revisão ISSN 2238-1589

CRITÉRIOS PARA ESCOLHA DA AMOSTRA EM EXPERIMENTOS COM

RATOS WISTAR
Adriano Bento-Santos1, José Antonio dos Santos1, Aline Isabel da Silva1, Lígia Cristina Monteiro Galindo Novaes1,
Kelli Nogueira Ferraz-Pereira1, Sandra Lopes de Souza1, Carol Virgínia Góis Leandro1, Raul Manhães-de-Castro1

1 Departamento de Nutrição – Universidade O presente estudo tem como objetivo contribuir para delimitação, por meio de achados na

RESUMO
Federal de Pernambuco, Brazil literatura, de critérios de inclusão e de exclusão para escolha de ratos albinos Wistar em
pesquisas experimentais. Foi realizada uma busca literária nas bases de dados eletrônicas
Autor para correspondência: PUBMED, SCIELO e MEDLINE a partir do ano de 1950 até o ano de 2011. Na coleta biblio-
Adriano Bento-Santos
pregnancy; rats; Wistar; gestation; suckling;
E-mail: absbio@yahoo.com.br
lactation. Como critérios de inclusão, utilizaram-se citações que abordassem alguns dos
Recebido para publicação: 11/11/2011
Aceito para publicação: 02/01/2012 -

tamanho real da amostra e controle do ambiente experimental. Foram excluídos do estudo

short communications full text. Trata-se de um tema

Palavras-chave: Prenhez. Ratos Wistar. Lactação.

clareza, os critérios de inclusão e exclusão utiliza­

1 Introdução
O uso de modelos de experimentação animal
tem contribuído para o entendimento de muitos
aspectos referentes à genética, às doenças e às
interações medicamentosas de diversos fármacos1.
compõem a amostra. Desta forma, o presente estudo
tenta contribuir para delimitação, por meio de acha­
dos na literatura, de critérios de inclusão e exclusão
de ratos albinos Wistar para estudos experimentais.

utilizados ao longo dos anos em diversos estudos

2 materiais e métodos
­
zação de ratos ao invés de animais com maior por­
te, como ovelhas e macacos, é devida aos curtos ­
ciclos reprodutivos desses roedores1. Além disso,

de ratos ocorrem de forma similar em humanos2. foram consultadas na forma de artigos publicados
Uma variedade de estudos com ratos de labora­ em revistas indexadas na base de dados do SCIE­
3-13. No ­
DLINE a partir do ano de 1950 até o ano de 2011.

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012 121

CRITÉRIOS PARA ESCOLHA DA AMOSTRA EM EXPERIMENTOS COM RATOS WISTAR
Na seleção dos artigos foram utilizadas as se­
Wistar
­ 220 gramas16
Foram excluídos do estudo short communications
e trabalhos não disponíveis no formato full text.
3 critérios para escolha das genitoras
­
sideração critérios como idade, peso, utilização de
ratas primíparas para o acasalamento e o controle
genético dos genitores.
A maioria dos artigos encontrados não revela
com precisão a idade reprodutiva das ratas Wistar.
No entanto, consideramos esta variável funda­
mental devido ao início e duração do período em
Regina14, a idade média para o início da puberdade
abertura do canal vaginal e o primeiro proestro. Já
1 em relação ao crescimento do tecido adiposo na
primeiras células nucleadas no esfregaço vaginal
são observadas entre o 35o e o 40o
reprodutivo das ratas compreende, aproximada­
mente, a idade entre 100 e 300 dias de vida14, é
­
15.
A explicação para se adotar esta postura não foi
dada em nenhum estudo, contudo, parece estar
relacionada à maturação do sistema reprodutor
122 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012
e no peso ao nascer da prole é o peso corporal das
genitoras. O peso corporal de ratas está diretamente
correlacionado com sua idade14. Na literatura, é
muito comum utilizar ratas com aproximadamente
14.
gramas ao nascimento17
normalmente encontrada para o peso ao nascer da
prole de ratos Wistar é em torno de 6 gramas3,14.
16 é me­
submetidas a 40% de restrição alimentar17. Desta
o acasalamento pode induzir baixo peso ao nascer
crescimento intrauterino, e ser confundido com os
efeitos de outro estímulo como uma desnutrição
normalmente aumenta com a paridade da genitora,
­
terno entre a primeira e a segunda prenhez de ove­
lhas e ratos da linhagem Sprague-Dawley .
Wistar,
bem como a primeira prenhez, pode desempenhar
Sprague-Dawley,
da prole pode estar relacionada com a idade e a
paridade materna9,11
experimentais com ratos .
rata a determinada manipulação (principalmente
19,20. Para
 Adriano Bento-Santos, José Antonio dos Santos, Aline Isabel da Silva, Lígia Cristina Monteiro Galindo Novaes, Kelli Nogueira Ferraz-Pereira,
14
utilizamos animais irmãos para compor um grupo
experimental e o grupo controle, sendo composto
por animais de ninhadas diferentes, podemos não
ser mais ou menos responsivos a determinada
manipulação19. As principais formas de eliminar
ninhada por casal reprodutor21.
4 critérios para escolha daa prole
nutri­
cionais3,6e comportamentais24,25.
A utilização
da prole pode ser realizada havendo ou não a
manipulação da rata genitora, porém são diversas
as variáveis a serem analisadas para escolha e
proporção entre sexos nas ninhadas.
Wistar
em idade reprodutiva constituem ninhadas de 12 a
141. Cripps et al.26 ­ haver, até o 3º DPN, a regulação da produção de
das de gestantes submetidas à dieta hipoproteica
ou normoproteica apresentaram, em média, 13
provavelmente, apresentarão o peso ao nascer fora
da faixa normalmente encontrada (em torno de 6
comportamentais, como observado na atividade
motora no início da vida14,27. Quando se pretende
obter ninhadas nascidas no mesmo dia é possível
mapear o ciclo estral da rata e escolher o período
estro para o acasalamento . Também é interes­
RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012 123
Sandra Lopes de Souza, Carol Virgínia Góis Leandro, Raul Manhães-de-Castro
.
­
células presentes no epitélio vaginal nas diversas
fases do ciclo estral . Encontram-se também no
Logo, a escolha29.
entre um ou outro método de monitoramento do
poderão ser manipulados a partir do primeiro ciclo
­
26. Os ratos
Wistar geralmente nascem entre 13 e 15 horas do
21º dia de gestação ou entre 9 e 11 horas do 22º dia
de gestação1. A determinação do 1º DPN é impor­
­
22,23,
ao 14º dia de vida pela nutriz30. Como a nutriz, ao
lamber a cria, capta fatores sensoriais provenientes
­
­ nipulação dos ratos recém-nascidos pode interferir
rata30. A importância do período compreendido
entre o 1º e o 3º DPN parece induzir alteração no
ou aumentadas a partir do 3º dia de vida, sugerindo
31.
Desta forma, não é ocasional o fato de muitos
trabalhos referirem a primeira manipulação das ni­
nhadas pela primeira vez no intervalo entre o 1º e o
­
ra manipulação da prole ocorre no 1º 9,25,32,33 ou no
2º DPN34,35
um relatou pesagem da prole no dia zero13 ou no
terceiro DPN36. Entretanto, independentemente
do dia de realização da primeira manipulação dos
fármacos, – deve ser mínimo o contato do mani­
feedback
diz respeito à orientação para as tetas.
CRITÉRIOS PARA ESCOLHA DA AMOSTRA EM EXPERIMENTOS COM RATOS WISTAR
ao longo do período de lactação é outro ponto
alimentares utiliza oito ratos wistar por ninhada,
podendo esta conter animais apenas do sexo
masculino ou ser constituída de forma mista, com
35,36. No entanto, há trabalhos
por ninhada35, 37
9,11. Quando se
o catch up crescimento e induzir obesidade em
ratos wistar podem ser utilizadas ninhadas redu­
. Ao
contrário, existe trabalho enfatizando a restrição
34
por ninhada estará diretamente relacionado à ne­
5 DETERMINAÇÃO DA UNIDADE EXPERIMENTAL (UE)
E DO TAMANHO REAL DA AMOSTRA
A UE é representada por um indivíduo ou por
deve ser feita de acordo com a metodologia apli­
cada no estudo e os dados registrados das UEs
37. Logo,
resultados e levar a conclusões incorretas10,12,40,41.
efeitos de manipulações no período perinatal sobre a
prole . Em espécies geralmente uníparas,
entanto, em espécies multíparas, como o rato, a UE
124 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012
A determinação da UE e do “n” depende dos
­
mentos, como nos dois exemplos a seguir. Em um
e/ou a ninhada inteira formam um grupo de trata­
mento, a UE é a ninhada e não cada descendente
grupo10 ­
­ as não são manipuladas durante a gestação e/ou
recebem tratamentos distintos (ex: doses de drogas
cada ninhada terá representante em todos os gru­
avaliados por grupo representa o “n”37.
­
correta da UE, em estudos com manipulação pré-
natal em espécies multíparas, é o “effect of litter”
10. Esse fenômeno ocorre em
ninhada como unidades amostrais independentes,
levando ao falso aumento do “n”10,40,41. O “effect of
litter
animais possuírem mesma carga genética e terem
compartilhado mesmo ambiente intrauterino10,40,41.
de uma mesma ninhada, os efeitos do tratamento
podem ser confundidos com efeitos de ninhada10.
­ Alguns métodos são recomendados para as
effect of litter”.
Pode-se realizar uma randomização em cada ni­
nhada para a escolha e utilização dos dados obtidos
de apenas um animal por ninhada, de tal forma
­
das. Outra estratégia é utilizar alguns ou todos os
dos dados para representar cada ninhada, criando
10. 10,45,46.
 Adriano Bento-Santos, José Antonio dos Santos, Aline Isabel da Silva, Lígia Cristina Monteiro Galindo Novaes, Kelli Nogueira Ferraz-Pereira,
realizado randomização, para formação dos grupos
experimentais3,9-11,13 ­
naram, a maioria não explica como foi realizada
esta randomização9,11,13. Contudo, a escolha dos
­ animais devem consistir em minimizar ao extremo
10,37. Outra
ratas para compor dois grupos (exemplo: controle
10 pedaços de papel contendo o nome controle e
é sacudido. Retira-se um pedaço de papel, pelo
indicado37. Este processo seria repetido com todos
forem retirados devem voltar para o recipiente
todos os animais tenham a mesma probabilidade
de serem escolhidos. Quando o neonato for a UE
separadamente dentro de cada ninhada, através de
uma das formas descritas anteriormente37.
6 controle do ambiente
A manutenção de animais em biotério, não
apenas de ratos Wistar, implica em trabalhar em
ambientes controlados e com animais padroniza­
­
bilidade e a possibilidade de fazer generalizações
47-50. No
­
terismo nos levaram a resumir alguns cuidados
importantes na prática experimental. O cuidado
47-50. Desta
nos experimentos e para proporcionar o bem-estar
RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012 125
Sandra Lopes de Souza, Carol Virgínia Góis Leandro, Raul Manhães-de-Castro
­
47-50.
­
50,51.
Todos os cuidados na criação desses
50,51.
Por isso, as variáveis ambientais são importantes
vez mais considerada. Então, fatores como tempe­
e ruídos devem ser controlados ao máximo50,51.
Em se tratando do controle da temperatura,
­
As mudanças nesses padrões levam a respostas
­
52. A maioria dos animais
diante do calor53,54. A temperatura e a umidade
­
tante o seu monitoramento diário. Portanto, para
animais devem ser mantidos nesta zona de conforto
53,54.
Os animais estão constantemente perdendo
calor, umidade e eliminando CO2, além de outras
biotérios devem ter um mecanismo de renovação
amônia, decorrente da degradação de excretas ni­
na gaiola e no biotério. O aumento exagerado do
nível de amônia pode estar associado, por exem­
plo, com o aumento da umidade decorrente do
vazamento de bebedouros.
­
ciam o metabolismo e o ciclo estral dos ratos,
CRITÉRIOS PARA ESCOLHA DA AMOSTRA EM EXPERIMENTOS COM RATOS WISTAR

promover períodos alternados e regulares de luz e como estes são manuseados. É importante o uso

o seu ciclo circadiano55. Além disso, os animais alterar os odores característicos do animal. Esses
albinos são mais sensíveis à luz. Então a intensi­
dade luminosa não pode ultrapassar 600 Lux na ­
sala a um metro do chão e no interior da gaiola
não deve exceder 60 Lux56,57. pelo tato59,60.

do animal. Os roedores possuem capacidade de

7 considerações finais
ouvidos humanos. A audição do rato varia de 500

nos biotérios deve ser mínimo e os horários de

entrada devem ser padronizados. A alta energia bom andamento de trabalhos experimentais. Em
sonora pode resultar em alterações auditivas e função de sua importância, eles devem ser levados
não auditivas nos ratos. Alterações não auditivas em consideração desde antes do início dos expe­

fertilidade reduzida. Algumas destas foram

correlacionadas com elevações de corticosteroides.
ratas para acasalamento às condições ambientais do
biotério podem alterar o delineamento experimen­
­ tal e constituir-se em variável passível de alterar
mente na resposta ao estresse . ­
­ térios e a sua padronização são um ponto essencial

CRITERIA FOR SELECTION OF THE SAMPLE IN EXPERIMENTS

WITH WISTAR RATS
ABSTRACT

exclusion criteria to choose Wistar

research in the PUBMED, SCIELO and MEDLINE databases (1950 to 2011). For database
Wistar

-
short communications and not available full text manuscript.

Keywords:

126 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012

 Adriano Bento-Santos, José Antonio dos Santos, Aline Isabel da Silva, Lígia Cristina Monteiro Galindo Novaes, Kelli Nogueira Ferraz-Pereira,
Nutrition on the Development and
159:503-9. No abstract available.
attenuate the effects of a maternal
malnutrition programs sustained
alterations in nitric oxide released
consumption. J Strength Cond Res.
6. Lopes de Souza S, Orozco-
protein restriction reduces the
Souza SL, et al. Short- and long-term
effects of a neonatal low-protein
R, Canon F. Effect of a low-protein
RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012 127
Sandra Lopes de Souza, Carol Virgínia Góis Leandro, Raul Manhães-de-Castro
muscle mechanical properties of
Effect of repeated reproductive
status, lactational performance and
litter growth in ad libitum-fed and
treatment effects in multiparous
species. Neurotoxicol Teratol. 1992
1959-66.
Litter effects on caries in rats and
implications for experimental design.
alimentar de ratos adultos submetidos
sofreram desnutrição durante a
low maternal protein diet during
glucose metabolism and serum leptin
Effect of strenous maternal exercise
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RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012 129

 INSTRUÇÕES AOS AUTORES
Normas para publicação

Indicativos para Submissão

-
- Paginação

Artigo RESBCAL Folha de Rosto (Identificação)

Carta de apresentação

Carta de autorização
-

Carta dos autores

-

Considerações éticas Estrutura do Texto

Introdução:
-
Material e Métodos:

- -

Resultados: -

Discussão:

Conclusão:

Resumo e Palavras-Chave
originais

revisão

Ponto de vista -

-
 Exemplos:

Tabelas
Exemplos:

Artigo de Periódico
-

Obs:

Unidades
-
Livro
Mesmo Autor da Obra no Todo
Abreviaturas e Siglas CT laboratory
animals

Autor distinto da obra no todo

Agradecimentos ver Folha de Rosto

Citações no Texto Dissertações/Teses

-

Dissertações/Teses on-line
Exemplo: -
-
1 hamsters -
Rattus
norvegicus

Exemplo:
2 Trabalho Apresentado em Evento

Referências (Vancouver)
- -

- Trabalho de evento publicado em periódico

Braz Oral Res

Impressão e acabamento