitrocelulose
Fago
hbrido
Adicionar camada de
clulas de E. coli
Filtros de nitrocelulose
Lise
Placa
Camada de
bactrias
E. coli
Zona de lise
indicando clones
do fago
Figura 2.24
Sonda
radioativa
DNA de
fago de fita
nica ligado
ao filtro
Preparao dos
autoradiogramas
63
64
65
(B)
(A)
(C)
Figura 2.25
Enzima
fosfatase
alcalina
Corante
(precipitado azul escuro)
Ncleo
Corante
Anticorpo
para biotina
Biotina
(incolor)
Sonda complementar a mRNA de Brachyury
tendo resduos de biotina em suas uridinas
mRNA de Brachyury
66
(A)
Ovo
Clivagem
Blstula
Blstula
Mesenquimatosa
Blstula precoce
Blstula tardia
Prisma
Plteo
(B)
Ectoderma / mesoderma
Endoderma
Figura 2.26
Transferncia Northern para um gene especfico no endoderma do ourio-do-mar, Lytechinus variegatus. (A) Transferncia Northern
de desenvolvimento, mostrando acumulao
de mRNA de acordo com o estgio especfico
desse gene. mRNA total (10 g por estgio)
foi submetido eletroforese em gel de agarose.
O gel foi transferido para papel tratado e os
mRNAs aderidos ao papel, que foi em seguida
incubado com cDNA radioativo de um clone
endoderma-especfico. Mostrou-se que esse
mRNA sintetizado durante o estgio de blstula do mesnquima e aumentado ao longo do
desenvolvimento. (B) Transferncia Northern
no estgio de prisma, mostrando que o mRNA
est presente no endoderma (com algum mesoderma aderido) mas no no ectoderma. RNA
total do endoderma foi eletroforisado (pista 2)
prximo ao mRNA do resto do ourio-do-mar
(pista1). Ligao com cDNA radioativo detectou mRNA somente no endoderma. (de Wessel
et al., 1989, cortesia de G. Wessel.)
Extrair
mRNA
mRNA total
de ocito
Ocito
mRNA total
de gstrula
Gstrula
Hibridizar
Fazer cDNA
de mRNA
Extrair
mRNA
DNA polimerase
S1 nuclease
cDNA de
gstrula
cDNA de dupla
fita especfico de gstrula
Figura 2.27
Adicionar ligantes
Colocar em veculo
de clonagem
Figura 2.28
Gstrula
Nurula
67
Broto de cauda
68
Primeiro ciclo
1 cpia
DNA alvo
RNA
iniciador 2
Segundo ciclo
Hibridiza
iniciadores
Estende novas
fitas de DNA
Segundo ciclo de
snteses resulta em
quatro cpias da
seqncia alvo de DNA
4 cpias
Figura 2.29
Protocolo para a reao de polimerase em cadeia (PCR). Para determinar se um tipo particular
de mRNA est presente, todo mRNA convertido a DNA de dupla fita pela transcriptase
reversa e DNA polimerase. Esse DNA desnaturado e dois conjuntos de iniciadores so
adicionados. Se a seqncia especfica estiver presente, os iniciadores se hibridizaro aos seus
terminais opostos. (Iniciadores especficos so produzidos com base na seqncia que se procura. Se conhecida apenas a seqncia da protena codificada pela mensagem, prepara-se um
conjunto de diferentes iniciadores, cada um possivelmente complementar ao DNA.) Usando
DNA polimerase termoestvel de T. aquaticus, cada fita de DNA sintetiza seu complemento.
Essas fitas so, por sua vez, desnaturadas e os iniciadores so hibridizados a elas, iniciando o
ciclo novamente. Dessa maneira, o nmero de fitas novas com a sequncia entre os dois
iniciadores aumenta exponencialmente.
69
Ovrio de rato
Rim de camundongo
Salivares de camundongo
Pncreas de camundongo
Pulmo de camundongo
Embrio de 14 dias
Rim de camundongo
Figura 2.30
Adulto
Ovrio de camundongo
70
Figura 2.31
Camundongos quimricos
As tcnicas descritas tm sido usadas recentemente para transferir genes para todas as clulas do embrio de camundongo (Figura 2.32). Durante o desenvolvimento do camundongo existe um estgio onde somente esto presentes dois tipos de
clulas: as clulas externas, que formaro a poro fetal da placenta, e as clulas
internas, que daro origem ao prprio embrio. Essas clulas internas so chamadas
clulas embrionrias precursoras (clulas tronco), porque cada uma delas pode,
se isolada, gerar todas as clulas do embrio (Gardner, 1968; Moustafa e Brinster,
1972). Essas clulas podem ser isoladas do embrio de um camundongo e cultivadas. Uma vez em cultura, elas podem ser tratadas como descrito, de modo a incorporar novo DNA. A nova clula embrionria precursora (no somente o DNA, mas a
clula inteira) pode ser injetada em outro embrio de camundongo em fase precoce.
Assim, a clula precursora tratada estar integrada no embrio do hospedeiro. O
resultado um camundongo quimrico*. Algumas de suas clulas so derivadas
das clulas embrionrias precursoras do hospedeiro, mas outra poro de clulas
derivada tambm das clulas precursoras tratadas. Se as clulas tratadas se tornaram parte da linha germinal do camundongo, alguns dos seus gametas sero derivados da clula doadora. Quando cruzado com um camundongo do tipo selvagem,
alguns de seus descendentes levaro, portanto, uma cpia do gene inserido. Os
descendentes heterozigotos, no acasalamento produziro 25% de embries carregando duas cpias do gene inserido em cada clula de seu corpo (Gossler et al.,1986).
Assim, em trs geraes o camundongo quimrico, o camundongo heterozigoto
e o camundongo homozigoto um gene que foi clonado de um outro indivduo,
est agora presente em ambas as cpias dos cromossomos dentro do genoma do
camundongo. Camundongos com genes estveis de outros indivduos so chamados camundongos transgnicos. Essas linhagens tm sido particularmente teis na
determinao das funes de regies reguladoras que ladeiam os genes.
Experimentos com genes com endereamento
(Gene targeting ou Knockout)
A anlise de embries precoces de mamferos foi durante muito tempo prejudicada
pela dificuldade em criar e selecionar mutaes que afetam a fase inicial do desenvolvimento embrionrio. Esse problema foi superado pela tcnica chamada de
endereamento de genes (s vezes, chamada de Knockout). As tcnicas so similares quelas que produzem camundongos transgnicos, mas em lugar de adicionar
genes, enderear genes significa trocar alelos do tipo selvagem por outros mutados.
Chisaka e Capecchi (1991) usaram essa tcnica para estudar a funo do gene Hoxa3 no desenvolvimento do camundongo. Hoxa-3 semelhante a vrios genes de
Drosophila que so conhecidos como controladores da expresso gnica de segmentos especficos no embrio precoce; a protena codificada por Hoxa-3 liga-se ao
DNA, exatamente como sua correspondente na Drosophila. Seria possvel que Hoxa3 de maneira similar estaria regulando a expresso gnica espao-especfica nos
mamferos? Chisaka e Capecchi isolaram o gene Hoxa-3, cortaram-no com uma enzima
de restrio e inseriram nesse stio um gene para resistncia neomicina (Figura
2.33). Em outras palavras, eles mutaram o gene Hoxa-3 pela insero de um grande
pedao de DNA que continha um gene resistente neomicina, destruindo a habilidade da protena Hoxa-3 em se ligar a DNA. Esses genes mutantes Hoxa-3 foram
eletroporados em clulas embrionrias precursoras que eram sensveis neomicina.
* crtico notar a diferena entre uma quimera e um hbrido. Um hbrido resulta da unio de dois
genomas diferentes dentro da mesma clula: o descendente de um genitor de gentipo AA e outro de
gentipo aa um hbrido Aa. Uma quimera resulta quando clulas de constituio gentica diferente
aparecem no mesmo organismo. O termo apto: refere-se a um monstro mitolgico com cabea de
leo, corpo de bode e cauda de serpente.
71
Clulas embrionrias
precursoras
Trofoblasto
Microinjetar
clulas precursoras
transgnicas no
embrio hospedeiro
Cultura de clulas
embrionrias precursoras
Gene clonado
no vetor
Mistura de clulas
embrionrias precursoras
com o gene clonado
Seleo de clulas
embrionrias precursoras
que incorporaram o transgene
Injetar no
tero
Camundongos
quimricos
Figura 2.32
Camundongos
transgnicos
heterozigotos
Camundongos
transgnicos
homozigotos
Uma vez dentro do ncleo dessas clulas, o gene Hoxa-3 mutado substituiu um
alelo normal desse gene por um processo chamado recombinao homloga. Aqui,
as enzimas envolvidas no reparo de DNA e replicao incorporam o gene mutante
em lugar da cpia normal. Esse um evento raro, mas tais clulas podem ser
selecionadas cultivando as clulas precursoras em neomicina. A maioria das clulas
morre com a droga, mas aquelas que adquiriram resistncia pelo gene incorporado
sobrevivem. As clulas resultantes tm um gene Hoxa-3 normal e um Hoxa-3 mutado.
As clulas precursoras heterozigotas so microinjetadas em um blastcito de camundongo e se integram nas clulas do embrio. O camundongo resultante uma
quimera composta de clulas do tipo selvagem do embrio hospedeiro e de clulas
heterozigotas Hoxa-3, das clulas precursoras. As quimeras so acasaladas com
camundongos do tipo selvagem e se algumas das clulas doadoras se integraram
linhagem das clulas germinativas, alguns dos descendentes sero heterozigotos
Produo de camundongos transgnicos. Clulas embrionrias precursoras de um camundongo so cultivadas e o genoma alterado pela
adio de um gene clonado. As clulas
transgnicas so selecionadas e injetadas em
um embrio hospedeiro de camundongo na sua
fase precoce. Aqui, as clulas embrionrias
precursoras transgnicas se integram s celulas
precursoras do hospedeiro. Esse embrio
colocado no tero de um camundongo fmea
grvida e se desenvolve em um camundongo
quimrico. Se as clulas precursoras doadoras
contriburam para a linha germinativa, e o camundongo quimrico cruzado com um do
tipo selvagem, parte dos descendentes sero
heterozigotos ao alelo adicionado. Cruzando
heterozigotos, pode ser gerada uma linhagem
de camundongos que homozigota ao alelo
adicionado. Essa seria uma linhagem transgnica. O gene adicionado (o transgene) pode
ser de qualquer fonte eucaritica.
72
(A)
Massa
celular
interna
neo r
Blastcito
Cultura de clulas
embrionrias
precursoras (ES)
Recombinao
homloga
Eletroporao
Clula
precursora
embrionria
(B)
gene Hoxa-3
Endonucleases
de restrio
Hoxa-3
gene neor
Figura 2.33
Seleo de clulas ES
heterozigotas por sua
resistncia neomicna
Injeo de clulas ES
heterozigotas no
blastcito
(C)
Injeo dos
blastcitos no tero
Produo de
camundongos quimricos
Heterozigotos
Cruzamento de
quimricos com
tipo selvagem
Cruzamento de
camundongos
heterozigotos
Hoxa-3/ Hoxa-3+
Heterozigotos
Hoxa-3/ Hoxa-3
Homozigoto
para o gene Hoxa-3. Os animais heterozigotos podem ser cruzados entre si, e aproximadamente 25% de seus descendentes devem levar duas cpias do gene mutado
Hoxa-3. Esses camundongos mutantes homozigotos no possuem as glndulas
tireide, paratireide e timo! Dessa maneira, endereando genes pode-se analisar as
funes de determinados genes durante o desenvolvimento de mamferos.
[gene7.html]
73
T3
promotor
T3 RNA
polimerase
Embrio normal
T7 RNA
polimerase
mRNA
antisense
Krppel
T7
promotor
mRNA de consenso
(sense) Krppel
Embrio normal
infectado com RNA
antisense Krppel
Figura 2.34
74
o stio onde se liga a RNA polimerase. Localizada em algum lugar dentro do gene (a
jusante ou a montante, ou ainda em um ntron dentro do gene), est uma segunda
regio chamada intensificadora. Fatores proticos que se ligam ao intensificador permitem sua interao com o promotor e, conseqentemente, com a transcrio do gene
pela RNA polimerase. Alguns promotores (como aqueles usados por produtos relacionados ao metabolismo geral da clula) no precisam ser ativados por intensificadores, mas a maioria dos genes ligados ao desenvolvimento so ativados em tempos e
clulas especficos. Esses genes precisam ser ativados por fatores que se ligam ao
intensificador e ao promotor. Como veremos no Captulo 10, a ligao de diferentes
fatores de transcrio aos promotores e intensificadores de genes especficos um
dos mecanismos que controlam a produo de protenas diferentes a partir de genomas
idnticos. Um exemplo a ativao do gene para ZP3.
Como detalharemos no Captulo 4, ZP3 a principal protena ligante de espermatozide na superfcie do vulo de camundongo. uma glicoprotena sintetisada pelo
ocito durante sua maturao em vulo (Roller et al.,1989). Uma transferncia Northern
mostra que o mRNA para essa protena sintetizado somente em ocitos em crescimento e no pode ser detectado em nenhum outro tipo de clula (Figura 2.36). O que
permite a esse gene ser ativado somente nos ocitos? Lira e colaboradores (1990)
isolaram o gene para ZP3, determinaram sua seqncia e encontraram um stio promotor, 28 pares de bases a montante do stio onde a transcrio do gene iniciada. Como
hiptese, consideraram que seqncias responsveis por ativao ocito-especfica
podem existir at mais longe, a montante do gene. Eles usaram enzimas de restrio
para isolar o DNA da regio 5', a montante, (com 150 pares de bases) e o fundiram ao
gene para a luciferinase de vaga-lume. (No necessrio dizer que essa enzima produtora de luz no encontrada em camundongos. Est sendo usada aqui como um gene
reprter para monitorar onde o DNA a montante pode causar sua expresso.) O gene
recm-construdo, contendo a regio a montante do gene ZP3 ligada ao gene estrutural para luciferinase, foi injetado em zigotos de camundongo para criar animais
transgnicos, levando em cada ncleo o gene luciferinase com a regio regulatria
ZP3. Em camundongos transgnicos fmeas, a hibridizao in situ localizou mRNA de
luciferinase em um nico tipo de clula, o ocito (Figura 2.37). Assim, a seqncia de
DNA com 150 pares de bases foi necessria e suficiente para ativar o gene (qualquer
gene!) no ocito. Dentro dessa regio de 150 pares de bases (de 99 a 86 pares de bases
a montante do gene estrutural ZP3) existe a seqncia 5-GATAA-3' que liga uma
protena chamada OSP-1. OSP-1 encontrada somente em ocitos em maturao; ela
ativa o gene ZP3 ligando-se a essa sequncia de DNA no promotor. Parece, ento, que
ZP3 sintetizado em ocitos porque eles tm a protena OSP-1 que se liga a certas
seqncias de DNA que so parte de seu promotor (Schickler et al.,1992). No momento, est sendo investigado como regulado o gene codificador de OSP-1.
Figura 2.35
Intensificador
Promotor
xon
ntron
Intensificador
a montante
do gene
Intensificador
a jusante
do gene
Figura 2.36
Ocito
Ovrio
Crebro
Embrio de 13 dias
Corao
Intestino
Rim
Msculo
(A)
Fgado
(B)
Figura 2.37
Testculos
tero
75
76
LITERATURA CITADA
Morange, M. 1996. Construction of the developmental gene concept. The crucial years:
1960-1980. Biol. Zent. bl. 115:132-138.
Morgan, I H. 1897. The Frogs Egg. Macmillan, New York. [p. 135].
King, T. J. and Briggs, R. 1956. Serial transplantation of embryonic nuclei. Cold Spring Harbor
Symp. Quant. Biol. 21: 271-289.
77
78
80
Figura 3.1
PROCESSO
AO
MORFOLOGIA
EXEMPLO
CLULAS MESENQUIMATOSAS
Condensao
cartilagem
Mesnquima se
torna epitlio
Mesquina da
cartilagem
Diviso
celular
Mesnquima
dos membros
Morte
celular
Clula morre
Mesnquima
interdigital
Migrao
Mesnquima
do corao
Secreo de
matriz e degradao
Sntese ou remoo da
camada extracelular
Mesnquima
da cartilagem
Crescimento
Clulas ficam
maiores (hipertrofia)
Clulas
gordurosas
CLULAS EPITELIAIS
Disperso
Epitlio
mesnquima
(estrutura inteira)
Degenerao do
ducto Mlleriano
Delaminao
Epitlio
mesnquima
(parte da estrutura)
Hipoblastos de
de galinha
Mudana de
forma ou crescimento
Neurulao
Migrao celular
(intercalao)
Gastrulao
de vertebrados
Diviso celular
Gastrulao de
vertebrados
Secreo de matriz
e degradao
Sntese ou remoo da
camada extracelular
Formao de
rgos vertebrados
Migrao
Formao de bordas
livres
Ectoderma de
galinha
82
Clulas epidrmicas
presuntivas
Dissociao
de clulas
Reagregao
espontnea
Segregao de
tipos de clulas
Figura 3.2
Reagregao de clulas da nurula de anfbios. Clulas epidrmicas presuntivas de embries pigmentados e clulas da placa neural
de embries no pigmentados so dissociadas
e misturadas entre si. As clulas reagrupamse de tal forma que um tipo (aqui, a epiderme
presuntiva) cobre o outro. (Modificado de
Townes e Holtfreter, 1955.)
83
Epiderme
+
mesoderma
Epiderme
Mesoderma
+
endoderma
Endoderma
Mesoderma
Mesoderma
Mesoderma
(A)
Epiderme
+
Mesoderma
+
endoderma
Epiderme
Endoderma
(B)
Placa neural
+
epiderme
Epiderme
Placa
neural
(C)
Placa neural
+
Mesoderma axial
+
epiderme
Mesoderma
Epiderme
(D)
Placa
neural
(E)
Figura 3.3
ectoderma. Assim, afinidade seletiva parece ser importante para fornecer informao
posicional s clulas embrionrias.
A terceira concluso de Holtfreter e seus colegas foi que afinidades seletivas
mudam durante o desenvolvimento. Isso deveria ser esperado, pois clulas embrionrias no mantm uma nica relao estvel com outras clulas. Para que ocorra o
desenvolvimento, clulas precisam interagir de forma diferente com outras populaes celulares em tempos especficos. Essas mudanas na afinidade celular foram
dramaticamente confirmadas por Trinkaus (1963), que mostrou uma clara correlao
entre mudanas de adeso in vitro e o comportamento da clula embrionria. Mais
recentemente, os experimentos de Fink e McClay (1985) demonstraram esse comportamento no ourio-do-mar, durante seu desenvolvimento. Na blstula, todas as clulas
parecem ter a mesma afinidade umas pelas outras. Cada clula tem tambm uma alta
afinidade para a matriz extracelular (camada hialina) que cobre o embrio, e uma baixa
afinidade para as protenas dentro da cavidade embrionria (blastocele). Entretanto,
ao iniciar-se a gastrulao, um grupo especfico de clulas, no plo vegetal da blstula, perde sua afinidade pelas clulas vizinhas e pela matriz extracelular externa, enquanto adquire simultaneamente afinidade pelas fibrilas proticas que forram a blastocele (Figura 3.4). Essas mudanas de afinidade causam a perda de contato das clulas
84
Figura 3.4
(A)
(B)
Camada hialina
Clulas da
blstula
Fibrilas
da
blastocele
com suas vizinhas e a migrao para dentro da blastocele, onde elas formaro o
esqueleto da larva. Quando elas comeam a formar esse esqueleto, suas propriedades adesivas tero que mudar novamente. Essas clulas, que tinham sido antisociais entre si desde seu ingresso na blastocele, devem agora aderir para formar
os rudimentos do anel esqueltico. Essas mudanas na adeso so especficas
temporalmente e tambm especficas para as clulas precursoras esquelticas
(McClay e Ettensohn, 1987). Tais mudanas na afinidade celular so extremamente
importantes nos processos da morfognese.
A reconstruo de agregados de embries tardios de aves e mamferos foi
obtida pelo uso da protease tripsina para dissociar as clulas entre si (Moscona,
1952). Quando as clulas isoladas resultantes foram misturadas em um frasco e
agitadas de modo que a fora de cisalhamento destrusse adeses no especficas, as clulas se distriburam de acordo com seu tipo celular. Dessa maneira, elas
reconstruram a organizao do tecido original (Moscona, 1961; Giudice, 1962). A
Figura 3.5 mostra a reconstruo do tecido da pele de um embrio de camundongo de 15 dias. As clulas da pele so separadas por enzimas proteolticas e depois
agregadas em uma cultura rotatria. As clulas epidrmicas migram para a periferia, e as drmicas migram para o centro. Em 72 horas, a epiderme foi reconstituda,
formou-se uma camada de queratina e folculos de plo so vistos na regio dermal.
Essa reconstruo de tecidos complexos a partir de clulas nicas chamada de
agregao histotpica.
O modelo termodinmico de interaes celulares
A clulas, ento, no se distribuem ao acaso, mas se movem ativamente para criar
organizao tissular. Quais foras dirigem o movimento celular durante a morfognese? Em 1964, Malcolm Steinberg props um modelo que explicava o direcionamento da
Figura 3.5
Epiderme
Reconstruo da pele a partir de uma suspenso de clulas de pele de um embrio de camundongo de 15 dias. (A) Seo atravs da pele embrionria, mostrando a epiderme, derme e folculos
pilosos primrios. (B) Suspenso de clulas isoladas de pele tanto da derme como da epiderme.
(C) Agregados aps 24 horas. (D) Seo atravs de um agregado mostrando migrao de clulas
epidrmicas para a periferia. (E) Nova diferenciao dos agregados (72 horas), mostrando
epiderme e derme reconstitudas, completa com folculos de plo e camada queratinizada. (de
Monroy e Moscona, 1979, cortesia de A. Moscona.)
(B)
(C)
Derme
(B)
Folculo piloso
primrio
(A)
(D)
(A)
Derme
Derme
Epiderme Camada queratinizada
(C)
Figura 3.6
Agregados formados pela mistura de clulas da retina neural (no pigmentada) de um embrio de
galinha de 7 dias com clulas pigmentadas da retina (escuras). (A) Cinco horas aps a mistura
das suspenses de clulas isoladas, so vistos agregados de clulas distribudas ao acaso. (B) Em
19 horas, as clulas pigmentadas da retina no so mais vistas na periferia. (C) Aps dois dias,
a maioria das clulas pigmentadas da retina esto localizadas em uma massa central interna
rodeadas pelas clulas da retina neural. (As clulas pigmentadas espalhadas so provavelmente
clulas mortas). (de Armstrong, 1989, cortesia de P. B. Armstrong.)
85
(E)
Folculos de plo
86
Figura 3.7
Tecido
A
Tecido
B
Colocar tecidos
juntos, bem
encaixados
Dissociar os
tecidos
e reagregar
Movimento do
tecido B para
envolver o tecido A
Movimento das
clulas A para dentro,
distante da periferia
Espalhamento de um tipo de clula sobre outro tipo. A posio final de agregados compostos de
dois tipos de tecidos independente de sua posio inicial. Uma condio final idntica
obtida, se os tecidos so transformados em suspenses de clulas isoladas e, ento, reagregadas
ou os tecidos so mantidos intactos e colocados em contato. (De acordo com Armstrong, 1989.)
Clulas A localizadas
centralmente s clulas B
(A) DISTRIBUIO
(B) AO ACASO
(C) SEPARAO
Figura 3.8
Distribuio como um processo tendendo estabilidade termodinmica mxima. (A) Distribuio ocorre quando a fora adesiva mdia entre diferentes tipos de clulas (ab) menor que a
fora adesiva mdia homotpica (A-A ou B-B) (aa, bb). As clulas mais adesivas se localizam
centralmente. (B) Se a fora das adeses A-B maior ou igual mdia das adeses homotpicas,
no vai haver distribuio, porque o sistema j atingiu o equilbrio termodinmico, e a mistura
dos tipos de clulas ser ao acaso. (C) Se as ligaes A-B so muito mais fracas que a mdia das
adeses homotpicas, haver uma completa separao, como caracterstico para leo e gua.
Informaes adicionais
&
87
Especulaes
sas clulas formam um gradiente ao longo do eixo proximodistal; essas propriedades so maiores no pulso e menores no
antebrao.
Crawford e Stocum (1988) conseguiram
relacionar essa distribuio de clulas in
vitro ao processo de regenerao de membro ao vivo. Blastemas do pulso, cotovelo
ou antebrao foram enxertados na juno
blastema-toco de um membro posterior regenerando a partir da meia coxa. Os
blastemas de membro anterior migraram
distalmente at o nivel correspondente do
membro posterior do hospedeiro e regeneraram uma nova estrutura (Figura 3.10). O
blastema do antebrao imediatamente regenerou um membro completo a partir do
nvel da meia coxa; o blastema do cotovelo
se moveu ao nvel do joelho e formou o
resto do brao a partir desse ponto; o
blastema do pulso foi deslocado at o fim
do membro posterior em regenerao, onde
formou um pulso ao nvel do tarso do p.
Esses dados sugerem que as hierarquias
da distribuio celular, vistas in vitro, refletem diferenas que so usadas pelo corpo, in vivo, na construo de novos rgos.
Blastema marcado
Cotovelo
Pulso
Pulso
Blastema no marcado
Figura 3.9
Antebrao
Cotovelo
Antebrao
88
Figura 3.10
Distribuio in vivo, onde blastemas de membros anteriores em regenerao (em cores) enxertados em blastemas da coxa mediana (cinza) so deslocados para a regio correspondente do membro posterior em regenerao
(pulso ao tarso; cotovelo ao joelho; antebrao
coxa mediana) onde iniciam a formao do
membro anterior, distalmente daquele ponto.
(de Crawford e Stocum, 1988.)
Blastema
de pulso
Blastema
de cotovelo
Blastema de
coxa mediana
Blastema
de antebrao
Enxertar blastema no
blastema em regenerao
da coxa mediana
Permitir crescimento
externo dos enxertos
Informaes adicionais
&
89
Especulaes
Imunizao
Clulas de bao
de camundongo
Clulas de mieloma
Fuso
Figura 3.11
Protocolo para preparar anticorpos monoclonais. Clulas do bao de um camundongo imunizado so fundidas com clulas mutadas de mieloma, sem a enzima HPRT. Clulas so cultivadas
em um meio contendo hipoxantina, aminopterina e timidina (HAT). Clulas de mieloma no
fundidas no podem crescer nesse meio porque a aminopterina bloqueia a nica via para sintetizar nucleotdeos purnicos. Clulas B morrem nesse meio, mesmo contendo a enzima (HPRT)
que lhes permitiria utilizar a hipoxantina do meio. As clulas fundidas (hibridomas) crescem e se
dividem. Os poos nos quais crescem os hibridomas so selecionados quanto presena do
anticorpo efetivo, e as clulas de poos positivos so semeadas em densidade suficientemente
baixa para permitir que clulas individuais originem clones discretos. Esses clones so isolados
e selecionados para o anticorpo efetivo. Tal anticorpo monoclonal. Os hibridomas produzindo
esse anticorpo podem ser cultivados e congelados. (de Yelton e Scharff, 1980.)
90
Segmentos externos de
fotorreceptores
Somas de fotorreceptores
(camada nuclear externa)
(B)
(C)
(D)
Da protena ao gene
Figura 3.12
Fotorreceptor
Neurnio
Vrios antgenos
no especficos
Como antgenos de diferenciao so protenas cuja expresso regulada no tempo e no espao, e como essas mudanas
so freqentemente correlacionadas com
mudanas morfolgicas especficas (como
mostra a Figura 3.13), seria interessante
saber como seus genes so regulados. Por
exemplo, o conhecimento de como a protena 24B10 se expressa poderia dar
indicaces sobre os mecanismos genticos da diversidade neuronal. Como podemos realizar essa gentica reversa
indo da protena para o gene?
Em primeiro lugar, ligamos anticorpos
monoclonais s particulas de resinas e
passamos homogenatos de retina em
colunas contendo esse material (Figura
3.14). (Essa uma coluna de imunoafinidade.) O anticorpo se liga somente ao
antgeno reconhecido originalmente, e a
protena ligada resina eluda (por solues salinas) e submetida eletroforese em gel para separ-la de um possvel
Fotorreceptor
maduro
Neurnio sensorial
fotorreceptor
22C10
antgeno
24B10
antgeno
21A6
antgeno
28H9
antgeno
Figura 3.13
Anticorpo
monoclonal ao
antgeno 24B10
91
Figura 3.14
3 Adicionar homogenato
de retina contendo
antgeno 24B10 ( ) e
outros antgenos ( )
Homogenato
retinal
Protena purificada,
antgeno 24B10
Met-Glu-Glu-Thr-His-Tyr-Pro
6 Gerar uma seqncia
mensageira possvel e
sintetizar uma seqncia
complementar radioativa
Protocolo para encontrar o gene que codifica a protena identificada por um anticorpo
monoclonal. O oligonucleotdeo decodificado
pela estrutura da protena no precisa ser
um par perfeito com a verdadeira seqncia.
(de Venkatesh et al., 1985; fotografia cortesia de S. Benzer.)
92
Figura 3.15
Clula isotpica
marcada com
3
H (cartilagem)
Clula
heterotpica
marcada com
14
C (fgado)
Agregado
(cartilagem)
Cartilagem
Fgado
Msculo peitoral
Cartilagem
Fgado
Msculo peitoral
100
10
38
6
100
49
48
0
100
Contar clulas
radioativas que
aderiram ao agregado
93
Tabela 3.1 Classificao geral das principais molculas de adeso celular (CAMs)
Classe
CAM
Tipo celular
Caderinas
(clcio-dependente)
CAMs da super
famlia de imunoglobulinas
(clcio-independente)
N-CAM
Ng-CAM (a.k.a. L1, NILE)
Neurofascina
CAM-celular
LFA-1
CD4 glicoprotena (HIV receptor)
E-caderina (caderina epitelial, tambm chamada uvomorulina e L-CAM) expressa em todas as clulas embrionrias precoces de mamferos, mesmo no
estgio de uma clula. Mais tarde, essa molcula restrita a tecidos epiteliais
de embries e adultos.
P-caderina (caderina de placenta) parece ser expressa primariamente em clulas placentrias do embrio de mamfero, que fazem contato com a parede
uterina (as clulas trofoblsticas) e o prprio epitlio da parede uterina (Nose
e Takeichi, 1986). possvel que a P-caderina facilita a conexo do trofoblasto
com o tero, pois a P-caderina nas clulas uterinas visualizada em contato
com a P-caderina das clulas trofoblsticas de embries de camundongos
(Kadokawa et al., 1989).
Stios de fosforilao
Reconhecimento
do stio de adeso
Stio de
ligao
de clcio
Membrana
celular
Cateninas
Actina
Figura 3.16
Caderina
Ligao
caderina-caderina
Caderina
94
(A)
(B)
Ectoderma
Crista Neural
Clulas
migratrias
Tubo neural
(C)
E-caderina
N-caderina
Figura 3.17
Localizao de duas diferentes caderinas durante a formao do tubo neural no camundongo. Foi usada marcao imunofluorescente dupla para localizar E-caderina (A) e Ncaderina (B) na mesma seo transversal do
crebro posterior de um embrio de camundongo de 8.5 dias. Anticorpos para E-caderina foram marcados com um tipo de corante
fluorescente (o qual fluoresce em um intervalo de comprimento de onda), enquanto anticorpos para N-caderina foram marcados com
um segundo tipo de corante (que emite sua
cor em outros comprimentos de onda). Fotografias obtidas em diferentes comprimentos
de onda. mostram que o ectoderma externo
expressa E-caderina predominantemente, ao
passo que a invaginante placa neural cessa a
expresso de E-caderina, mas passa a expressar N-caderina. (C) quando se forma o tubo
neural, ele expressa N-caderina, a epiderme
expressa E-caderina e as clulas da crista
neural nenhuma das duas. (Fotografias de K.
Shimamura e H. Matsunami, cortesia de M.
Takeichi; C de Rutishauser, 1988.)
(A)
(B)
Figura 3.18
et al., 1990; Fujimori et al., 1990). Assim, as caderinas esto, provavelmente, tendo um
papel principal na organizao das clulas em tecidos. [cell2.html]
CAMs da superfamlia de imunoglobulinas
Como discutimos no Captulo 1, anticorpos foram usados inicialmente para identificar
molculas de adeso celular em Dictyostelium. Gerisch e colegas (Beug et al.,1970),
prepararam anticorpos contra Dictyostelium e os quebraram quimicamente de modo
que somente suas regies monovalentes ligantes de antgeno permanecessem os
fragmentos Fab. (Os anticorpos bivalentes tiveram que ser quebrados, porque de
outra maneira eles poderiam artificialmente agrupar clulas e o efeito no poderia ser
medido). Isso levou descoberta de uma glicoprotena de 80-kDa que mediadora da
adeso clula-clula durante a agregao no fungo pegajoso. A mesma estratgia foi
usada por Edelman e seus colaboradores (Brackenbury et al., 1977) que levou ao
isolamento de uma molcula de adeso de clulas neurais (N-CAM). [cell3.html]
N-CAM um membro de uma classe de CAMs que no necessitam ons de clcio
e que tm uma estrutura semelhante (Figura 3.19). Essa estrutura extracelular com seus
domnios globulares imobilizados por pontes dissulfeto, se assemelha molcula de
imunoglobulina, e mesmo possvel que as imunoglobulinas sejam derivadas desse
grupo de CAMs (Williams e Barclay, 1988; Lander, 1989). Assim, essas glicoprotenas
so chamadas CAMs da superfamlia de imunoglobulinas*.
As CAMs da superfamlia de imunoglobulinas podem ter um papel importante
no desenvolvimento do sistema nervoso. N-CAM necessria para uma ligao
adequada de axnios s clulas musculares alvos (Covault e Sanes, 1986; Tosney et
al.,1986). Alm disso, N-CAM parece ser crtica para o empacotamento (fasciculao)
de axnios para que se movimentem como uma unidade. Anticorpos N-CAM podem quebrar essas ligaes, permitindo que os axnios se dispersem (Fraser et al.,
1988; Landmesser et al.,1988). Uma situao similar parece ocorrer em insetos, onde
* A designao superfamlia freqentemente usada porque as diferentes classes de molculas de imunoglobulinas tambm constituem, elas mesmas, uma famlia. Esses outros
membros da superfamlia tm estruturas semelhantes s imunoglobulinas, mas no so exatamente famlia prxima.
95
96
Figura 3.19
(B)
ou
(A)
N
N
N
Domnios semelhantes
imunoglobulina
Domnios semelhantes
fibronectina
Extracelular
ou
Citoplasma
CC
IgM
ou
C
N-CAM ou fasciclina II
C
L1 ou neurogliana
Figura 3.20
(A)
(B)
(C)
97
Figura 3.21
(A)
(B)
(B)
(D)
Figura 3.22
Espao intracelular
(15-40 nm)
Canais de
comunicao
Membranas
celulares
Conexes
(A)
(D)
Protenas das junes em fenda. (A) Micrografia eletrnica de uma fileira de junes em
fenda ligando duas clulas justapostas. (B) Micrografia fluorescente de junes em fenda em
tbulo renal de embrio de camundongo de 17
dias. (C) Compartimento formado por protenas da juno de fenda entre clulas que se
comunicam umas com as outras. Esse compartimento na gstrula de camundongo pode
ser visto injetando o corante Lucifer Yellow
em um clula e observando sua transferncia a
um pequeno grupo de clulas. (D) Estrutura
da subunidade da juno em fenda. (A de
Peracchia e Dulhunty, 1976, cortesia de C.
Peracchia; B de Sainio et al., 1992, cortesia de
K. Sainio; C de Kalimi e Lo, 1988, cortesia de
C. Lo; D conforme Darnell et al., 1986.)
98
(A)
dos blastmeros precoces esto ligados por junes em fenda, dessa forma permitindo que ons e pequenas molculas solveis passem livremente entre eles. A habilidade de clulas em formar junes em fenda com algumas clulas, e no com
outras, cria compartimentos fisiolgicos dentro do embrio em desenvolvimento
(Figura 3.22 C).
A importncia de junes em fenda no desenvolvimento foi demonstrada em
embries de anfbios e mamferos (Warner et al., 1984). Quando anticorpos contra
protenas da juno em fenda foram microinjetados em uma clula especfica de uma
blstula de Xenopus de oito clulas, a prognie daquela clula que usualmente est
ligada por junes de fenda, agora no podia permitir a passagem de ons ou molculas pequenas de uma clula outra. Ainda mais, os girinos que resultaram das
blstulas tratadas mostraram defeitos especificamente relacionados ao destino desenvolvimental da clula injetada (Figura 3.23). A prognie de tal clula no morreu,
mas foi incapaz de se desenvolver de maneira normal (Warner et al., 1984). No embrio de camundongo, os oito primeiros blastmeros so conectados entre si por
junes em fenda. Apesar de frouxamente associadas entre si, essas oito clulas se
movem juntas para formar um embrio compacto. Se a compactao for inibida por
anticorpos contra protenas da juno em fenda, o desenvolvimento posterior cessa. Os blastmeros tratados continuam a dividir-se, mas a compactao no ocorre
(Lo e Gilula, 1979; Lee et al., 1987). Se RNA antisense contra as mensagens da juno
em fenda injetado em um dos blastmeros de um embrio normal de camundongo,
aquela clula no formar junes em fenda e no ser includa no embrio (Bevilacqua
et al., 1989).
Os canais da juno em fenda so feitos de protenas chamadas conexinas. Em
cada clula, seis conexinas idnticas da membrana se agrupam para formar um canal
transmembrana contendo um poro central. O complexo de juno em fenda de uma
clula se conecta ao complexo de juno em fenda de outra clula, permitindo que se
juntem os citoplasmas de ambas as clulas (Figura 3.22D). Existem aproximadamente
doze tipos de conexinas, e algumas podem ser reguladas por caderinas. Jongen e
colaboradores (1991) observaram que em clulas acopladas por E-caderina, a comunicao entre clulas, mediada por junes em fenda, depende da funo de caderinas.
Evidncias sugerem que caderinas permitem no s o contato entre as clulas como
tambm modificam as protenas tipo conexina. Os diferentes tipos de protena
conexina tm papis separados, mas parcialmente sobrepostos, no desenvolvimento normal. Por exemplo, a protena de juno em fenda conexina-43 encontrada em
quase todos os tecidos do embrio do camundongo em desenvolvimento. Entretanto, se os genes da conexina-43 forem derrubados por endereamento de genes, o
embrio ainda se desenvolver. Parece que a funo da protena conexina-43 pode
ser assumida por outras conexinas. Mas, logo aps o nascimento, esses camundongos tm respirao convulsiva, se tornam cianticos e morrem. Autpsia desses
animais mostra que o ventrculo direito a cmara que bombeia sangue aos pulmes
atravs da artria pulmonar est cheio de tecido que fecha a cmara e impede o
fluxo de sangue (Reaume et al.,1995). Mesmo que a perda da protena conexina-43
possa ser compensada em muitos tecidos, parece que ela crtica para o desenvolvimento normal do corao. [cell4.html]
A membrana celular tem, ento, vrios mecanismos pelos quais pode fazer ligaes com membranas de outras clulas. Podem ser usadas CAMs da superfamlia de
Figura 3.23
(B)
Epitlio
Lmina basal
Colgeno
Figura 3.24
99
100
COLGENOS
COLGENO IV
Os componentes estruturais majoritrios da lmina basal. Ao contrrio de outros colgenos, suas fibrilas so como um fino arame de
galinheiro e se organizam em um substrato semelhante a feltro.
PROTEOGLICANOS DA MATRIZ
PROTEOGLICANOS DA MATRIZ
Compostos de protenas e dissacardeos repetitivos (glicosaminoglicanos). Glicosaminoglicanos incluem cido hialurnico, uma enorme
molcula (108 Da) que liga grandes quantidades de gua. Proteoglicanos sulfatados compreendem uma protena linear interna qual esto
ligadas cadeias de um ou mais glicosaminoglicanos sulfatados
(condroitina, heparan, queratan e dermatan sulfato).
Proteoglicanos estimulam e modulam movimentos celulares; sua
disponibilidade sugere que podem ter outras propriedades no
conhecidas.
cido hialurnico e proteoglicanos sulfatados so freqentes na lmina basal. Sua presena pode facilitar a passagem de produtos
secretados pela lmina.
MOLCULAS DE ADESO DE SUBSTRATO
Laminina, o componente funcional majoritrio da lmina basal. Um
trmero de glicoprotena com stios de adeso para a membrana celular, colgeno IV e glicosaminoglicanos.
Lmina basal pode conter fibronectina, tenascina, nidogen e outras
glicoprotenas adesivas.
101
Monmeros de proteoglicanos
Pequenos glicosaminoglicanos
(tal como condroitina sulfato)
Protena
esqueleto
cido D-glucurnico
N-acetil-D-glucosamina
cido
hialurnico
cido hialurnico
Figura 3.25
Glicosaminoglicano
Glicoprotenas
ligantes
Agregados de
proteoglicanos
Tabela 3.3
Glicosaminoglicano
Distribuio
cido hialurnico
cido glucurnico-Nacetilglucosamina
cido glucurnico-Nacetigalactosamina sulfato
[cido glucurnico ou idurnico]
N-acetilgalactosamina sulfato
Galactose-N-acetilglucosamina
sulfato
[cido glucurnico ou idurnico]
N-acetilglucosamina sulfato
Condroitina sulfato
Dermatan sulfato
Queratan sulfato
Heparan sulfato
a
Essas so unidades repetitivas tpicas desses glicosaminoglicanos. Entretanto, algumas regies de cada GAG podem ter
sacardeos ligeiramente modificados.
102
(A)
(B)
(D)
(C)
Figura 3.26
riedade de outras molculas especializadas, tais como: fibronectina, laminina e tenascina. Essas glicoprotenas grandes provavelmente so responsveis pela organizao de colgeno, proteoglicanos e clulas em uma estrutura ordenada. Fibronectina um dmero de glicoprotena, muito grande (460-kDa), sintetizada por
fibroblastos, condrcitos, clulas endoteliais, macrfagos e certas clulas epiteliais
(como hepatcitos e amnicitos). Uma funo da fibronectina servir como adesivo
103
molecular em geral, ligando clulas a substratos, tais como: colgeno e proteoglicanos. Fibronectina tambm organiza a matriz extracelular por ter vrios pontos de
ligao distintos, que interagindo com as molculas apropriadas produz um alinhamento adequado de clulas e sua matriz extracelular (Figura 3.27).
Como ser visto em captulos posteriores, fibronectina tem tambm um papel importante na migrao celular. As rodovias pelas quais se movem certas clulas
migratrias so pavimentadas com essa protena. A migrao de clulas mesodrmicas
na gastrulao vista na superfcie de fibronectina em muitas espcies, e o movimento
dessas clulas cessa quando a fibronectina localmente removida. Em embries de
galinha, os precursores do corao, as clulas precardacas, migram na fibronectina
para se mover das laterais do embrio para a linha mediana. Se embries de galinhas
so injetados com anticorpos fibronectina, as clulas precardacas no migram para
a linha mediana e desenvolvem dois coraes separados. Anticorpos fluorescentes
fibronectina demonstraram um gradiente da protena no caminho de migrao entre o
endoderma e o mesoderma. Se essa regio for cortada e sofrer uma rotao, as clulas
do corao seguem o gradiente para novas posies se afastando da linha mediana
(Linask e Lash, 1988a,b). Assim, a fibronectina parece ter um papel principal na migrao das clulas precardacas para a linha mediana do embrio. Outros tipos de clulas,
como as clulas germinativas, precursoras de embries do sapo, tambm migram sobre clulas que secretam fibronectina em suas superfcies (Heasman et al.,1981).
Laminina um componente principal da lmina basal. composta de trs cadeias
peptdicas, e, como fibronectina, pode se ligar ao colgeno, glicosaminoglicanos e clulas. O colgeno ligado por laminina do Tipo IV (especfico para lmina basal), e a regio
ligante de clulas da laminina reconhece principalmente clulas epiteliais e neurnios. A
adeso de clulas epiteliais laminina (na qual elas se assentam e usam) muito maior do
que a afinidade de clulas mesenquimatosas pela fibronectina ( qual elas devem se ligar
e liberar se dever haver migrao). Como a fibronectina, a laminina tem um papel na
montagem da matriz extracelular, promovendo adeso celular e crescimento, mudando a
forma da clula e permitindo a migrao celular (Hakomori et al.,1984).
Nem todas grandes glicoprotenas celulares promovem adeso celular. Tenascina
(tambm chamada citotactina) se assemelha a fibronectina em mais ou menos metade
Figura 3.27
(A)
Stio de alta
afinidade
(B)
RGDS
COOH
H 2N
Domnio
ligante
de fibrina e
heparina
Domnio
ligante
de colgeno
Domnios ligantes
de clulas para
fibroblastos
Stio II
ligante de
heparina
Stio II
ligante de
fibrina
104
Figura 3.28
105
RGD
(A)
Fibronectina
Subunidade
de integrina
Extracelular
Citoplasma
Actinina
Stios de
ligao
de clcio
Subunidade
de
integrina
Vinculina
Talina
Actinina
Microfilamento de actina
Figura 3.29
106
(A)
NDP-acar + aceptor
(B)
Enzima
glicosiltransferase
Glicosil transferase
NDP + acar-aceptor
Doador de acar
ativado (NDP-acar)
(C)
Aceptor
insolvel
Ligao
Figura 3.30
Interaes da superfcie celular atravs de glicosiltransferases. (A) A reao padro de glicosiltransferase, na qual um acar transferido de um carregador nucleosdeo difosfato a
um receptor. (B) Interao entre glicosiltransferases e o grupo carboidrato (aceptor) na glicoprotena da matriz extracelular. Se o acar
ativado est ausente, ocorre a adeso (considera-se que isso ocorra durante a fertilizao).
Se o acar ativado est presente em pequenas
quantidades, a migrao permitida. (C) Marcao da glicosiltransferase da superfcie celular, incubando sees microscpicas de um embrio de galinha de 10-somitos, com UDP-[3H]
galactose. Radioatividade insolvel vista por
radioautografia mostra que esse acar radioativo foi transferido s superfcies celulares, especialmente das clulas mesodrmicas migratrias. (A e B modificado de Pierce et al., 1980;
C de Shur, 1977a, cortesia de B. Shur.)
Ligao de
NDP-acar
glicosiltransferase
Catlise cliva
acar de NDP e
o adiciona ao
aceptor
protenas da matriz extracelular tal como a laminina. Isso causa adeso. Quando o
segundo substrato aparece, essas adeses podem ser quebradas pela catlise. Em
algumas instncias (como fertilizao no camundongo, onde a galactosiltransferase
na membrana celular do espermatozide interage com componentes carboidrato da
matriz extracelular secretada pelo vulo), a adeso crtica e a catlise no ocorre. Em
clulas migratrias, tanto adeso como catlise so observadas (Toole, 1976; Shur,
1977a,b; Turley e Roth, 1979; Eckstein e Shur, 1989).
Adeso diferencial resultante de sistemas de adeso mltipla
Apesar de estarmos discutindo sistemas de adeso como unidades separadas, os
processos morfogenticos de interao clula-clula so provavelmente realizados
por combinaes de molculas de adeso celular. Por exemplo, a fixao inicial do
embrio de camundongo parede uterina parece ser mediada por vrios sistemas de
adeso. Primeiro, as clulas de fora do embrio (as clulas trofoblsticas) tm receptores para o colgeno e os proteoglicanos de heparan sulfato do endomtrio uterino, e
interferncia com essa ligao pode impedir a implantao (Farach et al.,1987; Carson
et al., 1988, 1993). Segundo, Dutt e colaboradores (1987) mostraram que as clulas
trofoblsticas podem tambm aderir s clulas uterinas atravs das glicosiltransferases da superfcie celular. Terceiro, Kadokawa e colaboradores (1989) mostraram que Pe E-caderinas esto presentes tanto no tecido uterino como no trofoblstico no local
da implantao. Assim, clulas podem ter muitos sistemas adesivos que lhes permitem
ligar e/ou migrar em substratos especficos.
As clulas tambm usam sistemas mltiplos para remodelar tecidos por digesto. Por
exemplo, quando embries de mamferos se embebem no tero, eles digerem seu caminho atravs do epitlio do tero e atravs de sua membrana basal de laminina, fibronectina
e colgeno Tipo IV (Behrendtsen et al., 1992). Crescimento do osso, regresso da cauda do
girino e formao de rgos ramificados (tais como: glndulas salivares, rins e pulmes)
tambm requerem quebra da membrana basal. Essa degradao controlada de molculas
da matriz extracelular completada por um conjunto de enzimas coletivamente chamadas
de Metaloproteinases degradativas de matrizes (Matrisian, 1992; Sato et al., 1994). Algumas dessas enzimas esto ligadas membrana celular, enquanto outras so secretadas
diretamente pelas clulas para dentro da matriz que ser dissolvida. Essas metaloproteinases
incluem: (1) colagenases que digerem colgenos dos Tipo I, II e III; (2) gelatinases que
digerem elastina e colgenos IV e V; e (3) estromelisinas que digerem proteoglicanos,
fibronectina e laminina. A ativao dos genes das metaloproteinases realizada
coordenativamente, e vrias dessas enzimas interagem para amplificar a intensidade das
enzimas digestivas (Figura 3.31). Logo aps a ativao das metaloproteinases, as clulas
ativam os genes para os inibidores dessas protenas. A produo e degradao controlada
da matriz extracelular parte essencial do desenvolvimento normal.
Colagenase
Procolagenase
Plasminognio
Ativao
transcricional
Uroquinase
Prostromelisina
Plasmina
Ativa
Estromelisina
Figura 3.31
Colagenase
muito ativa
107
108
Figura 3.32
A via JAK-STAT nesse caso, a via de ativao do gene de casena por prolactina. O gene
de casena ativado durante a ltima fase do
desenvolvimento da glndula mamria (lactognica) e seu sinal a secreo de prolactina,
um peptdeo de 9 aminocidos da glndula
pituitria anterior. Prolactina causa a dimerizao dos receptores de prolactina nas clulas
epiteliais do ducto mamrio. Uma protena
JAK especfica (Jak2) est atrelada nesses
receptores. Quando os receptores so dimerizados, as protenas JAK fosforilam umas as
outras e os receptores vizinhos, ativando a
quinase dormente desses receptores. Esses
adicionam um grupo fosfato a um resduo de
tirosina (Y) de uma protena STAT especfica
(nesse caso Stat5). Isso permite que a protena se dimerize e seja translocada para o ncleo
onde se liga a regies especficas de DNA. Em
combinaes com outros fatores de transcrio (que presumivelmente esperavam sua chegada), a protena STAT ativa a transcrio do
gene de casena. GR o glucocorticide receptor, OCT1 um fator de transcrio geral, e TBP
o conjunto de protenas responsvel pela ligao de RNA polimerase. (Para detalhes, veja
Groner e Gouilleux, 1995.)
Receptores de prolactina
Prolactina
Receptores
dimerizados
ativos
Extracelular
Citoplasma
Envoltrio nuclear
Ncleo
Inicio da
transcrio
Promotor do
gene de casena
as
-R
A via RTK
-Ras
RTK-R
A via de transduo de sinais RTK-Ras foi uma das primeiras vias a unir as vrias reas
da biologia do desenvolvimento. Pesquisadores estudando olhos de Drosophila,
vulvas de nematdeos e cnceres humanos chegaram concluso que estudavam o
mesmo gene. A via RTK-Ras comea na superfcie celular, onde o receptor tirosina
quinase liga seu ligante especfico. Ligantes que se ligam a RTKs incluem fatores de
crescimento fibroblsticos, fatores de crescimento epidrmico e fatores de crescimento derivados de plaquetas. O receptor tirosina quinase abrange a membrana e, quando
conectado com seu ligante, sofre uma mudana conformacional que permite sua
dimerizao. Esses dmeros tm uma atividade quinsica latente, ativada por mudana
conformacional fazendo com que os receptores se fosforilem um ao outro em resduos
particulares de tirosina. Assim, a introduo de um ligante no receptor causa uma
autofosforilao no domnio citoplasmtico do receptor.
A tirosina fosforilada no receptor reconhecida por uma protena adaptiva (Figura
3.33)especificamente, as tirosinas fosforiladas so reconhecidas por uma poro da
protena adaptativa chamada domnio SH2. As protenas adptativas servem como uma
ponte que liga a quinase fosforilada do receptor a um poderoso sistema intracelular de
sinalizao. Enquanto ligada ao receptor fosforilado pelo seu domnio SH2, a protena
adaptativa usa seu domnio SH3 para regular o ativador de uma protena Ras G. Normalmente, a protena de tipo selvagem Ras est na sua forma inativa e ligante de GDP.
Quando ativada pelo receptor ligante-acoplado, ela troca um fosfato de outro GTP
para transformar o GDP ligado em GTP. Essa catlise ajudada pelo fator de troca
guanina nucleotdeo. A Ras ligada a GTP a forma ativa da protena que transmite o
sinal. Aps a transmisso, o GTP hidrolizado a GDP. Essa catlise muito estimulada
Ligante
109
Figura 3.33
Receptor
Extracelular
Citoplasma
Ativao de
eventos
dependentes de
clcio e PKC
Fator de
transcrio ativo
Fator de
transcrio inativo
Ncleo
Modulao da
transcrio
A via RTK-Ras amplamente usada. O receptor tirosina quinase dimerizado pelo ligante.
Isso causa a autofosforilao do receptor. A
protena SH3 reconhece as fosfotirosinas e
ativa as protenas intermedirias (GRB2 e
SOS), as quais ativam a protena Ras G por
permitir a fosforilao da poro GDP da Ras.
Ao mesmo tempo, as protenas GAP estimulam a hidrlise dessa ligao fosfato. A Ras
ativa capaz de ativar a protena quinase C
(PKC), que ao seu turno fosforila uma srie de
quinases. Por fim, a MAP quinase altera a expresso gnica, fosforilando certos fatores de
transcrio (que podem penetrar no ncleo
para mudar os tipos de genes transcritos) e
certos fatores de traduo (que alteram o nvel
de sntese de protenas). Em muitos casos, essa
via reforada pela liberao de ons clcio.
110
* Nomes podem ser perigosamente ilusivos. Muitos compostos tm mais de uma funo na
clula, e o que fazem depende do contexto da clula. Certos fatores de crescimento podem inibir
o crescimento, e alguns fatores de transcrio podem ser utilizados para inibir a transcrio.
Realmente, alguns fatores de transcrio podem ser usados para regular a traduo. Aqui vemos que
molculas de adeso celular podem ser usadas para transduo de sinais. Protenas celulares no
respeitam nossas fronteiras disciplinares.
Informaes adicionais
&
Especulaes
(A)
FGFR normal:
FGF se liga causando dimerizao
do receptor de FGF
(B)
FGF
FGFR
normal
Receptor de FGF
Domnio
da tirosina
quinase
Sinal
Receptores
sem domnios
intracelulares
so inativos
Sem sinal
FGFR
mutante
Excesso do receptor
mutante pode
seqestrar o receptor
normal do fator de
crescimento. Esse
heterodmero inativo.
Sem sinal
Figura 3.34
111
Figura 3.35
(A)
Extracelular
Fosfolipase C
Citoplasma
(B)
RECEPTORES LIGADOS PROTENA G
Ligante
Extracelular
Citoplasma
Protena G
Via IP 3 PATHWAY
MAP quinase
PKC
Receptor
IP 3
Retculo
endoplasmtico
Atividade
celular e
mitognese
112
A via pode ter dois pontos iniciais (Figura 3.35; Berridge, 1993; Shilling et al.,
1994). Um ponto de iniciao o receptor tirosina quinase, mencionado anteriormente. Alm de ativar a protena Ras G, as tirosina quinases ativadas podem
interagir com um tipo de enzima, fosfolipase C (PLC1-y1, que tambm tem um
domnio SH2 que reconhece as tirosinas autofosforiladas). Fosfolipase C pode
catalisar a hidrlise de fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PIP2) em dois segundos
mensageiros: inositol 1,4,5-trifosfato (IP3) e diacilglicerol (DAG). IP3 capaz de
abrir canais de clcio do retculo endoplasmtico, liberando uma grande quantidade de ons clcio no citoplasma. DAG ativa a protena quinase C, que por sua vez
ativa a bomba de protena que troca ons sdio por ons hidrognio (Swann e
Whitaker, 1986; Nishizuka, 1986). O resultado a elevao de ons intracelulares
de clcio e um aumento no pH intracelular.
Um segundo ponto de iniciao outra classe de receptores, algumas vezes chamado de receptores serpentina, porque tm sete domnios transmembrana e serpenteiam atravs da membrana. Esses receptores esto relacionados com outro tipo de
protena G, a protena G heteromrica. Quando o ligante liga-se ao seu receptor, esse
ativa a protena G. Essa ativao dissocia a protena G em suas subunidades, as quais
ativam outro conjunto de fosfolipase C, ou seja, PLC-1 e PLC-2. Esses dois tipos de
fosfolipase C podem clivar PIP2 em inositol 1,4,5-trifosfato e diacilglicerol. Como veremos em captulos posteriores, as mudanas nos ons hidrognio e clcio, efetuadas
por essa via, alteram no somente a transcrio de genes, mas tambm a traduo de
mRNA e a replicao de DNA.
Cruzamentos entre vias
Representamos as vias principais como se fossem cadeias lineares, onde a informao flui em condutes nicos. Na verdade, essas vias so apenas as principais
estradas pelas quais se escoa a informao, pois entre elas existem ruas e avenidas
que fazem as conexes entre elas. (Essa pode ser a razo da existncia de tantos
passos entre a superfcie da clula e o ncleo. Cada passo um ponto de regulao
em potencial e um potencial ponto de interseo). Essa comunicao cruzada pode
ser vista na Figura 3.35, onde duas vias reforam uma a outra. Deve-se lembrar
tambm que a clula tem numerosos receptores e est constantemente recebendo
muitos sinais simultaneamente. Em alguns casos, a transcrio de genes requer dois
sinais. Isso visto durante o desenvolvimento de linfcitos, onde dois sinais so
necessrios, cada um produzindo um dos dois peptdeos de um fator de transcrio
envolvido na produo de interleucina 2 (IL-2, tambm conhecida como fator de
crescimento da clula T). Um fator, c-Fos, produzido pela ligao do receptor da
clula T ao antgeno (Figura 3.36). Isso ativa a cascata Ras, criando um fator de
transcrio, Elk-1, ativador do gene c-fos que sintetiza c-Fos. O segundo sinal vem
da glicoprotena B7 na superfcie da clula que apresenta o antgeno. Esse sinal
ativa uma segunda cascata de quinases, finalmente produzindo c-Jun. Os dois
peptdeos, c-Fos e c-Jun, podem produzir a protena AP-1, um fator de transcrio
que se liga ao intensificador de IL-2 e ativa sua expresso (Liet al., 1996).
A matriz extracelular e a superfcie da clula como
fontes de sinais crticos para o desenvolvimento
Bissell e colegas (1982; Martins-Green e Bissell, 1995) propuseram que a matriz
extracelular capaz de induzir expresso gnica especfica em tecidos em desenvolvimento, especialmente aqueles do fgado e da glndula mamria, onde a induo de
fatores de transcrio especficos dependem da ligao clula-substrato (Liu et al.,
1991; Streuli et al., 1991; Notenboom et al.1996). Muitas vezes, a presena de integrina ligada previne a ativao de genes que especificam a morte celular (Brooks et al.,
1994; Montgomery et al., 1994). Portanto, a matriz extracelular uma fonte importante
de sinais que podem ser transduzidos para o ncleo para dar expresso gnica especfica. Estudos recentes mostraram que a ligao de integrinas matriz extracelular
SINAL 1
SINAL 2
Citoplasma
MHC II
Antgeno
Receptor
da clula T
Extracelular
B7
CD28
Citoplasma
RAF
T-LINFCITO
ELK-1 ativa
transcrio de c-fos
Intensificador de
interleucina 2
Ncleo
Transcrio de IL-2
Figura 3.36
Dois sinais so necessrios para efetuar a diferenciao de linfcitos T. O primeiro sinal vem de
receptores que ligam o antgeno apresentado na superfcie das clulas B ou macrfagos. O
segundo sinal vem da ligao da protena CD28 protena B7 que est na superfcie da clula
apresentante do antgeno. O primeiro sinal dirige a sntese de uma subunidade do fator de
transcrio AP-1. A outra subunidade sintetizada sob direo do segundo sinal. As duas
subunidades, c-fos e c-jun, formam o fator de transcrio AP-1 que pode ativar intensificadores
especficos para a clula T como os que regulam a produo de interleucina 2.
pode estimular a via RTK-Ras, como tambm pode estimular a interao da clula
com o L1, N-CAM e caderinas de uma clula vizinha (Bixby et al., 1994; Williams et
al., 1994a; Clark e Brugge, 1995). Caderinas (mesmo as solveis) podem dimerizar
receptores FGF exatamente como os ligantes normais de FGF, causando a liberao
de ons clcio, ativao transcricional e fenmenos de desenvolvimento caractersticos das respostas do FGF celular (Figura 3.37; Williams et al., 1994b; Doherty et al.,
1995). Comunicao cruzada quase certa acontecer quando as molculas de adeso celular so tambm transdutores de sinais.
Interaes recprocas na superfcie celular
Quando duas clulas interagem durante o desenvolvimento, ambas so modificadas
na maioria das vezes. Essa induo recproca mediada por interaes na membrana
113
114
Citoplasma
Molcula de
adeso celular
Receptor FGF
Extracelular
Citoplasma
Sinal
Figura 3.37
Possveis interaes de molculas de adeso celular com receptores de FGF. Os receptores FGF
podem ser seqestrados pelas molculas de adeso e colocados juntos. Isso pode ser feito
pela interao de molculas de adeso opostas, ou ligaes cruzadas de receptores de FGF das
membranas celulares opostas podem ativar seus domnios quinase.
Receptor Frizzled
Prot. Dishevelled
Protena
DPP
wingless
patched
decapentaplegic
Quinase Zw3
Prot. Armadillo (-catenina)
engrailed
Protena
Smoothened
Ci ativo
115
Figura 3.38
Ci inativo
hedgehog
Protena G
Protena
engrailed
Receptor
Patched
Protena
Hedgehog
LITERATURA CITADA
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4 Fertilizao: Iniciando um novo organismo
5 Clivagem: Criando multicelularidade
121
167
209
253
307
341
Fertilizao:
Iniciando um novo organismo
121
122
Figura 4.1
123
ser considerado como uma vescula secretria modificada. Essas enzimas armazenadas so usadas para lisar os invlucros externos do vulo. Em muitas espcies, tais
como os ourios-do-mar, existe uma regio de molculas globulares de actina entre o
ncleo e a vescula acrossmica. Essas protenas so usadas para estender um processo de forma semelhante a um dedo durante os estgios precoces da fertilizao. Em
ourios-do-mar e vrias outras espcies, o reconhecimento mtuo entre espermatozide e vulo envolve molculas desse processo acrossmico. Juntos, o acrossomo e o
ncleo constituem a cabea do espermatozide.
Os meios pelos quais o espermatozide impulsionado variam de acordo com o
modo pelo qual a espcie se adaptou s condies ambientais. Em algumas espcies
(como o nematelminto parasitrio Ascaris), o espermatozide viaja por movimentao
amebide de extenses lamelipodiais da membrana celular. Na maioria das espcies,
porm, um espermatozide capaz de viajar por longas distncias agitando o seu
flagelo. Os flagelos so estruturas complexas. A sua principal poro motora chamada axonema. Um axonema formado pelos microtbulos que emanam do centrolo na
base do ncleo do espermatozide (Figuras 4.2 e 4.3). O centro do axonema consiste
de dois tbulos centrais rodeados por uma fileira de nove duplas de microtbulos.
Realmente, s um microtbulo est completo, contendo 13 protofilamentos; o outro
tem forma de C e tem apenas 11 protofilamentos (Figura 4.3B). Um modelo tridimensional de um microtbulo completo est apresentado na Figura 4.3C. Aqui vemos os 13
protofilamentos interligados; os quais consistem exclusivamente da protena dimrica,
a tubulina.
Embora a tubulina seja a base da estrutura do flagelo, outras protenas tambm
so crticas para a funo do flagelo. A fora para a propulso do espermatozide
proporcionada pela dinena, uma protena apensa aos microtbulos (Figura 4.3B). A
dinena hidrolisa molculas de ATP e pode converter a energia qumica liberada em
Golgi
remanescente
Centrolo
Flagelo
Centrolo
Flagelo
Vescula
acrossmica
e grnulo
Microtbulos
Poro
final
Ncleo
Mitocndrias
Aparelho
de Golgi
Cauda
Mitocndrias
Figura 4.2
Axonema
Mitocndrias
Centrolo
Ncleo
Membrana plasmtica
Vescula acrossmica
Poro mediana
Pescoo
Cabea do
espermatozide
A modificao de uma clula germinativa para formar um espermatozide de mamfero. O centrolo produz um longo flagelo na parte que vir a ser a extremidade
posterior do espermatozide, e o aparelho de Golgi forma a vescula acrossmica
na futura extremidade anterior. As mitocndrias (pontos abertos) agrupam-se ao
redor do flagelo perto da base do ncleo haplide e so incorporadas na parte
mediana do espermatozide. O citoplasma remanescente descartado e o ncleo
se condensa. O tamanho do espermatozide maduro foi aumentado em relao s
outras figuras. (Segundo Clermont e Leblond, 1955.)
124
Figura 4.3
O aparelho de movimentao do espermatozide. (A) Seo transversal do flagelo de um
espermatozide mamfero, mostrando o
axonema central e as fibras externas. (B) Diagrama interpretativo do axonema, mostrando o
arranjo 9 + 2 dos microtbulos e outros componentes flagelares. O diagrama esquemtico
mostra a associao de protofilamentos de
tubulina em um microtbulo duplo. A primeira
(A) poro do par duplo um microtbulo
normal compreendendo 13 protofilamentos. A
segunda (B) poro da dupla contm somente 11 (ocasionalmente 10) protofilamentos. (C)
Um modelo tridimensional do microtbulo A.
As subunidades -tubulina e -tubulina so
semelhantes, porm, no idnticas, e o
microtbulo pode mudar de tamanho polimerizando e despolimerizando subunidades de tubulina em qualquer um dos lados. (A cortesia de
D. M. Phillips; B segundo De Robertis et al.,
1975, e Tilney et al., 1973; C de Amos e Klug,
1974, cortesia dos autores.)
(A)
(C)
(B)
Membrana plasmtica
Trave radial
Cabea da trave
Nexina
Subfibra A
Subfibra B
Microtbulo central
MICROTBULO DUPLO
* Os contedos do vulo variam muito de espcie para espcie. A sntese e a colocao desses
materiais ser tratada no Captulo 22, quando discutirmos a diferenciao das clulas germinativas.
125
126
Figura 4.4
Envoltrio vitelnico
Camada gelatinosa
Espermatozide
Membrana
plasmtica
Grnulo de gema
Grnulo cortical
Mitocndria
Ncleo
Corpos
polares
Vescula
germinal
Ocito
primrio
jovem
Os vermes aneldeos
Dinophilus e
Sacocirrrus
O verme poliqueta
Histriobdella
O platelminto
Otomesostoma
O onicforo
Peripatopsis
Ocito primrio
totalmente
crescido
O nematelminto
Ascaris
O mesozorio Dicyema
A esponja Grantia
O verme poliqueta
Myzostoma
O verme concha
Nereis
O molusco Spisula
O verme equiuride Urechis
Ces e raposas
127
Proncleo
feminino
Primeira metfase
Segunda metfase
Meiose completa
O verme nemerteano
Cerebratulus
O verme poliqueta
Chaetopterus
O molusco
Dentalium
O verme central
Pectinaria
Muitos insetos
Estrela-do-mar
O anfioxo
Branchiostoma
Anfbios
Mamferos (maioria)
Peixes
Cnidrios
(e.g., anmonas)
Ourios-do-mar
Figura 4.5
Microvilosidades
(A)
Envoltrio vitelnico
(B)
Figura 4.6
Grnulo cortical
128
Cumulus
vulo
Zona
pelcida
(A)
(B)
Figura 4.7
vulos de hamster imediatamente antes da fecundao. (A) O ovo do hamster, ou vulo, est
encaixado na zona pelcida. Essa, por sua vez, est envolvida por clulas do cumulus. Uma clula
do corpo polar, produzida durante a meiose, tambm est dentro da zona pelcida. (B) Em menor
aumento, um ocito de camundongo mostrado em relao ao cumulus. Partculas de carbono
coloidal (tinta Nanquim) so excludas pela matriz de hialuronidase. (Cortesia de R. Yanagimachi.)
(A)
(B)
(C)
129
(D)
Figura 4.8
130
Membrana
acrossmica
Enzimas
acrossmicas
Membrana do
espermatozide
Actina
globular
Bindina
Microfilamentos
de actina
Ncleos
Figura 4.9
131
Membrana celular do
espermatozide
Membrana
acrossmica
Fuso entre a
membrana celular
do espermatozide
e a membrana
acrossmica adjacente
Ncleo
Centrolo
Figura 4.10
Informaes adicionais
&
Especulaes
MUITO DIFCIL estudar as interaes que podem estar ocorrendo entre gametas de mamferos
antes do contato espermatozide-vulo.
Um motivo bvio para isso que a fertilizao ocorre dentro dos ovidutos femininos. Embora seja relativamente fcil
mimetizar as condies rodeando a fertilizao do ourio-do-mar (usando gua do
mar natural ou artificial), ainda no conhecemos os componentes dos vrios ambientes naturais encontrados pelo espermatozide dos mamferos em sua viajem ao
encontro do vulo. Um segundo motivo
para essa dificuldade que a populao
de espermatozide ejaculada para o interior da fmea provavelmente muito heterognea, contendo espermatozides em
diferentes estgios de amadurecimento.
Dos 280 x 106 espermatozides humanos
normalmente ejaculados para o interior da
vagina, somente 200 atingem a regio
ampolar do oviduto, onde ocorre a fecundao (Ralt et al., 1991). Como menos de 1
em 10.000 espermatozides chegam perto
do vulo, difcil analisar aquelas mol-
132
Hiperativao e Quimiotaxia
As diferentes regies do trato reprodutivo feminino podem secretar fatores diferentes, regionalmente especficos. Esses
fatores podem influenciar a motilidade
espermtica assim como a capacitao. Por
exemplo, quando os espermatozides de
certos mamferos (especialmente hamsters, cobaias e algumas variedades de camundongos) passam do tero para os
ovidutos, ficam hiperativados, passando a nadar com maior velocidade e gerando maior fora. Suarez e colaboradores
(1991) mostraram que enquanto essas reaes no so conducentes a viagens em
fluidos de baixa viscosidade, parecem ser
muito adequadas para o movimento linear do espermatozide no fluido viscoso
que poder encontrar no oviduto.
Alm de aumentar a atividade do espermatozide, fatores solveis no oviduto
tambm podem prover o componente direcional do movimento do espermatozide.
Especulou-se que o vulo (ou, mais provavelmente, o folculo ovariano no qual o
vulo se desenvolve) pode estar secretando substncias quimiotticas que poderiam atrair o espermatozide em direo ao
vulo durante os ltimos estgios da migrao (veja Hunter, 1989). Ralt e colaboradores (1991) testaram essa hiptese usando fluido de folculos humanos cujos vulos estavam sendo usados para fertilizao in vitro. Realizando um experimento
semelhante aquele descrito anteriormente
com ourios-do-mar, os autores microinjetaram uma gota do fluido folicular em uma
gota maior da suspenso de espermatozides. Feito isso, observaram que parte
do espermatozide mudou sua direo de
movimentao, passando a migrar ao encontro da fonte de fluido folicular. A
microinjeo de outras solues no teve
esse efeito. Esses estudos no eliminam a
133
Figura 4.11
BINDINA DO ESPERMATOZIDE
S. purpuratus
S. fransciscanus
S. purpuratus
Partculas
de bindina
Aglutinao
Sem aglutinao
vulos
S. fransciscanus
OVOS DESGELEIFICADOS
(A)
Sem aglutinao
Aglutinao
(B)
Figura 4.12
Aglutinao espcie-especfica por bindina de vulos desgeleificados . (A) aglutinao promovida pela adio de 212 g de
bindina em um recipiente plstico contendo 0.25 ml de suspenso a 2% (volume/
volume) de vulos. Aps 2-5 min de agitao branda, os recipientes foram fotografados. Cada bindina somente se ligou a seus
prprios vulos. (B) Fotomicrografia de
fluorescncia de vulos de S. purpuratus
ligados entre si por partculas de bindina
de S. purpuratus marcadas por fluorescncia. As partculas de bindina estavam invariavelmente nos lugares onde dois vulos
se encontravam. (A baseado em fotografias
de Glabe e Vacquier, 1977; B de Glabe e
Lennarz, 1979, cortesia dos autores.)
134
(A)
DAB + H2O2
Imunoglobulina
porcina anti-coelho
conjugada com a
enzima peroxidase
(B)
Precipitado
denso
Anti-bindina
de coelho
(C)
Membrana
vitelnica do vulo
Precipitado DAB
Acrossomo
Ncleo
Processo acrossmico
Bindina
Espermatozide
Figura 4.13
(A)
Figur
a 4.14
Figura
Receptores de bindina no vulo. (A) Micrografia eletrnica de varredura do espermatozide do ourio-do-mar ligado ao
envoltrio vitelnico de um vulo. (B) ligao do espermatozide de S. purpuratus a
partculas de polistireno que foram cobertas com a protena purificada do receptor de
bindina. (A cortesia de C. Glabe, L. Perez e
W. J. Lennarz; B de Foltz et al., 1993.)
(B)
135
(A)
ZP3 sem
carboidratos
(B)
Figura 4.15
136
O mecanismo molecular pelo qual a zona pelcida e o espermatozide do mamfero se reconhecem mutuamente est sendo estudado. A hiptese corrente sobre
a ligao dos gametas de mamferos postula um conjunto de protenas do espermatozide capazes de reconhecer regies especficas de carboidratos na zona ZP3
do vulo (Florman et al., 1984; Florman e Wassarman, 1985; Wassarman, 1987;
Saling, 1989). A remoo desses grupos de carboidratos ligados por treonina ou
serina suprime a habilidade de ligar o espermatozide.
PROTENAS DE ADESO ESPERMATOZIDE-ZONA. O espermatozide do camun-
Espermatozide
ZP3
Protenas candidatas
a ligao zona no
acrossomo
N-acetil
glicosamina
GALACTOSILTRANSFERASE
Ligao
cruzada ativa
protenas G
Galactose
Membrana
celular do
espermatozide
SP 56
(protena
perifrica da
membrana)
Ativao de sntese
de IP3 na
membrana
acrossmica
P95
Ativao
de
tirosinoquinase
Regulao de
canais inicos
ou sntese
de IP3
Liberao de Ca++
Reao acrossmica
Figura 4.16
137
Figura 4.17
ZP3 uma coluna de afinidade, passando em seguida, por essa coluna, as protenas
isoladas da membrana de espermatozides de camundongo (Bleil e Wassarman,
1990). A maioria das protenas passou pela coluna; porm um peptdio de 56kDa, ligou-se s partculas recobertas com ZP3, mas no se ligou a partculas
recobertas com ZP2 em experimento semelhante. Essa protena foi encontrada
exposta na membrana espermtica; ligava-se a resduos de galactose, sugerindo fortemente ser um receptor de espermatozide ligante entidade terminal de
galactose na glicoprotena ZP3. A protena sp56 liga-se zona pelcida de
ovos no-fertilizados (porm no dos fertilizados), bloqueando a ligao espermatozide-vulo (Figura 4.17; Bookbinder et al., 1995).
GALCTOSILTRANSFERASE. A Segunda protena do espermatozide que parece
138
ZP1
ZP2
ZP3
Resduos de
carboidratos
Figura 4.18
139
contraceptivo perdurou por vrios meses, aps os quais a fertilidade foi restabelecida.
Os animais foram temporariamente esterilizados por esses anticorpos. O anlogo
humano da protena PH-20 no ainda conhecido, porm, certos antgenos do espermatozide apresentam um padro semelhante de localizao no espermatozide.
As protenas da zona pelcida humana e suas funes ainda no foram estabelecidas to claramente como no camundongo. Ainda assim, esses experimentos mostram que o princpio da contracepo imunolgica est bem fundamentado.
(A)
(B)
Figura 4.19
(D)
140
(A)
(B)
141
(C)
Zona
Ncleo
(E)
Membrana
acrossmica
interna
Figura 4.20
no somente por sua habilidade de se fundir com a membrana espermtica, mas tambm por sua capacidade de resistir a uma ulterior fuso imediatamente aps a entrada
de um espermatozide (Just, 1919).
O bloqueio rpido polispermia, conseguido pela mudana do potencial eltrico
da membrana do vulo. Essa prov uma barreira seletiva entre o citoplasma e o ambiente exterior; a concentrao inica do vulo difere muito daquela do ambiente, uma
diferena especialmente pronunciada para os ons de sdio e potssio. A gua do mar
tem uma alta concentrao do on sdio, ao passo que o citoplasma do vulo tem
relativamente pouco sdio. O oposto acontece com os ons potssio. Essa condio
mantida pela membrana celular, que constantemente inibe a entrada de sdio no
Segmento
equatorial do
acrossomo
142
(A)
Ocito
Centrossomo do
espermatozide
Proncleos
do espermatozide
Proncleos
do ocito
Figura 4.21
Desenvolvimento aberrante de um vulo de ourio-do-mar fecundado por dois espermatozides. (A) Fuso de trs ncleos haplides, cada um contendo 18 cromossomos, e
diviso dos dois centrolos espermticos para formar quatro plos mitticos. (B, C) Os
54 cromossomos se distribuem aleatoriamente nos quatro fusos. (D) Na anfase da
primeira diviso, os cromossomos duplicados so arrastados para os quatro plos. (E)
Quatro clulas contendo nmeros e tipos diferentes de cromossomos so formadas,
causando a morte prematura do embrio (F). (Segundo Boveri, 1907.)
Fuso pronuclear
(B)
1a clivagem
(C)
(D)
(E)
(F)
Clulas em desintegrao;
morte do embrio
ocito e impede o escoamento de ons de potssio para o ambiente. Quando inserimos um eletrodo no vulo e colocamos um outro fora do ocito, podemos medir
a constante diferena potencial da membrana plasmtica do vulo. Esse potencial
de repouso da membrana geralmente cerca de 70 mV, e usualmente expresso
como 70 mV porque o interior da clula est carregado negativamente em relao
ao exterior. [fert7.html]
Dentro de 1-3 segundos aps a ligao do primeiro espermatozide, o potencial
da membrana muda para um nvel positivo (Longo et al., 1986). Um pequeno influxo
de ons de sdio no vulo permitido, trazendo a diferena de potencial para +20 mV
(Figura 4.22 A). Embora o espermatozide possa se fundir com membranas tendo um
potencial de 70 mV, no pode se fundir com membranas com um potencial de repouso positivo. No conhecido como a ligao ou a entrada do espermatozide sinaliza a abertura dos canais de sdio; porm, Gould e Stephano (1987, 1991) forneceram o que poder ser uma pista importante para a compreenso desse processo. Os
autores isolaram do espermatozide de Urechis (um verme equiuride marinho) uma
protena cromossmica capaz de abrir canais de sdio de vulos de Urechis. Quando tais vulos so expostos a essa protena, a mudana da velocidade do influxo de
sdio e do potencial de membrana resultante so muito parecidos com aqueles
produzidos pelo espermatozide vivo. A abertura dos canais de sdio no vulo,
parece ser causada pela ligao do espermatozide ao vulo.
Jaffe e seus colaboradores mostraram que a polispermia podia ser induzida
quando vulos foram supridos artificialmente com uma corrente eltrica que mantinha negativo o seu potencial de membrana. Reciprocamente, a fertilizao podia
ser inteiramente prevenida conservando tal potencial positivo (Jaffe, 1976). O
bloqueio rpido da polispermia podia tambm ser evitado baixando-se a concentrao do sdio da gua (Figura 4.22B-D). Se os ons de sdio no forem suficientes para ocasionar um deslocamento positivo do potencial de membrana, ocorre a
polispermia (Gould-Somero et al., 1979; Jaffe, 1980). No conhecido como diferenas no potencial de membrana atuam sobre o espermatozide bloqueando a
segunda fecundao. Muito provavelmente, o espermatozide conduz um componente (possivelmente uma protena fusognica carregada positivamente), sendo a
insero desse componente na membrana do vulo, provavelmente, regulada pela
carga eltrica transmembrana (Iwao e Jaffe, 1989). Um bloqueio eltrico polispermia
tambm ocorre em rs (Dross e Elinson, 1980), mas provavelmente no na maioria
dos mamferos (Jaffe e Cross, 1983).
O BLOQUEIO LENTO DA POLISPERMIA. vulos do ourio-do-mar (e muitos ou-
143
Figura 4.22
Adio de
espermatozide
(A)
Segundos
[Na+] (mM)
(B)
(C)
(D)
Porcentagem de
ovos polisprmicos
144
Figura 4.23
Formao do envoltrio de fertilizao e remoo do excesso de espermatozide. Espermatozide foi adicionado a vulos de ourio-do-mar,
e a suspenso foi fixada em formaldedo para
evitar futuras reaes. (A) Dez segundos aps
a adio de espermatozide, esses foram vistos
rodeando o vulo. (B,C) 25 e 35 segundos aps
a inseminao, um envoltrio de fertilizao se
forma em volta do vulo, iniciado no ponto de
entrada do espermatozide. (D) O envoltrio
de fertilizao est completo, e o excesso de
espermatozide removido. (de Vacquier e
Payne, 1973, cortesia de V. D. Vacquier.)
(A)
(B)
(C)
(D)
zona pelcida de maneira que esses no mais podem ligar-se a espermatozide (Bleil
e Wassarman, 1980). Essa modificao chamada reao da zona. Durante essa
reao, tanto ZP3 como ZP2 so modificadas. Florman e Wassarman (1985), propuseram que os grnulos corticais do vulo do camundongo contm uma enzima que
corta os resduos terminais de acares de ZP3, com isso liberando espermatozide
ligado zona e evitando a fixao de mais espermatozide. Esses grnulos corticais
contm N-acetilglicosaminidases capazes de clivar N-acetilglicosamina de cadeias
de carboidrato de ZP3. Miller e colaboradores (1992, 1993) demonstraram que aps
a fertilizao, o resduo de N-acetilglicosamina removido, ZP3 no serve como
substrato para a ligao de galactosiltransferase. ZP2 cortada pelas proteases
granulares perdendo tambm sua habilidade de ligar espermatozide (Moller e Wassarman, 1989). Assim, o espermatozide no pode mais iniciar ou manter sua ligao
zona pelcida e rapidamente descartado.
CLCIO COMO O INICIADOR DA REAO GRANULAR CORTICAL . O meca-
Figura 4.24
Membrana plasmtica
(i)
do vulo
Microvilosidade
Envoltrio
vitelnico
Grnulo
cortical
(ii)
Espermatozide
supranumerrio no
envoltrio vitelnico
Enzimas proteolticas e
mucopolissacardeos so liberados
(B)
(C)
(iii)
Microfilamentos
(iv)
Envoltrio de
fertilizao
Hialina
(D)
Espermatozide liberado
Camada hialina
(A)
145
Membrana
celular
(E)
espermatozide um feixe de luz atravessa a clula (Steinhardt et al., 1977; Gilkey et al.,
1978; Hafner et al., 1988). Como documentado pelas fotografias, os ons de clcio no
se difundem simplesmente atravs do vulo a partir do ponto da entrada do espermatozide. Ao contrrio, a liberao de clcio inicia-se de um lado da clula e termina do
outro. O mecanismo dessa onda ser discutido logo adiante (veja Informaes adicionais & Especulaes, pgina 147). A total liberao de ons de clcio completada, a
grosso modo, em 30 segundos no ovo do ourio-do-mar; os ons livres de clcio so
re-seqestrados pouco aps sua liberao. Quando dois espermatozides entram no
citoplasma do vulo, a liberao de clcio pode ser vista comeando em dois pontos
separados da superfcie celular (Hafner et al., 1988).
Vrios experimentos demonstraram que ons de clcio so responsveis diretos
pela propagao da reao cortical e que so armazenados dentro do prprio vulo.
A droga A23187 um ionforo que transporta ons de clcio atravs de membranas,
permitindo a esses ctions atravessar barreiras antes impermeveis. A colocao de
146
Figura 4.25
(A)
(B)
Informaes adicionais
&
147
Especulaes
148
celular foram sintetizados e foram detectados na membrana celular do vulo. Os vulos puderam ser fertilizados
por serotonina e acetilcolina e foi observado a reao cortical. Experimentos
semelhantes mostraram que quando
neurotransmissores ativam o caminho
da protena GIP3 em ocitos de camundongo, so induzidos os eventos da fertilizao (Williams et al., 1992; Moore et
al., 1993).
Entretanto, a cascata ligada protena-G no o nico caminho capaz de gerar IP3 (veja Captulo 3). Evidncias recentes (Moore et al., 1994; Shilling et al.,
1994; Yim et al., 1994) demonstram que a
ativao do receptor da tirosinoquinase
tambm produz IP3 e ativa a onda de clcio e a reao granular cortical (Figura
4.26b). Quando o mRNA para o receptor
dessa quinase (o receptor para o fator de
crescimento derivado das plaquetas,
PDGF) foi injetado em ocitos de estrela-do-mar, o receptor PDGF foi sintetizado e incorporado nas membranas celulares desse organismo. Quando, aps a
maturao dos ocitos, PDGF foi adicionado gua banhando os vulos, esses
apresentaram aumento de clcio intracelular livre, exocitose de grnulos corticais
e sntese de DNA. Alguns se desenvolveram em larvas. Quando o mRNA continha um ponto de mutao que impedia
Figura 4.26
Mecanismos possveis da ativao do vulo. (A) Trajetria do fosfatidilinositol mediado pela G-protena. (B) Trajetria do receptor da tirosinoquinase (RTK). (C) Trajetria da tirosinoquinase citoplasmtica. (D) Trajetria na qual a G protena ou
tirosinoquinase ativadas na membrana espermtica ativam trajetrias no vulo. (E)
Trajetrias de ativadores solveis.
CAMINHOS ANTERIORES FUSO DO ESPERMATOZIDE
(A)
(B)
(C)
Espermatozide
Fosfolipase C (PLC)
Receptor
G-protena
Tirosinoquinase
Receptor de
Tirosinoquinase
Receptor de IP3
Retculo endoplasmtico
APS A FUSO DO ESPERMATOZIDE
(D)
Fator solvel
do vulo
G-protena
Receptor de IP3
Retculo endoplasmtico
Fatores solveis
do Espermatozide
*Em certas salamandras, essa funo desenvolvimental da fertilizao est totalmente divorciada da funo gentica. A salamandra prateada (Ambystoma platineum) uma espcie hbrida
que consiste somente de fmeas. Cada uma produz um ovo com um nmero no-reduzido de
cromossomos. Esse ovo, porm, no pode se desenvolver sozinho; assim, a salamandra prateada
copula com o macho da salamandra Jefferson (A. jeffersonianum). O espermatozide desse macho
somente estimula o desenvolvimento do ovo; no contribui com material gentico (Uzzell,
1964). Para detalhes desse complexo mecanismo de procriao veja Bogart et al., 1989.
149
150
Tabela 4.1
Evento
Ligao espermatozide-vulo
Elevao do potencial de fertilizao (bloqueio rpido da polispermia)
Fuso das membranas espermatozide-vulo
Primeira deteco de aumento de clcio
Exocitose das vesculas corticais (bloqueio lento da polispermia)
Ativao da NAD quinase
Aumento de NADH e NADPH
Aumento do consumo de O2
Entrada do espermatozide
Efluxo de cido
Aumento de pH (permanece alto)
Descondensao da cromatina do espermatozide
Migrao do ncleo do espermatozide para o centro do vulo
Migrao do ncleo do vulo para o ncleo do espermatozide
Ativao da sntese protica
Ativao do transporte de aminocidos
Iniciao da sntese de DNA
Mitose
Primeira clivagem
O segundos
dentro de 1 sec
dentro de 6 sec
6 sec
15-60 sec
comea em 1 min
comea em 1 min
comea em 1 min
1-2 min
1-5 min
1- 5 min
2-12 min
2-12 min
5-10 min
comea em 5-10 min
comea em 5-10 min
20-40 min
60-80 min
85- 95 min
Alterao do potencial
da membrana
Influxo de Na+
Bloqueio rpido
da polispermia
Ativao da
NAD+ quinase
Ligao e/ou fuso de
espermatozide
membrana celular do vulo
Estimulao de
protena G ou
de tirosinoquinase?
Produo
de IP3
Exocitose
de grnulos
corticais
Liberao
de Ca2+
Ativao de
fosfolipase C
Produo de
diacil-glicerol
Figura 4.27
151
Ativao de
proteno-quinase C
Troca
Na+/H+
Respostas tardias
Pouco tempo aps o aumento dos nveis de ons clcio, o pH intracelular tambm
aumenta. Acredita-se que essas duas condies inicas (> [Ca2+], < [H+] ajam em
conjunto para fornecer o espectro completo dos eventos da fertilizao, incluindo a
sntese de protenas e de DNA (Winkler et al., 1980; Whitaker e Steinhardt, 1982). O
aumento do pH intracelular comea com o segundo influxo de ons de sdio, causando uma troca 1:1 entre ons de sdio da gua do mar e os ons hidrognio do vulo*.
Essa perda de hidrognio faz o pH elevar-se de 6.8 a 7.2, ocasionando enormes mudanas na fisiologia do ovo (Shen e Steinhardt, 1978).
As respostas tardias da fertilizao produzidas por essas alteraes inicas, incluem a ativao da sntese de DNA e da protena. O surto de sntese de protena ocorre
vrios minutos aps a entrada do espermatozide e no depende da sntese de novo
RNA mensageiro (Figura 4.28). Em seu lugar, a sntese de protena nova utiliza mRNAs
j presentes no citoplasma do ocito (muito mais sobre isso ser mencionado no
Captulo 12). Esses RNAs incluem aqueles que codificam protenas como histonas,
tubulinas, actinas e fatores morfogenticos que so utilizados durante o desenvolvimento precoce. Tal surto de sntese protica pode ser induzido pelo aumento artificial
do pH citoplasmtico por ons amnio (Winkler et al., 1980). Reciprocamente, agentes
que bloqueiam o aumento do pH inibem eventos da fertilizao tardia como a sntese
de DNA e protena. Quando ovos recm-fertilizados so colocados em solues contendo baixas concentraes de ons de sdio e amiloride (uma droga que inibe a troca
Na+/H+), a sntese protica falha, os movimentos dos proncleos do vulo e do espermatozide so prevenidos, e a diviso celular no ocorre (Dube et al., 1985).
*Novamente, a variao espcie-para-espcie est solta. No vulo muito menor do camundongo, no h elevao do pH aps a fertilizao. Similarmente no camundongo, no h um
aumento dramtico na sntese protica imediatamente em seguida fertilizao.
Aumento do pH
intracelular
Converso de
NAD+ em NADP+
Bloqueio lento
da polispermia
Formao da
camada hialina
Estimulao de sntese
protica, replicao de
DNA, e movimentos
citoplasmticos de
material morfogentico
152
Surto de sntese protica na fertilizao emprega mRNA armazenado no citoplasma do ocito. (A) Sntese protica em vulos do ourio-do-mar Arbacia punctulata fertilizada na presena ou ausncia
de actinomicina D, um inibidor da transcrio. Durante as primeiras
horas, a sntese protica ocorre sem nova transcrio dos ncleos
do zigoto ou embrio. Um segundo surto de sntese protica ocorre
durante os estgios medianos de blstula, e isso representa traduo de mensagens recm-transcritas (e, portanto, no visto em
embries crescendo em actinomicina). (B) Aumento na porcentagem de ribossomos recrutados para polissomos durante as primeiras horas do desenvolvimento do ourio-do-mar, especialmente durante o primeiro ciclo celular. (A segundo Gross et al., 1964; B
segundo Humphreys, 1971.)
Incorporao de valina[14C] na
protena/mg protena (cpm x 10-3)
Figura 4.28
gua do mar
normal
Porcentagem de ribossomos
em polissomos
(A)
153
(B)
Proncleo do vulo
Ponte internuclear
Proncleo do
espermatozide
Tempo (seg)
Figura 4.29
histonas espermatozide-especficas, que se ligam fortemente ao DNA. Esse processo comea quando o espermatozide entra em contato com uma glicoprotena na
gelia do vulo que eleva o nvel da atividade proteinoquinase cAMP-dependente.
(Tais proteino-quinases cAMP-dependentes foram mencionadas no Captulo 1.)
Essas quinases fosforilam vrios resduos bsicos das histonas espermatozideespecficas interferindo, desse modo, com sua ligao ao DNA (Garbers et al., 1980,
1983; Porter e Vacquier, 1986). Esse afrouxamento considerado facilitar a substituio das histonas espermatozide-especficas por outras histonas que haviam sido
estocadas no citoplasma do ocito (Poccia et al., 1981; Green e Poccia, 1985). Uma
vez descondensado, o DNA pode iniciar a transcrio e a replicao. [fert9.html]
Depois que o espermatozide do ourio-do-mar entra no citoplasma do vulo, o
proncleo masculino gira 180o fazendo com que o centrolo fique entre o proncleo do
espermatozide e o proncleo do vulo. Em seguida, o centrolo espermtico age
como um centro organizador de microtbulos, estendendo seus prprios microtbulos e integrando-os com os microtbulos do vulo formando um ster*. Esses
microtbulos se estendem atravs de todo o vulo, contatam o proncleo feminino, e
trazem os dois proncleos um para perto do outro (Hamaguchi e Hiramoto, 1980;
Bestor e Schatten, 1981). A fuso forma o ncleo zigtico diplide (Figura 4.19). A
iniciao da sntese de DNA pode ocorrer no estgio pronuclear (durante a migrao)
ou depois da formao do ncleo zigtico.
Em mamferos, o processo da migrao pronuclear dura aproximadamente 12
horas, comparado com menos de uma hora no ourio-do-mar. O espermatozide do
mamfero entra quase tangencialmente superfcie do vulo em vez de aproxim-la
perpendicularmente, e funde com numerosas microvilosidades (veja Figura 4.20). O
ncleo do espermatozide mamfero tambm se parte quando sua cromatina
descondensa, sendo depois reconstrudo por vesculas coalescentes. O DNA do
ncleo espermtico ligado por protenas bsicas chamadas protaminas; essas
protenas nucleares esto firmemente compactadas atravs de ligaes dissulfeto.
Uma vez no vulo, a glutationa reduz essas ligaes de dissulfeto, permitindo o
desdobramento da cromatina do espermatozide (Calvin e Bedford, 1971; Kvist et
*Quando Oskar Hertwig observou esse arranjo radial de steres de espermatozide no seu
recm-fertilizado ovo de ourio-do-mar, chamou-o de sol dentro do ovo, e considerou-o feliz
indicao de uma fertilizao bem-sucedida (Hertwig, 1877). Mais recentemente, Simerly e
colaboradores (1994) descobriram que certos tipos de infertilidade em homens eram devidos a
defeitos na capacidade do centrossoma formar esses steres microtubulares. Essa deficincia
causa a falncia da migrao pronuclear e a interrupo do desenvolvimento.
154
(A)
(B)
(C)
Figura 4.30
Informaes adicionais
&
Especulaes
155
Nmero de transplantes
bem-sucedidos
Nmero de
sobrevivente
Bimaternal
339
Bipaternal
328
Controles
348
18
Operao
se desenvolvem at o nascimento, ao
passo que alguns ovos controle (contendo um proncleo masculino e um feminino de zigotos diferentes) que sofreram tal transplante se desenvolvem normalmente (Tabela 4.20). Ainda mais, os
embries bimaternos ou bipaternos cessam o desenvolvimento ao mesmo tempo que camundongos partenogenticos.
Portanto, embora os dois proncleos
sejam equivalentes em muitos animais,
nos mamferos existem importantes diferenas funcionais entre eles.
A razo para essas mortes embrionrias que em algumas clulas somente o alelo de certos genes derivado da
me ativo, enquanto em outras clu-
Figura 4.31
(A) Embries controle e (B) partenogenticos (dois proncleos femininos) de camundongos no 11 o dia de gestao. Os camundongos estavam se desenvolvendo na mesma fmea. Alm de serem menores e em deteriorao, os embries partenogenticos
tambm tinham placentas muito menores. (de
Surani e Barton, 1983, cortesia dos autores.)
156
Figura 4.32
Plo animal
Material do
ncleo do ocito
Ncleo do
ocito
Citoplasma
Cortical
amarelo
Citoplasma
claro
Gema cinzenta
(A)
(B)
Crio
Plo vegetal
Proncleo do Citoplasma
espermatozide amarelo
(C)
Proncleo do
espermatozide
(D)
Citoplasma
amarelo
Crescente
amarelo
Material
da gema
(A)
Ponto de
entrada do
espermatozide
(B)
Crescente
cinzento
Crtex
Citoplasma
interno
Zona de
deslizamento
Figura 4.33
157
158
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 4.34
com Azul Nilo e observaram seu movimento por microscopia fluorescente (o corante
ligado emite fluorescncia vermelha). Durante a parte intermediria do primeiro ciclo
celular, a massa do citoplasma central do ovo flui do presumvel lado ventral (abdome),
para o futuro lado dorsal (posterior) do embrio (Prancha 7). Ao fim da primeira diviso, o citoplasma presumivelmente do lado dorsal do embrio, distintamente diferente daquele do provvel lado ventral. O que havia sido um embrio radialmente simtrico, agora um embrio bilateralmente simtrico.
Como veremos nos Captulos 6 e 15, esses movimentos citoplasmticos iniciam
uma cascata de eventos que determina o eixo dorso-ventral da r. Realmente, os
microtbulos paralelos que permitem esses rearranjos parecem estender-se ao longo
do futuro eixo dorso-ventral (Klag e Ubbels, 1975; Gerhart et al., 1983).
Preparao para a Clivagem
O aumento dos nveis de ons livres de clcio intracelular tambm inicia a movimentao de aparelhagem para a diviso celular. O mecanismo iniciador da clivagem
provavelmente difere entre espcies, dependendo do estgio de meiose em que
159
Figura 4.35
(B)
(A)
(C)
160
Boveri, T. 1907. Zellenstudien VI. Die Entwicklung dispermer Seeigeleier. Ein Beitrge zur
Befruchtungslehre und zur Theorie des Kernes.
Jena Z. Naturwiss. 43: 1-292.
Fol, H. 1877. Sur le commencement de Ihmognie chez divers animaux. Arch. Zool. Exp. Gn.
6: 145-169.
161
162
163
164
Terasaki, M. and Sardet, C. 1991. Demonstration of calcium uptake and release by sea urchin
egg cortical endoplasmic reticulum. J. Cell Biol.
115: 1031-1037.
Surani, M. A. H. and Barton, S. C. 1983. Development of gynogenetic eggs in the mouse: Implications for parthenogenetic embryos. Science
222: 1034-1036.
165
Para nossa limitada inteligncia, pode parecer simples dividir um ncleo em partes
iguais. A clula, manifestadamente, abriga
uma opinio muito diferente.
E. B. WILSON, (1923)
Deve-se mostrar o mximo respeito por
tudo que cresce exponencialmente, no
importa o seu tamanho.
GARRETT HARDIN, (1968)
167
mento. O zigoto, com o seu novo potencial gentico e com sua nova disposio do citoplasma, inicia agora a produo de um novo organismo
multicelular. Em todas as espcies de animais conhecidas, isso comea por um processo chamado clivagem, uma srie de divises mitticas pelo qual o enorme volume do
citoplasma do ovo dividido em numerosas pequenas clulas nucleadas. Essas clulas
em estado de clivagem so chamadas de blastmeros.
Na maioria das espcies (mamferos sendo a principal exceo) a velocidade da
diviso celular e a colocao dos blastmeros um em relao ao outro esto completamente sob controle das protenas e dos mRNAs armazenados no ocito pela me. O
genoma zigtico transmitido por mitose para todas as outras clulas, no funciona em
embries com clivagem precoce. Poucos, se alguns, mRNAs so produzidos mais
tarde durante a clivagem, o embrio pode dividir-se apropriadamente at mesmo quando produtos qumicos so usados para inibir a transcrio. Tambm em muitas espcies, no h aumento do volume embrionrio durante a clivagem. Isso difere da maioria
dos casos de proliferao de clulas, do qual existe um perodo de crescimento celular
entre as mitoses: a clula se expande para quase o dobro de seu volume, da se divide.
Esse crescimento produz um aumento total de clulas enquanto mantm uma razo
relativamente constante entre volume nuclear e volume citoplasmtico. Durante a clivagem embrionria, no entanto, o volume citoplasmtico no aumenta. Antes, o enorme
volume do citoplasma zigtico dividido cada vez mais em clulas menores. O primeiro
ovo dividido ao meio, em seguida em quartos, em oitavos, e assim por diante. Essa
diviso do citoplasma do ovo, sem o aumento do seu volume, acompanhada pela
abolio do perodo de crescimento entre as divises, enquanto a clivagem dos ncleos
ocorre numa razo to rpida nunca vista antes (nem mesmo em clulas de tumor). Um
ovo de r, por exemplo, pode ser dividido em 37.000 clulas em apenas 43 horas. A
mitose na Drosophila, em estgio de clivagem, ocorre a cada dez minutos por mais de
duas horas, e em apenas 12 horas forma algo em torno de 50.000 clulas. Esse aumento
em nmero de clulas pode ser apreciado comparando a clivagem com outras fases do
desenvolvimento. A Figura 5.1 mostra o logaritmo de nmeros celulares em um embrio
de r representado graficamente em funo do tempo de desenvolvimento (Sze, 1953).
Ela ilustra uma evidente descontinuidade entre clivagem e gastrulao.
Uma conseqncia dessa diviso rpida a razo do volume citoplasmtico/nuclear se tornar cada vez menor assim que a clivagem progride. Em muitos tipos de embries, a diminuio da razo entre os volumes citoplasmtico e nuclear crucial na
167
168
Figura 5.1
Clivagem
Gastrulao
Log10 do nmero de
clulas por embrio
Horas a 150C
Posio do vitelo
Simetria
de clivagem
Holoblstica
(clivagem completa)
Isolcito (oligolcito)
(vitelo escasso, distribudo por igual)
Radial
Espiral
Meroblstica
(clivagem incompleta)
Bilateral
Rotacional
Radial
Bilateral
Discoidal
Superficial
Animais representativos
Equinodermos, Amphioxus
Maioria dos moluscos,
aneldeos, nematelmintos, platelmintos
Ascdios
Mamferos
Anfbios
Moluscos cefalpodos
Rpteis, peixes, aves
Maioria dos artrpodos
169
170
Figura 5.2
Plo animal
Plano de clivagem
meridional
Plano de
clivagem
equatorial
Plo vegetal
Metade Animal
Metade Vegetal
Plo animal
Blstula oca
(aberta por corte)
Plo vegetal
(A)
Figura 5.3
Plo animal
Plo vegetal
Metade animal
171
Mesmeros
an 1
an 2
derivados
derivados
Clivagem no ourio-do-mar. (A) Planos de clivagem nas primeiras trs divises e formao
de camadas particulares de clulas nas divises 3-6. (B-D) Fotomicrografias de embries
vivos do ourio-do-mar Lytechinus pictus, viso de cima para baixo do plo animal. (B) O
estgio de 2 clulas. (C) O estgio de 4 clulas.
(D) O estgio de 32 clulas, mostrado sem a
membrana de fertilizao para permitir a visualizao dos mesmeros do plo animal, os
macrmeros centrais e dos micrmeros vegetais em ngulo para o centro. (Fotografia cortesia de G. Watchmaker.)
veg1
veg2
Metade vegetal
Micrmeros
Macrmeros
(C)
(B)
(D)
Figura 5.4
(A)
(B)
Formao de micrmeros durante a quarta diviso de embries de ourios-do-mar. Os plos vegetais dos embries so visualizados por
baixo. (A) A localizao e orientao do fuso
mittico na parte baixa das clulas vegetais
so visualizadas com luz polarizada no embrio vivo. (B) A clivagem atravs desses fusos, colocados assimetricamente, produziu micrmeros e macrmeros. (de Inou, 1982, cortesia de S. Inou.)
172
Clio
Blastocele
(C)
Figura 5.5
Blstulas de ourio-do-mar. (A) Esquema de um corte controle atravs de uma blstula precoce
de ourio-do-mar, mostrando uma camada nica de clulas arredondadas rodeando uma grande
blastocele. (B) Com a contnua diviso, as clulas da blstula tardia mostram diferenas de forma
medida que as clulas da placa vegetal se alongam, (C) Junes apertadas (flecha) formando
se entre clulas de uma blstula de equinodermo com 1024 clulas. (A e B segundo Giudice,
1973; C de Dan-Sohkawa e Fujisawa, 1980, cortesia dos autores.)
algum tempo aps a fertilizao, que direcionam os fusos formados para uma certa
direo; (2) deve haver material formador de micrmero no citoplasma vegetal; e (3)
deve haver algum mecanismo pelo qual o material formador de micrmeros seja ativado no tempo correto (Hrstadius,1973).
No desenvolvimento do ourio-do-mar, o estgio de blstula comea na fase de
128 clulas. Nesse estgio, as clulas formam uma esfera oca circundando a blastocele
central (Figura 5.5A,B). Nessa altura, todas as clulas so do mesmo tamanho, os
micrmeros tendo diminuda sua diviso celular e clivando menos freqentemente.
Toda a clula est em contato com o fluido proteinceo da blastocele e com a camada
hialina dentro do envoltrio de fertilizao. Durante esse tempo, os contatos entre as
clulas so estreitados. Dan-Sohkawa a Fujisawa (1980) analisaram esse mtodo em
embries de estrela-do-mar e mostraram que o fechamento da cavidade esfrica
contempornea com a formao de junes apertadas entre os blastmeros. Essas
junes unem as clulas frouxamente conectadas num tecido epitelial onde a blastocele
isolada do ambiente externo (Figura 5.5C). Dando prosseguimento a sua diviso, a
camada celular expandida e se afina. Durante esse perodo, a blstula permanece
como uma camada unicelular grossa.
Duas teorias surgiram para explicar a concomitante proliferao de clulas e
formao da blastocele. Dan (1960) conjeturou que o motivo maior dessa expanso o influxo de gua na cavidade da blastocele. J que o blastmero secreta
protena na blastocele, seu fluido torna-se espesso. Esse fluido absorve grandes
quantidades de gua por osmose, exercendo presso nos blastmeros para se expandirem. Essa presso tambm alinha o longo eixo de cada clula para que a
diviso nunca seja para dentro da blastocele. Isso criaria uma expanso adicional
fazendo com que a populao fosse orientada somente para um plano. Wolpert e
Gustafson (1961) e Wolpert e Mercer (1963) propuseram que a presso da
blastocele no necessria para se conseguir esse efeito. Eles enfatizaram o papel
de adesividade das clulas entre si e a camada hialina. Eles mostraram que enquanto permanecessem fortemente atracadas na camada hialina, as clulas no
tm alternativa a no ser a de se expandir. Essa expanso cria a blstula ao invs
do contrrio. Certamente, a camada hialina vital para expanso da blastocele, e
se a adeso de clulas da camada hialina inibida por anticorpos para a hialina,
ento a expanso da blastocele cessa (Adelson e Humphreys, 1988). Em um trabalho recente (Ettensohn e Ingersoll, 1992) concluram que provvel que ambos
173
mecanismos expandem a blastocele. Durante a clivagem precoce, a adeso camada hialina parece ser o fator mais importante, enquanto que em estgios mais
tardios, a presso osmtica tambm parece exercer o seu papel.
A clulas da blstula desenvolvem clios em sua superfcie externa (Figura 5.6),
desse modo, causando a rotao da blstula dentro do envoltrio de fertilizao. Logo
aps, as clulas da parte animal do embrio sintetizam e secretam uma enzima de
ecloso que lhes permite digerir a membrana fertilizante (Lepage et al., 1992), o embrio se torna uma blstula eclodida livre para nadar.
Anfbios
Clivagem na maioria dos embries de rs e salamandras radialmente simtrica e
holoblstica, como na clivagem do equinodermo. O ovo do anfbio, no entanto, contm muito mais vitelo. Esse vitelo, que concentrado no hemisfrio vegetal, um
impedimento clivagem. Sendo assim, a primeira diviso comea no plo animal e
vagarosamente se estende at a regio vegetal (Figura 5.7). Na salamandra axolotle, o
sulco da clivagem se estende atravs do hemisfrio animal a uma velocidade prxima
de 1mm/min. O sulco da clivagem seciona o crescente cinzento e depois diminui para
menos de 0.02-0.03mm/min ao se aproximar do plo vegetal (Hara, 1977).
A Figura 5.8A uma varredura no microscpio eletrnico, mostrando a primeira
clivagem em um ovo de r. Podemos notar as dobras nos sulcos da clivagem e a
diferena entre os sulcos nos hemisfrios animal e vegetal. A Figura 5.8B mostra que
enquanto o sulco da primeira clivagem ainda est tentando clivar o vitelo
citoplasmtico do hemisfrio vegetal, a segunda clivagem j comeou prxima ao
plo animal. Essa clivagem est em ngulos retos em relao primeira, e tambm
meridional. A terceira clivagem, como era de se esperar, equatorial. No entanto,
por causa do vitelo vegetalmente colocado, esse sulco da clivagem em ovos anfbios
muito mais prximo do plo animal. Ele divide o embrio de r em quatro
blastmeros animais pequenos (micrmeros) e quatro grandes blastmeros
(macrmeros) na regio vegetal. Essa clivagem holoblstica desigual estabelece duas
regies embrionrias principais: uma de diviso rpida de micrmeros, prxima ao
plo animal, e outra de macrmeros, mais lenta (Figura 5.8C). Assim que a clivagem
progride, a regio animal se torna abarrotada com numerosas clulas pequenas,
enquanto a regio vegetal contm uma pequena quantidade de grandes macrmeros
carregados de vitelo (ver Figura 5.7).
Embries anfbios contendo de 16 a 64 clulas so freqentemente chamados
mrulas (do Latim amora, da qual sua forma vagamente reminiscente). No estgio
de 128 clulas a blastocele se torna aparente e o embrio considerado uma blstula.
(A)
(B)
(C)
Figura 5.6
(D)
Figura 5.7
Crescente
Cinzento
(E)
(F)
(G)
(H)
Blastocele
174
Figura 5.8
(A)
Pregas
Sulco de
clivagem
(B)
(C)
Figura 5.9
(A)
(B)
(A)
175
(B)
Figura 5.10
Figura 5.11
176
(A)
(B)
Vista lateral
Figura 5.12
Figura 5.13
(A)
Enrolamento sinistrogiro
(B)
Enrolamento dextrogiro
Figura 5.14
Olhando do plo animal de caracis enrolados para a direita e para a esquerda. A origem do
enrolamento para direita e para a esquerda do caracol pode ser reconhecida pela orientao do
fuso mittico na segunda clivagem. Os caracis sinistrogiros e dextrogiros se desenvolvem como
imagens espelhares uma da outra. (Segundo Morgan, 1927.)
A orientao das clulas aps a segunda clivagem estava diferente (Figura 5.14),
graas a uma orientao diferente do aparelho mittico nos caracis com enrolamento
sinistrogiro. Todas as subseqentes divises em embries de espiral para a esquerda
so imagens espelhares daqueles embries com espirais dextras. Na Figura 5.14, podemos notar que a posio do blastmero 4d (o qual muito importante, j que sua
prognie ir formar os rgos mesodrmicos) diferente nos dois tipos de espirais
dos embries. Geralmente, os dois caracis so formados com seus corpos em lados
diferentes da abertura da espiral.
A direo da abertura na espiral da concha do caracol controlada por um nico
par de genes (Sturtevant, 1923; Boycott et al., 1930). No caracol Limnaea peregra a
maioria dos indivduos so espiralados para a direita. Raros mutantes, exibindo abertura esquerda, foram encontrados e acasalados com caracis tipo-selvagem. Esses
acasalamentos mostraram que existe um alelo D dextrogiro que dominante em
relao ao alelo d sinistrogiro. No entanto, a direo da clivagem no determinada
pelo gentipo do caracol em desenvolvimento, mas pelo gentipo da me do caramujo.
Caramujo fmea do tipo dd pode produzir somente herdeiros de espiral sinistra, mesmo quando o gentipo dos herdeiros Dd. Um indivduo Dd ir se espiralar tanto
para a direita quanto para a esquerda dependendo do genoma de sua me. Esses cruzamentos produzem o seguinte quadro:
177
178
Informaes adicionais
&
Especulaes
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 5.16
imitam o comportamento e a forma de pequenos peixes nadando. Para tornar a iluso mais completa, desenvolveram uma
mancha preta em forma de olho (ocelo) de
um lado e uma nadadeira do outro. O peixe visto na Figura 5.16 no um peixe real,
mas sim a bolsa de criao e o manto abaixo
dela. Quando o peixe que estiver ao alcance
for atrado, o molusco despeja as gloqudias
da bolsa de criao. Dessa maneira, a modificao de padres de comportamentos j
existentes permitiram moluscos uniondeos
sobreviver em ambientes hostis.
(A
(B)
(C)
Figura 5.16
Ectoderma
Ectoderma
neural
Msculo
Notocorda
Mesnquima
Endoderma
Plo vegetal
179
Plo vegetal
180
Estgio de 2 clulas
Zona pelcida
tero
Primeira clivagem
Figura 5.18
Desenvolvimento de um embrio humano desde a fertilizao at a implantao. A compactao em embries humanos ocorre no dia 4,
quando ele est no estgio de 10 clulas. O ovo
eclode da zona quando alcana o tero, e
provvel que a zona evite a adeso das clulas
em clivagem de se colarem ao oviduto, em lugar de viajar para o tero. (Segundo TuchmannDuplessis et al., 1972.)
Oviduto
Mrula
Blastocisto
Ovrio
Estgio precoce
da implantao
Fertilizao
Ovulao
Plano de
clivagem II
Plano de
clivagem I
Plano de
clivagem IIA
181
Figura 5.19
Plano de
clivagem I
(A) EQUINODERMO
(Ourio-do-mar)
(B) MAMFERO
(Coelho)
(A)
(B)
(C )
Figura 5.20
(D)
(E)
(F)
Clivagem de um nico embrio de camundongo in vitro. (A) estgio de 2 clulas. (B) estgio
de 4 clulas. (C) incio do estgio de 8 clulas.
(D) Estgio de 8 clulas compactado. (E)
Mrula. (F) Blastocisto. (de Mulnard, 1967,
cortesia de J. G. Mulnard.)
182
(A)
(B)
Figura 5.21
Micrografia ao microscpio eletrnico de embries de camundongos de 8 clulas. (A) nocompactados e (B) compactados. (Cortesia de C. Ziomek.)
(A) Estgio precoce de 8 clulas: no-polar, porm com efeitos de contato local
183
Figura 5.22
Junes apertadas
Lateral
Basal
(C) 16 clulas:
Adeso basolateral intensificada, laminina, cingulina, mitocndria, vesculas lipdicas.
Basal: lisossomos, Golgi
Junes apertadas
entre clulas exteriores
Junes de fendas
entre clulas interiores
Massa celular
interna (ICM)
Blastocele
Trofoblasto
E-caderinaDesmossomos
Direo da corrente inica
Desmossomos
Lisossomos secundrios
Na+, K+ - ATPase
Golgi
Actina cortical
Junes de fendas
Filamentos de
citoqueratina
Microtbulos e actina
citoplasmtica
Microvilosidades
Protenas da membrana
apical
Mitocndrias
184
Figura 5.23
(A)
Informaes adicionais
(B)
&
Especulaes
OMPACTAO CRIA AS circunstncias que trazem tona a primeira diferenciao no desenvolvimento de mamferos: a separao do trofoblasto da massa celular interna. Como isso
feito? Existe uma crescente evidncia que a
compactao realizada por intermdio de
eventos que ocorrem na superfcie das clulas dos blastmeros adjacentes. No primeiro
estgio da compactao, cada um dos oito
blastmeros interage com os seus vizinhos
para sofrer polarizao da membrana.
Componentes diferentes da superfcie das clulas migram para regies diferentes da clula (veja Figura 5.22; Ziomek e Johnson,
1980). Isso pode ser observado, marcando
certas molculas da superfcie celular com
corantes fluorescentes. Uma dessas marcaes, que reconhece a classe das glicoprotenas, mostra que no estgio de 4 clulas, essas glicoprotenas so aleatoriamente distribudas por toda a membrana (Figura 5.24A).
No entanto, na metade do estgio de 8 clulas, essas molculas so encontradas predominantemente nos plos mais distantes do
centro do agregado (Figura 5.24B). A polarizao da membrana influenciada por interaes clula a clula porque acontece somente quando a clula est em contato, no
mnimo, com um outro blastmero. Se um
blastmero for separado do resto do embrio
perde sua polarizao.
Protenas especficas da superfcie celular cumprem o seu papel na compactao.
Uma dessas molculas, E-caderina (tam-
(A)
(B)
Figura 5.24
Polarizao de componentes
da membrana em blastmeros de camundongo
durante o estgio de 8 clulas. (A) Distribuio homognea, no-polar, de componentes
da membrana marcados com concanavalina A
fluorescente no estgio de 4 clulas. (B) Distribuio heterognea, polar, desses componentes no estgio de 8 clulas. (A de Fleming
et al., 1986; B de Levy et al., 1986. Fotografias cortesia dos autores.)
por actino-filamentos, aparecem na superfcie de clulas adjacentes, unindo uma clula outra. Essas microvilosidades podem
ser os stios onde a E-caderina est funcionando para mediar adeso intercelular. O
achatamento dos blastmeros um contra o
outro pode, portanto, ter acontecido em virtude do encolhimento do blastmero atravs da despolimerizao da actina (Pratt et
al., 1982; Sutherland e Calarco-Gillam, 1983).
Dessa maneira, existem evidncias crescentes de que a compactao causada
por mudanas na arquitetura da superfcie
celular dos blastmeros. No entanto, no
est totalmente certo como esses eventos
se relacionam um com o outro, ou como
so coordenados e integrados na cadeia
de eventos que causa a compactao.
(A)
185
(B)
Figura 5.25
* As clulas internas mostraram virem mais freqentemente da primeira clula a se dividir no estgio
de 2 clulas. Essa clula normalmente produz o primeiro par de blastmeros a alcanar o estgio de 8
clulas, e essas clulas se dividem de tal modo que elas esto soltas dentro dos blastmeros agregados
(Graham e Kelly, 1977).
186
Figure 5.26
Informaes adicionais
&
Especulaes
Embrio
Saco vitelnico
187
2 Crios
mnio
(A)
2 mnios
Massa celular interna
1 Crio
(B)
2 mnios
Embrio
bicelular
Blastocele
1 Crio
(C)
1 mnio
Crio
Figura 5.27
Diagrama mostrando a relao entre a formao de gmeos monozigticos humanos e as membranas extra-embrionrias. (A) A ciso ocorre antes da formao da trofectoderma, de modo que
cada gmeo tem o seu prprio crio e mnio. (B) A ciso ocorre aps a formao da trofectoderma,
porm, antes da formao do mnio, resultando em gmeos que tm sacos amniticos individuais, porm, compartilhando um crio. (C) Ciso aps a formao do mnio conduz a gmeos em
um saco amnitico, e um nico crio. (Segundo Langman, 1981.)
188
Figura 5.28
(A)
Pronase
Zona
pelcida
Blastmeros
Blastocisto
Blastocistos implantados
na me de criao
1981; Martin, 1981). Essas clulas so chamadas de clulas-tronco embrionrias (clulas ES). Como foi mostrado no captulo
2, essas clulas podem ser alteradas na placa de Petri. Genes clonados podem ser inseridos dentro de seu ncleo, ou genes
existentes podem ser mutados. Quando
essas clulas ES so injetadas nos
blastocistos de um outro gene de camundongo, elas podem integrar a sua massa
celular interna hospedeira. O embrio resultante tem clulas vindas de ambos tecidos, hospedeiro e doador. Essa tcnica se
tornou extremamente importante para determinar a funo dos genes durante o desenvolvimento de mamfero.
(A)
(B)
(B)
(C )
Figura 5.29
Agregao e compactao de trs embries de camundongo, no estgio de 8 clulas, para formar um
nica mrula compactada. Clulas de trs diferentes embries (A) so agregadas para formar uma
mrula (B) que sofre compactao para formar um
blastocisto nico (C). O camundongo quimrico resultante mostrado na Prancha 21. (de Markert e
Petters, 1978, cortesia de C. Markert.)
Clivagem Meroblstica
Como j foi mencionado anteriormente, concentraes de vitelo cumprem um papel
importante na clivagem celular. Em parte alguma isso est to aparente como nos tipos
de clivagem meroblstica. Aqui, as grandes concentraes de vitelo probem a clivagem
no seu todo, exceto em uma pequena poro do citoplasma do ovo. Na clivagem
189
tomada pelo vitelo, permitindo que a clivagem ocorra somente no blastodisco, uma
regio de citoplasma ativo de aproximadamente 2-3mm de dimetro no plo animal
do ovo. Porque essas clivagens no se estendem para o vitelo citoplasmtico, as
clulas da clivagem precoce so, na realidade, contnuas nas suas bases. O primeiro
sulco de clivagem aparece centralizado no blastodisco, e outras clivagens se seguem
para criar um blastoderma de camada nica. Num primeiro instante, essa camada
celular est incompleta, j que as clulas permanecem contnuas ao vitelo subjacente.
Da por diante, clivagens equatoriais e verticais dividem o blastoderma em um tecido de cinco a seis camadas celulares. Essas clulas permanecem ligadas com junes apertadas (Bellairs et al.,1975; Eyal-Giladi, 1991). Entre o blastoderma e o
vitelo existe um espao chamado cavidade subgerminal, criado quando uma clula
blastodrmica absorve fluido da albumina (branco do ovo) e secreta-o entre si e o
vitelo (New, 1956). Nesse estgio, as clulas mais profundas do centro do blastoderma
so descartadas para criar uma zona pelcida unicelular (as clulas descartadas
parecem morrer). O anel perifrico das clulas blastodrmicas que no so descartadas constituem a zona opaca.
Quando uma galinha se considera pronta para botar um ovo, o blastoderma j
contm 60.000 clulas. Algumas dessas clulas so delaminadas em cavidades
subgerminais para formar uma segunda camada (Figura 5.31). Dessa maneira, logo
aps a galinha ter botado o ovo, esse contm duas camadas de clulas: a superior
epiblasto e a inferior hipoblasto. Entre elas est a blastocele. Detalharemos a formao do hipoblasto no prximo captulo.
PEIXES. Nos ltimos anos, o peixe zebra, Danio rerio, se tornou o organismo favorito para quem deseja estudar o desenvolvimento dos vertebrados. Esses peixes tm
grandes crias, procriam o ano inteiro, so facilmente mantidos, tm embrio transparente que se desenvolve fora da me (uma caracterstica importante para a microscopia),
e pode ser criado para que mutantes possam ser protegidos e propagados. Ademais,
eles se desenvolvem rapidamente, para que 24 horas aps a fertilizao, o embrio j
tenha formado a maior parte de seus tecidos e rgos primordiais, apresentando como
caracterstica a forma semelhante ao girino (veja Granato e Nsslein-Volhard, 1996;
Langeland e Kimmel, 1997).
Os ovos de peixes com muito vitelo desenvolvem-se similarmente aos das aves,
com a diviso celular ocorrendo somente no blastodisco do plo animal. Observaes da clivagem de ovos de peixe atravs de micrografia ao microscpio eletrnico
Sulcos de clivagem
Blastoderma
Figura 5.30
Figura 5.31
190
(A)
(B)
(C)
(E)
(F)
(D)
Figura 5.32
Clivagem discoidal em um peixe-zebra, criando uma regio celular acima do vitelo denso. Em (A), BD significa a regio do
blastodisco. (de Beams e Kessel, 1976, cortesia dos autores.)
(A)
191
(B)
Blastoderma
Camada
envolvente (EVL)
Clulas
profundas
YSL interna
Ncleos
sinciciais
do vitelo
YSL externa
Microtbulos
Clula do vitelo
Figura 5.33
(C)
Plo animal
Nariz,
olho
Crebro
Epiderme
Ectoderma
Medula espinhal
Crista neural
Mesoderma
Ventral
Somito do msculo
Prnefron
Cabea
Intestino
Dorsal
Notocorda
Faringe
Fgado
Margem do blastoderma
Endoderma
A blstula do peixezebra. (A) antes da gastrulao, clulas profundas esto rodeadas pelo EVL. A superfcie animal do vitelo achatada
e contm os ncleos do YSL. Microtbulos se estendem atravs do
citoplasma vitelnico e da regio externa do YSL. (B) Estgio tardio de
blstula, mostrando a YSL. Os ncleos dessas clulas so derivados
de clulas da margem do blastoderma, que liberou seus ncleos para o
citoplasma vitelnico. (C) Mapa do destino das clulas profundas
depois que a mistura de clulas cessou. A vista lateral mostrada, e
no todos os destinos dos rgos esto identificados (para clareza). O
mapa gerado injetando clulas com corante de alto peso molecular,
determinando em seguida, quais rgos as clulas carregadas de corante
geraram. (A e C segundo Langeland e Kimmel, 1996; B de Trinkaus,
1993, cortesia do autor.)
Clula do vitelo
Plo vegetal
blastoderma, e a EVL uma cobertura epitelial fina composta apenas de uma camada
de clulas. A EVL finalmente forma a periderme, uma proteo extra-embrionria cobrindo o que se pensa ser descartado mais tarde durante o desenvolvimento.
Entre a EVL externa e a YSL interna esto as clulas profundas, das quais surgir
o embrio propriamente dito. Os destinos das clulas blastodrmicas precoces no
esto determinados, e os estudos de linhagem celular (onde um corante fluorescente
no difusvel injetado em uma das clulas e os descendentes daquela clula podem
ser seguidos) mostram que existe muita mistura de clulas durante a clivagem. Alm
do mais, qualquer clula pode dar origem a uma variedade imprevisvel de descendentes de tecido (Kimmel e Warga, 1987; Helde et al., 1994). O destino da clula
blastodrmica parece ser fixado pouco antes do comeo da gastrulao. Nesse perodo, clulas em regies especficas do embrio originam certos tecidos de uma maneira
altamente previsvel, permitindo que um mapa do destino possa ser traado (Figura
5.33C; Kimmel et al., 1990).
O processo pelo qual a clula contribui para o tecido envolve uma narrativa progressiva de possveis destinos para o desenvolvimento de uma determinada clula. Esse comportamento pode ser observado em algumas das primeiras clulas a terem seu destino
estabelecido - as clulas precursoras do corao (Stainer et al., 1993; Lee et al., 1994).
192
Figura 5.34
(B)
(A)
Figura 5.35
Ventral
Dorsal
Clula do vitelo
Saco
vitelnico
Ncleos
(enrgides)
Enrgides migram
para a periferia
Clulas
polares
Blastoderma
celular
Clulas polares
Superfcie do ovo
Fuso mittico
Sulco de clivagem
ster
Ncleo
Canal do sulco
Microtbulos
Figura 5.36
Membrana vitelnica
193
(A)
(B)
(C)
Prfase 12
194
Ncleos
Microfilamentos
Microtbulos
Figura 5.37
195
alcanada quando existe um ncleo para cada 61 m3 de citoplasma. Em Xenopus, uma desacelerao similar na taxa mittica observada aps a dcima segunda diviso celular. Aqui tambm, as divises daqui para frente se tornam
assincrnicas. Experimentos de ligao sugerem que o tempo de durao da transio dessa blstula intermediria tambm funo da razo volumes cromatina/
citoplasma (Newport e Kirschner, 1982a,b).
Em ambos, Drosophila e Xenopus, a iniciao da transcrio pode ser induzida
prematuramente aumentando artificialmente a durao do ciclo celular. Quando
cicloheximida (um inibidor da sntese protica) atrasa a diviso celular, a transio da
blstula intermediria induzida precocemente em Xenopus, e uma exploso de transcries ocorre em Drosophila (Edgard et al., 1986; Kimelman et al., 1987).
Informaes adicionais
&
Especulaes
Excees, Generalizaes,
e Clivagem Parastica da Vespa
volvimento conhecem apenas o desenvolvimento de uma espcie: Drosophila melanogaster. A Drosophila ganhou proeminncia somente depois que se fez necessrio relacionar fenmenos embriolgicos com genes particulares. Em 1941, o
maior compndio do desenvolvimento de
insetos (Embriologia dos insetos e
Miripodes, Johannsen e Butt) sequer
mencionava essa espcie em seu ndice.
Insetos so um excepcionalmente bemsucedido e espalhado subfilo, no sendo
surpreendente encontrar uma grande variabilidade no seu desenvolvimento. O desenvolvimento da vespa parasita Copidosomopsis tanytmemus difere marcadamente
daquele da Drosophila cannica. Como
muitas outras espcies parasitrias, a fmea C. tanytmemus deposita seu ovo den-
Olho/cabea da
lagarta hospedeira
Esfago
Mrula de
4 dias
Corpo gorduroso
do hospedeiro
Ovo
(A)
Poligerme
precoce
Poligerme
(B)
Poligerme em expanso
Desenvolvimento de vespas
parasitrias (Encyrtidae). (A) Clivagem
holoblstica do ovo de Copidosomopsis
tanytmenus produz uma poligerme de clulas
no-diferenciadas. (B) Larvas precoces de um
gnero relacionado, Pentalitomastix, atacam a
larva de Trathala dentro do mesmo hospedeiro. A fotografia de um hospedeiro recmaberto. (A segundo Cruz, 1986a; B de Cruz,
1981, cortesia de Y. Cruz.)
196
Com o crescimento, a poligerme se divide em dzias (s vezes milhares, dependendo da espcie) de discretos grupos de clulas. Cada um desses grupos se torna um
embrio! A vespa poliembrionria Copidosoma floridanum produz at 2000 indivduos de um nico ovo fertilizado (Grbic et al.,
1996). Essa habilidade que um ovo tem para
se transformar em uma massa de clulas,
que rotineiramente forma numerosos embries, chamada de poliembrionia. (Poliembrionia caracterstica de certos grupos de
insetos e certas espcies de mamferos, tais
como o tatu de nove bandas, cujos ovos
formam qudruplos idnticos.) A maior parte desses embries de vespa parasita se desenvolvem em larvas normais que levam
aproximadamente 30 dias para se desenvolver. Um grupo menor, de cerca de 10
porcento do nmero total de embries, se
tornam larvas precoces (Figura 5.38B), que
se desenvolvem em uma semana. Elas no
s se desenvolvem precocemente, como tm
muito pouca estrutura e no sofrem metamorfose. So essencialmente um conjunto
de mandbulas mveis. Essas larvas no se
MECANISMO
DE
CLIVAGEM
(A)
(B)
Ciclina B
Ciclina D
Ciclina A
Ciclina E
Ciclina A
Figura 5.39
Ciclos celulares de clulas somticas e blastmeros precoces. (A) Ciclo celular de uma clula
somtica tpica. A Mitose (M) seguida por uma condio de interfase. Esse ltimo perodo
subdividido em fases G1, S (sntese) e G2. Clulas que esto se diferenciando so geralmente
removidas do ciclo celular e esto numa fase G1 estendida chamada G0. As ciclinas e suas
respectivas quinases, responsveis para progresso atravs do ciclo celular, so mostradas no
seu ponto de regulao do ciclo celular. (B) Ciclo celular bifsico mais simples dos blastmeros
precoces de anfbios, tendo somente dois estados, S e M. (A segundo Nigg, 1995.)
197
198
Informaes adicionais
&
Especulaes
(A) Ciclina e protena cdc25 (cordo) so abundantes antes da fertilizao. Portanto, durante os
primeiros sete ciclos celulares, a atividade da MPF quinase permanece constante e as divises
celulares prosseguem to rapidamente quanto funcionam as enzimas e os substratos. medida
que a ciclina degradada, sua sntese (de mRNA estocado no citoplasma) torna-se limitante no
ciclo 8. No ciclo 14, o mRNA materno para ciclina desapareceu, e deve ser sintetizado de genes
nucleares. Alm disso, a degradao das protenas do cordo comanda nova sntese a partir do
ncleo. Pr-MPF acumula mas no ativado at que a fosfatase cordo cliva os fosfatos T-14 e
Y-15 da cdc2 quinase. O mecanismo que relaciona a atividade do MPF com o trmino da sntese
de DNA e a iniciao da citocinese esto sendo investigados. (Segundo Edgar et al., 1994.)
Regulado maternalmente
Ciclina maternal
e protenas de
cordo presentes
MPF ativo
Regulado zigoticamente
Ciclina
Degradao
Protena Ciclina
Pr-MPF
Ciclina
Sntese de
ciclina
(zigtica)
MPF ativo
Desfosforilao
Ciclina
cdc 25/cordo
fosfatase (zigtica)
Ciclina
Ciclina
MPF ativo
Sntese de
ciclina
Ciclina
Degradao da ciclina
Mitose
Quinase ativa de
protenas maternas
(limita substrato)
Ciclo
Divises nucleares
Mitose
Ciclo dirigido pela traduo de
nova ciclina de mRNA materno
Mitose
Ciclo dirigido pela cdc25/fosfatase de cordo
Mitose
(A)
(B)
A Fosfatase cdc25:
Iniciadora de Mitose
A mitose se inicia com uma abrupta
desfosforilao de todas essas subunidades
MPF quinase na posio 15. Isso conseguido pelo aparecimento da fosfatase cdc25
(Edgar e OFarrell, 1989; Gautier et al.,
1991; Jessus e Beach, 1992; Lee et al.,
1992). Dessa maneira, a acumulao gradual do MPF convertida em uma breve
exploso de atividade quinase que inicia
a mitose. Essa fosfatase (que tem sido encontrada em inmeros organismos) ela
prpria regulada pelo desenvolvimento.
Na Drosophila, a fosfatase cdc25 (produto do gene string, de cordo) inicialmente sintetizada pelo mRNA armazenado no ocito durante os 13 primeiros ciclos celulares. No entanto, durante o pr-
199
(C)
200
comeo da mitose; mas a prpria montagem do fuso necessria para o funcionamento apropriado da ciclina B (Minshull et
al., 1994). Se os fusos so formados incorretamente, a ciclina B cessa seu funcionamento, e a mitose pra. Tambm parece haver retroalimentao entre a cromatina replicante e as quinases ciclina-dependentes, fazendo com que a mitose no comece
at que o DNA tenha comeado a replicarse, e somente uma rodada de replicao
normalmente permitida durante a diviso
celular (Chong et al., 1995; Madine et al.,
1995). As molculas que mediam essas trocas esto agora sendo estudadas.
Fator Citosttico
A sntese e a degradao do MPF leva a
ciclagem das clulas. No entanto, se a degradao da ciclina for prevenida, o MPF
permanece ativo e a clula travada na
metfase (Murray et al., 1989). Isso o que
acontece, aparentemente, durante o desenvolvimento do ocito da r. O ocito maduro da r cessa a diviso celular produzindo uma protena chamada fator citosttico (CSF), que mantm o ocito preso na
metfase da segunda diviso meitica (Figura 5.42). Essa protena contm os produtos dos genes c-mos e cdk-2, e parece
agir bloqueando a degradao da ciclina
(veja o Captulo 22). Uma vez que a ciclina
no degradada, MPF permanece ativo, e
Figura 5.42
Ocito
Imaturo
Meiose
I
Meiose
II
Ocito
maduro
Primeira
clivagem
Segunda
clivagem
201
Enquanto os ons de clcio esto ocupados desligando a mitose, os sinais da fertilizao que ativam a protena quinase C
esto estabelecendo condies de interfase: descondensao da cromatina e reforma do envoltrio nuclear (Bement e
Capco, 1991).
Tabela 5.2
Cariocinese e citocinese
Processo
Agente mecnico
Principal
composio protica
Localizao
Principal droga
disruptora
Cariocinese
Citocinese
Fuso mittico
Anel contrtil
Microtbulos de tubulina
Microfilamentos de actina
Citoplasma central
Citoplasma cortical
Colchicina, nocodazola
Citocalasina B
Como foi verificado que a colchicina inibe independentemente vrias funes da membrana, incluindo a osmorregulao e o transporte de ons e
nucleosdeos, nocodazol tornou-se a principal droga usada para inibir processos mediados por microtbulos (veja Hardin, 1987).
202
Figura 5.43
(B)
(A)
Microfilamentos
(anel contrtil)
Centrolo
Microtbulos
Cromossomo
(C)
Zigotos
(A)
Bola de vidro
deslocando o
aparelho mittico
(B)
steres
Interrupo do
sulco de clivagem
203
(D)
Fuso
Figura 5.44
204
(A)
(B)
Figura 5.45
sulco em embries precoces de Xenopus, tambm contm microtbulos curtos, dispostos radialmente. Pensa-se que esses microtbulos poderiam fornecer um caminho
para o movimento de vesculas das membranas em direo ao lugar onde so inseridos
na membrana (Danilchik e Funk, 1996).
Esses processos de clivagem dividem o citoplasma do zigoto em numerosas
clulas. Cada clula pode ter os mesmos genes nucleares, mas seus respectivos
citoplasmas podem diferir significativamente. No prximo captulo veremos como
esses blastmeros se locomovem e interagem um com o outro para iniciar a estrutura do corpo.
LITERATURA CITADA
Cisek, L. J. and Corden, J. L. 1989. Phosphorylation of RNA polyrnerase by the murine homologue of the cell-cycle control protein cdc2.
Nature 339: 679-684
205
Gould, K. and Nurse, P. 1989. Tyrosine phosphorylation of the fission yeast cdc2 protein
kinase regulates entry into mitosis. Nature 342:
39-45.
Graham, C. F. and Kelly, S. J. 1977. Interactions between embryonic cells during early de-
206
New, D. A. T. 1956. The formation of subblastodermic fluid in hens eggs. 1. Embryol. Exp.
Morphol. 43: 221-227.
207
Gastrulao:
Reorganizando as clulas embrionrias
Meu querido amigo..... a vida infinitamente mais complexa do que qualquer coisa que
a mente humana possa imaginar. No ousaramos sequer conceber as coisas que so
meros detalhes da existncia.
A. CONAN DOYLE (1891)
No o nascimento, o casamento ou a morte, mas a gastrulao que verdadeiramente a parte mais importante de nossa vida.
LEWIS WOLPERT (1986)
210
so independentes da celularizao. F. R. Lillie (1902) conseguiu ativar, partenogeneticamente, vulos do aneldeo Chaetopterus e suprimir sua clivagem.
Muitos eventos do desenvolvimento precoce ocorreram mesmo na ausncia
de clulas. O citoplasma do zigoto se separou em regies definidas, e os clios
se diferenciaram nas partes apropriadas do ovo. Ainda mais, o citoplasma claro
externo migrou para baixo em direo regio vegetativa, de uma maneira
muito parecida epibolia das clulas do hemisfrio animal durante o desenvolvimento normal. Isso ocorreu precisamente no momento em que ocorreria a
epibolia durante a gastrulao. Assim, a epibolia pode ser (pelo menos em
alguns aspectos) independente das clulas que formam a regio migratria.
A expanso ou dobramento de uma camada celular deve-se a fatores intrnsecos prprios, ou s foras extrnsecas que a estendem ou a distorcem?
essencial conhecer a resposta a essa pergunta se queremos entender como os
vrios movimentos celulares da gastrulao so integrados. Por exemplo, esto as clulas involutivas puxando as clulas epibolizantes para baixo em sua
direo, ou so os dois movimentos independentes?
Existe uma expanso ativa do tecido total, ou a margem limitante que se
expande e arrasta o resto da camada celular, passivamente?
So as mudanas na forma e na motilidade celular, durante a gastrulao,
conseqncias de mudanas nas propriedades da superfcie celular, tais como
adesividade ao substrato ou a outras clulas?
Considerando essas questes, observaremos os vrios padres de gastrulao encontrados em equinodermos, anfbios, peixes, aves e mamferos*.
Gastrulao em ourio-do-mar
A blstula do ourio-do-mar consiste de uma nica camada de mais ou menos 1000
clulas. Essas clulas derivadas de diferentes regies do zigoto tm tamanhos e propriedades diferentes. As Figuras 6.1 e 6.2 mostram o destino das vrias regies do
zigoto enquanto ele se desenvolve atravs da clivagem e da gastrulao na larva
pluteus, caracterstica dos ourios-do-mar. O destino de cada camada pode ser visto
atravs de seus movimentos durante a gastrulao.
Ingresso do Mesnquima Primrio
FUNO DAS CLULAS PRIMRIAS DO MESNQUIMA. Logo aps a ecloso
da blstula da membrana de fecundao, o seu hemisfrio vegetal comea a se espessar e achatar (Figura 6.2, 9 horas). No centro dessa placa vegetativa achatada, um
aglomerado de pequenas clulas comea a se modificar. Essas clulas apresentam
movimentos de vibrao em suas superfcies internas, estendendo e contraindo longos e finos processos (30x5 m) chamados filopdios. As clulas ento se dissociam
da monocamada epitelial e ingressam na blastocele (Figura 6.2, 9-10 horas). Essas
clulas so chamadas de mesnquima primrio e so derivadas dos micrmeros. As
64 ou mais clulas mesenquimatosas primrias do ourio-do-mar so as descendentes
dos quatro blastmeros que se formaram pela quarta clivagem assimtrica.
Gustafson e Wolpert (1961) usaram filmes com exposio contnua para seguir os
movimentos microscpicos das clulas mesenquimatosas dentro da blastocele. No
*A discusso da gastrulao de Drosophila ser transferida para o Captulo 14, quando ela ocorre
no contexto da formao do eixo. Lembre-se do alerta feito pelo pesquisador de gastrulao, Ray
Keller (comunicao pessoal) Estudantes NO deveriam ler esse material apressadamente, ao
contrrio uma cena tpica aquela em que um pobre coitado est debruado sobre este texto s 2.30
horas da madrugada com uma xcara de caf, examinando desesperadamente as figuras para ver se ele
ou ela podem entender o que est se passando. Gastrulao (como diz Wolpert na citao no
comeo deste captulo) a poca mais importante da sua vida. Vale a pena examin-la criticamente
e apreci-la vagarosamente.
Animal
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
(F)
211
(G)
Mesmeros
Macrmeros
(H)
veg1
veg2
Micrmetros
Vegetal
Tufo ciliar
(I)
(J)
Mesnquima
secundrio
(K)
(L)
(Vista lateral)
Estomodeu
(boca)
Mesnquima
primrio
(M)
Endoderma
invaginante
Bastonetes
esquelticos
(mesoderma)
Figura 6.1
Desenvolvimento normal do ourio-do-mar, seguindo o destino das camadas celulares da blstula. (A-F) Clivagem at o estgio de 60 clulas (omitindo o estgio de 2-clulas). (G) Blstula
precoce com clios. (H) Blstula tardia com tufo ciliar e placa vegetal achatada. (I) Blstula com
mesnquima primrio. (J) Gstrula com mesnquima secundrio. (K) Larva em estgio prismtico.
(L,M) Larva pluteus. Os destinos do citoplasma zigtico podem ser seguidos pelas variaes
no sombreamento. (N) Fotomicrografia de uma larva pluteus viva de ourio-do-mar. (A-M
segundo Hrstadius, 1939; N cortesia de G. Watchmaker.)
Envoltrio
ectodrmico
Intestino
(endoderma)
(Vista ventral)
(N)
Boca
Bastonetes
esquelticos
9 hs.
9.5 hs.
10 hs.
10.5 hs.
11 hs.
11.5 hs.
12 hs.
13 hs.
nus
Figura 6.2
15 hs.
13.5 hs.
17 hs.
18 hs.
212
(A)
(B)
Figura 6.3
Formao dos cordes sinciciais por clulas mesenquimatosas do ourio-do-mar. (A) Clulas
mesenquimatosas primrias da gstrula precoce se alinham e se fundem para depositar a matriz
da espcula de carbonato de clcio. (B) microfotografia eletrnica de varredura de espculas
formadas pela fuso das clulas mesenquimatosas primrias para formar os cordes sinciciais.
(C) Anel de clulas mesenquimatosas em volta do arquntero (intestino primitivo). A metade
animal e todo o arquntero foram removidos. (D) Colocao das clulas mesenquimatosas
primrias na larva precoce de Lytechinus variegatus. (A e D de Ettensohn, 1990; B e C de
Morrill e Santos, 1985; todas as fotografias, cortesia dos autores.)
(C)
Agregados Ventrolaterais
Cadeia
ventral
Espcula
(A)
(B)
Figure 6.4
Fotografias ao estreo-microscpio eletrnico de varredura de clulas mesenquimatosas primrias dentro da matriz extracelular de fibrilas da blastocele. (A) Clulas mesenquimatosas primrias enredadas na matriz extracelular da gstrula precoce de Strongylus centrotus. (B,C) migrao de clulas mesenquimatosas em estgio de gstrula. As fibrilas da matriz extracelular da
blastocele ficaram paralelas ao eixo animal-vegetal e esto intimamente associadas com as clulas mesenquimatosas primrias. (de Cherr et al., 1992; cortesia de G. Cherr.)
Enquanto outras clulas mantm sua forte ligao camada hialina e s clulas vizinhas, as precursoras do mesnquima primrio perdem sua afinidade a essas estruturas
(para aproximadamente 2% do valor original), enquanto que sua afinidade aos componentes da lmina basal e matriz extracelular aumenta 100 vezes. Essa mudana na
afinidade faz com que os micrmeros percam suas ligaes com a camada hialina
externa e com as clulas circundantes e, atrados pela lmina basal, migram para o
interior da blastocele (Figura 6.5). As modificaes na afinidade celular foram
Hialino
Monocamadas de
clulas gastrulares
Lmina basal
5.8 x 10-5
6.8 x 10-5
4.8 x 10-7
1.2 x 10-7
1.2 x 10-7
1.5 x 10-5
5.0 x 10-5
5.0 x 10-5
5.0 x 10-7
a
Clulas testadas foram colocadas em placas contendo hialino, lmina basal extracelular, ou
monocamadas celulares. As placas foram invertidas e centrifugadas a vrias foras para deslocar
as clulas. A fora de deslocamento calculada pela fora centrfuga necessria para remover as
clulas teste do substrato.
(C)
213
214
Clulas
Mesenquimatosas primrias
Matriz
extracelular fibrilar
Blastocele
Lmina basal
(A)
Camada
hialina
Clios
(B)
(C)
(D)
(E)
Figure 6.5
(F)
(A)
215
Figura 6.6
(B)
e contribui para a formao das espculas embrionrias (Prancha 35). Se clulas mesenquimatosas primrias de embries mais velhos so injetadas em gstrulas mais jovens,
elas atrasaro sua diferenciao, migraro como as clulas mais jovens e sero incorporadas normalmente no mesnquima do hospedeiro. Alm disso, se todas as clulas
mesenquimatosas do hospedeiro so removidas antes da injeo de clulas mesenquimatosas mais velhas, essas repetiro os estgios iniciais de sua migrao, formando um
anel mesenquimatoso e o esqueleto, normalmente (Ettensohn, 1990). Considera-se que
essa informao posicional fornecida pelas futuras clulas ectodrmicas e suas lminas basais (von bisch, 1939; Harkey e Whiteley, 1980). Somente clulas mesenquimatosas primrias (e no outros tipos de clulas ou partculas de ltex) so capazes de
responder a esses sinais modeladores (Ettensohn e McClay, 1986). Miller e colegas
(1995) observaram a existncia de filopdios extremamente delgados (0.3 m de dimetro) no mesnquima esqueletognico (skeletonogenic); esses parecem explorar e sentir
a parede da blastocele (Figura 6.7). Esses filopdios contm actina e no so considerados como locomotores. Em lugar disso, so considerados como sensores do ambiente,
da mesma maneira que os filopdios nas pontas dos cones de crescimento axonal. Essas
extenses delgadas podem ser responsveis pela captao de sinais modeladores
dorsoventral e animal-vegetal, a partir do ectoderma (Malinda et al., 1995).
Primeiro estgio da invaginao do arquntero
Enquanto se forma o anel de clulas mesenquimatosas primrias no plo vegetal da
blastocele, mudanas importantes esto ocorrendo nas clulas que permanecem na
Figura 6.7
216
placa vegetativa. Essas clulas permanecem ligadas umas s outras e camada hialina
do ovo, e se movem para ocupar os vazios deixados pelo ingresso do mesnquima;
portanto, a placa vegetal se achata ainda mais. Verifica-se, tambm, que a placa vegetal
se dobra para dentro e se estende por um quarto ou at a metade do seu caminho para
a blastocele (veja Figura 6.2, 10.5-11.5 horas; Figura 6.8A). Ento, repentinamente, a
invaginao cessa. A regio invaginada chamada de arquntero (intestino primitivo)
e sua abertura no plo vegetal chamada de blastporo.
Quais foras atuam para invaginar essas clulas? Lane e colaboradores (1993)
mostraram que o envergamento semelhante aquele produzido pelo aquecimento de
uma faixa bimetlica. A camada hialina , na verdade, formada de duas lminas: uma
externa, formada primariamente de protena hialina, e uma interna, composta de protenas fibropelinas* (Hall e Vacquier. 1982; Bisgrove et al., 1991). As clulas da placa
vegetal (e somente essas clulas) secretam um proteoglicano de condroitina sulfato
na lmina interna da camada hialina, diretamente abaixo delas. Essa molcula
higroscpica (absorvente de gua) incha a lmina interna mas no a externa. Isso
causa o envergamento da camada hialina (Figura 6.8B,C). Um pouco mais tarde, uma
*Fibropelinas so armazenadas em grnulos secretores dentro dos ocitos. So secretadas desses
grnulos aps a liberao da protena hialina pela exocitose granular cortical. No estgio de blstula,
as fibropelinas j formaram um envoltrio, tipo rede, sobre a superfcie do embrio.
(A)
Figura 6.8
Invaginao da placa vegetal. (A) Invaginao da placa vegetal de Lytechinus variegatus vista
por micrografia eletrnica de varredura da superfcie externa da gstrula precoce. O blastporo
est claramente visvel. (B) a camada hialina consiste de lminas internas e externas. Microvilosidades da placa vegetal estendem-se atravs da camada hialina e seu citoplasma contm
vesculas secretoras que armazenam um proteoglicano de sulfato de condroitina (CSPG). (C)
Os grnulos de armazenamento secretam o proteoglicano para dentro da lmina interna da
camada hialina. O proteoglicano absorve gua e entumece a lmina interna, enquanto a lmina
externa, ao qual est fixado, no entumece. Isso ocasiona a curvatura para dentro do envoltrio
hialino e do epitlio a ele ligado. (A de Morrill e Santos, 1985, cortesia de J. B. Morrill e C
segundo Lane et al., 1993.)
(B)
(C)
Blastocele interior
Camada hialina
Lmina interna
Lmina externa
Microvilosidades
Vesculas secretoras
com proteoglicano de
sulfato de condroitina
(CSPG)
Gastrulao precoce
Gastrulao tardia
217
Figura 6.9
blastporo
segunda fora resultante dos movimentos das clulas epiteliais adjacentes placa
vegetal, pode facilitar essa invaginao puxando para dentro a camada envergada
(Burke et al., 1991).
Segundo e terceiro estgios da invaginao do arquntero
A invaginao das clulas vegetais ocorre em trs estgios discretos. Aps uma breve
pausa, comea a segunda fase da formao do arquntero. Durante essa fase, o
arquntero se estende dramaticamente, algumas vezes triplicando seu comprimento.
No processo de extenso, o largo e curto intestino rudimentar transformado em um
tubo longo e delgado; mas no so formadas novas clulas (veja Figura 6.2, 12 horas;
Figura 6.9). Para produzir essa extenso, as clulas do arquntero se reorganizam
migrando umas sobre as outras e sofrendo um achatamento (Ettensohn, 1985; Hardin
e Cheng, 1986). Esse fenmeno, onde clulas se intercalam para estreitar o tecido e, ao
mesmo tempo, lev-lo adiante chamado extenso convergente.
Em pelo menos algumas espcies de ourio-do-mar, ocorre um terceiro estgio no
alongamento do arquntero. Essa ltima fase iniciada pela tenso propiciada pelas
clulas mesenquimatosas secundrias, que se formam na ponta do arquntero e l
permanecem (veja Figura 6.2, 13 horas; Figura 6.10). Os filopdios se estendem dessas
clulas atravs do fluido da blastocele e fazem o contacto com a superfcie interna da
Figura 6.10
(A)
(B)
Estgio de gstrula intermediria do ouriodo-mar Lytechinus pictus, mostrando extenses de filopdios do mesnquima secundrio estendendo-se da ponta do arquntero at
a parede da blastocele. (A) Clulas mesenquimatosas estendendo filopdios da ponta
do arquntero. (B) Cabos de filopdios
conectando a parede da blastocele ponta do
arquntero. A tenso nos cabos pode ser avaliada pela trao exercida sobre a parede da
blastocele no ponto de fixao. (Fotografias
cortesia de C. Ettensohn.)
218
Gastrulao em peixes
A transio da blstula intermediria
e a aquisio de motilidade celular
Durante o dcimo ciclo de clivagem do peixe-zebra, as divises celulares perdem
sua sincronia, novos genes so expressos e as clulas se tornam mveis. Essa
transio da blstula intermediria (MBT) tambm evidente em rs e em Drosophila. Como discutido no Captulo 5, a MBT parece ser regulada pela relao entre
cromatina e citoplasma. Peixes haplides entram na MBT um ciclo mais tarde;
peixes tetraplides entram um ciclo antes (Kane e Kimmel, 1993). Parece que alguma coisa na cromatina est removendo por titulao alguma substncia (at
agora desconhecida) do citoplasma.
O primeiro movimento celular a epibolia das clulas blastodrmicas sobre o
vitelo. Na fase inicial, as clulas blastodrmicas internas se movem para o exterior e se
intercalam com as clulas mais superficiais (Warga e Kimmel, 1990). Mais tarde, as
clulas se movem sobre a superfcie do vitelo envolvendo-o completamente (Figura
6.11). Esse movimento no devido a um arrasto ativo dos blastmeros. Pelo contrrio, o movimento propiciado pela expanso autnoma da camada sincicial do vitelo
(YSL) dentro do citoplasma do hemisfrio animal. A camada envolvente (EVL) est
Figura 6.11
(A)
30% DE EPIBOLIA (4.7 HS)
Plo animal
Camada envolvente
219
Camada profunda
Camada sincicial
do vitelo
Ventral
Dorsal
Clula do vitelo
Ncleo do vitelo
Plo vegetal
(B)
ESCUDO (6.0 HS.)
(C)
Ingresso celular
Plo animal
Epiblasto
Hipoblasto
Hipoblasto
Camada envolvente
Escudo
Epiblasto
Ventral
Dorsal
Clulas em involuo
Clulas em noinvoluo
Sinal indutor
mesodrmico
Plo Vegetal
(D)
Sinais indutores
mesodrmicos
e dorsais
Camada sincicial
do vitelo
Grnulo do vitelo
(E)
Anterior
Plo animal
Mesoderma
dorsal
Camada
envolvente
Plo animal
Regio ceflica
Camada
envolvente
Somito #1
Ventral
Dorsal
Ventral
Dorsal
Mesoderma
Ectoderma,
neuroectoderma
Plo vegetal
Mesendoderma: precursores
para mesoderma e endoderma
Coto caudal
Posterior
Plo animal
Endoderma
(90% EPIBOLIA (9 HS)
Regio do
tronco
fortemente ligada YSL e arrastada junto com ela. As clulas mais profundas do
blastoderma enchem o espao entre a YSL e a EVL enquanto a epibolia se desenvolve.
Isso pode ser demonstrado cortando a ligao entre YSL e EVL. Quando isso feito,
as clulas blastodrmicas retornam ao topo do vitelo enquanto YSL continua sua
expanso ao redor da clula do vitelo (Trinkaus, 1984b, 1992). A expanso de YSL tem
como base uma rede de microtbulos em sua estrutura, e radiao ou drogas que
220
(A)
Figura 6.12
Plo animal
Extenso
Escudo
embrionrio
Convergncia
Involuo
Epibolia
Clula do
vitelo
(B)
(C)
(D)
(E)
(A)
(B)
Vidro para
segurar o
embrio
Discos de gar
com corante
(C)
Manchas de
corante no embrio
Lbio dorsal
do blastporo
Embrio
Seco em
plano de
viso (E)
Figura 6.13
Colorao vital de embries de anfbios. (A) Mtodo de Vogt para marcao de clulas especficas da superfcie embrionria com corantes vitais. (B-D) Vistas da superfcie do corante em
embries sucessivos. (E) Embrio de trito dissecado no plano mediano para mostrar clulas
coradas no interior. (Segundo Vogt, 1929.)
ao escudo embrionrio (Trinkaus, 1992). As clulas hipoblsticas do escudo embrionrio convergem e se estendem anteriormente, finalmente estreitando-se ao longo da
linha dorsal mdia do hipoblasto. Esse o cordomesoderma, o primrdio da notocorda
(Figura 6.12B,C). As clulas adjacentes ao cordomesoderma, as clulas adaxiais, so
as precursoras dos somitos mesodrmicos (Figura 6.12D,E). A convergncia e a extenso no epiblasto traz as clulas presuntivas do crebro de todo o epiblasto para a linha
mdia dorsal onde formam a quilha neural. O resto do epiblasto se torna a pele do
peixe. O mapa de destino do peixe-zebra, ento, no to diferente daquele da r ou
outros vertebrados (como logo veremos). Se abrirmos, conceitualmente, uma blstula
de Xenopus no plo vegetal e esticarmos a abertura em um anel marginal, o mapa de
destino resultante se parece muito com aquele do embrio do peixe-zebra quando
metade do vitelo estava coberto pelo blastoderma (Langeland e Kimmel, 1997).
Gastrulao de anfbios
O estudo da gastrulao em anfbios ao mesmo tempo uma das mais antigas e uma
das mais novas reas da embriologia experimental; mesmo considerando que gastrulao de anfbios foi estudada extensamente no sculo passado, a maior parte de
nossas teorias relacionadas aos mecanismos do movimento no desenvolvimento,
foram revisadas na dcada passada. O estudo da gastrulao em anfbios foi complicado pelo fato de existir mais de um tipo de gastrulao nos anfbios. Espcies diferentes empregam diferentes maneiras para atingir o mesmo objetivo (Smith e Malacinski,
1983; Lundmark, 1986). Nos ltimos anos, a pesquisa mais intensa se concentrou em
Xenopus, portanto, daremos nfase ao seu processo de gastrulao.
Movimentos celulares durante a gastrulao de anfbios
As blstulas de anfbios tm as mesmas tarefas que seus companheiros, equinodermos e peixes, ou seja, trazer para dentro aquelas reas destinadas a formar os rgos
endodrmicos, envolver o embrio com clulas capazes de formar o ectoderma e colocar as clulas mesodrmicas no lugar apropriado entre elas. Os movimentos pelos
quais isso conseguido podem ser visualizados pela tcnica de colorao vital. Vogt
(1929) saturou fragmentos de gar com corante, como vermelho neutro ou sulfato de
azul do Nilo, os quais coram mas no danificam as clulas embrionrias. Esses fragmentos corados de gar foram pressionados contra a superfcie da blstula e uma
parte do corante foi transferida para as clulas contatadas (Figura 6.13). Os movimentos de cada grupo de clulas coradas foram acompanhados atravs da gastrulao, e
(D)
(E)
221
222
Figura 6.14
Epiderme
Placa neural
Endoderma
acima do
blastporo
Mesoderma
lateral
Endoderma
abaixo do blastporo
(A) EXTERIOR
Notocorda
Blastporo
Somitos
Blastporo
(B) INTERIOR
223
Clulas
superficiais
Clulas
profundas
(A)
Mesoderma
Blastocele
deslocada
(B)
Endoderma
(C)
Plo vegetal
Mesoderma dorsal
Ectoderma
Arquntero
Notocorda
Lbio dorsal
do blastporo
Mesnquima
Ectoderma
Notocorda
Lbio dorsal
do blastporo
Lbio lateral
do blastporo
Lbio lateral
do blastporo
Endoderma
(D)
Ectoderma
Tampo do
vitelo
Lbio ventral
do blastporo
(E)
Endomesoderma
anterior
(F)
Mesoderma
ventral
Figura 6.15
(A)
(B)
Figura 6.16
Estrutura do lbio do blastporo. (A) Diagrama de clulas de uma seo da gastrulao do embrio da salamandra, mostrando a
extenso das clulas-garrafa do blastporo.
(B) Viso de superfcie de um lbio dorsal
precoce do blastporo de Xenopus. A diferena de tamanho entre os blastmeros animais e vegetais est claramente aparente. (C)
Detalhe da regio onde as clulas do hemisfrio animal esto involuindo atravs do lbio do blastporo. (A segundo Holtfreter,
1943; B e C, micrografias de varredura eletrnica cortesia de C. Phillips.)
(C)
Clulasgarrafa
Blastporo
224
(A)
(B)
Lbio dorsal
i
ii
iii
Obturador
do vitelo
Lbio lateral
Lbio do
blastporo
iv
Lbio ventral
Obturador
do vitelo
Figura 6.17
Normal
Girada
Porcentagem de embries
Essa rotao faz com que o eixo animal-vegetal da superfcie do ovo se desloque 30o
relativo ao eixo animal-vegetal do citoplasma interno. Dessa maneira, um novo estado de simetria adquirido. Enquanto que o vulo era radialmente simtrico em
relao ao eixo animal-vegetal, o ovo fecundado agora tem um eixo dorsoventral e
bilateralmente simtrico (tem lados direito e esquerdo). O citoplasma interno tambm se move, e microscopia de fluorescncia de embries precoces mostrou que os
padres citoplasmticos das clulas presuntivas dorsais so diferentes daqueles
das clulas presuntivas ventrais (Prancha 7).
Esses movimentos citoplasmticos ativam o citoplasma oposto ao ponto de
entrada do espermatozide, a iniciar a gastrulao (Figura 6.18). O lado pelo qual
entra o espermatozide marca a futura superfcie ventral do embrio; o lado oposto,
onde se inicia a gastrulao, marca o futuro dorso (costas) do embrio (Gerhart et al.,
1981; Vincent et al., 1986). Mesmo que o espermatozide no seja necessrio para
induzir esses movimentos no citoplasma do ovo, ele importante na determinao
da direo dessa rotao. Se um ovo artificialmente estimulado anucleado, a rotao cortical ainda se d no tempo correto. Entretanto, a direo desse movimento
imprevisvel. (De fato, em ovos disprmicos existe uma nica direo de rotao.) O
espermatozide parece fornecer um sinal espacial que orienta a rotao autnoma
do citoplasma, mas a rotao citoplasmtica que essencial para o futuro desenvolvimento. Alm disso, se essa rotao cortical bloqueada, no h o desenvolvimento dorsal, e o embrio morre como uma massa de clulas ventrais (primariamente
intestinais) (Vincent e Gerhart, 1987). A direo do movimento citoplasmtico determina qual lado ser o dorsal e qual ser o ventral.
A direo preferencial fornecida pelo ponto de entrada do espermatozide pode
ser sobrepujada por um redirecionamento mecnico da relao espacial entre os
citoplasmas cortical e subcortical. Quando se impede a rotao do ovo (por imerso
em um polissacardeo que provoca o colapso do espao perivitelino entre o ovo e o
envoltrio de fertilizao) ele pode sofrer uma rotao de 90o de modo que o eixo
animal-vegetal fique horizontal e no vertical e o ponto de entrada do espermatozide voltado para cima (Gerhart et al., 1981; Kirschner e Gerhart, 1981; Cooke, 1986).
Quando ovos fecundados so inclinados dessa maneira por trinta minutos, partindo
da metade do primeiro ciclo de clivagem, o citoplasma gira de tal maneira que quase
todos os embries iniciam a gastrulao no mesmo lado da entrada do espermatozide (veja Figura 6.18).
A discusso precedente sugere que deve ser possvel ter dois stios de iniciao
de gastrulao se houver a combinao de rotao orientada pelo espermatozide
com uma rotao do ovo artificialmente induzida. Black e Gerhart (1985) permitiram a
rotao inicial orientada pelo espermatozide, mas em seguida imobilizaram os ovos
em gelatina e os centrifugaram levemente, de modo que o citoplasma interno se movesse para o ponto de entrada do espermatozide. Quando foi permitido que os ovos
centrifugados se desenvolvessem em gua normal, apareceram dois stios de gastrulao, levando ao aparecimento de larvas gmeas ligadas (Figura 6.19). A hiptese de
Black e Gerhart (1986) que tal produo de gmeos causada pela formao de duas
reas de interao: um eixo se forma onde a rotao cortical normal deu origem s
interaes citoplasmticas no plo vegetal da clula; o outro eixo se forma onde o
citoplasma dirigido pela centrifugao interage com os componentes do plo vegetal.
Gmeos tambm podem ser produzidos em gravidade normal, colocando o lado do
ovo onde penetra o espermatozide voltado para cima, aps remover o envoltrio de
fertilizao (Gerhart et al., 1981).
A possibilidade de se obter dois lbios funcionais dos blastporos tambm sugere
que no h nada especial a respeito do crescente cinzento, onde se observa pela
primeira vez o incio da gastrulao. Na verdade, os fatores indutores da gastrulao
parecem ser criados pelas interaes dos citoplasmas animal e vegetal, interaes
essas que, provavelmente, ativam algum componente do citoplasma vegetal. Gimlich
e Gerhart (1984) realizaram uma srie de experimentos de transplante que confirmaram
225
Figura 6.18
226
(A)
(B)
Figura 6.19
a hiptese de que os fatores que iniciam a gastrulao originalmente esto no citoplasma profundo das clulas vegetativas dorsais, e no no crescente cinzento. Eles
demonstraram que em um embrio de Xenopus, no estgio de 64 clulas, os trs
blastmeros vegetais mais dorsais so capazes de induzir a formao do lbio dorsal
do blastporo e de um eixo dorsal completo em embries hospedeiros irradiados com
luz ultravioleta (que, de outra maneira, no seriam capazes de iniciar a gastrulao;
Figura 6.20A). Alm disso, esses trs blastmeros, situados abaixo da regio do
prospectivo lbio dorsal, podem tambm induzir uma invaginao secundria e um
eixo quando transplantados para o lado ventral de um embrio normal, no estgio de
64 clulas, no irradiado (Figura 6.20B). Esse pequeno grupo de blastmeros vegetais
permite a invaginao de clulas marginais adjacentes e a formao do eixo mesodrmico dorsal do embrio. Holowacz e Elinson (1993) observaram que o citoplasma
cortical, das clulas vegetativas dorsais do embrio de Xenopus, no estgio de 64
clulas, era capaz de induzir a formao de eixos secundrios quando injetado em
clulas vegetativas ventrais. Nem o citoplasma cortical de clulas animais e nem o
citoplasma profundo das clulas ventrais puderam induzir esses eixos.
Parece, ento, que os rearranjos internos do citoplasma, provavelmente orientados pela entrada do espermatozide, so responsveis pela distribuio assimtrica
de fatores subcelulares. Essa assimetria cria uma distino dorsoventral no ovo que,
em ltima instncia, dirige o posicionamento do blastporo acima de um conjunto de
blastmeros vegetais e oposto ao ponto de entrada do espermatozide. As molculas
que podem estar envolvidas na formao do stio vegetal de iniciao da gastrulao
(o centro de Nieuwkoop) sero discutidas no Captulo 15.
Movimentos celulares e a construo do arquntero
O INCIO DA GASTRULAO. A gastrulao em anfbios iniciada quando um
(A)
Ponto de
entrada do
espermatozide
DOADOR
NORMAL
227
(B)
RECEPTOR
IRRADIADO POR UV
Ponto de entrada
do espermatozide
DOADOR
NORMAL
RECEPTOR
NORMAL
Ponto de
entrada do
espermatozide
UV
Sem transplante
Transplante
Pea embrionria
ventral carente de
eixo corporal
Novo local de
gastrulao e forma
de eixo corporal
Figura 6.20
de recombinao de Holtfreter, nos quais clulas da zona marginal dorsal (que dariam
origem ao lbio dorsal do blastporo) foram combinadas com o tecido endodrmico
interno. Quando as clulas da zona marginal dorsal foram removidas e colocadas no
prospectivo tecido endodrmico interno, as clulas precursoras do blastporo formaram clulas garrafas e se aprofundaram abaixo da superfcie do endoderma interno
(Figura 6.21). Mais ainda, ao se aprofundarem, criaram uma depresso reminiscente do
blastporo precoce. Sendo assim, Holtfreter sugeriu que a habilidade de invaginar
com profundidade para dentro do endoderma uma propriedade inata das clulas da
zona marginal dorsal.
Implante
Clulas
endodrmicas
Sulco no blastporo
Figura 6.21
228
(B)
(C)
Clulas
marginais
profundas
(D)
Endoderma
Clulas
garrafa
Intercalao
radial de clulas
profundas
Clulas
marginais
superficiais
Futuro
mesoderma
posterior
IMZ
profunda
Clulasgarrafa
Lbio dorsal
do blastporo
Futuro
mesoderma anterior
Blastporo
Morfologia de
mudanas das
clulas profundas
O lbio se
extende lateral
e vegetalmente
Clulas garrafa
(E)
Precursores do
mesoderma ceflico do
endoderma da faringe
(F)
Ectoderma
Precursores do
mesoderma ceflico do
endoderma da faringe
Plo animal
Clulas garrafa
re-espalhadas
Blastocele
IMZ superficial
movendo-se em
direo do plo animal
Endoderma
Intercalao
medianolateral
Figure 6.22
baixo dos precursores mesodrmicos posteriores e comear a migrar no teto da blastocele (Hardin e Keller, 1988).
Entretanto, aps comear esses movimentos, as clulas garrafa do Xenopus no
so mais necessrias. Quando as clulas garrafa so removidas aps sua formao, a
involuo, a formao do blastporo e o fechamento continuam. O fator principal no
movimento das clulas para dentro do embrio parece ser a involuo das clulas
marginais subsuperficiais mais do que as superficiais. Parece que essas clulas
subsuperficiais ou clulas da zona marginal involutiva profunda se viram para dentro
e migram em direo ao plo animal, ao longo das superfcies internas das clulas
profundas remanescentes (Figura 6.22C-E), e que a camada superficial forma o revestimento do arquntero unicamente porque ela est ligada s clulas profundas, que
esto migrando ativamente. O movimento das clulas garrafa mais profundamente
dentro do embrio depende da sua ligao s clulas profundas subjacentes. A remoo das clulas garrafa no afeta a involuo das clulas profundas ou das clulas
superficiais da zona marginal para dentro do embrio, mas a remoo das clulas
marginais dorsais profundas e sua substituio por clulas do hemisfrio animal (que
normalmente no sofrem involuo) interrompe a formao do arquntero.
A FORMAO DO MESODERMA DURANTE A GASTRULAO DE XENOPUS
229
230
Informaes adicionais
&
Especulaes
Figura 6.23
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
(A)
Plo animal
231
Figura 6.24
(B)
AP
A direo da migrao das clulas da zona marginal dorsal (DMZ) depende da orientao da
matriz extracelular do teto da blastocele. (A)
Explantes do teto da blastocele do blastforo
(BP) para o plo animal (AP) foram dissecados de embries de salamandra em estgio precoce de gastrulao e colocados em placas plsticas. A matriz extracelular aderiu placa, e o
tecido foi ento removido. Um explante menor de uma gstrula precoce, contendo clulas
da DMZ, foi ento colocado sobre essa matriz, com o seu prprio eixo perpendicular
aquele da matriz. (B) Clulas da DMZ do
explante migraram para o plo animal da matriz. A linha pontilhada indica a borda original
do explante, e a flecha branca representa seu
eixo blastporo-plo animal. (de Shi et al.,
1989, fotografia cortesia dos autores.)
232
Epibolia do ectoderma
Enquanto a involuo est ocorrendo no lbios do blastporo, os precursores
ectodrmicos esto se expandindo sobre todo o embrio. Keller (1980) e Keller e
Schoenwolf (1977) usaram microscopia eletrnica de varredura para observar as modificaes tanto nas clulas superficiais como nas clulas profundas das regies
animal e marginal. O mecanismo principal de epibolia na gastrulao do Xenopus
parece ser um aumento no nmero de clulas (atravs de diviso), acoplado a uma
concomitante integrao de vrias camadas profundas em uma s (Figura 6.25). Durante a gastrulao precoce, trs rodadas de diviso celular aumentam o nmero de
camadas de clulas profundas no hemisfrio animal. Ao mesmo tempo, completa
integrao de numerosas clulas profundas em uma camada tambm ocorre. A camada
mais superficial se expande por diviso e achatamento celular. O espalhamento de
clulas nas zonas marginais dorsal e ventral, se d provavelmente pelo mesmo mecanismo, ainda que mudanas na forma celular parecem ter um papel mais importante do
que no hemisfrio animal. O resultado dessas expanses a epibolia das clulas
superficiais e profundas do plo animal e regies marginais no involutivas sobre a
superfcie do embrio (Keller e Danilchik, 1988). A maior parte das clulas da regio
marginal, como mencionado anteriormente, involuem para se juntar corrente de clulas mesodrmicas dentro do embrio.
Gastrulao no Xenopus uma orquestrao de vrios eventos distintos. A primeira indicao de gastrulao envolve a invaginao local das clulas garrafa do
endoderma na zona marginal, em tempo e lugar precisamente definidos. Em seguida, a
involuo das clulas marginais atravs do lbio do blastporo, comea a formao
do arquntero. Essas clulas involutivas, na margem anterior do manto mesodrmico,
migram ao longo da superfcie interna do teto do blastporo, e o prospectivo cordomesoderma atrs delas, se estreita e se alonga posteriormente, por extenso convergente, na poro dorsal do embrio. Ao mesmo tempo, as clulas precursoras ectodrmicas epibolizam vegetalmente por diviso celular e pela integrao de camadas celulares previamente independentes. O resultado desses movimentos celulares o posicionamento adequado das trs camadas germinativas em preparao para sua diferenciao em rgos do corpo. Estudos moleculares (a serem discutidos no Captulo 15)
esto comeando a nos dar pistas relacionadas a mecanismos pelos quais as clulas
so informadas de como comear e finalizar essas migraes
Estgio
Figura 6.25
233
Gastrulao em aves
Generalidades sobre gastrulao em aves
A clivagem em embrio de aves cria um blastodisco acima de um enorme volume de
vitelo. Essa massa subjacente e inerte de vitelo impe vrias restries aos movimentos celulares, e a gastrulao em aves parece, primeira vista, ser muito diferente
daquela do ourio-do-mar ou da r. Realmente, logo veremos que existem numerosas
similaridades entre a gastrulao em aves e as gastrulaes que j estudamos. Alm
disso, veremos que embries de mamferos - que no tem vitelo- retm movimentos de
gastrulao muito parecidos com aqueles dos embries de aves e rpteis.
FORMAO DO HIPOBLASTO E EPIBLASTO. As clulas centrais do blastodisco
das aves so separadas do vitelo por uma cavidade subgerminativa e parecem mais
claras - por isso, o centro do blastodisco chamado de rea pelcida. Em contraste, as
clulas da margem da rea pelcida parecem opacas, devido a seu contato com o
vitelo, formam a rea opaca (Figura 6.26). Enquanto a maioria das clulas permanece na
superfcie formando o epiblasto, certas clulas migram individualmente para a cavidade subgerminativa, para formar as ilhas de polinvaginao (hipoblasto primrio), um
arquiplago de aglomerados desconectados contendo cada um de 5 a 20 clulas (veja
Figuras 6.26 e 5.33). Pouco tempo depois, uma lmina de clulas da margem posterior
do blastoderma (crescente de Koller e a zona marginal atrs dele) migra em direo
anterior para se juntar s ilhas de polinvaginao e formar o hipoblasto secundrio
(Eyal-Giladi et al.,1992). O blastoderma de duas camadas (epiblasto e hipoblasto) tem
as camadas unidas na margem da rea opaca, e o espao entre as camadas uma
blastocele. Assim, a estrutura do blastodisco das aves no diferente da blstula de
anfbios ou equinodermos.
Blastoderma
Epiblasto
Anterior
Zona marginal
posterior
rea opaca
Espao subgerminativo
Vitelo
Clulas do hipoblasto
delaminando-se do epiblasto
rea pelcida
Figura 6.26
rea opaca
rea opaca
Epiblasto
Blastocele
234
trulao em aves, rpteis e mamferos a linha primitiva. Essa linha visvel inicialmente como um espessamento de uma camada de clulas do epiblasto, na regio
posterior do embrio, imediatamente anterior ao crescente de Koller (Figura 6.27A).
Esse espessamento causado pelo ingresso de clulas mesodrmicas do epiblasto
para dentro da blastocele, e pela migrao de clulas da regio lateral do epiblasto
posterior em direo ao centro (Figura 6.27B; Vakaet, 1984; Bellairs, 1986; Eyal-Giladi
et al., 1992). medida que a rea espessada se estreita, ela se move anteriormente e
se contrai para formar a linha primitiva definitiva. Essa linha se estende em 60-75%
do comprimento da rea pelcida e marca o eixo ntero-posterior do embrio (Figura
6.27C-E). Enquanto as clulas convergem para formar a linha primitiva, se forma uma
depresso na linha. Essa depresso chamada fenda primitiva, e serve como um
blastporo, atravs do qual as clulas migratrias passam para a blastocele. Assim,
a fenda primitiva anloga ao blastporo de anfbios. Na ponta anterior da linha
primitiva h um espessamento regional de clulas chamado ndulo primitivo ou
ndulo de Hensen. O centro desse ndulo contm uma depresso em forma de funil
(algumas vezes chamada cova primitiva), atravs da qual as clulas passam para a
blastocele. O ndulo de Hensen o equivalente funcional do lbio dorsal do
blastporo de anfbios. [gast1.html]
To logo se forma a linha primitiva, as clulas do epiblasto comeam a migrar sobre
os lbios dessa e para dentro da blastocele (Figura 6.28). De maneira similar ao
blastporo de anfbios, a linha primitiva tem uma populao celular se modificando
constantemente. Clulas migrando atravs do ndulo de Hensen passam para dentro
da blastocele, migram anteriormente formando o intestino anterior, o mesoderma da
cabea e a notocorda; clulas passando atravs das pores laterais da linha primitiva
do origem maioria dos tecidos endodrmicos e mesodrmicos (Schoenwolf et al.,
1992). Em contraste com o mesoderma de Xenopus, o qual migra como lminas de
clulas para a blastocele, clulas entrando no embrio de aves o fazem individualmente. Em lugar de formar uma lmina de clulas fortemente organizadas, a populao
ingressante cria um mesnquima fracamente conectado. Alm disso, no se forma um
verdadeiro arquntero na gstrula de aves.
Enquanto as clulas entram na linha primitiva, essa se estende na direo da futura
regio da cabea. Ao mesmo tempo, as clulas do hipoblasto secundrio esto continuando a migrar da margem posterior do blastoderma, na direo anterior. A elongao
(A)
Anterior
(B)
(I)
Ectoderma
rea opaca
Posterior
(C)
Endoderma
Mesoderma
Axial
Paraxial (vrtebras, rins, musculatura)
rea pelcida
rea de
engrossamento
do blastoderma
235
rea opaca
rea
pelcida
Figura 6.27
Linha primitiva
tomando forma
(E)
(F)
Anterior
Ndulo
de Hensen
(K)
Processo
ceflico
rea
pelcida
rea
opaca
Ndulo
de Hensen
Sulco primitivo
(G)
Borda anterior
do mesoderma
Ectoderma da
dobra ceflica
Dobra neural
(H)
Dobra ceflica
Intestino
anterior
Somito
Notocorda
Ndulo
de Hensen
Placa
segmental
Linha primitiva
da linha primitiva parece ser coincidente com a migrao em direo anterior dessas
clulas do hipoblasto secundrio.
MIGRAO ATRAVS DA LINHA PRIMITIVA: FORMAO DO ENDODERMA E
MESODERMA. As primeiras clulas a migrarem atravs da linha primitiva so
aquelas destinadas a se transformarem no intestino anterior. Essa situao, novamente, similar quela vista nos anfbios. Uma vez dentro da blastocele, essas clulas
migram anteriormente e finalmente deslocam as clulas do hipoblasto na poro anterior do embrio. As clulas hipoblsticas esto confinadas a uma regio na poro
anterior da rea pelcida. Essa regio, o crescente germinativo, no forma estruturas
236
Figura 6.28
(A)
Migrao de clulas endodrmicas e mesodrmicas atravs da linha primitiva. (A) Micrografia eletrnica de varredura mostra clulas
epiblsticas passando para a blastocele, estendendo seus terminais apicais para transformarem em clulas garrafa. (B) Estereograma
de um embrio gastrulante de galinha, mostrando a relao da linha primitiva, das clulas
migratrias e das duas camadas originais do
blastoderma. A camada inferior se transforma
em um mosaico de clulas hipoblsticas e
endodrmicas; porm, as clulas hipoblsticas
finalmente se separam para formar uma camada abaixo daquela do endoderma e contribuem
para o saco vitelnico. (A de Solursh e Revel,
1978, cortesia de M. Solursh; B segundo
Balinsky, 1975.)
(B)
Ndulo de Hensen
Linha primitiva
Epiblasto
Blastocele
Hipoblasto
Endoderma
Clulas migratrias
(mesnquima)
embrionrias, mas contm os precursores das clulas germinativas, que mais tarde
migram atravs dos vasos sangneos at as gnadas. As prximas clulas que entram na blastocele atravs do ndulo de Hensen (e o primeiro quarto anterior da linha
primitiva) tambm se movem anteriormente, mas no se movem to ventralmente como
as clulas presuntivas endodrmicas do intestino anterior. Essas clulas permanecem
entre o endoderma e o epiblasto para formar as clulas do mesoderma da cabea e do
cordomesoderma (notocorda) (veja Psychoyos e Stern, 1996). Essas clulas de ingresso precoce se moveram todas anteriormente, empurrando para cima a regio medianoanterior do hipoblasto, a fim de formar o processo ceflico (Figura 6.29). Enquanto
isso, as clulas continuam a migrar para dentro, atravs da poro lateral da linha
primitiva. Quando entram na blastocele, essas clulas se separam em duas correntes.
Uma corrente se move mais profundamente e encontra o hipoblasto em sua regio
mediana, deslocando as clulas hipoblsticas para os lados. Essas clulas de movimento profundo do origem a todos os rgos endodrmicos do embrio, assim como
a maioria das membranas extra-embrionrias (o hipoblasto forma o restante). A segunda corrente migratria se espalha atravs da blastocele como uma camada frouxa, mais
ou menos a meio caminho entre o hipoblasto e o epiblasto. Essa camada origina as
pores mesodrmicas do embrio e das membranas extra-embrionrias. Aps 22 horas de incubao, a maior parte das clulas presuntivas endodrmicas esto no interior do embrio, apesar das clulas presuntivas mesodrmicas continuarem a migrar
para o interior por um tempo mais longo.
Endoderma
farngeo
Ilhas
de sangue
Processo ceflico
(notocorda anterior)
237
Dobra
ceflica
Intestino anterior
Sulco neural
Ndulo de
Hensen
Somito
Linha primitiva
rea
pelcida
Linha primitiva
rea opaca
(B)
(C)
Linha de
referncia
Regr
es
da li s o
p r i m nha
itiva
Alongamento da notocorda
(A)
Horas
(D)
(E)
Figura 6.29
238
material celular e a migrao das clulas ectodrmicas presuntivas ao longo da superfcie inferior do envoltrio vitelnico. Assim, chegando ao fim da gastrulao em aves,
o ectoderma envolveu o vitelo, o endoderma substituiu o hipoblasto e o mesoderma
se posicionou entre essas duas regies.
Mecanismos de gastrulao em aves
O PAPEL DO HIPOBLASTO E A FORMAO DOS EIXOS EMBRIONRIOS. O
eixo dorso-ventral (costa-frente) crtico para a formao do hipoblasto e para o
contnuo desenvolvimento do embrio. Esse eixo estabelecido quando as clulas em
clivagem do blastoderma, produzem uma barreira entre a albumina bsica (pH 9.5)
acima do blastodisco e o espao subgerminativo cido (pH 6.5), abaixo do disco.
gua e ons de sdio so transportados da albumina atravs das clulas para dentro
do espao subgerminativo criando uma diferena de potencial de membrana de 25 mV
atravs da camada de clulas (positivo no lado ventral das clulas). Isso cria dois
lados para as clulas: um lado frente albumina negativa e bsica, e outro lado frente
ao fluido do espao subgerminativo positivo e cido. O lado frente albumina se torna
o dorsal, e aquele frente ao espao subgerminativo se torna o ventral. Isso pode ser
revertido ou invertendo o gradiente de pH ou invertendo a diferena de potencial
atravs da camada de clulas (reviso em Stern e Canning, 1988).
A converso de um blastoderma radialmente simtrico em uma estrutura simtrica
bilateral determinada pela gravidade. Enquanto o vulo rola oviduto abaixo, ele gira
a uma velocidade de 10 a 15 revolues por hora. O citoplasma que dever se tornar a
camada celular est sempre girando para baixo, mas deslocado para cima pelo vitelo
mais denso. Portanto, no est em cima do vitelo, mas um pouco deslocado para o
lado. A poro mais alta do blastodisco se transforma na ponta caudal (rabo) do
blastoderma, a parte onde comea a gastrulao (Kochav e Eyal-Giladi, 1971). Assim,
os eixos ntero-posterior e dorsolateral so determinados antes da gastrulao, enquanto o vulo est lentamente rolando oviduto abaixo.
O blastoderma do embrio de galinha age como um sistema nico integrado para
formar um nico embrio; se o blastoderma separado em partes, cada uma tendo
sua zona marginal, cada parte vai formar seu prprio embrio (Spratt e Haas, 1960).
O controle desse campo parece residir na zona marginal posterior, a regio onde
comea a formao do hipoblasto. Essas clulas marginais posteriores no s contribuem com as clulas indutoras do hipoblasto, como tambm impedem que outras
regies marginais induzam seus hipoblastos. Khaner e Eyal-Giladi (1989) verificaram
que na transposio da zona marginal posterior para uma rea marginal lateral (Figura 6.30A), o rasgo posterior cicatriza e duas linhas primitivas aparecem. Similarmente, se uma regio posterior reciprocamente transposta com uma regio lateral (Figura 6.30B), somente se forma uma linha primitiva e ela provm da regio posterior
original. Entretanto, se uma zona marginal posterior colocada em um embrio que
retm sua margem posterior original (Figura 6.30C), somente a margem posterior
original do hospedeiro forma o hipoblasto que est subjacente linha primitiva.
Khaner e Eyal-Giladi sugerem que as clulas da zona marginal formam um gradiente
de atividade cujo pico est na ponta posterior. As clulas posteriores formaro o
hipoblasto e, ao mesmo tempo, evitaro que qualquer clula, com menos atividade,
forme hipoblastos prprios.*
EXPERIMENTO
(A)
RESULTADOS
239
INTERPRETAO
Anterior
Zona marginal
rea
opaca
Epiblasto
Posterior
Cicatriz
Linhas primitivas
(B)
(C)
Figura 6.30
240
clulas HNK-1 positivas dissolvem a lmina basal do epiblasto central para formar
uma canal atravs da linha primitiva. Isso permite que clulas do epiblasto (que
nunca expressaram HNK-1) sejam recrutadas para a linha que est se estendendo
anteriomente e, assim, contribuir (junto com as clulas HNK-1 positivas) para os
mesoderma e endoderma embrionrios.
Movimento dentro da blastocele amniota feito por clulas individuais, e no por
uma camada epitelial. Mas, como na gastrulao de anfbios, clulas de aves passando pelo blastporo sofrem uma constrio no seu terminal apical e se tornam clulas
garrafa (Figura 6.28). Na ponta anterior do canal, ndulo de Hensen, a destruio da
lmina basal e a liberao dessas clulas do epiblasto pode ser realizada por uma
protena de 190-kDa chamada fator de espalhamento (Stern et al., 1990). O fator de
espalhamento secretado somente no ndulo de Hensen, e tem sido implicado na
dissociao de clulas nessa regio e na induo do tecido neural a partir do epiblasto, na vizinhana do ndulo (Streit et al., 1995). Quando se implantam resinas contendo o fator de espalhamento abaixo do epiblasto de embries de galinha, em gastrulao precoce, novas regies da linha primitiva podem ser induzidas. O fator de
espalhamento se liga a receptores tirosina quinase em clulas adjacentes, e agindo
atravs da cascata da protena G, fosforila as -cateninas que ancoram as E-caderinas
membrana celular (Hartmann et al., 1994). Na ausncia de E-caderina funcional, a
lmina epitelial se desmonta naquela regio e as clulas se tornam mesnquima. As
clulas, uma vez liberadas da linha primitiva, entram na blastocele, so achatadas e
passam a fazer parte de uma corrente de clulas migratrias independentes.
Polissacardeos extracelulares podem tambm ter um papel importante nessa migrao. Um desses complexos polissacardeos o cido hialurnico, um polmero linear
de cido glucurnico e N-acetilglicosamina (veja Figura 3.35). Esse composto produzido pelas clulas ectodrmicas e se acumula na blastocele, onde reveste a superfcie
das clulas que esto chegando. Fisher e Solursh (1977) mostraram que quando esse
material digerido (injetando a enzima hialuronidase na blastocele), as clulas mesenquimatosas se aglomeram e no conseguem migrar adequadamente. Muito estudos
tm mostrado que o cido hialurnico importante para manter as clulas mesenquimatosas migratrias separadas umas das outras. Alm disso, o cido hialurnico comea a se acumular precisamente no momento em que as primeiras clulas entram na
blastocele. O cido hialurnico capaz de manter as clulas separadas, provavelmente devido a sua capacidade de se expandir em gua. Em ambiente aquoso, esse polmero
pode expandir em at 1000 vezes o seu volume original. Portanto, o cido hialurnico
pode ser um fator importante para manter as clulas mesenquimatosas dispersas durante sua migrao, assegurando que a migrao continue.
cido hialurnico e outros polissacardeos facilitam a migrao de clulas individuais (veja Captulo 3), mas no parecem dirigir o movimento dessas clulas (Fisher e
Solursh, 1979). Na verdade, o movimento dessas clulas est ligado, mais uma vez,
presena de uma rede de fibronectina na lmina basal extracelular das clulas do
epiblasto. Essa camada rica em fibronectina aparece na superfcie inferior das clulas
da camada de cima, pouco antes da formao da linha primitiva e desaparece na regio
da linha. Dentro da linha, as clulas se separam e migram lateralmente ao longo da
membrana basal do epiblasto, rica em fibronectina (Duband e Thiery, 1982). No existe
evidncia clara de que essa fibronectina essencial para o direcionamento do movimento celular que afasta as clulas lateralmente da linha primitiva.
FORMAO SECUNDRIA DA NOTOCORDA. Enquanto a poro anterior da
notocorda formada pelo ingresso de clulas atravs do ndulo de Hensen e a subseqente migrao anterior, a notocorda posterior formada de maneira diferente. Aps
o somito 17 (da galinha), a notocorda se forma pela condensao de tecido mesodrmico
que ingressou atravs da linha primitiva (isto , no atravs do ndulo de Hensen).
Isso se estende posteriormente para o broto da cauda do embrio (incluindo os
somitos 28-50) (Le Douarin et al., 1996).
241
derma se expandem externamente para envolver o vitelo. Essas clulas esto ligadas
entre si por ligaes firmes e migram como uma unidade, mas no individualmente.
Nas aves, a superfcie superior da rea opaca adere fortemente superfcie inferior do
envoltrio vitelnico e se espalha ao longo dessa superfcie interna. O mesmo comportamento visto em cultura de clulas. New (1959) demonstrou que o blastoderma
isolado se estende normalmente sobre o envoltrio vitelnico isolado, e Spratt (1963)
demostrou que esse espalhamento no ocorre com outros substratos. Essas observaes sugerem que o envoltrio vitelnico essencial para a extenso da lmina celular.
interessante observar que somente as clulas marginais (isto , as clulas da rea
opaca) se ligam firmemente superfcie vitelnica. A maioria das clulas blastodrmicas
aderem frouxamente, quando o fazem. As clulas marginais so inerentemente diferentes das outras clulas blastodrmicas, pois podem estender longos processos citoplasmticos (500m) em direo ao envoltrio vitelnico. Esses filopdios alongados
so considerados o aparelho locomotor das clulas marginais.
Existem vrias linhas de evidncia indicando que as clulas marginais da rea
opaca so os agentes da epibolia ectodrmica. Em primeiro lugar, o blastoderma se
espalha somente quando as margens esto se expandindo. Se as clulas marginais so
removidas, a epibolia do ectoderma cessa. Segundo, quando as clulas marginais so
isoladas do resto do blastoderma, elas continuam a migrar sozinhas. Assim, parece
que as clulas precursoras do ectoderma so levadas junto com as clulas ativamente
migratrias da rea opaca (Schlesinger, 1958). Existe tambm uma relao especfica
entre as membranas celulares das clulas marginais e a superfcie inferior da membrana
vitelnica. New (1959) mostrou que quando o blastoderma colocado sobre o envoltrio
vitelnico de forma invertida (camada profunda em contato com o envoltrio vitelnico),
as bordas do blastoderma se curvam para dentro de modo que as clulas marginais da
camada superior esto, mais uma vez, em contato com a superfcie vitelnica (Figura
6.31). Lash e seus colaboradores (1990) expandiram esses resultados mostrando que a
fibronectina est presente na superfcie interna do envoltrio vitelnico. Ento, como
no experimento discutido anteriormente, no qual Boucaut e colaboradores injetaram o
composto sinttico contendo a seqncia do stio de ligao fibronectina (RGD), na
blastocele de salamandra, Lash e colegas aplicaram a seqncia RGD ao envoltrio
vitelnico enquanto as clulas migravam sobre ele. Esse tratamento quebrou especificamente o contato entre as clulas marginais e o envoltrio vitelnico, causou retrao
dos filopdios das clulas marginais e parou a migrao do blastoderma.
Identificamos muitos dos processos envolvidos na gastrulao de aves, mas ignoramos como esses processos so realizados; no sabemos ainda como se forma a
cavidade subgerminativa, como certas clulas so destinadas a se tornarem clulas do
hipoblasto, como certas clulas expressam HNK-1, enquanto suas vizinhas no o
fazem, como clulas expressando HNK-1 migram para a margem posterior e como l
interagem com as clulas do epiblasto, como a linha primitiva se estende e se retrai, ou
como as clulas so designadas aos seus respectivos destinos. Recentemente, Gary
Figura 6.31
Endoderma
Presuntivo
(camada
profundas)
(A)
(B)
Ectoderma
Presuntivo
Envoltrio Vitelnico
242
Schoenwolf (1991) comentou: A despeito de tudo que foi escrito, certo dizer que o
que sabemos sobre gastrulao e neurulao em aves consideravelmente menos do
que ainda resta conhecer.
Gastrulao em mamferos
Aves e mamferos so descendentes de espcies de rpteis. Portanto, no surpreendente que o desenvolvimento de mamferos se d paralelamente ao dos rpteis e aves. O que surpreendente que os movimentos de gastrulao de embries de rpteis e aves, que evoluram como uma adaptao a ovos com vitelo, so
mantidos mesmo na ausncia de grandes quantidades de vitelo no embrio mamfero. A massa celular interna nos mamferos pode ser visualizada como assentada
sobre uma bola imaginria de vitelo, seguindo instrues que parecem mais apropriadas a seus ancestrais.
Modificaes para desenvolvimento dentro de outro organismo
Em lugar de desenvolver-se isoladamente dentro do ovo, a maioria dos mamferos
evoluiu para uma admirvel estratgia de desenvolvimento dentro da prpria me.
O embrio mamfero obtm seus nutrientes diretamente da me e no depende de
vitelo armazenado. Essa evoluo ensejou uma dramtica reestruturao da anatomia materna (tal como a expanso do oviduto para formar o tero) como tambm o desenvolvimento de um rgo fetal capaz de absorver os nutrientes maternos. Esse rgo fetal -a placenta- derivado primariamente de clulas
trofoblsticas embrionrias, suplementado por clulas mesodrmicas derivadas
da massa celular interna.
TECIDOS
EMBRIONRIOS
Ectoderma
embrionrio
Epiblasto
embrionrio
Epiblasto
Mesoderma
embrionrio
Linha primitiva
Ectoderma
amnitico
Massa celular
interna
Hipoblasto
Endoderma
extra-embrionrio
Endoderma
amnitico
Envoltrio
vitelnico
Mesoderma
extra-embrionrio
Blastocisto
TECIDOS
EXTRA-EMBRIONRIOS
Trofoblasto
Citrofoblasto
Sinciciotrofoblasto
Figura 6.32
(A)
Blastocisto, 7 dias
(B)
243
8 dias
Revestimento uterino
Capilar maternal
Epitlio uterino
(endomtrio)
Sinciciotrofoblasto
proliferando no
tecido uterino
Epiblasto
Cavidade amnitica
Blastocele
Trofoblasto
(C)
9 dias
Lacunas
trofoblsticas
10-11 dias
(D)
Cavidade
amnitica
Lacunas
trofoblsticas
(suprimento de
sangue materno)
Sinciciotrofoblasto
Epiblasto
Hipoblasto
Trofoblasto
Cavidade
Amnitica
Blastocele
Formao de
mesoderma extraembrionrio
Figura 6.33
Formao de tecido no embrio humano entre 7 e 12 dias. (A,B) Blastocisto humano imediatamente antes da gastrulao. A massa celular interna delaminam clulas hipoblsticas que forram
o trofoblasto, formando, com isso, o envoltrio vitelnico primitivo e um blastodisco de duas
camadas (epiblasto e hipoblasto), semelhante aquele visto em embries de aves. O trofoblasto
em alguns mamferos pode ser dividido em trofoblasto polar, que cobre a massa de clulas
internas, e o trofoblasto mural, que no o faz. O trofoblasto se divide no citotrofoblasto que
forma as vilosidades, e o sinciciotrofoblasto que ir ingressar no tecido uterino. (C) Ao mesmo
tempo o epiblasto se divide em ectoderma amnitico (que rodeia a cavidade amnitica) e epiblasto
embrionrio. O mamfero adulto se forma das clulas do epiblasto embrionrio. (D) O endoderma
extra-embrionrio forma o saco vitelnico. (Segundo Gilbert, 1989, e Larsen, 1993.)
Retculo
extra-embrionrio
244
Figura 6.34
(A)
Sinciciotrofoblasto
Mesoderma
Extra-embrionrio
Disco germinativo
bilaminar
Cavidade amnitica
Epiblasto
Sulco primitivo
Hipoblasto
Saco vitelnico
(B)
14-15 dias
Cavidade
amnitica
Sulco
Primitivo
Sulco
primitivo
Ndulo de
Hensen
Epiblasto
Hipoblasto
Endoderma
16 dias
Saco
vitelnico
Mesoderma
Endoderma
Mesoderma
extra-embrionrio
vez completado o revestimento do mnio, ele se enche com uma secreo chamada
fluido amnitico, que serve como absorvente de choques para o embrio em desenvolvimento, enquanto impede a sua dessecao.
O epiblasto embrionrio parece conter todas as clulas que vo dar origem ao
prprio embrio e , de muitas maneiras, semelhante ao epiblasto de ave. Kirstie Lawson
e seus colegas (1991) marcaram clulas individuais do epiblasto com peroxidase de
rabanete (horseradish) o que lhes permitiu construir um detalhado mapa de destino do
epiblasto de camundongo (Figura 6.35). Como as clulas do epiblasto de galinha, o
mesoderma e o endoderma de mamfero migram atravs da linha primitiva. Enquanto
penetram a linha, as clulas do epiblasto deixam de expressar E-caderina, que mantm
as clulas unidas, e elas migram como clulas individuais (Burdsal et al., 1993). As
clulas migrando atravs do ndulo de Hensen do origem notocorda. Na formao
da notocorda do camundongo, as clulas devem se integrar no endoderma do intestino primitivo, portanto, de maneira diferente da formao da notocorda da galinha
(Jurand, 1974; Sulik et al., 1994). Essas clulas podem ser vistas como uma banda de
clulas pequenas e ciliadas se estendendo para cima do ndulo de Hensen (Figura
6.36). Elas formam a notocorda convergindo mediamente e se dobrando em uma direo dorsal com afastamento do teto do intestino.
Figura 6.35
(A)
Mapa do destino do embrio do camundongo. (A) O estgio do ovo cilndrico, 6 dias aps a
fertilizao. Notar que ao contrrio dos epiblastos da galinha e humano, o epiblasto do camundongo firmemente curvado. Os endodermas parietal e visceral so derivados do hipoblasto,
no do trofectoderma. (B) Mapa do destino de um epiblasto de 7 dias na gastrulao precoce. (O
mapa do destino do camundongo foi achatado e deve ser visto como enrolado para cima com a
linha primitiva nas bordas.) (Segundo Lawson et al., 1991.)
245
Cone ectoplacentrio
do trofoblasto
Cavidade amnitica
Epiblasto
tero
Endoderma
visceral
Endoderma parietal
Saco vitelnico
Trofoblasto
(B)
Anterior
mnio
Ectoderma
Mesoderma
Endoderma
Posterior
Notocorda
Mesoderma
extra-embrionrio
Linha primitiva
Tubo neural
presuntivo
Mesnquima
Endoderma
Notocorda
presuntiva
Figura 6.36
Tubo neural
Notocorda
(A)
(B)
246
Figura 6.37
247
Figura 6.38
Para o feto
Do feto
Artrias umbilicais
Veia umbilical
mnio
Vilosidades
corinicas
Crio (poro fetal da placenta)
Clulas trofoblsticas
Para a me
Da me
Veia maternal
Artria maternal
248
(B)
Vilosidade secundria
(C)
Vilosidade terciria
Endomtrio
Casca
citotrofoblstica
Sinciciotrofoblasto
Espao entre
vilosidades
Citotrofoblasto
Capilares das
vilosidades
Figura 6.39
Mesoderma
extra-embrionrio
249
LITERATURA CITADA
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251
252
Porque a verdadeira maravilha, se voc quiser se maravilhar, este processo. Voc inicia como uma nica clula derivada da unio
entre um espermatozide e um vulo; essa
se divide em duas, depois quatro, depois oito
e assim por diante e, em um certo estgio
aparece uma nica clula, cuja descendncia total o crebro humano. A mera existncia de tal clula deveria ser uma das coisas assombrosas da Terra. As pessoas deveriam vagar o dia inteiro, enquanto acordadas, chamando umas s outras, maravilhadas, falando de nada exceto da clula.
LEWIS THOMAS (1979)
Ainda mais atraente do que a mata virgem, era a floresta que se estendia a minha frente naquele momento: o sistema
nervoso central.
RITA LEVI-MONTALCINI (1988)
253
poca*, anunciou: Eu tenho dois pequenos embries preservados em lcool, que esqueci de identificar. No momento, no consigo determinar o gnero ao qual pertencem. Eles podem ser lagartos, pequenas aves ou mesmo mamferos. A Figura 7.1 permite-nos apreciar seu dilema e ilustra as quatro leis gerais da
embriologia propostas por von Baer. De seu estudo detalhado sobre o desenvolvimento da galinha e da comparao de tais embries com embries de outros
vetebrados, von Baer estabeleceu quatro generalizaes, ilustradas aqui com alguns exemplos de vertebrados.
1. As caractersticas gerais de um grande grupo de animais aparecem no embrio mais cedo do que os aspectos especializados. Todos os vertebrados em
desenvolvimento (peixes, rpteis, anfbios, aves e mamferos) so muito semelhantes logo aps a gastrulao. Somente mais tarde no desenvolvimento que
as caractersticas especiais da classe, ordem e, finalmente, espcie aparecem
(veja Figura 7.1). Todos os embries de vertebrados tm arcos de guelras,
notocordas, medulas espinhais e rins pronfricos.
2. Caracteres menos gerais so desenvolvidos a partir dos mais gerais, at
finalmente aparecerem os caracteres mais especializados. Inicialmente todos
os vertebrados tm o mesmo tipo de pele. Somente mais tarde se desenvolvem
as escamas de peixes, as escamas de rpteis, as penas das aves, ou o plo,
garras e unhas dos mamferos. Da mesma maneira, o desenvolvimento precoce
de membros essencialmente o mesmo em todos os vertebrados. Somente
mais tarde que diferenas entre pernas, asas e braos se tornam evidentes.
3. Cada embrio de uma dada espcie, em lugar de passar atravs de todos os
estgios adultos de outros animais, se afasta mais e mais deles. As fendas
viscerais em embries de aves e mamferos no se parecem em detalhe s
fendas das guelras de peixes adultos. Ao contrrio, elas se parecem s fendas
viscerais de peixes embrionrios e outros vertebrados embrionrios. Enquanto peixes preservam e elaboram essas fendas tornando-as verdadeiras guelras,
os mamferos as convertem em estruturas tais como os tubos de Eustquio
(entre o ouvido e a boca).
4. Assim, o embrio precoce de um animal superior nunca como um animal inferior, mas somente como seu embrio precoce. Von Baer verificou que diferentes
* K. E. von Baer descobriu a notocorda, o ovo de mamfero e o ovo humano, alm de contribuir
para o progresso conceitual aqui descrito. Seu trabalho ser mais discutido no Captulo 23.
253
254
Figura 7.1
Ilustrao das leis de von Baer. Embries precoces de vertebrados mostram aspectos comuns ao subfilo inteiro. Com o progresso do
desenvolvimento, os embries se tornam reconhecveis como membros de sua classe, sua
ordem, sua famlia e, finalmente, sua espcie.
(de acordo com Romanes, 1901).
II
III
Peixe
Salamandra Tartaruga
Galinha
Porco
Boi
Coelho
Homem
Neurulao primria
Em vertebrados, a gastrulao cria um embrio com uma camada endodrmica interna,
uma camada mesodrmica intermediria e um ectoderma externo. A interao entre o
mesoderma dorsal e o ectoderma que a ele se sobrepem uma das interaes mais
importantes em todo o desenvolvimento de tetrpodes, porque ela inicia a
organognese, a criao de tecidos e rgos especficos. Nessa interao, o cordomesoderma estimula o ectoderma acima dele a formar o tubo neural oco, que se diferenciar em crebro e medula espinhal. Os eventos da neurulao primria esto no
(A)
Placa neural
Prega neural
(B)
(C)
Crista neural
Figura 7.2
Epiderme
Tubo neural
255
256
Figura 7.3
Placa
neural
Placa neural
Tubo neural
Notocorda
Prega neural
Notocorda
Mesoderma
Notocorda
Arquntero
(A)
SEO
TRANSVERSAL
Endoderma
Endoderma
Mesoderma
Endoderma
Epiderme
Epiderme
Epiderme
Notocorda
Notocorda
Prega neural
Cavidade
do intestino
Mesoderma
Cavidade do intestino
Placa neural
Prega neural
Tubo neural
Placa neural
Prega neural
Blastporo
Epiderme
(B)
SEO
SAGITAL
Blastporo
Cavidade do
intestino
Cavidade do
intestino
Mesoderma
Arquntero
Resto da
blastocele
Endoderma
Epiderme
Mesoderma
Mesoderma
Endoderma
Epiderme
Endoderma
Divertculo
do fgado
Tubo neural
Placa neural
Prega neural
Placa neural
Prega neural
Pregas
neurais
fundidas
(C)
VISTA DA
SUPERFCIE
DORSAL
Blastporo
(D)
SIMULAO
COMPUTADORIZADA
DA DEFORMAO
DA LMINA DE
ECTODERMA (LINHA C)
Blastporo
Epiderme
presuntiva
257
(C)
Notocorda
Placa neural
presuntiva
Formao
de cunha
Zona de
transio
Placa neural
Formao
de sulco
Ancoragem
Epiderme
Notocorda
Figura 7.4
258
as clulas se movem em direo ao centro (ou seja, em direo rea onde estava a
placa neural). Se a placa neural isolada, suas clulas convergem e se estendem para
formar uma placa mais delgada, mas no se fundem para formar um tubo neural. Esses
movimentos da placa neural e da epiderme originam as pregas neurais. Inicialmente, o
ectoderma torcido e logo a epiderme presuntiva comea a recobrir a placa neural.
(Realmente, se a regio de transio contendo os dois tecidos isolada, ela formar
pequenas pregas neurais em cultura). Esses movimentos coordenados finalmente
causaro a elevao e o dobramento do tubo neural (veja Figura 7.4; Jacobson e
Moury, 1995; Moury e Schoenwolf, 1995).
Formao do assoalho da placa neural
Anteriormente, considerava-se que somente as clulas da linha mdia da placa neural
formavam a placa do assoalho do tubo neural. Ou seja, no fechamento da placa para
formar o tubo neural, suas clulas mais centrais se localizariam no fundo do tubo. As
partes mais perifricas, as pregas neurais, se tornariam as pores mais dorsais do tubo
neural. Provavelmente assim que se forma a regio da cabea. Evidncia recente,
entretanto, sugere que o assoalho do tubo neural do tronco tem uma outra origem - que
se origina em parte do ndulo de Hensen e inserido no centro da placa neural.
Esse modelo foi proposto por Catala e colaboradores (1995) baseado nos seus
dados e em estudos anteriores de vrios laboratrios. Para acompanhar as clulas
embrionrias individuais do ndulo eles usaram o sistema de quimera galinha-codorna. Embries de galinha e codorna se desenvolvem de maneira muito semelhante
(especialmente no desenvolvimento precoce), e quando pores do embrio de
codorna so enxertadas em uma regio equivalente do embrio de galinha, as clulas se integram no embrio e participam da construo dos rgos adequados. O
enxerto pode ser feito enquanto o embrio ainda est dentro do ovo, e o pinto que
eclode uma quimera, tendo uma poro do seu corpo composta de clulas de
codorna (Figura 7.5; Le Douarin, 1969; Le Douarin e Teillet, 1973). As clulas de
galinha e codorna, entretanto, tm duas diferenas crticas. Primeiro, na codorna a
heterocromatina do ncleo est concentrada ao redor dos nuclolos. Isso cria uma
grande massa que se cora intensamente e facilmente distinta da heterocromatina
difusa da galinha. Segundo, existem alguns antgenos que so especficos para a
(A)
Figura 7.5
Clula de
galinha
Clula
de codorna
(A)
Somito 6
259
(B)
Tubo
neural
Somito
Ndulo
de
Hensen
Codorna
Galinha
Endoderma
dorsal
Figura 7.6
260
Placa neural
Poo do ndulo de
Hensen
Articulao cordoneural
Figura 7.7
O ndulo de Hensen contribui tanto para a notocorda como para a placa do assoalho neural.
Seo atravs do ndulo de Hensen no estgio do somito-6, mostrando que esse contribui
para a camada superior das clulas embrionrias. (de Catala et al., 1996; fotografia, cortesia
de N. M. Le Douarin.)
originando uma articulao em forma de sulco na linha mdia dorsal. Essas clulas so
induzidas pela notocorda a diminuir sua altura e adquirir a forma de cunha (van Straaten
et al., 1988; Smith e Schoenwolf, 1989). As clulas laterais MHP no sofrem essas
mudanas (Figuras 7.4 e 7.8). Logo aps, duas outras regies de articulaes formam
sulcos prximos conexo da placa neural ao restante do ectoderma. Essas regies
so chamadas pontos de articulao dorsolateral (DLHPs), e esto ancoradas ao
ectoderma da superfcie da prega neural. Essas clulas aumentam sua altura e adquirem a forma de cunha. Essa transformao (modelagem como cunha) est intimamente
ligada s modificaes da forma celular. Nos pontos de articulao dorsolateral, tanto
microtbulos como microfilamentos esto envolvidos nessas transformaes. A
colchicina, um inibidor de polimerizao de microtbulos, inibe o alongamento dessas
clulas, enquanto citocalasina B, um inibidor da formao de microfilamentos, impede
a constrio apical dessas clulas impedindo, assim, a formao de cunha (Burnside,
1971, 1973; Karfunkel, 1972; Nagele e Lee, 1980, 1987). Depois da formao inicial de
sulcos, a placa neural se dobra ao redor dessas regies com articulaes. Cada uma
delas age como um eixo que dirige a rotao das clulas ao seu redor (Smith e
Schoenwolf, 1991).
Enquanto isso, foras extrnsecas tambm esto em ao. O ectoderma superfcial
do embrio de galinha empurra na direo central do embrio, fornecendo mais uma
fora motora para o dobramento da placa neural (veja Figura 7.4 B,C; Alvarez e
Schoenwolf, 1992). Esse movimento da epiderme presuntiva e a ancoragem da placa
neural ao mesoderma subjacente deve ser tambm importante para assegurar que o
tubo neural se dobre para dentro do embrio e no para fora. Se pequenos pedaos da
placa neural so isolados do resto do embrio (incluindo o mesoderma) eles tendem a
se enrolar para fora (Schoenwolf, 1991a).
Fechamento do tubo neural
O tubo neural se fecha ao se aproximarem os pares de dobras neurais na linha mdia
dorsal; as dobras aderem umas s outras e as clulas das duas partes se renem. Em
algumas espcies, as clulas nessa juno formam as clulas da crista neural. Mas em
aves, as clulas da crista neural no migram da regio dorsal at que o tubo neural
tenha sido fechado naquele local. Em mamferos, entretanto, as clulas da crista neural
cranial (que formam as estruturas da face e do pescoo) migram enquanto as dobras
neurais esto se elevando (ou seja, antes do fechamento do tubo), enquanto que na
regio da medula espinhal, as clulas da crista esperam at que o fechamento ocorra
(Nichols, 1981; Erickson e Weston, 1983).
(A)
(B)
(C)
Figura 7.8
Micrografia eletrnica de varredura da formao do tubo neural no embrio de galinha. (A) Sulco
neural rodeado por clulas mesenquimatosas. (B) Clulas neuroepiteliais alongadas formam um
tubo, enquanto as clulas epidrmicas achatadas so trazidas linha mdia do embrio. As
clulas MHP formam uma articulao no fundo do tubo, enquanto as clulas da placa neural,
ligadas rea basal do ectoderma da superfcie formam as regies de articulaes dorsolaterais.
Essas trs articulaes podem ser vistas como sulcos. (C) A formao do tubo neural completada. As clulas que eram a placa neural esto agora dentro do embrio. A epiderme presuntiva
se localiza acima do tubo, e o tubo neural ladeado pelos somitos mesodrmicos e no fundo
limitado pela notocorda. (Fotografias, cortesia de K. W. Tosney.)
261
262
Figura 7.9
Ectoderma da cabea
Anterior
Ectoderma do blastoderma
Mesnquima
Prega neural
Notocorda
Sulco neural
Espao
subceflico
Intestino
Mesoderma extraembrionrio
Celoma extraembrionrio
Vitelo
Prega lateral
do corpo
Prega neural
Regio
pericrdica
do celoma
Placa neural
Endoderma
Vitelo
aderente ao
endoderma
Porta
intestinal
anterior
Sulco
neural
Somito
Prega
neural
Mesoderma
intermedirio
Placa
neural
Mesoderma
somtico
Celoma
Endoderma do
intestino mdio
Somito
Mesoderma
esplncnico
Divergncia
das pregas
neurais
N de Hensen
Poo
primitivo
Mesoderma
Ilhota
sagnea
Sulco
primitivo
Linha
primitiva
Margem
primitiva
Posterior
(A)
(B)
Neurporo
anterior
Prega neural
Ectoderma
da superfcie
Intumescncia
pericardaca
Placdio
tico
Somitos
Crista
neural
(C)
(D)
263
(E)
Intumescncia
pericardaca
Tubo neural
Borda
cortada do
mnio
Somitos
Sulco
neural
22 dias
Neurporo
posterior
23 dias
Normal
Figura 7.10
tubo neural anterior resulta em uma condio letal, anencefalia. Aqui, o crebro
anterior permanece em contato com o lquido amnitico e em seguida degenera. O
desenvolvimento do crebro anterior fetal cessa, e a abboda do crnio no se
forma. Essas anormalidades no so raras em humanos, pois esto presentes em
aproximadamente um em cada quinhentos nascimentos viveis. Defeitos de fechamento do tubo neural podem freqentemente ser identificados durante a gravidez
por vrios testes fsicos e qumicos.
O fechamento do tubo neural humano envolve uma complexa interao entre fatores genticos e ambientais. Certos genes, Pax3, sonic hedgehog e openbrain, so
essenciais para a formao do tubo neural de mamferos, mas fatores da dieta como
colesterol e cido flico parecem ser crticos.* Foi estimado que aproximadamente
50% dos defeitos do tubo neural poderiam ser evitados se as mulheres grvidas
tomassem suplementos de cido flico (vitamina B12), e o Servio de Sade Pblica
dos Estados Unidos da Amrica recomendam que todas as mulheres em idade frtil
tomem 0.4mg dirios de folato para reduzir o risco de defeitos do tubo neural durante
a gravidez (Milunsky et al., 1989; Czeizel e Dudas, 1992; CDC, 1992). [ecto1.html]
O tubo neural finalmente forma um cilindro fechado que se separa do ectoderma da
superfcie. Considera-se que essa separao mediada pela expresso de diferentes
molculas de adeso celular. As clulas que se tornaro o tubo neural, originalmente
expressam E-caderina, mas elas param de expressar essa protena ao se formar o tubo
e, em vez disso, sintetizam N-caderina e N-CAM (veja Figura 3.17). Como resultado,
os dois tecidos no aderem mais um ao outro. Se o ectoderma da superfcie passar a
expressar N-caderina (injetando mRNA de N-caderina em uma das clulas do embrio
de Xenopus de duas cabeas), a separao do tubo neural da epiderme presuntiva
dramaticamente impedida (Detrick et al., 1990; Fujimori et al., 1990).
*Colesterol parece ser necessrio para a autoclivagem da protena Sonic hedgehog. Mutaes da
Sonic hedgehog podem impedir o fechamento do tubo neural em camundongos e no homem (Chiang
et al., 1996; Roessler et al., 1996); a poro ativa da Sonic hedgehog sua regio N-terminal. Essa
regio clivada da molcula precursora em uma reao que requer colesterol como um cofator
(Porter et al., 1996). No homem, certas sndromes envolvendo falhas no fechamento do tubo
neural foram relacionadas s mutaes na sntese de colesterol (Kelley et al., 1996).
Anencefalia
Espinha bfida
264
Informaes adicionais
&
Especulaes
(A)
(B)
Figura 7.11
(C)
Conjunto secundrio de
neurnios motores
Placa do assoalho
ventral doada
por outro embrio
Sinais dorsais
(D)
Inibio dos sinais
dorsais por Sonic
hedgehog
Neurnios
motores
Induo de neurnios
motores ventrolaterais
Placa do assoalho ventral
Neurulao secundria
A neurulao secundria envolve a formao do cordo medular e seu subseqente
esvaziamento interno formando o tubo neural. Na r e na galinha, esse tipo de neurulao geralmente identificado na formao das vrtebras lombar e da cauda. Em
ambos os casos, a neurulao secundria pode ser vista como continuao da gastrulao. Entretanto, as clulas do lbio dorsal do blastporo continuam a crescer
Notocorda
Placa neural
presuntiva
Blastocele
Medula espinhal
Canal
ependimrio Intestino
Assoalho
Te t o
Notocorda
Articulao
cordoneural
Movimentos de
extenso posterior
Movimentos
involutivos
Parede
posterior
Ectoderma
(A)
(B)
265
(C)
Figura 7.12
Movimentos celulares durante a neurulao secundria em Xenopus. (A) Involuo da mesoderma no estgio de gstrula mdia.(B) Movimentos do lbio dorsal do blastporo nos estgios de
gstrula tardia/ gstrula precoce. A involuo cessou e ambos, o ectoderma e o mesoderma do
lbio tardio do blastporo se movem posteriormente. (C) Estgio de girino precoce, onde as
clulas revestindo o blastporo formam o canal neurentrico, parte do qual se torna o lmen do
tubo neural secundrio. (de Gont et al., 1993.)
ventralmente, em lugar de involuir para o embrio (Figura 7.12A,B). A regio em crescimento, na ponta do lbio, chamada articulao cordoneural (Pasteels, 1937), e
contm precursores da poro mais posterior da placa neural e a poro posterior da
notocorda. O crescimento dessa regio converte a gstrula aproximadamente esfrica,
1.2mm de dimetro, em um girino linear com 9mm de comprimento. A ponta da cauda
um descendente direto do lbio dorsal do blastporo, e as clulas que revestem o
blastporo formam o canal neurentrico. A parte proximal do canal neurentrico,
funde com o nus, enquanto que a poro distal se torna o canal ependimrio (isto ,
o lmen do tubo neural) (Figura 7.12C; Gont et al., 1993).
Na galinha, os tecidos localizados posteriomente ao neurporo recentemente
fechado so chamados de broto da cauda. Como o broto da cauda da r, essa
estrutura no uma massa no diferenciada de clulas. Enxertando pequenas regies do broto da cauda da codorna no broto da cauda da galinha, Catala e colaboradores (1995) mostraram que o broto de cauda precoce, j tem clulas com um destino
determinado. Exatamente como no Xenopus, existe uma articulao cordoneural, e
essa regio contm as clulas que dividem-se para formar ambas, a notocorda e a
corda medular. Como se d na r, essas clulas se movem posteriomente. O tubo
neural se forma medida que a corda medular produz pequenas cavidades, que se
fundem umas s outras (Figura 7.13).
nus
Canal neurentrico
266
Figura 7.13
(A)
(B)
(C)
Notocorda
O tubo neural precoce de mamferos uma estrutura reta. Entretanto, mesmo antes
que a poro posterior do tubo se forme, a poro mais anterior est sofrendo mudanas drsticas. Nessa regio anterior, o tubo neural se expande em trs vesculas primrias (Figura 7.14): crebro anterior (prosencfalo), crebro mdio (mesencfalo) e crebro posterior (rombencfalo). Quando se fecha a ponta posterior do tubo neural,
dilataes secundrias -as vesculas pticas- se estendem lateralmente de cada lado
do crebro anterior em desenvolvimento.
O crebro anterior se subdivide no telencfalo anterior e o diencfalo mais caudal. O telencfalo formar os hemisfrios cerebrais, e o diencfalo formar o tlamo
e o hipotlamo e tambm a regio que recebe os impulsos neurais da retina. Na
verdade, a prpria retina uma derivao do diencfalo. O mesencfalo no se
subdivide e seu lmen se tornar o aqueduto cerebral. O rombencfalo se subdividir em um mielencfalo posterior e um metencfalo mais anterior. O mielencfalo vai
dar origem medula oblongata (Bulbo), cujos neurnios do origem aos nervos que
regulam os movimentos respiratrios, gastrointestinais e cardiovasculares. O
metencfalo d origem ao cerebelo, a parte do crebro responsvel pela coordenao dos movimentos, postura e equilbrio. O crebro posterior (rombencfalo) desenvolve um modelo segmentado que especifica os lugares de onde se originam
certos nervos. Alargamentos peridicos chamados rombmeros dividem o
(D)
Figura 7.14
Desenvolvimento precoce do crebro humano. As trs vesculas cerebrais primrias so subdivididas enquanto o desenvolvimento continua. A direita esto os derivados em adultos, formados pelas paredes e cavidades do crebro. (De acordo com Moore e Persaud, 1993.)
Derivados Adultos
Lobos olfativos - Cheiro
3 vesculas primrias
Parede
5 vesculas primrias
Hipocampo
Crebro
- Armazenamento de memria
- Associao
Retina
Epitlamo
- Viso
- Glndula pineal
Tlamo
Cavidade
Telencfalo
Crebro anterior
(Prosencfalo)
Crebro mdio
(Mesencfalo)
Diencfalo
Hipotlamo
Mesencfalo
Metencfalo
Crebro posterior
(Rombencfalo)
Cerebelo
Mielencfalo
Ponte
Medula espinhal
Medula
- Coordenao de movimentos
musculares complexos
- Fibras nervosas entre o crebro e o
cerebelo (somente mamferos)
- Centro reflexo de atividades
involuntrias
rombencfalo em compartimentos menores. Os rombmeros representam territrios separados de desenvolvimento onde clulas de cada rombmero podem se
misturar livremente dentro dele, mas no com clulas de rombmeros adjacentes
(Guthrie e Lumsden, 1991). Alm disso, cada rombmero tem um destino de desenvolvimento diferente. Isso foi extensivamente estudado na galinha, onde os primeiros neurnios aparecem nos rombmeros de nmero par, r2, r4 e r6 (Figura 7.15;
Lumsden e Keynes, 1989). Neurnios dos gnglios r2 formam o quinto nervo cranial
(trigmeo); aqueles do r4 formam o stimo nervo cranial (facial) e o oitavo
(vestibuloacstico); o nono nervo cranial (glossofarngeo) nasce do r6. [ecto2.html]
A expanso do crebro embrionrio precoce notvel em sua velocidade, extenso e no fato de que isso resulta primariamente em um aumento de tamanho de cavidade e no de crescimento de tecido. Em embries de galinha, o volume do crebro
expande 30 vezes entre os dias 3 e 5 do desenvolvimento. Considera-se que essa
rpida expanso causada por uma presso fluida positiva, exercida contra as paredes
do tubo neural pelo fluido no seu interior. Seria de se esperar que essa presso do
fluido fosse dissipada pela medula espinhal, mas isso parece no acontecer. Na verdade, enquanto as pregas neurais vo fechando a regio entre o crebro presuntivo e a
medula espinhal, o tecido dorsal circundante empurra para dentro, produzindo uma
constrio no tubo, na base do crebro (Figura 7.16; Schoenwolf e Desmond, 1984;
Desmond e Schoenwolf, 1986; Desmond e Field, 1992). Essa ocluso (que tambm
ocorre no embrio humano) efetivamente separa a regio cerebral presuntiva da futura
medula espinhal (Desmond, 1982). Se for removida a presso do fluido na poro
anterior de um tubo neural assim ocludo, o crebro da galinha aumenta a uma velocidade muito menor e contm um nmero menor de clulas, quando comparado com
embries controles, normais. A regio ocluda do tubo neural abre novamente aps a
expanso inicial, rpida, dos ventrculos cerebrais.
(A)
(B)
267
Figura 7.15
(D)
Figura 7.16
Ocluso do tubo neural para permitir a expanso da futura regio do crebro. (A) Corante
injetado na poro anterior do tubo neural de
galinha de 3 dias, enche a regio do crebro
mas no passa para a regio espinhal. (B,C)
Seo do tubo neural da galinha na base do
crebro (B) antes da ocluso e (C) durante a
ocluso. (D) A reabertura da ocluso, aps aumento inicial do crebro, permite a passagem
do corante da regio do crebro para a da medula espinhal. (Cortesia de M. Desmond.)
268
Informaes adicionais
&
Especulaes
Determinando as regies
do crebro anterior e crebro mdio
identidade ntero-posterior de
cada vescula do crebro de mamferos especificada durante a
gastrulao pelo mesoderma precordal e
pela notocorda. Essa especificao parece ser estabilizada no estgio de placa
neural, por interaes a nvel do ectoderma. Somente as molculas principais envolvidas na especificao dos crebros
anterior e mdio sero aqui discutidas; os
detalhes da especificao do crebro posterior e da medula espinhal pelo gene Hox
sero discutidos no Captulo 16.
As regies dos crebros anterior e
mdio so definidas pelo mesoderma
subjacente e pela notocorda anterior. Os
genes Lim1 e Otx2 so expressos por
esses tecidos mesodrmicos anteriores.
Se um deles no est presente, o embrio
no forma o crebro anterior ou o mdio.
Na parte caudal, em relao ao rombmero 2, os embries parecem normais (Figura 7.17; Acampora et al., 1995; Shawlot
e Behringer, 1995).
Rubenstein e Puelles (1994) propuseram que o crebro anterior composto
por seis regies neuromricas chamadas
prosmeros. Os prosmeros p1-p3 correspondem ao diencfalo e os prosmeros p4-p6 ao hipotlamo (ventralmente)
e ao telencfalo (dorsalmente). Os limites prosomricos coincidem com os limites de expresso de vrios genes que so
considerados importantes na especificao neural. Eles tambm so considerados como limitantes de respostas a certos estmulos externos. A interface p2/p3
Figura 7.17
Prosencfalo
Mesencfalo
Mes/Met
limite
Metencfalo
Rombencfalo
Medula espinhal
En (Engrailed)
Wnt1
Fgf8 (Fator de
crescimento do fibroblasto)
shh (Sonic
hedgehog)
Figura 7.18
(A)
Mesencfalo
Diencfalo
Mes/Met
limite
269
Figura 7.19
Regio expressando En
Telencfalo
En (Engrailed)
Wnt1
Fgf8 (Fator de
crescimento do fibroblasto)
Crebro posterior
Metencfalo
Crebro mdio
Cerebelo
Rombencfalo
(B)
Pea
invertida
Diencfalo
Mesencfalo
ist/cb
istmo/
cerebelo
Induo
da estrutura
mesenceflica
Rombencfalo
Mesencfalo
Duplicao e polarizao
relativa ao tecido cerebelar
En mais prximo
Mesencfalo
Diencfalo
Diencfalo
Eixo longo
Rombencfalo
Rombencfalo
270
Figura 7.20
(B)
Medula espinhal
Zona ventricular
germinal (V)
Zona
subventricular (S)
Camada granular
externa (EG)
271
Camada molecular
de axnios das
clulas granulares
Cerebelo
Tubo neural
Camada molecular
Neocrtex
Crtex cerebral
Massa branca
Figura 7.21
Diferenciao das paredes do tubo neural. Seo de um tubo neural humano de 5 semanas,
contendo 3 zonas: ependimria, manto e marginal. Na medula espinhal e no bulbo (linha
superior), o epndima a nica fonte de neurnios e clulas gliais. No cerebelo (linha do
meio) uma segunda camada mittica, a camada granular externa, se forma na regio mais
remota do epndima. Neuroblastos dessa camada migram de volta para a zona intermediria para formar as clulas do grnulo. No crtex
cerebral (linha inferior), os neuroblastos ou
glioblastos em migrao formam uma placa
cortical contendo seis camadas. (De acordo com
Jacobson, 1991.)
272
(A)
(B)
(C)
(D)
Epiderme
Regio
presuntiva basal
Sulcus
limitans
Regio
presuntiva alar
(E)
Gnglio da
raiz dorsal
Neurnio de associao
Nervo
espinhal
Raiz dorsal
Neurnio
sensorial
Neurnio
somtico motor
Camada marginal
Camada
do manto
Figura 7.22
Desenvolvimento da medula espinhal humana. (A-D) O tubo neural funcionalmente dividido nas regies dorsal (alar, A) e ventral
(basal, B), separadas pelo sulcus limitans.
Enquanto os condroblastos da regio esclertoma do somito formam as vrtebras espinhais,
o tubo neural se diferencia nas zonas ependimria, do manto e marginal, e o teto e o
assoalho se tornam distintos. (E) Um segmento da medula espinhal com suas razes sensoriais (alar) e motoras (basal). (De acordo com
Larsen, 1993.)
Camada ependimria
(ventricular)
neurnios sensoriais, enquanto a poro ventral est envolvida na realizao de vrias funes motoras (Figura 7.22).
Organizao do cerebelo
No encfalo, a migrao celular, o crescimento diferencial e a morte celular seletiva
produzem modificaes no modelo de trs camadas, especialmente no cerebelo e no
crebro. Alguns neurnios penetram a massa branca para diferenciarem-se em aglomerados de neurnios chamados ncleos. Cada ncleo desempenha o papel de uma
unidade funcional, servindo como uma estao de retransmisso entre as camadas
externas do cerebelo e outras partes do encfalo. Alm disso, as clulas neurnicas
precursoras, em diviso, neuroblastos, migram para a superfcie externa do cerebelo
em desenvolvimento, formando uma nova zona embrionria, camada embrionria
externa, prxima ao limite externo do tubo neural. No limite externo da camada embrionria externa (na espessura de uma ou duas clulas), os neuroblastos proliferam. Na
parte interna da camada esto os neuroblastos ps-mitticos que so os precursores
dos neurnios mais importantes do crtex do cerebelo, as clulas granulares. Essas
clulas neuronais pr-granulares migram de volta para a massa branca do cerebelo em
desenvolvimento para produzir clulas neurnicas granulares em uma regio chamada
camada granular interna. Enquanto isso, a camada ependimria original do cerebelo
origina uma grande variedade de neurnios e clulas gliais, incluindo os notveis e
grandes neurnios de Purkinje. Cada um deles tem um enorme aparelho dendrtico,
que se espalha como um leque sobre o corpo celular em forma de bulbo. Uma clula
de Purkinje tpica pode formar at 100.000 sinapses com outros neurnios, mais do que
qualquer outro neurnio estudado. Cada neurnio de Purkinje tambm emite um axnio
delgado que se comunica com outras clulas nos ncleos cerebelares profundos.
O desenvolvimento de uma organizao espacial crtico para o funcionamento
correto do cerebelo. Todos os impulsos regularo a atividade da clulas de Purkinje,
que so os nicos neurnios que liberam impulsos para fora do crtex cerebelar. Para
que isso acontea, as clulas adequadas devem se diferenciar no tempo e local adequados. Como isso acontece?
Um mecanismo considerado importante para posicionar neurnios jovens dentro
de encfalo de mamferos em desenvolvimento o direcionamento glial (Rakic, 1972;
Hatten, 1990). Atravs do crtex, os neurnios parecem caminhar no monotrilho da
glia para seu respectivo destino. No cerebelo, os precursores das clulas granulares
caminham nos longos prolongamentos da glia de Bergmann (Figura 7.23; Rakic e
Sidman, 1973; Rakic, 1975). A interao neuroglial consiste em uma complexa e fascinante srie de eventos, envolvendo reconhecimento recproco entre a glia e o
neuroblasto (Hatten, 1990; Komuro e Rakic, 1992). O neurnio mantm sua adeso
clula da glia atravs de vrias protenas, a mais importante sendo uma protena de
adeso chamada astrotactina. Se a astrotactina na clula nervosa mascarada pelo
seu respectivo anticorpo, a clula nervosa no adere ao prolongamento da glia
(Edmondson et al., 1988; Fishell e Hatten, 1991).
A anlise de mutaes neurolgicas no camundongo poder, em breve, fornecer
conhecimentos novos sobre os mecanismos de ordenao espacial. Mais de 30 mutaes conhecidas afetam o arranjo de neurnios cerebelares. Muitos dos mutantes
cerebelares foram encontrados porque o fentipo de tais mutantes - principalmente a
inabilidade de manter o equilbrio ao andar - pode ser facilmente reconhecido. Por
razes bvias essas mutaes so identificadas na lngua inglesa com nomes como
weaver, reeler, staggerer e waltzer. [ecto4.html], [ecto5.html]
(B)
(A)
Processo condutor
do neurnio
(C)
Neurnio em
migrao
Processo da
clula glial
273
Figura 7.23
274
Organizao cerebral
Figura 7.24
Massa
branca
Camada
ventricular
Dias de gestao
Nascimento
(A)
(C)
275
(D)
Migrao
neural do
hospedeiro
Massa
branca
Camadas corticais
[3H]-timidina no dia ps-natal 1
Camadas corticais
Migrao neural
do hospedeiro
Camada
intermediria
Camada
ventricular
Destino independente da
clula quando transplantada
aps ltima fase S.
Clula glial
Destino condicionado ao
hospedeiro quando
transplantado na fase S.
Figura 7.25
Massa
branca
Camadas corticais
Determinao de identidade laminar em crebro de doninha. (A) Precursores neuronais precoces (aniversrios no dia embrionrio 29) migram para a camada 6. (B) Precursores neuronais
tardios (aniversrios no dia ps-natal 1) migram mais adiante para as camadas 2 e 3. (C)
Quando os precursores precoces (vermelho) so transplantados em zonas ventriculares mais
velhas, aps sua ltima fase S mittica, os neurnios que eles formam migram para a camada
6. (D) Se esses precursores so transplantados antes ou durante sua ltima fase S, seus
neurnios migram (com os neurnios do hospedeiro) para a camada 2. (De acordo com
McConnell e Kaznowski,1991.)
em qualquer das camadas corticais (Walsh e Cepko, 1988). Mas, como que a clula
reconhece a camada na qual deve entrar? McConnell e Kaznowski (1991) mostraram
que a determinao da identidade laminar (isto , para qual camada a clula migrar)
feita durante a diviso celular final. Clulas transplantadas de crebros jovens (onde
elas formariam a camada 6) para crebros mais velhos, cujos neurnios migratrios
esto formando a camada 2 aps sua ltima diviso, mantm seu destino e migram
somente para a camada 6. Entretanto, se as clulas so transplantadas antes de sua
diviso final (na metade da fase S), elas no tm destino fixo e podem migrar para a
camada 2 (Figura 7.25). Os destinos de clulas progenitoras mais velhas so mais
determinados. As clulas cerebrais corticais progenitoras precoces tm o potencial
para transformarem-se em qualquer neurnio (nas camada 2 ou 6, por exemplo), mas as
clulas corticais progenitoras tardias do origem somente a neurnios da camada
superior (camada 2) (Frantz e McConnell, 1996). Ainda no conhecemos a natureza da
informao transmitida clula ao ser fixado o seu destino.
Nem todos os neurnios migram radialmente. ORourke e seus colegas (1992)
marcaram neurnios jovens com corante fluorescente e seguiram sua migrao atravs do crebro. Enquanto mais ou menos 80% dos jovens neurnios migraram radialmente em processos gliais, da zona ventricular para a placa cortical, aproximadamente
12% deles migraram lateralmente de uma regio funcional do crtex para outra. Essas
observaes esto de acordo com aquelas de Walsh e Cepko (1992), que infectaram
clulas ventriculares com um retrovrus e conseguiram corar essas clulas e seus
descendentes aps o nascimento. Eles descobriram que os descendentes neurais de
276
uma nica clula ventricular estavam dispersos atravs das regies funcionais do
crtex. Quando neurnios do crtex do crebro anterior foram transplantados para a
regio que formaria o corpo estriado, essas clulas adquiriram a morfologia do estriado
(Fishell, 1995). Portanto, a especificao de funes determinadas pelas reas corticais
ocorre aps a neurognese. Considera-se que chegando a seu destino final, as clulas
produzem molculas adesivas especficas que as organizam e as agrupam como ncleos cerebrais (Matsunami e Takeichi, 1995).
O crebro bastante plstico e o desenvolvimento do crtex neopleo humano
particularmente notvel a esse respeito. O crebro humano continua a se desenvolver
na velocidade do desenvolvimento fetal, mesmo aps o nascimento (Holt et al., 1975).
Baseado em critrios morfolgicos e de comportamento, Portmann (1941, 1945) sugeriu que, comparada com outros primatas, a gestao humana deveria durar 21 meses
em lugar de 9. Entretanto, nenhuma mulher poderia dar luz um feto de 21 meses, pois
sua cabea no passaria pelo canal do parto; assim a espcie humana d luz aps 9
meses. Montagu (1962) e Gould (1977) sugeriram que durante o primeiro ano de vida,
somos essencialmente fetos extra-uterinos, e eles especulam que a inteligncia humana vem da estimulao do sistema nervoso que est se formando durante aquele
primeiro ano.*
Tipos de neurnios
O crebro humano consiste de mais de 1011 clulas nervosas (neurnios) associadas
com mais de 1012 clulas gliais. Aquelas clulas que permanecem como componentes
integrais do revestimento do tubo neural se transformam em clulas ependimrias.
Essas clulas podem dar origem a precursores de neurnios e clulas gliais. Considera-se que a diferenciao dessas clulas precursoras principalmente determinada
pelo ambiente no qual elas entram (Rakic e Goldman, 1982) e que, em pelo menos
alguns casos, uma determinada clula precursora pode formar ambos, neurnios e
clulas gliais (Turner e Cepko, 1987). Existe uma grande variedade de tipos de neurnios e clulas gliais (como fica evidente pela comparao entre uma clula granular
relativamente pequena e o enorme neurnio de Purkinje). As delgadas extenses das
clulas, usadas para captar impulsos eltricos so chamadas dendritos (Figura 7.26).
Alguns neurnios desenvolvem somente alguns dendritos, enquanto outras clulas
(como os neurnios de Purkinje) desenvolvem extensas reas para interaes celulares. Muito poucos dendritos so encontrados em neurnios corticais no nascimento,
mas uma das coisas maravilhosas, a respeito do primeiro ano de vida do ser humano,
o aumento do nmero dessas regies receptivas nos neurnios corticais. Durante
esse ano, cada neurnio cortical desenvolve um nmero suficiente de dendritos (ou
superfcie dendrtica) para acomodar at 100.000 conexes com outros neurnios. O
neurnio cortical, em mdia, se conecta com 10.000 outros neurnios. Esse padro de
conexes neurais (sinapses) permite ao crtex humano funcionar como o centro para
o aprendizado, raciocnio e memria, e a desenvolver a capacidade de expresso simblica, bem como a produo de respostas a estmulos interpretados.
Outra caracterstica importante de um neurnio em desenvolvimento seu axnio
(s vezes chamado um neurito). Enquanto os dendritos so freqentemente numerosos e no se extendem muito alm do corpo da clula nervosa, ou soma, os axnios
podem se alongar por vrios centmetros. Os receptores da dor no dedo grande (hlux)
do p, por exemplo, precisam transmitir suas mensagens por um longo caminho at a
* Ao contrrio do que afirma um filme antiaborto, amplamente divulgado, o crtex cerebral
humano no tem conexes neurnicas na 12a semana de gestao (e, portanto, no pode se mover
em resposta a um pensamento, nem mostrar conscincia ou medo). A atividade eltrica mensurvel,
caracterstica de clulas neurais (o padro do eletroencefalograma, ou EEG) verificada inicialmente aos 7 meses de gestao. Morowitz e Trefil (1992) sugeriram provocativamente que tendo a
sociedade, nos Estados Unidos, aceito que a definio de morte a perda do padro de EEG, talvez
ela devesse aceitar a aquisio do padro de EEG como o comeo da vida humana.
Figura 7.26
Dendritos
Diagrama de um neurnio motor. Impulsos recebidos pelos dendritos e o neurnio estimulado podem transmitir impulsos eltricos atravs do axnio (que podem ter 60 a 90 cm de
comprimento) para o tecido alvo. A bainha de mielina que promove o isolamento do axnio
formada pelas clulas de Schwann adjacentes. (De acordo com Bloom e Fawcett, 1975.)
RECEPTOR
Cone do
axnio
Segmento
inicial
do axnio
CONDUTOR
277
Chegada de impulsos
via axnios de outros
neurnios
N de
Ranvier
Impulso
nervoso
Clula de
Schwann
Bainha de mielina
EFETOR
Msculo esqueltico
278
Cone de crescimento
Microespculas
(A)
(B)
(C)
Figura 7.27
Microespculas de actina em cones de crescimento de axnios como vistos por (A) microscopia
eletrnica de transmisso, (B) microscopia de contraste da interface diferencial e (C) microscopia
de fluorescncia com anticorpos fluorescentes actina. (A de Letourneau,1979; B e C de
Forscher e Smith, 1988. Todas fotografias, cortesia dos autores.)
279
Figura 7.28
Clula oligodendroglial
MIELINIZAO
NO SISTEMA
NERVOSO CENTRAL
Axnio
N de Ranvier
Axnio
(A)
(B)
MIELINIZAO NO
SISTEMA NERVOSO PERIFRICO
Clula de Schwann
Clula de Schwann
Axnio
(C)
280
Parede do
crebro anterior
Ectoderma
da cabea
Vescula
ptica
primria
Camada
neural
Vescula
ptica
Cristalino
Vescula
do
cristalino
Placdio
do
cristalino
Camada
pigmentada
Figura 7.29
281
Bastonetes e cones
dos fotorreceptores
Corpos celulares
dos fotorreceptores
Camada
neuroblstica
externa
Camada
plexiforme externa
Camada dos
nervos bipolares
Camada
neuroblstica
interna
Camada
plexiforme interna
Camada de clulas ganglionares
(A)
Clulas ganglionares
(B)
(D)
Luz
estmulo eltrico dos bastonetes e cones s clulas ganglionrias. Alm disso, existem
numerosas clulas gliais de Mller que mantm a integridade da retina, bem como
neurnios amcrinos (sem grandes axnios) e neurnios horizontais que transmitem
impulsos eltricos no plano da retina.
Nos estgios iniciais do desenvolvimento da retina, a diviso celular de uma camada embrionria e a migrao e morte diferencial das clulas resultantes formam o
padro laminar, estriado, da retina neural. A formao desse tecido altamente estruturado
um dos problemas mais intensamente estudado em neurobiologia do desenvolvimento. Mostrou-se que (Turner e Cepko, 1987) uma nica clula precursora do
neuroblasto retinal pode dar origem a pelo menos trs tipos de neurnios ou dois
tipos de neurnios e uma clula glia. Essa anlise foi feita usando uma tcnica engenhosa para marcar as clulas geradas por uma clula precursora especfica. Ratos
recm-nascidos (cujas retinas ainda esto se desenvolvendo) foram injetados, no
fundo do olho, com um vrus que se integra ao seu DNA. Esse vrus continha um gene
da -galactosidase (no presente na retina do rato) que seria expresso somente nas
clulas infectadas. Um ms aps a infeco dos ratos, as retinas foram removidas e
coradas para detectar a presena de -galactosidase. Somente os descendentes das
clulas infectadas deveriam ser coradas de azul. A Figura 7.31 mostra uma fita de
clulas derivadas de uma clula precursora infectada. A colorao pode ser vista em
cinco bastonetes, um neurnio bipolar e uma clula glia (Mller).
Figura 7.30
(A)
Figura 7.31
(B)
4-6 semanas
Cristalino
Retina
Epitlio
pigmentado
Remova a
retina, fixe
e core e
analise os
clones
Desenvolvimento da retina humana. Neurnios da retina se distribuem em camadas funcionais durante o desenvolvimento. (A,B)
Separao inicial de neuroblastos dentro da
retina. (C) As trs camadas de neurnios na
retina adulta e as camadas sinpticas entre
elas. (D) Uma apresentao funcional dos
principais caminhos dos neurnios na retina.
A luz atravessa as camadas at ser recebida
pelos fotorreceptores. Os axnios dos fotorreceptores fazem sinapse com neurnios bipolares que transmitem a despolarizao para
os neurnios ganglionares. Os axnios das
clulas ganglionares se renem para formar o
nervo ptico que entra no crebro. (A e B
segundo Mann, 1964; fotografia cortesia de
G. Grunwald.)
Determinao da linhagem de uma clula precursora na retina do rato. (A) Tcnica pela
qual um vrus contendo um gene de galactosidase funcional injetado na parte dorsal do olho para infectar algumas das clulas
precursoras da retina. Aps um ms ou 6 semanas, o olho removido e a retina corada
para -galactosidase. (B) Clulas coradas formando uma banda atravs da retina neural, incluindo 5 bastonetes (r), um neurnio bipolar
(bp), um neurnio terminal (t) e clulas gliais
de Mller (mg). As identidades dessas clulas
foram confirmadas por microscopia de contraste Nomarski. (Barra de escala, 20 m). (de
Turner e Cepko, 1987, fotografia cortesia de
D. Turner.)
282
Informaes adicionais
&
Especulaes
ecm-nascidos humanos no
tm boa viso. Devem existir vrias razes para isso, mas a que
mais chama a ateno a imaturidade dos
fotorreceptores da retina. Estudos anatmicos realizados por Yuodelis e Hendrickson (1986) e estudos fsicos por Banks e
Bennett (1988) mostraram que os cones
fotorreceptores da retina central do recmnascido tm mais de 7.5m de dimetro,
que diminui at o valor adulto normal de
2m em cerca de 3 anos. Durante esse tempo, a densidade em cones nessa regio
aumenta de 18 fotorreceptores para 42 por
100 m, e os fotorreceptores desenvolvem tanto seus segmentos externos (que
captam a luz) quanto os seus axonais
Figura 7.32
(A)
(B)
(C)
283
Cavidade
oca da
vescula do
cristalino
Epitlio
do cristalino
(A)
Figura 7.33
(B)
Cpsula anterior
do cristalino
Fibras primrias
se alongando
Epitlio
anterior
do cristalino
Regio
equatorial
(C)
Fibras
primrias
do cristalino
Fibras secundrias
do cristalino
(D)
Fibras
secundrias do cristalino
(E)
Cpsula
posterior do cristalino
Fibras primrias
do cristalino
284
Q A CRISTA NEURAL
A crista neural e seus derivados
Embora derivada do ectoderma, a crista neural algumas vezes considerada a quarta
camada germinativa devido sua importncia. Tem sido dito, talvez hiperbolicamente,
que a nica coisa interessante a respeito dos vertebrados a crista neural (citado
em Thorogood, 1989). As clulas da crista neural se originam na regio mais dorsal do
tubo neural. Experimentos com transplantes, onde uma placa neural de codorna
enxertada no ectoderma no-neural de galinha, mostram que justapondo esses tecidos se induz a formao de clulas da crista neural e que ambas, as prospectivas placa
neural e a epiderme, contribuem para a crista neural (Selleck e Bronner-Fraser, 1995;
Mancilla e Mayor, 1996). As clulas da crista migram extensivamente dando origem a
um incrvel nmero de tipos de clulas diferenciadas. Esses incluem (1) os neurnios
e clulas gliais dos sistemas nervosos sensorial, simptico e parassimptico, (2) as
clulas produtoras de epinefrina (medula) da glndula supra-renal, (3) as clulas
pigmentares da epiderme, e (4) muitos dos componentes dos tecidos esquelticos e
conjuntivos da cabea. O destino das clulas da crista neural depende, na sua maioria,
do lugar para onde elas migram e onde se instalam. A crista neural pode ser dividida em
quatro principais (mas parcialmente sobrepostos) domnios:
A crista neural ceflica (cabea), cujas clulas migram dorsolateralmente para
produzir o mesnquima craniofacial que se diferencia em cartilagem, osso, neurnios cranianos, glia e tecidos conjuntivos da face. Essas clulas tambm
entram nas bolsas farngeas para originar as clulas do timo, odontoblastos
dos primrdios dos dentes e a cartilagem do ouvido interno e o queixo.
A crista neural do tronco, cujas clulas tomam um de dois caminhos principais. Clulas da crista neural, que se tornam os melancitos sintetizadores de
pigmentos, migram dorsolateralmente para o ectoderma, e continuam em seu
caminho em direo linha mdia ventral do abdmen. Entretanto, a maioria da
clulas da crista neural do tronco passa ventrolateralmente atravs da metade
anterior de cada esclertomo. (Esclertomos so blocos de clulas mesodrmicas que cercam o tubo neural e diferenciam-se na cartilagem vertebral da espinha.) Essas clulas da crista neural do tronco que permanecem nos esclertomos
formam os gnglios dorsais da raiz. As clulas que continuam mais ventralmente formam os gnglios simpticos, a medula da supra-renal e o agrupamento de nervos circundando a aorta.
A crista neural cervical e sacral, cujas clulas do origem aos gnglios
parassimpticos (entricos) do intestino (Le Douarin e Teillet, 1973; Pomeranz
et al., 1991). A crista cervical tem posio oposta aos somitos 1-7 da galinha,
enquanto que a crista neural sacral posterior ao somito 28. A ausncia de
migrao da clula da crista neural para o clon resulta na falta de gnglios
entricos e, portanto, a ausncia de movimento peristltico nessa regio.
Isso resulta na obstruo funcional, dilatao e aumento da regio acima do
clon (megaclon).
Tabela 7.1
Derivado
Derivados endcrinos e
paraendcrinos
Medula supra-renal
Clulas secretoras de calcitonina
Clulas do tipo I do corpo carotdeo
Clulas pigmentadas
Tecido conjuntivo
285
286
Epiderme
Caudal
Tubo neural
Dermomitomo
Esclertomo
Notocorda
Post.
Aorta
Ant.
Somito
Rostral
Figura 7.34
Migrao das clulas da crista neural no tronco do embrio do pinto. Via 1: As clulas viajam ventralmente atravs do esclertomo anterior (aquela poro do somito que gera a cartilagem vertebral). Aquelas clulas inicialmente opostas s pores posteriores dos
esclertomos migram ao longo do tubo neural
at alcanar uma regio anterior. Essas clulas
contribuem para os gnglios simpticos e
parassimpticos assim como para as clulas
da medula supra-renal e os gnglios da raiz
dorsal. Via 2: Algum tempo depois, clulas penetram na rota dorsolateral abaixo do ectoderma. Essas clulas se tornam melancitos produtores de pigmento.
Clulas da Via 1
viajam ventralmente atravs
do mitomo anterior
(Mayer, 1973; Erickson et al., 1992). Essa via foi demonstrada em uma srie de experimentos clssicos por Mary Rawles e outros (1948), que transplantaram o tubo neural
e a crista de uma linhagem pigmentada de galinha para o tubo neural de um embrio de
galinha albina. O resultado foi uma galinha branca com penas coloridas em uma regio
especfica (Figura 7.35A). A crista neural responsvel pela produo de todas as
clulas contendo melanina no organismo (com exceo de certos derivados neurais
como a retina pigmentada).
A VIA VENTRAL. Enxertando uma parte do tubo neural e a crista associada de embri-
es de galinha, radioativos ou geneticamente marcados, em outros embries, foi possvel identificar outra rota principal de migrao das clulas da crista neural do tronco
(Weston, 1963; Le Douarin e Teillet, 1974), investigadores foram capazes de traar uma
outra rota maior de migrao das clulas da crista neural (Figura 7.35B,C). Estudos
mais recentes estenderam essas pesquisas usando anticorpos fluorescentes, corantes
vitais, ou clulas transformadas por vrus para marcar e seguir clulas individuais da
crista neural at seu destino. As clulas saindo pela via ventral se tornam neurnios
sensoriais (raiz dorsal) e simpticos, clulas adrenomedulares e clulas de Schwann.
Como pode ser visto na Figura 7.36 e Prancha 19, essas clulas da crista neural do
tronco migram ventralmente atravs da poro anterior, mas no da poro posterior
dos esclertomos (Rickmann et al., 1985; Bronner-Fraser, 1986; Loring e Erickson,
1987; Teillet et al. 1987). Teillet e colaboradores associaram o procedimento com
anticorpos a um transplante de clulas da crista neural de codornas geneticamente
marcadas, a embries de galinha. O anticorpo marcador reconhece e marca as clulas
da crista neural de ambas espcies; o marcador gentico permite aos pesquisadores
(A)
(B)
Hospedeiro
Doador marcado
radioativamente
Figura 7.35
Migrao das clulas da crista neural. (A) Pinto resultante do transplante de uma regio da crista
neural do tronco de uma linhagem pigmentada de galinhas para uma regio da crista neural do
tronco de uma linhagem no-pigmentada. As clulas da crista que deram origem ao pigmento
foram capazes de migrar para a pele da asa. (B) Tcnica de enxerto para o mapeamento de clulas
da crista neural. Um pedao de eixo dorsal excisado de um embrio doador; o tubo neural e a
crista associada so isolados e implantados no embrio hospedeiro, cujo tubo neural e crista
haviam sido excisados. Quando as clulas da crista do doador so marcadas radioativamente
(com timidina tritiada) ou marcadas geneticamente (de uma espcie ou variedade diferentes),
seus descendentes podem ser detectados no embrio hospedeiro durante o processo do desenvolvimento. (C) Auto-radiografia mostrando localizaes de clulas da crista neural que migraram da crista neural radioativa doadora para formar melanoblastos (M), gnglios simpticos
(SG), gnglios da raiz dorsal (DRG) e clulas gliais (G). (A, fotografia original dos arquivos de
B. Willier; B segundo Weston, 1963; C cortesia de J. Weston.)
distinguir entre clulas de codorna e galinha. Esses estudos mostram que clulas da
crista neural, antes opostas regio posterior dos somitos, migram anteriormente ou
posteriormente ao longo do tubo neural penetrando, assim, na regio anterior de seus
somitos ou de outros adjacentes. Essas clulas da crista neural se juntam com outras
que inicialmente estavam opostas poro anterior dos somitos, e formam a mesma
estrutura. Dessa maneira, cada gnglio da raiz dorsal composto de trs populaes
de crista neural: uma da crista neural oposta poro anterior do somito e uma de cada
lado das regies de crista neural adjacentes, opostas s pores posteriores dos
somitos. Em regies especficas do tronco, clulas da crista migrando pela mesma via,
se agregam para formar gnglios simpticos e as clulas secretoras de epinefrina da
medula da supra-renal. A diviso parassimptica do sistema nervoso perifrico tambm formada pelas clulas da crista neural migrando por essa via, mas somente nas
regies sacral e cervical do embrio.
A matriz extracelular e a migrao da crista neural do tronco
Em qualquer anlise de migrao (seja de pssaros, borboletas ou clulas da crista
neural) deve-se fazer trs perguntas: Como se inicia a migrao? Como os agentes
migratrios conhecem a via a ser percorrida? Quais sinais indicam que o destino foi
alcanado e que a migrao deve terminar? Mais ainda, deve -se perguntar se o agente
competente para responder a esses sinais. Clulas da crista neural, pr-migratrias,
expressam a protena Slug, um fator de transcrio. Oligonucleotdeos antisense
contra o mRNA do slug impediro a migrao da crista neural, sugerindo que a protena
(C)
287
288
Esclertomo
do somito
Tubo
neural
Anterior
Posterior
Anterior
Posterior
Anterior
Posterior
Figura 7.36
Migrao de clulas da crista neural. Fotomicrografias de fluorescncia de sees longitudinais de um embrio de pinto de dois dias,
marcadas com anticorpo HNK-1, que reconhece seletivamente as clulas da crista neural.
Extensa marcao vista na metade anterior,
porm, no na posterior do esclertomo. (de
Bronner-Fraser, 1986, cortesia de M.
Bronner-Fraser.)
Slug deve ser necessria para que a clula epitelial imvel se torne um migrante (Nieto
et al., 1994). Outro fator em potencial na iniciao da migrao da clula da crista neural
a molcula de adeso N-caderina. Originalmente na superfcie da clula da crista
neural, ela regulada para decrescer na poca da migrao celular. Clulas da crista em
migrao no tm N-caderina em sua superfcie, mas comeam a express-la novamente enquanto se agregam para formar a raiz dorsal e os gnglios simpticos (Takeichi,
1988; Akitaya e Bronner-Fraser, 1992). Ao mesmo tempo que as clulas da crista neural
perdem sua N-caderina e se tornam aptas a migrar como clulas individuais, a superfcie extracelular que as rodeia se torna mais adesiva (Perris et al., 1990). Parece haver
vias especficas que devem ser seguidas pelas clulas da crista neural e quando as
clulas, ou seus derivados, so colocadas (por transplante ou por injeo) em sua via
normal de migrao em um embrio hospedeiro, elas migram ao longo dessa (BronnerFraser e Cohen, 1980; Erickson et al., 1980).
O caminho das clulas da crista neural controlado pela matriz extracelular do
embrio (Newgreen e Gooday, 1985; Newgreen et al., 1986). Pesquisas sobre o desenvolvimento de salamandra indicaram que a direo de migrao das clulas da crista
neural determinada pela matriz extracelular sobre a qual elas migram. Em salamandras
axolotle existe uma mutao onde h formao da crista neural mas suas clulas no
migram pela via dorsolateral. Isso pode ser visto facilmente pela falta de clulas
pigmentadas em todos os lugares, com exceo do topo do tubo neural desses animais (Figura 7.37), e essas clulas finalmente degeneram. Quando cristas neurais do
tipo selvagem so transplantadas para embries mutantes, as clulas da crista so
incapazes de migrar. Entretanto, quando cristas de embries mutantes so transplantadas em embries selvagens, suas clulas migram normalmente (Spieth e keller, 1984).
Assim, o defeito nesse mutante est no ambiente em que as clulas encontram e no
nas prprias clulas. (A estrada deficiente mas no o veculo.) Lfberg e colaboradores (1989) usaram essa informao para mostrar que a matriz extracelular contm compostos que so crticos na regulao da migrao das clulas da crista neural. Eles
adsorveram, em microtransportadores da membrana, a matriz extracelular da regio
subepidrmica da pele (atravs da qual migrariam as clulas da crista neural formadoras de pigmentos). Os microtransportadores foram ento colocados junto s cristas
neurais de embries mutantes e do tipo selvagem, pouco antes do momento quando
ocorreria a migrao. Os microtransportadores sozinhos no estimularam a migrao
em nenhum dos dois embries. Os microtransportadores contendo matriz extracelular
de mutantes tambm no estimularam migrao primativa de clulas da crista neural
em nenhum dos embries. Entretanto, aqueles transportadores contendo a matriz
extracelular do tipo selvagem estimularam a migrao de clulas da crista neural tanto
no embrio mutante como no selvagem, demonstrando assim a importncia da matriz
extracelular na migrao de clulas da crista neural.
Uma situao semelhante se d em embries de galinha, pois o transplante de
diferentes regies do mesoderma para a rea adjacente crista neural pode produzir
diferentes modelos de migrao (Goldstein et al., 1990; Bronner-Fraser e Stern, 1991).
As regies que permitem migrao de clulas da crista neural so determinadas no
mesoderma antes que ocorra a migrao.
Mas quais so as molculas que permitem ou impedem a migrao de clulas da
crista neural? A matriz extracelular que suporta essa migrao uma mistura rica em
molculas como fibronectina, laminina, tenascina, vrias molculas de colgeno e
proteoglicanos. Experimentos programados para estudar esse aspecto devem ser
cuidadosamente planejados, pois as clulas da crista neural podem ter necessidades
de migrao diferentes em diferentes espcies e mesmo em diferentes partes do mesmo embrio. Uma soluo preparar anticorpos contra molculas das regies da
matriz extracelular s quais as clulas se ligam. Quando esses anticorpos so injetados
no embrio, bloqueando as regies da matriz, verifica-se alguma perturbao na migrao das clulas da crista neural? A migrao das clulas da crista neural craniana de
galinha pode ser severamente alterada quando so injetados, no embrio em desen-
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 7.37
Deficincia na migrao das clulas da crista neural no mutante d/d do axolotle. (A) As
larvas de axolotles do tipo selvagem so caracterizadas por clulas pigmentadas por todo o
corpo exceto nas pores mais ventrais. (B) No mutante d/d, as clulas pigmentadas derivadas da crista neural formam uma estria ao longo da linha mediana dorsal da larva. (C,D)
Micrografias eletrnicas de varredura da crista neural embrionria mostram que (C) as
clulas da crista dos embries de tipo selvagem migram sobre o tubo neural para o interior
dos somitos, enquanto (D) aquelas do mutante permanecem sobre o tubo neural. (de Lfberg
et al., 1989, cortesia dos autores.)
289
290
Informaes adicionais
&
Especulaes
Lethal-spotting e Piebald-lethal.
Nessas mutaes, a deficincia de
endotelina-3 e seu receptor, o receptor de
endotelina-B. Endotelina-3 um fator de
crescimento que estimula a proliferao
de clulas como as da crista neural, e
critico para o desenvolvimento de melancitos e neurnios entricos que causam o peristaltismo no trato digestivo. A
ausncia homozigtica de genes para o
receptor de endotelina-B produz o megaclon, a distenso do intestino grosso
devido a impossibilidade de evacuar. No
Figura 7.38
podem estar mais determinadas do que outras. Tambm, a potncia se torna mais
restrita medida que a clula envelhece. Clulas da crista neural do tronco na galinha
que migram mais cedo podem formar uma ampla variedade de derivados, incluindo
clulas pigmentares, neurnios e clulas adrenrgicas. Clulas migrando mais tarde,
na sua maioria, se tornam melancitos (Serbedzija et al., 1989; Artinger e Bronnerfraser, 1992). Realmente, as emigrantes tardias da crista neural parecem j estar destinadas a se tornarem melancitos antes de entrarem na via dorsolateral (Erickson e
Goins, 1995). Existe evidncia de que alguma restrio de potncia pode ser identificada
mesmo em algumas clulas emigrantes precoces. Vrios pesquisadores (veja SieberBlum e Sieber, 1984; Stocker et al., 1991; Weston, 1991) verificaram que um nmero
291
292
Figura 7.39
Injeo
Caso 1
Crista neural
Injeo
Caso 2
Dextrano
fluorescente
Resultados
Caso 1
Resultados
Caso 2
Melancitos
Gnglios da
raiz dorsal
Clulas de Schwann
da raiz ventral
Gnglios
simpticos
Aorta
Medula supra-renal
(A)
(B)
293
Figura 7.40
NGF
GF
bF
Clula
pluripotente
da crista
neural
Clula NGF
competente
Gl
ico
co
rtic
Clula
id
precursora
es
bipotente
Inibio da
diferenciao
neural
Incapacidade de
responder a
glicocorticides
Neurnio
simptico
Glicocorticides
Clula
precursora
cromafim
Promoo
de enzimas
cromafim
especificas
Clula cromafim
(adrenomedular)
294
Pregas
neurais
(A)
Clulas migratrias
da crista neural
(B)
Ro
m
mb
ero
Tubo
neural
Gnglios IX, X
Bolsa farngea II
(D)
Clulas migratrias
da crista neural
Bolsa farngea
Cartilagem
facial
e
Tubo neural
Martelo
Cartilagem
de Meckel
Bigorna
Tronco arterial
Estribo
Bulbus cordis
Processo
estilide
Aorta descendente
Osso hiide
Artria vitelnica
Cartilagem tireide
Cartilagem cricide
Artria
umbilical
Anis traqueais
Figura 7.41
* O fentipo dos camundongos mutantes, Hoxb-1, se assemelha ao de certas condies humanas como a Paralisia de Bell e a Sndrome de Moebius (paralisia facial congnita) e pode fornecer
possveis esclarecimentos para essa condio.
295
296
Elementos
esquelticos
(crista neural mais
mesoderma)
Arcos, artrias
(mesoderma)
Msculos
(mesoderma)
Nervos cranianos
(tubo neural)
Bigorna e martelo
(da crista neural);
mandbula, maxila
e regies do osso
temporal (da crista
do mesnquima
drmico)
Ramo maxilar da
artria cartida
(para ouvido,
nariz e queixo)
Msculos do
queixo, soalho
bucal; msculos
do ouvido e do
palato mole
Divises maxilares
e mandibulares do
nervo trigmeo
Osso estribo do
ouvido mdio
apfise estilide
do osso temporal;
parte do osso hiide
do pescoo (todos
da cartilagem da
crista neural)
Artrias para a
regio do ouvido:
artria crticotimpnica (adulto);
artria estribal
(embrio)
Msculos da
expresso facial;
msculos do
queixo e pescoo
superior
Borda inferior e
cornos maiores do
osso hiide (da
crista neural)
Artria cartida
comum; raiz da
cartida interna
Estilofarngeo
(para elevar a
faringe)
Glossofarngeo
(IX)
Cartilagens laringeanas
(do mesoderma da
placa lateral)
Arco da aorta;
artria subclvia
direita; bicos artrias
originais de pulmonares
Constritores
da faringe e
cordas vocais
Ramo superior
laringeano do
nervo vago
Cartilagens laringeanas
(do mesoderma da
placa lateral)
Duto arterioso;
razes das artrias
pulmonares definitivas
Msculos
intrnsecos
da laringe
Ramo recorrente
laringeano do nervo vago
mandibulares, pois as clulas derivadas do enxerto tambm produziram uma mandbula. A base para essa instruo ser discutida no Captulo 16.
Quando clulas da crista neural ceflica da galinha ou codorna so cultivadas, se
obtm uma populao heterognea de clulas (Baroffio et al., 1991). Algumas das
clulas so pluripotentes, e seus clones contm clulas de vrios tipos. Outras clulas
da crista do derivados mais restritos. interessante notar que nem todas as combinaes de cartilagem, glia, neurnios colinrgicos, melancitos e neurnios adrenrgicos
so observadas. A Figura 7.42 mostra os tipos de clones que emergem e traa vias
hipotticas para os tipos restritos de clula
Figura 7.42
Neurnios
colinrgicos
Cartilagem
Clulas adrenrgicas
Clulas semelhantes
s germinativas
Clulas gliais
Melancitos
Clulas
germinativas de
linhagem restrita
Progenitores
unipotentes
Cartilagem
Neurnios
colinrgicos
Clulas gliais
297
Clulas
adrenrgicas
Melancitos
Tipos celulares
derivados da
crista neural
pela crista neural do tronco ou pela crista ceflica anterior, ocorrem anormalidades
cardacas (especialmente a falta da separao artica-pulmonar). Fica evidente, que a
crista cardaca j est determinada para gerar clulas cardacas, e outras regies da
crista neural no podem substitu-la (Kirby, 1989; Kuratani e Kirby, 1991). Defeitos
cardacos congnitos no homem com freqncia ocorrem com defeitos nas glndulas
paratireide, tireide e timo. No seria surpresa se esses estivessem ligados a defeitos
na migrao de clulas da crista neural. [ecto7.html]
Restrio hipottica de linhagem nas clulas da crista neural ceflica da codorna. Um total de 533 clones, cada um
derivado de uma nica clula, foram observados para os tipos celulares derivados de cada clula. Os resultados so
consistentes com a restrio progressiva do destino celular de clula germinativa pluripotente, atravs de clulas germinativas mais restritas, at uma clula
progenitora unipotente. (A, neurnio
adrenrgico; C, cartilagem; G, clulas da
glia; M, melancitos; N, neurnios
colinrgicos.) (Segundo Le Douarin et
al., 1994.)
298
Figura 7.43
Membrana
plasmtica engrossada
Queratina
Camada crnea
Grnulos de queratina
Clula de transio
Melanossomos
Camada granular
Camada
espinhosa
Camada
de Malpighi
Camada
basal
Lmina basal
Melancito
299
alcanar o estrato crneo e permanece na camada crnea mais ou menos duas semanas. Em indivduos com psorase, uma doena caracterizada por esfoliao de uma
enorme quantidade de clulas epidrmicas, o tempo de permanncia na camada crnea
de somente dois dias (Weinstein e van Scott, 1965; Halprin, 1972). Essa condio
est ligada a uma super expresso de TGF- (a qual ocorre secundariamente a uma
inflamao imune) (Elder et al., 1989). Analogamente, se o gene TGF- for ligado a um
promotor para queratina 14 (uma das principais protenas da pele), e inserido no proncleo do camundongo, os animais transgnicos ativam o gene TGF- em suas clulas da pele e no podem suprimi-lo. O resultado um camundongo com pele escamosa,
pouco plo e um enorme excesso de epiderme queratinizada sobre uma nica camada
de clulas basais (Figura 7.44C; Vassar e Fuchs, 1991).
O outro fator de crescimento necessrio para a produo de epiderme o fator de
crescimento do querancito (KGF; tambm chamado fator de crescimento fibroblstico 7) um fator parcrino que produzido pelos fibroblastos da derme subjacente
(derivada do mesoderma). O KGF recebido pelas clulas basais que esto acima dos
fibroblastos da derme e se considera que ele regula a proliferao dessas clulas
basais. Se o gene KGF fundido com o promotor de queratina 14 e so produzidos
camundongos transgnicos, o KGF se torna autcrino. Os animais resultantes (Figura
7.44A) tm uma epiderme espessada, pele solta, muitas clulas basais e no tm folculos
de plo, nem mesmo folculos do bigode (Guo et al., 1993). Essas clulas basais so
foradas a entrar na via de diferenciao da epiderme. A alternativa para a clula
basal ajudar a gerar o folculo do plo.
Apndices cutneos
A epiderme e a derme tambm interagem em stios especficos para criar as glndulas
sudorparas e os apndices cutneos: plos, escamas ou penas (dependendo da espcie). A primeira indicao de que um folculo do plo se formar em um local especfico
uma agregao de clulas na camada basal da epiderme. Essa agregao dirigida
pelas clulas dermais subjacentes e ocorre em diferentes tempos e locais no embrio.
As clulas basais se alongam, se dividem e penetram na derme. As clulas dermais
(B)
(C)
(A)
Figura 7.44
KGF
Tipo selvagem
TGF-
Fatores de crescimento e proliferao epidrmica. (A) Um camundongo transgnico expressando baixos nveis de KGF em seus queratincitos. Notar a rarefao do plo ao redor das patas, olhos e focinho. (B) Um camundongo de tipo selvagem. (C) Um companheiro de ninhada de (B) que est expressando altos nveis de TGF- em seus queratincitos. Tem pele descamada e muito pouco
plo. Abaixo de cada camundongo est um
corte atravs de sua pele. O animal expressando KGF em excesso no tem folculos
pilosos e um nmero aumentado de clulas
epidrmicas basais. O camundongo expressando TGF- tem camadas muito extensas
de epitlio queratinizado, o qual ele descarta.
(de Vassar e Fuchs, 1991, e Guo et al., 1993.
Fotografias cortesia de E. Fuchs.)
300
(A)
(B)
(C)
Ectoderma
epidrmico
Mesoderma
condensado
(D)
Canal piloso em
desenvolvimento
Mesoderma
drmico
Ponta do plo
Papila drmica
Glndula
sebcea
Bulbo contendo
clulas germinativas
pluripotentes do
folculo piloso
Figura 7.45
Plo
respondem a esse ingresso de clulas epidrmicas basais formando um pequeno ndulo (a papila dermal) abaixo do tampo epidrmico. A papila drmica, em um movimento ascendente, estimula as clulas basais germinativas a dividirem-se mais rapidamente e produzir clulas ps-mitticas que se diferenciaro na haste queratinizada do
plo (veja Hardy, 1992; Miller et al., 1993). Melanoblastos, que estavam presentes
entre as clulas epidrmicas enquanto ingressavam, diferenciam-se em melancitos e
transferiam seu pigmento haste (Figura 7.45). Enquanto isso ocorre, duas intumescncias epiteliais comeam a crescer nos lados do folculo. As clulas da intumescncia inferior podem reter uma populao de clulas germinativas que regeneraro a
haste do plo periodicamente, quando ela for descartada (Pinkus e Mehregan, 1981;
Cotsarelis et al., 1990). As clulas da intumescncia superior formaro as glndulas
sebceas que produzem uma secreo oleosa, o sebo. Em muitos mamferos, incluindo
o homem, o sebo se mistura com clulas peridrmicas escamadas para formar a vernix
caseosa, esbranquiada, que envolve o feto no nascimento. [ecto8.html]
Os primeiros plos do embrio humano so finos, localizados muito prximos, e
formam o chamado lanugo. Esse tipo de plo geralmente descartado antes do nascimento e substitudo (pelo menos em parte, por novos folculos) por plos curtos e
sedosos, o velo. Velo permanece em muitas partes do corpo humano, usualmente
consideradas sem plos como a testa e as plpebras. Em outras partes do corpo, o velo
d lugar para o plo definitivo. Durante a vida de uma pessoa, alguns dos folculos
que produziram velo podem, mais tarde, formar plos definitivos, depois reverter para
a produo de velo. As axilas das crianas, por exemplo, tm folculos que produzem
velo at a adolescncia. Nessa fase, as hastes definitivas so produzidas. Inversamente, em calvcie normal masculina, os folculos do couro cabeludo voltam a produzir
plos velos muito finos e no pigmentados (Montagna e Parakkal, 1974). A localizao
e o padro de plos, penas, escamas e glndulas sudorparas envolve interaes da
epiderme e da derme, e essas sero discutidas em detalhe no Captulo 17. Da mesma
forma que existe uma clula germinativa neural, cuja descendncia se torna clulas
neurais e clulas gliais, tambm parece existir uma clula germinativa epidrmica
pluripotente, cujos descendentes podem se tornar epiderme, glndulas sebceas e
hastes de plo.
Concluses
Neste captulo acompanhamos a diferenciao do ectoderma embrionrio em uma
ampla variedade de tecidos. Vimos que o ectoderma produz trs conjuntos de clulas
durante a neurulao: (1) O tubo neural que d origem aos neurnios, s clulas gliais
301
LITERATURA CITADA
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305
306
Especificidade axnica
Assim, para alm de questes de quantidade, existem questes de padres que so essenciais para a compreenso da Natureza.
ALFRED NORTH WHITEHEAD (1934)
307
308
Figura 8.1
ertebrado
Especificao do Neurnio Motor de V
Vertebrado
Vertebrados formam um tubo neural dorsal, enquanto invertebrados, tal como a
Drosophila, formam um tubo neural ventral. No entanto, a especificao do ectoderma neural mediada pela ligao de protenas semelhantes. Em Xenopus (e provavelmente outros vertebrados) a notocorda secreta as protenas Chordin e Noggin.
Essas protenas ligam BMP4, e o ectoderma na vizinhana da notocorda desenvolve
a capacidade de formar neurnios. Se o ectoderma est exposto a BMP4, ele torna-se
epidrmico (Sasai et al., l995; Piccolo et al., 1996; veja Captulo 16). Na ausncia de
estimulao por BMP4 as clulas ectodrmicas dos vertebrados parecem sintetizar
um fator de transcrio (ou um conjunto de fatores de transcrio) que compromete
as clulas uma linhagem neural. Posteriormente, as clulas iro sintetizar outras
protenas (tal como a NeuroD) que levam-nas a expressar seu fentipo neural (Turner
e Weintraub, 1994; Lee et al., 1995).
As decises relativas ao tipo de neurnio parecem ser controladas pela posio
do precursor neuronial no interior do tubo neural e pelo momento quando esse sofre
sua ltima diviso celular. Conforme descrito no captulo anterior, os neurnios na
margem ventro-lateral tornam-se neurnio motores, enquanto os neurnios sensoriais so derivados de clulas na regio dorsal do tubo. Como transplante de clulas da
placa ectpica do assoalho ou notocorda (que secretam a protena Sonic hedgehog)
para reas laterais pode re-especificar clulas dorsolaterais em neurnios motores,
essa deciso quanto ao tipo de neurnio provavelmente uma funo de sua posio
em relao placa do assoalho. Ericson e colega (1996) mostraram que so necessrios dois perodos de sinalizao de Sonic hedgehog para especificar os neurnios
motores: um perodo precoce durante o qual as clulas so instrudas para se tornarem
neurnios ventrais e um perodo mais tardio (que inclui a fase S de sua diviso de
aniversrio) que especifica que o neurnio ventral est para se tornar um neurnio
motor (em vez de um interneurnio). A primeira fase provavelmente regulada pela
secreo de Sonic hedgehog pela notocorda, enquanto o estgio mais tardio mais
309
Nveis
Colunas de um lado
do tubo neural
Ordem da
Neurnio
expresso gnica motor
Projeo de neurnios
dentro de cada coluna
Figura 8.2
Tubo neural
Cervical
Torcica
Msculo
Membro
anterior
Dorsal
Parede
do corpo
Ventral
Torcico
Membro posterior
Msculo
Dorsal
ou
Membro
posterior
Ventral
Tempo
310
(A)
Estgio 15-16
Estgio 28.5
Plexo
crural
Estgio 28.5
Plexo
crural
Axial
Sartrio
(B) Controle
Axial
Sartrio
(C) Revertido
Figura 8.3
311
Figura 8.4
Embrio de Drosophila
Blastoderma
celular
Gastrulao
Alongamento da
banda geminativa
Delaminao
do neuroblasto
Ectoderma
superficial
Neuroectoderma
presuntivo
Clulas presuntivas
da linha mediana
Mesoderma
Neuroblastos
Ectoderma ventral (do
ectoderma neurognico)
Precursores
da linha
mediana
Neurnios
Clula-me do
gnglio
Crescimento
axnico
Neuroblasto
NB 1-1
Interno
Externo
genes proneurais (Figura 8.5). Esses constituem um conjunto de fatores de transcrio encontrados em arranjos de cerca de quatro a seis clulas na regio ectodrmica.*
Cada arranjo forma uma zona de interao onde uma (e apenas uma) das clulas se
torna um neuroblasto. Uma clula compromissada para formar um neuroblasto, inibe
as outras clulas de seu arranjo de se tornarem neuroblastos. Isso conseguido pela
interao com um grupo de genes chamados de genes neurognicos. As protenas
Notch e Delta so crticas nessas reaes. Essas protenas se integram na membrana
celular. Suas interaes sugerem que a clula que est destinada a se tornar um
neuroblasto diminui a regulao da sua protena Notch, que leva suas vizinhas a
diminuir a regulao das suas protenas Notch. Essa deciso comunicada atravs de
protenas Delta. Dessa maneira, o neuroblasto inibe lateralmente outras clulas do
agregado de se tornarem neuroblastos (veja Captulo 17). [axon3.html]
Tal como acontece em vertebrados, a especificao de neuroblasto em Drosophila
conseguida pela expresso combinatria de diferentes genes. (De maneira interessante, esses genes foram usados anteriormente para especificar cada regio do
blastoderma da Drosophila). Se quaisquer desses genes no forem capazes de funcionar, os neuroblastos se comportam como se fossem outros tipos de neurnios, freqentemente formando nervos que enviam seus axnios para alvos errados (ChuLaGraff et al., 1995). [axon4.html]
312
Figura 8.5
Ectoderma
superficial
Ectoderma
neurognico
(F)
Especificao seqencial da linhagem de neuroblastos. (A) O ectoderma neurognico especificado por sinais posicionais ao longo dos eixos dorsoventral e ntero-posterior. (B,C) Agregados de neuroblastos potencias esto especificados por genes proneurais como o achaete (mostrado em F). (D) Interao entre neuroblastos potenciais seleciona uma clula do agregado para ser
neuroblasto, e essa clula inibe as outras clulas do agregado de se tornarem neuroblastos. (E) Os
neuroblastos brotam das clulas-me ganglionares (da maneira que ser discutida no Captulo
13), cada uma indo formar dois neurnios. (F) Embrio de Drosophila corado para o transcrito
de achaete. Os agregados neurognicos expressam esse gene. Os parnteses indica um domnio
de atividade neurognica. (Segundo Goodman e Doe, 1993; fotografia de Skeath e Carrol, 1922;
cortesia de J. Skeath.)
Seleo de trajetria, onde os axnios viajam por uma rota que os conduz a
uma regio particular do embrio.
*Os cones de crescimento dos neurnios pioneiros migram para seus tecidos alvos enquanto as
distncias embrionrias ainda so curtas e o tecido embrionrio interveniente ainda relativamente
no-complicado. Mais tardiamente no desenvolvimento, os outros neurnios que inervam o tecido
alvo se ligam (fasciculam) ao neurnio pioneiro e assim penetram no tecido alvo. Klose e Bentley
(1989) mostraram que em alguns casos, os neurnios pioneiros morrem aps outros neurnios
terem atingido sua destinao. No entanto, tivesse esse neurnio pioneiro sido impedido de se
diferenciar, os outros axnios no teriam atingido seu tecido alvo.
Seleo de alvo, onde os axnios, uma vez atingido a rea correta, reconhecem
e ligam-se a um conjunto de clulas com as quais podem formar conexes
estveis.
Seleo de endereo, onde os padres iniciais so refinados fazendo cada
axnio se ligar a um pequeno subconjunto (s vezes de somente um) de seus
possveis alvos.
313
314
consideraram a hiptese de que esses canais proviam sinais para guiar os axnios
em direo s regies apropriadas do crebro. Canais celulares foram tambm detectados na retina do camundongo (Silver e Sidman, 1980), e parecem guiar os cones de
crescimento das clulas ganglionares da retina para o caule ptico durante seu
desenvolvimento.
A presena de canais preexistentes provavelmente no crtica para o crescimento
da maioria dos axnios. O cone de crescimento parece capaz de digerir seus prprios
canais atravs de uma matriz extracelular secretando enzimas proteolticas para sua
vizinhana imediata (Pittman, 1985).
Orientao para Gradientes de Adeso: Haptotaxia
O cone de crescimento de um axnio em desenvolvimento encontra numerosos
microambientes, e alguns locais podem conter molculas que so mais adesivas que
outras encontradas em outros locais. A capacidade de um cone de crescimento (ou de
uma clula) para migrar subindo um gradiente de adesividade chamada haptotaxia. O
cone de crescimento tem receptores que reconhecem protenas encontradas em certas
lminas basais e o cone conduz o axnio ao longo de caminhos recobertos por essas
protenas. A hiptese da especificidade adesiva diferencial postula que o cone de crescimento ir encontrar um ambiente irregular e que reconhece o seu caminho por ter
receptores particulares para certas molculas no ambiente. Isso pode ser visto in vitro.
Quando colocado em cultura, um pedao de tecido da retina neural no emite facilmente
Figura 8.6
axnios para a placa de plstico. Porm, se a placa for recoberta com fibronectina ou
laminina, crescimento de longos axnios so observados (Figura 8.6). Reciprocamente,
glicosaminoglicanos, outro conjunto de protenas associadas com matrizes extracelulares,
parecem impedir esses crescimentos neurais (Tosney e Landmesser, 1985).
A presena de tais molculas delineia as trajetrias atravs do embrio (Akers et
al., 1981; Gundersen, 1987), e muitos dos caminhos percorridos pelos axnios parecem
ser pavimentados por laminina. Letourneau e colaboradores (1988) mostraram que os
axnios de certos neurnios espinhais migram atravs do neuroepitlio por uma superfcie transitoriamente recoberta por laminina que indica precisamente o caminho
desses axnios. De maneira semelhante, existe muito boa correlao entre o alongamento dos axnios da retina e a presena de laminina nas clulas neuroepiteliais e
astrcitos no crebro do embrio do camundongo (Cohen et al., 1986, 1987; Liesi e
Silver, 1988). Depsitos puntiformes de laminina so vistos nas superfcies das clulas
gliais ao longo do caminho levando da retina para o tectum ptico, ao passo que reas
adjacentes onde o nervo tico deixa de crescer no h tais depsitos de laminina.
Aps os axnios da retina terem alcanado o tectum, as clulas gliais se diferenciam e
perdem sua laminina. Nesse ponto, os neurnios ganglionares da retina que formaram o
nervo tico perdem seu receptor integrina para a laminina. Depsitos de laminina podem
tambm ser necessrios para a regenerao do tecido neural. Clulas astrogliais contendo laminina puntiforme em suas superfcies podem induzir a regenerao quando colocadas em embries nos quais os caminhos neuroniais do corpo caloso foram rompidos.
Existem ao menos quatro regies da glicoprotena laminina que podem sustentar
a migrao e o crescimento axnico (Figura 8.7). Primeiro, as integrinas do cone de
crescimento podem se ligar seqncia RGD da protena laminina. Segundo, outro
receptor do cone de crescimento pode reconhecer a seqncia de aminocidos YIGSR
na laminina, enquanto a regio de 10 aminocidos rica em isoleucina do peptdeo B2
crtica para o crescimento neurtico de certos neurnios (Matsuzawa et al., 1996). O
quarto receptor para laminina do cone de crescimento a glicosiltransferase que
reconhece certas cadeias laterais de carboidrato da molcula de laminina (Begovac e
Shur, 1990; Thomas et al., 1990). Esses carboidratos podem residir no domnio de
crescimentos neurticos da cadeia A da laminina.
Conduo por Sinais Migratrios Especficos do Axnio:
A Hiptese das Trajetrias Marcadas
Por serem encontradas em muitos lugares atravs do embrio, molculas da matriz
extracelular como a laminina e N-CAM podem usualmente proporcionar somente sinais gerais para a movimentao dos cones de crescimento. Seria difcil para tais
molculas generalizadas dirigir cones de crescimento de diferentes tipos em direes
diferentes. Apesar disso, em Drosophila, gafanhotos e Caenorhabditis (e provavelmente na maioria dos invertebrados), a padronizao do movimento axnico um
processo surpreendentemente preciso, e os axnios adjacentes esto dando instrues migratrias diferentes de seus ambientes. Por exemplo, de dentro de cada segmento do gafanhoto emergem 61 neuroblastos (30 de cada lado e um no centro). Um
desses, o neuroblasto 7-4, uma clula germinativa e d origem a uma famlia de seis
neurnios, chamados C, G, Q1, Q2, Q5 e Q6. Essa famlia de neurnios est mostrada na
Figura 8.8, do mesmo modo que os neurnios amarelos na Prancha 20. Os cones de
crescimento axnico desses neurnios alcanam seus alvos seguindo caminhos especficos formados por outros neurnios precoces. Q1 e Q2 seguem um caminho reto
juntos, atravessando numerosas outras clulas, at encontrar o axnio do neurnio
precursor da linha mediana dorsal (dMP2), na qual eles seguem posteriormente. Os
outros quatro neurnios da famlia 7-4 migram atravs do axnio dMP2 como se esse
no existisse. Axnios do neurnios C e G progridem juntos por um longo caminho,
mas finalmente C segue os nervos X1 e X2 para a parte posterior do segmento, enquanto G adere aos axnios P1 e P2 (que prosseguiro posteriormente) e move-se
anteriormente sobre suas superfcies (Goodman et al., 1984, Taghert et al., 1984).
315
Cadeia A
Regio de ligao
de clulas epiteliais
Cadeia B1
Local YIGSR
de fixao celular
e migrao
Local de fixao
de clulas RDG
Cadeia B2
Domnio de
ligao de
colgeno
tipo IV
Regio de
crescimento
de neuritos
Regio ligante de
heparina e axnio
Figura 8.7
316
Clulas-me ganglionares
Prognie:
Neurnios irmos
Axnios
Cones de
crescimento
Fascculos axnicos
Figura 8.8
Cada um dos 17 segmentos do embrio precoce do gafanhoto tem o mesmo padro de neuroblastos. Existem 30 neuroblastos laterais de
cada lado, um neuroblasto mediano e 7 precursores na linha mediana. Os neuroblastos da
linha mediana se dividem uma vez, enquanto
os neuroblastos so clulas-tronco que dividem-se repetidamente para formar as clulasme ganglionares. Cada uma das clulas se
divide uma vez para fornecer dois neurnios
irmos. O neuroblasto 7-4 tem uma prognie
de quase 100 neurnios, dos quais os primeiros 6 so aqui mostrados. (Segundo Goodman
e Bastiani, 1984.)
(A)
317
(B)
Figura 8.9
pareados contendo cerca de 400 neurnios cada. Foram identificados neurnios individuais, e as funes de muitos desses neurnios so conhecidas. Zipser e Mckay
(1981) injetaram o sistema nervoso da sanguessuga em camundongos e obtiveram
centenas de anticorpos monoclonais que se ligaram a vrias regies do sistema nervoso. Em alguns casos, essas diferenas puderam ser correlacionadas com funo. O
anticorpo monoclonal Lan 3-1 se ligou especificamente a um nico par de neurnios
em cada um dos gnglios do corpo mediano (Figura 8.9). Esses pares de neurnios so
conhecidos por controlar o processo da everso peniana nas sanguessugas em
copulao. Outro anticorpo monoclonal, Lan 3-2, reconheceu todos os quatro neurnios em cada gnglio, que respondem a estmulos mecnicos nocivos. A situao,
de acordo com Zipser e Mckay parece bastante anloga a cabos eltricos codificados por cores contendo muitos fios, onde cada fio tem sua prpria molcula (corante)
para facilitar o reconhecimento apropriado e conexo terminais.
Estudos sobre trajetrias marcadas especificamente em vertebrados esto muito
atrasados em comparao com aqueles em invertebrados, mas estudos recentes nos
neurnios motores do peixe-zebra indicam que as trajetrias marcadas tambm funcionam aqui. O peixe-zebra poder tornar-se o organismo de escolha em neurobiologia
desenvolvimental em vertebrados, porque tem desenvolvimento muito rpido, muitos
indivduos podem ser comparados, e os embries so transparentes, permitindo aos
neurobiologistas observar o crescimento dos axnios em embries vivos. Neurnios
podem ser identificados pela injeo de substncias marcadas por fluorescncia em
percursores neuroniais (Kimmel e Law, 1985), e o crescimento axnico pode ser seguido visualmente ou por registro em vdeo. Eisen e colegas (1986) observaram o alongamento axnico de trs neurnios motores pioneiros nesses embries. Aps deixar a
medula espinhal, todos os trs seguiram o mesmo caminho ao longo de um msculo
at alcanarem um determinado local no embrio. Nesse ponto, eles divergiram em trs
trajetrias especficas levando aos msculos apropriados. A hiptese das trajetrias
marcadas tem sido extremamente importante tanto como modelo para a gerao de
pesquisas, como em um contexto no qual podem ser inseridos dados existentes sobre
a especificidade neuronial.
Orientao pela Repulso Especfica de Cones de Crescimento
Alm da adeso especfica existe tambm a possibilidade da repulso especfica pela
matriz extracelular. Axnios dos neurnios dos gnglios da raiz dorsal do tronco passam somente atravs da parte anterior da rea de cada somito (assim como as clulas da
crista neural iro migrar somente atravs dessas regies e no das regies posteriores)
318
(A)
Esclertomo
Tubo neural
(B)
Notocorda
(C)
Figura 8.10
(Figura 8.10A). A superfcie celular da poro posterior do somito pode estar inibindo essa migrao. Davies e colegas (1990) mostraram que membranas isoladas da
poro posterior do somito causam o colapso dos cones de crescimento dos neurnios dos gnglios da raiz dorsal (Figura 8.10B,C). Alm disso, eles isolaram uma
frao de glicoprotena da soma de pinto, que causa o colapso desses cones; e os
componentes dessa frao so especificamente encontrados na poro posterior
dos somitos. Em insetos, a semaforina I (tambm conhecida como fasciculina IV)
uma protena transmembrana que expressa em uma banda de clulas epiteliais no
membro em desenvolvimento. Essa protena parece inibir os cones de crescimento
dos neurnios sensoriais Ti1 moverem-se para frente, levando-os a se virarem (Figura 8.11; Kolodkin et al., 1992, 1993).
G-Sema I
Figura 8.11
Ti1
Membro em
Desenvolvimento
CNS
Informaes adicionais
&
319
Especulaes
Lobo
Frontal
Figura 8.12
Modelo para a etiologia da sndrome de Kallmann. Na ilustrao esquerda, neurnios sensoriais do epitlio olfativo estendem axnios para o bulbo olfativo do crebro. Na sndrome de
Kallmann, o bulbo olfativo degenerou, e essa perda considerada secundria carncia de
axnios dos neurnios sensoriais. A srie de cortes sagitais da cabea de camundongos embrionrios mostra a migrao de neurnios secretores de GnRH (colorido) do primrdio nasal
para dentro da poro hipotalmica do crebro. Essa migrao no ocorre na sndrome de
Kallmann. (Segundo Calof, 1992.)
Bulbo
olfativo
Bulbo olfativo
Hipotlamo
Epitlio Olfativo
Lngua
Cavidade
Nasal
Clula
neurossensorial
primria
Epitlio
olfativo
Clula
neurossensorial
secundria
Nariz
Dia 11
Dia 13
Dia 14
Maxilar
Dia 15
rea
pr-ptica
320
(A)
Gradiente de
netrina-2
Neurnio
comissural
Gradiente de
netrina-1
Placa do assoalho
(B)
Placa do assoalho
Figura 8.13
A idia de que sinais quimiotticos guiam os axnios no sistema nervoso em desenvolvimento foi primeiro proposta por Ramn y Cajal (1982). Ele sugeriu que os neurnios comissurais da medula espinhal poderiam viajar de suas posies dorsais para a
placa ventral do assoalho por meio de fatores difusveis. Os axnios desse neurnio
comeam a crescer ventralmente abaixo do lado do tubo neural. Porm, aproximadamente a dois-teros do caminho, sua direo muda, e eles se projetam atravs da rea
do neurnio (motor) ventrolateral do tubo neural em direo s clulas da placa do
assoalho (Figura 8.13). [axon1.html], [axon5.html]
Em 1994, Serafini e colegas desenvolveram um ensaio que lhes iria permitir selecionar tais molculas difusveis. Quando explantes da medula espinhal dorsal foram
colocados sobre placas de colgeno, a presena de clulas da placa de assoalho nas
proximidades promoveria o crescimento dos axnios comissurais desses explantes.
Serafini e seus colegas tomaram fraes de crebro de embries de pinto e homogenaram
e testaram essas fraes para ver se alguma de suas protenas imitaria essa atividade.
Isso resultou na identificao de duas protenas, netrina-1 e netrina-2. Netrina-1
produzida e secretada pelas clulas da placa de assoalho, enquanto netrina-2 sintetizada na regio mais inferior da medula espinhal, mas no na placa de assoalho (veja
Figura 8.13). Os efeitos quimiotticos dessas netrinas foram mostrados pela transformao de clulas COS (que em geral no produzem essas protenas) com um vetor
contendo um gene netrin ativo (Kennedy et al., 1994). Agregados das clulas COS
secretoras de netrina provocaram o crescimento do axnio comissural de explantes da
espinha dorsal do rato, enquanto aquelas clulas COS tratadas com o vetor sem o
gene netrin ativo no provocaram tal atividade (Figura 8.14). Ambas netrinas se associam matriz extracelular.* possvel que os neurnios comissurais primeiro encontrem um gradiente de netrina-2, que os trazem para os domnios do gradiente mais
ngreme da netrina-1 (veja Figura 8-13).
As netrinas tm numerosas regies de homologia com UNC-6, uma protena envolvida no direcionamento da migrao circunferencial de axnios ao redor do corpo
de Caenorhabditis elegans. No nematide de tipo selvagem, a UNC-6 induz axnios
de certas posies centrais a moverem-se ventralmente, e isso induz alguns corpos
celulares localizados ventralmente a estenderem o axnio dorsalmente (Figura 8.15).
Em mutaes de perda-de-funo do gene unc-6, nenhum desses movimentos axnicos
ocorre (Hedgecock et al., 1990; Ishii et al., 1992; Hamelin et al., 1993). Mutaes do
gene unc-40 interrompem a migrao axnica ventral (mas no a dorsal), enquanto
mutaes do gene unc-5 somente previnem a migrao dorsal. Culotti (1994) props
que a protena UNC-6 pode atrair o conjunto de axnios que sintetiza UNC-40 e repelir
os axnios que produzem UNC-5. Estudos recentes (Wadsworth et al., 1996) mostram
que a UNC-6 restrita espacialmente s clulas mais ventrais da hipoderme (pele) e
sistema nervoso, e que as propriedades atrativas e repulsivas dessa molcula so
mediadas pelas regies diferentes da protena. Alm disso, os sinais da netrina tambm guiam clulas mesodrmicas assim como axnios.**
Se a UNC-6 atrativa para certos neurnios e repulsiva para outros, poder-se-ia
pensar que esse duplo papel tambm seria atribudo s netrinas. Colamarino e TessierLavigne (1995) mostraram que isso o caso observando a trajetria do nervo troclear
*A ligao de um fator solvel matriz extracelular cria uma ambigidade interessante entre quimiotaxia, haptotaxia e trajetrias marcadas. A natureza no se conforma
necessariamente s nossas categorias.
**No somente UNC-6 homloga netrina, mas UNC-40 homloga ao receptor de netrina dos mamferos e da Drosophila (Chan et al., 1996; Keino-Masu et al.,
1996; Kolodziej et al., 1996). Em todos os tipos de organismos, a molcula de netrina
parece proporcionar orientao para a migrao de clulas portando seu receptor.
(A)
(C)
(B)
(D)
321
Figura 8.14
322
Figura 8.15
C. elegans
(A)
(B)
neurnios
sensoriais
de unc 40+
Tipo
selvagem
Epidermoblastos
da parede ventral
do corpo
(C)
Neurnios
motores unc5+
(D)
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 8.16
Netrina inibe o crescimento de axnios trocleares da medula espinhal dorsal. Axnios trocleares,
corados para antgeno especfico do axnio troclear, emergem dorsalmente e no so inibidos
pelo explante de medula espinhal dorsal (A) ou pelas clulas COS (B). Eles so inibidos pelas
clulas COS secretando netrina-1 (C) ou pela placa do assoalho da medula espinhal (D). (Segundo Colamarino e Tessier-Lavigne, 1995; fotografias cortesia de M. Tessier-Lavigne).
(A)
323
Neurnios aferentes Ia
(responsivos NT-3)
Aferente para mecanorreceptores
de baixo limiar
Receptores de temperatura e dor
(B)
Figura 8.17
Semaforina III como inibidor seletivo de projees axnicas para a medula espinhal
ventral. (A) Trajetria de axnios em relao expresso de semaforina III na medula
espinhal do embrio de rato de 14 dias. Os neurnios responsivos neurotrofina-3
podem viajar para a regio ventral da medula espinhal, mas os neuritos aferentes para os
mecanorreceptores e neurnios receptores de temperatura e dor terminam dorsalmente.
(B) Clulas COS secretoras de semaforina III inibem o crescimento de axnios
mecanorrecepores (aqui mostrados crescendo num meio tratado com NGF, mas inibidos de crescer em direo fonte de semaforina III). (C) Os neurnios que so
responsivos NT-3 para crescimento no so inibidos de se estenderem em direo
fonte de semaforina III. (A segundo Marx, 1995; B e C segundo Messersmith et al.,
1995; fotografias cortesia de A. Kolodkin.)
Tubo neural
(medula
espinhal)
Nervos
espinhais
Rudimento
renal
Intestino
Broto de
membro
Sulco
ectodrmico
apical
Figura 8.18
324
(A)
Medula espinhal
Neurnios
motores
(B)
Barreira
Esclertomo posterior
e
Trajetria
Esclertomo
dorso-anterior
Nervos epaxiais
(para o dorso)
Plexo
Nervo espinhal
Tronco nervoso
dorso-anterior
Tronco
nervoso ventroanterior
Nervo do
msculo
Barreira
Mesnquima
perinotocordal
Trajetria
Mesnquima
do plexo
Barreira
precursor do
cinturo plvico
Figura 8.19
posterior que penetram no membro. Se outros orifcios forem feitos esperimentalmente no tecido precursor do cinturo plvico, os axnios os atravessam prontamente (Tosney e Landmesser, 1984, 1985).
Os nervos podem at mesmo alcanar seus respectivos destinos se as clulas
formadoras de msculos tiverem sido removidas (Phelan e Hollyday, 1990), e provvel que as outras clulas mesenquimatosas no broto do membro (tal como aquelas que formam a derme ou a cartilagem) estejam provendo os sinais direcionais.
Essas trajetrias para as regies musculares dos membros parecem ser muito bem
definidas. Quando se redireciona axnios de uma origem diferente (como um gnglio
diferente) para o membro, eles se ramificam como o fazem os axnios que originalmente inervaram o membro. Em outras palavras, o membro capaz de ditar o padro
de inervao para um conjunto de axnios que normalmente no o penetrariam
(Hamburger, 1939; Hollyday et al., 1977). Ainda mais, se segmentos da medula espinhal do pinto forem revertidos fazendo com que seus neurnios motores se encontrem em novas localizaes, seus axnios iro encontrar seus alvos originais (veja
Figura 8.3; Lance-Jones e Landmesser, 1980). No entanto, quando membros se desenvolvem com reas duplicadas (como duas coxas), os neurnios inervando a
segunda coxa no sero neurnios especficos da coxa, mas neurnios que usualmente inervam a panturrilha (Whitelaw e Holliday, 1983). Esses experimentos apresentam um paradoxo ainda a ser resolvido: Axnios particulares esto predispostos a crescer para lugares especficos; no entanto, axnios de pools de neurnios
motores diferentes podem substituir um outro no estabelecimento de padres nervosos normais (Purves e Lichtman, 1985). A explicao mais plausvel que vrios
mecanismos atuam simultaneamente para assegurar que os axnios cheguem a seus
lugares apropriados. Um desses mecanismos parece ser a conduo da superfcie
celular de clulas mesenquimatosas no formadoras de msculos no broto do membro, enquanto outro mecanismo provavelmente envolve a quimiotaxia de mioblastos
do broto do membro (Goodman e Shatz, 1993).
Axnios da Retina
Tambm se postularam sinais de orientao mltipla para explicar como neurnios
retinianos individuais so capazes de enviar axnios para a rea apropriada do crebro, mesmo quando transplantados para longe do nervo ptico (Harris, 1986). Essa
capacidade indica que os sinais de orientao no esto distribudos somente ao
longo da trajetria normal, mas existem atravs de todo o crebro embrionrio. Orientar um axnio de um corpo celular nervoso para seu destino atravs do embrio um
fenmeno complexo, e vrios tipos de sinais diferentes podem ser usados simultaneamente para assegurar que sejam estabelecidas as conexes corretas.
Os primeiros passos para levar os axnios retinianos para suas regies especficas no tectum ptico se realizam no interior da retina (Figura 8.20A). medida que
as clulas ganglionares retinianas se diferenciam, sua posio na margem interna da
retina determinada pelas molculas de caderina (N-caderina assim como a R-caderina
especfica da retina) das suas membranas celulares (Matsunaga et al., 1988; Inuzuka
et al, 1991). Os axnios dessas clulas crescem ao longo da superfcie interna da
retina em direo cabea do nervo ptico (Figura 8.20B). A adeso e o crescimento
dos axnios das clulas da retina podem ser controlados pela lmina basal contendo
laminina. Porm, a fixao laminina no pode explicar o direcionamento do crescimento. possvel que um gradiente da molcula inibidora do proteoglicano de sulfato de condroitina da matriz extracelular tenha um papel na especificao da direo
do crescimento (Hynes e Lander, 1992).
Quando os axnios penetram no nervo ptico, eles crescem sobre as clulas gliais
em direo ao crebro. Estudos in vitro sugerem que numerosas molculas de adeso
celular N-CAM, caderinas e integrinas tm funes na orientao do axnio para
o tectum ptico (Neugebauer et al., 1988). N-CAM parece ser especialmente importante aqui, pois a migrao direcionada dos cones de crescimento ganglionares retinianos
325
326
(B)
Retina
(D)
Trato ptico
(F)
Chegada ao alvo
Perda de laminina in vivo
Perda de resposta laminina in vitro
Te c t
um
(G)
ptic
Figura 8.20
Sinais para a orientao mltipla direcionam o movimento dos axnios dos gnglios retinianos
para o tectum ptico. (Segundo Hynes e Lander, 1992.)
Seleo de alvos
Quando os axnios chegam ao fim desse trajeto forrado de laminina, eles se espalham e acham seus alvos especficos. Estudos em rs e peixes (onde os neurnios
retinianos de cada olho se projetam para o lado oposto do crebro) indicaram que
cada axnio retiniano envia seu impulso para um local especfico (uma clula ou
TECTUM ESQUERDO
Rostral
Caudal
TECTUM DIREITO
Posterior
Dorsal
Anterior
Posterior
Dorsal
Campo
visual direito
Ventral
OLHO ESQUERDO
Campo
visual esquerdo
Ventral
OLHO DIREITO
Figura 8.21
Mapa da projeo retinotectal normal no Xenopus adulto. O olho direito inerva o tectum esquerdo, e o olho esquerdo inerva o tectum direito. Os nmeros nos campos visuais (retina) e os tecta
mostram regies de correspondncia; isto , estimulao do ponto 15 na retina direita envia
impulsos eltricos para a regio tectal esquerda 15. As flechas negras e coloridas sumariam o
padro das conexes retinotectais. (de Jacobson, 1967.)
pequeno grupo de clulas) dentro do tectum (Sperry, 1951). Como mostra a Figura
8.21, existem dois tecta ptico no crebro da r. Os axnios do olho direito entram no
tectum ptico esquerdo, enquanto aqueles do olho esquerdo formam sinapses com
as clulas do tectum ptico direito. O crescimento de neurnios no trato ptico de
Xenopus parece ser mediado por fatores de crescimento fibroblstico secretados
pelas clulas forrando o trato. Os axnios ganglionares retinianos expressam receptores FGF nos seus cones de crescimento. Porm, medida que as clulas ganglionares atingem o tectum, a quantidade de FGF diminui, talvez retardando os axnios
e permitindo-lhes achar seus alvos (McFarlane et al., 1995).
O mapa das conexes retinianas at o tectum ptico da r (a projeo retinotectal)
foi detalhada por Marcus Jacobson (1967). Jacobson definiu esse mapa lanando um
estreito feixe de luz numa regio pequena e limitada da retina e anotou, por meio de um
eletrodo registrador no tectum, quais clulas tectais estavam sendo estimuladas. A
projeo retinotectal de Xenopus laevis mostrada na Figura 8.21. A luz iluminando a
parte ventral da retina estimula clulas na superfcie lateral do tectum. Da mesma
maneira, luz focalizada na parte posterior da retina estimula clulas na poro caudal
do tectum. Esses estudos demonstraram uma correspondncia ponto-por-ponto entre
as clulas da retina e do tectum. Quando um grupo de clulas da retina ativado, um
grupo muito pequeno e especfico de clulas tectais estimulado. Podemos tambm
observar que os pontos formam um contnuo; em outras palavras, pontos adjacentes
na retina se projetam sobre pontos adjacentes no tectum. Esse arranjo permite r ver
uma imagem inteira. Essa intrincada especificidade levou Sperry (1965) a lanar a
hiptese da quimioafinidade:
Os complicados circuitos das fibras nervosas cerebrais crescem, se juntam e se
organizam atravs de intricados cdigos qumicos sob controle gentico. No
incio do desenvolvimento, as clulas nervosas, contadas em milhes, adquirem
327
328
Figura 8.22
Adeso diferencial de clulas dorsais radioativas da retina do pinto s metades tectais dorsal e ventral. Clulas radioativas da metade
dorsal de retinas de pinto de 7 dias foram adicionadas s metades dorsal (cor) e ventral (negro) de tecta pticos de pintos de 12 dias. Os
dados mostram a adeso seletiva das clulas
retinianas dorsais ao tecido tectal ventral. (Segundo Roth e Marchase, 1976).
ectum
egies do T
desivas em Diferentes R
Especificidades A
Tectum
Regies
Adesivas
Existe boa evidncia que as clulas ganglionares retinianas podem distinguir entre
as regies do tectum. Clulas preparadas da metade ventral da retina neural do pinto
aderem-se preferencialmente s metades dorsais do tectum (Figura 8.22; Roth e
Marchase, 1976). Gottlieb e colaboradores (1976) acharam que neurnios retirados
da parte mais dorsal da retina do pinto aderem-se preferencialmente poro mais
ventral do tectum e que os neurnios do extremo ventral da retina aderem-se preferencialmente aos extremos mais dorsais do tectum. Esses resultados foram confirmados sob outras condies experimentais usando extremidades axnicas em lugar
de neurnios inteiros (Halfter et al., 1981).
Um gradiente que foi identificado funcionalmente um gradiente de repulso que
mais alto no tectum posterior e mais fraco no tectum anterior. Bonhoeffer e colegas
(Walter et al., 1987) prepararam um tapete de membranas tendo tiras alternadas
derivadas dos tecta posterior e anterior. Eles deixaram, ento, clulas das regies nasal
(anterior) ou temporal (posterior) da retina estenderem axnios nesse tapete. As clulas ganglionares da poro nasal da retina estendem axnios igualmente bem nas
membranas anterior e posterior do tectum. Os neurnios do lado temporal da retina,
porm, estenderam axnios somente nas membranas tectais anteriores (Figura 8.23). A
base dessa especificidade parece ser o fator repulsivo nas membranas das clulas
tectais posteriores. Quando o cone de crescimento de um axnio retiniano temporal
contata a membrana da clula tectal posterior, os filopdios do cone se retraem, e o
cone de crescimento entra em colapso e se retrai (Cox et al., 1990). Baier e Bonhoffer
(1992) demonstraram que um gradiente de uma substncia inibidora isolada da poro
posterior do tectum capaz de guiar os axnios temporais da retina.
Duas dessas molculas repulsivas foram identificadas em embries de pinto.
Chamadas RAGS (sinal repulsivo de orientao axnica) e ELF-1 (famlia ligante de
Eph 1), esto presentes num gradiente caudal-para-rostral atravs do tectum, e a
protena clonada capaz de repelir axnios (Figura 8.24; Drescher et al., 1995). RAGS
e ELF-1 revelaram ser ligantes para uma famlia de tirosina quinases receptores
chamadas Quinases receptoras Eph. Essas quinases foram encontradas nas clulas
ganglionares da retina do pinto, e elas so expressas em um gradiente temporalpara-nasal ao logo dos axnios da retina (Cheng et al., 1995). Parece haver vrios
receptores Eph na retina e ligantes no tectum que podem ter o papel de empurra-epuxa na orientao dos axnios retinianos temporais para o tectum anterior e permitir os axnios retinianos se projetarem para a poro posterior do tectum.
Membranas tectais
329
Figura 8.23
Anterior
Posterior
Anterior
Posterior
Anterior
Posterior
Anterior
Nasal
Olho
Crebro
Temporal
Temporal
Tectum
Receptor Eph da
tirosina quinase
(Mek-4)
(A)
Retina
Anterior
Nasal
Posterior
Temporal
Tectum
Figura 8.24
(B)
Retina temporal
Retina nasal
330
aqueles da regio nasal) da retina evitaram as regies expressando ELF-1. Assim, ELF1 pode prover sinais negativos para as regies temporais da retina.
O aparecimento de RAGS e ELF-1 regulado pela expresso da protena Engrailed.
A protena Engrailed expressa no dia 2 do desenvolvimento do pinto em uma banda
que inclui a poro caudal (posterior) do futuro tectum ptico (veja Figura 7.18). Se a
protena Engrailed for induzida experimentalmente na poro rostral do tectum, tambm essa adota um fentio caudal. Quando isso ocorre, RAGS e ELF-1 so expressos
atravs de todo o tectum, e os axnios temporais so repelidos das duas metades
(Logan et al., 1996). Assim, a expresso precoce de Engrailed parece induzir a expres-
(D)
Axnios
Miotbulo
Receptores de ACh
(B)
(E)
Miotbulo
(C)
Matriz extracelular
(F)
Vescula
neurotransmissora
Envolvimento pelas
clulas de Schwann
2
laminina
Figura 8.25
Diferenciao da sinapse do neurnio motor com o msculo. Partes (E) e (G) esto representadas em menor aumento que outras para dar uma viso panormica da regio onde o axnio
encontra o msculo. (A) Um cone de crescimento se aproxima de uma clula muscular em
desenvolvimento. (B) O axnio pra e forma um contato no-especializado na superfcie do
miotbulo. A agrina, liberada pelo tubo neural, causa a agregao de receptores de aceticolina.
(C) Vesculas neurotransmissoras penetram no axnio terminal, e uma matriz extracelular
conecta o axnio terminal com a clula muscular medida que a sinapse se alarga. Essa matriz
contm uma laminina especfica do nervo. (D) Outros axnios convergem para o mesmo local
sinptico. (E) Viso geral da inervao muscular por vrios axnios (vista em mamferos no
nascimento). (F) Todos os axnios menos um so eliminados. O axnio remanescente pode se
ramificar para formar uma juno complexa com o msculo. Cada terminal do axnio est
recoberto por um processo de uma clula de Schwann e dobras se formam na membrana da
clula muscular. (G) Viso panormica da inervao muscular vrias semanas aps o nascimento. (Segundo Hall e Sanes, 1993; Purves, 1994; Hall, 1995.)
(G)
Na maturidade
so de RAGS e ELF-1, e essas duas protenas mediam a excluso dos axnios retinianos
temporais da poro caudal (posterior) do tectum.
Seleo de endereo:
Desenvolvimento dependente de atividade
Quando um axnio contata seu alvo (em geral um msculo ou outro neurnio)
forma uma juno especializada chamada sinapse. Neurotransmissores do terminal
do axnio so liberados nessas sinapses para despolarizar ou hiperpolarizar a membrana da clula do outro lado da fenda sinptica. A construo de uma sinapse
envolve vrios passos (Figura 8.25). Quando neurnios motores na medula espinhal
estendem axnios para os msculos, os cones de crescimento que contatam as
recm-formadas clulas musculares migram sobre suas superfcies. Quando o cone
de crescimento adere primeiro membrana da clula muscular, a especializao no
pode ser vista em membrana alguma. Porm, logo os terminais axnicos comeam a
acumular vesculas sinpticas contendo neurotransmissores, as membranas de ambas
as clulas se engrossam na regio de contato, e a fenda entre as clulas se enche
com matriz extracelular que inclui uma forma especfica de laminina. Essa laminina
derivada do msculo, especificamente liga os cones de crescimento dos neurnios
motores e pode agir como um sinal de parada para o crescimento axnico (Martin
et al., 1995; Noakes et al., 1995). Aps esse primeiro contato, os cones de crescimento de outros axnios convergem para esse local para formar sinapses adicionais.
Durante o desenvolvimento, todos os msculos de mamferos estudados parecem
ser inervados por, ao menos, dois axnios. No entanto, essa inervao polineuronial
transitria. Durante a fase precoce da vida ps-natal, todos esses ramos axnicos,
menos um, so recolhidos. Esse rearranjo est baseado na competio entre os
axnios (Purves e Lichtman, 1980; Thompson, 1983). Quando um dos neurnios
motores est ativo, ele suprime as sinapses dos outros neurnios, possivelmente
atravs de um mecanismo dependente de xido ntrico (Dan e Poo, 1992; Wang et al.,
1995). Finalmente, as sinapses menos ativas so eliminadas. O terminal axnico
remanescente se expande e revestido pela clula de Schwann.
A formao de sinapse dependente de atividade tambm parece estar envolvida
nos estgios finais da projeo da retina para o crebro. Em embries de r, ave e
roedor tratados com tetrodotoxina, os axnios iro crescer normalmente para seus
respectivos territrios e iro estabelecer sinapses com os neurnios tectais. Porm,
o mapa retinotectal grosseiro, carente de resoluo fina. Tal como na especificao
final da sinapse do neurnio motor, a atividade neuronial necessria para a projeo retiniana ponto-por-ponto at os neurnios tectais (Harris, 1984; Fawcett e
OLeary, 1985; Kobayashi et al., 1990). Essa eliminao de contatos retinianos transitrios pelo tectum tambm pode envolver a expresso do xido ntrico pelas clulas tectais alvo (Wu et al., 1994).
331
332
(A)
Simptico
(C)
333
Figura 8.26
Nodoso
Figura 8.27
Sem
adio de
agentes
FGF2
Despolarizao
FGF2
+
Despolarizao
334
Informaes adicionais
&
Especulaes
O desenvolvimento de comportamentos:
Constncia e plasticidade
Um dos aspectos mais fascinantes da neurobiologia do desenvolvimento a correlao de certas conexes neuroniais com certos comportamentos. Existem dois aspectos notveis desse fenmeno. Primeiro h aqueles casos nos quais os padres complexos do comportamento esto inerentemente presentes no circuito do crebro no
nascimento. O ritmo cardaco de um embrio de pinto de 19 dias se acelera quando ele
escuta o chamado de aflio, e nenhum outro chamado provocar essa resposta
(Gottlieb, 1965). Alm disso, um pinto recm-eclodido imediatamente ir buscar abrigo
se apresentado sombra de um gavio. O gavio verdadeiro no necessrio a
sombra pela sua silhueta em papel ser suficiente, mas sombra de nenhuma outra ave
causar essa resposta (Tinbergen, 1951). Parece, portanto, que so certas conexes
neuroniais que levam a comportamentos inerentes em vertebrados.
So igualmente notveis os exemplos em que o sistema nervoso to plstico que
novas experincias podem modificar o conjunto original de conexes neuroniais,
335
causando a criao de novos neurnios ou a formao de novas sinapses entre neurnios existentes. Iremos discutir a plasticidade neuronial em maior detalhe no Captulo
21, mas suficiente dizer neste ponto que o crebro no cessa de se desenvolver com
o nascimento. O trabalho ganhador do prmio Nobel de Hubel e Wiesel (1962, 1963)
demonstrou que havia competio entre neurnios retinianos de cada olho por alvos
no crtex, e que suas conexes tinham que ser fortalecidas pela experincia. Em pssaros canoros, alm disso, novos neurnios so criados e novas sinapses formadas
quando os pssaros aprendem seu canto (Alvarez-Buylla et al., 1990), e quando ratos
adultos aprendem novas atitudes, seus neurnios corticais desenvolvem novas
sinapses (Black et al., 1990). Assim, o sistema nervoso continua a se desenvolver na
vida adulta, e o padro de conexes neuroniais um produto de padronizao herdada
e padronizao produzida pela experincia. [axon6.html]
Como um investigador (Purves, 1994) recentemente concluiu em sua anlise do
desenvolvimento cerebral:
Embora a grande maioria dessa construo deve se originar de programas
desenvolvimentais configurados durante a evoluo de cada espcie, a atividade neuronial pode modular e instruir esse processo, armazenando assim a
imensido de informao idiossincrtica que cada um de ns adquire pela experincia individual e prtica.
LITERATURA CITADA
336
337
338
339
341
derma em desenvolvimento. Neste captulo acompanharemos o desenvolvimento precoce das camadas germinativas mesodrmica e endodrmica. Veremos que o endoderma forma o revestimento dos tubos digestivo e respiratrio, com
seus rgos associados; o mesoderma ser observado gerando todos os rgos entre
a parede ectodrmica e os tecidos endodrmicos.
QMESODERMA
341
342
Zigoto
Clulas
germinativas
primordiais
Gametas
Clivagem
Bexiga urinria
Glndulas
sudorparas*
Gastrulao
Unhas
Glndulas mamrias*
ENDODERMA
Alantide*
Fgado
Traquia*
brnquios*
Pulmes
Pncreas*
Tubo digestivo*
Tireide
Cabelo
INTESTINO
PRIMITIVO
NOTOCORDA
(CORDOMESODERMA)
Glndulas
sebceas*
Cristalino do olho
Vescula
auditiva*
MESODERMA
FARINGE
EPITLIO EXTERNO
DO CORPO
ECTODERMA
Epitlio
estomodeal
Bolsas farngeas*
MESODERMA
PARAXIAL
DORSAL
Recessos
tonsilares*
Ouvido mdio*
tubo de eustquio
Timo primitivo*,
paratireides*
Mecanismo do
ouvido interno
Epitlio
proctodeal
Esclertomos
Brotos dos
apndices
Esqueleto
apendicular
Mitomos
TUBO NEURAL
Dutos mulerianos
Crebro
Nervos e gnglios
cranianos sensoriais
Gnglios da raiz
dorsal espinhal
Dentina
dentria
MESODERMA
LATERAL
Crnio e
cartilagens
branquiais
MESNQUIMA
DA CABEA
Tecido conectivo
Ms.emb. ext.
ceflico
do saco vitelnico
Gnglios
simpticos
Camadas externas
da cabea
e alantide
Mesoderma
esplncnico
Pleura,
pericrdio,
peritnio
Vesculas pticas
CRISTA NEURAL
Pronefro
Mesoderma somtico
Estroma
das gnadas
Retina* e
nervo ptico
MESODERMA
INTERMEDIRIO
Metanefro,
tbulos renais*
Pars neuralis
Razes dos nervos
da hipfise
motores espinhais
Medula espinhal
Canal
anal*
Msculos
Msculos dos
esquelticos do tronco
apndices
Camadas de tecido
Dermtomos
conjuntivo da pele
Epiddimo
vasos deferentes
Divertculo metanfrico,
ureteres pelve renal,
Dutos mesonfricos
tbulos coletores
Mesonefro, dutos
eferentes
Esmalte dentrio
Lbulo anterior da hipfise
Paratireides*
Corpos
ps-branquiais*
Esqueleto
axial
Epitlio oral
Crtex da
supra-renal
Msculos
Mesentrios
Peritnio visceral
Mesnquima
Pleura visceral
Epimiocrdio
epicrdio
miocrdio
Tecido hemangioblstico
* O esquema indica somente a origem
da parte epitelial do rgo. Todos esses
rgos tm investimentos de sustentao secundria de origem mesodrmica.
Tecido conjuntivo e
msculo liso das vsceras e
vasos sangneos
Corpsculos
sangneos
Endotlio dos
vasos sangneos
Endocrdio
Corao
343
Figura 9.1
O esquema ilustra a linhagem das partes especializadas do corpo, derivadas das trs camadas
germinativas embrionrias. As clulas germinativas esto representadas como uma linhagem
de clulas separada das trs camadas germinativas somticas pois, apesar dos precursores das
clulas germinativas se localizarem no endoderma ou mesoderrma presuntivos, elas so provavelmente um nico tipo celular. (Segundo Carlson, 1981.)
e ectodrmicos no subseqente formao do tubo neural, mas ocorre sincronicamente. A formao da notocorda foi discutida no Captulo 6. Essa haste epitelial se
estende desde a base da cabea at a cauda. Em cada lado da notocorda existem faixas
grossas de clulas mesodrmicas. Essas faixas de mesoderma paraxial so referidas
como as placas segmentares (nas aves) e mesoderma no segmentado (nos mamferos). Com a regresso dos sulcos primitivos, as dobras neurais comeam a se aglomerar no centro do embrio, o mesoderma paraxial se separa em blocos de clulas chamadas somitos. Embora os somitos sejam estruturas transitrias, elas so muito importantes na organizao do padro segmentar de embries de vertebrados. Como vimos
no captulo anterior, os somitos determinam os caminhos da migrao das clulas da
crista neural e axnios do nervo espinhal. Os somitos geram clulas que formam (1) as
vrtebras e costelas, (2) a derme e a pele dorsal, (3) os msculos esquelticos das
costas e (4) os msculos esquelticos da parede do corpo e membros.
Somitmeros e a Iniciao da Formao do Somito
Os primeiros somitos aparecem na parte anterior do embrio, e os novos somitos
brotam da extremidade rostral do mesoderma paraxial em intervalos regulares (Figuras 9.2C,D e 9.3). Devido aos embries poderem se desenvolver em taxas um pouco
diferentes (da mesma maneira que acontece com embries de galinha quando so
incubados em temperaturas um pouco diferentes), o nmero de somitos presentes
Sulco primitivo
(A)
Endoderma
Epiderme
(B) Endoderma
Placa neural
Mesoderma paraxial
Epiderme
Epiblasto
Notocorda
Tubo neural
Mesoderma lateral
Mesoderma somtico
Somito
Mesoderma
Esplncnico
Celoma
Esclertomo do somito
Dermtomo do somito
Notocorda
Celoma intra-embrionrio
Mitomo
do somito
Celoma
extra-embrionrio
(D)
Aortas dorsais
Figura 9.2
344
Figura 9.3
(A)
(B) Notch1
presente
Mesoderma
paraxial (pr-somtico)
Somitos
Figura 9.4
Transio de um somitmero para um somito. (A) A expresso da N-caderina se correlaciona com a converso de clulas
mesenquimatosas soltas em um somito epitelial. (B) Nos embries de tipo selvagem, expresso de Notch1 vista na regio mais anterior do mesoderma paraxial no segmentado
(i.e., a poro que est sendo organizada em um somito). (C)
Em embries deficientes em Notch1, a organizao dos
somitos perturbada. (A de Hatta et al., 1987; cortesia de M.
Takeichi; B e C segundo Conlon et al., 1995.)
Concentrao de
protena Notch
( C ) Notch1
ausente
Somitos
Anterior
Transio
Mesoderma paraxial
Posterior
Clulas do
esclertomo
em migrao
(A)
Condensao
de condrcitos
das clulas do
esclertomo
Dermtomo
Figura 9.5
(B)
Mitomo
Aorta dorsal
Nefrtomo do rim
em desenvolvimento
Camada
mesodrmica
somtica
Camada
mesodrmica
esplncnica
(C)
Celoma
intra-embrionrio
Intestino
Camada
mesodrmica
somtica
(D)
Tubo neural
345
(E)
Dermamitomo
Dermtomo
Clulas migratrias
(Musculatura dos membros
e ventrolateral)
Medial Lateral
Esclertomo
Notocorda
novamente. A poro do somito que d origem a essas clulas chamada de esclertomo, e essas clulas mesenquimatosas no final se tornam condrcitos vertebrais
(Figuras 9.2 e 9.5). Os condrcitos so responsveis pela secreo de um tipo especial
de colgeno e GAGs (tais como o sulfato de condroitina) caractersticos da cartilagem.
Esses condrcitos em particular sero responsveis pela construo do esqueleto
axial (vrtebras, costelas, cartilagem e ligamentos). As clulas da poro lateral do
somito (a regio mais distante do tubo neural) tambm se dispersam. Essas clulas
formam os precursores dos msculos, dos membros e da parede do corpo. Ordahl e Le
Douarin (1992) seguiram essas clulas transplantando pores de somitos de codorna
em somitos de embries de galinha. As clulas dos pintos e das codornas podem ser
distinguidas pela sua morfologia nucleolar. Os pesquisadores notaram que aquelas
clulas que estavam mais distantes do tubo neural migram para formar a parede do
corpo e a musculatura dos membros, mesmo se essas clulas doadoras forem originalmente da poro medial do somito.
Uma vez que o esclertomo e os precursores das clulas musculares dos membros e da parede do corpo migraram para longe dos somitos, as clulas somticas
prximas ao tubo neural migram ventralmente em direo poro epitelial remanescente do somito para formar uma slida camada epitelial dupla chamada
dermamitomo (veja Figuras 9.2 e 9.5 ). A camada dorsal dessa estrutura chamada
de dermtomo, sendo a responsvel pela gerao do tecido conectivo
mesenquimatoso da pele dorsal: a derme. (A derme de outras reas do corpo se forma
de outras clulas mesenquimatosas e no de somitos.) A camada interna de clulas
chamada de mitomo, e essas clulas do origem aos msculos vertebrais que
Mitomo
Esclertomo
346
(A)
Ectoderma dorsal
Musculatura apaxial
Ectoderma dorsal
Medial
Derme
Msculos da
parede corporal
NT-3
Dermamitomo
Derme
Wnt
?Wnt
Tubo
neural
Tubo
neural
Clulas
musculares apaxiais
Lateral
Myf5
BMP4
?FGF5
Msculos
dos
membros
Shh
Aorta dorsal
Notocorda
Esclertomo
Mesoderma lateral
Notocorda
Myf5
c-met, MyoD
Pax3
Pax1
Mesoderma lateral
Figura 9.6
347
348
Mioblastos
Msculo
Homogenize e coloque
na origem de uma
placa de eletroforese
Msculo
Miotubos
Enzimas de isocitrato
desidrogenase vistas
por eletroforese
Origem
Origem
AA
AA
AB
BB
BB
Gentipo AA
Gentipo BB
Enzima hbrida
formada
Polipeptdeo A
Polipeptdeo B
Enzima AA
Enzima BB
Enzima AB
Figura 9.7
Os dois mecanismos possveis da formao do msculo esqueltico, e como distingu-los. Camundongos quimricos so produzidos da fuso de embries de duas raas diferentes de camundongos, cada uma produzindo uma forma diferente da enzima isocitrato desidrogenase. Essa
enzima composta de duas subunidades; uma raa produz isocitrato desidrogenase AA (indicada
em negro) e a outra produz BB (colorida). (A) Se as enzimas forem produzidas em uma nica
clula ou em clulas multinucleadas surgindo de divises nucleares dentro de uma nica clula, a
enzima ser puramente AA ou BB. (B) Se houver dois diferentes ncleos em uma mesma clula,
porm, um poder codificar para subunidades B enquanto o outro poder codificar para A, com
o resultado de que algumas molculas da enzima sero hbridas (AB). Por eletroforese pode-se
separar esses trs tipos de molculas. A presena de molculas AB no msculo esqueltico (mas
no em outro tipos de clulas) confirma o modelo de fuso. (Segundo Mintz e Bakerr, 1967.)
Figura 9.8
Informaes adicionais
&
349
Especulaes
Gene MyoD
Neuroblastos,
clulas
gordurosas,
fibroblastos
Promotor viral ativo
Ncleo
Figura 9.9
Miotubo
Sumrio de vrios experimentos em que o gene MyoD foi ativado por um promotor viral e
transfectado para clulas no musculares. A protena MyoD parece no levar em conta os
reguladores originais do fentipo celular, convertendo as clulas em msculos.
350
(A)
Myf5
ou
MyoD
Clula no somito
Mesoderma Paraxial
(B)
Clulas do sangue
MRF4
Miogenina
Mioblasto
Tubo neural
Notocorda
Miotubo
Miofibra
Dermtomo
Mitomo
(C)
Figura 9.10
Comprometimento e diferenciao muscular mediada pela famlia MyoD de fatores de transcrio. (A) Papis
postulados para protenas miognicas durante a formao do msculo esqueltico no camundongo. (B)
Hibridizao in situ indicando a ausncia do mRNA myf5 no mesoderma paraxial no segmentado do
embrio. O lado esquerdo mostra fotografia sob o microscpio ptico da rea. (C) Hibridizao in situ
mostrando a presena do mRNA myf5 no mitomo do somito embrionrio do camundongo. (A segundo
Rudnicki et al., 1993; fotografias cortesia de G. Lyons.)
tos na formao de suas clulas musculares (Hasty et al., 1993; Nabeshima et al.,
1993). Os somitos se formaram normalmente e foram compartimentalizados em
mitomo, esclertomo e dermtomo, mas
os mioblastos deixaram de se diferenciar
em miofibras (Venuti et al, 1995).
MyoD e seus parentes parecem ser crticos para a remoo de mioblastos do ciclo celular. Conforme j mencionado,
mioblastos em diviso no se diferenciam.
Essa distino entre diviso e diferenciao caracterstica de vrios tipos celulares derivados de populaes de clulas
germinativas (Bischoff e Holtzer, 1969;
Holtzer et al., 1975). Parece haver duas
maneiras pelas quais o mioblasto se retira
do ciclo celular. O primeiro mecanismo
inibir o caminho da diviso celular. Para
isso, a protena MyoD induz a expresso
de p21, um inibidor de quinases dependentes de ciclina (Figura 9.11; Halevy et
*Isso significa que existe alguma redundncia no desenvolvimento dos msculos esquelticos.
Tal redundncia j do conhecimento dos embriologistas h longa data (Spemann, 1938), mas os
geneticistas a esto redescobrindo (para sua consternao, j que confunde a interpretao de tais
experimentos). Gould (1990) considera a redundncia desenvolvimental essencial para evoluo
ocorrer, j que um dos scios redundantes fica livre para conseguir uma nova funo enquanto o
outro scio mantm a funo original.
Figura 9.11
(A)
Proliferao
Diferenciao
MyoD
Ciclina D1
Cdk4
p21
Ativao
Inibio
(B)
Proliferao
Diferenciao
MyoD
Ciclina D1
Cdk4
p21
racterstico pelo qual so formados os ossos chatos do crnio. Clulas mesenquimatosas derivadas da crista neural interagem com a matriz extracelular das clulas epiteliais
da cabea para formar o osso. Se as clulas mesenquimatosas no contatam essa
matriz, no ser formado osso algum (Tyler e Hall, 1977; Hall, 1988). Isso foi demonstrado in vitro por Hall e colegas (1983), que isolaram clulas mesenquimatosas da
351
352
Figura 9.12
Diagrama esquemtico da ossificao membranosa. (A) Clulas mesenquimatosas, provavelmente derivadas da crista neural, se condensam para produzir osteoblastos, que depositam matriz osteide. Esses osteoblastos
ficam enfileirados ao longo da regio
calcificada da matriz. Osteoblastos aprisionados dentro da matriz ssea tornam-se
ostecitos. (B) Espalhamento de espculas
sseas do local da ossificao primria nos
ossos chatos do crnio de um embrio humano de trs meses. Os ossos mostrados em
negro so formados por ossificao endocondral. (Segundo Langman, 1981.)
Osteoblastos
Matriz
osteide
Osso
calcificado
Espculas do
osso parietal
Clula ssea
(ostecito)
Espculas do
osso frontal
(A)
Mesnquima frouxo
Osteoblastos
(B)
353
Figura 9.13
(A)
(B)
* Mutaes que afetam a formao de ndulos freqentemente causam anomalias nos membros.
Nas galinhas, as mutaes talpid so caracterizadas pela duplicao e fuso dos membros. Isso, por
sua vez, descobriu-se, ter sido causado por condensaes pr-condrognicas anormalmente grandes.
Esses grandes ndulos so causados pelo excesso de adesividade das clulas mesenquimatosas nessas
condensaes, e foi diretamente ligado a uma super expresso de N-CAM (Ede 1983; Chuong et al.,
1993). Em humanos, o gene SOX9 expresso por condensaes pr-cartilaginosas, e isso codifica
uma protena ligante de DNA. As mutaes do gene SOX9 causa displasia camptomelica, uma
doena rara do desenvolvimento esqueltico, causando uma srie de deformidades nos ossos do
corpo. A maioria dos bebs afetados morrem de parada respiratria devido a m-formao das
cartilagens traqueobronquiais e das costelas. (Wright et al., 1995).
354
Cartilagem epifisria
Mesnquima
Cartilagem
Condrcitos
hipertrficos
Osteoblastos
(osso)
Vasos
sangneos
Condrcitos
proliferando
Placa de
crescimento
Medula
ssea
Osso
(A)
(B)
(C)
Figura 9.14
Diagrama esquemtico da ossificao endocondral. (A,B) Clulas mesenquimatosas se condensam em ndulos cartilaginosos que formam
o modelo do osso. (C) Condrcitos no centro
da haste sofrem hipertrofia e alteram sua matriz
extracelular, permitindo a entrada de vasos
sangneos. (D,E) Vasos sangneos trazem
osteoblastos que se ligam matriz cartilaginosa
em degenerao e deposita matriz ssea. (F-H)
Formao das placas de crescimento epipifisrio
pelos condrcitos, que se proliferam antes de
hipertrofiar. Centros secundrios de ossificao
tambm se formam quando vasos sangneos
penetram perto das extremidades do osso. (Segundo Horton, 1990.)
(D)
(E)
Placa de
crescimento
(F)
(G)
Centro de
ossificao
secundria
(H)
9.14). Logo aps o modelo cartilaginoso ser formado, as clulas na parte central do
modelo se tornam dramaticamente maiores e comeam a secretar um tipo diferente de
matriz, que contm tipos diferentes de colgeno, mais fibronectina e menos inibidor de
protease. Essas clulas so os condrcitos hipertrficos. A sua matriz mais susceptvel invaso pelas clulas de vasos sangneos do peristeo. Um capilar do peristeo
invade, em seguida, o centro da haste da cartilagem previamente avascular. Com a
degradao da matriz da cartilagem, as clulas da cartilagem hipertrfica morrem, e
osteoblastos (clulas formadoras de ossos), transportados pelos vasos sangneos,
comeam a secretar matriz ssea sobre a cartilagem parcialmente degradada (Hattori et
al.,1995). Finalmente toda a cartilagem substituda por osso.
Como o centro do modelo da cartilagem convertido em osso, formada uma
frente de ossificao entre o osso recm-sintetizado e o restante da cartilagem. O lado
da cartilagem dessa frente contm a cartilagem hipertrfica que prepara a haste para a
invaso pelos vasos sangneos, e o lado do osso contm as clulas osteoblsticas
depositando a matriz ssea. Essa frente se espalha de dentro para fora em ambas as
direes a partir do centro, enquanto mais cartilagem se transforma em osso. Se isso
fosse tudo, no entanto, no existiria crescimento, e nossos ossos seriam somente do
tamanho do modelo cartilaginoso original. Porm, com a frente de ossificao se aproximando dos finais do modelo cartilaginoso, os condrcitos prximos frente de
ossificao se proliferam antes de sofrer hipertrofia. Isso estica a parte final cartilaginosa
do osso, fornecendo uma fonte para nova cartilagem. Essas regies cartilaginosas no
final dos ossos longos so chamadas placas de crescimento epifisrio. Essas placas
contm trs regies: uma regio de proliferao de condrcitos, uma regio de
condrcitos maduros, e uma regio de condrcitos hipertrofiados (Figura 9.15; Chen
et al.,1995). Como essa cartilagem se hipertrofia e a frente de ossificao se estende
mais adiante, a cartilagem remanescente na placa epifisria se prolifera. Essa cartilagem forma a rea de crescimento do osso. Dessa maneira, o osso se mantm em
crescimento pela produo de novas clulas cartilaginosas que sofrem hipertrofia,
permitindo aos vasos sangneos entrarem, e morrem medida que a matriz ssea
(B)
Cartilagem
de reserva
355
(C)
Clulas
cartilaginosas
em proliferao
(A)
Zona de
condrcitos
maduros
Hipertrofia e
calcificao das
clulas
cartilaginosas
Zona de
degenerao
e ossificao de
cartilagem
Osso calcificado
Figura 9.15
356
Figura 9.16
(A)
(B)
Condrcitos
Clcio na matriz
extracelular
Figura 9.17
Deposio de clcio pelos condrcitos na regio distal da zona hipertrfica. Clcio (corado em
escuro nesta montagem de micrografia eletrnica) colocado na matriz pelas clulas em crescimento. (de Brighton e Hunt, 1974; cortesia de C. T. Brighton.)
(A)
(B)
(C)
45
357
Ca
[3H] Prolina
Tempo (horas)
Figura 9.18
Informaes adicionais
&
Especulaes
taes do desenvolvimento esqueltico de seres humanos e murinos forneceram notveis vises sobre como a diferenciao, proliferao e padronizao de
condrcitos so reguladas.
mutao dominante causada por mutaes na regio transmembrana do receptor 3 do fator de crescimento fibroblstico (FGFR3). Aproximadamente 95% dos
anes acondroplsicos tm a mesma mutao de FGFR3, uma substituio do par
de bases que converte glicina em arginina
na posio 380 na regio transmembrana
da protena. Alm disso, mutaes na poro extracelular da protena FGFR3 ou no
domnio da tirosina quinase intracelular
resultaram na displasia tanatofrica, uma
forma letal de nanismo que se parece com
a acondroplasia homozigota (Figura 9.19;
Bellus et al., 1995; Tavormina et al., 1995).
Mutaes em FGFR1 podem causar a sndrome de Pfeiffer, caracterizada por defeitos nos membros e fuso prematura
das suturas cranianas (craniosinostose),
resultando em formas anormais do crnio e da face. Mutaes diferentes em
FGFR2 podem originar vrias anomalias
nos membros e/ou face (Park et al., 1995;
Wilkie et al., 1995). [cell7.html]
Receptores de Estrgeno
Hormnios tambm so conhecidos por ter
um efeito marcado sobre a epfise humana.
O surto de crescimento puberal e amadurecimento subseqente da placa epifisria
358
(A)
(B)
(C)
Figura 9.19
(A) EMBRIO DE R
Crista neural
Placa neural
Tubo neural
Somito
Notocorda
Mesoderma
somtico
Endoderma
Celoma
Mesoderma
Esplncnico
Intestino
mdio
(B)
359
Mesoderma
da placa
lateral
EMBRIO DO PINTO
Cortes para remoo do embrio
Figura 9.20
Vitelo
Comparao entre o desenvolvimento mesodrmico em embries de r e pinto. (A) Embries de r em estgio de nurula mostrando
desenvolvimento progressivo do mesoderma
e celoma. (B) Seo transversa de um embrio de pinto. (C) Quando o embrio de pinto separado da sua enorme massa de vitelo,
parece uma nurula anfbia em estgio semelhante. (A segundo Rugh, 1951; B e C segundo Patten, 1951.)
Intestino primitivo
Rasgo
Rasgo
( C ) PINTO TRANSFORMADO EM R
Tubo neural
Somito
Celoma
Intestino
primitivo
Vitelo
EMBRIO DE PINTO
(removido do vitelo;
margens rejuntadas)
EMBRIO DE R
360
(A)
(B)
Cabea do embrio
Celoma
extra-embrionrio
Celoma
extra-embrionrio
Ectoderma
Ectoderma
Mesoderma somtico
Mesoderma somtico
Mesoderma esplncnico
Mesoderma esplncnico
Endoderma
Endoderma
Envoltrio vitelnico
Envoltrio vitelnico
Vitelo
Vitelo
Dobra da
cabea do mnio
Embrio
Dobra caudal
do mnio
(C)
Crio
Ectoderma
Cavidade amnitica
mnio
Tubo neural
Cavidade crio-amnitica
Notocorda
Aorta
Mesnquima
Intestino mdio
Intestino posterior
Endoderma
Mesoderma
Esplncnopleura
do saco vitelnico
Proctdeo
Invaginao Alantica
(D)
Alantide adentrando o
celoma extra-embrionrio
(E)
Embrio
Membrana
alantica
Embrio
mnio
Intestino
Intestino
mnio
Cavidade
amnitica
Cavidade
amnitica
Crio
Vitelo
Alantide
Crio
Vitelo
Saco vitelnico
Figura 9.21
Desenho esquemtico das membranas extraembrionrias do pinto. O embrio est cortado longitudinalmente e os revestimentos de
albumina e da casca no so mostrados. (A)
embrio de 2 dias. (B) Embrio de 3 dias. (C)
Diagrama esquemtico detalhado da regio
caudal (posterior) do embrio do pinto, mostrando a formao da alantide. (D) Embrio
de 5 dias. (E) Um embrio de 9 dias. (Segundo Carlson, 1981.)
Membrana
alantica
O primeiro problema de um ovo vivendo na terra a dessecao. Clulas embrionrias secariam rapidamente se no estivessem em um ambiente aquoso. Esse
ambiente suprido pelo mnio. As clulas dessa membrana secretam fluido amnitico;
assim, a embriognese ainda acontece na gua. Esse avano evolucionrio to
significativo e caracterstico que rpteis, aves e mamferos esto agrupados como
vertebrados amniticos.
O segundo problema desses ovos a troca de gases. Essa troca realizada pelo
crio, a membrana extra-embrionria mais externa. Nas aves e rpteis, essa membrana
se adere casca, permitindo a troca de gases entre o ovo e o ambiente. Nos mamferos,
como havamos dito, o crio evoluiu tornando-se placenta, que tem muitas funes
alm da respirao.
A alantide armazena resduos urinrios e media a troca de gases. Nos rpteis e
aves, a alantide se torna um grande saco, j que no existe outro modo para manter os
subprodutos do metabolismo do embrio em desenvolvimento. A camada mesodrmica
da membrana da alantide freqentemente alcana e se funde com a camada
mesodrmica do crio para criar a membrana corioalantica. Esse envelope extremamente vascularizado crucial para o desenvolvimento da ave, e o responsvel pelo
transporte de clcio da casca do ovo para o embrio para produo de ossos (Tuan,
1987). Nos mamferos, o tamanho da alantide depende do sucesso da remoo dos
resduos de nitrognio pela placenta corinica. Em humanos a alantide um saco
vestigial; enquanto nos porcos um rgo grande e importante.
O saco vitelnico a primeira membrana extra-embrionria a ser formada, visto que
ele medeia a nutrio em aves e rpteis em desenvolvimento. Ele derivado de clulas
endodrmicas que crescem sobre o vitelo para englob-lo. O saco vitelnico conectado
ao intestino mdio por um tubo aberto, o duto vitelnico, para que as paredes do saco
vitelnico e do intestino sejam contnuas. Os vasos sangneos dentro do mesoderma
da esplancnopleura transportam nutrientes do vitelo para o corpo, pois o vitelo no
levado diretamente para o corpo atravs do duto vitelnico. Ao contrrio, clulas
endodrmicais digerem a protena em aminocidos solveis, que podem ento ser
passados aos vasos sangneos envolvendo o saco vitelnico. Outros nutrientes,
incluindo vitaminas, ons e cidos graxos so armazenados no saco vitelnico e transportados pela circulao embrionria. Por esses caminhos, as quatro membranas extra-embrionrias permitem que o embrio se desenvolva em terra.
O Corao
O sistema circulatrio uma das grandes conquistas do mesoderma da placa lateral.
Consistindo de um corao, clulas sangneas e um intricado sistema de vasos sangneos, o sistema circulatrio fornece a nutrio para o embrio vertebrado em desenvolvimento. O sistema circulatrio a primeira unidade funcional no embrio em
desenvolvimento, e o corao o primeiro rgo funcional. O corao vertebrado
surge de duas regies do mesoderma esplncnico que interagiu com tecido adjacente
para se tornar especfico para o desenvolvimento do corao. Essas clulas
cardiognicas migram para uma posio mediana ventral e se fundem para se tornar
um tubo simples de clulas musculares que se contraem. Esse corao tubular se
contorce formando uma estrutura em forma de S, com um nico trio e um nico
ventrculo. Com a continuao do desenvolvimento, o ventrculo forma suas camadas
e se prolifera mais rapidamente que o trio, os septos separam as cmaras do corao
e as vlvulas se desenvolvem.
FUSO DOS RUDIMENTOS DO CORAO. Nos anfbios, as duas provveis
regies formadoras do corao so inicialmente encontradas na posio mais anterior da manta mesodrmica. Enquanto o embrio est sofrendo neurulao, essas duas regies se juntam na regio ventral do embrio para formar uma cavidade
pericardial comum. Nas aves e mamferos, o corao tambm se desenvolve pela
361
362
Clulas se
tornam
notocorda
Anterior (rostral)
Clulas se
tornam
corao
Ndulo de Hensen
Tronco
arterioso
Ventrculo
Bulbus cordis
Seio venoso
(A)
(B)
Posterior (caudal)
Figura 9.22
Ectoderma
Mesoderma
Endoderma
Clulas formadoras do corao no embrio do pinto. (A) Origem de clulas cardacas no embrio
precoce do pinto (estgio 3b). O padro ntero-posterior geral do sulco primitivo visto no
endocrdio e miocrdio do corao. (B) Modelo para a especificaco do mesoderma cardaco.
Os caminhos da migrao mesodrmica nas vrias regies do sulco primitivo esto representados
por setas. Sinais que induzem miognese cardaca esto representados por + , e inibidores da
induo cardaca esto representados como - . O mesoderma migratrio na regio 1 no encontra
indutores ou repressores. Clulas migrando da regio 3 encontram ambos. Somente clulas
migrando da regio 2 encontram o indutor sem o inibidor. (C) Micrografia eletrnica de varredura
do mesoderma formador do corao no embrio de pinto de 24 horas. O mesoderma facilmente
separado do ectoderma, mas permanece em ntima associao com o endoderma. (A segundo
Garcia-Martinez e Schoenwolf, 1993; B segundo Schultheiss et al., 1995; C de Linask e Lash,
1986, cortesia de K. Linask.)
(C)
fuso de primrdios pareados, mas a fuso desses dois rudimentos ocorre muito
mais tardiamente no desenvolvimento. Nesses vertebrados amniticos, o embrio
um disco achatado, e o mesoderma da placa lateral no circunda completamente
o saco vitelnico. As provveis clulas do corao se originam no sulco primitivo
precoce, um pouco posterior ao ndulo de Hensen e se estendem at cerca da
metade do seu comprimento (Figura 9.22A). Essas clulas migram atravs do sulco
e formam dois grupos de clulas mesodrmicas laterais ao (e no mesmo nvel do)
ndulo de Hensen (Figura 9.22B; Garcia-Martinez e Schoenwolf, 1993). Quando o
embrio do pinto tiver somente 18 a 20 horas de idade, essas provveis clulas do
corao se movem anteriormente entre o ectoderma e o endoderma em direo ao
meio do embrio, permanecendo em estreito contato com a superfcie endodrmica
(Figura 9.22C; Linask e Lash, 1986). Quando as clulas alcanam a rea onde o
intestino se estendeu at a regio anterior do embrio, a migrao cessa. O
direcionamento para essa migrao parece ser fornecido pelo endoderma. Se o
endoderma da regio cardaca girado com respeito ao resto do embrio, a migrao das clulas mesodrmicas pr-cardacas invertida. Pensa-se que o componente endodrmico responsvel por esse movimento um gradiente ntero-posterior de concentrao da fibronectina. Anticorpos contra a fibronectina interrompem a migrao, enquanto anticorpos contra outros componentes da matriz extracelular no o fazem (Linask e Lash, 1988a,b).
O endoderma tambm faz com que as clulas pr-cardacas comecem seu desenvolvimento como msculos do corao. O endoderma anterior pode fazer com que as
clulas mesodrmicas no cardacas expressem protenas especficas do corao tanto em aves como em anfbios (Jacobson, 1961; Sugi e Lough, 1994; Nascone e Mercola,
1995; Schultheiss et al., 1995). Essa diferenciao ocorre independentemente nos dois
primrdios formadores do corao, um migrando ao encontro do outro. As presuntivas
clulas do corao de aves e mamferos formam um tubo de parede dupla consistindo
de um endocrdio interior e um epimiocrdio exterior. O endocrdio formar o revestimento interno do corao, e o revestimento externo formar a camada dos msculos
do corao que iro bombear por toda a vida do organismo.
Com a continuao da neurulao, o intestino anterior fechado pelo dobramento
interno do mesoderma esplncnico (Figura 9.23). Esse movimento junta os dois tubos,
finalmente unindo o epimiocrdio em um tubo nico. Os dois endocrdios ficam em
uma cmara comum por um curto perodo, mas tambm iro se fundir. Nessa altura, a
dupla cmara celmica original se une para formar a cavidade do corpo que aloja o
corao. A origem bilateral do corao pode ser demonstrada atravs de interveno
cirrgica, prevenindo a fuso do mesoderma da placa lateral (Grper, 1907; DeHaan,
1959). Isso resulta em uma condio chamada crdia bfida, na qual um corao em
separado se forma em cada lado do corpo (Figura 9.24). A prxima etapa na formao
do corao a fuso dos tubos endocrdicos para formao de uma nica cmara de
bombeamento (veja Figura 9.23C,D). Essa fuso ocorre aproximadamente s 29 horas
do desenvolvimento das aves e na terceira semana da gestao humana. As partes
posteriores no fundidas do endocrdio se tornam as aberturas das veias vitelnicas
para o corao (Figura 9.25). Essas veias vo carregar nutrientes do saco vitelnico
para o seio venoso. O sangue ento passa atravs de uma lmina semelhante vlvula
de forma achatada, para a regio atrial do corao. Contraes do tronco arterioso
aceleram o sangue para a aorta.
As pulsaes do corao comeam enquanto os primrdios pareados ainda esto
se fundindo. O marcapasso dessa contrao o seio venoso. Contraes comeam
aqui e uma onda de contrao muscular ento propagada at o corao tubular.
Desse modo, o corao pode bombear sangue mesmo antes do seu intricado sistema
de vlvulas ter sido completado. As clulas musculares do corao tm na sua prpria
herana a habilidade de contrair, e clulas do corao isoladas de um rato com 7 dias
ou de embries de pintos, vo continuar a bater em placas de Petri (Harary e Farley,
1963; DeHaan, 1967). No embrio, essas contraes se tornam reguladas por estmulos eltricos procedentes da medula oblongata via nervo vago, e em 4 dias, o
eletrocardiograma de um embrio de pinto se aproxima daquele de um animal adulto.
FORMAO DAS CMARAS DO CORAO. Em um embrio de pinto de 3 dias ou
363
364
Figura 9.23
(A)
Sulco
neural
Mesnquima ceflico
Ectoderma superficial
Notocorda
Somatopleura
Intestino
Epimiocrdio (mesoderma
esplncnico engrossado)
Cavidade
pericardial
Esplncnopleura
Endoderma
Conjuntos celulares
angiogenticos
(B)
Sulco neural (fechando)
Mesnquima ceflico
Somatopleura
Cavidade
pericardial
Primrdio do
epicrdio
Esplancnopleura
Primrdio
endocrdio
(C)
Canal neural
Intestino anterior
Somatopleura
Cavidade Pericrdica
Esplancnopleura
Tubo endocrdico
Mesocrdio ventral
Epimiocrdio
(D)
Tubo neural
Intestino anterior
Somatopleura
Cavidade Pericrdica
Esplancnopleura
Tubo endocrdico
Epimiocrdio
Mesocrdio ventral
(desaparecendo)
365
Figura 9.24
(A)
(B)
(A)
(B)
(C)
Razes articas
Bulbus
cordis
Bulbus
cordis
Ventrculo
Ventrculo
trio
trio
Sulco
bulboventricular
Seio Venoso
Seio venoso
Veias
vitelnicas
21 dias
22 dias
(D)
24 dias
Figura 9.25
(E)
Tronco arterioso
trio direito
Razes
articas
trio esquerdo
trio esquerdo
Bulbus
cordis
Ventrculo
Esquerdo
Ventrculo
direito
Ventrculo
esquerdo
trio
esquerdo
Veias vitelnicas
25 dias
Sulco interventricular
29 dias
Formao da cmara cardaca durante a terceira semana do desenvolvimento humano, mostrando a formao das cmaras a partir de um
tubo simples. Vistas A-D mostram o corao
em desenvolvimento do lado esquerdo; E
uma viso frontal. Embora os trios sejam distintos externamente, no esto separados dentro do corao. Note que h duas razes articas
e que essas se ramificam para formar os arcos
articos (veja Figura 9.27). (Segundo
Langman, 1981, e Larsen, 1993.)
366
Septo atrial
secundrio
Forame primrio
Septo
atrial
primrio
Seio venoso
Canal
trio-ventricular
esquerdo
Colches
endocrdicos
fundidos
Vlvula da
veia cava
inferior
Vlvula
do seio
coronrio
25 dias
(B)
40 dias
Figura 9.26
bao tanto do lado esquerdo como direito do corpo) est associada a coraes com
dois lados esquerdos, enquanto asplenia (ausncia do bao) est associada a coraes com dois lados direitos (Anderson et al., 1990; Ho et al., 1991). O mecanismo
para a assimetria esquerda-direita no entendido, mas Tsuda e colegas (1996)
mostraram uma deposio assimtrica precoce da protena flectina, da matriz extra
celular, a qual pode predispor um lado do corao a se desenvolver diferentemente
do outro (Prancha 33)*.
asos Sangneos
Formao dos V
Vasos
LIMITAES RELATIVAS CONSTRUO DE VASOS SANGNEOS. Existem
trs limitaes principais para a construo de vasos sangneos. A primeira
fisiolgica. Diferentemente de novas mquinas, que no necessitam funcionar at
terem sado da linha de montagem, os organismos novos precisam funcionar mesmo enquanto se desenvolvem. As clulas embrionrias precisam obter nutrientes
antes que exista um intestino, fazer uso do oxignio antes que existam pulmes, e
excretar resduos antes que os rins estejam prontos. Portanto, a fisiologia ciculatria
do embrio em desenvolvimento difere daquela do organismo adulto, e o seu
sistema circulatrio reflete tais diferenas. O alimento no absorvido atravs do
intestino, mas pelo vitelo ou placenta, e a respirao no conduzida pelas guelras ou pulmes, mas atravs da membranas corinicas ou alanticas. Os principais vasos sangneos embrionrios devem ser construdos para servir a essas
estruturas extra-embrionrias.
A segunda limitao evolucionria. O embrio mamfero estender vasos sangneos at o saco vitelnico mesmo no havendo vitelo no interior. Alm disso, o
sangue que deixa o circuito do corao passa por cima do intestino anterior para
formar a aorta localizada dorsalmente. Os seis pares de arcos articos passam por cima
da faringe (Figura 9.27). Nos peixes primitivos, esses arcos persistem e permitem que
Figura 9.27
Os arcos articos do embrio humano. (A) Originalmente, o tronco arterioso bombeia sangue
para a aorta, que se ramifica para ambos os lados do intestino anterior. Os seis arcos articos
tomam sangue da aorta ventral e o permitem fluir para a aorta dorsal. (B) Os arcos comeam a
se desintegrar ou se modificar: as linhas pontilhadas indicam estruturas em degenerao. (C)
Finalmente, os arcos remanescentes so modificados e o sistema arterial adulto formado.
(Segundo Langman, 1981.)
as guelras oxigenem o sangue. Na ave ou mamfero adultos, onde os pulmes oxigenam o sangue, tal sistema faz pouco sentido, mas todos os seis pares de arcos articos
so formados nos embries mamferos e das aves antes que o sistema finalmente seja
simplificado em um nico arco. Dessa maneira, mesmo que nossa fisiologia no requeira tal estrutura, nossa condio embrionria reflita nossa histria evolutiva.
O terceiro conjunto de limitaes fsico. De acordo com a lei dos movimentos
dos fluidos, o transporte mais efetivo de fluidos obtido por grandes tubos. Quando o raio dos vasos sangneos fica menor, a resistncia ao fluxo aumenta de r4 (Lei
de Poiseuille). Um vaso sangneo que metade da largura de outro tem uma resistncia ao fluxo 16 vezes maior. No entanto, a difuso dos nutrientes ocorre somente
quando o sangue flui vagarosamente e tem acesso membrana. Ento temos aqui
um paradoxo: As restries na difuso ordenam que os vasos sangneos sejam
pequenos, enquanto que a lei da hidrulica ordena que os vasos sejam grandes.
Organismos vivos resolveram esse paradoxo desenvolvendo um sistema circulatrio com uma hierarquia no tamanho dos vasos (LaBarbera, 1990). Essa hierarquia
formada muito cedo no desenvolvimento, como pode ser visto em embries de pinto
de 3 dias. Nos ces, o sangue dos vasos grandes (aorta e veia cava) flui 100 vezes
mais rapidamente do que nos capilares. Havendo vasos grandes especializados
para o transporte e pequenos especializados para a difuso (onde o sangue passa a
maior parte do tempo), nutrientes e oxignio podem alcanar as clulas individuais
do organismo em crescimento. Mas essa no a estria completa. Se um fluido sob
presso constante move-se diretamente de um tubo de grande dimetro para um
tubo de pequeno dimetro (como um bico de esguicho), a velocidade do lquido
aumenta. A soluo evolucionria para esse problema foi o surgimento de muitos
vasos pequenos ramificados de um vaso sangneo de maior tamanho, tornando o
corte secional coletivo de todos os vasos pequenos, maior que o daquele do grande
vaso. Esse relacionamento (conhecido como lei de Murray) explica que o cubo do
raio do vaso parental se aproxima da soma dos cubos dos raios de vasos menores. A
construo de qualquer sistema circulatrio precisa negociar entre essas limitaes
fsicas, fisiolgicas e evolucionrias.
(A) 29 dias
Arcos
articos
Tronco arterioso
Aorta dorsal direita
Aorta dorsal esquerda
(B)
49 dias
Artria
cartida
interna
Artrias
cartidas externas
Artria
cartida
comum
Artria
subclvia
direita
Stima artria
intersegmental
Artria
pulmonar
Arco
da
aorta
Duto
arterioso
Aorta
(C) 56 dias
Artria cartida
externa direita
Artria
subclvia
Direita
VASCULOGNESE: FORMAO DE VASOS SANGNEOS DE ILHAS DE SANGUE. A criao de vasos sangneos de novo a partir do mesoderma chamada vascu-
lognese (Pardanaud et al., 1989). No intestino, pulmo, aorta e tambm no revestimento mesodrmico esplncnico do saco vitelnico, uma rede de vasos capilares surge independentemente dentro de seus prprios tecidos (Auerbach et al.,1989;
Pardanaud et al., 1989). Nesses casos, os capilares no aparecem como extenses
cada vez menores de vasos sangneos originados do corao. Pelo contrrio, o
mesoderma de cada um desses rgos contm clulas chamadas angioblastos que se
organizam em vasos capilares. Essa rede de capilares especficos do rgo finalmente
se liga s extenses dos principais vasos sangneos.
No pinto, existem duas fontes de angioblastos (Figura 9.28; Pardanaud et al.,
1996). A primeira fonte o mesoderma paraxial. O mesoderma paraxial ceflico fornece
angioblastos para os vasos sangneos da cabea (Couly et al., 1995), enquanto o
mesoderma paraxial somtico do tronco contm angioblastos que migram para formar
os vasos da parede do corpo, membros, rins e pores dorsais da aorta. A segunda
fonte de angioblastos o mesoderma esplancnopleural. Esses angioblastos colonizam
367
Artria cartida
externa esquerda
Artria cartida
comum esquerda
Artria
subclvia
Esquerda
Ligamento
Aorta ascendente
Artria pulmonar
Aorta descendente
368
Figura 9.28
Tubo neural
Mesoderma
intermedirio
Somito
Somito
Aorta
Somatopleura
Broto dos
membros
Veia
cardinal
Esplancnopleura
Notocorda
Aorta
1 dias
Intestino
3 dias
Figura 9.29
os rgos viscerais, intestino e o assoalho da aorta. Esses angioblastos so na realidade hemangioblastos, porque no s geram revestimento endotelial como tambm
fornecem os precursores das clulas sangneas (Pardanaud et al.,1996).
A agregao de clulas do mesoderma esplncnico crucial para o progresso do
desenvolvimento amnitico porque esses agrupamentos angiogenticos (por vezes
chamados de ilhas de sangue) que forram o saco vitelnico produzem as veias vitelnicas
(onfalomesentricas) que trazem nutrientes para o corpo e transportam os gases de
ida e volta para os lugares onde so realizadas trocas gasosas (Figura 9.29). Essas
clulas so primeiro vistas na rea opaca no estgio da dobra da cabea na embriognese do pinto, quando o sulco primitivo est totalmente estendido (Pardanaud et al.,
1987). Esses cordes de clulas logo cavitam transformando-se em tubos com parede
dupla anlogos aos tubos duplos do corao. A parede interna se torna o revestimento liso de clulas endoteliais do vaso, e as clulas externas se tornam msculo liso.
Entre essas camadas existe a lmina basal contendo um tipo de colgeno especfico
para vasos sangneos. Pensa-se que essa lmina basal inicia a diferenciao dos
tipos de clulas no vaso (Murphy e Carson, 1978; Kubota et al., 1988). As clulas
centrais das ilhas de sangue se diferenciam em clulas sangneas embrionrias. Com
o crescimento, as ilhas de sangue finalmente se juntam para formar a rede capilar
drenando as duas veias vitelnicas, que trazem alimento e clulas sangneas para o
corao recm- formado.
Trs fatores de crescimento podem ser responsveis pela iniciao da vasculognese. Um deles, o fator de crescimento fibroblstico bsico (FGF2) necessrio para
a gerao de angioblastos a partir do mesoderma. Quando as clulas do blastodisco
das codornas so dissociadas em cultura, elas no formam ilhas de sangue ou clulas
endoteliais. No entanto, quando essas clulas so cultivadas em FGF2, surgem ilhas
de sangue na cultura, e essas formam clulas endoteliais (Flamme e Risau, 1992). O
FGF2 sintetizado na membrana corioalantica do embrio de pinto e responsvel
pela vascularizao desse tecido (Ribatti et al., 1995). A segunda protena o fator de
(B)
Endoderma do saco vitelnico
Clulas mesenquimatosas
(C)
Clula sangnea primitiva
Clula endotelial
(A)
Mesoderma
perifrico Avascular
Sulco
ectodrmico apical
Veia
marginal Anterior
Somitos
Estgio
Artria Subclvia
Figura 9.30
crescimento vascular endotelial (VEGF), que parece ser especfica para permitir a
diferenciao dos angioblastos e sua multiplicao para formar os tubos endoteliais.
Alm disso, os receptores para VEGF so encontrados nas ilhas de sangue e em
outros lugares onde VEGF pode estar ativo (Millauer et al., 1993). Se embries de
camundongos no possuem os genes codificando o principal receptor para VEGF
(FlK1 tirosina quinase) as ilhas de sangue do saco vitelnico no aparecem, e a vasculognese no ocorre. Camundongos carentes de genes para o segundo receptor para
VEGF (Flt1 tirosinoquinase), tm as clulas endoteliais e ilhas de sangue diferenciadas, mas essas clulas no so organizadas em vasos sangneos (Fong et al.,1995;
Shalaby et al., 1995). Um terceiro fator, angiopoietina-1, intermedia a interao entre as
clulas endoteliais e os msculos lisos recrutados para cobri-las. Mutaes de cada
uma dessas angiopoietinas ou seus receptores levam a vasos sangneos mal-formados, deficientes em msculos lisos que normalmente os envolvem (Davis et al.,1996;
Suri et al., 1996; Vikkula et al., 1996).
ANGIOGNESE: O SURGIMENTO DOS VASOS SANGNEOS. Vasculognese no
(B)
Veia marginal
posterior
369
370
Figura 9.31
Alguns rgos parecem produzir seus prprios fatores de angiognese. A placenta um rgo cuja funo depende do redirecionamento de vasos sangneos existentes dentro dela. Quando a placenta primeiro formada, induz a angiognese secretando a proliferina (PLF), um fator parecido com o hormnio de crescimento. Quando os
vasos sangneos placentrios se estabeleceram (no camundongo aps o dcimo
segundo dia), a placenta secreta uma protena relacionada proliferina (PRP), um
peptdeo que age como um inibidor da angiognese (Jackson et al., 1994). O osso em
desenvolvimento um outro rgo que redireciona vasos sangneos para si enquanto est em formao. Como j foi mencionado, a cartilagem normalmente um tecido
avascularizado, exceto quando os capilares invadem a placa de crescimento para converter cartilagem em osso. Cartilagem hipertrfica (mas no cartilagem em diviso ou
madura) secreta um fator de angiognese de 120-kDa (Alini et al., 1996). interessante
que esse fator produzido somente quando os condrcitos hipertrficos precoces
foram expostos a vitamina D. Isso ajudaria explicar as deformidades nos ossos vistas
em pacientes com raquitismo.
A angiognese crucial no crescimento de qualquer tecido, incluindo os tumores.
Os tumores so bem sucedidos somente quando so capazes de direcionar para si
os vasos sangneos. Portanto, os tumores secretam fatores de angiognese. A habilidade de inibir tais fatores pode se tornar uma maneira extremamente importante para
prevenir o crescimento de tumores e metstases (Fidler e Ellis, 1994).[mesend3.html]
CIRCULAO EMBRIONRIA. O sistema circulatrio embrionrio para e do embrio
do pinto e saco vitelnico mostrado na Figura 9.32. O sangue bombeado atravs da
aorta dorsal passa sobre os arcos articos e se direciona para baixo, entrando no
embrio. Parte desse sangue deixa o embrio atravs das artrias vitelnicas entrando
no saco vitelnico. Nutrientes e oxignio so absorvidos, e o sangue retorna atravs
das veias vitelnicas para o corao atravs do seio venoso. Nos embries de mamferos, alimento e oxignio so obtidos da placenta. Dessa maneira, embora o embrio de
mamfero possua vasos anlogos s veias vitelnicas, o principal suprimento de oxignio e alimento procede da veia umbilical, que une o embrio com a placenta (Figura
9.33). Essa veia, que leva o sangue oxigenado e carregado de alimento de volta ao
embrio derivada do que seria nas aves a veia vitelnica direita. A artria umbilical,
carregando os resduos da placenta, derivada do que teria sido a artria alantica do
pinto. Ela estende-se da poro caudal da aorta e prossegue ao longo da alantide e
emergindo depois para a placenta.
Aps a sua entrada no corao embrionrio do mamfero, o sangue bombeado
para uma srie de arcos articos que circundam a faringe para trazer o sangue dorsalmente. Nos mamferos, o membro esquerdo dos quarto par de arcos articos o
nico que sobrevive para alcanar a aorta. O membro direito desse par se tornou a
raiz da artria subclvia. O terceiro arco artico se modificou para formar artrias
cartidas comuns, que fornecem sangue para o crebro e cabea. O sexto arco
modificado para formar a artria pulmonar; o primeiro, o segundo e o quinto arcos
degeneram. A aorta e a artria pulmonar, portanto, tm uma abertura para o corao
em comum, durante a maior parte do seu desenvolvimento. Finalmente, divises se
Veia vitelnica
anterior
(B)
(A)
371
Arcos articos
Corao
Aorta
dorsal
Veia
vitelnica
Artria
vitelnica
Capilares
Seio terminal
Figura 9.32
formam dentro do tronco arterioso para criar dois vasos diferentes. Somente quando a primeira respirao do animal recm-nascido indica que os pulmes esto preparados para a oxigenao do sangue, o corao se modifica para bombear sangue
separadamente para a artria pulmonar.
Veia cardinal
posterior
Vilosidades
corinicas
Artria
e veia
vitelnica
Veia
umbilical
Artria
cartida
Interna
Artria
Umbilical
Saco vitelnico
Figura 9.33
372
Informaes adicionais
&
Especulaes
Hemoglobina
fetal
H
Saturao com O2 (%)
em
ia
em
fe
ta
ia
is
e
at
rn
ai
Hemoglobina
adulta
Presso de O2
Figura 9.34
Mas uma vez que o feto no est conseguindo oxignio da me, como ele reestrutura sua circulao para conseguir
oxignio de seus prprios pulmes? Durante o desenvolvimento fetal, uma abertura - o duto arterioso - direciona a passagem do sangue da artria pulmonar para a
aorta (e conseqentemente para a placenta). Como o sangue no retorna da veia
pulmonar no feto, mamferos em desenvolvimento tm que ter alguma outra maneira de obter sangue no seu ventrculo
esquerdo para ser bombeado. Isso conseguido pelo forame oval, uma abertura
no septo separando o trio direito do esquerdo. O sangue pode entrar no trio direito, passar pelo forame em direo ao
*A base molecular para essa mudana
nas globinas ser posteriormente discutida
no Captulo 11.
trio esquerdo, e depois entrar no ventrculo esquerdo (Figura 9.35). Quando ocorre a primeira respirao, o oxignio no sangue faz com que os msculos que envolvem o duto arterioso feche a abertura. O
aumento da presso sangnea no lado esquerdo do corao causa o fechamento do
septo sobre o forame oval, com isso separando a circulao sistmica e pulmonar**.
Dessa maneira, quando comea a respirao, a circulao respiratria desviada da
placenta para os pulmes. [other.html#4]
**Em algumas crianas, o septo no se fecha, e o formen oval deixado aberto. Em
geral, a abertura to pequena que essas crianas
no apresentam sintomas fsicos, e o formen
finalmente acaba se fechando. No entanto, se o
segundo septo falha na sua formao, a abertura
septal do trio pode causar um aumento do lado
direito do corao, que pode levar falncia
cardaca durante a idade adulta jovem.
De e para a cabea
Veia cava superior
FETO
De e para o brao
Artria
pulmonar
Ducto
arterioso
De e para o brao
Forame oval
est aberto
Forame oval
Veia cava
inferior
Ducto venoso
Pulmo
Parede
corporal
Rim
Fgado
Veia
umbilical
De e para o
Intestino
Artrias
umbilicais
NEONATO
Ducto arterioso
se fecha
De e para as pernas
Forame oval
se fecha
Placenta
Figura 9.35
373
374
Figura 9.36
Auto-manuteno
Maturao e
diferenciao
Modelo da dinmica da proliferao e diferenciao da clula-tronco. A proliferao est representada por crculos horizontais, e a diferenciao se d ao longo do eixo vertical progredindo
para baixo, para tipos mais diferenciados de clulas. As clulas-tronco iniciais (S) podem
permanecer quiescentes (na fase G0 ) ou entrar no ciclo celular. Clulas-tronco que produzem
mais clulas-tronco permanecem em um nvel, mas podem se dividir para produzir um tipo de
clula de transio que cai para o prximo nvel. Em cada nvel mais baixo, a probabilidade de
cair ainda mais na prxima diviso aumenta. Finalmente, uma clula madura diferenciada
gerada. (Segundo Potten e Loeffer, 1990).
Clula-tronco
Fase S
Ciclo
celular
Mitose (M)
Diferenciao
Reabastecendo nicho
do tronco (renovao
/regenerao)
Clula-tronco intermediria
tipo 1
Clula-tronco
intermediria tipo 2
Clula-tronco
intermediria tipo 3
Blastoclula comprometida
com a diferenciao
Clula madura
totalmente diferenciada
dos. A primeira clula-tronco hematopotica pluripotencial a CFU-M. L. O desenvolvimento dessa CFU-M,L parece ser dependente do fator de transcrio SLC. Camundongos carentes dessa protena morrem por ausncia de todas linhagens de clulas
sangneas e linfocticas. SLC pode especificar o mesoderma ventral como o destino de
uma clula sangnea ou pode envolver a formao ou manuteno de clulas CFU-M,L
(Porcher et al., 1996; Robb et al., 1996). Essa clula d origem s CFU-S (clulas sangneas)
e aos CFU-L (linfcitos). As CFU-S e as CFU-L tambm so clulas-tronco pluripotenciais
porque sua prognie pode se diferenciar em numerosos tipos de clulas. A prognie
imediata da CFU-S, no entanto, so clulas-tronco restritas s linhagens. Cada uma
pode produzir somente um tipo de clula alm de renovar a si mesma. A BFU-E (unidade
formadora de rompimento de eritride), por exemplo, formada da CFU-S e ela pode
formar somente um tipo de clula alm de si mesma. Essa nova clula a CFU-E (unidade
formadora de colnia de eritride), a qual capaz de responder ao hormnio eritropoetina
para produzir o proeritroblasto, o primeiro membro diferenciado reconhecvel da linhagem do eritrcito. Eritropoetina uma glicoprotena que rapidamente induz a sntese do
mRNA para globina (Krantz e Goldwasser, 1965). Ela produzida predominantemente no
rim, e sua sntese responde s condies ambientais. Se o nvel de oxignio do sangue
cair, a produo de eritropoeitina aumentada, um evento levando produo de mais
375
Figura 9.37
376
CLULAS-TRONCO
PLURIPOTENTES
CLULAS EM
DIFERENCIAO
Clula T
Clula pr-T
Clula-tronco
linfide
F ent
SC mbi
oa
cr
CLULAS
DIFERENCIADAS
Clula T ativada
Clula plasma
Clula pr-B
Clula-B
Basfilos
Clula-tronco
de granulcitos
Eosinfilos
Mic
SCF i e n t e
mb
roa
Neutrfilos
Clula-tronco
totipotente autorenovadora
Moncito
Clula-tronco
mielide
Macrfagos
CFC-Meg
Megacaricito
Plaquetas
Eriotroblasto
Proeritroblasto
Reticulcito
Clulas sangneas
vermelhas (hemcias)
(Eritrcitos)
Figura 9.38
hemcias. Com a maturao, as hemcias se tornam eritroblastos, capazes de sintetizar enormes quantidades de hemoglobina. Finalmente, o eritroblasto mamfero expele
o seu ncleo, tornando-se um reticulcito. Os reticulcitos j no conseguem mais
sintetizar mRNA da globina, mas ainda conseguem traduzir mensagens existentes na
globina. O estgio final da diferenciao o eritrcito. Nesse estgio no h diviso,
sntese de RNA ou sntese de protena. As clulas deixam a medula ssea para exercer
o seu papel de fornecedoras de oxignio aos tecidos corporais. Similarmente, existem
clulas-tronco restritivas de linhagem para plaquetas e granulcitos (neutrfilos,
basfilos e eosinfilos) e macrfagos.
Alguns fatores de crescimento hematopoitico (tal como o IL-3) estimulam a
diviso e a maturao de outras clulas-tronco mais primitivas, desse modo aumentando o nmero de tipos de clulas sangneas. Outros fatores (como a
eritropoetina) so especficos somente para algumas linhagens de clulas. A habilidade da clula em responder a esses fatores depende da presena de receptores
para esses fatores na sua superfcie. O nmero desses receptores muito baixo.
Existem somente cerca de 700 receptores para eritropoetina em uma CFU-E, e a
maioria das outras clulas progenitoras tem o mesmo baixo nmero de receptores
do fator de crescimento. A exceo o receptor para o fator de estimulao de
colnia de macrfagos -M-CSF, tambm conhecido como CSF-1- do qual pode
haver at 73.000 por clula em algumas clulas progenitoras.
MICROAMBIENTES HEMATOPOITICOS INDUTIVOS. Alguns fatores de cresci-
377
378
pelo fornecimento de estrgeno ao indivduo, e essa perda ssea foi associada com
o aumento da produo de osteoclastos. Acredita-se que o osteoclasto (clula responsvel para formar buracos nos ossos, como descrito anteriormente) procedente da mesma clula-tronco que os macrfagos e granulcitos, o CFU-GM (Kurihara
et al., 1990; Hattersley et al., 1991). O fator de crescimento interleucina 6 (IL-6)
estimula a produo de osteoclastos. No entanto, a produo de IL-6 inibida pelo
estrgeno que, quando adicionado s clulas de medula de camundongo em cultura, tanto a produo de IL-6 como a de osteoclastos so inibidas (Girasole et al,
1992). Jilka e colegas (1992) mostraram que a remoo dos ovrios do camundongo
causa um aumento no nmero de CFU-GMs, acentuando o desenvolvimento do
osteoclasto, e um aumento no nmero de osteoclastos encontrados no osso. Essas
mudanas podem ser prevenidas injetando nesses camundongos estrgeno ou IL6. Isso sugere que o estrgeno normalmente suprime a produo de IL-6 e a formao de osteoclastos em fmeas de mamferos, e que a perda ssea ps-menopausa
pode ser devida produo de novos osteoclastos pela IL-6.* [mesend4.html]
Locais de Hematopoiese
Nas espcies avcolas e anfbias, as primeiras clulas do sangue derivam do vitelo ou
saco vitelnico. Essa populao celular, no entanto, transitria; as clulas-tronco
hematopoiticas que perduram por toda vida do organismo so derivadas da rea
mesodrmica que envolve a aorta. Isso foi demonstrado no pinto atravs de uma srie
de experimentos elegantes por Dieterlen-Livre, que enxertou o blastoderma de um
*Ento, como os machos - que no tm ovrios ou mesmo estrgeno - normalmente no sofrem
perda ssea osteoportica? Parece que a testosterona tambm suprime o desenvolvimento osteoclstico
(Bellido et al., 1995). Nos seres humanos machos, a produo de testosterona normalmente mantida
com a chegada da idade. Dada a fisiologia do osteoclasto, ns podemos apreciar a intuio presciente
de H. L. Menken (1919): A vida uma luta, mas no contra o pecado ou o Poder Econmico, ou
contra o malicioso magnetismo animal, mas contra os ons de hidrognio.
(B)
Clula
de pinto
Clula
de codorna
Figura 9.39
Mapeamento de clulas sangneas por quimeras pinto-codorna. (A) Fotografia de uma quimera de saco vitelnico onde o blastoderma de
uma codorna foi transplantado para o saco
vitelnico de um pinto. (B) Fotografia de clulas de pinto e de codorna no timo de um animal
quimrico, mostrando a diferena na colorao
nuclear. As clulas linfides so todas de pinto, enquanto as clulas estruturais do timo so
originrias da codorna. (C) Seo atravs da
aorta de um embrio de pinto de trs dias, mostrando as clulas (setas) que do origem s clulas-tronco hematopoiticas. Se clulas dessa
regio forem retiradas de embries de codorna
e colocadas em embries de pinto, os embries
de pinto tero sangue de codorna. (de Martin
et al., 1978, e Dieterlen-Livre e Martin, 1981,
fotografias cortesia de F. Dieterlen-Livre.)
(A)
(C)
pinto em um vitelo de codorna japonesa (Figura 9.39). As clulas do pinto so facilmente distinguidas daquelas da codorna porque o ncleo celular da codorna escurece
muito mais (devido a seus densos nuclolos), assim fornecendo uma marca permanente para a distino entre os dois tipos de clulas. Usando essas quimeras do saco
vitelnico, Dieterlen-Livre e Martin (1981) mostraram que as clulas-tronco do saco
vitelnico no contribuem com clulas para o animal adulto, mas que as verdadeiras
clulas-tronco so formadas dentro dos ndulos do mesoderma que revestem os
principais vasos sangneos e o mesentrio. Esses so os hemangioblastos que so
derivados da esplancnopleura (veja Figura 9.28; Pardanaud et al., 1996). No embrio
de pinto de 4 dias, a parede da orta parece ser a fonte mais importante de clulas
sangneas novas, onde foi encontrado numerosas clulas-tronco hematopoiticas
(Cormier e Dieterlen-Livre, 1988).
Nos mamferos a situao mais controversa, mas comea a ficar bem parecida
com a do pinto. As primeiras ilhas sangneas no embrio do camundongo aparecem
no mesoderma extra-embrionrio e saco vitelnico. Essas clulas parecem ter atividade de CFU-C. Essa populao derivada do saco vitelnico provavelmente transitria ou pode suprir somente as necessidades respiratrias do embrio (produzindo
hemcias nucleadas). No dcimo primeiro dia, clulas-tronco hematopoiticas e clulas CFU-S podem ser encontradas na regio mesodrmica embrionria do camundongo que inclui a aorta, gnadas e mesonefro (a regio AGM; Kubai e Auerbach,
1983; Godlin et al., 1993; Medvinsky et al., 1993). Essas so as precursoras das
clulas sangneas que iro colonizar o fgado e constituir o sistema circulatrio do
feto e do adulto (Medvinsky e Dzierak, 1996). Mller e colegas (1994) propuseram
(A)
Saco vitelnico
(B)
AGM
Aorta dorsal
Prnefro
Mesonefro
Sulco genital
CFU-C no
rudimento heptico
Figura 9.40
AGM
CFU-C
CFU-S
Clula-tronco
hematopoitica
pluripotente
Segunda onda
Primeira onda
379
380
que duas ondas de clulas colonizam o fgado fetal. A populao menor dessas
clulas viriam do saco vitelnico e seriam predominantemente clulas CFU-C. A maior parte da populao viria de stios AGM e constituiriam tanto CFU-S como clulastronco hematopoiticas pluripotentes (Figura 9.40). Essa proposta foi fortalecida
com a descoberta de que camundongos com deficincia no fator de transcrio
AML1 possuem hematopoiese normal dos sacos vitelnicos, mas no tem
hematopoiese (AGM) definitiva (Okuda et al., 1996). Esses camundongos mutantes,
morrem no dia embrionrio 12,5. O seu fgado contm um pequeno nmero de hemcias
nucleadas primitivas, enquanto os fgados controles esto repletos de clulas
sangneas derivadas da AGM. A protena AML essencial para a ativao dos
genes envolvidos na hematopoiese difinitiva. Ao redor da poca do nascimento, as
clulas-tronco do fgado povoam a medula ssea, que assim se torna o principal
local formador de sangue por toda a vida adulta.
QENDODERMA
Faringe
A funo do endoderma embrionrio construir o revestimento de dois tubos dentro do organismo. O primeiro se estende atravs do comprimento do corpo; o tubo
digestivo. Brotos desse tubo formam o fgado, vescula biliar e o pncreas. O segundo, o tubo respiratrio, que cresce a partir do tubo digestivo, finalmente se bifurcando e se transformando nos dois pulmes. Os tubos digestivo e respiratrio
dividem uma cmara comum na regio anterior do embrio; essa regio chamada de
faringe. Bolses epiteliais exteriores da faringe do origem as amgdalas, as glndulas tireide, timo e paratireide.
Os tubos digestivo e respiratrio so ambos derivados do intestino primitivo
(Figura 9.41). Com o avano do endoderma em direo ao centro do embrio, so
formados o intestino anterior e posterior. Antes, a parte terminal oral bloqueada por
uma regio do ectoderma chamada placa oral, ou estomodeu. Finalmente (aproximadamente aps 22 dias nos embries humanos), o estomodeu se rompe, criando a abertura
oral do tubo digestivo. Essa abertura revestida por clulas ectodrmicas. Esse arranjo cria uma situao interessante, porque o ectoderma da placa oral est em contato
com o ectoderma do crebro, qual se curvou ao redor da poro ventral do embrio. As
duas regies ectodrmicas interagem mutualmente uma com a outra. A cobertura da
regio oral forma a bolsa de Rathke e se torna a parte glandular da glndula pituitria.
O tecido neural no assoalho do diencfalo d origem ao processo infundibular, que se
torna a poro neural da pituitria. Assim, a glndula pituitria tem um dupla origem:
essa natureza dupla se reflete em suas funes no adulto.
A poro endodrmica dos tubos digestivo e respiratrio, se inicia na faringe.
Aqui, o embrio de mamfero produz quatro pares de bolsas farngeas (Figura 9.42).
Em vertebrados aquticos, essas estruturas produzem as guelras, porm, as bolsas
farngeas humanas foram modificadas para o ambiente terrestre. Como discutido no
Captulo 7, clulas da crista neural craniana migram para essas bolsas para formar o
componente mesenquimatoso ou cartilaginoso dessas estruturas revestidas de
endoderma. Entre essas estruturas esto os arcos farngeos. O primeiro par das
bolsas farngeas se torna as cavidades auditivas do ouvido mdio e os tubos de
eustquio associados. O segundo par d origem s paredes das amgdalas. O timo
derivado do terceiro par de bolsas farngeas; ele ir direcionar a diferenciao dos
linfcitos T durante os estgios tardios do desenvolvimento. Um par das glndulas
paratireides tambm deriva do terceiro par das bolsas farngeas; o outro par deriva
do quarto. Alm dessas bolsas pareadas, um pequeno divertculo central formado
entre as segundas bolsas farngeas no assoalho da faringe. Essa bolsa de endoderma
e mesnquima brotar da faringe e migrar descendo pelo pescoo para se tornar a
glndula tireide.
(A)
381
(B)
Ndulo de Hensen
Notocorda
Placa neural
Primrdio
cardaco
Ilha
sangnea
Vilosidade corinica
Cavidade
amnitica
Pregas neurais
comeando a se fundir
Intestino anterior
Saco vitelnico
Corao
Celoma
pericardaco
Divertculo
alantico no
pednculo
de conexo
mnio
(secionado)
Intesti
no po
sterio
r
Intestino
mdio
Saco
vitelnico
Portal
intestinal
anterior
Intestino
primitivo
Pednculo
de conexo
Portal
intestinal
posterior
Sulco neural
mnio
Somito
Cavidade
amnitica
Mesoderma somtico
Mesoderma esplncnico
Saco vitelnico
Intestino mdio
(C)
(D)
Estmago
Broto pulmonar
Pncreas
Tireide
Tireide
Faringe
Pulmo
Estomodeu
Neurporo
anterior
Fgado
Corao
Saco
vitelnico
Mesentrio
Dorsal
Placa
da cloaca
Broto
caudal
Pednculo
corporal
Aorta dorsal
Estomodeo
(agora aberto)
Notocorda
Alantide
Bolsa
de Rathke
Corao
Infundbulo
Saco
vitelnico
Fgado
Crebro
Proctodeu
mnio
(secionado)
Tubo Neural
Mesoderma
Somtico
Intestino
Mdio
Mesentrio
dorsal
Cavidade
abdominal
Tubo
neural
Pncreas
dorsal
Peritnio
visceral
Saco vitelnico
Duodeno
Mesentrio
Dorsal
Figura 9.41
Formao do sistema digestivo humano, apresentado aps aproximadamente (A) 16 dias, (B) 18
dias, (C) 22 dias e (D) 28 dias. (Segundo Crelin, 1961.)
Peritnio
parietal
382
(A)
Infundbulo
Hipfise
Notocorda
Processo
mandibular
(da bolsa
farngea I)
Bolsa de Rathke
(C)
(B) 29 dias
Embrio
secionado ao
nvel mostrado
esquerda
32 dias
Broto
lingual lateral
Broto
lingual mediano
Sulcos
farngeos
Expanso do
segundo arco
Arcos
farngeos
Traquia
Duto heptico
Fgado
Entrada para
o esfago
Estmago
(D) 42 dias
Esfago
Vescula biliar
Pednculo vitelnico
Alantide
Membrana da cloaca
Seio urogenital
Intestino caudal
Figura 9.42
Pncreas dorsal
Pncreas ventral
Abertura
auditiva
externa
Cavidade peritoneal
Amgdala
Reto
Tubo auditivo
Seio cervical lateral
Glndula
paratireide
inferior
Glndula
paratireide
superior
Estmago
Broto
Heptico
383
Duto
pancretico acessrio
Duto biliar
Duto
Heptico
Pncreas
dorsal
Vescula
biliar Broto
pancretico
ventral
Vescula biliar
Broto
pancretico
dorsal
(A)
Duto
pancretico
Dorsal
Duto biliar
Vescula biliar
Pncreas
ventral
(B)
Duodeno
Duto
pancretico ventral
Duto
pancretico
ventral
Duodeno
Duto
pancretico principal
(D)
(C)
Figura 9.43
384
Figura 9.44
Intestino
anterior
Faringe
Traquia
Brotos dos
membros
Divertculo respiratrio
(Sulco laringotraqueal)
Esfago
(A)
(B)
(C)
Christ, B., Jacob, H. J. and Jacob, M. 1977. Experimental analysis of the origin of the wing
musculature in avian embryos. Anat. Embryol.
150: 171-186.
385
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Merimee, T. J., Zapf, J., Hewlett, B. and CavalliSforza, L. L. 1987. Insulin-like growth factors
in pygmies. The role of puberty in determining
final stature. N. EngI. J. Med. 316: 906-911.
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Till, J. E. 1981. Cellular diversity in the bloodforming system. Am. Sci. 69: 522-527.
Mecanismo da
Diferenciao Celular
10
III
461
431
10
Regulao transcricional
da expresso gnica: Fatores de transcrio
e a ativao de promotores especficos
Quaisquer que sejam as operaes imediatas dos genes, elas certamente pertencem
categoria de processos do desenvolvimento
e, portanto, se enquadram no espao da embriologia. Esse problema central da biologia bsica est sendo, atualmente, tratado
sob vrios aspectos, tanto por fisiologistas
como bioqumicos e por geneticistas; mas
essencialmente um problema embriolgico.
C. H. WADDINGTON (1956)
nas, mesmo que seus genomas sejam idnticos. Cada ser humano tem aproximadamente 150.000 genes em cada ncleo, mas cada clula usa somente
um pequeno subgrupo desses genes. Alm disso, diferentes tipos de clulas usam
diferentes subgrupos de genes. As clulas vermelhas do sangue produzem globinas,
as clulas do cristalino produzem cristalinas, as clulas nervosas produzem
neurotransmissores e as glndulas endcrinas produzem seus hormnios especficos.
Gentica do desenvolvimento a disciplina que examina como o gentipo se transforma no fentipo, e o paradigma principal da gentica do desenvolvimento a expresso gnica diferencial a partir do mesmo repertrio nuclear. A regulao da expresso gnica pode ser realizada em vrios nveis:
Transcrio gnica diferencial, regulando quais dos genes nucleares so transcritos em RNA
Processamento seletivo do RNA nuclear, regulando quais dos RNAs transcritos passaro para o citoplasma tornando-se RNAs mensageiros
Traduo seletiva de RNA mensageiro, regulando quais dos RNAs mensageiros no citoplasma sero traduzidos em protena
Modificao protica diferencial, regulando quais protenas permanecero ou
funcionaro na clula
Alguns genes (tais como aqueles codificando as protenas globina da hemoglobina) so regulados em cada um desses nveis. Neste e no prximo Captulo sero
discutidos os mecanismos da transcrico gnica diferencial: como genes diferentes
so ativados em diferentes tipos de clulas em tempos determinados. Os fenmenos
bsicos da transcrio diferencial de genes foram discutidos no Captulo 2. Os tufos
de cromossomos politnicos representam a ativao de grupos de genes em resposta a um hormnio produzido na larva do inseto. Analogamente, a expresso de genes
especficos do endoderma na larva do ourio-do-mar foi controlada ao nvel da
transcrio do gene. Nestes Captulos, discutiremos os mecanismos pelos quais
diferentes genes podem ser ativados ou reprimidos em clulas especficas enquanto
elas se diferenciam.
391
392
xons e ntrons
Quando genes so observados, a primeira coisa que se torna aparente que a maioria
dos genes de eucariotos no se parecem maioria dos genes procariotos. Genes
eucariotos no so colineares com seus produtos peptdicos. Ao contrrio, os terminais 3' e 5' do mRNA eucarioto se originam de regies no-contguas no cromossomo.
Entre as regies de codificao de protenas no DNA-xons- esto seqncias intercaladas-ntrons- que no tm relao com a seqncia de aminocidos da protena.*
A estrutura do gene da -globina humana est ilustrada na Figura 10.1. Esse gene
consiste dos seguintes elementos:
1. Uma regio promotora responsvel pela ligao da RNA polimerase e subseqente iniciao da transcrio. Essa regio promotora do gene da -globina
humana tem trs unidades distintas e se estende de 95 a 26 pares de base
antes (a montante de) do stio de iniciao da transcrio (isto , de -95 a 26).
2. A seqncia ACATTTG, onde a transcrio se inicia. Essa freqentemente
chamada seqncia de capeamento (cap) porque representa o terminal 5' do
RNA, que receber um capeamento de nucleotdeos modificados logo aps
sua transcrio. A seqncia especfica do capeamento varia entre os genes.
3. O cdon ATG para o incio da traduo. Esse cdon est localizado 50 pares
de base depois do ponto de iniciao da transcrio (apesar dessa distncia
variar muito em genes diferentes). A seqncia interposta de 50 pares de
nucleotdeos entre os pontos de iniciao da trancrio e a traduo chamada seqncia lder. A seqncia lder pode determinar a velocidade de iniciao da traduo.
4. O primeiro xon contendo 90 pares de bases codificando para os aminocidos
1-30 da -globina humana.
5. Um ntron contendo 130 pares de bases sem seqncias codificadoras para a
globina. A estrutura desse ntron importante para permitir que o RNA seja
processado a RNA mensageiro e saia do ncleo.
6. Um xon contendo 222 pares de bases codificando para os aminocidos 31- 104.
7. Um grande ntron- 850 pares de bases- sem relao com a estrutura da protena globina.
8. Um xon contendo 126 pares de bases codificando para os aminocidos 105- 146.
9. Um cdon de terminao da traduo, TAA.
10. Uma regio 3' no-traduzida que, apesar de transcrita, no traduzida em
protena. Essa regio inclui a seqncia AATAAA, a qual necessria para
colocar uma cauda de cerca de 200 a 300 resduos adenilados no transcrito
de RNA. Essa cauda de poli(A) confere estabilidade e traduzibilidade ao mRNA,
e inserida no RNA cerca de 20 bases a jusante da seqncia AAUAAA.
Entretanto, a transcrio continua alm do stio AATAAA por ainda 1000
nucleotdeos aproximadamente, antes de ser terminada. Dentro da seqncia
3' transcrita mas no traduzida (mais ou menos 600 a 900 pares de bases do
stio AATAAA) est uma seqncia de DNA que serve como um intensificador. Essa seqncia necessria para a expresso temporal e especfica de
tecido do gene da -globina em precursores das clulas vermelhas do sangue
de adulto (Trudel e Constantin, 1987).
* O termo xon tem dois significados sobrepostos. No sentido original, isso definido
anatomicamente como uma seqncia nucleotdica cujo RNA sai do ncleo. O termo tomou
tambm a definio funcional de uma seqncia de nucleotdeos que codifica uma protena. Para
discusso aqui, usaremos a primeira definio e definiremos as seqncias lderes e as seqncias 3'
no traduzidas como xons no traduzidos. Alguns genes eucariotos (como os genes de histonas) no
tm seqncias interpostas, e qualquer hiptese sobre funes de ntrons deve considerar essas
excees. Por conveno, direes a montante, a jusante, 5' e 3' so especficas em relao ao RNA.
Assim, o promotor est a montante do gene, perto de seu terminal 5'.
CAPTULO 10
(A)
Stio de iniciao
da transcrio
(capeamento)
Stio de iniciao da
traduo de Aminocido (aa) 1
Stio de terminao
da traduo
Regio do promotor
Elementos
promotores a
montante
TATA
Box
Stio de adio
de poli(A)
Stio terminal
da transcrio
Regio no traduzida 3
Figura 10.1
(B)
O RNA nuclear original transcrito para tal gene contm a seqncia do capeamento, a
seqncia lder, os xons, os ntrons e a regio 3' no traduzida (Figura 10.2). Em
adio, ambos terminais se modificam. Um capeamento consistindo de guanosina
metilada colocado no terminal 5' do RNA em polaridade oposta ao prprio RNA.
Assim, enquanto todas as bases no precursor da mensagem esto ligadas 5a 3', a
394
Iniciao da
transcrio
Regio promotora
(ligao da RNA
polimerase)
Seqncia
ATA
ATG:
cdon iniciador
da traduo
AATAAA:
seqncia de
adio de poli(A)
TAA: cdon
terminador da
traduo
Seqncia
terminadora da
transcrio
Lder
Transcrio
RNA NUCLEAR
(capeamento)
Cauda
Processamento
RNA MENSAGEIRO
Lder
Cauda
Traduo
PROTENA -GLOBINA
Modificao ps-traduo
Figura 10.2
estrutura do capeamento est ligada 5' a 5'. Isso significa que no h grupo fosfato 5'
livre no RNA nuclear (Figura 10.3). Molculas de RNA mensageiro esto igualmente
capeadas, apesar de no se ter certeza se o capeamento do mRNA o original
recebido no ncleo. O capeamento 5' necessrio para a ligao do mRNA ao ribossomo
e para a subseqente traduo (Shatkin, 1976).
O terminal 3' usualmente modificado no ncleo pela adio de uma cauda de
cerca de 200 resduos adenilados. Esses resduos de cido adenlico so ligados
enzimaticamente e adicionados ao transcrito. Eles no so parte da seqncia do
gene. Ambas as modificaes 3' e 5' podem proteger o RNA das exonucleases
(Sheiness e Darnell, 1973; Gedamu e Dixon, 1978), assim estabilizando a mensagem e seu precursor.
CAPTULO 10
ANTES DO CAPEAMENTO
Terminal 5 da molcula
APS O CAPEAMENTO
7-metil guanosina
Direo da traduo
Direo da
traduo
Figura 10.3
Terminal 3
da molcula
Terminal 3
da molcula
396
Elementos
promotores a
montante
TATA
box
Iniciao de
mRNA
Figura 10.4
CAPTULO 10
Figura 10.5
Posio
Stio do
capeamento
Funo do promotor
Promotores podem funcionar no somente na ligao da RNA polimerase, mas tambm na especificao do lugar e tempo que a transcrio pode ocorrer daquele gene.
Essa funo dos promotores pode ser claramente demonstrada em certos animais
transgnicos. Aqui, um novo gene construdo, onde o promotor normal de um determinado gene substitudo pelo promotor de algum outro gene, e o gene fundido
colocado no proncleo de um zigoto de mamfero. Palmiter e colaboradores (1982)
isolaram o gene do hormnio de crescimento do rato e deletaram sua regio promotora 5'. Nesse espao, eles substituram a seqncia promotora de outro gene-Mt-1 por
metalotionena 1 de camundongo, uma pequena protena envolvida na regulao dos
nveis de zinco no soro. O gene hbrido est ilustrado na Figura10.6A. O gene Mt-1
pode ser induzido pela presena de metais pesados tais como zinco e cdmio, e as
seqncias responsveis por essa induo esto no promotor desse gene. Fundindo
essa regio do promotor de metalotionena ao gene do hormnio de crescimento do
(A)
Gene GH do rato
Gene GH do rato
Figura 10.6
398
Figura 10.7
Funo do promotor vista em carneiros transgnicos. O gene estrutural para uma protena
de importncia farmacutica como a 1antitripsina ou peptdeos do fator de coagulao so ligados ao promotor para a lactalbumina (ou casena) do leite de carneiro. O gene recombinante injetado no proncleo de um ovo de carneiro recentemente fertilizado, e o ovo implantado no tero de
uma me adotiva. Os carneiros recm-nascidos so analisados (por PCR ou transferncia Southern) para verificar a presena do
transgene. Quando os carneiros transgnicos
fmeas maturam, o transgene deveria ser ativado na glndula mamria e a protena
secretada no leite. Do leite pode-se isolar o
composto de importncia farmacutica. (De
acordo com Watson et al., 1992.)
Gene 1-antitripsina (AAT)
Promotor da
-lactoglobulina
*Dois fatos surgiram desse experimento. O primeiro nossa potencial habilidade para curar
doenas genticas fertilizando ovos in vitro e injetando um gene normal dentro de um proncleo.
Esses ovos podem iniciar seu desenvolvimento e, em seguida, ser retornados ao tero da mulher. O
segundo fato que surgiu foi nossa responsabilidade (que geralmente proporcional ao nosso poder,
quer queiramos ou no).
vulo de
carneiro
DNA
recombinante
injetado no
proncleo
Pipeta
suporte
**A maior parte da secreo no leite do animal transgnico no to grande assim, provavelmente
porque os genes no esto ligados aos seus intensificadores apropriados, como veremos mais tarde.
Implante na me adotiva
Prognie transgnica
identificada por PCR
Obteno de leite de
animais trransgnicos
Fracionamento de
protenas do leite
Protena ATT
secretada no leite
CAPTULO 10
Informaes adicionais
&
Especulaes
com RNA polimerase purificada e nucleosdeos trifosfato. necessrio adicionar extratos nucleares para que se inicie uma
transcrio exata. Quais so esses fatores
que permitem o incio da transcrio? Pelo
menos seis protenas nucleares foram consideradas como necessrias para uma iniciao adequada da transcrio pela RNA
polimerase II (Figura 10.8; Buratowski et
al., 1989; Sopta et al., 1989).
TFIID e TFIIA.** Na primeira etapa da transcrio do mRNA, o complexo TFIID se liga
seqncia TATA. Isso foi demonstrado
em experimentos de proteo de DNase
onde TFIID foi adicionado a genes clonados
e o DNA, ento, foi digerido pela DNase. A
nica maneira de salvar o DNA da digesto lig-lo ao TFIID, impedindo o acesso
da DNase. Dessa maneira, Sawadogo e
Roeder (1984) demonstraram que TFIID se
liga especificamente regio TATA dos
genes. TFIID uma protena multimrica e
um de seus componentes-a protena ligante
da seqncia TATA (TBP)- se liga diretamente no sulco menor da seqncia TATA
(Lee et al., 1991; Starr e Hawley, 1991). O
complexo TFIID tem vrias atividades; a primeira ligar a seqncia TATA e servir como
fundao ao complexo transcricional. Outro papel do TFIID impedir a estabilizao
de nucleossomos na regio do promotor.
Quando DNA contendo promotor incorporado nos nucleossomos, esses genes no
podem ser transcritos quando TFIID, RNA
polimerase II e outros fatores so adicionados mais tarde. Entretanto, quando TFIID
adicionado antes ou durante a formao de
nucleossomos, a cromatina resultante
transcricionalmente ativa (Workman e
Roeder, 1987). Bloqueando a formao de
nucleossomos, TFIID parece agir antagonicamente histona H1. Histona H1 (como
**TF significa fator de transcrio; II indica que
o fator foi, inicialmente, considerado necessrio para
a RNA polimerase II; as designaes de letras se
referem s fraes da coluna de fosfocelulose que
tinham a atividade.
400
(A)
+1
Stio de iniciao
da transcrio
(B)
TFIID estabilizado pelo TFIIA
(C)
RNA
polimerase II
Domnio carboxi-terminal (CTD)
(D)
RNA polimerase II
(E)
Transcrito de RNA
Figura 10.8
Formao do complexo de iniciao ativo nos eucariotos. O diagrama representa os complexos formados na seqncia TATA pelos fatores de transcrio e RNA polimerase II. (A) O
complexo TFIID se liga seqncia TATA atravs de sua subunidade TBP. (B) TFIID
estabilizado pelo TFIIA. (C) TFIIB eTFIIH se juntam ao complexo na seqncia TATA
enquanto TFIIE e TFIIF se associam RNA polimerase II. (D) RNA polimerase posicionada
pelo TFIIB, e seu domnio carboxi-terminal (CTD) ligado pelo TFIID. (E) O CTD
fosforilado pelo TFIIH e liberado pelo TFIID. A RNA polimerase II est agora competente
a transcrever o mRNA do gene.
CAPTULO 10
(B)
Iniciao da
transcrio
Iniciao da
transcrio
Iniciao da
transcrio
Iniciao da
transcrio
Protena de
ativao
ligante de DNA
Figura 10.9
Esquema de experimentos sugerindo que diferentes TAFs interagem com diferentes fatores de
transcrio para ativar a transcrio. O complemento total das TAFs ilustrado em (D). O
ativador em (D) uma protena ligada uma seqncia de DNA que foi estabilizada pelas
outras interaes. (De acordo com Chen et al., 1994.)
Sp1
Protena ligante
de TATA
RNA polimerase II
e fatores basais
Figura 10.10
402
Linhagem de clulas de
mieloma produzindo IgG
Figura 10.11
Transfectar com
gene normal
Mielomas de
camundongos
sem genes da
cadeia pesada
Transfeco com
diferentes
pores faltantes
do ntron
Sem
transfeco
Transfectar com
gene normal
Fibroblasto de
camundongo
Posio do mRNA
de C normal
CAPTULO 10
Gillies et al., 1983). Alm disso, quando a regio do intensificador da cadeia pesada da
imunoglobulina inserida em um gene clonado de -globina, ele estimula a transcrio
daquele gene da hemoglobina somente se o gene inserido em uma clula B. Ambos,
os elementos reguladores cis e os fatores reguladores trans so necessrios para a
transcrio de gene especfico da clula.
Funo do intensificador:
Modelos temporais e espaciais de transcrio
Intensificadores podem regular a expresso temporal e especfica do tecido de todos
os genes regulados diferencialmente, e genes ativos em tipos de clulas adjacentes
tm diferentes intensificadores. No pncreas, por exemplo, os genes para as protenas
excrinas (para as protenas quimotripsina, amilase e tripsina) tm intensificadores
diferentes daqueles do gene para a protena endcrina insulina. Esses intensificadores
se situam nas seqncias ladeando o terminal 5 dos seus respectivos genes. Walker e
colegas (1983) colocaram essas regies de flanco no gene para o cloranfenicol acetill
transferase de bactria (CAT), um gene cujo produto enzimtico no encontrado em
clulas de mamfero. Atividade de CAT facilmente determinada em clulas de mamferos e usada como um gene reprter para mostrar ao pesquisador se um determinado intensificador est funcionando. Em seguida, os pesquisadores transfectaram
esses genes hbridos em (1) clulas de ovrio (que no secretam insulina ou quimotripsina), (2) em uma linhagem de clulas que secretam insulina, e (3) em uma linhagem de clulas excrinas, e mediram a atividade da enzima marcadora em cada uma
dessas clulas. Como mostrado na Figura 10.12, nenhuma das seqncias
intensificadoras promoveu a produo da enzima nas clulas ovarianas. Nas clulas
secretoras de insulina, a regio flanqueando a posio 5 do gene da insulina permitiu
a expresso do gene da cloranfenicol acetiltransferase, mas a regio flanqueando a 5
do gene da quimotripsina, no o permitiu. Inversamente, quando os clones foram
colocados na linhagem de clulas pancreticas excrinas, a regio flanqueando a 5 da
quimotripsina permitiu a expresso de CAT enquanto o intensificador da insulina no
(A)
(B)
Figura 10.12
Cloranfenicol
monoacetato (produto)
Cloranfenicol
(substrato)
Intensificador
viral
Intensificador de
quimotripsina
Intensificador
de insulina
404
Stio de ligao de
protena especfica
do sexo
yp1
Regio do
intensificador
yp2
Intensificador
do ovrio
Intensificador
dos corpos
gorduros
Figura 10.13
o permitiu. Os intensificadores para 10 protenas excrinas compartilham uma seqncia de consenso de 20 pares de bases, sugerindo que essas seqncias similares
tenham um papel na ativao desses genes nas clulas excrinas do pncreas (Boulet
et al., 1986). Assim, parece que a expresso dos genes em clulas endcrinas e excrinas
do pncreas controlada por intensificadores diferentes.
Intensificadores so crticos para a regulao do desenvolvimento normal, durante
a ltima dcada foram feitas cinco generalizaes que enfatizam sua importncia para
a expresso gnica diferencial:
1. A maioria dos genes requer intensificadores para sua transcrio.
2. Intensificadores so os principais determinantes do tempo e do espao (tipo
celular) na transcrio diferencial.
3. Estando o intensificador a uma distncia relativamente grande do promotor
isso significa que pode haver mltiplos sinais para determinar se um dado gene
transcrito. Um gene pode ter vrios stios de intensificadores a ele ligados, e
cada intensificador pode se ligar a mais de um fator (que pode regular, seja
inibindo ou estimulando, a transcrio).
4. A interao entre as protenas ligadas aos stios intensificadores com o sistema
de transcrio agrupado no promotor considerada como regulador da transcrio. O mecanismo dessa associao no inteiramente conhecido, e nem
entendemos como o promotor integra todos esses sinais.
5. Intensificadores so modulares. Existem elementos de DNA que conferem expresso gnica temporal e espacial, e esses podem ser misturados e pareados.
Por exemplo, o intensificador da protena do vitelo da Drosophila melanogaster
construdo de tal forma que um dos elementos do DNA permite a expresso
do gene nos corpos gordurosos, outro elemento de DNA permite a expresso
nos ovrios e o terceiro elemento liga protenas especficas do sexo (as protenas Doublesex). A protena Doublesex especfica da fmea estimula a transcrio; a protena especfica do macho inibe a transcrio. Assim, o gene da
protena do vitelo ativado somente nos corpos gordurosos e ovrios da
mosca fmea (Figura 10.13; Garabedian et al., 1985; An e Wensink, 1995). O
elemento de DNA para expresso nos corpos gordurosos compartilhado com
outros genes que so expressos nesse rgo, e o elemento de DNA ligado s
protenas Doublesex tambm compartilhado pelos genes cuja expresso
especfica para o sexo.
Fatores de transcrio:
Os trans-reguladores dos promotores e dos intensificadores
Fatores de transcrio so protenas que se ligam s regies intensificadoras ou promotoras e que interagem de tal maneira que a transcrio ocorre somente a partir de um
pequeno grupo de promotores numa dada clula. A maioria dos fatores de transcrio
pode se ligar s seqncias especficas de DNA, e essas protenas trans-reguladoras
podem ser agrupadas em famlias baseadas em similaridades de estrutura. Dentro de
cada famlia, as protenas compartilham uma armao estrutural comum nos seus respectivos stios de ligao ao DNA, e pequenas diferenas de aminocidos no stio de
ligao podem alterar a seqncia do DNA ao qual elas se ligam. Alm de terem o
domnio ligante de DNA que especfico para uma seqncia, os fatores de transcrio contm um domnio envolvido na ativao da transcrio do gene cujo promotor
ou intensificador ele ligou. Freqentemente, esse domnio trans-ativador permite ao
fator de transcrio interagir com protenas envolvidas na ligao da RNA polimerase.
Essa interao com freqncia aumenta a eficincia com a qual o complexo transcricional bsico pode ser construdo e ligar a RNA polimerase II. Existem vrias famlias de
fatores de transcrio; as aqui discutidas so de alguns tipos principais.
CAPTULO 10
Figura 10.14
O homeodomnio da protena Engrailed se liga em um stio especfico do DNA. A hlice 3 contata os pares de bases no sulco principal, enquanto a poro amino-terminal do homeodomnio entra no
sulco menor. (Segundo Pabo e Sauer, 1992.)
Protenas de homeodomnio
Uma famlia extremamente importante de fatores trans-reguladores o conjunto de
protenas de homeodomnio. Essas protenas so crticas para a especificao dos
eixos corporais ntero-posteriores em todo o reino animal; elas sero mais detalhadas nos Captulos 14 e 16. O homeodomnio consiste de 60 aminocidos organizados em hlice-giro-hlice, de tal maneira que a terceira hlice se estende para dentro
do sulco principal do DNA que ela reconhece. Os aminocidos da poro aminoterminal do homeodomnio tambm contactam as bases no sulco menor (Figura
10.14). Esse homeodomnio foi visto pela primeira vez em protenas que especificam
a identidade de segmentos na Drosophila. Mutaes nessas protenas causaram a
transformao de um segmento do corpo em outro (uma transformao conhecida
como homeosis, que ser discutida em detalhe no Captulo 14). Vrias protenas de
homeodomnio na Drosophila melanogaster foram clonadas, seqenciadas e testadas para sua habilidade de regular a transcrio. A Tabela 10.1 mostra nove protenas de Drosophila contendo homeodomnios e as seqncias de DNA que elas
reconhecem. O reconhecimento de promotores especficos pelas protenas contendo o homeodomnio tem sido considerado essencial para o desenvolvimento da
Drosophila. A protena Bicoid, por exemplo, um fator de transcrio de homeodomnio que se liga aos promotores do gene hunchback. Essa ligao ativa a transcrio desse gene; a protena Hunchback resultante tambm um fator de transcrio,
e se liga aos intensificadores daqueles genes necessrios para a formao da cabea e do trax da Drosophila (Driever e Nsslein-Volhard, 1989; Struhl et al., 1989).
Pequenas modificaes na composio de aminocidos do stio de ligao ao DNA
podem mudar a seqncia de DNA reconhecida pela protena. Treisman e seus
colegas (1989) demonstraram que alterando um nico aminocido no homeodomnio
podia-se modificar os promotores que essa protena ativaria.
406
Tabela 10.1
Protena
Abdominal B
TAATTTGCAT
TCAATTAAAT
Antennapedia
TAATAATAATAATAA
Bicoid
TCCTAATCCC
Engrailed
TCAATTAAAT
Even-skipped
TCAATTAAAT
TAATAATAATAATAA
TCAGCACCG
Fushi tarazu
TCAATTAAAT
TAATAATAATAATAA
Paired
Ultrabithorax
Zerknlt
TCAATTAAAT
TAATAATAATAATAA
TCAATTAAAT
Principal
domnio
trans-ativador
POU-especfico
Homeodomnio
Alta afinidade,
Interao
stio-especfico,
protena-protena,
ligante de DNA,
ligante de DNA
interao
protena-protena
dependente de DNA
Figura 10.15
CAPTULO 10
Gene Pit-1 do
primrdio da
pituitria no
expresso
Transcrio do gene
Pit-1 especfico
do rgo
Figura 10.16
Traduo de Pit-1
especfico da clula
Estrgeno
Embrio de
14 dias
Embrio de
16 dias
Somatotrofos
Lactotrofos
Tireotrofos
Corticotrofos
Gonadotrofos
para a prolactina ilustra muitas das caractersticas dos fatores de transcrio. Primeiro, o intensificador do gene prolactina liga vrios fatores diferentes cuja interao
regula a transcrio. O gene prolactina ativado durante a gravidez para produzir o
hormnio da pituitria (prolactina) que estimula a produo de leite; esse gene estimulado ao mximo pela combinao de Pit-1 e estrgeno. Essa combinao regula o
lugar (a glndula pituitria) e o tempo (gravidez e logo aps) para a sntese de prolactina. Simmons e colegas (1990) mostraram que esse sinergismo ocorre na regio do
408
Figura 10. 17
(A)
Pit-1
Estrgeno
Tireotrofos
Promotor
Intensificador
(C)
Sinergismo promotorintensificador
Sinergismo do
intensificador
Promotor
Regies
Ativantes:
DNA
Regies
restritivas:
Somatotrofos
Somatotrofos
Tireotrofos
Tireotrofos
intensificador do gene. A protena Pit-1 se liga a uma regio do intensificador enquanto o estrgeno, atravs da sua protena receptora, se liga a outra regio do
intensificador. Quando esses fatores esto presentes ao mesmo tempo, a transcrio
muito maior que aquela resultante da adio de cada um separadamente (Figura
10.17A). Mais ainda, parece haver regies silenciadoras flanqueando o intensificador que so necessrias para desligar o gene da prolactina nos tireotrofos (que de
outra maneira ativariam o gene da prolactina) (Figura 10.17B,C; Crenshaw et al.,
1989). Assim, Pit-1 age de forma combinatria com outros fatores de transcrio
para regular seus genes alvos.
Segundo, h um sinergismo entre o intensificador e o promotor do gene da prolactina. O intensificador do gene da prolactina no estimular o promotor de outro gene
to eficientemente como estimular o seu prprio promotor (Figura 10.17B,C; Crenshaw
CAPTULO 10
et al., 1989). Esse sinergismo entre os stios promotor e intensificador parece ser
causado pela formao de alas no DNA entre os dois stios. No gene da prolactina do
rato, o intensificador est localizado a mais de 1300 pares de bases a montante do seu
promotor. Usando um ensaio que funde DNA aproximado por interaes protenaprotena, Cullen e colegas (1993) mostraram que as regies do promotor e do intensificador so reunidas somente quando Pit-1 e estrgeno esto presentes. Parece que
o receptor do estrgeno ligado ao hormnio no intensificador capaz de estabilizar a
interao entre essa regio e a do promotor, assim permitindo a interao entre as
protenas ligadas ao intensificador (Pit-1 e receptor do estrgeno) com o sistema de
transcrio do promotor.
Terceiro, a protena Pit-1 regula positivamente sua prpria sntese. Um dos alvos da protena Pit-1 o intensificador do prprio gene Pit-1 (Rhodes et al., 1993).
Uma vez que o gene Pit-1 foi ativado (por outros fatores de transcrio), a protena
Pit-1 se liga ao seu prprio intensificador e mantm a transcrio do gene Pit-1.
Esse tipo de auto-regulao positiva importante como um mecanismo que compromete a clula a um determinado caminho de desenvolvimento. Assim o gene Pit-1,
uma vez ativo, mantm o fentipo da pituitria. Tal auto-regulao tambm se d para
a protena MyoD (que envolve a clula na via do desenvolvimento da clula muscular) e para vrias protenas de Drosophila que mantm os limites especficos dos
segmentos e individuais do sexo.
Informaes adicionais
&
Especulaes
410
Stio de combinao
do antgeno
Sitio de combinao
do antgeno
Cadeia leve
Pontes de dissulfeto
Cadeia pesada
Figura 10.18
HOOC
Sito efetuador
COOH
Estrutura de uma protena imunoglobulina tpica (anticorpo). Duas cadeias pesadas idnticas
so ligadas por pontes de dissulfeto. O stio de combinao do antgeno composto de regies
variveis (branco) de cadeias leves e pesadas, enquanto o stio efetuador do anticorpo (que
controla se aglutina antgenos, se liga aos macrfagos, ou entra em secrees mucosas) determinado pela seqncia de aminocidos da regio constante da cadeia pesada (colorida).
Figura 10.19
Rearranjo dos genes da cadeia leve durante o desenvolvimento do linfcito B. Enquanto a clula
B em desenvolvimento ainda est maturando na medula ssea, um dos 300 ou mais segmentos
V do gene, se combina com um dos cinco segmentos J do gene e se aproxima do segmento
constante do gene (C).
Organizao original do gene
CAPTULO 10
Figura 10.20
Clulas de mieloma
Protocolo e resultados do experimento de Hozumi e Tonegawa. DNAs de clulas de embrio de camundongo e clulas B de tumores (mielomas) foram
digeridos separadamente em BamHI, separados por eletroforese e eludos do
gel. Aps a desnaturao, cada amostra de DNA eludo foi hibridizada com
mRNA radioativo codificando as regies V e C da cadeia leve da imunoglobulina (total) ou com um mRNA radioativo fragmentado codificando somente a
regio C daquela protena de cadeia leve (a metade 3). Para o DNA embrionrio, as regies V e C da protena de cadeia leve foram encontradas em dois
pedaos diferentes de DNA (regio V em um pedao com peso molecular de
3.9x106, e a regio C em um fragmento de DNA de peso molecular de 6x106).
No tumor linfoctico, as regies V e C foram encontradas juntas em um nico
fragmento de DNA de peso molecular 2.4x106.
Camundongo embrionrio
Enzimas de
restrio
DNA de mieloma
DNA de embrio
cpm no hbrido
V-CRNA
C-RNA
cpm no hbrido
Tamanho do fragmento
ligando-se sonda
V-CRNA
C-RNA
Tamanho do fragmento
ligando-se sonda
412
PM 6x106
PM 3.9x106
Stio Bam HI
DNA embrionrio
as regies sinalizadas de DNA imediatamente a montante do DNA recombinvel e forma um complexo que inicia as quebras na
fita dupla (Hiom e Gellert, 1997). Os genes
para essas enzimas, so ativos somente nas
clulas pr-B e clulas pr-T, onde os genes
esto sendo recombinados. Esses genes de
recombinases no so ativos em clulas maduras, tanto B como T, e tambm no esto
na maioria de outros tipos de clulas.*
Regies cis-reguladoras dos
genes de imunoglobulinas.
A descoberta da juno de V(D)J e a troca
de classe resolveu a maioria dos proble-
PM 2.4x106
Figura 10.21
(A)
Formao da regio varivel
(B)
Troca de classe
(C)
Figura 10.22
CAPTULO 10
(A)
Regio J
Intensificador
Figura 10.23
RNA nuclear
mRNA
(C)
O rearranjo no gene coloca um determinado promotor na proximidade de um intensificador. Um evento semelhante ocorre com o gene de cadeia pesada, e durante
a troca de classe (quando uma regio do
DNA transformada em ala e deletada), a
regio do intensificador permanece prxima ao pedao VDJ (Figura 10.23).
DNA
RNA nuclear
mRNA
Non-B
trans-Regulao da sntese
de imunoglobulinas
O rearranjo de genes em si, no suficiente para sua ativao, pois um gene de
imunoglobulina rearranjado no transcrever ativamente quando colocado em um
fibroblasto ou clula do fgado. Devem
estar presentes fatores trans-reguladores
especficos para a clula em questo.
Staudt e colaboradores, em 1986, identificaram dois fatores que se ligam a promotores. Para isso, eles incubaram um pequeno pedao de DNA contendo uma
seqncia octa com extratos nucleares de
vrias clulas. Os produtos resultantes foram analizados em um gel. Se o extrato
Figura 10.24
Ligao no
especfica
Ligao especfica
da linhagem B
Fragmento de DNA
somente
414
Figura 10.25
Receptor de antgeno
de clula T ou B
Entrada
do vrus
ds RNA
quinase
Receptor de
lipopolissacardeo
Protena
quinase C
Receptor do fator de
necrose tumoral
Outras
protenas quinases
IB inativo
Fosforilao
de IB
NF-B ativo
Complexo
inativo
Ncleo
Stio B
Outros stios
* As clulas B so as nicas clulas que sintetizam imunoglobulinas. A clula pr-B pode produzir
a cadeia pesada mas no a cadeia leve da protena imunoglobulina. NF-B ativo tambm foi
encontrado em clulas T ativadas (mas no em inativadas). Genes especficos para a clula T, tais
como os que codificam a interleucina 2 (fator de crescimento da clula T) e seu receptor tm
intensificadores que ligam NF-B. Essa responsividade a NF-B pode ser importante na propagao
do vrus da imunodeficincia humana (HIV). Quando HIV infecta uma clula T, ele induz a formao
do NF-B ativo (Sen e Baltimore, 1986b; Lenardo e Baltimore, 1989). A produo de NF-B ativo
estimula os genes da clula T, que tm stios nos intensificadores para essa protena. Assim, a clula
T estimulada a se proliferar. Ao mesmo tempo, HIV tambm tem elementos intensificadores de
NF-B que tambm o permitem transcrever seus produtos rapidamente. bvio que a NF-B tem
um papel muito importante no desenvolvimento de linfcitos normal ou alterado.
Pode-se conjecturar o que a protena, no especfica, ligante da seqncia octa, est fazendo em clulas
no-B. Embora as protenas Oct1 e Oct2 possam se ligar mesma seqncia octa, elas exercem seus efeitos
interagindo com outras protenas em certos promotores (Tanaka et al., 1992).
CAPTULO 10
Diviso celular
de Mamfero
Protena onipresente
Regulador positivo
Regulador negativo
Max
myc
Mad ou Max
daughterless
achaete-scute
extramacrochaetae
E12, E47
Famlia MyoD
Id
HOOC
Hlice
Ala
Hlice
Domnio de
ligao do
DNA
COOH
Hlice
Ala
Hlice
Domnio de
ligao do
DNA
Figura 10.26
416
Informaes adicionais
&
Especulaes
CAPTULO 10
Figura 10.27
Representao estereoscpica da regio ligante de DNA da protena bZip, C/EBP, interagindo com 20 pares de bases contendo a
seqncia CCAAT. (Topo) Vista dorsal olhando para baixo,
para uma dupla hlice do DNA e paralelamente ao zper de leucina.
(Embaixo) Vista lateral em ngulo reto ao diagrama acima e perpendicularmente ao eixo do DNA. Resduos de leucina conectando
as duas subunidades podem ser vistas embaixo, como tambm as
alas da tesoura no DNA. (Se voc no est acostumado a cruzar seus olhos para ver a estreo imagem composta, use um
estereptico.) (de Pathak e Sigler, 1992.)
na Figura 10.27 (Vinson et al., 1989; Pu e Struhl, 1991). Na figura, as duas hlices
contendo a regio ligante de DNA esto inseridas no sulco maior desse DNA, cada
hlice encontrando uma idntica seqncia de DNA. A ligao resultante assume a
aparncia de uma tesoura ou hemostato.
Sabe-se que existem vrias protenas bZIP que podem se ligar seqncia CCAAT;
uma das mais importantes chamada protena ligante do intensificador CCAAT
(C/EBP). C/EBP tem um papel na adipognese semelhante ao das protenas
miognicas bHLH na miognese. Expresso precoce de C/EBP em clulas pradiposas em diviso causa a cessao da diviso celular e a iniciao do fentipo
adiposo (Umek et al., 1991). (Ao contrrio das protenas bHLH miognicas, as quais
podem converter clulas nervosas e fibroblastos em msculos, C/EBP no parece
converter outros tipos de clulas na linhagem de adipcitos). A protena bZIP C/EBP
se liga aos intensificadores de numerosos genes especficos de adipose quando a
adipognese iniciada em cultura (Figura 10.28; Christy et al., 1989; Kaestner et al.,
1990). mRNA antisenso contra C/EBP suprime a expresso coordenada de mensagens especficas de adipcitos e a diferenciao de pr-adipcitos em adipcitos.
(Samuelsson et al., 1991; Lin e Lane, 1992).
C/EBP tambm enriquecido nas clulas hepticas, e um dos mais importantes
reguladores da expresso gnica especfica do fgado. Em hepatcitos de camundongo,
418
(A)
(B)
(C)
Figura 10.28
Informaes adicionais
&
Especulaes
CAPTULO 10
(A)
Reprter
Promotor
fraco
Ativao
Intensificador
Elemento de transposio
contendo um gene
reprter em um promotor
fraco
Transcrio
Promotor fraco
Reprter
Gene normalmente
regulado pelo
intensificador
(B)
Figura 10.29
Tcnica da armadilha para intensificadores. (A) um gene reprter fundido a um promotor fraco
que no pode dirigir uma transcrio sozinho. A construo injetada no ncleo do ovo e se
integra no genoma, aleatoriamente. Se a integrao for prxima de um intensificador, o gene
reprter ser expresso quando o intensificador for ativado, mostrando um padro de expresso
de um gene normalmente associado ao intensificador. (B) Expresso do gene reprter em Drosophila injetada com uma armadilha de intensificador. Esses intensificadores so ativos no
desenvolvimento do sistema nervoso do inseto e no estavam identificados antes deste procedimento. (Fotografias cortesia Y. Hiromi.)
Identificao de intensificadores
por meio de genes reprteres
A habilidade de um intensificador em ativar
outros genes foi usada pelos cientistas para
encontrar novos intensificadores e os genes
que os regulam. Para fazer isso faz-se uma
armadilha para intensificador. A armadilha
consiste de um gene reprter (como o gene
para a -galactosidade de E. coli ou a protena fluorescente verde) fundido a um promotor eucarioto relativamente fraco. Esse
promotor no iniciar a transcrio do gene
420
Transativao
Ligao a DNA
Figura 10.30
Transativao
Interface de dimerizao,
ligao de HSP90,
funo inibitria, transativao
CAPTULO 10
(A)
PROTENA
Transativao
Ligao
a DNA
Ligao a
hormnio
(B)
Dedos de zinco
Cadeia principal
da protena
Mdulo 1
(C)
Mdulo 2
DNA
esterides inclui os hormnios glicocorticides (cortisona, hidrocortisona e o hormnio sinttico dexametasona). Esses se ligam aos receptores de hormnios glicocorticides e lhes permitem se ligar aos elementos responsivos aos glicocorticides nos
cromossomos (Figura 10.31).
Os elementos responsivos aos hormnios esterides so muito semelhantes entre
si e so reconhecidos pelas protenas muito relacionadas. As protenas receptoras de
esterides contm, cada uma, trs domnios funcionais: (1) um domnio ligante de
hormnio, (2) um domnio ligante de DNA que reconhece o elemento responsivo ao
hormnio, e (3) um domnio de trans-ativao que est envolvido na mediao do sinal
para o incio da transcrio. Essas funes podem sobrepor-se parcialmente, e todos
os domnios parecem ter algum papel na ativao da transcrio (Beato, 1989). Para
ocorrer a ativao transcricional, o receptor deve penetrar no ncleo e dimerizar com
uma protena similar ligante de hormnio. A ligao do hormnio ao seu domnio
ligante de hormnio pode ser necessria para a dimerizao, translocao para o ncleo, e habilidade da regio ligante de DNA em reconhecer o elemento responsivo a
hormnio. (Kumar et al., 1987)
Os elementos responsivos aos hormnios dentro do DNA foram inicialmente
identificados por ensaios de ligao competitiva (Pfahl, 1982; Karin, 1984), onde
fragmentos de restrio especficos do DNA foram testados para verificar sua habilidade de ligao a receptores de hormnios carregando hormnios radioativos.
Usando vrios fragmentos derivados de enzimas de restrio do DNA e comparando as seqncias de vrios elementos responsivos a glicocorticides, foi determinado que a seqncia de consenso do elemento responsivo ao glicocorticide
AGAACANNNT-GTTCT (onde N pode ser qualquer base). Mostrou-se que essas
seqncias ligantes de glicocorticides agem como intensificadores: quando o
Figura 10.31
422
(A)
Figura 10.32
Seqncia ligante
de glicocorticide
Teste para a seqncia do intensificador de glicocorticide. (A) Um vrus recombinante contendo o intensificador responsivo ao glicocorticide do vrus de tumor mamrio de camundongo e o gene da timidina quinase do vrus de Herpes simplex podem se integrar no genoma de
uma clula sem o gene da timidina quinase. Pelo
tratamento com glicocorticides, o gene recombinante transcreve a timidina quinase viral. P,
regio promotora; TK, gene da timidina quinase;
VG, gene viral do vrus do tumor mamrio de
camundongo. (B) Micrografia eletrnica dos elementos intensificadores de glicocorticides,
mostrando o receptor de hormnio ligado quela regio do gene. (A modificado de Chandler et
al., 1983: B de Payvar et al., 1983, cortesia de
K. R. Yamamoto.)
Enzimas de
restrio
Enzimas de
restrio
Ligao
e
seleo
(B)
Estimular com
glicocorticide
CAPTULO 10
(A)
Enhanceosome
Figura 10.33
Estrutura de um enhanceosome. (A) A protena que dobra DNA, HMG-I(Y), empacota uma espiral 60 pares de bases do DNA ao
redor de ativadores transcricionais NF-B
(o complexo p50/p65), IRF1, e ATF2/c-Jun.
O HMG-I(Y) est no sulco menor, enquanto os outros fatores de transcrio operam
no sulco principal da dupla hlice. Uma vez
que o enhanceosome montado, ele
contata o sistema basal de transcrio em
vrios stios. (B) O DNA tem inclinao de
20o, antes da formao do enhanceosome.
Aps a formao do enhanceosome ele se
inclina na direo oposta +26o. Esse ltimo
complexo estimula a transcrio. (A de acordo com Thanos e Maniatis, 1995; B de acordo com Falvo et al., 1995.)
424
Figura 10.34
Sem glicocorticide
Com glicocorticide
Hormnio
Stio de iniciao
da transcrio
Receptor de
glicocorticide
Sem transcrio
Sem transcrio
Sem c-Jun
nem c-Fos
c-Jun:c-Jun
c-Jun: c-Jun
Pouca transcrio
Muita transcrio
c-Jun: c-Fos
c-Jun: c-Fos
Muita transcrio
Pouca transcrio
no stio, ele poderia dirigir uma transcrio extremamente eficiente do gene Proliferin.
Essa transcrio inibida pela presena de glicocorticides. Assim, se o
glicocorticide tem um efeito estimulador ou inibidor na transcrio do gene
Proliferin depende do estado fisiolgico anterior da clula. Uma nica seqncia de
DNA ligando um determinado receptor de hormnio pode ser tanto um intensificador como um silenciador para a mesma protena.
Existem outras maneiras para um elemento cis-regulador ser ativador em algumas
situaes e repressor em outras. Por exemplo, o fator de transcrio Krppel da
Drosophila (uma protena cuja atividade veremos no Captulo 14, responsvel
pela formao do trax e abdmen superior da mosca) um ativador em baixas
concentraes e um repressor em altas concentraes. Em baixas concentraes, ele
se liga a seu elemento cis-regulador no DNA, e interage com TFIIB para facilitar a
construo do complexo de iniciao da transcrio. Em altas concentraes, ele se
liga a si mesmo, e os dmeros resultantes no complexam com TFIIB (Sauer et al.,
1995). Em lugar disso, os dmeros interagem com TFIIE e podem bloquear sua funo. Se a protena p53 supressora de tumor um ativador ou repressor depende da
estrutura do promotor do gene especfico. Se existe no promotor um elemento ligante
de p53, a protena p53 age como um ativador. Se no existe um elemento p53 no
promotor, p53 pode se ligar a TAF em TFIID e impedir a transcrio. Ela pode tambm interagir com o fator de transcrio WT1. Esse fator usualmente um ativador
de transcrio, mas se est ligado p53, se torna um repressor* (Figura 10.35; Seto
et al., 1992; Maheswaran et al., 1993).
*Temos boa e m novidades. A boa novidade que at o fim desta dcada, conheceremos a maioria,
seno todos os fatores de transcrio ativos em muitos tipos de clulas, e como eles interagem para iniciar
ou reprimir a transcrio. A m notcia que muitos de ns teremos que aprender fsico-qumica para
entender esses dados.
CAPTULO 10
(A)
Protena
Krppel
Ativao
Figura 10.35
Sem ativao
Protena
Krppel
Elemento
ligante de Kr
Elemento
ligante de Kr
(B)
Sem ativao
Ativao
Elemento
ligante de p53
(C)
Elemento
ligante de WT1
Sem
ativao
Ativao
Elemento
ligante de WT1
426
(A)
(B)
(C)
Figura 10.36
A expresso de Myogenin no embrio de camundongo de 10.5 dias. Um gene reprter da galactosidase foi ligado s seqncias reguladoras a montante do gene Myogenin, e isso foi usado
para produzir camundongos transgnicos. Os embries transgnicos com 10.5 dias foram corados para identificar a presena da -galactosidade bacteriana. (A) Regio promotora de Myogenin
selvagem, mostrando todos os lugares onde o gene Myogenin usualmente expresso. (B) Expresso de um promotor de Myogenin com uma mutao em um stio prximo ao gene Myogenin.
No h transcrio desse gene nos brotos dos membros. (C) Expresso de um promotor de
Myogenin com uma mutao em um stio mais a montante do gene. No vista transcrio do
promotor nos arcos farngeos, membros ou clulas centrais posteriores do mitomo. (de Cheng
et al., 1993.)
CAPTULO 10
LITERATURA CITADA
Christy, R. J. and seven others. 1989. Differentiationinduced gene expression in 3T3-Ll preadipocytes:
CCAAT/enhancer binding protein interacts with and
activates the promoter of two adipocyte-specific
genes. Genes Dev. 3: 1323-1335.
428
CAPTULO 10
McKnight, S. and Tjian, R. 1986. Transcriptional selectivity of viral genes in mammalian cells.
Cell 46: 795-805.
430
Umesono, K. and Evans, R. M. 1989. Determinants of target gene specificity for steroid/
thyroid hormone receptors. Cell 57: 1139-1146.
Sheiness, D. and Darnell, J. E. 1973. Polyadenylic segment in mRNA becomes shorter with
age. Nat. New Biol. 241: 265-268.
Regulao transcricional da
expresso gnica: A ativao da cromatina
Ento, no podemos negar categoricamente que em ltima anlise poderemos triturar genes em um almofariz e em seguida
cozinh-los em um bquer.
H. J. MULLER (1922)
11
431
432
Figura 11.1
(A)
(B)
Ligante
H1
Partcula central:
2 H2A;
2H2B;
2H3;
2H4
(D)
Nucleossomo central
DNA
H1
Cromatina
DNA ligante
(A)
433
(B)
Figura 11.2
434
Figura 11.3
Nucleossomo
Um TF (fator de transcrio)
inicial se liga a um nucleossomo
central, deslocando parte do
ncleo da histona
TF se ligando ao
nucleossomo
Histona H1
Outros TFs
Quando as histonas so
deslocadas, outros TFs
podem se ligar
Outros TFs
Histona ou
protenas carreadoras
Origem (galinha)
DNA da clula
vermelha do sangue
Cromatina da clula
do crebro
Cromatina do
fibroblasto
Cromatina da clula
vermelha do sangue
Cromatina da clula
vermelha do sangue
Porcentagem de
ligao mxima
do cDNA radioativo
ao DNA extrado da
cromatina tratada
Tratamento
com DNase
Sonda de cDNA
radioativo
cDNA da globina
94
cDNA da globina
90-100
cDNA da globina
90-100
cDNA da globina
25
cDNA da ovalbumina
90-100
Eritrcito nucleado
ou clula do
oviduto
435
Figura 11.4
Extrair
cromatina
Regies sensveis
DNase I
Fibra, 30-nm
Medida de nucleotdeos
radioativos ligados
436
Nucleossomo
Yamamoto (1984), estudando o intensificador responsivo a glicocorticides do vrus do tumor mamrio do camundongo, demonstraram que antes da adio do hormnio s clulas contendo o vrus, essa seqncia intensificadora no mostrou
sensibilidade especial DNase I. Aps a administrao do hormnio, um stio discretamente hipersensvel DNase I se desenvolveu nessa regio. A formao do
stio hipersensvel coincidiu com o incio da transcrio do gene viral; quando o
hormnio foi retirado, ambos o stio hipersensvel e a transcrio do gene viral
desapareceram. Zaret e Yamamoto especularam que a interao entre o complexo do
receptor de glicocorticide e o intensificador de DNA altera a configurao da
cromatina para facilitar a transcrio do promotor vizinho. Esse seria o caso se,
como j mencionado, o receptor de glicocorticide pudesse remover nucleossomos
da regio contendo a seqncia de DNA onde ele se liga.
Ruptura e reorganizao de nucleossomos:
o papel dos complexos de ruptura
Fatores de
transcrio
Figura 11.5
TAF (250-kDa) de TFIID capaz de acetilar histonas H3 e H4 (Mizzen et al., 1996). Essa
atividade enzimtica pode ter um papel importante permitindo que TFIID substitua os
nucleossomos.
Histona
acetiltransferase
437
DNA
Histona
deacetilase
Figura 11.6
438
Figura 11.7
Cromossomo
Cromossomo
Embrionrio
Adulto
minoritrio
Genes da globina
Genes da globina
Fetal
Adulto
majoritrio
Protenas
globina
contm quatro stios que so hipersensveis DNase I somente em clulas precursoras de eritrides e que parecem ser necessrios para altos nveis de ativao da transcrio especfica nessas clulas, da famlia inteira dos genes da -globina (-, -, - e
-globinas) no cromossomo 11 humano (Grosveld et al., 1987). Deleo ou mutao da
LCR causa o silenciamento de todos esses genes. Inversamente, se a LCR colocada
adjacente a genes que no so usualmente expressos nas clulas vermelhas do sangue (como o gene especfico da clula T, thy-1) e ento transfectados nas clulas
precursoras de eritrides, esses novos genes so expressos nas clulas vermelhas do
sangue. Esse efeito especfico para precursores das clulas vermelhas do sangue,
pois somente elas teriam os fatores trans-reguladores apropriados para se ligar a essa
regio (Blom van Assendelft et al., 1989; Fiering et al., 1993).
A LCR responsvel por permitir expresso gnica em uma regio inteira. Alm
disso, se os genes da globina permanecem ligados LCR, eles podem ser expressos
em clulas eritrides independentemente de onde elas residem no genoma. Se eles so
separados da LCR, os genes da globina so reprimidos, mesmo nas clulas eritrides
que transcreveriam os genes da globina. Ryan e colaboradores (1989) produziram
Stio da eritropoiese
Fgado
Bao
Medula ssea
Figura 11.8
Porcentagem da sntese
total de globina
Saco vitelnico
Idade ps-concepo
(semanas)
Nascimento
Idade ps-natal
(semanas)
(A)
LCR
Genes da globina
(B)
(i)
Figura 11.9
Nucleossomos
LCR
Garfo de
replicao
Promotor ou
intensificador
(ii)
Nucleossomo
formando no DNA
replicado
O complexo promotor-LCR
estabilizado pelas protenas
ligantes de promotores durante
a construo do nucleossomo
Promotor
LCR
Protenas ligantes
do promotor
(iii)
LCR
Promotor ou
intensificador
hipersensveis
camundongos transgnicos contendo o gene da -globina humana e seus promotores e intensificadores imediatos. Estes animais transgnicos produziram somente pequenas quantidades da -globina humana (menos de 0.3 porcento da -globina celular total). Entretanto, quando os pesquisadores adicionaram LCR, a -globina humana
correspondia a mais da metade da globina total nesses camundongos. Esse resultado
explica observaes clnicas em pacientes que no tinham essa regio e mostravam
deficincias de -, -, -, e -globinas, apesar de seus genes para essas protenas
estarem intactos e os genes de globinas no outro cromossomo funcionarem normalmente (Tuan et al., 1987).
A regio controladora do loco est abarrotada com stios de ligao de fatores
trans-reguladores. Como foi observado por Gary Felsenfeld (1992) Os domnios parecem ter sido montados por um estudante super-entusiasmado determinado a construir um poderoso elemento atuante como cis. Ele sugere que uma das funes da
LCR formar uma ala ao redor de uma das regies promotoras durante a replicao do
DNA e se ligar a ela de maneira a impedir que nucleossomos se formem naquele
promotor de globina (Figura 11.9). Realmente, os promotores da globina no so
hipersensveis DNase I exceto na presena da LCR.
439
440
Informaes adicionais
&
Especulaes
Intensificador intragnico
Promotor
Gene da
globina
Intensificador flanqueando
a extremidade 3
441
Aglomerado de genes
semelhantes globina
Embrionrio
Fetal
Adulto
Holocomplexo
Mecanismo proposto para ativao da famlia das globinas pela LCR. (A) O stio hipersensvel 3 da LCR ativado por um fator transativador. (B) Uma vez aberto o stio 3, os outros
stios hipersensveis abrem e ligam seus fatores de transcrio. Interaes entre essas protenas
formam um holocomplexo de DNA e protena. Esse pode formar uma ala e interagir com os
promotores dos genes da globina. Competio por essa interao, pela presena de diferentes
concentraes de fatores de transcrio, permitiria a ativao diferencial e seqencial desses
genes durante o desenvolvimento dos eritrcitos. (De acordo com Ellis et al., 1996.)
442
Figura 11.12
Promotor
metilado
Promotor no
metilado
Gene da globina
Gene da globina
6 semanas
DNA
Ativo
globina
Inativo
12 semanas
Inativo
443
Ativo
globina
clonados foram transcritos. Se certas regies dos genes de globina clonados forem
protegidos da metilao, antes de adicion-los s clulas, ser possvel criar clones
nos quais os genes da globina tm seqncias idnticas mas diferentes padres de
metilao. Um gene completamente no metilado transcrito, enquanto que um gene
completamente metilado (grupo metila em cada apropriado resduo C) no transcrito.
Usando clones parcialmente metilados, Busslinger e colaboradores mostraram que a
metilao na regio 5 do gene da globina (nucleotdeos 760 a +100) previne a
transcrio. Parece, portanto, que a metilao no terminal 5 de um gene tem um
papel direto na regulao da expresso gnica. De modo geral, a metilao da regio
promotora inibe a transcrio de genes.
Metilao e a manuteno dos padres de transcrio
Diferenas na metilao podem ser responsveis pela manuteno (como o oposto
iniciao) de um padro de atividade transcricional ao longo de vrias geraes
de clulas (Holliday, 1987). Durante a replicao, cada fita de DNA serve como um
molde para sua fita complementar. Nas regies de metilao, os grupos metila esto
nas duas fitas da dupla hlice, visto que uma CpG em um lado do DNA refletida por
uma CpG antiparalela no outro lado. Se o C em uma das fitas est metilado, o C na na
outra fita tambm est (Figura 11.13). Durante a replicao, uma fita de DNA (a fita
molde) teria o padro de metilao, ao passo que a fita recm-sintetizada no o teria.
Entretanto, a enzima DNA (citosina-5)-metiltransferase tem uma forte preferncia
por DNA com uma fita metilada, e quando encontra um metil-CpG em um lado do
DNA, a enzima metila a nova citosina no outro lado (Gruenbaum et al., 1982; Bestor
e Ingram, 1983).
duvidoso que modificaes na metilao realmente iniciam modificaes na
atividade do gene, pois a DNA metiltransferase no tem uma especificidade inerente em relao a uma seqncia (salvo uma propenso geral para reas ricas em
CpG). Como o padro de metilao deve ser herdado aps cada diviso celular,
alguma outra coisa deve reconhecer os genes de clulas diferenciadas no seu
estado metilado e subseqentemente desmetil-los. Isso foi demonstrado
transfectando um gene metilado de -actina para clulas cultivadas de mioblastos
(que normalmente transcrevem aquele gene). Quando transfectado para os
mioblastos, esse gene foi desmetilado e transcrito. Entretanto, se transferido a
Figura 11.13
Modelo para a propagao de padres de metilao. Quando o DNA se replica, somente uma
das duas fitas (a fita velha) retm o padro original de metilao. A outra fita (a fita nova)
no metilada. Uma enzima metilante especfica para CpG seria capaz de se ligar aos pares de
CpG onde um resduo C estava metilado, e ento metilaria o resduo C na fita complementar.
(De acordo com Browder, 1984.)
Replicao
Metilao de
novas fitas de DNA
444
outros tipos de clulas, esse gene especfico para o msculo permaneceu metilado.
A desmetilao especfica para o msculo no necessitou de sntese de novo
DNA mas certas seqncias cis-DNA foram necessrias (Yisraeli et al., 1986;
Paroush et al., 1990). Uma situao semelhante foi vista na desmetilao de genes
da imunoglobulina e vitelogenina (protena do vitelo) (Frank et al., 1990; Jost,
1993). Portanto, a metilao pode ser necessria para estabilizar o padro de transcrio do gene, mas a ativao inicial do gene provavelmente realizada por
fatores de transcrio especficos para tecidos.
Como que a metilao impede a transcrio? Uma possibilidade que os fatores
de transcrio no podem se ligar s suas seqncias intensificadoras ou promotoras se o DNA estiver metilado (Iguchi-Ariga e Schaffner, 1989). Outra possibilidade
que o DNA metilado seja especificamente reconhecido por certas protenas que
competem contra os fatores de transcrio por esses stios. Boyse e Bird (1991,
1992) forneceram evidncias para esse segundo modelo mostrando que seqncias
promotoras metiladas esto ligadas por uma protena ligante de metil-CpG. Essa
protena parece competir com a ligao de fatores de transcrio, desse modo reduzindo a transcrio desses stios.
A metilao do DNA pode tambm influenciar a formao de nucleossomos. Keshet
e colaboradores (1986) demonstraram que a metilao afeta a estrutura da cromatina e
sugerem que a desmetilao cria stios hipersensveis DNase I. Quando eles
transfectaram genes da globina desmetilados em ncleos de fibroblastos de camundongo, os genes foram empacotados em cromatina sensvel DNase (independente
da habilidade transcricional do gene). Quando os mesmos genes foram metilados em
todos os stios CpG, as regies sensveis DNase no se formaram, possivelmente
porque sua metilao os levou a um empacotamento de forma inacessvel. possvel
que quando os fatores trans-reguladores removem os nucleossomos do DNA, essas
regies se tornam desmetiladas. Essa desmetilao pode ser necessria para estabilizar essas regies de atividade. Os grupos metila interagiriam com as histonas para
permitir que os nucleossomos se formem somente no DNA metilado e no no DNA
desmetilado, deixando as regies ativas livres de nucleossomos no DNA (Keshet et
al., 1986). Uma vez estabelecidas essas regies, seria mais fcil para outros elementos
trans-reguladores encontrar essas regies livres de nucleossomos.
Informaes adicionais
&
Especulaes
Origem genitora
Me
Pai
Fentipo
Alelo normal
Alelo mutante
Sndrome de Prader-Willi
Alelo mutante
Alelo normal
Sndrome de Angelman
Alelo ausente
Sndrome de Prader-Willi
Sndrome de Angelman
Alelo ausente
445
1.4
Figura 11.14
446
Figura 11.15
Ncleos de clulas do epitlio oral humano coloridos com Cresil violeta. (A) Clula de um
homem normal XY, mostrando ausncia do corpo de Barr. (B) Clula de uma mulher normal XX,
mostrando um nico corpo de Barr (seta). (C) Clula de uma mulher com trs cromossomos X.
Dois corpos de Barr podem ser vistos, e somente um cromossomo por clula ativo. (De acordo
com Moore, 1977.)
CLIVAGEM
PRECOCE
IMPLANTAO
NA FERTILIZAO
Corpos de Barr
Cromossomo X
materno
Cromossomo
X paterno
Zigoto feminino
com dois
cromossomos X
(A)
Os dois cromossomos X
so ativos em todas
as clulas
Inativao ao acaso de
um cromossomo X
em todas as
clulas do embrio
(B)
Figura 11.16
Inativao do cromossomo X em mamferos. (A) Diagrama esquemtico ilustrando inativao ao acaso do cromossomo X. Considera-se que a inativao
ocorra aproximadamente na poca da implantao. (B) Um camundongo fmea
heterozigoto para o gene dappled, da colorao da pelagem, ligado ao X. Podem ser observadas regies distintamente pigmentadas. (Fotografia cortesia
de M. F. Lyon.)
447
448
Figura 11.17
Informaes adicionais
&
449
Especulaes
Clulas germinativas:
TATA
DNA
Espermatozide
TATA
vulo
Clulas somticas:
TATA
X-inativo
loco de Xist em uma clula XX impedese a inativao do X naquele cromossomo (Penny et al., 1996). Terceiro, a transferncia de um segmento de 450 quilobases contendo o gene Xist do camundongo para um autossomo de clulas precursoras embrionrias masculinas causa
a inativao aleatria daquele autossomo ou do cromossomo X endgeno (Lee
et al., 1996). O autossomo contado
como um cromossomo X. A expresso de
Xist somente necessria para a iniciao da inativao do cromossomo X.
Uma vez ocorrida a inativao ele se torna dispensvel (Brown e Willard, 1994).
Ainda no se sabe o que o RNA do Xist
faz para inativar o cromossomo.
O loco do Xist est impresso nos
gametas, e a impresso efetuada pela
metilao diferencial na regio promotora
do Xist. Durante a espermatognese, trs
stios CG no promotor do Xist so desmetilados, enquanto que os mesmos stios
so completamente metilados durante a
oognese. Em clulas somticas, o gene
Xist ativo (no cromossomo X inativo)
praticamente no metilado, enquanto que
o gene Xist inativo (no cromossomo X
ativo) est completamente metilado (Figura 11.18; Norris et al., 1994; Ariel et al.,
1995; Zuccotti e Monk, 1995). Esse padro de expresso do Xist mantido nos
tecidos extra-embrionrios do camundongo (de tal modo que o Xist de origem paterna est desmetilado e ativo, levando
inativao daquele cromossomo). Entretanto, as clulas do epiblasto embrionrio perdem os padres de impresso de
seus ancestrais e reestabelecem as diferenas de metilao ao acaso.
TATA
X-ativo
Stios de correlao
da transcrio
do gene
Figura 11.18
450
Impedindo a transcrio:
O nucleossomo no acetilado.
O que est impedindo que a transcrio do
DNA do cromossomo X inativo seja como
aquela do ativo? Um estudo recente de
Jeppeson e Turner (1993) sugere que os cromossomos X ativo e inativo diferem entre
si pela acetilao de suas respectivas
histonas H4. Uma das melhores maneiras
de liberar protenas do DNA adicionar
cargas negativas s protenas. Isso pode
ser feito adicionando grupos fosfato ou
acetato s regies da protena ligante de
DNA. A acetilao de histona H4 tem sido
correlacionada a genes transcrevendo ativamente. Nucleossomos de regies promotoras com CG no metilados tm protenas H4 altamente acetiladas, e a acetilao
da histona H4 se correlaciona com a ativao de certos genes (Chahal et al., 1980;
Tazi e Bird, 1990). Alm disso, apesar do
fator de transcrio TFIIIA no poder se
ligar ao gene do RNA 5S se esse estiver
envolvido em um nucleossomo, aquele fator pode se ligar ao gene se as histonas
do nucleossomo estiverem acetiladas (Lee
et al., 1993). A acetilao de histonas parece no ser obrigatria para a transcrio do gene, mas pode facilitar a transcrio em vrios sistemas (Turner, 1991).
Usando um anticorpo que reconhece a
histona H4 acetilada (mas no a no acetilada), Jeppesen e Turner encontraram
que cromossomos X ativos, no homem e
no camundongo, tm tanta histona H4
acetilada como a maioria dos outros cromossomos. Entretanto, o cromossomo X
inativo tem pouqussima histona H4 acetilada (Figura 11.19). No se sabe como a
expresso de Xist causaria a ocorrncia
de H4 no acetilada nos nucleossomos
do cromossomo X inativo.
Trancamento dos padres de transcrio:
metilao do DNA
O trancamento do estgio transcricional
inativo feito pela metilao. A primeira
evidncia indicando tais cis diferenas
entre o estado ativo e o inativo do DNA
do cromossomo X foi obtida quando
Liskay e Evans (1980) transfectaram o
gene ligado ao X para HPRT para clulas
de camundongo deficientes em HPRT em
cultura. Quando o DNA vinha de um
clone de clulas nas quais o gene para
(A)
(B)
Figura 11.19
451
Figura 11.20
452
(A)
(B)
Figura 11.21
Presena de cromatina ativa ao longo da periferia e canais nucleares.
(A) Ncleos de eritrcitos tratados com DNase I, que parecem cortar
regies de cromatina transcrevendo ativamente. Esse corte foi curado por traduo de corte dentro do ncleo em presena de nucleotdeos, cuja presena pode ser detectada por fluorescncia. Os nucleotdeos marcados foram encontrados na periferia do ncleo e ao longo
de estruturas levando para dentro a partir do envoltrio nuclear. (B)
Modelo especulativo da organizao da cromatina na interfase, imaginando a matriz nuclear como uma srie de canais internos. (A de
Hutchinson e Weintraub, 1985, cortesia de N. Hutchinson; B de
acordo com Razin e Gromova, 1995.)
Canal da
matriz
nuclear
mRNA coberto
com protenas
DNA
RNA sendo
transportado
para o citoplasma
Citoplasma
Matriz nuclear
Poro nuclear
van Eekelen e van Venrooij, 1981; Mariman et al., 1982). Essa ligao parece ser
mediada por um conjunto de protenas da matriz nuclear. Essas protenas incluem
laminina B1, um componente principal do envoltrio nuclear (Ludrus et al., 1992),
uma protena ligante de DNA especfica do timo que desenrola o DNA adjacente ao
seu stio de ligao (Dickinson et al., 1992), e o fator de transcrio YY1/NF-E1 que
foi considerado idntico protena 1 da matriz nuclear (NMP-1) (Guo et al., 1995).
Considerando que genes ativos, RNA polimerase, e transcritos nascentes parecem
estar ligados a uma matriz nuclear, Jackson e Cook (1985) propuseram que a transcrio no ocorre pela migrao de uma polimerase ao longo do gene. Ao contrrio,
eles imaginaram uma RNA polimerase acorrentada matriz nuclear, com o DNA
migrando atravs dela.
Existe tambm alguma evidncia de que o DNA ativo possa estar ligado matriz
nuclear atravs de seqncias de DNA ricas em AT e denominadas regies associadas matriz (MARs), ou regies associadas a andaimes (Gasser e Laemmli, 1986). A
maior parte dessas MARs se localizam perto ou dentro de intensificadores ou promotores. A importncia dessas regies foi mostrada por Stief e colaboradores (1989), que
identificaram duas MARs no gene da lisozima do pinto. Nesse caso, as MARs no
estavam no intensificador e por essa razo puderam ser separadas. Quando eles fundiram o intensificador e o promotor da lisozima do pinto ao gene CAT reprter e
transfectaram o clone em clulas produtoras de lisozima, isso no produziu muita
protena CAT. Ento eles produziram um gene similar que continha o promotor, o
intensificador e seqncias CAT e o conjunto foi flanqueado por duas MARs. Quando
453
Figura 11.22
Intensificador
Promotor
Gene CAT
Topoisomerase II
Produtos
Substrato
Resultados da transfeco
esse clone foi transfectado em clulas produtoras de lisozima, a sntese de CAT foi
enormemente aumentada (Figura 11.22). Da mesma forma, duas MARs flanqueiam um
intensificador do loco da cadeia pesada da imunoglobulina de camundongo, e a
transcrio desse gene requer a presena tanto do intensificador como das duas
MARs. As MARs parecem cooperar com o intensificador para estender uma regio de
cromatina acessvel a fatores, ao promotor do gene da imunoglobulina (Forrester et al.,
1994; Jenuwein et al., 1997).
Topoisomerases e transcrio gnica
Em vrios estudos, foram identificadas regies associadas matriz que continham
ou eram adjacentes a uma seqncia de DNA que reconhecida por uma enzimatopoisomerase II que pode ser essencial transcrio (Cockerill e Garrard, 1986;
Adachi et al., 1989; Scheuermann e Chen, 1989). Estudos recentes sugeriram que
desenrolar a hlice de DNA importante para a facilitao da transcrio. Cromatina
ativa transcricionalmente tem que ser torcida para permitir o desenrolar das fitas
(Ryoji e Worcel, 1984), e a toro realizada por superespiralamento da hlice de
DNA (Figura 11.23). Villeponteau e colaboradores (1984) mostraram que stios sensveis DNase I em genes ativos so formados somente quando os genes esto sob
tenso torcional. A topoisomerase II a enzima responsvel pela toro do DNA e
separao das fitas. Usando anticorpos para essa protena, Berrios e colegas (1985)
Figura 11.23
RNA polimerase
Superespiral
negativa
454
Figura 11.24
Stio de ligao da
topoisomerase
Seqncia de
ligao matriz
Protegida por
NF-NR
demonstraram que a topoisomerase II est localizada no complexo matriz nuclearenvoltrio nuclear. A proximidade entre as MARs e as regies de ligao da
topoisomerase II sugerem que a ancoragem do DNA matriz deve ser necessria
para impedir a rotao livre do DNA, permitindo assim que as topoisomerases ligadas matriz toram a cromatina (Bode et al., 1992).
Se a ligao matriz essencial para a transcrio do RNA, possvel que protenas reguladoras negativas como os silenciadores possam inibir essa associao.
Essa possibilidade foi sugerida por Scheuermann e Chen (1989), que isolaram uma
protena que inibe a transcrio do gene de cadeia pesada da imunoglobulina. Essa
protena, NF-NR, expressa em clulas no B e nos estgios precoces do desenvolvimento da clula B, mas est ausente em clulas B maduras que transcrevem grandes
quantidades de genes da imunoglobulina. Essa protena se liga em quatro locais
flanqueando o intensificador da cadeia pesada: duas seqncias de consenso MAR e
duas seqncias de consenso topoisomerase II ( Figura 11.24). possvel que, com a
presena de NF-NR no ncleo, essa se ligue s regies flanqueando o intensificador
e impea a associao do gene de cadeia pesada da imunoglobulina com a matriz
nuclear e a topoisomerase. Quando a protena no est presente, essas associaes
no ocorrem resultando na transcrio do gene. A demonstrao de que a protena da
matriz nuclear NMP-1 a mesma que o fator de transcrio YY1 especialmente
interessante, pois YY1 foi implicado no silenciamento do gene de -globina uma vez
que os genes da -globina so expressos (Raich et al., 1995; Wandersee et al., 1996).
Isoladores e domnios
O genoma eucarioto no meramente parcelado em determinados genes. Na verdade, ele parece estar dividido em regies de desenvolvimento relativamente independentes freqentemente denominadas domnios. Evidncia para os domnios veio de
estudos onde blocos de DNA foram colocados prximos a genes reprteres que podiam ser normalmente ativados por um intensificador. Certas seqncias impediram o
intensificador de ativar o gene reprter, enquanto que outras seqncias no o fizeram
(Geyer e Corces, 1992). Foi proposto que essas seqncias isoladoras ligam protenas
que impedem a interao de intensificadores e promotores no seu outro lado. Desse
modo, elas poderiam estabelecer fronteiras: a ativao poderia ocorrer em um de seus
lados, mas no cruzar para o outro lado. Algumas dessas seqncias fronteirias
foram isoladas de DNA de Drosophila, como tambm algumas das protenas ligantes.
Kellum e Schedl (1991) mostraram que o gene hsp70 (para a protena do choque
trmico em Drosophila) estava confinado por duas seqncias, scs e scs, que impediam os efeitos da cromatina adjacente de influenciar sua transcrio. Zhao e colegas
(1995) identificaram uma protena de 32-kDa que se liga ao elemento de fronteira scs e
est localizada entre as bandas de numerosos genes na Drosophila (veja Prancha 31;
Zhao et al., 1995). Isso pode ser visto quando os genes formam tufos e a colorao
dessas protenas as mostram nas bordas dos tufos. O stio scs no complexo Bithorax
parece estar localizado aps o ltimo gene (AbdB), de modo que a unidade inteira
possa ser regulada como um nico loco gentico.
455
Resumo
A transcrio gnica diferencial uma via majoritria na regulao do desenvolvimento. As regies cis-reguladoras no DNA e as protenas trans-reguladoras que
ativam e reprimem a transcrio esto sendo identificadas e seus mecanismos de
ao delineados. Parece que certos fatores de transcrio rompem ou previnem a
formao de nucleossomos nos intensificadores e regies promotoras, assim permitindo a ligao da RNA polimerase II ao promotor e a transcrio do gene. Certos
fatores de transcrio estimulam o processo interagindo com o complexo transcricional e acelerando sua formao. A desmetilao e o desenrolamento de regies
genticas na matriz nuclear provavelmente tambm esto envolvidas na regulao
da expresso gnica. Como disse Albert Claude, ns apenas comeamos a apreciar
nossa riqueza adquirida.
LITERATURA CITADA
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458
459
Controle do desenvolvimento
pelo processamento e traduo
diferencial do RNA
Entre a concepo
E a criao...
Entre a potncia
E a existncia
Entre a essncia
E a origem
Cai a Sombra.
T. S. ELIOT (1936)
12
rencial do DNA. Mesmo que um determinado transcrito de RNA seja sintetizado, no h garantia que ele ir criar uma protena funcional na clula. Para
se formar uma protena ativa, o RNA tem que ser: (1) processado em um RNA mensageiro pela remoo de ntrons, (2) trasladado do ncleo para o citoplasma, e (3) traduzido pelo aparelho sintetizador de protenas. Em alguns casos, a protena sintetizada
no est em sua forma madura e (4) tem que ser modificada, aps a traduo, para
tornar-se ativa. A regulao pode ocorrer em qualquer um desses passos durante o
desenvolvimento.
Q CONTROLE DO DESENVOLVIMENTO
PELO PROCESSAMENTO DIFERENCIAL DE RNA
A essncia da diferenciao a produo de diferentes conjuntos de protenas em
diferentes tipos de clulas. Nas bactrias, a expresso diferencial de genes pode ser
efetuada a nvel da transcrio, traduo e modificao das protenas. Nos eucariotos,
porm, outro nvel possvel de diferenciao existe, a saber, o controle ao nvel do
processamento e transporte de RNA. Este captulo ir apresentar duas maneiras pelas
quais o processamento diferencial do RNA pode regular o desenvolvimento. A primeira envolve a censura pela qual transcritos nucleares podem ser processados em
mensagens citoplasmticas. Aqui, diferentes clulas podem selecionar diferentes transcritos nucleares para ser processados e colocados no citoplasma como o RNA mensageiro. O mesmo pool de transcritos nucleares pode, com isso, dar origem a diferentes populaes de mRNAs citoplasmticos em diferentes tipos de clulas. O segundo
modo de processamento diferencial do RNA se refere a emendar precursores de mRNA
em protenas diferentes usando diferentes combinaes de xons em potencial. Se um
precursor de mRNA deve passar a ter cinco xons em potencial, uma clula poderia
usar xons 1, 2, 4 e 5, uma outra clula poderia utilizar xons 1, 2 e 3, e ainda outra clula
poderia usar uma combinao diferente. Assim, um gene pode criar uma famlia de
protenas relacionadas.
461
462
Figura 12.1
RNA de
blstula + plteo
RNA de blstula
RNA de plteo
463
Tabela 12.1 Comparaes entre tecidos das seqncias de genes estruturais em RNA mensageiros e RNA nucleares
Reao normalizada
com mRNA parental
Pista referencial
complementar a
mRNA
OURIO-DO-MAR
mRNA de blstula (DNA de cpia nica)
Blstula
Crebro
Crebro
CAMUNDONGO
mRNA cerebral (cDNA total)
mRNA cerebral (cDNA
representando mensagens raras)
Reao normalizada
com outro mRNA
Reao normalizada
com nRNA
mRNA
nRNA
100
Intestino
Celomcito
12
13
Intestino
Celomcito
97
101
100
100
Rim
Rim
78
56
Rim
Rim
102
100
(A)
Figura 12.2
(B)
(C)
Clula tipo 1
Clula tipo 2
nRNA do celomcito
nRNA da gstrula
nRNA do intestino
464
Figura 12.3
Dividir o tecido
em duas amostras
(A)
Ensaio de proteo de RNase
Isolar RNA
(B)
Ensaio run-on nuclear
Isolar ncleos
Ncleo
RNA polimerase
Adicionar
oligonucleotdeo
radioativo
Transcrito nascente
de RNA
Adicionar UTP radioativo
Poro radioativa
de RNA
Eletroforese em gel
Auto-radiografia
Filtro de papel
Auto-radiograma
465
(A)
ntron Cyllla
xon Cyllla
Ectoderma
Endoderma +
mesoderma
Vetor
(B)
Spec1
Figura 12.4
466
COMPLEXO DE COMPROMETIMENTO
ntron
xon
xon
SPLICEOSOME
xon
xon
xon
xon
ntron
Figura 12.5
Emendar o ntron e conectar os xons adjacentes. No complexo de comprometimento levando formao do spliceosome, as duas
junes de emenda 5 e 3 no ntron foram
reconhecidas pelo snRNA U1 e pela protena
U2AF, respectivamente. Ambas so estabilizadas por protenas da famlia SR. As protenas U2AF e SR so consideradas ser substitudas por riboprotenas nucleares pequenas
(snRNPs) que facilitam a clivagem do ntron e
a ligao de dois xons adjacentes. (Segundo
Hodges e Beggs, 1994.)
EMENDA CONSTITUTIVA
Figura 12.6
467
468
mRNA da tropomiosina
especfico de msculo estriado
Figura 12.7
Diagrama esquemtico da emenda alternativa do RNA no precursor do mRNA da tropomiosina. No msculo esqueltico, xons
possveis 6 e 11 so evitados (e transformados em ntrons), enquanto em fibroblastos e
clulas do msculo liso, xons possveis 7 e
10 so tornados ntrons, e 6 e 11 so usados
como xons.
Processamento de
clula muscular
Processamento de fibroblasto,
clula do msculo liso
mRNA de tropomiosina de
fibroblasto e msculo liso
Em alguns casos, as propriedades das protenas emendadas alternativamente podem ter conseqncias importantes durante o desenvolvimento. As cinco diferentes
protenas fibronectinas humanas so geradas por um par de genes idnticos da
fibronectina. As formas diversas (e em alguns casos especficas de rgos) da
fibronectina vm de mRNAs diferentes gerados pela emenda de diferentes xons dos
precursores do mRNA da fibronectina (Tamkun et al., 1984; Hynes, 1987). Algumas
formas de fibronectina so encontradas nas trajetrias sobre as quais migram clulas
embrionrias, enquanto outras no o so, o que sugere que formas de fibronectina
emendadas alternativamente tm diferentes funes embrionrias (ffrench-Constant e
Hynes, 1989). Algumas isoformas emendadas do fator 8 de crescimento fibroblstico
(FGF8) somente interagem com receptores gerados da emenda particular de RNA.
Assim, o FGF8b (uma das sete variantes emendadas de FGF8) se ligar a receptores
FGF 2c e 3c, mas no aos receptores FGF 1b, 1c, 2b ou 3b. No camundongo em
desenvolvimento, o FGF8b produzido do sulco ectodrmico apical no broto dos
membros e dos arcos branquiais e fossas nasais da cabea. Em cada um desses locais,
o mesnquima subjacente expressa o receptor FGFR2c (Fotografia de rosto, Crossley
e Martin, 1995; MacArthur et al., 1995).
Processamento Alternativo de RNA e Determinao Sexual em Drosophila
A emenda alternativa do RNA pode gerar famlias de protenas cujos membros
podem ter diferentes funes. Nada previne tal emenda alternativa de produzir protenas de fatores de transcries alternativas, e essa tcnica foi usada pela Drosophila
para controlar sua diferenciao sexual. Alm disso, a diferenciao sexual em
Drosophila regulada por uma cascata de eventos processadores de RNA (veja
Baker et al., 1987; MacDougall et al., 1995).
Conforme veremos no Captulo 20, o desenvolvimento do fentipo sexual em
Drosophila mediado por uma srie de genes que convertem a relao cromossomo X-autossomo em uma clula de macho ou uma de fmea. Quando a relao 1
(i.e., quando existem dois cromossomos por clula diplide), o embrio se desenvolve em uma mosca fmea. Quando a relao de 0.5 (i.e., quando a mosca XY
com apenas um cromossomo X por clula diplide), o embrio se desenvolve em
um macho (Figura 12.8).
Um dos genes chave nessa trajetria o transformer (tra1). Esse gene necessrio para produo de fmeas, e sua perda resulta em moscas macho, independentemente da relao cromossmica. Atravs de todo o perodo larval, o gene tra1
sintetiza ativamente um transcrito que processado em um mRNA geral (que
*A protena Sxl ela prpria um produtor de um complexo tipo de emenda alternativa do RNA.
Mais ser dito sobre isso no Captulo 20.
XX;AA
XY;AA
Sex lethal
Sex lethal
mRNA especfico
de fmea
transformer
mRNA especfico
de fmea
Doublesex
mRNA especfico
de fmea
Fentipo
feminino
469
mRNA no
funcional
transformer
mRNA no
funcional
Doublesex
mRNA especfico
de macho
Fentipo
masculino
Figura 12.8
470
ntron xon
gene tra1
Cdon de parada
Cdon de parada
FMEA
MACHO
prmRNA
tra1
prmRNA
tra1
Sx1 bloqueia ligao de
U2AF (e spliceosome) ao
stio mais eficiente; assim,
stio de emenda 3 menos
eficiente usado
mRNA transformer
(macho e fmea)
constitutivo produz
protena truncada,
no-funcional
RNA Transformer
feminino
Protena transformer
Protena degrada
Gene
doublesex
Stio de emenda 3 ineficiente
Pr-mRNA
doublesex
Pr-mRNA
doublesex
Protenas Tra ajudam ligao
de U2AF ao stio ineficiente
mRNA doublesex
especfico de fmea
Protena
Doublesex (DSX)
especfica de fmea
Ativa genes especficos de fmea
Suprime genes especficos de macho
mRNA doublesex
especfico de macho
Protena
Doublesex (DSX)
especfica de macho
Ativa genes especficos de macho
suprime genes especficos de fmea
Figura 12.9
471
472
h vrias maneiras para realizar o controle da traduo e que clulas diferentes desenvolveram diferentes meios de o fazerem.
Figura 12.10
Representao esquemtica dos eventos da traduo eucaritica. Os passos da iniciao renem as subunidades ribossmicas 40S e 60S,
mRNA e o tRNA iniciador, que est complexado ao aminocido metionina (Met). Durante
o alongamento, aminocidos so trazidos para
o polissomo, e ligaes peptdicas so formadas entre os aminocidos. A seqncia de aminocidos na protena em crescimento
direcionada pela seqncia de cdons de cidos nuclicos no mRNA. Aps a ltima ligao peptdica da protena ter sido feita, um dos
cdons UAG, UGA, ou UAA sinaliza o trmino da traduo. As subunidades ribossmicas
e a mensagem podem ser reutilizadas.
INICIAO
ALONGAMENTO
TERMINAO
Polipeptdeo
nascente
tRNA
iniciador
Ligao
peptdica
Ribossomo
Subunidades
ribossmicas
Fator de
liberao
Subunidades
ribossmicas
recicladas
Polipeptdeo
completado
473
Figura 12.11
Unidade
ribossmica
pequena
Ligao do fator de iniciao
tRNA
Iniciador
Escaneamento
Reciclagem
de eIF2
Subunidade 60S
474
Figura 12.12
(A)
(B)
tRNA iniciador sobre o cdon AUG. Somente aps o mRNA ter sido posicionado
apropriadamente na subunidade ribossmica pequena, pode a unidade ribossmica
60S (grande) se ligar. Isso completa a reao de iniciao. Durante esse processo, o GTP no eIF2 hidrolisado em GDP. Para o eIF2 captar um novo tRNA iniciador, esse tem que ser regenerado para eIF-GTP pelo eIF2B.
O alongamento envolve a ligao seqencial de tRNAs do aminoacil ao
ribossomo e a formao de ligaes peptdicas entre os aminocidos medida que
eles abandonam seqencialmente seus tRNAs transportadores (veja Figura 12.10).
medida que aminocidos so ajuntados, o ribossomo viaja ao longo da mensagem, expondo novos cdons para a ligao de tRNA. Isso permite a um outro
ribossomo iniciar sua viajem no terminal 5 da mensagem. Assim, em geral, qualquer mRNA ter vrios ribossomos ligados a ele. Essa estrutura ento chamada
poliribossomo- ou mais comumente, polissomo (Figura 12.12). A terminao da
sntese protica ocorre quando um dos cdons mRNA UAG, UAA ou UGA exposto no ribossomo. Esses tripletes de nucleotdeos (chamados cdons de terminao) no so reconhecidos pelos tRNAs e portanto no codificam para quaisquer aminocidos. Ao contrrio, eles so reconhecidos pelos fatores de liberao,
que hidrolizam o peptdeo do ltimo tRNA, destacando-o do ribossomo. O
ribossomo se separa em duas unidades, e o ciclo da traduo recomea.
475
estabilizada em certas clulas em certos momentos, ento ele poderia produzir grandes
quantidades de uma protena particular em certos momentos e em certos locais.
Degradao Seletiva de mRNAs
LONGEVIDADE DE UM mRNA E SUA REGIO 3 NO TRADUZIDA. Nem todos os
mRNAs tm a mesma estabilidade dentro da clula. Uma mensagem estvel como a
globina tem uma meia-vida de cerca de 17 horas, enquanto os mRNAs para vrios
fatores de crescimento tm meia-vida de menos de 30 minutos. Assim, a quantidade
de protena produzida de uma nica mensagem de globina deve ser muito maior que
aquela de uma mensagem de um nico fator de crescimento. Dados recentes, sumariados por Decker e Parker (1994), sugerem que as seqncias de RNA dentro da
regio 3 no-traduzida (3UTR) podem promover a rpida desadenilao da cauda
do poliadenilato 3. Isso leva perda da cobertura do terminal 5 da mensagem e de
sua subseqente degradao 5 a 3. Portanto, os principais determinantes reguladores da meia-vida da mensagem parecem residir na 3 UTR. As espcies mais efmeras
de RNA contm uma ou mais seqncias ricas em AU nessa regio. Shaw e Kamen
(1986) inseriram uma regio rica em AT com 51 pares de bases oriundas da 3UTR do
gene para o fator de crescimento GM-CSF na 3UTR do gene da globina do coelho
(Figura 12.13). A mensagem da globina resultante tinha uma meia-vida de menos de
30 minutos. Uma seqncia semelhante, mas contendo 14 resduos G e C, foi inserida
em um outro gene da globina como um controle. Sua mensagem para globina
normalmente tinha a meia-vida longa.
A capacidade de degradar seletivamente mRNAs crtica para a funo celular.
Por exemplo, o gene c-fos codifica um fator de transcrio necessrio para a diviso
celular normal do fibroblasto (Holt et al., 1986). Tal como a mensagem do fator de
crescimento GM-CSF, o mRNA para c-fos contm grandes regies 3 no-traduzidas
ricas em seqncias AU. Se essas regies forem deletadas (experimentalmente ou
por mutao natural), a mensagem ganha uma meia-vida mais longa. Conseqentemente, mais protena C-fos produzida, e a clula recebe sinalizao contnua para
se dividir. O resultado um tumor das clulas que tm o gene c-fos, carente da 3
UTR rica em AU (Meijlink et al., 1985). Wilson e Treisman (1988) descobriram que
essa regio estimula a remoo da cauda poli(A) quando a mensagem traduzida.
Quando a regio rica em AU foi deletada ou substituda por uma outra seqncia, a
cauda poli(A) permanecia, e a mensagem tinha uma meia-vida mais longa. Foram
encontradas vrias protenas que reconhecem essas regies 3UTR ricas em AU, e
elas podem acelerar a degenerao das mensagens quando ligada elas (Chen et al,
1992, 1994). Reciprocamente, a 3UTR do RNA de longa vida da globina contm
trs regies ricas em C que ligam protenas que parecem estabilizar a mensagem
(Kiledjian et al., 1995).
Encurtamento diferencial da cauda poli(A) tem um papel decisivo no ciclo vital do
fungo limoso Dictyostelium. Nesse organismo, um novo conjunto de mensagens
transcrito durante a mudana do crescimento vegetativo (ameba) para o desenvolvi-
Figura 12.13
RNA globina
Terminais 3 alternativos
CAP
(A)
ntron
RNA de controle
2-microglobulina
ntron
(B)
Porcentagem da marcao
(pulso) inicial
476
Com prolactina
Sem prolactina
Figura 12.14
mento (grex). Ao mesmo tempo, as caudas poli(A) dos mRNAs existentes no estgio
vegetativo so dramaticamente encurtadas. Como resultado, as mensagens recmtranscritas so traduzidas, enquanto as mensagens pr-existentes no o so (Palatnik
et al., 1984). Esse mecanismo tambm foi observado em glndulas salivares na larva de
Drosophila (Restifo e Guild, 1986).
ESTABILIZAO HORMONAL DE RNAs MENSAGEIROS ESPECFICOS. Produtos
Clula ou tecido
Efetuador
Regulatrio
Viteologenina
Albumina
Vitelogenina
Apo VLDL II
Casena
Hormnio do crescimento
Insulina
Ovalbumina
Fgado de Xenopus
Fgado de Xenopus
Fgado de ave
Fgado de ave
Glndula mamria de rato
Culturas de clula
pituitria de rato
Clulas de ilhotas
pancreticas de rato
Oviduto de galinha
Estrgeno
Estrgeno
Estrgeno
Estrgeno
Prolactina
Dexametasona e tiroxina
Glicose
Estrgeno, progesterona
Meia-vida (horas)
+Efetuador
500
10
22
26
92
202
-Efetuador
16
3
~2.5
3
5
77
29
~24
2-5
477
478
Tabela 12.3
mRNAs codificando
Funo(es)
Organismo(s)
Ciclinas
Regulao da diviso
celular
Movimento celular
e contrao
Formao de fusos
mitticos, clios, flagelos
Sntese de DNA
Ourio-do-mar, molusco,
estrela-do-mar, r
Camundongo, estrela-do-mar
Actina
Tubulina
Molusco, camundongo
Pequena subunidade da
ribonucleotdeo redutase
Hipoxantina fosforil-transferase Sntese de purinas
Vg1
Determinao
mesodrmica (?)
Ourio-marinho, molusco,
estrela-do-mar
Camundongo
R
Histonas
Caderinas
Metaloproteinases
Fatores de crescimento
Ourio-do-mar, r, molusco
R
Camundongo
Fator FEM-3 de
determinao do sexo
Produtos gnicos PAR
Morfgeno SKN-1
Morfgeno Hunchback
Morfgeno Caudal
Morfgeno Bicoid
Morfgeno Nanos
Morfgeno GLP 1
Protena Germ cell-less
Protena Oskar
Ornitina transcarbamilase
Fator de alongamento 1
Protenas ribossmicas
Formao de cromatina
Adeso de blastmeros
Implantao no tero
Crescimento celular;
crescimento de clulas
uterinas (?)
Formao de espermatozide
Camundongo
C. elegans
Segregam determinantes
morfognicos
Determinao do destino
do blastmero
Determinao do destino
do anterior
Determinao do destino
do posterior
Determinao do destino
do anterior
Determinao do destino
do posterior
Determinao do destino
do anterior
Determinao da clula
germinativa
Drosophila
Localizao da
clula germinativa
Ciclo da uria
Sntese protica
Sntese protica
Drosophila
R
R
R, Drosophila
C. elegans
C. elegans
Drosophila
Drosophila
Drosophila
Drosophila
C. elegans
Fontes: Compilado de numerosas fontes, incluindo Raff, 1980; Shiokawa et al., 1983; Rappollee
et al., 1988; Brenner et al., 1989; Standart, 1992.
(A)
479
Figura 12.15
uniformemente distribudos no ocito (Rodgers e Gross, 1978). Rebagliati e colaboradores (1985) mostraram que enquanto a maioria das mensagens maternas encontrada distribuda uniformemente atravs do ovo no-fecundado de Xenopus, alguns
mRNAS armazenados se localizam no plo animal ou vegetal do citoplasma. Eles
extraram RNA contendo poli(A) de ocitos e usaram transcriptase reversa e DNA
polimerase para converter os RNAs em uma populao de DNAs de dupla fita. Esses
DNAs foram em seguida inseridos em vetores clonados e cultivados separadamente
em E. coli. Cerca de 2 milhes de clones foram derivados dessa maneira. O DNA
desses clones (a biblioteca do ocito de Xenopus) foi ento transferido para dois
pedaos de papel de filtro e desnaturado sob condies de fornecer DNA de fita
simples. Em seguida, os investigadores cortaram o plo animal ou vegetal do ovo e
extraram o RNA contendo poli(A) dessas regies. cDNAs radioativos foram produzidos a partir dos RNAs, e um grupo e filtros contendo DNA foi incubado em cDNAs
das mensagens animal, enquanto o outro foi incubado em cDNAs das mensagens
vegetal. Quando a ligao de cDNAS radioativos foi medida, a maioria dos clones
ligaram quantidades iguais de cDNA dos plos animal e vegetal, indicando que essas
mensagens estavam igualmente distribudas. Porm, cerca de 1.2 porcento dos clones
somente ligaram cDNA produzido de mensagens do plo animal, e cerca de 0.2 porcento
dos clones somente se ligaram ao cDNA derivado do mRNA do plo vegetal.
O DNA dos clones especfico para mensagens animal ou vegetal pde, ento, ser
usado para identificar os mRNAs localizados. RNA foi extrado de ovos inteiros ou
de seus plos animal e vegetal e corrido em gel. Os RNAs foram separados
eletroforeticamente e foram transferidos para papel de nitrocelulose (transferncia
Northern) e examinados com sondas de DNA radioativo para cada um dos clones
especficos para a regio. Dois dos resultados esto mostrados na Figura 12.15 e
Prancha 8. A localizao desses mRNAs em regies especficas do ovo conseguida
atravs do citoesqueleto e ser detalhada nos Captulos 13 e 20.
480
Informaes adicionais
&
Especulaes
desenvolvimento precoce ocorrem sem ativao do ncleo embrionrio. J que a especificao dos eixos
embrionrios em geral um dos primeiros
processos da embriognese, durante muito tempo foi considerado que esses eventos poderiam ser regulados pelo mRNA
materno. Nos anos recentes, isso foi demonstrado ser o caso.
O eixo ntero-posterior (cabea-cauda)
da Drosophila especificado principalmente pelas protenas codificadas pelos genes
bicoid, nanos e hunchback (Figura 12.16).
Embora suas atuaes sero detalhadas de
maneira mais completa nos prximos captulos, discutiremos suas regulaes de traduo aqui. Primeiramente, os mRNAs de
bicoid e nanos so transportados das clulas foliculares do ovrio para dentro do ovo.
O RNA bicoid permanece na regio mais anterior do ocito, enquanto a mensagem nanos
vai para o plo posterior do ovo. A mensagem bicoid parece ser amarrada pelas suas
3UTR aos microtbulos anteriores pelos
produtos dos genes swallow e staufen (Ferrandon et al., 1994; veja Captulo 22). A mensagem bicoid colocada no ocito tem uma
cauda poli(A) relativamente curta, de cerca
de 70 resduos. Porm, dentro do primeiro
ciclo de diviso, a mensagem poliadenilada
de maneira a sua cauda quase dobrar de tamanho (Salls et al., 1994; Lieberfarb et al.,
1996). Essa poliadenilao coincide com a
capacitao da mensagem bicoid ser traduzida. A protena Bicoid se difunde atravs da
poro anterior do embrio precoce, sendo
responsvel pela especificao das regies
da cabea e trax da larva de Drosophila. Os
produtos dos genes cortex e grauzone parecem ser crticos para a poliadenilao do
mRNA bicoid porque mutaes nesse gene
previnem a poliadenilao e traduo da mensagem bicoid.
O mRNA nanos est localizado no plo
posterior do ovo durante a oognese, mas
quantidades significativas permanecem distribudas atravs do citoplasma. Durante o
desenvolvimento precoce, porm, somente
RNA hunchback
RNA
bicoid
RNA nanos
Figura 12.16
Gradiente
de protena
bicoide
(AJ P)
Gradiente
de protena
nanos
(A I P)
Nanos de liga 3
UTR hunchback
genoma materno. O mRNA oskar entra primeiro, transportado para o plo posterior e
traduzido na meia oognese, antes da chegada
de outras mensagens. A mensagem bicoid
amarrada no anterior do ovo pela sua 3UTR. A
mensagem nanos direcionada pela sua 3UTR
para ir ao plo posterior, onde interage com a
protena Oskar. O mRNA hunchback visto
em todo o ocito. (B) Aps fecundao e ativao do ovo, o mRNA bicoid poliadenilado e
se torna ativo para traduo, formando um gradiente ntero-posterior da protena Bicoid. O
mRNA nanos no plo posteror torna-se competente para traduo e comea a produzir um
gradiente posterior-para-anterior da protena
Nanos. (C) A protena Nanos liga-se 3UTR
da mensagem hunchback para impedir a traduo. A protena Bicoid liga-se a regio intensificadora do gene hunchback para promover a
transcrio de novas mensagens hunchback. O
resultado um gradiente ngreme da protena
Hunchback. Essa protena ir ativar diferentes
genes em diferentes concentraes, com isso
especificando as diferentes regies do embrio.
(A)
mRNA hunchback
Poly (A)
mRNA glp-1
Poly (A)
Figura 12.18
(B)
Hunchback
(Drosophila)
GLP-1 (C.
elegans)
Protena
Protena
GLP-1
Figura 12.17
481
482
(A)
(B)
Extrato
RNA
KCI
RNA
antisenso (ug/ml)
Figura 12.19
Audet et al., 1987; Swiderski e Richter, 1988), mas no sabido se essas protenas
mascaram funcionalmente RNAs endgenos. possvel que essas protenas facilitem a ligao de uma protena mascaradora de RNA geral que se associaria com o
mRNA fazendo com que ele fique intraduzvel. A protena FGRY2 ativa em ocitos de
Xenopus poderia ser uma tal protena mascaradora geral (Bouvet e Wolffe, 1994).
Essa protena se complexa com certos transcritos de ocitos que esto sendo transcritos no ncleo e capaz de silenciar tais mensagens. O desempacotamento
global de tais mensagens na fecundao pode envolver alteraes inicas, a fosforilao de certas protenas, ou mudanas na composio do RNP.
A Hiptese da Cauda Poli(A)
Estudos recentes demonstraram que a poliadenilao alterada crtica para estabelecer o momento da traduo do mRNA do ocito e que essa poliadenilao alterada
regulada pela regio 3 no-traduzida.
A 3UTR pode regular a eficincia da traduo de mensagens do ocito controlando o tamanho da cauda poli(A). Em ocitos, o encurtamento dessa cauda no
condena a mensagem extino. Apenas reprime sua capacidade de ser traduzida
(Hyman e Wormington, 1988). Essa represso muitas vezes temporria. Em ocitos
de camundongo, aqueles mRNAs que esto sendo usados para o crescimento e
metabolismo do ocito retm suas longas caudas poli(A) e so imediatamente traduzidos. Entretanto, aqueles mRNAs que devero ser estocados no ocito para traduo na maturao meitica (logo antes da ovulao) ou na fecundao tendem a
perder a maior parte da suas caudas poli(A) quando entram no citoplasma. Esses
483
484
Ncleo
Ocito
mRNA nuclear poliadenilado
Remoo da
cauda poli(A)
Ocito primrio
imaturo e em
crescimento
Mensagem
Mensagem
Dormente
Recomeo da
meiose
Cauda poli(A)
Ativamente traduzido
Adenilao
Desadenilao
Cauda poli(A)
Ocito em
maturao
Ativamente traduzido
Dormente
Figura 12.20
RNAs somente retm entre 15 e 90 resduos de adenilato (Figura 12.20). Na maturao meitica, uma inverso ocorre. Aqueles mRNAs que haviam sido ativamente
traduzidos perdem suas caudas poli(A) e no mais funcionam, enquanto aqueles
mRNAs pouco adenilados que haviam sido estocados, rapidamente adquirem longas caudas poli(A) (150 a 600 adenilatos) e so traduzidos em protenas (Vassalli et
al., 1989; Huarte et al., 1992).
Em mamferos, as mensagens que so traduzidas no ocito imaturo tm uma seqncia padro AAUAAA de poliadenilao. Essas mensagens retm suas caudas
poli(A) at o recomeo da maturao meitica. Nesse momento, suas caudas so
desadeniladas, e se tornam inativas para a traduo. Aqueles mRNAs que iro ser
estocados no citoplasma do ocito imaturo para traduo aps a maturao tm suas
caudas poli(A) cortadas imediatamente aps abandonarem o ncleo. Essas mensagens tem dois sinais em suas 3UTR: a seqncia de poliadenilao AAUAAA e uma
seqncia conhecida como o elemento de poliadenilao citoplasmtica (CPE), tambm chamado de elemento de controle da adenilao (ACE); sua seqncia consensual
em camundongos e rs UUUUUAU (Fox et al., 1989; Bachvarova, 1992; Huarte et al.,
1992). Quando recomea a maturao do ocito, esses transcritos estocados so
novamente poliadenilados (provavelmente pela mesma enzima de poliadenilao encontrada no ncleo) e tornam-se ativos para traduo. A aquisio de uma longa
cauda crtica para o comeo da traduo do mRNA estocado do ocito; o controle
desse alongamento depende da presena ou ausncia de um CPE.
*As funes das seqncias poli(A) e CPEs diferem entre ocitos de camundongo e de r. Nos
ocitos de r, a desadenilao que ocorre na maturao o estado de ausncia, e desadenilao
e inativao para traduo ocorrem, a no ser que CPE esteja presente. A poliadenilao ir ativar
a mensagem mascarada e manter a traduo dos mRNAs associados aos polissomos. Em ocitos
de camundongo, o CPE controla tanto a poliadenilao como a desadenilao. Em ocitos
imaturos, mensagens sem CPE so imediatamente traduzidas, enquanto mRNAs contendo CPE
so desadenilados e inativados para a traduo. Na maturao, o sistema do camundongo torna-se
semelhante ao de Xenopus, e os RNAs contendo CPE so agora poliadenilados e ativados para
traduo (Huarte et al., 1992).
485
486
Figura 12.21
[3H] Valina incorporada na protena (cpm x 103)
80 minutos
80 minutos
90 minutos
Figura 12.22
Seqestro das mensagens de histona do ocito do ourio-do-mar. A sonda de cDNA que reconhece a mensagem da histona hibridizada para ovos de ourio-do-mar fixados em vrios
perodos ps-fecundao. A auto-radiografia mostra a mensagem a ser seqestrada no proncleo
materno at sua degradao 80-90 minutos aps a entrada do espermatozide. (Segundo DeLeon
et al., 1983, cortesia de L. e R. Angerer.)
487
488
Informaes adicionais
&
Especulaes
Frao de clulas
com membranas
mveis
Densidade da banda
Sntese de RNA
Clivagem
Tempo (minuto)
Figura 12.23
Longevidade da
mensagem materna funcional
Estgio de clivagem
de 4 clulas (dia 2-4)
Estgio de nurula
(15-30 h)
Blstula tardia
(15 h)
Organognese intermediria
(~15 h)
Perodo da maior
nova transcrio nucleara
Mamfero
(Mus musculus)
Anfbio
(Xenopus laevis)
Equinodermo
(S. purpuratus e
outros ouriosdo-mar)
Inseto
(Drosophila
melanogaster)
Fonte: Adaptado de Wilt, 1964; Woodland e Ballantine, 1980; Clegg e Piko, 1983; Gilbert e Solter, 1985; Poccia et al., 1985; Weir e Kornberg,
1985; Davidson, 1986; Edgar e Schubiger, 1986; Shiokawa et al., 1989.
a Perodos indicam incubao nas temperaturas apropriadas.
mutada eles no sero corretamente expressados (Figura 12.24). possvel que essa
protena OZ1 seja por si mesma inativa, at
que algum outro fator (talvez associado com
o alongamento do ciclo celular) a ative.
O conceito de que protenas maternas
podem ativar o genoma durante a transio
da blstula intermediria apoiado por investigaes sobre o mutante o da salamandra axolotle. Essa uma mutao de efeito
materno no qual fmeas homozigotas produzem ovos que so fecundados com sucesso sendo completamente normais at os
estgios de clivagem tardia e blstula precoce (Briggs e Cassens, 1966). Na blstula
intermediria, ovos descarregados por uma
fmea o/o tm mitoses mais lentas e continuam a formar um lbio do blastporo dorsal, mas sempre param na gastrulao.
Malacinski (1971) e Carroll (1974) mostraram que em embries de fmeas do tipo selvagem, RNA novo e sntese protica comeam nesse estgio de blstula intermediria.
No entanto, as blstulas intermedirias de
ovos de mes o/o no sofrem esse surto de
sntese de protena e tm um padro de protenas idntico aquele produzido por zigotos
enucleados (Figura 12.25). Briggs e Cassens
(1966) demonstraram que os embries de
mes o/o no tinham um fator que ativa o
genoma nuclear da blstula intermediria. Na
ausncia de tal fator, o nico desenvolvimento
que ocorre aquele que pode ser provido
pelo mRNA estocado no ocito. Em anfbios, h material estocado no ocito suficiente
para permitir ao embrio entrar na gastrulao. Porm, sem a sntese de novo RNA, no
pode ocorrer ulterior desenvolvimento.
Em Drosophila tambm parece haver
uma transio da blstula intermediria dos
mRNAs e protenas do citoplasma do ocito
para a transcrio nuclear. Essa transio
primeiro vista aps a dcima diviso nuclear. Esse o primeiro ciclo com uma fase G2,
que aumenta de comprimento entre 10 minutos aps o dcimo ciclo at 60 minutos
aps o dcimo quarto. Na fase G2 do dcimo quarto ciclo, o genoma est transcrevendo no mais alto nvel de atividade visto
durante a embriognese (Anderson e
Lengyel, 1979; Weir e Kornberg, 1985). Edgar e Schubiger (1986) mostraram que ncleos de Drosophila tornam-se competentes para transcrever no ciclo 10 mas que a
maioria dos genes necessita de fases G2 mais
longas para ficarem ativados. A alta atividade transcricional de embries de ciclo 14
pode ser induzida prematuramente, esten-
Auto-radiograma
489
Sem molde
globina
Intensificador MBT
tipo selvagem
globina
Intensificador
MBT mutante
globina
Outro intensificador
MBT mutante
globina
Figura 12.24
Efeito do intensificador da transio da blstula intermediria (MBT) ligante de OZ1. A seqncia de DNA que ativa a transcrio na MBT para o gene GS17 de Xenopus laevis foi colocada
em um gene da -globina e injetada em ocitos de Xenopus. Essa construo de globina ficou
expressa no estgio de blstula intermediria. Genes de globina sem esse intensificador ou com
um intensificador MBT mutado no mostraram expresso significativa nesse estgio. (Segundo
Ovsenek et al., 1992.)
Figura 12.25
Incorporao de [3H]uridina no RNA dos embries de axolotles tipo selvagem e mutante o/o.
Embries em estgio de blstula foram incubados no precursor RNA radioativo por 3 horas,
lavados, fixados, corados e observados por auto-radiografia. (A) Clulas embrionrias normais
mostrando intensa radioatividade, indicando sntese de RNA. (B) Embrio de uma fmea o/o.
Colorao est presente, mas no se v marcao significativa, indicando que pouca ou nenhuma
transcrio havia ocorrido. (Segundo Carroll, 1974.)
490
ourio-do-mar em que o ncleo embrionrio no esteja funcionando. Baixos nveis de transcrio (incluindo novas mensagens de histonas) podem ser vistos em
proncleos mesmo antes de sua fuso
(Poccia et al., 1985). Essas mensagens recm-transcritas entram no pool maior
do mRNA materno. A cromatina das quatro primeiras clivagens feita primariamente com histonas estocadas no citoplasma do ocito e histonas sintetizadas
de mensagens maternas. Do estgio de
16 clulas em diante, porm, a maioria das
histonas sintetizada de mensagens
transcritas de ncleos de clulas embrionrias (Goustin e Wilt, 1981). Esse padro
est em contraste marcado com aquele de
embries de Xenopus, nos quais um grande pool de protena histona estocada
pela me, e um grande suprimento de mensagem histona estocada no ocito so utilizados por milhares de clulas.
Embries de mamferos, ascdios,
nematides e moluscos tambm parecem
iniciar a transcrio dentro do primeiro
ciclo celular (Schauer e Wood, 1990). Porm, tal como em muitos eventos do desenvolvimento, no se pode dizer que os
mamferos tenham aperfeioado uma estratgia uniforme. No grupo mamfero mais
estudado, os camundongos, o genoma
embrionrio extremamente ativo duran-
491
no-traduzido
espermatozides
traduzido
traduzido
vulos
no-traduzido
Figura 12.26
Figura 12.27
Seqncia de codificao
Poli(A)
492
IRE-BP ausente
Seqncias de reconhecimento para
protena reguladora ligante de ferro
(IRE-BP)
Regio codificadora
de protena
Traduo
de mRNA
Figura 12.28
IRE-BP presente
Seqncias de
reconhecimento para IRE-BP
Regio
codificadora
de protena
Degradao de mRNA
493
Editorao do RNA
Um dos mecanismos mais inesperados do controle da traduo foi visto recentemente na regulao das protenas apolipoprotenas-B. Protenas apo-B so componentes de protenas sricas portadoras de lipdios, e so consideradas como tendo
um papel preponderante na gnese da arteriosclerose. Apo-B48 (48-kDA) sintetizada no intestino e torna-se parte do complexo de quilomcrons necessrios para
absoro e transporte do colesterol e triglicerdeos dietticos. Apo-B100 (100-KDA)
produzida no fgado e a principal componente das protenas portadoras de lipdios
de densidade muito-baixa, baixa e intermediria. Apo-B100 e Apo-B48 so transcritas do mesmo gene e no se nota processamento diferencial algum para gerar mRNAs
diferentes para essas duas protenas. A anlise dos DNAs de Apo-B indica que a
mensagem apo-B no fgado codifica todo o peptdeo Apo-B100. A mensagem intestinal, porm, difere daquela do fgado por apenas uma base. Uma transio C-paraU ocorreu, mudando um cdon normal de glutamina (CAA) para um cdon terminador
(UAA) no cdon 2153. Essa diferena resulta na formao de uma protena Apo-B48
mais curta no intestino (Chen et al, 1987; Powell et al., 1987). Essa editorao do RNA
um exemplo de uma situao em que uma mudana especfica de base feita em um
RNA existente, com isso alterando a mensagem. O transcrito primrio do gene apoB no parece ser editado, e a editorao C-para-U pode estar sendo conseguida por
um fator contido no ncleo. Por isso, Lau e colegas (1991) concluram que essa
editorao do RNA realizada durante os passos de processamento do RNA. A
protena responsvel por essa editorao a citidina desaminase (Navaratnam et al.,
1995); e pela alterao da estrutura seqencial do RNA prximo da citosina editada,
Chen e colaboradores (1990) descobriram duas regies que so crticas para a
editorao. Uma a regio de nucleotdeos conservada por vrias espcies de mamferos, e a outra uma seqncia espcie-especfica mais a jusante. Eles postulam
uma enzima que reconhece essas duas regies e coloca seu stio cataltico sobre a
citosina em questo. A desaminao dessa citosina converte-a em um resduo de
uridina (Figura 12.29). At agora tem sido um axioma da biologia molecular que a
seqncia de nucleotdeos de uma mensagem, uma vez transcrita, no pode ser
alterada. Embora a editorao do RNA seja um evento excepcionalmente raro,
tambm visto em certas mensagens de organelas (veja Scott, 1995; Simpson e
Thiemann, 1995), na alterao da permeabilidade do on de clcio de certos canais
inicos com portal de glutamato, durante o desenvolvimento do crebro de mamferos (Sommer et al., 1991; Higuchi et al., 1993), e na alterao do fator de transcrio
WT1 (Sharma et al., 1994).
Enzima editora
Figura 12.29
mRNA Apo-B 5
NH 3
Stio cataltico
No espcieespecfico
Espcie-especfico
Stio de reconhecimento
494
Subunidades
Heme
Heme
Heme
Heme
Subunidades
Figura 12.30
A estrutura da hemoglobina do humano adulto, com quatro cadeias polipeptdicas (duas , duas
) e quatro molculas de heme. (Segundo Dickerson e Geis, 1983.)
Succinil coenzima
A + glicina
sintase DALA
Inibio
cido aminolevulnico
Porfobilingeno
Protoporfirina IX
Heme
Figura 12.31
495
Tabela 12.5 Componentes do sistema de traduo in vitro contendo lisato de reticulcitos de coelho
Concentrao
(em 100 l)
Componente
50 l
10 mM
1 mM
0.2 mM
5 mM
10 g
2 mM
Concentrao
(em 100 l)
Componente
KCl
Mistura proporcional de aminocidos
[14 C]Leucina
leucina fria
Hemina
H2O para trazer o volume da reao
para 100 l
76 mM
6-170 M
0.8 Ci
26 M
10-30 M
fator foi testado separadamente. Achou-se que o fator 2 de iniciao eucaritica (eIF2)
restaurava a sntese protica para lisatos deficientes de heme no sistema de traduo
(Figura 12.32B). Esse fator de iniciao responsvel pela combinao com o tRNA
iniciador e complex-lo subunidade ribossmica 40S.
Qual, ento, a relao entre heme e eIF2? Para responder a isso, London e colaboradores (Levin et al., 1976; Ranu et al., 1976; Ramaiah et al., 1992) adicionaram
lisatos deficientes de heme a sistemas de traduo suplementados com heme. Eles
acharam que uma poro do lisato deficiente de heme podia realmente deprimir a
sntese da globina no sistema de traduo ao qual ele fora adicionado. Esse achado
indicou que um inibidor estava presente. Essa protena inibidora responsiva ao heme,
HRI, foi isolada e verificou-se que era uma quinase capaz de fosforilar eIF2. A hemina
liga-se a essa quinase, inativando-a (veja Chen e London, 1995).
O eIF2 finalmente ir parar a traduo. Normalmente, uma vez que as subunidades ribossmicas se juntam, o eIF2 liberado como um complexo com GDP
(Raychaudhury et al., 1985). Para o eIF2 ser novamente usado na iniciao, ele
(A)
+Hemina
-Hemina
Tempo (minutos)
+Hemina
(B)
Sem adies
Tempo (minutos)
Figura 12.32
Regulao da traduo por hemina e pelo fator 2 de iniciao eucaritica. (A) Traduo do
mRNA da globina no sistema de sntese
protica in vitro do reticulcito de coelho. A
incluso de hemina ocasiona uma dramtica
elevao da sntese protica. (B) Efeito da adio do fator 2 de iniciao eucaritica no sistema de traduo in vitro do reticulcito de coelho. O eIF2 elevou o nvel da sntese protica
para perto daquele do sistema estimulado pela
hemina. (A segundo London et al., 1976; B
segundo Clemens et al., 1974.)
496
Figura 12.33
Traduo
Protena
quinase ativa
Heme
Protena quinase
inativa
eIF2 - P (Seqestra o
fator de reciclagem)
dever complexar-se com o eIF2B (fator de reciclagem). Esse eIF2B troca GTP por
GDP (veja Figura 12.11), e o complexo eIF2-GTP resultante capaz de entrar num
outro ciclo de iniciao. Porm, se a subunidade do eIF2 for fosforilada, o fator de
reciclagem eIF2B se liga mas no consegue se despregar (Gross et al., 1985; Thomas
et al., 1985). Por fim, todo eIF2B (cuja concentrao 10- a 20-vezes mais baixa que
aquela do eIF2) ligado a esses complexos, e a traduo cessa. A adio de eIF2B a
lisatos deficientes em heme restitui a sntese protica aos nveis dos sistemas
suplementados com heme (Grace et al., 1984). Heme em excesso capaz de se ligar
protena quinase, inativando-a (Fagard e London, 1981). Quinase inativada no ir
fosforilar eIF2, fazendo com que a traduo prossiga. Assim, enquanto heme estiver presente, a sntese da globina continuar (Figura 12.33).
A histria do controle da traduo da sntese da globina no termina aqui. Conforme discutimos no Captulo 11, h quatro genes globina ativos por clula diplide e
somente dois genes globina ativos. Se cada gene fosse transcrito e traduzido com
a mesma velocidade, esperar-se-ia duas vezes mais molculas globina que globina.
Isso claramente no o caso. Encontra-se uma relao 1.4:1 de mRNA :, mas uma
relao 1:1 de protenas (Lodish, 1971). A igualizao das protenas parece envolver
regulao da traduo.
Kabat e Chappell (1977) sugeriram que a igualizao feita no estgio de iniciao da traduo. Eles mostraram que o mRNA da globina compete com a mensagem da globina para fatores de iniciao e que a mensagem da globina parece
ser o melhor competidor. A mensagem da globina reconhecida mais eficientemente pelos fatores de iniciao sendo por isso traduzida mais freqentemente.
Quando os dois mRNAs esto presentes em quantidades iguais, mas com um suprimento de fatores de iniciao severamente limitante, somente 3% da protena resultante era globina. Porm, quando o mRNA no-fracionado (mensagens e
globinas de clulas lisadas) foi adicionado a um excesso de tais fatores de iniciao,
todos os mRNAs foram traduzidos com igual eficincia e a relao : resultante foi
de 1.4:1. A protena cap ligante foi implicada como sendo o fator responsvel pela
discriminao entre os dois tipos de mensagem da globina (Ray et al., 1983; Sarkar et
al., 1984). Enquanto ainda no conhecido como se d a discriminao, conhecido
que a estrutura secundria da seqncia lder 5 afeta a eficincia da traduo (Pelletier
e Sonenberg, 1985). Como pode ser visto na Figura 12.34, os terminais 5 das mensagens e globina diferem significativamente. Assim, as razes apropriadas de
globina e globina, e heme so estabelecidas no passo de iniciao da traduo.
Embora a sntese da hemoglobina envolva regulao nos nveis de transcrio e
processamento de RNA, a molcula final construda atravs da coordenao fina
ao nvel da traduo.
mRNA da globina
497
mRNA da globina
Fator 12.34
Provveis estruturas secundrias para os terminais 5 das cadeias de -globina e de globina do camundongo. Os cdons AUG iniciadores da traduo esto coloridos. (Segundo Pavlakis et al., 1980.)
498
merosas outras protenas. Assim, ainda podem ocorrer vrias mudanas que determinam se uma protena est ou no ativa. Em primeiro lugar, algumas protenas
recmsintetizadas so inativas sem ulteriores modificaes que podem envolver a
remoo por clivagem de certos setores inibitrios da protena, ou a ligao de um
pequeno composto para intensificar sua atividade. Segundo, algumas protenas
podem ser inativadas seletivamente. Em alguns casos, a inativao envolve a degradao da prpria protena; em outros, a inativao pode ser causada pela ligao de
um ligante inibidor. Terceiro, algumas protenas tm que ser endereadas a seus
destinos intracelulares especficos. A clula no simplesmente um saco de enzimas:
protenas so muitas vezes seqestradas em certas regies, tais como membranas,
lisossomos, ncleos ou mitocndrias. Em quarto lugar, algumas protenas tm que
se juntar a outras protenas para formar uma unidade funcional. A protena hemoglobina, o microtbulo e o ribossomo so todos exemplos de numerosas protenas
juntadas para formar uma unidade funcional. Portanto, a expresso da informao
gentica ainda pode ser influenciada no nvel ps-traduo. Alguns desses casos
(como a fosforilao do fator promotor da mitose) j foram discutidos, enquanto
outros sero discutidos medida que aparecerem. Neste ponto, abandonaremos
nossa discusso dos aspetos moleculares da expresso gnica e voltaremos para a
dinmica do embrio em desenvolvimento. Podemos agora olhar para processos
desenvolvimentais precoces para estudar mecanismos moleculares para a determinao do destino celular e da estrutura tissular.
LITERATURA CITADA
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Especificao do Destino
Celular e os Eixos Embrionrios
IV
505
543
635
591
13
506
Produto da clula
diferenciada
Queratina
Hemoglobina
Cristalinas
Imunoglobulinas
Antgenos da superfcie
celular (linfocinas)
Transporte de oxignio
Transmisso de luz
Sntese de anticorpos
Destruio de clulas
estranhas; regulao
da resposta imune
Produo de pigmento
Regulao do
metabolismo de
carboidratos
Caractersticas sexuais
masculinas
Tendes e ligamentos
Melancito
Clulas das
ilhotas pancreticas
Melanina
Insulina
Testosterona
Condrcito
(clula da cartilagem)
Osteoblasto
(clula formadora de osso)
Micito
(clula muscular)
Hepatcito
(clula do fgado)
Sulfato de condroitina;
colgeno tipo II
Neurnios
Clula tubular ( )
do oviduto da galinha
Clula folicular ( )
do oviduto de inseto
Funo especializada
Matriz ssea
Actina e miosina
do msculo
Suporte do esqueleto
Contrao
Albumina do soro;
numerosas enzimas
Produo de protenas
do soro e numerosas
funes enzimticas
Transmisso de
impulsos eltricos
Neurotransmissores
(acetilcolina,
epinefrina, etc.)
Ovalbumina
Protenas corinicas
Protenas do
albmen do
ovo e proteo
do embrio
Protenas da casca do
ovo para proteo
do embrio
Especificao autnoma
Caracterstica da maioria dos invertebrados.
Especificao pela aquisio de certas molculas citoplasmticas presentes no ovo.
Clivagens invariantes produzem as mesmas linhagens em cada embrio da espcie.
Destinos dos blastmeros so geralmente invariantes.
Linhagens de Clulas ncoras so usualmente especificadas de maneira autnoma
nos plos dos eixos embrionrio.
Especificao do tipo celular precede qualquer migrao celular embrionria em larga escala.
Produz desenvolvimento em mosaico (determinativo): clulas no podem
modificar o destino se um blastmero perdido.
Pr-formao e epignese
Qualquer explicao sobre a diferenciao das diversas clulas corporais, a partir do
ovo fertilizado tem que explicar (1) a constante morfologia de cada espcie (i.e., que
galinhas somente geram galinhas, e no crocodilos) e (2) a diversidade entre as partes
corporais de cada organismo. Na verdade, uma das principais caractersticas do desenvolvimento que cada espcie reproduz seu padro de desenvolvimento. O desenvolvimento envolve a expresso das propriedades herdadas pelas espcies.
No sculo dezessete, a unio de herana e desenvolvimento foi obtida com a
hiptese do pr-formacionismo. De acordo com essa viso, todos os rgos do adulto estariam prefigurados em miniatura dentro do espermatozide ou (mais usualmente)
no vulo. Os organismos no eram considerados como desenvolvidos, mais sim
desenrolados. Essa hiptese encontrava apoio na cincia e na filosofia (Gould,
507
508
1977; Roe, 1981). Primeiro, porque todos os rgos eram prefigurados, o desenvolvimento embrionrio meramente requeria o crescimento de estruturas existentes, e no a
formao de novas. Nenhuma fora misteriosa extra era necessria para o desenvolvimento embrionrio. Segundo, assim como o organismo adulto era prefigurado em
clulas germinativas, a outra gerao j existia em estado prefigurado dentro das
clulas germinativas da primeira gerao prefigurada. Esse corolrio, chamado de
embitment (encapsulao), assegurava que as espcies sempre permaneceriam constantes. Embora alguns microscopistas alegassem enxergar miniaturas humanas totalmente desenvolvidas dentro do espermatozide ou do vulo, os maiores proponentes
dessa hiptese - Albrecht von Haller e Charles Bonnet- sabiam que o desenvolvimento dos sistemas orgnicos se dava em velocidades diferentes e que as estruturas
embrionrias no precisavam estar no mesmo lugar daquelas do recm-nascido.
Os pr-formacionistas no tinham uma teoria celular para fornecer um limite inferior para o tamanho dos seus organismos pr-formados, e nem tinham uma viso do
domnio do ser humano sobre a Terra como sendo infinito. Pelo contrrio, como disse
Bonet (1764) O trabalho da natureza to pequeno quanto ela deseja, e a espcie
humana existia no finito espao compreendendo a criao e a ressurreio. Isso estava de acordo com a melhor cincia da poca, e de acordo com o princpio do matemtico e filsofo francs Ren Descartes sobre a divisibilidade infinita de uma natureza
mecnica iniciada, mas no interferida por Deus.
A pr-formao era uma teoria conservadora, enfatizando a falta de mudanas
entre geraes. Sua principal falha era a inabilidade em explicar as variaes j conhecidas pela limitada evidncia gentica da poca. Sabia-se, por exemplo, que a unio
entre uma pessoa branca e outra negra gerava filhos de uma cor intermediria entre as
duas, uma impossibilidade se a herana e o desenvolvimento ocorressem somente
atravs do vulo ou do espermatozide. Em experimentos com um controle maior, o
botnico alemo, Joseph Klreuter (1766) produziu plantas hbridas de tabaco contendo caractersticas de ambas as espcies. Ademais, cruzando o hbrido tanto com o
ascendente masculino ou o feminino, Klreuter foi capaz de reverter as caractersticas do hbrido de volta quelas de um ou outro ascendente, aps vrias geraes.
Dessa maneira, a herana parecia depender de uma mistura de componentes dos pais.
E mais, a pr-formao no podia explicar a gerao de monstruosidades e determinados desvios, tal como o hexadactilismo (seis dedos em cada mo), quando ambos
os pais eram normais.
Desenvolveu-se, ento, uma hiptese alternativa: epignese. De acordo com essa
hiptese, cada organismo adulto se desenvolveria novamente a partir de uma condio no diferenciada. Essa viso do desenvolvimento, tendo razes filosficas remontando a Aristteles, foi revivida por Kaspar Friedrich Wolff, um embriologista alemo
que trabalhava em St. Petersburg. Observando cuidadosamente embries de pinto,
Wolff demonstrou que as partes embrionrias se desenvolvem de tecidos que no tm
contrapartida no organismo adulto. O corao e os vasos sangneos (que de acordo
com os pr-formacionistas, tinham que estar presentes desde o comeo para assegurar o crescimento embrionrio) podiam ser vistos se desenvolvendo de novo em cada
embrio. Similarmente, foi visto que o tubo intestinal se originava das dobras de um
tecido originalmente plano. Essa ltima observao foi explicitamente detalhada por
Wolff (1767) que declarou: Quando a formao do intestino por essa maneira for
adequadamente avaliada no existir nenhuma dvida, eu acredito, sobre a verdade
da epignese. No entanto, para explicar como o organismo criado novamente a cada
gerao, Wolff teve que postular uma fora desconhecida, a vis essentialis (fora
essencial), a qual agindo como a gravidade ou o magnetismo organizaria o desenvolvimento embrionrio.
O pr-formacionismo explica melhor a continuidade das geraes, enquanto que a
epignese explica melhor a variao e as observaes diretas na formao dos rgos.
Uma certa reconciliao entre as partes foi tentada pelo filsofo alemo Immanuel
Kant (1724-1804) e seu colega, o biologista Friedrich Blumenbach (1752-1840). Na
tentativa de construir uma teoria cientfica de descendncia racial, Blumenbach postulou uma fora mecnica, objetivamente dirigida chamada Bildungstrieb (fora de
desenvolvimento). Tal fora, dizia ele, no era terica, mas poderia ser demonstrada
atravs de experimentao. A Hydra, quando cortada, regenera suas partes amputadas atravs de um remanejamento de elementos existentes. Algum tipo de fora
organizadora proposital podia ser observada nessa operao, e essa fora era uma
propriedade do prprio organismo. Imaginava-se que essa Bildungstrieb fosse uma
herana adquirida atravs de clulas germinativas. Dessa maneira, o desenvolvimento
poderia prosseguir epigeneticamente atravs de uma fora predeterminada inerente
matria do embrio (Cassirer, 1950; Lenoir, 1980). Ademais, acreditava-se que tal fora
era suscetvel a mudanas, como demonstrado pela variante da concha do caracol,
com espirais voltadas para o lado esquerdo.
Nessa hiptese, onde o desenvolvimento epigentico direcionado por instrues pr-formadas, no estamos muito distantes da viso de alguns biologistas modernos considerando que A descrio completa do organismo j est escrita no ovo
(Brenner, 1979). No entanto, at a redescoberta dos trabalhos de Mendel, no comeo
do sculo vinte, no havia uma teoria gentica consistente na qual se poderia encaixar
tais idias sobre variaes herdadas, e cada cientista era livre para especular sobre os
mecanismos pelos quais os padres de desenvolvimento so herdados.
Os T
eratologistas F
ranceses
Teratologistas
Franceses
As tentativas de encontrar hipteses que explicassem a constncia das espcies e o
desenvolvimento epigentico levaram criao da moderna embriologia. As buscas
por tais hipteses foram executadas sob duas tradies intelectuais diferentes. Uma,
centralizada na Frana, buscava os mecanismos pelos quais erros embriolgicos causavam o nascimento de crianas com anormalidades de desenvolvimento. Essa cincia ficou conhecida como teratologia, ou estudo de malformaes congnitas. A segunda busca estava centralizada na Alemanha, e estava voltada para a fisiologia dos
processos do desenvolvimento. Ambas as correntes de pesquisa iniciaram a manipulao de embries para verificar como um organismo em desenvolvimento iria responder a essas perturbaes (Churchill, 1973; Fischer e Smith, 1984).
Os experimentos teratolgicos franceses comearam na dcada de 1820 com os
estudos de Etienne Geoffrey Saint-Hilaire e seu filho, Isadore. Essas investigaes
tentaram mostrar que nascimentos anmalos eram produtos de uma falha no desenvolvimento fetal ao invs de aberraes pr-formadas. Eles buscavam produzir anomalias de desenvolvimento artificialmente, alterando as condies de incubao do
ovo de galinha em desenvolvimento. Apesar dos inmeros fracassos dessas tentativas (suas tcnicas rudimentares, ou permitiam a continuao do desenvolvimento
normal ou terminavam por matar os embries), eles abriram o caminho para as anlises
mais refinadas de Dareste em 1877. Dareste realizou milhares de experimentos e acompanhou anormalidades no desenvolvimento de aves desde os primeiros estgios do
seu desenvolvimento.
Mas o embrio de pinto foi uma m escolha de organismo para estudar os primeiros estgios da embriognese. Se a inteno era examinar se perturbaes nos primeiros estgios do desenvolvimento afetavam as estruturas adultas, dever-se-ia usar um
outro organismo. Em 1866, um francs, estudante de medicina, Laurent Chabry, comeou a estudar a teratognese no embrio de tunicado, um organismo mais acessvel.
Essa foi uma escolha muito feliz, porque esses embries desenvolvem-se rapidamente
em larvas, com relativamente poucas variedades de clulas. Chabry se concentrou em
produzir malformaes especficas, lancetando blastmeros especficos de embries
de tunicados em clivagem. Ele descobriu que cada blastmero era responsvel pela
produo de um conjunto particular de tecidos larvares. Na ausncia dessas clulas,
a larva deixava de apresentar justamente as estruturas normalmente formadas por
aquelas clulas. Alm disso, ele observou que quando algumas clulas em particular
509
510
eram isoladas do resto do embrio, elas formavam sua estrutura caracterstica independentemente do contexto das outras clulas. Dessa maneira, cada uma das clulas
tunicadas aparentavam estar se desenvolvendo de maneira autnoma.* Como discutimos anteriormente, essa habilidade de cada clula desenvolver-se independentemente de outras clulas embrionrias freqentemente chamada de desenvolvimento
autnomo ou em mosaico, porque o embrio aparenta ser um mosaico de partes
autodiferenciadas.
Figura 13.1
*Essa no foi a resposta pela qual Chabry esperava ou pretendia encontrar. Na Frana do sculo
dezenove, os conservadores favoreciam a viso dos pr-formacionistas, que era interpretada como
apoio s desigualdades hereditrias dos membros de uma comunidade. O que voc era, era determinado pela sua linhagem. Os liberais, especialmente os socialistas, aprovaram as vises epigenticas,
as quais foram interpretadas como indicando que todos comeavam com a mesma dotao hereditria, e que ningum tinha o direito a uma posio mais alta do que a do outro. Chabry, um
socialista que odiava os direitos hereditrios dos aristocratas, se esforou para no extrapolar seus
dados para nada alm dos embries tunicados.
Clulas pigmentadas
Tronco cerebral
Medula espinhal
Msculo
Notocorda
VISTA ANIMAL
VISTA LATERAL
Medula espinhal
Tronco cerebral
Clulas
pigmentadas
Epiderme
Palpos
Msculo
Crebro
Mesnquima
Tronco cerebral
Medula espinhal
Notocorda
Crebro
Clulas filamentosas
endodrmicas
Palpos
Endoderma
Clulas
pigmentadas
Tronco cerebral
Medula espinhal
Epiderme
Msculo
VISTA VEGETAL
Msculo
Endoderma
Notocorda
Clulas laterais
do tronco
Msculo
Tronco
cerebral
(B)
Notocorda
Mesnquima
Manto
(Ectoderma)
Mancha ocelar
Crebro
Cordo nervoso
Notocorda
Boca
Clulas
filamentosas
endodrmicas
Palpo
Estmago
Medula espinhal
Msculo
Mesnquima
Clulas
laterais do tronco
Notocorda
Faringe
(endoderma)
Corao
Endstilo
(endoderma)
Clula
muscular
511
PLO ANIMAL
Ectoderma
ANTERIOR
POSTERIOR
Sistema nervoso
Mesnquima
Notocorda
Msculo
Endoderma
PLO VEGETAL
Separao dos pares
de blastmeros
Ectoderma
Notocorda
Ectoderma
Msculo
Mesnquima
Endoderma
Endoderma
Figura 13.2
512
Estgio celular
Horas a 100 C
A6.1 endoderma
A7.3 notocorda
Animal
Anterior
Vegetal
A7.5 endoderma
A7.6 clulas laterais do tronco
A7.7 notocorda
medula espinhal
msculo
crebro
palpos
Tronco cerebral
Medula espinhal
Crebro
Faringe primordial
palpos
epiderme
epiderme
Clula pigmentada
Crebro
epiderme
epiderme
msculo
Vegetal
Posterior
mesnquima
notocorda
filamento endodrmico
mesnquima
msculo
Animal
Direita
Esquerda
endoderma
epiderme
epiderme
epiderme
Endoderma
Filamento
endodrmico
Msculo
Endoderma
Msculo
Medula espinhal
Filamento
endodrmico
Tronco cerebral
Medula espinhal
Msculo
b5.4 epiderme
Figura 13.3
Figura 13.4
(B)
Estgio de
64 clulas
Estgio de
32 clulas
Estgio de
16 clulas
Estgio de 8 clulas
Especificao muscular
condicionada
formador do ectoderma gera clulas musculares como tambm sua prognie ectodrmica
normal (Whittaker, 1982). Alm disso, o citoplasma da rea de plasma amarelo do ovo
fertilizado pode tambm fazer com que o blastmero 4.2a expresse protenas especficas do msculo (Figura 13.4; Nishida, 1992a). Tung e colegas (1977) mostraram o
inverso, que quando os ncleos larvais so transplantados a fragmentos enucleados
de ovos de tunicados, as clulas recm-formadas mostram uma estrutura tpica daquelas clulas que fornecem o citoplasma, e no daquelas clulas que fornecem o ncleo.
(A) 8 clulas
(C) Segregao da
primeira fase
(D) Segregao da
segunda fase
Crescente
amarelo
Lateral
513
514
Podemos concluir, ento, que certos determinantes que existem no citoplasma causam
a formao de certos tecidos. Esses determinantes morfogenticos parecem agir ativando (ou inativando) seletivamente genes especficos. A determinao dos
blastmeros e a ativao de certos genes so controlados pela localizao espacial de
determinantes morfogenticos dentro do citoplasma do ovo. [cyto1.html]
Existe a hiptese de que o determinante miognico do crescente amarelo regula a
transcrio de genes especficos para o msculo. Imaginava-se que os tunicados
poderiam segregar uma protena semelhante MyoD dentro do crescente amarelo. No
entanto, embora essa protena seja vista nas clulas musculares do embrio tunicado,
ela s comea a funcionar no estgio de 32 clulas no sendo ento o fator do crescente amarelo (Satoh et al.,1995). Um melhor candidato a determinante miognico do
crescente amarelo o RNA materno que parece estar ligado ao citoesqueleto do
ocito e que segregado junto com o citoplasma formador de msculos. Esse RNA
encontrado no crtex de ocitos maduros, segregado juntamente com o citoplasma
amarelo formador de msculos para a coroa do plo vegetal na primeira fase dos
movimentos citoplasmticos durante a fertilizao, e a partir da muda para a regio
vegetativa posterior do zigoto enquanto se forma o crescente amarelo definitivo (Figura 13.5; Swalla e Jeffery, 1995). Esse RNA provavelmente no codifica uma protena,
e no se sabe se pode direcionar o desenvolvimento muscular quando inserido em
uma clula no muscular.
Especificao citoplasmtica das linhagens
endodrmicas e epidrmicas e o eixo ntero-posterior
Figura 13.5
(B)
(D)
(E)
Primeira fase
da segregao
Segunda fase
da segregao
Embrio de
8 clulas
Msculo
Endoderma
Epiderme
linhagens de clulas epidrmicas e endodrmicas. Aps a fuso da clula ou do fragmento de clula a uma clula de outra linhagem, Nishida usou um marcador bioqumico
ou antignico para determinar se aquela clula assumiu o novo destino. Os
determinantes epidrmicos migram para a regio apical da clula durante a fertilizao
e entram nos blastmeros da coroa do plo animal (o par a4.2 e o par b4.2) do embrio
de 8 clulas. Inversamente, foi encontrado que os determinantes endodrmicos migram para o hemisfrio vegetal do zigoto e se distribuem entre os blastmeros
vegetativos (Figura 13.6; Nishida, 1994a).
O eixo ntero-posterior tambm determinado durante a migrao das regies
citoplasmticas do ocito. Pela remoo de aproximadamente 10% do citoplasma da
regio vegetativa posterior do ovo, aps o segundo movimento ooplsmico, a maioria
dos embries no formou o eixo ntero-posterior. Em lugar disso, os embries se
desenvolveram em larvas radialmente simtricas com destinos anteriores. Esse citoplasma vegetativo posterior (PVC) era dominante em relao a outros citoplasmas,
pois ao se transplantar o PVC para a regio vegetativa anterior de zigotos que tiveram
seu prprio PVC removido, o anterior da clula se transformou no novo posterior, e o
eixo foi invertido (Nishida, 1994b). Esses resultados sugerem que o destino posterior
determinado por um determinante especfico do citoplasma, enquanto que o destino
anterior determinado pela ausncia do citoplasma vegetativo posterior. Isso se
correlaciona bem com a observao de que a maioria dos destinos celulares posteriores (como o msculo e o endoderma) so especificados pelo citoplasma, mas os destinos celulares anteriores (como o crebro e a notocorda) so gerados por indues
(Figura 13.7).
No embrio de tunicado, os movimentos ooplsmicos na fertilizao criam domnios citoplasmticos distintamente diferentes, que se distribuem proporcionalmente
nos blastmeros. A identidade desses determinantes e seus mecanismos de ao
ainda no foram esclarecidos.
515
Figura 13.6
516
Figura 13.7
Figura 13.8
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
(F)
(G)
Figura 13.9
Citoplasma
animal claro
Citoplasma
equatorial
granular
Citoplasma
vegetal claro
517
Lbulo
polar
Segunda extruso
do lbulo polar
Lbulo polar
absorvido no
blastmero D
(A)
(B)
Figura 13.10
Lbulos polares de moluscos. (A) Micrografia eletrnica de varredura do lbulo polar em extenso no ovo no clivado de
Buccinum undatum. As cristas superficiais
so restritas regio do lbulo polar. (B)
Seo atravs da primeira clivagem ou estgio triflio do embrio de Dentalium. A seta
aponta o grande lbulo polar grande. (Cortesia de M. R. Dohmen.)
518
(A)
Figura 13.11
Desenvolvimento do blastmero D. (A) Diagramas esquemticos da linhagem do blastmero D em embries de Ilyanassa. (i) Embrio
de 4 clulas. (ii) Blastmeros 1D e 1d no estgio de 8 clulas. (iii) Estgio de 16 clulas contendo blastmeros 2D e 2d (derivados de 1D).
As clulas derivadas do D (coloridas) freqentemente se dividem mais tarde do que as outras. (iv) Diviso do macrmero 2D para gerar
clulas 3D e 3d, enquanto a clula 2d se divide
em 2d1 e 2d2. (v) Estgio de 64 clulas. O
blastmero 3D produz as clulas 4D e 4d. (vi)
O blastmero 4d divide-se simetricamente para
produzir os dois mesentoblastos ME1 e ME2.
(B) Embrio de 8 clulas. A pequena clula
PB o lbulo polar e no parte do embrio.
(C) Embrio de 12 clulas (1a-1d ainda no
dividiram). (D) Embrio de 32 clulas. (A de
acordo com Clement, 1962; fotografias de Craig
e Morrill, 1986, cortesia dos autores.)
(A)
(B)
519
(C)
Figura 13.12
Importncia do lbulo polar no desenvolvimento de Ilyanassa. (A) Larva vliger normal. (B)
Larva anormal, tpica para os casos onde o lbulo polar do blastmero D removido. (E,
olho; F, p; S, concha; ST, estatocisto, rgo de
equilbrio; V, velum; VC, clios velares; Y, vitelo
residual; ES, estomodeu evertido; DV, velum
desorganizado.) (de Newrock e Raff, 1975,
cortesia de K. Newrock.)
520
Embrio normal
(A)
(B)
Embrio duplo
Figura 13.13
521
(A)
Figura 13.14
Gnada
Intestino
Faringe
Sistema
nervoso
nus
Reto
vulo
Vulva
Espermatozide
vulo
(B)
Clulas produtoras
de cutcula
Sistema nervoso
Faringe
Vulva
Gnada
Intestino
Celulas
germinativas
522
Ovo fertilizado
PO (zigoto)
Hipoderme
Neurnios
Msculos farngeos
Um msculo do corpo
Glndulas
(389 clulas)
Msculos do corpo
Msculos farngeos
Neurnios
Glndulas
(80 clulas)
Intestino
(20 clulas)
Hipoderme
Msculos do corpo
Dois neurnios
(47 clulas)
Msculos do corpo
(20 clulas)
Linhagem germinativa
Figura 13.15
523
Figura 13.16
(A)
(B)
(C)
Figura 13.17
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
524
Tipo selvagem
Mutante skn-1
Antgeno do
msculo
da faringe
(A)
(B)
(C)
(D)
525
Figura 13.18
Grnulos
especficos
do intestino
mex-1
Figura 13.19
526
Figura 13.20
Modelo esquemtico da determinao da clula MS em embries do tipo selvagem e mutantes. (A) O determinante MS (considerado como
o produto do gene skn-1) est presente no estado inativo dentro do ovo. Durante a primeira
diviso nos embries do tipo selvagem, o determinante MS est localizado no blastmero
posterior (P1), e na segunda diviso, ele vai se
localizar na clula EMS. Na terceira diviso, a
clula EMS se divide na clula MS (onde o
fator ativado) e a clula E. Em embries derivados de fmeas deficientes em mex-1, o fator
no se segrega na primeira diviso, mas a segregao a partir de P1 normal na diviso
seguinte. Em embries derivados de fmeas
deficientes em pie-1, a segregao inicial do
determinante de MS para o P1 normal, mas a
segunda distribuio assimtrica do determinante (para a clula EMS) defeituosa. No
mutante combinado, os padres so superpostos, de modo que todas as clulas do embrio
de 4 clulas tm o determinante MS inativo.
(B) Sumrio das interaes envolvendo skn-1,
pie-1 e mex-1. (A de acordo com Mello et al.,
1992; B de acordo com McGhee, 1995.)
(A)
Ovo
Tipo selvagem
(B)
Em mutantes mex-1,
a protena SKN-1
tambm encontrada
nos ncleos AB
A protena SKN-1
normalmente
encontrada nos
ncleos de EMS e P2
O produto de pie-1
pode reprimir
atividade de
skn-1 no ncleo P2
P2 precisa contactar
EMS para haver
diferenciao do intestino
527
(A)
(B)
Intestino se diferencia
Intestino no se diferencia
(C)
Tempo de separao
(minutos antes da clivagem de EMS)
Figura 13.21
528
ABa se diferenciam nessas clulas musculares farngeas devido sua interao com o
blastmero EMS ou seus descendentes (os quais produzem 18 clulas musculares da
faringe de maneira autnoma).
Estudos genticos mostraram que ABp se torna diferente de ABa pela interao
com a clula P2. Alm disso, esses estudos mostraram que essa interao mediada
pela protina GLP-1 na clula ABp e a protena APX-1 (anterior pharynx excess) no
blastmero P2. Em um embrio no manipulado, tanto ABa como ABp contactam o
blastmero EMS, mas somente ABp contacta a clula P2. Se a clula P2 destruda na
fase precoce do estgio de 4 clulas, a clula ABp no gera as clulas da vlvula
intestinal, o que normalmente faria (Bowerman et al., 1992). O contato entre ABp e P2
essencial para a especificao do destino das clulas ABp, e a clula ABa pode ser
mudada em um tipo de clula ABp se for forado seu contacto com P2 (Hutter e
Schnabel, 1994; Mello et al., 1994). O produto materno do gene glp-1 parece ser crtico
na distino entre ABa e ABp. Nos embries de mes com glp-1 mutante, o ABp
transformado em uma clula ABa (Hutter e Schnabel, 1994; Mello et al., 1994). Usando
alelos de glp-1 sensveis temperatura, foi mostrado que o momento para a interao
dependente de GLP-1 entre os estgios de 4 a 12 clulas, quando P2 necessrio
para o estabelecimento dos destinos de ABp (Figura 13.22). A protena um membro
de uma famlia amplamente conservada chamada de protenas Notch, que servem
como receptores de membranas celulares em muitas interaes clula-clula e tambm
detectada nas clulas ABa e ABp (Evans et al 1994).*
Um dos ligantes mais importantes para protenas Notch como GLP-1 uma outra
protena de superfcie chamada Delta. No C. elegans uma protena semelhante Delta
a APX-1 encontrada na clula P2 (Mango et al., 1994; Mello et al., 1994). Esse sinal
APX-1 parece quebrar a simetria entre ABa e ABp, pois estimula a protena GLP-1
somente no descendente AB que toca, ou seja, o blastmero ABp. Fazendo assim, a
clula P2 inicia o eixo dorsoventral de C. elegans.
Figura 13.22
* Como discutido no captulo anterior, a protena GLP1 est localizada nos blastmeros ABa e
ABp mas o mRNA do glp-1, maternalmente codificado, encontrado em todo o embrio. Evans e
colegas (1994) postularam que deve haver algum determinante de traduo no blastmero AB que
permite que a mensagem glp-1 seja traduzida nos seus descendentes. O gene glp-1 tambm ativo
na regulao das interaes clula-clula ps-embrionrias. Ele usado mais tarde pela clula da
extremidade distal da gnada para controlar o nmero de clulas germinativas entrando em meiose;
da o nome proliferao da linhagem germinativa (em ingls: germinal line proliferation) (veja
Captulos 17 e 22; Austin e Kimble, 1987).
Prancha 2
Unidades de transcrio ativa em
um cromossomo de trito
Prancha 1
Um clone de rs Xenopus
Prancha 3
O fator de crescimento do fibroblasto
essencial para produo dos mesodermas
lateral e ventral em Xenopus
Quando ovos de Xenopus so injetados com um receptor mutante negativo e dominante para o fator de
crescimento de fibroblasto (FGF), o embrio incapaz de responder ao FGF. Na ausncia do sinal do
FGF, os mesodermas lateral e ventral no se formam,
e o embrio carece de tronco e cauda. Captulos 3 e
15. (Fotografia cortesia de M. Kirschner.)
Prancha 4
Capacidade do lbio
dorsal do blastporo
gerar o eixo neural
secundrio em anfbios
(A)
Prancha 5
Salvamento de
estruturas dorsais pela
protena Noggin
(B)
(C)
Prancha 6 ( direita)
O gene noggin transcrito no mesoderma dorsal e tecido mesodrmico
O RNA de noggin se acumula na regio da zona marginal dorsal (A) e visto no lbio dorsal
do blastporo (B). Quando essas clulas involuem, a expresso de noggin vista na notocorda
e endoderma farngeo (C), que se estende anteriormente, no centro do embrio (D). Captulo
15. (Fotografias cortesia de R. M. Harland.)
(D)
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
(F)
Prancha 7
Rearranjos do citoplasma em Xenopus laevis
O ovo no-fertilizado de Xenopus laevis tem simetria radial. (B) Movimentos citoplasmticos
so vistos medida que o ovo comea a clivar, 90 minutos aps a fecundao. O citoplasma
do futuro lado dorsal ( direita) difere daquele do futuro lado ventral ( esquerda). Essas
diferenas podem ser vistas durante toda a clivagem embrionria (C,D) e resultam no
posicionamento dos determinantes morfogenticos dorsais, no lado do embrio oposto ao
ponto de entrada do espermatozide. (E) Os movimentos citoplasmticos se correlacionam
com o deslocamento da -catenina. No estgio bicelular precoce, a -catenina (cor laranja)
est localizada predominantemente na futura superfcie dorsal do embrio. Esse padro
persiste no estgio de blstula (F). Captulos 4, 6 e 15. (A-D cortesia de M. V. Danilchik; E
e F cortesia de R. T. Moon.)
Prancha 8
Localizao de um RNA
especfico numa regio do ovo
Prancha 9
Efeito do cido retinico na
regenerao de membros
Prancha 10
Localizao progressiva no citoplasma
A segregao de certos grnulos citoplasmticos (grnulos P) vista progredindo para dentro das clulas mais posteriores do embrio de Caenorhabditis elegans.
Essas clulas geram o espermatozide e o vulo do nematide. Quando os
proncleos se encontram durante a fecundao, os grnulos P se movem para a
poro posterior da clula. Esse movimento prossegue at os grnulos serem
encontrados somente na clula P que d origem aos gametas. A coluna esquerda
est corada para mostrar a posio dos ncleos, enquanto a coluna direita est
corada para mostrar os grnulos P. Captulo 13. (Fotografias cortesia de S. Strome.)
Prancha 11
Localizao citoplasmtica em
embries de tunicados
Prancha 12
Onda de ons de clcio atravs de ovos do
ourio-do-mar durante a fertilizao
(A)
Prancha 13
Regies responsivas ao cido
retinico do embrio de camundongo
(B)
(C)
Prancha 14
Formao de padres em Drosophila
Prancha 15
Compartimentao do disco imaginal da asa de Drosophila
O corante imunofluorescente vermelho marca as clulas onde a protena Vestigial produzida (a futura asa ventral); o corante verde
marca as clulas que expressam a protena Apterous (necessria para
a formao da asa dorsal). A rea sobreposta amarela. Captulo 19.
(Fotografia cortesia de S. Carroll.)
Prancha 16
Localizao da RNA polimerase II nos
ocitos do bicho-da-seda gigante
Prancha 17 ( acima )
Mariposa ginandromorfa
Prancha 18 (esquerda)
Controle do desenvolvimento pelo ambiente
Prancha 19
Migrao das clulas da crista neural do pinto
Clulas da crista neural do pinto podem ser seguidas em sua migrao corando-as com
um anticorpo monoclonal marcado, fluorescente. As clulas da crista neural (coradas de
verde) so consideradas migrar atravs das regies anteriores (A) mas no das regies
posteriores (B) do tecido somtico. Esse padro especfico de migrao das clulas da
crista neural tem um papel na determinao da colocao dos neurnios perifricos.
Captulo 7. (Fotografias cortesia de M. Bronner-Fraser.)
Prancha 20
Vias de migrao neural em insetos
Prancha 21
Um camundongo com seis pais
O camundongo multicolorido foi formado misturando clulas de trs embries do estgio de 4 clulas: Um embrio
oriundo de dois camundongos pretos; um embrio oriundo
de dois camundongos brancos; e um embrio oriundo de
dois camundongos castanhos. Em lugar de formar um monstro de trs cabeas, o embrio regulou-se para formar um
camundongo de tamanho normal com contribuies de cada
um dos trs embries. Cada um dos trs embries tambm
proveu clulas da linhagem germinativa, o que foi mostrado
acasalando esse camundongo com um camundongo recessivo
(branco); esse acasalamento produziu descendncia de todas
as trs cores. Captulo 5. (Fotografia cortesia de C. Markert
eThe Journal of Heredity.)
529
Informaes adicionais
&
Especulaes
Inibe
ced-3
ced-4
(apopain)
Morte
celular
Sobrevivncia
da clula
Morte celular
Figura 13.23
530
(B) Metfase
Protena Prospero se acumula
na membrana polar
Anfase
(A)
Clula-me
ganglionar
Clula-tronco do
neuroblasto
(C)
(D)
Telfase
Interfase
Figura 13 24
531
Localizao citoplasmtica de
determinantes de clulas germinativas
Determinantes localizados no citoplasma so encontrados em todo o reino animal. Os
determinantes observados mais freqentemente so os responsveis pela determinao de precursores de clulas germinativas, ou seja, as clulas que do origem aos
gametas. Mesmo em embries onde outros aspectos do desenvolvimento precoce
so reguladores, aquelas clulas contendo determinadas regies do citoplasma do
ovo so destinadas a se tornarem precursoras de clulas germinativas.
Determinao de clulas germinativas em nematdeos
Theodor Boveri (1862-1915) foi o primeiro a observar os cromossomos de um organismo ao longo do seu desenvolvimento. Nesse estudo, ele descobriu um aspecto fascinante do desenvolvimento do nematdeo Parascaris aequorum (antes Ascaris
megalocephala). Esse nematdeo tem somente dois cromossomos por clula haplide,
permitindo assim observaes detalhadas dos cromossomos individuais. O plano de
clivagem da primeira diviso embrionria pouco usual, porque sendo equatorial
separa a metade animal da metade vegetal do zigoto (Figura 13.25A). Mais estranho,
no entanto, o comportamento dos cromossomos na diviso subseqente desses
primeiros dois blastmeros. As extremidades dos cromossomos no blastmero derivado do hemisfrio animal se fragmentam em dezenas de pedaos imediatamente antes
da clivagem dessa clula. Esse fenmeno chamado diminuio cromossmica, porque somente sobrevive uma parte do cromossomo original. Numerosos genes so
perdidos nessas clulas pela fragmentao dos cromossomos, e esses genes no
esto includos nos ncleos recentemente formados (Tobler et al., 1972). Enquanto
isso, no blastmero vegetativo, os cromossomos permanecem normais. Durante a
segunda diviso, a clula animal cindida meridionalmente, enquanto a clula vegetal
novamente se divide equatorialmente. Ambas as clulas derivadas vegetativamente
tm cromossomos normais. Entretanto, os cromossomos de um dos dois blastmeros
vegetativos, o mais prximo do plo animal, fragmentam-se antes da terceira diviso.
Desse modo, no estgio de 4 clulas, somente uma clula- a mais vegetal- contm um
conjunto completo de genes. Em clivagens sucessivas, ncleos somticos so emitidos
(A)
Plasma germinativo
Diminuio de
cromossomos
Sem diminuio
de cromossomos
Clulas-tronco
(B)
Plasma germinativo
Figura 13.25
Sem diminuio
de cromossomos
Clulas-tronco
532
(A)
Agulha
Agulha
Plasma polar removido
do ovo doador
(B)
Blastoderma
Blastoderma
Blastoderma
Clulas
polares
Clulas
polares
Figura 13.26
Habilidade do plasma polar para corrigir a esterilidade induzida por radiao. (A) Tcnica de
transplante de plasma polar de um doador no irradiado a um hospedeiro irradiado. (B) Sees
longitudinais da poro posterior do embrio de Drosophila fixado ao se completar a clivagem.
(i) Embrio normal com o blastoderma completo e clulas polares. (ii) Embrio irradiado durante
a clivagem precoce. O blastoderma se formou, mas as clulas polares esto ausentes. (iii)
Embrio irradiado durante a clivagem precoce, mas subseqentemente injetado com plasma polar
de embries normais. O blastoderma e clulas polares esto presentes. (De acordo com Okada
et al., 1974, cortesia de M. Okada.)
Mahowald e colegas (1979) mostraram que essas fmeas cruzadas com machos normais produzem embries cujos ncleos nunca migram para o plasma polar no ovo. No
se formam clulas polares, e os adultos resultantes no tm clulas germinativas
primordiais para a produo de gametas. Outra mutao de efeito materno agameticcausa a ausncia de clulas germinativas em cerca de metade das gnadas dos descendentes de moscas fmeas homozigotas. Nesse caso, so formadas clulas polares
em nmero normal, mas os grnulos polares degeneram logo aps a fertilizao
(Engstrom et al., 1982). Experimentos com transplantes demonstram que o defeito est
no citoplasma polar e no no ambiente ovariano. Dessa maneira, temos agora evidncia bastante segura que o plasma polar est diretamente envolvido na determinao
da clula germinativa.
(A)
Figura 13. 27
O plasma polar de Drosophila. (A) Micrografia eletrnica de grnulos polares de uma frao
particulada de clulas polares de Drosophila. (B) Micrografia eletrnica de varredura de clulas
polares de um embrio de Drosophila pouco antes do trmino da clivagem. As clulas polares
podem ser vistas direita da fotografia. (Fotografias, cortesia de A. P. Mahowald.)
(B)
533
534
Tipo selvagem
Mutante
Figura 13.28
Localizao dos produtos do gene germ cellless na parte posterior do ovo e do embrio. O
mRNA de gcl pode ser visto no plo posterior
em embries produzidos por fmeas do tipo
selvagem, na fase precoce de clivagem (A),
mas no nos embries produzidos por fmeas
mutantes deficientes em gcl (B). Anticorpos
contra a protena codificada pelo gene gcl podem ser detectados no estgio de blastoderma
celular de embries produzidos por fmeas do
tipo selvagem (C), mas no em embries de
fmeas mutantes (D). (De acordo com Jongens
et al.,1992, cortesia de T. A. Jongens.)
RNA
gcl
(A)
(B)
(C)
(D)
Protena
Gcl
Tipo selvagem
Mutante
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
(F)
535
Figura 13.29
536
Figura 13.30
(A)
Sonda staufen no
ovo do tipo selvagem
(B)
cappucino
spire
oskar
staufen
(localizado posteriormente)
vasa
tudor
Determinantes da
clula germinativa
formam.* Embries derivados de fmeas com somente uma cpia do gene oskar produzem de 10 a 15 clulas polares no estgio de blastoderma celular, enquanto aquelas
que contm duas cpias do gene produzem aproximadamente 35 clulas polares. Aumentando-se o nmero de cpias do gene oskar para quatro, sero formadas cerca de
50 clulas polares. Alm disso, Ephrussi e Lehmann (1992) demonstraram que clulas
germinativas sero formadas onde estiver localizada a mensagem oskar e os estgios
que a precedem so cruciais somente na colocao do mRNA de oskar no plo posterior do ovo. Se a mensagem oskar se localiza na parte anterior do embrio (o que pode
ser feito experimentalmente), o plasma e as clulas germinativas se formaro no anterior. A protena Oskar provavelmente constri a primeira parte estrutural dos grnulos
polares. As protenas Vasa e Tudor se ligam Oskar tornando a estrutura mais complexa e apta a ligar os determinantes da clula germinativa (Breitwieser et al., 1996). A
localizao do mRNA de gcl e do mtlrRNA no plo posterior do ovo frustrada por
qualquer uma das mutaes precedentes. Em mutantes valois e tudor, pequenas quantidades da mensagem de glc podem ser vistas no plasma posterior em embries em
clivagem precoce, mas essa localizao perdida na clivagem tardia (Jongens et al.,
1992). Assim, os grnulos polares incluem os determinantes das clulas germinativas
e a estrutura que os mantm no posterior do ovo e do embrio. A estrutura ligar o
mRNA do germ cell-less (e provavelmente produtos gnicos para outros determinantes
de clulas germinativas). Essas mensagens so traduzidas em protenas durante a
clivagem precoce, entram no ncleo das clulas polares, e (de uma forma ainda no
conhecida) determinam que essas clulas devam ser germinativas.
Determinao de clulas germinativas em anfbios
A localizao citoplasmtica de determinantes de clulas germinativas foi tambm
observada em embries de vertebrados. Bounoure (1934) mostrou que a regio
vegetativa de ovos fertilizados de r contm um material com propriedades de colorao semelhantes s do plasma polar de Drosophila (Figura 13.31). Ele conseguiu
*O nome oskar no vm de Grouch nem do rei da Noruega, mas do anti-heri ano do romance
de Gnter Grass, The Tin Drum. A traduo especfica de regio do mRNA do oskar em isoformas
especficas um processo complexo. A mensagem oskar translocada atravs do ovo ao plo
posterior por uma estrutura contendo tropomiosina que ligada pela protena repressora Bruno,
para prevenir sua traduo prematura (Erdyli et al., 1995; Kim-Ha et al., 1995). Com a localizao
do mRNA no plo posterior, a protena Staufen permite sua traduo. A protena Oskar necessria
para reter o mRNA de oskar (e a protena Oskar) no plo posterior (Markussen et al., 1995; Rongo
et al., 1995; Captulo 22).
Plaquetas de vitelo
(A)
Plasma
germinativo
Plasma germinativo
(B)
Fuso
mittico
Plaquetas
de vitelo
Figura 13.31
Clula
somtica
Plasma germinativo de embries de r. (A) Plasma germinativo (reas escuras) perto do plo
vegetativo de um zigoto recentemente fertilizado. (B) Clula contendo plasma germinativo na
regio endodrmica da blstula na anfase mittica. Note o plasma germinativo penetrando em
somente uma das clulas-filha carregadas com vitelo. (C) Clula germinativa primordial e clulas
somticas perto do assoalho da blastocele na gstrula precoce. (Cortesia de A. Blackler.)
(C)
Plaquetas
de vitelo
Clula germinativa
537
538
Resumo
Temos evidncia que em certos organismos a determinao do destino de uma clula
devida poro do citoplasma do ovo que ela adquire durante a clivagem. Tal clula
diferencia-se independentemente das outras clulas, e os organismos que utilizam o
mecanismo tendem a um tipo de desenvolvimento em mosaico ou determinado. Essa
forma de desenvolvimento exibida por moluscos, tunicados e nematdeos. A localizao dos determinantes morfogenticos dentro do citoplasma do ovo, sua redistribuio
durante o desenvolvimento do ovo e a fertilizao e os padres de clivagem celular so
importantes para determinar o destino de cada clula. Cada um desses fenmenos uma
funo do ovo. Apesar da maior parte do desenvolvimento desses organismos seguir o
padro de mosaico, alguma determinao interativa tambm existe. Em tunicados, o
sistema nervoso e alguns msculos so formados por interaes indutivas entre
blastmeros, e os caracis e nematdeos tambm tm certos rgos formados de maneira interativa. No prximo captulo nos ocuparemos de certos organismos nos quais as
interaes entre molculas no blastoderma sincicial de ovos de insetos constituem o
mecanismo primrio da determinao do destino celular.
LITERATURA CITADA
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541
Quando um espermatozide penetra no vulo, entra em um sistema celular que j alcanou um certo grau de organizao.
ERNST HADORN (1955)
Aqueles de ns que esto trabalhando com
Drosophila encontram um aspecto da questo. Pois o material disponvel tudo que se
pode desejar, e mesmo experimentos embriolgicos podem ser realizados... Depende de
ns utilizarmos essas oportunidades. Temos
uma histria completa a desemaranhar, pois
podemos trabalhar as coisas por ambos trminos aos mesmo tempo.
JACK SCHULTZ (1935)
14
543
544
(A)
(B)
(C)
Invaginao
do intestino
anterior
Sulco ceflico
Clulas polares
na invaginao
do intestino
mdio
(D)
(E)
Clipeolabro
Regio proceflica
Crista
ptica
(F)
Segmento anterior
Crista
dorsal
Figura 14.1
Gastrulao em Drosohila. (A) Sulco ventral comeando a formar medida que as clulas
flanqueando a linha mediana ventral se invaginam. (B) O sulco se fecha, com clulas mesodrmicas colocadas internamente e ectoderma superficial flanqueando a linha mediana ventral. (C)
Vista dorsal de um embrio um pouco mais velho mostrando as clulas polares e o endoderma
posterior mergulhando no embrio. (D) Vista lateral mostrando migrao completa da banda
germinativa. Sutis reentrncias marcam o comeo da segmentao ao longo da banda germinativa: Ma, Mx e Lb correspondem aos segmentos mandibular, maxilar e labial da cabea. T1-T3,
segmentos torcicos; A1-A8, segmentos abdominais. (E) Banda germinativa revertendo sua
direo. Os segmentos reais so agora visveis, assim como os outros territrios da cabea dorsal,
tal como o clipeolabro, a regio proceflica, a crista ptica e a crista dorsal. (F) Larva recmeclodida do primeiro instar. (Cortesia de F. R. Turner.)
545
interior do embrio. Em seguida, se achata para formar uma camada de tecido mesodrmico sob o ectoderma ventral. O endoderma prospectivo invagina em duas bolsas nos
terminais anterior e posterior do sulco ventral. As clulas polares so internalizadas
juntamente com o endoderma. Nesse momento, o embrio se curva para formar o sulco
ceflico e as dobras transversais anterior e posterior. [other.html#droso1]
As clulas que permanecem na superfcie (o ectoderma) sofrem convergncia e
extenso, migrando para a linha ventral mediana para formar a banda germinativa. Essa
se estende posteriormente e talvez devido ao invlucro do ovo, se enrola em volta da
superfcie superior (dorsal) do embrio. Assim, ao final da formao da banda
germinativa, as clulas destinadas a formar as estruturas larvais mais posteriores
esto localizadas logo aps a futura regio da cabea. Nesse momento, comeam a
aparecer os segmentos corporais, dividindo o ectoderma e o mesoderma. A banda
germinativa se retrai em seguida, colocando os presuntivos segmentos posteriores na
extremidade posterior do embrio.
Enquanto a banda germinativa estiver em sua posio estendida, vrios processos chaves morfogenticos ocorrem: organognese, segmentao e segregao dos
discos imaginais.* Alm disso, o sistema nervoso forma-se a partir de duas regies de
clulas ectodrmicas localizadas ventralmente. Conforme descrito no Captulo 8, os
neuroblastos se diferenciam desse ectoderma neurognico dentro de cada segmento
(e tambm da regio no-segmentada do ectoderma da cabea). Portanto, em insetos
como a Drosophila, o sistema nervoso est localizado ventralmente, em vez de ser
derivado do tubo neural dorsal, como nos vertebrados.
Cabea
Protrax
Mesotrax
Metatrax
Figura 14.2
Segmentos
abdominais
546
Polaridade
citoplasmtica
(efeito
materno)
Gradiente de
protena
Hunchback
Genes
gap
Genes
pair-rule
Genes de
polaridade
segmentar
Genes
hometicos
Figura 14.3
adulta tem a sua prpria identidade. O primeiro segmento torcico por exemplo, somente
tem patas; o segundo segmento torcico contm patas e asas. O terceiro segmento
torcico tem patas e halteres (equilibradores). Os segmentos torcicos e abdominais
tambm podem ser diferenciados por suas cutculas. Como aparece esse padro? Durante a ltima dcada, a combinao de mtodos da biologia molecular, gentica e embriologia,
levou a um modelo detalhado descrevendo como gerado o padro peridico ao longo
do eixo ntero-posterior, e como cada segmento diferenciado dos outros.
A polaridade ntero-posterior no embrio, na larva e no adulto tem sua origem na
polaridade ntero-posterior do ovo(Figura 14.3). Os genes de efeito materno nos
ovrios da mosca produzem RNAs mensageiros que so colocados em diferentes
regies do ovo. Esse codifica protenas regulatrias transcricional e de traduo que
se difundem atravs do blastoderma sincicial, e ativam ou reprimem a expresso de
certos genes zigticos. Um par dessas protenas, Bicoid e Hunchback, regula a produo de estruturas anteriores, enquanto outro par de protenas especificado maternalmente, Nanos e Caudal, regulam a formao da parte posterior do embrio. Em seguida, os genes zigticos regulados por esses fatores maternos so expressos em certos
domnios largos (cerca de trs segmentos de largura), parcialmente sobrepostos. Esses genes so chamados genes gap (genes de fenda-porque suas mutaes causam
fendas no padro de segmentao) e esto entre os primeiros genes transcritos no
embrio. As diferentes concentraes das protenas dos genes gap causam a transcrio dos genes pair-rule que dividem o embrio em unidades peridicas. O padro de
transcrio desses genes pair-rule fornece um padro de listas de sete bandas verticais perpendiculares ao eixo ntero-posterior. As listas das protenas dos genes pairrule ativam a transcrio dos genes de polaridade segmentar (segment polarity genes).
Seus mRNAs e produtos proticos dividem o embrio em 14 unidades de largura
segmentar. Isso estabelece a periodicidade do embrio. Ao mesmo tempo, protenas
dos genes gap, pair-rule e de polaridade segmentar interagem para regular outra
classe de genes, os genes hometicos, cuja transcrio determina o destino desenvolvimental de cada um desses segmentos.
547
Anterior
Prosencfalo
Segmentos
da cabea
Segmentos
torcicos
Segmentos
abdominais
Posterior
Figura 14.4
Experimento de ligadura de Sander no embrio do inseto saltador de folhas Euscelis. (A) Embrio normal em viso ventral. A bola preta na base representa um agregado de bactrias simbiticas
que marca o plo posterior. (B) Aps ligadura do embrio precoce, forma-se um embrio parcial,
mas a cabea e os segmentos torcicos esto ausentes em ambos embries. (C) Quando ligados
mais tarde (no estgio de blastoderma) so formados mais dos segmentos faltantes, mas a maioria
dos embries ainda no tem os segmentos mais centrais. (D) Quando o citoplasma do plo
posterior transplantado para um embrio ligado no estgio de blastoderma, um embrio pequeno, porm completo, forma-se na metade anterior, enquanto a metade posterior forma um embrio
parcial invertido. Esses resultados podem ser explicados em termos de gradientes nos plos do
embrio que ativam um conjunto de estruturas e reprimem a formao de outras. (Segundo
Sander, 1960, e French, 1988.)
Figura 14.5
548
Tabela 14.1 Genes de efeito materno que afetam a polaridade ntero-posterior do embrio de Drosophila
Gene
Fentipo
pumilio (pum)
Sem abdome
Sem abdome, sem clulas polares
Sem abdome, sem clulas polares
Sem abdome, sem clulas polares;
oognese defeituosa
Sem abdome, sem clulas polares;
celularizao defeituosa
Sem abdome
caudal (cad)
Sem abdome
Estabilizao da localizao do
complexo Nanos
Ajuda protena Nanos ligar mensagem
hunchback
Ativa genes do terminal posterior
GRUPO TERMINAL
torso (tor)
trunk (trk)
fs(1)Nasrat[fs(1)N]
fs(1)polehole[fs(1)ph]
Sem terminais
Sem terminais
Sem terminais; ovos em colapso
Sem terminais; ovos em colapso
GRUPO ANTERIOR
bicoid (bcd)
exuperantia (exu)
swallow (swa)
GRUPO POSTERIOR
nanos (nos)
tudor (tud)
oskar (osk)
vasa (vas)
valois (val)
Figura 14.6
Trs vias genticas independentes interagem para formar o eixo ntero-posterior do embrio de
Drosophila. Em cada caso, a assimetria inicial estabelecida durante a oognese, e o padro
organizado pelos produtos maternos logo aps a fertilizao. A realizao do padro ocorre
quando os produtos maternos localizados ativam ou reprimem genes zigticos especficos em
diferentes regies do embrio. (Segundo St. Johnston e Nsslein-Volhard, 1992.)
Meiaoognese
Concluso da
oognese
Blastoderma
sincicial
mRNA bicoid
mRNA
bicoid
Blastoderma
celular
Protena Bicoid
RNA do gene
gap anterior
Expresso
gnica
Protena
Hunchback
cron
Fentipo
Tipo selvagem
Cabea
Clulas
nutrizes
Trax
Abdome
Telso
Deficiente em bicoid
Telso
Protena
Caudal
Ocito
mRNA bicoid
localizado no anterior
por produtos de
exuparantia e
swallow
RNA
hunchback
Materno
Clulas
embrionrias
Clulas
polares
mRNA bicoid
traduzido forma
gradiente protico;
reprime traduo de
mRNA caudal
Abdome
Telso
Anterior Bicoid:
Protena
Hunchback
RNA nanos
Deficiente em nanos
cron
Cabea
Trax
Protena
Staufen
Protena
Nanos
RNA
oskar
RNA giant
RNA nanos
mRNA nanos
secretado por clulas
nutrizes ovarianas
localizadas no
plo posterior
Clulas nutrizes
ovarianas secretam
forma posterior para
ligar mRNA nanos
Telso
RNA
Knirps
Posterior: Nanos
Protena
Torsolike
Protena
Torso
Protena
Torsolike
Protena
Torso ativada
mRNA
tailess e
huckebein
Deficiente em torso
Cabea
Trax
Protena
Torsolike
Clulas foliculares
ovarianas produzem
protena Torsolike
nas extremidades
anterior e posterior
Abdome
Clulas
foliculares
Torsolike ativa
Torso nas
extremidades
Terminal: Torso
mRNA tailess
e huckebein
Torso ativa
genes gap
terminais
A) Ocito
(C)
Concentrao
ANTERIOR
mRNA bicoid
Bicoid
Hunchback
caudal
Anterior
Cortex,
Grauzone,
Staufen
Nanos
Posterior
mRNA caudal
Protena Bicoid
PROTENA
POSTERIOR
Hunchback
Bicoid
Caudal
Nanos
Concentrao
550
mRNA nanos
Smaug
Oskar
Protena
Nanos
Anterior
Embrio de
clivagem precoce
Posterior
mRNA
hunchback
Pumilio p55
Protena
Hunchback
Figura 14.7
Um modelo da gerao do padro ntero-posterior por genes de efeito materno. (A) Os RNA
mensageiros bicoid, nanos, hunchback e caudal so colocados no ocito pelas clulas nutrizes
ovarianas. A mensagem bicoid seqestrada anteriormente. A mensagem nanos enviada para
o plo posterior. (B) Na traduo, o gradiente da protena Bicoid enviado para o plo posterior,
e o gradiente da protena Nanos se estende do posterior para o anterior. Nanos inibe traduo da
mensagem hunchback (no posterior), enquanto Bicoid previne a traduo da mensagem caudal
(no anterior). Isso resulta na oposio dos gradientes Caudal e Hunchback. O gradiente Hunchback
reforado secundariamente pela transcrio do gene hunchback dos ncleos anteriores (j que
Bicoid age como um fator de transcrio ativando a transcrio do gene hunchback). (C) Interaes paralelas pelas quais a regulao da traduo gnica estabelece o padro ntero-posterior do
embrio de Drosophila. No anterior do embrio, o mRNA bicoid ligado ao citoesqueleto
anterior e impedido de ser traduzido por ter uma pequena cauda poliadenilada. Na fecundao, a
cauda estendida de maneira dependente das protenas Cortex, Grauzone e Staufen, e o mRNA
bicoid traduzido. A protena Bicoid suprime a traduo do mRNA caudal. Na regio posterior
do embrio, o mRNA nanos suprimido no ocito pela protena Smaug (que se liga sua
3UTR). Na fertilizao, Oskar ajuda em sua traduo e a protena Nanos age como um supressor
da traduo de mRNA hunchback. (C segundo Macdonald e Smibert, 1996.)
posterior. A protena Bicoid inibe a traduo do RNA caudal, permitindo com isso que
a protena Caudal seja somente sintetizada na parte posterior da clula. Reciprocamente, a protena Nanos, em conjunto com a protena Pumilio, liga-se ao RNA hunchback,
impedindo sua traduo na parte posterior do embrio. Bicoid tambm eleva o nvel da
protena Hunchback no anterior do embrio ligando-se aos intensificadores do gene
hunchback e estimulando sua transcrio (Figura 12.18). O resultado dessas interaes a criao de quatro gradientes proticos no embrio precoce:
Um gradiente anterior-para-posterior da protena Bicoid
Um gradiente anterior-para-posterior da protena Hunchback
Um gradiente posterior-para-anterior da protena Nanos
Um gradiente posterior-para-anterior da protena Caudal
O palco est agora preparado para a ativao dos genes zigticos naqueles ncleos que
tinham sido ocupados dividindo-se enquanto esse gradiente estava sendo estabelecido.
Informaes adicionais
&
551
Especulaes
Figura 14.8
Gene A
Limiar B
Limiar A
Gene B
Concentrao do morfgeno
sificador que liga o morfgeno fracamente. Somente quando houver uma grande
concentrao do morfgeno esse gene
estaria ativo. O(s) gene(s) responsveis
pela formao do trax, por outro lado,
poderiam apresentar um intensificador que
ligasse o morfgeno mais eficazmente, o
que o habilitaria a responder a nveis relativamente baixos daquele morfgeno. As
clulas da cabea expressariam ambos os
genes, enquanto os genes do trax expressariam somente aquele gene cujo intensificador puder ligar baixas quantidades do morfgeno. As clulas das pores posteriores do corpo no veriam
quantidade alguma desse morfgeno, e
nenhum desses genes seria ativado. Dessa maneira, as clulas poderiam sentir a
presena de um morfgeno e responder
diferentemente. O sensor no precisaria
ser um intensificador; poderia bem ser
um receptor para um fator de crescimento especfico na superfcie celular (veja
Captulo 17).
A maioria dos modelos de gradiente
assume que todas as clulas que podem
responder a um gradiente so equivalentes. Todas essas clulas interpretam o sinal do morfgeno da mesma maneira e a
concentrao de morfgeno que recebem
determina sua identidade. Porm, a interpretao dos gradientes no necessari-
Distncia da fonte
(A)
(C)
(B)
Concentrao Q
(D)
Gradiente Q
Gradiente P
Centro da
pinta ocular
Veias alares
Figura 14.9
552
Figura 14.10
(A)
(B)
(A)
(B)
Figura 14.11
(C)
Tipo selvagem
Mutante bicoid
Anterior
Posterior
mRNA bicoid
Figura 14.12
Tipo selvagem
Fentipo deficiente
em bicoid
cron
Tipo selvagem
Fentipo
tipo selvagem
Cabea
Trax
Abdome
Telso
553
554
Figura 14.13
Ocito
Clulas
foliculares
polares nocomprometidas
(D) Estgio 9
gurken
Ncleo do
ocito com
mRNA gurken
Clulas
foliculares
anteriores
Mensagem gurken
sobre o ncleo
Clulas
foliculares
posteriores
mRNA bcd
Clulas foliculares dorsais
Microtbulos
Clulas foliculares
posteriores
mRNA osk
reconhecer a 3UTR da mensagem nanos. Assim, a organizao global do citoesqueleto do ocito crucial para o desenvolvimento. Como ocorre essa organizao do
citoesqueleto? No meio da oognese, o ncleo do ocito est posicionado perto do
plo posterior do ocito (i.e., longe das clulas nutrizes). O ncleo do ocito serve
como um local de coleta para o RNA gurken, uma mensagem que codifica um
homlogo do fator de crescimento epidrmico e cuja sntese no bem compreendida.
A mensagem gurken se coleta diretamente sobre o ncleo, entre o ncleo e as clulas
foliculares dorsais posteriores. Aqui, ele traduzido em protena Gurken e secretado
pelo ocito para aquelas clulas foliculares mais prximas do ncleo as clulas
foliculares posteriores. Isso altera essas clulas foliculares motivando-as a secretar
um fator que induz a reorganizao dos microtbulos do ocito. Esses microtbulos
iniciam a reorganizao do citoesqueleto do ocito permitindo ao ncleo mover-se de
sua posio posterior para a poro dorso-anterior do ocito em crescimento (Figura
14.13; Gonzles-Reyes et al., 1995; Roth et al., 1995). Assim, o primeiro sinal para o eixo
ntero-posterior do embrio vem das clulas foliculares maternas. A distino entre
clulas foliculares anteriores e posteriores no ovrio causa a distino entre o eixo
anterior e posterior do embrio.
A prxima questo emergiu em seguida: Como podia um gradiente da protena
Bicoid controlar a determinao do eixo ntero-posterior? Evidncia recente sugere
que Bicoid age de duas maneiras para especificar o anterior do embrio de Drosophila. Primeiro, agindo como um repressor da formao do posterior. Ela faz isso ligando
e suprimindo a traduo do RNA caudal que encontrado em todo o ovo e no embrio
precoce. O homeodomnio da protena Bicoid liga-se uma regio especfica da regio
3 no-traduzida da mensagem caudal (Dubnau e Struhl, 1996; Rivera-Pomar et al.,
1996). Essa supresso necessria, pois se a protena Caudal for produzida no anterior, cabea e trax no sero formados de maneira apropriada. O segundo modo de
funo de Bicoid a nvel da ativao transcricional. A protena Bicoid parece penetrar nos ncleos dos embries em clivagem. Aqui, ela ativa o gene hunchback (hb). A
transcrio de hunchback somente vista na metade anterior do embrio a regio
onde vista a protena Bicoid. Mutantes deficientes em protena Hunchback materna
e zigtica carecem de partes orais e estruturas torcicas. Em fins da dcada de 1980,
555
Figura 14.14
Gene
CAT
Atividade CAT
Influncia da protena Bicoid na ativao do gene hunchback. Diferentes regies do promotor hunchback foram fundidas com o gene
reprter CAT e injetadas em outros embries tipo selvagem, ou
embries de mes deficientes em bicoid. Quanto mais stios ligantes
de Bicoid havia na regio promotora, tanto mais eficaz era sua
expresso nos embries de tipo selvagem. Em embries sem protena Bicoid, nenhuma transcrio resultou de qualquer dos genes
movimentados pelo promotor hunchback. (Segundo Driever e
Nsslein-Volhard, 1989.)
556
regies anteriores da cabea. Em adio sua necessidade por nveis altos de Bicoid
para ativao, esses genes tambm requerem a presena da protena Hunchback para
serem transcritos (Simpson-Brose et al., 1994; Reinitz et al., 1995). As protenas Bicoid
e Hunchback atuam sinergicamente como intensificadores desses genes da cabea
promovendo suas transcries.
O Centro de Organizao Posterior:
Localizando e Ativando o Produto de nanos
O centro de organizao posterior definido pelas atividades do gene nanos (Lehmann
e Nsslein-Volhard, 1991; Wang e Lehmann, 1991; Wharton e Struhl, 1991). O RNA
nanos produzido no ovrio e transportado para o vulo, onde se liga na regio
posterior (a mais distante das clulas nutrizes ovarianas). Os produtos de vrios
outros genes (oskar, valois, vas, staufen e tudor) os mesmos produtos gnicos que
colocam o determinante do plasma germinativo no plasma do plo posterior (veja
Captulo 13) so necessrios para colocar RNA nanos na parte posterior do ovo.* Se
nanos ou qualquer desses genes de efeito materno esto ausentes na me, no h
formao de abdome embrionrio (Lehmann e Nsslein-Volhard, 1986; Schpbach e
Wieschaus, 1986).
A mensagem nanos traduzida em protena logo aps a fecundao, tal como
acontece com a mensagem bicoid. Tautz (1988) mostrou que durante a formao normal do abdome, o produto protico do gene nanos reprime a traduo do RNA
hunchback (veja Figura 14.7). Esse RNA hunchback est inicialmente presente em
todo o embrio, embora mais dele possa ser produzido a partir de ncleos zigticos se
forem ativados pela protena Bicoid. Assim, a combinao das protenas Nanos e
Bicoid causa um gradiente de protena Hunchback atravs do ovo (Figura 14.15). A
protena Bicoid ativa a transcrio do gene hunchback na parte anterior do embrio,
enquanto a protena Nanos inibe a traduo do RNA hunchback na parte posterior do
embrio. Se o produto do gene nanos no estivesse presente, a protena Hunchback
seria fabricada em todo o embrio, e presumivelmente inibiria a expresso de genes
gap geradores do abdome, como knirps (Hlskamp et al., 1989; Irish et al., 1989;
Struhl, 1990). O gene hunchback, portanto, parece ser o ponto focal sob regulao
tanto do centro organizador anterior como do posterior, h muito conhecido existir no
desenvolvimento dos insetos. Esses estudos de funes nanos e bicoid podem agora
explicar experimentos embriolgicos. Luz ultravioleta ou tratamento com RNase iria
destruir RNA bicoid, causando a perda de estruturas anteriores e a duplicao do
abdome; procedimentos de ligao podem bloquear o espalhamento de Nanos, permitindo assim o acmulo de nveis mais altos da protena Hunchback.
Embora Nanos seja considerado o principal morfgeno posterior, duas outras
protenas, Pumilio e Caudal, tambm so importantes para a construo dos segmentos posteriores da Drosophila. A protena Nanos no se liga diretamente mensagem
hunchback. Em seu lugar, Pumilio, uma protena encontrada por todo o embrio, ligase a 3UTR da mensagem hunchback formando um stio de ligao ao qual Nanos
pode se ligar (Barker et al., 1992; Murata e Wharton, 1995). A ligao de Nanos crtica
para a represso da traduo da mensagem hunchback. A protena Caudal tambm
importante para a formao de estruturas posteriores. Embora embries possam
(A)
MATERNOS
Fatores de transcrio
Figura 14.15
ZIGTICOS
cron
Cabea
Trax
Abdome
557
Telso
formar segmentos abdominais na ausncia de Caudal, esses segmentos so freqentemente fundidos uns aos outros ou esto parcialmente ausentes (MacDonald e Struhl,
1986; Mlodzik e Gehring, 1987).
erminal
O Grupo Gene T
Terminal
Quando ambos os centros de organizao, anterior e posterior, forem no-funcionais,
um embrio pode ainda desenvolver algum padro ntero-posterior (Nsslein-Volhard
et al., 1987). Quando fmeas so tornadas duplamente mutantes tanto para o morfgeno
anterior como para o posterior, seus embries produzem dois telsos, um em cada
terminal do embrio. Assim, existe um terceiro conjunto de genes de efeito materno
que ajudam a criar os extremos do eixo ntero-posterior. Mutaes nesses genes
terminais resultam na perda das extremidades no-segmentadas do organismo: o cron
anterior e o telso posterior. Na ausncia dos produtos desses genes, a poro segmentada do embrio se expande at as extremidades (Degelmann et al., 1986; Klingler
et al., 1988). Portanto, o conjunto de genes terminais define os limites das partes
segmentadas do corpo.
O gene crtico aqui parece ser torso, um gene codificando uma tirosina quinase
receptora (veja Figura 14.6). O RNA torso sintetizado por clulas ovarianas, depositado no ocito e traduzido aps a fecundao. A protena transmembrana Torso no
est restrita espacialmente aos terminais do ovo, mas est distribuda uniformemente
pela membrana plasmtica (Casanova e Struhl, 1989). Uma mutao dominante de
torso, que proporciona atividade constitutiva ao receptor, converte toda a metade
anterior do embrio em um cron e toda a metade posterior em um telso. Assim, Torso
precisa normalmente ser ativada somente nos terminais do ovo. Realmente, Stevens e
seus colegas (1990) mostraram que a protena Torso ativada por clulas foliculares
em cada plo do embrio. O ativador da protena Torso provavelmente Torsolike,
558
Figura 14.16
Torsolike
Modelo hipottico da sinalizao de Torso. A protena Torsolike, secretada pelas clulas foliculares anteriores e posteriores ligada pelo receptor Torso
(que encontrado por toda a membrana do ocito).
Ligao do ligante conduz ativao de torso e
autofosforilao em resduos especficos de tirosina.
Os grupos fosfotirosina sero reconhecidos pelo
domnio da protena Drk. O domnio SH3 da protena Drk liga-se protena SOS, com isso ativando a
GTPase da protena Ras. Isso ir ativar a protena
Raf que o primeiro membro de uma cascata de serina/
treonina. Essa cascata em geral funciona fosforilando
um fator de transcrio permitindo-lhe com isso entrar ou funcionar no ncleo. Esse fator no foi ainda
identificado. O resultado final a estimulao da transcrio dos genes gap huckebein e tailless. (Segundo
Duffy e Perrimon, 1994.)
RAS
Extracelular
Citoplasma
Ativao
de RAS
Ativao
de Torso
MAP quinase quinase
MAP quinase
Fator de transcrio
Os genes da segmentao
Uma Viso Panormica
O compromisso do destino celular em Drosophila parece ser um processo de duas
etapas: especificao e determinao (Slack, 1983). Precocemente no desenvolvimento, o destino de uma clula depende de sinais ambientais tais como aqueles fornecidos
pelos gradientes j mencionados. Essa especificao do destino celular flexvel e
ainda pode ser alterada em resposta a sinais ambientais. Finalmente, as clulas iro
sofrer uma transio desse tipo de comunicao frouxa para uma determinao
irreversvel. Aqui, o destino da clula tornou-se intrnseco da clula.* A transio de
especificao para determinao em Drosophila mediada pelos genes de segmentao
(segmentation genes). Esses genes dividem o embrio precoce em uma srie repetitiva
de primrdios segmentares ao longo do eixo ntero-posterior. Mutaes em genes de
segmentao causam ao embrio tornar-se carente de certos segmentos ou partes de
segmentos; essas mutaes demonstram a existncia de trs classes de genes de
segmentao (Tabela 14.2). Freqentemente essas mutaes afetam parasegmentos,
regies do embrio separadas por engrossamentos mesodrmicos e sulcos
ectodrmicos e que dividem o embrio em 14 regies (Martinez-Arias e Lawrence,
1985). Os parasegmentos do embrio no se transformam nos segmentos da larva ou
do adulto. Ao invs disso, incluem a parte posterior do segmento anterior e a poro
anterior do segmento que o sucede (Figura 14.17). Embora os segmentos sejam as
principais divises anatmicas do plano corporal da larva e do adulto, esses segmentos so construdos de acordo com regras que usam o parasegmento como a unidade
bsica da construo.
* Aficionados da teoria da informao iro reconhecer que o processo pelo qual a informao
ntero-posterior em gradientes morfogenticos transferida para domnios discretos de genes
seletores hometicos representa uma transio de especificao analgica para digital. Especificao analgica, determinao digital. Isso permite que a informao transitria dos gradientes no
blastoderma sincicial seja estabilizada de modo a poder ser utilizada muito mais tarde no desenvolvimento (Baumgartner e Noll, 1990).
Locais
Categoria
Locais
Genes gap
Krppel (Kr)
knirps (kni)
hunchback (hb)
giant (gt)
tailless (tll)
huckebein (hkb)
buttonhead (btd)
empty spiracles (ems)
Genes pair-rule
(secundrios)
Genes de polaridade
segmentar
engrailed (en)
wingless (wg)
cubitus interruptusD (ciD)
hedgehog (hh)
fused (fu)
armadillo (arm)
patched (ptc)
gooseberry (gsb)
pangolin (pan)
Genes pair-rule
(primrios)
orthodenticle (otd)
hairy (h)
even-skipped (eve)
runt (run)
559
560
Segmentos
Comportamentos
Parasegmento
Figura 14.17
Embrio
precoce
(normal)
rea da
ao gnica
Embrio
mais
tardio
(normal)
Larva
(mutante
letal)
Larva
(normal)
rea da
ao gnica
Bandas de
dentcula
Existem trs classes de genes de segmentao, cada classe expressa aps outra
(Figura 14.3). A transio de um embrio caracterizado por gradientes de morfgenos
para um embrio tendo unidades distintas realizada por produtos dos genes gap. Os
genes gap so ativados ou reprimidos pelos genes de efeito materno, e dividem o
embrio em largas regies contendo vrios primrdios parasegmentares. O gene
krppel, por exemplo, expresso primeiramente nos parasegmentos 4-6 no centro do
embrio de Drosophila (Figuras 14.18A e 14.19; Prancha 14A); a ausncia de krppel
faz com que o embrio no apresente essas regies. Os produtos proticos dos genes
gap interagem com as suas protenas vizinhas codificadas por genes gap e ativam a
transcrio de genes pair-rule. A transcrio desses genes subdivide os largos domnios do gene gap em parasegmentos. Mutaes dos genes pair-rule (como em fushi
tarazu; Prancha 14C) usualmente deleta pores de cada segmento alternante. As
Figuras 14.18 e 14.20 comparam o morfologia do embrio de tipo selvagem com aquela
do mutante fushi tarazu. Finalmente, os genes de polaridade segmentar so responsveis pela manuteno de certas estruturas repetitivas dentro de cada segmento. Mutaes nesse grupo de genes faz com que uma poro de cada segmento seja deletada
e substituda por uma estrutura em imagem espelhar de outra poro do segmento. Por
exemplo, em mutantes engrailed, as pores posteriores de cada segmento so substitudas por duplicatas da regio anterior do segmento subseqente (Figura 14.18C;
Prancha 14D). Assim, os genes de segmentao so fatores de transcrio que tomam
os gradientes do embrio de clivagem precoce e transformam o embrio em uma peridica estrutura parasegmentar.
Figura 14.18
Trs tipos mutantes de padres de segmentao. O painel esquerda mostra o embrio em estgio
de clivagem, com a regio onde um determinado gene normalmente transcrito no embrio tipo
selvagem mostrado em cores. Nos trs painis direita, as reas coloridas foram deletadas
medida que esses mutantes se desenvolvem. (Segundo Mange e Mange, 1990.)
561
Figura 14.19
Os genes gap foram originalmente definidos por uma srie de mutantes cujos embries no tinham grupos de segmentos consecutivos (Nsslein-Volhard e Wieschaus,
1980). Conforme mostra a Figura 14.21, delees causadas pelos genes hunchback
(hb), Krppel (Kr) e knirps (kr) cobrem toda regio segmentar do embrio da
Drosophila. O gene gap giant (gt), superpe-se a esses trs genes e os fentipos
dos mutantes tailless e huckebein deletam pores dos terminais no-segmentados do embrio.
A expresso desses genes dinmica. Em geral, h um baixo nvel de atividade
transcricional atravs de todo o embrio que se define em discretas regies de alta
atividade medida que a clivagem continua (Jckle et al., 1986). O elemento crtico
parece ser a expresso da protena Hunchback, que ao fim do ciclo 12 da diviso
nuclear, est em nveis altos na parte anterior do embrio e em seguida forma um
gradiente ngreme por 15 ncleos. O ltimo tero do embrio no tem expresso de
detectvel Hunchback. Os padres de transcrio dos genes gap anterior so
iniciados pelas diferentes concentraes das protenas Hunchback e Bicoid.
(A)
(B)
Pr-ceflico
Maxilar
Figura 14.20
Clipeolabro
Labial
(C)
Mandbula
562
hunchback
krppel
Knirps
tailless
giant
Figura 14.21
Delees segmentares em mutantes de genes gap. A tabela sob as fotografias indica por
barras brancas regies segmentares faltantes. Em mutantes hunchback, a regio estendida
(sobreamento mais claro) quando tanto a me como o zigoto no tm atividade do gene
hunchback. Os reais domnios da expresso hunchback no foram completamente expressos. (Segundo Gaul e Jckle, 1990; expresso huckebein segundo Weigel et al., 1990;
fotografias cortesia de E. Wieschaus.)
seja responsvel pela ativao dos genes gap abdominais knirps e giant. O gene
giant tem dois modos de ativao um para sua banda de expresso anterior, e um
para a banda de expresso posterior (veja Figura 14.15; Rivera-Pomar, 1995; Schultz
e Tautz, 1995).
Aps a colocao inicial dessas protenas pelos genes de efeito materno e
Hunchback, elas se estabilizam e so mantidas por interaes entre os diferentes
genes gap*. Por exemplo, a expresso do gene Krppel regulada negativamente
no seu limiar anterior pela protena Hunchback, e no seu limiar posterior pelas
protenas Knirps e Tailless (Jckle et al., 1986; Harding e Levine, 1988; Hoch et al.,
1992). Se a atividade de Hunchback est faltando, o domnio da expresso de
Krppel estende-se anteriormente. Se a atividade Knirps estiver faltando, a expresso gnica Krppel estende-se mais posteriormente. Os limites entre as regies de transcrio dos genes gap so provavelmente criados por represso mtua. Tal como as protenas Giant e Hunchback podem controlar o limite anterior da
transcrio de Krppel, assim tambm Krppel pode determinar os limites posteriores da transcrio de giant e hunchback. Se um embrio no tiver o gene Krppel,
a transcrio de hunchback continua para dentro da rea usualmente reservada
para Krppel (Jckel et al., 1986; Kraut e Levine, 1991). Essas inibies formadoras de limites so consideradas ser mediadas diretamente pelos produtos dos
genes gap, porque todos os principais genes gap (hb, gt, Kr e kni) codificam
protenas ligantes de DNA que podem ativar ou reprimir a transcrio (Kniple et
al., 1985; Gaul e Jckle, 1990; Capovilla et al., 1992).
Alm do mais, essas interaes so altamente especficas e o produto de um
gene gap pode se ligar aos promotores de outros genes gap. A determinao da
pegada (footprinting) de DNase I mostra que a protena codificada pelo gene
Krppel tipo selvagem liga-se regio promotora do gene hunchback (que ele
inibe) e regio promotora do gene knirps (que ele estimula). A regio promotora de
knirps tambm reconhecida pelo produto protico do gene tailless, que inibe a
transcrio de knirps. A protena Hunchback (alm de reconhecer o promotor de
Krppel) tambm reconhece seu prprio promotor, sugerindo que hunchback est
envolvido na regulao de sua prpria expresso (Pankratz et al., 1990; Stanojevc et
al., 1989; Treisman e Desplan, 1989).
Os Genes pair-rule
A primeira indicao de segmentao no embrio da mosca vem quando os genes
pair-rule so expressos durante o dcimo-terceiro ciclo da diviso. Os padres de
transcrio desses genes so marcantes porque cada um divide o embrio em reas
precursoras do plano do corpo segmentado. Como pode ser visto na Figura 14.22 e
Prancha 14C, uma faixa vertical de ncleos (as clulas esto apenas comeando a se
formar) expressa esse gene, seguida por outra faixa de ncleos que no o expressa, e
em seguida por outra faixa que o faz. O resultado um padro de faixa de zebra ao
longo do eixo ntero-posterior, dividindo-o em 15 subunidades (Hafen et al., 1984).
Oito genes atualmente so conhecidos como capazes de dividir o embrio precoce
desse modo; eles esto listados na Tabela 14.2. importante notar que nem todos os
ncleos expressam os mesmos genes pair-rule. Realmente, em cada parasegmento,
cada fila de ncleos provavelmente tem sua prpria constelao de genes pair-rule
que a distingue de qualquer outra fila.
Como so instrudos alguns ncleos do embrio de Drosophila a transcrever
um determinado gene, enquanto seus vizinhos so instrudos para no o fazer? A
resposta parece vir da distribuio de produtos proticos dos genes gap. Enquanto o RNA de cada um dos genes gap tem uma distribuio muito discreta que
*As interaes entre genes e produtos de genes so facilitadas pelo fato de que essas reaes
ocorrem dentro de um sinccio. As membranas celulares ainda no se formaram.
563
564
(A)
Figura 14.22
Faixa #1
Auto-regulao
Faixa #3
Faixa #2 + #7
(A)
565
Figura 14.23
hunchback
krppel
Knirps
giant
giant
(B)
Faixas eve
(C)
Bicoid
Hunchback
Ativadores
Repressores
Giant
Krppel
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
Figura 14.24
Transcrio do gene ftz. (A-D) No comeo do ciclo 14, h baixa transcrio em cada ncleo da
regio segmentada do embrio de Drosophila. Dentro dos prximos 30 minutos, o padro da
expresso se altera enquanto a transcrio de ftz intensificada em certas regies (que formam as
faixas) e reprimida nas regies entre as faixas. (E) Dupla marcao dos transcritos even-skipped
(bandas mais escuras) e fushi tarazu (bandas mais claras), mostrando que ftz expresso entre a
bandas. (A-D segundo Karr e Kornberg, 1989; E cortesia de M. Levine.)
566
567
Figura 14.25
Segmento
Parasegmento
Segmento
Parasegmento
Segmento
Parasegmento
Concentrao de
produtos dos genes
(A)
Segmento
Parasegmento
Eve
Ftz
Eve
Ftz
Posterior
Anterior
Clulas
(B) Interao entre engrailed e wingless
Um segmento
Anterior
Engrailed competente
wingless competente
Posterior
engrailed competente
Expresso wingless
Receptores Patched
Expresso engrailed
Difuso da protena
Hedgehog
Protena Wingless
Frizzled
Transcrio
de wingless
Armadillo
Cubitus interruptus
Receptores
Patched
Hedgehog
Protena smoothened
Transcrio
de engrailed,
hedgehog
Modelo para a transcrio dos genes de polaridade segmentar engrailed (en) e wingless
(wg). (A) A expresso de wg e en iniciada
por genes pair-rule. O gene engrailed expresso quando as clulas contm altas concentraes das protenas Even-skipped ou
Fushi tarazu. O gene wingless transcrito
quando nem o gene eve nem ftz esto ativos,
mas um terceiro gene (provavelmente oddpaired) expresso. (B) A expresso contnua de wg e en mantida pela interao entre
clulas expressando engrailed e wingless. A
protena Wingless secretada e se difunde
para as clulas circunjacentes. Nas clulas
com competncia para expressar engrailed
(tendo protenas Eve ou Ftz), a protena
Wingless ligada pelo receptor Frizzled. Isso
permite a ativao do gene engrailed. A protena Engrailed ativa a transcrio do gene
hedgehog e tambm ativa a transcrio de
seu prprio gene (engrailed). A protena
Hedgehog se difunde dessas clulas e se liga
protena Patched. Essa ligao impede a
protena Patched de inibir a sinalizao da
protena Smoothened. O sinal permite a transcrio do gene wingless e a subseqente secreo da protena Wingless.
568
Gradiente
Hedgehog
Gradiente
Wingless
Figura 14.26
569
usa um ligante e um receptor diferentes (Figura 14.26). O padro dos destinos celulares tambm muda o foco da padronizao de parasegmento em segmento. Tem-se
agora marcadores externos, as clulas expressando engrailed tornando-se as clulas
mais posteriores de cada segmento.
Figura 14.27
Complexo Antennapedia
(B)
Complexo Bithorax
Os domnios funcionais dos genes dos complexos bithorax e Antennapedia em Drosophila. (A) O complexo bithorax foi dividido em trs
grupos complementares letais identificados por E. B. Lewis. Os genes
do complexo Antennapedia so labial (lab), Deformed (Dfd), Sex comb
reduced (Scr) e Antennapedia (Antp). (B) Sumrio do controle dos
genes AbdA e AbdB em Drosophila. Os limites so controlados pelos
genes gap. As sries de mutaes infra-abdominal controlam os elementos reguladores desses genes. (A segundo Dessain et al., 1992; B
segundo Casares e Snchez-Herrero, 1995.)
570
Figura 14.28
(A)
Figura 14.29
571
Segmentos:
gene en:
Parasegmentos:
gene ftz:
Complexo Antennapedia
labial
(lab)
Deformed
(Dfd)
Epiderme
Sistema
nervoso
central (CNS)
Epi
CNS
Epi
CNS
Antennapedia
(Antp)
Epi
CNS
Complexo bithorax
Ultrabithorax
(Ubx)
Epi
CNS
abdominal A
(abdA)
Epi
CNS
Abdominal B
(AbdB)
Epi
CNS
caudal
(cad)
Epi
Figura 14.30
Esses principais genes seletores hometicos foram clonados e sua expresso analisada por hibridizao in situ (Harding et al., 1985; Akam, 1987). Os resultados desses
experimentos esto sumariados na Figura 14.30. Transcritos de cada loco so detectados em regies especficas do embrio sendo especialmente proeminentes no sistema
nervoso central. Em mutantes hometicos, essa expresso normal fica alterada. Por
exemplo, em alelos dominantes de Antennapedia, o gene Antennapedia foi invertido
no cromossomo, fazendo com que perdesse seu prprio promotor ficando sob o controle de um promotor diferente, ativo na cabea. Isso causa a expresso ectpica de
Antp na cabea. De maneira semelhante, se o gene Ultrabithorax for colocado em um
novo promotor e expresso na regio da cabea, as antenas comeam a produzir estruturas especficas de patas e protenas (Mann e Hogness, 1990).
572
(B)
A iniciao dos domnios dos genes hometicos influenciada pelos genes gap e
genes pair-rule. Por exemplo, a expresso dos genes abdA e AbdB reprimida
pelas protenas Gap Hunchback e Krppel. Essa inibio impede esses genes que
especificam para o abdome, serem ativos na cabea e no trax (Casares e SnchezHerrero, 1995). Reciprocamente, o gene Ultrabithorax ativado por certos nveis
da protena Hunchback, fazendo com que seja originalmente transcrito em uma
larga banda no meio do embrio, e a protena Gap Krppel ative a transcrio de
Antennapedia (Figura 14.31; Harding e Levine, 1988; Struhl et al., 1992). Os limites
de expresso dos genes hometicos so logo confinados a parasegmentos definidos pela protenas Fushi tarazu e Even-skipped (Ingham e Martinez-Arias, 1986;
Mller e Bienz, 1992).
Figura 14.31
(A)
genes que so alvos dos genes hometicos e que funcionam para formar os
primrdios de tecidos especficos ou rgos. Um mtodo, pioneiro no laboratrio
de Walter Gehring, usou armadilhas de intensificadores para detectar aqueles
genes regulados por Antennapedia. Aqui, um transpson contendo um gene reprter da -galactosidase acoplado a um promotor fraco e introduzido aleatoriamente no genoma de diferentes Drosophila. A expresso da -galactosidase (que
pode ser facilmente detectada por colorao) fica sob o controle de intensificadores na vizinhana do promotor. Se o intensificador for regulado pela protena
Antennapedia (que est presente na regio torcica, mas no na cabea do embrio), ento a atividade da -galactosidase deveria ser diferente quando tecidos
torcico e da cabea so comparados. Usando essa tcnica, Wagner-Bernholz e
colaboradores (1991) encontraram o que pode ser o gene crtico regulado por
Antennapedia. Esse gene, salm, no ativo em discos imaginais de pata do trax,
Disco antenal
(A)
(B)
(C)
Figura 14.32
mas expresso no disco imaginal da antena (Figura 14.32). Assim, salm parece ser
um gene que reprimido pela protena Antennapedia. A represso do gene salm
pode ser crtica para a formao de tecido das patas, em lugar de tecido antenal,
dos discos imaginais torcicos.
Outro mtodo empregado para achar tais genes tem sido o seqenciamento. O
seqenciamento de genes mostrou que alguns genes tm elementos intensificadores
que ligam os genes hometicos, com isso, fazendo com que eles sejam regulados por
padres de expresso dos genes hometicos. Um gene alvo, decapentaplegic, tem
um stio de ligao em seu intensificador para a protena Ultrabithorax. Isso permite
protena Decapentaplegic ser expressa no mesoderma visceral do parasegmento 7,
onde necessria para o desenvolvimento do intestino mdio (Immergluck et al., 1990;
Panganiban et al., 1990).
Outro alvo das protenas hometicas, o gene Distal-less (ele prprio um gene
contendo um homeobox) necessrio para o desenvolvimento dos membros e
ativo somente no trax. A expresso Distal-less reprimida no abdome, provavelmente por uma combinao de protenas Ubx e AbdA que podem-se ligar a seu
intensificador e bloquear a transcrio (Vachon et al., 1992; Castelli-Gair e Akam,
1995). Isso apresenta um paradoxo, j que ambos, o parasegmento 5 (inteiramente
torcico e produtor de patas) e o parasegmento 6 (que inclui a maior parte do
primeiro segmento abdominal livre de patas) expressam Ultrabithorax. Como podem dois segmentos to diferentes ser especificados pelo mesmo gene? CastelliGair e Akam (1995) mostraram que a mera presena da protena Ubx em um grupo
de clulas no suficiente para a especificao. Em vez disso, o momento e o local
de sua expresso dentro do parasegmento podem ser crticos. Antes da expresso
Ubx, os parasegmentos 4-6 tm potenciais semelhantes. No estgio 10, a expresso de Ubx nas partes anteriores dos parasegmentos 5 e 6 impede-os de formarem
estruturas (como a espiral anterior), caractersticas do parasegmento 4. Alm disso, no compartimento posterior do parasegmento 6 (mas no do parasegmento 5),
a protena Ultrabithorax bloqueia a formao do primrdio dos membros reprimindo os genes Distal-less. No estgio 11, quando Ubx tiver alcanado todo
parasegmento 6, o gene Distal-less tornou-se auto-regulatrio e no pode ser
reprimido por Ultrabithorax (Figura 14.33).
573
574
Figura 14.33
Anterior
Posterior
Segmentos:
(A)
Primrdio
do espirculo
Primrdio da pata
Parasegmentos
Protena Ubx
(B)
Protena AbdA
(C)
Segmentos
Compartimentos
Parasegmentos
Mutaes
Ultrabithorax
Mutaes
reguladoras
Seqncias reguladoras
Genes estruturais
Unidades de transcrio
Figura 14.34
575
576
Informaes adicionais
&
Especulaes
Hlice III
A protena Dorsal:
Morfgeno para a polaridade dorsoventral
A polaridade dorsoventral estabelecida pelo gradiente de um outro fator protico de
transcrio, Dorsal. Em contraste com Bicoid, cujo gradiente estabelecido dentro de
um sinccio, o gradiente Dorsal forma-se sobre um campo de clulas estabelecido
como uma conseqncia de eventos celulares sinalizadores.
A especificao do eixo dorsoventral pode ser dividida em vrias etapas. A etapa
crtica a translocao da protena Dorsal do citoplasma para os ncleos das clulas
ventrais durante o ciclo da dcima quarta diviso. Anderson e Nsslein-Volhard (1984)
isolaram 11 genes de efeito materno, cuja ausncia de cada um est associada com a
falta de estruturas ventrais (Figura 14.36). Alm disso, a ausncia de outro gene de
efeito materno, cactus, causa a ventralizao de todas as clulas. As protenas codificadas por esses genes maternos so crticas para certificar que a protena Dorsal entre
somente em ncleos da superfcie ventral do embrio. As etapas posteriores
translocao da protena Dorsal afetam aquilo que essa protena faz para especificar
as diferentes regies do embrio. Aqui, diferentes concentraes da protena Dorsal
parecem especificar os diferentes destinos dessas clulas.
Translocao da Protena Dorsal
A protena que realmente distingue o dorso do ventre o produto protico do gene
dorsal. O RNA dos genes dorsais da me colocado no interior do vulo pelas clulas
*De uma maneira que no poderia ter sido predita por Just, revela-se que alguns dos genes (como
o decapentaplegic) envolvidos na regulao do nmero de cerdas ou forma das asas tambm tm
funes anteriores na regulao da polaridade dorsoventral.
577
fator de transcrio dedo de zinco necessrio para o funcionamento do produto Scr distinguindo entre os segmentos labial e primeiro torcico. Ele crtico para a especificao da identidade
do protorcico anterior (parasegmento
3), e pode ser o gene que especifica a
condio basal do complexo hometico. Se o complexo bithorax e o gene
Antennapedia forem removidos, todos
os segmentos se tornam protrax anterior. A funo do gene teashirt parece
ser crtica para o trabalho com a protena Scr, distinguindo o trax da cabea e
trabalhando atravs do tronco para impedir a formao de estruturas da cabea (Roder et al., 1992). [droso2.html]
578
ovarianas da mosca me. Porm, a protena Dorsal no sintetizada a partir da mensagem materna antes de decorridos 90 minutos aps a fecundao. Quando essa protena traduzida, ela encontrada em todo o embrio, no somente no lado ventral ou
dorsal. Como pode ento essa protena atuar como um morfgeno, se existe por todo
o embrio? Em 1989, a surpreendente resposta foi encontrada (Roth et al., 1989; Rushlow
et al., 1989; Steward, 1989). Enquanto a protena Dorsal pode ser encontrada em todo
o blastoderma sincicial no embrio precoce de Drosophila, ela somente transportada para os ncleos celulares na parte ventral do embrio (Figura 14.37A,B). Aqui, a
protena Dorsal se liga a certos genes nucleares para ativar ou suprimir suas transcries. Se a protena Dorsal no penetrar no ncleo, os genes ventralizantes (snail e
twisted) no so transcritos, os genes dorsalizantes (decapentaplegic e zerknllt)
no so reprimidos, e todas as clulas do embrio so especificadas como clulas
dorsais. Essa hiptese de que o eixo dorsoventral da Drosophila especificado pelo
transporte seletivo da protena morfognica Dorsal para o ncleo reforada pela
anlise de mutaes com um fentipo inteiramente dorsalizado ou ventralizado (Figura 13.37C,D). Nesses mutantes quando todas a clulas estiverem dorsalizadas (conforme se evidencia pela sua cutcula dorsal), a protena Dorsal no penetra no ncleo de
nenhuma clula. Reciprocamente, nos mutantes cujas clulas tm um fentipo ventral,
a protena Dorsal encontrada em todos os ncleos.
(A)
(B)
Figura 14.36
Figura 14.37
Incluso da protena Dorsal em ncleos ventrais, mas no laterais ou dorsais. (A) Mapa de
destinos atravs do centro do embrio de Drosophila. A parte mais ventral vira o mesoderma, a
parte superior seguinte vira o ectoderma neurognico (ventral). O ectoderma lateral e epidrmico
pode ser distinguido na cutcula, e a regio mais dorsal torna-se a amnioserosa, a camada extraembrionria que envolve o embrio. (B-D) Seo transversal de embries corados com anticorpo
para mostrar a presena da protena Dorsal. Em todos os casos, a mancha escura representa a
protena Dorsal. (B) Um embrio tipo selvagem, mostrando a protena Dorsal nos ncleos mais
ventrais. (C) Um mutante dorsalizado, mostrando ausncia de protena Dorsal em todos os
ncleos. (D) Um mutante ventralizado; a protena Dorsal penetrou no ncleo de cada clula. (A
de Rushlow et al., 1989; B-D de Roth et al., 1989, cortesia dos autores.)
(A)
(B)
Dorsal
Amnioserosa
Ectoderma dorsal
Ectoderma lateral
Ectoderma
neurognico
Mesoderma
Ventral
Viso lateral
Seo transversal
(C)
(D)
(A)
Clulas nutrizes
ovarianas
(B)
Dorsal
579
(C)
Ocito
Torpedo
Ncleo
Destino da
s clulas do
rsais
Dorsal
Cactus
Protena
Toll
Sinal
Toll
Clulas
foliculares
Inibio da
sntese das
protenas
Windbeutel,
Nudel, Pipe
Ncleo
Nenhum
sinal para o
lado ventral
Membrana
celular
Protease
Easter
ativada
Easter
Sntese de Windbeutel,
Nudel, Pipe
las
das clu
Destino
Sptzle
ativado
Sptzle
mRNA
gurken
Snake
ventrais
Windbeutel
Gastrulation
defective
Nudel
Pipe
Envoltrio
vitelnico
Ventral
1.
2.
5.
6.
7.
8.
4.
9.
Figura 14.38
3 a. O sinal Torpedo faz com que as clulas foliculares se diferenciem para uma morfologia dorsal
580
Figura 14.39
Clulas germinativas
deficientes em torpedo em
uma fmea tipo selvagem
Embrio de me
tipo selvagem
Eixo
dorsoventral
Clulas polares
(precursoras das
clulas germinativas)
Embrio de
me deficiente
no gene
torpedo
Ocito deficiente
em torpedo no
folculo tipo selvagem
Troca entre
clulas polares
Clulas germinativas tipo
selvagem em uma fmea
deficiente em torpedo
No h eixo
dorsoventral
(o todo do
embrio
dorsal)
Clulas germinativas tipo
selvagem em um folculo
deficente em torpedo
581
582
IL-1
Sptzle
Receptor
Toll
Membrana
plasmtica
Citoplasma
do ocito
quinase pelle
Cactus
Receptor
IL-1
Quinase
Membrana
plasmtica
Citoplasma do
linfcito
Dorsal
Dorsal
Ncleo
Regulao de genes
ventralmente especficos
Ncleo
Figura 14.40
Modelo de uma trajetria conservada para regular o transporte nuclear de fatores de transcrio em Drosophila e mamferos. (A) Em
Drosophila, a protena Toll liga o sinal da protena Sptzle e ativa a regio da quinase da
protena Pelle. A protena Pelle fosforila
Cactus e Dorsal, fazendo com que as duas
protenas se separem uma da outra. A protena Dorsal pode ento entrar no ncleo e regular a transcrio de genes ventralmente especficos. (B) Em linfcito de mamferos, o receptor IL-1 pode causar a fosforilao de IB
(atravs de uma protena quinase ainda no
identificada). Isso permite protena NF-B
penetrar no ncleo e efetuar a transcrio de
vrios genes especficos do linfcito. (Segundo Shelton e Wasserman, 1993.)
transcrio NF-B para o ncleo de linfcitos de mamferos. De fato, existe uma substancial homologia entre NF-B e Dorsal, entre IB e Cactus, entre a protena Toll e o
receptor da interleucina 1 (IL-1), entre a protena Pelle e uma protena quinase associada a IL-1, e entre as seqncias de DNA reconhecidas por Dorsal e NF-B (GonzlesCrespo e Levine, 1944; Cao et al., 1996). Assim, a via bioqumica usada para especificar
a polaridade dorsoventral em Drosophila parece ser a mesma que aquela usada para
diferenciar linfcitos em mamferos (Figura 14.40).*
LEITURA DO GRADIENTE DA PROTENA DORSAL. O que faz a protena Dorsal
uma vez localizada nos ncleos das clulas ventrais? Olhando o mapa de destino do
corte transversal pelo meio do embrio de Drosophila no dcimo quarto ciclo da
diviso (veja Figura 14.37), torna-se bvio que as 16 clulas com a mais alta concentrao da protena Dorsal so as que geram o mesoderma. A prxima clula acima dessa
regio gera as clulas especializadas da glia e as clulas neurais da linha mediana. As
prximas duas clulas so aquelas que do origem epiderme ventral e cordo nervoso
*Lemaitre e colegas (1996) mostraram que Toll e seu ligante (Sptzle) tambm esto envolvidos na resposta imune da Drosophila s infeces fngicas.
583
Figura 14.41
Gastrulao em Drosophila. Nesta seo transversal, as clulas mesodrmicas na poro ventral do embrio se dobram para o interior, formando um tubo que em seguida se achata e
forma os rgos mesodrmicos. Os ncleos
esto corados por anticorpos contra a protena
Twist. (de Leptin, 1991b, cortesia de M. Leptin.)
ventral, enquanto as nove clulas acima dessas produzem a epiderme dorsal. O grupo
mais dorsal de seis clulas no se divide; ele gera a cobertura amnioserosa do embrio
(Ferguson e Anderson, 1991).
Esse mapa de destinos gerado pelo gradiente da protena Dorsal nos ncleos.
Grandes quantidades especificam que as clulas sejam mesoderma, enquanto quantias menores especificam-nas para ser tecido glial ou ectodrmico (Jiang e Levine,
1993). O primeiro evento morfogentico da gastrulao de Drosophila a invaginao
das 16 clulas mais ventrais do embrio (Figura 14.41). Todos os derivados mesodrmicos dos msculos, corpos gordurosos e gnadas originam-se dessas clulas (Foe,
1989). A protena Dorsal especifica essas clulas para tornarem-se mesoderma de duas
maneiras. Primeiro, a protena pode ativar genes especficos que criam o fentipo
mesodrmico. Trs dos genes alvo de Dorsal so twist, snail e rhomboid (Figura
14.42). Esses genes so transcritos somente nos ncleos da clulas ventrais que
receberam altas concentraes da protena Dorsal, pois esses intensificadores no se
zerknllt
Dorsal
Figura 14.42
Subdiviso do eixo dorsoventral pelo gradiente de protena Dorsal nos ncleos. A protena Dorsal ativa os genes zigticos
rhomboid, twist e snail de acordo com sua
concentrao nuclear. A protena Snail, formada mais ventralmente, inibe a transcrio
da protena Rhomboid. A protena Dorsal
inibe a expresso de tolloid, decapentaplegic e zerknllt na regio ventral. Diferentes
concentraes da protena Zerknllt determinam os destinos das clulas dorsais. (Segundo Steward e Govind, 1993.)
Padronizao ventral
(ativao)
Amnioserosa
Padronizao dorsal
(represso)
dorsal
dorsal
Ectoderma dorsal
Ativao
tolloid
decapentaplegic
rhomboid
Inibio
Ectoderma lateral
rhomboid
Ectoderma neurognico
twist
snail
Ventral
Mesectoderma
Mesoderma
twist
snail
Inibio
tolloid
dpp
zerknllt
584
ligam protena Dorsal com alta afinidade (Thisse et al., 1988; Jiang et al., 1991; Pan et
al., 1991). A protena Twist ativa genes mesodrmicos, enquanto a protena Snail
reprime genes no-mesodrmicos em particular que poderiam, de outro modo, ser
ativos. O gene rhomboid interessante porque ativado por Dorsal mas reprimido
por Snail. Assim, a expresso de rhomboid no encontrada nas clulas mais ventrais
(i.e., as precursoras do mesoderma), mas expressa nas clulas adjacentes ao
mesoderma que formam o neuroectoderma presuntivo (veja Figura 14.42; Jiang e Levine,
1993). Tanto snail como twist so necessrios para produzir o fentipo mesodrmico
e gastrulao apropriada (Leptin et al., 1991a). A borda aguda entre as clulas
mesodrmicas e as clulas elas adjacentes que geram as clulas gliais produzida
pela presena de produtos dos genes snail e twist nas clulas mais ventrais (Kosman
et al., 1990). Em mutantes de snail, as clulas mais ventrais ainda tm o gene twist
ativado, e parecem-se com as clulas mais laterais (Nambu et al., 1990).
A protena dorsal tambm determina o mesoderma diretamente. Alm de ativar
genes estimuladores do mesoderma (twist e snail), ela inibe diretamente os genes
dorsalizantes zerknllt (zen) e decapentaplegic (dpp). Assim, nas mesmas clulas, a
protena Dorsal pode agir como um ativador de certos genes e um repressor de outros.
A opo se funciona como um ativador ou um repressor, depende da estrutura dos
Figura 14.43
Ativao e represso pela protena Dorsal. Um intensificador em um gene ativado pela protena
Dorsal (como twist ou snail) tem mltiplos stios de ligao de baixa afinidade para a protena
Dorsal e nenhum stio ligante de DSP1. Intensificadores naqueles genes que so reprimidos por
Dorsal contm tanto stios ligantes de Dorsal, como um stio ligante de DSP1. (A) Na ausncia
da protena Dorsal (i.e., naquelas futuras clulas ectodrmicas nas quais a protena Dorsal no
penetrou no ncleo) os genes twist e snail no so ativados e genes como zerknllt no so
reprimidos. (B) Reciprocamente, na presena da protena Dorsal no ncleo, os genes twist e snail
tornam-se ativos e o gene zerknllt desligado. (Segundo Ip, 1995.)
Embrio de Drosophila
Dorsal
(A)
Co-repressores putativos
que ligam seqncias ricas
em AT de AT1-3
DSP1
Sem twist
ou snail
Ectoderma
dorsal
Dorsal
Neuroectoderma
Mesoderma
Inibio
(B)
Ativao
twist,
Snail
Gradiente de
Dorsal nuclear
585
intensificadores dos genes. O intensificador zen contm um stio de ligao para uma
protena chamada DSP1 (protena de comutao dorsal 1). Essa protena encontrada em todo o embrio. Quando a protena Dorsal est ausente, no parece ter efeito
algum sobre a transcrio. Porm, quando Dorsal tambm est presente no stio do
intensificador, ela converte a funo ativadora de Dorsal em funo repressora (Figura
14.43; Lehming et al., 1994; Ip, 1995). Mutantes de dorsal expressam genes dpp e zen
atravs do embrio (Rushlow et al., 1987), e embries deficientes em dpp e zen deixam
de formar estruturas dorsais (Irish e Gelbart, 1987). Assim, em embries tipo selvagem,
os precursores mesodrmicos expressam twist e snail (mas no zen e dpp); precursores da epiderme dorsal e da amnioserosa expressam zen e dpp, mas no twist ou snail;
precursores da glia (mesectoderma) expressam somente snail; enquanto os precursores neuroectodrmicos laterais no expressam qualquer um desses quatro genes
(Kosman et al., 1991; Ray et al., 1991). Assim, em conseqncia das respostas ao
gradiente da protena Dorsal, o eixo fica subdividido em mesoderma, mesectoderma,
ectoderma neurognico, epiderme e amnioserosa. [droso3.html]
Scr Ativa
Inibe dpp
Inibe grupo
dl, spitz
Figura 14.44
586
LITERATURA CITADA
Akam, M. E. 1987. The molecular basis for
metameric pattern in the Drosophila embryo.
Development 101: 1-22.
Anderson, K. V. and Nsslein-Volhard, C. 1984.
Information for the dorsal-ventral pattern of
the Drosophila embryo is stored as maternal
mRNA. Nature 311: 223-227.
Anderson, K., Bokla, L. and Nsslein-Volhard,
C. 1985. Establishment of dorsal-ventral
polarity in the Drosophila embryo: The
induction of polarity by the Toll gene product.
Cell 42: 791-798.
Barker, D. D., Wang, C., Moore, J., Dickinson,
L. K. and Lehmann, R. 1992. Pumillio is
essential for function but not for distribution of
the Drosophila abdominal determinant, Nanos.
Genes Dev. 6: 2312-2326.
Bate, M. and Martinez-Arias, A. 1993. The Development of Drosophila melanogaster. Cold
Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring
Harbor, NY.
587
588
Lemaitre, B., Nicolas, E., Michaut, L., Reichhart, J.-M. and Hoffmann, J. A. 1996. The
dorsoventral regulatory gene casette sptzle/
Toll/cactus controls the potent an-tifungal
response in Drosophila adults. Cell 86: 973-983.
Macdonald, P. M. and Struhl, G. 1986. A molecular gradient in early Drosophila embryos and
its role in specifying the body pattern. Nature
324: 537-545.
Klingler, M., Erdlyi, M., Szabad, J. and NssleinVolhard, C. 1988. Function of torso in
determining the terminal anlagen of the Drosophila embryo. Nature 335: 275-277.
Mohler, J. and Vani, K. 1992. Molecular organization and embryonic expression of the
hedgehog gene involved in cell-cell communication in segmental patterning in Drosophila. Development 115: 957-971.
589
590
15
Desenvolvimento regulativo
Em deuterostomatas, tais como ourio-do-mar e vertebrados, o destino da clula depende de sua posio no embrio e no da parte do citoplasma que ela adquiriu.
Sidney Brenner (Citado em Wilkins, 1993) observou que o desenvolvimento animal
pode se dar de duas maneiras. Alguns organismos so especificados predominantemente no estilo Europeu; ou seja, cada clula determinada por quem eram seus
ancestrais. A linhagem o fator importante. Inversamente, os blastmeros da maioria
dos vertebrados so especificados predominantemente no estilo Americano; existe
uma grande mistura de clulas e cada clula determinada pela natureza de suas
vizinhas. Toda clula se inicia com um potencial similar e se desenvolve de acordo com
o que encontra. Nesses embries, em pelo menos parte da clivagem, cada clula
capaz de se desenvolver no embrio todo se ela for separada das outras, e as clulas
remanescentes so capazes de alterar seu destino para produzir o embrio completo
(como na formao de gmeos). Esse tipo de comprometimento chamado especificao
condicional (ou dependente), e d origem ao desenvolvimento regulativo.
Durante o desenvolvimento autnomo, o eixo do embrio determinado pela distribuio de materiais em cada um dos blastmeros. Entretanto, no desenvolvimento
regulativo, os eixos se formam a partir de interaes das clulas constituintes. Neste
captulo acompanharemos os experimentos que se iniciaram h mais de um sculo para
entender como se d a especificao do sistema nervoso nos anfbios.
591
592
Clulas
somticas
A clula germinativa
593
Diferenciao das
clulas somticas
Figura 15.1
A morte de um indivduo no envolve soluo de continuidade na srie de divises celulares pelas quais a vida da raa continua. O indivduo morre, verdade, mas as clulas germinativas continuam, levando com elas as tradies da
raa da qual se originaram e as repassando aos seus descendentes.
Wilhelm Roux: Desenvolvimento em mosaico
Weismann intuiu que os cromossomos so os portadores da informao herdada para
o desenvolvimento. Mais importante que isso, ele props uma hiptese de desenvolvimento que podia ser testada imediatamente. Weismann dizia que quando a primeira
diviso da clivagem separava a futura metade direita do embrio da futura metade
esquerda, haveria uma separao dos determinantes direitos dos determinantes
esquerdos nos blastmeros resultantes. Essa afirmao foi testada por Wilhelm
Roux, um jovem embriologista alemo. Em 1888, Roux publicou o resultado de uma
srie de experimentos nos quais usou embries de r de 2 e 4 clulas, e destruiu
algumas das clulas com uma agulha aquecida. A hiptese de Weismann predizia a
formao de embries pela metade, direita ou esquerda; Roux obteve mrulas incompletas (metades), justamente como havia sido previsto por Weismann (Figura 15.2).
Essas se desenvolveram em nurulas tendo somente um lado completo, direito ou
esquerdo, com uma dobra medular, uma fossa auditiva e assim por diante. Portanto, ele
concluiu que o embrio da r era um mosaico de partes autodiferenciveis e era provvel que cada clula estivesse recebendo um conjunto especfico de determinantes e se
diferenciava de acordo com isso. Com essa srie de experimentos, Roux inaugurou seu
programa de mecnica do desenvolvimento (Entwicklungsmechanik), um enfoque
fisiolgico experimental da embriologia (veja Sander, 1991a,b). Nunca mais, insistia
Roux, ser a embriologia submetida por estudos evolucionrios. Pelo contrrio, a
embriologia assumiria seu papel como uma cincia experimental independente.
Figura 15.2
Tecido
morto
Tecido
vivo
Meio embrio
Clivagem
Ovo fertilizado de r
Estgio de 2 clulas
Estgio de blstula
Metade destruda
(tecido morto)
Estgio de nurula
594
Figura 15.3
Demonstrao do desenvolvimento regulativo por Driesch. (A) Uma larva pluteus normal. (B)
Plutei menores, mas normais, cada uma delas se desenvolveu a partir de um blastmero de um
embrio dissecado de 4 clulas. (Todas as larvas esto desenhadas na mesma escala.) (De acordo
com Hrstadius e Wolsky, 1936.) Note que as larvas derivadas dessa maneira no so idnticas,
apesar de sua capacidade de gerar todos os tipos celulares necessrios. Essas variaes tambm
esto presentes nos ourios-do-mar adultos formados dessa maneira (Marcus, 1979).
8 clulas
Vista
superior
16 clulas
8 clulas
Vista
superior
16 clulas
Vista lateral
Placa de vidro
Vista lateral
Figura 15.4
Experimento de Driesch com placas de presso para alterar a distribuio dos ncleos. (A)
Clivagem normal de embries de ourio-do-mar com 8 a 16 clulas, com vistas do plo animal
(seqncia superior) e lateral (seqncia inferior). (B) Planos de clivagem anormal formados
sob presso, como observados do plo animal e lateralmente. (De acordo com Huxley e
deBeer, 1934.)
normalmente produziriam estruturas dorsais agora eram encontrados em clulas ventrais (Figura 15.4). Se a segregao dos determinantes nucleares tivesse ocorrido
(como havia sido proposto por Wiesmann e Roux), o embrio resultante deveria estar
estranhamente desorganizado. Entretanto, Driesch obteve larvas normais desses embries. Ele concluiu que A posio relativa de um blastmero dentro do conjunto
provavelmente definir de um modo geral o que com ele originar.
As conseqncias desses experimentos foram monumentais para a embriologia e
pessoalmente para Driesch. Primeiro, Driesch havia demonstrado que a potncia
prospectiva de um blastmero isolado (aqueles tipos de clulas que ele tinha a possibilidade de formar) maior do que seu destino prospectivo (os tipos de clulas
que normalmente originaria no curso inalterado do seu desenvolvimento). De acordo
com Weismann e Roux, a potncia prospectiva e o destino prospectivo de um blastmero deveriam ser idnticos. Segundo, Driesch concluiu que o embrio do ourio-domar era um sistema eqipotencial harmonioso, porque todas essas partes potencialmente independentes funcionavam juntas para formar um nico organismo. Terceiro,
ele concluiu que o destino de um ncleo dependia unicamente da sua localizao
dentro do embrio. Driesch (1894) hipotetizou uma srie de eventos onde o desenvolvimento prosseguia por interaes do ncleo e do citoplasma:
Como contm um ncleo, cada clula carrega durante a ontognese a totalidade dos primrdios; como ela contm um corpo celular citoplasmtico especfico,
est especificamente apta a responder somente a efeitos especficos... Ento quando o material nuclear ativado, sob seu controle, o citoplasma de uma clula
que a princpio havia influenciado o ncleo por sua vez modificado, e ento
est estabelecida a base para um novo processo elementar, o qual no somente
o resultado mas tambm a causa.
Esse surpreendente conceito moderno de interao ncleo-citoplasma e equivalncia
nuclear, por fim, fez Driesch abandonar a cincia. Ele no podia mais imaginar o embrio como uma mquina fsica, porque esse podia ser subdividido em partes, cada
uma capaz de reformar o organismo todo. Em outras palavras, Driesch passou a acreditar que o desenvolvimento no podia ser explicado por foras fsicas. Ele foi levado
595
596
Tabela 12.2
151 Procedimentos
Estabilizao de
experimentais
RNAs mensageiros
e resultados
especficos
de Roux
por e
hormnios
Driesch
Pesquisador
Organismo
Tipo de experimento
Concluso
Interpretao em relao
potncia e destino
Roux (1888)
R (Rana fusca)
Defeito
Ourio-do-mar
(Echinus
microtuberculatus)
Ourio-do-mar
(Echinus e
Paracentrotus)
Isolamento
Desenvolvimento em
mosaico (autnomo)
Desenvolvimento regulativo
(condicional)
Potncia prospectiva
igual ao destino prospectivo
Potncia prospectiva maior
que o destino prospectivo
Desenvolvimento
regulativo (condicional)
Driesch (1892)
Dreisch (1893)
Recombinao
a invocar uma fora vital, entelechy (fora dirigida por uma meta interna), para explicar
como prosseguia o desenvolvimento. Essencialmente, ele acreditava que o embrio
era imbudo de uma psique interna e sabedoria para conseguir suas metas, apesar dos
obstculos colocados no seu caminho por embriologistas. Incapaz de explicar seus
resultados pela Fsica de sua poca, Driesch renunciou ao estudo da fisiologia do
desenvolvimento e se tornou um professor de filosofia, proclamando o vitalismo at
sua morte em 1941. Outros, especialmente Oscar Hertwig (1894), puderam incorporar
os experimentos de Driesch em uma embriologia experimental mais sofisticada.*
As diferenas entre os experimentos de Roux e os de Driesch esto resumidas na
Tabela 15.1. A diferena entre experimentos de isolamento e de defeitos e a importncia
das interaes fornecidas pelos blastmeros destrudos foi enfatizada em 1910, quando J. F. McClendon mostrou que blastmeros isolados de r se comportam exatamente
como clulas isoladas de ourio-do-mar. Portanto, o desenvolvimento em mosaico
dos primeiros dois blastmeros da r no estudo de Roux foi um artefato do experimento de defeito. Alguma coisa dentro do blastmero morto ou sobre ele ainda informava
s clulas vivas que ele existia. Ns j vimos que blastmeros precoces de mamferos
tm um desenvolvimento do tipo regulativo. Como discutimos no Captulo 5, cada
blastmero isolado de uma massa de clulas internas do camundongo capaz de gerar
um animal inteiro e frtil. A habilidade de dois ou mais embries precoces de camundongo se fundirem em um embrio normal (veja Figura 5.28) e o fenmeno de gmeos
idnticos (veja Figura 5.27) tambm atestam a habilidade regulativa dos blastmeros
de mamferos. Portanto, mesmo que Weismann e Roux tenham sido pioneiros no estudo da fisiologia do desenvolvimento, sua proposio que a diferenciao causada
pela segregao de determinantes nucleares logo se mostrou incorreta.
*Esses experimentos reforaram dentro da embriologia um tipo de filosofia mecanstica chamada organicismo holstico. Essa filosofia se refere aos conceitos que (1) as propriedades do todo
no podem ser previstas unicamente a partir das propriedades das partes componentes, e (2) as
propriedades das partes so informadas pela sua relao ao todo. Como uma analogia, o significado
de uma sentena obviamente depende do significado de suas partes componentes, as palavras.
Entretanto, o significado de cada palavra depende da sentena toda. Na sentena Os lderes do
partido estavam divididos no palanque, o significado possvel de cada substantivo e verbo limitado pelo significado da sentena toda e pelas relaes com outras palavras dentro da sentena.
Similarmente, uma clula no embrio desenvolve seu fentipo dependendo de suas interaes dentro
do embrio inteiro. O conceito materialista oposto o reducionismo, que mantm que as propriedades do todo podem ser conhecidas se todas as propriedades das partes forem conhecidas. Tradicionalmente, a embriologia tem apoiado o organicismo holstico, enquanto que a gentica tem se
caracterizado como sendo uma disciplina reducionista (Haraway, 1976; Roll-Hansen, 1978; Allen,
1985; Tauber e Sarkar, 1992; Gilbert e Faber, 1996). Driesch se tornou um conhecido opositor do
Nazismo, e foi um dos primeiros professores no judeus a se aposentar foradamente quando Hitler
assumiu o poder (Harrington, 1996).
597
(B)
Plo animal
Plo animal
Agulha
de vidro
Plo vegetal
Plo vegetal
Figura 15.5
Clios
Dauerblstula
(blstula permanente)
Larva
(levemente anormal)
Larva
(pequena, mas normal)
Larva (pequena,
mas normal)
598
Figura 15.6
(A)
Plo
animal
(B)
Plo
animal
Plo
vegetal
Plo
vegetal
Merognias
Merognias
Fertilizao
Fertilizao
Larva
(pequena,
mas normal)
Larva
(pequena,
mas normal)
Dauerblstula
(blstula anormal)
Larva
(quase normal)
Essas observaes levaram Hrstadius a realizar algumas das experincias mais excitantes da histria da embriologia. Primeiro, Hrstadius (1935) acompanhou o desenvolvimento normal de cada uma das 6 camadas de clulas do embrio de ourio-domar com 64 clulas. Como mostrado na Figura 15.7A, as clulas animais e a primeira
camada vegetativa normalmente produzem o ectoderma; a segunda camada vegetativa
d origem ao endoderma e parte do mesoderma larval; e os micrmeros geram o esqueleto mesodrmico.
Em seguida, Hrstadius removeu a membrana de fertilizao dos embries de 64
clulas, separou as camadas com finas agulhas de vidro e as recombinou de vrias
maneiras. O hemisfrio animal isolado se tornou uma bola de clulas ectodrmicas
ciliadas (Figura 15.7B). Essa dauerbstula ciliada foi chamada de animalizada. Quando Hrstadius recombinou um hemisfrio animal isolado com a camada veg1 (Figura
15.7C), a larva resultante estava menos animalizada. O desenvolvimento ciliar foi suprimido, e foi formada uma poro do intestino. Entretanto, quando o hemisfrio animal foi combinado com a camada veg2 (Figura 15.7D), desenvolveu-se uma larva pluteus
normal. Nessa combinao, as clulas veg2, que normalmente formam somente o
arquntero e seus derivados, esto agora formando tambm as estruturas esquelticas.
Analogamente, quando a metade animal foi combinada com somente os micrmeros
(Figura 15.7E), uma pequena pluteus normal foi formada, mas nesse caso o endoderma
foi completamente derivado das clulas animais. Nesse caso, o intestino foi formado
por clulas que normalmente teriam dado origem ao ectoderma ciliado. Esses experimentos mostraram que as clulas animais tm potencial gentico para se tornarem
clulas do intestino mesmo no estgio de 64 clulas.
Formao de um organismo integrado:
Restringindo a potncia das clulas vizinhas
Driesch se referiu ao embrio como um sistema harmnico eqipotencial porque
cada uma das clulas que o compem abdica da maior parte de seu potencial para fazer
parte de um nico organismo completo. Cada clula poderia sozinha se tornar um
Figura 15.7
Micrmeros
Larva pluteus
599
Dauerblstula
Animalizao
completa
(C) Metade animal e veg1
Animalizao
(incompleta)
(D) Metade animal e veg2
Larva reconhecvel;
mesoderma da
camada veg2
(E) Metade animal e micrmeros
Larva reconhecvel;
endoderma das
camadas animais
600
Mesmeros
Macrmeros
Micrmeros
Figura 15.8
nhas. Jon Henry e colegas no laboratrio de Rudolf Raff (1989) mostraram que se
forem isolados pares de clulas do hemisfrio animal pigmentado de um embrio de
ourio-do-mar com 16 clulas, essas clulas podem originar componentes tanto
ectodrmicos como mesodrmicos. Entretanto, sua capacidade de formar mesoderma
severamente restringida se elas so agregadas a outros pares do hemisfrio animal
pigmentado. Assim, a presena de clulas vizinhas, mesmo sendo do mesmo tipo,
restringe a potncia de ambos os parceiros. Ettensohn e McClay (1988) mostraram que
a potncia tambm restringida quando uma clula combinada com suas vizinhas ao
longo do eixo animal-vegetal. Primeiro, eles demonstraram que o nmero de clulas
mesenquimatosas primrias parece ser fixo e pode ser regulado por variaes nos
macrmeros. Se todas as 60 clulas mesenquimatosas primrias de Lytechinus
variegatus so removidas da gstrula precoce, um nmero igual de clulas
mesenquimatosas secundrias (do arquntero que havia sido macrmeros do plo
vegetal) se convertem em mesnquima primrio e comeam a formar espculas. Se so
removidas 20 clulas mesenquimatosas primrias, cerca de 20 clulas mesenquimatosas
secundrias se tornam clulas mesenquimatosas primrias formadoras de espculas. E
assim por diante. Portanto, as clulas mesenquimatosas primrias tm uma influncia
restritiva, impedindo a formao de novas clulas mesenquimatosas primrias a partir
do arquntero, havendo ento a ocorrncia de uma induo negativa. No conhecemos o mecanismo pelo qual as clulas mesenquimatosas primrias impedem que o
arquntero forme o mesnquima primrio e estabelecem um limite para o nmero de
tais clulas na blastocele.
Recombinando clulas de vrias camadas, Khaner e Wilt (1990, 1991) observaram
que na maioria dos casos, a clula de uma camada restringe a habilidade de uma clula
de outra camada em expressar seus destinos potenciais (Figura 15.8). A exceo mais
importante - como mencionado acima- a recombinao das clulas mesomricas do
plo animal com certos micrmeros do plo vegetal para formar tecido intestinal dos
mesmeros. Entretanto, no desenvolvimento normal de ourio-do-mar, essas clulas
nunca se associam entre si.
601
Ligadura
Estgio de 8 clulas
Estgio de 16 clulas
140 dias
Figura 15.9
veram, uma ligeiramente mais velha do que a outra (Figura 15.9). Spemann concluiu
desse resultado que os ncleos precoces de anfbios so geneticamente idnticos e
que cada clula capaz de originar um organismo completo. Nesse respeito, os
blastmeros de anfbios eram similares aqueles de ourio-do-mar.
Alm do mais, quando Spemann realizou um experimento similar com uma constrio
ainda longitudinal, mas perpendicular ao plano da primeira clivagem (separando as
futuras regies dorsal e ventral e no os lados direito e esquerdo), ele obteve um
resultado completamente diferente. Os ncleos continuaram a se dividir em ambos os
lados da constrio, mas somente um lado - o futuro lado dorsal do embrio- dava
origem a uma larva normal. O outro lado produzia um massa desorganizada de tecido
com clulas ventrais, que Spemann chamou de Bauchstck - poro ventral. Essa
massa de tecido era uma bola de clulas epidrmicas (ectoderma) contendo sangue e
mesnquima (mesoderma) e clulas de intestino (endoderma), mas nenhuma estrutura
dorsal tal como sistema nervoso, notocorda ou somitos (Figura 15.10).
Porque deveriam esses dois experimentos dar resultados diferentes? Poderia ser
que quando o ovo dividido perpendicularmente ao plano da primeira clivagem,
algumas substncias citoplasmticas no so igualmente divididas entre as duas
(A)
(B)
Primeira clivagem
Crescente
Cinzento
Separao dos
blastmeros e
desenvolvimento
Figura 15.10
Poro
ventral
Desenvolvimento
Normal
Desenvolvimento
Normal
Desenvolvimento
Normal
602
metades? Felizmente, o ovo da salamandra era um bom lugar para procurar respostas. Como foi visto nos Captulos 4 e 6, existem movimentos dramticos do citoplasma cortical aps a fertilizao de ovos de anfbios, e em alguns deles esses movimentos expem uma rea cinzenta do citoplasma em forma de um crescente na regio
diretamente oposta ao ponto de entrada do espermatozide. Alm disso, o primeiro
plano de clivagem normalmente divide essa regio em partes iguais, dando origem a
dois blastmeros. Se essas clulas forem separadas, duas larvas completas se desenvolvem. Entretanto, se esse plano de clivagem for anormal (em um raro evento
natural ou em um experimento onde o investigador faz uma constrio com um fio de
cabelo, perpendicularmente ao plano normal de clivagem) o material do crescente
cinzento passa para somente um dos dois blastmeros. Spemann observou que
quando esses dois blastmeros so separados, somente aquele contendo o crescente cinzento se desenvolve normalmente.
Parece, ento, que algo contido na regio do crescente cinzento essencial para o
desenvolvimento embrionrio adequado. Mas como isso funciona? Qual o seu papel
no desenvolvimento normal? A pista mais importante veio do mapa de destino dessa
rea do ovo, ao mostrar que a regio do crescente cinzento origina as clulas que
iniciam a gastrulao. Essas clulas formam o lbio dorsal do blastporo. Como visto
no Captulo 6, as clulas do lbio dorsal do blastporo so de certa maneira comprometidas a invaginar para dentro da blstula, iniciando assim a gastrulao e a formao do arquntero. Porque o desenvolvimento futuro do anfbio depende da interao
das clulas rearranjadas durante a gastrulao, Spemann especulou que a importncia
do crescente cinzento era devida sua habilidade em iniciar a gastrulao, onde
ocorriam mudanas cruciais para o desenvolvimento.
Em 1918, Spemann demonstrou que enormes modificaes na potncia celular de
fato ocorriam durante a gastrulao. Ele verificou que as clulas da gstrula precoce
no estavam comprometidas com respeito diferenciao final, mas que o destino das
clulas da gstrula tardia eram fixos. Spemann trocou os tecidos de gstrulas precoces de duas espcies pigmentadas de salamandra aqutica (Figura 15.11). Quando a
regio das clulas epidrmicas prospectivas foi transplantada para uma rea de formao da placa neural, as clulas transplantadas deram origem ao tecido neural. Quando
clulas da prospectiva placa neural foram transplantadas regio destinada a se
tornar pele do ventre, as clulas se tornaram epidrmicas (Tabela 15.2). Portanto, essas
clulas da gstrula precoce ainda no estavam comprometidas a um tipo especfico de
diferenciao. Suas potncias prospectivas eram ainda maiores que seus destinos
prospectivos. Essas clulas exibem desenvolvimento condicional (regulativo ou
Regio hospedeira
Diferenciao do
tecido doador
Concluso
GSTRULA PRECOCE
Neurnios prospectivos
Epiderme
prospectiva
Epiderme
Desenvolvimento
dependente (condicional)
Epiderme prospectiva
Neurnios
prospectivos
Neurnios
Desenvolvimento
dependente (condicional)
Neurnios prospectivos
Epiderme
prospectiva
Neurnios
Desenvolvimento
(determinado)
independente (autnomo)
Epiderme prospectiva
(determinada)
Neurnios
prospectivos
Epiderme
Desenvolvimento
independente (autnomo)
GSTRULA TARDIA
(A)
Ectoderma
neural presuntivo
Figura 15.11
Epiderme
presuntiva
Placa neural
TRANSPLANTE EM
GSTRULA PRECOCE
Forma-se
a epiderme
(B)
Ectoderma
neural presuntivo
Epiderme
presuntiva
603
Placa
neural
TRANSPLANTE EM
GSTRULA TARDIA
Forma-se a placa
neural secundria
dependente) porque seu destino final depende da sua localizao no embrio. Entretanto, quando os mesmos experimentos de transplantes heteroplsticos (entre espcies) foram feitos entre gstrulas tardias, Spemann obteve resultados completamente
diferentes. Em lugar de regular sua diferenciao de acordo com sua nova localizao
as clulas transplantadas exibiram desenvolvimento autnomo (ou independente, ou
em mosaico). Seus destinos prospectivos estavam determinados e as clulas se desenvolveram independentemente de sua nova localizao embrionria. Especificamente, clulas neurais prospectivas agora se desenvolviam em tecido cerebral mesmo
quando localizadas na regio prospectiva da epiderme, e epiderme prospectiva formava epiderme mesmo na regio do prospectivo tubo neural. Durante o intervalo de
tempo entre a gastrulao precoce e a tardia, as clulas ficavam restritas s suas vias
de diferenciao. Essas clulas so consideradas como determinadas: elas no podem
mais regular sua diferenciao em outros tipos de clulas. Deve ser notado que os
critrios para a determinao so puramente operacionais. No ocorrem modificaes
bvias nas clulas e no se detecta qualquer diferenciao. A base molecular da
determinao permanece como uma das principais incgnitas do desenvolvimento.
Hans Spemann e Hilde Mangold: Induo embrionria primria
Os mais espetaculares experimentos com transplantes foram publicados por Hans
Spemann e Hilde Mangold em 1924*. Eles mostraram que ao se colocar tecidos em
novos locais, o lbio dorsal do blastporo a nica regio autodiferencivel da gstrula.
Quando o tecido do lbio dorsal do blastporo de uma gstrula precoce foi transplantado para o ectoderma ventral de outra gstrula, ele no s continuou a ser o lbio do
blastporo, como tambm iniciou a gastrulao e a embriognese no tecido vizinho.
Nesses experimentos, Spemann e Mangold usaram embries de duas espcies de
* Hilde Proescholdt Mangold morreu em um trgico acidente quando seu aquecedor a gasolina
explodiu. Na poca, ela tinha 26 anos e seu trabalho estava sendo publicado. Sua tese de doutoramento
foi uma das poucas teses em biologia que resultaram diretamente na concesso do Prmio Nobel.
Para maiores informaes sobre Hilde Mangold e sua poca veja Hamburger (1984) e Fssler e
Sander (1996).
604
(A)
Blastocele
Notocorda
presuntiva
Somitos presuntivos
Lbio dorsal
do blastporo
Endoderma
presuntivo
Estruturas
secundrias induzidas
(B)
Invaginao
primria
Epiderme
presuntiva
Estruturas primrias
Somito
Lmen do intestino
Notocorda
Tubo neural
Somito
Notocorda
Lmen do
intestino
Endoderma
Tubo neural
Invaginao
primria
Invaginao
secundria
(C)
Figura 15.12
(B)
(A)
Transplante do ndulo
de Hensen do pato
Embrio de pato
Tubo neural
induzido
Embrio
hospedeiro
Embrio de pinto
Figura 15.13
Induo de um novo eixo embrionrio pelo ndulo de Hensen. (A) O tecido do ndulo de Hensen
removido de um embrio de pato e implantado em um embrio de pinto hospedeiro. (B) Um
tubo neural accessrio induzido no local do enxerto. (De acordo com Waddington, 1933.)
ainda, era que as clulas do lbio dorsal do blastporo podiam interagir com os tecidos do hospedeiro para formar uma placa neural completa a partir do ectoderma do
hospedeiro. Por fim, formou-se um embrio secundrio, face a face com o seu hospedeiro (veja Figura 15.12; Prancha 4). Essas experincias, tecnicamente difceis, foram
repetidas recentemente com marcadores nucleares e os resultados de Spemann e
Mangold foram confirmados (Gimlich e Cook, 1983; Smith e Slack, 1983; Jacobson,
1984; Recanzone e Harris, 1985).* [regul2.html]
Spemann (1938) se referiu s clulas do lbio dorsal do blastporo como o
organizador porque (1) elas induziam os tecidos ventrais do hospedeiro a mudar seus
destinos para formar um tubo neural e tecido mesodrmico dorsal e (2) elas organizavam esses tecidos do doador e do hospedeiro em um embrio secundrio com ntidos
eixos ntero-posterior e dorsoventral. Ele props que durante o desenvolvimento
normal, essas clulas organizariam o ectoderma dorsal em um tubo neural e transformariam o mesoderma dos flancos no eixo do corpo. Sabe-se agora (graas principalmente a Spemann e seus alunos) que a interao entre o cordomesoderma e o ectoderma no suficiente para organizar o embrio completo. Em lugar disso, essa interao inicia uma srie de eventos indutivos seqenciais. O processo pelo qual uma
regio embrionria interage com uma segunda regio para influenciar a sua diferenciao ou comportamento (da segunda regio) chamado de induo. Como existem
numerosas indues durante o desenvolvimento embrionrio, essa induo principal
onde as clulas do lbio do blastporo induzem o eixo dorsal e o tubo neural tradicionalmente chamada de induo embrionria primria.**
Sabemos tambm que o lbio dorsal do blastporo ativo na organizao de
embries secundrios em Amphioxus, ciclstomos e em uma variedade de anfbios.
Em aves e mamferos, o organizador se origina na foice de Koller (margem posterior do
embrio), e o ndulo de Hensen age como o lbio dorsal do blastporo. Clulas
migrando atravs do ndulo de Hensen se tornam o endoderma e o cordomesoderma
da cabea, enquanto que clulas migrando atravs de outras partes da linha primitiva
se tornam clulas mesodrmicas laterais e ventrais. Quando o ndulo de Hensen de
uma gstrula jovem transplantado em um epiblasto de outra gstrula jovem ele induz
a formao de outro eixo secundrio completo (Figura 15.13; Waddington, 1933; Storey
et al., 1992; Khaner, 1995).
*O laboratrios de Spemann e de seus alunos usavam embries de salamandra para seus
experimentos. Foi demonstrado que o ectoderma de r muito mais difcil de ser induzido do que
o desses urodeles.
** Esse termo clssico tem sido uma fonte de confuso, porque a induo do tubo neural pela
notocorda no mais considerada como o primeiro processo indutivo no embrio. Logo discutiremos os eventos indutivos que precedem essa induo primria.
605
606
O centro de Nieuwkoop
Apesar do considervel volume de pesquisa realizada com embries de anfbios,
estamos apenas comeando a conhecer os mecanismos bsicos da induo embrionria primria. Na ltima dcada, numerosos laboratrios focalizaram seus esforos para
explicar a induo embrionria em um anfbio Xenopus laevis e existe um consenso
em relao s linhas gerais da induo embrionria primria nesse organismo.
Os dados indicam uma orquestrao da induo que tem pelo menos quatro
estgios. O primeiro estgio da induo se d na fertilizao. O vulo no fertilizado radialmente simtrico ao redor do eixo animal-vegetal. A entrada do espermatozide quebra essa simetria causando a rotao do citoplasma interno do ovo em
relao ao crtex (veja Captulo 4). Essa assimetria especifica o eixo dorsoventral
pela mistura dos citoplasmas animal e vegetal nas clulas vegetativas que se
formam em oposio ao ponto de entrada do espermatozide. Parece que a mistura
dos citoplasmas ativa determinantes da dorsalizao nessas clulas vegetativas.
Essas clulas vegetativas dorsalizadas so chamadas centro de Nieuwkoop. No
segundo estgio, os descendentes dessas clulas vegetativas induzem as clulas
acima delas a se tornarem o organizador de Spemann-Mangold. As outras clulas
vegetativas induzem as clulas marginais acima delas a se tornarem os mesodermas
lateral e ventral. Portanto, existe uma induo antes da induo primria. No
terceiro estgio, o organizador converte o mesoderma vizinho em mesoderma dorsal, e instrui o ectoderma dorsal a se tornar tecido neural. O quarto estgio envolve a caracterizao regional do tecido neural induzido (crebro anterior, crebro
posterior, medula espinhal, etc.).
Fragmentos de blstula dissecada do
origem a diferentes tecidos em cultura:
Clulas do
hemisfrio
animal
pigmentado
Clulas
equatoriais
Clulas
vegetativas
Ectoderma
Mesoderma
Endoderma
Figura 15.14
ope aos sinais do organizador. Assim, existe evidncia para uma especificao
do mesoderma em trs etapas (Figura 15.17): (1) a induo da atividade do
organizador pelas clulas vegetativas mais dorsais (o centro de Nieuwkoop), (2) a
induo do mesoderma ventral pelas outras clulas vegetativas e (3) a dorsalizao
das clulas marginais laterais adjacentes s clulas marginais dorsais para produzir o mesoderma intermedirio enquanto que outras clulas marginais seguem destinos ventrais. Na dcada passada foram feitas tentativas para identificar as
interaes moleculares que originam essa modelagem mesodrmica.
Organizador
607
Sinais ventrais
(FGF, BMP-4)
Sinais dorsais
(Vg1, Noggin,
activina, Wnt)
Centro de
Nieuwkoop
Figura 15.15
Plo
animal
Plo
vegetal
Figura 15.16
Plo
animal
Camada D
Plo
vegetal
Especificidade regional na induo do mesoderma pela recombinao de clulas do embrio de Xenopus com 32 clulas. As clulas
do plo animal de embries de 32 clulas foram combinadas com blastmeros vegetativos
individuais. As clulas do plo animal foram
marcadas com polmeros fluorescentes para
identificao de seus descendentes. As
indues resultantes dessas recombinaes esto resumidas direita. (De acordo com Dale e
Slack, 1987.)
608
Endoderma
farngeo
Blastocele
Arquntero
Arquntero
Ec
tod
erm
Blastocele
Mesoderma
ventral
Mesoderma
dorsal
Animal
Figura 15.17
Mesoderma
intermediria
Gastrulao
Animal
Mesoderma
ventral
Dorsalizao do
mesoderma ventral
Espermatozide
Mesoderma
dorsal (organizador)
Animal
Animal
Mesoderma
ventral
Clivagem
Vegetal
Centro de Nieuwkoop
Oognese
609
610
(A)
(B)
-catenina ativada
dorsalmente por
rotao cortical
(D)
Traduo,
processamento
e difuso de Vg1
Expresso mxima
de Siamois: centro
de Nieuwkoop
(C)
Figura 15.18
Papel da via das protenas Wnt na especificao do eixo dorsoventral. (A,B) Translocao
diferencial da protena -catenina para os ncleos de blastmeros de Xenopus. (A) Lado dorsal
presuntivo de uma blstula de Xenopus corado para -catenina mostra a localizao do ncleo.
(B) Tal localizao nuclear no vista no lado ventral do mesmo embrio. (C) Formao do
eixo dorsal causado pela injeo de ambos os blastmeros de um embrio de Xenopus de 2
clulas com GSK-3 inativa dominante. O destino dorsal ativamente suprimido pela GSK3 tipo selvagem. (D) Modelo irnico pelo qual o centro de Nieuwkoop (caracterizado pela
expresso do gene Siamois e a habilidade para induzir o mesoderma dorsal) criado pelo
sinergismo da ativao dorsal da -catenina e a ativao vegetal de Vg1. (A e B de Schneider
et al., 1996, fotografias cortesia de P. Hausen; C de Pierce e Kimelman, 1995, fotografia
cortesia de D. Kimelman.)
Primeira, a protena Vg1 pode induzir a formao do mesoderma dorsal nas clulas
acima dela. O mRNA para Vg1 restrito pela massa de vitelo vegetativo durante a
oognese e permanece no hemisfrio vegetal durante a clivagem (Captulos 4 e 12;
Prancha 8). Aps a fertilizao, a protena Vg1 produzida no hemisfrio vegetal da
Controle
611
Vg madura
EF1 (controle)
Actina cardaca
(mesoderma dorsolateral)
Xbra
(mesoderma geral)
(A)
Gsc (mesoderma
dorsal anterior)
Noggin (mesoderma
dorsal anterior)
Xwnt8 (mesoderma
ventrolateral)
NCAM (neural)
(B)
(C)
Figura 15.19
blstula, mas est na forma de um precursor inativo que precisa ser cindido para ser
ativo. A protena Vg1 ativada capaz de (1) induzir o mesoderma dorsal nas clulas do
hemisfrio animal; (2) induzir um eixo embrionrio completo quando microinjetada em
clulas vegetativas ventrais; e (3) recuperar o eixo dorsal em ovos irradiados com luz
UV quando microinjetada nas clulas vegetativas dorsais (Dale et al., 1993; Thomsen
e Melton, 1993; Kessler e Melton, 1995).
Kessler e Melton (1995) mostraram que a protena Vg1 ativada causava a
elongao ativa do mesoderma da notocorda como tambm a ativao dose-dependente dos marcadores mesodrmicos. Quando coroas do plo animal, no estgio de
blstula so colocadas em baixa concentrao de Vg1 processada, a protena Vg1
induz a expresso de genes como Brachyury, que caracteriza o mesoderma geral.
Doses ligeiramente maiores de Vg1 induz a expresso de marcadores mesodrmicos
laterais (Xwnt8 e actina), e em altas concentraes, a Vg1 induz essas clulas a
expressar os marcadores mesodrmicos dorsais goosecoid e noggin (Figura 15.19).
Entretanto, Cui e colaboradores (1996) encontraram que a Vg1, sozinha, no capaz
de causar diferenciao da notocorda in vivo. Para que isso ocorra, as clulas necessitam dos produtos de Vg1 e Wnt. (A via Wnt no foi suficiente para induzir
sozinha o mesoderma dorsal.) possvel que a combinao de Vg1 com algum
produto especificado pelo gene Siamois seja capaz de induzir a especificao do
mesoderma dorsal e sua diferenciao na notocorda*.
A protena Vg1 madura (processada) parece ser crtica para o funcionamento (se
no o estabelecimento) do centro de Nieuwkoop nos anfbios. Vg1 tambm
identificada na regio homloga do embrio de galinha - a zona marginal posterior.
Alm disso, quando a protena Vg1 introduzida experimentalmente em reas laterais
* Alternativamente, isso pode ser outro exemplo do conceito de Spemann (1938) chamado de
dupla certeza. O embrio poderia especificar o mesoderma dorsal pelo sinergismo de Vg1 e catenina (sem um centro de Nieuwkoop). O mesmo resultado poderia ser obtido a partir de um sinal
iniciado pelo gene Siamois do centro de Nieuwkoop abaixo dele. Spemann considerava dupla
certeza em analogia a usar tanto um cinto como suspensrios.
612
do blastoderma do pinto, um novo centro de Nieuwkoop formado e um eixo secundrio induzido (Seleiro et al., 1996).
Induo de especificidade mesodrmica ventral e lateral
At aqui discutimos a induo do mesoderma dorsal pelas clulas vegetativas mais
dorsais. Mas, no s isso. As outras clulas vegetativas so capazes de induzir as
clulas acima delas a se tornarem mesoderma ventral. Experimentos de Smith e seus
colegas (1991) mostraram que na blstula intermediria os blastmeros vegetativos
ventrolaterais e dorsais de Xenopus induzem a expresso do gene Brachyury nas
clulas marginais acima deles. O mRNA de Brachyury codifica um fator de transcrio cuja funo crucial para a formao do mesoderma. Ele expresso antes da actina e outras protenas que so produtos das clulas mesodrmicas, e se o gene
Brachyury expresso em clulas onde o fator de transcrio est normalmente
inativo, aquelas clulas se tornam mesodrmicas (Cunliffe e Smith, 1992). Se o hemisfrio animal contendo as clulas da zona marginal removido do hemisfrio
vegetal na blstula intermediria no se forma o mesoderma no hemisfrio animal.
Entretanto, se clulas vegetativas so adicionadas de volta aos hemisfrios animais, o gene brachyury expresso, e as clulas que o expressam se tornam
mesodrmicas. Desse modo, as clulas vegetativas induzem a expresso de genes
mesodrmicos em clulas da zona marginal. Sem essa interao, as clulas da zona
marginal permanecem ectodrmicas.
FATORES DE CRESCIMENTO FIBROBLSTICO. Existe muito debate sobre a
Figura 15.20
613
614
Tabela 15.3
Protenas nucleares
Protenas secretadas
Lim1
XANF1
Goosecoid
Protenas relacionadas
A HNF3 (p.ex., Forkhead, Pintallavis)
Chordin
Noggin
Follistatin
Sonic hedgehog
Cerberus
Protenas relacionadas Nodal (vrias)
Filandeses (Saxn, 1961; Toivonen et al., 1975; Toivonen e Wartiovaara, 1976). O lbio
dorsal da salamandra aqutica foi colocado em um lado de um filtro suficientemente
fino, de modo que nenhum processo pudesse atravessar os poros, e o ectoderma
competente de gstrula foi colocado no outro lado do filtro. Aps vrias horas, estruturas neurais foram observadas no tecido ectodrmico (Figura 15.21). As identidades
desses fatores difundindo do organizador levaram um quarto de sculo para serem
definidas. Atualmente, vrias dessas molculas esto sendo estudadas: Chordin,
Noggin, Follistatin, Sonic hedgehog e Cerberus.
(A)
(B)
Figura 15.21
(A)
(B)
(C)
Figura 15.22
Localizao do mRNA de chordin. (A) Montagem total da hibridizao in situ mostra que
imediatamente antes da gastrulao, a mensagem chordin expressa na regio que se tornar o
lbio dorsal do blastporo. (B) Quando a gastrulao comea, chordin expresso no lbio dorsal
do blastporo, e (C) visto nos tecidos do organizador. (de Sasai et al., 1994; fotografias cortesia
de E. De Robertis.)
(A)
Animal
Ectoderma
epidrmico
Ectoderma neural
Ventral
Dorsal
MOLCULAS DO ORGANIZADOR:
Chordin, Noggin, Follistatin, Xnr3
Mesoderma
Endoderma dorsal
Vegetal
(B)
Screw
Tolloid
Decapentaplegic
Genes homeobox
no neurais
Chordin
Short gastrulation
Cordados
Drosophila
Figura 15.23
Modelo para a ao do organizador. (A) BMP4 (e outras certas molculas) so poderosos fatores
ventralizantes. Protenas do organizador como Chordin e Noggin podem bloquear a ao de
BMP4. (Follistatin pode inibir a ao de BMP7, que combina com BMP4 para ativ-lo.) Os
efeitos antagnicos dessas protenas podem ser vistos em todas as trs camadas germinativas. (B)
Vias do desenvolvimento homlogo na formao do sistema nervoso central de um vertebrado
(Xenopus) e de um invertebrado (Drosophila). O fator vertebrado est em preto, a protena
homloga da Drosophila em cor. (De acordo com De Robertis e Sasai, 1996; Sasai et al., 1996.)
615
616
Informaes adicionais
&
Especulaes
ECENTEMENTE, os laboratri-
os de De Robertis e Kimelman
mostraram que a reao que
leva formao do tubo neural dorsal no
Xenopus so as mesmas reaes que levam formao do cordo nervoso ventral nos insetos (veja Figura 15.23B;
Holley et al., 1995; Schmidt et al., 1995).
Em Drosophila, o homlogo do gene
bmp4 o decapentaplegic (dpp). Como
discutido no captulo anterior, a protena
Dpp responsvel pela modelagem do
eixo dorsoventral na Drosophila, e est
presente na poro dorsal do embrio e
difunde-se ventralmente. Aqui, ela sofre
a oposio de uma protena chamada
Short-gastrulation (Sog). A Short-gastrulation a homloga de Chordin na Drosophila. Esses homlogos no s se
parecem como tambm podem ser substitudos um pelo outro. Quando o mRNA
NOGGIN. Um dos outros agentes do organizador deve ser o produto do gene noggin.
Smith e Harland (1991, 1992) isolaram esse gene construindo uma biblioteca de cDNAs
de gstrulas dorsalizadas (tratadas com ltio). RNAs sintetizados de conjuntos desses
plasmdeos foram injetados em embries ventralizados produzidos por irradiao com
luz UV. Os conjuntos de plasmdeos cujos RNAs recuperavam o eixo dorsal foram
divididos em conjuntos menores, e assim por diante, at o isolamento de clones nicos cujos mRNAs eram capazes de restaurar o eixo dorsal nesses embries. Um desses clones continha noggin. Smith e Harland (1992) mostraram que mRNA do noggin,
recentemente transcrito, est localizado inicialmente na regio do lbio dorsal do
blastporo e depois expresso na notocorda (Prancha 6). Ainda mais, se o embrio
precoce tratado com cloreto de ltio (LiCl) de modo que o manto mesodrmico inteiro
se torne um tecido organizador semelhante notocorda, ento o mRNA de noggin
encontrado no manto mesodrmico inteiro. Tratamento do embrio precoce com luz
ultravioleta (que impede a formao do lbio dorsal do blastporo) inibe a sntese do
mRNA de noggin. Injeo de mRNA de noggin em embries de uma clula, irradiados
com luz ultravioleta, restaura completamente o eixo dorsal e permite a formao do
embrio completo (Prancha 5). Se muita protena Noggin sintetizada nessa ocasio,
o embrio se torna hiperdorsal, formando somente a regio da cabea (da o nome
noggin). O mRNA para a protena Noggin j est presente no ovo fertilizado, e a
seqncia da protena (como deduzida pelo gene) sugere fortemente que Noggin
uma protena secretada. Parece ento, que Noggin um excelente candidato para
mediar algumas das funes do organizador.
Evidncia recente sugere que a protena Noggin pode realizar duas funes importantes do organizador de Spemann-Mangold: ela induz o tecido neural do ectoderma
dorsal, e dorsaliza as clulas mesodrmicas que, de outra maneira, contribuem para o
mesoderma ventral. Smith e colaboradores (1993) mostraram que a protena Noggin
pode dorsalizar as clulas da zona marginal ventral na gastrulao e reespecificar seu
destino a partir do mesoderma ventral (mesnquima e clulas do sangue) a destinos
mais intermedirios (msculo, corao e rim pronfrico). Quando Smith e colaboradores removeram as zonas marginais ventrais (o mesoderma ventral presuntivo) da gstrula
de Xenopus e as colocaram em um meio contendo a protena Noggin solvel, esses
explantes produziram um mRNA especfico para msculo que normalmente reservado para explantes marginais dorsais. Esses explantes tambm se tornaram alongados
(outra caracterstica do desenvolvimento dorsal). Entretanto, os explantes alongados
no coravam como tecido notocordal. Esses experimentos mostram que a protena
solvel Noggin pode induzir clulas mesodrmicas ventrais da gstrula a se tornarem
msculo (mas no notocorda) e, portanto, ela se assemelha ao sinal do organizador
que dorsaliza o tecido mesodrmico lateral (veja Figura 15.17).
A protena Noggin tambm pode induzir tecido neural no ectoderma da gstrula
sem a presena de qualquer mesoderma dorsal (Lamb et al.,1993). Quando Noggin
adicionada ao ectoderma da gstrula (ou hemisfrio animal pigmentado), as clulas
ectodrmicas so induzidas a expressar marcadores neurais especficos para o crebro
anterior. Alm disso, os produtos gnicos para as clulas do msculo ou da notocorda
no so induzidos pela protena Noggin. Como Noggin uma protena secretada
sintetizada pelos derivados do organizador (o mesoderma da cabea e o
cordomesoderma) durante a gastrulao (quando se d a induo), e desde que ela
inativa a BMP4 (a qual ventraliza o embrio), considera-se que Noggin tem um papel
na dorsalizao do mesoderma e na dorsalizao do ectoderma dorsal.*
FOLLISTATIN. Hemmati-Brivanhou e Melton (1994) demonstraram que a protena
Follistatin, ligante de activina, est presente no lbio dorsal do blastporo e posteriormente se torna restrita notocorda. Embora originalmente se pensasse ligar
somente a activina, agora existe evidncia (Yamashida et al., 1995) que a Follistatin
pode inibir as atividades da BMP7. A BMP7 necessria para a ativao da BMP4,
assim pela inibio da BMP7, a Follistatin pode tambm prevenir a ventralizao do
mesoderma. A Follistatin tambm tem um papel na dorsalizao do ectoderma. Parece que a activina (ou, provavelmente, uma protena semelhante activina, tal como
a BMP7) necessria para a represso da induo neural. Ligando essa protena
Follistatin a inibio liberada e permite que o tecido se torne neural (HemmatiBrivanlou et al., 1994; Hawley et al., 1995).
interessante que Noggin, Chordin e Follistatin so todas inibidoras. Aqui vemos
um princpio que a base de boa parte do desenvolvimento: a ativao freqentemente realizada inibindo um repressor. Isso pode ser explicado pelo fato de que em
cada ncleo a maioria dos genes esto reprimidos. Para ativar um determinado gene,
necessrio um inibidor dessa represso. Analogamente, a inibio freqentemente
realizada pela supresso do inibidor do repressor. (Biologistas do desenvolvimento se
acostumam a falar com negativas duplas e triplas). Nesse caso, o estado default do
ectoderma se tornar neural, a no ser que sofra a ao de BMP4. As protenas do
mesoderma organizador impedem a ao de BMP4 no ectoderma.
*Noggin pode tambm estar funcionando como parte do centro de Nieuwkoop. Um material do
mRNA de noggin traduzido na blstula precoce (Smith e Harland, 1992) e uma investigao
recente (Lustig et al., 1996) mostra que Noggin funciona com um co-fator, Xenopus nodal related1(Xnr-1), para induzir a gstrula precoce. Xnr-1 pode tambm estar envolvido na formao do eixo
esquerdo-direito em Xenopus. Durante a neurulao, ele expresso assimetricamente no mesoderma
da placa lateral, estando presente somente no lado esquerdo do embrio. Esse modelo de expresso
se assemelha aquele dos genes nodal em pintos e camundongos, onde a expresso de nodal crtica
para o estabelecimento do eixo esquerdo-direito (Captulo 16).
617
618
Placa do assoalho
ventral secundrio
Conjunto de neurnios
motores secundrios
Conjunto de neurnios
motores secundrios
Regio do
neurnio
Motor
Notocorda
doadora
Placa do
assoalho ventral
Notocorda
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 15.24
dos eventos indutivos da neurulao. Ela usada para padronizar o tubo neural
recm-formado. Sonic hedgehog expressa na notocorda e a poro aminoterminal
dessa protena secretada (veja Figura 7.11). Se fragmentos da notocorda de um
embrio so transplantados para as laterais de um tubo neural hospedeiro, esse
formar, nas suas laterais, outro conjunto de clulas da placa do assoalho. Se um
pedao da notocorda removido de um embrio, o tubo neural adjacente regio
deletada no tem clulas da placa do assoalho (Figura 15.24; Placzek et al., 1990;
Yamada et al.,1991). Essas clulas da placa do assoalho, uma vez induzidas, induzem
a formao dos neurnios motores em um de seus lados. O mesmo resultado pode
ser obtido se os fragmentos de notocorda so substitudos por aglomerados de
clulas secretando Sonic hedgehog (Echelard et al., 1993; Roelink et al., 1994). A
Sonic hedgehog das clulas da placa do assoalho capaz, em seguida, de polarizar
o tubo neural. Ela induz os neurnios motores nas regies ventrolaterais, e impede
a dorsalizao do tubo neural ventral antagonizando os efeitos de BMP4 originada
na epiderme dorsal* (veja Captulo 7).
CERBERUS. A induo da estruturas mais anteriores da cabea realizada por uma
protena secretada chamada Cerberus. Diferentemente de outras protenas secretadas,
Cerberus promove a formao da glndula do cimento, olhos e placdios olfatrios.
Entretanto, diferente de Noggin e Chordin, a protena Cerberus suprime a formao do
mesoderma dorsal, enquanto induz o mesoderma cardaco e fgado (um derivado
endodrmico do intestino anterior). Quando o mRNA de Cerberus foi injetado no
conjunto de blastmeros vegetativos ventrais (D4) no estgio de 32 clulas, se formaram estruturas ectpicas da cabea (Figura 15.25; Bouwmeester et al., 1996). Essas
estruturas da cabea foram produzidas tanto a partir das clulas injetadas como das
clulas circundantes. O gene cerberus expresso naquelas clulas que lideram o
movimento anterior das clulas em gastrulao para dentro do embrio. Essas so as
clulas do endoderma involutivo (na camada profunda do organizador) que do origem ao intestino anterior e seus derivados, os quais esto sob a cabea. A mensagem
*BMP4 age como um agente ventralizador na formao do tubo neural (impedindo ativamente
sua formao na parte ventral do embrio), mas uma vez que o tubo neural est produzido, a
protena pode agir como um agente dorsalizante, sendo secretada da epiderme superior para dorsalizar
o tubo neural (veja Captulo 7). Um parceiro verstil, ela estimular o desenvolvimento do msculo
no mitomo, padroniza o desenvolvimento do dente, e at destri a rede formada entre nossos
dedos da mo e do p. A BMP4 freqentemente pareada com a Sonic hedgehog na formao dos
primrdios dos rgos.
619
Figura 15.25
620
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 15.26
Habilidade do mRNA de goosecoid para induzir um novo eixo. (A) Na gstrula, o embrio
controle (no injetado ou injetado com mRNA semelhante a goosecoid mas sem o homeobox)
tem um lbio dorsal do blastporo. (B) Um embrio no estgio de 16 clulas cujos blastmeros
vegetativos ventrais foram injetados com a mensagem goosecoid. Note o lbio dorsal do blastporo
secundrio. (C) Superior, duas nurulas injetadas com mRNA de goosecoid, mostrando dois
eixos; inferior, duas nurulas controle. (D) Embrio duplicado produzido pela injeo de goosecoid.
Foram induzidas estruturas completas da cabea. (De acordo com Cho et al., 1991a; Niehrs et al.,
1993; cortesia de E. De Robertis.)
(A)
Xbra
Noggin
Goosecoid
Xnr3
(B)
clulas faz com que a prognie desses blastmeros involuam, sofram extenso convergente e formem o mesoderma dorsal e o endoderma da cabea do eixo secundrio
(Figura 15.26; Niehrs et al., 1993). Alm disso, experimentos com marcao (Niehrs et
al., 1993) mostram que clulas injetadas com goosecoid so tambm capazes de
recrutar para o eixo dorsal clulas vizinhas do hospedeiro. Resumindo, o centro de
Nieuwkoop ativa o gene goosecoid codificando uma protena ligante de DNA que
(1) ativa as propriedades de migrao (involuo e extenso convergente) das clulas do lbio dorsal do blastporo, (2) de forma autnoma, determina os destinos
endodrmico da cabea e mesodrmico dorsal das clulas que o expressam, e (3)
permite s clulas que expressam goosecoid recrutarem clulas vizinhas para dentro
do eixo dorsal. Foi observado que Goosecoid ativa o gene Xotx2 no mesoderma
anterior e no ectoderma presuntivo do crebro (Blitz e Cho, 1995). Xotx2 o homlogo
do gene orthodenticle em Xenopus que essencial para o desenvolvimento do
crebro em moscas e camundongos.
A expresso gnica especfica para o organizador pode ser usada para subdividir o organizador precoce em regies tendo diferentes combinaes dessas mensagens (Figura 15.27; Vodicka e Gerhart, 1995). No comeo da gastrulao, enquanto
as clulas do organizador involuem para o embrio, essas configuraes mudam.
Dentro das clulas profundas, o goosecoid agora visto nas pores mais anteriores (na maior parte construda de clulas C1), especialmente o mesoderma da placa
precordal da cabea. A sobreposio parcial dos genes noggin e Xbra define a
notocorda, e a regio tendo Xbra sem noggin define o domnio destinado a se
tornar o endoderma posterior. Um segundo domnio de expresso de noggin visto
na placa neural anterior. [regul6.html]
Figura 15.27
Estrutura fina do organizador. (A) No comeo da gastrulao, o Xbra est nas clulas mais
animais do organizador, enquanto o noggin est mais vegetal. As clulas vegetativas involuem
primeiro e se localizam mais anteriormente. (B) Os mesmos fatores vistos perto do fim da
gastrulao. As zonas de expresso so mais discretas e menos superpostas, e no h correlao
entre a localizao original das clulas e seu padro de expresso gnica posterior. (De acordo
com Vodicka e Gerhart, 1995.)
Informaes adicionais
&
621
Especulaes
molculas sinalizadoras esteja sendo estabelecida, o mecanismo de suas aes ainda um enigma. provvel que alm de bloquear o
sinal ventralizante (BMP4), o organizador deve tambm ativar as clulas ectodrmicas para se tornarem a placa
neural. Apesar de no se conhecer a(s)
molcula(s) responsvel(s), possvel
que a neuralizao possa se dar pela
combinao de duas reaes separadas:
o aumento do AMP cclico intracelular
nas clulas ectodrmicas e a ativao
622
Figura 15.28
(A)
(B)
Poro do teto do
arquntero transplantado
para gstrula precoce
Animal
resultante
(C)
(D)
Figura 15.29
623
Anterior
Posterior
Figura 15.30
(A)
Medula
ssea
Fgado
Figura 15.31
(B)
Crebro anterior
Olho
Nariz
Equilibrador
Crebro posterior
Vescula do ouvido
Medula espinhal
Notocorda
Somitos
Prnefros
Nadadeira
Fgado
113 casos
Fgado + medula
ssea 66 casos
Medula ssea
34 casos
624
Crebro anterior
Crebro posterior
Medula espinhal
Porcentagem
Figura 15.32
Formao da cabea
anterior (Cerberus)
Anterior
Figura 15.33
O modelo de ativaotransformao na padronizao neural. De acordo com este modelo, a induo neural original (ativao) faz
com que o ectoderma neural seja especificado
como o tipo de clulas neurais mais anteriores.
A caudalizao (transformao) dessas clulas realizada por um gradiente de uma outra
substncia, cuja concentrao a mais alta posteriormente. (De acordo com Doniach, 1995.)
Transformao
posterior
Ativao neural
(Chordin, Noggin,
Follistatin)
Posterior
Transformao posterior
FGF, RA, Wnt?
Ativao:
(Chordin
Noggin
Follistatin
Xnr3)
Posterior
Ativao da cabea
anterior (Cerberus)
Mesoderma dorsal
Anterior
Lbio dorsal do blastporo
Endomesoderma
anterior
Ectoderma
Endoderma
Concentrao de RA
em contato com a
nurula tardia
No tratada
cido
retinico
Controle
rRNA
Glndula do cimento
XCG-1
Glndula do
cimento XAG-1
XA-1 Cabea
XIF-1 Cabea
XIHbox6 Tronco
Sistema neural N-CAM
Xhox36 Cauda
Figura 15.34
cido retinico (RA) causa a posteriorizao de estruturas neurais. (A) Embries em nurula
tardia foram expostos continuamente a diferentes concentraes de cido retinico e seu
crescimento foi permitido at que os controles atingissem o estgio de girinos. (B) Efeito na
expresso do mRNA do marcador neural quando as blstulas so tratadas com 10-6 M de cido
retinico por 2 horas (suficiente para produzir girinos aceflicos). Efeito inibitrio pode ser visto
nos genes expressos mais anteriormente. (A de acordo com Ruiz i Altaba e Jessell, 1991; B de
acordo com Sive et al., 1990.)
625
Embri
Xwnt3a pode caudalizar o tecido neural anterior. Explantes de ectoderma competente ligados ao lbio dorsal do blastporo foram isolados como na Figura 15.30. Os mRNAs especficos expressos foram identificados por PCR
de transcriptase reversa. Nesta figura, os
marcadores neurais expressos mais anteriormente esto localizados mais ao alto. A
superexpresso de Wnt3a no embrio com
Xwnt3a anulou os marcadores neurais mais
anteriores. As regies ectodrmicas de embries no injetados ou aquelas superexpressando uma protena controle (prolactina) no
foram afetadas. (de McGrew et al., 1995; fotografia cortesia de R. T. Moon.)
Figura 15.35
Xwnt3
o
No in
jetad
626
XAG1
Glndula do cimento
XANF2
Glndula pituitria
OtxA
Crebro anterior
En2
Crebro intermedirio
Krox20
Crebro posterior
Xlhbox6
Medula espinhal
NCAM
Neural (geral)
Actina muscular
Mesoderma
Informaes adicionais
&
Especulaes
Figura 15.36
Sinal
planar
Arquntero
Blastocele
Anterior
Lbio dorsal
do blastporo
Posterior
(A)
Plo
animal
627
(B)
Corte
Ventral
Corte
Blastporo
Dorsal
(C)
Embrio controle
(D)
Tecido do explante
Figura 15.37
Padro de expresso dos marcadores neurais induzidos por contato com o lbio dorsal do
blastporo no plano do ectoderma. (A) Seo sagital de gstrula precoce de Xenopus mostrando
onde foram feitos os cortes. (B) Explante demonstrando a polaridade ntero-posterior esperada
pelo mapa de destino: a regio branca a epiderme; a regio pontilhada o neuroectoderma
presuntivo; a regio colorida o mesoderma dorsal; a regio estriada o teto do arquntero. Os
explantes foram colocados sob lamnulas para impedir a migrao do mesoderma. (C) Expresso
dos marcadores neurais no embrio controle, estgio 21. Os genes homeobox engrailed-2 e
XlHbox6 so expressos na borda do crebro do posteriorintermedirio e na medula espinhal,
respectivamente; o gene Krox-20 da protena do dedo de zinco expresso nos rombmeros 3 e 5
do crebro posterior. (D) A mesma ordem de expresso vista no ectoderma daqueles explantes
tendo uma conexo com o lbio dorsal do blastporo. (De acordo com Doniach et al., 1992.)
628
*Apesar das indues que se seguem s indues embrionrias primrias terem, freqentemente, sido chamadas de secundrias, no existe diferena conceitual entre elas. Retornaremos s
indues secundrias no Captulo 17.
629
Mais ainda, uma vez que um tecido foi induzido, ele pode induzir outros tecidos.
Os blastmeros D1 do centro de Nieuwkoop induzem as clulas acima dele a se tornarem o organizador. O organizador ento induz o ectoderma acima dele a se tornar o
tubo neural. O tubo neural pode induzir o ectoderma da cabea a formar o cristalino. E
as indues continuam. Mais ainda, um tecido pode induzir vrios outros. O organizador induz tanto o mesoderma como o ectoderma. A Sonic hedgehog da notocorda no
induz somente a placa do assoalho no tubo neural; originando-se tanto da placa do
assoalho como da notocorda, A Sonic hedgehog induz o somito ventral mediano a se
tornar o esclertomo formador de cartilagem (veja Figura 9.6; Fan e Tessier-Lavigne,
1994; Johnson et al., 1994). Continuaremos nossa discusso de indues secundrias
no Captulo 17.
Estamos finalmente dando nomes aos agentes e fatores solveis dos embriologistas experimentais. Estamos finalmente delineando as vias intercelulares dos fatores parcrinos e fatores de transcrio que constituem os primeiros passos nos processos da organognese. O programa internacional de pesquisa iniciado pelo laboratrio de Spemann na dcada de 1920 est chegando a sua concluso. Mas essa pesquisa encontrou nveis de complexidade muito mais profundos que Spemann teria
concebido, e da mesma forma que seus experimentos nos mostraram o quanto no
sabamos, assim hoje, enfrentamos um novo conjunto de problemas gerados pelas
nossas solues aos problemas mais velhos: Como iniciado o centro de Nieuwkoop?
Qual a atividade de Siamois? Como o mesoderma se torna padronizado? Como so
limitados os sinais da notocorda? Como a notocorda se diferencia? Como o ectoderma
adquire sua competncia?
Analisando o campo em 1927, Spemann observou:
Ns ainda estamos em presena de enigmas, mas no sem a esperana de os
resolver. E enigmas com esperana de soluo - o que mais um cientista poderia
desejar?
O desafio ainda permanece.
LITERATURA CITADA
Allen, G. E. 1985. Thomas Hunt Morgan:
Materialism and reductionism in the development of modern genetics. Trends Genet. 3: 151154; 186-190.
Appel, T. A. 1987. The Cuvier-Geoffroy Debate: French Biology in the Decades before
Darwin. Oxford University Press, NY.
Cornell, R. A. and Kimelman, D. 1994. Ac-tivinmediated mesoderm induction requires FGF. Development 120: 453-462.
630
Kageura, H. and Yamana, J. 1986. Pattern formation in 8-cell composite embryos of Xenopus
laevis. J. Embryol. Exp. Morphol. 91: 79-100.
631
632
Roux, W. 1888. Contributions to the developmental mechanics of the embryo. On the artificial
production of half-embryos by destruction of one
of the first two blastomeres and the later development (postgeneration) of the missing half of the
body. In B. H. Willier and J. M. Oppenheimer
(eds.), 1974, Foundations of Experimental
Embryology. Hafner, New York, pp. 2-37.
Spemann, H. 1927. Neue Arbieten ber Organisatoren in der tierischen Entwicklung. Naturwissenschaften 15: 946-951.
633
635
16
635
636
Figura 16.1
Redistribuio citoplasmtica
ativa localmente os
determinantes maternos
Distribuio de
determinantes ativados
na blstula tardia
Anfbio
Dorsal
Telesteo
Dorsal
Clula
do vitelo
Ave
Vitelo
(Openheimer, 1936; Tung et al., 1945; Grunwald e Wilson, 1996) que o futuro lado
dorsal da clula vitelnica age como um centro de Nieuwkoop, transferindo fatores
maternos para o blastoderma (Figura 16.1). Nos embries de aves (e presumivelmente
tambm em mamferos) a zona marginal posterior (PMZ) pode ser equivalente ao centro de Nieuwkoop (Eyal-Giladi e Khaner, 1989; Khaner e Eyal-Giladi, 1989). Experimentos de transplante demonstraram que esse o local onde as clulas se renem para
formar a linha primitiva. Pensou-se que o hipoblasto tinha habilidade indutora de
eixos, mas estudos recentes (Khaner, 1995) sugerem que essa capacidade reside somente na PMZ. O hipoblasto parece apenas dirigir os movimentos subseqentes da
linha. A identificao da zona marginal posterior do pinto com o centro de Nieuwkoop
reforada pela descoberta de que o homlogo Vg1 do pinto transcrito nessa
regio. Alm disso, quando clulas cultivadas secretando a protena Vg1 madura
(processada) do pinto so colocadas ao longo das bordas laterais do blastoderma,
elas induzem a formao de novas linhas primitivas (Seleiro et al., 1996). Tal como o
centro Nieuwkoop de anfbios, a futura posio da PMZ fixada pouco depois da
fecundao e depende da gravidade e rotao.
ecidos Organizadores
Expresso Gnica em T
Tecidos
Conforme mencionado no Captulo 6, o homlogo mamfero do lbio dorsal do
blastporo dos anfbios o seu ndulo no terminal anterior da linha primitiva. Em
aves, esse chamado ndulo de Hensen, e em mamferos (apesar de ter sido primeiro
descrito por Hensen em coelhos), essa estrutura freqentemente chamada apenas
de ndulo. A linha primitiva porta-se como os lbios laterais do blastporo. O ndulo
contm muitas das mesmas protenas encontradas no organizador da r, incluindo
Goosecoid, Nodal, Lim-1 e HNF3. O gene nodal essencial para a iniciao da linha
primitiva e para sua contnua manuteno. Sua expresso primeiro vista na margem
ventral (onde comea a gastrulao). Em seguida, a protena Nodal vista na regio
mais anterior da linha (Figura 16.2; Conlon et al., 1994). Quando esse gene deletado,
o embrio em desenvolvimento tem uma linha defeituosa e no pode gastrular. Mais
tardiamente na gastrulao (como veremos), a expresso do gene nodal importante
na formao do eixo esquerdo-direito do embrio.
637
Figura 16.2
638
639
Figura 16.3
(A)
HOM-C de
Drosophila
Hox-A
Camundongo
Subgrupos
Parlogos
3 Anterior
Crebro posterior
Tronco
Precoce
Posterior
Tardio
Fraca resposta de
cido retinico
Forte resposta de
cido retinico
(B)
Drosophila
Camundongo
Medula
Tor
cica
Lo
mb
ar
Cervical
espinhal
Crebro
intermedirio
Crebro
anterior
Crebro
posterior
640
(A)
(B)
Arcos viscerais
Ectoderma
superficial
Mesnquima
do arco
Sistema nervoso
Gnglios
craniais
Tubo
neural
Rombmero 2
Arco
branquial 1
Arco
Branquial 2
Figura 16.4
Arco
Branquial 3
Arco
Branquial 4
Medula
espinhal
rombmero. Os genes Hox, mais 5 so encontrados somente nas regies posteriores do tubo neural, onde formam tambm um conjunto aninhado. Os genes
mais 5 tm limites de expresso mais posteriores que os genes menos 5. Quando
as clulas da crista neural entram em contato com o ectoderma superficial levam as
clulas ectodrmicas a expressarem o mesmo conjunto de genes Hox (Figura 16.4
A; Hunt et al., 1991b).
Alguns dos genes Hox de mamferos so to semelhantes a seus homlogos de
Drosophila, que eles podem substituir um ao outro. O gene do camundongo Hox-6
pode realizar algumas das funes reguladoras do gene Antennapedia da Drosophila
quando o gene murino transfectado para a Drosophila. O gene humano HOXD-4
tambm pode executar algumas das funes do seu homlogo da Drosophila,
Deformed (Malicki et al., 1990; McGinnis et al., 1990). Alm disso, a regio intensificadora do gene Deformed da Drosophila (um gene especificando a expresso gnica
especfica da cabea em Drosophila) pode causar expresso gnica no crebro posterior do camundongo; e as seqncias reguladoras do homlogo humano de Deformed
fornecem expresso gnica especfica da cabea em embries de Drosophila
(Awgulewitsch e Jacobs, 1992; Malicki et al., 1992).
Um padro semelhante da expresso gnica de Hox parece existir tambm dentro
do tronco. Aqui os padres da expresso gnica correspondem a limiares somticos
(em lugar de rombomricos) (Kessel e Gruss, 1991), e alguns genes parlogos so
expressos em limiares somticos ligeiramente diferentes (Figura 16.5).
Anlise Experimental de um Cdigo Hox: Gene Alvo
Os padres de expresso dos genes Hox murinos sugerem um cdigo pelo qual certas
combinaes de genes Hox especificam uma determinada regio do eixo ntero-posterior (Hunt e Krumlauf, 1991). Conjuntos particulares de genes parlogos fornecem
identidade segmentria ao longo do eixo ntero-posterior do corpo. A evidncia para
tal cdigo vem de trs fontes:
Vrtebras
occipitais
Vrtebras
cervicais
Vrtebras
torcicas
Vrtebras
lombares
Vrtebras
sacrais
641
Vrtebras
caudais
Figura 16.5
642
Figura 16.6
Mutante
Tipo selvagem
Outro experimento de alvejar genes eliminou o gene Hoxa-1 (Lufkin et al., 1991). A
expresso de Hoxa-1 se sobrepe ao gene Hoxa3, mas tambm expressa mais
anteriormente que Hoxa-3. Esses embries sem genes Hoxa-1 funcionais mostram
uma constelao de anormalidades que indicam especificao deficiente dos
rombmeros 4-7. Esses mutantes freqentemente deixam de fechar seus tubos neurais,
no tm estruturas do ouvido interno, e no tm os gnglios do crebro posterior (que
formam os nervos acstico, glossofarngeo e vago), derivados desses rombmeros.
No entanto, no foram encontradas malformaes dos arcos farngeos, glndulas
tireide, paratireide e timo, ou cartilagem do pescoo. Assim, defeitos dos mutantes
Hoxa-1 somente so vistos na regio anterior da rea de expresso desse gene. (
possvel que suas funes no sejam requeridas ou sejam redundantes na poro
posterior a seu alcance.) Ao contrrio dos defeitos (que se limitam crista neural) de
camundongos Hox3 deficientes, os defeitos de Hox-1 so notados no sistema nervoso central e no tecido derivado do placdio, assim como no mesoderma paraxial. A
eliminao de Hoxa-2 tambm produz camundongos cujas clulas da crista neural
foram re-especificadas. Elementos cranianos normalmente formados pelas clulas da
crista neural do segundo arco branquial (estribo, ossos estilides) esto faltando e
so substitudos pela duplicao de estruturas do primeiro arco branquial (bigorna,
martelo, etc.) (Gendron-Maguire et al., 1993; Rijli et al., 1993). Assim, sem certos genes
Hox, alguns rgos regionalmente especficos ao longo do eixo ntero-posterior deixam de se formar ou so re-especificados para outras regies. A evidncia inicial apia
a noo que diferentes conjuntos de genes Hox so necessrios para a especificao
completa de toda regio do eixo e que um conjunto de genes parlogos pode ser
responsvel por diferentes subconjuntos de rgos nessas regies.
Transformao Parcial de Segmentos por
Eliminao de Genes Hox Expressos no Tronco
Se os genes Hox realmente formam um cdigo que especifica o eixo ntero-posterior,
poder-seia esperar que a alterao da constelao de genes Hox expressos em qualquer regio particular do embrio poderia alterar uma estrutura em outra ao longo do
eixo ntero-posterior. Isso mostrou ser o caso quando o gene Hoxc-8 deletado do
embrio por mira ao gene alvo (Le Mouellic et al., 1992). Nesses camundongos, vrios
segmentos esquelticos axiais parecem mais com segmentos anteriores, de tipo muito
semelhante ao que se v em mutaes hometicas de perda-de-funo em Drosophila. Como pode ser visto na Figura 16.7, nesse camundongo a primeira vrtebra lombar
formou uma costela algo caraterstico das vrtebras anteriores ela. A eliminao do
gene Hoxb-4 converte parcialmente a segunda vrtebra cervical (a vrtebra axial) em
(A)
(B)
uma cpia da primeira vrtebra cervical (o atlas), e a deleo do gene Hoxa-5 causa a
transformao posterior da stima vrtebra cervical (pescoo) em uma vrtebra torcica
formadora de costela (Jeannotte et al., 1993; Ramirez-Solis et al., 1993).
Pode-se conseguir severas transformaes axiais eliminando dois ou mais genes do
conjunto parlogo. Camundongos homozigotos para a deleo de Hoxd-3 tm anormalidades moderadas da juno crnio-cervical (o atlas est reduzido em tamanho), enquanto camundongos homozigotos para a deleo de Hoxa-3 no tm anormalidades
nessa juno (veja a discusso anterior sobre esse mutante). Quando os dois mutantes
so criados juntos, ambos conjuntos de problemas ficam mais severos. Os camundongos sem conjuntos de genes Hoxa-3 nem Hoxd-3 no tm osso atlas algum, e as cartilagens hiide e tireide so de tamanho to reduzido que h buracos no esqueleto (Condie
e Capecchi, 1994). Parece que ocorrem interaes sinrgicas entre os produtos dos
genes Hox e que para algumas funes, um dos parlogos pode substituir ao outro.
A regulao dos genes Hox de vertebrados parece ser controlada por fatores
semelhantes aqueles que regulam os genes HOM-C em moscas. Em Drosophila, h
um gene homeobox, caudal, que reside externamente ao complexo HOM-C. Esse gene
de efeito materno em Drosophila funciona para co-direcionar a expresso dos genes
HOM-C mais posteriores (AbdB). Um homlogo mamfero desse gene, Cdx1, tem um
papel semelhante no mesoderma paraxial. Ele torna-se expresso na linha primitiva
durante a gastrulao, quando a especificao do eixo ntero-posterior est sendo
feita; e desligado pouco depois. Se esse gene for deletado do embrio do camundongo, os padres de expresso dos genes Hox mudam posteriormente para um somito, e
estruturas esquelticas anteriores so encontradas mais posteriormente (Subramanian
et al., 1995). De maneira semelhante, a represso de genes Hom-C de Drosophila
mediada por um conjunto de genes que inclui extra sex combs (esc). Se o homlogo
murino desse gene (embryonic ectoderm development; eed) desempenhar o mesmo
papel, poder-se-ia esperar que mutaes em eed resultassem na anti-depresso de
genes Hox e na transformao hometica de estruturas anteriores em posteriores.
Isso realmente acontece. Genes eed mutantes causam a transformao de estruturas
esquelticas anteriores em posteriores (Schumacher et al., 1996).
Anlise Experimental do Cdigo Hox:
etinico
Teratognese do cido R
Retinico
Tais alteraes hometicas tambm podem ser vistas quando a embries de camundongos so administradas doses teratognicas de cido retinico. O cido retinico
exgeno dado a embries in utero pode fazer com que certos genes Hox sejam expres-
643
(C)
Figura 16.7.
644
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 16.8
(A)
Figura 16.9
(B)
(C)
Figura 16.10
O cido retinico media a transformao hometica em regies do crebro posterior. Em embries de camundongo no tratados, no dia 8.5, a expresso de Hoxb-1 se limita ao rombmero
r4. Quando expostos ao cido retinico nesse momento, a expresso de Hoxb-1 se expande
anteriormente em direo ao crebro intermedirio. Aps 2 dias, em embries normais Hoxb-1
expresso nas clulas descendentes do rombmero r4 e em clulas da linha mediana de r5, que
geram o nervo motor facial (mnVII). Em embries tratados com cido retinico, o padro normal
de r4/5 foi duplicado em r2/3. A expresso da crista neural de Hoxb-2 tambm est duplicada, e
um segundo nervo motor facial formado. Isso sugere que o cido retinico media a transformao hometica de r2/3 em r4/5. (Segundo Krumlauf, 1993.)
645
Dia 8.5
Controle
+ cido retinico
Crebro
intermedirio
Crebro
Posterior
vrtebra lombar. Quando genes Hox posteriores no foram expressos, a parte caudal
do embrio deixou de se formar. *
No sistema nervoso central, o cido retinico induz a expresso anterior dos genes
hox que usualmente so somente expressos mais posteriormente, e fazem com que os
rombmeros 2 e 3 assumam a identidade dos rombmeros 4 e 5 (Figura 16.10; Marshall
et al., 1992; Kessel, 1993). Nessa situao, o nervo trigmeo (que se origina do
rombmero 2) transformado em outro nervo facial (caracterstico do rombmero 4), e
anormalidades do primeiro arco branquial indicam que as clulas da crista neural do
segundo e terceiro rombmeros foram transformadas em fentipos mais posteriores.
O cido retinico provavelmente desempenha um papel na especificao axial
durante o desenvolvimento normal, e a fonte desse cido provavelmente o ndulo
de Hensen (Hogan, 1992; Maden et al., 1996). Desde que o ndulo precoce parece
conter os precursores tanto de estruturas anteriores como posteriores, possvel
que a especificao dessas clulas dependa da quantidade de tempo despendido no
meio de alta concentrao de cido retinico no ndulo. Quanto mais tempo for
despendido no ndulo, mais posterior ser a especificao. Isso visto ocorrer em
cultura, quando clulas embrionrias de carcinoma expressam mais genes Hox posteriores quanto maior for o tempo de sua exposio ao cido retinico (Simeone et
al., 1990). Alm disso, Hoxa-1, Hoxb-1 e Hoxd-4 tem, cada um, elementos sensveis
ao cido retinico nas regies reguladoras a montante (veja Captulo 21). A administrao de cido retinico exgeno iria mimetizar a situao normalmente encontrada
somente pelas clulas posteriores. Avantaggiato e colegas (1996) mostraram que
quando o cido retinico dado a embries durante os estgios de meia-linha, as
regies mais anteriores do tubo neural no se formam e so substitudas por tecido
parecendo o crebro anterior. Isso se correlaciona com uma perda de expresso
gnica (Emx1, Emx2) do crebro anterior e mdio nessa regio, e sua substituio
por genes Hox especficos para o crebro posterior como Hoxb-1. A evidncia aponta
para um cdigo Hox enquanto constelaes diferentes de genes Hox especificam as
caractersticas regionais ao longo do eixo ntero-posterior. Alm disso, como esses
padres de expresso so semelhantes para mamferos e insetos, parece que existe
um plano de desenvolvimento comum sobre o qual construdo o eixo nteroposterior da maioria dos animais.
Evidncia para um Cdigo Hox da Anatomia Comparada
Um novo tipo de embriologia comparada est atualmente emergindo. Gaunt (1994) e
Burke e seus colaboradores (1995) compararam as vrtebras do camundongo e do
pinto. Embora ambos tenham um nmero semelhante de vrtebras, elas distribuemnas diferentemente. Camundongos (como todos os mamferos, sejam elas girafas ou
baleias) tm somente 7 vrtebras cervicais (pescoo). Essas so seguidas por 13
*Hoxa-10 tambm importante para a especificao do padro axial dos dutos genitais.
Eliminaes de Hoxa-10 criam camundongos cuja regio uterina superior transformada em tecido
parecendo o oviduto. Essa regio coincide com o limite anterior da expresso de Hoxa-10 no duto
Mlleriano tipo selvagem (Benson et al., 1996).
Medula
Espinhal
Dia 10.5
Vescula
tica
Expresso de hoxb-1
Expresso de Krox-20
Expresso hoxb-2
da crista neural
646
Figura 16.11
Cervical
Torcico
Lombar
Sacral Coccgeas
Pinto
Vrtebras
Somitos
Vrtebras
Camundongo
Cervical
Occipital
Cervical
Torcico
Torcico
Lombar
Lombar
Sacral
Sacral
Caudal
Caudal
Transicional
Informaes adicionais
&
Especulaes
mesmas leis, enquanto a embriologia tradicionalmente via cada espcie se desenvolvendo de uma maneira diferente.
Recentemente, porm, a embriologia
est fornecendo evidncia para a unidade
subjacente da natureza animal. Jonathan
Slack e seus colegas (1993) definiram um
animal como um organismo que exibe um
particular padro espacial de expresso do
gene Hox. eles propem que o plano corporal de cada filo tipificado em um particular estgio filotpico durante seu desenvolvimento. Para vertebrados, isso seria o estgio do broto caudal (onde, apesar
de suas diferentes clivagens e gastrulaes,
os embries de vertebrados convergem e
tm brotos caudais e bolsas farngeas); para
insetos, a banda germinativa completamente segmentada o local onde os embries
convergem. Nesse estgio, o padro de
expresso gnica hometica dos genes
Hox/HOM-C visto mais claramente, sendo notavelmente semelhante em todos animais. Os genes parecendo com Deformed
e labial so expressos no anterior do embrio; aqueles parecendo com Abdominal
B so expressos no posterior. Mesmo
nematides e hidras tm agregados de
genes hometicos que parecem ser expressos da mesma maneira ntero-posterior
(Schummer et al., 1992; Wang et al., 1993).
Embora fungos e plantas tenham genes
homeobox, esses no so homlogos com
aqueles dos animais, nem esto arranjados
na mesma ordem cromossmica, nem esto expressos pelo mesmo padro nteroposterior. Assim, o padro espacial da expresso do gene Hox est sendo usado
como a caracterstica subjacente primria
definindo a existncia animal. Essa observao ainda no foi testada em vrios filos,
e ser muito interessante ver se esse padro geral visto em todo o reino animal.
Drosophila
647
Camundongo
Crebro
anterior
Crebro
intermedirio
Crebro
posterior
r1-r8
Medula
espinhal
Figura 16.12
*Alm de expressar os homlogos dos genes contendo homeobox ems e otd, o crebro de
mamfero tambm expressa o homlogo do gene tailess. Esse gene expresso nas pores mais
anteriores e posteriores do embrio de Drosophila, e um membro da famlia dos receptores
esterides (Monaghan et al., 1995).
648
(A)
(B)
(C)
Figura 16.13
*Esse gene foi descoberto acidentalmente quando Yokoyama e colegas (1993) produziram
camundongos transgnicos com o transgene (para a enzima tirosinase) inserido aleatoriamente
no genoma. Em um caso, esse gene se inseriu em uma regio do cromossomo 4, eliminando o
gene existente.
Figura 16.14
(A) ESQUERDO
Caminho para a assimetria esquerda-direita no embrio do pinto. (A) Topo: padro de expresso
de genes sonic hedgehog, activin receptor IIa e cNR-1, em relao ao ndulo de Hensen. O
receptor de activina o primeiro, seguido por sonic hedgehog e por ltimo por cNR-1. Base:
Aps um dia, a assimetria vista no lao do lado direito do corao. O caminho hipottico entre
esses genes mostrado abaixo deles. (B,C) Vistas dorsal e em aproximao da hibridizao in
situ do mRNA sonic hedgehog. (D,E) Vistas dorsal e em aproximao da mensagem de activin
receptor IIa. (A segundo Roush, 1995, e Wolpert e Brown, 1995; B-E de Levin,et al., 1995,
cortesia de C. Tabin e C. Stern.)
649
DIREITO
12-13 horas
sonic hedgehog
cNR-1
(nodal)
Notocorda
Receptor IIa
da activina
Ndulo de
Hensen
(A)
(C)
(D)
Linha primitiva
(E)
sonic hedgehog
isso iria bloquear a transcrio no lado direito do ndulo. Sonic hedgehog seria
assim somente expresso no lado esquerdo do ndulo. A protena Sonic hedgehog
seria ento secretada no lado esquerdo do embrio ativando o gene nodal no
mesoderma da placa lateral que contm os precursores do corao. A, poderiam
causar acmulo da protena flectina no lado esquerdo da matriz extracelular. Experimentos sugerem que esse caminho uma boa aproximao. A activina realmente sintetizada no momento apropriado e somente do lado direito do ndulo de
Hensen. Se bloqueada pela adio experimental de Follistatin, a assimetria da
expresso de sonic hedgehog desaparece, e o corao tem uma chance igual de
voltar-se para qualquer dos lados (Levin et al., 1997). Quando gotas impregnadas
com activina foram colocadas no lado esquerdo do ndulo de Hensen, induziram
a sntese de cActRIIa nesse lado, e o gene shh (usualmente expresso somente do
lado esquerdo) foi reprimido. Isso, por sua vez, suprimiu a transcrio de nodal.
Nessa situao, o tubo cardaco se formou aleatoriamente, tendo uma probabilidade igual de ir para a esquerda ou para a direita. Uma condio semelhante foi
produzida quando clulas secretando Sonic hedgehog foram implantadas no lado
direito do ndulo. Nesse caso, Nodal foi induzida simetricamente no mesoderma
da placa lateral, e o corao teve 50 porcento de chance de ter um tubo esquerda
(Figura 16.15). A formao do eixo esquerdo-direito no camundongo tambm parece usar receptores de activina e protena nodal, porm no parece ligar os dois
atravs de Sonic hedgehog (Collignon et al., 1996). O pinto e o camundongo
parecem ter variaes sutis sobre como construir seus eixos. [mamaxis2.html]
Vrios caminhos diferentes teratognese, eliminao de genes, estudos de genes
organizadores especficos, gentica clnica, at mesmo gentica da mosca das frutas
esto nos conduzindo compreenso de um mistrio fundamental: como o embrio
vertebrado comea a saber distinguir o lado de cima do lado de baixo, a boca do nus,
e a esquerda da direita. Aprendemos mais sobre isso nos ltimos cinco anos do que
em todos os anos que os precederam.
Sonic
hedgehog
Activina
cNR-1 no
mesoderma
da placa lateral
Receptor
IIa da
activina
Tubo cardaco
40-45 horas
650
(A)
Notocorda
Ndulo de Hensen
(B)
Pastilha de
Sonic hedgehog
Figura 16.15
Expresso ectpica de sonic hedgehog leva expresso simtrica de cNR-1 (nodal) e aleatorizao
do volteamento cardaco. (A) Expresso tipo selvagem de cNR-1, mostrando expresso no lado
esquerdo. Quase todos os coraes desenvolvem voltas do lado direito. Esse padro tambm
visto quando pastilhas contendo substncias controles so implantadas no lado direito do ndulo
ou quando uma pastilha contendo Sonic-hedgehog implantada no lado esquerdo (onde shh em
geral expresso). (B) Quando pastilhas de Sonic hedgehog so implantadas no lado direito do
ndulo, a expresso de cNR-1 se torna bilateralmente simtrica. (de Levin et al., 1995; fotografias
cortesia dos autores.)
LITERATURA CITADA
Acampora, D., Mazan, S., Lallemand, Y.,
Avantaggiato, V., Maury, M., Simeone, A. and
Brulet, P. 1995. Forebrain and midbrain regions
are deleted in Otx2-/- mutants due to a defective
anterior neuroectoderm specification during gastrulation. Development 121: 3279-3290.
Ang, S. L. and Rossant, J. 1994. HNF-3Fb is
essential for node and notochord formation in
mouse development. Cell 78: 561-574.
Ang, S. L., Jin, O., Rhinn, M., Daigle, N.,
Stevenson, L. and Rossant, J. 1995. A targeted
mouse otx2 mutation leads to severe defects in
gastrulation and formation of axial mesoderm
and to deletion of rostral brain. Development
122: 243-252.
Appel, T. A. 1987. The Cuvier-Geoffroy Debate: French Biology in the Decades before Darwin.
Oxford University Press, New York.
Avantaggiato, V. Acampora, D., Tuorto, F. and
Simeone, A. 1996. Retinoic acid induces
stagespecific repatterning of the rostral central
nervous system. Dev. Biol. 175: 347-357.
651
652
Simeone, A., Gulisano, M., Acampora, Stornaiuolo, A., Rambaldi, M. and Boncinelli, E.
1992. Two vertebrate homeobox genes related
to Drosophila empty spiracles are expressed in
the embryonic cerebral cortex. EMBO J.
11:2541-2550.
Interaes Celulares
Durante a Formao do rgo
17 Interaes proximais de tecidos: Induo secundria
18 Desenvolvimento do membro de tetrpode
655
701
773
805
843
883
733
655
17
RGOS SO ESTRUTURAS COMPLEXAS compostas de numerosos tipos de tecidos. No olho do vertebrado, por exemplo, a luz transmitida
atravs do tecido corneano transparente e focalizada pelo tecido do cristalino (cujo dimetro controlado pelo tecido muscular), para finalmente atingir o
tecido neural da retina. O arranjo preciso dos tecidos nesse rgo no pode ser
alterado sem lesar a sua funo. Tal coordenao na construo dos rgos
conseguida por um grupo de clulas modificando o comportamento de um conjunto
adjacente de clulas, desse modo, fazendo com que elas mudem sua forma, velocidade mittica ou diferenciao. Essa ao queima-roupa, s vezes chamada interao proximal ou induo secundria, permite a um grupo de clulas responder a um
segundo grupo de clulas, em modificao, tornando-se freqentemente capazes de
alterar um terceiro conjunto de clulas.
Howard Holtzer (1968) distinguiu dois modos principais de interao entre tecidos
proximais. Na interao instrutiva, um sinal da clula indutora necessrio para
iniciar nova expresso gnica na clula responsiva. Sem a clula indutora, a clula
responsiva no seria capaz de se diferenciar de uma maneira particular. Por exemplo,
no Captulo 15 discutimos a capacidade da notocorda induzir a formao de clulas
da placa do assoalho no tubo neural. Todas as clulas do tubo neural so capazes
de responder ao sinal da notocorda, porm, somente aquelas mais prximas da
notocorda so induzidas. As outras clulas no se tornam clulas da placa do
assoalho. Ainda mais, se removermos a notocorda do embrio, as clulas que normalmente se tornariam clulas da placa do assoalho no se diferenciaro nesse tipo
de clula, e se adicionarmos uma notocorda lateralmente placa neural, essa nova
notocorda ir induzir um conjunto secundrio de clulas da placa do assoalho. As
clulas responsivas do tubo neural seriam, de alguma maneira, comandadas a expressar um conjunto de genes diferentes do conjunto de genes que expressariam, se
no tivessem estado em contato com a notocorda. A notocorda considerada ser
um tecido indutor que age instrutivamente. Wessell (1977) props quatro princpios
gerais caractersticos da maioria das interaes instrutivas:
655
656
Competncia e receptores
Deve-se notar que nos princpios acima, o tecido responsivo deve ser competente
para responder. Competncia a capacidade de responder a um sinal indutivo
(Waddington, 1940). Isso no um estado passivo, mas uma condio adquirida.
Quando detalhamos a induo do tubo neural, observamos que o ectoderma da
gstrula capaz de ser induzido pelo lbio dorsal do blastporo ou seus derivados
mesodrmicos. Assim, o ectoderma da gstrula dito ser competente para responder a estmulos indutivos. Essa competncia para a induo neural adquirida durante a clivagem tardia e perdida durante os estgios tardios da gstrula. medida
que essa competncia para responder induo pelo lbio dorsal diminui, algumas
regies do ectoderma adquirem competncia para responder a indutores do cristalino. Mais tarde ainda, a competncia dos indutores do cristalino perdida, mas o
ectoderma pode responder a indutores do placdio do ouvido (Serventnick e
Grainger, 1991). Portanto, a prpria competncia um fentipo diferenciado que
distingue clulas tanto espacial como temporalmente.
Considera-se, em geral, que a competncia pode ser adquirida de vrias maneiras.
Primeiro, uma clula pode tornar-se competente sintetizando um receptor para a molcula indutora. Como veremos mais adiante neste captulo, uma clula B no competente para responder induo por clulas T at que tenha ligado antgenos. Quando
os antgenos so ligados, eles criam um conjunto de receptores que os capacitam a
responder s molculas indutoras secretadas pelas clulas T. Esse mecanismo de
competncia tambm visto na induo da diferenciao de neurnios simpticos
(Birren e Anderson, 1990; Cattanco e McKay, 1990). Desde o incio da dcada de 1960,
era conhecido que a diferenciao dos neurnios simpticos depende do fator de
crescimento nervoso (NGF); porm, quando as clulas progenitoras desses neurnios
foram isoladas, elas no responderam ao NGF. Alm disso, no tinham receptores
capazes de ligar NGF. Em vez disso, para se diferenciarem, essas clulas tinham que ser
primeiro expostas ao fator de crescimento de fibroblasto (FGF). Essa exposio resultava na expresso de NGF nas suas membranas celulares. Tais clulas tratadas por
FGF podiam responder ao NGF (Figura 17.1). A clula progenitora original no era
competente para ser induzida pelo NGF porque no tinha o receptor NGF. Quando
esse foi induzido pelo FGF, tornou-se competente para responder ao NGF.
* fcil distinguir as relaes permissivas e instrutivas por uma analogia com uma situao mais
familiar. Este livro foi possvel ser feito pelas interaes permissivas e instrutivas. Os revisores
podem convencer-me a alterar o material no captulo. Isso uma interao instrutiva, j que a
informao passar a ser diferente daquela que teria sido. Porm, a informao no livro no poderia
ter sido expressa sem as interaes permissivas com o editor e o impressor.
Receptor NGF
Ligao de NGF sinaliza a clula
para se diferenciar em um
neurnio simptico maduro
Neurnio
simptico maduro
Figura 17.1
Em segundo lugar, uma clula pode alcanar a competncia sintetizando uma molcula que permite o funcionamento do receptor. Receptores podem ligar o indutor,
mas isso no significa que os receptores sejam funcionais. Freqentemente, um receptor atua enviando um sinal para o ncleo. Como vimos no Captulo 3, uma vez que o
receptor tenha fixado um ligante, ele ativa enzimas que fabricam o sinal para diviso ou
diferenciao. Se alguma dessas enzimas no estiver presente, o sinal no transmitido. Assim, uma clula pode alcanar competncia sintetizando um elo faltante na
trajetria da sinalizao.
Em terceiro lugar, a competncia pode ser adquirida pela represso de um inibidor.
Se o inibidor estiver presente, uma clula poder ligar o indutor, enviar o sinal para o
ncleo e, apesar disso, no ser capaz de ser induzida. Por exemplo, os indutores
freqentemente causam alteraes da forma celular (como na induo do tubo neural).
Se a clula estiver inibida de mudar sua forma, ela no ser capaz de responder.
Fatores parcrinos
Interaes proximais so em geral mediadas por protenas que podem difundir-se ao
longo de curtas distncias para induzir mudanas em suas clulas vizinhas. Essas
protenas so muitas vezes chamadas de fatores parcrinos ou fatores de diferenciao
657
658
*Os fisiologistas descreveram trs maneiras principais pelas quais molculas solveis efetuam
mudanas em clulas. Os fatores parcrinos so molculas solveis que efetuam mudanas nas
clulas adjacentes, ou prximas, clula secretora. Em embriologia, tais fatores tm tambm sido
chamados de morfgenos. Os fatores endcrinos (hormnios) so molculas solveis que viajam
pelo sangue para realizar mudanas em clulas distantes da clula secretora. Os fatores autcrinos
so molculas que efetuam mudanas nas clulas que os secretaram. Para que os efeitos autcrinos
ocorram, a clula sintetiza uma molcula para qual ela tenha seu receptor prprio. Embora a
estimulao autcrina no seja comum, ela vista em clulas citotrofoblsticas placentrias que
sintetizam e secretam o fator de crescimento derivado das plaquetas, cujo receptor est na membrana celular daquelas clulas (Goustin et al., 1985). O resultado a proliferao explosiva daquele
tecido. Existe aprecivel debate sobre at que ponto fatores parcrinos podem operar. A activina,
por exemplo, pode difundir-se por muitos dimetros celulares e pode induzir diferentes conjuntos de
genes em diferentes concentraes (Gurdon et al., 1994, 1995). As protenas Vg1, BMP4 e Nodal,
porm, provavelmente somente trabalham sobre seus vizinhos adjacentes (Jones et al., 1996; Reilly
e Melton, 1996). Esses fatores podem induzir a expresso de outros fatores de curto alcance desses
vizinhos, e uma cascata de indues parcrinas pode ser iniciada.
(A)
659
Figura 17.2
(B)
A famlia hedgehog
Em Drosophila, a protena Hedgehog tem vrios papis crticos na padronizao da
mosca em desenvolvimento. No embrio precoce, ela atua de maneira dependente da
concentrao na especificao de cada parasegmento embrionrio e como veremos
nos prximos captulos, hedgehog tambm trabalha mais tardiamemte no desenvolvimento, especificando os eixos da pata e dos discos imaginais alares (Basler e Struhl,
1994; Heemskerk e DiNardo, 1994). Os vertebrados tm pelo menos trs homlogos do
gene hedgehog de Drosophila: sonic hedgehog (shh), desert hedgehog (dhh) e
indian hedgehog (ihh). O Desert hedgehog expresso nas clulas de Schwann e
Sertoli, e camundongos homozigotos para um alelo zero (null) de dhh tm
espermatognese defeituosa. O indian hedgehog expresso no intestino e na cartilagem (Bitgood e McMahon, 1995; Bitgood et al., 1996).
Entre os trs homlogos de vertebrados Sonic hedgehog a mais empregada.
Confeccionada pela notocorda, a protena responsvel pela induo de clulas da
placa de assoalho e neurnios motores no tubo neural (Placzek et al., 1990; Yamada et
al., 1993; veja Captulo 8). A protena Hedgehog secretada pela notocorda (na realidade, os dois-teros do N-terminal dessa protena) tambm responsvel pela induo
do esclertomo nos somitos (Fan e Tessier-Lavigne, 1994; Johnson et al., 1994). A
Sonic hedgehg foi mostrada mediar a formao do eixo esquerdo-direito em pintos,
iniciar o eixo ntero-posterior nos membros, e induzir o eixo polarizado do intestino
(Riddle et al., 1993; Levin et al., 1995; Roberts et al., 1995). Freqentemente, a Sonic
hedgehog trabalha com outros fatores parcrinos, como Wnt e FGF. Como veremos
no prximo captulo, o shh no broto dos membros induz a expresso de FGF4 no
mesoderma posterior, e a combinao de FGF4 e Wnt7a necessria para manter a
expresso de shh. No dente em desenvolvimento, Sonic hedgehog, FGF4, e outros
fatores parcrinos esto concentrados em regies onde ocorrem interaes celulares
(Figura 17.3; Vaahtokari et al., 1996a).
660
Bucal
(bochecha)
Mesial
(interno)
N de esmalte
N de esmalte
Figura 17.3
A famlia Wnt
Esta famlia compreende uma famlia de glicoprotenas ricas em cistena; existem pelo
menos 15 membros dessa famlia em vertebrados. Seu nome advm da fuso do nome
do gene da polaridade segmentria de Drosophila, wingless, com o nome de um dos
seus homlogos vertebrados, integrated. Como vimos no Captulo 7, a Wnt1 parece
ser ativa na induo do mitomo nos somitos e no estabelecimento dos limites do
crebro intermedirio (McMahon e Bradley, 1990; Ku e Melton, 1993; Stern et al.,
1995). Conforme veremos em captulos subseqentes, os genes Wnt tambm so importantes no estabelecimento da polaridade dos membros vertebrados, tal como o
wingless estabelece a polaridade durante o desenvolvimento dos membros dos insetos. interessante que em ambos os casos ocorrem interaes com membros da
famlia hedgehog. Durante a gastrulao do camundongo Wnt3a, Wnt5a e Wnt5b so
todos expressos em regies sobrepostas mas distintas na linha primitiva. A Wnt3a a
nica protena Wnt vista nessa regio da linha que ir gerar o mesoderma dorsal
(somito), e camundongos homozigotos para o alelo zero do gene Wnt3a no tm
somitos caudais aos membros anteriores (Figura 17.4; Takada et al., 1994).
A trajetria sinalizando Wnt est intimamente conectada trajetria hedgehog.
Como mostrado na Figura 3.38, hedgehog estimula a expresso de wg e a protena
Wingless estimula a expresso de hedgehog. Em Drosophila, uma das coisas
feitas por Hedgehog para ativar a expresso gnica de wingless de contrapor a
represso da protena Patched. Uma vez eliminada a represso do gene patched, o
wingless pode ser expresso. A expresso ectpica do gene patched inibe o crescimento celular. Pensa-se existir uma trajetria semelhante em humanos, e cada uma
das molculas na trajetria de Drosophila tem um homlogo humano. Em humanos, mutaes espordicas de perda-defuno do gene patched em tecidos
somticos causam carcinomas de clulas basais, o tipo mais comum do cncer
(A)
(B)
661
Figura 17.4
(D)
662
Famlia BMP
osteogenina
Dorsalina 1 (pinto)
(braquipodismo)
(orelha curta)
(camundongo)
(Xenopus)
(ourio-do-mar)
Screw (Drosophila)
Nodal
activina
activina
Inibina
Figura 17.5
663
Figura 17.6
Citoplasma
Serrate
Sinalizao clula-clula entre duas clulas justapostas. Este modelo especulativo para a sinalizao Delta-Notch baseado em evidncia gentica de cruzamentos de Drosophila. A protena receptora
Notch pode se ligar s protenas Serrate ou Delta das clulas adjacentes atravs de seus domnios extracelulares. A protena Delta
age como um ligante e dimeriza a protena Notch na membrana
desse ltimo. Essa dimerizao estabilizada por interaes entre
as protenas, que podem permitir a troca da protena Suppressor of
Hairless com Deltex. A protena Suppressor of Hairless estava
ligada ao lado citoplasmtico da molcula Notch, mas uma vez
liberada, torna-se um fator de transcrio. Esse fator pode controlar
o destino da clula, direcionando-a a tornar-se pele em vez de tecido
neural. (Segundo Artavanis-Tsakonas et al., 1995.)
Delta
Monmero
Notch
Notch
Extracelular
Citoplasma
Deltex
Suppressor
of Hairless
Suppressor of Hairless
Ncleo
Hairless
Interaes epitlio-mesnquima
Alguns dos casos melhor estudados de induo secundria so aqueles envolvendo as
interaes de lminas epiteliais com clulas mesenquimatosas adjacentes. So chamadas interaes epitelio-mesnquima. O epitlio pode originar-se de qualquer camada
germinativa, enquanto o mesnquima geralmente derivado de tecido mesodrmico
frouxo ou da crista neural. Exemplos dessas interaes esto listados na Tabela 17.1.
Especificidade Regional da Induo
Usando como nossos exemplos a induo de estruturas cutneas, iremos examinar
as propriedades das interaes epitlio-mesnquima. O primeiro fenmeno a
especificidade regional da induo. A pele composta de dois tecidos principais: a
664
Tabela 17.1
rgo
Componente epitelial
Componente
mesenquimatoso
Epiderme (ectoderma)
Derme (mesoderma)
Membro
Epiderme (ectoderma)
Mesnquima
(mesoderma)
Epitlio (endoderma)
Mesnquima
(mesoderma)
Epitlio (endoderma)
Mesnquima
(mesoderma)
Rim
Mesnquima
(mesoderma)
Dente
Mesnquima
(crista neural)
Fonte do mesoderma
Asa
Figura 17.7
Especificidade regional da induo. Quando clulas da derme (mesoderma) so recombinadas com a epiderme (ectoderma) no
pinto, o tipo de estrutura cutnea produzida
pelo ectoderma determinado pela localizao original do mesoderma. (Adaptado de
Saunders, 1980.)
Coxa
Ectoderma alar
Induo especfica
Pena
da asa
Pena
da coxa
Escamas,
garra
epitlio endodrmico capaz de responder diferentemente aos diferentes mesnquimas especficos regionalmente. Isso capacita o tubo digestivo e o tubo respiratrio
desenvolverem diferentes estruturas em diferentes regies do tubo. Assim, medida que o tubo digestivo encontra novos mesnquimas, se diferencia em esfago,
estmago, intestino delgado e clon (Gumpel-Pinot et al., 1978; Fukumachi e
Takayama, 1980). Essa especificidade regional da induo do mesnquima fica dramaticamente aparente na formao do sistema respiratrio. No mamfero em desenvolvimento, o tubo respiratrio epitelial responde de duas maneiras distintas. Quando na regio do pescoo, ele cresce de modo reto, formando a traquia. Aps penetrar no trax, ele se ramifica, formando os dois brnquios e depois o pulmo. O
epitlio respiratrio pode ser isolado logo depois de ter se dividido nos dois
brnquios, e os dois lados podem ser tratados de maneira diferente. A Figura 17.8
mostra o resultado de tal experimento. O epitlio bronquial direito manteve seu
mesnquima pulmonar, enquanto o brnquio esquerdo foi rodeado pelo mesnquima traqueal (Wessells, 1970). O brnquio direito se proliferou e se ramificou sob a
influncia do mesnquima pulmonar, enquanto o lado esquerdo continuou a crescer
de uma maneira no-ramificada. Assim, o epitlio extremamente malevel e pode se
diferenciar de acordo com suas instrues mesenquimatosas.
A especificidade do mesoderma considerada ser controlada por suas interaes
com o tubo endodrmico durante os estgios precoces do desenvolvimento. Roberts
e colegas (1995) implicaram a Sonic hedgehog nessa especificao. No incio do desenvolvimento, a expresso de shh limitada ao endoderma posterior do intestino
terminal. Isso parece ser necessrio para a induo no mesoderma de um conjunto
aninhado de genes Hox que se parece com o conjunto posterior de genes HOM-C de
Drosophila. Tal como a situao nas vrtebras, as margens anteriores do padro de
expresso delineiam os limites morfolgicos das regies que iro formar a cloaca, o
intestino grosso, o ceco, ceco mdio (na margem intestino mdio/intestino terminal), e
a poro posterior do intestino mdio (Prancha 22; Figura 17.9). Assim, a expresso
endodrmica de Sonic parece induzir uma expresso aninhada de genes Hox no mesoderma. Esses genes Hox provavelmente especificam o mesoderma de modo que eles
possam interagir com o tubo endodrmico e especificar suas regies.
Grupo
paralogo
Hox
665
Figura 17.8
Intestino delgado
Ceco mediano
Ceco
Neurulao
precoce
Intestino
grosso
Cloaca
Estgio do broto mediano
Figura 17.9
666
*Spemann reportado como tendo descrito dessa maneira: O ectoderma diz ao indutor, voc
me diz como produzir uma boca; est bem, assim o farei, porm, no posso produzir o seu tipo de
boca; s posso produzir a minha e isso farei. (Citado por Harrison, 1933.)
Doador
Hospedeiro
Resultado
rea do
presuntivo ectoderma oral
Gstrula
de r
Gstrula de
salamandra
Sugador
Salamandra com
sugadores de
girino de r
Figura 17.10
Gstrula
de salamandra
Gstrula de R
Equilibradore
Girino de r com
equilibradores de
salamandra
667
Figura 17.11
(A)
(B)
668
cristalino, e concluiu que a vescula ptica era suficiente para induzir a formao
de tecido do cristalino em ectoderma, que de outra maneira no o teria formado.
Pareceu que o contato com a vescula ptica era tudo o que era necessrio para
induzir cristalino no ectoderma sobrejacente.
DESACORDOS COM O MODELO DO CLICE PTICO. Houve dissidentes dessa
viso; Mencl (1908) notou que certos peixes tinham defeitos congnitos devido aos
quais no formavam olhos. Apesar disso, esses peixes tinham cristalino no seu
ectoderma da cabea. Mais importante, quando King (1905) tentou repetir os experimentos de Spemann, ele encontrou ao contrrio do esperado que o cristalino ainda se
formava mesmo quando rudimentos da vescula ptica tinham sido obliterados. Esses
e outros investigadores comearam a achar que os cristalinos podiam se formar sem
contato com a vescula ptica.*
medida que mais dados se acumulavam, pareceu que havia um alto grau de
diversidade de espcies. Algumas espcies pareciam formar cristalinos sem a necessidade de vesculas pticas, ao passo que em outras espcies, os cristalinos pareciam depender inteiramente do contato com essa vescula. Spemann (1938) reconciliou esses resultados argumentando que um organismo podia evoluir com uma margem de segurana, desenvolvendo duas maneiras de formar determinado tecido.
Assim, o cristalino normalmente se originaria pelo contato com a vescula ptica,
porm, essa falhando, poderia originar-se separadamente se assim ele tivesse que
fazer. Esse conceito foi chamado de hiptese da dupla segurana. Em 1966, Jacobson
integrou mais dados nesse modelo. Ele notou que o ectoderma formador do cristalino entra seqencialmente em contato com o endoderma presuntivo do intestino
anterior, o endoderma presuntivo do corao e a vescula ptica. Ele sugeriu que
cada um desses tecidos atuaria de uma maneira aditiva para induzir a formao do
cristalino nesse tecido. Em algumas espcies, o limiar para a induo do cristalino
seria baixo, e o contato com o ectoderma seria suficiente. Em outras, o limiar seria
alto, e todos os trs indutores teriam que estar ativos. Assim, a formao do cristalino parecia depender da vescula ptica, mas na realidade, essa seria somente o
ltimo dos trs indutores.
A Base Celular da Induo do Cristalino
Sem descartar o papel do mesoderma e endoderma, estudos recentes em Xenopus
enfatizam a importncia da placa neural anterior como um indutor precoce do
ectoderma do cristalino. Esses experimentos indicam que o ectoderma presuntivo
do cristalino recebe sua habilidade de tornar-se cristalino muito cedo durante o
desenvolvimento (durante os estgios de gstrula tardia para meia-nurula) e que a
vescula ptica apenas localiza a diferenciao desse tecido j autnomo. Em outras
palavras, o ectoderma da cabea formar cristalinos sem o contato do clice ptico,
mas esse necessrio para a completa diferenciao do cristalino e seu
posicionamento adequado em relao ao restante do olho. Este modelo (Figura
17.12; Saha et al., 1989; Grainger, 1992) divide a determinao do ectoderma do
cristalino em quatro estgios: competncia, propenso, determinao e diferenciao final. Competncia para responder ao sinal indutor inicial vista como um processo autnomo dentro do ectoderma, e a propenso para produzir cristalino
provida pela placa neural anterior. A especificao do cristalino ocorre ao tempo do
fechamento da placa neural, quando a vescula ptica se aproxima do ectoderma da
cabea, e a determinao final induzida pela vescula ptica.
*A interpretao desses experimentos foi extremamente difcil devido s diferenas especficas
nos mecanismos de induo, a temperatura na qual ocorre induo mxima, e a dificuldade de
conseguir pedaos de tecidos no contaminados para transplante. Veja Jacobson e Sater (1988) e
Saha et al. (1989, 1991) para revises sobre esses dissidentes e seus experimentos.
Ectoderma
Mesoderma
(B)
Endoderma
rea da retina
rea
do cristalino
( C ) Nurula precoce
(vis de formao do cristalino)
Placa
neural
rea do cristalino
Ectoderma do
cristalino
(D)
Nurula tardia
(especificao do cristalino)
Tubo
neural
Vescula
ptica
Ectoderma
do cristalino
Crebro em
desenvolvimento
(E)
Girino jovem
(diferenciao do cristalino)
Clice ptico
Cristalino
669
Figura 17.12
670
Tabela 17.2
Estgio do
Doador
Doador
Nurula
hospedeira
Nmero
examinados
Cristalinos
induzidos
(%)
Corpo
semelhante
ao cristalino
%
Espessamento
ectodrmico
(%)
Corpo sem
cristalino
(%)
Sem
resposta
(%)
Total
positivo
Gstrula
intermediria
24
38
50
1 (4%)
Gstrula tardia
21
10
14
42
10
24
5 (24%)
Nurula precoce
24
75
13
20 (83%)
Nurula tardia
20
95
20 (100%)
Figura 17.13
Resposta do
cristalino
Endomesoderma
lateral
Cultura
Placa
neural
Cultura
(B) DETERMINAO DO PERODO COMPETENTE DO CRISTALINO
Estgio
Operao
671
Resposta
do cristalino
Gstrula
precoce
Gstrula
intermediria
Gstrula
tardia
crebro anterior ir dar origem pequenos cristalinos, mesmo sob essas condies. O
clice ptico no contatou ainda esse tecido, mostrando que no crtico para a
induo do cristalino em Xenopus. Porm, ele exerce uma funo em capacitar o fentipo
completo do cristalino para ser expresso. Os cristalinos que se formam na ausncia da
vescula ptica so em geral muito rudimentares. No conhecido se a influncia da
vescula ptica diretamente positiva, promovendo a diferenciao do placdio do
cristalino para um cristalino totalmente diferenciado, ou se tal influncia se d removendo um inibidor da diferenciao do cristalino. Foi proposto (von Woellwarth, 1961;
Henry e Grainger, 1987) que as clulas da crista neural impedem a diferenciao do
cristalino e que o contato com a vescula ptica serve como escudo do placdio do
cristalino, frente a esses sinais inibidores.
672
O fator de transcrio Pax6 participa de vrias maneiras nos processos de determinao e diferenciao do tecido ocular. Mutantes homozigotos Pax6 de humanos,
camundongos, ratos e moscas no tm olhos. O ectoderma do embrio de ratos deficientes em Pax6 incapaz de tornar-se cristalino, mesmo quando cultivado com
vesculas pticas de embries de tipo selvagem. O ectoderma da cabea no foi determinado por sinais anteriores da placa neural ou do mesoderma (Fujiwara et al., 1994).
Pax6 tambm crtico para a expresso das cristalinas cristalino. No somente so
vistos stios ligantes de Pax6 nas regies reguladoras de vrios genes do cristalino,
mas a expresso especfica do cristalino dessas protenas depende da expresso de
Pax6 (Cvekl et al., 1995; Richardson et al., 1995).
O cristalino est situado entre as cmaras anterior e vtrea do olho, e acreditase que sua diferenciao (discutida no Captulo 7) seja mediada por fatores de
crescimento emanando dessas duas cmaras. A cmara anterior parece concentrar
uma protena mitognica (cuja identidade permanece desconhecida) que especfica para causar mitose e inibir a diferenciao no epitlio formador do cristalino.
Essa protena tida como proveniente dos capilares sangneos para a cmara
anterior. Na cmara vtrea, FGF1 e 2 estimulam o alongamento e a diferenciao das
clulas do cristalino e bloqueiam a atividade mitognica do fator de crescimento
da cmara anterior (Hyatt e Beebe, 1993; Schulz et al., 1993). O resultado o
alongamento daquelas clulas do cristalino na superfcie dorsal do placdio do
cristalino, e a continuada proliferao de clulas no lado ventral do placdio do
cristalino (Figura 17.14).
Formao da Crnea
Aps ter invaginado, o placdio do cristalino fica coberto por duas camadas
de clulas do ectoderma adjacente. Agora, o cristalino em desenvolvimento pode
atuar como um indutor. O ectoderma destinado a se tornar crnea, provavelmente
j havia sido determinado durante um estgio anterior do desenvolvimento (Meier,
1977). Agora, a diferenciao da crnea ocorre sob influncia do cristalino. O
ectoderma sobrejacente torna-se colunar e se enche de grnulos secretores. Esses grnulos migram para a base das clulas e secretam um estroma primrio contendo cerca de 20 camadas de colgeno dos tipos I e II (veja Figura 17.14). As
clulas endoteliais vizinhas migram para essa regio (no estroma primrio) e
secretam cido hialurnico para essa matriz. O cido hialurnico faz com que a
matriz se expanda e se torne um bom substrato para a migrao de duas ondas de
clulas mesenquimatosas derivadas da crista neural. Ao penetrar a matriz, a segunda onda dessas clulas a permanece, secretando colgeno do tipo I e
hialuronidase. Essa causa o encolhimento do estroma. Sob a influncia da tiroxina
da glndula tireide em desenvolvimento, esse estroma secundrio desidratado,
e a matriz rica em colgeno dos tecidos epitelial e mesnquima, transforma-se na
crnea transparente (veja Hay, 1980; Bard, 1990).
Podemos ver, assim, que simples interaes indutivas so na realidade dramas
bem coordenados, nos quais os atores tm que vir ao palco e falar seus trechos no
momento e posio corretos. Por adquirir nova informao, elas podem tambm transmitir informaes para outros usarem. Tendo isso em mente, ns podemos agora
passar a estudar alguns dos princpios sobre a induo secundria, obtidos de outros
rgos em desenvolvimento.
Figura 17.14
Cristalino
Borda do
clice ptico
Mesnquima
da cabea
Vtreo
Cmara anterior
Epitlio
Fatores de crescimento das cmaras
anterior e vtrea fazem com que as
clulas dorsais se diferenciem e as
clulas ventrais se proliferem
Mesnquima
Cmara vtrea
Endotlio
Epitlio
corneano
Mesnquima
O cristalino induz o ectoderma
sobrejacente em epitlio colunar e
secretor
Estroma
primrio
Mesnquima
Estroma
primrio
Cristalino
Mesnquima
Epitlio
Cristalino
673
Estroma secundrio Secrees das clulas mesenquimatosas levam o estroma a encolher; sob
Endotlio
a influncia de tiroxina o estroma
ir finalmente tornar-se crnea
674
(A)
(B)
(C)
(D)
Tbulos
mesonfricos
Prnefros
Duto nfrico
Cordo
nefrognico
Gnada
Gnada
Mesonefros
Mesonefros
Duto nfrico
(Wolffiano)
Cordo nefrognico
Mesnquima
metanefrognico
Cloaca
Broto uretrico
Duto nfrico
Mesnquima
metanefrognico
Ureter
Figura 17.15
Esquema geral do desenvolvimento do rim vertebrado. (A) Os tbulos originais, constituindo o rim pronfrico, so induzidos a partir do
mesnquima nefrognico pelo duto pronfrico
migrando caudalmente. (B) medida que o
prnefro de degenera, formam-se os tbulos
mesonfricos. (C) O rim mamfero final, o
metanefro, induzido pelo broto uretrico. (D)
Seo de um rim de camundongo mostrando a
iniciao do rim mesonfrico (abaixo) enquanto o mesonefro ainda est aparente. O tecido do
duto est corado com um anticorpo fluorescente para citoqueratina encontrada no duto mesonfrico e seus derivados. ( A-C segundo Saxn,
1987; D cortesia de S. Vainio.)
675
Dutos
coletores
Mesnquima
Metanefrognico
Ureter
Broto
uretrico
Ureter
Tbulos
Renais
Tbulo distal
Mesnquima
Broto
Uretrico
Tbulo
Proximal
Corpo com
forma de S
Cpsula de
Bowman do
glomrulo
Clulas
endoteliais
Figura 17.16
676
Tbulos renais
(A)
Dutos coletores
(B)
Figura 17.17
(C)
677
Broto uretrico
(A)
Mesnquima
condensando
Glomrulo
(B)
Ureter
(C)
mesoderma como algumas clulas originrias da crista neural (Le Douarin e Tiellet,
1974; Sariola, 1989; Sainio et al., 1994).
SINAL 2: FORMAO DO BROTO URETRICO. O segundo sinal no desenvol-
Figura 17.18
678
Duto
Wolffiano
Duto Wolffiano
Broto
uretrico
Broto
uretrico
Duto
Wolffiano
(A)
(B)
Receptor
Ret
Mesnquima
metanefrognico
(C)
Duto
Wolffiano
Receptor
Ret
Broto
uretrico
(D)
Figura 17.19
Rim
Glndula
Supra-renal
Rim
Figura 17.20
679
Figura 17.21
O proteoglicano syndecan da matriz extracelular no sintetizado ou secretado por clulas do mesnquima at aps a induo. Essa
molcula provavelmente est envolvida na
estruturao do novo epitlio tubular, e distingue as clulas do tbulo, do mesnquima
remanescente. (A) Colorao imunolgica de
syndecan mostra sua presena nas clulas
mesenquimatosas recm-induzidas (T) que esto se tornando epiteliais. Alguma colorao
(U) tambm vista no epitlio do broto
epitelial. (B) Colorao intensa de syndecan
vista na regio tubular em desenvolvimento
que ir se tornar o glomrulo renal (G). (de
Vainio et al., 1989, cortesia de L. Saxn.)
(A)
(B)
Dudley et al., 1995; Luo et al., 1995). As clulas mesenquimatoses induzidas tambm
sintetizam receptores para o fator de crescimento epidrmico e o fator de crescimento neural, e podem responder essas protenas com a proliferao.
SINAL 4: CONVERSO DE CLULAS MESENQUIMATOSAS EM EPITLIO. O
broto uretrico causa mudanas dramticas na matriz extracelular das clulas do
mesnquima metanefrognico. O mesnquima no-induzido secreta uma matriz extracelular consistindo predominantemente de fibronectina e colgenos dos tipos I e II.
Aps a induo, essas protenas desaparecem e so substitudas por uma lmina
epitelial basal feita de laminina e colgeno do tipo IV. As alteraes na matriz extracelular parecem ser crticas para formao dos tbulos, pois o mesnquima induzido
secreta um receptor para laminina que permite sua participao na formao epitelial
(Ekblom et al., 1994). O citoesqueleto tambm muda de uma caracterstica de clulas
mesenquimatosas para um tpico de epitlio (Ekblom et al., 1983, Lehtonen et al., 1985).
Dessa maneira, as clulas mesenquimatosas frouxas so ligadas umas s outras como
um epitlio polarizado sobre uma lmina basal.
Antes dessas mudanas o mesnquima metanefrognico rcem-induzido sintetiza duas protenas adesivas, E-caderina e Syndecan. A Syndecan um proteoglicano
primeiro notado ao redor das clulas mesenquimatosas envolvendo o broto uretrico
quando entra na regio do mesnquima. Quando o broto inicia sua primeira ramificao, toda a regio mesnquima ao redor do ramos se cora positivamente para
Syndecan (Figura 17.21). O mRNA de Syndecan est presente no mesnquima renal
no-induzido, mas no traduzido em protena a no ser que o mesnquima seja
induzido (Figura 17.22; Vainio et al., 1989a, 1992). No s pode Syndecan regular a
condensao do mesnquima em um epitlio, como pode tambm promover a proliferao dessas clulas. Por marcao de clulas em proliferao com bromodeoxiuridina (que incorporada em DNA somente em clulas em diviso) e marcando as
clulas expressando Syndecan com anticorpos fluorescentes essa protena, Vainio
e colegas (1992) demonstraram uma estreita correlao entre as clulas em diviso e
aquelas expressando Syndecan.
Alm disso, o fator de transcrio Pax2 sintetizado no mesnquima induzido.*
Quando o RNA antisenso ao Pax2 previne a traduo do mRNA de Pax2 que transcrito em resposta induo, as clulas do mesnquima de rudimentos de rim em
cultura, deixam de se condensar (Rothenpieler e Dressler, 1993). [prox3.html]
* Pax2 tem vrios papis durante o desenvolvimento renal. Sua funo mais crtica ocorre at
mesmo antes da converso do mesnquima, pois parece que o Pax2 pode ser importante na
especificao do mesoderma intermedirio. Em mutantes de Pax2 de camundongo no se forma o
sistema urogenital (Torres et al., 1995).
680
Figura 17.22
(A)
Induzido
No-induzido
(B)
(C)
(A)
(B)
(C)
Figura 17.23
Papel do receptor NGF de baixa afinidade na morfognese do rim. (A) Hibridizao in situ mostra a localizao de
mRNA de NGFR nos mesnquimas condensados de um rim embrionrio de rato de 18 dias. (B) Maior aumento do
padro de ramificao do broto uretrico (corado com anticorpos para uma citoqueratina epitelial especfica) em rim de
13 dias cultivado durante 5 dias, in vitro. (C) Broto uretrico de um rim igual aquele em (B) mas cultivado em presena
de oligonucletidos antisenso ao mRNA de NGFR . (de Sariola et al., 1991, cortesia de H. Sariola.)
681
682
Informaes adicionais
&
Especulaes
URANTE A MORFOGNESE de
qualquer rgo ocorrem numerosos dilogos entre os tecido em
interao. Nas interaes epitlio-mesnquima, o mesnquima influencia o epitlio;
o tecido epitelial, uma vez modificado pelo
mesquima, pode secretar fatores que alteram o mesnquima. Tais interaes continuam at que seja formado um rgo com
clulas mesenquimatosas especficas do
orgo e epitlio especfico. A identificao
das substncias envolvidas nessas conversas inter-tissulares est sendo estudada em diversos laboratrios. Algumas das
interaes mais investigadas so aquelas
que formam os dentes dos mamferos. Aqui,
o epitlio da mandbula se diferencia em
ameloblastos, enquanto as clulas mesenquimatosas derivadas da crista neural se tornam os odontoblastos secretores da dentina.
Em primeiro lugar, o epitlio faz com
que o mesnquima se agregue em locais
especficos. Nesse momento, o epitlio
possui o potencial de gerar estruturas
dentais a partir de vrios tipos de clulas
mesenquimatosas (Mina e Kollar, 1987;
Lumsden, 1988). Porm, esse potencial
de formao do dente logo transferido
para o mesnquima que se agrega abaixo
dele. Essas clulas mesenquimatosas
formam a papila dental e so agora capazes de induzir a morfognese dental em
outros epitlios (Kollar e Baird, 1970).
Nesse estgio, o epitlio maxilar perdeu
sua capacidade de instruir a formao do
dente em outros mesnquimas. Assim, o
potencial odontognico passou do
epitlio para o mesnquima. Na membrana basal que separa o epitlio do mesnquima, o epitlio induz o mesnquima a
se transformar em odontoblastos, enquanto o mesnquima induz o epitlio a
se transfornar em clulas ameloblsticas
(Figura 17.24; Thesleff et al., 1989).
Esse deslocamento do potencial odontognico coincide com o deslocamento da
sntese da protena morfogentica 4 do osso
(BMP4). Durante as fases mais precoces do
desenvolvimento do dente, a BMP4 sintetizada no epitlio; e induz a diferenciao
do mesnquima e estimula-o a expressar trs
Ectomesnquima
Condensao
Papila dental
Formao da cspide
Odontoblastos
Epitlio
Mesnquima
N de esmalte
Pr-odontoblastos
Nvel de diferenciao
Osteonectina
Colgeno tipo I
FGF3
BMP4, 3
activina- A
do mesnquima
ao epitlio
BMP2,
4 FGF8 do
epitlio ao
mesnquima
BMP2, 4, 7
Sonic hedgehog
FGF4 do n de
esmalte
Fosfatase alcalina,
Tenascina
receptor EGF
metaloprotenas
BMP4 do
mesnquima
Syndecan, tenascina
TGF- no mesnquima
msx1, 2
Iniciao
Agregao
Morfognese
Diferenciao terminal
Idade desenvolvimental
Figura 17.24
Diferenciao coordenada e morfognese no dente do mamfero. medida que progride o desenvolvimento, o mesnquima da mandbula derivado da crista neural sofre diferenciao gradual
interagindo com o epitlio mandibular (Segundo Thesleff et al., 1990; Thesleff e Sahlberg, 1996.)
683
684
Clulas
mesenquimatosas
Clula
epitelial
Colgeno na
fenda entre
clulas epiteliais
Figura 17.25
Micrografia eletrnica de varredura da acumulao de fibras de colgeno dentro da fenda precoce da glndula salivar de um embrio de camundongo de 12 dias. (de Nakanishi et al., 1986b, cortesia de Y. Nakanishi.)
1 hr
(A)
Controle
(B)
Adio de colagenase
(C)
18 hr
25 hr
685
Figura 17.26
686
(A)
Fenda estreita
(B)
Hialuronidase
Colgeno
Degradao da matriz
extracelular causada por
hialuronidase
Fibras de
colgeno
Mais
mitose
GAG
Clulas
mesenquimais
Clulas
epiteliais
Clulas
mesenquimais
Clulas
epiteliais
Colgeno
Figura 17.27
687
Figura 17.28
(A)
(B)
Figura 17.29
(A)
(B)
688
Figura 17.30
clula; com a induo, torna-se um outro. Nossas discusses sobre induo usualmente ocuparam-se de tecidos e no de clulas. Porm, a induo tambm pode
ocorrer ao nvel da nica clula. Os primeiros exemplos desse fenmeno vieram de
estudos com o sistema imune. Aqui, a recepo de antgeno (substncias estranhas)
pela clula B deu-lhe a competncia de responder a fatores parcrinos e justcrinos
sintetizados pelas clulas T auxiliares. H um dilogo recproco entre as clulas B e
as clulas T pelo qual ambas se diferenciam e se proliferam na presena de antgeno
estranho (Clark e Ledbetter, 1994; Essen et al., 1995). Na verdade, a AIDS uma
doena de induo, na qual a clula T auxiliar foi destruda e no pode induzir a
diferenciao de clulas B e macrfagos.* [prox4.html]
Pesquisas recentes sobre o desenvolvimento de Drosophila e Caenorhabditis
mostraram que a induo realmente ocorre no nvel clula-para-clula. Alguns dos
exemplos melhor estudados envolvem a formao dos fotorreceptores da retina do
olho da Drosophila. A retina consiste de cerca de 800 unidades chamadas omatdios
(Figura 17.30). Cada omatdio composto de 20 clulas organizadas em um padro
preciso. O olho desenvolve-se na camada epitelial plana do disco imaginal do olho
da larva. No h clulas diretamente acima ou abaixo dessa camada, de modo que as
interaes so limitadas s clulas vizinhas em duas dimenses. A diferenciao das
clulas epiteliais arranjadas de maneira aleatria nos fotorreceptores da retina e seu
tecido do cristalino ao redor ocorre durante o ltimo (terceiro) estgio larval. Uma
reentrncia se forma na margem posterior do disco imaginal, e esse sulco
morfogentico comea a trafegar para frente em direo ao anterior do epitlio (Figura 17.31). O movimento do sulco depende das protenas do conjunto marcador,
Hedgehog e Decapentaplegic. Hedgehog expresso por clulas imediatamente posteriores ao sulco (i.e., aquelas que acabaram de se diferenciar) e induz a expresso da
protena decapentaplegic dentro do sulco (Heberlein et al., 1993; Ma et al., 1993).
medida que as clulas da retina comeam a se diferenciar atrs do sulco, elas secretam
a protena Hedgehog, que empurra o sulco anteriormente (Brown et al., 1995). Quando o sulco passa atravs de uma regio de clulas, essas comeam a se diferenciar
em uma ordem especfica. A primeira clula a se desenvolver o fotorreceptor central (R8). (Ainda no sabido como o sulco instru certas clulas a se tornarem
fotorreceptores R8, mas possvel que as protenas DPP e Hedgehog na regio do
sulco induzam a determinao de R8). A clula R8 considerada induzir a clula
anterior e a clula posterior a ela (em relao ao sulco), para se tornarem os fotorreceptores R2 e R5, respectivamente. Os fotorreceptores R2 e R5 so funcionalmente
equivalentes, sendo o sinal de R8 provavelmente o mesmo para ambas (Tomlinson e
Ready, 1987). Sinais dessas clulas induzem mais quatro clulas adjacentes a tornarem-se os fotorreceptores R3, R4, e depois R1 e R6. Em ltimo lugar aparece o
fotorreceptor R7. As outras clulas ao redor desses fotorreceptores tornam-se clulas do cristalino. A determinao do cristalino a condio de revelia (default) se
as clulas no forem induzidas. [prox5.html]
Uma srie de mutaes foram encontradas bloquear alguns dos passos dessa
cascata indutora. A mutao rough (ro), por exemplo, bloqueia a induo dos fotorreceptores R3 e R4. A mutao sevenless (sev) e a mutao bride of sevenless (boss)
pode, cada uma, prevenir as clulas R7 de se diferenciarem. (Essas clulas tornam-se
ento clulas do cristalino). A anlise dessas mutaes mostrou que elas esto envolvidas no processo indutivo. O gene sevenless requerido na prpria clula R7. Se
embries mosaico so produzidos de modo que algumas das clulas do disco ocular
sejam heterozigotas (normais) e algumas homozigotas para a mutao sevenless, o
fotorreceptor R7 visto desenvolver-se somente se o precursor R7 tem o alelo sevenless
* Em seres humanos, essas clulas T so chamadas clulas T auxiliares / indutoras, um nome que
reconhece seu papel no desenvolvimento. A glicoprotena CD4 normalmente est envolvida na
mediao celular da adeso no-especfica entre a clula T auxiliar/indutora e os linfcitos B (Doyle
e Strominger, 1987).
689
Figura 17.31
Diferenciao mais
tardia (posterior ao
sulco morfogentico)
tipo selvagem (Basler e Hafen, 1989; Bowtell et al., 1989). Anticorpos para essa protena encontram-na na membrana celular, e a seqncia do gene sevenless sugere que ela
uma protena transmembrana com um stio tirosina quinase em seu domnio
citoplasmtico (Banerjee et al., 1987; Hafen et al., 1987). Isso consistente com a
suposio da protena ser um receptor para algum sinal.
Esse sinal para o precursor R7 diferenciar-se no fotorreceptor R7, provavelmente
vem diretamente de uma protena codificada pelo alelo tipo selvagem de bride of
sevenless (boss). Moscas homozigotas para a mutao boss no tm os fotorreceptores R7. Estudos com genes de mosaico onde algumas das clulas do disco imaginal
so normais e algumas das clulas so homozigotas para mutao boss mostram que
o gene boss tipo selvagem no necessrio na clula precursora R7. Ao contrrio, o
fotorreceptor R7 somente se diferencia se o gene boss tipo selvagem expresso na
clula R8. Assim, o gene bride of sevenless est codificando alguma protena cuja
existncia na clula R8 necessria para a diferenciao da clula R7.* O sinal
produzido pela protena Boss provavelmente trabalha por contato celular. Genes
* Todos os precursores de fotorreceptores sintetizam a protena Sev, e o sinal Boss dado pelo
fotorreceptor R8 provavelmente dado e recebido por todas as clulas circunjacentes. O que,
ento, impede as clulas R1-R6 de tambm se tornarem clulas R7? O agente restritivo provavelmente o produto do gene seven-up (sup). Em mutante deficientes em sup, os precursores R1,
R3, R4 e R6 todos desenvolvem o fentipo R7. O gene sup codifica um fator de transcrio da
famlia receptora de esterides (Mlodzik et al., 1990). Isso, porm, no toda a histria. Provavelmente existe um caminho paralelo, pelo qual o receptor Sevenless tambm ativa a protena
Corkscrew. Corkscrew ativa a protena Daughter-of-sevenless (dos). A protena Dos facilita a
ativao de Ras (Herbst et al., 1996).
Diferenciao precoce
(entrando no sulco
morfogentico)
690
Induo V
ulvar no Nematide Caenorhabditis elegans
Vulvar
A vulva de Caenorhabditis elegans um caso onde um sinal indutor pode gerar
uma variedade de tipos celulares. Esse rgo se forma durante o estgio larval de
seis clulas do blasto chamadas clulas precursoras vulvares (VPCs). A clula que
conecta a gnada sobrejacente clulas precursoras vulvares chamada clula
ncora. Ela secreta a protena LIN-3, um parente do fator de crescimento epidrmico
(Hill e Sternberg, 1992). Se a clula ncora destruda (ou se o gene lin-3 mutado),
as VPCs no formam uma vulva; elas tornam-se parte da hipoderme (pele) (Kimble,
1981). As seis clulas precursoras vulvares sob influncia da clula ncora formam
um grupo de equivalncia. Cada membro desse grupo competente para ser induzido pela clula ncora e pode assumir um de trs destinos, dependendo de sua
proximidade essa clula (Figura 17.33). A clula diretamente abaixo da clula ncora se divide para formar as clulas vulvares centrais. As duas clulas flanqueando a
clula central se dividem para tornarem-se as clulas vulvares laterais, enquanto as
trs clulas mais distantes da clula ncora geram as clulas hipoblsticas. Se a
clula ncora destruda, todas as seis clulas do grupo de equivalncia dividem-se
uma vez e contribuem para o tecido hipodrmico. Se as trs clulas centrais forem
destrudas, as trs clulas externas, que normalmente formam clulas hipodrmicas,
geram clulas vulvares em seu lugar. A protena LIN-3 recebida pela tirosina quinase
do receptor LET-23 nas VPCs, e o sinal transferido para o ncleo atravs da trajetria Ras-MAP quinase (veja Captulo 3).
(A)
Gnada
Clula ncora
Figura 17.33
Cutcula
(C)
Clula ncora
691
H trs mecanismos pelos quais tais indues podem ocorrer (Katz e Sternberg, 1996):
1. A hiptese do sinal graduado. Aqui, a VPC mais prxima da clula ncora
recebe as mais altas concentraes de protena LIN-3 e gera as clulas vulvares
centrais. As duas VPCs adjacentes recebem uma baixa quantidade de LIN-3 e
se tornam as clulas vulvares laterais. As VPCs mais distantes da clula ncora
no recebem LIN-3 suficiente, e se tornam hipoderme (Katz et al., 1995).
2. O modelo da induo seqencial. Aqui, a protena LIN-3 trabalha somente
sobre a clula imediatamente abaixo a ela. Essa clula ir gerar a linhagem
vulvar central. Ir tambm sinalizar lateralmente para as duas clulas adjacentes e instru-las para gerar linhagens vulvares laterais. Essas clulas no iro
instruir as clulas perifricas de VPCs de fazer algo; por isso, essas tornam-se
hipoderme (Koga e Oshima, 1995; Simske e Kim, 1995).
3. O modelo da no-equivalncia. Aqui, as VPCs podem substituir uma a outra,
mas no so idnticas. Elas tm os seus vieses e podem responder at a baixas
concentraes da protena LIN-3. Porm, os vieses fazem com que a clula
abaixo da clula ncora gere a linhagem vulvar central (Sternberg, 1989;
Sternberg e Horvitz, 1989).
Interessante, existe evidncia que todos os trs modelos funcionam durante o
desenvolvimento normal (Kenyon, 1995; Katz e Sternberg, 1996). Provavelmente h
um sinal graduado de LIN-3 da clula ncora, que refora os vieses das VPCs j
existentes. Alm disso, uma vez que a VPC abaixo da clula ncora fica determinada a
formar a linhagem vulvar central, ela sinaliza as clulas a ela adjacentes proibindo-as
de tambm formar clulas vulvares centrais. Essa inibio lateral das clulas precursoras vulvares secundrias pelas VPC primria conseguida atravs das protenas LIN-12 (Figura 17.34; Sternberg, 1988). Se todos esses sistemas estiverem operando durante o desenvolvimento normal, conforme nota Kenyon (1995), ento em conjunto elas poderiam produzir as to-perfeitas pequenas vulvas pelas quais C. elegans
to famoso.
LET-3
Sinal ativa genes Vulval
Sinal
ativa
lin-12
Vul ligado
lin-12 ligado
Hipoderme
Sinal
ativa
lin-12
Vul ligado
Vulva
Figura 17.34
Vol ligado
lin-12 ligado
Hipoderme
692
Informaes adicionais
&
Especulaes
DESENVOLVIMENTO da vulva
Sinal
Receptor
(A)
(B)
(C)
(D)
Clula ncora
Precursor
uterino ventral
Figura 17.35
um neuroblasto. O gene Notch de Drosophila tambm canaliza uma clula bipotencial em uma de duas trajetrias alternativas. Logo aps a gastrulao, uma
regio de cerca de 1800 clulas ectodrmicas encontra-se ao longo da linha mediana ventral do embrio de Drosophila.
Essas clulas tm o potencial de formar o
cordo nervoso ventral do inseto, e cerca
de um-quarto delas se tornam neuroblastos, enquanto o resto se torna precursoras da hipoderme. As clulas que do origem aos neuroblastos esto intermisturadas com as clulas que so destinadas a
dar origem a precursores hipodrmicos.
Assim, cada clula ectodrmica nas regies
formadoras de nervos do embrio da mosca pode dar origem ou a clulas hipodrmicas ou a clulas precursoras neurais
(Hartenstein e Campos-Ortega, 1984), Na
ausncia de transcrio do gene Notch
no embrio, as clulas se desenvolvem
em precursores neurais em lugar de uma
mistura de clulas precursoras neurais e
hipodrmicas (Figura 17.36; ArtavanisTsakonis et al., 1983; Lehmann et al., 1983).
Esses embries morrem, com um grande
excesso de clulas neurais, s custas da
hipoderme ventral e da cabea (Poulson,
1937; Hoppe e Greenspan, 1986). O gene
Notch foi clonado (Kidd et al., 1983;
Yedvobnick et al., 1985) e encontrado ser
transcrito durante a metade precoce da
embriognese (e mais tarde no estgio
pupal precoce). Tanto a protena Notch
como a LIN-12 compartilham notveis
homologias seqenciais entre si. Ambas
so protenas transmembrana que podem
atuar como receptores de sinais de clulas adjacentes (Yochem et al., 1988).
Heitzler e Simpson (1991) propuseram
que a protena Notch, tal como a LIN-12, funciona como um receptor para sinais intercelulares envolvendo a distino entre clulas
equivalentes. Alm disso, elas provem evidncia que outra protena transmembrana,
produto do gene delta (cuja ausncia cria
um fentipo muito semelhante aquele das
693
Figura 17.36
Neuroblasto
Tipo selvagem
Dorsal
Hipoderme
Clulas
ectodrmicas
neurognicas
Ventral
(B)
Mutante
notch
Figura 17.37
(D)
(E)
694
LITERATURA CITADA
Armstrong, J. F., Pritchard-Jones, K., Bickmore,
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expression of the Wilms tumor gene, WT-1, in
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Artavanis-Tsakonis, S., Muskavitch, M. A. T.
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Artavanis-Tsakonas, S., Matsuno, K. and Fortini, M.
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Wessells, N. K. 1970. Mammalian lung development: Interactions in formulation and morphogenesis of tracheal buds. J. Exp. Zool. 175:
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lung, ureteric bud and pancreas. Dev. Biol. 18:
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Wilkie, A. O. M, Morriss-Kay, G. M., Jones, E.
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1989. Expression of the FGF-related protooncogene int-2 suggests multiple roles in fetal development. Development 105: 131-136.
699
Desenvolvimento do
membro de tetrpode
Meus braos so mais longos do que minhas pernas.... Eu sou meu prprio escultor:
estou partindo do meu interior e me modelando com materiais vivos, molhados e
maleveis: qual outro artista teve sua disposio um desenho to perfeito como esse
disposio de meus martelos e cinzis: as
clulas migram para o local exato para construir um brao: a primeira vez que elas o
fizeram, nunca antes e nunca mais, entendem vocs mercies benz o que eu estou
dizendo? Eu nunca serei repetido.
CARLOS FUENTES (1989)
O que pode ser mais curioso do que a mo de
um homem, formada para pegar, a de uma
toupeira para cavar, a perna de um cavalo, a
nadadeira de um boto e a asa de um morcego, todos devem ser construdos no mesmo
modelo e devem incluir ossos similares na
mesma posio relativa?
CHARLES DARWIN (1859)
701
18
Padronizao no membro
PADRONIZAO um processo pelo qual as clulas embrionrias formam arranjos de
tecidos diferenciados, espacialmente ordenados. A possibilidade de realizao desse processo uma das propriedades mais dramticas do organismo em desenvolvimento, provocando um senso de estupefao em cientistas e leigos. Como que o
embrio capaz no s de produzir os diferentes tipos de clulas do corpo, mas
tambm produzi-las de maneira a formar tecidos e rgos funcionais? Uma coisa
diferenciar os condrcitos e ostecitos que sintetizam a cartilagem e as matrizes dos
ossos, respectivamente; outra coisa produzir essas clulas em uma orientao
temporal e espacial gerando um osso funcional. E ainda outra coisa produzir um
osso que um mero e no uma pelve ou um fmur. A habilidade das clulas dos
membros em pressentir suas posies relativas e diferenciar-se de acordo com essas
posies tem sido o tema de intensos debate e experimentao. Como que as
clulas que se diferenciam em cartilagem do osso embrionrio so especificadas de
modo a formar dedos em uma ponta e o ombro na outra? (Seria um apndice quase
desnecessrio se a ordem fosse inversa.) Aqui, os tipos de clulas so os mesmos,
mas os padres que os originam so diferentes.
O membro dos vertebrados um rgo muito complexo com uma distribuio
assimtrica de partes. Os ossos do membro anterior, seja uma asa, uma mo, uma
nadadeira ou uma barbatana, consistem de um mero proximal (adjacente parede do
corpo), um rdio e um cbito na regio mediana, e os ossos distais do pulso e dos
dedos (Figura 18.1). Originalmente, essas estruturas so cartilaginosas, mas finalmente a maioria delas substituda por ossos. A posio de cada um dos ossos e dos
msculos no membro precisamente determinada. A polaridade tambm existe em
outras dimenses. No homem, bvio que cada mo se desenvolve como a imagem
espelhar da outra. possvel tambm a existncia de outros arranjos- como o polegar
se desenvolver no lado esquerdo de ambas as mos- mas isso no comum. Analogamente, a palma (ventral) facilmente distinta do pulso (dorsal). De alguma maneira, a estrutura tridimensional do membro anterior produzida rotineiramente. O problema fundamental da morfognese- como estruturas especficas se situam em lugares determinados- exemplificado no desenvolvimento dos membros. Como que o
mesoderma da placa lateral desenvolve capacidades formadoras de membros? Como
que dedos se formam em uma das extremidades do membro e em nenhum outro
lugar? Como que o dedo mnimo se desenvolve em uma margem do membro e o
polegar em outra?
701
702
Figura 18.1
Rdio
mero
Dgitos
Metacarpos
Cbito
Anterior
Proximal
Distal
Posterior
Somitos
703
Rim
pronfrico
Guelras
Tecido do
flanco
peribraquial
Membro
livre
Cinta do
ombro
Figura 18.2
Campo prospectivo do membro anterior da salamandra Ambystoma maculatum. A rea central contm aquelas clulas destinadas a formar
o membro propriamente dito; as clulas rodeando o membro livre so aquelas que do origem ao tecido do flanco peribraquial e a cinta
do ombro. As clulas fora dessas regies geralmente no so includas nos membros, mas
podem formar um membro se os tecidos mais
centrais so extirpados. (De acordo com Stocum
e Fallon, 1982.)
Figura 18.3
704
cauda (Figura 18.4). possvel que o cido retinico tenha causado uma transformao hometica na cauda em regenerao, reespecificando o tecido da cauda em campos de membros (Mller et al., 1996).
Crescimento do broto de membro precoce: fatores de crescimento
dos fibroblastos como indutores do broto do membro
Figura 18.4
O desenvolvimento dos membros comea quando as clulas mesenquimatosas comeam a proliferar a partir da camada somtica do mesoderma da placa lateral do campo do
membro (precursores esquelticos do membro), e a partir dos somitos (precursores
musculares do membro) (Figura 18.5). As clulas acumulam-se sob o tecido epidrmico
da nurula. A protuberncia circular na superfcie do embrio chamada broto do membro. As clulas mesenquimatosas no broto do membro se multiplicam para criar uma
protuberncia que vai se proliferar para formar um membro. Os estgios iniciais dessa
proliferao podem ser regulados pelo mesoderma intermedirio vizinho, tal como os
mesonefros (o rim primitivo). Se nesse estgio, o mesonefro de um dos lados do embrio
removido, ou se uma delgada membrana impermevel inserida entre o mesonefro e um
broto de membro, as clulas mesenquimatosas daquele broto de membro especfico
param de se multiplicar (Stephens et al., 1991; Geduspan e Solursh, 1992).
Experimentos recentes (Crossley et al., 1996) sugerem que a molcula proveniente
do mesoderma intermedirio o fator 8 de crescimento do fibroblasto (FGF8). No
mesnquima mesonfrico do pinto, nos estgios 14 e 15 (quando os prospectivos
brotos do membro comeam a aparecer), as regies de expresso de FGF8 nos
mesonefros coincidem com as regies onde se formaro os brotos de membro (Figura
18.6). Alm disso, os FGFs podem induzir a formao de membros. Uma partcula
embebida em FGF8 (ou FGFs relacionados) pode ser inserida na regio intramembro
(oposta aos somitos 21-25; veja Figuras 18.6 e 18.7) no estgio 15. Aps uma semana
de incubao, um membro ectpico l se forma. [limb2.html]
Induo da crista ectodrmica apical
A habilidade do FGF8 (ou outros FGFs) em induzir o crescimento mesodrmico do broto
do membro precoce pode ser somente uma atividade permissiva, e no instrutiva. A
formao do broto do membro necessita, alm de um indutor mesodrmico ativo, de um
ectoderma competente. O ectoderma competente para formar um broto de membro parece se localizar somente na borda entre as superfcies dorsal e ventral do embrio.
Mitomo
do somito
Precursor do
msculo
do membro
Medula
espinhal
Notocorda
Clulas
mesodrmicas
Broto do
membro
Prnefro
Figura 18.5
Precursor
esqueltico
do membro
Endoderma
Mesoderma
da placa lateral
Mesoderma
da placa lateral
*Assim chamada devido ao gene fringe de Drosophila. A procura dos homlogos do gene fringe
nos vertebrados foi motivada por estudos (a serem discutidos no prximo captulo) mostrando que
a formao da margem da asa na Drosophila depende da expresso marginal desse gene. Como os
genes hedgehog e wingless parecem ter funes na formao de membros tanto nos vertebrados
como nos insetos, vrios laboratrios procuraram os genes fringe em vertebrados para verificar se
haveria a criao do equivalente margem da asa, ou seja, a AER. Foi previsto que expresses
limtrofes entre as regies dorsal e ventral seriam crticas na formao de membros vertebrados e
invertebrados (Bryant et al., 1981; Meinhardt, 1984; Javois e Iten, 1986), mas as molculas
envolvidas s agora esto sendo identificadas.
Estgios embrionrios
Membro anterior
Somitos
Membro posterior
Enquanto o broto do membro se forma, as clulas mesodrmicas induzem o ectoderma sobrejacente a formar uma estrutura chamada crista ectodrmica apical (AER;
Figura 18.8; Kieny, 1960; Saunders e Reuss, 1974). Essa crista corre ao longo da
margem distal do broto do membro e se tornar o principal centro sinalizador para o
membro em desenvolvimento. Suas funes incluem (1) manter o mesoderma abaixo
dela em uma fase plstica e proliferativa permitindo o crescimento linear (prximodistal) do membro; (2) manter a expresso daquelas molculas que geram o eixo nteroposterior (polegar-dedo mnimo); e (3) interagir com as protenas especificando os
eixos ntero-posterior e dorsoventral permitindo a cada clula receber instrues de
como se diferenciar.
A AER est localizada na juno entre o ectoderma dorsal e o ventral. No broto
do membro precoce, s o ectoderma nessa juno tem a habilidade de formar uma
AER (Goetinck, 1964; Fraser e Abbott, 1971). Nos mutantes onde o ectoderma do
broto do membro est dorsalizado (como o mutante limbless de pinto), a AER no se
forma e o desenvolvimento do membro cessa (Carrington e Fallon, 1988). Ainda
mais, partculas embebidas com FGF no induziro uma AER quando colocadas
abaixo do ectoderma puramente dorsal ou ventral das costas ou do ventre. A juno
dorsoventral parece ser crtica. Experimentos recentes (Laufer et al., 1997; Rodriguez
e Izpisa-Belmonte, 1997; Tanaka et al., 1997) demonstraram que a aposio do
ectoderma dorsal e ventral do broto do membro do pinto necessria para causar a
formao de uma AER. Quando o ectoderma dorsal do broto do membro foi enxertado no ectoderma ventral de outro broto do membro, uma nova AER se formou em
adio original (Figura 18.9). Parece que no estgio 15 (justamente antes da formao do broto do membro), o ectoderma dorsal est sintetizando uma protena secretora
chamada Radical fringe.* Ao emergir, o broto do membro (no estgio 17) se produz
705
Mesoderma
intermedirio
Expresso
de FGF8
Mesoderma
segmentrio
Figura 18.6
Figura 18.7
706
Figura 18.8
Micrografia eletrnica de varredura de um broto de membro precoce de pinto, com sua crista
ectodrmica apical em primeiro plano. (Cortesia de K. W. Tosney.)
uma forte demarcao entre as clulas dorsais que expressam o gene radical fringe
e as clulas do ectoderma ventral que no o expressam. Durante o crescimento do
broto, a expresso do radical fringe se restringe quase exclusivamente quelas
clulas do ectoderma dorsal na margem dorsal/ventral do broto do membro. Essas
clulas comeam a expressar Fgf8 e se tornam a AER. (Como veremos, a FGF8
secretada da AER considerada crtica por sua capacidade em manter a proliferao
do mesoderma abaixo dela e manter a expresso do gene sonic hedgehog para a
organizao do eixo ntero-posterior; veja Figura 18.10.)
A importncia da margem expressando ou no o radical fringe confirmada em
estudos onde esse gene expresso ectopicamente em retrovrus. Se as clulas ventrais do broto do membro so infectadas com um retrovrus expressando radical
fringe, um novo limite criado entre as clulas que expressam o gene e aquelas que
no o expressam, e uma nova AER nela originada. Inversamente, se a expresso
ectpica de radical fringe destri a fronteira entre as clulas que o expressam e as que
no o expressam, aquela regio da AER original no se forma.
A formao da AER pode envolver uma interao entre a secreo de FGFs (tal
como FGF8) pelo mesoderma e o limite de expresso de radical fringe ao longo da
borda dorsoventral do ectoderma. A secreo limitada de FGFs pode ser crtica na
identificao de quais clulas, ao longo do flanco dorsoventral do embrio produzem
os brotos do membro. Ainda no se conhece como a borda entre expresso e no
expresso de radical fringe e os FGFs induzem a formao da AER.
Estgio 18/19
Jaqueta ectodrmica
do doador
(A)
Somitos
Enxerto
ectodrmico
AER
(B)
(C)
Estgio 15
Estgio 16
Estgio 17
Figura 18.10
Estgio 18
AER
Induzido
por Fgf8
Sinal
dependente
de Fgf8?
Proliferao
mantida
por FGF8
Somitos
Proliferao
mantida por
FGF8 + FGF4
Anterior
Posterior
shh
induzido
por FGF8
Mesoderma
intermedirio
shh mantido
por FGF8
+FGF4
Fgf4
induzido
por Shh
Ectoderma
superficial
Mesoderma da
placa lateral
707
Um modelo molecular para a iniciao do broto do membro. FGF8 secretado pelo mesoderma intermedirio e/ou expresso de radical fringe na margem ectodrmica induz a expresso de FGF8 no ectoderma superficial que
a recobre. A borda ntero-posterior est presente no estgio 16 (e talvez antes). A secreo de FGF8 pelo ectoderma induz a proliferao nas clulas mesenquimais e induz a expresso de Sonic hedgehog na regio posterior do broto do membro. A Sonic hedgehog
induz a expresso de FGF4 na poro posterior do ectoderma do broto do membro. A
FGF2 tambm produzida pelo ectoderma,
apesar de no estar claro se induzido pelo
FGF8 do mesoderma mesofrnico. (De acordo com Crossley et al., 1995.)
Fgf4 +Fgf8
AER
removida
Cessa
desenvolvimento
do membro
AER
extra
Asa
Mesoderma
do membro
anterior
Perna
Asa
Mesoderma
da Perna
Figura 18.11
708
Figura 18.12
(A)
(B)
(D)
(E)
709
(C)
Figura 18.13
Vista dorsal do padro esqueltico do pinto aps remoo total da AER do broto da asa direita de
embries em vrios estgios. A ltima foto (E) do esqueleto de uma asa normal. (de Iten, 1982,
cortesia de L. Iten.)
(A)
(B)
Figura 18.14
710
(A)
(C)
(B)
(D)
Figura 18.15
Deleo de elementos sseos do membro por deleo dos genes Hox parlogos. (A) Membro
anterior de camundongo tipo selvagem. (B) Membro anterior de camundongo produzido duplamente mutante, com a falta funcional dos genes Hoxa-11 e Hoxd-11. O cbito e o rdio esto
ausentes. (C) Sinpolidactilia resultante de homozigosidade nos locos HOXD-13. (D) Hiptese
considerando que os parlogos 5 dos genes Hox poderiam especificar determinadas regies do
membro anterior. (A, B e D de acordo com Davis et al., 1995; fotografia cortesia de M. Capecchi.
C de Muragaki et al., 1996, cortesia de B. Olsen.)
pesquisadores propuseram um modelo onde os genes parlogos especificam a identidade de uma regio do membro (Figura 18.15D). Esse modelo est sendo testado e faz
previses bvias em relao ao fentipo de outros camundongos com dupla ou tripla
eliminao (quando os parlogos 13 ou 12 so deletados).
Esse modelo tem suporte na anlise de duas mutaes naturais. Camundongos
homozigotos para um alelo de perda-de-funo de Hoxa-13 apresentam severa
malformao nas quatro patas, que desenvolvem somente um dgito, uma verso
malformada do dgito 4 (Mortlock et al., 1996). Homozigotos humanos para uma
mutao de perda-de-funo de Hoxd-13 mostram anormalidades nos ps e nas
mos onde ossos metacrpicos e metatrsicos so transformados em ossos crpicos
e trsicos curtos. Isso resulta na fuso dos dgitos (Figura 18.15C; Muragaki et al.,
1996). Em ambos os casos, o autpodo (a poro mais distal do membro) afetado
pela perda-de-funo do gene Hox mais 5. O mecanismo pelo qual os genes Hox
podem especificar o eixo prximo-distal ainda no est esclarecido, mas uma pista
vem da anlise do Hoxa-13 de galinha. A expresso ectpica desse gene (que
usualmente expresso nas extremidades distais dos membros em desenvolvimento
do pinto) parece tornar mais pegajosas as clulas que o expressam. Isso, por sua
vez, causaria condensao de ndulos cartilaginosos em formas especficas
(Yokouchi et al., 1995; Newman, 1996).
Interaes entre a AER e a zona progressiva
Os sinais moleculares da interao entre a AER e o mesnquima da zona progressiva
esto comeando a ser identificados. A diviso das clulas mesenquimatosas na zona
progressiva parece ser regulada pela secreo de membros da famlia FGF, tais como
FGF2 (Fallon et al., 1994), FGF4 (Niswander et al., 1993) e FGF8 (Mahmood et al., 1995;
Crossley et al., 1996; Vogel et al., 1996). Considera-se que esses fatores de crescimento
do fibroblasto so secretados da AER para o mesnquima adjacente (veja Capa; Figura 18.16). Ainda mais, se a AER removida, ela poder ser substituda pela implantao
de partculas esfricas (contas) cheias de FGF2, FGF8 ou FGF4 (Figura 18.17). Parece,
portanto, que a AER promove o crescimento pela secreo de fatores de crescimento
do fibroblasto (Crossley et al., 1996; Vogel et al., 1996). O FGF8 uma das primeiras
molculas identificadas na regio do ectoderma que se torna a AER, e sua expresso
crtica no crescimento do broto do membro (Figura 18.16).
Mutaes nas interaes entre a zona progressiva e a AER
A relao entre a AER e o mesnquima do broto do membro pode ser melhor apreciada
em mutaes no desenvolvimento de membros do pinto. A mutao polydactylous,
como o nome sugere, adiciona dgitos extras em cada membro. Recombinando tecidos
(A)
(B)
(C)
Figura 18.16
(D)
711
712
(A)
Remover
AER
20 horas
Forma o mero
Sem
AER
(B)
Remover
AER
Adicionar
partcula com
soluo salina
20 horas
Forma o
mero
Partcula
(C)
Remover
AER
Adicionar partcula
contendo FGF2
20 horas
mero
Rdio
Cbito
Partcula
Dgitos
(D)
mero
Rdio
Cbito
Remover
AER
Adicionar partcula
contendo FGF2
24 horas
Implantar
segunda
partcula
contendo
FGF2
20 horas
Segunda
partcula
Carpos
Figura 18.17
Habilidade de FGF2 para substituir a crista ectodrmica apical no broto do membro anterior em
desenvolvimento do pinto. (A) Quando a AER removida dos brotos da asa do pinto no estgio
20, somente se forma o mero. (B) Se uma partcula gelatinosa de lenta liberao embebida em
soluo salina colocada no mesnquima da zona progressiva, o membro ainda fica truncado e
forma somente o mero. (C) Quando um broto embebido em FGF2 colocado na zona progressiva o crescimento do broto do membro continua, e o cbito e o rdio so formados. (D) Se uma
segunda partcula contendo FGF2 colocada na zona progressiva aps a dissipao da maioria
do FGF2 da primeira partcula, o broto do membro continua a crescer e a produzir metacarpos e
dgitos. (De acordo com Fallon et al., 1994.)
Tabela 18.1
713
Mesoderma
Epiderme
Resultado
Concluso
POLIDCTILO
Polidctilo
Tipo selvagem
Tipo selvagem
Polidctilo
Polidctilo
Tipo selvagem
Mesoderma afetado
pela mutao
EUDIPLOPODIA
Eudiplopodia
Tipo selvagem
Tipo selvagem
Eudiplopodia
Tipo selvagem
Eudiplopodia
Ectoderma afetado
pela mutao
LIMBLESS
Limbless
Tipo selvagem
Tipo selvagem
Limbless
Tipo selvagem
Limbless
Ectoderma
afetado pela mutao
aPor transplante recproco entre o tipo selvagem e AER mutante e mesnquima, o compartimento aberrante da induo pode ser identificado.
mutantes e do tipo selvagem (Tabela 18.1), os defeitos podem ser traados para as
clulas mesodrmicas que induzem amplamente uma AER. No mutante eudiplopodia
(Grego, dois bons ps), alm dos dgitos extras aparecem duas seqncias completas de dedos em cada membro posterior (Figura 18.18). Experimentos semelhantes com
reconstituio mostram que aqui o defeito est no tecido ectodrmico. Embries de
pintos homozigotos para a mutao limbless iniciam a formao do broto do membro,
mas a AER no se forma. Experimentos de recombinao mostram que o ectoderma de
limbless incapaz de formar uma AER, mesmo quando colocado no mesoderma de
membro do tipo selvagem; uma crista normal pode ser formada quando ectoderma
normal enxertado no campo do membro em lugar do ectoderma mutante (Figura
18.19; Carrington e Fallon, 1988).
Alm disso, existem vertebrados naturalmente sem membros, cuja falta de membros pode ser relacionada s deficincias na interao AER-mesnquima. A praga
contra cobras no Livro do Gnesis parece ter sido dirigida extremidade distal do
broto do membro, pois a AER desses rpteis degenera-se prematuramente e ao mesmo
tempo em que ocorre a morte celular no mesnquima adjacente (Lande, 1978). No se
sabe se o defeito inicial est no mesnquima ou na AER. [limb3.html]
(A)
(B)
Figura 18.18
Seces transversais dos brotos dos membros posteriores em eudiplopodia de embries de pinto. (A) Duas AERs no broto do
membro posterior; crescimento extra no lado
dorsal formar um conjunto extra de dedos.
(B) Ambas as regies de crescimento esto
cobertas por uma AER. Recentemente foi
demonstrado (Laufer et al., 1997) que duas
reas de radical fringe aparecem no broto do
membro desse mutante, e cada uma se associa com a nova AER. (De Goetinck,1964,
cortesia de P. Goetinck.)
714
Figura 18.19
O embrio limbless no forma AER, e o defeito parece residir no ectoderma. Se o ectoderma de codorna do tipo selvagem substitui o ectoderma
mutante do pinto na regio que forma o membro anterior, a asa se desenvolver naquele lado do embrio. No se forma outro membro. (De acordo
com Carrington e Fallon, 1988; fotografia cortesia de J. Fallon.)
Informaes adicionais
&
Especulaes
Figura 18.20
(A)
(B)
Figura 18.21
Efeitos da vitamina A (um retinide) em membros de salamandra em regenerao. (A) Membro normal regenerado de axolotle (9x) com
mero, rdio e cbito pareados, carpos e dgitos. A linha pontilhada mostra o plano de amputao. (B) Regenerao aps a amputao
atravs da rea do corpo, mas aps a colocao
do blastema do membro em palmitato de retinol
por 15 dias. Aparecem um novo mero, cbito,
rdio, conjunto de carpos e conjunto de dgitos
(5x). (de Maden et al., 1982; fotografias cortesia de M. Maden.)
Soluo
controle
Blastema forma
punho e dgitos
Colocar blastema
de punho doador na
regio do ombro
do membro cortado
do hospedeiro
715
BLASTEMA
de punho
doador
Colocar blastema de
punho doador na regio do
ombro do membro
cortado do hospedeiro
Proximalizao
dos destinos
do blastema
o punho quando colocados em membros hospedeiros cortados na rea do ombro (Veja Captulo
3). Entretanto, se forem colocados em soluo de cido retinico, esses blastemas comearo a se
regenerar no local onde foram colocados no tecido hospedeiro, e geram estruturas proximais
quelas do punho. (Dados de Crawford e Stocum, 1998a,b.)
716
contendo um mero, que no deve produzir outro mero e nem comear imediatamente a produzir dgitos. No somente
o blastema regenera essas estruturas comeando no nvel prximo-distal apropriado no membro, como tambm as polaridades dos eixos ntero-posterior (polegar-dedo mnimo) e dorsoventral (punhopalma da mo) tambm correspondem
quelas do coto.
Dorsal
Ventral
Desenvolvimento
normal dos brotos
do membro nas asas
Posterior
Brotos enxertados
diferem do hospedeiro
no eixo dorsoventral
Relacionamento
de eixos entre
enxerto
(sombreado)
e hospedeiro
Brotos enxertados
diferem do
hospedeiro no eixo
ntero-posterior
Figura 18.23
Brotos enxertados
diferem do
hospedeiro nos
eixos ntero-posterior
e dorsoventral
Estgio 17
Figura 18.24
Considera-se que a diferenciao das estruturas prximo-distais depende do nmero de divises realizadas pela clula enquanto na zona progressiva, mas a informao posicional instruindo a clula quanto sua posio nos eixos ntero-posterior e
dorsoventral deve vir de outras fontes. Vrios experimentos (Saunders e Gasseling,
1968; Tickle et al.,1975; Summerbell, 1979) sugerem que o eixo ntero-posterior especificado por um pequeno bloco de tecido mesodrmico perto da juno posterior do
jovem broto do membro com a parede do corpo. Quando esse tecido de um jovem
broto de membro transplantado para uma posio no lado anterior de outro broto de
membro (Figura 18.24), o nmero de dgitos na asa resultante duplicado. Alm disso
as estruturas do conjunto extra de dgitos a imagem espelhar daquelas estruturas
normalmente produzidas. A polaridade foi mantida, mas agora a informao vem ao
mesmo tempo das direes anterior e posterior. Essa regio do mesoderma chamada
de zona de atividade polarizante (ZPA).
A distribuio e a fora da atividade de sinalizao posicional da ZPA na asa do
pinto e brotos da perna foram mapeados (Hinchliffe e Sansom, 1985; Honig e
Summerbell, 1985). Como indicado nos desenhos da Figura 18.25, a atividade polarizante
(medida aps o enxerto das clulas marginais posteriores na margem anterior do broto
do membro) maior em uma regio determinada da margem posterior e de l vai diminuindo. A atividade enfraquece enquanto progride o desenvolvimento.
A
Sonic hedgehog como definidor da ZP
ZPA
A procura de molcula(s) conferindo atividade polarizante ao broto do membro do
pinto se tornou uma das mais intensas buscas da biologia do desenvolvimento. Os
candidatos atuais a fatores da ZPA foram identificados a partir de estudos que assumiram uma homologia evolucionria dos sistemas reguladores do desenvolvimento
entre a Drosophila e os vertebrados. Como deve ser lembrado do Captulo 16, os
genes hometicos da Drosophila tm contrapartidas nos vertebrados os quais tm
Estgio 19
Estgio 21
Estgio 23
Estgio 25
Estgio 27
Figura 18.25
Mapa da atividade sinalizadora de posio enquanto o membro se desenvolve. As cores representam a intensidade de expresso de sonic hedgehog. Os nmeros representam a porcentagem de
enxertos mostrando duplicaes completas quando essas regies foram transplantadas para a
margem anterior do broto do membro precoce. (Desenhos de acordo com Honig e Summerbell,
1985, dados de expresso de Riddle et al., 1993.)
Estgio 29
717
718
Cepa infectvel de
clulas fibroblsticas
do embrio de pinto
Clulas compactadas
por centrifugao
Anterior
Cepa resistente
do embrio
hospedeiro
Plete de
clulas
secretando
Shh
Posterior
Figura 18.26
Ensaio para a atividade polarizante de Sonic hedgehog. O gene sonic hedgehog foi inserido no
promotor ativo de um vrus de pinto, e o vrus recombinante colocado em clulas fibroblsticas
cultivadas de embrio de pinto. As clulas infectadas pelo vrus foram compactadas e implantadas
na margem anterior do broto do membro de um embrio de pinto resistente infeco por esse
vrus. O vrus no podia infectar o hospedeiro, mas podia expressar e secretar altos nveis de
Sonic hedgehog. Os membros resultantes mostraram que o material secretado tinha atividade
polarizante. (De acordo com Riddle et al., 1993.)
(B)
Difuso de
curto alcance
(C)
Figura 18.27
Modelos de atividade da ZPA. (A) Modelo de funo da ZPA por sinalizao de curto alcance e
subseqente deslocamento do tecido especificado. (B) Modelo de funo da ZPA por sinais
seqenciais de curto alcance. (C) Modelo de funo de ZPA por espalhamento progressivo de um
sinal graduado, onde o tecido responsivo responde a gradiente de concentrao. (De acordo com
Tickle, 1995.)
719
720
FGF4
cido
retinico
Manter proliferao na
zona progressiva;
ativar a expresso do
gene HoxD
Desenvolvimento
esqueltico posterior
Wnt7a
Sonic
hedgehog
Figura 18.28
(especialmente a BMP2), existem outros dois importantes alvos para Sonic hedgehog.
O primeiro conjunto de alvos podem ser os genes Hoxd 5 (Figura 18.28; Hoxd-9 a
Hoxd-13). Durante o desenvolvimento normal dos membros de pinto ou camundongo, desenvolve-se um padro caracterstico de expresso de genes Hoxd concentricamente aninhados e centrados na margem posterior que tinha sido definida como a
ZPA (Doll et al., 1989; Nelson et al., 1996). A regio mais prxima do centro tem todos
esses genes Hoxd 5 expressos, mas a expresso desses genes cai seqencialmente
medida que as clulas esto progressivamente mais afastadas da ZPA. Alm disso, o
transplante de ZPA ou de clulas secretoras de Sonic hedgehog para a margem anterior leva formao de padres de imagens espelhares na expresso dos genes Hoxd
e padres de imagens espelhares de dgitos (Izpisa-Belmonte et al., 1991; Nohno et
al., 1991; Riddle et al., 1993).
Originalmente parecia haver um cdigo pelo qual a expresso dos diferentes genes
HoxD especificaria o padro ntero-posterior dos dgitos, mas estudos recentes mostram que o problema mais complexo. Sonic hedgehog pode estar agindo em conjuno com sinais da AER na especificao de padres. Primeiro, a expresso de genes
Hoxd controlada pela cooperao de AER e ZPA. Na ausncia de uma AER, a Sonic
hedgehog incapaz de induzir a expresso de genes Hoxd (Laufer et al., 1994). Entretanto, a adio de cido retinico pode substituir a falta de AER (Helms et al., 1996;
Ogura et al., 1996).* H muito tempo se sabe que o cido retinico induz polarizao de
membros. Partculas embebidas em cido retinico podem mimetizar o tecido ZPA, e
induzir uma reverso da imagem espelhar na polaridade ntero-posterior (Tickle et al.,
1982, 1985), e uma nica partcula embebida com cido retinico pode substituir uma
ZPA quando o tecido ZPA normal foi removido (Eichele, 1989). Entretanto, o contedo
de cido retinico na ZPA no parece suficientemente alto para ativar genes
responsivos ao cido (Prancha 13; Noji et al., 1991; Rossant et al., 1991), e consideraes tericas (veja Wanek et al., 1991) indicam que pouco provvel que o cido
retinico seja o agente ativo da ZPA. De outro lado, estudos recentes sugerem que o
O cido retinico morfogeneticamente ativo no broto do membro pode diferir de acordo com
a espcie. No membro do pinto, o cido retinico ativo parece ser o cido didehidroretinico.
Entretanto, essa forma no encontrada no broto do membro de camundongo (Stratford et al.,
1996).
721
722
(A)
(B)
Figura 18.29
solas em ambas as superfcies de suas patas, mostrando que a Wnt7a era necessria
para a padronizao dorsal do membro (Figura 18.29). A Wnt7a induz o gene Lmx1 no
mesnquima dorsal, e esse gene codifica um fator de transcrio que parece ser essencial para a especificao do destino das clulas dorsais no membro (Riddle et al., 1995;
Vogel et al., 1995). Se esse fator expresso nas clulas do mesnquima ventral, elas
desenvolvem um fentipo dorsal.
Os camundongos deficientes em Wnt7a tambm no tinham dgitos posteriores,
sugerindo que o Wnt7a tambm era necessrio para o eixo ntero-posterior. Yang e
Niswander (1995) fizeram observaes similares no embrio de pinto. Esses pesquisadores removeram o ectoderma dorsal do membro em desenvolvimento e observaram que esse procedimento resultou na perda dos elementos esquelticos posteriores dos membros. Esses membros no tinham dgitos posteriores porque a expresso de sonic hedgehog e Fgf4 estavam faltando. A expresso de Wnt7a induzida por
vrus podia substituir o ectoderma dorsal e restaurar a expresso de sonic hedgehog
e o padro posterior. A sntese de Sonic hedgehog estimulada pela combinao
das protenas Wnt7a e FGF4. Os trs eixos do embrio de pinto so todos interrelacionados e coordenados.
Asa
Perna
Soro
TGF
cido retinico
Figura 18.30
Essa deposio variada de fibronectina pode ser muito importante considerando as diferenas entre a perna e a asa. A localizao, temporalidade e arquitetura
na deposio de cartilagem em culturas de tecido do broto do membro so estritamente paralelas deposio de fibronectina. Em culturas de asa, as condensaes
de cartilagem eram amplas e planas; em culturas de perna, elas eram compactas e
esferoidais. Em ambos os casos, a deposio de cartilagem era paralela localizao da fibronectina (Downie e Newman, 1995). Portanto, existem diferenas inerentes entre as clulas mesenquimatosas precartilaginosas nos membros anteriores e posteriores, e que so responsveis pelas respostas diferentes aos fatores
de crescimento e pela diferente deposio de fibronectina. A disposio de
fibronectina crtica no direcionamento da colocao e extenso da condrognese.
O mecanismo pelo qual se d a formao e bifurcao da cartilagem para formar o
esqueleto do membro assunto de grande interesse. [limb4.html]
Recentemente foi demonstrada a expresso diferenciada de pares relacionados de
fatores de transcrio em brotos de membros anteriores e posteriores. No pinto, Hoxc4 e Hocx-5 so expressos nos brotos das asas, enquanto que Hocx-9, Hocx-10 e
Hocx-11 so expressos exclusivamente nos brotos das pernas (Nelson et al., 1996). O
gene tbx5 semelhante ao Brachyury transcrito nos membros anteriores do camundongo, enquanto o gene estreitamento relacionado, o tbx4 expresso nos membros
posteriores (Gibson-Brown et al., 1996). Ainda tem que ser verificado se qualquer um
desses genes causalmente envolvido ao direcionar a especificao para membros
anteriores ou membros posteriores*. Entretanto, a perda de TBX5 humana resulta na
sndrome de Holt-Oram, caracterizada por anormalidades do corao e membros superiores (Basson et al., 1996; Li et al., 1996). As pernas no so afetadas.
*Quando se refere mo tem-se um conjunto ordenado de nomes para especificar cada dgito
(Digitus pollicis, d. indicis, d. medius, d. annularis e d. minimus, respectivamente do polegar ao
dedo mnimo). No existe tal nomenclatura para os dgitos do p, mas o plano proposto por Phillips
(1991) tem muito mrito. Os dgitos do p, desde o hlux at o dedinho, seriam chamados porcellus
fori, p. domi, p. carnivorus, p. non voratus e p. plorans domi, respectivamente.
Rede de fibronectina
723
724
Informaes adicionais
&
Especulaes
Lies de limbless
tante limbless pode formar brotos de membros, mas esses brotos regridem porque no forma uma
AER. Estudos recentes sobre a expresso gnica nesse mutante mostra que o
brotamento do membro acompanhado
por padres normais de expresso
gnica que no so estabelecidos pelos trs centros de sinalizao. Esses
dados sugerem que os padres de expresso gnica, normalmente associados ao desenvolvimento do membro
tetrpode, teriam se dado de qualquer
maneira e representam um pr-padro
que dirige o desenvolvimento desse
membro (Ros et al., 1996). Os centros
sinalizadores somente reforam e suportam esse padro.
Zona
necrtica
interior
(B) PRIMRDIO DA PERNA DO PINTO
Morte celular extensa
Zona necrtica
interdigital
Zona
necrtica
anterior
Zona
necrtica
posterior
Zona
necrtica
interior
Receptor de
cido retinico
CRBP
msx-1
Figura 18.31
Padres de morte celular em primrdios de pernas de embries de (A) pato e (B,C) de pinto.
Sombreamento indica reas de morte celular. No pato, a morte celular mnima, enquanto que
existem regies de extensa morte celular no tecido interdigital da perna do pinto (De acordo com
Saunders e Fallon, 1966.)
725
726
Informaes adicionais
&
Especulaes
Estgio 21
Mesnquima
Mesnquima
Dobra ectodrmica
apical da nadadeira
Estgio 26
Figura 18.32
(A)
(B)
(C)
727
Desenvolvimento normal
Broto do
membro
Pinto
Expresso
de shh
Expresso de hh
Membro
embrionrio
Drosophila
Disco
imaginal da asa
Asa
adulta
Figura 18.34
728
LITERATURA CITADA
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transferrin on amphibian limb regeneration: A
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limb. Cell 84: 127-136.
Basler, K. and Struhl. G. 1993. Compartment boundaries and the control of Drosophila limb pattern
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Hinchliffe, J. R. and Sansom, A. 1985. The distribution of the polarizing zone (ZPA) in the
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Rubin, L. and Saunders, J. W., Jr. 1972. Ectodermal-mesodermal interactions in the growth
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temporal limits of the ectodermal induction. Dev.
Biol. 28: 94-112.
731
19
Metamorfose: o direcionamento
hormonal do desenvolvimento
extremamente difcil isolar hormnios de embries pois quantidades muito pequenas
desses so suficientes para concretizar sua ao. Portanto, algumas das anlises mais
detalhadas do controle hormonal do desenvolvimento foram centralizadas na dramtica reprogramao do desenvolvimento conhecida como metamorfose.
Em muitas espcies de animais, o desenvolvimento embrionrio leva a um estgio
larval com caratersticas muito diferentes daquelas do organismo adulto. Muito freqentemente, as formas larvais so especializadas para algumas funes tais como crescimento ou disperso. A larva pluteus do ourio-do-mar, por exemplo, pode se deslocar em
correntes ocenicas, enquanto o ourio adulto leva uma existncia sedentria. As larvas, em forma de lagarta, das borboletas e mariposas so especializadas para a alimentao, ao passo que suas formas adultas so especializadas para o vo e a reproduo e
freqentemente no possuem as partes da boca necessrias para a alimentao. A diviso de funes entre a larva e o adulto freqentemente bastante distinta (Wald, 1981).
As efemridas eclodem de ovos e se desenvolvem durante vrios meses. Todo esse
desenvolvimento lhes permite passar um dia como insetos alados completamente desenvolvidos, acasalando rapidamente antes de morrer. Como seria de se esperar dessa
discusso, a forma larval e o adulto com freqncia vivem em ambientes diferentes. Mais
ainda, como primeiro observado por Weismann (1875), as larvas devem ter sua prpria
adaptao para lhes ajudar a sobreviver. A borboleta viceroy adulta (limenitis archippus)
mimetiza a menos apetitosa borboleta monarca, mas a lagarta viceroy no se parece com
a bonita lagarta da monarca. Ao contrrio, a larva viceroy escapa da deteco parecendo
excremento de pssaros (Begon et al., 1986).
733
734
Durante a metamorfose, hormnios especficos reativam processos do desenvolvimento, e o organismo inteiro se modifica preparando-se para sua nova existncia.
Essas modificaes no so somente na forma. Em girinos de anfbios, a metamorfose
causa no s a maturao desenvolvimental de enzimas do fgado, da hemoglobina e
de pigmentos do olho, como tambm remodela os sistemas nervoso, digestivo e
reprodutor. Portanto, a metamorfose uma fase de mudanas dramtica no desenvolvimento, afetando o organismo todo.
Este captulo focaliza trs casos nos quais os hormnios reativam os processos de
desenvolvimento aps o nascimento: metamorfose em anfbios, metamorfose em insetos e desenvolvimento das mamas do camundongo.
Metamorfose anfbia
Em anfbios, a metamorfose geralmente associada com as mudanas que preparam
um organismo aqutico para uma existncia terrestre. Em urodelos (salamandras), as
modificaes incluem a reabsoro das nadadeiras da cauda, a destruio das guelras externas e a mudana da estrutura da pele. Nos anuros (rs e sapos), as mudanas metamrficas so mais surpreendentes, e quase todos os rgos so modificados (Tabela 19.1). As modificaes na forma so muito bvias (Figura 19.1). Mudanas regressivas incluem a perda dos dentes crneos e das guelras internas do girino,
como tambm a destruio de sua cauda. Ao mesmo tempo, so evidentes os pro-
Tabela 19.1
Sistema
Larva
Adulto
Locomotivo
Respiratrio
Circulatrio
Nutricional
Nervoso
Desenvolvimento de msculos
oculares, membrana nictitante,
rodopsina, perda do sistema de linha
lateral- degenerao dos neurnios de
Mauthner; membrana timpnica
Excretrio
Principalmente amnia,
pouca uria (amonotlico)
Integumentrio
cessos construtivos como o desenvolvimento dos membros e a construo da glndula dermide. Para a locomoo, a cauda tipo remo retrocede enquanto os membros
anteriores e posteriores se diferenciam. O crnio cartilaginoso do girino substitudo pelo crnio predominantemente sseo da pequena r. Os dentes crneos,
construdos para dilacerar plantas das lagoas, desaparecem enquanto a boca e a
mandbula assumem novas formas e se desenvolve o msculo da lngua. Enquanto
isso, o amplo intestino caracterstico dos herbvoros se encurta para se adaptar
dieta mais carnvora da r adulta. As guelras regridem e os arcos das guelras degeneram. Os pulmes aumentam, e msculos e cartilagem se desenvolvem para bombear ar para dentro e para fora dos pulmes. O sistema sensorial muda, tambm,
assim como o sistema da linha lateral do girino degenera e o olho e o ouvido sofrem
mais diferenciaes. No ouvido se desenvolve o ouvido mdio e a membrana do
tmpano, to caracterstica de rs e sapos. No olho, aparecem as membranas nictitantes
e as plpebras; o pigmento do olho tambm muda. Nos girinos, como nos peixes de
gua doce, o fotopigmento mais importante da retina a porfiropsina, um complexo
entre a protena opsina e o aldedo da vitamina A2. Em rs adultas, o pigmento muda
para rodopsina, o fotopigmento caracterstico dos vertebrados terrestres e martimos. A Rodopsina um conjugado de opsina e o aldedo da vitamina A1 (Wald, 1945,
1981; Smith-Gill e Carver, 1981; Hanken e Hall, 1988).
Outros eventos bioqumicos tambm esto associados metamorfose. A hemoglobina do girino liga o oxignio mais rapidamente e o libera mais lentamente do que
a hemoglobina do adulto (McCutcheon, 1936). Alm disso, Riggs (1951) mostrou
que a ligao do oxignio pela hemoglobina do girino independente do pH, ao
passo que a hemoglobina da r (como a maioria das outras hemoglobinas de vertebrados) mostra um aumento na ligao de oxignio com o aumento do pH (efeito de
Bohr). Outra mudana bioqumica na metamorfose de certas rs a induo daquelas enzimas necessrias para a produo de uria. Girinos, como a maioria dos peixes
de gua doce so amonotlicos; ou seja, eles excretam amnia. Muitas rs adultas
(tal como o espcie Rana mas no o Xenopus) so ureotlicos, excretando uria,
como a maioria dos vertebrados terrestres. Durante a metamorfose, o fgado desenvolve enzimas necessrias para produzir uria de dixido de carbono e amnia.
Essas enzimas constituem o ciclo da uria, e cada uma delas aparece durante a
metamorfose (Figura 19.2).
Controle hormonal da metamorfose de anfbios
Todas essas variadas modificaes so induzidas pela secreo dos hormnios da
tireide tiroxina (T4) e triiodotironina (T3), durante a metamorfose (Figura 19.3). Atualmente se acredita que T3 o hormnio ativo, pois ele causa mudanas metamrficas
em girinos tireoidectomizados em concentraes muito menores do que o faria o T4
(Kistler et al., 1977; Robinson et al., 1977). O controle da metamorfose pelos hormnios
da tireide foi demonstrado por Gudernatsch (1912), observando que girinos sofriam
uma metamorfose prematura ao serem alimentados com a glndula tireide de carneiro
pulverizada. Allen (1916) e Hoskins e Hoskins (1917) mostraram que pela retirada do
rudimento da tireide de girinos precoces, a larva no sofria metamorfose tornandose, em lugar disso, um girino gigante.
MODIFICAES REGIONALMENTE ESPECFICAS. Os vrios rgos do corpo
735
Figura 19.1
736
Figura 19.2
(A)
Carbamoilfosfato
sintase
Carbamoilfosfato
Ornitina
carbamoiltransferase
Citrulina
Ornitina
Aspartato
Argininosuccinato
sintetase
Uria
Arginase
Argininosuccinato
Arginina
Argininosuccinato
liase
Fumarato
(B)
Carbamoilfosfato sintase
Ornitina carbamoiltransferase
Argininosuccinato sintetase
Argininosuccinato liase
Excreo de uria
Estgio do desenvolvimento
737
Tiroxina (T 4 )
Triiodotironina (T 3 )
Figura 19.3
torna uma grande sacola de enzimas proteolticas (Figura 19.4). As principais enzimas
proteolticas parecem ser as colagenases e outras metaloprotenases cuja sntese depende dos hormnios da tireide. Se um inibidor de metaloprotenases (TIMP) adicionado s caudas, ele impede a regresso da cauda induzida pelo hormnio da tireide
(Oofusa e Yoshizato, 1991; Patterson et al., 1995).
A resposta aos hormnios da tireide intrnseca ao prprio rgo e no depende dos tecidos vizinhos. Na epiderme, a resposta aos hormnios tireoidianos depende de qual parte do corpo a epiderme est cobrindo. As clulas epidrmicas da
cabea e do corpo do girino sofrem uma lenta renovao (como esperado na pele), e
T3 no modifica essa velocidade. Na cauda, entretanto, T3 causa um rpido aumento
na queratinizao e morte dessas clulas. Tambm se d uma supresso, especfica
para a cauda, das divises das clulas precursoras que poderiam originar mais clulas epidrmicas. O resultado a morte das clulas epidrmicas da cauda enquanto
Figura 19.4
738
(A)
(B)
Extremidade da
cauda transplantada
no tronco
Figura 19.5
Cauda
739
Figura 19.6
740
ao seu estilo predatrio de vida. Para alcanar sua presa, a r deve enxergar em trs
dimenses. Ou seja, ela deve adquirir um campo de viso binocular onde os sinais
de ambos os olhos convergem no crebro. No girino, o olho direito inerva o lado
esquerdo do crebro e vice-versa. No existem projees ipsilaterais (do mesmo
lado) dos neurnios da retina. Entretanto, durante a metamorfose essas vias
ipsilaterais adicionais emergem, permitindo que sinais de ambos os olhos atinjam a
mesma rea do crebro (Currie e Cowan, 1974; Hoskins e Grobstein, 1985a). Em
Xenopus, essas novas vias neuroniais no resultam da remodelao de neurnios
existentes, mas da formao de novos neurnios que se diferenciam em resposta
aos hormnios da tireide (Hoskins e Grobstein, 1985a,b). Tanto o movimento dos
olhos para sua nova posio como a diferenciao de novos neurnios que estendem processos ipsilaterais para o crebro so modificaes dependentes de hormnios da tireide.
Outros neurnios tambm sofrem mudanas profundas. Algumas clulas nervosas morrem, como aquelas que inervam os msculos da cauda de girinos (Forehand e
Farel, 1982). Essa morte neuronial parece ser uma outra resposta ao hormnio da
tireide, e no causada pela morte do tecido alvo. Outros neurnios, como certos
neurnios motores na mandbula do girino trocam sua fidelidade do msculo larval
para o msculo adulto recm-formado (Alley e Barnes, 1983). E ainda outros neurnios, como aqueles inervando a lngua (um msculo recm-formado, no presente na
larva) estiveram dormentes durante o estgio de girino e s iniciam a formao de
conexes durante a metamorfose (Grobstein, 1987). O crebro tambm sofre mudanas
em sua estrutura durante a metamorfose. Portanto, o sistema nervoso dos anuros
sofre enorme reestruturao durante a metamorfose. Alguns neurnios morrem, outros nascem, e outros mudam sua especificidade.
MUDANAS DE COMPORTAMENTO. A metamorfose tambm traz mudanas de
codificando as novas enzimas do fgado adulto. Mori e colaboradores (1979) mostraram que muito do aumento de carbamoilfosfato sintase pode ser atribudo ao aumento
da transcrio do seu gene.
O mtodo de transferncia de manchas, onde mRNA radioativo de girinos da r boi
(bullfrog) na fase premetamrfica e em metamorfose hibridizado com genes clonados,
demonstrou trs tipos de resposta aos hormnios da tireide. A transcrio de um
conjunto de genes aumenta em resposta a uma metamorfose induzida natural ou experimentalmente; a transcrio de um outro conjunto de genes dramaticamente reduzida; e um terceiro conjunto de genes permanece inalterado pelos hormnios da tireide
(Lyman e White, 1987; Mathison e Miller, 1987). A transcrio dos mRNAs para
albumina, globina adulta, queratina da pele adulta e o homlogo de Sonic hedgehog
em Xenopus controlada por T3. A transcrio do gene sonic hedgehog interessante, pois sugere que o padro regional de formao de rgos durante a metamorfose
pode ser conseqncia do reaparecimento de algumas das mesmas molculas que
haviam estruturado o embrio (Stolow e Shi, 1995).
Mas essas so respostas ao T3 relativamente tardias. A resposta a T3 mais precoce
a ativao transcricional dos genes do receptor do hormnio da tireide (TR) (Yaoita
e Brown, 1990; Kawahara et al., 1991). Os receptores de hormnios da tireide so
membros de uma superfamlia de receptores de hormnios esterides dos fatores de
transcrio. Existem dois tipos principais de TR, TR e TR, e os mRNAs de ambos
esto presentes em nveis relativamente baixos antes do incio da metamorfose (Tabela 19.2; Kawahara et al., 1991; Baker e Tata, 1992). Entretanto, a sntese desses mRNAs
acelerada dramaticamente ao se iniciar a metamorfose. A injeo de T3 exgeno causa
um aumento de 2 a 5 vezes na mensagem de TR e um aumento de 20 a 50 vezes no
mRNA para TR. Essa auto-induo da mensagem do receptor de T3 pelo prprio T3
pode ter um papel significativo na acelerao da metamorfose (Figura 19.7). Quanto
mais receptores de T3 tiver um tecido, mais competente ele ser para responder
pequenas quantidades de T3. Portanto, o clmax metamrfico, quando as mudanas
visveis da metamorfose ocorrem rapidamente, pode ser conseqncia de um aumento
na produo e induo de mais receptores de T3. O mecanismo dessa induo no
conhecido, mas Kanamori e Brown (1992) mostraram que a acelerao na formao do
mRNA de TR significativamente bloqueada por inibidores da sntese de protenas.
Assim, outras protenas esto provavelmente envolvidas na responsividade de genes
de TR ao T3. O TR no funciona sozinho, mas forma um dmero com o receptor retinide,
RX. Esse dmero liga hormnios da tireide e pode entrar no ncleo para efetuar a
transcrio (Wong e Shi, 1995).
Tabela 19.2
Acumulao relativa de
e em
mRNA TR
girinos de Xenopus
aps tratamento com
T3 e prolactina
Unidades relativas
TR
TR
505
24
1290
368
Prolactina + T3
799
<10
Prolactina
405
43
Tratamento
Nenhum
T3
741
742
(A) PREMETAMORFOSE
Concentrao baixa de tirotropina
Concentrao
baixa de T3 e T4
Concentrao baixa
do receptor de T3
(B)
METAMORFOSE PRECOCE
(PROMETAMORFOSE)
Concentrao
do receptor
de T3 aumenta
(C)
CLMAX METAMRFICO
Alta
concentrao do
receptor de T3
Gene do receptor de T3
Transcrio
(Nenhuma transcrio)
Outros genes responsivos a T3
Transcrio
Ligao ao receptor
de T3 estimula a
produo de mais
receptores de T3
Aumenta transcrio
dos genes induzidos
por T 3
Transcrio
Transcrio
Ligao ao receptor de T3 estimula
a transcrio de outros genes
Transcrio
Transcrio
Figura 19.7
Informaes adicionais
&
743
Especulaes
Heterocronia
Neotenia
Em certas salamandras, a maturidade sexual ocorre em uma fase que considerada larval. O sistema reprodutivo e as clulas germinativas amadurecem, enquanto
o resto do corpo retm a forma juvenil ao
longo de sua vida. Na maioria dos casos,
a metamorfose no se concretiza, e a maturidade sexual se d em um corpo larval.
A axolotle Mexicana, Ambystoma mexicanum, no sofre metamorfose na natureza porque sua glndula pituitria no libera a forma ativa do hormnio estimulante da tireide (TSH) para que seja estimulada a sntese de T3 em sua glndula tireide
(Prahlad e De-Lanney, 1965; Norris et al.,
1973; Taurog et al., 1974). Assim, quando
os pesquisadores forneceram A. mexicanum o hormnio da tireide ou TSH, eles
observavam uma metamorfose em um adulto no encontrado na natureza (Huxley,
1920). Outras espcies como a A. tigrinum,
s sofrem metamorfose se receberem sinais do ambiente. Isso no acontecendo,
elas se tornam neotnicas e realizam, como
(A)
(B)
Figura 19.8
Metamorfose induzida no axolotle. (A) Condio normal do axolotle. (B) Espcimen tratado com
tiroxina para induzir a metamorfose. (Cortesia de G. Malacinski.)
De Beer (1940) e Gould (1977) especularam que a neotenia um dos fatores importantes na evoluo de grupos taxonmicos mais complexos. Retardando o desenvolvimento de tecidos somticos, se d
seleo natural um substrato mais flexvel. De acordo com Gould, a neotenia estaria fornecendo um escape da especializao. Os animais podem abandonar suas
formas adultas especializadas, retornar
labilidade da juventude e se preparar para
novas direes evolucionrias.
Prognese
Na prognese, a maturao das gnadas
acelerada enquanto o resto do corpo se
desenvolve normalmente a um certo estgio. A prognese permitiu que certas espcies de salamandra encontrassem novos
nichos ecolgicos. Bolitoglossa occidentalis uma salamandra tropical diferente
de outros membros do seu gnero, por viver em rvores. Essa salamandra palmpedes e tem um corpo pequeno, condies
adequadas para uma vida arbrea; os ps
produzem a suco para a subida e o corpo pequeno torna a trao eficiente.
Alberch e Alberch (1981) mostraram que
744
Estmulos externos
Hipotlamo
Ambystoma tigrinum
Ambystoma gracilus
Hormnio liberador de
tirotropina (TSH-RF)
Pituitria
Ambystoma mexicanum
Hormnio
estimulante da tireide
Tireide
Tiroxina,
Triiodotironina
Eurycea neotenes
Espcies de Necturus
e Siren
Figura 19.9
(A)
(B)
(C)
(D)
Figura 19.10
(A)
(B)
Rudimento do
ourio-do-mar
(C)
Estmago
(D)
Rudimento do
ourio-do-mar
Apndices
adultos
Figura 19.11
Metamorfose normal da larva pluteus para adulto no ourio-do-mar Lytechinus pictus. (A) Larva
pluteus, 8 dias aps a fertilizao. (B) Larva pluteus de 11 dias com rudimento do ourio-do-mar
e bolsa celmica esquerda. (C) Uma pluteus de 19 dias com o rudimento do ourio-do-mar em
desenvolvimento. (D) Cerca de 11 minutos aps a fixao ao substrato, os braos da larva
comeam a ser reabsorvidos. (De Hinegardner, 1969, cortesia de R. T. Hinegardner.)
Intervalos de tamanho
m)
de ovo (
60 - 345
Tipo de desenvolvimento
Larva pluteus com alimentao
280
300 - 350
19
400 - 2000
745
746
Figura 19.12
DESENVOLVIMENTO INDIRETO
S. purpuratus, H. tuberculata
Seqestro do adulto
para o primrdio
da bolsa celmica
Destinos em 32 clulas
Pluteus
4 semanas
DESENVOLVIMENTO DIRETO
Ourio-do-mar
juvenil
H. erythtogramma
Destinos em
32 clulas
4 dias
Sem alongamento do
arquntero, iniciao
do esqueleto larval,
formao do intestino
larval ou seqestro
do primrdio embrionrio
Metamorfose em insetos
Everso e Diferenciao dos Discos Imaginais
Enquanto a metamorfose em anfbios caracterizada pela remodelao de tecidos
existentes, a metamorfose nos insetos freqentemente envolve a destruio de tecidos larvais e sua substituio por uma populao de clulas totalmente diferente.
Existem trs padres principais de desenvolvimento dos insetos. Alguns poucos
insetos, como os poduras (subordem dos colmbolos) no tm o estgio larval e se
desenvolvem diretamente. Outros insetos, notavelmente gafanhotos e insetos
rastejantes, sofrem uma metamorfose gradual hemimetablica (Figura 19.13A). rgos adultos so formados sem uma descontinuidade intensa. Os rudimentos da asa,
rgos genitais e outras estruturas adultas esto presentes na ecloso, e se tornam
mais maduros em cada muda. Na ltima muda, o inseto emergente um adulto alado e
sexualmente maduro. A forma larval do inseto hemimetablico chamada de ninfa.
Nos insetos holometablicos (moscas, besouros, mariposas e borboletas) existe
uma transformao dramtica e sbita entre os estgios de larva e adulto (Figura
19.13B). A larva juvenil (lagarta, verme, larva de inseto) sofre uma srie de mudas
enquanto se torna maior. Uma larva de inseto recm-eclodida coberta com uma dura
cutcula. Para crescer, o inseto precisa produzir uma cutcula nova e maior, como
tambm descartar a cutcula velha. Portanto, o desenvolvimento ps-embrionrio
(A) DESENVOLVIMENTO
HEMIMETABLICO
(B)
DESENVOLVIMENTO
HOLOMETABLICO
Muda
Muda
Muda
Muda
Muda
Muda
Muda
Muda
Muda e metamorfose
Metamorfose
Adulto
Adulto
Figura 19.13
747
748
Figura 19.14
Discos para:
As localizaes e os destinos desenvolvimentais dos discos imaginais de Drosophila melanogaster. (De acordo com Fristrom
et al., 1969.)
Parte da boca
Discos imaginais
Placa frontal e
lbio superior
Antena
Cabea
Olho
Trax
Perna
Haltere
Asa
Abdmen
Genitlia
Larva de
Drosophila
Metamorfose
Adulto de
Drosophila
(A)
749
(B)
Figura 19.15
Fmur
Coxa
Membrana
peripodial
T2-5
T1
Fmur
Tbia
Tbia
Trocanter
T1
Tbia
Fmur
Tbia
T1
Fmur
T2-5
Coxa
Garra
Fmur
Trocanter
Coxa
(A)
T1
T2-5
Garras
Trax
presuntivo
(B)
Fmur
Trocanter
Trax
presuntivo
Tbia
Coxa
Trocanter
Trax
presuntivo
(C)
Tarso
Figura 19.16
(D)
Garras
750
Figura 19.17
(A)
(B)
(C)
Modificaes na forma da clula durante o alongamento do disco imaginal da perna da Drosophila. Superior: Sees pticas atravs do segundo disco da perna em alongamento. As flechas marcam os segmentos basitarsais, e a barra de calibrao representa 100m. Inferior:
Aumento maior (barra de calibrao representa
10m) dos pices celulares atravs da rea
basitarsal. Os limites celulares esto marcados
com faloidina marcada por fluorescncia. (A)
Incio do estgio prepupal. (B) Prepupa com 6
horas. (C) Disco da perna de uma prepupa em
fase inicial tratada com tripsina. As clulas
basitarsais esto inicialmente comprimidas ao
longo do eixo prximo-distal. Por tratamento
com hidroxiecdisona ou tripsinizao, a compresso liberada, e as clulas se expandem
para alongar o tecido. (de Condic et al., 1990,
cortesia dos autores.)
Informaes adicionais
&
Especulaes
751
10 horas
Embrio maduro
Figura 19.18
(A)
Gene vestigial
Protena
GAL4
Intensificador
do olho
GAL4
Elemento
ligante de
GAL4 (USP)
Vestigial expresso
ectopicamente nas
clulas do olho
(B)
Vista ventral da cabea da Drosophila
Crescimento semelhante
asa a partir do olho ventral
O eixo dorsoventral
No segundo instar da larva, um segundo
eixo, o dorsoventral determinado no disco
da asa. O limite D/V se situa na futura margem da lmina da asa, assim separando as
superfcies superior e inferior da asa (Bryant,
1970; Garcia-Bellido et al., 1973). O gene
envolvido nesse evento de compartimentao o apterous. Clulas expressando o
gene apterous se tornam as clulas dorsais
Olho
Figura 19.19
752
Primeiro instar
Anterior
Posterior
Segundo instar
Ventral
Dorsal A
Margem
Figura 19.20
Compartimentao e expresso gnica no disco da asa. (A) No primeiro instar da larva foi
formado o eixo ntero-posterior e manifestado pela expresso do gene engrailed no compartimento posterior. No segundo instar, forma-se o eixo dorsoventral, e visto pela expresso do gene apterous na futura superfcie
dorsal. No terceiro instar da larva, as bordas da
expresso de engrailed se estendem ligeiramente alm do limite de A/P. Onde h interao das
protenas secretadas e da membrana na juno
dos eixos D/V e A/P, as clulas so determinadas a se tornar a extremidade distal da asa (X).
(De acordo com Blair, 1995.)
Ventral
Dorsal
Lmina da asa
Adulto
Dorsal
Ventral
Margem
engrailed
apterous
ambos
perna realizada por interaes nos limites entre os eixos D/V e A/P.
Na perna, a protena Hedgehog do
compartimento posterior induz as clulas
mais prximas do compartimento anterior
dorsal, a secretar a protena Decapentaplegic e induz a protena Wingless das
clulas mais prximas do compartimento
anterior ventral. Ambas as protenas, Decapentaplegic e Wingless ativam o gene
optomotorblind, cujo produto protico
promove o crescimento dos apndices do
membro (Wilder e Perrimon, 1995; Grimm
e Pflugfelder, 1996). Ainda mais, onde essas trs protenas difusveis se encontram
se define a extremidade mais distal do
(B)
(Prancha 15; Frontispcio; Blair, 1993; DiazBenjumea et al., 1993). Quando o apterus
deletado, todas as clulas no disco adquirem destinos ventrais. Tanto engrailed
como apterous so considerados genes
seletores pois eles regulam o destino de um
compartimento. Da mesma maneira que os
genes hometicos seletores discutidos no
Captulo 14, esses genes contm homeoboxes que parecem codificar fatores de transcrio. Na asa, no h crescimento ao longo
do eixo D/V, pois o ectoderma permanece
com a espessura de uma camada de clulas
em cada lado da margem da asa. No se
sabe o que causa a polaridade inicial do D/
V no disco da perna.
O eixo prximo-distal
A interao entre os eixos D/V e A/P nos
seus limites crtica para o crescimento
ao longo do eixo prximo-distal. Durante
a metamorfose, a distalizao do eixo
prximo-distal da base do trax para fora
em direo extremidade da asa ou da
Distalless
Anterior
Posterior
(C)
Prancha 22
Expresso de sonic hedgehog no
embrio do pinto de trs dias.
Prancha 23
Expresso de sonic hedgehog no embrio
do pinto de dez dias.
O sonic hedgehog est envolvido em numerosas interaes indutivas nas quais um tecido influencia a diferenciao de outro tecido. Hibridizao in situ da
montagem total encontra mRNA de sonic hedgehog
na notocorda, clulas da placa do assoalho neural,
intestino anterior e mediano e no mesoderma do broto
do membro posterior. Captulos 7, 8 , 15 e 18. (Fotografia cortesia de C. Tabin.)
Prancha 24
xpressa em precursores da clula muscular
expressa
muscular..
A protena Myf-5 e
Prancha 25
Expresso assimtrica do gene nodal no
embrio do pinto de 24 horas.
Prancha 26
Regulao da expresso
hometica dos genes na
formao das patas dos insetos.
Prancha 27
A protena Wingless tem um papel crtico na organizao do disco alar imaginal de Drosophila
Drosophila..
Clulas na juno entre os compartimentos dorsal e ventral do disco alar induzem a expresso da protena Wingless
em uma estreita faixa de clulas abarcando esse limite. A
protena Wingless induz ento a expresso de outras protenas tal como a Vestigial (aqui corada de vermelho) a
vrios dimetros de distncia. Captulo 19. (Fotografia
cortesia de K. Basler.)
Prancha 28
Expresso ectpica do gene eyeless de Drosophila causa a
formao de novos olhos em outras regies do adulto.
Prancha 30
Expresso do fator de transcrio Oct4
no blastocisto do camundongo.
Prancha 29
Polifenismo sazonal de Araschina levana
levana,,
a borboleta mapeada europia.
Vrias espcies de borboletas desenvolvem-se de maneira diferente nas diferentes estaes do ano. Em A. levana, a forma de vero representada no alto;
a forma de primavera representada abaixo. Neste caso, as diferenas
desenvolvimentais so produzidas pelo ambiente, especificamente as diferenas na durao do dia. Captulo 21. (Fotografia cortesia de H. F. Nijhout.)
Prancha 31
Isoladores da expresso gnica.
Prancha 33
Expresso assimtrica da protena Flectina no
corao em desenvolvimento do pinto.
Prancha 32
Polaridade dorsoventral do tubo neural do pinto.
Sinais difusveis da notocorda (tubo verde em baixo) induzem a formao da placa do assoalho no lado ventral do tubo neural (verde). As
clulas da placa do assoalho induzem a formao de duas regies de
neurnios motor (dourado) nos lados ventrolaterais. A notocorda tambm restringe a expresso da protena Dorsalin (necessria para o desenvolvimento das clulas da crista neural) para a regio mais dorsal do
tubo neural (azul). Captulos 7 e 17. (Fotografia cortesia de T. M. Jessell.)
Essa protena da matriz extracelular (corada de amarelo) acumula-se predominantemente no lado esquerdo do embrio do pinto no estgio 10. Captulos 9 e
16. (Fotografia confocal laser de varredura cortesia
de K. Linask.)
Prancha 35
Localizao das clulas mesenquimatosas
-mar
primrias no embrio do ourio
do-mar
-mar..
ourio--do
Prancha 34
Cuidado parental de girinos de r.
Nesta micrografia confocal imunofluorescente somente mostrada parte da blstula mesenquimatosa. As clulas mesenquimatosas primrias esto coradas de verde e a -catenina est
corada de vermelho. -catenina vista nas junes aderentes das
membranas celulares embrionrias, e tambm encontrada no
citoplasma e ncleos das clulas que servem de alvos para a
migrao das clulas mesenquimatosas primrias. Captulo 6.
(Fotografia cortesia de J. R. Miller e D. McClay.)
Segmentos da antena
ANTENA
Arista
Garras
PERNA
Coxa
Segmentos tarsais
Trocanter
Tbia
Fmur
Figura 19.22
753
usadas pelos discos imaginais para especificar informao posicional podem ser
as mesmas na mosca inteira. Ou seja, os
discos podem especificar os destinos respectivos de suas clulas pelos mesmos
mecanismos. Isso chamado de especificao homloga. Portanto, clulas no disco do olho podem responder s mesmas
deixas posicionais que as clulas no
disco da perna. Especificao homloga
pode ser vista com certos mutantes hometicos como Antennapedia, na qual
estruturas antenais so transformadas em
pernas (Postlethwait e Schneiderman,
1971). Ocasionalmente, a antena inteira se
torna uma perna inteira, mas mais comum que somente uma poro da antena
seje parecida com a perna. No ltimo caso,
a troca absolutamente especfica da posio. As clulas do disco da antena que
normalmente formariam a extremidade
distal da antena (arista) so transformadas na poro mais distal da perna (garra); clulas especificadas para dar origem
segunda poro da antena so transformadas na segunda poro (trocanter) da
perna. As partes correspondentes das
duas estruturas esto ilustradas na Figura 19.22. Ento, aparente que os dois
discos determinados diferentemente usam
um mecanismo comum para a especificao dos destinos das clulas dentro dos
respectivos discos.*
Sim, muito complexo e provvel que
fique ainda mais complexo. Mas no h falta de
humor. Sidney Brenner (1996) relembra a frustrao do Prmio Nobel Francis Crick com essa
complexidade dizendo Deus sabe como esses
discos imaginais funcionam. Brenner fantasiou
uma reunio onde Crick pergunta a Deus como
ele construiu essas entidades e fazendo com que
o prprio Deus tambm se supreendesse com
essa complexidade. Finalmente tudo o que Deus
pde fazer foi assegurar a Crick que estamos
construindo moscas aqui por 200 milhes de anos
e no tivemos nenhuma reclamao.
754
motor inervando o segundo msculo oblquo da larva sobrevive a morte de seu alvo,
para inervar um msculo adulto recm-formado (o quarto msculo externo dorsal) que
se diferencia durante a metamorfose (Truman et al., 1985).
Em alguns casos, as funes larvais so assumidas por diferentes regies no
adulto. O vaga-lume larval tem suas lanternas pareadas no oitavo (ltimo) segmento
abdominal; os neurnios desse segmento controlam a luminescncia da larva. Durante a pupao, o sexto e o stimo segmentos tambm desenvolvem os fotocitos produtores de luz e os nervos para controlar a regulagem do flash. No fim da pupao,
somente o sexto e o stimo segmentos tm lanternas funcionais. Ainda mais, se as
lanternas larvais forem removidas, as lanternas adultas ainda se formaro (Strause et
al., 1979). Portanto, o que havia sido uma funo neural dos gnglios do oitavo segmento se tornou uma funo dos gnglios do sexto e stimo segmentos.
Controle Hormonal da Metamorfose de Insetos
O controle hormonal da metamorfose de insetos foi mostrado nos experimentos
dramticos de Wigglesworth (1934), que estudou o Rodnius prolixus, um inseto
sugador de sangue que tem cinco instares antes de sofrer uma surpreendente metamorfose. Quando uma larva de Rodnius do primeiro instar foi decapitada e fundida
a uma larva em muda do quinto instar, o diminuto primeiro instar desenvolveu a
cutcula, a estrutura do corpo e a genitlia do adulto. Isso mostrou que os hormnios carreados pelo sangue so responsveis pela induo da metamorfose.
Wigglesworth tambm mostrou que a corpora allata, perto do crebro do inseto,
produz um hormnio que contra ataca essa tendncia para sofrer metamorfose. Se a
corpora allata fosse removida de uma larva do terceiro instar, a prxima muda transformaria a larva em um adulto precoce. Inversamente, se a corpora allata de uma
larva do quarto instar fosse implantada em uma larva do quinto instar, essas larvas
se tornariam larvas enormes do sexto instar e no adultos. Sabemos atualmente
que a corpora allata secreta o hormnio juvenil, um inibidor natural da metamorfose
(que ser discutido em breve).
Transplante de tecidos em insetos, realizados em vrios laboratrios, permitiram
o estabelecimento de uma viso integrada de como se d a metamorfose. Ainda que
o mecanismo detalhado da metamorfose seja diferente entre as espcies, o padro
geral da ao hormonal usualmente bastante similar (Figura 19.23). Como na metamorfose dos anfbios, a metamorfose nos insetos parece ser regulada por hormnios
efetores controlados por hormnios peptdicos neurosecretores no crebro (para
revises, veja Gilbert e Goodman,1981; Granger e Bollenbacher, 1981). O processo
de muda iniciado no crebro, onde clulas neurosecretoras liberam o hormnio
protoracicotrpico (PTTH) em resposta a fatores neurais, hormonais ou ambientais.
PTTH uma famlia de hormnios peptdicos com um peso molecular de aproximadamente 40.000, que estimulam a produo de ecdisona pela glndula protorcica
(Figura 19.24). A ecdisona, entretanto, no um hormnio ativo, mas um pr-hormnio que precisa ser convertido para a forma ativa. Essa converso realizada por
uma oxidase contendo heme nas mitocndrias e microssomos de tecidos perifricos
como o corpo gorduroso. Aqui a ecdisona transformada no hormnio ativo 20hidroxiecdisona (Figura 19.25).*
Cada muda ocasionada por um ou mais pulsos de 20-hidroxiecdisona. Para uma
muda de uma larva, o primeiro pulso produz um pequeno aumento na concentrao de
hidroxiecdisona na hemolinfa da larva (sangue) e produz uma mudana no comprometimento celular. O segundo, grande pulso de hidroxiecdisona inicia os eventos de
Desde sua descoberta em 1954, quando Butenandt e Karlson isolaram 25mg de ecdisona a partir
de 500kg de pupas da mariposa do bicho-da-seda, a 20-hidroxiecdisona teve vrios nomes, incluindo
-ecdisona, ecdisterona e crustecdisona.
PTTH
Ecdisona
Glndula
protorcica
Clulas
neurossecretoras
Crebro
755
Corpus
cardiacum
Hidroxiecdisona
20-hidroxiecdisona
Regulao
Corpus
allatum
Protena ligante
(JHBP)
Hormnio
juvenil (JH)
Epiderme L/P
L/P Epiderme
Hormnio juvenil
P/A
discos
imaginais
Disco
imaginal
P,L/A
Epiderme
P/A
JH-JHBP
Dia do quarto
instar
Pupa
Figura 19.23
Figura 19.24
756
Hormnio juvenil
Ecdisona
20-hidroxiecdisona
Figura 19.25
para o desenvolvimento pupal. Os mRNAs especficos para as larvas no so substitudos e novos mRNAs so sintetizados, cujos produtos proticos inibem a transcrio das mensagens larvais. Aps o segundo pulso de ecdisona, so sintetizados
novos produtos de genes especficos de pupas (Riddiford, 1982), e a muda subseqente transforma o organismo de larva para pupa. Parece, portanto, que o primeiro
pulso de ecdisona durante o ltimo instar larval desencadeia o processo que inativa
os genes especficos da larva e prepara para transcrio os genes especficos de
pupa. O segundo pulso de ecdisona transcreve os genes especficos para a pupa e
inicia a muda (Nijhout, 1994).
At recentemente e desde a dcada de 1950, acreditava-se que o tipo de muda era
determinado pela concentrao de hormnio juvenil no momento dos pulsos de
ecdisona. Altos nveis de JH induziam as larvas, nveis intermedirios produziam pupas
e baixos nveis de JH produziam adultos (veja Piepho,1951; veja tambm o Captulo 20
da Quarta Edio deste livro). Entretanto, quando o ttulo de JH pde efetivamente ser
determinado, encontrou-se que ele flutuava durante o perodo do ltimo instar, tendo
picos e vales especficos. A metamorfose no est correlacionada a um declnio progressivo na atividade de JH e nem causada por ele. O controle da metamorfose deve
ser mais complexo.
Na mariposa chifruda do tabaco Manduca sexta, existem momentos quando
diferentes clulas so sensveis a hormnios juvenis (veja Figura 19.23). Como regra
geral, se o JH est presente em um perodo sensvel ao hormnio, o estado corrente
do desenvolvimento mantido, mas se o JH estiver ausente nesse perodo esse
tecido progredir a um estgio de desenvolvimento mais maduro. O incio e a durao do perodo sensvel ao JH parece ser um estado autnomo da clula e no
controlado por hormnios (Nijhout, 1994). (Foi considerado que esse deve ser um
momento quando receptores de JH esto disposio nesses tecidos.) Em cada
instar larval existe um perodo quando a presena de JH impede a transformao da
epiderme larval em epiderme pupal. Se o JH est presente, a epiderme continua a ser
larval; se o JH est ausente, ela se torna pupal. Em larvas no penltimo instar, os
ttulos de JH conseguem reter a epiderme no seu estado larval. Durante o ltimo
instar existem duas janelas de sensibilidade ao JH. A primeira para a epiderme;
nesse momento, entretanto, os nveis de JH j baixaram significativamente e a
epiderme ser transformada de larval a pupal. O segundo perodo sensvel ao JH diz
respeito ao tecido do disco imaginal. Nesse momento, todavia, o ttulo de JH aumentou novamente, de modo que os discos imaginais no so instrudos para inverter
ou diferenciar. A muda transforma a larva em pupa (Nijhout e Wheeler, 1982). No
momento seguinte, ocorrem pulsos de ecdisona, e no se identifica JH nos perodos
crticos. A epiderme se transforma de pupal adulta, e os discos imaginais podem
inverter e se diferenciar. A injeo de JH na pupa nesse momento pode fazer com que
ele mude para uma segunda pupa (Williams, 1959).
Como na metamorfose da r, a regulagem da ecdise deve ser meticulosamente
coordenada. Muitos dos comportamentos vistos durante a metamorfose so caractersticos daquele estgio, e o fracasso em realiz-los deixa o inseto fatalmente enredado
na sua velha cutcula. A coordenao dos movimentos e trocas de cutcula provavelmente regulada por uma cascata de hormnios, onde o hormnio da ecloso do crebro ativa a secreo de hormnios desencadeadores de ecdise pelas clulas na base
de cada espirculo. Os hormnios desencadeadores de ecdise sinalizariam os gnglios
abdominais de cada segmento para iniciar os movimentos que permitem que a larva
descarte sua velha casca (itan et al., 1996).
Na Drosophila, existe uma variao desse tema geral (Riddiford, 1993). A ecdisona
liberada pela glndula em anel (uma estrutura tendo regies similares tanto ao
corpus allatum como a glndula protorcica). Um pulso de ecdisona com ttulo alto
no fim do terceiro instar sinaliza o incio da metamorfose. A larva cessa o movimento,
inverte seus espirculos e permite que a cutcula larval endurea em um puparium
(casulo pupal) que envolve o organismo durante sua metamorfose. Nesse estgio,
757
os discos imaginais se invertem para formar o esquema bsico do corpo adulto, mas
ainda com a cabea presa dentro da cavidade do corpo. Aps 12 horas (a 25C), um
breve pulso de ecdisona desencadeia a emergncia da cabea a partir do trax e a
transio de prepupa pupa. A cabea empurrada para fora pela contrao de
msculos abdominais, que empurram uma bolha de ar para o interior, produzindo um
espao para a cabea everter (Fristrom e Fristrom, 1993). Um surto subseqente de
ecdisona completa a diferenciao final da pupa de Drosophila para a forma adulta,
imediatamente antes da ecloso, a produo do adulto a partir do casulo pupal.
Como em outros insetos, a Drosophila tem um hormnio de ecloso que inicia os
movimentos e comportamentos que permitem ao adulto se desvencilhar de seu casulo pupal para um mundo maior.
A biologia Molecular da Atividade da Hidroxiecdisona
A LIGAO DE HIDROXIECSIDONA AO DNA. Durante a muda e a metamorfose,
certas regies dos cromossomos politnicos da Drosophila formam tufos em certas
clulas (Veja Figura 2.13; Clever, 1966; Ashburner, 1972; Ashburner e Berondes,
1978). Esses tufos cromossmicos representam reas onde o DNA est sendo ativamente transcrito. Mais ainda, o padro especfico de rgos de formao de tufos
pode ser reproduzido cultivando o tecido larval e adicionando hormnios ao meio
ou fornecendo hidroxiecdisona larva em um estgio precoce. Quando a hidroxiecdisona adicionada s glndulas salivares da larva, certos tufos so produzidos e
Figura 19.26
758
outros regridem (Figura 19.26). A formao de tufos mediada pela ligao de hidroxiecdisona a locais especficos nos cromossomos; anticorpos fluorescentes contra
a hidroxiecdisona encontram esse hormnio localizado nas regies sensveis a ele
(Gronemeyer e Pongs, 1980).
DIFERENTES RECEPTORES DE HIDROXIECDISONA EM DIFERENTES TECIDOS. Os tecidos de larvas em instares tardios podem ser grosseiramente divididos
em trs tipos com base em suas respostas hidroxiecdisona: (1) os tecidos estritamente larvais (tais como, glndulas salivares, msculo e intestino) que sofrem morte
celular em resposta hidroxiecdisona; (2) os tecidos imaginais que se dividem e se
diferenciam para produzir estruturas adultas quando expostos hidroxiecdisona; e
(3) tecidos que sofrem extensas modificaes ou remodelagem, tais como o corpo
gorduroso ou o sistema nervoso central. No se sabe como um grupo de clulas
prolifera enquanto outro degenera recebendo o mesmo sinal, mas estudos recentes
(Talbot et al., 1993; Truman et al., 1994) sugerem que nem todos os receptores de
ecdisona so os mesmos em cada tecido. O gene para o receptor de ecdisona (EcR)
pode ser alternativamente emendado dentro de trs mRNAs que fornecero trs
protenas diferentes, mas relacionadas: EcR-A, EcR-B1 e EcR-B2 (Figura 19.27). Todas as clulas parecem ter um pouco de cada uma, mas os tecidos estritamente
larvais e os neurnios regressivos so caracterizados por sua abundncia em EcRB1 em comparao com EcR-A. Discos imaginais e neurnios diferenciados, de outro lado, mostram uma preponderncia da isoforma EcR-A sobre EcR-B1. possvel,
portanto, que os diferentes receptores ativem diferentes conjuntos de genes quando ligam hidroxiecdisona.
Figura 19.27
A2
A3
Sntese de mRNA
Protena EcR
Seqncias lider ou
seguidora (no traduzidas)
xons traduzidos
ntrons
Stio de
ligao
de DNA
Stio de ligao
de ecdisona
(A)
Corpo gorduroso
Figura 19.28
(B)
Anti Z3
Glndula salivar
759
Colorao de DNA
Corpo gorduroso
Glndula salivar
Complexo receptor
de ecdisona (EcR)
Hidroxiecdisona
EcR
As respostas hidroxiecdisona devem ser coordenadas tanto temporal quanto espacialmente. Assim, em adio heterogeneidade de respostas hidroxiecdisona entre
tecidos, existe tambm uma heterogeneidade de respostas dentro de uma clula individual. Os tufos sensveis hidroxiecdisona ocorrendo nos estgios tardios da larva
no terceiro instar (ao se preparar para formar a pupa) podem ser divididos grosseiramente em trs categorias: tufos que regridem devido hidroxiecdisona; tufos que a
hidroxiecdisona induz rapidamente; e tufos vistos inicialmente algumas horas aps a
estimulao. Por exemplo, nas glndulas salivares da larva, cerca de seis tufos emergem dentro de poucos minutos aps o tratamento com hidroxiecdisona. Esses genes
no necessitam de sntese de protena para serem ativos. Um conjunto muito maior de
genes induzido mais tarde no desenvolvimento, e esses necessitam de sntese protica
para serem transcritos. Ashburner (1974, 1990) predisse que os genes precoces
produzem uma protena que essencial para a ativao dos genes tardios. Ainda
mais, essa prpria protena desligaria a transcrio do gene precoce (Figura 19.29).
Pesquisas recentes suportam essa idia e sugere que os genes precoces representam fatores de transcrio que podem mediar o efeito da ecdisona. Os receptores de
ecdisona (EcRs) constituem uma famlia de fatores de transcrio derivados de um
nico gene, e eles ligam esse hormnio esteride e o trazem regio especfica do
DNA. Como nos receptores ligantes de esterides dos vertebrados, os EcRs formam
Tufo precoce
Tufo tardio
Sntese de
protena
Figura 19.29
760
Figura 19.30
(A)
Formao do puparium
Pupa
Larva do terceiro instar
Prepupa
Picos de ecdisona
mRNAs precoces
mRNA precoce-tardio
mRNA prepupal intermedirio
Genes de adeso
Genes tardios L71
(B)
Genes ng
Pig-1
Genes de resposta
secundria
Larva
precoce do
terceiro
instar
Larva tardia
do terceiro
instar
Prepupa
intermediria
Prepupa
tardia
Baixa
concentrao de
ecdisona
Alta
concentrao de
ecdisona
Baixa
concentrao de
ecdisona
Alta
concentrao de
ecdisona
Genes
de adeso
Genes
tardios
L71
Genes
tardios
761
Informaes adicionais
&
Especulaes
762
Primeiro
estgio
da ninfa
Segundo
estgio
da ninfa
Terceiro
estgio
da ninfa
Quarto
estgio
da ninfa
Quinto
estgio
da ninfa
Adulto
Precoceno 1
Aps tratamento
com precocenos
no estgio 2
Adulto precoce
Precoceno 2
(A)
(B)
Figura 19.31
Metamorfose precoce no inseto Dysdercus causada por precocenos. (A) Estrutura de dois precocenos ativos encontrados em plantas. (B) Desenvolvimento inibido no Dysdercus. Quando ninfas no segundo estgio so tratadas
com precocenos, elas se metamorfoseiam em adultos precoces estreis em
lugar de continuar sua seqncia de mudas do desenvolvimento normal. (De
acordo com Bowers et al., 1976.)
763
Figura 19.32
(A)
Seqncia do desenvolvimento precoce da glndula mamria no camundongo fmea. (A) Broto mamrio no feto de 12 dias. Clulas ectodrmicas
epiteliais invadem o mesnquima. (B) Corda mamria de um feto de 15
dias. Uma pequena fenda no fundo sinaliza o incio da ramificao. (C)
Cavidade da corda se estendendo para formar um lmen oco no feto de 20
dias. (de Hogg et al., 1983, cortesia de C. Tickle.)
(B)
(C)
corda mamria. Essa corda abre na pele, em uma extremidade, formando um mamilo
enquanto a outra extremidade comea a se ramificar em dutos. Aqui o desenvolvimento cessa at a puberdade.
O desenvolvimento do tecido mamrio no camundongo macho idntico ao da
fmea at 13-15 dias de gestao. Nessa poca, o mesnquima se condensa ao redor
do centro do broto mamrio, e as clulas da corda morrem. Portanto, uma pequena
corda de clulas epiteliais destacada da pele (Figura 19.33), e a glndula mamria no
se estende at a superfcie. No ocorre desenvolvimento adicional.
Essa morte celular na corda mamria dos machos tem sido estudada cultivando
os brotos mamrios in vitro. Tais brotos de camundongos fmeas normalmente
desenvolvem lbulos conectados superfcie (Figura 19.34). Entretanto, se testosterona adicionada ao meio de cultura, os brotos se degeneram. Os brotos mamrios
de camundongos machos tambm desenvolvem lbulos quando cultivados em ausncia de testosterona; portanto, o hormnio testosterona impede o desenvolvimento mamrio no macho. A testosterona motiva essa morte celular especfica instruindo as clulas mesenquimatosas a destruir a corda epitelial. Isso foi mostrado
por uma srie de experimentos de recombinao. Existe em camundongos (e tambm
em humanos) uma mutao chamada sndrome de insensibilidade andrognica, na
qual indivduos cromossomicamente machos (XY) no produzem um receptor funcional de testosterona. Assim, apesar desses indivduos possurem testculos que
esto secretando testosterona ativamente, eles so incapazes de responder a ela.
Um dos resultados que esses indivduos tm um desenvolvimento mamrio do
tipo feminino (veja Figura 19.9). Kratochwil e Schwartz (1976) isolaram clulas epiteliais
e mesenquimatosas a partir de brotos mamrios normais e mutantes e os cultivaram
em vrias combinaes. Algumas culturas tiveram a adio de testoterona e outras
no. Os resultados esto mostrados na Figura 19.35. Quando ambos, o mesnquima
e o epitlio, eram do tipo selvagem, o rudimento se desenvolvia em tecido mamrio.
Figura 19.33
Rudimento mamrio em um feto de camundongo macho. O rudimento (flecha) se separou da epiderme. (de Raynaud, 1961.)
764
Figura 19.34
Papel da testosterona como mediador do desligamento da corda mamria. (A) O tecido mamrio do camundongo fmea, in vivo ou em
cultura, crescer para baixo a partir da epiderme
e se ramifica. (B) Quando o tecido mamrio do
camundongo fmea cultivado na presena de
testosterona, o broto se alonga, mas as clulas
mesenquimatosas se agregam ao redor da haste e a poro inferior separada, exatamente
como no desenvolvimento normal do macho.
(C) Quando o tecido mamrio do camundongo
macho cultivado em ausncia de testosterona,
o desenvolvimento o mesmo que o da fmea.
(De acordo com Kratochwil, 1971.)
Epiderme
Broto
Derme
Haste
Lbulos
(A) TECIDO NORMAL
DE FMEA
Figuras 19.35
(A)
(B)
(C)
(D)
765
mamria. Assim, o alvo da testosterona o mesnquima e no o epitlio. O mesnquima deve ser responsivo testosterona para que sua ao ocorra. Nos machos, a
testosterona induz o mesnquima mamrio a destruir seu epitlio adjacente. O efeito
especfico para o rgo visto que nenhum outro mesnquima destruir o epitlio
mamrio, e nenhum outro epitlio pode ser destrudo pelo mesnquima mamrio
(Drnberger e Kratochwil, 1980).
Adolescncia
Durante a adolescncia (que no camundongo ocorre da semana 4 semana 6), o
sistema de dutos da glndula mamria prolifera extensivamente. As clulas alveolares
secretoras de leite nas extremidades dos dutos ainda no se diferenciaram e o leite no
produzido. A extensa diviso celular est sob o controle de hormnios estrognio e
de crescimento e parece estar concentrada nas extremidades dos dutos. Estudos da
pesquisadora Coleman e seus colegas (1988) implicaram o fator de crescimento
epidrmico (EGF) como o fator responsvel pelo crescimento dos dutos nesse perodo. Eles implantaram pletes plsticos de lenta liberao contendo EGF em glndulas
mamrias de camundongos de 5 semanas. Os ovrios desses camundongos haviam
sido removidos e, portanto, seu desenvolvimento mamrio foi interrompido. Os dutos
adjacentes ao implante de EGF reiniciaram seu crescimento e desenvolvimento
morfolgico, ao passo que os dutos mais distantes no o fizeram (Figura 19.36). Ainda
mais, quando seces da glndula mamria foram incubadas com EGF radioativo, o
EGF foi detectado na extremidade dos dutos e associado com as clulas sofrendo
mitose. Provavelmente o EGF age diretamente causando o crescimento das glndulas
mamrias durante a adolescncia.*
Gravidez e lactao
Figura 19.36
Entre a adolescncia e a gravidez, as clulas da mama no camundongo esto mitoticamente dormentes e indiferenciadas. Esse estado se modifica durante a segunda metade da gravidez. Sob a influncia dos hormnios estrognio e progesterona (o ltimo
da placenta), novos dutos so formados, e suas clulas distais comeam a desenvolver as caractersticas de um tecido secretor.
O receptor do fator de crescimento epidrmico (EGFR) pode ser um elemento chave na
etiologia dos cnceres de mama (que afetam uma em cada oito mulheres nos Estados Unidos).
Considera-se que alguns cnceres de mama podem se desenvolver se o estrognio induz TGF-, um
ligante alternativo para o EGFR. A ativao de EGFR causaria a contnua proliferao do tecido
mamrio (Sainsbury et al., 1985; Klijn et al., 1992; McIntyre et al., 1995).
(A)
(B)
(C)
766
Clula precursora
Clula secretora
secretando casena
Insulina e hidrocortisona
(diviso celular e
diferenciao)
Prolactina
(sem diviso celular)
Figura 19.37
(D)
Delees no 5 da -casena
Figura 19.39
Atividade de CAT
CAT (cpm convertidas/min/g)
Construes importantes na identificao do intensificador do gene da -casena no camundongo. O gene CAT foi usado como um reprter e foi fundido ponta 5 do gene da -casena no
camundongo. A exonuclease removeu pedaos sucessivamente maiores da regio do gene
flanqueando a ponta 5. Enquanto o gene contendo 1677 pares de bases na seqncia flanqueando
a ponta 5 foi totalmente ativo, a seqncia contendo somente 1517 pares de bases apresentou
pouca atividade. Portanto, foi postulado que o intensificador estava dentro dos 160 pares de
bases. (De acordo com Schmidhauser et al., 1992.)
Somente Insulina
Auto-radiograma
-casena
(B)
Intensificador
de -casena
Promotor
de -casena
Gene
CAT
Plstico
Matriz extracelular
Plstico
Matriz extracelular
Insulina + prolactina
Insulina + hidrocortisona
767
Sntese de CAT
Plstico
Substratos
Matriz extracelular
Hormnios
Plstico
(A)
Matriz extracelular
Figura 19.38
Insulina, hidrocortisona
+ prolactina
768
Vimos que a regulao difusvel nas interaes clula-clula so tambm importantes na regulao do desenvolvimento. Estudando a reativao do desenvolvimento
que ocorre durante a metamorfose e o desenvolvimento da mama, podemos identificar
o papel dos hormnios na elicitao de novos padres de diferenciao e morfognese. Podemos tambm ver as interaes entre o desenvolvimento do organismo e o
ecossistema do qual ele faz parte. No prximo captulo, estudaremos os papis de
fatores difusveis e autnomos da clula nos processos responsveis pelo desenvolvimento das gnadas e pela determinao do sexo.
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Determinao do sexo
20
773
774
(A)
(B)
transmitir traos parentais, e a fisiologia dos rgos sexuais comeou a ser estudada.
Ainda assim, no havia consenso sobre como os sexos eram determinados (veja
Horowitz, 1976; Tuana, 1988; Schiebinger, 1989).
Naquele tempo o ambiente em especial, calor e nutrio - eram acreditados ser
de importncia para a determinao do sexo. Em 1890, Geddes e Thomson resumiram
todos os dados disponveis sobre a determinao sexual, e chegaram concluso que
constituio, idade, nutrio e ambiente dos pais deveriam ser especialmente considerados em qualquer dessas anlises. Eles argumentavam que fatores favorecendo a
armazenagem de energia e nutrientes influenciavam a favor de prognie feminina,
enquanto que fatores favorecendo a utilizao da energia e nutrientes influenciavam
a favor de prognie masculina.
Essa viso ambiental da determinao sexual permaneceu a nica teoria cientfica
importante at a descoberta do trabalho de Mendel em 1900 e da redescoberta do
cromossomo sexual por McClung em 1902. Baseado em seu conhecimento do
Mendelismo, Correns especulou que a relao sexual 1:1 da maioria das espcies,
podia ser conseguida se o macho fosse heterozigoto e a fmea homozigota para algum
fator determinante do sexo. Porm, somente em 1905 a correlao (em insetos) do sexo
feminino com os cromossomos sexuais XX e do sexo masculino com os cromossomos
XY ou XO foi estabelecida (Stevens, 1905; Wilson, 1905). Isso sugeriu fortemente que
um componente nuclear especfico era responsvel pelo direcionamento do desenvolvimento do fentipo sexual. Assim, acumulou-se evidncia que a determinao sexual
ocorria por herana nuclear em vez de por circunstncias ambientais.
Hoje, achamos que tanto os mecanismos ambientais como os internos da determinao sexual podem atuar em diferentes espcies. Iremos primeiro discutir os mecanismos cromossmicos da determinao do sexo, e em seguida considerar os meios pelos
quais o ambiente regula o fentipo sexual.
Figura 20.1
A determinao sexual primria se refere determinao das gnadas. Nos mamferos, a determinao do sexo estritamente cromossmica e no usualmente influenciada pelo ambiente. Na maioria dos casos, a fmea XX e o macho XY. Cada
indivduo tem que ter ao menos um cromossomo X. Como a fmea XX, cada um de
seus vulos tem um nico cromossomo X. O macho, sendo XY, pode gerar dois tipos
de espermatozide: metade contm o cromossomo X, metade o Y. Se o vulo receber
outro cromossomo X do espermatozide, o indivduo resultante XX, forma ovrios,
e feminino; se o vulo recebe um cromossomo Y do espermatozide, o indivduo
XY, forma testculos, e masculino. O cromossomo Y carrega um gene que codifica um
fator determinador de testculos. Esse fator organiza a gnada em um testculo em vez
de um ovrio. Diferentemente do caso da Drosophila (a ser discutido adiante), o
cromossomo Y do mamfero um fator crucial para determinao do sexo nessa espcie. Uma pessoa com cinco cromossomos X e um cromossomo Y (XXXXXY) seria
macho. Alm disso, um indivduo com somente um nico cromossomo X e nenhum
segundo X ou Y (i.e., XO) se desenvolve como fmea e comea a formar ovrios, mas
incapaz de manter os folculos ovarianos.
Determinao Secundria do Sexo
A determinao secundria do sexo se refere ao fentipo corporal externo s gnadas. Um mamfero masculino tem um pnis, vesculas seminais, uma glndula
prstata, e freqentemente tamanho, cartilagem vocal e musculatura especficos
do sexo. Um mamfero feminino tem a vagina, crvix, tero, ovidutos, glndulas
mamrias, e freqentemente tamanho, cartilagem vocal e musculatura especficos
Genitlia interna
feminina (tero,
oviduto, crvix,
vagina superior)
Clulas
Foliculares
OVRIO
Folculos
Clulas
tecais
Sulco Genital
Gnada
bipotencial
775
Duto Mlleriano
TESTCULOS
Clulas
de Sertoli
Clulas
de Leydig
Regresso
Seio urogenital do
tubrculo genital
Testosterona
Pnis,
prstata
Duto
Wolffiano
Genitlia interna
masculina
(epiddimo, vasos
deferentes, vescula
seminal)
Figura 20.2
776
GNADAS INDIFERENTES
Duto
Wolffiano
Sulco
mesonfrico
Glomrulo
Tbulo
Sulco
mesonfrico
Genital
excretrio
(A)
Aorta
Mesentrio
Dorsal
Duto
Wolffiano
Duto
Mlleriano
4 SEMANAS
Epitlio
celmico em
proliferao
(B)
Cordas sexuais
primitivas
6 SEMANAS
DESENVOLVIMENTO TESTICULAR
DESENVOLVIMENTO OVARIANO
Tbulo
mesonfrico em
degenerao
Tbulo mesonfrico
em degenerao
Duto Wolffiano
(vasos deferentes)
Cordas da
rede testicular
Mesnquima
urogenital
Duto Wolffiano
Cordas
sexuais corticais
Cordas
testiculares
Duto Mlleriano
Tnica albugnea
(C)
8 SEMANAS
(E)
Cordas da
rede testicular
Dutos eferentes
(vasos eferentes)
Epitlio
superficial
Duto Mlleriano
8 SEMANAS
Cordas sexuais
em degenerao
Epitlio
Superficial
Tnica
albugnea
Cordas
testiculares
Duto Wolffiano
(vasos deferentes)
Duto Mlleriano
Oognia
Duto Wolffiano
Folculos
ovarianos
Duto Mlleriano
(D)
16 SEMANAS
(F)
20 SEMANAS
Figura 20.3
Diferenciao das gnadas humanas mostrada em seo transversal. (A) Sulco genital de um embrio de
4 semanas. (B) Sulco genital de uma gnada indiferente de 6 semanas mostrando cordas sexuais primitivas. (C) Desenvolvimento testicular na oitava semana. As cordas sexuais perdem contato com o epitlio
cortical e desenvolvem a rede testicular. (D) Na dcima-sexta semana de desenvolvimento, as cordas
testiculares so contnuas com a rede testicular e se conectam com o duto Woffiano. (E) O desenvolvimento ovariano em um embrio humano de 8 semanas, quando as cordas sexuais primitivas degeneram. (F)
O ovrio humano de 20 semanas no se conecta ao duto Wolffiano, e novas cordas sexuais corticais
rodeiam as clulas germinativas que migaram para o sulco genital. (Segundo Langman, 1981.)
777
778
Figura 20.4
(A)
SEXUALMENTE INDIFERENTES
Gnadas
Rim metanfrico
Mesonefro
Ureter
Duto Wolffiano
Duto
Mlleriano
Epiddimo
Cloaca
Rins
metanfricos
Testculos
Oviduto
Ovrios
Ureteres
Duto Wolffiano
degenerado
Bexiga
Bexiga
urinria
urinria
Duto Mlleriano
degenerado
Duto Wolffiano
(vasos deferentes)
Duto Mlleriano
(oviduto)
tero
Uretra
Uretra
Vagina
(B)
MASCULINO
(C)
FEMININO
GNADAS
Tipo gonadal
Cordas sexuais
Testculos
Medular (interno)
Ovrio
Cortical (externo)
DUTOS
Dutos remanescentes para
clulas germinativas
Wolffiano
Mlleriano
Diferenciao do duto
Vasos deferentes
Epiddimo, vescula seminal
xual do Cromossomo Y
Sexual
SRY:: O Determinante Se
SRY
Em seres humanos, o principal gene para o fator determinante dos testculos reside no
brao curto do cromossomo Y. Indivduos que nascem com o brao curto, porm, sem
o brao longo do cromossomo Y so machos enquanto que indivduos que nascem
com o brao longo do cromossomo Y, mas no o brao curto, so fmeas. Analisando
o DNA de homens XX e fmeas XY, a posio do gene determinador dos testculos foi
restringida uma regio de 35.000 pares de bases do cromossomo Y, localizada perto
da extremidade do brao curto [sex2.html]. Nessa regio, Sinclair e colaboradores
(1990) encontraram uma seqncia de DNA especfica de macho que podia codificar um peptdio de 223 aminocidos. Tal peptdio provavelmente seria um fator de
Controle
(A)
(B)
Figura 20.6
779
Figura 20.5
780
Rim
Rim
Epiddimo
Testculo
Oviduto
(A)
(B)
Figura 20.7
Funes de SF1 durante a gonadognese. (A). Eliminao do gene SF1 do embrio do camundongo leva perda tanto das supra-renais como dos testculos. (O duto Mlleriano persiste e
torna-se o oviduto.) (B) Um controle mostrando epiddimo e testculos. (C) Hibridizao in situ
mostrando a ativao do gene Sf1 atravs do desenvolvimento testicular de um embrio de
camundongo de 12.5 dias. (A de Luo et al., 1994; C de Shen et al., 1994.)
(C)
781
782
Gentipo
DAX1
inativo
2 cpias
de DAX1
Gnadas
Testculos
Ovrio
Disgnese gonadal
Fentipo
Macho
Fmea
Fmea
Figura 20.8
Reverso sexual fenotpica em seres humanos tendo duas cpias do loco DAX1. DAX1 (no cromossomo X) mais SRY no Y produzem testculos. DAX1 sem SRY (pois o outro loco DAX1 est no
cromossomo X inativo) produz ovrios. Duas cpias ativas de DAX1 (no cromossomo X ativo)
mais um SRY (do cromossomo Y) levam a uma gnada mal-formada. Como a gnada no produz
AMH nem testosterona, o fentipo feminino. (Segundo Genetics Review Group, 1995.)
ovrios; porm, esses ovrios se atrofiam antes do nascimento, e as clulas germinativas morrem antes da puberdade. Porm, sob a influncia de estrgeno primeiramente
derivado do ovrio, mas depois da me e da placenta, essas crianas nascem com um
trato genital feminino (Langman e Wilson, 1982).*
A formao do fentipo masculino envolve a secreo de hormnios testiculares
que promovem o desenvolvimento do duto Wolffiano e promovem atrofia do duto
Mlleriano. O primeiro desses hormnios o hormnio anti-duto Mlleriano, o hormnio da clula de Sertoli que causa a degenerao do duto Mlleriano. O segundo
desses hormnios a testosterona esteride, que secretado pelas clulas de Leydig
testiculares fetais. Esse hormnio causa a diferenciao do duto Wolffiano em
epiddimo, vasos deferentes e vesculas seminais, e causa o desenvolvimento de
tumefaes urogenitais e seios no interior do escroto e pnis. A existncia desses dois
sistemas independentes de masculinizao demonstrada em pessoas tendo sndrome
da insensibilidade andrgena. Esses indivduos XY tm o gene do fator determinante
testicular e, por isso, tm testculos que produzem testosterona e AMH. Porm, essas
pessoas no tm a protena receptora de testosterona e portanto no podem responder testosterona produzida em seus testculos (Meyer et al., 1975). Porque elas so
capazes de responder ao estrgeno produzido em suas glndulas supra-renais, elas
so de aparncia distintamente feminina (Figura 20.9). Porm, apesar dessa aparncia
feminina, esses indivduos tm testculos, e embora no possam responder testosterona, eles respondem ao AMH. Assim, seus dutos Mllerianos degeneram. Essas
pessoas se desenvolvem como mulheres normais mas so estreis, no tendo um
tero ou ovidutos e tendo testculos em seu abdome.**
Testosterona e Diidrotestosterona
Existem dois diferentes hormnios masculinizantes, testosterona e AMH. Existe evidncia que a testosterona, em certos tecidos, pode no ser o hormnio ativo. A testosterona
parece ser responsvel pela promoo da formao de estruturas reprodutivas masculinas (o epiddimo, vesculas seminais e vasos deferentes) do primrdio do duto Wolffiano.
No entanto, a testosterona no masculiniza diretamente a uretra masculina, prstata,
-diidrotestosterona.
pnis ou escroto. Essas funes posteriores so controladas pela 5
Siiteri e Wilson (1974) mostraram que a testosterona convertida em 5diidrotestosterona nos seios urogenitais e tumefaes, mas no no duto Wolffiano.
Imperato - McGinley e colegas (1974) acharam uma pequena comunidade na Repblica Dominicana na qual vrios habitantes tinham uma deficincia gentica da enzima
5-cetoesteride redutase 2, que converte testosterona em diidrotestosterona. Indiv-
*Os mecanismos pelos quais o estrgeno poderia promover a diferenciao dos dutos Mllerianos
no so bem compreendidos. Durante o desenvolvimento embrionrio, o duto extremamente
sensvel a compostos estrognicos, conforme conhecido pelos efeitos teratognicos da
dietilstilbesterol (DES). Esse composto um estrgeno sinttico que foi dado s mulheres nas
dcadas de 1940 at 1960 para manuteno da gravidez. As filhas nascidas dessas mulheres que
usaram essa droga apresentaram alta incidncia de anomalias do duto Mlleriano, incluindo malformaes dos epitlios vaginal e cervical, anomalias estruturais dos ovidutos e tero, e uma incidncia
acima do normal de cncer vaginal (Robboy et al., 1982; Bell, 1986).
**A sndrome da insensibilidade andrgena uma de vrias condies chamadas pseudohermafroditismo. Os hermafroditas verdadeiros (raros em humanos e na maioria dos mamferos,
mas normal em certos invertebrados) contm tecidos gonadais tanto masculino como feminino.
Hermafroditas mamferos verdadeiros tm anormalidades na determinao sexual primria e podem ocorrer quando o cromossomo Y translocado para o cromossomo X. Se o X translocado for
inativado, o Y ser desligado. Algumas das clulas gonadais sero XX e outras XY (Berkovitz et al.,
1992). Na condio pseudo-hermafrodita, existe somente um tipo de gnada, mas as caractersticas
sexuais secundrias diferem daquilo que esperado do sexo gonadal. Em humanos, pseudo-hermafroditas masculinos podem resultar da sndrome da insensibilidade andrgena, ou da incapacidade de
produzir testosterona devido a um defeito gnico em uma das enzimas levando sua sntese (Geissler
et al., 1994). Pseudo-hermafroditas femininos ocorrem quando o organismo tem uma superproduo de testosterona.
783
Figura 20.9
784
Bexiga urinria
Reto
Vescula
seminal
Pbis
Prstata
Pnis
Uretra
Vaso deferente
Epiddimo
Testculo
Dependente de diidrotestosterona
Dependente de testosterona
Figura 20.10
duos afetados no tinham um gene funcional para essa enzima (Andersson et al.,
1991; Thigpen et al, 1992). Embora esses indivduos XY tenham testculos funcionantes,
eles tm uma bolsa vaginal cega e um clitris aumentado. Pareciam meninas e so
criadas como tais. Suas anatomia interna, porm, masculina: testculos, desenvolvimento de duto Wolffiano e degenerao do duto Mlleriano. Assim, parece que a
formao da genitlia externa est sob o controle da diidrotestosterona, enquanto que
a diferenciao do duto Wolffiano controlada pela prpria testosterona (Figura
20.10). interessante que a genitlia externa torna-se responsiva testosterona na
puberdade, causando bvia masculinizao em uma pessoa originalmente considerada como sendo uma menina.
Hormnio Anti-Mlleriano
O hormnio anti-duto Mlleriano (AMH) uma glicoprotena com 560 aminocidos
(Cate et al., 1986) produzido nas clulas de Sertoli (Tran et al., 1977). Quando fragmentos de testculos fetais ou clulas de Sertoli isolados so colocados ao lado de segmentos em cultura, contendo pores dos dutos Wolffiano e Mlleriano, o duto
Mlleriano se atrofia apesar de nenhuma alterao ocorrer no duto Wolffiano (Figura
20.11). Essa atrofia causada tanto pela morte celular como pela transformao em
mesnquima e migrao de clulas epiteliais do duto (Trelstad et al., 1982). O gene
AMH de camundongo tem uma seqncia promotora que ligada tanto pela protena
SF1 como por SRY (Haqq et al., 1994; Shen et al., 1994). [sex5.html]
Vemos assim, que uma vez formados, os testculos secretam dois hormnios que
causam a masculinizao do feto. Um desses hormnios - testosterona - pode ser
convertido em uma forma mais ativa pelos tecidos que criam a genitlia externa. Em
fmeas, o estrgeno secretado pelos ovrios fetal parece ser suficiente para induzir a
diferenciao do duto Mlleriano em tero, ovidutos e crvix. Dessa maneira, os
cromossomos sexuais controlam o fentipo sexual de um indivduo.
785
Figura 20.11
(B)
Tentilho-zebra macho
Syrinx
Figura 20.12
Dimorfismo sexual no crebro avicular. O diagrama esquemtico indica as principiais rea neurais
acreditadas estar envolvidas na produo do canto no tentilho-zebra. Os crculos representam
reas cerebrais especficas; o tamanho de cada crculo proporcional ao volume ocupado por
essa regio. Crculos com linhas hachuriadas so volumes estimados. Os nmeros dentro de
cada crculo representam a porcentagem de clulas que incorporam testosterona radioativa. As
diferenas de volume entre trs dessas regies (HVc, RA e NXIIts) so significantes entre os
sexos, e a rea X no foi observada nos crebros de tentilhes fmeas. As diferenas na ligao
de testosterona nas regies HVc e MAN so significativas, e no foram observadas diferenas
sexuais relativas ligao de hormnio esteride em outras regies do crebro. As setas indicam
as vias axnicas conectando as regies no tentilho macho. (Segundo Arnold, 1980.)
Tentilho-zebra fmea
786
Telencfalo
Diencfalo
Mesencfalo
Rom- Medula
benc- espinhal
falo
Cerebelo
Crtex
Te t o
ptico
Bulbo
olfativo
Figura 20.13
Representao das regies ligantes de estrgeno no crebro de uma rata. (Segundo Kandel e
Schwartz, 1985.)
Septo
rea
pre-ptica
Hipotlamo
Hipfise
Medula
espinhal
Informaes adicionais
&
787
Especulaes
podem levar pessoas semelhantes biologicamente a divergirem extensamente em suas atividade sexuais.
Homossexualidade Masculina
Certos comportamentos so freqentemente citados como sendo parte do fentipo
completo masculino ou feminino. Temse dito que o crebro do homem maduro
formado de forma que ele tenha o desejo
de copular com uma mulher madura, e o
crebro da mulher madura faz com que ela
deseje copular com um homem maduro.
Porm, por mais importantes que sejam os
desejos em nossas vidas, eles no podem
ser detectados por hibridizao in situ nem
isolados por anticorpos monoclonais. No
sabemos ainda se os desejos sexuais so
instilados em ns pela nossa educao
social ou se so armados em nossos crebros por genes ou hormnios durante
nosso desenvolvimento intra-uterino ou
por outros meios.
Em 1991, Simon LeVay props que parte do hipotlamo anterior de homens homossexuais tinha a forma anatmica tpica
da mulher em lugar daquela de homens
heterossexuais. O hipotlamo considerado ser a fonte de nossas necessidades sexuais, e ratos tm uma rea sexualmente
dimrfica no hipotlamo anterior que parece regular o comportamento sexual. Esse
estudo gerou muita publicidade e discusso. Os principais resultados esto mostrados na Figura 20.14. Os ncleos
intersticiais do hipotlamo anterior (INAH)
foram divididos em quatro regies. Trs
delas no mostraram sinais de dimorfismo
sexual. Uma delas, INAH3, mostrou uma
diferena estatstica significativa entre
machos e fmeas; foi apregoado que o
INAH3 masculino , em mdia, mais de
duas vezes maior que o INAH3 feminino.
Alm disso, os dados de LeVay sugeriram
que o INAH3 de homens homossexuais
era semelhante ao das mulheres e tinha
menos da metade do tamanho do INAH3
de homens heterossexuais. Esse achado,
proclamou LeVay, sugere que a orientao sexual tem um substrato biolgico.
Houve vrias crticas essa interpretao dos dados por LeVay. Em primeiro
788
Figura 20.14
Homens
heterossexuais
presumidos
Homens
homossexuais
presumidos
Mulheres
Homens
heterossexuais
presumidos
Homens
homossexuais
presumidos
789
Conjuntos de
Autossomos (A)
Relao X:A
3
4
4
3
2
2
1
1
2
3
4
3
2
3
2
3
1.50
1.33
1.00
1.00
1.00
0.66
0.50
0.33
Sexo
Metafmea
Metafmea
Fmea normal
Fmea normal
Fmea normal
Intersexo
Macho normal
Metamacho
Figura 20.15
Tipo
selvagem
eosin eye
miniature wing
eosin eye
miniature wing
790
Razo X:A
No-ativado (sem
protena funcional)
No-ativado (sem
protena tra funcional)
Reprime
Protenas Dsx
especficas
da fmea
genes
msl
ix
Genes
ligados ao X
Taxa de
transcrio
feminina
Genes de
diferenciao
feminina
Protenas Dsx
especficas
da macho
Reprime
Genes de
diferenciao
masculina
Fentipo
feminino
Genes
msl
Reprime
Genes de
diferenciao
masculina
Fentipo
masculino
Genes de
diferenciao
feminina
Genes
ligados ao X
Taxa de
transcrio
masculina
Figura 20.16
791
792
(A)
2X:2A
feminino
(B)
1X:2A
masculino
Fatores de transcrio
dos promotores precoces
Gene Sxl
Gene Sxl
Transcrio
Protena Sxl
Cdon
Iniciador
No h transcrio de Sxl,
traduo ou subseqente atividade
do fator de emenda da protena Sxl
Emenda e
traduo
Transcrio
Transcrio
Sem
M Protena
Cdon
iniciador
Cdon
Terminao
Figura 20.17
Ativao diferencial do gene Slx em machos e fmeas. (A) em Drosophila tipo selvagem com
dois cromossomos X e dois conjuntos de autossomos (XX; AA), as subunidades do fator
de transcrio numerador (sis-a, sis-b, etc.) no esto totalmente complexadas pelas
subunidades inibidoras derivadas dos genes (como deadpan) nos autossomos. Esses fatores
numeradores ativam o promotor precoce do gene Sxl, que produz um transcrito que automaticamente emendado no mRNA especfico de fmea que codifica a protena Sxl funcional.
Por fim, a transcrio constitutiva de Sxl comea a partir do promotor tardio. Se Sxl j estiver
disponvel (i.e., de uma transcrio precoce), o mRNA de Sxl ser emendado para formar a
mensagem funcional especfica de fmea. (B) Em Drosophila de tipo selvagem com um
cromossomo X e dois conjuntos de autossomos (XO; AA), os fatores de transcrio numeradores so ligados pelas subunidades denominadoras e no podem ativar o promotor precoce. Quando o gene Sxl for transcrito do promotor tardio, a emenda de RNA no ir excluir
o xon especfico de macho no mRNA. A mensagem resultante codifica um peptdio truncado e no-funcional, visto que o xon especfico de macho contm um cdon de terminao
da traduo. (Segundo Keyes et al. 1992.)
RNA tais como quelas em snRNPs. Bell e colegas (1988) propuseram que existem dois
alvos para a protena ligante de RNA codificada pelo Sxl. Um desses alvos o prmRNA do prprio Sxl. Isso seria o mecanismo que manteria o estado feminino da
trajetria aps a ocorrncia do evento ativador inicial. O segundo alvo seria o prmRNA do prximo gene da trajetria, transformer.
793
Os Genes transformer
O gene Sxl regula a determinao sexual somtica controlando o processamento do
transcrito do gene transformer. Como vimos no Captulo 12, o gene transformer (tra)
emendado alternadamente em machos e fmeas. Existe um mRNA especfico de
fmea e tambm um mRNA no-especfico encontrado tanto em fmeas como em
machos. Tal como a mensagem Sxl masculina, o mRNA tra contm um cdon de
terminao precoce na mensagem, tornando a protena no-funcional (Boggs et al.,
1987). Em tra, o segundo xon do mRNA no-especfico tem um cdon de terminao.
Esse xon no utilizado na mensagem especfica de fmea (veja Figura 20.18). Como
fmeas produzem um transcrito diferente dos machos? Acredita-se que a protena
especfica de fmea do gene Sxl ative um local de emenda 3 especfico de fmea no
pr-mRNA do transformer fazendo com que ele seja processado de uma maneira que
expele o segundo xon. Para isso, a protena Sxl bloqueia a ligao do fator de emenda
U2AF ao stio de emenda no-especfico, ligando-se especificamente ao trato de
polipirimidina adjacente. Isso leva o U2AF a se ligar ao local de emenda 3 de menor
afinidade (especfico de fmea) e gerar um mRNA especfico de fmea (Valcrcel et al.,
1993). A protena codificada por essa mensagem crtica para a determinao do sexo
feminino. Se o transcrito especfico de fmea for produzido artificialmente em moscas
XY, essas moscas se tornam fmeas. O transcrito no-especfico no tem efeito quer
em machos quer em fmeas (McKeown et al., 1988).
O produto de tra especfico de fmea age em conjunto com o gene transformer-2
(tra2) para ajudar a gerar o fentipo feminino. (O gene tra2 no necessrio para a
determinao do sexo masculino, embora seja necessrio mais tarde para a espermatognese.) O gene tra2 constitutivamente ativo e produz o mesmo produto protico
em machos e fmeas. Essa protena TRA-2, tal como a protena especfica de fmea Sxl,
contm um domnio ligante de RNA (Amrein et al., 1988; Goralski et al., 1988). Propese que o gene tra2 pode se ligar ao transcrito do gene doublesex, mas somente na
presena da protena Tra especfica de fmea (Baker, 1989).
Figura 20.18
doublesex
doublesex:: O Gene Comutador da Determinao Sexual
O gene doublesex ativo tanto em machos como fmeas, mas seu transcrito primrio processado de uma maneira especfica do sexo (veja Figura 12.9; Baker et al.,
1987). Os transcritos masculino e feminino so idnticos atravs dos trs primeiros
xons. Os xons 3 diferem marcadamente. O que um xon para os transcritos especficos de fmea parte do terminal 3 no-traduzido da mensagem especfica de macho. Alm disso, anlises moleculares das mutaes dsx dominantes revelam que elas
mRNA feminino
Emenda
especfica
de fmea
Pr-mRNA
Emenda
revelia
mRNA masculino
ou no-especfico
Sex-lethal
AAA
Cdon de parada
Transformer
AAA
Cdon de parada
Doublesex
AAA
794
795
Hermafroditismo
Hermafroditismo no Nematide C. elegans
O nematide Caenorhabditis elegans tem usualmente dois tipos sexuais: hermafrodita e macho. A maioria dos indivduos dessa espcie so hermafrodticos,* tendo
tanto testculos como ovrios. Quando larvas, esses hermafroditas produzem espermatozide, que armazenado no trato genital do nematide (Figura 20.19). O ovrio
adulto produz vulos que so fertilizados quando migram para o tero. (O espermatozide j est presente no hermafrodita adulto.) A autofertilizao quase sempre produz
mais hermafroditas. Somente 0.2 porcento da prognie so machos. Esses, porm,
podem copular com hermafroditas; como seu espermatozide tem uma vantagem competitiva sobre o espermatozide hermafrodita endgeno, a razo sexual resultante de
tais unies de cerca 50% hermafroditas e 50% machos (Hodgkin, 1985).
Em C. elegans, o hermafrodita XX, e o macho XO. Como em Drosophila, o sexo
determinado pela razo de cromossomos X para autossomos. Em espcies estreitamente relacionadas de nematides so encontradas fmeas XX, sugerindo que os
hermafroditas evoluram de fmeas. Somaticamente, as fmeas e os hermafroditas so
idnticos, a nica diferena sendo a produo de espermatozide durante o desenvolvimento precoce antes dos hermafroditas mudarem para a produo de vulos. Em C.
elegans existe uma mutao dominante (tra-1D) que transforma indivduos XX ou XO
*Hermafroditas receberam o nome em homenagem ao filho de Hermes (Mercrio) e Afrodite
(Vnus). Tendo herdado a beleza de ambos os pais, excitou o amor da ninfa da fonte de Salmacis.
Enquanto ele se banhava nessa fonte, ela o abraou, pedindo aos deuses que eles ficassem unidos para
sempre. Ela conseguiu seu desejo da forma mais literal possvel.
Hermafrodita: XX
Ovrio
vulos no
tero
Espermatozide
na espermateca
Boca
Macho: XO
Ovrio
Ocitos
nus
rgo
copulatrio
Vulva
Figura 20.19
Espermatozide Vasos
deferentes
Testculos
Cloaca
Diagramas esquemticos do macho e do hermafrodita de Caenorhabditis elegans, enfatizando seus sistemas reprodutivos. (de
Hodgkin, 1985.)
796
1.0
Baixo
Alto
Baixo
Alto
Baixo
Alto
Hermafrodita
Ratio
X:A
Alto
Baixo
Alto
Baixo
Alto
Baixo
Macho
Figura 20.20
em fmeas frteis. Em colnias com tal alelo, trs sexos so possveis e funcionais
(Hodgkin, 1980).
Como em Drosophila, a determinao do sexo em C. elegans envolve vrios genes
autossmicos que lem e respondem razo X:A. O gene que integra os numeradores
e denominadores do desenvolvimento de C. elegans o xol-1 (XO-lethal). Nveis
altos de XOL-1 durante a gastrulao desligam a trajetria para o desenvolvimento
hermafrodtico, transformando com isso o animal em um macho (Rhind et al., 1995).
XOL-1 parece conseguir isso reprimindo os genes sdc (controle da determinao do
sexo), cujas atividade tornam o animal hermafrodita (Miller et al., 1988).
A trajetria para determinao do sexo em C. elegans foi decifrada encontrando-se
mutaes em genes necessrios para o desenvolvimento hermafrodita (os genes tra),
bem como outros necessrios para a expresso do fentipo masculino (os genes her
e fem). Criando gentipos carreando diferentes combinaes dessas mutaes Hodgkin
(1980) e outros foram capazes de construir um modelo para essa via desenvolvimental
(Figura 20.20). Por exemplo, mutaes tra-2 suprimiram a mutao her-1, indicando
que her-1 mais tardio na trajetria.
O gene crucial na trajetria para a determinao sexual parece ser o tra-1. Se o
tipo selvagem tra-1 for ativo, o indivduo um hermafrodita. Se esse gene no for
funcional, o indivduo um macho. Os outros genes parecem regular esse gene
singular de troca.
Porm, o que tem essa via gentica linear a ver com os reais eventos celulares
levando determinao sexual? Estudos recentes indicam que alguns desses genes
codificam protenas de uma via sinalizadora entre clulas. A anlise de mosaicos
genticos sugere que sdc-1 e her-1 no so necessariamente ativos nas clulas
que os produzem. Ao contrrio, esses genes parecem produzir produtos secretados. Em contraste, tra-1 age de um modo celular autnomo e, portanto, provavelmente parte de um aparelho receptor de sinais. A seqncia do gene tra-1 sugere
que esse codifica um fator de transcrio dedo de zinco (Hunter e Wood, 1990;
Zarkower e Hodgkin, 1992; Perry et al., 1993). Kuwabara e Kimble (1992) propuseram recentemente um modelo que integra essa via gentica com a biologia celular
da determinao do sexo. A protena HER-1 considerada promover o desenvolvimento masculino em nematides XO inibindo a TRA-2. A protena codificada por
tra-2, porm, no um fator de transcrio ou um fator de emenda, mas sim uma
protena integral de membrana com mltiplos domnios transmembrana. Alm disso, seu mRNA encontrado (em quantidade diferentes) tanto em machos como em
fmeas. De acordo com esse modelo especulativo (Figura 20.21), as protenas
FEM se combinam para criar um grande complexo de protena FEM, e esse complexo est ligado pela protena TRA-2 da membrana. Em indivduos XX, esse complexo ligado membrana, e a protena TRA-1 pode entrar no ncleo. Em nematides
XO, porm, a protena HER-1 se liga regio extracelular da protena TRA-2,
causando a liberao do complexo FEM. Esse complexo, uma vez livre no citoplasma, pode ligar a protena TRA-1 e impedir sua entrada no ncleo. Desde que a
Hermafroditas XX
Machos XO
797
Figura 20.21
Citoplasma
Ncleo
protena TRA-1 (um fator de transcrio putativo) no pode entrar no ncleo, ela
no poder ativar os genes especficos do hermafrodita. Mais estudos tero que
ser realizados para confirmar ou desaprovar esse modelo que, no entanto, til
por sugerir novas pesquisas e por visualizar como os genes poderiam gerar vias
para a determinao sexual em C. elegans.
Um dos problemas mais interessantes desse nematide seu hermafroditismo.
Como se originou essa condio em um organismo que provavelmente tinha um sistema sexual macho/fmea? Quais mudanas genticas apareceram, e haveria outras
solues que poderiam ter prevalecido? Os genes determinantes do sexo de uma
espcie estreitamente relacionada, a C. ramanei (com indivduos macho e fmea)
esto sendo agora identificados para se poder responder a essas perguntas. [sex7.html]
Hermafroditismo em Peixes
Embora o hermafroditismo no seja incomum em vermes e insetos, s visto raramente em vertebrados. Em aves e mamferos, o hermafroditismo geralmente uma condio patolgica causando infertilidade. Os hermafroditas vertebrados mais comuns
so peixes, que exibem vrios tipos de hermafroditismo (Yamamoto, 1969). Alguns
peixes, porm, so gonocorsticos; isso , eles tm um sexo determinado cromossomicamente como macho ou fmea. Peixes hermafroditas podem ser divididos em trs
grupos. Os primeiros so os hermafroditas sincrnicos, nos quais ovrios e tecidos
testiculares existem ao mesmo tempo e nos quais tanto espermatozide como vulos
so produzidos. Uma dessas espcies Servanus scriba. Na natureza e em aqurios,
esses peixes formam pares procriadores. Assim que um dos peixes pe seus ovos, o
outro peixe os fertiliza. Em seguida os peixes invertem seus papis, e o peixe que havia
sido macho pe seus ovos para que possam ser fertilizados pelo espermatozide de
seu parceiro (Clark, 1959).
Em outras espcies hermafroditas, um indivduo passa por uma mudana sexual
geneticamente programada durante seu desenvolvimento. Nesses caso, as gnadas
so dimrficas, tendo tanto reas femininas como masculinas. Uma ou outra predomina durante certa fase da vida. Em hermafroditas protginos (fmea primeiro), o
animal comea sua vida como uma fmea para mais tarde tornar-se um macho. O
reverso acontece em espcies protndreas (machos primeiro). A Figura 20.22
798
Figura 20.22
(A)
FASE MASCULINA
(B)
FASE TRANSITRIA
(C)
FASE FEMININA
Ovrio
Ovrio
Ovrio
Testculo
Testculo
Testculo
(B) Tartarugas
Todos machos
Agama
agama
Eublepharis
macularius
Todas fmeas
(A) Lagartos
799
Graptemys (3 espcies)
Chrysemys picta
Todos machos
Emys obicularis
Testudo
graeca
Caretta
caretta
Todas fmeas
Figura 20.23
Relao entre a razo sexual e a temperatura de incubao em rpteis. (A) Duas espcies de
lagartos nas quais temperaturas mais altas resultam na gerao de prole masculina. (B) Sete
espcies de tartarugas nas quais temperaturas mais altas resultam em prole feminina. (Segundo
Bull, 1980.)
do sexo normalmente ocorre (Bull et al., 1988; Gutzke e Chymiy, 1988). Parece que a
enzima aromatase (que pode converter testosterona em estrgeno) importante. A
atividade da aromatase de Emys muito baixa temperatura masculina de 25oC.
temperatura feminina de 30oC, a atividade da aromatase aumenta dramaticamente
durante o perodo crtico para a determinao do sexo (Desvages et al., 1993; Pieau et
al., 1994). Atividade dependente de temperatura de aromatase tambm vista em
terrapneos (tartarugas-diamondback terrapins), e sua inibio masculiniza suas
gnadas (Jeyasuria et al., 1994). possvel que o regulador da atividade da aromatase
seja o hormnio anti-Mlleriano. AMH conhecido por diminuir a atividade da aromatase em gnadas de Emys (Desvages e Pieau, 1992).
Ferguson e Joanen (1982) estudaram a determinao sexual no jacar do Mississipi,
tanto no laboratrio como no campo; eles concluram que o sexo determinado entre
7 e 21 dias de incubao. Ovos criados a 30oC ou abaixo produzem fmeas, enquanto
aqueles incubados a 34oC ou acima produzem somente machos. Alm disso, ninhos
construdos sobre barragens (perto de 34oC) produzem machos, enquanto aqueles
construdos em pntanos midos (perto de 300C) produzem fmeas. As vantagens e
desvantagens da determinao sexual dependente de temperatura so discutidas no
Captulo 21.
Determinao Sexual Dependente da Localizao
em Bonellia viridis e Crepidula fornicata
O sexo do verme equiuride Bonellia depende de onde a larva se aloja. Bonellia
fmea marinha, habita rochas, tem um corpo de cerca de 10 cm (Figura 20.24), Tem,
porm, uma probscide que pode se estender por mais de um metro. Essa probscide
tem duas funes. Em primeiro lugar, varrer comida das rochas para o trato digestivo
da fmea. Em segundo lugar, se uma larva aterrissar na probscide, essa entra na boca
do animal, migra at o tero, e se diferencia em macho simbitico de 1-3 mm de comprimento. Assim, quando uma larva se aloja numa superfcie rochosa, torna-se uma fmea, mas se a mesma larva se aloja sobre a probscide de uma fmea, se torna um
macho. O macho de Bonellia passa sua vida no interior do corpo da fmea, fecundando seus ovos.
Baltzer (1914) demonstrou que quando larvas eram cultivadas na ausncia de
fmeas adultas, cerca de 90 porcento se tornavam fmeas. Porm, quando essas larvas
Probscide
(A)
(B)
Figura 20.24
Porcentagem
800
Indiferentes
Figura 20.25
Anlise in vitro da diferenciao de Bonellia. Larvas foram colocadas em gua do mar normal ou
em gua do mar contendo fragmentos de probscide feminina. A maioria dos animais cultivados
na presena dos fragmentos de probscide tornaram-se machos, enquanto normalmente se tornariam fmeas. (Segundo Leutert, 1974.)
Resumo
A Natureza forneceu muitas variaes em sua obra prima. Em algumas espcies, o sexo
determinado somente por cromossomos, enquanto em outras, sexo uma questo
de condies ambientais. Entre essas grandes categorias, existem numerosas variaes. Um catlogo completo dos mecanismos de determinao sexual conhecidos iria
requerer um volume em separado (e muito interessante).
Figura 20.26
Morto
Agregados de lesmas Crepidula. Dois indivduos esto mudando de machos para fmeas.
Aps esses moluscos se tornarem fmeas, sero fecundados pelo macho acima deles. (Segundo Coe, 1936.)
801
LITERATURA CITADA
Agius, L. 1979. Larval settlement in the
echiuran worm Bonellia vividis: Settlement on
both the adult proboscis and body trunk. Mar.
Biol. 53: 125-129.
802
803
804
Wagner, T. and thirteen others. 1994. Autosomal sex reversal and campomelic dyspla-sia
are caused by mutations in and around the SRYrelated gene SOX9. Cell 79: 1111-1120.
Washburn. L. L. and Eicher, E. M. 1989. Normal testis determination in the mouse depends
on genetic interaction of a locus on chromosome 17 and the Y chromosome. Genetics 123:
173-179.
Werner, M. H., Huth, J. R., Groneborn, A. M.
and Clore, G. M. 1995. Molecular basis of human
46X,Y sex reversal revealed from the threedimensional solution structure of the human SRYDNA complex. Cell 81: 705-714.
Regulao ambiental do
desenvolvimento animal
21
mo em relao s suas condies de existncia, e a investigao do organismo vivo era geralmente realizada em seu habitat original. Somente ao
redor de 1850, que a fisiologia emergiu como uma tentativa de quantificar o fenmeno biolgico no laboratrio. A embriologia permaneceu dentro do reino da biologia,
enquanto a fisiologia investigava as estruturas e funes dos organismos adultos
independentemente dos seus ambientes originais (Nyhart, 1995).
Dentro desse contexto biolgico, a embriologia foi vista como o motor da mudana evolucionria, e o desenvolvimento como sendo condicionado pelo ambiente.
Por exemplo, Augusto Weismann (1875) verificou que borboletas da mesma espcie
eclodindo em estaes diferentes podiam apresentar cores diferentes, e ele podia
transformar a forma do vero na forma da primavera, resfriando as pupas. Carl Siebold
mostrou que alguns afdios partenogenticos podiam dar origem a machos e fmeas
sexuadas tardiamente na poca de reproduo para produzir um ovo que hibernava (e
que invariavelmente eclodia como uma fmea partenogentica), e vrios pesquisadores estudaram a determinao sexual pelo ambiente na Bonellia e em colmias de
insetos (veja Hertwig, 1894). A primeira gerao de embriologistas experimentais
estudou os efeitos do ambiente sobre o desenvolvimento, incluindo o efeito de falta
de ons ou de nutrientes na determinao do sexo e na morfognese (Selenka 1876;
Born, 1881; Herbst, 1893). (Os estudos de Born mostrando que o sexo de embries de
rs podia ser alterado por fatores ambientais foi mostrado com proeminncia no filme
Jurassic Park.)
Mas a mar estava mudando. Nas dcadas de 1870 e de 1880, jovens zoologistas
se afastavam dessas questes biolgicas em direo s questes de fisiologia
interna e anatomia. Embriologistas mais velhos, como Carl Siebold e Ernst Haecke,
que desenvolveram seus trabalhos em um contexto evolucionrio ou ambiental, se
desesperavam porque a prxima gerao de zoologistas cientficos somente conheceria cortes seccionais e tecidos corados, mas nem o animal inteiro e nem seu
modo de vida (Haeckel, 1881). Eles estavam atnitos pela falta de interesse dos
805
806
Q REGULAO AMBIENTAL DO
DESENVOLVIMENTO NORMAL
CAPTULO 21
Substrato
AMPHINEURA (CHITONS)
Tonicella lineata
LAMELLIBRANCHIA (Bivalvos)
Teredo sp.
Bankia gouldi
Mercenaria mercenaria
Placopecten magellanicus
Mytilus edulis
Crassostrea virginica
Madeira
Madeira
Lquidos de moluscos; areia
Concha adulta; areia; etc.
Algas filamentosas; outro material no biolgico de seda
Lquido da concha; extrato do corpo; glicognio de crustceo
sugestes para iniciar sua colonizao. Nos moluscos, freqentemente existem sugestes muito especficas para a colonizao (Tabela 21.1). A maioria das larvas dos
nudibrnquios (lesma do mar) sofrem metamorfose somente se induzida por uma
presa adulta viva (que diferente de espcie a espcie). Em alguns casos, foi identificado o produto solvel da presa que dispara a metamorfose (Hadfield, 1977). A
larva do teredo (shipworm) Teredo navalis induzida a se estabelecer por compostos
liberados pela madeira, e material solvel eludo de conchas de ostras induzem a
colonizao das larvas de ostras.*
O haliote vermelho (abalone) Haliotis rufescens tem larvas que somente colonizam quando entram em contacto fsico com algas vermelhas coralinas. Somente um
contacto breve necessrio para que a larva competente pare de nadar e comece a
metamorfose. Ainda no foi isolado o agente qumico responsvel por essa modificao, mas o reconhecimento de um peptdeo de algas induz a metamorfose em larvas
competentes. As larvas que no so competentes para a induo da metamorfose
parecem no ter esse receptor. Considera-se que esse receptor esteja ligado a uma
* Em 1880, William Keith Brooks, um embriologista na Universidade de Johns Hopkins (e supervisor
da tese de T. H. Morgan, E. B. Wilson, R.G. Harrison e E. G. Conklin), foi solicitado a ajudar a
problemtica indstria de ostras de Chesapeake Bay. Durante dcadas, as ostras foram dragadas da baa,
e sempre havia uma nova colheita em seu lugar. Mas, recentemente, a produo estava caindo ano a ano.
O que seria responsvel por esse declnio? Realizando experimentos com larvas de ostras, Brooks
descobriu que a ostra Americana (diferentemente de sua prima Europia- melhor conhecida) necessitava
de um substrato rgido no qual sofriam metamorfose. Durante anos, os pescadores de ostras jogavam as
conchas de volta para o mar, mas com o advento das caladas suburbanas, os pescadores estavam
vendendo as conchas para as fbricas de cimento. A soluo de Brooks: jogar as conchas de volta na baa.
A populao de ostras respondeu: o cais de Baltimore at hoje vende seus descendentes.
807
808
protena G semelhante quelas encontradas em vertebrados, e a ativao dessa protena G pode ser necessria para a induo da colonizao larval e a metamorfose
(Morse et al., 1984; Baxter e Morse, 1992; Degnan e Morse, 1995).
O alimento no a nica sugesto usada na colonizao larval. A larva da mosca
preta, por exemplo, se adere a superfcies duras nos rios e se alimenta passivamente
das partculas suspensas no fluxo. Essas larvas procuram ativamente reas com correntes de alta velocidade. Nessa zona de alta velocidade as larvas so relativamente
imunes aos ataques dos platelmintos. Em experimentos de laboratrio (Hansen et al.,
1991), platelmintos no podiam capturar larvas da mosca preta em fluxos mais rpidos
que 35 cm/segundo. A razo disso que os platelmintos ingerem sua presa elevando
a cabea para fora da superfcie. Isso expe sua superfcie frontal ao fluxo e reduz a
rea da superfcie de aderncia ao substrato. Portanto, em correnteza de alta velocidade, os platelmintos correm o risco de serem levados rio abaixo se eles tentam se
alimentar. Dessa maneira, as moscas pretas sobrevivem, sofrem metamorfose e dificultam a vida dos prximos acampados.
Refeies de sangue
Em muitos mosquitos, a produo de ovos induzida por uma refeio sangnea.
(Na Drosophila a sugesto ambiental para a produo de ovos parece ser o
fotoperodo.) Nos mosquitos, s a fmea pica e ela no produz vitelogenina antes
dessa refeio. No Aedes aegypti, os produtos digeridos do alimento sangneo
estimulam o crebro a secretar o hormnio neurosecretor para o desenvolvimento
do ovo (EDNH, tambm conhecido como hormnio ecdisteroidognico ovariano,
OEH). Esse estimula o ovrio a produzir ecdisterides, os quais instruem as clulas do corpo gorduroso a produzir vitelogenina para os ocitos (Fallon et al., 1974;
Hagedorn, 1983; Borovsk et al., 1990). A vitelogenina crtica para a produo de
ovos. Portanto, sem uma refeio sangnea, no h vitelogenina e nem ovos
(Figura 21.1).
No inseto sugador de sangue, Rhodinus prolixus, as fmeas adultas produzem
uma nova carga de ovos toda vez que sugam sangue. Esse alimento sangneo serve
a dois propsitos. As protenas do sangue fornecem os aminocidos necessrios para
a sntese de vitelogenina, e o estiramento fsico do abdmen pelo sangue inicia o
estmulo endcrino que ativa a secreo do hormnio juvenil pela corpora allata. O
hormnio juvenil estimula a sntese de vitelogenina no ovrio e no corpo gorduroso
(veja Nijhout, 1994). Alm disso, o estiramento causado por uma nica refeio
sangnea induz a muda larval. Se esse inseto se alimentar com vrias pequenas
refeies, ele sobreviver, mas no sofrer muda e nem crescer. Nessa situao,
mamferos so usados em parte do desenvolvimento de insetos.
Simbiose no desenvolvimento
Em alguns dos exemplos acima, o desenvolvimento de um indivduo possvel
pela presena de outro indivduo de uma espcie diferente. Em alguns organismos,
essa relao se tornou simbitica (Sapp, 1994). Aqui, os simbiontes esto fortemente integrados ao organismo hospedeiro, e esse no pode se desenvolver sem
eles. A lula adulta Euprymna scolopes est equipada com um rgo de luz composto de sacos contendo a bactria luminosa Vibrio fischeri. A lula juvenil no tem
esses simbiontes emitentes de luz e nem as estruturas para abrig-los. Na verdade,
a lula adquire a bactria atravs da gua do mar bombeada atravs da cavidade de
sua cobertura. As bactrias se ligam a um epitlio ciliado que se estende nessa
cavidade. As bactrias induzem a morte dessas clulas, sua substituio por um
epitlio no ciliado e a diferenciao das clulas epiteliais vizinhas para se tornar
receptculos de armazenagem das bactrias (Figura 21.2; McFall-Ngai e Ruby,
1991; Montgomery e McFall-Ngai, 1995).
CAPTULO 21
Emergncia
EDNH
Acasalamento e
comportamento alimentar
JH
Ovrio
imaturo
Competncia
Crebro
Corpora allata
809
Figura 21.1
Refeio de sangue
Crebro
Corpo
gorduroso
Competncia
crescimento
Vitelogenina
Ovrio no
estgio de repouso
Ovrio vitelognico
Corpo gorduroso
competente
Ovos e ovrio
ps-vitelognico
Ecdisterides
A simbiose entre massas de ovos e algas fotossintticas crtica para o desenvolvimento de certas espcies. O suprimento de oxignio limita a taxa de desenvolvimento quando os ovos esto agrupados em massas compactas, e o desenvolvimento dos
embries na parte interna do aglomerado retardado em comparao com aqueles
mais prximos da superfcie (Strathmann e Strathmann, 1995). Apesar do forte gradiente de oxignio partindo de fora do aglomerado para seu interior, os embries parecem
ter resolvido o problema envolvendo-se com uma fina camada de algas fotossintticas.
Em ninhadas de ovos de anfbios e caracis, fotossntese infratora das algas permite produo lquida de oxignio na luz, enquanto a respirao excede a fotossntese no
escuro (Bachmann et al., 1986; Pinder e Friet, 1994; Cohen e Strathmann, 1996). Portanto, as algas salvam os ovos pela fotossntese.
Uma ligao ainda mais intensa entre morfognese e simbiose verificada na
cigarrinha Euscelis incisus. Aqui, a simbiose ocorre dentro do ovo. Existem bactrias
simbiticas nessas espcies que esto dentro do citoplasma do ovo e que so
transferidas atravs de geraes, exatamente como as mitocndrias. Essas bactrias
se tornaram to especializadas que s podem se multiplicar dentro do citoplasma do
organismo, e o embrio do hospedeiro se tornou to dependente da bactria que lhe
Figura 21.2
(A)
(B)
810
Figura 21.3
Trax
Cabea
Abdmen
0.1 mm
(A)
Cabea
Trax
Abdmen
0.1 mm
(B)
CAPTULO 21
Nmero de
cromossomos
Oognese completa
Ovo com 12
cromossomos
Ovo
Ovo
Me precursora
partenognico
hibernal
assexuada
Fema
capaz de
produzir
gerao
sexuada
Ovo haplide
Fmea
sexuada
Espermatognese
completa
Ovo com 10
cromossomos
Macho
sexuado
Figura 21.4
Thomas Hunt Morgan (antes dele comear a trabalhar com a mosca da fruta). Morgan
analisou os cromossomos do afdio da nogueira (hickory) durante vrias geraes
(Figura 21.4). Ele encontrou que o nmero diplide das fmeas de afdios 12.
Durante a oognese, somente um corpo polar expelido do vulo em desenvolvimento, de modo que o nmero diplide de 12 retido. Esse ovo desenvolve-se
partenogeneticamente sem ser fertilizado. Nas fmeas que podem dar origem a ovos
que se tornam macho ou fmea, ocorre uma modificao dessa oognese. Nos ovos
produtores de fmeas, seis pares de cromossomos penetram no nico corpo polar.
Portanto, o nmero diplide de 12 retido. Nos ovos produtores de machos, entretanto, um par extra de cromossomos entra no corpo polar. O nmero diplide do
macho 10. Esses machos e fmeas so sexuados e tm divises meiticas completas. A fmea produz ocitos com um conjunto haplide de 6 cromossomos. Os
machos, entretanto, dividem os seus 10 cromossomos para produzir uma parte do
espermatozide com o nmero haplide de 4 cromossomos e a outra parte com o
nmero haplide de 6 cromossomos. O espermatozide com 4 cromossomos se
degenera. O espermatozide com 6 cromossomos fertiliza o ovo com esses para
restaurar o nmero diplide de cromossomos a 12. Quando o ovo eclode, aps o
inverno, uma fmea.
Isso resolveu uma charada. A outra, de como o clima do outono regula se a
fmea sexuada ou partenognica ou se o organismo alado ou ptero permanece
sem soluo. Da mesma maneira, no sabemos o que regula o ocito diplide a
produzir ovos dando machos ou fmeas. Alm disso, fatores ambientais so usados de maneiras diferentes pelas vrias espcies. A Figura 21.5 mostra um tipo de
ciclo vital encontrado em afdios. Nos afdios da nogueira e na Megoura viciae,
existe uma alternncia de geraes sexuadas e assexuadas. Em Megoura, a temperatura determina o sexo precocemente no desenvolvimento (temperaturas extremas favorecendo a produo de fmeas). No desenvolvimento da fmea, o
fotoperodo e a temperatura determinam se a fmea se reproduzir sexualmente ou
partenogeneticamente, e uma combinao de temperatura e densidade populacional
determinar se a fmea alada ou sem asas (Beck, 1980). possvel que o hormnio juvenil controle a troca partenogentica/sexual (adio de hormnio juvenil a
adultos produzindo descendentes sexuados os leva a ter descendentes partenogenticos) e inibe a formao de asas (Hardie, 1981; Hardie e Lees, 1985). Mas no
se sabe como as mudanas ambientais se transformam em ttulos de hormnio
juvenil ou como o clima de outono ou a luz solar causam o movimento diferencial
dos cromossomos para o corpo polar.
Cruzamento
Fertilizao
Degenerao
811
812
Figura 21.5
(A)
Primavera
Vero
Fmea
assexuada
sem asas
Fmea
assexuada alada
Macho
Ovo hibernal
Inverno
Outono
Fmea sexual
(B)
Aglomerao,
baixa temperatura
Dia longo,
alta temperatura
Temperatura
alta ou baixa
Isolamento,
alta temperatura
Dia curto,
temperatura mdia
Fmeas
assexuadas
aladas
Fmeas
assexuadas
sem asas
Fmea
sexuada
Temperatura
mdia
Macho
No Captulo 1, discutimos o ciclo vital do volvox e sua dependncia da temperatura. Aqui, tambm, a temperatura responsvel pela troca das formas assexuadas do
organismo pelas formas sexuadas. A fmea reproduzindo-se assexualmente d origem
a descendentes que produzem espermatozides ou vulos. O resultado dessa fertilizao o zigoto cuja camada externa pode proteg-lo da dessecao e do frio ao secar
a lagoa e chegada do inverno.
Diapausa
Muitas espcies de insetos desenvolveram uma estratgia chamada diapausa.
Diapausa a suspenso do desenvolvimento que pode ocorrer no estgio embrionrio, larval, pupal ou adulto, dependendo das espcies. Em algumas espcies, a
diapausa facultativa e ocorre somente quando induzida por condies ambientais;
em outras espcies, a diapausa se tornou uma parte obrigatria do ciclo vital. Essa
ltima freqentemente encontrada em insetos da zona temperada, onde a diapausa
induzida por mudanas no fotoperodo (a durao relativa dos dias e das noites).
O comprimento do dia onde 50% da populao entrou em diapausa chamado de
comprimento crtico do dia, e geralmente bastante repentino (Figura 21.6). Insetos
entrando na diapausa quando o comprimento do dia cai abaixo desse limite so
chamados de insetos de dia longo. Os insetos que se desenvolvem normalmente
quando existem somente algumas horas de luz solar e que entram em diapausa
quando expostos a dias mais longos so chamados de insetos de dia curto. O comprimento crtico do dia uma propriedade geneticamente determinada (Danilevskii,
1965; Tauber et al., 1986).
CAPTULO 21
813
Laspeyresia
molesta
Pieris
brassicae
Acronycta
rumicis
Leptinotarsa
decemlineata
Figura 21.6
814
Figura 21.7
Forma estacionria
Forma migratria
CAPTULO 21
815
Figura 21.8
(B)
(A)
(B)
Figura 21.9
As duas formas sazonais da borboleta de Malawi, Bicyclus anynana. (A) A forma da estao
seca que se mistura a restos de folhas mortas, secas e escuras. (B) Forma da estao chuvosa com
visveis manchas em forma de ocelos das asas posteriores ventrais. A forma da estao chuvosa
pode ser mimetizada pelo cultivo da larva em temperaturas mais altas (23oC); larvas cultivadas em
temperaturas mais baixas (17oC, se aproximando das temperaturas na transio para a estao
seca) se desenvolvem na forma da estao seca. (De acordo com Brakefield et al., 1996; fotografias cortesia de S. Carroll e P. Brakefield.)
816
Figura 21.10
(A)
(B)
Diviso
da asa
(C)
(D)
Expresso de
Distal-less
T alta
T baixa
Prepadronizao
Determinao
Focal
Sinalizao
Diferenciao
Polifenismo nutricional
Nem todo polifenismo controlado pelas estaes. Nas abelhas, o tamanho da larva
fmea na muda pupal determina se o indivduo ser uma operria ou uma rainha. A
larva que alimentada com gelia real, rica em nutrientes, retm a atividade da sua
corpora allata durante o estgio do ltimo instar. O hormnio juvenil secretado por
esses rgos atrasa a pupao, fazendo com que a abelha emergente seja maior e (em
algumas espcies) mais especializada em sua anatomia (Figura 21.11A; Brian, 1974,
1980; Plowright e Pendrel, 1977). Os nveis de hormnio juvenil em larvas destinadas a se tornar rainha 25 vezes maior que o ttulo das destinadas a serem operrias,
e a aplicao desse hormnio em larvas operrias pode transform-las em rainhas
(Wirtz, 1973; Rachinsky e Hartfelder, 1990).
Analogamente, colnias de formigas so predominantemente fmeas, e essas
podem ser extremamente polimrficas (Figura 21.11A). Os dois tipos principais de
fmeas so a operria e a gine. A gine uma rainha em potencial. Em espcies mais
especializadas, tambm se observa uma operria maior, o soldado. Na Pheidole
bicarinata, essas castas so determinadas pelos nveis de hormnio juvenil nas larvas em desenvolvimento. Larvas recebendo alimento rico em protenas tm um ttulo
elevado de hormnio juvenil que causa uma abrupta mudana no desenvolvimento
(A)
(B)
(C)
Nascimento
Nascimento
Gines
Operrias
Gines
Operrios
secundrios
Operrios
principais
(soldados)
Figura 21.11
CAPTULO 21
817
Muitas tartarugas
Porcentagem de fmeas
Lagartos, crocodilos
Temperatura (oC)
Figura 21.12
Tartarugas mordedoras
(e outras), crocodilos
Alguns lagartos,
cobras e tartarugas
818
Figura 21.13
Norte
Nova Scotia
Prince Edward Island
New York
Virginia
North Carolina
South Carolina
Sul
beneficiam por serem maiores, pois tamanho se traduz em maior fecundidade. uma
vantagem nascer cedo na poca da reproduo para uma fmea Menidia, que teria um
perodo mais longo de alimentao e um tamanho maior. Nos machos, o tamanho no
tem importncia. Conover e Heins mostraram que na parte sul da rea da Menidia, as
fmeas realmente nascem cedo na estao de reproduo. A temperatura parece ter um
papel importante. Entretanto, na parte norte de sua regio, a mesma espcie no mostra determinao sexual ambiental. Na verdade, uma relao 1:1 gerada em todas as
temperaturas (Figura 21.13). Os autores especulam que as populaes mais ao norte
tm uma estao de alimentao muito curta, de modo que no h vantagem para uma
fmea nascer antes. Portanto, essa espcie de peixes tem uma determinao sexual
ambiental nas regies onde adaptiva e uma determinao sexual genotpica nas
regies onde no adaptiva. Aqui, novamente, observa-se que o ambiente pode
induzir um fentipo sexual, ou o fentipo sexual pode ser uma propriedade do genoma,
como o caso na maioria dos mamferos.
CAPTULO 21
819
Figura 21.14
Forma
tpica
Abertura
grossa com dente
Inflado e
com corcova
Forma
induzida
por
predador
Cladocera
(Daphnia)
Rotfero
(Keratella)
Cirrpede
(Chthalamus)
Bryozoa
(Membranipora)
Sobrevivncia (tpica/induzida)
Molusco (Thais)
Sem predao at que
50% das formas tpicas
sejam devoradas
Carpa (Carassius)
820
Isso permite que o girino se afaste nadando rapidamente e desvie golpes na regio da
cauda. A carpa Carassius carassius reponde presena do lcio (pike) predatrio
somente se esse j se alimentou com peixe. A carpa cresce adquirindo uma forma
entumecida e com uma corcova que no mais se ajusta s mandbulas do lcio. Como
na maioria das defesas induzidas pelo predador, existe uma contrapartida (ou ento
seria de se esperar que a forma induzida se tornasse o fentipo normal). Nesse caso, a
morfologia induzida produz um retardamento nas condies de natao, e o peixe mais
gordo no pode nadar to eficientemente (Brnmark e Pettersson, 1994). A Figura
21.14 mostra as formas tpicas e as induzidas pelo predador para vrias espcies. Em
cada caso, filtrados solveis da gua envolvendo o predador so capazes de induzir
essas modificaes. Como mostra a Figura 21.14, a forma induzida mais susceptvel
a sobreviver ao seu predador. [env4.html]
Plasticidade fenotpica e mudanas no ambiente
O sapo p de espada (spadefoot toad), Scaphiopus couchii, tem um ciclo de vida
extraordinrio. Os sapos terminam a hibernao com o barulho do trovo que acompanha as primeiras tempestades da primavera no deserto de Sonoran. (Infelizmente,
motocicletas produzem o mesmo som, fazendo com que esses sapos saiam da hibernao e morram no escaldante sol do Arizona.) Os sapos se reproduzem nas lagoas
temporrias formadas pelas chuvas, e os embries se desenvolvem rapidamente em
larvas. Aps a metamorfose das larvas, os novos sapos retornam ao deserto, se afundando na areia at que as tempestades do ano seguinte os tragam para fora.
As lagoas do deserto so poas efmeras e tanto podem secar rapidamente como
persistir por algum tempo, dependendo da profundidade inicial e a freqncia das
chuvas. Poderia se considerar que existem somente dois cenrios alternativos confrontando o embrio do sapo: ou (1) a lagoa persiste at que ele sofra a metamorfose
e ele vive, ou (2) a lagoa seca antes da metamorfose e ele morre. Esses sapos (e
numerosos outros anfbios), entretanto, desenvolveram uma terceira alternativa. A
poca da metamorfose controlada pela lagoa. Se essa no seca, o desenvolvimento
continua em uma velocidade normal, e os girinos se alimentando de algas finalmente
se transformam em sapos p de espada juvenis. Entretanto, se a lagoa est secando,
se cria uma superpopulao e alguns dos girinos embarcam em uma via alternativa
de desenvolvimento. Eles desenvolvem uma boca mais larga e necessitam de msculos mais fortes nas mandbulas que os permita comer, entre outras coisas, outros
girinos de Scaphiopus. Esses girinos carnvoros sofrem uma rpida metamorfose,
ainda que em uma verso menor do sapo p de espada juvenil. Mas eles sobrevivem,
enquanto que os outros girinos Scaphiopus morrem ou por dessecao ou ingeridos
por seus companheiros de lagoa (Figura 21.15; Newman, 1989, 1992).
Grupo de msculo
hiideos da mandbula
Figura 21.15
Msculo
interhiideo
Alas
intestinais
CARNVORO
(outros girinos)
Superfcie ventral
Grupo de msculo
hiideos da mandbula
Musculo
interhiideo
Alas
intestinais
CAPTULO 21
821
Informaes adicionais
&
Especulaes
Assimilao Gentica
a discusso sobre a relao custo/
benefcio entre formas induzidas
e no induzidas, foi mencionado
que se a forma induzida no tivesse um custo significativo, seria de se esperar que essa
se tornasse a forma predominante da espcie. Isso foi previsto independentemente por
C. H. Waddington e I. I. Schmalhausen para
explicar como algumas espcies podiam
evoluir rapidamente em determinadas direes (veja Gilbert, 1994). Ambos estavam
impressionados com os calos encontrados
nos ps de avestruzes. Na maioria dos mamferos, a pele capaz de formar calos nas
reas que se desgastam em contacto com o
solo ou outra superfcie.*
Aqui, as clulas da pele respondem
frico proliferando-se. Apesar dos exemplos de calos induzidos pelo ambiente serem muito difundidos, o avestruz nasce com
calos onde tocar o solo (Figura 21.16).
Waddington e Schmalhausen propuseram
que as clulas da pele j so competentes
para serem induzidas pela frico, elas poderiam ser induzidas por outras coisas tambm. Com a evoluo dos avestruzes, uma
mutao permitiu que as clulas da pele respondessem a uma substncia dentro do
embrio. Waddington (1942) escreveu:
* E at este sculo, escritores eram reconhecidos pelos calos em seus dedos. (Portanto, da observao dos seus dedos, Sherlock Holmes corretamente deduziu que o homem ruivo havia sido contratado como um escriba.)
Figura 21.16
822
Se a assimilao gentica indica a fixao de um dos fentipos adaptivamente expressos, ento as borboletas seriam uma boa
fonte onde encontrar mais exemplos. Brakefield e colegas (1996) mostraram que podiam fixar geneticamente as diferentes formas do polifenismo adaptivo de Bicyclus,
e Shapiro (1976) mostrou que o fentipo
CAPTULO 21
Linfcito
em repouso
Clula B
Dia 1
823
Anticorpo na superfcie
celular reconhecendo o
antgeno B
Anticorpo na superfcie
celular reconhecendo o
antgeno A
Ncleo
Citoplasma
Antgeno A
Sem diviso ou diferenciao
dos linfcitos cujos anticorpos
da superfcie celular no
reconhecem o antgeno A
Clones de
linfcito
em repouso
Ribossomos
Dia 2
Figura 21.17
Molculas de
anticorpo so
sintetizadas no
retculo
endoplasmtico
Dia 3
Proliferao
Retculo
endoplasmtico
Dia 4
Diferenciao
Anticorpo anti-A secretado
Clula
plasmtica
Clula de
memria
Dia 5
Anticorpo secretado
824
em mamferos se concentram nos efeitos da privao sensorial no desenvolvimento do sistema visual em gatinhos e macacos. As vias pelas quais os impulsos
eltricos passam da retina ao crebro nos mamferos esto ilustradas na Figura
21.18. Os axnios das clulas ganglionares da retina formam os dois nervos pticos,
que se encontram no quiasma ptico. Como nos girinos de Xenopus, algumas
fibras vo para o lado oposto (contralateral) do crebro, mas diferentemente da
maioria dos outros vertebrados, as clulas retinianas dos mamferos tambm enviam sinais para o mesmo lado (ipsilateral) do crebro. Esses nervos terminam nos
dois ncleos geniculados laterais. Aqui, a entrada de cada olho mantida separada, as camadas mais superiores e anteriores recebendo os axnios do olho contralateral, e o meio dos corpos recebendo a entrada do olho ipsilateral. A situao se
torna mais complicada quando os neurnios do ncleo geniculado lateral se
conectam com os neurnios do crtex visual. Mais de 80% das clulas neurais no
crtex recebem entradas de ambos os olhos. O resultado viso binocular e percepo de profundidade. Outro conhecimento importante que a projeo
retinocortical a mesma para os dois olhos. Se um neurnio cortical estimulado
por luz reluzindo atravs de uma regio do olho esquerdo, 5o acima e 1o esquerda
da fvea,* ele tambm ser estimulado por uma luz reluzindo atravs de uma regio do olho direito, 5o acima e 1o esquerda da fvea. Alm disso, a resposta
evocada na clula cortical quando ambos os olhos so estimulados maior do que
a resposta quando cada retina estimulada sozinha.
Hubel, Wiesel e seus colaboradores (veja Hubel, 1967) demonstraram que o
desenvolvimento do sistema nervoso depende at certo ponto da experincia do
indivduo durante um perodo crtico do desenvolvimento. Em outras palavras, nem
todo o desenvolvimento neuronial est codificado no genoma: uma parte aprendida. A experincia parece reforar ou estabilizar algumas conexes neuroniais que j
esto presentes no nascimento e enfraquecer ou eliminar outras conexes. Essas
concluses vm de estudos de privao sensorial parcial. Hubel e Wiesel (1962,
1963) fecharam com costura as plpebras direitas de gatos recmnascidos e as
deixaram fechadas durante trs meses. Aps esse tempo, eles descosturaram as
plpebras direitas. As clulas corticais desses gatos no puderam ser estimuladas
por luz brilhante no olho direito. Quase todas as entradas no crtex visual vinham
somente do olho esquerdo. O comportamento dos gatinhos revelava a ineficincia
do olho direito: quando o olho esquerdo desses animais foi vedado, eles se tornaram funcionalmente cegos. Como os neurnios geniculados laterais pareciam ser
estimulados pelos dois olhos, direito e esquerdo dos gatinhos, o defeito fisiolgico
parecia ser entre os ncleos geniculados laterais e o crtex visual. Nos macacos
*A fvea uma depresso no centro da retina onde somente os cones esto presentes e os bastonetes
e vasos sangneos esto ausentes. Aqui ela se torna um marco conveniente.
CAPTULO 21
Olho direito
(A)
825
Olho esquerdo
Retina
Nervo
ptico
Quiasma
ptico
Ncleo
geniculado
lateral
Radiaes pticas
Crtex visual
Figura 21.18
(B)
(C)
Vias principais do sistema visual de mamferos. (A) Em mamferos, o nervo ptico de cada
olho se ramifica, enviando fibras nervosas a
um ncleo geniculado lateral em cada lado do
crebro. No lado ipsilateral, uma parte especfica da retina vai a uma parte especfica do ncleo geniculado lateral. No lado contralateral,
o ncleo geniculado lateral recebe entradas de
todas as partes da retina. Neurnios de cada
ncleo geniculado lateral inervam o crtex visual no mesmo lado. (B,C) Retinas isoladas (e
filetadas) mostrando projees ipsilaterais (B)
e contralaterais (C), das clulas ganglionrias
da retina de um embrio de camundongo de 16
dias. O corante fluorescente carbocianina DiI
foi inserido atrs do quiasma ptico, e foi permitido que o corante penetrasse nos axnios
retinianos. O corante se difunde ao longo dos
axnios, assim demarcando a sua origem. Projees ipsilaterais na sua maioria vm de uma
nica parte da retina (neste caso, da regio
ventro-temporal). Projees contralaterais para
o mesmo stio vm de toda a retina. (B e C de
Colello e Guillery, 1990, cortesia dos autores.)
826
(B)
(A)
(C)
(D)
Camada cortical 3
Camada cortical 4
Figura 21.19
CAPTULO 21
827
Q DISTRBIOS AMBIENTAIS DO
DESENVOLVIMENTO NORMAL
Malformaes e distrbios
Da primeira parte deste captulo, ficou claro que as instrues para o desenvolvimento no residem completamente nos genes ou mesmo no zigoto. O organismo sensvel s sugestes do ambiente. Entretanto, isso torna o organismo vulnervel s mudanas ambientais que podem provocar distrbios no desenvolvimento.
Se parece surpreendente que qualquer um de ns sobrevive para nascer, isso
real; estima-se que da metade a dois teros de todas as concepes humanas no se
desenvolvem a termo com sucesso (Figura 21.20). Muitos desses embries expressam sua anormalidade to cedo que no h implantao no tero. Outros se implantam mas no conseguem estabelecer uma gravidez de sucesso. Portanto, a maioria
dos embries anormais so espontaneamente abortados antes mesmo que a mulher
saiba que est grvida (Bou et al., 1985). Edmonds e colaboradores (1982) usando
um teste imunolgico muito sensvel que pode detectar a presena de gonadotropina
corinica humana (hCG) 8 ou 9 dias aps a fertilizao, monitoraram 112 gestaes
em mulheres normais. Dessas gestaes determinadas por hCG, 67 no foram mantidas.
Parece, ento, que muitos embries humanos so prejudicados cedo no desenvolvimento e no sobrevivem por muito tempo no tero. Os defeitos nos pulmes, membros, face ou boca no seriam deletrios para o feto (que no depende desses rgos
enquanto dentro da me), mas podem ameaar seriamente a vida aps o nascimento.
Cerca de 5% de todos os nascimentos humanos tm uma malformao reconhecvel,
algumas leves, outras muito severas (McKeown, 1976).
Anormalidades congnitas (no nascimento) e a eliminao de embries e fetos
antes do nascimento so causadas tanto intrinsecamente como extrinsecamente. As
anormalidades causadas por eventos genticos (mutaes, aneuploidia, translocaes)
so chamadas malformaes. Por exemplo, aniridia (ausncia da ris) causada pela
mutao do gene PAX6, uma malformao. A sndrome de Down, causada pela
trissomia do cromossomo 21, tambm uma malformao. A maior parte da eliminao precoce de embries e fetos provavelmente devida s anormalidades
cromossmicas que interferem com o processo normal do desenvolvimento.
Nmero de
sobreviventes
dos 20 originais
Porcento
Figura 21.20
828
Tabela 21.2 Alguns agentes considerados causadores de distrbios no desenvolvimento fetal humanoa
DROGAS E SUBSTNCIAS QUMICAS
cido retinico (Isotretinoina, Accutane)
cido valprico
Agentes antitirideos (PTU)
lcool
Aminoglicosdeos (Gentamicina)
Aminopterina
Bromo
Chumbo
Cocana
Cortisona
Dietilestilbesterol (DES)
Difenilhidantona
Estreptomicina
Fumaa de cigarro
Herona
Metilmercrio
Penicilamina
Talidomida
Tetraciclina
Trimetadiona
Warfarina
RADIAO IONIZANTE (RAIOS-X)
HIPERTERMIA
MICROORGANISMOS INFECCIOSOS
Cytomegalovrus
Herpes simplex
Parvovrus
Rubola (Sarampo Alemo)
Toxoplasma gondii (toxoplasmose)
Treponema pallidum (sfilis)
Vrus Coxsackie
CONDIOES METABLICAS NA ME
Doena auto-imune
(incluindo incompatibilidade de Rh)
Diabetes
Deficincias dietticas, malnutrio
Fenilcetonria
Fonte: Adaptado de Opitz, 1991.
a
Esta lista inclui agentes teratognicos conhecidos e possveis e no exaustiva.
Agentes teratognicos
Agentes diferentes so teratognicos em diferentes organismos. Uma lista parcial de
agentes teratognicos no homem est apresentada na Tabela 21.2.
A principal classe de teratognicos inclui drogas e compostos qumicos
ambientais. Alguns compostos qumicos que so encontrados naturalmente no
ambiente podem causar defeitos de nascimento. Mesmo nos puros campos alpinos intocados das Montanhas Rochosas so encontrados teratognicos. Aqui nasce
o repolho de gamb Veratrum californicum, que algumas vezes serve de alimento
para os carneiros. Se ovelhas grvidas se alimentam dessa planta, seus fetos tendem a desenvolver graves danos neurolgicos, incluindo ciclopia, a fuso dos
dois olhos no centro da face (Figura 21.21). Essa condio tambm ocorre no
homem, porco e muitos outros mamferos; o organismo afetado morre logo aps
o nascimento (como resultado do grave defeito no crebro, incluindo a falta da
glndula pituitria).
Quinina e lcool, duas substncias derivadas de plantas, podem tambm causar
malformaes. A quinina pode causar surdez, e o lcool (quando mais de 60-90 g por
dia so ingeridas pela me) pode causar retardamento fsico e mental na criana. No
foi provado que a nicotina e a cafena causam anomalias congnitas, mas mulheres
que fumam muito (20 cigarros ou mais por dia) podem ter crianas menores que
aquelas nascidas de mes que no fumam. Fumar tambm diminui significativamente o
nmero e a motilidade de espermatozides em homens que fumam pelo menos quatro
cigarros por dia (Kulikauskas et al., 1985).
Alm disso, nossa sociedade industrial produz anualmente centenas de novos
compostos artificiais que passam para o uso geral. Pesticidas e compostos orgnicos
de mercrio tm causado anormalidades neurolgicas e de comportamento em bebs
cujas mes os ingeriram durante a gravidez. Uma trgica demonstrao disso ocorreu
em 1965, quando uma firma japonesa despejou mercrio em um lago, onde foi ingerido pelos peixes que foram comidos por mulheres grvidas da aldeia de Minamata.
O dano cerebral congnito e a cegueira nas crianas nascidas se tornou conhecido
como a doena de Minamata.
Em alguns casos, as mesmas condies podem ser causadas por um distrbio (causado por um agente
exgeno) ou uma malformao (do ncleo). Por exemplo, certas malformaes axiais em camundongos
podem ser produzidas pela administrao de cido retinico ou por mutaes em certos genes Hox. Considera-se que, em alguns casos, a mutao e o teratognico esto afetando a mesma enzima. A
condroplasia puntacta um defeito congnito do osso e da cartilagem, caracterizada por uma
mineralizao anormal do osso, subdesenvolvimento da cartilagem nasal e dedos encurtados; esse
defeito causado por um gene defeituoso no cromossomo X. Um fentipo idntico produzido pela
ingesto de warfarina, o composto que mata ratos. Parece que o gene defeituoso normalmente
responsvel pela produo de uma protena, a arilsulfatase, necessria para o crescimento da cartilagem. O composto warfarina inibe essa mesma enzima (Franco et al., 1995).
CAPTULO 21
829
*Sade Pblica um fator crtico, pois existe uma significante sobreposio entre a populao
que usa medicamentos para a acne e a populao de mulheres em idade frtil. Alm disso, considerase que metade das gestaes na Amrica do Norte no so planejadas (Nulman et al., 1997). A
prpria vitamina A teratognica quando injetada em mega doses. Rothman e colegas (1995)
encontraram que mulheres grvidas que tomaram mais de 10.000 unidades internacionais de vitamina A pr-formada/dia (na forma de suplementos vitamnicos) tinham cerca de 2 por cento de chance
de terem uma criana nascida com distrbios semelhantes aqueles produzidos pelo cido retinico.
Figura 21.21
Cabea de carneiro ciclope nascido de uma cabra que havia ingerido Veratrum californicum
no incio da gestao. Os hemisfrios cerebrais se fundiram, formando um nico olho e
sem glndula pituitria. (de Binns et al. 1964,
cortesia de J. F. James e o USDA-ARS
Poisonous Plant Laboratories.)
830
Figura 21.22
(B)
um padro de anomalias muito especfico, incluindo uma dramtica reduo no tamanho do primeiro e segundo arcos farngeos (Figura 21.22). Em camundongos normais,
o primeiro arco forma o maxilar e a mandbula do queixo e dois ossculos do ouvido
mdio, enquanto o segundo arco forma o terceiro ossculo do ouvido mdio como
tambm outros ossos faciais.
A base para esse distrbio do desenvolvimento parece residir na habilidade da
droga em alterar a expresso dos genes Hox e, portanto, reespecificar pores do
eixo ntero-posterior e inibir a migrao das clulas da crista neural da regio craniana
do tubo neural (Moroni et al., 1994; Studer et al., 1994). O cido retinico marcado
radioativamente se liga s clulas da crista neural craniana e impede no s sua
proliferao como sua migrao (Johnston et al., 1985; Goulding e Pratt, 1986). A
ligao parece ser especfica s clulas derivadas da crista neural craniana, e o
efeito teratognico da droga confinado a um perodo especfico do desenvolvimento (dias 8-10 no camundongo; dias 20-35 em humanos). A teratognese do cido
retinico em modelos animais tem sido extremamente bem sucedida em elucidar seus
mecanismos a nvel celular. [env6.html]
Talidomida como um teratgeno
Antes de 1961, havia pouca evidncia sobre malformaes induzidas por drogas
em humanos. Mas, naquele ano, Lenz e McBride independentemente acumularam evidncia de que um sedativo leve, talidomida, causava um enorme aumento
em uma sndrome previamente rara de anomalias congnitas. A mais evidente dessas anomalias era a focomelia, uma condio na qual os ossos longos dos membros esto ausentes (amelia) ou severamente deficientes (peromelia), fazendo com
que os apndices resultantes paream membros de foca (Figura 21.23). Mais de
7000 crianas afetadas nasceram de mes que haviam tomado a droga, e uma
mulher necessitava ingerir apenas um comprimido para produzir crianas com os
quatro membros deformados (Lenz, 1962, 1966; Toms,1962). Outras anormalidades
induzidas pela ingesto de talidomida incluem defeitos no corao, ausncia de
ouvidos externos e intestinos malformados. A droga foi retirada do mercado em
Novembro de 1961.
Nowack (1965) documentou o perodo de susceptibilidade durante o qual a
talidomida causava essas anormalidades. Foi encontrado que a droga era teratognica
somente durante os dias 34-50 aps a ltima menstruao (cerca de 20 a 36 dias
ps-concepo). A especificidade da ao da talidomida mostrada na Figura
21.23C. Do dia 34 ao dia 38, no se observa anormalidades nos membros. Durante
esse perodo, a talidomida pode causar a ausncia ou deficincia dos componentes
do ouvido. Malformaes dos membros superiores so vistas antes daquelas dos
membros inferiores, pois durante o desenvolvimento os braos se formam pouco
antes do que as pernas.
CAPTULO 21
(A)
(B)
831
Figura 21.23
(C)
Ausncia de ouvido
Dedos ausentes ou mal formados
Ausncia de braos
Severo encurtamento dos braos
Deslocamento da bacia
Malformao do ouvido
Ausncia de pernas
Severo encurtamento das pernas
Dedos malformados
832
Figura 21.24
Efeitos da talidomida no feto de sagi. As figuras superiores mostram fentipos de fetos de sagis tardiamente na gestao. As figuras inferiores mostram sees da medula espinhal ao nvel dos membros anteriores.
(A) Feto de um sagi controle. (B) Feto de um sagi tratado com 25mg de talidomida por quilograma de peso
coporal entre os dias 38 e 46 da gestao. (de McBride e Vardy, 1983, cortesia de W. G. McBride.)
CAPTULO 21
833
Figura 21.25
834
Figura 21.26
Clulas
aderindo
pelo L1
Clulas controle no
expressando L1
Concentrao de etanol, mM
CAPTULO 21
adesivas das protenas L1 in vitro a nveis to baixos como 7mM, uma concentrao de etanol produzida no sangue ou crebro com um nica dose (Figura
21.26D). Alm disso, mutaes nos genes L1 humanos causam uma sndrome de
retardamento mental e malformaes semelhantes quelas vistas em casos severos da sndrome alcolica fetal. [env7.html]
Outros agentes teratognicos
Drogas e substncias qumicas no so os nicos agentes capazes de causar distrbios no desenvolvimento. Outra classe de teratognicos inclui os vrus. Gregg (1941)
foi o primeiro a documentar o fato que mulheres com rubola (sarampo Alemo)
durante o primeiro tero da gravidez tinham uma chance em seis de dar luz uma
criana com catarata ocular, malformaes cardacas ou surdez. Essa foi a primeira
evidncia de que a me no podia proteger totalmente seu feto contra o meio ambiente externo. Quanto mais cedo na gravidez ocorria a infeco por rubola, maior era
o risco de que o embrio seria malformado. As primeiras cinco semanas parecem ser
as mais crticas, porque nesse perodo que esto sendo formados o corao, os
olhos e os ouvidos. A epidemia de rubola entre 1963 e 1965 nos Estados Unidos
provavelmente resultou em 20.000 mortes fetais e 30.000 crianas com defeitos de
nascena. Dois outros vrus, Cytomegalovirus e Herpes simplex, so tambm
teratognicos. Infeco por Cytomegalovirus em embries precoces quase sempre fatal, mas infeco mais tardia pode levar cegueira, surdez, paralisia cerebral e
retardamento mental.
Bactrias e protistas so raramente teratognicos, mas dois deles podem prejudicar embries humanos. Toxoplasma gondii, um protozorio carreado por coelhos e
gatos (e por suas fezes), pode atravessar a placenta e causar defeitos no crebro e
olhos do feto. Treponema pallidum, a causa da sfilis, pode matar fetos precoces e
produzir surdez em outros mais velhos.
A radiao ionizante pode quebrar cromossomos e alterar a estrutura do DNA.
Por essa razo, mulheres grvidas so alertadas para evitar RaiosX desnecessrios, mesmo que no exista evidncia para anomalias congnitas resultantes de
radiao diagnstica (Holmes, 1979). O calor em febres altas tambm um
teratognico possvel. [env8.html], [env11.html]
Apesar de conhecermos as causas de certas malformaes, a maioria das anormalidades congnitas ainda no esto explicadas. Por exemplo, anomalias cardacas congnitas ocorrem 1 em 200 nascimentos vivos. As causas genticas so responsveis
por cerca de 8% dessas anomalias cardacas, e cerca de 2% podem ser explicadas por
teratognicos conhecidos. Isso deixa 90% das anomalias sem explicao (ORahilly e
Mller, 1992). Ainda existe muita pesquisa a ser realizada e ainda no foram feitas
anlises da maioria das substncias qumicas para avaliar seus efeitos teratognicos.
Atualmente, existem mais de 50.000 substncias qumicas artificiais em uso na nossa
sociedade e entre 200 e 500 novos materiais sendo produzidos a cada ano (Johnson,
1980). O problema de analisar esses produtos qumicos de grande importncia, e
protocolos padro so caros, longos, e sujeitos a diferenas metablicas entre espcies. Ainda no existe consenso em como testar a teratogenicidade de uma substncia
em embries humanos.
Na antiga Unio Sovitica, a prtica no regulada de uma produo industrial a
qualquer custo, deixa uma herana de defeitos de nascimentos em elevao. Em
algumas regies do Kazakhstan, teratognicos como o chumbo, o mercrio e o zinco
so encontrados em altas concentraes na gua potvel, nos vegetais e no ar. Nesses
lugares, quase metade das pessoas testadas apresentaram extensa quebra cromossmica. Em algumas reas, a incidncia de defeitos de nascimento dobrou desde 1980
(Edwards, 1994). Apesar da constante presena de teratognicos entre ns, os fetos
esto expostos a riscos cada vez maiores com o aparecimento anual de muitos compostos no testados em nosso ambiente.
835
836
Informaes adicionais
&
Especulaes
Estrognos Ambientais
do plstico polistireno e os pesquisadores tiveram que faz-lo eles mesmo. Descobriu-se que o composto era o pnonilfenol, usado para endurecer o plstico PVC dos encanamentos que trazem
gua e para estabilizar o plstico polistireno que contm gua, leite, suco de laranja e outros lquidos (Soto et al., 1991;
Colburn et al., 1996). Esse composto
tambm o produto de degradao de detergentes e produtos de limpeza caseira.
Um composto relacionado, 4-tert-pentilfenol, tem um potente efeito estrognico
em clulas humanas cultivadas e pode
fazer com que carpas machos (Cyprinus
carpis) desenvolvam ovidutos, tecido
ovariano e ocitos (Gimeno et al., 1996).
Alguns outros estrgenos ambientais
so os bifenis policlorinados (PCBs). Esses compostos eram muito usados como
refrigeradores at serem banidos, na dcada de 1970, como causadores de cncer em ratos. Entretanto, eles permanecem na cadeia alimentar e tm sido responsabilizados pelo declnio generalizado da capacidade reprodutiva de lontras, focas, vises e peixes. Os PCBs se
assemelham ao dietil-estilbesterol (DES)
na forma, e eles podem afetar o receptor
de estrgenos como o faz o DES, talvez
se ligando a outro stio do receptor estrognico. A estrutura desses compostos se parece com a estrutura dos hormnios da tireide (Figura 21.27). Hormnios da tireide so crticos para o crescimento da cclea do ouvido interno, e
ratos cujas mes foram expostas a PCBs
mostravam ccleas mal desenvolvidas e
defeitos de audio (Goldey e Crofton
em Stone, 1995). [env9.html]
No norte dos Estados Unidos e sul do
Canad est havendo um dramtico aumento no nmero de rs com deformaes desenvolvimentais no que parecem
ser puras lagoas de florestas. As principais anormalidades so membros extras
e malformados. No se conhece a causa
desses distrbios, mas a especulao (veja
Hilleman, 1996) que pesticidas (pulverizados para o controle de mosquitos e
carrapatos) estejam ativando os recepto-
CAPTULO 21
Estradiol-17
Dietilestilbesterol
837
Figura 21.27
Bisfenol-A
o,p-DDT
Tiroxina
Estrutura PCB
Interaes gentica-ambiental
A observao de que uma substncia pode ser teratognica em uma espcie mas no
em outra, sugere fortemente que existe um componente gentico para que uma substncia possa ou no produzir modificaes no desenvolvimento normal. Evidncia
recente sugere que diferentes alelos na populao humana podem influenciar se uma
substncia benigna ou perigosa para o feto. Por exemplo, existe na populao em
geral, um pequeno risco de que o fumo intenso pela me cause malformaes faciais
no seu feto. Entretanto, se o feto possui um determinado alelo (A2) do gene para o
fator de crescimento TGF-, a fumaa absorvida atravs da placenta pode aumentar
de dez vezes o risco de lbio e plato fissurados (Shaw et al., 1996). Analogamente,
diferentes alelos codificando a enzima lcool desidrogenase-2 tm diferentes habilidades de degradar o etanol. Se o alto consumo de lcool pela me leva uma sndrome
alcolica fetal ou a um efeito alcolico fetal depender do tipo de isozimas de lcool
desidrogenase presentes na me e no feto (McCarver-May, 1996). Portanto, se um
composto teratognico depende de muitos fatores, incluindo os genes do indivduo a ele exposto.
Resumo
Freqentemente, o desenvolvimento ocorre em um meio ambiente rico, e a maioria dos animais sensvel s sugestes do ambiente. O ambiente pode determinar o
fentipo sexual, pode induzir incrveis adaptaes qumicas e estruturais de acordo
com a estao, pode induzir determinadas modificaes morfolgicas que permitem
838
que o indivduo escape predao e pode induzir a determinao de castas nos insetos.
O ambiente tambm pode alterar a estrutura de nossos neurnios e a especificidade de
nossas clulas imunocompetentes. Infelizmente, o ambiente tambm pode ser a fonte de
compostos qumicos que prejudicam processos normais de desenvolvimento.
Enquanto o desenvolvimento ocorre normalmente em um ambiente natural complexo, ele pode ser facilmente estudado no laboratrio. Na verdade, nossos sistemas
modelo so animais facilmente domesticados, cujo desenvolvimento pouco afetado por fatores ambientais (Bolker, 1995). Entretanto, ao conhecermos a complexidade do desenvolvimento, compreendemos que esse criticamente ligado ao ambiente.
necessria uma comunidade para desenvolver um embrio. A explorao de como
o ambiente regula o desenvolvimento est apenas comeando.
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CAPTULO 21
841
22
fecundao, e iremos terminar nosso estudo sobre o desenvolvimento individual investigando a gametognese, os processos pelos quais so formados o espermatozide e o vulo. Clulas germinativas proporcionam a continuidade
da vida entre as geraes, e os ancestrais mitticos de nossas prprias clulas
germinativas residiram uma vez nas gnadas de rpteis, anfbios, peixes e invertebrados. Em muitos animais, como insetos, nematelmintos e vertebrados existe uma
clara e precoce separao das clulas germinativas de tipos celulares somticos. Em
vrios filos animais (e no todo do reino vegetal), essa diviso no est to bem estabelecida. Nessas espcies (que incluem cnidrios, platelmintos e tunicados), as clulas somticas podem facilmente se tornarem clulas germinativas mesmo em organismos adultos. Os zoides, brotos e plipos de muitos filos de invertebrados atestam
a capacidade das clulas somticas dar origem a novos indivduos.
Naqueles organismos nos quais existe uma linhagem germinativa estabelecida, separando-se precocemente no desenvolvimento, as clulas germinativas no se originam de dentro da gnada propriamente. Ao contrrio, seus precursores as clulas
germinativas primordiais (PGCs) migram para o interior das gnadas em desenvolvimento. O primeiro passo na gametognese, portanto, envolve a formao das PGCs
e sua conduo para o sulco genital medida que a gnada est se formando. A iniciao da linhagem da clula germinativa (a linhagem germinativa) em anfbios, insetos e
nematelmintos foi discutida no Captulo 13. Reiniciamos nossa histria da linhagem
germinativa com a migrao das PGCs de seu local de origem para as gnadas.
843
844
Figura 22.1
Sulco de clivagem
Plo animal
(A)
(B)
Plasma
germinativo
Plo vegetal
(C)
Blastocele
Figura 22.2
845
Figura 22.3
Intestino
anterior
Intestino
posterior
Alantide
Sulcos
genitais
Corao
Clulas
germinativas
primordiais
Mesonefros
Mesentrio
dorsal
Saco vitelnico
(A)
(B)
Cloaca
Intestino
posterior
Clulas germinativas
primordiais
(C)
(D)
Mesentrio
dorsal
Sulcos
genitais
Trajetria para a migrao de clulas germinativas primordiais de mamfero. (A) clulas germinativas primordiais vistas no saco vitelnico
prximas da juno do intestino posterior e da
alantide. (B) Migrao atravs do intestino e,
dorsalmente, acima do mesentrio dorsal para
o interior do sulco genital. (C) Quatro grandes
PGCs no intestino posterior de um embrio de
camundongo (perto da alantide e do saco
vitelnico) se coram positivamente para altos
nveis de fosfatase alcalina. (D) Tais clulas
podem ser vistas migrando subindo o mesentrio dorsal e entrando nos sulcos genitais. (A
e B de Langman, 1981; C de Heath, 1879; D de
Mintz, 1957; fotografias cortesia dos autores.)
846
(A)
(B)
(C)
Figura 22.4
Informaes adicionais
847
&
Especulaes
FATOR DA CLULA-TRONCO
Epitlio
Clulas
queratinizadas
Eritrcitos
Matriz ssea
Cartilagem
Tecido
conjuntivo
Epitlio
queratinizante
Figura 22.5
tumor, as clulas germinativas tornam-se clulas-tronco embrionrias, tal como nos experimentos j referidos. Esse tipo de tumor
chamado teratocarcinoma. Seja espontneo ou produzido experimentalmente, um
teratocarcinoma contm uma populao de
clulas-tronco no diferenciadas que tem
propriedades bioqumicas e desenvolvimentais notavelmente semelhantes quelas das
clulas da massa celular interna (Graham,
Insero no
blastocisto
Transferncia cirrgica
para a me de criao
Incorporao
na massa
celular interna
Isolamento da linhagem de
clulas-tronco
Teratocarcinoma
maligno
Figura 22.6
Mosaico
Tipo selvagem
Protocolo para a criao de camundongos cujos genes so predominantemente derivados de clulas tumorais. Clulas-tronco
foram isoladas de um teratocarcinoma de camundongo e inseridas
em blastocistos de uma variedade diferente de camundongo. Os
blastocistos quimricos foram colocados em uma me de criao. Se as clulas tumorais estiverem integradas no blastocisto,
o camundongo que se desenvolve ter muitas de suas clulas
derivadas do tumor. Se o tumor tiver dado origem s clulas
germinativas, os camundongos mosaicos podem ser cruzados
com camundongos normais para produzir uma gerao F1. Os
animais F1 devem ser heterozigotos para todos os cromossomos
das clulas tumorais. Cruzamentos entre animais F1 produzem
camundongos F2 tendo alguns genes homozigotos derivados
das clulas tumorais. (Segundo Stewart e Mintz, 1981.)
848
riedade agouti (ponta-amarela) de camundongo foram cultivadas por vrias geraes e foram vistas manter o complemento cromossmico caracterstico do camundongo ancestral. Clulas-tronco individuais desse tipo foram injetadas em
blastocistos de camundongos negros. Os
blastocistos foram em seguida transferidos para o tero de uma me de criao,
nascendo camundongos vivos. Alguns
desses tinham pelagem de duas cores, indicando que as clulas tumorais haviam
se integrado no embrio. Alm disso,
quando cruzado com um camundongo
Crescente
germinativo
rea pelcida
rea opaca
Ndulo de Hensen
Figura 22.7
Vista dorsal de um embrio em estgio de linha primitiva, mostrando a regio, chamada crescente
germinativo, na qual se originam as clulas germinativas. (Segundo Swift, 1914.)
849
Vaso sangneo
Clulas sangneas
Epitlio gonadal
Clula
germinativa
primordial
(A)
(B)
Figura 22.8
Dessa forma, as PGCs entram no embrio sendo transportadas pelo sangue (Pasteels,
1953, Dubois, 1969). As PGCs tm tambm que saber como sair do sangue quando
encontram a gnada em desenvolvimento (veja Figura 22.8B). Quando o crescente
germinativo de um embrio de pinto removido, e a circulao desse embrio juntada quela de um embrio normal, as clulas germinativas primordiais do embrio normal iro migrar para ambos conjuntos de gnadas (Simon, 1960). No conhecido o
que causa a atrao para os sulcos genitais. Uma possibilidade que a gnada em
desenvolvimento produz uma substncia quimiottica que atrai as PGCs e as retm
nos capilares limitando a gnada (Regulska, 1969). (Tais substncias so conhecidas
como secretadas pelos linfcitos nos locais de infeco para atrair os macrfagos
permitindo que esses passem atravs da parede capilar por diapedese.) A evidncia
para essa quimiotaxia veio de estudos (Kuwana, et al., 1986) nos quais as PGCs
circulantes do pinto foram isoladas do sangue e cultivadas entre rudimentos gonadais
e outros tecidos embrionrios. As PGCs migraram para o interior dos rudimentos
gonadais durante 3 horas de incubao.
Outra possibilidade que as clulas endoteliais dos capilares gonadais tm um
composto na superfcie celular que promove as PGCs aderirem especificamente a esse
local. Usando anticorpos monoclonais que reconhecem diferentes molculas da superfcie celular, Auerbach e Joseph (1984) mostraram que as clulas endoteliais de
vrias redes capilares tm diferentes componentes da membrana celular, e que as
clulas endoteliais de capilares ovarianos diferem de todas as outras testadas.* Tanto
a quimiotaxia como os mecanismos diferenciais de adeso celular podem estar atuando. Seja como for, esses fatores no so espcie-especficos. A gnada do pinto
atrai as PGCs circulantes do peru e at mesmo do camundongo (Reynaud, 1969;
Regulska et al., 1971).
rimordiais em Drosophila
Migrao de Clulas Germinativas P
Primordiais
Durante a embriognese de Drosophila, as clulas germinativas passam do plo
posterior para as gnadas. O primeiro passo uma fase passiva, na qual as clulas
germinativas so deslocadas pelos movimentos das clulas embrionrias durante
a gastrulao. A diferenciao do endoderma aciona o movimento amebide ativo
*Uma situao semelhante parece ocorrer quando linfcitos migram atravs da corrente sangnea
e abandonam a circulao quando entram no leito capilar de um determinado rgo linfide. O mecanismo para esse alojamento e especificidade para o rgo envolvem a capacidade do linfcito de
aderir especificamente s clulas endoteliais dos vasos sangneos nesses rgos. Clulas endoteliais
dos ndulos linfticos perifricos contm uma glicoprotena, uma selectina, em suas membranas
celulares que essencial para a ligao e sada daqueles linfcitos que podem reconhec-la. Para
cada selectina nessas clulas endoteliais, existe uma molcula complementar no linfcito que
pode reconhec-la (Gallatin et al., 1983, 1986).
850
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
Figura 22.9
Clulas germinativas
(F)
nas clulas germinativas promordiais, e elas viajam atravs do endotlio intestinal, migrando em direo ao mesoderma. A se dividem em dois grupos, cada qual
ficando associado com um primrdio da gnada em desenvolvimento (Figura 22.9;
Warrior et al., 1994).
O produto do gene wuwen parece ser responsvel pelo direcionamento da migrao
das PGCs do endoderma para dentro do mesoderma. Essa protena expressa no
endoderma imediatamente antes da migrao da PGC, e ele repele as PGCs. Nos mutantes de perda de funo desse gene, as PGCs viajam ao acaso (Zhang et al., 1997).
Meiose
Uma vez na gnada, as clulas germinativas primordiais continuam a dividir-se mitoticamente, produzindo milhes de gametas potenciais. As PGCs de gnadas tanto
masculinas como femininas enfrentam ento a necessidade de reduzir seu nmero de
cromossomos da condio diplide para a haplide. Nessa ltima, cada cromossomo
est representado somente uma vez, enquanto as clulas diplides tm duas cpias de
cada cromossomo. Para conseguir essa reduo, as clulas germinativas masculina e
feminina passam por meiose.
Aps a ltima diviso meitica, ocorre um perodo de sntese de DNA, fazendo
com que as clulas iniciando a meiose tenham o dobro da quantidade normal de
DNA em seus ncleos. Nesse estado, cada cromossomo consiste de duas cromtides
irms fixadas a um centrmero comum. (Em outras palavras, o ncleo diplide
contm quatro cpias de cada cromossomo, mas os cromossomos so vistos como
duas cromtides ligadas.) A meiose (mostrada na Figura 1.13) envolve duas divises
celulares. Na primeira diviso, cromossomos homlogos (p.e., o par cromossmico 3
851
Cromatina
Elementos laterais
(A)
(B)
Filamentos
transversos
Figura 22.10
O complexo sinptico. (A) cromossomos homlogos conservados juntos na primeira prfase meitica no ocito de Neottiella.
(B) Diagrama interpretativo da estrutura do complexo sinptico.
(A de von Wettstein, 1971, cortesia de D. von Wettstein; B segundo Schmekel e Daneholt, 1995.)
Elementos centrais
Pilar
Elementos laterais
Cromatina
852
Figura 22.11
Informaes adicionais
853
&
Especulaes
germinativas migrando para o interior das gnadas so bipotenciais e podem diferenciar-se em espermatozides ou vulos, conforme seu ambiente
gonadal. Quando ovrios de salamandras
so transformados experimentalmente em
testculos, as clulas germinativas residentes cessam sua diferenciao oognica e
comeam a desenvolver-se em espermatozide (Burns, 1930; Humphrey, 1931). Da
mesma maneira, na mosca domstica e no
camundongo, a gnada pode direcionar a
diferenciao da clula germinativa
(McLaren, 1983; Inoue e Hiroyoshi,
1986). Assim, na maioria dos organismos,
o sexo das gnadas e de suas clulas germinativas o mesmo.
Porm, o que se passa em animais hermafroditas, nos quais a mudana de produo de espermatozide para produo de
vulos um evento fisiolgico que ocorre
naturalmente? Como pode o mesmo animal
ser capaz de produzir espermatozide durante parte de sua vida e ocitos durante
outra? Usando Caenorhabditis elegans,
Kimble e seus colegas identificaram duas
decises que clulas germinativas presumveis tm que fazer. A primeira envolve a
deciso de entrar em meiose ou permanecer
uma clula-tronco dividindo-se mitoticamente. A segunda se a clula meitica ir
se converter em um vulo ou um espermatozide. Evidncia recente mostra que essas
decises esto intimamente ligadas. A deciso mittica/meitica controlada por uma
nica clula que no se divide, no terminal
de cada gnada, a clula da extremidade
distal. Os precursores das clulas germinativas prximos dessa clula dividem-se mitoticamente formando o reservatrio de clulas germinativas, mas medida que essas
clulas se afastam da clula da extremidade
distal, elas entram em meiose. Se as clulas
da extremidade distal forem destrudas por
um feixe focalizado de raio laser, todas as
clulas germinativas entram em meiose, e se
a clula da extremidade distal for colocada
em um local diferente na gnada, clulas-
Zona de
transio
Regio de
mitose
Clula da
extremidade distal
(B) Clula da extremidade distal removida
Todas clulas sofrem meiose
Figura 22.12
(C)
MITOSE
Regulador
terminal
para mitose
OOGNESE
Trajetria da
determinao
sexual
ESPERMATOGNESE
tronco da linhagem germinativa sero produzidas perto dessa nova posio (Figura
22.12; Kimble, 1981; Kimble e White,
1981). Parece que as clulas da extremidade
distal secretam alguma substncia que mantm essas clulas em mitose e inibe sua diferenciao meitica. Austin e Kimble (1987)
isolaram uma mutao que mimetiza o
fentipo obtido quando as clulas da extremidade distal so removidas. Todos os precursores das clulas germinativas de
nematides homozigotos para a mutao
recessiva glp-1 iniciam a meiose, no deixando populao mittica. Em lugar das
1500 clulas germinativas geralmente encontradas no quarto estgio larval do desenvolvimento hermafrodito, esses mutantes
854
Espermateca
(regio de
armazenagem de
espermatozide)
Espermateca (vazia)
Primeiro ocito
Espermateca
Espermatozide maduro
Figura 22.13
Estgios precoces
da espermatognese
Gnadas de C. elegans tipo selvagem e mutante. (A) Hermafrodita tipo selvagem produzindo
primeiro espermatozides e em seguida vulos. (B) Animal fmea produzido por mutao fem1 produz somente vulos. (C) Hermafrodita masculinizado produzido por mutaes de perda-defuno de genes mog (ou mutaes do 3UTR de fem-3) produz somente espermatozides.
(Fotografia cortesia de J. Kimble.)
te, em cada ovrio/testculo, as clulas germinativas mais prximas produzem espermatozide, enquanto as mais distantes (perto da extremidade) tornam-se vulos
(Hirsch et al., 1976). A gentica dessa mudana est atualmente sendo analisada.
Conforme discutido no Captulo 20, os
genes para a determinao sexual geram
ou um corpo feminino funcionalmente hermafrodita ou um corpo masculino. Na linhagem germinativa, o caminho da determinao sexual ativa ou reprime certos
genes que so crticos para as clulas se
transformarem em vulo ou espermatozi-
Figura 22.14
baixo
ALTO
baixo
ALTO
baixo
ALTO
ALTO
baixo
ALTO
baixo
ALTO
baixo
baixo
precoce
baixo
tardio
ALTO
855
ALTO
ALTO
baixo
ALTO
ESPERMATOZIDES
ALTO
baixo
ALTO
baixo
OCITOS
baixo
ALTO
baixo
ALTO
ESPERMATOZIDES
Espermatognese
A espermatognese a produo de espermatozide pelas clulas germinativas primordiais. Uma vez que as clulas germinativas primordiais de mamferos chegam no
sulco genital dos embries masculinos, elas se incorporam s cordas sexuais. A permanecem at a maturidade quando as cordas sexuais tornam-se ocas para formar os
tbulos seminferos, e o epitlio dos tbulos se diferencia em clulas de Sertoli. Durante sua vida, um homem pode produzir de 1012 a 1013 gametas (Reijo et al., 1995). As
clulas espermticas so ligadas s clulas de Sertoli por molculas de N-caderina em
suas respectivas superfcies celulares, e por molculas de galactosil-transferase nas
clulas espermatognicas que ligam um receptor nas clulas de Sertoli (Newton et al.,
1993; Pratt et al., 1993.) As clulas de Sertoli alimentam e protegem as clulas espermticas em desenvolvimento, e espermatognese - a via de desenvolvimento da clulatronco espermatognia at o espermatozide maduro ocorre nos recessos das clulas de Sertoli (Figura 22.15). Os processos pelos quais as PGCs produzem espermatozide foram estudados em detalhe em vrios organismos, mas enfocaremos aqui a
espermatognese em mamferos. Aps atingir a gnada, as PGCs se dividem para
formar espermatognias tipo A1. Essas clulas so menores que as PGCs e so caracterizadas por um ncleo ovide que contm cromatina associada com a membrana
nuclear. As espermatognias A1 so encontradas adjacentes membrana basal externa das cordas sexuais. Na maturidade, essas espermatognias so consideradas dividir-se para produzir uma outra espermatognia tipo A1, assim como um tipo de clula
mais plida, a espermatognia tipo A2. Assim, cada espermatognia tipo A1 uma
clula-tronco capaz de se regenerar assim como produzir um novo tipo de clula. A
espermatognia tipo A2 se divide para produzir a espermatognia tipo A3, que produz
856
Lmem do tbulo
Espermtides
Corpo residual
Espermatcito secundrio
Espermatcito primrio
Espermatognia Tipo A1
Clula de
Sertoli
Espermatognia
Tipo A2
Espermatognia
Tipo B
Figura 22.15
a espermatognia tipo A4. possvel que cada tipo de espermatognia A seja uma
clula-tronco capaz de auto-renovao. A espermatognia A4 tem trs opes. Ela
pode formar outra A4 (auto-renovao); pode apresentar morte celular (apoptose), ou
pode diferenciar-se na primeira clula-tronco comprometida, a espermatognia intermediria. Essas esto comprometidas a se tornarem espermatozide e se dividem uma
vez para formar as espermatognias tipo B. Essas clulas so os precursores dos
espermatcitos e so as ltimas clulas a sofrerem mitose. Essas clulas dividem uma
vez, gerando os espermatcitos primrios - as clulas que entram em meiose. No
conhecido o que faz com que as espermatognias tomem o caminho da diferenciao
em lugar da auto-renovao; tambm no conhecido o que estimula as clulas a
entrar em diviso meitica em vez de mittica (Dym, 1994).
Examinando a Figura 22.16, vemos que durante as divises espermatognicas, a
citocinese no completa. Antes, as clulas formam um sinccio pelo qual cada clula
se comunica com a outra atravs de pontes citoplamticas de cerca de 1 m de dimetro (Dym e Fawcett, 1971). As sucessivas divises produzem clones de clulas
interconectadas, e como ons e molculas passam facilmente por essas pontes intercelulares, cada grupo amadurece sincronicamente.
Cada espermatcito primrio sofre a primeira diviso meitica para fornecer um par
de espermatcitos secundrios, que completam a segunda diviso da meiose. As
clulas haplides formadas so chamadas espermtides e ainda esto conectadas
uma a outra por pontes citoplasmticas. Essas espermtides tm ncleos haplides
mas so funcionalmente diplides, j que o produto gnico formado em uma clula
pode facilmente se difundir para o citoplasma de suas vizinhas (Braun et al., 1989).
Durante as divises de espermatognias tipo A1 at a espermtide, as clulas se
distanciam mais e mais da membrana basal do tbulo seminfero e se aproximam de seu
lmen (veja Figura 22.15). Assim, cada tipo de clula pode ser encontrado em uma
camada particular do tbulo. As espermtides esto localizadas na margem do lmen,
Espermatognia tipo A1
Figura 22.16
ou
Espermatognias tipo A2
Espermatognias tipo A 3
Espermatognias tipo A 4
Espermatognias intermedirias
Espermatognias
tipo B
Espermatcitos primrios
(1a diviso meitica)
857
Pontes citoplasmticas
Espermatcitos secundrios
(2a diviso meitica)
Espermtides
Corpos residuais
Clulas espermticas
aqui perdendo duas conexes citoplasmticas e diferenciando-se em clulas espermticas. Em humanos, a progresso da clula-tronco espermatognica at o espermatozide maduro demora 65 dias (Dym, 1994).
Espermiognese
A espermtide haplide uma clula redonda no-flagelada que no se parece em
absoluto com o espermatozide maduro dos vertebrados. O prximo passo na
maturao do espermatozide, portanto, a espermiognese (ou espermateliose), a
diferenciao da clula espermtica. Para que a fecundao possa ocorrer, o espermatozide ter que encontrar e ligar-se ao vulo; a espermiognese diferencia o espermatozide para essas funes de motilidade e interao. Os processos da diferenciao do espermatozide mamfero podem ser vistos na Figura 4.2. O primeiro passo envolve a construo da vescula acrossmica a partir do aparelho de Golgi. O
acrossomo forma uma coroa que cobre o ncleo espermtico. medida que a coroa
formada, o ncleo gira fazendo com que a coroa acrossmica fique de frente para a
858
membrana basal do tbulo seminfero. Essa rotao necessria porque o flagelo est
comeando a se formar do centrolo do outro lado do ncleo, e esse flagelo ir se
estender para o interior do lmen. Durante o ltimo estgio da espermiognese, o
ncleo se achata e se condensa, o citoplasma remanescente (a gotcula citoplasmtica)
descartado, e as mitocndrias formam um anel em volta da base do flagelo. O
espermatozide resultante penetra em seguida no lmen do tbulo.
No camundongo, o integral desenvolvimento da clula-tronco at o espermatozide leva 34.5 dias. Os estgios espermatognicos duram 8 dias, a meiose 13 dias, e a
espermiognese gasta mais 13.5 dias. Em seres humanos, o desenvolvimento
espermtico perto de duas vezes mais longo. Como as espermatognias do tipo A1
so clulas-tronco, a espermatognese pode ocorrer continuamente. Cada dia, perto
de 100 milhes de espermatozides so produzidos em cada testculo humano, e
cada ejaculao liberta cerca de 200 milhes de espermatozides. Quando no usado, esses so reabsorvidos ou eliminados do organismo pela urina.
Informaes adicionais
&
Especulaes
Expresso Gnica
Durante o Desenvolvimento do Espermatozide
Expresso Gnica Antes da
Meiose Masculina
A expresso gnica no espermatozide estgio-especfica, e mesmo as clulas haplides so aptas a sintetizar certos produtos. A
iniciao da espermatognese na puberdade provavelmente regulada pela sntese
de BMP8B pelas espermatognias. Quando BMP8B atinge uma concentrao crtica, as espermatognias podem se diferenciar em espermtides redondas. Essas clulas
produzem altos nveis de BMP8B, que podem estimular as espermatognias a se diferenciarem. Camundongos carentes de
BMP8B no iniciam a espermatognese na
puberdade (Zhao et al., 1996). Em humanos, o gene DAZ localizado no brao longo
do cromossomo Y est deletado em muitos
homens infrteis, muitos dos quais no produzem espermatozide algum. O gene DAZ
expresso exclusivamente em clulas germinativas masculinas, especialmente nas espermatognias, e parece codificar uma protena ligante de RNA (Reijo et al., 1995;
Menke et al., 1997). DAZ homlogo de
dois genes da Drosophila, Rb97D e boule,
os quais tambm codificam protenas
ligantes de RNA, e ambos so essenciais para
a espermatognese. Espermatognias se degeneram em moscas masculinas deficientes
em Rb97D, enquanto as clulas germinativas de moscas carentes do gene boule no
entram em meiose (Karsch-Mizrachi e
Haynes, 1993; Eberhart et al., 1996). Prote-
nas ligantes de RNA so crticas na espermatognese porque muitos dos genes expressos no espermatozide so regulados no
nvel da traduo (Schfer et al., 1995). Realmente, em alguns animais, muito da espermatognese ocorre na ausncia de transcrio de novos genes. A sntese de
protamina, a protena bsica que substitui
as histonas no ncleo espermtico haplide
do espermatozide, regulada pela fosforilao de uma protena ligante de 18-kDa
que reconhece a regio 3 no-traduzida da
mensagem protamina do camundongo
(Kwon e Hecht, 1993).
Em Drosophila, o gene roughex transcrito por espermatognias de Drosophila
pr-meitica controla o nmero de divises meiticas. Machos carentes de cpias funcionais do gene roughex sofrem
uma metfase meitica extra em adio s
duas normais. O aumento da concentrao de Roughex resulta na incapacidade
de executar meiose II (Gnczy et al., 1994).
Expresso Gnica durante a
Meiose Masculina
Muito da transcrio gnica durante a espermatognese ocorre durante o estgio
diplteno da prfase meitica. Os genes que
so transcritos especificamente durante a
espermatognese so freqentemente aqueles cujos produtos so necessrios para motilidade do espermatozide ou sua fixao
ao vulo. Em Drosophila melanogaster, um
859
para o alelo mutante, leva a embries normais. Um desses genes de efeito paterno o
spe-11 em C. elegans. Os espermatozides
contendo alelos mutantes nesse loco so incapazes de direcionar movimentos cromossmicos que orientam o fuso mittico do embrio, sugerindo que a mutao afeta as regies organizadoras dos microtbulos, tais
como os centrolos (Figura 22.18; Hill et al.,
1989). Mutaes de efeito paterno foram
identificadas em Drosophila e essas podem
tambm envolver a estrutura do fuso mittico
do zigoto (Karr, 1996). [fert10.html]
Figura 22.17
Localizao de bindina no acrossomo do espermatozide, por meio de anticorpos antibindina marcados com ouro. Os tomos de ouro
permitem aos anticorpos aparecerem como
pontos negros na micrografia eletrnica. Esses espermatozides ainda esto no interior
dos testculos do ourio-do-mar. (Cortesia de
D. Nishioka.)
* Esse mecanismo parece indevidamente complexo. Os genes ps-meiticos parecem ser regulados
pelo fator de transcrio CREM. Esse gene para o fator de transcrio, o modulador do elemento responsivo
ao AMP-cclico transcrito durante a espermatognese precoce, mas a mensagem decai rapidamente. A
protena que produz, inibe a transcrio de dois genes ps-meiticos. Porm, a recepo de FSH pelas clulas
meiticas causa a emenda alternativa do precursor do mRNA de CREM, fazendo com que ele se torne uma
mensagem estvel para uma isoforma ativadora da molcula. O direcionamento para o alvo do gene CREM
de camundongo resulta na ausncia da expresso gnica ps-meitica e na morte dos espermatcitos.
(A)
(B)
Figura 22.18
Oognese
Meiose oognica
Oognese - a diferenciao do vulo- difere de vrias maneiras da espermatognese.
Enquanto o gameta formado pela espermatognese essencialmente um ncleo mvel,
o gameta formado pela oognese contm todos os fatores necessrios para iniciar e
manter o metabolismo e o desenvolvimento. Portanto, alm de formar um ncleo
haplide, a oognese tambm constri um reservatrio de enzimas citoplasmticas,
mRNAs, organelas e substratos metablicos. Enquanto o espermatozide torna-se diferenciado para motilidade, o ocito desenvolve um citoplasma notavelmente complexo.
Os mecanismos da oognese variam mais que os da espermatognese. Essa diferena no deve surpreender, j que os padres de reproduo variam extremamente
entre espcies. Em algumas espcies, tais como os ourios-do-mar e as rs, a fmea
rotineiramente produz centenas ou milhares de vulos de uma vez, enquanto em outras
espcies, como nos seres humanos e na maioria dos mamferos, somente so produzidos alguns vulos durante a vida de um indivduo. Nas espcies que produzem milhares de vulos, as oognias so clulas-tronco auto-renovveis que perduram durante a
vida do organismo. Nas espcies que produzem menos vulos, as oognias se dividem
para formar um nmero limitado de clulas precursoras de vulos. Em humanos, as
mil, ou coisa assim, oognias dividem-se rapidamente do segundo ao stimo ms da
gestao para formar cerca de 7 milhes de clulas germinativas (Figura 22.19). Aps o
stimo ms do desenvolvimento, porm, o nmero de clulas germinativas decresce
abruptamente. A maioria das oognias morre durante esse perodo, enquanto as oognias
remanescentes entram na prfase da primeira diviso meitica (Pinkerton et al., 1961).
Essas clulas tardias, chamadas de ocitos primrios, progridem atravs da primeira
prfase meitica at o estgio diplteno, no qual so mantidas at a puberdade. Com o
advento da adolescncia, grupos de ocitos periodicamente reiniciam a meiose. Assim,
na fmea humana, a primeira parte da meiose iniciada no embrio, e o sinal para
reiniciar a meiose no dado antes de decorridos cerca de 12 anos. Na realidade, alguns ocitos so mantidos em prfase meitica por perto de 50 anos. Como indicado
na Figura 12.19, ocitos primrios continuam a morrer mesmo aps o nascimento. Dos
milhes de ocitos primrios presentes na ocasio do nascimento, somente cerca de
400 amadurecem durante a vida da mulher.
Nascimento
860
Meses antes
da concepo
Figura 22.19
861
Figura 22.20
Formao do corpo polar no ocito do peixe branco Coregonus. (A) Anfase da primeira diviso
meitica, mostrando o primeiro corpo polar comprimindo-se com seus cromossomos. (B) Metfase
(no interior do ocito, seta) da segunda diviso meitica, com o primeiro corpo polar ainda no seu
lugar. O primeiro corpo polar pode ou no dividir-se novamente. (de Swanson et al., 1981,
cortesia de C. P. Swanson.)
(A)
(B)
Componente
Excesso aproximado em
relao quantidade
existente em clulas larvais
Mitocndria
RNA polimerases
DNA polimerases
Ribossomos
tRNA
Histonas
Deoxirribonucleosdeo
trifosfatos
100.000
60.000 100.000
100.000
200.000
10.000
15.000
2.500
862
Figura 22.21
Fase vitelognica
Fase pr-vitelognica
Segundo grupo
Primeiro ano
Segundo ano
Inverno
Outono
Vero
Primavera
Inverno
Outono
Vero
Primavera
Inverno
Outono
Vero
Primavera
Terceiro grupo
Terceiro ano
(A)
(B)
(C)
Figura 22.22
Distribuio do vitelo em Xenopus. (A) Uma plaqueta de vitelo anfbio. (B-E) Estabelecimento
da polaridade animal-vegetal das plaquetas de vitelo em ocitos de Xenopus. (B) No ocito no
final do estgio III (600 m), plaquetas de vitelo penetram na clula igualmente por todos os
pontos da superfcie. (C,D) medida que o ocito cresce, as plaquetas do futuro plo animal
so deslocadas para o plo vegetal, enquanto aquelas no plo vegetal a permanecem. Continua
a entrada de vitelo por todos os lados. (E) Ao fim da vitelognese, as plaquetas mais precoces
(III) esto todas no hemisfrio vegetal, que concentrou agora 75% do vitelo do ocito. O
momento de entrada do vitelo nas plaquetas do ocito est indicado pelo grau de sombreamento
e nmeros romanos: III, plaquetas de estgio III; IV-e, plaquetas do estgio precoce IV; IVl:plaquetas de estgio tardio IV; V, plaquetas do estgio V; gv, vescula germinativa. (Segundo
Danilchik e Gerhart, 1987; fotografia cortesia de L. K. Opresko.)
medida que o vitelo est sendo depositado, as organelas tambm se arranjam assimetricamente. Os grnulos corticais comeam a se formar a partir do aparelho de Golgi, estando originalmente espalhados aleatoriamente atravs do citoplasma do ocito. Posteriormente, migram para a periferia da clula. As mitocndrias
se replicam nesse perodo, dividindo-se para formar milhes de organelas que
sero distribudas para as diferentes clulas durante a clivagem. (Em Xenopus no
so formadas novas mitocndrias antes do incio da gastrulao.) Quando a
vitelognese se aproxima de seu final, o citoplasma do ocito se estratifica. Os
grnulos corticais, mitocndrias e grnulos pigmentados so encontrados na periferia da clula, dentro do crtex do ocito rico em actina. No interior do citoplasma interior, emergem gradientes distintos. Enquanto as plaquetas do vitelo se
concentram mais no plo vegetal, os grnulos de glicognio, ribossomos, vesculas
lipdicas e retculo endoplasmtico so encontrados mais em direo do plo animal. Mesmo os mRNAs especficos armazenados no citoplasma se localizam em
determinadas regies do ocito. [germ1.html]
Enquanto os mecanismos precisos para o estabelecimento desses gradientes
permanecem desconhecidos, estudos usando inibidores mostraram que o citoesqueleto criticamente importante para a localizao de RNAs especficos e de
fatores morfogenticos. Parece haver dois caminhos para conseguir a localizao
no crtex vegetal (Foristall et al., 1995; Kloc e Etkin, 1995). Mensagens tais como
as que codificam a protena Vg1 esto inicialmente presentes em todo o ocito,
sendo trasladadas para o crtex vegetal em dois passos (Yisraeli et al., 1990). Na
primeira fase, so necessrios microtbulos para trazer o mRNA Vg1 para o hemisfrio vegetal. Na segunda fase, os microfilamentos so responsveis pelo
ancoramento da mensagem de Vg1 no crtex. A poro do mRNA Vg1 que se liga
a esses elementos citoesquelticos reside na regio 3 no-traduzida. Quando uma
seqncia especfica de 340 bases colocada sobre uma mensagem de -globina, o
mRNA -globina colocado de maneira semelhante no crtex vegetal (veja Captulo 12; Mowry e Melton, 1992). Outros mRNAs, como Xlsirt (uma famlia de RNAs
(D)
(E)
863
864
RNAs
maternos
Estgio 1-2
que no codificam protenas mas podem ser necessrios para a manuteno de Vg1
no crtex), Xwnt11 e Xcat2 (que codifica uma protena ligante de RNA relacionada
a Nanos), deixam a vescula germinativa para se localizarem na nuvem mitocondrial no plo vegetal do ncleo. Essas mensagens ficam compartimentalizadas em
agregados associados com o plasma germinativo e so transportadas para o crtex
vegetal de uma maneira que parece ser independente do citoesqueleto (Figura 22.23;
Kloc et al., 1996).
Concluso da meiose: P
rogesterona e Fecundao
Progesterona
Estgio 2-3
Estgio 4
Trajetria Vg1
Trajetria metro
(Xwnt11, Xcat2)
Figura 22.23
Liberao da
parada da metfase
pela fertilizao
Progesterona secretada
pelas clulas foliculares
libera a parada da interfase
Estgio do
ciclo celular
Parada em
interfase
Meiose I
em metfase
865
Metfase: meiose II
parada de metfase
mediada por CSF
Mitose I
em metfase
Primeira fase-S
Atividade de MPF
Alta
Baixa
Sntese protica
Calpaina II
Cam-PK II
Estgio
desenvolvimental
Ciclina B
Espermatozide
Ocito Imaturo
(Parada G2)
GVBD
(primeira meiose)
Ocito ou
vulo maduro
(segunda meiose)
Fertilizao
Primeira
mitose
Primeira
clivagem
Figura 22.24
Representao esquemtica da maturao do ocito de Xenopus, mostrando a regulao da diviso meitica da clula por pp39mos, cdk2 e calpaina II. A linha slida no grfico representa os
nveis relativos de MPF ativo. As barras sob o traado mostram os perodos quando as snteses
de determinadas protenas so necessrias para a entrada na prxima fase M. GVBD o ponto da
desintegrao da vescula germinativa. A morfologia do ocito est representada embaixo. (Segundo Minishull, 1993.)
Figura 22.25
866
Figura 22.26
Alta
Taxa relativa de sntese
tRNA
RNAs ribossmicos
DNA
RNA 5S
Baixa
Amplificaes de rDNA
Comea o
acmulo de vitelo
Ocito
totalmente
crescido
(B)
Comea a transcrio
Transcrio por
gravidade do RNA
ribossmico
Fim da
transcrio
Hormnio
pituitrio
Fertilizao
Maturao
16 horas
867
Figura 22.27
Clula nutriz
Ocito
Posterior
Clulas
foliculares
posteriores
(B)
Mais 2
divises
Cistoblasto
em diviso
Fussomo
Cisto de 2 clulas
868
Figura 22.28
Ncleo da
clula nutriz
Citoplasma da
clula nutriz
Citoplasma
do ocito
Epitlio
folicular
(B)
(C)
Informaes adicionais
869
&
Especulaes
S EIXOS NTERO-POSTERIOR e
dorsoventral so estabelecidos
durante a metade da oognese
(Gonzlez-Rayes et al., 1995; Roth et al.,
1995). O mRNA para o determinante anterior, bicoid, colocado na regio anterior
do vulo; os mRNAs para os determinantes posteriores, oskar e nanos, so enviados para o plo posterior; a mensagem
gurken fica concentrada em uma regio do
vulo, a iniciando as reaes que estabelecem esse lado como a superfcie dorsal
do embrio. Os mecanismos para a construo desses eixos envolvem complexas
interaes entre as clulas nutrizes, o ocito
e as clulas foliculares (veja Figura 14.13).
Primeiro, a mensagem gurken produzida
pelas clulas nutrizes, e se aglutina ao redor do ncleo do ocito, posicionando-se
entre o ncleo e a membrana plasmtica. O
ncleo est na regio posterior do vulo, e
a protena Gurken recm-transcrita ativa seu
receptor nas clulas foliculares no plo posterior. (A protena Gurken se parece com o
fator de crescimento epidrmico.) Essas clulas foliculares do plo posterior respondem enviando um sinal (talvez AMP
cclico) que ativa a protena quinase A
(PKA) na membrana celular do ocito.
Como um resultado da ativao de PKA,
os microtbulos do ocito so reorientados (Lane e Kalderon, 1994).* Em lugar
de ter seus terminais positivos apontados
para as clulas nutrizes (i.e., anteriormente), elas revertem seus terminais positivos
de modo que fiquem posteriores (onde
havia estado o ncleo).
*PKA tambm conhecida por organizar microtbulos no crescimento axnico (Shea et al.,
1992), e como vimos no Captulo 1, isso pode
mediar a diferenciao da clula peduncular em
Dictyostelium (Williams et al., 1993).
(A)
WT
gurken
Ncleo
oskar
bicoid
gurken
(B)
PKA -
oskar
bicoid
Figura 22.29
Localizao do RNA nos ocitos de Drosophila tipo selvagem e mutantes deficientes em PKA.
(A) No ocito do tipo selvagem (estgio 9), o
mRNA oskar est no plo posterior, o mRNA
bicoid est nas margens anteriores, e o mRNA
gurken est localizado no canto anterior dorsal.
(B) Nos ocitos deficientes em PKA, a distribuio da mensagem gurken no afetada, mas
o mRNA oskar deixa de se localizar no plo
posterior e se acumula centralmente, enquanto o
mRNA bicoid transportado para o plo posterior. (Segundo Lasko, 1995.)
as clulas foliculares adjacentes se convertam em clulas dorsais. (As clulas foliculares polares e laterais produzem protenas diferentes e respondem de maneira diferente
ao sinal Gurken. As clulas foliculares polares ativam a PKA do ocito; as clulas foliculares laterais se tornam dorsalizadas e reprimem a sntese de protenas ventralizantes). Assim, os eixos ntero-posterior e dorsoventral em Drosophila so iniciados antes mesmo de ocorrer a fertilizao.
870
Crebro
Hormnio cerebral
Corpora allata
Hormnio juvenil
Ovrio
Clulas
abdominais
produtoras de
ecdisona
Protenas
vitelnicas
Ecdisterides
Corpo
gorduroso
Protenas
vitelnicas
Figura 22.30
hormnio juvenil, ecdisona e nutrio. Esses agentes fisiolgicos so integrados pela regio intensificadora entre os dois genes da protena do vitelo de
Drosophila (veja Figura 10.13; Bownes et al, 1988). Esses genes so somente
ativos em moscas fmeas, e isso regulado pela ligao da protena Doublesex
especfica de fmea a essa regio do intensificador. Acredita-se que um hormnio
cerebral, respondendo a sinais ambientais*, estimule o corpora allata a secretar
hormnio juvenil (Figura 22.30). O hormnio juvenil (1) regula a captao de
peptdeos vitelnicos na superfcie do ocito, (2) estimula a sntese de protenas
vitelnicas do ovrio (que so idnticas quelas produzidas pelo corpo gorduroso), e (3) faz com que os folculos ovarianos e outras clulas abdominais secretem
ecdisona. Essa metabolizada para sua forma ativa - 20-hidroxiecdisona - e estimula o corpo gorduroso a produzir protenas do vitelo, tal como o estradiol estimula o fgado anfbio a faz-lo. Da mesma maneira, a administrao de ecdisona a
machos adultos faz com que seus corpos gordurosos secretem protenas vitelnicas
(Postlethwait et al., 1980) e que a protena vitelnica seja levada para os ocitos de
insetos atravs de endocitose mediada por receptores (Raikhel e Dhadialla, 1992).
Os receptores para a vitelogenina esto localizados em regies da membrana do
ocito na base das microvilosidades e entre as mesmas. Os complexos receptorvitelogenina so internalizados e a vitelogenina liberada do receptor dentro do
vacolo endoctico. Esse se funde com outros endossomos para formar o grnulo
repleto de vitelogenina armazenado pelo vitelo.
Oognese em Mamferos
A ovulao do vulo dos mamferos segue um de dois padres bsicos, dependendo
da espcie. Um tipo de ovulao estimulado pelo ato fsico da copulao. A
estimulao fsica do crvix desencadeia a liberao de gonadotrofinas da hipfise.
Essas gonadotrofinas sinalizam o ovo para recomear a meiose e iniciar os eventos
que expelem o vulo do ovrio. Esse mtodo assegura que a maior parte das copulaes
conduz a vulos fertilizados; e animais que utilizam esse mtodo de ovulao coelhos e vises tm a reputao de procriaes bem sucedidas.
A maioria dos animais, porm, tem um tipo peridico de ovulao. A fmea
apenas ovula em pocas especficas do ano, chamadas de estro (ou seu equivalente portugus cio). Nesses casos, sinais ambientais, mais notavelmente a
quantidade e o tipo de iluminao diurnos, estimulam o hipotlamo a liberar o fator
liberador de gonadotrofina. Esse estimula a hipfise para liberar suas
gonadotrofinas o hormnio estimulante de folculos (FSH) e o hormnio luteinizante (LH) que faz com que as clulas foliculares se proliferem e secretem
estrgeno. O estrgeno subseqentemente penetra em certos neurnios e evoca
o padro de comportamento copulatrio caracterstico da espcie. As
gonadotrofinas tambm estimulam o crescimento folicular e a iniciao da ovulao. Assim, estro e ovulao ocorrem em pocas prximas.
Os seres humanos apresentam variao sobre o tema da ovulao peridica.
Embora fmeas humanas tenham ovulao cclica (em mdia de cerca de 29.5
dias), sem estro anual definido, a maior parte da fisiologia reprodutiva humana
compartilhada com outros primatas. A caracterstica periodicidade dos primatas
na maturao e liberao de vulos chamada ciclo menstrual porque envolve o
* Em Drosophila, o sinal ambiental parece ser o fotoperodo. No mosquito comum, o sinal a refeio
sangnea. Somente mosquitos fmeas picam, e elas no produzem vitelogenina antes da refeio.
Algum fator sangneo estimula o crebro do mosquito para liberar o hormnio juvenil e o fator estimulador
do corpocardaco. Esse ltimo fator causa a liberao do hormnio neurosecretrio do desenvolvimento do ovo (EDNH). Esse estimula o ovrio a secretar vitelogenina (Hagedorn, 1983; Borovsk
et al., 1990). (Veja Captulo 21.)
(A)
Clulas
Granulosas
Clulas
tecais
871
Clulas
Granulosas
Clulas
tecais
FOLCULOS
PRIMORDIAIS
(B)
Zona pelcida
Clulas tecais
Coroa radiata
Antro
Clulas granulosas
Membrana
granulosa
Ocito
FOLCULO GRAAFIANO
Figura 22.31
O folculo ovariano dos mamferos. (A) Maturao do folculo ovariano. Quando maduro, ele
freqentemente chamado folculo Graafiano. (B) Microfotografia eletrnica de varredura de um
foliculo maduro no rato. O ocito (centro) est rodeado pelas menores clulas granulosas que iro
constituir a coroa. (A segundo Carlson, 1981; B cortesia de P. Bagavandoss.)
872
873
Figura 22.32
Gonadotrofinas
(da hipfise anterior)
(A)
Eventos no ovrio
Folculo em desenvolvimento
Corpo lteo
Ovulao
Ovo
(C)
Hormnios ovarianos
Progesterona
Estrgeno
Revestimento uterino
(D)
Menstruao
Fase folicular
Fase ltea
874
Figura 22.33
Cumulus
Ocito
Ovrio
Folculo imaturo
Clulas foliculares
remanescentes
Informaes adicionais
875
&
Especulaes
E NUMEROSOS FOLCULOS so
capazes de maturar quando
secretado o hormnio estimulante de folculos, por que em geral somente
um folculo e seu ocito prevalecem? Parece que o folculo capaz de produzir a
maior quantidade de estrgeno em resposta ao FSH aquele que amadurece, enquanto todos os outros morrem. Aqueles
conjuntos de folculos que inicialmente
receberam FSH no somente comeam a
proliferar, mas tambm produzir novos receptores de hormnio luteinizante nas suas
clulas tecais (Figura 22.34). A recepo
de LH faz com que essas clulas iniciem a
produo de estrgeno. Como vimos, o
estrgeno tem dois efeitos diferentes envolvendo a futura recepo de FSH. Em
um nvel, deprime a secreo hipofisria
de FSH, enquanto em outro nvel aumenta os receptores de FSH nas clulas foliculares. Assim, quanto mais estrgeno um
Recepo de FSH
Mais
receptores
de LH
Diminuio dos
nveis de FSH
Mais
receptores
de FSH
LH
Mais estrgeno
secretado
pelo folculo
Figura 22.34
(A)
Processo da
clula folicular
(B)
Ocito
Figura 22.35
Comunicao entre ocito e clulas granulosas. (A) Ocito de carneiro rodeado pela zona
pelcida e clulas foliculares. As clulas granulosas do folculo esto estendendo processos atravs da zona pelcida, tocando o ocito.
(B) Micrografia eletrnica de processos de clulas foliculares estabelecendo conexes de juno de fenda com um ocito de macaco rhesus.
Junes de fenda (setas) esto coradas com
lantanio ionizado. (A de Moor e Cran, 1980,
cortesia dos autores; B de Anderson e Albertini,
1976, cortesia de D. Albertini.)
876
Fosforilao de certas
protenas do ocito
Manuteno da
parada meitica
Certas protenas do
ocito no so fosforiladas
Desintegrao da vescula
germinativa; liberao
da parada meitica
Figura 22.36
Sumrio do mecanismo proposto por meio do qual o nvel de cAMP do ocito regula o recomeo
da meiose pelo ocito. Os nveis de cAMP no ocito so providos, ao menos em parte, pelo
cAMP das clulas foliculares. O AMP cclico no pode atravessar membranas celulares, mas
pode penetrar no ocito atravs das junes de fenda conectando o ocito com suas clulas
foliculares. Quando as conexes so liberadas, os nveis de cAMP do ocito declinam, conduzindo liberao da parada meitica.
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879
880
881
Mecanismos desenvolvimentais
da mudana evolucionria
23
883
884
(A) Tetraclita
(B) Penaeus
Figura 23.1
embrionrias seriam um argumento muito forte em favor da conexo gentica em grupos de animais diferentes. Uma comunidade de estruturas embrionrias revela uma
comunidade de linhagem, ele concluiria na Origens das espcies.
Formas larvais foram usadas para a classificao taxonmica mesmo antes de
Darwin. J. V. Thompson, por exemplo, demonstrou que a larva da craca (cirrpede) era
quase idntica s larvas do caranguejo e portanto contou as cracas como artrpodes
e no como moluscos (Figura 23.1; Winsor, 1969). Darwin, um perito em taxinomia da
craca comemorou esse achado: Mesmo o ilustre Cuvier no se apercebeu de que a
craca tratava-se de um crustceo, mas num relance a larva mostra isso de maneira
indubitvel. A interpretao evolucionria de Darwin sobre a lei de von Baer criou
um paradigma que foi seguido por muitas dcadas, especificamente, que relaes
entre grupos podem ser descobertas observando-se formas larvais em comum.
Kowalevsky (1871) faria em breve uma descoberta similar (publicada em Descent of
Man por Darwin) que a larva tunicada tem notocordas e forma o seu tubo neural e
outros rgos de uma maneira muito similar ao cordado anfioxo primitivo. Os
tunicados, outro enigma dos esquemas de classificao (normalmente colocados,
juntamente com as cracas, como um molusco), desse modo encontraram um lar entre
os cordados. Darwin tambm notou que organismos embrionrios, s vezes, produzem estruturas que so inapropriadas para sua forma adulta, mas que mostram sua
relao com outros animais. Ele mostrou a existncia de olhos em toupeiras embrionrias, rudimentos plvicos em cobras embrionrias, e dentes nas barbatanas em
embries de baleia. Neste livro, notamos que os embries mamferos formam um
saco vitelnico rudimentar, enviam vasos sangneos para esse saco, e sofrem gastrulao de uma maneira semelhante s aves e rpteis, cujo desenvolvimento
confinado pelo vitelo.
Darwin tambm argumentou que as adaptaes que partem do tipo e permitem
que o organismo sobreviva em ambiente prprio, se desenvolvem mais tarde no
embrio. Ele notou que diferenas entre espcie e gneros so, como as previstas
pela lei de von Baer, somente produzidas mais tarde no desenvolvimento; ele at
mesmo colocou pombos em clorofrmio (com grande relutncia) para provar a si
prprio de que esse era realmente o caso. Dessa maneira, Darwin reconheceu duas
maneiras de encarar a linhagem com modificao. Poderamos enfatizar a linhagem comum, assinalando homologias embrionrias entre dois ou mais grupos de
animais, ou poderamos enfatizar as modificaes mostrando como o desenvolvimento foi alterado para produzir estruturas que permitem aos animais se adaptarem
s condies particulares.
Darwin no procurou construir filogenias completas a partir de dados embriolgicos, mas o seu trabalho influenciou muitos dos seus contemporneos a faz-lo. Um dos
primeiros cientistas a perceber a importncia evolucionria dos estudos de von Baer foi
Elie Metchnikoff. Metchnikoff reconheceu que a evoluo consiste na modificao de
organismos embrionrios, e no de adultos. Assim ele escreveu (1891):
O homem parece ser um resultado unilateral, mas no total, de um organismo
melhorado, no s pela juno de macacos adultos, mas preferivelmente por ter
seus fetos desenvolvidos desigualmente. Do ponto de vista puramente histrico
natural, seria possvel reconhecer o homem como um monstro de macaco, com
um crebro, face e mos enormemente desenvolvidos.
Dessa maneira, os organismos eram vistos atravs das mudanas no seu desenvolvimento embrionrio. No incio do sculo 20, essa fuso de evoluo e embriologia foi
mal interpretada apoiando o modelo linear de evoluo (oposto ao ramificado). A
interpretao de Ernst Haeckel foi de que muitos organismos evoluram pela adio
terminal de um estgio novo ao fim do anterior. Dessa maneira, ele interpretou todo
o reino animal como representaes de etapas encurtadas do desenvolvimento humano (veja Gasman,1971; Gould, 1977). [evo1.html]
E. B. Wilson e F
R.. Lillie
F.. R
Se mudanas no desenvolvimento embrionrio afetaram mudanas evolucionrias,
como acontecem essas mudanas de desenvolvimento? No final do sculo 19, muitos investigadores tentaram ligar o desenvolvimento filogenia atravs de anlises
das linhagens celulares. Eles observaram meticulosamente cada clula nos embries
em desenvolvimento e compararam os caminhos pelos quais organismos diferentes
formaram seus tecidos. Em 1898, dois embriologistas eminentes realizaram palestras
sobre linhagem celular no Marine Biology Laboratories em Woods Hole,
Massachusetts, e suas palestras serviram para enfatizar os dois caminhos da embriologia que estavam sendo usados para apoiar a biologia evolucionria. A primeira
palestra, apresentada por E. B. Wilson, foi um marco no uso de homologias embrionrias para estabelecer relaes filogenticas. Wilson havia observado que os padres de clivagem espiral de platelmintos, moluscos e aneldeos e ele havia descoberto que em cada caso, os mesmos rgos provinham do mesmo grupo de clulas.
Para ele, isso significou que esses filos tinham um antepassado comum. Os vrios
grupos de clulas em estgio de clivagem em platelmintos, moluscos e aneldeos
Mostram uma correspondncia to prxima tanto em relao origem como ao
destino, que parece impossvel explicar a similaridade obtida a no ser como um
resultado da comunidade de linhagem. As muitas diferenas, como veremos, do
algumas das mais interessantes e convincentes evidncias da afinidade gentica;
para processos nos quais nas formas inferiores desempenham um papel importante no desenvolvimento esto nas formas superiores to reduzidos a ponto de
no ser mais que vestgios ou reminiscncias do que eram, e em alguns casos
parecem ter desaparecidos to completamente como os dentes de pssaros ou os
membros de serpentes.
O prximo palestrante foi F. R. Lillie, que tambm havia realizado pesquisas
sobre o desenvolvimento de embries de moluscos e em modificaes de linhagens
celulares. Ele enfatizou as modificaes, no as similaridades, da clivagem. Suas
pesquisas no Unio, um mexilho cuja clivagem foi alterada para produzir uma larva
com forma de armadilha de urso permitindo-lhe sobreviver em gua corrente, foram descritas no Captulo 5. Lillie argumentou que os estudos evolucionrios modernos estavam melhor concentrados nas mudanas do desenvolvimento embrionrio que permitiram a sobrevivncia em ambientes particulares em vez de enfocar
homologias ancestrais que uniam os animais em linhas de descendncia.
Em 1898, portanto, as duas principais vias de aproximao para a evoluo e o desenvolvimento estavam claramente definidas: encontrar unidades bsicas que unem grupos
de animais distintos, e detectar diferenas no desenvolvimento que permitem espcies se
adaptarem a ambientes particulares. (Certamente, essas mesmas linhas de pensamento
caracterizaram os dois tipos de teologia natural antes de Darwin.) Darwin pensou serem
apenas distines temporrias, isto , seriam encontradas unidades bsicas nos primeiros
estgios, enquanto os ltimos estgios se divergiriam para permitir adaptaes especficas (veja Ospovat, 1981). No entanto, Wilson e Lillie estavam ambos discutindo o estgio da clivagem da embriognese. Essas duas maneiras de caracterizar o desenvolvimento e a evoluo ainda so as principais correntes de pensamento hoje.
885
886
patamar de complexidade. As volvocaceas e os dictiosteldeos mencionados no Captulo 1 representam somente 2 de 17 tipos de protistas nos quais a multicelularidade foi
conseguida (Buss, 1987). No entanto, somente trs grupos (aqueles que geraram fungos, plantas e animais) desenvolveram a capacidade de formar agregados multicelulares
que poderiam se diferenciar em tipos de clulas particulares, i. e., um embrio.
Os primeiros embries tiveram que resolver um problema fundamental. Uma vez
que cada um dos componentes celulares tinha o aparelho gentico e a arquitetura
citoplasmtica necessria para a diviso, porque cada clula no haveria de continuar
a sua prpria proliferao? O que causaria essas clulas sacrificarem sua capacidade
proliferativa para formar um indivduo coletivo? Pode ter havido mais de uma soluo. Buss sugere que nesses embries precoces houve uma dicotomia abrupta entre a
proliferao e a diferenciao e que nosso ancestral protista nunca aprendeu o truque
da diviso aps a diferenciao dos clios. Enquanto outros grupos de protistas (especialmente os ciliados) podiam produzir mais centros organizadores de microtbulos, nossos ancestrais no o podiam. At os dias atuais, nenhuma clula metazoria
ciliada se divide (embora clulas metazorias ciliadas podem perder os seus clios e
depois se dividir). Buss especula que os ancestrais dos metazorios de hoje pararam
sua proliferao celular se diferenciando em uma blstula de clulas ciliadas. (Os
embries precoces dos primeiros filos metazorios- esponjas e cnidrios- so caracterizados como bolas de clulas ciliadas, como os embries de ourio-do-mar discutidos no Captulo 5.) Essas blstulas ciliadas podiam se mover, mas parecia que todo
o seu desenvolvimento havia parado, para as clulas ciliadas no se dividirem, nem
se tornarem outro tipo diferenciado de clula. Para se desenvolver em um organismo,
esse dilema tinha que ser resolvido.
Esse problema foi resolvido pela reteno ou produo de uma populao de clulas no-ciliadas. Essas clulas podiam se proliferar em novas clulas, enquanto as clulas ciliadas permitiam ao embrio se mover. Mas essas clulas divididas no podiam
simplesmente ir para qualquer lugar. No podiam crescer em cima das clulas ciliadas ou
seu movimento cessaria. Elas no podiam crescer na gua ou seriam sugadas pelos
movimentos do embrio. Ao contrrio, teriam que migrar para dentro da blastocele (Figura 23.2). Acredita-se que esse movimento e proliferao de clulas seja a origem da
gastrulao. Dessa maneira, a blstula surge como uma maneira de juntar clulas autnomas em uma federao. A gstrula surgiu como um acordo com essa federao permitindo ao embrio se desenvolver enquanto se move (Buss, 1987).*
Os primeiros embries provavelmente se desenvolveram sob essa forma de mosaico. No entanto, a induo proporcionou um segundo mecanismo para assegurar
que blastmeros totipotentes permanecessem juntos para formar um nico indivduo. Aqui, cada clula sacrificou sua autonomia para criar uma comunidade coerente. Henry e seus colaboradores (1989) descobriram que enquanto os blastmeros
individuais do ourio-do-mar podem ser totipotentes, os agregados produzidos dessas mesmas clulas no o so. Ao contrrio, cada clula restringe a potncia da sua
vizinha (veja Captulo 15). Essa regulao restritiva tambm vista em camundongos
quimricos (veja Captulo 5), onde blastmeros de mamferos se combinam para formar
um nico camundongo quimrico ao invs de dois camundongos individuais. Parece
haver restries muito importantes na potncia celular, uma vez que as clulas se
juntam. Ademais, uma vez que a populao interna pode interagir com a populao
*Essa uma modificao da teoria originalmente proposta por Metchnikoff (1886) para explicar a
origem dos organismos multicelulares. Usando embries de hidrides e de esponjas, Metchnikoff assinalou que certas clulas da parede da blstula arrastadas por seu flagelo, se tornam amebides e mveis, se
multiplicam por diviso, preenchem a cavidade da blstula, e se tornam capazes de fazer digesto. Esse
estado embrionrio, ele sentiu, como com o direito de ser considerado o prottipo dos seres multicelulares.
Metchnikoff tentou fazer uma filogenia de todos os organismos baseada nas suas camadas germinativas,
e ele acreditava que todas as clulas mesodrmicas poderiam ser caracterizadas por sua habilidade de
fagocitar substncias estranhas. As suas descobertas em embriologia comparativa finalmente lhe permitiu
formular fundaes conceituais de uma nova cincia, a imunologia. (Para maiores detalhes sobre a teoria
de origens multicelulares de Metchnikoff, veja Chernyak e Tauber, 1988, 1991.)
887
Figura 23.2
(A)
Aequoria foskalea
(F)
Clava squamata
(B)
(C)
(G)
(D)
(H)
(E)
(I)
celular externa e com outras partes da populao interna, eventos indutivos podem
dar origem ao surgimento de novos rgos.
Independentemente da maneira pela qual essa comunidade de clulas foi formada, a integrao delas em um embrio unificado realizada pela contribuio materna ao citoplasma do ovo. esse conjunto de instrues que causa a clivagem das
clulas de um modo especfico, aderir uma a outra, e se diferenciar em perodos
particulares. Como foi observado no Captulo 12, o embrio do ourio-do-mar se torna
uma blstula ciliada mesmo na ausncia de transcrio nuclear. Somente na gastrulao o ncleo comea a regular o desenvolvimento. Dessa maneira, seleo a nvel de
propagao celular (que tem sido a regra da sobrevivncia entre os protistas) foi
suplantada pela seleo ao nvel de organismos multicelulares individuais.
ilo: Modificando os
Formao de um Novo F
Filo:
Caminhos do Desenvolvimento
Somente trs dzias de modelos de corpos animais esto sendo usados atualmente
neste planeta (Margulis e Schwartz, 1988; Brusca e Brusca, 1990). Esses constituem
o filos animais. Isso no quer dizer que esses modelos so os nicos possveis. O
Burgess Shale, um depsito de fsseis de corpos moles do perodo Cambriano inicial, conhecido por conter representantes de 20 filos ou mais que nunca desenvolveram descendentes nas camadas superiores (Figura 23.3). Alm disso, essa pequena
banda de sedimento, aproximadamente do tamanho de um quarteiro, contm cerca
de uma dzia de classe de artrpodes previamente desconhecida. Esses animais no
so membros primitivos de uma classe ou filo existente, mas so exemplos
especializados do seus prprios grupos. (Whittington, 1985; Gould, 1989). Existem
tambm duas espcies no Burgess Shale que podem estar relacionadas s formas
ancestrais do filo existente. Uma um animal parecido com um peripato, que deve
ser prximo uma forma ancestral de inseto; e outro aparenta ser um cordado bem
preservado chamado Pikaia gracilens que pode estar relacionado aos cordados ancestrais (veja Figura 23.3B). Esse ltimo fssil apresenta muitos traos que recomendam que seja classificado em nosso filo: ele parece ter uma notocorda, e as bandas
(A)
(B)
Figura 23.3
888
Medusas reprodutivas
sexualmente com
clulas mutantes
Boca
Tentculo
Colnias jovens
compostas de
clulas mutantes
Plipo
reprodutivo
Plipos de
nutrio
Ovo
Broto de
medusa
Zigoto
Larva
Espermatozide
Brotamento
Mutao somtica
d origem a uma
nova linhagem
Colnia madura
Figura 23.4
889
Figura 23.5
Mapa de destino
Larva trocfora
Tufo apical
Prototroco
Ectoderma
anterior presuntivo
Prototroco
presuntivo
Estomodeu
Ectoderma
presuntivo
posterior
Embrio de 40 clulas
Estomodeu
presuntivo
Intestino
mdio
presuntivo
(B) Tubifex
Mesoderma
presuntivo
Ectomesoderma
presuntivo
Ectoderma dorsal
temporrio do
saco vitelnico
Ectoderma do
saco vitelnico
presuntivo
Estomodeu
presuntivo
Intestino
mdio
Banda
mesodrmica
Somitos
mesodrmicos
Banda
ectoteloblstica
Ectoteloblasto
Ectoderma do
ectoteloblasto
presuntivo
Intestino
mdio
presuntivo
Embrio em clivagem
Mesoderma
presuntivo
Mapa de destino
Ectoteloblasto
Ectoderma ventral
temporrio do
saco vitelnico
Intestino
mdio
Gastrulao
890
Vestimentiferano
Polygordius
Patella
(A)
(B)
(C)
Figura 23.6
(D)
(E)
(F)
seus morfgenos em clulas diferentes. Poliquetas sofrem uma clivagem espiral relativamente padronizada, dando origem larva trocfora. Oligoquetas, no entanto, colocam a maior parte de seu citoplasma nas clulas destinadas formao de estruturas
adultas, ao invs de larvais. Esse grupo passa depois para o estgio larval. Se uma
mutao colocasse um certo morfgeno citoplasmtico em uma nica regio do ovo
ao invs de uma outra, ou se a mutao originasse uma mudana no eixo da diviso
celular para que conjuntos diferentes de clulas adquirissem esses determinantes,
ento um fentipo radicalmente diferente poderia ser produzido. Como E. G. Conklin
escreveu em 1915, Ns somos vertebrados porque nossas mes eram vertebrados e
produziram ovos de padro vertebrado.
Uma outra maneira de evoluo de um novo filo pode envolver uma modificao da larva. Darwin e outros pensavam que similaridades na forma larval significavam origem em comum. No entanto, isso pode ser reinterpretado para significar
que as mudanas que originam filos diferentes podem ocorrer na larva. Caramujos,
equiurides e poliquetos tm padres de diviso muito semelhantes e formam larvas trocforas (Figura 23.6). De fato a colocao do filo recm-descoberto
Vestimentfera (invertebrados vermelho brilhante, sem tubo digestivo, encontrados nas valas profundas do oceano) prximo aos aneldeos foi feita em parte baseada nas larvas trocforas das vestimentferas (Jones e Gardiner, 1989; Young et al.,
1996). Assim, um dos principais mecanismos para estabelecer novos filos e classes
pode ser a relocao do desenvolvimento durante o estgio larval para que a metamorfose surja com novos tipos de organizao. Garstang (1928) mostrou como a
larva vliger de alguns caramujos pode ter surgido atravs de mutao e depois ter
sido selecionada porque a nova disposio da cabea e concha permitiam que a
cabea se retrasse, por segurana, abaixo da concha. Ele tambm inventou a hiptese de que cordados se desenvolveram das larvas tunicadas ancestrais que se
tornaram neotnicas. Infelizmente, larvas de corpo mole raramente se fossilizam,
portanto sabemos muito pouco dos mecanismos pelos quais cordados e outros filos
surgiram de larvas* Cambrianas precoces.
* Formas larvais freqentemente preenchem a lacuna entre as diferentes formas adultas. A forma
larval vista ou como sendo ancestral a dois grupos ou como um separador por neotenia e formando um
diferente tipo de organismo. Isso vem freqentemente sendo hipotetizado como um mecanismo pelo qual
os cordados emergiram de invertebrados e vertebrados surgiram de cordados. A larva tornaria dos
hemicordados formada de uma maneira deuterstoma, similar s larvas equinodermos e se mostra muito
parecida com uma larva equinodermo tendo sido originalmente confundida com elas. Isso ligaria os
equinodermos e cordados. Garstang (1928) e Berril (1955) hipotetizaram que as larvas de certos tunicados
podiam ter evoludo em cordados tais como os anfioxos pelo desenvolvimento neotnico. Desse modo, os
tunicados manteriam a notocorda, musculatura larval e o aparelho alimentar da larva tunicada enquanto se
tornam sexualmente maduras. Existem, na verdade, tunicados nadadores neotnicos (como as Larvacea).
Modificaes dessa interpretao (usando linhagens de protocordados diferentes) foram sugeridas por
Jefferies (1986). A origem dos cordados permanece um problema difcil.
891
892
Nasal
Figura 23.7
Parietal
Pr-maxilar
Occipital
Maxilar
Frontal
Parietal
Nasal
Zigomtico
Occipital
Maxila
Mandbula
Figura 23.8
Escamoso (temporal)
893
Essa bolsa no possui abertura interna para a boca. Certamente, a transio de bolsa
interna para externa uma questo de limiares. A localizao das evaginaes, anterior ou posteriormente, determina se a bolsa interna ou no. No existe estgio de
transio com duas aberturas, uma interna e outra externa. Poderia-se imaginar
essa externalizao como uma ocorrncia de mutao por acaso deslocando a posio da bolsa externa para uma posio um pouco mais anterior. Esse trao seria
selecionado no deserto. Como Van Valen refletiu em 1976, a evoluo pode ser
definida como o controle do desenvolvimento pela ecologia.
Duplicao e Divergncia
Modularidade tambm permite a ocorrncia de duplicao e divergncia. A parte da
duplicao nesse processo permite a formao de estruturas redundantes, e a parte
divergente do processo permite que essas estruturas assumam novos papis. Uma
das cpias pode manter o papel original enquanto as outras esto livres para mutar e
divergir funcionalmente. Isso pode acontecer em vrios nveis. A famlia TGF-, a
famlia MyoD e as globinas, cada uma provavelmente comeou como um nico gene
que se duplicou diversas vezes. Aps a duplicao, mutaes causaram as divergncias que deram aos membros de cada famlia novas funes. Em nvel de tecido,
podemos observar duplicao e divergncia nos somitos que do origem aos esqueletos cervicais, lombares e torcicos.
Tambm existem duplicaes e divergncias de padres particulares do desenvolvimento. Interaes epitlio-mesnquima parecem ser variaes de um nico tema (Figura
23.9; Maderson, 1975; Burke, 1989a). As glndulas de secreo da epiderme so modificaes do mesmo tipo de induo - glndulas mamrias so glndulas sudorparas
INDUO
INICIAL
INDUES
SECUNDRIAS
Figura 23.9
Epitlio
ectodrmico
Morfognese
Mesnquima
894
Figura 23.10
(A)
(B)
modificadas embriologicamente. Da mesma maneira, a temida fileira de dentes do tubaro so modificaes das escamas do corpo. Mudanas na induo podem transformar
escamas em penas (como no caso das galinhas garniz) e so responsveis por adaptaes to extraordinrias quanto o pulmo das aves, o estmago dos ruminantes, as
presas dos elefantes (incisivos modificados), e as presas das morsas (dentes caninos
superiores modificados). A carapaa (casco) da tartaruga uma novidade evolucionria
que parece se formar de maneira reminiscente aos membros. Existe at mesmo uma crista
da carapaa que organiza o mesnquima de maneira semelhante crista ectodrmica
apical do broto do membro (Figura 23.10; Burke, 1989b).
Co
Co--opo
Nenhuma estrutura destinada a um propsito particular. Um lpis pode ser usado para
escrita, mas ele tambm pode ser usado como um palito, uma adaga, um instrumento
perfurante ou uma baqueta. Ao nvel molecular, sabemos que o gene engrailed, usado
para segmentao nos embries de Drosophila, usado posteriormente tambm para
especificar seus neurnios e usado nos estgios larvais para fornecer um eixo nteroposterior aos discos imaginais. Similarmente, uma protena que funciona como uma
enzima no fgado pode funcionar como uma protena cristalina estrutural no cristalino
(Piatigorsky and Wistow, 1991). Em outras palavras, unidades prexistentes podem ser
recrutadas para novas funes. Essa co-opo tambm vista a nvel morfolgico. As
asas evoluram trs vezes durante a evoluo dos vertebrados, e em cada caso, diferentes estruturas de antebraos foram modificados para uma funo inteiramente nova.
Um dos casos mais celebrados de co-opo o uso de partes da mandbula embrionria para a criao do ouvido mdio dos mamferos (revisado por Gould, 1990).
Clulas da crista neural distinguem vertebrados dos protocordados e invertebrados.
Os protocordados tm um tubo neural dorsal e notocorda, mas no uma cabea
verdadeira. As clulas da crista neural craniana so as grandes responsveis pela
criao da face, crnio e arcos branquiais. Considera-se que o desenvolvimento da
cabea originalmente permitia uma predao mais eficiente, pela colocao das estruturas sensoriais adjacentes s mandbulas que capturam as presas (Gans e Northcutt,
1983; Langille e Hall, 1989; Hall, 1992). Duas transies notveis ocorreram na
evoluo da mandbula do vertebrado. A primeira a criao de mandbulas a partir
895
dos arcos das guelras de peixes sem mandbulas. A segunda o uso de ossos que
articulavam as mandbulas superiores e inferiores nos rpteis para a formao dos
ossos martelo e bigorna do ouvido mdio. Nos primeiros vertebrados, uma srie de
guelras se abriu atrs de uma boca sem mandbula. Quando as fendas das guelras
foram sustentadas por elementos cartilaginosos, o primeiro conjunto desses suportes
de guelras circundou a boca para formar a mandbula. Existem amplas evidncias de
que as mandbulas so suportes de guelras modificadas. Primeiro, esses dois conjuntos de ossos so produzidos de clulas da crista neural. (A maioria dos outros ossos
procedem de tecidos mesodrmicos.) Segundo, ambas estruturas se formam de barras superiores e inferiores que se curvam para a frente e so dobradas no meio. Terceiro, a musculatura da mandbula parece ser homloga musculatura dos suportes
de guelras originais. Dessa maneira, a primeira transformao da cartilagem do primeiro arco branquial foi aquela do aparelho da guelra para o aparelho da mandbula.
Mas a histria no termina aqui.
A parte superior do segundo arco branquial que suporta a guelra se transforma
no osso hiomandibular de peixes com mandbula. Esse elemento segura o crnio e
junta a mandbula ao crnio (Figura 23.11A). Como vimos no Captulo 7, essa funo
do osso hiomandibular nos mamferos realizada pelo estribo, um dos ossos do
ouvido mdio. Mas os peixes no usam esse osso para escutar; ento, como um
osso usado para suporte de guelras e depois como suporte para o crnio se torna
parte do aparelho auditivo dos mamferos? Quando o peixe chegou terra deparou-se com um novo problema: como conseguir escutar em um meio to pouco
denso como o ar? Acontece que o osso hiomandibular est prximo da cpsula
auditiva, e a matria ssea um excelente transmissor do som. Dessa maneira,
enquanto ainda funcionava como um suporte para o crnio, o osso hiomandibular
dos primeiros anfbios tambm comeou a funcionar como um transdutor de som
(Clark, 1989). medida que os vertebrados terrestres alteraram sua locomoo,
estrutura mandibular e postura, o crnio prendeu-se firmemente em seu lugar sem
necessitar de apoios hiomandibulares. Parece ter se especializado em seguida como
o osso estribo do ouvido mdio. O que havia sido a segunda funo desse osso
acabou se tornando sua funo primria.
Os ossos originais da mandbula tambm mudaram. O primeiro arco branquial
gera o aparelho da mandbula. Nos anfbios, rpteis e pssaros, a poro posterior
dessa cartilagem forma o osso quadrado da mandbula superior e o osso articular da
mandbula inferior. Esses ossos se conectam e so responsveis pela articulao na
mandbula superior e inferior. No entanto, nos mamferos, essa articulao ocorre em
outra regio (os ossos dentrios e escamosos), com isso liberando esses elementos
sseos para adquirirem novas funes. Os osso quadrado da mandbula superior dos
rpteis evoluiu nos mamferos transformando-se no osso bigorna e o osso articular
da mandbula inferior dos rpteis se tornou nosso osso martelo. Esse segundo processo foi primeiramente descrito por Reichert em 1837, que observou no embrio do
porco que a mandbula se ossifica pelo lado da cartilagem de Meckel, enquanto a
regio posterior dessa cartilagem se ossifica, se destaca do resto da cartilagem, e
entra na regio do ouvido mdio para se tornar o osso martelo (Figura 23.11B,C)*
* A falta de formas de transio freqentemente citada pelos Criacionistas como uma crtica
da evoluo. Por exemplo, na transio de rpteis para mamferos, trs ossos da mandbula dos
rpteis se tornaram martelo e bigorna, deixando somente um osso (dentrio) na mandbula inferior.
Gish (1973), um Criacionista, disse que isso uma situao impossvel, pois nenhum fssil com dois
ou mais ossos da mandbula e dois ou trs ossculos do ouvido fora encontrado. Ele considerou que tal
animal teria arrastado suas mandbulas pelo cho. Entretanto, tal forma de transio especfica no
precisaria ter existido (h mais de dzia de formas de transio documentadas entre crnios de
rpteis e mamferos). Hopson (1966) mostrou com bases embriolgicas como os ossos da mandbula
poderiam ter se dividido e usados para diversas funes, e Romer (1970) encontrou fsseis de rpteis
onde as novas articulaes da mandbula j eram funcionais enquanto ossos mais antigos se tornavam inteis. Existem vrias espcies de rpteis terapsdeos com duas articulaes de mandbula, com
a bigorna junto a parte superior do osso quadrado (que vir se tornar o osso bigorna). [evo3.html]
(A)
Mandbula
superior
Caixa
craniana
Suportes
das guelras
Hiomandibular
Mandbula
inferior
Escamoso
(B)
Quadrado
Pr-maxilar
Maxilar
Nasal
Articular
Dentrio
(C)
Escamoso
(temporal)
Nasal
Auditivo
Zigomtico
Maxila
Mandbula
Figura 23.11
896
A existncia de discretos mdulos de desenvolvimento permitiu que os princpios de dissociao, duplicao e divergncia e co-opo formassem novos tipos de
organismos.
Progresso correlacionada
Estribo
(B)
Parte da
caixa craniana
Esqueleto
da lngua
Processo
retroarticular
Figura 23.12
Uma conseqncia evolucionria da natureza modular do desenvolvimento a progresso correlacionada. Aqui, mudanas em uma parte do embrio induzem mudanas em outras. A cartilagem esqueltica informa a colocao dos msculos, e os
msculos induzem a colocao dos axnios dos nervos. Nesses casos, se uma estrutura muda, isso ir induzir que outras estruturas tambm o faam (Thomson, 1988).
As mudanas dramticas na organizao dos ossos, desde os gnatos at os peixes
com mandbulas, dos peixes com mandbulas at os anfbios, e dos rpteis at os
mamferos foram todas coordenadas atravs de mudanas nas estruturas da mandbula, musculatura da mandbula, deposio e formato dos dentes e modificaes da
abboda cranial e ouvido (Kemp, 1982; Thomson, 1988). Em 1995, Rowe formulou
a tese de que a migrao da cartilagem da mandbula dos rpteis para formar a cartilagem do ouvido mdio por si s um caso de progresso correlacionada, ou seja, uma
conseqncia do aumento da caixa craniana pelo qual os precursores da cartilagem
foram liberados para migrar caudalmente.
Podemos observar tambm a progresso correlacionada ao longo de um curto
perodo em animais domsticos. Humanos tm um grande talento para selecionar
variantes hereditrias em animais domsticos que envolvem aquelas clulas da crista
neural formadoras dos processos mandibular e frontonasal. Em tais casos, como o do
bulldog, a raa selecionada para se obter uma face larga com um ngulo muito
pequeno entre a mandbula e a cabea. Outras raas como o collie so selecionadas
visando obter um focinho estreito com uma mandbula alongada distanciando-se da
cabea. Todas as raas podem mover suas mandbulas, sacudir suas cabeas e latir,
apesar das diferenas na via que seus ossos so formados ou posicionados. Cada
variao geneticamente determinada; e importante notar que cada uma representa
uma reordenao harmoniosa dos diferentes ossos que interagem entre si e com suas
ligaes musculares. Com a seleo dos elementos esquelticos, tambm foram selecionados os msculos que os movem, os nervos que controlam os movimentos, e os
vasos sangneos que os alimentam.*
O mecanismo pelo qual o aparelho da mandbula manteve sua integridade desde
as lamprias at os amniotas um extraordinrio exemplo de mdulos embrionrios.
As estruturas da cabea de vertebrados derivadas da crista neural, incluem os arcos
farngeos (os precursores da mandbula, ouvido mdio, esqueleto da lngua, etc.) to
bem quanto os ossos drmicos da face e a musculatura facial (veja Captulo 7). A
caixa craniana um produto de tecidos mesodrmicos. Substituindo rombmeros
individuais de pinto pelos de codornas, Kntges e Lumsden (1996) foram capazes de
mapear os destinos das clulas da crista neural associadas com os rombmeros da
codorna (Figura 23.12). Os anticorpos marcando as clulas da crista neural das codornas mostraram que cada rombmero d origem a um elemento esqueltico em
particular e aos msculos a eles atados. Ademais, se descobriu que os mdulos msculo-e-esqueleto de cada rombmero foram enervados por um nervo cranial especfico. Por exemplo, as clulas da crista neural do rombmero 4 geraram quatro tecidos
esquelticos - o processo retroarticular da mandbula inferior (encontrado nas aves
mas no nos mamferos), uma poro do esqueleto da lngua, o osso bigorna do
ouvido mdio, e supreendentemente, a pequena poro da caixa craniana onde os
msculos de abertura da mandbula se ligam ao crnio, principalmente derivado do
mesoderma. Os msculos que conectam esses quatro elementos esquelticos tambm
*Entretanto essa coordenao no totalmente universal. Em ces com faces muito acentuadas (como
os bulldogs), a pele no coordenou o seu desenvolvimento com os ossos e, portanto, fica pendente em
dobras desde a cabea (Stockard, 1941).
897
Archaeopteryx
Ave moderna
Msculo
poplteo
Ave
experimental
Rptil
(Crocodylus)
(D)
Figura 23.13
898
Restries ao desenvolvimento
Embora discretamente, os mdulos de desenvolvimento podem interagir uns com os
outros. Essas interaes limitam os fentipos possveis que podem ser criados, e
tambm permitem a ocorrncia de mudanas em certas direes com maior eficincia do que em outras.* Coletivamente, essas restries na produo de fentipos so
chamadas de restries do desenvolvimento.
Restries Fsicas
Fizemos aluso ao fato de que existem relativamente poucos Bauplne, e podemos
facilmente imaginar tipos de animais que no existem dentro de um filo existente. Por
que no existem mais tipos principais de corpos entre os animais? Para responder a
isso, temos que considerar as restries impostas na evoluo. Existem trs classes
principais de restries na evoluo morfogentica. Primeiro, existem as restries
fsicas na construo de um organismo. Essas restries de difuso, hidrulica e
sustentao fsica permitem que somente certos mecanismos do desenvolvimento
ocorram. Podemos observar que no existe um vertebrado com apndices virados
(parecido com que Dorothy viu em o Mgico de Oz) porque o sangue no circula em
rgos que giram; toda essa possibilidade da evoluo foi abandonada. Similarmente,
parmetros estruturais e a dinmica de fluidos impossibilitam a existncia de um
pernilongo de um metro e meio de altura. [evo4.html]
Restries Morfogenticas
Existem tambm restries envolvendo regras de construo morfogentica (Oster et al.,
1988). Bateson (1894) ressaltou que quando organismos se afastam do seu desenvolvimento normal, eles o fazem em somente um nmero limitado de maneiras. Pesquisas nessa
rea tentam encontrar parmetros arquitetnicos pelos quais os organismos so construdos
e procuram mostrar como esses parmetros podem ser modificados durante a evoluo.
Alguns dos melhores exemplos desses tipos de restries vm da anlise da formao de
membros em vertebrados. Holder (1983) afirma que embora possam ter havido muitas
modificaes do membro vertebrado nestes 300 milhes de anos, algumas modificaes
(tais como o dedo indicador ser mais curto que os dedos vizinhos) no foram encontradas.
Alm do mais, anlises de populaes naturais sugerem que existe um nmero relativamente pequeno de caminhos pelos quais a mudana nos membros pode ocorrer (Wake e
Larson, 1987). Se um membro mais longo favorvel em determinado ambiente, o mero
pode se tornar alongado. Jamais veremos dois meros pequenos unidos juntos em dois
lugares, embora possamos imaginar as vantagens seletivas que essa distribuio poderia
ter. Isso indica um esquema de construo que tem certas regras.
As regras principais para a formao de um membro vertebrado foi resumida por
Oster e seus colegas (1988). Eles descobriram que o mecanismo de reao-difuso
pode explicar as morfologias conhecidas do membro e tambm pode explicar porque
outras morfologias so proibidas. Esse modelo postula que as agregaes da cartilagem recrutam ativamente mais clulas da rea em volta e inibem lateralmente a formao de outros focos de condensao. O nmero de focos depende da geometria do
tecido e a fora da inibio lateral. Se a inibio permanece a mesma, o tamanho do
volume do tecido deve aumentar para permitir a formao de dois focos onde inicialmente s havia um. Num dado limite (chamado de limite de bifurcao), esse tamanho
alcanado, e o membro pode se ramificar em dois focos.
*Leibniz, provavelmente o filsofo que mais influenciou Darwin, notou que a existncia deve ser limitada
no somente pelo possvel, mas tambm pelo mutuamente compatvel. Isto , enquanto diversas coisas podem
vir a existir, somente aquelas que so mutualmente compatveis iro realmente existir (veja Lovejoy, 1964).
Assim, embora muitas mudanas do desenvolvimento sejam possveis, somente aquelas que podem se integrar
ao resto do organismo (ou que podem causar mudanas compensatrias no resto do organismo) sero vistas.
899
Prognese natural
Tbia
Tbia
VARIAO
NATURAL
Fbula
Tbia
Fbula
Tbia
Tbia
VARIAO
EXPERIMENTAL
Fbula
Fbula
Figura 23.14
900
a novos tipos de larvas que ainda sofrem metamorfose em moluscos, e mudanas nos
morfgenos citoplasmticos do ourio-do-mar podem gerar ourios-do-mar que se
desenvolvem sem larvas mas ainda so ourios-do-mar. Na realidade, ao olharmos
para os vertebrados, podemos observar que existe uma histria completa que nos leva
at o famoso diagrama da lei de von Baer mostrado no Captulo 7. Todos os vertebrados chegam a esse estgio particular do desenvolvimento (chamado de farngula),
mas o fazem por meios diferentes (Figura 23.15). Aves, rpteis e peixes chegam a esse
ponto aps clivagens meroblsticas de tipos diversos; os anfbios chegam a esse
estgio por meio de clivagem holoblstica radial; e os mamferos alcanam o mesmo
ponto aps construrem um blastocisto, crion e mnio. Portanto, os primeiros estgios do desenvolvimento parecem ser extremamente plsticos. Similarmente, os ltimos
SALAMANDRA
Ovo
(em escala)
Blstula
(seco)
Gstrula
Figura 23.15
O gargalo no estgio faringular do desenvolvimento dos vertebrados. A parte inferior deste esquema a ilustrao padro da lei
de von Baer (como mostrado no Captulo 7), demonstrando a divergncia das classes de vertebrados aps um estgio embrionrio
comum. A parte superior deste esquema representa os incios divergentes do desenvolvimento. O prprio von Baer (1886) estava
consciente desse gargalo. (De acordo com Elinson, 1987.)
PINTO
HOMEM
901
(A)
(B)
(C)
Figura 23.16
902
Figura 23.17
Modelo hipottico para o sistema de reconhecimento entre o espermatozide e o vulo em duas espcies relacionadas de ourio-domar. O espermatozide de Strongylocentrotus purpuratus pode
ligar o receptor no vulo. Analogamente, o espermatozide de S.
franciscanus pode se ligar com seu receptor do vulo. O
espematozide de S. purpuratus no se ligar a vulos de S.
franciscanus, mas o espermatozide desse se ligar fracamente a
vulos de S. purpuratus. Postula-se que cada um dos elementos
repetidos na protena bindina interage com stios complementares
nos seus respectivos receptores de bindina. A co-evoluo entre a
bindina e seu receptor pode ter separado as duas espcies. (De
acordo com Shaw et al., 1994.)
Cruzamento
homlogo
Protena bindina do
espermatozide
Bindina S.p.
Bindina S.f.
Receptor S.f.
Receptor S.p.
Protena do
receptor no vulo
Cruzamento
heterlogo
Bindina S.p.
Bindina S.f.
Receptor S.p.
Receptor S.f.
Sem ligao
Ligao fraca
ser rpida e se correlaciona com a especiao (Shaw et al.,1994; Lee et al., 1995;
Metz e Palumbi, 1996).*
903
904
Figura 23.18
Seqncia
intensificadora
especfica do
disco imaginal
GAL4
Protena
ativadora
de GAL4
Stios ligantes
de GAL4
cDNA
de Pax6
905
(B)
(A)
Figura 23.19
906
Figura 23.20
HOM-C de
Drosophila
HOM-C de
inseto em geral
Ancestral
comum
hipottico
Aglomerado
Hox de
Anfioxo
Hox- de
Camundongo
Hox- de
Camundongo
Hox-C de
Camundongo
Hox-D de
Camundongo
Hoxa-2 resulta numa transformao parcial do segundo arco farngeo em uma cpia
do primeiro arco. Os fetos mutantes carecem dos ossos estribo e estilide formados
do segundo arco, mas tm extra os ossos martelo, bigorna, timpnico e escamoso. Eles
tm tambm uma cartilagem filamentosa que est fundida ao elemento alisfenide e
cujo terminal caudal est em contato com a bigorna supranumerria. Essa cartilagem
no tem contrapartida em camundongos normais, mas suas relaes anatmicas sugerem que seja homloga com a cartilagem pterigoquadrtica vista em rpteis. O complexo formado por essa cartilagem e a bigorna considerado ter estado presente em
terapsdeos, o grupo de rpteis que deu origem aos mamferos (Rijli et al., 1993; Mark
et al., 1995). Quando o gene Hoxa-2 desregulado pela eliminao de receptores de
cido retinico, uma distinta cartilagem pteroquadrada se desenvolve ligando os ossos bigorna e alisfenide (Figura 23.21; Lohnes et al., 1994).
Porm, permanecia a pergunta se os genes Hox especificam o eixo de acordo
com um sistema de contagem ou por um cdigo pelo qual diferentes genes Hox
especificam vrtebras diferentes. Essa uma pergunta importante porque d a
viso de como os mesmos genes Hox podem especificar corpos diferentes. Comparando os padres de expresso do gene Hox com o tipo de vrtebras mostrouse que esse era especificado pela constelao de genes Hox expressos nos somitos
(Gaunt, 1994; Burke et al., 1995). Por exemplo, o camundongo tem 5 vrtebras
occipitais, 7 cervicais, 13 torcicas, 6 lombares e 4 sacrais. O pinto, por outro lado,
tem 5 vrtebras occipitais, 14 cervicais, 7 torcicas, 9 lombares e 4 sacrais. Embora
o nmero total de vrtebras pr-sacrais difira somente por uma (34 versus 35),
existem bvias transposies entre as espcies (Goodrich, 1930). Em ambos os
animais, Hoxc-5 expresso no fim das vrtebras cervicais, enquanto Hoxc-6 aparece no comeo da srie torcica. No camundongo isso ocorre no limiar entre a
dcima segunda e dcima terceira vrtebra e em pintos entre a dcima nona e a
vigsima. Assim em vertebrados, alteraes da morfologia podem se concretizar
mudando-se os domnios da expresso gnica de Hox.
Figura 23. 21
Camundongo selvagem/mamfero
evoludo de apndices multiramificados de guelras de crustceos ancestrais. Especificamente, o padro de expresso ptero das abas osmorreguladoras dorsais (eppodos)
dos crustceos se parece com sua expresso em asas de insetos em desenvolvimento
(Kukalova-Peck, 1978; Averof e Cohen, 1997). Carroll e seus colegas (1995) sugerem que o inseto original tinha asas saindo de todos os segmentos (como as guelras
dos crustceos). Em insetos modernos, diferentes genes hometicos suprimem esse
potencial na maioria dos segmentos. Em outras palavras, a formao das asas originou-se independentemente dos genes hometicos em um organismo que estava usando
os genes hometicos para identidade segmentar ou padronizao neural. Somente
mais tarde o programa formador de asas ficou sob o controle dos genes hometicos.
H vrias observaes apontando para essa concluso. Primeiro, embora o Antennapedia seja expresso em dois segmentos (segundo e terceiro torcico), capazes de
produzir asas, ele no necessrio para formao das asas. O segmento mesotorcico alar (T2) pode, portanto, representar o estado fundamental presente em todos os
segmentos antes dos genes hometicos comearem a regular a formao das asas.
Segundo, em vez do Antennaedia estar regulando positivamente o desenvolvimento
alar em T2 e T3 parece que outros genes Hom-C reprimem o desenvolvimento alar
em outros primrdios. Mutaes de perda-de-funo dos genes Hom-C causam a
formao de primrdios alares ectpicos nos segmentos em que so expressos (veja
Figura 14.29 mostrando uma mosca cujo Ubx foi removido). Portanto, com a possvel exceo dos segmentos abdominais inferiores controlados por Abd-b, o potencial
para o desenvolvimento de asas existe em todos os segmentos e reprimido pelos
genes hometicos. Terceiro, se a expresso de Scr induzida em discos alares (usando o sistema GAL4 mencionado anteriormente), o desenvolvimento alar abortado
em seus estgios precoces.
Rptil
907
908
(A) Apterigoto
Figura 23.22
evolucionria que os genes Hom-C no so reguladores todo-poderosos. Ao contrrio, eles podem ser regulados localmente pelos produtos de outros genes. Em
artrpodes, muitos grupos so distinguidos pelo nmero de membros. Os insetos tm
seis patas quando adultos, trs pares se originando de cada um dos trs segmentos
torcicos. Em Drosophila, o gene Distal-less (Dll) crtico para prover o eixo prximo-distal dos apndices (veja Figuras 14.33 e 19.21). A expresso de Distal-less ocorre
nos discos formadores de membros ceflicos e torcicos (tanto para patas, mandbulas e asas), mas excluda no abdmen pelas protenas AbdA e Ubx. Assim, os apndices crescem como patas e asas no trax e como mandbulas na cabea. A larva de
Drosophila nunca desenvolve membros no seu abdmen.
No obstante, larvas de borboletas e mariposas so caracterizadas por patas abdominais rudimentares chamadas pr-patas. A pesquisadora Panganiban e seus colegas (1994) clonaram o homlogo do Distal-less da borboleta buckeye e mapearam
sua expresso durante o desenvolvimento da borboleta. Durante a poro precoce da
embriognese de Precis a expresso de Dll a mesma que em Drosophila. Primeiro
vista nas regies da cabea durante a gastrulao (segmentos antenais, maxilares, e
labiais) e nas regies torcicas que iro dar origem aos discos imaginais das patas
(Figura 23.23A). No entanto, com o progresso do desenvolvimento, o gene Dll de
Precis torna-se expresso do terceiro at o sexto segmento abdominal (Figura 23.22B).
Enquanto a expresso de Dll vista tanto no anel proximal como em soquetes das
patas torcicas verdadeiras, a expresso de Distal less no abdmen est restrita ao
anel proximal.
Assim, as pr-pernas dos lepidpteros parecem ser homlogas poro proximal
das patas torcicas. A expresso nos segmentos maxilar e labial tanto em Drosophila
como em Precis interessante por ser consistente com recente evidncia paleontolgica
(Kukalova-Peck et al., 1992) de que embora essas estruturas da mandbula se originaram de primrdios de membros, elementos de membros distais esto perdidos de todas
as mandbulas de artrpodes.
909
Figura 23.23
(B)
910
Figura 23.24
Regulao semelhante do gene da lcool desidrogenase em Drosophila e humanos. CREB/ATF e C/EBP so reguladores positivos do
gene da lcool desidrogenase. AEF um regulador negativo. (De
acordo com Abel et al., 1992; Zuckerkandl, 1994.)
Fatores de transcrio
Seqncia reguladora
a montante
Seqncia reguladora
a montante
Figura 23.25
A via RTK-RAS amplamente usada. O esquema da via est mostrado no lado esquerdo junto com os nomes em diferentes espcies. O
ligante, que pode ser solvel (como no EGF)
ou uma protena ligada membrana em outra
clula (como na protena Boss [Bride of
sevenless] associada ao sevenless do RTK).
Os domnios citoplasmticos das RTKs so
autofosforilados ao se dimerizarem, e isso lhes
permite se ligar protena adaptadora e estimular a protena Ras G. A protena Ras G transloca
a protena Raf para a membrana celular, dessa
maneira ativando-a. Isso pode ser inibido pelas
protenas gap, as quais podem inativar Ras. A
protena Raf ativada inicia a cascata de fosforilao que termina em um fator de transcrio
fosforilado (ativado) que entrando no ncleo
efetua a transcrio do RNA.
Ligante
Receptor
Protena G
Fora da clula
Membrana plasmtica
Citoplasma
Domnio
da tirosina
quinase
Organismo e tecido
Ligante
Tirosina
quinase do
receptor
Protena
SH2-SH3
Protena G
Ativador de GTPase
e protenas
de troca GDP/GTP
Efeito
Vulva de C. elegans
Protena
LIN-3
Protena
LET-23
SEM-5
Protena
LET-60
?/LET-341 (?)
Diferenciao e diviso
da clula vulvar
Pele de mamfero
EGF
Receptor
de EGF
GRB2
Protena Ras
GAP/GNRP
Olho de Drosophila
Bride of
sevenless
Sevenless
Drk
Ras1
Diferenciao do fotorreceptor
sete em cada omatdio
(no suposto fotorreceptor 7) se junta protena Bride Sevenless (Boss) no fotorreceptor 8. Essa interao ativa a tirosina quinase da protena Sevenless a se
autofosforilar. A protena DRK se liga ento a essas novas tirosinas fosforiladas
atravs da sua regio de homologia-2 de Src (SH2) e ativa a protena Son of Sevenless
(SOS). Essa protena uma trocadora de nucleotdeos de guanosina e troca GDP por
GTP na protena Ras1 G. Isso ativa a protena G, permitindo que ela transmita seu
sinal ao ncleo atravs da cascata da quinase MAP. Esse mesmo sistema foi encontrado na determinao da vulva do nematide, da epiderme do mamfero, e dos
segmentos terminais da Drosophila. A similaridade nesses sistemas to impressionante que muito dos componentes so intercambiveis entre as espcies. O gene
para o GRB2 humano pode corrigir os defeitos fenotpicos dos nematides deficientes em Sem-5 e a protena do nematide SEM-5 pode se juntar forma fosforilada do
receptor EGF humano (Stern et al.,1993).
Caminhos homlogos formam a infra-estrutura bsica do desenvolvimento. Os
alvos desse caminho podem mudar, dependendo do organismo. No ectoderma de um
organismo, o caminho RTK-Ras pode ativar os genes responsveis pela proliferao.
Em outro organismo, o mesmo caminho pode ativar os genes responsveis pela produo de um fotorreceptor. E num terceiro organismo, o caminho ativa os genes necessrios para a construo de uma vulva.
911
CORDADOS
Gnatostomatas
Agnatos
Cefalocordados
(Amphioxus)
Urocordados
(ascidianos)
Hemicordados
Conodontes
Calcicordados
VERTEBRADOS
Equinodermos
912
Modificao do
arco mandibular
em mandbulas
Simetria radial
Sistema vascular aquoso
Figura 23.26
um lugar onde o Distal-less no expresso em anfioxos. Outros homlogos vertebrados de Distal-less so expressos no crebro anterior, imitando um padro de
expresso visto no anterior do tubo neural do anfioxo. Isso sugere que o crebro
anterior vertebrado homlogo ao tubo neural anterior do anfioxo. Um outro
homlogo vertebrado de Distal-less expresso nas clulas da crista neural. Embora
no esteja comprovado, possvel que um novo tipo do gene Distal-less possa
fazer com que as clulas ectodrmicas migratrias dos anfioxos evoluam em clulas da crista neural.
913
914
Ao mesmo tempo, Conrad H. Waddington estava tentando descobrir mecanismos de desenvolvimento para a produo dessas novas espcies. Ele tambm considerou mutaes hometicas em moscas como modelos de fentipos drasticamente novos, formulando a noo de transferncia de competncia (assimilao gentica, veja Captulo 21) para explicar certos aspectos da evoluo morfolgica. Poucos cientistas prestavam ateno a Goldschmidt ou Waddington porque eles no
estavam escrevendo no paradigma da gentica de populaes da sntese moderna e
seus programas cientficos eram suspeitos. (Goldschmidt no acreditava na opinio
de Morgan sobre o gene como uma entidade particular, e o trabalho de Waddington
foi mal interpretado como apoiando a herana de traos adquiridos.) No entanto, na
dcada de 1970, eventos na paleontologia (teoria do equilbrio pontuado), eventos
na sociedade (os Criacionistas dando a disputa microevolucionria para os biologistas mas contestando a macroevoluo), e eventos em biologia molecular
(Notadamente o trabalho de King e Wilson em 1975 mostrando que os DNAs, humano e do chimpanz, eram mais do que 99% idnticos) levaram os cientistas a considerar seriamente que mutaes em genes reguladores podem criar grandes mudanas na morfologia.
Na dcada de 1990, as tcnicas de biologia molecular permitiram aos biologistas
descobrirem (1) genes reguladores homlogos como o Pax6, que controlam o desenvolvimento dos mesmos rgos em todo reino animal, (2) caminhos homlogos
para o desenvolvimento, cujas funes podem mudar entre organismos ou entre
clulas do mesmo organismo, e (3) os padres de mudana da expresso dos genes
hometicos, permitindo que diversas partes do corpo tenham estruturas e funes
diferentes. Tais descobertas convergiram para a formao de uma sntese evolucionria do desenvolvimento que incorpora a abordagem da gentica de populaes
mas que expande a teoria evolucionria para explicar tambm o fenmeno
macroevolucionrio. A sntese evolucionria do desenvolvimento tambm retm
uma multiplicidade de paradigmas. Em alguns momentos (tais como a criao das
clulas da crista neural), uma mudana qualitativa ocorre, enquanto em outros casos (como a formao da bolsa do toupeira com bolso), quantidade se torna qualidade quando um limite ultrapassado. Sinalizando a unio dessa sntese, Biologia
Evolucionria do Desenvolvimento se tornou um tpico separado em uma enciclopdia da cincia (Hall, 1996), e o Rouxs Archives of Developmental Biology, uma
das mais antigas publicaes da embriologia experimental, mudou o nome para Development, Genes, and Evolution.
Ns estamos em um extraordinrio momento de nosso entendimento da natureza, pois a sntese da gentica do desenvolvimento com a biologia evolucionria
pode transformar nossa apreciao dos mecanismos fundamentais da mudana
evolucionria e diversidade animal. Tal sntese na realidade um retorno a uma
teoria evolucionria mais ampla que se fragmentou na virada do ltimo sculo (Figura 23.27). Nos ltimos anos do sculo 19, a biologia evolucionria continha as cincias que ns chamamos hoje de biologia evolucionria, sistemtica, ecologia, gentica e desenvolvimento. Quando Wilhelm Roux (1894) anunciou a criao da mecnica do desenvolvimento, ele no rompeu totalmente com a biologia evolucionria.
Ao contrrio, ele afirmou que uma mecnica do desenvolvimento ontogentico e
filogentico deve ser aperfeioada. Ele citou que a mecnica do desenvolvimento
dos embries (o ramo ontogentico) iria crescer mais rpido do que os estudos em
filogentica, mas afirmou que em conseqncia das conexes causais ntimas entre
os dois, muitas das concluses surgidas da investigao sobre ontogenia [iriam]
esclarece os processos filogenticos.
Cem anos mais tarde, estamos em um ponto onde podemos nos ater segunda
mecnica do desenvolvimento de Roux e criar uma teoria unificada da evoluo.
915
Figura 23.27
EVOLUO
Roux, Wilson,
outros
Questo geracional
Mecnica desenvolvimental
Biologia evolucionria
Sistemtica
Ecologia
Anatomia comparada
Morgan
Gentica
Gentica de
populaes
Embriologia experimental
Grupo
do fago
Sntese moderna
NeoDarwinismo
Regenerao
Fertilizao
Imunologia
Biologia celular
Biologia do
desenvolvimento
Gentica molecular
Gentica do
desenvolvimento
Sob Construo
SNTESE
DESENVOLVIMENTAL
LITERATURA CITADA
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binds to both fat body- and liver-specific
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during sperm-egg attachment and early stages of
fusion. Biol. Bull. 187: 23-34.
918
C-1
ndice de Autores
Abassi, Y A., 149
Abbott, U. K., 705
Abe, K., 446
Abel, E. L., 833
Abel, T., 910
Abramson, S., 375
Acampora, D., 268, 647
Adachi, Y., 453
Adams, C. C., 433, 434
Adams, M., 913
Adamson, S. D., 494
Adeslon, D. C., 173
Adler, F. R., 819
Afzelius, B. A., 124
Agius, L., 800
Ahlberg, P. E., 896
Ahlgren, U., 383
Ahringer, J., 491, 854
Akam, M. E., 571, 573, 574
Akers, R. M., 314, 315
Akitaya, T., 288
Akoulitchev, S., 400
Akutagawa, E., 785
Alberch, J., 744
Alberch, P., 726, 743, 899
Albert, P., 715
Albertini, D. F., 875
Alberts, B. M., 193, 194, 543
Alexandrov, D. A., 902
Alfandari, D., 231
Alini, M., 370
Allen, B. M., 735
Allen, G. E., 36, 37, 38, 596
Alley, K. E., 740
Allsopp, T. E., 529
Almeida, E. A. C., 140
Alvarez, I. S., 259, 260
Alvarez-Buylla, A., 335, 824
Amaya, E., 110, 625
Amikura, R., 534
Amos, L. A., 124
Amrein, H., 793
An, W., 404
Ancel, P., 157
Anderson, C., 366
Anderson, D. J., 291, 292, 293,
656, 657
Anderson, D. T., 889
Anderson, E., 875
Anderson, K. V., 489, 548, 577,
581, 583
Andersson, S., 784
IA1 - 1
IA1 - 2
ndice de Autores
Boyse, E. A., 89
Boyse, J., 444
Brack, C., 410
Brackenbury, R., 95
Braden, A. W. H., 146
Bradley, A., 269, 660
Brakefield, P. M., 815, 816, 822
Brandhorst, B. P., 520
Brannon, M., 610
Braude, P., 490
Braun, R. E., 856
Braun, T., 349, 350
Braunstein, M., 436
Breedlove, S. M., 786
Breier, G., 369, 370
Breitweiser, W., 536
Brennen, M. D., 869
Brenner, C. A., 186, 478
Brenner, S., 509, 521, 753
Brent, R., 576
Brian, M. V, 816
Bridges, C. B., 789
Briggs, R., 42, 44, 489
Brighton, C. T., 356
Brill, G., 347
Brinster, R. I., 70, 397
Brinton, C. C. Jr., 12
Briscoe, J., 107
Britten, R. J., 463
Brock, H. W., 572
Brockendorrf, N., 449
Brockes, J. P., 715
Brnmark, C., 820
Bronner-Fraser, M., 104, 284,
286, 288, 289, 291, 292
Brooks, P. C., 112
Brooks, W. K., 807
Browder, L. W., 443
Brower, D. L., 105, 753
Brown, C. J., 448, 449
Brown, D. D., 432, 437, 741,
742, 743, 866
Brown, N. A., 649
Brown, N. L., 688
Brown, P. S., 736
Brownell, J. E., 436
Brownlee, G. G., 418, 466
Bruce, B. S., 794
Bruening, W, 420
Brunelli, S., 647
Brunetti, A., 350
Brunk, B. P., 442
Brusca, G. J., 887
Brusca, R. C., 887
Brush, S., 37
Brust, D. G., 740
Bry, L., 810
Bryant, S. V., 702, 703, 705, 715
Brylski, P., 892
Bchmann, D., 814
Buck, W. R., 147
Buckbinder, L., 742
Buckingham, M. E., 349
Buehr, M., 777
Bull, J. J., 798, 799, 817
Bungert, J., 441
Bunick, D., 400
Buratowski, S., 399, 400
ndice de Autores
IA1 - 3
IA1 - 4
ndice de Autores
ndice de Autores
IA1 - 5
IA1 - 6
ndice de Autores
ndice de Autores
IA1 - 7
IA1 - 8
ndice de Autores
ndice de Autores
Ohmori, T., 27
Ohshima, Y., 691
Okada, M., 532, 533, 534
OKane, C. J., 419
Okazaki, K., 218
Okuda, T., 379
OLeary, D. D. M., 331
Old, L. J., 89
Old, R. W., 865
Olds, J. L., 147
Oliphant, G., 132
Oliver, B., 855
Oliver, G., 703
Olsen, B., 710
Olson, E. N., 416
Olwin, B. B., 350
Oofusa, K., 737
Opitz J. M., 358, 702, 828, 833
Oppenheim, R. W., 332
Oppenheimer, J. M., 40, 220, 636
Opresko, L. K., 863
ORahilly, R., 835
Ordahl, C. P., 345
Orkin, R. W., 102
Orkin, S. H., 396, 440, 466
ORourke, N. A., 275
Orr, N. H., 45
Ortolani, G., 512
Osathanondh, V., 676, 677
Ospovat, D., 885
Ostareck-Lederer, A., 497
Oster, G. F., 898, 899
Ostrovsky, D., 344
Otte, A. P., 621, 628
Otting, G., 576
Ottolenghi, S., 440
Oudet, P., 433
Ovsenek, N., 489
Owen, R., 726., 883
Ozawa, E., 703
Pabo, C. O., 405
Packard, D. S., Jr., 344
Paglia, L. M., 868
Palatnik, C. M., 476
Palka, J., 874
Palmer, A. R., 819
Palmiter, R. D., 397, 442, 859
Palumbi, S. R., 902
Panganiban, G., 573, 908, 909
Pankratz, M. J., 563, 564
Panzer, S., 585
Papaconstantinou, J., 283
Papalopulu, N., 625
Parakkal, P. F., 298, 300
Pardanaud, L., 367, 368, 371, 379
Pardue, M. L., 63
Paris, J., 485, 867
Park, W.-J., 357
Paroush, Z., 444
Parr, B. A., 722
Parrington, J., 149
Parslow, T. G., 412
Passera, L., 817
Pasteels, J., 255, 265, 849
Patapoutian, A., 425
Pathak, D., 416
Paton, D., 283
IA1 - 9
IA1 - 10
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ndice de Autores
IA1 - 11
IA1 - 12
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ndice de Assuntos
Termos definidos no texto esto
indexados em negrito
abdA. veja gene abdominal A
abdB. veja gene abdominal B
Abelhas, polifenismo nutricional, 816
abx. veja gene anterobithorax
ac. veja gene achaete
Acanthostega, 726
Accutane, 829
ACE. veja Adenilao, elemento controle
Acetabularia, morfognese, 6-10
Acetilao
na desagregao de nucleossomos, 436-437
na inativao do cromossomo X, 450
Acetilao de histonas, 436-437,450
Acetilcolina, 147,148,279,291
cido -aminobutrico, 279
cido flico, 263
cido hialurnico, 240,245,672,876
cido retinico (RA)
como um teratgenio, 829-830
elementos responsivos ao DNA, 829
genes homeobox e, 628
na anlise do cdigo Hox, 641,643-645
na caudalizao neural, 625-626
na especificao do campo dos membros,
703-704
na especificao do eixo, 645
na polarizao dos membros, 720-721
na regenerao dos membros, 715
Acinos, 684
Acne cstica, 829
Acondroplasia, 109-110,357
Acron, 558
Acrossomo, 122-123,129-130,132,857
ACTH. veja Hormnio adrenocorticotrfico
Actina, 15. veja tambm Microfilamentos
em fuso de gametas, 139-140
em microespiges, 277
em microfilamentos do ovo, 126-127
em oognese merostica, 868
em processo acrossmico, 130
-actinina, 104
Actinomicina D, 740
Activina, 617,619
em assimetria esquerda-direita, 648-649
em ramificao do epitlio, 686
Adenil ciclase, 621
Adenosina 3,5 monofosfato cclico
(cAMP), 22-23
na capacitao de espermatozide, 132
na descondensao da cromatina em
espermatozide, 153
na diferenciao de Dictyostelium, 26-28
na neuralizao, 621
no reincio da meiose em ocitos, 875-876
Adeso. veja Adeso celular
Adolescncia, desenvolvimento mamrio, 765
Aedes, 808
Aequorina, 144
AER. veja Crista ectodrmica apical
Afdeos, partenognese, 810-811
Afinidade. veja Afinidade celular
Afinidade celular
diferencial, 80,82-88,99
matriz extracelular e, 99
micrmeros de ourio-do-mar, 212-214
modelo termodinmico, 84-88
neurnios e, 327-328
Afinidade celular diferencial, 80
experimentos de reagregao, 80,82-84
modelo termodinmico, 84-88
Agregao
em Dictyostelium, 22-23
histiotpica, 84
Agregao histotpica, 84
Agrupamentos angiogenticos, 368
AIDS, 688,788
Alantide, 31,361,845
Albumina, 189,683
lcool desidrogenase-2, 837
lcool, como um teratognio, 828,833-835
Alelo Steel-Dickie (Sld), 846
Algas, em simbiose desenvolvimental, 808-809
Alometria, 891-893
Alternncia de geraes, 888
Aluno, 284
Alvolos, 383
Ambystoma, 703, 743
Amebas sociais, 21
Ameboflagelados, diferenciao, 10-11
Amelia, 830
Ameloblastos, 682
Amendoim, aglutininas, 289
AMH. veja hormnio anti-ducto Mlleriano
Amgdalas, 380,786
Amiloride, 151-152
-aminolevulinato sintase (DALA sintase), 494
mnio, 31,186,243-244, 361
Amnia
em diferenciao de Dictyostelium, 28
excreo de girinos, 735
Amphioxus, 169,888,911-912
Ampola, 132,180
Analogia, 727
Anatomia comparada
evidncia para o cdigo Hox, 641,645-646
no desenvolvimento, 646-647
Andrgenos, sndrome de insensibilidade
a, 763,783
Anel contrtil, 201
Anel de Balbiani 2 (BR2), 52-54
Anel germinativo, 220-221
Anencefalia, 262
Anfbio. veja tambm Metamorfose de
anfbios; tipos especficos
ativao do genoma embrionrio, 489
clulas garrafa em, 226-229
clivagem, 173-174
desenvolvimento autnomo, 603
desenvolvimento condicionado, 602-603
determinao progressiva em, 600-603
especificao de polaridade, 607-609
experimentos de clonagem, 42-45
experimentos de reagregao, 80,82-83
induo embrionria primria em, 603-605
induo especfica de regio, 621-623
migrao da clula germinativa, 843-844
modelagem mesodrmica em, 606-607
mrulas,173-174
neurulao, 255
oognese, 861-864
rearranjo no ovo, 156-157
Anfiregulina, 687
Angioblastos, 367-369
Angiognese, 369-370
Angiopoietina-1, 369
Animais, definio do gene Hox, 647
Aniridia, 827
Anormalidades congnitas
cigarros e, 833,837
defeitos cardacos, 297
malformaes, 827
rupturas, 828
teratgenos e, 828-835
Anosmia, 319
Anticonvulsivos, em anormalidades congnitas,
833
Anticorpos, 822
especificidade axnica e, 316-317
linfcitos B e, 409
monoclonais, 89-91
regio constante, 409
regio varivel, 409
Anticorpos monoclonais, 89-91
especificidade axnica e, 316-317
Antidepressivos tricclicos, em anormalidades
congnitas, 833
IA2 - 1
IA2 - 2
ndice de Assuntos
Antidepressivos, em anormalidades
congnitas, 833
Antgeno, 822
diferenciao, 89-90
histocompatibilidade principal, 248
Antgenos de diferenciao, 89-90
1-antitripsina, 398
Antp. veja gene Antennapedia
Antro, 872
Anuros. veja Sapo
nus, formao nos deuterostomatas, 218
Aorta, 363,369,370-371
Aparelho dendrtico, 272
Apndices cutneos, 299-300
induo especfica de regio, 663-664
Apo-B. veja Apolipoproteina B
Apolipoproteina-B (Apo-B), 493
Apoptose. veja tambm Morte celular
inibio, 677-679
na corda mamria, 763-765
Aprendizado, respostas neuroniais, 823-826
Araschnia, 814
Arbacia, 129-130
Arco digital, 726
Arcos articos, 366-367,370-371
Arcos Farngeos, 380
rea (zona) pelcida, 189,233
rea opaca, 189,233
em gastrulao de ave, 241
Arista, 753
Armadilha intensificadora, 418-419
Aromatase, 799
Aromatase P450, 787
Arquntero, 216
anfbio, 222,226-229
na prognese, 745
ourio-do-mar, 215-218
Arquecito, 29-30
Arquistriato, 823
Artria pulmonar, 370-371
Artria subclvia, 369,370
Artria umbilical, 370
Artrias vitelnicas, 370
Arthroleptella, 169
Artrpodos. veja tambm Drosophila
evoluo, 907-909
Asa
determinao do disco imaginal, 750-753
evoluo em insetos, 907-908
Ascdios, clivagem, 179
Asplachna, 819
Assimetria, no desenvolvimento do corao,
366,648-649
Assimilao gnica, 821-822
steres, 153,154
rearranjo do ovo e, 159
sulco de clivagem e, 202
Astrotactina, 273
Ativador plasminognio, 186,873
trio, desenvolvimento, 363-365
Autofosforilao, 108
Autoradiografia, 56,64
Autoregulao, na transcrio, 409
Aves. veja tambm pinto; pato
centro de Nieuwkoop em, 636
clivagem, 189
colapsina, 322
comportamento especfico do sexo, 785
ndice de Assuntos
IA2 - 3
IA2 - 4
ndice de Assuntos
Dorsal, 577
Clulas vermelhas do sangue
controle da traduo em, 486-497
gene globina e, 438-439,440
linhagem, 375-377
Clulas-tronco, 373-374. veja tambm
Clulas-tronco hematopoiticas
pluripotenciais
embrionrias, 188
epidrmicas, 298,300
restrita linhagem, 375
teratocarcinoma e, 847-848
Centrolo, espermatozide, 153
Centro de inativao do cromossomo X
(XIC), 449
Centro de Nieuwkoop, 226,606-609
fatores de transcrio do organizador e,
619-620
iniciao em vertebrados, 635-636
na formao do organizador, 613
protena Vg1 e, 610-612
Centro organizador anterior, 552-556
Centrossomo, proncleo masculino, 154
Cerebelo, 266-267
organizao, 272-273
Crebro
expanso de volume, 267
formao de regies, 265-269
organizao cerebelar, 272-273
organizao cerebral, 274-276
organizao tissular, 270-272
sensibilidade aos teratgenos, 828
sndrome alcolica fetal e, 834
Crebro, organizao, 274-276
Crvix, 784,870
5-cetoesteride redutase, 2,783-784
CFU-GM, 378
CFU-M,L. veja Unidade formadora de colnias
das clulas mielides e linfides
CFU-S. veja Unidade formadora de colnias
do bao
Chaetopterus, 210
Chironomus, 50-54
Chlamydomonas, 16
reproduo sexual, 13-15,17
Ciclina E, 200
Ciclinas, 159,199,200
na regulao do ciclo celular, 198-201
mRNA de ocito armazenado, 477-478
regulao traducional de, 485
Ciclo celular. veja tambm Diviso celular
bifsica, 196-197
inibio em mioblastos, 350
na clivagem, 196-197
regulao, 198-201
Ciclo cervical, 871
Ciclo da uria, 735
Ciclo de clivagem, regulao, 196-201
Ciclo menstrual, 870-873
Ciclo ovariano, 871
Ciclo uterino, 871
Cicloheximida, 195
Cigarros, em anormalidades congnitas, 833,837
Clios, 173,886
Cinesina, 156,868
Cintura plvica, migrao de neurnios
motores, 324-325
cis-reguladores, 395-396
ndice de Assuntos
talidomida e, 832
Condutividade, membrana, 203
Cone de crescimento, 277
hiptese da especificidade adesiva diferencial,
314-315
repulso especfica, 317-318
Cone de fertilizao, 139-140
Conexina, 98,680
Conjugao, 12
Contato, celular, 80
Contato placentrio, 246
Contracepo, 138,139,864
Contracepo imunolgica, 139
Contralateral, 825
Controle da herana, 35-37
Controle da traduo, 10
em eucariotos, 472-474
em hemcias, 496-497
em larvas e adultos, 490-493
em ocitos, 476-487
longevidade diferencial do mRNA e, 474-476
na produo de hemoglobina, 494-497
no desenvolvimento, 471-472
trocas, 492
Controle ps-traduo, 11
Controle transcricional, 11
Co-opo, no desenvolvimento, 894-896
Copidosomopsis, poliembrionismo, 195-196
Corao. veja tambm desenvolvimento do
corao
contrao, 363
embrionrio, 370,371
fator inibidor da leucemia e, 292
genes reguladores homlogos e, 904
sensibilidade aos teratgenos, 828
Corantes fluorescentes, 144
Corda mamria, 762-765
Cordo medular, 264
Cordo umbilical, formao, 246
Cordas sexuais, 775-776
corticais, 777
medulares, 777
Cordes sinciciais, 212
Cordomesoderma, 221,222,341
de aves, 236,237
na neurulao primria, 255
Crio, 31,182,246,361
em gmeos, 186
produo de hormnio, 247-248
Crnea
diferenciao, 283-284
formao, 672
Corpo de Barr, 446
Corpo frutfero, 21
Corpo polar, 861
Corpora allata, 754,755
Corpus luteum, 874
Crtex neoplio, 274,276
Crtex visual, 824-825
Crtex, ovo, 126
Corticotrficos, 407
Coxa, 748
CPE. veja Elemento de poliadenilao
citoplasmtica
Crnio
evoluo no, 892
formao, 351-352
Craniosinostomose, 658
IA2 - 5
Crassius, 820
Crepidula, determinao do sexo, 800
Crescente amarelo, 156
Crescente cinzento, 156,225-226,602
Crescente germinativo, 235-236,848
Criao, progresso correlacionada e, 896
Crista ectodrmica apical (AER), 704-705
interaes com ZPA, 718-721
mesnquima do broto dos membros e,
708,711,713
no crescimento prximo-distal, 706-708
Crista mamria, 762
Crista neural, 260
cardaca, 285,296-297
ceflica, 284,293-296,641,830
derivados, 284-285
mesenceflica, 291
mutaes no desenvolvimento, 290
na neurulao primria, 256
sacral, 284
sagal, 284
torcica, 291
tronco, 284,285-293
vagal, 291
Crista neural ceflica, 284
potencial de desenvolvimento, 295-296
teratognese de cido retinico e, 830
vias de migrao, 293-295
Crista neural craniana. veja Crista neural ceflica
Crista neural do tronco, 284
diferenciao final, 292-293
matriz extracelular e migrao, 287-290
potncia desenvolvimental, 291-292
trajetrias migratrias, 285-287
Cristalinas, 283
Cristalino. veja tambm Induo do cristalino
diferenciao, 283-284
fibras, 283
formao, 279-280
regenerao em salamandra, 40-41
Cromatdeos, na meiose, 850-852
Cromatina, 431
acessibilidade a trans-reguladores, 432-434
complexos de disrupo de nucleossomos,
436-437
descondensao no espermatozide, 153-154
em genes hometicos, 572
matriz nuclear e, 451-453
metilao, 444
na meiose, 851
nucleossomos em, 431-432
regies controladoras de locos, 437-441
stios hipersensveis DNase I, 434-436
topoisomerases e, 453-454
Cromossomos. veja tambm cromossomo X;
cromossomo Y
em forma de escova, 865
homlogos, 850-852
nas teorias da herana, 36-38
politeno, 50-54
sntese diferencial de RNA e, 51-54
teoria do plasma germinativo, 592
translocaes, 418-419
trissomia, 827
tufos (puffs), 51-54,757-758,759
Cromossomo X
compensao de dosagem, 446-450
descoberta, 37
IA2 - 6
ndice de Assuntos
secundria, 774-775,782-788
Determinao do sexo em aligtor, 799
Determinao progressiva, em anfbios, 600-603
Determinao sexual primria, 774
Determinao sexual secundria, 774-775
Determinantes morfogenticos, 125,156,551
Deuterostomatas, 30
ativao do ovo, 149-151
formao da boca, 218
formao do nus, 218
padres do desenvolvimento, 30-32
Dfd. veja gene Deformed
DHP. veja Ponto de articulao dorsolateral
Diacilglicerol (DAG), 112,147
Diacinesia, 852
Diapausa, 755,812-813
Diapedese, 848
Dicloro difenil-tricloroetano (DDT), 836
Dictyostelium
agregao, 22-23
ciclo vital, 21
diferenciao, 23,26-28
encurtamento diferencial da cauda poli(A)
em, 475-476
molculas de adeso celular, 24-25
Dideoxinucleotdeos, 59-61
Diencfalo, 266,268
Dietilstilbesterol, 836
DIF. veja Fator indutor da diferenciao
Diferenciao, 2
ameboflagelados, 10-11
definida, 47-48
em Dictyostelium, 23,26-28
em Volvocaceanas, 16-17
modelo operon e, 48
na induo do cristalino, 670-672
no dente de mamferos, 682
no desenvolvimento, 79
teoria do plasma germinativo e, 592
Digesto, em interaes clula-clula, 106-107
Dihidrotestosterona, na determinao do sexo,
783-784
-dihidrotestosterona, 783
5
Dinena, 123-124
Dioxina, 836
Diploteno, 852
Direcionamento da glia, 273
Direcionamento de contato, 313-314
Disco dos membros, 703
Disco imaginal da perna, 748,750-753
Discos imaginais, 746-753
Disjuntores, no controle da traduo, 492
Displasia campomlica, 780
Displasia tanatofrica, 357
Disrupo, 828
Dissociao, no desenvolvimento, 891-893
Divergncia, no desenvolvimento, 893-894
Diversidade, emergncia dos filos e, 888
Divertculo heptico, 382
Diviso Celular. veja tambm Ciclo celular;
clivagem; mitose
clulas do tubo neural, 270
em procariotos, 5
longevidade do mRNA e, 475
MPF e, 197
DMZ. veja Zona marginal dorsal
DNA. veja tambm cDNA; sntese de DNA
acessibilidade a trans-reguladores, 432-434
ndice de Assuntos
clonagem, 55-57
determinao da pegada (footprinting) da
DNAse, 555
elementos de resposta ao cido retinico, 829
elementos responsivos a hormnio, 420-423
em eucariotos, 5-6
em procariotos, 5-6
ensaio de transferncia de mobilidade, 414
enzimas reparadoras na meiose, 852
hibridizao, 54-55;58-59
matriz nuclear e, 451-454
metilao, 442-446
polimerase de reao em cadeia e, 66,68-69
recombinante, 56
regies controladoras de locos, 437-441
separao de fitas, 453-454
seqenciamento, 59-61
seqncias limitantes, 454
tcnicas de insero, 69-70
DNA complementar. veja cDNA
DNA ligase, 56
DNA polimerase. 69
DNA recombinante, 56
DNA, protenas dobradoras de DNA, 423
DNAse I, 433-434
DNAse I, stios hipersensveis, 434-436,451
metilao, 444
regies de controle de locos e, 440,441
Dobradia cordoneural, 265
Dobras corpreas, 359
Dobras neurais, 257,258
Dobras transversais anteriores, 545
Dobras transversais posterior, 545
Doena de Alzheimer, 334
Doena de Hirschprung, 290
Doena de Minamata, 828
Doena de Parkinson, 332,334
Doenas neurodegenerativas, 333-334
Domnio, 454
Domnio carboxi-terminal (CTD), 400
Domnio de ligao de hormnio, 421
Domnio do trans-ativador, 404-421
Domnio ligante de DNA, 404,421
Domnio POU, 406-407
Dopamina, 279
Dorsal, definido, 341
dpp, veja gene decapentaplegic
Drosophila. veja tambm Metamorfose de insetos
ativao do genoma embrionrio, 489
clulas germinativas em, 849-850,855
ciclo de clivagem, 196
compensao de dosagem em, 446
complexos de ruptura nucleossmica, 436
compromisso do destino celular em, 559-561
determinao do sexo, 468-471,788-795
determinao dos eixos, 480-481,585
discos imaginais, 747-753
ecdise em, 756-757
encurtamento diferencial da cauda poli(A)
em, 476
espaamento do neuroblasto, 692-693
especificao da glndula salivar, 585
especificao das clulas neurais, 585
especificao do neurnio motor, 310-312
espermatognese, 858-859
famlia da protena Hedgehog em, 659
fatores de transcrio, 400,401
formao de fotoreceptores retinianos, 688-690
IA2 - 7
IA2 - 8
ndice de Assuntos
EP-caderina, 94,174
Epndima, 271
Epiblasto, 189,220-221,233
de aves, 233-234,239-240
de mamfero, 243-245
Epibolia, 209
controle citoplasmtico, 210
microtbulos e, 220
na gastrulao de anfbio, 222-224,232
na transio da blstula intermediria, 218-220
no ectoderma de ave, 241-242
Epiderme
apndices, 299-300
desenvolvimento, 297-299
ferimento, 714
na neurulao primria, 256,257-258
nos discos imaginais, 748-750
Epiderme do ferimento, 714
Epiddimo, 125
Epfises, 357-358
Epimiocrdio, 363
Epinefrina, 279
Epitlio olfatrio, 319
Epitlio pancretico, 383
Equinoderma, clivagem, 169
Equivalncia genmica, evidncia para a, 40-47
Eritroblasto, 377
Eritride. veja tambm Clula sangnea
vermelha, 375,377
gene globina e, 438-439,440
unidade formadora de ruptura, 375
Eritropoietina, 375
Esc. veja gene extra sex combs
Esclerose lateral amotrfica, 333
Esclertomo, 284,324-325,345
gerao, 346-347
Escroto, 783
Escudo embrionrio, 220-221
Especificao, 559
condicional, 591
dependente, 591
homloga, 753
Especificao axial. veja eixo nteroposterior; eixo Dorso-ventral
Especificao condicional, 591
Especificao dependente, 591
Especificao homloga, 753
Espermateliose, 857-858
Espermtides, 856,859
Espermatcitos, 856,859
Espermatcitos primrios, 865
Espermatcitos secundrios, 856
Espermatognese, 855-859
gene desert hedgehog e, 659
Espermatognia, 855-856
Espermatognia intermediria, 856
Espermatognia tipo A1, 855
Espermatognia tipo A2, 855
Espermatognia tipo B, 856
Espermatozide. veja tambm Espermatognese
ativao do vulo, 147-149
ativao, 129-130
atrao, 128-129
capacitao, 125,131-132
centrolo, 153
conceitos iniciais do, 121-122
condensao no, 859
de mamfero, 131-132
ndice de Assuntos
IA2 - 9
IA2 - 10
ndice de Assuntos
diferenciao, 292
GAP. veja Protena ativadora de GTP-ase
Gstrula, desenvolvimento evolucionrio, 886
Gastrulao, 3,209-210
crescente cinzento em, 602
desenvolvimento evolucionrio, 886
Drosophila, 543-545
em anfbios, 221-232
em aves, 233-242
em peixes, 218,221
em mamferos, 242-248
gradiente de maturidade, 237
ourio-do-mar, 210-218
peixes, 218-221
GATA-1, 440
Gato, padro neuronial do sistema visual, 824-826
Gd. veja Gene gastrulation defective
GDF. veja Fatores de crescimento e
diferenciao
GDNF. veja Fator neurotrfico derivado da glia
Gelatinase, 106
Gelia cardaca, 363
Gelia do ovo, 128
na reao acrossmica, 129-130
Gema, 31,125
absoro de protena, 870
cerco, 237-238
distribuio, 168-169
importncia evolucionria, 169
intensificador de protena, 404
prognese e, 745
Gmeos
fraternos, 186
idnticos, 186
unidos, 186
Gmeos conjugados, 186
Gmeos dizigticos, 186
Gmeos monozigticos, 186
Gmeos siameses, 186
Gene(s).veja tambm Genes autossmicos;
Expresso gnica; Transcrio
acesso a trans-reguladores, 432-434
autossmicos, 447
dorsalizao, 578
em efeitos teratognicos, 837
emenda alternativa do RNA e, 468-471
especficos para o fgado, 417-418
estrutura, 74,392
xons, 392-394
experimentos de eliminao, 70-73
identificao com anticorpos monoclonais,
90-91
impresso, 444-446
intensificadores, 402-404
interaes com sntese de protenas, 426
metilao de DNA e, 442-446
modelo operon, 47-48
na determinao do sexo, 777-781
promotores, 394-401
regulao, 6,391
seqncias de limite, 454
sntese diferencial de RNA e, 49-54
sntese em linfcitos B, 410-415
tcnicas de insero, 69-70
transcrio, 392-394,431-432
ventralizao, 578
Gene
abdominal A (abdA), 569,572,575
ndice de Assuntos
fog, 854
fringe, 753
fused, 565
fushi tarazu (ftz), 560,565,575
gastrulation defective (gd), 581
giant (gt), 561-563
Globina, 442-443
-globin, 863
glp-1, 478,853-854
goosecoid, 611,614,619,637
grauzone, 480
gurken, 554,580,869
H19, 445-446
hairy, 564
hedgehog (hh), 566-568,660,718
her, 796
hid, 761
HNF3, 637
Hoxa-2, 642
Hoxa-3, 70-73,295
HPRT, 448-450
hsp, 436
hsp70, 454
huckbein, 561
hunchback (hb), 405-575
Igf-2, 444
Igf-2r, 444,445-446
indian hedgehog (ihh), 659
Interferon (INF), 423
intersex (ix), 790
intra-abdominal (iab), 575
inversion of embryonic turning (inv), 648
knirps (kni), 556,561-563
krox-20, 627
krppel (Kr), 73,560,561-563
L71, 761
labial (lab), 569,637,638,647
lefty, 648
lethal of scute (lsc), 585
Lim-1, 268,637
Lmx1, 722
15-lox, 497
Luciferinase, 74
mog, 854
MRF4, 349
msx-1, 397-398,264,714,715
MT-1, 397-398
myf5, 349
MyoD, 349-350,416,442
myogenin, 349
nanos, 478,556
Netrin, 320
nodal, 636-637,648-649
noggin, 611,614,616,620
Notch, 692-693
Notch-1, 344
nudel (nd), 580-581
openbrain, 263
optomotorblind, 752
orthodenticle(otd), 555-556,620,647
oskar, 480,556,869
Otx-2, 268,647
Paraxis, 344
patched, 660-661
Pax2, 680
Pax3, 263,264
Pax6, 282,902-903
PAX6, 827,903
IA2 - 11
pdx-1, 383
pipe (pip), 580-581
Pit-1, 407-409
posterobithorax (pbx), 574
proboscipedia (pb), 569,638
prolactin, 407-409
Proliferin, 423-424
radical fringe, 706
Ras, 109
Rb97D, 858
reaper, 761
rGH, 397-398
rhomboid, 583-585
roughex, 858
runt, 564,791
salm, 572-573
screw, 616
scute (sc), 585
serrate, 753
Sex comb reduced (Scr), 569,585
Sex-determining region of the Y (SRY), 778-780
Sex-letal (Sxl), 469
Sf1, 780
shaker, 467
Siamois, 610-611
sisterless, 791
situs inversus viscerum (iv), 648
Small eyes, 903
snail, 578,583-585
snake (snk), 581
sonic hedgehog (shh), 263,648-649,659,718
SOX9, 780
spe-11, 859
Spec1, 465
staufen, 480,556
string, 199
swallow, 480,553
tailless, 561,563,575
teashirt, 577
TGF -, 299
tinman, 903-904
Toll, 581
torpedo, 580
torso, 557
torsolike, 558
transformer (tra), 468-469,789-790
transformer-1 (tra-1), 468-469
transformer-2 (tra-2), 469,490-491,789-790
tudor, 556
twist, 351,583-585
twisted, 578
Ultrabithorax (Ubx), 569,571,572,573,616
ultraspiracle (usp), 760
unc, 320
valois, 556
vasa, 556
vestigal, 751,753
Vg1, 478,863
Vitellogenin, 444
v-myc, 418
windbeutel (wind), 580-581
wingless (wg), 566,660,753
Wnt, 268,269,677,680,724,781-782
Wnt7a, 721-722,724
WT-1, 420,677
wuwen, 850
Xbra, 620
Xcat2, 863
IA2 - 12
ndice de Assuntos
ndice de Assuntos
isoladores, 454
Gestao, humana, 276
GGF. veja Fator de crescimento da glia
GHF1. veja Pit-1
Ginandromorfos, 789
Gines (rainha em potencial), 816-817
Girino. veja tambm Metamorfose de anfbios
campo dos membros, 703-704
excreo de amnia, 735
Glndula mamria
adolescente, 765
embrionria, 762-765
na gravidez e lactao, 765-768
Glndula paratireide, 380
Glndula pituitria, 380,786
gene Pit-1 e, 407
hormnio luteinizante e, 787
no ciclo menstrual, 871,872
Glndula salivar
especificao em Drosophila, 585
protena BR-C e, 758-759
Glndula tireide, 380
Glndulas sebceas, 300
Glia de Bergmann, 273
Glicoprotenas
extracelulares, 102-104
integrinas, 104-105
proteoglicanos, 90,100-102
Glicosaminoglicano (GAG), 100,345,685
Glicosiltransferases, 105
Globina, controle traducional da, 494-497
-globina, longevidade de mRNA, 475
Gloqudias, 178-179
Glutationa, 151,154
GM-CSF, 377
GnRH. veja Hormnio liberador de
gonadotrofina
Goldberg-Hogness box (seqncia TATA), 396
Gnadas
desenvolvimento, 319,775-777
em heterocronia, 743
estgio indiferente, 775
fatores de transcrio dedo de zinco e, 420
hermafroditas, 853-855
Gonadotrofinas
corinica, 247
na reiniciao da meiose ooctica, 875-876
no ciclo menstrual, 870,872-874
Gonadotrofos, 407
Gonadotropina corinica (hCG), 827
Gondios, 18
Gonium, 16
Gonocoristismo, 797
Gradientes adesivos, migrao de axnios,
314-315
Grnulos corticais, 127-128
exocitose, 143,144,146
na vitelognese, 862-863
Grnulos secretores, na formao da crnea, 672
Gravidez
desenvolvimento mamrio na, 765-768
Gravidez ectpica, 186
Gravidez tubria, 186
Grex, 21,27-28
Grupo box de alta mobilidade (HMG), 779
Grupo de equivalncia, 186,690
Grupo terminal do gene, 557-559
Grupos parlogos, 638
IA2 - 13
Hiperestriato, 823
Hipoblasto, 189,220-221,690
de aves, 233-234,238
de mamferos, 243
primrio, 233
secundrio, 233
Hipometilao, 442
Hipotlamo, 268,319,786
comportamento sexual e, 787
no ciclo menstrual, 872
Hiptese da adeso diferencial, 86
Hiptese da afinidade diferencial de
substrato, 99
Hiptese da cauda poli(A), 483-486
Hiptese da eficincia da traduo, 486
Hiptese da especificidade da adeso
diferencial, 314-315
Hiptese da mensagem maternal mascarada,
482-483
Hiptese da quimioafinidade, 327-328
Hiptese da seleo clonal, 822
Hiptese das vias marcadas, 315-317
Hiptese do cdigo Hox, 637-647
Hiptese do sinal gradativo na induo da
vulva, 691
Hipoxantina fosforibosiltransferase (HPRT),
89,448,450
Histoblastos, 748
Histocompatibilidade, antgenos principais, 248
Histonas, 5,124,399,431
acetilao, 436-437
na estrutura de nucleossomos, 432
HLH, fator de transcrio hlice-lao-hlice, 791
HNK-1, 239-240
hnRNA, 462
hnRNA-A1, 466
Holocomplexo, 441
Hom-C. veja Complexo hometico
Homeobox, 576
Homeodomnio, 576
Homeose, induzida por cido retinico, 641
Homologia
de membros e nadadeiras, 726-727
em genes hometicos, 637-638
em genes reguladores, 902-909
entre genes Hox e Hom-C, 905
nas vias de desenvolvimento, 727,909-911
Homlogos, 616
Homossexualidade, 787-788
Hormnio, 658,733. veja tambm Tipos
especficos
como fator de transcrio, 420-423
corinico, 247-248
da placenta, 247-248
em epfises, 357-358
estrgeno ambiental, 836-837
na determinao secundria do sexo, 775,
782-788
na estabilizao de mRNA, 476
na formao de ossos, 355
na metamorfose de anfbios, 735-743
na metamorfose de insetos, 749,754-761
na ovulao, 870
no desenvolvimento da glndula mamria,
762-768
Hormnio adrenocortocotrfico (ACTH), 407
Hormnio anti-duto Mlleriano (AMH),
775,784
IA2 - 14
ndice de Assuntos
aromatase e, 799
ativao, 780
clulas de Sertoli e, 777
Hormnio da diapausa, 813
Hormnio da ecloso, 756
Hormnio desencadeador de ecdise, 756
Hormnio ecdisteroidognico ovariano
(OEH), 808
Hormnio folculo estimulante (FSH)
no ciclo menstrual, 870,872-874
na maturao de folculos, 875
Hormnio Juvenil, 754,755-756
na absoro da protena do vitelo, 870
na diapausa, 813
na partenognese, 811
no polifenismo nutricional, 816-817
Hormnio liberador de gonadotrofina (GnRH),
319
Hormnio luteinizante (LH), 319,787
na maturao folicular, 875
no ciclo menstrual, 870,872-874
Hormnio neurosecretrio do
desenvolvimento do ovo (EDNH), 808
Hormnio protracicotrfico (PTTH),
754,755-756,813
Hormnios esterides
como fatores de transcrio, 420-423
folculos e, 777
Hormnios glicocorticides, 420-424
Hormnios peptdicos, 754
Hormnios sexuais
em epfises, 358
sistema nervoso central e, 785-788
HPFH. veja Persistncia hereditria da
hemoglobina fetal
HPRT. veja Hipoxantina fosforibosil-transferase
HRI. veja Protena inibidora responsiva ao heme
Humano
anormalidades congnitas, 297,827-837
ciclo menstrual, 870-873
defeitos do tubo neural, 262-263
deficincia da protena TBX5, 722
desenvolvimento do cabelo, 300
determinao do sexo, 778-780,781,782-784
epfise, 357-358
espermatozide, 131,138,858
fatores de transcrio, 400-401
fertilizao, 132
formao do crebro, 265-269
fotoreceptores em neonatos, 282
gene Hoxd13, mutao de perda-de-funo,
710-711
gestao, 276
impresso gnica, 444-445
inteligncia, 276
morte celular programada, 783
mutaes das clulas da crista neural, 290
mutaes do gene patched, 660-661
mutaes EMX-2, 647
oognese, 860,870-876
placenta, 246
quimeras, 187
regulao do gene da globina, 440,441
sindactilia, 724-725
Hyalophora, 755,813
Hyla, 819-820
-B, 414-415,582
I
iab. veja gene intra-abdominal
Ichthyostega, 726
Id. veja Inibidor da diferenciao
Idade celular, na determinao de neurnios, 309
IFN. veja gene Interferon
IGF-II. Veja Fator II de crescimento
semelhante insulina
ihh. veja gene indian hedgehog
IL-3. veja Interleucina 3
IL-6. veja Interleucina 6
Ilhas de polinvaginao, 233
Ilhas de sangue, 367-369
Ilhota-1, 309
Imago, 748
IMZ. veja Zona marginal involutiva
INAH. veja Ncleo intersticial do hipotlamo
anterior
Inativao do cromossomo X, 446-448
mecanismo, 449-450
Induo, 605. veja tambm Induo
embrionria primria; Induo
especfica de regio
broto dos membros, 704
cascatas, 629,667
clula-para-clula, 687-693
cristalino, 667-672
definida, 48
especificidade gentica na, 666-667
mesodrmico, 606,609-612,614
modelo seqencial, 691
na ramificao epitelial, 683-687
negativa, 599-600
neural, 257,621-624,626-627,628
no desenvolvimento evolutivo, 886-887
recproca, 113-114,675-676
secundria, 628-629,655
Induo clula-a-clula. veja Induo
Induo do cristalino
base celular, 668-672
formao da crnea, 672
modelo do clice optico, 667-668
Induo embrionria primria, 603-605
atividade organizadora na, 613-621
base molecular, 609-612
centro de Nieuwkoop e, 606-609
especificidade regional, 621-628
Induo especfica de regio
caudalizao neural, 624-626
determinao de diferenas regionais, 621-623
em interaes epitlio-mesnquima, 663-666
modelo de duplo gradiente, 623-624
Induo negativa, 599-600
Induo neural, 257
especificidade regional, 621-623
genes homeobox e, 628
modelo do gradiente duplo, 623-624
sinais planares e, 626-627
Induo recproca, 113-114, 675-676
Induo secundria, 628-629,655. veja
tambm Interao proximal
Inervao
neurnio motor e, 313
sobrevida diferencial na, 331-334
Informosomos, 482
Ingresso, 209
na formao do hipoblasto, 220
no mesnquima primrio, 210
nos micrmeros do ourio-do-mar, 212-215
Inibio lateral, 311,691
ndice de Assuntos
Ligao homoflica, 94
Ligao homoflica, 94
Ligante, em co-evoluo, 901-902
Limnaea, 177-178
Linfcito. veja tambm Linfcitos B
gerao, 374,375
via de diferenciao, 582
Linfcito B
criao de genes de cadeia leve, 410-411
criao de genes de cadeia pesada, 411-412
fatores de transcrio, 412-415
hiptese de seleo clonal, 822
protenas-anticorpos e, 409
sntese de anticorpos monoclonais, 89-90
troca de classe, 411
Linfcito T, 410-411
Linfoma de Burkitt, 419
Linha primitiva, 234
acmulo celular na, 239-240
em mamferos, 244-245
formao, 234-235
migrao celular na, 235-238
organizador mamfero e, 636-637
Lipovitelina, 862
15-lipoxigenase (15-LOX), 497
Lisossomos, na metamorfose de anfbio, 736
LMC. veja Coluna motora lateral
Lbulos, 684,685
Lordose, 786,787
15-LOX. veja 15-lipoxigenase
Lula, simbiose de desenvolvimento na, 808,
809-810
Luteotropina, 874
Lymantia, 813
Lytechinus, 130
Macaco. veja Macaco Rhesus
Macaco Rhesus, padronizao neuronial do
sistema visual, 824-825
Macrocentrus, 196
Macrmero, 170
Malformaes, 827-828
Mamfero(s)
gametas, 131-132
ativao do genoma embrionrio, 490
circulao embrionria, 370-371
clivagem, 180-188
clonagem, 45-46
colapsina em, 322
compactao em, 181-183
desenvolvimento da crista neural, 295
desenvolvimento da glndula mamria,
762-768
desenvolvimento do ouvido mdio, 894-896
determinao sexual, 774-788
eixo dorso-ventral, 647-650
eixo esquerdo-direito, 647-650
especificao do eixo ntero-posterior,
637-647
fechamento do tubo neural, 260,262
fertilizao, 135-139,153-154,180
gastrulao, 242-248
hemoglobina, 372
hiptese da cauda poli(A), 484
homologia do gene hometico, 637-638
inativao do cromossomo X, 446-450
induo embrionria primria em, 605
mapa do destino, 244
migrao da clula germinativa, 844-846
IA2 - 15
IA2 - 16
ndice de Assuntos
migrao, 285-286
Meltrinas, 348
Membrana. veja tambm Potencial de membrana
condutncia, 204
polarizao, 184
sntese, 203-204
Membrana basal, 99
Membrana celular. Veja Membrana plasmtica
Membrana cloacal, 382
Membrana corioalantica, 361
Membrana plasmtica, 88,126. veja
tambm Potencial da membrana
interaes recprocas, 113-114
na fuso de gametas, 139-140
Membranas extraembrionrias, formao em
mamferos, 245-248
Membro anterior, distinto do membro
posterior, 722-723
Membro posterior, distinto do membro
anterior, 722-723
Membro tetrpode
diferena membro anterior/membro
posterior, 722-723
eixo prximo-distal, 706-716
eixo ntero-posterior, 716-721
eixo dorso-ventral, 721-722
evoluo de, 726-727
formao do broto do membro, 702-706
formao dos dedos, 724-727
padro de formao em, 701-702
regenerao, 714-716
talidomida e, 830-833
Membros. veja tambm Broto dos membros;
Membro tetrpode
condrognese em, 722-723
evoluo, 904-905,908-909
genes reguladores homlogos e, 904-905
homologia s nadadeiras, 726-727
regenerao, 87-88,714-716
restrio morfogentica na formao, 898-899
talidomida e, 830-833
Memria, 826
Menidia, 818,821
Mensageiros secundrios, 112,147
Mercrio, como um teratgeno, 828
Merognias, 597
Mesencfalo, 266
determinao, 268-269
Mesnquima. veja tambm Mesnquima
metanefrognico
cabea, 341
crista ectodrmica apical e, 708,711,713
cultura de, 681
facial, 295
induo da ramificao epitelial, 683-687
ingresso na gastrulao em ourio-do-mar,
210-215
mamrio, 763-765
Mesnquima metanefrognico, 674
apoptose e, 677-679
converso em epitlio, 679-680
formao, 676-677
na induo recproca, 675-676
Mesnquima primrio, 210-215
induo negativa e, 600
Mesnquima secundrio, elongao do
arquntero, 217-218
Mesoderma, 4. veja tambm Mesoderma
ndice de Assuntos
IA2 - 17
precursores, 345
Msculos vertebrais, precursores, 345-346
Mutao eudiplopodia, 713
Mutao polydactylous, 711,713
Mutante limbless, 705,713,724
MyoD. veja Protena 1 determinante do
mioblasto
Myrmica, 817
N-acetilglucosamina
na zona pelcida, 137
nos grnulos corticais, 144
NAD+ quinase, 150
Nadadeiras, homologia aos membros, 726-727
NADPH, 150-151
Naegleria, 10-11
centro organizador posterior e, 556-557
na determinao do eixo ntero-posterior,
480-481,548-550
Nanismo, 658
N-caderina, 94,287-288
em somitmeros, 344
na condrognese, 353
no fechamento do tubo neural, 263
N-CAM, 95
migrao de axnios retinianos, 325-326
na condrognese, 353
na emenda alternativa do RNA, 467
nd. veja Gene nudel
Nefro, 674,675-676,680-681
Nematide. veja tambm Caenorhabditis
hermafroditismo, 795-797
migrao axnica, 320
mRNA de ocitos e determinao de eixo, 481
RNA antisenso em, 491-492
Nemoria, 814,819
Neotenia, 743
Nervo ptico, 280
Netrin-1, 320,321
Netrin-2, 320
Neuralizao. veja tambm Induo neural
organizador na, 621
protena Noggin e, 616-617
Neuroblastos, 272,310-312,585
Neuroepitlio, 265
germinativo, 270-271
Neurognese, 307
Neurmeros, 647
Neurnio. veja tambm Axnio
apoptose e, 331-334
axnios e, 276-279
dendritos e, 276
especificidade, 312-313
fatores neurotrficos, 331-334
formao, 270-272
hiptese da quimoafinidade, 327-328
identidade laminar, 274-275
interao com a glia, 273
na metamorfose de anfbios, 739-740
na metamorfose de insetos, 753-754
na organizao do cerebelo, 272-273
na organizao do crebro, 274-276
na regenerao do membro, 715
na trajetria visual, 824-826
precursores, 276
respostas ao aprendizado, 823-826
retiniano, 280-282
talidomida e, 831
tipos, 276-279,280-281
IA2 - 18
ndice de Assuntos
Organismos transgnicos
experimentos com, 70-73
tcnicas, 69-70
Organismos ureotlicos, 735
Organizador, 605
centro de Nieuwkoop e, 613
em mamferos, 636-637
fatores de transcrio e, 619-620
induo especfica de regio e, 621-623
mapa de destino do, 613
na neuralizao, 621
propriedades, 613
protenas difusveis e, 613-619
sinais planares do, 626-627
Organizador Spemann-Mangold, 606-609
Organognese, 4-5,255
rim, 676-681
rgo primordial, modelo cartesiano
coordenado, 585
rgo vomeronasal, 319
rgos. veja rgos parenquimatosos
rgos endcrinos, crion, 247-248
rgos parenquimatosos
desenvolvimento do rim, 673-681
mecanismos de ramificao nos, 683-687
Oscilina, 149
Ossificao endocondral, 351,352-356
Ossificao intramembranosa, 351-352
Ossificao, 351-356
Osso. veja tambm Esqueleto
crescimento de vasos sangneos, 370
desenvolvimento, 351-358
medula, 377
Osso alisfenide, 902
Osso bigorna, 895,906
Osso hiomandibular, 895
Osso martelo, 895
Ossos longos, formao, 353-356
Osteoblasto, 352,355
Ostecito, 352
Osteoclasto, 356
desenvolvimento, 377-378
Osteognese, 351-358
Osteonectina, 682
Osteoporose, na ps-menopausa, 377-378
otd. veja Gene orthodenticle
Ourio-do-mar
ativao do ovo, 149-152
ativo do genoma embrionrio, 489
atrao do espermatozide, 129
blstula, 172-173
clivagem, 170-173
coevoluo em, 901-902
descoberta da fertilizao em, 122
desenvolvimento em mosaico, 597
destino celular, 598
experimentos de isolamento em, 594-596
experimentos de reagregao em, 83-84
formao da boca, 218
formao da espcula, 214-215
formao do nus, 218
fuso de gametas, 139-140,152-154
gastrulao, 210-218
induo negativa, 600
mRNA seqestrado do ocito, 487
mRNAs especficos do endoderma, 61-63
ondas de clcio, 144-145
plasticidade fenotpica, 821
ndice de Assuntos
IA2 - 19
IA2 - 20
ndice de Assuntos
desenvolvimento, 293-296
sndrome alcolica fetal e, 834
Processo frontonasal, 295
Sndrome alcolica fetal e, 834
Proeritroblasto, 375
Prognese, 743-745
Progesterona, 874
na meiose do ocito, 864
placentria, 247
Progresso correlacionada, 896-897
Projeo retinocortical, 824
Projeo retinotectal, 327
Projees ipsilaterais, 740
Prolactina
na metamorfose de anfbios, 736,742
na sntese da casena, 476,766-767
Proliferina (PLF), 370
Promotores, 74,394-395
em genes pair-rule, 564
estrutura, 396
falta de elementos TATA, 401
funo, 397-398
metilao, 442-443
ruptura de nucleossomos nos, 433
sinergismo e, 408-409
uso em produtos farmacuticos, 398
Proncleo, 152-154
mRNA seqestrado e, 487
no equivalncia em mamferos, 154-155
Proncleo feminno, 152-154
Proncleo masculino, 152-154
Pr-pernas, 907,908-909
Prosencfalo, 266
determinao, 268-269
sndrome alcolica fetal e, 834
Prosmeros, 268
Prostaglandina, no ciclo menstrual, 873
Prstata, 783
Protaminas, 154
Protease, acrosina, 138
Protease, na reao do grnulo cortical, 143
Protena. veja tambm Tipos especficos
como fatores de crescimento, 102
gradientes, 551
junes de fendas e, 97-99
na adeso espermatozide-zona, 136-138
ovo, 125
sntese, 151-152,426,472-476
Protena
Antennapedia, homeodomnio, 576
Apterous, 752-753
Armadillo, 566
associada mitose (MAP), 109
ativadora de GTP-ase (GAP), 108-109
BF2, 681
Bicoid, 401,405,546
Brachyury, 637
Broad-Complex, 758-759
Bruno, 869
cactus, 581-582
cap ligante (eIF4E), 472
Caudal, 481,546
Cerberus, 618-619
Chordin, 308,614,616,617,619,624
c-mos, 864
c-Myc, 418-419
1 comutadora dorsal (DSP1), 584
CPEB, 485
c-Ret, 677
1 da matriz nuclear (NMP-1), 452,454
da superfamlia TGF-, 610,661-662
Daughterless, 791
Decapentaplegic, 310,585,616,662
1 determinante do mioblasto (MyoD),
346,349-351
D-Frizzled-2, 566
Disheveled, 566
Distal-less, na determinao do disco
imaginal, 750
Dorsal, 577,585
Dorsalin, 661
Doublesex, 404
E12, 415
E47, 415
E74A, 761
E74B, 760-761
Engrailed, 330-331,566
Even-skipped, 564
Extradenticle, 577
F, 140
FEM, 796
FEM-3, 491
Flectina, 648,649
FRGY2, 483
FTZ-F1, 761
Fushi tarazu, 565,566,572,576
G, 108
G heteromrica, 112
G trimrica, 147
Gastrulation-defective, 581
Giant, 564
GLP-1, 481
Goosecoid, 614,619-620,636,637
Gurken, 554,869
HA, 140
Hedgehog, 114,556-568,659
HER-1, 796
Hialina, 128,143
HNF3, 636,637
Hoxb-8, 721
Hunchback, 546,572
inibidora responsiva ao heme (HIR), 495
intensificadora de linfcito (LEF-1), 423
Krox-20, 420
Krppel, 420,572
L1, 834-835
ligante da seqncia TATA (TBP), 399-401
ligante de galactose, 136-137
ligante de metil-CpG, 444
ligante do intensificador CCAAT
(C/EBP), 417-418
ligante responsiva ao ferro (IRE-BP), 492
Lim-1, 636,637
Mad, 418
Mei-S332, 852
Mix 1, 614
morfogentica do osso (BMP), 264, 293,
352,662
morfogentica 2 do osso (BMP2), 682
morfogentica 3 do osso (BMP3), 682
morfogentica 4 do osso (BMP4),
264,308,616,662
morfogentica 7 do osso (BMP7), 264,617
morfogentica 8B do Osso (BMP8B), 858
Myf5, 346,349
Nanos, 546
ndice de Assuntos
Nodal, 662
Noggin, 308,614,616-617,619,624
Notch, 311,416
Nudel, 581
Odd-skipped, 566
Oskar, 480,869
OZ1, 488-489
Pax2, 679-680
PBX1, 577
Pelle, 581-582
Pipe, 581
Pumilio, 550-556
quinase C (PKC), 147
quinase dependente de cAMP (PKA),
490,869
Rad51, 852
Radical fringe, 705-706
Raf, 109
relacionada Proliferina (PRP), 370
repressora Mad-Max, 418
RGD, 627
Sex comb reduced, 577
Sexual indutiva, em Volvox, 20-21
Short-gastrulation (Sog), 310,616
Slug, 287
Smaug, 480
Snail, 583-584,585
Sonic hedgehog, 264,268,346,618,659,702
Sptzle, 581
SRY, 780-782
Syndecan, 679
Toll, 581-582
Torso, 557
Torsolike, 558
TRA-1, 797
TRA-2, 490-491,793,796
Twist, 350,583-584
Ultrabithorax, 573,576,577
UNC-6, 320-321
Vg1, 610-612,619,636
Vox, 614
Windbeutel, 581
Wingless (Wg), 114,566,568
Wnt7a, 702,722
WT-1, 420,424,676
Xnot2, 614
XOL-1, 796
Xom, 614
Xvent-1, 614
Zeste, 566
Protena Bicoid, 401,405,546
centro organizador do anterior e, 552-556
determinao do eixo, 480-481,548-550
genes terminais e, 558
homeodomnio, 576
na ativao do gene gap, 561
na regulao do gene pair-rule, 564
Protena Caudal, 481,546
centro de organizao posterior e, 550,
556-557
homeodomnio, 576
na ativao do gene gap, 562
Protena Decapentaplegic, 310,585,616,662
na determinao dos discos imaginais, 750,
751,752-753
na formao de fotoreceptores, 688
Protena Dorsal, 577,585
gradiente, 581-585
IA2 - 21
IA2 - 22
ndice de Assuntos
ndice de Assuntos
Rombmeros, 267,293,638-640
Rotferos, polifenismo induzido por
predadores, 819
rRNA, em ocitos de anfbios, 866
RTK. veja Receptor tirosina quinase
Rubola, 835
RX. veja Receptor retinide
Saco amnitico, 186
Saco vitelnico, 31,361
quimeras, 378-379
Sacos areos, 383
Salamandra
ativao do genoma embrionrio, 489
clulas garrafa, 226-229
clivagem, 169,173
determinao progressiva em, 600-603
diferenciao da crista neural, 293
disco dos membros, 703
induo especfica de regio, 621-623
inervao dos neurnios motores, 313
mapa de destino, 222
migrao da crista neural, 288
migrao das clulas germinativas, 844
mutante o, 489
neotenia na, 743
prognese em, 743-744
quimeras, 666
regenerao do olho na, 40-41
regenerao dos membros, 87-88,714-716
Salamandra aqutica (Newt)
cromossomos em forma de escova, 865
determinao progressiva em, 600-603
induo especfica de regio, 621
inervao do neurnio motor, 313
Salamandra axolotle. veja Salamandra
Sangue, leis de movimento, 367
Sanguessuga, sistema nervoso, 316-317
Sapo
migrao da clula germinativa no , 843-844
plasticidade fenotpica, 820
Sapo. veja tambm Metamorfose anfbia; Xenopus
anormalidades congnitas relacionadas
poluio, 836
blastocele, 174
clivagem,169,173
crescente cinzento, 156-157
estudos de defeitos em, 593
migrao de clulas germinativas em, 843-844
neurulao primria em, 256-257
neurulao secundria em, 264-265
oognese, 861-864
polifenismo induzido por predadores, 819-820
potncia nuclear, 42-43
quimeras, 666
seleo de alvos de axnios retinianos em,
326-328
Sapo leopardo (Rana pipiens), potncia
nuclear, 42-43
Sazonalidade, na regulao desenvolvimental,
810-812
sc. veja gene scute
Scaphiopus, 819
Scleraxis, 352
Scr. veja gene Sex comb reduced
Scr. veja Protena Sex comb reduced
Sebo, 300
Segmentos, larvas, 559-561
Seio venoso, 363
IA2 - 23
IA2 - 24
ndice de Assuntos
Totipotncia
clonagem de Xenopus, 43-45
nas clulas germinativas primordiais, 846
Toupeiras com bolso, evoluo e, 892-893
Toxoplasma, 835
Toxopneustes, 122
TR. veja Receptor do hormnio da tireide
tra. veja gene transformer
tra-1. veja gene transformer-1
tra-2. veja gene transformer-2
Traduo, 392,472. veja tambm Controle da
traduo
em eucariotos, 6
em procariotos, 6
mecanismos, 472-474
na regulao do desenvolvimento, 471-472
Trajetria do inositol fosfato, 111-112
Trajetrias da transduo de sinais
Comunicao cruzada em 112
trajetria do inositol-fosfato, 110-112
trajetria JAK-STAT, 107-108
trajetria RTK-Ras, 108-110
Transcrio, 392-394. veja tambm Fatores
de transcrio
autoregulao, 409
compensao de dosagem do cromossomo
X, 446-450
de genes da -globina, 437-441
durante a clivagem, 167-168
em Acetabularia, 9-10
em eucariotos, 6
em genes da imunoglobulinas, 409-415
em ocitos, 865-867
em procariotos, 6
especfica da clula, 403
especfica do tecido, 402-403
fatores trans-reguladores, 399-401
inibio, 431-432
intensificadores, 402-404
matriz nuclear e, 451-454
metilao do DNA e, 442-446
na metamorfose, 741
na regulao da diviso celular, 418-419
na transio da blstula intermediria, 194-195
promotores, 394-401
sinergismo em, 408-409
topoisomerases e, 453-454
Transcrio gnica, transferncia de mancha,
64,66
Transcriptase reversa, 55
Transdiferenciao, 41
Transdutores e ativadores de sinais da
transcrio (STAT), 107-108
Transfeco, 69
Transferncia de mancha, 64,66
Transferncia de RNA, 64,66
Transferncia Northern, 64,66
Transferncia Southern, 58-59
Transferncias de DNA, 58-59
Transferina, 715
Transio da blstula intermediria
(MBT), 194-195
ativao do genoma embrionrio e, 488-490
ativao e represso do gene na, 437
movimentao celular na, 218-220
Translocaes, em leucemia, 418-419
Transplante nuclear, em camundongos, 45-46
Transplantes heteroplsticos, 604-605
Trans-reguladores, 395-396
armadilhas de intensificadores e, 418-419
dedo de zinco, 420
domnios, 404,421
genes das imunoglobulinas e, 413-415
hlice-ala-hlice bsico, 415-416
POU, 406-409
protenas do homeodomnio e, 405
regio controladora de locos e, 439
responsivos a hormnios, 420-423
RNA polimerase e, 399-401
ruptura de nucleossomos e, 432-434
stios hipersensveis DNase-I e, 435-436
ziper bsico de leucina, 416-418
Traquia, 383
Trato ptico, 326
Treponema, 835
Trade de Kartagener, 124
Triiodotironina (T3), 735,737,739,741,743
Trimetadiona, em anomalidades congnitas, 833
Tripsina, 84
Trissomia, 827
Triturus, 865
induo embrionria primria em, 603-605
induo especfica de regio em, 621
tRNA, 472,474
em ocitos de anfbios, 866
ovo, 125
Troca de classes, 411
Trocanter, 753
Trofoblasto, 182
de mamferos, 245-247
formao, 185
implantao no tero, 186
P-caderina e, 93
Trofoectoderma, 182
Trompas de eustquio, 380
Tronco arterioso, 363,371
Tronco, expresso do gene Hox, 642-643
-tropomiosina, 467
TSH. veja Hormnio estimulador da tireide
Tubo de fertilizao, 15
Tubo digestivo, 380
derivados, 382-383
Tubo neural, 254-255,258
defeitos, 262-263
diferenciao, 265-276
diviso celular no, 270
eixo dorso-ventral, 264
fechamento, 260-264
formao, 258-259
neurulao primria e, 256,260-264
Tubo respiratrio, 380
derivados, 383
Tubos epiteliais, mecanismos de ramificao,
683-687
Tubulina, 10-11. veja tambm Microtbulos
em flagelos, 123
na epilobia, 220
na espermatognese, 858-859
Tbulos renais, 673-674
Tbulos renais pronfricos, 673-674
Tbulos seminferos, 777
na espermatognese, 856-857
Tufos (puffs) de cromossomos, 51-54,
757-758,759
Tulerpedon, 726
Tumor de Wilm, 420
ndice de Assuntos
IA2 - 25
ndice de Abreviaturas
ACE, Adenylation control element, 484
ACTH, Adrenocorticotropic hormone, 407
ADH, Alcohol dehydrogenase, 50
AER, Apical ectodermal ridge, 705
Aldox, Aldehyde oxidase, 50
AMH, Anti Mllerian duct hormone, 775
AP, Animal pole, 223
BDNF, Brain-derived neurotrophic factor, 292
bFGF, Basic fibroblast growth factor, 293
BFU-E, Burst-forming unit, erythroid, 375
bHLH, Basic helix-loop-helix, 415
BMP2, Bone morphogenetic protein 2, 293
BMP4, Bone morphogenetic protein 4, 346
BMP7, Bone morphogenetic protein 7, 293
BMPs, Bone morphogenesis proteins, 661
BR2, Balbiani ring 2, 52
bZip, Basic leucine zipper, 416
C/EBP, CCAAT enhacer-biding protein, 417
cActRIIa, Activin receptor IIa, 648
cAMP, Cyclic adenosine 3,5-monophosphate, 22
CAMs, Cell adhesion molecules, 92
CAT, Chloranphenicol acetyltransferase, 403
CDK, Cyclin-dependent kinase, 198
cdk2, Cyclin-dependent kinase 2, 864
cDNA, Complementary DNA, 54
CFS, Cytostatic factor, 864
CFU-E, Colony-forming unit, erythroid, 375
CFU-M,L, Colony-forming unit of the myeloid and lymphoid
cells, 375
CFU-S, Colony-forming unit of the spleen, 375
CNS, Central nervous system, 318
CNTF, ciliary neurotrophic factor, 332
CP, Cone synaptic pedicle, 282
CPE, Cytoplasmic polyadenylation element, 484
CSF, Cytostatic factor, 200
CSPG, Chondroitin sulfate proteoglycan, 216
CT, Column of Terni, 309
CTD, Carboxy-terminal domain, 400
DAB, Diaminobenzidine, 134
DAG, Diacylglycerol, 112
DDT, Dichloro-diphenyl-trichloroethane, 836
DHT, Dihydrotestosterone, 775
DIF, Differentiation-inducing-factor, 26
DLHP, Dorsolateral hinge positions, 260
dMP2, Dorsal midline precursor neuron, 315
IA3 - 1
IA3 - 2
ndice de abreviaturas
FUNPEC - Editora
Editor Chefe
Computao Grfica