UNIDADE V FOTOSSNTESE

FOTOSSNTESE 1. INTRODUO O termo fotossntese significa, literalmente, sntese usando a luz. Os organismos fotossintticos captam e utilizam a energia solar para oxidar H2O, liberando O2, e para reduzir CO2, produzindo compostos orgnicos, primariamente acares. Esta energia estocada nas molculas orgnicas utilizada nos processos celulares da planta e serve como fonte de energia para todas as formas de vida. O mesofilo o tecido mais ativo em termos de fotossntese. As clulas desse tecido foliar contm muitos cloroplastos, organelas circundadas por uma dupla membrana, os quais possui um pigmento verde especializado, a clorofila. Nos cloroplastos, a luz absorvida pelas molculas de clorofila e a energia colhida por duas diferentes unidades funcionais, conhecidas como fotossistemas. A energia da luz absorvida utilizada para impulsionar a transferncia de eltrons atravs de uma srie de compostos que agem como doadores e aceptores de eltrons. A maioria dos eltrons utilizada para reduzir NADP+ para NADPH. A energia da luz utilizada, tambm, para gerar um gradiente de prtons entre o estroma e o lmem dos tilacides, o qual usado para sntese da ATP. Os produtos destas reaes (ATP e NADPH) so usados para a sntese de acares nas reaes de fixao e reduo de CO2.

2. EVOLUO HISTRICA DOS CONHECIMENTOS SOBRE FOTOSSNTESE (Prisco, 1989) Na Grcia antiga acreditava-se que as plantas obtinham do solo e da gua todos os elementos necessrios ao seu crescimento. Foi somente no sculo XVIII, mais precisamente em 1727, que Stephan Hales sugeriu que parte da nutrio da planta dependia da atmosfera, tendo a luz papel importante neste processo. Nesta poca, ainda no se conhecia a composio qumica do ar e nem se tinha idia de como acontecia a respirao dos animais. Os alquimistas, tentando explicar o fenmeno da combusto, criaram a teoria de que quando, por exemplo, uma vela queimava havia a produo de uma substncia txica, denominada flogisto (fluido produzido como resultado da combusto), que fazia com que o ar se tornasse impuro ou contaminado. Em 1771, o ingls Joseph Priestley descobriu que se um rato era colocado sob uma campnula juntamente com uma vela acesa, depois de algum tempo o animal morria. Sua interpretao foi que o ar estava contaminado devido a combusto da vela, a qual produzia flogisto. Quando ele substituiu o rato por uma planta, ela se desenvolveu normalmente. Isto foi interpretado por ele como sendo devido capacidade que tm as plantas de purificar o ar, ou seja, de desflogist-lo. Ao tomar conhecimento das experincias de Priestley, o cientista holands Jan Ingen-Housz deu continuidade ao trabalho e em 1779 concluiu que a purificao do ar feita pelas plantas dependia da luz e que isto s ocorria nas partes verdes da planta. As partes no verdes (razes, por exemplo) comportavam-se de maneira idntica aos animais. Nesta poca, o qumico francs Antoine Lavoisier esclareceu o fenmeno da combusto, demonstrando que neste processo o que ocorre o consumo de oxignio com conseqente liberao de gs carbnico, colocando por terra a teoria do flogisto. De posse desta informao, Ingen-Housz e o suo Jean Senebier (1782) concluram que o CO2 existente no ar era a fonte de carbono para a formao da matria orgnica vegetal. As 103

experincias at aqui relatadas eram qualitativas, mas o suo Nicholas de Saussure (1804) deu um cunho mais quantitativo aos seus experimentos, podendo, assim, chegar a concluso de que a gua era tambm um reagente da fotossntese. Alm disto, ele demonstrou claramente que na presena de luz as plantas absorviam CO2 e liberavam O2 e que no escuro acontecia o inverso. Durante o restante do sculo XIX as contribuies dos alemes Julius Robert Meyer (1842) e Julius von Sachs (1864) permitiram entender a fotossntese, no s como um processo de trocas gasosas mas, tambm, como um processo em que h sntese de matria orgnica e transformao de energia luminosa em energia qumica. Em 1905, o fisiologista ingls F. F. Blackman, estudando os efeitos da temperatura, da concentrao de CO2 e da intensidade luminosa sobre a fotossntese, chegou importante concluso de que este processo consistia de dois tipos de reaes: as que dependiam da luz e aquelas que ocorriam no escuro. As reaes da luz eram rpidas e a temperatura no as afetava, j as reaes do escuro eram lentas e dependiam da temperatura, ou seja, as reaes da luz eram fotoqumicas e as do escuro eram bioqumicas. Durante a dcada de 1920, o microbiologista holands C. B. van Niel observou que existiam bactrias que eram capazes de fotossintetizar, mas que no liberavam O2 durante este processo. Ele observou tambm que estes microorganismos, ao invs de H2O usavam H2S como reagente da fotossntese, ou seja nestes organismos a equao da fotossntese era: Bactrias sulfurosas CO2 + 2H2S + Luz (CH2O) + H2O + 2S

A comparao da equao acima com a da fotossntese de plantas verdes o levou a concluir que H2O e H2S desempenham papel semelhante, isto , so doadores de hidrognio. Portanto, a equao geral da fotossntese pode ser escrita como: Organismos Fotossintetizantes CO2 + 2H2A + Luz (CH2O) + H2O + 2A Alm disso, ele postulou que o O2 liberado na fotossntese provm da gua e no do CO2, como se imaginava na poca. Foi tambm este cientista holands que lanou a idia de que a luz que produz o agente redutor (H) e o agente oxidante (oxignio) era produzido a partir da gua, processo que ele denominou de fotlise da gua. O bioqumico ingls Robert Hill (1937) demonstrou que preparaes contendo fragmentos de folhas ou cloroplastos isolados, na presena de gua, luz e de um aceptor artificial de eltrons ou de hidrognio (oxalato frrico, cianeto frrico ou ferricianeto de potssio) podiam provocar a liberao de oxignio, ou seja: 2H2O + 4Fe3+ + Luz Folhas ou Cloroplastos 4Fe2+ + 4H+ + O2

Esta reao (liberao de O2 na presena de luz) ficou conhecida como reao de Hill. Infelizmente, ele no conseguiu demonstrar naquela poca, que o CO2 funcionava como aceptor de eltrons ou de hidrognio.

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No incio da dcada de 1940, o fisiologista americano Robert Emerson postulou que na fotossntese deveriam existir, pelo menos, duas reaes luminosas (dois sistemas de pigmentos). Sua concluso baseou-se nos estudos por ele realizados sobre eficincia fotossinttica em funo do comprimento de onda da luz incidente. Os resultados de seus estudos, realizados com algas, podem ser assim resumidos: A luz mais eficiente para a fotossntese era a que se encontrava nas faixas do vermelho e do azul; A atividade fotossinttica caa drasticamente quando era aplicada luz de comprimento de onda maior que 680 nm. Isto ficou conhecido como QUEDA NO VERMELHO (Figura 1A); A soma da atividade fotossinttica em luz de comprimento de onda de 650 nm e 700 nm, aplicados isoladamente, era inferior obtida quando os dois comprimentos de onda eram aplicados simultaneamente. Isto ficou conhecido como EFEITO DE INTENSIFICAO DE EMERSON (Figura 1B). Este resultado constituiu-se na principal evidncia de que a fotossntese dependia de dois fotossistemas, que trabalhavam em srie.
100 Fotossntese (valores relativos) A Fotossntese (valores relativos) 120 B 100 80 60 40 20 0 500 600 700 650 700 650 + 700 Comprimento de Onda (nm) Comprimento de Onda (nm)

80

60

40

20

0 400

Figura 1 A queda no vermelho (A) e o efeito de intensificao da fotossntese (B), descoberto por Emerson em estudos com algas Aps a segunda guerra mundial, ocorreram inmeras descobertas importantes para a elucidao do processo fotossinttico. A primeira delas, ocorrida na dcada de 1950, foi a demonstrao feita pela bioqumica americana Mary Allen, de que preparaes de cloroplastos eram capazes de fixar CO2 na presena de luz e de gua, ou seja, ela provou experimentalmente o que Hill havia postulado em 1937. Foi tambm na mesma poca que outro americano, Daniel Arnon, demonstrou que o sistema de membranas de cloroplastos isolados era capaz de sintetizar ATP e NADPH, na presena de luz. Aps esta srie de descobertas pde-se concluir que durante as reaes da luz h liberao de O2, produo de ATP (energia) e NADPH (poder redutor) e que estas reaes ocorriam no sistema de membranas dos cloroplastos. As reaes do escuro foram tambm elucidadas durante a dcada de 1950. Isto deveu-se ao trabalho de mais de 10 anos, realizado por um grupo de cientistas da Universidade da Califrnia, em Berkeley, liderados por Melvin Calvin e Andrew Benson. Estes pesquisadores 105

demonstraram: qual era o composto aceptor de CO2, como o CO2 era fixado, qual era o primeiro composto formado na fotossntese, como o composto aceptor de CO2 era regenerado e como os carboidratos, aminocidos e outros compostos orgnicos eram sintetizados durante este processo fisiolgico. Como reconhecimento pela elucidao do ciclo de reduo do carbono na fotossntese o professor M. Calvin recebeu o Prmio Nobel da Qumica de 1961. Na dcada de 1960, os americanos liderados por H. P. Kortshak da Estao Experimental de Cana-de-acar do Hawai e os australianos M. D. Hatch e C. R. Slack demonstraram que o ciclo elucidado por Calvin no era o nico encontrado em plantas superiores. A este novo ciclo deu-se o nome de Ciclo dos cidos Dicarboxlicos e as plantas que o possuem foram denominados de plantas do tipo C4 para distingu-las das plantas tipo C3, as quais possuem somente o ciclo de Calvin. O estudo da fotossntese ao longo de quase 300 anos, que acabamos de descrever, um exemplo de como evolui o conhecimento cientfico. Pesquisadores de diferentes nacionalidades e com formao a mais diversificada, conseguiram construir uma doutrina coerente, atravs do trabalho paciente e organizado, em que foram sendo agrupados diversos conhecimentos como se fossem peas de um quebra-cabea. Resumindo tudo o que foi visto at aqui podemos afirmar que a fotossntese o resultado de uma srie de reaes fotoqumicas e bioqumicas. A energia luminosa ao ser absorvida pela clorofila provoca uma reao fotoqumica que resulta na retirada de eltrons da gua (causando liberao de O2) e consequentemente elevao dos mesmos (eltrons) para nveis energticos mais elevados (atravs dos dois fotossistemas), que possibilitam a sntese de ATP (energia) e NADPH (poder redutor). A energia qumica e o poder redutor assim formado so utilizados para reduzir o CO2 a compostos orgnicos, durante as reaes bioqumicas da fotossntese.

3. REAES FOTOQUMICAS a) Estrutura dos Cloroplastos O cloroplasto o local onde ocorre a fotossntese dos Eucariotos fotossintticos (Figura 2). um tipo de plastdio que, nas plantas, encontrado principalmente nos caules e folhas. So organelas circundadas por uma dupla membrana e que possuem um sistema de membranas internas conhecido como tilacide. Assim, os cloroplastos possuem trs compartimentos distintos: o espao intermembranar, o estroma (matriz) e o lmem dos tilacides. Os tilacides podem aparecer empilhados ou no. As regies empilhadas so chamadas de lamelas do grana, enquanto as regies no empilhadas so chamadas de lamelas do estroma. Nestes sistemas de membranas que se encontram os pigmentos e onde ocorrem as reaes fotoqumicas. As reaes bioqumicas associadas fixao de CO2, ocorrem na regio aquosa que circunda os tilacides, conhecida como estroma.

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Figura 2 Esquema mostrando a organizao estrutural dos cloroplastos (Taiz & Zeiger, 1998) Outra caracterstica do cloroplasto a existncia de grnulos de amido, gotculas de lipdio, DNA, RNA e ribossomos, prprios da organela. Assim, algumas protenas dos cloroplastos so produtos da transcrio e traduo que ocorrem no prprio cloroplasto, enquanto outras so codificadas pelo DNA nuclear, sintetizadas nos ribossomos citoslicos e transportados para os cloroplastos. b) A Absoro de Luz pelos Pigmentos Fotossintticos A clorofila aparece verde para nossos olhos porque ela absorve luz nos comprimentos de onda referentes ao vermelho e ao azul, na regio visvel do espectro, e a luz nos comprimentos de onda correspondente ao verde refletida. Esta relao entre a absoro da luz e o comprimento de onda, mostrada em grficos conhecidos como espectro de absoro. O espectro de absoro de luz de alguns pigmentos mostrado na figura 3.

0,4

Clorofila a + b Carotenides

Absorvncia

0,3

0,2

0,1

0,0 400

450

500

550

600

650

700

750

Comprimento de Onda (nm)

Figura 3 - Espectro de absoro das clorofilas (a + b) e dos carotenides.

107

A luz proveniente do sol tem caractersticas tanto de onda como de partcula. A onda caracterizada pelo seu comprimento e pela freqncia, sendo que o comprimento de onda tem relao inversa com a energia (Tabela 1). J a luz como partcula conhecida como fton. Cada fton contm um montante de energia conhecido como quantum (plural quanta). A energia (E) de um fton depende do comprimento de onda de acordo a Lei de Plank; E=h.c ou E = h

Em que: h = constante de Plank; c = velocidade da luz; = comprimento de onda. Como a freqncia dada por: = c/ , Pode-se escrever tambm: E = h importante destacar que um fton no pode ser subdividido nem um eltron pode ser parcialmente excitado. Em outras palavras, um fton pode excitar apenas um eltron (Lei de Einstein- Stark). O nvel que o eltron no estado vai atingir depende da energia do fton, ou seja, depende do comprimento de onda. Tabela 1 Principais radiaes de interesse biolgico (Hopkins, 2000) Cor Ultravioleta UV C UV B UV A Visvel Violeta Azul Verde Amarelo Laranja Vermelho Vermelho distante Infra-Vermelho Faixa de Comprimento de Onda (nm) 100 400 100 280 280 320 320 400 400 740 400 425 425 490 490 550 550 585 585 640 640 700 700 740 > 740 Energia Mdia (kJ mol-1 ftons) 471 399 332 290 274 230 212 196 181 166 85

Assim, a luz do sol um espectro de raios de diferentes comprimentos de onda ou de diferentes freqncias. O espectro de absoro da clorofila indica e coincide aproximadamente com a regio do espectro que efetiva na fotossntese. A efetividade de um processo com relao ao comprimento de onda produz um grfico conhecido como espectro de ao (Figura 4).

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Figura 4 Um tpico espectro de ao da fotossntese (B) comparado com o espectro de absoro de um extrato foliar (A) (Hopkins, 2000). A absoro da luz representada pela equao abaixo, na qual a clorofila no seu estado de menor energia (estado fundamental) absorve um fton de luz e passa para um estado de maior energia (estado excitado): chl + h chl A absoro da luz azul excita a clorofila para um estado de maior energia do que o vermelho excitaria, isto porque o azul tem menor comprimento de onda e, consequentemente, maior energia do que o vermelho (Figura 5).

Figura 5 A excitao da molcula de clorofila pela luz (Taiz & Zeiger, 1998) 109

A clorofila excitada extremamente instvel e ela pode retornar para o estado fundamental atravs dos seguintes processos: Fluorescncia Neste processo, a molcula de clorofila re-emite um fton de luz e retorna para o seu estado fundamental. Neste caso, ocorre tambm perda de energia na forma de calor e o comprimento de onda fluorescente sempre maior do que o da luz absorvida. A molcula pode converter a energia na forma de calor, sem nenhuma emisso de ftons. Transferncia de energia Neste caso, a molcula excitada transfere sua energia para outra molcula por ressonncia induzida. Ou pode ocorrer uma: Reao Fotoqumica Neste processo a energia do estado excitado usada para impulsionar uma transferncia de eltrons.

O processo mais rpido ser o mais provvel para retirar a clorofila do estado excitado. Medies do RENDIMENTO QUNTICO () indicam que na maioria das molculas de clorofila excitada predomina a reao fotoqumica (95%), contra 5% da fluorescncia. O rendimento quntico dado pela seguinte frmula: = Nmero de produto formado/Nmero de quanta absorvido OBS: O somatrio dos rendimentos qunticos dos vrios processos sempre igual a unidade. O inverso do rendimento quntico chamado de REQUERIMENTO QUNTICO, ou seja, o nmero de quanta absorvidos dividido pelo nmero de produtos formados. Embora a eficincia fotoqumica seja alta, o rendimento quntico para os produtos da fotossntese baixo, o que se deve s perdas de energia ao longo de todo o processo. Para o O2, por exemplo, o rendimento quntico aproximadamente igual a 0,1 ( 0,1). Isto indica que cerca de 10 quanta so absorvidos para cada molcula de O2 liberada, ou seja, o requerimento quntico igual a dez. c) Os Complexos de Absoro de Luz e os Fotossistemas Todos os pigmentos ativos na fotossntese so encontrados nos cloroplastos. Nas plantas superiores so encontrados as clorofilas (a e b), os carotenos e as xantofilas (Figura 6). As clorofilas a e b so os principais pigmentos relacionados com a fotossntese. Todas as clorofilas possuem uma estrutura em anel, quimicamente relacionada ao grupo das porfirinas, contendo um Mg2+ no centro. Em adio, uma longa cauda hidrofbica ancora a clorofila na poro hidrofbica do seu ambiente. J os carotenos e as xantofilas so tetraterpenos formados pela juno de unidades de isopreno.

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Figura 6 Estrutura molecular de pigmentos fotossintticos (Taiz & Zeiger, 1998)

A maioria dos pigmentos serve como uma antena, coletando a luz e transferindo a energia, por ressonncia induzida, para o centro de reao, onde a reao fotoqumica ocorre (Figura 7). Isto necessrio porque uma molcula de clorofila absorve poucos ftons por segundo. O sistema de antena, portanto, importante, pois torna o processo ativo a maior parte do tempo (dia).

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Figura 7 O sistema em antena transferindo a excitao para o centro de reao (Taiz & Zeiger, 1998). O mecanismo pelo qual a energia de excitao passada da clorofila que absorve a luz para o centro de reao, conhecido como transferncia por ressonncia induzida. No se trata de uma re-emisso de ftons, mas de uma transferncia de energia de excitao de molcula para molcula por um processo no radioativo. O resultado final que 95 a 99% de ftons absorvidos pelos pigmentos antena so transferidos para os centros de reao, onde podem ser usados na reao fotoqumica. A luz absorvida nos centros de reao de duas unidades conhecidas como fotossistemas. O centro de reao de uma dessas unidades absorve preferencialmente a luz de comprimento de onda maior que 680 nm, precisamente em 700 nm, sendo denominada de fotossistema I (P700). A outra unidade absorve a luz preferencialmente em 680 nm, sendo chamada de fotossistema II (P680). Estes dois fotossistemas trabalham simultaneamente e em srie, como foi demonstrado inicialmente por Emerson (Efeito de Intensificao de Emerson, ver figura 1). Os pigmentos que absorvem a luz no esto distribudos de forma desordenada nas membranas dos tilacides. Na realidade, em cada fotossistema, existe pelo menos um complexo coletor de luz (antenas) formado por protenas e pigmentos a elas associados (ver figura 8). O complexo coletor de luz do fotossistema II (LHC II) e o do fotossistema I (LHC I). O fotossistema II e o seu complexo coletor de luz esto localizados predominantemente nas lamelas dos grana (regies empilhadas). J o fotossistema I e o seu complexo coletor de luz e, tambm, o sistema de sntese de ATP, so encontrados quase que exclusivamente nas lamelas do estroma (regies no empilhadas) e nas bordas externas das lamelas dos grana.

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d) Mecanismos de Transporte de Prtons e de Eltrons Todas as etapas que constituem as reaes dependentes de luz so realizadas por quatro complexos proticos (Figura 8): fotossistema II (PS II), complexo protico do citocromo b6f, fotossistema I (PS I) e ATP sintase. Estes complexos possuem protenas transmembranares orientadas vetorialmente nas membranas dos tilacides, de modo que a H2O oxidada a O2 no lmem do tilacide (o sistema de oxidao da gua formado por protenas perifricas que parecem estar associadas ao PS II, no lado do lmem do tilacide), NADP+ reduzido para NADPH no lado estromal e ATP liberado no estroma pelo movimento de H+ do lmem para o estroma.

Figura 8 O transporte vetorial de prtons e eltrons nas membranas dos tilacides (Hopkins, 2000) Nas reaes fotoqumicas pode se distinguir dois tipos de fluxos de eltrons: fluxo no cclico e fluxo cclico (Figura 9). O fluxo de eltrons no cclico inicia-se no fotossistema II (PS II). O centro de reao do PS II consiste de duas protenas de membrana conhecidas como D1 e D2, as quais possuem massas moleculares de 32 e 34 kDa, respectivamente. Associado a estas protenas tem a clorofila a680 (P680) e muitas clorofilas adicionais, carotenides, feofitina e plastoquinonas. A luz excita a molcula de clorofila (P680) no centro de reao, o que a torna um forte agente redutor (Figura 9). Este centro de reao pode, ento, transferir um eltron para uma molcula aceptora. Estudos indicam que a feofitina (uma molcula de clorofila em que o Mg2+ substitudo por dois H+) o primeiro aceptor de eltrons no PS II, seguido de duas quinonas. Um eltron transferido de P680 para feofitina, desta para uma primeira quinona (Quinona A) e desta ltima para uma segunda quinona (Quinona B), onde permanece. O P680 oxidado paralelamente reduzido pelo doador de eltrons conhecido como Yz (um intermedirio, identificado como um resduo de tirosina na protena D1), que transfere os eltrons da gua para o P680. O P680 recebe outro fton de luz e, uma vez excitado, transfere um segundo eltron para feofitina. Esta transfere o segundo eltron para a Quinona A, que transfere para a Quinona B. Esta quinona recebe dois H+ do meio (no lado do estroma) ficando reduzida (QH2). Esta hidroquinona dissocia-se do complexo PS II, migra na poro hidrofbica da membrana, onde ela transfere seus eltrons para o complexo citocromo b6f e 113

libera os prtons no lmem do tilacide. Os eltrons do citocromo b6f so ento transferidos para uma protena mvel contendo cobre, a plastocianina. Esta protena movimenta-se at o P700, provocando a reduo do mesmo. O fluxo de eltrons no cclico continua no fotossistema I. O P700, aps ser reduzido pela plastocianina, fica apto ao processo de excitao pela luz. O centro de reao do PS I formado por duas protenas com massas moleculares de 66 a 70 kDa. Associadas a estas protenas encontram-se alm da clorofila a700 (P700), outras molculas de clorofila e carreadores de eltrons, como as ferredoxinas. O P700 na forma excitada pela luz transfere eltrons, via carreadores especficos, para o NADP+, reduzindo-o para NADPH.

Em (volts)

Figura 9 O esquema Z da fotossntese (Taiz & Zeiger, 1998)

Adicionalmente, pode ocorrer um fluxo cclico de eltrons, neste caso, entre o PS I e o complexo citocromo b6f. Os eltrons da ferredoxina, ao invs de serem utilizados para reduo do NADP+, so transferidos para o citocromo b6 (Figura 9). Para cada dois eltrons transferidos neste fluxo, uma quinona reduzida (QH2) formada. Esta QH2 posteriormente oxidada, transferido seus eltrons para o PS I, sendo os H+ liberados no lmem do tilacide. Como se v, a funo deste fluxo cclico aumentar o gradiente de H+ entre o lmem do tilacide e o estroma e, consequentemente, aumentar a produo de ATP. e) A Oxidao da gua A gua oxidada pela seguinte equao qumica: 2H2O O2 + 4H+ + 4e-

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O sistema de formao de oxignio ou de foto-oxidao da gua inclui trs protenas perifricas com massas moleculares de 16, 23 e 33 kDa, que parecem estar associadas ao PS II, no lado do lmem do tilacide. Este sistema inclui ainda os ons Mn2+, Ca2+ e Cl-, como cofatores. O modelo de foto-oxidao da gua consiste de uma srie de cinco estados de oxidao do sistema, conhecidos como S0, S1, S2, S3 e S4 (Figura 10). O aumento no grau de oxidao do sistema parece representar o aumento no grau de oxidao da enzima contendo 4 tomos de Mn. Estes tomos esto ligados a aminocidos na protena D1 (PS II) e a tomos de O, Cl e Ca.

Figura 10 O sistema de foto-oxidao da gua (Taiz & Zeiger, 1998)

Cada excitao de P680 seguida pela retirada de um eltron do cacho de Mn, o qual armazena a carga positiva residual. Quando quatro cargas positivas so acumuladas, o complexo oxida duas molculas de gua e libera uma molcula de O2. Os prtons (H+) produzidos pela oxidao da gua so liberados no lmem, contribuindo para a produo de ATP, via gradiente de H+. Estes resultados indicam que QUATRO FTONS DE LUZ so necessrios para oxidar uma molcula de gua (Lembre-se que cada fton pode excitar apenas um eltron - Lei de Einstein- Stark) Os eltrons da gua so transferidos, via tomos de Mn, para um carreador identificado como Yz, o qual transfere os eltrons para o P680. Este carreador Yz tem sido identificado como um resduo de tirosina da protena D1, no PS II. Assim, a gua o doador inicial de eltrons para a fotossntese e o Yz seria o intermedirio para transferir os eltrons da molcula de H2O para o P680.

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f) A Sntese de ATP Em adio energia estocada na forma de poder redutor (NADPH), uma poro da energia dos ftons capturada para formao de ATP. Esta fotofosforilao explicada pelo mecanismo quimiosmtico. O princpio bsico da quimiosmose que diferenas na concentrao de ons (representadas aqui pela diferena na concentrao de H+ ou de pH) e de potencial eltrico (E) entre os dois lados das membranas biolgicas so fontes de energia livre que podem ser utilizadas pela clula. p = E + 59 pH p: fora motriz de prtons

Como vimos anteriormente, o fluxo de eltrons na fotossntese gera, paralelamente, um gradiente de H+ (Figura 8 e Figura 11). Os prtons so transportados para o lmem dos tilacides, ocorrendo um aumento do pH no estroma e uma queda do pH no lmem. Os H+ ao retornarem para o estroma, a favor do seu gradiente, liberam energia que utilizada para a sntese de ATP.

Figura 11 O acoplamento do sistema de transporte de eltrons com a sntese de ATP estabelece uma transferncia de prtons (Hopkins, 2000). O processo de sntese de ATP catalisado pelo complexo enzimtico transmembranar, conhecido como CFo-CF1 ATP Sintase (Figura 11). A poro hidrofbica do complexo, CFo, parece formar o canal atravs da membrana, o qual favorece a passagem dos H+. O stio cataltico, por sua vez, se localiza na poro CF1, que fica no lado estromal, onde ocorre a sntese de ATP a partir de ADP e Pi. A estequiometria de H+ transportados por ATP sintetizado foi calculado recentemente como sendo: 4 H+ / 1 ATP.

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4. CICLO DE REDUO DO CARBONO Recentes estimativas indicam que cerca de 200 bilhes de toneladas de CO2 so convertidas para a biomassa a cada ano. As reaes que catalisam a reduo de CO2 para carboidratos so acopladas ao consumo de ATP e NADPH gerados no fluxo de eltrons fotossinttico (Figura 12). Esta reduo de CO2 ocorre no estroma, a fase solvel do cloroplasto, onde esto localizadas as enzimas que catalisam tais reaes.

Figura 12 A relao entre as reaes fotoqumicas e bioqumicas da fotossntese (Taiz & Zeiger, 1998). Muitos estudiosos acreditavam que as reaes de fixao de CO2 eram independentes da luz, e elas foram denominadas de reaes do escuro. Nas ltimas trs dcadas, no entanto, tornou-se claro que estas reaes so controladas pela luz. Assim, denominaes como Fase Bioqumica da Fotossntese, Reaes de Fixao do Carbono, Ciclo de Reduo do Carbono ou Ciclo de Reduo da Pentose-fosfato so preferidas hoje. a) Ciclo de Calvin Todos os eucariotos fotossintticos, desde a mais primitiva alga at a mais avanada Angiosperma, reduzem CO2 para carboidratos, via o ciclo de Calvin, descrito originalmente para espcies C3. O ciclo da Calvin consiste de trs fases: carboxilao, reduo e regenerao (Figura 13) Carboxilao

CO2 + ribulose-1,5-bisFosfato intermedirio instvel + H2O 2 (3 fosfoglicerato) (5C) (6C) 2 (3C) obs: O intermedirio instvel o 2-carboxi-3-cetoarabinitol-1,5-bifosfato. O 3-Fosfoglicerato o primeiro intermedirio estvel do ciclo de Calvin. A reao descrita acima catalisada pela enzima ribulose-1,5-bisfosfato carboxilase/oxigenase, conhecida como rubisco. Esta protena enzimtica, com massa molecular de aproximadamente 560kDa, constituda de 16 subunidades (L8S8), sendo oito subunidades menores (S8), originadas do DNA nuclear, e oito subunidades maiores (L8) originadas do 117

DNA do cloroplasto. Esta enzima a principal protena encontrada em folhas verdes, correspondendo a at 40% da protena total deste rgo. A rubisco, como o prprio nome indica, tem atividade carboxilsica e oxigensica, embora a afinidade pela carboxilao assegure a ocorrncia da fotossntese mesmo que a concentrao de CO2 seja muito menor que a de O2, como ocorre normalmente na natureza.

Figura 13 Fases do ciclo de Calvin (Taiz & Zeiger, 1998)

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Reduo

A fase de reduo consiste na utilizao do ATP e do NADPH formados durante a fase fotoqumica da fotossntese para reduzir o cido 3-fosfoglicrico para produzir o primeiro acar, o gliceraldedo 3-fosfato (triose-fosfato). 3 fosfoglicerato + ATP + NADPH triose-fosfato + ADP + Pi + NADP+ Parte do gliceraldedo-3-fosfato formado utilizado na regenerao da ribulose-1,5bisfosfato e outra parte utilizada para sntese de amido, sacarose e todos os demais constituintes do vegetal (paredes celulares, membranas, protenas, organelas, etc.). Regenerao

Nesta fase, as trioses-fosfato (gliceraldedo 3-fosfato) regeneram o aceptor inicial de CO2 (ribulose-1,5- bisfosfato), com gasto de ATP. Este estgio envolve vrias interconverses atravs da ao de isomerases, epimerases, transcetolases, fosfatase e uma quinase.

b) Sntese de Sacarose e Amido A sacarose a principal forma de carboidrato que translocada na planta, via floema. J o amido um carboidrato insolvel, de reserva, presente em quase todas as plantas. O interessante que tanto a sacarose como o amido so gerados a partir da triose-fosfato gerada no ciclo de Calvin (Figura 14) A sntese de amido ocorre no cloroplasto e se d pela formao de ADP-glucose. A partir da adio de ADP-glucose forma-se um polmero de glicose unido por ligao glicosdica -1,4. A sntese de sacarose, por sua vez, ocorre no citosol e se d pela formao de UDP-glucose que se combina com frutose-6-fosfato e produz a sacarose-6-fosfato. Esta ltima convertida para sacarose por ao de uma fosfatase. As snteses de amido e de sacarose apresentam praticamente os mesmos intermedirios (frutose-1,6-bisfosfato, frutose-6-fosfato, glicose-1-fosfato, etc.). No entanto, estas vias biossintticas possuem izoenzimas, que so nicas para cloroplasto e citosol. O que determina o destino do gliceraldedo-3-fosfato produzido na fotossntese? Produz amido ou sacarose? As concentraes relativas de ortofosfato e triose-fosfato (gliceraldedo3-fosfato) so os principais fatores que controlam se o carbono fixado fotossinteticamente alocado como amido nos cloroplastos ou como sacarose no citosol. Estes dois compartimentos se comunicam pelo translocador de fosfato/triose-fosfato. O ortofosfato em direo ao cloroplasto e triose-fosfato para o citosol. Situao 1: [ortofosfato no citosol] exportao de triose-fosfato sntese de amido para o citosol no cloroplasto 119

Situao 2: [ortofosfato no citosol] exportao de triose-fosfato sntese de sacarose para o citosol no citosol

Figura 14 Sntese de amido e de sacarose (Taiz & Zeiger, 1998) c) Regulao do Ciclo de Calvin Cinco enzimas do ciclo de Calvin so reguladas pela luz: rubisco (fase de carboxilao); NADP: desidrogenase do gliceraldedo-3-fosfato (fase de reduo); frutose-1,6-bisfosfatase, sedoheptulose-1,7-bisfosfatase e quinase ribulose-5-fosfato (fase de regenerao). A enzima da fase de reduo (desidrogenase do gliceraldedo-3-fosfato) e as trs enzimas da fase de regenerao so controladas pelo sistema ferredoxina-tiorredoxina. Estas quatro enzimas possuem um ou mais grupos dissulfeto (SS). No escuro estes resduos esto na forma oxidada, deixando a enzima inativa ou subativa. Na luz, os eltrons da ferredoxina, via tiorredoxina, so utilizados para reduzir o grupo SS para o estado sulfidrila (SH). A mudana promove a ativao da enzima.

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A rubisco, por sua vez, regulada pela carbamilao (Figura 15). Quando os cloroplastos so submetidos luz, ocorre um aumento no pH do estroma. Este aumento no pH do estroma provoca a desprotonao do grupamento amino (-NH3+) de um resduo de lisina no stio ativo da enzima. Este grupamento passa de NH3+ para NH2. Este resduo desprotonado reage com uma molcula de CO2 (que no a mesma molcula substrato) ficando a enzima com uma carga negativa (NHCOO-). A ativao final da enzima depende da atrao eletrosttica desta carga negativa com ons Mg2+. A concentrao deste on no estroma tambm aumenta em folhas expostas luz.

Figura 15 Mecanismo de regulao da atividade da rubisco pela luz (Taiz & Zeiger, 1998) d) O Ciclo Fotorrespiratrio O ciclo fotorrespiratrio est relacionado com a atividade de oxigenao da rubisco e resulta na perda de CO2 e na diminuio da eficincia fotossinttica (Figura 16). As molculas de CO2 e O2 competem na reao catalisada pela rubisco, visto que, carboxilao e oxigenao ocorrem no mesmo stio ativo da enzima. Em teste em tubo de ensaio, com iguais concentraes de CO2 e O2, a rubisco de Angiospermas fixa CO2 80 vezes mais rpido do que fixa O2. No entanto, em soluo aquosa em equilbrio com o ar, a 25 oC, a relao [CO2]/[O2] = 0,0416. Nesta situao, em que a concentrao de CO2 muito menor que a de O2, a carboxilao supera a oxigenao em apenas trs vezes. Na reao de oxigenao o O2 reage com a ribulose-1,5- bisfosfato e produz um composto de trs carbonos (3-fosfoglicerato) e outro de dois carbonos (2-fosfoglicolato). O2 + ribulose-1,5-bisfosfato 3-fosfoglicerato + 2-fosfoglicolato + 2H+ (5C) (3C) (2C) O ciclo fotorrespiratrio serve para recuperar os dois carbonos gerados pela atividade oxigenase, na forma de 2-Fosfoglicolato. Este ciclo envolve trs compartimentos celulares: cloroplasto, peroxissomo e mitocndria. O ciclo se inicia no cloroplasto com a formao do glicolato a partir do 2-fosfoglicolato. O glicolato migra para o peroxissomo onde convertido para glicina (aminocido) e perxido de hidrognio (H2O2). Esta organela rica em uma enzima conhecida como catalase, a qual degrada o H2O2, que txico para a clula. catalase 2 H2O2 2 H2O + O2

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Figura 16 O ciclo fotorrespiratrio (Taiz & Zeiger, 1998) A glicina migra do peroxissomo para a mitocndria. Duas molculas de glicina (2C) produzem uma molcula de serina (aminocido com 3 carbono). Nesta etapa ocorre liberao de NH3 e de CO2. OBS: Como se v, ocorre consumo de O2 (no cloroplasto) e liberao de CO2 (na mitocndria), por isso chama-se fotorrespirao. A serina (3C) formada na mitocndria migra para o peroxissomo onde convertido para glicerato. O glicerato (3C) migra para o cloroplasto onde convertido para 3-fosfoglicerato (3C), com gasto de ATP. 122

Assim, duas molculas de fosfoglicolato (2x2 = 4 carbonos), geradas pela atividade oxigensica da rubisco, produzem uma molcula de 3-fosfoglicerato (3C) e uma molcula de CO2. Neste caso, 75% do carbono gerado pela oxigenase recuperado e retorna para o ciclo de Calvin. No entanto, o grau de perdas de carbono pela fotorrespirao depende das concentraes de CO2 e O2, das propriedades cinticas da rubisco e da temperatura, e tende a ser maior que 25% em condies normais do ambiente. Em geral, nas temperaturas elevadas de regies tropicais as perdas pela fotorrespirao podem ser bem maiores. O aumento na temperatura diminui a solubilidade dos gases, sendo que a temperatura afeta mais a solubilidade do CO2 do que a do O2. Assim temos: Temperatura [CO2]/[O2] Temperatura Atividade Oxigensica da rubisco Temperatura FOTORRESPIRAO As perdas podem superar os 40%. Assim, a fotorrespirao reduz a assimilao lquida de CO2, ou seja, reduz a fotossntese lquida. Fotossntese lquida = fotossntese total (respirao + fotorrespirao) Quanto maior for a fotorrespirao, menor ser a fotossntese lquida. Por que a existncia da fotorrespirao??? A qumica da reao de carboxilao poderia requerer um intermedirio (substrato) com capacidade para reagir com CO2 ou O2. Isto no teria sido problema no incio da evoluo do processo de fotossntese, visto que naquele tempo a razo [CO2]/[O2] era muito maior do que a observada nos dias de hoje. A fotorrespirao poderia contribuir para a dissipao de ATP e poder redutor e evitar danos sobre o aparelho fotossinttico (foto-oxidao e fotoinibio) sob condies de excesso de energia (por exemplo, alta intensidade de luz e baixa concentrao interna de CO2, como ocorre em plantas expostas a estresse hdrico estmatos fechados).

e) Mecanismos de Concentrao de CO2 Algumas plantas tm desenvolvido mecanismos de concentrao de CO2, os quais contribuem para reduzir a fotorrespirao ( o caso das plantas C4) ou para permitir a sobrevivncia das plantas em condies ridas e semi-ridas ( o caso das plantas CAM). Estes mecanismos envolvem adaptaes morfolgicas e fisiolgicas bastante interessantes.

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I O Ciclo C4 - SEPARAO ESPACIAL As folhas de plantas conhecidas como C4 possuem dois tipos distintos de clulas contendo cloroplastos: o mesofilo e a bainha do feixe vascular, as quais esto conectadas por extensa rede de plasmodesmas. As clulas da bainha do feixe apresentam uma anatomia diferenciada, em forma de coroa, conhecida como anatomia kranz. O ciclo C4 consiste de quatro etapas (Figura 17):

Figura 17 Esquema geral do ciclo fotossinttico de assimilao de carbono C4 (Hopkins, 2000). Na primeira etapa ocorre a fixao de CO2 (como HCO3-) pela enzima carboxilase do fosfoenolpiruvato (PEP-carboxilase) no citosol das clulas do mesofilo, formando oxaloacetato. Este cido orgnico convertido para malato ou aspartato, dependendo da espcie, nos cloroplastos das clulas do mesofilo. OBS: Estes cidos de quatro carbonos so os primeiros intermedirios estveis da fotossntese destas plantas, da o nome C4. Nas plantas que possuem apenas o ciclo de Calvin, o primeiro intermedirio estvel o 3-fosfoglicerato, de trs carbonos, sendo estas plantas referidas como C3. Na segunda etapa, os cidos de quatro carbonos so transportados das clulas do mesofilo para as clulas da bainha do feixe vascular, via plasmodesmas. Algumas plantas C4 transportam malato enquanto outras transportam aspartato. Estes cidos de quatro tomos de carbono so ento descaboxilados nas clulas da bainha do feixe vascular, liberando CO2 e produzindo piruvato ou alanina. O CO2 ento fixado pela RuBisCO, que nestas plantas encontrada somente nas clulas da bainha do feixe. OBS: As demais reaes do Ciclo de Calvin ocorrem normalmente nestas plantas, concluindo o processo de fixao de CO2.

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Finalmente, ocorre o transporte do composto de trs carbonos, piruvato ou alanina, de volta para o mesofilo, onde ocorre a regenerao do fosfoenolpiruvato (PEP) com gasto de duas molculas de ATP. Esta ltima reao catalisada pela enzima diquinase do piruvato ortofosfato.

Algumas vantagens do mecanismos C4: A enzima fosfoenolpiruvato carboxilase utiliza como substrato o HCO3- que no compete com O2, ou seja, a fotorrespirao suprimida no mesofilo; A enzima PEP carboxilase tem elevada afinidade pelo substrato (HCO3-, 5M), o que a permite atuar mesmo em muito baixas concentraes do substrato; A grande afinidade da enzima pelo substrato permite que as plantas C4 fotossintetizem com pequena abertura estomtica e, consequentemente, com baixa perda de gua; Uma conseqncia do exposto acima que as plantas C4 habitam ambientes com altas temperaturas e climas semi-ridos (quentes e secos); A rubisco encontrada apenas nas clulas da bainha vascular. Estas plantas, portanto, gastam menos nitrognio do que as plantas C3.

Existe alguma desvantagem? Mecanismo de regenerao do PEP consome dois ATP. Assim, as C4 gastam 5 ATP para cada CO2 fixado; As plantas C3 gastam apenas 3 ATP por CO2 fixado;

Apesar deste maior consumo de ATP, o mecanismo C4 bastante eficiente para as condies de clima tropical, pois praticamente anula a fotorrespirao. Nestas condies as espcies C4 apresentam taxas de fotossntese lquida bem superiores s de espcies C3. II Plantas CAM - SEPARAO TEMPORAL Nestas plantas o CO2, na forma de HCO3-, capturado pela carboxilase do PEP no citosol, a qual combina o HCO3- com o fosfoenolpiruvato, produzindo oxaloacetato. O que diferencia estas plantas das demais que este processo de fixao de CO2 ocorre durante a noite (Figura 18). O oxaloacetato formado ento convertido para malato, o qual se acumula nos vacolos. Este acmulo de cidos orgnicos durante a noite explica o nome CAM metabolismo cido das crassulceas, comum nas cactceas, bromeliceas, orquidceas, euforbiceas e crassulceas. Durante o dia, o malato estocado transportado para os cloroplastos e descarboxilado, liberando CO2 que reduzido pelo ciclo de Calvin. Estas plantas so tpicas de ambientes ridos. Elas abrem os estmatos durante a noite e fecham durante o dia, prevenindo as perdas de gua. OBS: Algumas plantas podem alterar o metabolismo fotossinttico, passando de CAM para C3 e vice versa. O modo CAM predomina sob condies de aridez. Quando as plantas esto bem supridas com gua elas podem passar para C3 (CAM facultativas). Muitas plantas, no entanto, so CAM obrigatrias. 125

Figura 18 Esquema do Metabolismo cido das Crassulceas (Hopkins, 2000)

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f) Fisiologia Comparada de Plantas C3, C4 e CAM A tabela 2 mostra as diferenas na fotossntese das plantas C3, C4 e CAM. Nota-se que as adaptaes nas C4 permitem que elas fotossintetizem em altas taxas, mesmo em altas temperaturas (o mecanismo de concentrao de CO2 praticamente elimina a fotorrespirao). Estas plantas conseguem altas produtividades nas condies tropicais. As adaptaes fisiolgicas das plantas CAM permitem a sua sobrevivncia em condies de climas ridos e semi-ridos. Estas plantas so pouco produtivas (baixas taxas fotossintticas). J as caractersticas das plantas C3 permitem que elas sejam mais eficientes em condies de climas temperados (note que estas plantas consomem menos ATP por molcula de CO2 fixado). A reduo na produtividade das plantas C3 deve-se ao aumento da fotorrespirao com o aumento da temperatura. Tabela 2 Parmetros fisiolgicos de plantas C3, C4 e CAM

Parmetro Fotorrespirao Primeiro Produto Estvel Ponto de Compensao de CO2 Enzima Primria de carboxilao Relao CO2/ATP/NADPH Temperatura tima Taxa de Fotossntese Lquida sob Saturao de luz Razo de transpirao Contedo de N na folha/mxima fotossntese Saturao na Luz (mol m-2 s-1)

C3 Presente, > de 25% da fotossntese bruta cido 3-fosfoglicrico (3C) Alto, 20 a 100 L CO2 L-1 Rubisco (km =20 M de CO2) 1: 3: 2 20 a 25 C 10 a 20 (mol de CO2 m-2 s-1) exemplo: soja 450 a 1000 gH2O/gMS
o

C4 Presente, no detectvel cido oxaloactico (4C) Baixo, 0 a 5 L CO2 L-1 Carboxilase do PEP (km=5 M de HCO3-) 1: 5: 2 30 a 45 C 20 a 40 (mol de CO2 m-2 s-1) exemplo: milho 250 a 350 gH2O/gMS 3,0 a 4,5 (% na matria seca) No saturvel
o

CAM Detectvel no final da tarde cido oxaloactico (4C) _ Carboxilase do PEP

1: 6,5: 2 35 oC 0,6 a 2,4 (mol de CO2 m-2 s-1) Agave americana 18 a 125 gH2O/gMS

6,5 a 7,5 (% na matria seca) 400 500

_ _

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5. ASPECTOS FISIOLGICOS E ECOLGICOS FATORES QUE AFETAM A FOTOSSNTESE Vrios fatores influenciam a fotossntese: H2O, nutrientes minerais, luz, CO2 e temperatura, alm da idade e do gentipo da planta. Ento, qual o fator que mais limita a fotossntese em ecossistemas naturais e agrcolas? Tudo indica que a gua. Os desertos so extremamente improdutivos, enquanto os esturios, florestas tropicais e cultivos irrigados apresentam elevadas produtividades. Quando o potencial hdrico do solo torna-se muito negativo, a expanso celular retardada e a reduo no crescimento da folha o primeiro sintoma aparente. A continuidade do estresse provoca o fechamento estomtico e, consequentemente, a absoro de CO2 restringida. Assim, a reduo no suprimento de gua limita a fotossntese reduzindo a rea foliar e a prpria absoro de CO2. As funes e a importncia da gua e dos nutrientes minerais para as plantas j foram estudadas nas unidades III (Relaes Hdricas) e IV (Nutrio Mineral), respectivamente. Neste ponto, pretendemos discutir outros fatores que afetam a fotossntese, principalmente, luz, concentrao de CO2 e temperatura.

5.1 LUZ a) Anatomia Foliar e Fotossntese Aproximadamente 1,3 kW m-2 da energia radiante solar atinge a terra, porm somente cerca de 5% desta energia convertida em carboidratos pela fotossntese (Figura 19). Uma das razes para esta percentagem to baixa que a maior frao da luz incidente de comprimento de onda muito curto (por exemplo, ultravioleta) ou muito longo (infravermelho) e no so absorvidos pelos pigmentos fotossintticos. Em adio, muito da energia absorvida perdida como calor e um menor montante perdido como fluorescncia. A regio do espectro compreendida entre 400 e 700 nm (regio do visvel) possui a radiao til para a fotossntese, sendo denominada de radiao fotossinteticamente ativa (PAR). Cerca de 85 a 90% da PAR absorvida pela folha, sendo o restante refletido na sua superfcie ou transmitido atravs da folha. Como a clorofila, principal pigmento da fotossntese, absorve muito fortemente a luz nas regies do vermelho e do azul, as radiaes refletidas e transmitidas so enriquecidas em verde, produzindo a colorao verde da vegetao. A morfologia, a anatomia e as propriedades ticas das folhas so feitas para interceptar e canalizar eficientemente a luz para os cloroplastos, ou seja, onde a fotossntese ocorre. A anatomia de uma folha de dicotilednea mesfila descrita a seguir: A folha coberta com uma epiderme superior (adaxial) e uma inferior (abaxial). Os tecidos fotossintticos so localizados entre as duas epidermes e, consequentemente, so chamados de mesofilo (meso = meio e filo = folha). A camada superior do mesofilo consiste de uma a trs camadas de clulas, conhecidas como parnquima palidico (vem de paliada). As clulas do parnquima palidico so alongadas e cilndricas com o seu maior eixo ficando perpendicular superfcie da folha. Abaixo da camada palidica encontra-se o mesofilo esponjoso, assim denominado por causa dos grandes espaos entre as clulas. A forma destas clulas , em geral, irregular, porm tende para a forma isodiamtrica. A estrutura de uma folha de monocotiledneas similar de dicotiledneas. Nas monocotiledneas, no entanto, no se observa distino entre parnquima palidico e esponjoso.

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Figura 19 Converso de energia solar em energia qumica (carboidratos) pelas folhas (Taiz & Zeiger, 1998). A anatomia da folha altamente especializada para a absoro de luz. A camada mais externa, ou seja, a epiderme, usualmente transparente luz visvel e as clulas individuais so freqentemente convexas (Figura 20). A estrutura convexa das clulas da epiderme permite que elas atuem como uma lente, redirecionando e focalizando a luz incidente para os cloroplastos que se encontram adjacentes s paredes laterais das clulas do parnquima palidico (Figura 20C). Isto comum entre plantas herbceas e especialmente em espcies tropicais que crescem dentro das florestas (sub-bosque), onde os nveis de luz so muito baixos. As clulas do parnquima palidico geralmente possuem maior nmero de cloroplastos do que as clulas do parnquima esponjoso (Figura 20), o que , sem dvida, uma adaptao s maiores taxas de radiao fotossinteticamente ativa que atinge a superfcie superior das folhas. A despeito do grande nmero de cloroplastos nas camadas palidicas de folhas de dicotiledneas, existe uma proporo significativa do volume celular que no contm cloroplastos. Visto que os pigmentos se concentram nos cloroplastos, um substancial montante de luz pode passar atravs da primeira camada de clula do parnquima palidico, sem ser absorvida (Figura 20B). Isto tem sido conhecido como efeito peneira (effect sieve). A existncia de mltiplas camadas de clulas palidicas uma maneira de aumentar a probabilidade de um fton de luz, aps atravessar uma primeira camada de clulas, ser interceptado pelas camadas inferiores. Na realidade, a primeira camada de clulas pode facilitar a passagem da luz, canalizando-a para o interior da folha. Isto permite a diviso de trabalho (fotossntese) dentro da folha. 129

Figura 20 Diagrama simplificada mostrando a redistribuio de luz na folha (Hopkins, 2000). O impacto do efeito peneira sobre a eficincia de absoro de luz , em parte, balanceado por fatores que mudam a direo da luz dentro da folha. Dentro da folha, no parnquima palidico e, particularmente no parnquima esponjoso, a luz pode ser refletida e refratada nas superfcies entre a gua e o ar, fazendo com que a sua direo seja alterada de forma casualizada. Este fenmeno conhecido como disperso da luz (light scattering). Neste caso, a disperso da luz pela reflexo e refrao, aumenta o comprimento do caminho a ser percorrido pela luz atravs da folha, aumentado a possibilidade da mesma ser absorvida. De fato, os trajetos que os ftons de luz percorrem dentro da folha so, geralmente, quatro ou mais vezes maiores que a espessura da folha. b) Adaptaes de Folhas para Diferentes Condies Ambientais Nem todas as folhas so desenhadas como uma tpica folha mesomrfica de dicotilednea, como descrito acima. As folhas de muitas espcies apresentam modificaes, associadas a adaptaes s diferentes condies ambientais. Folhas de pinheiro, por exemplo, so mais circulares quando vistas em uma seo transversal. Sua capacidade para absoro de luz tem sido comprometida em favor de uma reduzida relao superfcie/volume, uma modificao que evita a dessecao quando estas plantas so expostas ao ar seco do inverno. Em outros casos, tais como as espcies de regies semi-ridas e ridas, as folhas so muito mais espessas, que permite o acmulo de gua. Em casos extremos, tais como os cactos, as folhas tm sido reduzidas para espinhos e o caule exerce uma dupla funo: estoque de gua e fotossntese. As folhas absorvem o mximo de luz quando o limbo est perpendicular luz incidente. Muitas espcies vegetais (alfafa, algodo, soja, feijo, espcies selvagens de Malvaceae, 130

Lupinus succulentus, dentre muitas outras) controlam a absoro de luz ajustando a orientao do seu limbo de tal forma que ele fique perpendicular aos raios solares (Solar Tracking, ajustamento solar). Assim, estas espcies conseguem manter a mxima taxa fotossinttica permitida ao longo do dia, inclusive pela manh e no final da tarde (Figura 21). Isto importante, pois permite que a planta fotossintetize em taxas aceitveis nas horas mais amenas do dia (no incio e no final do perodo de luz), o que pode ser uma vantagem para plantas de regies ridas ou semi-ridas. De modo contrrio, algumas outras plantas movem suas folhas para evitar a exposio completa luz do sol, minimizando, desta forma, a absoro de calor e a perda de gua. Este movimento de folhas induzido pelo sol conhecido como heliotropismo. As folhas que maximizam a absoro de luz so conhecidas como diaheliotrpicas e as que minimizam so paraheliotrpicas.

Figura 21 Movimento de folhas de Lupinus succulentus em resposta luz: A (orientao inicial); B (Orientao das folhas aps 4 horas de exposio luz direcionada (Taiz & Zeiger, 1998)).

Um caso especial de adaptao visto quando comparamos Plantas (ou folhas) de Sol com Plantas (ou folhas) de Sombra. As plantas de sombra so aquelas que se desenvolvem em habitats sombreados, como no interior das florestas. Estes habitats sombreados recebem, em geral, menos de 1% da radiao fotossinteticamente ativa que disponvel nos habitats abertos. Comparando com as plantas de sol, as plantas de sombra apresentam as seguintes caractersticas: Muito baixas taxas fotossintticas quando expostas luz do sol Sua resposta fotossinttica satura em baixos nveis de irradincia Quando os nveis de irradincia so muito baixos elas usualmente fotossintetizam em maiores taxas do que as plantas de sol, colocadas nas mesmas condies.

Em rvores, arbustos e tambm em plantas herbceas, muitas folhas se desenvolvem na sombra de outras e atingem durante o seu desenvolvimento caractersticas semelhantes s folhas das verdadeiras plantas de sombra. Em dicotiledneas, as folhas de sombra so tipicamente maiores em rea, porm apresentam espessura inferior s das folhas de sol. As folhas de sol so mais espessas do que as de sombra por que elas formam clulas palidicas longas ou, ento, mais de uma camada (Figura 22). Na base de peso, as folhas de sombra possuem mais clorofila do que as de sol e tambm produzem um maior nmero de complexos coletores de luz. Por outro lado, os cloroplasto de folhas de sombra possuem menor contedo 131

de protenas no estroma, incluindo a rubisco, e tambm menor proporo de protenas de transporte de eltrons. Isto indica, que as folhas de sombra investem mais energia na produo de pigmentos coletores de luz, os quais permitem a absoro e utilizao de praticamente toda a luz que atinge a folha.

SOL

SOMBRA

Figura 22 Folhas de sugar maple expostas a diferentes intensidades de luz (Salisbury & Ross, 1991) Pode uma planta de sol (ou folha de sol) se adaptar sombra ou uma planta de sombra (ou folha de sombra) se adaptar ao sol? Folhas maduras mostram muito pouca capacidade de adaptao sombra ou ao sol, porm, plantas inteiras de algumas espcies se adaptam muito bem a ambas durante o desenvolvimento, principalmente sombra. claro, existem limites genticos para esta adaptao. Algumas plantas parecem ser plantas de sombra obrigatrias" (por exemplo, Alocasia) e outras "plantas de sol obrigatrias" (por exemplo, girassol). Porm, a grande 132

maioria facultativa. Muitas espcies C3 e C4, so plantas de sol facultativas e se adaptam at certo ponto sombra, produzindo caractersticas morfolgicas e fotossintticas semelhantes s plantas de sombra. Elas diminuem seu ponto de compensao de CO2 (pela reduo na respirao), reduzem a taxa fotossinttica e apresentam saturao da fotossntese em baixa irradincia. Estas plantas desenvolvem a habilidade para crescer na sombra, porm, seu crescimento lento. A adaptao reversa, ou seja, da sombra para o sol, menos comum. As plantas de sombra (ou folhas de sombra) usualmente no podem ser expostas radiao solar direta sem exibir inibio drstica da fotossntese e morte de folhas maduras dentro de poucos dias. As folhas destas plantas no possuem a morfologia adequada e os mecanismos fisiolgicos de proteo contra o excesso de luz, que esto presentes nas folhas que normalmente so expostas aos raios solares. c) Efeito da Luz sobre a Fotossntese de Folhas Intactas A medio da fixao de CO2 em folhas intactas mantidas em fluxo crescente de ftons (intensidade luminosa) permite construir curvas de resposta luz (Figura 23), que fornecem informaes teis das propriedades fotossintticas da folha. No escuro, CO2 liberado pela planta devido respirao e, por conveno, a assimilao de CO2 negativa nesta parte da curva (Figura 23).

Figura 23 Respostas fotossintticas a intensidade luminosa de folhas de uma planta C3 (Taiz & Zeiger, 1998) Quando o fluxo de ftons aumenta, a fixao de CO2 pela fotossntese aumenta inicialmente at o ponto em que ela se iguala liberao de CO2 mitocondrial (Figura 23). A intensidade luminosa na qual a fixao de CO2 exatamente igual liberao pela respirao, conhecida como ponto de compensao de luz, o qual depende da espcie e das condies

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de crescimento. Plantas de sombra, por exemplo, possuem ponto de compensao de luz bem menor do que as plantas de sol. Para entender isto veja a equao: Fotossntese lquida = fotossntese total - respirao mitocondrial No ponto de compensao luminoso a fotossntese lquida igual a zero. Nas plantas de sombra a respirao muito baixa o que justifica o seu menor ponto de compensao luminoso (Figura 24). Isto , com uma menor intensidade de luz (em relao a uma planta de sol) ela consegue realizar a fotossntese e contrabalanar a liberao de CO2 pela respirao. Na realidade, elas conseguem ter uma fotossntese lquida positiva (fotossntese bruta maior que a respirao) em nveis muito baixos de luz e por isso que elas conseguem se adaptar a tais ambientes sombreados.

Figura 24 Curva de resposta luz para assimilao de CO2 de uma planta de sol e outra de sombra (Taiz & Zeiger, 1998) Aumentando-se a intensidade luminosa acima do ponto de compensao resulta em um aumento na fotossntese, produzindo um relacionamento linear entre o fluxo de ftons e a taxa fotossinttica (Figuras 23 e 24). Observa-se na curva que em determinado ponto, o aumento da luz no provoca mais aumentos na taxa de fotossntese. Neste caso, diz-se que ocorreu a saturao. As plantas de sombra mostram saturao em baixos nveis de luz, devido a fatores j comentados anteriormente (as folhas destas plantas no esto adaptadas luz intensa). A maioria das plantas C3 mostra saturao entre 500 e 1.000 mol m-2 s-1, valor que fica bem abaixo da completa luz do sol (2.000 mol m-2 s1). Como mostrado na figura 23, a saturao nas folhas de plantas C3 devido s limitaes associadas fixao de CO2 (em outras palavras, a fotossntese limitada pela capacidade de carboxilao da rubisco). J as plantas 134

C4 (milho, sorgo, cana-de-acar, etc.), adaptadas a ambientes de elevada intensidade luminosa, no apresentam a referida saturao (Figura 25). Algumas espcies C3, como amendoim e girassol no apresentam saturao at quase completa luz do sol.

Figura 25 Efeito da intensidade de radiao sobre a taxa de fotossntese lquida de milho - C4 e de trigo e algodo - C3 (Salisbury & Ross, 1991). interessante destacar que as curvas mostradas acima se referem a estudos realizados com folhas isoladas. Quando ns avaliamos a planta como um todo, observamos que nem todas as folhas absorvem a mesma intensidade de luz, visto que muitas ficam sombreadas. Exposio da planta para altas irradincias pode provocar a saturao das folhas completamente expostas luz, mas no das sombreadas. Assim, dificilmente se observa saturao ao nvel de planta inteira. Como resultado, uma planta, uma cultura ou mesmo uma floresta provavelmente nunca recebe luz suficiente para maximizar a sua taxa fotossinttica. Assim, as plantas que tem um melhor arranjamento das folhas e distribuem a luz de maneira mais uniforme entre as diferentes folhas, poder apresentar uma maior produtividade. Muitos pesquisadores tm buscado relacionar a arquitetura das plantas com a produtividade. Uma das medidas mais utilizadas para isto o ndice de rea foliar (IAF), o qual corresponde relao entre a rea foliar da planta (medida em apenas um dos lados das folhas) e a rea ocupada pela projeo da copa. IAF = rea foliar da planta (ou da cultura)/rea do terreno delimitada pela projeo da copa (plantado)

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Em geral, a produtividade aumenta com o aumento do IAF, at certo ponto. Se o valor do ndice aumenta demais significa que a rea foliar muito grande em relao a rea ocupada pela planta (cultura), ou seja, muitas folhas esto sombreadas. O excesso de folhas sombreadas representa reas de pouca produo ou de baixa taxa fotossinttica. As reas sombreadas funcionam como ramos ladres" (drenos). OBS 1: O IAF timo para um dado conjunto de plantas depende do ngulo entre as folhas e o caule. Folhas na horizontal, como as de feijo, absorvem a luz mais eficientemente, porm, provoca maior sombreamento. De modo contrrio, folhas eretas, como as de gramneas (como o milho), absorvem menos luz, porm, produzem pouco sombreamento. As folhas eretas podem permitir melhor distribuio de luz na planta, aumentando a eficincia fotossinttica. OBS 2: rvores de florestas possuem valor de IAF em torno de 12, sendo que muitas folhas sombreadas recebem menos de 1% da luz solar. Valores de IAF em ecossistemas agrcolas so menores, variando de 3 a 8, dependendo da espcie e da densidade de plantio. d) Regulao e Reparo do Aparelho Fotossinttico EXCESSO DE LUZ O aparelho fotossinttico apropriado para absorver uma grande quantidade de energia luminosa e convert-la em energia qumica. O excesso de energia, no entanto, pode acarretar a produo de espcies qumicas txicas que provocam a foto-oxidao ou fotoinibio de componentes celulares (lipdios de membrana, protenas, etc.). Em funo disso, os organismos fotossintticos evoluram alguns mecanismos de regulao e de reparo, que descreveremos abaixo. A proteo do aparelho fotossinttico contra os danos provocados pela luz em excesso pode ocorrer em vrios nveis. O primeiro mecanismo que pode ocorrer a supresso do dano. Isto pode ocorrer pela liberao de energia na forma de calor. Alguns pigmentos, especialmente as xantofilas, associadas ao complexo de antena do fotossistema II, parecem estar envolvidas nesse processo. Alguns estudos tm demonstrado, tambm, a existncia de um complexo coletor de luz mvel associado ao fotossistema II (LHC II mvel). Este complexo est envolvido na partio de energia entre os dois fotossistemas e, sob determinadas condies, contribui para prevenir danos no aparelho fotossinttico. Assim, excesso de energia no fotossistema II acarreta a movimentao deste complexo coletor de luz para a regio do fotossistema I, ajudando-o na absoro de luz e promovendo um maior equilbrio entre os dois fotossistemas. Caso os mecanismos de supresso do dano no forem suficientes, ocorre a produo de espcies txicas, tanto no fotossistema II (oxignio singleto) como no fotossistema I (superxido, O2-), que podem acarretar a foto-oxidao dos componentes celulares. Neste nvel, mecanismos que destroem estes radicais livres podem evitar danos ao aparelho fotossinttico. Os carotenides, por exemplo, reage com o oxignio singleto, convertendo-o para forma menos ativa: O2 (singleto) + carotenide (fundamental) O2 (tripleto) + carotenide (excitado) carotenide (fundamental) + Calor

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Como se v, os carotenides convertem o oxignio singleto em oxignio tripleto (forma pouco ativa), e ficam no estado excitado. Os carotenides retornam espontaneamente para o seu estado fundamental, liberando calor. J os superxidos (O2-) formados pelo forte poder redutor da ferredoxina, na regio do fotossistema I, podem ser eliminados pela ao de enzimas, incluindo a Superxido Dismutase e Ascorbato Peroxidase: 2 O2- (txico) + 2 H2O H2O2 (txico) dismutase do superxido 2 H2O2 (txico) + O2 peroxidase do ascorbato + ascorbato reduzido 2 H2O + desidroascorbato

Caso esta segunda linha de defesa no seja suficiente, os produtos txicos, formados pelo excesso de energia, pode danificar certas molculas alvo que so susceptveis, especialmente a protena D1 do fotossistema II. Este processo produz a conhecida fotoinibio. No entanto, as plantas possuem um sistema de reparo que envolve a remoo, a degradao e a sntese de novo da protena D1, que novamente inserida no centro de reao do fotossistema II. As outras partes do centro de reao do fotossistema II parecem ser recicladas. Assim, a protena D1 o nico componente que necessita ser sintetizado de novo.

5.2 CONCENTRAO DE CO2 OBS: Os mecanismos de abertura e fechamento estomtico, que esto associados s trocas gasosas (entrada de CO2 e sada de vapor dgua) foram estudados na unidade III (Relaes Hdricas) A concentrao de CO2 na atmosfera um assunto bastante estudado por muitos pesquisadores, devidos principalmente, a trs fatores: - A concentrao de CO2 tem crescido linearmente nos ltimos 40 anos; O aumento na concentrao de CO2 pode contribuir para o efeito estufa. Isto decorre da absoro da radiao infravermelha refletida pela terra pelos gases da atmosfera (a entra o CO2), produzindo o aquecimento do planeta. O aumento na concentrao de CO2 na atmosfera pode aumentar a taxa fotossinttica das plantas C3

A influncia do CO2 sobre a fotossntese tm implicaes importantes sobre o crescimento e a produtividade. Em nveis muito baixos de concentrao de CO2, existe um balano negativo entre o CO2 fixado e o respirado, isto , a planta libera CO2 para a atmosfera. Aumentando-se a concentrao de CO2 o ponto de compensao de CO2 alcanado, ou seja, a fotossntese bruta igual respirao. Neste ponto a fotossntese lquida igual a zero. As plantas C4 possuem ponto de compensao prximo de zero, refletindo a maior afinidade da enzima primria de assimilao de CO2 (PEP carboxilase) e taxa de fotorrespirao que praticamente nula (Figura 26). Procure entender: 137

Sob condies ambientes (O2 = 21% e CO2 = 0,036%), e nas condies TROPICAIS (altas temperaturas), temos: Plantas C3 Fotossntese lquida = fotossntese total (respirao + fotorrespirao) Plantas C4 Fotossntese lquida = fotossntese bruta respirao Conseqncias: As plantas C4 possuem menor ponto de compensao de CO2 e maiores taxas de fotossntese lquida, nas condies citadas acima. OBS: Em condies de clima temperado as plantas C3 podem ser mais eficientes (ver figura 27). Outro ponto a ser considerado a saturao da fotossntese pelos nveis de CO2. As plantas C4, apresentam saturao em baixas concentraes de CO2, o que se deve ao fato de que estas plantas j possuem um mecanismo eficiente de concentrao deste gs nas clulas da bainha do feixe. Por outro lado, em plantas C3, aumentando-se a concentrao de CO2 acima do ponto de compensao estimula-se a fotossntese, sem saturao, at valores relativamente altos deste gs na atmosfera. Estes resultados indicam que as plantas C3 podem ser beneficiadas pelo aumento na concentrao de CO2 atmosfrico, enquanto que a maioria das plantas C4 saturada pelos nveis deste gs existente atualmente no nosso planeta.

Figura 26 - Mudanas na fotossntese em funo da concentrao de CO2 no ambiente (Taiz & Zeiger, 1998) 138

5.3 TEMPERATURA A temperatura, como sabemos, afeta as reaes enzimticas de todos os processos, inclusive as da fotossntese. O efeito da temperatura sobre a fotossntese depende da espcie e das condies ambientais nas quais as plantas esto crescendo. Plantas como milho e sorgo, as quais crescem bem em climas quentes, usualmente possuem temperaturas timas para a fotossntese maior do que culturas como trigo, ervilha, centeio e cevada, as quais so cultivadas em regies frias. Quando comparamos plantas C3 com plantas C4, observamos que estas ltimas possuem maiores temperaturas timas para a fotossntese do que as primeiras. Estas diferenas se devem s diferentes taxas de fotorrespirao. Quando aumentamos a temperatura, a taxa de fotorrespirao cresce consideravelmente nas espcies C3, reduzindo a fotossntese lquida. As plantas C4, graas ao mecanismo de concentrao de CO2, reduzem a taxa de fotorrespirao a nveis desprezveis, mesmo em elevadas temperaturas. As temperaturas timas para plantas C4 variam de 30 a 45oC e para as C3, de 20 a 25oC. interessante destacar que a vantagem das plantas C4 ocorre apenas nas condies de climas quentes, como o caso do nosso clima tropical. Lembre-se que as plantas C3 consomem menos ATP para fixar uma molcula de CO2 (Tabela 2). Observe na figura 27 que as plantas C3 apresentam um maior rendimento quntico do que as C4, quando as temperaturas ficam abaixo de 27oC. Isto significa que, sob condies de baixa temperatura as plantas C3 tem fotorrespirao baixa, podem ser mais produtivas.

Figura 27 O rendimento quntico para a assimilao fotossinttica de carbono em uma planta C3 e uma C4, em funo da temperatura da folha (Taiz & Zeiger, 1998) 139

5.4 IDADE DA FOLHA E TRANSLOCAO DE CARBOIDRATOS Quando as folhas crescem, sua capacidade para fotossintetizar aumenta at elas atingirem a sua maturidade, ou seja, seu crescimento final. A partir de ento, a taxa de fotossntese comea a decrescer. Folhas velhas e senescentes eventualmente tornam-se amarelas e so incapazes de realizar a fotossntese, pois a clorofila degradada e o cloroplasto perde sua funo. Um controle interno da fotossntese a taxa na qual os produtos da fotossntese, como a sacarose, podem ser translocados da folha produtora (fonte) para o rgo de utilizao ou armazenamento (dreno). Em geral, a remoo de tubrculos, sementes ou frutos em desenvolvimento (drenos), inibe a fotossntese aps uns poucos dias, especialmente nas folhas adjacentes que normalmente translocam substncias para estes rgos. Alm disso, espcies que fotossintetizam em taxas mais elevadas tambm apresentam maiores taxas de translocao de assimilados via floema. Estes resultados mostram que existe um controle entre a produo (fotossntese), a translocao via floema e a utilizao dos fotoassimilados (respirao e, ou armazenamento).

BIBLIOGRAFIA FERREIRA, L. G. R. Fisiologia Vegetal: Relaes Hdricas. 1st ed. Fortaleza: Edies UFC, 1992, 138p. MARSCHNER, H. Mineral Nutrition of Higher Plants. 2nd ed. London: Academic Press, 1995, 889p. HOPKINS, W. G. Introduction to Plant Physiology. 2nd ed. New York: John Wiley & Sons, Inc., 2000, 512p. PRISCO, J. T. Fotossntese e Fotorespirao. Fortaleza, CE, 1989, 20p (mimeog.) SALISBURY, F. B., ROSS, C. W. Plant Physiology. 4th ed. California: Wadsworth Publishing Company, Inc., 1991, 682p. TAIZ, L., ZEIGER, E. Fisiologia Vegetal. 3 edio. Editota Artmed, 2004, 719p.

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ESTUDO DIRIGIDO No 04 ASSUNTO: FOTOSSNTESE 1 Sabe-se que a fotossntese consta de duas fases. Diga quais so elas, onde ocorrem e o que produzem? 2 Quais os pigmentos responsveis pela absoro de luz na fotossntese nas plantas superiores e quais as suas estruturas? 3 Todas as etapas que constituem as reaes dependentes de luz, so realizadas por quatro complexos proticos: fotossistema II (PS II), citocromo b6f, fotossistema I (PS I) e a sintase do ATP. Alm destes tambm se encontra o complexo de foto-oxidao da gua. Em relao a essa fase da fotossntese descreva: a) b) c) d) e) O fluxo acclico de eltrons; O fluxo cclico de eltrons; O processo de foto-oxidao da gua; O processo de sntese de ATP (fotofosforilao); Mostre a distribuio de H+, O2, ATP e NADPH, ou seja, indique onde cada um desses produtos liberado (no estroma ou no lmen dos tilacides). JUSTIFIQUE.

4 Em relao ao ciclo de Calvin dizer: a) Qual o composto receptor de CO2? Qual o primeiro produto estvel? Quais as trs etapas bsicas do ciclo? 5 O que fotorrespirao? Quais os seus efeitos sobre a fotossntese lquida? 6 Como ocorre a fixao de CO2 nas plantas C4? 7 O que voc entende por metabolismo cido das crassulceas (CAM)? 8 Cite as caractersticas diferenciais entre plantas C3", C4 e CAM. 9 Defina ponto de compensao de luz e ponto de compensao de CO2. Avalie as plantas C3 e C4 , em relao utilizao da luz e do CO2. 10 Cite as caractersticas diferenciais entre plantas adaptadas sombra e plantas adaptadas ao sol. 11 Descreva os mecanismos de regulao e de reparo dos danos provocados pelo excesso de luz sobre o aparelho fotossinttico. 12 Faa comentrios sobre o aumento dos nveis de CO2 na atmosfera, efeito estufa e produtividade das plantas.

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