Biotecnologia Ciência & Desenvolvimento - Nº 1

2 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 3

ENTREVISTA
MARCO MACIEL, vice-presidente da Repblica Federativa do Brasil
Governo Brasileiro apia o
desenvolvimento da biotecnologia
Marco Maciel, vice-presidente da Repblica Federativa do Brasil, foi o autor da Lei de
Biossegurana, quando era senador, em 1991. Foi ele tambm que, como presidente
da Repblica em exerccio, baixou o decreto que regulamenta a atual Lei de
Biossegurana, n 8.974, em vigor no Brasil desde janeiro de 1995. Para falar sobre
biossegurana e questes relacionadas biotecnologia, tica e religio, o vice-
presidente concedeu esta entrevista revista Biotecnologia Cincia &
Desenvolvimento.
Biotecnologia Cincia & Desenvol-
vimento - O Brasil investe pouco em
cincia e tecnologia. Hoje, esse inves-
timento gira em torno de 0,7% do
Produto Interno Bruto(PIB). As naes
desenvolvidas investem mais de 2%. O
governo do presi dente Fernando
Henrique Cardoso tem alguma estrat-
gia para reverter este quadro e ampliar
os i nvest i ment os em ci nci a e
tecnologia?
Marco Maciel - O Plano Plurianual 1996/
99 fixa a meta de elevar a 1,5% do PIB
em 1999 os investimentos nacionais
em cincia e tecnologia, ampliando
para cerca de 40% a participao do
setor produtivo nestes investimentos.
Isto significa mais do que dobrar o
esforo nacional em pesquisa e desen-
volvimento. Apesar de ambiciosa, esta
meta factvel. Pretendemos atingi-la,
por um lado, mantendo crescente o
or ament o f eder al em ci nci a e
tecnologia, na medida do possvel, e
por outro recorrendo a financiamentos
externos, principalmente do BID e Ban-
co Mundial. Numa terceira via, incenti-
varemos as empresas a investirem em
pesquisa para se manterem competiti-
vas num mercado extremamente exi-
gente.
BC&D - A base do desenvolvimento
cientfico e tecnolgico comea nas
universidades, com os cursos de gradu-
ao, mestrado e doutorado. O recente
provo aplicado pelo MEC mostrou
que as universidades pblicas so as
que melhor formam os profissionais.
Essas universidades esto passando por
srias dificuldades, como o grande n-
mero de aposentadorias precoces de
professores e a falta de recursos finan-
ceiros. Qual a poltica do governo para
formar mais e melhores cientistas?
MM - Efetivamente, a base do desen-
volvimento cientfico e tecnolgico co-
mea nas universidades. certo, po-
rm, que a formao universitria, por
sua vez, depende do ensino do primei-
ro e segundo graus. isto exatamente
o que acabam de provar os resultados
do processo de avaliao inaugurado
ano passado pelo MEC. Comeamos a
corrigir esse problema com duas provi-
dncias essenciais: a Emenda Constitu-
cional 14/96, que redirecionou os re-
cursos pblicos destinados educao
e redefiniu as competncias da Unio,
estados e municpios em relao ao
sistema de ensino, e a Lei de Diretrizes
4 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 4 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
e Bases da Educao Nacional, de 23
de dezembro ltimo, que estabeleceu
os padres do sistema brasileiro de
ensino. As duas iniciativas terminaro
mudando o panorama educacional do
pas, gerando conseqncias positivas
para o ensino universitrio, no qual o
Brasil continuar, obviamente, inves-
tindo significativamente. No demais
lembrar, ainda, que no ano passado
foram concedidas quase 50 mil bolsas
de formao e pesquisa pelo CNPq.
BC&D - Com a globalizao da econo-
mi a, as quest es de di r ei t o e
comercializao de recursos biolgicos
vo ser cada vez mais debatidas em
fruns internacionais. O Brasil tido
como a nao que possui a maior
biodiversidade do planeta. Pirataria de
recursos biolgicos um fato. Fala-se
at que j estamos pagando royalties
de alguns frmacos extrados de nossas
plantas da Amaznia e que, no futuro,
estaremos pagando ainda mais. Como
que o senhor v a questo dos nossos
recursos biolgicos e da biodiversidade?
MM - preciso distinguir duas etapas
essenciais no aproveitamento dos re-
cursos biolgicos e da biodiversidade.
A primeira dispor deles e, por conse-
qncia, preserv-los. A segunda ter
a capacidade de aproveit-los, em apli-
caes cientficas, especialmente no
campo da produo de medicamentos,
que exige enorme concentrao de
recursos em pesquisa, usualmente de
longa maturao. O Brasil tem a pri-
meira condio, que necessria, mas
no suficiente, porm no dispe ain-
da da segunda, hoje concentrada em
pouqussimos centros especializados
em todo o mundo. Li, certa feita, em
publicao editada em 1993, que 45%
do faturamento de mais de 140 bilhes
de dlares da indstria farmacutica
dos principais pases da OECD naquele
ano provinham de medicamentos cujos
princpios ativos eram originrios das
florestas tropicais. Estamos caminhan-
do para o salto qualitativo que nos
permitir participar autonomamente
desse enforo. J temos a massa crtica
necessria para tanto. O que nos falta
so recursos financeiros e mercados.
Enquanto isso, o Ministrio do Meio
Ambiente est desenvolvendo, por
deci so do presi dent e Fernando
Henrique Cardoso e do ministro Gustavo
Krause, um amplo programa de pre-
servao da biodiversidade, para que
mantenhamos a primeira condio de
que j dispomos e que ser indispens-
vel quando superarmos a segunda. Acre-
dito que a velocidade com que o co-
nhecimento cientfico circula hoje no
mundo terminar permitindo chegar-
mos soluo ideal, antes at do que
esperamos.
BC&D - Desde que comeou a funcio-
nar, h cerca de nove meses, a Comis-
so Tcnica Nacional de Biossegurana
- CTNBio aprovou trs solicitaes para
testes de campo de organismos gene-
ticamente modificados, os OGMs, a
exemplo do que j acontece em outros
pases. Como o senhor acredita que a
sociedade brasileira vai reagir a esse
respeito? O governo pretende lanar
alguma campanha de conscientizao
da opinio pblica acerca do papel, da
importncia e da potencialidade da
biotecnologia?
MM - A bioengenharia e a biotecnologia,
em face dos desenvolvimentos cient-
ficos j alcanados e previsveis, tm
dois componentes. O primeiro uma
questo do mbito cientfico, relacio-
nado com a disseminao do conheci-
mento, normas de segurana e os as-
suntos a elas relacionados. O segundo
de natureza tica: os limites aceit-
veis na manipulao gentica. No pri-
meiro, o Estado tem necessariamente
de intervir, atravs de normas legais,
estabelecidas em projeto de minha
iniciativa como senador. O segundo
componente extrapola a competncia
do Estado, e assim tem sido em todo o
mundo, pois envolve questes muitas
vezes ambguas, com vises pessoais
inteiramente conflitantes, at mesmo
sob o ponto de vista religioso. Este
segundo aspecto ter de ser, como
alis est sendo, discutido, tanto pela
comunidade cientfica, que estabele-
cer seus prprios limites, como pela
sociedade em geral, inclusive polticos
e religiosos, estes preocupados sobre-
tudo com o enfoque moral e tico da
questo. Certa feita, o papa Joo Paulo
II, em palestra na ustria, disse que a
toda cincia deve corresponder uma
conscincia e a toda tcnica, uma ti-
ca.
BC&D - Grupos ecolgicos radicais, na
Europa, tm se manifestado de forma
contrria produo e comercializao
de OGMs. Representantes desses gru-
pos, no Brasil, tm expressado a mes-
ma opi ni o com rel ao soj a
transgnica procedente dos EUA. O
senhor acha que leis de defesa do
consumidor deveriam ser criadas para
obrigar, por exemplo, a inscrio nas
etiquetas e embalagens dos produtos,
informando que so geneticamente mo-
dificados?
MM - Esta questo comea a aparecer
em alguns pases europeus, em face da
comercializao de produtos aliment-
cios geneticamente modificados, como
foi o caso dos tomates procedentes
dos Estados Unidos, oferecidos no mer-
cado de consumo da Grcia. O Brasil j
possui um marco legal que a lei
8.974, a que j me referi, que criou a
Comi sso Tcni ca Naci onal de
Biossegurana, que tem atribuies para
fiscalizar no s as pesquisas a serem
desenvolvidas no Brasil como tambm
os seus resultados. A questo dos ali-
mentos importados no demasiada-
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 5 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 5
mente relevante em nosso pas, pois,
com exceo basicamente do trigo e
da carne e de alguns produtos origina-
dos do Mercosul, como certas frutas,
por exemplo, somos exportadores de
alimentos. As trocas comerciais desses
produtos fatalmente sero objeto de
disputa e regulamentao em cada pas
e, no Brasil, se e quando isto ocorrer, j
temos o recurso legal e necessrio para
o seu efetivo controle.
BC&D - O senhor acredita que o mer-
cado consumidor brasileiro j atingiu
um grau de sofisticao e exigncia de
qualidade e est apto para receber
produtos geneticamente modificados?
MM - Minha convico de que consu-
miremos produtos geneticamente mo-
dificados, elaborados aqui mesmo, an-
tes de import-los. A receptividade,
obviamente, ter de ser testada pelo
prprio mercado, mas j temos, sem
dvida, competncia cientfica para
faz-los. Alis, no Brasil, malgrado mui-
tas dificuldades, j existem excelentes
quadros em diferentes ramos da cin-
cia e da pesquisa, quer pura ou aplica-
da.
BC&D - A recente divulgao dos cien-
tistas escoceses sobre a clonagem da
ovelha Dolly levantou uma polmica
mundial, j que envolve aspectos ti-
cos, religiosos, polticos e jurdicos. No
Brasil, vrias instituies de pesquisa
esto prestes a produzir clones de
bovinos. O senhor acha que devem ser
estabelecidos limites para que essas
pesquisas no cheguem at a espcie
humana?
MM - Sem dvida, tratando-se de uma
questo tica, de cunho moral e de
natureza religiosa, haver limites para
manipulao dos genes humanos. Acre-
dito que no apenas as convices
religiosas, mas a prpria comunidade
cientfica terminar fixando esses limi-
tes. No campo legal, por sua vez, os
pases e os prprios organismos mun-
diais tm os instrumentos necessrios
para controlar esses limites no campo
da biossegurana. previsvel que,
dentro de algum tempo, tenhamos con-
venes internacionais estabelecendo
os...
BC&D - Como j foi mencionado nesta
nossa conversa, em 1989, como sena-
dor, o senhor apresentou o projeto de
lei de biossegurana no Congresso
Nacional, quando este assunto sequer
era debatido nos segmentos represen-
tativos da sociedade, inclusive na co-
munidade cientfica. Este projeto hoje
a Lei n 8.974 - Lei de Biossegurana -
que foi regulamentada por decreto. O
que motivou o senhor, h oito anos, a
apresentar este projeto, j que poucos
pases no mundo tm lei similar?
MM - Efetivamente, o Brasil um dos
pioneiros nessa matria e isso se justi-
fica at mesmo por nossa biodiversidade
e pela existncia de abundantes recur-
sos vegetais. O que me inspirou, no
entanto, foram as advertncias da Igre-
ja Catlica, que h muito tempo tem
tratado do tema.
BC&D - A propsito da Igreja Cat-
lica: o papa Joo Paulo II, em uma
aparente referncia ao debate sobre
a clonagem, fez crticas a todos que
abusam da dignidade humana com
experimentos perigosos. Como que
tem sido a relao da Igreja com o
governo, em relao regulamenta-
o e fiscalizao de produtos
transgnicos?
MM - A lei brasileira conseqente
com a posio doutrinria da Igreja.
O Estado tutela os aspectos tcnicos,
a Igreja vela pelos aspectos ticos,
religiosos e morais, e seus fiis, se-
guramente, observaro segundo as
convices religiosas de cada um.
Minha posio pessoal, como catli-
co, de acatamento a esses limites
ticos e morais.
BC&D - Em muitas discusses que
apareceram na mdia acerca da clo-
nagem, ficaram dois posicionamen-
tos totalmente antagnicos: uns
vem a cincia como obra do dem-
nio e ameaadora do bem-estar da
humanidade; outros pregam o de-
senvolvimento cientfico a qualquer
custo, independentemente das con-
seqncias. Qual o seu ponto de
vista na perspectiva do governo?
MM - No se pode satanizar nem
santificar a cincia. No sou um cien-
tista, minhas preocupaes so de
natureza poltica. Acredito que os
fins do conhecimento cientfico e
suas aplicaes tecnolgicas e seus
desenvolvimentos so o bem-estar
da humanidade. Creio firmemente
que neste sentido e com esse
objetivo que se aplicam cientistas e
pesquisadores em todo o mundo. O
desvirtuamento de um avano cien-
tfico uma questo poltica e isto o
Estado tem a obrigao legal e o
dever moral de evitar, embora esse
dever no impea que, eventual-
mente, se faa mau uso de uma boa
descoberta. O marco legal que te-
mos, no entanto, obriga a todos,
inclusive o Poder Pblico, no Estado
e no direito.
BC&D - Alguns cientistas j pensam
em usar a tcnica da clonagem para
recuperar ani mai s em ri sco de
extino. Outras correntes de pes-
quisadores alegam que isso vai im-
pedir a variabilidade gentica. O se-
nhor no acha que a Lei de
Biossegurana deveria estabelecer
mecanismos para preservar a variabili-
dade gentica dos animais?
MM - Esta me parece uma questo
tica da prpria cincia. Um avano
que contribua para o bem-estar da
humanidade e no oferea risco para a
vida est nos objetivos de toda a comu-
nidade cientfica. Se for colocado em
risco o homem ou a natureza, deve ser
proibido.
BC&D - A manipulao gentica, num
sentido mais amplo, , em tese, capaz
de curar molstias como o diabetes
herdado, propenso ao cncer e outras
doenas. Abrir mo deste instrumento
na cura de doenas certamente um
erro. A Lei de Biossegurana contem-
pla esta questo?
MM - Contempla, sim. O artigo 8,
inciso III, determina que vedada a
interveno em material gentico hu-
mano in vivo, exceto para o tratamen-
to de defeitos genticos, respeitando-
se princpios ticos. A Comisso Naci-
onal Tcnica de Biossegurana tem,
entre seus objetivos institucionais, os
de autorizar e fiscalizar experincias
genticas que possam representar ris-
cos. Obviamente que a cura de doen-
as que possam ser prevenidas, sem
riscos, no s no deve ser proibida
como deve ser estimulada.
BC&D - A nica empresa brasileira que
entrou com pedido de liberao de
produto geneticamento modificado, na
Comi sso Tcni ca Naci onal de
Biossegurana, at o momento, foi a
Copersucar. Como o senhor situa as
pesquisas biotecnolgicas realizadas
pelas empresas brasileiras em relao
aos outros pases?
MM - Na biotecnologia agrcola, o Brasil
tem boa presena e posio de lide-
rana. A Embrapa, que alis acaba de
completar 27 anos, possui timos ex-
perimentos nessa rea e pessoal alta-
mente qualificado. Notadamente no
setor de sementes, empresas brasilei-
ras vm demonstrando capacidade e
competitividade em escala internacio-
nal.
BC&D - O presidente americano Bill
Clinton encomendou Comisso Con-
sultiva de Biotica dos EUA, que
composta de 18 especialistas, um es-
tudo detalhado das implicaes da
clonagem de organismos. O senhor
acha que necessrio criar, no Brasil,
uma Comisso Nacional de Biotica?
MM - Os limites do Estado, nas ques-
tes cientficas, devem ser estabeleci-
dos legalmente. As questes ticas,
como j assinalei, extrapolam essa com-
petncia, pois a cincia no tem naci-
onalidade, universal.
A questo que envolve o Estado, como
acaba de ocorrer na Esccia, em que
medida ele deve ou pode financiar
pesquisas que possam representar ris-
cos, mesmo que potencialmente,
humanidade ou natureza. No caso
brasileiro, especificamente, compete
CTNBio propor um cdigo de biotica.
BC&D - A biotecnologia tem um mer-
cado potencial estimado em bilhes de
dlares. Somente na agricultura, este
mercado pode chegar a 30 bilhes de
dlares. E, especificamente em rela-
o s sementes melhoradas a partir de
modificaes genticas, o mercado de-
ver passar de 8 milhes de dlares,
em 1985, para quase 7 bilhes de
dlares no ano 2000. Neste contexto,
pode-se inferir que, no prximo
milnio, haver dois grupos de pases:
os que detm e vendem a tecnologia e
os que compram. Qual a estratgia do
governo para que o Brasil pertena ao
primeiro grupo?
MM - As empresas brasileiras de se-
mente investem, em mdia, 5% do seu
faturamento em pesquisa. Todo o es-
foro brasileiro se destina a criar condi-
es de atingirmos um desenvolvi-
mento sustentvel. Isto implica no s
expandir os investimentos nos setores
bsicos, como tambm redirecionar as
funes do Estado, para superarmos
nossas enormes carncias sociais. So-
mos um dos maiores produtores de
bens alimentcios em todo o mundo e
continuamos ampliando nossa frontei-
ra agrcola aceleradamente. A questo
da autonomia tecnolgica faz parte
desse esforo de crescimento e mo-
dernizao, mas ser impossvel con-
templ-lo de maneira setorizada. O
desenvolvimento cientfico , sem d-
vida, uma varivel condicionante do
progresso econmico, social e cultural
que estamos buscando conscientemen-
te, com amplo apoio na sociedade
brasileira.
Marcos A. Machado
Laboratrio de biotecnologia em Citros
Centro de Citricultura Sylvio Moreira
Instituto de Citricultura Sylvio Moreira
Instituto Agronmico de Campinas
Brasil e Flrida continuam sendo
as duas principais reas fornecedoras
de fruta para a produo de suco con-
centrado, principalmente a partir de
laranja doce. O Brasil responde por
mais da metade (1.146,9 mil tonela-
das) do volume mundial de suco con-
centrado (61 Brix), que em 1994 al-
canou o volume de 2.138,5 mil tone-
ladas.
Sendo uma das mais tpicas ativi-
dades agroindustriais no Brasil em um
setor altamente articulado, a citricultura
responde por um faturamento varivel
anual da ordem de 1,5 bilho de US$,
centralizando-se principalmente em
suco concentrado e subprodutos. No
Estado de So Paulo, responsvel
direto por 400.000 empregos em 204
municpios, envolvendo 20.000 pro-
dutores.
O setor de suco concentrado conta
atualmente com 22 indstrias (2 em
instalao), com um total de 994
extratoras (97 fora de So Paulo). Com
uma rea aproximada de 630.200ha
em So Paulo, a citricultura tem 164
milhes de plantas e produo anual
da ordem de 374 milhes de caixas
(40,8kg), distribudas entre a indstria
(71,5%), consumo interno de fruta
fresca (28,0%) e a exportao (0,5%).
No binio 95/96, os principais
importadores do suco brasileiro foram
a Unio Europia (68,8%), Amrica
do Norte (18,5%), sia (9,5%) e ou-
tros pases (3,2%). O Estado de So
Paulo participa com 96,4% do volume
total exportado.
A produo mundial de citros no
binio 95/96 deve atingir um novo
recorde de 80 milhes de toneladas,
com um aumento de 3% em relao
ao binio anterior, atribudo principal-
mente ao aumento da produo bra-
sileira, aps a queda de 94/95. Avalia-
se que nesse perodo houve um au-
mento de 18% da produo nacional.
Do total mundial, 66% representa la-
ranja doce, com o Brasil respondendo
por 30% da produo mundial, cerca
de 16,1t. A participao brasileira no
mercado mundial de frutas frescas
pequena (menos que 2%), porm o
mercado interno tem se tornado um
grande consumidor de fruta fresca,
competindo com a indstria.
Embor a as condi es
edafoclimticas favoream a cultura dos
citros em vrias regies do Brasil, nossa
produtividade mdia ainda extrema-
mente baixa, quando comparada com
outros pases: em torno de 2,0 caixas/
planta/ano, contra 6,0 na Flrida, a
principal regio competidora do Brasil.
O aumento de produo nos ltimos
20 anos explica-se essencialmente por
um aumento de reas de plantio. De
1975 a 1993, houve um incremento de
147% de novos plantios.
Avaliaes atualizadas apontam
para uma estabilizao da demanda
com simultneo aumento de oferta, o
que inevitavelmente se refletir nos
pr eos e, por consegui nt e, na
competitividade do citricultor. Em fun-
o dessas perspectivas e da tradicio-
nal baixa produtividade brasileira, a
palavra de ordem para a citricultura do
ano 2000 PRODUTIVIDADE.
Vrios so os componentes envol-
vidos com a produtividade, podendo
de modo geral ser agrupados em fato-
res relacionados com a qualidade do
material gentico das plantas e sua
sanidade, e com o manejo da cultura,
incluindo conduo e ps-colheita.
A citricultura brasileira pode ser considerada uma das mais competitivas e importantes atividades
agroindustriais do Brasil. A baixa produtividade mdia e as altas tarifas protecionistas dos
mercados importadores do suco brasileiro, como o caso do mercado americano, apontam
necessariamente para um aumento de produtividade como opo do setor. Apesar do volume da
produo brasileira, o setor ainda capaz de absorver tecnologia, e necessita ter opo de renovao,
principalmente de material gentico superior. Nesse sentido, a biotecnologia representa uma
ferramenta valiosa para incrementar ganhos de produtividade e vem sendo utilizada em vrios
ncleos de pesquisa no Brasil. Atualmente, o Centro de Citricultura Sylvio Moreira, do Instituto
Agronmico de Campinas (Secretaria de Agricultura de So Paulo), com envolvimento exclusivo
com citros em todos seus aspectos, congrega projetos significaticos na rea de melhoramento e
biotecnologia, com forte apoio do Ministrio de Cincia e Tecnologia (CNPq, PADCT, RHAE e
PRONEX), FAPESP e iniciativa privada.
A necessidade de ampliao das
bases genticas atuais dos citros, assim
como a pot enci al i zao de
germoplasma j existente, impe a
necessidade de desenvolver progra-
mas de melhoramento. No entanto, as
dificuldades de se conduzir programas
tradicionais de melhoramento, princi-
palmente face prpria botnica des-
se grupo de plantas, so enormes.
Nesse contexto, a biotecnologia em
seus vrios aspectos pode contribuir
no ganho ou potencializao de carac-
tersticas desejveis.
POR QUE BIOTECNOLOGIA
EM CITROS?
Os programas tradicionais de me-
lhoramento de citros foram conduzidos
quase exclusivamente nos Estados Uni-
dos, sendo significativamente repre-
sentados pelos trabalhos de W.T.
Swingle com obteno de vrios hbri-
dos interespecficos. No Brasil, o me-
lhoramento de citros foi sempre muito
mais uma atividade de coleta, manu-
teno e seleo massal de variantes
espontneos. As evidncias apontam
mais para fatores de ordem botnica,
como poliembrionia e longo perodo
juvenil, que de outra natureza, para o
baixo aproveitamento do potencial ge-
ntico que essas espcies de citros e
correlatos apresentam.
Os citros apresentam uma diversi-
dade muito grande de gneros, espci-
es, variedades e clones. No entanto,
um nmero relativamente pequeno
utilizado nos atuais plantios comerci-
ais, no sem algumas razes botnicas
e histricas. Como espcies de propa-
gao quase excl usi vament e
vegetativa, os citros tiveram na sele-
o massal a via mais rpida de melho-
ramento, principalmente devido ao fato
de apresentarem uma elevada taxa de
mutaes somticas promovendo o apa-
recimento de novas variedades e, even-
tualmente, a reverso variedade an-
terior.
Programas tradicionais de melho-
ramento gentico via hibridao e se-
leo recorrente sempre esbarraram
em obstculos caractersticos desse
grupo de plantas. Entre os fatores rela-
cionados com as caractersticas bo-
tnicas e genticas da espcie, po-
deriam ser citados:
- so plantas lenhosas pere-
nes com longo perodo juvenil.
Como conseqn-cia, demoram muito
para florescer, de modo que a obten-
o de geraes F1 e F2 pode demorar
acima de trinta anos;
- apresentam alta variabilida-
de gentica. Dos cruzamentos, resul-
tam indivduos bastante distintos entre
si e dos pais, isto , ocorre segregao
de quase todas as caractersticas dese-
jadas;
- apresentam poliembrionia
nucelar, dificultando sobremaneira a
distino entre indivduos hbridos e
nucelares (no hbridos);
- podem desenvolver muta-
es espontneas de gemas, origi-
nando novos cultivares;
- herana quantitativa das prin-
cipais caractersticas de interesse. Re-
lacionados cultura dos citros, po-
deriam ser mencionados:
- a planta no campo no
uma nica planta, porm duas, cons-
titudas da copa e porta-enxerto (siste-
ma radicular), quase sempre de esp-
cies diferentes;
- o carter monoclonal do
plantio, isto , a utilizao de alguns
poucos clones por variedade, tanto de
copa como de porta-enxerto, com re-
duo acentuada do componente vari-
abilidade gentica, importante na ma-
nuteno do equilbrio com os fatores
biticos e abiticos;
- o carter perene que tornam
os citros plantas com interao mais
constante com fatores biticos (pra-
gas/microrganismos/vrus/virides) e
abiticos. Os fatores relacionados aci-
ma fazem com que qualquer programa
de melhoramento gentico seja real-
mente um desafio a geraes de
melhoristas. Seno vejamos:
- a longa juvenilidade estende
os programas a mais de 30 anos de
durao;
- a alta taxa de segregao
gentica obriga a muitos, onerosos e
demorados testes com os sem-nmero
de indivduos resultantes dos cruza-
mentos;
- alteraes espontneas de
gemas, por ser um processo aparente-
mente ao acaso, pode alterar no tempo
todo o trabalho do melhoramento;
- poliembrionia nucelar torna
bastante difcil a separao dos indiv-
duos resultantes de cruzamento da-
queles que so propagao vegetativa
da planta-me. Evidentemente que tais
problemas ocorrem tanto em espcies
de porta-enxerto quanto em espcies
de copa. Desnecessrio ressaltar os
riscos que os plantios monoclonais/
monoespecficos esto sujeitos, vis--
vis problemas como a tristeza e outras
viroses/virides, o declnio, a clorose
variegada dos citros (CVC), pragas como
os caros e insetos etc.
COMO APLICAR
BIOTECNOLOGIA EM
CITRICULTURA?
Fica evidente que a deciso de
qual mtodo de melhoramento ser
adotado deve sempre levar em consi-
derao as caractersticas acima relaci-
onadas. Do mesmo modo que como
aplicar a biotecnologia depender do
programa a ser executado e em que
fase de desenvolvimento ele se en-
contra. Considerando essas barreiras ao
melhoramento dos citros e a disponibi-
lidade de novos mtodos e tcnicas
auxiliando a super-las, os maiores im-
pactos de uso de biotecnologia seriam:
- na reduo dos ciclos de seleo: o
uso de marcadores bioqumicos e
moleculares correlacionados s carac-
tersticas importantes possibilitar a se-
leo precoce, ao estgio de plntulas,
reduzindo assim o nmero de progni-
es a serem testadas em trabalhos de
hibridao;
- na potencializao da variabili-
dade gentica: programas de hibridao
(sexual e/ou somtica) interespecfica
e intergenrica devem ser continua-
dos, apoiados principalmente em
marcadores genticos de maior facili-
dade de i dent i f i cao, como os
bioqumicos e moleculares;
- no estabelecimento de multipli-
cao clonal rpida: a seleo e a mul-
tiplicao de porta-enxertos em reas
sob intensa presso de seleo (como
O Centro de Citricultura Sylvio Moreira, do Instituto
Agronmico, da Coordenadoria de Pesquisa Agropecuria
da Secretaria de Agricultura e Abastecimento, um pioneiro
no projeto de interiorizao da pesquisa, permitindo ao seu
usurio o acesso mais rpido informao, ao mesmo
tempo em que coloca o pesquisador mais perto da demanda
de pesquisa. H mais de duas dcadas, o Centro de
Citricultura Sylvio Moreira (ex-Estao Experimental de
Limeira) vem desenvolvendo trabalho em parceria com a
iniciativa privada e, mais intensamente, nos ltimos cinco
anos, quando da instalao e operacionalizao do labora-
trio de biotecnologia em citros. O xito desse trabalho
demonstrou a necessidade de interiorizao da pesquisa.
Sua criao foi mais um desafio vencido pelo Instituto
Agronmico, que vem em processo crescente de moderni-
zao, visualizando novas conquistas para o produtor ainda
neste sculo em todas as suas reas de atuao.
Com mais de 65 anos de experincia acumulada em
pesquisa, divulgao, prestao de servios e formao de
pesquisadores, alm de centenas de trabalhos cientficos
publicados no Brasil e no exterior, o Centro de Citricultura
Sylvio Moreira, do Instituto Agronmico, considerado
centro de referncia em pesquisa citrcola.
Face s dificuldades inerentes gentica e botnica do
grupo, a biotecnologia representa uma ferramenta valiosa
para acelerar ganhos em programas de melhoramento.
Procurando se adequar s necessidades atuais de pesquisa
e desenvolvimento em citricultura, o Centro de Citricultura
Sylvio Moreira, do Instituto Agronmico de Campinas,
situado em Cordeirpolis/SP, tem atuado em vrias frentes
da biotecnologia. Em apoio direto ao melhoramento, o
programa de biotecnologia envolve as principais linhas de
pesquisa:
- Marcadores moleculares (RAPD, RFLP, AFLP e
microssatlites) para caracterizao/proteo varietal e
mapeamento gentico;
- Produo de novas combinaes hbridas de porta-
enxertos;
- Desenvolvimento de sistemas mais eficientes de
diagnstico de patgenos;
- Biologia molecular de patgenos importantes, como
o vrus da tristeza dos citros e a bactria da CVC;
- Micropropagao de porta-enxertos in vitro;
- Cultura e fuso de protoplastos para produo de
hbridos somticos, principalmente porta-enxertos;
- Desenvolvimento de tcnicas de isolamento de
genes de interesse agronmico, principalmente o mRNA
display.
Ao lado do Instituto Agronmico de Campinas, atravs
do Centro de Citricultura, outras importantes instituies que
atuam com biotecnologia em citros no Brasil so: a Escola
Superior de Agricultura Luiz de Queirz (ESALQ) e o Centro
de Energia Nuclear na Agricultura (CENA), da USP, em
Piracicaba/SP; a UNESP, em Botucatu e Jaboticabal; a
UNICAMP; o Instituto Biolgico de So Paulo e a Embrapa,
em Cruz das Almas (BA).
ONDE A BIOTECNOLOGIA EST SENDO APLICADA NA CITRICULTURA?
em pomares com declnio, por exem-
plo) podem ser bastante facilitadas
com a aplicao de micropropagao
para produo de mudas em escala
mais rpida e em maior volume para
continuidade de testes de avaliao,
assim como para produo comercial
de porta-enxertos.
- na recuperao de clones supe-
ri ores: o acmul o de pat genos
sistmicos de lenta expresso, como
os vrus, torna a senescncia clonal um
fato inevitvel em plantas perenes de
propagao vegetativa, exigindo m-
todos de limpeza clonal acompanha-
dos de indexao, de modo a monitorar
constantemente o grau de infeco
nesses clones.
- no estabelecimento de testes
mais rpidos para diagnstico: mesmo
com o avano de tcnicas de diagns-
tico utilizando-se plantas indicadoras,
evidente a necessidade de acelerar a
indexao com mtodos mais rpidos
como imunodiagnstico e/ou sondas
moleculares.
PESQUISA
Gentica e melhoramento de fungos na biotecnologia
Joo Lcio de Azevedo
Universidade Federal de Gois
biotecnologia consiste
no uso de sistemas celu-
lares para o desenvolvi-
mento de processos e
produtos de interesse
econmico ou social. Entre os sistemas
celulares, os fungos so de grande inte-
resse biotecnolgico. Talvez sejam eles,
dentre os seres vivos, os que mais tm
contribudo com produtos e processos de
importncia fundamental para o bem-
estar da populao. Mas, que so os
fungos e o que eles fazem? o que ser
visto a seguir.
O que so os fungos?
Os fungos, tambm chamados de
bolores, mofos ou cogumelos, esto in-
terferindo constantemente nas nossas ati-
vidades dirias. Eles so to importantes
que hoje constituem um reino parte,
lado a lado com os reinos vegetal e
animal. Fica difcil definir os fungos tal
a sua diversidade. No entanto, eles pos-
suem algumas caractersticas em comum
que os distinguem dos outros seres vivos.
Em geral, eles apresentam filamentos, as
chamadas hifas, com paredes rijas, ricas
em quitina, o mesmo material que reves-
te insetos como besouros; tm caracters-
ticas heterotrficas, isto , no possuem
clorofila e, portanto, necessitam de mate-
rial orgnico para viver, sendo sua nutri-
o feita por absoro de nutrientes gra-
as presena de enzimas que so por
eles produzidas e que degradam produ-
tos como, por exemplo, celulose e ami-
do. Por outro lado, os fungos so
eucariticos, isto , possuem um ncleo
tpico no interior de suas clulas, compa-
rvel ao das plantas e animais. Reprodu-
zem-se por via sexual ou assexual e
assim possuem divises celulares do tipo
mitose e meiose, tendo sempre como
produto final os esporos que so rgos
de reproduo, resistncia e dissemina-
o (figura 1). Na verdade, o reino dos
fungos um dos mais numerosos. Esti-
ma-se que existam pelo menos um
milho e quinhentas mil espcies de
fungos espalhadas pelo mundo. Isso
muito mais do que todas as espcies
vegetais e animais somadas, excluindo-
se os insetos. E por incrvel que parea,
apenas cerca de 70.000 espcies de
fungos foram at hoje descritas, ou seja,
menos de 5% das possivelmente exis-
tentes. Se entre esses cinco por cento
de espcies, j existem muitas de gran-
de importncia, como as que entram na
fabricao de alimentos, incluindo bebi-
das, de cidos orgnicos, de frmacos e
inmeros outros produtos, pode-se ima-
ginar o que se espera com a descoberta
de novas espcies com distintas propri-
edades potenci al mente de val or
biotecnolgico. Em particular no Brasil,
que o pas que possui a maior
biodiversidade do mundo, a busca de
novas espcies de fungos dever produ-
zir resultados extremamente interessan-
tes do ponto de vista biotecnolgico. Mas
para o leigo, o que fazem os fungos? Na
maioria dos casos, eles so vistos pela
populao como prejudiciais, uma ima-
gem que dada pelas poucas espcies
dentro do reino que causam as micoses
do homem e animais ou as que so
responsveis por doenas em plantas
cultivadas.
Outras pessoas associam os fungos
com os bolores ou mofos que invadem
paredes midas das residncias, artigos
de couro ou ainda cobrem os alimentos,
como frutas e gros armazenados. De
uma forma mais favorvel, eles podem
ser associados culinria, como o caso
dos cogumelos de chapu usados em
sopas, pizzas e nos strogonoffs. Essa a
imagem que o grande pblico tem sobre
os fungos. O que esquecido que eles
so tambm os responsveis pela produ-
o de antibiticos como a penicilina, a
griseofulvina ou a cefalosporina, de vita-
minas como a riboflavina, de esterides,
de cido ctrico, usado na fabricao de
refrigerantes, medicamentos, balas e do-
ces, de enzimas tipo celulases, quitinases,
proteases, amilases e muitas outras de
valor industrial, de etanol, usado como
combustvel nos automveis, como
solvente e desinfetante, ou ainda nas
fermentaes alcolicas, produzindo be-
bidas como o vinho, a cerveja, o saqu e
os destilados. Eles tambm entram na
panificao, na fabricao e maturao
de queijos como o gorgonzola, o
camembert e o roquefort, em alimentos
exticos orientais, entre muitos outros
produtos. Tambm de grande importn-
cia agrcola e ecolgica, so eles que
mantm um equilbrio, decompondo res-
tos vegetais, degradando substncias t-
xicas, auxiliando as plantas a crescerem e
se protegerem contra inimigos, como
outros microrganismos patognicos, in-
setos-pragas da agricultura ou herbvo-
ros. Enfim, os fungos constituem um
Figura 1- Estruturas de um fungo vistas
atravs de microscpio tico.
Notam-se filamentos (hifas) e corpos esf-
ricos que so os esporos vegetativos ou
condios.
reino que, se extinto, ocasionaria tam-
bm o desaparecimento da maioria das
espcies atualmente existentes, inclusi-
ve a humana, uma vez que sem os fungos
os ciclos biolgicos no seriam completa-
dos. No por acaso que eles so consi-
derados como de grande importncia
para a gentica e a biotecnologia, como
ser visto a seguir.
A gentica de fungos e as novas
tecnologias
Os fungos tm contribudo com enor-
me soma de conhecimentos para um
melhor entendimento dos processos ge-
nticos. Como se sabe, a gentica a
cincia da hereditariedade ou transmis-
so de caractersticas de pais para filhos
ou de ascendentes para descendentes.
Como j mencionado, sendo eucariticos,
alm de reproduzirem-se rapidamente,
eles puderam ser usados, com eficincia,
na resoluo de problemas genticos. Foi
utilizando fungos filamentosos e levedu-
ras que se descobriu em 1941 que genes
produziam enzimas e outras protenas.
Veio a seguir uma avalanche de conheci-
mentos derivados do uso de fungos,
como sistemas genticos que no s
confirmaram as regras da cincia da here-
ditariedade (figura 2), mas tambm con-
triburam para a consolidao da
biotecnologia como um todo. Foi por
meio de tcnicas genticas clssicas,
como busca da variabilidade natural, sele-
cionando-se linhagens mais apropriadas,
e pelo uso de mutantes e de cruzamen-
tos entre linhagens, que se conseguiu
realizar o melhoramento gentico de
muitos fungos de valor industrial. O exem-
plo mais tpico e de maior sucesso foi o
do melhoramento gentico do fungo
produtor de penicilina, como ser visto
mais adiante. Apesar dessa enorme con-
tribuio, a moderna biotecnologia, com
as novas tecnologias, como a fuso de
protoplastos (figura 3) e a tecnologia do
DNA recombinante ou engenharia gen-
tica, s foi usada de forma mais rotineira,
em fungos, a partir de meados dos anos
70 e incio dos anos 80. Com os processos
de fuso de protoplastos e de transforma-
o gentica, foi possvel a manipulao
gentica dos fungos, permitindo com
que novas caractersticas de valor
biotecnolgico fossem adicionadas a es-
pcies j utilizadas comercialmente, au-
mentando assi m o seu potenci al
biotecnolgico. Alguns fungos, principal-
mente leveduras, que so aqueles que se
reproduzem por brotamento, como
Saccharomyces cerevisiae, j vm sendo
usados desde a Antiguidade na fabricao
de produtos alimentcios, como o po;
outros fungos vm sendo tambm em-
pregados na fabricao de produtos de
uso dirio, como o caso do cido ctrico
produzido por Aspergillus niger.
Sabe-se assim que esses fungos no
causam qualquer problema, sendo eles
prprios, ou seus produtos, ingeridos
pela espcie humana e outros mamfe-
ros. Desta forma, esses fungos constitu-
em-se em hospedeiros ideais para alber-
gar genes provenientes de outros orga-
nismos. A produo de hormnios, como
a insulina ou o hormnio de crescimento
humano, ou, ainda, a produo de outros
tipos de frmacos, como o interferon,
usado contra alguns vrus, pode ser leva-
da a cabo tendo fungos como hospedei-
ros de genes responsveis pela produo
dessas substncias. Em bactrias, hospe-
deiros tradicionais de genes clonados, as
protenas no so modificadas de manei-
ra apropriada, como ocorre em seres
eucariticos, como os fungos. Alm do
mais, h um maior conhecimento no uso
de fungos em fermentaes industriais
devido a sua grande utilizao na produ-
o de antibiticos e etanol. Finalmente,
o rendimento em peso por litro do pro-
duto desejado , em geral, maior, quando
fungos so utilizados como hospedeiros
de genes clonados. De tudo isso, pode-se
concluir que cada vez mais eles tendem
a ocupar um papel de destaque na
biotecnologia. Fica difcil descrever aqui
todas as aplicaes biotecnolgicas que
os fungos apresentam. No entanto, al-
guns exemplos sero dados para que o
leitor tenha cincia da importncia dos
fungos em biotecnologia. No presente
artigo, alguns exemplos foram escolhi-
dos pelo seu valor econmico ou histri-
co ou por serem derivados de trabalhos
realizados no Brasil.
Exemplos do uso biotecnolgico
de fungos manipulados
geneticamente
A produo de antibiticos
Um dos exemplos mais impressio-
nantes de melhoramento gentico, utili-
zando tcnicas de gentica clssica, in-
cluindo seleo e mutao, ocorreu no
fungo fi l ament oso Peni ci l l i um
chrysogenum. Quando Fleming relatou,
pela primeira vez, em 1929, o grande
valor potencial desse fungo produtor da
penicilina no combate a doenas infecci-
osas causadas por bactrias, estava longe
de imaginar que sua linhagem, que pro-
duzia menos de 2mg do antibitico por
litro de meio de cultivo, teria sua produ-
o melhorada em milhares de vezes. Por
seleo natural, foram obtidas linhagens
com produo de 60mg/litro. Graas a
tcnicas de induo de mutaes e sele-
o de mutantes, alm da melhoria das
condies de cultivo, os aumentos foram
constantes at atingir o valor de 7g/litro.
Atualmente, estima-se que existam li-
nhagens industriais de Penicillium capa-
zes de produzir mais de 50g/litro, ou seja,
um aumento de 25.000 vezes em relao
linhagem original de Fleming (figura 4).
Esse exemplo demonstra a importncia
das tcnicas clssicas no melhoramento
gentico de microrganismos de valor
industrial. Alis, foi com a produo de
antibiticos que a biotecnologia teve seu
incio efetivo na dcada de 40, adquirin-
do em seguida a importncia que tem
atualmente, quando acrescida das mo-
dernas tecnologias, especialmente a do
DNA recombinante. na indstria de
antibiticos que existem outros exem-
plos comparveis ao descrito para a pe-
nicilina, tanto utilizando fungos como
bactrias.
Figura 2- Colnias de fungo, resultantes
de um cruzamento sexual entre fungos da
mesma espcie, porm, com mutaes para
diferentes cores. Notam-se colnias rosa-
das (caracters-tica dada por um gene)
em contra-posio a colnias brancas,
verdes e amarelas. A proporo de colni-
as rosadas em relao s outras de 1:1
evidenciando uma segregao que com-
prova as leis mendelianas da gentica.
Figura 3- Fuso de protoplastos em fungos
A produo de cidos
orgnicos
Diferentes cidos orgnicos so pro-
duzidos industrialmente por fungos. Den-
tre estes fungos, destaca-se o Aspergillus
niger, responsvel pela produo de v-
rios compostos teis, incluindo o cido
ctrico. Exemplos de melhoramento ge-
ntico empregando-se tcnicas de gen-
tica clssica e molecular nesse fungo tm
sido descritos. No Estado de So Paulo,
uma linhagem industrial utilizada para
produo de cido ctrico em cultura de
superfcie, isto , em bandejas contendo
meio de cultura lquido com sacarose
como fonte de carbono, foi melhorada no
laboratrio do Setor de Gentica de Mi-
crorganismos do Instituto de Gentica da
Escola Superior de Agricultura Luiz de
Queiroz, da Universidade de So Paulo
(ESALQ/USP), em Piracicaba, resultando
em um aumento na produo de at 30%
de cido, em relao cultura original.
Foram utilizadas tcnicas de mutao,
seleo e fuso de protoplastos (figura
5). Quando as linhagens melhoradas fo-
ram levadas indstria, ocorreram au-
mentos considerveis na produo de
cido ctrico. Esse um dos exemplos
brasileiros que demonstram que os prin-
cpios genticos na biotecnologia, quan-
do racionalmente aplicados, podem le-
var, com poucos custos, a ganhos subs-
tanciais na indstria.
A produo de etanol
O Brasil tem larga experincia na
produo de lcool combustvel. O Pro-
grama Nacional do lcool desencadeado
no final dos anos 70, decorrente da crise
do petrleo, gerou uma srie de
tecnologias prprias, tornando o nosso
pas lder mundial nesse sentido. No
poderia deixar de ocorrer, portanto, o
desenvolvimento de processos visando
produo de linhagens melhoradas da
levedura Saccharomyces cerevisiae, res-
ponsvel pela produo de etanol. Linha-
gens mais produtivas, com caractersticas
desejveis para produo de etanol e
com monitoramento na indstria por tc-
nicas de marcao molecular, foram de-
senvolvidas em vrios laboratrios, sali-
entando-se mais uma vez os da ESALQ/
USP, em Piracicaba. Por tecnologia do
DNA recombinante, os laboratrios de
pesquisa das universidades de Braslia e
da USP desenvolveram em conjunto li-
nhagens de leveduras contendo genes
de amilases capazes de utilizar o amido,
por exemplo de mandioca ou batata-
doce, na produo de etanol. Essas leve-
duras manipuladas geneticamente esto
sendo aperfeioadas e podero desem-
penhar um importante papel na produ-
o de etanol. A tecnologia do DNA
recombinante tem sido tambm usada
por esses e outros laboratrios brasileiros
e do exteri or na cl onagem e
seqenciamento de genes de interesse
industrial em fungos.
A biotecnologia na enologia
Um outro exemplo, tambm brasi-
leiro, o do melhoramento via fuso de
protoplastos com produo de hbridos,
empregando-se espcies diferentes de
leveduras utilizadas na fabricao do vi-
nho. Por fuso de protoplastos, foi obtido
um h bri do entre as l eveduras
Saccharomyces cerevi si ae e
Schizossaccharomyces pombe reunindo
caractersticas favorveis dos dois gne-
ros de fungos em uma s clula (figura 6).
Esta, multiplicada e retrocruzada com a
linhagem original de Saccharomyces
cerevisiae, resultou em linhagem capaz
de utilizar uvas cidas, como as que
ocorrem em certas safras na regio Sul do
pas, na produo de vinhos finos, sem
necessidade de utilizao de fermenta-
es mistas (duas espcies de leveduras)
ou, o que seria pior, adio de acar.
Esse trabalho resultou em patente que
est em vigor, e a levedura melhorada
desenvolvida na Universidade de Caxias
do Sul (UCS), no Rio Grande do Sul, j
est sendo utilizada com sucesso na pro-
duo de vinhos de alta qualidade.
O controle biolgico de insetos
por fungos
Assim como os fungos podem even-
tualmente causar doenas em plantas e
mamferos, tambm os insetos podem
ser atacados por certos fungos (figura 7).
Se usados convenientemente, eles po-
dem ser empregados no controle de
insetos-pragas de plantas cultivadas ou
mesmo de insetos vetores de doenas. O
Brasil, possuindo um clima tropical em
grande parte de seu territrio e com
vastas reas cultivadas, tem dificuldades
na utilizao do controle qumico de
insetos, que se torna at invivel e
antieconmico em certas condies, alm
de causar desequilbrios biolgicos e pro-
blemas de intoxicao. A soluo ento
o uso e aplicao de tcnicas na produ-
o de inseticidas microbianos que
possam, se no substituir, pelo menos
diminuir o uso de agroqumicos com
vantagens econmicas e de preservao
do ambiente. O Brasil talvez seja o pas
onde as pesquisas e a utilizao em larga
escala de fungos entomopatognicos,
isto , os que atacam insetos, tm tido
maior sucesso. Melhoramento gentico
clssico, desenvolvimento de marcadores
moleculares, clonagem de genes e ou-
tros estudos tm sido realizados em um
esforo conjunto abrangendo diversas
instituies. Assim, vrios centros da
Empresa Brasi l ei ra de Pesqui sa
Agropecuria (EMBRAPA), a ESALQ/USP,
a UNICAMP, o Centro de Biotecnologia
da UFRGS, a Universidade Estadual de
Londrina, a UCS a UFPernambuco, alm
de empresas privadas, tm trabalhado
com fungos como o Metarhizium
Figura 4 - Melhoramento gentico para pro-
duo de penicilina pelo fungo filamentoso
Penicillium chrysogenum (modificado de
Elander R. P. (1967)). Enhanced penicillin
Biosynthesis in mutant and recombinant strais
of Penicillium chrysogenum. In Induced
mutations and their utilization (H.Stubbe,Ed.)
pp 403-423. Akademic-Verlag, Berlim.
Figura 5- Protoplastos de um fungo. Os
protoplastos foram corados, mostrando que
eles possuem vrios ncleos (corpos azuis) no
seu interior.
ani sopl i ae, Beauveri a bassi ana e
Nomuraea rileyi aplicando tecnologias
clssicas e modernas para um melhor
conhecimento da biologia e gentica
desses fungos e no desenvolvimento de
linhagens mais eficientes no controle
biolgico de insetos.
Controle biolgico de doenas de
plantas e fungos endofticos Como no
caso do controle biolgico de insetos por
fungos, existem tambm exemplos de
fungos que atuam como controladores
de doenas de plantas. Novamente o
emprego racional dos mesmos pode pre-
venir doenas causadas por microrganis-
mos fitopatognicos. A utilizao desses
controladores naturais restringe tambm
a aplicao abusiva de fungicidas. As
tcnicas de produo massal desses
controladores biolgicos, a otimizao
dos processos de aplicao e o melhora-
mento gentico dos fungos empregados,
tornando-os mais eficientes, vm sendo
desenvolvidos em laboratrios do Brasil e
exterior. Exemplos de interesse tm sido
obtidos em alguns centros de pesquisa da
EMBRAPA no Sul e Sudeste do pas.
Recentemente tem sido verificado que
fungos e bactrias encontrados interna-
mente em vegetais, particularmente em
suas partes areas como folhas e ramos,
tm enorme importncia no controle de
doenas de plantas e tambm de insetos.
Uma boa quantidade da populao de
microrganismos que existe no interior de
plantas constituda por fungos que so
denominados de fungos endofticos. Eles,
alm de controlarem doenas e pragas,
podem possuir outras propriedades, como
alterar o metabolismo das plantas, impe-
dindo formao de sementes ou produ-
zindo hormnios que causam modifica-
es no desenvolvimento dos vegetais.
Existem, tambm, casos de incremento
de produo em plantas, graas presen-
a desses endofticos. O estudo de fun-
gos endofticos feito em pases de
clima temperado; entretanto, so escas-
sos os trabalhos com plantas tropicais.
Devido a isso, vrios laboratrios do
Brasil (ESALQ/USP, UNESP, em Botucatu-
SP, Universidade Federal de Gois,
Fiocruz, no Rio de Janeiro, Universidade
Federal do Amazonas e outras) tm
isolado e encontrado novas caractersti-
cas de valor biotecnolgico em fungos
endofticos. A sua manipulao gentica
tem sido feita no intuito de serem
clonados genes de interesse, de tal modo
que sua reinoculao em plantas culti-
vadas poder levar introduo nos
vegetais de caractersticas novas e de
interesse biotecnolgico.
CONCLUSES
Os exemplos citados no esgotam
nem de longe o potencial que os fungos
apresentam em biotecnologia. A viso
que se pretendeu dar por meio dos
exemplos selecionados foi de que a
gentica, o melhoramento gentico e a
biotecnologia em fungos, embora j
tenham produzido resultados realmen-
te assombrosos, como no caso do me-
lhoramento para produo de antibiti-
cos, ainda tm muito mais a oferecer.
evidente que, no Brasil, um nmero
maior de micologistas, geneticistas de
fungos e biologistas moleculares tem
que existir para conseguir estudar no
s as espcies j conhecidas como tam-
bm toda a biodiversidade ainda
inexplorada no grande reino dos fungos.
Referncias bibliogrficas
Seguem algumas referncias ge-
rais, onde o leitor poder encontrar mais
dados sobre a biotecnologia em fungos.
So citados tambm alguns trabalhos de
autores nacionais referentes s pesqui-
sas acima mencionadas.
Alves, S.B. (1997) Control e
Microbiano de Insetos. Editora FEALQ,
Piracicaba (esta a segunda edio que
dever estar disponvel no segundo se-
mestre deste ano e que apresenta vrios
captulos sobre uso de fungos no controle
biolgico de insetos).
Astolfi Filho, S; Galembeck, E.V.;
Faria, J.B. & Frascino A.C.S. (1986)
Stable yeasts transformants that secrete
functional alfa-amilase encoded by cloned
mouse pancreatic cDNA. Biotechnology
1:47-54 (trabalho realizado no Brasil en-
volvendo a UNB e a USP, sobre manipu-
lao de levedura de interesse para pro-
duo de etanol).
Azevedo, J. L. (1986) Gentica de
Microrganismos em Biotecnologia e En-
genharia Gentica (apresenta uma srie
de captulos com revises de diversos
autores sobre aspectos biotecnolgicos
em fungos, incluindo controle biolgico,
produo de cido ctrico, enzimas
hidrolticas e leveduras de uso enolgico.
Possui tambm captulos descrevendo as
tcnicas de fuso de protoplastos e a
tecnologia do DNA recombinante).
Azevedo, J. L. (1997) Endophytic
fungi and their roles mainly on tropical
plants. Seventh International Symposium
on Microbial Ecology (captulo de livro
que dever estar publicado ainda em
1997. O captulo possui dados sobre
fungos endofticos com nfase nos isola-
dos de plantas no Brasil).
Ball, C. (1984) Genetics and
breeding of industrial microorganisms.
CRC Press, Boca Raton, Florida (contm
cap tul os sobre mtodos de
mel horamento de fungos e suas
aplicaes biotecnolgicas, com nfase
na produo de antibiticos).
Bettiol, W (1991) Controle Biolgico
de Doenas de Plantas. EMBRAPA/
CNPDA, Jaguarina (possui captulos
sobre o uso de fungos no controle
biolgico de doenas de plantas e seu
valor biotecnolgico).
Carrau, J. L.; Azevedo, J. L.; Sudbery,
P. & Campbell, D. (1982) Methods for
recovery fusi on products among
oenological strains of Saccharomyces
cerevisiae and Schizossacharomyces
pombe. Revista Brasileira de Gentica
5:221-226 (publicao original, em grande
parte feita no Brasil, sobre obteno de
levedura hbrida de valor enolgico).
Saunders, V.A. & Saunders, J.R.
(1987) Microbial genetics applied to
Biotechnology. Croom-Helm, London
(apresenta as diversas aplicaes da
gentica de fungos no melhoramento
gentico de espcies de valor industrial).
Figura 6 - Clulas hbridas resultantes de um
cruzamento por fuso de protoplastos entre
duas espcies de leveduras. O produto vem
sendo empregado com finalidades enolgicas
na fabricao de vinhos finos.
Figura 7 - Fungo entomopatognico ata-
cando inseto em seu estado larval. Nota-se
que uma das lagartas est completamente
recoberta pelo fungo, ao lado de outra sadia,
no atacada.Os fungos que causam doenas
em insetos so usados para controlar pragas
da agricultura em um processo de controle
biolgico.
Um pesquisador realiza em seus
laboratrios uma pesquisa de base que
faz parte de seu trabalho na universida-
de. De repente, esta pesquisa toma um
rumo, de modo pretendido ou no, que
inegavelmente apresenta uma aplicao
industrial. Conseqentemente este pes-
quisador acaba de realizar uma inven-
o, que, se apresentar novidade em
relao ao que j foi descrito nas revistas
cientficas ou nas patentes, se apresentar
um determinado nvel inventivo e no
constar das proibies expressas na lei,
plenamente patentevel.
Quais so os direitos deste pesquisa-
dor sobre esta futura patente?
Ou, melhor dizendo:
Quais so os passos que um pesquisa-
dor deve percorrer para que sua inveno
reverta em retorno financeiro tanto para
a universidade em que trabalha quanto
para si prprio?
De um modo geral, todos os pesqui-
sadores so inventores em potencial,
sem que tenham conscincia disto, pois
todo o trabalho criativo inerente a uma
inveno nasce do trabalho de pesquisa.
Toda a pesquisa de base que seria em
tese puramente terica poder se trans-
formar em pesquisa aplicada desde que
o pesquisador siga atalhos laterais que
partam da pesquisa de base, quer seja de
modo aleatrio, quer seja de maneira
pretendida. Em resumo, a pesquisa de
base o tronco de uma rvore e a
pesquisa aplicada so os galhos, a folha-
gem, os frutos. Ou fica-se fortalecendo o
tronco durante toda a vida da rvore ou
atenta-se para o nascimento dos galhos
e segue-se sua formao! Os atalhos
laterais, ou seja, os galhos, so as inven-
es com aplicao industrial que geram
as patentes que, por sua vez, geram
recursos que remuneraro novas pes-
quisas.
Da Alemanha, do livro Der Schutz
wissenschaftlicher Forschungsergebnisse,
do Prof. Friedrich-Karl Beier e Dr. Joseph
Straus, constata-se que so 3 as etapas
inerentes a um processo inventivo:
1. A etapa da PESQUISA propria-
mente dita, que engloba o avano cient-
fico.
2. A etapa do DESENVOLVIMENTO,
qual pertence o avano tcnico.
3. A etapa da APLICAO da pes-
quisa, que representa o avano econmi-
co e social.
Na fase do DESENVOLVIMENTO
onde se r eal i zam as i nvenes
patenteveis e muitas vezes nesta oca-
sio que j se mostra indicada a elabora-
o de um pedido de patente, mesmo que
ainda no tenha concludo naquele mo-
mento, com detalhes, o contexto inventivo
global do produto ou do processo recm-
desenvolvido. A fase da APLICAO re-
presenta a utilizao do produto ou do
processo comercialmente.
Cabe agora a pergunta:
Como se situa ao redor do mundo os
direitos dos empregados e dos empregado-
res no que concerne s patentes?
Na Alemanha, existem somente duas
situaes:
I. Ou a inveno se realizou durante
a vigncia do contrato de trabalho, e a o
empregador quem tem o direito de
reivindicar a inveno (cabendo sempre
ao empr egado di r ei t os sobr e a
comercializao do invento, os royalties
que o empregado recebe durante toda a
vida da patente);
II. Ou a inveno se deu fora da
vigncia do contrato de trabalho, e a o
empregado que tem todos os direitos.
A Sua segue este modelo e no
Japo o estmulo s invenes to
grande, seja nas universidades, seja nas
indstrias, que um inventor aufere lucro
por trs vezes, se for empregado. A pri-
meira, quando depositado o pedido; a
segunda vez, quando concedida a pa-
tente; e a terceira vez, quando ela
comercializada.
Durante todo o seu caminho de
pesquisa, um inventor japons deposita
invenes mesmo no estando elas ainda
perfeitamente delimitadas em todo o
mbito de suas aplicaes. Desta forma,
seus depsitos de inveno funcionam
como se fossem pequenos segmentos de
uma i nt egr al ou de um t odo,
correspondendo cada segmento a um
pedido de depsito, e sendo a patente
global o somatrio dos diversos segmen-
tos. Este modo de agir faz com que sua
inveno fique cercada em todos os
seus detalhes por vrias pequenas pa-
tentes.
Os EUA seguem em princpio o que
j foi dito para a Alemanha e Sua, mas
ao mesmo tempo tm dado muito incen-
tivo ao pesquisador, seja nas universida-
des, seja nos centros de pesquisa. Mais
especificamente, na Universidade da
Califrnia entre muitas outras, h um
centro de transferncia de tecnologia
que cuida de todos os direitos da propri-
edade intelectual, apoiando os pesqui-
sadores. H, por exemplo, por parte da
uni ver si dade, a obr i gao de
comercializar as invenes registradas
por seus pesquisadores, de procurar li-
cenciados para os ditos inventos, de
pedir o registro para os inventos e de
dividir os royalties auferidos com seus
pesquisadores (50%). Os licenciamentos
das patentes perfazem 30 a 40% da
receita da universidade, existindo pes-
quisadores de tecnologias de ponta que
j tm auferido at 1 milho de dlares
por ano com suas patentes.
No Brasil, no caso da ausncia de
um contrato especfico entre empregado
e a empresa, deve o empregado buscar
suporte ou:
1) nos regulamentos nacionais so-
bre a matria, ou
2) nos regulamentos das universida-
des, ou
3) nos estatutos das universidades,
ou
4) nas leis que regem os contratos
no pas.
A nova Lei de Propriedade Industri-
al, sancionada em 14 de maio de 1996 e
que entrou em pleno vigor em 15 de
maio de 1997, deu uma nfase muito
mais abrangente proteo conferida s
invenes realizadas por empregados
ou prestadores de servios, do que aque-
la j existente no Cdigo de Propriedade
Industrial anterior. Consideramos de im-
portncia salientar aqui alguns artigos
desta nova lei que por si s demonstram
o interesse do legislador de incentivar os
inventores/pesquisadores, sem que com
isto sejam prejudicados os empregado-
res.
So eles:
Art. 88 - A inveno e o modelo de
utilidade pertencem exclusivamente ao
EMPREGADOR quando decorrerem de
contrato de trabalho cuja execuo ocorra
no Brasil e que tenha por objeto a
pesquisa ou a atividade inventiva, ou
resulte esta na natureza dos servios
para os quais foi o empregado contrata-
do.
Art. 89 - O empregador, titular da
patente, poder conceder ao EMPREGA-
DO autor de invento ou aperfeioamen-
to PARTICIPAO nos ganhos econmi-
cos resultantes da explorao da paten-
te, mediante negociao com o interes-
sado ou conforme disposto em norma
da empresa.
Art. 90 - Pertencer exclusivamente
ao EMPREGADO a inveno ou o mode-
lo de utilidade por ele desenvolvido,
desde que DESVINCULADO do contrato
de trabalho e no decorrente da utiliza-
o de recursos, meios, dados, materiais,
instalaes ou equipamentos do empre-
gador.
Art. 91 - A propriedade da inveno
ou do modelo de utilidade SER CO-
MUM, em partes iguais, quando resultar
da contribuio pessoal do empregado e
de recursos, dados, meios, materiais,
instalaes ou equipamentos do empre-
gador, ressalvada expressa disposio
contratual em contrrio.
Art. 92 - O disposto nos artigos
anteriores aplica-se, no que couber, s
relaes entre o trabalhador AUTNO-
MO ou o ESTAGIRIO e a EMPRESA
CONTRATANTE e entre empresas con-
tratantes e contratadas.
Art. 93 - Aplica-se o disposto neste
captulo, no que couber, s entidades da
administrao pblica, direta, indireta e
fundacional, federal, estadual ou muni-
cipal.
Pargrafo nico: Na hiptese do
Art. 88, ser assegurada ao INVENTOR,
na forma e condies previstas no esta-
tuto ou regimento interno da entidade a
que se refere este artigo, PREMIAO de
parcela no valor das vantagens auferidas
com o pedido ou com a patente, a ttulo
de incentivo.
Certas universidades no Brasil, como,
por exemplo, a USP, tm convnios com
seus professores e pesquisadores, atri-
buindo a metade da propriedade das
patentes de inveno que eventualmente
forem realizadas aos ditos pesquisado-
res e a outra metade universidade, que
por sua vez reverte ainda uma parte de
seus 50% ao ncleo de pesquisa do
inventor. Tal acordo nada mais do que
um ato de justia ao esforo particular
do pesquisador, j que sem ele no se
teriam invenes.
O ATO NORMATIVO n 116 de ou-
tubro de 1993 regula esta matria, permi-
tindo s empresas domiciliadas no pas
ou no que registrem contratos com
centros de pesquisas para o desenvolvi-
mento de novas tecnologias, podendo
at haver a possibilidade de dedutibilidade
fiscal por parte da empresa quanto aos
custos das pesquisas.
Um pesqui sador poder ai nda
auferir lucro sobre suas pesquisas, se
seu contrato com o empregador lhe
permitir prestar consultorias. De qual-
quer maneira, absolutamente indis-
pensvel, para a prpria segurana do
empregado, que estas consultorias se-
jam consagradas por contratos, de prefe-
rncia, escritos.
O usual entre as universidades, seus
pesquisadores e as empresas so contra-
tos ou convnios tripartite, onde uni-
versidade pertencero 33%, empresa
33% e financiadora 33%. Como j
anteriormente mencionado, o pesquisa-
dor somente ter direitos materiais sobre
suas pesquisas se seu contrato com a
instituio para a qual trabalha assim o
tiver estipulado.
A IMPORTNCIA DO DEPSITO DE
PATENTE DE UMA INVENO
comum e inerente ao papel de
pesquisador a PUBLICAO! Pesquisa
sem PUBLICAO no existe!
Mas, e a PATENTE?
A patente em embrio, ou seja, o
fruto de uma inveno, morta se sua
publicao se der ANTES do depsito
escrito da inveno em uma repartio
governamental autorizada, sendo esta
repartio no Brasil o INPI (Instituto
Nacional da Propriedade Industrial).
A patente remunera o esforo
inventivo com retorno do investimento
universidade e ao pesquisador. A publi-
cao sem PATENTE apenas comunica
o esforo inventivo, sem retorno finan-
ceiro.
A PATENTE obrigatoriamente
publicada 18 meses aps o depsito do
pedido, mas o pesquisador poder efe-
tuar sua publicao depois de ter seu
pedido depositado a qualquer hora que
lhe convier, seja em revistas cientficas
especializadas, em palestras ou em
papers.
Portanto, a PATENTE no impede
qualquer publicao, muito pelo contr-
rio, obriga-se publicao.
Repetindo, o pesquisador, aps ter
descrito sua inveno e a tiver deposita-
do no INPI (o que poder ser feito muito
rapidamente), poder dispor dela para
publicao imediatamente, concluindo-
se que o depsito de uma patente no
inibe as publicaes como muito erro-
neamente repetido por leigos e at
mesmo por pesquisadores, mas apenas
garante direitos. Assim, portanto, os pas-
sos de uma pesquisa inventiva aplicada
deveriam ser:
1) Descrio por escrito da inven-
o.
2) Depsito desta descrio no INPI.
3) Publicao por parte do pesqui-
sador para a comunidade cientfica, se
assim o desejar.
4) Publicao obrigatria por parte
do INPI 18 meses aps o depsito.
LICENAS
importante para um pesquisador
ao obter uma patente que, alm do
enri queci ment o de sua ref ernci a
curricular, sua inveno venha a ser
comercializada.
Como feita esta comercializao?
Atravs de LICENAS.
O que uma licena?
Uma licena um aluguel remune-
rado que o inventor faz de seu invento.
A empresa que aluga (licencia) o inven-
to, remunera o dono da patente durante
os anos de sua vida de modo exclusivo
ou no exclusivo, dependendo do tipo
da licena concedida.
Uma inveno sem patentes, ou me-
lhor, sem a possibilidade de haver licen-
as, no comercializvel porque ne-
nhuma empresa se arriscaria em investir
milhes sem ter a garantia de que auferir
os lucros de seu investimento.
Fleming, o inventor da penicilina,
um exemplo entre muitos outros, no
quis patentear seu invento por achar que
o mundo deveri a usufrui r de sua
inveno sem precisar pagar royalties.
Por isso que a penicilina deveria ser
franqueada ao pblico em geral a preos
baratos. O resultado de sua deciso foi
que nenhuma empresa ousou arcar com
os ri scos de uma f abri cao no
patenteada e somente aps 10 anos, e
mesmo assim com a interveno do
gover no i ngl s que, em guer r a,
praticamente obrigou um laboratrio
particular a fabric-la, foi que a penicilina
ficou conhecida e comeou a salvar
vidas.
Assim, fica aqui aos cientistas a
mensagem:
Patente publicao obrigatria
remunerada.
Somente o patenteamento permite a
comercializao.
Um inventor pode doar o fruto de
sua inveno para seu pas, se quiser,
mesmo depois de obter a patente, mas
atravs do patenteamento poder trazer
tambm para seu pas divisas de outros
pases que permitiro a continuidade de
suas pesquisas.
processo de gerao,
divulgao e adoo
das agribiotecnologias
tem-se constitudo num
importante objeto de
anlise e planejamen-
to, particularmente em
pases desenvolvidos. Como em todo
processo de transio, manifesta-se uma
mistura de apreenso e antecipao por
parte da sociedade - a apreenso ao
desconforto de adaptaes, nem sempre
neutras e de fcil assimilao; e a ante-
cipao, relacionada s novas perspecti-
vas e s oportunidades a serem explora-
das. Nesse processo, as reaes quanto
aceitao e adoo das novas
tecnologias so bastante variadas, po-
dendo-se agregar os seus participantes
em trs grandes grupos: os inovadores,
que procuram se antecipar na adoo de
inovaes; os tradicionais, avessos a
mudanas; e finalmente, os indivduos
que se adaptam progressivamente a
modificaes, visualizando-as como um
processo natural.
No presente artigo, procura-se mo-
tivar a implementao dessas novas
agribiotecnologias de uma forma plane-
jada na economia brasileira. Para tal,
considera-se importante identificar os
efeitos dessas mudanas num mbito
mais amplo do desenvolvimento setorial.
Tal percepo pode constituir-se num
subsdio importante para o delineamen-
to de polticas relacionadas forma de
conduo e assimilao das pesquisas,
medida que permite a definio de metas
e objetivos de uma forma bastante clara,
o que tende a reduzir a importncia
relativa dos problemas implcitos a pro-
cessos dessa natureza.
Perspectiva histrica do
desenvolvimento da agricultura -
breve reviso
Numa perspectiva histrica, o de-
senvolvimento da agricultura pode ser
apresentado como uma seqncia de
trs estgios. O primeiro ocorreu h
cerca de dez mil anos, quando se passou
a utilizar prticas de cultivo e variedades
melhoradas de plantas.
Na dcada de sessent a,
implementou-se a revoluo verde,
cujo impacto sobre a produo agrcola
foi suficientemente amplo para demar-
car um segundo perodo de desenvolvi-
mento do setor. Esse fenmeno compre-
endeu o emprego de novas tecnologias,
tais como o uso de herbicidas, fertilizan-
tes e variedades de plantas com maior
resposta aplicao de fertilizantes. A
assimilao dessa nova tecnologia resul-
tou numa expanso na produo de
alimentos e num rpido aumento na
utilizao de fertilizantes qumicos.
Durante a revoluo verde, a pro-
duo de trigo na sia no ano de 1969,
por exemplo, superou em 30% a mdia
do perodo de 1960-64, e a produo de
arroz em 1969 excedeu em 18% a mdia
do perodo de 1960-64. Os nveis de
produtividade alcanados foram pratica-
mente duas vezes superiores queles
obtidos com a maior parte das varieda-
des utilizadas anteriormente.
O aumento da eficincia agrcola
reduziu, por um lado, importantes obst-
culos ao desenvolvimento de economias
asiticas (como a indiana, paquistanesa
e chinesa), onde milhes de indivduos
passavam fome, correndo srios riscos
de sucumbir inanio. Por outro lado,
as mudanas tecnolgicas no foram
assimiladas de forma homognea, fa-
zendo com que outros problemas de
natureza social e econmica, associados
distribuio no-eqitativa de renda,
fossem agravados. Alm disso, o entusi-
asmo com os ganhos de produtividade
levou os agricultores a substiturem cul-
turas tradicionais pelas que ofereciam
maiores retornos.
Os benefcios da revoluo verde
em termos da maior oferta de alimentos
tm sido ressaltados com maior freqn-
cia. No entanto, vrios estudos associa-
ram seus efeitos a um agravamento de
problemas socioeconmicos, tais como
o desemprego e a desigualdade na distri-
buio de renda. A esses devem ser
acrescentados os prejuzos relativos
degradao do solo por resduos qumi-
cos.
No presente artigo, no se tem a
pretenso de diagnosticar se o impacto
lquido desse processo foi positivo ou
negativo, e, sim, propor formas que per-
mitam antecipar os possveis impactos
sociais e econmicos de processos de
natureza semelhante, a fim de fornecer
subsdios para a tomada de medidas que
possam evitar (ou minimizar) a reinci-
dncia dos efeitos negativos.
Goldin e Rezende (1993) argumen-
taram que o deslocamento de bens ali-
mentares no Brasil, particularmente du-
rante a dcada de setenta, ocorreu por
motivos semelhantes aos que provoca-
ram a substituio de produtos agrcolas
tradicionais no continente asitico. Ou
seja, nesse perodo, os produtos alimen-
tares foram menos privilegiados por avan-
os tecnolgicos desenvolvidos na eco-
nomia domstica. medida que produ-
tos exportveis, como a soja e o acar,
passaram a competir por terra e outros
recursos, os produtos alimentares do-
msticos (como o feijo e o arroz) foram
progressivamente substitudos.
Em perodo recente, a agricultura
mundial vem-se defrontando com um
processo que aparentemente pode ser
identificado como uma terceira revolu-
o ou a biorrevoluo. Os principais
fatores relacionados a esse processo so
as agribiotecnologias emergentes, alm
dos sistemas de comunicao e a troca
de informao de forma mais eficiente.
De maneira geral, os objetivos dessa
biorrevoluo envolvem um aumento da
quantidade e da qualidade na produo
de alimentos, incluindo-se a elevao da
taxa de produto por unidade de insumo.
Norman Ernest Bourlag, conhecido
como o pai da revoluo verde, v a
engenharia gentica, com suas plantas
transgnicas e clones de animais, como
a frente de uma nova revoluo na
produo de alimentos.
Vrios trabalhos conduzidos em
meados da dcada de 80 tm sugerido
que esse novo processo de transio
tecnolgica tem um maior potencial para
apresentar impactos positivos em termos
distributivos e de gerao de empregos,
comparado revoluo verde. Esse ar-
gumento sustenta-se em perspectivas de
que a infuso de biotecnologias venha a
proporcionar condies para um desen-
volvimento econmico mais integrado e
equilibrado entre a agricultura e o setor
industrial, ao contrrio do que ocorreu
na revoluo tecnolgica da dcada de
60. O estmulo consolidao de novos
sistemas agroindustriais apresenta-se pro-
missor, particularmente como um instru-
mento que poder alavancar um proces-
so de desenvolvimento econmico sus-
tentado, tendo como base relaes
intersetoriais mais equilibradas.
O desafio apresenta-se, portanto,
como a determinao de formas para
maxi mi zar os benef ci os das
agribiotecnologias na economia brasilei-
ra, ao mesmo tempo em que se minimizam
os custos socioeconmicos associados a
problemas distributivos.
Uma pauta para a formulao de
estratgias.
No contexto da agricultura brasilei-
ra, a biotecnologia tem promovido o
desenvolvimento de plantas de melhor
qualidade, mais resistentes a adversida-
des ambientais, alm de formas adequa-
das ao processamento industrial (o que
auxilia a integrao dos vrios subsetores
da agr i cul t ur a em si st emas
agroindustriais).
Tcnicos do Centro Nacional de
Recursos Genticos e Biotecnologia -
CENARGEN, da Empresa Brasileira de
Pesquisa Agropecuria - EMBRAPA, ava-
liam o impacto das biotecnologias no
Brasil como sendo mais evidente em
reas de recuperao, conservao e
caracterizao de variabilidade gentica,
e de reflorestamento. Tem-se direcionado
esforos tambm para o desenvolvimen-
to de inoculantes mais competitivos e
com maior capacidade de sobrevivncia
nos solos para culturas-chave como o
feijo e soja. A utilizao de insumos
biolgicos para assegurar o suprimento
adequado de nitrognio para essas cul-
turas dever, eventualmente, prover um
aumento na produtividade sem custos
adicionais, alm de se apresentar como
uma alternativa que viabiliza a conserva-
o ambiental.
importante atentar ao fato de que
os programas de pesquisa para a agricul-
tura utilizados em dcadas passadas ti-
veram um impacto negativo sobre a
distribuio de renda e para a oferta de
alimentos (Pastore, 1984; Homem de
Melo, 1985). Considerando-se que a dis-
tribuio de renda e a oferta de alimen-
tos so determinadas primariamente por
fatores sociais e naturais, relevante
questionar se uma inovao tecnolgica
pode compensar as deficincias relati-
vas situao socioeconmica prevale-
cente no pas. Neste contexto, impor-
tante destacar, ainda, que o modelo de
desenvolvimento brasileiro ao longo das
duas ltimas dcadas buscou promover
um crescimento rpido da economia,
t endo- se ut i l i zado uma est rat gi a
desenvolvimentista que priorizou a subs-
tituio de importaes de bens de capi-
tal e insumos bsicos, bem como a
dinamizao das exportaes de manu-
faturados. Esse processo resultou numa
acentuada transferncia de recursos do
setor agrcola em favor dos setores se-
cundrio e tercirio, o que conduziu,
por sua vez, a uma alterao desfavor-
vel na taxa de crescimento relativa da
agricultura.
Mais recentemente, presses polti-
cas e econmicas tm induzido o pas a
liberalizar seu regime de comrcio exte-
rior, sendo que os esforos nessa dire-
o vm sendo acompanhados de um
grande empenho na retomada do cresci-
mento econmico, particularmente atra-
vs de uma melhor alocao dos recur-
sos disponveis.
Quando ocorre uma realocao de
recursos (o que pode ser provocado
pel a i nt roduo de uma i novao
tecnolgica), os padres de pagamentos
aos fatores alteram-se, trazendo conse-
qncias tanto para a distribuio de
renda como para a estrutura de emprego.
Nesse processo, sempre existem grupos
na sociedade que atingem maiores n-
veis de satisfao com as mudanas,
enquanto outros sofrem perdas efetivas.
Tendo-se em conta, portanto, que
os programas de pesquisa para a agricul-
tura tm sido importantes na determina-
o da distribuio de renda e na oferta
de alimentos no pas, e que esses fatores
podem e devem ser melhorados, torna-
se importante direcionar esforos para
assegurar que os impactos dos desen-
volvimentos de novas tecnologias ve-
nham a ser administrados de forma ade-
quada. Isso envolve um esquema de
planejamento baseado na identificao
prvia da viabilidade na conduo do
processo e dos possveis efeitos positi-
vos (e negativos). A determinao dessas
caractersticas permite que se trabalhe
para ampliar os impactos positivos po-
tenciais. De uma mesma forma, tem-se
elementos para identificar impactos ne-
gativos potenciais e ajust-los, antes que
venham a ser institucionalizados.
Os est udos r el aci onados
biorrevoluo tm apresentado, a princ-
pio, perspectivas otimistas, indicando
que a biotecnologia dever ter um gran-
de impacto na produo agrcola, com
reflexos favorveis tanto no que se refe-
re distribuio de renda como oferta
de alimentos, e nos nveis de emprego da
populao (Salles, 1986; Possas et al,
1994). possvel e desejvel, portanto,
aumentar a probabilidade do sucesso na
i mpl ement ao dessa r ef or ma
tecnolgica, pela identificao prvia dos
grupos que iro usufruir de maiores
ganhos ao longo do processo.
Alguns itens de mbito global, sele-
cionados para a composio de uma
pauta para a definio de estratgias das
novas agribiotecnologias no contexto
brasileiro, so listados a seguir:
. Identificao da forma pela qual
as novas tecnologias podero ser absor-
vidas, traduzidas e interpretadas tanto
pelas instituies pblicas como pelas
entidades privadas envolvidas na pro-
moo de seu desenvolvimento e divul-
gao.
. Verificao do grau de aceitao
das mudanas previstas em decorrncia
da assimilao da nova tecnologia tanto
por parte da sociedade, como pelos
formuladores de poltica.
. Aval i ao da vi abi l i dade na
implementao das novas tcnicas, ten-
do-se em considerao:
- a importncia atribuda pelo go-
verno e pela sociedade s solues pro-
porcionadas pela sua adoo;
- o enquadramento das mudanas
potenciais nas metas delineadas pelo
governo;
- a aceitao dessas mudanas pelas
empresas privadas que promovem o
desenvolvimento e a divulgao das
novas tecnologias. Com relao a esse
ltimo item, importante considerar que
as agribiotecnologias vm sendo gera-
das em sua maior parte pelo setor priva-
do, o que torna necessrio verificar se o
aumento no valor adicionado compensa
os aumentos nos custos para os agricul-
tores inovadores.
. Avaliao do tempo requerido para
que a nova tecnologia apresente algum
efeito positivo a fim de proceder pon-
derao das necessidades mais imedia-
tas.
. Avaliao do potencial que a assi-
milao da nova tecnologia apresenta
para reduzir o grau de desigualdade e
aumentar o nvel de emprego, bem como
proceder a uma verificao da necessi-
dade de recorrer interveno governa-
mental para auxiliar a viabilidade de sua
implementao.
. Det ermi nao das rest ri es
institucionais que possam atuar tanto no
sentido de prejudicar como no sentido
de promover o impacto e a efetividade
da tecnologia para a agricultura.
. Verificar se existe uma demanda
social efetiva pela reduo do nvel de
desemprego e de desigualdade na distri-
buio de renda, ou mesmo se esses
objetivos inserem-se nas metas polticas
traadas pelo governo. Quando esse o
caso, r est a aval i ar se exi st e um
equacionamento para a soluo desses
problemas e se a promoo do desen-
vol vi ment o e empr ego de novas
tecnologias para a agricultura incluem-
se nas formas identificadas para propor-
cionar esses ganhos de bem-estar para a
sociedade.
Considerando-se, portanto, que, na
atual conjuntura poltica do pas, os
esforos no sentido de promover a reto-
mada do crescimento econmico tm
sido evidentes e direcionados, a princ-
pio, a um desenvolvimento intersetorial
mais integrado e equilibrado, neste con-
t ext o, a bi or r evol uo pode ser
identificada como um processo adequa-
do s metas polticas governamentais
recentes. As expectativas relativas ao
efeito da assimilao dessas novas
tecnologias tm sido positivas, tanto para
questes da produo como para ques-
tes socioeconmicas, de forma que o
planejamento adequado desse processo
deve ser tratado com a devida ateno,
medida em se procura evitar a reincidn-
cia de impactos negativos relativos a
mudanas tecnolgicas na agricultura
brasileira.
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nolgica, Braslia, 3(3), 379-405, set/dez.
Leishmania so protozorios para-
sitas causadores das leishmanioses, que
vo desde formas graves viscerais, fatais
quando no tratadas, at formas cutneas
de cura espontnea. Estas doenas afe-
tam milhes de pessoas em todo o mun-
do, e so um grave problema de sade
pblica no Brasil. Estes parasitas so
transmitidos ao hospedeiro mamfero,
inclusive o homem, pela picada de um
pequeno inseto, o flebtomo. No inseto
a Leishmania existe como um parasita
flagelado extracelular, uma forma cha-
mada pr omast i got a. Quando o
promastigota injetado no mamfero
pela picada do inseto, ele invade as
clulas que normalmente so respons-
veis pela defesa imune do organismo, os
macrfagos, onde se transforma numa
forma arredondada imvel, o amastigota,
que a se multiplica. A ingesto destas
formas pelo inseto fecha o ciclo infecci-
oso. A capacidade de sobrevivncia da
Leishmania nestas clulas de defesa, um
ambiente normalmente hostil a organis-
mos invasores, tem atrado o interesse de
muitos pesquisadores. Apesar dos meca-
nismos de escape no serem ainda total-
mente compreendidos, vrios aspectos
fascinantes j so conhecidos, como o
desenvolvimento de estratgias de
detoxificao que incluem a produo
de molculas inibitrias especficas como
catalases, novos agentes redutores e
inibidores de protena quinases.
O conhecimento de caractersticas
das formas amastigotas que sobrevivem
nos macrfagos, e das molculas por
elas produzidas, que podem estar envol-
vidas nestes mecanismos de escape,
portanto de grande importncia potenci-
al para o desenvolvimento de vacinas e
novas terapias. Nosso laboratrio vem
trabalhando com uma destas molculas
amast i got a-espec fi cas, as ci st e na-
proteinases.
Provavelmente a cistena-proteina-
se mais conhecida popularmente a
papana do mamo, muito utilizada no
amaciamento de carnes. Cistena-protei-
nases existem em praticamente todos os
organismos onde foram procuradas,
desde vrus, bactrias e plantas, at nos
mamferos, tendo funes diferentes nos
vrios casos. Elas foram encontradas
tambm em vrios parasitas de interesse
para o homem. Uma produo aumenta-
da de cistena-proteinases por amebas,
parasitas unicelulares que podem pro-
vocar srias diarrias, foi correlacionada
gravidade da doena causada, uma vez
que estas proteinases parecem estar im-
plicadas na capacidade invasiva destes
parasitas. O Schistosoma, um verme que
tem um estgio de diferenciao num
vetor caramujo, transmitido ao homem
em guas infectadas por uma pequena
forma chamada cercria, que penetra
pela pele. Uma cistena-proteinase foi
responsabilizada por este processo inva-
sivo. Testes preliminares demonstraram
que a utilizao de inibidores destas
proteinases, quando passados na pele
de animais de laboratrio, eram capazes
de bloquear a transmisso do parasita.
Cistena-proteinases foram tambm de-
tectadas, e esto sendo exaustivamente
estudadas, em protozorios parasitas
como o plasmdio causador da malria,
e os tripanosomatdeos patognicos
Trypanosoma brucei, causador da doen-
a do sono na frica, e o Trypanosoma
cruzi, causador da doena de Chagas no
Brasil e outros pases das Amrica, como
um alvo potencial para novas terapias e
desenvolvimento de vacinas. No caso do
protozorio causador da malria, ciste-
na-proteinases so responsveis pela
Yara Maria Traub-Cseko
Ph.D em Biologia Molecular pela Universidade
de Columbia, New York - EUA.
Chefe do Departamento de Bioqumica e
Biologia Molecular do Instituto Oswaldo Cruz.
Pesquisadora Visitante na Universidade de Yale,
EUA.
Fundao Oswaldo Cruz, Instituto Oswaldo
Cruz, Departamento de Bioqumica e Biologia
Molecular, Rio de Janeiro, RJ
quebra da hemoglobina que nutre estes
parasitas. No T. cruzi elas parecem ter
um importante papel no ciclo de desen-
volvimento do parasita. Em Leishmania,
inibidores de cistena-proteinases ini-
bem em grande parte a transformao de
promastigotas para amastigotas, e dimi-
nuem dramaticamente a infeco de
macrfagos. Informaes detalhadas
sobre cistena-proteinases de Leishma-
nia podem ser obtidas numa reviso que
publicamos em Cincia e Cultura (vol. 45
N.5, 1993).
Nossos trabalhos sobre cistena-
proteinases de Leishmania iniciaram-se
pela identificao e caracterizao dos
genes que codificam estas enzimas. Isto
foi possvel explorando uma de suas
caractersticas, a alta conservao das
seqncias correspondentes aos stios
ativos, aos quais se liga o substrato. Isto
permitiu o desenho de pequenas se-
qncias de DNA que foram usadas
como iniciadoras numa tcnica de am-
plificao de DNA conhecida como PCR,
a reao em cadeia da polimerase. As
seqnci as ampl i f i cadas f or am
seqenciadas e desta maneira consegui-
mos identificar dois genes que codifi-
cam duas cistena-proteinases distintas.
O estudo cuidadoso destas seqncias
nos permitiu chegar a vrias concluses
interessantes: trata-se de duas proteinases
bastante diferentes, to diferentes entre
si , di gamos, como uma ci st e na-
proteinase de T. cruzi e qualquer uma
das de Leishmania. A quantidade das
protenas produzidas por estes genes,
que chamamos de Lpcys1 e Lpcys2,
bastante diferente, a 2 sendo muito mais
abundante que a 1, o que correlacionado
com o nmero de genes presentes no
genoma, apenas um gene na 1, e uma
dezena de cpias pelo menos da 2.
Outra diferena que chamou a ateno
foi a ausncia, em Lpcys1, de uma exten-
so no fim C-terminal da protena, que
caracterstico de todas as cistena-
proteinases de tripanosomatdeos estu-
dadas at agora. Os dois tipos de genes
encontram-se tambm em cromosomas
diferentes. Sua localizao celular na
Leishmania foi determinada atravs de
marcao com anticorpos e visualizao
por microscopia eletrnica. Ambas fo-
ram encontradas em abundncia nos
lisosomas e Lpcys1 em quantidades sig-
nificativas na bolsa flagelar, uma cavida-
de na base do flagelo que parece servir
como um importante stio de ingesto e
secreo nestes parasitas.
Neste meio tempo, um grupo de
pesquisadores na Esccia estava estu-
dando alguns outros aspectos desta
proteinases de Leishmania. Estudos fun-
cionais foram feitos atravs da tcnica
de eliminao ou knockout gnico. Esta
tcnica tornou-se possvel a partir do
desenvolvimento de transfeco em
Leishmania. Um dos carros-chefes da
engenharia gentica a tcnica de
cl onagem mol ecul ar , onde genes
heterlogos so ligados a plasmdeos
bacterianos e depois reintroduzidos e
amplificados em bactrias. O equivalen-
te desta tcnica foi tambm desenvolvi-
do para tripanosomatdeos, inclusive
Leishmania. Foram criados plasmdeos
capazes de se replicar nestes parasitas,
que so introduzidos na Leishmania pela
tcnica de eletroporao. O plasmdeo
i nt roduzi do pode cont er um gene
construdo de tal maneira que, atravs de
recombinao gentica, se insira no gene
normal da clula e o destrua, causando
assim uma deficincia de seu produto. A
chamada gentica reversa uma arma
poderosa para o estudo funcional de
genes especficos. Quando o grupo da
Esccia eliminou o gene de Lpcys1 de
Leishmania, no foi possvel detectar
qualquer efeito deletrio nas clulas,
indicando no ser este um produto es-
sencial para a sobrevivncia do parasita.
Quando, entretanto, as cpias de Lpcys2
foram eliminadas, essas leishmnias per-
deram em grande parte sua capacidade
de infectar e sobreviver nos macrfagos,
comprovando assim seu importante pa-
pel na virulncia destes parasitas.
Nosso interesse atual se foca princi-
palmente no estudo de mecanismos de
trnsito celular de cistena-proteinases
em Leishmania, ou seja, na sinalizao
que leva estas proteinases aos lisosomas.
Pouco se sabe a respeito das caracters-
ticas moleculares responsveis pelo
ender eament o de pr ot e nas em
tripanosomatdeos em geral. Foi identifi-
cado um sinal de apenas trs aminocidos
que capaz de levar protenas ao
glicosoma, uma organela caracterstica
de tripanosomatdeos onde se concen-
tram enzimas glicolticas. Os sinais de
direcionamento ao lisosoma so bem
conhecidos em vrios organismos, exis-
tindo mesmo, em mamferos, patologias
definidas relacionadas a mecanismos
deficientes de endereamento de enzimas
ao lisosoma. O mecanismo mais comum,
que envolve receptores e uma marcao
por gl i cose-6-f osf at o nas enzi mas
l i sosomai s, no parece exi st i r em
Leishmania. Foi aventada na literatura a
hiptese do envolvimento da extenso
C- t er mi nal , car act er st i ca de
tripanosomatdeos, neste processo. A
descoberta, em nosso laboratrio, de
uma classe de cistena-proteinases de
Leishmania que no tem esta extenso, e
mesmo assim tem uma localizao
lisosomal, vai contra esta hiptese. Duas
abordagens esto sendo utilizadas neste
estudo. Esto sendo clonados os frag-
mentos gnicos que antecedem e suce-
dem a seqncia que dar origem
proteinase madura e ativa, juntamente
com um gene reprter, que d origem
protena verde fluorescente, de uma gua-
viva marinha. A fluorescncia desta pro-
tena reprter pode ser visualizada por
microscopia, sendo assim possvel de-
terminar qual fragmento da cistena-
pr ot ei nase r esponsvel pel o
endereamento ao lisosoma. Na outra
abordagem est sendo investigado o
envolvimento potencial de acares no
direcionamento. J foi demonstrada a
presena de acares em cistena-
proteinases de tripanosomatdeos. pos-
svel determinar, a partir da seqncia
primria dos aminocidos na protena,
os stios potenciais de glicosilao. Dois
destes stios foram identificados em
Lpcys2, a cistena-proteinase abundante
de Leishmania. Nossa inteno modifi-
car est es ami noci dos at ravs de
mutagnese dirigida, e depois verificar
se estas proteinases, agora deficientes
em sua glicosilao, ainda so capazes
de encontrar seu caminho ao lisosoma.
J conseguimos com sucesso eliminar
um destes stios, e no momento estamos
introduzindo estes genes mutados em
Leishmania atravs de transfeco. Ou-
tro experimento que j foi levado a cabo
em nosso laboratrio foi a introduo do
gene de Lpcys2 numa espci e de
Leishmania que normalmente apresenta
nveis baixos desta proteinase, com o
intuito de averiguar o efeito de uma
superproduo no parasita, em relao,
por exemplo, virulncia. Quando o
gene heterlogo foi introduzido em for-
mas promastigotas, observamos um efei-
to inesperado: quando a proteinase foi
visualizada em gis com o auxlio de
anticorpos especficos, no foi visto o
pr ocessament o que d or i gem
proteinase madura e ativa, como o
caso nas formas amastigotas da espcie
de onde foi clonado Lpcys2. Isto pode
ter dois significados: ou esta espcie
distinta de Leishmania no reconhece os
sinais de processamento molecular da
espcie original e/ou o processamento,
que ocorre normalmente em amastigotas,
no ocorre na forma promastigota. As
duas so possibilidades excitantes que
esto sendo investigadas no momento.
Talvez a aplicao mais dramtica,
com direito a manchetes recentes nos
jornais, das cistena-proteinases como
um alvo para quimioterapias, seja a uti-
lizao de inibidores destas proteinases
como um dos componentes dos to
divulgados coquetis anti-HIV. pos-
svel que um futuro no muito distante
veja o desenvolvimento de novas terapi-
as baseadas em inibidores de cistena-
proteinases em vrias doena infeccio-
sas e parasitrias, inclusive as leishmani-
oses, to carentes de novos desenvolvi-
mentos nesta rea
m apenas dez anos, o Centro de Engenharia Gentica e Biotecnologia de Cuba -
CIGB transformou essa ilha em um ponto de referncia e excelncia mundial de
pesquisa e desenvolvimento de produtos biotecnolgicos. Atuando na sade humana e
nas reas animal e vegetal, o CIGB j colocou disposio de mais de 50 pases
cerca de 160 produtos em escala industrial.
Entre esses produtos, encontram-se verdadeiras inovaes na rea de sade humana,
como a vacina para hepatite-B, que j foi exportada para 28 pases; o Streptokinase,
utilizado para combater o enfarte, que faz com que, por exemplo, a populao de
Cuba tenha o menor ndice dessa doena no mundo; kits para diagnstico de vrias doenas,
como AIDS, sfilis e toxoplasmose, entre muitos outros. Na rea animal, vrias vacinas foram
desenvolvidas, inclusive uma para carrapatos de bovinos, nica no mundo. Na rea vegetal, o
CIGB est em fase avanada de desenvolvimento de pesquisas para produo de plantas
transgnicas de cana-de-acar, batata, caf e mamo papaia, para torn-las resistentes a
doenas e aumentar a produtividade e a qualidade.
Para falar dos trabalhos do CIGB, seu diretor geral, Manuel Limonta, concedeu essa entrevista
Revista BIOTECNOLOGIA Cincia & Desenvolvimento, no dia 20 de maro, na sede da
Embaixada de Cuba, em Braslia.
Durante a entrevista, Limonta destacou o esforo do governo cubano em apoiar as pesquisas
biotecnolgicas do CIGB e tambm o entusiasmo e o comprometimento de todos os seus 1.080
funcionrios com os objetivos da instituio.
Biotecnologia Cincia & Desenvolvi-
mento - Do total de funcionrios do
quadro do CIGB, quantos so pesqui-
sadores, tcnicos especializados e
quantos trabalham em atividades de
produo e comercializao?
Limonta - O CIGB trabalha com pesqui-
sa, produo e comercializao de pro-
dutos biotecnolgicos. Para desenvolver
essas atividades, contamos com 350 pes-
quisadores, 200 profissionais qualifica-
dos na produo, 400 tcnicos treinados
na par t e de i nvest i ment o e
comercializao e o restante em ativida-
des de apoio.
BC&D - Como feita a comercializao
dos produtos biotecnolgicos pelo
CIGB?
Limonta - O Centro tem, desde 1991, uma
companhia distribui-
dora, que funciona
dentro da sua prpria
rea fsica, chamada
Heber Biotec, que foi
criada para atender s
demandas crescentes
do mercado interno e
mundial dos nossos
produtos. Ela uma empresa privada,
com seu prprio capital, que, apesar do
pouco tempo de existncia e do reduzi-
do quadro, que no chega a cem funci-
onrios, tem desenvolvido frutferas re-
laes comerciais com empresas priva-
das e estatais, e com instituies de mais
de 50 pases. A Heber Biotec oferece
ainda tecnologias e desenvolve projetos
em cooperao com empresas de Cuba
e de outros pases para o desenvolvi-
mento de novos produtos e daqueles j
acabados.
BC&D - O Centro mantm intercmbi-
os para capacitao de pessoal com o
Brasil?
Limonta - Sim. J foram feitos vrios
convnios com instituies brasileiras
para treinamento de pessoal nas reas de
pesquisa de sade humana, de animais
e no desenvol vi ment o de pl ant as
transgnicas, envolvendo todos os as-
pectos da biotecnologia moderna, inclu-
sive estratgias comerciais para esses
produtos. Vrios pesquisadores brasilei-
ros participam continuamente de estgi-
os e treinamentos em Cuba.
BC&D - Quais so os principais produ-
tos biotecnolgicos comercializados
na rea de sade humana e quais as
suas aplicaes?
Limonta - Na rea de sade humana, o
principal produto biotecnolgico a
vacina contra a hepatite-B, conhecida
comer ci al ment e como
Heberbiovac HB, que foi produ-
zida h oito anos. A sua patente
est registrada em 30 pases,
comercializada em 28, englo-
bando todos os latino-america-
nos, alm da Coria do Sul, Ir,
ndia, Rssia, Mxico, Colm-
bia, Argentina e outros. No Bra-
sil, foi firmado um protocolo de
pesquisa dessa vacina com o
Hospital das Clnicas, em So
Paulo, e os resultados tm sido
muito positivos. Ela adquiriu aval
cientfico muito grande na Co-
lmbia, Mxico e Argentina, em
decorrncia dos programas de
vacinao desenvolvidos nesses pases.
Desde 1990, em Cuba, essa vacina tem
sido aplicada, obrigatoriamente, em re-
cm-nascidos e a Organizao Mundial
de Sade - OMS recomenda a aplicao
obrigatria nos ou-
tros pases. Cuba
ser o primeiro pas
do mundo a ter toda
a sua populao, de
at 20 anos de ida-
de, vacinada, em
1999. Outro produ-
to o interferon
recombinante, conhecido comercialmente
por Heberon Alfa R, que amplamente
utilizado em Cuba, de forma gratuita,
desde 1988, no controle de vrios tipos
de cncer e de leucemia. Esse produto
exportado para muitos pases, incluindo
o Brasil, e gera dezenas de milhes de
dlares de receita para o Centro. O
Streptokinase recombinante, obtido a
partir da engenharia gentica h quatro
anos, elimina os cogulos das artrias
coronrias, evitando o enfarte. Cuba o
nico pas do mundo que tem a tecnologia
de engenharia gentica para desenvolver
esse produto que, hoje, tem sua patente
registrada em mais de 40 pases, inclusi-
ve nos Estados Unidos. Esse medica-
mento utilizado gratuitamente em to-
dos os hospitais de Cuba, pas que tem a
menor percentagem de morte por enfarte
do mundo. Outro produto obtido pela
engenharia gentica o Hebermin, um
creme que tem um fator de crescimento
de tecidos da epiderme para curar quei-
maduras e lceras e que tem a sua
patente registrada em vrios pases. Te-
mos ainda os kits de diagnstico de
vrias doenas, como a AIDS, a sfilis e
a toxoplasmose e tambm para deteco
de gravidez.
BC&D - Quais so os principais produ-
tos biotecnolgicos comercializados
na rea animal e de plantas?
Limonta - Na rea animal, o principal
produto a vacina contra carrapatos,
conhecida comercialmente como Gavac,
que o nico produto desse gnero no
mundo. Essa vacina est registrada no
Brasil, onde largamente utilizada, alm
de vrios outros pases. Ela tem a vanta-
gem de reduzir o uso de produtos qumi-
cos para o controle dos carrapatos, con-
tribuindo assim para o desenvolvimento
de uma agricultura sustentada. Outro
pr odut o o Vacol i , uma vaci na
r ecombi nant e cont r a o por ci ne
colibacillosis, doena que prejudica a
produo de sunos. Quanto s plantas,
muitas pesquisas ainda esto em fase de
desenvolvimento, mas o Centro no tem
nenhum produto acabado, como alis
poucos pases tm. Estamos trabalhando
para o desenvolvimento de plantas
transgnicas de batata, caf, cana-de-
acar e mamo papaia resistentes a
doenas e com melhor qualidade e pro-
dutividade.
"Cuba ser o primeiro pas
do mundo a ter toda a sua
populao, de at 20 anos de
idade, vacinada contra
hebatite-B em 1999"
BC&D - Voltando rea de sade huma-
na, quais os outros produtos
biotecnolgicos que ainda esto em
fase de pesquisa?
Limonta - Temos um produto denomina-
do I nt er l euci na I I , ai nda no
comercializado, para cura do cncer. O
produto j est pronto e estamos reali-
zando os estudos clnicos em Cuba, para
registr-lo. O principal produto, em de-
senvolvimento, a vacina contra AIDS.
No mundo, apenas cinco pases esto
em busca dessa tecnologia: EUA, Japo,
Inglaterra, Frana e Cuba. Faltam ainda
pr ovas cl ni cas,
mas j esto sendo
feitos estudos com
pequenos animais,
que tm apresenta-
do bons resulta-
dos. Tambm es-
to sendo feitos tes-
tes com humanos. Ainda no sabemos
quando essa vacina estar pronta, mas
estamos brigando para sermos os pri-
meiros a desenvolv-la. H ainda uma
pesquisa para o desenvolvimento da
vacina contra a hepatite-C, que no exis-
te no mundo. Ns vamos iniciar os testes
ainda este ano. Estamos desenvolvendo
tambm uma vacina contra a dengue
junto com o Instituto de Medicina Tropi-
cal Pedro Kour e outros centros.
BC&D - A respeito desses testes que so
feitos com animais e humanos, existe
alguma norma ou lei, em Cuba, que
disciplina essas experincias?
Limonta - Ns seguimos rigorosamente
todos os regulamentos internacionais e
os procedimentos tcnicos adotados pelo
FDA - Food and Drug
Administration, do go-
verno americano, e
tambm seguimos os
critrios da norma ISO
9000, que trata da qua-
lidade total dos pro-
dutos, quanto a essas
experincias. Existem muitos voluntrios
em Cuba dispostos a fazer os testes,
inclusive os prprios pesquisadores do
CIGB.
"No queremos apenas, que o
Brasil compre nossos produtos,
queremos que participe das
pesquisas, em conjunto. Ns que
queremos ser parceiros do Brasil."
BC&D - A populao de Cuba tem algu-
ma resistncia em se submeter apli-
cao desses produtos oriundos da
engenharia gentica?
Limonta - No. A populao de Cuba
reage muito bem utilizao desses
produtos engenheirados e tambm no
temos registro de rea-
es contrrias ao uso
dos nossos produtos
em qualquer parte do
mundo. Na comuni-
dade cientfica, tam-
bm no h reaes.
Existem poucos gru-
pos organizados, em
outras partes do mun-
do, que, eventualmente, manifestam-se
de forma contrria utilizao de pro-
dutos geneticamente modificados, mas
no so expressivos.
BC&D - Percebemos durante a entre-
vista que h muito entusiasmo por
parte dos pesquisadores e tcnicos do
CIGB para desenvolver seus trabalhos.
De onde vem tanto entusiasmo e moti-
vao?
Limonta - Em Cuba, o principal fator
motivacional o apoio do governo, que
investe alto em biotecnologia. Nos lti-
mos 15 anos, foi aplicado, nessa rea,
mai s de um bi l ho de dl ares e
construdas modernas instalaes com
os equi pament os
necessrios. Os pes-
quisadores tm to-
das as condies
necessrias para re-
alizar suas pesqui-
sas, situao dife-
rente de muitos ou-
tros pases latino-
ameri canos. El es
mandam seus tcnicos para serem trei-
nados em outros pases, os quais no
querem voltar por falta de condies de
trabalho. O incentivo do governo cuba-
no no puramente econmico. Todas
as condies so proporcionadas para
que eles possam se desenvolver cientifi-
camente, em nvel mundial.
BC&D - Em geral, os pesquisadores
cubanos so treinados em que pases?
Limonta - Em primeiro lugar, os pesqui-
sadores so todos formados em Cuba.
Depois que se graduam, muitos vo
fazer intercmbio cientfico nos melho-
res lugares do mundo.
BC&D - Nesse intercmbio cientfico,
os pesquisadores so treinados, pre-
ferencialmente, em que pases?
Limonta - Preferencialmente, em pases
muito desenvolvidos de todo o mundo,
como EUA, Frana, Japo, Inglaterra e
outros. Com os pases da Amrica Latina,
temos muito intercmbio, para onde so
mandados professores, pesquisadores
etc.
BC&D - Quais so os parceiros de Cuba
na rea de biotecnologia? O Brasil um
deles?
Limonta - Ns, cubanos, temos muito
interesse em ter o Brasil como aliado,
pois h muitos produtos, em Cuba, que
o Brasil est precisando. No queremos,
apenas, que o Brasil compre nossos
produtos, queremos que participe das
pesquisas, em conjunto. Ns que que-
remos ser parceiros do Brasil.
BC&D - Pedidos de formalizao de
acordos e intercmbios j foram feitos
pelo governo de Cuba s autoridades
brasileiras?
Limonta - Sim. J foi encaminhado pedi-
do formal s autoridades do Brasil, como
o Ministrio da Sade e o Instituto Butant,
de So Paulo. Ns temos muitas idias na
rea agrcola, como, por exemplo, a
batata transgnica resistente a vrus, que
vem sendo desenvolvida pela Embrapa/
Cenargen. Fundamentalmente, estamos
interessados no desenvolvimento da
metodologia usada na transformao da
batata, para us-la em outras culturas.
Queremos desenvolver parceria com ins-
tituies brasileiras para produo da
vacina contra a hepatite-C recombinante
e contra a dengue, que uma doena
muito grave. Alis, temos interesse que o
Brasil participe de todos os trabalhos
que estamos desenvolvendo. O CIGB
est aberto para receber qualquer pro-
posta brasileira de cooperao cientfi-
ca.
BC&D - O governo cubano pensa em
firmar convnios para realizao de
cursos e transferncia de tecnologia?
Limonta - Sim. Temos interesse em rea-
lizar cursos para viabilizar a transfern-
cia de tecnologia dos nossos produtos,
j que estamos trabalhando para erradicar
as principais doenas do mundo.
BC&D - O CIGB tem algum trabalho
para tornar o acar menos calrico?
Limonta - Sim. J desenvolvemos uma
enzima recombinante, que transforma a
sacarose do acar em frutose, com
menos calorias, por um processo que
utiliza um biorreator. Essa enzima j est
patenteada.
BC&D - O CIGB tem alguma previso de
quando ir comercializar produtos
oriundos de plantas transgnicas?
Limonta - Ns temos a expectativa de
que, dentro de um ano e meio, possamos
estar lanando nossos produtos de plan-
tas transgnicas, comercialmente.
BC&D - O CIGB realiza algum evento de
nvel internacional para atrair cien-
tistas e pesquisadores de todo o mun-
do?
Limonta - Sim. No ms de dezembro de
cada ano, realizamos o Congresso Anual
de Biotecnologia, que rene cerca de
1.200 pessoas, de 45 pases. Represen-
tantes do Brasil tm participado sistema-
ticamente. Este ano, o Congresso ser
realizado no perodo de 1 a 6 de dezem-
bro e ser dedicado discusso de
aspectos mdicos, como a produo e
aplicao de medicamentos e vacinas e
kits de diagnstico; polticas de forma-
o cientfica, de desenvolvimento
biotecnolgico e educacional; mtodos
biotecnolgicos modernos. Contamos
com a participao do Brasil.
"O principal produto em desen-
volvimento, a vacina contra
AIDS. No mundo, apenas cinco
pases esto em busca dessa
tecnologia: EUA, Japo, Ingla-
terra, Frana e Cuba"
ntre as mais importantes
descobertas deste final de
sculo, uma tem destaque
especial, particularmente
para milhes de pessoas
em todo o mundo portado-
ras de diabetes mellitus e
que dependem da insulina para estabili-
zar o nvel de glicose no sangue. Este
novo produto, resultado de recentes pes-
quisas biotecnolgicas, a insulina lispro,
produzida e comercializada pelo labora-
trio Eli Lilly com o nome de Humalog.
Somente no Brasil, existem milhares
de portadores de diabetes mellitus, divi-
didos entre os que no so insulino-
dependentes e aqueles que necessitam
de aplicaes deste hormnio que, em
indivduos no-diabticos, produzido
pelo pncreas, em resposta a um aumen-
to no nvel de glicose no sangue causado
pela ingesto de alimentos (figura 1). Os
nveis dessa insulina endgena e da
glicose atingem seus valores mais altos
em torno de uma hora aps a refeio e
voltam ao normal em aproximadamente
duas horas.
As pesquisas
A descoberta da insulina se deu em
1921, na Universidade de Toronto, no
Canad. Era de origem animal e foi
comercializada a partir de 1923.
Na dcada de 80, passou-se a utili-
zar a tecnologia do ADN recombinante
para produo de insulina humana em
escala comercial.
importante ressaltar que, desde o
incio, as pesquisas com a insulina sem-
pre se concentraram na produo de
formulaes com diferentes perfis de
tempo de ao, na produo de insuli-
nas de origem animal de maior pureza e
no uso da t ecnol ogi a do ADN
recombinante para produzir insulinas
humanas que pudessem estar comercial-
mente disponveis para o maior nmero
de pacientes possvel.
Nesta ltima etapa, as pesquisas
objetivaram criar um substituto da insu-
lina humana regular, de curta durao,
que viesse trazer maior conforto para o
paciente insulino-dependente e, tambm,
evitasse os riscos de uma hipoglicemia,
o que pode ocorrer quando as concen-
traes sricas de insulina permanecem
elevadas por um tempo acima do ideal,
como decorrncia do uso de terapia
intensiva visando a um bom controle
glicmico.
A descoberta
Uma maneira de evitar o risco de
uma hipoglicemia com o uso da insulina
humana regular recomendar sua apli-
cao entre 30 e 45 minutos antes das
refeies. Mas isso pode ser bastante
desconfortvel, principalmente para
aquelas pessoas com uma vida profissi-
onal movimentada.
Procurou-se, ento, desenvolver,
com o auxlio da biotecnologia, uma
insulina que tivesse um comportamento
semelhante ao da insulina ps-prandial
fisiolgica dos indivduos no-diabti-
cos, isto : um incio de ao mais rpido
e uma durao mais curta do que a
insulina humana regular, que produz
concentraes sricas que chegam ao
pico bem depois e permanecem por
muito mais tempo.
Um dos principais problemas en-
contrados era que as molculas de insu-
lina humana, quando muito prximas,
tm a tendncia de se auto-associarem,
formando, assim, um dmero. Foi neces-
srio, ento, buscar uma molcula de
insulina que tivesse uma tendncia redu-
zida de auto-associao e, conseqente-
mente, uma maior capacidade de se
dissociar de hexmero - forma inicial -
em dmeros e, posteriormente, em
monmeros, estruturas individuais que
so absorvidas pelos capilares sangune-
os (figura 2).
Isso foi conseguido invertendo-se
as posies dos aminocidos prolina e
lisina, que na cadeia B da insulina huma-
na ocupam, respectivamente, as posi-
es 28 e 29 (figura 3). O resultado foi
justamente a descoberta da insulina lispro,
que possui uma conformao molecular
semelhante insulina humana (figura 4)
e um perfil de tempo de ao tambm
mais prximo ao fisiolgico do que a
insulina humana regular.
Quer dizer, a insulina lispro pode
ser administrada at 15 minutos antes
das refeies, o que facilita bastante a
vida das pessoas que necessitam de
i nsul i na par a a manut eno da
homeostase de glicose e para a estabili-
zao inicial do diabetes mellitus, po-
dendo, assim, ser considerada como
uma importante conquista na busca da
otimizao do tratamento com insulina.
A idia de cultivar clulas isoladas
de plantas surgiu no incio deste sculo
com Gottlieb Haberlandt, um ilustre bo-
tnico alemo, como uma estratgia ca-
paz de materializar os conceitos embuti-
dos na teoria celular proposta por
Schwann e Shleider por volta de 1839. O
que postulava esta teoria? Esta conceituava
a clula (vegetal e animal) como a menor
unidade biolgica, autnoma, e capaz,
em princpio, de originar um organismo
inteiro. Assim, ela afirmava que a clula
madura do corpo de um organismo
pluricelular (clula somtica) manteria
seu material gentico em condies de
originar um indivduo idntico matriz
doadora, comportando-se desta forma
como se fosse uma clula-ovo ou zigoto.
A questo, pois, era descobrir como
fazer uma clula madura e especializada
(diferenciada), programada para a reali-
zao de funes especficas, voltar ao
estgio embrionrio. A tarefa no era
pequena para a poca de Haberlandt e
continua desafiadora e malcompreendida
para a cincia ainda hoje, quase s
vsperas da entrada da humanidade no
Gilberto B.Kerbauy
Instituto de Biocincia da
Universidade de So Paulo
terceiro milnio.
Haberlandt, todavia, legou s gera-
es seguintes de pesquisadores algo
muito importante para o avano do co-
nhecimento cientfico, ou seja, princpi-
os bem fundamentados, e procedimen-
tos tcnico-tericos a serem seguidos,
tendo alguns destes ltimos se mostrado
mais tarde quase que como verdadeiras
premonies.
A pr i mei r a demonst r ao
inquestionvel na obteno de embries
de plantas a partir de clulas maduras
(embriognese somtica) viria a ocorrer
em 1958 pelo prof. F.C. Steward e cola-
boradores, cerca de quarenta anos mais
tarde, atravs do cultivo de clulas isola-
das de raiz de cenoura. No obstante, o
significado cientfico e o imenso poten-
cial prtico representado por esta desco-
berta parecem no ter sido suficientes
para despertar na mdia da poca o
mesmo frisson verificado com a divulga-
o dos resultados com a ovelha Dolly,
mesmo que neste caso no se possa falar
em clonagem, na verdadeira acepo
deste termo.
Antes da obteno de embries
somticos de cenoura, j haviam conse-
guido a formao in vitro de estruturas
complexas, como gemas vegetativas,
razes e plantas inteiras, utilizando-se
fragmentos (explantes) de tecidos isola-
dos de caules, folhas e razes. Todavia,
um avano fantstico nos estudos da
cultura de clulas, embries e rgos de
plantas foi possibilitado com a desco-
berta das citocininas, um importantssi-
mo hormnio vegetal, pelo grupo do
professor Folke Skoog da Universidade
de Wisconsin (USA). Paradoxalmente, a
descoberta deste novo fitormnio deu-
se graas ao emprego da prpria tcnica
da cultura de clulas vegetais. Esta des-
coberta levou constatao de que o
processo de formao de rgos nas
plantas dependia, na verdade, de um
balano das quantidades relativas de
uma citocinina e de uma auxina (outro
hormnio vegetal j conhecido), e no
da pr esena de subst nci as
organognicas especficas, conforme se
postulava at ento (floregno, calinas,
rizocalinas).
Paralelamente a uma renovada e
indita perspectiva de compreenso dos
complexos mecanismos controladores
do desenvolvimento das plantas como
um todo, dava-se tambm com esta des-
Embries somticos de amor-perfeiro (Viola tricolor) em diferentes estgios de
desenvolvimento (estruturas verdes), formados sobre um calo (estrutura creme).
cober t a o i n ci o da chamada
biotecnologia celular de plantas, aqui
entendida como a utilizao integrativa
de pr ocessos t ecnol gi cos e
bioqumicos, empregando-se clulas,
tecidos e rgos de plantas superiores,
visando a gerao de produtos e servi-
os.
1- Aplicaes da cultura de tecidos
Vrias tm sido hoje as aplicaes
das tcnicas de biotecnologia celular de
plantas, a comear pela clonagem, seu
lado mais visvel, seguido pela cultura de
clulas (suspenses celulares em meio
lquido), tecidos e rgos para fins pr-
ticos, a obteno de plantas haplides a
partir da cultura de anteras, a produo
de met abl i t os secundr i os em
biorreatores, a gerao de variantes
somaci onai s, a mi cr oenxer t i a, a
tecnologia dos protoplastos (clulas nuas
com capacidade de se fundir) etc. Alm
disto, no seria demais mencionar ainda
que um dos esteios bsicos da chamada
biologia molecular de plantas (enge-
nharia gentica) depende em grande
extenso de estratgias e tcnicas utiliza-
das em biologia celular. Neste artigo,
procuraremos abordar apenas uma des-
tas diferentes tcnicas, aquela mais vis-
vel para o pblico em geral, ou seja, a
clonagem in vitro ou plantas de prove-
ta.
2 - Estabelecimento das culturas
Comparativamente s clulas ani-
mais, as clulas das plantas superiores
(produtoras de flores) podem ser consi-
deradas menos diferenciadas, tendo sido
esta caracterstica interpretada como uma
importante estratgia de sobrevivncia
para organismos imveis.
Entretanto, isto no signifi-
ca que possamos regenerar
uma planta inteira de qual-
quer tecido. Os potenciais
de regenerao dependem
do tipo de planta, do rgo
utilizado e do estgio de
desenvolvimento deste. r-
gos jovens so mais susce-
tveis clonagem do que
quando maduros, o que sig-
nifica que, medida que a
especializao progride du-
rante o desenvolvimento do
rgo ou da pl ant a, a
despr ogr amao gni ca
(desdiferenciao) torna-se
mais difcil.
Conforme mostrado no
esquema, verifica-se que as
cul t ur as podem ser
estabelecidas a partir tanto
de fragmentos de tecidos
maduros (fol has, caul es
etc.), quanto de tecidos
meristemticos, constitudos
por clulas em processo de
diviso e localizados, geral-
mente, nos pices dos cau-
les e razes em crescimento.
O baixo grau de diferencia-
o de suas clulas, associ-
ado maior estabilidade
gentica destas, faz dos pi-
ces meristemticos uma das
principais fontes de explantes.
Aps a necessria desinfestao das
superfcies externas, os explantes so
transferidos para os meios de cultura,
uma mistura balanceada de macro e
mi cr onut r i ent es ( sai s mi ner ai s) ,
aminocidos, vitaminas etc., e, obvia-
mente, de uma auxina e uma citocinina
em propores adequadas s finalida-
des desejadas. A geleificao do meio
para efeito de sustentao das culturas
obtida atravs da adio de agar. Gemas
vegetativas e mesmo florais, razes e
embries somticos podero se formar
tanto diretamente do explante quanto
indiretamente (via proliferao celula-
res, os chamados calos). De um modo
geral, os balanos hormonais mais favo-
rveis s auxinas promovem a formao
de embries e primrdios de razes e,
quando favorveis s citocininas, indu-
zem a formao de gemas. Quando ape-
nas gemas so formadas, torna-se neces-
sria a transferncia destas para meios
indutores de razes, obtendo-se ento
uma planta inteira e em condies de ser
transferida para a casa de vegetao. Os
calos, por serem massas celulares
indiferenciadas, permitem tambm a re-
generao in vitro com relativa facilida-
de. Todos os procedimentos necessrios
ao manuseio das culturas so realizados
sob condies asspticas, fornecidas por
equipamentos especiais.
3 - Clonagem de plantas in vitro
O termo clonagem, hoje j incor-
porado ao cotidiano das pessoas, signi-
f i ca a f or mao de i ndi v duos
geneticamante idnticos a partir de clu-
las ou fragmentos de uma determinada
matriz. Clone deriva etmologicamente
do grego kln, que quer dizer broto e
pressupe, portanto, a existncia de um
indivduo gerador, e a ocorrncia de
reproduo assexuada.
A tcnica da clonagem in vitro de
pl ant as, t ambm conheci da por
micropropagao, devido ao emprego
de pores de tecidos bastante peque-
nas, tem-se mostrado de enorme impor-
tncia prtica e potencial nas reas agr-
cola, florestal, horticultural, bem como
na pesquisa bsica em geral.
A necessidade de colocao rpida
no mercado de plantas de ciclo de vida
longo, geralmente arbreas e arbustivas,
selecionadas aps prolongados pero-
dos de melhoramento gentico, faz da
clonagem uma alternativa muito impor-
tante e indispensvel nos dias atuais. Em
orqudeas, por exemplo, embora sejam
Flor e botes florais formados a partir de
tecido epidrmico, isolado de flores maduras
de tabaco.
Protocormides formados diretamente de pi-
ces de razes de Catasetum fimbriatum
(Orquidceas).
plantas herbceas, uma boa muda (di-
viso) no se obtm em menos de dois
anos, enquanto que neste mesmo pero-
do, atravs da cultura in vitro de pices
meristemticos, centenas ou milhares de
clones podem ser produzidos. Alm dis-
to, so indiscutveis as vantagens repre-
sentadas pela manuteno de quantida-
des considerveis destas plantas por
metro quadrado, dentro de frascos em
laboratrios, protegidos do ataque de
pragas, doenas e intempries.
Particularmente na rea de plantas
ornamentais, onde predominam plantas
hbridas (gerbera, cravo, tulipa, orqu-
dea etc.), a clonagem in vitro de matrizes
sel eci onadas t em per mi t i do a
compatibilizao de demandas especfi-
cas do mercado interno e externo, com
atributos importantes como poca de
florao, colorao, tamanho e forma
das flores, nmero de flores/planta, com-
primento e resistncia das hastes florais,
tamanho e vigor das plantas etc. A mul-
tiplicao in vitro em larga escala de
plantas de importncia econmica tem
resultado na instalao de verdadeiras
biofbricas comerciais, baseadas no prin-
cpio da linha de produo.
4 - Eliminao de patgenos
Plantas propagadas vegetativamente
por meio de tcnicas convencionais,
como estaquia, enxertia, etc., uma vez
infectadas por vrus, micoplasmas, bac-
trias e fungos endgenos, transmitem
inescapavelmente estes patgenos s
geraes subseqentes, provocando uma
diminuio progressiva no rendimento
das culturas. O cultivo de espcies com
retornos abaixo do potencial gentico
produtivo, selecionado previamente,
inaceitvel num
mundo com po-
pulao crescen-
te e carente de ali-
ment os. Aval i a-
es comparati-
vas realizadas com
pl ant as de um
mesmo cultivar de
mo r a n g u i n h o ,
infectadas com v-
r us, most r ar am
que aquelas livres
destes patgenos,
via cultura de pi-
c e s
mer i st emt i cos,
eram duas vezes
mais produtivas. O
fato de uma plan-
ta ter sido limpa
de vrus, ou de
out ro pat geno
em l aborat ri o,
no confere a ela
nenhuma imuni-
dade a novas in-
feces. De fato,
a substituio das
popul aes de
plantas, aps al-
guns anos de cul-
tivo a campo, por
novas matrizes produzidas
em laboratrio torna-se con-
dio sine qua non. Labora-
trios comerciais de mdio e
grande portes tm sido os
responsveis pela produo
contnua de plantas livres de
patgenos.
Por sorte, conforme se
descobriu tempos atrs, a
distribuio de vrus e ou-
tros patgenos dentro das
plantas no uniforme, sen-
do os tecidos meristemticos
apicais praticamente livres
destes microrganismos. In-
felizmente, a cincia no sabe
ao certo a(s) causa(s) desta
capacidade protetora dos
tecidos meristemticos.
De qualquer forma, o
isolamento cuidadoso de
pequenas pores de regi-
es meristemticas (0,1 a
0,5mm) e a cultura destas em
meios de cultura apropria-
dos permitem a obteno em
escala econmica de plantas
clonadas livres de muitos
patgenos. muito prov-
vel, sem que o leitor o saiba, que a
batatinha, banana, moranguinho, abaca-
xi que saboreou nesta ltima semana
tenham sido produzidos por plantas
clonadas in vitro.
PLANTAS TRANSGNICAS - POR QU?
Ao abrir qualquer revista, seja de
moda ou cientfica, a inocente ovelha
Dolly nos cumprimenta! Fruto do desen-
volvimento cientfico e tecnolgico, Dolly
hoje o smbolo mximo da capacidade
do homem de recriar a natureza. E esta
capacidade se estende ao mundo vege-
tal.
Os conhecimentos bsicos - deriva-
dos da gentica, da biologia molecular e
da biologia celular moderna - que permi-
tiram a criao da Dolly podem e so
utilizados na pesquisa agrcola moderna
para melhorar espcies de plantas essen-
ciais para a alimentao humana e ani-
mal.
Desde o incio da agricultura, ou
seja, desde que os seres humanos aban-
donaram a vida nmade e resolveram
viver em aldeias e cidades, os objetivos
dos agricultores so:
1. aumentar a produtividade de de-
terminadas culturas pela seleo de va-
riedades que apresentem:
resistncia a doenas e pragas;
resistncia a encharcamentos e
seca;
maior resposta ou independncia a
fertilizantes;
tolerncia a condies ambientais
hostis, como solos cidos e/ou salgados
etc.
2. aumentar o valor de culturas de
interesse socioeconmico, selecionan-
do caractersticas como:
maior contedo de leo;
maior valor nutritivo;
maior facilidade de colheita e arma-
zenagem;
independncia da proteo por pro-
dutos qumicos.
At poucos anos atrs, a nica ma-
neira de alcanar estes objetivos era
atravs dos mtodos clssicos de cruza-
mento, ou seja, da gentica mendeliana.
No entanto, estas estratgias levaram o
rendimento das culturas a uma situao
estacionria, que no foi solucionada
pelos mtodos convencionais. Alm dis-
so, estes mtodos no permitem ultra-
passar as barreiras naturais de cruza-
mentos, e at que uma variedade com
caractersticas novas possa ser lanada
no mercado, 5 a 15 anos se passam.
Outra desvantagem do melhoramento
clssico o fato de que, alm das qua-
lidades desejadas, qualidades indesej-
veis so transferidas porque, invariavel-
mente, o melhorista forado a trabalhar
com a informao gentica inteira dos
pais.
Os mtodos da biotecnologia per-
mitem no somente reduzir o tempo da
obteno de variedades com novas ca-
ractersticas, mas tambm transmitir pro-
priedades de espcies que, normalmen-
te, so sexualmente incompatveis. Em
outras palavras, as barreiras naturais entre
as espcies podem ser superadas, o que
oferece um enriquecimento de varieda-
des realmente novas em forma de plan-
tas transgnicas. Alm disso, possvel,
com os mtodos da biologia molecular
moderna, isolar e manipular genes espe-
cficos, o que no acontece no melhora-
mento clssico, onde o melhorista
obrigado a trabalhar com genomas intei-
ros.
PLANTAS TRANSGNICAS - COMO?
As primeiras plantas transgnicas
foram desenvolvidas em 1983 quando
um gene codificante para a resistncia
contra o antibitico canamicina foi in-
troduzido em plantas de fumo. Nesta
frase, tudo o que essencial para com-
preender o que uma planta transgnica
e como ela pode ser obtida est includo.
Assim, necessrio:
- um gene de interesse;
- uma tcnica para transformar c-
lulas vegetais atravs da introduo do
gene de interesse nestas; e
- uma tcnica para regenerar, a
partir de uma s clula transformada,
uma planta inteira.
Eugen S.Gander e
Lucilia H. Marcellino
Laboratrio de Biologia Molecular
EMBRAPA-CENARGEN
S.A.I.N Parque Rural
70770-900 Braslia-DF
Aps esta ltima etapa, temos uma
planta transgnica porque ela contm,
alm dos genes naturais, um gene adici-
onal proveniente de um outro organis-
mo, que pode ser uma planta, uma
bactria ou at um animal.
Os genes de interesse
O genoma de uma bactria contm
aproximadamente 5.000 genes, o de plan-
tas tem em torno de 40.000 a 60.000,
enquanto que o genoma de seres huma-
nos consiste na faixa de 100.000 genes.
Independente do organismo e de sua
complexidade, os genes so segmentos
de um mesmo tipo de molcula: o cido
desoxirribonuclico (DNA). Esta carac-
terstica que permite que genes de um
organismo sejam potencialmente funci-
onais em outro. Mas como isolar um
gene de interesse dentro da totalidade do
genoma de qualquer organismo? A apre-
sentao dos pormenores especficos
das tcnicas de DNA recombinante no
o objetivo deste artigo, mas gostara-
mos de apresentar, resumidamente, as
ferramentas necessrias.
Uma das possibilidades para isola-
mento de um gene a construo de
uma biblioteca genmica. Para tal, o
DNA do organismo contendo o gene de
interesse extrado. Em seguida, este
DNA cortado em fragmentos menores
utilizando as enzimas de restrio - que
so como tesouras moleculares. Estes
fragmentos so, ento, ligados a outros
fragmentos de DNA, mas que podem se
replicar em bactrias. Este material
inserido na bactria e a replicado vrias
vezes. A partir da, s selecionar a
colnia de bactrias que contm o frag-
mento de DNA correspondente ao gene
de interesse. Desta maneira, uma quan-
t i dade i mpr essi onant e de genes
bacterianos, de plantas, animais e huma-
nos j foi isolada e est disposio da
comunidade cientfica.
Diversos genes de interesse agron-
mico j foram isolados. Podemos citar
alguns que j esto disponveis e seu
potencial de uso no melhoramento de
plantas:
Gene que codifica para uma prote-
na de alto valor nutricional, presente na
castanha-do-par. Este gene poderia ser
usado para aumentar o valor nutricional
de algumas culturas importantes, como,
por exemplo, o feijo, soja, ervilha etc.
Genes que codificam para prote-
nas capazes de modificar herbicidas,
inativando-os. Herbicidas so muito usa-
dos para o controle de ervas daninhas
em algumas culturas. Entretanto, algu-
mas plantas no sobrevivem aplicao
deste produto. Deste modo, culturas
contendo este gene poderiam se tornar
resistentes ao herbicida, facilitando as-
sim o controle das ervas.
Genes bacterianos que codificam
para protenas com propriedades txicas
para insetos. Insetos que se alimentas-
sem de plantas expressando este gene
morreriam ou se desenvolveriam com
menor eficincia, levando ao seu con-
trole na cultura.
Nestes exemplos, trata-se de carac-
tersticas monognicas, onde o fentipo
determinado pela expresso de um
nico gene. Mas necessrio salientar
que, muitas vezes, certas caractersticas
importantes so definidas por vrios
genes - a resistncia seca, salinidade
ou acidez do solo so alguns exemplos
deste tipo de caracterstica. Todas elas
so, provavelmente, o produto de aes
coordenadas em tempo e em espao de
baterias de genes, e devido a esta com-
plexidade, a identificao de todos os
componentes genticos para este tipo de
caracterstica ainda est no incio, em
laboratrios no mundo inteiro.
A transferncia dos genes de
interesse
O isolamento de genes , hoje, uma
tcnica dominada pela cincia. A etapa
seguinte para a obteno de plantas
transgnicas a insero do gene isola-
do em clulas vegetais. Algumas estrat-
gias para alcanar esse objetivo j foram
desenvolvidas. Vejamos as mais impor-
tantes:
Agrobactria
H bactrias do solo, do gnero
Agrobacterium, que se associam a plan-
tas dicotiledneas, causando-lhes tumo-
As plantas in vitro so colocadas nas cmaras de cultura de tecidos do Cenargen, que possuem as
condies ideais de temperatura e umidade necessrias ao seu crescimento.
res. Durante a infeco, a bactria
capaz de inserir seus prprios genes no
genoma da planta. Estudos demonstra-
ram que estes genes esto codificados
no DNA de grandes plasmdeos de
Agrobacterium, os plasmdeos Ti (= Tu-
mor inducing = indutores de tumores),
em um segmento de DNA denominado
de T-DNA (Transferred DNA = DNA trans-
ferido). O T-DNA, carregando os genes
bacterianos, integra-se ao genoma da
planta, que passa a expressar estes genes.
Esta expresso resulta na sntese de
auxinas e citocininas, que levam for-
mao de t umores em pl ant as, e
aminocidos modificados (opinas), subs-
tncias necessrias para a sobrevivncia
da bactria. Em outras palavras: atravs
desta estratgia, a agrobactria transfere
alguns de seus genes para a planta, com
os seus plasmdeos Ti, que representam
vetores naturais de transferncia de ma-
terial gentico para plantas.
Para aproveitar-se destas proprie-
dades naturais para a transferncia de
genes de interesse em plantas, neces-
srio eliminar as caractersticas indesej-
veis do T-DNA, mantendo a sua capaci-
dade de integrar-se ao genoma da planta
hospedeira. Em outras palavras, os genes
responsveis pela formao de tumores
devem ser eliminados e, no lugar deles,
devem ser inseridos os genes de interes-
se. Com as tesouras moleculares, as
chamadas enzimas de restrio, poss-
vel executar a substituio destes genes
sem interferir nas propriedades que per-
mitem a integrao do T-DNA ao DNA da
clula hospedeira. Assim, qualquer gene
pode ser introduzido em uma clula
vegetal utilizando-se esta ferramenta ofe-
recida pela prpria natureza.
Neste caso, no se trata de uma
inveno humana. A natureza chegou l
primeiro e h muito tempo!
Transferncia direta de genes
Neste caso, os genes so inseridos
diretamente na clula vegetal, sem inter-
mdio da agrobactria. Este tipo de trans-
ferncia de genes o mtodo de escolha
quando se t r at a de pl ant as
monocotiledneas como milho, trigo etc.
A transferncia de genes alcanada
por um dos seguintes mtodos:
1. Eletroporao de protoplastos e
clulas vegetais
Protoplastos so clulas vegetais
desprovidas de parede celular. Para a
transformao, so incubados em solu-
es que contm os genes a serem trans-
feridos, e, em seguida, um choque eltri-
co de alta voltagem aplicado por
curtssimo tempo. O choque causa uma
alterao da membrana celular, o que
permi t e a penet rao e event ual
integrao dos genes no genoma. O
mesmo princpio tambm pode ser apli-
cado para clulas vegetais, porm, a taxa
de transformao mais baixa.
2.Biolstica
H ainda outra tcnica, de caracte-
rstica bastante blica, para a transforma-
o de clulas ou tecidos vegetais e
animais, que foi introduzida no incio da
dcada de 80. Trata-se do mtodo de
biolstica, anteriormente chamado ba-
lstica. baseado no princpio da arma
de fogo! A diferena que na engenha-
ria gentica, em vez de projteis de
chumbo, utiliza-se microprojteis de ouro
ou tungstnio cobertos com os genes de
interesse. Esta munio biolgica
acelerada com plvora ou gs em dire-
o aos alvos, que neste caso so os
tecidos vegetais. Os genes entram nas
clulas junto com o projtil e se integram
ao genoma celular! Transformao cum-
prida!
A regenerao das plantas a partir
das clulas transformadas
Uma vez inserido o gene na clula
vegetal, por um dos mtodos menciona-
dos acima, esta clula ou grupos delas
so estimulados a gerar uma planta intei-
ra transformada.
A transformao de uma clula ve-
getal um tipo de manipulao gentica
que atende ao mesmo princpio da trans-
formao de microrganismos, estabele-
cido pela primeira vez em 1973, quando
Stanley e Cohen, em San Francisco, in-
troduziram o gene proveniente de uma
r dentro de uma bactria. No entanto,
h diferenas conceituais entre a situa-
o com microrganismos e com plantas:
nos primeiros, o objetivo final so mu-
danas operadas ao nvel celular, en-
quanto que em eucariotos superiores,
como plantas e animais, as mudanas
obtidas ao nvel celular no so signifi-
cativas, a no ser que possam ser
transferidas para todas as clulas do
organismo. Em outras palavras: o dom-
nio das tcnicas de regenerao de plan-
tas inteiras a partir de uma nica clula
condio sine qua non na biotecnologia
aplicada para a agricultura. E como cada
espcie de planta tem diferentes exign-
cias hormonais, nutricionais e ambientais
para a regenerao, esta etapa ainda
representa o maior gargalo na criao de
plantas transgnicas, embora esta tcni-
ca j esteja estabelecida para inmeras
plantas de interesse econmico.
PLANTAS TRANSGNICAS - ONDE?
Uma vez dominados a identificao
e o isolamento de genes de interesse e a
regenerao de plantas hospedeiras a
partir de uma ou de um grupo de clulas
transformadas, so incontveis as possi-
bilidades oferecidas por esta tecnologia
em plantas transgnicas.
E esta tecnologia vem sendo mais e
mais utilizada. No ano de 1987, cinco
tipos de plantas transgnicas foram tes-
tadas no campo; j em 1995, um total de
707 tipos de plantas transgnicas j fo-
ram para o campo!
No surpreendente que entre as
espcies geneticamente manipuladas se
encontrem aquelas que so as mais im-
portantes na alimentao humana e ani-
mal e na indstria de tecido, ou seja,
milho, batata, tomate, soja, feijo, algo-
do e, como planta modelo em experi-
mentos de pesquisa bsica, o fumo.
Alm destas espcies, foram transforma-
das melancia, couve, cenoura, alfafa,
arroz, trigo, girassol, alface, ma e amen-
doim, entre outras.
De uma maneira geral, mais de 50%
destas espcies foram transformadas com
genes que conferem resi st nci a a
herbicidas, vrus e insetos. Em outros
30% dos casos, o objetivo da transforma-
o gentica era um aumento da quali-
dade dos produtos e o restante visou
obteno de resistncia a fungos ou
obteno de conhecimentos bsicos nas
rea de biologia molecular de plantas ou
das interaes entre patgenos e plantas.
No que diz respeito ao melhora-
mento qualitativo de produtos vegetais,
cabe-nos destacar os tomates que, gra-
as s manipulaes genticas, amadu-
recem muito mais devagar do que toma-
tes no manipulados. Para quem j lutou
com uma geladeira ocupada de tomates
em estgios avanados de maturao, a
vantagem deste tipo de alterao bvia!
Outro tipo de melhoramento envol-
ve a manipulao, no sentido de dimi-
nuio, da sntese de cidos graxos
saturados ou a expresso de genes de
protenas de reserva com teor otimizado
de aminocidos essenciais para a nutri-
o humana ou animal.
Mas as plantas transgnicas no so
promissoras somente para a indstria
alimentcia. Alguns pesquisadores esto
atualmente investigando a possibilidade
de usar plantas transgnicas na produ-
o de vacinas contra doenas humanas
e de animais, tais como clera, malria e
gastroenterites de porcos. Neste ltimo
caso, trata-se de uma doena viral que
afeta porcos recm-nascidos. Os pesqui-
sadores acham que possvel imunizar
os animais atravs de alimentao com
batatas que expressem uma protena
imunognica do vrus causador da do-
ena.
E se vocs acham que anticorpos
sempre sero anticorpos, vocs esto
enganados: desde 1989 existem tambm
os planticorpos ou seja anticorpos que
so produzidos, em escala, em plantas
transgnicas.
Estes poucos exemplos mostram o
imenso potencial de plantas transgnicas
no somente na agricultura, mas tambm
nas reas da sade humana e animal e
na produo industrial e processamento
de alimentos.
Embora o assunto deste artigo seja
bem definido e abranja apenas as plan-
tas transgnicas, gostaramos de chamar
a at eno para o f at o de que a
biotecnologia aplicada em todos os seto-
res de nosso interesse requer ateno
visando ao controle de possveis riscos
para o ambiente e o equilbrio ecolgico.
Eugen Silvano Gander recebeu o ttulo de doutor em Biologia da Universidade de
Basel na Sua, fez ps-doutorados no Instituto de Pesquisa Experimental sobre o Cncer
em Lausanne, Sua, na Northwestern University nos Estados Unidos, na Universidade
Paris VII e em Toulouse, Frana. Foi professor da UnB e atualmente trabalha como lder
de projetos na rea de biotecnologia na Embrapa-Cenargen.
Lucilia Helena Marcellino mestre em Biologia Molecular pela UnB e atualmente
estudante de doutorado da mesma universidade. Trabalha como pesquisadora na
Embrapa - Cenargen, na regulao da expresso gnica em plantas.
Maria Fernanda Diniz Avidos e
Lucas Tadeu Ferreira
impacto da biotecnologia, hoje, na sociedade ocorre
de forma irreversvel, j que o seu papel na agricultu-
ra sustentvel o de contribuir para o desenvolvimen-
to de novas variedades melhoradas e mais produtivas,
e que exibam resistncia aos estresses ambientais e auxiliem na
recuperao e manuteno do meio ambiente, diminuindo a
necessidade de insumos agrcolas e de novas reas agricultveis.
Alm disso, a importncia socioeconmica da biotecnologia
pode ser ilustrada pelo valor associado ao seu mercado mundial,
estimado em torno de 50 bilhes de dlares. Somente na agricul-
tura, o mercado potencial de 30 bilhes de dlares.
Os Estados Unidos dominam esse mercado, com o maior
nmero de produtos geneticamente modificados lanados co-
mercialmente no mundo, alm de ter grande quantidade de
instituies com especialistas em pesquisa e desenvolvimento
atuando nessa rea e de investir maciamente em biotecnologia,
especialmente na rea vegetal.
Para falar do estgio da biotecnologia nos EUA, e de suas
relaes com outros pases, o representante do Departamento de
Agricultura dos Estados Unidos - USDA, em Riverdale, Maryland,
Quentin B. Kubicek, que trabalha no Animal and Plant Health
Inspection Service - APHIS/ PPQ - Plant Protection and
Quarantine, concedeu esta entrevista Revista Biotecnologia
Cincia & Desenvolvimento.
Durante a entrevista, Kubicek ressaltou a importncia que os
EUA do biotecnologia e falou de assuntos referentes percep-
o da opinio pblica, do mercado, da pesquisa, do desenvol-
vimento de biotecnologias e do interesse daquele pas em
incrementar parcerias com o Brasil nesse campo.
Biotecnologia Cincia & Desenvolvi-
mento - A agricultura tradicional tem
dado respostas razoveis ao aumento
da produo, da produtividade e da
qualidade dos alimentos. Contudo, o
uso inadequado de insumos agrcolas
vem apresentando riscos ao meio
ambiente. O senhor acredita que a
biotecnologia, que vem sendo
incrementada na ltima dcada, ca-
paz de viabilizar o aumento da produ-
o e melhorar a qualidade dos ali-
mentos, sem agredir o meio ambiente?
Kubicek - Sim. Eu creio que sim. A
agricultura tradicional tem-se mostrado
eficiente, mas, em alguns casos, houve
abuso no uso de insumos agrcolas.
possvel que a engenharia gentica crie
plantas que necessitem de menor quan-
tidade desses produtos ou que permitam
o uso de herbicidas menos danosos. Eu
acredito ser possvel proteger o ambiente
com esse tipo de planta e melhorar a
qualidade dos alimentos, como, por
exemplo, milho com maior e melhor teor
de protenas, leo de soja de melhor
qualidade etc.
BC&D - Com a biotecnologia, o senhor
acha que possvel aumentar a produ-
o e a produtividade agrcola sem
expandir a rea cultivada?
Kubicek - Sim. possvel. A biotecnologia
tem um potencial inesgotvel de ferra-
mentas para promover o incremento
agrcola. Entretanto, existem outras ma-
neiras de aumentar a produo agrcola
nas fases de colheita, de ps-colheita e
de armazenamento, j que as perdas
nessas etapas, dependendo das culturas,
podem ser muito expressivas, pois os
gros armazenados ficam sujeitos ao
ataque de roedores, insetos, microrga-
nismos e de muitas outras pragas. Por-
tanto, h muitas maneiras de aumentar a
produo, sem que, necessariamente,
sejam utilizadas tcnicas de engenharia
gentica e a expanso da rea cultivada.
No se deve ver a biotecnologia como a
salvao da lavoura. Outra maneira ain-
da de aumentar a quantidade de alimen-
tos evitando o desperdcio. comum
pessoas, nos restaurantes, deixarem res-
tos de comida que so jogados no lixo.
Isso um absurdo. As pessoas tm que
se conscientizar da importncia de evitar
o desperdcio de alimentos.
BC&D - Como est a situao da
biotecnologia, hoje, nos EUA, em ter-
mos de pesquisa bsica e aplicada com
animais, vegetais e microrganismos?
Kubicek - A biotecnologia, hoje, nos
EUA, est mais avanada em plantas do
que em animais. Com plantas, j h
produtos sendo comercializados e, com
animais, por enquanto, s existem pro-
messas. Muitas tcnicas avanadas esto
sendo desenvolvidas tambm com mi-
crorganismos, para melhorar a agricultu-
ra. No entanto, no h ainda muitos
produtos microbianos.
BC&D - O senhor saberia dizer quantos
produtos transgnicos, ou genetica-
mente modificados, j esto sendo
comercializados nos EUA?
Kubicek - H em torno de 15 produtos
genet i cament e modi f i cados sendo
comercializados, atualmente, nos EUA,
como a soja transgnica resistente a
herbicida, vrias espcies de milho com
Bt (Bacillus thuringiensis) resistentes a
insetos, algumas variedades de tomates
resistentes a insetos e a herbicidas, bata-
tas com resistncia a vrus, canola (colza)
com melhor qualidade de leo e resis-
tente a herbicidas, entre outros.
BC&D - Como a aceitao dos produ-
tos geneticamente modificados pelo
consumidor norte-americano?
Kubicek - Esses produtos comearam a
entrar no mercado americano no ano de
1996. O primeiro produto lanado foi o
tomate FLAVR-SAVR, que foi modificado
por tcnicas de engenharia gentica para
retardar o seu amadurecimento ps-co-
lheita. Logo que surgiu no mercado,
houve tanta demanda por parte dos
consumidores em relao a esse tomate,
por ser novidade, que a empresa produ-
tora teve dificuldades de atend-la. Hoje,
esse tomate j faz parte do cotidiano dos
consumidores.
BC&D - O FLAVR-SAVR vendido por
um preo maior do que o tomate co-
mum?
Kubicek - No incio, era deciso da
companhia produtora elevar o preo
desse tomate, de forma a obter maior
retorno para investir mais recursos nas
pesquisas e conhecimento do produto.
Hoje, como o consumidor se orienta
principalmente pelo preo, o FLAVR-
SAVR compete com os demais tomates
no mercado, com uma diferena a mais
"A agricultura tradicional
tem-se mostrado eficiente,
mas, em alguns casos
houve abuso no uso de
insumos agrcolas. poss-
vel que a engenharia
gentica crie plantas que
necessitem de menor quan-
tidade desses produtos ou
que permitam o uso de
herbicidas menos danosos"
Tomate longa-vida
no preo de cerca de 25%.
BC&D - Os produtos transgnicos
comercializados possuem algum tipo
de selo de identificao para informar
o consumidor que so geneticamente
modificados?
Kubicek - No. No um requisito legal
nos EUA. Todos os produtos que so
comercializados, independentemente de
serem transgnicos ou no, tm que
conter selo de identificao, quando
apresentarem alteraes nutricionais e
vitamnicas, ou quando contiverem prin-
cpios alergnicos. No caso do tomate
FLAVR-SAVR, o selo era uma estratgia
de marketing da companhia produtora
para atrair maior nmero de consumido-
res.
BC&D - O governo americano desen-
volveu alguma campanha de
conscientizao da populao para
aceitao de produtos geneticamente
modificados?
Kubicek - No houve nenhuma campa-
nha por parte do governo, e sim por
parte das empresas interessadas, que
destacam a segurana biolgica dos pro-
dutos quanto ao meio ambiente e
sade da populao. Por outro lado, h
movimentos organizados que aconse-
lham a populao a no consumir pro-
dutos biotecnolgicos, alegando que nin-
gum sabe o que podem causar ao ser
humano e ao meio ambiente. Entretanto,
hoje, nos EUA, o nmero de pessoas
favorveis biotecnologia maior do
que o nmero de descontentes. O gover-
no americano no se envolve com isso.
uma questo de mercado. Antes de
chegar ao mercado, esses produtos tm
que passar primeiro pelo USDA e depois
pelo FDA - Food and Drug Administration
ou pelo EPA - Environmental Protection
Agency, que so rgos muito rigorosos
quanto ao controle de alimentos e medi-
camentos. A populao norte-americana
confia nessas instituies e na legislao
dos EUA.
BC&D - No Brasil existe a Lei de
Biossegurana, a qual constituiu a Co-
misso Tcnica Nacional de
Biossegurana - CTNBio. Todas as ins-
tituies de pesquisas pblicas e pri-
vadas que aqui atuam tm que subme-
ter seus projetos de pesquisa de
biotecnologia aprovao do Minist-
rio da Cincia e Tecnologia. Nos EUA, o
governo tambm exerce esse controle
sobre as pesquisas nessa rea?
Kubicek - Sim. Essa atividade est dentro
da Diviso de Quarentena Vegetal, do
USDA, na qual eu trabalho, que com-
posta por um grupo de especialistas,
onde so avaliados os pedidos para
testes de campo e as solicitaes de
comercializao de produtos. O USDA
se preocupa com a proteo agrcola e
ambiental.
BC&D - Diversas instituies governa-
mentais norte-americanas, como uni-
versidades, centros de pesquisa, fun-
daes, empresas comerciais etc. in-
vestem muito em pesquisa e no desen-
volvimento de produtos geneticamen-
te modificados. Existe, nos EUA, algu-
ma linha de crdito do governo espec-
fica para essas pesquisas, quer seja
atravs do aporte direto de recursos,
de incentivos e isenes fiscais, para
esses empreendimentos, ou so mera-
mente atividades de risco de mercado?
Kubicek - Sim. O USDA tem uma dotao
financeira para pesquisa, da qual uma
por cent agem apl i cada em
biotecnologia. Existe iseno de impos-
tos para as empresas que aplicam recur-
sos diretamente nas pesquisas desenvol-
vidas nas universidades, independente-
mente de sua natureza. Esse incentivo j
existe h muitos anos nos EUA.
BC&D - Assim que foi divulgada a
clonagem da ovelha Dolly, o presiden-
te dos EUA, Bill Clinton, constituiu um
grupo renomado de cientistas e pes-
quisadores para discutir os limites da
pesquisa biotecnolgica com animais
e humanos. O senhor tem alguma in-
formao a respeito desse trabalho?
Kubicek - No tenho certeza, mas acho
que esse grupo foi nomeado para anali-
sar somente pesquisas que envolvem
seres humanos, porque a sociedade norte-
americana no aceita esse tipo de pes-
quisa. O presidente teve que constituir
essa comisso para responder s pres-
ses da sociedade. Na verdade, no h
nenhuma razo cientfica para isso, e
sim razes de natureza sociolgica. Po-
rm, a tcnica usada na ovelha Dolly
pode ser usada perfeitamente em huma-
nos, o que no desejado nem pelo
governo e nem pela sociedade.
BC&D - Qual a sua opinio pessoal
sobre essa questo? O senhor acha que
o cientista e a cincia devem ser livres
para avanar no conhecimento ou deve
haver algum tipo de restrio?
Kubicek - Em relao pesquisa bsica,
eu creio que no deve haver nenhum
tipo de restrio, mas quanto pesquisa
aplicada em humanos, no estou seguro
se deve haver ou no. Mas estou convic-
to de que no se deve clonar seres
humanos.
BC&D - A clonagem de animais desper-
tou nas sociedades americana, euro-
pia e de vrios outros pases reaes
diversas, inclusive de temor aos clones.
Como o senhor v essa questo?
Kubicek - Na verdade, eu creio que a
"A biotecnologia tem um
potencial inesgotvel de
ferramentas para promover
o incremento agrcola."
"As pessoas tm que se
conscientizar da impor-
tncia de evitar o desperd-
cio de alimentos."
"H em torno de 15 produtos
geneticamente modificados
sendo comercializados
atualmente, nos EUA".
"Todos os produtos que so
comercializados, indepen-
dentemente de serem
transgnicos ou no, tm
que conter selo de identifi-
cao, quando apresenta-
rem alteraes
nutricionais e vitamnicas,
ou quando contiverem
princpios alergnicos."
"A tcnica usada na ovelha
Dolly pode ser usada
perfeitamente em humanos, o
que no desejado nem pelo
governo e nem pela
sociedade."
sociedade civil de todos os pases no
entende a cincia. As pessoas, de um
modo geral, so leigas e, geralmente,
temem aquilo que no entendem. Alm
disso, os cientistas falam demais e pro-
metem muito mais do que tm para
oferecer. Preconizam que a biotecnologia
a tbua de salvao do mundo e a
soluo de muitas doenas, como o
cncer e outras. Dizem muitas coisas,
sem apresentar resultados. Como a soci-
edade no est devidamente informada
sobre os avanos da cincia, o medo
uma reao normal.
BC&D - Os EUA so centro de origem de
diversas espcies silvestres, e a intro-
duo de produtos transgnicos pr-
ximos a essas espcies nativas pode
provocar cruzamentos atravs da
polinizao por insetos. Que medidas
o USDA adota para evitar esses cruza-
mentos?
Kubi cek - Sabemos que a pl ant a
transgnica est exposta a esses cruza-
mentos e que, com o tempo, teoricamen-
te isso vai ocorrer. Entretanto, o risco
para o meio ambiente o mesmo com
plantas obtidas a partir do melhoramen-
to gentico clssico, ou com plantas
transgnicas. At o momento, no h
nenhuma planta transgnica que tenha
parentes silvestres nos EUA. O primeiro
o girassol, que est sendo testado em
pequena escala, mas que brevemente
entrar em processo de comercializao.
Antes, porm, sero feitas todas as ava-
liaes tcnicas pertinentes.
BC&D - Como a legislao americana,
hoje, para regulamentar o trnsito e a
troca de material gentico com outros
pases?
Kubicek - O trnsito de germoplasma
livre. A nica coisa que esperamos a
reciprocidade por parte dos outros pa-
ses na troca de material gentico, quan-
do se trata de instituies e de laborat-
rios do governo federal.
BC&D - No d para falar em produtos
biotecnolgicos sem mencionar as leis
de propriedade industrial e de paten-
tes. Por quanto tempo a legislao
americana protege as patentes?
Kubicek - Essa no a minha especiali-
dade, portanto, posso cometer impreci-
ses, mas eu creio que as patentes, nos
EUA, so vlidas por 17 anos. Com
respeito a plantas, h dois sistemas dife-
rentes: proteo de patentes e lei de
proteo de cultivares. Apesar de no ser
essa a minha especialidade, eu sei que
muito importante que todos os pases
tenham seus sistemas de proteo de
patentes e de cultivares.
BC&D - O governo americano j negou
autorizao para a comercializao de
algum produto transgnico?
Kubicek - No. Porque o processo o
mesmo por que passam as demais plan-
tas, ou seja, primeiro os testes so feitos
em pequena escala e, depois, em reas
cada vez maiores e o controle muito
rigoroso em cada etapa, at chegar ao
mer cado. Os pr i mei r os pr odut os
transgnicos demoravam, em mdia, de
trs a quatro anos para serem liberados
pelo USDA. Hoje, esse processo dura
cerca de um ano. Agora, se o produto vai
ter aceitao no mercado um risco que
a empresa produtora tem que correr.
BC&D - Com quais pases o governo
americano mantm maior interao
no campo da biotecnologia?
Kubicek - Em primeiro lugar, com os
pases do acordo do NAFTA, ou seja,
Canad e Mxico. Temos tambm fortes
interaes com a Argentina, Chile e com
o Brasil, razo pela qual eu estou aqui,
para conhecer a CTNBio. Agora, que o
Brasil tem a Lei de Biossegurana, essa
interao tende a aumentar cada vez
mais. Alm disso, o Brasil um mercado
muito grande, com o qual podemos
trocar informaes e produtos. Na rea
de pesquisa, temos trabalhado muito
com a Embrapa, principalmente no trei-
namento de pesquisadores e no inter-
cmbio de germoplasma, especialmente
" muito importante que
todos os pases tenham seus
sistemas de proteo de
patentes e de cultivares."
com o Centro de Pesquisa de Milho e
Sorgo e com Centro Nacional de Pesqui-
sa de Recursos Genticos e Biotecnologia
- Cenargen. Com os pases europeus,
sempre h muitas discusses, mas que,
infelizmente, no se consumam. Traba-
lhamos muito com a Amrica Latina e
com o Oriente.
BC&D - Nos EUA, as instituies de
pesquisa tm seus prprios comits
de biossegurana?
Kubicek - Sim. Nos EUA, as companhias
e as universidades que recebem financi-
amento do governo para pesquisas tm
que, obrigatoriamente, constituir seus
comits de biossegurana, para avaliar
os projetos de pesquisa de biotecnologia
em todas as suas etapas, os quais so
similares aos do Brasil.
BC&D - Todos os produtos transgnicos
comercializados nos EUA, hoje, foram
desenvolvidos dentro das suas fron-
teiras?
Kubicek - A maioria, sim. Mas, em todos
os produtos desenvolvidos h influncia
de outros pases, porque difcil estabe-
lecer a origem do conhecimento em
cada etapa do processo de produo. A
cincia nunca exclusiva de qualquer
pas, j que o conhecimento cumulati-
vo e remonta a outras pocas e sculos.
Quem inventou os nmeros que permi-
tem os clculos foram os rabes, h
muitos sculos passados. Cada vez mais,
os pases so forados a buscar coope-
rao e parceria e a abrir seus mercados.
BC&D - O governo norte-americano faz
alguma restrio especfica a produ-
tos geneticamente modificados desen-
volvidos em outros pases e que quei-
ram entrar no mercado dos EUA?
Kubicek - No. Se os produtos transgni-
cos foram desenvolvidos seguindo os
mesmos protocolos americanos, no h
nenhum problema. No caso de produtos
agroindustriais, como, por exemplo, os
enlatados, podem entrar diretamente no
mercado. Com relao aos produtos in
natura, eles tm que passar pelos proce-
dimentos quarentenrios vigentes nos
EUA e que valem para qualquer cultura
ou produto, independentemente de se-
rem transgnicos ou no.
"Hoje, nos EUA, o nmero de
pessoas favorveis
biotecnologia maior do que
o nmero de descontentes."
"Na rea de pesquisa, temos
trabalhado muito com a
Embrapa, principalmente no
treinamento de
pesquisadores e no
intercmbio de
germoplasma, especialmente
com o Centro de Pesquisa de
Milho e Sorgo e com Centro
Nacional de Pesquisa de
Recursos Genticos e
Biotecnologia - Cenargen."
presente artigo quer dei-
xar para o leitor uma
idia, a mais realista, acer-
ca de algumas observa-
es relativas ao contro-
le de vetores da Ordem
Dptera, feito com princpios ativos
bacterianos, sobretudo aqueles vetores
transmissores corriqueiros de doenas
para o homem, e, portanto, de interesse
para a Sade Pblica no Brasil.
Para se entender melhor a impor-
tncia e o papel inseticida de algumas
bactrias, faz-se necessria uma rpida
recapitulao e descrio de algumas
doenas humanas transmitidas por
dpteros vetores (Culicidae e Simuliidae).
Malria
O Informe da Organizao Mundial
da Sade, relativo ao tratamento da ma-
lria grave e complicada, publicado em
Braslia em 1995, d conta de que a
malria continua sendo um grande pro-
blema de sade no mundo, com mais de
40% de sua populao, isto , mais de 2
bilhes de pessoas, expostas em vrios
graus de risco de contrair malria em
cerca de 100 pases.
Alm disso, com os mais variados
meios de transporte, grande nmero de
pessoas, provenientes de reas onde
no existe a malria, fica exposto
infeco, que talvez s venha a afet-lo
depois que regressar ao seu pas de
origem.
O Plasmodium falciparum causa a
forma mais grave da doena e encon-
trado comumente nas regies tropicais.
As infeces provocadas por este tipo de
parasita podem ser fatais, a no ser que
a doena e suas complicaes sejam
imediatamente identificadas e que o pa-
ciente seja submetido a um tratamento
apropriado. Esta situao complica-se
ainda mais com o aumento de parasitas
do Plasmodium falciparum resistentes
cloroquina e outras drogas antimalri-
cas.
Outras fontes apontam que a cloro-
quina a droga de escolha para o
tratamento de pacientes portadores do
Plasmodium vivax. Tanto o Plasmodium
falciparum como o Plasmodium vivax
so endmicos como ocorre, por exem-
plo, na regio de Costa Marques, uma
cidade pequena e fronteiria com a Bo-
lvia, territrios separados pelo Rio Gua-
por.
O Anopheles darlingi uma das
espcies transmissoras da malria huma-
na, sendo, no entanto, um vetor primrio
na regio Amaznica, e a espcie que se
mostrou naturalmente infectada com os
trs Plasmodium (Plasmodium vivax,
Plasmodium malriae e Plasmodium
falciparum). Outras espcies, Anopheles
deaneorum, Anopheles oswaldocruzi e
Anopheles neneztovari, so vetores se-
cundrios e ocasionais.
O uso de inseticidas bacterianos,
principalmente base de Bacillus
sphaericus, so admitidos por pesquisa-
dores de modo limitado, restrito s reas
peridomiciliares, ficando difcil o con-
trole em grandes volumes de guas como
rios por exemplo, alm dos criadouros
de difcil acesso, como os das bromlias
existentes em rvores altas.
Dengue e dengue hemorrgico - febre
amarela
Por ocasio de recente reunio da
Organizao Pan-Americana da Sade,
ocorrida no perodo de 16 a 18 de abril
de 1996, no Rio de Janeiro, foi apresen-
tado um documento-relatrio versando
sobre programas de dengue e Aedes nas
Amricas. O objetivo foi o de estudar a
factibilidade, oportunidade e conveni-
ncia da erradicao do Aedes aegypti.
Tal documento foi originado de um
questionrio respondido por 28 pases,
no ficando includos Belize, Brasil,
Guatemala e Haiti, porque a organizao
no recebeu a resposta destes membros.
O relatrio mostra que nos ltimos
cinco anos ocorreram gradativamente
aumentos de casos de dengue, dengue
hemorrgico e disfunes por dengue
hemorrgico.
Foram apontados um total de 220.885
casos de dengue (118.687 no Mxico),
7.300 casos hemorrgicos (5.380 na
Venezuela) e 92 disfunes (43 na
Venezuela). Sabe-se, no entanto, que no
Brasil 120.000 casos ocorreram somente
no ano de 1955. Entre 1986 e 1987 foram
notificados 135.764 casos de dengue e
levantamentos sorolgicos, neste binio,
estimaram a ocorrncia de 1 milho de
infeces somente no Rio de Janeiro.
Curiosamente, o questionrio per-
mitiu retirar a informao de que 174
casos de febre amarela silvestre foram
registrados em 1995, dos quais 154 casos
confirmados foram relatados pelo Peru.
No combate ao vetor Aedes aegypti,
os inseticidas mais utilizados nos pro-
gramas so o Temephos (Abate) para
t rat ament o focal dos cri adouros e
Malathion para aplicao a ultrabaixo
volume, para controle do mosquito adul-
to, especialmente durante os perodos
de transmisso da dengue.
O relatrio aponta que o emprego
de piretrides est aumentando para o
combate a esse mosquito. Quanto ao
inseticida biolgico base de bactria,
soment e o Baci l l us t hur i ngi ensi s
subespcie israelensis foi empregado na
Argentina de 1991-1995, sendo 400 litros
contra 16.000kg de inseticidas qumicos
convencionais, mas no se sabe que
apreciaes tcnicas foram feitas sobre
o uso deste tipo de inseticida.
Nos programas assinalados no j
mencionado relatrio da OPAS, a resis-
tncia do Aedes aegypti a inseticidas
convencionais foi registrada em pases
do Caribe, sendo apontados o Temephos,
Malathion, Fenitrothion e Fenthion (o
piretride 1-cyhalothrin).
conveniente lembrar que dengue
e febre amarela so arboviroses e os
vrus pertencem famlia Flaviridae. Os
vrus DEN-I e DEN-II predominam em
muitos estados do Brasil. Dengue e den-
gue hemorrgico vm se constituindo
cada vez mais num grave problema nas
Amricas, e em algumas reas com fre-
qncia se observam epidemias exten-
sas e explosivas. Em 1994, foram repor-
tados mais de 26.000 casos de dengue
hemorrgico nas Amricas.
O controle biolgico de dengue
clssico e dengue hemorrgico, com o
emprego de inseticidas bacterianos com
princpio ativo tipo pr-toxinas de
Baci l l us t hur i ngi ensi s subespci e
israelensis, parece no ter sido outrora
muito considerado pelos experimenta-
dos tcnicos no assunto, que deram
preferncia aos inseticidas qumicos,
quando se tornava necessrio utilizar
inseticida.
Todavia, no presente, quando nova
epidemia de dengue vista ocorrer na
maioria dos estados brasileiros, 25 at
agora, e ocorrendo o dengue hemorrgico
no Cear, Rio de Janeiro e Mato Grosso,
o Ministrio da Sade se volta para o
problema, apresentando um programa
de erradicao da doena e, no que se
refere ao Aedes aegypti o programa pre-
v o emprego de inseticida bacteriano
do tipo Bacillus thuringiensis subespcie
israelensis em combinao com insetici-
das qumicos. Tambm bom lembrar
que o Aedes aegypti uma espcie do
subgnero Stegomyia, originria talvez
da frica, onde existem linhagens silves-
tres e domsticas. Nas Amricas, existe
somente linhagens com hbitos doms-
ticos. Tambm do subgnero Stegomya
o Aedes albopictus - o chamado tigre
asitico - que possui hbitos comuns
aos apresentados pelo Aedes aegypti.
Este mosquito existe na sia e no Pacfi-
co, desde as regies temperadas at os
trpicos, tendo sido recentemente en-
contrado no sul da frica, Nigria e
Itlia. Nos pases do Pacfico e na sia,
se demonstrou que Aedes albopictus
um vetor da dengue, mas permaneceu
em segundo lugar em importncia se
comparado com o Aedes aegypti.
Todavia, no Brasil no se detectou
nenhuma transmisso da dengue pelo
tigre asitico, ainda que este mosquito
t enha si do encont rado em zonas
endmicas da doena. Em zonas do pas
onde existe Aedes albopictus, mas no
Aedes aegypti, no se detectou nenhuma
transmisso da dengue, conforme infor-
ma a OPAS. Convm lembrar que o
Aedes albopictus sensvel ao Bacillus
thuringiensis subespcie israelensis.
Oncocercose
A Onchocerca volvulus transmiti-
da por simuldeos, o nematdeo pode
atingir o globo ocular e determinar um
tipo de cegueira tambm conhecida como
cegueira dos rios. Esta parasitose pos-
sui distribuio por alguns pases da
frica, da Amrica Central e Amrica do
Sul. No Brasil, j existem casos de
oncocercose registrados como ocorrentes
na regio Amaznica. Estima-se que uma
tribo de ndios Yanomamis esteja com a
doena, e a preocupao dos tcnicos
a de evitar que o mal se expanda para
outras regies do pas. O chamado
borrachudo ou black- fly o vetor deste
tipo de nematdeo, e sensvel ao
israelensis como o Simulium damnosum.
Si mul deos no t r ansmi ssor es da
Onchocerca volvulus, como o Simulium
pertinax tem suas larvas sensveis a inse-
ticidas base de Bacillus thuringiensis
subespcie israelensis.
Filariose
A mi cr of i l r i a do nemat deo
Wuchereria bancrofti, continua sendo
de grande importncia para a Sade
Pblica. O verme, fazendo a obliterao
mecnica da luz interna de vasos linf-
ticos, determina o transbordamento de
linfa, o que provoca o aumento do
volume dos membros, sobretudo os in-
feriores. No homem, pode tambm indu-
zir o aumento do saco escrotal. A doen-
a tambm conhecida como elefantase.
A Organizao Mundial da Sade
contabilizou no incio da dcada de 90
cerca de 300 milhes de pessoas portan-
do a Wuchereria bancrofti, no mundo.
No Brasil a filariose existe sobretu-
do na Regio Nordeste, onde a filria
transmitida pelo Culex quinquefasciatus.
A filariose linftica apresenta altos nveis
de prevalncia em vrias regies, e um
inqurito realizado em 31 distritos da
cidade de Recife mostrou uma prevalncia
mdia de 6,5% chegando a atingir 14,9%
num destes distritos. Nesta cidade, no
bairro do Coque, cuja prevalncia da
doena em 1990 foi de cerca de 10%,
detectou-se uma densidade mdia de
adul t os capt ur ados em ambi ent e
intradomiciliar, de 60 a 120 mosquitos/
quarto/noite. O Culex quinquefasciatus
ocorre no meio urbano e as formas
imaginais se desenvolvem, preferencial-
mente, em guas poludas com matria
orgnica.
O Culex quinquefasciatus muito
sensvel a certas linhagens de Bacillus
sphaericus e a ao residual desta bac-
tria mais longa do que a do Bacillus
thuringiensis subespcie israelensis. Por-
tanto, a primeira bactria utilizada no
preparo de inseticidas dirigidos para o
controle de Culex quinquefasciatus.
As larvas da espcie de mosquito
citada so controladas em Recife, e seus
distritos, com inseticida base de Bacillus
sphaericus 2362.
O quadro, a seguir, mostra dados
sobre operaes ao nvel de campo e
registros de resistncia de larvas de Culex
toxina binria de 51kDa e 42kDa, e
neste momento cabe a seguinte indaga-
o:
So ainda de importncia prtica o
israelensis e o Bacillus sphaericus
entomopatognicos?
A resposta a esta pergunda pode ser
apresentada da seguinte maneira:
A partir da poca em que o Bacillus
thuringiensis subespcie israelensis foi
considerado como um novo candidato
luta biolgica contra mosquitos, isto se
deu h uns vinte e um anos, os interesses
empresariais tiveram a sua ateno des-
pertada para esta subespcie, seme-
lhana do que ocorreria com Bacillus
thuringiensis subespcie kurstaki, que j
existia industrializado, para emprego
como procedimento alternativo nos pro-
gramas de controle e manejo de pragas
de vegetais de importncia econmica.
No campo da Sade Pblica, que
o que mais interessa, existem vrias pro-
vas de que a utilizao de pr-toxina de
bactrias do tipo Bacillus thuringiensis
subespcie israelensis, como princpio
ativo de inseticidas, no esgotou todas
as possibilidades de aproveitamento des-
tes produtos, e, at certo ponto, o mesmo
pode ser dito para os poucos e tmidos
produtos industrializados que exploram
as toxinas de Bacillus sphaericus (linha-
gens 2362 e 1593) e outras espcies de
Bacillus. So constantes e persistentes os
investimentos que buscam:
a - Novas linhagens de Bacillus
thuringiensis e Bacillus sphaericus
entomotxicas dotadas de pr-toxinas
mais ativas ou esta propriedade somada
de outra clula bacteriana, objetivando
a uma maior adaptabilidade ao meio
ambiente onde proliferam as larvas dos
insetos-alvo.
b - Melhoria e aperfeioamento de
estratgias tcnicas visando a clonagem
com expresses de genes de protenas
larvicidas em seres ingeridos por larvas
de culicdeos e simuldeos.
c - Desenvolvimento de formula-
es slidas e lquidas, visando preser-
var por longos tempos as pr-toxinas no
meio ambiente de proliferao das lar-
vas dos insetos-alvo.
d - Conhecimento mais detalhado
dos mecani smos f i si ol gi cos e
bioqumicos de ao das toxinas nos
insetos sensveis, visando descobrir pon-
tos fracos nestes insetos, como a sensi-
bilidade prvia de clulas epiteliais e,
inversamente, estudar o aparecimento
de resistncia s toxinas.
Alm disso, uma outra evidncia do
no-esgotamento do uso de inseticidas
bacterianos representada pelas paten-
tes requeridas e concedidas para gran-
des empresas do ramo. Por exemplo, h
poucos meses foi concedida uma paten-
te Companhia Monsanto, referente
tecnologia que permite modificar vege-
tais como milho com protenas de Bacillus
thuringiensis, de modo a proteger a plan-
ta contra lagartas e Lepidoptera.
Essa patente cobre uma classe de
genes sintticos incorporados em plan-
tas modificadas, tornando-as resistentes
a pragas, sem contudo prejudicar outras
formas de vida. Esta resistncia, como
esperam os especialistas no assunto,
permitir reduzir o emprego de insetici-
das qumicos para o mesmo fim. A Com-
panhia Mosanto tem utilizado a sua
tecnologia de modificao gentica para
o fim de desenvolver batatas e algodoei-
ros resistentes s pragas. Anos atrs, o
Plant Genetic System, da Blgica, inseriu
e expr essou genes de Baci l l us
thuringiensis subespcie kurstaki em to-
mateiros. claro que a rea agrcola
apresenta maior apelo econmico.
Na rea de vetores de interesse para
a Sade Pblica, so ingentes os esfor-
os tcnicos visando a clonagem e ex-
presso de genes de toxinas de Bacillus
thuringiensis subespcie israelensis em
algas azul-verdes e algas unicelulares do
plancton. A empresa ECOGEN possui
pat ent e de l i nhagem de Baci l l us
thuringiensis subespcie israelensis con-
tendo pr-toxinas de Bacillus sphaericus
ativas contra Culex sp., muito embora a
ECOGEN no seja a nica neste tipo de
pesquisa.
Acrescenta-se, ainda, que uma ou-
tra forma de estmulo s indstrias de
inseticidas bacterianos, que se refere a
constataes expressas em livros leigos
como Our Stolen Future - How We Are
Threatening Our Fertility, Intelligence &
Survival - A Scientific Detective Story,
dos autores T. Colborn, D. Mumanoski &
J.P. Myers (Business Week, March 18,
1996) o qual resume os perigos potenci-
ais que agentes qumicos apresentam
como interferentes dos hormnios da
reproduo, uma vez que se suspeita
fortemente que o DDT, PCBs, dioxina e
centenas de outras substncias podem
imitar o estrognio e a testosterona, alte-
rando assim o sistema endcrino regular
da reproduo. O articulista lembrou
que, aps a contaminao do Lago
Apopka com um pesticida na Flrida, os
jacars passaram a nascer com o pnis
reduzido no tamanho, ou que ratos em
laboratrios desenvolviam alteraes na
genitlia quando ingeriam DDT, peixes e
pssaros expostos a pesticidas conven-
cionais nos Grandes Lagos tornaram-se
incapazes de se reproduzir. Relatos como
estes, causadores no mnimo de descon-
fiana e apreenso, aliados ao crescente
nmero de constataes de resistncia
dos insetos-alvo, tm estimulado cada
vez mais a busca de procedimentos
alternativos para o controle de pragas e
vetores. Esta busca se d tambm no
Brasil, com intensidade crescente, so-
bretudo no campo de inimigos naturais
de insetos que possam vir a se constituir
em princpios ativos de novos insetici-
das.
Assim, h a forte sugesto de que os
chamados inseticidas biolgicos, sobre-
tudo os preparados com microrganis-
mos do tipo Bacillus, tero longa vida, e
esta ser continuamente fornecida pelas
pesquisas bsicas feitas aos nveis de
laboratrio e de campo.
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento traz, ainda, para seus
leitores, particularmente para a classe acadmica, Encarte Especial
com artigos de trs conceituados pesquisadores. So eles:
Johanna Dbereiner, cientista brasileira nascida na Tchecoslovquia
e indicada para receber o Prmio Nobel por suas pesquisas com
bactrias do gnero Rhizobium, trazendo para o pas uma economia
de bilhes de dlares;
. Denise Valle, pesquisadora do Departamento de Bioqumica e
Biologia Molecular da Fundao Oswaldo Cruz Fiocruz, que nos traz
uma explanao de seus estudos com mosquitos anofelinos
transmissores da malria; e
. Joo de Deus Medeiros, Chefe do Departamento de Cincias
Biolgicas da Universidade Federal de Santa Catarina e Membro do
Conselho Federal de Biologia, que destaca a produo de embriides
como uma importante aliada da humanidade na manuteno e
propagao das espcies e, conseqentemente, na proteo da
biodiversidade.
Este Encarte Especial acompanhar todas as prximas edies de
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento, trazendo sempre artigos
de grande interesse para centros de pesquisa, fundaes, institutos,
universidades, enfim, para toda a comunidade cientfica.
elemento mais importante
para elevadas produes
na agricultura tropical o
nitrognio, que forma 80%
da atmosfera na forma
gasosa de N2, mas que as plantas no
conseguem utilizar. Somente certas
bactrias, chamadas diazotrficas ou
fixadoras de N2 (FBN), so capazes de
transformar o N2 da atmosfera em
NH3, ou aminocidos, que as plantas
podem usar. Este processo conheci-
do desde o incio do sculo na
simbiose das leguminosas, que so
infectadas por bactrias do gnero
Rhizobium ou Azorhizobium, em
simbiose com a planta. So visualmen-
te observadas pela presena dos
ndulos nas razes, ou, em certos
casos, tambm no colmo. Sua colora-
o interna ativa avermelhada, pois
apresentam estruturas especficas
contendo leghemoglobina, que supre
as bactrias com baixas concentraes
de O2 para a gerao de ATP, neces-
srio ao processo de fixao de N2,
mas que, em concentraes mais
elevadas, inativa a enzima nitrogenase.
H um grande nmero de
leguminosas nos trpicos com impor-
tncia ecolgica e na produo de
alimentos, como a soja. Esta planta foi
introduzida no Brasil nos anos 60, e
vem sendo feita a seleo e adaptao
das variedades importadas aos solos
locais sem nenhuma aplicao de
adubos nitrogenados. Com isto, a
produo de soja no Brasil obtm do
ar todo o nitrognio necessrio para
altas produes, enquanto que nos
EUA e outros pases produtores deste
vegetal aplicam-se doses relativamente
baixas, porm constantes, na soja. Esta
tecnologia tornou o Brasil o segundo
produtor de soja no mundo, represen-
tando hoje um dos maiores produtos
de exportao do pas.
Alm da soja, outras leguminosas
como feijo e leguminosas forrageiras
e de reflorestamento (Franco et al.,
1995) tm as mesmas caractersticas,
mesmo que nem sempre consigam
obter nitrognio suficiente da simbiose
para suprir as necessidades de produ-
es elevadas.
A extenso da FBN para plantas
no leguminosas, principalmente
gramneas e cereais, se tornou um dos
maiores desafios dos ltimos 20 anos.
Inicialmente, pensava-se que havia
somente bactrias diazotrficas na
rizosfera, j que certas gramneas
como a grama batatais (Paspalum
notatum) crescem bem em solos
cidos, sem adubo nitrogenado. Na
rizosfera desta gramnea, foi encontra-
da a primeira bactria nova no Brasil,
que se associa especificamente a este
gnero (Dbereiner, 1966). Nos anos
seguintes, foram isoladas de cana-de-
acar e cereais como milho, arroz e
sorgo trs novas espcies de
Azospirillum que no somente coloni-
zam a rizosfera, como tambm contm
certas estirpes que so capazes de
infectar a planta, e, assim, fornecer o
nitrognio de forma mais eficiente
(Baldani & Dbereiner, 1980).
Nos ltimos anos, foram ainda
descobertas mais trs novas espcies
de bactrias diazotrficas que so
endfitas obrigatrias, isto , coloni-
zam razes, colmos e folhas de cana-
de-acar, cereais e gramneas
forrageiras em nmeros de at 106
clulas por grama de planta seca
(Dbereiner et al., 1993). Estas bactri-
as, duas espcies de Herbaspirillum e
uma de Acetobacter denominadas A.
diazotrophicus, fixam N2 no interior
da planta e no so capazes de
sobreviver no solo por muito tempo.
Sua transferncia se d nos toletes ou
sementes de uma planta para outra. As
trs espcies excretam metade do
nitrognio, que elas fixam para a
planta que o assimila, diretamente e
sem competio com outros microrga-
nismos do solo. A comprovao de
contribuies da FBN substanciais foi
feita pelo uso de 15N, em quantidades
pequenas, aplicadas no solo e que so
diludas nos casos que h fixao de
N2. Com esta metodologia, Boddey &
Dbereiner (1988) e Boddey et al.
(1991) comprovaram contribuies da
FBN ao arroz e a gramneas
forrageiras. Os maiores benefcios da
FBN foram demonstrados para varieda-
des brasileiras de cana-de-acar, que
foram selecionadas com nveis de
adubao nitrogenada, muito abaixo
das necessidades da planta (Lima et
al., 1987). Estudos adicionais com 15N,
confirmados com balanos de N, num
grande tanque, contendo solo muito
pobre adubado com fsforo, potssio
e micronutrientes, confirmaram que
certas variedades de cana podem obter
produes de at 200 toneladas/ha,
Quadro 1. Contribuio da FBN em variedades de cana-de-acar, estimada pela
diluio de
15
N e pelo balano de N na planta e no solo (urquiaga et.al., 1992).
O
A IMPORTNCIA DA FIXAO
BIOLGICA DE NITROGNIO PARA
A AGRICULTURA SUSTENTVEL
Johanna Dbereiner,
CNPAB/EMBRAPA, SEROPDICA, RJ.
sem nenhuma adubao nitrogenada
(Urquiaga et. al., 1992), conforme
demonstrado no quadro 1.
A descoberta das bactrias
endfitas, principalmente de
Acetobacter diazotrophicus, pode
explicar melhor estas elevadas contri-
buies da FBN em certas variedades
selecionadas para isto.
Os dados do quadro 1 mostram as
grandes diferenas entre gentipos, ou
variedades de cana que so a chave
para elevadas contribuies da FBN.
Enquanto somente pensava-se em
bactrias na rizosfera, foi difcil
entender contribuies to elevadas, e
principalmente as grandes diferenas
entre variedades. A descoberta das
bactrias endfitas, que colonizam
todo o vegetal, podem explicar estes
resultados de forma mais completa,
devido a uma associao mais eficien-
te.
Mesmo que os efeitos das bactri-
as diazotrficas sejam menos efetivos
em cereais, nas variedades brasileiras,
se plantadas com baixos nveis de
adubo nitrogenado e elevadas doses
de fsforo e micronutrientes, obser-
vam-se efeitos significativos das
bactrias na produtividade do milho,
arroz, sorgo e trigo (Garcia de
Salomone, 1993; Baldani et al., 1983;
Baldani et al., 1981; Koyama e App,
1979). Com isto abriu-se um caminho
para uma agricultura mais econmica,
e, principalmente, mais ecolgica, j
que estas bactrias nunca fixam mais
N2 do que as plantas precisam. A
disponibilidade de N para as bactrias
inativa imediatamente a FBN, e as
bactrias utilizam o N mineral em vez
de fixar o da atmosfera. Assim o
Brasil, inconscientemente, tornou-se o
menor usurio de adubos
nitrogenados no mundo, com uso em
mdia de 20kg.ha-1, enquanto os
pases tropicais no Oriente, como a
ndia, seguindo a chamada revoluo
verde, usam dez vezes mais N por ha,
mas produzem pouco mais cereais que
o Brasil.
BIBLIOGRAFIA
Baldani, V.L.D. e Dbereiner, J.
1980. Host plant specificity in the
infection of cereals with Azospirillum
spp. Soil Biol. Biochem. 12:433-439
Baldani, J.I.; Pereira, P.A.A.;
Rocha, R.E.M & Dbereiner J.1981.
Especificidade na infeco de razes
por Azospirillum spp. em plantas com
via fotossinttica C3 e C4.
Baldani, V.L.D.; Baldani, J.I &
Dbereiner, J., 1983. Effects of
Azospirillum inoculation on root
infection and nitrogen incorporation in
wheat. Can. J. Microbiol. 29:924-929
ascida em 1924, na Tchecoslovquia, Johanna Dbereiner
chegou em 1950 ao Brasil, mais tarde naturalizando-se brasilei-
ra. Formada em agronomia pela Universidade de Munique, tem
mais de 300 trabalhos publicados ganhando 12 prmios impor-
tantes. Reconhecida internacionalmente nos meios cientficos, ocupa um lugar
na Academia de Cincias do Vaticano, sendo, inclusive, indicada para
receber o Prmio Nobel de Qumica. Entre as vrias pesquisas realizadas,
descobriu que as bactrias do gnero Rhizobium retiram o nitrognio do ar e o
transferem para a planta, que, por sua vez, usa esse nitrognio como nutriente,
fazendo com que cresa rapidamente. Com isso, a utilizao de nutrientes
qumicos passa a ser dispensvel, economizando bilhes de dlares.
N
malria a doena infecci-
osa que mais provoca
mortes no mundo. A
malria, ou paludismo,
causada por parasitas
unicelulares do gnero
Plasmodium e transmitida por 60
espcies de mosquitos do gnero
Anopheles, popularmente conhecidos
como mosquitos-prego. Segundo
estimativas recentes da Organizao
Mundial de Sade (OMS), existem, por
ano, cerca de 400 milhes de novos
casos e 2 milhes de pessoas morrem
em decorrncia desta infeco. Em
aproximadamente 200 pases, a malria
uma endemia qual 2 bilhes de
pessoas esto expostas, ou seja, 35%
da populao mundial.
Vrios fatores contribuem para o
aumento da malria nas ltimas
dcadas: a desacelerao dos progra-
mas de controle da malria e de
combate ao mosquito, a aquisio de
resistncia dos mosquitos aos insetici-
das e do plasmdio aos antimalricos
existentes, os deslocamentos crescen-
tes de turistas entre regies endmicas
e no-endmicas, os movimentos
migratrios crescentes do campo para
as cidades, o alto custo do desenvolvi-
mento de novos inseticidas e o au-
mento da conscincia dos efeitos
prejudiciais destes produtos ao ambi-
ente, com uma legislao conseqen-
temente restritiva ao seu uso.
Todos estes aspectos apontam
para a necessidade de se implementar
meios eficazes de controle da trans-
misso da malria, e de outras molsti-
as provocadas por mosquitos e por
outros insetos.
A biotecnologia e a biologia
molecular tm sido empregadas no
desenvolvimento de vacinas e de
compostos contra as larvas de mosqui-
tos no-txicos ao meio ambiente. Por
outro lado, o grande avano destas
disciplinas tem colocado em discusso
a viabilidade de outras estratgias no
controle de insetos vetores de doenas
parasitrias. Estas estratgias, em
desenvolvimento, tm por objetivo
reduzir as populaes de insetos
vetores (transmissores de doenas) ou
diminuir sua capacidade de transmitir
os parasitas causadores de molstias.
Em ambos os casos, apenas a espcie
de inseto em questo atacada.
Com relao ao primeiro caso, de
A
A CLONAGEM DE MOSQUITOS
NO COMBATE MALRIA
Denise Valle
Pesquisadora da
Fundao Oswaldo Cruz
Ilustraes: Simone Valle
Arte-final: Rodolfo Cunha
reduo do tamanho das populaes
de insetos, o exemplo mais bem
sucedido foi o combate mosca do
berne no sul dos Estados Unidos, em
1982 e na frica do Norte, em 1991.
Nestas situaes, foi liberada nas reas
afetadas uma enorme quantidade de
machos esterilizados por radiao. A
idia que est por trs desta
metodologia a de que as fmeas, ao
copularem com machos estreis, no
deixaro descendentes. A maioria das
fmeas de insetos copula apenas uma
ou poucas vezes durante a vida (existe
um rgo na fmea, ligado ao oviduto
e chamado de espermateca, onde os
espermatozides depositados pelo
macho so estocados e vo sendo
liberados gradualmente, fecundando
grandes quantidades de ovos). Uma
desvantagem deste procedimento a
de que preciso que a quantidade de
machos estreis seja muito maior do
que aquela dos machos frteis da
populao selvagem, do campo. Na
prtica, trata-se de uma tcnica extre-
mamente dispendiosa, pois requer a
criao destes insetos em laboratrio,
a irradiao de grandes quantidades
de machos, e a sua liberao macia e
repetida no campo, a partir de avies.
Este procedimento invivel no
combate malria devido s grandes
extenses territoriais que esta endemia
atinge.
A segunda possibilidade de
controle biolgico da malria seria a
obteno de mosquitos geneticamente
modificados que fossem incapazes de
se infectar com o parasita e, portanto,
de transmiti-los ao homem. Atualmen-
te, vrios laboratrios no mundo
trabalham no desenvolvimento destes
FIGURA 1: Desenho da estratgia de
produo de mosquitos incapazes de se
infectar com a malria. A) Gene que se
expressa no intestino ( esquerda, ver
texto em "Onde?") e gene cujos produtos
so capazes de neutralizar ou matar o
plasmdio ( direita, texto "O qu?"); B)
construo de gene hbrido contendo a
regio promotora que induz a expresso
no intestino e a regio codificante que
produz informao contra o plasmdio;
C) insero do gene hbrido (B) em um
elemento de transposio (ver texto em
"Como?") ativo em mosquitos. Este
elemento ser integrado ao material
gentico do mosquito; D) mosquito
modificado pela introduo deste
elemento; E) detalhe do intestino do
mosquito (D), mostrando a expresso,
neste rgo, de uma protena capaz de
combater o plasmdio e impedir a
infeco.
insetos, ditos refratrios, principalmen-
te em relao malria. Um mosquito
anofelino resistente malria deve
necessariamente ter em seu material
hereditrio (genoma, ou conjunto de
genes, ou DNA) uma informao nova
que bloqueie a infeco pelo parasita.
A maneira mais eficiente e rpida de
conseguir esta linhagem resistente
malria seria a introduo desta
informao nova (codificada por um
gene) no mosquito atravs de tcnicas
de biologia molecular. Para tal, trs
perguntas devem ser respon-
didas: 1) Que informao
inserir? 2) uma vez no
genoma do mosquito, onde
este gene deve ser expres-
so, ou melhor, em que lugar
a protena que deriva deste
gene deve ser sintetizada? 3)
Como inserir esta informao no
mosquito? Como mencionado
anteriormente, vrios grupos tm
trabalhado tentando responder
a cada uma destas questes.
O qu?
Os genes que induzem
resistncia do mosquito ao plasmdio
e que surgem como candidatos
aplicao desta metodologia podem
estar presentes no prprio mosquito,
ou mesmo em vertebrados. Anopheles
gambiae o principal vetor da malria
no mundo. Muito abundante em toda
a frica, continente onde esto 90% de
todos os casos de malria, uma
espcie extremamente antropoflica
(90% se alimentam de humanos). Em
1986, o laboratrio de Frank Collins
(EUA) conseguiu obter mosquitos
mutantes de A. gambiae, nos quais o
plasmdio no podia se desenvolver
sendo, portanto, refratrios ao parasita.
Segundo Frank Collins, duas formas de
refratoriedade do anofelino que
parecem ser reguladas por um ou
poucos genes foram identificadas por
seu mtodo gentico de seleo. Em
uma forma, o oocineto encapsulado
logo aps a passagem pela parede do
tubo digestivo (ver ciclo da malria -
box 1). Na outra forma, o parasita
lisado medida que passa pelas
clulas do intestino, impedindo que a
infeco do mosquito pelo plasmdio
se complete. Seu grupo tem trabalhado
atualmente na clonagem dos genes de
mosquito responsveis pela
encapsulao e pela lise do
plasmdio. Estes genes seriam uma
boa resposta primeira pergunta, ou
seja, que informao inserir no mos-
quito para torn-lo refratrio ao
plasmdio.
Uma outra forma de buscar
resposta a esta questo a procura,
em vertebrados, de informao que
bloqueie o desenvolvimento do
plasmdio. As equipes de Robert
Sinden e Julian Crampton (Inglaterra)
produziram anticorpos em camundon-
gos, dirigidos contra protenas presen-
tes nas formas do plasmdio tpicas do
intestino do mosquito (gametcitos e
oocinetos). Estes anticorpos se ligam a
antgenos presentes no plasmdio,
bloqueando seu desenvolvimento e
impedindo que atravessem o
epitlio intestinal, sendo, por
isto, chamados de
"anticorpos bloqueadores da
transmisso". Estes anticorpos
j foram clonados e caracteri-
zados.
A idia com esta aborda-
gem, como veremos a seguir,
fazer com que o prprio mosqui-
to produza os genes que
encapsulam os parasitas ou os
anticorpos bloqueadores da
transmisso, tornando-se "imper-
mevel" malria.
Onde?
Um mosquito "impermevel"
malria estar expressando uma
informao (sintetizando uma prote-
na) que no originalmente sua. Se a
protena estranha estiver presente em
todo seu corpo, provvel que este
mosquito no sobreviva na natureza
to bem quanto um mosquito dito
selvagem, j adaptado ao seu meio
ambiente. Contudo, com o avano da
biologia molecular, pode-se hoje
determinar onde e quando um gene
ser expresso, se quisermos inseri-lo
em um dado organismo. Para isto
preciso definir uma regio promotora
com as caractersticas desejadas (ver
box 2). Com relao aos mosquitos
refratrios malria, acredita-se que,
se o mosquito expressar a informao
que bloqueia o plasmdio apenas no
momento e no lugar adequados,
haver uma maior chance de que ele
seja to ou quase to vivel quanto o
mosquito selvagem.
O primeiro passo, ento, foi
definir em que situao se deseja que
esta informao seja expressa. E a
resposta foi simples: no momento e no
local onde parasita e hospedeiro
entram em contato pela primeira vez.
Esta seria a situao ideal, pois garanti-
ria um bloqueio do plasmdio antes
de a infeco se instalar no hospedei-
ro invertebrado. O local seria o intesti-
no e o momento, logo aps a alimen-
tao de sangue. O prximo passo foi
identificar genes com estas caractersti-
cas, ou seja, genes que so expressos
abundante e especificamente no
intestino e que sejam ativados pelo
repasto sanguneo. Os primeiros
candidatos que surgiram foram os
genes que codificam proteases digesti-
vas, isto , genes que codificam
enzimas responsveis pela degradao
do alimento.
A equipe de Andrea Crisanti
(Itlia) isolou genes que codificam as
tripsinas e quimiotripsinas de A.
gambiae, duas proteases majoritaria-
mente ativadas aps a alimentao. A
caracterizao de seus promotores est
sendo feita. Nosso grupo est fazendo
o mesmo com os genes equivalentes
de anofelinos brasileiros, pois
preciso caracterizar promotores que
sejam ativos nas diferentes espcies de
vetores da malria, para definir uma
estratgia de aplicao ampla.
Como?
Uma vez definidas as regies
codificante (o que) e promotora
(onde) apropriadas, pode-se fazer um
"gene hbrido", que dever ser integra-
do ao genoma do mosquito. a que
surge a terceira questo, e provavel-
mente a de resposta mais complexa:
como inserir esta informao, de
maneira definitiva, no genoma do
inseto, para que seja transmitida s
geraes futuras?
Mais uma vez, vrias alternativas
foram apresentadas. Enquanto no se
pode contar com um mtodo que
introduza de maneira eficaz a informa-
o diretamente no genoma do mos-
quito, vrios grupos tm trabalhado
com duas possibilidades alternativas: o
uso de bactrias simbiontes, que vivem
no intestino dos insetos em associao
ntima com os mesmos, e o uso de
retrovrus capazes de infectar mosqui-
tos e, eventualmente, se incorporarem
ao seu genoma. O objetivo, nos dois
casos, inserir o "gene hbrido" nestes
organismos, o que seria facilitado
porque tanto bactrias quanto
retrovrus tm um genoma pequeno e,
por isto, mais facilmente manipulvel.
At a os problemas tcnicos so
contornveis. A questo se complicaria
na segunda fase do processo: a
infeco do mosquito por bactrias ou
retrovrus. No caso das bactrias
simbiontes, o problema seria o de
substituir aquelas j presentes no
inseto selvagem por outras genetica-
mente manipuladas em laboratrio e,
via de regra, mais frgeis. Por outro
lado, Marcelo Jacobs-Lorena (EUA) e
outros colaboradores obtiveram
integrao de retrovrus no genoma de
algumas clulas intestinais de mosqui-
tos alimentando larvas com soluo
contendo estes vrus. Embora isto
signifique um grande avano
tecnolgico, um problema persiste: a
integrao do retrovrus s clulas
intestinais no permite a transferncia
desta informao para a prole do
mosquito. Em termos de desenvolvi-
mento, existem dois tipos de clula no
organismo: as somticas, que vo
originar todos os tecidos e rgos do
corpo, e as germinais, que iro fazer
parte das gnadas e vo originar os
gametas. Um mosquito s poder
transmitir o "gene hbrido" a seus
filhos quando este gene estiver integra-
do em suas clulas germinais, o que,
at agora, no foi metodologicamente
possvel com o retrovrus.
Elementos chamados de
transposons, capazes de se integrar de
forma definitiva no genoma (box 3)
so bastante empregados na famosa
mosca-da-banana (Drosophila
melanogaster), amplamente utilizada
em estudos genticos h vrias dca-
das. Na Drosophila os transposons so
usados para gerar mutantes e para
introduzir genes alterados e mesmo
genes de outras espcies.
A possibilidade do uso de
transposons para introduzir genes de
combate ao Plasmodium em mosquitos
ganhou importncia recentemente, a
partir de estudos tericos de um
pesquisador brasileiro, Jos Marcos
Ribeiro, atualmente nos EUA. Ribeiro
demonstrou que, se um gene for
inserido no genoma de um indivduo
atravs de um transposon, ele se
espalhar por toda a espcie em um
nmero muito pequeno de geraes
(aproximadamente 50). Isto ocorrer
mesmo que a quantidade inicial de
indivduos carregando o transposon
seja muito pequena e mesmo que estes
indivduos sejam menos viveis que os
selvagens. Basta que o transposon
"roube mais do que mate". Por exem-
plo, se um transposon for transferido
para 75% da prole de um indivduo
(ao invs dos 50% definidos pela 1a lei
de Mendel), mesmo que 20% dos
indivduos morram ou no sejam
viveis, ainda sobraro 55% (mais do
que o previsto pela gentica clssica)
de indivduos capazes de viver nor-
malmente e deixar descendentes. Este
trabalho terico, que tornou possvel
toda a idia de construo de mosqui-
tos transgnicos, encontra comprova-
o em pelo menos um exemplo
retirado da natureza: no final da
dcada de 30, verificou-se que pratica-
mente todas as populaes naturais de
Drosophila melanogaster apresentavam
um transposon, chamado de elemento
P. Anlises das populaes de labora-
trio que haviam sido coletadas no
campo at o comeo da dcada de 30
no identificaram tal elemento, reve-
lando que 1) tratava-se de fenmeno
de introduo recente na espcie e 2)
apesar de recente, o elemento P havia
se difundido rapidamente por toda a
espcie, a tal ponto que, depois de
aproximadamente uma dcada, no
era mais possvel encontrar popula-
es naturais desprovidas deste
elemento.
At o momento, apesar dos
esforos de vrios laboratrios no
mundo, ainda no foi encontrado
nenhum transposon ativo ( semelhan-
a do elemento P, de Drosophila),
com capacidade de "pular", em mos-
quito. Acredita-se que encontrar tal
transposon seja uma questo de
tempo, e muitos esto atualmente
trabalhando neste sentido, pois a idia
de gerar mosquitos refratrios
malria e de poder introduzi-los na
natureza, com baixo custo e com tal
nvel de eficcia, extremamente
atrativa.
Contudo, para que tal estratgia
possa ser levada a cabo com xito,
no basta encontrar um transposon
ativo em mosquitos. preciso investir
no estudo da organizao do genoma
de Anopheles, o que tem sido feito
pelos grupos de Fotis Kafatos, Alema-
nha, e de Frank Collins, entre outros. A
insero de um transposon nos vetores
da malria vai depender ainda da
existncia de diferentes linhagens
mutantes, que sero usadas na seleo
dos mosquitos transgnicos. Mutantes
sero utilizados tambm como
marcadores que permitiro prever se
um transposon foi ou no inserido em
determinada linhagem. Mutantes tm
sido gerados pela equipe de Louis
Miller, EUA, e por vrios grupos j
citados. Finalmente, a gerao de
conhecimento a respeito do desenvol-
vimento embrionrio dos mosquitos
ser necessria: na prtica, a insero
de um transposon requer injeo, em
embries precoces, imediatamente
antes da formao da linhagem das
clulas germinais, de soluo conten-
do o DNA que se quer introduzir.
preciso ento conhecer em detalhe o
embrio, para definirmos o momento e
o local nos quais a injeo ser feita.
O desenvolvimento embrionrio ser
importante tambm na caracterizao
dos mutantes que esto sendo isolados
e das linhagens transgnicas geradas
quando o transposon for disponvel.
Uma das linhas de pesquisa em nosso
laboratrio trata precisamente do
estudo da embriogenia de anofelinos
brasileiros (ver figura 2). importante
ressaltar que, at pouco tempo atrs,
este tipo de estudo era praticamente
invivel, devido dificuldade de
cultivo, em laboratrio, dos anofelinos
nativos da Amrica do Sul. Recente-
mente contudo, um outro brasileiro,
Jos Bento Pereira Lima, trabalhando
no Instituto de Biologia do Exrcito,
Rio de Janeiro, obteve reproduo em
cativeiro destes anofelinos e hoje
dispe de colnias bem estabelecidas.
Em resumo, o avano da biologia
molecular e as novas possibilidades de
manipulao do genoma que da
derivam tm aberto o campo para a
concepo de estratgias inovadoras
no controle de vetores de endemias
parasitrias. A malria, doena tropical
que mais mata no mundo, surge como
primeira molstia-alvo de esforos
neste sentido. O objetivo final da
estratgia aqui detalhada a introdu-
o, no campo, de mosquitos
anofelinos que sejam refratrios
malria (ver figura 1). Isto ser conse-
guido atravs da construo de linha-
gens transgnicas contendo um gene
que codifica resistncia ao
Plasmodium, sob o controle de um
promotor ativo exclusivamente no
intestino, aps o repasto sanguneo,
local e momento em que ocorre a
primeira interao do mosquito com o
parasita. Para introduzir esta resistncia
nas populaes naturais, pretende-se
usar um elemento de transposio, o
que, em teoria, garante uma rpida
difuso da caracterstica adquirida em
toda a espcie.
No pretendemos polemizar com
o tema clonagem e suas implicaes
ticas, to em voga atualmente, princi-
palmente quando se fala de clonagem
humana. Por outro lado, toda a
estratgia mostrada aqui aponta para o
uso racional da clonagem, que j faz
parte de nosso cotidiano. A gerao de
mosquitos refratrios s doenas
parasitrias deve ser vista como um
exemplo de aplicao deste tipo de
recurso biotecnolgico em prol da
melhoria da qualidade de vida, interfe-
rindo-se pontual e criteriosamente com
os recursos naturais.
BOX 1 - CICLO DA MALRIA
O plasmdio um protozorio
que necessita obrigatoriamente de dois
hospedeiros para completar seu ciclo,
um invertebrado e um vertebrado. A
introduo do plasmdio no homem
se d atravs da picada do mosquito,
que injeta na corrente sangunea a
forma conhecida como esporozoito,
juntamente com as secrees da
glndula salivar do invertebrado, rgo
onde os esporozoitos se alojam. O
parasita ento levado at o fgado,
invadindo ativamente clulas hepti-
cas, onde se reproduz
assexuadamente. Depois de aproxima-
damente uma semana, o plasmdio
invade hemceas do sangue. No
eritrcito o plasmdio aumenta de
tamanho e se divide vrias vezes,
ainda assexuadamente, produzindo as
formas conhecidas como merozoitos.
a liberao de merozoitos na corren-
te sangunea, que ocorre de forma
sincrnica, que gera os calafrios e a
febre tpicos da malria. Estes
merozoitos invadem, ento, outras
hemceas e o ciclo de divises reco-
mea. Os perodos de febre, caracters-
ticos para cada espcie de plasmdio,
correspondem ao tempo necessrio
para que o parasita complete seu ciclo
no hospedeiro vertebrado.
Alguns merozoitos no prosse-
guem dividindo, mas transformam-se
em gametas, que ficam dentro dos
eritrcitos. Se um mosquito ingere esta
clula, o gameta ser liberado em seu
intestino. a, no lmen intestinal, que
ocorre a fuso dos gametas, formando
um zigoto mvel, o oocineto. Este
zigoto atravessa ativamente a parede
do estmago do hospedeiro
invertebrado, formando cistos do lado
oposto ao lmen. Nos cistos ocorre
multiplicao intensa at a liberao
das formas conhecidas como
esporozoitos que, por sua vez, migram
e invadem as glndulas salivares.
Quando o mosquito pica outra pessoa,
em busca de alimento, o ciclo do
plasmdio se completa.
BOX 2 - PROMOTORES E REGIES
CODIFICANTES
Nem todos os genes so expressos
por todas as clulas. Aqueles que o
fazem so os chamados genes
constitutivos, como, por exemplo, os
genes que codificam a actina, protena
que participa da formao do esquele-
to celular. Outros genes so expressos
em locais e/ou momentos bem defini-
dos, como a hemoglobina, presente
apenas nas clulas vermelhas do
sangue. De maneira simplificada, um
gene definido pela soma de sua
regio codificante (a regio que define
qual protena ser sintetizada) com a
regio promotora (ou promotor), isto ,
aquela regio que define em que
situaes a regio codificante ser
expressa, ou sintetizada. Pode-se dizer
ento que a regio promotora regula o
gene como um todo. A biologia
molecular nos d a possibilidade de
"dissecar" estes elementos. Verificou-
se, em inmeros exemplos, que
promotor e regio codificante so
domnios independentes dentro da
unidade que o gene. Isto significa
que um promotor pode regular da
mesma maneira a expresso de qual-
quer regio codificante que lhe seja
justaposta. Este tipo de procedimento
vem sendo largamente utilizado na
indstria farmacutica. Hoje em dia j
se pode comprar insulina sintetizada
por bactrias, por exemplo. Neste caso,
constri-se um "gene hbrido", com-
posto por um promotor bacteriano
associado regio codificante de
insulina de vertebrado. Este novo
"gene" reinserido na bactria, que
tem toda a maquinaria capaz de
reconhecer os sinais presentes no
promotor e, em decorrncia, sintetizar
insulina.
BOX 3 - TRANSPOSONS
Elementos de transposio, ou
transposons, so seqncias de DNA
que apresentam duas caractersticas
bsicas: as extremidades so constitu-
das por repeties invertidas de
seqncia e no meio existe uma
seqncia que codifica uma enzima,
chamada de transposase. A
transposase, por mecanismo
bioquimicamente no entendido at
hoje, capaz de, como seu nome diz,
transpor este elemento de um lugar
para outro do cromossomo. Em outras
palavras, o elemento de transposio
capaz de "pular" no genoma.
Existem algumas particularidades
neste processo. A primeira que,
quando este elemento "pula", pode
deixar uma cpia de si mesmo no
lugar original. Na verdade, um
transposon se duplica no genoma e
vai inserindo cpias de si mesmo, de
maneira relativamente aleatria. Isto
contradiz a primeira lei de Mendel, ou
da gentica clssica, que trata da
segregao dos caracteres, os genes.
Segundo a gentica clssica, se um
indivduo tem sangue do tipo AB, ele
produzir dois tipos diferentes de
gametas, 50% carregando a informao
para o tipo A e 50% para o tipo B,
alternativamente. De acordo com esta
lei, no existe a possibilidade de um
mesmo gameta carregar simultanea-
mente A e B, a no ser que ocorra
algum evento anmalo, como fuso ou
translocao de cromossomos.
Imagine agora um transposon que
existe em uma s cpia no genoma de
determinado indivduo. Este indivduo
seria ento T+/T-. Se, em algumas
clulas que vo originar os gametas
(clulas germinais), o transposon
"pular" para o outro cromossomo,
todos os gametas produzidos por estas
clulas sero T+. Em conseqncia,
este indivduo, embora seja T+/T-,
produzir mais de 50% de clulas T+.
A quantidade de gametas T+ ser tanto
maior quanto mais freqentes forem
os eventos de transposio nas clulas
germinais. Por este motivo, diz-se que
o transposon rouba da Lei da Segrega-
o dos Caracteres definida pela
gentica clssica, agindo em "benefcio
prprio", ou seja, garantindo sua
perpetuao em um nmero de
indivduos maior que o "permitido".
Outra particularidade do
transposon que, ao "pular", ele pode
levar junto consigo pedaos de se-
qncias adjacentes, que sero
inseridas, junto com ele, em um novo
local do genoma. Se neste novo local
existe um gene, o transposon poder
provocar-lhe alteraes decorrentes
no s da sua prpria insero, mas
tambm da insero destas seqncias
estranhas. Alguns pesquisadores
acreditam que os transposons tenham
tido papel importante na evoluo,
DENISE VALLE
6 Pesquisadora da Fundao
Oswaldo Cruz deste 1986.
l Graduao em Biologia - Bachare-
lado em Gentica - pela Universidade
Federal do Rio de Janeiro, em 1983.
Mestrado pelo Departamento de
Gentica, Instituto de Biologia,
Universidade Federal do Rio de
Janeiro, em 1986.
Doutorado pelo Instituto de
Biofsica, Universidade Federal do
Rio de Janeiro, em 1992.
Tanto no mestrado quanto no
doutorado desenvolveu trabalho de
tese no Departamento de Bioqumica e
Biologia Molecular, sob a orientao
do Dr. Samuel Goldenberg e co-
orientao do Dr. Eloi de Souza
Garcia.
No mestrado e no doutorado traba-
lhou com o processo de vitelognese e
com a protena vitelogenina do inseto
causador da doena de Chagas, o
barbeiro Rhodnius prolixus. A
vitelogenina a principal protena
que ir constituir os ovos. Foram
realizados estudos fisiolgicos,
bioqumicos e de biologia molecular
(clonagem dos genes que codificam a
vitelogenina). Os resultados mostra-
ram, entre outros, que quando R.
prolixus alimentado com sangue
humano os nveis desta protena so
muito aumentados e as fmeas deste
transmissor da doena de Chagas
colocam muito mais ovos.
Ps-doutorado no Centre de Biologie
du Dvloppement, Toulouse, Frana,
no laboratrio do Dr. Alain Vincent,
de 1993 a 1995, com aspectos
moleculares do desenvolvimento de
Drosophila melanogaster. Clonagem e
caracterizao de um gene, denomi-
nado collier, e verificao de seu
envolvimento com a formao da
cabea do embrio, de sua possvel
participao no controle do ciclo
celular e ainda no olfato.
Em setembro de 1995 se juntou
equipe do Dr. Ricardo Galler, Depar-
tamento de Bioqumica e Biologia
Molecular, Fundao Oswaldo Cruz,
onde tem desenvolvido os projetos, em
mosquitos anofelinos, de caracteriza-
o de genes e promotores especficos
do intestino e de anlise do desenvol-
vimento embrionrio. Ambos os
projetos se encaixam na estratgia de
gerao de mosquitos refratrios
malria, que tm sido o objetivo de
esforos conjuntos de vrios laborat-
rios no mundo.
misturando "pedaos de genes",
colocando prximas e combinando
seqncias que, normalmente, nunca
se encontrariam. De fato, encontramos
seqncias que lembram a organiza-
o de um transposon em todos os
eucariotos analisados at hoje. No
entanto, estes transposons, em sua
grande maioria, no so mais funcio-
nais, ou seja, perderam a capacidade
de "pular" no genoma. Isto porque,
quando os transposons alcanam um
determinado nmero de cpias (que
pode variar de algumas dezenas a
poucas centenas), tendem a se estabili-
zar. Acredita-se que, a partir da, os
efeitos nocivos que os transposons
acarretam ao genoma da espcie que
os carrega sejam tantos que os indiv-
duos se tornam inviveis, no deixan-
do mais descendentes. Neste ponto os
transposons, estabilizados, passam a
obedecer s leis clssicas da gentica,
passando a acumular mutaes que
bloqueiam sua atividade, ou seja, sua
capacidade de "pular".
mbrioidognese uma forma
peculiar de formao e de-
senvol vi ment o de um
esporfito, num processo de
r epr oduo homof si co
(esporfito-esporfito). Con-
siderando-se o embriide como uma
unidade estrutural de reproduo, pode-
ramos falar no tipo embrioidognico de
reproduo assexual, como prope
Batygina (1987). Maheshwari (1950), um
dos embriologistas mais influentes deste
sculo, foi um dos primeiros a notar
algumas diferenas entre embries ad-
ventcios e sexuais. A descoberta de uma
estrutura semelhante a um embrio, em
culturas de tecidos in vitro de Daucus
carota (cenoura) por Steward et al. (1958),
suscitou grande interesse biolgico e
estimulou o desenvolvimento de uma
srie de estudos posteriores, associados
com a diferenciao de embriides, em-
bries foliares, gemas adventcias, os
quais culminaram com diferentes e
instigantes concluses. Com a anlise
dos dados disponveis, foi possvel esta-
belecer uma caracterizao mais com-
pleta do embriide, e consolidar a
hiptese da embrioidognese como um
modo especfico e peculiar de reprodu-
o esporoftica.
Embriide, na definio de Batygina
(1988), uma estrutura bipolar seme-
lhante a um embrio, com o desenvolvi-
mento conjugado de pices caulinares e
radiculares, em suma o rudimento de um
novo i nd vi duo. For ma- se
assexuadamente a partir de uma clula
somtica, mas pode tambm originar-se
de um complexo celular embrinico,
originado a partir de um meristema pri-
mrio ou secundrio. Os embriides di-
ferem dos embries sexuais e apomticos
no apenas por sua origem distinta, mas
tambm por uma diferenciao mais
lenta e irregular, notadamente nas fases
iniciais do seu desenvolvimento. De um
modo geral, pelo menos os casos descri-
tos do fenmeno da pseudoviviparidade,
associados com a formao de gemas e
embr i es f ol i ar es, poder i am ser
categorizados como embriides.
O principal critrio para distinguir
embriides e gemas adventcias no se
situa na diferena de origem, mas no fato
do embriide no ser parte da planta, j
que estes no esto conectados com o
organismo materno por um sistema
vascular comum. Embriides originam-
se em diferentes estruturas, e nos mais
diversos estgios do desenvolvimento
ontogentico, desde as fases iniciais,
como no zigoto e embrio, at as estru-
turas florais, tanto in situ, in vivo quanto
in vitro.
Consi der ando o pr ocesso
embrioidognico de reproduo, pos-
svel estabelecer as seguintes categorias
de heterogeneidade em sementes: se-
mentes contendo embries sexuais; se-
mentes contendo apenas embriides
originados a partir do esporfito mater-
nal (embri oi dogeni a t egument ar e
nucelar); sementes contendo embriides
or i gi nados do espor f i t o- f i l ho
(embriogenia embrinica); sementes con-
tendo embrio sexual e embriides de
diferentes origens.
A produo de embriides mostra-
se promissora ferramenta para utilizao
E
EMBRIIDES EM
PLANTAS SUPERIORES
Joo de Deus Medeiros
Chefe do Departamento de Cincias
Biolgicas da Universidade Federal
de Santa Catarina e Membro do
Conselho Federal de Biologia
em programas de melhoramento vegetal
com fins diversos. Na explorao dos
diferentes nveis de variabilidade visan-
do a obteno de gentipos melhorados,
a seleo de embriides amplifica e
otimiza o trabalho de seleo. Em deter-
minadas plantas, como os cereais de
interesse agrcola, os embriides podem
ser repicados para um novo meio de
cultura, passando a produzir grande
quantidade de material vegetal. A partir
deste material, calos embrioidognicos
podem ser selecionados para o desen-
volvimento dos chamados embriides
adventcios secundrios. Estes embriides
apresentam um padro de diferenciao
similar quele observado nos embriides
primrios, que so aqueles obtidos dire-
tamente da cultura de partes do esporfito.
Uma das mais significativas contri-
buies do cultivo de embriides, que
abriu um enorme potencial para os pro-
gramas de melhoramento vegetal, bem
como para pesquisas bsicas e aplicadas
em gentica, refere-se cultura de anteras
para produo dos embriides. Estes
embriides, originados a partir dos gros
de pl en, desenvol vem pl nt ul as
haplides. Os estudos pioneiros na rea
foram desenvolvidos por Shimakura, em
1934, e Guha & Maheshwari, em 1964
(ver Bhojwani & Bhatnagar, 1981). Para
obteno de haplides a partir de
micrsporos ou gros de plen, em geral
cultiva-se em meio nutritivo assptico
toda a antera. Na cultura de anteras,
dependendo da espcie e da composi-
o do meio, o gro de plen pode
originar diretamente os embriides, ou
inicialmente produzir um calo, a partir
do qual podero ser regeneradas as
plntulas haplides. Temperatura, idade
da planta, idade da antera cultivada e
composio do meio de cultura so os
fatores que mais significativamente in-
fluenciam o resultado no processo de
produo de embriides haplides.
No processo de microsporognese,
o padro de diviso dos micrsporos
assimtrico, originando uma pequena
clula geradora e uma clula vegetativa
proporcionalmente bem maior. Assim,
inicialmente questionou-se a origem dos
embriides produzidos a partir de cultu-
ra de anteras: o esporfito formado ori-
ginou-se da clula geradora ou da clula
vegetativa? Aps detalhadas investiga-
es citolgicas, mostrou-se que em di-
versas espcies a clula vegetativa e a
geradora so formadas normalmente, e
que os embriides so derivados da
clula vegetativa. Diversos estudos pos-
teriores confirmaram este processo, con-
tudo a ampliao das investigaes acres-
centou novas informaes, demonstran-
do que atravs da cultura de anteras o
micrsporo pode formar esporfitos atra-
vs de trs vias distintas:
1. A clula-me do micrsporo so-
fre uma diviso simtrica, no diferenci-
ando clulas geradora e vegetativa, e as
duas clulas contribuem na formao do
esporfito;
2. A diviso assimtrica, e o
esporfito origina-se da clula vegetativa;
3. A diviso assimtrica, e tanto a
clula geradora quanto a vegetativa con-
tribuem na formao do esporfito.
Independente do padro de divi-
ses iniciais, uma massa multicelular
formada. Em determinadas espcies, esta
massa celular gradualmente assume a
forma de um embrio globular, e expe-
rimenta um processo posterior de dife-
renciao similar quele observado no
processo de embriognese normal. Atra-
vs desta via, uma nica planta haplide
derivada de cada micrsporo. Na mai-
oria dos casos, contudo, a proliferao
de clulas conduz formao de um
cal o, a part i r do qual numerosos
esporfitos podem ser diferenciados, os
quais podem ser mixplides (2n, 3n ou
mais), em decorrncia do conhecido
fenmeno da endopoliploidia em clu-
las de calos.
Os diversos gros de plen no inte-
rior do microsporngio constituem uma
populao altamente heterognea gene-
ticamente; assim as plantas haplides
obtidas a partir da cultura de anteras
t ambm vo ext er nal i zar est a
heterogeneidade. Se o fenmeno da
heterogeneidade indesejvel, o proble-
ma pode ser contornado com a cultura
de gros de plen isolados. Em 1972
Sharp e colaboradores (apud Bhojwani
& Bhatnagar, 1981) obtiveram sucesso
na produo de clones haplides a partir
da cultura de gros de plen isolados de
tomate. Posteriormente, Nitsch (1974) de-
senvolveu um meio puramente sinttico
para originar plantas haplides a partir
da cultura de gros de plen isolados. Os
ingredientes especiais deste meio de cul-
tura so glutamina, L-serina e inositol, e
seu uso generalizou-se.
Uma vez obt i do o esporf i t o
haplide, este pode crescer normalmen-
te at o estgio de florao, porm, em
decorrncia da ausncia de cromossomos
homlogos, a meiose aberrante, e con-
seqent ement e no so f ormados
gametas normais. Para obteno de plan-
tas frteis, necessrio induzir a
diploidizao, originando diplides
homozigotos. Tradicionalmente usa-se a
colchicina para induzir a diploidizao;
e mais recentemente tem-se usado a
tendncia de endomitose observada no
crescimento in vitro de calos, como uma
tcnica alternativa para a diploidizao.
A importncia da cultura de plantas
haplides para o desenvolvimento e am-
pliao do conhecimento acerca das
plantas superiores enorme. A induo
de mutaes em haplides pode ser
facilmente detectada, j que estes apre-
sentam um complemento simples de
genes, eliminando-se conseqentemen-
te a interferncia dos alelos dominantes.
Haplides com mutaes desejveis
podem ento ser selecionados e seus
cromossomos duplicados, obtendo-se
diplides frteis numa nica gerao. As
plantas assim obtidas podem ser usadas
como fonte de tecidos haplides, os
quais podem ser mantidos in vitro
indiferenciados, sendo ainda possvel
sua dissociao para produo de clu-
las haplides livres. Estas por sua vez
passam a constituir valiosa ferramenta
nas pesquisas genticas, fisiolgicas, bi-
oqumicas etc.
A utilizao de haplides acelera e
facilita enormemente os programas de
melhoramento vegetal, cujos mtodos
tradicionais envolvem o acompanhamen-
to de sucessivas geraes, o que deman-
da, via de regra, um lapso de tempo
bastante longo. Nos ltimos anos, muito
progresso tem-se conseguido com a
induo de plantas haplides em espci-
es de interesse econmico, e suas linha-
gens diploidizadas so freqentemente
usadas como fonte de homozigose nos
programas de melhoramento vegetal e
nos estudos bsicos de gentica.
A cultura de anteras uma das
poucas ferramentas biotecnolgicas que
j consolidaram sua importncia e
aplicabilidade, contudo muitas espcies
botnicas mostram-se recalcitrantes, in-
dicando que o mecanismo pelo qual
gametfitos imaturos alteram sua via
normal de desenvolvimento, para origi-
nar di r et a e assexuadament e um
esporfito, persiste ainda com vrios
pontos obscuros.
Certamente, com a sofisticao de
equipamentos e novas metodologias,
muitas dvidas sero esclarecidas num
futuro breve. O interesse crescente na
embriologia vegetal e na biologia
reprodutiva das plantas vem consolidan-
do estes campos de conhecimento como
r eas de car t er essenci al ment e
transdisciplinar e com um futuro bastan-
te promissor.
Atualmente, uma crescente deman-
da se incorpora e exige avanos que
podem ser encontrados na produo de
embriides, haplides ou no. Tal de-
manda refere-se diretamente conserva-
o de germoplasma. crescente a rela-
o de espcies em eminente risco de
empobrecimento gentico ou mesmo
extino. No raro mtodos convencio-
nais de propagao mostram-se insufici-
entes ou inadequados, notadamente nos
casos de espcies arbreas tropicais. Um
crescente nmero de espcies arbreas
vem sofrendo comprometimento nos seus
sistemas reprodutivos, muitas vezes de
difcil reverso, sendo nestes casos im-
prescindvel a interferncia humana.
Nestas situaes crticas, a produo de
embriides pode representar uma alter-
nativa, mostrando-se como instrumento
indispensvel na proteo e manuten-
o da biodiversidade global. A canela-
preta (Ocotea catharinensis), s para
citar um exemplo, um destes casos
tpicos: exaustivamente explorada atra-
vs do simples extrativismo, teve sua
populao drasticamente reduzida. Ou-
trora espcie de freqncia bastante alta,
encontra-se hoje numa condio crtica,
com poucos indivduos largamente dis-
tanciados na maioria das vezes, com
evidente comprometimento no seu siste-
ma de reproduo natural. Mesmo em
populaes naturais, problemas de con-
servao podem surgir, como o caso
da auto-incompatibilidade, registrada, por
exempl o, em al guns gner os de
orquidceas. Charanastri & Kanemoto
(1977) citam que 68% das espcies de
Oncidium mostram auto-incompatibili-
dade. Clifford & Owens (1988) registram
dados semelhantes para as orquidceas
dos gner os Lembogl ossum e
Odontoglossum. Neste contexto, a pro-
duo de embriides pode auxiliar enor-
memente na manuteno e propagao
das espcies, criando um certo alento
numa das mais graves conseqncias do
desenvolvimento desequilibrado da so-
ciedade humana, que a perda de um
inestimvel patrimnio, singularmente
chamado biodiversidade.
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