CÉLULAS-TRONCO: BIOLOGIA E

APLICAÇÕES

Bábyla G. Monteiro
Instituto Butantan / USP
Células-tronco embrionárias

Células-tronco adultas

Células-tronco imaturas da polpa dentária: definição, isolamento,

caracterização, cultivo, diferenciação.

Células-tronco pluripotentes induzidas – iPS

Isolamento, técnicas de cultivo celular, meios de cultivo, caracterização através
de técnicas moleculares, imunocitoquímica e citometria de fluxo;
criopreservação, viabilidade e armazenamento.

Clonagem Terapêutica

Bioengenharia Tecidual

Aula Prática: Isolamento de células-tronco medulares e técnica de

imunofluorescência para caracterização de células-tronco de polpa dentária.

Avaliação
Células tronco:
• proliferação mantendo-se como célula
tronco
• dar origem a células diferenciadas
• colonizar organismo
Tipos de células-tronco
Célula-tronco embrionária

Célula-tronco do adulto
A célula-tronco embrionária
 botão
1 2 3 4 5 6 7 interno

trofoblasto

As primeiras células embrionárias são

Células-tronco (stem cells) pluripotentes

Célula-tronco embrionária
- pluripotente -
As células-tronco embrionárias são utilizadas após isolamento
e cultivo, originando linhagens celulares permanentes.
A célula-tronco “adulta”
• função principal: manter as células que vão
morrendo no organismo ao longo dos anos
• reparar lesões
Renovação celular a partir de células-tronco

célula tronco do
adulto
- multipotente -

As células sanguíneas são renovadas a partir de células

tronco presentes (~0,1%) na medula óssea.
Cada órgão/tecido
apresenta seu conjunto de
células-tronco

pele
músculo
cérebro
fígado
dente
etc
O contato com o nicho mantém as células-tronco
quiescentes (repouso).
Contato com o nicho e a mitose assimétrica.
Métodos de obtenção de células-tronco
Células tronco embrionárias: isolamento

• coletando o embrião diretamente; ou

• coletando células germinativas primordiais do feto.
Células tronco do adulto: isolamento

• células raras
• morfologia pouco diferenciada COMBINAÇÃO DE PROTOCOLOS
• marcadores de superfície pouco conclusivos
Marcadores (proteínas) de superfície
• marcação com anticorpos específicos
• separação com colunas magnéticas
Marcadores (proteínas) de superfície
• marcação com anticorpos específicos
• separação por citometria de fluxo
Aderência: MSC

Cultivo de medula óssea

com remoção constante
das células não aderentes.
embrião normal

embrião clonado
• Clonagem: reprodutiva x terapêutica
transferência nuclear
Plasticidade das células-tronco
Por que é importante?

• para aplicação em procedimentos terapêuticos,

interessam células MUITO plásticas

possibilidade de originar os diferentes tipos de

células necessários para correção da doença ou
lesão
As células tronco embrionárias têm, por definição,
plasticidade de 100%
Qual a plasticidade das células tronco adultas?

Questão ainda não definida: há indicações de grande

plasticidade reprogramação? fusão?
Terapia celular com células tronco

utilização de células tronco para o reparo

de tecidos danificados
Abordagens:
• diferenciar a célula in vitro e transplantar
Abordagens:
• diferenciar a célula in vitro e transplantar
• transplantar a população total (ou purificada) e
esperar pela diferenciação in vivo
 Método de utilização de células-
tronco do adulto em terapia celular
Tecido mais comumente utilizado como fonte: medula
óssea

•Questão: isolar as células tronco ou empregar medula

óssea total?
• Célula-tronco embrionária?

•célula-tronco hematopoiética?

• célula-tronco mesenquimal?
 A medula óssea como residência de múltiplos tipos de células tronco

Circulating TCSC may compete for occupancy of niches in various

tissue/organs. Bone marrow tissue as a source of many stem cell
chemoattractants and survival factors provides an environment that
encourages TCSC to home into it. In this context bone marrow tissue
becomes a “home” or “hideout” not only of hematopoietic stem cells but
also of already differentiated circulating TCSC and perhaps PSC as well.
Kucia et al (2005) Are bone marrow stem cells plastic or heterogenous—That is the question. Exper
Hematol 33:613–623.
 Terapia celular: fração mononuclear da medula óssea

• HSC
• MSC
• outros tipos de células-tronco?

3 – administração
1 – coleta da
aos pacientes
medula óssea

2 – isolamento
da fração
mononuclear