 Metabolismo do DNA- 08/03/12

Objetivos

1- Citar a nomenclatura dos genes e proteínas nas bactérias; OK

2- Citar as regras fundamentais que governam a replicação do DNA;OK
3- Citar a classificação das enzimas que degradam o DNA e suas características; OK
4- Explicar como ocorre a reação de formação da ligação fosfodiéster pela DNA
polimerase; OK
5- Citar os requisitos para a polimerização do DNA; OK
6- Citar as enzimas que participam na replicação e suas respectivas funções. OK

1- Terminologia
- Os genes das bactérias são nomeados por ____________ e em _______, que refletem
sua função aparente.
Ex: dna- gene que afeta o processo de replicação do DNA
uvr- gene de resistência aos efeitos lesivos da radiação UV
- Quando vários genes afetam a mesma função (processo), as letras A,B,C e assim por
diante são adicionadas, usualmente refletindo sua ordem de descoberta.
Ex: rec A, rec B- atuam na recombinação
- Quando se trata de proteínas, elas retêm o nome de seu gene de origem. A 1° letra é
maiúscula e o nome não é escrito em itálico.
Ex: dna A- proteína Dna A
dna B- proteína Dna B

2- Replicação do DNA
- A replicação do DNA é governada por um conjunto de regras fundamentais:
a) É______________: As fitas da molécula parental original servem como molde para
origem de uma nova fita, formando assim duas moléculas filhas, sendo compostas por
uma fita velha e uma fita nova.
b) A replicação do DNA começa em uma seqüência denominada origem e prossegue
_______________.Durante a replicação do DNA, as fitas parentais são desenroladas e
replicadas simultaneamente.
c) A síntese do DNA prossegue na direção ____________e é _____________
- ____________da extremidade 3’ é o local onde o DNA é alongado, onde os são
adicionados.
-_______________ou Contínua: Sua síntese ocorre na direção 5’>3’ e prossegue na
mesma direção do movimento da forquilha de replicação. A Fita Líder é sintetizada de
forma contínua.
- Forquilha: Local onde as fitas de DNA estão sendo desenroladas e as fitas separadas
são rapidamente replicadas.
- _________________ ou Atrasada: Sua síntese também ocorre na direção 5’>3’, porém
ela prossegue opostamente a direção do movimento da forquilha de replicação. Essa fita
é sintetizada em pequenos fragmentos denominados __________________________.
- A síntese das fitas ocorre de maneira coordenada.

3- Degradação do DNA
- A degradação do DNA é catalisada por enzimas denominadas
_____________________, as quais pertencem a duas classe:
 -_______________: Degradam o DNA removendo nucleotídeos a partir de uma das
extremidades da molécula. Podem atuar tanto no sentido 5’>3’ quanto no sentido 3’>5’.
- 5’>3’: Removem nucleotídeos a partir da extremidade 5’.
- 3’>5’: Removem nucleotídeos a partir da extremidade 3’.
-_________________: Degradam o DNA em qualquer região da molécula, reduzindo a
fita em fragmentos menores.
- Endonucleases de restrição: São endonucleases que clivam seqüências nucleotídicas
específicas (Qualquer local da fita ou molécula de DNA).

4- Síntese do DNA
- É catalisada pela enzima__________________. Essa enzima atua agregando (fazendo
a ligação) nucleotídeos à extremidade 3’ da espinha dorsal ou arcabouço.
- A__________________ da E.coli é a principal enzima da replicação.

4.1 - Reação para o alongamento

- O grupo OH 3’ da extremidade 3’ se liga ao grupamento fosfato α de um
desoxinucleosídeo 5’-trifosfato que chega. A reação ocorre entre o grupo
________________________________e o grupo _______________ do
desoxinucleosídeo 5’-trifosfato, formando uma ligação ___________________.
- Reação Geral:
(dNMP)n + dNTP  ( dNMP)n+1 + PPi

dNMP: desoxinucleosídeo 5’- monofosfato

dNTP: desoxinucleosídeo 5’- trifosfato

4.2 - Polimerização do DNA

- Requisitos para a polimerização do DNA
a) A DNA polimerase requer___________________, que é guiada segundo as regras de
pareamento de bases de Watson e Crick.

b) A DNA polimerase requer um iniciador (uma fita pré-existente), que é um segmento

da fita nova, complementar a fita molde, com o grupo OH 3’ livre, ao qual os
nucleotídeos podem ser adicionados.
- Os iniciadores são____________________, que são sintetizados por enzimas
chamadas _______________________.
- Os iniciadores são retirados e a correção é feita pela ______________________, que
adiciona as “bases” que faltam.
- A DNA polimerase pode se dissociar da fita molde ou mover-se ao longo da fita para
adicionar nucleotídeos.
- A dissociação ou ressociação da DNA polimerase pode limitar a velocidade da
polimerização. Quando a DNA polimerase permanece associada ao molde, o processo é
mais rápido.
- O número médio de nucleotídeos adicionados a fita crescente de DNA antes que a
DNA polimerase se dissocie da fita molde é definido como
_____________________(alta ou baixa).
c) Fidelidade: A replicação do DNA possui um grau de fidelidade bem alto. Três
processos garantem esse grau de fidelidade:
 1- _________________________________segundo as regras de pareamento de Watson
e Crick (A-T/C-G).
2- ____________________________, da grande maioria das DNAs polimerases.
3-_________________________________.

Objetivos (continuação) - 14/03/12

7- Citar e explicar as etapas da replicação;

8- Citar as diferenças entre a síntese da Fita Líder e da Fita Atrasada.

4.3 – Enzimas e Fatores protéicos

Proteínas na forquilha de replicação de E.coli

-_____________ Liga-se às fitas simples do DNA.

-Proteína Dna B (Helicase)
_________________________________________________________
-________________________ Sintetiza os RNA iniciadores; constituinte do
iniciossomo.
- DNA polimerase III________________________________
- ___________________Preenchimento dos vazios; excisão (remoção) dos
iniciadores (oligonucleotídeos de RNA são removidos e desoxinucleotídeos são
adicionados).
- DNA ligase___________________________________
- _________________________Superespiralamento, alivia o estresse topológico
causado pela ação da helicase. Alivia a torção da fita produzida pelo desenrolamento do
DNA.

Proteínas requeridas para iniciar a replicação na origem em E.coli

- Proteína Dna A
__________________________________________________________
-______________________ Desenrola o DNA; constituinte do iniciossomo.
- Proteína Dna C______________________________________
-_________ Proteína semelhante à histona; proteína que encurva o DNA;
____________________.
- _____________________________ Sintetiza os RNA iniciadores.
- SSB_____________________________________.
- ___________________ Facilita a atividade da Dna A
- DNA girase (DNA topoisomerase II)________________________
4.4 – Etapas da Replicação
- Pode ser dividida em 3 etapas: Iniciação, Alongamento e Terminação.

Iniciação
- A origem da replicação em E.coli é denominada__________; é constituída de
_________. Essa região apresenta 2 seqüências de repetições curtas (3 repetições de
13pb e 4 repetições de 9pb).
-Pelo menos 9 enzimas participam dessa etapa, sendo que a enzima chave para o início
da replicação é _______________________que reconhece a origem e abre a dupla fita.
- Um complexo formado por cerca de 20 moléculas de Dna A se liga
às______________________, reconhece e desnatura sucessivamente as 3 repetições de
13pb. Esse processo requer____________________.
- Em seguida, com o auxilio da Proteína ___________ e com gasto de ATP, a Protéina
Dna B (Helicase) vai se ligar a fita dupla separada. A Helicase é composta por dois
Hexamêros, cada um se liga a uma fita, e vão assim desenrolando o
DNA_____________________, formando duas forquilhas de replicação.
- As proteínas __________se ligam as fitas simples recém separadas, estabilizando-as e
impedindo assim a renaturação da molécula de DNA.
- A enzima ________________alivia o estresse topológico causado pela ação da
helicase. Ela alivia a torção da fita produzida pelo Desenrolamento do DNA.

Alongamento
- Essa etapa da replicação do DNA inclui dos processos: a síntese da Fita Líder e a
síntese da Fita Atrasada.
- Síntese da Fita Líder: Para a síntese dessa fita, a_________________ requer um
iniciador (seqüência curta de RNA- 10 à 60 nucleotídeos), que é sintetizado pela
___________________________.
- Após a síntese do iniciador, os desoxirribonucleotídeos são adicionados pela
________________ no sentido ___________
- A síntese dessa fita prossegue à medida que o DNA vai sendo desenrolado pela
Helicase, na direção 5’>3’ até que encontre um sinal de término.

- Síntese da Fita Atrasada: Primeiramente o RNA iniciador é sintetizado pela Iniciase.

- A síntese dessa fita ocorre em curtos fragmentos chamados de
_______________________
- Para que a síntese ocorra no sentido 5’>3’, uma alça é formada,
pela__________________________, na fita molde. Feito isso, os
desoxirribonucleotídeos são adicionados pela DNA polimerase III no sentido 5’>3’. A
síntese do fragmento continua até que este se estenda até o RNA iniciador do fragmento
de Okazaki previamente sintetizado.
- Os espaços entre os fragmentos são preenchidos pela
_________________________(possui atividade exonucleosídica 5’>3’, remove
nucleotídeos a partir da extremidade 5’), que remove o RNA iniciador e adiciona os
___________________no lugar.
- A DNA ligase tem a função de_______________________. Ela catalisa a formação
de uma ligação fosfodiéster entre a extremidade OH 3’ de um fragmento de Okazaki
com o grupo 5’-fosfato de outro fragmento.

Terminação
- A terminação ocorre quando a forquilha de replicação encontra uma região terminal, a
qual contém cópias múltiplas de uma seqüência de 20pb ________________
 - Essas seqüências TER são arranjadas em forma de armadilha, onde a forquilha de
replicação pode entrar mas não pode sair.
- As seqüências TER funcionam como sítio de ligação para a proteína____________,
formando o _________________. Quando a forquilha de replicação encontra esse
complexo a replicação termina.

 Metabolismo do RNA (Transcrição)- 15/03/12

Objetivos

1- Citar os componentes necessários para síntese do RNA;

2- Explicar como ocorre o alongamento de uma fita de RNA pela RNA polimerase;
3- Explicar como ocorre a seleção de nucleotídeos a serem inseridos na molécula (fita) de
RNA;
4- Citar as características da RNA polimerase bacteriana;
5- Citar as características da região promotora da E.coli

1- Introdução

- Transcrição: Expressão da informação existente no gene e que envolve a produção ou

síntese de uma molécula de ________a partir de uma fita molde de ________
- Todas as moléculas de RNA, exceto as do genoma de alguns vírus, são derivadas da
informação permanente armazenada no DNA.
- Durante a Transcrição: um sistema enzimático converte a informação genética contida
em um segmento de DNA em uma fita de RNA, a qual possui uma seqüência de bases
complementar a uma das fitas do DNA (fita molde).
- Existem 3 tipos principais de RNA
RNAm: RNA mensageiro
RNAt: RNA trasnportador ou de transferência
RNAr: RNA ribossômico

- O RNA mensageiro _____________________ de uma ou mais cadeias polipeptídicas

que são especificadas por um gene ou um conjunto de genes.
- O RNA transportador ______________(informação) codificada no RNAm e
transporta o ________ apropriado para a cadeia polipeptídica que está sendo
sintetizada.
- O RNA ribossômico é constituinte do ribossomo, local onde ocorre a
___________________
- A Transcrição é mais____________ que a replicação. Na replicação todo o
cromossomo é copiado, enquanto que na transcrição apenas genes ou grupos de genes
são transcritos em um determinado momento. Somente os produtos gênicos necessários
para aquele momento serão produzidos (poupar energia).

2- Síntese de RNA

2.1- Componentes
A síntese do RNA é catalisada pela RNA polimerase, que requer:
- Os quatro ________________________(ATP,GTP,CTP,UTP), os quais são precursores
dos ribonucleotídeos.
- Uma fita molde de _____________
- ___________, cofator enzimático

- A fita de DNA que atua como molde para a síntese de RNA é chamada de fita
_____________ e a fita que é complementar a fita molde é denominada como
fita___________________ OU __________________.
- A diferença entre o transcrito (RNA) e a fita codificadora é a presença da uracila ao invés
da timina.
Ex: (5’)CGCTATAGCGTTT(3’)Fita não molde
(3’)GCGATATCGCAAA(5’)Fita molde
_______________________Transcrito de RNA

2.2- Reação

- A _____________ catalisa o alongamento da fita de RNA pela adição de

_______________na direção __________. A adição é feita através da ligação do
grupo_____________’ da extremidade 3’ de um nucleotídeo com o
grupo_____________________________-, formando uma ligação _______________.

(NMP)n + NTP  (NMP)n+1 + PPi

NMP ribonucleosídeo 5’- monofosfato

NTP ribonucleosídeo 5’-trifosfato

- A seleção de bases a serem adicionadas na fita de RNA é feita segundo as regras de

pareamento de Watson e Crick (A-U/C-G).

2.3 – Características da RNA polimerase

a) A RNA polimerase não requer ______________________

b) A iniciação ocorre quando a RNA polimerase se liga a regiões (seqüências) específicas
do DNA chamadas de______________.
c) Requer um _______________________________.
d) A _________________ de E.coli é uma molécula grande e complexa composta por ___
subunidades básicas (α,α, β,β’,ω), e mais uma 6° subunidade_________.
e) A RNA polimerase é uma ___________________ (______________) que possui uma
massa molecular de 390000.
f) A subunidade _________liga-se transitoriamente ao__________, apenas quando este se
liga a região promotora, pois essa subunidade atua somente
no__________________________, não participando do____________________.
g) A RNA polimerase não possui atividade______________________. Portanto um erro
pode ser cometido a cada 104-105 ribonucleotídeos adicionados ao RNA.
OBS: Um erro cometido na síntese do RNA é menos danoso que um erro contido em uma
molécula de DNA, pois a informação contida no DNA é permanente, já os RNAs são
sintetizados em muitas cópias e podem ser substituídos.

2.4 – Etapas

Iniciação

- A _______________ se liga às seqüências _______________ do_____. Essas vão

direcionar a transcrição (expressão) de segmentos adjacentes no DNA.
- Na E.coli a ligação da RNA polimerase ocorre numa região que se estende desde
__________antes do sítio de inicio da transcrição até ________ além deste sítio.
- Por convenção, aos pares de bases do DNA que correspondem ao início de uma molécula
de RNA são dados números positivos. E aos pares de bases que antecedem o sítio do início
da transcrição são dados números negativos. Portanto a região promotora em E.coli
compreende a posição de -70 até a de +30.
- As seqüências dos promotores variam de um promotor para outro, porém foram
encontradas semelhanças nas posições -10 e -35. Assim certos nucleotídeos comuns em
uma determinada posição, formam uma seqüência consenso.
- Exemplos
Elemento UP (entre -40 e -60 da região promotora): 3° fator de reconhecimento e ocorre
nos genes altamente expressos.
Região promotora: Elem UP -35 -10
Seqüência consenso: TTGACA TATAAT

- Fases da Iniciação: Fase de ligação e Fase de iniciação

a) Fase de ligação:
- A _____________se liga a região ____________formando um____________, onde as
fitas do DNA não estão separadas (A molécula está intacta).
- Em seguida ocorre a formação do____________, onde as fitas do DNA
estão______________________.
- Para que a transcrição comece a _________________desenrola cerca de 17pb, formando
uma “bolha da transcrição”.

b) Fase de iniciação:
- Envolve a iniciação propriamente dita e a______________________.
- Logo que __________________à nova fita de RNA, a subunidade ∑ se dissocia do
núcleo básico da RNA polimerase. A _____________se desliga da região promotora e a
fase de alongamento da fita tem inicio.

Objetivos- 21/03/12
1- Citar as fases da Transcrição em E.coli;
2- Citar as classes de sinais de terminação da síntese de RNA em E.coli;
3- Citar os tipos de RNA polimerase eucarióticas e as suas funções;
4- Citar as proteínas requeridas para a transcrição nos promotores da RNA
polimerase eucariótica e suas funções
5- Citar as etapas do processo de transcrição em eucariotos.

Alongamento

- Durante essa fase, a extremidade crescente da nova fita de RNA faz

________________(de acordo com as regras de pareamento de bases de
Watson-Crick) temporariamente com a__________, formando um
_______________constituído por_____.
- O alongamento prossegue até que a ____________________encontre um
sinal de terminação.

Terminação

- Existem seqüências específicas que sinalizam a terminação da síntese de

RNA.
- Em E.coli há duas classes de “terminações" (sinais de terminação): as
terminações ______________ (___________) e as
terminações__________________________________.
- As terminações ______________________possuem duas características:
a) Região terminal cujo transcrito de RNA possui uma seqüências
autocomplementares, ricas em _____e_____, que permitem a formação de
uma estrutura chamada_________”, que está em torno de
__________________ antes da extremidade da fita de RNA. Essa
seqüência é seguida de uma seqüência curta.
b) Seqüência curta(__________), presente na fita molde de DNA,
de_________________, que serão transcritos em ___________na fita de
RNA.
- Esses sinais estão presentes no ____________.
- Quando a _____________encontra essas terminações ela faz uma pausa.
A formação do grampo vai ___________importantes entre DNA e RNA,
facilitando a liberação do RNA.
- As terminações __________da ____________possuem as seguintes
características:
a) Não possuem _____________na fita molde de DNA, mas possuem uma
seqüência curta que permite a formação de uma estrutura de “_______” no
transcrito de RNA.
- A proteína ρ se liga a sítios específicos no RNA que está sendo
sintetizado, movendo-se na direção ________até encontrar a __________,
que está parada no sinal de terminação (grampo). A proteína ρ facilita a
liberação da fita de RNA sintetizada.

3- Transcrição em Eucariotos
3.1 RNA polimerase

Em eucariotos há três tipos de RNA polimerase:

a) RNA polimerase I: Responsável pela síntese de apenas um tipo de
RNA, o transcrito de___________, que é precursor dos rRNAs 18S,
5.8S e 28S.
b) RNA polimerase II: Síntese dos ________e alguns ______
especializados. Reconhece muitos promotores, os quais possuem
características de seqüência em comum, seqüência
________(_________________) próximo a posição -____ e uma
sequencia ___ (_________) próxima ao sítio de início em __.
c) RNA polimerase III: Síntese dos______,_______ 5S e alguns
________(pequenos) especializados.

 Proteínas requeridas para a Transcrição nos promotores da RNA

polimerase II eucariótica

Iniciação:
- RNA polimerase II: ______________________
- TBP (proteína de ligação a seqüência TATA):
________________________________________
-__________: Estabiliza a ligação do TFII B e TBP ao promotor
- TFII B: ______________________________________________
-_______: Interage com proteínas reguladoras positivas e negativas
- TFII E: ________________________________________________
-_____: Liga-se fortemente a RNA polimerase II; liga-se ao TFII B e
previne a ligação da RNA polimerase a seqüências de DNA não
específicas.
- TFII H:______________________________________________.

Alongamento:
- ________
- ________
- ________
- ________

3.2 Etapas da Transcrição

A Transcrição é composta de 4 etapas:

- Montagem da RNA polimerase e fatores de transcrição em um promotor
- Iniciação
- Alongamento
- Terminação
 a) Montagem
- A Transcrição em eucariotos é mais complexa do que em bactérias.
Além da RNA polimerase, são necessários vários fatores protéicos para
se ligarem ao promotor.
- A formação do complexo fechado começa com a ligação da _____ á
seqüência_________. Em seguida a proteína ______ também se liga ao
fator de Transcrição _________ (que também se liga ao DNA). Esse
complexo ________é ligado ao complexo_________________. A
______ direciona a RNA polimerase ao seu promotor, porque ela
interage com o fator de Transcrição ______e impede que a RNA
__________ se ligue a sítios não específicos do DNA. Posteriormente,
se ligam os fatores de transcrição ______e______, formando assim o
complexo fechado. A _______tem função_______, ou seja, desenrola o
DNA (fita molde) na região promotora, próximos aos sítios de
transcrição, formando o complexo aberto.

b) Iniciação
- Além da atividade helicase a ________tem atividade ________
(transfere grupamentos fosfato), então ela promove a fosforilação de
vários lugares do domínio carboxiterminal da___________. Essa
fosforilação causa uma mudança conformacional do complexo de
transcrição, iniciando assim a Transcrição.
- Depois que 60-70 nucleotídeos são adicionados á fita de RNA que está
sendo sintetizada ocorre a liberação dos fatores _______e depois do
fator _________e a __________entra na fase de alongamento do RNA,
ou Transcrição do RNA.

c) Alongamento
- O Fator _________ permanece associado à RNA polimerase durante
toda a fase de alongamento. No alongamento, a atividade da RNA
polimerase vai ser aumentada por fatores de alongamento (fatores de
alongamento).

d) Terminação
- Quando o alongamento da nova fita de RNA for completado, o
trasncrito é liberado, a ___________ é liberada da fita molde, é
___________e está pronta para iniciar um novo ciclo (é reciclada).

 Metabolismo de proteínas (Tradução)- 22/03/12

Objetivos
1- Citar as características dos ribossomos bacterianos e eucarióticos;
2- Citar as principais características do RNA de Transferência;
3- Citar as características do código genético;
4- Citar os códons que tem a função de iniciar e finalizar a síntese da
cadeia polipeptídica;
5- Citar e explicar as quatro relações de pareamento códon/anticódon
chamadas de “hipótese da oscilação”.

1- Definição
- A Tradução é a síntese de proteínas guiada pelo mRNA, que codifica a
seqüência da cadeia polipeptídica.

2- Ribossomos
- Ribossomo bacteriano (70S): dividido em duas subunidades de
tamanhos diferentes e coeficientes de sedimentação também distintos.
- 50S 55 rRNA (120 nucleotídeos)
23S rRNA (3200 nucleotídeos)
34 proteínas

- 30S 16S rRNA (1540 nucleotídeos)

21 proteínas

- Ribossomo eucarioto (80S): Também é formado por duas subunidades:

- 60S 5S rRNA (120 nucleotídeos)
28S rRNA (4700 nucleotídeos)
5,8S rRNA (160 nucleotídeos)
49 proteínas

- 40S 18S rRNA (1900 nucleotídeos)

33 proteínas

3- Estrutura dos tRNAs

- O tRNa consiste de uma fita simples, enrolada em uma estrutura
tridimensional bem definida, possuindo entre 73-93 resíduos de
nucleotídeos. Possui uma massa molecular de 24.000-31000 Da.
 Características estruturais comuns (aos tRNAs):
- 8 ou mais resíduos de nucleotídeos, possuem bases ou açucares
modificados;
- A maioria dos tRNAs possui resíduos de guanilato na extremidade 5’;
- Todos tRNAs tem a seqüência trinucleotídica CCA na extremidade 3’;
- Quando desenhado em 2 dimensões, o padrão das pontes de
hidrogênio, ou seja, o padrão de pareamento de bases no tRNA forma
uma estrutura em forma de trevo, com 4 braços principais. Em 3
dimensões o tRNAs possuem o formato de um L torcido.
- Os tRNAs contém 4 braços principais:
 a) O braço do aa, que transporta o aa específico
b) O braço do anticódon: seqüência de 3 bases que pareia com o códon
c) O braço DHU: contém a diidrouridina que é um nucleotídeo não usual;
atua no enovelamento do DNA;
d) O braço TψC (pseudouridina ψ): tem a mesma função do braço DHU.
- O 5° braço (braço extra) está presente nos tRNAs maiores.

4- Características do Código Genético

a) Códon: seqüência de 3 nucleotídeos que codifica um aa específico.
b) A tradução das trincas nucleotídicas é feita de maneira sucessiva,
não sobreposta, ou seja, um códon começa onde termina o outro.
c) O 1° códon específico na seqüência estabelece uma janela de
leitura: um novo códon a cada 3 resíduos de nucleotídeos.
d) Não há pontuação entre os códons para os sucessivos resíduos de
aa
e) Seqüência de aa de uma proteína é determinada por uma seqüência
linear de códons contíguos.
f) Vários códons desempenham funções especiais:
- Códon AUG: sinaliza o início das cadeias polipeptídicas em todas
as células, além de codificar resíduos de metionina (Met) nas
posições internas dos polipeptídeos.
- Códons UAA, UAG e UGA: Eles são códons de terminação, códons
de parada, ou códons sem sentido. Não codificam nenhum aa
conhecido, apenas sinalizam o final da síntese da cadeia
polipeptídica.
g) Código degenerado: um aa pode ser especificado (codificado) por
mais de um códon, mas cada códon especifica apenas um aa. A
degeneração do códon não é uniforme, ou seja, cada aa possui um
número correspondente de códons.
h) Vários códons diferentes especificam um aa, geralmente a diferença
entre eles está na 3° base (extremidade 3’).
i) Código genético é quase universal: códons idênticos para
determinados organismos, com exceção de bactérias e os seres
eucarióticos unicelulares.

5- Hipótese de Oscilação (Crick)- relação de pareamento

códon/anticódon
- Os tRNAs pareiam suas bases (sendo que essa seqüência de bases
dos tRNAs são chamadas de anticódon) com uma seqüência de 3 bases
do mRNA (códon).
- Crick propôs um conjunto de 4 relações de pareamento (hipótese de
oscilação):
a) As duas primeiras bases de um códon (mRNA) se ligam fortemente
(segundo as regras de pareamento de bases de Watson-Crick) as bases
 do anticódon (tRNA), dando a maior parte da especificidade da
codificação. Se as 3 bases fizessem um pareamento forte, a dissociação
do anticódon seria difícil, levando a uma menor velocidade no processo.
b) A 1° base do anticódon determina o número de códons reconhecidos
pelo tRNA:
- Quando a 1° base do anticódon for A ou C, o tRNA reconhece apenas
um códon;
- Se a 1° base do anticódon for U ou G, o reconhecimento é menos
específico, o tRNA reconhece dois códons;
- Se a 1° base do anticódon for a Inosina (I), o tRNA reconhece 3
códons.
c) Quando um aa for especificado por vários códons diferentes
(ex:leucina), os códons que diferem em uma das duas primeiras bases
requerem tRNAs diferentes.
d) Para traduzir os 61 códons são requeridos um mínimo de 32 tRNAs.

Objetivos- 28/03/12
1- Citar os principais componentes da síntese de proteínas;
2- Explicar o processo de ativação dos aa;
3- Explicar os processos de iniciação, alongamento e terminação da
síntese de proteínas.

6- Etapas da Síntese Protéica

- Componentes requeridos para as 5 principais etapas na síntese de

proteínas em E.coli;
Ativação de aa: 20aa; 20 aminoacil-tRNA sintetase; 20 ou + tRNAs;
ATP; Mg+2.
Iniciação: mRNA; N-formilmetionil-tRNA; códon de iniciação no
mRNA; subunidade ribossômica 30S e 50S; Fatores de Iniciação (FI 1,
FI2, FI3), GTP, Mg+2.
Alongamento: Ribossomo 70S funcional (Complexo de Iniciação),
Aminoacil-tRNA especificados pelos códons, Fatores de
Alongamento (EF-Tu, EF-Ts, EF-G), GTP, Mg2+.
Terminação e Liberação: Códon de terminação no mRNA; Fatores
de Liberação de polipeptídeos (RF1, RF2, RF3); ATP.
Enovelamento e Processamento pós-traducional: Enzima; co-
fatores e outros componentes específicos para a remoção de
resíduos iniciais e seqüências sinalizadoras; processamento
proteolítico; modificação dos resíduos terminais e ligação dos grupos
fosfato, metila, carboxila, carboidrato ou prostético.
6.1 Ativação dos aa

- Durante a síntese de proteínas, todos os 20 aa precisam ser

ativados: Esterificação dos aa aos tRNAs correspondentes. É um
processo que ocorre no citosol e é catalizado pela enzima aminoacil-
tRNAsintetase.
- Para o processo de ativação são necessários: 20 aa, 20 ou mais
tRNAs, enzima aminoacil-tRNAsintetase, Mg+2 como cofator
enzimático, ATP.

1°Etapa: O aa é ligado ao grupo fosforil do ATP, formando o 5’

aminoacil-adenilato como intermediário.

aa+ATP  5’ aminoacil-adenilato + PPi

2°Etapa: Nessa etapa o grupo aminoacil é transferido do 5’-

aminoacil-adenilato, ligado a enzima, ao seu RNA de Transferência
correspondente.

5’ aminoacil-adenilato+tRNAaminoacil-tRNA+ adenilato+ PPi

- A aminoacil-tRNAsintetase pode ser de duas classes e o curso da

reação vai depender da classe da enzima. Se a enzima pertencer à
classe I, o grupo aminonoacil é transferido primeiramente para o OH
2’ da extremidade 3’ do tRNA. Posteriormente esse grupo aminoacil
é transferido para o OH 3’ por uma reação de transesterificação. Se a
enzima pertencer a classe II, o grupo aminoacil é transferido
diretamente para o grupo OH 3’ do tRNA.

Reação Geral (2 etapas):

aa+tRNA+ATP+aminoacil-tRNAsintetaseaminoacil-
tRNA+AMP+PPi

- Para cada aa ativado são gastos 2Pi.

6.2 Iniciação

- A síntese das cadeias polipeptídicas começa pela extremidade

amino-terminal e prossegue passo a passo pela adição de aa até a
extremidade carboxi-terminal.
- O códon AUG sinaliza a iniciação da síntese da cadeia polipeptídica
e codifica a metionina (do resíduo amino terminal, códon de
iniciação, e também a metionina das posições internas da cadeia
polipeptídica).
- Todos os organismos apresentam 2 tipos de tRNA para codificar a
metionina, apesar de existir apenas um códon.O tRNA Fmet é utilizado
quando o códon AUG for o códon de iniciação, ou seja, aquele que
codifica a metionina do resíduo amino terminal. O tRNA met é utilizado
quando o códon AUG codifica a metionina nas posições internas da
cadeia polipeptídica.
- Em E.coli, quando o códon AUG for o de iniciação, o resíduo de aa
incorporado a cadeia polipeptídica é a N-formil metionina (aa
iniciador), que chega ao ribossomo na forma de N-formil-metionina-
tRNAFMet. Esse aa é formado em duas reações sucessivas:

Metionina+tRNAFmet+ATP metionil-tRNAFmet+AMP+PPi
Enzima: metionil+RNA-sintetase

N10-formiltetraidrofolato+metionil-tRNAFmetN-formilmet-tRNAFmet (aa
ativado) +tetraidrofolato
Enzima: transformilase

- A ativação dos aa ocorre no citosol, que é o local da síntese de

proteínas.
- A adição do grupo N-formil ao grupo amino da Metionina impede
que a N-formil-metionina seja incorporada nas posições internas da
cadeia polipeptídica, além de permitir a ligação da NFMet-tRNA Fmet
na posição correta no ribossomo (no sítio de iniciação específico no
ribossomo).
- As células eucarióticas iniciam seus polipeptídeos por Metionina,
doada pela Metionil-tRNA

- A iniciação propriamente dita (3 etapas):

1°Etapa
- Subunidade 30S se liga a fatores de iniciação I e III (o fator de
iniciação III impede que as subunidades 30S e 50S se combinem
prematuramente). O mRNA liga-se a subunidade 30S. O códon de
iniciação AUG é posicionado corretamente na subunidade 30S por
uma seqüência existente no mRNA, chamada de seqüência
SHINE-DALGARNO. Essa seqüência é um sinal de iniciação que
contém cerca de 4-9 resíduos purínicos, localizados de 8-13 pb do
lado 5’ do códon AUG (de iniciação). Essa seqüência pareia suas
bases com uma seqüência complementar no rRNA, que é rica em
pirimidina e que está localizada próximo à extremidade 3’ do rRNA
16S.
 - O que distingue o códon AUG, de iniciação, do códon AUG que
codifica a metionina das posições internas da cadeia polipeptídica
é a proximidade da seqüência AUG com a seqüência SHINE-
DALGARNO.
- O códon de iniciação é reconhecido pela proximidade com a
seqüência SHINE-DALGARNO.
- O Ribossomo possui 3 sítios onde os aminoacil-tRNA podem se
ligar:
a) sítio P ou peptidil
b) sítio A ou aminoacil
OBS: Ambas as subunidades 30S e 50S contribuem para a forma e
características desses dois sítios (A e P)
c) sítio E ou saída: somente a subunidade 50S contribui.

- O códon de iniciação AUG é posicionado na subunidade 30S no

sítio P.
- O único aminoacil que se liga primeiramente ao sítio P é o aa
iniciador N-formilmet-tRNA, todos os outros aminoacil-tRNA, no
alongamento, se ligam primeiramente ao sítio A e depois ao sítio P
e E.
- Sítio E: sítio do qual o tRNA é descarregado (deacilado) e
liberado para o citosol.

2°Etapa
- Nessa etapa, o complexo da subunidade 30S, IF-3 e mRNA
formam um complexo ainda maior ligando-se ao IF-2, o qual está
ligado ao GTP e também a N-formilmetionina-tRNA FMet. Ocorre
pareamento códon/anticódon.

3°Etapa
- Nessa etapa, todo o complexo da 2° etapa vai se unir à
subunidade 50S. Simultaneamente ocorre a hidrólise do
GTPGDP+PPi e os fatores de iniciação 1,2 e 3 são liberados do
ribossomo para o citosol, formando um ribossomo funcional 70S
chamado complexo de iniciação.

6.3 Alongamento
-Componentes necessários para o alongamento: Ribossomo 70S
(Complexo de Etapas iniciação), aminoacil-tRNAs específicos pelos
códons, Fatores de Alongamento (EF-Tu, EF-Ts, EF-G).
- O número de vezes que o alongamento se repete, correspondem
ao número de aa a serem adicionados.
 1°Etapa
- Ligação do aminoacil-tRNA apropriado ao complexo formado pelo
EF-Tu-GTP. Esse complexo resultante se liga ao sítio aminoacil,
simultaneamente o GTP é hidrolisado e o complexo Tu-GDP é
liberado do ribossomo. OBS: O complexo Tu-GTP é regenerado
pelo fator Ts.

2°Etapa
- Um aa é unido a outro através da ligação peptídica;
- Como ocorre a ligação: o N-formil-metionil é transferido do tRNA
para o grupo amino do segundo aa, formando uma ligação
peptídica (tem-se um dipeptídeo ligado ao tRNA do 2°aa)
- A reação de transferência é catalisada pela peptidil transferase,
que é um RNA ribossômico 23S, com atividade catalítica
(ribozima).

3°Etapa
- Translocação: movimentação do ribossomo em uma distância de
1 códon em direção à extremidade 3’ do mRNA.
- O dipeptil tRNA que estava no sítio aminoacil se desloca para o
sítio peptidil e o tRNA que estava no sítio peptidil (de onde saiu o
aa transferido) vai para sítio E (exit) e posteriormente esse tRNA
deacilado (descarregado) vai ser liberado para o citosol. O sítio
aminoacil fica então disponível para receber outro aa (o
alongamento começa de novo).
- Para essa etapa de translocação é necessário o fator EF-G
também chamado de translocase. Para ocorrer o movimento é
necessário além do fator, o GTP (GTPGDP+PPi).
- Então para cada aa adicionado na cadeia polipeptídica são
necessários 2GTPs (1 na 1° Etapa e 1 na 3° Etapa).
- O alongamento prossegue até que o ribossomo encontre um sinal
de terminação.

6.4 Terminação
- Códons (sinais) de terminação: UAA, UAG, UGA: quando esses
códons ocupam o sítio aminoacil do ribossomo (quando o ribossomo
encontra um sinal de terminação), os fatores de liberação RF 1, RF2 e
RF3 contribuem para:
a) A hidrólise da ligação do peptidil-tRNA terminal
b) Liberação do polipeptídeo livre e do último tRNA do sítio peptidil.
c) Dissociação do ribossomo 70S nas subunidades 30S e 50S.

Objetivos- 29/03/12
1- Citar exemplos de modificações pós traducionais;
2- Citar a ação dos inibidores da síntese protéica.

6.5.Terminação
- Durante ou após a síntese, a cadeia polipeptídica vai ser
processada e enovelada para adquirir sua conformação
biologicamente ativa.
- Vai assumindo progressivamente a conformação nativa; são
formadas: Ligações de Hidrogênio, Interações de Van der Waals,
Interações Hidrofóbicas, Interações Iônicas.
- A maioria das proteínas só vão se tornar ativas passando por
reações de processamento chamadas modificações pós-
traducionais. Enquanto que outras se tornam ativas apenas
passando por modificações em sua conformação, causadas pelas
interações citadas acima.
 Modificações pós-traducionais;
Modificações no grupo amino e carboxiterminais;
- Remoção enzimática: grupo formila, resíduo amino terminal de Met,
resíduos amino terminais adicionais (e alguns casos
carboxiterminal).
- N-acetilação do grupo amino do resíduo amino terminal50% das
proteínas eucarióticas.

Perda de seqüências sinalizadoras;

- Remoção das seqüências sinalizadoras (função dessa seqüência:
direciona a proteína ao seu destino final na célula; depois ela
removida por ação de peptidases específicas).
Modificações de aa individuais
- Fosforilação enzimática de grupos OH de serina, tirosina e
treonina. Ex:caseínagrupos fosfoserina que ligam o Ca2+.
- Carboxilação de resíduos de Glutamatoprotrombina (resíduos ɣ
carboxiglutamato em sua região amino terminal).
- Metilação de resíduos de lisina: resíduos monometil e dimetillisina
(proteínas musculares; Citocromo C).
Ligações de cadeias laterais de carboidratos
- Podem ocorrer em resíduos de Asparagina formando
oligossacarídeos N-ligados e em resíduos de Serina ou Treonina
formando oligossacarídeos O-ligados. Ex: Proteoglicanos
lubrificadores (membranas mucosas).
 Adição de grupos prostéticos
Ex: biotina (é o grupo prostético da acetil CoA carboxilase)
Grupo hemeCitocromo c
Processamento proteolítico
 - Algumas proteínas são sintetizadas em formas maiores, inativas.
São processadas em formas menores, ativas.
Ex: insulina, proteases (tripsina e quimiotripsina).
Formação das ligações cruzadas de dissulfeto
- Intra ou inter cadeias entre resíduos de cisteína
- Ligações cruzadas protegem a conformação nativa da proteína
contra a desnaturação.

7- Inibidores da Síntese de Proteínas (antimicrobianos)

Estreptomicina (Aminoglicosídeos): Inibe o início e causa a leitura
errada do mRNA (procariotos).
Tetraciclina: Liga-se à subunidade 30S e inibe a ligação de aminoacil-
tRNAs (procariotos).
Cloranfenicol: Inibe a atividade da peptidil-transferase da subunidade
ribossômica 50S (procariotos).
Ciclo-Hexamida: Inibe a atividade da peptidil-transferase da
subunidade ribossômica 60S (eucariotos).
Eritromicina: Liga-se a subunidade 50S e inibe a translocação
(procariotos)
Puromicina: Causa o termino prematuro da cadeia, agindo como
análogo da aminoacil-tRNA (procariotos e eucariotos).

Olá professora!
Estou enviando o valor das densidades:

fibra de Soja: 19,51/ 25 = 0,7804 g/cm

Fibra de Cana: 3,19/ 25 = 7,8369

Fibra de Coco (em pó) : 25/4,74 = 5,2742

Fibra de Coco: 25/1,54 = 16,2337