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ENZIMAS

) Professora: Roberta Schmatz

....as Enzimas, a mais admirvel e altamente especializada das protenas....

Histrico
1700 Catlise biolgica, em estudos da digesto da carne pelas secrees do estmago; 1850 Louis Pasteur concluiu que a fermentao do acar em lcool pela levedura catalisada por fermentos Vitalismo; 1987 Eduard Buchner descobriu que extratos de levedura poderiam fermentar acar em lcool provando que a fermentao era promovida por molculas que continuavam a funo quando removidas das clulas; Frederick W. Kuhne chamou essas molculas de Enzimas; 1926 James Sumner isolou a cristalizao da Urease, descobriu que cristais de urease consistiam inteiramente de protenas e postulou que todas as enzimas so protenas Desde a ltima parte do Sculo XX a pesquisa sobre enzimas tem sido intensa.

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Enzimas
So as protenas mais notveis e mais altamente especializadas; Catalisadores das reaes dos sistemas biolgicos; Aceleram reaes qumicas; Possuem um extraordinrio poder cataltico; Alto grau de especificidade para seus substratos; Desempenham suas funes em solues aquosas sob condies suaves de T e pH.

Nutrientes

Deficincia ou ausncia de uma Enzima

Doenas genticas

Atividade em excesso uma Enzima

Protenas

Carboidratos Enzimas

Lipdeos

Atividade de Enzimas Enzimas + + ENERGIA

Diagnstico de Doenas

Plasma sanguneo Eritrcitos Amostras de tecido

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Todas as enzimas so protenas...

Com exceo de um grupo de RNA cataltico, A atividade cataltica da enzima depende da integridade de sua conformao nativa:
Estruturas proteicas essenciais para a sua atividade cataltica

Se a enzima for desnaturada ou dissociada em suas subunidades a atividade cataltica perdida; Possuem pesos moleculares de cerca de 12000 at mais de 1 milho;

Algumas enzimas requerem outros grupos qumicos alm dos seus resduos de aminocidos paraa sua atividade.

Cofator
Pode ser um ou mais ons inorgnicos como Fe2+, Mg 2+, Mn2+ ou Zn2+

Co-fator

Enzima Inativa

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Coenzima
Molcula orgnica ou metalorgnica complexa. Agem como carreadores transitrios de grupos funcionais especficos. A maioria derivada das vitaminas, cuja presena na dieta necessria em pequenas quantidades.

ESTRUTURA
Enzima Simples Aminocidos

Enzima Conjugada

Aminocidos Parte Proteica

Parte no Proteca

Grupo Prosttico Apoenzima Holoenzima Coenzima

Mg
2+

Cofator

Mg 2+ Cofator

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Uma coenzima ou on metlico ligado muito forte ou covalentemente enzima chamado de grupo prosttico Holoenzima = Uma enzima completa cataliticamente ativa, junto com a sua coenzima ou/ e ons metlicos:

Parte proteica+ coenzima e/ou on metlico (cofator)

A frao proteica de uma enzima, na ausncia do seu cofator e/ou coenzima, chamada de apoenzima ou apoprotena.

A CLASSIFICAO DAS ENZIMAS SE DO A PARTIR DAS REAES QUE ELAS CATALISAM...

1. Oxidorredutases: So enzimas que catalisam reaes de transferncia
de eltrons. Ex:. Desidrogenases e as Oxidases;

2. Transferases: Enzimas que catalisam reaes de transferncia de

grupamentos funcionais como grupos amina, fosfato, acil, carboxil, etc. Ex:. as Quinases e as Transaminases;

3. Hidrolases: Catalisam reaes de hidrlise de ligao covalente. Ex: As

peptidades;

4. Liases: Catalisam a quebra de ligaes covalentes e a remoo de

molculas de gua, amnia e gs carbnico. Ex:. As Dehidratases e as Descarboxilases;

5. Isomerases: Catalisam reaes de interconverso entre ismeros pticos

ou geomtricos. Ex:. Epimerases;

6. Ligases: Catalisam reaes de formao e novas molculas a partir da

ligao entre duas j existentes, sempre s custas de energia (ATP). Ex:. Sintetases.

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As enzimas so classificadas pelas reaes que catalisam

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Nomenclatura e Classificao Oxirredutases Transferases Hidrolases Liases Isomerases Ligases

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NOMENCLATURA DAS ENZIMAS

A determinao do nome das enzimas normatizada por um comit especializado, o Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (NC-IUBMB). Nome Recomendado: Mais curto e utilizado no dia a dia de quem trabalha com enzimas; Utiliza o sufixo "ase" para caracterizar a enzima. Exs: Urease, Hexoquinase, Peptidase. Nome Usual : Consagrados pelo uso; Exs: Tripsina, Pepsina, Ptialina. Nome Sistemtico: Mais complexo, nos d informaes precisas sobre a funo metablica da enzima. ATP: D-hexose 6 -Fosfo-Transferase (Hexoquinase) Ex: E.C. 2.7.1.1.

Cada enzima possui cdigo com 4 dgitos que caracteriza o tipo de reao catalisada...

1955 - Comisso de Enzimas (EC) da Unio Internacional de Bioqumica (IUB) - nomear e classificar.

E.C. e o nmero.... Que corresponde a: 1 dgito - classe 2 dgito - subclasse 3 dgito - sub-subclasse 4 dgito - indica o substrato

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Nome sistemtico da enzima que catalisa a reao:

ATP: glicose- fosfotransferase

ATP + D-glicose

ADP + D-glicose 6-fosfato

Hexoquinase
Numero na Comisso de Enzimas: E.C 2.7.1.1
Classe: transferase Subclasse: fosfotransferase
Fosfotransferase com um grupo Hidroxila como receptor

Nome comum

D-glicose como o grupo receptor da fosforila

1. Oxido-redutases 1.1.atuando 1.2.atuando 1.3.atuando 1.4.atuando 1.5.atuando 1.6.atuando

(reaes de oxidao-reduo ou transferncia de eltrons) em CH-OH em C=O em C=Oem CH-NH2 em CH-NHem NADH, NADPH

2.Transferases (transferem grupos funcionais entre molculas) 2.1.grupos com um carbono 2.2.grupos aldedo ou cetona 2.3.grupos acil 2.4.grupos glicosil 2.7.grupos fosfatos 2.8.grupos contendo enxofre 3.Hidrolases (reaes de hidrlise) 3.1.steres 3.2.ligaes glicosdicas 3.4.ligaes peptdicas 3.5.outras ligaes C-N 3.6.anidridos cidos 4.Liases (catalisam a quebra de ligaes covalentes e a remoo de molculas de gua, amnia e gs carbnico) 4.1. =C=C= 4.2. =C=O 4.3. =C=N5.Isomerases (transferncia de grupos dentro da mesma molcula para formar ismeros) 5.1.racemases 6.Ligases (catalisam reaes de formao de novas molculas a partir da ligao entre duas pr-existentes, sempre s custas de energia) 6.1. C-O 6.2. C-S 6.3. C-N 16 6.4. C-C

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Como as enzimas funcionam

A catlise enzimtica das reaes essencial para os sistemas vivos; Reaes no catalisadas tendem a ser lentas- a maioria das molculas biolgicas muito estvel nas condies internas das clulas; As reaes requeridas para digerir os alimentos, enviar sinais nervosos ou contrair um msculo no ocorrem com uma velocidade til sem a catlise.

As enzimas proporcionam um ambiente especfico adequado para que uma dada reao possa ocorrer mais rapidamente. A propriedade caracterstica das reaes catalisadas por enzimas que a reao ocorre confinada em um bolso da enzima STIO ATIVO A molcula que liga no stio ativo e sobre qual a enzima age Substrato

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Sitio Ativo Revestido com resduos de aa com grupos nas cadeias laterais

Se ligam ao SUBSTRATO e catalisam a sua transformao qumica

Ligao de um substrato a uma enzima no stio ativo. Enzima quimotripsina com o substrato ligado em vermelho

Reao Enzimtica
E+S ES EP P+E

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As enzimas alteram a velocidade da reao, no o equilbrio E+S ES EP E+P

A funo do catalisador aumentar a velocidade da reao.
Elas no so consumidas no processo!!! O equilbrio entre S e P reflete a diferena entre as energias livres dos seus estados fundamentais. G negativa o equilbrio favorece P. A posio e a direo do equilbrio no so afetadas pelo catalisador.

Estado Fundamental Estado Fundamental

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A velocidade da reao depende da barreira energtica entre S e P: - A energia necessria para alinhar os grupos reagentes, para formao de cargas instveis transitrias, rearranjos de ligaes, etc...para que a reao ocorra em qualquer direo. - Para que a reao ocorra, as molculas devem suplantar esta barreira e atingir um nvel de energia mais alto. ESTADO DE TRANSIO- topo da curva de energia Momento molecular transitrio no qual eventos como a quebra de ligao, a formao de ligao ou o desenvolvimento de carga ocorrem com a mesma probabilidade de seguirem tanto para formar novamente o S como para formar o P.

Comparao de uma reao catalisada de uma reao no-catalisada E+S ES EP E+P

A diferena entre os nveis energticos do estado fundamental e do estado de transio a ENERGIA DE ATIVAO, G . A velocidade da reao reflete G .

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Uma maior energia de ativao corresponde a uma reao mais lenta. A velocidade da reao pode aumentar pelo aumento da T e/ou P, aumentando assim o n de molculas que possuem energia suficiente para suplantar a barreira energtica. Os catalisadores aumentam a velocidade das reaes por diminurem as energias de ativao. O papel da E acelerar a interconverso entre S e P. A E no gasta no processo e o ponto de equilbrio no afetado. Entretanto a reao atinge o equilbrio muito mais rapidamente quando a E apropriada estiver presente, pois a velocidade da reao aumentada.

Alguns princpios explicam o especificidade das enzimas

poder cataltico e a

As enzimas so catalisadores extraordinrios . O aumento da velocidade que elas conferem esta na faixa de 5 a 17 ordens de magnitude. As enzimas tambm so muito especficas, discriminando facilmente substratos que possuem estruturas muito semelhantes

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Como que este aumento de velocidade altamente seletivo pode ser explicado?

Qual a fonte de energia para esta grande diminuio nas energias de ativao de reaes especficas?

Primeira parte: Rearranjo de lig. covalentes Reaes qumicas de muitos tipos ocorrem entre substratos e grupos funcionais da enzima ( ons metalicos, coenzimas, aa). Podem formam ligaes covalentes transitrias com um S e ativ-lo para a reao, ou um grupo pode ser transitoriamente transferido do S para a enzima. Interaes covalentes entre E e S diminuem a energia de ativao, acelerando assim a reao, por darem condies para que a reao ocorra por uma via alternativa de baixa energia.

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2 parte: Interaes no covalentes entre E e S Muito da energia necessria para diminuir a energia de ativao provm de interaes fracas no covalentes entre a E e o S. Interao entre E e S no complexo ES mediada por ligaes de H e interaes hidrofbicas e inicas. A formao de cada interao fraca no complexo ES acompanhada pela liberao de uma pequena quantidade de energia livre que estabiliza a interao. Energia proveniente da interao E-S denominada ENERGIA DE LIGAO principal fonte de energia livre utilizada pelas enzimas para a diminuio da energia de ativao das reaes.

Dois princpios fundamentais de como as enzimas utilizam a energia de ligao no covalente: 1. Muito do poder cataltico das enzimas provm basicamente da energia livre liberada na formao de muitas ligaes fracas e interaes entre a E e seu S. Igualmente, essa energia de ligao contribui para a especificidade e a catlise. 2. Interaes fracas so otimizadas no estado de transio da reao. Os stios ativos das E so complementares no aos S por si mesmos, mas aos estados de transio pelos quais os S passam ao serem convertidos em produtos durante a reao enzimtica.

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O requerimento de interaes fracas para impulsionar a catlise uma razo por que as enzimas so to grandes

pois elas devem oferecer grupos funcionais para as interaes inicas, pontes de hidrognio e outras, posicionando esses grupos para que a energia de ativao seja otimizada no estado de transio.

Interaes Fracas entre Enzima e Substrato so otimizadas no estado de transio

Emil Fischer 1894 as enzimas so estruturalmente complementares aos seus substratos, de modo a se encaixarem como uma chave em uma fechadura

Complementaridade de formas entre o substrato e seu stio de ligao na enzima

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Complementaridade de formas entre o substrato e seu stio de ligao na enzima

A hiptese chave e fechadura pode ser enganadora quando aplicada a catlise enzimtica. Uma enzima totalmente complementar ao seu S seria uma enzima muito pobre.

Reao imaginria: a quebra de uma basto de metal magnetizado

Duas enzimas imaginrias- duas bastonases- catalisar a quebra do metalutilizando foras magnticas como energia de ligao ( proveniente da interao E-S, ponte de energia livre utilizada para diminuir a Energia de ativao)

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Enzima complementar ao substrato

S ativo: Bolso delimitado por ms - O curvamento impedido pelas interaes magnticas entre o basto e a E. Para quebrar(reagir) o basto deve atingir o estado de transio da reao, mas o basto se encaixa to perfeitamente ao stio ativo que ele no pode se dobrar, pois ao se dobrar haveria a eliminao de algumas interaes magnticas entre o basto e a E. Uma E deste tipo impede a reao, pois estabiliza o S ao invs de desestabiliz-lo ENZIMA INTIL POIS IMPEDIRIA A REAO Complexo ES corresponderia a uma energia da qual o S teria dificuldade de escapar.

Noo moderna da catlise enzimtica: Haldane (1930), Linus Pauling (1946): Para poder catalisar reaes, o substrato deve ser complementar a enzima no estado de transio da reao.

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Enzimas complementar ao estado de transio da reao Interaes timas entre S e E s ocorrem no estado transio.

interaes magnticas (pago)

GB

Subconjunto de interaes magnticas

Energia Livre para o S (gasto)

Velocidade da Reao

O basto de metal liga-se bastonase, mas apenas um subconjunto de possveis interaes magnticas usado para formar o complexo ES. O de energia livre necessrio para tencionar o basto em uma curvatura e quebrar parcialmente a conformao compensado (pago) pelas interaes (energia de ligao) que se formam entre a E e o S no estado de transio. Muitas dessas interaes envolvem partes do basto que esto distantes do ponto de quebraessas interaes fornecem parte da energia necessria para catalisar a quebra do basto diminui a energia de ativao e aumenta a velocidade da reao.

G + GB

diminuio lquida da energia de ativao

*** Interaes fracas entre a E e o S fornecem uma fora impulsionadora substancial para a cat enzimtica

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No complexo ES h a formao de interaes fracas, no entanto a completa complementaridade entre o S e a E ocorre apenas quando o S estiver no estado de transio.

A energia livre liberada durante a formao dessas interaes compensa parcialmente a energia necessria para atingir o topo da curva de energia.
A soma da energia de ativao desfavorvel (positiva) e a energia de ligao favorvel (negativa) resulta em uma reduo lquida de energia de ativao. Mesmo quando ligado enzima, o estado de transio no uma forma estvel, mas sim o curto perodo de tempo que o S o permanece no topo da curva de energia.

Interaes com ligaes fracas entre a enzima e o substrato fornecem uma fora propulsora substancial para a catlise enzimtica. Os grupos presentes no S que esto envolvidos nessas ligaes fracas podem atuar a alguma distncia das ligaes que so rompidas ou modificadas. As interaes fracas formadas apenas no estado de transio so as que representam a principal contribuio para a catlise.

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A energia de ligao contribui para a especificidade da reao e a catlise

A mesma energia de ligao que oferece a energia para a catlise tambm d a enzima sua ESPECIFICIDADE capacidade de discriminar entre um S e uma molcula competidora deriva da formao de muitas interaes fracas entre a E e o S especfico.
Se o stio ativo de uma E tiver grupos funcionais organizados otimamente de modo a formar uma grande variedade de interaes fracas com um determinado S no correspondente estado de transio, a E no ser capaz de interagir com a mesma intensidade com nenhuma outra molcula neste caso o S pobre para a enzima;
Se este S contem um grupo funcional extra para o qual a E no tiver um stio de ligao provavelmente ser excludo da E.

Grupos catalticos especficos contribuem para a catlise

Uma vez que o S esteja ligado a E, grupos funcionais catalticos posicionados de modo apropriado ajudam no rompimento e na formao de ligaes por vrios mecanismos: Catlise cido-base geral Catlise covalente Catlise por ons metlicos Mecanismos diferentes dos mecanismos com base na energia de ligao, pois geralmente envolvem uma interao transitria covalente com o S ou uma transferncia de grupo do S ou para ele.

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Cintica Enzimtica
Determina as constantes de afinidade do S e dos inibidores; Conhecer as condies timas da catlise; Ajuda a elucidar os mecanismos de reao; Determinar a funo de uma determinada enzima em uma rota metablica.

O modelo de Michaelis-Menten til para explicar a cintica das reaes catalisadas por enzimas.

A concentrao do substrato afeta a velocidade das reaes catalisadas por enzimas

O estudo dos efeitos da concentrao do S complicado pelo fato de [S] modificar-se durante o curso de uma reao in vitro, a medida que o S convertido em P. Uma abordagem simplificadora nos experimentos de cintica medir a velocidade inicial (Vo), quando a [S] for maior que a [E].

Onde a E pode estar em [ ] nanomolares, enquanto que S em [ ] cinco a seis ordens de magnitude maior!!

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[S] >> [E] Saturao

Em [ S] relativamente Vo aumenta quase que linearmente com o da [S]. Em [S], Vo em pequenas quantidades em resposta ao da [S]. atingido um ponto alm do qual um em Vo insignificante pequeno com o de [S]. Esta regio de Vo tipo plat esta prxima a Vmx.

Vo

Figura. Efeito da variao da concentrao do substrato na velocidade inicial de uma reao catalisada por enzima ([E] mantida constante).

A combinao de uma enzima com a sua molcula de substrato formando ES uma etapa necessria para a catlise enzimtica. Essa ideia foi expandida em uma teoria geral da ao enzimtica Teoria de Michaelis e Menten

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Modelo de Michaelis e Menten

O modelo de Michaelis-Menten considera que uma reao enzimtica ocorre em dois passos: ETAPA 1. Ligao de um substrato (S) a uma enzima (E), formando um complexo intermedirio (ES) ETAPA 2. Formao do produto (P) a partir do complexo ES, com recuperao da forma livre da enzima (E)

Enzima primeiro combina reversivelmente com o S para formar o ES, numa etapa reversvel e rpida:

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O complexo ES depois se quebra em uma segunda etapa mais lenta produzindo a E livre e o produto P da reao

Uma vez que a 2 reao a mais lenta deve limitar a velocidade da reao total a velocidade total deve ser proporcional concentrao das espcies que reagem na 2 etapa, isto ES.

A velocidade inicial mxima (Vmx) de uma reao catalisada ocorre quando toda a enzima estiver presente como complexo ES e [E] desprezvel.
Nessas condies, a E esta saturada com o S e um incremento de [S] no provoca efeito na velocidade. Essa condio ocorre quando [S] for alta o suficiente para que essencialmente toda a enzima livre se converta na forma ES. Aps o rompimento do complexo ES dando o produto P a E fica livre para catalisar a reao de mais uma molcula de S.

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A relao entre a concentrao de substrato e a velocidade da reao pode ser expressa quantitativamente A curva que expressa a relao entre a [S] e a Vo segue a mesmo forma para a maioria das enzimas HIPRBOLE RETANGULAR. E so expressas algebricamente pela equao de MichaelisMenten.

A equao de Michaelis-Menten define a relao quantitativa entre velocidade inicial, Vo, a velocidade mxima, Vmx e a concentrao inicial do S, [S], todas relacionadas pela constante de Michaelis, Km.
Km Constante de Michaelis

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A equao se confirma pelo grfico

Atingiu o plat Ponto de saturao

Alta [S]

Baixa [S]

Km >> [S]

Insignificante

Parmetros Cinticos so usados para comparar as atividades enzimticas

As enzimas que seguem o comportamento de uma curva hiperblica seguem a cintica de Michaelis-Menten.

Quando: Km=[S] quando a Vo= 1/2 Vmax

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O Km de um substrato para uma enzima especfica caracterstico, e nos fornece um parmetro de especificidade deste substrato em relao enzima. Quanto menor o Km, maior a especificidade...

Para uma mesma enzima temos Km diferentes

Transformao da equao de Michaelis-Menten: o grfico do duplo recproco

Invertemos a equao para:

Separando a os componentes do numerador no lado direito temos

Equao de Lineweaver-Burk

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Enzimas que obedecem a relao Michaelis e Menten usando o Diagrama de Lineweaver-Burk produzem uma linha reta

til para diferenciar certos tipos de mecanismos de reao enzimtica. til na anlise da inibio de enzimas.

Muitas enzimas catalisam reaes com dois ou mais substratos

Exemplo:
Reao catalisada pela HEXOQUINASE

Substratos A hexoquinase possui um Km caracterstico para cada substrato. Geralmente envolve a transferncia de um tomo de um grupo funcional de um S para outro; Ambos os substratos podem estar ligados a enzima formando um complexo ternrio no-covalente. Os S se ligam segundo uma sequncia aleatria ou em uma sequncia com ordem especfica. Em outros casos o 1 S convertido em um produto que se dissocia antes que o 2 S se ligue.

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Reao enzimtica envolvendo o complexo ternrio

Ordem ao acaso

Ordenado

Reao enzimtica onde no se forma o complexo ternrio

As enzimas esto sujeitas inibio reversvel ou irreversvel

Os inibidores das enzimas so molculas que interferem com a catlise, diminuindo ou interrompendo as reaes enzimticas.

Os inibidores esto entre os medicamentos mais importantes.

Ex.:A aspirina inibe a enzima que catalisa a primeira etapa da sntese das prostaglandinas (Ciclooxigenase), compostos envolvido em muitos processos, incluindo alguns que produzem dor e inflamao.

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DUAS AMPLAS CLASSES DE INIBIDORES ENZIMTICOS...

MISTO

Inibio Enzimtica Reversvel Inibio competitiva, onde um inibidor competitivo compete com o substrato pelo o stio ativo de uma enzima

Inibidores competem com o stio ativo da enzima!!!

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Tratamento teraputico com base na competio pelo stio ativo utilizado para tratar pacientes que ingeriram metanol. O etanol compete efetivamente com o metanol como substrato par a a lcool desidrogenase. A terapia para o envenenamento com o metanol uma infuso endovenosa de etanol, que diminui a velocidade de formao do fo rmaldedo, o suficiente Para que a maior parte do metanol possa ser excretado na urina sem maiores danos.

Cegueira

Inibio Competitiva
Inibidor competitivo Estrutura semelhante do substrato Liga-se ao Stio Ativo da Enzima

E+S
+ I

ES

E+P

EI

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Inibio Competitiva
Na presena do inibidor competitivo afinidade da enzima pelo substrato

[substrato] necessria para que a enzima funcione normalmente

Km aparente da enzima

Inibio Competitiva
Anlise Grfica

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INIBIO COMPETITIVA
Km aumenta Vmx no altera Sempre haver uma [S] to alta que desloca o inibidor competitivo do stio ativo da enzima independente de quo alta seja a [I]

Inibio incompetitiva
Inibidores incompetitivos ligam-se a um stio distinto do stio ativo do S, e ao contrrio do inibidor competitivo, liga-se em apenas ao complexo ES!!!

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Inibio Incompetitiva
Diminui a concentrao de enzima ativa

Velocidade Mxima da Reao

Exemplos: Metais pesados - Pb+2

INIBIO INCOMPETITIVA
Vmx e o Km diminuem Inibidor no tem
semelhana estrutural com o substrato NO se liga no stio ativo da enzima Aumento da [substrato] no diminui a inibio A VELOCIDADE mxima DIMINUI na presena do inibidor e assim necessria uma [S] menor para atingir o ponto que Vo=Vmx/2 km diminui

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Inibio mista Inibidores mistos ligam-se a um stio distinto do Stio ativo do qual o substrato se liga, mas podem ligar-se tanto a E livre quanto ao complexo ES!!!

INIBIO MISTA
Aumenta o Km e a diminui a Vmax

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Inibio Enzimtica Irreversvel

Inibidores irreversveis so aqueles que se ligam de forma covalente ou destroem um grupo funcional da enzima que essencial para a atividade da enzima ou ento forma uma associao no covalente estvel.

A enzima no volta mais a sua atividade normal.

Inibio Enzimtica Irreversvel

Ex: Inibio da enzima ciclo-oxigenase pelo acetilsalicilato

Ciclo-oxigenase

cido araquidnico

Prostaglandinas Processos fisiolgicos, ex. sensao de dor

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Inibio

Isso demonstra que a Ser195 o resduo de Ser com funes catalticas chave no sitio ativo da quimotripsina

Reao da quimotripsina com o Diisopropilfluorofosfato (DIFP)

Inibio Enzimtica Irreversvel

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Inibio Enzimtica Irreversvel

Inibidores Suicidas
ou

Inibidores com Base no Mecanismo

Compostos, em geral, pouco reativos at se ligarem enzima

ou Convertido em um composto muito reativo que se combina IRREVERSIVELMENTE com a enzima Forma um produto que um potente inibidor do prximo passo da via metablica

Enzimas Reguladoras
No metabolismo celular grupos de enzimas trabalham juntas em vias seqenciais para realizar um certo processo metablico. Nessas reaes o P da reao de uma E torna-se o substrato da prxima. Essas enzimas reguladoras aumentam e diminuem sua atividade em resposta a certos sinais celulares
Dessa forma elas ajustam a velocidade das reaes, permitindo que a clula alcance suas necessidades energticas, requerimento de biomolculas para o crescimento e reparo celular.

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Enzimas Reguladoras
No obedecem a cintica de Michaelis-Menten; Controlam a etapa limitante em uma cadeia de reaes enzimticas; Tem sua atividade cataltica aumentada ou diminuda em resposta a determinados sinais, molculas sinalizadoras (pequenos metablicos ou cofatores). Classes de enzimas reguladoras: Enzimas alostricas; Enzimas reguladas pela modificao covalente reversvel

Enzimas alostricas Funcionam atravs da ligao no-covalente e reversvel de um metablito regulador chamado modulador; Moduladores podem ser inibidores ou ativadores; So maiores e mais complexas, possuem duas ou mais cadeias polipeptdicas. Enzimas reguladas por modificao covalente reversvel Grupos qumicos so ligados covalentemente e removidos da enzima reguladora por enzimas diferentes. EX:. fosfato, adenosina monofosfato, grupos metil, etc.

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Enzimas alostricas sofrem alteraes de conformao em resposta ligao de moduladores

Moduladores podem ser: Inibitrios Estimuladores Enzimas Homotrpica: o modulador e o substratos so idnticos Enzimas Heterotrpicas: modulador e substratos so molculas diferentes

Regulao da Atividade Enzimtica Enzimas Alostricas

Reguladas por

efetores ou moduladores alostricos

fora do stio ativo (stio alostrico)

modo no covalente

positivos

negativos

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Subunidade reguladora
Subunidade catalitica

Enzima menos ativa

Sitio regulador com alta especificidade pelo modulador

Enzima mais ativa

Muda a conformao

Complexo Enzima-Substrato ativo

Ativa o sitio para ligar-se ao S

As propriedades cinticas das enzimas alostricas divergem do comportamento de Michaelis e Menten

As enzimas alostricas mostram relaes Vo e [S] diferentes da cintica de Michaelis e Menten Elas no exibem saturao com o substrato quando a [S] for alta; Produzem uma curva de saturao sigmide e no hiperblica. Enzimas alostricas so reguladas pelas necessidades celulares

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Curva representando Enzima Alostrica Homotrpica

[S] = [modulador]

Vo aumenta

[S] aumentada A curva torna-se sigmide pq o S atua como modulador positivo (um ativador) onde as subunidades atuam cooperativamente o S se liga tanto ao sitio ativo quanto ao sitio regulador alterando a conformao da enzima aumentando a afinidade da ligao do S das molculas subseqentes do substrato.

Modulador positivo (ativador), curva mais

prxima de uma hiprbole, diminui o K0,5

Modulador negativo ( inibidor), curva mais

sigmoidal, aumento no K0,5

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Curva representando Enzima Alostrica Heterotrpica (efeitos de um modulador + e um -)

Ativador produz uma curva mais ligeiramente hiperblica

Atividade da E sem modulador

Inibidor produz uma curva mais sigmide

No modificam a Vmax o K0,5 se altera com os moduladores + e -

Em muitas vias uma etapa reguladora catalisada por uma enzima alostrica

Em alguns sistemas multienzimticos, a enzima reguladora especificamente inibida pelo produto final da via toda a vez que a [P] exceder os requerimentos celulares Quando a reao da enzima reguladora diminuda, todas as enzimas subseqentes operam em velocidades reduzidas medida que seus substratos so depletados

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Ativao
Enzima alostrica

INIBIO RETROALIMENTAO

Excesso
Baixa [ ]

Algumas enzimas reguladoras sofrem modificao covalente reversvel

Grupos que modulam a atividade covalentemente: Fosforila Adenila Uridila Metila Grupos adenosina difosfato ribosila

de

Enzimas

A fosforilao o tipo mais comum de modificao reguladora, de um tero de todas as protenas na clula eucaritica so fosforiladas.

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(Resduos alvo)

Grupos fosforilas afetam a estrutura e a atividade cataltica das protenas

A ligao de grupos fosforilas a resduos de aminocidos de uma protena catalisada pelas protenas quinases A remoo de grupos fosforilas catalisada pelas protenas fosfatases

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Glicognio fosforilase ocorre em duas formas:

Fosforilase a (mais ativa) Fosforilase b (menos ativa)

Fosforilase b (menos ativa)

Modificao na conformao

Fosforilase a Fosforilase b
Diferentes estruturas: -Secundria -Terciria -Quaternria -modificao no sitio ativo -atividade cataltica

Fosforilase a (mais ativa)

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Fatores externos que influenciam na velocidade de uma reao enzimtica

- Temperatura: Quanto maior a temperatura, maior a velocidade da reao, at se atingir a temperatura tima; a partir dela, a atividade volta a diminuir, por desnaturao da molcula.

- pH: Igual temperatura; existe um pH timo, onde a distribuio de cargas eltricas da molcula da enzima e, em especial do stio cataltico, ideal para a catlise.

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Resumindo enzimas....

...so protenas complexas que produzem uma alterao qumica especfica sobre outras substncias sem que exista uma alterao sobre si mesma.

Sua principal funo a catlise biolgica, alm de reguladoras dessas reaes, por isso so consideradas as unidades funcionais do metabolismo celular...

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Obrigado!!!

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