1SeguLabVirol Alu PDF

VIROLOGIA
A
BO
IS
UL
FF
IA
G
LO
RO
Aulas de Laboratório
VI
VIROLOGIA Quirina Santos-Costa

Laboratório URIA-CPM, FFUL
A Equipa
J M Azevedo-Pereira

A
Professor Auxiliar da FFUL

BO
Responsável de Projecto de Investigação HIV-2

Unidade dos Retrovírus e Infecções Associadas

Centro de Patogénese Molecular

Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa

IS
UL
Helena Rebelo de Andrade

Professora Convidada do Departamento de

FF
Microbiologia e Imunologia da FFUL

Responsável de Projecto de Investigação - Gripe

Instituto Ricardo Jorge

IA
G Quirina Santos-Costa

Professora Auxiliar da FFUL

LO
Unidade dos Retrovírus e Infecções Associadas

Centro de Patogénese Molecular

Responsável do Laboratório de Segurança Biológica Nível 3

RO
Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa

Técnicos de Laboratório FFUL

VI
Claudia Teresa Vieira

Auxiliares de Laboratório FFUL

Augusto de Jesus Kleida
Sumário
A
HISTÓRIA DA VIROLOGIA LABORATORIAL
BO
INSTALAÇÕES E FUNCIONAMENTO DO LABORATÓRIO DE VIROLOGIA
1.  Design Conceptual do Espaço
IS
2.  Aparelhos necessários
UL
3.  Consumíveis
FF
4.  Manutenção do Laboratório
5.  Protocolos e Boas Práticas
IA
SEGURANÇA NO LABORATÓRIO DE VIROLOGIA
G
1.  Níveis de Segurança Biológica
2.  Câmaras de Fluxo Laminar e Níveis de Segurança Biológica
LO
3.  Vias de Contaminação e de Exposição a Microorganismos no Laboratório

4.  Tipos de Acidentes Associados a Infecções Laboratoriais
RO
5.  O que fazer em caso de acidente

6.  Regras de Utilização do Laboratório de Virologia (URIA)
VI

A
•  1798 - Vacina anti-varíola (Jenner)
•  1884 - Vacina anti-rábica (Pasteur)
BO
•  1892 - Vírus como agentes filtráveis (Ivanovsky - vírus do mosaico do
tabaco)
IS
•  1898 - Vírus da febre aftosa
UL
•  1902 - Vírus da febre amarela
FF
•  1930 - Utilização do rato
•  1940 - Utilização do ovo embrionado
IA
•  1949 - Utilização das culturas celulares
G
•  1952 - Método das placas
•  1962 - Linhas celulares diplóides humanas
LO
•  1962 - A estrutura da partícula vírica

•  1968 - Integração da informação genética vírica no genoma celular
RO
•  1970 - A transcriptase reversa (Howard Temin e David Baltimore)

VI
•  1970-2002 - Isolamento clonagem e sequênciação de inúmeros vírus

•  1979 - OMS declara erradicada a varíola
•  1983 - Descoberta do agente causal de SIDA: VIH (Luc Montaigner)*
1ª Aula:
A
BO
3.  Consumíveis
IS
UL
FF
IA
G
LO
RO
CULTURAS CELULARES EM VIROLOGIA:

1.  Como iniciar uma cultura
VI
2.  Tripsinização

A
BO
ULIS
Contenção Microbiológica BSL 4
FF
IA
G
LO
RO
VI
Como equipar com EPI Take Home Messages QSC

iMED-FFUL
ORGANIZAÇÃO DO LABORATÓRIO DE CULTURA
CELULAR

A
• Laboratório do passado:
BO
primeiro no séc. XX, 1907,
IS
Ross Harrison, neurobiologista
UL
FF
• O Laboratório do Futuro
IA
G
LO
O Nosso Laboratório
RO
• Categoria 3, Guidelines do Advisory

Committee on Dangerous
VI
Pathogenes (ACDP, 1995)

INSTALAÇÕES E FUNCIONAMENTO DO
LABORATÓRIO DE VIROLOGIA
A
Design Conceptual do Espaço
BO
IS
UL
FF
IA
G
LO
RO
VI
Deve ser construído de raiz, com divisões para a Área

Limpa, Área de Preparação, Área de Lavagens e Armazém
Refrigerado, (indicado para 10 a 12 pessoas).
Design Conceptual do Espaço
Chão, Janelas, Bancadas ou
A
Superfícies de Trabalho
BO
IS
UL
Armários para armazenar material
FF
descartável, soluções, etc.
IA
G
LO
Serviços
a.  Garrafas de CO2
RO
b.  Água Bidestilada, ou Ultrapura

VI

APARELHOS NECESSÁRIOS

A
Câmaras de Fluxo Laminar Vertical de
BO
extracção total ou de extracção parcial
(filtros HEPA-high efficiency particle air )
IS
UL
Incubadores / Estufas (para células
FF
infectadas e não infectadas)
IA
• as condições de temperatura
• de humidade G
• a % de CO2(entre 5 e 10%)
LO
vs O2 (90-95%)
RO
VI
Microscópios

APARELHOS NECESSÁRIOS

A
Centrífugas
BO
Arcas Frigoríficas 4ºC e
IS
Arcas Congeladoras –20ºC
UL
Autoclave
FF
Contentores de Azoto
Líquido (N2)
IA
Lavatórios
G
LO
Zona de lavagens de
material
RO
Equipamento de menores dimensões

VI
• Banho de água
• Sistema de Aspiração por Vácuo
CONSUMÍVEIS

Pipetas volumétricas(2, 5, 10, 25 e 50mL)
Micropipetas (10, 20, 100, 200 e 1000uL)
A
autoclaváveis
Pipetador Automático
BO
Contentor de Plástico para o interior das Câmaras de
Fluxo
Frascos de Cultura (T25, T75, T125, Factories,
IS
Roller)
Placas de Cultura (P Petri, 4, 6, 24, 48 e 96 Cúpulas)
UL
Criotubos
Tubos de 4mL
Tubos Falcon15 e 50mL
FF
Câmara de Contagem de Células (Hematímetro de
Neubauer)
Lamelas
IA
Pontas amarelas
Pontas Azuis G
Eppendorf
Luvas
LO
Máscaras
Botas de Protecção para os pés
Óculos
RO
Batas
EtOH diluído a 70º.
Água Destilada e Bidestilada Estéril
Baldes ou Contentores para lixo contaminado
VI
e não contaminado

MANUTENÇÃO DO LABORATÓRIO

Pessoal Especializado
a. de limpeza
A
b. manutenção dos aparelhos
c. técnicos de laboratório
BO
Diariamente:
•
Temperatura de estufas (a temperatura da estufa deve ser confirmada com um
termómetro de referência -calibrador) e banhos

Níveis de CO2 e de O2, de modo a que os valores sejam mantidos. Se necessário
IS
•
mudar as bilhas e fazer de imediato a encomenda para o fornecedor.
UL
•
Nível dos banhos de água
•
Esvaziar os contentores de pipetas e de material contaminado e não contaminado
•
Verificar o nível de hipoclorito de sódio nos sistema de vácuo
FF
•
Verificar os stocks de material descartável, soluções, etc.
•
Limpar as superfícies de trabalho

IA
Semanalmente:
•
Controlo microbiológico das CFL
•
Mudar a água dos banhos G
•
Repor o nível de água dentro das estufas
•
Verificar os stocks de material no armazém
LO
•
Esvaziar o jarro do sistema de vácuo
•
Repor o nível de N2 nos contentores

RO
Mensalmente:
•
Limpar o sistema de bidestilação e desinfectar
•
Descongelar as arcas (se necessário)

Calibrar os instrumentos
VI
•
•
Limpar as estufas, centrífugas, etc
•
Inspeccionar as Câmaras de Fluxo Laminar (atenção aos filtros HEPA)


PROTOCOLOS E BOAS PRÁTICAS

Devem ser elaborados pelos Chefes de Laboratório,
A
BO
afixados em local visível e
entregues a cada um dos utilizadores,
IS
fazendo-se cumprir as suas regras escrupulosamente!
UL
FF
IA
G
LO
RO
VI

1ª Aula:
A
BO
3.  Consumíveis
IS
UL
FF
IA
G
LO
RO
CULTURAS CELULARES EM VIROLOGIA:

1.  Como iniciar uma cultura
VI
2.  Tripsinização

MEDIDAS DE CONTENÇÃO INDIVIDUAL

E NO LABORATÓRIO
RISCO E BIOSSEGURANÇA

A
BO
A Biossegurança é um conjunto de ações voltadas para: prevenção,
LIS
minimização e eliminação de riscos para a saúde, ajuda na proteção do
U
FF
meio ambiente contra resíduos e na conscientização do profissional da
IA
saúde. Existem 4 níveis.
G
LO
RO
VI
O Risco é a probabilidade ou ameaça de lesão, perda ou algum conjunto
de ocorrências “negativas” de origem externa ou vulnerabilidade intrínseca
do indivíduo, que poderão ser evitadas com uma acção de boas prátcas e
prudência. Existem 4 classes.
QSC
iMED-FFUL

E NO LABORATÓRIO
CLASSES DE RISCO
A
Classe de Risco 1: o risco individual e para comunidade é baixo, são agentes
BO
biológicos, que têm probabilidade nula ou baixa de provocar infecções no homem ou
LIS
em animais sadios e de risco potencial mínimo para o profissional do laboratório e
U
FF
para o ambiente. Exemplo: Lactobacillus..

IA

G
LO
Classe de Risco 2: o risco individual é moderado e para comunidade é limitado.
RO
Aplica-se a agentes biológicos que provocam infecções no homem ou nos animais,
VI
cujo risco de propagação na comunidade e de disseminação no meio ambiente é
limitado, não constituindo em sério risco a quem os manipula em condições de
contenção, pois existem medidas terapêuticas e profiláticas eficientes. Exemplo:
Toxoplasma spp.

!
QSC
iMED-FFUL

E NO LABORATÓRIO
CLASSES DE RISCO
Classe de Risco 3: o risco individual é alto e para comunidade é limitado. Aplica-se a
A
BO
agentes biológicos que provocam infecções, graves ou letais, no homem e nos animais
LIS
e representam um sério risco a quem os manipulam. Representam risco se
U
FF
disseminados na comunidade e no meio ambiente, podendo se propagar de indivíduo
IA
para indivíduo, mas existem medidas de tratamento e prevenção. Exemplo: Bacillus
G
LO
anthracis.

!
RO
VI
Classe de Risco 4: o risco individual para a comunidade é elevado. Aplica-se a
agentes biológicos de fácil propagação, altamente patogênicos para o homem, animais
e meio ambiente, representando grande risco a quem os manipula, com grande
poder de transmissibilidade via aerossol ou com riscos de transmissão desconhecido,
não existindo medidas profiláticas ou terapêuticas. Exemplo: Vírus Ebola.

QSC
iMED-FFUL
SEGURANÇA BIOLóGICA NO LABORATÓRIO DE
VIROLOGIA
A
BO
Contenção microbiológica:
Visa reduzir ou eliminar a exposição do microbiologista a agentes potencialmente
IS
patogénicos presentes nas amostras e culturas que necessita de manipular.
UL
-  Informação
FF
-  Treino e Boas Práticas
-  Responsabilidade
IA
-  Equipamento G
-  Barreiras primárias:
-  Bata, luvas, máscara, óculos de protecção, etc.
LO
Perigo Biológico
-  Câmaras de fluxo (classe I, II ou III)
-  Barreiras secundárias:
RO
-  Design do Laboratório com localização e infra-estruturas adequadas

-  Acesso restrito
VI
-  Autoclave
-  Lavatório

NíVEIS DE SEGURANÇA BIOLóGICA
A
Risco para o Risco para a
BO
Nível Transmissão Exemplos
operador comunidade
IS
1 - Nulo Nulo B. subtilis
UL
FF
Percutânea
Hepatite B
2 Mucosas Moderado Moderado
IA
HIV
Ingestão G
2+ M. tuberculosis
LO
3 Elevado Moderado
aerossóis HIV concentrado
RO
Vírus Ebola e
4 3 Muito elevado Muito elevado
Marburg
VI


E NO LABORATÓRIO
A
BO
ULIS
FF
IA
G
LO
RO
VI
QSC
iMED-FFUL
NíVEIS DE SEGURANÇA BIOLóGICA
NSB Agentes Práticas Equipamento de segurança Instalações

(Barreiras primárias) (barreiras secundárias)
Que se desconheça
A
Práticas de Microbiologia gerais Nenhum requerido
causarem doença Banco com regulação de
1 altura
de forma consistente
BO
em adultos saudáveis
Associados com doença

NBS-1 mais: Barreiras 1ªS = NBS Classe I ou II ou
no Homem, NBS-1 mais:
outros dispositivos físicos usados para
Perigo= lesão percutânea,
IS
Acesso limitado, todas as manipulações de agentes que
2 ingestão, exposição a
Sinalização de perigo biológico, causem salpicos ou aerossóis de
Autoclave disponível
membrana mucosa
UL
Precauções c/objectos cortantes, materiais infecciosos;
Manual de biosegurança que Protecção: batas de laboratório, luvas,
defina politicas de protecção da face, sempre que
descontaminação de qualquer necessário
FF
material necessário ou
vigilância médica
Barreiras 1ªS = NBS Classe I ou II ou NBS-2 mais:
IA
Agentes indígenas ou NBS-2 mais: outros dispositivos físicos usados para
exóticos potencialmente
todas as manipulações abertas de Separação física dos
transmissíveis por Acesso controlado,
G agentes que causem salpicos ou corredores de acesso;
3 aerossóis; a doença pode Descontaminação de todo o lixo,
aerossóis de materiais infecciosos; Dupla porta de acesso que se
ter consequências sérias Descontaminação do vestuário Protecção: vestuário de protecção à feche automaticamente
ou letais do laboratório antes de ser
bata de laboratório, luvas, Exaustão de ar que não
LO
lavado
protecção respiratória, sempre que recircule
Amostra reduzida ao mínimo
necessário Pressão negativa no laboratório
RO
Agentes perigosos / NBS-3 mais: NBS-3 mais:

exóticos que apresentem Barreiras 1ªS = todos os procedimentos
na NBS Classe III ou Classe I ou II em
risco elevado de causar Trocar de vestuário antes de Edifício separado ou isolado;
conjunto com fato completo, com
4 morte, devido a infecções entrar, Sistemas de fornecimento de
fornecimento de ar e pressão positiva
laboratoriais transmitidas Chuveiro à saída, ar, exaustão, vácuo e de
VI
por aerossóis; ou agentes Descontaminação de todo o descontaminação

aparentados com risco material à saída da instalação especializados
de transmissão Outros equipamentos como
desconhecido autoclave com 2 portas,
portas de acesso com chaves,
sistemas de comunicação, etc.
Câmaras de Fluxo Laminar e Níveis de Segurança Biológica
Tipo Velocidade de Perfil do fluxo do ar Radionucleótidos/ Níveis de Protecção do
Face (lfpm) químicos tóxicos biosegurança produto
A
BO
Classe I 75 Entrada pela frente; parte de
Não 2,3 Não
trás e de cima por filtros HEPA
IS
Classe II,
UL
75 70% recirculado por HEPA;
Tipo A Não 2,3 Sim
exaustão por HEPA
(baixos níveis/volatilização)
FF
Tipo B1 100 30% recirculado por HEPA;
Sim 2,3 Sim
IA
exaustão por HEPA e conducta
G
LO
Tipo B2 100 Não há recirculação;
Sim 2,3 Sim
total exaustão por HEPA e
conducta
RO
Tipo B3 100 Igual a IIA, mas com pressão

Sim 2,3 Sim
negativa na sala e exaustão
de ar pela conducta
VI
Classe III NA O ar fornecido entra e sai

Sim 3,4 Sim
através de 2 filtros HEPA

Câmara de fluxo laminar de segurança biológica, Classe I
A
BO
A-abertura frontal
IS
B-janela de guilhotina
UL
C-filtro HEPA de exaustão
D-sistema de exaustão total
FF
IA
G
LO
Ar da sala
RO
Ar potencia/
contaminado
Ar filtrado
p/ HEPA
VI
Vista lateral

Câmara de fluxo laminar de segurança biológica, Classe II, Tipo A
A
BO
IS
UL
A-abertura frontal
FF
D-sistema de exaustão total
IA
G E –Filtro HEPA adicional
Ar da sala F- ventilador
LO
Ar potencia/
contaminado
Ar filtrado
RO
p/ HEPA
70% do ar recirculado
VI
Vista
Vistalateral
lateral

Câmara de fluxo laminar de segurança biológica, Classe II, Tipo B1
A
BO
Necessário ligação ao sistema de exaustão do edifício
IS
UL
FF
A-abertura frontal
IA
G C-filtro HEPA de exaustão
D-filtro HEPA adicional
LO
Ar da sala E-pressão negativa de

RO
Ar potencia/ exaustão total

contaminado
Ar filtrado F-ventilador
p/ HEPA
G-filtro HEPA adicional
VI
Vista lateral Vista de fente para o ar fornecido
30% do ar recirculado
Câmara de fluxo laminar de segurança biológica, Classe II, Tipo B2
A
BO
IS
UL
FF
A-abertura frontal
IA
G C-filtro HEPA de exaustão
LO
E-pressão negativa de
Ar da sala
exaustão total
Ar potencia/
F-filtro visível
RO
Contaminado
Ar filtrado Nota: filtro de carbono do
p/ HEPA sistema de exaustão
VI
do edifício não visível

Vista lateral Vista de fente
VIROLOGIA
Não há recirculação do ar Quirina Santos-Costa
A
BO
ULIS
FF
IA
G
LO
RO
VI

iMED-FFUL

E NO LABORATÓRIO
LAB. DE NÍVEL DE SEGURANÇA 4

NSB Agentes Práticas Equipamento de segurança Instalações
(Barreiras primárias) (barreiras secundárias)
A
Que se desconheça Práticas de Microbiologia gerais Nenhum requerido
BO
causarem doença Banco com regulação de
1 altura
de forma consistente
em adultos saudáveis
LIS
Associados com doença
NBS-1 mais: Barreiras 1ªS = NBS Classe I ou II ou
U
no Homem, NBS-1 mais:
outros dispositivos físicos usados para
FF
Perigo= lesão percutânea,
Acesso limitado, todas as manipulações de agentes que
2 ingestão, exposição a
Sinalização de perigo biológico, causem salpicos ou aerossóis de
Autoclave disponível
membrana mucosa
IA
Precauções c/objectos cortantes, materiais infecciosos;
Manual de biosegurança que Protecção: batas de laboratório, luvas,
G
defina politicas de protecção da face, sempre que
descontaminação de qualquer necessário
LO
material necessário ou
vigilância médica
RO
Barreiras 1ªS = NBS Classe I ou II ou NBS-2 mais:
Agentes indígenas ou NBS-2 mais: outros dispositivos físicos usados para
exóticos potencialmente
VI
todas as manipulações abertas de Separação física dos
transmissíveis por Acesso controlado,
agentes que causem salpicos ou corredores de acesso;
3 aerossóis; a doença pode Descontaminação de todo o lixo,
aerossóis de materiais infecciosos; Dupla porta de acesso que se
ter consequências sérias Descontaminação do vestuário Protecção: vestuário de protecção à feche automaticamente
ou letais do laboratório antes de ser
bata de laboratório, luvas, Exaustão de ar que não
lavado
protecção respiratória, sempre que recircule
Amostra reduzida ao mínimo
necessário Pressão negativa no laboratório
Agentes perigosos / NBS-3 mais: NBS-3 mais:

exóticos que apresentem Barreiras 1ªS = todos os procedimentos
na NBS Classe III ou Classe I ou II em
risco elevado de causar Trocar de vestuário antes de Edifício separado ou isolado;
conjunto com fato completo, com
4 morte, devido a infecções entrar, Sistemas de fornecimento de
fornecimento de ar e pressão positiva
laboratoriais transmitidas Chuveiro à saída, ar, exaustão, vácuo e de
por aerossóis; ou agentes Descontaminação de todo o descontaminação
aparentados com risco material à saída da instalação especializados
de transmissão Outros equipamentos como
desconhecido autoclave com 2 portas,
portas de acesso com chaves, QSC
sistemas de comunicação, etc. iMED-FFUL
Câmara de fluxo laminar de segurança biológica, Classe III
A
BO
IS
UL
FF
A-abertura com O-ring
IA
para luvas para todo o
G braço
LO
E-autoclave com 2
aberturas ou caixa fechada
RO
Ar da sala para passar material

Ar potencia/
Contaminado Nota: pode ser instalado
VI
Ar filtrado um tanque químico por

p/ HEPA baixo da superfície de
Vista de fente trabalho com acesso
Vista lateral
pela parte superior
VIROLOGIA Não há recirculação do ar Quirina Santos-Costa
A
BO
ULIS
FF
IA
G
LO
RO
VI

iMED-FFUL

E NO LABORATÓRIO
EQUIPAMENTO PROTECÇÃO INDIVIDUAL
A
BO
LIS
Os Equipamentos de Protecção Individual (EPI) pertencem à classe
U
FF
de barreira primária de protecção individual e servem para evitar do
IA
G
contato com agentes infecciosos, substâncias irritantes e tóxicas, materiais
LO
perfurocortantes e materiais submetidos a aquecimento ou congelamento.

RO
VI
!
Ainda dentro das barreiras primárias, as câmaras de fluxo laminar vertical com filtros HPA
pertencem à classe de equipamento de protecção colectiva.

!
Como exemplo de barreira secundária: design do laboratório.
QSC
iMED-FFUL
Usar Sempre Tranquilidade
Reunir TODO o material necessário

A
Roupa autoclavável/descartável e
BO
remover TODOS os objectos pessoais

LIS
Equipar sempre com a ajuda de um(a)
U
FF
colega

IA
G
Desinfectar as mãos

LO
Confirmar a boa saúde do Técnico
RO
Superior de Saúde ( medir a temperatura)

VI
Hidratar: beber líquidos (H2O)


Colocar luvas nitrilo

Calçar botas de borracha até ao joelho
QSC
iMED-FFUL
Vestir fato completo semi-permeável por
cima das luvas e adaptar ao dedo médio

Calçar protecção para botas

A
BO
Desinfectar luvas e colocar a máscara

LIS
Colocar os óculos de proteção

U
FF
Colocar a touca
IA
G
LO
Colocar a viseira/protecção facial

Colocar o avental
RO
VI
Calçar o último para de luvas

NÃO Selar as luvas ao fato com fita
adesiva forte: pode danificar a luva...
Confirmar que está tudo confortável
CDC Expert Commentary Ebola: Donning and Doffing of Personal Protective Equipment (PPE) QSC
iMED-FFUL
EQUIPAMENTO PROTECÇÃO INDIVIDUAL:

!
REMOVER
Desinfectar as áreas expostas

Remover o avental
Remover a protecção do calçado

A
BO
Remover as luvas exteriores

LIS
Remover a viseira

U
FF
Remover a touca

IA
G
Ajudar a remover o fato como “descascar
LO
uma banana”: para fora!

Desinfectar as mãos ainda com as luvas
RO
VI
Remover as luvas internas


Remover os óculos


Em último, remover a máscara.
http://www.cdc.gov/vhf/ebola/hcp/ppe-training/index.html
QSC
iMED-FFUL
VIAS DE CONTAMINAÇÃO E EXPOSIÇÃO A
MICROORGANISMOS
Vias de contaminação:
A
•  Inalação de aerossóis
Ingestão
BO
• 
•  Contacto directo (pele e mucosas)
•  Cortes e picadas com objectos cortantes contaminados
IS
UL
Vias de exposição a microorganismos:
FF
Via Prática microbiológica
Ingestão Pipetagem com a boca.
Salpicos de material infeccioso para a boca.
IA
Colocação de objectos contaminados ou dedos na
G boca.
Consumo de alimentos no laboratório.
LO
Inoculação Acidentes com agulhas.
Cortes.
Mordeduras de insectos e arranhões.
RO
Contaminação da pele e Salpicos para os olhos, boca, e nariz.

mucosas Derrames ou salpicos em pele intacto ou lesada.
Superfícies, equipamento e material
VI
contaminados.
Inalação Aerossóis.
VIROLOGIA * Sewell, D.L., 1995; Clin. Microbiol. Reviews, 8: 389-405 Quirina Santos-Costa
TIPOS DE ACIDENTES ASSOCIADOS A INFECÇÕES
LABORATORIAIS*
A
BO
Acidentes Nº (%) de infecções
IS
Derrames e aerossóis 188 (26,7)
UL
Agulhas 177 (25,2)
FF
Objectos cortantes 112 (15,9)
IA
Mordedura/arranhão de animal ou
95 (13,5)
parasita
G
LO
Pipetagem com a boca 92 (13,1)

RO
Outros, desconhecidos 39 (5.5)
TOTAL 703
VI
* Sewell, D.L., 1995; Clin. Microbiol. Reviews, 8: 389-405

O QUE FAZER EM CASO DE ACIDENTE?
Seguir o Protocolo elaborado pelo Responsável do Laboratório,
A
tendo em conta os seguintes factores:
BO
• Patogenicidade, severidade do Agente Infeccioso (morbilidade vs mortalidade,
doença crónica)
• Via de Exposição (ingestão, inoculação, inalação, contacto com pele ou mucosas)
IS
• Estabilidade do Agente Infeccioso (formação de esporos)
UL
• Dose Infectante (a dose infectante pode variar entre uma e centenas de milhares de
unidades infectantes)
FF
• Carga Vírica (número de agentes infecciosos por unidade de volume)
• Origem da Amostra (região geográfica, hospedeiro natural)
IA
G
1.  Lavar a picada ou corte com água e sabão azul e branco
LO
2.  Salpicos para nariz, boca e pele deve ser lavado com
água corrente
RO
3.  Os olhos devem ser enxaguados com água destilada

estéril ou soro fisiológico
4.  Ir ao Hospital e receber tratamento profiláctico pós-
VI
exposição no intervalo de 1 a 2 horas

Contactar o Responsável do Laboratório
Regras de Utilização do Laboratório de Virologia (URIA)
A
1. Acesso restrito a pessoal especializado, no máximo de 1/CFL.
BO
2. Usar bata, protecção para sapatos, máscara, dois pares de luvas e
IS
óculos de protecção.
UL
FF
3. Nunca pipetar à boca, não comer, não beber ou fumar.
Não armazenar objectos na CFL que possam obstruir a entrada de ar
IA
G
4. Evitar o uso de agulhas, seringas, lâminas ou outro
LO
material cortante.
RO
5. As pipetas usadas devem ser reenchidas com lixívia até ao nível

anteriormente pipetado.
VI

6. Descontaminação de superfícies de trabalho:
A
Bom desinfectante
BO
Hipocloritos Activo em vírus
Cloros, Corrosivo para metais
Presept Inactivado rapidamente por material orgânico – preparação diária
IS
Para desinfecção: 1000ppm
UL
Para pipetas: 2500ppm
Para lixo de culturas celulares: 10.000ppm
FF
Hipocloritos + fumigação com formaldeído = produtos carcinogénicos
Fenólicos Não activo nos vírus
IA
Sudol, Permanece activo na presença de material orgânico
Hycolin G
Concentrações efectivas: etanol a 70% e isopropanol a 60-70%
Alcool Actuam por desidratação e fixação
LO
Etanol, Activos contra bactérias
isopropanol
Etanol activo para a > parte dos vírus
RO
Isopropanol não activo nos vírus
Aldeídos Irritantes pelo que o seu uso deve estar limitado

VI
Gluteraldeído, Gluteraldeído pode ser usado em aço quando os hipocloritos são corrosivos
formaldeído

7. Inactivação dos vírus:
A
Vírus da Imunodeficiência Humana
BO
• Agenes Físicos:
Calor húmido (autoclave: 20´, 121ºC)
Calor seco (estufa: 2h, 170ºC)
IS
Radiação U.V. (5x103 J/m2)
UL
• Agentes químicos: HIV-2ALi
Hipoclorito de sódio a 0,1% de cloro activo
Gluteraldeído a 2%
FF
Etanol a 70%
Formol 1/10 em água
Detergentes e solventes de lípidos
• Vírus da Hepatite B
IA
• Agenes Físicos:
G
LO
Calor húmido (autoclave: 15´, 121ºC, ou 5´a 132ºC)
Calor seco (estufa: 1h, 170ºC, ou 2h a 160ºC)
Radiação U.V. (5x103 J/m2)
RO
• Agentes químicos:
Gluteraldeído a 2%
Hipoclorito de sódio a 0,5% de cloro activo
Peróxido de hidrogénio 6-10%
VI
Formaldeído 8-12%

A
BO
Registar sempre os resultados
e marcar os reagentes, frascos, e meios de cultura com:
data, nome do operador e do produto.
IS
UL
FF
IA
G
LO
RO
VI

BIBLIOGRAFIA
http://article.wn.com/view/2014/10/21/La_espanola_con_ebola_gana_la_batalla_al_virus/

http://www.youtube.com/watch?v=2EJVdRawt5c#t=50

Ebola outbreak UK centre opens in Sierra Leone - BBC 2014

Jornal das 8 - TVI Nov 2014

A
http://www.youtube.com/watch?v=rOAdGLcjmAQ

BO
http://nr.news-republic.com/Web/ArticleWeb.aspx?regionid=3&articleid=32637012

https://www.youtube.com/watch?v=AxdlOqs2_ww

LIS
https://www.youtube.com/watch?v=WsLTYQA_v0c

http://videocast.nih.gov/Summary.asp?File=18060&bhcp=1

U
http://www.the-scientist.com//?articles.view/articleNo/41382/title/Taking-Shots-at-Ebola/

FF
http://www.portalangop.co.ao/angola/pt_pt/noticias/africa/2014/6/31/Epidemia-Ebola-esta-descontrolada-ameaca-estender-Medicos-Sem-Fronteiras,18a9be11-
ae0f-48aa-be77-8aea0205a922.html

IA
http://www.who.int/topics/haemorrhagic_fevers_viral/en/

http://ecdc.europa.eu/en/healthtopics/ebola_marburg_fevers/Pages/index.aspx

G
http://www.ebola.dgs.pt/?mnredir=1&lnc=683368347965AAAAAAAAAAAA

LO
http://www.cdc.gov/vhf/ebola/hcp/safety-training-course/index.html

http://www.dw.de/ebola-research-in-a-high-security-laboratory/av-18048105

RO
http://www.medscape.com/viewarticle/834304


VI

http://www.medscape.com/resource/ebola

http://www.cdc.gov/vhf/ebola/pdf/how-talk-children-about-ebola.pdf

http://www.cdc.gov/vhf/ebola/hcp/safety-training-course/index.html

http://www.cdc.gov/vhf/ebola/hcp/ppe-training/index.html

http://www.cdc.gov/vhf/ebola/hcp/procedures-for-ppe.html

http://lisbonphfful.wix.com/ebola-the-outbreak#!apresentao/cms3

http://lisbonphfful.wix.com/ebola-the-outbreak#!programa/c6v5

http://blogs.plos.org/dnascience/2014/11/13/mutation-counters-infection-sickle-cell-ebola/

http://www.dgs.pt/?cr=26600

http://nr.news-republic.com/Web/ArticleWeb.aspx?regionid=3&articleid=31583596

http://article.wn.com/view/2014/10/21/La_espanola_con_ebola_gana_la_batalla_al_virus/

CDC Expert Commentary Ebola: Donning and Doffing of Personal Protective Equipment (PPE)

http://www.bbc.com/news/world-africa-29919944
QSC
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VIROLOGIA

VIROLOGIA Quirina Santos-Costa

Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa

Técnicos de Laboratório FFUL

Claudia Teresa Vieira

3. Vias de Contaminação e de Exposição a Microorganismos no Laboratório

5. O que fazer em caso de acidente

VIROLOGIA Quirina Santos-Costa

• 1962 - A estrutura da partícula vírica

• 1970 - A transcriptase reversa (Howard Temin e David Baltimore)

• 1970-2002 - Isolamento clonagem e sequênciação de inúmeros vírus

CULTURAS CELULARES EM VIROLOGIA:

VIROLOGIA Quirina Santos-Costa

Como equipar com EPI Take Home Messages QSC

• Categoria 3, Guidelines do Advisory

Pathogenes (ACDP, 1995)

VIROLOGIA Quirina Santos-Costa

Deve ser construído de raiz, com divisões para a Área

b. Água Bidestilada, ou Ultrapura

VIROLOGIA Quirina Santos-Costa

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Equipamento de menores dimensões

VIROLOGIA Quirina Santos-Costa

VIROLOGIA Quirina Santos-Costa

Devem ser elaborados pelos Chefes de Laboratório,

VIROLOGIA Quirina Santos-Costa

CULTURAS CELULARES EM VIROLOGIA:

VIROLOGIA Quirina Santos-Costa

- Design do Laboratório com localização e infra-estruturas adequadas

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NSB Agentes Práticas Equipamento de segurança Instalações

Associados com doença

Barreiras 1ªS = NBS Classe I ou II ou NBS-2 mais:

Agentes perigosos / NBS-3 mais: NBS-3 mais:

por aerossóis; ou agentes Descontaminação de todo o descontaminação

Tipo B3 100 Igual a IIA, mas com pressão

Classe III NA O ar fornecido entra e sai

VIROLOGIA Quirina Santos-Costa

VIROLOGIA Quirina Santos-Costa

VIROLOGIA Quirina Santos-Costa

Ar da sala E-pressão negativa de

Ar potencia/ exaustão total

Vista lateral Vista de fente para o ar fornecido

do edifício não visível

Como equipar com EPI Take Home Messages QSC

LAB. DE NÍVEL DE SEGURANÇA 4

Agentes perigosos / NBS-3 mais: NBS-3 mais:

Ar da sala para passar material

Ar filtrado um tanque químico por

Como equipar com EPI Take Home Messages QSC

EQUIPAMENTO PROTECÇÃO INDIVIDUAL

Hidratar: beber líquidos (H2O)

Calçar o último para de luvas

Remover as luvas internas

Contaminação da pele e Salpicos para os olhos, boca, e nariz.

Pipetagem com a boca 92 (13,1)

Outros, desconhecidos 39 (5.5)

* Sewell, D.L., 1995; Clin. Microbiol. Reviews, 8: 389-405

3. Os olhos devem ser enxaguados com água destilada

exposição no intervalo de 1 a 2 horas

5. As pipetas usadas devem ser reenchidas com lixívia até ao nível

VIROLOGIA Quirina Santos-Costa

3.  Vias de Contaminação e de Exposição a Microorganismos no Laboratório

5.  O que fazer em caso de acidente

•  1962 - A estrutura da partícula vírica

•  1970 - A transcriptase reversa (Howard Temin e David Baltimore)

•  1970-2002 - Isolamento clonagem e sequênciação de inúmeros vírus

• Categoria 3, Guidelines do Advisory

b.  Água Bidestilada, ou Ultrapura

-  Design do Laboratório com localização e infra-estruturas adequadas

3.  Os olhos devem ser enxaguados com água destilada