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AULA
Mutao e reparo do DNA
objetivos
Pr-requisitos
Para acompanhar mais facilmente esta aula,
importante que voc reveja alguns conceitos
das aulas sobre cidos nuclicos (3, 4 e 5) e
replicao (9, 10, 11 e 12) de nossa disciplina.
INTRODUO Voc viu, na Aula 4, que o papel do DNA como molcula da hereditariedade
depende, em parte, de sua estabilidade. O armazenamento de informaes
por um longo perodo sem alterao importante para a clula. Concorda?
Contudo, voc deve saber que as reaes que alteram a estrutura do DNA
CARCINOGNESE podem ser fisiologicamente significantes. Processos como carcinognese e
Processo de envelhecimento, por exemplo, podem estar intimamente ligados ao acmulo
desenvolvimento de
cncer, doena que lento de alteraes irreversveis do DNA.
se origina de clulas
mutantes que escapam As mutaes no devem ser vistas como algo totalmente ruim. Se voc pensar
dos controles normais
de diviso celular, no como um indivduo, mas sim como uma espcie, com certeza concordar
podendo invadir e
colonizar diferentes com o lado bom das alteraes no DNA. As mutaes que no levam
tecidos do corpo. morte ou a restries drsticas de vida de cada indivduo de uma populao
podem representar uma vantagem em determinadas condies ambientais.
Essas variaes sutis, existentes entre os integrantes de uma populao, muitas
vezes asseguram a perpetuao e o processo evolutivo de uma espcie.
Em uma clula, que geralmente tem apenas uma ou duas cpias de DNA
genmico, as protenas e os RNAs defeituosos podem ser rapidamente
substitudos usando a informao codificada no DNA. Entretanto, as molculas
de DNA so insubstituveis e, apesar de se reconhecer a contribuio inestimvel
de algumas mutaes, manter a integridade da informao contida no DNA
uma obrigatoriedade celular, o que assegurado por um sofisticado conjunto
de sistemas de reparo de DNA. Os danos no DNA podem ser causados por uma
variedade de processos, alguns espontneos, outros catalisados por agentes
ambientais. Voc ver que a prpria replicao pode ocasionar danos no
contedo de informao do DNA.
Nesta aula, no discutiremos o aspecto evolutivo das mutaes, mas sim como elas
ocorrem, como podem ser classificadas e sua importncia em diferentes reas, como
a da sade e a biotecnolgica. Voc tambm ter a oportunidade de conhecer como
as clulas reparam as possveis leses que surgem no DNA, de forma a minimizar
a transmisso desses erros para as futuras geraes de clulas.
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defeituosos que codificam protenas que atuam nos sistemas de reparo.
AULA
Como so muitas informaes, sugerimos que voc leia esta aula com mais
calma e ateno do que o habitual. No preciso se apressar! Lembre-se
de que voc est construindo seu conhecimento, o que requer pacincia e
perseverana.
Vamos comear?!?!
O QUE MUTAO?
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Figura 13.1: Mutao somtica vs mutao germinativa. As mutaes podem ocorrer tanto no tecido somtico
como no germinativo, entretanto, apenas as que ocorrem no tecido germinativo so transmitidas para a gerao
seguinte de clulas.
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em desenvolvimento, podendo originar uma populao, denominada
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clone, de clulas mutantes idnticas, todas descendentes da clula na qual
ocorreu a mutao. Este tipo de mutao, em geral, no transmitido
para a prole.
A mutao germinativa, em contrapartida, ocorre em tecido
associado formao de clulas sexuais. A mutao transmitida
para a gerao seguinte caso as clulas sexuais mutantes participem da
fertilizao. Vale lembrar que um indivduo exibindo fentipo normal
pode produzir clulas sexuais mutantes.
!
As mutaes em bactrias podem causar resistncia a antibiticos. De fato, o uso excessivo ou
a interrupo do tratamento aumenta a probabilidade de surgimento de linhagens de bactria
resistentes a diversos antibiticos, o que constitui um problema de sade pblica.
Os vrus sofrem mutao muito rapidamente, o que representa uma preocupao dos profissionais
da sade. Por exemplo, as vacinas contra gripe devem ser modificadas a cada ano para se adequarem
s mudanas virais. Outro exemplo diz respeito elevada taxa de mutao do HIV, o que dificulta
ainda mais o tratamento da AIDS.
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!
Ns j definimos gentipo e fentipo na Aula 1. Voc j viu que a informao gentica armazenada
no DNA transcrita sob a forma de RNA, que, ento, utilizado durante a sntese de protenas,
determinando a seqncia de aminocidos na cadeia polipeptdica (Aula 5). Tambm j foi estudado
que, na maioria das vezes, apenas parte do genoma codifica alguma molcula, ou seja, est
relacionada sntese de uma molcula. Se juntarmos essas informaes, fcil entender que, se a
mutao ocorre em uma regio do genoma que no representa um gene, provavelmente no haver
alterao do fentipo. Alm disso, mesmo que a mutao ocorra dentro de um gene, a constatao
de um fentipo alterado depender do local e do tipo da mutao. Vamos entender por qu?
Nas aulas do Mdulo 3, voc ver que o gene apresenta regies no-codificadoras, ou seja, regies
que no so importantes para determinar, por exemplo, a seqncia de aminocidos em uma protena.
Voc ver tambm, nas aulas do Mdulo 4, que vrios tipos de cdon (a trinca de nucleotdeos no
RNA que determina um aminocido na protena, lembra?) determinam o mesmo aminocido na
protena. Assim, se a mutao ocorre na regio no-codificadora ou modifica o cdon sem que seja
introduzida uma mudana de aminocido na protena, o fentipo, associado protena, no se
apresentar alterado.
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sem que envolva recombinao. Nem toda mutao est
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associada a um fentipo mutante (j vimos isso), mas todo
mutante apresenta uma alterao estrutural no DNA, que
resulta em um fentipo mutante.
Evento mutacional expressa a ocorrncia de uma
mutao.
Agente mutagnico ou mutgeno um agente fsico ou um
reagente qumico que pode interagir com o DNA causando
uma mutao.
Mutagnese o processo de produo de mutantes, ou
seja, de induo de mutao.
Figura 13.2: Mutao ao nvel molecular. Aps a introduo de uma base errada (a), a mutao ratificada
durante a replicao do DNA (b).
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resistentes a um antibitico. Nesse caso, emprega-se meio de cultura
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adicionado de antibitico, permitindo, assim, o crescimento apenas das
clulas mutantes. Este mtodo bem simples, no ?
Para a seleo de mutantes de bactria incapazes de utilizar lactose,
pode-se utilizar um meio de cultura, conhecido como EMB gar, contendo
todos os aminocidos, lactose e dois CORANTES SENSVEIS AO PH, eosina e azul CORANTES SENSVEIS
AO PH
de metileno. Vamos entender o que ocorre! As clulas LAC+ consomem
Estes compostos
lactose, por um metabolismo oxidativo, havendo liberao de on H+. apresentam colorao
Portanto, ocorre diminuio do pH do meio ao redor das clulas, o que distinta de acordo
com seu estado de
faz com que os corantes que permeiam as colnias apresentem colorao ionizao. So tambm
conhecidos como
vermelha. Ao contrrio, as clulas LAC- consomem glicina e liberam NH 3 indicadores de pH.
(amnia) que causa um aumento de pH ao redor destas clulas. Assim,
LAC+
os corantes perdem a cor, gerando colnias brancas.
Refere-se bactria
selvagem, capaz de
utilizar a lactose como
BASE MOLECULAR DAS MUTAES fonte de carbono.
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O cdon que especifica Tyr substitudo por um cdon
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que determina o trmino da traduo, gerando, assim, uma
protena menor, incompleta.
Mutao frameshift (mutao por mudana de quadro
de leitura) a adio ou deleo de pares de bases, no
mltiplos de trs dentro da regio codificadora, resulta
em mudana de todos os cdons a partir do ponto onde
ocorreu a alterao.
Figura 13.3: Tipos de mutao. a) A partir de trs bases constituintes de um gene, possvel gerar algumas
seqncias mutadas resultantes de substituies de cada uma das bases. Neste exemplo, tais alteraes origi-
naram mutaes silenciosa, missense e nonsense, associadas a protenas normal, defeituosa e incompleta,
respectivamente. b) Insero ou deleo de bases, envolvendo um nmero no mltiplo de trs, resulta em
mudana de quadro de leitura (frameshift). As conseqncias de uma mutao frameshift podem ser as mais
diversas, incluindo protenas defeituosas ou incompletas.
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!
Um exemplo importante da mutao causada por substituio de bases a anemia falciforme, doena
caracterizada por hemlise (quebra de hemcias) acentuada devido presena de hemoglobina
mutante, conhecida por hemoglobina S (HbS), no interior das clulas vermelhas do sangue. Esta
doena est associada substituio de adenina por timina, o que resulta em troca de cido glutmico
por valina na hemoglobina.
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b
Figura 13.4: Estados tautomricos das bases. Adenina (a) e citosina (b) apresentam-se sob as formas amino (estado
mais comum) e imino (estado transiente). Guanina (c) e timina (d) apresentam-se sob as formas ceto (estado mais
comum) e enol (estado transiente).
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c
Figura 13.5: Possveis pares de bases contendo uma das bases em seu estado tautomrico transiente. Pares de
bases Watson-Crick (a) e pares de bases formados pelas formas transientes de purinas (b), adenina e guanina,
e de pirimidinas (c), citosina e timina.
!
Ser que voc se lembra das frmulas estruturais das bases nitrogenadas? Voc sabe quais so os
grupamentos envolvidos no pareamento das bases?
No se esquea de retornar s aulas anteriores sempre que sentir necessidade. Se for necessrio,
no hesite em retornar s Aulas 3 e 4.
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normalmente com C. Entretanto, a outra fita de DNA, contendo a
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base T, serviria de molde para a sntese de uma molcula contendo,
ento, o par de bases A=T. Esta mudana do par original GC para o
par A=T caracterizaria uma mutao. Portanto, podemos concluir que
tautmeros transientes permitem pareamentos no-padres de bases que
se encaixam na dupla-hlice de DNA, causando eventuais mutaes nos
ciclos seguintes de replicao.
a b
c
d
Figura 13.6: Erro de replicao devido ao tautomerismo das bases. a) DNA parental a ser replicado. b) No primeiro
ciclo de replicao, o tautmero transiente G* pareia com T, em lugar de C, originando o par G*T. c) Durante o
segundo ciclo de replicao, a forma imino (transiente) convertida para a forma amino, regenerado o estado
normal G. d) A fita de DNA contendo G gera uma molcula com o par de bases GC, enquanto a outra fita
contendo T gera o par de bases A=T, ratificando a mutao de GC para A=T.
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SEQNCIA REPETITIVA
(OU SEQNCIA DE Outra possibilidade de erro se origina da replicao incorreta de
REPETIO)
SEQNCIAS REPETITIVAS (OU SEQNCIAS DE REPETIO) encontradas no genoma
As seqncias de
repetio, como o dos organismos. Observe, na Figura 13.8, que devido a um fenmeno
nome mesmo diz, conhecido como derrapagem da DNA polimerase possvel adicionar
correspondem a
unidades bsicas ou deletar uma ou mais bases. Na Figura 13.8.a, a seqncia repetitiva
de repetio que
se encontram em AAAAA propicia o desemparelhamento da base T, antes mesmo do
mltiplas cpias em
trmino da sntese da nova fita. Como resultado, temos uma fita com
srie no genoma dos
organismos. Estas seis, em lugar de cinco, bases do tipo T. Caso este erro no seja corrigido,
seqncias so mais
comumente do tipo em um segundo ciclo de replicao, a mutao por adio de base ser
mono, di, tri ou
tetranucleotdeos,
ratificada. Ao contrrio, na Figura 13.8.b, possvel observar o que
ou seja, de um, ocorre durante a replicao de uma seqncia repetitiva de CT. Nesse
dois, trs ou quatro
nucleotdeos. exemplo, a fita molde no completamente utilizada, o que resulta em
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este erro no for reparado, no ciclo seguinte de replicao, ser ratificada
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a mutao por deleo de duas bases.
Figura 13.8: Replicao incorreta de seqncias repetitivas. Replicao incorreta de seqncias repetitivas,
resultando em adio (a) e deleo (b) de bases.
Leses espontneas
Depurinao
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Figura 13.9: Depurinao perda espontnea de purinas presentes no DNA. A perda de purina gera um stio
apurnico stio AP (a). Na ausncia de uma base na fita molde, qualquer base pode ser incorporada durante a
replicao do DNA, podendo gerar uma mutao (b).
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A desaminao caracteriza-se pela perda do grupamento amino
(NH2) de uma das bases nitrogenadas. A desaminao da citosina, por
exemplo, gera uracila, conforme esquematizado na Figura 13.10.a, o que
resulta, nos ciclos subseqentes de replicao, em converso do par CG
para o par T=A. Alm disso, algumas bases se encontram metiladas, ou
seja, adicionadas de um grupamento metil (CH3), sendo que o estado
de metilao de um gene consiste em um importante mecanismo de
controle de expresso gnica. A desaminao de 5-metilcitosina produz
timina, conforme a Figura 13.10.b, resultando na transio CT e na
substituio do par CG pelo par T=A. Como a presena de timina no
reconhecida pela maioria dos sistemas de reparo, este mecanismo
uma causa comum de mutao.
Figura 13.10: Desaminao perda do grupamento amino das bases. A perda do grupamento amino da cito-
sina (a) e da 5-metilcitosina (b) resulta em uracila e timina, respectivamente. Essa mudana de base favorece a
formao de um par de bases diferente do original, o que caracteriza uma mutao.
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Danos oxidativos
RADICAIS LIVRES
tomos ou molculas Os danos oxidativos podem ocorrer espontaneamente devido
quimicamente reativas,
devido existncia de ao de RADICAIS LIVRES, tais como superxido (O2), perxido de hidrognio
pelo menos um eltron
desemparelhado, que (H2O2) e radical hidroxila (OH), que so gerados durante o metabolismo
apresentam tempo de aerbico normal. Estas espcies reativas de oxignio podem causar danos
vida pequeno.
Na busca de uma con- no DNA, ou at mesmo nos precursores do DNA (dGTP), resultando
figurao mais estvel,
os radicais livres em mutao. Dois dos produtos formados esto representados na Figura
podem causar danos
13.11. O 8-oxo-7-hidrodesoxiguanosina (8-oxodG), por exemplo, pareia
s macromolculas no
interior das clulas. Os freqentemente com A, estando associado a altos nveis da transverso
radicais livres podem
ser produzidos em GT. J a timidina glicol bloqueia a replicao.
processos normais ou
patolgicos e esto
Os danos oxidativos ocorrem naturalmente, mas sua freqncia
associados a danos aumentada por radiao ionizante, conforme voc ver mais adiante
teciduais em diver-
sas circunstncias, nesta aula.
incluindo: exposio
radiao, danos por a b
poluentes ambientais
e envelhecimento.
As substncias anti-
oxidantes, como a
vitamina C, diminuem
os nveis de radicais
livres em nosso
organismo, evitando,
assim, que eles causem
algum dano. Para
maiores informaes
sobre radicais livres e
sua importncia, visite
a pgina da Virtual
Free Radical School, Figura 13.11: Produtos de danos oxidativos do DNA decorrentes da ao de esp-
cujo endereo cies reativas de oxignio. a) Timidina glicol, que bloqueia a replicao do DNA. b)
http:// 8-Oxo-7-hidrodesoxiguanosina (8-oxodG), que promove a transverso GT.
ww.medicine.uiowa.edu/
FRRB/VirtualSchool/
Virtual.html.
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Anlogos de base
Figura 13.12: Possveis pareamentos entre 5-bromo uracila (5-BU) e as bases nitrogenadas comuns. A presena
da forma comum do 5-bromo uracila (5-BU), um anlogo de timina, pareia com adenina (a), enquanto a forma
ceto de 5-BU permite o pareamento com guanina (b), o que caracteriza uma mutao.
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Figura 13.13: Possveis pareamentos entre 2-amino purina (2-AP) e as bases nitrogenadas comuns. Enquanto
2-amino purina (2-AP) pareia com timina (a), a forma protonada de 2-AP permite o pareamento com citosina
(b), o que em ciclos subseqentes de replicao gera uma mutao, caso o erro no seja reparado.
!
Exemplos de anlogos de base so algumas drogas antivirais e antitumorais. O AZT (azidotimidina),
um anlogo de timina, amplamente usado no tratamento de pacientes portadores de HIV.
!
O cido nitroso formado a partir de precursores orgnicos, tais como as nitrosaminas, e de sais de
nitrito e nitrato, que so comumente empregados como conservantes de alimentos processados para
prevenir o crescimento de bactrias txicas. Na quantidade utilizada para este fim, estes compostos
no parecem aumentar o risco de cncer, conferindo um risco muito menor para a sade do que no
caso dos alimentos estragados pelo no uso de conservantes.
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forma, passa a parear com A mudando o par CG para
o par T=A.
Etil metano sulfonato O composto etil metano sulfonato
(EMS) um agente alquilante, ou seja, adiciona um
grupamento alquila a uma base nitrogenada. O EMS
capaz de adicionar o grupamento etila a muitas posies
das quatro bases, mas seu poder mutagnico est mais
relacionado adio da etila ao oxignio na posio 6 da
guanina. A O-6-etilguanina formada pareia, ento, com
timina (Figura 13.14), podendo resultar na transio GC
A=T nos ciclos seguintes de replicao. J a ao de
EMS sobre a timina resulta em formao de O-4-etiltimina,
que, ao parear com guanina, pode determinar a converso
de T para C.
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Figura 13.14: Ao do etil metano sulfonato (EMS). A ao do EMS sobre a guanina gera O-6-etil guanina que,
ao parear com timina, promove a converso do par GC em A=T (a). A timina, sob ao do EMS, convertida
em O-4-etil timina, que pareia com guanina, resultando na mudana do par T=A em CG (b).
Substncias intercalantes
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Figura 13.15: Substncias intercalantes e seu modo de ao. (a) Frmula estrutural de duas substncias inter-
calantes: proflavina e acridina laranja. (b) A presena de uma substncia intercalante na molcula de DNA causa
um estiramento da dupla-hlice, o que faz com que, durante a replicao, a DNA polimerase promova a adio
ou deleo de pares de bases.
!
O benzopireno, encontrado na fumaa de cigarro, e aflatoxinas, produzidas pelo fungo
Aspergillus flavus, que cresce em amendoim e em diversos tipos de gros, so exemplos de agentes
mutagnicos.
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Figura 13.16: Ao de raios ultravioleta sobre o DNA. (a) A incidncia de raios UV sobre uma molcula de DNA,
que apresenta dois resduos adjacentes de timina, pode resultar em formao de dmero de timina (ciclobutano)
ou em 6-4 fotoproduto. (b) Um possvel mecanismo para o surgimento de uma mutao induzida por raios UV.
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!
A recomendao de no se tomar banho de sol entre 10h e 14h devida maior quantidade de
raios UV neste perodo do dia. O bronzeamento solar excessivo pode causar a formao de dmeros
de pirimidina nas clulas epiteliais, podendo resultar em cncer de pele.
REPARO DO DNA
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replicao do DNA no pequena. Entretanto, os sistemas de reparo
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de DNA reduzem esta taxa de erro, sendo responsveis por manter o
equilbrio entre preservar a sade, preservar as espcies e possibilitar
a evoluo. Por exemplo, a subunidade da DNA polimerase III de
Escherichia coli introduz, aproximadamente, uma base incorreta a cada
104 pares de bases formados durante a replicao in vitro. Contudo, a taxa
estimada de mutao em clulas bacterianas muito menor, correspondendo
a um erro a cada 109 nucleotdeos incorporados durante a sntese de DNA.
Esta reduo da taxa de mutao se deve, principalmente, funo
revisora das DNA polimerases de E. coli. Na DNA polimerase III, esta
funo exibida pela subunidade (epsilon), de forma que, quando uma
base errada incorporada durante a sntese de DNA, a polimerase faz
uma pausa, transfere a extremidade 3 da cadeia crescente para o stio
da exonuclease no qual a base malpareada removida. A extremidade
3 , ento, transferida de volta para o stio da polimerase, onde esta
regio copiada corretamente. A funo revisora uma propriedade de
quase todas as DNA polimerases de bactria e das polimerases (delta) e
(epsilon) de clulas animais, indicando que esta funo indispensvel
para reduzir o excesso de erro em todas as clulas.
Alm dos sistemas de reparo que discutiremos nesta aula,
as clulas tambm desenvolveram sistemas enzimticos capazes de
neutralizar compostos com potencial de causar danos ao DNA. Como
exemplo, podemos citar um sistema que previne contra danos oxidativos
e que envolve a ao da enzima superxido dismutase sobre radicais
superxidos, convertendo-os a perxido de hidrognio, que , ento,
convertido gua pela ao da enzima catalase.
Voc j viu, na primeira parte desta aula, que os danos observados
nas molculas de DNA podem ser decorrentes no apenas de substituio
de bases durante a replicao, como tambm da troca de bases resultante da
instabilidade qumica, inerente s prprias bases ou s ligaes N-glicosdicas
e s alteraes resultantes da ao de agentes qumicos ou fsicos.
Agora, vamos discutir um pouco sobre os principais sistemas de
reparo conhecidos, lembrando que grande parte desse conhecimento foi
adquirida a partir de estudos com bactria. Muitos desses sistemas de reparo
tambm existem em eucarioto. Entretanto, o complexo enzimtico envolvido
e os detalhes do processo ainda no foram inteiramente esclarecidos.
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A protena MutH, que se liga especificamente seqncia GATC de
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molculas hemimetiladas, capaz de distinguir a fita original metilada da
fita recm-sintetizada e, portanto, no-metilada. A protena MutS, que
reconhece o mau pareamento de bases, forma um complexo com uma
terceira protena, MutL. O DNA atravessa esse complexo, que se move
nas duas direes ao longo da molcula de DNA. Quando o complexo
encontra uma protena MutH ligada seqncia hemimetilada GATC, a
atividade endonuclease latente da MutH ativada, ocorrendo a clivagem
especfica da fita no metilada. Aps esta inciso, o segmento da fita
recm-sintetizada contendo a base incorporada erroneamente retirado
pela ao de uma exonuclease. Este segmento , ento, devidamente
substitudo pela seqncia correta em uma etapa em que se observa a
participao de vrias enzimas, incluindo a DNA polimerase III e a ligase.
Lembra do papel dessas enzimas na replicao?
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a b
Figura 13.17: Metilao do DNA e reparo de mau pareamento de bases. (a) Etapas envolvidas na metilao do
DNA. Note, durante este processo, a existncia de DNAs hemi-metilados, importantes para o reconhecimento
da fita a ser reparada. (b) Etapas envolvidas no reparo de mau pareamento de bases. A explicao da figura
encontra-se no texto.
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AULA
O reparo por exciso de base reconhece qualquer leso que crie
uma distoro significativa na dupla-hlice do DNA, tais como as geradas
pela desaminao de citosina e adenina. Nesse caso, a base alterada
removida por clivagem da ligao N-glicosdica pelas enzimas conhecidas
como DNA glicosilases, gerando um stio AP, j citado anteriormente.
A uracil glicosilase, por exemplo, especfica para a remoo de
uracila que resulta da desaminao de citosina. Esta glicosilase no
remove resduos de uracila do RNA nem resduos de timina do DNA.
Outras glicosilases so capazes de remover hipoxantina, resultante da
desaminao de adenina, e bases alquiladas. Alm disso, lembre que
os stios AP tambm podem ser gerados pela hidrlise espontnea das
ligaes N-glicosdicas do DNA.
O fato que, independentemente dos eventos que antecedem sua
formao, o stio AP reparado por um processo enzimtico que consiste
em quatro etapas:
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Figura 13.18: Reparo por exciso de base BER. (a) A DNA glicosilase reconhece uma base danificada e cliva a
ligao N-glicosdica formada entre esta base e a desoxirribose. (b) Uma AP endonuclease cliva a ligao fos-
fodister prxima ao stio AP. (c) A DNA polimerase I inicia a sntese de um novo segmento de DNA, concomi-
tantemente a sua atividade 53 exonuclease remove a poro da fita danificada. (d) A fita devidamente
selada pela ao da DNA ligase.
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AULA
O reparo por exciso de nucleotdeos reconhece grandes distores
da dupla-hlice do DNA. Neste sistema de reparo, uma enzima hidrolisa
duas ligaes fosfodister, uma em cada lado da leso. Em E. coli, em
particular, o complexo enzimtico que participa desse processo
denominado excinuclease ABC, sendo constitudo por trs subunidades,
UvrA, UvrB e UvrC. Inicialmente, o complexo formado por duas UvrA
e uma UvrB (A2B) se ligam ao stio da leso. O dmero UvrA (A2) se
dissocia e UvrB e UvrC efetuam as incises que flanqueiam a leso. Em
E. coli e em outros procariotos, o sistema enzimtico hidrolisa a quinta
ligao fosfodister no terminal 3 e a oitava no terminal 5, gerando
um fragmento de 12 a 13 nucleotdeos (dependendo se a leso envolve
uma ou duas bases). Em seres humanos e outros eucariotos, a enzima
hidrolisa a sexta ligao fosfodister no terminal 3 e a vigsima segunda
no terminal 5, produzindo um fragmento de 27 a 29 nucleotdeos. Aps
a dupla inciso e liberao do oligonucleotdeo excisado, o espao gerado
preenchido pela DNA polimerase I em E. coli e DNA polimerase em
humanos. A fita , ento, selada pela DNA ligase. Releia este pargrafo
acompanhando a Figura 13.19.
Figura 13.19: Reparo por exciso de nucleotdeo NER. (a) Um complexo enzimtico denominado excinuclease
cliva duas ligaes fosfodister especficas que flanqueiam a leso no DNA. (b) O fragmento de DNA resultante,
com 13 ou 29 nucleotdeos, respectivamente, em E. coli ou no ser humano, removido pela DNA helicase. (c) O
espao vazio preenchido pela DNA polimerase. (d) A fita reparada selada pela DNA ligase.
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CONSIDERAES FINAIS
Considerando tudo o que vimos nesta aula, vamos pensar juntos
sobre o destino de um dano no DNA. Um erro na molcula de DNA
pode ser tolerado, ou simplesmente ignorado, pode ser reparado, pode
causar a morte da clula ou determinar que a clula se programe para
morrer, atravs de um processo conhecido como apoptose, ou pode ser
fixado, resultando em uma mutao.
As mutaes se apresentam com grande utilidade no s na
natureza, representando uma das causas da variabilidade gentica que
permitem a seleo natural e, portanto, a evoluo das espcies, como
tambm no campo da pesquisa. Nesta rea, os genes mutantes so
utilizados como sondas, uma vez que ajudam a desvendar os mistrios
pertinentes a uma funo biolgica. Assim, no estudo detalhado da
funo de um gene, importante que se obtenha o maior nmero
possvel de mutantes.
Muitos polimorfismos so responsveis pela variabilidade
observada entre os seres humanos. Talvez voc j tenha estudado sobre
isso em Gentica, mas vale a pena repetir. Em geral, o termo mutao
usado para indicar uma mudana gentica encontrada numa freqncia
baixa. Uma mutao passa a ser chamada polimorfismo quando sua
freqncia se torna maior que 0,01 (1%), ou seja, o termo polimorfismo
empregado quando se observam duas ou mais formas de um gene sem
que nenhuma delas represente mais que 99% na populao estudada.
Diferentemente da mutao, o termo polimorfismo indica um variante
normal de um gene. Esta normalidade controversa, pois alguns alelos,
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AULA
Quanto s mutaes, voc estudou nesta aula que elas podem ocorrer em tecidos
somticos e germinativos de forma espontnea ou induzida. Existem regies,
chamadas hotspots, preferencialmente mutadas no genoma dos diferentes
organismos.
Quanto ao aspecto molecular, uma mutao pode ser definida como transio,
quando h substituio de uma purina por outra ou de uma pirimidina por outra,
ou transverso, quando ocorre troca de uma purina por uma pirimidina ou vice-
versa. Alm disso, mutaes em um gene podem ou no causar alteraes na
protena codificada por este gene.
As mutaes espontneas podem ser decorrentes de erros de replicao do DNA,
originados principalmente pelos pareamentos no usuais das formas tautomricas
raras das bases nitrogenadas, ou de leses espontneas, incluindo depurinao,
desaminao e danos oxidativos.
As mutaes induzidas podem ser causadas por agentes qumicos e fsicos. Dentre os
mutagnicos qumicos, destacam-se os anlogos de bases, compostos que reagem
diretamente com o DNA e os agentes alquilantes. As radiaes ionizantes (raios-
UV) e no-ionizantes (raios e os raios X) so importantes por causarem danos
no DNA.
A maioria das leses reparada pela clula. Entretanto, a maneira com que os
sistemas de reparo atuam depende do tipo do dano ou erro. Alm disso, diferentes
organismos variam em sua capacidade de reparar DNA. Quando ocorre falha no
sistema de reparo, um nmero muito menor de leses corrigido, acarretando
um aumento no nmero de mutaes no genoma.
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EXERCCIOS
1. Uma mutao que ocorre em uma clula somtica de um indivduo pode ser
herdada por sua prole? Explique.
AUTO-AVALIAO
FIQUE ATENTO!
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