Roteiro Extração de DNA e RNA - Biologia Molecular - Marisa Amaro Polezi

LABORATÓRIO DE BIOLOGIA MOLECULAR / GENÉTICA
EXTRAÇÃO E PURIFICAÇÃO DE DNA E RNA
INSTRUÇÕES GERAIS
1. Neste experimento, você irá realizar a extração e purificação do DNA e RNA.
2. Utilize a seção “Recomendações de Acesso” para melhor aproveitamento da

experiência virtual e para respostas às perguntas frequentes a respeito do
VirtuaLab.
3. Caso não saiba como manipular o Laboratório Virtual, utilize o “Tutorial

VirtuaLab” presente neste Roteiro.
4. Caso já possua familiaridade com o Laboratório Virtual, você encontrará as

instruções para realização desta prática na subseção “Procedimentos”.
5. Ao finalizar o experimento, responda aos questionamentos da seção “Avaliação

de Resultados”.
ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 1

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
E-mail: contato@algetec.com.br | Site: www.algetec.com.br
RECOMENDAÇÕES DE ACESSO
PARA ACESSAR O VIRTUALAB
ATENÇÃO:
O LABORATÓRIO VIRTUAL DEVE SER ACESSADO POR COMPUTADOR. ELE NÃO DEVE SER
ACESSADO POR CELULAR OU TABLET.
O REQUISITO MÍNIMO PARA O SEU COMPUTADOR É UMA MEMÓRIA RAM DE 4 GB.
SEU PRIMEIRO ACESSO SERÁ UM POUCO MAIS LENTO, POIS ALGUNS PLUGINS SÃO
BUSCADOS NO SEU NAVEGADOR. A PARTIR DO SEGUNDO ACESSO, A VELOCIDADE DE
ABERTURA DOS EXPERIMENTOS SERÁ MAIS RÁPIDA.
1. Caso utilize o Windows 10, dê preferência ao navegador Google Chrome;

2. Caso utilize o Windows 7, dê preferência ao navegador Mozilla Firefox;
3. Feche outros programas que podem sobrecarregar o seu computador;
4. Verifique se o seu navegador está atualizado;
5. Realize teste de velocidade da internet.
Na página a seguir, apresentamos as duas principais dúvidas na utilização dos

Laboratórios Virtuais. Caso elas não se apliquem ao seu problema, consulte a nossa seção
de “Perguntas Frequentes”, disponível em: https://algetec.movidesk.com/kb/pt-br/
Neste mesmo link, você poderá usar o chat ou abrir um chamado para o contato com
nossa central de suporte. Se preferir, utilize os QR CODEs para um contato direto por
Whatsapp (8h às 18h) ou para direcionamento para a central de suporte. Conte conosco!

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PERGUNTAS FREQUENTES
1) O laboratório virtual está lento, o que devo fazer?
a) No Google Chrome, clique em “Configurações” -> “Avançado” -> “Sistema” ->

“Utilizar aceleração de hardware sempre que estiver disponível”. Habilite a
opção e reinicie o navegador.
b) Verifique as configurações do driver de vídeo ou equivalente. Na área de

trabalho, clique com o botão direito do mouse. Escolha “Configurações
gráficas” e procure pela configuração de performance. Escolha a opção de
máximo desempenho.
Obs.: Os atalhos e procedimentos podem variar de acordo com o driver de

vídeo instalado na máquina.
c) Feche outros aplicativos e abas que podem sobrecarregar o seu computador.
d) Verifique o uso do disco no Gerenciador de Tarefas (Ctrl + Shift + Esc) ->

“Detalhes”. Se estiver em 100%, feche outros aplicativos ou reinicie o
computador.

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2) O laboratório apresentou tela preta, como proceder?
a) No Google Chrome, clique em “Configurações” -> “Avançado” -> “Sistema” ->

“Utilizar aceleração de hardware sempre que estiver disponível”. Habilite a
opção e reinicie o navegador. Caso persista, desative a opção e tente
novamente.
b) Verifique as configurações do driver de vídeo ou equivalente. Na área de

trabalho, clique com o botão direito do mouse. Escolha “Configurações
gráficas” e procure pela configuração de performance. Escolha a opção de
máximo desempenho.
Obs.: Os atalhos e procedimentos podem variar de acordo com o driver de

vídeo instalado na máquina.
c) Verifique se o navegador está atualizado.

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DESCRIÇÃO DO LABORATÓRIO
MATERIAIS NECESSÁRIOS
• Água Mili-Q;
• Álcool 96%;
• Centrífuga de Eppendorf;
• Hipoclorito de sódio;
• Incubadora;
• Jaleco;
• Kit de extração DNA – Proteinase K tipo L;
• Kit de extração DNA – Tampão de eluição SI;
• Kit de extração DNA – Tampão de lavagem SI;
• Kit de extração DNA – Tampão de lavagem SII;
• Kit de extração DNA – Tampão de lise S;
• Kit de extração DNA – Tampão de proteinase;
• Luvas;
• Máscara;
• Micropipeta;
• Nanodrop (espectrofotômetro);
• Notebook;
• Óculos;
• Ponteira para micropipeta;
• Tubo de coleta com amostra de sangue;
• Tubo Eppendorf;
• Tubo spin;
• Vórtex.

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PROCEDIMENTOS
1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO
Coloque os equipamentos de proteção individual localizados no “Armário de EPIs”.
2. ETAPA DE LISE
Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra

de sangue no mesmo tubo, e por último, pipete 200 µl do tampão lise S no tubo.
Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo,
incube o Eppendorf por 15 min.
3. ETAPA DE LIGAÇÃO
Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em

seguida, pipete 640 µl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por
1 minuto.
4. ETAPA DE LAVAGEM
Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em

um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo
spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta,
porém a lavagem irá utilizar 600 µl o tampão de lavagem SII, e centrifugue
novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo de coleta e
centrifugue novamente.

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5. ETAPA DE ELUIÇÃO
Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em

um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo
spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra.
6. REALIZANDO A MENSURAÇÃO DA AMOSTRA
Retire o Eppendorf da centrífuga, e retire o tubo spin de dentro do tubo de coleta. Em

seguida, abra o espectrômetro e limpe-o, depois pipete 10 µl de água mili-q no mesmo
e feche o espectrômetro. Ligue o notebook, clique na opção “Nucleic acid” e depois
na opção “blank”. Por último, limpe o novamente o espectrômetro e pipete 10 µl da
amostra, feche o espectrômetro e selecione a opção “Measure”.
7. AVALIANDO OS RESULTADOS
Siga para a seção “Avaliação dos Resultados”, localizada na página 08 deste roteiro, e
responda de acordo com o que foi observado no experimento associando também
com os conhecimentos aprendidos sobre o tema.

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AVALIAÇÃO DOS RESULTADOS
1. No que consiste a etapa de eluição da purificação?
2. Qual a diferença entre os tampões de lavagem SI e SII?
3. Na etapa de ligação, porque se utiliza o álcool 96%?
4. Quais são as prováveis substâncias do tampão S?

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TUTORIAL VIRTUALAB
1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO
Visualize a pia clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome “Pia”
localizada dentro do painel de visualização no canto superior esquerdo da tela. Se
preferir, também pode ser utilizado o atalho do teclado “Alt+1”.

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Lave as mãos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a pia.
Visualize o armário de EPIs clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o
nome “Armário de EPIs” ou através do atalho do teclado “Alt+2”.

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Abra o armário de EPI clicando com o botão esquerdo do mouse sobre as portas.
Selecione os EPIs necessários para a realização do ensaio clicando com o botão esquerdo
do mouse sobre eles. Nesse experimento, é obrigatório o uso de jaleco, luvas máscaras
e óculos.

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Feche as portas do armário de EPIs clicando com o botão esquerdo do mouse sobre as
portas.

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2. ETAPA DE LISE
Visualize a bancada clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome
“Bancada” ou através do atalho do teclado “Alt+3”.
Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse na pipeta e selecione
“Reajustar volume”.

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Altere volume da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no canto
inferior esquerdo, digite o volume e clique em “OK”.
Posicione a pipeta no tubo de Proteinase K clicando com o botão direito do mouse na

pipeta e selecione “Colocar em Proteinase K”.

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Posicione a pipeta no tubo Eppendorf clicando com o botão direito do mouse na pipeta
e selecione “Colocar em Eppendorf”.
Troque a ponteira clicando com o botão direito do mouse na pipeta e selecione “Trocar
ponteira”.

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Ajuste o volume clicando com o botão direito do mouse na pipeta e selecione “Reajustar
volume”.
Altere o volume da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no
canto inferior esquerdoe clique em “OK”.

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Posicione a pipeta no tubo com a amostra de sangue clicando com o botão direito do
mouse na pipeta e selecione “Colocar em Amostra de sangue”.

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ponteira”.
Posicione a pipeta no tampão de lise S clicando com o botão direito do mouse na pipeta
e selecione “Colocar em Tampão de lise S”.

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ponteira”.

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Tampe o tubo Eppendorf clicando com o botão esquerdo do mouse no tubo Eppendorf.
Homogeneíze o Eppendorff no vortex clicando com o botão direito do mouse no tubo.

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Avance o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse em “Avançar”.
Retire o tubo do vortex clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo.

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Coloque o tubo na incubadora clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo.
Feche a tampa da incubadora clicando com o botão esquerdo do mouse na incubadora.

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Ligue a incubadora clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão “Ligar”.

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Abra a tampa da incubadora clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a

incubadora.
Retire o tubo da incubadora cliquando com o botão direito do mouse sobre a

incubadora.

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3. ETAPA DE LIGAÇÃO
Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse na pipeta e selecione
“Reajustar volume”.

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Posicione a pipeta no recipiente de álcool 96° clicando com o botão direito do mouse no
álcool 96° e selecione “Colocar em Álcool 96°”.

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Troque a ponteira clicando com o botão direito do mouse sobre a pipeta e selecione
“Trocar ponteira”.
Tampe o tubo Eppendorf clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o tubo.

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Homogeneíze o Eppendorff no vórtex clicando com o botão direito do mouse sobre o

tubo.

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Retire o tubo do vórtex clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo.
Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a pipeta e
selecione “Reajustar volume”.

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Altere o volume clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no canto inferior
esquerdoe clique em “OK”.
Posicione a pipeta no Eppendorf clicando com o botão direito do mouse sobre a pipeta

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Posicione a pipeta no tubo spin clicando com o botão direito do mouse sobre a pipeta e
selecione “Colocar em Tubo spin”.

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Coloque o tubo spin dentro do tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse
sobre tubo spin.
Mova para a centrífuga o conjunto de tubos clicando com o botão esquerdo do mouse
sobre ele.

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Ajuste a velocidade de rotação para 11.000 rpm clicando com o botão esquerdo do
mouse sobre os botões indicados.
Ajuste o tempo para 1 minuto clicando com o botão esquerdo do mouse sobre os botões
selecionados.

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Feche a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão “Open”.
Inicie o processo de centrifugação clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o

botão “Start/Stop”.

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4. ETAPA DE LAVAGEM
Abra a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão “Open”.
Retire o conjunto de tubos clicando com o botão direito do mouse sobre a centrífuga.

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Retire o tubo spin do tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo
de coleta e selecione a opção “Retirar tubo spin”.
Descarte o tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta
e selecione a opção“Descartar”.

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Posicione a pipeta no tampão lavagem SI clicando com o botão direito do mouse sobre
a pipeta e selecione “Colocar em Tampão lavagem SI”.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
Mova o tubo spin para o tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre
o tubo spin.

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Coloque na centrífuga o conjunto de tubos clicando com o botão esquerdo do mouse

sobre o tubo.

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botão “Starst/Stop”.
Avance o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box “Avançar”.

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e selecione a opção “Descartar”.

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Posicione a pipeta no tampão lavagem SII clicando com o botão direito do mouse sobre
a pipeta e selecione “Colocar em Tampão lavagem SII”.

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Coloque o tubo spin no tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse no
tubo spin.

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sobre o tubo.
Feche a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão “Open”

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botão “Start/Open”.

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e selecione a opção“Descartar”.

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Mova o tubo spin para o tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre
o tubo spin.
sobre o tubo.

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Feche a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão “Open”

botão “Start/Stop”.

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5. ETAPA DE ELUIÇÃO

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e selecione a opção “Descartar”.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
Ajuste o volume da pipeta para 200 µL clicando com o botão esquerdo do mouse sobre
o box no canto inferior esquerdo e clique em “OK”.
Posicione a pipeta no tampão eluição S clicando com o botão direito do mouse sobre a
pipeta e selecione “Colocar em Tampão eluição S”.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
Mova o tubo spin para do tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre
o tubo spin.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
sobre o tubo.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
Inicie o processo de centrifugação clicando com o botão esquerdo do mouse

“Start/Stop”.

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6. REALIZANDO A MENSURAÇÃO DA AMOSTRA
de coleta e selecione “Retirar tubo spin”.

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Visualize o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com

o nome “Espectrofotômetro” ou através do atalho do teclado “Alt+7”.
Abra o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o

espectrofotômetro.

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Limpe o espectrofotômetro clicando com o botão direito do mouse sobre o

espectrofotômetro.

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Altere o volume da pipeta para 10 µL clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o
box no canto inferior esquerdo e clique em “OK”.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
Mova a pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a pipeta e selecione
“Colocar em Água Ultra Pura”.
Mova a pipeta para o espectrofotômetro clicando com o botão direito do mouse sobre
a pipeta e selecione “Colocar em Espectrofotômetro”.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
Feche o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o

espectrofotômetro.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
Visualize o notebook clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome
“Notebook” ou através do atalho do teclado “Alt+8”.
Ligue o notebook clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de ligar.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
Selecione “Nucleic Acid” no clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a tela.
Selecione “Blank” clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a tela.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
Visualize o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com

o nome “Espectrofotômetro” ou através do atalho do teclado “Alt+7”.
Abra o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o

espectrofotômetro.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
Limpe o espectrofotômetro clicando com o botão direito do mouse sobre o

espectrofotômetro.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
Mova a pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e selecione
“Colocar em Tubo de Coleta”.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
Mova a pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e selecione
“Colocar em Espectrofotômetro”.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
Feche o espectrofotômetro clicando com o botão direito do mouse o

espectrofotômetro.
Visualize o notebook clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome
“Notebook” ou através do atalho do teclado “Alt+8”.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
Selecione “Measure” clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a tela do

notebook.

CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504
7. AVALIANDO OS RESULTADOS
Siga para a seção “Avaliação dos Resultados”, localizada na página 08 deste roteiro, e
responda de acordo com o que foi observado no experimento associando também com
os conhecimentos aprendidos sobre o tema.

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LABORATÓRIO DE BIOLOGIA MOLECULAR / GENÉTICA

EXTRAÇÃO E PURIFICAÇÃO DE DNA E RNA

1. Neste experimento, você irá realizar a extração e purificação do DNA e RNA.

2. Utilize a seção “Recomendações de Acesso” para melhor aproveitamento da

3. Caso não saiba como manipular o Laboratório Virtual, utilize o “Tutorial

4. Caso já possua familiaridade com o Laboratório Virtual, você encontrará as

5. Ao finalizar o experimento, responda aos questionamentos da seção “Avaliação

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 1

O REQUISITO MÍNIMO PARA O SEU COMPUTADOR É UMA MEMÓRIA RAM DE 4 GB.

1. Caso utilize o Windows 10, dê preferência ao navegador Google Chrome;

Na página a seguir, apresentamos as duas principais dúvidas na utilização dos

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 2

1) O laboratório virtual está lento, o que devo fazer?

a) No Google Chrome, clique em “Configurações” -> “Avançado” -> “Sistema” ->

b) Verifique as configurações do driver de vídeo ou equivalente. Na área de

Obs.: Os atalhos e procedimentos podem variar de acordo com o driver de

c) Feche outros aplicativos e abas que podem sobrecarregar o seu computador.

d) Verifique o uso do disco no Gerenciador de Tarefas (Ctrl + Shift + Esc) ->

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 3

2) O laboratório apresentou tela preta, como proceder?

a) No Google Chrome, clique em “Configurações” -> “Avançado” -> “Sistema” ->

b) Verifique as configurações do driver de vídeo ou equivalente. Na área de

Obs.: Os atalhos e procedimentos podem variar de acordo com o driver de

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ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 5

Coloque os equipamentos de proteção individual localizados no “Armário de EPIs”.

Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra

Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em

Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 6

Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em

6. REALIZANDO A MENSURAÇÃO DA AMOSTRA

Retire o Eppendorf da centrífuga, e retire o tubo spin de dentro do tubo de coleta. Em

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 7

AVALIAÇÃO DOS RESULTADOS

1. No que consiste a etapa de eluição da purificação?

2. Qual a diferença entre os tampões de lavagem SI e SII?

3. Na etapa de ligação, porque se utiliza o álcool 96%?

4. Quais são as prováveis substâncias do tampão S?

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 8

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 9

Lave as mãos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a pia.

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ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 11

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 12

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 13

Posicione a pipeta no tubo de Proteinase K clicando com o botão direito do mouse na

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ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 15

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ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 17

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 18

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 19

Homogeneíze o Eppendorff no vortex clicando com o botão direito do mouse no tubo.

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 20

Avance o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse em “Avançar”.

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 21

Feche a tampa da incubadora clicando com o botão esquerdo do mouse na incubadora.

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 22

Avance o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse em “Avançar”.

ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 23

Abra a tampa da incubadora clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a