Sumário

INTRODUÇÃO .................................................................................................................... 2
OBJECTIVOS ...................................................................................................................... 3
Princípio Do Microscópio De Contraste De Fase .............................................................. 4
Microscópio de caminho de luz de contraste de fase ......................................................... 5
Tipos de Microscópio de Contraste de Fase ....................................................................... 6
Procedimento Operacional do Microscópio de Contraste de Fase .................................. 6
Como a microscopia de contraste de fase ajuda os cientistas a visualizar espécimes
difíceis .................................................................................................................................... 7
Contraste De Fase Negativo E Positivo .............................................................................. 8
Aplicações Do Microscópio De Contraste De Fase ............................................................ 9
Vantagens .............................................................................................................................. 9
CONCLUSÃO..................................................................................................................... 10
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................................. 11
INTRODUÇÃO

O microscópio de contraste de fase converte pequenas mudanças de fase em variações de

amplitude (brilho), que são vistas como diferenças de contraste na imagem.

As amostras que não são coradas e não absorvem luz são conhecidas como objetos de
fase. Isso ocorre porque eles alteram ligeiramente a fase da luz que difratam; a luz
normalmente muda de fase em aproximadamente um quarto de comprimento de onda em
relação à luz de fundo. Nossos olhos só são capazes de detectar flutuações na frequência e
intensidade da luz, portanto, eles não podem detectar essas diferenças de fase mínimas.

O contraste de fase permite a produção de imagens de alto contraste aumentando a

diferença de fase da luz. Esta propriedade permite distinguir a luz de fundo da luz difratada
pela amostra. Uma placa de fase colocada diretamente antes do plano da imagem retarda (ou
avança) a luz de fundo em um quarto de comprimento de onda, aumentando assim a diferença
de fase.

Quando a luz é focada no plano da imagem, a luz difratada e de fundo gera interferência
destrutiva (ou construtiva), que diminui (ou aumenta) a luminância das áreas contendo
amostras em relação à luz de fundo.

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OBJECTIVOS

GERAL:

 Falar do microscópio de contraste de fase desde o Princípio do Microscópio e dos

Procedimento Operacional do Microscópio de Contraste de Fase e as suas
vantagens.

ESPÉCIFICOS:

 Conhecer o microscópio de contraste de fase desde Fase e os tipos de Microscópio de

Contraste de Fase;

 Entender a importância do microscópio de contraste de fase e os mecanismos do

ponto de vista estrutural e organizacional.

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Princípio Do Microscópio De Contraste De Fase

O condensador de um microscópio de contraste de fase tem um batente anular um disco

opaco com um fino anel transparente que produz um cone oco de luz.
À medida que esse cone passa por uma célula, alguns raios de luz são dobrados devido à
variação na densidade e no índice de refração dentro da amostra e são retardados em 1/4 do
comprimento de onda. A luz desviada é focada para formar uma imagem do objeto.
Os raios de luz não desviados atingem um anel de fase na placa de fase em discos ópticos
especiais localizados na objetiva, enquanto os raios desviados erram o anel e passam pelo
resto da placa. A luz não desviada que atinge o anel de fase avança 1/4 do comprimento de
onda ao passar por este anel.
As ondas desviadas e não desviadas se tornam 1/2 comprimento de onda uma da outra e
se cancelam para se unirem para formar uma imagem. Portanto, luzes desviadas e não
desviadas de imagens diferentes.
O fundo formado pela luz não desviada é brilhante, enquanto o objeto não manchado parece
escuro e bem definido.

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Microscópio de caminho de luz de contraste de fase

1. Os raios de luz entram no anular diafragma de sua fonte.

2. Em seguida, passa pela lente do condensador, que focaliza os raios na amostra.
3. A luz transmitida através do espécime e, em seguida, entra na lente objetiva onde uma
imagem do espécime é criada.
4. À medida que a luz transmitida através do espécime cria raios de luz desviados e não
desviados.
5. Os raios de luz desviados perdem o anel de fase sobre a lente objetiva.

5
 6. Considerando que os raios de luz não desviados atingem um anel de fase. Como
resultado, raios desviados e não desviados formaram imagens diferentes.
7. Os raios de luz sem desvio formaram o fundo da imagem do espécime.

Tipos de Microscópio de Contraste de Fase

Existem dois tipos principais de microscópios de contraste de fase:

1. Microscópios de contraste de fase de campo claro: Esses microscópios usam um
sistema padrão de iluminação de campo claro, no qual a amostra é iluminada de cima
e a imagem é visualizada através das oculares ou de uma câmara digital. O efeito de
contraste de fase é obtido usando um condensador de contraste de fase especial e uma
lente objetiva, que são colocados entre a fonte de luz e a amostra.
2. Microscópios de contraste de interferência diferencial (DIC): Esses microscópios
usam uma abordagem diferente para obter o efeito de contraste de fase. Em vez de
usar um condensador de contraste de fase e lentes objetivas, eles usam uma fonte de
luz polarizadora especial e um par de prismas de compensação para criar o efeito de
contraste de fase. Os microscópios DIC são particularmente úteis para estudar
amostras altamente transparentes, como células e tecidos, porque fornecem um nível
mais alto de aprimoramento de contraste do que os microscópios de contraste de fase
de campo claro.

No geral, existem dois tipos principais de microscópios de contraste de fase:

microscópios de contraste de fase de campo claro e microscópios de contraste de interferência
diferencial (DIC). Ambos tipos de microscópios usam abordagens diferentes para obter o
efeito de contraste de fase e são úteis para estudar amostras pequenas, transparentes ou
difíceis de ver.

Procedimento Operacional do Microscópio de Contraste de Fase

O procedimento operacional para microscópio de contraste de fase geralmente envolve as

seguintes etapas:
1. Preparando a amostra: A amostra é normalmente preparada colocando-a em uma
lâmina de microscópio e cobrindo-a com uma fina camada de óleo de imersão ou uma
lamínula. A amostra deve ser a mais fina possível para maximizar o aumento do
contraste fornecido pela luz de contraste de fase.
2. Montando o microscópio: O microscópio é normalmente equipado com um
condensador de contraste de fase e lente objetiva, bem como uma fonte de luz de

6
 contraste de fase especial. O condensador e a lente objetiva são ajustados para
otimizar o efeito de contraste de fase e a fonte de luz é ligada.
3. Focando o microscópio: O microscópio é focado usando o botão de foco fino, com
a fonte de luz desligada. Isso permite que o operador encontre o plano de foco para a
amostra.
4. Iluminando a amostra: A fonte de luz é ligada e a amostra é iluminada com luz de
contraste de fase. A amostra é então visualizada através das oculares ou de uma
câmera digital, e o foco é ajustado usando o botão de foco fino.
5. Analisando a amostra: O operador pode então analisar a amostra e fazer observações
sobre sua estrutura e características. Pode ser útil tirar fotos ou fazer um vídeo da
amostra para análise posterior.

Como a microscopia de contraste de fase ajuda os cientistas a visualizar espécimes

difíceis

 Para tornar as mudanças de fase aparentes na microscopia de contraste de fase, é

necessário separar a luz de iluminação (fundo) da luz dispersada pela amostra
(primeiro plano) e modificá-las de maneira diferente.

 O condensador concentra a luz iluminante em forma de anel (verde) que flui

através do anel do condensador para a amostra. Uma parte da iluminação é
espalhada pela amostra (amarelo). A luz restante não danificada serve como
iluminação de fundo (vermelha). Ao estudar uma amostra biológica não corada,
a luz espalhada é normalmente fraca e muda de fase em 90° em relação à luz de
fundo (devido à espessura típica da amostra e à diferença do índice de refração
entre o tecido biológico e o meio circundante). Isso faz com que o primeiro plano
(vetor azul) e o fundo (vetor vermelho) tenham intensidades semelhantes,
resultando em falta de contraste na imagem.

 O contraste da imagem é aumentado com um microscópio de contraste de fase de

duas maneiras: gerando interferência construtiva entre os raios de luz dispersos e
de fundo em partes do campo de visão contendo espécimes e limitando a
quantidade de luz de fundo que atinge o plano da imagem.

 Primeiro, a luz de fundo é deslocada em 90° usando um anel de mudança de fase,

eliminando a diferença de fase entre o fundo e os feixes de luz espalhados.

7
  Essa mudança de fase faz com que os raios de luz espalhados e de fundo
provenientes de regiões do campo de visão que contêm a amostra (ou seja, o
primeiro plano) interfiram construtivamente, tornando essas regiões mais brilhantes
do que as regiões que não contêm a amostra quando a luz é focada na imagem plano
(onde uma câmera ou ocular é colocada).

 Finalmente, um anel de filtro cinza é usado para diminuir o fundo em 70-90 por
cento; esta técnica otimiza a luz dispersa gerada pela luz de iluminação enquanto
diminui a quantidade de luz de iluminação que atinge o plano da imagem.

 Os anéis de filtro de mudança de fase e cinza serão iluminados apenas pela luz de
fundo, enquanto a luz dispersa que ilumina toda a superfície do filtro será esmaecida
e com mudança de fase em um grau menor.

Contraste De Fase Negativo E Positivo

1. No contraste de fase positiva, o objeto aparece como cinza escuro em um fundo cinza
mais claro.
2. No contraste de fase negativa, o objeto aparece mais brilhante em um fundo escuro.

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Aplicações Do Microscópio De Contraste De Fase

A microscopia de contraste de fase é amplamente utilizada em uma variedade de

aplicações científicas e médicas, incluindo:
 Biologia Celular: A microscopia de contraste de fase é frequentemente usada para
estudar células vivas, tecidos e organismos para entender sua estrutura e função. Essa
técnica pode ser usada para visualizar formas de células, organelos e outras estruturas
subcelulares, bem como para estudar o movimento e o comportamento das células ao
longo do tempo.
 Microbiologia: A microscopia de contraste de fase é usada para estudar micro-
organismos, como bactérias e vírus, a fim de entender suas características e
comportamento. Esta técnica pode ser utilizada para identificar e caracterizar
diferentes tipos de microrganismos, bem como para estudar o seu crescimento e
reprodução.

 Genética: A microscopia de contraste de fase pode ser usada para estudar ADN e
outros materiais genéticos dentro de células e tecidos, fornecendo informações
valiosas sobre os mecanismos de a expressão do gene e regulamentação.
No geral, a microscopia de contraste de fase é uma ferramenta valiosa para cientistas e
profissionais médicos, pois permite visualizar e estudar espécimes pequenos, transparentes
ou difíceis de ver com mais detalhes, fornecendo informações valiosas sobre a estrutura e a
função desses materiais.

Vantagens

Existem várias vantagens em usar a microscopia de contraste de fase em aplicações

científicas e médicas, incluindo:
1. Alto contraste: O microscópio de contraste de fase aumenta o contraste entre
diferentes partes da amostra, facilitando a visualização de estruturas pequenas ou
transparentes dentro da amostra. Isso o torna particularmente útil para estudar
espécimes pequenos ou difíceis de ver, como micro-organismos ou estruturas
subcelulares.

2. Versatilidade: O microscópio de contraste de fase pode ser usada com uma ampla
gama de amostras, incluindo células, tecidos, micro-organismos e materiais,
tornando-a uma ferramenta valiosa para uma variedade de aplicações científicas e
médicas. É útil para estudar em espécimes finos.

3. Componentes intercelulares: Componentes intercelulares de células vivas podem

ser observados com alta resolução. Essa descoberta permitiu que os biólogos
examinassem as células vivas e o processo de divisão celular

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Conclusão

Em suma, o microscópio de contraste de fase é uma ferramenta poderosa que permite

que cientistas e profissionais médicos estudem espécimes pequenos, transparentes ou difíceis
de ver com mais detalhes, fornecendo informações valiosas sobre a estrutura e a função
desses materiais.

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Referencias Bibliográficas

https://microbiologynote.com/pt/phase-contrast-microscopy/
https://pt.wikipedia.org/wiki/Microsc%C3%B3pio_de_contraste_de_fase
https://www.slideshare.net/manjunathasanka/phase-contrast-microscope-41441936
https://microbiologynote.com/pt/phase-contrast-microscopy/#Phase_contrast_microscopy_images

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