HbA1c Turbiquest
: 385
Instruções de Uso
Finalidade . Sistema para determinação quantitativa da Hemoglobina
A1c (HbA1c) em amostras de sangue total e papa de hemácias.
[Somente para uso diagnóstico in vitro.]
Princípio . Todas as hemoglobinas presentes na amostra se ligam à
superfície das partículas de látex (Reagente 1). A adição de anticorpo
monoclonal de camundongo anti-HbA1c humana (Reagente 2) promove
a formação do complexo látex-HbA1c-anticorpo anti-HbA1c. Um
segundo anticorpo presente no Reagente 2 (anticorpo policlonal anti-IgG
de camundongo) produz aglutinação deste complexo. A intensidade da
aglutinação, medida em absorbância, é proporcional à quantidade de
HbA1c presente na amostra. O valor de HbA1c é obtido através de curva
de calibração.
Características do sistema . O produto HbA1c Turbiquest
Labtest é um método imunoturbidimétrico facilmente aplicável a
analisadores automáticos bioquímicos capazes de medir absorbâncias
entre 600 e 660 nm. A medição é realizada diretamente, sem a
necessidade da determinação da hemoglobina total utilizando somente
um canal do analisador automático. Além disso, os resultados são
obtidos através de curva de calibração, dispensando a realização de
cálculos adicionais. Todas estas características agregam maior
praticidade e segurança para o usuário, além de propiciar maior agilidade
e rapidez ao processo analítico.
O método é certificado pelo National Glycohemoglobin Standardization
Program (NGSP) para TFB, Inc., com rastreabilidade ao método de
cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) utilizado no estudo
3
Diabetes Control and Complications Trial (DCCT) .
Metodologia . Imunoturbidimetria.
Reagentes
1. ( - Reagente 1 - Armazenar entre 2 - 8 C.
Pronto para uso. Contém partículas de poliestireno e azida sódica
£0,05%.
2. ) - Reagente 2 - Armazenar entre 2 - 8 C.
Pronto para uso. Contém tampão 0,3% pH 6,0, anticorpo monoclonal de
camundongo anti-HbA1c humana, anticorpo policlonal anti-IgG de
camundongo e preservativo.
3. * - Reagente Hemolisante - Armazenar entre 2 - 8 ºC.
Pronto para uso. Contém azida sódica £0,05%.
Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições
indicadas, são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo.
Durante o manuseio, os reagentes estão sujeitos a contaminações de
natureza química e microbiana que podem provocar redução da
estabilidade.
01 Português - Ref.: 385
Ref.
MS 10009010311
Precauções e cuidados especiais
Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na
manipulação dos reagentes, os quais não devem ser pipetados com a
boca.
O reagente 1 e o reagente Hemolisante contêm azida sódica que é tóxica.
Deve-se tomar cuidado para evitar a ingestão e no caso de contato com
os olhos, deve-se lavar imediatamente com grande quantidade de água e
procurar auxílio médico.
A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulações de
chumbo e cobre. Portanto, utilizar grandes volumes de água para
descartar o reagente.
Material necessário e não fornecido
1. Analisador capaz de medir com exatidão a absorbância entre 600 e
660 nm.
2. Calibradores Calibra HbA1c Turbiquest - Ref. 386 e controles Glicotrol
- Ref. 303 da Labtest.
Amostra
Deve ser criado um Procedimento Operacional Padrão (POP) que
estabeleça procedimentos adequados para colheita, preparação e
armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros devidos à amostra
podem ser muito maiores que os erros ocorridos durante o procedimento
analítico.
Papa de hemácia ou sangue total podem ser utilizados. O sangue deve ser
colhido com EDTA ou fluoreto de sódio. O analito é estável por 7 dias entre
2 - 8 ºC e por pelo menos 1 ano em temperatura igual ou inferior a 70 ºC
negativos.
Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue
não transmitem infecções, todas elas devem ser consideradas como
potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las deve-se seguir as
normas estabelecidas para biossegurança.
Para descartar os reagentes e o material biológico, sugerimos aplicar as
normas locais, estaduais ou federais de proteção ambiental.
Interferências
Concentrações de bilirrubina conjugada até 30 mg/dL; bilirrubina não-
conjugada até 30 mg/dL; ácido ascórbico até 50 mg/dL não produzem
interferências significativas.
Resultados inconsistentes podem ser obtidos em pacientes que
apresentam as seguintes condições: uso de opiáceos, envenenamento
por chumbo, alcoolismo e ingestão de grandes quantidades de ácido
acetilsalicílico.
A fração pré-HbA1c (fração lábil ou instável) não é detectada e, portanto,
não interfere na determinação imunométrica da HbA1c.
Valores elevados de hemoglobina fetal produzem interferência negativa.
Hemoglobina A2, hemoglobina C e hemoglobina S podem aumentar a
inexatidão dos resultados.
Procedimento
Ver observações 1 e 2.
Estão disponíveis aplicações para sistemas automáticos.
Preparo da amostra . Preparar um hemolisado para cada amostra.
Papa de hemácia
1. Centrifugar o sangue total por 2 minutos a 2000 rpm.
2. Em um tubo pipetar 0,5 mL do Reagente Hemolisante e 0,005 mL
de papa de hemácia;
3. Agitar fortemente por 10 segundos e esperar 5 minutos ou até que
a lise completa seja evidente (ausência de turvação);
4. O hemolisado pode ser armazenado até 10 dias entre 2 - 8 ºC.
Sangue total
1. Em um tubo pipetar 0,5 mL do Reagente Hemolisante e 0,010 mL
da amostra de sangue total homogeneizada;
2. Agitar fortemente por 10 segundos e esperar 5 minutos ou até que
a lise completa seja evidente (ausência de turvação);
**Os volumes de amostra e reagentes podem ser modificados
proporcionalmente sem prejuízo para o desempenho do teste e o
procedimento de cálculos se mantém inalterado. Em caso de redução
dos volumes é fundamental que se observe o volume mínimo necessário
para a leitura fotométrica.
Calibração
O método é certificado pelo National Glycohemoglobin Standardization
Program (NGSP) para TFB, Inc., com rastreabilidade ao método de
cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) utilizado no estudo
3
Diabetes Control and Complications Trial (DCCT) .
Calibração de 5 pontos
Utilizar o produto Calibra HbA1c Turbiquest - Ref. 386.
Ponto 0: utilizar o calibrador 0.
Ponto 1 ao 4: utilizar os calibradores 1, 2, 3 e 4.
Intervalo de calibrações:
Quando o controle interno da qualidade indicar;
Quando utilizar novo lote de reagentes.
Intervalo operacional . O intervalo operacional de medição é de
3,0% a 13,0%. Resultado superior a 13,0% pode ser reportado como
maior que 13,0% ou diluir a amostra 1:3 utilizando como diluente outra
amostra com concentração de HbA1c menor que 6% (50 mL do
hemolisado da amostra com concentração elevada e 100 mL do
hemolisado da amostra diluente).
Determinar a concentração da HbA1c na mistura e calcular a
concentração de HbA1c da amostra elevada conforme abaixo:
HbA1c (%) = [HbA1c(%) na mistura X n] - [HbA1c(%) na amostra
diluente X (n - 1)]
n = fator de diluição da amostra

3. O hemolisado pode ser armazenado até 10 dias entre 2 - 8 ºC. Exemplo

[8,3 X 3] - [4,6 X (3 - 1)] = 24,9 - 9,2 = 15,7%

Parâmetros para Analisadores Automáticos
Tipo de Reação
Direção da Reação
l de Onda Primário
l de Onda Secundário
Temperatura
Calibração
Modelo de Calibração*
Volume de Amostra**
Volume de Reagente 1**
Incubação a 37 ºC
Volume de Reagente 2**
Absorbância 1
Absorbância 2
Ponto Final
Controle interno da qualidade . O laboratório deve manter um
programa de controle interno da qualidade que defina claramente os
Crescente
regulamentos aplicáveis, objetivos, procedimentos, critérios para
600 a 660 nm
especificações da qualidade e limites de tolerância, ações corretivas e
800 nm
registro das atividades. Ao mesmo tempo deve-se manter um sistema
37 ºC
definido para monitorar a variabilidade analítica que ocorre em todo o
5 pontos (Calibra HbA1c
sistema de medição.
Turbiquest - Ref. 386)
Não linear (Spline, Exponencial)
Materiais de controle devem ser utilizados para monitorar a imprecisão da
4 mL medição e desvios da calibração. Sugere-se que as especificações para o
150 mL coeficiente de variação e o erro total sejam baseadas nos componentes
300 segundos 5 6
da variação biológica (VB) ou nas especificações propostas pelo NGSP .
50 mL
Entre 60 e 90 segundos após
adição de Reagente 2
Valores esperados . Para indivíduos não diabéticos: 4,0% a 6,0%.
300 segundos após a adição do Para indivíduos diabéticos em controle glicêmico:
Reagente 2

Criança (faixa pré-puberal) <8,0%

*A definição de modelo de calibração deve ser adequada a cada modelo Criança (faixa puberal) <8,5%
de equipamento. Em caso de dúvida, entre em contato com o Serviço de Adulto <7,0%
Apoio ao Cliente Labtest. Idoso <8,0%

02 Português - Ref.: 385

Os valores para indivíduos diabéticos foram determinados a partir dos Sensibilidade metodológica ou analítica . Limite de
resultados de estudos clínicos prospectivos e randomizados e se detecção: 0,095%. Equivale a 3 desvios padrão (DP) obtidos a partir de
correlacionam com risco significativamente menor de desenvolvimento 10 medições de uma amostra com concentração de HbA1c igual a 3,0 %.
3,4
de complicações do Diabetes Mellitus .
Significado clínico . A hemoglobina humana do adulto é
7
Características do desempenho habitualmente constituída de HbA (97%), HbA2 (2,5%) e HbF (0,5%).
A análise cromatográfica da HbA identifica uma gama de hemoglobinas
Estudos de recuperação . Em duas amostras com que migram mais rapidamente do que a HbA0: HbA1a, HbA1b e HbA1c,
2
concentrações de HbA1c iguais a 6,2% e 9,4% foram adicionadas que foram inicialmente denominadas hemoglobinas rápidas .
quantidades do analito, sendo obtidos os seguintes resultados: Posteriormente, observou-se que estas hemoglobinas rápidas estão
ligadas a alguns açucares, sendo coletivamente chamadas
Concentração (%) hemoglobinas glicadas ou HbA1. A HbA1c é a principal fração e
Recuperação
corresponde a 80% da HbA1. A HbA1c é formada pela ligação não
Inicial Adicionada Esperada Encontrada (%)
enzimática da glicose com a porção N-terminal valina (glicação) em cada
6,2 0,9 7,1 7,2 101,4 cadeia beta da HbA, formando uma base de Schiff instável (pré-HbA1c,
9,4 1,0 10,4 10,6 101,9 HbA1c lábil ou instável) que sofre um rearranjo irreversível (rearranjo de
2
Amadori), formando uma cetoamina estável .
Utilizando o erro médio de 1,7%, o erro sistemático proporcional
estimado é igual a 0,099% para amostra com concentração de 6,0% e A formação de hemoglobina glicada é contínua e irreversível, e seu nível
0,167% para amostra com concentração de 10,0%. sanguíneo depende da sobrevida da hemácia (cerca de 120 dias) e da
concentração de glicose no sangue, já que a hemácia é livremente
Comparação de métodos . O método proposto foi comparado permeável à glicose. A HbA1c corresponde a cerca de 4% a 6% da HbA
com o método HPLC, sendo obtidos os seguintes resultados. total em indivíduos não diabéticos, podendo chegar a 20% em indivíduos
diabéticos mal controlados. A quantidade de HbA1c é diretamente
Método Método proporcional à concentração média de glicose no sangue durante as seis
Comparativo Labtest a oito semanas precedentes e fornece um critério adicional para a
Número de amostras 50 50 avaliação do controle glicêmico.
Método Labtest (%) =
Equação da regressão A dosagem de HbA1c parece ser capaz de prognosticar o risco do
0,9844 x Comparativo + 0,039 3
desenvolvimento e progressão das complicações crônicas do diabetes .
Coeficiente de correlação 0,994
Assim, a HbA1c deve ser medida rotineiramente em todos os pacientes
Utilizando a equação da regressão, o erro sistemático total (bias) com diabetes mellitus para avaliar o grau de controle glicêmico.
estimado é igual 0,85% e 1,18% para amostras de 5,5 e 10,2%,
Conforme o Posicionamento Oficial - 2004 do Grupo Interdisciplinar de
respectivamente. Esse erro é menor que o erro sistemático da 4
5 Padronização da Hemoglobina Glicada , a determinação da HbA1c deve
especificação desejável baseada nos componentes da VB que é
ser realizada pelo menos duas vezes ao ano para todos os pacientes
£1,50%.
diabéticos e quatro vezes por ano (a cada três meses) para pacientes que
se submeteram a alteração do esquema terapêutico ou que não estejam
Estudos de precisão . Os estudos de precisão foram realizados 4
atingindo os objetivos recomendados com o tratamento vigente .
utilizando três amostras com concentrações iguais a 5,5%, 7,1% e
10,2%.
Os níveis de HbA1c não retornam aos valores esperados imediatamente
após a redução e estabilização da concentração sanguínea de glicose.
Repetitividade - imprecisão intra-ensaio O tempo necessário é de aproximadamente oito a dez semanas.
N Média (%) DP CV (%)
Amostra 1 15 5,5 0,034 0,62 Pacientes com doença hemolítica ou outras condições que reduzem a
0,032 0,45 sobrevida das hemácias (estados hemorrágicos) podem apresentar
Amostra 2 15 7,1
resultados falsamente diminuídos de HbA1c.
Amostra 3 15 10,2 0,037 0,36
Anemia por deficiência de ferro, vitamina B12 ou ácido fólico pode levar a
resultados falsamente aumentados de HbA1c por aumentar a sobrevida
Reprodutibilidade - imprecisão total
das hemácias.
N Média (%) DP CV (%)
Amostra 1 15 5,5 0,038 0,70 A determinação da HbA1c não tem valor nos pacientes que apresentam
0,047 0,66 hemoglobinopatias homozigóticas devido a ausência de HbA. Nestas
Amostra 2 15 7,1
0,34 situações sugere-se realizar a determinação da frutosamina para
Amostra 3 15 10,2 0,035
avaliação do controle glicêmico.
A imprecisão encontrada atende a especificação desejável para A dosagem de HbA1c pode ser utilizada para diagnosticar diabetes
5 1
imprecisão total baseada nos componentes da VB que é £0,93%. mellitus de acordo com a Associação Americana de Diabetes .

03 Português - Ref.: 385

Observações 6. Summary of NGSP Certification Categories. Disponível em:
http://www.ngsp.org/news.asp (acesso em 01/2015).
1. O laboratório clínico tem como objetivo fornecer resultados exatos e
7. Labtest: Dados de Arquivo.
precisos. A utilização de água de qualidade inadequada é uma causa
potencial de erros analíticos. A água utilizada no laboratório deve ter a
qualidade adequada a cada aplicação. Assim, para preparar reagentes, Apresentação
usar nas medições e para uso no enxague final da vidraria, a água deve ter
Produto Referência Conteúdo
resistividade ³1 megaohm.cm ou condutividade £1 microsiemens/cm e
concentração de silicatos <0,1 mg/L. Quando a coluna deionizadora está 1 1 X 15 mL
com sua capacidade saturada ocorre liberação de vários íons, silicatos e 385-1/20 2 1 X 5 mL
substâncias com grande poder de oxidação ou redução que deterioram 3 1 X 65 mL
HbA1c Turbiquest
os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados 1 1 X 30 mL
de modo imprevisível. Assim, é fundamental estabelecer um programa de 385-1/40 2 1 X 10 mL
controle da qualidade da água. 3 1 X 130 mL

2. Para uma revisão das fontes fisiopatológicas e medicamentosas de

interferência nos resultados e na metodologia sugere-se consultar Young Informações ao consumidor
DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 3ª edição, Washington:
AACC Press, 1990. [Termos e Condições de Garantia]

A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto, dentro das

Referências
1. American Diabetes Association. Diabetes care 2015, 38 (Suppl 1).
2. Burtis CA, Ashwood ER. Tietz Textbook of Clinical Chemistry,
Philadelphia: Saunders Company 1994; 980-986.
3. DCCT Research Group. Diabetes Control and Complications Trial
(DCCT). N Eng J Med 1993; 329: 977-986.
4. Grupo Interdisciplinar de Padronização da Hemoglobina Glicada - A1c.
2004. www.sbpc.org.br (Menu: Comissões).
especificações, até a data de expiração indicada nos rótulos, desde que
os cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e
nestas instruções sejam seguidos corretamente.
Labtest Diagnóstica S.A.
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
Serviço de Apoio ao Cliente 0800 031 34 11 (Ligação Gratuita)
e-mail: sac@labtest.com.br

5. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular.

Disponível em: Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
Ediçao: Agosto, 2015
<http://www.seqc.es/es/Comisiones/18/9/102/Base_de_datos_de_ Ref.: 100615 Reprodução sob prévia autorização
Variacion_biologica_%7C_Comision_de_Calidad_Analitica_%7C_Co
mite_Cientifico/> (acesso em 02/2015).

04 Português - Ref.: 385

05 Português - Ref.: 385
06 Português - Ref.: 385